【手続補正書】
【提出日】令和1年6月28日(2019.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるアルツハイマー病または前記疾患に類似する認知障害の発症リスクのインビトロ決定方法であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、Ｅ２Ｆ４タンパク質または機能的に等価な変異体のスレオニン残基のリン酸化のレベルを決定すること、および
ｂ）ａ）で得られたリン酸化のレベルを参照値と比較すること
を含んでなり、参照値と比較した場合の、Ｅ２Ｆ４タンパク質または機能的に等価な変異体のスレオニン残基のリン酸化のレベルの上昇が、前記対象がアルツハイマー病または前記疾患に類似する認知障害を発症する高いリスクを有することを示す、方法。
【請求項２】
前記対象が軽度認知機能障害に罹患している、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象がヒトであって、神経変性疾患がアルツハイマー病であるか、または前記対象がイヌであって、前記アルツハイマー病に類似する認知障害が認知機能障害症候群である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
軽度認知機能障害に罹患している対象における個別化療法のインビトロ設計方法であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、Ｅ２Ｆ４タンパク質または機能的に等価な変異体のスレオニン残基のリン酸化のレベルを決定すること、および
ｂ）ａ）で得られたリン酸化のレベルを参照値と比較すること
を含んでなり、参照値と比較した場合の、Ｅ２Ｆ４タンパク質または機能的に等価な変異体のスレオニン残基のリン酸化のレベルの上昇が、前記対象がアルツハイマー病または前記疾患に類似する認知障害の予防および／または治療のための療法を受容する感受性を持つことを示す、方法。
【請求項５】
前記対象がヒトであって、前記療法がアルツハイマー病の予防および／もしくは治療のためのものであるか、または前記対象がイヌであって、前記療法が認知機能障害症候群の予防および／もしくは治療のためのものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
アルツハイマー病または前記疾患に類似する認知障害の予防および／または治療のための療法による処置に感受性のある患者のインビトロ選択方法であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、Ｅ２Ｆ４タンパク質または機能的に等価な変異体のスレオニン残基のリン酸化のレベルを決定すること、および
ｂ）ａ）で得られたリン酸化のレベルを参照値と比較すること
を含んでなり、参照値と比較した、Ｅ２Ｆ４タンパク質または機能的に等価な変異体のスレオニン残基のリン酸化合物のレベルの上昇が、前記対象がアルツハイマー病または前記疾患に類似する認知障害の予防および／または治療のための療法を受容する候補であることを示す、方法。
【請求項７】
前記対象がヒトであって、前記療法がアルツハイマー病の予防および／もしくは治療のためのものであるか、または前記対象がイヌであって、前記療法が認知機能障害症候群の予防および／もしくは治療のためのものである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｅ２Ｆ４タンパク質のスレオニン残基のリン酸化のレベルを決定することが、ヒトＥ２Ｆ４タンパク質の２４８番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２４８）、２５０番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２５０）、１４番のスレオニン残基（Ｔｈｒ１４）、１６３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ１６３）、２２４番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２２４）および３３３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３３３）、ならびにそれらの組合せからなる群から選択されるスレオニン残基、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基のリン酸化を決定することを含んでなるか、あるいは、
前記対象がイヌであって、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質、または機能的に等価な変異体の３１１番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３１１）、３１３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３１３）、７６番のスレオニン残基（Ｔｈｒ７６）、２２５番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２２５）、２８６番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２８６）、３９１番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３９１）、４０番のスレオニン残基（Ｔｈｒ４０）およびそれらの組合せからなる群から選択されるスレオニン残基のリン酸化が決定される、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記サンプルが脳脊髄液、血清、血漿、血液および末梢血単核細胞の群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記リン酸化のレベルがＥＬＩＳＡの手段により決定される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
スレオニンにおいてリン酸化されているＥ２Ｆ４またはその機能的に等価な変異体の、アルツハイマー病またはアルツハイマー病に類似する認知障害を発症するリスクのマーカーとしての使用。
【請求項１２】
前記Ｅ２Ｆ４がヒト起源であり、２４８番のスレオニン（Ｔｈｒ２４８）、２５０番のスレオニン（Ｔｈｒ２５０）、１４番のスレオニン（Ｔｈｒ１４）、１６３番のスレオニン（Ｔｈｒ１６３）、２２４番のスレオニン（Ｔｈｒ２２４）、３３３番のスレオニン（Ｔｈｒ３３３）およびそれらの組合せからなる群から選択されるスレオニンにおいてリン酸化されており、前記疾患がアルツハイマー病であるか、あるいは、
前記Ｅ２Ｆ４がＵｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４であり、３１１番のスレオニン（Ｔｈｒ３１１）、３１３番のスレオニン（Ｔｈｒ３１３）、７６番のスレオニン（Ｔｈｒ７６）、２２５番のスレオニン（Ｔｈｒ２２５）、２８６番のスレオニン（Ｔｈｒ２８６）、３９１番のスレオニン（Ｔｈｒ３９１）、４０番のスレオニン（Ｔｈｒ４０）およびそれらの組合せからなる群から選択されるスレオニンにおいてリン酸化されており、前記アルツハイマー病に類似する認知障害が認知機能障害症候群である、
請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
Ｅ２Ｆ４タンパク質のスレオニン残基のリン酸化のレベルを決定し得る試薬を含んでなるキット。
【請求項１４】
Ｅ２Ｆ４タンパク質のリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、
ａ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の２４８番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２４８）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｂ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の２５０番（Ｔｈｒ２５０）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｃ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の１４番のスレオニン残基（Ｔｈｒ１４）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｄ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の１６３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ１６３）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｅ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の２２４番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２２４）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｆ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の３３３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３３３）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｇ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体のＴｈｒ、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｈ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の３１１番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３１１）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｉ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の残基番のスレオニン３１３（Ｔｈｒ３１３）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｊ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の７６番のスレオニン残基（Ｔｈｒ７６）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｋ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の２２５番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２２５）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｌ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の２８６番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２８６）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｍ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の３９１番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３９１）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｎ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体の４０番のスレオニン残基（Ｔｈｒ４０）、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬、
ｏ）イヌＥ２Ｆ４タンパク質もしくは機能的に等価な変異体のＴｈｒ、または多重アミノ酸配列アラインメントにより定義される別のＥ２Ｆ４タンパク質のリン酸化可能で位置的に等価なアミノ酸残基におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬
からなる群から選択され、
特に、
ａ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質の２４８番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２４８）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、２４８番を含んでなるヒトＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｂ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質の２５０番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２５０）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、２５０番を含んでなるヒトＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｃ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質の１４番のスレオニン残基（Ｔｈｒ１４）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、１４番を含んでなるヒトＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｄ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質の１６３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ１６３）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、１６３番を含んでなるヒトＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｅ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質の２２４番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２２４）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、２２４番を含んでなるヒトＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｆ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質の３３３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３３３）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、３３３番を含んでなるヒトＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｇ）ヒトＥ２Ｆ４タンパク質のＴｈｒにおけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、抗ホスホスレオニン抗体である、
ｈ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質の３１１番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３１１）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、３１１番を含んでなる、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｉ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質の３１３番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３１３）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、３１３番を含んでなる、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｊ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質の７６番のスレオニン残基（Ｔｈｒ７６）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、７６番を含んでなる、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｋ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質の２２５番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２２５）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、２２５番を含んでなる、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｌ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質の２８６番のスレオニン残基（Ｔｈｒ２８６）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、２８６番を含んでなる、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｍ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質の３９１番のスレオニン残基（Ｔｈｒ３９１）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、３９１番を含んでなる、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、
ｎ）Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４タンパク質の４０番のスレオニン残基（Ｔｈｒ４０）におけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が、４０番を含んでなる、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース受託番号Ｊ９ＮＳＪ４を有するイヌＥ２Ｆ４配列を含んでなるホスホペプチドを特異的に認識する抗体であり、前記Ｔｈｒ残基はリン酸化されている、または
ｏ）イヌＥ２Ｆ４タンパク質のＴｈｒにおけるリン酸化のレベルを決定し得る試薬が抗ホスホスレオニン抗体である、
請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
Ｅ２Ｆ４タンパク質に特異的に結合し得る試薬をさらに含んでなり、好ましくは、Ｅ２Ｆ４タンパク質に特異的に結合し得る試薬が抗体であるか、あるいは、Ｅ２Ｆ４タンパク質に特異的に結合し得る試薬が支持体に固定化されている、請求項１３または１４に記載のキット。
【請求項１６】
対象においてその対象がアルツハイマー病もしくは前記疾患に類似する認知障害を発症するリスクを決定するための、軽度認知機能障害に罹患している対象において個別化療法を設計するための、またはアルツハイマー病もしくは前記疾患に類似する認知障害の予防および／もしくは治療のための療法による処置に感受性のある患者を選択するための、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載のキットの使用。