【手続補正書】
【提出日】令和1年8月5日(2019.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩｇＧ  Ｆｃドメイン；機能的三量体化ドメイン；およびグルココルチコイド誘導ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）の受容体結合ドメインを含む単離された一本鎖ポリペプチドサブユニットであって、三量体または六量体タンパク質に自己組織化し得る、ポリペプチドサブユニット。
【請求項２】
アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、前記ＩｇＧ  Ｆｃドメイン、その後に前記三量体化ドメイン、その後に前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインを含み、場合により前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインのカルボキシ末端が、第１のリンカー領域を介して前記三量体化ドメインのアミノ末端に融合され、かつ／または前記三量体化ドメインのカルボキシ末端が、第２のリンカー領域を介して前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインのアミノ末端に融合される、請求項１に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項３】
前記第１のリンカー領域、前記第２のリンカー領域、または前記第１および第２のリンカー領域が、存在する場合、（Ｇｌｙ４）ｎモチーフ、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎモチーフ（配列番号１９）、Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎモチーフ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＬ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡ（配列番号２４）、およびそれらの組み合わせ（式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０からなる群から選択される正の整数である）を含有するリンカー領域からなる群から独立して選択され、場合により前記第１のリンカー領域がＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２０）であり、かつ前記第２のリンカー領域が（Ｇｌｙ４）モチーフである、請求項１または２に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項４】
前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧ４Ｐ  Ｆｃドメイン、またはその変異体を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項５】
前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５６Ｅ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基置換を有し、ここで前記残基はＥＵ付番に従って付番される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項６】
前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが配列番号２１のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項７】
前記三量体化ドメインが、α−ヘリカルコイルドコイルドメイン、ロイシンジッパードメイン、またはそれらの組み合わせを含み、場合により前記三量体化ドメインが、マトリリン１、コロニン１ａ、筋強直性ジストロフィーキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ランゲリン、またはそれらの組み合わせから誘導される、請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項８】
前記三量体化ドメインが、配列番号１０のコロニン１ａ三量体化ドメインを含み、場合により前記コロニン１ａ三量体化ドメインが、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、またはその任意の組み合わせもしくは変異体のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項９】
前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが配列番号３５、配列番号３６または配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項１０】
前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ここで配列番号３５の残基１１２はアスパルチル残基である、請求項９に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項１１】
６つの前記ポリペプチドサブユニットから構築される六量体タンパク質が、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し得る、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項１２】
配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項１３】
関連の異種薬剤をさらに含み、場合により
（ａ）前記異種薬剤が異種ポリペプチドであり、かつ前記ポリペプチドサブユニットとペプチド結合を介して融合される、または
（ｂ）前記異種薬剤が、前記ポリペプチドサブユニットに化学的に結合される、または
（ｃ）前記異種薬剤が、細胞傷害性分子、安定化剤、免疫応答修飾因子、または検出可能な薬剤を含む、
請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の３つのポリペプチドサブユニットを含む三量体タンパク質。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の６つのポリペプチドサブユニットを含む六量体タンパク質。
【請求項１６】
ヒト、または非ヒト霊長類、任意選択的にはカニクイザル、アカゲザル、またはそれらの任意の組み合わせに由来するＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞で発現されるようなグルココルチコイド誘導ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）に特異的に結合し得、ここで前記ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞またはＢ細胞が任意選択的に抗原を経験するか、または前記ＮＫ細胞が任意選択的に活性化される、請求項１５に記載の六量体タンパク質。
【請求項１７】
ヒトＧＩＴＲに対する結合親和性が、動力学的排除アッセイによって測定されるとき、約５４ｎＭ〜約１１１ｎＭであり、場合により前記結合親和性が、動力学的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）において測定されるとき、約８２ｎＭである、請求項１５または１６に記載の六量体タンパク質。
【請求項１８】
ＧＩＴＲ陽性免疫細胞からの用量依存性増殖および用量依存性サイトカイン放出を誘導し得、場合により
（ａ）前記六量体タンパク質が、チミジン取り込みによって測定されるとき、約０．１〜約２．７ｎＭのＥＣ５０で、一次抗原を経験したヒトＴ細胞の増殖を刺激し得る、
（ｂ）前記六量体タンパク質の前記ＥＣ５０が約０．５ｎＭである、
（ｃ）前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、またはそれらの任意の組み合わせである、
請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の六量体タンパク質。
【請求項１９】
ＧＩＴＲ発現細胞における下流シグナル伝達経路を活性化し得、任意選択的には前記下流シグナル伝達経路はＮＦκＢ経路またはＭＡＰＫ経路である、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の六量体タンパク質。
【請求項２０】
がん治療を必要とする被験者への有効用量の投与が、前記被験者における腫瘍成長を阻害し得、場合により腫瘍成長が、アイソタイプに合致した対照の投与と比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも１００％阻害される、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の六量体タンパク質。
【請求項２１】
請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質、および担体を含む組成物。
【請求項２２】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット、または請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質をコードする核酸を含み場合により配列番号５の核酸を含むポリヌクレオチド。
【請求項２３】
請求項２２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項２４】
請求項２２に記載のポリヌクレオチドまたは請求項２３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチドサブユニット、または請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質を産生する方法であって、請求項２４に記載の宿主細胞を、前記ポリヌクレオチドまたはベクターによってコードされる前記ポリペプチドサブユニットまたは六量体タンパク質が発現される条件下で培養するステップと、前記ポリペプチドサブユニットまたは六量体タンパク質を回収するステップと、を含む、方法。
【請求項２６】
抗原を経験したＴ細胞および／またはＮＫ細胞の生存または増殖を促進するための方法であって、抗原を経験したＴ細胞および／またはＮＫ細胞を、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質または請求項２１に記載の組成物と接触させるステップを含み、ここで前記六量体タンパク質は前記Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞の表面上のＧＩＴＲに特異的に結合し得る、方法。
【請求項２７】
活性化されたＧＩＴＲを発現する免疫細胞からのサイトカイン放出を誘導する方法であって、これらの細胞を、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質または請求項２１に記載の組成物と接触させるステップを含み、ここで前記六量体タンパク質はこれらの細胞の表面上のＧＩＴＲに特異的に結合し得、場合により前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、またはそれらの任意の組み合わせである、方法。
【請求項２８】
Ｔ細胞またはＮＫ細胞活性化を促進する方法であって、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質または請求項２１に記載の組成物と接触させるステップを含み、ここで前記六量体タンパク質は前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞の表面上のＧＩＴＲに特異的に結合し得、場合により前記六量体タンパク質を、前記ＦｃドメインとＦｃγＲを発現する細胞との相互作用を通じて架橋するステップをさらに含む、方法。
【請求項２９】
被験者におけるがんを治療する方法であって、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質、または請求項２１に記載の組成物を有効量で治療を必要とする被験者に投与するステップを含む、方法。
【請求項３０】
被験者における免疫応答を増強する方法であって、それを必要とする被験者に請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質、または請求項２１に記載の組成物を治療有効量で投与するステップを含み、場合によりそれを必要とする前記被験者ががんを有する、方法。
【請求項３１】
前記がんが固形腫瘍であり、場合により前記被験者が、結腸直腸がん、乳がん、肝細胞がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺がん、中皮腫、頭頚部がん、胃がん、膵がん、黒色腫、ぶどう膜黒色腫、腎臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、神経膠芽腫、睾丸がん、甲状腺がん、前立腺がん、食道がん、膀胱がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、血液がん、またはそれらの組み合わせを有する、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記六量体タンパク質または組成物の投与により、腫瘍成長が阻害され得るか、腫瘍減少が促進され得るか、またはその双方である、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３３】
腫瘍成長阻害が、ＮＫ細胞またはＴ細胞の存在下で達成され、場合により腫瘍成長が、ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが欠如したアイソタイプに合致した対照の投与と比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは１００％阻害される、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３４】
被験者におけるがんを治療する方法であって、Ｔ細胞プライミング剤と組み合わせてまたはＯＸ４０アゴニストと組み合わせて、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の六量体タンパク質、または請求項２１に記載の組成物を有効量で治療を必要とする被験者に投与するステップを含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５２】
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］ＩｇＧ  Ｆｃドメイン；機能的多量体化ドメイン；およびグルココルチコイド誘導ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）の受容体結合ドメインを含む単離された一本鎖ポリペプチドサブユニットであって、三量体または六量体タンパク質に自己組織化し得る、ポリペプチドサブユニット。
［実施形態２］前記多量体化ドメインが三量体化ドメインである、実施形態１に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３］アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、前記ＩｇＧ  Ｆｃドメイン、その後に前記多量体化または三量体化ドメイン、その後に前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインを含む、実施形態１または２に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４］前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインのカルボキシ末端が、第１のリンカー領域を介して前記多量体化または三量体化ドメインのアミノ末端に融合される、実施形態１〜３のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態５］前記多量体化または三量体化ドメインのカルボキシ末端が、第２のリンカー領域を介して前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインのアミノ末端に融合される、実施形態１〜４のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態６］前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインのカルボキシ末端が、前記多量体化または三量体化ドメインのアミノ末端に直接的に融合される、実施形態１〜４のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態７］前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、そのアミノ末端にＩｇＧヒンジ領域を含む、実施形態５または６に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態８］前記ＩｇＧヒンジ領域が、完全な重鎖間ジスルフィド結合形成を与える突然変異を含む、実施形態５または６に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態９］前記ＩｇＧヒンジ領域が、ＩｇＧ１ヒンジ領域、ＩｇＧ４ヒンジ領域、またはその変異体を含む、実施形態７または８に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１０］前記ＩｇＧ４ヒンジ領域が、ＥＵ付番に従う２２８位にセリンからプロリンへの突然変異（Ｓ２２８Ｐ）を有する（ＩｇＧ４Ｐ）、実施形態９に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１１］前記ＩｇＧ  ＦｃドメインがヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインである、実施形態１〜１０のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１２］前記多量体化または三量体化ドメインのカルボキシ末端が、前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインのアミノ末端に直接的に融合される、実施形態１〜４または６〜１０のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１３］前記第１のリンカー領域、前記第２のリンカー領域、または前記第１および第２のリンカー領域が、存在する場合、（Ｇｌｙ４）ｎモチーフ、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎモチーフ（配列番号１９）、Ｓｅｒ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎモチーフ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＬ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡ（配列番号２４）、およびそれらの組み合わせ（式中、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０からなる群から選択される正の整数である）を含有するリンカー領域からなる群から独立して選択される、実施形態５〜１２のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１４］前記第１および第２のリンカー領域が、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２５）、およびＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号２６）からなる群から独立して選択される、実施形態１３に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１５］前記第１のリンカー領域がＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２０）であり、かつ前記第２のリンカー領域が（Ｇｌｙ４）モチーフである、実施形態１３または１４に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１６］前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧ４Ｐ  Ｆｃドメイン、またはその変異体を含む、実施形態１〜１５のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１７］前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５６Ｅ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基置換を有し、ここで前記残基はＥＵ付番に従って付番される、実施形態１〜１６のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１８］前記ＩｇＧ  ＦｃドメインがＣＨ２領域を含む、実施形態１〜１７のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態１９］前記ＩｇＧ  ＦｃドメインがＣＨ３領域をさらに含む、実施形態１８に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２０］前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが、配列番号２１に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１９に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２１］前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインが配列番号２１のアミノ酸配列を含む、実施形態１９に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２２］前記三量体化ドメインが、α−ヘリカルコイルドコイルドメイン、ロイシンジッパードメイン、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態１〜２１のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２３］前記三量体化ドメインが、マトリリン１、コロニン１ａ、筋強直性ジストロフィーキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ランゲリン、またはそれらの組み合わせから誘導される、実施形態２２に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２４］前記三量体化ドメインが、マトリリン１またはコロニン１ａから誘導される、実施形態２３に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２５］前記三量体化ドメインが、コロニン１ａから誘導される、実施形態２４に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２６］前記三量体化ドメインが、配列番号１１に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するコロニン１ａ三量体化ドメインを含む、実施形態２５に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２７］前記コロニン１ａ三量体化ドメインが配列番号１１のアミノ酸配列を含む、実施形態２６に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２８］前記三量体化ドメインが、配列番号１０のコロニン１ａ三量体化ドメインを含む、実施形態２６に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態２９］前記コロニン１ａ三量体化ドメインが、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、またはその任意の組み合わせもしくは変異体のアミノ酸配列を含む、実施形態２６に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３０］前記三量体化ドメインが、配列番号２８に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するマトリリン１三量体化ドメインを含む、実施形態２４に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３１］前記三量体化ドメインが、配列番号３０に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するＤＭＰＫ三量体化ドメインを含む、実施形態２３に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３２］前記三量体化ドメインが、配列番号３２に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するランゲリン三量体化ドメインを含む、実施形態２３に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３３］前記三量体化ドメインが、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、または配列番号３３のアミノ酸配列を含む、実施形態２３に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３４］前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが、配列番号３４に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１〜３３のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３５］前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが、配列番号３７に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで残基１６１はアスパラギル残基ではない、実施形態１〜３３のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３６］前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが配列番号３５のアミノ酸配列を含む、実施形態３５に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３７］前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが配列番号３５のアミノ酸配列を含み、ここで残基１６１はアスパルチル残基である、実施形態１〜３３のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３８］前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが配列番号３６のアミノ酸配列を含む、実施形態３７に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態３９］前記ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが配列番号３７のアミノ酸配列を含む、実施形態３８に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４０］６つの前記ポリペプチドサブユニットから構築される六量体タンパク質が、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し得る、実施形態１〜３９のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４１］前記タンパク質がグリコシル化されない、実施形態１〜４０のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４２］配列番号６に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１〜４１のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４３］配列番号６のアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４４］アゴニスト活性を有する、実施形態１〜４３のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４５］関連の異種薬剤をさらに含む、実施形態１〜４４のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４６］前記異種薬剤が異種ポリペプチドであり、かつ前記ポリペプチドサブユニットとペプチド結合を介して融合される、実施形態４５に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４７］前記異種ポリペプチドが前記ＩｇＧ−ＦｃドメインのＮ末端に融合されるか、ＧＩＴＲＬの前記受容体結合ドメインのＣ末端に融合されるか、前記ＩｇＧ−ＦｃドメインのＣ末端および前記三量体化ドメインのＮ末端に融合されるか、またはＧＩＴＲＬの前記三量体化ドメインのＣ末端および前記受容体結合ドメインのＮ末端に融合される、実施形態４６に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４８］前記異種薬剤が、前記ポリペプチドサブユニットに化学的に結合される、実施形態４５に記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態４９］前記異種薬剤が、細胞傷害性分子、安定化剤、免疫応答修飾因子、または検出可能な薬剤を含む、実施形態４５〜４８のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット。
［実施形態５０］実施形態１〜４９のいずれかに記載の３つのポリペプチドサブユニットを含む三量体タンパク質。
［実施形態５１］実施形態１〜４９のいずれかに記載の６つのポリペプチドサブユニットを含む六量体タンパク質。
［実施形態５２］ヒト、または非ヒト霊長類、任意選択的にはカニクイザル、アカゲザル、またはそれらの任意の組み合わせに由来するＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞で発現されるようなグルココルチコイド誘導ＴＮＦ受容体（ＧＩＴＲ）に特異的に結合し得、ここで前記ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞またはＢ細胞が任意選択的に抗原を経験するか、または前記ＮＫ細胞が任意選択的に活性化される、実施形態５１に記載の六量体タンパク質。
［実施形態５３］ヒト、または非ヒト霊長類、任意選択的にはカニクイザル、アカゲザル、またはそれらの任意の組み合わせに由来する一次ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞で発現されるようなＧＩＴＲに特異的に結合し得る、実施形態５２に記載の六量体タンパク質。
［実施形態５４］前記ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞が抗原を経験する、実施形態５２または５３のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態５５］ヒトＧＩＴＲに対する結合親和性が、動力学的排除アッセイによって測定されるとき、約５４ｎＭ〜約１１１ｎＭである、実施形態５１または５４に記載の六量体タンパク質。
［実施形態５６］前記結合親和性が、動力学的排除アッセイ（ＫｉｎＥｘＡ）において測定されるとき、約８２ｎＭである、実施形態５５に記載の六量体タンパク質。
［実施形態５７］ＧＩＴＲ陽性免疫細胞からの用量依存性増殖および用量依存性サイトカイン放出を誘導し得る、実施形態５１〜５６のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態５８］前記ＧＩＴＲ陽性免疫細胞が、プレートに基づくアッセイにおけるＴ細胞である、実施形態５７に記載の六量体タンパク質。
［実施形態５９］前記細胞が、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＮＫ、またはＢ細胞である、実施形態５２〜５８のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態６０］前記ＧＩＴＲ陽性免疫細胞、Ｔ細胞、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはＢ細胞が抗原を経験し、かつ／またはＮＫ細胞が活性化される、実施形態５７〜５９のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態６１］チミジン取り込みによって測定されるとき、約０．１〜約２．７ｎＭのＥＣ５０で、一次抗原を経験したヒトＴ細胞の増殖を刺激し得る、実施形態６０に記載の六量体タンパク質。
［実施形態６２］前記ＥＣ５０が約０．５ｎＭである、実施形態６１に記載の六量体タンパク質。
［実施形態６３］前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、またはそれらの任意の組み合わせである、実施形態５７に記載の六量体タンパク質。
［実施形態６４］ＧＩＴＲ発現細胞における下流シグナル伝達経路を活性化し得、任意選択的には前記下流シグナル伝達経路はＮＦκＢ経路またはＭＡＰＫ経路である、実施形態５１〜６３のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態６５］前記ＧＩＴＲ発現細胞がＴ細胞である、実施形態６４に記載の六量体タンパク質。
［実施形態６６］前記ＧＩＴＲ発現Ｔ細胞が、前記ＮＦκＢシグナル伝達経路の刺激に応答してルシフェラーゼを生成する、ＧＩＴＲを発現するＪｕｒｋａｔ  ＮＦκＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞である、実施形態６４に記載の六量体タンパク質。
［実施形態６７］がん治療を必要とする被験者への有効用量の投与が、前記被験者における腫瘍成長を阻害し得る、実施形態５１〜６６のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態６８］前記腫瘍成長阻害が、ＧＩＴＲ陽性免疫細胞、任意選択的にはＴ細胞またはＮＫ細胞の存在下で達成される、実施形態６７に記載の六量体タンパク質。
［実施形態６９］腫瘍成長が、アイソタイプに合致した対照の投与と比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも１００％阻害される、実施形態６７または６８に記載の六量体タンパク質。
［実施形態７０］前記ポリペプチドサブユニットが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃドメインを含み、かつＧＩＴＲへの結合を通じてＧＩＴＲを発現するＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖およびサイトカイン活性化を誘導し得るが、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞に対する補体依存性または抗体依存性細胞傷害性を実質的に誘導しない、実施形態５１〜６９のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態７１］前記ポリペプチドサブユニットが、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含み、かつ高レベルのＧＩＴＲを発現する細胞に対してＦｃ受容体依存性細胞傷害性を誘導する、実施形態５１〜６９のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態７２］前記ポリペプチドサブユニットが、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩＧ４Ｐ  Ｆｃドメインを含み、かつＧＩＴＲへの結合を通じてＧＩＴＲ発現細胞の増殖を誘導し得る、実施形態５１〜６９のいずれかに記載の六量体タンパク質。
［実施形態７３］前記Ｆｃ受容体依存性細胞傷害性が、抗体依存細胞傷害性または抗体依存性食作用である、実施形態７１に記載の六量体タンパク質。
［実施形態７４］高レベルのＧＩＴＲを発現する前記細胞が腫瘍細胞である、実施形態７１に記載の六量体タンパク質。
［実施形態７５］高レベルのＧＩＴＲを発現する前記細胞が、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔ細胞または抗原を経験したＣＤ４＋ＦＯＸＰ３−Ｔ細胞である、実施形態７１に記載の六量体タンパク質。
［実施形態７６］対照と比べて、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞の頻度における減少をもたらす、実施形態７１に記載の六量体タンパク質。
［実施形態７７］対照と比べて、腫瘍内部のＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞の頻度における減少をもたらす、実施形態７１に記載の六量体タンパク質。
［実施形態７８］実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質、および担体を含む組成物。
［実施形態７９］実施形態１〜４９のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット、または実施形態５１〜７８のいずれかに記載の六量体タンパク質をコードする核酸を含むポリヌクレオチド。
［実施形態８０］前記ポリペプチドサブユニットに作動可能に連結されるシグナルペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態７９に記載のポリヌクレオチド。
［実施形態８１］前記シグナルペプチドをコードする前記核酸が、前記ポリペプチドサブユニットの前記ＩｇＧ  Ｆｃドメインのアミノ末端をコードする核酸に作動可能に連結される、実施形態８０に記載のポリヌクレオチド。
［実施形態８２］配列番号５を含む、実施形態７９に記載のポリヌクレオチド。
［実施形態８３］実施形態７９〜８２のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
［実施形態８４］実施形態７９〜８２のいずれかに記載のポリヌクレオチドまたは実施形態８３に記載のベクターを含む宿主細胞。
［実施形態８５］実施形態１〜４９のいずれかに記載のポリペプチドサブユニット、または実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質を産生する方法であって、実施形態８４に記載の宿主細胞を、前記ポリヌクレオチドまたはベクターによってコードされる前記ポリペプチドサブユニットまたは六量体タンパク質が発現される条件下で培養するステップと、前記ポリペプチドサブユニットまたは六量体タンパク質を回収するステップと、を含む、方法。
［実施形態８６］抗原を経験したＴ細胞および／またはＮＫ細胞の生存または増殖を促進するための方法であって、抗原を経験したＴ細胞および／またはＮＫ細胞を、実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質または実施形態７８に記載の組成物と接触させるステップを含み、ここで前記六量体タンパク質は前記Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞の表面上のＧＩＴＲに特異的に結合し得る、方法。
［実施形態８７］活性化されたＧＩＴＲを発現する免疫細胞からのサイトカイン放出を誘導する方法であって、これらの細胞を、実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質または実施形態７８に記載の組成物と接触させるステップを含み、ここで前記六量体タンパク質はこれらの細胞の表面上のＧＩＴＲに特異的に結合し得る、方法。
［実施形態８８］前記サイトカインが、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＧＭ−ＣＳＦ、またはそれらの任意の組み合わせである、実施形態８７に記載の方法。
［実施形態８９］前記ＧＩＴＲを発現する免疫細胞が、抗原を経験したＣＤ４＋Ｔ細胞、抗原を経験したＣＤ８＋Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞またはそれらの組み合わせである、実施形態８７または８８のいずれかに記載の方法。
［実施形態９０］前記活性化ＮＫ細胞、抗原を経験したＣＤ４＋もしくは抗原を経験したＣＤ８＋Ｔ細胞が、ヒトＮＫ細胞、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、カニクイザルＮＫ細胞、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、アカゲザルＮＫ細胞、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせである、実施形態８６〜８９のいずれかに記載の方法。
［実施形態９１］Ｔ細胞またはＮＫ細胞活性化を促進する方法であって、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を、実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質または実施形態７８に記載の組成物と接触させるステップを含み、ここで前記六量体タンパク質は前記Ｔ細胞またはＮＫ細胞の表面上のＧＩＴＲに特異的に結合し得る、方法。
［実施形態９２］前記六量体タンパク質を、前記ＦｃドメインとＦｃγＲを発現する細胞との相互作用を通じて架橋するステップをさらに含む、実施形態９１に記載の方法。
［実施形態９３］ＦｃγＲを発現する前記細胞が、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、骨髄もしくは形質細胞様樹状細胞、濾胞樹状細胞、ランゲルハンス細胞、内皮細胞、ＮＫ細胞、好中球、好酸球、血小板、肥満細胞、一次ヒト腫瘍もしくは腫瘍灌流もしくは非灌流リンパ節に由来するＣＤ４５＋細胞、他の二次もしくは三次リンパ様構造に由来するＣＤ４５＋細胞、またはそれらの組み合わせである、実施形態９２に記載の方法。
［実施形態９４］ＮＫ細胞またはＴ細胞活性化が、前記ＮＦκＢまたはＭＡＰＫシグナル伝達経路の刺激を通じて測定され得る、実施形態９１〜９３のいずれかに記載の方法。
［実施形態９５］前記ＮＫまたはＴ細胞が、活性化ＮＫ細胞、抗原を経験したＣＤ４＋Ｔ細胞、抗原を経験したＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせである、実施形態９１〜９４のいずれかに記載の方法。
［実施形態９６］前記ＮＫ細胞、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞が、一次ヒトＮＫ細胞、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、カニクイザルＮＫ細胞、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、アカゲザルＮＫ細胞、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞、またはそれらの組み合わせである、実施形態９５に記載の方法。
［実施形態９７］前記接触させるステップが、前記六量体タンパク質または前記六量体タンパク質を含む組成物を有効量で被験者に投与するステップを含む、実施形態８６〜９６のいずれかに記載の方法。
［実施形態９８］被験者におけるがんを治療する方法であって、実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質、または実施形態７８に記載の組成物を有効量で治療を必要とする被験者に投与するステップを含む、方法。
［実施形態９９］前記被験者がヒト被験者またはイヌ被験体である、実施形態９８に記載の方法。
［実施形態１００］前記がんが固形腫瘍である、実施形態９８に記載の方法。
［実施形態１０１］前記固形腫瘍が、結腸直腸がん、乳がん、肝細胞がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、中皮腫、頭頚部がん、胃がん、膵がん、黒色腫、ぶどう膜黒色腫、腎臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、神経膠芽腫、睾丸がん、甲状腺がん、前立腺がん、および食道がんからなる群から選択されるがんに関連する、実施形態１００に記載の方法。
［実施形態１０２］前記がんが血液がんである、実施形態９８に記載の方法。
［実施形態１０３］前記血液がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される、実施形態１０２に記載の方法。
［実施形態１０４］前記六量体タンパク質または組成物の投与により、腫瘍成長が阻害され得るか、腫瘍減少が促進され得るか、またはその双方である、実施形態９８〜１０３のいずれかに記載の方法。
［実施形態１０５］腫瘍成長阻害が、ＮＫ細胞またはＴ細胞の存在下で達成される、実施形態９８〜１０４のいずれかに記載の方法。
［実施形態１０６］腫瘍成長が、ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが欠如したアイソタイプに合致した対照の投与と比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは１００％阻害される、実施形態１０４または実施形態１０５に記載の方法。
［実施形態１０７］前記六量体タンパク質が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃドメインを含み、かつ抗原を経験したＧＩＴＲ発現免疫細胞の増殖をＧＩＴＲへの結合を通じて誘導し得るが、前記活性化免疫細胞に対する補体依存性または抗体依存性細胞傷害性を実質的に誘導しない、実施形態９８〜１０６のいずれかに記載の方法。
［実施形態１０８］前記ＧＩＴＲ発現免疫細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態１０７に記載の方法。
［実施形態１０９］前記六量体タンパク質が、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含み、かつ高レベルのＧＩＴＲを発現する細胞のＮＫ細胞および／またはマクロファージ媒介性の抗体依存細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または抗体依存性細胞食作用を誘導する、実施形態９８〜１０６のいずれかに記載の方法。
［実施形態１１０］高レベルのＧＩＴＲを発現する前記細胞が腫瘍細胞である、実施形態１０９に記載の方法。
［実施形態１１１］高レベルのＧＩＴＲを発現する前記細胞がＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔ細胞である、実施形態１０９に記載の方法。
［実施形態１１２］前記六量体タンパク質が、対照と比べて、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞の頻度における減少をもたらす、実施形態１１１に記載の方法。
［実施形態１１３]
前記六量体タンパク質が、対照と比べて、腫瘍内部のＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞の頻度における減少をもたらす、実施形態１１１に記載の方法。
［実施形態１１４］被験者における免疫応答を増強する方法であって、それを必要とする被験者に実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質、または実施形態７８に記載の組成物を治療有効量で投与するステップを含む、方法。
［実施形態１１５］前記被験者が、ヒト被験者またはイヌ被験体である、実施形態１１４に記載の方法。
［実施形態１１６］それを必要とする前記被験者ががんを有する、実施形態１１５に記載の方法。
［実施形態１１７］前記がんが固形腫瘍である、実施形態１１６に記載の方法。
［実施形態１１８］前記被験者が、結腸直腸がん、乳がん、肝細胞がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺がん、中皮腫、頭頚部がん、胃がん、膵がん、黒色腫、ぶどう膜黒色腫、腎臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、神経膠芽腫、睾丸がん、甲状腺がん、前立腺がん、食道がん、膀胱がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、血液がん、またはそれらの組み合わせを有する、実施形態１１４〜１１７のいずれかに記載の方法。
［実施形態１１９］前記がんが血液がんである、実施形態１１８に記載の方法。
［実施形態１２０］前記血液がんが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、および慢性骨髄性白血病からなる群から選択される、実施形態１１９に記載の方法。
［実施形態１２１］前記六量体タンパク質または組成物の投与により、腫瘍成長が阻害され得るか、腫瘍減少が促進され得るか、またはその双方である、実施形態１１４〜１２０のいずれかに記載の方法。
［実施形態１２２］腫瘍成長阻害が、ＮＫ細胞またはＴ細胞の存在下で達成される、実施形態１１４〜１２１のいずれかに記載の方法。
［実施形態１２３］腫瘍成長が、ＧＩＴＲＬ受容体結合ドメインが欠如したアイソタイプに合致した対照の投与と比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは１００％阻害される、実施形態１２１または１２２のいずれかに記載の方法。
［実施形態１２４］前記六量体タンパク質が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＧ４Ｐ  Ｆｃドメインを含み、かつ活性化されたＧＩＴＲ発現免疫細胞の増殖をＧＩＴＲへの結合を通じて誘導し得るが、前記活性化免疫細胞に対する補体依存性または抗体依存性細胞傷害性を実質的に誘導しない、実施形態１１４〜１２３のいずれかに記載の方法。
［実施形態１２５］前記ＧＩＴＲ発現免疫細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態１２４に記載の方法。
［実施形態１２６］前記六量体タンパク質が、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含み、かつ高レベルのＧＩＴＲを発現する細胞のＮＫ細胞および／またはマクロファージ媒介性の抗体依存細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または抗体依存性細胞食作用を誘導する、実施形態１１４〜１２３のいずれかに記載の方法。
［実施形態１２７］高レベルのＧＩＴＲを発現する前記細胞が腫瘍細胞である、実施形態１２６に記載の方法。
［実施形態１２８］高レベルのＧＩＴＲを発現する前記細胞がＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔ細胞である、実施形態１２６に記載の方法。
［実施形態１２９］前記六量体タンパク質が、対照と比べて、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞の頻度における減少をもたらす、実施形態１２６に記載の方法。
［実施形態１３０］前記六量体タンパク質が、対照と比べて、腫瘍内部のＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋制御性Ｔ細胞の頻度における減少をもたらす、実施形態１２６に記載の方法。
［実施形態１３１］被験者における固形腫瘍を治療する方法であって、実施形態１に記載の単離された一本鎖ポリペプチドサブユニットおよびＯＸ４０アゴニストを前記被験者に投与するステップを含む、方法。
［実施形態１３２］前記ＯＸ４０アゴニストが、ＯＸ４０リガンド融合タンパク質または抗ＯＸ４０抗体の１つ以上である、実施形態１３１に記載の方法。
［実施形態１３３］前記ＯＸ４０リガンド融合タンパク質がＭＥＤＩ６３８３である、実施形態１３２に記載の方法。
［実施形態１３４］前記抗ＯＸ４０抗体がＭＥＤＩ０５６２である、実施形態１３２に記載の方法。
［実施形態１３５］被験者におけるがんを治療する方法であって、Ｔ細胞プライミング剤と組み合わせて、実施形態５１〜７７のいずれかに記載の六量体タンパク質、または実施形態７８に記載の組成物を有効量で治療を必要とする被験者に投与するステップを含む、方法。
［実施形態１３６］前記Ｔ細胞プライミング剤が、Ｅ７合成ロングペプチド（ＳＬＰ）にＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドを加えたものである、実施形態１３６に記載の方法。
上に引用した参照文献の全て、ならびに本明細書で引用する全ての参照文献は、全体として参照により本明細書に組み込むものとする。