(57)【要約】  天然物由来で広範囲な抗菌スペクトルを有する、より強力な新規の抗菌活性物質を提供することを目的とし、次の工程（ａ）〜（ｄ）（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）を培養し、  （ｂ）得られた培養物から上清を回収し、  （ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、  （ｄ）沈殿物からエタノールで抽出するを含む製造方法により得られる抗菌活性物質ＤＭ０５０７を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程（ａ）〜（ｄ）
（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）を培養し、
（ｂ）得られた培養物から上清を回収し、
（ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、
（ｄ）沈殿物からエタノールで抽出する
を含む製造方法により得られることを特徴とする抗菌活性物質ＤＭ０５０７。
【請求項２】
次の微生物群（Ａ）〜（Ｄ）に対する抗菌活性を有するものである請求項第１項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７。
（Ａ）群（好気性・通性嫌気性微生物）
ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus  suis）
ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus  pneumoniae）
ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus  pyogenes）
バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）ＡＴＣＣ６６３３
バチルス・セレウス バー ミコイデス（Bacillus  cereus  var.  mycoides）
ＡＴＣＣ１１７７８
アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Arcanobacterium  pyogenes）
エロモナス・サルモニシダ（Aeromonas  salmonicida）
エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）
アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）ＪＣＭ２４３４
アクチノバチルス・プレウロニューモニエ（Actinobacillus  pleuropneumoniae）２型
ヘモフィルス・パラスイス（Haemophilus  parasuis）
パスツレラ・ムルトシーダ（Pasteurella  multocida）Ｄ型
パスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella  haemolytica）
サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella  Typhimurium）
サルモネラ・コレラスイス（Salmonella  Choleraesuis）
クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella  pneumoniae）ＡＴＣＣ１００３１
アシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter  junii） 
アシネトバクター（Acinetobacter  sp.）
ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas  maltophilia）
レジオネラ・ニューモフィラ セロタイプ１（Legionella  pneumophila  serotype  1）
マイコプラズマ・ガリセプチカム（Mycoplasma  gallisepticum）
マイコプラズマ・シノビエ（Mycoplasma  synoviae）
（Ｂ）群（微好気性微生物）
カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）
カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）
ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）ＡＴＣＣ４３５２６
（Ｃ）群（偏性嫌気性微生物）
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium  perfringens）
クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）
プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium  acnes）ＪＣＭ６４２５
バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides  fragilis）
ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingvalis）ＪＣＭ８５２５
タンネレラ・フォーサイセンシス（Tannerella  forsythensis）ＪＣＭ１０８２７
ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus  acidophilus）ＪＣＭ１１３２
ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＪＣＭ１２５５
アナエロコッカス・プレボッティ（Anaerococcus  prevotii）ＪＣＭ６５０８
フソバクテリウム・ヌクレアートム（Fusobacterium  nucleatum）
（Ｄ）群（真菌）
フザリウム・オキシスポラム（Fusarium  oxysporum）
【請求項３】
バチルス・ズブチルスが、バチルス・ズブチルスＤＢ９０１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３４１８）である請求項第１項または第２項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７。
【請求項４】
請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７を有効成分とする抗菌剤。
【請求項５】
請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７を含有する飲食品。
【請求項６】
次の工程（ａ）〜（ｄ）
（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）を培養し、
（ｂ）得られた培養物から上清を回収し、
（ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、
（ｄ）沈殿物からエタノールで抽出する
を含むことを特徴とする抗菌活性物質ＤＭ０５０７の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規な抗菌活性物質に関し、更に詳細には、幅広い菌種に対して抗菌活性を有する抗菌活性物質ＤＭ０５０７およびその利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物は抗細菌、抗真菌、抗ウイルス等の作用を有する抗菌活性物質を産生することが知られており、これまでペニシリウム属細菌が産生するペニシリン、セファロスポリウム属が産生するセファロスポリン、ストレプトマイセス属が産生するストレプトマイシン、テトラサイクリンおよびエリスロマイシン等が抗菌活性物質として広く利用されている。【０００３】
これらの抗菌活性物質は、長年の使用の結果、これら抗菌活性物質に耐性を有する菌（耐性菌）が発生することも知られており、より強力な新規の抗菌活性物質が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、本発明は天然物由来で広範囲な抗菌スペクトルを有する、より強力な新規の抗菌活性物質を提供することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究した結果、特殊なバチルス・ズブチルスの培養液から幅広い菌種に対して抗菌活性を有する物質が得られることを見出し、本発明を完成した。また、前記抗菌活性を有する物質は、様々な既存の製品に添加しても抗菌活性を発揮できることを見出し、本発明を完成した。【０００６】
すなわち、本発明は次の工程（ａ）〜（ｄ）
（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）を培養し、
（ｂ）得られた培養物から上清を回収し、
（ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、
（ｄ）沈殿物からエタノールで抽出する
を含む製造方法により得られることを特徴とする抗菌活性物質ＤＭ０５０７である。【０００７】
また、本発明は上記抗菌活性物質ＤＭ０５０７を有効成分とする抗菌剤である。【０００８】
更に、本発明は上記抗菌活性物質ＤＭ０５０７を含有する飲食品である。【０００９】
また更に、本発明は次の工程（ａ）〜（ｄ）
（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）を培養し、
（ｂ）得られた培養物から上清を回収し、
（ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、
（ｄ）沈殿物からエタノールで抽出する
を含むことを特徴とする抗菌活性物質ＤＭ０５０７の製造方法である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の抗菌活性物質ＤＭ０５０７は、幅広い菌種に対して抗菌活性を有するものである。【００１１】
従って、本発明の抗菌活性物質ＤＭ０５０７を利用すれば、優れた抗菌活性を有する種々の抗菌剤や飲食品等を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の抗菌活性物質ＤＭ０５０７（以下、単に「ＤＭ０５０７」という）は、以下に記載する工程を含む製造方法により得ることができる。
（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）を培養し、
（ｂ）得られた培養物を遠心した後、上清を回収し、
（ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、
（ｄ）沈殿物からエタノールで抽出する。【００１３】
上記製造方法の工程（ａ）で、培養に用いられるバチルス・ズブチルスとしては、ＤＭ０５０７を生産するものであれば特に制限されないが、好ましいものとして例えば、バチルス・ズブチルスＤＢ９０１１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３４１８）やバチルス・ズブチルスＭＢＩ６００株（beckerunderwood Inc.：SUBTILEX（商品名））が挙げられ、特に好ましくはバチルス・ズブチルスＤＢ９０１１株が挙げられる。【００１４】
上記バチルス・ズブチルスの培養は常法により行うことができるので、培養条件は特に限定されないが、例えば、ミューラーヒントンブロス（ＤＩＦＣＯ製）を用い、３０℃〜４０℃、好ましくは３５℃で、２４〜４８時間、好ましくは３６時間、振とう培養する条件が挙げられる。【００１５】
次に、上記工程（ａ）で得られた培養物から上清を回収する（工程（ｂ））。この工程（ｂ）において上清の回収は遠心分離で行えばよい。具体的な遠心分離の条件は特に限定されないが、例えば、１０,０００ｒｐｍ〜４０,０００ｒｐｍ、好ましくは２０,０００ｒｐｍで、２０分〜１時間、好ましくは１時間遠心分離すれば良い。【００１６】
上記工程（ｂ）で回収した上清は、そのｐＨを３以下、好ましくは３.０に調整し、生じた沈殿物を回収する（工程（ｃ））。この工程（ｃ）においてｐＨの調整は硫酸、塩酸等の酸で行うことができる。また、上清はｐＨを調整後、８〜２４時間、好ましくは１２〜１８時間、４〜１０℃、好ましくは４〜５℃で放置しておくことが好ましい。更に、ｐＨを調整することにより生じた沈殿物の回収は、遠心分離、限外ろ過、凍結乾燥、透析等により回収すればよく、好ましくは遠心分離を行えばよい。具体的な遠心分離の条件は特に限定されないが、例えば、１０,０００ｒｐｍ〜４０,０００ｒｐｍ、好ましくは２０,０００ｒｐｍで、２０分〜１時間、好ましくは１時間遠心分離すれば良い。【００１７】
最後に、上記工程（ｃ）で回収した沈殿物をエタノールによる抽出に付す（工程（ｄ））。この工程（ｄ）により本発明のＤＭ０５０７が得られる。沈殿物からＤＭ０５０７を抽出する方法は、例えば、沈殿物にエタノールを添加し、沈殿物を浮遊させた状態で１５分〜１時間程度静置して、エタノール中にＤＭ０５０７を抽出する方法等が挙げられる。【００１８】
斯くして得られる本発明のＤＭ０５０７は、次の微生物群（Ａ）〜（Ｄ）に対する幅広い抗菌活性を有するものである。
（Ａ）群（好気性・通性嫌気性微生物）
ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus  suis）
ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus  pneumoniae）
ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus  pyogenes）
バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）ＡＴＣＣ６６３３
バチルス・セレウス バー ミコイデス（Bacillus  cereus  var.  mycoides）
ＡＴＣＣ１１７７８
アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Arcanobacterium  pyogenes）
エロモナス・サルモニシダ（Aeromonas  salmonicida）
エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）
アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）ＪＣＭ２４３４
アクチノバチルス・プレウロニューモニエ（Actinobacillus  pleuropneumoniae）２型
ヘモフィルス・パラスイス（Haemophilus  parasuis）
パスツレラ・ムルトシーダ（Pasteurella  multocida）Ｄ型
パスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella  haemolytica）
サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella  Typhimurium）
サルモネラ・コレラスイス（Salmonella  Choleraesuis）
クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella  pneumoniae）ＡＴＣＣ１００３１
アシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter  junii）
アシネトバクター（Acinetobacter  sp.）
ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas  maltophilia）
レジオネラ・ニューモフィラ セロタイプ１（Legionella  pneumophila  serotype  1）
マイコプラズマ・ガリセプチカム（Mycoplasma  gallisepticum）
マイコプラズマ・シノビエ（Mycoplasma  synoviae）
（Ｂ）群（微好気性微生物）
カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）
カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）
ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）ＡＴＣＣ４３５２６
（Ｃ）群（偏性嫌気性微生物）
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium  perfringens）
クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）
プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium  acnes）ＪＣＭ６４２５
バクテロイデス・フラジリス （Bacteroides  fragilis）
ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingvalis）ＪＣＭ８５２５
タンネレラ・フォーサイセンシス（Tannerella  forsythensis）ＪＣＭ１０８２７
ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus  acidophilus）ＪＣＭ１１３２
ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＪＣＭ１２５５
アナエロコッカス・プレボッティ（Anaerococcus  prevotii）ＪＣＭ６５０８
フソバクテリウム・ヌクレアートム（Fusobacterium  nucleatum）
（Ｄ）群（真菌）
フザリウム・オキシスポラム（Fusarium  oxysporum）【００１９】
本発明のＤＭ０５０７は、これらの微生物の中でも特に、レジオネラ・ニューモフィラ セロタイプ１、プロフィロモナス・ジンジバーリス、プロピオニバクテリウム・アクネスに対する抗菌活性が高く、次にクロストリジウム・ディフィシル、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・コリ、ステノトロホモナス・マルトフィリア、その次としてエロモナス・サルモニシダ、マイコプラズマ・ガリセプチカム、マイコプラズマ・シノビエに対する抗菌活性が高い。【００２０】
本発明のＤＭ０５０７は上記のような幅広い種類の微生物に対して抗菌活性を有するので、これを有効成分とした抗菌剤やこれを含有させた抗菌用品、飲食品等に利用することができる。【００２１】
本発明のＤＭ０５０７を有効成分として抗菌剤を製造するには、ＤＭ０５０７と公知の適当な薬学的に許容されうる医薬担体と組み合わせて常法により製剤化すればよい。この抗菌剤におけるＤＭ０５０７の含有量は、抗菌活性が発揮される量であれば特に制限されないが、例えばＤＭ０５０７のアシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter junii）に対するＭＩＣ（最少発育阻止濃度）を測定し、製品中にＭＩＣ値またはそれ以上、好ましくはＭＩＣ値の２〜１０倍のＤＭ０５０７が含有されていればよい。以下に、微量液体希釈法によるアシネトバクター・ジュニーに対するＭＩＣの測定法を示す。【００２２】
＜微量液体希釈法によるアシネトバクター・ジュニーに対するＭＩＣの測定法＞
測定は１検体当たり２系列行い、ＤＭ０５０７の濃度段階は１０倍希釈から２倍段階希釈していき１０２４０倍までとする。まず２価イオン調整ミュラーヒントンブロス（以下ＣＡＭＨＢと記す）を９６ウェル、平底のマイクロプレートに１００μｌずつ分注する。ＤＭ０５０７を入れる最初のウェルにはＣＡＭＨＢを１８０μｌ分注する。次に最初のウェルにＤＭ０５０７を２０μｌ入れ１０倍希釈とし、１００μｌずつ１０２４０倍まで２倍段階希釈していく。アシネトバクター・ジュニーは前日に分離培養し、１８〜２４時間ＭＨＡで培養しておく。寒天培地の新鮮培養菌を生理食塩水でマクファーランド０．５に調整後１０倍希釈し、１０７ｃｆｕ／ｍｌに調整する。調整した菌液を５μｌずつ各ウェルに接種する。最終的な接種濃度は５×１０５ｃｆｕ／ｍｌ（５×１０４ｃｆｕ／１００μｌ）となる。コントロールとしてＣＡＭＨＢと菌液のみのウェル及び、ＣＡＭＨＢだけのウェルを作成する。マイクロプレートを３５℃で１８時間培養後、肉眼的にみて完全に発育が阻止された最少希釈倍数をＭＩＣ値とする。【００２３】
また、本発明のＤＭ０５０７は、そのままあるいは上記のように製造した抗菌剤として以下に示した既存の製品に含有または含浸させて、以下に示すような抗菌用製品とすることができる。【００２４】
＜医薬部外品、試薬、うがい剤等＞
外用薬、歯磨き（練り歯磨き、粉歯磨き、水歯磨き）、歯間ブラシ、うがい剤、口内炎などの消毒薬、入れ歯用品(洗浄、粘着、殺菌、消毒、消臭)、浴用剤、薬用石鹸、口唇保護剤、爪保護剤、外皮消毒剤、うおの目・たこ用剤、傷消毒剤ただれ・あせも防止剤、ひび・あかぎれ用剤、かさつき・あれ用剤頭皮・頭皮用剤、フケ・かゆみ用剤、腋下用剤
＜日用品、トイレタリー、繊維・皮革商品等＞
おむつ、台所用品、トイレタリー用品、石鹸・カーボンファイバー・布・皮などに含浸した製品
＜洗浄剤等＞
衛生綿類（紙製品も含む）、シャンプー、リンス、生理処理用品、コンタクトレンズ洗浄剤
＜化粧品等＞
化粧水、乳液、クレンジング、エステ剤、パック、クリーム・ハンドクリーム、化粧用油、ひげ剃り用剤、日焼け止め剤
＜消毒剤、殺菌剤等＞
循環式大衆浴場・温泉殺菌剤、プール殺菌剤、チラー（冷却水）用剤、クーラーなどフィルター用剤
＜建材、塗料等＞
木材、紙、油性ペンキ、水性ペンキ、クロス、接着剤、たたみ、塗装保護剤
＜食品添加物等＞
保存料(飲料を含む) 【００２５】
これらの抗菌用製品の中でも特に化粧水、歯磨きが好ましい。これら抗菌用製品の製造は、本発明のＤＭ０５０７を製品原料素材等に有効量添加する以外は、通常の製品の製造方法に準じればよい。【００２６】
更に、本発明のＤＭ０５０７は、ガム、飴、クッキー、錠菓等の菓子、サプリメント、清涼ドリンク剤等の飲食品に含有せしめることができる。これら飲食品のなかでも特にガム、飴が好ましい。本発明のＤＭ０５０７をこのような通常の飲食品に含有せしめ日常的に摂取することにより、歯周病菌やヘリコバクター・ピロリ等の除菌または定着を阻害する健康食品となり得る。この飲食品の製造方法は本発明のＤＭ０５０７を飲食品の原料素材等に有効量添加する以外は、通常の飲食品の製造方法に準じればよい。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例を挙げ、本発明を説明するが、本発明はこれら実施例に何ら制約されるものではない。【００２８】
参 考 例  １
抗菌活性物質産生菌のスクリーニング：
以下のバチルス・ズブチルス培養上清の抗菌活性をポルフィロモナス・ジンジバーリス（Porphyromonas gingivalis）ＪＣＭ８５２５の増殖阻害活性を指標として測定した。【００２９】
＜供試菌株＞
・ＤＢ９０１１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３４１８として１９９１年５月２１日付で独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（〒305-8566日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）に寄託済み））
・ＡＴＣＣ ６６３３株
・ＢＮ１００１株（明治製菓株式会社製：ビーエヌクリーン（商品名））
・Ｋｕｂｏｔａ株（株式会社あさひバイオテック社製：ＢＳＫ菌）
・ＯＵＶ２３４８１株（ミツカン株式会社製：金のつぶほね元気（商品名））
・ＭＢＩ６００株（beckerunderwood Inc.製：SUBTILEX（商品名））【００３０】
まず、ミュラーヒントンＳ寒天培地（栄研化学株式会社製）に各バチルス・ズブチルスを３代継代培養した。次に、滅菌したミューラーヒントンブロス（ＤＩＦＣＯ製）１０ｍｌにそれぞれの菌株を１白金耳ずつ接種し、３５℃で２４時間振盪培養した。【００３１】
振盪培養後の各培養液をそれぞれ１.５ｍｌのマイクロチューブに分注し、１５,０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。次に、遠心した上清を回収し、０.４５μｍのフィルターでろ過した。このろ過した培養上清を直径６.５ｍｍのペーパーディスク（ＤＩＦＣＯ製）にしみ込ませた。一方、抗菌活性の指標として用いるポルフィロモナス・ジンジバーリスはあらかじめＧＡＭブイヨン（日水製薬株式会社製）で嫌気培養しておいた。次に、ＧＡＭ寒天培地（日水製薬株式会社製）を高圧蒸気滅菌後５０℃に保温し、これに予め嫌気培養しておいたポルフィロモナス・ジンジバーリス培養液を混合後、シャーレに流し固化させた。このシャーレ中央に各バチルス・ズブチルス培養ろ液をしみ込ませたペーパーディスクを置き、３５℃で４８時間嫌気培養を行った。培養から４８時間後、各バチルス・ズブチルスのポルフィロモナス・ジンジバーリスに対する阻止円直径を測定した。その結果を表１に示した。【００３２】
【表１】
2007052356.tif 000002
【００３３】
表１より、ＤＢ９０１１株とＭＢＩ６００株の培養上清はポルフィロモナス・ジンジバーリスに対する抗菌活性が高いことがわかった。【００３４】
実  施  例  １
抗菌活性物質ＤＭ０５０７の製造：
（１）ＤＢ９０１１株の培養
斜面培地に発育させ冷蔵庫に保存してあるＤＢ９０１１株をミュラーヒントンＳ寒天培地（栄研化学株式会社製）に継代し、３５℃で２４時間培養してコロニーを形成させた。次に、ミュラーヒントンブロス（ＤＩＦＣＯ製）１０ｍｌに上記１コロニーを接種し、３５℃で２４時間振盪培養した。最後に、前記培養液１ｍｌを予め高圧蒸気滅菌しておいた３Ｌのミュラーヒントンブロスに接種し、３５℃で３０時間、２００ｒｐｍの条件で振盪培養を行い培養液を得た。【００３５】
（２）抗菌活性物質ＤＭ０５０７の抽出
上記（１）で調製した培養液３Ｌを４℃に維持したまま２０,０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、その遠心上清を回収した。次に、遠心上清に１０Ｎの塩酸を添加してｐＨ３に調整後、冷蔵庫で一晩静置した。静置後の上清を更に４℃に維持したまま２０,０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、上清を捨て、沈殿を回収した。その沈殿にエタノール（９９.５質量％）１０ｍｌを加えて浮遊させ、１５分程度静置して抗菌活性物質ＤＭ０５０７を抽出した。この抗菌活性物質ＤＭ０５０７は、更に４℃に維持したまま２０,０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、上清に１Ｎの水酸化ナトリウムを添加しｐＨ７.０に調整後、０.４５μｍのフィルターでろ過し、−８０℃で冷凍保存した。【００３６】
（３）抗菌活性物質ＤＭ０５０７の物性測定
＜ＩＲ測定＞
ＤＭ０５０７を以下の条件でＩＲ測定を行った結果、3060.48、2958.27、2927.41、2871.49、2856.06、1737.55、1650.77、1573.63、1558.20、1469.49、1403.92、1274.72（いずれも単位はｃｍ−１）等にピークが認められた（図１）。
（測定条件）
測定装置：ＨＯＲＩＢＡ ＦＴ−７１０（堀場製作所製）
測定方法：ＫＢｒ法
測定温度：室温【００３７】
＜ＮＭＲ測定＞
ＤＭ０５０７を以下の条件でＮＭＲ測定を行った。この結果を図２に示した。
（測定条件）
測定装置：Ｕｎｉｔｙ ＩＮＯＶＡ６００（Ｖａｒｉａｎ製）
測定周波数：５９９.８９８ＭＨｚ
測定溶媒：重ＤＭＳＯ
測定温度：３０℃【００３８】
実  施  例  ２
抗菌活性の測定：
実施例１で得られた抗菌活性物質ＤＭ０５０７を用いて以下の供試菌株に対する抗菌活性を測定した。【００３９】
＜供試菌株＞
・スタヒロコッカス・アウレウス（Staphylococcus  aureus）ＭＳＳＡ
・スタヒロコッカス・アウレウス（Staphylococcus  aureus）ＭＲＳＡ
・スタヒロコッカス・ハイカス（Staphylococcus  hyicus）
・ミクロコッカス・ルテウス（Micrococcus  luteus）ＡＴＣＣ９３４１
・ストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus  mutans）ＪＣＭ５７０５
・ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus  suis）
・ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus  pneumoniae）
・ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus  pyogenes）
・エンテロコッカス・ガリナルム（Enterococcus  gallinarum）
・バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）ＤＢ９０１１
・バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis ）ＡＴＣＣ６６３３
・バチルス・セレウス バー ミコイデス（Bacillus  cereus  var.  mycoides）
ＡＴＣＣ１１７７８
・アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Arcanobacterium  pyogenes）
・ビブリオ・パラヘモリティクス（Vibrio  parahaemolyticus ）ＡＴＣＣ１７８０２
・エロモナス・サルモニシダ（Aeromonas  salmonicida）
・エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）
・アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）ＪＣＭ２４３４
・アクチノバチルス・プレウロニューモニエ （Actinobacillus  pleuropneumoniae）２型
・ヘモフィルス・パラスイス（Haemophilus  parasuis）
・パスツレラ・ムルトシーダ （Pasteurella  multocida）Ｄ型
・パスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella  haemolytica）
・パスツレラ・トレハローシ（Pasteurella  trehalosi）
・エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）
・サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella  Typhimurium）
・サルモネラ・コレラスイス（Salmonella  Choleraesuis）
・クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella  pneumoniae）ＡＴＣＣ１００３１
・シュードモナス・アエルギノーザ（Pseudomonas  aeruginosa）
・シュードモナス・アエルギノーザ（Pseudomonas  aeruginosa）ポンプ高発現株
・シュードモナス・アエルギノーザ（Pseudomonas  aeruginosa）ポンプ欠損株
・アシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter  junii）
・アシネトバクター（Acinetobacter  sp.）
・ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas  maltophilia）
・レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella  pneumophila）serotype 1
・マイコプラズマ・ガリセプチカム（Mycoplasma  gallisepticum）
・マイコプラズマ・シノビエ（Mycoplasma  synoviae）
・カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）
・カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）
・ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）ＡＴＣＣ４３５２６
・クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium  perfringens）
・クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）
・プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium  acnes）ＪＣＭ６４２５
・バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides  fragilis）
・ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingvalis）ＪＣＭ８５２５
・タンネレラ・フォーサイセンシス（Tannerella  forsythensis）ＪＣＭ１０８２７
・ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus  acidophilus）ＪＣＭ１１３２
・ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＪＣＭ１２５５
・カンジダ・アルビカンス（Candida  albicans）
・クリプトコッカス（Cryptococcus  sp.）
・アスペルギルス・ニガー（Aspergillus  niger）
・フザリウム・オキシスポラム（Fusarium  oxysporum）【００４０】
（１）アッセイ
供試菌株は適する培地及び培養条件（表２）で３代継代培養し、下記の（２）混釈または（３）画線塗沫のいずれかの方法で培地に接種した。次に実施例１で作成した抗菌活性物質０５０７を直径８ｍｍの薄型ペーパーディスク（アドバンテック製）に２０μlずつしみ込ませ、シャーレのふたをずらした状態で冷蔵庫に３０分間静置しエタノールを揮発させた。コントロールとしてエタノールのみのディスクも同様に操作を行った。供試菌株を接種した培地にＤＭ０５０７のディスク及びコントロールのディスクを１枚ずつ置いて培養後、ディスク周囲の阻止円を測定した。【００４１】
（２）混釈
３代継代培養した菌株を１ｍｌの滅菌生理食塩水でマクファーランド２（６.０×１０８／ｍｌ）に調整後、さらに１０倍希釈した。次に、この菌液を予め高圧蒸気滅菌後５０℃に保温しておいた寒天培地に０.１質量％の割合で添加・混合した。更に、これに予め１０ｍｌの寒天培地を流しておいたシャーレに菌液入りの培地を１０ｍｌ重層した。このときの菌数は１.０×１０４／ｃｍ２であった。【００４２】
（３）画線塗沫
３代継代培養した菌株を１ｍｌの滅菌生理食塩水でマクファーランド０.５（１.５×１０８／ｍｌ）に調整後、それに滅菌木軸綿棒（栄研器材株式会社製）を浸漬した後、各培地に３方向から画線した。【００４３】
【表２−１】
2007052356.tif 000003
【表２−２】
2007052356.tif 000004
※１：寒天培地
MHA：ミュラーヒントンＳ寒天培地（栄研化学株式会社製）
GAM：GAM寒天培地（日水製薬株式会社製）
澤田：澤田の培地（自家調整）
B-CYEα：B-CYEα寒天培地（栄研化学株式会社製）
Fray：Frayの寒天培地（自家調整）
PDA：ポテトデキストロース寒天培地（栄研化学株式会社製）
※２：M. gallisepticum、M. synoviaeの画線塗沫
M. gallisepticum及びM. synoviaeはFrayのブロス（自家調整）を使用し、その黄変
によって増殖を確認しながら３５℃で３代継代した。黄変した３代目のブロスに滅菌木軸綿棒を浸漬し、Ｆｒａｙの寒天培地に３方向から画線した。
※３：T. forsythensis  JCM  10827の画線塗沫：
T. forsythensisは発育にN-アセチルムラミン酸を必要とするため、１．５％ N-アセ
チルムラミン酸ディスクを培地中央に置いて培養した。N-アセチルムラミン酸１５ｍｇ
を精製水１ｍｌに溶解し、０.４５μｍのフィルターでろ過後、直径８ｍｍのペーパー
ディスクに２０μｌずつしみ込ませ室温で乾燥させた。これを１．５％ N-アセチルム
ラミン酸ディスクとした。
※４：A. niger、F. oxysporumの画線塗沫：
A. niger及びF. oxysporumはＰＤＡの斜面培地を使用し、２５℃で７日間培養した。
真菌が発育した斜面培地に０.１％Ｔｗｅｅｎ８０加生理食塩水を２ｍｌ入れ軽く混合
し、胞子液を作成した。胞子液を血球計算盤に入れ胞子数を測定後、０.１％Ｔｗｅｅ
ｎ８０加生理食塩水で１×１０６／ｍｌに調整した。滅菌木軸綿棒を胞子液に浸漬し、
ＰＤＡ平板に３方向から画線した。【００４４】
以上の結果より本発明のＤＭ０５０７は、非常に広範囲な抗菌スペクトルを有し、抗菌活性の強さも菌種により様々であることがわかった。【００４５】
実  施  例  ３
収れん性化粧水の製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合して収れん性化粧水を製造した。
2007052356.tif 000005
【００４６】
実  施  例  ４
乳液の製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合して乳液を製造した。
2007052356.tif 000006
【００４７】
実  施  例  ５
薬用歯みがきの製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合して薬用歯みがきを製造した。
2007052356.tif 000007
【００４８】
実  施  例  ６
薬用石鹸の製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合して薬用石鹸を製造した。
2007052356.tif 000008
【００４９】
実  施  例  ７
美容液の製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合して美容液を製造した。
2007052356.tif 000009
【００５０】
実  施  例  ８
クリームの製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合してクリームを製造した。
2007052356.tif 000010
【００５１】
実  施  例  ９
クレンジングの製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合してクレンジングを製造した。
2007052356.tif 000011
【００５２】
実  施  例  １０
浴用剤の製造：
以下の処方で常法に基づき各成分を混合して浴用剤を製造した。
2007052356.tif 000012
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明のＤＭ０５０７は幅広い菌種に対して抗菌活性を有するので、優れた抗菌活性を有する抗菌剤、抗菌製品、飲食品等に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】ＤＭ０５０７のＩＲスペクトルを示す図面である。
【図２】ＤＭ０５０７のＮＭＲスペクトルを示す図面である。
【図１】
2007052356.tif 000013
【図２】
2007052356.tif 000014
【手続補正書】
【提出日】平成18年11月20日(2006.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】
次の微生物群（Ａ）〜（Ｄ）に対する抗菌活性を有するものである請求項第１項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７。
（Ａ）群（好気性・通性嫌気性微生物）
ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus  suis）
ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus  pneumoniae）
ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus  pyogenes）
バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）ＡＴＣＣ６６３３
バチルス・セレウス バー ミコイデス（Bacillus  cereus  var.  mycoides）
ＡＴＣＣ１１７７８
アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Arcanobacterium  pyogenes）
エロモナス・サルモニシダ（Aeromonas  salmonicida）
エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）
アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）ＪＣＭ２４３４
アクチノバチルス・プレウロニューモニエ（Actinobacillus  pleuropneumoniae）２型
ヘモフィルス・パラスイス（Haemophilus  parasuis）
パスツレラ・ムルトシーダ（Pasteurella  multocida）Ｄ型
パスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella  haemolytica）
サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella  Typhimurium）
サルモネラ・コレラスイス（Salmonella  Choleraesuis）
クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella  pneumoniae）ＡＴＣＣ１００３１
アシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter  junii） 
アシネトバクター（Acinetobacter  sp.）
ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas  maltophilia）
レジオネラ・ニューモフィラ セロタイプ１(Legionella  pneumophila  serotype  1)
マイコプラズマ・ガリセプチカム（Mycoplasma  gallisepticum）
マイコプラズマ・シノビエ（Mycoplasma  synoviae）
（Ｂ）群（微好気性微生物）
カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）
カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）
ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）ＡＴＣＣ４３５２６
（Ｃ）群（偏性嫌気性微生物）
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium  perfringens）
クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）
プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium  acnes）ＪＣＭ６４２５
バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides  fragilis）
ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingivalis）ＪＣＭ８５２５
タンネレラ・フォーサイセンシス（Tannerella  forsythensis）ＪＣＭ１０８２７
ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus  acidophilus）ＪＣＭ１１３２
ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＪＣＭ１２５５
アナエロコッカス・プレボッティ（Anaerococcus  prevotii）ＪＣＭ６５０８
フソバクテリウム・ヌクレアートム（Fusobacterium  nucleatum）
（Ｄ）群（真菌）
フザリウム・オキシスポラム（Fusarium  oxysporum）
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
微生物は抗細菌、抗真菌、抗ウイルス等の作用を有する抗菌活性物質を産生することが知られており、これまでペニシリウム属菌株が産生するペニシリン、セファロスポリウム属が産生するセファロスポリン、ストレプトマイセス属が産生するストレプトマイシン、テトラサイクリンおよびエリスロマイシン等が抗菌活性物質として広く利用されている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
斯くして得られる本発明のＤＭ０５０７は、次の微生物群（Ａ）〜（Ｄ）に対する幅広い抗菌活性を有するものである。
（Ａ）群（好気性・通性嫌気性微生物）
ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus  suis）
ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus  pneumoniae）
ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus  pyogenes）
バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）ＡＴＣＣ６６３３
バチルス・セレウス バー ミコイデス（Bacillus  cereus  var.  mycoides）
ＡＴＣＣ１１７７８
アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Arcanobacterium  pyogenes）
エロモナス・サルモニシダ（Aeromonas  salmonicida）
エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）
アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）ＪＣＭ２４３４
アクチノバチルス・プレウロニューモニエ（Actinobacillus  pleuropneumoniae）２型
ヘモフィルス・パラスイス（Haemophilus  parasuis）
パスツレラ・ムルトシーダ（Pasteurella  multocida）Ｄ型
パスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella  haemolytica）
サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella  Typhimurium）
サルモネラ・コレラスイス（Salmonella  Choleraesuis）
クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella  pneumoniae）ＡＴＣＣ１００３１
アシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter  junii）
アシネトバクター（Acinetobacter  sp.）
ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas  maltophilia）
レジオネラ・ニューモフィラ セロタイプ１(Legionella  pneumophila  serotype  1)
マイコプラズマ・ガリセプチカム（Mycoplasma  gallisepticum）
マイコプラズマ・シノビエ（Mycoplasma  synoviae）
（Ｂ）群（微好気性微生物）
カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）
カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）
ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）ＡＴＣＣ４３５２６
（Ｃ）群（偏性嫌気性微生物）
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium  perfringens）
クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）
プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium  acnes）ＪＣＭ６４２５
バクテロイデス・フラジリス （Bacteroides  fragilis）
ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingivalis）ＪＣＭ８５２５
タンネレラ・フォーサイセンシス（Tannerella  forsythensis）ＪＣＭ１０８２７
ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus  acidophilus）ＪＣＭ１１３２
ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＪＣＭ１２５５
アナエロコッカス・プレボッティ（Anaerococcus  prevotii）ＪＣＭ６５０８
フソバクテリウム・ヌクレアートム（Fusobacterium  nucleatum）
（Ｄ）群（真菌）
フザリウム・オキシスポラム（Fusarium  oxysporum）
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明のＤＭ０５０７は、これらの微生物の中でも特に、レジオネラ・ニューモフィラ セロタイプ１、ポルフィロモナス・ジンジバリス、プロピオニバクテリウム・アクネスに対する抗菌活性が高く、次にクロストリジウム・ディフィシル、カンピロバクター・ジェジュニ、カンピロバクター・コリ、ステノトロホモナス・マルトフィリア、その次としてエロモナス・サルモニシダ、マイコプラズマ・ガリセプチカム、マイコプラズマ・シノビエに対する抗菌活性が高い。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
＜医薬部外品、試薬、うがい剤等＞
外用薬、歯磨き（練り歯磨き、粉歯磨き、水歯磨き）、歯間ブラシ、うがい剤、口内炎などの消毒薬、入れ歯用品(洗浄、粘着、殺菌、消毒、消臭)、浴用剤、薬用石鹸、口唇保護剤、爪保護剤、外皮消毒剤、うおの目・たこ用剤、傷消毒剤、ただれ・あせも防止剤、ひび・あかぎれ用剤、かさつき・あれ用剤、頭皮・頭皮用剤、フケ・かゆみ用剤、腋下用剤
＜日用品、トイレタリー、繊維・皮革商品等＞
おむつ、台所用品、トイレタリー用品、石鹸・カーボンファイバー・布・皮などに含浸した製品
＜洗浄剤等＞
衛生綿類（紙製品も含む）、シャンプー、リンス、生理処理用品、コンタクトレンズ洗浄剤
＜化粧品等＞
化粧水、乳液、クレンジング、エステ剤、パック、クリーム・ハンドクリーム、化粧用油、ひげ剃り用剤、日焼け止め剤
＜消毒剤、殺菌剤等＞
循環式大衆浴場・温泉殺菌剤、プール殺菌剤、チラー（冷却水）用剤、クーラーなどフィルター用剤
＜建材、塗料等＞
木材、紙、油性ペンキ、水性ペンキ、クロス、接着剤、たたみ、塗装保護剤
＜食品添加物等＞
保存料(飲料を含む) 
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
＜供試菌株＞
・スタヒロコッカス・アウレウス（Staphylococcus  aureus）ＭＳＳＡ
・スタヒロコッカス・アウレウス（Staphylococcus  aureus）ＭＲＳＡ
・スタヒロコッカス・ハイカス（Staphylococcus  hyicus）
・ミクロコッカス・ルテウス（Micrococcus  luteus）ＡＴＣＣ９３４１
・ストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus  mutans）ＪＣＭ５７０５
・ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus  suis）
・ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus  pneumoniae）
・ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus  pyogenes）
・エンテロコッカス・ガリナルム（Enterococcus  gallinarum）
・バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）ＤＢ９０１１
・バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis ）ＡＴＣＣ６６３３
・バチルス・セレウス バー ミコイデス（Bacillus  cereus  var.  mycoides）
ＡＴＣＣ１１７７８
・アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Arcanobacterium  pyogenes）
・ビブリオ・パラヘモリティクス（Vibrio  parahaemolyticus ）ＡＴＣＣ１７８０２
・エロモナス・サルモニシダ（Aeromonas  salmonicida）
・エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）
・アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）ＪＣＭ２４３４
・アクチノバチルス・プレウロニューモニエ(Actinobacillus  pleuropneumoniae)２型
・ヘモフィルス・パラスイス（Haemophilus  parasuis）
・パスツレラ・ムルトシーダ（Pasteurella  multocida）Ｄ型
・パスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella  haemolytica）
・パスツレラ・トレハローシ（Pasteurella  trehalosi）
・エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）
・サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella  Typhimurium）
・サルモネラ・コレラスイス（Salmonella  Choleraesuis）
・クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella  pneumoniae）ＡＴＣＣ１００３１
・シュードモナス・アエルギノーザ（Pseudomonas  aeruginosa）
・シュードモナス・アエルギノーザ（Pseudomonas  aeruginosa）ポンプ高発現株
・シュードモナス・アエルギノーザ（Pseudomonas  aeruginosa）ポンプ欠損株
・アシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter  junii）
・アシネトバクター（Acinetobacter  sp.）
・ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas  maltophilia）
・レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella  pneumophila）serotype 1
・マイコプラズマ・ガリセプチカム（Mycoplasma  gallisepticum）
・マイコプラズマ・シノビエ（Mycoplasma  synoviae）
・カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）
・カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）
・ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）ＡＴＣＣ４３５２６
・クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium  perfringens）
・クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）
・プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium  acnes）ＪＣＭ６４２５
・バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides  fragilis）
・ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingivalis）ＪＣＭ８５２５
・タンネレラ・フォーサイセンシス（Tannerella  forsythensis）ＪＣＭ１０８２７
・ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus  acidophilus）ＪＣＭ１１３２
・ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＪＣＭ１２５５
・アナエロコッカス・プレボッティ（Anaerococcus  prevotii）ＪＣＭ６５０８
・フソバクテリウム・ヌクレアートム（Fusobacterium  nucleatum）
・カンジダ・アルビカンス（Candida  albicans）
・クリプトコッカス（Cryptococcus  sp.）
・アスペルギルス・ニガー（Aspergillus  niger）
・フザリウム・オキシスポラム（Fusarium  oxysporum）
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
（１）アッセイ
供試菌株は適する培地及び培養条件（表２）で３代継代培養し、下記の（２）混釈または（３）画線塗沫のいずれかの方法で培地に接種した。次に実施例１で作成した抗菌活性物質ＤＭ０５０７を直径８ｍｍの薄型ペーパーディスク（アドバンテック製）に２０μlずつしみ込ませ、シャーレのふたをずらした状態で冷蔵庫に３０分間静置しエタノールを揮発させた。コントロールとしてエタノールのみのディスクも同様に操作を行った。供試菌株を接種した培地にＤＭ０５０７のディスク及びコントロールのディスクを１枚ずつ置いて培養後、ディスク周囲の阻止円を測定した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
【表２−１】
2007052356.tif 000015
【表２−２】
2007052356.tif 000016
※１：寒天培地
MHA：ミュラーヒントンＳ寒天培地（栄研化学株式会社製）
GAM：GAM寒天培地（日水製薬株式会社製）
澤田：澤田の培地（自家調製）
B-CYEα：B-CYEα寒天培地（栄研化学株式会社製）
Fray：Frayの寒天培地（自家調製）
PDA：ポテトデキストロース寒天培地（栄研化学株式会社製）
※２：M. gallisepticum、M. synoviaeの画線塗沫
M. gallisepticum及びM. synoviaeはFrayのブロス（自家調製）を使用し、その黄変
によって増殖を確認しながら３５℃で３代継代した。黄変した３代目のブロスに滅菌木軸綿棒を浸漬し、Ｆｒａｙの寒天培地に３方向から画線した。
※３：T. forsythensis  JCM  10827の画線塗沫：
T. forsythensisは発育にN-アセチルムラミン酸を必要とするため、１．５％N-アセ
チルムラミン酸ディスクを培地中央に置いて培養した。N-アセチルムラミン酸１５ｍｇ
を精製水１ｍｌに溶解し、０.４５μｍのフィルターでろ過後、直径８ｍｍのペーパー
ディスクに２０μｌずつしみ込ませ室温で乾燥させた。これを１．５％ N-アセチルム
ラミン酸ディスクとした。
※４：A. niger、F. oxysporumの画線塗沫：
A. niger及びF. oxysporumはＰＤＡの斜面培地を使用し、２５℃で７日間培養した。
真菌が発育した斜面培地に０.１％Ｔｗｅｅｎ８０加生理食塩水を２ｍｌ入れ軽く混合
し、胞子液を作成した。胞子液を血球計算盤に入れ胞子数を測定後、０.１％Ｔｗｅｅ
ｎ８０加生理食塩水で１×１０６／ｍｌに調整した。滅菌木軸綿棒を胞子液に浸漬し、
ＰＤＡ平板に３方向から画線した。
【手続補正書】
【提出日】平成19年4月23日(2007.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程（ａ）〜（ｄ）
（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）を培養し、
（ｂ）得られた培養物から上清を回収し、
（ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、
（ｄ）沈殿物からエタノールで抽出する
を含む製造方法により得られ、図１で示すＩＲスペクトルおよび図２で示すＮＭＲスペクトルを有することを特徴とする抗菌活性物質ＤＭ０５０７。
【請求項２】
次の微生物群（Ａ）〜（Ｄ）に対する抗菌活性を有するものである請求項第１項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７。
（Ａ）群（好気性・通性嫌気性微生物）
ストレプトコッカス・スイス（Streptococcus  suis）
ストレプトコッカス・ニューモニエ（Streptococcus  pneumoniae）
ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus  pyogenes）
バチルス・ズブチルス（Bacillus  subtilis）ＡＴＣＣ６６３３
バチルス・セレウス バー ミコイデス（Bacillus  cereus  var.  mycoides）
ＡＴＣＣ１１７７８
アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Arcanobacterium  pyogenes）
エロモナス・サルモニシダ（Aeromonas  salmonicida）
エロモナス・ハイドロフィラ（Aeromonas  hydrophila）
アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス
（Actinobacillus  actinomycetemcomitans）ＪＣＭ２４３４
アクチノバチルス・プレウロニューモニエ（Actinobacillus  pleuropneumoniae）２型
ヘモフィルス・パラスイス（Haemophilus  parasuis）
パスツレラ・ムルトシーダ（Pasteurella  multocida）Ｄ型
パスツレラ・ヘモリチカ（Pasteurella  haemolytica）
サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella  Typhimurium）
サルモネラ・コレラスイス（Salmonella  Choleraesuis）
クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella  pneumoniae）ＡＴＣＣ１００３１
アシネトバクター・ジュニー（Acinetobacter  junii） 
アシネトバクター（Acinetobacter  sp.）
ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas  maltophilia）
レジオネラ・ニューモフィラ セロタイプ１（Legionella  pneumophila  serotype 1）
マイコプラズマ・ガリセプチカム（Mycoplasma  gallisepticum）
マイコプラズマ・シノビエ（Mycoplasma  synoviae）
（Ｂ）群（微好気性微生物）
カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter  jejuni）
カンピロバクター・コリ（Campylobacter  coli）
ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）ＡＴＣＣ４３５２６
（Ｃ）群（偏性嫌気性微生物）
クロストリジウム・パーフリンジェンス（Clostridium  perfringens）
クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）
プロピオニバクテリウム・アクネス（Propionibacterium  acnes）ＪＣＭ６４２５
バクテロイデス・フラジリス（Bacteroides  fragilis）
ポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas  gingivalis）ＪＣＭ８５２５
タンネレラ・フォーサイセンシス（Tannerella  forsythensis）ＪＣＭ１０８２７
ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus  acidophilus）ＪＣＭ１１３２
ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＪＣＭ１２５５
アナエロコッカス・プレボッティ（Anaerococcus  prevotii）ＪＣＭ６５０８
フソバクテリウム・ヌクレアートム（Fusobacterium  nucleatum）
（Ｄ）群（真菌）
フザリウム・オキシスポラム（Fusarium  oxysporum）
【請求項３】
バチルス・ズブチルスが、バチルス・ズブチルスＤＢ９０１１（ＦＥＲＭ  ＢＰ−３４１８）である請求項第１項または第２項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７。
【請求項４】
請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７を有効成分とする抗菌剤。
【請求項５】
請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７を含有する飲食品。
【請求項６】
次の工程（ａ）〜（ｄ）
（ａ）バチルス・ズブチルス（Bacillus subtilis）を培養し、
（ｂ）得られた培養物から上清を回収し、
（ｃ）上清のｐＨを３以下に調整して生じた沈殿物を回収し、
（ｄ）沈殿物からエタノールで抽出する
を含むことを特徴とする請求項１記載の抗菌活性物質ＤＭ０５０７の製造方法。
【国際調査報告】
2007052356.tif 000017
2007052356.tif 000018
2007052356.tif 000019
2007052356.tif 000020