【手続補正書】
【提出日】令和1年9月13日(2019.9.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）約１００ｎＭ超のＥＣ50でエフェクター細胞に特異的に結合し、（ｉｉ）標的腫瘍細胞に特異的に結合する、二重特異性抗原結合分子を含む細胞毒性組成物であって、前記ＥＣ50は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＦＡＣＳ結合アッセイにおいて測定される結合親和性値である、前記組成物。
【請求項２】
前記二重特異性抗原結合分子は：
（ａ）５００ｎＭ超もしくは約１μＭ超のＥＣ50でヒトＣＤ３に特異的に結合する；
（ｂ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＦＡＣＳ結合アッセイもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏ表面プラズモン共鳴結合アッセイにおいて測定されるような、エフェクター細胞に特異的に結合することができない第１の抗体から得られる第１の抗原結合断片（Ｆａｂ１）を含む；または
（ｃ）エフェクター細胞もしくはＣＤ３抗原への検出可能な結合を示さない；
請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記二重特異性抗原結合分子は、約５００ｎＭ超、または約１μＭ超のＥＣ50値でヒトＣＤ３及びカニクイザルＣＤ３のそれぞれと特異的に結合する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記二重特異性抗原結合分子は、約５０ｎＭ未満のＥＣ50値で前記標的腫瘍細胞に特異的に結合する第２の抗体から得られる第２の抗原結合断片（Ｆａｂ２）を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記標的腫瘍細胞は、ヒト腫瘍細胞である、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記二重特異性抗原結合分子は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  Ｔ細胞媒介腫瘍細胞死滅アッセイにおいて測定されるように、約１．３ｎＭ未満のＥＣ50値でＴ細胞媒介腫瘍細胞死滅を誘引する、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記標的腫瘍細胞は、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥタンパク質、ＢＩＲＣ５（スルビビン）、ＢＩＲＣ７、β−カテニン、ｂｒｃ−ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ−８、ＣＡＬＲ、ＣＣＲ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０（ＭＳ４Ａ１）、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリン−Ｂ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、Ｆｒａ−１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥタンパク質（例えばＧＡＧＥ−１、−２）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン−３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ−ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ−ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ−Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＧＥタンパク質（例えばＭＡＧＥ−１、−２、−３、−４、−６、及び−１２）、ＭＡＲＴ−１、メソテリン、ＭＬ−ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６（ＣＡ−１２５）、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ−ＢＲ１、ＮＹ−ＢＲ６２、ＮＹ−ＢＲ８５、ＮＹ−ＥＳＯ１、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ−１、ＰＬＡＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１）、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＡＧ−７２、ＴＧＦ−β、ＴＭＰＲＳＳ２、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ−ｎｏｕｖｅｌｌｅ抗原（Ｔｎ）、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、チロシナーゼ、及びウロプラキン−３からなる群から選択される腫瘍関連抗原を発現する、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記腫瘍関連抗原は、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１）、ＳＴＥＡＰ２、またはＭＵＣ１６である、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記二重特異性抗原結合分子は：
（ａ）配列番号１７８のアミノ酸残基１〜７を含むＣＤＲ１、配列番号１７９のアミノ酸残基１〜７を含むＣＤＲ２、及び／もしくは配列番号１８０のアミノ酸残基４〜１１を含むＣＤＲ３を含む、第１の重鎖；
（ｂ）配列番号１２もしくは２０に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む、第１の重鎖；
（ｃ）配列番号１４もしくは５４に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む、第１の重鎖；
（ｄ）配列番号１６、配列番号２４、配列番号３２、配列番号４０、配列番号４８、配列番号５６、配列番号６４、配列番号７２、配列番号８０、配列番号８８、配列番号９６、配列番号１０４、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１２８、配列番号１３６、配列番号１４４、もしくは配列番号１５２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、第１の重鎖；
（ｅ）ＦＲ１（配列番号１７４）、ＦＲ２（配列番号１７５）、ＦＲ３（配列番号１７６）、及びＦＲ４（配列番号１７７）から選択されるアミノ酸配列を有する可変ドメインフレームワーク領域を含む、第１の重鎖；ならびに／または
（ｆ）それぞれ配列番号１７８−１７９−１８０のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３ドメインを含むＨＣＶＲを含む、第１の重鎖；
を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記二重特異性抗原結合分子は、配列番号２／１６２；１０／１６２；１８／１６２；２６／１６２；３４／１６２；４２／１６２；５０／１６２；５８／１６２；６６／１６２；７４／１６２；８２／１６２；９０／１６２；９８／１６２；１０６／１６２；１１４／１６２；１２２／１６２；１３０／１６２；１３８／１６２；１４６／１６２からなる群から選択されるＨＣＶＲ及びＬＣＶＲアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物を作製する方法であって、前記方法は
：
ａ．約４０ｎＭ未満のＥＣ50値でＣＤ３に特異的に結合する第１の抗体から得られる第１の重鎖のアミノ酸配列を特定すること、
ｂ．前記第１の抗体の前記重鎖可変領域内の選択されたアミノ酸残基を改質して、改質抗体を生成すること、
ｃ．前記改質抗体を、標的腫瘍抗原に特異的に結合する第２の抗体から得られる第２の重鎖と対形成して、二重特異性抗体を生成すること、
ｄ．前記二重特異性抗体を結合親和性アッセイにおいて試験すること、およびＣＤ３に対する結合親和性が約５００ｎＭ超のＥＣ50値を有する場合、次いで
ｅ．前記二重特異性抗体及び薬学的に許容される担体または希釈剤を含む組成物を調製すること、
を含む、前記方法。
【請求項１２】
前記第１の抗体重鎖は、第１のＣH３ドメインを含み、前記第２の抗体は、二重特異性対形成及び単離に好適な第２のＣH３ドメインを含み、場合により、前記第１及び第２のＣH３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸だけ互いに異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差は、アミノ酸の差を有しない二重特異性抗体と比較して、タンパク質Ａに対する前記二重特異性抗体の結合を低減する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物、または請求項１１または１２に記載の方法により作製された組成物を含み、薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項１４】
対象のがんの処置において使用するための、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記がんは、膵臓がん、黒色腫、膠芽腫、頭頸部がん、前立腺癌、悪性神経膠腫、骨肉腫、結腸直腸がん、胃がん、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、卵巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、滑膜肉腫、甲状腺がん、乳がん、黒色腫神経膠腫、乳がん、扁平上皮癌、食道がん、明細胞腎細胞癌、嫌色素細胞性腎癌、腎膨大細胞腫、腎移行上皮癌、尿路上皮癌、腺癌、または小細胞癌からなる群から選択される、請求項１４に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記対象は、単一特異性治療のみに対して抵抗性である、または不完全応答性である腫瘍に罹患している、請求項１４または１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
対象の腫瘍細胞溶解の媒介、または腫瘍成長の抑制において使用するための、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記量は、前記対象の腫瘍組織量を低減する、腫瘍退縮をもたらす、腫瘍成長を阻害する、または腫瘍発生を低減するのに十分である、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記対象は、ＡＦＰ、ＡＬＫ、ＢＡＧＥタンパク質、ＢＩＲＣ５（スルビビン）、ＢＩＲＣ７、β−カテニン、ｂｒｃ−ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９、炭酸脱水酵素ＩＸ、カスパーゼ−８、ＣＡＬＲ、ＣＣＲ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０（ＭＳ４Ａ１）、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ４、サイクリン−Ｂ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、Ｆｒａ−１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥタンパク質（例えばＧＡＧＥ−１、−２）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｌｏｂｏＨ、グリピカン−３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ−ｒａｆ、ＨＬＡ／ｋ−ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ−Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＬＭＰ２、ＭＡＧＥタンパク質（例えばＭＡＧＥ−１、−２、−３、−４、−６、及び−１２）、ＭＡＲＴ−１、メソテリン、ＭＬ−ＩＡＰ、Ｍ
ｕｃ１、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３、Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ１６（ＣＡ−１２５）、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＹ−ＢＲ１、ＮＹ−ＢＲ６２、ＮＹ−ＢＲ８５、ＮＹ−ＥＳＯ１、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ−１、ＰＬＡＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１）、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−３、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＴＡＧ−７２、ＴＧＦ−β、ＴＭＰＲＳＳ２、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ−ｎｏｕｖｅｌｌｅ抗原（Ｔｎ）、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、チロシナーゼ、及びウロプラキン−３からなる群から選択される腫瘍関連抗原を発現する腫瘍に罹患している、請求項１８に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
対象の腫瘍成長の抑制において使用するための、低減されたクリアランスを有する細胞毒性二重特異性抗体を含む薬学的組成物であって、前記二重特異性抗体は、エフェクター細胞に対する検出可能な結合親和性を有しない、または少なくとも２００超のＥＣ50またはＫDでのエフェクター細胞に対する弱い結合親和性を有し、標的腫瘍細胞に高い親和性で特異的に結合し、結合親和性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＦＡＣＳ結合アッセイまたはｉｎ
ｖｉｔｒｏ表面プラズモン共鳴アッセイにおいて測定される、前記薬学的組成物。
【請求項２１】
細胞毒性二重特異性抗体を生成する方法であって、以下の：
ａ．複数の種から、エフェクター細胞抗原と相互作用する第１のヒト抗体またはその抗原結合断片を特定すること；
ｂ．前記第１のヒト抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の生殖細胞系列アミノ酸残基を特定すること；
ｃ．前記第１のヒト抗体の前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列を、対応する生殖細胞系列ＨＣＶＲのアミノ酸配列と比較すること；
ｄ．前記第１のヒト抗体の前記ＨＣＶＲの改質領域内のアミノ酸を特定することであって、前記第１のヒト抗体内の改質領域は、前記生殖細胞系列ＨＣＶＲ内の同じ領域と比較して、単一アミノ酸残基の置換、欠失または付加による少なくとも１つのアミノ酸改質を示す、特定すること；
ｅ．それぞれ前記ＨＣＶＲの少なくとも１つの改質領域を含む複数の改質抗体を生成すること；
ｆ．前記複数の改質抗体のそれぞれを、前記エフェクター細胞抗原に対する一価親和性に関してスクリーニングすること；
ｇ．前記第１のヒト抗体と比較して前記エフェクター細胞抗原へのより弱い結合親和性を示す改質抗体を選択すること；及び
ｈ．選択された抗体を腫瘍関連抗原と相互作用する第２の抗体と対形成し、細胞毒性二重特異性抗体を生成すること；
を含む、前記方法。
【請求項２２】
ヒトＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメイン及び標的抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む細胞毒性二重特異性抗体であって、前記第１の抗原結合ドメインは、配列番号：１０、１８、２６、３４、４２、５０、５８、６６、７４、８２、９０、９８、１０６、１１４、１２２、１３０、１３８および１４６から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）、ならびに、第１の抗原結合ドメインおよび第２の抗原結合ドメインの両方に共通する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、前記細胞毒性二重特異性抗体。
【請求項２３】
標的抗原が、腫瘍関連抗原である、請求項２２に記載の細胞毒性二重特異性抗体。
【請求項２４】
請求項２２または２３に記載の細胞毒性二重特異性抗体、及び、薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項２５】
腫瘍の治療において使用するための、請求項２４に記載の薬学的組成物。