【手続補正書】
【提出日】平成19年5月16日(2007.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚より採取した角層細胞の形状の鑑別法であって、落射光条件下で撮影した角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、該画像に処理を行って得られる特性値を指標とすることを特徴とする、角層細胞の鑑別法。
【請求項２】
特性値の算出が自動処理により行われることを特徴とする、請求項１に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項３】
特性値が、角層細胞面積及び／又は角層細胞の剥がれ具合であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項４】
特性値として、角層細胞面積と角層細胞の剥がれ具合を同時に定量することを特徴とする、請求項１〜３何れか１項に記載の鑑別法。
【請求項５】
特性値として、角層細胞の面積を計測する場合に於いて、前記角層細胞の拡大イメージが、非染色の角層細胞標本のモノクロ画像、又は拡大カラー画像をモノクロ画像に変換したものであることを特徴とする、請求項１〜４何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項６】
前記画像処理が、フィルター処理、二値化処理、画像形状加工処理、輝度による画像選択処理、絶対最大長による画像選択処理、周囲長による画像選択処理、針状比による画像選択処理及び楕円の長軸短軸比による画像選択処理から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする、請求項１〜５何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項７】
次に示す工程に従って行われることを特徴とする、請求項１〜５の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（工程１）  皮膚の状態をカラー画像に取り込みモノクロ画像に変換するか、又は直接モノクロ画像として取り込む。
（工程２）  工程１によって得られたモノクロ画像に、フィルター処理を行う。
（工程３）  工程２によって得られたフィルター処理画像に、二値化処理を行う。
（工程４）  工程３によって得られた二値化処理画像に、画像形状加工処理を行う。
（工程５）  工程４によって得られた画像形状加工処理の画像に、面積、周囲長、針状比、輝度ヒストグラムの画像計測処理指標による計測対象の選択又は除去を行う。
（工程６）  工程５によって得られた画像より、角層細胞面積を計測し皮膚特性を鑑別する。
【請求項８】
特性値として、角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於いて、角層細胞標本の拡大イメージを画像として取り込み、該画像から背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分３領域の画像を抽出し、該３領域の画像の物理量を測定し、該物理量及び／又はその変換値を指標とすることを特徴とする、請求項４に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項９】
角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於ける、前記角層細胞の拡大イメージが、非染色の角層細胞標本のモノクロ画像、又は拡大カラー画像をモノクロ画像に変換したものであることを特徴とする、請求項８に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項１０】
角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於ける、前記３領域の画像を抽出するにあたり、それぞれの画像の輝度領域を設定し、抽出を行うことを特徴とする、請求項８又は９に記載の鑑別法。
【請求項１１】
角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於ける、前記画像計測から得られる物理量として、輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び画像の位置に関する物理量から選択される１種乃至は２種以上を使用することを特徴とする、請求項８〜１０の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項１２】
角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於いて、前記物理量の変換値として、前記物理量の多変量解析を行い、多変量解析の結果を指標とすることを特徴とする、請求項８〜１１の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項１３】
角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於いて、次に示す工程を構成要素とすることを特徴とする、請求項８〜１２何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（工程１）  角層細胞をテープストリッピング法により採取し、拡大ビデオを用い、モノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２）  取り込んだ画像がカラー画像であればモノクロ画像に変換し、該モノクロ画像又は直接取り込んだモノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分を判別し、背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
（工程３）  背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
（工程４）  予め、剥がれ具合の程度が計測されている、複数の角層細胞標本であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について、工程１〜工程３で物理量を計測し、この物理量と剥がれ具合について、多変量解析を行い作成した回帰式に工程３によって得られた、試験角層細胞標本の物理量を代入し角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する。
【請求項１４】
皮膚より採取した角層細胞の形状の鑑別法であって、角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、該画像に処理を行って得られる特性値を指標とし、該特性値として、角層細胞面積と角層細胞の剥がれ具合が同時に定量するものであり、次の工程を経て行うことを特徴とする、請求項４〜１３何れか１項に記載の角層細胞の形状の鑑別法。
（工程１）  角層細胞をテープストリッピング法により採取し、拡大ビデオを用い、モノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２）  工程１で取り込んだ画像がカラー画像であればモノクロ画像に変換した後、
次の独立した２種の処理工程で処し、角層細胞の面積と角層細胞の剥がれ具合を計測する工程。
（処理工程１）
１）モノクロ画像に、フィルター処理を行う工程。
２）１の工程によって得られたフィルター処理画像に、二値化処理を行う工程。
３）２の工程によって得られた二値化処理画像に、画像形状加工処理を行う工程。
４）３の工程によって得られた画像形状加工処理の画像に、面積、周囲長、針状比、輝度ヒストグラムの画像計測処理指標による計測対象の選択又は除去を行う工程。
５）４の工程によって得られた画像より、角層細胞面積を計測する工程。
（処理工程２）
１）モノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分を判別し、背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
２）背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
３）予め、剥がれ具合の程度が計測されている、複数の角層細胞標本であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について、１、２の工程で物理量を計測し、この物理量と剥がれ具合について、多変量解析を行い作成した回帰式に処理工程２  ２）の工程によって得られた、試験角層細胞標本の物理量を代入し角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する工程。
（工程３）  工程２で得られた計測値より、角層細胞を鑑別する工程。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
これらの課題を克服すべく、非染色的な観察及び評価技術として、ビデオマイクロスコープを応用した観察装置（特許文献６参照）、蛍光抗体を用いた方法（特許文献７参照）や紫外線照射下で角層細胞を観察する方法（特許文献８参照）が試みられている。しかし、観察装置では細胞と細胞との接合状況が不明瞭であり、蛍光抗体を用いた方法では、蛍光抗体が非常に高価な上に処理工程が多く相応な空間が必要であり、また、紫外線照射による角層細胞の観察では、角層細胞の形状画像の鮮明さは十分でない上に紫外線の安全性という懸念があった。一方では、画像処理による精度と迅速性の向上を図ろうとする評価技術もあり、例えば、透過光量に基づいて角層細胞剥離量を判定する方法（特許文献９参照）、透過画像に対して画像処理を行って角層細胞剥離量と角層細胞剥離均一性の両方を解析する方法（特許文献１０参照）、角層細胞の画像形状に対して自己相関マスクパターンを用いた学習型画像計測システムによって、角層細胞面積や角層細胞の剥がれ具合等の分析を行う技術（特許文献１１参照）も知られている。しかし、透過光量の評価では、剥離角層細胞の絶対量のみしか知ることができず、画像処理による方法の角層細胞剥離均一性では、粒子化された細胞のみが対象であり、実際の角層細胞の剥がれ具合における、角層細胞がまとまった剥離が頻繁に観察されるか、何層も重なっているのか、若しくは１個１個離れて剥離しているのか、という重要な特性を鑑別する技術は全く知られていなかった。また、マスクパターンによる面積や角層細胞の剥がれ具合の評価では、迅速であっても精度不足であり、面積や角層細胞の剥がれ具合等を迅速且つ的確に把握し鑑別する技術は全く知られていなかった。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
このような状況を鑑みて、本発明者らは、どこでも、迅速且つ精度良く、染色或いは非染色の条件下において、角層細胞の形状、特に角層細胞の面積を把握し肌特性を評価できる角層細胞の鑑別技術を求めて鋭意研究努力を重ねた結果、角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込んだ後、モノクロ画像に、フィルター処理、二値化処理、画像形状加工処理又は画像選択処理の画像処理を行って得られる角層細胞面積、及び／又は、モノクロ画像から背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分との３領域の画像を抽出し、該画像の物理量の多変量解析の結果から得られる角層細胞の剥がれ具合、を指標とする角層細胞の鑑別法によって、どこでも、迅速且つ精度良く、角層細胞面積と角層細胞の剥がれ具合の角層細胞の鑑別を同時に行えることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
（１）皮膚より採取した角層細胞の形状の鑑別法であって、落射光条件下で撮影した角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、該画像に処理を行って得られる特性値を指標とすることを特徴とする、角層細胞の鑑別法。
（２）特性値の算出が自動処理により行われることを特徴とする、（１）に記載の角層細胞の鑑別法。
（３）特性値が、角層細胞面積及び／又は角層細胞の剥がれ具合であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の角層細胞の鑑別法。
（４）特性値として、角層細胞面積と角層細胞の剥がれ具合を同時に定量することを特徴とする、（１）〜（３）何れか１項に記載の鑑別法。
（５）特性値として、角層細胞の面積を計測する場合に於いて、前記角層細胞の拡大イメージが、非染色の角層細胞標本のモノクロ画像、又は拡大カラー画像をモノクロ画像に変換したものであることを特徴とする、（１）〜（４）何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（６）前記画像処理が、フィルター処理、二値化処理、画像形状加工処理、輝度による画像選択処理、絶対最大長による画像選択処理、周囲長による画像選択処理、針状比による画像選択処理及び楕円の長軸短軸比による画像選択処理から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする、請求項１〜５何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（７）次に示す工程に従って行われることを特徴とする、（１）〜（５）の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（工程１）  皮膚の状態をカラー画像に取り込みモノクロ画像に変換するか、又は直接モノクロ画像として取り込む。
（工程２）  工程１によって得られたモノクロ画像に、フィルター処理を行う。
（工程３）  工程２によって得られたフィルター処理画像に、二値化処理を行う。
（工程４）  工程３によって得られた二値化処理画像に、画像形状加工処理を行う。
（工程５）  工程４によって得られた画像形状加工処理の画像に、面積、周囲長、針状比、輝度ヒストグラムの画像計測処理指標による計測対象の選択又は除去を行う。
（工程６）  工程５によって得られた画像より、角層細胞面積を計測し皮膚特性を鑑別する。
（８）特性値として、角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於いて、角層細胞標本の拡大イメージを画像として取り込み、該画像から背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分３領域の画像を抽出し、該３領域の画像の物理量を指標とすることを特徴とする、（４）に記載の角層細胞の鑑別法。
（９）角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於ける、前記角層細胞の拡大イメージが、非染色の角層細胞標本のモノクロ画像、又は拡大カラー画像をモノクロ画像に変換したものであることを特徴とする、（８）に記載の角層細胞の鑑別法。
（１０）角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於ける、前記３領域の画像を抽出するにあたり、それぞれの画像の輝度領域を設定し、抽出を行うことを特徴とする、（８）又は（９）に記載の鑑別法。
（１１）角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於ける、前記画像計測から得られる物理量として、輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び画像の位置に関する物理量から選択される１種乃至は２種以上を使用することを特徴とする、（８）〜（１０）の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（１２）角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於ける、前記物理量の多変量解析を行い、多変量解析の結果を指標とすることを特徴とする、（８）〜（１１）の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（１３）角層細胞の剥がれ具合を計測する場合に於いて、次に示す工程を構成要素とすることを特徴とする、（８）〜（１２）何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（工程１）  角層細胞をテープストリッピング法により採取し、拡大ビデオを用い、モノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２）  取り込んだ画像がカラー画像であればモノクロ画像に変換し、該モノクロ画像又は直接取り込んだモノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分を判別し、背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
（工程３）  背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
（工程４）  予め、剥がれ具合の程度が計測されている、複数の角層細胞標本であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について、工程１〜工程３で物理量を計測し、この物理量と剥がれ具合について、多変量解析を行い作成した回帰式に工程３によって得られた、試験角層細胞標本の物理量を代入し角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する。
（１４）皮膚より採取した角層細胞の形状の鑑別法であって、角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、該画像に処理を行って得られる特性値を指標とし、該特性値として、角層細胞面積と角層細胞の剥がれ具合が同時に定量するものであり、次の工程を経て行うことを特徴とする、（４）〜（１３）何れか１項に記載の角層細胞の形状の鑑別法。（工程１）  角層細胞をテープストリッピング法により採取し、拡大ビデオを用い、モノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２）  工程１で取り込んだ画像がカラー画像であればモノクロ画像に変換した後、次の独立した２種の処理工程で処し、角層細胞の面積と角層細胞の剥がれ具合を計測する工程。
（処理工程１）
１）モノクロ画像に、フィルター処理を行う工程。
２）１の工程によって得られたフィルター処理画像に、二値化処理を行う工程。
３）２の工程によって得られた二値化処理画像に、画像形状加工処理を行う工程。
４）３の工程によって得られた画像形状加工処理の画像に、面積、周囲長、針状比、輝度ヒストグラムの画像計測処理指標による計測対象の選択又は除去を行う工程。
５）４の工程によって得られた画像より、角層細胞面積を計測する工程。
（処理工程２）
１）モノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分を判別し、背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
２）背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
３）予め、剥がれ具合の程度が計測されている、複数の角層細胞標本であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について、１、２の工程で物理量を計測し、こ
の物理量と剥がれ具合について、多変量解析を行い作成した回帰式に処理工程２  ２）の工程によって得られた、試験角層細胞標本の物理量を代入し角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する工程。
（工程３）  工程２で得られた計測値より、角層細胞を鑑別する工程。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明は、どこでも、迅速に且つ精度良く、染色或いは非染色の条件下において、角層細胞の形状、特に角層細胞面積及び／又は角層細胞の剥がれ具合を把握し、肌特性を評価できる角層細胞の鑑別方法であって、皮膚より粘着テープ等を用いて採取した角層細胞標本の落射光条件下で撮影した角層細胞の拡大イメージを画像として取り込んだ後、該画像にフィルター処理、二値化処理、或いは輝度若しくは周囲長による画像選択処理等、の画像処理を行うことによって得られる角層細胞面積、及び／又は、該画像から、背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分との３領域の画像を抽出し、この物理量を計測し、該物理量より得られる角層細胞の剥がれ具合、の特性値を同時に鑑別することを特徴とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
前記落射光条件下とは、上又は斜め方向から標本に対して光源から照射し、対物レンズを通して標本を観察する条件である。一般的には、標本に対して透過させた光を拡大して観察する透過光条件では、光が透過しやすい標本の観察に適し、一方、落射光条件においては光が透過しにくい標本の観察に適している。前記拡大イメージを取り込む画像としては、モノクロ画像で取り込むこともできるし、カラー画像として取り込むこともできる。カラー画像として取り込んだ場合には、後述のソフトウェアを用いて、これをモノクロ画像に変換することが好ましい。この様な処理をすることにより、因子が３種ある画像を、因子を輝度の１つのみにすることができるためである。又、この様な拡大イメージを取り込むべき角層細胞の標本としては、テープストリッピング法により採取した、角層細胞を染色することなく用いることもできる。通常は、角層細胞の剥がれ具合については、染色工程を経て得られた標本でなければその程度を鑑別できないが、本発明の鑑別法による落射光条件下で撮影した角層細胞の拡大イメージの画像においては、染色することなく鑑別でき、染色に要する時間と、環境の負担を軽減することができることを本発明者らは見出している。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
特性値として、角層細胞の剥がれ具合を鑑別する場合においては、角層細胞を採取し、拡大イメージとして取り込まれたモノクロ画像に対して、背景部、角層細胞の他の角層細
胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分との３領域を抽出処理し、該抽出領域の画像計測を行って得られる輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び／又は画像の位置に関する物理量等のデータを作成し、該データを、予め、標準角層サンプルを同様に処理し得られた物理量と、角層細胞の剥がれ具合の肉眼判定値とを多変量解析して、作成しておいた、予測式（回帰式）に導入して角層細胞の剥がれ具合を推定する。この鑑別法のフローチャートを図５に示す。又、好ましい作業形態を工程毎に分けて、記述すれば、次に示す如くになる。かかる工程は、これ以外の鑑別の的確性を向上させる工程を含むこともできるし、多少の順番を本発明の効果を損なわない範囲で変えることもできる。
（工程１）  角層細胞をテープストリッピング法により採取し、拡大ビデオを用い、モノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２）  取り込んだ画像がカラー画像であれば、モノクロ画像に変換し、該モノクロ画像又は直接取り込んだモノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分とを判別し、背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
（工程３）  背景画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
（工程４）  予め、剥がれ具合の程度が計測されている、複数の角層細胞標本であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について、工程１〜工程３で物理量を計測し、この物理量と剥がれ具合について、多変量解析を行い作成した回帰式に工程３によって得られた、試験角層細胞標本の物理量を代入し角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
前記物理量を用いて、角層細胞の剥がれ具合等の角層細胞の鑑別を行うには、後述する予測式を利用する。かかる予測式は、予め剥がれ具合の異なって分布する、複数の標準角層細胞標本を用意し、前記の手順に従って、前記の物理量を計測し、該計測物理量を説明変数とし、剥がれ具合の程度を表す数値を目的変数とし、多変量解析より求めておくことが好ましい。かような予測式を用いることにより、従前の技術では、染色条件（図６参照）や非染色条件（図７参照）での角層細胞の剥がれ具合の評価が人による目視評価では変わる場合が存するため、これが角層細胞の剥がれ具合の評価を困難にしていたが、本発明では、この様に客観的な物理量を設定し、これを予測式に代入することで、かかる判定上のバラツキを克服したものである。この様な手技を用いることにより、角層細胞が不均一で複雑に重なった状態にあり、角層細胞の剥がれ具合の評価が困難であったのが、物理量を特定し、重み付けを行うことにより、単純化、且つ、的確化できたためである。したがって、染色又は非染色の角層細胞の剥がれ具合の評価を、染色又は非染色の角層細胞の計測結果から推察することによって解決できる。即ち、予測式に染色又は非染色の角層細胞評価から得られる前記物理量を導入することで、染色又は非染色の角層細胞の剥がれ具合を鑑別できる。また、前記物理量と後述する評価者による角層細胞の剥がれ具合からなる多変量データは、データベース（ＤＢ）として保存し、必要に応じて多変量解析を行って予測式を作成することによって鑑別精度の向上を図ることもできる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
該予測式は以下のように作成されることが好ましい。即ち、５０名以上、より好ましくは１００名以上の女性被験者の頬部より粘着テープを用いて採取した角層細胞を２分割し、一方の角層細胞をゲンチアナバイオレットで染色し、標準化された評価方式に従って訓練された評価者が角層細胞の剥がれ具合の評価を行う。人数は、多変量解析の正確性を維持するために好適な数値である。２分割した残りの非染色の角層細胞をカラー画像として取り込み、モノクロ画像に変換後、背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分の３領域の抽出処理し、該領域画像の画像計測を行って得られる輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び画像の位置に関する物理量を算出する。これらの物理量データ及び角層細胞の剥がれ具合の評価値について多変量解析を行う。該多変量解析として、例えば、重回帰分析、判別分析、因子分析、主成分分析、数量化一類、数量化二類及び数量化三類等が例示できる。これらの内、特に好ましいのは、重回帰分析、判別分析及び数量化一類である。これは、重回帰分析、判別分析及び数量化一類によって作成される予測式を利用できるためである。例えば、４５項目の物理量を説明変数とし、前記染色した角層細胞の剥がれ具合の評価値を目的変数に重回帰分析を行い、重回帰式を求める。該重回帰式をもって予測式とする。かような、予め設定された、予測式を用いて、これから角層細胞の鑑別を行われるべき被験者の角層細胞標本における角層細胞の剥がれ具合を求め、皮膚水分量、肌性、肌質等の角層細胞の鑑別を行うことができる。尚、前記の多変量解析において、角層細胞の剥がれ具合の評価値の対象を非染色の角層細胞に変更したり、物理量を算出する対象を染色した角層細胞に変更することもでき、対応する組み合わせ毎に、前記の多変量解析を行い予測式を作成することが好ましい。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の鑑別対象である角層細胞について、染色と非染色の角層細胞面積における測定精度を検討した。女性被験者の頬部より採取した非染色の角層細胞１００個について、（株)モリテックスのコスメティック用マイクロスコープを使用し、図３及び図４の手順に従い、７００倍の計測倍率にて角層細胞面積を計測した。続けて、前記の角層細胞１００個をゲンチアナバイオレットで染色し、同じ倍率にて染色した角層細胞面積を計測した。非染色と染色の角層細胞面積の相関係数は０．９８２を示した。また、図２に本実施例に使用した角層細胞である染色と非染色の角層細胞を示す。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
染色条件における角層細胞の剥がれ具合の目視評価値と、非染色条件の角層細胞の本発明による染色条件の角層細胞剥がれ具合の推定値との関係から、本発明の精度を検討した。１８〜６２才までの女性被験者の頬部より採取した角層細胞標本２９８枚を２分した。半数の１４９枚を用い、最初に、非染色細胞標本に対して実施例１と同様に自動評価を行
い、続けてその非染色の角層細胞標本を染色し、染色した角層細胞の剥がれ具合の目視評価に対して、自動評価の結果を用い重回帰分析による予測式を作成した。残りの１４９枚の角層細胞標本に対して、この予測式を適用し、染色した角層細胞の剥がれ具合の目視評価値と、非染色角層細胞を利用した本発明による推定値との関係を検討した。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
【図１】角層細胞標本を画像に取り込むマイクロスコープを示す図である（図面代用写真）。
【図２】染色と非染色の角層細胞の画像の比較を示す図である（図面代用写真）。
【図３】角層細胞面積の鑑別手順のフローチャートを示す構成図である。
【図４】フローチャートに基づく画像処理の１例を示す図である（図面代用写真）。
【図５】角層細胞の剥がれ具合の鑑別手順のフローチャートを示す構成図である。
【図６】染色した角層細胞の画像を示す図である（図面代用写真）。
【図７】非染色の角層細胞の画像を示す図である（図面代用写真）。