【手続補正書】
【提出日】平成20年5月22日(2008.5.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
金属および/または半導体原子を含有するコアを含むナノ粒子であって、コアが複数のリガンドと共有結合しており、リガンドがRNAリガンドを含むナノ粒子。
【請求項２】
RNAリガンドがsiRNAリガンドおよび/またはmiRNAリガンドおよび/またはshRNAリガンドを含む、請求項1に記載のナノ粒子。
【請求項３】
炭水化物基を含むリガンドをさらに含む、請求項1または2に記載のナノ粒子。
【請求項４】
リンカー基を介してRNAリガンドと共有結合している、請求項1〜3のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項５】
リンカー基がチオール基、エチレン基またはペプチド基である、請求項1〜4のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項６】
RNAリガンドの長さが17リボヌクレオチドと30リボヌクレオチドの間である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項７】
リガンドがsiRNAリガンドであり、2リボヌクレオチドの3'オーバーハングを含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項８】
RNA分子の第1センスまたはアンチセンス鎖が、その5'および/または3'末端を介してナノ粒子コアと共有結合している、請求項1〜7のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項９】
第1鎖と相補的であるRNA分子の第2鎖はRNA分子の第1鎖とアニーリングする、請求項8に記載のナノ粒子。
【請求項１０】
第2のRNA鎖が、その5'および/または3'末端を介してナノ粒子コアと共有結合している、請求項9に記載のナノ粒子。
【請求項１１】
RNA分子の第1および第2鎖はナノ粒子コアと個別に結合しているが、後に一緒になってアニーリングする、請求項9または10に記載のナノ粒子。
【請求項１２】
RNAリガンドがmiRNAリガンドであり、ヘアピンを含む、請求項1〜6または8〜11のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項１３】
RNAリガンドがshRNAリガンドである、請求項1〜6または8〜11のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項１４】
shRNAリガンドの長さが40塩基と100塩基の間である、請求項13に記載のナノ粒子。
【請求項１５】
shRNAリガンドがヘアピンで二本鎖のステムを有し、この二本鎖のステムの長さが19塩基対と30塩基対の間である、請求項13または14に記載のナノ粒子。
【請求項１６】
RNAリガンドがHer2遺伝子配列に基づくものである、請求項1〜15のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項１７】
標識を含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項１８】
標識が蛍光基、放射性核種、磁性標識、色素、NMR活性原子または表面プラズモン共鳴を用いて検出できる原子である、請求項17に記載のナノ粒子。
【請求項１９】
(a)蛍光基がフルオレセイン、ローダミンまたはテトラメチルローダミン、テキサスレッド、Cy3もしくはCy5であるか；または
(b)放射性核種が99mTc、32P、33P、57Co、59Fe3+、67Cu2+、67Ga3+、68Ge、82Sr、99Mo、103Pd、111In3+、125I、131I、137Cs、153Gd、153Sm、158Au、186Re、201Tl+、39Y3+、71Lu3+もしくは24Cr2+であるか；または
(c)磁性標識がMn+2、Gd+3、Eu+2、Cu+2、V+2、Co+2、Ni+2、Fe+2、Fe+3もしくはランタニド+3を含む常磁性基であるか；または
(d)NMR活性原子がMn+2、Gd+3、Eu+2、Cu+2、V+2、Co+2、Ni+2、Fe+2、Fe+3もしくはランタニド+3である、
請求項18に記載のナノ粒子。
【請求項２０】
水溶性である、請求項1〜19のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項２１】
(a)ナノ粒子のコアの平均直径が0.5と10nmの間であるか；または
(b)ナノ粒子のコアの平均直径が1と5nmの間であるか；または
(c)リガンドを含むナノ粒子の平均直径が10と30nmの間である、
請求項1〜20のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項２２】
コアが金属コアである、請求項1〜21のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項２３】
(a)金属コアがAu、AgもしくはCuを含むか；または
(b)金属コアがAu/Ag、Au/Cu、Au/Ag/Cu、Au/Pt、Au/Pd、Au/Ag/Cu/Pd、Au/Fe、Au/Cu、Au/Gd、Au/Fe/Cu、Au/Fe/GdもしくはAu/Fe/Cu/Gdから選択される合金である、
請求項22に記載のナノ粒子。
【請求項２４】
ナノ粒子のコアが磁性である、請求項22〜24のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項２５】
約5:0.1と約2:5の間の割合でコアに不動態化金属原子および磁性金属原子を含む、請求項24に記載のナノ粒子。
【請求項２６】
不動態化金属が金、白金、銀または銅であり、磁性金属が鉄またはコバルトである、請求項25に記載のナノ粒子。
【請求項２７】
コアがMnFe(スピネルフェライト)またはCoFe(コバルトフェライト)を含む、請求項24に記載のナノ粒子。
【請求項２８】
コアが半導体原子を含む、請求項1〜21のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項２９】
半導体原子が量子ドットとして作用しうる、請求項28に記載のナノ粒子。
【請求項３０】
半導体がセレン化カドミウム、硫化カドミウム、テルル化カドミウム化または硫化亜鉛である、請求項28または29に記載のナノ粒子。
【請求項３１】
複数の異なる種類のリガンドを含む、請求項1〜30のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３２】
複数の異なる種類のリガンドが異なる種類のRNAリガンドを含む、請求項31に記載のナノ粒子。
【請求項３３】
(a)リガンドがペプチド、タンパク質ドメイン、核酸セグメントもしくは炭水化物基をさらに含むか；または
(b)リガンドが多糖、オリゴ糖もしくは単糖基を含むか；または
(c)リガンドが糖ナノ複合体であるか；または
(d)糖ナノ複合体が糖脂質もしくは糖タンパク質を含むか；または
(e)リガンドがDNAもしくはRNAを含む、
請求項1〜32のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３４】
請求項1〜33のいずれか一項に記載の、1種または複数のナノ粒子の集団を含む組成物。
【請求項３５】
RNAをナノ粒子のコアとコンジュゲートすることによる、請求項1〜33のいずれか一項に記載のナノ粒子の調製方法であって、
RNAの第1鎖および/または第2鎖をリンカーを用いて誘導体化して、5'および/または3'末端においてリンカーで誘導体化された第1および/または第2のRNA鎖を作製するステップと、
ナノ粒子のコアを作製するために、リンカーで誘導体化されたRNAを反応物と反応させ、その結果、ナノ粒子の自己組織化の際に、ナノ粒子コアがリンカーを介してRNAに結合するステップとを含む方法。
【請求項３６】
(a)リンカーがチオールリンカー、エチレンリンカーもしくはペプチドリンカーであるか；または
(b)反応混合物が、ナノ粒子を製造するための誘導体化siRNAと、金属および/または半導体原子の塩と、還元剤とを含む、
請求項35に記載の方法。
【請求項３７】
請求項35または36に記載の方法によって得られるナノ粒子。
【請求項３８】
治療または診断に用いるための、請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３９】
遺伝子の発現のダウンレギュレーションによって寛解される状態または遺伝子の過剰発現と関連している状態であって、遺伝子がRNAリガンドによってターゲッティングされ、ダウンレギュレートされる状態を治療するための医薬の調製のための、請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子の使用。
【請求項４０】
癌、ウイルス感染または眼の黄斑変性症を治療するための医薬の調製のための、請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子の使用。
【請求項４１】
癌が乳癌であるか、またはウイルスがHIV、肝炎またはインフルエンザである、請求項39または40に記載の使用。
【請求項４２】
(a)RNAがHer2/Neu遺伝子配列に基づくものであるか；または
(b)ナノ粒子が、ナノ粒子のコアとコンジュゲートしているさらなるリガンドもしくはRNA分子と会合しているドメインを含み、さらなるリガンドもしくはドメインが標的遺伝子を発現する細胞と特異的に相互作用でき；および/または
(c)さらなるリガンドもしくはドメインが、特異的結合対の一員であり、標的細胞の表面または内側に存在するその結合パートナーと特異的に結合でき；および/または
(d)RNA分子が、RNA分子と相互作用できるmRNAを発現する細胞にナノ粒子をターゲッティングし；および/または
(e)RNA分子によってターゲッティングされる細胞を治療または死滅させるために、ナノ粒子が放射性核種、薬物もしくはその他の薬剤をさらに含み；および/または
(f)ナノ粒子が膜移行シグナルを含み、その結果、細胞膜を透過できる、
請求項39〜41のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４３】
標的遺伝子をダウンレギュレートするためのin vitro方法であって、該遺伝子を含む細胞を、請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子と接触させることを含む方法。
【請求項４４】
標的遺伝子の一時的なノックアウトをもたらす、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
同一のナノ粒子にコンジュゲートしているか、または少なくとも2種の異なる種類のナノ粒子の組成物中に存在している、少なくとも2種の異なるRNAリガンドを有するナノ粒子を用いて、経路中少なくとも2種の遺伝子の発現をダウンレギュレートする、請求項43または44に記載の方法。
【請求項４６】
経路が炎症経路、抗ウイルス経路、癌におけるシグナル伝達経路、転移経路または代謝経路である、請求項45に記載の方法。
【請求項４７】
RNAリガンドが遺伝子ファミリーの保存されたドメインに基づいており、遺伝子ファミリーの複数のメンバーの発現をダウンレギュレートする、請求項43〜46のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
RNAを検出またはイメージングするための、請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子の使用。
【請求項４９】
請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子を用いるmRNAを検出および/またはイメージングする方法であって、ナノ粒子上に存在するRNAリガンドが標的mRNAと相互作用し、ナノ粒子-RNA-mRNA複合体を検出できる条件下で、ナノ粒子を標的mRNAを含有するサンプル/細胞と接触させることを含む方法。
【請求項５０】
複合体を検出するステップがナノ粒子の固有の特性を用いるか、またはナノ粒子と関連している標識を検出することによる、請求項49に記載の方法。
【請求項５１】
(a)標識が磁性基、量子ドットもしくは放射性核種であり；および/または
(b)mRNAを含有するサンプルでin vitroで実施し；および/または
(c)細胞においてmRNAを検出するためにin vivoで実施する、
請求項49または50に記載の方法。
【請求項５２】
RNA分子を標的細胞に送達するための、請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子の使用。
【請求項５３】
疾患または障害によって影響を受ける標的細胞にRNA分子を送達するための医薬を調製するための、請求項52に記載の使用。
【請求項５４】
請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子の、機能ゲノミクスのツールとしての使用。
【請求項５５】
肺に送達するための医薬を調製するための請求項1〜34のいずれか一項に記載のナノ粒子を含むエアゾール組成物の使用であって、該ナノ粒子がイメージングのための標識を含むか、または哺乳類の肺に影響を及ぼす状態の治療のためのものである使用。