【手続補正書】
【提出日】平成20年10月23日(2008.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを産生することが可能な組換え宿主細胞を、増殖を好む条件下で、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含有する液体栄養培地中で培養すること、
ｂ）前記細胞による、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨの産生を誘導すること、及び
ｃ）前記細胞又は培地から、天然においてコードされていないアミノ酸を含む前記ｈＧＨを精製すること、
を含む方法。
【請求項２】
１つ又はそれ以上の天然においてコードされていないアミノ酸の添加が、細胞増殖中に継続的に、誘導前の時点、誘導の時点又は誘導後の時点からなる群から選択される時点で行なわれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
１つ又はそれ以上の天然においてコードされていないアミノ酸の添加が誘導と同時に行なわれる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
１つ又はそれ以上の天然においてコードされていないアミノ酸の添加が誘導の約１時間前に行なわれる、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）請求項１の工程ｃ）から得た、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを、ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、陰イオン交換クロマトグラフィーマトリックスと接触させる工程と、
（ｂ）マトリックスからｈＧＨを溶出及び収集する工程と、
（ｃ）工程ｂ）から得たｈＧＨを、ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）マトリックスと接触させる工程と、及び
（ｄ）ＨＩＣマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集して、天然においてコードされていないアミノ酸を含む実質的に純粋なｈＧＨを提供する工程と、
を含む方法。
【請求項６】
前記組換え宿主細胞が、原核細胞及び真核細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記実質的に精製されたｈＧＨが、成熟ｈＧＨ、成熟ｈＧＨバリアント、ｈＧＨポリペプチド及びｈＧＨポリペプチドバリアントからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記方法が、工程ａ）の後に、ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、陰イオン交換クロマトグラフィーから溶出されたｈＧＨをヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーマトリックスと接触させた後、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集する追加工程を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
（ａ）ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を形成するのに十分な条件下で、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを、誘導体化されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる工程と、及び
（ｂ）ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、前記ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を陰イオン交換マトリックスと接触させた後、陰イオン交換クロマトグラフィーマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集して、実質的に精製されたｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を提供することにより、前記ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を単離及び精製する工程と、
を含む方法。
【請求項１０】
ａ）天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを産生することが可能な組換え宿主細胞を、増殖を好む条件下で、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含有する液体栄養培地中で培養する工程と、
ｂ）前記細胞による、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨの産生を誘導する工程と、
ｃ）工程ｂ）から得た、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを、ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、陰イオン交換クロマトグラフィーマトリックスと接触させた後、マトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集する工程と、
ｄ）ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、工程ｃ）の陰イオン交換クロマトグラフィーから溶出されたｈＧＨをヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーマトリックスと接触させた後、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集する工程と、
ｅ）工程ｄ）から得たｈＧＨを、ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）マトリックスと接触させた後、ＨＩＣマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集して、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを提供する工程と、
（ｆ）ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を形成するのに十分な条件下で、工程ｅ）から得られた、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを、誘導体化されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる工程と、及び
ｇ）ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、前記ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を陰イオン交換マトリックスと接触させた後、陰イオン交換クロマトグラフィーマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集して、実質的に精製されたｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を提供することにより、前記ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を単離及び精製する工程と、
を含む、実質的に精製されたｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を単離する方法。
【請求項１１】
ａ）天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを産生することが可能な組換え宿主細胞を、増殖を好む条件下で、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含有する液体栄養培地中で培養する工程と、
ｂ）前記細胞による、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨの産生を誘導する工程と、
ｃ）工程ｂ）から得た、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを、ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、陰イオン交換クロマトグラフィーマトリックスと接触させた後、マトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集する工程と、
ｄ）工程ｃ）から得たｈＧＨを、ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）マトリックスと接触させた後、ＨＩＣマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集して、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを提供する工程と、
ｅ）ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を形成するのに十分な条件下で、工程ｄ）から得られた、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを、誘導体化されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる工程と、及び
ｆ）ｈＧＨのマトリックスへの結合を可能とする条件下で、前記ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を陰イオン交換マトリックスと接触させた後、陰イオン交換クロマトグラフィーマトリックスからｈＧＨを溶出し及び収集して、実質的に精製されたｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を提供することにより、前記ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を単離及び精製する工程と、
を含む、実質的に精製されたｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を単離する方法。
【請求項１２】
ａ）天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを産生することが可能な組換え宿主細胞を、増殖を好む条件下で、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含有する液体栄養培地中で培養する工程と、
ｂ）前記細胞による、前記天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨの産生を誘導する工程と、
ｃ）ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を形成するのに十分な条件下で、工程ｂ）から得られた、天然においてコードされていないアミノ酸を含むｈＧＨを、誘導体化されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる工程と、及び
ｄ）前記ｈＧＨ−ＰＥＧ結合体を精製する工程と、
を含む方法。