【手続補正書】
【提出日】平成31年4月25日(2019.4.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、それぞれが個々に参照により組み込まれているかのように同じ程度まで、それらの全体が参照により明示的に組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
(構成１)
ナイーブ型多能性幹細胞の誘導方法であって、有効量のリゾホスファチジン酸受容体（ＬＰＡＲ）のアゴニストを含む培養培地中でプライム型多能性幹細胞を培養し、それにより、前記プライム型多能性幹細胞をナイーブ型多能性幹細胞に復帰させることを含む、方法。
(構成２)
ナイーブ型多能性幹細胞の、そのナイーブ状態での維持方法であって、有効量のＬＰＡＲのアゴニストを含む培養培地中で前記ナイーブ型多能性幹細胞を培養することを含む、方法。
(構成３)
前記培地が、有効量の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの１つ以上をさらに含む、構成１または構成２に記載の方法。
(構成４)
前記培養培地が、有効量のシグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）をさらに含む、構成１または構成２に記載の方法。
(構成５)
前記ＳＴＡＴ３活性化因子が、白血病抑制因子（ＬＩＦ）である、構成４に記載の方法。
(構成６)
前記ＬＰＡＲのアゴニストが、１−オレオイル−２−メチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオネート（ＯＭＰＴ）、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）、またはこれらの任意の組み合わせである、構成１または構成２に記載の方法。
(構成７)
前記有効量の前記ＬＰＡＲのアゴニストが、約１０ｎＭ〜約５μＭである、構成１または構成２に記載の方法。
(構成８)
前記酸化防止剤が、ｎ−アセチルシステインである、構成３に記載の方法。
(構成９)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成３に記載の方法。
(構成１０)
前記培養培地が、有効量のＥＲＫ１／２阻害剤、ＧＳＫ３β阻害剤、及びＰＫＣ阻害剤のうちの少なくとも１つをさらに含む、構成１または構成２に記載の方法。
(構成１１)
前記培養培地が、有効量のアクチビンＡ、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成１または構成２に記載の方法。
(構成１２)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、胚性幹細胞、胚盤胞、誘導多能性幹細胞、及び体細胞からなる群から選択される、構成１または構成２に記載の方法。
(構成１３)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、ヒト細胞である、構成１または構成２に記載の方法。
(構成１４)
フィブロネクチン層またはラミニン層上で前記プライム型多能性幹細胞及び／またはナイーブ型多能性幹細胞を培養することをさらに含む、構成１または構成２に記載の方法。
(構成１５)
前記プライム型多能性幹細胞が、１０日未満で前記ナイーブ型多能性幹細胞に復帰する、構成１に記載の方法。
(構成１６)
前記プライム型多能性幹細胞が、少なくとも１つの外因性リプログラミング因子、少なくとも１つの外因性ＲＮＡ、またはこれらの両方を発現する、構成１に記載の方法。
(構成１７)
前記少なくとも１つの外因性リプログラミング因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｌ−Ｍｙｃ、Ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ４、またはＬｉｎ２８である、構成１６に記載の方法。
(構成１８)
前記少なくとも１つの外因性ＲＮＡが、ｐ５３またはＬｉｎ２８の発現を下方調節する、構成１６に記載の方法。
(構成１９)
ある一定期間の間、低酸素条件下で前記プライム型多能性幹細胞及び／または前記ナイーブ型多能性幹細胞を培養するステップをさらに含む、構成１または構成２に記載の方法。
(構成２０)
構成１〜１９のいずれか１項に記載の方法により調製された、単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
(構成２１)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、Ｘ染色体不活性化特異的転写産物（ＸＩＳＴ）を発現する、構成２０に記載の単離されたナイーブ型多能性幹細胞。
(構成２２)
単離されたナイーブ型多能性幹細胞と、有効量のＬＰＡＲのアゴニストと、を含む、組成物。
(構成２３)
有効量のＢＭＰ、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの１つ以上をさらに含む、構成２２に記載の組成物。
(構成２４)
有効量のＳＴＡＴ３活性化因子をさらに含む、構成２２に記載の組成物。
(構成２５)
前記ＳＴＡＴ３活性化因子が、白血病抑制因子（ＬＩＦ）である、構成２４に記載の組成物。
(構成２６)
前記ＬＰＡＲのアゴニストが、ＯＭＰＴ、ＬＰＡ、またはこれらの組み合わせである、構成２２に記載の組成物。
(構成２７)
前記ＬＰＡＲのアゴニストが、約１０ｎＭ〜約５μＭの濃度で前記培地中に存在する、構成２２に記載の組成物。
(構成２８)
前記酸化防止剤が、ｎ−アセチルシステインである、構成２３に記載の組成物。
(構成２９)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成２３に記載の組成物。
(構成３０)
有効量のＥＲＫ１／２阻害剤、ＧＳＫ３β阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成２２に記載の組成物。
(構成３１)
有効量のアクチビンＡ、ＴＧＦβ、ｂＦＧＦ、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成２２に記載の組成物。
(構成３２)
前記単離されたナイーブ型多能性幹細胞の少なくとも一部が、少なくとも１つの外因性リプログラミング因子、少なくとも１つの外因性ＲＮＡ、またはこれらの両方を発現するように改変されている、構成２２に記載の組成物。
(構成３３)
前記少なくとも１つのリプログラミング因子が、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｌ−Ｍｙｃ、Ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ４、またはＬｉｎ２８である、構成３２に記載の組成物。
(構成３４)
前記少なくとも１つのＲＮＡが、ｐ５３またはＬｉｎ２８の発現を下方調節する、構成３３に記載の組成物。
(構成３５)
前記ナイーブ型多能性幹細胞が、低酸素条件下で培養される、構成２２に記載の組成物。
(構成３６)
１０ｎＭ〜約１０μＭのＬＰＡＲのアゴニストを含む、細胞培養培地。
(構成３７)
前記細胞培養培地が、有効量のＢＭＰ、酸化防止剤、または脱メチル化酵素のうちの１つ以上をさらに含む、構成３６に記載の細胞培養培地。
(構成３８)
前記細胞培養培地が、有効量のＳＴＡＴ３活性化因子をさらに含む、構成３６に記載の細胞培養培地。
(構成３９)
前記ＳＴＡＴ３活性化因子が、ＬＩＦである、構成３８に記載の細胞培養培地。
(構成４０)
前記ＬＰＡＲのアゴニストが、ＯＭＰＴ、ＬＰＡ、またはこれらの任意の組み合わせである、構成３６に記載の細胞培養培地。
(構成４１)
前記ＬＰＡＲのアゴニストが、約１０ｎＭ〜約５μＭの濃度で前記培地中に存在する、構成３６に記載の細胞培養培地。
(構成４２)
前記酸化防止剤が、ｎ−アセチルシステインである、構成３７に記載の細胞培養培地。
(構成４３)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成３７に記載の細胞培養培地。
(構成４４)
前記細胞培養培地が、有効量のＥＲＫ１／２阻害剤、ＧＳＫ３β阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成３６に記載の細胞培養培地。
(構成４５)
ｂＦＧＦと、アクチビンＡまたはトランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）のうちの１つ以上と、を含む、プライム型多能性幹細胞を培養するための細胞培養培地。
(構成４６)
ナイーブ型多能性幹細胞の誘導方法であって、培養培地中でプライム型多能性幹細胞を培養することを含み、前記培養培地が、ＥＲＫ１／２阻害剤、ＧＳＫ３β阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせを実質的に含まない、方法。
(構成４７)
単離されたプライム型多能性幹細胞であって、前記単離されたプライム型多能性幹細胞が、ＬＰＡＲのアゴニストを含む培地の存在下でインキュベートされ、前記プライム型ヒト多能性幹細胞が、インキュベーション中またはインキュベーション後に、ナイーブ型多能性幹細胞に復帰される、単離されたプライム型多能性幹細胞。
(構成４８)
前記培地が、有効量の骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、酸化防止剤、脱メチル化酵素、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成４７に記載の細胞。
(構成４９)
前記培地が、有効量のＳＴＡＴ３活性化因子をさらに含む、構成４７に記載の細胞。
(構成５０)
前記ＳＴＡＴ３活性化因子が、ＬＩＦである、構成４９に記載の細胞。
(構成５１)
前記ＬＰＡＲが、ＬＰＡＲ１である、構成４７に記載の細胞。
(構成５２)
前記ＬＰＡＲのアゴニストが、ＯＭＰＴ、ＬＰＡ、またはこれらの組み合わせである、構成４８に記載の細胞。
(構成５３)
前記酸化防止剤が、ｎ−アセチルシステインである、構成４９に記載の細胞。
(構成５４)
前記脱メチル化酵素が、アスコルビン酸である、構成４９に記載の細胞。
(構成５５)
前記培養培地が、有効量のＥＲＫ１／２阻害剤、ＧＳＫ３β阻害剤、ＰＫＣ阻害剤、またはこれらの任意の組み合わせをさらに含む、構成４８に記載の細胞。