【手続補正書】
【提出日】平成19年5月11日(2007.5.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】ローヤルゼリー中の下記に示す性質を有するタンパク質を指標とする事を特徴とする、ローヤルゼリーの鮮度の評価方法。
トーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフィーにより保持時間約２５分にピークを有するタンパク質。
【請求項２】ローヤルゼリー中における鮮度の指標物質であるタンパク質の含有量を、ローヤルゼリー中の総タンパク質量に対する割合で表すことを特徴とする、請求項１に記載のローヤルゼリーの鮮度の評価方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ローヤルゼリーの鮮度の評価方法に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
ローヤルゼリーは、滋養強壮作用を有する素材として知られており、これを主成分とした健康食品などが広く販売されているが、その生理活性の本体全てが未だ決定されておらず、その為、その生理活性には、ロット差が大きく、活性値としてコントロールされていないのが現状であった。何故なら、天然成分であるため、内容成分の構成にバラツキがある場合があるからであり、その有効成分が正確に配合されているかどうかが問題となっている。特に、ローヤルゼリーの様に、その有効性が如実に認められ、それ自身が複数の成分からなるものは、どの物質を指標として、有効性や品質を分析・評価するかを決めるのが困難である。従って、製剤や品質の安定性の面で特に、健康食品などに配合されるロー
ヤルゼリーについて、ロット毎の有効性の度合いやそれ自身の劣化の基準となる鮮度の指標物質の策定が望まれていた。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
一方、ローヤルゼリー中のタンパク質成分をトーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフィーで分析した結果、保持時間約２５分にピークを有し、且つ該タンパク質は、熱に弱く分解することも知られていなかった。又、そのタンパク質がローヤルゼリーの鮮度の指標になることも知られていなかった。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【課題の解決手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは鋭意研究努力を重ねた結果、ローヤルゼリー中の鮮度の指標物質が即ち、トーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフィーで分析した結果、保持時間約２５分にピークを有し、且つ該タンパク質は、熱に弱く分解することも知られていなかった。又、該タンパク質の含有量や分解の度合いを指標とすることにより、ローヤルゼリーの鮮度の推定が可能であり、このタンパク質を指標とするローヤルゼリーの鮮度の指標物質になることを見いだし、発明を完成させるに至った。本発明は、次に示す技術に関するものである。（１）ローヤルゼリー中のタンパク質を指標とする事を特徴とする、ローヤルゼリーの鮮度の指標物質。（２）該タンパク質が、下記に示す性質を有するものであることを特徴とする、（１）記載の鮮度の指標物質。該タンパク質がトーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフィーにより保持時間２５分にピークを有するタンパク質と決定される（１）記載の鮮度の指標物質。（３）指標物質が、ローヤルゼリーの鮮度を示すことを特徴とする、（１）又は（２）に記載の鮮度の指標物質。（４）（１）〜（３）何れか一項に記載の鮮度の指標物質のローヤルゼリー中に於ける含有量をローヤルゼリー中の総タンパク質量に対する割合で表わすローヤルゼリーの鮮度の指標。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のローヤルゼリー
本発明の組成物は、ローヤルゼリーを必須成分とすることを特徴とする。ローヤルゼリーの化学的組成は、生産地により、多少の差異はあるが、水分６５〜７０％、タンパク質１５〜２０％、炭水化物１０〜１５％、脂肪１．７〜６％、灰分０．７〜２％含むとされている。ローヤルゼリーの生物学的・薬理学的作用については、老化予防作用、酵素作用、抗菌作用、抗腫瘍作用、血液・循環器に対する作用などが知られている。本発明の鮮度の指標物質であるタンパク質は、トーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出する、高速液体クロマトグラフィーにより保持時間２５分にピークを有するタンパク質であることを特徴とする。このタンパク質は本発明者らによって、はじめてローヤルゼリーの鮮度の指標物質であると認められたタンパク質であり、熱に対して不安定である。ここで、この該タンパク質の含有量であるが、採取直後の鮮度の良いローヤルゼリー中の総タンパク質量に対して、約５重量％以上を含んでいることを特徴とする。このタンパク質はＧＰＣカラムを用いた高速液体クロマトグラフィーによって定量する事ができる。即ち、該指標物質の多少により、ローヤルゼリーの鮮度の程度がわかる。更に、ローヤルゼリーを採取直後より、経時的に保存し、この指標物質を定量した場合、この指標物質の含有量は単調に減少し、それに伴い、上記に示した鮮度も同様に減少するため、上記タンパク質はローヤルゼリーの鮮度の指標物質であることがわかる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
（２）高速液体クロマトグラフィーによるローヤルゼリー中の鮮度の指標物質（タンパク質）分析
上記の指標物質は、高速液体クロマトグラフィーによるゲル濾過でも識別・定量することが出来る。従って、この様な分析結果をもって、品質管理や効果の鑑別・評価に使用することもできる。かかるゲル濾過分析は、通常に知られている方法に従って行えば良く、この様な好ましい例としては、例えば、トーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出した結果、鮮度の指標タンパク質を求めることが挙げられる。この分析条件下では上記指標タンパク質は、保持時間約２５分にピークとして現れる。また、該タンパク質の含有量は、採取直後の鮮度の良いローヤルゼリー中の総タンパク質量に対して、約５重量％含んでいた。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
＜実施例１＞
ローヤルゼリー中の鮮度の指標タンパク質を各種保存温度（４℃、２０℃、３０℃、４０℃、４０℃）で保存し、安定性を高速液体クロマトグラフィーにて分析した。高速液体クロマトグラフィーの条件は、トーソー株式会社製ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷをカラムとして用いて、０．３Ｍ塩化ナトリウム、０．０５％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液とし、流速を０．３ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度を３５℃に設定し、２８０ｎｍの吸光度で検出した結果、鮮度の指標タンパク質の保持時間は約２５分
にピークとして現れる。また、該タンパク質の含有量は、採取直後の鮮度の良いローヤルゼリー中の総タンパク質量に対して、約５重量％含んでいた。その指標タンパクの安定性を表１に示す。４０℃及び５０℃の保存条件では各々６日及び４日後では、鮮度指標のタンパク質は検出されず、又４℃の条件でも７日後に約４０％減少している。この様にローヤルゼリーの鮮度の指標としては、極めて精度の良い鮮度指標タンパク質である。