【手続補正書】
【提出日】平成20年2月15日(2008.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脊椎動物における粘膜免疫応答を発生させるための組成物の製造へのイムノマーの使用であって、該組成物が脊椎動物の粘膜内層に投与されるものである、前記使用。
【請求項２】
疾患または障害を有する脊椎動物を治療するための組成物の製造へのイムノマーの使用であって、該組成物が脊椎動物の粘膜内層に投与されるものである、前記使用。
【請求項３】
脊椎動物における疾患または障害を予防するための組成物の製造へのイムノマーの使用であって、該組成物が脊椎動物の粘膜内層に投与されるものである、前記使用。
【請求項４】
疾患または障害が、癌、炎症性障害、炎症性腸症候群、潰瘍性大腸炎、クローン病、気道炎症、喘息およびアレルギーからなる群から選択される、請求項２または３に記載の使用。
【請求項５】
組成物が、ワクチン、アレルゲン、抗原、抗体、モノクローナル抗体、化学療法薬物、抗生物質、脂質、ＤＮＡワクチンおよびミョウバンなどの他のアジュバントからなる群から選択される剤と共に投与されるものである、請求項２〜４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
組成物が、疾患または障害と関連する抗原と共に投与されるものである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
イムノマーまたは抗原、あるいはその両方が、免疫原性タンパク質または非免疫原性タンパク質に結合している、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
組成物が、アジュバントと共に投与されるものである、請求項２〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
脊椎動物における粘膜免疫応答を調節するための組成物の製造へのイムノマーの使用であって、該組成物が脊椎動物の粘膜内層に投与されるものである、前記使用。
【請求項１０】
免疫応答がＴｈ１免疫応答である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
免疫応答がＴｈ２免疫応答である、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
組成物が経口投与されるものである、請求項１〜１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１３】
組成物の投与経路が、鼻腔内、気管内、直腸内、膣内および胃内投与からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
脊椎動物が、魚類、鳥類、および哺乳類からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれかに記載の使用。
【請求項１５】
哺乳類が、ラット、マウス、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、乳牛、ブタ、ウサギ、ヒト以外の霊長類、およびヒトからなる群から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
イムノマーが、少なくとも２つのオリゴヌクレオチドであって、非ヌクレオチドリンカーによって結合され、かつ、２つ以上の５’末端を有するものを含み、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つが、利用可能な５’末端を有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドであり、かつ、免疫賦活性ジヌクレオチドを含む、請求項１〜１５のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
免疫賦活ジヌクレオチドが、ＣｐＧ、Ｃ＊ｐＧ、ＣｐＧ＊、およびＣ＊ｐＧ＊からなる群から選択され、ここで、Ｃは、シチジンまたは２’−デオキシシチジンであり、Ｃ＊は、２’−デオキシチミジン、アラビノシチジン、１−（２’−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−オキソ−７−デアザ−８−メチル−プリン、２’−デオキシ−２’−置換−アラビノシチジン、２’−Ｏ−置換−アラビノシチジン、２’−デオキシ−５−ヒドロキシシチジン、２’−デオキシ−Ｎ４−アルキル−シチジン、２’−デオキシ−４−チオウリジンまたは他の非天然型ピリミジンヌクレオシドであり、Ｇは、グアノシンまたは２’−デオキシグアノシンであり、Ｇ＊は、２’−デオキシ−７−デアザグアノシン、２’−デオキシ−６−チオグアノシン、アラビノグアノシン、２’−デオキシイノシン、２’−デオキシ−２’−置換−アラビノグアノシン、２’−Ｏ−置換−アラビノグアノシンである、請求項１６に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
例２０：胃内ワクチン接種
メスＣ５７ＢＬ／６マウスをオリゴ投与前にイソフルレン吸入で軽度に鎮静化した。１５ｍｇ／ｋｇのＩＭＯ２またはＯｌｉｇｏ１７あるいはＣｐＧ  ＤＮＡを２５ｍｇ／ｋｇトリオバルブミン（ＯＶＡ）（グレードＶ、Sigma, St. Louis, MO）とＰＢＳ４００μｌ中に混合して胃内投与で１日目および１４日目に投与し、対照群マウスは４００μｌのＰＢＳ中の２５ｍｇ／ｋｇのＯＶＡで免疫化した（図２３に処置手順を示す）。図２４〜２６に結果を示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
ＯＶＡ特異的抗体決定のために、９６ウェルプレートを室温で３時間ＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬのＯＶＡと培養した。固相は一晩４℃で最初の免疫化から３５〜４２日後に採集した腸洗浄物あるいは血清試料とともに培養し、引き続いて西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を接合したヤギ抗マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａあるいはＩｇＡ（PharMingen, San Diego, CA）と共に培養した。抗体の結合は、ＡＢＴＳ基質（Zymed, San Francisco, CA）との免疫複合物の反応ののち４５０ｎｍで吸光として測定した。図２５で示すように、ＩＭＯを混合したＯＶＡはより強いＴｈ１型の応答を誘導して、より高い血清ＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａを示し（Ａ）、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１を抑制する（低くする）（Ｂ）。付け加えて、図２６で示すように、ＩＭＯ媒介胃内ＯＶＡワクチン接種は、腸内洗浄物において局所的なＯＶＡ特異的分泌ＩｇＡを誘導した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
例２１：ＩＭＯ媒介胃内ワクチン接種の経時研究
図２７で表したように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５ｍｇ／ｋｇのＯＶＡのみあるいは、直線ＣｐＧオリゴ（Ｏｌｉｇｏ１７）あるいはＩＭＯ２との混合物を１日目と１４日目に胃内投与し、ＯＶＡ特異的血清抗体応答を４２日目と６０日目にＥＬＩＳＡ法で評価した。図２８で示すように、４２日目のＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａレベルは、ＯＶＡ−ＩＭＯグループにおいて増え始めた。ところが一方、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１は、この時点ではＯＶＡ−ＩＭＯ群において完全に抑制された。６０日目までは、抗ＯＶＡ  ＩｇＧ２ａはＯＶＡ−ＩＭＯ群においては増え続け、ＯＶＡ−ＣｐＧ群におけるＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａはＯＶＡ−非ＣｐＧ対照群レベルまで減少した。ところが一方、抗ＯＶＡ  ＩｇＧ１力価はこの時点では劇的に増加し、恒常的なＯＶＡ−ＩＭＯの存在がＯＶＡ−ＩＭＯ群においてＴｈ１優勢状態のままにすることに必要なことを示唆している。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
例２２：ＩＭＯ媒介胃内ワクチン接種免疫化のスケジュールの研究
図２９で示したように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５ｍｇ／ｋｇのＯＶＡのみ、あるいは５ｍｇ／ｋｇのＯｌｉｇｏ１７あるいはＩＭＯ２との混合物を１日目および１４日目に（第１群）、あるいは１日目、１４日目および４２日目（第２群）に胃内投与した。ＯＶＡ特異的血清抗体応答を、４２日目および６０日目のＥＬＩＳＡ法で評価した。図３０は、恒常的なＯＶＡ−ＩＭＯの存在がＯＶＡ−ＩＭＯ群においてＴｈ１優勢状態を維持するために必要なことを示す。２つの免疫群（１日目および１４日目）において、ＯＶＡ−ＩＭＯ群において６０日目にＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１の両方に高い力価がみられ、免疫応答が早い時点（４２日目）のＴｈ１型のものから遅い時点（６０日目）のＴｈ１およびＴｈ２混合型のものへと移行したことを示唆している。ＯＶＡ−Ｏｌｉｇｏ１７の胃内免疫化により引き出される体液性応答は、ＩｇＧ２ａが６０日目に対照群レベルまで減少するので、有意により短い期間続いた。４２日目のさらなる免疫化は、ＯＶＡ−ＩＭＯ群においてＯＶＡ特異的ＩｇＧ１を明らかに阻害するので、かかる応答を逆転することができる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
例２３：ＩＭＯ媒介胃内ワクチン接種用量依存性応答
図３１で示すように、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５ｍｇ／ｋｇあるいは２５ｍｇ／ｋｇのＯＶＡのみ、あるいは５ｍｇ／ｋｇあるいは１５ｍｇ／ｋｇの直線ＣｐＧオリゴ（Ｏｌｉｇｏ１７）あるいはＩＭＯ２を混合して１日目と１４日目に投与し、ＯＶＡ特異的血清抗体応答を４２日目にＥＬＩＳＡ法で評価した。図３２は、ＯＶＡ−ＩＭＯがより強いＴｈ１型の応答を誘導したことを示す。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
例２４：ＩＭＯ媒介胃内ワクチン接種腫瘍接種研究
図３３に示すように、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１０）に、１５ｍｇ／ｋｇのＩＭＯ２あるいはＯｌｉｇｏ１７を４００μｌのＰＢＳで混合した２５ｍｇ／ｋｇのＯＶＡを１日目と１４日目に胃内投与し、免疫化したマウス（ｎ＝７）に１．５×１０６個のＯＶＡ陽性ＥＧ−７細胞を４２日目に接種した。図３４は、ＯＶＡ−Ｏｌｉｇｏ１７およびＯＶＡ−ＩＭＯの両方が抗原特異的な腫瘍拒絶を引き出したが、しかしながら異なる免疫応答プロフィルがＩＭＯ２あるいはＯｌｉｇｏ１７におけるＯＶＡにより引き出され、ＯＶＡ陽性ＥＧ−７腫瘍細胞接種に対する異なる免疫防御が結果として起こり得るということを示す。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
【図１１】ＩＭＯ２あるいはオリゴヌクレオチド１７を粘膜アジュバントとして混合したＯＶＡによる胃内免疫化に引き続く血清抗ＯＶＡ  ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１応答を示す図である。
【図１２】腸内洗浄物および血清洗浄物における抗ＯＶＡ  ＩｇＡレベルを示す図である。
【図１３】ＩＭＯ２、あるいはオリゴヌクレオチド１７を混合したＯＶＡで胃内免疫化したマウスにおける、ＯＶＡ陽性腫瘍接種に対する誘導された免疫防御効果を示す図である。
【図１４】粘膜免疫に対する容量依存的な応答を示す図である。
【図１５】粘膜免疫応答の経時的研究に対するＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ１応答を表す図である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
【図２１】ＯＶＡ感作および接種マウスにおけるＢＡＬＦ  Ｉｇレベルへの、ＩＭＯの経口投与の効果を示す図である。
【図２２】ＯＶＡ感作マウスにおける肺の炎症への、ＩＭＯの経口投与の効果を示す図である。
【図２３】胃内ワクチン接種の処置手順を表す図である。
【図２４】Ｔ細胞が特異的に腸間膜リンパ節および脾臓から収集したＯＶＡ２５７−２６４へ応答していることを示す図である。
【図２５】より高い血清ＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａ（Ａ）、および抑制された（より低い）ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１（Ｂ）を示すことにより、ＩＭＯを混合したＯＶＡがより強いＴｈ１型の応答を誘導したことを示す図である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
【図２６】ＩＭＯ媒介胃内ＯＶＡワクチン接種により、腸内洗浄物中に局所的なＯＶＡ特異的ＩｇＡ分泌が誘導されたことを示す図である。
【図２７】胃内ワクチン接種の処置手順を表す図である。
【図２８】４２日目のＯＶＡ特異的ＩｇＧ２ａのレベルがＯＶＡ−ＩＭＯ群において増加し始めたことを示す図である。
【図２９】胃内ワクチン接種およびＯＶＡ特異的体液性応答の処置手順を表す図である。
【図３０】ＯＶＡ−ＩＭＯ群においてＴｈ１優勢の状態を維持するためには、ＯＶＡ−ＩＭＯが一貫して存在している必要があることを示す図である。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
【図３１】胃内ワクチン接種とＯＶＡ特異的体液性応答の処置手順を表す図である。
【図３２】ＯＶＡ−ＩＭＯがより強いＴｈ１型の応答を誘導したことを示す図である。
【図３３】胃内ワクチン接種腫瘍接種研究の処置手順を表す。
【図３４】ＯＶＡ−Ｏｌｉｇｏ１７およびＯＶＡ−ＩＭＯの両方は抗原特異的な腫瘍拒絶反応を発現させたが、しかしながら、異なる免疫応答の分析結果がＩＭＯあるいはＯｌｉｇｏ１７におけるＯＶＡにより引き出され、ＯＶＡ陽性ＥＧ−７腫瘍細胞接種に対して異なる免疫防御が起こりうることを示す図である。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2007523173.tif 000001
【手続補正１３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２】
2007523173.tif 000002
【手続補正１４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３】
2007523173.tif 000003
【手続補正１５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４】
2007523173.tif 000004
【手続補正１６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図５】
2007523173.tif 000005
【手続補正１７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図６】
2007523173.tif 000006
【手続補正１８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図７】
2007523173.tif 000007
【手続補正１９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図８】
2007523173.tif 000008
【手続補正２０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１０】
2007523173.tif 000009
【手続補正２１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１１】
2007523173.tif 000010
【手続補正２２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１２】
2007523173.tif 000011
【手続補正２３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１３】
2007523173.tif 000012
【手続補正２４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２４】
2007523173.tif 000013
【手続補正２５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２５】
2007523173.tif 000014
【手続補正２６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２６】
2007523173.tif 000015
【手続補正２７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２８】
2007523173.tif 000016
【手続補正２８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３０】
2007523173.tif 000017
【手続補正２９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３２】
2007523173.tif 000018
【手続補正３０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３４】
2007523173.tif 000019