【手続補正書】
【提出日】平成20年4月8日(2008.4.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）in vitro分化細胞を含む検査試料を、スクリーニング対象の検査物質と接触させるステップであって、前記細胞が、ある罹患細胞、組織又は器官の細胞の表現型に実質的に相当する所定の罹患表現型を示すように誘導される、ステップと；
（ｂ）前記検査試料の表現型の応答性変化を判定するステップであって、
（ｉ）前記罹患表現型の発現又は進行を妨げる又は遅らせる応答性変化は、有用な薬物の指標であり、そして、
（ｉｉ）前記罹患表現型の発現又は進行を亢進する応答性変化は、前記化合物の毒性の指標である、
ステップと、
を含む、
ある疾患の改善又は治療のための薬物を同定する及び／又は得るための、あるいは、ある化合物の毒性を判定するための、方法。
【請求項２】
前記in vitro分化細胞が多能又は多分化能細胞を由来とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記多能又は多分化能細胞が胚性幹（ES）細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記多能又は多分化能細胞がマウス又はラットを由来とする、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記in vitro分化細胞が、細胞種特異的調節配列に作動的に連鎖した選択マーカと、細胞種特異的調節配列に作動的に連鎖したレポータ遺伝子とを含む、請求項１乃至４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記選択マーカがピューロマイシンに耐性をもたらすものであり、及び／又は、前記レポータが、高感度緑色蛍光タンパク質（EGFP）の種々のカラーバージョンから選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記レポータ遺伝子の前記細胞種特異的調節配列が、前記マーカ遺伝子の前記細胞種特異的調節配列と実質的に同じである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記 in vitro分化細胞が心筋細胞である、請求項１乃至７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記細胞種特異的調節配列が心房及び／又は心室特異的である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記プロモータが、α-MHC、MLC2v、MLC1a、MLC2a及びβMHCから成る群より選択される心臓特異的調節配列である、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
前記in vitro分化細胞が胚様体（EB）中に存在する、請求項１乃至１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記疾患が心疾患、好ましくは心不全又は心筋症である、請求項１乃至１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記表現型が心臓肥大表現型である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記表現型が、細胞のサイズ、細胞の形状、タンパク質合成、アクチン/ミオシンフィラメントの組織化、心筋症の細胞に特徴的な遺伝子発現パターンの活性化、及び／又は、初期胚発生で発現する遺伝子の活性化、から成る群より選択されるパラメータを含む、請求項１乃至１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記表現型が、生理活性化合物の存在下で前記in vitro分化細胞を培養することにより誘導される、請求項１乃至１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が、肥大アゴニストであり、好ましくは該肥大アゴニストが、エンドセリン-1、アンジオテンシンII、又はα1-アドレナリン作動性アゴニストから成る群より選択され、好ましくは該α1-アドレナリン作動性アゴニストがフェニレフリンである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記in vitro分化細胞が、前記表現型を示すように遺伝子操作されている、請求項１乃至１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記in vitro分化細胞が、潜在的薬物ターゲットをコードする遺伝子を発現又は抑制するように遺伝子操作されている、請求項１乃至１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
電極アレイを通じて電気活性、及び付加的に更なるパラメータを測定するステップを含む、請求項１乃至１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
以下のパラメータ：
（ｉ）Na+チャネル;
（ｉｉ）Ca2+/K+チャネル;
（ｉｉｉ）K+チャネル; 
（ｉｖ）振幅及び／又は外界電位の期間 (FDP)；
（ｖ）心臓細胞の周期変動及びニューロン細胞のバースト期間；
（ｖｉ）不整脈、EAD様現象；
（ｖｉｉ）pH値；
（ｖｉｉｉ）酸素分圧(pO2);
（ｉｘ）拍動停止;及び
（ｘ）心房心室分離収縮、ＮＯ効果及び/形態上の変化の分析、
のうちのいずれか一つ又は全部が分析される、請求項１乃至１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記in vitro分化細胞が、心筋細胞に分化した胚様体（EB）中に存在する、請求項１乃至２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
前記EBが、自律的に拍動して、心房及び心室心筋細胞やペースメーカ細胞の電気生理的特性を網羅する機能的心臓組織を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記in vitro分化細胞が、マウスES細胞株を由来とする、請求項１乃至２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
（ａ）請求項８乃至１１のいずれかに定義した通りのin vitro分化細胞を含む検査試料を、検査物質に、ある罹患細胞、組織又は器官の細胞の表現型に実質的に相当する所定の罹患表現型を示すように前記細胞が誘導される前、誘導中、又は誘導後に、接触させるステップと；
（ｂ）ステップ（ａ）の心筋細胞中の心筋症パラメータを測定するステップと；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られた測定値と、前記物質に曝されていない心筋細胞のそれと比較するステップであって；
ステップ（ａ）の心筋細胞中の心筋症パラメータの測定値が、心臓肥大症の減少と一致する、ステップと、を含む
心筋症を改善する能力について物質をスクリーニングする、請求項１乃至２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
心筋症パラメータが、心房性ナトリウム利尿因子遺伝子、ベータ型ナトリウム利尿ペプチド遺伝子、β-ミオシン重鎖遺伝子、α-骨格アクチン遺伝子、c-FOS、c-JUN、c-MYC、初期成長応答遺伝子、熱ショックタンパク質７０、アルファ-ミオシン重鎖、コラーゲンＩＩＩ、プレプロエンドセリン-1、ミオシン軽鎖２、Na+/H+ 交換体、心臓アルファ-アクチン、Na+/Ca2+ 交換体、ホスファチジルイノシトール-3受容体、アンジオテンシン転化酵素、コラーゲンＩ、コラーゲンＸＶ、筋小胞体Ca-ATPase-2 アルファ、β-アドレナリン受容体、プロテインキナーゼＣ、及びホスホランバンから成る群より選択される遺伝子の発現又は遺伝子産物の活性である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記接触させるステップが、前記検査試料を、前記第一の検査物質の存在下で少なくとも一つの第二の検査物質に接触させるステップを更に含む、請求項１乃至２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
分化プロセス及び／又は組織構造形成を活性化又は阻害することが既知の化合物が培養液に添加される、請求項１乃至２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
請求項１乃至２７のいずれかに記載の方法のステップを含む、薬物の毒性及び／又は治療的プロファイリングの方法であって、
（ａ）in vitroでスクリーニングのための検査物質により識別された細胞であって、該細胞は、羅患した細胞、組織又は器官の細胞の表現型に実質的に相当する、所定の罹患表現型を示すように誘導される細胞、を含む試験試料を接触させるステップと、
（ｂ）前記試料の前記表現型への応答性変化を判定するステップであって、
（i）前記罹患表現型の発現又は進行を妨げる又は遅らせる応答性変化は、有効な薬物のための指標であり、
（ii）前記罹患表現型の発現又は進行を亢進させる応答性変化は、指標である、
ステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）で得られたプロファイルに関する情報を第三者に提供するステップと、
を含む、
方法。
【請求項２９】
多能もしくは多分化能細胞、in vitro分化細胞、及び付加的に培養液、組換え核酸分子、及び／又は標準化合物を含有する、請求項１乃至２８のいずれかに記載の方法を行うために有用なキット又は組成物の使用。
【請求項３０】
請求項１乃至２８のいずれかに記載の方法において、前記表現型のパラメータを分析するための装置の使用。
【請求項３１】
ターゲット評価、薬物発見又は薬物動態学的もしくは薬理学的プロファイリングにおける、請求項１乃至２３のいずれかに記載の方法に従って、所定の罹患表現型を示すように誘導されるin vitro分化細胞の使用。
【請求項３２】
ある疾患に関与する遺伝子又は遺伝子産物を、薬物ターゲットとして同定する及び／又は得る方法であって、前記表現型の誘導前及び誘導後に、請求項１乃至２３のいずれかに定義した通りに、in vitro分化細胞の発現プロファイリングを行うステップであって、ある遺伝子又は遺伝子産物の示差的な発現は、潜在的な薬物ターゲットの指標である、ステップと、付加的に、同定された遺伝子又はその対応するcDNA又は断片をクローニングするステップと、を含む、方法。
【請求項３３】
（ａ）請求項１乃至２３のいずれかに定義された通りに、in vitro分化細胞中の標的遺伝子の発現及び／又は前記標的遺伝子産物の活性を、ある罹患細胞、組織又は器官の細胞の表現型に実質的に相当する所定の罹患表現型を示すように前記細胞を誘導する前、誘導中、又は誘導後に、変化させるステップと；
（ｂ）前記細胞の表現型の応答性変化を判定するステップであって、
（ｉ）前記罹患表現型の発現又は進行を妨げる又は遅らせる応答性変化は、活性化させるべき薬物ターゲットの指標であり；そして
（ｉｉ）前記罹患表現型の発現又は進行を亢進させる応答性変化は、前記疾患の治療のために阻害すべき薬物ターゲットの指標である、
ステップと、を含む、
潜在的薬物ターゲットを評価する方法。