【手続補正書】
【提出日】平成20年10月14日(2008.10.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、およびＰｈｌＣ−である単離もしくは組換えＰｈｌＤ＋酵素系、またはＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、およびＰｈｌＣ−であるＰｈｌＤ＋組換え細胞、またはその細胞でのＰｈｌＤの発現をさらに増強させるように遺伝子操作されているＰｈｌＤ＋細胞であるＰｈｌＤ＋、ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、およびＰｈｌＣ−組換え細胞（ここで、該酵素系または組換え細胞は、マロニル−ＣｏＡをフロログルシノールへと変換することができる）。
【請求項２】
少なくとも１つのマロニル−ＣｏＡ合成酵素、好ましくは、マロニル−ＣｏＡシンセターゼ、マロニル−ＣｏＡデカルボキシラーゼ、またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼのうちのいずれか、をさらに含んでなる、請求項１に記載の酵素系。
【請求項３】
配列番号：２と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を含んでなり、マロニル−ＣｏＡをフロログルシノールへと変換することができる、単離または組換えフロログルシノールシンターゼ酵素。
【請求項４】
配列番号：２のアミノ酸配列を含んでなる、請求項３に記載の酵素。
【請求項５】
ｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、またはｐｈｌＣ−の少なくとも１つであり、マロニル−ＣｏＡ合成酵素をコードする少なくとも１つのオープンリーディングフレームをさらに含んでなる、ＰｈｌＤ酵素をコードする少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含んでなる、単離または組換え核酸ベクター。
【請求項６】
配列番号：１の塩基配列、配列番号：１と少なくとも８０％相同である塩基配列、それらに対応するＲＮＡ塩基配列、またはそれらと重複するコドン配列を含んでなる、請求項５に記載の核酸。
【請求項７】
ｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、およびｐｈｌＣ-であり、その細胞で発現されるフロログルシノールシンターゼの作用によりマロニル−ＣｏＡをフロログルシノールへと変換することができるｐｈｌＤ＋組換え細胞であって、ＰｈｌＤ酵素をコードする少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含んでなる核酸ベクターで形質転換されており、それによりフロログルシノールシンターゼを発現することができる、ｐｈｌＤ＋組換え細胞。
【請求項８】
同化フロログルシノールを生産する方法であって、
（Ａ）
（１）
（ａ）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つである、単離もしくは組換えＰｈｌＤ＋酵素系、または
（ｂ）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つである、ＰｈｌＤ＋組換え細胞、または
（ｃ）その細胞でのＰｈｌＤの発現をさらに増強させるように遺伝子操作されているＰｈｌＤ＋細胞であるＰｈｌＤ＋組換え細胞
（ここで、該酵素系または組換え細胞は、マロニル−ＣｏＡをフロログルシノールへと変換することができる）；および
（２）マロニル−ＣｏＡ、またはその酵素系もしくは組換え細胞がマロニル−ＣｏＡへと変換することができる別の炭素源の少なくとも１つ
を提供するステップ；および
（Ｂ）
（１）該マロニル−ＣｏＡと該酵素系もしくは組換え細胞とを、そこからフロログルシノールを合成することができる条件下で接触させるステップ、または
（２）該他の炭素源と該酵素系もしくは組換え細胞とを、該炭素源をマロニル−ＣｏＡへと変換することができ、そこからフロログルシノールを合成することができる条件下で接触させるステップ
を含んでなり、それにより同化フロログルシノールを得る、方法。
【請求項９】
酵素系（１)（a）または細胞（１)（b）が、ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、およびＰｈｌＣ−である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
酵素系または組換え細胞が、マロニル−ＣｏＡ合成酵素、好ましくは、マロニル−ＣｏＡシンセターゼ、マロニル−ＣｏＡデカルボキシラーゼ、またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼのうちのいずれかを含んでなる、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
噴射剤化合物または爆発性化合物を生産するための方法であって、
（Ａ）（１）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つである単離もしくは組換えＰｈｌＤ＋酵素系、または（２）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つであるＰｈｌＤ＋組換え細胞、または（３）その細胞でのＰｈｌＤの発現をさらに増強させるように遺伝子操作されているＰｈｌＤ＋細胞であるＰｈｌＤ＋組換え細胞（ここで、該酵素系または組換え細胞は、マロニル−ＣｏＡをフロログルシノールへと変換することができる）の作用によりフロログルシノールを同化作用により生合成すること；および
（Ｂ）それによって生合成された同化フロログルシノールを化学修飾して、またはそれから製造されるレソルシノールを化学修飾して、噴射剤化合物または爆発性化合物を生産すること
を含んでなる、方法。
【請求項１２】
同化フロログルシノールが
（Ａ）（１）（ａ）前記単離もしくは組換えＰｈｌＤ＋酵素系（Ａ)(１)、または（ｂ）前記ＰｈｌＤ＋組換え細胞（Ａ)(２)、または（ｃ）前記ＰｈｌＤ＋組換え細胞（Ａ)(３)（ここで、該酵素系または組換え細胞は、炭素源をフロログルシノールへと変換することができる）；および
（２）マロニル−ＣｏＡ、またはその酵素系もしくは組換え細胞がマロニル−ＣｏＡへと変換することができる別の炭素源の少なくとも１つ
を提供するステップ；および
（Ｂ）（１）該マロニル−ＣｏＡと該酵素系もしくは組換え細胞とを、そこからフロログルシノールを合成することができる条件下で接触させるステップ、または
（２）該他の炭素源と該酵素系もしくは組換え細胞とを、その炭素源をマロニル−ＣｏＡへと変換することができ、そこからフロログルシノールを合成することができる条件下で接触させるステップ
を含み、それによって同化フロログルシノールを得る工程によって生合成される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
酵素系または組換え細胞が、マロニル−ＣｏＡ合成酵素、好ましくは、マロニル−ＣｏＡシンセターゼ、マロニル−ＣｏＡデカルボキシラーゼ、またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼのうちのいずれか、をさらに含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＰｈｌＤ＋酵素系（A)（１）または組換え細胞（A)（２）が、ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、およびＰｈｌＣ−である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
炭素源が提供され、該炭素源と酵素系とを接触させる、請求項８または１２に記載の方法。
【請求項１６】
炭素源が単純な炭素源であり、好ましくは、糖類、脂肪族ポリオール、またはそれらの組合せである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
炭素源がグルコース、キシロース、アラビノース、グリセロール、またはそれらの組合せを含んでなる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
組換え細胞が提供され、前記接触（Ｂ）ステップが、該細胞を炭素源を含む増殖培地において培養することを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
培養が抽出発酵として実施される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
培養が二重温度プロフィールを用いて実施される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
組換え細胞が提供される、請求項８または１２に記載の方法。
【請求項２２】
組換え細胞が、ｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、またはｐｈｌＣ−の少なくとも１つであるｐｈｌＤ＋組換え細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ｐｈｌＤ＋組換え細胞が、ｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、およびｐｈｌＣ−である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
組換え細胞が、ｐｈｌＡＢＣＤ＋細胞を提供すること、並びにその総てのｐｈｌＡ、ｐｈｌＢ、およびｐｈｌＣ遺伝子を不活化すること、を含む工程によって生産される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
組換え細胞が、ｐｈｌＡＢＣＤ−細胞を提供すること、およびｐｈｌＤ遺伝子をその細胞に挿入すること、を含む工程によって生産される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
組換え細胞が、マロニル−ＣｏＡシンセターゼ、マロニル−ＣｏＡデカルボキシラーゼ、またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼのうちのいずれかであるマロニル−ＣｏＡ合成酵素をコードする遺伝子を該細胞に挿入することをさらに含む工程によって生産される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
組換え細胞が、酵母、真菌、または細菌である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
組換え細胞が、細菌である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
組換え細胞が、エシェリキア属(Escherichia)またはシュードモナス属(Pseudomonas)、好ましくは、大腸菌(E. coli)またはＰ．フルオレセンス(P. fluorescens)のうちのいずれかのメンバーである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
レソルシノールの調整のための工程であって、
（Ａ）（１）（ａ）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つである単離もしくは組換えＰｈｌＤ＋酵素系、または（ｂ）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つであるＰｈｌＤ＋組換え細胞、または（ｃ）その細胞でのＰｈｌＤの発現をさらに増強させるように遺伝子操作されているＰｈｌＤ＋細胞であるＰｈｌＤ＋組換え細胞（ここで、該酵素系または組換え細胞は、マロニル−ＣｏＡをフロログルシノールへと変換することができる）の作用によりフロログルシノールを同化作用により生合成すること；および
（２）水素およびロジウム触媒を提供すること；および
（Ｂ）それによって生合成されたフロログルシノールと該水素およびそのロジウム触媒とを、該フロログルシノールが水素化されてレソルシノールが生成される条件下で接触させること
を含み、それによってレソルシノールを調整する、工程。
【請求項３１】
（１）（ａ）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つである単離もしくは組換えＰｈｌＤ＋酵素系；または（ｂ）ＰｈｌＡ−、ＰｈｌＢ−、もしくはＰｈｌＣ−の少なくとも１つであるＰｈｌＤ＋組換え細胞；または（ｃ）その細胞でのＰｈｌＤの発現をさらに増強させるように遺伝子操作されているＰｈｌＤ＋細胞であるＰｈｌＤ＋組換え細胞（ここで、該酵素系または組換え細胞は、マロニル−ＣｏＡをフロログルシノールへと変換することができる）の作用によりフロログルシノールを同化作用により生合成すること；および
（２）それによって生合成された同化フロログルシノールから、またはその同化フロログルシノールを化学修飾することによって得られるレソルシノールから爆発性組成物または噴射剤組成物を調製すること
を含む工程によって調整される爆発性組成物または噴射剤組成物。
【請求項３２】
単離同化フロログルシノールまたはその誘導体を含んでなる組成物。
【請求項３３】
医薬、化粧料、染料、ポリマー樹脂、ゴム、接着剤、封止剤、被覆剤、複合材料、または積層もしくは結合材料である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
爆発物または噴射剤である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
誘導体がレソルシノールまたはその誘導体である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
マロニル−ＣｏＡからフロログルシノールを生合成することができる組換え細胞の調製のための工程であって、
（Ａ）以下の、
（１）ｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、およびｐｈｌＣ−であり、ＰｈｌＤ酵素をコードする少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含むか、またはＰｈｌＤ酵素をコードする少なくとも１つのオープンリーディングフレームとマロニル−ＣｏＡ合成酵素をコードする少なくとも１つのオープンリーディングフレームの両方を含む、単離もしくは組換え核酸を提供すること、
（２）（ａ）前記核酸で形質転換することができるＰｈｌＤ−、ｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、およびｐｈｌＣ−細胞、または（ｂ）前記核酸で形質転換することができるＰｈｌＤ＋、ｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、およびｐｈｌＣ−細胞を提供すること；および
（３）該細胞と該核酸とを、該細胞を該核酸で形質転換することができる条件下で接触させること
により細胞を、該細胞による発現が可能な、ＰｈｌＤをコードする核酸で形質転換することを含み、それによって組換え細胞を得ること；または
（Ｂ）以下によりｐｈｌＤ＋細胞における遺伝子を不活化することを含み、それによってｐｈｌＡ−、ｐｈｌＢ−、およびｐｈｌＣ−である組換え細胞を得ること
（１）ｐｈｌＡ＋、ｐｈｌＢ＋、もしくはｐｈｌＣ＋の少なくとも１つであるｐｈｌＤ＋細胞を提供すること；および
（２）その細胞における前記ｐｈｌＡ、ｐｈｌＢ、およびｐｈｌＣ遺伝子の総てを不活化すること
を含んでなる、工程。