【手続補正書】
【提出日】令和1年11月8日(2019.11.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物
【化１】
2019502650.tif 000001
［式中、
Ａは、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体であり；
Ｘは、Ｎであり；
Ｙは、Ｎ又はＣＲ１であり、Ｒ１は、Ｈ又はＣ１〜Ｃ１０アルキルであり；
Ｌは、二価のリンカーであり；
Ｄは、細胞傷害性薬物基であり；
ａは、２〜１０からなる群から選択される整数である］。
【請求項２】
抗ＥｒｂＢ２抗体が、抗ヒトＥｒｂＢ２抗体であり、好ましくは、抗ヒトＥｒｂＢ２抗体の重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３が、それぞれ、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３である、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
【請求項３】
抗ＥｒｂＢ２抗体が、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体、好ましくは、トラスツズマブである、請求項２に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
【請求項４】
ＹがＣＲ１である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
【請求項５】
Ｒ１がＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
【請求項６】
ａが２、３又は４である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
【請求項７】
Ｌが、
【化２】
2019502650.tif 000002
2019502650.tif 000003
2019502650.tif 000004
2019502650.tif 000005
2019502650.tif 000006
2019502650.tif 000007
［式中、ｍ及びｎはそれぞれ、各出現につき１〜１０からなる群から選択される整数であり、１、２、３、４、５又は６であることが好ましい］
からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
【請求項８】
細胞傷害性薬物基が、式（Ｄ１）若しくは（Ｄ２）の化合物又はその立体異性体に由来する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物
【化３】
2019502650.tif 000008
［式中、
Ｒ２は、−ＣＨ２Ｎ３、−ＣＯＮＨＳＯ２（シクロプロピル）、チアゾール−２−イル、−ＣＨ３及び−ＣＯＯＨからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ及び−ＯＨからなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、−ＮＨ２、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ６（式中、Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル又はＣ６〜Ｃ１４アリールであり、アルキル、シクロアルキル及びアリールは、Ｆ等のハロゲンから選択される１つ又は複数（例えば、１、２、３、４又は５つ）の置換基で任意選択でそれぞれ置換される）からなる群から選択される］；
【化４】
2019502650.tif 000009
［式中、Ｒ５は、−Ｃ（ＣＨ３）Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＳＨ及び−Ｃ（ＣＨ３）Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＳＨからなる群から選択される］。
【請求項９】
抗体−薬物コンジュゲートが、Ｉ−１、Ｉ−２及びＩ−３
【化５】
2019502650.tif 000010
［式中、Ａは、トラスツズマブである］
からなる群から選択される、請求項８に記載の抗体−薬物コンジュゲート、又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物。
【請求項１０】
（１）．式（Ｉ−Ａ）の化合物
【化６】
2019502650.tif 000011
［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、式（Ｉ）について、請求項１〜９のいずれか一項で定義された通りである］
を調製するステップと；
（２）．ステップ（１）から得られた式（Ｉ−Ａ）の化合物を活性化することにより式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物
【化７】
2019502650.tif 000012
［式中、Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＮＲＲ’、ＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’、ＲＳＯ２−Ｏ−及び
【化８】
2019502650.tif 000013
からなる群から選択され、各出現につきＲ及びＲ’はそれぞれ、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、５〜１０個の環員を有するヘテロシクリル、又はフェノキシであり、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びフェノキシはそれぞれ、非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜８個の環員を有するヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の環員を有するヘテロアリールからなる群から選択される１つ又は複数の置換基で独立に置換され；Ｇは、−ＯＮＲＲ’及び−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’（式中、各出現につきＲ及びＲはそれぞれ、独立に、フェノキシである）からなる群から選択されることが好ましい］
を得るステップと；
（３）ステップ（２）から得られた式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物を、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体とコンジュゲートすることにより、異なるａ値を有する様々な抗体−薬物コンジュゲートの混合物を得るステップと；
（４）イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー及び親和性クロマトグラフィーからなる群から選択される１種又は複数のクロマトグラフ法によって、ステップ（３）から得られた混合物を精製することにより、抗体−薬物コンジュゲートを得るステップと
を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲートの調製方法。
【請求項１１】
ステップ（２）における式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物が、式（Ｉ−Ａ）の化合物を、ペンタフルオロフェノールと反応させることにより、形成される式（Ｉ−Ｂ）の化合物：
【化９】
2019502650.tif 000014
［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、式（Ｉ）について請求項１〜９のいずれか一項で定義された通りであり、反応は、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及び／又はジクロロメタンを好ましくは用いて行われる］
である、請求項１０に記載の調製方法。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物、及び薬学的に許容される担体を含み、化学療法薬及び／又は抗体等の１種若しくは複数の他の抗がん剤を、任意選択でさらに含む、医薬組成物。
【請求項１３】
固形製剤、半固形製剤、液体製剤又は気体製剤であり、例えば、凍結乾燥粉末等の形態である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物を含む、医薬品製剤。
【請求項１４】
がんを予防又は治療するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物、請求項１２に記載の医薬組成物、又は請求項１３に記載の医薬品製剤。
【請求項１５】
がんが、乳がん、胃がん、卵巣がん、非小細胞肺がん、肝がん、子宮内膜がん、唾液腺がん、腎がん、結腸がん、甲状腺がん、膵がん又は膀胱がん、特に、乳がん、例えば、ＥｒｂＢ２−過剰発現乳がん等からなる群から選択される、がんを予防又は治療するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート又は薬学的に許容されるその塩、その立体異性体若しくは代謝産物、又は前述のものの溶媒和物、請求項１２に記載の医薬組成物、又は請求項１３に記載の医薬品製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】抗ＥｒｂＢ２抗体−薬物コンジュゲート及びその組成物、そのための調製方法、並びにその使用
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
第２の態様では、本発明は、
（１）．式（Ｉ−Ａ）の化合物
【化２】
2019502650.tif 000015
［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、上記の式（Ｉ）に定義される通りである］
を調製するステップと；
（２）．ステップ（１）から得られた式（Ｉ−Ａ）の化合物を活性化することにより、式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物
【化３】
2019502650.tif 000016
［式中、Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＮＲＲ’、ＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’、ＲＳＯ２−Ｏ−、及び
【化４】
2019502650.tif 000017
からなる群から選択され、各出現につきＲ及びＲ’はそれぞれ、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、５〜１０個の環員を有するヘテロシクリル、又はフェノキシからなる群から選択され、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びフェノキシはそれぞれ、非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜８個の環員を有するヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール及び５〜１０個の環員を有するヘテロアリールからなる群から選択される１つ又は複数の置換基で独立に置換される］
を得るステップと；
（３）．ステップ（２）から得られた式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物を、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体とコンジュゲートすることにより、異なる値を有する抗体−薬物コンジュゲートの混合物を得るステップと；
（４）．イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー及び親和性クロマトグラフィーからなる群から選択される１種又は複数のクロマトグラフ法を用いて、ステップ（３）から得られた混合物を精製することにより、抗体−薬物コンジュゲートを得るステップと
を含む、第１の態様の抗体−薬物コンジュゲートの調製方法を提供する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
これらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、未変化抗体は、異なる「クラス」に割り当てることができる。主な５つのクラスは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭであり、これらのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。抗体の異なるクラスの重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμとして公知である。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置は、当技術分野で周知である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
抗体フラグメントは、様々な方法により、例えば、未変化抗体のタンパク質消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、１９９２年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２４巻：１０７〜１１７頁；及びＢｒｅｎｎａｎら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻：８１頁を参照のこと）により、又は上記で論じられた組換え宿主細胞及び抗体ファージライブラリーにより、直接、生成することができる。或いは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から直接回収し、化学的に結合させて、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）、１９９２年２月、１０巻（２号）：１６３〜１６７頁）。さらに、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養から直接単離することができる。抗体フラグメントの生成のための他の技法は、当業者には明らかである。いくつかの実施形態では、本発明において用いられる抗体フラグメントは、単鎖のＦｖ断片（ｓｃＦｖ）である（例えば、国際公開第９３／１６１８５号；米国特許第５，５７１，８９４号；及び米国特許第５，５８７，４５８号を参照のこと）。いくつかの実施形態では、抗体フラグメントは、直鎖の抗体フラグメントであり（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号を参照のこと）、これは、単一特異性でも二重特異性でもよい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
二重特異性抗体を、抗体フラグメントから生成するための技法は、化学結合を用いたもの等が記載されており、未変化抗体は、タンパク分解的に切断されて、Ｆ（ａｂ’）２断片が生成される（Ｂｒｅｎｎａｎら、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁）。Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から回収され、化学的に結合されて、二重特異性抗体を形成する（Ｓｈａｌａｂｙら、１９９２年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５巻：２１７〜２２５頁を参照のこと）。「二重特異性抗体」技術では、二重特異性抗体断片を作製するための代替方法を提供する（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁を参照のこと）。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
式（Ｉ）の最も好ましい抗体−薬物コンジュゲートは、Ｉ−１、Ｉ−２及びＩ−３：
【化１１】
2019502650.tif 000018
［式中、「Ａ」は、トラスツズマブである］
から選択される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
第２の態様では、本発明は、
（１）式（Ｉ−Ａ）の化合物：
【化１２】
2019502650.tif 000019
［式中、Ｄ、Ｌ、Ｘ及びＹは、上記の式（Ｉ）において定義される通りである］
を調製するステップと；
（２）ステップ（１）から得られた式（Ｉ−Ａ）の化合物を活性化することにより式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物
【化１３】
2019502650.tif 000020
［式中、
Ｇは、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｎ３、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＮＲＲ’、ＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＰ（Ｏ）ＲＲ’、ＲＳＯ２−Ｏ−及び
【化１４】
2019502650.tif 000021
からなる群から選択され、各出現につきＲ及びＲ’はそれぞれ、独立に、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ６〜Ｃ１４アリール、５〜１０個の環員を有するヘテロシクリル、又はフェノキシであり、アルキル、アリール、ヘテロシクリル及びフェノキシはそれぞれ、非置換であるか又はハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、５〜８個の環員を有するヘテロシクリル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール又は５〜１０個の環員を有するヘテロアリールからなる群から選択される１つ又は複数の置換基で独立に置換される］
を得るステップと；
（３）ステップ（２）から得られた式（Ｉ−Ａ−Ｇ）の化合物を、抗ＥｒｂＢ２抗体又はその活性がある断片若しくは変異体とコンジュゲートすることにより、異なる値を有する様々な抗体−薬物コンジュゲートの混合物を得るステップと；
（４）イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー及び親和性クロマトグラフィーからなる群から選択される１種又は複数のクロマトグラフ法によって、ステップ（３）から得られた混合物を精製することにより、抗体−薬物コンジュゲートを得るステップと
を含む、第１の態様の抗体−薬物コンジュゲートの調製方法を提供する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
実施例１．抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の調製
【化１６】
2019502650.tif 000022
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
ステップｄ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−１の調製
【化２１】
2019502650.tif 000023
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２７】
図８のペプチドマッピングでは、上部の曲線は、２１４ｎｍの抗体のペプチドマッピングであり、下部の曲線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２のペプチドマッピングである。比較によれば、抗体−薬物コンジュゲートＩ−２は、保持時間３３．０分で一つだけ追加のピークを有することが示される。図７中の軽鎖及び重鎖のクロマトグラムの減少と共に、細胞傷害性薬物（Ｄ）は、この例で得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−２における軽鎖の同じペプチドセグメントのリジン残基にすべてコンジュゲートされ、部位特異的なコンジュゲーションによって、生成物の優れた均質性、制御性、及び反復率が保証される。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３７】
未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３は、Ｉ−３−１（図９中のＤＡＲ１、ｎ＝１）、Ｉ−３−２（図９中のＤＡＲ２、ｎ＝２）、及びＩ−３−３（図９中のＤＡＲ３、ｎ＝３）を含む混合物であることを、図９から示すことができる。
ステップｄ．未精製の抗体−薬物コンジュゲートＩ−３の精製
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４２】
図１２のペプチドマッピングでは、上部の曲線は、２１４ｎｍの抗体のペプチドマッピングであり、下部の曲線は、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３のペプチドマッピングである。比較によれば、抗体−薬物コンジュゲートＩ−３は、保持時間３９．０分で唯一の追加のピークを有することが示される。図１１中の軽鎖及び重鎖のクロマトグラムの減少と共に、細胞傷害性薬物（Ｄ）は、この例で得られた抗体−薬物コンジュゲートＩ−３における軽鎖の同じペプチドセグメントのリジン残基にすべてコンジュゲートされ、部位特異的なコンジュゲーションによって、生成物の優れた均質性、制御性、及び反復率が保証される。