【手続補正書】
【提出日】平成19年12月14日(2007.12.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項２】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ヒトシナプシン遺伝子由来の少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項３】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、配列番号2の配列を有する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを含むサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項４】  (a)ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来の少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項５】  (a)配列番号1の配列を有する少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項６】  (a)低酸素誘導因子-1に結合する少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを含むサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項７】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるウイルスプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項８】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にある哺乳動物プロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項９】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にある細胞型特異的プロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項１０】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、前記ベクターは非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転されるものであり、かつ前記ヌクレオチド配列は、アデノシンデアミナーゼ、アンギオポエチン、アポトーシスインヒビタータンパク質、アンギオスタチン、Ｂ細胞CLL／リンパ腫、カタラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、DT-ジアホラーゼ、エンドスタチン、エリトロポエチン、繊維芽細胞増殖因子、フマジリン、β-グロビン、グルタチオンペルオキシダーゼ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ-コロニー刺激因子、熱ショック転写因子、肝細胞増殖因子、インターフェロン、組織メタロプロテイナーゼ阻害剤、一酸化窒素シンターゼ、血小板由来増殖因子、プロリフェリン、ソマトメジンＣ、スーパーオキシドジスムターゼ、サーバイビン(survivin)、チミジンキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、腫瘍タンパク質p53、ウロキナーゼ、および血管内皮増殖因子からなる群より選択される遺伝子の機能性コード領域である、前記単離された発現ベクター。
【請求項１１】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、前記ベクターは非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転されるものであり、かつ前記発現ベクターは、Kozak配列、転写終結配列、ポリアデニル化配列およびmRNA分解配列からなる群より選択される配列をさらに１以上有する、前記単離された発現ベクター。
【請求項１２】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、前記少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと前記少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、前記ベクターは非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転されるものであり、かつ前記発現ベクターはアデノ随伴ウイルス粒子内に封入されている、前記単離された発現ベクター。
【請求項１３】  (a)少なくとも１つのNF-κB応答エレメントと、ニューロン限定サイレンサー因子に結合する少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなり、少なくとも１つのニューロン限定サイレンサーエレメントと少なくとも１つのNF-κB応答エレメントが互いから500ヌクレオチド以内に配置されている単離された発現ベクターであって、NF-κBのNF-κB応答エレメントへの結合をもたらす条件に供された細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞を該条件から除いたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項１４】  (a)サイレンサーエレメント、(b)誘導エレメント、および(c)該サイレンサーエレメントと該誘導エレメントに機能的に連結されていて該サイレンサーエレメントと該誘導エレメントにより調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなる単離された発現ベクターであって、真核細胞に組み込まれたときに前記サイレンサーエレメントは少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現を可逆的に抑制する、前記単離された発現ベクター。
【請求項１５】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、少なくとも１つのサイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなる単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。
【請求項１６】  プロモーターがウイルスプロモーターである、請求項１５に記載の単離された発現ベクター。
【請求項１７】  プロモーターが哺乳動物プロモーターである、請求項１５に記載の単離された発現ベクター。
【請求項１８】  プロモーターが細胞型特異的プロモーターである、請求項１５に記載の単離された発現ベクター。
【請求項１９】  前記ヌクレオチド配列が、単球化学誘因タンパク質-1 (MCP-1)、間質細胞誘導因子1 (SDF-1)、エオタキシン、Myo D、アデノシンデアミナーゼ、アンギオポエチン、アポトーシスインヒビタータンパク質、アンギオスタチン、Ｂ細胞CLL／リンパ腫、カタラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、DT-ジアホラーゼ、エンドスタチン、エリトロポエチン、繊維芽細胞増殖因子、フマジリン、β-グロビン、グルタチオンペルオキシダーゼ、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ-コロニー刺激因子、熱ショック転写因子、肝細胞増殖因子、インターフェロン、組織メタロプロテイナーゼ阻害剤、一酸化窒素シンターゼ、血小板由来増殖因子、プロリフェリン、ソマトメジンＣ、スーパーオキシドジスムターゼ、サーバイビン(survivin)、チミジンキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因子、腫瘍タンパク質p53、ウロキナーゼ、および血管内皮増殖因子からなる群より選択される遺伝子の機能性コード領域である、請求項１５に記載の単離された発現ベクター。
【請求項２０】  前記発現ベクターが、Kozak配列、転写終結配列、ポリアデニル化配列およびmRNA分解配列からなる群より選択される配列をさらに１以上含む、請求項１５に記載の単離された発現ベクター。
【請求項２１】  前記発現ベクターが、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、およびアデノウイルスからなる群より選択される粒子内に封入されている、請求項１５に記載の単離された発現ベクター。
【請求項２２】  (a)少なくとも１つの低酸素応答エンハンサーエレメントと、配列番号17の配列を有する少なくとも１つのサイレンサーエレメントとを含むサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなる単離された発現ベクターであって、非低酸素細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞が低酸素にされたときに該サイレンシングされた発現が逆転される前記単離された発現ベクター。
【請求項２３】  (a)少なくとも１つのNF-κB応答エレメントと少なくとも１つのサイレンサーエレメントとを有するサイレンサー誘導領域、および(b)該サイレンサー誘導領域と機能的に連結されていて該サイレンサー誘導領域により調節され、かつ少なくとも１つのヌクレオチド配列の上流にあるプロモーターを含んでなる単離された発現ベクターであって、NF-κBのNF-κB応答エレメントへの結合をもたらす条件に供された細胞に組み込まれたときに前記少なくとも１つのヌクレオチド配列の発現がサイレンシングされ、該細胞を該条件から除いたときに該サイレンシングされた発現が逆転される、前記単離された発現ベクター。