【誤訳訂正書】
【提出日】平成20年5月29日(2008.5.29)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト被験体におけるアルツハイマー病の検出方法であって、前記ヒト被験体から単離された非神経細胞のＧ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損の存在に関してスクリーニングすることを含む方法。
【請求項２】
Ｇ１／Ｓ移行でのチェックポイント制御の有効性の低下が、前記被験体がアルツハイマー病を持つことのしるしであると解釈される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｇ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損の存在に関してスクリーニングすることが、
非神経細胞の細胞分裂を誘導し、特異的Ｇ１阻害剤に対する前記細胞の応答性を試験することによって行われ、ここで、被験体由来の細胞の特異的Ｇ１阻害剤に対する応答性の低下が、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を持たない対照細胞との比較により、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損が存在するしるしであると解釈される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ｇ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損の存在に関するスクリーニングが、
非神経細胞の細胞分裂を誘導し、細胞周期停止誘導刺激に対する前記細胞の応答性を試験することによって行われ、ここで、被験体由来の細胞の前記刺激に対する応答性の低下が、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を持たない対照細胞との比較により、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損が存在するしるしであると解釈される、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項５】
細胞周期停止誘導刺激が、酸化ストレス、電離放射線、低酸素、またはＵＶ線から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止誘導刺激に対する細胞の応答性が、細胞増殖アッセイによって試験され、特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止誘導刺激で処理された後に、被験体由来細胞の相対的に高い増殖活性が、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を持たない対照細胞との比較により、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損が存在するしるしであると解釈される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止誘導刺激に対する細胞の応答性が、被験体由来細胞の細胞周期のＧ１期の相対的延長を算出することによって試験され、前記細胞の特異的Ｇ１阻害剤または刺激の存在下で起こるＧ１期の相対的延長の減少が、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を持たない対照細胞との比較により、Ｇ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損のしるしであると解釈される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止誘導刺激に対する細胞の応答性が、細胞周期調節タンパク質または細胞周期調節タンパク質をコードするｍＲＮＡの発現の解析によって試験される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
細胞周期調節タンパク質が、ＣＤＫＮ３、ｐ１５ｉｎｋ４Ｂ、ｐ１６ｉｎｋ４Ａ、ｐ１９ｉｎｋ４Ｄ、ｐ２７ｋｉｐ１、ｐ２１ｃｉｐ１、ｐ５７ｋｉｐ２およびＴＰ５３からなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
細胞周期停止誘導刺激がＤＮＡ損傷であり、前記刺激に対する細胞の応答性がＤＮＡ損傷応答要素の発現の解析によって試験される、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
ＤＮＡ損傷応答要素が、ＴＰ５３、Ｇａｄｄ３４、Ｇａｄｄ４５Ａ、Ｇａｄｄ４５Ｂ、Ｇａｄｄ４５Ｇ、Ｇａｄｄ１５３およびＰＣＮＡからなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止誘導刺激に対する細胞の応答性が、細胞生存性または細胞死の評価によって試験される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法であって、特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止誘導刺激へ暴露された後に、前記細胞の細胞生存性の増加または細胞死の程度の低下が、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を持たない対照細胞との比較により、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損が存在するしるしであると解釈される、前記方法。
【請求項１３】
特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止惹起刺激に対する細胞の応答性が、細胞死関連タンパク質または細胞死関連タンパク質をコードするｍＲＮＡの発現の解析によって試験される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
細胞死関連タンパク質が、ｂｃｌ−２タンパク質ファミリーのメンバーである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
特異的Ｇ１阻害剤または細胞周期停止惹起刺激に対する細胞の応答性が、細胞周期解析の有無に関係なく、細胞のＤＮＡ含量の評価によって試験される、請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
非神経細胞がリンパ球である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
散発性アルツハイマー病を診断するための請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
アルツハイマー病の処置において薬理活性を持つ可能性がある化合物を同定する方法であって、
Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を示す非神経細胞において、試験化合物の存在下および不在下で、Ｇ１／Ｓ期移行の調節を解析する工程を含み、前記細胞のＧ１／Ｓ期移行での調節欠損の矯正をもたらす試験化合物が、アルツハイマー病の処置において薬理活性を持つ可能性があると同定する方法。
【請求項１９】
薬剤が、ある特定のヒト個体におけるアルツハイマー病の処置に役立つ見込みがあるかどうかを決定する方法であって、
上記薬剤の存在下および不在下で、Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を示す非神経細胞である前記個体から単離された細胞のＧ１／Ｓ期移行の調節を解析することを含み、Ｇ１／Ｓ移行での調節欠損の矯正をもたらす薬剤が、前記個体におけるアルツハイマー病の処置に役立つ見込みがあると同定する方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
Ｇ１／Ｓ移行での調節欠損が末梢細胞でも起こるという知見は、アルツハイマー病の診断に役立つ新しい診断試験であって、リンパ球培養物などの非神経細胞におけるＧ１／Ｓ移行チェックポイントの活性化を惹起することに依拠する診断試験の根拠となる。神経細胞における細胞周期調節不全は、アルツハイマー病の発病における極めて初期の事象であると思われるので、このような試験は、痴呆に関するＮＩＮＣＤＳ／ＡＤＲＤＡ基準の要件は満たさないがアルツハイマー病の予防策による早期介入によって利益を受けるであろうアルツハイマー病の症状発現前の段階にある被験者の同定に役立つだろうと予想される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
（発明の説明）
本発明の第１の態様によれば、ヒト被験体におけるアルツハイマー病の診断方法であって、そのヒト被験体の非神経細胞におけるＧ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損の存在に関するスクリーニングを含む方法が提供される。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
本発明の方法は、最も好ましくは、試験対象であるヒト被験体から単離された非神経細胞に対してインビトロで行われる。非神経細胞は、アルツハイマー病で神経細胞に存在するものと同じＧ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損を示す非神経細胞タイプであれば、どれでもよい。最も好ましい実施形態として、本方法は、被験者から単離されインビトロで培養されたリンパ球に対して行われる。非神経細胞タイプで細胞周期調節欠損の存在に関する試験を行いうることには、明白な実用上の利点がある。リンパ球は血液試料から容易に単離され、インビトロで培養することができるので、リンパ球の使用は特に便利である。もう一つの好ましい選択肢は、線維芽細胞の使用、特に皮膚生検材料から便利に入手しうる皮膚線維芽細胞の使用である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明の方法を診断的に使用する場合は、非神経細胞タイプにおけるＧ１／Ｓ期移行での細胞周期調節の欠損の存在を、その被験者がアルツハイマー病を持つことのしるしであると解釈する。典型的には、Ｇ１／Ｓ移行でのチェックポイント制御の有効性の低下を、その被験者がアルツハイマー病を持つことのしるしであると解釈する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
本発明に従って非神経細胞におけるＧ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損の存在に関してスクリーニングする方法はいくつかある。一実施形態として、細胞周期調節欠損の存在に関するスクリーニングは、まず細胞の分裂を誘導し、次に細胞分裂阻害物質の添加によって細胞周期停止を惹起し、細胞分裂阻害物質の添加に対する細胞のＧ１／Ｓ細胞周期調節機構の応答性を試験することによって達成することができる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
（２）細胞分裂阻害剤または細胞周期停止を誘導する刺激へのばく露の結果として被験者から得た細胞で起こる細胞周期のＧ１期の相対的延長を算出すること。細胞分裂阻害剤または細胞周期停止を誘導する刺激へのばく露の結果として起こるＧ１期の相対的延長は、式：ＲＬ＝１００ｆ−１００を使って算出される（百分率として表される）。「ｆ」は、細胞分裂阻害剤または細胞周期停止を誘導する刺激による阻害処理にさらした細胞（試験対象である被験者から得た非神経細胞）がＧ１にある時間（ＴＧ１ｔｒ）と、阻害処理にばく露していない無処理対照細胞（すなわち、やはり試験対象である被験者から得た非神経細胞）がＧ１にある時間（ＴＧ１ｃ）との比である。ｆは次の関係式に従って算出することができる：
ｆ＝ＴＧ１ｔｒ／ＴＧ１ｃ＝［ｌｎ２−ｌｎ（２−Ｇ１ｔｒ）］［ｌｎ（２−Ｇ１ｃ）］／［ｌｎ（２−Ｇ１ｔｒ）］［ｌｎ２−ｌｎ（２−Ｇ１ｃ）］  （５）。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
ＴＧ１ｔｒおよびＴＧ１ｃの値を得るには、さまざまな技術を使用することができる。好ましい一実施形態として、処理細胞（細胞分裂阻害物質または細胞周期停止を誘導する刺激で処理した、試験被験者由来の非神経細胞）と無処理対照細胞（細胞分裂阻害物質または細胞周期停止を誘導する刺激にばく露していない、同じ被験者に由来する非神経細胞）の両方について、細胞周期のさまざまな時期にある細胞の割合を決定することによって、ＴＧ１ｔｒおよびＴＧ１ｃを得ることができる。細胞周期のさまざまな時期にある細胞の割合は、下記の実施例で説明するように、標識ヌクレオチド類似体、好ましくはブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みと、それに続く蛍光標示式細胞分別法（ＦＡＣＳ解析）または相当する方法によって、容易に決定することができる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
（７）細胞周期解析を伴う、または細胞周期解析を伴わない、非神経細胞のＤＮＡ含量の評価。この実施形態では、細胞分裂阻害剤または細胞周期停止を誘導する他の刺激で処理した試験被験者由来の細胞のＤＮＡ含量の測定が、そのような細胞におけるＧ１／Ｓ移行での調節欠損の存在の間接的なしるしになる。この方法を支える原理は、Ｇ１期にある細胞と、細胞周期のＤＮＡ複製段階を通過し終えたＧ２期にある細胞との間のＤＮＡ含量の相違である。正常細胞（すなわちＧ１／Ｓに調節欠損を持たない細胞）の集団を処理してＧ１またはＧ１／Ｓでの細胞周期停止を誘導すると、細胞の大半はＧ１期にとどまるだろう。しかし、細胞がＧ１／Ｓに調節欠損を持つ場合は、細胞の一部がＧ１／Ｓチェックポイントを通過して、ＤＮＡ複製を起こすだろう。したがって、Ｇ１での細胞周期停止を誘導するための処理後に、Ｇ１／Ｓに調節欠損を持たない対照細胞と比較して、試験被験者から得た細胞中のＤＮＡ含量が増加すれば、それは、Ｇ１／Ｓに調節欠損が存在するしるしであると解釈される。結果として、そのような調節欠損の存在は、その被験者がアルツハイマー病を持つことのしるしであると解釈される。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
細胞分裂阻害剤または細胞周期停止を誘導する刺激による阻害処理に対する非神経細胞（特に培養リンパ球）の応答性を試験するのに適した技術の上記リストは、本発明の例示を意図するものであって、本発明を限定するものではない。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
さらにもう一つの態様として、本発明は、アルツハイマーの処置において薬理活性を持つ可能性がある化合物を同定する方法であって、
Ｇ１／Ｓ期移行に細胞周期調節欠損を示す非神経細胞におけるＧ１／Ｓ移行の調節を、試験化合物の存在下および不在下で解析する工程
を含み、Ｇ１／Ｓ移行での調節欠損の矯正をもたらす試験化合物を、アルツハイマー病の処置において薬理活性を持つ可能性があると同定する方法を提供する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
本発明の方法は、アルツハイマー病で神経細胞に観察されるものと類似するＧ１／Ｓ期移行での細胞周期調節欠損を示す非神経細胞であれば本質的にどの細胞を使って行ってもよい。好適な細胞としては、例えばアルツハイマー病を持つ一個体またはいくつかの個体に由来する培養リンパ球を挙げることができる。