【手続補正書】
【提出日】平成20年9月2日(2008.9.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２７】
ある実施形態では、薬剤融合体または薬剤複合体は、式Ｉ：
Ｈｉｓ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｇｌｙ１０−Ｘａａ１１−Ｐｈｅ１２−Ｔｈｒ１３−Ｘａａ１４−Ａｓｐ１５−Ｘａａ１６−Ｘａａ１７−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｘａａ２１−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ｘａａ２４−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｐｈｅ２８−Ｉｌｅ２９−Ｘａａ３０−Ｘａａ３１−Ｘａａ３２−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−Ｘａａ４１−Ｘａａ４２−Ｘａａ４３−Ｘａａ４４−Ｘａａ４５
式Ｉ−配列番号１７２
（ただし、
８位のＸａａは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
９位のＸａａは、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
１１位のＸａａは、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
１４位のＸａａは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
１６位のＸａａは、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、ＴｒｐまたはＬｙｓであり；
１７位のＸａａは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
１８位のＸａａは、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＬｙｓであり；
１９位のＸａａは、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、ＧｌｎまたはＬｙｓであり；
２０位のＸａａは、Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｍｅｔ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＬｙｓであり；
２１位のＸａａは、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
２２位のＸａａは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
２３位のＸａａは、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
２４位のＸａａは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
２５位のＸａａは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
２６位のＸａａは、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＨｉｓであり；
２７位のＸａａは、Ｌｅｕ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
３０位のＸａａは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
３１位のＸａａは、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
３２位のＸａａは、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり、
３３位のＸａａは、Ｖａｌ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
３４位のＸａａは、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＨｉｓであり；
３５位のＸａａは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓであり；
３６位のＸａａは、Ｇｌｙ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＨｉｓであり；
３７位のＸａａは、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓである、あるいは欠失しており；
３８位のＸａａは、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＨｉｓである、あるいは欠失しており；
３９位のＸａａは、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＨｉｓである、あるいは欠失しており；
４０位のＸａａは、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＬｙｓである、あるいは欠失しており；
４１位のＸａａは、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓである、あるいは欠失しており；
４２位のＸａａは、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、ＧｌｕまたはＡｓｐである、あるいは欠失しており；
４３位のＸａａは、Ｓｅｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓである、あるいは欠失しており；
４４位のＸａａは、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓである、あるいは欠失しており；
および４５位のＸａａは、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、ＡｓｐまたはＬｙｓである、あるいは欠失しているが；
３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３または４４位のアミノ酸が欠失している場合には、そのアミノ酸の下流の各アミノ酸も欠失している）
の配列を含むＧＬＰ−１類似体を含む。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２８】
別の実施形態では、薬剤融合体または薬剤複合体は、式（II）：
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｘａａ１６−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｘａａ１９−Ｘａａ２０−Ｇｌｕ−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ａｌａ−Ｘａａ２５−Ｘａａ２６−Ｘａａ２７−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｘａａ３３−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８−Ｘａａ３９−Ｘａａ４０−Ｘａａ４１−Ｘａａ４２−Ｘａａ４３−Ｘａａ４４−Ｘａａ４５−Ｘａａ４６
式（II）−配列番号１７３
（ただし、
Ｘａａ７は、Ｌ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、脱アミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、（３−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニンまたは４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ａｉｂ、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロへキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロへプチル）カルボン酸または（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１６は、ＶａｌまたはＬｅｕであり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、ＬｙｓまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ１９は、ＴｙｒまたはＧｌｎであり；
Ｘａａ２０は、ＬｅｕまたはＭｅｔであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、ＧｌｕまたはＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、ＬｙｓまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ２５は、ＡｌａまたはＶａｌであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、ＧｌｕまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ２７は、ＧｌｕまたはＬｅｕであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、ＧｌｕまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ３３は、ＶａｌまたはＬｙｓであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、ＡｓｎまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、Ａｒｇ、ＧｌｙまたはＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｐｒｏ、Ｌｙｓ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ３９は、Ｓｅｒ、Ｌｙｓ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ４０は、Ｇｌｙ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ４１は、Ａｌａ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ４２は、Ｐｒｏ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ４３は、Ｐｒｏ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ４４は、Ｐｒｏ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ４５は、Ｓｅｒ、アミドであるか、または存在せず；
Ｘａａ４６は、アミドであるか、または存在しないが；Ｘａａ３８、Ｘａａ３９、Ｘａａ４０、Ｘａａ４１、Ｘａａ４２、Ｘａａ４３、Ｘａａ４４、Ｘａａ４５またはＸａａ４６が存在しない場合には、下流の各アミノ酸残基も存在しない）
のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−１類似体を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２９】
本発明の別の実施形態では、薬剤融合体または薬剤複合体は、式（III）：
Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｘａａ１８−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｘａａ２２−Ｘａａ２３−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｘａａ２６−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｘａａ３０−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｘａａ３４−Ｘａａ３５−Ｘａａ３６−Ｘａａ３７−Ｘａａ３８
式（III）−配列番号１７４
（ただし、
Ｘａａ７は、Ｌ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、脱アミノ−ヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Ｎ’１−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、３−ピリジルアラニン、２−ピリジルアラニンまたは４−ピリジルアラニンであり；
Ｘａａ８は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、（１−アミノシクロプロピル）カルボン酸、（１−アミノシクロブチル）カルボン酸、（１−アミノシクロペンチル）カルボン酸、（１−アミノシクロへキシル）カルボン酸、（１−アミノシクロへプチル）カルボン酸または（１−アミノシクロオクチル）カルボン酸であり；
Ｘａａ１８は、Ｓｅｒ、ＬｙｓまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ２２は、Ｇｌｙ、ＧｌｕまたはＡｉｂであり；
Ｘａａ２３は、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、ＬｙｓまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ２６は、Ｌｙｓ、ＧｌｕまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ３０は、Ａｌａ、ＧｌｕまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ３４は、Ｌｙｓ、ＧｌｕまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ３５は、ＧｌｙまたはＡｉｂであり；
Ｘａａ３６は、ＡｒｇまたはＬｙｓであり；
Ｘａａ３７は、Ｇｌｙ、Ａｌａ、ＧｌｕまたはＬｙｓであり；
Ｘａａ３８は、Ｌｙｓ、アミドであるか、または存在しない）
のアミノ酸配列を含むＧＬＰ−１ペプチドを含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４２】
別の実施形態では、ＧＬＰ−１ペプチドは、ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫ−アミド−配列番号１７５である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４３】
別の実施形態では、ＧＬＰ−１ペプチドは、ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＸ−配列番号１７６（ただし、Ｘ＝ＰもしくはＹ、またはそれらの断片もしくは類似体）である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０４】
【図１Ａ】図１Ａは、マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）との結合によって選択された３種のＶκのアミノ酸配列のアラインメントを示す図である。アラインメントしたアミノ酸配列は、ＤＯＭ７ｍ−１６とも呼ばれるＭＳＡ１６（配列番号１）、ＤＯＭ７ｍ−１２とも呼ばれるＭＳＡ１２（配列番号２）およびＤＯＭ７ｍ−２６とも呼ばれるＭＳＡ２６（配列番号３）と表されるＶκに由来するものである。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ラット血清アルブミン（ＲＳＡ）との結合によって選択された６種のＶκのアミノ酸配列のアラインメントを示す図である。アラインメントしたアミノ酸配列は、ＤＯＭ７ｒ−１（配列番号４）、ＤＯＭ７ｒ−３（配列番号５）、ＤＯＭ７ｒ−４（配列番号６）、ＤＯＭ７ｒ−５（配列番号７）、ＤＯＭ７ｒ−７（配列番号８）およびＤＯＭ７ｒ−８（配列番号９）と表されるＶκに由来するものである。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）との結合によって選択された６種のＶκのアミノ酸配列のアラインメントを示す図である。アラインメントしたアミノ酸配列は、ＤＯＭ７ｈ−２（配列番号１０）、ＤＯＭ７ｈ−３（配列番号１１）、ＤＯＭ７ｈ−４（配列番号１２）、ＤＯＭ７ｈ−６（配列番号１３）、ＤＯＭ７ｈ−１（配列番号１４）、ＤＯＭ７ｈ−７（配列番号１５）と表されるＶκ由来のものである。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ヒト血清アルブミンとの結合によって選択された７種のＶＨのアミノ酸配列およびコンセンサス配列（配列番号２３）のアラインメントを示す図である。アラインメントした配列は、ＤＯＭ７ｈ−２２（配列番号１６）、ＤＯＭ７ｈ−２３（配列番号１７）、ＤＯＭ７ｈ−２４（配列番号１８）、ＤＯＭ７ｈ−２５（配列番号１９）、ＤＯＭ７ｈ−２６（配列番号２０）、ＤＯＭ７ｈ−２１（配列番号２１）およびＤＯＭ７ｈ−２７（配列番号２２）と表されるＶκに由来するものである。
【図１Ｅ】図１Ｅは、ヒト血清アルブミンおよびラット血清アルブミンとの結合によって選択される３種のＶκのアミノ酸配列のアラインメントを示す図である。アラインメントしたアミノ酸配列は、ＤＯＭ７ｈ−８（配列番号２４）、ＤＯＭ７ｒ−１３（配列番号２５）およびＤＯＭ７ｒ−１４（配列番号２６）と表されるＶκに由来するものである。
【図２Ａ−Ｂ】図２Ａおよび２Ｂは、ＭＳＡ１６ＩＬ−１ｒａ（ＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａとも呼ばれる）およびＩＬ−１ｒａＭＳＡ１６（ＩＬ−ｌｒａ／ＤＯＭ７ｍ−１６とも呼ばれる）融合体をそれぞれ発現させるために用いられるベクターの概略マップを示す図である。
【図２Ｃ】図２Ｃ〜２Ｄは、ＩＬ−ＩｒａＭＳＡ１６融合体（ＩＬ−Ｉｒａ／ＤＯＭ７ｍ−１６とも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列（配列番号２７）および融合体のアミノ酸配列（配列番号２８）を例示する図である。
【図２Ｄ】図２Ｃ〜２Ｄは、ＩＬ−ＩｒａＭＳＡ１６融合体（ＩＬ−Ｉｒａ／ＤＯＭ７ｍ−１６とも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列（配列番号２７）および融合体のアミノ酸配列（配列番号２８）を例示する図である。
【図２Ｅ】図２Ｅ〜２Ｆは、ＭＳＡ１６ＩＬ−１ｒａ融合体（ＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列（配列番号２９）および融合体のアミノ酸配列（配列番号３０）を例示する図である。
【図２Ｆ】図２Ｅ〜２Ｆは、ＭＳＡ１６ＩＬ−１ｒａ融合体（ＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａとも呼ばれる）をコードするヌクレオチド配列（配列番号２９）および融合体のアミノ酸配列（配列番号３０）を例示する図である。
【図２Ｇ】図２Ｇ〜２Ｈは、血清アルブミンと結合しなかったダミーＩＬ−１ｒａ融合体をコードするヌクレオチド配列（配列番号３１）および融合体のアミノ酸配列（配列番号３２）を例示する図である。
【図２Ｈ】図２Ｇ〜２Ｈは、血清アルブミンと結合しなかったダミーＩＬ−１ｒａ融合体をコードするヌクレオチド配列（配列番号３１）および融合体のアミノ酸配列（配列番号３２）を例示する図である。
【図３】図３Ａは、ＩＬ−１が、ＨｅＬａ細胞によるＩＬ−８の産生を誘導することを示す、およびＥＬＩＳＡアッセイにおいてＩＬ−８が検出される機構を示す例を示す図である。図３Ｂは、ＩＬ−１ｒａ（◆）、ＭＳＡ１６ＩＬ−１ｒａ（■）およびＩＬ−１ｒａＭＳＡ１６（△）が、ＩＬ−１によって誘導される、培養ＭＲＣ−５細胞によるＩＬ−８の分泌を各々阻害したことを示すグラフを示す図である。観察された阻害は、ＩＬ−１ｒａ、ＭＳＡ１６ＩＬ−１ｒａおよびＩＬ−１ｒａＭＳＡ１６について用量依存性であった。
【図４】図４Ａ〜４Ｃは、ＩＬ−１ｒａ（◆）、ＭＳＡ１６ＩＬ−１ｒａ（■）の双方とも、マウス血清アルブミンを含まない（４Ａ）、５％マウス血清アルブミンを含む（４Ｂ）または１０％マウス血清アルブミンを含む（４Ｃ）アッセイにおいて、ＩＬ−１によって誘導される、培養ＭＲＣ−５細胞によるＩＬ−８の分泌を阻害したということを示すグラフを示す図である。観察された阻害は、試験したすべての条件下で、ＩＬ−１ｒａおよびＭＳＡ１６ＩＬ−１ｒａについて用量依存性であった。
【図５】ＭＳＡ１６ＩＬ１−ｒａ融合体およびＩＬ−１ｒａＭＳＡ１６融合体は双方とも血清アルブミンと結合したが、ダミーＩＬ１−ｒａ融合体は結合しなかったということを実証するＥＬＩＳＡの結果の図式的提示を示す図である。
【図６Ａ−１】図６Ａはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とのクローンＤＯＭ７ｈ−１結合（６Ａ）の、ＢＩＡＣＯＲＥ親和性データを示すセンソグラムおよび表を示す図である。
【図６Ａ−２】図６Ａ−１の続き。
【図６Ｂ−１】図６ＢはＨＳＡとのＤＯＭ７ｈ−７結合（６Ｂ）の、ＢＩＡＣＯＲＥ親和性データを示すセンソグラムおよび表を示す図である。
【図６Ｂ−２】図６Ｂ−１の続き。
【図６Ｃ−１】図６Ｃはラット血清アルブミン（ＲＳＡ）とのＤＯＭ７ｒ−１結合の、ＢＩＡＣＯＲＥ親和性データを示すセンソグラムおよび表を示す図である。
【図６Ｃ−２】図６Ｃ−１の続き。
【図７】ＤＯＭ７ｈ−１、ＤＯＭ７ｒ−１、ＤＯＭ７ｈ−２、ＤＯＭ７ｒ−３、ＤＯＭ７ｈ−７、ＤＯＭ７ｈ−８、ＤＯＭ７ｒ−８、ＤＯＭ７ｒ−１３、ＤＯＭ７ｒ−１４、ＤＯＭ７ｍ−１６、ＤＯＭ７ｈ−２２、ＤＯＭ７ｈ−２３、ＤＯＭ７ｈ−２６、ＤＯＭ７ｒ−１６、ＤＯＭ７ｍ−２６、ＤＯＭ７ｒ−２７およびＤＯＭ７Ｒ−３１の、それらが結合する血清アルブミンに対する親和性を示す表を示す図である。
【図８】図８ＡはＧｅｎＢａｎｋに受託番号ＮＭ＿１７３８４２として寄託されるヒトインターロイキン１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）をコードする核酸のヌクレオチド配列（配列番号３３）を例示する図である。この核酸は、位置６５で始まるオープンリーディングフレームを有する。図８Ｂは、図８Ａ（配列番号３３）に示される核酸によってコードされるヒトＩＬ−１ｒａ（配列番号３４）のアミノ酸配列を例示する図である。成熟タンパク質は、１５２個のアミノ酸残基（配列番号３４のアミノ酸残基２６〜１７７）からなる。
【図９】ＣＤ１系統雄動物への単回の静脈内（ｉ．ｖ．）注射（用量は約１．５ｍｇ／ｋｇとした）後の、マウス血清におけるＭＳＡ結合性ｄＡｂ／ＨＡエピトープタグ融合タンパク質の濃度（μｇ／ｍＬ）を経時的に（日）示すグラフを示す図である。血清濃度は、ヤギ抗ＨＡ（Ａｂｃａｍ，ＵＫ）捕捉とプロテインＬ−ＨＲＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）検出試薬とを用い、ＥＬＩＳＡによって測定した。既知濃度のＭＳＡ結合性ｄＡｂ／ＨＡ融合体の標準曲線は、１×マウス血清の存在下で設定し、試験サンプルとの比較性を確実にした。１コンパートメントモデルでのモデリング（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）により、ＭＳＡ結合性ｄＡｂ／ＨＡエピトープタグ融合タンパク質は、最終相ｔ1/2  ２９．１時間および曲線下面積５５９時間・μｇ／ｍ１を有するとわかった。
【図１０】ラット血清アルブミン（ＲＳＡ）との結合によって選択したＶκのアミノ酸配列のアミノ酸配列を例示する図である。例示される配列は、ＤＯＭ７ｒ−１５（配列番号３７）、ＤＯＭ７ｒ−１６（配列番号３８）、ＤＯＭ７ｒ−１７（配列番号３９）、ＤＯＭ７ｒ−１８（配列番号４０）、ＤＯＭ７ｒ−１９（配列番号４１）と表されるＶκに由来するものである。
【図１１Ａ−１】図１１Ａは、ラット血清アルブミン（ＲＳＡ）と結合するＶκのアミノ酸配列のアミノ酸配列を例示する図である。例示される配列は、ＤＯＭ７ｒ−２０（配列番号４２）、ＤＯＭ７ｒ−２１（配列番号４３）、ＤＯＭ７ｒ−２２（配列番号４４）、ＤＯＭ７ｒ−２３（配列番号４５）、ＤＯＭ７ｒ−２４（配列番号４６）、ＤＯＭ７ｒ−２５（配列番号４７）、ＤＯＭ７ｒ−２６（配列番号４８）、ＤＯＭ７ｒ−２７（配列番号４９）、ＤＯＭ７ｒ−２８（配列番号５０）、ＤＯＭ７ｒ−２９（配列番号５１）、ＤＯＭ７ｒ−３０（配列番号５２）、ＤＯＭ７ｒ−３１（配列番号５３）、ＤＯＭ７ｒ−３２（配列番号５４）、ＤＯＭ７ｒ−３３（配列番号５５）と表されるＶκに由来するものである。
【図１１Ａ−２】図１１Ａ−１の続き。
【図１１Ａ−３】図１１Ａ−２の続き。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ラット血清アルブミン（ＲＳＡ）と結合するＶκのアミノ酸配列のアミノ酸配列を例示する図である。例示される配列は、ＤＯＭ７ｒ−２０（配列番号４２）、ＤＯＭ７ｒ−２１（配列番号４３）、ＤＯＭ７ｒ−２２（配列番号４４）、ＤＯＭ７ｒ−２３（配列番号４５）、ＤＯＭ７ｒ−２４（配列番号４６）、ＤＯＭ７ｒ−２５（配列番号４７）、ＤＯＭ７ｒ−２６（配列番号４８）、ＤＯＭ７ｒ−２７（配列番号４９）、ＤＯＭ７ｒ−２８（配列番号５０）、ＤＯＭ７ｒ−２９（配列番号５１）、ＤＯＭ７ｒ−３０（配列番号５２）、ＤＯＭ７ｒ−３１（配列番号５３）、ＤＯＭ７ｒ−３２（配列番号５４）、ＤＯＭ７ｒ−３３（配列番号５５）と表されるＶκに由来するものである。
【図１２】ＣＤ１系統雄動物への単回の静脈内（ｉ．ｖ．）注射（用量は約１．５ｍｇ／ｋｇとした）後の、マウス血清中の、各々ＨＡエピトープタグを含む、ＤＯＭ７ｍ−１６、ＤＯＭ７ｍ−２６またはＭＳＡと結合しない対照ｄＡｂの濃度（初期用量の％）を経時的に示すグラフを示す図である。血清濃度は、ヤギ抗ＨＡ（Ａｂｃａｍ，ＵＫ）捕捉とプロテインＬ−ＨＲＰ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）検出試薬とを用い、ＥＬＩＳＡによって測定した。既知濃度のＭＳＡ結合性ｄＡｂ／ＨＡ融合体の標準曲線は、１×マウス血清の存在下で設定し、試験サンプルとの比較性を確実にした。１コンパートメントモデルでのモデリング（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）により、対照ｄＡｂは２０分という最終相ｔ1/2αを有していたのに対し、ＤＯＭ７ｍ−１６、ＤＯＭ７ｍ−２６は血清中で有意に長く持続した。
【図１３】マウスコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルにおける関節炎の治療においてＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａは、ＩＬ−１ｒａまたはエンブレル（登録商標）（ｅｎｔａｒｅｃｅｐｔ；Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）よりもより有効であったということを示すグラフを示す図である。関節炎は、誘導し、２１日目に開始して、マウスを０．４ｍｇ／Ｋｇのデキサメタゾン（ステロイド）、１ｍｇ／ＫｇのＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａ（ＩＬ−１ｒａ／抗−ＳＡ  １ｍｇ／ｋｇ）または１０ｍｇ／ＫｇのＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａ（ＩＬ−１ｒａ／抗−ＳＡ  １０ｍｇ／ｋｇ）、１ｍｇ／ＫｇのＩＬ−１ｒａまたは１０ｍｇ／ＫｇのＩＬ−１ｒａ、５ｍｇ／Ｋｇのエンブレル（登録商標）（ｅｎｔａｒｅｃｅｐｔ；Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）または生理食塩水で治療した。結果は、この研究では、ＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａは、ＩＬ−１ｒａまたはエンブレル（登録商標）（ｅｎｔａｒｅｃｅｐｔ；Ｉｍｍｕｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）よりもより有効であったということを示す。ＩＬ−１ｒａに対する反応は、予想通り用量依存的であり、ＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａに対する反応も用量依存的であった。１ｍｇ／ＫｇのＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａでの治療の平均スコアは、１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１ｒａでの治療によって得られた平均スコアよりも一貫して低かった。これらの結果は、この研究では、ＤＯＭ７ｍ−１６／ＩＬ−１ｒａでの治療は、ＩＬ−１ｒａよりも１０倍より有効であったということを示す。
【図１４Ａ−Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｇは、サポリンポリペプチドのアミノ酸配列を例示する図である。図１４Ａは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ２７５５９（配列番号６０）として寄託されるサポリン−２前駆体のアミノ酸配列を例示する。シグナルペプチドは、配列番号６０のアミノ酸１〜２４である。図１４Ｂは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ２７５６０（配列番号６１）として寄託されるサポリン−３のアミノ酸配列を例示する。図１４Ｃは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ２７５６１（配列番号６２）として寄託されるサポリン−４前駆体のアミノ酸配列を例示する。シグナルペプチドは、配列番号６２のアミノ酸１〜２４である。図１４Ｄは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ４１３８９（配列番号６３）として寄託されるサポリン−５のアミノ酸配列を例示する。図１４Ｅは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０６５６（配列番号６４）として寄託されるサポリン−６前駆体のアミノ酸配列を例示する。シグナルペプチドは、配列番号６４のアミノ酸１〜２４であり、可能性のあるプロペプチドは、配列番号６４のアミノ酸２７８〜２９９である。成熟ポリペプチドは、配列番号６４のアミノ酸２５〜２７７（配列番号６５）である。図１４Ｆは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ４１３９１（配列番号６６）として寄託されるサポリン−７のアミノ酸配列を例示する。図１４Ｇは、サポリン−６のいくつかの変異体およびアイソフォームを包含するコンセンサスアミノ酸配列（配列番号６７）を例示する。
【図１４Ｃ−Ｄ】図１４Ｃは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ２７５６１（配列番号６２）として寄託されるサポリン−４前駆体のアミノ酸配列を例示する。シグナルペプチドは、配列番号６２のアミノ酸１〜２４である。図１４Ｄは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ４１３８９（配列番号６３）として寄託されるサポリン−５のアミノ酸配列を例示する。
【図１４Ｅ−Ｆ】図１４Ｅは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｐ２０６５６（配列番号６４）として寄託されるサポリン−６前駆体のアミノ酸配列を例示する。シグナルペプチドは、配列番号６４のアミノ酸１〜２４であり、可能性のあるプロペプチドは、配列番号６４のアミノ酸２７８〜２９９である。成熟ポリペプチドは、配列番号６４のアミノ酸２５〜２７７（配列番号６５）である。図１４Ｆは、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ受託番号Ｑ４１３９１（配列番号６６）として寄託されるサポリン−７のアミノ酸配列を例示する。
【図１４Ｇ】図１４Ｇは、サポリン−６のいくつかの変異体およびアイソフォームを包含するコンセンサスアミノ酸配列（配列番号６７）を例示する。
【図１５】ＷＯ２００４／０４１８６２に開示されている、マウス血清アルブミンと結合するいくつかのラクダ科動物ＶＨＨのアミノ酸配列を例示する図である。配列Ａ（配列番号７２）、配列Ｂ（配列番号７３）、配列Ｃ（配列番号７４）、配列Ｄ（配列番号７５）、配列Ｅ（配列番号７６）、配列Ｆ（配列番号７７）、配列Ｇ（配列番号７８）、配列Ｈ（配列番号７９）、配列Ｉ（配列番号８０）、配列Ｊ（配列番号８１）、配列Ｋ（配列番号８２）、配列Ｌ（配列番号８３）、配列Ｍ（配列番号８４）、配列Ｎ（配列番号８５）、配列Ｏ（配列番号８６）、配列Ｐ（配列番号８７）、配列Ｑ（配列番号８８）。
【図１６Ａ】図１６(a)は、［Ｐｒｏ９］ＧＬＰ−１−Ｄｏｍ７ｈ８融合体をコードするヌクレオチド配列（配列番号１７７）および融合体のアミノ酸配列（配列番号１７９）を例示する図である。
【図１６Ｂ】図１６(b)は、［Ｐｒｏ９］ＧＬＰ−１−ＰＳＳ−Ｄｏｍ７ｈ８融合体をコードするヌクレオチド配列（配列番号１８０）および融合体のアミノ酸配列（配列番号１８２）を例示する図である。
【図１６Ｃ】図１６(c)は、［Ｐｒｏ９］ＧＬＰ−１−ＰＳＳＧＡＰ−Ｄｏｍ７ｈ８融合体をコードするヌクレオチド配列（配列番号１８３）および融合体のアミノ酸配列（配列番号１８５）を例示する図である。
【図１７】［Ｐｒｏ９］ＧＬＰ−Ｉ−ＰＳＳＧＡＰ−Ｄｏｍ７ｈ８融合体（□）が、ＧＬＰ−１対照、（黒塗り三角）、エキセンディン−４（黒塗り逆三角）と同等の用量依存性細胞増殖活性を有していたことを示すグラフを示す図である。基礎のゼロ対照は（◆）で示されている。
【図１８】［Ｐｒｏ９］ＧＬＰ−Ｉ−ＰＳＳＧＡＰ−Ｄｏｍ７ｈ８融合体（□）が、ＧＬＰ−１対照、（黒塗り三角）、エキセンディン−４（黒塗り逆三角）と同等の用量依存性インスリン放出を有していたことを示すグラフを示す図である。基礎のゼロ対照は（◆）で示されている。
【図１９】図１９(a)〜(c)は、Ｄｏｍ７ｈ−８  ＰＹＹ（３−３６）（配列番号１８６）、ＰＹＹ（３−３６）ＤＯＭ７ｈ−８（配列番号１８７）および［Ｐｒｏ９］ＧＬＰ−１（３−３７）−ＤＯＭ７ｈ−８  ＰＹＹ（３−３６）（配列番号１８８）融合体のアミノ酸配列をそれぞれ例示する図である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０５】
配列表
2008521869.tif 000001
2008521869.tif 000002