【手続補正書】
【提出日】令和1年5月9日(2019.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
懸濁物中の細胞の大スケール灌流培養をシミュレーションするための方法であって、
（ａ）前記大スケール灌流培養物の１０％またはそれ未満の培養容量を有する小スケール細胞培養物を提供するステップ；
（ｂ）シミュレーションするべき前記大スケール灌流培養物の１つまたは複数の培養条件を使用して前記細胞培養物中の細胞を培養するステップであって、前記小スケール細胞培養物が攪拌されるステップ；
（ｃ）前記小スケール細胞培養物の撹拌を停止するステップ；
（ｄ）前記小スケール細胞培養物中の前記細胞の少なくとも部分的な沈降の後に、前記小スケール細胞培養物の培養培地の一部を除去するステップ；および
（ｅ）新鮮な培養培地を前記小スケール細胞培養物に添加するステップ
を含む方法。
【請求項２】
前記小スケール細胞培養物において細胞を培養するために使用される、シミュレーションするべき前記大スケール灌流培養物の前記１つまたは複数の培養条件が、培養培地、温度、ｐＨ値、酸素濃度、細胞密度、前記培養培地中の栄養素の添加時間および目標濃度を含む細胞栄養素の添加、培養時間、比動力入力、ガス供給速度、灌流速度ならびに前記培養培地の浸透圧からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
懸濁物中の細胞の大スケール灌流培養のための培養条件および／または細胞クローンをスクリーニングするための方法であって、
（ａ）前記大スケール灌流培養物の１０％またはそれ未満の培養容量を有する小スケール細胞培養物を提供するステップ；
（ｂ）前記小スケール細胞培養物中の細胞を培養するステップであって、前記小スケール細胞培養物が攪拌されるステップ；
（ｃ）前記小スケール細胞培養物の撹拌を停止するステップ；
（ｄ）前記小スケール細胞培養物中の前記細胞の少なくとも部分的な沈降の後に、前記小スケール細胞培養物の培養培地の一部を除去するステップ；
（ｅ）新鮮な培養培地を前記小スケール細胞培養物に添加するステップ；および
（ｆ）前記大スケール灌流培養物の所望の特性および／または特徴を提供する培養条件および／または細胞クローンについてスクリーニングされたものを選択するステップ
を含み、個々の前記小スケール細胞培養物は、スクリーニングするべき前記培養条件および／または前記細胞クローンが異なる、方法。
【請求項４】
スクリーニングするべき前記培養条件が、培養培地、温度、ｐＨ値、酸素濃度、細胞密度、前記培養培地中の栄養素の添加時間および目標濃度を含む細胞栄養素の添加、培養時間、比動力入力、ガス供給速度、灌流速度ならびに前記培養培地の浸透圧からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記培養条件および／または細胞クローンが、高い細胞生存率、高いおよび／または安定な細胞密度、前記細胞培養物中の前記細胞によって産生される目的の生体分子の高いおよび／または安定した収率、ならびに前記細胞培養物中の前記細胞によって産生される目的の生体分子の所望の特性を提供する前記スクリーニングにおいて選択される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記大スケール灌流培養物が少なくとも１ｌの容量を有し、および／または前記小スケール細胞培養物が５０ｍｌもしくはそれ未満の容量を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｃ）における撹拌を停止した後、ステップ（ｄ）で前記培養培地の一部を除去する前に、前記細胞の沈降が少なくとも３５分間起きる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｃ）における撹拌を停止した後、ステップ（ｄ）で前記培養培地の一部を除去する前に、前記細胞の沈降が３０分またはそれ未満の間起き、ステップ（ｄ）で、前記細胞培養物中の前記細胞の一部もまた、細胞ブリーディングをもたらすために除去される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ｄ）で前記培養培地の１５％〜５０％の間および３０％が除去され；ならびに／または前記培養培地がステップ（ｄ）で前記細胞培養物の上部から除去される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｅ）で添加される新鮮な培養培地の量は、ステップ（ｄ）で除去される培養培地の量と、本質的に同一である、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記培養培地中の前記ｐＨ値および／または前記酸素濃度が前記細胞の培養中に制御され、ステップ（ｃ）における前記細胞培養物の撹拌を停止する前に、前記ｐＨ値および／または前記酸素濃度の制御が少なくとも５分間停止される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（ｂ）〜（ｅ）が１回または複数回、繰り返され、ステップ（ｅ）の後、次のサイクルのステップ（ｃ）で撹拌が停止する前に、少なくとも１時間、撹拌下で前記細胞が培養される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
培養するべき前記細胞が、懸濁状態で成長する真核細胞、好ましくは骨髄性白血病起源の不死化ヒト細胞のような不死化ヒト血液細胞、またはＣＨＯ細胞である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞が、目的の生体分子、好ましくは糖タンパク質を組換えにより産生する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
本明細書に記載された数値範囲は、範囲を定義する数字を含んでいる。本明細書で提供される表題は、全体として本明細書を参照して読むことができる本発明の様々な態様または実施形態の限定ではない。一実施形態によれば、方法の場合には、ある特定のステップを含むものとして、または組成物の場合には、ある特定の成分を含むものとして本明細書に記載される主題は、それぞれのステップまたは成分からなる主題のことを指す。本明細書に記載される具体的な態様および実施形態を選択し、組み合わせることが好ましく、具体的な実施形態のそれぞれの組合せから生じる具体的な主題もまた、本開示に属する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
懸濁物中の細胞を培養するための方法であって、
（ａ）細胞培養物を提供するステップ；
（ｂ）細胞培養物中の細胞を培養するステップであって、前記細胞培養物が攪拌されるステップ；
（ｃ）前記細胞培養物の撹拌を停止するステップ；
（ｄ）前記細胞培養物中の前記細胞の少なくとも部分的な沈降の後に、前記細胞培養物の培養培地の一部を除去するステップ；および
（ｅ）新鮮な培養培地を前記細胞培養物に添加するステップ
を含む方法。
（項目２）
懸濁物中の細胞の大スケール灌流培養をシミュレーションするための方法であって、
（ａ）前記大スケール灌流培養物の１０％またはそれ未満の培養容量を有する小スケール細胞培養物を提供するステップ；
（ｂ）シミュレーションするべき前記大スケール灌流培養物の１つまたは複数の培養条件を使用して前記細胞培養物中の細胞を培養するステップであって、前記小スケール細胞培養物が攪拌されるステップ；
（ｃ）前記小スケール細胞培養物の撹拌を停止するステップ；
（ｄ）前記小スケール細胞培養物中の前記細胞の少なくとも部分的な沈降の後に、前記小スケール細胞培養物の培養培地の一部を除去するステップ；および
（ｅ）新鮮な培養培地を前記小スケール細胞培養物に添加するステップ
を含む方法。
（項目３）
前記小スケール細胞培養物において細胞を培養するために使用される、シミュレーションするべき前記大スケール灌流培養物の前記１つまたは複数の培養条件が、培養培地、温度、ｐＨ値、酸素濃度、細胞密度、前記培養培地中の栄養素の添加時間および目標濃度を含む細胞栄養素の添加、培養時間、比動力入力、ガス供給速度、灌流速度ならびに前記培養培地の浸透圧からなる群から選択される、項目２に記載の方法。
（項目４）
懸濁物中の細胞の大スケール灌流培養のための培養条件および／または細胞クローンをスクリーニングするための方法であって、
（ａ）前記大スケール灌流培養物の１０％またはそれ未満の培養容量を有する小スケール細胞培養物を提供するステップ；
（ｂ）前記小スケール細胞培養物中の細胞を培養するステップであって、前記小スケール細胞培養物が攪拌されるステップ；
（ｃ）前記小スケール細胞培養物の撹拌を停止するステップ；
（ｄ）前記小スケール細胞培養物中の前記細胞の少なくとも部分的な沈降の後に、前記小スケール細胞培養物の培養培地の一部を除去するステップ；および
（ｅ）新鮮な培養培地を前記小スケール細胞培養物に添加するステップ
を含み、個々の前記小スケール細胞培養物は、スクリーニングするべき前記培養条件および／または前記細胞クローンが異なる、方法。
（項目５）
スクリーニングするべき前記培養条件が、培養培地、温度、ｐＨ値、酸素濃度、細胞密度、前記培養培地中の栄養素の添加時間および目標濃度を含む細胞栄養素の添加、培養時間、比動力入力、ガス供給速度、灌流速度ならびに前記培養培地の浸透圧からなる群から選択される、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記培養条件および／または細胞クローンが、高い細胞生存率、高いおよび／または安定な細胞密度、前記細胞培養物中の前記細胞によって産生される目的の生体分子の高いおよび／または安定した収率、ならびに前記細胞培養物中の前記細胞によって産生される目的の生体分子の所望の特性を提供する前記スクリーニングにおいて選択される、項目４または５に記載の方法。
（項目７）
前記大スケール灌流培養物が少なくとも１ｌの容量を有し、および／または前記小スケール細胞培養物が５０ｍｌもしくはそれ未満の容量を有する、項目２から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
ステップ（ｃ）における撹拌を停止した後、ステップ（ｄ）で前記培養培地の一部を除去する前に、前記細胞の沈降が少なくとも３５分間起きる、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
ステップ（ｃ）における撹拌を停止した後、ステップ（ｄ）で前記培養培地の一部を除去する前に、前記細胞の沈降が３０分またはそれ未満の間起き、ステップ（ｄ）で、前記細胞培養物中の前記細胞の一部もまた、細胞ブリーディングをもたらすために除去される、項目１から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
ステップ（ｄ）で前記培養培地の１５％〜５０％の間および３０％が除去され；ならびに／または前記培養培地がステップ（ｄ）で前記細胞培養物の上部から除去される、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
ステップ（ｅ）で添加される新鮮な培養培地の量は、ステップ（ｄ）で除去される培養培地の量と、本質的に同一である、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記培養培地中の前記ｐＨ値および／または前記酸素濃度が前記細胞の培養中に制御され、ステップ（ｃ）における前記細胞培養物の撹拌を停止する前に、前記ｐＨ値および／または前記酸素濃度の制御が少なくとも５分間停止される、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
ステップ（ｂ）〜（ｅ）が１回または複数回、繰り返され、ステップ（ｅ）の後、次のサイクルのステップ（ｃ）で撹拌が停止する前に、少なくとも１時間、撹拌下で前記細胞が培養される、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
培養するべき前記細胞が、懸濁状態で成長する真核細胞、好ましくは骨髄性白血病起源の不死化ヒト細胞のような不死化ヒト血液細胞、またはＣＨＯ細胞である、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記細胞が、目的の生体分子、好ましくは糖タンパク質を組換えにより産生する、項目１から１４のいずれか一項に記載の方法。