【手続補正書】
【提出日】平成31年1月18日(2019.1.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療または診断剤を含む脂質ナノ粒子と、
該脂質ナノ粒子と組成的に区別されるナノ粒子を形成する膜不安定化ポリマーと
を含む、対象内の標的細胞の細胞質ゾルに治療または診断剤を送達するための組成物。
【請求項２】
(a)治療または診断剤を含む脂質ナノ粒子を含むキャリア組成物と、
(b)該脂質ナノ粒子と組成的に区別されるナノ粒子を形成する膜不安定化ポリマーを含むエンハンサー組成物と
を含む、対象内の標的細胞の細胞質ゾルに治療または診断剤を送達するための送達システム。
【請求項３】
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの少なくとも一方が、標的細胞の表面の分子に特異的に結合する第1の標的化リガンドを含む、請求項1記載の組成物または請求項2記載の送達システム。
【請求項４】
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーが別々に投与されるように用いられることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項５】
膜不安定化ポリマーが脂質ナノ粒子の投与後に投与されるように用いられることを特徴とする、請求項4記載の組成物または送達システム。
【請求項６】
膜不安定化ポリマーが第1の標的化リガンドを含む、請求項3〜5のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項７】
脂質ナノ粒子が第1の標的化リガンドを含む、請求項3〜5のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項８】
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの両方が第1の標的リガンドを含む、請求項3〜5のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項９】
第1の標的化リガンドがN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、請求項3〜8のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項１０】
膜不安定化ポリマーがpH感受性ポリマーである、請求項1〜9のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項１１】
pH感受性膜不安定化ポリマーが、親水性ランダムコポリマーブロックおよび疎水性ランダムコポリマーブロックを有するジブロックコポリマーであり、
該親水性ブロックは、親水性モノマー残基および疎水性モノマー残基の両方を含む両親媒性ブロックであり、親水性ブロック中の親水性モノマー残基の数は、疎水性モノマー残基の数よりも大きく；
該疎水性ブロックは、疎水性モノマー残基および親水性モノマー残基の両方を含み、約7.4のpHで全体的に疎水的特性を有する両親媒性膜不安定化ブロックであり；かつ
該親水性および疎水性ブロックの親水性モノマー残基のそれぞれは、独立して、約7.4のpHでイオン性であるモノマー残基、約7.4のpHで中性であるモノマー残基、および約7.4のpHで双性イオン性であるモノマー残基からなる群より選択される、
請求項10記載の組成物または送達システム。
【請求項１２】
式Iのランダムブロックコポリマーであって、
2018509387.tif 000001
式中、
A0、A1、A2、A3、A4およびA5は、それぞれ独立して、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-、-O(C)b-、および-CR8-CR9からなる群より選択され；R1〜R6およびY0〜Y5では完全には置換されていないA0〜A5の4価の炭素原子は、適切な数の水素原子で満たされており；aおよびbは、それぞれ独立して1〜4であり；R8およびR9は、それぞれ独立して、-C(O)OH、-C(O)Oアルキル、および-C(O)NR10からなる群より選択され、R8およびR9は、互いに共有連結して環構造を形成していてもよく；
Y5は、水素であるか、または、いずれも1つもしくは複数のフッ素原子で置換されていてもよい-(1C-10C)アルキル、-(3C-6C)シクロアルキル、-O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、-C(O)NR11(1C-10C)アルキル、および-(6C-10C)アリールからなる群より選択され；
Y0、Y3、およびY4は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-、-S(2C-10C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-10C)アルキル-からなる群より選択され；
Y1およびY2は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-18C)アルキル-、-(3C-18C)分岐アルキル、-C(O)O(2C-18C)アルキル-、-C(O)O(2C-18C)分岐アルキル、-OC(O)(1C-18C)アルキル-、-OC(O)(1C-18C)分岐アルキル-、-O(2C-18C)アルキル-、-0(2C-18C)分岐アルキル-、-S(2C-18C)アルキル-、-S(2C-18C)分岐アルキル-、-C(O)NR12(2C-18C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-18C)分岐アルキル-からなる群より選択され、Y1またはY2の任意のアルキルまたは分岐アルキル基は、1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11、およびR12は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q0は、生理的pHで親水性である残基；O-[(C)2-3-O]x-R7；およびO-[(C)2-3-O]x-C(O)-NR13R14からなる群より選択される残基であり；xは、1〜48であり；R7は、-CH3または-CO2Hであり；R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q1およびQ2は、それぞれ独立して、存在しないか、あるいは、通常の生理的pHで親水性である残基；コンジュゲート可能なまたは官能化可能な残基；通常の生理的pHで疎水性である残基；1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよいアルキル基；および1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよい分枝アルキル基より選択され；
Q3は、通常の生理的pHで正電荷を持つ残基であり； 
Q4は、通常の生理的pHで負電荷を持つが、より低いpHではプロトン化を受ける残基であり；
mは、0より大きく1.0までのモル分率であり；
nは、0〜1.0未満のモル分率であり；
pは、0〜1.0未満のモル分率であり；m + n + p = 1であり；
qは、0.1〜0.9のモル分率であり；
rは、0.05〜0.9のモル分率であり；
sは、最大で0.85までのモル分率で存在し；q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；かつ
wは、1〜50kDaである、
前記ランダムブロックコポリマーを、pH感受性ポリマーが含む、請求項10記載の組成物または送達システム。
【請求項１３】
pH感受性ポリマーが、式Vのポリマーであって、
T1-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  V
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり;
M2は、
(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；
(C4-C18)分枝アルキル-メタクリレート残基；
コレステリルメタクリレート残基；
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；および
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)分岐アルキル-メタクリレート残基
からなる群より選択されるメタクリレート残基であり；
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mおよびnは、それぞれ0より大きいモル分率であり、mは、nより大きく、m + n = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記ポリマーである、請求項12記載の組成物または送達システム。
【請求項１４】
M2が、
2,2,3,3,4,4,4-ヘプタフルオロブチルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,6,6,6-オクタフルオロ-5(トリフルオロメチル)ヘキシルメタクリレート残基、
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-ペンタデカフルオロオクチル2-メチルアクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,6-ノナフルオロヘキシルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルメタクリレート残基、
1,1,1-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)-2-ヒドロキシ-4-メチル-5-ペンチルメタクリレート残基、
2-[(1',1',1'-トリフルオロ-2'-(トリフルオロメチル)-2'-ヒドロキシ)プロピル]-3-ノルボルニルメタクリレート残基、
2-エチルヘキシルメタクリレート残基、
ブチルメタクリレート残基、
ヘキシルメタクリレート残基、
オクチルメタクリレート残基、
n-デシルメタクリレート残基、
ラウリルメタクリレート残基、
ミリスチルメタクリレート残基、 
ステアリルメタクリレート残基、
コレステリルメタクリレート残基、
エチレングリコールフェニルエーテルメタクリレート残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-フェニルエチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-[[(1,1-ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-(1H-イミダゾール-1-イル)エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，シクロヘキシルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-[ビス(1-メチルエチル)アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，3-メチルブチルエステル残基、
ネオペンチルメタクリレート残基、
tert-ブチルメタクリレート残基、
3,3,5-トリメチルシクロヘキシルメタクリレート残基、
2-ヒドロキシプロピルメタクリレート残基、
5-ノニルメタクリレート残基、
2-ブチル-1-オクチルメタクリレート残基、
2-ヘキシル-1-デシルメタクリレート残基、および
2-(tert-ブチルアミノ)エチルメタクリレート残基
からなる群より選択される、請求項13記載の組成物または送達システム。
【請求項１５】
PEGMAが、エチレングリコール単位を4〜5個またはエチレングリコール単位を7〜8個有する、請求項13および14のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項１６】
T1およびLが存在しており、T1がN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、請求項13〜15のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項１７】
Lが、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコール(PEG)部分を含む、請求項16記載の組成物または送達システム。
【請求項１８】
M2が、へキシルメタクリレート残基である、請求項13〜17のいずれか一項記載の組成物または送達システム。
【請求項１９】
脂質ナノ粒子が治療剤を含み、該治療剤がオリゴヌクレオチドである、請求項1〜18のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
オリゴヌクレオチドが、siRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗miR、ロックド核酸（LNA）をベースとするオリゴヌクレオチド、ダイサー基質、miRNA、aiRNA、shRNA、リボザイム、または核酸アプタマーである、請求項19記載の組成物または送達システム。
【請求項２１】
式VのpH感受性膜不安定化ポリマーであって：
T1-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  V
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり；
M2は、
(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；
(C4-C18)分枝アルキル-メタクリレート残基；
コレステリルメタクリレート残基；
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；および
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)分岐アルキル-メタクリレート残基
からなる群より選択されるメタクリレート残基であり；
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mおよびnはそれぞれ0より大きいモル分率であり、mはnより大きく、m + n = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記pH感受性膜不安定化ポリマー。
【請求項２２】
M2が、
2,2,3,3,4,4,4-ヘプタフルオロブチルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,6,6,6-オクタフルオロ-5(トリフルオロメチル)ヘキシルメタクリレート残基、
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-ペンタデカフルオロオクチル2-メチルアクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,6-ノナフルオロヘキシルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルメタクリレート残基、
1,1,1-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)-2-ヒドロキシ-4-メチル-5-ペンチルメタクリレート残基、
2-[(1',1',1'-トリフルオロ-2'-(トリフルオロメチル)-2'-ヒドロキシ)プロピル]-3-ノルボルニルメタクリレート残基、
2-エチルヘキシルメタクリレート残基、
ブチルメタクリレート残基、
ヘキシルメタクリレート残基、
オクチルメタクリレート残基、
n-デシルメタクリレート残基、
ラウリルメタクリレート残基、
ミリスチルメタクリレート残基、
ステアリルメタクリレート残基、
コレステリルメタクリレート残基、
エチレングリコールフェニルエーテルメタクリレート残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-フェニルエチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-[[(1,1-ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-(1H-イミダゾール-1-イル)エチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,シクロヘキシルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-[ビス(1-メチルエチル)アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,3-メチルブチルエステル残基、
ネオペンチルメタクリレート残基、
tert-ブチルメタクリレート残基、
3,3,5-トリメチルシクロヘキシルメタクリレート残基、
2-ヒドロキシプロピルメタクリレート残基、
5-ノニルメタクリレート残基、
2-ブチル-1-オクチルメタクリレート残基、
2-ヘキシル-1-デシルメタクリレート残基、および
2-(tert-ブチルアミノ)エチルメタクリレート残基
からなる群より選択される、請求項21記載のpH感受性ポリマー。
【請求項２３】
M2が、ヘキシルメタクリレート残基である、請求項21記載のpH感受性ポリマー。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
そのような値が「約」Xまたは「およそ」Xとして表される場合には、Xの記載値は±10％まで正確であると理解されるであろう。
[本発明1001]
（a）治療または診断剤を含む有効量の脂質ナノ粒子と、
（b）有効量の膜不安定化ポリマーと
を対象に投与する工程であって、該治療または診断剤が標的細胞の細胞質ゾルに送達される、工程
を含む、対象内の標的細胞の細胞質ゾルに治療または診断剤を送達するための方法。
[本発明1002]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの少なくとも一方が、標的細胞の表面の分子に特異的に結合する第1の標的化リガンドを含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーが別々に投与される、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
膜不安定化ポリマーが脂質ナノ粒子の投与後に投与される、本発明1003の方法。
[本発明1005]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーが単一組成物内で一緒に投与される、本発明1001または1002の方法。
[本発明1006]
脂質ナノ粒子がカチオン性脂質を含む、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
カチオン性脂質が、
N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTMA）、
N-[1-(2,3-ジオレオイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTAP）、
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（DOEPC）、
1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（DLEPC）、
1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（DMEPC）、
1,2-ジミリストレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（14:1）、
N1-[2-((1S)-1-[(3-アミノプロピル)アミノ]-4-[ジ(3-アミノプロピル)アミノ]ブチルカルボキサミド）エチル]-3,4-ジ[オレイルオキシ]-ベンズアミド（MVL5）、
ジオクタデシルアミド-グリシルスペルミン（DOGS）、
3b-[N-(N',N'-ジメチルアミノエチル)カルバモイル]コレステロール（DC-Chol）、
ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（DDAB）、
SAINT-2,N-メチル-4-(ジオレイル)メチルピリジニウム、
1,2-ジミリスチルオキシプロピル-3-ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（DMRIE）、
1,2-ジオレオイル-3-ジメチル-ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（DORIE）、
1,2-ジオレオイルオキシプロピル-3-ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロリド（DORI）、
ジアルキル化アミノ酸（DILA2）、
C18:1-norArg-C16、
ジオレイルジメチルアンモニウムクロリド（DODAC）、
1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（POEPC）、
1,2-ジミリストレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（MOEPC）、
(R)-5-(ジメチルアミノ)ペンタン-1,2-ジイルジオレエート塩酸塩（DODAPen-Cl）、
(R)-5-グアニジノペンタン-1,2-ジイルジオレエート塩酸塩（DOPen-G）、
(R)-N,N,N-トリメチル-4,5-ビス(オレオイルオキシ)ペンタン-1-アミニウムクロリド（DOTAPen）、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1006の方法。
[本発明1008]
カチオン性脂質が、イオン化可能なカチオン性脂質である、本発明1006の方法。
[本発明1009]
イオン化可能なカチオン性脂質が、
ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（DDAB）、
1,2-ジリノレイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン（DLinDMA）、
2,2-ジリノレイル-4-(2ジメチルアミノエチル)-[1,3]-ジオキソラン（DLin-KC2-DMA）、
ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル4-(ジメチルアミノ)ブタノエート（DLin-MC3-DMA）、
1,2-ジオレオイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン（DODAP）、
1,2-ジオレイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン（DODMA）、
モルホリノコレステロール（Mo-CHOL）、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1008の方法。
[本発明1010]
脂質ナノ粒子が、イオン化可能なアニオン性脂質を含む、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1011]
イオン化可能なアニオン性脂質が、
コレステリルヘミサクシネート(CHEMS)、
ホスファチジルセリン、
パルミトイルホモセリン、
α-トコフェロールヘミサクシネート、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1010の方法。
[本発明1012]
脂質ナノ粒子がヘルパー脂質を含む、本発明1001〜1011のいずれかの方法。
[本発明1013]
ヘルパー脂質が、
コレステロール(CHOL)、
1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)、
1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DPPC)、
1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DMPC)、
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DLPE)、
1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPHyPE）、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1012の方法。
[本発明1014]
脂質ナノ粒子が、ポリエチレングリコール-脂質コンジュゲート（PEG-脂質）を含む、本発明1001〜1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
PEG-脂質が、
N-(カルボニル-メトキシポリエチレングリコール2000)-1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DMPE-PEG2,000)、
N-(カルボニル-メトキシポリエチレングリコール2000)-1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DSPE-PEG2,000)
ポリエチレングリコール-ジミリストールグリセロール（PEG-DMG）、
ポリエチレングリコール-ジステアロイルグリセロール（PEG-DSG）、
N-オクタノイル-スフィンゴシン-1-{スクシニル[メトキシ(ポリエチレングリコール)2000]}(C8 PEG2000セラミド)、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1014の方法。
[本発明1016]
脂質ナノ粒子は、大きさが約200nmより小さい、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
膜不安定化ポリマーが第1の標的化リガンドを含む、本発明1002の方法。
[本発明1018]
脂質ナノ粒子が第1の標的化リガンドを含む、本発明1002の方法。
[本発明1019]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの両方が第1の標的リガンドを含む、本発明1002の方法。
[本発明1020]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの一方が第1の標的化リガンドを含み、脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーのうちの他方が、第1の標的化リガンドとは異なる第2の標的化リガンドを含み、かつ(i)第1の標的化リガンドによって認識されるのと同じ細胞表面分子に特異的に結合するか、または(ii)標的細胞の表面の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、本発明1002の方法。
[本発明1021]
標的細胞が、分泌細胞、軟骨細胞、上皮細胞、神経細胞、筋肉細胞、血液細胞、内皮細胞、周皮細胞、線維芽細胞、グリア細胞、または樹状細胞である、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
標的細胞が、癌細胞、免疫細胞、細菌感染細胞、ウイルス感染細胞、または異常な代謝活性を有する細胞である、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1023]
第1の標的化リガンドが、トランスフェリン受容体1型、トランスフェリン受容体2型、EGF受容体、HER2/Neu、VEGF受容体、PDGF受容体、インテグリン、NGF受容体、CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD33、CD43、CD38、CD56、CD69、アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、葉酸受容体、およびシグマ受容体からなる群より選択される細胞表面分子に特異的に結合する、本発明1002および1017〜1020のいずれかの方法。
[本発明1024]
第2の標的化リガンドが、トランスフェリン受容体1型、トランスフェリン受容体2型、EGF受容体、HER2/Neu、VEGF受容体、PDGF受容体、インテグリン、NGF受容体、CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD33、CD43、CD38、CD56、CD69、アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、葉酸受容体、およびシグマ受容体からなる群より選択される細胞表面分子に特異的に結合する、本発明1020の方法。
[本発明1025]
第1の標的化リガンドが小分子標的化部分を含む、本発明1002および1017〜1020のいずれかの方法。
[本発明1026]
第2の標的化リガンドが小分子標的化部分を含む、本発明1020の方法。
[本発明1027]
小分子標的化部分が、糖、ビタミン、ビスホスホネート、またはこれらのアナログである、本発明1025または1026の方法。
[本発明1028]
糖が、ラクトース、ガラクトース、N-アセチルガラクトサミン(NAG)、マンノース、およびマンノース-6-リン酸(M6P)より選択される、本発明1027の方法。
[本発明1029]
ビタミンが葉酸である、本発明1027の方法。
[本発明1030]
第1の標的化リガンドがタンパク質である、本発明1002および1017〜1020のいずれかの方法。
[本発明1031]
第2の標的化リガンドがタンパク質である、本発明1020の方法。
[本発明1032]
タンパク質が、抗体、ペプチドアプタマー、または細胞表面分子の天然リガンドに由来するタンパク質である、本発明1030または1031の方法。
[本発明1033]
第1の標的化リガンドがペプチドである、本発明1002および1017〜1020のいずれかの方法。
[本発明1034]
第2の標的化リガンドがペプチドである、本発明1020の方法。
[本発明1035]
ペプチドが、インテグリン結合ペプチド、LOX-1結合ペプチド、および上皮成長因子（EGF）ペプチド、ニューロテンシンペプチド、NL4ペプチド、またはYIGSRラミニンペプチドである、本発明1033または1034の方法。
[本発明1036]
標的細胞が肝細胞である、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1037]
標的細胞が肝細胞である、本発明1002および1017〜1020のいずれかの方法。
[本発明1038]
第1の標的化リガンドが、アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)に特異的に結合する、本発明1037の方法。
[本発明1039]
第1の標的化リガンドがN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、本発明1038の方法。
[本発明1040]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの両方が第1の標的化リガンドを含む、本発明1037〜1039のいずれかの方法。
[本発明1041]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの一方が第1の標的化リガンドを含み、脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーのうちの他方が、第1の標的化リガンドとは異なる第2の標的化リガンドを含み、かつ(i)アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)に特異的に結合するか、または(ii)肝細胞の表面の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、
本発明1037〜1039のいずれかの方法。
[本発明1042]
第2の標的化リガンドがN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、本発明1041の方法。
[本発明1043]
膜不安定化ポリマーが、コポリマー、合成ペプチド、膜不安定化毒素もしくはその誘導体、またはウイルス融合ペプチドもしくはその誘導体である、本発明1001〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
膜不安定化ポリマーがpH感受性ポリマーである、本発明1001〜1042のいずれかの方法。
[本発明1045]
pH感受性ポリマーがコポリマーである、本発明1044の方法。
[本発明1046]
コポリマーがブロックコポリマーである、本発明1045の方法。
[本発明1047]
ブロックコポリマーがジブロックコポリマーである、本発明1046の方法。
[本発明1048]
ブロックコポリマーが疎水性膜不安定化ブロックおよび親水性ブロックを含む、本発明1046の方法。
[本発明1049]
親水性ブロックが疎水性ブロックに開裂可能に連結している、本発明1048の方法。
[本発明1050]
親水性ブロックがジスルフィド結合またはpH感受性結合を通して疎水性ブロックに連結している、本発明1049の方法。
[本発明1051]
pH感受性結合が、ヒドラゾン、アセタール、ケタール、イミン、オルトエステル、カーボネート、またはマレアミド酸である、本発明1050の方法。
[本発明1052]
親水性ブロックにおいて疎水性モノマー残基よりも親水性モノマー残基が多くなるように、親水性ブロックが親水性モノマーおよび疎水性モノマーの両方から重合されている、本発明1048の方法。
[本発明1053]
親水性ブロックが、ペンダント遮蔽部分に連結したモノマー残基を含む、本発明1048または1052の方法。
[本発明1054]
前記遮蔽部分がポリエチレングリコール(PEG)部分である、本発明1053の方法。
[本発明1055]
前記遮蔽部分が親水性ブロックに開裂可能に連結している、本発明1053または1054の方法。
[本発明1056]
前記遮蔽部分が、ジスルフィド結合またはpH感受性結合を通して親水性ブロックに連結している、本発明1055の方法。
[本発明1057]
pH感受性結合が、ヒドラゾン、アセタール、ケタール、イミン、オルトエステル、カーボネート、またはマレアミド酸である、本発明1056の方法。
[本発明1058]
pH感受性ポリマーが、カルボン酸官能基を有するモノマー残基を含む、本発明1044の方法。
[本発明1059]
pH感受性ポリマーが、アミン官能基を有するモノマー残基を含む、本発明1044の方法。
[本発明1060]
pH感受性ポリマーが、疎水性官能基を有するモノマー残基を含む、本発明1044の方法。
[本発明1061]
pH感受性ポリマーが、(C2-C8)アルキルアクリル酸の重合に由来するモノマー残基を含む、本発明1044の方法。
[本発明1062]
pH感受性ポリマーが、(C2-C8)アルキル-エタクリレート、(C2-C8)アルキル-メタクリレート、または(C2-C8)アルキル-アクリレートの重合に由来するモノマー残基を含む、本発明1044の方法。
[本発明1063]
pH感受性ポリマーが、(N,N-ジ(C1-C6)アルキル-アミノ(C1-C6)アルキル-エタクリレート、(N,N-ジ(C1-C6)アルキル-アミノ(C1-C6)アルキル-メタクリレート、または(N,N-ジ(C1-C6)アルキル-アミノ(C1-C6)アルキル-アクリレートの重合に由来するモノマー残基を含む、本発明1044の方法。
[本発明1064]
pH感受性ポリマーが、プロピルアクリル酸、N,N-ジメチルアミノエチルメタクリレート、およびブチルメタクリレートの重合に由来するモノマー残基を有するランダムコポリマー鎖を含む、本発明1044の方法。
[本発明1065]
pH感受性ポリマーが、膜破壊ポリマーブロックとしてランダムコポリマー鎖を含み、1つまたは複数の追加のブロックをさらに含むブロックコポリマーである、本発明1064の方法。
[本発明1066]
pH感受性ポリマーが膜不安定化ペプチドに共有連結している、本発明1044〜1064のいずれかの方法。
[本発明1067]
pH感受性ポリマーが複数のペンダント連結基を含み、複数の膜不安定化ペプチドが該複数のペンダント連結基を介して該pH感受性ポリマーに連結している、本発明1044〜1064のいずれかの方法。
[本発明1068]
pH感受性膜不安定化ポリマーが、親水性ランダムコポリマーブロックおよび疎水性ランダムコポリマーブロックを有するジブロックコポリマーであり、
該親水性ブロックは、親水性モノマー残基および疎水性モノマー残基の両方を含む両親媒性ブロックであり、親水性ブロック中の親水性モノマー残基の数は、疎水性モノマー残基の数よりも大きく；
該疎水性ブロックは、疎水性モノマー残基および親水性モノマー残基の両方を含み、約7.4のpHで全体的に疎水的特性を有する両親媒性膜不安定化ブロックであり；かつ
該親水性および疎水性ブロックの親水性モノマー残基のそれぞれは、独立して、約7.4のpHでイオン性であるモノマー残基、約7.4のpHで中性であるモノマー残基、および約7.4のpHで双性イオン性であるモノマー残基からなる群より選択される、
本発明1044の方法。
[本発明1069]
式Iのランダムブロックコポリマーであって、
2018509387.tif 000002
式中、
A0、A1、A2、A3、A4およびA5は、それぞれ独立して、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-、-O(C)b-、および-CR8-CR9からなる群より選択され；R1〜R6およびY0〜Y5では完全には置換されていないA0〜A5の4価の炭素原子は、適切な数の水素原子で満たされており；aおよびbは、それぞれ独立して1〜4であり；R8およびR9は、それぞれ独立して、-C(O)OH、-C(O)Oアルキル、および-C(O)NR10からなる群より選択され、R8およびR9は、互いに共有連結して環構造を形成していてもよく；
Y5は、水素であるか、または、いずれも1つもしくは複数のフッ素原子で置換されていてもよい-(1C-10C)アルキル、-(3C-6C)シクロアルキル、-O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、-C(O)NR11(1C-10C)アルキル、および-(6C-10C)アリールからなる群より選択され；
Y0、Y3、およびY4は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-、-S(2C-10C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-10C)アルキル-からなる群より選択され；
Y1およびY2は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-18C)アルキル-、-(3C-18C)分岐アルキル、-C(O)O(2C-18C)アルキル-、-C(O)O(2C-18C)分岐アルキル、-OC(O)(1C-18C)アルキル-、-OC(O)(1C-18C)分岐アルキル-、-O(2C-18C)アルキル-、-0(2C-18C)分岐アルキル-、-S(2C-18C)アルキル-、-S(2C-18C)分岐アルキル-、-C(O)NR12(2C-18C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-18C)分岐アルキル-からなる群より選択され、Y1またはY2の任意のアルキルまたは分岐アルキル基は、1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11、およびR12は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q0は、生理的pHで親水性である残基；O-[(C)2-3-O]x-R7；およびO-[(C)2-3-O]x-C(O)-NR13R14からなる群より選択される残基であり；xは、1〜48であり；R7は、-CH3または-CO2Hであり；R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q1およびQ2は、それぞれ独立して、存在しないか、あるいは、通常の生理的pHで親水性である残基；コンジュゲート可能なまたは官能化可能な残基；通常の生理的pHで疎水性である残基；1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよいアルキル基；および1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよい分枝アルキル基より選択され；
Q3は、通常の生理的pHで正電荷を持つ残基であり； 
Q4は、通常の生理的pHで負電荷を持つが、より低いpHではプロトン化を受ける残基であり；
mは、0より大きく1.0までのモル分率であり；
nは、0〜1.0未満のモル分率であり；
pは、0〜1.0未満のモル分率であり；m + n + p = 1であり；
qは、0.1〜0.9のモル分率であり；
rは、0.05〜0.9のモル分率であり；
sは、最大で0.85までのモル分率で存在し；q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；かつ
wは、1〜50kDaである、
前記ランダムブロックコポリマーを、pH感受性ポリマーが含む、本発明1044の方法。
[本発明1070]
mがn + pより大きい、本発明1069の方法。
[本発明1071]
pが0である、本発明1070の方法。
[本発明1072]
nが0より大きい、本発明1069〜1071のいずれかの方法。
[本発明1073]
Y1およびQ1の少なくとも一方が、1つもしくは複数のフッ素原子で置換されたアルキルまたは分枝アルキル基を含有する、本発明1072の方法。
[本発明1074]
pH感受性ポリマーが、式IIのポリマーであって、
T1-L-[PEGMAm-PDSMAn-BPAMp]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  II
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり；
PDSMAは、ピリジルジスルフィドメタクリレート残基であり；
BPAMは、2-[2-Bocアミノエトキシ]エチルメタクリレート残基であり；
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mは、0.6〜1のモル分率であり；
nは、0〜0.4のモル分率であり；
pは、0〜0.4のモル分率であり；
m + n + p = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記ポリマーである、本発明1069の方法。
[本発明1075]
pH感受性ポリマーが、式Vのポリマーであって、
T1-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  V
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり;
M2は、
(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；
(C4-C18)分枝アルキル-メタクリレート残基；
コレステリルメタクリレート残基；
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；および
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)分岐アルキル-メタクリレート残基
からなる群より選択されるメタクリレート残基であり；
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mおよびnは、それぞれ0より大きいモル分率であり、mは、nより大きく、m + n = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記ポリマーである、本発明1069の方法。
[本発明1076]
M2が、
2,2,3,3,4,4,4-ヘプタフルオロブチルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,6,6,6-オクタフルオロ-5(トリフルオロメチル)ヘキシルメタクリレート残基、
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-ペンタデカフルオロオクチル2-メチルアクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,6-ノナフルオロヘキシルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルメタクリレート残基、
1,1,1-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)-2-ヒドロキシ-4-メチル-5-ペンチルメタクリレート残基、
2-[(1',1',1'-トリフルオロ-2'-(トリフルオロメチル)-2'-ヒドロキシ)プロピル]-3-ノルボルニルメタクリレート残基、
2-エチルヘキシルメタクリレート残基、
ブチルメタクリレート残基、
ヘキシルメタクリレート残基、
オクチルメタクリレート残基、
n-デシルメタクリレート残基、
ラウリルメタクリレート残基、
ミリスチルメタクリレート残基、 
ステアリルメタクリレート残基、
コレステリルメタクリレート残基、
エチレングリコールフェニルエーテルメタクリレート残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-フェニルエチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-[[(1,1-ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-(1H-イミダゾール-1-イル)エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，シクロヘキシルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-[ビス(1-メチルエチル)アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，3-メチルブチルエステル残基、
ネオペンチルメタクリレート残基、
tert-ブチルメタクリレート残基、
3,3,5-トリメチルシクロヘキシルメタクリレート残基、
2-ヒドロキシプロピルメタクリレート残基、
5-ノニルメタクリレート残基、
2-ブチル-1-オクチルメタクリレート残基、
2-ヘキシル-1-デシルメタクリレート残基、および
2-(tert-ブチルアミノ)エチルメタクリレート残基
からなる群より選択される、本発明1075の方法。
[本発明1077]
PEGMAが、エチレングリコール単位を4〜5個またはエチレングリコール単位を7〜8個有する、本発明1074〜1076のいずれかの方法。
[本発明1078]
T1およびLが存在しており、T1がN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、本発明1074〜1077のいずれかの方法。
[本発明1079]
Lが、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコール(PEG)部分を含む、本発明1077の方法。
[本発明1080]
脂質ナノ粒子が治療剤を含む、本発明1001〜1079のいずれかの方法。
[本発明1081]
治療剤が、抗癌剤、抗ウイルス剤、免疫調節剤、抗炎症剤、または細胞代謝活性を調節する薬剤である、本発明1080の方法。
[本発明1082]
治療剤が、ポリヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、または小分子である、本発明1080の方法。
[本発明1083]
治療剤がポリヌクレオチドである、本発明1082の方法。
[本発明1084]
脂質ナノ粒子が脂質成分の混合物を含み、該脂質成分の混合物が、
生理的pHで永続的に電荷を有し、該混合物中に約35モル％〜約55モル％存在するカチオン性脂質と；
イオン化可能なアニオン性脂質であって、該アニオン性脂質は存在しなくてもよく、存在する場合は該混合物中に約25モル％〜約40モル％存在する、イオン化可能なアニオン性脂質と；
該イオン化可能なアニオン性脂質が存在しない場合は、該混合物中に約40モル％〜約50モル％存在するヘルパー脂質であって、該イオン化可能なアニオン性脂質が存在する場合は、該混合物中に約5モル％〜約20モル％存在する、ヘルパー脂質と；
該混合物中に約2モル％〜約15モル％存在するPEG-脂質と
を含む、本発明1083の方法。
[本発明1085]
カチオン性脂質がDOTAPであり；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり；
ヘルパー脂質がCHOLであり；かつ/あるいは、
PEG-脂質がDSPE-PEG2kまたはDMPE-PEG2kである、
本発明1084の方法。
[本発明1086]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、カチオン性脂質が約35モル％〜約45モル％存在し、PEG-脂質が約5モル％〜約15モル％存在する、本発明1084または1085の方法。
[本発明1087]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在し、カチオン性脂質が約40モル％〜約55モル％存在する、本発明1084または1085の方法。
[本発明1088]
PEG-脂質が約5モル％〜約15モル％存在する、本発明1087の方法。
[本発明1089]
カチオン性脂質がDOTAPであり、ヘルパー脂質がCHOLであり、かつ
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約40:50:10であるか；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDMPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DMPE-PEG2kのモル比が約50:32:16:2であるか；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10であるか；または
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDMPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DMPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10である、
本発明1084の方法。
[本発明1090]
脂質ナノ粒子は、N:P比が約1〜約30である、本発明1083の方法。
[本発明1091]
ポリヌクレオチドがmRNAである、本発明1083〜1090のいずれかの方法。
[本発明1092]
mRNAが、タンパク質欠損症と関連する機能性タンパク質をコードする、本発明1091の方法。
[本発明1093]
標的細胞が肝細胞であり、mRNAが、アルファ-1-抗トリプシン(A1AT)、カルバモイルホスフェートシンテターゼI(CPS1)、フマリルアセトアセターゼ(FAH)酵素、アラニン：グリオキシレート-アミノトランスフェラーゼ(AGT)、メチルマロニルCoAムターゼ(MUT)、プロピオニルCoAカルボキシラーゼアルファサブユニット(PCCA)、プロピオニルCoAカルボキシラーゼベータサブユニット(PCCB)、分枝鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ(BCKDH)のサブユニット、オルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)、銅輸送ATPアーゼAtp7B、ビリルビンウリジンジホスフェートグルクロニルトランスフェラーゼ(BGT)酵素、ヘプシジン、グルコース-6-ホスファターゼ(G6Pase)、グルコース6-ホスフェートトランスロカーゼ、リソソームグルコセレブロシダーゼ(GB)、ニーマン・ピックC1タンパク質(NPC1)、ニーマン・ピックC2タンパク質(NPC2)、酸性スフィンゴミエリナーゼ(ASM)、第IX因子、ガラクトース-1-ホスフェートウリジリルトランスフェラーゼ、ガラクトキナーゼ、UDP-ガラクトース4-エピメラーゼ、トランスサイレチン、補体調節タンパク質、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ(PAH)、ホモゲンチセート1,2-ジオキシゲナーゼ、ポルホビリノーゲンデアミナーゼ、ヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HGPRT)、アルギニノコハク酸リアーゼ(ASL)、アルギニノコハク酸シンテターゼ(ASS1)、P型ATPアーゼタンパク質FIC-1、アルファ-ガラクトシダーゼA、酸性セラミダーゼ、酸性α-L-フコシダーゼ、酸性β-ガラクトシダーゼ、イズロネート-2-スルファターゼ、アルファ-L-イズロニダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、酸性α-マンノシダーゼ、β-マンノシダーゼ、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼA、N-アセチルガラクトサミン-6-サルフェートスルファターゼ、酸性β-ガラクトシダーゼ、酸性α-グルコシダーゼ、β-ヘキソサミニダーゼB、ヘパラン-N-スルファターゼ、アルファ-N-アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル-CoA:α-グルコサミニドN-アセチルトランスフェラーゼ、N-アセチルグルコサミン-6-サルフェートスルファターゼ、アルファ-N-アセチルガラクトサミニダーゼ、シアリダーゼ、β-グルクロニダーゼ、およびβ-ヘキソサミニダーゼAからなる群より選択されるタンパク質をコードする、本発明1092の方法。
[本発明1094]
mRNAが分泌タンパク質をコードする、本発明1091の方法。
[本発明1095]
分泌タンパク質が、ホルモン、サイトカイン、成長因子、凝固因子、抗プロテアーゼタンパク質、血管新生タンパク質、抗血管新生タンパク質、ケモカイン、および抗体からなる群より選択される、本発明1094の方法。
[本発明1096]
分泌タンパク質が、エリスロポエチン、トロンボポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、レプチン、血小板由来成長因子B、ケラチノサイト成長因子、骨形成タンパク質2、骨形成タンパク質7、インスリン、グルカゴン様ペプチド-1、ヒト成長ホルモン、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、リラキシン-2、インターフェロン-α、インターフェロン-β、インターフェロン-γ、インターロイキン-2、インターロイキン-4、インターロイキン-10、インターロイキン-11、インターロイキン-12、インターロイキン-18、インターロイキン-21、CCサブファミリーケモカイン、CXCサブファミリーケモカイン、Cサブファミリーケモカイン、およびCX3Cサブファミリーケモカインからなる群より選択される、本発明1094の方法。
[本発明1097]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーが反復投薬計画で投与される、本発明1091〜1093のいずれかの方法。
[本発明1098]
ポリヌクレオチドがオリゴヌクレオチドである、本発明1083の方法。
[本発明1099]
オリゴヌクレオチドが、siRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗miR、ロックド核酸（LNA）をベースとするオリゴヌクレオチド、ダイサー基質、miRNA、aiRNA、shRNA、リボザイム、または核酸アプタマーである、本発明1098の方法。
[本発明1100]
治療剤がタンパク質である、本発明1082の方法。
[本発明1101]
タンパク質が抗体またはペプチドアプタマーである、本発明1100の方法。
[本発明1102]
抗体が一本鎖抗体である、本発明1101の方法。
[本発明1103]
抗体が二重特異性抗体である、本発明1101の方法。
[本発明1104]
治療剤がペプチドである、本発明1102の方法。
[本発明1105]
治療剤が小分子である、本発明1102の方法。
[本発明1106]
小分子が、抗チューブリン剤、DNA副溝結合剤、およびDNA複製阻害剤からなる群より選択される、本発明1105の方法。
[本発明1107]
小分子が、アントラサイクリン、アウリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシン、エトポシド、メイタンシノイド、ビンカアルカロイド、および白金(II)化合物からなる群より選択される、本発明1105の方法。
[本発明1108]
治療剤が、疾患に関連する遺伝子を破壊するかまたは修正する遺伝子編集システムの構成要素である、本発明1080の方法。
[本発明1109]
遺伝子編集システムの構成要素が、ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドである、本発明1108の方法。
[本発明1110]
ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ(TALEN)、CRISPR関連タンパク質9(Cas9)、および組換えメガヌクレアーゼからなる群より選択される、本発明1109の方法。
[本発明1111]
ヌクレアーゼがCas9であり、脂質ナノ粒子が、標的細胞ゲノムにおける特定部位にヌクレアーゼを標的化させるガイドRNAをさらに含む、本発明1110の方法。
[本発明1112]
脂質ナノ粒子が、相同組換えによって疾患関連遺伝子を修正するためのDNA供与体配列を含有するポリヌクレオチドをさらに含む、本発明1109〜1111のいずれかの方法。
[本発明1113]
相同組換えによって疾患関連遺伝子を修正するためのDNA供与体配列を含有するポリヌクレオチドを含む有効量の第2の脂質ナノ粒子を対象に投与する工程をさらに含む、本発明1109〜1111のいずれかの方法。
[本発明1114]
治療剤が免疫原である、本発明1080の方法。
[本発明1115]
治療または診断剤を含む脂質ナノ粒子と、
膜不安定化ポリマーと
を含む、対象内の標的細胞の細胞質ゾルに治療または診断剤を送達するための組成物。
[本発明1116]
(a)治療または診断剤を含む脂質ナノ粒子を含むキャリア組成物と、
(b)膜不安定化ポリマーを含むエンハンサー組成物と
を含む、対象内の標的細胞の細胞質ゾルに治療または診断剤を送達するための送達システム。
[本発明1117]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの少なくとも一方が、標的細胞の表面の分子に特異的に結合する第1の標的化リガンドを含む、本発明1115の組成物または本発明1116の送達システム。
[本発明1118]
脂質ナノ粒子がカチオン性脂質を含む、本発明1115〜1117のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1119]
カチオン性脂質が、
N-[1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTMA）、
N-[1-(2,3-ジオレオイルオキシ)プロピル]-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTAP）、
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（DOEPC）、
1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（DLEPC）、
1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（DMEPC）、
1,2-ジミリストレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（14:1）、
N1-[2-((1S)-1-[(3-アミノプロピル)アミノ]-4-[ジ(3-アミノプロピル)アミノ]ブチルカルボキサミド）エチル]-3,4-ジ[オレイルオキシ]-ベンズアミド（MVL5）、
ジオクタデシルアミド-グリシルスペルミン（DOGS）、
3b-[N-(N',N'-ジメチルアミノエチル)カルバモイル]コレステロール（DC-Chol）、
ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（DDAB）、
SAINT-2,N-メチル-4-(ジオレイル)メチルピリジニウム、
1,2-ジミリスチルオキシプロピル-3-ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（DMRIE）、
1,2-ジオレオイル-3-ジメチル-ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（DORIE）、
1,2-ジオレオイルオキシプロピル-3-ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロリド（DORI）、
ジアルキル化アミノ酸（DILA2）、
C18:1-norArg-C16、
ジオレイルジメチルアンモニウムクロリド（DODAC）、
1-パルミトイル-2-オレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（POEPC）、
1,2-ジミリストレオイル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン（MOEPC）、
(R)-5-(ジメチルアミノ)ペンタン-1,2-ジイルジオレエート塩酸塩（DODAPen-Cl）、
(R)-5-グアニジノペンタン-1,2-ジイルジオレエート塩酸塩（DOPen-G）、
(R)-N,N,N-トリメチル-4,5-ビス(オレオイルオキシ)ペンタン-1-アミニウムクロリド（DOTAPen）、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1118の組成物または送達システム。
[本発明1120]
カチオン性脂質が、イオン化可能なカチオン性脂質である、本発明1118の組成物または送達システム。
[本発明1121]
イオン化可能なカチオン性脂質が、
ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（DDAB）、
1,2-ジリノレイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン（DLinDMA）、
2,2-ジリノレイル-4-(2ジメチルアミノエチル)-[1,3]-ジオキソラン（DLin-KC2-DMA）、
ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル4-(ジメチルアミノ)ブタノエート（DLin-MC3-DMA）、
1,2-ジオレオイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン（DODAP）、
1,2-ジオレイルオキシ-3-ジメチルアミノプロパン（DODMA）、
モルホリノコレステロール（Mo-CHOL）、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1120の組成物または送達システム。
[本発明1122]
脂質ナノ粒子が、イオン化可能なアニオン性脂質を含む、本発明1115〜1119のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1123]
イオン化可能なアニオン性脂質が、
コレステリルヘミサクシネート(CHEMS)、
ホスファチジルセリン、
パルミトイルホモセリン、
α-トコフェロールヘミサクシネート、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1122の組成物または送達システム。
[本発明1124]
脂質ナノ粒子がヘルパー脂質を含む、本発明1115〜1123のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1125]
ヘルパー脂質が、
コレステロール(CHOL)、
1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DSPC)、
1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DPPC)、
1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DMPC)、
1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DOPE)、
1,2-ジラウロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DLPE)、
1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DMPE)、
1,2-ジフィタノイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン(DPHyPE）、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1124の組成物または送達システム。
[本発明1126]
脂質ナノ粒子がポリエチレングリコール-脂質コンジュゲート(PEG-脂質)を含む、本発明1115〜1125のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1127]
PEG-脂質が、
N-(カルボニル-メトキシポリエチレングリコール2000)-1,2-ジミリストイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DMPE-PEG2,000)、
N-(カルボニル-メトキシポリエチレングリコール2000)-1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン（DSPE-PEG2,000)
ポリエチレングリコール-ジミリストールグリセロール（PEG-DMG）、
ポリエチレングリコール-ジステアロイルグリセロール（PEG-DSG）、
またはN-オクタノイル-スフィンゴシン-1-{スクシニル[メトキシ(ポリエチレングリコール)2000]}(C8 PEG2000セラミド)、または
これらの2つ以上の組み合わせ
である、本発明1126の組成物または送達システム。
[本発明1128]
脂質ナノ粒子は、大きさが約200nmより小さい、本発明1115〜1127のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1129]
膜不安定化ポリマーが第1の標的化リガンドを含む、本発明1117の組成物または送達システム。
[本発明1130]
脂質ナノ粒子が第1の標的化リガンドを含む、本発明1117の組成物または送達システム。
[本発明1131]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの両方が第1の標的リガンドを含む、本発明1117の組成物または送達システム。
[本発明1132]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの一方が第1の標的化リガンドを含み、かつ
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーのうちの他方が、第1の標的化リガンドとは異なる第2の標的化リガンドを含み、かつ(i)第1の標的化リガンドによって認識されるのと同じ細胞表面分子に特異的に結合するか、または(ii)標的細胞の表面の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、
本発明1117の組成物または送達システム。
[本発明1133]
標的細胞が、分泌細胞、軟骨細胞、上皮細胞、神経細胞、筋肉細胞、血液細胞、内皮細胞、周皮細胞、線維芽細胞、グリア細胞、または樹状細胞である、本発明1115〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1134]
標的細胞が、癌細胞、免疫細胞、細菌感染細胞、ウイルス感染細胞、または異常な代謝活性を有する細胞である、本発明1115〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1135]
第1の標的化リガンドが、トランスフェリン受容体1型、トランスフェリン受容体2型、EGF受容体、HER2/Neu、VEGF受容体、PDGF受容体、インテグリン、NGF受容体、CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD33、CD43、CD38、CD56、CD69、アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、葉酸受容体、およびシグマ受容体からなる群より選択される細胞表面分子に特異的に結合する、本発明1117および1129〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1136]
第2の標的化リガンドが、トランスフェリン受容体1型、トランスフェリン受容体2型、EGF受容体、HER2/Neu、VEGF受容体、PDGF受容体、インテグリン、NGF受容体、CD2、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD22、CD33、CD43、CD38、CD56、CD69、アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、葉酸受容体、およびシグマ受容体からなる群より選択される細胞表面分子に特異的に結合する、本発明1132の組成物または送達システム。
[本発明1137]
第1の標的化リガンドが小分子標的化部分を含む、本発明1117および1129〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1138]
第2の標的化リガンドが小分子標的化部分を含む、本発明1132の組成物または送達システム。
[本発明1139]
小分子標的化部分が、糖、ビタミン、ビスホスホネート、またはこれらのアナログである、本発明1137または1138の組成物または送達システム。
[本発明1140]
糖が、ラクトース、ガラクトース、N-アセチルガラクトサミン(NAG)、マンノース、およびマンノース-6-リン酸(M6P)より選択される、本発明1139の組成物または送達システム。
[本発明1141]
ビタミンが葉酸である、本発明1139の組成物または送達システム。
[本発明1142]
第1の標的化リガンドがタンパク質である、本発明1117および1129〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1143]
第2の標的化リガンドがタンパク質である、本発明1132の組成物または送達システム。
[本発明1144]
タンパク質が、抗体、ペプチドアプタマー、または細胞表面分子の天然リガンドに由来するタンパク質である、本発明1142または1143の組成物または送達システム。
[本発明1145]
第1の標的化リガンドがペプチドである、本発明1117および1129〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1146]
第2の標的化リガンドがペプチドである、本発明1132の組成物または送達システム。
[本発明1147]
ペプチドが、インテグリン結合ペプチド、LOX-1結合ペプチド、および上皮成長因子(EGF)ペプチド、ニューロテンシンペプチド、NL4ペプチド、またはYIGSRラミニンペプチドである、本発明1145または1146の組成物または送達システム。
[本発明1148]
標的細胞が肝細胞である、本発明1115〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1149]
標的細胞が肝細胞である、本発明1117および1129〜1132のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1150]
第1の標的化リガンドが、アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)に特異的に結合する、本発明1149の組成物または送達システム。
[本発明1151]
第1の標的化リガンドがN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、本発明1150の組成物または送達システム。
[本発明1152]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの両方が第1の標的化リガンドを含む、本発明1149〜1151のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1153]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの一方が第1の標的化リガンドを含み、
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーのうちの他方が、第1の標的化リガンドとは異なる第2の標的化リガンドを含み、かつ(i)アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)に特異的に結合するか、または(ii)肝細胞の表面の異なる細胞表面分子に特異的に結合する、
本発明1149〜1151のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1154]
第2の標的化リガンドがN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、本発明1153の組成物または送達システム。
[本発明1155]
膜不安定化ポリマーが、コポリマー、合成ペプチド、膜不安定化毒素もしくはその誘導体、またはウイルス融合ペプチドもしくはその誘導体である、本発明1115〜1154のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1156]
膜不安定化ポリマーがpH感受性ポリマーである、本発明1115〜1154のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1157]
pH感受性ポリマーがコポリマーである、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1158]
コポリマーがブロックコポリマーである、本発明1157の組成物または送達システム。
[本発明1159]
ブロックコポリマーがジブロックコポリマーである、本発明1158の組成物または送達システム。
[本発明1160]
ブロックコポリマーが疎水性膜不安定化ブロックおよび親水性ブロックを含む、本発明1159の組成物または送達システム。
[本発明1161]
親水性ブロックが疎水性ブロックに開裂可能に連結している、本発明1160の組成物または送達システム。
[本発明1162]
親水性ブロックがジスルフィド結合またはpH感受性結合を通して疎水性ブロックに連結している、本発明1161の組成物または送達システム。
[本発明1163]
pH感受性結合が、ヒドラゾン、アセタール、ケタール、イミン、オルトエステル、カーボネート、またはマレアミド酸である、本発明1162の組成物または送達システム。
[本発明1164]
親水性ブロックにおいて疎水性モノマー残基よりも親水性モノマー残基が多くなるように、親水性ブロックが親水性モノマーおよび疎水性モノマーの両方から重合されている、本発明1160の組成物または送達システム。
[本発明1165]
親水性ブロックが、ペンダント遮蔽部分に連結したモノマー残基を含む、本発明1160または1164の組成物または送達システム。
[本発明1166]
前記遮蔽部分がポリエチレングリコール(PEG)部分である、本発明1165の組成物または送達システム。
[本発明1167]
前記遮蔽部分が親水性ブロックに開裂可能に連結している、本発明1165または1166の組成物または送達システム。
[本発明1168]
前記遮蔽部分がジスルフィド結合またはpH感受性結合を通して親水性ブロックに連結している、本発明1167の組成物または送達システム。
[本発明1169]
pH感受性結合が、ヒドラゾン、アセタール、ケタール、イミン、オルトエステル、カーボネート、またはマレアミド酸である、本発明1168の組成物または送達システム。
[本発明1170]
pH感受性ポリマーが、カルボン酸官能基を有するモノマー残基を含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1171]
pH感受性ポリマーが、アミン官能基を有するモノマー残基を含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1172]
pH感受性ポリマーが、疎水性官能基を有するモノマー残基を含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1173]
pH感受性ポリマーが、(C2-C8)アルキルアクリル酸の重合に由来するモノマー残基を含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1174]
pH感受性ポリマーが、(C2-C8)アルキル-エタクリレート、(C2-C8)アルキル-メタクリレート、または(C2-C8)アルキル-アクリレートの重合に由来するモノマー残基を含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1175]
pH感受性ポリマーが、(N,N-ジ(C1-C6)アルキル-アミノ(C1-C6)アルキル-エタクリレート、(N,N-ジ(C1-C6)アルキル-アミノ(C1-C6)アルキル-メタクリレート、または(N,N-ジ(C1-C6)アルキル-アミノ(C1-C6)アルキル-アクリレートの重合に由来するモノマー残基を含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1176]
pH感受性ポリマーが、プロピルアクリル酸、N,N-ジメチルアミノエチルメタクリレート、およびブチルメタクリレートの重合に由来するモノマー残基を有するランダムコポリマー鎖を含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1177]
pH感受性ポリマーが、膜破壊ポリマーブロックとして前記ランダムコポリマー鎖を含み、1つまたは複数の追加のブロックをさらに含むブロックコポリマーである、本発明1176の組成物または送達システム。
[本発明1178]
pH感受性ポリマーが膜不安定化ペプチドに共有連結している、本発明1156〜1176のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1179]
pH感受性ポリマーが複数のペンダント連結基を含み、複数の膜不安定化ペプチドが該複数のペンダント連結基を介して該pH感受性ポリマーに連結している、本発明1156〜1176のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1180]
pH感受性膜不安定化ポリマーが、親水性ランダムコポリマーブロックおよび疎水性ランダムコポリマーブロックを有するジブロックコポリマーであり、
該親水性ブロックは、親水性モノマー残基および疎水性モノマー残基の両方を含む両親媒性ブロックであり、親水性ブロック中の親水性モノマー残基の数は、疎水性モノマー残基の数よりも大きく；
該疎水性ブロックは、疎水性モノマー残基および親水性モノマー残基の両方を含み、約7.4のpHで全体的に疎水的特性を有する両親媒性膜不安定化ブロックであり；かつ
該親水性および疎水性ブロックの親水性モノマー残基のそれぞれは、独立して、約7.4のpHでイオン性であるモノマー残基、約7.4のpHで中性であるモノマー残基、および約7.4のpHで双性イオン性であるモノマー残基からなる群より選択される、
本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1181]
式Iのランダムブロックコポリマーであって：
2018509387.tif 000003
式中、
A0、A1、A2、A3、A4およびA5は、それぞれ独立して、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-、-O(C)b-、および-CR8-CR9からなる群より選択され；R1〜R6およびY0〜Y5では完全には置換されていないA0〜A5の4価の炭素原子は、適切な数の水素原子で満たされており；aおよびbは、それぞれ独立して、1〜4であり；R8およびR9は、それぞれ独立して、-C(O)OH、-C(O)Oアルキル、および-C(O)NR10からなる群より選択され、R8およびR9は、互いに共有連結して環構造を形成していてもよく；
Y5は、水素であるかまたは、いずれも1つもしくは複数のフッ素原子で置換されていてもよい-(1C-10C)アルキル、-(3C-6C)シクロアルキル、-O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、-C(O)NR11(1C-10C)アルキル、および-(6C-10C)アリールからなる群より選択され；
Y0、Y3、およびY4は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-、-S(2C-10C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-10C)アルキル-からなる群より選択され；
Y1およびY2は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-18C)アルキル-、-(3C-18C)分岐アルキル、-C(O)O(2C-18C)アルキル-、-C(O)O(2C-18C)分岐アルキル、-OC(O)(1C-18C)アルキル-、-OC(O)(1C-18C)分岐アルキル-、-O(2C-18C)アルキル-、-0(2C-18C)分岐アルキル-、-S(2C-18C)アルキル-、-S(2C-18C)分岐アルキル-、-C(O)NR12(2C-18C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-18C)分岐アルキル-からなる群より選択され、Y1またはY2の任意のアルキルまたは分岐アルキル基は、1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11、およびR12は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q0は、生理的pHで親水性である残基；O-[(C)2-3-O]x-R7；およびO-[(C)2-3-O]x-C(O)-NR13R14からなる群より選択される残基であり；xは、1〜48であり；R7は、-CH3または-CO2Hであり；R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q1およびQ2は、それぞれ独立して、存在しないか、または通常の生理的pHで親水性である残基；コンジュゲート可能なまたは官能化可能な残基；通常の生理的pHで疎水性である残基；1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよいアルキル基；および1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよい分枝アルキル基より選択され；
Q3は、通常の生理的pHで正電荷を持つ残基であり；
Q4は、通常の生理的pHで負電荷を持つが、より低いpHではプロトン化を受ける残基であり；
mは、0より大きく1.0までのモル分率であり；
nは、0〜1.0未満のモル分率であり；
pは、0〜1.0未満のモル分率であり；m + n + p = 1であり；
qは、0.1〜0.9のモル分率であり；
rは、0.05〜0.9のモル分率であり；
sは、最大で0.85までのモル分率で存在し；q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；かつ
wは、1〜50kDaである、
前記ランダムブロックコポリマーを、pH感受性ポリマーが含む、本発明1156の組成物または送達システム。
[本発明1182]
mがn + pより大きい、本発明1181の組成物または送達システム。
[本発明1183]
pが0である、本発明1182の組成物または送達システム。
[本発明1184]
nが0より大きい、本発明1181〜1183のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1185]
Y1およびQ1の少なくとも一方が、1つまたは複数のフッ素原子で置換されたアルキルまたは分枝アルキル基を含有する、本発明1184の組成物または送達システム。
[本発明1186]
pH感受性ポリマーが、式IIのポリマーであって：
T1-L-[PEGMAm-PDSMAn-BPAMp]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  II
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり；
PDSMAは、ピリジルジスルフィドメタクリレート残基であり；
BPAMは、2-[2-Bocアミノエトキシ]エチルメタクリレート残基であり；
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mは、0.6〜1のモル分率であり；
nは、0〜0.4のモル分率であり；
pは、0〜0.4のモル分率であり；
m + n + p = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記ポリマーである、本発明1181の組成物または送達システム。
[本発明1187]
pH感受性ポリマーが、式Vのポリマーであって：
T1-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  V
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり;
M2は、
(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；
(C4-C18)分枝アルキル-メタクリレート残基；
コレステリルメタクリレート残基；
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；および
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)分岐アルキル-メタクリレート残基
からなる群より選択されるメタクリレート残基であり；
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mおよびnはそれぞれ0より大きいモル分率であり、mはnより大きく、m + n = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記ポリマーである、本発明1181の組成物または送達システム。
[本発明1188]
M2が、
2,2,3,3,4,4,4-ヘプタフルオロブチルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,6,6,6-オクタフルオロ-5(トリフルオロメチル)ヘキシルメタクリレート残基、
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-ペンタデカフルオロオクチル2-メチルアクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,6-ノナフルオロヘキシルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルメタクリレート残基、
1,1,1-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)-2-ヒドロキシ-4-メチル-5-ペンチルメタクリレート残基、
2-[(1',1',1'-トリフルオロ-2'-(トリフルオロメチル)-2'-ヒドロキシ)プロピル]-3-ノルボルニルメタクリレート残基、
2-エチルヘキシルメタクリレート残基、
ブチルメタクリレート残基、
ヘキシルメタクリレート残基、
n-デシルメタクリレート残基、
オクチルメタクリレート残基、
ラウリルメタクリレート残基、
ミリスチルメタクリレート残基、 
ステアリルメタクリレート残基、
コレステリルメタクリレート残基、
エチレングリコールフェニルエーテルメタクリレート残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-フェニルエチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-[[(1,1-ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-(1H-イミダゾール-1-イル)エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，シクロヘキシルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，2-[ビス(1-メチルエチル)アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸，2-メチル-，3-メチルブチルエステル残基、
ネオペンチルメタクリレート残基、
tert-ブチルメタクリレート残基、
3,3,5-トリメチルシクロヘキシルメタクリレート残基、
2-ヒドロキシプロピルメタクリレート残基、
5-ノニルメタクリレート残基、
2-ブチル-1-オクチルメタクリレート残基、
2-ヘキシル-1-デシルメタクリレート残基、および
2-(tert-ブチルアミノ)エチルメタクリレート残基
からなる群より選択される、本発明1187の組成物または送達システム。
[本発明1189]
PEGMAが、エチレングリコール単位を4〜5個またはエチレングリコール単位を7〜8個有する、本発明1186〜1188のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1190]
T1およびLが存在しており、T1がN-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、本発明1186〜1189のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1191]
Lが、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコール(PEG)部分を含む、本発明1190の組成物または送達システム。
[本発明1192]
脂質ナノ粒子が治療剤を含む、本発明1115〜1191のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1193]
治療剤が、抗癌剤、抗ウイルス剤、免疫調節剤、抗炎症剤、または細胞代謝活性を調節する薬剤である、本発明1192の組成物または送達システム。
[本発明1194]
治療剤が、ポリヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、または小分子である、本発明1192の組成物または送達システム。
[本発明1195]
治療剤がポリヌクレオチドである、本発明1194の組成物または送達システム。
[本発明1196]
脂質ナノ粒子が脂質成分の混合物を含み、該脂質成分の混合物が、
生理的pHで永続的に電荷を有し、該混合物中に約35モル％〜約55モル％存在する、カチオン性脂質と；
イオン化可能なアニオン性脂質であって、該アニオン性脂質は存在しなくてもよく、存在する場合は該混合物中に約25モル％〜約40モル％存在する、イオン化可能なアニオン性脂質と；
該イオン化可能なアニオン性脂質が存在しない場合、該混合物中に約40モル％〜約50モル％存在するヘルパー脂質であって、該イオン化可能なアニオン性脂質が存在する場合、該混合物中に約5モル％〜約20モル％存在する、ヘルパー脂質と；
該混合物中に約2モル％〜約15モル％存在するPEG-脂質と
を含む、本発明1195の組成物または送達システム。
[本発明1197]
カチオン性脂質がDOTAPであり；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり；
ヘルパー脂質がCHOLであり；かつ/あるいは、
PEG-脂質が、DSPE-PEG2kまたはDMPE-PEG2kである、
本発明1196の組成物または送達システム。
[本発明1198]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、カチオン性脂質が約35モル％〜約45モル％存在し、PEG-脂質が約5モル％〜約15モル％存在する、本発明1196または1197の組成物または送達システム。
[本発明1199]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在し、カチオン性脂質が約40モル％〜約55モル％存在する、本発明1196または1197の組成物または送達システム。
[本発明1200]
PEG-脂質が約5モル％〜約15モル％存在する、本発明1199の組成物または送達システム。
[本発明1201]
カチオン性脂質がDOTAPであり、ヘルパー脂質がCHOLであり、かつ
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約40:50:10であるか；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDMPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DMPE-PEG2kのモル比が約50:32:16:2であるか；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10であるか；または
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDMPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DMPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10である
本発明1196の組成物または送達システム。
[本発明1202]
脂質ナノ粒子は、N:P比が約1〜約30である、本発明1195の組成物または送達システム。
[本発明1203]
ポリヌクレオチドがmRNAである、本発明1195〜1202のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1204]
mRNAが、タンパク質欠損症と関連する機能性タンパク質をコードする、本発明1203の組成物または送達システム。
[本発明1205]
mRNAが、アルファ-1-抗トリプシン(A1AT)、カルバモイルホスフェートシンテターゼI(CPS1)、フマリルアセトアセターゼ(FAH)酵素、アラニン：グリオキシレート-アミノトランスフェラーゼ(AGT)、メチルマロニルCoAムターゼ(MUT)、プロピオニルCoAカルボキシラーゼアルファサブユニット(PCCA)、プロピオニルCoAカルボキシラーゼベータサブユニット(PCCB)、分枝鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ(BCKDH)のサブユニット、オルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)、銅輸送ATPアーゼAtp7B、ビリルビンウリジンジホスフェートグルクロニルトランスフェラーゼ(BGT)酵素、ヘプシジン、グルコース-6-ホスファターゼ(G6Pase)、グルコース6-ホスフェートトランスロカーゼ、リソソームグルコセレブロシダーゼ(GB)、ニーマン・ピックC1タンパク質(NPC1)、ニーマン・ピックC2タンパク質(NPC2)、酸性スフィンゴミエリナーゼ(ASM)、第IX因子、ガラクトース-1-ホスフェートウリジリルトランスフェラーゼ、ガラクトキナーゼ、UDP-ガラクトース4-エピメラーゼ、トランスサイレチン、補体調節タンパク質、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ(PAH)、ホモゲンチセート1,2-ジオキシゲナーゼ、ポルホビリノーゲンデアミナーゼ、ヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HGPRT)、アルギニノコハク酸リアーゼ(ASL)、アルギニノコハク酸シンテターゼ(ASS1)、P型ATPアーゼタンパク質FIC-1、アルファ-ガラクトシダーゼA、酸性セラミダーゼ、酸性α-L-フコシダーゼ、酸性β-ガラクトシダーゼ、イズロネート-2-スルファターゼ、アルファ-L-イズロニダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、酸性α-マンノシダーゼ、β-マンノシダーゼ、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼA、N-アセチルガラクトサミン-6-サルフェートスルファターゼ、酸性β-ガラクトシダーゼ、酸性α-グルコシダーゼ、β-ヘキソサミニダーゼB、ヘパラン-N-スルファターゼ、アルファ-N-アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル-CoA:α-グルコサミニドN-アセチルトランスフェラーゼ、N-アセチルグルコサミン-6-サルフェートスルファターゼ、アルファ-N-アセチルガラクトサミニダーゼ、シアリダーゼ、β-グルクロニダーゼ、およびβ-ヘキソサミニダーゼAからなる群より選択されるタンパク質をコードする、本発明1204の組成物または送達システム。
[本発明1206]
mRNAが分泌タンパク質をコードする、本発明1203の組成物または送達システム。
[本発明1207]
分泌タンパク質が、ホルモン、サイトカイン、成長因子、凝固因子、抗プロテアーゼタンパク質、血管新生タンパク質、抗血管新生タンパク質、ケモカイン、および抗体からなる群より選択される、本発明1206の組成物または送達システム。
[本発明1208]
分泌タンパク質が、エリスロポエチン、トロンボポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、レプチン、血小板由来成長因子B、ケラチノサイト成長因子、骨形成タンパク質2、骨形成タンパク質7、インスリン、グルカゴン様ペプチド-1、ヒト成長ホルモン、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、リラキシン-2、インターフェロン-α、インターフェロン-β、インターフェロン-γ、インターロイキン-2、インターロイキン-4、インターロイキン-10、インターロイキン-11、インターロイキン-12、インターロイキン-18、インターロイキン21、CCサブファミリーケモカイン、CXCサブファミリーケモカイン、Cサブファミリーケモカイン、およびCX3Cサブファミリーケモカインからなる群より選択される、本発明1206の組成物または送達システム。
[本発明1209]
ポリヌクレオチドがオリゴヌクレオチドである、本発明1195の組成物または送達システム。
[本発明1210]
オリゴヌクレオチドが、siRNA、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗miR、ロックド核酸(LNA)をベースとするオリゴヌクレオチド、ダイサー基質、miRNA、aiRNA、shRNA、リボザイム、または核酸アプタマーである、本発明1209の組成物または送達システム。
[本発明1211]
治療剤がタンパク質である、本発明1194の組成物または送達システム。
[本発明1212]
タンパク質が抗体またはペプチドアプタマーである、本発明1211の組成物または送達システム。
[本発明1213]
抗体が一本鎖抗体である、本発明1212の組成物または送達システム。
[本発明1214]
抗体が二重特異性抗体である、本発明1212の組成物または送達システム。
[本発明1215]
治療剤がペプチドである、本発明1194の組成物または送達システム。
[本発明1216]
治療剤が小分子である、本発明1194の組成物または送達システム。
[本発明1217]
小分子が、抗チューブリン剤、DNA副溝結合剤、およびDNA複製阻害剤からなる群より選択される、本発明1216の組成物または送達システム。
[本発明1218]
小分子が、アントラサイクリン、アウリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシン、エトポシド、メイタンシノイド、ビンカアルカロイド、および白金(II)化合物からなる群より選択される、本発明1216の組成物または送達システム。
[本発明1219]
治療剤が、疾患に関連する遺伝子を破壊するかまたは修正する遺伝子編集システムの構成要素である、本発明1192の組成物または送達システム。
[本発明1220]
遺伝子編集システムの構成要素が、ヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチドである、本発明1219の組成物または送達システム。
[本発明1221]
ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ(TALEN)、CRISPR関連タンパク質9(Cas9)、および組換えメガヌクレアーゼからなる群より選択される、本発明1220の組成物または送達システム。
[本発明1222]
ヌクレアーゼがCas9であり、脂質ナノ粒子が、標的細胞ゲノムにおける特定部位にヌクレアーゼを標的化させるガイドRNAをさらに含む、本発明1221の組成物または送達システム。
[本発明1223]
脂質ナノ粒子が、相同組換えによって疾患関連遺伝子を修正するためのDNA供与体配列を含有するポリヌクレオチドをさらに含む、本発明1220〜1222のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1224]
相同組換えによって疾患関連遺伝子を修正するためのDNA供与体配列を含有するポリヌクレオチドを含む第2の脂質ナノ粒子をさらに含む、本発明1220〜1222のいずれかの組成物または送達システム。
[本発明1225]
治療剤が免疫原である、本発明1192の組成物または送達システム。
[本発明1226]
式Iaのランダムブロックコポリマーであって：
2018509387.tif 000004
式中、
A0、A1、A2、A3、A4およびA5は、それぞれ独立して、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-、-O(C)b-、および-CR8-CR9からなる群より選択され；R1〜R6およびY0〜Y5では完全には置換されていないA0〜A5の4価の炭素原子は、適切な数の水素原子で満たされており；aおよびbは、それぞれ独立して、1〜4であり；R8およびR9は、それぞれ独立して、-C(O)OH、-C(O)Oアルキル、および-C(O)NR10からなる群より選択され、R8およびR9は、互いに共有連結して環構造を形成していてもよく；
Y5は、水素であるかまたは、いずれも1つもしくは複数のフッ素原子で置換されていてもよい-(1C-10C)アルキル、-(3C-6C)シクロアルキル、-O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、-C(O)NR11(1C-10C)アルキル、および-(6C-10C)アリールからなる群より選択され；
Y0、Y3、およびY4は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-、-S(2C-10C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-10C)アルキル-からなる群より選択され；
Y1およびY2は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-18C)アルキル、-(3C-18C)分岐アルキル、-C(O)O(2C-18C)アルキル-、-C(O)O(2C-18C)分岐アルキル、-OC(O)(1C-18C)アルキル-、-OC(O)(1C-18C)分岐アルキル-、-O(2C-18C)アルキル-、-0(2C-18C)分岐アルキル-、-S(2C-18C)アルキル-、-S(2C-18C)分岐アルキル-、-C(O)NR12(2C-18C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-18C)分岐アルキル-からなる群より選択され、Y1またはY2の任意のアルキルまたは分岐アルキル基は、1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11、およびR12は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q0は、生理的pHで親水性である残基；O-[(C)2-3-O]x-R7；およびO-[(C)2-3-O]x-C(O)-NR13R14からなる群より選択される残基であり；xは、1〜48であり；R7は、-CH3または-CO2Hであり；R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q1およびQ2は、それぞれ独立して、存在しないか、または通常の生理的pHで親水性である残基；コンジュゲート可能なまたは官能化可能な残基；通常の生理的pHで疎水性である残基；1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよいアルキル基；および1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよい分枝アルキル基より選択され；
Q3は、通常の生理的pHで正電荷を持つ残基であり；
Q4は、通常の生理的pHで負電荷を持つが、より低いpHではプロトン化を受ける残基であり；
mは、0.5より大きく1.0より小さいモル分率であり；
nは、0より大きく0.5より小さいモル分率であり；
pは、0〜0.5未満のモル分率であり；m + n + p = 1であり；
qは、0.1〜0.9のモル分率であり;
rは、0.05〜0.9のモル分率であり;
sは、最大で0.85までのモル分率で存在し；q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜50kDaであり；かつ
Y1およびQ1の少なくとも一方は、1つまたは複数のフッ素原子で置換されたアルキルまたは分枝アルキル基を含有する、
前記ランダムブロックコポリマーを含む、pH感受性膜不安定化ポリマー。
[本発明1227]
pが0である、本発明1226のpH感受性ポリマー。
[本発明1228]
R2-A1-Y1-Q1が一緒になって、
2,2,3,3,4,4,4-ヘプタフルオロブチルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,6,6,6-オクタフルオロ-5(トリフルオロメチル)ヘキシルメタクリレート残基、
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-ペンタデカフルオロオクチル2-メチルアクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,6-ノナフルオロヘキシルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルメタクリレート残基、
1,1,1-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)-2-ヒドロキシ-4-メチル-5-ペンチルメタクリレート残基、および
2-[(1',1',1'-トリフルオロ-2'-(トリフルオロメチル)-2'-ヒドロキシ)プロピル]-3-ノルボルニルメタクリレート残基
からなる群より選択されるメタクリレート残基である、本発明1226または1227のpH感受性ポリマー。
[本発明1229]
Y3が-C(O)OCH2CH2であり、Q3がジメチルアミノである、本発明1226〜1228のいずれかのpH感受性ポリマー。
[本発明1230]
R4が-CH3である、本発明1229のpH感受性ポリマー。
[本発明1231]
Y4が共有結合であり、Q4がカルボキシル残基である、本発明1226〜1230のいずれかのpH感受性ポリマー。
[本発明1232]
R5が-CH2CH2CH3である、本発明1231のpH感受性ポリマー。
[本発明1233]
Y5が-C(O)O(CH2)3CH3である、本発明1226〜1232のいずれかのpH感受性ポリマー。
[本発明1234]
R6が-CH3である、本発明1233のpH感受性ポリマー。
[本発明1235]
Y0が-C(O)O(2C-10C)アルキル-であり、Q0がO-[(C)2-3-O]x-R7であり、xが1〜48であり、R7が-CH3である、本発明1226〜1234いずれかのpH感受性ポリマー。
[本発明1236]
R1が-CH3である、本発明1235のpH感受性ポリマー。
[本発明1237]
式Vaのポリマーであって：
T1-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  Va
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり；
M2は、
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基、および
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)分岐アルキル-メタクリレート残基
からなる群より選択されるメタクリレート残基であり、
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mおよびnはそれぞれ0より大きいモル分率であり、mはnより大きく、m + n = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記ポリマーである、本発明1226のpH感受性ポリマー。
[本発明1238]
M2が、
2,2,3,3,4,4,4-ヘプタフルオロブチルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,6,6,6-オクタフルオロ-5(トリフルオロメチル)ヘキシルメタクリレート残基、
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-ペンタデカフルオロオクチル2-メチルアクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,6-ノナフルオロヘキシルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルメタクリレート残基、
1,1,1-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)-2-ヒドロキシ-4-メチル-5-ペンチルメタクリレート残基、および
2-[(1',1',1'-トリフルオロ-2'-(トリフルオロメチル)-2'-ヒドロキシ)プロピル]-3-ノルボルニルメタクリレート残基
からなる群より選択される、本発明1237のpH感受性ポリマー。
[本発明1239]
式VのpH感受性膜不安定化ポリマーであって：
T1-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w  V
式中、
PEGMAは、エチレングリコール単位を2〜20個有するポリエチレングリコールメタクリレート残基であり；
M2は、
(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；
(C4-C18)分枝アルキル-メタクリレート残基；
コレステリルメタクリレート残基；
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)アルキル-メタクリレート残基；および
1つまたは複数のフッ素原子で置換された(C4-C18)分岐アルキル-メタクリレート残基
からなる群より選択されるメタクリレート残基であり；
BMAは、ブチルメタクリレート残基であり；
PAAは、プロピルアクリル酸残基であり；
DMAEMAは、ジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；
mおよびnはそれぞれ0より大きいモル分率であり、mはnより大きく、m + n = 1であり；
qは、0.2〜0.75のモル分率であり；
rは、0.05〜0.6のモル分率であり；
sは、0.2〜0.75のモル分率であり；
q + r + s = 1であり；
vは、1〜25kDaであり；
wは、1〜25kDaであり；
T1は、存在しないか、または第1の標的化リガンドであり；かつ
Lは、存在しないか、または連結部分である、
前記pH感受性膜不安定化ポリマー。
[本発明1240]
M2が、
2,2,3,3,4,4,4-ヘプタフルオロブチルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,6,6,6-オクタフルオロ-5(トリフルオロメチル)ヘキシルメタクリレート残基、
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-ペンタデカフルオロオクチル2-メチルアクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,6-ノナフルオロヘキシルメタクリレート残基、
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-トリデカフルオロオクチルメタクリレート残基、
1,1,1-トリフルオロ-2-(トリフルオロメチル)-2-ヒドロキシ-4-メチル-5-ペンチルメタクリレート残基、
2-[(1',1',1'-トリフルオロ-2'-(トリフルオロメチル)-2'-ヒドロキシ)プロピル]-3-ノルボルニルメタクリレート残基、
2-エチルヘキシルメタクリレート残基、
ブチルメタクリレート残基、
ヘキシルメタクリレート残基、
オクチルメタクリレート残基、
n-デシルメタクリレート残基、
ラウリルメタクリレート残基、
ミリスチルメタクリレート残基、
ステアリルメタクリレート残基、
コレステリルメタクリレート残基、
エチレングリコールフェニルエーテルメタクリレート残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-フェニルエチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-[[(1,1-ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-(1H-イミダゾール-1-イル)エチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,シクロヘキシルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,2-[ビス(1-メチルエチル)アミノ]エチルエステル残基、
2-プロペン酸,2-メチル-,3-メチルブチルエステル残基、
ネオペンチルメタクリレート残基、
tert-ブチルメタクリレート残基、
3,3,5-トリメチルシクロヘキシルメタクリレート残基、
2-ヒドロキシプロピルメタクリレート残基、
5-ノニルメタクリレート残基、
2-ブチル-1-オクチルメタクリレート残基、
2-ヘキシル-1-デシルメタクリレート残基、および
2-(tert-ブチルアミノ)エチルメタクリレート残基
からなる群より選択される、本発明1239のpH感受性ポリマー。
[本発明1241]
(a)ポリヌクレオチドと、
(b)脂質成分の混合物と
を含む、脂質ナノ粒子であって、
該脂質成分の混合物が、
生理的pHで永続的に電荷を有し、該混合物中に約35モル％〜約55モル％存在する、カチオン性脂質と；
イオン化可能なアニオン性脂質であって、該アニオン性脂質は存在しなくてもよく、存在する場合は該混合物中に約25モル％〜約40モル％存在する、イオン化可能なアニオン性脂質と；
該イオン化可能なアニオン性脂質が存在しない場合、該混合物中に約40モル％〜約50モル％存在するヘルパー脂質であって、該イオン化可能なアニオン性脂質が存在する場合、該混合物中に約5モル％〜約20モル％存在するヘルパー脂質と；
該混合物中に約5モル％〜約15モル％存在するPEG-脂質と
を含む、前記脂質ナノ粒子。
[本発明1242]
カチオン性脂質がDOTAPであり；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり；
ヘルパー脂質がCHOLであり；かつ/あるいは、
PEG-脂質がDSPE-PEG2kまたはDMPE-PEG2kである、
本発明1241の脂質ナノ粒子。
[本発明1243]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、カチオン性脂質が約35モル％〜約45モル％存在する、本発明1241または1242の脂質ナノ粒子。
[本発明1244]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在し、カチオン性脂質が約40モル％〜約55モル％存在する、本発明1241または1242の脂質ナノ粒子。
[本発明1245]
カチオン性脂質がDOTAPであり、ヘルパー脂質がCHOLであり、かつ
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約40:50:10であるか；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10であるか；または
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDMPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DMPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10である、
本発明1241の脂質ナノ粒子。
[本発明1246]
ポリヌクレオチドがmRNAである、本発明1241〜1245のいずれかの脂質ナノ粒子。
[本発明1247]
機能性タンパク質の欠損をもたらす遺伝的欠陥を特徴とする疾患を治療するための方法であって、
該疾患を有する対象に、（a）該機能性タンパク質をコードするmRNAまたは該機能性タンパク質と同じ生物学的活性を有するタンパク質を含む有効量の脂質ナノ粒子と、（b）有効量の膜不安定化ポリマーとを投与する工程を含み、
該mRNAが該疾患に関連する標的組織の標的細胞の細胞質ゾルに送達され、コードされたタンパク質が該標的組織内に産生されるようにタンパク質合成中に該mRNAが翻訳され、これにより該疾患を治療する、
前記方法。
[本発明1248]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーの少なくとも一方が、標的組織の標的細胞の表面の分子に特異的に結合する第1の標的化リガンドを含む、本発明1247の方法。
[本発明1249]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーが別々に投与される、本発明1247または1248の方法。
[本発明1250]
膜不安定化ポリマーが脂質ナノ粒子の投与後に投与される、本発明1249の方法。
[本発明1251]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーが、単一組成物内で一緒に投与される、本発明1247または1248の方法。
[本発明1252]
脂質ナノ粒子が脂質成分の混合物を含み、該脂質成分の混合物が、
生理的pHで永続的に電荷を有し、該混合物中に約35モル％〜約55モル％存在するカチオン性脂質と；
イオン化可能なアニオン性脂質であって、該アニオン性脂質は存在しなくてもよく、存在する場合は該混合物中に約25モル％〜約40モル％存在する、イオン化可能なアニオン性脂質と；
該イオン化可能なアニオン性脂質が存在しない場合、該混合物中に約40モル％〜約50モル％存在するヘルパー脂質であって、該イオン化可能なアニオン性脂質が存在する場合、該混合物中に約5モル％〜約20モル％存在するヘルパー脂質と；
該混合物中に約2モル％〜約15モル％存在するPEG-脂質と
を含む、
本発明1247〜1251のいずれかの方法。
[本発明1253]
カチオン性脂質がDOTAPであり；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり；
ヘルパー脂質がCHOLであり；かつ/あるいは、
PEG-脂質がDSPE-PEG2kまたはDMPE-PEG2kである、
本発明1252の方法。
[本発明1254]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、カチオン性脂質が約35モル％〜約45モル％存在し、PEG-脂質が約5モル％〜約15モル％存在する、本発明1252または1253の方法。
[本発明1255]
イオン化可能なアニオン性脂質が存在し、カチオン性脂質が約40モル％〜約55モル％存在する、本発明1252または1253の方法。
[本発明1256]
PEG-脂質が約5モル％〜約15モル％存在する、本発明1255の方法。
[本発明1257]
カチオン性脂質がDOTAPであり、ヘルパー脂質がCHOLであり、かつ
イオン化可能なアニオン性脂質が存在せず、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約40:50:10であるか；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDMPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DMPE-PEG2kのモル比が約50:32:16:2であるか；
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDSPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DSPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10であるか；または
イオン化可能なアニオン性脂質がCHEMSであり、PEG-脂質がDMPE-PEG2kであり、DOTAP:CHEMS:CHOL:DMPE-PEG2kのモル比が約50:32:8:10である、
本発明1252の方法。
[本発明1258]
膜不安定化ポリマーが、疎水性膜不安定化ブロックおよび親水性ブロックを含むpH感受性ブロックコポリマーである、本発明1247〜1257のいずれかの方法。
[本発明1259]
親水性ブロックにおいて疎水性モノマー残基よりも親水性モノマー残基が多くなるように、親水性ブロックが、親水性モノマーおよび疎水性モノマーの両方から重合されている、本発明1258の方法。
[本発明1260]
膜不安定化ポリマーが、プロピルアクリル酸、N,N-ジメチルアミノエチルメタクリレート、およびブチルメタクリレートの重合に由来するモノマー残基を有するランダムコポリマー鎖を含むpH感受性ポリマーである、本発明1247〜1257のいずれかの方法。
[本発明1261]
pH感受性膜不安定化ポリマーが、親水性ランダムコポリマーブロックおよび疎水性ランダムコポリマーブロックを有するジブロックコポリマーであり、
該親水性ブロックは、親水性モノマー残基および疎水性モノマー残基の両方を含む両親媒性ブロックであり、親水性ブロック中の親水性モノマー残基の数は、疎水性モノマー残基の数よりも大きく；
該疎水性ブロックは、疎水性モノマー残基および親水性モノマー残基の両方を含み、約7.4のpHで全体的に疎水的特性を有する両親媒性膜不安定化ブロックであり；かつ
該親水性および疎水性ブロックの親水性モノマー残基のそれぞれは、独立して、約7.4のpHでイオン性であるモノマー残基、約7.4のpHで中性であるモノマー残基、および約7.4のpHで双性イオン性であるモノマー残基からなる群より選択される、
本発明1247〜1257のいずれかの方法。
[本発明1262]
式Iのランダムブロックコポリマーであって：
2018509387.tif 000005
式中、
A0、A1、A2、A3、A4およびA5は、それぞれ独立して、-C-C-、-C(O)(C)aC(O)O-、-O(C)aC(O)-、-O(C)b-、および-CR8-CR9からなる群より選択され；R1〜R6およびY0〜Y5では完全には置換されていないA0〜A5の4価の炭素原子は、適切な数の水素原子で満たされており；aおよびbは、それぞれ独立して、1〜4であり；R8およびR9は、それぞれ独立して、-C(O)OH、-C(O)Oアルキル、および-C(O)NR10からなる群より選択され、R8およびR9は、互いに共有連結して環構造を形成していてもよく；
Y5は、水素であるかまたは、いずれも1つもしくは複数のフッ素原子で置換されていてもよい-(1C-10C)アルキル、-(3C-6C)シクロアルキル、-O-(1C-10C)アルキル、-C(O)O(1C-10C)アルキル、-C(O)NR11(1C-10C)アルキル、および-(6C-10C)アリールからなる群より選択され；
Y0、Y3、およびY4は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-10C)アルキル-、-C(O)O(2C-10C)アルキル-、-OC(O)(1C-10C)アルキル-、-O(2C-10C)アルキル-、-S(2C-10C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-10C)アルキル-からなる群より選択され；
Y1およびY2は、それぞれ独立して、共有結合、-(1C-18C)アルキル-、-(3C-18C)分岐アルキル、-C(O)O(2C-18C)アルキル-、-C(O)O(2C-18C)分岐アルキル、-OC(O)(1C-18C)アルキル-、-OC(O)(1C-18C)分岐アルキル-、-O(2C-18C)アルキル-、-0(2C-18C)分岐アルキル-、-S(2C-18C)アルキル-、-S(2C-18C)分岐アルキル-、-C(O)NR12(2C-18C)アルキル-、および-C(O)NR12(2C-18C)分岐アルキル-からなる群より選択され、Y1またはY2の任意のアルキルまたは分岐アルキル基は、1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8、R9、R10、R11、およびR12は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q0は、生理的pHで親水性である残基；O-[(C)2-3-O]x-R7；およびO-[(C)2-3-O]x-C(O)-NR13R14からなる群より選択される残基であり；xは、1〜48であり；R7は、-CH3または-CO2Hであり；R13およびR14は、それぞれ独立して、水素、-CNであるか、またはアルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択され、これらのいずれも1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよく；
Q1およびQ2は、それぞれ独立して、存在しないか、または通常の生理的pHで親水性である残基；コンジュゲート可能なまたは官能化可能な残基；通常の生理的pHで疎水性である残基；1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよいアルキル基；および1つまたは複数のフッ素原子で置換されていてもよい分枝アルキル基より選択され；
Q3は、通常の生理的pHで正電荷を持つ残基であり；
Q4は、通常の生理的pHで負電荷を持つが、より低いpHではプロトン化を受ける残基であり；
mは、0より大きく1.0までのモル分率であり；
nは、0〜1.0未満のモル分率であり；
pは、0〜1.0未満のモル分率であり；m + n + p = 1であり；
qは、0.1〜0.9のモル分率であり； 
rは、0.05〜0.9のモル分率であり； 
sは、最大で0.85までのモル分率で存在し；q + r + s = 1であり； 
vは、1〜25kDaであり；かつ
wは、1〜50kDaである、
前記ランダムブロックコポリマーを、pH感受性ポリマーが含む、本発明1261の方法。
[本発明1263]
前記疾患が、肝臓のタンパク質欠損症である、本発明1247〜1262のいずれかの方法。
[本発明1264]
mRNAが、アルファ-1-抗トリプシン(A1AT)、カルバモイルホスフェートシンテターゼI(CPS1)、フマリルアセトアセターゼ(FAH)酵素、アラニン:グリオキシル酸-アミノトランスフェラーゼ(AGT)、メチルマロニルCoAムターゼ(MUT)、プロピオニルCoAカルボキシラーゼアルファサブユニット(PCCA)、プロピオニルCoAカルボキシラーゼベータサブユニット(PCCB)、分枝鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ(BCKDH)のサブユニット、オルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)、銅輸送ATPアーゼAtp7B、ビリルビンウリジンジホスフェートグルクロニルトランスフェラーゼ(BGT)酵素、ヘプシジン、グルコース-6-ホスファターゼ(G6Pase)、グルコース6-ホスフェートトランスロカーゼ、リソソームグルコセレブロシダーゼ(GB)、ニーマン・ピックC1タンパク質(NPC1)、ニーマン・ピックC2タンパク質(NPC2)、酸性スフィンゴミエリナーゼ(ASM)、第IX因子、ガラクトース-1-ホスフェートウリジリルトランスフェラーゼ、ガラクトキナーゼ、UDP-ガラクトース4-エピメラーゼ、トランスサイレチン、補体調節タンパク質、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ(PAH)、ホモゲンチセート1,2-ジオキシゲナーゼ、ポルホビリノーゲンデアミナーゼ、ヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HGPRT)、アルギニノコハク酸リアーゼ(ASL)、アルギニノコハク酸シンテターゼ(ASS1)、P型ATPアーゼタンパク質FIC-1、アルファ-ガラクトシダーゼA、酸性セラミダーゼ、酸性α-L-フコシダーゼ、酸性β-ガラクトシダーゼ、イズロネート-2-スルファターゼ、アルファ-L-イズロニダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、酸性α-マンノシダーゼ、β-マンノシダーゼ、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼA、N-アセチルガラクトサミン-6-サルフェートスルファターゼ、酸性β-ガラクトシダーゼ、酸性α-グルコシダーゼ、β-ヘキソサミニダーゼB、ヘパラン-N-スルファターゼ、アルファ-N-アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル-CoA:α-グルコサミニドN-アセチルトランスフェラーゼ、N-アセチルグルコサミン-6-サルフェートスルファターゼ、アルファ-N-アセチルガラクトサミニダーゼ、シアリダーゼ、β-グルクロニダーゼ、およびβ-ヘキソサミニダーゼAから選択される機能性タンパク質をコードする、本発明1263の方法。
[本発明1265]
肝臓のタンパク質欠乏性疾患が、尿素サイクル異常症である、本発明1263の方法。
[本発明1266]
尿素サイクル異常症が、オルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)欠損症；カルバモイルホスフェートシンテターゼI(CPS1)欠損症；アルギニノコハク酸尿症(アルギニノコハク酸リアーゼ(ASL)欠損症)；およびシトルリン血症(アルギニノコハク酸シンテターゼ(ASS1)欠損症)からなる群より選択される、本発明1265の方法。
[本発明1267]
尿素サイクル異常症が、オルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)欠損症であり、mRNAが、SEQ ID NO:1の残基35〜354と少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む機能性OTCタンパク質をコードする、本発明1265の方法。
[本発明1268]
尿素サイクル異常症が、アルギニノコハク酸尿症(アルギニノコハク酸リアーゼ(ASL)欠損症)であり、mRNAが、SEQ ID NO:48と少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む機能性ASLタンパク質をコードする、本発明1265の方法。
[本発明1269]
尿素サイクル異常症が、シトルリン血症（アルギニノコハク酸シンテターゼ（ASS1）欠損症）であり、mRNAが、SEQ ID NO:50と少なくとも95％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む機能性ASS1タンパク質をコードする、本発明1265の方法。
[本発明1270]
膜不安定化ポリマーおよび脂質ナノ粒子の少なくとも一方が、アシアロ糖タンパク質受容体(ASGPR)に特異的に結合する標的化リガンドを含む、本発明1263から1266のいずれかの方法。
[本発明1271]
ASGPR特異的標的化リガンドが、N-アセチルガラクトサミン(NAG)残基を含む、本発明1270の方法。
[本発明1272]
脂質ナノ粒子および膜不安定化ポリマーが、反復投薬計画で投与される、本発明1247〜1271のいずれかの方法。