【手続補正書】
【提出日】平成31年2月14日(2019.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物またはヒトの治療における使用のための一本鎖オリゴヌクレオチドであって、該一本鎖オリゴヌクレオチドが２つ以上のアシル−アミノ−ＬＮＡヌクレオチドモノマーを含有し、他のヌクレオチドモノマーをＤＮＡヌクレオチドモノマー、ＲＮＡヌクレオチドモノマーまたは化学修飾ヌクレオチドモノマーとすることができ；
該オリゴヌクレオチドのモノマーが、ホスホジエステル結合および／またはホスホロチオエート結合および／またはホスホトリエステル結合で結合しており、
該アシル−アミノ−ＬＮＡモノマーのアシル基が場合によって置換されており、したがって場合によって１つ以上のヒドロキシル基、アミノ基、チオ基、オキソ基、アルキルチオ基、エーテル基および／またはチオール（メルカプト）基を含有し、
但し、該アシル基の各々において炭素原子の総数が３０未満であることを条件とし、
該アシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが、単量体、二量体または三量体のＮ−アセチルアミノガラクトシル部分がアミノＬＮＡモノマーの２’−アミノ基を介して結合しているアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーであり；そして、該一本鎖オリゴヌクレオチドがＲＮアーゼＨを媒介とするアンチセンスＲＮＡ標的化によって遺伝子調節を媒介することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドである、
一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項２】
前記オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合のうちの少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは全てがホスホジエステル結合である、および／または
前記オリゴヌクレオチドのヌクレオチドモノマーのうちの４０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは２０％以下、最も好ましくは１０％以下がリボヌクレオチドモノマーである、請求項１に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項３】
前記オリゴヌクレオチドが、コレステリル部分と結合した１つまたは２つのヌクレオチドモノマーを含有する、請求項１または２に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも７個のヌクレオチドモノマー単位、好ましくは少なくとも８個のヌクレオチドモノマー単位、より好ましくは少なくとも１１個のヌクレオチドモノマー単位、より好ましくは少なくとも１２個のヌクレオチドモノマー単位を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項５】
ギャップマー、アプタマーまたはミクスマーである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチドが、５’末端から３’末端に、３つのセグメント：少なくとも２ヌクレオチド単位の５’末端セグメントと、少なくとも６ヌクレオチド単位の長さの中央結合セグメントと、少なくとも２ヌクレオチド単位の長さの３’末端セグメントとを有し、そして、
該オリゴヌクレオチドが、少なくとも２つの２’−Ｎ−アシル−２’−アミノ−ＬＮＡヌクレオチドモノマーを、５’末端セグメントもしくは３’末端セグメントのどちらかの中には含有するがしかし中央セグメント中には全く含有しないか；または、少なくとも１つの２’−Ｎ−アシル−２’−アミノＬＮＡヌクレオチドモノマーを、前記末端セグメントの各々の中には含有するがしかし中央セグメント中には全く含有しない、請求項１〜５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドが、下記構成：
ＮＶ−ＭＹ−ＮＺ
のギャップマーである請求項１〜５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｍは、標的ＲＮＡのＲＮアーゼＨ分解に適合するヌクレオチドモノマーを表し、Ｎは、親和性増強ヌクレオチドモノマー、アシル−アミノ−ＬＮＡモノマーならびにＤＮＡヌクレオチドモノマーのうちから選択されるモノマーを表し、Ｖ、ＹおよびＺはセグメント中のモノマーの数を示し、ハイフンは、２つのウィング配列セグメントＮＶおよびＮＺとギャップ配列セグメントＭＹとの間の分離を示し；Ｖ＋Ｚ＋Ｙの合計が最大で３０であるという条件の下に、数ＶおよびＺを２〜８の間で変化させてもよく、かつ数Ｙを６〜１４の間で変化させてもよく、但し、
（ａ）少なくとも１つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが、ウィングセグメントすなわちＮモノマーからなるセグメントの各々の中に存在すること；または
（ｂ）少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが、ウィングセグメントすなわちＮモノマーからなるセグメントのうちの一方の中に存在すること
が条件であり、
好ましくは、前記オリゴヌクレオチドが下記構成５’−（Ｌ）２〜４−（Ｄ）６〜１０−（Ｌ）２〜４であり、
式中、ＤはＤＮＡヌクレオチドモノマーを表し、Ｌは、親和性増強ヌクレオチドモノマーまたはアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを表す、
一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項８】
前記オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドモノマーの総数が奇数であるならば中心ヌクレオチドモノマーが２つの半配列セグメントのどちらにも含まれないという条件の下に、少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが半配列セグメントのうちの一方、すなわち該オリゴヌクレオチド配列の５’末端半分またはオリゴヌクレオチド配列の３’末端半分の中に存在するか；または、該オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドモノマーの総数が奇数であるならば該少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーのうちの１つを場合によって中心ヌクレオチドモノマーとすることができる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の一本鎖オリゴヌクレオチド。
【請求項９】
構成５’−（Ｎ）７〜２６を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドである請求項５に記載の一本鎖ミクスマーオリゴヌクレオチドであって、
式中、Ｎは、少なくとも１つの親和性増強モノマーを表し、加えて他のタイプのヌクレオチドモノマーを表してもよく、但し、少なくとも２つのＮヌクレオチドが請求項１に定義のアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーであることを条件とし、かつ、
（ａ）各配列要素、すなわちオリゴヌクレオチド配列の５’末端半分およびオリゴヌクレオチド配列の３’末端半分の各々が、少なくとも１つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを含有すること、または
（ｂ）ヌクレオチドの総数が奇数であるならば中心ヌクレオチドモノマーが２つの配列要素のどちらにも含まれないという条件の下に、
少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが半配列要素のうちの一方、すなわちオリゴヌクレオチド配列の５’末端半分もしくはオリゴヌクレオチド配列の３’末端半分の中に存在すること、または
（ｃ）該オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドモノマーの総数が奇数であるならば該少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーのうちの１つを場合によって中心ヌクレオチドモノマーとしてもよいこと
を条件とする、一本鎖ミクスマーオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】
構成が以下の（ａ）から（ｆ）の１つである、請求項９に記載の一本鎖ミクスマーアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、
（ａ）５’−（Ｎ）７〜１２、式中、Ｎは、前記配列要素の各々が少なくとも１つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを含有するように、親和性増強ヌクレオチドならびに、少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを表す、
（ｂ）５’−（Ｎ）１２〜２２、式中、Ｎは、前記配列要素の各々が少なくとも１つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを含有するように、少なくとも４つのＬＮＡ型親和性増強モノマー、数々のＤＮＡモノマーまたは２’−ＯＭｅ−ＲＮＡモノマー、ならびに少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを表す、
（ｃ）５’−（Ｎ）１５〜２２、式中、Ｎは、前記配列要素の各々が少なくとも１つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを含有するように、少なくとも３つのＬＮＡ型親和性増強モノマー、１つ以上の２’−ＯＭｅ−ＲＮＡモノマー、ならびに少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを表す、
（ｄ）５’−（Ｎ）７〜１２、式中、Ｎは、ヌクレオチドの総数が奇数であるならば中心ヌクレオチドモノマーが２つの配列要素のどちらにも含まれないという条件の下に、少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが半配列要素のうちの一方、すなわち配列の５’末端半分または配列の３’末端半分の中に存在するように；または、該オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドモノマーの総数が奇数であるならば該少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーのうちの１つが場合によって中心ヌクレオチドモノマーとなり得るように、親和性増強ヌクレオチド、ならびに少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを構成する、
（ｅ）５’−（Ｎ）１２〜２２、式中、Ｎは、ヌクレオチドの総数が奇数であるならば中心ヌクレオチドモノマーが２つの配列要素のどちらにも含まれないという条件の下に、少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが半配列要素のうちの一方、すなわち配列の５’末端半分もしくは配列の３’末端半分の中に存在するように；または、該オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドモノマーの総数が奇数であるならば上記少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーのうちの１つが場合によって中心ヌクレオチドモノマーとなり得るように、少なくとも４つのＬＮＡ型親和性増強モノマー、数々のＤＮＡモノマーまたは２’−ＯＭｅ−ＲＮＡモノマー、ならびに少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを表す、または
（ｆ）５’−（Ｎ）１５〜２２、式中、Ｎは、ヌクレオチドの総数が奇数であるならば中心ヌクレオチドモノマーが２つの配列要素のどちらにも含まれないという条件の下に、少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが半配列要素のうちの一方、すなわち配列の５’末端半分もしくは配列の３’末端の中に存在するように；または、該オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドモノマーの総数が奇数であるならば上記少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーのうちの１つが場合によって中心ヌクレオチドモノマーとなることができるように、少なくとも３つのＬＮＡ型親和性増強モノマー、数々の２’−ＯＭｅ−ＲＮＡモノマー、ならびに少なくとも２つのアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーを表す、
一本鎖ミクスマーアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
遺伝子サイレンシングが起こる条件下で、細胞を、請求項１〜１０のいずれかのアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドと接触させることを含む、該細胞において遺伝子サイレンシングを媒介するイン・ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）での方法。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドが、好ましくはＲＮアーゼＨを媒介として、標的遺伝子または標的ＲＮＡのサイレンシングを媒介するために、前記細胞において発現される該標的遺伝子または標的ＲＮＡに対して相補性を有する、請求項１に記載のオリゴヌクレオチドまたは請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
２つ以上のアシル−アミノ−ＬＮＡモノマーが、（１つ以上の）パルミトイルアミノＬＮＡモノマー、（１つ以上の）ミリストイルアミノＬＮＡモノマーまたは、別の脂肪酸アシル基でＮ−アシル化されたアミノＬＮＡモノマーであり、上記脂肪酸アシル基が、好ましくは飽和脂肪酸の脂肪酸アシル基でありかつ／または好ましくは１０〜１８個の炭素原子を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
前記オリゴヌクレオチドが、細胞透過性ペプチド、コレステロール、ガラクトースまたはアルファ−トコフェロールから選択される１つ以上の複合基を含有し、該複合基が該オリゴヌクレオチドの３’末端および／または５’末端に連結されている、請求項１〜１０、１２または１３のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド。