【手続補正書】
【提出日】平成19年12月10日(2007.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えB型肝炎ウイルスコア（HBc）タンパク質キメラ分子であって、約150から約375アミノ酸残基の長さを有し、ドメインI、II、III及びIVと称される、ペプチド結合した4つのアミノ酸残基配列ドメインをN-末端から含み、ここで、
（a）ドメインIは、（i）その配列が少なくともHBcの4位から約75位の残基配列を含
む約75から約160アミノ酸残基、（ii）配列番号:1のHBcのN-末端に対して約1から約-55のキメラ分子内の位置に存在する1つから3つのシステイン残基（N-末端システイン残基）であって、前記1つ又は2つ以上のN-末端システイン残基は、HBcのプレコア配列以外の配列内に存在する前記N-末端システイン残基、及び（iii）HBc配列のN-末端又は前記N-末端の約15残基内でペプチド結合した、配列番号:9のインフルエンザA M2ポリペプチドの約6から約24残基の2つから4つの配列を含み；
（b）ドメインIIは、約残基75とペプチド結合した約0から約60のアミノ酸残基を含み、ここで（i）前記のHBc配列の0から全部が76位から85位に存在し、さらに（ii）配列番号:9のインフルエンザA M2ポリペプチドの6から約24残基の1つ又は2つ以上のリピートを構成する6から約48残基の随意配列を含み； 
（c）ドメインIIIは、約残基85とペプチド結合した約86位から約135位のHBc配列であり；さらに
（d）ドメインIVは、（i）ドメインIIIの約135位の残基とペプチド結合した、約136位から140位の残基＋141位から156位のHBcアミノ酸残基配列の16残基まで、（ii）0から3つのシステイン残基、及び（iii）HBcの156位からHBcのC-末端に対して異種である配列内の約100までのアミノ酸残基を含み、
前記キメラ分子は、（i）HBc配列にわずか10%の保存的置換アミノ酸残基を含み、（ii）自己会合して宿主細胞内での発現時に核酸と実質的に結合しない粒子を形成し、さらに前記粒子は、前記N-末端システイン残基を欠くがその他の点では同一であるHBcキメラから形成される粒子、又はキメラ分子内に存在するN-末端システイン残基が別の残基によって置き換えられている粒子よりも形成時により安定である、前記組換えB型肝炎ウイルスコア（HBc）タンパク質キメラ分子。
【請求項２】
ドメインI、II、III及びIVと称される4つのペプチド結合ドメインをN-末端から含む、約150から約235アミノ酸残基の配列を有する、組換えB型肝炎ウイルスコア（HBc）タンパク質キメラ分子であって、ここで、
（a）ドメインIは、（i）その配列が少なくともHBcの4位から約75位の残基配列を含
む約95から約140アミノ酸残基、（ii）配列番号:1のHBcのN-末端に対して約1から約-55のキメラ分子内の位置に存在する1つから3つのシステイン残基（N-末端システイン残基）であって、前記1つ又は2つ以上のN-末端システイン残基はHBcのプレコア配列以外の配列内に存在する前記N-末端システイン残基、及び（iii）HBc配列のN-末端又は前記N-末端の約15残基内でペプチド結合した、配列番号:9のインフルエンザA M2ポリペプチドの約6から約24残基の2つから4つの配列を含み；
（b）ドメインIIは、約残基75とペプチド結合した約0から約60のアミノ酸残基を含み、ここで（i）前記のHBc配列の0から全部が76位から85位に存在し、さらに（ii）配列番号:9のインフルエンザA M2ポリペプチドの6から約24残基の1つ又は2つ以上のリピートを構成する6から約48残基の随意配列を含み； 
（c）ドメインIIIは、本質的に約86位から約135位のHBc配列から成り；さらに
（d）ドメインIVは、（i）ドメインIIIの135位の残基とペプチド結合した、約136位から140位の残基＋141位から156位のHBcアミノ酸残基配列の16残基まで、（ii）0又は1つのシステイン残基、及び（iii）HBcの156位からHBcのC-末端に対して異種である配列内の約50までのアミノ酸残基を含み、
前記キメラ分子は、（i）HBc配列にわずか10%の保存的置換アミノ酸残基を含み、（ii）自己会合して宿主細胞内での発現時に核酸と実質的に結合しない粒子を形成し、さらに前記粒子は、前記N-末端システイン残基を欠くがその他の点では同一であるHBcキメラから形成される粒子、又はキメラ分子内に存在するN-末端システイン残基が別の残基によって置き換えられている粒子よりも形成時により安定である、前記組換えB型肝炎ウイルスコア（HBc）タンパク質キメラ分子。
【請求項３】
請求項1に記載の組換えB型肝炎ウイルスコア（HBc）タンパク質キメラ分子で構成された粒子。
【請求項４】
請求項２に記載の組換えB型肝炎ウイルスコア（HBc）タンパク質キメラ分子で構成された粒子。
【請求項５】
医薬的に許容できる希釈剤に溶解又は分散した、請求項３に記載の免疫原性粒子の免疫原的有効量を含むワクチン又は接種物。
【請求項６】
医薬的に許容できる希釈剤に溶解又は分散した、請求項４に記載の免疫原性粒子の免疫原的有効量を含むワクチン又は接種物。
【請求項７】
請求項１に記載の組換えHBcタンパク質分子をコードする核酸、又はその変種、類似体若しくは相補物。
【請求項８】
請求項２に記載の組換えHBcタンパク質分子をコードする核酸、又はその変種、類似体若しくは相補物。
【請求項９】
請求項１に記載の組換えHBcタンパク質分子をコードする遺伝子、又はその変種、類似体若しくは相補物を規定する核酸セグメントに機能的に連結されたベクター、及び適合宿主細胞内で前記遺伝子の発現を駆動するために適したプロモーターを含む組換え核酸分子。
【請求項１０】
請求項２に記載の組換えHBcタンパク質分子をコードする遺伝子、又はその変種、類似体若しくは相補物を規定する核酸セグメントに機能的に連結されたベクター、及び適合宿主細胞内で前記遺伝子の発現を駆動するために適したプロモーターを含む組換え核酸分子。
【請求項１１】
請求項１０に記載の組換え核酸分子で形質転換された宿主細胞。
【請求項１２】
請求項９に記載の組換え核酸分子で形質転換された宿主細胞。
【請求項１３】
B型肝炎ウイルスコア（HBc）タンパク質に融合したインフルエンザAウイルスM2eポリペプチドを含む複数のキメラ分子を有する組換え免疫原性粒子を製造する方法であって、下記工程(a)〜(c)：
(a)組換えHBcキメラタンパク質分子の粒子を宿主細胞において発現させる工程、
(b)宿主細胞を溶解する工程、及び
(c)組換えHBcキメラタンパク質分子の粒子を、i)メタロプロテアーゼ又はセリンプロテアーゼの阻害剤を阻害量で含む緩衝液中で単離するか、ii)約５０℃〜約７０℃の緩衝液中で約１．５時間〜約３時間の間単離するか、又はiii)メタロプロテアーゼ又はセリンプロテアーゼの阻害剤を阻害量で含みかつ約５０℃〜約７０℃の緩衝液中で約１．５時間〜約３時間の間単離する工程
を含み、
各キメラ分子は、約150から約375アミノ酸残基の長さを有し、配列番号:9の6から約24残基の配列を含み、かつ、ドメインI、II、III及びIVと称される、ペプチド結合した4つのアミノ酸残基配列ドメインをN-末端から含み、ここで、
（a）ドメインIは、（i）その配列が少なくともHBcの4位から約75位の残基配列を含む約75から約160アミノ酸残基、及び（ii）配列番号:1のHBcのN-末端に対して約1から約-55のキメラ分子内の位置に存在する1つから3つのシステイン残基（N-末端システイン残基）であって、前記1つ又は2つ以上のN-末端システイン残基は、HBcのプレコア配列以外の配列内に存在する前記N-末端システイン残基を含み；
（b）ドメインIIは、約残基75とペプチド結合した約0から約60のアミノ酸残基を含み、ここで（i）前記のHBc配列の0から全部が76位から85位に存在し、さらに（ii）配列番号:9のインフルエンザA M2ポリペプチドの6から約24残基の1つ又は2つ以上のリピートを構成する6から約48残基の随意配列を含み；
（c）ドメインIIIは、約残基85とペプチド結合した約86位から約135位のHBc配列であり；さらに
（d）ドメインIVは、（i）ドメインIIIの約135位の残基とペプチド結合した、約136位から140位の残基＋141位から149位のHBcアミノ酸残基配列の9残基まで、（ii）0から3つのシステイン残基、（iii）互いに隣接する4つ未満のアルギニン又はリジン残基又はそれらの混合物、（iv）HBcの164位からHBcのC-末端に対して異種である配列内の約100までのアミノ酸残基を含み、
前記キメラ分子は、（i）HBc配列に、配列番号１〜６に対してわずか10%の保存的置換アミノ酸残基を含み、（ii）自己会合して宿主細胞内での発現時に核酸と実質的に結合しない粒子を形成し、さらに前記粒子は、前記N-末端システイン残基を欠くがその他の点では同一であるHBcキメラから形成される粒子、又はキメラ分子内に存在するN-末端システイン残基が別の残基によって置き換えられている粒子よりも形成時により安定である、前記製造方法。