【手続補正書】
【提出日】令和1年5月23日(2019.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼと、
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）核酸に相補的な部分を有するガイドＲＮＡであって、前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを前記ＨＳＶ核酸に向かわせることが可能なガイドＲＮＡと
をコードするベクターを含む組成物であって、
前記ＨＳＶ核酸が、複製開始点Ｓ（ｏｒｉＳ）領域、ロングユニーク領域９（ＵＬ９）またはＬＡＴイントロン（ＬＡＴｉ）を含む、組成物。
【請求項２】
経皮的に投与されるように構成されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
局所用溶液を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ヒト患者への送達用にパッケージングされている、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＨＳＶ核酸に相補的な前記ガイドＲＮＡの前記部分が、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有していない、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、プラスミド、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、マイクロバブル、細胞透過性ペプチド、およびリポスフェアからなる群から選択されるベクターを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ＨＳＶ感染を処置するための方法において使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
リボ核タンパク質を含む組成物であって、前記リボ核タンパク質は、
Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼと、
ＨＳＶ核酸に相補的な部分を有するガイドＲＮＡであって、前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを前記ＨＳＶ核酸に向かわせることが可能なガイドＲＮＡと
を含み、
前記ＨＳＶ核酸が、ｏｒｉＳ領域、ＲＬ２、ＵＬ９またはＬＡＴｉを含む、組成物。
【請求項９】
経皮的に投与されるように構成されている、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
感染組織に局所塗布するための薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＨＳＶ核酸に相補的な前記ガイドＲＮＡの前記部分が、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有していない、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
ＨＳＶ感染の処置の方法において使用するための、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記リボ核タンパク質が、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、細胞透過性ペプチド、リポスフェア、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を使用して送達される、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記リボ核タンパク質が、ナノ粒子に封入されているかまたはナノ粒子と複合体となっている、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
組成物であって、
Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼをコードするｍＲＮＡと、
ＨＳＶ核酸に相補的な部分を有するガイドＲＮＡであって、前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを前記ＨＳＶ核酸に向かわせることが可能なガイドＲＮＡと
を含み、
前記ＨＳＶ核酸が、ｏｒｉＳ領域、ＵＬ９、ＲＬ２またはＬＡＴｉを含む、組成物。
【請求項１６】
前記ｍＲＮＡおよび前記ガイドＲＮＡが、脂質ナノ粒子に封入されているかまたはナノ粒子と複合体となっている、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、局所用溶液を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ＨＳＶ核酸に相補的な前記ガイドＲＮＡの部分が、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有していない、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１９】
ＨＳＶ感染の処置の方法において使用するための、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
本方法は、ＣＭＶゲノム破壊を可能にし、それにより、細胞に対する細胞毒性が観察されることなく、ウイルス増殖の無能力化がもたらされる。本発明の態様は、ＣＭＶゲノム物質（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を選択的に標的とするようにＣＲＩＳＰＲ／ｇＲＮＡ／Ｃａｓ９複合体を設計し、ＣＲＩＳＰＲ／ｇＲＮＡ／Ｃａｓ９複合体を、ＣＭＶゲノムを含む細胞または組織に送達し、ウイルスを無力化にするためにＣＭＶゲノムを切断することを提供する。本方法は、ＣＭＶゲノム機能が標的にされた損壊を可能にするか、または好ましい実施形態では、ＣＭＶゲノムにおけるヌクレアーゼ作用のための複数の部位を標的とすることにより引き起こされた複数の切断によってＣＭＶ核酸を消化することを可能にする。本発明の態様は、ＣＲＩＳＰＲ／ｇＲＮＡ／Ｃａｓ９複合体カクテルのトランスフェクションを提供することによって、ＣＭＶ増殖を完全に抑制する。本発明のさらなる態様および利点は、以下のその詳細な説明を考慮すると明白となる。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染の処置のための組成物であって、
ヌクレアーゼと、
ＨＳＶ核酸に相補的であり、前記ヌクレアーゼを前記ＨＳＶ核酸に向かわせることが可能な配列特異的標的指向性部分と
をコードするベクターを含む組成物。
（項目２）
前記ＨＳＶ核酸が、複製開始点Ｓ（ｏｒｉＳ）領域である、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記ＨＳＶ核酸が、ロングユニーク領域９（ＵＬ９）またはロングリピート領域２（ＲＬ２）である、項目１に記載の組成物。
（項目４）
経皮的に投与されるように構成されている、項目１に記載の組成物。
（項目５）
局所用溶液を含む、項目１に記載の組成物。
（項目６）
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼからなる群から選択されるヌクレアーゼである、項目１に記載の組成物。
（項目７）
前記ヌクレアーゼが、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを含み、配列特異的結合モジュールが、ウイルスゲノムの部分を特異的に標的とするガイドＲＮＡを含む、項目１に記載の組成物。
（項目８）
ヒト患者への送達用にさらにパッケージングされている、項目１に記載の組成物。
（項目９）
標的指向性の配列が、ガイドＲＮＡであり、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有していない、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記ベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、プラスミド、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、マイクロバブル、細胞透過性ペプチド、およびリポスフェアからなる群から選択されるベクターを含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染を処置するための方法であって、
ヌクレアーゼとＨＳＶ核酸に相補的な配列特異的標的指向性部分とをコードするベクター、または前記ヌクレアーゼと前記配列特異的標的指向性部分とを含むリボ核タンパク質を宿主の細胞内に導入するステップ、
前記配列特異的標的指向性部分が、前記ヌクレアーゼを前記ＨＳＶ核酸に向かわせるようにさせるステップ、および
前記ヌクレアーゼに前記ＨＳＶ核酸を切断させるステップ
を含む方法。
（項目１２）
前記ＨＳＶ核酸が、複製開始点Ｓ（ｏｒｉＳ）領域である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ＨＳＶ核酸が、ロングユニーク領域９（ＵＬ９）またはロングリピート領域２（ＲＬ２）である、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記ベクターを前記宿主に経皮的に投与するステップをさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
さらに、前記経皮的な投与が、前記ベクターを含む局所用溶液を塗布することを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼからなる群から選択されるベクターである、項目１１に記載の方法。
（項目１７）
前記ヌクレアーゼが、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを含み、配列特異的結合モジュールが、ウイルスゲノムの部分を特異的に標的とするガイドＲＮＡを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１８）
前記宿主が、生体ヒト対象であり、前記ステップがｉｎ  ｖｉｖｏで実施される、項目１１に記載の方法。
（項目１９）
標的指向性の配列が、ガイドＲＮＡであり、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有していない、項目１１に記載の方法。
（項目２０）
前記ベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、プラスミド、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、マイクロバブル、細胞透過性ペプチド、およびリポスフェアからなる群から選択されるベクターを含む、項目１１に記載の方法。
（項目２１）
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染の処置のための組成物であって、
ヌクレアーゼと、
ＨＳＶ核酸に相補的であり、前記ヌクレアーゼを前記ＨＳＶ核酸に向かわせることが可能な配列特異的標的指向性部分と
を含むリボ核タンパク質を含む組成物。
（項目２２）
前記ＨＳＶ核酸が、複製開始点Ｓ（ｏｒｉＳ）領域である、項目２１に記載の組成物。
（項目２３）
前記ＨＳＶ核酸が、ロングユニーク領域９（ＵＬ９）またはロングリピート領域２（ＲＬ２）である、項目２１に記載の組成物。
（項目２４）
経皮的に投与されるように構成されている、項目２１に記載の組成物。
（項目２５）
感染組織に局所塗布するための薬学的に許容される担体をさらに含む、項目２１に記載の組成物。
（項目２７）
前記ヌクレアーゼが、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを含み、配列特異的結合モジュールが、ウイルスゲノムの部分を特異的に標的とするガイドＲＮＡを含む、項目２１に記載の組成物。
（項目２９）
標的指向性の配列が、ガイドＲＮＡであり、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有していない、項目２１に記載の組成物。
（項目３０）
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染の処置のための組成物であって、
ヌクレアーゼと、
ＣＭＶ核酸に相補的であり、前記ヌクレアーゼを前記ＣＭＶ核酸に向かわせることが可能な配列特異的標的指向性部分と
を含む組成物。
（項目３１）
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼからなる群から選択されるヌクレアーゼを含む、項目３０に記載の組成物。
（項目３２）
前記ヌクレアーゼがＣａｓ９エンドヌクレアーゼである、項目３０に記載の組成物。
（項目３３）
前記ヌクレアーゼが、前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを前記ＣＭＶ核酸の部分へと標的化するガイドＲＮＡをさらに含む、項目３２に記載の組成物。
（項目３４）
前記ヌクレアーゼが、前記ＣＭＶ核酸中に少なくとも１つの二本鎖切断を引き起こす、項目３０の組成物。
（項目３５）
前記ヌクレアーゼが、前記ＣＭＶ核酸中に少なくとも１つの挿入を引き起こす、項目３０の組成物。
（項目３６）
臓器のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染を処置するための方法であって、
ヌクレアーゼと、ＣＭＶ核酸に相補的であり、前記ヌクレアーゼを前記ＣＭＶ核酸に向かわせることが可能な配列特異的標的指向性部分とを含む組成物を臓器内に導入するステップ、および
前記ヌクレアーゼに、ＣＭＶ核酸を標的とし、かつ切断させるステップ
を含む方法。
（項目３７）
前記臓器が移植ドナーに由来する、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記臓器が、心臓、肝臓、腎臓、目、肺、膵臓、腸、および胸腺からなる群から選択される、項目３６に記載の方法。
（項目３９）
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼからなる群から選択されるヌクレアーゼを含む、項目３６に記載の方法。
（項目４０）
前記ヌクレアーゼがＣａｓ９エンドヌクレアーゼである、項目３６に記載の方法。
（項目４１）
前記ヌクレアーゼが、前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを前記ＣＭＶ核酸の部分へと標的化するガイドＲＮＡをさらに含む、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記導入するステップが、送達用ウイルスベクターで前記ヌクレアーゼを送達することを含む、項目３６に記載の方法。
（項目４３）
前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、およびアデノ随伴ウイルスからなる群から選択される、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記導入するステップが、プラスミド、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマ
ー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、細胞透過性ペプチド、リポスフェア、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）からなる群から選択されるものを含むベクターで前記ヌクレアーゼを送達することを含む、項目３６に記載の方法。
（項目４５）
前記ヌクレアーゼが、前記ＣＭＶ核酸中に少なくとも１つの二本鎖切断を引き起こす、項目３６に記載の方法。
（項目４６）
前記ヌクレアーゼが、前記ＣＭＶ核酸中に少なくとも１つの挿入を引き起こす、項目３６に記載の方法。
（項目４７）
胎児のサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染を処置するための方法であって、
ヌクレアーゼと、ＣＭＶ核酸に相補的であり、前記ヌクレアーゼを前記ＣＭＶ核酸に向かわせることが可能な配列特異的標的指向性部分とを含む組成物を妊婦に導入するステップ、および
前記ヌクレアーゼに、ＣＭＶ核酸を標的とし、かつ切断させるステップ
を含む方法。
（項目４８）
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼからなる群から選択されるヌクレアーゼを含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ヌクレアーゼがＣａｓ９エンドヌクレアーゼである、項目４７に記載の方法。
（項目５０）
前記ヌクレアーゼが、前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを前記ＣＭＶ核酸の部分へと標的化するガイドＲＮＡと会合している、項目４７に記載の方法。
（項目５１）
前記導入するステップが、ウイルスベクター内の前記ヌクレアーゼを送達することを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５２）
前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、およびアデノ随伴ウイルスからなる群から選択される、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記導入するステップが、プラスミド、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、細胞透過性ペプチド、リポスフェア、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）からなる群から選択されるものを含むベクターで前記ヌクレアーゼを送達することを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５４）
前記ヌクレアーゼが、前記ＣＭＶ核酸中に少なくとも１つの二本鎖切断を引き起こす、項目４７に記載の方法。
（項目５５）
前記ヌクレアーゼが、前記ＣＭＶ核酸中に少なくとも１つの挿入を引き起こす、項目４７に記載の方法。