【手続補正書】
【提出日】平成20年2月28日(2008.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
部分付加抗体であって、該抗体は以下：
少なくとも１個の鎖間ジスルフィド結合、および
少なくとも２個の細胞毒性薬または細胞増殖抑制薬または標識であって、各薬物または標識は、鎖間チオールに結合体化された、薬物または標識；
を含み、ここで該薬物または標識の結合箇所が容易に割当て可能である、
部分付加抗体。
【請求項２】
少なくとも４個の細胞毒性薬または細胞増殖抑制薬が前記抗体に結合体化されており、各薬物が鎖間チオールに結合されている、請求項１に記載の部分付加抗体。
【請求項３】
請求項１に記載の部分付加抗体であって、
（ｉ）該抗体は種４Ａ〜４Ｆのうちのいずれか１つの配置を有するか、
（ｉｉ）該抗体はヒト化抗体またはキメラ抗体であるか、あるいは
（ｉｉｉ）細胞毒性薬または細胞増殖抑制薬がＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、またはＡＦＰである、
抗体。
【請求項４】
請求項１に記載の抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項５】
癌、免疫疾患、自己免疫疾患または感染性疾患の処置のための医薬品の調製における、請求項１に記載の部分付加抗体の、使用。
【請求項６】
薬物を還元して、薬物配置の選択性をもたらす抗体に該薬物を結合させる方法であって：
該抗体を還元剤によって完全に還元する工程；
該完全に還元された抗体を再酸化剤の制限量で処理し、少なくとも２個の鎖間チオールが残存するように、該抗体の少なくとも１個の鎖間ジスルフィド結合を再形成する工程；および
該薬物を該鎖間チオールに結合体化する工程；
を包含する、方法。
【請求項７】
前記再酸化剤が、５，５’−ジチオ−ビス−２−ニトロ安息香酸、４，４’−ジチオジピリジン、２，２’−ジチオジピリジン、テトラチオン酸ナトリウムまたはヨードソ安息香酸であるか、または前記薬物が細胞毒性薬もしくは細胞増殖抑制薬もしくは免疫抑制剤である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記細胞毒性薬または細胞増殖抑制薬が、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＡＦＰ、副溝バインダ、ＡＥＢ、またはＡＥＶＢであるか、あるいは
前記還元剤がＤＴＴまたはＴＣＥＰである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
抗体鎖間ジスルフィド結合を還元して、生じた鎖間チオールに薬物を結合させて、該抗体に対する該薬物配置の選択性を生じさせる方法であって、該方法は：
該抗体を還元剤によって完全に還元し、鎖間チオールを形成する工程；
該抗体を再酸化剤で部分的に再酸化し、少なくとも１個の鎖間ジスルフィド結合を再生成する工程；および
該薬物を該鎖間チオールに結合させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、
（ｉ）前記再酸化剤が、５，５’−ジチオ−ビス−２−ニトロ安息香酸、４，４’−ジチオジピリジン、２，２’−ジチオジピリジン、テトラチオン酸ナトリウム、またはヨードソ安息香酸であるか、
（ｉｉ）前記還元剤が、ＤＴＴまたはＴＣＥＰであるか、あるいは、
（ｉｉｉ）前記薬物が、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、またはＡＦＰである、
方法。
【請求項１１】
前記部分的に再酸化された抗体を精製する工程をさらに包含する、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
抗体鎖間ジスルフィド結合を還元して、生じた鎖間チオールに薬物を結合させて、薬物を該抗体上に選択的に配置する方法であって、該方法は：
該抗体を還元剤によって部分的に還元し、少なくとも２個の鎖間チオールを形成する工程；および
該薬物を、該部分的に還元された抗体の鎖間チオールに結合体化させる工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であって、
ここで、前記抗体は、制限濃度の還元剤によって、キレート剤を含む緩衝液中で部分的に還元され；そして
ここで、該抗体溶液を冷却して、前記薬物を冷溶媒に溶解させ、該抗体溶液と混合することによって、該薬物が結合体化され；
該抗体および該薬物溶液を、抗体−薬物結合体を形成するのに十分な時間インキュベートさせ；
過剰の薬物をチオール含有試薬によってクエンチさせ；そして
生じた結合体を精製する、
方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、
（ｉ）前記抗体が約３７℃にて約１時間、部分的に還元されるか、
（ｉｉ）前記還元された抗体が約０℃まで冷却されるか、あるいは
（ｉｉｉ）該抗体および前記薬物溶液が、約０℃にて約３０分間インキュベートされる、
方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法であって、
（ｉ）前記チオール含有試薬が、システインまたはＮ−アセチルシステインであるか、
（ｉｉ）前記還元剤が、ＤＴＴまたはＴＣＥＰであるか、
（ｉｉｉ）前記緩衝液がホウ酸ナトリウム溶液であり、前記キレート剤がジエチレントリアミン五酢酸であるか、
（ｉｖ）該キレート剤が、エチレントリアミン五酢酸またはＥＤＴＡであるか、
（ｖ）前記溶媒がアセトニトリル、アルコールまたはＤＭＳＯであるか、あるいは
（ｖｉ）該薬物が細胞毒性薬または細胞増殖抑制薬である、
方法。
【請求項１６】
前記還元された抗体または結合体を、カラムクロマトグラフィー、透析、またはダイアフィルトレーションを使用して精製する工程をさらに包含する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記カラムがＰＤ−１０脱塩カラムである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の抗体を産生する方法であって、該方法は：
ＤＴＮＢ滴定によって決定されるように、大幅に過剰の還元剤を添加して、溶液を約３７℃にて約３０分間インキュベートすることによって、鎖間チオールを生成するのに十分な時間、該抗体を完全に還元する工程；
該抗体を精製する工程；
酸化剤を使用して該抗体を部分的に再酸化し、少なくとも１個の鎖間ジスルフィド結合を、以下、
該還元された抗体を０℃に冷却する工程；
該還元および冷却された抗体を該酸化剤１．５〜２．５モル当量で処理する工程；
反転により該溶液を混合する工程；
約０℃にて約１０分間インキュベートする工程
によって形成する工程；
該部分的に再酸化された抗体を精製する工程；
該薬物を該部分的に再酸化された抗体の鎖間チオールに結合体化させ、結合体化抗体を作成する工程；ならびに
該結合体化抗体を精製する工程
を包含する、方法。
【請求項１９】
１個以上のジスルフィド結合を有するタンパク質と、遊離チオールと反応性である薬物との結合体を調製する方法であって、該方法は：
該タンパク質を還元剤によって部分的に還元する工程；
該遊離チオールと反応性である薬物を該部分的に還元されたタンパク質に結合体化する工程
を包含し、ここで、該タンパク質は、（ｉ）部分的に還元されたか、または（ｉｉ）完全に還元され、次いで再酸化剤で部分的に再酸化されたかのいずれかである、方法。
【請求項２０】
部分的に付加された抗体を形成する方法であって、該方法は：
抗体含有溶液を提供する工程、
該抗体溶液のｐＨを約ｐＨ７．５に調整して、キレート剤を添加する工程；
該抗体溶液を約３７℃まで加熱する工程；
モル過剰のＴＣＥＰを該抗体溶液に添加し、約３７℃にて十分な時間反応させて、該抗体の鎖間ジスルフィド基を部分的に還元して鎖間チオールを形成する工程；
該抗体溶液を約２〜８℃まで冷却することと；
わずかにモル過剰の薬物を該抗体溶液に添加することによって、該部分的に還元された抗体の鎖間チオールに該薬物を結合体化させ、そして該部分的に付加された抗体を形成するために十分な時間反応させる工程；ならびに
部分的に付加された抗体を精製する工程、
を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の部分付加抗体を含む、癌、免疫疾患、自己免疫疾患または感染性疾患の処置のための組成物。