【誤訳訂正書】
【提出日】平成20年7月14日(2008.7.14)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
無細胞試料においてキナーゼの酵素活性を測定する方法であって、
（ａ）界面活性剤、発光原性分子および化学的に安定なルシフェラーゼを含む一つの混合試薬であって、前記界面活性剤が前記化学的に安定なルシフェラーゼの活性に実質的に影響を及ぼすことなくキナーゼ活性を選択的に停止させることを特徴とする一つの混合試薬を供給すること、
（ｂ）キナーゼ、ＡＴＰ、およびキナーゼの基質を含む第１の反応混合物を、第１の既定期間の間、トランスフェラーゼ反応を起こさせるのに有効な条件下でインキュベートすること、
（ｃ）該第１の反応混合物を該一つの混合試薬と接触させて第２の反応混合物を形成し、該第２の反応混合物を、第２の既定期間の間、キナーゼの酵素活性を停止すると同時に生物発光反応を起こさせるのに有効な条件下でインキュベートすること、および
（ｄ）該第２の反応混合物の発光を測定することによりキナーゼ活性を決定すること
を含む方法。
【請求項２】
無細胞試料において、化合物を、キナーゼの酵素活性に対する該化合物の影響に関してスクリーニングする方法であって、
（ａ）スクリーニングするための化合物を供給すること、
（ｂ）界面活性剤、発光原性分子および化学的に安定なルシフェラーゼを含む一つの混合試薬であって、前記界面活性剤が前記化学的に安定なルシフェラーゼの活性に実質的に影響を及ぼすことなくキナーゼ活性を選択的に停止させることを特徴とする一つの混合試薬を供給すること、
（ｃ）キナーゼ、ＡＴＰ、キナーゼの基質および該化合物を含む第１の反応混合物を、第１の既定期間の間、トランスフェラーゼ反応を起こさせるのに有効な条件下でインキュベートすること、
（ｄ）該第１の反応混合物を該一つの混合試薬と接触させて第２の反応混合物を形成し、該第２の反応混合物を、第２の既定期間の間、キナーゼの酵素活性を停止すると同時にＡＴＰ依存性生物発光反応を起こさせるのに有効な条件下でインキュベートすること、および
（ｅ）化合物を含まない対照混合物に対して、該第２の反応混合物の発光を測定および
比較することにより、キナーゼ活性に対する該化合物の影響を決定すること
を含む方法。
【請求項３】
無細胞試料において、複数の化合物を、キナーゼの酵素活性に対する該化合物の影響を決定するために迅速にスクリーニングするハイスループットスクリーニング方法であって、
（ａ）スクリーニングするための複数の化合物を供給すること、
（ｂ）界面活性剤、発光原性分子および化学的に安定なルシフェラーゼを含む一つの混合試薬であって、前記界面活性剤が前記化学的に安定なルシフェラーゼに実質的に影響を及ぼすことなくキナーゼ活性を選択的に停止させることを特徴とする一つの混合試薬を供給すること、
（ｃ）キナーゼ、ＡＴＰ、キナーゼ基質および少なくとも１つの化合物を含む複数の第１の反応混合物を、第１の既定期間の間、トランスフェラーゼ反応を起こさせるのに有効な条件下でインキュベートすること、
（ｄ）該第１の反応混合物を、第２の既定期間の間、キナーゼの酵素活性を停止すると同時にＡＴＰ依存性生物発光反応を起こさせるのに有効な条件下で該一つの混合試薬と接触させて複数の第２の反応混合物を形成すること、および
（ｅ）化合物を含まない少なくとも１つの対照混合物に対して、該第２の反応混合物の発光を測定および比較することにより、キナーゼ活性に対する該化合物の影響を決定すること
を含む方法。
【請求項４】
キナーゼの酵素活性は、プロテインキナーゼ活性、脂質キナーゼ活性、ポリヌクレオチドキナーゼ活性、または糖キナーゼ活性を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
プロテインキナーゼは、Ｓｅｒ／Ｔｈｒプロテインキナーゼ、プロテインチロシンキナーゼ、またはプロテイン脂質依存性キナーゼを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｓｅｒ／Ｔｈｒプロテインキナーゼは、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）、カルシウムおよびリン脂質依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＣ）、ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＧ）、カルシウムおよびカルモジュリン依存性プロテインキナーゼ（ＣａＭ  ＫＩＩ）または二重特異性プロテインキナーゼを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
二重特異性プロテインキナーゼは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）またはマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
チロシンキナーゼは、ラウス肉腫関連プロテインキナーゼ（Ｓｒｃ）、成長因子レセプター、またはＳｒｃファミリープロテインチロシンキナーゼを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
Ｓｒｃファミリープロテインチロシンキナーゼは、Ｓｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、またはＬｙｎを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
成長因子レセプターは、上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）、血小板由来成長因子レセプター（ＰＤＧＦＲ）またはＳｔｅｅｌ成長因子レセプター（ｃ‐ＫＩＴ）を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
脂質依存性プロテインキナーゼは、Ｉ型ホスホイノシチド３‐ＯＨホスファチジルイノ
シトールキナーゼ（ＰＩ３Ｋ）を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
界面活性剤は、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、または両性イオン性界面活性剤を含む、請求項１、２または３のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
陽イオン性界面活性剤は、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、および臭化ベンジルジメチルドデシルアンモニウムを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
陽イオン性界面活性剤は、臭化ドデシルトリメチルアンモニウムである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
陰イオン性界面活性剤は、ＳＤＳおよびデオキシコール酸塩を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
両性イオン性界面活性剤は、スルホベタイン３‐１０を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
発光原性分子はＤ‐ルシフェリンまたはルシフェリン誘導体を含む請求項１、２または３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
キナーゼ自体がリン酸化されるか、またはトランスフェラーゼ基質がリン酸化される、請求項１、２または３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
化合物がキナーゼの酵素活性を高める、請求項２または３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
化合物がキナーゼの酵素活性を阻害する、請求項２または３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
無細胞試料においてキナーゼの酵素活性を測定するためのキットであって、
（ａ）化学的に安定なルシフェラーゼの活性に実質的に影響を及ぼすことなくキナーゼ活性を選択的に停止させる１つまたはそれ以上の界面活性剤を含む再構成緩衝液、
（ｂ）発光原性分子と化学的に安定なルシフェラーゼとを含む組成物、および
（ｃ）該キットを使用するための指示書
を含むキット。
【請求項２２】
前記キナーゼ活性は、プロテインキナーゼ活性、プロテイン脂質依存性キナーゼ活性、ポリヌクレオチドキナーゼ活性、または糖キナーゼ活性を含む、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
プロテインキナーゼは、Ｓｅｒ／Ｔｈｒプロテインキナーゼ、プロテインチロシンキナーゼ、またはプロテイン脂質依存性キナーゼを含む、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
Ｓｅｒ／Ｔｈｒプロテインキナーゼは、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＡ）、カルシウムおよびリン脂質依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＣ）、ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＧ）、カルシウムおよびカルモジュリン依存性プロテインキナーゼ（ＣａＭ  ＫＩＩ）または二重特異性プロテインキナーゼを含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
二重特異性プロテインキナーゼは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）またはマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）を含む、請求項２５に記載のキット。
【請求項２６】
チロシンキナーゼは、ラウス肉腫関連プロテインキナーゼ（Ｓｒｃ）、成長因子レセプター、またはＳｒｃファミリープロテインチロシンキナーゼを含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２７】
Ｓｒｃファミリープロテインチロシンキナーゼは、Ｓｒｃ、Ｌｃｋ、Ｆｙｎ、またはＬｙｎを含む、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
成長因子レセプターは、上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）、血小板由来成長因子レセプター（ＰＤＧＦＲ）またはＳｔｅｅｌ成長因子レセプター（ｃ‐ＫＩＴ）を含む、請求項２６に記載のキット。
【請求項２９】
脂質依存性プロテインキナーゼは、Ｉ型ホスホイノシチド３‐ＯＨホスファチジルイノシトールキナーゼ（ＰＩ３Ｋ）を含む、請求項２２に記載のキット。
【請求項３０】
界面活性剤は、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、または両性イオン性界面活性剤を含む、請求項２１に記載のキット。
【請求項３１】
陽イオン性界面活性剤は、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、および臭化ベンジルジメチルドデシルアンモニウムを含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
陽イオン性界面活性剤は、臭化ドデシルトリメチルアンモニウムである、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
陰イオン性界面活性剤は、ＳＤＳおよびデオキシコール酸塩を含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３４】
両性イオン性界面活性剤は、スルホベタイン３‐１０を含む、請求項３０に記載のキット。
【請求項３５】
発光原性分子はＤ‐ルシフェリンまたはルシフェリン誘導体を含む、請求項２１に記載のキット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
ＦＰアッセイは、蛍光標識分子への、抗体、キレート原子等のような高親和性結合試薬の結合に基づいている。例えば、リン酸化された蛍光標識ペプチドに結合するが、リン酸化されていない蛍光標識ペプチドには結合しない抗体をキナーゼアッセイに使用することができる。蛍光標識が平面偏光により励起されると、該蛍光標識は励起状態の間中（励起状態の持続期間はフルオロフォアによって様々であり、フルオレセインに関しては４ナノ秒である）定常状態を維持する限り、同じ偏光平面において光を放出する。しかしながら、励起された蛍光標識が、励起状態の間に偏光平面から外れて回転または傾斜する場合、光は、初期の励起状態の平面とは異なる平面において放出される。偏光を用いてフルオロ
フォアを励起する場合、放出光の強度は、偏光平面（励起平面）に平行した平面および偏光平面に垂直な平面の両方でモニタリングすることができる。放出光の強度が平行な平面から垂直な平面まで移動する度合いは、蛍光標識分子の移動性に関連する。蛍光標識分子が大きい場合、例えば蛍光標識分子が結合試薬と結合している場合、蛍光標識分子は励起状態の間にあまり移動せず、放出された光は励起平面に関して高度に偏光されたままである。蛍光標識分子が小さい場合、例えば結合試薬が蛍光標識分子に結合していない場合、蛍光標識分子はより迅速に回転または傾斜し、生じた放出光は励起平面に対して減偏光される。したがって、ＦＰアッセイは、蛍光標識分子に対して高度に特異的に結合することが可能な高親和性結合試薬、例えば抗体を要する。抗体を使用する場合、ペプチドのような特定の蛍光標識分子と結合する抗体についての最適化が必要とされるが、これには時間および費用がかかる。さらに、ＦＰアッセイには、リン酸化タンパク質および他の反応構成成分、例えば脂質および界面活性剤が、偏光を妨害する可能性が存在する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
トランスフェラーゼクエンチング剤の例としては、界面活性剤、好ましくは陽イオン性界面活性剤［例えば、ＤＴＡＢ（臭化ドデシルトリメチルアンモニウム）、ＣＴＡＢ（セチルトリメチルアンモニウム）およびＢＤＤＡＢｒ（臭化ベンジルジメチルドデシルアンモニウム）］、陰イオン性界面活性剤（例えば、ＳＤＳおよびデオキシコール酸塩）および両性イオン性界面活性剤（例えば、スルホベタイン３‐１０）のような荷電した基を有する界面活性剤が挙げられる。上記方法を容易とするために、ルシフェラーゼ用の基質、例えばルシフェリンを試薬組成物に含めてもよい。試薬組成物の他の実施形態は、ＮａＦ、バナデートおよびパラニトロフェニルホスフェートのようなトランスフェラーゼ阻害剤をさらに含む。試薬組成物のさらに他の実施形態は、緩衝剤およびマグネシウムをさらに含む。当業者には、他の陽イオン（例えば、マンガンおよびカルシウム）がマグネシウムに代わる適切な代用物であり得ることが既知である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
反応組成物はまた、酵素安定剤を含んでもよい。酵素安定剤は、分解からルシフェラーゼを安定化する任意の化合物であり得る。適切な酵素安定剤としては、タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミンまたはゼラチン）または界面活性剤（好ましくは、非イオン性界面活性剤、最も好ましくはＴＨＥＳＩＴ（登録商標））が挙げられる。酵素安定剤のさらなる例は、２００３年２月１３日に出願された、「改善されたルシフェラーゼを用いるアッセイ(IMPROVED LUCIFERASE-BASED ASSAYS)」という表題の米国仮特許出願第６０／４４７，３３４号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
本発明はまた、本発明の要素を集めてキットにする。かかるキットは、試料中のトランスフェラーゼ活性を検出および定量化するように、あるいはトランスフェラーゼ活性に対
する化合物の影響を決定するように設計される。キットは、複数の目的が実現され得るように多機能性であり得る。一実施形態では、試料中のトランスフェラーゼ活性を検出するのに使用されるキットは、１つの容器中に凍結ルシフェラーゼを含み、別の容器が１つまたはそれ以上のトランスフェラーゼクエンチング剤を含んだ再構成用緩衝剤を含んでいてもよい。トランスフェラーゼクエンチング剤は、非界面活性剤のトランスフェラーゼ阻害剤または界面活性剤、好ましくは陽イオン性界面活性剤（好ましくは、ＤＴＡＢまたはＢＤＤＡＢｒ）、陰イオン性界面活性剤（好ましくは、ＳＤＳまたはデオキシコール酸）または両性イオン性界面活性剤（好ましくは、スルホベタイン３‐１０）を含むイオン性基を有する界面活性剤、あるいはそれらの組合せであり得る。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
最も好ましくは、キットは、緩衝界面活性剤溶液を含む容器を含み、該緩衝界面活性剤溶液は、約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０の範囲のｐＨであり、該緩衝界面活性剤溶液は、試薬組成物中の濃度が約０．０５％〜約２％（ｗ／ｖ）の範囲であるＤＴＡＢを含み、また任意選択で試薬組成物中の濃度が約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲であるＮａＦを含み、また任意選択で試薬組成物中の濃度が約１％〜約５％の範囲であるＴＨＥＳＩＴ（登録商標）を含む。キットはさらに、凍結乾燥したルシフェラーゼ、好ましくは配列番号１、２、３または４、最も好ましくは配列番号２または４の配列を有するルシフェラーゼを含む別個の容器を含む。好ましくは、緩衝界面活性剤溶液と組み合わさって試薬組成物となるルシフェラーゼは、１μｇ／ｍｌ以上の濃度、より好ましくは８０μｇ／ｍｌ以上の濃度である。好ましくは、凍結乾燥したルシフェラーゼを含む容器はさらに、凍結乾燥したルシフェリンを含む。任意選択で、キットはさらに、ＡＴＰを測定する目的でキットを使用するための指示書を含む。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
Ｂ．試薬組成物
本発明の試薬組成物は、１つまたはそれ以上のトランスフェラーゼクエンチング剤、好ましくは界面活性剤、および非内在性のＡＴＰ依存性生物発光酵素を含み、ここで該組成物は、酵素をトランスフェラーゼクエンチング剤と組み合わせた直後（０〜１０分）の酵素活性と比較して、少なくとも約１時間、好ましくは少なくとも約２時間、より好ましくは少なくとも約４時間、少なくとも約３０％の酵素活性を維持することが可能であり、かつ、１つまたはそれ以上のトランスフェラーゼクエンチング剤は、トランスフェラーゼクエンチング剤の非存在下での試料に内在するトランスフェラーゼ活性に対して、試料に内在するトランスフェラーゼ活性を総計で少なくとも約２５％、より好ましくは少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％、あるいはその中の任意の増分だけ減少させるのに十分な濃度で組成物中に存在する。本発明の好ましい実施形態では、非内在性のＡＴＰ依存性酵素は、ルシフェラーゼである。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
したがって、好ましいルシフェラーゼとしては、トランスフェラーゼクエンチング剤の非存在下での試料に内在するトランスフェラーゼ活性に対して、全体として少なくとも約２５％（好ましくは、少なくとも約３０％、さらにより好ましくは少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはこの中での任意の増分）の割合で、同試料のトランスフェラーゼ活性を減少させるのに十分な量のトランスフェラーゼクエンチング剤、好ましくは界面活性剤、例えば陽イオン性界面活性剤（好ましくは、ＤＴＡＢまたはＢＤＤＡＢｒ）、陰イオン性界面活性剤（好ましくは、デオキシコール酸塩またはＳＤＳ）または両性イオン性界面活性剤（好ましくは、スルホベタイン３−１０）またはそれらの組合せと接触させてから、少なくとも１時間（好ましくは少なくとも２時間、より好ましくは少なくとも４時間）後に、発光により測定される場合に少なくとも約３０％（好ましくは、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％）の酵素活性を維持するルシフェラーゼが挙げられる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
化学的に安定な好ましいルシフェラーゼ（例えば、Ｐｐｅ２ｍ７８、Ｐｐｅ２ｍ９０、Ｐｐｅ２ｍ１３３、およびＰｐｅ２ｍ１４６）はまた、複数の界面活性剤を含む溶液中でも活性を保持する。具体的には、少なくとも０．０１％、好ましくは０．０５％、０．１％、０．２％、最も好ましくは０．３％または１．０％のＢＤＤＡＢｒ、タウロコール酸もしくはタウロリトコール酸、またはＤＴＡＢとともに、０．０１％、好ましくは０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、最も好ましくは０．２５％のＣＨＡＰＳ（３‐（［３‐コラミドプロピル］ジメチルアンモニオ）‐１‐プロパンスルホネート）を含有する溶液、あるいは少なくとも０．０１％、好ましくは０．０５％、０．１％、０．２％、最も好ましくは０．３％または１．０％のＢＤＤＡＢｒ、ＤＴＡＢまたはＣＨＡＰＳとともに、０．０１％、好ましくは０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、最も好ましくは１．０％のタウロコール酸またはタウロリトコール酸を含有する溶液である。複数の界面活性剤を含む他の溶液で、その中でＬｕｃＰｐｅ２ｍ７８、ＬｕｃＰｐｅ２ｍ９０、ＬｕｃＰｐｅ２ｍ１３３およびＬｕｃＰｐｅ２ｍ１４６が活性を保持するものとしては、少なくとも０．０１％、好ましくは０．０５％、０．１％、０．２％、０．５％、最も好ましくは１．０％のＢＤＤＡＢｒ、ＤＴＡＢ、またはＣＨＡＰＳを含む０．０１％、好ましくは０．０５％、最も好ましくは０．１％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ‐１００溶液、あるいは少なくとも０．０１％、好ましくは０．０５％、０．１％、０．２％、最も好ましくは０．３％または１．０％のＢＤＤＡＢｒ、ＤＴＡＢ、またはＣＨＡＰＳを含む０．０１％、好ましくは０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、最も好ましくは１．０％のタウロコール酸またはタウロリトコール酸溶液、あるいは少なくとも０．０５％、好ましくは０．１％、０．２％、最も好ましくは０．３％または１．０％のＢＤＤＡＢｒ、ＤＴＡＢ、またはＣＨＡＰＳを含む０．０５％、０．１％、２．０％、４．０％、好ましくは２％のポリエチレングリコール４００ドデシルエーテル（ＴＨＥＳＩＴ）溶液が挙げられる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８３】
（トランスフェラーゼクエンチング剤）
本発明の一態様は、トランスフェラーゼクエンチング剤、好ましくはトランスフェラーゼを阻害する界面活性剤、より好ましくは荷電基を有する界面活性剤、例えば、陽イオン性界面活性剤（好ましくは、ＤＴＡＢまたはＢＤＤＡＢｒ）、陰イオン性界面活性剤（好ましくは、デオキシコール酸塩またはＳＤＳ）または両性イオン性界面活性剤（好ましくは、スルホベタイン３‐１０）である。かかる阻害剤は、ルシフェラーゼがルシフェラーゼ‐ルシフェリン反応のために試料中のＡＴＰを利用するのが可能となる前に、試料に内在するトランスフェラーゼによりＡＴＰがアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）およびアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）へと処理されるのを防止する。トランスフェラーゼクエンチング剤は、直接的または間接的にトランスフェラーゼを不活性化し得る。トランスフェラーゼクエンチング剤は、トランスフェラーゼの活性部位のいずれかに結合することによって基質の結合を防止してもよいし、例えば変性作用を有する界面活性剤などによりトランスフェラーゼを変性させてもよいし、あるいはトランスフェラーゼクエンチング剤がトランスフェラーゼをその基質から選択的に分離してもよい。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８４】
本発明の一実施形態は、トランスフェラーゼクエンチング剤として作用するＤＴＡＢまたはＢＤＤＡＢｒのような陽イオン性界面活性剤を使用する。しかしながら、他の陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤（例えば、ＳＤＳおよびデオキシコール酸）および両性イオン性界面活性剤（例えば、スルホベタイン３‐１０）のような他のトランスフェラーゼクエンチング剤も考えられる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８６】
他の非陽イオン性界面活性剤のトランスフェラーゼクエンチング剤が試薬組成物中に含まれることも考えられるが、該トランスフェラーゼクエンチング剤の要件は、ＤＴＡＢのように、試薬組成物中に存在する場合に、好ましくは試料中の内在性トランスフェラーゼ活性の少なくとも約２５％、より好ましくは少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、最も好ましくは１００％を阻害し、ここで試薬組成物は、ルシフェラーゼをトランスフェラーゼクエンチング剤と合わせた直後の試薬組成物の活性と比較して、少なくとも１時間、より好ましくは少なくとも２時間、試薬組成物を試料と組み合わせた後の発光により測定する場合、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、最も好ましくは約１００％の活性を維持することが可能である。トランスフェラーゼクエンチング剤として機能する可能性のある安定な非陽イオン性界面活性剤としては、陰イオン性界面活性剤（好ましくは、ＳＤＳおよびデオキシコール酸）、両性イオン性界面活性剤（好ましくは、スルホベタイン３‐１０）が挙げられる。特定のトランスフェラーゼクエンチング剤の濃度は、使用する阻害剤、および幾分は分析される試料に依存して様々となろう。当業者であれば、試薬組成物
中に含めるのに適したトランスフェラーゼクエンチング剤の濃度を決定する方法に精通しており、例えば、長期間にわたってルシフェリン‐ルシフェラーゼ由来のシグナルを検査して、様々な濃度のトランスフェラーゼクエンチング剤候補を有する試料を、既知のトランスフェラーゼクエンチング剤を含有しない試料と比較してもよい。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
トランスフェラーゼクエンチング剤はまた、単独で、あるいは界面活性剤と併用して使用され得るトランスフェラーゼ活性の非界面活性剤系阻害剤を包含する。有効な阻害剤の例は、ＮａＦである( ボスティック（Bostick ）他、1982) 。かかる組成物は、少なくとも０．５ｍＭ、好ましくは少なくとも１ｍＭ、より好ましくは少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００ｍＭまたはこの中での任意の増分の濃度でＮａＦを含み、２ｍＭが最も好ましい。ＡＴＰ生成酵素の他の阻害剤としては、他のキナーゼ阻害剤、例えば、バナジン酸塩、ＡＭＰ、ＤＡＰＰ( ボスティック（Bostick ）他、1982) 、ジクロロ酢酸( キークル（Kiechle ）他、1980) 、スタウロスポリン、ＵＣＮ−０１、およびカルフォスチンＣ( タマオキ（Tamaoki ）、199 1) が挙げられる。一般に、任意の
適切な非界面活性剤系阻害剤は、トランスフェラーゼクエンチング剤として、および本発明の有用性をなくすような不都合な影響をルシフェラーゼに及ぼさない限りにおいて任意の適切な濃度で使用してもよい。当業者であれば、阻害剤が新規であろうと、既知であろうと、かかる阻害剤の適切な濃度を決定する方法がわかるであろう。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８８】
本発明の方法において機能的なトランスフェラーゼクエンチング剤に関する最も好ましい濃度、さらに濃度範囲は、種々のクエンチング剤に関して多様であることが十分理解されよう。例えば、本発明の方法で機能的なＳＤＳ界面活性剤濃度は、約０．００２％である。例えば、２００１年３月９日に出願された「ＡＴＰの検出方法(METHOD FOR DETECTION OF
ATP) 」という表題のＵＳ２００３０１０４５０７Ａ１として公開された米国特許出願第０９／８１３，２７９号（これは、その全体が参照により本明細書に援用される）における実施例および３を参照されたい。本発明で使用する界面活性剤および／または非界面活性剤系阻害剤に関する機能的濃度範囲は、本明細書中に開示する方法を用いて当業者により容易に決定され得る。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９３】
（安定化剤）
非イオン性界面活性剤および低濃度の両性イオン性界面活性剤の作用に対して耐性である( シンプソン（Simpson ）およびハモンド（Hammond ）、1991) のに対して、天然のホタルルシフェラーゼは、陽イオン性界面活性剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ＣＴＡＢ（セチルトリメチルアンモニウム）、ＤＴＡＢ（臭化ドデシルトリメチルアンモニウム）、および塩化メチルベンゼトニウムにより不活性化される( シンプソン（Simpson ）およびハモンド（Hammond ）、1991) 。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
安定化剤は、ルシフェラーゼを分解から安定化する任意の化合物であり得る。適切な安定化剤としては、タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミンまたはゼラチン）または界面活性剤（好ましくは、非イオン性界面活性剤、最も好ましくはＴＨＥＳＩＴ）が挙げられる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１０】
細胞溶解産物は、もはや認識可能な細胞構築物の原型へと組織化されはしない細胞構成成分を含む。細胞溶解産物は、可溶性構成成分および不溶性構成成分を有してもよく、それらのいずれかを溶解産物を使用する前に除去してもよい。溶解産物は、超音波処理、ダウンス（dounce）型ホモジナイザー、乳鉢と乳棒、凍結融解を繰り返す処理、または細胞の物理的一体性を崩壊する任意の他の装置もしくはプロセスを用いた物理的破壊、あるいはＬｕｃＰｐｅ２ｍ１４６がその中で活性を保持する界面活性剤のような界面活性剤（例えば、両性イオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤、または陽イオン性界面活性剤ＤＴＡＢもしくはＣＴＡＢ）による溶解を含む任意の手段により調製され得る。好ましくは、細胞溶解産物は、細胞を収集した時点でのＡＴＰ濃度の完全性が保存されるような方法で調製される。試料中のＡＴＰを正確に検出するために、細胞内のＡＴＰを分解する酵素またはＡＴＰを生成する酵素を阻害することが好ましい。かかる阻害剤の非存在下では、ＡＴＰ濃度の決定が不正確となるリスクが生じる。ＤＴＡＢのような阻害剤は、トランスフェラーゼを不活性化するのに対して、ＮａＦのような他の分子は、ＡＴＰを生成する酵素の活性を不活性化する。ＮａＦが有効である細胞種（例えば、リンパ系細胞）にとって、ＮａＦはキナーゼ（複数可）を阻害するように作用する可能性が仮定されているが、十分に理解はされていない。