【手続補正書】
【提出日】平成19年2月26日(2007.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（１）：
【化１】
2001233884.tif 000001
［式（１）中、
Ａ１は、Ｓ又はＯであり；
Ａ２は、Ｓ、Ｏ又はＮＨであり；
Ａ３は、Ｓ、Ｓ＝Ｏ又はＯ＝Ｓ＝Ｏであり；
Ｒ１及びＲ２は、各々独立に選択されてもよい、枝分かれしていてもよい炭素数１ないし４のアルキル基であり；
Ｒ３は、枝分かれしていてもよい炭素数１ないし４のアルキレン基であり；そして
ｎは１−１０の整数である。］
あるいは、以下の式（２）：
【化２】
2001233884.tif 000002
［式（２）中、
Ａ１は、Ｓ又はＯであり；
Ａ２は、Ｓ、Ｏ又はＮＨであり；
Ａ３は、Ｓ、Ｓ＝Ｏ又はＯ＝Ｓ＝Ｏであり；
Ａ４は、Ｏ又はＮＨであり；
Ｒ１及びＲ４は、各々独立に選択されてもよい、枝分かれしていてもよい炭素数１ないし４のアルキル基であり；
Ｒ３は、枝分かれしていてもよい炭素数１ないし４のアルキレン基であり；そして
ｍは１−１０の整数である。］
で表される構造を有する化合物。
【請求項２】
式（１）中、Ａ１及びＡ３がＳであり、Ａ２がＮＨであり、Ｒ１及びＲ２がエチル基であり、そしてＲ３がエチレン基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（２）中、Ａ１及びＡ３がＳであり、Ａ２及びＡ４がＮＨであり、Ｒ１及びＲ４がエチル基であり、そしてＲ３がエチレン基である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式（１）中、ｎが５である請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項５】
式（２）中、ｍが３である請求項１又は３に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１ないし５に記載された化合物と高分子化合物又は標識物質との結合体。
【請求項７】
請求項１ないし５に記載の化合物と高分子化合物を結合させることにより抗原を作製し、当該抗原を用いることにより、以下の式（３）：
【化３】
2001233884.tif 000003
［式（３）中、
Ａ１は、Ｓ又はＯであり；
Ａ２は、Ｓ、Ｏ又はＮＨであり；
Ａ３は、Ｓ、Ｓ＝Ｏ又はＯ＝Ｓ＝Ｏであり；
Ｒ１、Ｒ２及びＲ４は、各々独立に選択されてもよい、枝分かれしていてもよい炭素数１ないし４のアルキル基であり；そして
Ｒ３は、枝分かれしていてもよい炭素数１ないし４のアルキレン基である。］
で表される構造を有する化合物に反応性を示す抗体を製造することを特徴とする、式（３）で表される化合物に反応性を示す抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメントの製造方法。
【請求項８】
請求項６に記載の結合体を抗原として用いることにより製造された、式（３）で表される化合物に反応性を示す抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメント。
【請求項９】
モノクローナル抗体である、請求項８に記載の抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメント。
【請求項１０】
寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１７７３２で寄託されているハイブリドーマから産生されるモノクローナル抗体４４Ｋ７−１−１である、請求項８若しくは９に記載の抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメント。
【請求項１１】
請求項８ないし１０のいずれか１項に記載の抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項１２】
寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１７７３２で寄託されている、請求項１１に記載のハイブリドーマ。
【請求項１３】
請求項８ないし１０のいずれか１項に記載の抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメントを用いることを特徴とする、式（３）で表される化合物の免疫化学的測定方法。
【請求項１４】
さらに請求項１ないし５のいずれか１項に記載の化合物、又は請求項６に記載の結合体を用いることを含む、請求項１３に記載の免疫化学的測定方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、Ｏ，Ｏ−ジエチル−Ｓ−２−（エチルチオ）エチルホスホロジチオエート（一般には、「エチルチオメトン」又は「ジスルホトン」と呼称される：以下、本明細書中「エチルチオメトン」と言う）及びその類縁化合物のハプテン化合物、抗原、抗体及び抗原と結合可能なそのフラグメントに関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
本発明はさらに、前記抗原、抗体及びその抗原と結合可能なそのフラグメントを用いた免疫化学的測定方法に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
従来、例えば農作物中のエチルチオメトンは米、果実、野菜、いも類、豆類等から抽出し、精製した後、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により分析されてきた。即ち、例えば、試料をアセトンで抽出し、ジクロロメタンに転溶し、ヘキサン−アセトニトリル分配してアセトニトリル層を濃縮乾固し、そしてジクロロメタン、アセトンに転溶後、ＧＣで測定する方法等が採用されている（「最新  農薬の残留分析法」  第２３４頁−第２３５頁、中央法規出版  １９９５年４月１日発行））。これらの方法は、試料の調製が煩雑で多大の手順と時間を必要とし、分析に熟練を要すること、並びに、測定装置や設備等に高額の費用を必要とする等の問題点がある。エチルチオメトンの測定は短時間で膨大な数の試料の分析結果を出す必要があり、精度面だけでなく、簡便性、迅速性及び経済性をも具備した新規測定方法が要求されてきている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明は、さらに、エチルチオメトンハプテンと高分子化合物との結合体を提供することを目的とする。
本発明は、さらにまた、前記抗体を産生するハイブリドーマを提供することを目的とする。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明は、さらに、前記抗体若しくは抗原と結合可能なそのフラグメント及び／又は前記エチルチオメトンハプテンと高分子化合物若しくは標識物質との結合体を使用することを含む、エチルチオメトンの免疫化学的測定方法を提供することを目的とする。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
【化８】
2001233884.tif 000004
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
反応は、マイナス１０℃から溶媒の沸点、好ましくは２０℃から８０℃で、３０分から１０時間、好ましくは３０分から２時間行う。
Ｐで表されるカルボキシル基の保護基は公知のものでよく、具体例として、例えばメチル基、エチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、３，４−ジメトキシベンジル基、トリクロロエチル基、トリメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、トリメチルシリルエトキシメチル基等が挙げられる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
式（Ｘ５）の化合物の合成のための有機溶媒としては、例えば、アセトニトリル、アセトン、ヘキサン、ペンタン、ベンゼン、トルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、酢酸エチル、ジグリム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ヘキサメチルリン酸トリアミド等、又はこれらの混合溶媒を用いることができる。塩基としては、例えば、前述した式（Ｘ３）の化合物の合成に使用可能なものと同様のものを使用できる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
エチルチオメトンハプテンと高分子化合物との結合は、例えば、活性化エステル法（Ａ．Ｅ．ＫＡＲＵ  ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，４２，３０１−３０９（１９９４））、又は混合酸無水物法（Ｂ．Ｆ．Ｅｒｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２３４，１０９０‐１０９４（１９５４））等の公知の方法によって行うことができる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
（ｄ）の工程に用いることのできるミエローマ細胞としては、例えば、Ｂａｌｂ／ｃマウス由来骨髄腫細胞株のＰ３／Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３）（Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５−４９７（１９７５））、Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ８．Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８１，  １−７（１９８７））、Ｐ３／ＮＳＩ−１−Ａｇ  ４−１（ＮＳ−１）（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６，５１１−５１９（１９７６））、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４（Ｓｐ２／０）（Ｎａｔｕｒｅ，  ２７６，２６９−２７０（１９７８））、ＦＯ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．Ｍｅｔｈ．，３５，  １−２１（１９８０））、ＭＰＣ−１１、Ｘ６３．６５３、Ｓ１９４等の骨髄腫株化細胞、あるいはラット由来の２１０．ＲＣＹ３．Ａｇ  １．２．３．（Ｙ３）（Ｎａｔｕｒｅ，  ２７７，１３１−１３３，（１９７９））等を使用できる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２５
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２６】
化合物（３）の合成
３．８ｇ（１５ｍｍｏｌ）の化合物（２）とクロロリン酸ジエチル３．０ｇ（１５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１５０ｍｌに溶解して、炭酸カリウム２．１ｇ（１５ｍｍｏｌ）を加えて５０℃で１時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過、濃縮してシリカゲルカラム（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４９：１→１９：１→９：１）で精製し、無色油状物として２．２ｇ（収率３６％）の化合物（３）を得た。