【手続補正書】
【提出日】平成30年12月21日(2018.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物細胞によって組換え産生されたセクキヌマブ抗体の調製物中のＣｙｓＬ９７を選択的に還元する方法であって、
ａ）システム内で前記調製物を少なくとも１つの還元剤と接触させて還元性混合物を形成するステップであって、前記少なくとも１つの還元剤が、チオール−ジスルフィド交換によって測定した場合、ｐＨ７．０で約−０．２０Ｖ〜約−０．２３Ｖの標準酸化還元電位Ｅ０を有するチオール含有還元剤であり、前記還元性混合物中の還元剤：抗体のモル比が、約４６：１〜約１１８：１の間である、ステップ、および
ｂ）溶存酸素曲線を飽和曲線に当てはめることによって計算される≦約０．３７ｈ−１の酸素物質移動容量係数（ｋＬａ＊）をシステム内で維持しながら前記還元性混合物をインキュベートするステップ
を含み、
ステップａ）の前、前記調製物の初期酸素飽和度パーセントが、２５℃で較正した酸素プローブを使用して測定した場合、少なくとも約６０％である、方法。
【請求項２】
哺乳動物細胞によって組換え産生されたセクキヌマブ抗体の調製物中のＣｙｓＬ９７を選択的に還元する方法であって、
ａ）システム内で前記調製物をシステインと接触させて還元性混合物を形成するステップであって、前記還元性混合物中のシステイン：抗体のモル比が約４６：１〜約１１８：１の間であるステップ、および
ｂ）溶存酸素曲線を飽和曲線に当てはめることによって計算される≦約０．３７ｈ−１の酸素物質移動容量係数（ｋＬａ＊）をシステム内で維持しながら前記還元性混合物をインキュベートするステップ
を含む、方法。
【請求項３】
ステップａ）の前、前記調製物の初期酸素飽和度パーセントが、２５℃で較正した酸素プローブを使用して測定した場合、少なくとも約６０％である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ステップｂ）中の前記システム内のｋＬａ＊が、
ａ．≦約０．３７ｈ−１であり、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が、約５６：１〜約１１８：１の間であり、前記還元性混合物が、ステップｂ）に従って最大約２４０分までインキュベートされるか、
ｂ．≦約０．３７ｈ−１であり、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が、約７７：１〜約１１８：１の間であり、前記還元性混合物が、ステップｂ）に従って最大約３００分までインキュベートされるか、
ｃ．＜約０．３７ｈ−１であり、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が、約４６：１〜約１１８：１の間であるか、
ｄ．＜約０．３７ｈ−１であり、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が、約５４：１〜約８２：１の間であるか、または、
ｅ．≦約０．２７ｈ−１である、
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が、約６６：１である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記還元性混合物中のシステインの濃度が、約４．０ｍＭ〜約８．０ｍＭである、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
ステップａ）とステップｂ）の間に、前記還元性混合物が、約４５〜約９０分間、約３２℃〜約４２℃の間の温度に加熱され、加熱中の前記システム内のｋＬａ＊が、≦約０．６９ｈ−１であり、前記ｋＬａ＊が、飽和曲線を溶存酸素曲線に当てはめることによって計算される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記還元性混合物が、ステップｂ）に従って、約２１０〜約４２０分間、約２０℃〜約４２℃の間の温度でインキュベートされる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記還元剤の酸化型が前記還元性混合物に添加されない、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
変性剤が前記還元性混合物に添加されない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物細胞によって組換え産生されたセクキヌマブ抗体の調製物中のＣｙｓＬ９７を選択的に還元する方法であって、
ａ）システム内で前記調製物を、約４．０ｍＭ〜約８．０ｍＭのシステインと接触させて、還元性混合物を形成するステップ、
ｂ）前記還元性混合物を、約４５〜約９０分間、約３２℃〜約４２℃の間の温度に加熱するステップであって、加熱中の前記システム内の酸素物質移動容量係数（ｋＬａ＊）が＜約０．６９ｈ−１であるステップ、および
ｃ）前記還元性混合物を約２０℃〜約４２℃の間の温度でインキュベートし、この間、前記システム内のｋＬａ＊を、
i．≦約０．３７ｈ−１に維持するステップであって、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が約５６：１〜約１１８：１の間であり、前記還元性混合物が最大約２４０分までインキュベートされる、ステップ、
ii．≦約０．３７ｈ−１に維持するステップであって、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が約７７：１〜約１１８：１の間であり、前記還元性混合物が最大約３００分までインキュベートされる、ステップ、
iii．＜約０．３７ｈ−１に維持するステップであって、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が約４６：１〜約１１８：１の間であるステップ、
iv．＜約０．３７ｈ−１に維持するステップであって、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が約５４：１〜約８２：１の間であるステップ、または、
v. ≦約０．２７ｈ−１に維持するステップ
を含み、
前記ｋＬａ＊が、飽和曲線を溶存酸素曲線に当てはめることによって計算され、
ステップａ）の前、前記調製物の初期酸素飽和度パーセントが、２５℃で較正した酸素プローブを使用して測定した場合、少なくとも約６０％である、方法。
【請求項１２】
哺乳動物細胞によって組換え産生されたセクキヌマブ抗体の調製物中のＣｙｓＬ９７を選択的に還元する方法であって、
ａ）前記調製物を、システイン／シスチンおよびシステイン／シスタミンから選択される酸化／還元試薬のセットと接触させて、還元性混合物を形成するステップであって、前記還元性混合物中の酸化／還元試薬のモル比が、約４：１〜約８０：１の間であり、前記還元性混合物中のシステイン：セクキヌマブ抗体のモル比が、約２１：１〜約２９６：１の間である、ステップ、および
ｂ）前記還元性混合物を
i.  約３７℃の温度で嫌気条件下、少なくとも約４時間インキュベートするか、または
ii.  約１８〜２４℃の温度で約１６〜２４時間インキュベートする
ステップを含む、方法。
【請求項１３】
酸化／還元試薬の前記セットがシステイン／シスチンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記調製物中の前記セクキヌマブ抗体の活性レベルが、シスタミン−ＣＥＸによって測定した場合、ステップｂ）後約６０分以内に少なくとも約１０パーセントポイント増加する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
哺乳動物細胞によって組換え産生されたセクキヌマブ抗体の調製物中のＣｙｓＬ９７を選択的に還元する方法であって、
ａ）前記調製物中のセクキヌマブ抗体の濃度を約４ｍｇ／ｍｌ〜約１９．４ｍｇ／ｍｌの間に調整するステップ、
ｂ）前記調製物の酸素飽和度パーセントを少なくとも約６０％に調整するステップ
ｃ）前記調製物のｐＨを、約７．４〜約８．５に調整するステップ、
ｄ）前記調製物を容器内でシステインと接触させて還元性混合物を形成するステップであり、前記還元性混合物中のシステインの濃度が約４．０ｍＭ〜約８．０ｍＭである、ステップ；
ｅ）前記還元性混合物を約３２℃〜約４２℃の間の温度に加熱するステップ、
ｆ）ステップｅ）からの前記還元性混合物を約２０℃〜約４２℃の間の温度でインキュベートするステップであり、前記インキュベートを約２１０〜約４２０分間行い、この間、容器内で≦０．３７ｈ−１の酸素物質移動容量係数（ｋＬａ＊）を維持し、前記ｋＬａ＊は飽和曲線を溶存酸素曲線に当てはめることによって計算される、ステップ、
ｇ）ステップｆ）から結果として得られる混合物を約１６℃〜約２８℃の温度に冷却するステップであって、前記冷却を約４５〜約９０分間行うステップ、および
ｈ）ステップｇ）から結果として得られる混合物のｐＨを約５．１〜約５．３の間に調整するステップ
を含む方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法によって生産されたセクキヌマブ抗体の精製された調製物。
【請求項１７】
セクキヌマブ抗体の精製された調製物であって、前記調製物中のインタクトセクキヌマブのレベルが、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）によって測定された場合、少なくとも約９０％であり、前記調製物中のセクキヌマブの活性レベルが、シスタミン−ＣＥＸによって測定された場合、少なくとも約９０％である、精製された調製物。
【請求項１８】
セクキヌマブ抗体の精製された調製物であって、前記調製物は、カラム溶出液、濾過溶出液または透析緩衝液中に溶出されたセクキヌマブ抗体を含み、前記調製物中のインタクトセクキヌマブのレベルが、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）によって測定された場合、少なくとも約９０％であり、前記調製物中のセクキヌマブの活性レベルが、シスタミン−ＣＥＸによって測定された場合、少なくとも約９０％である、精製された調製物。
【請求項１９】
前記調製物中のセクキヌマブの活性レベルが、シスタミン−ＣＥＸによって測定された場合、少なくとも約９２％である、請求項１７または１８に記載の精製された調製物。
【請求項２０】
前記調製物中のセクキヌマブの活性レベルが、シスタミン−ＣＥＸによって測定された場合、少なくとも約９３％である、請求項１７または１８に記載の精製された調製物。
【請求項２１】
前記調製物中のセクキヌマブの活性レベルが、シスタミン−ＣＥＸによって測定された場合、少なくとも約９６％である、請求項１７または１８に記載の精製された調製物。
【請求項２２】
前記調製物中のインタクトセクキヌマブのレベルが、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）によって測定された場合、少なくとも約９２％である、請求項１７または１８に記載の精製された調製物。
【請求項２３】
前記調製物中のインタクトセクキヌマブのレベルが、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）によって測定された場合、少なくとも約９３％である、請求項１７または１８に記載の精製された調製物。
【請求項２４】
前記調製物中のインタクトセクキヌマブのレベルが、ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）によって測定された場合、少なくとも約９６％である、請求項１７または１８に記載の精製された調製物。