【手続補正書】
【提出日】令和1年7月31日(2019.7.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０４】
本発明の様々な局面の説明の中で他の用語が本明細書において定義される。
[本発明1001]
造血幹細胞集団を、細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1002]
造血幹細胞集団を、細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1003]
造血幹細胞集団を、細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1004]
前記造血幹細胞集団におけるNotch標的遺伝子の発現を、前記第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団と比べて増加させるのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質が存在する、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
前記Notch標的遺伝子が、Hes1およびMycからなる群より選択される、本発明1004の方法。
[本発明1006]
前記ikarosファミリーメンバー転写因子が、ikaros、aiolos、およびheliosからなる群より選択される、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる前記1種類または複数種類の作用物質が、該ikarosファミリーメンバー転写因子のユビキチン結合を促進する、本発明1001〜1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる前記1種類または複数種類の作用物質が、式(1)によって表される化合物を含む、本発明1001〜1007のいずれかの方法：
2019508055.tif 000001
式中、
Yは、C=OまたはCH2であり;
X1、X2、X3、およびX4のそれぞれは、独立して水素または-NHX5であり;
X5は、水素または1〜8個の炭素原子のアルキル基であり;かつ
X6は、水素、1〜8個の炭素原子のアルキル基、ベンジル基、またはハロゲン原子である。
[本発明1009]
式(1)によって表される前記化合物が、ポマリドミド、レナリドミド、およびサリドマイドからなる群より選択される、本発明1008の方法。
[本発明1010]
前記造血幹細胞集団を、UM171、その構造類似体、および表1に列挙した化合物より選択される1種類または複数種類の化合物と接触させる工程をさらに含む、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
表1に列挙した前記1種類または複数種類の化合物がUM171を含む、本発明1010の方法。
[本発明1012]
前記造血幹細胞集団を、TGFβシグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1001〜1011のいずれかの方法。
[本発明1013]
TGFβシグナル伝達を阻害する前記1種類または複数種類の作用物質が、TGFβ受容体阻害物質を含む、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記TGFβ受容体阻害物質が、ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択される、本発明1013の方法。
[本発明1015]
前記TGFβ受容体阻害物質がA83-01である、本発明1014の方法。
[本発明1016]
前記造血幹細胞集団を、ヒストンメチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
ヒストンメチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストンメチル化を活性化するか、ヒストンメチル化を維持するか、またはヒストン脱メチル化を阻害する、本発明1016の方法。
[本発明1018]
ヒストンメチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストンデメチラーゼ阻害物質を含む、本発明1016または1017の方法。
[本発明1019]
前記ヒストンデメチラーゼ阻害物質がLSD1阻害物質である、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記LSD1阻害物質が、LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択される、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記LSD1阻害物質がトラニルシプロミンである、本発明1020の方法。
[本発明1022]
前記造血幹細胞集団を、ヒストンアセチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1001〜1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
ヒストンアセチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストンアセチル化を活性化するか、ヒストンアセチル化を維持するか、またはヒストン脱アセチル化を阻害する、本発明1022の方法。
[本発明1024]
ヒストンアセチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストン脱アセチル化阻害物質を含む、本発明1022または1023の方法。
[本発明1025]
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害物質が、トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択される、本発明1024の方法。
[本発明1026]
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害物質がトリコスタチンAである、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記造血幹細胞集団を、
a．p38シグナル伝達の阻害;および
b．古典的Wntシグナル伝達の活性化
からなる群より選択される1つまたは複数の作用を示す1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1001〜1026のいずれかの方法。
[本発明1028]
前記造血幹細胞集団を、アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1001〜1027のいずれかの方法。
[本発明1029]
アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する前記1種類または複数種類の作用物質がSR1を含む、本発明1028の方法。
[本発明1030]
造血幹細胞集団を、表1に列挙した1種類または複数種類の化合物、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;
e．ヒストンアセチル化の調節;および
f．アリール炭化水素受容体シグナル伝達の阻害
からなる群より選択される1つまたは複数の作用を示す1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の化合物および該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1031]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、表1に列挙した1種類または複数種類の化合物、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;
e．ヒストンアセチル化の調節;および
f．アリール炭化水素受容体シグナル伝達の阻害
からなる群より選択される1つまたは複数の作用を示す1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の化合物および該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1032]
第1の造血幹細胞集団を、表1に列挙した1種類または複数種類の化合物、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;
e．ヒストンアセチル化の調節;および
f．アリール炭化水素受容体シグナル伝達の阻害
からなる群より選択される1つまたは複数の作用を示す1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該1種類または複数種類の化合物および該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1033]
造血幹細胞集団を、アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;および
e．ヒストンアセチル化の調節
からなる群より選択される1つまたは複数の作用を示す1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1034]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;および
e．ヒストンアセチル化の調節
からなる群より選択される1つまたは複数の作用を示す1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1035]
第1の造血幹細胞集団を、アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;および
e．ヒストンアセチル化の調節
からなる群より選択される1つまたは複数の作用を示す1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1036]
造血幹細胞集団を、セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1037]
造血幹細胞集団を、セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1038]
第1の造血幹細胞集団を、セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1039]
セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する前記1種類または複数種類の作用物質が、式(1)によって表される、本発明1036〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する前記1種類または複数種類の作用物質が、ポマリドミド、レナリドミド、およびサリドマイドからなる群より選択される、本発明1039の方法。
[本発明1041]
前記造血幹細胞集団を、UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物と接触させる工程をさらに含む、本発明1036〜1040のいずれかの方法。
[本発明1042]
前記造血幹細胞集団を、ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1036〜1041のいずれかの方法。
[本発明1043]
前記造血幹細胞集団を、LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1036〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
前記造血幹細胞集団を、トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1036〜1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
前記造血幹細胞集団を、
a．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;ならびに
b．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1036〜1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
前記造血幹細胞集団を、アリール炭化水素受容体を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1036〜1045のいずれかの方法。
[本発明1047]
アリール炭化水素受容体を阻害する前記1種類または複数種類の作用物質がSR1を含む、本発明1046の方法。
[本発明1048]
前記造血幹細胞集団を、BMPシグナル伝達を阻害する化合物と接触させる工程をさらに含む、本発明1036〜1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
造血幹細胞集団を、表1に列挙した1種類または複数種類の化合物、ならびに
a．ヒストンデメチラーゼ;
b．TGFβシグナル伝達を伝えるタンパク質;
c．p38シグナル伝達を伝えるタンパク質;
d．β-カテニン分解を促進するタンパク質;
e．ヒストンデアセチラーゼ;および
f．アリール炭化水素受容体
からなる群より選択される1種類または複数種類のタンパク質の作用を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の化合物および該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1050]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、表1に列挙した1種類または複数種類の化合物、ならびに
a．ヒストンデメチラーゼ;
b．TGFβシグナル伝達を伝えるタンパク質;
c．p38シグナル伝達を伝えるタンパク質;
d．β-カテニン分解を促進するタンパク質;
e．ヒストンデアセチラーゼ;および
f．アリール炭化水素受容体
からなる群より選択される1種類または複数種類のタンパク質の作用を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の化合物および該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1051]
第1の造血幹細胞集団を、表1に列挙した1種類または複数種類の化合物、ならびに
a．ヒストンデメチラーゼ;
b．TGFβシグナル伝達を伝えるタンパク質;
c．p38シグナル伝達を伝えるタンパク質;
d．β-カテニン分解を促進するタンパク質;
e．ヒストンデアセチラーゼ;および
f．アリール炭化水素受容体
からなる群より選択される1種類または複数種類のタンパク質の作用を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該1種類または複数種類の化合物および該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1052]
造血幹細胞集団を、アリール炭化水素受容体を阻害する1種類または複数種類の作用物質、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;および
e．ヒストンアセチル化の調節
からなる群より選択される1種類または複数種類のタンパク質の作用を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1053]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、アリール炭化水素受容体を阻害する1種類または複数種類の作用物質、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;および
e．ヒストンアセチル化の調節
からなる群より選択される1種類または複数種類のタンパク質の作用を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1054]
第1の造血幹細胞集団を、アリール炭化水素受容体を阻害する1種類または複数種類の作用物質、ならびに
a．ヒストンメチル化の調節;
b．TGFβシグナル伝達の阻害;
c．p38シグナル伝達の阻害;
d．古典的Wntシグナル伝達の活性化;および
e．ヒストンアセチル化の調節
からなる群より選択される1種類または複数種類のタンパク質の作用を阻害する1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1055]
造血幹細胞集団を、式(1)によって表される化合物と接触させる工程を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1056]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、式(1)によって表される化合物と接触させる工程を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1057]
第1の造血幹細胞集団を、式(1)によって表される化合物と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが第1の作用物質および第2の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1058]
式(1)によって表される前記化合物が、ポマリドミド、レナリドミド、およびサリドマイドからなる群より選択される、本発明1055〜1057のいずれかの方法。
[本発明1059]
前記造血幹細胞集団を、UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物と接触させる工程をさらに含む、本発明1055〜1058のいずれかの方法。
[本発明1060]
前記造血幹細胞集団を、ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1055〜1059のいずれかの方法。
[本発明1061]
前記造血幹細胞集団を、LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1055〜1060のいずれかの方法。
[本発明1062]
前記造血幹細胞集団を、トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質と接触させる工程をさらに含む、本発明1055〜1061のいずれかの方法。
[本発明1063]
前記造血幹細胞集団を、
a．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;ならびに
b．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物
からなる群より選択される1種類または複数種類の化合物と接触させる工程をさらに含む、本発明1055〜1062のいずれかの方法。
[本発明1064]
前記造血幹細胞集団をSR1と接触させる工程をさらに含む、本発明1055〜1063のいずれかの方法。
[本発明1065]
造血幹細胞集団を、UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物と;ならびに
a．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;
d．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物;
e．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質;ならびに
f．SR1を含む、アリール炭化水素受容体阻害物質
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物、および該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1066]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物と;ならびに
a．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;
d．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物;
e．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質;ならびに
f．SR1を含む、アリール炭化水素受容体阻害物質
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物、および該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1067]
第1の造血幹細胞集団を、UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物と;ならびに
a．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;
d．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物;
e．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質;ならびに
f．SR1を含む、アリール炭化水素受容体阻害物質
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該UM171および該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1068]
造血幹細胞集団を、SR1と、ならびに
a．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;
d．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物;ならびに
e．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該SR1および該1種類または複数種類の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1069]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、SR1と、ならびに
a．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;
d．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物;ならびに
e．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該SR1および該1種類または複数種類の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1070]
第1の造血幹細胞集団を、SR1と、ならびに
a．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;
d．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物;ならびに
e．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質と接触させる工程であって、該第1の造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該第1の造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該SR1および該1種類または複数種類の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1071]
7日間またはそれを上回る日数の培養の後(例えば、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数の培養の後)、該1種類または複数種類の作用物質または化合物と接触されていない造血幹細胞集団と比べて10％またはそれ以上、前記細胞集団の増大を刺激するのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が存在する、本発明1001〜1070のいずれかの方法。
[本発明1072]
7日間またはそれを上回る日数の培養の後(例えば、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数の培養の後)、プロスタグランジン、Notchシグナル伝達アゴニストと接触された、またはSIRT1阻害物質、例えば、ニコチンアミド、カンビノール、もしくはその類似体と接触された造血幹細胞集団と比べて10％またはそれ以上、前記細胞集団の増大を刺激するのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が存在する、本発明1001〜1070のいずれかの方法。
[本発明1073]
7日間またはそれを上回る日数の培養の後(例えば、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数の培養の後)、該1種類または複数種類の作用物質または化合物と接触されていない造血幹細胞集団と比べて10％またはそれ以上、造血幹細胞について前記細胞集団を富化するのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が存在する、本発明1001〜1070のいずれかの方法。
[本発明1074]
7日間またはそれを上回る日数の培養の後(例えば、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数の培養の後)、プロスタグランジン、Notchシグナル伝達アゴニストと接触された、またはSIRT1阻害物質、例えば、ニコチンアミド、カンビノール、もしくはその類似体と接触された造血幹細胞集団と比べて10％またはそれ以上、造血幹細胞について前記細胞集団を富化するのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が存在する、本発明1001〜1070のいずれかの方法。
[本発明1075]
前記第1の造血幹細胞集団が、3日間またはそれを上回る日数(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)の培養の後、前記対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、本発明1003、1032、1035、1038、1051、1054、1057、1067、および1070のいずれかの方法。
[本発明1076]
前記造血幹細胞が哺乳動物細胞である、本発明1001〜1075のいずれかの方法。
[本発明1077]
前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、本発明1076の方法。
[本発明1078]
前記造血幹細胞がCD34+細胞である、本発明1077の方法。
[本発明1079]
前記CD34+細胞の少なくとも10％が、CD34+細胞、CD34+CD38-細胞、CD34+CD38-CD90+細胞、CD34+CD38-CD90+CD45RA-細胞、またはCD34+CD38-CD90+CD45RA-CD49F+細胞である、本発明1078の方法。
[本発明1080]
前記造血幹細胞がヒト臍帯血に由来する、本発明1076〜1078のいずれかの方法。
[本発明1081]
前記造血幹細胞がヒトの動員末梢血に由来する、本発明1076〜1078のいずれかの方法。
[本発明1082]
前記造血幹細胞がヒト骨髄に由来する、本発明1076〜1078のいずれかの方法。
[本発明1083]
前記造血幹細胞がヒトから新たに単離されたものである、本発明1076〜1082のいずれかの方法。
[本発明1084]
前記造血幹細胞が以前に凍結保存されていたものである、本発明1076〜1083のいずれかの方法。
[本発明1085]
前記哺乳動物細胞がマウス細胞である、本発明1076の方法。
[本発明1086]
前記造血幹細胞が、2日間またはそれを上回る日数(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)にわたって培養される、本発明1001〜1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
前記造血幹細胞が、2日間またはそれを上回る日数(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)にわたって前記1種類または複数種類の作用物質または化合物と接触する、本発明1001〜1086のいずれかの方法。
[本発明1088]
前記造血幹細胞が、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物と同時に接触される、本発明1001〜1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
前記造血幹細胞が、異なる時間に前記1種類または複数種類の作用物質または化合物と接触される、本発明1001〜1087のいずれかの方法。
[本発明1090]
前記造血幹細胞が、2日間(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)の培養の後、造血幹細胞機能的能力を維持する、本発明1001〜1089のいずれかの方法。
[本発明1091]
前記造血幹細胞が、2日間(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)の培養の後、移植後に造血幹細胞機能的能力を維持する、本発明1090の方法。
[本発明1092]
前記造血幹細胞が、2日間(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)の培養の後、長期生着能を維持する、本発明1001〜1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
患者に移植されると、前記造血幹細胞が、好中球、血小板、赤血球、単球、マクロファージ、抗原提示細胞、小グリア細胞、破骨細胞、樹状細胞、およびリンパ球からなる群より選択される細胞の集団の回復を生じさせる、本発明1001〜1092のいずれかの方法。
[本発明1094]
前記リンパ球が、ナチュラルキラー細胞、T細胞(例えば、CD4+細胞またはCD8+細胞)、およびB細胞からなる群より選択される、本発明1093の方法。
[本発明1095]
前記造血幹細胞が、移植されたレシピエントにおいて造血組織に局在して生産的造血を再度確立することができる、本発明1001〜1094のいずれかの方法。
[本発明1096]
前記造血幹細胞が、プラスチック表面上で、またはビトロネクチン、フィブロネクチン、もしくはマトリゲルを含む支持体上で培養される、本発明1001〜1095のいずれかの方法。
[本発明1097]
前記造血幹細胞が、2〜20％酸素の存在下で培養される、本発明1001〜1096のいずれかの方法。
[本発明1098]
前記造血幹細胞が、2〜12％酸素の存在下で培養される、本発明1097の方法。
[本発明1099]
前記造血幹細胞が、約5％酸素の存在下で培養される、本発明1098の方法。
[本発明1100]
前記造血幹細胞が、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物で処理される前に、単核細胞画分中に元々存在する、本発明1001〜1099のいずれかの方法。
[本発明1101]
前記造血幹細胞が、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物と接触する前に、CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38-CD90+、CD34+CD38-CD90+CD45RA-、またはCD34+CD38-CD90+CD45RA-CD49F+、またはCD34+CD38-CD90+CD45RA-CD49F+EPCR+富化細胞画分中に元々存在する、本発明1001〜1099のいずれかの方法。
[本発明1102]
前記造血幹細胞が、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物と接触する前に、非富化細胞画分中に元々存在する、本発明1001〜1099のいずれかの方法。
[本発明1103]
a．ポリヌクレオチドを造血幹細胞集団に挿入する工程;ならびに
b．本発明1001、1030、1033、1036、1049、1052、1055、1065、および1068のいずれかの方法に従って該造血幹細胞集団を増大させるか、または本発明1003、1032、1035、1038、1051、1054、1057、1067、および1070〜1102のいずれかの方法に従って該造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を維持する工程
を含む、該ポリヌクレオチドを該造血幹細胞集団に導入する方法。
[本発明1104]
(a)が(b)より先行する、本発明1103の方法。
[本発明1105]
(b)が(a)より先行する、本発明1103の方法。
[本発明1106]
前記細胞中で核酸を切断する1種類または複数種類の試薬を提供する工程を含む、本発明1103〜1105のいずれかの方法。
[本発明1107]
前記細胞中で核酸を切断する前記1種類または複数種類の試薬がジンクフィンガーヌクレアーゼを含む、本発明1106の方法。
[本発明1108]
前記細胞中で核酸を切断する前記1種類または複数種類の試薬が転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼを含む、本発明1106の方法。
[本発明1109]
前記細胞中で核酸を切断する前記1種類または複数種類の試薬がCRISPR関連タンパク質を含む、本発明1106の方法。
[本発明1110]
前記細胞中で核酸を切断する前記1種類または複数種類の作用物質がメガヌクレアーゼを含む、本発明1106の方法。
[本発明1111]
前記造血幹細胞を、ウイルスベクター(例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、ピコルナウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、またはポックスウイルス)、および転位因子(例えば、piggybacトランスポゾンまたはsleeping beautyトランスポゾン)からなる群より選択されるベクターと接触させる工程を含む、本発明1103〜1110のいずれかの方法。
[本発明1112]
エレクトロポレーション、Nucleofection(商標)、またはスクイーズポレーション(squeeze-poration)によって前記ポリヌクレオチドを前記造血幹細胞に導入する工程を含む、本発明1103〜1110のいずれかの方法。
[本発明1113]
前記細胞を、カチオン性ポリマー(例えば、ジエチルアミノエチル-デキストラン)、カチオン性脂質、リン酸カルシウム、活性化デンドリマー、および磁気ビーズからなる群より選択される形質転換物質と接触させる工程を含む、本発明1103〜1110のいずれかの方法。
[本発明1114]
マイクロインジェクションまたはレーザーフェクション(laserfection)によって前記ポリヌクレオチドを前記造血幹細胞に導入する工程を含む、本発明1103〜1110のいずれかの方法。
[本発明1115]
前記ポリヌクレオチドが、プロモーター配列、エンハンサー配列、またはサイレンサー配列からなる群より選択される制御配列を含む、本発明1103〜1114のいずれかの方法。
[本発明1116]
前記ポリヌクレオチドが、タンパク質およびRNA(mRNA、tRNA、siRNA、miRNA、shRNA)からなる群より選択される分子をコードする、本発明1103〜1115のいずれかの方法。
[本発明1117]
前記ポリヌクレオチドが、化学修飾されたRNAである、本発明1103〜1115のいずれかの方法。
[本発明1118]
増大した前記造血幹細胞集団またはその子孫をレシピエントに導入する工程をさらに含む、本発明1103〜1117のいずれかの方法。
[本発明1119]
a．造血幹細胞集団を提供する工程;
b．本発明1001、1030、1033、1036、1049、1052、1055、1065、1068、および1071〜1102のいずれかの方法に従って該造血幹細胞集団を増大させる工程;
c．任意で、該造血幹細胞を、リンパ系共通前駆細胞、骨髄系共通前駆細胞、巨核球-赤血球前駆細胞、顆粒球-巨核球前駆細胞、顆粒球、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球、赤血球、網状赤血球、栓球、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板、単球、マクロファージ、樹状細胞、小グリア細胞、破骨細胞、ならびにリンパ球、NK細胞、B細胞、および/またはT細胞に分化させる工程;ならびに
d．増大した該造血幹細胞集団またはその子孫をレシピエントに導入する工程
を含む、該レシピエントを造血幹細胞またはその子孫で処置する方法。
[本発明1120]
a．造血幹細胞集団を提供する工程;
b．本発明1002、1031、1034、1037、1050、1053、1056、1066、1069、および1071〜1102のいずれかの方法に従って該造血幹細胞集団を富化する工程;
c．任意で、該造血幹細胞を、リンパ系共通前駆細胞、骨髄系共通前駆細胞、巨核球-赤血球前駆細胞、顆粒球-巨核球前駆細胞、顆粒球、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球、赤血球、網状赤血球、栓球、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板、単球、マクロファージ、樹状細胞、小グリア細胞、破骨細胞、ならびにリンパ球、NK細胞、B細胞、および/またはT細胞に分化させる工程;ならびに
d．造血幹細胞について富化された該細胞集団またはその子孫をレシピエントに導入する工程
を含む、該レシピエントを造血幹細胞またはその子孫で処置する方法。
[本発明1121]
a．造血幹細胞集団を提供する工程;
b．本発明1003、1032、1035、1038、1051、1054、1057、1067、および1070〜1102のいずれかの方法に従って該造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を維持する工程;
c．任意で、該造血幹細胞を、リンパ系共通前駆細胞、骨髄系共通前駆細胞、巨核球-赤血球前駆細胞、顆粒球-巨核球前駆細胞、顆粒球、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球、赤血球、網状赤血球、栓球、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板、単球、マクロファージ、樹状細胞、小グリア細胞、破骨細胞、ならびにリンパ球、NK細胞、B細胞、および/またはT細胞に分化させる工程;ならびに
d．該造血幹細胞集団またはその子孫をレシピエントに導入する工程
を含む、該レシピエントを造血幹細胞またはその子孫で処置する方法。
[本発明1122]
a．本発明1001〜1102のいずれかの方法によって作製された造血幹細胞集団を提供する工程;
b．任意で、該造血幹細胞を、リンパ系共通前駆細胞、骨髄系共通前駆細胞、巨核球-赤血球前駆細胞、顆粒球-巨核球前駆細胞、顆粒球、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球、赤血球、網状赤血球、栓球、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板、単球、マクロファージ、樹状細胞、小グリア細胞、破骨細胞、ならびにリンパ球、NK細胞、B細胞、および/またはT細胞に分化させる工程;ならびに
c．該造血幹細胞集団またはその子孫をレシピエントに導入する工程
を含む、該レシピエントを造血幹細胞またはその子孫で処置する方法。
[本発明1123]
前記レシピエントがヒトである、本発明1118〜1122のいずれかの方法。
[本発明1124]
前記造血幹細胞が、ヒトドナーから単離された1つまたは複数の造血幹細胞に由来する、本発明1123の方法。
[本発明1125]
前記造血幹細胞が、前記ドナーの動員末梢血に由来する、本発明1124の方法。
[本発明1126]
前記ドナーが、CXCR4アンタゴニスト(例えば、AMD3100)、GCSF、およびGROβからなる群より選択される1種類または複数種類の動員物質を以前に投与されたことがある、本発明1125の方法。
[本発明1127]
前記造血幹細胞が、プロスタグランジンとさらに接触される、本発明1001〜1126のいずれかの方法。
[本発明1128]
前記プロスタグランジンが、dmPGE2またはその類似体である、本発明1127の方法。
[本発明1129]
前記造血幹細胞が、Notchシグナル伝達アゴニストとさらに接触される、本発明1001〜1128のいずれかの方法。
[本発明1130]
前記造血幹細胞が、SIRT1阻害物質とさらに接触される、本発明1001〜1129のいずれかの方法。
[本発明1131]
前記阻害物質またはSIRT1が、ニコチンアミド、カンビノール、およびその類似体からなる群より選択される、本発明1130の方法。
[本発明1132]
前記レシピエントが、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病(CML)、慢性リンパ性白血病(CLL)、ホジキンリンパ腫(HL)、非ホジキンリンパ腫(NHL)、骨髄異形成症候群(MDS)、多発性骨髄腫、再生不良性貧血、骨髄機能不全、骨髄増殖性疾患、例えば、骨髄線維症、本態性血小板減少症、または真性赤血球増加症、ファンコーニ貧血、先天性角化不全症、分類不能型免疫不全(Common variable immune deficiency)(CVID、例えば、CVID1、CVID2、CVID3、CVID4、CVID5、およびCVID6)、血球貪食性リンパ組織球症、固形腫瘍、例えば、神経芽細胞腫、生殖細胞腫瘍、乳癌、ウィルムス腫瘍、髄芽細胞腫、および神経外胚葉性腫瘍、自己免疫疾患、例えば、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、またはI型糖尿病、ヒト免疫不全症ウイルス(HIV)、またはタンパク質欠乏症、例えば、副腎脳白質ジストロフィー(ALD)、異染性白質ジストロフィー(MLD)、血友病AおよびB、ハーラー症候群、ハンター症候群、ファブリー病、ゴーシェ病、表皮水疱症、アミロイドーシス、グロボイド細胞白質ジストロフィー、サンフィリポ症候群、ならびにモルキオ症候群からなる群より選択される疾患に罹患しているヒト患者である、本発明1118〜1131のいずれかの方法。
[本発明1133]
前記レシピエントが、鎌状赤血球性貧血、αサラセミア、βサラセミア、δサラセミア、ヘモグロビンE/サラセミア、ヘモグロビンS/サラセミア、ヘモグロビンC/サラセミア、ヘモグロビンD/サラセミア、慢性肉芽腫症(X連鎖性慢性肉芽腫症、常染色体劣性(AR)慢性肉芽腫症、慢性肉芽腫症AR I NCF1、慢性肉芽腫症AR CYBA、慢性肉芽腫症AR II NCF2、慢性肉芽腫症AR III NCF4)、X連鎖重症複合免疫不全(SCID)、ADA SCID、IL7-RA SCID、CD3 SCID、Rag1/Rag2 SCID、Artemis SCID、CD45 SCID、Jak3 SCID、先天性顆粒球減少症、先天性顆粒球減少症-先天性好中球減少症-SCN1、先天性顆粒球減少症-先天性好中球減少症-SCN2、家族性血球貪食性リンパ組織球症(FHL)、家族性血球貪食性リンパ組織球症2型(FHL2、パーフォリン変異)、無γグロブリン血症(X連鎖性無γグロブリン血症)、ウィスコット・オールドリッチ症候群、チェディアック・東症候群、赤血球ピルビン酸キナーゼ欠損症による溶血性貧血、発作性夜間血色素尿症、X連鎖性副腎脳白質ジストロフィー(X-ALD)、X連鎖性リンパ球増殖性疾患、単中心性キャッスルマン病(Unicentric Castleman's Disease)、多中心性キャッスルマン病(Multicentric Castleman's Disease)、先天性無巨核球性血小板減少症(Congenital amegakaryocytic thrombocytopenia)(CAMT)I型、細網異形成症、ファンコーニ貧血、後天性特発性鉄芽球性貧血、全身性肥満細胞症、フォン・ヴィルブランド病(VWD)、先天性赤血球異形成貧血2型、軟骨毛髪形成不全症候群、遺伝性球状赤血球症、ブラックファン・ダイアモンド症候群、シュワックマン・ダイアモンド症候群、血小板減少-橈骨欠損症候群、大理石骨病、小児型大理石骨病、ムコ多糖症、レッシュ・ナイハン症候群、糖原貯蔵症、先天性肥満細胞症、オーメン症候群、X連鎖免疫調節異常・多発性内分泌障害腸症(X-linked Immunodysregulation, polyendocrinopathy, and enteropathy)(IPEX)、FOXP3変異を特徴とするIPEX、X連鎖多発性内分泌障害・免疫機能不全・下痢症候群(X-linked syndrome of polyendocrinopathy, immune dysfunction, and diarrhea)(XPID)、X連鎖自己免疫・アレルギー性調節異常症候群(X-Linked Autoimmunity-Allergic Dysregulation Syndrome)(XLAAD)、IPEX様症候群、高IgM 1型、高IgM 2型、高IgM 3型、高IgM 4型、高IgM 5型、X連鎖性高免疫グロブリンM、裸リンパ球症候群I型、および裸リンパ球症候群II型(裸リンパ球症候群II型、MHCクラスI欠損症;裸リンパ球症候群II型、相補群A;裸リンパ球症候群II型、相補群C;裸リンパ球症候群II型、相補群D;裸リンパ球症候群II型、相補群E)からなる群より選択される疾患に罹患しているヒト患者である、本発明1118〜1131のいずれかの方法。
[本発明1134]
前記レシピエントが、造血リンパ組織悪性腫瘍(hematolymphoid malignancy)、非造血リンパ組織悪性腫瘍、もしくはタンパク質欠乏症に罹患しているヒト患者であるか、または(例えば、移植された組織もしくは細胞に対する寛容を誘導する)組織移植レシピエントもしくは細胞移植レシピエントである、本発明1118〜1131のいずれかの方法。
[本発明1135]
前記造血幹細胞が自己由来または同系である、本発明1118〜1134のいずれかの方法。
[本発明1136]
前記造血幹細胞が同種異系である、本発明1118〜1134のいずれかの方法。
[本発明1137]
a．細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる1種類または複数種類の作用物質と、
b．TGFβシグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質;
c．表1に列挙した1種類または複数種類の化合物;
d．ヒストンメチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質;
e．ヒストンアセチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質;および
f．アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1138]
前記ikarosファミリーメンバー転写因子が、ikaros、aiolos、およびheliosからなる群より選択される、本発明1137の組成物。
[本発明1139]
細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる前記1種類または複数種類の作用物質が、該ikarosファミリーメンバー転写因子のユビキチン結合を促進する、本発明1137または1138の組成物。
[本発明1140]
細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる前記1種類または複数種類の作用物質が、式(1)によって表される化合物を含む、本発明1137〜1139のいずれかの組成物。
[本発明1141]
式(1)によって表される前記化合物が、ポマリドミド、レナリドミド、およびサリドマイドからなる群より選択される、本発明1140の組成物。
[本発明1142]
表1に列挙した前記1種類または複数種類の化合物がUM171を含む、本発明1137〜1141のいずれかの組成物。
[本発明1143]
TGFβシグナル伝達を阻害する前記1種類または複数種類の作用物質が、TGFβ受容体阻害物質を含む、本発明1137〜1142のいずれかの組成物。
[本発明1144]
前記TGFβ受容体阻害物質が、ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択される、本発明1143の組成物。
[本発明1145]
前記TGFβ受容体阻害物質がA83-01である、本発明1144の組成物。
[本発明1146]
ヒストンメチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストンメチル化を活性化するか、ヒストンメチル化を維持するか、またはヒストン脱メチル化を阻害する、本発明1137〜1145のいずれかの組成物。
[本発明1147]
ヒストンメチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストンデメチラーゼ阻害物質を含む、本発明1146の組成物。
[本発明1148]
前記ヒストンデメチラーゼ阻害物質がLSD1阻害物質である、本発明1147の組成物。
[本発明1149]
前記LSD1阻害物質が、LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択される、本発明1148の組成物。
[本発明1150]
前記LSD1阻害物質がトラニルシプロミンである、本発明1149の組成物。
[本発明1151]
ヒストンアセチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストンアセチル化を活性化するか、ヒストンアセチル化を維持するか、またはヒストン脱アセチル化を阻害する、本発明1137〜1150のいずれかの組成物。
[本発明1152]
ヒストンアセチル化を調節する前記1種類または複数種類の作用物質が、ヒストンデアセチラーゼ阻害物質を含む、本発明1151の組成物。
[本発明1153]
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害物質が、トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択される、本発明1152の組成物。
[本発明1154]
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害物質がトリコスタチンAである、本発明1153の組成物。
[本発明1155]
アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する前記1種類または複数種類の作用物質がSR1を含む、本発明1137〜1154のいずれかの組成物。
[本発明1156]
a．表1に列挙した1種類または複数種類の化合物と、
b．TGFβシグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質;
c．ヒストンメチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質;
d．ヒストンアセチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質;および
e．アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1157]
a．アリール炭化水素受容体シグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質と、
b．TGFβシグナル伝達を阻害する1種類または複数種類の作用物質;
c．ヒストンメチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質;および
d．ヒストンアセチル化を調節する1種類または複数種類の作用物質
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1158]
a．セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する1種類または複数種類の作用物質と、
b．TGFβ受容体阻害物質;
c．表1に列挙した化合物;
d．ヒストンデメチラーゼ阻害物質;
e．ヒストンデアセチラーゼ阻害物質;および
f．アリール炭化水素受容体阻害物質
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1159]
セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する前記1種類または複数種類の作用物質が、式(1)によって表される、本発明1158の組成物。
[本発明1160]
セレブロンを含むユビキチンリガーゼ複合体を活性化する前記1種類または複数種類の作用物質が、ポマリドミド、レナリドミド、およびサリドマイドからなる群より選択される、本発明1159の組成物。
[本発明1161]
表1に列挙した前記化合物がUM171である、本発明1158〜1160のいずれかの組成物。
[本発明1162]
前記TGFβ受容体阻害物質が、ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択される、本発明1158〜1161のいずれかの組成物。
[本発明1163]
前記ヒストンデメチラーゼ阻害物質が、LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択される、本発明1158〜1162のいずれかの組成物。
[本発明1164]
前記ヒストンデアセチラーゼ阻害物質が、トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択される、本発明1158〜1163のいずれかの組成物。
[本発明1165]
a．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;ならびに
b．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質をさらに含む、本発明1158〜1164のいずれかの組成物。
[本発明1166]
前記アリール炭化水素受容体阻害物質がSR1である、本発明1158〜1165のいずれかの組成物。
[本発明1167]
BMPシグナル伝達を阻害する化合物をさらに含む、本発明1158〜1166のいずれかの組成物。
[本発明1168]
a．表1に列挙した化合物と、
b．TGFβ受容体阻害物質;
c．ヒストンデメチラーゼ阻害物質;
d．ヒストンデアセチラーゼ阻害物質;および
e．アリール炭化水素受容体阻害物質
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1169]
a．アリール炭化水素受容体阻害物質と、
b．TGFβ受容体阻害物質;
c．表1に列挙した化合物;
d．ヒストンデメチラーゼ阻害物質;および
e．ヒストンデアセチラーゼ阻害物質
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1170]
a．式(1)によって表される化合物と、
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物;
d．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
e．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質;ならびに
f．SR1
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1171]
式(1)によって表される前記化合物が、ポマリドミド、レナリドミド、およびサリドマイドからなる群より選択される、本発明1170の組成物。
[本発明1172]
a．SB203580を含む、p38シグナル伝達を伝えるタンパク質を阻害する化合物;ならびに
b．CHIR99021、塩化リチウム、BIO、およびFGF2からなる群より選択される、β-カテニン分解を促進するタンパク質を阻害する化合物
からなる群より選択される1種類または複数種類の作用物質をさらに含む、本発明1170または1171の組成物。
[本発明1173]
a．UM171、その構造類似体、または表1に列挙した化合物と、
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;
d．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質;ならびに
e．SR1
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1174]
a．SR1と、
b．ALK5阻害物質II、LY364947、DMH1、およびA83-01からなる群より選択されるTGFβ受容体阻害物質;
c．LSD1阻害物質IV RN-1、LSD1阻害物質II S2101、LSD1阻害物質LSD1-C76、LSD1阻害物質III CBB1007、LSD1阻害物質I、およびトラニルシプロミンからなる群より選択されるヒストンデメチラーゼ阻害物質;ならびに
d．トリコスタチンA、バルプロ酸、ブチリルヒドロキサム酸、およびistodaxからなる群より選択されるヒストンデアセチラーゼ阻害物質
のうちの1つまたは複数と
を含む、組成物。
[本発明1175]
前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、本発明1137〜1174のいずれかの組成物。
[本発明1176]
前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに十分な量で存在する、本発明1137〜1174のいずれかの組成物。
[本発明1177]
前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が、少なくとも2日間前記造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を維持するのに十分な量で存在する、本発明1137〜1174のいずれかの組成物。
[本発明1178]
前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が、水溶液中に存在する、本発明1137〜1177のいずれかの組成物。
[本発明1179]
前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が、凍結乾燥固体として存在する、本発明1137〜1177のいずれかの組成物。
[本発明1180]
7日間またはそれを上回る日数の培養の後(例えば、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数の培養の後)、プロスタグランジン、Notchシグナル伝達アゴニスト、またはSIRT1阻害物質、例えば、ニコチンアミド、カンビノール、もしくはその類似体と接触された造血幹細胞集団と比べて10％またはそれ以上、前記細胞集団の増大を刺激するのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が存在する、本発明1137〜1179のいずれかの組成物。
[本発明1181]
7日間またはそれを上回る日数の培養の後(例えば、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数の培養の後)、プロスタグランジン、Notchシグナル伝達アゴニスト、またはSIRT1阻害物質、例えば、ニコチンアミド、カンビノール、もしくはその類似体と接触された造血幹細胞集団と比べて10％またはそれ以上、造血幹細胞について前記細胞集団を富化するのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が存在する、本発明1137〜1179のいずれかの組成物。
[本発明1182]
2日間またはそれを上回る日数(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)にわたって培養状態の前記造血幹細胞と接触した後、移植後の該造血幹細胞の長期生着能を維持するのに十分な量で、前記1種類または複数種類の作用物質または化合物が存在する、本発明1137〜1179のいずれかの組成物。
[本発明1183]
本発明1137〜1182のいずれかの組成物を含む、細胞培養培地。
[本発明1184]
血清を実質的に含まない、本発明1183の細胞培養培地。
[本発明1185]
前記1種類または複数種類の作用物質または化合物と接触している造血幹細胞集団をさらに含む、本発明1137〜1184のいずれかの組成物。
[本発明1186]
前記造血幹細胞が、2日間またはそれを上回る日数(例えば、3日間、5日間、7日間、10日間、12日間、14日間、15日間、20日間、またはそれを上回る日数)にわたって前記1種類または複数種類の作用物質または化合物の存在下で培養されている、本発明1185の組成物。
[本発明1187]
造血幹細胞集団を、
(1)細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる第1の作用物質;および
(2)SR1もしくはその類似体、プロスタグランジン、Notchシグナル伝達アゴニスト、またはSIRT1阻害物質からなる群より選択される第2の作用物質
と接触させる工程であって、該第1の作用物質および該第2の作用物質が、増大した造血幹細胞集団を作製するのに全体として十分な量で存在する、前記工程
を含む、増大した造血幹細胞集団をエクスビボで作製する方法。
[本発明1188]
1つまたは複数の造血幹細胞を含有する造血細胞集団を、
(1)細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる第1の作用物質;および
(2)SR1もしくはその類似体、プロスタグランジン、Notchシグナル伝達アゴニスト、またはSIRT1阻害物質からなる群より選択される第2の作用物質
と接触させる工程であって、該第1の作用物質および該第2の作用物質が、造血幹細胞について富化された細胞集団を作製するのに全体として十分な量で存在する、前記工程
を含む、造血幹細胞について細胞集団をエクスビボで富化する方法。
[本発明1189]
第1の造血幹細胞集団を、
(1)細胞におけるikarosファミリーメンバー転写因子のレベルを低減させる第1の作用物質;および
(2)SR1もしくはその類似体、プロスタグランジン、Notchシグナル伝達アゴニスト、またはSIRT1阻害物質からなる群より選択される第2の作用物質
と接触させる工程であって、該造血幹細胞集団が、2日後またはそれ以降に、該造血幹細胞集団と同じ条件下でかつ同じ時間にわたって培養されたが該第1の作用物質および該第2の作用物質と接触されていない対照造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力より優れた造血幹細胞機能的能力を示す、前記工程
を含む、造血幹細胞集団の造血幹細胞機能的能力を少なくとも2日間エクスビボで維持する方法。
[本発明1190]
本発明1001〜1102および1187〜1189のいずれかの方法によって作製された、造血幹細胞集団。
[本発明1191]
本発明1137〜1182、1185、および1186のいずれかの組成物を含み、添付文書をさらに含む、キット。
[本発明1192]
前記添付文書が、前記キットの使用者に、エクスビボでの造血幹細胞集団の増大、富化、または該細胞集団の造血幹細胞機能的能力の維持について説明する、本発明1191のキット。
[本発明1193]
前記添付文書が、前記使用者に、前記造血幹細胞におけるポリヌクレオチドの発現について説明する、本発明1191のキット。
[本発明1194]
前記添付文書が、前記使用者に、前記造血幹細胞またはその子孫の患者への投与について説明する、本発明1191のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４０】
コンホメーションが制約されたペプチド
ペプチドに基づく治療剤は、多くの場合、他の手段では阻害することが困難だったタンパク質間相互作用の阻害に有用な化合物の新たに出現したクラスである。コンホメーションが制限されたペプチドには治療用途に特別の利点がある。なぜならこれらの化合物は、例えば、特定のファーマコフォアが関心対象のタンパク質と空間的に相互作用しやすくなっている構造的に予め組織化されたエピトープを提示することによって、高い標的親和性および選択性を示すことが多いからである。制約されたペプチドは、プロテアーゼが内部アミド結合に到達するのを制限することによって、制約されていない(例えば、直鎖)対応物と比べてプロテアーゼ抵抗性が高いなどの、さらなる利益を特徴とすることが多い。水素結合ドナーおよびアクセプターが水性溶媒から隔離されるために、これらの化合物の細胞透過能力も直鎖ペプチドの細胞透過能力より往々にして高い。本発明の組成物および方法と共に有用な例示的な制約されたペプチド阻害物質には、αヘリックスの同じ面にある残基間に共有結合架橋を挿入することによって構造的に堅くなっているαへリックスを特徴とすることが多いオレフィン「ステープルド(stapled)」ペプチドが含まれる。このクラスの制約されたペプチドは、例えば、Walensky et al. Journal of Medicinal Chemistry 57:6275 (2014)に記載されている。この開示は参照により本明細書に組み入れられる。アキシン(Axin)/β-カテニン相互作用を破壊することによって機能する、β-カテニンリン酸化のステープルドペプチド阻害物質が開発されている。アキシンは、β-カテニンを、GSK3を含むタンパク質複合体に固定するのに役立ち、この会合は、アキシンのαヘリックス領域を、β-カテニン表面にある表層部ポケットに挿入することによって媒介されることが示されている。残基R8((S)-α-(7-オクテニル)アラニン)とS5((S)-α-(4-ペンテニル)アラニン)におけるオレフィン架橋によってαヘリックスコンホメーションに構造的に制限された、配列
2019508055.tif 000002
のステープルドペプチドが報告されている(例えば、Cui et al. Cell Research 23: 581 (2013)を参照されたい。この開示は参照により本明細書に組み入れられる)。このペプチドはβ-カテニン表面での結合においてアキシンと競合し、GSK3含有複合体から、このタンパク質を遊離させ、従って、この転写因子の核濃度を増やすのに役立つ。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2019508055000001.app