【手続補正書】
【提出日】平成31年2月25日(2019.2.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的多重反応監視（ＭＲＭ）取得実験の間に示差移動度スペクトロメトリー（ＤＭＳ）デバイスを使用してマトリクスサンプルの脂質を定量化するためのシステムであって、前記システムは、
マトリクスサンプルの第１の注入および第２の注入を連続して受容し、前記マトリクスの既知の脂質分子を前記第１の注入および前記第２の注入から経時的に分離するように構成された、分離デバイスであって、前記実験の前に、前記マトリクスの前記既知の脂質分子が脂質クラスに群化されており、前記脂質クラスはさらに、他の脂質分子との同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含まない通過群と、同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む移動度分離群とに群化されている、分離デバイスと、
前記第１の注入および前記第２の注入について分離された脂質分子を前記分離デバイスから受容し、前記第１の注入および前記第２の注入について前記分離された脂質分子をイオン化するように構成された、イオン源と、
前記第１の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第１のビームを受容し、イオン移動度分離を伴わずに前記第１のビームを通過させ、前記第２の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第２のビームを受容し、前記移動度分離群の脂質クラス毎に実験的に事前に決定された補償電圧（ＣｏＶ）値に従って前記第２のビームを連続的に移動度分離するように構成された、ＤＭＳデバイスと、
第１の複数のサイクルについて前記第１のイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記通過群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第１の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第１の強度値のセットを記憶し、第２の複数のサイクルについて前記第２の移動度分離されたイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記移動度分離群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第２の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第２の強度値のセットを記憶するように構成された、タンデム質量分析計であって、各脂質分子の各ＭＲＭ遷移が実験的に事前に決定されている、タンデム質量分析計と、
前記質量分析計および前記ＤＭＳデバイスと通信し、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットを受信し、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の既知の標準に関するＭＲＭ強度および濃度値を受信し、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットと、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の前記既知の標準に関する前記ＭＲＭ強度および濃度値とを比較することによって、前記マトリクスサンプル中の各脂質分子を定量化するように構成された、プロセッサと、
を備える、システム。
【請求項２】
前記分離デバイスが、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）デバイスを備える、請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記分離デバイスが、低キャリーオーバー管を通して前記第１の注入および前記第２の注入を受容する、請求項１に記載のシステム。
【請求項４】
前記タンデム質量分析計がさらに、脂質クラス毎に事前に決定された極性を使用して、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の脂質分子毎に各ＭＲＭスキャンを行う、請求項１に記載のシステム。
【請求項５】
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の増加順に順序付けられる、請求項１に記載のシステム。
【請求項６】
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の減少順に順序付けられる、請求項１に記載のシステム。
【請求項７】
前記マトリクスが、血漿、心臓、肝臓、脳、筋肉、全血、尿、および細胞のうちの１つを含む、請求項１に記載のシステム。
【請求項８】
前記マトリクスが、乳、食用油、および食肉のうちの１つを含む、請求項１に記載のシステム。
【請求項９】
前記マトリクスの前記既知の脂質分子が群化される脂質クラスが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）、ヘキソシルセラミド（ＨＣｅｒ）、ラクトシルセラミド（ＬＣｅｒ）、ジヘキソシルセラミド（ＤＣｅｒ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、カルジオリピン（ＣＬ）、および酸化脂肪酸代謝物（エイコサノイド）を含む、請求項１に記載のシステム。
【請求項１０】
前記マトリクスが血漿を含み、血漿の前記既知の脂質分子が群化される脂質クラスが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）、ヘキソシルセラミド（ＨＣｅｒ）、ラクトシルセラミド（ＬＣｅｒ）、およびジヘキソシルセラミド（ＤＣｅｒ）を含む、請求項１に記載のシステム。
【請求項１１】
標的多重反応監視（ＭＲＭ）取得実験の間に示差移動度スペクトロメトリー（ＤＭＳ）デバイスを使用してマトリクスサンプルの脂質を定量化するための方法であって、前記方法は、
分離デバイスを使用して、マトリクスサンプルの第１の注入および第２の注入を連続して受容し、前記マトリクスの既知の脂質分子を前記第１の注入および前記第２の注入から経時的に分離するステップであって、ここで、前記実験の前に、前記マトリクスの前記既知の脂質分子が脂質クラスに群化されており、前記脂質クラスはさらに、他の脂質分子との同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含まない通過群と、同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む移動度分離群とに群化されている、ステップと、
イオン源を使用して、前記第１の注入および前記第２の注入について分離された脂質分子を前記分離デバイスから受容し、前記第１の注入および前記第２の注入について前記分離された脂質分子をイオン化する、ステップと、
ＤＭＳデバイスを使用して、前記第１の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第１のビームを受容し、イオン移動度分離を伴わずに前記第１のビームを通過させる、ステップと、
前記ＤＭＳデバイスを使用して、前記第２の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第２のビームを受容し、前記移動度分離群の脂質クラス毎に実験的に事前に決定された補償電圧（ＣｏＶ）値に従って前記第２のビームを連続的に移動度分離する、ステップと、
タンデム質量分析計を使用して、第１の複数のサイクルについて前記第１のイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記通過群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第１の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第１の強度値のセットを記憶するステップと、
前記タンデム質量分析計を使用して、第２の複数のサイクルについて前記第２の移動度分離されたイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記移動度分離群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第２の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第２の強度値のセットを記憶するステップであって、ここで、各脂質分子の各ＭＲＭ遷移が実験的に事前に決定されている、ステップと、
プロセッサを使用して、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットを受信し、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の既知の標準に関するＭＲＭ強度および濃度値を受信し、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットと、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の前記既知の標準に関する前記ＭＲＭ強度および濃度値とを比較することによって、前記マトリクスサンプル中の各脂質分子を定量化する、ステップと、
を含む、方法。
【請求項１２】
前記第１の注入および前記第２の注入からの前記マトリクスの既知の脂質分子を経時的に分離するステップが、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を行うことを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行うステップがさらに、脂質クラス毎に事前に決定された極性を使用することを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の減少順に順序付けられる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の増加順に順序付けられる、請求項１１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
その結果、手ごろな時間量内で、特定のタイプのサンプルマトリクス中に存在する全脂質を同定および定量化するためのシステムおよび方法が、必要とされる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
システムおよび方法の種々の実施形態が、標的多重反応監視（ＭＲＭ）取得実験の間に示差移動度スペクトロメトリー（ＤＭＳ）デバイスを使用して特定のマトリクスの既知の脂質分子を定量化するために提供される。実験の前に、前記マトリクスの前記既知の脂質分子が脂質クラスに群化され、前記脂質クラスはさらに、通過群および移動度分離群に群化される。通過群は、他の脂質分子との同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含まない。移動度分離群は、同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
前記質量分析計および前記ＤＭＳデバイスと通信したプロセッサは、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットと、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の前記既知の標準に関するＭＲＭ強度および濃度値とを比較することによって、前記マトリクスサンプル中の各脂質分子を適用、定量化する。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
標的多重反応監視（ＭＲＭ）取得実験の間に示差移動度スペクトロメトリー（ＤＭＳ）デバイスを使用してマトリクスサンプルの脂質を定量化するためのシステムであって、前記システムは、
マトリクスサンプルの第１の注入および第２の注入を連続して受容し、前記マトリクスの既知の脂質分子を前記第１の注入および前記第２の注入から経時的に分離するように構成された、分離デバイスであって、前記実験の前に、前記マトリクスの前記既知の脂質分子が脂質クラスに群化されており、前記脂質クラスはさらに、他の脂質分子との同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む通過群と、同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む移動度分離群とに群化されている、分離デバイスと、
前記第１の注入および前記第２の注入について分離された脂質分子を前記分離デバイスから受容し、前記第１の注入および前記第２の注入について前記分離された脂質分子をイオン化するように構成された、イオン源と、
前記第１の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第１のビームを受容し、イオン移動度分離を伴わずに前記第１のビームを通過させ、前記第２の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第２のビームを受容し、前記移動度分離群の脂質クラス毎に実験的に事前に決定された補償電圧（ＣｏＶ）値に従って前記第２のビームを連続的に移動度分離するように構成された、ＤＭＳデバイスと、
第１の複数のサイクルについて前記第１のイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記通過群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第１の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第１の強度値のセットを記憶し、第２の複数のサイクルについて前記第２の移動度分離されたイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記移動度分離群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第２の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第２の強度値のセットを記憶するように構成された、タンデム質量分析計であって、各脂質分子の各ＭＲＭ遷移が実験的に事前に決定されている、タンデム質量分析計と、
前記質量分析計および前記ＤＭＳデバイスと通信し、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットを受信し、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の既知の標準に関するＭＲＭ強度および濃度値を受信し、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットと、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の前記既知の標準に関する前記ＭＲＭ強度および濃度値とを比較することによって、前記マトリクスサンプル中の各脂質分子を定量化するように構成された、プロセッサと、
を備える、システム。
（項目２）
前記分離デバイスが、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）デバイスを備える、項目１に記載のシステム。
（項目３）
前記分離デバイスが、低キャリーオーバー管を通して前記第１の注入および前記第２の注入を受容する、項目１に記載のシステム。
（項目４）
前記タンデム質量分析計がさらに、脂質クラス毎に事前に決定された極性を使用して、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の脂質分子毎に各ＭＲＭスキャンを行う、項目１に記載のシステム。
（項目５）
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の増加順に順序付けられる、項目１に記載のシステム。
（項目６）
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の減少順に順序付けられる、項目１に記載のシステム。
（項目７）
前記マトリクスが、血漿、心臓、肝臓、脳、筋肉、全血、尿、および細胞のうちの１つを含む、項目１に記載のシステム。
（項目８）
前記マトリクスが、乳、食用油、および食肉のうちの１つを含む、項目１に記載のシステム。
（項目９）
前記マトリクスの前記既知の脂質分子が群化される脂質クラスが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）、ヘキソシルセラミド（ＨＣｅｒ）、ラクトシルセラミド（ＬＣｅｒ）、ジヘキソシルセラミド（ＤＣｅｒ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、カルジオリピン（ＣＬ）、および酸化脂肪酸代謝物（エイコサノイド）を含む、項目１に記載のシステム。
（項目１０）
前記マトリクスが血漿を含み、血漿の前記既知の脂質分子が群化される脂質クラスが、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）、コレステリルエステル（ＣＥ）、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド（ＣＥＲ）、ヘキソシルセラミド（ＨＣｅｒ）、ラクトシルセラミド（ＬＣｅｒ）、およびジヘキソシルセラミド（ＤＣｅｒ）を含む、項目１に記載のシステム。
（項目１１）
標的多重反応監視（ＭＲＭ）取得実験の間に示差移動度スペクトロメトリー（ＤＭＳ）デバイスを使用してマトリクスサンプルの脂質を定量化するための方法であって、前記方法は、
分離デバイスを使用して、マトリクスサンプルの第１の注入および第２の注入を連続して受容し、前記マトリクスの既知の脂質分子を前記第１の注入および前記第２の注入から経時的に分離するステップであって、ここで、前記実験の前に、前記マトリクスの前記既知の脂質分子が脂質クラスに群化されており、前記脂質クラスはさらに、他の脂質分子との同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む通過群と、同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む移動度分離群とに群化されている、ステップと、
イオン源を使用して、前記第１の注入および前記第２の注入について分離された脂質分子を前記分離デバイスから受容し、前記第１の注入および前記第２の注入について前記分離された脂質分子をイオン化する、ステップと、
ＤＭＳデバイスを使用して、前記第１の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第１のビームを受容し、イオン移動度分離を伴わずに前記第１のビームを通過させる、ステップと、
前記ＤＭＳデバイスを使用して、前記第２の注入について前記分離された脂質分子のイオンの第２のビームを受容し、前記移動度分離群の脂質クラス毎に実験的に事前に決定された補償電圧（ＣｏＶ）値に従って前記第２のビームを連続的に移動度分離する、ステップと、
タンデム質量分析計を使用して、第１の複数のサイクルについて前記第１のイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記通過群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第１の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第１の強度値のセットを記憶するステップと、
前記タンデム質量分析計を使用して、第２の複数のサイクルについて前記第２の移動度分離されたイオンビームを前記ＤＭＳデバイスから受容し、前記移動度分離群の各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行い、前記第２の複数のサイクルについて各ＭＲＭスキャンの第２の強度値のセットを記憶するステップであって、ここで、各脂質分子の各ＭＲＭ遷移が実験的に事前に決定されている、ステップと、
プロセッサを使用して、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットを受信し、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の既知の標準に関するＭＲＭ強度および濃度値を受信し、前記第１の強度値のセットおよび前記第２の強度値のセットと、前記マトリクスの前記既知の脂質分子の前記既知の標準に関する前記ＭＲＭ強度および濃度値とを比較することによって、前記マトリクスサンプル中の各脂質分子を定量化する、ステップと、
を含む、方法。
（項目１２）
前記第１の注入および前記第２の注入からの前記マトリクスの既知の脂質分子を経時的に分離するステップが、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を行うことを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
各脂質クラスの脂質分子毎に少なくとも１つのＭＲＭ遷移に関するＭＲＭスキャンを行うステップがさらに、脂質クラス毎に事前に決定された極性を使用することを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の減少順に順序付けられる、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記移動度分離群の脂質クラスがさらに、前記イオンの第２のビームの分析の間の前記ＤＭＳデバイスのＣｏＶ値を変化させるために必要とされる時間を短縮するために、ＣｏＶ値の増加順に順序付けられる、項目１１に記載の方法。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
本質的に、群４５１および４５２は、それぞれ、ＤＭＳをオンにした状態およびオンにしない状態でＭＳ／ＭＳを行うことを可能にする。これらの群を別個に分析することによって、装置を使用した総分析時間が短縮される。言い換えると、通過デバイスとして作用するＤＭＳを用いて群４５２の脂質クラスを分析することは、全体的分析時間を減少させる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
実験の前に、マトリクスの既知の脂質分子は、脂質クラスに群化され、脂質クラスはさらに、通過群と、移動度分離群とに群化される。通過群は、他の脂質分子との同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含まない。移動度分離群は、同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
図６の方法のステップ６１０では、マトリクスサンプルの第１の注入および第２の注入が、連続して受容され、マトリクスの既知の脂質分子が、分離デバイスを使用して、第１の注入および第２の注入から経時的に分離される。実験の前に、マトリクスの既知の脂質分子は、脂質クラスに群化される。脂質クラスはさらに、他の脂質分子との同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含まない通過群と、同重体干渉を生成することが既知の脂質分子を伴う脂質クラスを含む移動度分離群とに群化される。