【手続補正書】
【提出日】平成20年3月6日(2008.3.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  以下から選択される核酸配列：
（ｉ）味覚受容体ポリペプチドをコードする遺伝子であって、配列番号２０もしくは配列番号１３に含有されるか、または配列番号２０もしくは配列番号１３に含有される核酸配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、遺伝子；
（ｉｉ）配列番号４または配列番号１４に含有されるＴ１Ｒ３味覚受容体ポリペプチドに少なくとも９０％は同一である味覚受容体ポリペプチドをコードする核酸配列；
（ｉｉｉ）（ｉ）または（ｉｉ）に記載される味覚受容体遺伝子の膜貫通領域または細胞外領域をコードする核酸配列。
【請求項２】  以下から選択される核酸配列：
（ｉ）配列番号１５もしくは配列番号１６に含有されるか、または配列番号１５もしくは配列番号１６に含有される核酸配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、味覚受容体遺伝子；
（ｉｉ）配列番号１７に含有されるＴ１Ｒ１味覚受容体ポリペプチドに少なくとも９０％は同一である味覚受容体ポリペプチドをコードする核酸配列；
（ｉｉｉ）（ｉ）または（ｉｉ）に記載される味覚受容体遺伝子の膜貫通領域または細胞外領域をコードする核酸配列。
【請求項３】  請求項１または２に記載の核酸配列によってコードされる味覚受容体ポリペプチド。
【請求項４】  標識または検出可能な部位に付着した請求項３記載の味覚受容体ポリペプチド。
【請求項５】  固相に付着した請求項３記載の味覚受容体ポリペプチド。
【請求項６】  請求項１または２に記載の核酸配列によってコードされる味覚受容体ポリペプチドを発現する組換え細胞。
【請求項７】  バクテリア細胞、酵母細胞、アフリカツメガエル卵母細胞および哺乳動物細胞から選択される請求項６記載の細胞。
【請求項８】  ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞、ＣＯＳ細胞またはＢＨＫ細胞である請求項７記載の細胞。
【請求項９】  さらにＧタンパク質を発現する請求項６記載の細胞。
【請求項１０】  該ポリペプチドが細胞表面上に発現される請求項６記載の細胞。
【請求項１１】  該味覚受容体ポリペプチドの産生および単離のための請求項６記載の細胞を使用する方法。
【請求項１２】  味覚を調節する化合物のスクリーニング方法であって：
（ｉ）化合物と、味覚刺激に応答する請求項３記載の味覚受容体ポリペプチドとを接触させ；そして
（ｉｉ）該化合物が、該味覚受容体に結合するかどうかおよび／または該味覚受容体の活性に影響するかどうかを測定する、
工程を含む、方法。
【請求項１３】  請求項３記載の味覚受容体ポリペプチドへの化合物の結合および／または化合物による請求項３記載の味覚受容体ポリペプチドの活性化を増大または阻害する化合物のスクリーニング方法であって：
（ｉ）該味覚受容体ポリペプチドと該化合物とを接触させ、そして該味覚受容体ポリペプチドとそれに特異的に結合するリガンドとをさらに接触させ；そして
（ｉｉ）該味覚受容体ポリペプチドへの該リガンドの結合および／または該味覚受容体ポリペプチドの活性に対する該化合物の効果を測定する、
工程を含む、方法。
【請求項１４】  味覚受容体ポリペプチドが膜上に構成される請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】  味覚受容体ポリペプチドが細胞によって発現される請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１６】  細胞が、バクテリア細胞、酵母細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞、両生類の細胞および寄生虫細胞からなる群から選択される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】  味覚受容体ポリペプチドが哺乳動物細胞によって発現される請求項５記載の方法。
【請求項１８】  哺乳動物細胞が、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞およびＨＥＫ−２９３細胞からなる群から選択される、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】  味覚受容体ポリペプチドが固相に連結している請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２０】  味覚受容体ポリペプチドが、該受容体に共有結合している細胞外ドメインを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２１】  味覚受容体ポリペプチドが、該受容体に共有結合している細胞外ドメインを含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２２】  細胞が、該味覚受容体ポリペプチドに結合するＧタンパク質をさらに発現する、請求項１５記載の方法。
【請求項２３】  Ｇタンパク質がＧα１５またはＧα１６である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】  該味覚受容体の活性が、細胞内Ｃａ2+レベルにおける変化を検出することによって測定される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２５】  Ｃａ2+レベルが、イオン感受性色素または膜電圧蛍光指示物質を用いて検出される、請求項２１記載の方法。
【請求項２６】  味覚受容体活性が、蛍光偏光における変化をモニターすることによって検出される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項２７】  味覚受容体活性が、第２メッセンジャーレベルにおける変化を検出することによって測定される、請求項１記載の方法。
【請求項２８】  第２メッセンジャーがＩＰ３である請求項２７記載の方法。
【請求項２９】  味覚受容体活性が、細胞内の環状ヌクレオチドにおける変化を検出することによって測定される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項３０】  環状ヌクレオチドがｃＡＭＰまたはｃＧＭＰである請求項２９記載の方法。
【請求項３１】  味覚受容体活性が、蛍光イメージングによってＣａ2+レベルにおける変化を測定することによって検出される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項３２】  味覚受容体活性における変化が、ＧＴＰγＳのＧタンパク質結合における変化を測定することによって検出される、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項３３】  高処理のスクリーニングアッセイである請求項１記載の方法。
【請求項３４】  味覚受容体ポリペプチドが、配列番号４または配列番号１４に含有されるＴ１Ｒ３ポリペプチドに少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％は同一である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項３５】  味覚受容体ポリペプチドが、配列番号１７に含有されるＴ１Ｒ１ポリペプチドに少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％は同一である、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項３６】  味覚受容体ポリペプチドとそれに結合するＧタンパク質を発現する細胞を用いる請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】  ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドと少なくとも９０％の配列同一性または配列番号９、１３もしくは２０に含有される核酸配列によってコードされるＴ１Ｒ３ポリペプチドの対応する断片または配列番号４、１０もしくは１４に含有されるヒトＴ１Ｒ３ポリペプチド配列あるいはその一部に対して９０％を有するポリペプチド配列またはその断片を含有するヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドを含む味覚受容体であって、
該Ｔ１Ｒ３ポリペプチドまたはその断片を含有するこのような味覚受容体は、配列番号４、１０または１４に含有される天然のヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドを含有する味覚受容体に特異的に結合するおよび／またはその機能を調節するリガンドに特異的に結合するおよび／または機能的に応答する、
味覚受容体。
【請求項３８】  ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドが、配列番号４に含有されるかまたは配列番号２０によってコードされる核酸配列によってコードされるヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドと少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項３７記載の味覚受容体。
【請求項３９】  ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドが、配列番号４に含有されるかまたは配列番号２０によってコードされる核酸配列によってコードされるヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドと少なくとも９６％の配列同一性を有する、請求項３７記載の味覚受容体。
【請求項４０】  ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドが、配列番号４に含有されるかまたは配列番号２０によってコードされる核酸配列によってコードされるヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドと少なくとも９７％の配列同一性を有する、請求項３７記載の味覚受容体。
【請求項４１】  ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドが、配列番号４に含有されるかまたは配列番号２０によってコードされる核酸配列によってコードされるヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドと少なくとも９８％の配列同一性を有する、請求項３７記載の味覚受容体。
【請求項４２】  ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドが、配列番号４に含有されるかまたは配列番号２０によってコードされる核酸配列によってコードされるヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドと少なくとも９９％の配列同一性を有する、請求項３７記載の味覚受容体。
【請求項４３】  ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドが、配列番号４に含有される核酸配列によってコードされるヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドと１００％の配列同一性を有する、請求項３７記載の味覚受容体。
【請求項４４】  請求項３７〜４３のいずれか一項に記載のヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドをコードする核酸配列。
【請求項４５】  検出可能な標識をコードする配列をさらに含む請求項４４記載の核酸配列。
【請求項４６】  検出可能な標識が酵素または緑色蛍光ポリペプチドである請求項４５記載の核酸配列。
【請求項４７】  請求項４４、４５または４６に記載の核酸配列を含むベクター。
【請求項４８】  プラスミドである請求項４７記載のベクター。
【請求項４９】  請求項４６、４７または４８に記載の核酸配列またはベクターを含有する組換え細胞。
【請求項５０】  バクテリア細胞、酵母細胞、昆虫細胞またはアフリカツメガエルの細胞である請求項４９記載の組換え細胞。
【請求項５１】  哺乳動物細胞である請求項５０記載の組換え細胞。
【請求項５２】  ＨＥＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞およびＢＨＫ細胞から選択される請求項５１記載の組換え細胞。
【請求項５３】  Ｇタンパク質も発現する請求項４９、５０、５１または５２に記載の組換え細胞。
【請求項５４】  Ｇタンパク質がＧα１５またはＧα１６である請求項５３記載の組換え細胞。
【請求項５５】  該ヒトＴ１Ｒ３ポリペプチドに結合またはその機能を調節するリガンドの検出を提供する標識を発現する請求項４９〜５３のいずれか一項に記載の組換え細胞。
【請求項５６】  標識が、放射性核種、フルオロフォア、酵素または緑色蛍光ポリペプチドである、請求項５５記載の組換え細胞。
【請求項５７】  請求項３７〜４３のいずれか一項に記載のヒトまたは齧歯類Ｔ１Ｒ３ポリペプチドを含む受容体に特異的に結合するおよび／または該受容体へのリガンドの特異的結合を調節するリガンド化合物を検出するアッセイ。
【請求項５８】  ヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドが組換え細胞によって発現される請求項５７記載のアッセイ。
【請求項５９】  細胞が、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、バクテリア細胞またはアフリカツメガエルの細胞である、請求項５８記載のアッセイ。
【請求項６０】  細胞が哺乳動物細胞である請求項５９記載のアッセイ。
【請求項６１】  細胞が、ＨＥＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞またはＢＨＫ細胞である、請求項６０記載のアッセイ。
【請求項６２】  細胞がＧタンパク質をさらに発現する請求項５８記載のアッセイ。
【請求項６３】  Ｇタンパク質がＧα１５またはＧα１６である請求項６２記載のアッセイ。
【請求項６４】  細胞が、ヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドに特異的に結合するまたは該受容体へのリガンドの特異的結合を調節するリガンドの検出を促進する検出可能な標識を含む、請求項５８記載のアッセイ。
【請求項６５】  標識が、酵素、フルオロフォア、放射性核種または緑色蛍光ポリペプチドである、請求項６４記載のアッセイ。
【請求項６６】  検出されたリガンドの味覚に対する効果が上昇する次の味覚試験をさらに含む、請求項５８記載のアッセイ。
【請求項６７】  請求項３７〜４３のいずれか一項に記載のヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドを含む受容体を特異的に調節するおよび／または該受容体に対する別のリガンドの効果を調節するリガンド化合物を検出する機能的アッセイ。
【請求項６８】  ヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドが組換え細胞によって発現される請求項６７記載のアッセイ。
【請求項６９】  細胞が、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞、バクテリア細胞またはアフリカツメガエルの細胞である、請求項６８記載のアッセイ。
【請求項７０】  細胞が哺乳動物細胞である請求項６９記載のアッセイ。
【請求項７１】  細胞が、ＨＥＫ細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞またはＢＨＫ細胞である請求項７０記載のアッセイ。
【請求項７２】  細胞がＧタンパク質をさらに発現する請求項６８記載のアッセイ。
【請求項７３】  Ｇタンパク質がＧα１５またはＧα１６である請求項７２記載のアッセイ。
【請求項７４】  細胞が、ヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドの機能的活性を特異的に調節するまたは該活性に対する別のリガンドの効果を調節するリガンドの検出を促進する検出可能な標識を含む、請求項６８記載のアッセイ。
【請求項７５】  標識が、細胞内イオンを検出する標識である、請求項６４記載のアッセイ。
【請求項７６】  標識が、カルシウムまたはナトリウムに特異的な色素またはフルオロフォアまたは電圧特異的な色素である、請求項７５記載のアッセイ。
【請求項７７】  細胞内イオンの量を調節する化合物をスクリーニングする請求項６８記載のアッセイ。
【請求項７８】  イオンがカルシウムまたはナトリウムである請求項７７記載のアッセイ。
【請求項７９】  第２メッセンジャーの量を調節する化合物をスクリーニングする請求項６８記載のアッセイ。
【請求項８０】  ヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドのコンフォーメーションを調節する化合物をスクリーニングする請求項６８記載のアッセイ。
【請求項８１】  自動イメージングまたは電圧検出機器を使用する請求項６８記載のアッセイ。
【請求項８２】  ヒトまたは齧歯類のＴ１Ｒ３ポリペプチドに結合するＧタンパク質を調節する化合物をスクリーニングする請求項６８記載のアッセイ。
【請求項８３】  検出されたリガンドの味覚に対する効果が上昇する次の味覚試験をさらに含む請求項６８記載のアッセイ。