【手続補正書】
【提出日】平成31年2月7日(2019.2.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
網膜色素上皮(RPE)特異的プロモーター及び作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列を含む発現構築物であって、RPE特異的プロモーターが：
(a)作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列にRPE特異的発現を付与する、配列番号1由来の連続したヌクレオチドの配列、又は、
(b)(a)の前記配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する配列
を含み、作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列が配列番号４の配列を含む、発現構築物。
【請求項２】
RPE特異的プロモーターが、(a)配列番号1由来の1300個以下の連続したヌクレオチド、又は(b)配列番号1由来の1300個以下の連続したヌクレオチドの前記配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する配列を含む、請求項１に記載の発現構築物。
【請求項３】
RPE特異的プロモーターが、(a)配列番号1由来の800個以下の連続したヌクレオチド、又は(b)配列番号1由来の800個以下の連続したヌクレオチドの前記配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する配列を含む、請求項２に記載の発現構築物。
【請求項４】
RPE特異的プロモーターが、(a)配列番号2の配列若しくは配列番号2のヌクレオチド12〜761の配列、又は(b)配列番号2の前記配列若しくは配列番号2のヌクレオチド12〜761に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する配列を含む、請求項３に記載の発現構築物。
【請求項５】
(a)又は(b)の前記配列が、少なくとも500ヌクレオチドの長さである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の発現構築物。
【請求項６】
網膜色素上皮(RPE)特異的プロモーターであって、(a)配列番号2の配列若しくは配列番号2のヌクレオチド12〜761の配列、又は(b)配列番号2の前記配列若しくは配列番号2のヌクレオチド12〜761に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する配列を有する、RPE特異的プロモーター。
【請求項７】
RPE特異的方法で発現される配列に作動可能に連結されている、請求項６に記載のプロモーターを含む発現構築物。
【請求項８】
作動可能に連結されている配列が、RPE65、MERTK、LRAT、TYR、GRP143若しくはMYO7Aコード配列、又は神経栄養因子、抗血管新生ポリペプチド若しくはRPEにおいて抗アポトーシス作用を有するポリペプチドをコードしている配列である、請求項７に記載の発現構築物。
【請求項９】
作動可能に連結されている配列が、配列番号3〜8から選択される配列、又は配列番号3〜8のいずれか1つに対して少なくとも80％の配列同一性を有し、RPE機能を回復する能力を有する配列を含む、請求項８に記載の発現構築物。
【請求項１０】
請求項１〜５若しくは請求項７〜９のいずれか一項に記載の発現構築物又は請求項６に記載のプロモーターを含む、ベクター。
【請求項１１】
ベクターがウイルスベクターである、請求項１０に記載のベクター。
【請求項１２】
ベクターがアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターであるか、又はAAVゲノム若しくはその誘導体を含み、任意で前記誘導体が、キメラ、シャッフル又はキャプシド修飾誘導体である、請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
前記AAVゲノムが、AAVの天然由来血清型又は単離物又はクレードに由来し、任意で前記AAVゲノムが、AAV血清型2(AAV2)、AAV血清型4(AAV4)、AAV血清型5(AAV5)又はAAV血清型8(AAV8)に由来し、及び/又はキャプシドがAAV5又はAAV8に由来する、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
AAVゲノムがAAV2に由来し、キャプシドがAAV5又はAAV8に由来する、請求項１３に記載のベクター。
【請求項１５】
請求項１０に記載のベクターを含有するか、又は請求項１１〜１４のいずれか一項に記載のウイルスベクターを産生する、宿主細胞であって、任意で宿主細胞がHEK293又はHEK293T細胞である、宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のベクターを含む、網膜ジストロフィーの処置又は予防用の医薬品。
【請求項１８】
網膜ジストロフィーの処置又は予防用の医薬品の製造における、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のベクターの使用。
【請求項１９】
網膜ジストロフィーの処置又は予防用の、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
網膜ジストロフィーが、レーバー先天性黒内障(LCA)、加齢性黄斑変性症(AMD)、眼皮膚症1型、又はネトルシップ-ファルス型眼白子症、又はMERTK欠損症である、請求項１７に記載の医薬品、又は請求項１８に記載の使用、又は請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
処置又は予防が、網膜、網膜下又は硝子体内への直接注射により、請求項１０〜１４のいずれか一項に記載のベクターを患者に投与することによるものであり、任意で、前記ベクターは、網膜、網膜下腔又は硝子体内腔に直接投与される、
請求項１７若しくは２０に記載の医薬品、請求項１８若しくは２０に記載の使用、又は請求項１９若しくは２０に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７１】
[実施例3]
処置効果のin vivoでの評価
最高レベルの発現をもたらすプロモーター、配列番号2で示した「NA」断片、及び配列番号4で示した最適化されたRPE65コード配列からなる構築物を、AAV5キャプシド及びAAV8キャプシドにパッケージングし、RPE65欠損マウスにおいてin vivoで網膜機能を回復させるその能力に関して試験した。回復の効果を、以前にBainbridge et al (2008)において使用された臨床グレードベクター、「AAV2-hRPE65」と比較した。このベクターは、ヒトRPE65プロモーターの1400bp断片によって駆動されるヒトRPE65コード配列を含有していた。以前のベクターが動物において既に回復を導いていたので、限定された状況下での処置効果が比較できるように、低いベクター用量が投与された(図3)。b波振幅を回復の尺度として使用した。驚いたことに、最適化されたベクターで処置した眼から得られたb波振幅は、元のベクターの300倍高い用量で注射された眼から得られた振幅と同じであるか、それよりも高かった。これは、新規ベクターが元のベクターよりも少なくとも300倍有効であることを示した。
本発明は以下の態様も提供する。
[１]網膜色素上皮(RPE)特異的プロモーターであって、
(a)作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列にRPE特異的発現を付与する、配列番号1由来の連続したヌクレオチドの配列、又は、
(b)(a)の前記配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する配列
を含む、プロモーター。
[２]前記配列が、(a)配列番号1由来の1300個以下の連続ヌクレオチドを含むか、又は前記配列が、(b)配列番号1由来の1300個以下の連続ヌクレオチドの前記配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する、[１]に記載のプロモーター。
[３]前記配列が、(a)配列番号1由来の800個以下の連続ヌクレオチドを含むか、又は前記配列が、(b)配列番号1由来の800個以下の連続ヌクレオチドの前記配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する、[２]に記載のプロモーター。
[４]前記配列が、(a)配列番号2の配列若しくは配列番号2のヌクレオチド12〜761の配列を含むか、又は前記配列が、(b)配列番号2の前記配列若しくは配列番号2のヌクレオチド12〜761に対して少なくとも90％の配列同一性を有し、RPE特異的プロモーター活性を保持する、[３]に記載のプロモーター。
[５](a)又は(b)の前記配列が、少なくとも500ヌクレオチドの長さである、[１]〜[４]のいずれか一項に記載のプロモーター。
[６]RPE特異的方法で発現される配列に作動可能に連結されている、[１]〜[５]のいずれか一項に記載のプロモーターを含む発現構築物。
[７]作動可能に連結されている配列が、RPE65、MERTK、LRAT、TYR、GRP143若しくはMYO7Aコード配列、又は神経栄養因子、抗血管新生ポリペプチド若しくはRPEにおいて抗アポトーシス作用を有するポリペプチドをコードしている配列である、[６]に記載の発現構築物。
[８]作動可能に連結されている配列が、配列番号3〜8から選択される配列、又は配列番号3〜8のいずれか1つに対して少なくとも80％の配列同一性を有し、RPE機能を回復する能力を有する配列を含む、[７]に記載の発現構築物。
[９]作動可能に連結されている配列が、配列番号4を含む、[７]又は[８]に記載の発現構築物。
[１０][１]〜[５]のいずれか一項に記載のプロモーター又は[６]〜[９]のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、ベクター。
[１１]ウイルスベクターである、[１０]に記載のベクター。
[１２]アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターであるか、又はAAVゲノム若しくはその誘導体を含む、[１１]に記載のベクター。
[１３]前記誘導体が、キメラ、シャッフル又はキャプシド修飾誘導体である、[１２]に記載のベクター。
[１４]前記AAVゲノムが、AAVの天然由来血清型又は単離物又はクレードに由来する、[１２]又は[１３]に記載のベクター。
[１５]前記AAVゲノムが、AAV血清型2(AAV2)、AAV血清型4(AAV4)、AAV血清型5(AAV5)又はAAV血清型8(AAV8)に由来し、及び/又はキャプシドがAAV5又はAAV8に由来する、[１４]に記載のベクター。
[１６]ゲノムがAAV2に由来し、キャプシドがAAV5又はAAV8に由来する、[１５]に記載のベクター。
[１７][１０]に記載のベクターを含有するか、又は[１１]〜[１６]のいずれか一項に記載のウイルスベクターを産生する、宿主細胞。
[１８]HEK293又はHEK293T細胞である、[１７]に記載の細胞。
[１９][１０]〜[１６]のいずれか一項に記載のベクター及び薬学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
[２０]網膜ジストロフィーを予防又は処置する方法における使用のための、[１０]〜[１６]のいずれか一項に記載のベクター。
[２１]網膜ジストロフィーの処置又は予防用の医薬品の製造における、[１０]〜[１６]のいずれか一項に記載のベクターの使用。
[２２]それを必要とする患者における網膜ジストロフィーを処置又は予防する方法であって、[１０]〜[１６]のいずれか一項に記載のベクターの治療上有効な量を患者に投与することを含む、方法。
[２３]網膜ジストロフィーが、レーバー先天性黒内障(LCA)、加齢性黄斑変性症(AMD)、眼皮膚症1型、又はネトルシップ-ファルス型眼白子症、又はMERTK欠損症である、[２０]に記載の使用のためのベクター、又は[２１]に記載の使用、又は[２２]に記載の方法。
[２４]処置又は予防が、網膜、網膜下又は硝子体内への直接注射により、[１０]〜[１６]のいずれか一項に記載のベクターを患者に投与することによる、[２０]若しくは[２３]に記載の使用のためのベクター、又は[２１]、[２２]若しくは[２３]に記載の使用若しくは方法。
[２５]前記ベクターが、網膜、網膜下腔又は硝子体内腔に直接投与される、[２４]に記載の使用のためのベクター、使用又は方法。