【手続補正書】
【提出日】平成20年5月12日(2008.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ａ)５'ＬＴＲ；
ｂ)ポリアデニル化シグナルを含む３'ＬＴＲ；および
ｃ)該ポリアデニル化シグナルと操作可能に結合している(ｉ)１個または数個の異種上流エンハンサー(ＵＥ)配列および／または(ii)１個または数個の内因性ＵＥ配列の付加的複製：
を含む、レトロウイルスベクター。
【請求項２】  数個の異種ＵＥ配列を含み、少なくともその二つが同じＵＥに由来する、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項３】  数個の異種ＵＥ配列を含み、少なくともその二つが異なるＵＥに由来する、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項４】  数個の内因性ＵＥ配列の付加的複製を含み、少なくともその二つの複製が同一配列を有する、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項５】  数個の内因性ＵＥ配列の付加的複製を含み、少なくともその二つの複製が異なる配列を有する、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項６】  該異種ＵＥ配列、または該異種ＵＥ配列の少なくとも一つ、または内因性ＵＥ配列の該付加的複製、または内因性ＵＥ配列の該付加的複製の少なくとも一つが、該３'ＬＴＲにある、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項７】  該異種ＵＥ配列、または該異種ＵＥ配列の少なくとも一つ、または内因性ＵＥ配列の該付加的複製、または内因性ＵＥ配列の該付加的複製の少なくとも一つが、該３'ＬＴＲのＵ３領域にある、請求項６に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項８】  該３'ＬＴＲが機能的Ｕ３プロモーターを有しない、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項９】  該３'ＬＴＲがＵ３プロモーターの欠失を含む、請求項８に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１０】  該異種ＵＥ配列、または該異種ＵＥ配列の少なくとも一つ、または内因性ＵＥ配列の該付加的複製、または内因性ＵＥ配列の該付加的複製の少なくとも一つが、Ｕ３プロモーター欠失部位にある、請求項９に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１１】  該異種ＵＥ配列または該異種ＵＥ配列の少なくとも一つがウイルスＵＥ配列である、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１２】  該ウイルスＵＥ配列がＳＶ４０、カリフラワーモザイクウイルス、ＨＩＶ−１、地リス肝炎ウイルスまたはウマ感染性貧血ウイルスＵＥ配列である、請求項１１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１３】  該ウイルスＵＥ配列がＡＴＴＴＧＴＧＡまたはＡＴＴＴＧＴＡＡを含むＳＶ４０  ＵＥ配列である、請求項１２に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１４】  該ＳＶ４０  ＵＥ配列がＴＴＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＡＴＴＴＧＴＡＡ(配列番号１)を含む、請求項１３に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１５】  該異種ＵＥ配列または該異種ＵＥ配列の少なくとも一つが動物ＵＥ配列である、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１６】  該動物ＵＥ配列が補体Ｃ２またはラミンＢ２  ＵＥ配列である、請求項１５に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１７】  レンチウイルス配列を含む、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１８】  該３'ＬＴＲが内因性ＵＥ配列を含む、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１９】  該５'ＬＴＲがＵ３領域に挿入された異種プロモーターを含む、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項２０】  ５'ＬＴＲが内因性Ｕ３プロモーター配列の欠失を含む、請求項１９に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項２１】  該５'ＬＴＲの３'下流であり、該３'ＬＴＲの５'上流である異種コード配列を含む、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項２２】  該異種コード配列が治療的ポリペプチドをコードする、請求項２１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項２３】  該異種コード配列が陰性選択マーカーをコードする、請求項２１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項２４】  請求項１に記載のレトロウイルスベクターを含む、細胞。
【請求項２５】  哺乳類細胞である、請求項２４に記載の細胞。
【請求項２６】  ヒト細胞である、請求項２５に記載の細胞。
【請求項２７】  請求項１に記載のレトロウイルスベクター由来のプロウイルス配列を含む、細胞。
【請求項２８】  哺乳類細胞である、請求項２７に記載の細胞。
【請求項２９】  ヒト細胞である、請求項２８に記載の細胞。
【請求項３０】  細胞がプロデューサー細胞である、請求項２６に記載の細胞により製造された感染性レトロウイルス粒子。
【請求項３１】  請求項２１に記載のレトロウイルスベクターを細胞に送達することを含む、細胞において異種コード配列を発現する方法。
【請求項３２】  異種コード配列が治療的ポリペプチドをコードする、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】  該異種コード配列が陰性選択マーカーをコードする、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】  請求項２１に記載のレトロウイルスベクターを含む感染性レトロウイルス粒子を細胞に送達することを含む、細胞において異種コード配列を発現する方法。
【請求項３５】  異種コード配列が治療的ポリペプチドをコードする、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】  該異種コード配列が陰性選択マーカーをコードする、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】  請求項２１に記載のレトロウイルスベクターを含む感染性レトロウイルス粒子を宿主に送達することを含む、被検体の細胞において異種コード配列を発現する方法。
【請求項３８】  異種コード配列が治療的ポリペプチドをコードする、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】  該異種コード配列が陰性選択マーカーをコードする、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】  該被検体が哺乳類である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】  該被検体がヒトである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】  請求項２４に記載の細胞を含む組成物を被検体に注入することを含む、被検体において異種コード配列を発現する方法。
【請求項４３】  該被検体が哺乳類である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】  該被検体がヒトである、請求項４３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
レンチウイルスベクター
今日まで、臨床的遺伝子治療プロトコールにおいて最も一般に使用されているレトロウイルスは、マウス白血病ウイルス(ＭｕＬＶ)を基にしており、ウイルス粒子内にベクターゲノムを封入する種々のパッケージングシステムが開発されている(Miller, AD. 1997. Development and applications of retroviral vectors. Retroviruses, Ed. Coffin JM, Hughes SH, Varmus HE. CSHL Press, New Yorkにレビュー)。ベクターそれ自体は、全てのウイルス遺伝子が除去され、完全に複製欠損であり、約６−８ｋｂの外来ＤＮＡを受け入れることができる。これらの現在のベクター／パッケージングシステムで患者に課される危険性は最少であり、今日までそれらの使用に関連する毒性または長期問題の報告はない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
しかし、ＭｕＬＶおよびそれ由来のベクターは、分割細胞の感染のみできる。これは、予め統合された核タンパク質複合体が無傷の核膜を通過できないためである。対照的に、原型的レンチウイルスＨＩＶ−１は、無傷の膜が存在する場合でさえ、核輸送の能力を示し、ＨＩＶ−１由来ベクターはしたがって非分割細胞も形質導入できる(Naldini et al., Science 272:263-267 (1996))。ＨＩＶベクターのこの能力は、標的細胞が非分割であり、異種遺伝子の安定な統合が必要であるとき、それらを遺伝子治療の特に魅力的な候補物とする。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
発明の要約
本発明は、増強された３'転写終結構造を有するレトロウイルスベクターに関する。一つの実施態様において、本発明のレトロウイルスベクターは、３'ＬＴＲポリアデニル化シグナルと操作可能に関連した１個以上の異種上流エンハンサー(ＵＥ)を含む。他の実施態様において、本発明のレトロウイルスは、３'ＬＴＲポリアデニル化シグナルと操作可能に関連した内因性ＵＥ配列の付加的な複製を含む。本発明は、このようなレトロウイルスベクター、そのヌクレオチド配列、このようなベクターにより生成されるウイルス粒子、およびこのようなベクターおよびそのプロウイルス配列を含む細胞を含む組成物を提供する。本発明はまた哺乳類細胞および生物における異種コード配列を発現するためのこのようなレトロウイルスベクターの使用法も提供する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
“ベクター”は、特記しない限り“レトロウイルスベクター”を意味する。
“レトロウイルスベクターゲノム”は、そのポリヌクレオチドのＲＮＡバージョンがレトロウイルス粒子にパッケージされるのを可能にし、そのパッケージ化ＲＮＡポリヌクレオチドが逆転写され、レトロウイルス粒子内に含まれる逆転写酵素およびインテグラーゼのようなレトロウイルス酵素の作用により宿主細胞染色体に統合されるのに充分である、レトロウイルスゲノム由来の配列を含むポリヌクレオチドを意味する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
図９.ＲＡａｓｅ保護アッセイによる３'ポリ(Ａ)効率の分析のためのリボプローブの設計。
図は、標準ＳＩＮ−ＬＴＲ(例えば、ベクターｐＣＳＯ、ｐＣＳＯ−ＭＰ)またはＳＩＮ−ＬＴＲ−ＵＳＥ(例えば、ベクターｐＣＳＯ−ＭＰ.ＵＳＥ)のいずれかを含む統合ベクターにおける配列の配置を示す。正常ポリ(Ａ)／開裂部位の位置は３'Ｒ／Ｕ５境界である。特異的リボプローブを、全ＬＴＲ領域、上流ポリプリントラクト(ＰＰＴ)およびＰＰＴに５'の３６ヌクレオチド非関連ヌクレオチドの更なる範囲を含むために、各ベクターのために設計した。予期される保護フラグメントのサイズを示す。３'Ｒ／Ｕ５境界で正確に終結する転写物を、示すように、サイズの差異のために読み通し転写物から区別できる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
より好ましくは、本発明のベクターは：ｐＨＲ'ＣＭＶｌａｃＺ、ｐＨＲ'ＣＭｌａｃＺ  ＳＩＮ１８およびｐＲＲＬＰＧＫ−ＧＦＰ(Zufferey et al., J. Virol. 72:9873-9880 (1998))、ＬＬ−ＣＧ、ＣＬ−ＣＧ、ＬＳ−ＣＧ、ＣＳ−ＣＧおよびＣＬ−Ｇ(Miyoshi et al., J. Virol. 72. 8150-8157 (1998))、ｐＶ６５３ＣＭＶβ−ｇａｌ(Gasmi et al., J Virol 73:1828-1834 (1999))、ｐＴＶ(Iwakuma et al., Virology 261:120-232 (1999))、ｐＨ３Ｚ、ｐＨ４Ｚ、ｐＨ５Ｚ(Kim et al., Virol. 72:811-516))のようなＨＩＶ−１；ＨＩＶ−２(Arya et a., Hum Gene Ther. 9:1371-80 (1998))；ｐＶＧ(Schnell et al., Hum Gene Ther 11:439-47 (2000))のようなサル免疫不全ウイルス；ＦＩＶ−ｇａｌ(Wang et al., J Clin Invest. 104:R55-62 (1999))；、ＰＴＦＩＶ(Johnston et al., J Virol 73:4991-5000 (1999))；ｐＯＮＹ２.１０ｌａｃＺ、ｐＯＮＹ４.０Ｚ(Mitrophanous et al., Gene Ther. 6:1808-18 (1999))のようなウマ感染性貧血ウイルスを含むが、これらに限定されない。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
最も好ましくは、本発明のベクターはｐＨＲ'ＣＭＶｌａｃＺ  ＳＩＮ１８(Zufferey et al., J Virol. 72:9873-9880 (1988))、ＬＳ−ＣＧ、ＣＳ−ＣＧ(Miyosih et al., J. Virol. 72. 8150-8157 (1988))、ＳＩＮ−Ｗ−ＰＧＫ(Deglon et al., Hum Gene Ther. 11:179-190 (2000))、ｐＶＧ(Schnell et al., Hum Gene Ther. 11:439-47 (2000))およびｐＴＣ(Iwakuma et al., Virology 261:120-132 (1999))に由来するＳＩＮレンチウイルスベクター由来である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
ベクターの３'ＬＴＲは非修飾レトロウイルス３'ＬＴＲであり得る。好ましい実施態様において、３'ＬＴＲのＵ３プロモーターは変異または欠失により不活性化されている。より好ましい実施態様において、このような不活性化はＵ３プロモーターに特異的である。即ち、不活性化は、ａｔｔ配列および任意の内因性ＵＥのような３'ＬＴＲの他の構造に不利に働かない。最も好ましい実施態様において、プロモーターはＨＩＶ−１のｐＮＬ４−３株のほぼ９１１３から９５０６の残基に対応する領域において配列の変異または欠失により不活性化される。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
本発明のベクターはまたＵＥの活性セグメントを含み得る。このようなセグメントは、例えば、転写読み通しアッセイを使用した、慣用の実験により決定し得る。例えば、このようなアッセイは、多シストロン性発現構築物によりコードされる二つのレポーターポリペプチドの相対的発現レベルを測定するためのシステムを含み、ここでレポーターポリペプチドのコード配列は転写終結構造および内部リボソーム挿入配列(ＩＲＥＳ)により分離される。特に、発現構築物は５'から３'方向で以下の要素：宿主細胞中で活性な転写制御要素(例えば、プロモーターまたはエンハンサー)、第１レポーターポリペプチドのコード配列、第１転写終結構造、内部リボソーム挿入配列(ＩＲＥＳ)、第２レポーターのコード配列、および、所望により、第２転写終結構造を含み、ここで、第１転写終結構造はポリアデニル化シグナルを含む。このような構築物の模式図は図８Ａに示す。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
ＵＥセグメントの活性は、それを第１転写終結構造のポリアデニル化シグナルの上流に置き、その位置がその構造を通過する転写読み通しを減少させるかどうかを測定することにより測定し得る。挿入ＵＥセグメントの３'ＬＴＲにおけるポリアデニル化シグナルに対する配向は、ＵＥセグメントが由来する遺伝子におけるポリアデニル化シグナルに対するその配向と同じべきである。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
ＵＥ配列は、シグナルの５'上流であるベクター部位に配列を挿入することにより３'ＬＴＲポリアデニル化シグナルと操作可能に結合し得る。挿入ＵＥ配列のポリアデニル化シグナルに対する配向は、配列が由来する遺伝子におけるポリアデニル化シグナルに対する配向と同じでなければならない。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
特に好ましい実施態様において、挿入は３'ＬＴＲのＵ３領域における部位である。更に好ましい実施態様において、このような部位はａｔｔ配列とＵ３領域に存在し得る任意の内因性ＵＥ配列の間である。より更に好ましい実施態様において、ａｔｔ配列と、Ｕ３プロモーター構造のいくつかまたは全てを含むＵＥ配列の間の３'ＬＴＲ配列は欠失し、ＵＥ配列が欠失部位に挿入される。最も好ましい実施態様において、このような欠失は、ＨＩＶ−１のｐＮＬ４−３株の約９１１３から９５０６残基に対応する領域に伸び、ＵＥ配列が欠失部位に挿入される。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
複数のＵＥ配列を含むベクター
本発明のベクターは、３'ＬＴＲポリアデニル化シグナルと操作可能に結合した複数のＵＥ配列を含む。本発明は、複数のＵＥ配列の可能性のある組合せ全てを含むベクターを意図する。組み合わせの例は；２個以上の異種ＵＥ配列が同一または同じＵＥ由来である；異なるＵＥに由来する２個以上の異種ＵＥ配列；同じ内因性ＵＥの２個以上の複製、異なる内因性ＵＥ配列の２個以上の複製；１個以上の異種ＵＥ配列と１個以上の内因性ＵＥ配列の付加的複製を含むが、これらに限定されない。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
異種遺伝子およびコード配列
本発明のベクターは哺乳類細胞および生物における所望の遺伝子産物の発現に有利に使用し得る。したがって、ベクターは更に１個以上の異種コード配列を含み得、ここでこのような配列はベクターが由来するレトロウイルスゲノム以外の源由来である。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
他の実施態様において、異種コード配列は、個々のプロモーターと各々操作可能に結合し、発現構築物を形成し、このような構築物をレトロウイルス骨格に、好ましくは、５'および３'ＬＴＲの間に挿入する。発現構築物は、構造的、誘導可能、組織特異的、または細胞サイクル特異的であるプロモーターを含み得る。有用なプロモーターの例は、ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶプロモーター、アデノウイルスプロモーター、Ｂ１９パルボウイルスプロモーター、ヒストンプロモーター、ｐｏｌ  IIIプロモーターおよびベータ−アクチンプロモーターを含むが、これらに限定されない。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
他の実施態様において、本発明のベクターは陰性選択可能マーカーをコードする１個以上の異種配列を含み、発現する。陰性選択可能マーカーは、宿主細胞を直接的または間接的に阻害するまたは殺す細胞毒素であり得る。“直接”細胞毒素の例は、コレラの活性部分およびボツリヌス毒素を含む。好ましい実施態様において、本発明のベクターは間接細胞毒素をコードする１種以上の異種配列を含み、発現する。間接細胞毒素は、それ自体は毒性ではないが、他の作動物質との相互作用により細胞性阻害を達成する。例は、非毒性であるが、ガンシクロビルのような薬剤を哺乳類細胞を殺す毒性ヌクレオチドに活性化できるＨＳＶ−チミジンキナーゼ(ＴＫ)である。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
本発明の感染性ベクター粒子は哺乳類細胞および生物中で異種コード配列の発現に使用し得る。一つの実施態様において、異種コード配列を含む感染性ベクター粒子の有効な投与量を、直接哺乳類生物に投与し、生物内で標的細胞の形質導入を達成する。他の実施態様において、哺乳類細胞を、このようなベクター粒子でインビトロで形質導入し、形質導入細胞をついでインビボで宿主に投与する。好ましくは、本発明の感染性ベクター粒子は、霊長類および霊長類細胞に異種コード配列を発現するために使用する。より好ましくは、本発明のベクター粒子はヒトおよびヒト細胞に異種コード配列を発現するために使用する。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
転写読み通しアッセイ
これらの転写終結構築物の活性は、図８Ａに示す多シストロン性発現カセットに基づく転写読み通しアッセイを使用して評価する。転写終結構築物は二つのレポーター遺伝子、レニラルシフェラーゼ(Ｒ  ｌｕｃ)およびホタルルシフェラーゼ(Ｆ  ｌｕｃ)の間に挿入し、Ｒ  ｌｕｃおよびＦ  ｌｕｃ活性の量を、発現カセットを含むプラスミドの２９３Ｔ細胞へのトランスフェクションに続いて測定する。Ｒ  ｌｕｃおよびＦ  ｌｕｃ活性は、ルシフェラーゼアッセイキット(Promega)を使用して測定する。発現カセット中の内部リボソーム挿入部位(ＩＲＥＳ)配列の存在は、ｍＲＮＡ上で第２コード配列であってさえ、Ｆ  ｌｕｃ発現を可能にする。この配置において、Ｆ  ｌｕｃの発現は転写が挿入構築物により終結する効率と逆相関する。加えて、第１レポーター遺伝子、Ｒ  ｌｕｃの発現レベルはｍＲＮＡの全体的安定性／翻訳可能性を反映し、それはまた挿入構築物の強度により影響される。一緒に考えて、挿入終結構築物のこれら二つの異なる効果は、二つのルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現の比率の変化を組み合わる。構築物の活性は、発現されたＲ  ｌｕｃ：Ｆ  ｌｕｃの比率におけるそれらの効果に基づいて比較できる(即ち、高い比率を有する構築物は、低い比率を有する構築物と比較して増強された終結活性を有する)。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
前記のアッセイは、ＳＩＮ−ＬＴＲ−ＵＳＥにおける転写終結構造が、天然ＨＩＶ−１  ＬＴＲまたは既知の最強のシグナルの一つであると考えられる野生型ＳＶ４０遅延ポリアデニル化シグナルよりさえ、強いポリアデニル化シグナルである。完全ＵＳＥの付加はＳＩＮ−ＬＴＲのポリアデニル化強度を約３倍増加させ、一方ＳＩＮ−ＬＴＲ−ＵＳＥＰへの２個のＵＳＥのＡＵＵＵＧＵＰｕＡ要素の付加は、約２倍ポリアデニル化強度を増強する。ＨＩＶ−１推定マイナーエンハンサー(ＳＩＮ−ＬＴＲ−ＵＨＥＭ)の付加はポリアデニル化効率を減少させる。これらの結果を図８に要約する。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
ベクター力価
完全および部分的ＵＳＥおよび完全ＵＧＥを、ベクターｐＳＣＯ−ＭＰの３'ＬＴＲに挿入し、ベクターｐＣＳＯ−ＭＰ.ＵＳＥ、ｐＣＳＯ−ＭＰ.ＵＳＥＰおよびｐＣＳＯ−ＭＰ.ＵＧＥをそれぞれ創生する。ベクター粒子は、記載のように、これらのベクターを含むプラスミドと、複製ヘルパープラスミドｐＣＭＶ△Ｒ８.７１およびｐＭＤ.Ｇの２９３Ｔ細胞への共トランスフェクションにより生成する(Naldini et al., Science 272:263-267 (1996))。トランスフェクト細胞から製造したベクター上清は、２９３Ｔ細胞で力価測定する。これらの分析は、ベクターｐＣＳＯ−ＭＰ.ＵＳＥが標準ＳＩＮ−ＬＴＲベクターであるｐＣＳＯ−ＭＰよりも少なくとも２倍高いベクター力価を提供することを示す(図１０)。ベクター力価を増加させる能力は、ベクターｐＣＳＯ−ＭＰ.ＵＳＥ中のＵＧＥが約２倍までベクター力価を増加させるため、ＵＳＥの特性だけではない。ｍＲＮＡの高い定常状態レベルは強いポリアデニル化シグナルによる処理に起因することが知られている。したがって、３'ＳＩＮ−ＬＴＲ−ＵＳＥまたは３'ＳＩＮ−ＬＴＲ−ＵＧＥ配置は、プロデューサー細胞においてベクター転写物に高い安定性を付与し、それは高いベクター力価をもたらす。