【手続補正書】
【提出日】平成31年3月15日(2019.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）をインビトロで不活性化する方法であって、
ＨＩＶ長末端反復（ＬＴＲ）プロモーターの少なくともコア領域およびトランス活性型応答要素（ＴＡＲ）を含む短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターと操作可能に結合している、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼをコードしている単離核酸配列を含む組成物を、
被検体に投与する工程、または哺乳動物細胞に接触させる工程を含む、方法。
【請求項２】
上記単離核酸配列はさらに、ＨＩＶ中の標的核酸配列に相補的な少なくとも１つのガイドＲＮＡをコードしている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記ＨＩＶ中の標的核酸配列は、ＨＩＶのコード領域内または非コード領域内の配列を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
上記非コード領域はＨＩＶの長末端反復配列を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
上記標的核酸配列はＨＩＶの長末端反復内の配列を含み、
上記ＨＩＶの長末端反復内の上記配列は、上記短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターの配列を全く含まない配列であって、Ｕ３領域内、Ｒ領域内またはＵ５領域内の配列である配列を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
上記哺乳動物細胞は潜伏感染細胞であり、
上記潜伏感染細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、マクロファージ、単球、腸関連リンパ系細胞、小膠細胞、および星状膠細胞からなる群から選択されるか、または、上記哺乳動物細胞は、（i）ＨＩＶに感染した被検体に由来する培養細胞、（ii）組織外植片、もしくは（iii）細胞株を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
上記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼはＣａｓ９であり、
上記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼは、ヒト細胞における発現のために最適化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
上記組成物は、トランス活性型小型ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）をコードしている配列をさらに含み、
上記ｔｒａｃｒＲＮＡは、ガイドＲＮＡをコードしている配列と融合している、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
上記組成物は、核局在化シグナルをコードしている配列をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
上記組成物は、発現ベクターと操作可能に結合しており、
上記発現ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
上記組成物は、上記ＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターのエンハンサー領域をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーターの少なくともコア領域およびトランス活性型応答要素（ＴＡＲ）を含む短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターと操作可能に結合している、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼをコードしている配列を有する、単離核酸配列。
【請求項１３】
上記配列はさらに、ＨＩＶのコード領域内または非コード領域内の標的核酸配列に相補的な少なくとも１つのガイドＲＮＡをコードしている、請求項１２に記載の単離核酸配列。
【請求項１４】
上記非コード領域は、ＨＩＶの長末端反復、または当該ＨＩＶの上記長末端反復内の配列を含み、
上記ＨＩＶの長末端反復内の上記配列は、上記短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターの配列を全く含まない配列であって、Ｕ３領域内、Ｒ領域内またはＵ５領域内の配列である配列を含む、請求項１３に記載の単離核酸配列。
【請求項１５】
上記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼはＣａｓ９であり、
上記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼは、ヒト細胞における発現のために最適化されている、請求項１２に記載の単離核酸配列。
【請求項１６】
トランス活性型小型ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）をコードしている配列をさらに含み、
上記ｔｒａｃｒＲＮＡは、ガイドＲＮＡをコードしている配列と融合している、請求項１２に記載の単離核酸配列。
【請求項１７】
核局在化シグナルをコードしている配列さらに含む、請求項１２に記載の単離核酸配列。
【請求項１８】
上記単離核酸配列は、発現ベクターと操作可能に結合しており、
上記発現ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項１２に記載の単離核酸配列。
【請求項１９】
上記ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターのエンハンサー領域をさらに含む、請求項１２に記載の単離核酸配列。
【請求項２０】
薬学的に許容される担体、ならびに、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーターの少なくともコア領域およびトランス活性型応答要素（ＴＡＲ）を含む短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターと操作可能に結合している、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼをコードしている核酸配列を含む、薬学的組成物。
【請求項２１】
上記薬学的に許容される担体は、脂質系コロイドまたは重合体系コロイドを含み、
上記コロイドは、リポソーム、ヒドロゲル、微粒子、ナノ粒子、またはブロック共重合体ミセルである、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
上記薬学的組成物は、局所適用用に製剤されている、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
上記薬学的組成物は、コンドーム内に収容されている、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
上記配列はさらに、ＨＩＶ中の標的核酸配列に相補的な少なくとも１つのガイドＲＮＡをコードしている、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
上記ＨＩＶ中の標的核酸配列は、ＨＩＶのコード領域内または非コード領域内の配列を含み、
上記非コード領域は、ＨＩＶの長末端反復配列を含む、請求項２４に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
上記標的核酸配列は、ＨＩＶの上記長末端反復内の配列を含み、
上記ＨＩＶの長末端反復内の上記配列は、上記短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターの配列を全く含まない配列であって、Ｕ３領域内、Ｒ領域内またはＵ５領域内の配列である配列を含む、請求項２５に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
上記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼはＣａｓ９であり、
上記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼは、ヒト細胞における発現のために最適化されている、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
ガイドＲＮＡをコードしている配列と融合しているトランス活性型小型ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）をコードしている核酸配列をさらに含む、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
核局在化シグナルをコードしている配列をさらに含む、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
上記薬学的組成物は、発現ベクターと操作可能に結合しており、
上記発現ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
上記配列はさらに、上記ＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターのエンハンサー領域をコードしている、請求項２０に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症を患う被検体を治療するため、または、ＨＩＶに感染した妊婦もしくは授乳婦からその子供への、ＨＩＶ感染症の伝染リスクを低減するための薬学的組成物の製造のための使用であって、
上記薬学的組成物は、ＨＩＶ長末端反復（ＬＴＲ）プロモーターの少なくともコア領域およびトランス活性型応答要素（ＴＡＲ）を含む短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターと操作可能に結合している、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼをコードしている核酸配列を含む。
【請求項３３】
上記配列はさらに、ＨＩＶ中の標的核酸配列に相補的な少なくとも１つのガイドＲＮＡをコードしている、請求項３２に記載の薬学的組成物の製造のための使用。
【請求項３４】
ＨＩＶ感染症は潜伏感染症である、請求項３２に記載の薬学的組成物の製造のための使用。
【請求項３５】
上記薬学的組成物は、局所的または非経口的に投与される、請求項３２に記載の薬学的組成物の製造のための使用。
【請求項３６】
上記ＣＲＩＳＰＲ関連エンドヌクレアーゼはＣａｓ９である、請求項３２に記載の薬学的組成物の製造のための使用。
【請求項３７】
上記薬学的組成物は、発現ベクターと操作可能に結合しており、
上記発現ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群から選択される、請求項３３に記載の薬学的組成物の製造のための使用。
【請求項３８】
上記配列はさらに、上記ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターのエンハンサー領域をコードしている、請求項３３に記載の薬学的組成物の製造のための使用。
【請求項３９】
ＨＩＶ長末端反復（ＬＴＲ）プロモーターの少なくともコア領域およびトランス活性型応答要素（ＴＡＲ）領域を含む短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターと操作可能に結合している、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼ（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）をコードしている核酸配列を含み、
上記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、ヒト細胞における発現のために最適化される、組成物。
【請求項４０】
上記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓは、最初期転写活性化因子（Ｔａｔ）によって活性化され、それによって、ＨＩＶ複製の初期段階に、制限的にＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓを活性化する、最小ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターの制御下にある、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
ＨＩＶ中の標的核酸配列に相補的な少なくとも１つのガイドＲＮＡをさらに含む、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４２】
上記組成物は、トランス活性型小型ＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）をコードしている配列をさらに含み、
上記ｔｒａｃｒＲＮＡは、ガイドＲＮＡをコードしている配列と融合している、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４３】
上記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓは、ウイルスゲノムのセグメントを切除し、
上記セグメントは、ウイルスプロモーター配列および／またはウイルスコーディング配列に及んでいる、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４４】
配列番号１〜２１の何れか１つに対して、少なくとも７５％の配列類似性を有する、単離核酸配列。
【請求項４５】
配列番号１〜２１の何れか１つ、またはその組み合わせを有する、単離核酸配列。
【請求項４６】
（i）ＨＩＶ長末端反復（ＬＴＲ）プロモーターの少なくともコア領域およびトランス活性型応答要素（ＴＡＲ）領域を含む短縮型ＨＩＶ  ＬＴＲプロモーターと操作可能に結合している、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連エンドヌクレアーゼをコードしている配列を含む単離核酸配列、または
（ii）上記単離核酸をコードしているベクター
を含む、一定量の組成物と、
包装材料、使用方法説明を含む添付文書、無菌液、注射器、および無菌容器からなる群から選択される少なくとも１つと、を備えている、キット。