【手続補正書】
【提出日】令和1年8月19日(2019.8.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチド及び１つ以上の不純物を含む組成物からのポリペプチドの精製方法であって、方法が、
ａ）組成物を親和性クロマトグラフィーに供して、親和性溶出物を産生することと、
ｂ）親和性溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成することと、
ｃ）混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成することと、
ｄ）陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、ポリペプチドを含む画分を収集することと、
ｅ）疎水性相互作用溶出物を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し、ポリペプチドを含む画分を収集することと、を含み、
組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、方法。
【請求項２】
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの多重特異性抗体の精製方法であって、多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、方法が、逐次的に、
ａ）組成物をタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、タンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）タンパク質Ａ溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｄ）陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、
ｅ）疎水性相互作用溶出物を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し、ポリペプチドを含む画分を収集するステップと、を含み、
組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、方法。
【請求項３】
多重特異性抗体の精製方法であって、多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、多重特異性抗体の各アームが、別個に産生され、方法が、逐次的に、
ａ）多重特異性抗体の各アームをタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）多重特異性抗体を含む組成物を産生するのに十分な条件下で、多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を含む混合物を形成するステップと、
ｃ）多重特異性抗体を含む組成物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｅ）陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、
ｆ）疎水性相互作用溶出物を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し、ポリペプチドを含む画分を収集するステップと、を含み、
組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、方法。
【請求項４】
混合モードクロマトグラフィーが、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
多重特異性抗体の精製方法であって、多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、方法が、逐次的に、
ａ）組成物をタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、タンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）タンパク質Ａ溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｄ）陰イオン交換溶出物をヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーに供し、多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、方法。
【請求項６】
多重特異性抗体の精製方法であって、多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、多重特異性抗体の各アームが、別個に産生され、方法が、逐次的に、
ａ）多重特異性抗体の各アームをタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）多重特異性抗体を含む組成物を産生するのに十分な条件下で、多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を含む混合物を形成するステップと、
ｃ）多重特異性抗体を含む組成物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｅ）陰イオン交換溶出物をヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーに供し、多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、方法。
【請求項７】
混合モードクロマトグラフィーが、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
親和性クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
タンパク質Ａクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、請求項２〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
混合モードクロマトグラフィー、及び／または陰イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、請求項１〜６及び９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、貫流モードで行われる、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１２】
ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含むヒドロキシアパタイト相互作用クロマトグラフィー画分を限外濾過に供するステップを更に含む、請求項５または６に記載の方法。
【請求項１３】
ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む陽イオン交換画分を限外濾過に供するステップを更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含むヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー画分を限外濾過に供するステップを更に含む、請求項５、６、及び１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
限外濾過が、第１の限外濾過、透析濾過、及び第２の限外濾過を逐次的に含む、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
タンパク質Ａクロマトグラフィーが、アガロースに結合しているタンパク質Ａを含む、請求項２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
タンパク質Ａクロマトグラフィーが、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ（商標）、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ（商標）ＳｕＲｅ、及びＭＡｂＳｅｌｅｃｔ（商標）ＳｕＲｅ  ＬＸ、Ｐｒｏｓｅｐ−ＶＡ、Ｐｒｏｓｅｐ−ＶＡ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ｆａｓｔ  ｆｌｏｗ、またはＴｙｏｐｅａｒｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａクロマトグラフィーである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
混合モードクロマトグラフィーが、四級アミン及び疎水性部分、四級アミン及び高架橋アガロースに結合している疎水性部分、またはＮ−ベンジル−ｎ−メチルエタノールアミンを含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
混合モードクロマトグラフィーが、Ｃａｐｔｏ（商標）ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィーである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）が、疎水性部分を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
疎水性相互作用クロマトグラフィーが、フェニル部分、フェニル部分架橋アガロース、または架橋アガロースに結合しているブチル部分を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ｐｈｅｎｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィーまたはＢｕｔｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィーである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ヘキシル部分、ヒドロキシル化メタクリルポリマーに結合している疎水性部分、またはヒドロキシル化メタクリルポリマーに結合しているヘキシル部分を含む、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）Ｈｅｘｙｌ６５０Ｃである、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーである、請求項５、６、１１、及び１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、ＣＨＴ  Ｉ型セラミックヒドロキシアパプタイト（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｐｔｉｔｅ）クロマトグラフィーである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
陽イオン交換クロマトグラフィーが、カルボン酸部分、スルホン酸部分、カルボン酸部分架橋アガロース、または架橋アガロースに結合しているスルホン酸部分を含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
陽イオン交換材料が、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＨＳ５０、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＨＳ２０、ＳＯ３  Ｍｏｎｏｌｉｔｈ、Ｓ  Ｃｅｒａｍｉｃ  ＨｙｐｅｒＤ、スルホプロピル−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ（ＳＰＳＦＦ）、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＸＬ（ＳＰＸＬ）、ＣＭ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ、Ｃａｐｔｏ（商標）Ｓ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  Ｓｅ  ＨｉＣａｐ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＳＯ３、またはＦｒａｃｔｏｇｅｌ  ＣＯＯである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ポリペプチドまたは多重特異性抗体、または多重特異性抗体のアームが、細胞内で産生される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
細胞が、原核生物細胞である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
原核生物細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
細胞が、１つ以上のシャペロンを発現するように操作される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
シャペロンが、ＦｋｐＡ、ＤｓｂＡ、またはＤｓｂＣのうちの１つ以上である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
多重特異性抗体の第１のアームが、ＩＬ１３に結合する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ＩＬ１３が、ヒトＩＬ１３である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＩＬ１３が、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
（ａ）多重特異性抗体の第１のアームが、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、
（ｂ）多重特異性抗体の第１のアームが、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、または
（ｃ）多重特異性抗体の第１のアームが、配列番号１５、１６、または１７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
抗体の第２のアームが、ＩＬ１７に結合する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
ＩＬ１７が、ヒトＩＬ１７である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＩＬ１７が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】
ａ）多重特異性抗体の第２のアームが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、
ｂ）多重特異性抗体の第２のアームが、配列番号２５のアミノ段配列を含むＶＨ配列、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、または
ｃ）多重特異性抗体の第２のアームが、配列番号２７、２８、または２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法によって精製されたポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む、組成物であって、約５％、４％、３％、２％、または１％以下の産物特異的不純物を含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５７７】
その後、ｐＨ５．５に調整したＱＳＦＦ溶出物を、貫流モードでＰｈｅｎｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＨＳクロマトグラフィーに供した。貫流Ｐｈｅｎｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）６Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ（高置換）ＨＩＣ条件は、以下の通りであった。カラムを１７０ｍＭの酢酸塩（ｐＨ５．５）で平衡化した。調整したＱＳＦＦ溶出物プールをカラムに装填した。二重特異性抗体を貫流させ、その後、カラムを平衡化緩衝液で洗浄した。産物プール収集を開始し、２８０ｎｍでの吸光度に基づいて終結させた。その後、Ｐｈｅｎｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）プールを濃縮し、限外濾過／透析濾過（ＵＦ／ＤＦ）を使用して緩衝液交換した。非対合半抗体、ホモ二量体、低分子量種（ＬＭＷＳ）、高分子量種（ＨＭＷＳ）、超高分子量種（ｖＨＭＷＳ）、酸性変異形、塩基性変異形、ＦｋｐＡ、ＤｓｂＡ、ＤｓｂＣ、ＥＣＰ、浸出タンパク質Ａ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＤＮＡ、及び内毒素を含む不純物の存在について、抗Ａ／抗Ｂ二重特異性抗体を分析した。産物品質及び（収率％によって示される）プロセス性能を表３５に詳述する。
表３５。抗Ａ／抗Ｂ産物品質及びプロセス性能
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配列
別途表記されない限り、アミノ酸配列はＮ末端からＣ末端で提示され、核酸配列は５’から３’で提示される。
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＦｋｐＡ
アミノ酸配列−リーダー配列なし
ＡＦＡＤＫＳＫＬＳＤＱＥＩＥＱＴＬＱＡＦＥＡＲＶＫＳＳＡＱＡＫＭＥＫＤＡＡＤＮＥＡＫＧＫＥＹＲＥＫＦＡＫＥＫＧＶＫＴＳＳＴＧＬＶＹＱＶＶＥＡＧＫＧＥＡＰＫＤＳＤＴＶＶＶＮＹＫＧＴＬＩＤＧＫＥＦＤＮＳＹＴＲＧＥＰＬＳＦＲＬＤＧＶＩＰＧＷＴＥＧＬＫＮＩＫＫＧＧＫＩＫＬＶＩＰＰＥＬＡＹＧＫＡＧＶＰＧＩＰＰＮＳＴＬＶＦＤＶＥＬＬＤＶＫＰＡＰＫＡＤＡＫＰＥＡＤＡＫＡＡＤＳＡＫＫ
（配列番号１）
アミノ酸配列−全配列
ＭＫＳＬＦＫＶＴＬＬＡＴＴＭＡＶＡＬＨＡＰＩＴＦＡＡＥＡＡＫＰＡＴＴＡＤＳＫＡＡＦＫＮＤＤＱＫＳＡＹＡＬＧＡＳＬＧＲＹＭＥＮＳＬＫＥＱＥＫＬＧＩＫＬＤＫＤＱＬＩＡＧＶＱＤＡＦＡＤＫＳＫＬＳＤＱＥＩＥＱＴＬＱＡＦＥＡＲＶＫＳＳＡＱＡＫＭＥＫＤＡＡＤＮＥＡＫＧＫＥＹＲＥＫＦＡＫＥＫＧＶＫＴＳＳＴＧＬＶＹＱＶＶＥＡＧＫＧＥＡＰＫＤＳＤＴＶＶＶＮＹＫＧＴＬＩＤＧＫＥＦＤＮＳＹＴＲＧＥＰＬＳＦＲＬＤＧＶＩＰＧＷＴＥＧＬＫＮＩＫＫＧＧＫＩＫＬＶＩＰＰＥＬＡＹＧＫＡＧＶＰＧＩＰＰＮＳＴＸＶＦＤＶＥＬＬＤＶＫＰＡＰＫＡＤＡＫＰＥＡＤＡＫＡＡＤＳＡＫＫ
（配列番号２）
核酸配列
ａｔｇａａａｔｃａｃｔｇｔｔｔａａａｇｔａａｃｇｃｔｇｃｔｇｇｃｇａｃｃａｃａａｔｇｇｃｃｇｔｔｇｃｃｃｔｇｃａｔｇｃａｃｃａａｔｃａｃｔｔｔｔｇｃｔｇｃｔｇａａｇｃｔｇｃａａａａｃｃｔｇｃｔａｃａｇｃｔｇｃｔｇａｃａｇｃａａａｇｃａｇｃｇｔｔｃａａａａａｔｇａｃｇａｔｃａｇａａａｔｃａｇｃｔｔａｔｇｃａｃｔｇｇｇｔｇｃｃｔｃｇｃｔｇｇｇｔｃｇｔｔａｃａｔｇｇａａａａｃｔｃｔｃｔａａａａｇａａｃａａｇａａａａａｃｔｇｇｇｃａｔｃａａａｃｔｇｇａｔａａａｇａｔｃａｇｃｔｇａｔｃｇｃｔｇｇｔｇｔｔｃａｇｇａｔｇｃａｔｔｔｇｃｔｇａｔａａｇａｇｃａａａｃｔｃｔｃｃｇａｃｃａａｇａｇａｔｃｇａａｃａｇａｃｔｃｔａｃａａｇｃａｔｔｃｇａａｇｃｔｃｇｃｇｔｇａａｇｔｃｔｔｃｔｇｃｔｃａｇｇｃｇａａｇａｔｇｇａａａａａｇａｃｇｃｇｇｃｔｇａｔａａｃｇａａｇｃａａａａｇｇｔａａａｇａｇｔａｃｃｇｃｇａｇａａａｔｔｔｇｃｃａａａｇａｇａａａｇｇｔｇｔｇａａａａｃｃｔｃｔｔｃａａｃｔｇｇｔｃｔｇｇｔｔｔａｔｃａｇｇｔａｇｔａｇａａｇｃｃｇｇｔａａａｇｇｃｇａａｇｃａｃｃｇａａａｇａｃａｇｃｇａｔａｃｔｇｔｔｇｔａｇｔｇａａｃｔａｃａａａｇｇｔａｃｇｃｔｇａｔｃｇａｃｇｇｔａａａｇａｇｔｔｃｇａｃａａｃｔｃｔｔａｃａｃｃｃｇｔｇｇｔｇａａｃｃｇｃｔｔｔｃｔｔｔｃｃｇｔｃｔｇｇａｃｇｇｔｇｔｔａｔｃｃｃｇｇｇｔｔｇｇａｃａｇａａｇｇｔｃｔｇａａｇａａｃａｔｃａａｇａａａｇｇｃｇｇｔａａｇａｔｃａａａｃｔｇｇｔｔａｔｔｃｃａｃｃａｇａａｃｔｇｇｃｔｔａｃｇｇｃａａａｇｃｇｇｇｔｇｔｔｃｃｇｇｇｇａｔｃｃｃａｃｃｇａａｔｔｃｔａｃｃｃｔｇｇｔｇｔｔｔｇａｃｇｔａｇａｇｃｔｇｃｔｇｇａｔｇｔｇａａａｃｃａｇｃｇｃｃｇａａｇｇｃｔｇａｔｇｃａａａｇｃｃｇｇａａｇｃｔｇａｔｇｃｇａａａｇｃｃｇｃａｇａｔｔｃｔｇｃｔａａａａａａｔａａ
（配列番号３）
＜本発明の更なる実施態様＞
［実施態様１］
ＦｋｐＡポリペプチドを含む細胞溶解物からの前記ＦｋｐＡポリペプチドの精製方法であって、
ａ）遠心分離により前記細胞溶解物を浄化することと、
ｂ）前記ＦｋｐＡポリペプチドを含む前記浄化された細胞溶解物を陽イオン交換クロマトグラフィー材料に適用することと、
ｃ）前記陽イオン交換クロマトグラフィー材料から前記ＦｋｐＡポリペプチドを溶出させて、前記ＦｋｐＡポリペプチドを含む陽イオン交換溶出物を生成することと、
ｄ）前記ＦｋｐＡポリペプチドを含む前記陽イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）材料に適用することと、
ｅ）前記ＨＩＣ材料から前記ＦｋｐＡポリペプチドを溶出させて、ＨＩＣ溶出物を生成することと、
ｆ）前記ＦｋｐＡポリペプチドを含む前記ＨＩＣ溶出物をサイズ排除クロマトグラフィーに適用することと、
ｇ）前記サイズ排除クロマトグラフィーから前記ＦｋｐＡポリペプチドを溶出させることと、を含む、前記方法。
［実施態様２］
前記ＦｋｐＡポリペプチドを含む前記溶解物が、約ｐＨ６．０である、実施態様１に記載の方法。
［実施態様３］
前記陽イオン交換クロマトグラフィー材料が、強陽イオン交換体である、実施態様１または２に記載の方法。
［実施態様４］
前記強陽イオン交換体が、スルホプロピル基を含む、実施態様３に記載の方法。
［実施態様５］
前記スルホプロピル基が、架橋アガロースに結合している、実施態様４に記載の方法。
［実施態様６］
前記陽イオン交換材料が、溶出前に２５ｍＭの２−（Ｎ−モルフィリノ（ｍｏｒｐｈｉｌｉｎｏ））エタンスルホン酸（ＭＥＳ）中で洗浄される、実施態様１〜５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７］
前記ＦｋｐＡが、塩勾配を使用して前記陽イオンクロマトグラフィー材料から溶出される、実施態様１〜６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様８］
前記塩勾配が、線形勾配である、実施態様７に記載の方法。
［実施態様９］
前記塩勾配が、９カラム体積にわたって、２５ｍＭのＭＥＳ、３００ｍＭのＮａＣｌから２５ｍＭのＭＥＳ、３００ｍＭのＮａＣｌまでの０〜３０％の勾配である、実施態様８に記載の方法。
［実施態様１０］
前記陽イオン交換溶出物が、画分で収集される、実施態様１〜９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１１］
前記画分が、疎水性相互作用クロマトグラフィー前にサイズ排除クロマトグラフィーによって分析される、実施態様１０に記載の方法。
［実施態様１２］
少なくとも約２５％のＦｋｐＡを含む画分が、更なる精製のために選択される、実施態様１１に記載の方法。
［実施態様１３］
前記ＨＩＣ材料が、ブチル部分を含む、実施態様１〜１２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１４］
前記ブチル部分が、架橋アガロースに結合している、実施態様１３に記載の方法。
［実施態様１５］
前記陽イオン交換溶出物が、ＨＩＣ前に約０．６Ｍの硫酸ナトリウム及び約５０ｍＭのＰＯ４（約ｐＨ７）を含有するように調整される、実施態様１〜１４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１６］
前記ＦｋｐＡ結合ＨＩＣ材料が、溶出前に４０ｍＭのリン酸塩、３００ｍＭの硫酸ナトリウム（ｐＨ７．０）で洗浄される、実施態様１〜１５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１７］
前記ＦｋｐＡが、水を使用して前記ＨＩＣ材料から溶出される、実施態様１〜１６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１８］
前記ＨＩＣ溶出物が、画分で収集される、実施態様１〜１６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１９］
ＦｋｐＡを含む画分が、プールされる、実施態様１８に記載の方法。
［実施態様２０］
少なくとも約２５％のＦｋｐＡを含む画分が、プールされる、実施態様１９に記載の方法。
［実施態様２１］
前記サイズ排除クロマトグラフィー材料が、架橋アガロースとデキストランとの球状複合体を含む、実施態様１〜２０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２２］
前記サイズ排除貫流物が、画分で収集される、実施態様１〜２１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２３］
前記ＨＩＣ溶出物が、サイズ排除クロマトグラフィー前に濃縮される、実施態様１〜２２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２４］
前記ＨＩＣ溶出物が、サイズ排除クロマトグラフィー前に約６倍〜約１０倍に濃縮される、実施態様２３に記載の方法。
［実施態様２５］
ＦｋｐＡを含むサイズ排除画分が、プールされる、実施態様２２〜２４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６］
前記ＦｋｐＡポリペプチドが、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＦｋｐＡポリペプチドである、実施態様１〜２５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７］
前記ＦｋｐＡポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施態様２６に記載の方法。
［実施態様２８］
前記ＦｋｐＡポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％の同一性を含む、実施態様２７に記載の方法。
［実施態様２９］
前記ＦｋｐＡが、細胞で発現される、実施態様１〜２８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０］
前記細胞が、原核生物細胞である、実施態様２９に記載の方法。
［実施態様３１］
前記細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞である、実施態様２９または３０に記載の方法。
［実施態様３２］
前記細胞が、ＦｋｐＡの内因性発現を超えるレベルでＦｋｐＡを発現するように操作される、実施態様２９〜３１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３３］
前記細胞が、微小流動化剤を使用して溶解される、実施態様１〜３２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３４］
実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって精製されたＦｋｐＡポリペプチドを含む組成物。
［実施態様３５］
精製されたＦｋｐＡポリペプチドを含む組成物であって、少なくとも約９８％の単量体ＦｋｐＡポリペプチドを含む、前記組成物。
［実施態様３６］
前記組成物が、約２％未満の低分子量種を含む、実施態様３５に記載の組成物。
［実施態様３７］
前記組成物が、約５％以下の高分子量種を含む、実施態様３５または３６に記載の組成物。
［実施態様３８］
単量体ＦｋｐＡポリペプチドの割合が、サイズ排除クロマトグラフィーによって検出される、実施態様３５〜３７のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様３９］
前記組成物が、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％未満の不純物を含む、実施態様３８に記載の組成物。
［実施態様４０］
前記不純物が、ＦｋｐＡに対して高分子量及び／または低分子量のポリペプチド種である、実施態様３９に記載の組成物。
［実施態様４１］
前記不純物が、Ｅ．ｃｏｌｉタンパク質（ＥＣＰ）、ＦｋｐＡ凝集体、ＦｋｐＡ断片、核酸、または細胞培養培地成分のうちの１つ以上である、実施態様３９または４０に記載の組成物。
［実施態様４２］
前記ＦｋｐＡが、１回以上の凍結融解サイクルに対して安定している、実施態様３４〜４１のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様４３］
前記ＦｋｐＡが、３回の凍結融解サイクルに対して安定している、実施態様４２に記載の組成物。
［実施態様４４］
前記組成物中の前記ＦｋｐＡポリペプチドの純度が、クロマトグラフィー、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはウエスタンブロット分析のうちの１つ以上によって測定される、実施態様３４〜４３のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様４５］
前記組成物中の前記ＦｋｐＡポリペプチドの純度が、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって測定される、実施態様３４〜４４のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様４６］
前記組成物中の前記ＦｋｐＡポリペプチドの純度が、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定される、実施態様３４〜４５のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様４７］
前記組成物中の前記ＦｋｐＡポリペプチドの純度が、蛍光画像化または銀染色を使用してＳＤＳゲル電気泳動によって測定される、実施態様３４〜４４のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様４８］
前記組成物中の非ＦｋｐＡポリペプチドの存在が、ウエスタンブロット分析により示される抗ＦｋｐＡ抗体と免疫反応しないゲル電気泳動によって特定される種の存在によって特定される、実施態様４７に記載の組成物。
［実施態様４９］
前記組成物中の前記ＦｋｐＡポリペプチドの凝集体の存在が、ウエスタンブロット分析により、前記天然ＦｋｐＡを超える分子量を有する種の存在によって特定される、実施態様４８に記載の組成物。
［実施態様５０］
ＦｋｐＡに特異的に結合する抗体の生成方法であって、動物を、実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって精製されたＦｋｐＡを含む組成物に曝露または免疫化することを含む、前記方法。
［実施態様５１］
ＦｋｐＡに特異的に結合する抗体の生成方法であって、動物を実施態様３４〜４９のいずれか一に記載の組成物に曝露または免疫化することを含む、前記方法。
［実施態様５２］
前記動物から血清を収集することを更に含み、前記血清がＦｋｐＡに特異的に結合する抗体を含む、実施態様５０または５１に記載の方法。
［実施態様５３］
前記血清が、ＦｋｐＡに特異的に結合するポリクローナル抗体を含む、実施態様５２に記載の方法。
［実施態様５４］
１つ以上のモノクローナル抗体が、前記血清から単離される、実施態様５２または５３に記載の方法。
［実施態様５５］
前記動物が、ヤギ、ウサギ、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ロバ、またはニワトリである、実施態様５０〜５４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様５６］
ＦｋｐＡに特異的に結合するポリクローナル抗体を含む組成物であって、前記ポリクローナル抗体が、動物を、実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって精製されたＦｋｐＡを含む組成物に免疫化することによって生成される、前記組成物。
［実施態様５７］
ＦｋｐＡに特異的に結合するポリクローナル抗体を含む組成物であって、前記ポリクローナル抗体が、動物を、実施態様３４〜４９のいずれか一に記載の組成物に免疫化することによって生成される、前記組成物。
［実施態様５８］
前記ポリクローナル抗体が、前記動物の血清から収集される、実施態様５６または５７に記載の組成物。
［実施態様５９］
ＦｋｐＡに特異的に結合するモノクローナル抗体を含む組成物であって、前記モノクローナル抗体が、動物を、実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって精製されたＦｋｐＡを含む組成物に免疫化することによって生成される、前記組成物。
［実施態様６０］
ＦｋｐＡに特異的に結合するモノクローナル抗体を含む組成物であって、前記モノクローナル抗体が、動物を、実施態様３４〜４９のいずれか一に記載の組成物に免疫化することによって生成される、前記組成物。
［実施態様６１］
前記動物が、ヤギ、ウサギ、マウス、モルモット、ハムスター、ラット、ロバ、またはニワトリである、実施態様５６〜６０のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様６２］
ＦｋｐＡに特異的に結合する抗体の精製方法であって、抗ＦｋｐＡ抗体を含む、実施態様５６〜６１のいずれか一に記載の組成物を、約６０％の最終濃度の硫酸アンモニウムになるまで、硫酸アンモニウムと接触させることと、前記溶液を遠心分離することと、前記上清を除去することと、前記ペレットをリン酸緩衝液中に溶解することと、を含む、前記方法。
［実施態様６３］
前記リン酸緩衝液が、約５０ｍＭのリン酸ナトリウム（約ｐＨ７．０）を含む、実施態様６２に記載の方法。
［実施態様６４］
ＦｋｐＡに特異的に結合する抗体の精製方法であって、
ａ）抗ＦｋｐＡ抗体を含む、実施態様５６〜６１のいずれか一に記載の組成物を、約６０％の最終濃度の硫酸アンモニウムになるまで、硫酸アンモニウムと接触させることと、前記溶液を遠心分離することと、前記上清を除去することと、前記ペレットをリン酸緩衝液中に溶解して、抗ＦｋｐＡ抗体溶液を生成することと、
ｂ）前記抗ＦｋｐＡ抗体溶液を親和性クロマトグラフィー材料に適用することと、
ｃ）前記親和性材料から前記抗体を溶出させて、前記抗ＦｋｐＡ抗体を含む親和性溶出物を生成することと、
ｄ）前記硫酸アンモニウム上清をサイズ排除クロマトグラフィーに供することと、ｅ）前記サイズ排除クロマトグラフィーから、前記精製された抗体を含む画分を収集することと、を含む、前記方法。
［実施態様６５］
前記リン酸緩衝液が、約５０ｍＭのリン酸ナトリウム（約ｐＨ７．０）を含む、実施態様６４に記載の方法。
［実施態様６６］
前記親和性クロマトグラフィー材料が、クロマトグラフィー培地に結合しているＦｋｐＡを含む、実施態様６４または６５に記載の方法。
［実施態様６７］
前記クロマトグラフィー培地が、架橋デキストランである、実施態様６６に記載の方法。
［実施態様６８］
前記ＦｋｐＡが、実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって精製される、実施態様６６または６７に記載の方法。
［実施態様６９］
前記ＦｋｐＡが、実施態様３４〜４９のいずれか一に記載の組成物に由来する、実施態様６６または６７に記載の方法。
［実施態様７０］
前記ＦｋｐＡが、前記クロマトグラフィー培地に共有結合している、実施態様６６〜６９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７１］
前記ＦｋｐＡが、グリセリル−制御孔ガラスカラム（グリセリル−ＣＰＧ）を使用して前記クロマトグラフィー培地に結合している、実施態様６６〜７０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７２］
前記抗ＦｋｐＡ抗体が、前記親和性カラムから溶出される、実施態様６４〜７１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７３］
前記サイズ排除クロマトグラフィー材料が、架橋アガロースとデキストランとの球状複合体を含む、実施態様６４〜７２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７４］
架橋アガロースとデキストランとの前記球状複合体が、１０，０００ダルトン〜６００，０００ダルトンの分子量を有する分子の分離範囲を有する、実施態様７３に記載の方法。
［実施態様７５］
前記サイズ排除貫流物が、画分で収集される、実施態様６４〜７４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７６］
抗ＦｋｐＡ抗体を含むサイズ排除画分が、プールされる、実施態様７５に記載の方法。
［実施態様７７］
前記抗体が、ポリクローナル抗体である、実施態様６４〜７６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７８］
前記抗体が、実施態様５０〜５５のいずれか一に記載の方法に従って調製される、実施態様６４〜７７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様７９］
前記抗体の約１％未満が、非ＦｋｐＡ化合物に特異的に結合する、実施態様６４〜７８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様８０］
実施態様６２〜７９のいずれか一に記載の方法によって精製された、単離された抗ＦｋｐＡ抗体。
［実施態様８１］
試料中のＦｋｐＡの定量化方法であって、検出システムを使用して前記試料中のＦｋｐＡを検出することと、前記試料中で検出されたＦｋｐＡの量を１つ以上の濃度の超高純度ＦｋｐＡ参照標準物の検出と比較することと、を含む、前記方法。
［実施態様８２］
前記超高純度ＦｋｐＡ参照標準物が、少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、または約９８％の単量体ＦｋｐＡポリペプチドを含む、実施態様８１に記載の方法。
［実施態様８３］
前記超高純度ＦｋｐＡ参照標準物が実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって調製され、実施態様３４〜４９のいずれか一に記載のＦｋｐＡ組成物を含む、実施態様８１または８２に記載の方法。
［実施態様８４］
前記検出システムが、免疫アッセイである、実施態様８１〜８３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様８５］
前記免疫アッセイが、超高純度ＦｋｐＡ参照標準物に特異的に結合する抗体を含む、実施態様８４に記載の方法。
［実施態様８６］
ＦｋｐＡの存在及び／または分量についての組換えポリペプチド試料の分析方法であって、免疫アッセイを使用して前記試料中のＦｋｐＡを検出することと、前記試料中で検出されたＦｋｐＡの量を１つ以上の濃度の超高純度ＦｋｐＡ参照標準物の検出と比較することと、を含む、前記方法。
［実施態様８７］
前記超高純度ＦｋｐＡ参照標準物が、少なくとも約９８％の単量体ＦｋｐＡポリペプチドを含む、実施態様８６に記載の方法。
［実施態様８８］
前記超高純度ＦｋｐＡ参照標準物が、実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって調製される、実施態様８６または８７に記載の方法。
［実施態様８９］
前記免疫アッセイが、超高純度ＦｋｐＡに特異的に結合する抗体を含む、実施態様８４〜８８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９０］
前記超高純度ＦｋｐＡに特異的に結合する前記抗体が、ポリクローナル抗体である、実施態様８９に記載の方法。
［実施態様９１］
前記超高純度ＦｋｐＡに特異的に結合する前記抗体が、前記免疫アッセイにおいて捕捉抗体として使用される、実施態様８９または９０に記載の方法。
［実施態様９２］
超高純度ＦｋｐＡに特異的に結合する前記抗体が、検出抗体として使用される、実施態様８９〜９１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９３］
前記検出抗体が、検出剤にコンジュゲートされる、実施態様９２に記載の方法。
［実施態様９４］
検出剤が、西洋ワサビペルオキシダーゼである、実施態様８９〜９３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９５］
ＦｋｐＡに特異的に結合する前記抗体が、実施態様５６〜６１のいずれか一に記載の組成物中に含まれるか、または実施態様５０〜５５のいずれか一に記載の方法に従って調製される、実施態様８９〜９４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９６］
前記ＦｋｐＡが、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＦｋｐＡである、実施態様８１〜９５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９７］
前記試料が、宿主細胞内で調製される組換えポリペプチドを含む、実施態様８１〜９６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様９８］
前記宿主細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞である、実施態様９７に記載の方法。
［実施態様９９］
前記宿主細胞が、ＦｋｐＡを過剰発現する、実施態様９７または９８に記載の方法。
［実施態様１００］
前記試料が、細胞溶解物である、実施態様８１〜９９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１０１］
前記試料が、組換えポリペプチド調製物から得られ、前記組換えポリペプチド調製物が、１つ以上のクロマトグラフィー精製ステップに供されている、実施態様８１〜１００のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１０２］
前記組換えポリペプチド調製物が、最終精製産物である、実施態様１０１に記載の方法。
［実施態様１０３］
前記組換えポリペプチド試料中に含有される前記組換えポリペプチドが、抗体またはイムノアドヘシンである、実施態様８１〜１０２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１０４］
前記抗体が、多重特異性抗体、二重特異性抗体、半抗体、または抗体断片である、実施態様１０３に記載の方法。
［実施態様１０５］
前記組換えポリペプチドが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、実施態様１０３または１０４に記載の方法。
［実施態様１０６］
試料中のＦｋｐＡの検出のための免疫アッセイ方法であって、前記試料が、宿主細胞株に由来する組換えポリペプチド調製物から得られ、前記方法が、
（ａ）ＦｋｐＡに結合する捕捉抗体を前記試料と接触させて、それにより試料−捕捉抗体組み合わせ材料を生成することと、
（ｂ）ＦｋｐＡに結合する検出抗体を前記試料−捕捉抗体組み合わせ材料と接触させることと、
（ｃ）前記試料−捕捉抗体組み合わせ材料に結合している前記抗体を検出することと、を含む、前記方法。
［実施態様１０７］
標準滴定曲線を使用して結合している前記検出抗体のレベルを定量化することを更に含む、実施態様１０６に記載の方法。
［実施態様１０８］
結合している前記検出抗体のレベルに基づいて、前記試料中に存在するＦｋｐＡの量を計算することを更に含む、実施態様１０７に記載の方法。
［実施態様１０９］
前記試料中に存在するＦｋｐＡの前記量が、前記標準滴定曲線を超高純度ＦｋｐＡ組成物で生成された標準滴定曲線と比較することによって決定される、実施態様１０８に記載の方法。
［実施態様１１０］
前記超高純度ＦｋｐＡ組成物が、少なくとも約９８％の単量体ＦｋｐＡポリペプチドを含む、実施態様１０９に記載の方法。
［実施態様１１１］
前記組成物中の前記超高純度ＦｋｐＡが、実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法によって調製される、実施態様１０９または１１０に記載の方法。
［実施態様１１２］
前記捕捉抗体が、前記超高純度ＦｋｐＡに特異的に結合する、実施態様１０６〜１１１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１１３］
前記検出抗体が、前記超高純度ＦｋｐＡに特異的に結合する、実施態様１０６〜１１２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１１４］
前記超高純度ＦｋｐＡに特異的に結合する前記抗体が、ポリクローナル抗体である、実施態様１１２または１１３に記載の方法。
［実施態様１１５］
ＦｋｐＡに結合する前記第２の検出抗体が西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートされる、実施態様１０６〜１１４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１１６］
前記ポリクローナル抗体が、実施態様５０〜５５のいずれか一に記載の方法に従って生成される、実施態様１０６〜１１５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１１７］
前記免疫アッセイが、サンドイッチアッセイである、実施態様１０６〜１１６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１１８］
前記サンドイッチアッセイが、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である、実施態様１１７に記載の方法。
［実施態様１１９］
前記ＦｋｐＡが、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＦｋｐＡである、実施態様１０６〜１１８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１２０］
前記宿主細胞株に由来する前記組換えポリペプチド調製物が、Ｅ．ｃｏｌｉから得られる、実施態様１０６〜１１９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１２１］
前記宿主細胞株が、外因性ＦｋｐＡを過剰発現する、実施態様１２０に記載の方法。
［実施態様１２２］
前記試料が、細胞溶解物である、実施態様１０６〜１２１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１２３］
前記試料が、前記組換えポリペプチド調製物から得られ、前記組換えポリペプチド調製物が、１つ以上のクロマトグラフィー精製ステップに供されている、実施態様１０６〜１２２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１２４］
前記組換えポリペプチド調製物が、最終精製産物である、実施態様１２３に記載の方法。
［実施態様１２５］
前記組換えポリペプチド調製物中に含有される前記組換えポリペプチドが、抗体またはイムノアドヘシンである、実施態様１０６〜１２４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１２６］
前記抗体が、多重特異性抗体、二重特異性抗体、半抗体、または抗体断片である、実施態様１２５に記載の方法。
［実施態様１２７］
前記組換えポリペプチドが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、実施態様１２５または１２６に記載の方法。
［実施態様１２８］
前記組換えポリペプチドが、ＩＬ１３に結合する第１の結合ドメイン、及びＩＬ１７に結合する第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体である、実施態様１２５に記載の方法。
［実施態様１２９］
前記ＩＬ１３が、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施態様１２８に記載の方法。
［実施態様１３０］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様１２８または１２９に記載の方法。
［実施態様１３１］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様１２８〜１３０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３２］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１２８〜１３１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３３］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１２８〜１３２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３４］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様１２８〜１３３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３５］
前記ＩＬ１７が、ヒトＩＬ１７である、実施態様１２８〜１３４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３６］
第２の結合ドメインが、ヒトＩＬ１７ＡＡ、ＩＬ１７ＦＦ、及びＩＬ１７ＡＦに結合する、実施態様１２８〜１３５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３７］
前記ＩＬ１７Ａが、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ１７Ｆが、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施態様１２８〜１３６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３８］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様１２８〜１３７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１３９］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様１２８〜１３８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１４０］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１２８〜１３９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１４１］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１２８〜１４０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１４２］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様１２８〜１４１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１４３］
細菌細胞から調製された組換えポリペプチドを含む薬学的組成物の品質アッセイであって、前記薬学的組成物の試料を実施態様１０６〜１４２のいずれか一に記載の免疫アッセイ方法に供して、前記薬学的組成物中のＦｋｐＡの存在または量を検出することを含む、前記品質アッセイ。
［実施態様１４４］
約３０ｐｐｍ、約２５ｐｐｍ、約２０ｐｐｍ、約１５ｐｐｍ、約１４ｐｐｍ、約１３ｐｐｍ、約１２ｐｐｍ、約１１ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ、約９ｐｐｍ、約８ｐｐｍ、約７ｐｐｍ、約６ｐｐｍ、約５ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約１ｐｐｍ、約０．９ｐｐｍ、約０．８ｐｐｍ、約０．７ｐｐｍ、約０．６ｐｐｍ、約０．５ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、約０．３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、または約０．１ｐｐｍ以下の前記薬学的組成物中のＦｋｐＡの量である、実施態様１４３に記載の品質アッセイ。
［実施態様１４５］
前記細菌細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞である、実施態様１４３または１４４に記載の品質アッセイ。
［実施態様１４６］
前記細菌細胞が、外因性ＦｋｐＡを過剰発現する、実施態様１４３〜１４５のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１４７］
前記試料が、細胞溶解物である、実施態様１４３〜１４６のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１４８］
前記試料が、前記組換えポリペプチド調製物から得られ、前記組換えポリペプチド調製物が、１つ以上のクロマトグラフィー精製ステップに供されている、実施態様１４３〜１４７のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１４９］
前記組換えポリペプチド調製物が、最終精製産物である、実施態様１４８に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５０］
前記組換えポリペプチドが、抗体またはイムノアドヘシンである、実施態様１４３〜１４９のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５１］
前記抗体が、多重特異性抗体、二重特異性抗体、半抗体、または抗体断片である、実施態様１５０に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５２］
前記組換えポリペプチドが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である、実施態様１５１に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５３］
前記組換えポリペプチドが、ＩＬ１３に結合する第１の結合ドメイン、及びＩＬ１７に結合する第２の結合ドメインを含む二重特異性抗体である、実施態様１５１に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５４］
前記ＩＬ１３が、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施態様１５３に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５５］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様１５３または１５４に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５６］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様１５３〜１５５のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５７］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１５３〜１５６のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５８］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１５３〜１５７のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１５９］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様１５３〜１５８のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６０］
前記ＩＬ１７が、ヒトＩＬ１７である、実施態様１５３〜１５９のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６１］
第２の結合ドメインが、ヒトＩＬ１７ＡＡ、ＩＬ１７ＦＦ、及びＩＬ１７ＡＦに結合する、実施態様１５３〜１５９のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６２］
前記ＩＬ１７Ａが、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ１７Ｆが、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施態様１５３〜１６１のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６３］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様１５３〜１６２のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６４］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様１５３〜１６３のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６５］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１５３〜１６４のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６６］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１５３〜１６５のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６７］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様１５３〜１６６のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６８］
前記薬学的組成物中のＤｓｂＡ及び／またはＤｓｂＣの量を検出するステップを更に含む、実施態様１５３〜１６７のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１６９］
ＤｓｂＡの量が、約５ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約１ｐｐｍ、約０．９ｐｐｍ、約０．８ｐｐｍ、約０．７ｐｐｍ、約０．６ｐｐｍ、約０．５ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、約０．３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、または約０．１ｐｐｍ以下である、実施態様１６８に記載の品質アッセイ。
［実施態様１７０］
ＤｓｂＣの量が、約５ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約１ｐｐｍ、約０．９ｐｐｍ、約０．８ｐｐｍ、約０．７ｐｐｍ、約０．６ｐｐｍ、約０．５ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、約０．３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、または約０．１ｐｐｍ以下である、実施態様１６８または１６９に記載の品質アッセイ。
［実施態様１７１］
ＤｓｂＡ及び／またはＤｓｂＣの量が、免疫アッセイによって測定される、実施態様１６８〜１７０のいずれか一に記載の品質アッセイ。
［実施態様１７２］
細菌細胞から調製された組換えポリペプチドを含む薬学的組成物中のＦｋｐＡの検出のためのキットであって、実施態様５０〜５５のいずれか一に記載の方法によって調製された抗ＦｋｐＡ抗体、または実施態様５６〜６１のいずれか一に記載の抗ＦｋｐＡ抗体の組成物を含む、前記キット。
［実施態様１７３］
前記キットが、試料中のＦｋｐＡを定量するための標準曲線を生成する際の参照標準物として使用するための、かつ／または陽性対照として使用するための超高純度ＦｋｐＡを更に含む、実施態様１７２に記載のキット。
［実施態様１７４］
前記超高純度ＦｋｐＡが、実施態様１〜３３のいずれか一に記載の方法に従って調製される、実施態様１７２に記載のキット。
［実施態様１７５］
組換えポリペプチドを含む組成物であって、前記組換えポリペプチドが、内因性ＦｋｐＡを発現する宿主細胞内で産生され、前記組成物が、約６ｐｐｍ、約５ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約１ｐｐｍ、約０．９ｐｐｍ、約０．８ｐｐｍ、約０．７ｐｐｍ、約０．６ｐｐｍ、約０．５ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、約０．３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、または約０．１ｐｐｍ以下の濃度のＦｋｐＡを含む、前記組成物。
［実施態様１７６］
前記組成物中のＦｋｐＡの量が、免疫アッセイによって決定される、実施態様１７５に記載の組成物。
［実施態様１７７］
前記組成物中のＦｋｐＡの量が、実施態様１０６〜１２４のいずれか一に記載の免疫アッセイによって決定される、実施態様１７５に記載の組成物。
［実施態様１７８］
組換えポリペプチドを含む組成物であって、前記組換えポリペプチドが、外因性ＦｋｐＡを発現するように操作されている宿主細胞内で産生され、前記組成物が、約１５ｐｐｍ、約１４ｐｐｍ、約１３ｐｐｍ、約１２ｐｐｍ、約１１ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ、約９ｐｐｍ、約８ｐｐｍ、約７ｐｐｍ、約６ｐｐｍ、約５ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約１ｐｐｍ、約０．９ｐｐｍ、約０．８ｐｐｍ、約０．７ｐｐｍ、約０．６ｐｐｍ、約０．５ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、約０．３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、または約０．１ｐｐｍ以下の濃度のＦｋｐＡを含む、前記組成物。
［実施態様１７９］
前記組換えポリペプチドが、抗体である、実施態様１７５〜１７８のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１８０］
前記抗体が、二重特異性抗体である、実施態様１７９に記載の抗体。
［実施態様１８１］
前記組成物が、少なくとも約０．２ｐｐｍのＦｋｐＡを含む、実施態様１７５〜１８０のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１８２］
前記宿主細胞が、外因性ＦｋｐＡを発現し、前記組成物が、約１３ｐｐｍ以下を含む、実施態様１７５〜１８１のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１８３］
前記宿主細胞が、外因性ＦｋｐＡを発現し、前記組成物が、約０．７ｐｐｍ以下を含む、実施態様１７５〜１８２のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１８４］
前記宿主細胞が、外因性ＦｋｐＡを発現し、前記組成物が、約６ｐｐｍ以下を含む、実施態様１７５〜１８３のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１８５］
前記組換えポリペプチドが、二重特異性抗体であり、前記二重特異性抗体が、ＩＬ１３に結合する第１の結合ドメイン、及びＩＬ１７に結合する第２の結合ドメインを含む、実施態様１７５〜１８４のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１８６］
前記ＩＬ１３が、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施態様１８５に記載の組成物。
［実施態様１８７］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様１８５または１８６に記載の組成物。
［実施態様１８８］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様１８５〜１８７のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１８９］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１８５〜１８８のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９０］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１８５〜１８９のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９１］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様１８５〜１９０のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９２］
前記ＩＬ１７が、ヒトＩＬ１７である、実施態様１８５〜１９１のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９３］
前記第２の結合ドメインが、ヒトＩＬ１７ＡＡ、ＩＬ１７ＦＦ、及びＩＬ１７ＡＦに結合する、実施態様１８５〜１９２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様１９４］
前記ＩＬ１７Ａが、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ１７Ｆが、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施態様１９３に記載の組成物。
［実施態様１９５］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様１８５〜１９４のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９６］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様１８５〜１９５のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９７］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１８５〜１９６のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９８］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様１８５〜１９６のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様１９９］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様１８５〜１９８のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２００］
前記組成物が、約５ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約１ｐｐｍ、約０．９ｐｐｍ、約０．８ｐｐｍ、約０．７ｐｐｍ、約０．６ｐｐｍ、約０．５ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、約０．３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、または約０．１ｐｐｍ以下の濃度のＤｓｂＡを含む、実施態様１８５〜１９９のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２０１］
前記組成物中のＤｓｂＡの濃度が、免疫アッセイによって決定される、実施態様２００に記載の組成物。
［実施態様２０２］
前記組成物が、約５ｐｐｍ、約４ｐｐｍ、約３ｐｐｍ、約２ｐｐｍ、約１ｐｐｍ、約０．９ｐｐｍ、約０．８ｐｐｍ、約０．７ｐｐｍ、約０．６ｐｐｍ、約０．５ｐｐｍ、約０．４ｐｐｍ、約０．３ｐｐｍ、約０．２ｐｐｍ、または約０．１ｐｐｍ以下の濃度のＤｓｂＣを含む、実施態様１８５〜２０１のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２０３］
前記組成物中のＤｓｂＣの濃度が、免疫アッセイによって決定される、実施態様２０２に記載の組成物。
［実施態様２０４］
二重特異性抗体を含む組成物であって、前記組換えポリペプチドが、
ａ）宿主細胞に、
ｉ）第１の重鎖及び第１の軽鎖をコードする核酸であって、前記第１の重鎖及び前記第１の軽鎖が、第１の抗原結合ドメインを形成する、核酸と、
ｉｉ）第２の重鎖及び第２の軽鎖をコードする核酸であって、前記第２の重鎖及び前記第２の軽鎖が、第１の抗原結合ドメインを形成する、核酸と、
ｉｉｉ）ＦｋｐＡポリペプチドをコードする核酸と、を導入することであって、
前記第１の重鎖及び前記第２の重鎖が、Ｆｃドメインを形成する、導入することと、
ｂ）前記抗体を精製することと、
を含む方法によって産生され、前記組成物が、約５ｐｐｍ未満のＦｋｐＡを含む、前記組成物。
［実施態様２０５］
前記組成物が、約１ｐｐｍ未満のＦｋｐＡを含む、実施態様２０４に記載の組成物。
［実施態様２０６］
前記宿主細胞が、原核生物宿主細胞である、実施態様１７５〜２０５のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２０７］
前記宿主細胞が、グラム陰性菌である、実施態様２０６に記載の組成物。
［実施態様２０８］
前記グラム陰性菌が、Ｅ．ｃｏｌｉである、実施態様２０７に記載の方法。
［実施態様２０９］
前記ＦｋｐＡが、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＦｋｐＡである、実施態様１７５〜２０８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２１０］
前記二重特異性抗体が、精製される、実施態様１７５〜２０９のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１１］
前記二重特異性抗体が、ＩＬ１３に結合する第１の結合ドメインを含む、実施態様１７５〜２１０のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１２］
前記二重特異性抗体が、ＩＬ１７に結合する第２の結合ドメインを含む、実施態様１７５〜２１１のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１３］
前記ＩＬ１３が、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施態様２１１または２１２に記載の組成物。
［実施態様２１４］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様２１１〜２１３のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１５］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様２１１のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１６］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様２１１〜２１５のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１７］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様２１１〜２１５のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１８］
前記二重特異性抗体の前記第１の結合ドメインが、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様２１１〜２１７のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２１９］
前記ＩＬ１７が、ヒトＩＬ１７である、実施態様２１１〜２１８のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２０］
前記第２の結合ドメインが、ヒトＩＬ１７ＡＡ、ＩＬ１７ＦＦ、及びＩＬ１７ＡＦに結合する、実施態様２１１〜２１９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２２１］
前記ＩＬ１７Ａが、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ１７Ｆが、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施態様２２０に記載の組成物。
［実施態様２２２］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様２１９〜２２１のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２３］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様２１９〜２２２のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２４］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様２１９〜２２３のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２５］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様２１９〜２２３のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２６］
前記二重特異性抗体の前記第２の結合ドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様２１９〜２２５のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２７］
前記組成物が、約１５ｐｐｍ以下のＤｓｂＡを含む、実施態様１７５〜２２６のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２８］
前記組成物が、約５ｐｐｍ以下のＤｓｂＡを含む、実施態様１７５〜２２７のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２２９］
前記組成物が、約１５ｐｐｍ以下のＤｓｂＣを含む、実施態様１７５〜２２８のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２３０］
前記組成物が、約５ｐｐｍ以下のＤｓｂＣを含む、実施態様１７５〜２２９のいずれか一に記載の組成物。
［実施態様２３１］
ポリペプチド及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記ポリペプチドの精製方法であって、
ａ）前記組成物を親和性クロマトグラフィーに供して、親和性溶出物を産生することと、
ｂ）前記親和性溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成することと、
ｃ）前記混合モード溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドを含む画分を収集することと、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２３２］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記組成物をタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、タンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記タンパク質Ａ溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）前記混合モード溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２３３］
前記混合モードクロマトグラフィーが、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーである、実施態様２３１または２３２に記載の方法。
［実施態様２３４］
前記親和性クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２３１に記載の方法。
［実施態様２３５］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２３２または２３３に記載の方法。
［実施態様２３６］
前記混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２３１〜２３５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２３７］
前記ＨＩＣが、貫流モードで行われる、実施態様２３１〜２３６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２３８］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記多重特異性抗体の各アームが、別個に産生され、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記多重特異性抗体の各アームをタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記多重特異性抗体を含む組成物を産生するのに十分な条件下で、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を含む混合物を形成するステップと、
ｃ）前記多重特異性抗体を含む前記組成物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記混合モード溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）に供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２３９］
前記混合モードクロマトグラフィーが、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーである、実施態様２３８に記載の方法。
［実施態様２４０］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２３８または２３９に記載の方法。
［実施態様２４１］
前記混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２３８〜２４０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２４２］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、貫流モードで行われる、実施態様２３８〜２４１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２４３］
前記混合モード溶出物が、疎水性相互作用クロマトグラフィー前に陰イオン交換クロマトグラフィーに供される、実施態様２３１〜２４２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２４４］
前記陰イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２４３に記載の方法。
［実施態様２４５］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む前記疎水性相互作用クロマトグラフィー画分を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む画分を収集するステップを更に含む、実施態様２３１〜２４４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２４６］
前記陽イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２４５に記載の方法。
［実施態様２４７］
ポリペプチド及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記ポリペプチドの精製方法であって、
ａ）前記組成物を親和性クロマトグラフィーに供して、親和性溶出物を産生することと、
ｂ）前記親和性溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成することと、
ｃ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成することと、
ｄ）前記陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドを含む画分を収集することと、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２４８］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記組成物をタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、タンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記タンパク質Ａ溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２４９］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記多重特異性抗体の各アームが、別個に産生され、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記多重特異性抗体の各アームをタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記多重特異性抗体を含む組成物を産生するのに十分な条件下で、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を含む混合物を形成するステップと、
ｃ）前記多重特異性抗体を含む前記組成物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｅ）前記陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２５０］
前記混合モードクロマトグラフィーが、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーである、実施態様２４７〜２４９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２５１］
前記親和性クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２４７に記載の方法。
［実施態様２５２］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２４８〜２５０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２５３］
前記混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２４７〜２５２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２５４］
前記陰イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２４７〜２５３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２５５］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、貫流モードで行われる、実施態様２４７〜２５４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２５６］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む前記疎水性相互作用クロマトグラフィー画分を陽イオン交換クロマトグラフィーに供するステップを更に含む、実施態様２４７〜２５５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２５７］
前記陽イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２４７〜２５６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２５８］
ポリペプチド及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記ポリペプチドの精製方法であって、
ａ）前記組成物を親和性クロマトグラフィーに供して、親和性溶出物を産生することと、
ｂ）前記親和性溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成することと、
ｃ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成することと、
ｄ）前記陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドを含む画分を収集することと、
ｅ）前記疎水性相互作用溶出物を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドを含む画分を収集することと、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２５９］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記組成物をタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、タンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記タンパク質Ａ溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、
ｅ）前記疎水性相互作用溶出物を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２６０］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記多重特異性抗体の各アームが、別個に産生され、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記多重特異性抗体の各アームをタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記多重特異性抗体を含む組成物を産生するのに十分な条件下で、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を含む混合物を形成するステップと、
ｃ）前記多重特異性抗体を含む前記組成物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｅ）前記陰イオン交換溶出物を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、
ｆ）前記疎水性相互作用溶出物を陽イオン交換クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２６１］
前記混合モードクロマトグラフィーが、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーである、実施態様２５８〜２６０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６２］
前記親和性クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２５８に記載の方法。
［実施態様２６３］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２５９〜２６１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６４］
前記混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２５８〜２６３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６５］
前記陰イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２５８〜２６４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６６］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、貫流モードで行われる、実施態様２５８〜２６５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６７］
前記陽イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２５８〜２６６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２６８］
ポリペプチド及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記ポリペプチドの精製方法であって、逐次的に、
ａ）前記組成物を親和性クロマトグラフィーに供して、親和性溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記親和性溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記陰イオン交換溶出物をヒドロキシアパパタイト（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｐａｔｉｔｅ）クロマトグラフィーに供し、前記ポリペプチドを含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２６９］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記組成物をタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、タンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記タンパク質Ａ溶出物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｃ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記陰イオン交換溶出物をヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーに供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２７０］
多重特異性抗体及び１つ以上の不純物を含む組成物からの前記多重特異性抗体の精製方法であって、前記多重特異性抗体が、複数のアームを含み、各アームが、ＶＨ／ＶＬ単位を含み、前記多重特異性抗体の各アームが、別個に産生され、前記方法が、逐次的に、
ａ）前記多重特異性抗体の各アームをタンパク質Ａクロマトグラフィーに供して、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を産生するステップと、
ｂ）前記多重特異性抗体を含む組成物を産生するのに十分な条件下で、前記多重特異性抗体の各アームのタンパク質Ａ溶出物を含む混合物を形成するステップと、
ｃ）前記多重特異性抗体を含む前記組成物を混合モードクロマトグラフィーに供して、混合モード溶出物を生成するステップと、
ｄ）前記混合モード溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーに供して、陰イオン交換溶出物を生成するステップと、
ｅ）前記陰イオン交換溶出物をヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーに供し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集し、前記多重特異性抗体を含む画分を収集するステップと、を含み、
前記組成物からの産物特異的不純物の量を低減する、前記方法。
［実施態様２７１］
前記混合モードクロマトグラフィーが、混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーである、実施態様２６８〜２７０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７２］
前記親和性クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２７１に記載の方法。
［実施態様２７３］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２６９〜２７２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７４］
前記混合モードクロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２６８〜２７３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７５］
前記陰イオン交換クロマトグラフィーが、結合及び溶出モードで行われる、実施態様２６８〜２７４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７６］
前記ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、貫流モードで行われる、実施態様２６８〜２７５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７７］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む前記ヒドロキシアパタイト相互作用クロマトグラフィー画分を限外濾過に供するステップを更に含む、実施態様２３１〜２４５または２５６〜２６７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７８］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む前記陽イオン交換画分を限外濾過に供するステップを更に含む、実施態様２４５〜２４６または２５６〜２６７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２７９］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む前記ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー画分を限外濾過に供するステップを更に含む、実施態様２６７〜２７６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２８０］
前記限外濾過が、第１の限外濾過、透析濾過、及び第２の限外濾過を逐次的に含む、実施態様２７７〜２７９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２８１］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、アガロースに結合しているタンパク質Ａを含む、実施態様２３２〜２３３、２３５〜２４６、２４８〜２５０、２５２〜２５７、２５９〜２６１、２６３〜２７０、または２６９〜２７６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２８２］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ（商標）、ＭＡｂＳｅｌｅｃｔ（商標）ＳｕＲｅ、及びＭＡｂＳｅｌｅｃｔ（商標）ＳｕＲｅ  ＬＸ、Ｐｒｏｓｅｐ−ＶＡ、Ｐｒｏｓｅｐ−ＶＡ  Ｕｌｔｒａ  Ｐｌｕｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ｆａｓｔ  ｆｌｏｗ、またはＴｙｏｐｅａｒｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａクロマトグラフィーである、実施態様２８１に記載の方法。
［実施態様２８３］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、タンパク質Ａ平衡化緩衝液、タンパク質Ａ装填緩衝液、またはタンパク質Ａ洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、前記平衡化緩衝液、装填緩衝液、及び／または洗浄緩衝液が、約ｐＨ７〜約ｐＨ８である、実施態様２８１または２８２に記載の方法。
［実施態様２８４］
前記タンパク質Ａ平衡化緩衝液が、約ｐＨ７．７である、実施態様２８３に記載の方法。
［実施態様２８５］
前記タンパク質Ａ平衡化緩衝液が、約２５ｍＭのＴｒｉｓ及び約２５ｍＭのＮａＣｌを含む、実施態様２８３または２８４に記載の方法。
［実施態様２８６］
前記タンパク質Ａクロマトグラフィーが、装填後に平衡化緩衝液で洗浄される、実施態様２８３〜２８５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２８７］
第２の洗浄及び第３の洗浄を更に含み、前記第２の洗浄が、１Ｍのアルギニンであり、前記第３の洗浄が、平衡化緩衝液である、実施態様２８６に記載の方法。
［実施態様２８８］
前記多重特異性抗体が、ｐＨ勾配によって前記タンパク質Ａクロマトグラフィーから溶出される、実施態様２８３〜２８７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２８９］
前記多重特異性抗体が、低ｐＨを有するタンパク質Ａ溶出緩衝液を前記タンパク質Ａクロマトグラフィーに適用することによって、タンパク質Ａから溶出される、実施態様２８３〜２８８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２９０］
前記タンパク質Ａ溶出緩衝液が、約１５０ｍＭの酢酸（約ｐＨ２．８または約ｐＨ２．９）を含む、実施態様２８９に記載の方法。
［実施態様２９１］
前記タンパク質Ａ溶出物が、プールされ、前記溶出物のＯＤ２８０が、約０．５を超える、実施態様２８３〜２９０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２９２］
前記混合モードクロマトグラフィーが、四級アミン及び疎水性部分を含む、実施態様２３１〜２９１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２９３］
前記混合モードクロマトグラフィーが、四級アミン及び高架橋アガロースに結合している疎水性部分を含む、実施態様２３１〜２９２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２９４］
前記混合モードクロマトグラフィーが、Ｎ−ベンジル−ｎ−メチルエタノールアミンを含む、実施態様２３１〜２９３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２９５］
前記混合モードクロマトグラフィーが、Ｃａｐｔｏ（商標）ａｄｈｅｒｅクロマトグラフィーである、実施態様２９４に記載の方法。
［実施態様２９６］
前記混合モードクロマトグラフィーが、混合モード事前平衡化緩衝液、混合モード平衡化緩衝液、混合モード装填緩衝液、または混合モード洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、前記混合モード事前平衡化緩衝液、前記混合モード平衡化緩衝液、及び／または混合モード洗浄緩衝液が、約ｐＨ６〜約ｐＨ７である、実施態様２３１〜２９５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様２９７］
前記混合モード事前平衡化緩衝液、前記混合モード平衡化緩衝液、及び／または混合モード洗浄緩衝液が、約ｐＨ６．５である、実施態様２９６に記載の方法。
［実施態様２９８］
前記混合モード事前平衡化緩衝液が、約２００ｍＭの酢酸塩または約５００ｍＭの酢酸塩を含む、実施態様２９６または２９７に記載の方法。
［実施態様２９９］
前記混合モード平衡化緩衝液が、約５０ｍＭの酢酸塩を含む、実施態様２９６〜２９８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３００］
前記混合モードクロマトグラフィーが、装填後に洗浄緩衝液で洗浄される、実施態様２９６〜２９９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０１］
前記洗浄緩衝液が、約５０ｍＭの酢酸塩（約ｐＨ６．５）または約２００ｍＭの酢酸塩（約ｐＨ６．５）である、実施態様３００に記載の方法。
［実施態様３０２］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体が、ｐＨ勾配によって前記混合モードクロマトグラフィーから溶出される、実施態様２３１〜３０１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０３］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体が、低ｐＨを有する混合モード溶出緩衝液を前記混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーに適用することによって、前記混合モードクロマトグラフィーから溶出される、実施態様２３１〜３０２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０４］
前記混合モード溶出緩衝液が、約２５ｍＭの酢酸塩（約ｐＨ５．２または約ｐＨ５．０）を含む、実施態様３０３に記載の方法。
［実施態様３０５］
前記混合モード溶出物が、プールされ、前記溶出物のＯＤ２８０が、約０．５超〜約１．０である、実施態様２３１〜３０４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０６］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）が、疎水性部分を含む、実施態様２３１〜２６７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３０７］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、フェニル部分を含む、実施態様３０６に記載の方法。
［実施態様３０８］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、架橋アガロースに結合している疎水性部分を含む、実施態様３０６または３０７に記載の方法。
［実施態様３０９］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、架橋アガロースに結合しているフェニル部分またはブチル部分を含む、実施態様３０６〜３０８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３１０］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ｐｈｅｎｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィーまたはＢｕｔｙｌ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）クロマトグラフィーである、実施態様３０９に記載の方法。
［実施態様３１１］
前記疎水性相互作用交換クロマトグラフィーが、ＨＩＣ平衡化緩衝液、ＨＩＣ装填緩衝液、またはＨＩＣ洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、前記ＨＩＣ平衡化緩衝液、前記装填緩衝液、及び／または前記ＨＩＣ洗浄緩衝液が、約ｐＨ５〜約ｐＨ６である、実施態様３０６〜３１０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３１２］
前記ＨＩＣ平衡化緩衝液、前記装填緩衝液、及び／または前記洗浄緩衝液が、約ｐＨ５．５である、実施態様３１１に記載の方法。
［実施態様３１３］
前記ＨＩＣ平衡化緩衝液及び前記洗浄緩衝液が、約１７０ｍＭの酢酸塩を含む、実施態様３１１または３１２に記載の方法。
［実施態様３１４］
前記ＨＩＣ装填緩衝液が、５０ｍＭのＴｒｉｓ、１００ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ約５．５）である、実施態様３１１〜３１３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３１５］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、装填後にＨＩＣ洗浄緩衝液で洗浄される、実施態様３１１〜３１４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３１６］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ヘキシル部分を含む、実施態様３０６〜３１５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３１７］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ヒドロキシル化メタクリルポリマーに結合している疎水性部分を含む、実施態様３０６に記載の方法。
［実施態様３１８］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ヒドロキシル化メタクリルポリマーに結合しているヘキシル部分を含む、実施態様３１６または３１７に記載の方法。
［実施態様３１９］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）Ｈｅｘｙｌ６５０Ｃである、実施態様３１８に記載の方法。
［実施態様３２０］
前記疎水性相互作用交換クロマトグラフィーが、ＨＩＣ平衡化緩衝液、ＨＩＣ装填緩衝液、またはＨＩＣ洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、前記ＨＩＣ平衡化緩衝液、前記ＨＩＣ装填緩衝液、及び／または前記ＨＩＣ洗浄緩衝液が、約ｐＨ６〜約ｐＨ８である、実施態様３１６〜３１９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３２１］
前記ＨＩＣ平衡化緩衝液、前記装填緩衝液、及び／または前記洗浄緩衝液が、約ｐＨ７．０である、実施態様３２０に記載の方法。
［実施態様３２２］
前記ＨＩＣ平衡化緩衝液及び前記洗浄緩衝液が、約５０ｍＭの３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）及び１２５ｍＭの酢酸塩を含む、実施態様３２０または３２１に記載の方法。
［実施態様３２３］
前記疎水性相互作用クロマトグラフィーが、装填後にＨＩＣ洗浄緩衝液で洗浄される、実施態様３１６〜３２２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３２４］
前記疎水性相互作用溶出物が、プールされ、前記溶出物のＯＤ２８０が、約０．５超〜約１．０である、実施態様３０６〜３２３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３２５］
陰イオン交換クロマトグラフィーが、四級アミンを含む、実施態様２４３、２４４、または２４７〜３２４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３２６］
前記陰イオン交換クロマトグラフィーが、架橋アガロースに結合している四級アミンを含む、実施態様３２５に記載の方法。
［実施態様３２７］
前記混合モード陰イオン交換クロマトグラフィーが、ＱＳＦＦクロマトグラフィーである、実施態様３２６に記載の方法。
［実施態様３２８］
前記陰イオン交換クロマトグラフィーが、陰イオン交換事前平衡化緩衝液、陰イオン交換平衡化緩衝液、または陰イオン交換装填緩衝液のうちの１つ以上を使用し、前記陰イオン交換事前平衡化緩衝液、前記陰イオン交換平衡化緩衝液、及び／または陰イオン交換前記装填緩衝液が、約ｐＨ８〜約ｐＨ９である、実施態様３２５〜３２７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３２９］
前記陰イオン交換事前平衡化緩衝液、前記陰イオン交換平衡化緩衝液、及び／または前記陰イオン交換装填緩衝液が、約ｐＨ８．５である、実施態様３２８に記載の方法。
［実施態様３３０］
前記陰イオン交換事前平衡化緩衝液が、約５０ｍＭのＴｒｉｓ及び約５００ｍＭの酢酸ナトリウムまたは約１００ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、実施態様３２８または３２９に記載の方法。
［実施態様３３１］
前記陰イオン交換平衡化緩衝液が、約５０ｍＭのＴｒｉｓを含む、実施態様３２８〜３３０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３３２］
前記陰イオン交換クロマトグラフィーが、装填後に陰イオン交換平衡化緩衝液で洗浄される、実施態様３２８〜３３１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３３３］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体が、塩勾配によって前記陰イオン交換クロマトグラフィーから溶出される、実施態様３２８〜３３２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３３４］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体が、増加した塩濃度を有する陰イオン交換溶出緩衝液を前記陰イオン交換クロマトグラフィーに適用することによって、前記陰イオン交換クロマトグラフィーから溶出される、実施態様３２８〜３３３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３３５］
前記陰イオン交換溶出緩衝液が、約５０ｍＭのＴｒｉｓ及び約１００ｍＭの酢酸ナトリウム（約ｐＨ８．５）を含む、実施態様３３４に記載の方法。
［実施態様３３６］
前記陰イオン交換溶出物が、プールされ、前記溶出物のＯＤ２８０が、約０．５超〜約１．０である、実施態様３２８〜３３５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３３７］
前記ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、セラミックヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーである、実施態様２６７〜２８０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３３８］
前記ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、ＣＨＴ  Ｉ型セラミックヒドロキシアパプタイト（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｐｔｉｔｅ）クロマトグラフィーである、実施態様３３７に記載の方法。
［実施態様３３９］
前記ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、ヒドロキシアパタイト緩衝液Ａまたはヒドロキシアパタイト緩衝液Ｂのうちの１つ以上を使用し、前記ヒドロキシアパタイト緩衝液Ｂが、ヒドロキシアパタイト緩衝液Ａと比較してより高い伝導度を有する、実施態様３３７または３３８に記載の方法。
［実施態様３４０］
前記ヒドロキシアパタイト緩衝液Ａが、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム（約ｐＨ６．８）を含む平衡化緩衝液である、実施態様３３９に記載の方法。
［実施態様３４１］
前記ヒドロキシアパタイト緩衝液Ｂが、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム及び約１Ｍ塩化ナトリウム（約ｐＨ６．８）を含む、実施態様３３９または３４０に記載の方法。
［実施態様３４２］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体が、ヒドロキシアパタイト緩衝液Ａ中のヒドロキシアパタイト緩衝液Ｂの勾配を使用して、ヒドロキシアパタイド（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｐｔｉｄｅ）クロマトグラフィーから溶出される、実施態様３３９〜３４１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３４３］
前記勾配が、線形勾配である、実施態様３４２に記載の方法。
［実施態様３４４］
前記勾配が、０％のヒドロキシアパプタイト緩衝液Ｂから１００％のヒドロキシアパプタイト緩衝液Ｂへと増加する、実施態様３４２または３４３に記載の方法。
［実施態様３４５］
前記勾配が、約２０カラム体積中、０％のヒドロキシアパプタイト緩衝液Ｂから１００％のヒドロキシアパプタイト緩衝液Ｂへと増加する、実施態様３４２〜３４４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３４６］
前記ヒドロキシアパタイト溶出物が、プールされ、前記溶出物のＯＤ２８０が、約０．５超〜約１．０である、実施態様３３７〜３４５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３４７］
陽イオン交換クロマトグラフィーが、カルボン酸部分またはスルホン酸部分を含む、実施態様２４５〜２４６または２５６〜３２６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３４８］
前記カルボン酸部分または前記スルホン酸部分が、スルホプロピル、スルホエチル、スルホイソブチル、またはカルボキシル部分である、実施態様３４７に記載の方法。
［実施態様３４９］
前記陽イオン交換クロマトグラフィーが、架橋アガロースに結合しているカルボン酸部分またはスルホン酸部分を含む、実施態様３４７または３４８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５０］
前記陽イオン交換材料が、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＨＳ５０、ＰＯＲＯＳ（登録商標）ＨＳ２０、ＳＯ３  Ｍｏｎｏｌｉｔｈ、Ｓ  Ｃｅｒａｍｉｃ  ＨｙｐｅｒＤ、スルホプロピル−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ（ＳＰＳＦＦ）、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）ＸＬ（ＳＰＸＬ）、ＣＭ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ、Ｃａｐｔｏ（商標）Ｓ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  Ｓｅ  ＨｉＣａｐ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＳＯ３、またはＦｒａｃｔｏｇｅｌ  ＣＯＯである、実施態様３４８または３４９に記載の方法。
［実施態様３５１］
前記陽イオン交換装填密度が、約２０ｇ／Ｌ未満である、実施態様３４７〜３５０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５２］
前記陽イオン交換クロマトグラフィーが、陽イオン交換事前平衡化緩衝液、陽イオン交換平衡化緩衝液、陽イオン交換装填緩衝液、または陽イオン交換洗浄緩衝液のうちの１つ以上を使用し、前記陽イオン交換事前平衡化緩衝液、前記陽イオン交換平衡化緩衝液、前記陽イオン交換装填緩衝液、及び／または陽イオン交換洗浄緩衝液が、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０である、実施態様３４７〜３５１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５３］
前記陽イオン交換陽イオン交換、前記平衡化緩衝液、前記陽イオン交換装填緩衝液、及び／または陽イオン交換洗浄緩衝液が、約ｐＨ５．５または約ｐＨ５．８である、実施態様３５２に記載の方法。
［実施態様３５４］
前記陽イオン交換平衡化緩衝液が、５０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、実施態様３５２または３５３に記載の方法。
［実施態様３５５］
前記陽イオン交換洗浄緩衝液が、５０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、実施態様３５２〜３５４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５６］
前記陽イオン交換クロマトグラフィーが、装填後に平衡化緩衝液で洗浄される、実施態様３５２〜３５５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５７］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体が、塩勾配によって前記陽イオン交換クロマトグラフィーから溶出される、実施態様３５２〜３５６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５８］
前記ポリペプチドまたは多重特異性抗体が、増加した塩濃度を有する陽イオン交換溶出緩衝液を前記陽イオン交換クロマトグラフィーに適用することによって、前記陽イオン交換クロマトグラフィーから溶出される、実施態様３５２〜３５７のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３５９］
前記陽イオン交換溶出緩衝液が、５００ｍＭの酢酸ナトリウム（約ｐＨ５．８）を含む、実施態様３５８に記載の方法。
［実施態様３６０］
前記溶出が、１０％〜１００％の陽イオン交換溶出緩衝液の勾配溶出である、実施態様３５９に記載の方法。
［実施態様３６１］
前記陽イオン交換溶出物が、プールされ、前記溶出物のＯＤ２８０が、約０．５超〜約１．０である、実施態様３５２〜３６０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３６２］
前記ポリペプチドまたは前記多重特異性抗体が、細胞内で産生される、実施態様２５１〜３６１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３６３］
前記多重特異性抗体の前記アームが、細胞内で産生される、実施態様３６１に記載の方法。
［実施態様３６４］
前記細胞が、原核生物細胞である、実施態様３６２または３６３に記載の方法。
［実施態様３６５］
前記原核生物細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞である、実施態様３６４に記載の方法。
［実施態様３６６］
前記細胞が、１つ以上のシャペロンを発現するように操作される、実施態様３６４または３６５に記載の方法。
［実施態様３６７］
前記シャペロンが、ＦｋｐＡ、ＤｓｂＡ、またはＤｓｂＣのうちの１つ以上である、実施態様３６６に記載の方法。
［実施態様３６８］
前記シャペロンが、Ｅ．ｃｏｌｉシャペロンである、実施態様３６６または３６７に記載の方法。
［実施態様３６９］
前記細胞が溶解されて、前記ポリペプチドまたは前記多重特異性抗体を含む細胞溶解物を生成する、実施態様３６２〜３６８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７０］
前記細胞が溶解されて、タンパク質Ａクロマトグラフィー前に前記多重特異性抗体または前記多重特異性抗体のアームを含む細胞溶解物を生成する、実施態様３６９に記載の方法。
［実施態様３７１］
前記細胞が、微小流動化剤を使用して溶解される、実施態様３６９または３７０に記載の方法。
［実施態様３７２］
ポリエスリエンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｌｙｅｎｅｉｍｉｎｅ）（ＰＥＩ）が、クロマトグラフィー前に前記細胞溶解物に添加される、実施態様３６９〜３７１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７３］
前記ＰＥＩが、約０．４％の最終濃度になるまで前記溶解物に添加される、実施態様３７２に記載の方法。
［実施態様３７４］
前記細胞溶解物が、遠心分離によって浄化される、実施態様３６９〜３７３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７５］
前記産物特異的不純物が、非対合抗体アーム、抗体ホモ二量体、凝集体、高分子量種（ＨＭＷ）、低分子量種（ＬＭＷ）、酸性変異形、または塩基性変異形のうちの１つ以上である、実施態様２５１〜３７３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７６］
前記方法が、前記組成物中のＥ．ｃｏｌｉタンパク質（ＥＣＰ）、ＦｋｐＡ、ＤｓｂＡ、ＤｓｂＣ、浸出タンパク質Ａ、核酸、細胞培養培地成分、またはウイルス不純物のうちのいずれか１つの量を低減する、実施態様２５１〜３７５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７７］
前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、実施態様２３２〜２４５、２４７〜２５７、２５９〜２６７、または２６９〜３７６のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３７８］
前記多重特異性抗体の第１のアームが、ＩＬ１３に結合する、実施態様３７７に記載の方法。
［実施態様３７９］
前記ＩＬ１３が、ヒトＩＬ１３である、実施態様３７８に記載の方法。
［実施態様３８０］
前記ＩＬ１３が、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列を含む、実施態様３７８または３７９に記載の方法。
［実施態様３８１］
前記多重特異性抗体の前記第１のアームが、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様３７８〜３８０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８２］
前記多重特異性抗体の前記第１のアームが、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様３７８〜３８１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８３］
前記多重特異性抗体の前記第１のアームが、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様３７８〜３８２のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８４］
前記多重特異性抗体の前記第１のアームが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様３７８〜３８３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８５］
前記多重特異性抗体の前記第１のアームが、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様３７８〜３８４のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８６］
前記抗体の第２のアームが、ＩＬ１７に結合する、実施態様３７８〜３８５のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３８７］
前記ＩＬ１７が、ヒトＩＬ１７である、実施態様３８６に記載の方法。
［実施態様３８８］
前記ＩＬ１７が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６のアミノ酸配列を含む、実施態様３８６または３８７に記載の方法。
［実施態様３８９］
前記多重特異性抗体の第２のアームが、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、実施態様３８６〜３８８のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３９０］
前記多重特異性抗体の前記第２のアームが、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＨ配列、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ配列を含む、実施態様３８６〜３８９のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３９１］
前記多重特異性抗体の前記第２のアームが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様３８６〜３９０のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３９２］
前記多重特異性抗体の前記第２のアームが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、実施態様３８６〜３９１のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３９３］
前記多重特異性抗体の前記第２のアームが、配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、実施態様３８６〜３９３のいずれか一に記載の方法。
［実施態様３９４］
実施態様２３１〜３９３のいずれか一に記載の方法によって精製されたポリペプチドまたは多重特異性抗体を含む、組成物であって、約５％、４％、３％、２％、または１％以下の産物特異的不純物を含む、前記組成物。
［実施態様３９５］
前記産物特異的不純物が、非対合抗体アーム、抗体ホモ二量体、凝集体、高分子量種（ＨＭＷ）、低分子量種（ＬＭＷ）、酸性変異形、または塩基性変異形のうちの１つ以上である、実施態様３９４に記載の組成物。
［実施態様３９６］
前記組成物が、約未満を含み、組成物が、前記組成物中、約５％、４％、３％、２％、または１％以下のＥ．ｃｏｌｉタンパク質（ＥＣＰ）、ＦｋｐＡ、ＤｓｂＡ、ＤｓｂＣ、浸出タンパク質Ａ、核酸、細胞培養培地成分、またはウイルス不純物のうちのいずれか１つを含む、実施態様３９４または３９５に記載の組成物。