【手続補正書】
【提出日】平成20年4月14日(2008.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】  明細書
【発明の名称】  変化した親和性を有する改変ウシアデノウイルス
【特許請求の範囲】
【請求項１】  キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド中に改変を含むウシアデノウイルスベクターであって、ここで該キャプシドタンパク質またはそのフラグメントは、親和性と関連し、ここで該改変は、変化した親和性と関連する、ウシアデノウイルスベクター。
【請求項２】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドが、異種哺乳動物キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドと置換されている、アデノウイルスベクター。
【請求項３】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ペントンタンパク質またはそのフラグメントである、アデノウイルスベクター。
【請求項４】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ヘキソンタンパク質またはそのフラグメントである、アデノウイルスベクター。
【請求項５】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ファイバータンパク質またはそのフラグメントである、アデノウイルスベクター。
【請求項６】  請求項５に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記改変がファイバータンパク質のノブ領域にある、アデノウイルスベクター。
【請求項７】  請求項３に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記ウシアデノウイルスペントン領域またはそのフラグメントが、少なくとも１つの異種哺乳動物ペントンアデノウイルス領域またはそのフラグメントで置換されている、アデノウイルスベクター。
【請求項８】  請求項４に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記ウシアデノウイルスヘキソン領域またはそのフラグメントが、少なくとも１つの異種哺乳動物アデノウイルスヘキソン領域またはそのフラグメントで置換されている、アデノウイルスベクター。
【請求項９】  請求項５に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記ウシアデノウイルスファイバー領域またはそのフラグメントが、少なくとも１つの異種哺乳動物アデノウイルスファイバー領域またはそのフラグメントで置換されている、アデノウイルスベクター。
【請求項１０】  請求項２に記載のアデノウイルスベクターであって、前記異種哺乳動物アデノウイルスキャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ブタアデノウイルスキャプシドタンパク質、ヒツジアデノウイルスキャプシドタンパク質、イヌアデノウイルスキャプシドタンパク質またはヒトアデノウイルスキャプシドタンパク質あるいはそれらのフラグメントを含む、アデノウイルスベクター。
【請求項１１】  請求項１０に記載のアデノウイルスベクターであって、前記異種哺乳動物アデノウイルスキャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ヒトアデノウイルスキャプシドタンパク質またはそのフラグメントである、アデノウイルスベクター。
【請求項１２】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここでアデノウイルスが、アデノウイルスサブタイプ１型である、アデノウイルスベクター。
【請求項１３】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここでアデノウイルスが、アデノウイルスサブタイプ２型である、アデノウイルスベクター。
【請求項１４】  前記アデノウイルスベクターがＢＡＶ３である、請求項１２に記載のアデノウイルスベクター。
【請求項１５】  請求項１４に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記改変が、異種哺乳動物アデノウイルスベクターファイバータンパク質またはそのフラグメントによるＢＡＶ３ファイバータンパク質またはそのフラグメントの置換である、アデノウイルスベクター。
【請求項１６】  請求項１５に記載のアデノウイルスベクターであって、前記哺乳動物アデノウイルスファイバータンパク質またはそのフラグメントが、ブタアデノウイルスファイバータンパク質、ヒツジアデノウイルスファイバータンパク質、イヌアデノウイルスファイバータンパク質またはヒトアデノウイルスファイバータンパク質を含む、アデノウイルスベクター。
【請求項１７】  請求項１６に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで前記哺乳動物アデノウイルスファイバータンパク質が、ヒトアデノウイルスファイバータンパク質である、アデノウイルスベクター。
【請求項１８】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで該ベクターが、Ｅ１機能を欠く、アデノウイルスベクター。
【請求項１９】  請求項１８に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで該ベクターが、前記Ｅ１遺伝子領域の一部または全ての欠損を有する、アデノウイルスベクター。
【請求項２０】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで該ベクターが、Ｅ３遺伝子領域の一部または全ての欠損を有する、アデノウイルスベクター。
【請求項２１】  請求項１に記載のアデノウイルスベクターであって、ここで該ベクターがさらに、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、アデノウイルスベクター。
【請求項２２】  請求項２１に記載のアデノウイルスベクターであって、前記異種タンパク質が、以下：
サイトカイン；リンホカイン；病原性生物により認識される膜レセプター、ジストロフィン；インスリン；細胞イオンチャネルに関与するタンパク質；アンチセンスＲＮＡ；病原性遺伝子によって産生されるタンパク質の活性を阻害し得るタンパク質、酵素活性を阻害するタンパク質、病原性タンパク質のタンパク質改変体；抗原性エピトープ；主要組織適合遺伝子複合体クラスＩタンパク質および主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩタンパク質；抗体；免疫毒素；毒素；成長因子または成長ホルモン；細胞レセプターまたは細胞レセプターのリガンド；腫瘍サプレッサー；細胞性酵素；または自殺遺伝子
を含む、アデノウイルスベクター。
【請求項２３】  請求項２２に記載のアデノウイルスであって、ここで前記異種タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、アデノウイルスＥ１遺伝子領域中に挿入されている、アデノウイルス。
【請求項２４】  請求項２２に記載のアデノウイルスであって、ここで前記異種タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、アデノウイルスＥ３遺伝子領域中に挿入されている、アデノウイルス。
【請求項２５】  該ベクターが複製能を有する、請求項１に記載のアデノウイルスベクター。
【請求項２６】  該ベクターが複製欠損性である、請求項１に記載のアデノウイルスベクター。
【請求項２７】  請求項１に記載のウシアデノウイルスベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２８】  請求項２１に記載のウシアデノウイルスベクターを含む、宿主細胞。
【請求項２９】  キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド中に改変を含む組換えウシアデノウイルスベクターを産生する方法であって、該方法は、ウシアデノウイルスベクターを得る工程；およびキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド中に改変を導入する工程を包含し、ここで該キャプシドタンパク質またはそのフラグメントは、親和性と関連し、該改変が、変化した親和性と関連する、方法。
【請求項３０】  請求項２９に記載の方法であって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ペントンタンパク質またはそのフラグメントである、方法。
【請求項３１】  請求項２９に記載の方法であって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ヘキソンタンパク質またはそのフラグメントである、方法。
【請求項３２】  請求項２９に記載の方法であって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ファイバータンパク質またはそのフラグメントである、方法。
【請求項３３】  請求項２９に記載の方法であって、ここで前記アデノウイルスベクターが、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、方法。
【請求項３４】  前記ウシアデノウイルスが、サブタイプ１型のウシアデノウイルスである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】  キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド中に改変を含む組換えウシアデノウイルスであって、ここで該キャプシドタンパク質またはそのフラグメントは、親和性に関し、そして該改変は、変化した親和性に関する、組換えウシアデノウイルス。
【請求項３６】  異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項３５に記載の組換えアデノウイルス。
【請求項３７】  請求項３６に記載の組換えアデノウイルスであって、ここで前記異種タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、アデノウイルスＥ１遺伝子領域中に挿入されている、組換えアデノウイルス。
【請求項３８】  請求項３６に記載の組換えアデノウイルスであって、ここで前記異種タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチドが、アデノウイルスＥ３遺伝子領域中に挿入されている、組換えアデノウイルス。
【請求項３９】  請求項３５に記載の組換えアデノウイルスであって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ペントンタンパク質またはそのフラグメントである、組換えアデノウイルス。
【請求項４０】  請求項３５に記載の組換えアデノウイルスであって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ヘキソンタンパク質またはそのフラグメントである、組換えアデノウイルス。
【請求項４１】  請求項３５に記載の組換えアデノウイルスであって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ファイバータンパク質またはそのフラグメントである、組換えアデノウイルス。
【請求項４２】  請求項４１に記載の組換えアデノウイルスであって、ここで前記改変が、ファイバータンパク質のノブ領域中にある、組換えアデノウイルス。
【請求項４３】  ウシアデノウイルスを含む免疫原性組成物であって、ここで該アデノウイルスは、キャプシドタンパク質またはそのフラグメント中の改変をコードするポリヌクレオチドを含み、そして該タンパク質またはフラグメントは、親和性と関連し、そして該改変は、変化した親和性と関連する、免疫原性組成物。
【請求項４４】  請求項４３に記載の免疫原性組成物であって、ここで前記キャプシドタンパク質が、ペントンタンパク質またはそのフラグメントである、免疫原性組成物。
【請求項４５】  請求項４３に記載の免疫原性組成物であって、ここで前記キャプシドタンパク質が、ヘキソンタンパク質またはそのフラグメントである、免疫原性組成物。
【請求項４６】  請求項４３に記載の免疫原性組成物であって、ここで前記キャプシドタンパク質が、ファイバータンパク質またはそのフラグメントである、免疫原性組成物。
【請求項４７】  請求項４６に記載の免疫原性組成物であって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ファイバータンパク質のノブドメインである、免疫原性組成物。
【請求項４８】  請求項４３に記載の免疫原性組成物であって、ここで前記改変が、哺乳動物アデノウイルスファイバータンパク質またはそのフラグメントによるウシファイバータンパク質またはそのフラグメントの置換である、免疫原性組成物。
【請求項４９】  請求項４８に記載の免疫原性組成物であって、ここで前記哺乳動物ファイバータンパク質が、ヒトアデノウイルスファイバータンパク質である、免疫原性組成物。
【請求項５０】  前記ウシアデノウイルスが、サブタイプ１型アデノウイルスである、請求項４３に記載の免疫原性組成物。
【請求項５１】  前記ウシアデノウイルスが、ＢＡＶ３である、請求項５０に記載の免疫原性組成物。
【請求項５２】  請求項４３に記載の免疫原性組成物であって、ここで前記ウシアデノウイルスが、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、免疫原性組成物。
【請求項５３】  哺乳動物被験体において免疫応答を誘導し得る薬学的組成物であって、請求項５２に記載の免疫原性組成物を含む、薬学的組成物。
【請求項５４】  薬学的に受容可能な賦形剤をさらに含む、請求項５３に記載の薬学的組成物。
【請求項５５】  感染を防御するために哺乳動物宿主において免疫応答を惹起する方法であって、請求項５４に記載の薬学的組成物を投与する工程を包含する、方法。
【請求項５６】  請求項５５に記載の方法であって、前記タンパク質が、以下：
サイトカイン；リンホカイン；病原性生物により認識される膜レセプター、ジストロフィン；インスリン；細胞イオンチャネルに関与するタンパク質；アンチセンスＲＮＡ；病原性遺伝子によって産生されるタンパク質の活性を阻害し得るタンパク質、酵素活性を阻害するタンパク質、病原性タンパク質のタンパク質改変体；抗原性エピトープ；主要組織適合遺伝子複合体クラスＩタンパク質および主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩタンパク質；抗体；免疫毒素；毒素；成長因子または成長ホルモン；細胞レセプターまたは細胞レセプターのリガンド；腫瘍サプレッサー；細胞性酵素；または自殺遺伝子
を含む、方法。
【請求項５７】  哺乳動物宿主における遺伝子送達の方法であって、該方法は、改変されたキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むウシアデノウイルスベクターを、該宿主に投与する工程を包含し、ここで該タンパク質は、親和性と関連し、そして該改変は、変化した親和性と関連し、そして該アデノウイルスベクターは、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、方法。
【請求項５８】  前記異種ポリヌクレオチドが治療タンパク質をコードする、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】  請求項５７に記載の方法であって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ペントンタンパク質またはそのフラグメントである、方法。
【請求項６０】  請求項５７に記載の方法であって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ヘキソンタンパク質またはそのフラグメントである、方法。
【請求項６１】  請求項５７に記載の方法であって、ここで前記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントが、ファイバータンパク質またはそのフラグメントである、方法。
【請求項６２】  前記改変が、ファイバータンパク質のノブ領域中にある、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】  請求項５７に記載の方法であって、ここで前記哺乳動物宿主が、ヒトであり、そして前記改変が、ヒトファイバータンパク質またはそのフラグメントによるウシアデノウイルスファイバータンパク質またはそのフラグメントの置換である、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の引用）
この出願は、２０００年５月３１日出願の米国仮出願番号６０／２０８，６７８号の利益を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、キャプシドタンパク質中の修飾を含み、かつ変化した親和性を呈するウシアデノウイルスに関する。本発明はまた、変化した親和性を有するウシアデノウイルスの作製および使用の方法に関する。
【０００３】
（背景技術）
アデノウイルスは、ヒトならびに家畜動物および実験動物において、腸内感染または呼吸感染を引き起こす。このウシアデノウイルス（ＢＡＶ）は、２つのサブグループに分けられた少なくとも９つの血清型を含む。これらのサブグループは、固相酵素免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイを用いた血清学的研究、ウイルス中和試験、免疫電子顕微鏡法に基づいて、それらの宿主特異性および臨床的症候群によって、特徴付けられている。サブグループ１ウイルスは、ＢＡＶ１、ＢＡＶ２、ＢＡＶ３、およびＢＡＶ９を含み、そしてそれぞれは、確立したウシ細胞において、ＢＡＶ４、ＢＡＶ５、ＢＡＶ６、ＢＡＶ７およびＢＡＶ８を含むサブグループ２と比較して良好に増殖する。
【０００４】
ＢＡＶ３は、１９６５年に最初に単離され、そしてＢＡＶ遺伝子型のうちで最も良好に特徴付けられており、約３５ｋｂのゲノムを含む（Ｋｕｒｏｋａｗａら（１９７８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２８：２１２−２１８）。Ｒｅｄｄｙら（１９９８、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７２：１３９４）は、ＢＡＶ３のヌクレオチド配列、ゲノム組織、および転写地図を開示する。Ｒｅｄｄｙら（１９９９、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７３：９１３７）は、発現ベクターとして複製欠損性ＢＡＶ３を開示する。ＢＡＶのサブグループ１の代表物であるＢＡＶ３（Ｂａｒｔｈａ（１９６９）Ａｃｔａ  Ｖｅｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｈｕｎｇ．１９：３１９−３２１）は、通常無症状感染を生じる（Ｄａｒｂｙｓｈｉｒｅら（１９６５）．Ｊ  Ｃｏｍｐ．Ｐａｔｈｏｌ．７５：３２７−３３０）が、しかし時折、より重大な気道感染に関連する（Ｄａｒｂｙｓｈｉｒｅら、１９６６  Ｒｅｓ．Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．７：８１−９３；Ｍａｔｔｓｏｎら、１９８８  Ｊ．Ｖｅｔ  Ｒｅｓ  ４９：６７−６９）、ウシの普通の病原性生物である。他のアデノウイルスのように、ＢＡＶ３は、直鎖状二本鎖ＤＮＡ分子を含む直径７５ｎｍ（Ｎｉｉｙａｍａら（１９７５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１６：６２１−６３３）の非エンベロープ性正二十面体粒子である。ハムスター中に注入された場合、ＢＡＶ３は腫瘍を生じ得（Ｄａｒｂｙｓｈｉｒｅ、１９６６  Ｎａｔｕｒｅ  ２１１：１０２）、そしてウイルスＤＮＡはマウス、ハムスターまたはラットの培養細胞の形態学的トランスフォーメーションを効率的にもたらし得る（ＴｓｕｋａｍｏｔｏおよびＳｕｇｉｎｏ、１９７２  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．９：４６５−４７３；Ｍｏｔｏｉら、１９７２  Ｇａｎｎ  ６３：４１５−４１８）。交差ハイブリダイゼーションは、ゲノムの左末端ではないが、その近くのいくつかの領域を含むゲノムの大部分の領域において、ＢＡＶ３とヒトアデノウイルス２型（ＨＡｄ２）との間で観察された（Ｈｕら、１９８４  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４９：６０４−６０８）。
【０００５】
ブタアデノウイルス（ＰＡＶ）感染は、脳炎、肺炎、腎臓病変および下痢と関連付けられている。Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ（１９９２）「Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  Ｓｗｉｎｅ」（Ｌｅｍａｎら編）、第７版、Ｉｏｗａ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｍｅｓ、ＩＡ．２２５−２２７頁を参照のこと。ＰＡＶが、感染した子ブタの腸内における液性応答および粘膜抗体応答の両方が刺激し得ることが示された。Ｔｕｂｏｌｙら（１９９３）Ｒｅｓ．ｉｎ  Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．５４：３４５−３５０。交差中和研究は、少なくとも５つの血清型のＰＡＶが存在することを示した。Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅら（１９７５）Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｐａｔｈｏｌ．８５：４３７−４４３；およびＨｉｒａｈａｒａら（１９９０）Ｊｐｎ．Ｊ．Ｖｅｔ．Ｓｃｉ．５２：４０７−４０９を参照のこと。ＰＡＶゲノムについての以前の研究は、ＰＡＶ３型（ＰＡＶ−３）についての制限地図の決定およびＰＡＶ−３の完全なゲノムを示す制限フラグメントのクローニングを含んでいた。Ｒｅｄｄｙら（１９９３）Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３６：１６１−１６８を参照のこと。さらに、ＰＡＶ−１およびＰＡＶ−２についての制限地図が決定された。Ｒｅｄｄｙら（１９９５ｂ）Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．１４０：１９５−２００を参照のこと。
【０００６】
ヌクレオチド配列は、種々のＰＡＶ血清型のゲノムのセグメントについて決定されている。ＰＡＶ−３のＥ３遺伝子、ｐＶＩＩＩ遺伝子およびファイバー遺伝子の配列は、Ｒｅｄｄｙら（（１９９５）Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．３６：９７−１０６）によって決定された。ＰＡＶ−１およびＰＡＶ−２のＥ３遺伝子、ｐＶＩＩＩ遺伝子およびファイバー遺伝子は、Ｒｅｄｄｙら（（１９９６）Ｖｉｒｕｓ
Ｒｅｓ．４３：９９−１０９））によって配列決定され、一方、ＰＡＶ−４のＥ３遺伝子、ｐＶＩＩＩ遺伝子およびファイバー遺伝子の配列は、Ｋｌｅｉｂｏｅｋｅｒ（（１９９４）Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．３１：１７−２５）によって決定された。このＰＡＶ−４ファイバー遺伝子配列は、Ｋｌｅｉｂｏｅｋｅｒ（（１９９５）Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．３９：２９９−３０９）によって決定された。全５つのＰＡＶ血清型（ＰＡＶ−１〜ＰＡＶ−５）に対する逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列は、Ｒｅｄｄｙら（（１９９５）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２１２：２３７−２３９）によって決定された。このＰＡＶ−３ペントン配列は、ＭｃＣｏｙら（（１９９６）Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．１４１：１３６７−１３７５）によって決定された。ＰＡＶ−４のＥ１領域のヌクレオチド配列は、Ｋｌｅｉｂｏｅｋｅｒ（（１９９５）Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．３６：２５９−２６８）によって決定された。ＰＡＶ−３のプロテアーゼ（２３Ｋ）遺伝子の配列は、ＭｃＣｏｙら（（１９９６）ＤＮＡ  Ｓｅｑ．６：２５１−２５４）によって決定された。ＰＡＶ−３ヘキソン遺伝子（および２３Ｋプロテアーゼ遺伝子の１４個のＮ末端コドン）の配列は、登録番号Ｕ３４５９２でＧｅｎＢａｎｋデータベースに寄託されている。ＰＡＶ−３  １００Ｋ遺伝子の配列は、登録番号Ｕ８２６２８でＧｅｎＢａｎｋデータベースに寄託されている。ＰＡＶ−３  Ｅ４領域の配列は、Ｒｅｄｄｙら（（１９９７）Ｖｉｒｕｓ  Ｇｅｎｅｓ  １５：８７−９０）によって決定された。Ｖｒａｔｉら（１９９５、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２０９：４００−４０８）は、ヒツジアデノウイルスの配列を開示する。
【０００７】
少なくとも４７の血清型のヒトアデノウイルスが記載されている。特定疾患に関連した最も普通の血清型についての総論が公開されている。例えば、Ｆｏｙ  Ｈ．Ｍ．（１９８９）Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ  Ｉｎ  Ｅｖａｎｓ  ＡＳ（編）．Ｖｉｒａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、７７−８９頁およびＲｕｂｉｎ  Ｂ．Ａ．（１９９３）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｉｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ、Ａｃｔａ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｈｕｎｇ  ４０：３０３−３２３を参照のこと。ヒトアデノウイルスのキャプシドは、正二十面体対称性を示し、そして２５２のキャプソメアを含む。キャプソメアは、２４０個のヘキソンおよび各ペントン上に突き出たファイバーを有する１２個のペントンからなる。そのペントンおよびヘキソンは、異なるウイルスポリペプチドからそれぞれ誘導される。型特異的抗体の原因であるこのファイバーは、ヒト株のうちで長さが変化する。このヘキソンは、グループ特異的な補体結合抗体であり、一方、このペントンは、赤血球凝集反応において特に活性である（ＰｌｏｔｋｉｎおよびＯｒｅｎｓｔｅｉｎ、Ｖａｃｃｉｎｅｓ、第３版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、６０９−６２３頁）。このファイバー領域はホモ三量体のコンフォメーションをとり、これは、アデノウイルスキャプシドの形成におけるペントンベースと成熟ファイバータンパク質との会合に必要である。ファイバーは、ファイバー３量体のアミノ末端とペントンベース内の保存されたドメインとの間の非共有結合的な相互作用によってペントンベースと会合する。アデノウイルスファイバータンパク質のカルボキシ末端の球状ノブドメインが、そのアデノウイルスの第一の細胞レセプターに対して結合するためのリガンドであることが示されている（Ｋｒａｓｎｙｋｈら（１９９６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７０：６８３９）。３量体ファイバー分子の遠位のＣ末端ドメインは、特定の第一のレセプターに対する高い親和性で結合するノブで終わる。結合後、ペントンベースのＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）モチーフは、第二のレセプターとして機能するαｖβ３型およびαｖβ５型の細胞インテグリンと相互作用する。この相互作用は、細胞内在化を引き起こし、これにより、ビリオンはエンドソーム中に存在する。このエンドソーム膜は、ペントンベースによって媒介される過程において溶解され、エンドソームの内容物が細胞質に放出される。これらの過程の間、このビリオンは、次第に脱殻され、そしてこのアデノウイルスＤＮＡは核中に輸送される（Ｓｈａｙａｋｈｍｅｔｏｖら（２０００）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７４：２５６７−２５８３）。
【０００８】
アデノウイルスおよびアデノウイルスベクターシステムの開発についての一般的な背景の引用文献については、Ｇｒａｈａｍら（１９７３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
５２：４５６−４６７；Ｔａｋｉｆｆら（１９８１）Ｌａｎｃｅｔ  １１：８３２−８３４；Ｂｅｒｋｎｅｒら（１９８３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １１：６００３−６０２０；Ｇｒａｈａｍ（１９８４）ＥＭＢＯ
Ｊ  ３：２９１７−２９２２；Ｂｅｔｔら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
６７：５９１１−５９２１；およびＢｅｔｔら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：８８０２−８８０６を参照のこと。
【０００９】
アデノウイルスは一般的に、宿主細胞の感染に続いて溶解性の複製周期を経る。感染細胞を溶解するのに加えて、アデノウイルスの複製過程は、宿主細胞のｍＲＮＡの輸送および翻訳を阻害し、従って細胞タンパク質合成を阻害する。アデノウイルスおよびアデノウイルス複製に関する総論については、Ｓｈｅｎｋ、Ｔ．およびＨｏｒｗｉｔｚ、Ｍ．Ｓ．、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第３版、Ｆｉｅｌｄｓ、Ｂ．Ｎ．ら編、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９６）、第６７章および第６８章のそれぞれを参照のこと。
【００１０】
遺伝子工学の適用は、アデノウイルス発現システムをワクチンを得るために調製するいくつかの試みを生じた。このような研究の例は、以下における開示を含む：米国特許第４，５１０，２４５号（酵母宿主での発現のためのアデノウイルスの主要後期プロモーター）；米国特許第４，９２０，２０９号（欠失した早期領域３の位置に位置するＢ型肝炎表面抗原のコード遺伝子を有する生の組換え体アデノウイルス７型）；欧州特許第３８９２８６号（ヒト細胞でのＨＣＭＶの主要エンベロープ糖タンパク質に対する非欠損ヒトアデノウイルス５組換え体の発現システム）；ＷＯ９１／１１５２５（Ｅ１Ａタンパク質を発現する細胞における生存可能な生の非病原的免疫原のイヌのアデノウイルス）；ならびにフランス特許第２６４２７６７号（アデノウイルス２のＥ３領域に由来するリーダーおよび／またはプロモーターを含むベクター）。米国特許第６，００１，５９１号および同第５，８２０，８６８号ならびに国際公開番号ＷＯ９５／１６０４８は、ウシアデノウイルス発現ベクターシステムでの組換え体タンパク質の産生を開示する。米国特許第５，９２２，５７６号は、組換え体アデノウイルス生成のためのシステムを開示する。
【００１１】
Ｋｒａｓｎｙｋｈら（１９９６、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７０：６８３９）、Ｚａｂｎｅｒら（１９９９）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、７３：８６８９）およびＳｈａｙａｋｈｍｅｔｏｖら、前出は、改変されたファイバー領域を有するヒトアデノウイルスベクターの生成を報告する。Ｘｕら（１９９８、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２４８：１５６−１６３）は、ヒトアデノウイルス５型のファイバータンパク質細胞結合ドメインを保有するウシアデノウイルスを開示する。
【００１２】
この本明細書中に引用された全ての特許および刊行物の開示は、それらの全体が参考として援用される。
【００１３】
（発明の開示）
本発明は、キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドに改変を含むアデノウイルス（好ましくは、ウシアデノウイルス）を提供し、ここで、上記タンパク質またはそれらのフラグメントは、親和性と関連し、そして上記改変は変更された親和性に関連する。本発明はさらに、改変されたアデノウイルスを含む宿主細胞および方法を提供する。従って、本発明は、キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドに改変を含むウシアデノウイルスベクターを提供し、ここで、上記タンパク質またはそのフラグメントは親和性と関連し、そして上記改変は変更された親和性に関連する。いくつかの実施形態において、キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするこのポリヌクレオチドは、異種の哺乳動物のキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドで置き換えられる。このキャプシドタンパク質またはそのフラグメントとしては、アデノウイルスのペントン、ヘキソン、またはファイバータンパク質、あるいはそれらのフラグメントが挙げられる。いくつかの実施形態において、この改変は、ファイバータンパク質のノブ領域をコードするポリヌクレオチドに存在する。他の実施形態において、ウシアデノウイルスのペントン、ヘキソンおよび／またはファイバータンパク質をコードするポリヌクレオチドは、異種の哺乳動物アデノウイルスのペントン、ヘキソンおよび／またはファイバータンパク質をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドでそれぞれ置き換えられる。さらなる実施形態において、ウシアデノウイルスのペントンタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、異種の哺乳動物アデノウイルスのペントンタンパク質またはそのフラグメントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドで置き換えられ；ウシアデノウイルスのヘキソンタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、異種の哺乳動物アデノウイルスのヘキソンタンパク質、またはそれらのフラグメントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドで置き換えられ；あるいはウシアデノウイルスのファイバータンパク質またはノブ領域のようなそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、異種の哺乳動物アデノウイルスのファイバータンパク質またはファイバータンパク質の異種ノブ領域のようなそのフラグメントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドで置き換えられる。
【００１４】
さらなる実施形態において、異種の哺乳動物アデノウイルスとしては、ウシ、ブタ、ヒツジ、イヌまたはヒトのアデノウイルスが挙げられる。さらなる実施形態において、ウシアデノウイルスとしては、サブタイプ１アデノウイルス、そして特にＢＡＶ３、またはサブタイプ２アデノウイルスが挙げられる。他の実施形態において、このウシアデノウイルスベクターはさらに、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、この異種タンパク質は治療的タンパク質である。他の実施形態において、この異種タンパク質としては、サイトカイン；リンホカイン；病原性生物によって認識される膜レセプター、ジストロフィン；インスリン；細胞イオンチャネルに関与するタンパク質；アンチセンスＲＮＡ；病原性遺伝子によって産生されるタンパク質の活性を阻害し得るタンパク質、酵素活性阻害タンパク質、病原性タンパク質のタンパク質改変体；抗原性エピトープ；主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩおよびクラスＩＩタンパク質；抗体；免疫毒素；毒素；増殖因子または成長ホルモン；細胞レセプターまたはそれらのリガンド；腫瘍サプレッサー；細胞酵素；あるいは自殺遺伝子が挙げられる。なお他の実施形態において、アデノウイルスベクターはＥ１機能を欠いている。さらなる実施形態において、アデノウイルスベクターは、Ｅ１遺伝子領域の部分的または全ての欠失を有する。さらなる実施形態において、このアデノウイルスベクターはＥ３遺伝子領域の部分的または全ての欠失を有する。なおさらなる実施形態において、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、アデノウイルスのＥ１遺伝子領域に挿入される。他の実施形態において、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、アデノウイルスのＥ３遺伝子領域に挿入される。さらなる実施形態において、アデノウイルスベクターは複製欠損性であり、そして、なおさらなる実施形態において、アデノウイルスベクターは複製能力がある。本発明はまた、キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドに改変を有するウシアデノウイルスベクターを含む宿主細胞を含む。
【００１５】
本発明はまた、キャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドに改変を含む組換え体ウシアデノウイルスベクターを産生する方法を提供し、この方法は、ウシアデノウイルスベクターを得る工程；およびキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドに改変を導入する工程を含み、ここで、上記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントは親和性に関連し、そして上記改変は変更された親和性に関連する。いくつかの実施形態において、この改変は、ウシアデノウイルスのペントン、ヘキソンおよび／またはファイバータンパク質、あるいはそれらのフラグメントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドと、異種の哺乳動物のペントン、ヘキソンおよび／またはファイバータンパク質、あるいはそれらのフラグメントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドとの置換である。他の実施形態において、この改変はファイバータンパク質のノブ領域をコードするポリヌクレオチドの置換である。さらなる実施形態において、このアデノウイルスベクターはさらに、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。
【００１６】
本発明はさらに、キャプシドタンパク質、またはそれらのフラグメントの改変を含む組換え体ウシアデノウイルスを提供し、ここで上記キャプシドタンパク質またはそのフラグメントは親和性に関連し、そして上記改変は変更された親和性に関連する。さらなる実施形態において、組み換え体アデノウイルスは異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。さらなる実施形態において、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドはアデノウイルスＥ１遺伝子領域に挿入され；なおさらなる実施形態において、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドはアデノウイルスＥ３遺伝子領域に挿入される。いくつかの実施形態において、組み換え体アデノウイルスは複製能力があり、そして他の実施形態において、組み換え体アデノウイルスは複製欠損性である。いくつかの実施形態において、組み換え体アデノウイルスは、ウシアデノウイルスのペントン、ヘキソンおよび／またはファイバータンパク質、あるいはそれらのフラグメントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドと、異種の哺乳動物のペントン、ヘキソンおよび／またはファイバータンパク質、あるいはそれらのフラグメントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドとの置換を含む。なおさらなる実施形態において、組み換え体アデノウイルスは、ファイバータンパク質のノブ領域における改変を含む。
【００１７】
本発明はまた、ウシアデノウイルスを含む免疫原性組成物を提供し、ここで上記アデノウイルスはキャプシドタンパク質またはそのフラグメントにおける改変をコードするポリヌクレオチドを含み、そして上記タンパク質またはそのフラグメントは親和性に関連し、そして上記改変は変更された親和性に関連する。いくつかの実施形態において、このキャプシドタンパク質またはそのフラグメントとしては、アデノウイルスのペントン、ヘキソンまたはファイバータンパク質、あるいはそれらのフラグメントが挙げられる。免疫原性組成物のいくつかの実施形態において、この改変は、ウシキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドと、異種の哺乳動物アデノウイルスキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドとの置換を含む。免疫原性組成物の他の実施形態において、この改変は、ウシファイバータンパク質のノブ領域をコードするポリヌクレオチドの、異種の哺乳動物アデノウイルスのファイバータンパク質のノブ領域をコードするポリヌクレオチドでの置換を含む。他の実施形態において、ウシアデノウイルスは、サブタイプ１アデノウイルス、特にＢＡＶ３、またはサブタイプ２アデノウイルスである。さらなる実施形態において、免疫原性組成物は、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むウシアデノウイルスを含む。他の実施形態において、免疫原性組成物は、サイトカイン；リンホカイン；病原性生物によって認識される膜レセプター、ジストロフィン；インスリン；細胞イオンチャネルに関与するタンパク質；アンチセンスＲＮＡ；病原性遺伝子によって産生されるタンパク質の活性を阻害し得るタンパク質、酵素活性阻害タンパク質、病原性タンパク質のタンパク質改変体；抗原性エピトープ；主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩおよびクラスＩＩタンパク質；抗体；免疫毒素；毒素；増殖因子または成長ホルモン；細胞レセプターまたはそれらのリガンド；腫瘍サプレッサー；細胞酵素；あるいは自殺遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含むウシアデノウイルスを含む。
【００１８】
本発明はまた、哺乳動物の被験体における免疫応答を誘導し得る有能な薬学的組成物を含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、改変されたキャプシドタンパク質またはそのフラグメントを有するウシアデノウイルスを含む免疫原性組成物を含み、ここで、上記タンパク質またはそのフラグメントは親和性に関連し、そして上記改変は変更された親和性に関連する。薬学的組成物のいくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むウシアデノウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態において、この異種タンパク質は治療的タンパク質である。他の実施形態において、この薬学的組成物はさらに、薬学的に受容可能な賦形剤を含む。
【００１９】
本発明はまた、哺乳動物宿主において免疫応答を誘発して感染を防ぐための方法を提供し、この方法は、本発明の薬学的組成物を必要のある哺乳動物宿主に投与する工程を含む。本発明はまた、哺乳動物宿主における遺伝子送達の方法を提供し、この方法は、改変されたキャプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含むウシアデノウイルスベクターをこの宿主に投与する工程を含み、ここで、このタンパク質は親和性に関連し、そしてこの改変は変更された親和性に関連し、そしてこのアデノウイルスベクターはさらに、異種タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、この異種ポリヌクレオチドは治療的タンパク質をコードする。
【００２０】
（発明を実行するための最良の形態）
本発明者らは、変更された親和性を有する改善されたアデノウイルスベクター（詳細には、改善されたウシアデノウイルスベクター）を発見し、そしてこれを構築した。本発明のウシアデノウイルスベクターは、少なくとも１つのキャプシドタンパク質をコードするポリヌクレオチド中に改変を含み、ここで、このタンパク質またはそのフラグメントは、親和性と関連し、そしてその改変は、変更された親和性と関連する。
【００２１】
キャプシドタンパク質としては、ペントン、ヘキソンおよびファイバータンパク質（ｆｉｂｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ）が挙げられる。本明細書中に例示される１つの実施形態において、ＢＡＶ３アデノウイルスベクターを構築し（ＢＡＶ６００）、これは、ＢＡＶ３ファイバーノブ領域（ｆｉｂｅｒ  ノブ  ｒｅｇｉｏｎ）とヒトアデノウイルス（Ａｄ５）ファイバーノブ領域との置換を含んだ。ＢＡＶ６００は、コントロールアデノウイルスと比較した場合、ヒト細胞株において増加した形質導入を示した。
【００２２】
本発明は、キャプシドタンパク質が親和性と関連し、そして置換が変更された親和性と関連する限りキャプシドタンパク質またはそのフラグメントの、異種哺乳動物キャプシドタンパク質またはそのフラグメントとの置換含む、ウシアデノウイルスベクターを含む。例えば、１つの実施形態において、ウシのファイバータンパク質のノブドメインを、種親水性を変更するために、ブタのファイバータンパク質のノブ領域またはヒツジのファイバータンパク質のノブ領域と置換する。このようなウシアデノウイルスベクターは、ブタアデノウイルスまたはヒツジアデノウイルスでそれぞれ初回免疫されたブタ哺乳動物またはヒツジ哺乳動物において免疫性をブーストするための免疫原として使用され得る。このような免疫化プロトコルにおいて、ブースト免疫は、初回免疫の結果として産生されるブタ哺乳動物またはヒツジ哺乳動物に対する任意の中和抗体の影響を回避しながら、ブタ哺乳動物またはヒツジ哺乳動物に対して種特異性を有するウシアデノウイルスの投与によって達成され得る。あるいは、別の実施形態において、ウシファイバータンパク質またはそのフラグメント（例えば、ノブ領域）を、ウシ細胞特異性を変更するために、異種ウシファイバータンパク質またはそのフラグメント（例えば、ファイバータンパク質のノブ領域）と置換する。１つの例において、ウシアデノウイルスサブタイプ１ファイバー領域またはそのフラグメント（例えば、ノブドメイン）を、ウシ細胞型特異性を変更するために、ウシアデノウイルスサブタイプ２ファイバー領域またはそのフラグメント（例えば、ノブドメイン）と置換する。このようなウシアデノウイルスベクターは、特定の細胞または組織を標的化するための免疫原として使用され得る。
【００２３】
本発明はまた、ウシキャプシドタンパク質またはそのフラグメントの、ヒトアデノウイルスキャプシドタンパク質またはそのフラグメントとの置換を含むウシアデノウイルスの使用を含み、その結果、改変されたウシアデノウイルスは、ヒトに対する種特異性を有する。このようなウシアデノウイルスは、ヒト免疫化プロトコルに使用され得、ここで、臨床患者におけるヒトアデノウイルス−５（ＨＡＶ−５）に対する既存の中和抗体は、ＨＡＶ−５の効果的な使用に対して障害を示し得る。
【００２４】
さらに、標的細胞に治療効果を提供するために、１つ以上の異種治療タンパク質が、アデノウイルスベクター中に存在し得る。
【００２５】
（定義）
本発明を記載する際に、以下の用語（以下に規定される）が使用される。
【００２６】
「アデノウイルスベクター（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  ｖｅｃｔｏｒ）」または「アデノウイルスベクター（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒ）」（これらは、交換可能に使用される）は、本発明のポリヌクレオチド構築物を含む。本発明のポリヌクレオチド構築物は、いくつかの形態（ＤＮＡ、アデノウイルスコートにカプセル化されたＤＮＡ、別のウイルスもしくはウイルス様形態（例えば、単純疱疹ウイルス、およびＡＡＶ）中にパッケージングされたＤＮＡ、リポソームにカプセル化されたＤＮＡ、ポリリジンと複合体化したＤＮＡ、合成ポリカチオン性分子と複合体化したＤＮＡ、トランスフェリンと結合体化したＤＮＡ、および分子を免疫学的に「マスクする」ためおよび／または半減期を増加させるためにＰＥＧのような化合物に複合体化したＤＮＡ、ならびに非ウイルスタンパク質に結合体化されたＤＮＡが挙げられるが、これらに限定されない）の内のいずれかであり得る。好ましくは、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡである。本明細書中に使用される場合、「ＤＮＡ」は、塩基Ａ、Ｔ、ＣおよびＧのみでなく、これらのアナログもしくはこれらの塩基の改変形態のうちのいずれか（例えば、メチル化ヌクレオチド、ヌクレオチド間改変（例えば、非電荷連結およびチオエート）、糖アナログの使用、ならびに改変された骨格構造および／または代替骨格構造（例えば、ポリアミド））を含み得る。アデノウイルスベクターは、標的細胞において複製コンピテントまたは複製欠損であり得る。
【００２７】
本明細書中に使用される場合、用語「変更された親和性」は、アデノウイルスの特異性を変化させることをいう。用語「改変された親和性」は、種特異性の変更ならびにアデノウイルスの組織特異性もしくは細胞特異性の変更を含む。本明細書中に例示される実施形態において、種特異性は、キャプシドタンパク質またはそのフラグメント（例えば、ファイバータンパク質、特に、ファイバータンパク質のノブ領域）に改変を生成することによって、変更される。
【００２８】
「キャプシドタンパク質」は、本明細書中に使用される場合、アデノウイルスのペントン、ヘキソンおよびファイバー領域を含む。キャプシドタンパク質は、アデノウイルス親和性に直接的または間接的に影響を与える場合、親和性と関連する。「変更された親和性と関連するキャプシドタンパク質の改変」は、本明細書中に使用される場合、その特異性が変更されるように、キャプシドタンパク質（すなわち、ペントン、ヘキソンもしくはファイバータンパク質領域、またはこれらのフラグメント（例えば、特異性が変更されるようなファイバー領域のノブドメイン））をコードするポリヌクレオチドの改変を生成することをいう。「関連する」とは、改変が、直接的または間接的のいずれかで、変更された親和性に寄与することを意味する。本明細書中に例示される実施形態において、アデノウイルスにおいて種特異性を生成するために、この改変は、ウシキャプシドタンパク質領域と異種哺乳動物キャプシドタンパク質領域との置換である。１つの種のキャプシドタンパク質領域と異種キャプシドタンパク質領域との置換は、変更された組織特異性または変更された細胞特異性もまた生成し得る。
【００２９】
「レプリコン」は、インビボでのＤＮＡ複製の自律的単位として機能する（すなわち、その独自の制御の下で複製し得る）任意の遺伝子エレメント（例えば、プラスミド、染色体、ウイルス）である。
【００３０】
本明細書で用いられる場合、用語「ベクター」は、１つ以上の細胞型の形質導入／トランスフェクションのために設計されたポリヌクレオチド構築物をいう。例えば、ベクターは、挿入ヌクレオチドの単離、増幅、および複製のために設計された「クローニングベクター」であり得るか、宿主細胞中でのヌクレオチド配列の発現のために設計された「発現ベクター」であり得るか、または組換えウイルスまたはウイルス様粒子を産生するよう設計された「ウイルスベクター」であり得るか、もしくは１つより多くの型のベクターの属性を含む「シャトルベクター」であり得る。
【００３１】
「殺された」ウイルスと対照的に、「生存ウイルス」により、組織培養物および接種した動物において同一の子孫を生成し得るウイルスが意味される。
【００３２】
「ヘルパーフリーウイルスベクター」は、そのベクターに欠失しているものを提供する第２ウイルスまたは第２細胞株を必要としないベクターである。
【００３３】
「二本鎖ＤＮＡ分子」は、その通常の二本鎖ヘリックスにおけるデオキシリボヌクレオチド（アデニン、グアニン、チミン、またはシトシン）のポリマー形態をいう。この用語は、その分子の一次構造および二次構造のみをいい、いずれの特定の三次構造にも限定されない。従って、この用語は、特に、直鎖状ＤＮＡ分子において見出される二本鎖ＤＮＡ（例えば、ウイルス、プラスミド、および染色体由来のＤＮＡの制限フラグメント）を含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造を議論する場合、配列は、ＤＮＡの転写されていない鎖（すなわち、ｍＲＮＡに相同な配列を有する鎖）に沿って５’から３’方向への配列のみを与えるという通常の約束事に従って、本明細書中で記載され得る。
【００３４】
ＤＮＡ「コード配列」は、適切な調節配列の制御下に配置される場合、インビボでポリペプチドに転写および翻訳されるＤＮＡ配列である。コード領域の境界は、５’（アミノ）末端の開始コドンおよび３’（カルボキシ）末端の翻訳終止コドンにより決定される。コード配列として、原核生物配列、真核生物ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡ、真核生物（例えば、哺乳動物）ＤＮＡ由来のゲノムＤＮＡ配列、ウイルスＤＮＡ、および合成ＤＮＡ配列さえも挙げられ得るがこれらに限定されない。ポリアデニル化シグナルおよび転写終結配列は、通常、コード配列に対して３’に位置する。
【００３５】
「転写プロモーター配列」は、細胞中でＲＮＡポリメラーゼに結合し、そして下流（３’方向）のコード配列の転写を開始し得るＤＮＡ調節領域である。本発明を定義する目的のために、プロモーター配列は、コード配列の翻訳開始コドン（ＡＴＧ）によりその３’末端が結合しており、そしてバックグラウンドを超えて検出可能なレベルで転写を開始するために必要な塩基またはエレメントの最小数を含むように上流（５’方向）に延びている。プロモーター配列内では、転写開始部位（ヌクレアーゼＳ１を用いたマッピングにより好適に規定されている）、およびＲＮＡポリメラーゼの結合の原因となるタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が見出される。真核生物プロモーターは、しばしば（しかし、いつもではない）、「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＡＡＴ」ボックスを含む。原核生物プロモーターは、−１０および−３５のコンセンサス配列に加えてシャイン−ダルガーノ配列を含む。
【００３６】
ＤＮＡ「制御配列」は、集合的に、プロモーター配列、リボソーム結合部位、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、上流調節ドメイン、エンハンサー、翻訳終結配列などをいい、集合的に、宿主細胞におけるコード領域の転写および翻訳を提供する。
【００３７】
コード配列またはタンパク質をコードする配列は、ＲＮＡポリメラーゼがプロモーター配列に結合し、そしてコード配列をｍＲＮＡへ転写し、次いでこのｍＲＮＡがコード配列によりコードされるポリペプチドに翻訳される場合、細胞中の制御配列に「作動可能に連結されている」か、または制御配列の「制御下にある」。
【００３８】
「宿主細胞」は、外因性ＤＮＡ配列により形質転換されたか、または形質転換され得る細胞である。
【００３９】
細胞は、このような外因性ＤＮＡが細胞膜の内側に導入される場合、このような外因性ＤＮＡにより「形質転換」されている。外因性ＤＮＡは、細胞のゲノムを構成する染色体ＤＮＡに組込まれ（共有結合され）ていてもそうでなくてもよい。原核生物および酵母において、例えば、外因性ＤＮＡはエピソームエレメント（例えば、プラスミド）上で維持され得る。安定に形質転換された細胞は、外因性ＤＮＡが染色体に組込まれ、その結果、染色体の複製を通じて娘細胞により遺伝される細胞である。哺乳動物細胞について、この安定性は、外因性ＤＮＡを含む娘細胞の集団からなる細胞株またはクローンを確立する細胞の能力により実証される。
【００４０】
「クローン」は、単一の細胞または共通の祖先に由来する娘細胞の集団である。「細胞株」は、インビトロで多くの世代の間安定に増殖し得る初代細胞のクローンである。
【００４１】
ＤＮＡ構築物の「異種」領域は、本来、他のＤＮＡ分子と関連して見出されない別のＤＮＡ分子内かまたはそのＤＮＡ分子に結合した同定可能なＤＮＡのセグメントである。従って、異種領域がウイルス遺伝子をコードする場合、この遺伝子は通常、供給源のウイルスまたはウイルスに感染した細胞のゲノムにおいてこのウイルスゲノムと隣接しないＤＮＡにより隣接される。異種コード配列の別の例は、そのコード配列自体が本来は見出されない構築物（例えば、ネイティブの遺伝子と異なるコドンを有する合成配列）である。本明細書で用いられる場合、対立遺伝子のバリエーションまたは天然に存在する変異現象は、ＤＮＡの異種領域を生じない。アデノウイルスベクターを記載する際に本明細書で用いられる場合、「異種哺乳動物キャプシド領域」は、そのキャプシド領域がアデノウイルスの別の哺乳動物種から獲得可能であるか、または同一種の哺乳動物から獲得可能であるが、異なるタイプまたはサブタイプのアデノウイルスからも獲得可能であることを意味する。例えば、「異種哺乳動物キャプシドタンパク質」は、１つのサブタイプのウシアデノウイルスキャプシドタンパク質と別のサブタイプのウシアデノウイルスキャプシドタンパク質との置換、およびウシアデノウイルスキャプシドタンパク質と別の種のキャプシドタンパク質（例えば、ヒトキャプシドタンパク質）との置換、ならびにウシアデノウイルスキャプシドタンパク質領域と別の血清型のウシアデノウイルスキャプシドタンパク質との置換を含む。
【００４２】
「ウシ（ｂｏｖｉｎｅ）宿主」は、任意の品種、成体または幼体のウシ（ｃａｔｔｌｅ）をいう。
【００４３】
用語「タンパク質」は、それぞれポリペプチドまたはグリコシル化ポリペプチドを示すために本明細書で用いられる（他に注記されない限り）。用語「ポリペプチド」は、その最も広い意味（すなわち、ペプチド結合を介して連結した任意のアミノ酸ポリマー（ジペプチド以上））において用いられる。従って、用語「ポリペプチド」は、タンパク質、オリゴペプチド、タンパク質フラグメント、アナログ、ムテイン、融合タンパク質などを含む。
【００４４】
「ネイティブな」タンパク質またはポリペプチドは、アデノウイルスまたはアデノウイルス感染細胞から回収されたタンパク質またはポリペプチドをいう。従って、用語「ネイティブなＢＡＶポリペプチド」は、天然に存在するＢＡＶタンパク質およびそのフラグメントを含む。「非ネイティブな」ポリペプチドは、組換えＤＮＡ法によるか、または直接的な合成により生成されたポリペプチドをいう。「組換え」ポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術により生成された（すなわち、所望のポリペプチドをコードする外来ＤＮＡ構築物により形質転換された細胞から生成された）ポリペプチドをいう。
【００４５】
「実質的に純粋な」タンパク質は、他のタンパク質を含まず、好ましくは少なくとも１０％同質、より好ましくは６０％同質性、そして最も好ましくは９５％同質である。
【００４６】
「抗原」は、体液性および／または細胞性の抗原特異的応答を生成する宿主の免疫系を刺激する１つ以上のエピトープを含む分子をいう。この用語はまた、「免疫原」と交換可能に用いられる。
【００４７】
「ハプテン」は、キャリアに連結されない限り、体液性または細胞性の応答を生成する宿主の免疫系を刺激しない１つ以上のエピトープを含む分子をいう。
【００４８】
用語「エピトープ」は、特異的な抗体分子が結合するか、またはＴ細胞により認識される、抗原またはハプテン上の部位をいう。この用語はまた、「抗原性決定基」または「抗原性決定部位」と交換可能に用いられる。
【００４９】
組成物またはワクチンに対する「免疫学的応答」は、目的の組成物またはワクチンに対する細胞性および／または抗体媒介性の免疫応答の宿主における発生である。通常、このような応答は、目的の組成物またはワクチンに含まれる抗原（単数または複数）に特異的な、被験体が産生する抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、および／または細胞障害性Ｔ細胞からなる。
【００５０】
用語「免疫原性ポリペプチド」および「免疫原性アミノ酸配列」ならびに「免疫原」は、それぞれ、ウイルス感染性を中和し、そして／もしくは免疫化された宿主の保護を提供する抗体補完的または抗体依存的な細胞障害性を媒介するポリペプチドまたはアミノ酸配列をいう。「免疫原性ポリペプチド」は、本明細書中で用いられる場合、所望のタンパク質の全長（またはほぼ全長）配列またはその免疫原性フラグメントを含む。
【００５１】
「免疫原性フラグメント」は、１つ以上のエピトープを含み、それによってウイルス感染性を中和し、そして／もしくは免疫化された宿主の保護を提供する抗体補完的または抗体依存的な細胞障害性を媒介する抗体を誘導するポリペプチドのフラグメントを意味する。このようなフラグメントは通常、少なくとも約５アミノ酸長、そして好ましくは少なくとも約１０〜１５アミノ酸長である。このフラグメントの長さに対する重要な上限はなく、ほぼ全長のタンパク質配列、または２つ以上の抗原のフラグメントを含む融合タンパク質さえも含み得る。用語「処置」は、本明細書で用いられる場合、哺乳動物（例えば、ウシもしくはヒトまたは他の哺乳動物）の処置であって、（ｉ）感染または再感染の防止（予防）、または（ｉｉ）感染の症状の減少または消滅、のいずれかの処置をいう。ワクチンは、組換えＢＡＶ自体かまたは組換えＢＡＶにより産生される組換え抗原を含む。
【００５２】
「感染性の」は、細胞中へウイルスゲノムを送達する能力を有することを意味する。
【００５３】
用語「ポリヌクレオチド」および「核酸」は、本明細書で交換可能に用いられ、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチド（リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれか）をいう。これらの用語は、一本鎖、二本鎖、または三本鎖ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、もしくはプリンおよびピリミジン塩基を含むポリマー、あるいは他の天然のヌクレオチド塩基、化学的に改変されたヌクレオチド塩基、生化学的に改変されたヌクレオチド塩基、非天然のヌクレオチド塩基、または誘導体化したヌクレオチド塩基を含む。ポリヌクレオチドの骨格は、糖およびリン酸基（代表的には、ＲＮＡまたはＤＮＡにおいて見出され得る）、または改変もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含み得る。あるいは、ポリヌクレオチドの骨格は、合成サブユニット（例えば、ホスホルアミデート）のポリマーを含み得、従って、オリゴデオキシヌクレオシドホスホルアミド（Ｐ−ＮＨ２）または混合ホスホラミデート−ホスホジエステルオリゴマーであり得る。Ｐｅｙｒｏｔｔｅｓら（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２４：１８４１−８；Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉら（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２３１８−２３；Ｓｃｈｕｌｔｚら、（１９９６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２４：２９６６−７３。ホスホロチオエート結合が、ホスホジエステル結合の代わりに用いられ得る。Ｂｒａｕｎら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：２０８４−９；Ｌａｔｉｍｅｒら（１９９５）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１０５７−１０６４。さらに、二本鎖ポリヌクレオチドは、化学的合成の一本鎖ポリヌクレオチド産物から、相補鎖を合成し、そして適切な条件下でこの鎖とアニーリングさせるか、または適切なプライマーと共にＤＮＡポリメラーゼを用いて相補鎖をデノボで合成するかのいずれかにより獲得され得る。ポリヌクレオチド配列に対する言及（例えば、配列番号の言及）はまた、その相補配列も含む。
【００５４】
以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子フラグメント、エキソン、イントロン、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドとしては、改変ヌクレオチド（例えば、メチル化ヌクレオチド、およびヌクレオチドアナログ）、ウラシル、他の糖および連結基（例えば、フルオロリボースおよびチオエート）、ならびにヌクレオチド分枝（ｂｒａｎｃｈ）を含み得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により介在され得る。ポリヌクレオチドは、例えば、標識成分と結合体化することにより、重合後にさらに改変され得る。この定義に含まれる他の型の改変は、キャップ、天然に存在するヌクレオチドの１つ以上のアナログとの置換、およびそのポリヌクレオチドをタンパク質、金属イオン、標識成分、他のポリヌクレオチド、または固体支持体に取りつけるための手段の導入である。好ましくは、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。本明細書で用いる場合、「ＤＮＡ」は、塩基Ａ、Ｔ、Ｃ、およびＧだけでなく、任意のそれらのアナログまたはこれらの塩基の改変形態（例えば、メチル化ヌクレオチド）、ヌクレオチド間改変体（例えば、非荷電結合およびチオエート）、糖アナログの使用、ならびに改変骨格構造および／または代替骨格構造（例えば、ポリアミド）も含む。
【００５５】
ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域は、整列させた場合に、２つの配列を比較して、塩基の割合が同一である別の配列の平均値に対する特定の割合（８０％、８５％、９０％、または９５％）の「配列同一性」を有する。このアラインメントおよびパーセント相同性または配列同一性は、当該分野で公知のソフトウェアプログラムを用いて決定され得る（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７年）補遺３０、７．７．１８節、表７．７．１に記載されるプログラム）。好ましいアラインメントプログラムは、ＡＬＩＧＮ  Ｐｌｕｓ（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）であり、好ましくは以下のようなデフォルト設定を使用する：ミスマッチ＝２；オープンギャップ＝０；伸長ギャップ＝２。
【００５６】
「転写制御下」は、当該分野で十分に理解される用語であり、そしてポリヌクレオチド配列（通常、ＤＮＡ配列）の転写が、転写の開始または促進に寄与するエレメントにそれが作動可能に連結されていることに依存することを示す。「作動可能に連結される」は、エレメントが機能することを可能にする配列にある並置をいう。
【００５７】
本明細書で用いられる場合、「細胞障害性」は、当該分野で十分に理解される用語であり、そして細胞の通常の生化学的または生物学的活性が損なわれる（すなわち、阻害される）状態をいう。これらの活性としては、代謝；細胞複製；ＤＮＡ複製；転写；翻訳；分子の取り込み、が挙げられるがこれらに限定されない。「細胞障害性」は、細胞死および／または細胞溶解を含む。細胞障害性を示すアッセイ（例えば、色素除去、３Ｈ−チミジンの取り込み、およびプラークアッセイ）は当該分野で公知である。
【００５８】
アデノウイルスの文脈において、「異種ポリヌクレオチド」または「異種遺伝子」もしくは「導入遺伝子」は、野生型アデノウイルスに存在しない任意のポリヌクレオチドまたは遺伝子である。好ましくは、導入遺伝子はまた、アデノウイルスベクターの導入前に標的細胞において発現または存在しない。
【００５９】
アデノウイルスの文脈において、「異種」プロモーターまたはエンハンサーは、アデノウイルス遺伝子に関連も由来もしないプロモーターまたはエンハンサーである。
【００６０】
アデノウイルスの文脈において、「内因性」プロモーター、エンハンサー、またはコントロール領域は、アデノウイルスに対してネイティブであるか、またはこれに由来する。
【００６１】
「宿主細胞」は、本発明のアデノウイルスベクターのレシピエントであり得るか、またはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、そしてこの子孫は、天然の、偶然の、または計画的な変異および／または変化に起因して、本来の親細胞と完全に同一である（形態または全ＤＮＡの相補性において）必要はない。宿主細胞は、本発明のアデノウイルスベクターを用いて、インビボまたはインビトロでトランスフェクトまたは感染させた細胞を含む。
【００６２】
「複製」および「増殖」は交換可能に用いられ、そして本発明のアデノウイルスベクターの再生または増殖する能力をいう。これらの用語は、当該分野で十分に理解される。本発明の目的のために、複製はアデノウイルスタンパク質の産生に関し、そして一般的に、アデノウイルスの繁殖に関する。複製は、当該分野で標準的なアッセイおよび本明細書に記載されるアッセイ（例えば、バーストアッセイまたはプラークアッセイ）を用いて測定され得る。「複製」および「増殖」は、ウイルス製造のプロセスに直接的にかまたは関節的に関与する任意の活性（ウイルス遺伝子の発現；ウイルスタンパク質、核酸、または他の要素の生成；ウイルス成分の完全なウイルスへのパッケージング；および細胞溶解）を含む。
【００６３】
配列番号に「示される」ポリヌクレオチド配列は、その配列が、配列番号において同一の連続的な配列として存在することを意味する。この用語は、配列番号の一部分または領域、ならびに配列番号中に含まれる配列全体を包含する。
【００６４】
「生物学的サンプル」は、個体から獲得される種々のサンプル型を包含し、そして診断アッセイまたはモニタリングアッセイにおいて用いられ得る。この定義は、生物学的起源の血液および他の液体サンプル、固体組織サンプル（例えば、生体標本もしくは組織培養物またはそれらの由来となる細胞）、およびそれらの子孫を包含する。この定義はまた、それらの獲得後に任意の方法で操作された（例えば、試薬による処理、可溶化、または特定の成分（例えば、タンパク質またはポリヌクレオチド）の濃縮により）サンプルを含む。用語「生物学的サンプル」は臨床的サンプルを包含し、そしてまた、培養物、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生物学的流体、および組織サンプル中の細胞を含む。
【００６５】
「個体」または「哺乳動物被験体」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物としては、家畜動物、競技用動物、げっ歯類、霊長類、およびペットが挙げられるがこれらに限定されない。
【００６６】
「有効量」は、有益な結果または所望の結果（臨床的な結果を含む）をもたらすのに十分な量である。有効量は、１つ以上の投与において投与され得る。本発明の目的のために、アデノウイルスベクターの有効量は、疾患状態の進行を和らげるか、改善するか、安定化させるか、逆転させるか、緩慢にする、または遅延させるのに十分な量である。
【００６７】
「発現」は、転写および／または翻訳を含む。
【００６８】
本明細書で用いられる場合、用語「含む（包含する）（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」およびその同義語は、それらの包括的な意味（すなわち、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」およびその対応する同義語と等価な意味）において用いられる。
【００６９】
「Ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その文脈が明らかにそうでないと示さない限り、複数の参照を含む。
【００７０】
（詳細な説明）
本発明は、親和性に関連するキャプシドタンパク質を同定し、そしてアデノウイルスベクターを構築する方法および変更された親和性を有する組換えアデノウイルスを提供する。好ましい実施形態において、このアデノウイルスは、ウシアデノウイルス（例えば、サブタイプ１アデノウイルス（特にＢＡＶ３）またはサブタイプ２アデノウイルス）である。例示的な実施形態において、親和性に関連するウシキャプシドタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の一部または全ては欠失され、そしてアデノウイルスの親和性を変更する異種哺乳動物キャプシドタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列と置換される。本明細書に開示される特定の実施形態において、ウシ線維タンパク質の小頭部（ノブ）領域は、ヒトの線維タンパク質の小頭部領域と置換される。本発明はまた、細胞の特異性を変更するために、親和性に関連する１つのウシ血清型アデノウイルスキャプシドタンパク質の、親和性に関連する異種性ウシ血清型アデノウイルスキャプシドタンパク質との置換を含むアデノウイルスを包含する。
【００７１】
ＢＡＶ３ゲノムの完全なヌクレオチド配列は、本明細書で開示される。図１（配列番号１）を参照のこと。ｍＲＮＡの転写マッピングおよびｃＤＮＡクローンの配列決定から得たＢＡＶ３ゲノムの転写地図を図２に示す。ＢＡＶ３ゲノムの大きさ（３４，４４６ｂｐ）および組織全体は、ＨＡＶのそれと類似している可能性があるが、特定の相違が存在する。Ｒｅｄｄｙら（１９９８）前出。ＢＡＶ３ゲノムの顕著な特徴の１つは、比較的小さい大きさのＥ３コード領域（１５１７ｂｐ）である。Ｍｉｔｔａｌら（１９９２）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７３：３２９５−３３００；Ｍｉｔｔａｌら（１９９３）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７４：２８２５；およびＲｅｄｄｙら（１９９８）前出。ＢＡＶ３  Ｅ３領域およびそのＲＮＡ転写物の配列の分析は、ＢＡＶ３  Ｅ３が少なくとも４つのタンパク質をコードし得ることを示唆し、そのうちの１つ（１２１Ｒ）は、ＨＡＶ５の１４．７ｋＤａタンパク質との限定された相同性を示す。Ｉｄａｍａｋａｎｔｉ（１９９８）「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ
Ｅ３  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｂｏｖｉｎｅ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−３」、Ｍ．Ｓｃ．ｔｈｅｓｉｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓａｓｋａｔｃｈｅｗａｎ、Ｓａｓｋａｔｏｏｎ、Ｓａｓｋａｔｃｈｅｗａｎ。
【００７２】
Ｒｅｄｄｙら（１９９８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７２：１３９４は、ＢＡＶ３のヌクレオチド配列を開示する。ＢＡＶ３のポリヌクレオチド配列において、ペントン領域は１２９１９で開始し、そして１４３６７で終了し；ヘキソン領域は１７８０９で開始し、そして２０５１７で終了し；線維領域は２７９６８で開始し、そして３０８９８で終了する。線維タンパク質の小頭部領域（またはドメイン）は、図４に示されるように残基ＴＬＷＴモチーフの後で開始する。この線維タンパク質はまた、シャフトおよびテイル領域（またはドメイン）を含む。
【００７３】
ヒトアデノウイルスＡｄ３、Ａｄ４、Ａｄ５、Ａｄ９、およびＡｄ３５は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能である。Ａｄ５に関するＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＧｅｎＢａｎｋ登録番号はＭ７３２６０／Ｍ２９９７８であり；Ａｄ９についてはＸ７４６５９であり；そしてＡｄ３５についてはＵ１０２７２である。Ｃｈｏｗら（１９７７、Ｃｅｌｌ  １２：１−８）はヒトアデノウイルス２配列を開示し；Ｄａｖｉｓｏｎら（１９９３、Ｊ．Ｍｏｌｅ．Ｂｉｏｌ．２３４：１３０８−１３１６）は４０型ヒトアデノウイルスのＤＮＡ配列を開示し；Ｓｐｒｅｎｇｅｎら（１９９４、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：３７９−３８９）は１２型ヒトアデノウイルスＤＮＡのＤＮＡ配列を開示し；Ｖｒａｔｉら（１９９５、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２０９：４００−４０８）はヒツジアデノウイルスの配列を開示し；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９９７、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７８：８７３−８７８）は１型イヌアデノウイルスＤＮＡ配列を開示し；そしてＲｅｄｄｙら（１９９８、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２５１：４１４）はブタアデノウイルスのＤＮＡ配列を開示する。
【００７４】
Ｓｈａｙａｋｈｍｅｔｏｖら（前出）はヒトＡｄ９およびヒトＡｄ３５線維領域のＰＣＲプライマーを提供する。ＨＡＶ−５線維タンパク質を図１２に示し；図１３はウシアデノウイルス−３（ＢＡＶ−３）線維タンパク質のアミノ酸配列を示し；図１４はヒツジアデノウイルス２８７線維タンパク質のアミノ酸配列を示し；図１５はブタアデノウイルス−３（ＰＡＶ−３）線維タンパク質のアミノ酸配列を示し；図１６はイヌアデノウイルス−２（ＣＡＶ−２）線維タンパク質のアミノ酸配列を示し；そして図１７Ａ〜１７Ｇは、マルチアラインプログラムのｃｌｕｓｔａｌ法を用いて、哺乳動物アデノウイルス線維領域のアミノ酸アラインメントを示す。線維領域の小頭部ドメインは、代表的に、アミノ酸残基モチーフＴＬＷＴ（ヒンジ領域）の後に開始する（図４を参照のこと）（１つの例外は、ヒツジアデノウイスル線維領域である）。
【００７５】
次いで、アデノウイルスベクター構築物は、適切な宿主細胞の形質転換またはトランスフェクションの前かまたは後のいずれかに、ＢＡＶゲノムを用いてインビトロまたはインビボで組換えが行なわれ得る。
【００７６】
適切な宿主細胞として、ＢＡＶゲノムとＢＡＶ配列を含むプラスミドとの間、または各々がＢＡＶ配列を含む、２つ以上のプラスミド間の組換えを支持する任意の細胞が挙げられる。組換えは、一般的に、原核生物細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）において実施され、一方、ウイルス粒子を生成するためのウイルスゲノムを含むプラスミドのトランスフェクトは真核生物細胞（好ましくは、哺乳動物、より好ましくはウシ細胞培物、最も好ましくはＭＤＢＫまたはＰＦＢＲ細胞、およびそれらの等価物）において実施される。細菌細胞培養物の増殖ならびに真核生物細胞および哺乳動物細胞株の培養および維持は、当業者に周知の手順である。
【００７７】
１つ以上の異種ポリヌクレオチド配列が、ＢＡＶゲノムの１つ以上の領域に挿入されて、組換えＢＡＶ（ＢＡＶゲノムの挿入物収容能およびこの組換えＢＡＶが挿入された異種配列を発現する能力によってのみ限定される）を生成し得る。一般的に、アデノウイルスゲノムは、ゲノム長の約５％の挿入物を受け入れ得、そしてウイルス粒子にパッケージングされる能力を保持し得る。この挿入物収容能は、非必須領域の欠失および／または必須領域（例えば、Ｅ１領域（Ｅ１領域の機能は、ヘルパー細胞株（例えば、Ｅ１機能を提供する細胞）により提供ｙされる））の欠失により増大され得る。いくつかの実施形態において、タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドは、アデノウイルスＥ１遺伝子領域に挿入される。いくつかの実施形態において、アデノウイルスは、Ｅ１領域の一部または全ての欠失を有し、そしてＥ１機能を提供するヘルパー細胞株中で増殖される。さらに他の実施形態において、タンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドは、アデノウイルスＥ３遺伝子領域に挿入される。他の実施形態において、アデノウイルスは、Ｅ３領域の一部または全ての欠失を有する。
【００７８】
本発明の１つの実施形態において、挿入は、挿入が所望されてＢＡＶゲノムの領域（例えば、キャプシドタンパク質をコードするポリヌクレオチド）を含むプラスミドを構築することによって達成され得る。さらに、所望の治療的タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ウシアデノウイルスに挿入され得る。次いでこのプラスミドは、プラスミドのＢＡＶ部分に認識配列を有する制限酵素を用いて消化され、そして異種ポリヌクレオチド配列は、制限消化の部位に挿入される。プラスミド（挿入された異種配列を有するＢＡＶゲノムの部分を含む）を、ＢＡＶゲノムまたはＢＡＶゲノムを含む直鎖状プラスミドと共に、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのような）中に同時形質転換し、ここで、ＢＡＶゲノムは、全長ゲノムであり得るか、または１つ以上の欠失を含み得る。プラスミド間の相同組換えは、挿入された異種配列を含む組換えＢＡＶゲノムを生成する。
【００７９】
ＢＡＶ配列の欠失は、異種配列の挿入の部位を提供するために、または異なる部位における挿入についてのさらなる能力を提供するために、当業者に周知の方法によって達成され得る。例えば、プラスミド中にクローニングされ、１つ以上の制限酵素（ＢＡＶ挿入物において少なくとも１つの認識配列を有する）で消化され、その後ライゲーションされるＢＡＶ配列は、いくつかの場合において、制限酵素認識部位間の配列の欠失を生じる。あるいは、ＢＡＶ挿入物内の単一の制限酵素認識部位での消化（その後、エキソヌクレアーゼ処理が続き、その後ライゲーションが続く）は、制限部位に隣接したＢＡＶ配列の欠失を生じる。上記のように構築された、１つ以上の欠失を有するＢＡＶゲノムの１つ以上の部分を含むプラスミドは、相同組換えによって、１つ以上の特定の部位に欠失を有する組換えＢＡＶゲノムを含むプラスミドを生成するために、ＢＡＶゲノム（全長もしくは欠失した）または全長ＢＡＶゲノムもしくは欠失したＢＡＶゲノムのいずれかを含むプラスミドと共に、細菌細胞に同時トランスフェクトされ得る。次いで、欠失を含むＢＡＶビリオンは、哺乳動物細胞（ＭＤＢＫ細胞またはＰＦＢＲ細胞およびこれらの等価物を含むがこれらに限定されない）の、組換えＢＡＶゲノムを含むプラスミドとのトランスフェクションによって得られ得る。
【００８０】
本発明の１つの実施形態において、挿入部位は、ＢＡＶプロモーターに隣接し、かつその（転写的な意味で）下流に存在する。ＢＡＶプロモーターの位置およびＢＡＶプロモーターの下流の制限酵素認識配列（挿入部位として使用するための）は、本明細書中に提供されるＢＡＶヌクレオチド配列から当業者によって容易に決定され得る。あるいは、種々のインビトロ技術が、特定の部位における制限酵素認識配列の挿入のために、または制限酵素認識配列を含まない部位に異種配列を挿入するために使用され得る。このような方法としては、１つ以上の酵素認識配列の挿入のためのオリゴヌクレオチド媒介ヘテロ二重鎖形成（例えば、Ｚｏｌｌｅｒら（１９８２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：６４８７−６５００；Ｂｒｅｎｎａｎら（１９９０）Ｒｏｕｘ’ｓ  Ａｒｃｈ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１９９：８９−９６；およびＫｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １５４：３６７−３８２を参照のこと）およびより長い配列の挿入のためのＰＣＲ媒介方法（例えば、Ｚｈｅｎｇら（１９９４）Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１：１６３−１８６を参照のこと）を含むが、これらに限定されない。
【００８１】
異種配列が、真核生物細胞において活性である転写調節配列をさらに含む場合、ＢＡＶプロモーターの下流ではない部位に挿入された異種配列の発現を得ることもまた可能である。このような転写調節配列としては、例えば、ウシｈｓｐ７０プロモーターのような細胞性プロモーター、ならびに例えば、ヘルペスウイルスプロモーター、アデノウイルスプロモーターおよびパポバウイルスプロモーターのようなウイルスプロモーター、そしてレトロウイルス長末端反復（ＬＴＲ）配列のＤＮＡコピーが挙げられ得る。
【００８２】
別の実施形態において、原核生物細胞における相同組換えを使用して、クローニングされたＢＡＶゲノムを作成し得る；そしてクローニングされたＢＡＶゲノムは、プラスミドとして増殖され得る。例えば、米国特許第５，９２２，５７６号を参照のこと。感染性ウイルスは、プラスミド含有細胞からレスキューされたクローニングされたＢＡＶゲノムでの哺乳動物細胞のトランスフェクションによって得られ得る。
【００８３】
本発明はまた、異種遺伝子の発現を調節するために使用され得るＢＡＶ調節配列を提供する。調節配列は、例えば、転写調節配列、プロモーター、エンハンサー、上流調節ドメイン、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、転写終結配列、翻訳調節配列、リボソーム結合部位および翻訳終結配列であり得る。
【００８４】
別の実施形態において、クローニングされたＢＡＶゲノムは、プラスミドとして増殖され得、そして感染性ウイルスは、プラスミド含有細胞からレスキューされ得る。
【００８５】
ウイルス核酸の存在は、ハイブリダイゼーションアッセイ、ポリメラーゼ連鎖反応、および他の型の増幅反応を含むがこれらに限定されない、当業者に公知の技術によって検出され得る。同様に、種々の型の免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング、酵素学的アッセイ、免疫組織化学などを含むがこれらに限定されない、タンパク質の検出のための方法は、当業者に周知である。本発明のヌクレオチド配列を含む診断キットはまた、細胞破壊および核酸精製のための試薬、ならびにハイブリッドの形成、選択および検出のための緩衝液および溶媒を含み得る。本発明のポリペプチドまたはアミノ酸配列を含む診断キットはまた、タンパク質の単離のための、ならびに免疫複合体の形成、単離、精製および／または検出のための試薬を含み得る。
【００８６】
種々の外来遺伝子またはヌクレオチド配列またはコード配列（原核生物および真核生物）は、本発明に従って、特に、広範な疾患に対する保護を提供するために、ウシアデノウイルスヌクレオチド配列（例えば、ＤＮＡ）中に挿入され得、そして多数のこのような遺伝子は、すでに当該分野で公知である。従来、遺伝子または配列のための安全な、簡便かつ効果的なワクチンベクター、ならびに種々の遺伝子治療適用において使用され得る遺伝子移入のための安全で、効果的な手段を提供することが、問題であった。
【００８７】
外因性（すなわち、外来の）ヌクレオチド配列は、目的の、そして好ましくは治療目的の１つ以上の遺伝子からなり得る。本発明の文脈において、目的の遺伝子は、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、または次いで目的のタンパク質に翻訳されるｍＲＮＡのいずれかをコードし得る。目的の遺伝子は、ゲノム型、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）型または混合型（ミニ遺伝子、ここで、少なくとも１つのイントロンが欠失している）の遺伝子であり得る。目的の遺伝子は、成熟タンパク質、成熟タンパク質の前駆体、特に、分泌されることが意図され従ってシグナルペプチドを含む前駆体、多様な起源の配列の融合に起因するキメラタンパク質、または改善されたかもしくは改変された生物学的特性を示す天然のタンパク質をコードし得る。このような変異体は、天然のタンパク質をコードする遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの欠失、置換および／または付加、あるいは天然のタンパク質をコードする配列における任意の他の型の変化（例えば、遺伝子転移または逆位）によって得られ得る。
【００８８】
目的の遺伝子は、宿主細胞におけるその発現に適したエレメント（ＤＮＡ制御配列）の制御下に配置され得る。適切なＤＮＡ制御配列は、ＲＮＡ（アンチセンスＲＮＡまたはｍＲＮＡ）への遺伝子の転写のために、そしてｍＲＮＡのタンパク質への翻訳のために必要なエレメントのセットを意味することが理解されている。転写に必要なエレメントの間で、プロモーターは、特別な重要性を想定する。これは、構成性プロモーターまたは調節性プロモーターであり得、そして真核生物、原核生物またはウイルス起源、およびアデノウイルス起源でさえの任意の遺伝子から単離され得る。あるいは、これは目的の遺伝子の天然のプロモーターであり得る。一般的には、本発明において使用されるプロモーターは、調節配列を含むように改変され得る。例としては、本発明での使用における目的の遺伝子は、リンパ性宿主細胞へのその移行を標的化することが所望である場合、免疫グロブリン遺伝子のプロモーターの制御下に配置される。例えば、多数の細胞型における発現を可能にする、ＨＳＶ−１  ＴＫ（１型ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ）遺伝子プロモーター、アデノウイルスＭＬＰ（主要後期プロモーター）、特にヒト２型アデノウイルス、ＲＳＶ（ラウス肉腫ウイルス）ＬＴＲ（長末端反復）、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）初期プロモーター、およびＰＧＫ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）遺伝子プロモーターがまた、言及され得る。
【００８９】
本明細書中に開示されるように、種の親和性を変更することは、ネイティブな線維タンパク質領域の、異種哺乳動物線維タンパク質領域での置換によって、ＢＡＶにおいて実証されている。本発明はまた、１つのウシ血清型アデノウイルス線維領域の、別のウシ血清型アデノウイルス線維領域での置換を包含し、ここで、この置換は、変更されたウシ細胞特異性と関連している。あるいは、組換えＢＡＶベクターの特定の細胞型への標的化は、組換えヘキソンおよび／または線維遺伝子を構築することによって達成され得る。これらの遺伝子のタンパク質産物は、宿主細胞認識に関与している；従って、これらの遺伝子は、ウイルスが代替の宿主細胞を認識するのを可能にするペプチド配列を含むように改変され得る。
【００９０】
本発明の文脈中において有用である目的の遺伝子の間で、以下の遺伝子が言及され得る：
−インターフェロンおよびインターロイキンのようなサイトカインをコードする遺伝子；
−リンホカインをコードする遺伝子；
−病原性生物生物（ウイルス、細菌、または寄生生物）、好ましくはＨＩＶウイルス（ヒト免疫不全ウイルス）によって認識されるレセプターのような膜レセプターをコードする遺伝子；
−第ＶＩＩＩ因子および第ＩＸ因子のような凝固因子をコードする遺伝子；
−ジストロフィンをコードする遺伝子；
−インスリンをコードする遺伝子；
−細胞性イオンチャネル（例えば、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症膜貫通伝導性調節因子）タンパク質）において直接的または間接的に関与するタンパク質をコードする遺伝子；
−アンチセンスＲＮＡ、病原性生物生物のゲノム中に存在する病原性遺伝子によって生成されるタンパク質の活性を阻害し得るタンパク質、または発現が調節解除される細胞性遺伝子（例えば、オンコジーン）の活性を阻害し得るタンパク質（もしくはこれらをコードする遺伝子）をコードする遺伝子；
−酵素活性を阻害するタンパク質（例えば、α１−アンチトリプシンまたはウイルスプロテアーゼインヒビターのような）をコードする遺伝子；
−それらの生物学的機能を損なうように変異された病原性タンパク質の改変体（例えば、標的配列への結合について天然タンパク質と競合し得、それによりＨＩＶの活性化を妨げ得るＨＩＶウイルスのｔａｔタンパク質のトランス優性改変体）をコードする遺伝子；
−宿主細胞の免疫を増加するために抗原性エピトープをコードする遺伝子；
−主要組織適合性複合体クラスＩおよびクラスＩＩタンパク質をコードする遺伝子、ならびにこれらの遺伝子の誘導物質であるタンパク質をコードする遺伝子；
−抗体をコードする遺伝子；
−免疫毒素をコードする遺伝子；
−毒素をコードする遺伝子；
−増殖因子または増殖ホルモンをコードする遺伝子；
−細胞レセプターおよびこれらのリガンドをコードする遺伝子；
−腫瘍サプレッサーをコードする遺伝子；
−以下を含むがこれらに限定されない、心血管疾患に関与する遺伝子：オンコジーン；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、および神経増殖因子（ＮＧＦ）を含むがこれらに限定されない増殖因子をコードする遺伝子；ｅ−ｎｏｓ；Ｒｂ（網膜芽細胞腫）遺伝子を含むがこれらに限定されない、腫瘍サプレッサー遺伝子；リポタンパク質リパーゼ；スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）；カタラーゼ；酸素およびフリーラジカルスカベンジャー；アポリポタンパク質；およびｐａｉ−１（プラスミノーゲン活性化因子インビター−１）；
−細胞性酵素または病原性生物生物によって生成される酵素をコードする遺伝子；ならびに
−自殺遺伝子。ＨＳＶ−１  ＴＫ自殺遺伝子は、例として言及され得る。このウイルスＴＫ酵素は、特定のヌクレオシドアナログ（アシクロビルまたはガンシクロビルのような）について、細胞性ＴＫ酵素と比較して、顕著に大きい親和性を示す。この酵素は、ヌクレオシドアナログをモノリン酸化された分子に変換し、これら自身は、細胞性酵素によって有毒なヌクレオチド前駆体に変換され得る。これらのヌクレオチドアナログは、複製しているＤＮＡ分子に組み込まれ得、従って、取り込みは、分裂細胞のＤＮＡにおいて主に発生する。この取り込みは、癌細胞のような分裂細胞の特定の破壊を生じ得る。
【００９１】
この列挙は限定的なものではなく、目的の他の遺伝子は、本発明の状況において使用され得る。
【００９２】
野生型生物において見出されるような完全な配列ではなく、遺伝子のヌクレオチド配列のフラグメントのみが使用され得る（ここで、これらのフラグメントは、保護的な免疫応答または特定の生物学的効果を生成するために十分である）ことはまた、可能である。利用可能な場合、合成遺伝子またはそのフラグメントもまた使用され得る。しかし、本発明は、広範な種々の遺伝子、フラグメントなどを用いて使用され得、そして上に示されるものに限定されない。
【００９３】
いくつかの場合において、特定の抗原に対する遺伝子は、多数のイントロンを含み得るか、またはＲＮＡウイルスに由来し得、これらの場合、相補的なＤＮＡコピー（ｃＤＮＡ）が使用され得る。
【００９４】
遺伝子の首尾良い発現を生じるために、遺伝子は、適切なプロモーターエンハンサーエレメントおよびポリアデニル化配列を含むと共に発現ベクターに挿入され得る。哺乳動物細胞における外来遺伝子の首尾良い発現および発現カセットの構築を提供する多数の真核生物プロモーターならびにポリアデニル化配列は、当該分野で公知である（例えば、米国特許第５，１５１，２６７号（この開示は、本明細書中で参考として援用される））。プロモーターは、公知の基準に従って、免疫原性タンパク質の最適な発現を与えるように選択され、これらは次いで体液性、細胞媒介性および粘膜性免疫応答を十分に生じる。
【００９５】
組換えウイルス感染細胞においてインビボでの発現によって生成される外来タンパク質は、それ自身免疫原性であり得る。１つより多くの外来遺伝子が、ウイルスゲノムに挿入されて、１つより多くの有効なタンパク質の首尾良い生成が得られ得る。
【００９６】
従って、本発明の組換えウイルスを用いて、ウシ、ヒトおよび他の哺乳動物を冒す広範な種々の疾患に対する保護を提供することが可能である。本発明の組換え抗原性決定因子または生きている組換えウイルスのいずれかは、抗原性決定のワクチンまたは生きているワクチンベクターについて記載されたのと実質的に同じ様式で処方および使用され得る。
【００９７】
本発明はまた、薬学的に受容可能なビヒクルおよび／またはアジュバントと組み合わせて、本発明の方法に従って調製された、治療的有効量の組換えアデノウイルスベクター、組換えアデノウイルスまたは組換えタンパク質を含む薬学的組成物を含む。このような薬学的組成物は、当該分野で周知の技術に従って調製され得、そして投薬量が決定され得る。本発明の薬学的組成物は、全身的（例えば、静脈内、気管内、血管内、肺内、腹腔内、鼻腔内、非経口、腸内、筋肉内、皮下、腫瘍内もしくは頭蓋内）を含むがこれらに限定されない任意の公知の投与経路によってか、またはエアロゾル適用もしくは肺内滴下によって、投与され得る。投与は、単回用量でか、または特定の時間間隔後に一回以上の反復用量で行なわれ得る。適切な投与経路および投薬は、状況（例えば、処置される個体、処置される障害または目的の遺伝子もしくはポリペプチド）に従って変化するが、当業者によって決定され得る。
【００９８】
本発明はまた、処置方法を包含し、この方法に従って、本発明の治療有効量のＢＡＶベクター、組換えＢＡＶ、または宿主細胞が、処置を必要とする哺乳動物被験体に投与される。
【００９９】
本発明において使用される抗原は、ネイティブまたは組換えのいずれかの抗原性ペプチドまたはフラグメントであり得る。これらは、部分配列、全長配列、または融合体（例えば、組換え宿主についての適切なリーダー配列を有するか、または別の病原性生物についてさらなる抗原配列を有する）でさえあり得る。本発明のウイルス系によって発現される好ましい抗原性ポリペプチドは、抗原をコードする全長（または全長に近い）配列を含む。あるいは、抗原性である（すなわち、１つ以上のエピトープをコードする）より短い配列が使用され得る。より短い配列は、インビトロアッセイにおいて、ウイルス感染力を中和する抗体を惹起し得るエピトープとして定義される「中和エピトープ」をコードし得る。好ましくは、このペプチドは、宿主において「保護的な免疫応答」（すなわち、感染から免疫された宿主を保護する抗体および／または細胞媒介免疫応答）を惹起し得る「保護エピトープ」をコードするはずである。
【０１００】
本発明において使用される抗原は、特に、短いオリゴペプチドから構成される場合、ワクチンキャリアに結合体化され得る。ワクチンキャリア：例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）およびキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）は、当該分野で周知である。好ましいキャリアタンパク質、ロタウイルスＶＰ６は、ＥＰＯ公開番号０２５９１４９において開示され、この開示は、本明細書中に参考として援用される。
【０１０１】
挿入され得る所望の抗原についての遺伝子またはそのコード配列としては、哺乳動物において疾患を引き起こす生物体（特に、ウシロタウイルス、ウシコロナウイルス、１型ウシヘルペスウイルス、ウシＲＳウイルス、３型ウシパラインフルエンザウイルス（ＢＰＩ−３）、ウシ下痢ウイルス、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ
ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｏｍｎｕｓなどのようなウシ病原性生物）の遺伝子が挙げられる。ヒト病原性生物の抗原をコードする遺伝子はまた、本発明の実施において有用である。外来遺伝子またはフラグメントを保有する本発明のワクチンはまた、適切な経口キャリア（例えば、腸溶性投薬形態）で経口投与され得る。経口処方物は、以下のような通常利用される賦形剤を含む：例えば、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンセルロースナトリウム、炭酸マグネシウムなど。経口ワクチン組成物は、約１０％〜約９５％の活性成分、好ましくは、約２５％〜約７０％の活性成分を含む、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル剤、徐放性の処方物、または散剤の形態をとり得る。経口および／または経鼻のワクチン接種は、全身性免疫とともに粘膜免疫（これは、気道および胃腸管に感染する病原性生物に対する予防において重要な役割を果たす）を惹起することが好ましくあり得る。
【０１０２】
さらに、ワクチンは、坐剤中に処方され得る。坐剤について、ワクチン組成物は、慣用的な結合剤およびキャリア（例えば、ポリアルカリのグリコールまたはまたはトリグリセリド）を含む。このような坐剤は、約０．５％〜約１０％（ｗ／ｗ）、好ましくは、約１％〜約２％の範囲内で活性成分を含有する混合物から形成され得る。
【０１０３】
本発明のワクチン組成物を動物に投与するためのプロトコルは、本開示の観点から当業者の範囲内である。当業者は、抗原性フラグメントに対する抗体および／またはＴ細胞媒介免疫応答を惹起するのに有効な用量でのワクチン組成物の濃度を選択する。広範な制限内において、投薬量が重要であるとは考えられない。代表的には、ワクチン組成物は、好都合な容量（例えば、約１〜１０ｃｃ）のビヒクル中約１〜約１，０００μｇの間のサブユニット抗原を送達する様式で投与される。好ましくは、単回免疫における投薬量は、約１〜約５００μｇのサブユニット抗原、より好ましくは、約５〜１０から約１００〜２００μｇ（例えば、５〜２００μｇ）のサブユニット抗原を送達する。
【０１０４】
投与のタイミングもまた、重要であり得る。例えば、最初の接種に続いて、好ましくは、必要な場合、次のブースター接種を行ってもよい。必要に応じてではあるが、最初の免疫から数週間から数ヶ月後に、動物に対して２回目のブースター免疫を投与することもまた好ましくあり得る。疾患に対する高レベルの予防が維持されることを保証するために、定期的な間隔で（例えば、数年毎に１回）、それらの動物にブースター免疫を再投与することが役立ち得る。あるいは、開始投薬が、経口投与に引き続いて、後に予防接種され得るか、またはその逆の場合も同様である。好ましいワクチン接種プロトコルは、慣例のワクチン接種プロトコル実験を通して確立され得る。
【０１０５】
インビボ組換えウイルスワクチンの投与経路全てについての投薬量は、以下に挙げられる種々の因子（患者の大きさ、予防が必要とされる感染の性質、キャリアなど）に依存し、そして当業者によって容易に決定され得る。非限定例として、１０３ｐｆｕと１０１５ｐｆｕとの間、好ましくは１０５ｐｆｕと１０１３ｐｆｕとの間、より好ましくは、１０６ｐｆｕと１０１１ｐｆｕとの間などの投薬量が用いられ得る。インビトロサブユニットワクチンを用いる場合、さらなる投薬量が、関連した臨床的因子によって決定されるように提供され得る。
【０１０６】
本発明のいくつかの実施形態において、組換え細胞株は、ＢＡＶ  Ｅ１領域および／または他の必須の遺伝子領域を含む発現カセットを構築し、そして、変更された親和性を有するよう改変され、かつＥ１機能を欠損する複製欠損ウシアデノウイルスとともに使用するために、Ｅ１タンパク質を発現する補完細胞株または培養物を提供するよう、この発現カセットを用いて宿主細胞を形質転換することによって産生される。これらの組換え補完細胞株は、Ｅ１配列を欠失した欠損組換えＢＡＶが所望の外来遺伝子またはそのフラグメント（これは、必要に応じて組換えＢＡＶ内にコードされる）を複製および発現させることを可能にする。これらの細胞株はまた、外来遺伝子またはフラグメントについてコードする異種のヌクレオチド配列によって置換されたＥ３遺伝子欠失を有する、組換えＢＡＶを、ＤＮＡ媒介同時トランスフェクション後のインビボでの組換えによって産生するのに非常に有用である。より一般的には、ＢＡＶゲノムによってコードされる１つ以上の必須機能を欠損する、欠損ＢＡＶベクターは、適切な補完細胞において伝播され得、ここで、特定の補完細胞株は、特定の欠損組換えＢＡＶベクターにおいて欠損している機能を提供する。補完細胞株は、例えば、ヘルペスウイルスとの同時感染によってか、または特定のウイルスの機能をコードするウイルスゲノムのフラグメントを組み込むかさもなくば安定な形態に維持することによって、ウイルスの機能を提供し得る。
【０１０７】
本発明の１つの実施形態において、組換え発現カセットは、適切な制限酵素を用いてＢＡＶゲノムを切断して、Ｅ１遺伝子領域配列またはＥ３遺伝子領域配列をそれぞれ含むゲノムの左末端または右末端を示すＤＮＡフラグメントを生成し、そして左末端フラグメントまたは右末端フラグメントをクローニングビヒクル（例えば、プラスミド）中に挿入し、その後、少なくとも１つの異種ＤＮＡ配列を外因性プロモーターの制御を伴うかまたは伴わずに、Ｅ１またはＥ３欠失中に挿入することによって獲得し得る。組換え発現カセットは、適切な細胞内でＢＡＶゲノムと接触し、そして相同組換えまたは他の慣用的な遺伝子操作方法によって、組換えＢＡＶゲノムは得られる。適切な細胞としては、原核生物細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなど）および真核生物細胞の両方が挙げられる。適切な真核生物細胞の例としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＭＤＢＫ細胞、アデノウイルスのＥ１機能を発現するＭＤＢＫ細胞、初代ウシ胎仔網膜細胞および既に列挙した細胞の機能と等価な機能を発現する細胞。Ｅ１領域またはＥ３領域を含む制限酵素断片以外のＢＡＶゲノムの制限酵素断片はまた、本発明の実施に有用であり、そしてクローニングビヒクル中に挿入され得、その結果、異種配列は、Ｅ１を有さないＢＡＶ配列およびＥ３を有さないＢＡＶ配列中に挿入されてもよい。次いで、これらのＤＮＡ構築物は、上記のような適切な宿主細胞の形質転換またはトランスフェクションの前かまたは後のいずれかにＢＡＶゲノムを用いてインビトロまたはインビボで組換えが行われ得る。本発明の目的について、ＢＡＶゲノムは、全長ゲノム、または得られた組換えＢＡＶゲノムが複製およびパッケージングに必要とされるＢＡＶ配列を含む限り、組換えるフラグメント内を欠失した領域以外の領域中に欠失を含むゲノムのいずれかであり得る。上記の細胞のような原核生物細胞および真核生物細胞におけるトランスフェクション、細胞培養ならびに組換えのための方法は、当業者に周知である。
【０１０８】
本発明の別の実施形態において、任意の特定のウイルスベクターにおける変異または欠失され得る任意のウイルス領域の機能は、そのベクターが欠如する機能を発現するウイルスとの細胞の同時感染によって（補完細胞株を提供するため）供給され得る。
【０１０９】
挿入が、ウイルスの複製に必須の遺伝子中になされる場合、アデノウイルスは、適切な補完細胞株（すなわちヘルパー細胞株）中で増殖されなければならない。ヒトアデノウイルスにおいて、Ｅ４領域（ＯＲＦ３およびＯＲＦ６／７）中の特定のオープンリーディングフレームは、ウイルスの複製に必須である。ＢＡＶ−３のＥ４領域中の類似のオープンリーディングフレームにおける欠失は、ウイルスベクターの増殖のためにヘルパー細胞株の使用を必要とし得る。
【０１１０】
本発明のアデノウイルスのＢＡＶ  Ｅ１遺伝子産物は、ほとんどの細胞の遺伝子をトランス活性化し、それ故、恒常的にＥ１タンパク質を発現する細胞株は、細胞のポリペプチドを正常細胞株よりも高レベルで発現し得る。本発明の組換え哺乳動物（特にウシ）細胞株を用いて、以下のようなタンパク質を含むポリペプチドを調製し、そして単離し得る：（ａ）アデノウイルスＥ１Ａタンパク質と会合するタンパク質（例えば、ｐ３００、網膜芽細胞腫（Ｒｂ）タンパク質、サイクリン、キナーゼなど）；（ｂ）アデノウイルスＥ１Ｂタンパク質と会合するタンパク質（例えば、ｐ５３など）；（ｃ）増殖因子（例えば、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）など）；（ｄ）レセプター（例えば、上皮細胞増殖因子レセプター（ＥＧＦ−Ｒ）、線維芽細胞増殖因子レセプター（ＦＧＦ−Ｒ）、腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦ−Ｒ）、インスリン様増殖因子レセプター（ＩＧＦ−Ｒ）、主要組織適合遺伝子複合体クラスＩレセプターなど）；（ｅ）プロトオンコジーンによってコードされるタンパク質（例えば、タンパク質キナーゼ（チロシン特異的タンパク質キナーゼおよびセリンまたはスレオニンに特異的なタンパク質キナーゼ）、ｐ２１タンパク質（ＧＴＰａｓｅ活性を有するグアニンヌクレオチド結合タンパク質）など）；（ｆ）他の細胞性タンパク質（例えば、アクチン、コラーゲン、フィブロネクチン、インテグリン、リンタンパク質、プロテオグリカン、ヒストンなど）、ならびに（ｇ）転写の調節に関連するタンパク質（例えば、ＴＡＴＡボックス結合タンパク質（ＴＢＰ）、ＴＢＰ随伴因子（ＴＡＦｓ）、Ｓｐ１結合タンパク質など）。
【０１１１】
本発明はまた、遺伝子欠失を制御するため、治療用遺伝子もしくは治療用ヌクレオチドを提供するため、および／または遺伝子変異を誘導もしくは補正するために、哺乳動物（例えば、ウシまたはヒトまたはそれを必要とする他の哺乳動物）に遺伝子送達を提供する方法を含む。本方法は、例えば、以下を含むがこれらに限定されない状態の処置において用いられ得る：遺伝性疾患、心臓血管疾患、およびウイルス感染。本方法は、キャプシドタンパク質、またはそのフラグメント中の改変を含む生きた組換えウシアデノウイルスをこの哺乳動物に投与することを含み、ここで、このキャプシドタンパク質は親和性と関連し、そしてこの改変体は変更された親和性と関連し、そしてここで、このアデノウイルスベクターはさらに、この組換えウイルスベクターのゲノムがこの哺乳動物のゲノムに組み込まれるか、または独立的かつ染色体外に保持されて、標的器官もしくは組織中で必要とされる遺伝子の発現を提供する条件下で、欠損のない形態のこの遺伝子をコードする外来ポリヌクレオチド配列を含む。これらの種類の技術は上述に提供された例に限定されない種々の疾患状態の処置のために、当業者によって一般に用いられている。慣用的な遺伝子治療における使用のために組込まれ得る、外来遺伝子、ヌクレオチド配列またはそれらの部分の例としては、嚢胞性線維症膜貫通調節遺伝子、ヒトミニジストロフィン（ｍｉｎｉｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ）遺伝子、α−１−抗トリプシン遺伝子、心臓血管疾患に関連する遺伝子などが挙げられる。
【０１１２】
特に、ヒトにおける遺伝子送達に関する本発明の実施は、以下が挙げられるがこれらに限定されない疾患の予防または処置のために意図される：遺伝病（例えば、血友病、サラセミア、気腫、ゴシェ病、嚢胞性線維症、デュシェーヌ筋ジストロフィー、デュシェーヌミオパシーまたはベッカーミオパシーなど）、癌、ウイルス疾患（例えば、ＡＩＤＳ、ヘルペスウイルス感染、サイトメガロウイルス感染および乳頭腫ウイルス属感染）、心臓血管疾患など。本発明の目的について、本発明の方法によって調製されたベクター、細胞およびウイルス粒子は、エキソビボ（すなわち、患者から回収された細胞における）または処置される身体へ直接的にインビボでのいずれかで被験体に導入され得る。
【０１１３】
以下の実施例は例証するために提供されるのであって、本発明を限定するものではない。
（実施例）
（実施例１：ヒトファイバー遺伝子を含むＢＡＶ６００の構築）
変更された親和性を有するＢＡＶ−３ベクターを生成するために、ＢＡＶ−３のテイルおよびシャフトに融合したＨＡＶ−５ファイバーノブを含むキメラファイバー遺伝子構築物を、Ｒｅｄｄｙら、１９９９（前出）に記載のＢＡＶ３０４のＢＡＶ−３ゲノム中に組込んだ（図３）。野生型ＢＡＶ−３ファイバー遺伝子の正確な置換について、先に作製したプラスミドｐＢＡＶ３０１．ｇｆｐ（Ｒｅｄｄｙら、１９９９）をＢＡＶ−３ファイバーの改変のために用いた。得られた移入ベクターｐＢＡＶ−３０１．Ｇ５ＦＫは、Ｅ３領域、キメラＢＡＶ−３／ＨＡＶ−５ファイバー遺伝子、およびＥ４中に挿入したＣＭＶプロモーター駆動性の緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現カセットを含んだ。この移入ベクターを用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＪ５１８３（Ｃｈａｒｔｉｅｒら、１９９６）における相同組換えによって、Ｅ３欠失ＢＡＶ−３の感染性プラスミド（ｐ．ＦＢＡＶ３０２（Ｚａｋｈａｒｔｃｈｏｕｋら、１９９８））の骨格中へのＧＦＰカセットおよび改変したファイバー遺伝子を組込み、プラスミドｐＦＢＡＶ−６００を作製した。ウイルスゲノムを、ＰａｃＩ消化によってこのプラスミドから遊離し、そしてこのウイルスゲノムを用いて、細胞株（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ１５６）（Ｅ１タンパク質を発現するウシ胎仔網膜細胞）にトランスフェクトした（Ｒｅｄｄｙら、１９９９、前出を参照のこと）。この対応キメラウイルスＢＡＶ６００を、トランスフェクション後２１日間産生した。
【０１１４】
（実施例２：ＢＡＶ６００の特徴付け）
Ｅ１タンパク質を発現するウシ胎仔網膜細胞（ＡＴＣＣ登録番号ＰＴＡ１５６）のトランスフェクションから得たＢＡＶ６００を、ＭＤＢＫ細胞中で増大させ、そしてこのウイルスＤＮＡを感染した細胞から抽出した。このＤＮＡを、制限酵素ＢｇｌＩＩを用いた消化の後、アガロースゲル電気泳動で分析した（図５Ａ）。図５Ａ〜図５Ｂに示すように、親のＢＡＶ３０２およびＢＡＶ３０４は両方とも、ウイルスゲノムの右末端に５．４ｋｂのＢｇｌＩＩフラグメントを有した。ＨＡＶ−５ファイバーノブ領域は、ＢＡＶ６００ゲノム内にさらなるＢｇｌＩＩ制限酵素部位を導入する。従って、１．５ｋｂおよび３．９ｋｂの診断用のフラグメントを、ＢｇｌＩＩ消化の後、見出した。ＨＡＶ−５ファイバーノブプローブを用いたサザンブロット解析は、ＢｇｌＩＩ消化されたＢＡＶ６００について予測したハイブリダイゼーションパターンを実証した（図５Ｂ）。
【０１１５】
組換えＢＡＶ６００によるキメラＢＡＶ−３およびＨＡＶ−５ファイバータンパク質の発現およびアセンブリを、免疫沈降アッセイによって試験した。親（ＢＡＶ３０４；Ｒｅｄｄｙら、１９９９、前出）およびキメラ（ＢＡＶ６００）のウイルス感染されたＭＤＢＫ細胞の溶解物由来の代謝的に放射性標識された免疫沈降物を、変性条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。全長のファイバーを含む野生型ＨＡＶ−５をまた解析した。免疫沈降アッセイを、ＢＡＶ３ファイバーノブに特異的なウサギポリクローナル抗体および抗ファイバーモノクローナル抗体（ＩＤ６．１４）を用いて実施した。ＩＤ６．１４抗体は、三量体化したＨＡＶ−５ファイバーノブを認識し、ノブドメインに結合することによってＨＡＶ−５を中和する（Ｄｏｕｇｌａｓら、１９９６）。図６に示すように、ＢＡＶ−３およびＢＡＶ３０４ウイルスは、およそ１００ｋＤａの大きさを有するファイバータンパク質を含む。これらのファイバータンパク質は、ＢＡＶ３ファイバーノブに特異的なウサギポリクローナル抗体と反応する。一方、ＨＡＶ−５は、およそ６４ｋＤａの大きさを有するファイバータンパク質を含む。ＢＡＶ６００キメラウイルス内のＨＡＶ−５ファイバーノブの存在は、ＨＡＶ−５ノブに特異的なモノクローナル抗体ＩＤ６．１４を用いた免疫沈降解析によって確認した。
【０１１６】
ファイバーキメラウイルスＢＡＶ６００の生物学的力価を、ＢＡＶ−３と親ウイルスＢＡＶ３０４とで比較した。ＭＤＢＫ細胞の単層を用いて決定した生物学的力価は、ＢＡＶ−３、ＢＡＶ３０４、およびＢＡＶ６００について、それぞれ１０８ＰＦＵ／ｍｌ、１０６ＰＦＵ／ｍｌ、および１０５ＰＦＵ／ｍｌの最大プラーク形成力価を示した。その結果は、ファイバー改変およびＥ３領域へのＧＦＰの挿入がウイルスの細胞産生を有意に変更することを示唆した。
【０１１７】
（実施例３：ＢＡＶ６００によるヒト細胞株の形質導入）
異なるヒト細胞株におけるＢＡＶ３０４およびＢＡＶ６００の形質導入効率を特徴付けるため、ＦＡＣＳ解析を実施して、異なるウイルスの投入（ｉｎｐｕｔ）での各細胞株の形質導入の割合を決定した（図７Ａ）。Ｔ２５フラスコ中で増殖させた細胞を、ＢＡＶ３０４またはＢＡＶ６００のいずれかを用いて１ＭＯＩおよび５ＭＯＩにて感染させた。感染から４８時間後、ＧＦＰ蛍光陽性細胞の割合を、フローサイトメトリによって決定した。各細胞株の形質導入の割合を定量し、そしてその画分の用量を図７Ｂに示す。２９３細胞は、両方のウイルスを用いた形質導入に同程度の感受性があった（これは、ＨＡＶ−５レセプターおよびＢＡＶ−３レセプターが両方とも細胞表面上に存在することを示す）。ＢＡＶ３０４を用いたＨｅＬａ細胞およびＨＥｐ−２細胞の形質導入は、用量依存的であり、１ＭＯＩにてそれぞれ約６％および１％、５ＭＯＩにてそれぞれ約２５％および５％であった。両方の細胞を、ＢＡＶ６００を用いて効果的に形質導入した。ＢＡＶ６００を用いた形質導入の割合は、１ＭＯＩにてさえ最大のレベルに達する（ＨｅＬａおよびＨｅｐ−２についてそれぞれ９４％および９３％）。一方、ＢＡＶ６００を用いたＡ５４９細胞のより低効率の形質導入を観察した。一緒に取得したこれらのデータは、ＨＡＶ５ファイバーノブを含むＢＡＶ６００がヒト細胞株の形質導入においてＢＡＶ３０４ベクターよりも明らかに優れていたことを実証する。
【０１１８】
（実施例４：ヒト血清におけるＨＡＶ−５中和抗体およびＢＡＶ−３中和抗体）
臨床的患者におけるＨＡＶ−５に対する既存の中和化抗体は、ヒト遺伝子治療プロトコルにおいてＨＡＶ−５の効果的な使用に対して主な障壁を示す。ＨＡＶ−５誘導ベクターに対する代替ベクターとしてＢＡＶ−３の使用についての可能性を検討するために、既存の抗ＨＡＶ−５中和化抗体がまた、ＢＡＶ−３とも交差反応性であったかを決定した。臨床患者由来のヒト血清のランダムな１０５個のサンプルを試験した。３つ（５０番、９７番、および１０２番）が、１：８００〜１，６０００の間で変化するより高い力価のＨＡＶ−５中和抗体を含むことを見出した。これらの血清を、ＭＤＢＫ細胞におけるＢＡＶ−３誘導プラーク形成を阻害するこれらの能力について試験した。本発明者らのデータは、これらのＨＡＶ−５陽性血清のいずれもが１／５０の希釈でＢＡＶ−３誘導プラーク形成に対して影響を示さなかったことを実証した。
【０１１９】
（実施例５：ヒト細胞株におけるＢＡＶ−３の複製）
ウイルス産生およびウイルス感染の時間経過を異なるヒト細胞株において研究して、ＢＡＶ−３の増殖についての許容度の程度を決定した。各細胞株（ＨｅＬａ、ＨＥｐ−２、２９３およびＡ５４９）のコンフルエントな単層培養物を、１０ＭＯＩにてＢＡＶ−３を用いて感染させ、そして感染後の異なる時間間隔でのウイルス産生を、ＭＤＢＫ細胞の単層における細胞溶解物の滴定によってアッセイした。許容ＭＤＢＫ細胞におけるウイルスの増殖は、感染から４８時間後には、予測通り、１０８ｐｆｕ／ｍｌの最大収量という結果となった。一方、４つのヒト細胞株全てにおけるＢＡＶ−３産生のレベルは着実に減少し、このことは、これらのヒト細胞株においてウイルス複製の完全な欠如が存在することを示唆していた。
【０１２０】
（実施例６：ヒト細胞株における初期ＢＡＶ−３タンパク質および後期ＢＡＶ３タンパク質の発現）
ウイルスタンパク質としては、初期タンパク質（低分子量のＥ１Ｂ（Ｅ１Ｂ  ｓｍａｌｌ）および一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質［ＤＢＰ］）ならびに後期タンパク質（ペントン塩基およびファイバー）が挙げられる。ヒト細胞株における初期ウイルスタンパク質および後期ウイルスタンパク質の発現を同定するため、ウイルスタンパク質の産生をウェスタンイムノブロット法によって解析した。培養物を、１０ＭＯＩにてＢＡＶ−３を用いて感染させた。感染後の間隔にて、細胞抽出物を各培養物から調製し、１０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で分離し、そしてニトロセルロースに転写した。ニトロセルロースシート上に固定化した抗原を、低分子量のＥ１Ｂ、ＤＢＰ、ペントン塩基、およびファイバーのそれぞれに対するウサギポリクローナル抗体の反応によってプローブ化した。予測通り、低分子量のＥ１ＢおよびＤＢＰ抗血清は、ＢＡＶ−３感染ＭＤＢＫ細胞由来の１９ｋＤａおよび５０ｋＤａのバンドとそれぞれ反応した。対照的に、２９３細胞株を除く全てのヒト細胞株は、抗低分子量Ｅ１Ｂポリクローナル抗体または抗ＤＢＰポリクローナル抗体と陽性の反応を示さなかった。どの構造タンパク質も、ＢＡＶ−３感染ヒト細胞株から検出されなかった。これらの結果は、本研究において試験したヒト細胞の大部分においてＢＡＶ−３の複製が低分子量のＥ１Ｂレベルでブロックされたことを示した。
【０１２１】
（実施例７：ＨＡＶ−５ファイバーノブに特異的なモノクローナル抗体によるＢＡＶ６００の中和化）
ＨＡＶ−５ファイバーノブを保有するＢＡＶ６００がＨＡＶ−５ノブに特異的な抗体によって中和されるはずだと仮定した。この仮説を確証するために、１００ｐｆｕのＢＡＶ−３またはＢＡＶ６００を含む二連のアリコートを、ＢＡＶ３ファイバーノブに特異的なウサギポリクローナル抗体またはＨＡＶ−５ファイバーノブドメインに対するモノクローナル抗体（ＩＤ６．１４）を連続的二倍希釈をして室温にて２時間インキュベートした。次いで、ＭＤＢＫ細胞を予めインキュベートしたＢＡＶ−３ウイルスまたはＢＡＶ６００ウイルスを用いて感染させた。細胞を１４日間インキュベートして、完全にＣＰＥを発達させた。これらのデータは、いずれのウイルスも正常なウサギ血清由来の血清またはウシヘルペスウイルスｇＤタンパク質に特異的なコントロールモノクローナル抗体２Ｃ８によって中和されなかったことを示す。ＢＡＶ−３およびＢＡＶ６００をそれぞれ、ＢＡＶ３ファイバーノブ（１：８００）およびＩＤ６．１４（１：３，２００）それぞれに特異的なウサギポリクローナル抗体によって中和した。しかし、いずれのウイルスも、１：５０の希釈でさえ相互の抗血清によって中和されなかった。このことは、ＢＡＶ６００がＨＡＶ−５ファイバーノブを保有することをさらに確証した。
【０１２２】
（配列表）
SEQUENCE LISTING
<110> University of Saskatchewan
<120> MODIFIED BOVINE ADENOVIRUS HAVING ALTERED TROPISM
<130> F1-0236U87
<140> JP 2002-500739
<141> 2001-05-31
<150> US 60/208,678
<151> 2000-05-31
<160> 9
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 34446
<212> DNA
<213> Bovine Adenovirus 3
<400> 1
catcatcaat aatctacagt acactgatgg cagcggtcca actgccaatc atttttgcca      60
cgtcatttat gacgcaacga cggcgagcgt ggcgtgctga cgtaactgtg gggcggagcg     120
cgtcgcggag gcggcggcgc tgggcggggc tgagggcggc gggggcggcg cgcggggcgg     180
cgcgcggggc ggggcgaggg gcggagttcc gcacccgcta cgtcattttc agacattttt     240
tagcaaattt gcgccttttg caagcatttt tctcacattt caggtattta gagggcggat     300
ttttggtgtt cgtacttccg tgtcacatag ttcactgtca atcttcatta cggcttagac     360
aaattttcgg cgtcttttcc gggtttatgt ccccggtcac ctttatgact gtgtgaaaca     420
cacctgccca ttgtttaccc ttggtcagtt ttttcgtctc ctagggtggg aacatcaaga     480
acaaatttgc cgagtaattg tgcacctttt tccgcgttag gactgcgttt cacacgtaga     540
cagacttttt ctcattttct cacactccgt cgtccgcttc agagctctgc gtcttcgctg     600
ccaccatgaa gtacctggtc ctcgttctca acgacggcat gagtcgaatt gaaaaagctc     660
tcctgtgcag cgatggtgag gtggatttag agtgtcatga ggtacttccc ccttctcccg     720
cgcctgtccc cgcttctgtg tcacccgtga ggagtcctcc tcctctgtct ccggtgtttc     780
ctccgtctcc gccagccccg cttgtgaatc cagaggcgag ttcgctgctg cagcagtatc     840
ggagagagct gttagagagg agcctgctcc gaacggccga aggtcagcag cgtgcagtgt     900
gtccatgtga gcggttgccc gtggaagagg atgagtgtct gaatgccgta aatttgctgt     960
ttcctgatcc ctggctaaat gcagctgaaa atgggggtga tatttttaag tctccggcta    1020
tgtctccaga accgtggata gatttgtcta gctacgatag cgatgtagaa gaggtgacta    1080
gtcacttttt tctggattgc cctgaagacc ccagtcggga gtgttcatct tgtgggtttc    1140
atcaggctca aagcggaatt ccaggcatta tgtgcagttt gtgctacatg cgccaaacct    1200
accattgcat ctatagtaag tacattctgt aaaagaacat cttggtgatt tctaggtatt    1260
gtttagggat taactgggtg gagtgatctt aatccggcat aaccaaatac atgttttcac    1320
aggtccagtt tctgaagagg aaatgtgagt catgttgact ttggcgcgca agaggaaatg    1380
tgagtcatgt tgactttggc gcgccctacg gtgactttaa agcaatttga ggatcacttt    1440
tttgttagtc gctataaagt agtcacggag tcttcatgga tcacttaagc gttcttttgg    1500
atttgaagct gcttcgctct atcgtagcgg gggcttcaaa tcgcactgga gtgtggaaga    1560
ggcggctgtg gctgggacgc ctgactcaac tggtccatga tacctgcgta gagaacgaga    1620
gcatatttct caattctctg ccagggaatg aagctttttt aaggttgctt cggagcggct    1680
attttgaagt gtttgacgtg tttgtggtgc ctgagctgca tctggacact ccgggtcgag    1740
tggtcgccgc tcttgctctg ctggtgttca tcctcaacga tttagacgct aattctgctt    1800
cttcaggctt tgattcaggt tttctcgtgg accgtctctg cgtgccgcta tggctgaagg    1860
ccagggcgtt caagatcacc cagagctcca ggagcacttc gcagccttcc tcgtcgcccg    1920
acaagacgac ccagactacc agccagtaga cggggacagc ccaccccggg ctagcctgga    1980
ggaggctgaa cagagcagca ctcgtttcga gcacatcagt taccgagacg tggtggatga    2040
cttcaataga tgccatgatg ttttttatga gaggtacagt tttgaggaca taaagagcta    2100
cgaggctttg cctgaggaca atttggagca gctcatagct atgcatgcta aaatcaagct    2160
gctgcccggt cgggagtatg agttgactca acctttgaac ataacatctt gcgcctatgt    2220
gctcggaaat ggggctacta ttagggtaac aggggaagcc tccccggcta ttagagtggg    2280
ggccatggcc gtgggtccgt gtgtaacagg aatgactggg gtgacttttg tgaattgtag    2340
gtttgagaga gagtcaacaa ttagggggtc cctgatacga gcttcaactc acgtgctgtt    2400
tcatggctgt tattttatgg gaattatggg cacttgtatt gaggtggggg cgggagctta    2460
cattcggggt tgtgagtttg tgggctgtta ccggggaatc tgttctactt ctaacagaga    2520
tattaaggtg aggcagtgca actttgacaa atgcttactg ggtattactt gtaaggggga    2580
ctatcgtctt tcgggaaatg tgtgttctga gactttctgc tttgctcatt tagagggaga    2640
gggtttggtt aaaaacaaca cagtcaagtc ccctagtcgc tggaccagcg agtctggctt    2700
ttccatgata acttgtgcag acggcagggt tacgcctttg ggttccctcc acattgtggg    2760
caaccgttgt aggcgttggc caaccatgca ggggaatgtg tttatcatgt ctaaactgta    2820
tctgggcaac agaataggga ctgtagccct gccccagtgt gctttctaca agtccagcat    2880
ttgtttggag gagagggcga caaacaagct ggtcttggct tgtgcttttg agaataatgt    2940
actggtgtac aaagtgctga gacgggagag tccctcaacc gtgaaaatgt gtgtttgtgg    3000
gacttctcat tatgcaaagc ctttgacact ggcaattatt tcttcagata ttcgggctaa    3060
tcgatacatg tacactgtgg actcaacaga gttcacttct gacgaggatt aaaagtgggc    3120
ggggccaaga ggggtataaa taggtgggga ggttgagggg agccgtagtt tctgtttttc    3180
ccagactggg ggggacaaca tggccgagga agggcgcatt tatgtgcctt atgtaactgc    3240
ccgcctgccc aagtggtcgg gttcggtgca ggataagacg ggctcgaaca tgttgggggg    3300
tgtggtactc cctcctaatt cacaggcgca ccggacggag accgtgggca ctgaggccac    3360
cagagacaac ctgcacgccg agggagcgcg tcgtcctgag gatcagacgc cctacatgat    3420
cttggtggag gactctctgg gaggtttgaa gaggcgaatg gacttgctgg aagaatctaa    3480
tcagcagctg ctggcaactc tcaaccgtct ccgtacagga ctcgctgcct atgtgcaggc    3540
taaccttgtg ggcggccaag ttaacccctt tgtttaaata aaaatacact catacagttt    3600
attatgctgt caataaaatt ctttattttt cctgtgataa taccgtgtcc agcgtgctct    3660
gtcaataagg gtcctatgca tcctgagaag ggcctcatat accatggcat gaatattaag    3720
atacatgggc ataaggccct cagaagggtt gaggtagagc cactgcagac tttcgtgggg    3780
aggtaaggtg ttgtaaataa tccagtcata ctgactgtgc tgggcgtgga aggaaaagat    3840
gtcttttaga agaagggtga ttggcaaagg gaggctctta gtgtaggtat tgataaatct    3900
gttcagttgg gagggatgca ttcgggggct aataaggtgg agtttagcct gaatcttaag    3960
gttggcaatg ttgcccccta ggtctttgcg aggattcatg ttgtgcagta ccacaaaaac    4020
agagtagcct gtgcatttgg ggaatttatc atgaagcttg gaggggaagg catgaaaaaa    4080
ttttgagatg gctttatggc gccccaggtc ttccatgcat tcgtccataa taatagcaat    4140
aggcccggtt ttggctgcct gggcaaacac gttctgaggg tgggcgacat catagttgta    4200
gtccatggtc aggtcttcat aggacatgat cttaaaggca ggttttaggg tgctgctttg    4260
aggaaccaga gttcctgtgg ggccgggggt gtagttccct tcacagattt gggtctccca    4320
agcaagcagt tcttgcgggg gtatcatgtc aacttggggg actataaaaa aaacagtttc    4380
gggaggtggt tgaatgaggc ccgtagacat aaggtttctg aggagctggg attttccaca    4440
accggttggt ccgtagacca ccccaataac gggttgcatg gtaaagttta aagatttgca    4500
tgaaccgtca gggcgcagat atggcatggt ggcattcatg gcatctctta tcgcctgatt    4560
atagtctgag agggcattga gtagggtggc gccccccata gccagtagct cgtccaagga    4620
agaaaagtgt ctaagaggtt tgaggccttc agccatgggc atggactcta agcactgttg    4680
catgagagca catttgtccc aaagctcaga gacgtggtct agtacatctc catccagcat    4740
agctctttgt ttcttgggtt ggggtggctg ttgctgtagg gggcgagacg gtgacggtcg    4800
atggcccgca gggtgcggtc tttccagggc ctgagcgtcc tcgccagggt cgtctcggtg    4860
accgtgaagg gctgctgatg cgtctgtctg ctgaccagcg agcgcctcag gctgagcctg    4920
ctggtgccga acttttcgtc gcctagctgt tcagtggaat aataacaagt caccagaagg    4980
tcgtaggaga gttgtgaggt ggcatggcct ttgctcgaag tttgccagaa ctctcggcgg    5040
cggcagcttg ggcagtagat gtttttaagg gcatatagtt tgggggctaa gaagacagat    5100
tcctggctgt gggcgtctcc gtggcagcgg gggcactggg tctcgcattc cacaagccaa    5160
gtcagctgag ggttggtggg atcaaagacc agaggacggt tattaccttt caggcggtgc    5220
ttgcctcggg tgtccatgag ttcctttccc ctttgggtga gaaacatgct gtccgtgtct    5280
ccgtagacaa atttgagaat ccggtcttct aggggagtgc ctctgtcttc taaatagagg    5340
atgtctgccc attcagagac aaaggctcta gtccacgcga ggacaaatga agctatgtgt    5400
gaggggtatc tgttattaaa tatgagagag gatttttttt gcaaagtatg caggcacagg    5460
gctgagtcat cagcttccag aaaggtgatt ggtttgtaag tgtatgtcac gtgatggttc    5520
tgggggtctc ccagggtata aaagggggcg tcttcgtctg aggagctatt gctagtgggt    5580
gtgcactgac ggtgcttccg cgtggcatcc gtttgctgct tgacgggtga gtaggtgatt    5640
tttagctctg ccatgacaga ggagctcagg ttgtcagttt ccacgaaggc ggtgcttttg    5700
atgtcgtagg tgccgtctga aatgcctcta acatatttgt cttccatttg gtcagaaaag    5760
acagtgactc tgttgtctag cttagtggca aagctgccat acagggcatt ggacagcagt    5820
ttggcaatgc ttctgagagt ttggtttttc tctttatccg ccctttcctt gggcgcaatg    5880
ttaagttgca cgtagtctct agccagacac tcccactggg gaaatactgt ggtgcggggg    5940
tcgttgagaa tttggactct ccagccgcgg ttatgaagcg tgatggcatc caaacaagtt    6000
accacttccc cccgtagtgt ctcgttggtc cagcagaggc gacctccttt tctggagcag    6060
aagggcggta taacgtccaa gaatgcttct gggggtgggt ctgcatcaat ggtgaatatc    6120
gcgggcagta gggtgcgatc aaaatagtca atgggtctgt gcaactgggt taggcggtct    6180
tgccagtttt taattgcaag cgctcgatca aaggggttca aaggttttcc cgctgggaaa    6240
ggatgggtga gggcgctggc atacatgccg cagatgtcat acacatagat ggcttctgtt    6300
aggacgccta tgtaggtagg atagcatcgg ccgccccgaa tactttctct aacgtaatca    6360
tacatttcat tggaaggggc tagtagaaag ttgcccagag agctcctgtt gggacgctgg    6420
gatcggtaga ctacctgtct gaagatggca tgggaattgg agctgatggt gggcctttgg    6480
aggacattga aattgcagtg gggcagcccc actgacgtgt gaacaaagtc caaataagat    6540
gcttggagtt ttttaaccaa ttcggccgta accagcacgt ccatagcaca gtagtccaag    6600
gtgcgttgca caatatcata ggcacctgaa ttctcttgca gccagagact cttattgaga    6660
aggtactcct cgtcgctgga ccagtagtcc ctctgaggaa aagaatctgc gtcggttcgg    6720
taggtaccta acatgtaaaa ttcatttaca gctttgtaag ggcagcagcc tttttccacg    6780
ggtaaagcgt aagcggcagc tgcgttcctg agactcgtgt gcgtgagagc aaaggtatct    6840
cggaccatga acttcacaaa ctgaaattta tagtctgctg aggtgggagt gccttcctcc    6900
cagtctttga agtcttttcg agcagcatgt gtggggttag gcagagcaaa agttaagtca    6960
ttgaaaagaa tcttgccaca acgaggcatg aaatttctac tgactttaaa agcagctgga    7020
ataccttgtt tgttgttaat gacttgtgcg gctagaacaa tctcatcaaa gccgtttatg    7080
ttgtgcccta cgacatagac ttccaagaaa gtcggttgcc ctttgagttc aagcgtacac    7140
agttcctcga aaggaatgtc gctggcatgg acatagccca gtttgaggca gaggttttct    7200
aagcacggat tatctgccag gaactggcgc caaagcaaag tgctggcagc ttcttgaagg    7260
gcatcccgat actgtttaaa caagctgcct actttgtttc tttgcgggtt gaggtagtag    7320
aaggtatttg cttgctttgg ccagcttgac cacttttgct ttttagctat gttaacagcc    7380
tgttcgcata gctgcgcgtc accaaacaaa gtaaacacga gcataaaagg catgagttgc    7440
ttgccaaagc taccgtgcca agtgtatgtt tccacatcat agacgacaaa gaggcgccgg    7500
gtgtcggggt gagcggccca ggggaaaaac tttatttctt cccaccagtc cgaagattgg    7560
gtgtttatgt ggtgaaagta aaagtcccgg cggcgagtgc tgcaggtgtg cgtctgctta    7620
aaatacgaac cgcagtcggc acatcgctgg acctctgcga tggtgtctat gagatagagc    7680
tttctcttgt gaataagaaa gttgaggggg aagggaaggc gcggcctgtc agcgcgggcc    7740
gggatgcttg taattttcag cttccccttg tatgttttgt aaacgcacat atttgcgttg    7800
cagaaccgga cgagcgtgtc ttggaatgaa aggatatttt ctggttttaa atcaaatggg    7860
cagtgctcca agtgcagttc aaaaaggttt cggagactgc tggaaacgtc tgcgtgatac    7920
ttgacttcca gggtggtccc gtcttcagtc tgaccgtgca gccgtagggt actgcgtttg    7980
gcgaccaggg gcccccttgg ggctttcttt aaaggggacg tcgagggccg aggggcggcc    8040
tttgcctttc gggcctgagg ggcggtagct ggaccggatc gttgagttcg ggcatgggtt    8100
gcagctgttg gcgcaggtct gatgcgtgct gcacgactct gcggttgatt ctctgaatct    8160
ccgggtgttg ggtgaatgct actggccccg tcactttgaa cctgaaagag aggtcgacag    8220
agttaataga tgcatcgtta agctccgcct gtctaataat ttcttccacg tcaccgctgt    8280
ggtctcggta agcaatgtct gtcataaacc gttcgatctc ttcctcgtcc agttctccgc    8340
gaccagctcg gtggaccgtg gctgccaagt ccgtgctaat gcgtcgcatg agctgggaaa    8400
aggcattggt tcccggttca ttccacactc tgctgtatat aacagcgcca tcttcgtctc    8460
gggctcgcat gaccacctgg cccaagttta gctccacgtg gcgagcaaag acggggctga    8520
ggcggaggtg gtggtgcaga taattgagag tggtggctat gtgctccacg atgaagaagt    8580
agatgaccca tctgcggatg gtcgactcgt taatgttgcc ctctcgctcc agcatgttta    8640
tggcttcgta aaagtccaca gcgaagttaa aaaactgctc gttgcgggcg gagactgtca    8700
gctcttcttg caggagacga atgacttcgg ctacggcggc gcggacttct tcggcaaagg    8760
agcgcggcgg cacgtcctcc tcctcctctt cttccccctc cagcgggggc atctccagct    8820
ctaccggttc cgggctgggg gacagggaag gcggtgcggg ccgaacgacc cgtcggcgtc    8880
gggtgggcaa ggggagactc tctatgaatc gctgcaccat ctcgccccgg cgtatccgca    8940
tctcctgggt aacggcacgc ccgtgttctc ggggtcggag ctcaaaagct ccgccccgca    9000
gttcggtcag aggccgcgcc gcgggctggg gcaggctgag tgcgtcaata acatgcgcca    9060
ccactctctc cgtagaggcg gctgtttcga accgaagaga ctgagcatcc acgggatcgc    9120
tgaagcgttg cacaaaagct tctaaccagt cgcagtcaca aggtaggctg agcataggtg    9180
aggctcgctc ggtgttgttt ctgtttggcg gcgggtggct gaggagaaaa ttaaagtacg    9240
cgcaccgcag gcgccggatg gttgtcagta tgatgagatc cctgcgaccc gcttgttgga    9300
ttctgatgcg gtttgcaaag ccccaggctt ggtcttggca tcgcccaggt tcatgcactg    9360
ttcttggagg aatctctcta cgggcacgtt gcggcgctgc gggggcaggg tcagccattt    9420
cggtgcgtcc aaacccacgc aatggttgga tgagagccaa gtccgctact acgcgctctg    9480
ctaggacggc ttgctggatc tgccgcagcg tttcatcaaa gttttccaag tcaatgaagc    9540
ggtcgtaggg gcccgcgttt atggtgtagg agcagtttgc catggtggac cagtccacaa    9600
tctgctgatc tacccgcacc gtttctcggt acaccagtcg gctataggct cgcgtctcga    9660
aaacatagtc gttgcaaacg cgcaccacgt attggtagcc gattaggaag tgcggcggcg    9720
ggtataagta gagcggccag ttttgcgtgg ccggctgtct ggcgcccaga ttccgtagca    9780
tgagtgtggg gtatcggtac acgtgacgcg acatccagga gatgcccgcg gccgaaatgg    9840
cggccctggc gtactcccgg gcccggttcc atatattcct gagaggacga aagattccat    9900
ggtgtgcagg gtctgccccg taagacgcgc gcaatctctc gcgctctgca aaaaacatac    9960
agatgaaaca tttttggggc ttttcagatg atgcatcccg ctttacggca aatgaagccc   10020
agatccgcgg cagtggcggg ggttcctgct gcggccgccg gcgcgagcgt tgactcaggc   10080
ggtactaccg cgccccctgg tgtcgagtgc ggcgaggggg aagggttagc tcggctgtac   10140
gcgcacccgg acacacaccc gcgcgtgtgc gtgaagcgcg atgcggcgga ggcgtacgtt   10200
ccccgggaga acttattccg cgaccgcagc ggggaggaac ccgaagggag ccgagaccta   10260
aagtacaagg ccggtcggca gttgcgcgcc ggcatgcccc gaaagcgggt gctgaccgaa   10320
ggggactttg aggtggatga gcgcactggc atcagctcag ccaaagccca catggaggcg   10380
gccgatctag tgcgggctta cgagcaaacg gtgaagcaag aggctaattt tcaaaagtca   10440
tttaataacc acgtgcggac actgatctcc cgcgaggaga ccaccctggg tttgatgcac   10500
ttgtgggact ttgcggaggc atacgcgcag aaccccggca gcaagaccct tacggcccaa   10560
gtctttctca tcgtgcagca cttgcaagat gagggcattt ttggggaagc tttcttaagc   10620
atagcagagc ccgagggacg atggatgcta gatctgctaa acatattgca gtccattgtg   10680
gtgcaagagc gccagctttc gctatctgaa aaggtagccg cggtgaacta ctccgtagtt   10740
accctgggca aacattatgc ccgcaagatc tttaagagcc cctttgtgcc gcttgacaag   10800
gaggtgaaga tcagtacatt ttatatgcgc gcggtgctta aggtcctggg tctaagtcac   10860
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aaaatccccc tgtcttgtcg cgccaaccgc acccacacag acaccatcat gcacctctac   23280
tcgggggact ccttaccgtg cttccccacg ctgcagctgg tcaacaaaat ctttgaaggc   23340
ttgggctcag aggagcggcg cgcagccaac tcgctgaaag atcaagagga taacagcgcg   23400
ttagttgagc tcgaagggga cagtccccga ctggctgtgg ttaagcgcac actgtctttg   23460
acacatttcg cctaccctgc cataacacta ccgcctaagg tgatggcagc tgtcactggc   23520
agcctcattc atgaatcagc agcgaccgcc gaaccggaag ctgaggcgct gccagaagcc   23580
gaggagcccg tggttagtga ccctgaactt gctcgctggt tggggctcaa cttacaacag   23640
gagcccgagg ccacggccca ggctttggaa gaaagacgca agattatgtt ggcagtatgc   23700
ttagtcacac ttcagctcga gtgcctgcac aagttttttt cttcagagga tgtcatcaaa   23760
aagctgggag agagcctcca ctacgccttt cgccacggct acgtgcgcca agcctgctcc   23820
atttctaacg tggaactaac gaacatcgtc tcatacctgg gtatcttgca cgaaaaccgc   23880
ttgggacaga gtaccctaca cgccaccctt aaagacgaga accgcagaga ctacatcaga   23940
gacacagtct ttctctttct ggtttatact tggcagactg ccatgggcat ttggcagcag   24000
tgcctcgaga ctgagaacgt aaaagaactt gaaaagctct tgcaaaaaag caagagggct   24060
ctctggacgg gcttcgacga gctcaccata gctcaagacc tagctgacat agtgttcccc   24120
cccaaattct tgcacacctt gcaagccggc ctgccagacc ttacatccca gagtctcctt   24180
cacaactttc gctccttcat tttcgaacgc tcgggcattc tacccgccat gtgcaatgca   24240
ctgcccaccg acttcatccc tatcagctac cgggagtgcc ctccaacttt ctgggcctac   24300
acctacctct ttaaactggc caattacctc atgtttcact ccgacatcgc ttacgatcgg   24360
agcggccccg gtctcatgga atgctactgt cgctgcaacc tgtgcagtcc tcaccgctgc   24420
ttggcgacca accccgccct gctcagcgag acccaagtta tcggtacctt cgagattcag   24480
ggccctcctg ctcaagacgg acagccgacc aaaccgcccc tcaggctgac tgcaggtctc   24540
tggacttccg cctacctgcg caaatttgta ccgcaagact tcaacgccca caaaatagcc   24600
ttctacgaag accaatccaa aaagccgaaa gtgaccccca gcgcttgtgt catcactgaa   24660
gaaaaagttt tagcccaatt gcatgaaatt aaaaaagcgc gggaagactt tcctcttaaa   24720
aaggggcacg gagtgtatct ggaccctcag accggcgagg agctgaacgg acccgcaccc   24780
tccgcagcta ggaatgaaac cccgcagcat gtcggcagcc gggccttccg cggctcaggc   24840
ttcggagggc caacagctgc cgccacagac agcggggctg cagccgagca agagggctgt   24900
gaggaaggta gtagcttctc tgaatcccac cgccgccctg gaagacatat ccgaggggga   24960
ggaaggcttc cccctgacgg acgaggaaga cggggacacc ctggagagcg atttcagcga   25020
cttcacggac gaagacgtcg aggaggagga tatgatttcg ataccccgcg accaggggca   25080
ctccggcgag ctcgaggagg gcgaaattcc cgcaacggta gcggcgacgg cggtcaagaa   25140
gggccagggc aagaagagta ggtgggacca gcaggtccgc tccacagcgc ctctaaaggg   25200
cgctagaggt aagaggagct acagctcctg gaaacccctc aagcccacta tcctttcatg   25260
cttactgcag agctccggca gcactgcctt cactcgccgc tatctgcttt ttcgccatgg   25320
cgtgtccgtt ccctccaggg taattcatta ctataattct tactgcagac ccgaagctga   25380
ccaaaaccgc cactcagagc aaaaagagcc gccggagtgc cagcgcggcg cgccctcgcc   25440
ctcctcctct tcctcccaag cgtgctcggg cgccccgccg ccccaaaggc cagcgccatc   25500
aggccgacga cgcaagcacc gagggccgcg acaagcttcg ggagctgatc tttcccactc   25560
tctatgccat attccaacaa agtcgcgctc agcggtgtca cctcaaagtg aaaaatagat   25620
ccttacgttc actgacgcgc agctgcctct accacaacaa ggaggaacag ctccagcgaa   25680
ccctagcaga ctccgaggcg cttctcagta aatactgctc tgcagctccg acacgattct   25740
cgccgccctc ttataccgag tctcccgcca aggacgaatc cggacccgcc taaactctca   25800
gcatgagcaa agaaattccc acaccttatg tttggacctt tcaacctcag atgggagcgg   25860
ccgcaggtgc cagtcaagat tactcgaccc gcatgaattg gttcagcgcg ggacctgata   25920
tgatccacga cgttaacaac attcgtgacg cccaaaaccg catccttatg actcagtcgg   25980
ccattaccgc cactcccagg aatctgattg atcccagaca gtgggccgcc cacctcatca   26040
aacaacccgt ggtgggcacc acccacgtgg aaatgcctcg caacgaagtc ctagaacaac   26100
atctgacctc acatggcgct caaatcgcgg gcggaggcgc tgcgggcgat tactttaaaa   26160
gccccacttc agctcgaacc cttatcccgc tcaccgcctc ctgcttaaga ccagatggag   26220
tctttcaact aggaggaggc tcgcgttcat ctttcaaccc cctgcaaaca gattttgcct   26280
tccacgccct gccctccaga ccgcgccacg ggggcatagg atccaggcag tttgtagagg   26340
aatttgtgcc cgccgtctac ctcaacccct actcgggacc gccggactct tatccggacc   26400
agtttatacg ccactacaac gtgtacagca actctgtgag cggttatagc tgagattgta   26460
agactctcct atctgtctct gtgctgcttt tccgcttcaa gccccacaag catgaagggg   26520
tttctgctca tcttcagcct gcttgtgcat tgtcccctaa ttcatgttgg gaccattagc   26580
ttctatgctg caaggcccgg gtctgagcct aacgcgactt atgtttgtga ctatggaagc   26640
gagtcagatt acaaccccac cacggttctg tggttggctc gagagaccga tggctcctgg   26700
atctctgttc ttttccgtca caacggctcc tcaactgcag cccccggggt cgtcgcgcac   26760
tttactgacc acaacagcag cattgtggtg ccccagtatt acctcctcaa caactcactc   26820
tctaagctct gctgctcata ccggcacaac gagcgttctc agtttacctg caaacaagct   26880
gacgtcccta cctgtcacga gcccggcaag ccgctcaccc tccgcgtctc ccccgcgctg   26940
ggaactgccc accaagcagt cacttggttt tttcaaaatg tacccatagc tactgtttac   27000
cgaccttggg gcaatgtaac ttggttttgt cctcccttca tgtgtacctt taatgtcagc   27060
ctgaactccc tacttattta caacttttct gacaaaaccg gggggcaata cacagctctc   27120
atgcactccg gacctgcttc cctctttcag ctctttaagc caacgacttg tgtcaccaag   27180
gtggaggacc cgccgtatgc caacgacccg gcctcgcctg tgtggcgccc actgcttttt   27240
gccttcgtcc tctgcaccgg ctgcgcggtg ttgttaaccg ccttcggtcc atcgattcta   27300
tccggtaccc gaaagcttat ctcagcccgc ttttggagtc ccgagcccta taccaccctc   27360
cactaacagt ccccccatgg agccagacgg agttcatgcc gagcagcagt ttatcctcaa   27420
tcagatttcc tgcgccaaca ctgccctcca gcgtcaaagg gaggaactag cttcccttgt   27480
catgttgcat gcctgtaagc gtggcctctt ttgtccagtc aaaacttaca agctcagcct   27540
caacgcctcg gccagcgagc acagcctgca ctttgaaaaa agtccctccc gattcaccct   27600
ggtcaacact cacgccggag cttctgtgcg agtggcccta caccaccagg gagcttccgg   27660
cagcatccgc tgttcctgtt cccacgccga gtgcctcccc gtcctcctca agaccctctg   27720
tgcctttaac tttttagatt agctgaaagc aaatataaaa tggtgtgctt accgtaattc   27780
tgttttgact tgtgtgcttg atttctcccc ctgcgccgta atccagtgcc cctcttcaaa   27840
actctcgtac cctatgcgat tcgcataggc atattttcta aaagctctga agtcaacatc   27900
actctcaaac acttctccgt tgtaggttac tttcatctac agataaagtc atccaccggt   27960
taacatcatg aagagaagtg tgccccagga ctttaatctt gtgtatccgt acaaggctaa   28020
gaggcccaac atcatgccgc ccttttttga ccgcaatggc tttgttgaaa accaagaagc   28080
cacgctagcc atgcttgtgg aaaagccgct cacgttcgac aaggaaggtg cgctgaccct   28140
gggcgtcgga cgcggcatcc gcattaaccc cgcggggctt ctggagacaa acgacctcgc   28200
gtccgctgtc ttcccaccgc tggcctccga tgaggccggc aacgtcacgc tcaacatgtc   28260
tgacgggcta tatactaagg acaacaagct agctgtcaaa gtaggtcccg ggctgtccct   28320
cgactccaat aatgctctcc aggtccacac aggcgacggg ctcacggtaa ccgatgacaa   28380
ggtgtctcta aatacccaag ctcccctctc gaccaccagc gcgggcctct ccctacttct   28440
gggtcccagc ctccacttag gtgaggagga acgactaaca gtaaacaccg gagcgggcct   28500
ccaaattagc aataacgctc tggccgtaaa agtaggttca ggtatcaccg tagatgctca   28560
aaaccagctc gctgcatccc tgggggacgg tctagaaagc agagataata aaactgtcgt   28620
taaggctggg cccggactta caataactaa tcaagctctt actgttgcta ccgggaacgg   28680
ccttcaggtc aacccggaag ggcaactgca gctaaacatt actgccggtc agggcctcaa   28740
ctttgcaaac aacagcctcg ccgtggagct gggctcgggc ctgcattttc cccctggcca   28800
aaaccaagta agcctttatc ccggagatgg aatagacatc cgagataata gggtgactgt   28860
gcccgctggg ccaggcctga gaatgctcaa ccaccaactt gccgtagctt ccggagacgg   28920
tttagaagtc cacagcgaca ccctccggtt aaagctctcc cacggcctga catttgaaaa   28980
tggcgccgta cgagcaaaac taggaccagg acttggcaca gacgactctg gtcggtccgt   29040
ggttcgcaca ggtcgaggac ttagagttgc aaacggccaa gtccagatct tcagcggaag   29100
aggcaccgcc atcggcactg atagcagcct cactctcaac atccgggcgc ccctacaatt   29160
ttctggaccc gccttgactg ctagtttgca aggcagtggt ccgattactt acaacagcaa   29220
caatggcact ttcggtctct ctataggccc cggaatgtgg gtagaccaaa acagacttca   29280
ggtaaaccca ggcgctggtt tagtcttcca aggaaacaac cttgtcccaa accttgcgga   29340
tccgctggct atttccgaca gcaaaattag tctcagtctc ggtcccggcc tgacccaagc   29400
ttccaacgcc ctgactttaa gtttaggaaa cgggcttgaa ttctccaatc aagccgttgc   29460
tataaaagcg ggccggggct tacgctttga gtcttcctca caagctttag agagcagcct   29520
cacagtcgga aatggcttaa cgcttaccga tactgtgatc cgccccaacc taggggacgg   29580
cctagaggtc agagacaata aaatcattgt taagctgggc gcgaatcttc gttttgaaaa   29640
cggagccgta accgccggca ccgttaaccc ttctgcgccc gaggcaccac caactctcac   29700
tgcagaacca cccctccgag cctccaactc ccatcttcaa ctgtccctat cggagggctt   29760
ggttgtgcat aacaacgccc ttgctctcca actgggagac ggcatggaag taaatcagca   29820
cggacttact ttaagagtag gctcgggttt gcaaatgcgt gacggcattt taacagttac   29880
acccagcggc actcctattg agcccagact gactgcccca ctgactcaga cagagaatgg   29940
aatcgggctc gctctcggcg ccggcttgga attagacgag agcgcgctcc aagtaaaagt   30000
tgggcccggc atgcgcctga accctgtaga aaagtatgta accctgctcc tgggtcctgg   30060
ccttagtttt gggcagccgg ccaacaggac aaattatgat gtgcgcgttt ctgtggagcc   30120
ccccatggtt ttcggacagc gtggtcagct cacattttta gtgggtcacg gactacacat   30180
tcaaaattcc aaacttcagc tcaatttggg acaaggcctc agaactgacc ccgtcaccaa   30240
ccagctggaa gtgcccctcg gtcaaggttt ggaaattgca gacgaatccc aggttagggt   30300
taaattgggc gatggcctgc agtttgattc acaagctcgc atcactaccg ctcctaacat   30360
ggtcactgaa actctgtgga ccggaacagg cagtaatgct aatgttacat ggcggggcta   30420
cactgccccc ggcagcaaac tctttttgag tctcactcgg ttcagcactg gtctagtttt   30480
aggaaacatg actattgaca gcaatgcatc ctttgggcaa tacattaacg cgggacacga   30540
acagatcgaa tgctttatat tgttggacaa tcagggtaac ctaaaagaag gatctaactt   30600
gcaaggcact tgggaagtga agaacaaccc ctctgcttcc aaagctgctt ttttgccttc   30660
caccgcccta taccccatcc tcaacgaaag ccgagggagt cttcctggaa aaaatcttgt   30720
gggcatgcaa gccatactgg gaggcggggg cacttgcact gtgatagcca ccctcaatgg   30780
cagacgcagc aacaactatc ccgcgggcca gtccataatt ttcgtgtggc aagaattcaa   30840
caccatagcc cgccaacctc tgaaccactc tacacttact ttttcttact ggacttaaat   30900
aagttggaaa taaagagtta aactgaatgt ttaagtgcaa cagactttta ttggttttgg   30960
ctcacaacaa attacaacag catagacaag tcataccggt caaacaacac aggctctcga   31020
aaacgggcta accgctccaa gaatctgtca cgcagacgag caagtcctaa atgttttttc   31080
actctcttcg gggccaagtt cagcatgtat cggattttct gcttacacct ttttagacag   31140
cagtttacac tcatttccgt taaaggatta caactgcggc atatgagaat taagtatata   31200
caactattgc cctttaccca caaacactcc ccccacgggg tgcacctgat gtagctgccc   31260
tcctcaatca tgaaagtgct attaaagtaa attaaatgaa cattattcac atacacgctt   31320
cccacatagg ccaaaaaaac agaggacaac tttgacagct cccgcctgaa ataccaatac   31380
actctatcaa actgcgcacc gtgcacgcac tgctttacca ggccttgaaa gtaaacagcg   31440
gcggaccgac actgcaagct tctaggcttt gggcagtggc agtgaatata tagccactcc   31500
tccccatgca cgtagtagga acgccgcttc ccgggaatca caaatgacaa gcagtagtca   31560
cagaggcaac tagtcaagtg agcgtcctcc tgaggcatga ttaccttcca tggaatgggc   31620
cagtgaatca tagtggcaaa gccagctgca tctggagcgc tgcgaacctt ggctacatgt   31680
ggtgattggc gacgcagatg gagacaggac cttgcattct gaagaccact gcaacagctt   31740
ctgcgtacgc ttgtatttac agtacataaa aaagcacttt tgccacagag cggtcttact   31800
caaccgacag cttttttctt tctgacgctg ccttctgcta ctcaggtagt acaagtccaa   31860
aagagccaaa cggacactca aatccgggtt atctcgatgc tgaagccaga gtccaaaagt   31920
aaccacgcta aaagcctgca tccatatttt gtaactgctg taactccatc ccagagccgg   31980
gcaccgcact tggtccacca tagctgcaaa caaacgggac aattaaggaa agtaaaatga   32040
gcgctggggg cggactcttc tcccgttcgt aggaaacagc cacgtatcaa acaccctttt   32100
caacactggc tctccagccg ctactcgttg aattaatttg tccctgtgct caaacaaccc   32160
acactggtaa cggtggtcgc taggcaaaca tgtcaaatag cacataatca tttccttcac   32220
tttaagcaaa catcgactag cagacacttc acttaattca gcacagtcat agcaaggaat   32280
gattatacac ttgtcatcta atccactgcc catgtacaca ttgccccagg caaaagtggg   32340
cagggacttt aagagctgat tgctcgcccc gacatagttg gtaaaataca gcaaatgcac   32400
cttgttaaca tacacactcc ccacatagta aatataccga gtagacagct tagaaagctc   32460
cctccgaaaa aatgggaaca tggtatcaaa ggcagtgccc gcaacacaca tcttgaacag   32520
atccatcagg atagtagctc gacacagccc ctgcagactt tggtcagctt gcttgctgca   32580
gcagtacact ctccacgtag catctccgct gatgaagtat tcgctatcgc agcgaccaaa   32640
aatacagcaa tcacaaggca gacgcaacag tctttcatcc agactgttca tgagaggctt   32700
tagaggtatg ggaaaaaatc caaagtgctc aaaataagca gcgctgggct cattctgaca   32760
ttcccccaac atgctgagtc gaaccatagc acagtcatac aaactcagct gtcggaattg   32820
atcttccatg attgagtttc tactgagata ttatctcaaa cttaaaactg ttgctcacca   32880
actctatgcg aacttgctca agaagctctt ggtttagggc gacctcttct ggtcgtcgga   32940
agttactgat ggaacaacaa gcgccgccca acttcaaatt tccagccgac ccaatccagt   33000
ggtctctcaa ctcacgcgca caagctacta tgcagtcctc actttcgtca aagtcagcag   33060
cgcctataga aatcaacaca ctgagtccac catcttcagc ttttaaggga taacagctga   33120
tagcaaactg gttctgagac cacggcaaag cacgtaggaa ttgctgttaa gttaatttcc   33180
aaacaccgct gaagcagctc tatggttgct ggacatatgt cctctgcata gaagctttga   33240
acataactta agacagggcc gggcacatga aacacaaaca gagaactata cacaatctgg   33300
gccatgatca ctcacattta aatagcagct gaaaagtggc tttcttcact tgggagcaaa   33360
attagcgaag actgtgccag aatgctcacg tcgaaaggcg gtgggtctcg cagaggcagg   33420
ttcggagctc taattaaaca caggtgggta atccagtcaa cgatgaggac cagctgaaaa   33480
gtggctttct tcacttggga gcaaaattag cgaagactgt gccagaatgc tcacgtcgaa   33540
aggcggtggg tctcgcagag gcaggttcgg agctctaatt aaacacaggt gggtaatcca   33600
gtcaacgatg aggactttta aaaaactgtc taaaactgaa gcagttaagt tagaggcaga   33660
cacagaaaaa actacagtta aactatcagt tgctgaaatt gaaaagcacc caataattat   33720
gcgcgagggc acaggcaata aaagtgttag cccctcggct aacgcgtcag ctaaaaaatc   33780
tttagctaaa gtatctactg gccgcgtggt aaaagtttga atataattta cgacaggagc   33840
tggcaagtga aactccacaa aaaaagtaaa tggctgcaca cacgccatta ttttgaaaat   33900
aagaagtact cacaaaatca gctggagctg ccgcaagtga aaaagaccag ctgaagtctt   33960
attttaaact gtaaaatata aaaaaaaaaa tagggcgtga acaaaaatga gaaaataata   34020
ccggatatga ctattaaggg cgtacactga aactgggtaa tatttgagaa aaagattaag   34080
ataatagctg aacaaatgtt gtgtgcagaa cacggaacaa tggtggcgaa aaaaaaaaac   34140
agtgtaagca catggcgcgc acgtacttcc gtgagaaaaa ttaaaaaaat ttacccagta   34200
taaggtgcgt cattagaccc gccttgtggc gcggttgtag ccctgccctt tgccccgccc   34260
cgcgcgccgc cccgcgcgcc gcccccgccg ccctcagccc cgcccagcgc cgccgcctcc   34320
gcgacgcgct ccgccccaca gttacgtcag cacgccacgc tcgccgtcgt tgcgtcataa   34380
atgacgtggc aaaaatgatt ggcagttgga ccgctgccat cagtgtactg tagattattg   34440
atgatg                                                              34446
<210> 2
<211> 4
<212> PRT
<213> Bovine adenovirus 600
<400> 2
Thr Leu Trp Thr
1
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> Bovine adenovirus 600
<400> 3
Thr Pro Ala Pro Ala Pro Asn Cys
1               5
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Bovine adenovirus 600
<400> 4
Ser Tyr Thr Phe Ser Tyr Ile Ala Gln Glu
1               5                  10
<210> 5
<211> 600
<212> PRT
<213> Human adenovirus 5
<400> 5
Met Ser Val Ser Ser Cys Ser Cys Pro Ser Ala Pro Thr Ile Phe Met
1               5                  10                  15
Leu Leu Gln Met Lys Arg Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Phe Asn Pro
20                  25                  30
Val Tyr Pro Tyr Asp Thr Glu Thr Gly Pro Pro Thr Val Pro Phe Leu
35                  40                  45
Thr Pro Pro Phe Val Ser Pro Asn Gly Phe Gln Glu Ser Pro Pro Gly
50                  55                  60
Val Leu Ser Leu Arg Leu Ser Glu Pro Leu Val Thr Ser Asn Gly Met
65                  70                  75                  80
Leu Ala Leu Lys Met Gly Asn Gly Leu Ser Leu Asp Glu Ala Gly Asn
85                  90                  95
Leu Thr Ser Gln Asn Val Thr Thr Val Ser Pro Pro Leu Lys Lys Thr
100                 105                 110
Lys Ser Asn Ile Asn Leu Glu Ile Ser Ala Pro Leu Thr Val Thr Ser
115                 120                 125
Glu Ala Leu Thr Val Ala Ala Ala Ala Pro Leu Met Val Ala Gly Asn
130                 135                 140
Thr Leu Thr Met Gln Ser Gln Ala Pro Leu Thr Val His Asp Ser Lys
145                 150                 155                 160
Leu Ser Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Thr Val Ser Glu Gly Lys Leu
165                 170                 175
Ala Leu Gln Thr Ser Gly Pro Leu Thr Thr Thr Asp Ser Ser Thr Leu
180                 185                 190
Thr Ile Thr Ala Ser Pro Pro Leu Thr Thr Ala Thr Gly Ser Leu Gly
195                 200                 205
Ile Asp Leu Lys Glu Pro Ile Tyr Thr Gln Asn Gly Lys Leu Gly Leu
210                 215                 220
Lys Tyr Gly Ala Pro Leu His Val Thr Asp Asp Leu Asn Thr Leu Thr
225                 230                 235                 240
Val Ala Thr Gly Pro Gly Val Thr Ile Asn Asn Thr Ser Leu Gln Thr
245                 250                 255
Lys Val Thr Gly Ala Leu Gly Phe Asp Ser Gln Gly Asn Met Gln Leu
260                 265                 270
Asn Val Ala Gly Gly Leu Arg Ile Asp Ser Gln Asn Arg Arg Leu Ile
275                 280                 285
Leu Asp Val Ser Tyr Pro Phe Asp Ala Gln Asn Gln Leu Asn Leu Arg
290                 295                 300
Leu Gly Gln Gly Pro Leu Phe Ile Asn Ser Ala His Asn Leu Asp Ile
305                 310                 315                 320
Asn Tyr Asn Lys Gly Leu Tyr Leu Phe Thr Ala Ser Asn Asn Ser Lys
325                 330                 335
Lys Leu Glu Val Asn Leu Ser Thr Ala Lys Gly Leu Met Phe Asp Ala
340                 345                 350
Thr Ala Ile Ala Ile Asn Ala Gly Asp Gly Leu Glu Phe Gly Ser Pro
355                 360                 365
Asn Ala Pro Asn Thr Asn Pro Leu Lys Thr Lys Ile Gly His Gly Leu
370                 375                 380
Glu Phe Asp Ser Asn Lys Ala Met Val Pro Lys Leu Gly Thr Gly Leu
385                 390                 395                 400
Ser Phe Asp Ser Thr Gly Ala Ile Thr Val Gly Asn Lys Asn Asn Asp
405                 410                 415
Lys Leu Thr Leu Trp Thr Thr Pro Ala Pro Ser Pro Asn Cys Arg Leu
420                 425                 430
Asn Ala Glu Lys Asp Ala Lys Leu Thr Leu Val Leu Thr Lys Cys Gly
435                 440                 445
Ser Gln Ile Leu Ala Thr Val Ser Val Leu Ala Val Lys Gly Ser Leu
450                 455                 460
Ala Pro Ile Ser Gly Thr Val Gln Ser Ala His Leu Ile Ile Arg Phe
465                 470                 475                 480
Asp Glu Asn Gly Val Leu Leu Asn Asn Ser Phe Leu Asp Pro Glu Tyr
485                 490                 495
Trp Asn Phe Arg Asn Gly Asp Leu Thr Glu Gly Thr Ala Tyr Thr Asn
500                 505                 510
Ala Val Gly Phe Met Pro Asn Leu Ser Ala Tyr Pro Lys Ser His Gly
515                 520                 525
Lys Thr Ala Lys Ser Asn Ile Val Ser Gln Val Tyr Leu Asn Gly Asp
530                 535                 540
Lys Thr Lys Pro Val Thr Leu Thr Ile Thr Leu Asn Gly Thr Gln Glu
545                 550                 555                 560
Thr Gly Asp Thr Thr Pro Ser Ala Tyr Ser Met Ser Phe Ser Trp Asp
565                 570                 575
Trp Ser Gly His Asn Tyr Ile Asn Glu Ile Phe Ala Thr Ser Ser Tyr
580                 585                 590
Thr Phe Ser Tyr Ile Ala Gln Glu
595                 600
<210> 6
<211> 976
<212> PRT
<213> Bovine adenovirus 3
<400> 6
Met Lys Arg Ser Val Pro Gln Asp Phe Asn Leu Val Tyr Pro Tyr Lys
1               5                  10                  15
Ala Lys Arg Pro Asn Ile Met Pro Pro Phe Phe Asp Arg Asn Gly Phe
20                  25                  30
Val Glu Asn Gln Glu Ala Thr Leu Ala Met Leu Val Glu Lys Pro Leu
35                  40                  45
Thr Phe Asp Lys Glu Gly Ala Leu Thr Leu Gly Val Gly Arg Gly Ile
50                  55                  60
Arg Ile Asn Pro Ala Gly Leu Leu Glu Thr Asn Asp Leu Ala Ser Ala
65                  70                  75                  80
Val Phe Pro Pro Leu Ala Ser Asp Glu Ala Gly Asn Val Thr Leu Asn
85                  90                  95
Met Ser Asp Gly Leu Tyr Thr Lys Asp Asn Lys Leu Ala Val Lys Val
100                 105                 110
Gly Pro Gly Leu Ser Leu Asp Ser Asn Asn Ala Leu Gln Val His Thr
115                 120                 125
Gly Asp Gly Leu Thr Val Thr Asp Asp Lys Val Ser Leu Asn Thr Gln
130                 135                 140
Ala Pro Leu Ser Thr Thr Ser Ala Gly Leu Ser Leu Leu Leu Gly Pro
145                 150                 155                 160
Ser Leu His Leu Gly Glu Glu Glu Arg Leu Thr Val Asn Thr Gly Ala
165                 170                 175
Gly Leu Gln Ile Ser Asn Asn Ala Leu Ala Val Lys Val Gly Ser Gly
180                 185                 190
Ile Thr Val Asp Ala Gln Asn Gln Leu Ala Ala Ser Leu Gly Asp Gly
195                 200                 205
Leu Glu Ser Arg Asp Asn Lys Thr Val Val Lys Ala Gly Pro Gly Leu
210                 215                 220
Thr Ile Thr Asn Gln Ala Leu Thr Val Ala Thr Gly Asn Gly Leu Gln
225                 230                 235                 240
Val Asn Pro Glu Gly Gln Leu Gln Leu Asn Ile Thr Ala Gly Gln Gly
245                 250                 255
Leu Asn Phe Ala Asn Asn Ser Leu Ala Val Glu Leu Gly Ser Gly Leu
260                 265                 270
His Phe Pro Pro Gly Gln Asn Gln Val Ser Leu Tyr Pro Gly Asp Gly
275                 280                 285
Ile Asp Ile Arg Asp Asn Arg Val Thr Val Pro Ala Gly Pro Gly Leu
290                 295                 300
Arg Met Leu Asn His Gln Leu Ala Val Ala Ser Gly Asp Gly Leu Glu
305                 310                 315                 320
Val His Ser Asp Thr Leu Arg Leu Lys Leu Ser His Gly Leu Thr Phe
325                 330                 335
Glu Asn Gly Ala Val Arg Ala Lys Leu Gly Pro Gly Leu Gly Thr Asp
340                 345                 350
Asp Ser Gly Arg Ser Val Val Arg Thr Gly Arg Gly Leu Arg Val Ala
355                 360                 365
Asn Gly Gln Val Gln Ile Phe Ser Gly Arg Gly Thr Ala Ile Gly Thr
370                 375                 380
Asp Ser Ser Leu Thr Leu Asn Ile Arg Ala Pro Leu Gln Phe Ser Gly
385                 390                 395                 400
Pro Ala Leu Thr Ala Ser Leu Gln Gly Ser Gly Pro Ile Thr Tyr Asn
405                 410                 415
Ser Asn Asn Gly Thr Phe Gly Leu Ser Ile Gly Pro Gly Met Trp Val
420                 425                 430
Asp Gln Asn Arg Leu Gln Val Asn Pro Gly Ala Gly Leu Val Phe Gln
435                 440                 445
Gly Asn Asn Leu Val Pro Asn Leu Ala Asp Pro Leu Ala Ile Ser Asp
450                 455                 460
Ser Lys Ile Ser Leu Ser Leu Gly Pro Gly Leu Thr Gln Ala Ser Asn
465                 470                 475                 480
Ala Leu Thr Leu Ser Leu Gly Asn Gly Leu Glu Phe Ser Asn Gln Ala
485                 490                 495
Val Ala Ile Lys Ala Gly Arg Gly Leu Arg Phe Glu Ser Ser Ser Gln
500                 505                 510
Ala Leu Glu Ser Ser Leu Thr Val Gly Asn Gly Leu Thr Leu Thr Asp
515                 520                 525
Thr Val Ile Arg Pro Asn Leu Gly Asp Gly Leu Glu Val Arg Asp Asn
530                 535                 540
Lys Ile Ile Val Lys Leu Gly Ala Asn Leu Arg Phe Glu Asn Gly Ala
545                 550                 555                 560
Val Thr Ala Gly Thr Val Asn Pro Ser Ala Pro Glu Ala Pro Pro Thr
565                 570                 575
Leu Thr Ala Glu Pro Pro Leu Arg Ala Ser Asn Ser His Leu Gln Leu
580                 585                 590
Ser Leu Ser Glu Gly Leu Val Val His Asn Asn Ala Leu Ala Leu Gln
595                 600                 605
Leu Gly Asp Gly Met Glu Val Asn Gln His Gly Leu Thr Leu Arg Val
610                 615                 620
Gly Ser Gly Leu Gln Met Arg Asp Gly Ile Leu Thr Val Thr Pro Ser
625                 630                 635                 640
Gly Thr Pro Ile Glu Pro Arg Leu Thr Ala Pro Leu Thr Gln Thr Glu
645                 650                 655
Asn Gly Ile Gly Leu Ala Leu Gly Ala Gly Leu Glu Leu Asp Glu Ser
660                 665                 670
Ala Leu Gln Val Lys Val Gly Pro Gly Met Arg Leu Asn Pro Val Glu
675                 680                 685
Lys Tyr Val Thr Leu Leu Leu Gly Pro Gly Leu Ser Phe Gly Gln Pro
690                 695                 700
Ala Asn Arg Thr Asn Tyr Asp Val Arg Val Ser Val Glu Pro Pro Met
705                 710                 715                 720
Val Phe Gly Gln Arg Gly Gln Leu Thr Phe Leu Val Gly His Gly Leu
725                 730                 735
His Ile Gln Asn Ser Lys Leu Gln Leu Asn Leu Gly Gln Gly Leu Arg
740                 745                 750
Thr Asp Pro Val Thr Asn Gln Leu Glu Val Pro Leu Gly Gln Gly Leu
755                 760                 765
Glu Ile Ala Asp Glu Ser Gln Val Arg Val Lys Leu Gly Asp Gly Leu
770                 775                 780
Gln Phe Asp Ser Gln Ala Arg Ile Thr Thr Ala Pro Asn Met Val Thr
785                 790                 795                 800
Glu Thr Leu Trp Thr Gly Thr Gly Ser Asn Ala Asn Val Thr Trp Arg
805                 810                 815
Gly Tyr Thr Ala Pro Gly Ser Lys Leu Phe Leu Ser Leu Thr Arg Phe
820                 825                 830
Ser Thr Gly Leu Val Leu Gly Asn Met Thr Ile Asp Ser Asn Ala Ser
835                 840                 845
Phe Gly Gln Tyr Ile Asn Ala Gly His Glu Gln Ile Glu Cys Phe Ile
850                 855                 860
Leu Leu Asp Asn Gln Gly Asn Leu Lys Glu Gly Ser Asn Leu Gln Gly
865                 870                 875                 880
Thr Trp Glu Val Lys Asn Asn Pro Ser Ala Ser Lys Ala Ala Phe Leu
885                 890                 895
Pro Ser Thr Ala Leu Tyr Pro Ile Leu Asn Glu Ser Arg Gly Ser Leu
900                 905                 910
Pro Gly Lys Asn Leu Val Gly Met Gln Ala Ile Leu Gly Gly Gly Gly
915                 920                 925
Thr Cys Thr Val Ile Ala Thr Leu Asn Gly Arg Arg Ser Asn Asn Tyr
930                 935                 940
Pro Ala Gly Gln Ser Ile Ile Phe Val Trp Gln Glu Phe Asn Thr Ile
945                 950                 955                 960
Ala Arg Gln Pro Leu Asn His Ser Thr Leu Thr Phe Ser Tyr Trp Thr
965                 970                 975
<210> 7
<211> 543
<212> PRT
<213> Ovine adenovirus 287
<400> 7
Met Lys Arg Ala Arg Trp Asp Pro Val Tyr Pro Phe Ser Glu Glu Arg
1               5                  10                  15
Leu Val Pro Leu Pro Pro Phe Ile Glu Ala Gly Lys Gly Leu Lys Ser
20                  25                  30
Glu Gly Leu Ile Leu Ser Leu Asn Phe Thr Asp Pro Ile Thr Ile Asn
35                  40                  45
Gln Thr Gly Phe Leu Thr Val Lys Leu Gly Asp Gly Ile Phe Ile Asn
50                  55                  60
Gly Glu Gly Gly Leu Ser Ser Thr Ala Pro Lys Val Lys Val Pro Leu
65                  70                  75                  80
Thr Val Ser Asp Glu Thr Leu Gln Leu Leu Leu Ser Asn Ser Leu Thr
85                  90                  95
Thr Glu Ser Asp Ser Leu Ala Leu Lys Gln Pro Gln Leu Pro Leu Lys
100                 105                 110
Ile Asn Asp Glu Gly Ser Leu Val Leu Asn Leu Asn Thr Pro Leu Asn
115                 120                 125
Leu Gln Asn Glu Arg Leu Ser Leu Asn Val Ser Asn Pro Leu Lys Ile
130                 135                 140
Ala Ala Asp Ser Leu Thr Ile Asn Leu Lys Glu Pro Leu Gly Leu Gln
145                 150                 155                 160
Asn Glu Ser Leu Gly Leu Asn Leu Ser Asp Pro Met Asn Ile Thr Pro
165                 170                 175
Glu Gly Asn Leu Gly Ile Lys Leu Lys Asn Pro Met Lys Val Glu Glu
180                 185                 190
Ser Ser Leu Ala Leu Asn Tyr Lys Asn Pro Leu Ala Ile Ser Asn Asp
195                 200                 205
Ala Leu Ser Ile Asn Ile Ala Asn Pro Leu Thr Val Asn Thr Ser Gly
210                 215                 220
Ser Leu Gly Ile Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Arg Ile Ser Asn Asn Ala
225                 230                 235                 240
Leu Ser Leu Phe Ile Gly Lys Pro Leu Gly Leu Gly Thr Asp Gly Ser
245                 250                 255
Leu Thr Val Asn Leu Thr Arg Pro Leu Val Cys Arg Gln Asn Thr Leu
260                 265                 270
Ala Ile Asn Tyr Ser Ala Pro Leu Val Ser Leu Gln Asp Asn Leu Thr
275                 280                 285
Leu Ser Tyr Ala Gln Pro Leu Thr Val Ser Asp Asn Ser Leu Arg Leu
290                 295                 300
Ser Leu Asn Ser Pro Leu Asn Thr Asn Ser Asp Gly Lys Leu Ser Val
305                 310                 315                 320
Asn Tyr Ser Asn Pro Leu Val Val Thr Asp Ser Asn Leu Thr Leu Ser
325                 330                 335
Val Lys Lys Pro Val Met Ile Asn Asn Thr Gly Asn Val Asp Leu Ser
340                 345                 350
Phe Thr Ala Pro Ile Lys Leu Asn Asp Ala Glu Gln Leu Thr Leu Glu
355                 360                 365
Thr Thr Glu Pro Leu Glu Val Ala Asp Asn Ala Leu Lys Leu Lys Leu
370                 375                 380
Gly Lys Gly Leu Thr Val Ser Asn Asn Ala Leu Thr Leu Asn Leu Gly
385                 390                 395                 400
Asn Gly Leu Thr Phe Gln Gln Gly Leu Leu Gln Ile Lys Thr Asn Ser
405                 410                 415
Ser Leu Gly Phe Asn Ala Ser Gly Glu Leu Ser Thr Ala Thr Lys Gln
420                 425                 430
Gly Thr Ile Thr Val Asn Phe Leu Ser Thr Thr Pro Ile Ala Phe Gly
435                 440                 445
Trp Gln Ile Ile Pro Thr Thr Val Ala Phe Ile Tyr Ile Leu Ser Gly
450                 455                 460
Thr Gln Phe Thr Pro Gln Ser Pro Val Thr Ser Leu Gly Phe Gln Pro
465                 470                 475                 480
Pro Gln Asp Phe Leu Asp Phe Phe Val Leu Ser Pro Phe Val Thr Ser
485                 490                 495
Val Thr Gln Ile Val Gly Asn Asp Val Lys Val Ile Gly Leu Thr Ile
500                 505                 510
Ser Lys Asn Gln Ser Thr Ile Thr Met Lys Phe Thr Ser Pro Leu Ala
515                 520                 525
Glu Asn Val Pro Val Ser Met Phe Thr Ala His Gln Phe Arg Gln
530                 535                 540
<210> 8
<211> 448
<212> PRT
<213> Porcine adenovirus 3
<400> 8
Met Gly Pro Lys Lys Gln Lys Arg Glu Leu Pro Glu Asp Phe Asp Pro
1               5                  10                  15
Val Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Gln Leu Gln Ile Asn Pro Pro Phe Val
20                  25                  30
Ser Gly Asp Gly Phe Asn Gln Ser Val Asp Gly Val Leu Ser Leu His
35                  40                  45
Ile Ala Pro Pro Leu Val Phe Asp Asn Thr Arg Ala Leu Thr Leu Ala
50                  55                  60
Phe Gly Gly Gly Leu Gln Leu Ser Gly Lys Gln Leu Val Val Ala Thr
65                  70                  75                  80
Glu Gly Ser Gly Leu Thr Thr Asn Pro Asp Gly Lys Leu Val Leu Lys
85                  90                  95
Val Lys Ser Pro Ile Thr Leu Thr Ala Glu Gly Ile Ser Leu Ser Leu
100                 105                 110
Gly Pro Gly Leu Ser Asn Ser Glu Thr Gly Leu Ser Leu Gln Val Thr
115                 120                 125
Ala Pro Leu Gln Phe Gln Gly Asn Ala Leu Thr Leu Pro Leu Ala Ala
130                 135                 140
Gly Leu Gln Asn Thr Asp Gly Gly Met Gly Val Lys Leu Gly Ser Gly
145                 150                 155                 160
Leu Thr Thr Asp Asn Ser Gln Ala Val Thr Val Gln Val Gly Asn Gly
165                 170                 175
Leu Gln Leu Asn Gly Glu Gly Gln Leu Thr Val Pro Ala Thr Ala Pro
180                 185                 190
Leu Val Ser Gly Ser Ala Gly Ile Ser Phe Asn Tyr Ser Ser Asn Asp
195                 200                 205
Phe Val Leu Asp Asn Asp Ser Leu Ser Leu Arg Pro Lys Ala Ile Ser
210                 215                 220
Val Thr Pro Pro Leu Gln Ser Thr Glu Asp Thr Ile Ser Leu Asn Tyr
225                 230                 235                 240
Ser Asn Asp Phe Ser Val Asp Asn Gly Ala Leu Thr Leu Ala Pro Thr
245                 250                 255
Phe Lys Pro Tyr Thr Leu Trp Thr Gly Ala Ser Pro Thr Ala Asn Val
260                 265                 270
Ile Leu Thr Asn Thr Thr Thr Pro Asn Gly Thr Phe Phe Leu Cys Leu
275                 280                 285
Thr Arg Val Gly Gly Leu Val Leu Gly Ser Phe Ala Leu Lys Ser Ser
290                 295                 300
Ile Asp Leu Thr Ser Met Thr Lys Lys Val Asn Phe Ile Phe Asp Gly
305                 310                 315                 320
Ala Gly Arg Leu Gln Ser Asp Ser Thr Tyr Lys Gly Arg Phe Gly Phe
325                 330                 335
Arg Ser Asn Asp Ser Val Ile Glu Pro Thr Ala Ala Gly Leu Ser Pro
340                 345                 350
Ala Trp Leu Met Pro Ser Thr Phe Ile Tyr Pro Arg Asn Thr Ser Gly
355                 360                 365
Ser Ser Leu Thr Ser Phe Val Tyr Ile Asn Gln Thr Tyr Val His Val
370                 375                 380
Asp Ile Lys Val Asn Thr Leu Ser Thr Asn Gly Tyr Ser Leu Glu Phe
385                 390                 395                 400
Asn Phe Gln Asn Met Ser Phe Ser Ala Pro Phe Ser Thr Ser Tyr Gly
405                 410                 415
Thr Phe Cys Tyr Val Pro Arg Arg Thr Thr His Arg Pro Arg His Gly
420                 425                 430
Pro Phe Ser Leu Arg Glu Arg Arg His Leu Phe Gln Leu Leu Gln Gln
435                 440                 445
<210> 9
<211> 542
<212> PRT
<213> Canine adenovirus 2
<400> 9
Met Lys Arg Thr Arg Arg Ala Leu Pro Ala Asn Tyr Asp Pro Val Tyr
1               5                  10                  15
Pro Tyr Asp Ala Pro Gly Ser Ser Thr Gln Pro Pro Phe Phe Asn Asn
20                  25                  30
Lys Gln Gly Leu Thr Glu Ser Pro Pro Gly Thr Leu Ala Val Asn Val
35                  40                  45
Ser Pro Pro Leu Thr Phe Ser Thr Leu Gly Ala Ile Lys Leu Ser Thr
50                  55                  60
Gly Pro Gly Leu Thr Leu Asn Glu Gly Lys Leu Gln Ala Ser Leu Gly
65                  70                  75                  80
Pro Gly Leu Ile Thr Asn Thr Glu Gly Gln Ile Thr Val Glu Asn Val
85                  90                  95
Asn Lys Val Leu Ser Phe Thr Ser Pro Leu His Lys Asn Glu Asn Thr
100                 105                 110
Val Ser Leu Ala Leu Gly Asp Gly Leu Glu Asp Glu Asn Gly Thr Leu
115                 120                 125
Lys Val Thr Phe Pro Thr Pro Pro Pro Pro Leu Gln Phe Ser Pro Pro
130                 135                 140
Leu Thr Lys Thr Gly Gly Thr Val Ser Leu Pro Leu Gln Asp Ser Met
145                 150                 155                 160
Gln Val Thr Asn Gly Lys Leu Gly Val Lys Pro Thr Thr Tyr Ala Pro
165                 170                 175
Pro Leu Lys Lys Thr Asp Gln Gln Val Ser Leu Gln Val Gly Ser Gly
180                 185                 190
Leu Thr Val Ile Asn Glu Gln Leu Gln Ala Val Gln Pro Pro Ala Thr
195                 200                 205
Thr Tyr Asn Glu Pro Leu Ser Lys Thr Asp Asn Ser Val Ser Leu Gln
210                 215                 220
Val Gly Ala Gly Leu Ala Val Gln Ser Gly Ala Leu Val Ala Thr Pro
225                 230                 235                 240
Pro Pro Pro Leu Thr Phe Thr Ser Pro Leu Glu Lys Asn Glu Asn Thr
245                 250                 255
Val Ser Leu Gln Val Gly Ala Gly Leu Ser Val Gln Asn Asn Ala Leu
260                 265                 270
Val Ala Thr Pro Pro Pro Pro Leu Thr Phe Ala Tyr Pro Leu Val Lys
275                 280                 285
Asn Asp Asn His Val Ala Leu Ser Ala Gly Ser Gly Leu Arg Ile Ser
290                 295                 300
Gly Gly Ser Leu Thr Val Ala Thr Gly Pro Gly Leu Ser His Gln Asn
305                 310                 315                 320
Gly Thr Ile Gly Ala Val Val Gly Ala Gly Leu Lys Phe Glu Asn Asn
325                 330                 335
Ala Ile Leu Ala Lys Leu Gly Asn Gly Leu Thr Ile Arg Asp Gly Ala
340                 345                 350
Ile Glu Ala Thr Gln Pro Pro Ala Ala Pro Ile Thr Leu Trp Thr Gly
355                 360                 365
Pro Gly Pro Ser Ile Asn Gly Phe Ile Asn Asp Thr Pro Val Ile Arg
370                 375                 380
Cys Phe Ile Cys Leu Thr Arg Asp Ser Asn Leu Val Thr Val Asn Ala
385                 390                 395                 400
Ser Phe Val Gly Glu Gly Gly Tyr Arg Ile Val Ser Pro Thr Gln Ser
405                 410                 415
Gln Phe Ser Leu Ile Met Glu Phe Asp Gln Phe Gly Gln Leu Met Ser
420                 425                 430
Thr Gly Asn Ile Asn Ser Thr Thr Thr Trp Gly Glu Lys Pro Trp Gly
435                 440                 445
Asn Asn Thr Val Gln Pro Arg Pro Ser His Thr Trp Lys Leu Cys Met
450                 455                 460
Pro Asn Arg Glu Val Tyr Ser Thr Pro Ala Ala Thr Ile Ser Arg Cys
465                 470                 475                 480
Gly Leu Asp Ser Ile Ala Val Asp Gly Ala Pro Ser Arg Ser Ile Asp
485                 490                 495
Cys Met Leu Ile Ile Asn Lys Pro Lys Gly Val Ala Thr Tyr Thr Leu
500                 505                 510
Thr Phe Arg Phe Leu Asn Phe Asn Arg Leu Ser Gly Gly Thr Leu Phe
515                 520                 525
Lys Thr Asp Val Leu Thr Phe Thr Tyr Val Gly Glu Asn Gln
530                 535                 540
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１Ａ〜１Ｓは、ＢＡＶ３ゲノムの完全ヌクレオチド配列（配列番号１）を示す。ＢＡＶ３についてのポリヌクレオチド配列において、ペントン領域は、１２９１９で開始し、そして１４３６７で終了する：ヘキソン領域は、１７８０９で開始し、そして２０５１７で終了する；ファイバー領域は、２７９６８で開始し、そして３０８９８で終了する。ファイバー領域のノブドメインは、図４に示されるように、４残基（ＴＬＷＴ（配列番号２））後に開始する。
【図２】
図２は、ｍＲＮＡの転写マッピングおよびｃＤＮＡクローンの配列決定による、ＢＡＶ３ゲノムの転写マップを示す。
【図３】
図３は、ＨＡＶ−５ファイバーノブタンパク質を発現するＢＡＶ６００の構築物を示す。
【図４】
図４は、ＢＡＶ６００の特徴付け（配列番号２〜４）を示す。
【図５】
図５Ａ〜５Ｂは、制限酵素Ｂｇｌ  ＩＩ消化によるＢＡＶ６００の分析を示す。図５Ａは、ゲル電気泳動を示し、そして図５Ｂは、サザンブロットを示す。
【図６】
図６は、ＢＡＶ６００によるＨＡＶ−５ファイバーノブの発現を示す。
【図７】
図７Ａ〜７Ｂは、ＢＡＶ６００によるヒト細胞株の形質導入を示す。図７Ａは、１のＭＯＩでの結果を示し、一方、図７Ｂは、５のＭＯＩでの結果を示す。
【図８】
図８は、ヒト細胞のＢＡＶ３０４形質導入およびＢＡＶ６００形質導入のＦＡＣＳ分析を示す。
【図９】
図９は、ヒト細胞株（ＨｅＬａ細胞、ＨＥｐ−２細胞、Ａ５４９細胞、２９３細胞およびＭＤＢＫ細胞）における初期ＢＡＶ−３タンパク質および後期ＢＡＶ−３タンパク質の発現を示す。
【図１０】
図１０は、ヒト細胞におけるＢＡＶ３複製を示す。
【図１１】
図１１は、ＨＡＶ−５ファイバーノブ領域に対して特異的なモノクローナル抗体によるＢＡＶ６００の中和を示す。
【図１２】
図１２は、ヒトアデノウイルス５（ＨＡＶ−４）ファイバータンパク質についてのアミノ酸配列（配列番号５）を示す。
【図１３】
図１３は、ウシアデノウイルス−３（ＢＡＶ−３）ファイバータンパク質についてのアミノ酸配列（配列番号６）を示す。
【図１４】
図１４は、ヒツジアデノウイルス２８７ファイバータンパク質のアミノ酸配列（配列番号７）を示す。
【図１５】
図１５は、ブタアデノウイルス−３（ＰＡＶ−３）ファイバータンパク質のアミノ酸配列（配列番号８）を示す。
【図１６】
図１６は、イヌアデノウイルス−２（ＣＡＶ−２）ファイバータンパク質のアミノ酸配列（配列番号９）を示す。
【図１７】
図１７Ａ〜１７Ｇは、多重整列プログラムのｃｌｕｓｔａｌ方法を用いた、種々の哺乳動物アデノウイルスファイバー領域のアミノ酸整列（配列番号５〜９）を示す。