【手続補正書】
【提出日】平成20年6月9日(2008.6.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群より選択される単離された相補性決定領域(CDR):
SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO: 3のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域3(CDR3);
SEQ ID NO: 4のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO: 5のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域2(CDR2);および
SEQ ID NO: 6のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域3(CDR3)。
【請求項２】
請求項1記載の単離相補性決定領域をコードする単離された核酸配列。
【請求項３】
SEQ ID NO: 7(図1)のアミノ酸配列を含む単離された軽鎖可変領域。
【請求項４】
SEQ ID NO: 8(図1)の軽鎖可変領域を含む単離された核酸配列。
【請求項５】
SEQ ID NO: 9(図2またはその変種)のアミノ酸配列を含む単離された重鎖可変領域。
【請求項６】
SEQ ID NO: 10(図2)の重鎖可変領域を含む単離された核酸配列、またはその変種。
【請求項７】
以下からなる群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域を含む結合タンパク質:
SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO: 3のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域3(CDR3);
SEQ ID NO: 4のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO: 5のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域2(CDR2);および
SEQ ID NO: 6のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域3(CDR3)。
【請求項８】
以下を含む請求項7記載の結合タンパク質:
SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO: 2のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域2(CDR2);
SEQ ID NO: 3のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域3(CDR3);
SEQ ID NO: 4のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域1(CDR1);
SEQ ID NO: 5のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域2(CDR2);および
SEQ ID NO: 6のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域3(CDR3)。
【請求項９】
抗体である、請求項7または8記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
抗体が抗体フラグメントである、請求項9記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
抗体フラグメントが、Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、dsFv、ds-scFv、それらのダイマー、ミニボディ(minobodies)、ダイアボディ(diabodies)、およびマルチマー、または二重特異性抗体フラグメントである、請求項10記載の結合タンパク質。
【請求項１２】
以下からなる群より選択されるタンパク質に結合する、請求項7〜11のいずれか一項記載の結合タンパク質:
CD44Eの5-v8インターフェース; CD44のv8エクソン; CD44E; ATNMDSSHSITのアミノ酸配列を含むタンパク質; α-フェトプロテインまたはその変種; SEQ ID NO: 38、39、40、41、42、43、44、および/または45のアミノ酸配列を含むタンパク質; 48〜54kDaの分子量を持ち等電点が5.1〜5.5であるタンパク質; SEQ ID NO: 46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、および/または75のアミノ酸配列を含むタンパク質; SEQ ID NO: 14のアミノ酸配列を含むタンパク質; SEQ ID NO: 15のアミノ酸配列を含むタンパク質; ならびにSEQ ID NO: 16のアミノ酸配列を含むタンパク質。
【請求項１３】
アミノ酸配列ATNMDSSHSITに結合する結合タンパク質。
【請求項１４】
競合的結合アッセイ法により同定されうる、腫瘍細胞上の抗原に結合することができる結合タンパク質であって、競合的結合アッセイ法が:
(1)一定数の腫瘍細胞を、一定数の腫瘍細胞に最大結合を生じる請求項7〜13のいずれか一項記載の最小濃度の結合タンパク質(Ab1)と共にインキュベーションして、Ab1の中央蛍光値(MFAb1)を測定する段階；
(2)Ab1および腫瘍細胞に試験結合タンパク質(Ab2)を添加することによって2つ以上の濃度のAb2を試験し、中央蛍光値(MF(Ab1+Ab2))を測定する段階；
(3)バックグラウンド中央蛍光値(MFbgd)を測定する段階；
(4)PI(ここで、PI=[(MF(Ab1+Ab2)-MFBgd)/(MFAb1-MFBgd)]×100)
を算出する段階；ならびに
(5)PIと対照PI値を比較する段階
を含み；
対照PIと統計学的に有意な差を有するPIは、試験結合タンパク質が腫瘍細胞の抗原に結合できることを示す、結合タンパク質。
【請求項１５】
請求項7〜13記載の結合タンパク質のいずれか1つを薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤または安定剤と共に含む組成物。
【請求項１６】
(2)細胞障害性であるか、細胞分裂抑制性であるか、または他の様式で癌細胞が分裂および/もしくは転移する能力を阻害するもしくは低下させる癌治療薬に結合している、(1)癌細胞上または癌細胞内の抗原に結合する請求項7〜13のいずれか一項記載の結合タンパク質、を含む免疫抱合体。
【請求項１７】
抗原が以下からなる群より選択される、請求項16記載の免疫抱合体:
CD44Eの5-v8インターフェースを含むタンパク質; CD44のv8エクソン; CD44E; ATNMDSSHSITのアミノ酸配列を含むタンパク質; α-フェトプロテインまたはその変種; SEQ ID NO: 38、39、40、41、42、43、44、および/または45のアミノ酸配列を含むタンパク質; 48〜54kDaの分子量を持ち等電点が5.1〜5.5であるタンパク質; SEQ ID NO: 46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、および/または75のアミノ酸配列を含むタンパク質; SEQ ID NO: 14のアミノ酸配列を含むタンパク質; SEQ ID NO: 15のアミノ酸配列を含むタンパク質; ならびにSEQ ID NO: 16のアミノ酸配列を含むタンパク質。
【請求項１８】
癌治療薬が毒素である、請求項16または17記載の免疫抱合体。
【請求項１９】
毒素がリボソーム不活性化ポリペプチドである、請求項18記載の免疫抱合体。
【請求項２０】
毒素が、ゲロニン、ボウガニン(bouganin)、サポリン、リシン、リシンA鎖、ブリオジン(bryodin)、ジフテリア、レストリクトシン(restrictocin)、およびシュードモナス(Pseudomonas)外毒素A、またはそれらの変種からなる群より選択される、請求項19記載の免疫抱合体。
【請求項２１】
毒素が修飾ボウガニンまたはその変種である、請求項19記載の免疫抱合体。
【請求項２２】
毒素が、アミノ酸252〜608からなるシュードモナス(Pseudomonas)外毒素Aの切断型またはその変種である、請求項19記載の免疫抱合体。
【請求項２３】
SEQ ID NO: 11のヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質を含む請求項16記載の免疫抱合体。
【請求項２４】
SEQ ID NO: 12および13のアミノ酸配列を含む請求項16記載の免疫抱合体。
【請求項２５】
免疫毒素が癌細胞によって内部移行される請求項16〜24のいずれか一項記載の免疫抱合体。
【請求項２６】
請求項16〜25のいずれか一項記載の免疫抱合体を薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤または安定剤と共に含む組成物。
【請求項２７】
癌を治療または予防するための医用製剤の製造を目的とする、請求項16〜25のいずれか一項記載の免疫抱合体の有効量の使用。
【請求項２８】
癌を同時、別個または逐次的に治療または予防するための医用製剤の製造を目的とする、1つ以上のさらに別の癌治療薬の使用をさらに含む請求項27記載の使用。
【請求項２９】
下記の段階を含む、哺乳類の癌を診断する方法:
(1)結合タンパク質-抗原複合体の形成を可能にする条件下において、該哺乳類から採取した試験試料と、癌細胞上または癌細胞内の抗原に結合する請求項7〜13記載の結合タンパク質のいずれか1つを接触させる段階；
(2)試験試料において結合タンパク質-抗原複合体の量を測定する段階；および
(3)試験試料中の結合タンパク質-抗原複合体の量を対照と比較する段階。
【請求項３０】
抗原が以下からなる群より選択される、請求項29記載の方法:
CD44Eの5-v8インターフェースを含むタンパク質; CD44のv8エクソン; CD44E; ATNMDSSHSITのアミノ酸配列を含むタンパク質; α-フェトプロテインまたはその変種; SEQ ID NO: 38、39、40、41、42、43、44、および/または45のアミノ酸配列を含むタンパク質; 48〜54kDaの分子量を持ち等電点が5.1〜5.5であるタンパク質; SEQ ID NO: 46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、および/または75のアミノ酸配列を含むタンパク質; SEQ ID NO: 14のアミノ酸配列を含むタンパク質; SEQ ID NO: 15のアミノ酸配列を含むタンパク質; ならびにSEQ ID NO: 16のアミノ酸配列を含むタンパク質。
【請求項３１】
下記の段階を含む、哺乳動物の癌を診断する方法:
(1) 抗体-α-フェトプロテイン複合体と、抗体-CD44E複合体の形成を可能にする条件下においてCD44Eに結合する抗体との形成を可能にする条件下において、該哺乳動物由来の試験試料とα-フェトプロテインまたはその変種に結合する抗体を接触させる段階；
(2)試験試料において抗体-α-フェトプロテイン複合体および抗体-CD44E複合体の量を測定する段階；ならびに
(3)試験試料の抗体-α-フェトプロテイン複合体および抗体-CD44E複合体の量を対照と比較する段階。
【請求項３２】
請求項7〜13記載の結合タンパク質のいずれか1つおよび癌を診断するためにそれを使用するための取り扱い説明書を含む、癌を診断するためのキット。
【請求項３３】
α-フェトプロテインまたはその変種に結合する抗体、CD44Eに結合する抗体、および癌を診断するためにそれらを使用するための取り扱い説明書を含む、癌を診断するためのキット。
【請求項３４】
(2)検出可能なシグナルを生成するラベルに直接または間接的に結合している(1)請求項7〜13のいずれか一項記載の結合タンパク質を含む診断薬。
【請求項３５】
ラベルが放射性同位体、蛍光化合物、化学発光化合物、酵素、造影剤、または金属イオンである、請求項34記載の診断薬。
【請求項３６】
請求項34または35記載の診断薬およびそれを使用するための取り扱い説明書を含むキット。
【請求項３７】
請求項2、4、および6のいずれか一項記載の核酸分子を含む組換え発現ベクター。
【請求項３８】
SEQ ID NO: 11に記載の核酸分子を含む組換え発現ベクター。