【手続補正書】
【提出日】令和1年10月10日(2019.10.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非多能性細胞を初期化する方法であって、
ａ）（ｉ）ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＫＬＦ４、ＬＩＮ２８、Ｃ−ＭＹＣ、ＥＣＡＴ１、ＵＴＦ１、ＥＳＲＲＢ、ＳＶ４０ＬＴ、ＨＥＳＲＧ、ＣＤＨ１、ＴＤＧＦ１、ＤＰＰＡ４、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＺＩＣ３及びＬ１ＴＤ１からなる群から選択した１つ又は複数のポリペプチドをコードする１つ又は複数のポリヌクレオチドと、（ｉｉ）ＨＥＳＲＧ、ＣＤＨ１、ＴＤＧＦ１、ＤＰＰＡ４、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＺＩＣ３及びＬ１ＴＤ１からなる群から選択した１つ又は複数のポリペプチドをコードする１つ又は複数のポリヌクレオチドとを、前記非多能性細胞に導入すること、又は、
ｂ）（ｉ）ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＫＬＦ４、ＬＩＮ２８、Ｃ−ＭＹＣ、ＥＣＡＴ１、ＵＴＦ１、ＥＳＲＲＢ、ＳＶ４０ＬＴ、ＨＥＳＲＧ、ＣＤＨ１、ＴＤＧＦ１、ＤＰＰＡ４、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＺＩＣ３及びＬ１ＴＤ１からなる群から選択した１つ又は複数のポリペプチドと、（ｉｉ）ＨＥＳＲＧ、ＣＤＨ１、ＴＤＧＦ１、ＤＰＰＡ４、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＺＩＣ３及びＬ１ＴＤ１からなる群から選択した１つ又は複数のポリペプチドとを、前記非多能性細胞に接触させることを含む、方法。
【請求項２】
１つ又は複数のポリヌクレオチドが１つ又は複数のコンストラクトに含まれ、それぞれのコンストラクトは同じ又は異なる数のポリヌクレオチド又は／及びポリヌクレオチドの組み合わせを含み、前記１つ又は複数のコンストラクトはベクターにより非多能性細胞に導入される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
１つ又は複数のポリヌクレオチドを前記非多能性細胞に導入することは、１つ又は複数のベクターであって、各ベクターが（ｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも２つのＯＣＴ４、（ｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ、（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ、（ｉｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＣＡＴ１及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＵＴＦ１、（ｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ、及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ、（ｖｉ）ポリヌクレオチドをコードする、ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧのうちの少なくとも１つ、（ｖｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする、Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１のうちの少なくとも１つ、又は、（ｖｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＮＭＴ３Ｂ、を含むものである前記１つ又は複数のベクターを導入することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
１つ又は複数のポリヌクレオチドを前記非多能性細胞に導入することは、
（ａ）１つ又は複数のベクターであって、各ベクターが（ｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも２つのＯＣＴ４、（ｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ、（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ、（ｉｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＣＡＴ１及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＵＴＦ１、又は、（ｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ、を含むものである前記１つ又は複数のベクターを導入することと、
（ｂ）１つ又は複数のベクターであって、各ベクターが（１）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＣＤＨ１、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＺＩＣ３及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＨＥＳＲＧ、（ｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＬ１ＴＤ１、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＰＰＡ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＴＤＧＦ１、又は、（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＮＭＴ３Ｂ、を含むものである前記１つ又は複数のベクターを導入することとを含む、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、
（ａ）Ｎａｎｏｇ、ＥＳＲＲＢ及びＯｃｔ４のうちの１つ又は複数をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド、
（ｂ）ＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１のうちの一方又は両方をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド、
（ｃ）Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１のうちの１つ又は複数をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド、又は、
（ｄ）ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧのうちの１つ又は複数をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド、を含むベクターのうちの少なくとも１つによって導入する、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、Ｏｃｔ４をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むベクターと、
（ａ）Ｎａｎｏｇ、ＥＳＲＲＢ及びＯｃｔ４をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、
（ｂ）ＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、
（ｃ）Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、ならびに、
（ｄ）ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧをコードするポリヌクレオチドを含むベクター、のうちの少なくとも１つとによって導入する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記ベクターが、レトロウイルス、センダイウイルス、アデノウイルス、エピソーム、プラスミド、ミニサークル、発現カセットを有するベクターシステム、又はmRNAである、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記ベクターはセンダイウイルスである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
コンストラクトに含まれる前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、少なくとも１つの自己切断ポリペプチドにより連結されている、請求項２記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が、以下の特徴のうち少なくとも一つを有する、請求項１記載の方法；
（ｉ）前記非多能性細胞が多能性細胞に初期化される、（ｉｉ）前記非多能性細胞が体細胞である、又は（ｉｉｉ）前記１つ又は複数のポリペプチドがＳＯＸ２、ＫＬＦ４、及びｃ−Ｍｙｃの少なくとも一つを除外する。
【請求項１１】
非多能性細胞を多能性細胞に初期化することに関する組成物であって、非多能性細胞の集団を含むものであり、前記非多能性細胞は、（ｉ）ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＫＬＦ４、ＬＩＮ２８、Ｃ−ＭＹＣ、ＥＣＡＴ１、ＵＴＦ１、ＥＳＲＲＢ、ＳＶ４０ＬＴからなる群から選択した１つ又は複数のポリペプチド又は外因性ポリヌクレオチド及び、（ｉｉ）ＨＥＳＲＧ、ＣＤＨ１、ＴＤＧＦ１、ＤＰＰＡ４、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＺＩＣ３及びＬ１ＴＤ１からなる群から選択した１つ又は複数のポリペプチド又は外因性ポリヌクレオチドとを含む、組成物。
【請求項１２】
非多能性細胞の集団を更に含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
１つ又は複数の外因性ポリヌクレオチドが１つ又は複数のコンストラクトに含まれ、それぞれのコンストラクトが同じ又は異なる数の同一ポリペプチド及び／又はポリペプチドの組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記１つ又は複数のコンストラクトが、以下のうち少なくとも一つを含む、請求項１３に記載の組成物；
（ｉ）ＯＣＴ４、ＥＳＲＲＢ、ＥＣＡＴ１、ＵＴＦ１、及びＮＡＮＯＧからなる群から選択される１つ又は複数のポリペプチドをコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド； ＣＤＨ１、ＺＩＣ３、ＨＥＳＲＧ、Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４、ＴＤＧＦ１、及びＤＮＭＴ３Ｂからなる群から選択される１つ又はそれ以上のポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の追加のポリヌクレオチド、（ｉｉ）ＯＣＴ４をコードする少なくとも２つのポリヌクレオチド、（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ、（ｉｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ、（ｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＣＡＴ１及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＵＴＦ１、 及び/又は、（ｖｉ）少なくとも１つのＯＣＴ４をコードするポリヌクレオチド、少なくとも１つのＥＳＲＲＢをコードするポリヌクレオチド、及び少なくとも１つのＮＡＮＯＧをコードするポリヌクレオチド、
ここで、１つ又は複数のコンストラクトは、１つ又は複数のＳＯＸ２、ＫＬＦ、及びｃ-Ｍｙｃを場合により含まない。
【請求項１５】
前記一つ又は複数のコンストラクトが、以下のうち少なくとも一つを含む、請求項１３記載の組成物：（ｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＣＤＨ１、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＺＩＣ３及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＨＥＳＲＧ、（ｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＬ１ＴＤ１、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＰＰＡ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＴＤＧＦ１、ならびに／又は、（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＮＭＴ３Ｂ。
【請求項１６】
前記１つ又は複数のコンストラクトが以下の少なくとも一つを含む、請求項１３記載の組成物。
（ｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも２つのＯＣＴ４、（ｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ、（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ、（ｉｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＣＡＴ１及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＵＴＦ１、（ｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ、（ｖｉ）ポリヌクレオチドをコードする、ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧのうちの少なくとも１つ、（ｖｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする、Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１のうちの少なくとも１つ、又は、（ｖｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＮＭＴ３Ｂ。
【請求項１７】
前記１つ又はそれ以上のコンストラクトが、グループ（ａ）からの少なくとも１つの組み合わせ及びグループ（ｂ）からの少なくとも１つの組み合わせを含む、請求項１３記載の組成物：
（ａ）：
（ｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも２つのＯＣＴ４；
（ｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ；
（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ；
（ｉｖ）少なくとも１つのＥＣＡＴ１をコードするポリヌクレオチド及び少なくとも１つのＵＴＦ１をコードするポリヌクレオチド； 又は
（ｖ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＯＣＴ４、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＥＳＲＲＢ、及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＮＡＮＯＧ。 及び、
（ｂ）：
（ｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＣＤＨ１、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＺＩＣ３、及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＨＥＳＲＧ；
（ｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＬ１ＴＤ１、ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＰＰＡ４、及びポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＴＤＧＦ１； 又は
（ｉｉｉ）ポリヌクレオチドをコードする少なくとも１つのＤＮＭＴ３Ｂ。
【請求項１８】
非多能性細胞が以下の組み合わせの少なくとも１つを含む、請求項１２に記載の組成物：
（ａ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＮａｎｏｇ、ＥＳＲＲＢ及びＯＣＴ４、
（ｂ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１、
（ｃ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＬ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１、又は
（ｄ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＣＤＨ１、ＺＩＣ３、及びＨＥＳＲＧ。
【請求項１９】
１つ又は複数のコンストラクトが、レトロウイルス、センダイウイルス、アデノウイルス、エピソーム、プラスミド、ミニサークル、又はｍＲＮＡによって非多能性細胞に導入され得る、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２０】
非多能性細胞を初期化する方法であって、
（ａ）ＯＣＴ４及び、任意にＫＬＦ、Ｓｏｘ２、Ｍｙｃ、Ｎａｎｏｇ及びＥＳＲＲＢのうちの１つ又は複数とをコードする、１つ又は複数のポリヌクレオチドを、前記非多能性細胞に導入すること、及び、
（ｂ）ＥＣＡＴ１、ＵＴＦ１、Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４、ＴＤＧＦ１、ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧのうちの少なくとも１つをコードする、１つ又は複数のポリヌクレオチドを、前記非多能性細胞に導入すること、及び、
それによって多能性細胞を取得することとを含む、方法。
【請求項２１】
前記（ａ）及び（ｂ）の１つ又は複数のポリヌクレオチドは、１つ又は複数のコンストラクトに含まれ、及び前記コンストラクトは同じ又は異なる数の同一ポリペプチド及び／又はポリペプチドの組み合わせを含む、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
１つ以上のコンストラクトが、以下のうちの少なくとも１つを含む、請求項２１に記載の方法：
（ａ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＮａｎｏｇ、ＥＳＲＲＢ及びＯＣＴ４;
（ｂ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１;
（ｃ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＬ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１; 又は
（ｄ）１つ又は複数のポリヌクレオチドをコードするＣＤＨ１、ＺＩＣ３、及びＨＥＳＲＧ。
【請求項２３】
少なくとも１つのコンストラクトが、ＯＣＴ４をコードする少なくとも２つのポリヌクレオチドを含む、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
１つ以上のコンストラクトが、レトロウイルス、センダイウイルス、アデノウイルス、エピソーム、プラスミド、ミニサークル、又はｍＲＮＡによって非多能性細胞に導入される、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
ベクターコンストラクトがセンダイウイルスによって導入される、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
センダイウイルスを用いて非多能性細胞を再プログラミングする方法であって、
（ａ）ＯＣＴ４及び、１つ又はそれ以上のＫＬＦ、Ｓｏｘ２、Ｍｙｃ、Ｎａｎｏｇ及びＥＳＲＲＢを任意にコードする１つ又はそれ以上のポリヌクレオチドを、前記非多能性細胞に導入すること、及び、
（ｂ）ＥＣＡＴ１、ＵＴＦ１、Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４、ＴＤＧＦ１、ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧのうちの少なくとも１つをコードする１つ又はそれ以上のポリヌクレオチドを、前記非多能性細胞に導入すること、及び、
それによって多能性細胞を取得することを含む、方法。
【請求項２７】
（ａ）及び（ｂ）の前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、１つ又は複数のベクターによって導入され、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、同一又は異なるポリペプチドをコードする、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
ベクターのうちの１つ又は複数が、
（ａ）Ｎａｎｏｇ、ＥＳＲＲＢ及びＯｃｔ４のうちの１つ又は複数をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド、
（ｂ）ＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１のうちの一方又は両方をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド、
（ｃ）Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１のうちの１つ又は複数をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド、又は、
（ｄ）ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧのうちの１つ又は複数をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ又は複数、を含むコンストラクトを含む、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、Ｏｃｔ４をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むベクターと、
（ａ）Ｎａｎｏｇ、ＥＳＲＲＢ及びＯｃｔ４をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、
（ｂ）ＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、
（ｃ）Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、ならびに、
（ｄ）ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧをコードするポリヌクレオチドを含むベクター、のうちの少なくとも１つとを介して導入するものであって、
前記ベクターは、センダイウイルスによって運ばれる、請求項２６記載の方法。
【請求項３０】
センダイウイルスを用いて非多能性細胞を初期化する方法であって、
（ａ）ＯＣＴ４と、任意にＫＬＦ、Ｓｏｘ２、Ｍｙｃ、Ｎａｎｏｇ及びＥＳＲＲＢのうちの１つ又は複数とをコードするポリヌクレオチドを、前記非多能性細胞に導入することと、
（ｂ）
（ｉ）ＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１のうちの一方又は両方をコードするポリヌクレオチド、
（ｉｉ）Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１のうちの１つ又は複数をコードするポリヌクレオチド、又は、
（ｉｉｉ）ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧのうちの１つ又は複数をコードするポリヌクレオチド、を含むコンストラクトのうちの１つを前記非多能生細胞に導入することと、
それによって多能性細胞を取得することとを含む、方法。
【請求項３１】
前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、ＯＣＴ４をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むベクターと、
（ａ）Ｎａｎｏｇ、ＥＳＲＲＢ及びＯＣＴ４をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、
（ｂ）ＥＣＡＴ１及びＵＴＦ１をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、
（ｃ）Ｌ１ＴＤ１、ＤＰＰＡ４及びＴＤＧＦ１をコードするポリヌクレオチドを含むベクター、ならびに、
（ｄ）ＣＤＨ１、ＺＩＣ３及びＨＥＳＲＧをコードするポリヌクレオチドを含むベクター、のうちの少なくとも１つとを介して導入するものであって、
前記ベクターは、センダイウイルスによって運ばれる、請求項３０記載の方法。