【手続補正書】
【提出日】平成31年1月11日(2019.1.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種または複数のラムノリピドを含む組成物を得るための、有機溶媒を使用しない方法であって、前記ラムノリピドを含む組成物は少なくとも３０重量％ラムノリピドを含む濃縮された清澄なブロスであり、
（ａ）  少なくとも１種のラムノリピド（ＲＬ）を含む水性培地を用意するステップと、
（ｂ）  ステップ（ａ）において用意した前記培地から固体不用物を除去するステップと、
（ｃ）  ステップ（ｂ）で得られた培地を酸で処理して酸性培地を得るステップであって、得られた前記酸性培地が固体相、液体相および油性相を含むステップと、
（ｄ）  少なくともステップ（ｃ）で得られた液体相を除去するステップと、
（ｅ）  ステップ（ｃ）で得られた固体相および場合により油性相を中和して中和溶液を得るステップと、
（ｆ）  ステップ（ｅ）における前記中和溶液から不溶性不用物質を除去して前記組成物を得るステップと
を含む、方法。
【請求項２】
ステップ（ｃ）において前記培地が酸で処理される前および／または後に、滅菌ステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記滅菌ステップの前および／または後に、不溶性不用物を前記溶液から除去するための追加の分離ステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
滅菌後に、前記滅菌して濃縮した清澄なブロスを脱色および／または脱臭するステップをさらに含む、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記滅菌ステップの前および／または後に、用意した前記培地を熟成させるステップをさらに含む、請求項２から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｆ）において得られた前記溶液から水を除去するステップをさらに含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記の固体相および油性相が別々に中和されて別々の溶液が得られる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記の固体相および油性相が合わされ、前記合わされた固体相および油性相が中和されて中和溶液が得られる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法により得られた中和溶液を含む組成物。
【請求項１０】
請求項４に記載の方法により得られた脱色および／または脱臭され濃縮された清澄なブロスを含む組成物。
【請求項１１】
請求項５に記載の方法により得られた熟成された培地を含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
全体的な方法により、高濃度のラムノリピドバイオサーファクタントである製品が、当初の発酵ブロスにおけるラムノリピドの約８０％超の回収率を有して、費用効果的に製造される。このことによって、ラムノリピド発酵から生成物を単離することは高価すぎて商業的に実現不可能であると認識されている問題が、解決される。
本発明は次の実施態様を含む。
［１］１種または複数のラムノリピドを含む組成物を得るための、有機溶媒を使用しない方法であって、
（ａ）  少なくとも１種のラムノリピド（ＲＬ）を含む水性培地を用意するステップと、
（ｂ）  （ａ）において用意した前記培地の非ろ過ベースの滅菌を行うステップと、
（ｃ）  （ｂ）の前記滅菌培地においてＲＬ含有相を不用物から分離して、前記組成物を得るステップと
を含み、場合により、
（１）ステップ（ａ）の後であってステップ（ｂ）の前に、ステップ（ａ）において用意した前記培地から固体不用物を除去するステップ、および／または
（２）滅菌ステップ（ｂ）の後であって分離ステップ（ｃ）の前に、ステップ（ａ）の前記滅菌培地を熟成させるステップ、および／または
（３）ステップ（ｃ）の後に、流体を、分離したＲＬ含有相から場合により除去して、固体組成物を得るステップ、および／または
（４）前記滅菌ステップの前および／または後に、用意した培地を脱色および／もしくは脱臭するステップ
をさらに含む、方法。
［２］ステップ（ａ）の後であってステップ（ｂ）の前、および／またはステップ（ｂ）の後であってステップ（ｃ）の前に、
（１）ステップ（ａ）において用意した前記培地を熟成させて、熟成されかつ滅菌された培地を得るステップをさらに含み、
ステップ（ａ）の後であって前記培地が（１）において熟成される前に、固体不用物がステップ（１）において用意した培地から場合により除去される、上記［１］に記載の方法。
［３］前記培地が約０〜３０℃の間にて少なくとも約１日間、熟成される、上記［２］に記載の方法。
［４］前記滅菌が、熱処理、化学処理および／または照射による、上記［１］から［３］に記載の方法。
［５］前記化学処理が酸性化処理および／または過酸化物処理による、上記［４］に記載の方法。
［６］ステップ（ｂ）の前にステップ（ａ）で用意した前記培地を熟成させるステップと、
（ｂ）前記熟成された培地を滅菌するステップと、
（ｃ）前記滅菌された培地においてＲＬ含有相を不用物から分離するステップとを含み、場合により、
（ｃ）（１）前記ＲＬ含有相をさらに滅菌するステップと、
（ｃ）（２）前記滅菌したＲＬ含有相においてＲＬ含有相を不用物から分離して、前記組成物を得るステップと
をさらに含む、上記［１］から［５］に記載の方法。
［７］ステップ（ｂ）における前記滅菌ステップが、化学処理および／または照射処理によるものであり、ステップ（ｃ）（２）における前記滅菌ステップが熱処理によるものである、上記［６］に記載の方法。
［８］得られたラムノリピドを含む前記組成物が少なくとも約５重量％ラムノリピドを含む清澄なブロスである、上記［１］から［６］に記載の方法。
［９］前記脱色および／または脱臭ステップが化学的処理および／または照射処理によるものである、上記［１］に記載の方法。
［１０］前記方法において、前記方法が、
（ｉ）用意した前記培地を滅菌する前に、ステップ（ａ）において用意した前記培地から固体不用物を除去するステップをさらに含み；
前記方法において、ステップ（ａ）において用意した前記培地が、前記培地を酸処理することによってステップ（ｂ）において滅菌され、得られた前記酸性培地が固体相、液体相および油性相を含み、少なくとも液体相が除去され、ステップ（ｃ）の前に固体相および場合により油性相が中和されて中和溶液が得られ、
ここで、前記の固体相および油性相が別々に中和されて別々の溶液を得るか、または前記の固体相および油性相が合わされ、前記合わされた固体相および油性相が中和されて中和溶液が得られ、
ステップ（ｃ）において、不溶性不用物質が前記溶液から除去されてラムノリピドを含む前記組成物が得られ、前記ラムノリピドを含む組成物は少なくとも約３０重量％ラムノリピドを含む濃縮された清澄なブロスであり；
前記方法は、場合により、前記培地がステップ（ｂ）において酸で処理される前および／または後に追加の滅菌ステップをさらに含み；
前記方法は、場合により、
（１）前記追加の滅菌ステップの前および／または後に、不溶性不用物を前記溶液から除去するための追加の分離ステップ、および／または
（２）滅菌後に、前記滅菌して濃縮した清澄なブロスを脱色および／または脱臭するステップ、および／または
（３）ステップ（ｃ）において得られた前記溶液から流体を除去するステップ、および／または
（４）ステップ（ｃ）において得られた前記溶液から水を除去するステップ
をさらに含む、上記［１］に記載の方法。
［１１］前記追加の滅菌ステップの前および／または後に、用意した前記培地を熟成させるステップをさらに含む、上記［１０］に記載の方法。
［１２］前記組成物がモノラムノリピドおよびジラムノリピドを含み、モノラムノリピド：ジラムノリピドの比が、約３５：６５から約５５：４５である、上記［１］から［１１］に記載の方法。
［１３］上記［１０］から［１２］に記載の方法により得ることができる中和溶液を含む組成物。
［１４］上記［１］から［１２］に記載の方法により得ることができる脱色および／または脱臭培地を含む組成物。
［１５］上記［１］から［１２］に記載の方法により得ることができる熟成された培地を含む組成物。