【手続補正書】
【提出日】平成20年6月6日(2008.6.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）組織試料中いたるところに分布する細胞の核を視覚化する工程であって、ここで組織試料は約50ミクロンまでの最大直径を有する核における核構造の完全性を実質的に保存する方法によって調製される、工程；ならびに
ｂ）一つまたは複数の種類の核形態型の存在および／または非存在を決定する工程であって、ここで核形態型が発生または病理の段階と関連する、工程
を含み、それによって一つまたは複数の特定の種類の核形態型の存在または非存在に基づいて組織試料を特徴付ける、組織試料の発生または病理の段階を特徴付ける方法。
【請求項２】
組織試料が物理的または化学的に固定される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
組織試料が凍結される、請求項２記載の方法。
【請求項４】
組織試料が、アルコール、アルデヒド、有機酸およびそれらの組合せからなる群より選択される1つ以上の化学的固定剤で処理される、請求項２記載の方法。
【請求項５】
固定剤がメタノールおよび酢酸を含有する、請求項４記載の方法。
【請求項６】
組織試料が核の細胞性分解の前に固定される、請求項２記載の方法。
【請求項７】
組織試料の細胞が、組織の浸軟および伸展によって部分的に解離する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
組織試料の細胞または高分子が染色され、それによって核の視覚化が可能になる、請求項１記載の方法。
【請求項９】
組織試料が30分の外科的除去のうちに固定される、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
組織試料が多細胞動物から得られる、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
多細胞動物が脊椎動物である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
脊椎動物が哺乳動物である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
発生の段階が、発生の胚形成期、胎児期、新生児期、幼若期および成体期の段階からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
1つまたは複数の特定の種類の核形態型の存在または非存在が、正常、新生物発生前、新生物および転移からなる群より選択される組織試料の指標である、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
核形態型の1つまたは複数の種類が、ベル形、葉巻形、凝縮した球形、球形、楕円形、ソーセージ形、腎臓形および弾丸形からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
ｃ）組織試料内の1つ以上の種類の核形態型の空間的または数的分布を決定する工程
をさらに含む請求項１記載の方法であって、ここで1つ以上の種類の核形態型の空間的または数的分布が組織試料をさらに特徴付ける、方法。
【請求項１７】
特定の空間的または数的分布が、正常、新生物発生前、新生物または転移組織の指標である、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
核が多核合胞体または単核細胞に含まれる、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
ベル形、葉巻形または弾丸形の核の存在が、新生物発生前、新生物または転移の指標である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
多核合胞体の出現が新生物または転移の指標である、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
無糸対称核分裂の指標である構造が、新生物または転移の指標である、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
ベル形の核の存在、無糸対称核分裂の非存在および多核合胞体の非存在が新生物発生前の指標である、請求項１８記載の方法。
【請求項２３】
血管壁組織中の非球形および非楕円形の核の存在が初期のアテローム硬化症状態の指標である、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
目的の細胞または目的の多核合胞体を同定する方法であって、ここで細胞または合胞体は細胞培養物もしくは組織試料から得られるか、または細胞培養物もしくは組織試料に含まれ、目的の細胞または目的の合胞体は、核形態型を視覚化することによって同定され、目的の細胞または合胞体は異形性核形態型を含む、方法。
【請求項２５】
細胞または多核合胞体が組織試料から単離される、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
細胞または多核合胞体が圧力支持レーザー顕微解剖によって単離される、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
細胞または多核合胞体が、培養物中の細胞の集団または組織試料において同定される、請求項２４記載の方法。
【請求項２８】
細胞または合胞体が、1つ以上の無糸核分裂複合体を含む、請求項２４記載の方法。
【請求項２９】
細胞が、細胞の多細胞集合体内に存在する、請求項２４記載の方法。
【請求項３０】
異形性核形態型形状の種類が、ベル形、葉巻形、凝縮した球形、球形、楕円形、ソーセージ形、腎臓形および弾丸形からなる群より選択される、請求項２４記載の方法。
【請求項３１】
請求項２４記載の方法によって単離される、目的の細胞または合胞体。
【請求項３２】
請求項３１記載の細胞に特異的な1つ以上の高分子マーカーを同定する方法であって、ここでマーカーが、発生または病理の特定の段階の指標である、方法。
【請求項３３】
高分子マーカーが抗原、細胞表面マーカー、核酸、タンパク質、リン酸化タンパク質またはグリコサミノグリカンである、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
請求項３１記載の方法によって同定される1つ以上の高分子マーカーの同定を含む、新生物発生前または新生物を診断する方法であって、ここで成体組織における1つ以上の高分子マーカーの同定が新生物発生前または新生物の指標である、方法。
【請求項３５】
ａ）腫瘍を有する哺乳動物を、1つ以上の候補薬剤で処理する工程；
ｂ)該哺乳動物から得られた腫瘍試料内に含まれる細胞の核形態型を決定する工程；および
ｃ)候補抗腫瘍形成剤で処理した哺乳動物由来の細胞の核形態型を、腫瘍を有するが候補抗腫瘍形成剤で処理していない哺乳動物から得られた細胞と比較する工程
を含み、ここで新生物の核形態型を含む細胞の排除が、薬剤の抗腫瘍形成剤としての有効性の指標である、1つ以上の抗腫瘍形成剤を同定する方法。
【請求項３６】
新生物の核が、ベル形の核、葉巻形の核および弾丸形の核からなる群より選択される、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
哺乳動物が齧歯動物である、請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
培養された腫瘍組織または細胞試料を1つ以上の候補薬剤で処理する工程、および試料中に含まれる細胞の核形態型を評価する工程を含み、ここで細胞が異形性核形態型を含み、抗腫瘍形成剤の非存在下では培養された腫瘍細胞はその異形性核形態型を維持し、新生物の核形態型の排除が薬剤の抗腫瘍形成剤としての有効性の指標であり、新生物発生前の核形態型の排除が腫瘍予防剤の指標である、1つ以上の抗腫瘍形成剤を同定する方法。
【請求項３９】
変化した核形態型が、ベル形の核、葉巻形の核および弾丸形の核からなる群より選択される1つ以上の核形態型の排除を含む、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
核形態型の変化がベル形の核の排除を含む、請求項３６または３９記載の方法。
【請求項４１】
核が合胞体中に配置され、新生物の核形態型の排除が合胞体の破壊を含む、請求項３５または４０記載の方法。
【請求項４２】
ａ）組織試料の細胞シートの細胞接着を破壊する工程；および
ｂ）破壊された接着を有する細胞を硬い表面に伸展させる工程
を含み、ここで細胞の核の構造的完全性がインタクトであり続け、そのため試料を異形性核形態型細胞の同定に適切にさせる、約50ミクロンまでの最大直径を有する核を含む細胞の同定に適切な哺乳動物組織試料を調製する方法。
【請求項４３】
組織試料が層に区分され、ここで、得られる層が細胞の厚さを超える、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
組織試料が、約0.5ミリメートルの顕微鏡スライド上に層を形成する、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
組織試料が、約50ミクロンより大きい層を形成する、請求項４３記載の方法。
【請求項４６】
細胞接着が化学的に破壊される、請求項４２記載の方法。
【請求項４７】
細胞接着の化学的破壊が、45％酢酸での処理を含む、請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
組織試料がヒト組織試料である、請求項４２記載の方法。
【請求項４９】
細胞シートが面積約1 mm2である、請求項４２記載の方法。
【請求項５０】
硬い表面が顕微鏡スライドである、請求項４２記載の方法。