【手続補正書】
【提出日】令和1年9月19日(2019.9.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む膜結合型キメラ受容体をコードする単離された核酸配列であって、該CD4細胞外ドメインが、SEQ ID NO: 3または64を含む核酸配列によってコードされ、かつHIV感染細胞を認識して結合することができる、前記単離された核酸配列。
【請求項２】
前記膜貫通ドメインが、SEQ ID NO: 4または65を含む核酸配列によってコードされるCD8αヒンジを含み、かつSEQ ID NO: 5または8を含む核酸配列によってコードされる膜貫通ドメインを含み、かつ任意で、
前記シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO: 6または68を含む核酸配列によってコードされるCD3ζシグナル伝達ドメインを含み、
前記膜結合型キメラ受容体が、共刺激シグナル伝達領域をさらに含み、任意で、
該共刺激シグナル伝達領域が、TCRζのα鎖、β鎖、もしくはζ鎖、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、またはCD66dからなる群より選択される共刺激分子の細胞内ドメイン、CD27、CD28、4-1BB（CD137）、DAP12、OX9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、リンパ球機能関連抗原-1（LFA-1）、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83特異的結合リガンドからの共刺激シグナル伝達領域、およびそれらの任意の組み合わせを含み、かつ／または、
該共刺激シグナル伝達領域がCD28であり、かつSEQ ID NO: 9または67を含む核酸配列によってコードされ、かつ／または、
前記CD4細胞外ドメインが、HIVエンベロープ（Env）糖タンパク質に特異的に結合する、
請求項1に記載の単離された核酸配列。
【請求項３】
前記核酸配列が、SEQ ID NO: 1、7、62、または63を含む、請求項1に記載の単離された核酸配列を含む、ベクター。
【請求項４】
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む膜結合型キメラ受容体をコードする単離されたアミノ酸配列であって、該CD4細胞外ドメインが、アミノ酸配列SEQ ID NO: 46を含み、かつHIV感染細胞を認識して結合することができる、前記単離されたアミノ酸配列。
【請求項５】
前記膜貫通ドメインが、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列を含むCD8αヒンジを含み、かつ、SEQ ID NO: 48または49のアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインを含み、かつ任意で、
前記シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO: 51を含むCD3ζシグナル伝達ドメインを含み、
前記単離されたアミノ酸配列が、共刺激シグナル伝達領域をさらに含み、任意で、
該共刺激シグナル伝達領域が、TCRζのα鎖、β鎖、もしくはζ鎖、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、またはCD66dからなる群より選択される共刺激分子の細胞内ドメイン、CD27、CD28、4-1BB（CD137）、DAP12、OX9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、リンパ球機能関連抗原-1（LFA-1）、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83特異的結合リガンドからの共刺激シグナル伝達領域、およびそれらの任意の組み合わせを含み、かつ／または、
該共刺激シグナル伝達領域がCD28であり、かつSEQ ID NO: 49を含み、かつ／または、
前記CD4細胞外ドメインが、HIVエンベロープ（Env）糖タンパク質に特異的に結合する、
請求項4に記載の単離されたアミノ酸配列。
【請求項６】
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む膜結合型キメラ受容体をコードする核酸配列を含むベクターであって、該CD4細胞外ドメインが、HIV感染細胞を認識して結合することができ、該核酸配列が、SEQ ID NO: 44または45のアミノ酸配列をコードし、かつ任意で、EFαプロモーターを含む、前記ベクター。
【請求項７】
HIV特異的な結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域、およびシグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（CAR）をコードする単離された核酸配列であって、該HIV結合ドメインが、抗HIV抗体またはその断片を含み、任意で、
該HIV特異的な結合ドメインが、重鎖および軽鎖を含み、
該HIV特異的な結合ドメインが、ヒト抗体、ヒト化抗体、およびその断片であり、任意で、該抗体またはその断片が、Fab断片、F(ab')2断片、Fv断片、および一本鎖Fv（scFv）からなる群より選択され、任意で、
該scFvが、SEQ ID NO: 13、17、21、25、29、57〜60、および61からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または、
該scFvが、SEQ ID NO: 12、16、20、24、28、75〜78、および79からなる群より選択される核酸配列によってコードされ、
該HIV特異的な結合ドメインが、HIV感染細胞またはHIVビリオンの表面に特異的に結合し、
該共刺激シグナル伝達領域が、TCR、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD86、共通FcRγ、FcRβ（FcεR1b）、CD79a、CD79b、FcγRIIa、DAP10、DAP12、T細胞受容体（TCR）、CD8、CD27、CD28、4-1BB（CD137）、OX9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、KIRファミリータンパク質、リンパ球機能関連抗原-1（LFA-1）、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83特異的結合リガンド、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM（LIGHTR）、SLAMF7、NKp80（KLRF1）、CD127、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1（CD226）、SLAMF4（CD244、2B4）、CD84、CD96（Tactile）、CEACAM1、CRTAM、Ly9（CD229）、CD160（BY55）、PSGL1、CD100（SEMA4D）、CD69、SLAMF6（NTB-A、Ly108）、SLAM（SLAMF1、CD150、IPO-3）、BLAME（SLAMF8）、SELPLG（CD162）、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D、Toll様受容体1（TLR1）、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、からなる群より選択される共刺激分子の細胞内ドメイン、およびそれらの任意の組み合わせを含み、
該シグナル伝達ドメインが、核酸配列SEQ ID NO: 6または68によってコードされるCD3ζシグナル伝達ドメインを含み、
該CARが、SEQ ID NO: 10、14、18、22、26、34、70〜73、および74からなる群より選択される核酸配列によってコードされ、かつ／または、
該CARが、SEQ ID NO: 11、15、19、23、27、35、52〜55、および56からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、
前記単離された核酸配列。
【請求項８】
請求項1または請求項7に記載の単離された核酸配列を含む、改変細胞であって、任意で、該細胞が、T細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、細胞傷害性Tリンパ球（CTL）、および調節性T細胞からなる群より選択され、かつ任意で、
該核酸配列が、DNAおよびmRNAからなる群より選択され、かつ／または
該核酸配列が、エレクトロポレーション、レンチウイルスの使用、レトロウイルスの使用、および化学物質ベースのトランスフェクションからなる群より選択される少なくとも1つの手順によって該細胞中に導入されている、
前記改変細胞。
【請求項９】
請求項8に記載の改変細胞を含む、組成物。
【請求項１０】
その必要がある対象におけるHIV感染症の処置のための薬剤の製造における、請求項8に記載の細胞の使用。
【請求項１１】
請求項8に記載の改変細胞、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１２】
請求項8に記載の改変細胞を含む、HIV感染哺乳動物において細胞免疫応答を刺激するための薬学的組成物。
【請求項１３】
請求項8に記載の改変細胞を含み、任意で、
高活性抗レトロウイルス療法（HAART）と組み合わせて使用され、任意で、
該改変細胞および該HAARTが、HIV感染哺乳動物に同時に施されるように使用されることを特徴とする、
HIV感染哺乳動物を処置するための薬学的組成物。
【請求項１４】
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体を含む改変T細胞であって、該CD4細胞外ドメインが、SEQ ID NO: 3または64を含む核酸配列によってコードされ、かつHIV感染細胞を認識して結合することができる、改変T細胞。
【請求項１５】
CCR5破壊アリルをさらに含む、請求項14に記載の改変T細胞。
【請求項１６】
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体を含む改変T細胞であって、該CD4細胞外ドメインが、SEQ ID NO: 46に記載のアミノ酸配列を含み、かつHIV感染細胞を認識して結合することができる、前記改変T細胞。
【請求項１７】
CCR5破壊アリルをさらに含む、請求項16に記載の改変T細胞。
【請求項１８】
SEQ ID NO: 1を含む核酸配列をT細胞に導入する段階を含む、HIV感染細胞に特異的なT細胞を作製する方法。
【請求項１９】
SEQ ID NO: 1を含む核酸配列をT細胞に導入する段階、および
CCR5アリルを破壊することができる、CCR5遺伝子に特異的なジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）を、該T細胞に導入する段階
を含む、HIV感染細胞に特異的なHIV耐性T細胞を作製する方法。
【請求項２０】
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体を含む改変T細胞であって、該CD4細胞外ドメインが、SEQ ID NO: 46に記載のアミノ酸配列を含み、かつHIV感染細胞を認識して結合することができ、かつ該改変T細胞がHIV感染に耐性がある、前記改変T細胞。
【請求項２１】
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体を含む改変T細胞を含む、HIV感染哺乳動物を処置するための薬学的組成物であって、該CD4細胞外ドメインが、SEQ ID NO: 46に示されるアミノ酸配列を含み、かつHIV感染細胞を認識して結合することができ、かつ該改変T細胞がHIV感染に耐性である、
前記薬学的組成物。
【請求項２２】
高活性抗レトロウイルス療法（HAART）と組み合わせて使用される、請求項21に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
またさらなる局面において、本発明は、HIV感染哺乳動物を処置する方法を含む。方法は、本明細書中の上記で列挙されたような本発明の改変細胞を哺乳動物に投与する段階を含む。いくつかの態様において、改変細胞は、哺乳動物にとって自己由来である。他の態様において、本発明の方法は、抗レトロウイルス療法（HAART）を哺乳動物に施す段階をさらに含む。さらに他の態様において、改変細胞およびHAARTは、哺乳動物に同時に施される。
[本発明1001]
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む膜結合型キメラ受容体をコードする単離された核酸配列であって、該CD4細胞外ドメインが、HIV感染細胞を認識して結合することができる、前記単離された核酸配列。
[本発明1002]
前記CD4細胞外ドメインが、SEQ ID NO: 3または64を含む核酸配列によってコードされる、本発明1001の単離された核酸配列。
[本発明1003]
前記膜貫通ドメインが、核酸配列SEQ ID NO: 4または65によってコードされるCD8αヒンジ、ならびに、SEQ ID NO: 5および8からなる群より選択される1つの核酸配列を含む核酸配列によってコードされる少なくとも1つのドメインを含む膜貫通ドメインを含む、本発明1001の単離された核酸配列。
[本発明1004]
前記シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO: 6または68を含む核酸配列によってコードされるCD3ζシグナル伝達ドメインを含む、本発明1001の単離された核酸配列。
[本発明1005]
共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、本発明1001の単離された核酸配列。
[本発明1006]
前記共刺激シグナル伝達領域が、TCRζのα鎖、β鎖、もしくはζ鎖、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、またはCD66dからなる群より選択される共刺激分子の細胞内ドメイン、CD27、CD28、4-1BB（CD137）、DAP12、OX9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、リンパ球機能関連抗原-1（LFA-1）、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83特異的結合リガンドからの共刺激シグナル伝達領域、およびそれらの任意の組み合わせを含む、本発明1005の単離された核酸配列。
[本発明1007]
前記共刺激シグナル伝達領域がCD28であり、SEQ ID NO: 9または67を含む核酸配列によってコードされる、本発明1006の単離された核酸配列。
[本発明1008]
前記CD4細胞外ドメインが、HIVエンベロープ（Env）糖タンパク質に特異的に結合する、本発明1001の単離された核酸配列。
[本発明1009]
本発明1001の単離された核酸配列を含む、ベクター。
[本発明1010]
前記核酸配列が、SEQ ID NO: 1、7、62、および63からなる群からの少なくとも1つの核酸配列を含む、本発明1009のベクター。
[本発明1011]
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む膜結合型キメラ受容体をコードする単離されたアミノ酸配列であって、該CD4細胞外ドメインが、HIV感染細胞を認識して結合することができる、前記単離されたアミノ酸配列。
[本発明1012]
前記CD4細胞外ドメインが、アミノ酸配列SEQ ID NO: 46を含む、本発明1011の単離されたアミノ酸配列。
[本発明1013]
前記膜貫通ドメインが、SEQ ID NO: 47のCD8αヒンジ、ならびに、SEQ ID NO: 48および49からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含む膜貫通ドメインを含む、本発明1011の単離されたアミノ酸配列。
[本発明1014]
前記シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO: 51を含むCD3ζシグナル伝達ドメインを含む、本発明1011の単離されたアミノ酸配列。
[本発明1015]
共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、本発明1011の単離されたアミノ酸配列。
[本発明1016]
前記共刺激シグナル伝達領域が、TCRζのα鎖、β鎖、もしくはζ鎖、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、またはCD66dからなる群より選択される共刺激分子の細胞内ドメイン、CD27、CD28、4-1BB（CD137）、DAP12、OX9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、リンパ球機能関連抗原-1（LFA-1）、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83特異的結合リガンドからの共刺激シグナル伝達領域、およびそれらの任意の組み合わせを含む、本発明1015の単離されたアミノ酸配列。
[本発明1017]
前記共刺激シグナル伝達領域がCD28であり、SEQ ID NO: 49を含む、本発明1016の単離されたアミノ酸配列。
[本発明1018]
前記CD4細胞外ドメインが、HIVエンベロープ（Env）糖タンパク質に特異的に結合する、本発明1011の単離されたアミノ酸配列。
[本発明1019]
CD4細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびシグナル伝達ドメインを含む膜結合型キメラ受容体を含むベクターであって、該CD4細胞外ドメインが、HIV感染細胞を認識して結合することができ、該ベクターが、SEQ ID NO: 44および45からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸配列を含む、前記ベクター。
[本発明1020]
EFαプロモーターを含む、本発明1019のベクター。
[本発明1021]
HIV特異的な結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域、およびシグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（CAR）をコードする単離された核酸配列であって、該HIV結合ドメインが、抗HIV抗体またはその断片を含む、前記単離された核酸配列。
[本発明1022]
前記HIV特異的な結合ドメインが、重鎖および軽鎖を含む、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1023]
前記HIV特異的な結合ドメインが、ヒト抗体、ヒト化抗体、およびその断片である、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1024]
前記抗体またはその断片が、Fab断片、F(ab')2断片、Fv断片、および一本鎖Fv（scFv）からなる群より選択される、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1025]
前記scFvが、SEQ ID NO: 13、17、21、25、29、57〜60、および61からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1024の単離された核酸配列。
[本発明1026]
前記scFvが、SEQ ID NO: 12、16、20、24、28、75〜78、および79からなる群より選択される核酸配列によってコードされる、本発明1024の単離された核酸配列。
[本発明1027]
前記HIV特異的な結合ドメインが、HIV感染細胞またはHIVビリオンの表面に特異的に結合する、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1028]
前記共刺激シグナル伝達領域が、TCR、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD86、共通FcRγ、FcRβ（FcεR1b）、CD79a、CD79b、FcγRIIa、DAP10、DAP12、T細胞受容体（TCR）、CD8、CD27、CD28、4-1BB（CD137）、OX9、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、KIRファミリータンパク質、リンパ球機能関連抗原-1（LFA-1）、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、CD83特異的結合リガンド、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM（LIGHTR）、SLAMF7、NKp80（KLRF1）、CD127、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1（CD226）、SLAMF4（CD244、2B4）、CD84、CD96（Tactile）、CEACAM1、CRTAM、Ly9（CD229）、CD160（BY55）、PSGL1、CD100（SEMA4D）、CD69、SLAMF6（NTB-A、Ly108）、SLAM（SLAMF1、CD150、IPO-3）、BLAME（SLAMF8）、SELPLG（CD162）、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D、Toll様受容体1（TLR1）、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、からなる群より選択される共刺激分子の細胞内ドメイン、およびそれらの任意の組み合わせを含む、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1029]
前記シグナル伝達ドメインが、核酸配列SEQ ID NO: 6または68によってコードされるCD3ζシグナル伝達ドメインを含む、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1030]
前記CARが、SEQ ID NO: 10、14、18、22、26、34、70〜73、および74からなる群より選択される核酸配列によってコードされる、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1031]
前記CARが、SEQ ID NO: 11、15、19、23、27、35、52〜55、および56からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、本発明1021の単離された核酸配列。
[本発明1032]
本発明1001または本発明1021の単離された核酸配列を含む、改変細胞。
[本発明1033]
T細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、細胞傷害性Tリンパ球（CTL）、および調節性T細胞からなる群より選択される、本発明1032の改変細胞。
[本発明1034]
前記核酸配列が、DNAおよびmRNAからなる群より選択される、本発明1033の改変細胞。
[本発明1035]
前記核酸配列が、エレクトロポレーション、レンチウイルスの使用、レトロウイルスの使用、および化学物質ベースのトランスフェクションからなる群より選択される少なくとも1つの手順によって前記細胞中に導入される、本発明1033の改変細胞。
[本発明1036]
本発明1033の改変細胞を含む、組成物。
[本発明1037]
その必要がある対象におけるHIV感染症の処置のための薬剤の製造における、本発明1033の細胞の使用。
[本発明1038]
本発明1033の改変細胞、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
[本発明1039]
HIV感染哺乳動物において細胞免疫応答を刺激するための方法であって、本発明1033の改変細胞の有効量を該哺乳動物に投与する段階を含む、方法。
[本発明1040]
HIV感染哺乳動物を処置する方法であって、本発明1033の改変細胞を該哺乳動物に投与する段階を含む、方法。
[本発明1041]
前記改変細胞が前記哺乳動物にとって自己由来である、本発明1040の方法。
[本発明1042]
抗レトロウイルス療法（HAART）を哺乳動物に施す段階をさらに含む、本発明1041の方法。
[本発明1043]
前記改変細胞およびHAARTが、前記哺乳動物に同時に施される、本発明1041の方法。