【手続補正書】
【提出日】平成31年2月15日(2019.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞において、アラニン−グリオキシレートアミノトランスフェラーゼ（ＡＧＸＴ）、シトクロムＰ４５０  ３Ａ４（ＣＹＰ３Ａ４）、オルニチントランスカルバミラーゼ（ＯＴＣ）、または肝細胞核因子４−アルファ（ＨＮＦ４ａ）から選択される遺伝子の発現をアップレギュレートするための医薬組成物であって、Ｃ／ＥＢＰα遺伝子の発現をアップレギュレートする単離された合成ｓａＲＮＡを含み、前記ｓａＲＮＡが配列番号７７の領域に対して少なくとも８０％相補的であり、前記ｓａＲＮＡが１４〜３０ヌクレオチドを有する、医薬組成物。
【請求項２】
前記細胞が過増殖細胞である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記細胞が癌細胞である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記細胞が肝細胞癌（ＨＣＣ）細胞である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記細胞が過増殖細胞でない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記細胞が一次ヒト肝細胞である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
治療を必要とする対象の肝線維症、肝不全、または非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）の治療用の医薬組成物であって、Ｃ／ＥＢＰα遺伝子の発現をアップレギュレートする単離された合成ｓａＲＮＡを含み、前記ｓａＲＮＡが配列番号７７の領域に対して少なくとも８０％相補的であり、前記ｓａＲＮＡが１４〜３０ヌクレオチドを有する、医薬組成物。
【請求項８】
前記肝不全が急性肝不全である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記対象の総ビリルビン（ＴＢＩＬ）レベル、循環アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベル、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）レベル、ガンマ−グルタミル−トランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）レベル、肝ヒドロキシプロリンレベル、プロトロンビン時間、アンモニア、または肝トリグリセリド（肝ＴＧ）レベルが減少される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記対象の血清中アルブミンレベル、総タンパク質レベルが増加される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記対象の線維組織または偽小葉の形成が低減される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
治療を必要とする対象のＩＩ型糖尿病またはインスリン抵抗性の治療用の医薬組成物であって、Ｃ／ＥＢＰα遺伝子の発現をアップレギュレートする単離された合成ｓａＲＮＡを含み、前記ｓａＲＮＡが配列番号７７の領域に対して少なくとも８０％相補的であり、前記ｓａＲＮＡが１４〜３０ヌクレオチドを有する、医薬組成物。
【請求項１３】
前記対象の肝コレステロールレベル、血清中ＡＳＴレベル、空腹時グルコースレベル、トリグリセリド対ＨＤＬ−ｃ比、または肝臓対生体比が減少される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記対象のインスリンレベルが増加される、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
リポソーム内にカプセル化された単離された合成ｓａＲＮＡを含む医薬組成物であって、前記ｓａＲＮＡがＣ／ＥＢＰα遺伝子の発現をアップレギュレートし、前記ｓａＲＮＡが配列番号７７の領域に対して少なくとも８０％相補的であり、前記ｓａＲＮＡが１４〜３０ヌクレオチドを有する、医薬組成物。
【請求項１６】
前記リポソームが、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グルセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グルセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、コレステリル−ヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）、および４−（２−アミノエチル）−モルホリノ−コレステロールヘミスクシネート（ＭＯＣＨＯＬ）を含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＰＯＰＣ：ＤＯＰＥ：ＣＨＥＭＳ：ＭＯＣＨＯＬのモル比が６：２４：２３：４７である、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記リポソームのサイズが５０ｎｍ〜１５０ｎｍである、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記リポソームの前記サイズが１００ｎｍ〜１２０ｎｍである、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記ｓａＲＮＡが二本鎖であり、かつアンチセンス鎖とセンス鎖とを含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記ｓａＲＮＡの前記アンチセンス鎖および／または前記センス鎖が３’オーバーハングを含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記ｓａＲＮＡが修飾されている、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記ｓａＲＮＡが少なくとも２つの修飾を含む、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記修飾が２’−Ｆ、２’−ＯＭｅ、反転デオキシリボース、またはヌクレオチド間のホスホロチオエート結合のいずれかを含みうる、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記修飾が前記センス鎖にある、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記修飾が前記センス鎖および前記アンチセンス鎖の両方にある、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記ｓａＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、配列番号１０９（ＣＥＢＰＡ５１）、９３（ＡＷ５１）、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、および４９から選択される配列を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
前記ｓａＲＮＡの前記センス鎖が、配列番号１１０（ＣＥＢＰＡ５１）、９４（ＡＷ５１）、１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、および４８から選択される配列を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記ｓａＲＮＡが配列番号１０９のアンチセンス鎖と配列番号１１０のセンス鎖とを有する、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記ｓａＲＮＡが２ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記ｓａＲＮＡが２．５ｍｇ／ｍＬの濃度を有する、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
７．２〜７．８のｐＨを有する、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
７．５のｐＨを有する、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
リン酸緩衝液を有する、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記リン酸緩衝液がリン酸水素二ナトリウム二水和物およびリン酸二水素カリウムを含む、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
凍結保護剤を含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記凍結保護剤がスクロースである、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
イオン強度調整剤を含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記イオン強度調整剤が塩化カリウムである、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
対象の癌の治療用の医薬組成物である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記対象が肝細胞癌（ＨＣＣ）を有する、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記ＨＣＣが進行ＨＣＣである、請求項４１に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記対象が二次肝腫瘍を有する、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
前記医薬組成物の用量が２０〜１６０ｍｇ／ｍ２である、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記医薬組成物が３週間にわたり週１回、１日目、８日目、およびに１５日目に静脈内注入により投与される、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
単離された合成ｓａＲＮＡをリポソーム内にカプセル化する方法であって、
前記ｓａＲＮＡを第１の緩衝液に溶解させてｓａＲＮＡ溶液を形成する工程と、
前記ｓａＲＮＡ溶液を０．２μｍフィルターに通して濾過する工程と、
前記濾過されたｓａＲＮＡ溶液と脂質溶液とを注入モジュール内で混合してリポソーム配合物を形成する工程と、
前記リポソーム配合物に第２の緩衝液を添加する工程と
を含み、
前記ｓａＲＮＡがＣ／ＥＢＰα遺伝子の発現をアップレギュレートし、前記ｓａＲＮＡが配列番号７７の領域に対して少なくとも８０％相補的であり、前記ｓａＲＮＡが１４〜３０ヌクレオチドを有する、方法。
【請求項４７】
前記第１の緩衝液が酢酸Ｎａ／スクロースである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ｓａＲＮＡ溶液のｐＨが４．０である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｓａＲＮＡ溶液中の前記ｓａＲＮＡの濃度が２．３８ｍｇ／ｍＬである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記脂質溶液が、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グルセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グルセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、コレステリル−ヘミスクシネート（ＣＨＥＭＳ）、および４−（２−アミノエチル）−モルホリノ−コレステロールヘミスクシネート（ＭＯＣＨＯＬ）を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
ＰＯＰＣ：ＤＯＰＥ：ＣＨＥＭＳ：ＭＯＣＨＯＬのモル比が６：２４：２３：４７である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記第２の緩衝液が９のｐＨを有する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５３】
前記第２の緩衝液がＮａＣｌ／Ｎａ２ＨＰＯ４である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ｓａＲＮＡが二本鎖であり、かつアンチセンス鎖とセンス鎖とを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５５】
前記ｓａＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、配列番号１０９（ＣＥＢＰＡ５１）、９３（ＡＷ５１）、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、および４９から選択される配列を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ｓａＲＮＡの前記センス鎖が、配列番号１１０（ＣＥＢＰＡ５１）、９４（ＡＷ５１）、１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、および４８から選択される配列を含む、請求項５４に記載の方法。