【手続補正書】
【提出日】平成31年2月21日(2019.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）磁性コア粒子、
（ｂ）前記磁性コア粒子をカプセル化するガラス層、
（ｃ）前記ガラス層と結合されたタンパク質／ポリマー複合層、および
（ｄ）前記タンパク質／ポリマー複合層と結合された生物親和性リガンド対の１つのメンバーを含む標的化部分
を含む、標的化ナノ磁性粒子。
【請求項２】
約５〜約５００ｎｍ、好ましくは約３０〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項３】
前記磁性コア粒子がマグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）結晶を含み、任意に前記マグネタイト結晶が約５〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項４】
前記ガラス層が有機官能性アルコキシシラン分子から形成されるシラン層であり、任意に有機官能性アルコキシシラン分子が結合可能な末端基を含み、任意に結合可能な末端基がアミノ、スルフィドリル、カルボキシル、およびヒドロキシル末端基からなる群から選択される、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項５】
前記タンパク質／ポリマー複合層が前記ガラス層と共有結合され、ここで任意に前記タンパク質／ポリマー複合層は血清アルブミン、任意にウシまたはヒト血清アルブミン、デキストランまたはカゼインからなり、任意に前記タンパク質／ポリマー複合層が前記組成物を約４５〜約８５℃に加熱することによって永続的に結合される、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項６】
前記標的化部分が抗体、抗原結合抗体フラグメント、細胞表面受容体、細胞表面受容体のリガンド結合細胞外領域、核酸、アビジン、ストレプトアビジン、およびビオチンからなる群から選択される、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項７】
さらに検出可能な標識を含む、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項８】
前記磁性コア粒子が酸化第一鉄、任意にＦｅ３Ｏ４もしくはＦｅ２Ｏ３、酸化クロム、任意にＣｒＯ３、またはＭｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｚｎ、Ｇｄ、およびＤｙからなる群から選択される置換金属イオンを含む安定な金属酸化物からなる、請求項３に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項９】
請求項１による複数の標的化ナノ磁性粒子を含む、組成物。
【請求項１０】
乾燥した容易に分散可能な組成物または液体組成物である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記複数の標的化ナノ磁性粒子が複数の標的化ナノ磁性粒子種を含み、ここで各標的化ナノ磁性粒子種が異なる標的化部分種を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
容器中に請求項９による組成物および任意に前記組成物の使用のための取扱説明書を含む、キット。
【請求項１３】
請求項１による標的化ナノ磁性粒子を作製する方法であって、
（ａ）約５〜約５００ｎｍ、好ましくは約３０〜約３００ｎｍの範囲の複数の直径を有す
る磁性コア粒子を得、
（ｂ）前記磁性コア粒子をガラス層でカプセル化して第一カプセル化磁性コア粒子を形成させ、ここで前記ガラス層は任意に約１〜約５０ｎｍの範囲の厚さを有し、
（ｃ）前記第一カプセル化磁性コア粒子をタンパク質／ポリマー複合層にカプセル化して第二カプセル化磁性コア粒子を形成させ、ここでタンパク質／ポリマー複合層は任意に約５〜約５０ｎｍの範囲の厚さを有し、
（ｄ）標的化部分を前記第二カプセル化磁性コア粒子に、任意に共有結合によって、結合させ、ここで前記標的化部分は生物親和性リガンド対の１つのメンバーを含み、任意に前記標的化部分は抗体、抗原結合抗体フラグメント、細胞表面受容体、細胞表面受容体のリガンド結合細胞外領域、核酸、アビジン、ストレプトアビジン、ビオチン、標的化薬剤送達の目的のための医薬化合物からなる群から独立して選択され、任意に
（ｅ）医薬化合物または検出可能な標識を前記第二カプセル化磁性コア粒子と、任意に共有結合によって、結合すること
を含む、方法。
【請求項１４】
前記磁性コア粒子が解膠される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
生体分子／粒子複合体を形成するための、請求項１による標的化ナノ磁性粒子を含む組成物であって、前記標的化ナノ磁性粒子が、前記標的化ナノ磁性粒子の前記標的化部分と直接的または間接的に特異的な反応性である対象の生体分子と結合し、生体分子／粒子複合体が形成されることを特徴とする、組成物。
【請求項１６】
前記結合がインビトロまたはインビボで生じる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
生体分子／粒子複合体を用いる方法であって、
（ａ）対象の生体分子を含むことが分かっている、または疑われる生物学的サンプルを、請求項１による標的化ナノ磁性粒子と接触させて生体分子／粒子複合体を形成させ、
（ｂ）磁場を用いて前記生体分子／粒子複合体を単離すること
を含む、方法。
【請求項１８】
磁気カラム分離またはＨＧＭＳ法を使用して、前記生体分子／粒子複合体を単離する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
複合液体、任意に哺乳動物全血または哺乳動物全血の分画と混合されたとき、安定したコロイドとしての挙動を示す、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項２０】
前記タンパク質成分が任意にマレイミド誘導体化タンパク質である、請求項５に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項２１】
５年までの期間にわたって保存された際に、その磁性、生物親和性、および粒子サイズ、ならびに標的化特性に有意または有害な変化を示さない、請求項１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
【請求項２２】
標的生体分子種を生物学的サンプルから分離するための方法であって、
（ａ）反応混合物において、対象の生体分子を含むことが分かっている、または疑われる生物学的サンプルを請求項１による標的化ナノ磁性粒子と接触させて生体分子／粒子複合体を形成させ、
（ｂ）磁場を用いて前記生体分子／粒子複合体を前記反応混合物から単離すること
を含む、方法。
【請求項２３】
複数の標的生体分子種を生物学的サンプルから単離する方法であって、
（ａ）反応混合物において、対象の第一および第二生体分子種を含むことが分かっている、または疑われる生物学的サンプルを、対象の前記第一生体分子種を標的とする請求項１による標的化ナノ磁性粒子と接触させて第一標的生体分子／粒子複合体を形成させ、対象の前記第二生体分子種を標的とする標的化浮揚マイクロ粒子と接触させて第二標的生体分子／粒子複合体を形成させ、
（ｂ）磁場を用いて前記第一生体分子／粒子複合体を前記反応混合物から単離し、
（ｃ）前記第二生体分子／粒子複合体を前記反応混合物から分離すること
を含む、方法。
【請求項２４】
前記標的化ナノ磁性粒子が約５〜約５００ｎｍ、好ましくは約３０〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記標的化ナノ磁性粒子の前記磁性コア粒子がマグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）結晶を含み、任意にここで前記マグネタイト結晶が約５〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
容器中に請求項２３による組成物および任意に前記組成物の使用のための取扱説明書を含む、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１４】
本明細書で適切に説明的に記載されている発明は、本明細書で具体的には開示されていない構成要素がなくても実行され得る。そのため、例えば、本明細書の各場合において、用語「含む」、「から基本的になる」、および「からなる」のいずれも他の２つの用語のいずれかと置き換えられ得る。用いられている用語および表現は、説明の用語として使用されており、限定するものではなく、示され説明されている特性のいかなる同等物またはその一部を除外するような用語および表現の使用は意図されておらず、様々な変更が請求される本発明の範囲内で可能であると認識される。そのため、本発明は好ましい実施形態および任意の特性によって具体的に開示されているが、本明細書で開示される概念の修正および変更は従来技術の当業者によって見直され得、このような修正および変更は添付の請求項によって定められる本発明の範囲内であると考えられ、また本発明のさらなる実施形態さえ含み得ると理解されるべきである。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
（ａ）磁性コア粒子、
（ｂ）前記磁性コア粒子をカプセル化するガラス層、
（ｃ）前記ガラス層と結合されたタンパク質／ポリマー複合層、および
（ｄ）前記タンパク質／ポリマー複合層と結合された生物親和性リガンド対の１つのメンバーを含む標的化部分
を含む、標的化ナノ磁性粒子。
（項目２）
約５〜約５００ｎｍ、好ましくは約３０〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目３）
前記磁性コア粒子がマグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）結晶を含み、任意に前記マグネタイト結晶が約５〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目４）
前記ガラス層が有機官能性アルコキシシラン分子から形成されるシラン層であり、任意に有機官能性アルコキシシラン分子が結合可能な末端基を含み、任意に結合可能な末端基がアミノ、スルフィドリル、カルボキシル、およびヒドロキシル末端基からなる群から選択される、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目５）
前記タンパク質／ポリマー複合層が前記ガラス層と共有結合され、ここで任意に前記タンパク質／ポリマー複合層は血清アルブミン、任意にウシまたはヒト血清アルブミン、デキストランまたはカゼインからなり、任意に前記タンパク質／ポリマー複合層が前記組成物を約４５〜約８５℃に加熱することによって永続的に結合される、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目６）
前記標的化部分が抗体、抗原結合抗体フラグメント、細胞表面受容体、細胞表面受容体のリガンド結合細胞外領域、核酸、アビジン、ストレプトアビジン、およびビオチンからなる群から選択される、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目７）
さらに検出可能な標識を含む、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目８）
前記磁性コア粒子が酸化第一鉄、任意にＦｅ３Ｏ４もしくはＦｅ２Ｏ３、酸化クロム、任意にＣｒＯ３、またはＭｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｚｎ、Ｇｄ、およびＤｙからなる群から選択される置換金属イオンを含む安定な金属酸化物からなる、項目３に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目９）
項目１による複数の標的化ナノ磁性粒子を含む、組成物。
（項目１０）
乾燥した容易に分散可能な組成物または液体組成物である、項目９に記載の組成物。
（項目１１）
前記複数の標的化ナノ磁性粒子が複数の標的化ナノ磁性粒子種を含み、ここで各標的化ナノ磁性粒子種が異なる標的化部分種を含む、項目９に記載の組成物。
（項目１２）
容器中に項目９による組成物および任意に前記組成物の使用のための取扱説明書を含む、キット。
（項目１３）
項目１による標的化ナノ磁性粒子を作製する方法であって、
（ａ）約５〜約５００ｎｍ、好ましくは約３０〜約３００ｎｍの範囲の複数の直径を有す
る磁性コア粒子を得、
（ｂ）前記磁性コア粒子をガラス層でカプセル化して第一カプセル化磁性コア粒子を形成させ、ここで前記ガラス層は任意に約１〜約５０ｎｍの範囲の厚さを有し、
（ｃ）前記第一カプセル化磁性コア粒子をタンパク質／ポリマー複合層にカプセル化して第二カプセル化磁性コア粒子を形成させ、ここでタンパク質／ポリマー複合層は任意に約５〜約５０ｎｍの範囲の厚さを有し、
（ｄ）標的化部分を前記第二カプセル化磁性コア粒子に、任意に共有結合によって、結合させ、ここで前記標的化部分は生物親和性リガンド対の１つのメンバーを含み、任意に前記標的化部分は抗体、抗原結合抗体フラグメント、細胞表面受容体、細胞表面受容体のリガンド結合細胞外領域、核酸、アビジン、ストレプトアビジン、ビオチン、標的化薬剤送達の目的のための医薬化合物からなる群から独立して選択され、任意に
（ｅ）医薬化合物または検出可能な標識を前記第二カプセル化磁性コア粒子と、任意に共有結合によって、結合すること
を含む、方法。
（項目１４）
前記磁性コア粒子が解膠される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
生体分子／粒子複合体を形成するための方法であって、項目１による標的化ナノ磁性粒子を、前記標的化ナノ磁性粒子の前記標的化部分と直接的または間接的に特異的な反応性である対象の生体分子と結合させて生体分子／粒子複合体を形成することを含む、方法。
（項目１６）
前記結合がインビトロまたはインビボで生じる、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
生体分子／粒子複合体を用いる方法であって、
（ａ）対象の生体分子を含むことが分かっている、または疑われる生物学的サンプルを、項目１による標的化ナノ磁性粒子と接触させて生体分子／粒子複合体を形成させ、
（ｂ）磁場を用いて前記生体分子／粒子複合体を単離すること
を含む、方法。
（項目１８）
磁気カラム分離またはＨＧＭＳ法を使用して、前記生体分子／粒子複合体を単離する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
複合液体、任意に哺乳動物全血または哺乳動物全血の分画と混合されたとき、安定したコロイドとしての挙動を示す、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目２０）
前記タンパク質成分が任意にマレイミド誘導体化タンパク質である、項目５に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目２１）
５年までの期間にわたって保存された際に、その磁性、生物親和性、および粒子サイズ、ならびに標的化特性に有意または有害な変化を示さない、項目１に記載の標的化ナノ磁性粒子。
（項目２２）
標的生体分子種を生物学的サンプルから分離するための方法であって、
（ａ）反応混合物において、対象の生体分子を含むことが分かっている、または疑われる生物学的サンプルを項目１による標的化ナノ磁性粒子と接触させて生体分子／粒子複合体を形成させ、
（ｂ）磁場を用いて前記生体分子／粒子複合体を前記反応混合物から単離すること
を含む、方法。
（項目２３）
複数の標的生体分子種を生物学的サンプルから単離する方法であって、
（ａ）反応混合物において、対象の第一および第二生体分子種を含むことが分かっている、または疑われる生物学的サンプルを、対象の前記第一生体分子種を標的とする項目１による標的化ナノ磁性粒子と接触させて第一標的生体分子／粒子複合体を形成させ、対象の前記第二生体分子種を標的とする標的化浮揚マイクロ粒子と接触させて第二標的生体分子／粒子複合体を形成させ、
（ｂ）磁場を用いて前記第一生体分子／粒子複合体を前記反応混合物から単離し、
（ｃ）前記第二生体分子／粒子複合体を前記反応混合物から分離すること
を含む、方法。
（項目２４）
前記標的化ナノ磁性粒子が約５〜約５００ｎｍ、好ましくは約３０〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記標的化ナノ磁性粒子の前記磁性コア粒子がマグネタイト（Ｆｅ３Ｏ４）結晶を含み、任意にここで前記マグネタイト結晶が約５〜約３００ｎｍの範囲の直径を有する、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
容器中に項目２３による組成物および任意に前記組成物の使用のための取扱説明書を含む、キット。