【手続補正書】
【提出日】令和1年9月17日(2019.9.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
方法が、ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターの治療有効量を対象に投与することを含み、エピジェネティックなモジュレーターが対象のＦＭＲ１を再活性化する、
その必要がある対象のＦＭＲ１不活性化に関連する異常を処置するための方法。
【請求項２】
ＦＭＲ１不活性化に関連する異常が、脆弱Ｘ症候群、脆弱Ｘ随伴振戦／失調症候群、早発性の卵巣老化、または多嚢胞性卵巣症候群である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、メチルトランスフェラーゼの阻害剤であり、任意に、メチルトランスフェラーゼが、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼまたはヒストンメチルトランスフェラーゼである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＤＮＡメチルトランスフェラーゼが、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、およびＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択され；任意に、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼがＤＮＭＴ１であり、エピジェネティックなモジュレーターがＤＮＭＴ１を選択的に阻害する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
エピジェネティックなモジュレーターが、５−アザシチジンである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ヒストンメチルトランスフェラーゼが、ＥＺＨ２、ＳＥＴＤＢ１、ＥＨＭＴ１／ＧＬＰ、ＥＨＭＴ２／Ｇ９ａ、ＳＵＶ３９Ｈ１、ＳＵＶ４２０Ｈ１、およびＳＵＶ４２０Ｈ２からなる群から選択され；
任意に、
（ｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼがＳＵＶ３９Ｈ１であり、エピジェネティックなモジュレーターがＳＵＶ３９Ｈ１を選択的に阻害し；または
（ｉｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼがＥＺＨ２であり、エピジェネティックなモジュレーターがＥＺＨ２を選択的に阻害する、
請求項３に記載の方法。
【請求項７】
エピジェネティックなモジュレーターがケトシン、ＥＰＺ６４３８、またはＧＳＫ１２６である、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、ヒストンユビキチンリガーゼの阻害剤であり、任意に、ヒストンユビキチンリガーゼが、ヒストンＨ２Ａをユビキチン化するユビキチンリガーゼおよび／またはＲＩＮＧ１Ｂ／ＲＮＦ２である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項９】
エピジェネティックなモジュレーターが、ＲＩＮＧ１／ＲＮＦ２を選択的に阻害する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤であり、任意に、エピジェネティックなモジュレーターが、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ１０、またはＳＩＲＴ５を選択的に阻害する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、ヒストンデメチラーゼの阻害剤であり、任意に、エピジェネティックなモジュレーターが、ＫＤＭ５Ｄを選択的に阻害する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、活性なマークの阻害因子を標的化し、任意に、活性なマークが、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４からなる群から選択される少なくとも１つのヒストンのアセチル化である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１３】
活性なマークが、ヒストンＨ３リジン４のトリメチル化（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３）である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが次：
ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９、ＨＤＡＣ１０、ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２、ＳＩＲＴ３、ＳＩＲＴ４、ＳＩＲＴ５、ＳＩＲＴ６、ＳＩＲＴ７、ＫＤＭ５Ａ、ＫＤＭ５Ｂ、ＫＤＭ５Ｃ、またはＫＤＭ５Ｄ
の少なくとも１つを標的化する、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、核酸、ポリペプチド、または小分子である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
核酸が、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、およびアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）からなる群から選択される干渉核酸である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、表２に定められている配列（例えばガイド配列）を含む干渉核酸である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ポリペプチドが抗体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
小分子が表１にリスト化された小分子である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
対象が、転写不活性なＦＭＲ１遺伝子の存在に基づいて、必要があるとして同定され、任意に、転写不活性なＦＭＲ１遺伝子が、エピジェネティックにサイレンシングされている、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
転写不活性なＦＭＲ１遺伝子が、サイレンシングされたＦＭＲ１遺伝子と結びついた少なくとも１つのエピジェネティックマークを含み、任意に、少なくとも１つのエピジェネティックマークが、ＤＮＡメチル化（ＤＮＡｍｅ）、ヒストンＨ３リジン２７トリメチル化（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）、ヒストンＨ３リジン９トリメチル化（Ｈ３Ｋ９ｍｅ３）、ヒストン４リジン２０トリメチル化（Ｈ４Ｋ２０ｍｅ３）、ヒストンＨ２Ａユビキチン化（Ｈ２Ａｕｂ）、ヒストンＨ２ａアセチル化、ヒストンＨ２Ｂアセチル化、ヒストンＨ３アセチル化、ヒストンＨ４アセチル化、およびヒストンＨ３リジン４トリメチル化（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３）からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
対象が、ＦＭＲ１遺伝子の５’ＵＴＲ内の多型ＣＧＧリピートの増幅の存在に基づいて、必要があるとして同定される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
増幅が、約５５個のＣＧＧリピートおよび約２００個のＣＧＧリピートの間を含み、または、増幅が、２００個よりも多くのＣＧＧリピートを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
有効量が、対象のＣＮＳ、精巣、卵巣、食道上皮、胸腺、眼、または脾臓に送達される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
有効量がニューロン細胞に送達され、任意に、ニューロン細胞が分化したニューロン細胞である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
エピジェネティックなモジュレーターが、ＦＭＲ１とＦＭＲ１をコードするｍＲＮＡとの間のＲループの形成を阻害する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
投与前および／または後の対象のＦＭＲ１のエピジェネティックなプロファイルを評価することをさらに含み、ＦＭＲ１のエピジェネティックなプロファイルの変化が処置の有効性を示す、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
方法が、ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターの有効量と細胞を接触させることを含み、エピジェネティックなモジュレーターが細胞のＦＭＲ１を再活性化する、
細胞の転写不活性なＦＭＲ１遺伝子を再活性化するための方法。
【請求項２９】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターがメチルトランスフェラーゼの阻害剤であり、任意に、メチルトランスフェラーゼがＤＮＡメチルトランスフェラーゼまたはヒストンメチルトランスフェラーゼである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＤＮＡメチルトランスフェラーゼが、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、およびＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択され、任意に、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼがＤＮＭＴ１であり、エピジェネティックなモジュレーターがＤＮＭＴ１を特異的に阻害する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ヒストンメチルトランスフェラーゼが、ＥＺＨ２、ＳＥＴＤＢ１、ＥＨＭＴｌ／ＧＬＰ、ＥＨＭＴ２／Ｇ９ａ、ＳＵＶ３９Ｈ１、ＳＵＶ４２０Ｈ１、およびＳＵＶ４２０Ｈ２からなる群から選択され；
任意に、
（ｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼがＳＵＶ３９Ｈ１であり、エピジェネティックなモジュレーターがＳＵＶ３９Ｈ１を選択的に阻害し；または
（ｉｉ）ヒストンメチルトランスフェラーゼがＥＺＨ２であり、エピジェネティックなモジュレーターがＥＺＨ２を選択的に阻害する、
請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、ヒストンユビキチンリガーゼの阻害剤であり、任意に、ヒストンユビキチンリガーゼが、ヒストンＨ２Ａをユビキチン化するユビキチンリガーゼおよび／またはＲＩＮＧ１Ｂ／ＲＮＦ２である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤であり、任意に、エピジェネティックなモジュレーターが、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ１０、ＳＩＲＴ５を選択的に阻害する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、ヒストンデメチラーゼの阻害剤であり、任意に、エピジェネティックなモジュレーターが、ＫＤＭ５ＤまたはＫＤＭ５Ｃを選択的に阻害する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、活性なマークの阻害因子を標的化し、任意に、活性なマークが、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４からなる群から選択される少なくとも１つのヒストンのアセチル化であり、任意に、活性なマークが、ヒストンＨ３リジン４のトリメチル化（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３）である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、核酸であり、任意に、
（ｉ）核酸が、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、およびアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）からなる群から選択される干渉核酸であり、または
（ｉｉ）核酸が、表２にリスト化された干渉核酸である、
請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、ポリペプチドであり、任意に、ポリペプチドが抗体である、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターが、表１にリスト化された小分子である、請求項２８〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
細胞が、ニューロン細胞または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）であり、任意に、細胞がインビトロである、請求項２８〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
細胞が、ＦＭＲ１遺伝子の５’ＵＴＲ内の多型ＣＧＧリピートの増幅を含み、任意に、増幅が、約５５および約２００個のＣＧＧリピートの間を含み、または、増幅が、２００個よりも多くのＣＧＧリピートを含む、請求項２８〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターの有効量との接触に先立って、転写不活性なＦＭＲ１遺伝子が、サイレンシングされたＦＭＲ１遺伝子と結びついた少なくとも１つのエピジェネティックマークを含み、任意に、少なくとも１つのエピジェネティックマークが、ＤＮＡメチル化（ＤＮＡｍｅ）、ヒストンＨ３リジン２７トリメチル化（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）、ヒストンＨ３リジン９トリメチル化（Ｈ３Ｋ９ｍｅ３）、ヒストン４リジン２０トリメチル化（Ｈ４Ｋ２０ｍｅ３）、ヒストンＨ２Ａユビキチン化（Ｈ２Ａｕｂ）、ヒストンＨ２ａアセチル化、ヒストンＨ２Ｂアセチル化、ヒストンＨ３アセチル化、ヒストンＨ４アセチル化、およびヒストンＨ３リジン４トリメチル化（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３）からなる群から選択される、請求項２８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
エピジェネティックなモジュレーターが、ＦＭＲ１とＦＭＲ１から転写されたｍＲＮＡとの間のＲループの形成を阻害する、請求項２８〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
方法が、
（ｉ）不活性化したＦＭＲ１遺伝子を含む細胞を候補薬と接触させることと、
（ｉｉ）細胞のＦＭＲ１発現レベルを検出することと、
（ｉｉｉ）ＦＭＲ１の発現レベルが候補薬との接触後にコントロール細胞に対して増大するときに、候補薬をＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターとして同定することと、
を含む、ＦＭＲ１のエピジェネティックなモジュレーターを同定するための方法。
【請求項４４】
（ａ）細胞が人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）またはニューロン細胞であり；
（ｂ）不活性化したＦＭＲ１遺伝子が、エピジェネティックにサイレンシングされたＦＭＲ１遺伝子であり；および／または
（ｃ）細胞が、サイレンシングされたＦＭＲ１遺伝子と結びついた少なくとも１つのエピジェネティックマークを含み、任意に、少なくとも１つのエピジェネティックマークが、ＤＮＡメチル化（ＤＮＡｍｅ）、ヒストンＨ３リジン２７トリメチル化（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）、ヒストンＨ３リジン９トリメチル化（Ｈ３Ｋ９ｍｅ３）、ヒストン４リジン２０トリメチル化（Ｈ４Ｋ２０ｍｅ３）、ヒストンＨ２Ａユビキチン化（Ｈ２Ａｕｂ）、ヒストンＨ２ａアセチル化、ヒストンＨ２Ｂアセチル化、ヒストンＨ３アセチル化、ヒストンＨ４アセチル化、およびヒストンＨ３リジン４トリメチル化（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３）からなる群から選択される、
請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
細胞が、ＦＭＲ１遺伝子の５’ＵＴＲ内の多型ＣＧＧリピートの増幅を含む、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
候補薬が、化合物ライブラリーから選択され、任意に、ライブラリーがメチルトランスフェラーゼ阻害剤またはヒストンユビキチンリガーゼ阻害剤を含む、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
候補薬が、活性なマークの阻害因子を標的化し、任意に、活性なマークが、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４からなる群から選択される少なくとも１つのヒストンのアセチル化であり、さらに任意に、活性なマークが、ヒストンＨ３リジン４のトリメチル化（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３）である、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
候補薬が、核酸、ポリペプチド、または小分子である、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
核酸が、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、およびアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）からなる群から選択される干渉核酸である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
ポリペプチドが抗体である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
検出が、ハイブリダイゼーションに基づくアッセイ、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ−ＰＣＲ）またはＦＡＣＳによって実行される、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
エピジェネティックなモジュレーターが、図９Ｃに示されている化合物またはそれらのいずれか１つの誘導体である、請求項１に記載の方法。