(57)【要約】本発明の目的は、遺伝子治療に有用な塩基配列認識能を有し、オリゴマー合成にも有効な安定性の優れたＭＧＢポリアミドハイブリッド化合物を提供することである。    本発明のＭＧＢポリアミドハイブリッド化合物は、下記式（３８）で示され、従来のＮ−末端のホルミル基に換えて１−メチルピロール−２−カルボニル基を導入してピロールアミド４量体となした点に特徴を有する。2007029364.tif 000039
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３８）式で示される２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物。
2007029364.tif 000032
【請求項２】
ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３７）式で示される水酸基が保護された２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物。
2007029364.tif 000033
（ここで、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ同一又は異なった水酸基保護基を意味する。）
【請求項３】
ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３６）式で示される保護された２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物。
2007029364.tif 000034
（ここで、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ同一又は異なった水酸基保護基を意味する。）
【請求項４】
下記一般式（３５）で示されるジアミン化合物と下記式（２３）で示される化合物を反応させることを特徴とする上記一般式（３６）式で示される保護された２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物の製造方法。
2007029364.tif 000035
（ここで、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を意味する。Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、前記と同じである。Ｈａｌはハロゲン原子を意味する。）
【請求項５】
ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３５）で示されるジアミン化合物。
2007029364.tif 000036
（ここで、Ｆｍｏｃは前記と同じである。）
【請求項６】
下記式（３４）で示されるピロールアミド４量体を含むカルボン酸化合物と下記式（２６）で示されるカルバメート化合物を反応させることを特徴とする上記一般式（３５）で示されるジアミン化合物の製造方法。
2007029364.tif 000037
【請求項７】
上記一般式（３５）で示されるジアミン化合物（３５）の製造のための下記式（２６）で示されるカルバメート化合物。
2007029364.tif 000038
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遺伝子治療のための医薬として有用な、２’−デオキシグアノシンのＮ２位にリンカーを介しピロールアミド４量体を導入した新規なハイブリッド化合物及びその製造方法、そのための製造中間体に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近の分子生物学、遺伝子技術の最近の発展は目覚しいものがある。特に、ゲノム科学発達に伴い、ヒトゲノムが解析され、さらにポストゲノムとして悪性新生物や病因ウイルスの遺伝子の解析が進んでいる。これまで原因がわからなかった多くの疾患の原因遺伝子が次々に同定され、それらの発症機構が分子レベルで解明されるようになった。このような遺伝子治療の考えは、遺伝子病の存在が知られるようになった１９５０年代からあったが、その後の組み換えＤＮＡ技術や遺伝子導入技術の発達により、徐々に実現可能な治療手段として現実的なものになりつつある。
遺伝子治療の方法としては、下記３つの方法が知られている。
（１）遺伝子そのものを直接操作する方法；
これは、異常遺伝子はそのままにして、正常な遺伝子を新たに細胞に加える方法であり、早い時期から具体化され、現在も実用化が急速に進められている。過去に行われた「ＡＤＡ（アデノシンデアミナーゼ）欠損症」の遺伝子治療がこの方法に該当する。その他、家族性高コレステロール血症、嚢胞性線維症、Ｆａｎｃｏｎｉ貧血等の遺伝子治療に対しても、それぞれの正常遺伝子を細胞に付加する手段の検討がなされている。
遺伝子治療のなかでは、比較的単純な方法であるといえるが、異常遺伝子が有害タンパク質を作らないこと、あるいは遺伝子が必要な働きをしないために起こる病気等、適用のための条件には制限がある。
（２）異常遺伝子の働きを止める方法；
所謂「アンチセンスＤＮＡ」療法と呼ばれる、特定のターゲット遺伝子配列に対して結合する人工的な遺伝子配列を該異常遺伝子に結合させて、該異常遺伝子の転写を阻止して該異常遺伝子の機能を失活させるものである。
（３）遺伝子の異常な部分を切り取る方法；
「制限酵素」を用いて異常遺伝子を切り取る方法である。ただし、現在の技術では、制限酵素はターゲット部位を自在に切り取れるわけではなく、切取り位置には制限がある。したがって、現在のレベルでは実際の治療への応用は困難である。
上記（２）の方法は、アンチセンス法、アンチジーン法と呼ばれるものであり、各種癌疾患やウイルス性疾患の遺伝子治療方法として期待されている。
このことから、疾患原因である特定のターゲット遺伝子配列を特異的に認識し、かつ、その発現を阻害できる化合物の開発が望まれている。
このような化合物に求められる特性は、下記のとおりである。
１．各々の細胞内の標的遺伝子を特定するために十分な長さの塩基配列を厳密に識別できること。
２．標的塩基配列に対してのみ高い親和性を有すること。
３．化学的合成が容易であること。
４．生体内の各種酵素存在下において安定であること。
５．細胞毒性が低いこと。
６．細胞膜、核膜を容易に透過できること。
７．一度の作用で失活せず、繰り返し多数の細胞に作用（ターンオーバー）すること。
また、標的となる塩基配列を持つ遺伝子としては、
Ａ．二重鎖ＤＮＡ（複製および転写の開始を阻害：アンチジーン法）、
Ｂ．一本鎖ＤＮＡ（転写の阻害：アンチセンス法）、
Ｃ．ｍＲＮＡ（翻訳の阻害：アンチセンス法、ＲＮＡｉ法）
などを挙げることができる。
上記アンチセンス法やアンチジーン法は、標的ｍＲＮＡ、一本鎖や二重鎖ＤＮＡに対して何らかの修飾を施したＤＮＡを結合させることで、複製、転写、翻訳を阻害、あるいはＲＮａｓｅ  Ｈによる分解を促すことにより、標的ｍＲＮＡを持つ細胞や細菌、さらにはウィルスに対しても増殖抑制効果を発揮する方法である。アンチセンス法に用いられる化合物としては、リン酸基の酸素原子１つを同族原子である硫黄に置き換えたホスホロチオエート型のオリゴヌクレオチドが特に広く研究されている。これは（１）ＲＮａｓｅ  Ｈによる分解活性、（２）ヌクレアーゼ耐性、（３）細胞膜透過性、（４）水溶性において優れており、その他の糖部や塩基部の修飾と組み合わせて用いることも可能であり、利便性が高い。
ＦＤＡ（米国食品医薬品局）により初のアンチセンスドラッグとして，サイトメガロウィルスによる網膜炎に対する適用で認可されたものもホスホロチオエート型オリゴヌクレオチド（（２１−ｍｅｒ）２１量体）（Ｖｉｔｒａｖｅｎｅ（登録商標））であり、最近では筋ジストロフィーに対する効果も報告されている。しかしながら、治療薬のホスホロチオエート型オリゴヌクレオチドには、天然型のＤＮＡと比較して二重鎖の熱力学的安定性が低い、塩基配列の認識能力が十分ではない、生体内のたんぱく質との相互作用が強く、アンチセンスとしての活性に基づかない生理活性を示すことがある等の問題点がある。他にも糖部フラノース環のパッカリングを３’−ｅｎｄｏ型（Ｎ型）に固定しｍＲＮＡとの親和性を高めたＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ  ｒｉｎｇ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ）や、塩基部位にスタッキング効果を増強させるような置換基を導入したもの、主鎖を糖ではなくアミド結合の高分子に置き換えたＰＮＡなどが治療薬の候補として挙げられているが，現段階ではまだ研究段階である。
ＤＮＡを用いる治療法は、遺伝子以外に転写調節因子と呼ばれるタンパク質の配列認識部位を標的とし、その作用を阻害するデコイ（おとり）型ＤＮＡを用いる遺伝子治療にも関心が集まっている。
ところで、近年非常に注目を集めている遺伝子を用いた技術が、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ；ＲＮＡｉ）法である。これは生体内において長鎖の二重鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が、Ｄｉｃｅｒと呼ばれる酵素により２１〜２３塩基対からなる短い二重鎖ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡｓ；ｓｉＲＮＡｓ）に切断されることから始まり、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ）と呼ばれる複合体の形成、取り込まれた二重鎖ｓｉＲＮＡｓのＲＮＡへリカーゼによる一本鎖ｓｉＲＮＡへの変換、一本鎖ｓｉＲＮＡをガイド分子とする標的ｍＲＮＡへの配列選択的なＲＩＳＣの結合、ＲＩＳＣが結合したｍＲＮＡのＲＮａｓｅ  Ｈによる切断に伴う遺伝子発現の抑制という一連の流れを利用したものである。実際の応用には、細胞内に任意の配列を持つｄｓＲＮＡを直接導入するか、ベクターを用いてｉｎ  ｖｉｖｏで発現させればよく、簡便に利用できるものと思われるが、ＲＮＡの安定性に多少の問題は残る。
このように、核酸あるいはその誘導体は元来から有する塩基配列選択性的遺伝子への親和性を生かし、医薬品へと応用していくことが可能である．
一方，上記のような核酸誘導体ではないものの、塩基配列選択的に遺伝子に作用する化合物もいくつか知られている。細菌から単離された抗生物質である下記式で示されるディスタマイシンＡは、配列にアデニン（Ａ）もしくはチミン（Ｔ）が３個以上連続した二重鎖ＤＮＡの熱的安定性を向上させる。
2007029364.tif 000002
ディスタマイシンＡは、その弓なりの分子構造がＢ型ＤＮＡの副溝（ｍｉｎｏｒ  ｇｒｏｏｖｅ）の湾曲にマッチし、内側を向いたわずかに酸性度を有するＮＨ基がアデニンのＮ３位、あるいはチミンのＣ２位のカルボニル酸素との水素結合を介することで分子間の結合を安定化させている。配列にグアニン（Ｇ）−シチジン（Ｃ）塩基対が存在すると、副溝側に突き出したグアニンのＣ２位のアミノ基と１−メチルピロール（Ｐｙ）のＣ３位の水素の間に立体的な障害があり、副溝に対する親和性が低下することから塩基配列選択性が現れている。
その後の研究からディスタマイシンＡは１つのマッチサイトに対して逆平行に２分子配位していることが明らかにされ、さらに逆平行に配向したディスタマイシンＡ誘導体の１−メチルピロールを１−メチルイミダゾール（Ｉｍ）や３−ヒドロキシ−１−メチルピロール（Ｈｐ）に置き換えることで、４つの塩基対の組み合わせ（Ａ−Ｔ，Ｔ−Ａ，Ｇ−Ｃ，Ｃ−Ｇ）全てを認識することが可能になった（例えば、非特許文献１）。また、Ｄｅｒｖａｎらは、逆平行に配向するＰｙ−Ｉｍポリアミド化合物をリンカーで結合し二重鎖ＤＮＡへの配列選択性と親和性を向上することに成功している（例えば、非特許文献２）。
更に、最近は、任意の塩基配列を認識するポリアミド化合物は固相法による自動合成法が確立されたことにより合成が容易に行えるようになり、標的とする塩基配列に適合する化合物を容易に合成できる利便性の高さ、さらに核酸誘導体で問題となるヌクレアーゼに対する安定性、細胞膜や核膜に対する透過性も優れていることから、新たな塩基配列認識分子として関心が高まっている。
このポリアミド化合物を用いた研究としては、配列選択的副溝結合型（Ｍｉｎｏｒ  Ｇｒｏｏｖｅ  Ｂｉｎｄｅｒｓ；ＭＧＢｓ）ポリアミドにＤＮＡ−影響を与える機能性分子を結合させ、その機能を塩基配列選択的に発現させようとする試みが数多くなされている。代表的な例はブレオマイシン、ナイトロジェンマスタード、シクロプロピルインドール、ＤＮＡインターカレーター、デュオカルマイシンを機能性分子として用いたものである。その中でも、Ｓｕｇｉｙａｍａらはデュオカルマイシンおよびその誘導体とＭＧＢポリアミドのハイブリッド化合物を、任意の標的塩基配列に選択的に作用させることに成功している（非特許文献３）。このようにＭＧＢポリアミドは機能性分子の持つ薬理活性を保持したまま、ユニークな塩基配列認識能を付加できることが明らかにされている。
本発明者らも、上記背景のもとにゲノム化学に基づく遺伝情報制御分子の創製を目的として、下記に示すような、２’−デオキシグアノシンのＮ２位にアミド結合を有するリンカーを介しピロールポリアミド３量体を導入したハイブリッド化合物や、Ｎ−アルキル化によるリンカーを介しピロールアミド３量体を導入したハイブリッド化合物を合成し、報告した。（非特許文献４、非特許文献５）
2007029364.tif 000003
2007029364.tif 000004
このようなヌクレオシドとＭＧＢポリアミドとのハイブリッド化合物は、通常の核酸や抗癌剤などに用いられる修飾ヌクレオシドと同様に生合成経路でＤＮＡ内に取り込まれた場合、その近辺の配列にＭＧＢポリアミドが特異的に認識するサイトが存在すると非常にタイトで安定した副溝への結合を形成することで二重鎖ＤＮＡの安定化を示し、そのＤＮＡの複製や転写を阻害するものと考えられる。
一方、近辺にＭＧＢポリアミドにとって特に認識しないサイトが存在した際には二重鎖の安定化作用を示さないことから複製や転写を阻害しないことが期待できる。また、ＭＧＢポリアミド−ヌクレオシド  ハイブリッド化合物が単体で二重鎖ＤＮＡに作用する場合には、ハイブリッド中のヌクレオシドがＨｏｏｇｓｔｅｅｎ型の水素結合を形成し、さらにＭＧＢポリアミドによる親和性、塩基選択性を発揮するようなアンチジーン的な作用を持つことが考えられる。
このようにＭＧＢポリアミドのハイブリッド化合物は、高い塩基配列認識能とＭＧＢポリアミドの有する生体内酵素に対する高い安定性、優れた膜透過性といった特徴を併せ持ち、遺伝情報制御分子としての候補として期待できる。
【非特許文献１】Ｗｈｉｔｅ，Ｓ．；Ｂａｉｒｄ，Ｅ．Ｅ．；Ｄｅｒｖａｎ，Ｐ．Ｂ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，１９９７，４，５６９
【非特許文献２】Ｔｒａｕｇｅｒ，Ｊ，Ｗ．；Ｂａｉｒｄ，Ｅ．Ｅ．；Ｄｅｒｖａｎ，Ｐ．Ｂ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９６，１１８，６１６０
【非特許文献３】Ｔａｏ，Ｚ．；Ｆｕｊｉｗａｒａ，Ｔ．；Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｈ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９９，１２１，４９６１
【非特許文献４】Ｙ．；Ｏｈｂａ，Ｙ．；Ｔｅｒｕｉ，Ｋ．；Ｋａｍａｉｋｅ，Ｔ．；Ｏｓｈｉｍａ，Ｅ．；Ｋａｗａｓｈｉｍａ，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｎｏ．４８，２００４，ｐ．５５−５６．
【非特許文献５】Ｙ．；Ｏｈｂａ，Ｙ．；Ｔｅｒｕｉ，Ｋ．；Ｋａｍａｉｋｅ，Ｔ．；Ｏｓｈｉｍａ，Ｅ．；Ｋａｗａｓｈｉｍａ，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｎｏ．４８，２００４，ｐ．５５−５６
【非特許文献６】「第１４回  アンチセンスシンポジウム講演要旨集」アンチセンスＤＮＡ／ＲＮＡ研究会、平成１６年１２月２日、ｐ５５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ＭＧＢポリアミドは様々な機能性分子とハイブリッドさせることでそれらの持つ薬理活性を保持したままユニークな塩基配列認識能を付加することが可能である。さらに、ＭＧＢポリアミドはその高い塩基配列認識能に加え生体内酵素に対する高い安定性、優れた膜透過性を有するため、ＭＧＢポリアミドとのハイブリッド化合物はこれら全ての特徴を併せ持つことが期待できる。
このようなハイブリッド化合物は、標的塩基配列を含むｄｓＤＮＡを選択的に安定化させる作用（アンチジーン型アプローチ）、あるいはハイブリッド化合物自体が生合成経路を経てＤＮＡに組み込まれ、このＤＮＡ中のＭＧＢポリアミドが特異的に認識するサイトを持つ副溝に対してのみ優位に配位することによる選択的安定化作用を有することから標的遺伝子の複製や転写を阻害できるものと期待できる。
ところで、本発明者らが前記ハイブリッド化合物（２０）をオリゴマー合成する際に必要となるアンモニア処理に対する安定性の評価を行ったところ、ＴＬＣ、１Ｈ−ＮＭＲによる検討において、アミド結合によるリンカーを介するハイブリッド化合物（１）のアンモニア処理で検出された２’−デオキシグアノシンは検出されなかった。このことから、Ｎ−アルキル化によるリンカーの結合へと結合様式を変換したことによりによりハイブリッド化合物のＮ２位でのアンモニア処理に対する安定化を高めることが可能であることが明らかになった。しかしながら、ＴＬＣ上で（２０）よりもＲｆ値の低いスポットがわずかながら生じた。これは１Ｈ−ＮＭＲからＮ−末端のホルミル基が脱落したと思われる化合物と推測された。即ち、先の化合物（２０）は、アンモニア処理において、２’−デオキシグアノシンは検出されないものの、Ｎ−末端のホルミル基の脱落が観察され、必ずしもその安定性が満足し得るものではないことが分かった。
したがって、本発明の目的は、ＭＧＢポリアミドハイブリッド化合物の性能を維持しつつ、効果的にオリゴマーを合成することができ、しかも安定性の優れたＭＧＢポリアミドハイブリッド化合物を提供することである。また、本発明の別の目的は、これらＭＧＢポリアミドハイブリッド化合物の製造方法及びそのために有用な中間体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、高い塩基配列認識能及び生体内酵素に対する高い安定性を有し、かつ、優れた膜透過性を有し、しかも、より効果的なオリゴマー合成が可能なＭＧＢポリアミドハイブリッド化合物を見出すべく鋭意研究をしたところ、Ｎ−末端のホルミル基に換えて１−メチルピロール−２−カルボニル基を導入してピロールアミド４量体とすることにより、優れた塩基配列認識能、優れた生体内酵素抵抗性、優れた膜透過性を維持しつつ、しかも効果的なオリゴマー合成が可能となることを見出して本発明を完成した。
即ち、本発明は、以下のとおりである。
１．ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３８）式で示される２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物。
2007029364.tif 000005
２．ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３７）式で示される水酸基が保護された２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物。
2007029364.tif 000006
（ここで、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ同一又は異なった水酸基保護基を意味する。）
３．ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３６）式で示される保護された２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物。
2007029364.tif 000007
（ここで、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ同一又は異なった水酸基保護基を意味する。）
４．下記一般式（３５）で示されるジアミン化合物と下記式（２３）で示される化合物を反応させることを特徴とする上記一般式（３６）式で示される保護された２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物の製造方法。
2007029364.tif 000008
（ここで、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を意味する。Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、前記と同じである。）
５．ピロールアミド４量体を含むことを特徴とする下記一般式（３５）で示されるジアミン化合物。
2007029364.tif 000009
（ここで、Ｆｍｏｃは前記と同じである。）
６．下記式（３４）で示されるピロールアミド４量体を含むカルボン酸化合物と下記式（２６）で示されるカルバメート化合物を反応させることを特徴とする上記一般式（３５）で示されるジアミン化合物の製造方法。
2007029364.tif 000010
７．上記一般式（３５）で示されるジアミン化合物（３５）の製造のための下記式（２６）で示されるカルバメート化合物。
2007029364.tif 000011
【発明の効果】
【０００５】
本発明のピロールアミド４量体−２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物は、Ｎ−末端に１−メチルピロール−２−カルボニル基を有することを１つの特徴とするものであり、ディスタマイシンＡと比較しても極めて高い塩基配列認識能を有し、かつ、優れた生体内酵素抵抗性、優れた膜透過性を有し、しかも効果的なオリゴマー合成が可能である。
したがって、本発明のＭＧＢポリアミド−ヌクレオシド  ハイブリッド化合物は、高い塩基配列選択能を有し、新規遺伝情報制御分子としての有用性が大いに期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明者らの発明に係る先のハイブリッド化合物発明においては、ＭＧＢポリアミド部のピロールポリアミド３量体は、Ｂｏｇｅｒらの報告を応用して酸−塩基による分配を利用した精製法により容易に合成できた。
本発明者らは、続いて、ハイブリッド化合物をＤＮＡに組み込む際の安定性を考慮し、Ｎ２位での結合様式をアミド結合からＮ−アルキル化による結合に変えることでＤＮＡ合成時の脱保護条件下で安定なハイブリッド化合物を設計し合成を行った。リンカーとして用いるジアミノプロパンの片側のアミノ基を選択的に保護するために、ｍｏｎｏ−Ｆｍｏｃ化試薬としてＦｍｏｃフェニルカルボネートを合成し、これをジアミノアルカンに１当量だけ作用させた。その結果、一方のアミノ基を塩酸塩にすることで収率よくｍｏｎｏ−Ｆｍｏｃ化することに成功した。本合成法はポリアミン化合物などの合成研究にも酸に安定な保護基の導入法として広く活用でき、その有用性は高いものと考えられる。続いてｍｏｎｏ−Ｆｍｏｃ−ジアミノプロパンに対してＭＧＢポリアミドを縮合し、Ｆｍｏｃ基の除去後、２−フルオロイノシン誘導体と反応させることで目的とするＮ−アルキル化により結合するハイブリッド化合物（Ｎ末端１−メチルピロール２−カルボニル体／ピロールアミド４量体）の合成を達成した。Ｎ−アルキル化により結合するハイブリッド化合物（ピロールアミド四量体）のアンモニア処理を検討した結果、安定であることが判明したことから、オリゴマー合成が可能であることが明らかとなった。
Ｒ１及びＲ２における「水酸基保護基」は、それぞれ同一又は異なって、アシル、カルバモイルまたはアラルキル等である。該アシル基は、好ましくはホルミル、Ｃ１−１０アルキルカルボニル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ６−１４アリールカルボニル、Ｃ７−１３アラルキル−カルボニル、芳香族複素環カルボニル、５ないし７員非芳香族複素環カルボニル、Ｃ３−１０シクロアルキルカルボニル（例、シクロペンタンカルボニル、シクロヘキサンカルボニル）；Ｃ８−１３アリールアルケニルカルボニル（例、スチリルカルボニル）；Ｃ８−１３アリールアルキニルカルボニル（例、フェニルエチニルカルボニル）；Ｃ６−１４アリールスルホニル（例、フェニルスルホニル）；モノ−またはジ−Ｃ１−６アルキルカルバモイル（例、メチルカルバモイル、ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）；Ｃ３−１０シクロアルキルカルバモイル（例、シクロプロピルカルバモイル、シクロペンチルカルバモイル、シクロヘキシルカルバモイル）；Ｃ６−１４アリールカルバモイル（例、フェニルカルバモイル）；Ｃ７−１４アラルキルカルバモイル（例、ベンジルカルバモイル、フェネチルカルバモイル、ジフェニルエテルカルバモイル）；Ｃ４−１３シクロアルキルアルキルカルバモイル（例、シクロヘキシルメチルカルバモイル）；芳香族複素環カルバモイル（例、イソキサゾリルカルバモイル、ベンゾチアゾリルカルバモイル）；非芳香族複素環カルバモイル（例、ピロリジニルカルバモイル）；Ｃ７−１４アラルキルオキシカルバモイル（例、ベンジルオキシカルバモイル）；等である。また、「炭素数１〜１５のアシル基」としては、Ｃ１−６アルコキシ−カルバモイル（例、メトキシカルバモイル）、Ｃ１−６アルコキシカルボニルカルバモイル（例、メトキシカルボニルカルバモイル、エトキシカルボニルカルバモイル）なども挙げられる。該「水酸基保護基」は、好ましくは同一であり、特に好ましくはアセチル基である。また該「水酸基保護基」はＲ１及びＲ２が一緒になってＴＩＰＤＳであってもよい。
本発明化合物の製造方法は、以下のとおりである。詳細は実施例を参照されたい。
先のハイブリッド化合物（１）や（２０）では、アンモニア処理に対してピロール間のアミド結合それ自体は安定であった。これはアミドのπ結合がピロール環との共鳴により安定化しているものと考えられる。そこでハイブリッド化合物のその後のオリゴマー合成におけるアンモニア処理に対する安定性改善のために、ホルミル基にかわるＮ末端基として１−メチルピロールー２−カルボニル基をアミド結合により結合させることでアンモニア処理に対する安定化を図ろうと試みた。
まず、化合物３を水酸化ナトリウム水溶液によりカルボン酸３２へと変換し、これとピロールアミド３量体８からＢｏｃ基を除去した化合物と縮合させることにより化合物３３を得る。次にエステル３３を加水分解することにより化合物３４へと変換した後、ｍｏｎｏ−Ｆｍｏｃジアミノプロパン２６と縮合させることによって化合物３５を得る。
2007029364.tif 000012
なお、Ｂｏｃ基で保護したピロールアミド３量体８は、化合物５のニトロ基を接触還元によりアミノ基とし、４−（ｔｅｒｔ−（ブトキシカルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−カルボン酸６との縮合させることによりメチル  ４｛［４−（ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノ−１−メチルピロール−２−カルボン酸エステル７とした。続いて、ピロールアミド２量体７のＢｏｃ基を酸性条件下で除去し、再びカルボン酸化合物６との縮合を行うことによりピロールアミド３量体８とした。
2007029364.tif 000013
上記合成法は、縮合試薬に１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）を用いたことにより、反応生成物の精製を酸−塩基による分液操作のみで行うことができるため、カラムクロマトグラフィーによる精製なしに目的とするピロールポリアミド３量体８を高収率で合成できる。
続いて、化合物３５のＦｍｏｃ基をトリエチルアミンにて除去し２’−デオキシイノシン誘導体２３のフッ素との置換反応を行うことにより化合物３６を得る。最後に、化合物３６のＯ６位２−（４−ニトロフェニル）エチル基および３’位ならびに５’位アセチル基を除去することでピロールアミド４量体を含む２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物３８を得ることができる。
2007029364.tif 000014
以下、実施例をもって具体的に説明する。
なお、本実験で用いた分析機器等は以下の通りである．
（１）１Ｈ核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ）；
・Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ４００  ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
・測定溶媒；重クロロホルム、重ジメチルスルホキサイド、重メタノール。
（２）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−ＮＭＲ）；
・Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ４００  ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
・測定溶媒；重クロロホルム、重ジメチルスルホキサイド、重メタノール。
（３）３１Ｐ核磁気共鳴スペクトル（３１Ｐ−ＮＭＲ）；
・Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ４００  ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
・測定溶媒；重クロロホルム、重ジメチルスルホキサイド。
（４）質量スペクトル（ＭＳ）；
・ＶＧ  Ａｕｔｏ  ＳｐｅｃＥ（Ｍｉｃｒｏ  Ｍａｓｓ）
・ＴＳＱ−７００（Ｔｈｅｒｍｏｑｕｅｓｔ）
（５）元素分析；
・Ｅｌｅｍｅｎｔａｌ  Ｖａｖｉｏ  ＥＬ
（６）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）；
・Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（上昇法によって展開）
・検出法：ＵＶ吸収（５％硫酸−メタノール溶液を噴霧し、１００〜１５０℃で加熱。アニスアルデヒド、エタノール、硫酸、水および酢酸の混合液に浸した後、１００〜１５０℃で加熱。）
（７）カラムクロマトグラフィー；
・和光純薬工業Ｗａｋｏｇｅｌ  Ｃ−３００
・関東化学シリカゲル６０Ｎ
（８）融点測定；
・柳本製作所のミクロ融点測定装置（未補正値を記載）
【実施例１】
【０００７】
［前工程１］．２−トリクロロアセチル−１−メチルピロール（３）の合成；
2007029364.tif 000015
塩化トリクロロアセチル（１３０ｍＬ、１．１６ｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下エーテル（２５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。発熱に注意しながら、予めエーテル（２５０ｍＬ）に溶解した１−メチルピロール（１００ｍＬ、１．１２ｍｏｌ）を滴下ロートを用いて滴下した。滴下終了後、徐々に室温まで昇温させながら１時間攪拌した。２Ｍ炭酸カリウム水溶液（３００ｍＬ）を加え反応を停止し、有機層を分液操作により分離した。水層からエーテル（３００ｍＬ×２）を用いて抽出を行い、全ての有機層をまとめた後、飽和塩化ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）により洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ別除去し、ろ液を減圧下濃縮することで、３を２４４ｇ（９６％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），７．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１８Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．３０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’＝２．５７Ｈｚ，Ｊ２’，２’’＝１．６３Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１７１．８４，１３５．３０，１２３．６８，１２０．６８，１０９．１０，９６．０４，３７．９３
ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ２２５（Ｍ＋Ｈ）
分子量（理論値）Ｃ７Ｈ６Ｎ１Ｏ１Ｃｌ３：Ｃ，３７．１３；Ｈ，２．６７；Ｎ，６．１８．
分子量（実測値）：Ｃ，３７．１４：Ｈ，２．８２：Ｎ，６．１５．
［前工程２］．２−トリクロロアセチル−１−メチル−４−ニトロピロール（４）の合成；
2007029364.tif 000016
上記化合物３（２．１４ｇ，９．４６ｍｍｏｌ）を無水酢酸（１２ｍＬ）に溶解、−４０℃に冷却した。温度を−４０℃に保ったまま、この溶液に発煙硝酸（０．８３ｍＬ）を滴下した。反応溶液を徐々に室温まで昇温し、さらに１時間撹拌した。反応溶液を再び−２０℃に冷却し、イソプロパノール（１２ｍＬ）を加え１５分間撹拌した。その後−２０℃を保ったまま１５分間静置し、生じた溶液中の結晶を吸引ろ過により採取した。結晶をイソプロパノールで洗浄後、減圧下乾燥し、白色の結晶を得た。さらに、ろ液を減圧下濃縮後、再びイソプロパノールを加え−２０℃で１０分間攪拌し、生じた結晶を吸引ろ過により採取した。結晶をイソプロパノールで洗浄後、減圧下乾燥し、先に得られた結晶と合わせて、化合物４を２．０１ｇ（７８％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．４４Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９１Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１７２．７９，１３４．２５，１３２．５７，１２０．６０，１１６．３０，９４．５４
ｍ．ｐ．：１３４−１３６℃
［前工程３］．メチル  １−メチル−４−ニトロピロール−２−カルボン酸エステルの（５）合成；
2007029364.tif 000017
前記化合物４（１５．０ｇ，５５．３ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下メタノール（２０ｍＬ）に溶解し、予めメタノール（５．０ｍＬ）に溶解した水素化ナトリウム（６０％）（０．２ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を滴下した。反応溶液を室温にて１時間撹拌した後、濃硫酸（０．３ｍＬ、５．５ｍｍｏｌ）を加えて反応を停止した。反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）により中和後、残渣を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ×２）、及び飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）にて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ別除去し、減圧下濃縮した。残渣を酢酸エチルで再結晶し、結晶を吸引ろ過により採取することで、化合物５を６．０２ｇ（６１％）得た。さらに、ろ液を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）により精製し、化合物５を合計で９．７８ｇ（９６％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９７Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０７Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８０（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１５９．８３，１３４．１６  １２９．４２，１２２．５９，１１１．５２，５１．７７，３７．４４
［前工程４］．４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−カルボン酸（６）の合成；
2007029364.tif 000018
前記化合物５（６．００ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム炭素（２．００ｇ）を加えた。懸濁液を水素雰囲気下、室温で１２時間激しく攪拌し、その後セライトを用いてパラジウム炭素をろ別除去した。ろ液を減圧下濃縮後、直ちにアルゴン雰囲気下エーテル（３０ｍＬ）に溶解し、予めエーテル（２０ｍＬ）に溶解したジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（７．４６ｇ、３４．２ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で２時間攪拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、メタノール（１００ｍＬ）に溶解し、２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を加え６０℃で２時間攪拌した。減圧下濃縮によりメタノールを除去した後、残った水層をエーテル（５０ｍＬ×２）で洗浄した。水層を１０％塩酸を用いてｐＨ３へと調整した後、酢酸エチル（２００ｍＬ×３）により抽出操作を行った。有機層をひとつにまとめ、飽和塩化ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）により洗浄し、無水硫酸マグネシウムにより乾燥した。無水硫酸マグネシウムをろ別除去した後、有機層を減圧下濃縮し、残渣から酢酸エチル−ヘキサンで再結晶を行うことで、化合物６を６．９７ｇ（８９％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．０８（ｓ，１Ｈ，−ＣＯＯＨ），９．０３（ｓ，１Ｈ，Ｂｏｃ−ＮＨ），７．０４（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），６．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．０４Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），１．４４（ｓ，９Ｈ，ＣＨ３−ｏｆ  Ｂｏｃ  ｇｒｏｕｐ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６１．８６，１５２．７０，１２２．８０，１１９．６４，１１８．７２，１０７．４５，７８．３９，３６．０１，２８．１４
［前工程５］．メチル  ４−｛［４−（ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノ−１−メチルピロール−２−カルボン酸エステル（７）の合成；
2007029364.tif 000019
前記化合物５（３．００ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム炭素（１．００ｇ）を加えた。懸濁液を水素雰囲気下、室温で１２時間激しく攪拌し、その後セライトを用いてパラジウム炭素をろ別除去した。ろ液を減圧下濃縮後、直ちにカルボン酸６（３．９２ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（６．２５ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．９８ｇ、３２．６ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下ＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解し室温で３時間攪拌した。反応溶液を約三分の一まで減圧下濃縮し、酢酸エチル（２００ｍＬ）、メタノール（２０ｍＬ）の混合溶媒で希釈した。有機層を１０％塩酸（１００ｍＬ×３）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ×３）、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）により洗浄し、無水硫酸マグネシウムにより乾燥した。無水硫酸マグネシウムをろ別除去し、有機層を減圧下濃縮することで、化合物７を６．０７ｇ（９９％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．８５（ｓ，１Ｈ，−ＣＯＮＨ−），９．０９（ｓ，１Ｈ，Ｂｏｃ−ＮＨ），７．４５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８６Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９０Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８１（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．７３（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ３），１．４５（ｓ，９Ｈ，ＣＨ３−ｏｆ  Ｂｏｃ  ｇｒｏｕｐ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６０．８０，１５８．４２，１５２．８５，１２２．９８，１２２．６０，１２２．４２，１２０．７２，１１８．４９，１１７．１５，１０８．３７，１０３．８２，７８．３０，５０．９０，３６．１３，３６．１３，３６．０１，２８．１９
［前工程６］メチル  ４−［（４−｛［４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノ−１−メチルピロール−２−イル）カルボニル］アミノ−１−メチルピロール−２−カルボン酸エステル（８）の合成；
2007029364.tif 000020
化合物７（３．００ｇ、７．９７ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。メタノール（４．１ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）を加え、続いて塩化アセチル（５．７ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）を発熱に注意しながら滴下した。０℃で３０分間攪拌後、減圧下濃縮することで溶媒および反応試薬を除去した。残渣にカルボン酸６（２．１１ｇ、８．７７ｍｍｏｌ），ＥＤＣＩ（３．０６ｇ、１５．９４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２．９２ｇ、２３．９１ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、室温で３時間攪拌した。反応溶液を約三分の一まで減圧下濃縮し、酢酸エチル（２００ｍＬ）、メタノール（２０ｍＬ）の混合溶媒で希釈した。有機層を１０％塩酸（１００ｍＬ×３）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ×３）、飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）により洗浄し、無水硫酸マグネシウムにより乾燥した。無水硫酸マグネシウムをろ別除去し、有機層を減圧下濃縮することで、化合物８を３．９０ｇ（９８％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ（ｓ，１Ｈ，−ＣＯＮＨ−），９．８７（ｓ，１Ｈ，−ＣＯＮＨ−），９．０８（ｓ，１Ｈ，Ｂｏｃ−ＮＨ），７．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８５Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．２２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６１Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９２
（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９３Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），３．８５（ｓ，３ＨＰｙ−ＣＨ３），３．８４（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８２（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．７４（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ３），１．４６（ｓ，９Ｈ，ＣＨ３−ｏｆ  Ｂｏｃ  ｇｒｏｕｐ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６０．８１，１５８．５２，１５８．４４，１５２．８８，１２３．０１，１２２．８３，１２２．５２，１２２．３４，２０．７４，１１８．５２，１１７．０８，１０８．３８，１０４．８３，１０３．８５，７８．２９，５０．９１，３６．１５，３６．０４，２８．２０
［前工程７］３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−２−フルオロ−Ｏ６−［２−（４−ニトロフェニル）エチル］−２’−ジオキシグアノシン（２３）の合成；
［前工程７−１］３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−２’−ジオキシグアノシン（２１）の合成；
2007029364.tif 000021
２’−デオキシグアノシン（８．０２ｇ，３０ｍｍｏｌ）をピリジンで３回共沸脱水し、アルゴン雰囲気下でＤＭＦ（２４ｍＬ）に溶解した。続いて４−ジメチルアミノピリジン（０．３７ｇ，３．０ｍｍｏｌ）、ピリジン（２４ｍＬ）、無水酢酸（２２．１ｍＬ，２４０ｍｍｏｌ）を加えて、室温で３時間攪拌した。その後、反応溶液に水（１０ｍＬ）を加えて反応を止め、エタノール（２００ｍＬ）を加えて３０分間攪拌した後、室温で放置した。生じた結晶を吸引ろ過し、結晶をエタノール（１０ｍＬ×３）で洗浄し、さらに２−プロパノール（１００ｍＬ）で洗浄した後減圧下乾燥し、化合物２１を８．９２ｇ（８５％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．８７  ａｎｄ２．０３（２ｓ，６Ｈ，ＣＨ３ＣＯ×２），２．４５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’’＝６．０ｚ，Ｊ２’，２’’＝２．３Ｈｚ，Ｊ２’’，３’＝４．０Ｈｚ，Ｈ−２“），２．９１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’），４．１７−４．２９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，５’，５”），５．２９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），６．１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’＝８．６Ｈｚ，Ｊ１’，２’’＝６．０Ｈｚ，Ｈ−１’），６．５２（ｂｒｓ，２Ｈ，Ｎ２−Ｈ２）７．９０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），１０．７４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｎ１−Ｈ）．
［前工程７−２］３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−Ｏ５−［２−（４−ニトロフェニル）エチル］−２’−ジオキシグアノシン（２２）の合成；
2007029364.tif 000022
化合物２１（１．７５ｇ，５．０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサンにより３回共沸脱水し、トリフェニルホスフィン（２．６２ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）、２−（４−ニトロフェニル）エタノール（１．６７ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下で１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）に溶解し、室温で１５分間攪拌した．その後、反応溶液にアゾジカルボン酸ジフェニルエステル４０％トルエン溶液（４．５ｍＬ，１０．０ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で３０分間攪拌した。反応溶液を減圧濃縮した後、酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、飽和炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）で２回、さらに水（５０ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で１回ずつ洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ別除去し、ろ液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸エチル＝１：３）で精製し、化合物２２を２．３０ｇ（９２％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２．０８  ａｎｄ  ２．１３（２ｓ，６Ｈ，ＣＨ３ＣＯ×２），２．５２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’’＝６．１Ｈｚ，Ｊ２’，２’’＝１４．１Ｈｚ，Ｊ２’’，３’＝２．５Ｈｚ，Ｈ−２’’），２．９８（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’＝７．８Ｈｚ，Ｊ２’，２’’＝１４．１Ｈｚ，Ｊ２’，３’＝４．９Ｈｚ，Ｈ−２’），３．２７（ｔ．２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＰｈＮＯ２），４．３１−４．４７（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，５’，５’’），４．７３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＰｈＮＯ２），４．８９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ，Ｎ２−Ｈ２），５．４２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），６．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’＝７．８Ｈｚ，Ｊ１’，２’’＝６．１Ｈｚ，Ｈ−１’），７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ  ｏｆ  ２−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ），７．７４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），８．１６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ  ｏｆ  ２−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）．
［前工程７−３］３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−２−フルオロ−Ｏ５−［２−（４−ニトロフェニル）エチル］−２’−ジオキシグアノシン（２３）の合成；
2007029364.tif 000023
化合物２２（０．５０ｇ，１．００ｍｍｏｌ）をピリジンにより３回共沸脱水し、−３０℃において４５％フッ化水素／ピリジン溶液（４．８ｍＬ）を加え、アルゴン雰囲気下で亜硝酸ｔ−ブチル（０．３６ｍＬ，３．００ｍｍｏｌ）を加え、室温に戻した後３０分攪拌した。その後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）で中和し、クロロホルム（３０ｍＬ）で３回抽出した後、水（５０ｍＬ）で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ別除去し、ろ液を減圧下濃縮した．残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸エチル＝１：３）で精製し、化合物２３を０．４４ｇ（８７％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２．０８  ａｎｄ  ２．１１（２ｓ，６Ｈ，ＣＨ３ＣＯ×２），２．６０（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２”＝５．９Ｈｚ，Ｊ２’，２”＝１４．１Ｈｚ，Ｊ２”，３’＝２．５Ｈｚ，Ｈ−２”），２．８７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’＝７．９Ｈｚ，Ｊ２’，２”＝１４．２Ｈｚ，Ｊ２’，３’＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２’），３．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＰｈＮＯ２），４．３０−４．３９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，５’，５”），４．８２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＰｈＮＯ２）５．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），６．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１’，２’＝７．９Ｈｚ，Ｊ１’，２”＝５．９Ｈｚ，Ｈ−１’），７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ  ｏｆ  ２−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ），８．０６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），８．１５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ  ｏｆ  ２−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ）．
［前工程８］９−フルオレニルメチル  ３−アミノプロピル−１−カルバメート塩酸塩（２６）の合成；
2007029364.tif 000024
化合物２５（３．８０ｇ，１２．０ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に懸濁させた。直ちに１，３−ジアミノプロパン（１．００ｍＬ，１２．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。やや透明になった反応溶液に、ピリジン塩酸塩（３．００ｇ，２６．０ｍｍｏｌ）を加え、１０分間攪拌した後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーの展開溶媒（クロロホルム：メタノール＝４：１）に懸濁し、シリカゲルを短く積んだカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝４：１）にて精製し、化合物２６を３．２５ｇ（８２％）得た。ジアミンの片方を保護基で保護することは通常困難なことであるが、上記化合物によりこの目的を達成し得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ７．７９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５２Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），７．６３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３９Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），７．３９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３８Ｈｚ  Ｐｈ−Ｈ），７．３１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４５Ｈｚ  Ｐｈ−Ｈ），４．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．６１Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），４．２０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４４Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），３．２０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．４４Ｈｚ，ＣＨ２ＮＨ），２．９１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，ＮＨＣＨ２），１．８２．（ｔｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１１Ｈｚ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，−ＣＨ２ＣＨ２−）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１５９．４９，１４５．４１，１４２．８０，１２８．９４，１２８．２７，１２６．２１，１２１．１０，６７．８３，４８．６４，３８．４２，２９．３２
ＨＲＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：２９７．１６１５（Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１８Ｈ２１Ｏ２Ｎ２：２９７．１６０３）
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１８Ｈ２０Ｎ２Ｏ２Ｃｌ＋Ｈ２Ｏ：６１．６２；Ｈ，６．６１；Ｎ，７．９８
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ，６１．２９；Ｈ，６．８３；Ｎ，７．２７
ｍ．ｐ．：１２９−１３０℃
［工程１］１−メチルピロール−２−カルボン酸（３２）の合成；
2007029364.tif 000025
前記前工程１で合成した化合物３（５．００ｇ，２２．０ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に溶解し、２．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加えた。反応溶液を６０℃に加温し、１時間攪拌した。減圧下メタノールを除去し、残った溶液を水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。水層を１０％塩酸によりｐＨ３程度に調整し、酢酸エチル（１００ｍＬ×３）により抽出した。有機層をひとつにまとめ、飽和塩化ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムにより乾燥し、無水硫酸マグネシウムをろ別除去した。ろ液を減圧濃縮し、残渣を減圧下乾燥することで、化合物３２を２．４５ｇ（８９％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．２３（ｂｒ．１Ｈ，−ＣＯＯＨ），６．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９４Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８０Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５８Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６２．１４，１２９．８２，１２２．６７，１１７．３７，１０７．４２，３６．３４
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ：１２５．１
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ６Ｈ７Ｎ１Ｏ２：Ｃ，５７．５９；Ｈ，５．６４，Ｎ，１１．１９
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ．５７．５９；Ｈ，５．６４；Ｎ，１１．０６
ｍ．ｐ．：１２７−１３０℃
［工程２］メチル  １−メチル−４−｛［４−（｛４−［（１−メチルピロール−２−イル）カルボニル］アミノ−１−メチルピロール−２−イル｝カルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノピロール−２−カルボン酸エステル（３３）の合成；
2007029364.tif 000026
前工程６で合成した化合物８（１００ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下メタノール（５．０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。続いて塩化アセチル（１．７ｍＬ，２３．９ｍｍｏｌ）を発熱に注意しながら滴下し、０℃で３０分攪拌後、減圧下濃縮することで溶媒および反応試薬を除去した。残渣に前記化合物３２（２７．７ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（８４．５ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（５３．４ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下ＤＭＦ（２．０ｍＬ）に溶解し８０℃で１時間攪拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１９：１）によって精製し、化合物３３を７１．４ｍｇ（７３％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．９６（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．９５（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８５（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），７．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８９Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７４Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７３Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７７Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８９Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５８Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８５（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８４（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．７４（ｓ，３Ｈ，Ｏ−ＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６０．８２，１５８．６１，１５８．５０，１２８．１６，１２５．４５，１２２．９９，１２２．７３，１２２．４９，１２２．３２，１２２．１１，１２０．７６，１１８．５７，１１８．４８，１１２．６７，１０８．３４，１０６．６６，１０４．７７，１０４．６９，５０．９７，３６．２７，３６．２０，３６．１４
ＨＲＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：５０６．２１５６（Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ２８Ｎ７Ｏ５：５０６．２１５２）
Ａｎａｌ  Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２５Ｈ２７Ｎ７Ｏ５：Ｃ，５９．４０；Ｈ，５．３８；Ｎ，１９．４０
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ，５９．２２；Ｈ，５．４５；Ｎ，１９．３８
ｍ．ｐ．：２２９−２３１℃
［工程３］１−メチル−４−｛［４−（｛４−［（１−メチルピロール−２−イル）カルボニル］アミノ−１−メチルピロール−２−イル｝カルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノピロール−２−カルボン酸（３４）の合成；
2007029364.tif 000027
化合物３３（１２７ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）をメタノール（２．０ｍＬ）に溶解し、２．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加えた。反応溶液を６０℃に加温し、２時間攪拌した。減圧下メタノールを除去し、残った溶液を水（５ｍＬ）で希釈し、エーテル（３ｍＬ）で洗浄した。水層を１０％塩酸によりｐＨ３程度に調整し、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）により抽出した。有機層をひとつにまとめ、飽和塩化ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）で洗浄後、無水硫酸マグネシウムにより乾燥し、無水硫酸マグネシウムをろ別除去した。ろ液を減圧濃縮し、残渣を減圧下乾燥することで、化合物３４を１２３ｍｇ（ｑｕａｎｔ．）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１２．１３（ｂｒ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），９．９３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８９（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８２（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），７．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９１Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．１０Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８３Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８４Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．８１Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７３Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９４Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５５Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５８Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８５（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８３（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６１．９４，１５８．５９，１５８．４７，１５８．４３，１２８．０９，１２５．４５，１２２．７５，１２２．６８，１２２．５８，１２２．２６，１２２．０８，１２０．２４，１１７．５０，１１８．４５，１１２．６３，１０８．３８，１０６．６２，１０４．６９，３６．２０，３６．０８
ＨＲＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：４９２．１９８９（Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２４Ｈ２６Ｎ７Ｏ５：４９２．１９９５）
Ａｎａｌ  Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２４Ｈ２５Ｎ７Ｏ５＋ＭｅＯＨ：Ｃ，５７．３５；Ｈ，５．５８；Ｎ，１８．７３
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ，５６．９５；Ｈ，５．６４；Ｎ，１８．５６
ｍ．ｐ．：１８０−１８２℃
［工程４］９−フルオロレンニルメチル  ３［（４−｛［４−（｛４−［（１−メチルピロール−２−イル）カルボニル］アミノ−１−メチルピロール−２−イル｝カルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノ−１−メチルピロール２−イル）カルボニル］アミノピロピル−１−カルバメート（３５）の合成；
2007029364.tif 000028
化合物３４（１．００ｇ，２．０４ｍｍｏｌ）と前記前工程８で合成した化合物２６（０．７４ｇ，２．２４ｍｍｏｌ）を、ジシクロヘキシルカルボジイミド（０．６３ｇ，３．０６ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンズトリアゾール（０．４１ｇ，３．０６ｍｍｏｌ）と共にアルゴン雰囲気下ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（０．３９ｍＬ，２．２４ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で１２時間攪拌した。その後、反応溶液を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、１０％塩酸（５０ｍＬ×３）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ×３）、および飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムによって乾燥させた。無水硫酸マグネシウムをろ別除去し、ろ液を減圧下濃縮後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１９：１）によって精製することで化合物３５を１．３５ｇ（８６％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．９３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８９（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８２（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），８．３１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．５５Ｈｚ，Ｂｏｃ−ＮＨ），７．９０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．４８Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），７．７０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３１Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），７．４１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３７Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），７．３３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４２Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−Ｈ），７．２８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６７Ｈｚ，Ｐｙ−ＣＯＮＨ），７．２５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．６５Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．１９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１７Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０６（ｄ，２Ｈ．Ｐｙ−Ｈ），６．９５（ｄ．１Ｈ，Ｊ＝１．７９Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６４Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．３２Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５７Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ）４．３２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．８４Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−ＣＨ２），４．２２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６４Ｈｚ，Ｆｍｏｃ−ＣＨ），３．８９（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８５（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８０（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．１７（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．１５Ｈｚ，Ｊ＝５．２７Ｈｚ，−ＮＨＣＨ２−），３．０２（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４４Ｈｚ，Ｊ＝６．２８Ｈｚ），１．６２（ｔｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６８Ｈｚ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６１．２７，１５８．５０，１５８．４６，１５６．１２，１４３．９３，１４０．７４，１２８．１１，１２７．５８，１２８．０４，１２５．４７，１２５．１１，１２２．９１，１２２．７９，１２２．１９，１２２．１６，１２２．０９，１２０．１０，１１８．４３，１１７．８０，１１２．６４，１０６．６４，１０４，７１，１０４．１３，６５．２１，４８．５９，４６．７８，３８．０５，３６．２１，３６．０７．３５．９９，２９．６６
ＨＲＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：７７０．３４００（Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ４２Ｈ４４Ｎ９Ｏ６：７７０．３４１５）
Ａｎａｌ  Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ４２Ｈ４３Ｎ９Ｏ６＋ＭｅＯＨ：Ｃ，６２．９９；Ｈ，６．０２；Ｎ，１５．３７
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ，６２．９２；Ｈ，５．７９；Ｎ，１５．１９
［工程５］
３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−Ｎ２−｛３−［（４−｛［４−（｛４−［（１−メチルピロール−２−イル）−カルボニル］アミノ−１−メチルピロール−２−イル｝カルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノ−１−メチルピロール−２−イル）−カルボニル］アミノプロピル｝−Ｏ６−［２−（４−ニトロフェニル）エチル−２’−デオキシグアノシン（３６）の合成；
2007029364.tif 000029
化合物３５（１．００ｇ，１．３０ｍｍｏｌ）と前記前工程７−３で合成した化合物２３（０．６９ｇ，１．３６ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ＤＭＦ（５．０ｍＬ）に溶解した．続いて、トリエチルアミン（１．０ｍＬ）を加え６０℃で１２時間攪拌した。反応溶液を減圧下濃縮後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２９：１）によって精製することで化合物３６を１．０７ｇ（７９％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．９３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８８（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８２（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），８．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，ＮＰＥ−Ｈ），８．０３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），８．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４２Ｈｚ，−ＣＨ２ＮＨ−），７．６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ，ＮＰＥ−Ｈ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．６９Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），７．０３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｎ２−Ｈ），６．９５−６．９２（ｍ，３Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），６．２５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．７８，Ｈ−１’），６．０７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６５Ｈｚ，Ｊ＝３．８６Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），５．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），４．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．５９Ｈｚ，ＮＰＥ−Ｈ），４．３１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．５９Ｈｚ，Ｈ−４’），４．２２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’），３．８９（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８５（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８０（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．３７（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２ＮＨ−），３．２７（ｍ，４Ｈ，−ＣＯＣＨ２，ＮＰＥ−ＣＨ２），３．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’），２．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’’）．２．０８（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），１．９９（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），１．７７（ｔｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７５Ｈｚ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１７０．０１，１６１．３３，１６０．０１，１５８．７２，１５８．６０，１５８．５０，１５７．８６，１４６．７２，１４６．２４，１３０．２２，１２８．１０，１２５．４７，１２３．３９，１２２．９６，１２２．７９，１２２．２０，１２２．０９，１１８．４３，１１７．７５，１１２．６４，１０６．６３，１０４．７１，１０４．１６，８１．３７，７４．２４，６５．４２，６３．６５，３６．２１，３６．０７，３５．９１，３４．３３，２０．７８，２０．４８
ＨＲＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：１０３１．４１４８（Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ４９Ｈ５５Ｎ１４Ｏ１２：１０３１．４１２４）
［工程６］
３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−Ｎ２−｛３−［（４−｛［４−（｛４−［（１−メチルピロール−２−イル）−カルボニル］アミノ−１−メチルピロール−２−イル｝カルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノ−１−メチルピロール−２−イル）カルボニル］アミノプロピル｝−２’−デオキシグアノシン（３７）の合成；
2007029364.tif 000030
化合物３６（２２．８ｍｇ，２２・ｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下０．５Ｍ  ＤＢＵ／ピリジン溶液（１．０ｍＬ）に溶解した。室温で１２時間攪拌した後、塩化アンモニウム（５０．０ｍｇ，０．９４ｍｍｏｌ）で反応を止めた。反応溶液を減圧下濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝４：１）によって精製し、化合物３７を１５．６ｍｇ（８０％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．６７（ｂｒ，１Ｈ，Ｈ−１），９．９３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８８（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８２（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），８．０５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６１Ｈｚ，Ｐｙ−ＣＯＮＨ），７．８７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），７．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５２Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６２Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５８，Ｐｙ−Ｈ），６．９５−６．９０（ｍ，３Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），６．５３（ｂｒ，１Ｈ，Ｎ２−Ｈ），６．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．００Ｈｚ，Ｈ−１’），６．０６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６１Ｈｚ，Ｊ＝３．８８Ｈｚ，Ｈ−１’），５．４１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），４．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’），４．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’），３．８９（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８５（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８１（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３）３．３６（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２ＮＨ−），３．２５（ｍ，４Ｈ，−ＣＯＣＨ２，），３．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’），２．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’’），２．０８（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），１．７５（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１７０．１２，１７０．０１，１６１．４３，１５８．６１，１５８．５０，１５８．４６，１５６．７３，１５２．５８，１５０．４５，１３６．２５，１２８．１０，１２５．４６，１２２．８９，１２２．７８，１２２．１８，１４６．７２，１４６．２４，１３０．２２，１２８．１０，１２５．４７，１２３．３９，１２２．９６，１２２．７９，１２２．２０，１２２．０９，１１８．４２，１１７．２８，１１２．６３，１０６．６４，１０４．７２，１０４．２２，８３．２８，８１．３３，７９．１６，７４．１２，６３．６７，３８．１８，３６．２１，３６．０７，３５．９０，３５．０５，２９．１８，２０．７６，２０．４７
ＨＲＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：８８２．３６６１（Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ４１Ｈ４８Ｎ１３Ｏ１０：８８１．８９）
［工程７］
Ｎ２−｛３−［（４−｛［４−（｛４−［（１−メチルピロール−２−イル）−カルボニル］アミノ−１−メチルピロール−２−イル｝カルボニル）アミノ−１−メチルピロール−２−イル］カルボニル｝アミノ−１−メチルピロール−２−イル）カルボニル］アミノプロピル｝−２’−デオキシグアノシン（３８）の合成；
2007029364.tif 000031
化合物３７（６０．０ｍｇ，７６・ｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下ピリジン（０．２ｍＬ）に溶解した。続いて０．０Ｍナトリウムメトキシド／メタノール溶液（０．８ｍＬ）を加え、室温で２時間攪拌した。Ｄｏｗｅｘ−５０（Ｈ＋ｆｏｒｍ）を用いて反応溶液をｐＨ６とし、樹脂をろ別除去した。ろ液を減圧下濃縮後、残渣にメタノールを加え再結晶を行った。生じた結晶を吸引ろ過により採取し、化合物３８を５１．６ｍｇ（９７％）得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１０．５６（ｂｒ，１Ｈ，Ｈ−１），９．９３（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８９（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），９．８４（ｓ，１Ｈ，Ｐｙ−ＮＨ），８．０８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−８），７．９０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４９Ｈｚ，−ＣＨ２ＮＨ−），７．２４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６６Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），７．２０（ｍ，２Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），７．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６５Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ），６．９５−６．８９（ｍ，３Ｈ，Ｐｙ−Ｈ），６．５２（ｂｒ，１Ｈ，Ｎ２−Ｈ），６．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６７，Ｈ−１’），６．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６５Ｈｚ，Ｐｙ−Ｈ）５．２７（ｂｒ，１Ｈ，５’−ＯＨ），４．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，Ｈ−３’），４．３６（ｂｒ，１Ｈ，３’−ＯＨ），３．８８（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３），３．８６（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３’），３．８５（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３’），３．８２（ｓ，３Ｈ，Ｐｙ−ＣＨ３’），３．８１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’），３．５５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５’），３．５１（ｍ，Ｈ１，Ｈ−５’’），３．３２（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．４７，Ｊ＝６．４９，−ＣＨ２ＮＨ−），３．２５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２ＮＨ），２．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’），２．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’’），１．７５（ｍ，２Ｈ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６１．４４，１５８．６０，１５８．４６，１５６．７５，１５２．５４，１５０．５０，１３５．７５，１２８．１１，１２５．４５，１２２．７５，１２２．０８，１１８．４２，１１７．８４，１１６．８７，１１２．６３，１０６．６４，１０４．７１，１０４．２４，８７．５７，８２．７６，７０．８６，６１．８３，３８．１８，３６．２１，３６．０７，３５．９２，２９．１８
ＨＲＥＳＩＭＳ  ｍ／ｚ：７９８．３４４５（Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３７Ｈ４４Ｎ１３Ｏ８：７９８．３４３６）
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３７Ｈ４３Ｎ１３Ｏ８＋３Ｈ２Ｏ＋ＭｅＯＨ：Ｃ，５１．６４；Ｈ，６．０４；Ｎ，２０．６０
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ，５１．８５；Ｈ，５．８８；Ｎ，２０．４８
本発明者らは、上記のとおり、新規遺伝情報制御分子としての有用性が期待されるＭＧＢポリアミド−ヌクレオシドハイブリッド化合物を合成した。
【産業上の利用可能性】
【０００８】
本発明のピロールアミド−２’−デオキシグアノシンハイブリッド化合物３８は、生合成によりｓｓＤＮＡに組み込まれた際にピロールポリアミドが特異的に認識するサイトを有するｓｓＤＮＡに対して安定な二重結合を形成する。また、極めて高い塩基配列選択能を有する。このように、本発明のＭＧＢポリアミド−ヌクレオシドハイブリッド化合物は高い塩基配列選択能を有する新規遺伝情報制御分子であり、アンチセンスドラッグへの効果的な応用が期待できる。
【国際調査報告】
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