【手続補正書】
【提出日】平成20年8月15日(2008.8.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的化された送達ベクターを生成するための方法であって、該方法は、以下の工程：
ａ）産生細胞を一過性に以下：
ｉ）コラーゲン結合ドメインを含むように修飾された４０７０Ａ両栄養性エンベロープタンパク質をコードする核酸配列を含む第１のプラスミドであって、該核酸配列はプロモーターに作動可能に連結されている、プラスミド；
ｉｉ）第２のプラスミドであって、以下：
プロモーターに作動可能に連結されている核酸配列であって、ウィルスｇａｇ−ｐｏｌポリペプチドをコードする、核酸配列；
プロモーターに作動可能に連結されている核酸配列であって、産生細胞に薬物耐性を与えるポリペプチドをコードする、核酸配列；
ＳＶ４０複製起点；
を含む、プラスミド；
ｉｉｉ）第３のプラスミドであって、以下：
プロモーターに作動可能に連結されている非相同核酸配列であって、診断用または治療用のポリペプチドをコードする、核酸配列；
５’および３’長末端反復配列（ＬＴＲ）；
Ψレトロウィルスパッケージング配列；
該５’ＬＴＲの上流のＣＭＶプロモーター；
プロモーターに作動可能に連結されている核酸配列であって、該産生細胞に薬物耐性を与えるポリペプチドをコードする、核酸配列；
ＳＶ４０複製起点；
を含む、プラスミド；
でトランスフェクトする工程であって、ここで該産生細胞はＳＶ４０ラージＴ抗原を発現するヒト細胞である、工程；
ｂ）標的化された送達ベクターの産生および培地の上澄みへの放出を可能にする条件下で、ａ）の産生細胞を培養する工程；
ｃ）ウィルス粒子を収集するための閉鎖ループマニホールド系内に該上澄みを単離して導入する工程；ならびに、
ｄ）該標的化された送達ベクターを収集する工程；
を包含する、方法。
【請求項２】
前記標的化された送達ベクターが、ウィルス粒子である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記収集されたウィルス粒子が、ミリリットル当たり約１×１０７〜１×１０１０個のコロニー形成単位のウィルス力価を示す、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ウィルス粒子が、直径５０ｎｍ〜１５０ｎｍである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記コラーゲン結合ドメインが、フォン・ビルブラント因子のＤ２ドメインに由来するペプチドを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記フォン・ビルブラント因子が、ウシフォン・ビルブラント因子である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ペプチドが、アミノ酸配列Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号１）を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ペプチドが、前記４０７０Ａ両栄養性エンベロープタンパク質のｇｐ７０部分に含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記治療用ポリペプチドが、サイクリンＧ１のＮ末端欠失突然変異体である、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記サイクリンＧ１のＮ末端欠失突然変異体が、ヒトサイクリンＧ１のアミノ酸約４１〜２４９を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記治療用ポリペプチドが、インターロイキン−２（ＩＬ−２）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記治療用ポリペプチドが、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記治療用ポリペプチドが、チミジンキナーゼである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記診断用ポリペプチドが、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、放射性同位体またはこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１のプラスミドが、Ｂｖｌ／ｐＣＡＥＰプラスミドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記第２のプラスミドが、ｐＣｇｐｎプラスミドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記第３のプラスミドが、Ｇ１ＸＳｖＮａプラスミドに由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記第３のプラスミドが、ｐｄｎＧ１／Ｃ−ＲＥＸプラスミドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記第３のプラスミドが、ｐｄｎＧ１／Ｃ−ＲＥＸＩＩプラスミドである、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記産生細胞が、２９３Ｔ細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記閉鎖ループマニホールド系が、図１９Ａおよび図１９Ｂに示す系を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記ウィルス粒子が、ＲＥＸＩＮ−Ｇと示される、請求項２に記載の方法。
【請求項２３】
新生物障害を有する被験体を処置する方法であって、該方法は、以下の工程：
ａ）請求項２に記載の方法により生成されるウィルス粒子に被験体を接触させる工程を包含する第１相プロトコルであって、ここで該被験体は、以下：
ｉ）連続１〜約６日間、該被験体に投与される約１×１０９〜６×１０９単位／日の第１のウィルス粒子用量レベル；
ｉｉ）連続１〜約３日間および第１のベクター用量の投与の後に該被験体に投与される約７×１０９〜約１×１０１０単位／日の第２のウィルス粒子用量レベル；および、
ｉｉｉ）連続１〜約３日間および第２のベクター用量の投与の後に該被験体に投与される約１×１０１０〜約５×１０１０単位／日のウィルス粒子用量レベル；
と接触される、プロトコル；
ｂ）請求項１に記載の方法により生成されるウィルス粒子と被験体を接触させる工程を包含する第２相プロトコルであって、ここで該被験体は、連続１〜約１５日間および該第１相のプロトコルの後に該被験体に投与される約１×１０９〜約５×１０１０単位／日のウィルス粒子用量レベルと接触される、プロトコル；ならびに、
ｃ）必要に応じて相１および相２のプロトコルの前、同時、または後に該被験体に化学療法剤を投与する工程；
を包含する、方法。
【請求項２４】
前記第１のウィルス粒子用量レベルが、約４×１０９〜５×１０９単位／日である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記第２のウィルス粒子用量レベルが、約９×１０９〜約１×１０１０単位／日である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記第３のウィルス粒子用量レベルが、約１×１０１０〜約２×１０１０単位／日である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記ウィルス粒子が、曝露されたコラーゲンの領域内で前記被験体に蓄積する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記曝露されたコラーゲンの領域が、新生物病変、活動性血管形成の領域、新生物病変、血管損傷の領域、外科処置部位、炎症部位および組織破壊領域を包含する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ウィルス粒子が、局所、静脈内、動脈内、結腸内、気管内、腹腔内、鼻腔内、血管内、鞘内、頭蓋内、骨髄内、胸膜腔内、皮内、皮下、筋肉内、眼内、骨内および／または滑液包内に投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験体が、哺乳動物である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
以下：
ａ）プロモーターに機能的に連結した任意のマルチクローニングサイトであって、該プロモーターが非相同核酸配列の発現を補助する、マルチクローニングサイト；
ｂ）５’および３’長末端反復配列（ＬＴＲ）；
ｃ）Ψレトロウィルスパッケージング配列；
ｄ）該５’ＬＴＲ配列の上流に位置する、ＣＭＶプロモーター；
ｅ）プロモーターに作動可能に連結されている核酸配列であって、ここで該配列は、プラスミドを含む産生細胞に薬物耐性を与えるポリペプチドをコードする、核酸配列；および、
ｆ）ＳＶ４０複製起点；
を含むプラスミド。
【請求項３３】
前記プラスミドが、ｐＣ−ＲＥＸである、請求項３２に記載のプラスミド。
【請求項３４】
前記プラスミドがｐＣ−ＲＥＸＩＩである、請求項３２に記載のプラスミド。
【請求項３５】
治療用または診断用のポリペプチドをコードする非相同核酸配列をさらに含む、請求項３３に記載のプラスミド。
【請求項３６】
前記治療用ポリペプチドが、突然変異体サイクリンＧ１である、請求項３５に記載のプラスミド。
【請求項３７】
標的化されたウィルス粒子を生成するためのキットであって、該キットは、以下：
ａ）コラーゲン結合ドメインを含むように修飾された４０７０Ａ両栄養性エンベロープタンパク質をコードする核酸配列を含む第１のプラスミドを含む容器であって、該核酸配列はプロモーターに作動可能に連結されている、容器；
ｂ）以下：
プロモーターに作動可能に連結されている核酸配列であって、ウィルスｇａｇ−ｐｏｌポリペプチドをコードする、核酸配列；
プロモーターに作動可能に連結されている核酸配列であって、産生細胞に薬物耐性を与えるポリペプチドをコードする、核酸配列；
ＳＶ４０複製起点；
を含む第２のプラスミドを含む、容器；
ｃ）以下：
プロモーターに作動可能に連結されている非相同核酸配列であって、診断用または治療用のポリペプチドをコードする、核酸配列；
５’および３’長末端反復配列（ＬＴＲ）、
Ψレトロウィルスパッケージング配列、
該５’ＬＴＲの上流のＣＭＶプロモーター、
プロモーターに作動可能に連結されている核酸配列であって、産生細胞に薬物耐性を与えるポリペプチドをコードする、核酸配列、
ＳＶ４０複製起点、
を含む第３のプラスミドを含む、容器；
ｄ）ＳＶ４０ラージＴ抗原を発現する産生細胞を含む、容器；および、
ｅ）ａ）、ｂ）およびｃ）のプラスミドでｄ）の産生細胞を一過性にトランスフェクトする工程、および、標的化されたウィルス粒子を生成し得る条件下で、該トランスフェクトされた産生細胞を培養する工程、に関する説明書；
を備える、キット。
【請求項３８】
前記第１のプラスミドが、Ｂｖｌ／ｐＣＡＥＰプラスミドである、請求項３３に記載のキット。
【請求項３９】
前記第２のプラスミドが、ｐＣｇｐｎプラスミドである、請求項３７に記載のキット。
【請求項４０】
前記第３のプラスミドが、ｐｄｎＧ１／Ｃ−ＲＥＸプラスミドである、請求項３７に記載のキット。
【請求項４１】
前記第３のプラスミドが、ｐｄｎＧ１／Ｃ−ＲＥＸＩＩプラスミドである、請求項３７に記載のキット。
【請求項４２】
前記産生細胞が、２９３Ｔ細胞である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４３】
標的化されたウィルス粒子の生成のためのキットであって、該キットは、以下：
ａ）Ｂｖｌ／ｐＣＡＥＰプラスミド：
ｂ）ｐＣｇｐｎプラスミド；
ｃ）ｐｄｎＧ１／Ｃ−ＲＥＸプラスミドまたはｐｄｎＧ１／Ｃ−ＲＥＸＩＩプラスミド；
ｄ）２９３Ｔ細胞；および
ｅ）ａ）、ｂ）およびｃ）のプラスミドでｄ）の産生細胞を一過性にトランスフェクトする工程、および、標的化されたウィルス粒子を産生し得る条件下で、トランスフェクトされた産生細胞を培養する工程、に関する説明書；
を含む容器を備える、キット。
【請求項４４】
新生物障害を処置するためのキットであって、該キットは以下：
ａ）薬学的に受容可能なキャリア中に請求項１に記載の方法により生成される標的化された送達ベクターを含む、容器；および、
ｂ）請求項２３に記載の方法に従って、被験体に、ａ）のベクターを投与する工程に関する説明書；
を備える、キット。
【請求項４５】
前記標的化された送達ベクターが、ウィルス粒子である、請求項４４に記載のキット。
【請求項４６】
遺伝子治療業務を実施するための方法であって、該方法は、以下：
ａ）請求項１に記載の方法により、標的化された送達ベクターを作製する工程；
ｂ）適切な培地の溶液中に粒子を回収して懸濁する工程、および、−７０℃〜−８６℃で該懸濁液を保存する工程により、標的化された送達ベクターのバンクを確立する工程；
ｃ）該ベクターおよび該ベクターの使用に関する説明書を、該ベクターを必要とする患者への投与に関する医師または健康管理提供者に提供する工程；
を包含する、方法。
【請求項４７】
前記標的化された送達ベクターが、ウィルス粒子である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
使用に関する前記説明書が、さらに請求項２３に記載の方法を包含する、請求項４６記載の方法。
【請求項４９】
前記適切な培地が、９５％ＤＭＥＭ培地および約１．２％のヒト血清アルブミンを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記患者または前記患者の保険提供者に支払請求する工程をさらに包含する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
遺伝子治療業務を実施するための方法であって、該方法が、医師または健康管理提供者に請求項３７、４３または４４に記載のキットを提供する工程を包含する、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
１つの実施形態において、コラーゲン結合ドメインはフォン・ビルブラント因子のＤ２ドメインから誘導したペプチドを含む。一般的に、フォン・ビルブラント因子は哺乳類より誘導される。ペプチドはアミノ酸配列Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号１）を含む。別の実施形態において、ペプチドは４０７０Ａ両栄養性エンベロープタンパクのｇｐ７０部分に含有される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2006524057000001.app