【手続補正書】
【提出日】平成20年8月4日(2008.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドを製造する方法：
（a）YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分に対してカルボキシ末端に配置された興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドを含む融合タンパク質をコードする発現ベクターを提供する工程、及び
（b）適切な細菌細胞で前記融合タンパク質を発現させ、それによって分泌融合タンパク質を生成する工程。
【請求項２】
さらに、前記細菌細胞が増殖する培養液から前記分泌融合タンパク質を精製する工程を含む、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記細菌細胞が大腸菌（Escherichia coli）である、請求項1又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記融合タンパク質がさらに少なくとも1つのタグを含む、請求項1、２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記融合タンパク質がさらに少なくとも1つのタンパク質切断部位を含む、請求項1、2、3又は4に記載の方法。
【請求項６】
以下の工程を含む、興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドを細菌細胞から増殖培養液に分泌させる方法：
（a）YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分をコードするヌクレオチド配列とインフレームで結合した興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、組換えDNA分子を含む発現ベクターを作成する工程、
（b）前記発現ベクターを細菌細胞にトランスフェクトする工程、及び
（c）前記タンパク質の増殖培養液への分泌を誘導する条件下で、前記組換えDNA分子によってコードされるタンパク質を前記細菌細胞で発現させる工程。
【請求項７】
前記細菌細胞が大腸菌（Escherichia coli）である、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
前記組換えDNA分子がさらにタグをコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列を含む、請求項6又は7に記載の方法。
【請求項９】
前記組換えDNA分子がさらにタンパク質切断部位をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列を含む、請求項6、7又は8に記載の方法。
【請求項１０】
興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドの細菌増殖培養液への分泌を誘導するための、YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分の使用。
【請求項１１】
前記YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分が、興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをさらに含む融合タンパク質の部分である、請求項10に記載の使用。
【請求項１２】
前記YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分が、興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドとアミノ末端で融合されている、請求項10又は11に記載の使用。
【請求項１３】
YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分の転写及び合成を誘導する制御ヌクレオチド配列と動作可能なように連結された、YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分をコードする発現ベクター。
【請求項１４】
YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分及び興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドを含む融合タンパク質をコードする、請求項13に記載の発現ベクター。
【請求項１５】
興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードする前記ヌクレオチド配列が、YebF又は生物学的に活性な変種若しくはその部分をコードするヌクレオチド配列の下流に配置される、請求項13又は14に記載の発現ベクター。
【請求項１６】
大腸菌（Escherichia coli）での使用を目的とする、請求項13、14又は15に記載の発現ベクター。
【請求項１７】
さらに少なくとも1つのタグを含む融合タンパク質をコードする、請求項13、14、15又は16に記載の発現ベクター。
【請求項１８】
さらに少なくとも1つのタンパク質切断部位を含む融合タンパク質をコードする、請求項13、14、15、16又は17に記載の発現ベクター。
【請求項１９】
YebF又はその生物学的に活性な変種若しくは部分をコードする第一のヌクレオチド配列及び興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードする第二のヌクレオチド配列を発現のためにインフレームで含む、組換えDNA構築物。
【請求項２０】
第一のヌクレオチド配列と第二のヌクレオチド配列との間にインフレームで配置されるか、又は第二のヌクレオチド配列の後にインフレームで配置された少なくとも1つの追加ヌクレオチド配列をさらに含み、前記追加ヌクレオチド配列が、タグ、タンパク質切断部位又はスペーサーから選択されるアミノ酸配列をコードする、請求項19に記載の組換えDNA構築物。
【請求項２１】
請求項19又は20に記載の組換えDNA構築物を含む発現ベクター。
【請求項２２】
大腸菌（Escherichia coli）での使用を目的とする、請求項21に記載の発現ベクター。
【請求項２３】
請求項19又は20に記載の組換えDNA構築物を含む宿主細胞。
【請求項２４】
前記宿主細胞が大腸菌（Escherichia coli）である、請求項23に記載の宿主細胞。
【請求項２５】
請求項21又は22に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２６】
前記宿主細胞が大腸菌（Escherichia coli）である、請求項23に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
請求項19又は20に記載の組換えDNA構築物によってコードされる融合タンパク質。
【請求項２８】
請求項21又は22に記載の発現ベクターによってコードされる融合タンパク質。
【請求項２９】
請求項21又は22に記載の発現ベクターを宿主細胞へ導入する工程を含む融合タンパク質の製造方法であって、前記発現ベクターを含む宿主細胞が適切な条件下で増殖するときに前記融合タンパク質を発現する、前記融合タンパク質の製造方法。
【請求項３０】
YebFのリーダー配列の転写及び合成を誘導する制御ヌクレオチド配列と動作可能なように連結された、前記YebFのリーダー配列をコードする発現ベクター。
【請求項３１】
前記YebFのリーダー配列及び興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドを含むタンパク質をコードする、請求項30に記載の発現ベクター。
【請求項３２】
興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードする前記ヌクレオチド配列が、YebFのリーダー配列をコードするヌクレオチド配列の下流に配置される、請求項30又は31に記載の発現ベクター。
【請求項３３】
大腸菌（Escherichia coli）での使用を目的とする、請求項30、31又は32に記載の発現ベクター。
【請求項３４】
さらに少なくとも1つのタグを含むタンパク質をコードする、請求項30、31、32又は33に記載の発現ベクター。
【請求項３５】
さらに少なくとも1つのタンパク質切断部位を含むタンパク質をコードする、請求項30、31、32、33又は34に記載の発現ベクター。
【請求項３６】
興味の対象となるタンパク質、ペプチド又はポリペプチドのペリプラズムへの輸送を誘導するための、YebFリーダーのリーダー配列の使用。
【請求項３７】
前記YebFのリーダー配列が、興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをさらに含むタンパク質の部分である、請求項36に記載の使用。
【請求項３８】
前記YebFのリーダー配列が、興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドとアミノ末端で融合されている、請求項36又は37に記載の使用。
【請求項３９】
以下の工程を含む、興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをペリプラズムで発現させる方法：
（a）YebFのリーダー配列に対してカルボキシ末端に配置された興味の対象となるタンパク質、ポリペプチド又はペプチドを含むタンパク質をコードする発現ベクターを提供する工程、及び
（b）適切な細菌細胞で前記タンパク質を発現させる工程。