【手続補正書】
【提出日】平成20年2月14日(2008.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
短縮型トロンボモジュリンタンパク質誘導体であって、該誘導体は、ＥＧＦ（４−６）様ドメイン、３８８位のメチオニンのロイシンによる置換、および、該誘導体のカルボキシ末端に付加されたＧＧＭアミノ酸モチーフを含む、タンパク質誘導体。
【請求項２】
前記ＧＧＭタンパク質モチーフが、Ｍアミノ酸残基に対応する非天然アミノ酸を有するタンパク質モチーフとして発現される、請求項１に記載の短縮型トロンボモジュリンタンパク質。
【請求項３】
配列番号３を含む、短縮型トロンボモジュリンタンパク質。
【請求項４】
短縮型トロンボモジュリン誘導体およびポリマーを含む短縮型トロンボモジュリン誘導体の結合体であって、該トロンボモジュリン誘導体は、ＥＧＦ（４−６）様ドメイン、３８８位のメチオニンのロイシンによる置換、および、該誘導体のカルボキシ末端に付加されたＧＧＭアミノ酸モチーフを含む、結合体。
【請求項５】
前記ポリマーが、ポリエチレングリコールを含む、請求項４に記載の結合体。
【請求項６】
短縮型トロンボモジュリン核酸誘導体であって、該誘導体は、ＥＧＦ（４−６）様ドメイン、３８８位のメチオニンのロイシンによる置換、および、該誘導体のカルボキシ末端に付加されたＧｌｙ  Ｇｌｙ  Ｍｅｔモチーフをコードし得る核酸配列を含む、核酸誘導体。
【請求項７】
配列番号１を含む、請求項５に記載のトロンボモジュリン誘導体。
【請求項８】
精製された短縮型トロンボモジュリン誘導体タンパク質を生成する方法であって、該タンパク質は、ＥＧＦ（４−６）様ドメイン、３８８位のメチオニンのロイシンによる置換、および、非天然アミノ酸を含み；該方法は、短縮型トロンボモジュリン核酸配列を提供する工程；非天然アミノ酸前駆体の存在下で、該核酸配列を組換え的に発現させる工程；および、組換え発現産物を精製する工程；それによって、精製された短縮型トロンボモジュリン誘導体タンパク質を生成する工程を包含する、方法。
【請求項９】
前記核酸配列が、配列番号１である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記非天然アミノ酸が、メチオニンアナログ、アラニンアナログ、フェニルアラニンアナログ、ロイシンアナログ、プロリンアナログおよびイソロイシンアナログからなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記メチオニンアナログが、Ｌ−２−アミノ−４−アジドブタン酸である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記非天然アミノ酸が、構築物のＣ末端部分に位置する、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
生物活性タンパク質の部位特異的ＰＥＧ化の方法であって、該方法は、変質可能なアミノ酸残基を同定する工程であって、該変質が、タンパク質の活性を実質的に損ねない、工程；該アミノ酸残基を変質させる工程；該生物活性タンパク質内のある部位に非天然アミノ酸残基を組み込む工程、および、該部位において、ＰＥＧポリマーを該非天然アミノ酸に結合体化させる工程、を包含する、方法。
【請求項１４】
前記生物活性タンパク質が、トロンボモジュリンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記生物活性タンパク質が、トロンボモジュリン誘導体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
トロンボモジュリンタンパク質またはトロンボモジュリン誘導体と、ポリマーとの結合体。
【請求項１７】
前記ポリマーがＰＥＧである、請求項１６に記載の結合体。
【請求項１８】
請求項１６に記載の結合体であって、前記ポリマーが、血漿中半減期の延長、タンパク質分解性の切断に対する安定性、および、タンパク質の免疫原性の減少、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される特性を前記結合体に付与し得る、結合体。
【請求項１９】
前記結合体が可溶性である、請求項１６に記載の結合体。
【請求項２０】
プロテインＣおよび非天然アミノ酸を活性化し得る、触媒的に活性な部位を含む、トロンボモジュリン誘導体。
【請求項２１】
前記誘導体が、トロンボモジュリンの細胞外部分を含む、請求項２０に記載のトロンボモジュリン誘導体。
【請求項２２】
前記活性な部位が、ＥＧＦ（４−６）ドメインを含む、請求項２０に記載のトロンボモジュリン誘導体。
【請求項２３】
前記非天然アミノ酸を介して、直鎖もしくは分枝の天然もしくは合成のポリマーに結合体化された、請求項２０に記載のトロンボモジュリン誘導体。
【請求項２４】
前記直鎖もしくは分枝の合成ポリマーが、ポリ（ｔ−ブチルアクリレート）、ポリ（ｔ−ブチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、糖脂質およびその模倣物；ならびに他のポリマー；糖タンパク質およびその模倣物、ポリ（アルギニン）、多糖類およびその模倣物；ならびに、当該分野で理解される他のポリマーからなる群より選択される、請求項２３に記載の誘導体。
【請求項２５】
トロンボモジュリン誘導体を基質に結合体化させる方法であって、該基質は、合成もしくは天然物質の表面；該結合体の組織特異的もしくは部位特異的な送達のためのターゲティング基；および、１以上のさらなる抗炎症性／抗血栓性特性を有し得る化合物からなる群より選択される、方法。
【請求項２６】
１以上の状態の処置のための全身性薬剤として作用し得る、トロンボモジュリン誘導体またはその結合体であって、該１以上の状態は、微小血管もしくは大血管の血餅、脳卒中、心臓発作、播種性血管内凝固症候群、および他の炎症性もしくは血液凝固促進性の状態からなる群より選択される、誘導体。
【請求項２７】
医学的に移植されるか、または、ヒトの組織もしくは体液に接触するデバイスの表面のコーティングであって、トロンボモジュリン誘導体またはその結合体を含む、コーティング。
【請求項２８】
前記移植されるか、または、ヒトの組織もしくは体液に接触するデバイスは、脈管グラフト、ステント、心臓弁、透析膜、膜型人工肺、カテーテルおよびガイドワイヤからなる群より選択される、請求項２７に記載のコーティング。
【請求項２９】
トロンボモジュリン誘導体またはその結合体を含む、生細胞または生組織のためのコーティング。
【請求項３０】
前記細胞または組織が、平滑筋細胞、線維芽細胞、上皮細胞、幹細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、膵島、遺伝子操作された細胞、および他の細胞からなる群より選択される、請求項２９に記載のコーティング。
【請求項３１】
請求項２７に記載のコーティングであって、該コーティングは、前記細胞または組織の抗炎症性特性を確立または増強させ得る、コーティング。
【請求項３２】
短縮型ＴＭ誘導体と、血液または組織と接触する表面との共有結合性の結合体であって、該結合体は、スペーサーとして、天然もしくは合成のポリマーを含む、結合体。
【請求項３３】
実質的にタンパク質の生物活性を保持したままで、合成もしくは天然の物質に対して、部位特異的にトロンボモジュリンを共有結合性に結合体化するための、方法。
【請求項３４】
組換えトロンボモジュリンＴＭ構築物であって、ＥＧＦ様ドメイン４−６と、必要に応じて該構築物のＣ末端部分に単一もしくは複数の非天然アミノ酸を含む、構築物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の構築物であって、該構築物は、１以上の非天然アミノ酸を介する、適切なポリマースペーサーとの反応により改変される、構築物。
【請求項３６】
請求項３５に記載の改変された構築物であって、該改変された構築物は、表面上へのさらなる固定化のため、または、抗炎症性活性もしくは抗血栓性活性であり得る、直鎖もしくは多官能性の、天然もしくは合成の化合物への結合体化のために適合される、構築物。
【請求項３７】
ＴＭまたはＴＭ誘導体の生物学的結合体を生成する方法であって、該方法は、ＴＭの生物活性を保存するような、中程度の結合体化反応を包含する、方法。
【請求項３８】
トロンボモジュリン構築物であって、該構築物は、天然もしくは合成のポリマー；または、抗体もしくは他のリガンド認識分子のような他の天然分子に結合体化される、構築物。
【請求項３９】
前記リガンド認識分子が、抗フィブリン抗体である、請求項３８に記載の構築物。
【請求項４０】
請求項３８に記載の結合体化された構築物であって、結合体化部分は、組換えＴＭタンパク質における少なくとも１つの非天然アミノ酸を介して結合される、構築物。
【請求項４１】
ポリ（エチレングリコール）分子に結合体化された構築物であって、該ＰＥＧ分子が、直鎖状または分枝状である、構築物。
【請求項４２】
前記ＰＥＧが直鎖状である、請求項４１に記載の構築物。
【請求項４３】
表面への係留のために、天然もしくは合成のポリマーに結合体化された、トロンボモジュリン構築物。
【請求項４４】
前記天然もしくは合成のポリマーが、多官能性である、請求項４３に記載の構築物。
【請求項４５】
前記ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）である、請求項４３に記載の構築物。
【請求項４６】
請求項４３に記載の構築物であって、さらに、ビオチン、結合体化されたジエン、アジド、アルキン、ジフェニルホスフィン、トリアリールホスフィン；および、当該分野で理解される他の基からなる群より選択される係留基を含む、構築物。
【請求項４７】
請求項４３に記載の構築物であって、さらに、シアリル−ルイスＸ；抗体、Ｆａｂフラグメントなど；ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１もしくは他の炎症性細胞表面タンパク質を認識し得るタンパク質もしくは非タンパク質の認識分子（アプタマーを含む）；抗フィブリン抗体；ストレプトアビジン；アジド；アルキン；Ｎ−（ε−マレイミドカプロイル）；ならびに、当該分野で理解される他のターゲティング基からなる群より選択されるターゲティング基を含む、構築物。
【請求項４８】
合成物質または天然物質の表面への係留のために、合成ポリマーに結合体化された、ＴＭ構築物。
【請求項４９】
前記合成物質が、ポリ（テトラフルオロエチレン）、ポリシロキサン、ポリ（エーテルウレタンウレア）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ガラス表面および誘導体；ならびに、当該分野で理解される他の物質からなる群より選択される、請求項４８に記載の構築物。
【請求項５０】
前記天然物質が、細胞、組織および血管からなる群より選択される、請求項４８に記載の構築物。
【請求項５１】
医学的に移植されるか、または、ヒトの組織もしくは体液と接触するデバイスのための表面コーティングであって、該コーティングは、ＴＭ構築物またはその結合体を含む、コーティング。
【請求項５２】
ＴＭ構築物またはその結合体を含む、生細胞または生組織のための表面コーティング。
【請求項５３】
多官能性の天然もしくは合成のポリマーに結合体化された、組換えトロンボモジュリン構築物であって、該ポリマーは、抗炎症性特性または抗血栓性特性を有し得る、構築物。
【請求項５４】
前記合成ポリマーが、１以上の抗炎症性基、または１以上のさらなる抗炎症性基を含む、請求項５３に記載の構築物。
【請求項５５】
前記抗炎症性基が、シアル酸；その模倣物／誘導体；ならびに、当該分野で理解される他の基を含む、請求項５４に記載の構築物。
【請求項５６】
合成ポリマーに結合体化されたＴＭ構築物であって、該構築物は、さらに、抗凝固性基または抗血栓性基を含む、構築物。
【請求項５７】
前記基が、ヘパリン；その模倣物／誘導体；ならびに、当該分野で理解される他の基を含む、請求項５６に記載の構築物。
【請求項５８】
病状の処置のための全身性薬剤であって、該薬剤は、ＴＭ構築物またはその結合体を含み、該状態は、微小血管もしくは大血管の血餅、脳卒中、心臓発作、播種性血管内凝固症候群、または他の炎症性もしくは血液凝固促進性の状態に関連する、薬剤。
【請求項５９】
病状の処置のための組成物であって、本発明のＴＭ構築物またはその結合体を含む、組成物。
【請求項６０】
前記状態は、微小血管もしくは大血管の血餅、脳卒中、心臓発作、播種性血管内凝固症候群、または他の炎症性もしくは血液凝固促進性の状態に関連する、請求項５９に記載の組成物。