【手続補正書】
【提出日】平成31年1月4日(2019.1.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞集団が眼異常を処置するための適切な治療用物質(therapeutic)であるかどうか適格性を判定する方法であって、
該方法が、細胞の該集団における、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)と、細胞レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)、レシチンレチノールアシルトランスフェラーゼ(LRAT)、および性決定領域Y-ボックス9(SOX9)からなる群より選択される少なくとも1つのポリペプチドの同時発現を分析する段階を含み、該PMEL17と該少なくとも1つのポリペプチドとを同時発現する細胞の数が所定のレベルを上回る場合に、該細胞集団が、眼異常を処置するための適切な治療用物質として適格であるとして判定される、方法。
【請求項２】
前記少なくとも1つのポリペプチドがCRALBPである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
エクスビボで多能性幹細胞を網膜色素上皮(RPE)細胞に分化させることによって、前記細胞集団が作製される、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
前記多能性幹細胞が胚性幹細胞を含み、かつ前記分化させることの前に、該胚性幹細胞が、bFGFおよびTGFβを含む培地中で増殖される、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
前記分化させることの前に、前記胚性幹細胞がヒト帯線維芽細胞上で培養される、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
前記エクスビボで分化させることが、
(a)分化細胞を生成するように、胚性幹細胞を、分化物質を含む培地中で培養すること;および
(b)該分化細胞を、トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーを含む培地中で培養すること
によって行われる、請求項4に記載の方法。
【請求項７】
前記分化物質がニコチンアミド(NA)または3-アミノベンズアミドである、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
段階(a)の培地が、ニコチンアミド(NA)を含み、かつ前記TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーを欠如しており、かつ段階(b)の培地が、NA、および該TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーを含む、請求項6に記載の方法。
【請求項９】
(c)段階(b)の後に、ニコチンアミド(NA)を含みかつ前記TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーを欠如している培地中で、前記細胞を培養する段階
をさらに含む、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
前記TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーが、TGFβ1、TGFβ3、およびアクチビンAからなる群より選択される、請求項8に記載の方法。
【請求項１１】
段階(c)の後に、多角細胞を選択する段階をさらに含む、請求項9に記載の方法。
【請求項１２】
前記多角細胞を増殖させる段階をさらに含む、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
前記増殖させる段階が付着性表面上で行われる、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
(a)分化細胞を生成するように、多能性幹細胞を、分化物質を含みトランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーを欠如している培地中で培養する段階;
(b)RPE系列にさらに分化している細胞を生成するように、該分化細胞を、該トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーおよび該分化物質を含む培地中で培養する段階;
(c)該RPE系列にさらに分化している細胞からの色素上皮由来因子(PEDF)の分泌を分析する段階;ならびに
(d)RPE細胞を生成するように、該RPE系列にさらに分化している細胞を、分化物質を含みトランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーを欠如している培地中で培養する段階
を含み、
該PEDFの量が所定のレベルを上回る場合に段階(d)が行われる、
網膜上皮細胞を作製する方法。
【請求項１５】
前記トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーが、TGFβ1、TGFβ3、およびアクチビンAからなる群より選択される、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
段階(a)の分化物質がニコチンアミド(NA)または3-アミノベンズアミドである、請求項14または15に記載の方法。
【請求項１７】
前記多能性幹細胞が胚性幹細胞を含む、請求項14〜16のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記胚性幹細胞が、bFGFおよびTGFβを含む培地中で増殖される、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記胚性幹細胞がヒト帯線維芽細胞上で培養される、請求項17に記載の方法。
【請求項２０】
細胞集団が眼異常を処置するための適切な治療用物質であるかどうか適格性を判定する方法であって、該方法が、細胞の該集団における、細胞レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)と、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)、レシチンレチノールアシルトランスフェラーゼ(LRAT)、および性決定領域Y-ボックス9(SOX9)からなる群より選択される少なくとも1つのポリペプチドの同時発現を分析する段階を含み、該CRALBPと該少なくとも1つのポリペプチドとを同時発現する細胞の数が所定のレベルを上回る場合に、該細胞集団が、眼異常を処置するための適切な治療用物質として適格であると判定される、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
[本発明1001]
細胞集団が眼異常を処置するための適切な治療用物質(therapeutic)であるかどうか適格性を判定する方法であって、
該方法が、細胞の該集団における、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)と、細胞レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)、レシチンレチノールアシルトランスフェラーゼ(LRAT)、および性決定領域Y-ボックス9(SOX9)からなる群より選択される少なくとも1つのポリペプチドの同時発現を分析する段階を含み、該PMEL17と該少なくとも1つのポリペプチドとを同時発現する細胞の数が所定のレベルを上回る場合に、該細胞集団が、眼異常を処置するための適切な治療用物質として適格であるとして判定される、方法。
[本発明1002]
前記少なくとも1つのポリペプチドがCRALBPである、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記分析する段階がフローサイトメーターを用いて行われる、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記分析する段階が免疫染色によって行われる、本発明1001の方法。
[本発明1005]
エクスビボで多能性幹細胞をRPE細胞に分化させることによって、前記細胞集団が作製される、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記多能性幹細胞が胚性幹細胞を含む、本発明1005の方法。
[本発明1007]
前記分化させることの前に、前記胚性幹細胞が、bFGFおよびTGFβを含む培地中で増殖される、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記分化させることの前に、段階(a)の前に、前記胚性幹細胞がヒト帯線維芽細胞上で培養される、本発明1006の方法。
[本発明1009]
前記エクスビボで分化させることが、
(a)分化細胞を生成するように、胚性幹細胞を、分化物質を含む培地中で培養すること;および
(b)該分化細胞を、トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーを含む培地中で培養すること
によって行われる、本発明1005の方法。
[本発明1010]
前記分化物質がニコチンアミド(NA)または3-アミノベンズアミドである、本発明1009の方法。
[本発明1011]
段階(a)の培地が、ニコチンアミド(NA)を含み、かつ前記TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーを欠如しており、かつ段階(b)の培地が、NA、および該TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーを含む、本発明1009の方法。
[本発明1012]
(c)段階(b)の後に、ニコチンアミド(NA)を含みかつ前記TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーを欠如している培地中で、前記細胞を培養する段階
をさらに含む、本発明1011の方法。
[本発明1013]
段階(a)が少なくとも2日間行われる、本発明1010の方法。
[本発明1014]
前記TGFβスーパーファミリーの少なくとも1つのメンバーが、TGFβ1、TGFβ3、およびアクチビンAからなる群より選択される、本発明1006の方法。
[本発明1015]
段階(c)の後に、多角細胞を選択する段階をさらに含む、本発明1012の方法。
[本発明1016]
前記多角細胞を増殖させる段階をさらに含む、本発明1015の方法。
[本発明1017]
前記増殖させる段階が付着性表面上で行われる、本発明1016の方法。
[本発明1018]
(a)分化細胞を生成するように、多能性幹細胞を、分化物質を含みトランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーを欠如している培地中で培養する段階;
(b)RPE系列にさらに分化している細胞を生成するように、該分化細胞を、該トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーおよび該分化物質を含む培地中で培養する段階;
(c)該RPE系列にさらに分化している細胞からの色素上皮由来因子(PEDF)の分泌を分析する段階;ならびに
(d)RPE細胞を生成するように、該RPE系列にさらに分化している細胞を、分化物質を含みトランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーを欠如している培地中で培養する段階
を含み、
該PEDFの量が所定のレベルを上回る場合に段階(d)が行われる、
網膜上皮細胞を作製する方法。
[本発明1019]
前記トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーのメンバーが、TGFβ1、TGFβ3、およびアクチビンAからなる群より選択される、本発明1018の方法。
[本発明1020]
段階(a)の分化物質および段階(d)の分化物質が同一である、本発明1018の方法。
[本発明1021]
段階(a)の分化物質がニコチンアミド(NA)または3-アミノベンズアミドである、本発明1018の方法。
[本発明1022]
前記多能性幹細胞が胚性幹細胞を含む、本発明1018の方法。
[本発明1023]
前記胚性幹細胞が、bFGFおよびTGFβを含む培地中で増殖される、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記胚性幹細胞がヒト帯線維芽細胞上で培養される、本発明1022の方法。
[本発明1025]
細胞集団が眼異常を処置するための適切な治療用物質であるかどうか適格性を判定する方法であって、該方法が、細胞の該集団における、細胞レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)と、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)、レシチンレチノールアシルトランスフェラーゼ(LRAT)、および性決定領域Y-ボックス9(SOX9)からなる群より選択される少なくとも1つのポリペプチドの同時発現を分析する段階を含み、該CRALBPと該少なくとも1つのポリペプチドとを同時発現する細胞の数が所定のレベルを上回る場合に、該細胞集団が、眼異常を処置するための適切な治療用物質として適格であると判定される、方法。
特に定義のない限り、本明細書で使用する技術用語および科学用語は全て、本発明が属する当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様のまたは等価な方法および材料を本発明の態様の実施または試験において使用することができるが、例示的な方法および/または材料を下記で説明する。矛盾する場合は、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法、および実施例は例示にすぎず、必ず限定することが意図されない。