【手続補正書】
【提出日】令和1年7月12日(2019.7.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸を分離細胞内に導入する方法であって、前記方法が、
成長因子受容体の少なくとも１つの阻害剤の存在下で、ドナー分子を含む、少なくとも１つのアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）を前記細胞に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記成長因子阻害剤が、血小板由来成長因子受容体、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｍｅｔ／肝細胞成長因子受容体（ＨＧＦＲ）、リポアラビノマンナン受容体（ＬａｍＲ）、αＶβ５インテグリン受容体、及び／または細胞間接着分子１受容体（Ｉｃａｍ−１）を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ドナー分子が前記細胞で発現する導入遺伝子を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記導入遺伝子が前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記導入遺伝子がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも１つのヌクレアーゼを前記細胞内に導入することを更に含み、前記導入遺伝子が、前記ヌクレアーゼによる１つ以上の遺伝子の開裂の後、前記細胞の１つ以上の遺伝子内に組み込まれ、前記方法が前記細胞の１つ以上の追加の遺伝子を不活性化する第２のヌクレアーゼを導入することを更に含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記ヌクレアーゼが、プログラムされた細胞死１（ＰＤ１）遺伝子、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）遺伝子、β２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）及び／またはＴ細胞受容体α（ＴＲＡＣ）遺伝子を切断する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記細胞が、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
対象の癌を治療するための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法に従って生産された分離細胞を含む組成物であって、ここで、前記細胞がＣＡＲを発現するように、前記ドナー分子が前記ＣＡＲをコードする配列を含む、組成物。
【請求項１０】
核酸を対象の細胞内に導入するための、ドナー分子を含む少なくとも１つのアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）を含む組成物であって、少なくとも１つのステロイド及び／または少なくとも１つのＢ細胞阻害剤と組み合わせて前記対象に投与されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項１１】
核酸を対象の細胞内に導入するための、少なくとも１つのステロイドを含む組成物であって、ドナー分子を含む少なくとも１つのアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）及び／または少なくとも１つのＢ細胞阻害剤と組み合わせて前記対象に投与されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項１２】
核酸を対象の細胞内に導入するための、少なくとも１つのＢ細胞阻害剤を含む組成物であって、ドナー分子を含む少なくとも１つのアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）及び／または少なくとも１つのステロイドと組み合わせて前記対象に投与されることを特徴とする、前記組成物。
【請求項１３】
前記ドナー分子が導入遺伝子をコードする配列を含む、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記対象が哺乳動物であり、前記導入遺伝子が治療用タンパク質をコードし、更に前記哺乳動物が治療用タンパク質に寛容化される、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記対象が血友病を有し、前記ドナー分子がＶＩＩＩ因子またはＩＸ因子などの凝固因子をコードする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
核酸を細胞内に導入するための組み合わせ物であって、前記組み合わせ物が、
核酸を含むドナー分子、および
ヌクレアーゼ、を含み、
前記ヌクレアーゼが、前記ドナー分子の投与の１〜４８時間後またはその前の４時間以内に投与されることを特徴とし、更に前記ドナー分子が、前記ヌクレアーゼによる開裂後、前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれる、前記組み合わせ物。
【請求項１７】
１つ以上の導入遺伝子を細胞のゲノム内に導入する方法において使用するための、少なくとも１つのヌクレアーゼを含む組成物であって、前記方法が、
前記組成物を前記細胞内に導入することを含み、前記少なくとも１つのヌクレアーゼは、前記１つ以上の導入遺伝子が前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれるように、前記細胞の前記ゲノムを切断し、更に（ｉ）前記組成物の前に前記ドナーベクターが前記細胞内に導入される場合、前記組成物は、前記ドナーベクターが導入された後、４８時間以内に前記細胞内に導入されて、（ｉｉ）前記ドナーベクターの前に前記組成物が導入される場合、前記ドナーベクターは、前記組成物が導入された後、４時間以内に前記細胞に導入される、前記組成物。
【請求項１８】
核酸を細胞内に導入するための、核酸を含むドナー分子を含む組成物であって、前記組成物はヌクレアーゼと組み合わせて前記細胞に投与されることを特徴とし、前記ヌクレアーゼが、前記組成物の投与の１〜４８時間後またはその前の４時間以内に投与されることを特徴とし、更に前記ドナー分子が、前記ヌクレアーゼによる開裂後、前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれる、前記組成物。
【請求項１９】
核酸を細胞内に導入するための、ヌクレアーゼを含む組成物であって、前記組成物は核酸を含むドナー分子と組み合わせて前記細胞に投与されることを特徴とし、前記組成物が、前記ドナー分子の投与の１〜４８時間後またはその前の４時間以内に投与されることを特徴とし、更に前記ドナー分子が、前記ヌクレアーゼによる開裂後、前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれる、前記組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
これら及び他の態様は、全体としての開示を踏まえて、当業者に容易に明らかである。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
核酸を分離細胞内に導入する方法であって、前記方法が、
成長因子受容体結合の少なくとも１つの阻害剤の存在下で、ドナー分子を含む、少なくとも１つのアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）を前記細胞に投与することを含む、前記方法。
（項目２）
前記成長因子阻害剤が、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、Ｍｅｔ／肝細胞成長因子受容体（ＨＧＦＲ）、リポアラビノマンナン受容体（ＬａｍＲ）、αＶβ５インテグリン受容体、細胞間接着分子１受容体（Ｉｃａｍ−１）及び／または血小板由来成長因子受容体に結合することを阻害する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ドナー分子が前記細胞で発現する導入遺伝子を含む、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記導入遺伝子が前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれる、項目１〜３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
前記導入遺伝子がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする、項目４に記載の方法。
（項目６）
少なくとも１つのヌクレアーゼを前記細胞内に導入することを更に含み、前記導入遺伝子が、前記ヌクレアーゼによる１つ以上の遺伝子の開裂の後、前記細胞の１つ以上の遺伝子内に組み込まれ、前記方法が前記細胞の１つ以上の追加の遺伝子を不活性化する第２のヌクレアーゼを導入することを更に含む、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記ヌクレアーゼが、プログラムされた細胞死１（ＰＤ１）遺伝子、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）遺伝子、β２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）及び／またはＴ細胞受容体α（ＴＲＡＣ）遺伝子を切断する、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記細胞が、造血幹細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫ細胞である、項目１〜７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
対象の癌を治療する方法であって、
前記方法が、項目１〜８のいずれか一項に記載の方法に従って核酸を細胞内に導入することであって、そこで前記細胞がＣＡＲを発現するように、ドナー分子が前記ＣＡＲをコードする配列を含む、前記導入することと、
前記対象に前記細胞を投与することと、を含む、前記方法。
（項目１０）
核酸を対象の細胞内に導入する方法であって、前記方法が、
ドナー分子及び少なくとも１つのステロイド及び／または少なくとも１つのＢ細胞阻害剤を含む、少なくとも１つのアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）を対象に投与することを含む、前記方法。
（項目１１）
前記ドナー分子が導入遺伝子をコードする配列を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記対象が哺乳動物であり、前記導入遺伝子が治療用タンパク質をコードし、更に前記哺乳動物が治療用タンパク質に寛容化される、項目１０または項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記対象が血友病を有し、前記ドナー分子がＶＩＩＩ因子またはＩＸ因子などの凝固因子をコードする、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
核酸を細胞内に導入する方法であって、前記方法が、
核酸を含むドナー分子を細胞内に投与することと、
ヌクレアーゼを前記細胞に投与すること、を含み、前記ヌクレアーゼが、ドナー分子の１〜４８時間後またはその前の４時間以内に投与され、更に前記ドナー分子が、前記ヌクレアーゼによる開裂後、前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれる、前記方法。
（項目１５）
１つ以上の導入遺伝子を細胞のゲノム内に導入する方法であって、前記方法が、
少なくとも１つのヌクレアーゼを前記細胞内に導入することを含み、前記少なくとも１つのヌクレアーゼは、前記１つ以上の導入遺伝子が前記細胞の前記ゲノム内に組み込まれるように、前記細胞の前記ゲノムを切断し、更に（ｉ）前記少なくとも１つのヌクレアーゼの前に前記ドナーベクターが前記細胞内に導入される場合、前記少なくとも１つのヌクレアーゼは、前記ドナーベクターが導入された後、４８時間以内に前記細胞内に導入されて、（ｉｉ）前記ドナーベクターの前に前記少なくとも１つのヌクレアーゼが導入される場合、前記ドナーベクターは、前記少なくとも１つのヌクレアーゼが導入された後、４時間以内に前記細胞に導入される、前記方法。