【手続補正書】
【提出日】令和1年7月19日(2019.7.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内でのトランスサイレチン（ＴＴＲ）の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）剤であって、前記ＲＮＡｉ剤がアンチセンス鎖に相補的なセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖が配列番号２に完全に相補的な領域を含み、
各鎖が１９−３０ヌクレオチド長であり、
前記センス鎖のヌクレオチドの実質的すべておよび前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの実質的すべてが修飾ヌクレオチドであり、
前記センス鎖が８以下の２’−フルオロ修飾を含み；
前記アンチセンス鎖が６以下の２’−フルオロ修飾を含み；
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が各々独立して、５’末端に２つのホスホロチオエート結合を含み；かつ
前記センス鎖が少なくとも１つのリガンドに結合される、
二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）剤。
【請求項２】
式（ＩＩＩｅ）：
センス：５’−Ｎａ−ＹＹＹ−Ｎｂ−３’
アンチセンス：３’−ｎｐ’−Ｎａ’−Ｙ’Ｙ’Ｙ’−Ｎｂ’−５’  （ＩＩＩｅ）
（式中、
ｎｐ’は２ヌクレオチドオーバーハングであり、かつｎｐ’内部の各ヌクレオチドはホスホロチオエート結合を介して隣接ヌクレオチドに連結され；
各Ｎａ、Ｎｂ、Ｎａ’およびＮｂ’は独立して、修飾もしくは非修飾のいずれかまたはその組み合わせである０〜２５のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列は少なくとも２つの異なる修飾ヌクレオチドを含み；
ＹＹＹおよびＹ’Ｙ’Ｙ’は各々独立して、３つの連続ヌクレオチド上の３つの同一修飾の１つのモチーフを表す）
によって表される、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項３】
前記ＹＹＹモチーフが前記センス鎖の切断部位またはその近傍に存在する、請求項２に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項４】
前記Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフが、前記アンチセンス鎖の前記５’末端から１１、１２および１３位に存在する、請求項２に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項５】
前記Ｙヌクレオチドが２’−フルオロ修飾を含む、請求項２に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項６】
前記Ｙ’ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチル修飾を含む、請求項２に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項７】
前記二本鎖領域が１５〜３０ヌクレオチド対長である、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項８】
前記二本鎖領域が１７〜２３ヌクレオチド対長である、請求項７に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項９】
前記二本鎖領域が１７〜２５ヌクレオチド対長である、請求項７に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１０】
前記二本鎖領域が２３〜２７ヌクレオチド対長である、請求項７に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１１】
前記二本鎖領域が１９〜２１ヌクレオチド対長である、請求項７に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１２】
前記二本鎖領域が２１〜２３ヌクレオチド対長である、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１３】
ヌクレオチド上の修飾が、デオキシ−ヌクレオチド、３’末端デオキシ−チミン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、２’−デオキシ−修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、非ロックドヌクレオチド、立体構造的に制限されたヌクレオチド、束縛エチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−アミノ−修飾ヌクレオチド、２’−Ｏ−アリル−修飾ヌクレオチド、２’−Ｃ−アルキル−修飾ヌクレオチド、２’−ヒドロキシル−修飾ヌクレオチド、２’−メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキル−修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミド酸、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトール修飾ヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾ヌクレオチド、ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、メチルホスホン酸基を含むヌクレオチド、５’−リン酸を含むヌクレオチド、および５’−リン酸模倣物を含むヌクレオチド、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１４】
前記ヌクレオチド上の前記修飾が２’−Ｏ−メチルまたは２’−フルオロ修飾である、請求項１３に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１５】
前記センス鎖が、６以下の２’−フルオロ修飾を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１６】
前記センス鎖が、５以下の２’−フルオロ修飾を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１７】
前記センス鎖が、４以下の２’−フルオロ修飾を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１８】
前記アンチセンス鎖が、５以下の２’−フルオロ修飾を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項１９】
前記アンチセンス鎖が、４以下の２’−フルオロ修飾を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２０】
前記アンチセンス鎖が、３以下の２’−フルオロ修飾を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２１】
前記アンチセンス鎖が、２以下の２’−フルオロ修飾を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２２】
前記アンチセンス鎖の前記５’ヌクレオチドに５’−リン酸または５’−リン酸模倣物をさらに含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２３】
前記アンチセンス鎖の前記５’ヌクレオチドに５’−リン酸模倣物をさらに含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２４】
前記５’−リン酸模倣物が、５’−ビニルホスフェート（５’−ＶＰ）である、請求項２３に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２５】
前記リガンドが、二価または三価分岐リンカーを介して結合された１つ以上のＧａｌＮＡｃ誘導体である、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２６】
前記リガンドが
【化１】
2018523655.tif 000001
である、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２７】
前記リガンドが、前記センス鎖の前記３’末端に結合される、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２８】
以下の模式図
【化２】
2018523655.tif 000002
（式中、ＸはＯまたはＳである）
で示されるようなリガンドに結合される、請求項２７に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項２９】
前記アンチセンス鎖が、
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇｇｕｕａｃａｕｇＡｆａａｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号６）、
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号７）、
５’−ＵｆｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号８）、および
５’−ＶＰｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号９）
（式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは２’−フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；ｓはホスホロチオエート結合であり；かつＶＰは５’−リン酸模倣物である）からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項３０】
前記センスおよびアンチセンス鎖が、
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇｇｕｕａｃａｕｇＡｆａａｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号６）；
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号７）；
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ＵｆｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号８）；ならびに
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ＶＰｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号９）
（式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは２’−フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；かつｓはホスホロチオエート結合であり；かつＶＰは５’−リン酸模倣物である）からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項３１】
前記センスおよびアンチセンス鎖が、ヌクレオチド配列
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号７）、
（式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは２’−フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；かつｓはホスホロチオエート結合である）を含む、請求項３０に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤。
【請求項３２】
請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物。
【請求項３３】
二本鎖ＲＮＡｉ剤が非緩衝液中で投与される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記非緩衝液が生理食塩水または水である、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が緩衝液とともに投与される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記緩衝液が、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記緩衝液がリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
インビトロでの細胞内でのトランスサイレチン（ＴＴＲ）の発現を阻害する方法であって、
前記細胞を、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤、または請求項３２−３７のいずれか一項に記載の医薬組成物と接触させるステップを含み、それにより前記細胞内での前記ＴＴＲ遺伝子の発現を阻害する、方法。
【請求項３９】
前記ＴＴＲの発現が、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％もしくは１００％阻害される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ＴＴＲ関連疾患に罹患しているかまたはＴＴＲ関連疾患を発症するリスクがある対象を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤、または請求項３２−３７のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、医薬組成物。
【請求項４１】
ＴＴＲ関連疾患に罹患しているかまたはＴＴＲ関連疾患を発症するリスクがある対象におけるニューロパチー障害スコア（ＮＩＳ）または改訂ＮＩＳ（ｍＮＩＳ＋７）を減少、緩徐化、または停止させるための医薬組成物であって、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤、または請求項３２−３７のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、医薬組成物。
【請求項４２】
ＴＴＲ関連疾患に罹患しているかまたはＴＴＲ関連疾患を発症するリスクがある対象における６分歩行試験（６ＭＷＴ）を増加させる医薬組成物であって、請求項１に記載の二本鎖ＲＮＡｉ剤、または請求項３２−３７のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、医薬組成物。
【請求項４３】
ヒトへの投与について製剤化されている、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
ＴＴＲ関連疾患に罹患している対象への投与のための、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
ＴＴＲ関連疾患を発症するリスクがある対象への投与のための、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
ＴＴＲ関連疾患の発症に関連したＴＴＲ遺伝子突然変異を有する対象への投与のための、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記ＴＴＲ関連疾患が、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、全身性家族性アミロイドーシス、家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＦＡＰ）、家族性アミロイド性心筋症（ＦＡＣ）、軟膜／中枢神経系（ＣＮＳ）アミロイドーシス、および高サイロキシン血症からなる群から選択される、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記対象がＴＴＲ関連アミロイドーシスを有し、かつ前記方法が前記対象におけるアミロイドＴＴＲ沈着を低減する、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、皮下、静脈内、筋肉内、気管支内、胸膜内、腹腔内、動脈内、リンパ管、脳脊髄、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される投与手段により前記対象に投与される、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、皮下、筋肉内または静脈内投与について製剤化されている、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記二本鎖ＲＮＡｉ剤が、皮下投与について製剤化されている、請求項４１または４２に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
医薬組成物がプレフィルドシリンジまたは自動注射器シリンジに含有される、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
前記アンチセンス鎖が、
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇｇｕｕａｃａｕｇＡｆａａｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号６）、
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号７）、
５’−ＵｆｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号８）、および
５’−ＶＰｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号９）
（式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは２’−フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；ｓはホスホロチオエート結合であり；かつＶＰは５’−リン酸模倣物である）からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０−４２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
前記センスおよびアンチセンス鎖が、
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇｇｕｕａｃａｕｇＡｆａａｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号６）；
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号７）；
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ＵｆｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号８）；ならびに
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ＶＰｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号９）
（式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは２’−フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；かつｓはホスホロチオエート結合であり；かつＶＰは５’−リン酸模倣物である）からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４０−４２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記センスおよびアンチセンス鎖が、ヌクレオチド配列
５’−ｕｓｇｓｇｇａｕＵｆｕＣｆＡｆＵｆｇｕａａｃｃａａｇａ−３’（配列番号１０）および
５’−ｕｓＣｆｓｕｕｇＧｆｕｕＡｆｃａｕｇＡｆａＡｆｕｃｃｃａｓｕｓｃ−３’（配列番号７）
（式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは２’−フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、およびＵであり；かつｓはホスホロチオエート結合である）を含む、請求項５４に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
プレフィルドシリンジまたは自動注射器シリンジが約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇの一定用量の二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）剤を含有する、請求項５２に記載の医薬組成物。