【手続補正書】
【提出日】令和1年9月20日(2019.9.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫グロブリンＬ鎖可変領域及び免疫グロブリンＨ鎖可変領域を含みヒトＣＤ３に特異的に結合するＣＤ３結合ドメインを含む、ＣＤ３結合ポリペプチドであって；
前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域は、ヒト化されており、ヒトＩＧＫＶ３Ｄ‐２０＊１生殖系列アミノ酸配列に基づくフレームワーク領域を含み；
前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域は、ヒト化されており、ヒトＩＧＨＶ１‐６９＊０２生殖系列アミノ酸配列に基づくフレームワーク領域を含み；
（ａ）前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域が、配列番号９４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号９５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域が配列番号９１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号９２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む；または
（ｂ）前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域が、配列番号２０２のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０３のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２０４のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域が配列番号１９９のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２００のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２０１のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
ＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＣＤ３結合ドメインが、以下の性質：
（ｉ）前記ＣＤ３結合ドメインの熱転移中間点は、少なくとも約５４℃、少なくとも約５５℃、少なくとも約５６℃、または少なくとも約５７℃であり、かつ約７２℃以下である；
（ｉｉ）前記ＣＤ３結合ドメインは約２５℃のＰＢＳでの保管において、少なくとも約６日、少なくとも約１０日、または少なくとも約１３日及び約９０日以下にわたり安定である；
（ｉｉｉ）前記ＣＤ３結合ドメインは、約１０ｎＭ以下のＥＣ５０を有するヒトＣＤ３に結合する；及び
（ｉｖ）前記ＣＤ３結合ドメインは、約３０ｎＭ以下のＥＣ５０を有するカニクイザルＣＤ３に結合する；
のうちのいずれか１つ以上を有する、請求項１に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項３】
前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域は、
（ａ）配列番号８８におけるアミノ酸配列と少なくとも約９３％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一もしくは少なくとも約９９％同一である；または
（ｂ）配列番号８９におけるアミノ酸配列と少なくとも約９４％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一もしくは少なくとも約９９％同一である；
アミノ酸配列を含み、
前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域は、配列番号８６におけるアミノ酸配列と少なくとも約８２％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約約８７％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９２％同一、少なくとも約９５％同一、少なくとも約９７％同一、少なくとも約９８％同一もしくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含む、
請求項１または２に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項４】
前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域は配列番号８８または配列番号８９を含み、前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域は配列番号８６を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項５】
前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置５２におけるアミノ酸残基がアルギニンである、および／または前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置５３におけるアミノ酸残基がトリプトファンである、請求項１に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項６】
前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置２７におけるアミノ酸残基がチロシンである、請求項１に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項７】
前記ＣＤ３結合ドメインは、以下の：
（ａ）前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置９におけるアミノ酸残基はプロリンである；
（ｂ）前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置５３におけるアミノ酸残基はイソロイシンである；及び
（ｃ）前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置２１におけるアミノ酸残基はメチオニンである；
のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項８】
前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置８７におけるアミノ酸残基はチロシンである、請求項１に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項９】
前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置８６におけるアミノ酸残基はアスパラギン酸である、請求項１に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置８６におけるアミノ酸残基はアスパラギン酸であり、かつ前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域のＩＭＧＴナンバリングシステムによる位置８７におけるアミノ酸残基はチロシンである、請求項１に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１１】
前記ＣＤ３結合ドメインは、配列番号８３または配列番号８４を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１２】
前記ＣＤ３結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１３】
前記ｓｃＦｖは、前記ｓｃＦｖのＨ鎖可変領域とＬ鎖可変領域との間にリンカーを含み、前記リンカーはアミノ酸配列ＱＲＨＮＮＳＳＬＮＴＧＴＱＭＡＧＨＳＰＮＳ（配列番号１４８）を含む、請求項１２に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１４】
前記ｓｃＦｖのＨ鎖可変領域は前記ｓｃＦｖのＬ鎖可変領域に対してアミノ末端である、請求項１２に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１５】
第２の結合ドメインをさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１６】
前記ＣＤ３結合ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端の順で、（ｉ）前記第２の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）カルボキシル末端リンカー、及び（ｖ）ＣＤ３結合ドメインを含む、請求項１５に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１７】
アミノ末端からカルボキシル末端の順で、（ｉ）第２の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）カルボキシル末端リンカー、及び（ｖ）ＣＤ３結合ドメインを含む、ＣＤ３結合ポリペプチドであって、
前記免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従う置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１  ＣＨ２ドメインを含む、
ＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１８】
前記ヒトＣＤ３結合ドメインは、免疫グロブリンＬ鎖可変領域及び免疫グロブリンＨ鎖可変領域を含み、
（ａ）前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域が、配列番号９４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号９５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域が配列番号９１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号９２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号９３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む；または
（ｂ）前記免疫グロブリンＬ鎖可変領域が、配列番号２０２のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２０３のＬＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２０４のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、前記免疫グロブリンＨ鎖可変領域が配列番号１９９のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２００のＨＣＤＲ２アミノ酸配列、及び配列番号２０１のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、
請求項１７に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項１９】
（ｉ）前記ＣＤ３結合ドメインは、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリンＬ鎖可変領域、ならびに（ｂ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリンＨ鎖可変領域を含み；かつ
（ｉｉ）前記第２の結合ドメインは、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリンＬ鎖可変領域、ならびに（ｂ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリンＨ鎖可変領域を含む、
請求項１５または１７に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２０】
前記ヒンジ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域由来である、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２１】
前記カルボキシル末端リンカーは、配列番号１９６を含むか、または配列番号１９６からなる、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２２】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１６〜２１のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２３】
前記免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従う置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１  ＣＨ２ドメインを含む、請求項１６に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２４】
前記ＣＤ３結合ポリペプチドがリダイレクトＴ細胞細胞障害性（ＲＴＣＣ）を誘導する、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２５】
前記ＣＤ３結合ポリペプチドは約３０ｐＭ以下のＥＣ５０を有するＲＴＣＣを誘導する、請求項２４に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２６】
前記第２の結合ドメインは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１５〜２５のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２７】
前記第２の結合ドメインが腫瘍関連抗原と結合または相互作用する、請求項１５〜２６のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２８】
前記ＣＤ３結合ポリペプチドは、前記腫瘍関連抗原を発現する細胞のＴ細胞依存性溶解を誘導する、請求項２７に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項２９】
前記腫瘍関連抗原は、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、Ｈｅｒ２、ＲＯＲ１、ＲＯＮ、糖タンパク質Ａ３３抗原（ｇｐＡ３３）、及びＣＥＡからなる群から選択される、請求項２７に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。
【請求項３０】
（ｉ）アミノ末端からカルボキシル末端またはカルボキシル末端からアミノ末端の順で、（ａ）請求項１〜１４のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド、（ｂ）第１のヒンジ領域、（ｃ）第１の免疫グロブリン定常領域、及び（ｄ）第１の免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインを含む、第１のポリペプチド鎖と、
（ｉｉ）アミノ末端からカルボキシル末端またはカルボキシル末端からアミノ末端の順で、（ａ’）第２のヒンジ領域、（ｂ’）第２の免疫グロブリン定常領域、及び（ｃ’）第１の単鎖ポリペプチドの第１の免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインとは異なる第２の免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインを含む、第２のポリペプチド鎖と、
を含むヘテロ二量体ＣＤ３結合タンパク質であって、前記第１及び第２の免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインは互いに結合してヘテロ二量体を形成する、ヘテロ二量体ＣＤ３結合タンパク質。
【請求項３１】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチドまたは前記ＣＤ３結合ポリペプチドの一部をコードする、単離核酸分子。
【請求項３２】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチドをコードする核酸セグメントを含む発現ベクターであって、前記核酸セグメントは、宿主細胞において前記核酸セグメントの発現に好適な制御配列に作動可能に結合している、発現ベクター。
【請求項３３】
請求項３２に記載の発現ベクターを含む、組換え宿主細胞。
【請求項３４】
ＣＤ３結合ポリペプチドを生産するための方法であって、
請求項３２に記載の発現ベクターを含む組換え宿主細胞を、前記核酸セグメントが発現する条件下で培養し、それにより前記ＣＤ３結合ポリペプチドを生産することと、
前記ＣＤ３結合ポリペプチドを回収することと、
を含む方法。
【請求項３５】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチドまたは請求項３０に記載のヘテロ二量体ＣＤ３結合タンパク質と、医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物。
【請求項３６】
腫瘍関連抗原を発現する細胞に対するリダイレクトＴ細胞細胞障害性（ＲＴＣＣ）を誘導するための方法であって、前記腫瘍関連抗原を発現する細胞を、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチドに接触させることを含み、前記接触は、前記腫瘍関連抗原を発現する細胞に対するＲＴＣＣが誘導される条件下で行われる、方法。
【請求項３７】
それを必要とする対象において腫瘍増殖を阻害するための方法であって、治療的有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド、請求項３０に記載のヘテロ二量体ＣＤ３結合タンパク質または請求項３５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３８】
それを必要とする対象においてがんまたは自己免疫異常を治療するための方法であって、治療的有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド、請求項３０に記載のヘテロ二量体ＣＤ３結合タンパク質または請求項３５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項３９】
前記がんは、前立腺がん、結腸直腸がん、腎細胞がん、膀胱がん、唾液腺がん、膵がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、乳がん（例えば、三種陰性乳がん）、メラノーマ、副腎がん、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂリンパ球白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、またはヘアリーセル白血病である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、または６０を含む、ヒトＣＤ３に特異的に結合するＣＤ３結合ドメイン。
【請求項４１】
２つの同一のポリペプチドの二量体であるＣＤ３結合タンパク質であって、それぞれのポリペプチドは、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチドである、ＣＤ３結合タンパク質。
【請求項４２】
前記ＣＤ３結合ポリペプチドは、抗体依存細胞媒介細胞障害性（ＡＤＣＣ）活性及び／または補体依存細胞障害性（ＣＤＣ）活性を示さないか、またはごくわずかに示す、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＣＤ３結合ポリペプチド。