【手続補正書】
【提出日】平成20年3月11日(2008.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８２】
ＡＬ−ＤＰ−４０９４  ｓｉＲＮＡの配列（表１）を保持しているが、ホスホロチオエート結合、Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、および２’−フルオロ修飾ヌクレオチドなどの様々な修飾を含む１群のｓｉＲＮＡを合成した（表４）。このｓｉＲＮＡ群をＨｅＬａ細胞において試験したが、図９のＡ〜Ｅは、ＡＬ−ＤＰ−４０９４  ｓｉＲＮＡの全ての修飾型が、ＶＥＧＦ発現を効率良く９０％超低下させたことを実証しており、以前に同定された２つのＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ（ライヒら（Ｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．）（上記）の「Ａｃｕｉｔｙ」、およびフィレウアーら（Ｆｉｌｌｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．）（上記）の「Ｆｉｌｌｅｕｒ」）のいずれよりも有効性が高いことを示している。図１０も、ＨｅＬａ細胞におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイのデータを示す。図１０中のグラフは、非修飾型のＡＬ−ＤＰ−４０９４  ｓｉＲＮＡおよびホスホロチオエート修飾型ＡＬ−ＤＰ−４００４のｓｉＲＮＡ（ＡＬ−ＤＰ−４２１９）が、ＶＥＧＦ発現を７０％超低下させたことを示す（図１０）。化合物ＡＬ−ＤＰ−４０９４のスクランブル型（例えば、ＡＬ−ＤＰ−４２１６およびＡＬ−ＤＰ−４２１８（配列を以下に示す；下線を引いたヌクレオチドは、ＡＬ−ＤＰ−４０９４と比較したミスマッチなヌクレオチドを表す））は、ＶＥＧＦ発現を阻害しなかった。ホタルルシフェラーゼ遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ（ＡＬ−ＤＰ−３０１５；以下参照）も、ＶＥＧＦ発現を阻害しなかった。
ＡＬ−ＤＰ−４２１６
ＡＬ４０９４  ＭＩ  ｓ
５’−ＧＣＡＣＡＵＵＧＧＡＣＡＧＵＵＧＵＧＧＵＵ−３’  配列番号１０６５
ＡＬ４０９４  ＭＩ  ａｓ
’３−ＧＵＣＧＵＧＵＡＡＣＣＵＧＵＣＡＡＣＡＣＣＡＡ−’５  配列番号１０６４
ＡＬ−ＤＰ−４２１８
ＡＬ４０９４  Ｍ５  ｓ
５’−ＧＣＡＣＡＵＡＧＡＡＧＵＧＡＣＧＣＧＣＵＵ−３’  配列番号１０６２
ＡＬ４０９４  Ｍ５  ａｓ
’３−ＧＵＣＧＵＧＵＡＵＣＵＵＣＡＣＵＧＣＧＣＧＡＡ−’５  配列番号１０６３
ＡＬ−ＤＰ−３０１５
５’−ＧＡＡＣＵＧＵＧＵＧＵＧＡＧＡＧＧＵＣＣＵ−３’  配列番号８３０
’３−ＣＧＣＵＵＧＡＣＡＣＡＣＡＣＵＣＵＣＣＡＧＧＡ−’５  配列番号８３１
Ｓｔａｉｎｓ−Ａｌｌ染色法（米国ミズーリ州セントルイス所在のシグマ（Ｓｉｇｍａ））を行って、修飾ｓｉＲＮＡの安定性を調べた。アッセイを行うために、ｓｉＲＮＡ二重鎖を９０％ヒト血清中で３７℃にてインキュベートした。反応混合物のサンプルをさまざまな時間地点（０、０．２５、１、２、４、および２４時間）で急冷し、ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供した。経時的なＲＮＡの切断から、血清ヌクレアーゼによる分解に対するｓｉＲＮＡ二重鎖の感受性に関する情報が得られた。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１２】
【表８】
2007528736.tif 000001
2007528736.tif 000002
2007528736.tif 000003
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１３】
【表９】
2007528736.tif 000004
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１４】
【表１０】
2007528736.tif 000005
2007528736.tif 000006
2007528736.tif 000007
2007528736.tif 000008
2007528736.tif 000009
2007528736.tif 000010
2007528736.tif 000011
2007528736.tif 000012
2007528736.tif 000013
2007528736.tif 000014
2007528736.tif 000015
2007528736.tif 000016
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１５】
【表１１】
2007528736.tif 000017
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１６】
【表１２】
2007528736.tif 000018
2007528736.tif 000019
2007528736.tif 000020
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１７】
【表１３】
2007528736.tif 000021
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１８】
【表１４】
2007528736.tif 000022
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１９】
【表１５】
2007528736.tif 000023
2007528736.tif 000024
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２０】
【表１６】
2007528736.tif 000025
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２１】
【表１７】
2007528736.tif 000026
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２２】
【表１８】
2007528736.tif 000027
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２３】
【表１９】
2007528736.tif 000028
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２４】
【表２０】
2007528736.tif 000029
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２５】
【表２１】
2007528736.tif 000030
2007528736.tif 000031
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２６】
【表２２】
2007528736.tif 000032
2007528736.tif 000033
2007528736.tif 000034
（他の実施形態）
本発明の幾つかの実施形態について記載してきた。しかし、当然ながら、本発明の思想および範囲から逸脱することなく、さまざまな変更形態を作製することが可能である。したがって、他の実施形態も特許請求の範囲の範疇内にある。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2007528736000001.app