【手続補正書】
【提出日】平成20年9月9日(2008.9.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白血球の試料を、白血球内のRNAを染色する蛍光細胞膜透過性色素と混合し；
単球、顆粒球およびリンパ球よりなる群から選択された白血球の３つの主要な亜集団のうち少なくとも２つを全白血球から同定し；
細胞内の染色された核酸からの単一蛍光を用いて、同定された亜集団の各々の蛍光強度を決定し； 次いで
１つの細胞の亜集団の蛍光強度の他の細胞の亜集団の蛍光強度に対する比率を計算する
工程を含む、患者におけるウイルス感染または疾患を診断またはモニターするアッセイ方法。
【請求項２】
白血球の試料が患者の血液試料由来である、請求項１記載のアッセイ方法。
【請求項３】
血液試料の赤血球を溶解させて白血球試料を得る、請求項２記載のアッセイ方法。
【請求項４】
培養細胞が白血球細胞を形成する、請求項１記載のアッセイ方法。
【請求項５】
単球、顆粒球およびリンパ球亜集団が全て同定される、請求項１から４のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項６】
各亜集団の蛍光強度が、各々の亜集団の蛍光強度の平均値から決定される請求項１から５のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項７】
各亜集団の蛍光強度が、各々の亜集団の蛍光強度の中央値から決定される、請求項１から５のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項８】
以下の比率の少なくとも１つが計算される、請求項１から７のいずれか１記載のアッセイ方法：
単球：顆粒球； 
単球：リンパ球；および
顆粒球：リンパ球  
【請求項９】
顆粒球集団またはリンパ球集団の蛍光強度の平均値に対する単球集団の蛍光強度の平均値の比率を、患者における細胞のウイルス貯蔵庫のインジケーターとする、請求項１ないし８いずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項１０】
ウイルス感染はHIVである、請求項１ないし９いずれか１記載のアッセイ方法。 
【請求項１１】
疾患はAIDSである、請求項１ないし１０いずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項１２】
他の疾患を持つ患者の重感染を付加的にモニターする、請求項１ないし１１のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項１３】
他の疾患がウイルス、寄生虫または細菌感染である、請求項１２記載のアッセイ方法。
【請求項１４】
他の疾患が結核である、請求項１２または１３記載のアッセイ方法。 
【請求項１５】
顆粒球集団の蛍光強度の平均値に対する単球集団の蛍光強度の平均値の比率が、リンパ球集団の蛍光強度の平均値に対する単球集団の蛍光強度の平均値の比率未満である時は重感染を示す、請求項１２ないし１４のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項１６】
色素がDNAおよびRNAの両者を染色する化合物である、前記請求項のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項１７】
フローサイトメーターを用いて行われる、前記請求項のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項１８】
血液アナライザーを用いて行われる、請求項１ないし１６のいずれか１記載のアッセイ方法。 
【請求項１９】
蛍光光度計を用いて行われる、請求項１ないし１６のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項２０】
さらにCD4カウントを得るための工程を含む、前記の請求項のいずれか１記載のアッセイ方法。
【請求項２１】
CD4カウントは、色素に対する異なる蛍光チャネルで蛍光する抗体試料に添加することによって得られる、請求項２０記載のアッセイ方法。
【請求項２２】
細胞膜マーカーまたは細胞内マーカーが表現型検査のために用いられる、請求項２０記載のアッセイ方法。
【請求項２３】
細胞活性マーカーがCD38、CD14/CD16 またはp24である、請求項２０記載のアッセイ方法。
【請求項２４】
ウイルス、寄生虫、または細菌感染を持つ患者内において細胞貯蔵庫を診断またはモニターする方法であって、単一蛍光を用いて、RNA染色用蛍光色素で染色されている患者の単球の蛍光強度の平均値の同じくその蛍光色素で染色されている患者の顆粒球および/またはリンパ球の蛍光強度の平均値に対する比率を計算する工程を含む方法。    
【請求項２５】
ウイルス感染がHIVである、請求項２４記載の方法。  
【請求項２６】
該方法によって得られた比較が患者のウイルス負荷のマーカー、疾患の診断、疾患の進行のマーカー、および/または重感染のインジケーターとして用いられる、請求項２４または２５記載の方法。
【請求項２７】
該方法によって得られた比較が患者の治療に対する応答を示すために用いられる、請求項２４ないし２６のいずれか１記載の方法。
【請求項２８】
請求項１ないし２３のいずれかに記載のアッセイ方法を行うための少なくともRNAを染色する細胞膜透過性色素を含むキットの使用。
【請求項２９】
該色素がDNAおよびRNAの両者を蛍光染色する、請求項２８記載の使用。
【請求項３０】
キットが、該アッセイ方法または該アッセイ方法の少なくとも一部を行うための１組のコンピューター解読可能な指示書をさらに含む、請求項２８または２９記載の使用。
【請求項３１】
キットが、
単球、顆粒球および/またはリンパ球亜集団のうちの少なくとも２つを同定し；
各々の同定した亜集団の蛍光強度を計算し；次いで /または 
細胞内の染色された核酸の単一蛍光を用いて、１つの亜集団の蛍光強度の他の亜集団の蛍光強度に対する比率を計算する；
ためのコンピューター解読可能な指示書を含む請求項３０記載のキット。
【請求項３２】
コンピューター解読可能な指示書が、得られた比率または複数比率を解釈して、患者が低、中または高ウイルス、寄生虫または貯蔵庫を有しているか否か、または重感染をしているか否かを示す、請求項３１記載の使用。
【請求項３３】
各亜集団の蛍光強度が各々の亜集団の蛍光強度の平均値である、請求項３１または３２記載の使用。
【請求項３４】
各亜集団の蛍光強度が、各々の亜集団の蛍光強度の中央値である、請求項３１または３２記載の使用。
【請求項３５】
各亜集団の蛍光強度が各々の亜集団の領域またはマーカーの境界である、請求項３１または３２記載の使用。
【請求項３６】
キットが、試料のCD4カウントを決定するための抗体を含む、請求項２８ないし３５のいずれか１記載の使用。
【請求項３７】
キットが、表現型検査のための細胞膜マーカーまたは細胞内マーカーを含む、請求項２８ないし３５のいずれか１記載の使用。  
【請求項３８】
マーカーがCD38、CD14/CD16またはp24である、請求項３７記載の使用。
【請求項３９】
キットが、赤血球溶解剤、安定化剤、固定剤、対照細胞、培地およびビーズ試薬よりなる群から選択される１以上の試薬を含む、請求項２８ないし３８のいずれか１記載の使用。
【請求項４０】
キットが、赤血球溶解剤、色素、抗体試薬および/またはアッセイ方法で使用する他の試薬を分注する手段を含む、請求項３９記載の使用。
【請求項４１】
請求項２４ないし２７のいずれか１記載の方法に従って患者の細胞のウイルス、寄生虫または細菌貯蔵庫の診断またはモニターするための命令を含む機械可読媒体であって、機械によって実行すると、機械が請求項１ないし２３のいずれかに記載のアッセイ方法の全てまたは、少なくともいくつかの工程を実行させる機械可読媒体。
【請求項４２】
フローサイトメーターおよび/または血液アナライザーと併用するように構成された、請求項４１記載の機械可読媒体。
【請求項４３】
インピーダンス、光散乱および蛍光よりなる群から選択される分析方法を行うための命令を含む、請求項４１または４２記載の機械可読媒体。