【手続補正書】
【提出日】平成20年2月27日(2008.2.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  油料種子出発原料を水性抽出し、そして分別し、低価値副産物または廃棄成分(waste stream)を有意な量含まない高価値産物を生成するための方法であって、
（ａ）ナタネまたはキャノーラ出発原料を、温和な抽出条件下で、水性溶液と混合し、抽出されたタンパク質を含む水性抽出物、ナタネまたはキャノーラ由来の細胞ミートの小固形物断片および繊維質材料(fibrous material)を含む水性混合物を形成させるステップ、
（ｂ）当該水性混合物を、濾過およびふるい分けの手段による分離の対象とし、抽出固形物残さの乾物基準で少なくとも２０重量％のタンパク質を含む抽出固形物残さを残しつつ、抽出されたタンパク質を含む水性抽出物および細胞ミートの小固形物断片を含む濾液を取得するステップ、
（ｃ）当該水性抽出物および細胞ミートの小固形物断片を、フィターゼ富化(enriched)酵素で処理し、油料種子出発原料中に含まれる総タンパク質の少なくとも約３０重量％を含む脱フィチン化されたタンパク質富化抽出物分画を取得するステップ、
（ｄ）当該脱フィチン化され、タンパク質富化された抽出物分画を処理し、当該抽出物中に含まれるタンパク質のカード形成を誘導するステップ、および
（ｅ）カード形成したタンパク質を含む当該抽出物分画を、固体−液体分離の対象とし、可溶性タンパク質およびタンパク質富化され、脱フィチン化された固形物分画を含む脱フィチン化された液体分画を取得するステップ、
を含む方法。
【請求項２】  該水性溶液が、実質的に酸、塩基または塩を含まない水である、請求項１の方法。
【請求項３】  該細胞ミートの小固形物断片が、０．１５ｍｍのスクリーン開口を通過する、請求項１の方法。
【請求項４】  ステップ（ｂ）からの当該抽出固形物残さが、有用なタンパク質−繊維産物として回収される、請求項１、２または３の方法。
【請求項５】  当該タンパク質富化され脱フィチン化された固形物分画、およびステップ（ｅ）からの可溶性タンパク質を含む当該脱フィチン化された液体分画が、有用タンパク質産物として別々に回収される、請求項１ないし４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】  該出発原料が、ナタネまたはキャノーラに由来する、油を抽出され、脱溶媒されたフレークを含む、請求項１ないし５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】  該脱溶媒されたフレークが軽く焼いた(lightly toasted)フレークである、請求項６記載の方法。
【請求項８】  該脱フィチン化された水性抽出物を加熱し、該抽出物中に含まれるタンパク質のカード形成を誘導する、請求項１ないし７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】  該油料種子出発原料を約１０ないし５０％（ｗ／ｖ）の濃度で水性溶液と混合する、請求項１ないし８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】  該油料種子出発原料中に含まれる総タンパク質の５０重量％より多くが、水性抽出物中に抽出される、請求項１ないし９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】  該フィターゼ富化酵素での処理が、１０ないし７０℃の範囲の温度で実施される、請求項１ないし１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】  該フィターゼ富化酵素での処理が、該水性抽出物中に含まれる全フィテートの５０％以上を加水分解する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】  該脱フィチン化された抽出物が、少なくとも８０℃の温度で少なくとも１分間加熱され、タンパク質のカード形成を誘導する、請求項１ないし１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】  当該タンパク質富化され、脱フィチン化された固形物分画が、１重量％より少ないフィテートを含む、請求項１ないし１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】  可溶性タンパク質を含むタンパク質富化され、脱フィチン化された当該液体分画が、さらに限外濾過によって処理され、濃縮され、そしてより低分子量の成分から可溶性タンパク質を一部分離する、請求項１ないし１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】  当該タンパク質富化され、脱フィチン化された固形物分画を乾燥し、高タンパク質、低フィテートタンパク質濃縮物を生産する、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】  当該タンパク質富化され、脱フィチン化された固形物分画が、該固形物分画の乾物基準で少なくとも４５重量％のタンパク質を含む、請求項１６記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
技術分野
本発明は概括的には、低価値副産物または廃棄成分(waste stream)を有意な量含まない高価値産物を生成する、油料種子(oilseed)材料の水性抽出、分別および酵素的処理に関する。特に、該分別スキームは、第１に反芻動物での使用および第２に脱フィチン化高タンパク質分画のための、タンパク質繊維飼料成分(protein-fiber feed ingredient)を生成する。該脱フィチン化高タンパク質分画は、多様な種の動物のための飼料成分としての価値を有する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
フィチン酸は、ミネラル、アミノ酸およびタンパク質と複合体を形成することができ、それによって栄養消化性を減少させる。さらに、フィチン酸分子中のリンは、該動物には多くは利用できず、そして糞便中に排出される。フィテート−Ｐのこの低い消化性のために、動物の要求に合致するためには食餌は十分利用可能な食物性Ｐで処方しなければならず、そしてこれはしばしば飼料のコストを増加させる。加えて、厩肥中の未消化Ｐは、環境を破壊し得、そして集約的な家畜生産の領域で相当の問題である。全体として、キャノーラミール中の高繊維および高フィテート含量は、単胃性動物、例えば、ブタ、ニワトリおよび魚のためのタンパク質源としてのその飼料価値を限定する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
反芻動物、例えばウシは、ルーメン中の発酵によって繊維からエネルギーを抽出できる。さらに、ルーメン微生物は、フィテートを効率的に加水分解し、こうして抗栄養性効果について有力であり、そして食物性フィチン酸からの環境ヘのダメージは、反芻動物に給餌することにおける問題についてより小さい。高度に可溶性のタンパク質を急速に加水分解し、そしてルーメン中の微生物によって利用する。ルーメン中の分解に抵抗性であるが、小腸のその後の通過の間に多くは消化されるタンパク質は、反芻動物について最高のタンパク質給餌価値を有する。反芻動物のための飼料成分として、キャノーラ種子中の高度に可溶性のタンパク質は、比較的不溶性である総キャノーラタンパク質の分画よりもより低い給餌価値を有する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
米国特許５，６５８，７１４号は、タンパク質を、抽出媒体のｐＨを７．０−１０．０の範囲に調節することによって植物性穀粉から効率的に抽出できることとを教示する。タンパク質を次いで、限外濾過および透過物のｐＨを３．５−６．０に調節することによる沈殿によって濃縮する。フィテートはタンパク質沈殿工程に抵抗性であり、こうして最終タンパク質濃縮物中のフィテート含量は、タンパク質単離物中の乾物の１％より小であると記載されている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
沈殿したタンパク質を、遠心分離によって残りの可溶分から分離した。該可溶性タンパク質を、１０，０００分子量カットオフ膜を使用して限外濾過およびダイアフィルトレーションによって濃縮した。不溶性残さ、等電沈殿タンパク質および限外濾過された可溶性タンパク質を、乾物、タンパク質、フィテートおよびグルコシノレートレベルについてアッセイした。これらの条件下で、キャノーラミールからの抽出されなかった残さは、出発原料中に存在する固形物の６７％およびタンパク質の６２％を含有した。乾物基準では、該ミール残さは、４２％のタンパク質および５．７％のフィテート含量を有した；該等電沈殿タンパク質は、８３％のタンパク質および２％のフィテート含量を有した；および該可溶性タンパク質は８６％のタンパク質および１．７％のフィテート含量を有した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
等電および可溶性タンパク質は、キャノーラミール出発原料中の全タンパク質中のそれぞれ２２％および１１％を含んだ。対照的に、アルカリ条件下のタンパク質抽出は、脱溶媒した非焼きキャノーラ白色フレークを出発原料として使用したときより実質的に高かった。この場合では、抽出されなかった残さは、出発原料中に見出される固形物の５０％およびタンパク質の１５％を含んだ。乾物基準では、該ミール残さは、１１％のタンパク質および６．５％のフィテート含量を有した；等電沈殿タンパク質は８７％のタンパク質および１％のフィテート含量を有した；および該可溶性タンパク質は９６％のタンパク質および１．２％のフィテート含量を有した。該等電および可溶性タンパク質は、キャノーラ白色フレーク出発原料中の全タンパク質中のそれぞれ４３％および３３％を含んだ。キャノーラ白色フレークからの非常に高い窒素抽出は、アルカリ抽出条件と組み合わせた出発原料の高い窒素可溶性を反映している。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
図面の簡単な説明
図１は、ＦＦＩまたはＮａｔｕｐｈｏｓフィターゼのいずれかでの６０分の加水分解後の、キャノーラ抽出物のフィテート濃度を示す。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
発明の開示
本発明は、その最も広い視点では、油料種子出発材料、例えば、ナタネまたはキャノーラに由来する油抽出した脱溶媒化フレークの、水性抽出および分別のための方法に関する。この油料種子材料は、水性溶媒を使用して最初に溶媒抽出され、そして水性抽出物を、残りの固形物から分離する。該水性抽出物を、フィターゼ富化酵素（phytase enriched enzyme）で処理することによって脱フィチン化する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
本発明の実施のためのベストモード
油料種子、例えばナタネまたはキャノーラの非油成分の固有の価値の十分な利用は、分別処理を要求し、ここで、該成分を目的の使用のために良好な価値を有する別個の産物に分割する。本発明による分別−処理系は、以下の基準を満たす：
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
タンパク質のような栄養分の抽出の効率は、高価値産物の実質的な量を生成するのに十分であるが、抽出残さの価値を過度に妥協してはならない。該抽出残さは、反芻動物のためのタンパク質−繊維としての良好な価値を保持する。高価値産物中の、繊維および例えばフィチン酸のような抗栄養性ファクターの含量は、ゼロまたは許容できる程低レベルである。該方法は、低価値副産物または廃棄成分を生成しない。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
よって、本発明は、油料種子の非油成分を別個の産物に効率的に分別するための、油料種子材料、例えば、キャノーラまたはナタネと使用できる、分別−処理スキームを開示する。これらの産物のそれぞれは、かなりの価値を有し、こうして該方法は、何らの実体的な廃棄成分または副産物成分を生成しない。さらに、該方法は、最小の水分含量の脱水された中間体産物を生成し、そして高レベルの水分または化学物質を要しない。該方法は、油料種子からのタンパク質の高度に効率的な抽出および単離に焦点を置き、そして該種子の非油成分の十分な使用をもたらす高価値産物への該材料の効率的な分別に焦点を置かない、先行技術と明確に異なる。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
該発明は、出発材料として、ナタネまたはキャノーラに由来する油料種子材料を使用する。特に、該出発材料は、ナタネまたはキャノーラからの、油を抽出された、焼かれないまたは軽度に焼かれた（toasted)フレークである。本発明では、焼かれないまたは軽度に焼かれたフレークを、油抽出後に残る、種子の残さとして定義し、ここでこの材料は、実質的な熱に対する曝露なく、脱溶媒化されている。より正確には、焼かれないまたは軽度に焼かれたフレークを、＞５０％の窒素分散性指数（Nitrogen dispersibility index,ＮＰＩ）を有するとして定義する。窒素分散性指数を、ＡＯＣＳ公式方法Ｂａによって決定できる。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
出発原料の抽出媒体との混合後、該混合物を、圧縮および／または真空濾過およびふるい分けまたは、可溶性材料プラス小固形物断片を含む液体から成る抽出物を除去する任意の他の分離系のような系を使用して脱水する。該抽出物中の小固形物断片は、本質的に細胞ミート（meats)を含む。該抽出された残さ材料は、より大きい抽出された粒子、例えば、外皮および抽出された細胞ミートのより大きい断片からなる。出発原料中のフェノール性化合物のほとんどは、種子外皮の繊維構造中に見出される。本発明で使用する抽出媒体中で酸、塩基または塩を使用しない温和な抽出条件下では、フェノール類の酸化はおこらず、そして高レベルの、フェノール類の酸化を阻害する化合物、例えば、Ｎａ２ＳＯ３を要しない。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
加えて、物理的繊維破壊の既知の方法、例えば、蒸気またはアンモニアに基づく繊維爆発を使用し、繊維消化性を増加させる得る。最終的に、該材料を繊維分解酵素、例えばフェルラ酸エステラーゼ、セルラーゼ、およびヘミセルラーゼで処理し、反芻動物に給餌したときの、産物内の繊維の消化性を増加させ得る。本発明にしたがって、脱水された抽出材料を既知のやり方で乾燥し、反芻動物、例えばウシおよびヒツジのためのタンパク質−繊維飼料として良好な価値を有する最終産物を生産することができる。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
恐らく、これは競合的キレート化の機構を経由して起こり、それによって該キレート化剤はミネラルに結合し、これによってフィチン酸へのミネラル結合を減少させ、そして該基質の該酵素による加水分解に対する感受性を増加させる。本発明の好ましい実施態様では、脱フィチン化工程でｐＨ修飾せずおよび化学キレート化剤を使用しない。本発明によると、酵素インキュベーションは１０−７０℃の温度で１ないし６００分であることができる。しかし、脱フィチン下の工程は比較的高効率的であり、そして本発明の好ましい実施態様では、該反応は、５０℃で６０分間で起こる。バルク抽出物中の全フィテートの５０％以上、好ましくは７０％以上が、酵素処理相中に加水分解される。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
本発明において、脱フィチン化抽出物のタンパク質含量は、乾物の＞４０％、好ましくは＞５０％である。脱フィチン化抽出物のフィテート含量は、乾物の＜１．０％、好ましくは＜０．５％である。既知のやり方で該抽出物を乾燥し、低フィテート高タンパク質産物を生成する選択肢が存在する。この産物は、動物、例えば魚、ブタ、家禽、反芻および愛玩動物のための飼料成分として良好な価値を有する。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
沈殿したタンパク質を次いで、液体から分離し、そして乾燥し、低フィテート高タンパク質産物を形成する。第２の例では、抽出物中のタンパク質を既知のやり方で、膜濾過のような方法によって濃縮し、分子量の相違に基づいて溶液中の分子を分離する。抽出物を限外濾過膜を通過させることによって、可溶性タンパク質を濃縮液（retentate)中で濃縮し、そしてより低い分子量の化合物から部分的に分離する。この限外濾過段階中に形成されるタンパク質濃縮物を乾燥し、低フィテート高タンパク質産物を生成することができる。さらに、２または３以上のタンパク質濃縮段階を逐次的に実施し、抽出物から多重産物を生産することができる。例として、沈殿段階、例えば、等電沈殿を使用し、抽出物中の全タンパク質の一部を沈殿させることができる。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
本発明の好ましい実施態様では、脱フィチン化抽出物を熱処理によってさらに処理する。脱フィチン化抽出物を１分以上＞８０℃で加熱する。好ましい実施態様では、脱フィチン化抽出物の該温度を、９５℃に上昇させ、そして５分間維持する。該抽出物中の全タンパク質の一部は、熱誘導性タンパク質カード形成に感受性である。さらに、熱処理工程は該抽出物を低温殺菌するために供し、それによって最終産物中にある微生物を減少させる。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
加えて、ＨＣｌのような酸またはＮａＯＨのような塩基を抽出物に所望により添加し、熱誘導性カード形成の工程を高める。好ましい実施態様では、化学物質を添加せず、そして熱誘導性タンパク質カード形成が、抽出物の補填なく起こる。該熱処理された脱フィチン化された抽出物を次いで、圧縮および／または真空濾過および／または固形物（カードタンパク質と小固形断片）から液体を効率的に除去する任意の他の分離系と組み合わせた、金属ふるいでのふるい分けのような系によって処理する。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
本発明によると、該フィテート含量は、該脱水された固形物中の乾物の＜１％、好ましくは＜０．５％である。本発明では、該脱水された固形物を既知のやり方で容易に乾燥し、低フィテート高タンパク質産物を、魚、ブタ、家禽、反芻動物および愛玩動物を含む動物の広範な種のための優れた飼料価値を有して生産することができる。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
熱処理され、脱フィチン化された抽出物の脱水中に形成される液体相は、熱誘導性沈殿に抵抗性である、可溶性炭水化物および可溶性タンパク質を主として含む。この液体を既知のやり方で乾燥し、魚、ブタ、家禽、反芻動物および愛玩動物を含む広範な種の動物のための飼料成分として価値を有する、エネルギー−タンパク質産物を生成することができる。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
本発明の好ましい実施態様では、熱処理した、脱フィチン化抽出物の脱水中に形成された液体相をさらに分別し、材料の価値を増加させる。ある例として、該抽出物中の全タンパク質の一部を既知のやり方で、例えば等電沈殿のような技術によって沈殿できる。沈殿したタンパク質を次いで分離し、そして乾燥し、低フィテート高タンパク質産物を形成することができる。沈殿したタンパク質の除去後の残留液体は、主として、熱誘導性および等電沈殿に抵抗性である可溶性炭水化物およびタンパク質を含む。この材料を乾燥し、ブタおよび家禽のような動物のための良好な飼料価値を有する産物を生成し得る。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
限外濾過中に形成されるタンパク質濃縮物を既知のやり方で乾燥し、高価値タンパク質産物を生成できる。本発明によると、このタンパク質濃縮物のフィテート含量は乾物の＜０．１％である。本発明の好ましい側面では、該タンパク質濃縮物のフィテート含量は、検出不能である。０−フィテート高タンパク質濃縮物は、魚、ブタ、ニワトリおよびウシのための飼料成分として優れた価値を有する。このタンパク質はさらに、食物成分としてのヒトの使用および消費のため可能性がある。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
本発明をより詳細に以下の実施例によって記載する。該実施例は、本発明を例示するためのみに提供し、そしていかなる意味でも本発明の範囲を限定するものと解すべきではない。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
２０ｋｇの脱溶媒化キャノーラフレークを、リボンブレンダー中で５０℃で６０リットルの水を、１０分間混合する。該混合物を圧縮ベルトフィルタープレス（Frontier Technolofies Incorporated）を経由して通過させる。該ベルトは、９プレッシャーロールおよびニップロールを有する、３０ｃｍの３５０ＣＦＭベルトからなる。ベルトプレスを経由した通過は、該混合物を抽出物とプレスケーキに分離する。該抽出物を、慣行的に確立された０．１５ｍｍ開口金属ふるいと適合化された小スケール商業的デパルパー（depulper）を経由して通過させた。該デパルパーは、該抽出物からより大きい粒子を除去する。該パルプを２度該デパルパーを通過させ、より大きい粒子の分離を改善した。第２の通過後に残っているパルプを、プレスケーキ材料と混合した。５０℃で２０リットルの水を、プレスケーキに添加し、そして一様なコンシステンシーが得られるまでリボンブレンダーで混合した。該混合物を次いで、ベルトフィルタープレスを経由して通過させた。ベルトプレスを経由するこの第２通過からの抽出物を、第１抽出のために記載のようにデパルパーによって処理した。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
第２抽出物の処理からの残っているパルプを、第２プレスケーキに混合した。５０℃で１０リットルの水を、一様なコンシステンシーが得られるまでリボンミキサーで第２プレスケーキと混合した。該混合物を次いで、６インチ脱水スクリュープレス（Model CP-6)Vincent Corporationによって処理し、抽出物およびプレスケーキを生成した。該抽出物を、前記のようにデパルパーによって処理し、そして該パルプを、該スクリュープレスによって第１通過から取得したプレスケーキに添加した。５０℃で５リットルの水を、一様なコンシステンシーが得られるまでリボンミキサーで該プレスケーキと混合した。該混合物を、該スクリュープレスを経由して通過させた。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
該抽出物を、前記のようにデパルパーによって処理し、そして該パルプを該プレスケーキに添加した。該パルプとプレスケーキの混合物を（さらなる水の添加なく）、該スクリュープレスを経由した最終的な通過によって処理し、最終的なプレスケーキおよび抽出物を生成する。抽出−脱水処理中の、種々の段階からの脱パルプ抽出物のすべてをプールし、そして混合し最終抽出物を生成する。該出発原料、最終抽出物および最終プレスケーキの粗タンパク質および乾物含量を、アッセイした。該タンパク質および乾物マスフローは、表１に示す。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
実施例２
キャノーラフレークの抽出物の脱フィチン化
フィターゼ(Natuphos(商標)5000, BASF)またはＦＦＩフィターゼ（FinnFeeds Internationalによって供給される非商業的酵素）を水で希釈し、その結果、２５０μｌアリコートは、それぞれフィターゼの０、２５０、５００、１０００、２０００、４０００、６０００、８０００、および１００００Ｕを添加した等価物であった。フィターゼ活性の１単位は、３７℃およびｐＨ５．５で過剰のフィチン酸ナトリウムから１分あたり１マイクロモルの無機リンを放出する酵素源の量として定義される。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
コニカル遠心管で、２０ｇの非焼き脱溶媒キャノーラフレークを、１００ｍｌの５０℃の０．７５％のＮａＣｌと混合した。該スラリーを３０００＊ｇで１０分間遠心分離した。該上清を除去し、そしてガラス試験管中、２ｍｌアリコートに分割し、そして５０℃のウォーターバス中におく。６０分が経過した後、該反応を、氷冷１ＭのＨＣｌを添加しそしてボルテックスで撹拌することによって停止させた。該サンプルを氷上で放置し、反応が停止することを確保した。該サンプルを可溶性リンについて分析し、そしてその６０分のサンプルをフィテートについて分析した。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
ＦＦＩおよびNatuphosフィターゼの６０分の処理後の、塩水抽出物中のフィテートのレベルを、図１に示す。たった２５０単位のいずれかのフィターゼを、ｐH５．８でのキャノーラ抽出物の完全な脱フィチン化に要した。キャノーラミールスラリーの完全な脱フィチン化は、５０００U／ｋｇのフィターゼを要することが、以前の研究で示された。以前の研究はまた、その脱フィチン化の効率がスラリーのｐＨを５．８から５．０に減少させることによって改善されたことを示したが、この研究では、ｐＨ５．８でなお、該反応が非常に速やかに起こった。
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
実施例３
キャノーラフレークの脱フィチン化抽出物の熱誘導性タンパク質カード
非焼き脱溶媒化キャノーラフレークを、実施例に記載のように抽出−脱水によって処理した。この場合ではしかし、該脱溶媒化フレークを１０Ｕ．Ｓ．メッシュふるいでふるい分けし、出発原料から大きな凝集物を除去した。
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
最終抽出物を、１００Ｌスチームケトル中に置き、そして抽出物の温度を、５０℃に上げた。フィターゼ（実施例２に記載したＦＦＩフィターゼ）を該混合物に添加し、１５００ＦＴＵ／ｋｇのオリジナルフレーク出発原料を提供した。該混合物を、機械的アジテーターで継続的に撹拌し、そして抽出物の脱フィチン化に影響するように、温度を６０分間維持した。脱フィチン化期間の終わりに、混合物の温度を９５℃に上げ、そしてこの温度を５分間維持した。該熱処理期間の終わりに、該ケトルヘの蒸気をとめ、そして冷水をラインを経由して流した。
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
タンパク質富化カードが該液体のトップに形成し、そして該カードを２０分の冷却期間中に硬化させた。ケトルの全内容物を、２００ミクロン開口ニテックス(nitex)ふるいに注いだ。固形物を、ふるい上にとり、そして該ふるいおよび内容物を折り重ね、そしてチーズ型中に置いた。該タンパク質富化カードを１０分間液圧チーズプレスで５ＰＳＩで圧縮した。
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
該圧力を１０ＰＳＩに上げ、そして１０分間維持した。該圧力を再び２０ＰＳＩに上げそしてさらに１０分間維持した。該圧力を再び３０ＰＳＩに上げ、そしてさらに１０分間維持した。最終的に該圧力を４０分に上げ、そして２０分間維持した。該出発フレーク、最終プレスケーキ、抽出物、脱水タンパク質富化カード、および脱フィチン化熱処理抽出物の脱水からの液体分画をタンパク質および乾物についてアッセイした。種々の分画のタンパク質および乾物含量およびマスフロータンパク質および乾物を表２に示す。
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
実施例４
キャノーラ抽出物の熱処理によって形成される、タンパク質カードの脱水中に得られた液体抽出物の限外濾過
液体抽出物を、キャノーラフレーク抽出物の熱処理によって形成された、タンパク質カードの圧縮脱水によって得た。液体抽出物を取得するための手法は、実施例１および３に記載したのと同じであった。
【手続補正３７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
７．５リットルの液体を、濾過処理の間に、一定の４５℃で維持した。該液体を、名目分子量カットオフが１００００である１８１２限外濾過膜を経由して通過させた。該透過物を収集し、そして濃縮液（retentate)を１．５Ｌに濃縮した。限外濾過の終了後、全部で６ラウンドのダイアフィルトレーションを行った。それぞれのランについて、４５℃で１．５Ｌの水を該濃縮液に添加し、そして該濃縮液を、１．５Ｌの体積に濾過した。最終濃縮液を、タンパク質および乾物含量についてアッセイした。９１．３％（乾物のパーセントとして表示）の最終タンパク質濃度が該濃縮液中について得られた。
【手続補正３８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、ＦＦＩまたはＮａｔｕｐｈｏｓフィターゼのいずれかでの６０分の加水分解後の、キャノーラ抽出物のフィテート濃度を示す。