(57)【要約】本発明は、疎水性化合物、特にヒノキチオールを安定化するための安定化剤であって、少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーからなる安定化剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
疎水性化合物を安定化するための安定化剤であって、少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーからなる安定化剤。
【請求項２】
親水性セグメントがポリエチレングリコールである請求項１に記載の安定化剤。
【請求項３】
疎水性セグメントが、ポリアミノ酸またはその誘導体である請求項１又は２に記載の安定化剤。
【請求項４】
ポリアミノ酸がポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、それらの誘導体およびそれらの１又は複数の混合物からなる群より選択される請求項３に記載の安定化剤。
【請求項５】
ブロックコポリマーが下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）である請求項１〜４の何れかに記載の安定化剤：
2007102608.tif 000009
または
2007102608.tif 000010
［上記各式中Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５はベンジル基、アルキルベンジル基またはアリル基を表し、Ｌ１は−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−および−ＯＣＯ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、Ｚは独立してＣ１〜Ｃ４アルキレン基である）からなる群より選ばれる連結基を表し、Ｌ２は、−ＯＣＯ−Ｚ−ＣＯ−および−ＮＨＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、ＺはＣ１〜Ｃ４アルキレン基からなる群より選ばれる連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘおよびｙは、同一もしくは異なり、それらの合計が１０〜３００となる整数であり、そしてｘ対ｙが１：１〜０：１の範囲内にあり、かつｘおよびｙは、それぞれランダムに存在し、ｑは１又は２の整数である］。
【請求項６】
疎水性化合物が、抗生剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、解熱剤、鎮痛剤、抗浮腫剤、鎮咳裾痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、血圧降下剤、糖尿治療剤、恒常性剤、ポリペプチド、ホルモン剤、抗酸化剤、歯肉疾患剤およびビタミンからなる群より選択される請求項１〜５の何れかに記載の安定化剤。
【請求項７】
疎水性化合物が、ヒノキチオール、ＣｏＱ１０、ビタミンＥ又はその誘導体、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＣ誘導体、α−リポ酸およびポリフェノールからなる群より選択される請求項１〜６の何れかに記載の安定化剤。
【請求項８】
疎水性化合物がヒノキチオールである請求項７に記載の安定化剤。
【請求項９】
疎水性化合物の安定化方法であって、
少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーとからなる安定化剤と前記疎水性化合物とを混合して当該ブロックコポリマーと当該疎水性化合物とを相互作用させる段階；又は
少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーからなる安定化剤により前記疎水性化合物を封入してミセルを形成する段階；
を含んで成る方法。
【請求項１０】
親水性セグメントがポリエチレングリコールである請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
疎水性セグメントが、ポリアミノ酸またはその誘導体である請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
ポリアミノ酸がポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、それらの誘導体およびそれらの１又は複数の混合物からなる群より選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ブロックコポリマーが下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）である請求項９〜１２の何れかに記載の方法：
2007102608.tif 000011
または
2007102608.tif 000012
［上記各式中Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５はベンジル基、アルキルベンジル基またはアリル基を表し、Ｌ１は−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−および−ＯＣＯ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、Ｚは独立してＣ１〜Ｃ４アルキレン基である）からなる群より選ばれる連結基を表し、Ｌ２は、−ＯＣＯ−Ｚ−ＣＯ−および−ＮＨＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、ＺはＣ１〜Ｃ４アルキレン基からなる群より選ばれる連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘおよびｙは、同一もしくは異なり、それらの合計が１０〜３００となる整数であり、そしてｘ対ｙが１：１〜０：１の範囲内にあり、かつｘおよびｙは、それぞれランダムに存在し、ｑは１又は２の整数である］。
【請求項１４】
疎水性化合物が、抗生剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、解熱剤、鎮痛剤、抗浮腫剤、鎮咳裾痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、血圧降下剤、糖尿治療剤、恒常性剤、ポリペプチド、ホルモン剤、抗酸化剤、歯肉疾患剤およびビタミンからなる群より選択される請求項９〜１３の何れかに記載の方法。
【請求項１５】
疎水性化合物が、ヒノキチオール、ＣｏＱ１０、ビタミンＥ又はその誘導体、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＣ誘導体、α−リポ酸およびポリフェノールからなる群より選択される請求項９〜１４の何れかに記載の方法。
【請求項１６】
疎水性化合物がヒノキチオールである請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、熱や光に対して不安定な疎水性化合物、特にヒノキチオールを安定化するための安定化剤であって、少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーからなる安定化剤、及びそれを利用した安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然物、合成物を問わず、化合物によっては優れた活性を有するにも拘らず、安定性の欠如を理由に医薬、食品、農薬などにおける実際の利用が敬遠されるものが多い。例えば、青森ヒバの酸性油には、ヒノキチオール（β−ツヤプリシン）をはじめβ−ドラブリン、γ−ツヤプリシン、α−ツヤプリシンならびに４−アセチルトロポロンなどの７員環を有した化合物が存在する。それらのうち、ヒノキチオールは、１９６３年、野副らによって台湾ヒノキから単離され、その化学構造式が決定され、生理活性に関し、抗微生物活性、細胞障害作用、金属プロテアーゼ阻害活性、チロシナーゼ阻害活性、植物成長阻害活性など多くの生理活性があることが報告されている（医薬ジャーナル３９，１２８３−１２９４（２００３）；Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４９，２５１９−２５２１（２００５）；Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２２，３３５−３３９（１９９９））。その多彩な生理活性により、食品の保存（特開平６−２７７０１９号公報、特開平６−１５３７８８号公報）、変色の防止（特開昭５９−０８５２７９号公報）、亜鉛と組合せて感染の治療薬（ＷＯ９３／１７５５９）への応用が研究されてきた。しかし、ヒノキチオールが本来昇華性の物質であること、さらに光によって速やかに分解されるため（図１）、通常の環境下での使用が制限され、十分な実用化には至っていなかった（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８３，１７６８−１７６９（１９６１）；Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９．１１７７−１１８０（１９７３）；Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６７，１９９６−１９９８（２００３））。
ヒノキチオールの安定化に関し、有機酸を配合し、ｐＨを５．０〜６．０に調節する方法（特開平９−１８８６２０号公報）、界面活性剤などを用いて乳化分散させる方法（特開平１０−２９１９０６号公報）、ヒノキチオールをアルミニウムとの塩又は／及びアルミニウム化合物との錯化合物とする方法（ＷＯ９７／０２０２５）などがあるが、いずれの方法でも十分な安定性は図れていない。
【発明の開示】
【０００３】
本発明の課題は、熱安定性、光安定性など、安定性に劣る疎水性化合物の安定化にある。
本願発明は以下の態様を含む。
［１］疎水性化合物を安定化するための安定化剤であって、少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーからなる安定化剤。
［２］親水性セグメントがポリエチレングリコールである［１］の安定化剤。
［３］疎水性セグメントが、ポリアミノ酸またはその誘導体である［１］又は［２］の安定化剤。
［４］ポリアミノ酸がポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、それらの誘導体およびそれらの１又は複数の混合物からなる群より選択される［３］の安定化剤。
［５］ブロックコポリマーが下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）である［１］〜［４］の何れかの安定化剤：
2007102608.tif 000002
または
2007102608.tif 000003
［上記各式中Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５はベンジル基、アルキルベンジル基またはアリル基を表し、Ｌ１は−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−および−ＯＣＯ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、Ｚは独立してＣ１〜Ｃ４アルキレン基である）からなる群より選ばれる連結基を表し、Ｌ２は、−ＯＣＯ−Ｚ−ＣＯ−および−ＮＨＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、ＺはＣ１〜Ｃ４アルキレン基からなる群より選ばれる連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘおよびｙは、同一もしくは異なり、それらの合計が１０〜３００となる整数であり、そしてｘ対ｙが１：１〜０：１の範囲内にあり、かつｘおよびｙは、それぞれランダムに存在し、ｑは１又は２の整数である］。
［６］疎水性化合物が、抗生剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、解熱剤、鎮痛剤、抗浮腫剤、鎮咳裾痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、血圧降下剤、糖尿治療剤、恒常性剤、ポリペプチド、ホルモン剤、抗酸化剤、歯肉疾患剤およびビタミンからなる群より選択される［１］〜［５］の何れかの安定化剤。
［７］疎水性化合物が、ヒノキチオール、ＣｏＱ１０、ビタミンＥ又はその誘導体、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＣ誘導体、α−リポ酸およびポリフェノールからなる群より選択される［１］〜［６］の何れかの安定化剤。
［８］疎水性化合物がヒノキチオールである［７］の安定化剤。
［９］疎水性化合物の安定化方法であって、
少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーとからなる安定化剤と前記疎水性化合物とを混合して当該ブロックコポリマーと当該疎水性化合物とを相互作用させる段階；又は
少なくとも親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーからなる安定化剤により前記疎水性化合物を封入してミセルを形成する段階；
を含んで成る方法。
［１０］親水性セグメントがポリエチレングリコールである［９］の方法。
［１１］疎水性セグメントが、ポリアミノ酸またはその誘導体である［９］又は［１０］の方法。
［１２］ポリアミノ酸がポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸又はそれらの誘導体およびそれらの１又は複数の混合物からなる群より選択される［１１］の方法。
［１３］ブロックコポリマーが下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）である［９］〜［１２］の何れかの方法：
2007102608.tif 000004
または
2007102608.tif 000005
［上記各式中Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５はベンジル基、アルキルベンジル基またはアリル基を表し、Ｌ１は−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＯ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−および−ＯＣＯ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、Ｚは独立してＣ１〜Ｃ４アルキレン基である）からなる群より選ばれる連結基を表し、Ｌ２は、−ＯＣＯ−Ｚ−ＣＯ−および−ＮＨＣＯ−Ｚ−ＣＯ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、ＺはＣ１〜Ｃ４アルキレン基からなる群より選ばれる連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘおよびｙは、同一もしくは異なり、それらの合計が１０〜３００となる整数であり、そしてｘ対ｙが１：１〜０：１の範囲内にあり、かつｘおよびｙは、それぞれランダムに存在し、ｑは１又は２の整数である］。
［１４］疎水性化合物が、抗生剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、解熱剤、鎮痛剤、抗浮腫剤、鎮咳裾痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、血圧降下剤、糖尿治療剤、恒常性剤、ポリペプチド、ホルモン剤、抗酸化剤、歯肉疾患剤およびビタミンからなる群より選択される［９］〜［１３］の何れかの方法。
［１５］疎水性化合物が、ヒノキチオール、ＣｏＱ１０、ビタミンＥ又はその誘導体、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＣ誘導体、α−リポ酸およびポリフェノールからなる群より選択される［９］〜［１４］の何れかの方法。
［１６］疎水性化合物がヒノキチオールである［１５］の方法。
本発明のブロックコポリマーを使用することにより、光及び／又は熱によって異性化反応が引き起こされる広範囲の疎水性化合物の安定化を図ることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１はヒノキチオールの構造及びその異性化を示す。
図２はヒノキチオールの光安定性に対する種々のキャリアの影響を示す。
図３はヒノキチオールの熱安定性に対する種々のキャリアの影響を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明は、親水性セグメントと疎水性セグメントを有するブロックコポリマーからなる疎水性化合物に汎用可能な安定化剤を提供する。一つの態様として本発明に係る安定化剤は、ヒノキチオールを安定化させ、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）によるＳＤＳミセル化ヒノキチオール、卵黄レシチンによるリポソーム化ヒノキチオール、ポリメチルメタクリレートのナノ粒子に含有されたヒノキチオールと比較して、光や熱に対して高い安定性を示すことが確認された。
本発明において使用できるブロックコポリマーは、親水性セグメントと疎水性セグメントを含んでなるブロックコポリマーであり、これらのブロックコポリマーは、本発明の目的に沿うものであれば、いかなる親水性セグメントといかなる疎水性セグメントとを含むものであってもよいが、具体的には、次のようなものを包含する。
限定されるものでないが、親水性セグメントとしては、ポリ（エチレングリコール）［またはポリ（エチレンオキシド）］、ポリサッカライド、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリルアミド）、ポリ（メタクリル酸）、ポリ（メタクリル酸エステル）、ポリ（アクリル酸エステル）、ポリアミノ酸、ポリ（リンゴ酸）、あるいはこれらの誘導体由来のセグメントが挙げられる。ここでポリサッカライドとしては、デンプン、デキストラン、フルクタン、ガラクタン等が挙げられる。これらのうち、ポリ（エチレングリコール）セグメントは片末端に種々の官能基を有するものが提供されており、また、セグメントの大きさも制御されたものが容易に利用できることから、好ましい。
他方、限定されるものでないが、疎水性セグメントとしては、ポリ［（メタ）アクリル酸アルキル−コ−（メタ）アクリル酸］、ポリ（アスパラギン酸誘導体）やポリ（グルタミン酸誘導体）、例えばポリ（β−ベンジルアスパルテート）、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アルキルアスパルテート）、ポリ（β−アルキルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アリルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アラルキルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アラルキルアスパルテート）、ポリ（β−アラルキルアスパルテート−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アルキルアスパルタミド）、ポリ（β−アルキルアスパルタミド−コ−アスパラギン酸）、ポリ（β−アラルキルアスパルタミド）、ポリ（β−アラルキルアスパルタミド−コ−アスパラギン酸）、ポリ（γ−ベンジルグルタメート）、ポリ（γ−ベンジル−Ｌ−グルタメート−コ−グルタミン酸）、ポリ（γ−アルキルグルタメート）、ポリ（γ−アルキルグルタメート−コ−グルタミン酸）、ポリ（γ−アリルグルタメート−コ−グルタミン酸）、ポリ（γ−アラルキルグルタメート）、ポリ（γ−アラルキルグルタメート−コ−グルタミン酸）、ポリ（γ−アルキルグルタミド）、ポリ（γ−アルキルグルタミド−コ−グルタミン酸）、ポリ（γ−アラルキルグルタミド）、ポリ（γ−アラルキルグルタミド−コ−グルタミン酸）、ポリ（ラクチド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（ε−カプロラクトン）、ポリ（δ−バレロラクトン）およびポリ（γ−ブチロラクトン）などのポリ（アミノ酸誘導体）を挙げることができる。
任意的に、このようなポリ（アミノ酸誘導体）セグメントのうち、側鎖にカルボキシル基を有するものは、それ自体公知の、例えば、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）またはポリ（γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸）のベンジル基を、加水分解によって除去した後、相当するアルコールまたはアミンによりエステルまたはアミドに交換し、その際、アルコールまたはアミンの反応量を変化させることにより、所望の割合でカルボキシル基を側鎖に持つ疎水性セグメントとする事ができる。この際、ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）は加水分解によってβ転位したアスパラギン酸が生じる。β転位を起こしていないアスパラギン酸とβ転位をおこしたアスパラギン酸の比はおよそ１：３であることが知られている。β転位をおこしたアスパラギン酸及びその誘導体を有する疎水性セグメントが本発明に包含されることはいうまでもない。アスパラギン酸、グルタミン酸は、いずれかの光学活性型のものであるか、それらの混合物であることができる。以上の親水性セグメントと疎水性セグメントは、それ自体既知の連結基、例えば、エステル結合、アミド結合、イミノ基、炭素−炭素結合、エーテル結合等を介して連結されうる。
特に、製造容易であり、本発明で都合よく使用できるブロックコポリマーとしては、下記式（Ｉ）および（ＩＩ）で示すことのできるものを挙げることができる。
2007102608.tif 000006
または
2007102608.tif 000007
上記各式中Ｒ１およびＲ３は、それぞれ独立して、水素原子または保護されていてもよい官能基が置換したもしくは未置換低級アルキル基を表し、Ｒ２は水素原子、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２９脂肪族カルボニル基またはアリールカルボニル基を表し、Ｒ４は水酸基、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ３０脂肪族オキシ基またはアリール−低級アルキルオキシ基を表し、Ｒ５はベンジル基、アルキルベンジル基またはアリル基を表す。（但し、Ｒ５は１つのブロックコポリマー内の各アミノ酸ユニットにおいて任意に選択可能である。）Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して連結基を表し、ｎは１０〜２５００の整数であり、ｘは１０〜３００となる整数であり、ｙは１又は２の整数を表す。保護されていてもよい官能基としては、ヒドロキシル基、アセタール、ケタール、アルデヒド、糖残基等が挙げられる。Ｒ１およびＲ３が保護されていてもよい官能基が置換した低級アルキル基を表す場合の親水性セグメントは、例えば、ＷＯ９６／３３２３３、ＷＯ９６／３２４３４、ＷＯ９７／０６２０２に記載の方法に従うことができる。低級アルキルとは炭素数が例えば７個以下、好ましくは４個以下の直鎖又は分枝鎖アルキル基を意味し、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル基などが含まれる。
連結基は、主として、ブロックコポリマーの製造方法により変化しうるので限定されるものでないが、具体的なものとしては、Ｌ１が−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｚ−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｚ−Ｓ−Ｚ−および−ＯＣＯ−Ｚ−ＮＨ−（ここで、Ｚは独立してＣ１〜Ｃ４アルキレン基である。）からなる群より選ばれ、Ｌ２が−ＯＣＯ−Ｚ−ＣＯ−および−ＮＨＣＯ−Ｚ−ＣＯ−（ここで、ＺはＣ１〜Ｃ４アルキレン基である。）からなる群より選ばれる基を挙げることができる。
本発明で用いることのできる特に好ましいブロックコポリマーは、ポリエチエングリコール（ＰＥＧ）−ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）ブロックコポリマー（以下、「ＰＥＧ−ＰＢＬＡ」と略す場合がある）である。ＰＥＧ−ＰＢＬＡは、例えば、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−５−２０−１００（ＰＥＧの分子量が５，０００、アスパラギン酸の重合度が２０、ベンジル化率が１００％）、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−４０−５０（ＰＥＧの分子量が１２，０００，アスパラギン酸の重合度が４０、ベンジル化率が５０％）、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−５０（ＰＥＧの分子量が１２，０００、アスパラギン酸の重合度が５０、ベンジル化率が５０％）であってよい。
本発明の態様の一つとしては、疎水性化合物をブロックコポリマーによってミセル化（薬物をミセル中に内包）することにより安定化することが可能である。例えば、ヒノキチオールは、光および／又は熱による異性化反応により分解されるが、ブロックコポリマーによる異性化反応の阻害は、ヒノキチオール／ブロックコポリマー１ｍｇ／１．２ｍｇを出発物質とした場合（ヒノキチオールがブロックコポリマーに対して大過剰の状態）でも認められた。従って、ヒノキチオールにブロックコポリマーを相互作用させるだけでも異性化反応に対する立体的阻害が起こり、ヒノキチオールは安定化されると考えられる。よって、本発明のブロックコポリマーからなる安定化剤は、光及び／又は熱によって異性化反応が引き起こされる広範囲の疎水性化合物に対して使用可能である。
従って、本発明に係るブロックコポリマーにより安定化される化合物としては、ヒノキチオールに限らず、例えば光及び／又は熱により異性化反応が引き起こされる広範囲の化合物が挙げられ、特に限定はされないが、抗生剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、解熱剤、鎮痛剤、抗浮腫剤、鎮咳裾痰剤、鎮静剤、筋肉弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗憂鬱剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、血圧降下剤、糖尿治療剤、恒常性剤、ポリペプチド、ホルモン剤、抗酸化剤、歯肉疾患剤およびビタミンなどが挙げられる。具体的には、ヒノキチオール、アムフォテリシンＢ、ナイスタチン、パモ酸ピルビニウム、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ダウノルビシン、アドリアマイシン、シスプラチン、ＤＡＣＨプラチン、パクリタキセル及びその誘導体、ビンクリスチン、カンプトテシン及びその誘導体、ステロイド、インドメタシン、サリチル酸メチル、フェンタニル、ヒノキチオール、ＣｏＱ１０、ビタミンＥ又はその誘導体、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＣ誘導体、α−リポ酸およびポリフェノール等が挙げられる。
特に好ましい疎水性化合物はヒノキチオールである。本発明に従い、ヒノキチオールの熱分解、光分解の際に発生するスーパーオキサイドアニオンラジカルやヒドロキシルラジカルの影響を極力抑えて、ヒノキチオールを様々な目的のために効果的に使用可能な組成物を提供することができる。
安定化剤として使用されるブロックコポリマーの量はブロックコポリマーの分子量、化合物の種類によって適宜変化させることができ、特に限定されないが、モル比で化合物１に対してブロックコポリマー０．０００１〜１０、好ましくは、０．００１〜１とすることができる。
本願発明の態様である安定化方法の一つとして疎水性化合物を本発明に係るブロックコポリマーからなる安定化剤で封入してミセルを製造する場合、その方法は特に限定されるわけではなく、例えば特開２００３−２６８１２又は特開２００３−３４２１６８号公報に開示された方法に従って行なうことができる。具体的な一例としては、親水性セグメントと疎水性セグメントとから構成されるブロックコポリマー及び疎水性化合物を揮発性の有機溶媒、例えばメチルアルコール、イソプロピルアルコール、アセトン、アセトニトリル、酢酸メチル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、シクロヘキサン等およびこれらの混合溶媒等、常温で揮散性を有する溶媒に溶解した後、当該有機溶媒を除去し、得られるフィルムを水に均一に分散するのに十分な時間、例えば２時間〜２４時間、適温、例えば４℃〜室温で攪拌する。得られた溶液を適宜超音波照射し、動的光散乱光度計（例えば、大塚電子ＤＬＳ−７０００ＤＨ）を用いて粒子径測定を行い、ゲルろ過（例えば、ＰＤ−１０  ｃｏｌｕｍｎｓ，ＧＥヘルスケア  バイオサイエンス株式会社）でミセルに取り込まれなかった化合物を分離する。
また、疎水性化合物を本発明に係るブロックコポリマー安定化剤と相互作用させ、安定化を図る場合、両者を適当な溶媒の中で混合し、相互作用していない疎水性化合物（フリーの化合物）を除去すればよい。
本発明の安定化剤は、医薬品、農薬、食品など、様々な用途に好適である。例えば医薬品の剤形としては特に限定されないが、丸剤、顆粒、シロップ、カプセル、注射剤、座剤、吸引剤、パッチなどが挙げられる。
以下に比較例、実施例を示し、本発明を具体的に示す。
【実施例】
【０００６】
以下においては、ポリエチレングリコール−ポリ（β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸）ブロックコポリマーをＰＥＧ−ＰＢＬＡと略す。また、例えばブロックコポリマーのＰＥＧ鎖の平均分子量１２，０００、ポリアミノ酸鎖４０残基、ポリアミノ酸側鎖のベンジル化率が５０％の場合、各ブロックコポリマーの後に、１２−４０−５０と表記する。
実施例１．ブロックコポリマーによるヒノキチオールの安定化
ヒノキチオール（Ｗａｋｏ，Ｏｓａｋａ）１ｍｇとＰＥＧ−ＰＢＬＡ−５−２０−１００、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−４０−５０またはＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−５０、１０ｍｇをスクリュー管に秤量し、ジクロロメタン中に溶解した後、ジクロロメタンを窒素気流下で揮発させ、ヒノキチオールとブロックコポリマーから成るフィルムを得た。このフィルムに３ｍｌの超純水を加え、遮光下、４℃で１２時間攪拌した。得られたミセル溶液を５分間超音波照射し、粒径測定を行い、ゲルろ過（ＰＤ−１０  ｃｏｌｕｍｎｓ）でミセルと取り込まれなかったヒノキチオールとを分離した。ヒノキチオールは、水中で３３０ｎｍに極大吸収を示すが、ブロックコポリマーミセルで封入されたヒノキチオールは３２４ｎｍと３７２ｎｍに極大吸収を示す。得られたミセルにおけるヒノキチオールの取り込み率（ミセルに取り込まれた薬物量の出発量に対する割合、ｗｔ／ｗｔ％）、封入率、ミセルのサイズを以下の表１に示す。なお、薬物の取り込み率は、取り込まれなかった薬物量をモル吸光係数から求め、この値を薬物の出発量から差し引いた値をミセルに取り込まれた薬物の値として求める。封入率は、ポリマーの出発量に対するミセルに取り込まれた薬物量の割合（ｗｔ／ｗｔ％）とする。ポリマーミセルの粒子径は当業者に周知の方法により測定することができ、例えば動的光散乱光度計（大塚電子（株）、ＤＬＳ−７０００ＤＨ）を用い、その説明書に従って行うことができる。
【表１】
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ポリマー１０ｍｇ、ヒノキチオール１ｍｇを出発物質とした場合、ヒノキチオールの取り込み率は、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−５−２０−１００、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−５０、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−４０−５０を用いた場合に最も高く、４７−４９％となり、封入率は４．７−４．９％であった（表１参照）。
出発物質として用いるヒノキチオールの量を１ｍｇとし、ＰＥＧ−ＰＢＬＡ−１２−５０−５０の量を５ｍｇ、２．５ｍｇ、１．２ｍｇ、０．５ｍｇ、０．１ｍｇとした場合、取り込まれるヒノキチオールの量はポリマー量が減少するのに伴って減少するが、ポリマー量が２．５ｍｇ、１．２ｍｇ、０．５ｍｇではほぼ一定となり、封入率が高くなり、ミセルのサイズが大きくなった（表１参照）。
実施例２．ブロックコポリマーによるヒノキチオールの光に対する安定性
ミセル化ヒノキチオール（表１に示した実験１から６のサンプル）の水溶液を、実験室の光の下、室温で保存し、それらの吸収強度変化を経時的に測定すると、図２に示すとおり、３２４ｎｍにおける吸収強度は１日後で８５％、７日後でも５３％、１４日後でも４０％維持されており、ミセル化によりヒノキチオールの光分解が抑制されていることが示された。尚、図２に示されている結果は実験１から６のミセルの３２４ｎｍの吸収の平均値を示す。即ち、図１に示した異性化反応は、ミセル化により立体的に阻害されるものと思われる。また、この異性化反応の阻害は、ヒノキチオール／ブロックコポリマー１ｍｇ／１．２ｍｇを出発物質とした場合（ヒノキチオールがブロックコポリマーに対して大過剰の状態）にも観測されることから、ヒノキチオールがブロックコポリマーと相互作用している状態でも異性化反応に対する立体的阻害が起こっていることが示唆される。
実施例３．ブロックコポリマーによるミセル化ヒノキチオールの熱に対する安定性
ミセル化ヒノキチオール（表１示した実験１から６のサンプル）の水溶液を、遮光下、３７℃で保存し、それらの吸収強度変化を経時的に測定すると、３２４ｎｍ吸収極大は１４日後でも９７％保持されており、ミセル化によりヒノキチオールの熱分解が完全に抑制されていることを示している（図３）。熱分解の場合のスペクトル的変化は光分解の場合と全く同じであることから、光分解の場合も熱分解の場合も分解物はシクロペンテン誘導体であり、熱分解阻害も光分解阻害と同様のメカニズムで起こっているものと考えられる。
比較例１．フリーのヒノキチオールの光または熱に対する安定性
フリーのヒノキチオールの光または熱に対する安定性評価は実施例２、３と同様の方法で行った。フリーのヒノキチオール水溶液を実験室の光の下、室温で保存し、３３０ｎｍにおける吸収強度を経時的に測定すると、吸収強度は１日後にはすでに６４％に減少し、８日後には９％、１４日後には６％にまで減少した（図２）。遮光下３７℃では、フリーのヒノキチオールの３３０ｎｍにおける吸収強度は、８日後には５７％に減少し、１４日後には４１％まで減少した（図３）。
比較例２．ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）によるヒノキチオールのミセル化
ＳＤＳ（Ｗａｋｏ，Ｏｓａｋａ）７．２ｍｇとヒノキチオール４５３μｇを超純水２．５ｍｌに溶かし、攪拌した後ゲルろ過で精製すると粒径１３０ｎｍのミセルが得られた。ヒノキチオールの取り込み率は１２．４％、封入率は０．８％で、ＳＤＳによるミセル化ヒノキチオールは、３２８ｎｍと３８７ｎｍに吸収極大を示した。ＳＤＳによるミセル化ヒノキチオールの光または熱に対する安定性評価は実施例２、３及び比較例１と同様の方法でおこなったが、ただし３２８ｎｍにおける吸収強度を測定した。ＳＤＳミセル化ヒノキチオールの３２８ｎｍにおける吸収強度は、実験室の光の下、常温で保存すると、１日後には６５％に減少し、７日後には４０％、１４日後には３０％にまで減少した（図２）。遮光下３７℃では、３２８ｎｍにおける吸収強度は、１日後には３３％に減少し、７日後には１７％、１４日後には１４％まで減少した（図３）。
比較例３．ヒノキチオール含有リポソーム
卵黄レシチン（Ｗａｋｏ，Ｏｓａｋａ）３０ｍｇを２ｍｌのジクロロメタンに溶解した後、ジクロロメタンを窒素気流下で揮発させ卵黄レシチンのフィルムを得た。このフィルムに３ｍｌの超純水に溶かした１ｍｇのヒノキチオールを加え、遮光下、４℃で攪拌し、１５分間超音波照射し、ゲルろ過で精製すると粒径約２００ｎｍの粒子が得られた。ヒノキチオールの取り込み率は２３．７％、封入率は０．８％で、リポソーム化ヒノキチオールは３２４ｎｍと３７２ｎｍに吸収極大を示した。卵黄レシチンによるリポソーム化ヒノキチオールの光または熱に対する安定性評価は実施例２、３及び比較例１と同様の方法で行った。リポソーム化ヒノキチオールの３２４ｎｍにおける吸収強度は、実験室の光の下、常温で保存すると、１日後には３８％に減少し、３日後にはすでに０％となった（図２）。遮光下３７℃では、３２４ｎｍにおける吸収強度は、１日後には７５％に減少し、７日後には２５％、１４日後には１０％にまで減少した（図３）。
比較例４．ヒノキチオール含有ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）ナノ粒子
ヒノキチオール１００ｍｇとＰＭＭＡ（Ｗａｋｏ，Ｏｓａｋａ）２ｇをジクロロメタン２８ｍｌに溶解させ、これをＳＤＳ１ｇを含む超純水２００ｍｌに加えて攪拌後、超高圧ホモジナイザー（マイクロフルイダイザー、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）に入れて圧力１０００ｂａｒ、流速１５０ｍｌ／ｍｉｎの条件で乳化物を作成し、ジクロロメタンを蒸発、除去した後、ＳＤＳと取り込まれなかったヒノキチオールを透析で除去すると粒径約５５ｎｍの粒子が得られた。ＰＭＭＡナノ粒子に内包されたヒノキチオールは３２４ｎｍと３６６ｎｍに吸収極大を持ち、光または熱に対する安定性評価は実施例２、３及び比較例１と同様の方法で行った。ＰＭＭＡナノ粒子に含有されたヒノキチオールの３２４ｎｍにおける吸収強度は、実験室の光の下、常温で保存すると、１日後には７２％に減少し、７日後には２５％、１４日後には２２％に減少した（図２）。遮光下３７℃では、ＰＭＭＡナノ粒子に含有されるヒノキチオールは安定で、１４日後でも９２％の吸収強度を保った（図３）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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