【手続補正書】
【提出日】平成19年4月6日(2007.4.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
発現がｐ２１によって調節される哺乳類遺伝子についての、プロモーターの転写制御下でレポーター遺伝子をコードする第一の組換え発現構築物、および哺乳類ｐ２１遺伝子をコードする第二の組換え発現構築物を包含し、ｐ２１の発現が、それにより哺乳類細胞中で実験的に誘導されることを特徴とする哺乳類細胞。
【請求項２】
哺乳類ｐ２１遺伝子をコードする組換え発現構築物が、誘導性異種プロモーターの転写制御下にあり、組換え発現構築物から得たｐ２１の発現が、組換え細胞を、誘導性プロモーターから転写を誘導する誘導剤に接触させることによるか、またはこのようなプロモーターから転写を阻害する剤を除去することによって仲介される請求項１に記載の哺乳類細胞。
【請求項３】
レポーター遺伝子が、ホタル・ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質、またはアルカリ性ホスファターゼをコードする請求項１に記載の哺乳類細胞。
【請求項４】
レポーター遺伝子は、その発現が、ｐ２１により抑制される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある請求項１に記載の哺乳類細胞。
【請求項５】
哺乳類遺伝子プロモーターが、表Ｉに同定される哺乳類遺伝子のプロモーターである、請求項４に記載の哺乳類細胞。
【請求項６】
レポーター遺伝子は、その発現が、ｐ２１により誘導される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項１に記載の哺乳類細胞。
【請求項７】
哺乳類遺伝子プロモーターが、表ＩＩに同定される哺乳類遺伝子のプロモーターである、請求項６に記載の哺乳類細胞。
【請求項８】
プロモーターが、遺伝子ＯＲＣ１、ＰＲＣ１、ＸＲＣＣ９、ＣＤＣ２、サイクリンＢ１、ＡＩＫ１、ＣＥＮＰ−Ａ、ＣＥＮＰ−Ｆ、ＭＡＤ２、ＢＵＢＲ１、ＭＣＡＫ、ＨＳＥＴ、ＣＨＬ１、サイモポイエチンα、ＭＰＰ２、ＭＰＰ５、ＣＤＣ４７／ＭＣＭ７、ＣＤＣ２１／ＭＣＭ４、ＤＮＡリガーゼＩ、ＤＮＡポリメラーゼα、Ｒａｄ５４、エキソヌクレアーゼＨＥＸ１／ＲＡＤ２、ＰＬＫ１、ＤＨＦＲまたはシトロンキナーゼから得られることを特徴とする、発現がｐ２１によって阻害される哺乳類遺伝子についての、プロモーターの転写制御下でレポーター遺伝子をコードする、組換え発現構築物を包含することを特徴とする哺乳類細胞。
【請求項９】
プロモーターが、遺伝子血清アミロイドＡ、補体Ｃ３、結合性組織成長因子、インテグリンβ―３、アクチビンＡ、ナチュラルキラー細胞タンパク質４、プロサポシン、Ｍａｃ２結合タンパク質、ガレクチン−３、スーパーオキシドジスムターゼ２、グラヌリン／エピセリン、ｐ６６ｓｈｃ、リソソームのβ−ガラクトシダーゼ、またはカテプシンＢから得られることを特徴とし、発現がｐ２１によって誘導される哺乳類遺伝子についての、プロモーターの転写制御下でレポーター遺伝子をコードする組換え発現構築物を包含する哺乳類細胞。
【請求項１０】
以下の段階を包含する、細胞の遺伝子発現のｐ２１−仲介調節を阻害する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在または不在下で、請求項１に記載の哺乳類細胞におけるｐ２１の発現を生じること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の存在下でより小さな範囲に変化される場合に、細胞の遺伝子発現のｐ２１仲介調節の阻害剤として化合物を同定すること。
【請求項１１】
レポーター遺伝子が、その発現がｐ２１によって抑制される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳類遺伝子プロモーターが、表Ｉに同定される哺乳類遺伝子のプロモーターである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
レポーター遺伝子は、その発現がｐ２１により誘導される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
哺乳類遺伝子プロモーターが、表ＩＩに同定される哺乳類遺伝子のプロモーターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
以下の段階を包含する、細胞の遺伝子発現のｐ２１−仲介調節を阻害する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在または不在下で、請求項８に記載の哺乳類細胞におけるｐ２１の発現を生じること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の存在下でより小さな範囲に変化される場合に、細胞の遺伝子発現のｐ２１仲介調節の阻害剤として化合物を同定すること。
【請求項１６】
以下の段階を特徴とする、細胞の遺伝子発現のｐ２１−仲介調節を阻害する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在または不在下で、請求項９に記載の哺乳類細胞におけるｐ２１の発現を生じること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の存在下でより小さな範囲に変化される場合に、細胞の遺伝子発現のｐ２１仲介調節の阻害剤として化合物を同定すること。
【請求項１７】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞における老化を阻害する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在および不在下で哺乳類細胞を剤で処理するか、または老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養すること；
（ｂ）ｐ２１遺伝子発現により抑制または誘導される遺伝子の抑制または誘導について哺乳類細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）化合物の不在でより化合物の存在下で、ｐ２１によって抑制される遺伝子が、より小さな範囲に抑制されるか、またはｐ２１によって誘導される遺伝子が、より小さな範囲に誘導される場合に老化の阻害剤として化合物を同定すること。
【請求項１８】
哺乳類細胞が、ｐ２１によって誘導される遺伝子についてアッセイされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
遺伝子が表ＩＩに同定される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
哺乳類細胞がｐ２１により抑制される遺伝子についてアッセイされる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
遺伝子が表Ｉに同定される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞中の老化を阻害する化合物を同定する方法。
（ａ）細胞は、その発現がｐ２１によって調節される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下で、レポーター遺伝子を包含することを特徴とする、化合物の存在または不在下にある哺乳類細胞を、剤と接触させるか、または老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養させること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下で小さな程度に変化される場合に、老化の阻害剤として化合物を同定すること。
【請求項２３】
レポーター遺伝子が、その発現がｐ２１によって誘導される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
哺乳類遺伝子プロモーターが、表ＩＩに同定される哺乳類遺伝子のプロモーターである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
レポーター遺伝子は、その発現がｐ２１により抑制される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳類遺伝子プロモーターが、表Ｉに同定される哺乳類遺伝子のプロモーターである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞での老化を阻害する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在または不在下にある哺乳類細胞を、剤と接触させるか、または老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養させること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下で小さな程度に変化される場合に、老化の阻害剤として化合物を同定すること。
【請求項２８】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞中の老化を阻害する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在または不在下にある請求項９に記載の哺乳類細胞を、剤と接触させるか、または老化を誘導する条件下で該哺乳類細胞を培養させること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下で小さな程度に変化される場合に、老化の阻害剤として化合物を同定すること。
【請求項２９】
以下の段階を包含する、細胞の遺伝子発現のｐ２１仲介調節の効果を増強する化合物を同定する方法。
（ａ）哺乳類細胞中でｐ２１の発現を生じること；
（ｂ）その発現が、ｐ２１で誘導または抑制される細胞の遺伝子の発現における変化について、化合物の存在および不在下にある細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）サブパート（ｂ）の細胞の遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下で大きな範囲に誘導または抑制される場合に、細胞の遺伝子発現のｐ２１仲介調節のポテンシエーターとして化合物を同定すること。
【請求項３０】
細胞の遺伝子の発現がｐ２１によって抑制される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
細胞の遺伝子が表Ｉに同定される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
細胞の遺伝子の発現がｐ２１によって誘導される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
細胞の遺伝子が表ＩＩに同定される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
以下の段階を包含する老化を増強する化合物を同定する方法。
（ａ）細胞は、その発現がｐ２１によって調節される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下で、レポーター遺伝子を包含することを特徴とする、化合物の存在または不在下にある哺乳類細胞を、剤と接触させるか、または老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養させること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下で大きな範囲に変化する場合に、老化のポテンシエーターとして化合物を同定すること。
【請求項３５】
レポーター遺伝子が、その発現がｐ２１によって誘導される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
遺伝子が表ＩＩに同定される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
レポーター遺伝子は、その発現がｐ２１により抑制される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
遺伝子が表Ｉに同定される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞における老化の誘導を促進する化合物を同定する方法。
（ａ）哺乳類細胞を剤で処理するか、または化合物の存在下で老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養すること；
（ｂ）ｐ２１遺伝子発現により抑制または誘導される遺伝子の抑制または誘導について哺乳類細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）化合物の存在下で、ｐ２１によって抑制される遺伝子が、さらに抑制されるか、またはｐ２１によって誘導される遺伝子が、さらに誘導される場合に老化の誘導を促進する化合物を同定すること。
【請求項４０】
哺乳類細胞が、ｐ２１により誘導される遺伝子についてのアッセイをうける、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
遺伝子が表ＩＩに同定される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
哺乳類細胞が、ｐ２１により抑制される遺伝子についてのアッセイをうける、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
遺伝子が表Ｉに同定される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞中の老化の誘導を促進する化合物を同定する方法。
（ａ）細胞は、その発現がｐ２１によって調節される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下で、レポーター遺伝子を包含することを特徴とする、化合物の存在または不在下にある哺乳類細胞を、剤と接触させるか、または老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養させること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下で大きな範囲に変化する場合に、老化の誘導を促進する化合物を同定すること。
【請求項４５】
レポーター遺伝子が、その発現がｐ２１によって誘導される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
遺伝子が、表ＩＩに同定される請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
レポーター遺伝子は、その発現がｐ２１により抑制される哺乳類遺伝子についてのプロモーターの転写制御下にある、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
遺伝子が表Ｉに同定される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞における老化の誘導を促進する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在または不在下で請求項８に記載の哺乳類細胞を剤と接触させるか、または老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養すること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下でより大きな範囲に変化する場合に、老化の誘導を促進する化合物を同定すること。
【請求項５０】
以下の段階を包含する、哺乳類細胞における老化の誘導を促進する化合物を同定する方法。
（ａ）化合物の存在または不在下で請求項９に記載の哺乳類細胞を剤と接触させるか、または老化を誘導する条件下で哺乳類細胞を培養すること；
（ｂ）レポーター遺伝子の発現における変化について細胞のアッセイを行うこと；および
（ｃ）レポーター遺伝子の発現が、化合物の不在下でより、化合物の存在下でより大きな範囲に変化する場合に、老化の誘導を促進する化合物を同定すること。