【手続補正書】
【提出日】令和1年7月4日(2019.7.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a)約1未満のlog Poct/wat(log P)を有する親水性ビニルモノマー；および
(b)少なくとも2つのビニル基を含む架橋剤
から形成されたポリマーを含む、単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子。
【請求項２】
(i) 親水性ビニルモノマーが約0.6未満のlog Pを有するか；
(ii) 親水性ビニルモノマーが約0.3未満のlog Pを有するか；または
(iii) 親水性ビニルモノマーが約0未満のlog Pを有する、
請求項1記載のポリマー粒子。
【請求項３】
(i) 親水性ビニルモノマーが0.5〜-2のlog Pを有するか；または
(ii) 親水性ビニルモノマーが0〜-2のlog Pを有する、
請求項1または請求項2記載のポリマー粒子。
【請求項４】
親水性ビニルモノマーが、アクリルアミドモノマーおよび／またはアクリレートモノマーである、請求項1〜3のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項５】
親水性ビニルモノマーが、少なくとも1つの式(I)の化合物：
2018528291.tif 000001
を含み、式中、
R1が、-H、-CH3または-CH2CH3であり；
R2が、-OR3または-N(R4)R5であり；
R3が、-H、-C1〜C6アルキル、または-C1〜C6アルコールであり；かつ
R4およびR5が、-H、-C1〜C6アルキル、-C1〜C6ハロアルキル、-C1〜C6アルコールより各々独立して選択され、
R3および／またはR4および／またはR5が、化学的に可能である場合、1〜5個の置換基によって各々独立して置換されてもよく、該置換基は各出現で各々独立して以下：オキソ、=NRa、=NORa、ハロ、ニトロ、シアノ、NRaRa、NRaS(O)2Ra、NRaCONRaRa、NRaCO2Ra、ORa；SRa、S(O)Ra、S(O)2ORa、S(O)2Ra、S(O)2NRaRa、CO2Ra  C(O)Ra、CONRaRa、C1〜C4-アルキル、C2〜C4-アルケニル、C2〜C4-アルキニル、C1〜C4ハロアルキルより選択され；Raは、HおよびC1〜C4アルキルより各出現で独立して選択される、請求項1〜4のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項６】
(i) 親水性ビニルモノマーが、少なくとも1つのアクリルアミドモノマー、アクリリックモノマー、メタクリルアミドモノマー、またはメタクリリックモノマーより選択されるかまたはこれを含むか；
(ii) 親水性ビニルモノマーが、アクリルアミド、ヒドロキシメチルアクリルアミド、ヒドロキシエチルアクリルアミド、[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]アクリルアミド、3-アクリルアミドプロパン酸、メタクリルアミド、2-ヒドロキシエチルメタクリルアミド、(3-アミノプロピル)メタクリルアミド、または2-ヒドロキシエチルアクリレートより選択されるかまたはこれを含むか；または
(iii) 親水性ビニルモノマーが、アクリルアミド(プロパ-2-エンアミド)、ヒドロキシメチルアクリルアミド、ヒドロキシエチルアクリルアミド、トリスヒドロキシメチルメタクリルアミド、2-ヒドロキシエチルメタクリレートおよびアクリル酸のうちの少なくとも1つより選択されるかまたはこれを含む、
請求項1〜5のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項７】
親水性ビニルモノマーが第1級アミド基(-C(O)NH2)を含む、請求項1〜6のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項８】
(i) 架橋剤が、二官能性、三官能性または四官能性アクリルアミドであるか；または
(ii) 架橋剤が、二官能性アクリルアミドである、
請求項1〜7のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項９】
架橋剤が、少なくとも1つの式(IIa)または(IIb)の化合物：
2018528291.tif 000002
を含み、式中、
R6が、-C1〜C6アルキル-、-C1〜C6ヘテロアルキル-、-C1〜C6シクロアルキル-、-C1〜C6ヒドロキシアルキル-、-C1〜C6エーテル-、または2〜100個のC2〜C3エーテル単位を含むポリエーテルより選択され；
R7およびR8が、-H、-C1〜C6アルキル、-C1〜C6ヘテロアルキル、-C3〜C6シクロアルキル、-C1〜C6ヒドロキシアルキル、または-C1〜C6エーテルより各々独立して選択され；
R9が、-N(R11)C(O)CH=CH2であり；
R10が、-Hおよび-N(R12)C(O)CH=CH2より選択され；かつ
R11およびR12が、-H、-C1〜C6アルキル、-C1〜C6ヘテロアルキル、-C3〜C6シクロアルキル、-C1〜C6ヒドロキシアルキル、または-C1〜C6エーテルより各々独立して選択され；
R6、R7、R8、R9、R10、R11およびR12のうちの1つまたは複数が、化学的に可能である場合、1〜5個の置換基によって独立して置換されていてもよく、該置換基は各出現で各々独立して以下：オキソ、=NRa、=NORa、ハロ、ニトロ、シアノ、NRaRa、NRaS(O)2Ra、NRaCONRaRa、NRaCO2Ra、ORa；SRa、S(O)Ra、S(O)2ORa、S(O)2Ra、S(O)2NRaRa、CO2Ra  C(O)Ra、CONRaRa、C1〜C4-アルキル、C2〜C4-アルケニル、C2〜C4-アルキニル、C1〜C4ハロアルキルより選択され；Raは、H、C1〜C4アルキルおよびC1〜C4アルケニルより各出現で独立して選択される、請求項1〜8のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項１０】
(i) 架橋剤が、約1未満のlog P値を有するか；
(ii) 架橋剤が、約0.5未満のlog P値を有するか；または
(iii) 架橋剤が、約0未満のlog P値を有する、
請求項1〜9のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項１１】
架橋剤が、N,N′-(1,2-ジヒドロキシエチレン)ビスアクリルアミド、N,N′-メチレンビス(アクリルアミド)、N,N′-エチレンビス(アクリルアミド)、グリセロール1,3-ジグリセロレートジアクリレート、ピペラジンジアクリルアミド、N,N'-((エタン-1,2-ジイルビス(オキシ))ビス(エタン-2,1-ジイル))ジアクリルアミド、ポリエチレングリコールジアクリルアミド(MW≦2000)、4-アームPEG-アクリルアミド(MW≦2000)、および／またはN,N-ビス(2-アクリルアミドエチル)アクリルアミドであるかまたはこれを含む、請求項1〜10のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項１２】
架橋剤が、第1級アミン、第2級アミン、ヒドロキシまたはカルボン酸を含まない、請求項1〜11のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項１３】
(i) 架橋レベルが、1〜60%wt架橋剤であるか；
(ii) 架橋レベルが、1〜30%wt架橋剤であるか；
(iii) 架橋レベルが、10〜90%wt架橋剤であるか；または
(iv) 架橋レベルが、25〜60%wt架橋剤である、
請求項1〜12のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項１４】
(i) 0.5μm〜10μmの平均直径を有するか；または
(ii) 0.5μm〜5μmの平均直径を有する、
請求項1〜13のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項１５】
(i) 変動係数(CV)が20%未満であるか；または
(ii) CVが15%未満である、
請求項1〜14のいずれか一項記載のポリマー粒子。
【請求項１６】
単分散シード粒子を形成する方法であって：
N,N-ジメチルアクリルアミド、安定剤、ラジカル開始剤および連鎖移動剤を有機溶媒中に溶解し、反応混合物を形成する工程；ならびに
反応混合物を加熱して開始剤を活性化する工程、
を含み、それによって単分散シード粒子を形成する、方法。
【請求項１７】
(i) 安定剤が、スチレンとポリオレフィンのブロックコポリマーであるか；または
(ii) 安定剤が、ポリ(エチレン-co-ブチレン)の中央ブロックおよびポリスチレンの外側ブロックからなるトリブロックコポリマーである、
請求項16記載の方法。
【請求項１８】
ラジカル開始剤が、過酸化物開始剤またはアゾ開始剤である、請求項16〜17のいずれか一項記載の方法。
【請求項１９】
(i) ラジカル開始剤が、2,2’-アゾビス(2-メチルプロピオニトリル)、2,2'-アゾジ(2-メチルブチロニトリル)、2,2'-アゾビス(2,4-ジメチルバレロニトリル)、過酸化ジベンゾイルより選択されるか；または
(ii) ラジカル開始剤が2,2’-アゾビス(2-メチルプロピオニトリル)である、
請求項16〜18のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
(i) 連鎖移動試薬がチオールまたはハロアルカンであるか；または
(ii) 連鎖移動剤がアルキルチオールである、
請求項16〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
連鎖移動試薬が、1-オクタンチオール、ヘキサンチオール、6-メルカプト-1-ヘキサノール、ベンジルチオール、四塩化炭素およびブロモトリクロロメタンより選択される、請求項16〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
反応混合物が：
約2%wt〜約5%wtの量のN,N-ジメチルアクリルアミド；
約1%wt〜約5%wtの量の安定剤；
約0.01%wt〜約4%wtの量のラジカル開始剤；および
約0.05%wt〜約0.25%wtの量の連鎖移動試薬
を含む、請求項16〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子を形成する方法であって、以下の工程を含む、方法：
水溶液中少なくとも2%wtの親水性ビニルモノマーの溶液(a)を形成する工程であって、溶液が、少なくとも2つのビニル基を含む架橋剤もまた含む、工程；
有機溶媒中の安定剤の溶液(b)を形成する工程であって、有機溶媒は水中に混和性ではなく、溶液(a)および溶液(b)のうちの少なくとも1つがラジカル開始剤を含む、工程；
溶液(a)および(b)を混合して油中水型エマルジョン(c)を形成し、エマルジョンへ単分散シード粒子を添加する工程；
単分散シード粒子がエマルジョン中で膨潤粒子を形成することを可能にする工程；ならびに
膨潤粒子を重合して単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子を形成する工程。
【請求項２４】
親水性ビニルモノマーが、請求項1〜7のいずれか一項にさらに定義される通りである、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
架橋剤が、請求項8〜12のいずれか一項にさらに定義される通りである、請求項23または24記載の方法。
【請求項２６】
(i) 安定剤が非イオン界面活性剤であるか；または
(ii) 安定剤が非イオンポリマー界面活性剤である、
請求項23〜25のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
有機溶媒が、脂肪族炭化水素、脂肪族カーボネート、脂肪族エステル、脂肪族エーテル、芳香族炭化水素、もしくはシリコーン、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも1つを含む、請求項23〜26のいずれか一項記載の方法。
【請求項２８】
単分散シード粒子が、請求項16〜22のいずれか一項記載の方法に従って形成される、請求項23〜27のいずれか一項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
[本発明1001]
(a)約1未満のlog Poct/wat(log P)を有する親水性ビニルモノマー；および
(b)少なくとも2つのビニル基を含む架橋剤
から形成されたポリマーを含む、単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子。
[本発明1002]
親水性ビニルモノマーが約0.6未満のlog Pを有し、任意で、log Pが約0.3未満であり、さらに任意で、log Pが約0未満である、本発明1001のポリマー粒子。
[本発明1003]
親水性ビニルモノマーが0.5〜-2のlog Pを有し、任意で、log Pが0〜-2である、本発明1001または本発明1002のポリマー粒子。
[本発明1004]
親水性ビニルモノマーが、アクリルアミドモノマーおよび／またはアクリレートモノマーである、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1005]
親水性ビニルモノマーが、少なくとも1つの式(I)の化合物：
2018528291.tif 000003
を含み、式中、
R1が、-H、-CH3または-CH2CH3であり；
R2が、-OR3または-N(R4)R5であり；
R3が、-H、-C1〜C6アルキル、または-C1〜C6アルコールであり；かつ
R4およびR5が、-H、-C1〜C6アルキル、-C1〜C6ハロアルキル、-C1〜C6アルコールより各々独立して選択され、
R3および／またはR4および／またはR5が、化学的に可能である場合、1〜5個の置換基によって各々独立して置換されてもよく、該置換基は各出現で各々独立して以下：オキソ、=NRa、=NORa、ハロ、ニトロ、シアノ、NRaRa、NRaS(O)2Ra、NRaCONRaRa、NRaCO2Ra、ORa；SRa、S(O)Ra、S(O)2ORa、S(O)2Ra、S(O)2NRaRa、CO2Ra  C(O)Ra、CONRaRa、C1〜C4-アルキル、C2〜C4-アルケニル、C2〜C4-アルキニル、C1〜C4ハロアルキルより選択され；Raは、HおよびC1〜C4アルキルより各出現で独立して選択される、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1006]
R1が-Hまたは-CH3であり、任意で、R1が-Hである、本発明1005のポリマー粒子。
[本発明1007]
R2が-OR3である、本発明1005または本発明1006のポリマー粒子。
[本発明1008]
R3が-Hである、本発明1005〜1007のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1009]
R4が-Hまたは-C1〜C6アルキルであり、任意で、R4が-Hである、本発明1005〜1008のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1010]
R5が-Hまたは-C1〜C6アルキルであり得、任意で、R5が-Hである、本発明1005〜1009のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1011]
親水性ビニルモノマーが、少なくとも1つのアクリルアミドモノマー、アクリリックモノマー、メタクリルアミドモノマー、またはメタクリリックモノマーより選択されるかまたはこれを含む、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1012]
親水性ビニルモノマーが、アクリルアミド、ヒドロキシメチルアクリルアミド、ヒドロキシエチルアクリルアミド、[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]アクリルアミド、3-アクリルアミドプロパン酸、メタクリルアミド、2-ヒドロキシエチルメタクリルアミド、(3-アミノプロピル)メタクリルアミド、または2-ヒドロキシエチルアクリレートより選択されるかまたはこれを含み；任意で、親水性ビニルモノマーが、アクリルアミド(プロパ-2-エンアミド)、ヒドロキシメチルアクリルアミド、ヒドロキシエチルアクリルアミド、トリスヒドロキシメチルメタクリルアミド、2-ヒドロキシエチルメタクリレートおよびアクリル酸のうちの少なくとも1つより選択されるかまたはこれを含む、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1013]
親水性ビニルモノマーが第1級アミド基(-C(O)NH2)を含む、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1014]
架橋剤が、二官能性、三官能性または四官能性アクリルアミドであり、任意で、架橋剤が二官能性アクリルアミドである、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1015]
架橋剤が、少なくとも1つの式(IIa)または(IIb)の化合物：
2018528291.tif 000004
を含み、式中、
R6が、-C1〜C6アルキル-、-C1〜C6ヘテロアルキル-、-C1〜C6シクロアルキル-、-C1〜C6ヒドロキシアルキル-、-C1〜C6エーテル-、または2〜100個のC2〜C3エーテル単位を含むポリエーテルより選択され；
R7およびR8が、-H、-C1〜C6アルキル、-C1〜C6ヘテロアルキル、-C3〜C6シクロアルキル、-C1〜C6ヒドロキシアルキル、または-C1〜C6エーテルより各々独立して選択され；
R9が、-N(R11)C(O)CH=CH2であり；
R10が、-Hおよび-N(R12)C(O)CH=CH2より選択され；かつ
R11およびR12が、-H、-C1〜C6アルキル、-C1〜C6ヘテロアルキル、-C3〜C6シクロアルキル、-C1〜C6ヒドロキシアルキル、または-C1〜C6エーテルより各々独立して選択され；
任意で、R6、R7、R8、R9、R10、R11およびR12のうちの1つまたは複数が、化学的に可能である場合、1〜5個の置換基によって独立して置換され、該置換基は各出現で各々独立して以下：オキソ、=NRa、=NORa、ハロ、ニトロ、シアノ、NRaRa、NRaS(O)2Ra、NRaCONRaRa、NRaCO2Ra、ORa；SRa、S(O)Ra、S(O)2ORa、S(O)2Ra、S(O)2NRaRa、CO2Ra  C(O)Ra、CONRaRa、C1〜C4-アルキル、C2〜C4-アルケニル、C2〜C4-アルキニル、C1〜C4ハロアルキルより選択され；Raは、H、C1〜C4アルキルおよびC1〜C4アルケニルより各出現で独立して選択される、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1016]
R6が、-C1〜C6アルキル-、-C1〜C6ヒドロキシアルキル-、および2〜100個のC2〜C3エーテル単位を含むポリエーテルより選択され、任意で、R6が、-C1〜C6アルキル-および-C1〜C6ヒドロキシアルキル-より選択され、さらに任意で、R6が-C1〜C6ヒドロキシアルキル-である、本発明1015の化合物。
[本発明1017]
R6が、-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、または-(CH2)4-より選択され、任意で、R6が-(CH2)2-である、本発明1015または本発明1016の化合物。
[本発明1018]
R6が、-C(OH)H-、-(C(OH)H)2-、-(C(OH)H)3-、または-(C(OH)H)4-より選択され、任意で、R6が-(C(OH)H)2-である、本発明1015〜1017のいずれかの化合物。
[本発明1019]
R6が(CH2)r(OCH2CH2)nO(CH2)sであり、
rおよびsが、各々独立して2または3であり、かつ
nが、1〜100の整数である、本発明1015または本発明1016の化合物。
[本発明1020]
rおよびsが各々2であり、nが1〜50の整数である、本発明1019の化合物。
[本発明1021]
R7および／またはR8がHである、本発明1015〜1020のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1022]
架橋剤が、約1未満のlog P値、任意で約0.5未満のlog P値、さらに任意で約0未満のlog P値を有する、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1023]
架橋剤が、N,N′-(1,2-ジヒドロキシエチレン)ビスアクリルアミド、N,N′-メチレンビス(アクリルアミド)、N,N′-エチレンビス(アクリルアミド)、グリセロール1,3-ジグリセロレートジアクリレート、ピペラジンジアクリルアミド、N,N'-((エタン-1,2-ジイルビス(オキシ))ビス(エタン-2,1-ジイル))ジアクリルアミド、ポリエチレングリコールジアクリルアミド(MW≦2000)、4-アームPEG-アクリルアミド(MW≦2000)、および／またはN,N-ビス(2-アクリルアミドエチル)アクリルアミドであるかまたはこれを含む、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1024]
架橋剤が、1,2-ジヒドロキシビス-アクリルアミドであるかまたはこれを含む、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1025]
架橋剤が、N,N'-((エタン-1,2-ジイルビス(オキシ))ビス(エタン-2,1-ジイル))ジアクリルアミド、ポリエチレングリコールジアクリルアミド(MW≦2000)および4-アームPEG-アクリルアミド(MW≦2000)であるかまたはこれを含み、任意で、架橋剤が、N,N'-((エタン-1,2-ジイルビス(オキシ))ビス(エタン-2,1-ジイル))ジアクリルアミドであるかまたはこれを含む、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1026]
架橋剤が、第1級アミン、第2級アミン、ヒドロキシまたはカルボン酸を含まない、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1027]
架橋レベルが、1〜60%wt架橋剤、任意で1〜30%wt架橋剤である；または、架橋レベルが、10〜90%wt架橋剤、任意で25〜60%wt架橋剤である、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1028]
親水性ビニルモノマーが、本発明1014〜1026のいずれかに定義されるような架橋剤である、本発明1001〜1003のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1029]
多孔性である、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1030]
0.5μm〜10μm、任意で0.5μm〜5μmの平均直径を有する、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1031]
変動係数(CV)が20%未満であり、任意で、CVが15%未満である、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1032]
粒子が、粒子へ結合されたオリゴヌクレオチドを含む、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1033]
粒子の各々が、粒子へ結合された複数のオリゴヌクレオチドを含み、任意で、該複数のオリゴヌクレオチドが、各個々の粒子について同一である、前記本発明のいずれかのポリマー粒子。
[本発明1034]
100 nm〜1500 nmのZ平均直径を有する単分散シード粒子であって、各シード粒子が、ポリN,N-ジメチルアクリルアミドの複数の未架橋オリゴマーを含む、単分散シード粒子。
[本発明1035]
オリゴマーが、2,000 Da〜100,000 Daの重量平均分子量(Mw)を有する、本発明1034のシード粒子。
[本発明1036]
オリゴマーが、5,000 Da〜70,000 Da；任意で6,000 Da〜40,000 Da；さらに任意で7,000 Da〜50,000 Daまたは8,000 Da〜40,000 DaのMwを有する、本発明1034または1035のシード粒子。
[本発明1037]
粒子が、安定剤および連鎖移動試薬の存在下で、有機溶媒中でのN,N-ジメチルアクリルアミドのラジカル開始重合によって形成されたシード粒子の特徴を有する、本発明1034〜1036のいずれかのシード粒子。
[本発明1038]
単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子を形成するための本発明1034〜1037のいずれかのシード粒子の使用であって、任意で、単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子が、架橋ポリアクリルアミド粒子である、使用。
[本発明1039]
単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子が、本発明1001〜1033のいずれかにさらに定義される通りである、本発明1038の使用。
[本発明1040]
単分散シード粒子を形成する方法であって：
N,N-ジメチルアクリルアミド、安定剤、ラジカル開始剤および連鎖移動剤を有機溶媒中に溶解し、反応混合物を形成する工程；ならびに
反応混合物を加熱して開始剤を活性化する工程、
を含み、それによって単分散シード粒子を形成する、方法。
[本発明1041]
安定剤が、スチレンとポリオレフィンのブロックコポリマーであり、任意で、安定剤が、ポリ(エチレン-co-ブチレン)の中央ブロックおよびポリスチレンの外側ブロックからなるトリブロックコポリマーである、本発明1040の方法。
[本発明1042]
安定剤が、Kraton A1535H、Kraton G1650M、Kraton G1652M、またはKraton G1657Mより選択されるかまたはこれを含む、本発明1040または本発明1041の方法。
[本発明1043]
ラジカル開始剤が、過酸化物開始剤またはアゾ開始剤である、本発明1040〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
ラジカル開始剤が、2,2’-アゾビス(2-メチルプロピオニトリル)、2,2'-アゾジ(2-メチルブチロニトリル)、2,2'-アゾビス(2,4-ジメチルバレロニトリル)、過酸化ジベンゾイルより選択され、任意で、ラジカル開始剤が2,2’-アゾビス(2-メチルプロピオニトリル)である、本発明1040〜1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
反応混合物を加熱して開始剤を活性化する工程が、少なくとも40℃へ加熱すること、任意で少なくとも50℃へ加熱すること、さらに任意で少なくとも60℃へ加熱することを含む、本発明1040〜1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
連鎖移動試薬がチオールまたはハロアルカンであり、任意で、連鎖移動剤がアルキルチオールである、本発明1040〜1045のいずれかの方法。
[本発明1047]
連鎖移動試薬が、1-オクタンチオール、ヘキサンチオール、6-メルカプト-1-ヘキサノール、ベンジルチオール、四塩化炭素およびブロモトリクロロメタンより選択される、本発明1040〜1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
連鎖移動試薬が1-オクタンチオールである、本発明1040〜1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
有機溶媒が、アルカン成分および芳香族成分の混合物を含む、本発明1040〜1048のいずれかの方法。
[本発明1050]
アルカン成分および芳香族成分が、約0.5:1〜約20:1のアルカン成分:芳香族成分の重量比で存在し、任意で、アルカン成分:芳香族成分の重量比が約1:1〜約10:1である、本発明1049の方法。
[本発明1051]
アルカン成分がヘプタンであり、芳香族成分がトルエンである、本発明1049または本発明1050の方法。
[本発明1052]
反応混合物が：
約2%wt〜約5%wtの量のN,N-ジメチルアクリルアミド；
約1%wt〜約5%wtの量の安定剤；
約0.01%wt〜約4%wtの量のラジカル開始剤；および
約0.05%wt〜約0.25%wtの量の連鎖移動試薬
を含む、本発明1040〜1051のいずれかの方法。
[本発明1053]
N,N-ジメチルアクリルアミドの%wtが安定剤の%wtより大きい、本発明1052の方法。
[本発明1054]
反応混合物を加熱する前に、反応混合物から酸素をパージする、本発明1040〜1053のいずれかの方法。
[本発明1055]
前記酸素をパージすることが、化学的不活性ガスを散布することを含み、任意で、化学的不活性ガスが、アルゴン、ヘリウムまたは窒素より選択される、本発明1054の方法。
[本発明1056]
単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子を形成する方法であって、以下の工程を含む、方法：
水溶液中少なくとも2%wtの親水性ビニルモノマーの溶液(a)を形成する工程であって、溶液が、少なくとも2つのビニル基を含む架橋剤もまた含む、工程；
有機溶媒中の安定剤の溶液(b)を形成する工程であって、有機溶媒は水中に混和性ではなく、溶液(a)および溶液(b)のうちの少なくとも1つがラジカル開始剤を含む、工程；
溶液(a)および(b)を混合して油中水型エマルジョン(c)を形成し、エマルジョンへ単分散シード粒子を添加する工程；
単分散シード粒子がエマルジョン中で膨潤粒子を形成することを可能にする工程；ならびに
膨潤粒子を重合して単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子を形成する工程。
[本発明1057]
親水性ビニルモノマーが、本発明1001〜1013または1028のいずれかにさらに定義される通りである、本発明1056の方法。
[本発明1058]
架橋剤が、本発明1014〜1026のいずれかにさらに定義される通りである、本発明1056または1057の方法。
[本発明1059]
安定剤が非イオン界面活性剤であり、任意で、非イオン界面活性剤が非イオンポリマー界面活性剤である、本発明1056〜1058のいずれかの方法。
[本発明1060]
非イオンポリマー界面活性剤が、少なくとも1つのポリエチレンオキシ基または少なくとも1つのポリプロピレンオキシ基を含む、本発明1059の方法。
[本発明1061]
安定剤が、少なくとも1つのポリエチレンオキシ基を含む、本発明1059または1060の方法。
[本発明1062]
非イオンポリマー界面活性剤がオリゴマー界面活性剤である、本発明1059〜1061のいずれかの方法。
[本発明1063]
安定剤が、Hypermer 2296、Abil EM90およびソルビタンモノオレエートより選択される、本発明1056〜1062のいずれかの方法。
[本発明1064]
ラジカル開始剤が過酸化物開始剤またはアゾ開始剤である、本発明1056〜1063のいずれかの方法。
[本発明1065]
ラジカル開始剤が2,2’-アゾビス-2,4-ジメチルバレロニトリルである、本発明1056〜1064のいずれかの方法。
[本発明1066]
有機溶媒が、脂肪族炭化水素、脂肪族カーボネート、脂肪族エステル、脂肪族エーテル、芳香族炭化水素、もしくはシリコーン、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも1つを含む、本発明1056〜1065のいずれかの方法。
[本発明1067]
有機溶媒が、ヘプタンおよびトルエンの混合物；脂肪族炭化水素の混合物；任意で脂肪族および芳香族炭化水素と混合された、炭酸ビス(2-エチルヘキシル)；またはアジピン酸ビス(2-エチルヘキシル)を含む、本発明1056〜1066のいずれかの方法。
[本発明1068]
単分散シード粒子が、本発明1040〜1055のいずれかの方法に従って形成された単分散シード粒子の特徴を有する、本発明1056〜1067のいずれかの方法。
[本発明1069]
単分散シード粒子が、本発明1040〜1055のいずれかの方法に従って形成される、本発明1056〜1067のいずれかの方法。
[本発明1070]
溶液(a)が、60%wt以下の親水性ビニルモノマーを含む、本発明1056〜1069のいずれかの方法。
[本発明1071]
溶液(a)が、少なくとも2%wt、かつ60%wt以下の親水性ビニルモノマーを含み、任意で、溶液(a)が、少なくとも5%wt、かつ45%wt以下の親水性ビニルモノマーを含む、本発明1056〜1070のいずれかの方法。
[本発明1072]
溶液(a)が約10%wtの親水性ビニルモノマーを含む、本発明1056〜1071のいずれかの方法。
[本発明1073]
開始剤が、約0.1%wt〜約1.5%wtの量でエマルジョン中に存在し、任意で、開始剤が、約0.6%wt〜約1.2%wtの量でエマルジョン中に存在し、さらに任意で、開始剤が、約0.8%wtの量でエマルジョン中に存在する、本発明1056〜1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
重合が、ラジカル開始剤を活性化することを含む、本発明1056〜1072のいずれかの方法。
[本発明1075]
ラジカル開始剤を活性化することが、膨潤粒子を含むエマルジョンを加熱することを含み、任意で、この加熱が、少なくとも40℃の温度へ加熱することを含む、本発明1074の方法。
[本発明1076]
単分散シード粒子が膨潤粒子を形成することを可能にするステップを、少なくとも30分間、任意で少なくとも1時間行う、本発明1056〜1075のいずれかの方法。
[本発明1077]
単分散シード粒子が膨潤粒子を形成することを可能にするステップが、エマルジョンを混合することを含み、任意で、この混合を30℃以下の温度で行い、任意で、この混合を約15℃〜約25℃の温度で行う、本発明1056〜1076のいずれかの方法。
[本発明1078]
単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子を形成する方法であって、以下の工程を含む、方法：
水溶液中少なくとも2%wtの親水性ビニルモノマーの溶液(a)を形成する工程であって、水溶液が連鎖移動剤もまた含む、工程；
有機溶媒中の安定剤の溶液(b)を形成する工程であって、有機溶媒は水中に混和性ではなく、溶液(a)および溶液(b)のうちの少なくとも1つがラジカル開始剤を含む、工程；
溶液(a)および(b)を混合して油中水型エマルジョン(c)を形成し、エマルジョンへ単分散シード粒子を添加する工程；
単分散シード粒子がエマルジョン中で膨潤粒子を形成することを可能にする工程；
膨潤粒子を重合して単分散ポリマー粒子を形成する工程；
有機溶媒中の安定剤の溶液(d)を形成する工程であって、有機溶媒は水中に混和性ではない、工程；
水溶液中少なくとも2%wtの親水性ビニルモノマーの溶液(e)を形成する工程であって、水溶液が、少なくとも2つのビニル基を含む架橋剤もまた含み、溶液(d)および溶液(e)のうちの少なくとも1つがラジカル開始剤を含む、工程；
溶液(d)および(e)を混合して油中水型エマルジョン(f)を形成し、エマルジョンへ単分散ポリマー粒子を添加する工程；
単分散ポリマー粒子がエマルジョン中で膨潤ポリマー粒子を形成することを可能にする工程；ならびに
膨潤ポリマー粒子を重合して単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子を形成する工程。
[本発明1079]
溶液(a)の親水性ビニルモノマーが、本発明1001〜1013のいずれかにさらに定義される通りである、本発明1078の方法。
[本発明1080]
溶液(e)の親水性ビニルモノマーが、本発明1001〜1013または1028のいずれかにさらに定義される通りであり；任意で、溶液(a)および溶液(e)の親水性ビニルモノマーが同じである、本発明1078または本発明1079の方法。
[本発明1081]
架橋剤が、本発明1014〜1026のいずれかにさらに定義される通りである、本発明1078〜1080のいずれかの方法。
[本発明1082]
各安定剤が非イオン界面活性剤であり、任意で、各非イオン界面活性剤が非イオンポリマー界面活性剤である、本発明1078〜1082のいずれかの方法。
[本発明1083]
非イオンポリマー界面活性剤が、少なくとも1つのポリエチレンオキシ基または少なくとも1つのポリプロピレンオキシ基を含む、本発明1082の方法。
[本発明1084]
各安定剤が、少なくとも1つのポリエチレンオキシ基を含む、本発明1082または1083の方法。
[本発明1085]
各非イオンポリマー界面活性剤がオリゴマー界面活性剤である、本発明1082〜1084のいずれかの方法。
[本発明1086]
各安定剤が、Hypermer 2296、Abil WE09、またはAMBNおよびAbil EM90より選択される、本発明1078〜1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
連鎖移動剤が、チオールまたはハロアルカンより選択され、任意で、連鎖移動剤がチオポリオールである、本発明1078〜1086のいずれかの方法。
[本発明1088]
連鎖移動試薬が、1-チオグリセロール、1-オクタンチオール、ヘキサンチオール、6-メルカプト-1-ヘキサノール、ベンジルチオール、四塩化炭素およびブロモトリクロロメタンより選択され；任意で、連鎖移動剤が1-チオグリセロールである、本発明1078〜1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
ラジカル開始剤が過酸化物開始剤またはアゾ開始剤である、本発明1078〜1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
ラジカル開始剤が、2,2’-アゾビス-2,4-ジメチルバレロニトリル、および／または2,2'-アゾジ(2-メチルブチロニトリル)(AMBN)である、本発明1078〜1089のいずれかの方法。
[本発明1091]
有機溶媒が、脂肪族炭化水素、脂肪族カーボネート、脂肪族エステル、脂肪族エーテル、芳香族炭化水素、もしくはシリコーン、またはそれらの組み合わせのうちの少なくとも1つを含む、本発明1078〜1090のいずれかの方法。
[本発明1092]
有機溶媒が、ヘプタンおよびトルエンの混合物；脂肪族炭化水素の混合物；任意で脂肪族および芳香族炭化水素と混合された、炭酸ビス(2-エチルヘキシル)；またはアジピン酸ビス(2-エチルヘキシル)を含む、本発明1078〜1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
単分散シード粒子が、本発明1040〜1055のいずれかの方法に従って形成された単分散シード粒子の特徴を有する、本発明1078〜1092のいずれかの方法。
[本発明1094]
単分散シード粒子が、本発明1040〜1055のいずれかの方法に従って形成される、本発明1078〜1092のいずれかの方法。
[本発明1095]
溶液(a)および／または溶液(e)が、60%wt以下の親水性ビニルモノマーを含む、本発明1078〜1094のいずれかの方法。
[本発明1096]
溶液(a)および／または溶液(e)が、少なくとも2%wt、かつ60%wt以下の親水性ビニルモノマーを含み、任意で、溶液(a)および／または溶液(e)が、少なくとも5%wt、かつ45%wt以下の親水性ビニルモノマーを含む、本発明1078〜1095のいずれかの方法。
[本発明1097]
溶液(a)および／または溶液(e)が約10%wtの親水性ビニルモノマーを含む、本発明1078〜1096のいずれかの方法。
[本発明1098]
開始剤が、約0.1%wt〜約1.5%wtの量でエマルジョン中に存在し、任意で、開始剤が、約0.6%wt〜約1.2%wtの量でエマルジョン中に存在し、さらに任意で、開始剤が、約0.8%wtの量でエマルジョン中に存在する、本発明1078〜1097のいずれかの方法。
[本発明1099]
各重合が、ラジカル開始剤を活性化することを含む、本発明1078〜1098のいずれかの方法。
[本発明1100]
ラジカル開始剤を活性化することが、膨潤粒子を含むエマルジョンを加熱することを含み、任意で、この加熱が、少なくとも40℃の温度へ加熱することを含む、本発明1099の方法。
[本発明1101]
単分散シード粒子が膨潤粒子を形成することを可能にするステップを、少なくとも30分間、任意で少なくとも1時間行う、本発明1078〜1100のいずれかの方法。
[本発明1102]
単分散シード粒子が膨潤粒子を形成することを可能にするステップが、エマルジョンを混合することを含み、任意で、この混合を30℃以下の温度で行い、任意で、この混合を約15℃〜約25℃の温度で行う、本発明1078〜1101のいずれかの方法。
[本発明1103]
形成された単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子が多孔性である、本発明1056〜1102のいずれかの方法。
[本発明1104]
形成された単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子が、0.5μm〜10μmまたは1μM〜10μmのモード径、任意で0.5μm〜5μmまたは1μm〜5μmのモード径を有する、本発明1056〜1103のいずれかの方法。
[本発明1105]
形成された単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子の変動係数(CV)が20%未満であり、任意で、CVが15%未満である、本発明1056〜1104のいずれかの方法。
[本発明1106]
形成された単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子が、官能基を含み、任意で、官能基が、ヒドロキシル、カルボン酸(-COOH)、第1級アミンまたは第2級アミンより選択される、本発明1056〜1105のいずれかの方法。
[本発明1107]
単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子へ1つまたは複数のオリゴヌクレオチドを結合する工程をさらに含む、本発明1106の方法。
[本発明1108]
本発明1040〜1055のいずれかの方法によって得ることができる、単分散シード粒子。
[本発明1109]
本発明1056〜1107のいずれかの方法によって得ることができる、単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子。
[本発明1110]
核酸増幅における、本発明1001〜1033または本発明1109のいずれかの単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子の使用。
[本発明1111]
核酸増幅が、オリゴヌクレオチドを複数のオリゴヌクレオチドへ増幅することを含み、任意で、複数のオリゴヌクレオチドの少なくとも一部分が、単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子の少なくとも1つへ結合される、本発明1110の使用。
[本発明1112]
核酸増幅が、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅またはエマルジョンPCR増幅を含む、本発明1110または1111の使用。
[本発明1113]
オリゴヌクレオチド配列決定における、本発明1001〜1033または本発明1109のいずれかの単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子の使用。
[本発明1114]
オリゴヌクレオチド配列決定が、化学電界効果トランジスタ(chemFET)に基づく配列決定またはイオン感応性電界効果トランジスタ(ISFET)に基づく配列決定を含む、本発明1113の使用。
[本発明1115]
単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子が、約10℃〜約100℃の温度範囲で安定している、本発明1110〜1114のいずれかの使用。
[本発明1116]
粒子が多孔性であり、オリゴヌクレオチドならびに核酸増幅および配列決定試薬に対してトランスペアレントである、本発明1110〜1115のいずれかの使用。
[本発明1117]
ポリマー粒子へ結合されているオリゴヌクレオチドへハイブリダイズされているポリヌクレオチドに対してプライマー伸長反応を行う工程を含む、核酸増幅のための方法であって、ポリマー粒子が、本発明1001〜1033または本発明1109のいずれかの単分散架橋ヒドロゲルポリマー粒子である、方法。
[本発明1118]
(a)単鎖オリゴヌクレオチドへ結合されたポリマー粒子を提供する工程；
(b)単鎖テンプレートポリヌクレオチドを提供する工程；
(c)単鎖オリゴヌクレオチドを単鎖テンプレートポリヌクレオチドへハイブリダイズさせる工程；および
(d)ポリメラーゼが単鎖オリゴヌクレオチド上への少なくとも1つのヌクレオチドの重合を触媒するために適した条件下で、単鎖テンプレートポリヌクレオチドとポリメラーゼおよび少なくとも1つのヌクレオチドとを接触させ、伸長された単鎖オリゴヌクレオチドを生じさせる工程
を含む、本発明1117の方法。
[本発明1119]
(e)単鎖オリゴヌクレオチドがポリマー粒子へ結合されたままとなるように、伸長された単鎖オリゴヌクレオチドから単鎖テンプレートポリヌクレオチドを除去する(例えば、変性させる)工程；
(f)残存している単鎖オリゴヌクレオチドを第2の単鎖テンプレートポリヌクレオチドへハイブリダイズさせる工程；および
(g)第2のポリメラーゼが単鎖オリゴヌクレオチド上への第2の少なくとも1つのヌクレオチドの重合を触媒するために適した条件下で、第2の単鎖テンプレートポリヌクレオチドと第2のポリメラーゼおよび第2の少なくとも1つのヌクレオチドとを接触させ、次の伸長された単鎖オリゴヌクレオチドを生じさせる工程
をさらに含む、本発明1118の方法。
[本発明1120]
(h)ヌクレオチド付加を検出することによって配列決定する工程
をさらに含む、本発明1117〜1119のいずれかの方法。
[本発明1121]
ヌクレオチド付加を検出することが、付加された蛍光ヌクレオチドからの蛍光発光を検出すること、またはポリマー粒子の局所環境におけるpH変化を検出することを含む、本発明1120の方法。
[本発明1122]
ヌクレオチド付加を検出することが、イオンセンサーを用いてポリマー粒子の局所環境におけるpH変化を検出することを含み、任意で、イオンセンサーが電界効果トランジスタ(FET)であり、さらに任意で、イオンセンサーが化学電界効果トランジスタ(ChemFET)またはイオン感応性電界効果トランジスタ(ISFET)である、本発明1121の方法。
本発明の産物、プロセスおよび使用は、今しがた言及された主題に限定されず、しかし、非限定的に、以下の説明および特許請求の範囲においてより完全に記載される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２３２】
溶液4(エマルジョン相)：溶液2および3を、Ultraturraxを使用して1分間混合し、次いで、氷上において3分間(6x30秒間隔)超音波処理する(Bransonデジタルソニファイアー450 CE, 40%振幅)。乳化に続いて、溶液4を、スターラーを備えた100 mLリアクターへ移し、実施例2のシード粒子の懸濁液8.1 g(およそ7 wt%乾燥含有量−本明細書においてシードと呼ばれる)をエマルジョンへ添加し、シード含有エマルジョンを穏やかな撹拌/回転下で室温にて一晩(約16時間)膨潤させる。膨潤に続いて、溶液4を撹拌下で50℃にて7時間重合する。