【手続補正書】
【提出日】平成18年11月28日(2006.11.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドアナログ化合物と該化合物の標的細胞への取り込みを高めるのに効果的なアルギニンリッチペプチドとの結合体を形成することによって該化合物の細胞取り込みを高めるための方法であって、該化合物は、該化合物が結合することが意図される標的核酸領域において、４個以上連続したシトシン塩基と相補的である塩基の列を含む方法において、改善が、該塩基の列における連続したグアニン塩基の数を３個以下に制限するために、前記化合物における該塩基の列において少なくとも１個のグアニン塩基をイノシン塩基に置換することを含む、改善。
【請求項２】
前記イノシン置換が、前記列における連続したグアニン塩基の数を２個以下に制限するのに効果的である、請求項１に記載の改善。
【請求項３】
少なくとも２個のイノシン塩基が前記塩基の列において置換される、請求項１に記載の改善。
【請求項４】
前記置換が、陽イオン性イオン交換樹脂への結合体の結合および該陽イオン性イオン交換樹脂からの結合体の遊離を含む精製工程中の前記結合体の水溶性を、該イノシン置換がない以外は同じ結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項１に記載の改善。
【請求項５】
前記標的核酸領域が、開始コドンをｍＲＮＡに含み、そして前記置換は、該ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の翻訳を妨害する前記結合体の能力を、前記イノシン置換がない以外は同じ結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項１に記載の改善。
【請求項６】
前記標的核酸領域が、プレプロセシングされたｍＲＮＡ中にドナースプライス部位またはアクセプタースプライス部位を含み、そして前記置換は、該標的領域でｍＲＮＡスプライシングをマスキングする前記結合体の能力を、前記イノシン置換がない以外は同じ結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項１に記載の改善。
【請求項７】
前記標的核酸領域が、ウイルス複製に関与する、ウイルスにコードされるシス作用性エレメントを含み、そして前記置換は、ウイルス複製をブロックする前記結合体の能力を、前記イノシン置換がない以外は同じ結合体と比較して高めるのに効果的である、請求項１に記載の改善。
【請求項８】
請求項１に記載の改善であって、前記アルギニンリッチペプチドが、少なくとも６個のＸサブユニット、少なくとも２個のＹサブユニットおよび多くても３個のＺサブユニットを含め、Ｘサブユニット、Ｙサブユニットおよび必要に応じたＺサブユニットから選択される８〜１６個のサブユニットを含み、ここで、該サブユニットの５０％より多くがＸサブユニットであり、そしてここで
（ａ）各々のＸサブユニットが、アルギニンまたはアルギニンアナログを独立して表し、該アナログは、構造Ｒ１Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｒ２の側鎖を含む陽イオン性αアミノ酸であり、ここで、Ｒ１は、ＨまたはＲであり；Ｒ２はＲ、ＮＨ２、ＮＨＲまたはＮＲ２であり、ここで、Ｒは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ；Ｒ１とＲ２とは、一緒に環を形成し得；そして、側鎖は、Ｒ１またはＲ２により該アミノ酸に連結され；
（ｂ）各々のＹサブユニットが、中性アミノ酸−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＲ）ｎ−ＮＨ−を独立して表し、ここで（ｉ）ｎが２〜７であり、そして各々のＲが独立してＨまたはメチルであるか、または（ｉｉ）ｎは１であり、そして、Ｒは、置換されたかまたは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択される中性の側鎖であり、ここで、該中性の側鎖は、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、４個全ての炭素原子について多くとも１個のヘテロ原子を含み；そして
（ｃ）各々のＺサブユニットが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンおよびトレオニンから選択されるアミノ酸を独立して表す、改善。
【請求項９】
前記オリゴヌクレオチドアナログ化合物が、１個のサブユニットのモルホリノ窒素と隣接したサブユニットのモルホリノ３位の環外炭素との間のリン含有結合により連結されるモルホリノサブユニットから構成されるモルホリノオリゴマーである、請求項８に記載の改善。
【請求項１０】
前記モルホリノサブユニットが、構造：
【化１】
2008509701.tif 000001
に従う、荷電していないホスホロジアミデート結合で結合され、ここで、Ｙ１＝Ｏであり、Ｚ＝Ｏであり、Ｐｊは、塩基特異的水素結合によってポリヌクレオチド中の塩基と結合するのに効果的なプリン塩基対合部分またはピリミジン塩基対合部分であり、そして、Ｘは、アルキル、アルコキシ、チオアルコキシまたはアルキルアミノである、請求項９に記載の改善。
【請求項１１】
治療的なオリゴマー−ペプチド結合体であって、
（ａ）化合物が結合することが意図される標的核酸領域において、４個以上連続したシトシン塩基と相補的である塩基の列を含む塩基配列を有する、実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドアナログ化合物、および
（ｂ）標的細胞への該化合物の取り込みを高めるのに効果的な、該化合物に結合されたアルギニンリッチペプチドを含み、
ここで該化合物における該塩基の列は、該塩基の列における連続したグアニン塩基の数を３個以下に制限するように該列中に配置される少なくとも１個のイノシン塩基を含む、治療的なオリゴマー−ペプチド結合体。
【請求項１２】
前記化合物中の１個以上のイノシン塩基の位置が、前記列中の連続したグアニン塩基の数を２個以下に制限するようなものである、請求項１１に記載の結合体。
【請求項１３】
前記化合物が、前記塩基の列中に少なくとも２個のイノシン塩基を含む、請求項１２に記載の結合体。
【請求項１４】
請求項１１に記載の結合体であって、前記アルギニンリッチペプチドが、少なくとも６個のＸサブユニット、少なくとも２個のＹサブユニットおよび多くても３個のＺサブユニットを含め、Ｘサブユニット、Ｙサブユニットおよび必要に応じたＺサブユニットから選択される８〜１６個のサブユニットを含み、ここで、該サブユニットの５０％より多くがＸサブユニットであり、そしてここで
（ａ）各々のＸサブユニットが、アルギニンまたはアルギニンアナログを独立して表し、該アナログは、構造Ｒ１Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｒ２の側鎖を含む陽イオン性αアミノ酸であり、ここで、Ｒ１は、ＨまたはＲであり；Ｒ２はＲ、ＮＨ２、ＮＨＲまたはＮＲ２であり、ここで、Ｒは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ；Ｒ１とＲ２とは、一緒に環を形成し得；そして、側鎖は、Ｒ１またはＲ２により該アミノ酸に連結され；
（ｂ）各々のＹサブユニットが、中性アミノ酸−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＲ）ｎ−ＮＨ−を独立して表し、ここで（ｉ）ｎが２〜７であり、そして各々のＲが独立してＨまたはメチルであるか、または（ｉｉ）ｎは１であり、そして、Ｒは、置換されたかまたは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択される中性の側鎖であり、ここで、該中性の側鎖は、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、４個全ての炭素原子について多くとも１個のヘテロ原子を含み；そして
（ｃ）各々のＺサブユニットが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンおよびトレオニンから選択されるアミノ酸を独立して表す、結合体。
【請求項１５】
前記オリゴヌクレオチドアナログ化合物が、１個のサブユニットのモルホリノ窒素と隣接したサブユニットのモルホリノ３位の環外炭素との間のリン含有結合により連結されるモルホリノサブユニットから構成されるモルホリノオリゴマーである、請求項１４に記載の結合体。
【請求項１６】
前記モルホリノサブユニットが、構造：
【化２】
2008509701.tif 000002
に従う、荷電していないホスホロジアミデート結合で結合され、ここで、Ｙ１＝Ｏであり、Ｚ＝Ｏであり、Ｐｊは、塩基特異的水素結合によってポリヌクレオチド中の塩基と結合するのに効果的なプリン塩基対合部分またはピリミジン塩基対合部分であり、そして、Ｘは、アルキル、アルコキシ、チオアルコキシまたはアルキルアミノである、請求項１５に記載の結合体。
【請求項１７】
陽イオン性イオン交換樹脂への結合体の結合および陽イオン性イオン交換樹脂からの結合体の遊離を含む精製工程中に、前記１個以上のイノシン塩基を含まないこと以外は同じ結合体よりも大きな水溶性を有する、請求項１１に記載の結合体。
【請求項１８】
プレプロセシングされたｍＲＮＡの前記標的核酸領域中の選択されたドナースプライス部位またはアクセプタースプライス部位での、該プレプロセシングされたｍＲＮＡのプロセシングを妨害するのに使用するための、請求項１１に記載の結合体であって、このようなｍＲＮＡのスプライス部位プロセシングを妨害する際に、前記１個以上のイノシン塩基がないこと以外は同じ結合体よりも活性である、結合体。
【請求項１９】
標的核酸領域がウイルス複製にとって必須のシス作用性エレメントを含むウイルスに感染した細胞におけるウイルス複製の妨害において使用するための、請求項１１に記載の結合体であって、このようなウイルス複製を妨害する際に、前記１個以上のイノシン塩基がないこと以外は同じ結合体よりも活性である、結合体。
【請求項２０】
標的核酸領域が開始コドンを含むｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の翻訳の妨害において使用するための、請求項１１に記載の結合体であって、このような翻訳を妨害する際に、前記１個以上のイノシン塩基がないこと以外は同じ結合体よりも活性である、結合体。
【請求項２１】
前記化合物が、（ｉ）ヒトのｃ−ｍｙｃ  ｍＲＮＡのＡＵＧ開始部位を含む領域を標的としており、そして該化合物が、（ｉｉ）が配列番号２〜１０からなる群から選択される標的化配列を含む、請求項２０に記載の結合体。
【請求項２２】
前記ペプチドが、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８からなる群から選択される配列を含む、請求項２１に記載の結合体。
【請求項２３】
前記ペプチドが、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８からなる群から選択される配列を含む、請求項１１に記載の結合体。
【請求項２４】
ｃ−ｍｙｃ発現の阻害に応答性の病理学的状態を有する被験体を処置するための医薬の製造のためのオリゴマー−ペプチド結合体の使用であって、
該オリゴマー−ペプチド結合体は、
（ａ）ｍＲＮＡ開始コドンを含む標的ｍＲＮＡ領域において、４個以上連続したシトシン塩基と相補的である塩基の列を含む塩基配列を有する実質的に荷電していないオリゴヌクレオチドアナログ化合物、および
（ｂ）該標的細胞への該化合物の取り込みを高めるのに効果的な、該化合物に結合されたアルギニンリッチペプチド
から構成され、ここで
（ｉ）該化合物の塩基配列は、該塩基の列において、該塩基の列における連続したグアニン塩基の数を３個以下に制限するように該列中に配置される少なくとも１個のイノシン塩基を含み、そして
（ｉｉ）該結合体は、このような翻訳を妨害する際に、前記１個以上のイノシン塩基がないこと以外は同じ結合体よりも活性である、使用。
【請求項２５】
請求項２４に記載の使用であって、前記アルギニンリッチペプチドが、少なくとも６個のＸサブユニット、少なくとも２個のＹサブユニットおよび多くても３個のＺサブユニットを含め、Ｘサブユニット、Ｙサブユニットおよび必要に応じたＺサブユニットから選択される８〜１６個のサブユニットを含み、ここで、該サブユニットの５０％より多くがＸサブユニットであり、そしてここで
（ａ）各々のＸサブユニットが、アルギニンまたはアルギニンアナログを独立して表し、該アナログは、構造Ｒ１Ｎ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｒ２の側鎖を含む陽イオン性αアミノ酸であり、ここで、Ｒ１は、ＨまたはＲであり；Ｒ２はＲ、ＮＨ２、ＮＨＲまたはＮＲ２であり、ここで、Ｒは低級アルキルまたは低級アルケニルであって、酸素または窒素をさらに含むことができ；Ｒ１とＲ２とは、一緒に環を形成し得；そして、側鎖は、Ｒ１またはＲ２により該アミノ酸に連結され；
（ｂ）各々のＹサブユニットが、中性アミノ酸−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＲ）ｎ−ＮＨ−を独立して表し、ここで（ｉ）ｎが２〜７であり、そして各々のＲが独立してＨまたはメチルであるか、または（ｉｉ）ｎは１であり、そして、Ｒは、置換されたかまたは非置換の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから選択される中性の側鎖であり、ここで、該中性の側鎖は、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択される場合、４個全ての炭素原子について多くとも１個のヘテロ原子を含み；そして
（ｃ）各々のＺサブユニットが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンおよびトレオニンから選択されるアミノ酸を独立して表す、使用。
【請求項２６】
前記オリゴヌクレオチドアナログ化合物が、１個のサブユニットのモルホリノ窒素と隣接したサブユニットのモルホリノ３位の環外炭素との間のリン含有結合により連結されるモルホリノサブユニットから構成されるモルホリノオリゴマーである、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記モルホリノサブユニットが、構造：
【化３】
2008509701.tif 000003
に従う、荷電していないホスホロジアミデート結合で結合され、ここで、Ｙ１＝Ｏであり、Ｚ＝Ｏであり、Ｐｊは、塩基特異的水素結合によってポリヌクレオチド中の塩基と結合するのに効果的なプリン塩基対合部分またはピリミジン塩基対合部分であり、そして、Ｘは、アルキル、アルコキシ、チオアルコキシまたはアルキルアミノである、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記化合物が、配列番号２〜配列番号１０からなる群から選択される標的化配列を含む、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記ペプチドが、配列番号１６、配列番号１７および配列番号１８からなる群から選択される配列を含む、請求項２７に記載の使用。
【請求項３０】
前記化合物が、配列番号２〜配列番号１０からなる群から選択される標的化配列を含む、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
請求項２４に記載の使用であって、前記医薬が、膀胱癌を処置する際に使用するためのものであり、前記結合体を含む医薬が経尿道送達により投与されるのに適切であり、そして、シスプラチン抗癌化合物とともに使用するのに適切である、使用。
【請求項３２】
請求項２４に記載の使用であって、前記医薬が、血管形成術手順後の血管損傷部位での冠状動脈再狭窄の危険度を減らす際に使用するためのものであり、前記結合体を含む医薬が、脈管内送達により投与されるのに適切である、使用。
【請求項３３】
前記結合体を含む医薬が、ステントからの放出により投与されるのに適切であり、該ステントは、血管損傷部位に配置されている、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
請求項２４に記載の使用であって、前記医薬が、冠状動脈バイパス形成手術の間に配置される伏在静脈を保護する際に使用するためのものであり、前記結合体を含む医薬が、該静脈を外科的に配置する前に該静脈を該結合体にさらすことにより投与されるのに適切である、使用。
【請求項３５】
請求項２４に記載の使用であって、前記医薬が、多嚢胞腎病を処置するためのものであり、前記結合体を含む医薬が、経口投与または非経口投与に適切である、使用。