【手続補正書】
【提出日】令和1年8月30日(2019.8.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における雌化活性に関する標的化合物のスクリーニング方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の第１集団及び第２集団を、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに好適な基本培地及び添加物を含む培地中で培養し、前記第１集団が、標的化合物の存在下で培養され、前記第２集団が、前記標的化合物の不存在下で培養されることと、
（ｂ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記第１及び第２集団の各々で前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞のうち１種以上をアッセイし、それによって雌化活性が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞におけるＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性の減少によって同定されることと、
とを含む、前記方法。
【請求項２】
（ｃ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に基づいて、Ｆ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成するために、前記第１集団からドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を選択し、前記Ｆ０世代における前記繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物の比率が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に逆相関すること、をさらに含む、請求項１に記載の方法であって、必要に応じて、前記方法は、
（ｄ）前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を宿主胚に導入すること、および必要に応じて、前記宿主胚を胚盤胞期まで培養することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の前記宿主胚をレシピエント雌非ヒト哺乳動物に導入して、前記宿主胚を懐胎させることと、
（ｆ）表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を含むＦ０  ＸＹ非ヒト哺乳動物子孫を得て、性成熟に達すると、前記Ｆ０の表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物が繁殖可能かつ妊孕可能になること
とを含む、前記方法。
【請求項３】
前記標的化合物の不存在下で、ステップ（ａ）の前記培地が、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに十分であるが、繁殖可能な雌子孫を生じる前記細胞の能力を変化させない、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記雌化活性が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの前記発現及び／または活性の減少によってステップ（ｂ）で同定される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、ｍＲＮＡレベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現が検出され、必要に応じて、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のｍＲＮＡ発現が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のｍＲＮＡ発現より少なくとも９０％低い場合に、雌化活性が同定される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記雌化活性が、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性の欠如によってステップ（ｂ）で同定され、必要に応じて、前記雌化活性が、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性の欠如によってステップ（ｂ）で同定される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
雌化培地における標的化合物の前記濃度の最適化方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の第１集団及び第２集団を、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに好適な基本培地及び添加物を含む培地中で培養し、
前記第１集団が、第１濃度の前記標的化合物の存在下で培養され、前記第２集団が、前記第１濃度とは異なる第２濃度の前記標的化合物の存在下で培養されることと、
（ｂ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記第１及び第２集団の各々で前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞のうち１種以上をアッセイすることと、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞で減少する場合に、前記第１濃度を選択すること、
とを含む、前記方法。
【請求項８】
（ｃ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に基づいて、Ｆ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成するために、前記第１集団からドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を選択し、前記Ｆ０世代における前記繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物の前記比率が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に逆相関すること、をさらに含む、請求項７に記載の方法であって、必要に応じて、前記方法は、
（ｄ）前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を宿主胚に導入すること、および必要に応じて、前記宿主胚を胚盤胞期まで培養することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の前記宿主胚をレシピエント雌非ヒト哺乳動物に導入して、前記宿主胚を懐胎させることと、
（ｆ）表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を含むＦ０  ＸＹ非ヒト哺乳動物子孫を得て、
性成熟に達すると、前記Ｆ０の表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物が繁殖可能かつ妊孕可能になること
とを含む、前記方法。
【請求項９】
前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有する場合に、前記第１濃度がステップ（ｂ）で選択される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、ｍＲＮＡレベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現が検出され、必要に応じて、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のｍＲＮＡ発現が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のｍＲＮＡ発現より少なくとも９０％低い場合に、前記第１の濃度が選択される、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性を欠いている場合に、前記第１濃度がステップ（ｂ）で選択され、必要に応じて、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性を欠いている場合に、前記第１濃度がステップ（ｂ）で選択される、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１集団が、アッセイステップ（ｂ）の前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記標的化合物の存在下で培養される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
（Ｉ）ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞、すなわち、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに十分であるが、繁殖可能な雌子孫を生じる前記細胞の能力を変化させない培地中で培養された前記細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有し、必要に応じて、ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有するか、または
（ＩＩ）ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記第２集団からの対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有し、必要に応じて、ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有する、請求項２〜６および８〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１集団及び前記第２集団が、同じ細胞株または同じクローンに由来するか、または同じ遺伝子型を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の作製方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の集団を、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに好適な基本培地及び添加物を含む低オスモル濃度培地中で培養し、前記低オスモル濃度培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有することと、
（ｂ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記集団において前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞のうち１種以上をアッセイすることと、
（ｃ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に基づいて、Ｆ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成するためにドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を選択し、前記Ｆ０世代における前記繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物の前記比率が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に逆相関すること
とを含む、前記方法。
【請求項１６】
（ｄ）前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を宿主胚に導入すること、および必要に応じて、前記宿主胚を胚盤胞期まで培養することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の前記宿主胚をレシピエント雌非ヒト哺乳動物に導入して、前記宿主胚を懐胎させることと、
（ｆ）表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を含むＦ０  ＸＹ非ヒト哺乳動物子孫を得て、
性成熟に達すると、前記Ｆ０の表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物が繁殖可能かつ妊孕可能になること
とをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、アッセイステップ（ｂ）の前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記低オスモル濃度培地中で培養される、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞、すなわち、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに十分であるが、繁殖可能な雌子孫を生じる前記細胞の能力を変化させない培地中で培養された前記細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有し、必要に応じて、ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有する、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、ｍＲＮＡレベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現が検出され、必要に応じて、前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のｍＲＮＡ発現が、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のｍＲＮＡ発現より少なくとも９０％低い場合に、前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞がステップ（ｃ）で選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（ａ）の前記培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有する低オスモル濃度培地である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記低オスモル濃度培地が、以下の特性：
（Ｉ）前記低オスモル濃度培地が、約２１８ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、約１１ｍＳ／ｃｍ〜約１３ｍＳ／ｃｍの伝導度を有すること、
（ＩＶ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（Ｖ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩ）前記基本培地が、炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩ）前記基本培地が、重炭酸ナトリウムを約１３ｍＭ〜約２５ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩＩ）前記基本培地が、約８５ｍＭ〜約１３０ｍＭのアルカリ金属ハロゲン化物塩及び炭酸塩の総濃度を有すること、
（ＩＸ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを８７±５ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、２６１±２６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（Ｘ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で、及び炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＸＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有し、前記基本培地が、塩化ナトリウムを５０ｍＭ〜１１０ｍＭの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを１３ｍＭ〜２５ｍＭの濃度で含むこと、
（ＸＩＩ）前記基本培地が、炭酸塩を約１８ｍＭ〜約４４ｍＭの濃度で含むこと、
（ＸＩＩＩ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＸＩＶ）前記炭酸塩が重炭酸ナトリウムであり、前記アルカリ金属及び前記ハロゲン化物の前記塩が塩化ナトリウムであり、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、ならびに
（ＸＶ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを約３ｍｇ／ｍＬの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを約２．２ｍｇ／ｍＬの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること
のうち１つ以上を有する、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、タンパク質レベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現が検出される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ｂ）が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、前記第１集団における少なくとも２種の前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞をアッセイすることを含み、ステップ（ｃ）が、前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞として、他方のアッセイした細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の最も低い発現及び／または活性を有するステップ（ｂ）の前記アッセイした細胞を選択することを含む、請求項２〜６および８〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性を欠いており、必要に応じて、ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性を欠いている、請求項２〜６および８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、胚性幹（ＥＳ）細胞であり、必要に応じて、前記ＥＳ細胞が、ＶＧＦ１マウスＥＳ細胞である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記非ヒト哺乳動物が、げっ歯類であり、必要に応じて、前記げっ歯類がラットまたはマウスであり、必要に応じて、前記げっ歯類がＣ５７ＢＬ／６系統を含むマウスであり、必要に応じて、前記Ｙ染色体が、Ｃ５７ＢＬ／６系統、１２９系統、またはＢＡＬＢ／ｃ系統からのものであり、必要に応じて、前記げっ歯類が、Ｃ５７ＢＬ／６系統及び１２９系統を含むマウスである、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、標的ゲノム遺伝子座に標的遺伝子改変を含み、必要に応じて、前記標的遺伝子改変が、挿入、欠失、ノックアウト、ノックイン、点変異、またはこれらの組合せを含む、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
本発明は、以下を含むキットもまた提供する：（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞においてＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性レベルを検出するための検出試薬、ならびに（ｂ）検出試薬を使用して、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞がＦ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成する予測傾向と検出を相互に関連付けるための説明書。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における雌化活性に関する標的化合物のスクリーニング方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の第１集団及び第２集団を、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに好適な基本培地及び添加物を含む培地中で培養し、前記第１集団が、標的化合物の存在下で培養され、前記第２集団が、前記標的化合物の不存在下で培養されることと、
（ｂ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記第１及び第２集団の各々で前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞のうち１種以上をアッセイし、それによって雌化活性が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞におけるＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性の減少によって同定されることと、
（ｃ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に基づいて、Ｆ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成するために、前記第１集団からドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を選択し、前記Ｆ０世代における前記繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物の比率が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に逆相関することと、
（ｄ）前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を宿主胚に導入することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の前記宿主胚をレシピエント雌非ヒト哺乳動物に導入して、前記宿主胚を懐胎させることと、
（ｆ）表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を含むＦ０  ＸＹ非ヒト哺乳動物子孫を得て、性成熟に達すると、前記Ｆ０の表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物が繁殖可能かつ妊孕可能になること
とを含む、前記方法。
（項目２）
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、ｍＲＮＡレベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現が検出される、項目１に記載の方法。
（項目３）
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、タンパク質レベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現が検出される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記雌化活性が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの前記発現及び／または活性の減少によってステップ（ｂ）で同定される、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
前記雌化活性が、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性の欠如によってステップ（ｂ）で同定される、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記雌化活性が、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞における、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性の欠如によってステップ（ｂ）で同定される、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞、すなわち、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに十分であるが、繁殖可能な雌子孫を生じる前記細胞の能力を変化させない培地中で培養された前記細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する、項目１〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記第２集団からの対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する、項目１〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有する、項目７または８に記載の方法。
（項目１０）
ステップ（ｂ）が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、前記第１集団における少なくとも２種の前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞をアッセイすることを含み、ステップ（ｃ）が、前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞として、他方のアッセイした細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の最も低い発現及び／または活性を有するステップ（ｂ）の前記アッセイした細胞を選択することを含む、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性を欠いている、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
ステップ（ｃ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性を欠いている、項目１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記第１集団が、アッセイステップ（ｂ）の前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記標的化合物の存在下で培養される、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記多能性細胞が、胚性幹（ＥＳ）細胞である、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記多能性細胞が、ＶＧＦ１マウスＥＳ細胞である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記標的化合物の不存在下で、ステップ（ａ）の前記培地が、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに十分であるが、繁殖可能な雌子孫を生じる前記細胞の能力を変化させない、項目１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記標的化合物の不存在下で、ステップ（ａ）の前記培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有する低オスモル濃度培地である、項目１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記低オスモル濃度培地が、以下の特性：
（Ｉ）前記低オスモル濃度培地が、約２１８ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、約１１ｍＳ／ｃｍ〜約１３ｍＳ／ｃｍの伝導度を有すること、
（ＩＶ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（Ｖ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩ）前記基本培地が、炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩ）前記基本培地が、重炭酸ナトリウムを約１３ｍＭ〜約２５ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩＩ）前記基本培地が、約８５ｍＭ〜約１３０ｍＭのアルカリ金属ハロゲン化物塩及び炭酸塩の総濃度を有すること、
（ＩＸ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを８７±５ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、２６１±２６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（Ｘ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で、及び炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、ならびに
（ＸＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有し、前記基本培地が、塩化ナトリウムを５０ｍＭ〜１１０ｍＭの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを１３ｍＭ〜２５ｍＭの濃度で含むこと
のうち１つ以上を有する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記基本培地が、炭酸塩を約１８ｍＭ〜約４４ｍＭの濃度で含む、項目１７または１８に記載の方法。
（項目２０）
前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含む、項目１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記炭酸塩が重炭酸ナトリウムであり、前記アルカリ金属及び前記ハロゲン化物の前記塩が塩化ナトリウムであり、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、項目１７〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記基本培地が、塩化ナトリウムを約３ｍｇ／ｍＬの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを約２．２ｍｇ／ｍＬの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、項目１７〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記非ヒト哺乳動物が、げっ歯類である、項目１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記げっ歯類がラットまたはマウスである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記げっ歯類がＣ５７ＢＬ／６系統を含むマウスである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記Ｙ染色体が、Ｃ５７ＢＬ／６系統、１２９系統、またはＢＡＬＢ／ｃ系統からのものである、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記げっ歯類が、Ｃ５７ＢＬ／６系統及び１２９系統を含むマウスである、項目２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記宿主胚が前桑実期胚であり、ステップ（ｄ）が、前記宿主胚を胚盤胞期まで培養することをさらに含む、項目１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記宿主胚への導入前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記標的化合物の存在下で培養される、項目１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の作製方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の集団を、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに好適な基本培地及び添加物を含む低オスモル濃度培地中で培養し、前記低オスモル濃度培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有することと、
（ｂ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記集団において前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞のうち１種以上をアッセイすることと、
（ｃ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に基づいて、Ｆ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成するためにドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を選択し、前記Ｆ０世代における前記繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物の前記比率が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に逆相関すること
とを含む、前記方法。
（項目３１）
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、前記ｍＲＮＡレベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現が検出される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、前記タンパク質レベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現が検出される、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞、すなわち、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに十分であるが、繁殖可能な雌子孫を生じる前記細胞の能力を変化させない培地中で培養された前記細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性に基づいて選択される、項目３０〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有する、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
ステップ（ｂ）が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記集団における少なくとも２種の前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞をアッセイすることを含み、ステップ（ｃ）が、前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞として、他方のアッセイした細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の最も低い発現及び／または活性を有するステップ（ｂ）の前記アッセイした細胞を選択することを含む、項目３０〜３４のいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性を欠いている、項目３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性を欠いている、項目３０〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、アッセイステップ（ｂ）の前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記低オスモル濃度培地中で培養される、項目３０〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
前記多能性細胞が、胚性幹（ＥＳ）細胞である、項目３０〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
前記多能性細胞が、ＶＧＦ１マウスＥＳ細胞である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記低オスモル濃度培地が、以下の特性：
（Ｉ）前記低オスモル濃度培地が、約２１８ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、約１１ｍＳ／ｃｍ〜約１３ｍＳ／ｃｍの伝導度を有すること、
（ＩＶ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（Ｖ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩ）前記基本培地が、炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩ）前記基本培地が、重炭酸ナトリウムを約１３ｍＭ〜約２５ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩＩ）前記基本培地が、約８５ｍＭ〜約１３０ｍＭのアルカリ金属ハロゲン化物塩及び炭酸塩の総濃度を有すること、
（ＩＸ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを８７±５ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、２６１±２６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（Ｘ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で、及び炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、ならびに
（ＸＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有し、前記基本培地が、塩化ナトリウムを５０ｍＭ〜１１０ｍＭの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを１３ｍＭ〜２５ｍＭの濃度で含むこと
のうち１つ以上を有する、項目３０〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
前記基本培地が、炭酸塩を約１８ｍＭ〜約４４ｍＭの濃度で含む、項目３０〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含む、項目３０〜４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記炭酸塩が重炭酸ナトリウムであり、前記アルカリ金属及び前記ハロゲン化物の前記塩が塩化ナトリウムであり、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、項目３０〜４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記基本培地が、塩化ナトリウムを約３ｍｇ／ｍＬの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを約２．２ｍｇ／ｍＬの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、項目３０〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記非ヒト哺乳動物が、げっ歯類である、項目３０〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記げっ歯類がラットまたはマウスである、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記げっ歯類がＣ５７ＢＬ／６系統を含むマウスである、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記Ｙ染色体が、Ｃ５７ＢＬ／６系統、１２９系統、またはＢＡＬＢ／ｃ系統からのものである、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記げっ歯類が、Ｃ５７ＢＬ／６系統及び１２９系統を含むマウスである、項目４７〜４９のいずれか１項に記載の方法。
（項目５１）
（ｄ）前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を宿主胚に導入することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の前記宿主胚をレシピエント雌非ヒト哺乳動物に導入して、前記宿主胚を懐胎させることと、
（ｆ）表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を含むＦ０  ＸＹ非ヒト哺乳動物子孫を得て、
性成熟に達すると、前記Ｆ０の表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物が繁殖可能かつ妊孕可能になること
とをさらに含む、項目３０〜５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目５２）
前記宿主胚が前桑実期胚であり、ステップ（ｄ）が、前記宿主胚を前記胚盤胞期まで培養することをさらに含む、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記宿主胚への導入前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記低オスモル濃度培地中で培養される、項目５１または５２に記載の方法。
（項目５４）
（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞においてＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性レベルを検出するための検出試薬と、
（ｂ）前記検出試薬を使用して、Ｆ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成するための前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の予測傾向と検出を相互に関連付けるための説明書
とを含む、キット。
（項目５５）
前記検出試薬が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現を検出するための、１つ以上のプライマーセット及び／または１つ以上のプローブを含む、項目５４に記載のキット。
（項目５６）
雌化培地における標的培地成分の前記濃度の最適化方法であって、
（ａ）非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の第１集団及び第２集団を、前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに好適な基本培地及び添加物を含む培地中で培養し、
前記第１集団が、第１濃度の前記標的培地成分の存在下で培養され、前記第２集団が、前記第１濃度とは異なる第２濃度の前記標的培地成分の存在下で培養されることと、
（ｂ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記第１及び第２集団の各々で前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞のうち１種以上をアッセイすることと、
（ｃ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞で減少する場合に、前記第１濃度を選択することと、
（ｄ）Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に基づいて、Ｆ０世代において繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を生成するために、前記第１集団からドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を選択し、前記Ｆ０世代における前記繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物の前記比率が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の前記発現及び／または活性に逆相関することと、
（ｅ）前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞を宿主胚に導入することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）の前記宿主胚をレシピエント雌非ヒト哺乳動物に導入して、前記宿主胚を懐胎させることと、
（ｇ）表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物を含むＦ０  ＸＹ非ヒト哺乳動物子孫を得て、
性成熟に達すると、前記Ｆ０の表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物が繁殖可能かつ妊孕可能になること
とを含む、前記方法。
（項目５７）
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、前記ｍＲＮＡレベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現が検出される、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
ステップ（ｂ）の前記アッセイによって、前記タンパク質レベルでＤｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現が検出される、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記第２集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有する場合に、前記第１濃度がステップ（ｃ）で選択される、項目５６〜５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性を欠いている場合に、前記第１濃度がステップ（ｃ）で選択される、項目５６〜５９のいずれか１項に記載の方法。
（項目６１）
前記第１集団からの前記１種以上の非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性を欠いている場合に、前記第１濃度がステップ（ｃ）で選択される、項目５６〜６０のいずれか１項に記載の方法。
（項目６２）
ステップ（ｄ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞、すなわち、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記多能性を維持するのに十分であるが、繁殖可能な雌子孫を生じる前記細胞の能力を変化させない培地中で培養された前記細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する、項目５６〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
ステップ（ｄ）の前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記第２集団からの対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する、項目５６〜６２のいずれか１項に記載の方法。
（項目６４）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記対照非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの減少した発現及び／または活性を有する、項目６２または６３に記載の方法。
（項目６５）
ステップ（ｂ）が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち１つ以上の発現及び／または活性について、非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞の前記第１集団における少なくとも２種の前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞をアッセイすることを含み、ステップ（ｄ）が、前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞として、他方のアッセイした細胞と比較して、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の最も低い発現及び／または活性を有するステップ（ｂ）の前記アッセイした細胞を選択することを含む、項目５６〜６４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の発現及び／または活性を欠いている、項目５６〜６５のいずれか１項に記載の方法。
（項目６７）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙの発現及び／または活性を欠いている、項目５６〜６６のいずれか１項に記載の方法。
（項目６８）
前記第１及び第２集団が、アッセイステップ（ｂ）の前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記標的培地成分の存在下で培養される、項目５６〜６７のいずれか１項に記載の方法。
（項目６９）
前記多能性細胞が、胚性幹（ＥＳ）細胞である、項目５６〜６８のいずれか１項に記載の方法。
（項目７０）
前記多能性細胞が、ＶＧＦ１マウスＥＳ細胞である、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
ステップ（ａ）の前記培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有する低オスモル濃度培地である、項目５６〜７０のいずれか１項に記載の方法。
（項目７２）
前記低オスモル濃度培地が、以下の特性：
（Ｉ）前記低オスモル濃度培地が、約２１８ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（ＩＩＩ）前記低オスモル濃度培地が、約１１ｍＳ／ｃｍ〜約１３ｍＳ／ｃｍの伝導度を有すること、
（ＩＶ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（Ｖ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩ）前記基本培地が、炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩ）前記基本培地が、重炭酸ナトリウムを約１３ｍＭ〜約２５ｍＭの濃度で含むこと、
（ＶＩＩＩ）前記基本培地が、約８５ｍＭ〜約１３０ｍＭのアルカリ金属ハロゲン化物塩及び炭酸塩の総濃度を有すること、
（ＩＸ）前記基本培地が、塩化ナトリウムを８７±５ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、２６１±２６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、
（Ｘ）前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で、及び炭酸塩を約１７ｍＭ〜約３０ｍＭの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２９ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有すること、ならびに
（ＸＩ）前記低オスモル濃度培地が、２１８ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有し、前記基本培地が、塩化ナトリウムを５０ｍＭ〜１１０ｍＭの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを１３ｍＭ〜２５ｍＭの濃度で含むこと
のうち１つ以上を有する、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記基本培地が、炭酸塩を約１８ｍＭ〜約４４ｍＭの濃度で含む、項目７１または７２に記載の方法。
（項目７４）
前記基本培地が、アルカリ金属及びハロゲン化物の塩を約５０ｍＭ〜約１１０ｍＭの濃度で含む、項目７１〜７３のいずれか１項に記載の方法。
（項目７５）
前記炭酸塩が重炭酸ナトリウムであり、前記アルカリ金属及び前記ハロゲン化物の前記塩が塩化ナトリウムであり、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、項目７１〜７４のいずれか１項に記載の方法。
（項目７６）
前記基本培地が、塩化ナトリウムを約３ｍｇ／ｍＬの濃度で、及び重炭酸ナトリウムを約２．２ｍｇ／ｍＬの濃度で含み、前記低オスモル濃度培地が、約２１６ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、項目７１〜７５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７７）
前記非ヒト哺乳動物が、げっ歯類である、項目５６〜７６のいずれか１項に記載の方法。
（項目７８）
前記げっ歯類がラットまたはマウスである、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
前記げっ歯類がＣ５７ＢＬ／６系統を含むマウスである、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記Ｙ染色体が、Ｃ５７ＢＬ／６系統、１２９系統、またはＢＡＬＢ／ｃ系統からのものである、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
前記げっ歯類が、Ｃ５７ＢＬ／６系統及び１２９系統を含むマウスである、項目７８〜８０のいずれか１項に記載の方法。
（項目８２）
前記宿主胚が前桑実期胚であり、ステップ（ｅ）が、前記宿主胚を前記胚盤胞期まで培養することをさらに含む、項目５６〜８１のいずれか１項に記載の方法。
（項目８３）
前記非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞が、前記宿主胚への導入前に少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、２週間、３週間、または４週間の間、前記標的培地成分の存在下で培養される、項目５６〜８２のいずれか１項に記載の方法。
（項目８４）
前記多能性細胞が、標的ゲノム遺伝子座に標的遺伝子改変を含む、項目１〜５３及び５６〜８３のいずれか１項に記載の方法。
（項目８５）
前記標的遺伝子改変が、挿入、欠失、ノックアウト、ノックイン、点変異、またはこれらの組合せを含む、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
（ｈ）子孫を生成するために前記繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌非ヒト哺乳動物を交配させること
をさらに含む、項目１〜２９、５１〜５３、及び５６〜８５のいずれか１項に記載の方法。
（項目８７）
少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または全ての前記ＸＹ子孫が、表現型的に雄かつ繁殖可能である、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記ＸＹ子孫には表現型的に雌がいない、項目８６または８７に記載の方法。
（項目８９）
前記交配が、前記繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌非ヒト哺乳動物をコホートＦ０  ＸＹ雄非ヒト哺乳動物と交雑させて、ここで前記繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌非ヒト哺乳動物及び前記Ｆ０  ＸＹ雄非ヒト哺乳動物が各々、遺伝子改変についてヘテロ接合体であること、ならびに前記遺伝子改変についてホモ接合体であるＦ１子孫非ヒト哺乳動物を得ることを含む、項目８６〜８８のいずれか１項に記載の方法。
（項目９０）
少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の前記Ｆ０  ＸＹ子孫が、性成熟に達すると繁殖可能になる表現型的に雌のＸＹ非ヒト哺乳動物である、項目１〜２９、５１〜５３、及び５６〜８９のいずれか１項に記載の方法。
（項目９１）
繁殖可能な表現型的に雌のＸＹ動物である前記Ｆ０  ＸＹ子孫の前記パーセンテージが、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のより高い発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ子孫と比較した場合に、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ子孫ではより高い、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来する前記Ｆ０雌の全てが、ＸＹ遺伝子型を有する、項目１〜２９、５１〜５３、及び５６〜９１のいずれか１項に記載の方法。
（項目９３）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来する少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の前記Ｆ０  ＸＹ雌が、繁殖可能である、項目１〜２９、５１〜５３、及び５６〜９２のいずれか１項に記載の方法。
（項目９４）
繁殖可能な前記Ｆ０  ＸＹ雌の前記パーセンテージが、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のより高い発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ子孫と比較した場合に、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ子孫ではより高い、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来する少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の前記Ｆ０  ＸＹ雌が、少なくとも２匹、３匹、４匹、５匹、６匹、７匹、８匹、９匹、または１０匹の仔を有する同腹仔を産生することができる、項目１〜２９、５１〜５３、及び５６〜９４のいずれか１項に記載の方法。
（項目９６）
Ｆ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌により産生される前記平均産子数が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のより高い発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌と比較した場合に、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌ではより高い、項目９５に記載の方法。
（項目９７）
前記ドナー非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来する少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の前記Ｆ０  ＸＹ雌が、それらの生涯において少なくとも２匹、３匹、４匹、５匹、６匹、７匹、８匹、９匹、または１０匹の同腹仔を産生することができる、項目１〜２９、５１〜５３、及び５６〜９６のいずれか１項に記載の方法。
（項目９８）
Ｆ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌により産生される一生涯における同腹仔の前記平均数が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のより高い発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌と比較した場合に、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌ではより高い、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
Ｆ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌により産生される一生涯における子孫の前記平均数が、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上のより高い発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌と比較した場合に、Ｄｄｘ３ｙ、Ｕｔｙ、及びＥｉｆ２ｓ３ｙのうち前記１つ以上の減少した発現及び／または活性を有する非ヒト哺乳動物ＸＹ多能性細胞に由来するＦ０  ＸＹ雌または繁殖可能なＦ０  ＸＹ雌ではより高い、項目１〜２９、５１〜５３、及び５６〜９８のいずれか１項に記載の方法。