(57)【要約】下記構造式（１）で表されるカルコン還元体、並びに該カルコン還元体を含有する美白剤、抗炎症剤、及び化粧料を提供する。2007052330.tif 000025ただし、前記構造式（１）中、Ｒ１は酸素原子、及び水酸基と水素原子のいずれかを表す。Ｒ２は水素原子、水酸基及びアルキル基のいずれかを表す。Ｒ３は水素原子及び水酸基のいずれかを表す。Ｒ４は水素原子、水酸基及びアルコキシ基のいずれかを表す。Ｒ５は水素原子、水酸基及びアルキレン基のいずれかを表す。
2007052330.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式（１）で表されることを特徴とするカルコン還元体。
【化１３】
2007052330.tif 000019
ただし、前記構造式（１）中、Ｒ１は酸素原子、及び水酸基と水素原子のいずれかを表す。Ｒ２は水素原子、水酸基及びアルキル基のいずれかを表す。Ｒ３は水素原子及び水酸基のいずれかを表す。Ｒ４は水素原子、水酸基及びアルコキシ基のいずれかを表す。Ｒ５は水素原子、水酸基及びアルキレン基のいずれかを表す。
【請求項２】
下記構造式で表される、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４及びロウレイリンＣから選択される少なくとも１種である請求の範囲第１項に記載のカルコン還元体。
【化１４】
2007052330.tif 000020
【化１５】
2007052330.tif 000021
【化１６】
2007052330.tif 000022
【化１７】
2007052330.tif 000023
【化１８】
2007052330.tif 000024
【請求項３】
マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出して油溶性甘草抽出物を得る抽出工程と、
得られた油溶性甘草抽出物を還元処理して還元処理物を得る還元工程と、
該還元処理物からカルコン還元体を分離し、精製する精製工程と
を含むことを特徴とするカルコン還元体の製造方法。
【請求項４】
グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）を、エタノール、含水エタノール、及び酢酸エチルから選択される少なくとも１種の溶媒で抽出し、得られた抽出物を水素ガスで還元し、得られた還元処理物からカルコン還元体を分離し、精製する請求の範囲第３項に記載のカルコン還元体の製造方法。
【請求項５】
マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を抽出原料とする油溶性甘草抽出物を還元処理してなることを特徴とする油溶性甘草抽出物の還元処理物。
【請求項６】
マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物が、グリチリザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）、グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリザ・アラレアシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ａｒａｌｅａｓｉｓ）、グリチリザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）及びグリチリザ・エチナタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｅｃｈｉｎａｔａ）から選択される少なくとも１種である請求の範囲第５項に記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物。
【請求項７】
マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出して油溶性甘草抽出物を得る抽出工程と、
得られた油溶性甘草抽出物を還元処理する還元工程と、
を含むことを特徴とする油溶性甘草抽出物の還元処理物の製造方法。
【請求項８】
グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）を、エタノール、含水エタノール、及び酢酸エチルから選択される少なくとも１種の溶媒で抽出し、得られた抽出物を水素ガスで還元する請求の範囲第７項に記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物の製造方法。
【請求項９】
請求の範囲第１項から第２項のいずれかに記載のカルコン還元体を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項１０】
チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用のいずれかを有する請求の範囲第９項に記載の美白剤。
【請求項１１】
請求の範囲第５項から第６項のいずれかに記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物を含有することを特徴とする美白剤。
【請求項１２】
チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用のいずれかを有する請求の範囲第１１項に記載の美白剤。
【請求項１３】
請求の範囲第１項から第２項のいずれかに記載のカルコン還元体を含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項１４】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用のいずれかを有する請求の範囲第１３項に記載の抗炎症剤。
【請求項１５】
請求の範囲第５項から第６項のいずれかに記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物を含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項１６】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用のいずれかを有する請求の範囲第１５項に記載の抗炎症剤。
【請求項１７】
マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出してなる油溶性甘草抽出物を含有することを特徴とするシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤。
【請求項１８】
請求の範囲第１７項に記載のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧料。
【請求項１９】
請求の範囲第９項から第１２項のいずれかに記載の美白剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧料。
【請求項２０】
請求の範囲第１３項から第１６項のいずれかに記載の抗炎症剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カルコン還元体及び該カルコン還元体の製造方法、油溶性甘草抽出物の還元処理物及び該油溶性甘草抽出物の還元処理物の製造方法、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害剤、並びに、これらを含有する美白剤、抗炎症剤、及び化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
古くから甘草（Ｌｉｃｏｒｉｃｅ）は、生薬として知られており、現在では主として食品用甘味料、医薬品、医薬部外品等の原料として使用されている。これらの中でも、甘草の水抽出物であるグリチルリチン及びグリチルレチン酸は、抗炎症作用、抗潰瘍作用、及び抗アレルギー作用などの優れた薬理作用を有し、広く飲食品、医薬品及び化粧品などに利用されている。【０００３】
また、前記甘草をエタノール、酢酸エチル等の有機溶媒で抽出した油溶性甘草抽出物は、上記グリチルリチン及びグリチルレチン酸以外にも多くのフラボノイドを含有することが知られている。このような油溶性甘草抽出物は、例えば、抗酸化作用（特許文献１参照）、酸化防止作用（特許文献２参照）、美白作用（特許文献３及び特許文献４参照）、紫外線吸収作用（特許文献５参照）、などの有用な作用を有することが開示されている。【０００４】
【特許文献１】特開昭５８−２１７５８３号公報
【特許文献２】特開昭５９−４６２１０号公報
【特許文献３】特開平１−１４９７０６号公報
【特許文献４】特開平１−３１１０１１号公報
【特許文献５】特開平１−１５７９０９号公報
【発明の開示】
【０００５】
本発明は、第１に、優れた美白作用及び抗炎症作用を有するカルコン還元体及び該カルコン還元体の製造方法、並びに該カルコン還元体を含有し、優れたチロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用のいずれかを有する美白剤、該カルコン還元体を含有し、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用のいずれかを有する抗炎症剤、及び該カルコン還元体を有効成分として含有する化粧料を提供することを目的とする。
本発明は、第２に、優れた美白作用及び抗炎症作用を有する油溶性甘草抽出物の還元処理物及び該油溶性甘草抽出物の還元処理物の製造方法、並びに該油溶性甘草抽出物の還元処理物を含有し、優れたチロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用のいずれかを有する美白剤、該カルコン還元体を含有し、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用のいずれかを有する抗炎症剤、及び該油溶性甘草抽出物の還元処理物を有効成分として含有する化粧料を提供することを目的とする。
本発明は、第３に、優れたシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有するシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、及び該シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤を有効成分として含有する化粧料を提供することを目的とする。
【０００６】
前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  下記構造式（１）で表されることを特徴とするカルコン還元体である。
【化１】
2007052330.tif 000003
ただし、前記構造式（１）中、Ｒ１は酸素原子、及び水酸基と水素原子のいずれかを表す。Ｒ２は水素原子、水酸基及びアルキル基のいずれかを表す。Ｒ３は水素原子及び水酸基のいずれかを表す。Ｒ４は水素原子、水酸基及びアルコキシ基のいずれかを表す。Ｒ５は水素原子、水酸基及びアルキレン基のいずれかを表す。
＜２＞  下記構造式で表される、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４及びロウレイリンＣから選択される少なくとも１種である前記＜１＞に記載のカルコン還元体である。
【化２】
2007052330.tif 000004
【化３】
2007052330.tif 000005
【化４】
2007052330.tif 000006
【化５】
2007052330.tif 000007
【化６】
2007052330.tif 000008
＜３＞  マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出して油溶性甘草抽出物を得る抽出工程と、
得られた油溶性甘草抽出物を還元処理して還元処理物を得る還元工程と、
該還元処理物からカルコン還元体を分離し、精製する精製工程と
を含むことを特徴とするカルコン還元体の製造方法である。
＜４＞  グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）を、エタノール、含水エタノール、及び酢酸エチルから選択される少なくとも１種の溶媒で抽出し、得られた抽出物を水素ガスで還元し、得られた還元処理物からカルコン還元体を分離し、精製する前記＜３＞に記載のカルコン還元体の製造方法である。
＜５＞  マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を抽出原料とする油溶性甘草抽出物を還元処理してなることを特徴とする油溶性甘草抽出物の還元処理物である。
＜６＞  マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物が、グリチリザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）、グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリザ・アラレアシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ａｒａｌｅａｓｉｓ）、グリチリザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）及びグリチリザ・エチナタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｅｃｈｉｎａｔａ）から選択される少なくとも１種である前記＜５＞に記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物である。
＜７＞  マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出して油溶性甘草抽出物を得る抽出工程と、
得られた油溶性甘草抽出物を還元処理する還元工程と、
を含むことを特徴とする油溶性甘草抽出物の還元処理物の製造方法である。
＜８＞  グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）を、エタノール、含水エタノール、及び酢酸エチルから選択される少なくとも１種の溶媒で抽出し、得られた抽出物を水素ガスで還元する前記＜７＞に記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物の製造方法である。
＜９＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のカルコン還元体を含有することを特徴とする美白剤である。
＜１０＞  チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用のいずれかを有する前記＜９＞に記載の美白剤である。
＜１１＞  前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物を含有することを特徴とする美白剤である。
＜１２＞  チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用のいずれかを有する前記＜１１＞に記載の美白剤である。
＜１３＞  前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のカルコン還元体を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜１４＞  ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用のいずれかを有する前記＜１３＞に記載の抗炎症剤である。
＜１５＞  前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の油溶性甘草抽出物の還元処理物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜１６＞  ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用のいずれかを有する前記＜１５＞に記載の抗炎症剤である。
＜１７＞  マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出してなる油溶性甘草抽出物を含有することを特徴とするシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤である。
＜１８＞  前記＜１７＞に記載のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧料である。
＜１９＞  前記＜９＞から＜１２＞のいずれかに記載の美白剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧料である。
＜２０＞  前記＜１３＞から＜１６＞のいずれかに記載の抗炎症剤を有効成分として含有することを特徴とする化粧料である。
【０００７】
本発明のカルコン還元体は、上記構造式（１）で表される。該構造式（１）で表されるカルコン還元体としては、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、ロウレイリンＣなどが挙げられ、これらのうち、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４は新規物質である。また、本発明の油溶性甘草抽出物の還元処理物は、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を抽出原料とする油溶性甘草抽出物を還元処理して得られる。前記カルコン還元体及び油溶性甘草抽出物の還元処理物が、優れたチロシナーゼ活性阻害作用、及びメラニン産生抑制作用を有し、美白剤として有用である。また、前記カルコン還元体及び油溶性甘草抽出物の還元処理物は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有し、抗炎症剤として有用である。更に、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出してなる油溶性甘草抽出物は、優れたシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有し、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤として有用である。これらカルコン還元体、油溶性甘草抽出物の還元処理物、及び油溶性甘草抽出物の優れた作用効果については、今まで全く知られておらず、本発明者らによる新知見である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
（カルコン還元体）
本発明のカルコン還元体は、下記構造式（１）で表される。
【化７】
2007052330.tif 000009
ただし、前記構造式（１）中、Ｒ１は酸素原子、及び水酸基と水素原子のいずれかを表す。Ｒ２は水素原子、水酸基及びアルキル基のいずれかを表す。Ｒ３は水素原子及び水酸基のいずれかを表す。Ｒ４は水素原子、水酸基及びアルコキシ基のいずれかを表す。Ｒ５は水素原子、水酸基及びアルキレン基のいずれかを表す。【０００９】
前記構造式（１）におけるＲ２のアルキル基としては、直鎖状又は分岐状のいずれであってもよく、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３、ヘキシル基、などが挙げられ、これらの中でも、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３が特に好ましい。
前記構造式（１）におけるＲ４のアルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基などが挙げられ、これらの中でも、メトキシ基が特に好ましい。
前記構造式（１）におけるＲ５のアルキレン基としては、直鎖状又は分岐状のいずれであってもよく、例えば、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、アミレン基、−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２などが挙げられ、これらの中でも、−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２が特に好ましい。【００１０】
前記構造式（１）で表されるカルコン還元体としては、下記構造式で表される、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４及びロウレイリンＣの少なくともいずれかが好適に挙げられる。【００１１】
【化８】
2007052330.tif 000010
【化９】
2007052330.tif 000011
【化１０】
2007052330.tif 000012
【化１１】
2007052330.tif 000013
【化１２】
2007052330.tif 000014
【００１２】
前記カルコン還元体は、後述するように、優れたチロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用のいずれかを有する美白剤、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用のいずれかを有する抗炎症剤、及び該カルコン還元体を有効成分として含有する化粧料として好適であり、以下の本発明のカルコン還元体の製造方法により製造することができる。【００１３】
（カルコン還元体の製造方法）
本発明のカルコン還元体の製造方法は、抽出工程と、還元工程、精製工程とを含んでなり、更に必要に応じてその他の工程を含んでなる。【００１４】
−抽出工程−
前記抽出工程は、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出して油溶性甘草抽出物を得る工程である。【００１５】
前記マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物としては、例えば、グリチリザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）、グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリザ・アラレアシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ａｒａｌｅａｓｉｓ）、グリチリザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、グリチリザ・エチナタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｅｃｈｉｎａｔａ）などが挙げられる。これらの中でも、グリチリザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）、グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）、グリチリザ・ウラレンシス（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）が好ましく、これらの中でも、グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）が、カルコンが高濃度に含有されている点で特に好ましい。
なお、甘草は生産地の名前を冠して呼ばれることが多く、例えば、中国東北西北甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、新彊甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｅｃｈｉｎａｔａ）、ロシア甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ）、スペイン甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｅｃｈｉｎａｔａ）、モンゴル産甘草、アフガニスタン甘草などの別名がある。【００１６】
前記油溶性甘草抽出物の抽出原料としては、上記マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物の根、根茎、葉、及び茎のいずれの部位でも使用することができるが、フラボノイドの含有率が高い点から根及び根茎の少なくともいずれかが特に好ましい。該抽出原料は、生のものを使用しても乾燥させたものを使用してもよいが、乾燥根、乾燥根茎が特に好ましい。
また、前記油溶性甘草抽出物の抽出原料としては、上記マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物の抽出原料の水抽出残渣を用いることもできる。
前記甘草の水抽出残渣とは、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物からグリチルリチンなどを得るために水、温水及び熱水、並びに中性乃至微アルカリ性の冷水、温水及び熱水の少なくともいずれかで抽出した後の固形残渣を意味する。なお、前記水抽出後の残渣は、含水及び乾燥状態のいずれであってもよい。
このように甘草の水抽出残渣を抽出原料として用いることにより、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物の水抽出残渣の有効利用が図れ、生産性が向上するという利点がある。【００１７】
前記有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて選択することができ、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、含水メタノール、含水エタノール、含水プロパノールなどが挙げられる。更に、超臨界流体として二酸化炭素を用いることもできる。これらの有機溶媒の中では、エタノール、含水エタノール、酢酸エチルを用いることが安全性の点で好ましい。前記含水エタノールとしては、エタノール濃度３０〜９９質量％のものが好適である。【００１８】
前記マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物又は甘草水抽出残渣から前記有機溶媒を用いて油溶性甘草抽出物を得るための抽出条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出原料に対し２〜１５倍量の有機溶媒を加え、撹拌しながら常温で抽出する方法、加熱乾留して抽出する方法が挙げられる。また、これらの方法をそれぞれ単独で、又は組み合わせて繰り返し操作すれば、抽出効率が向上するのでより好ましい。【００１９】
得られた抽出液は、遠心分離及びろ過により不溶物を取り除いた後、油溶性甘草抽出物として、そのまま使用することもできるし、更に常法により、濃縮して使用することもできる。また、目的とする生理的効果が低下しない範囲で脱臭及び脱色などを適宜行ってもよい。この脱臭及び脱色には、活性炭、合成吸着樹脂及びイオン交換樹脂などを用いることが一般的である。また、適当な方法で抽出液を乾燥させれば、油溶性甘草抽出物として、黄褐色の抽出物粉末を得ることができる。
得られた液状抽出物をそのまま、又は液状抽出物を濃縮したもの、更には液状抽出物の粉末或いは固形の乾燥物が油溶性甘草抽出物として利用される。【００２０】
−還元工程−
前記還元工程は、上記抽出工程により得られた油溶性甘草抽出物を還元処理する工程である。
前記還元処理としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、得られた油溶性甘草抽出液に触媒（例えば、パラジウムカーボン）の存在下で水素ガスを吹き込む方法、含水素錯化合物（例えば、水素化ホウ素ナトリウム）を用いてエタノール存在下で反応させる方法などが挙げられる。
具体的には、油溶性甘草抽出液に触媒（例えば、パラジウムカーボン）の存在下で水素ガスを吹き付けて還元処理した後、濾過により触媒を濾取することにより、還元処理物の溶液が得られる。【００２１】
−精製工程−
前記精製工程は、上記還元工程により得られた還元処理物から、上記構造式で表される、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４及びロウレイリンＣの少なくともいずれかを分離し、精製する工程である。
前記分離方法としては、特に制限はなく、公知の有機化合物の精製方法の中から目的に応じて適宜選択することができ、例えば、順相シリカゲルクロマトグラフィー及び逆相クロマトグラフィーのいずれかにより処理した後、アセトンから結晶化させる方法により行うことができる。この方法によれば、比較的容易に有効成分の純品を得ることができる。また、他の精製方法として、合成吸着体などによるカラムクロマトグラフィー、液−液向流抽出、などが挙げられる。【００２２】
具体的には、抽出物を、脱色、脱臭、活性向上などを目的として多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出し、精製する。この場合、多孔性樹脂としては、特に制限はなく目的に応じて適宜選択でき、例えば、セパビーズＳＰ−２０７、ダイアイオンＨＰ−２０（いずれも三菱化学株式会社製）などを用いることができる。また、アルコールとしては、メタノール、エタノールなどを用いることが好ましい。【００２３】
次に、アルコール溶出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理する。吸着剤としてはオクタデシルシリカゲル（ＯＤＳ）が好適に使用される。具体的には、ＯＤＳを充填したガラス製のカラムを用い、移動相としてヘキサン：酢酸エチル＝１：１（容量比）を流し、その溶出液を集め、脱溶媒して、カルコン還元体濃縮物を得ることができる。【００２４】
次に、吸着処理後の溶出液を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する。
これにより、上記構造式（１）で表されるカルコン還元体を含有する区分を分画して、純粋なカルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４及びロウレイリンＣを単離することができる。
液体クロマトグラフィーによる分画方法としては、特に制限されず、通常の方法で行うことができる。例えば、固定相としては、シリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂などの公知の担体を適宜選択して使用することができる。また、移動相としては、水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒が用いられ、水溶性溶媒としては、メタノールなどが好適に用いられる。
なお、前記分画操作は、単独の固定相を用いてもよく、また、別種の固定相を組み合わせて行うこともできる。【００２５】
以上により得られる、カルコン還元体は、そのままでも本発明の美白剤、及び抗炎症剤として使用することもできるが常法に従って製剤化して提供することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。【００２６】
本発明のカルコン還元体の製造方法により製造されたカルコン還元体は、後述する実施例の結果から明らかなように、優れた美白作用、抗炎症作用を有しており、これらの作用を利用して各種用途に用いることができるが、以下に説明する本発明の美白剤、抗炎症剤、化粧料などに特に好適に用いられる。【００２７】
（油溶性甘草抽出物の還元処理物及びその製造方法）
本発明の油溶性甘草抽出物の還元処理物は、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を抽出原料とする油溶性甘草抽出物を還元処理してなる。前記マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物及び油溶性甘草抽出物を還元処理としては、上述したとおりである。【００２８】
本発明の油溶性甘草抽出物の還元処理物の製造方法は、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出して油溶性甘草抽出物を得る抽出工程と、
得られた油溶性甘草抽出物を還元処理する還元工程と、を含み、更に必要に応じてその他の工程を含んでなる。前記抽出工程及び還元工程としては、上述したとおりである。
この場合、グリチリザ・インフラタ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ）を、エタノール、含水エタノール、及び酢酸エチルから選択される少なくとも１種の溶媒で抽出し、得られた抽出物を水素ガスで還元することが好ましい。【００２９】
（シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤）
本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、マメ科グリチリザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属植物を有機溶媒で抽出してなる油溶性甘草抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。前記油溶性甘草抽出物としては、上述したとおりである。
本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、皮膚の炎症を防止及び肌荒れを改善することができると共に、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、以下に説明する化粧料に配合するのに好適である。【００３０】
（美白剤）
本発明の美白剤は、本発明の前記カルコン還元体を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。前記カルコン還元体としては、上述したとおりである。
本発明の美白剤は、本発明の前記油溶性甘草抽出物の還元処理物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。前記油溶性甘草抽出物の還元処理物としては、上述したとおりである。
なお、前記カルコン還元体と前記油溶性甘草抽出物の還元処理物とを併用してもよい。【００３１】
前記美白剤は、チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用を有しており、優れた美白効果を奏するものである。
前記チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用は、皮膚においてメラニンは紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、次いで、５,６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成される。したがって皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）を予防し、治療するためには、メラニン産生過程を阻害すること、あるいは既に産生したメラニンを淡色漂白することが有効であると考えられる。【００３２】
（抗炎症剤）
本発明の抗炎症剤は、本発明の前記カルコン還元体を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。前記カルコン還元体としては、上述したとおりである。
本発明の抗炎症剤は、本発明の前記油溶性甘草抽出物の還元処理物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。前記油溶性甘草抽出物の還元処理物としては、上述したとおりである。
なお、前記カルコン還元体と前記油溶性甘草抽出物の還元処理物とを併用してもよい。【００３３】
前記抗炎症剤は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有しており、優れた抗炎症効果を奏するものである。
前記ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用は、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標としてヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。前記ヒスタミンは、マスト細胞（肥満細胞）内に存在し、マスト細胞が刺激を受けると脱顆粒反応により放出され、起炎及びアレルギー物質として作用する。また、活性化されたマスト細胞から放出されたヒスタミンは、血管透過性亢進、平滑筋収縮、粘液分泌亢進等をもたらし、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、じんま疹等のアレルギー疾患を生じさせる。したがってヘキソサミニダーゼの遊離抑制、即ちヒスタミンの遊離抑制により、アレルギー疾患性疾患や炎症性疾患を予防及び治療することができる。
前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用は、炎症の個々の反応にはプロスタグランジンが重要な役割を果たしており、この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２の関与が明らかとなっている。したがってシクロオキシゲナーゼ−２活性を阻害することによって、シクロオキシゲナーゼ−２の関与する炎症疾患を予防及び治療することができる。【００３４】
本発明の美白剤及び抗炎症剤は、皮膚の美白化及び炎症を防止及び肌荒れを改善することができると共に、皮膚や頭皮に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、以下に説明する化粧料に配合するのに好適である。【００３５】
（化粧料）
本発明の化粧料は、本発明の前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、本発明の前記美白剤、及び本発明の前記抗炎症剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。【００３６】
前記化粧料としては、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、リップ、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディシャンプー等の各種化粧料に配合してから吸収させることにより、チロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用の少なくともいずれかを高めるのに役立たせることができる。
この場合、本発明の前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤の化粧料への配合量は、油溶性甘草抽出物の乾燥物に換算して０．０００１〜１０質量％が好ましい。
また、本発明の前記美白剤、又は抗炎症剤の化粧料への配合量は、油溶性甘草抽出物の還元処理物又はカルコン還元体の乾燥物に換算して０．０００１〜１０質量％が好ましい。【００３７】
本発明の化粧料においては、本発明の前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、本発明の前記美白剤及び本発明の前記抗炎症剤の少なくともいずれか以外にも、通常化粧料に用いられる各種任意成分である収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、抗アレルギー剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などを目的に応じて適宜選択して配合し得る。【００３８】
なお、本発明の前記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、本発明の前記美白剤、本発明の前記抗炎症剤、及び本発明の前記化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。【００３９】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。【００４０】
（製造例１）
−油溶性甘草抽出物の調製−
甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ  Ｂａｔａｌｉｎ）の根１ｋｇに無水エタノ−ル１０Ｌを加え、還流下で５時間抽出を行った。得られた抽出液を減圧濃縮した。この濃縮した抽出液に酢酸エチル１Ｌを加え、還流下で５時間抽出を行った。得られた抽出液を減圧濃縮した。この濃縮液に酢酸エチル１Ｌを加え、還流下で５時間抽出し、減圧乾燥後、粉砕して、油溶性甘草抽出物３０ｇを得た。
得られた製造例１の油溶性甘草抽出物中におけるフラボノイドの含有率を高速液体クロマトグラフィー（日本分光株式会社製）で定量した結果、リコカルコンＡが２０質量％含まれていた。【００４１】
（実施例１）
−グリチリザ・インフラタ抽出物の還元処理物の調製−
製造例１のリコカルコンＡを含むグリチリザ・インフラタ抽出物９００ｇ、エタノール２７００ｇ及び５質量％パラジウムカーボン９０ｇの懸濁液を撹拌下、反応液中に水素ガスを３０℃にて４時間吹き込んだ。次いで、濾過により触媒を濾取し、グリチリザ・インフラタ抽出物の還元処理物のエタノール溶液を得た。【００４２】
（実施例２）
−カルコン還元体の分離、精製−
実施例１のグリチリザ・インフラタエキス還元処理物２０．０ｇを、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１（容量比）の混合液に溶解し、ＳｉＯ２（商品名：シリカゲル６０、富士シリシア化学（株）製）を充填したガラス製のカラム上部より流入して、ＳｉＯ２に吸着させた。移動相としてヘキサン：酢酸エチル＝１：１（容量比）の混合液を流し、その溶出液を集め、減圧下で溶媒を留去して、フラクション１（５３ｍｇ）、フラクション２（６７０ｍｇ）、フラクション３（７．６ｇ）、フラクション４（４．５ｇ）、及びフラクション５（８．５ｇ）に分画した。
前記フラクション３（３．４ｇ）を、メタノール：水＝７０：３０（容量比）の混合溶液に溶解し、ＯＤＳ（商品名：クロマトレックスＯＤＳ  ＤＭ１０２０Ｔ、富士シリシア化学（株）製）を充填したガラス製のカラム上部より流入して、ＯＤＳに吸着させた。移動相として、メタノール：水＝７０：３０（容量比）を流し、その溶出液を集め、減圧下で溶媒を留去して、カルコン還元体−１濃縮物（２．７ｇ）を得た。得られたカルコン還元体−１濃縮物５００ｍｇを下記の液体クロマトグラフィーを用いて分画した。
次に、前記フラクション４（４．５ｇ）を、メタノール：水＝６５：３５（容量比）の混合溶液に溶解し、ＯＤＳ（商品名：クロマトレックスＯＤＳ  ＤＭ１０２０Ｔ、富士シリシア化学（株）製）を充填したガラス製のカラム上部より流入して、ＯＤＳに吸着させた。移動相として、メタノール：水＝６５：３５（容量比）を流し、その溶出液を集め、減圧下で溶媒を留去して、カルコン還元体−２＋カルコン還元体−３濃縮物（３８０ｍｇ）、カルコン還元体−４（１３０ｍｇ）、ロウレイリンＣ濃縮物（１８０ｍｇ）を得た。得られたそれぞれの濃縮物を下記の液体クロマトグラフィーを用いて分画した。【００４３】
＜液体クロマトグラフィー条件＞
・固定相：ＪＡＩＧＥＬ  ＧＳ−３１０（日本分析工業株式会社製）
・カラム径：２０ｍｍ
・カラム長：５００ｍｍ
・移動相流量：５ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＲＩ
ここで、保持時間６０分〜７０分に流出する画分を、リサイクルにより精製を行い、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣを単離した。これら単離した化合物について、１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲ分析を行った。結果を下記に示す。【００４４】
〔カルコン還元体−１〕
＜１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属水素）：＞０．５６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３’’−Ｈ３），１．２４（６Ｈ，ｓ，４’’，５’’−Ｈ３），１．８５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，１５．１Ｈｚ，２’’−Ｈ２），２．８４（２Ｈ，ｄｄ−ｌｉｋｅ，β−Ｈ２），３．７３（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），３．７４（２Ｈ，ｄｄ−ｌｉｋｅ，α−Ｈ２），６．３２（１Ｈ，ｂｒ  ｓ，３−Ｈ），６．７８（１Ｈ，ｓ，６−Ｈ），６．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，３’，５’−Ｈ），７．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２’，６’−Ｈ）
＜１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞１０．０（３’’−Ｃ），２８．５（４’’，５’’−Ｃ），２７．５（β−Ｃ），３４．０（２’’−Ｃ），３８．５（１’’−Ｃ），４０．０（α−C），５５．６（ＯＭｅ），１００．６（３−Ｃ），１１６．１（３’，５’−Ｃ），１１９．６（１−Ｃ），１２６．７（５−Ｃ），１３０．０（１’−Ｃ），１３０．３（６−Ｃ），１３１．９（２’，６’−Ｃ），１５６．２（４−Ｃ），１５７．２（２−Ｃ），１６３．６（４’−Ｃ），２０１．９（Ｃ＝Ｏ）【００４５】
〔カルコン還元体−２〕
＜１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属水素）：＞０．６１（３Ｈ，ｔ−ｌｉｋｅ，３’’−Ｈ３），１．２８（６Ｈ，ｓ，４’’，５’’−Ｈ３），１．８４（２Ｈ，ｄｄ−ｌｉｋｅ，２’’−Ｈ２），１．９０（２Ｈ，ｍ，α−Ｈ２），２．４６（２Ｈ，ｍ，β−Ｈ２），３．７３（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），４．４５（１Ｈ，ｄｄ−ｌｉｋｅ，ＣＨＯＨ），６．３２（１Ｈ，ｂｒ  ｓ，３’−Ｈ），６．７４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３’，５’−Ｈ），６．７８（１Ｈ，ｓ，６’−Ｈ），
７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２’，６’−Ｈ）
＜１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞１０．０（３’’−Ｃ），２７．６（β−Ｃ），２８．５（４’’，５’’−Ｃ），３４．１（２’’−Ｃ），３８．３（１’’−Ｃ），４０．４（α−Ｃ），５５．７（ＯＭｅ），７４．７（ＣＨＯＨ），１００．７（３−Ｃ），１１５．８（３’，５’−Ｃ），１２０．７（１−Ｃ），１２６．５（５−Ｃ），１２８．５（２’，６’−Ｃ），１３０．３（６−Ｃ），１３７．０（１’−Ｃ），１５６．２（４−Ｃ），１５７．２（２−Ｃ），１５７．５（４’−Ｃ）【００４６】
〔カルコン還元体−３〕
＜１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属水素）：＞２．８５（２Ｈ，ｄｔ−ｌｉｋｅ，β−Ｈ２），３．１２（２Ｈ，ｄｔ−ｌｉｋｅ，α−Ｈ２），３．７８（３Ｈ，ＯＭｅ），６．４８（２Ｈ，ｂｒ  ｓ，２，６−Ｈ），６．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，３’，５’，−Ｈ），７．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２’，６’−Ｈ）
＜１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞２６．４（β−Ｃ），４０．５（α−Ｃ），６０．８（ＯＭｅ），１１１．８（３−Ｃ），１１６．１（３’，５’−Ｃ），１２０．３（６−Ｃ），１２６．４（１−Ｃ），１２９．７（１’−Ｃ），１３１．７（２’，６’−Ｃ），１３９．２（４−Ｃ），１４５．８（５−Ｃ），１４７．５（２−Ｃ），１６３．４（４’−Ｃ），２０１．１（Ｃ＝Ｏ）【００４７】
〔カルコン還元体−４〕
＜１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属水素）：＞１．６０（３Ｈ，ｓ，４’’−Ｈ３），１．６３（３Ｈ，ｓ，５’’−Ｈ３），２．７６（２Ｈ，ｄｔ−ｌｉｋｅ，β−Ｈ２），３．０１（２Ｈ，ｄｔ−ｌｉｋｅ，α−Ｈ２），３．２１（２Ｈ，ｄｄ−ｌｉｋｅ，１’−Ｈ２），３．６９（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），５．２０（１Ｈ，ｔ−ｌｉｋｅ，２’−Ｈ），６．３９（２Ｈ，ｂｒ  ｓ，３，６−Ｈ），６．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，５’−Ｈ），７．６０（１Ｈ，ｄｄ−ｌｉｋｅ，６’−Ｈ），７．６２（１Ｈ，ｄ−ｌｉｋｅ，２’−Ｈ）
＜１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞１７．９（４’’−Ｃ），２６．０（５’’−Ｃ），２６．７（β−Ｃ），２９．１（１’’−Ｃ），４０．６（α−Ｃ），６０．９（ＯＭｅ），１１１．８（３−Ｃ），１１５．４（５’−Ｃ），１２０．３（６−Ｃ），１２３．１（２’’−Ｃ），１２６．４（１−Ｃ），１２９．４（３’−Ｃ），１２９．４（６’−Ｃ），１３１．２（２’−Ｃ），１３３．６（３’’−Ｃ），１３３．６（１’−Ｃ），１３９．３（４−Ｃ），１４５．９（５−Ｃ），１４７．５（２−Ｃ），１６１．４（４’−Ｃ），２０１．４（Ｃ＝Ｏ）【００４８】
〔ロウレイリンＣ〕
＜１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属水素）：＞２．８２（２Ｈ，ｄｔ−ｌｉｋｅ，α−Ｈ２），３．０７（２Ｈ，ｄｔ−ｌｉｋｅ，β−Ｈ２），３．７３（３Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），６．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２，８．１Ｈｚ，５−Ｈ），６．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，３−Ｈ），６．８０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．１，６．９Ｈｚ，３’，５’−Ｈ），６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，６−Ｈ），７．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．１，６．９Ｈｚ，２’，６’−Ｈ）
＜１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）：＞２６．９（β−Ｃ），３９．９（α−Ｃ），５５．５（ＯＭｅ），９９．７（３−Ｃ），１０７．６（５−Ｃ），１１６．１（３’，５’−Ｃ），１２１．２（１−Ｃ），１２９．８（１’−Ｃ），１３１．１（６−Ｃ），１３１．８（２’，６’−Ｃ），１５８．０（４−Ｃ），１５９．５（２−Ｃ），１６３．５（４’−Ｃ），２０１．５（Ｃ＝Ｏ）【００４９】
以上の結果から、ＳｉＯ２、オクタデシルシリカゲル（ＯＤＳ）による分離、更に液体クロマトグラフィーで単離して得られるカルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣが、前記構造式（１）で表される化合物であることが確定できた。【００５０】
（実施例３）
−チロシナーゼ活性阻害作用試験−
被験試料として、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の油溶性甘草抽出物の還元処理物、実施例２のカルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣを用い、以下のようにして、チロシナーゼ活性阻害作用を試験した。
まず、４８ｗｅｌｌプレートに、Ｍｃｌｌｖａｉｎｅ緩衝液（ｐＨ６．８）０．２ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌチロシン溶液０．０６ｍｌ、各被試験料の２５質量％ＤＭＳＯ溶液０．１８ｍｌを加え、３７度で１０分間静置した。これに、２，５００ｕｎｉｔｓ／ｍｌチロシナーゼ溶液０．０２ｍｌを加え、引き続き、３７℃で１５分間反応した。反応終了後、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
以上の結果から、下記数式１によりチロシナーゼ活性阻害率を算出した。結果を表１に示す。なお、チロシナーゼ活性阻害率の数値が大きいほど、チロシナーゼ活性阻害作用が強いことを意味する。
＜数式１＞
チロシナーゼ活性阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
ただし、前記数式１中、Ａは酵素溶液添加、試料溶液添加時の吸光度を表す。Ｂは酵素溶液無添加、試料溶液添加時の吸光度を表す。Ｃは酵素溶液添加、試料溶液無添加時の吸光度を表す。Ｄは酵素溶液無添加、試料溶液無添加時の吸光度を表す。【００５１】
【表１】
2007052330.tif 000015
表１の結果から、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の還元処理物、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣは、チロシナーゼ活性阻害作用を有し、特に、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の還元処理物、カルコン還元体−３、及びカルコン還元体−４が、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有することが認められる。【００５２】
（実施例４）
−メラニン産生抑制作用試験−
被験試料として、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の油溶性甘草抽出物の還元処理物、実施例２のカルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣを用い、以下のようにして、メラニン産生抑制作用を試験した。
まず、Ｂ１６メラノーマ細胞を、１０質量％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで８．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に希釈した。その後、１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭを２ｍｌ加えた直径６０ｍｍシャーレに０．５ｍｌずつ播種し、８時間培養した。培養後、１０質量％ＦＢＳ及び１ｍｍｏｌ／ｌテオフィリン含有ダルベッコＭＥＭで終濃度の２倍に調整した被験試料を２．５ｍｌ添加し、４日間培養した。培養終了後、トリプシン処理により細胞を回収し、細胞数を数えた。その後、遠心分離（２５００ｇ、６分間）して培地を取り除き、１０質量％ＤＭＳＯ含有１ｍｍｏｌ／ｌのＮａＯＨ溶液２ｍｌを添加して超音波破砕機により細胞を破壊した。これをろ過し、得られたろ液の波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。
以上の結果から、メラニン産生抑制率を下記数式２により求めた。結果を表２に示す。なお、メラニン産生抑制率の数値が大きいほど、メラニン産生抑制作用が強いことを意味する。
＜数式２＞
メラニン産生抑制率（％）＝｛１−(Ｂ−Ａ)／Ａ｝×｛Ｃ／(Ｄ−Ｃ)｝×１００
ただし、前記数式２中、Ａは試料無添加時の４７５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは試料添加時の４７５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは試料無添加時の細胞数を表す。Ｄは試料添加時の細胞数を表す。【００５３】
【表２】
2007052330.tif 000016
表２の結果から、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の還元処理物、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣは、メラニン産生抑制作用を有し、特に製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の還元処理物、カルコン還元体−１、及びカルコン還元体−２が、優れたメラニン産生抑制作用を有することが認められる。【００５４】
（実施例５）
−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験−
被験試料として、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の油溶性甘草抽出物の還元処理物、実施例２のカルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣを用い、以下のようにして、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する。
まず、２５ｍＬの培養フラスコに入れた１５質量％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地にラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）１．０×１０６個を播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で４日間培養した。次いでトリプシン処理し、遠心分離（８００ｒｐｍ，４分間）して細胞を集めた。得られた細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌで培地に懸濁し、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ＩｇＥ）を０．５μｇ／ｍｌの濃度で添加した。得られた細胞浮遊液を９６穴プレートの１穴に付き１００μｌずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で２４時間培養した。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で２回洗浄した。
次いで、上記緩衝液３０μｌ及び各試料溶液１０μｌを加え、３７℃で１０分間インキュベーションした。
次に、ジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μｌを加え、次いで、３７℃で１５分間インキュベーションした。その後、氷冷下で上清１０μｌを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍｍｏｌ／ｌのｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μＬを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。反応終了後、０．１ｍｏｌ／ｌのＮａＣＯ−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液２５０μＬを加え、マイクロプレートリーダーにて６５０ｎｍを対照に４１５ｎｍにおける吸光度Ａを測定した。試料溶液の代りにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度測定を行った。このとき測定した吸光度をＢとした。
また、細胞上清と０．１ｍｏｌ／ｌのＮａＣＯ−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液を同様の処理で反応させたものについても、吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度をＣとした）。同様の操作をＤＮＰ−ＢＳＡの代わりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行った。このとき、測定された吸光度をＤとした。
以上の結果から、下記数式３によりへキソサミニダーゼ遊離抑制率を求めた。結果を表３に示す。なお、へキソサミニダーゼ遊離抑制率の数値が大きいほど、へキソサミニダーゼ遊離抑制作用が強いことを意味する。
＜数式３＞
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝
〔１−｛（Ａ−Ｃ−Ｄ）／（Ｂ−Ｄ）｝〕×１００【００５５】
【表３】
2007052330.tif 000017
表３の結果から、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の還元処理物、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣは、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有し、特にカルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣが、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが認められる。【００５６】
（実施例６）
−シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性阻害作用試験−
被験試料として、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の油溶性甘草抽出物の還元処理物、実施例２のカルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣを用い、以下のようにして、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を試験した。
Ｈｗａｎｇ，Ｂ．−Ｙ．らの方法（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ  ６７（２００１）、４０６−４１０）に一部修正を加えて行った。
まず、マウス由来マクロファージ様細胞（ＲＡＷ２６４．７）を前培養後、細胞を集め、１×１０５個／ｍＬに調製し、９６穴プレートに１００μｌづつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１８時間培養した。培養後、既に存在するＣＯＸ−１並びに少量発現しているＣＯＸ−２をアセチル化し失活させるため、５００μｍｏｌ／ｌアスピリン含有培地に交換し、４時間培養した。細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄し、１μｇ／ｍｌのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を含む培地で溶解したサンプル２００μｌを添加し、１８時間培養した。培養後、上清中のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）量をＰＧＥ２  ＥＩＡ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，  Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，  ＭＩ，  ＵＳＡ）を用いて定量し、対照と比較することにより、下記数式４からシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率を算出した。結果を表４に示す。なお、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率の数値が大きいほど、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用が強いことを意味する。
＜数式４＞
シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率（％）
＝｛１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）｝×１００
前記数式４中、Ａは試料溶液添加、ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量を表す。Ｂは試料溶液無添加、ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量を表す。Ｃは試料溶液無添加、ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量を表す。【００５７】
【表４】
2007052330.tif 000018
表４の結果から、製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の還元処理物、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−３、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣは、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有し、特に製造例１の油溶性甘草抽出物、実施例１の還元処理物、カルコン還元体−１、カルコン還元体−２、カルコン還元体−４、及びロウレイリンＣが、優れたシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有することが認められる。【００５８】
（配合実施例１）
−乳液−
下記の組成の乳液を常法により製造した。
カルコン還元体−１                                  ０．１ｇ
ホホバオイル                                            ４ｇ
オリーブオイル                                          ２ｇ
スクワラン                                              ２ｇ
セタノール                                              ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル                              ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０）      ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）    ２ｇ
黄杞エキス                                          ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                          ０．１ｇ
イチョウ葉エキス                                    ０．１ｇ
コンキオリン                                        ０．１ｇ
オウバクエキス                                      ０．１ｇ
カミツレエキス                                      ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１５ｇ
香料                                              ０．０５ｇ
精製水                                                残部    
全量                                                １００ｇ【００５９】
（配合実施例２）
下記の組成の乳液を常法により製造した。
カルコン還元体−１                                  ０．１ｇ
実施例１の還元処理物                                ０．１ｇ
ホホバオイル                                            ４ｇ
オリーブオイル                                          ２ｇ
スクワラン                                              ２ｇ
セタノール                                              ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル                              ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０）      ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）    ２ｇ
黄杞エキス                                          ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                          ０．１ｇ
イチョウ葉エキス                                    ０．１ｇ
コンキオリン                                        ０．１ｇ
オウバクエキス                                      ０．１ｇ
カミツレエキス                                      ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１５ｇ
香料                                              ０．０５ｇ
精製水                                                残部    
全量                                                １００ｇ【００６０】
（配合実施例３）
−乳液−
下記の組成の乳液を常法により製造した。
カルコン還元体−１                                  ０．１ｇ
カルコン還元体−３                                  ０．１ｇ
ホホバオイル                                            ４ｇ
オリーブオイル                                          ２ｇ
スクワラン                                              ２ｇ
セタノール                                              ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル                              ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０）      ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）    ２ｇ
黄杞エキス                                          ０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                          ０．１ｇ
イチョウ葉エキス                                    ０．１ｇ
コンキオリン                                        ０．１ｇ
オウバクエキス                                      ０．１ｇ
カミツレエキス                                      ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１５ｇ
香料                                              ０．０５ｇ
精製水                                                残部    
全量                                                １００ｇ【００６１】
（配合実施例４）
−化粧水−
下記組成の化粧水を常法により製造した。
ロウレイリンＣ                                        ０．１ｇ
グリセリン                                                ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）  ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１５ｇ
クエン酸                                              ０．１ｇ
クエン酸ソーダ                                        ０．１ｇ
製造例１の油溶性甘草抽出物                            ０．１ｇ
海藻エキス                                            ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー                            ０．５ｇ
クジンエキス                                          ０．１ｇ
香料                                                ０．０５ｇ
精製水                                                  残部    
全量                                                  １００ｇ【００６２】
（配合実施例５）
−化粧水−
下記組成の化粧水を常法により製造した。
ロウレイリンＣ                                        ０．１ｇ
カルコン還元体−１                                    ０．１ｇ
グリセリン                                                ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）  ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１５ｇ
クエン酸                                              ０．１ｇ
クエン酸ソーダ                                        ０．１ｇ
製造例１の油溶性甘草抽出物                            ０．１ｇ
海藻エキス                                            ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー                            ０．５ｇ
クジンエキス                                          ０．１ｇ
香料                                                ０．０５ｇ
精製水                                                  残部    
全量                                                  １００ｇ【００６３】
（配合実施例６）
−クリーム−
下記組成のクリームを常法により製造した。
カルコン還元体−３                                    ０．１ｇ
実施例１の還元処理物                                  ０．１ｇ
流動パラフィン                                            ５ｇ
サラシミツロウ                                            ４ｇ
セタノール                                                ３ｇ
スクワラン                                              １０ｇ
ラノリン                                                  ２ｇ
ステアリン酸                                              １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）  １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                                ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ６ｇ
酵母抽出液                                            ０．１ｇ
シソ抽出液                                            ０．１ｇ
シナノキ抽出液                                        ０．１ｇ
ジユ抽出液                                            ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                              １．５ｇ
香料                                                  ０．１ｇ
精製水                                                  残部    
全量                                                  １００ｇ【００６４】
（配合実施例７）
−クリーム−
下記組成のクリームを常法により製造した。
カルコン還元体−３                                    ０．１ｇ
ロウレイリンＣ                                        ０．１ｇ
流動パラフィン                                            ５ｇ
サラシミツロウ                                            ４ｇ
セタノール                                                ３ｇ
スクワラン                                              １０ｇ
ラノリン                                                  ２ｇ
ステアリン酸                                              １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）  １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                                ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ６ｇ
酵母抽出液                                            ０．１ｇ
シソ抽出液                                            ０．１ｇ
シナノキ抽出液                                        ０．１ｇ
ジユ抽出液                                            ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                              １．５ｇ
香料                                                  ０．１ｇ
精製水                                                  残部    
全量                                                  １００ｇ【００６５】
（配合実施例８）
−パック−
下記組成のパックを常法により製造した。
カルコン還元体−２                                    ０．２ｇ
実施例１の還元処理物                                  ０．１ｇ
ポリビニルアルコール                                    １５ｇ
ポリエチレングリコール                                    ３ｇ
プロピレングリコール                                      ７ｇ
エタノール                                              １０ｇ
セージ抽出液                                          ０．１ｇ
トウキ抽出液                                          ０．１ｇ
ニンジン抽出液                                        ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸エチル                            ０．０５ｇ
香料                                                ０．０５ｇ
精製水                                                  残部    
全量                                                  １００ｇ【００６６】
（配合実施例９）
−パック−
下記組成のパックを常法により製造した。
カルコン還元体−２                                    ０．１ｇ
ロウレイリンＣ                                        ０．１ｇ
ポリビニルアルコール                                    １５ｇ
ポリエチレングリコール                                    ３ｇ
プロピレングリコール                                      ７ｇ
エタノール                                              １０ｇ
セージ抽出液                                          ０．１ｇ
トウキ抽出液                                          ０．１ｇ
ニンジン抽出液                                        ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸エチル                            ０．０５ｇ
香料                                                ０．０５ｇ
精製水                                                  残部    
全量                                                  １００ｇ
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明のカルコン還元体は、優れた美白作用及び抗炎症作用を有し、美白剤、抗炎症剤、及び化粧料に好適に用いられる。
本発明の油溶性甘草抽出物の還元処理物は、優れた美白作用及び抗炎症作用を有し、美白剤、抗炎症剤、及び化粧料に好適に用いられる。
本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤は、優れたシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有し、化粧料に好適に用いられる。
本発明の美白剤は、本発明の前記カルコン還元体及び本発明の前記油溶性甘草抽出物の還元処理物の少なくともいずれかを含有し、チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン産生抑制作用を有しており、色素沈着、シミ、ソバカス等の原因となるメラニン産生を抑制することによって、色素沈着を防止することができる。
本発明の抗炎症剤は、本発明の前記カルコン還元体及び本発明の前記油溶性甘草抽出物の還元処理物の少なくともいずれかを含有し、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有しており、これらの関与する炎症を効果的に予防又は改善することができる。
また、本発明のシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤、美白剤、及び抗炎症剤は、使用感と安全性に優れているので化粧料に配合するのに好適なものである。
【国際調査報告】
2007052330.tif 000026
2007052330.tif 000027
2007052330.tif 000028
2007052330.tif 000029
2007052330.tif 000030