【手続補正書】
【提出日】平成20年3月28日(2008.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列YPFRLHQVYFDAPSC(配列番号9)内のシナプトフィジンエピトープに結合する特異的結合要素。
【請求項２】
C1-3 VHドメイン(配列番号2)と配列番号12のアミノ酸配列を有するVH CDR3ならびに場合により配列番号10および配列番号11から選択されたアミノ酸配列を有する1つまたは複数のVH CDRを含むVHドメインとからなる群から選択された抗体VHドメイン;
および/または
C1-3 VLドメイン(配列番号4)と配列番号13、配列番号14および配列番号15から選択されたアミノ酸配列を有する1つまたは複数のVL CDRを含むVLドメインとからなる群から選択された抗体VLドメイン
を含む、請求項1に記載の特異的結合要素。
【請求項３】
配列番号10、配列番号11および配列番号12のアミノ酸配列を有するVH CDRを含む抗体VHドメインを含み、シナプトフィジンに対する結合について、C1-3 VHドメイン(配列番号2)およびC1-3 VLドメイン(配列番号4)を含む抗体のシナプトフィジン結合ドメインと競合する請求項2に記載の特異的結合要素。
【請求項４】
C1-3 VHドメイン(配列番号2)を含む請求項1から3のいずれか一項に記載の特異的結合要素。
【請求項５】
C1-3 VLドメイン(配列番号4)を含む請求項4に記載の特異的結合要素。
【請求項６】
特異的結合要素の親和性とC1-3 VHドメイン(配列番号2)およびC1-3 VLドメイン(配列番号4)により形成されるシナプトフィジン抗原結合部位の親和性とを同条件で測定して、C1-3 VHドメイン(配列番号2)およびC1-3 VLドメイン(配列番号4)により形成されるシナプトフィジン抗原結合部位の親和性と同等またはより大きい親和性でシナプトフィジンに結合する請求項1から4のいずれか一項に記載の特異的結合要素。
【請求項７】
scFv抗体分子を含む請求項1から6のいずれか一項に記載の特異的結合要素。
【請求項８】
抗体定常部を含む請求項1から6のいずれか一項に記載の特異的結合要素。
【請求項９】
抗体全体を含む請求項8に記載の特異的結合要素。
【請求項１０】
抗原に結合する能力に加えてさらに他の機能的特性を提供する追加のアミノ酸を含む請求項1から9のいずれか一項に記載の特異的結合要素。
【請求項１１】
検出可能な標識、酵素、または毒素に、場合によりペプチド結合またはリンカーによって結合させた請求項1から10のいずれか一項に記載の特異的結合要素。
【請求項１２】
毒素がトリブチル錫およびグリオトキシンを含む群から選択された請求項11に記載の特異的結合要素。
【請求項１３】
検出可能な標識がFITCである請求項11に記載の特異的結合要素。
【請求項１４】
請求項1から10のいずれか一項に記載の特異的結合要素または特異的結合要素の抗体VHもしくはVLドメインをコードするヌクレオチド配列を含む単離した核酸。
【請求項１５】
請求項14に記載の核酸で形質転換した宿主細胞。
【請求項１６】
前記特異的結合要素または抗体VHもしくはVLドメインを製造するための条件下で、請求項15に記載の宿主細胞を培養するステップを含む特異的結合要素または抗体VHもしくはVLドメインの製造方法。
【請求項１７】
前記特異的結合要素または抗体VHもしくはVL可変ドメインを単離および/または精製するステップをさらに含む請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
前記特異的結合要素または抗体VHもしくはVL可変ドメインを、少なくとも1つの追加成分を含む組成物に配合するステップをさらに含む請求項16または17に記載の方法。
【請求項１９】
請求項1に記載の1つまたは複数の特異的結合要素を得る方法であって、
前記方法が、特異的結合要素のライブラリーと抗原とを接触させて、前記抗原に結合し得るライブラリーの1つまたは複数の特異的結合要素を選択することを含み、前記抗原がアミノ酸配列YPFRLHQVYFDAPSC(配列番号9)内のエピトープを含む、方法。
【請求項２０】
シナプトフィジンに結合する特異的結合要素を得る方法であって、
C1-3 VHドメイン(配列番号2)のアミノ酸配列中の1つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、置換または挿入により、各々がC1-3 VHドメインのアミノ酸配列変異体である1つまたは複数のVHドメインを提供し、場合により、このようにして提供された1つまたは複数のVHドメインアミノ酸配列変異体を1つまたは複数のVLドメインと組み合わせて1つまたは複数のVH/VLの組合せを提供するステップ;
および/または
C1-3 VLドメイン(配列番号4)のアミノ酸配列中の1つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、置換または挿入により、C1-3 VLドメインのアミノ酸配列変異体であるVLドメインを提供し、このようにして提供された1つまたは複数のVLドメインアミノ酸配列変異体を1つまたは複数のVHドメインと組み合わせて1つまたは複数のVH/VLドメインの組合せを提供するステップ;
および
シナプトフィジンに結合する特異的結合要素を同定するために、VHドメインアミノ酸配列変異体または1つまたは複数のVH/VLの組合せを試験するステップ
を含む方法。
【請求項２１】
シナプトフィジンに結合する特異的結合要素を得る方法であって、
置換されるべきCDR3を含むかまたはCDR3をコードする領域を欠く1つまたは複数のVHドメインをコードする出発核酸を提供し、前記出発核酸と配列番号12のVH CDR3のアミノ酸配列をコードするドナー核酸とを、前記ドナー核酸が出発核酸中のCDR3領域に挿入されて、VHドメインをコードする生成物核酸を提供するように組み合わせるステップ;または
置換されるべきCDR3を含むかまたはCDR3をコードする領域を欠く1つまたは複数のVLドメインをコードする出発核酸を提供し、前記出発核酸と配列番号15のVL CDR3のアミノ酸配列をコードするドナー核酸とを、前記ドナー核酸が出発核酸中のCDR3領域に挿入されて、VLドメインをコードする生成物核酸を提供するように組み合わせるステップ;
VHドメインをコードする前記生成物核酸の核酸を発現させ、場合により、このようにして生成したVHドメインを1つまたは複数のVLドメインと組み合わせてVH/VLの組合せを提供するステップ、および/またはVLドメインをコードする前記生成物核酸の核酸を発現させ、このようにして生成したVLドメインを1つまたは複数のVHドメインと組み合わせてVH/VLの組合せを提供するステップ;
シナプトフィジンと結合するVHドメインまたはVH/VLの組合せを含む特異的結合要素を選択するステップ;および
シナプトフィジンに結合する前記特異的結合要素および/またはシナプトフィジンに結合する特異的結合要素をコードする核酸を回収するステップ
を含む方法。
【請求項２２】
シナプトフィジンに結合する特異的結合要素が、VHドメインおよびVLドメインを含む抗体フラグメントである、請求項19から21のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
抗体フラグメントがscFv抗体分子である請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
抗体フラグメントがFab抗体分子である請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
全抗体にある抗体のフラグメントのVHドメインおよび/またはVLドメインをさらに提供するステップを含む、請求項23または24に記載の方法。
【請求項２６】
請求項1から13のいずれか一項に記載のシナプトフィジンに結合する特異的結合要素をシナプトフィジンまたはシナプトフィジンのフラグメントに結合させるステップを含む方法。
【請求項２７】
肝線維症を特徴とする疾患または障害を治療するための医薬の製造における特異的結合要素の使用であって、特異的結合要素が
(i)請求項1から12のいずれか一項に記載の特異的結合要素、
(ii)アミノ酸配列YPFRLHQVYFDAPSC(配列番号9)内のシナプトフィジンエピトープに結合する特異的結合要素であって、
C1-3 VHドメイン(配列番号2)の変異体または配列番号10、配列番号11および配列番号12から選択されたアミノ酸配列を有するVH CDRの変異体を含む変異体抗体VHドメイン;および/または
C1-3 VLドメイン(配列番号4)の変異体または配列番号13、配列番号14および配列番号15から選択されたアミノ酸配列を有するVL CDRの変異体を含む変異体抗体VLドメイン
(各々の場合、変異配列はVHもしくはVLドメインまたはCDRと比較して、20個未満の改変、約15個未満の改変、約10個未満の改変または約5個未満、4、3、2または1個のアミノ酸配列改変を含む)
を含む特異的結合要素、または
(iii)シナプトフィジンへの結合についてC1-3 VHドメイン(配列番号2)と競合する抗原結合部位を有する特異的結合要素
から選択される特異的結合要素の使用。
【請求項２８】
肝線維症を特徴とする疾患または障害を検出するための診断薬の製造における、特異的結合要素および特異的結合要素の肝星細胞への結合の測定を可能にする1つまたは複数の試薬の使用であって、前記特異的結合要素が、
(i)請求項1から13のいずれか一項に記載の特異的結合要素、
(ii)アミノ酸配列YPFRLHQVYFDAPSC(配列番号9)内のシナプトフィジンエピトープに結合する特異的結合要素であって、
C1-3 VHドメイン(配列番号2)の変異体または配列番号10、配列番号11および配列番号12から選択されたアミノ酸配列を有するVH CDRの変異体を含む変異体抗体VHドメイン;および/または
C1-3 VLドメイン(配列番号4)の変異体または配列番号13、配列番号14および配列番号15から選択されたアミノ酸配列を有するVL CDRの変異体を含む変異体抗体VLドメイン
(各々の場合、変異配列はVHもしくはVLドメインまたはCDRと比較して、20個未満の改変、約15個未満の改変、約10個未満の改変または約5個未満、4、3、2または1個のアミノ酸配列改変を含む)
を含む特異的結合要素、または
(iii)シナプトフィジンへの結合についてC1-3 VHドメイン(配列番号2)と競合する抗原結合部位を有する特異的結合要素
から選択される特異的結合要素の使用。
【請求項２９】
特異的結合要素および前記特異的結合要素の肝星細胞への結合の測定を可能にする1つまたは複数の試薬を含む診断キットであって、前記特異的結合要素が、
(i)請求項1から12のいずれか一項に記載の特異的結合要素、
(ii)アミノ酸配列YPFRLHQVYFDAPSC(配列番号9)内のシナプトフィジンエピトープに結合する特異的結合要素であって、
C1-3 VHドメイン(配列番号2)の変異体または配列番号10、配列番号11および配列番号12から選択されたアミノ酸配列を有するVH CDRの変異体を含む変異体抗体VHドメイン;および/または
C1-3 VLドメイン(配列番号4)の変異体または配列番号13、配列番号14および配列番号15から選択されたアミノ酸配列を有するVL CDRの変異体を含む変異体抗体VLドメイン
(各々の場合、変異配列はVHもしくはVLドメインまたはCDRと比較して、20個未満の改変、約15個未満の改変、約10個未満の改変または約5個未満、4、3、2または1個のアミノ酸配列改変を含む)
を含む特異的結合要素、または
(iii)シナプトフィジンへの結合についてC1-3 VHドメイン(配列番号2)と競合する抗原結合部位を有する特異的結合要素
から選択される診断キット。
【請求項３０】
有効成分として請求項1から12に記載の特異的結合要素を有効量で、薬理学的に許容できる賦形剤と共に含む薬剤組成物。