【手続補正書】
【提出日】平成31年4月26日(2019.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５６】
さらに、本発明の腫瘍溶解性アデノウイルスまたは医薬組成物と１種類以上の付加的治療薬とを含んでなるキットも提供される。例えば、いくつかの実施形態では、本キットは、本発明の腫瘍溶解性アデノウイルスまたは医薬組成物と１種類以上の付加的化学療法薬とを含んでなる。
本発明は以下の通りである。
［１］アデノウイルスタンパク質の免疫優性Ｔ細胞エピトープの少なくとも１つの機能欠失を含んでなる、腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２］前記免疫優性Ｔ細胞エピトープが、ヒトリンパ球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ拘束性エピトープである、上記［１］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３］前記免疫優性Ｔ細胞エピトープが、ヒトリンパ球抗原−Ａ２．１（ＨＬＡ−Ａ２．１）拘束性エピトープである、上記［２］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［４］前記免疫優性Ｔ細胞エピトープが、ＨＬＡクラスＩＩ拘束性エピトープである、上記［１］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［５］前記少なくとも１つの欠失は、前記少なくとも１つの欠失の無い親アデノウイルスと比較して細胞傷害性の実質的低下またはウイルス複製の実質的低下に関連しない、上記［１］〜［４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［６］前記アデノウイルスタンパク質が、Ｅ１Ａ、Ｅ１Ｂ、ヘキソン、ペントンベース、ファイバータンパク質、キャプシドタンパク質ＩＸ、ＤＮＡポリメラーゼ、および一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質からなる群から選択される、上記［１］〜［５］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［７］前記アデノウイルスタンパク質が、アデノウイルスヘキソンタンパク質である、上記［６］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［８］前記免疫優性Ｔ細胞エピトープが、前記アデノウイルスヘキソンタンパク質の保存されたベース領域にある、上記［７］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［９］前記免疫優性Ｔ細胞エピトープが、Ｈｅｘ５１２（ＧＬＶＤＣＹＩＮＬ）（配列番号２３）、Ｈｅｘ７１３（ＹＬＮＨＴＦＫＫＶ）（配列番号１１）、Ｈｅｘ８９２（ＬＬＹＡＮＳＡＨＡ）（配列番号１５）、およびＨｅｘ９１７（ＹＶＬＦＥＶＦＤＶ）（配列番号１９）からなる群から選択される、上記［８］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１０］アデノウイルスが、Ｈｅｘ５１２エピトープにおけるＬ５２０Ｐ突然変異、Ｈｅｘ７１３エピトープにおけるＶ７２１Ａ突然変異、Ｈｅｘ８９２エピトープにおけるＡ９００Ｓ突然変異、およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異からなる群から選択される少なくとも１つの突然変異を含んでなる、上記［８］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１１］アデノウイルスが、免疫優性Ｔ細胞エピトープＨｅｘ５１２（ＧＬＶＤＣＹＩＮＬ）（配列番号２３）およびＨｅｘ９１７（ＹＶＬＦＥＶＦＤＶ）（配列番号１９）の欠失を含んでなる、上記［８］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１２］アデノウイルスが、Ｈｅｘ５１２エピトープにおけるＬ５２０Ｐ突然変異およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異を含んでなる、上記［１１］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１３］アデノウイルスが、免疫優性Ｔ細胞エピトープＨｅｘ７１３（ＹＬＮＨＴＦＫＫＶ）（配列番号１１）、Ｈｅｘ８９２（ＬＬＹＡＮＳＡＨＡ）（配列番号１５）、およびＨｅｘ９１７（ＹＶＬＦＥＶＦＤＶ）（配列番号１９）の欠失を含んでなる、上記［１１］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１４］アデノウイルスが、Ｈｅｘ７１３エピトープにおけるＶ７２１Ａ突然変異、Ｈｅｘ８９２エピトープにおけるＡ９００Ｓ突然変異、およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異を含んでなる、上記［１３］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１５］アデノウイルスが、免疫優性Ｔ細胞エピトープＨｅｘ５１２（ＧＬＶＤＣＹＩＮＬ）（配列番号２３）、Ｈｅｘ７１３（ＹＬＮＨＴＦＫＫＶ）（配列番号１１）、Ｈｅｘ８９２（ＬＬＹＡＮＳＡＨＡ）（配列番号１５）、およびＨｅｘ９１７（ＹＶＬＦＥＶＦＤＶ）（配列番号１９）の欠失を含んでなる、上記［１３］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１６］アデノウイルスが、Ｈｅｘ５１２エピトープにおけるＬ５２０Ｐ突然変異、Ｈｅｘ７１３エピトープにおけるＶ７２１Ａ突然変異、Ｈｅｘ８９２エピトープにおけるＡ９００Ｓ突然変異、およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異を含んでなる、上記［１５］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１７］それぞれ腫瘍抗原またはエピトープをコードする１以上の異種核酸配列をさらに含んでなる、上記［１］〜［１６］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１８］前記１以上の異種核酸配列が、それぞれ腫瘍抗原またはエピトープをコードする１〜５の異種核酸配列を含んでなる、上記［１７］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［１９］前記腫瘍抗原またはエピトープが、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＣＥＡ、チロシナーゼ、ミドカイン、ＢＡＧＥ、ＣＡＳＰ−８、β−カテニン、ＣＡ−１２５、ＣＤＫ−１、ＥＳＯ−１、ｇｐ７５、ｇｐｌ００、ＭＡＲＴ−１、ＭＵＣ−１、ＭＵＭ−１、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ｒａｓ、ｔｒｐ−１、ＨＥＲ−２、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＩＬ１３Ｒα、ＩＬ１３Ｒα２、ＡＩＭ−２、ＡＩＭ−３、ＮＹ−ＥＳＯ−１、Ｃ９ｏｒｆ１ｌ２、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＢＲＡＰ、ＲＴＮ４、ＧＬＥＡ２、ＴＮＫＳ２、ＫＩＡＡ０３７６、ＩＮＧ４、ＨＳＰＨ１、Ｃ１３ｏｒｆ２４、ＲＢＰＳＵＨ、Ｃ６ｏｒｆ１５３、ＮＫＴＲ、ＮＳＥＰ１、Ｕ２ＡＦ１Ｌ、ＣＹＮＬ２、ＴＰＲ、ＳＯＸ２、ＧＯＬＧＡ、ＢＭＩ１、ＣＯＸ−２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＺＨ２、ＬＩＣＡＭ、リビン、ＭＲＰ−３、ネスチン、ＯＬＩＧ２、ＡＲＴ１、ＡＲＴ４、Ｂ−サイクリン、Ｇｌｉ１、Ｃａｖ−１、カテプシンＢ、ＣＤ７４、Ｅ−カドヘリン、ＥｐｈＡ２／Ｅｃｋ、Ｆｒａ−１／Ｆｏｓｌ１、ＧＡＧＥ−１、ガングリオシド／ＧＤ２、ＧｎＴ−Ｖ、β１，６−Ν、Ｋｉ６７、Ｋｕ７０／８０、ＰＲＯＸ１、ＰＳＣＡ、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サバイビン、ＵＰＡＲ、メソテリン、およびＷＴ−１、またはそのエピトープからなる群から選択される、上記［１７］または［１８］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２０］前記腫瘍抗原またはエピトープが、ヒト腫瘍抗原またはエピトープである、上記［１７］〜［１９］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２１］前記異種核酸配列が、免疫優性Ｔ細胞エピトープの少なくとも１つの欠失を有する前記アデノウイルスタンパク質をコードするアデノウイルス遺伝子に挿入されている、上記［１７］〜［２０］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２２］前記異種核酸配列が、免疫優性Ｔ細胞エピトープの少なくとも１つの欠失を有する前記アデノウイルスタンパク質以外のアデノウイルスタンパク質をコードするアデノウイルス遺伝子に挿入されている、上記［１７］〜［２０］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２３］前記異種核酸配列が、アデノウイルスヘキソンタンパク質をコードするアデノウイルス遺伝子に挿入されている、上記［１７］〜［２２］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２４］前記異種核酸配列が、前記アデノウイルスヘキソンタンパク質の超可変領域に挿入されている、上記［２３］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２５］前記超可変領域が、超可変領域５である、上記［２４］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２６］前記腫瘍抗原またはエピトープにフレキシブルリンカーが隣接している、上記［１７］〜［２５］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２７］前記フレキシブルリンカーが、ＧＳＧＳＲ（配列番号２８）、ＡＧＳＧＳＲ（配列番号２９）、およびＡＧＳＧＳ（配列番号３０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、上記［２６］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２８］前記１以上の異種核酸配列が、ｇｐ１００腫瘍抗原もしくはエピトープ、またはチロシナーゼ腫瘍抗原もしくはエピトープをコードする、上記［１７］〜［２７］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［２９］前記１以上の異種核酸配列が、（ａ）ｇｐ１００抗原またはエピトープをコードする異種核酸配列と、（ｂ）チロシナーゼ抗原またはエピトープをコードする異種核酸配列とを含んでなる、上記［１７］〜［２７］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３０］前記ｇｐ１００腫瘍抗原またはエピトープが、アミノ酸配列ＹＬＥＰＧＰＶＴＡ（配列番号３１）を含んでなり、前記チロシナーゼ抗原またはエピトープがアミノ酸配列ＹＭＤＧＴＭＳＱＶ（配列番号３２）を含んでなる、上記［２８］または［２９］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３１］前記異種核酸配列が、アデノウイルスヘキソンタンパク質の超可変領域５に挿入されている、上記［２８］〜［３０］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３２］前記アデノウイルスが、ヒトアデノウイルスである、上記［１］〜［３１］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３３］前記ヒトアデノウイルスが、ヒトアデノウイルス血清型１〜５１、およびそれらの誘導体からなる群から選択される、上記［３２］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３４］前記ヒトアデノウイルスが、血清型５である、上記［３３］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３５］前記腫瘍溶解性アデノウイルスが、腫瘍において選択的に複製する、上記［１］〜［３４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３６］アデノウイルスが、腫瘍における選択的複製を達成するために組織特異的または腫瘍特異的プロモーターをさらに含んでなる、上記［３５］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３７］前記組織特異的プロモーターまたは腫瘍特異的プロモーターが、腫瘍における選択的複製を達成するために、Ｅ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ２、およびＥ４からなる群からの１以上の遺伝子の発現を制御するためのプロモーター配列である、上記［３６］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３８］前記組織特異的プロモーターが、Ｅ２Ｆプロモーター、テロメラーゼｈＴＥＲＴプロモーター、チロシナーゼプロモーター、前立腺特異的抗原プロモーター、αフェトタンパク質プロモーター、およびＣＯＸ−２プロモーターからなる群から選択される、上記［３７］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［３９］アデノウイルスが、腫瘍における選択的複製を達成するためにＥ１ａ、Ｅ１ｂ、Ｅ４、およびＶＡ−ＲＮＡからなる群から選択される１以上の遺伝子に突然変異をさらに含んでなる、上記［３５］〜［３８］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［４０］アデノウイルスが、その感染力を増強するためまたは腫瘍細胞に存在する受容体を標的化するためのキャプシド修飾をさらに含んでなる、上記［１］〜［３９］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［４１］アデノウイルスが、癌の遺伝子療法の分野で慣用される少なくとも１つの遺伝子をさらに含んでなる、上記［１］〜［４０］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［４２］癌療法の分野で慣用される前記少なくとも１つの遺伝子が、プロドラッグ活性化遺伝子、腫瘍抑制遺伝子、および免疫刺激遺伝子からなる群から選択される遺伝子である、上記［４１］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［４３］配列番号３または４のヌクレオチド配列を含んでなる、腫瘍溶解性アデノウイルス。
［４４］配列番号５のヌクレオチド配列を含んでなる、腫瘍溶解性アデノウイルス。
［４５］薬理学的に有効な用量の上記［１］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスと１種類以上の薬学上許容可能な担体または賦形剤とを含んでなる医薬組成物。
［４６］薬理学的に有効な用量の上記［１７］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスと１種類以上の薬学上許容可能な担体または賦形剤とを含んでなる医薬組成物。
［４７］上記［４５］または［４６］に記載の医薬組成物と使用説明書とを含んでなるキット。
［４８］１種類以上の付加的治療薬をさらに含んでなる、上記［４７］に記載のキット。
［４９］前記治療薬が、化学療法薬である、上記［４８］に記載のキット。
［５０］上記［１］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスを含んでなる宿主細胞。
［５１］感染性アデノウイルス粒子を生産する方法であって、（ａ）上記［５０］に記載の宿主細胞を、前記腫瘍溶解性アデノウイルスの増殖および感染性アデノウイルス粒子の形成を可能とする条件下で培養すること、および（ｂ）前記感染性アデノウイルス粒子を回収することを含んでなる、方法。
［５２］哺乳動物における癌または癌に至る前悪性疾患の治療または予防のための薬剤の調製における、上記［１］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスの使用。
［５３］前記哺乳動物が、ヒトである、上記［５２］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルスの使用。
［５４］薬剤として使用するための、上記［１］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［５５］癌における予防薬および／または治療薬としての上記［５４］に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
［５６］腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、前記腫瘍細胞を有効量の上記［１］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスまたは上記［４５］に記載の医薬組成物と接触させて前記腫瘍細胞の溶解を誘導することを含んでなる、方法。
［５７］哺乳動物において腫瘍増殖を阻害する方法であって、治療上有効な量の上記［１］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスまたは上記［４５］に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与することを含んでなる、方法。
［５８］哺乳動物において癌を処置する方法であって、治療上有効な量の上記［１］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスまたは上記［４５］に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与することを含んでなる、方法。
［５９］哺乳動物において癌に対する免疫応答を増強するための方法であって、上記［１７］〜［４４］のいずれかに記載の腫瘍溶解性アデノウイルスまたは上記［４６］に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に、前記哺乳動物において前記１以上の腫瘍抗原またはエピトープに対する免疫応答を増強するのに有効な量で投与することを含んでなる、方法。
［６０］前記腫瘍溶解性アデノウイルスまたは医薬組成物が、腫瘍内、静脈内、血管内、くも膜下腔内、気管内、筋肉内、皮下、腹膜内、皮内、非経口、鼻腔内、経皮、眼内、頭蓋内、または経口投与される、上記［５７］〜［５９］のいずれかに記載の方法。
［６１］アデノウイルスのおよそ１０４〜１０１３のウイルス粒子が前記哺乳動物に投与される、上記［６０］に記載の方法。
［６２］１種類以上の付加的治療薬を前記哺乳動物に投与することをさらに含んでなる、上記［５７］〜［６１］のいずれかに記載の方法。
［６３］前記治療薬が、化学療法薬である、上記［６２］に記載の方法。
［６４］前記哺乳動物が、ヒトである、上記［５７］〜［６３］のいずれかに記載の方法。
［６５］配列番号３、４、および５からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一の配列を含んでなる、単離されたポリヌクレオチド。
［６６］配列番号３、４、および５からなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一の配列を含んでなる、単離されたポリヌクレオチド。
［６７］配列番号３、４、および５からなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一の配列を含んでなる、単離されたポリヌクレオチド。
［６８］配列番号３、４、および５からなる群から選択される配列を含んでなる、単離されたポリヌクレオチド。
［６９］上記［６５］〜［６８］のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含んでなるベクター。
［７０］上記［６９］のベクターを含んでなる宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノウイルスタンパク質の免疫優性Ｔ細胞エピトープの少なくとも１つの機能欠失を含んでなる、腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項２】
前記免疫優性Ｔ細胞エピトープが、ヒトリンパ球抗原−Ａ２．１（ＨＬＡ−Ａ２．１）拘束性エピトープである、請求項１に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項３】
前記少なくとも１つの欠失は、前記少なくとも１つの欠失の無い親アデノウイルスと比較して細胞傷害性の実質的低下またはウイルス複製の実質的低下に関連しない、請求項１または２に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項４】
前記アデノウイルスタンパク質が、Ｅ１Ａ、Ｅ１Ｂ、ヘキソン、ペントンベース、ファイバータンパク質、キャプシドタンパク質ＩＸ、ＤＮＡポリメラーゼ、および一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項５】
前記免疫優性Ｔ細胞エピトープが、Ｈｅｘ５１２（ＧＬＶＤＣＹＩＮＬ）（配列番号２３）、Ｈｅｘ７１３（ＹＬＮＨＴＦＫＫＶ）（配列番号１１）、Ｈｅｘ８９２（ＬＬＹＡＮＳＡＨＡ）（配列番号１５）、およびＨｅｘ９１７（ＹＶＬＦＥＶＦＤＶ）（配列番号１９）からなる群から選択される、請求項４に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項６】
アデノウイルスが、Ｈｅｘ５１２エピトープにおけるＬ５２０Ｐ突然変異、Ｈｅｘ７１３エピトープにおけるＶ７２１Ａ突然変異、Ｈｅｘ８９２エピトープにおけるＡ９００Ｓ突然変異、およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異からなる群から選択される少なくとも１つの突然変異を含んでなる、請求項４に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項７】
前記アデノウイルスが、
（ｉ）Ｈｅｘ５１２エピトープにおけるＬ５２０Ｐ突然変異およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異を含むアデノウイルス；
（ii）Ｈｅｘ７１３エピトープにおけるＶ７２１Ａ突然変異、Ｈｅｘ８９２エピトープにおけるＡ９００Ｓ突然変異およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異を含むアデノウイルス；および
（iii）Ｈｅｘ５１２エピトープにおけるＬ５２０Ｐ突然変異、Ｈｅｘ７１３エピトープにおけるＶ７２１Ａ突然変異、Ｈｅｘ８９２エピトープにおけるＡ９００Ｓ突然変異およびＨｅｘ９１７エピトープにおけるＶ９２５Ｋ突然変異を含むアデノウイルス
からなる群から選択される、請求項４に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項８】
Ｔ細胞により認識されうる腫瘍抗原またはエピトープをそれぞれコードする１以上の異種核酸配列をさらに含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項９】
前記腫瘍抗原またはエピトープにフレキシブルリンカーが隣接しており、前記フレキシブルリンカーがＧＳＧＳＲ（配列番号２８）、ＡＧＳＧＳＲ（配列番号２９）、およびＡＧＳＧＳ（配列番号３０）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項８に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項１０】
前記１以上の異種核酸配列が、ｇｐ１００腫瘍抗原もしくはエピトープ、またはチロシナーゼ腫瘍抗原もしくはエピトープをコードする、請求項８または９に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項１１】
アデノウイルスが、腫瘍における選択的複製を達成するために組織特異的または腫瘍特異的プロモーターをさらに含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項１２】
配列番号３または４または５のヌクレオチド配列を含んでなる、請求項７に記載の腫瘍溶解性アデノウイルス。
【請求項１３】
薬理学的に有効な用量の請求項１〜１２のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性アデノウイルスと１種類以上の薬学上許容可能な担体または賦形剤とを含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
哺乳動物における癌または癌に至る前悪性疾患の治療または予防に用いるための、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
配列番号３、４、および５からなる群から選択される配列を含んでなる、単離されたポリヌクレオチド。