【手続補正書】
【提出日】平成20年5月26日(2008.5.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＳＵＺ１２とを含む哺乳類の再構成複合体であって、該再構成複合体がヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）に対してヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴａｓｅ）活性を有する再構成複合体。
【請求項２】
ＲｂＡｐ４８、またはＡＥＢＰ２、あるいはこれらの両方をさらに含む請求項１に記載の再構成複合体。
【請求項３】
前記再構成複合体が、ネイティブの複合体の酵素活性に匹敵する酵素活性を有する請求項１に記載の再構成複合体。
【請求項４】
前記再構成複合体が、ネイティブの複合体の基質特異性に匹敵する基質特異性を有する請求項１に記載の再構成複合体。
【請求項５】
前記再構成複合体が、少なくとも６０％（ｗ／ｗ）の純度レベルを有する請求項１に記載の再構成複合体。
【請求項６】
ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＳＵＺ１２とから実質的になる再構成複合体であって、該再構成複合体がヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）に対して特異的なヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴａｓｅ）活性を有する哺乳類の再構成複合体。
【請求項７】
（ａ）ＥＥＤタンパク質をコードする異種核酸配列と、
（ｂ）ＥＺＨ２タンパク質をコードする異種核酸配列と、
（ｃ）ＳＵＺ１２タンパク質をコードする異種核酸配列と
を含む宿主細胞を準備するステップと、
タンパク質の発現及び再構成複合体の生産に十分な条件下で該宿主細胞を培養するステップと
を含む請求項１に記載の再構成複合体の製造方法。
【請求項８】
前記培養された宿主細胞又は前記培養された宿主細胞由来の培地から発現された前記再構成複合体を単離するステップをさらに含む請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記発現された再構成複合体を単離するステップが、前記発現された再構成複合体を固体支持体に結合させるステップを含む請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記固体支持体が、ニッケル、グルタチオン又は前記発現された再構成複合体に対する抗体を含む請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記固体支持体から前記発現された再構成複合体を溶出させるステップをさらに含む請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記発現された再構成複合体が、精製タグを含む請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
前記宿主細胞が、（ａ）ＲｂＡｐ４８タンパク質をコードする核酸配列、または（ｂ）ＡＥＢＰ２タンパク質をコードする核酸配列、あるいは（ｃ）これらの両方をさらに含む請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記宿主細胞が昆虫細胞である請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
前記昆虫細胞がＳｆ９細胞である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記宿主細胞が、前記（ａ）〜（ｃ）の異種核酸配列により安定に形質転換される請求項７に記載の方法。
【請求項１７】
前記宿主細胞が、前記（ａ）〜（ｃ）の異種核酸配列を含む１つ以上の組み換えベクターを含む請求項７に記載の方法。
【請求項１８】
前記ベクターがバキュロウイルスベクターである請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記１つ以上のベクターが、前記ＥＥＤタンパク質をコードする異種核酸配列を含むベクターと、前記ＥＺＨ２タンパク質をコードする異種核酸配列を含む別個のベクターと、及び、ＳＵＺ１２タンパク質をコードする異種核酸配列を含むさらに別個のベクターとを含む請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記１つ以上のベクターにより、前記宿主細胞を形質転換するステップをさらに含む請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）哺乳類のＥＥＤタンパク質をコードする異種核酸配列と、
（ｂ）哺乳類のＥＺＨ２タンパク質をコードする異種核酸配列と、
（ｃ）哺乳類のＳＵＺ１２タンパク質をコードする異種核酸配列と
を含む宿主細胞。
【請求項２２】
前記宿主細胞が昆虫細胞である請求項２１に記載の宿主細胞。
【請求項２３】
前記昆虫細胞がＳｆ９細胞である請求項２２に記載の宿主細胞。
【請求項２４】
前記宿主細胞が、前記（ａ）〜（ｃ）の異種核酸配列により安定に形質転換される請求項２１に記載の宿主細胞。
【請求項２５】
前記宿主細胞が、前記（ａ）〜（ｃ）の異種核酸配列を含む１つ以上の組み換えベクターを含む請求項２１に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
前記ベクターがバキュロウイルスベクターである請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
前記１つ以上のベクターが、前記ＥＥＤタンパク質をコードする異種核酸配列を含むベクターと、前記ＥＺＨ２タンパク質をコードする異種核酸配列を含む別個のベクターと、前記ＳＵＺ１２タンパク質をコードする異種核酸配列を含むさらに別個のベクターとを含む請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２８】
ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＳＵＺ１２とを含む哺乳類の再構成複合体のヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）に対するヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴａｓｅ）活性をモジュレートする化合物を識別する方法であって、
被験化合物の存在下で、該再構成複合体をヒストン基質に接触させるステップと、
Ｈ３−Ｋ２７メチル化するために十分な条件下で、Ｈ３−Ｋ２７メチル化のレベルを検出するステップと
を含み、該被験化合物非存在下におけるＨ３−Ｋ２７メチル化のレベルと比較した場合のＨ３−Ｋ２７メチル化の変化が、該被験化合物が該再構成複合体のＨ３−Ｋ２７ＨＴＭａｓｅ活性のモジュレーターであることを示す方法。
【請求項２９】
前記再構成複合体が、ＲｂＡｐ４８、またはＡＥＢＰ２、あるいはそれらの両方をさらに含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験化合物の非存在下におけるＨ３−Ｋ２７メチル化のレベルと比較した場合のＨ３−Ｋ２７メチル化の低下は、前記被験化合物が、前記再構成複合体のＨ３−Ｋ２７ ＨＭＴａｓｅ活性の阻害剤であることを示す請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記被験化合物の非存在下におけるＨ３−Ｋ２７メチル化のレベルと比較した場合のＨ３−Ｋ２７メチル化の上昇は、前記被験化合物が、前記再構成複合体のＨ３−Ｋ２７ ＨＭＴａｓｅ活性の活性化剤であることを示す請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記ヒストン基質が、コアヒストン、ヒストンオクタマー、モノヌクレオソーム、ジヌクレオソーム又はオリゴヌクレオソームである請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記ヒストン基質が、ジヌクレオソームである請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記方法が細胞系の方法である請求項２８に記載の方法。
【請求項３５】
前記方法が無細胞系の方法である請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
被験化合物の存在下で、ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＵＺ１２とを含む再構成複合体をヒストン基質に接触させるステップと、
Ｈ３−Ｋ２７をメチル化するために十分な条件下で、ヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）のヒストンメチル化のレベルを検出するステップと
を含む癌の治療のための候補化合物を識別する方法であって、該被験化合物の非存在下におけるＨ３−Ｋ２７メチル化のレベルと比較した場合のＨ３−Ｋ２７メチル化の低下は、該被験化合物が癌の治療のための候補化合物であることを示す、候補化合物を識別する方法。
【請求項３７】
前記ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＳＵＺ１２とが、哺乳類タンパク質、ショウジョウバエタンパク質、線虫タンパク質、植物タンパク質又はこれらの組み合わせである請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記再構成複合体が、ＲｂＡｐ４８、またはＡＥＢＰ２、あるいはそれらの両方をさらに含み、ＲｂＡｐ４８及び／又はＡＥＢＰ２が、哺乳類タンパク質、ショウジョウバエタンパク質、線虫タンパク質、植物タンパク質又はこれらの組み合わせである請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＳＵＺ１２とを含む哺乳類の再構成複合体のＨ３−Ｋ２７ヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴａｓｅ）活性の阻害剤に細胞を接触させるステップを含むヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）のメチル化を抑制する方法。
【請求項４０】
前記細胞が、培養細胞である請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記細胞が、対象中のインビボの細胞である請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＳＵＺ１２とを含む哺乳類の再構成複合体と、
任意選択的に、懸濁培地と
を含む、ヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）のメチル化の検出の感度を上昇させるための試薬。
【請求項４３】
前記再構成複合体が、ＲｂＡｐ４８、またはＡＥＢＰ２、あるいはそれらの両方をさらに含む請求項４２に記載の試薬。
【請求項４４】
ヒストンＨ３のリジン２７（Ｈ３−Ｋ２７）のヒストンメチル化の阻害を検出するためのキットであって、該キットが、
（ａ）ＥＥＤと、ＥＺＨ２と、ＳＵＺ１２とを含む哺乳類の再構成複合体と、
（ｂ）該再構成複合体のＨ３−Ｋ２７メチルトランスフェラーゼ（ＨＴＭａｓｅ）活性の阻害を測定するステップを含むＨ３−Ｋ２７メチル化の抑制を測定するための方法に関する取扱説明書と、
任意選択的に、ＨＴＭａｓｅ活性の阻害を測定するための方法を実施するための別の試薬又は装置と
を含むキット。
【請求項４５】
前記再構成複合体が、ＲｂＡｐ４８、またはＡＥＢＰ２、あるいはそれらの両方をさらに含む請求項４４に記載のキット。