【手続補正書】
【提出日】平成20年5月16日(2008.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定の大きさのＲＮＡ転写産物を産生可能な組換え転写ユニットを調製する方法であって、該方法は、
調節配列と転写される領域を含むヌクレオチド配列とを、該転写される領域の転写が該調節配列によって制御されるように作動可能に連結させる工程であって、ここで、該転写される領域は、ウイルス配列をコードする領域と該ウイルス配列をコードする該領域の下流の非コード領域とを含み、ここで、該非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記非コード領域は、前記シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列の上流に切断シグナルをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記切断シグナルは、ポリアデニル化シグナル、一時休止部位、強力休止部位、終止部位、近位上流（ＮＵＥ）、または３’非翻訳配列である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリアデニル化シグナルは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化（ポリＡ）シグナル、もしくはＳＶ４０ポリＡ部位である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
１より多い切断シグナルが使用される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記調節配列は、原核生物調節配列である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記調節配列は、真核生物調節配列である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記調節配列は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、メタロチオネインプロモーター、または延長因子（ＥＦ）プロモーターである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ウイルス配列は、ウイルスタンパク質をコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ウイルスタンパク質は、レンチウイルスによってコードされるタンパク質であるか、もしくはウイルスエンベロープタンパク質である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ウイルスタンパク質は、ＶＳＶ−Ｇ、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、もしくはｒｅｖであるか、またはＶＳＶ−Ｇ、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、およびｒｅｖの任意の組み合わせである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記ウイルス配列は、抗ウイルス因子をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、該抗ウイルス因子をコードするヌクレオチド配列は、前記ウイルスタンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列の上流もしくは下流のどちらかにある、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗ウイルス因子は、アンチセンス分子もしくはリボザイムである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記シス作動性リボザイムは、サテライトＲＮＡもしくはウイロイドＲＮＡに由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記シス作動性リボザイムは、タバコ輪点ウイルスのサテライトＲＮＡに由来するか、もしくはアラビスモザイクウイルスのサテライトＲＮＡに由来する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
所定の大きさのＲＮＡ転写産物を産生可能な組換え転写ユニットを含む宿主細胞であって、該転写ユニットは、調節配列を含み、該調節配列は、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該調節配列によって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、ウイルス配列をコードする領域と該ウイルス配列をコードする該領域の下流の非コード領域とを含み、ここで、該非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、宿主細胞。
【請求項１７】
前記非コード領域は、前記シス作動性リボザイムをコードする前記ヌクレオチド配列の上流に切断シグナルをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
所定の大きさのＲＮＡ転写産物を産生可能な組換え転写ユニットであって、該転写ユニットは、ウイルス配列をコードする転写される領域と該ウイルス配列をコードする該領域の下流の非コード領域とを含むヌクレオチド配列に、作動可能に連結された調節配列を含み、ここで、該非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、組換え転写ユニット。
【請求項１９】
前記非コード領域は、前記シス作動性リボザイムをコードする前記ヌクレオチド配列の上流に終止切断シグナルをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１８に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２０】
前記切断シグナルは、ポリアデニル化シグナル、休止部位、強力休止部位、近位上流（ＮＵＥ）、もしくは３’非翻訳配列である、請求項１９に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２１】
前記ポリアデニル化シグナルは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化（ポリＡ）シグナル、もしくはＳＶ４０ポリＡ部位である、請求項２０に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２２】
１より多いシグナルが使用される、請求項２０に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２３】
前記調節配列は、原核細胞調節配列である、請求項１８に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２４】
前記調節配列は、真核細胞調節配列である、請求項１８に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２５】
前記調節配列は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、メタロチオネインプロモーター、もしくは延長因子（ＥＦ）プロモーターである、請求項２４に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２６】
前記ウイルス配列は、ウイルスタンパク質である、請求項１８に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２７】
前記ウイルスタンパク質は、レンチウイルスにコードされるタンパク質であるか、もしくはウイルスエンベロープタンパク質である、請求項２６に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２８】
前記ウイルスタンパク質は、ＶＳＶ−Ｇ、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、もしくはｒｅｖであるか、またはＶＳＶ−Ｇ、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、およびｒｅｖの任意の組み合わせである、請求項２６に記載の組換え転写ユニット。
【請求項２９】
前記ウイルス配列は、ウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列に加えて、抗ウイルス因子をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、該抗ウイルス因子をコードするヌクレオチド配列は、該ウイルスタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列の上流もしくは下流のどちらかにある、請求項２８に記載の組換え転写ユニット。
【請求項３０】
前記抗ウイルス因子は、アンチセンス分子もしくはリボザイムである、請求項２９に記載の組換え転写ユニット。
【請求項３１】
前記シス作動性リボザイムは、サテライトＲＮＡもしくはウイロイドＲＮＡに由来する、請求項１８に記載の組換え転写ユニット。
【請求項３２】
前記シス作動性リボザイムは、タバコ輪点ウイルスのサテライトＲＮＡに由来するか、もしくはアラビスモザイクウイルスのサテライトＲＮＡに由来する、請求項３１に記載の組換え転写ユニット。
【請求項３３】
転写ユニットから産生されるＲＮＡ転写産物の大きさを限定する方法であって、該方法は、
調節配列を含む転写ユニットの転写を誘導する工程であって、該調節配列は、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該調節配列によって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、ウイルス配列をコードする領域と該ウイルス配列をコードする該領域の下流の非コード領域とを含み、ここで、該非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む工程
を包含し、ここで、該転写ユニットは、転写産物を、該シス作動性リボザイムをコードする該配列が転写されて該転写産物をシスで切断する条件下で産生する、方法。
【請求項３４】
前記非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードする前記ヌクレオチド配列の上流に切断シグナルをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記切断シグナルは、ポリアデニル化シグナル、一時休止部位、強力休止部位、終止部位、近位上流（ＮＵＥ）、または３’非翻訳配列である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記ポリアデニル化シグナルは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化（ポリＡ）シグナル、もしくはＳＶ４０ポリＡ部位である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
１より多いシグナルが使用される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記調節配列は、原核生物調節配列である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記調節配列は、真核生物調節配列である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
前記調節配列は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、メタロチオネインプロモーター、または延長因子（ＥＦ）プロモーターである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ウイルス配列は、ウイルスタンパク質をコードする、請求項３３に記載の方法。
【請求項４２】
前記ウイルスタンパク質は、レンチウイルスによってコードされるタンパク質であるか、もしくはウイルスエンベロープタンパク質である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ウイルスタンパク質は、ＶＳＶ−Ｇ、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、もしくはｒｅｖであるか、またはＶＳＶ−Ｇ、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、およびｒｅｖの任意の組み合わせである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記ウイルス配列は、ウイルスタンパク質をコードするヌクレオチド配列に加えて、抗ウイルス因子をコードするヌクレオチド配列をさらに含み、該抗ウイルス因子をコードするヌクレオチド配列は、該ウイルスタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列の上流もしくは下流のどちらかにある、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記抗ウイルス因子は、アンチセンス分子もしくはリボザイムである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記シス作動性リボザイムは、サテライトＲＮＡもしくはウイロイドＲＮＡに由来する、請求項３３に記載の方法。
【請求項４７】
前記シス作動性リボザイムは、タバコ輪点ウイルスのサテライトＲＮＡに由来するか、もしくはアラビスモザイクウイルスのサテライトＲＮＡに由来する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ベクターであって、
（ａ）所定の大きさの第１ＲＮＡ転写産物を産生可能な第１組換え転写ユニットであって、該第１転写ユニットは、第１プロモーターを含み、該第１プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第１プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第１遺伝子をコードする領域と該第１遺伝子をコードする該領域の下流の第１非コード領域とを含み、ここで、該第１非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第１組換え転写ユニット；および
（ｂ）所定の大きさの第２ＲＮＡ転写産物を産生可能な第２組換え転写ユニットであって、該第２転写ユニットは、第２プロモーターを含み、該第２プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第２プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第２遺伝子をコードする領域と該第２遺伝子をコードする該領域の下流の第２非コード領域とを含み、ここで、該第２非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第２組換え転写ユニット
を含む、ベクター。
【請求項４９】
前記第１プロモーターおよび前記第２プロモーターが異なっている、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５０】
前記第１プロモーター非コード領域および前記第２プロモーター非コード領域は、同一であるかもしくは異なっているシス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５１】
前記第１遺伝子、前記第２遺伝子、もしくは該第１遺伝子および該第２遺伝子の両方は、自己のカルボキシ末端において切断シグナルを有する、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５２】
前記切断シグナルは、ポリアデニル化シグナル、一時休止部位、強力休止部位、終止部位、近位上流（ＮＵＥ）、または３’非翻訳配列である、請求項５１に記載のベクター。
【請求項５３】
１より多いシグナルが使用される、請求項５２に記載のベクター。
【請求項５４】
前記第１シス作動性リボザイムもしくは前記第２シス作動性リボザイム、または該第１シス作動性リボザイムおよび該第２シス作動性リボザイムの両方は、サテライトＲＮＡもしくはウイロイドＲＮＡに由来する、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５５】
前記シス作動性リボザイムは、タバコ輪点ウイルスのサテライトＲＮＡに由来するか、もしくはアラビスモザイクウイルスのサテライトＲＮＡに由来する、請求項５４に記載のベクター。
【請求項５６】
前記第１プロモーターは構成的であり、そして前記第２プロモーターは誘導性である、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５７】
前記第１遺伝子は、前記第２遺伝子とは異なる、請求項４８に記載のベクター。
【請求項５８】
前記第１遺伝子は、ドミナントネガティブトランスジーンであり、そして前記第２遺伝子は、発現された場合に発現産物が該ドミナントネガティブトランスジーンを機能的遺伝子に変換させ得る遺伝子である、請求項５７に記載のベクター。
【請求項５９】
前記第１遺伝子は、前酵素であり、そして前記第２遺伝子の発現産物は、該前酵素を活性酵素に変換させる、請求項５７に記載のベクター。
【請求項６０】
前記第１遺伝子は、タンパク質をコードし、ここで該タンパク質の少なくとも１つのアミノ酸がリン酸化を受けることが可能であり、そして前記第２遺伝子は、該タンパク質の該アミノ酸をリン酸化可能なキナーゼをコードする、請求項５７に記載のベクター。
【請求項６１】
前記第１遺伝子は、少なくとも１つのリン酸化アミノ酸を含む第１タンパク質をコードし、そして前記第２遺伝子は、該第１タンパク質の該アミノ酸を脱リン酸化可能であるタンパク質ホスファターゼをコードする、請求項５７に記載のベクター。
【請求項６２】
宿主細胞であって、
（ａ）所定の大きさの第１ＲＮＡ転写産物を産生可能な第１組換え転写ユニットであって、該第１転写ユニットは、第１プロモーターを含み、該第１プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第１プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第１遺伝子をコードする領域と該第１遺伝子をコードする該領域の下流の第１非コード領域とを含み、ここで、該第１非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第１組換え転写ユニットと、
（ｂ）所定の大きさの第２ＲＮＡ転写産物を産生可能な第２組換え転写ユニットであって、該第２転写ユニットは、第２プロモーターを含み、該第２プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第２プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第２遺伝子をコードする領域と該第２遺伝子をコードする該領域の下流の第２非コード領域とを含み、ここで、該第２非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第２組換え転写ユニットと
を含むベクターを含む、宿主細胞。
【請求項６３】
前記第１遺伝子、前記第２遺伝子、もしくは該第１遺伝子および該第２遺伝子の両方は、自己のカルボキシ末端において切断シグナルを有する、請求項６２に記載の宿主細胞。
【請求項６４】
トランスジェニック非ヒト動物を作成する方法であって、該方法は、
（ａ）所定の大きさの第１ＲＮＡ転写産物を産生可能な第１組換え転写ユニットであって、該第１転写ユニットは、第１プロモーターを含み、該第１プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第１プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第１遺伝子をコードする領域と該第１遺伝子をコードする該領域の下流の第１非コード領域とを含み、ここで、該第１非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第１組換え転写ユニット；および
（ｂ）所定の大きさの第２ＲＮＡ転写産物を産生可能な第２組換え転写ユニットであって、該第２転写ユニットは、第２プロモーターを含み、該第２プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第２プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第２遺伝子をコードする領域と該第２遺伝子をコードする該領域の下流の第２非コード領域とを含み、ここで、該第２非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第２組換え転写ユニット
を含むベクターを、該動物のゲノム中に挿入する工程
を包含する、方法。
【請求項６５】
前記第１遺伝子、前記第２遺伝子、もしくは該第１遺伝子および該第２遺伝子の両方は、自己のカルボキシ末端において切断シグナルを有する、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記ベクターは、前記動物の生殖細胞系列のゲノム中に挿入される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
前記ベクターは、前記動物の未受精卵もしくは受精卵のゲノム中に挿入される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６８】
前記ベクターは、前記動物の胚のゲノム中に挿入される、請求項６４に記載の方法。
【請求項６９】
前記ベクターは、前記動物の子宮内に位置する細胞のゲノム中に挿入される、請求項６４に記載の方法。
【請求項７０】
トランスジェニック非ヒト動物であって、
（ａ）所定の大きさの第１ＲＮＡ転写産物を産生可能な第１組換え転写ユニットであって、該第１転写ユニットは、第１プロモーターを含み、該第１プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第１プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第１遺伝子をコードする領域と該第１遺伝子をコードする該領域の下流の第１非コード領域とを含み、ここで、該第１非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第１組換え転写ユニットと、
（ｂ）所定の大きさの第２ＲＮＡ転写産物を産生可能な第２組換え転写ユニットであって、該第２転写ユニットは、第２プロモーターを含み、該第２プロモーターは、転写される領域を含むヌクレオチド配列に、該転写される領域の転写が該第２プロモーターによって制御されるように作動可能に連結され、ここで、該転写される領域は、第２遺伝子をコードする領域と該第２遺伝子をコードする該領域の下流の第２非コード領域とを含み、ここで、該第２非コード領域は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列を含む、第２組換え転写ユニットと
を含むベクターを含む、トランスジェニック非ヒト動物。
【請求項７１】
前記第１遺伝子、前記第２遺伝子、もしくは該第１遺伝子および該第２遺伝子の両方は、自己のカルボキシ末端において切断シグナルを有する、請求項７０に記載のトランスジェニック非ヒト動物。
【請求項７２】
２ベクターレトロウイルス産生系であって、
（ａ）ペイロードをコードするヌクレオチド配列と該ペイロードの転写を制御する第１プロモーターとを含む第１ベクター；ならびに
（ｂ）
（ｉ）構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該構造遺伝子の転写を制御する第２プロモーター；ならびに
（ｉｉ）非構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該非構造遺伝子の転写を制御する第３プロモーター、
を含む第２ベクターであって、ここで、該構造遺伝子をコードする該ヌクレオチド配列と該非構造遺伝子をコードする該ヌクレオチド配列とは、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列によって分離されている、第２ベクター
を含む、２ベクターレトロウイルス産生系。
【請求項７３】
前記第１プロモーター、前記第２プロモーター、および前記第３プロモーターは、同一であるかもしくは異なっている、請求項７２に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項７４】
前記ペイロードは、アンチセンス分子、ＲＮＡデコイ、トランスドミナント変異体、毒素、ウイルス構造タンパク質に対する単鎖抗体（ｓｃＡｂ）、ｓｉＲＮＡおよびリボザイムからなる群より選択される、請求項７２に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項７５】
前記構造遺伝子は、ｇａｇ、ｇａｇ−ｐｏｌ前駆体、ｐｒｏ、逆転写酵素（ＲＴ）、インテグラーゼ（Ｉｎ）およびｅｎｖからなる群より選択される、請求項７２に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項７６】
前記非構造遺伝子は、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、およびｖｉｆからなる群より選択される、請求項７２に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項７７】
２ベクターレトロウイルス産生系であって、
（ａ）ペイロードをコードするヌクレオチド配列と該ペイロードの転写を制御する第１プロモーターとを含む、第１ベクター；ならびに
（ｂ）
（ｉ）構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該構造遺伝子の転写を制御する第２プロモーター、
（ｉｉ）非構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該非構造遺伝子の転写を制御する第３プロモーター、ならびに
（ｉｉｉ）エンベロープ遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該エンベロープ遺伝子の転写を制御する第４プロモーター、
を含む第２ベクターであって、ここで、該３つの遺伝子をコードする該ヌクレオチド配列の各々は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列によって分離されている、第２ベクター
を含む、２ベクターレトロウイルス産生系。
【請求項７８】
前記第１プロモーター、前記第２プロモーター、前記第３プロモーターおよび前記第４プロモーターは、同一であるかもしくは異なっている、請求項７７に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項７９】
前記ペイロードは、アンチセンス分子、ＲＮＡデコイ、トランスドミナント変異体、毒素、ウイルス構造タンパク質に対する単鎖抗体（ｓｃＡｂ）、ｓｉＲＮＡおよびリボザイムからなる群より選択される、請求項７７に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項８０】
前記構造遺伝子は、ｇａｇ、ｇａｇ−ｐｏｌ前駆体、ｐｒｏ、逆転写酵素（ＲＴ）、インテグラーゼ（Ｉｎ）およびｅｎｖからなる群より選択される、請求項７７に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項８１】
前記非構造遺伝子は、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、およびｖｉｆからなる群より選択される、請求項７７に記載のレトロウイルス産生系。
【請求項８２】
レトロウイルスを産生する方法であって、該方法は、
（ａ）ペイロードをコードするヌクレオチド配列と該ペイロードの転写を制御する第１プロモーターとを含む第１ベクター；ならびに
（ｂ）構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該構造遺伝子の転写を制御する第２プロモーターと、非構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該非構造遺伝子の転写を制御する第３プロモーターとを含む、第２ベクターであって、ここで、該構造遺伝子をコードする該ヌクレオチド配列と該非構造遺伝子をコードする該ヌクレオチド配列とは、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列によって分離されている、第２ベクター
を含む２ベクターレトロウイルス産生系と、細胞を接触させる工程
を包含する、方法。
【請求項８３】
レトロウイルスを産生する方法であって、該方法は、
（ａ）ペイロードをコードするヌクレオチド配列と該ペイロードの転写を制御する第１プロモーターとを含む第１ベクター；ならびに
（ｂ）構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該構造遺伝子の転写を制御する第２プロモーターと、非構造遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該非構造遺伝子の転写を制御する第３プロモーターと、エンベロープ遺伝子をコードするヌクレオチド配列および該エンベロープ遺伝子の転写を制御する第４プロモーターとを含む、第２ベクターであって、ここで、該３つの遺伝子をコードする該ヌクレオチド配列の各々は、シス作動性リボザイムをコードするヌクレオチド配列によって分離されている、第２ベクター
を含む２ベクターレトロウイルス産生系と、細胞を接触させる工程
を包含する、方法。