(57)【要約】  ３’−ホスホアデノシン−５’−ホスホ硫酸（３’−ｐｈｏｓｐｈｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ５’−ｐｈｏｓｐｈｏｓｕｌｆａｔｅ：ＰＡＰＳ）の安定塩及びその製造法を提供する。  ＰＡＰＳとアミン化合物とから得られるＰＡＰＳの安定塩（アミン塩）に関する。また、ＰＡＰＳ水溶液に等モル以上のアミン化合物を添加し、得られた溶液を凍結乾燥する、ＰＡＰＳ安定塩の製造法に関する。  本発明により、極めて簡便な手法で安定性が著しく向上した固体状のＰＡＰＳを取得することが初めて可能となり、得られたＰＡＰＳのアミン塩は非常に安定であるため、常温での分解をさほど気にせず、保管・使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
３’−ホスホアデノシン−５’−ホスホ硫酸（３’−ｐｈｏｓｐｈｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ５’−ｐｈｏｓｐｈｏｓｕｌｆａｔｅ：ＰＡＰＳ）とアミン化合物とから得られるＰＡＰＳの安定塩。
【請求項２】
アミン化合物が、一又は複数のアミノ基又はイミノ基を有する化合物である、請求項１記載の安定塩。
【請求項３】
アミン化合物が、二級アミンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項４】
アミン化合物が、炭素数１〜１０の炭化水素鎖を有する二級アミンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項５】
アミン化合物が、ジエチルアミン又はピペリジンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項６】
アミン化合物が、第三級アミンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項７】
アミン化合物が、炭素数１〜７の炭化水素鎖を有する三級アミンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項８】
アミン化合物が、トリメチルアミン、トリエチルアミン、又はトリエタノールアミンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項９】
アミン化合物が、ポリアミンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項１０】
アミン化合物が、プトレッシン又はポリエチレンイミンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項１１】
アミン化合物が、アミノ酸である、請求項１記載の安定塩。
【請求項１２】
アミン化合物が、Ｌ−ヒスチジンである、請求項１記載の安定塩。
【請求項１３】
ＰＡＰＳ水溶液に等モル以上のアミン化合物を添加し、得られた溶液を凍結乾燥する、ＰＡＰＳ安定塩の製造法。
【請求項１４】
ｐＨ５以上になるまでアミン化合物又はその水溶液を添加する、請求項１３記載のＰＡＰＳ安定塩の製造法。
【請求項１５】
ｐＨ５〜１０になるまでアミン化合物又はその水溶液を添加する、請求項１３記載のＰＡＰＳ安定塩の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、固体状では著しく不安定な３’−ホスホアデノシン−５’−ホスホ硫酸（３’−ｐｈｏｓｐｈｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ５’−ｐｈｏｓｐｈｏｓｕｌｆａｔｅ：ＰＡＰＳ）の、安定な塩に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＰＡＰＳは、微生物から植物、高等動物に至るまで広く生体内で利用される硫酸供与体である。また、プロテオグリカン疾患に代表されるいくつかの疾患とＰＡＰＳとの関わりも報告されており、今後、ＰＡＰＳを医薬品あるいは健康食品として利用・開発する可能性は高い。【０００３】
従来、ＰＡＰＳの合成法としては、化学合成法や酵素合成法など多数報告されており、得られたＰＡＰＳのリチウム塩あるいはナトリウム塩を粉末として取得していた（非特許文献１、特許文献１など参照）。
【非特許文献１】メルクカルビオケムカタログ（２００５／０６），３２頁
【特許文献１】特開平５−１３７５８８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、上記カタログにおける「Ｎｏｔｅ：ｕｎｓｔａｂｌｅ  ａｔ  ｒｏｏｍ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ」との記載及び後述参考例から明らかなように、固体状のＰＡＰＳ金属塩（リチウム塩又はナトリウム塩）は、それ自身著しく不安定で、常温で容易に分解してしまうことから、高純度なＰＡＰＳの単離、及びその安定的な維持・保管は非常に困難であり、このことがＰＡＰＳの産業利用への大きな障壁となっていた。【０００５】
したがって、ＰＡＰＳの産業利用を可能とするためには、固体状のＰＡＰＳの不安定性を克服することが必要不可欠で、本発明はＰＡＰＳの安定な塩を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、固体状のＰＡＰＳの不安定性を克服すべく鋭意検討した結果、ＰＡＰＳとアミン化合物から得られた塩は、優れた安定性を有することを見出し、本発明を完成させた。したがって、本発明は以下の通りである。【０００７】
（１）ＰＡＰＳとアミン化合物とから得られるＰＡＰＳの安定塩。
（２）アミン化合物が、一又は複数のアミノ基又はイミノ基を有する化合物である、上記（１）記載の安定塩。【０００８】
（３）アミン化合物が、二級アミンである、上記（１）記載の安定塩。
（４）アミン化合物が、炭素数１〜１０の炭化水素鎖を有する二級アミンである、上記（１）記載の安定塩。
（５）アミン化合物が、ジエチルアミン又はピペリジンである、上記（１）記載の安定塩。【０００９】
（６）アミン化合物が、第三級アミンである、上記（１）記載の安定塩。
（７）アミン化合物が、炭素数１〜７の炭化水素鎖を有する三級アミンである、上記（１）記載の安定塩。
（８）アミン化合物が、トリメチルアミン、トリエチルアミン、又はトリエタノールアミンである、上記（１）記載の安定塩。【００１０】
（９）アミン化合物が、ポリアミンである、上記（１）記載の安定塩。
（１０）アミン化合物が、プトレッシン又はポリエチレンイミンである、上記（１）記載の安定塩。【００１１】
（１１）アミン化合物が、アミノ酸である、上記（１）記載の安定塩。
（１２）アミン化合物が、Ｌ−ヒスチジンである、上記（１）記載の安定塩。【００１２】
（１３）ＰＡＰＳ水溶液に等モル以上のアミン化合物を添加し、得られた溶液を凍結乾燥する、ＰＡＰＳ安定塩の製造法。
（１４）ｐＨ５以上になるまでアミン化合物又はその水溶液を添加する、上記（１３）記載のＰＡＰＳ安定塩の製造法。
（１５）ｐＨ５〜１０になるまでアミン化合物又はその水溶液を添加する、上記（１３）記載のＰＡＰＳ安定塩の製造法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、極めて簡便な手法で安定性が著しく向上した固体状のＰＡＰＳの塩を取得することが初めて可能となり、得られたＰＡＰＳのアミン化合物塩は非常に安定であるため、常温での分解をさほど気にせず、保管・使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本明細書における「安定塩」とは、ＰＡＰＳの塩１０ｍｇを秤量し、これを常温（２３±２℃）でデシケーター中（相対湿度２０％以下）に静置し、静置７日後のＰＡＰＳ含量をＨＰＬＣで定量したときの残存率が８０％以上、好ましくは９０％以上を示す塩のことを意味し、残存率８０％未満の塩は本発明の安定塩には包含されない。なお、ＨＰＬＣの測定条件は、以下の通りである。【００１５】
＜ＨＰＬＣ測定条件＞
・分離カラム：ＹＭＣ社製のＯＤＳ−Ａ３１２カラム
・溶出液：５０ｍＭリン酸一カリウム水溶液
・流速：０．６ｍＬ／分
・検出：吸光度（Ａ）２７０ｎｍ
・温度：２０℃【００１６】
本発明は、上述したように、ＰＡＰＳとアミン化合物とから得られるＰＡＰＳの安定塩（アミン塩）に関する。【００１７】
ＰＡＰＳ安定塩を調製するのに使用するアミン化合物としては、一又は複数のアミノ基又はイミノ基を有する化合物で、得られた塩が上記の安定塩の範疇に含まれるのであれば、いずれの化合物であってもかまわない。【００１８】
このようなアミン化合物としては、二級アミン、第三級アミン、ポリアミンもしくはアミノ酸を例示することができる。【００１９】
二級アミンとしては、炭素数１〜１０の炭化水素鎖を有する二級アミンが好ましく、より具体的にはジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、ジブチルアミン、ジアミルアミン、ジアリルアミン、ジフェニルアミン、ピペリジンなどが例示され、特にジエチルアミン、ピペリジンを好ましいものとして挙げることができる。【００２０】
三級アミンとしては、炭素数１〜７の炭化水素鎖を有する三級アミンが好ましく、より具体的にはトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、トリアミルアミン、トリアリルアミン、トリフェニルアミン、トリエタノールアミンなどが例示され、特にトリエチルアミン、トリエタノールアミンを好ましいものとして挙げることができる。【００２１】
ポリアミンとしては、ジアミン、トリアミン、テトラアミンなどの生体ポリアミン又は側鎖ないしは主鎖にアミノ基もしくはイミノ基を有する高分子化合物を挙げることができる。具体的には生体ポリアミンとしてはプトレッシン、スペルミン、スペルミジンなどが、高分子化合物としてはポリエチレンイミン、ポリアリルアミン、ポリビニルアミンなどが例示され、特にポリエチレンイミンを好ましいものとして挙げることができる。【００２２】
アミノ酸としては、塩基性アミノ酸が例示され、特にＬ−ヒスチジンを好ましいものとして挙げることができる。【００２３】
このようなＰＡＰＳの安定塩は、ＰＡＰＳ水溶液に等モル以上のアミン化合物を添加し、得られた溶液を凍結乾燥することにより調製することができる。
すなわち、公知の化学合成法、酵素合成法により調製したＰＡＰＳ水溶液をそのまま、あるいは必要により精製した後、等モル以上のアミン化合物又はその水溶液をｐＨ５以上、好ましくはｐＨ５〜１０になるまで添加後、常法により凍結乾燥することで固体状（たとえば、白色粉末など）の形態でＰＡＰＳの安定塩を取得することができる。【００２４】
得られたＰＡＰＳの安定塩は、従来のＰＡＰＳ金属塩と比較して格段に安定性が優れたものではあるが、念のため、容器に封入後、４℃以下の低温で保管する方が好ましい。
【実施例】
【００２５】
以下、参考例及び実施例を示して本発明を詳細かつ具体的に説明するが、本発明は以下の例によって限定されないことは明らかである。なお、ＰＡＰＳの定量は、上記したＨＰＬＣ法に従って行った。【００２６】
参考例  ＰＡＰＳ・リチウム塩の水溶液中及び粉体での常温安定性
カルビオケム社製ＰＡＰＳ・リチウム塩の水溶液中及び粉体での常温安定性を以下のように検討した。すなわち、１０ｍｇ／ｍＬの濃度のＰＡＰＳ・リチウム塩水溶液を調製し、４℃もしくは常温（２３℃）で静置した。同時に、ＰＡＰＳ・リチウム塩を１０ｍｇ秤量し、粉体のまま４℃もしくは常温（２３℃）で静置した。静置開始７日後のＰＡＰＳ残存率を表１に示す。なお、ここでいう残存率とは、残存量の初発量に対する割合である。この結果から明らかなように、市販されているＰＡＰＳ・リチウム塩は水溶液中では比較的安定であるものの、粉体では非常に不安定であり、常温での７日間の静置で３５％が分解することが明らかとなった。【００２７】
【表１】
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【００２８】
実施例１
（１）各種ＰＡＰＳ塩（粉体）の調製
ＰＡＰＳ・リチウム塩（カルビオケム社）を、陽イオン交換樹脂ダイヤイオンＰＫ−２１６（三菱化学社）を充填したカラムに通液することで、ＰＡＰＳ遊離酸の水溶液を得た。該水溶液を即座に水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア水、Ｌ−リジン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジン、ピペリジン、エチルアミン、エタノールアミン、ジエチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、プトレッシン、ポリエチレンイミンの各々の水溶液でｐＨ７．０に中和してやることで、ＰＡＰＳのリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、Ｌ−リジン塩、Ｌ−アルギニン塩、Ｌ−ヒスチジン塩、ピペリジン塩、エチルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエチルアミン塩、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、トリエタノールアミン塩、プトレッシン塩、ポリエチレンイミン塩の各々を調製し、それぞれの溶液を凍結乾燥に付し、各種ＰＡＰＳ塩の粉体を得た。【００２９】
（２）各種ＰＡＰＳ塩粉体の常温での安定性
実施例１で得た各種ＰＡＰＳ塩の粉体を１０ｍｇずつ秤量し、常温（２３±２℃）でデシケーター中（相対湿度１０％）に静置した。静置７日後のＰＡＰＳ残存率をＨＰＬＣ法にて測定し、表２に示した。【００３０】
表２から明らかなように、ナトリウム塩、リチウム塩、及びカリウム塩などの金属塩の場合、ＰＡＰＳの安定性は低く、常温７日静置後のＰＡＰＳ残存率は６５％以下であった。また、アンモニウム塩、一級アミンであるエチルアミン塩やエタノールアミン塩、及びＬ−リジン塩やＬ−アルギニン塩も、金属塩より安定性は劣っていた。【００３１】
これに対し、２級アミンのジエチルアミン塩及びピペリジン塩、三級アミンのトリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩及びトリエタノールアミン塩、ポリアミンのプトレッシン塩及びポリエチレンイミン塩、アミノ酸のＬ−ヒスチジン塩は、顕著に安定化され、常温７日静置後のＰＡＰＳ残存率は、すべて８０％以上であった。その中でも特に、９０％以上の残存率を示すジエチルアミン塩、ピペリジン塩、トリエチルアミン塩、トリエタノールアミン塩、ポリエチレンイミン塩、及びＬ−ヒスチジン塩が好ましい塩の形態であることが明らかとなった。【００３２】
【表２】
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【国際調査報告】
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