【手続補正書】
【提出日】平成20年8月28日(2008.8.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一軽鎖ポリペプチドと対をなす第一重鎖ポリペプチドと第二軽鎖ポリペプチドと対をなす第二重鎖ポリペプチドを含んでなり、第一重鎖ポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域をそれぞれ含む二重特異性抗体を製造する方法であって、
（ａ）第一重鎖ポリペプチドと第一軽鎖ポリペプチドを第一宿主細胞で発現させ；
（ｂ）第二重鎖ポリペプチドと第二軽鎖ポリペプチドを第二宿主細胞で発現させ；
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の重鎖及び軽鎖ポリペプチドを単離し；
（ｄ）（ｃ）の単離ポリペプチドをアニールして、第一軽鎖と対をなす第一重鎖を含む第一アームと第二軽鎖と対をなす第二重鎖を含む第二アームを含んでなる二重特異性抗体を生成することを含む方法。
【請求項２】
（ａ）４つのポリペプチドの混合物を含むサンプルを取得し、ここで、該４つのポリペプチドは、第一標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、第二標的分子結合アームを生成可能な免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対であり、第一対及び第二対の重鎖ポリペプチドが重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含み、
（ｂ）ポリペプチドの多量体化を許容する条件下で４つのポリペプチドをインキュベートし、二つの区別される標的分子に対して結合特異性を有する抗体の実質的に均一な集団を生成することを含んでなる方法。
【請求項３】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一の対と、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第二の対を、第一対及び第二対のポリペプチドの多量体化を許容する条件下でインキュベートして実質的に均一な抗体の集団を生成し、
ここで、ポリペプチドの第一の対は第一標的分子に結合可能であり；
ここで、ポリペプチドの第二の対は第二標的分子に結合可能であり；
ここで、第一重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドと第二重鎖ポリペプチドのＦｃポリペプチドは界面で合致し、第二Ｆｃポリペプチドの界面は、第一Ｆｃポリペプチドの界面のキャビティに位置せしめることが可能な隆起を含む方法。
【請求項４】
第一対及び第二対の各重鎖ポリペプチドが、重鎖間ジスルフィド結合不能の変異ヒンジ領域を含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖ポリペプチドの第一対及び第二対が、別個の発現ユニットから得られる請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
発現ユニットが細胞、細胞培養物及びインビトロタンパク質発現系からなる群から選択される請求項５に記載の方法。
【請求項７】
上記重鎖間ジスルフィド結合がＦｃ領域間にある請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
上記変異重鎖ヒンジ領域が、ジスルフィド結合を形成可能なシステイン残基を欠く方法であって、システイン残基が欠失、セリンへの置換、もしくはセリン以外のアミノ酸への置換である、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
上記ジスルフィド結合が分子間にある請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
上記分子間ジスルフィド結合が２つの免疫グロブリン重鎖のシステイン間にある請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
上記抗体が重鎖定常ドメインと軽鎖定常ドメインを含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
重鎖がヒトＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
上記抗体、又は重鎖及び軽鎖ポリペプチドの一方又は両方の対がヒト化されている請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
抗体が完全長抗体である請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
上記抗体、又は重鎖及び軽鎖の一方又は両方の対がヒトである請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
抗体が、抗体断片である請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
上記抗体断片がＦｃ融合ポリペプチドである請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
抗体がＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＡ及びＩｇＤからなる群から選択される請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
抗体が治療用抗体、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、診断用抗体、阻止抗体及び中和抗体からなる群から選択される、請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
抗体が腫瘍抗原に結合可能である請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
腫瘍抗原が細胞表面分子ではない、又は腫瘍抗原がクラスター分類因子ではない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗体がクラスター分類因子、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、組織発生又は分化に関連する分子、細胞表面分子及びリンホカインからなる群から選択される分子に結合可能である請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
第一対及び第二対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ポリペプチドの少なくとも９０％が上記二重特異性抗体を生成する請求項３に記載の方法。
【請求項２５】
第二Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されて隆起をコードし、又は第一Ｆｃポリペプチドが鋳型／元のポリペプチドから改変されてキャビティをコードし、又はその双方をコードする請求項３に記載の方法。
【請求項２６】
上記抗体が二つの標的分子に特異的に結合可能である請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ポリペプチドの第一の対又は第一アームが第一標的分子に特異的に結合し、ポリペプチドの第二の対又は第二アームが第二標的分子に特異的に結合する請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
第一宿主細胞と第二宿主細胞が別の細胞培養物中にある、又は双方の宿主細胞を含む混合培養物中にある請求項１から２の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
第一の宿主細胞及び第二の宿主細胞が大腸菌又は内因性プロテアーゼ活性を欠く大腸菌からなる群から選択される原核生物である請求項１から２の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
第一の宿主細胞及び第二の宿主細胞が真核宿主細胞である請求項１から２の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
上記宿主細胞がＣＨＯ細胞である請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ポリペプチドをコードする核酸が、ほぼ等しい強度の翻訳開始領域（ＴＩＲ）に作用可能に結合している請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
アニーリング又はインキュベート工程が、単離ポリペプチドの混合物を室温でインキュベートする工程、単離ポリペプチドの混合物を加熱する工程、単離ポリペプチドの混合物を少なくとも２分間加熱する工程、単離ポリペプチドの混合物を、約４から約１１の間（約４と約１１を含む）のｐＨでインキュベートする工程及び単離ポリペプチドの混合物を、変性剤中でインキュベートする工程からなる群から選択される工程の少なくとも一つを含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
混合物を少なくとも４０℃、少なくとも５０℃、約４０℃から約６０℃の間、及び５０℃から選択される温度に加熱する請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
加熱後に混合物を冷却する請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ｐＨが約５．５及び約７．５からなる群から選択されるｐＨである請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
変性剤が尿素である請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
アニーリング又はインキュベート工程が、第一及び第二重鎖ポリペプチド間に化学結合を含まない請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ポリペプチドの少なくとも７５％が、第一重鎖及び軽鎖対と第二重鎖及び軽鎖対を含む複合体中にある請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
単離ポリペプチドの１０％以下が、抗体精製工程の前に、単量体又は二量体として存在している請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項４１】
第一の対及び第二の対の軽鎖が異なった可変ドメイン配列を含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項４２】
第一及び第二の重-軽鎖対はそれぞれ互いにジスルフィド結合した重鎖及び軽鎖を含んでなる請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項４３】
第一の対及び第二の対のポリペプチドがアニール又は接触工程においてほぼ等モル量で提供される請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ポリペプチドの第一の対と第二の対が少なくとも０．５のｐＩ値の差を含む請求項１から３の何れか一項に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１から４４の何れか一項に記載の方法によって製造された二重特異性抗体。
【請求項４６】
第一の対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドと第二の対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドを含んでなり、軽鎖ポリペプチドが異なった可変ドメイン配列を含み、重鎖が重鎖間ジスルフィド結合不可の変異ヒンジ領域を含む二重特異性抗体。
【請求項４７】
請求項１から４６の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項４８】
請求項４７に記載の核酸を含んでなる宿主細胞。
【請求項４９】
上記各対の重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸が単一のベクター中に存在している請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５０】
上記各対の重鎖ポリペプチドをコードする核酸及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸が別のベクター中に存在している請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
請求項１から４６の何れか一項に記載の二重特異性抗体を集合的にコードする一又は複数の組換え核酸を含んでなる組成物。
【請求項５２】
請求項１から４６の何れか一項に記載の二重特異性抗体と担体を含有してなる組成物。
【請求項５３】
免疫グロブリンの少なくとも８０％が請求項１から４６の何れか一項に記載の二重特異性抗体である免疫グロブリン群を含んでなる組成物。