【手続補正書】
【提出日】令和1年11月15日(2019.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
着床のための胚を培養する方法であって、
第１の胚培養培地中でコンパクション前の段階の胚をインキュベートするステップと、
前記第１の胚培養培地に第２の培地を添加するステップであって、配合された胚培養培地を形成するステップと、
前記配合された胚培養培地中で前記胚を、着床のためにさらにインキュベートするステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記第１の胚培養培地中でコンパクション前の胚をインキュベートするステップが、
前記胚がコンパクション後の胚を形成するのに十分な期間；および／または
２４〜７２時間の範囲の期間
を含む；ならびに／あるいは
前記配合された胚培養培地中で前記胚をインキュベートするステップが、
前記胚が桑実胚または胚盤胞を形成するのに十分な期間；および／または
２４〜１４４時間の範囲の期間
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１のまたは第２のまたは配合された培地が、１種または複数の抗酸化物質を含み、好ましくは、前記１種または複数の抗酸化物質は、アセチル−カルニチン、アセチルシステインまたはリポ酸ならびに／または許容されるその塩および／もしくは誘導体を含む群から選択され、より好ましくは、前記第１のまたは第２のまたは配合された培地中のアセチルカルニチンの濃度が、５μＭ〜１ｍＭを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の胚培養培地が、
０．１ｍＭを超えるピルビン酸塩、好ましくは０．２０ｍＭを超えるピルビン酸塩、好ましくは０．２５ｍＭを超えるピルビン酸塩、好ましくは０．３０ｍＭを超えるピルビン酸塩、より好ましくは０．３２ｍＭまたはそれを超えるピルビン酸塩；および／または
０．０１ｍＭを超えるアスパラギン酸塩、好ましくは０．１０ｍＭを超えるアスパラギン酸塩、好ましくは０．１５ｍＭを超え、好ましくは０．２０ｍＭを超え、好ましくは０．２５ｍＭを超え、好ましくは０．３０ｍＭを超え、より好ましくは０．３２ｍＭまたはそれを超えるアスパラギン酸塩；および／または
０．０１ｍＭを超えるグリシン、好ましくは０．１０ｍＭを超えるグリシン、好ましくは０．１５ｍＭを超え、好ましくは０．２０ｍＭを超え、好ましくは０．２５ｍＭを超え、好ましくは０．３０ｍＭを超え、より好ましくは０．３２ｍＭまたはそれを超えるグリシン；および／または
少なくとも０．０５ｍＭのグルコース、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのグルコース；少なくとも２ｍＭの乳酸塩、好ましくは５ｍＭを超える乳酸塩；少なくとも０．１ｍＭのピルビン酸塩、好ましくは少なくとも０．３ｍＭのピルビン酸塩；少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのアスパラギン酸塩；少なくとも０．０１ｍＭのグリシン、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのグリシン；および／または少なくとも０．１ｍＭのグルタミンおよび／または少なくとも０．１ｍＭのアラニル−グルタミン；ならびに任意選択で少なくとも０．１２ｍＭのアセチル−カルニチンの１つまたは複数
を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記第２の培地が、
前記第１の胚培養培地よりも少ないピルビン酸塩または乳酸塩を含み、好ましくは前記第１の胚培養培地と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のピルビン酸塩または乳酸塩含量を含み、より好ましくは前記第２の培地が、ピルビン酸塩を含まず、または１０ｍＭ未満の乳酸塩、好ましくは５ｍＭ未満の乳酸塩、好ましくは１．２４ｍＭまたはそれ未満の乳酸塩を含む、および／または
前記第１の胚培養培地よりも少ないアセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡを含み、好ましくは前記第１の胚培養培地と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のアセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡ含量を含み、より好ましくは前記第２の培地が、アセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡを含まないか、または実質的に含まない；および／または
前記第１の胚培養培地よりも少ないグルタミンおよび／またはアラニル−グルタミンを含み、好ましくは前記第２の培地が、前記第１の胚培養培地と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のグルタミンおよび／またはアラニル−グルタミン含量を含み、好ましくは前記第２の培地が、０．５ｍＭ未満のグルタミン、好ましくは０．１ｍＭまたはそれ未満のグルタミンを含み、好ましくはグルタミンを含まないか、もしくは実質的に含まず、かつ／または３ｍＭ未満のアラニル−グルタミン、好ましくは１．５ｍＭ未満のアラニル−グルタミンを含み、好ましくはアラニル−グルタミンを含まないか、もしくは実質的に含まない；および／または
少なくとも１ｍＭのグルコース濃度のグルコース、好ましくは少なくとも５ｍＭのグルコースを含む；および／または
以下の構成成分：少なくとも１ｍＭのグルコース、少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩、およびゼロのまたは０．５ｍＭ未満のグリシン、好ましくは０．１ｍＭ未満のグリシン、の１つまたは複数を含む
請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記配合された胚培養培地が、以下の構成成分：少なくとも０．５ｍＭのグルコース、好ましくは少なくとも３ｍＭのグルコース；１  ５ｍＭ未満のアスパラギン酸塩、好ましくは６ｍＭ未満の乳酸塩；１．０ｍＭ未満のピルビン酸塩、好ましくは０．２ｍＭ未満のピルビン酸塩；少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩；および少なくとも０．０１のグリシン、好ましくは少なくとも０．０５ｍＭのグリシン；ならびに任意選択で少なくとも０．０６ｍＭのグルタミン、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのグルタミンおよび／または任意選択で少なくとも０．０６ｍＭのアラニル−グルタミン、好ましくは少なくともアラニル−グルタミンおよび／または任意選択で少なくとも０．０１ｍＭのアセチル−カルニチンの１つまたは複数を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
培養の全体を通してのアンモニウム濃度が、３００μＭ未満、好ましくは１９０μＭ未満である、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記胚が、ヒトの胚である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
着床のための胚を培養する方法であって、アセチル−カルニチン、ならびに／または許容されるその塩および／もしくは誘導体を含む１つまたは複数の培養培地中で前記胚を培養するステップを含む方法。
【請求項１０】
胚培養培地に添加するための配合用の培地であって、少なくとも１ｍＭのグルコース濃度のグルコース、好ましくは少なくとも３．５ｍＭのグルコース；および１０ｍＭもしくはそれ未満の乳酸塩、好ましくは１．２４ｍＭもしくはそれ未満の乳酸塩；および／または２ｍＭもしくはそれ未満のピルビン酸塩、好ましくは０．１６ｍＭもしくはそれ未満のピルビン酸塩を含み、好ましくは乳酸塩および／またはピルビン酸塩を含まないか、または実質的に含まない、配合用の培地。
【請求項１１】
前記培地が、
０．０１ｍＭもしくはそれ未満のアセチル−カルニチンまたは０．０１ｍＭもしくはそれ未満のＥＤＴＡを含み、好ましくはアセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡを実質的に含まない；および／または
０．０１ｍＭ未満のグルタミン、または３ｍＭ未満、好ましくは１．５ｍＭもしくはそれ未満のアラニル−グルタミンを含み、好ましくはグルタミンおよび／またはアラニル−グルタミンを含まないか、または実質的に含まない；および／または
以下の構成成分：少なくとも３．５ｍＭのグルコース；少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩、好ましくは少なくとも０．０６ｍＭのアスパラギン酸塩；および０．５ｍＭまたはそれ未満のグリシン、好ましくは０．１ｍＭまたはそれ未満のグリシンの１つまたは複数を含み、好ましくはグリシンを含まないか、または実質的に含まない
請求項１０に記載の配合用の培地。
【請求項１２】
着床のための胚を培養する方法であって、
第１の胚培養培地中でコンパクション前の胚をインキュベートするステップと、
前記第１の胚培養培地に請求項１０または１１に記載の配合用の培地を添加するステップであって、配合された胚培養培地を形成するステップと、
前記配合された胚培養培地中で前記胚を着床のためにさらにインキュベートするステップと
を含む方法。
【請求項１３】
（ｉ）第１の胚培養培地、および
（ｉｉ）請求項１０または１１に記載の配合用の培地
を含むコンビネーション製品。
【請求項１４】
（ａ）前記胚培養培地中で胚を培養するための指示書、（ｂ）前記胚培養培地に前記配合用の培地を添加して、配合された胚培養培地を形成するための指示書、（ｃ）前記配合された胚培養培地中で前記胚をインキュベートするための指示書、および（ｄ）前記胚を着床させるための指示書の１つまたは複数をさらに含む、請求項１３に記載のコンビネーション製品。
【請求項１５】
（ｉ）第１の胚培養培地、および
（ｉｉ）請求項１０または１１に記載の配合用の培地
を含むキット。
【請求項１６】
胚をガラス化する方法であって、
第１の胚培養培地中でコンパクション前の段階の胚をインキュベートするステップと、
前記第１の胚培養培地に第２の培地を添加するステップであって、配合された胚培養培地を形成するステップと、
前記配合された胚培養培地中で前記胚をさらにインキュベートするステップと、
前記胚を凍結させるステップと
を含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
本開示のある特定の実施形態は、本明細書に記載される通りにガラス化する方法を使用して生成された、ガラス化された胚を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
着床のための胚を培養する方法であって、
第１の胚培養培地中でコンパクション前の段階の胚をインキュベートするステップと、
前記第１の胚培養培地に第２の培地を添加するステップであって、配合された胚培養培地を形成するステップと、
前記配合された胚培養培地中で前記胚を、着床のためにさらにインキュベートするステップと
を含む方法。
（項目２）
前記第１の胚培養培地中でコンパクション前の胚をインキュベートするステップが、前記胚がコンパクション後の胚を形成するのに十分な期間を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記第１の胚培養培地中でコンパクション前の胚をインキュベートするステップが、２４〜７２時間の範囲の期間を含む、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記配合された胚培養培地中で前記胚をインキュベートするステップが、前記胚が桑実胚または胚盤胞を形成するのに十分な期間を含む、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
前記配合された胚培養培地中で前記胚をインキュベートするステップが、２４〜１４４時間の範囲の期間を含む、項目１から４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記第１のまたは第２のまたは配合された培地が、１種または複数の抗酸化物質を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記第１のまたは第２のまたは配合された培地が、アセチル−カルニチン、アセチルシステインまたはリポ酸ならびに／または許容されるその塩および／もしくは誘導体を含む群から選択される１種または複数の抗酸化物質を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記第１のまたは第２のまたは配合された培地中のアセチルカルニチンの濃度が、５μＭ〜１ｍＭを含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記第１の胚培養培地が、０．１ｍＭを超えるピルビン酸塩、好ましくは０．２０ｍＭを超えるピルビン酸塩、好ましくは０．２５ｍＭを超えるピルビン酸塩、好ましくは０．３０ｍＭを超えるピルビン酸塩、より好ましくは０．３２ｍＭまたはそれを超えるピルビン酸塩を含む、項目１から８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記第１の胚培養培地が、０．０１ｍＭを超えるアスパラギン酸塩、好ましくは０．１０ｍＭを超えるアスパラギン酸塩、好ましくは０．１５ｍＭを超え、好ましくは０．２０ｍＭを超え、好ましくは０．２５ｍＭを超え、好ましくは０．３０ｍＭを超え、より好ましくは０．３２ｍＭまたはそれを超えるアスパラギン酸塩を含む、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記第１の胚培養培地が、０．０１ｍＭを超えるグリシン、好ましくは０．１０ｍＭを超えるグリシン、好ましくは０．１５ｍＭを超え、好ましくは０．２０ｍＭを超え、好ましくは０．２５ｍＭを超え、好ましくは０．３０ｍＭを超え、より好ましくは０．３２ｍＭまたはそれを超えるグリシンを含む、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記第１の胚培養培地が、以下の構成成分：少なくとも０．０５ｍＭのグルコース、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのグルコース；少なくとも２ｍＭの乳酸塩、好ましくは５ｍＭを超える乳酸塩；少なくとも０．１ｍＭのピルビン酸塩、好ましくは少なくとも０．３ｍＭのピルビン酸塩；少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのアスパラギン酸塩；少なくとも０．０１ｍＭのグリシン、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのグリシン；および／または少なくとも０．１ｍＭのグルタミンおよび／または少なくとも０．１ｍＭのアラニル−グルタミン；ならびに任意選択で少なくとも０．１２ｍＭのアセチル−カルニチンの１つまたは複数を含む、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記第２の培地が、前記第１の胚培養培地よりも少ないピルビン酸塩または乳酸塩を含み、好ましくは前記第１の胚培養培地と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のピルビン酸塩または乳酸塩含量を含み、より好ましくは前記第２の培地が、ピルビン酸塩を含まず、または１０ｍＭ未満の乳酸塩、好ましくは５ｍＭ未満の乳酸塩、好ましくは１．２４ｍＭまたはそれ未満の乳酸塩を含む、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記第２の培地が、前記第１の胚培養培地よりも少ないアセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡを含み、好ましくは前記第１の胚培養培地と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のアセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡ含量を含み、より好ましくは前記第２の培地が、アセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡを含まないか、または実質的に含まない、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記第２の培地が、前記第１の胚培養培地よりも少ないグルタミンおよび／またはアラニル−グルタミンを含み、好ましくは前記第２の培地が、前記第１の胚培養培地と比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のグルタミンおよび／またはアラニル−グルタミン含量を含み、好ましくは前記第２の培地が、０．５ｍＭ未満のグルタミン、好ましくは０．１ｍＭまたはそれ未満のグルタミンを含み、好ましくはグルタミンを含まないか、もしくは実質的に含まず、かつ／または３ｍＭ未満のアラニル−グルタミン、好ましくは１．５ｍＭ未満のアラニル−グルタミンを含み、好ましくはアラニル−グルタミンを含まないか、もしくは実質的に含まない、項目１から１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記第２の培地が、少なくとも１ｍＭのグルコース濃度のグルコース、好ましくは少なくとも５ｍＭのグルコースを含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記第２の培地が、以下の構成成分：少なくとも１ｍＭのグルコース、少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩、およびゼロのまたは０．５ｍＭ未満のグリシン、好ましくは０．１ｍＭ未満のグリシン、の１つまたは複数を含む、項目１から１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記配合された胚培養培地が、以下の構成成分：少なくとも０．５ｍＭのグルコース、好ましくは少なくとも３ｍＭのグルコース；１  ５ｍＭ未満のアスパラギン酸塩、好ましくは６ｍＭ未満の乳酸塩；１．０ｍＭ未満のピルビン酸塩、好ましくは０．２ｍＭ未満のピルビン酸塩；少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩；および少なくとも０．０１のグリシン、好ましくは少なくとも０．０５ｍＭのグリシン；ならびに任意選択で少なくとも０．０６ｍＭのグルタミン、好ましくは少なくとも０．１ｍＭのグルタミンおよび／または任意選択で少なくとも０．０６ｍＭのアラニル−グルタミン、好ましくは少なくともアラニル−グルタミンおよび／または任意選択で少なくとも０．０１ｍＭのアセチル−カルニチンの１つまたは複数を含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
培養の全体を通してのアンモニウム濃度が、３００μＭ未満、好ましくは１９０μＭ未満である、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記第１の胚培養培地から前記胚を取り出すステップを含まないか、そして／または前記第２の培地を添加する前に前記胚を洗浄するステップを含まない、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記胚が、ヒトの胚である、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記胚が、動物の胚である、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
着床のための胚を培養する方法であって、前記胚を培養するために第１の培養培地に添加される配合用の培地を使用するステップを含む方法。
（項目２４）
着床のための胚を培養する方法であって、アセチル−カルニチン、ならびに／または許容されるその塩および／もしくは誘導体を含む１つまたは複数の培養培地中で前記胚を培養するステップを含む方法。
（項目２５）
生殖補助の方法であって、項目１から２４のいずれか一項に記載の方法を使用して、着床のための胚を培養するステップ、および前記胚を対象に着床させるステップを含む方法。
（項目２６）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ受精を含む、項目２５に記載の生殖補助の方法。
（項目２７）
前記対象が、動物対象である、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２８）
前記対象が、ヒト対象である、項目２５または２６に記載の方法。
（項目２９）
胚培養培地に添加するための配合用の培地であって、少なくとも１ｍＭのグルコース濃度のグルコース、好ましくは少なくとも３．５ｍＭのグルコース；および１０ｍＭもしくはそれ未満の乳酸塩、好ましくは１．２４ｍＭもしくはそれ未満の乳酸塩；および／または２ｍＭもしくはそれ未満のピルビン酸塩、好ましくは０．１６ｍＭもしくはそれ未満のピルビン酸塩を含み、好ましくは乳酸塩および／またはピルビン酸塩を含まないか、または実質的に含まない、配合用の培地。
（項目３０）
０．０１ｍＭもしくはそれ未満のアセチル−カルニチンまたは０．０１ｍＭもしくはそれ未満のＥＤＴＡを含み、好ましくはアセチル−カルニチンまたはＥＤＴＡを実質的に含まない、項目２９に記載の配合用の培地。
（項目３１）
０．０１ｍＭ未満のグルタミン、または３ｍＭ未満、好ましくは１．５ｍＭもしくはそれ未満のアラニル−グルタミンを含み、好ましくはグルタミンおよび／またはアラニル−グルタミンを含まないか、または実質的に含まない、項目２９または３０に記載の配合用の培地。
（項目３２）
以下の構成成分：少なくとも３．５ｍＭのグルコース；少なくとも０．０１ｍＭのアスパラギン酸塩、好ましくは少なくとも０．０６ｍＭのアスパラギン酸塩；および０．５ｍＭまたはそれ未満の、好ましくは０．１ｍＭまたはそれ未満のグリシンの１つまたは複数を含み、好ましくはグリシンを含まないか、または実質的に含まない、項目２９から３１のいずれか一項に記載の配合用の培地。
（項目３３）
着床のための胚を培養する方法であって、
第１の胚培養培地中でコンパクション前の胚をインキュベートするステップと、
前記第１の胚培養培地に項目２９から３２のいずれか一項に記載の配合用の培地を添加するステップであって、配合された胚培養培地を形成するステップと、
前記配合された胚培養培地中で前記胚を着床のためにさらにインキュベートするステップと
を含む方法。
（項目３４）
（ｉ）第１の胚培養培地、および
（ｉｉ）項目２９から３２のいずれか一項に記載の配合用の培地
を含むコンビネーション製品。
（項目３５）
（ａ）前記胚培養培地中で胚を培養するための指示書、（ｂ）前記胚培養培地に前記配合用の培地を添加して、配合された胚培養培地を形成するための指示書、（ｃ）前記配合された胚培養培地中で前記胚をインキュベートするための指示書、および（ｄ）前記胚を着床させるための指示書の１つまたは複数をさらに含む、項目３４に記載のコンビネーション製品。
（項目３６）
項目１から２８のいずれか一項に記載の方法を実施するためのキット。
（項目３７）
（ｉ）第１の胚培養培地、および
（ｉｉ）項目２９から３２のいずれか一項に記載の配合用の培地
を含むキット。
（項目３８）
項目２５から２８のいずれか一項に記載の方法を使用して生成された非ヒト動物。
（項目３９）
胚をガラス化する方法であって、
第１の胚培養培地中でコンパクション前の段階の胚をインキュベートするステップと、
前記第１の胚培養培地に第２の培地を添加するステップであって、配合された胚培養培地を形成するステップと、
前記配合された胚培養培地中で前記胚をさらにインキュベートするステップと、
前記胚を凍結させるステップと
を含む方法。
（項目４０）
項目３９に記載の方法を使用して生成された、ガラス化された胚。