【手続補正書】
【提出日】令和1年5月13日(2019.5.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｘｌタンパク質に特異的に結合する単離ポリペプチドであって、３つの相補性決定領域を含む重鎖可変領域を含み、前記領域は、Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３配列を有し、
（ａ）前記Ｈ１配列は、Ｘ1ＧＸ2Ｘ3ＭＸ4（配列番号１）であり；
（ｂ）前記Ｈ２配列は、ＬＩＫＸ5ＳＮＧＧＴＸ6ＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２）であり；
（ｃ）前記Ｈ３配列は、ＧＸ7Ｘ8Ｘ9Ｘ10Ｘ11Ｘ12Ｘ13Ｘ14ＤＹＸ15Ｘ16（配列番号３）であり、
Ｘ1は、ＴまたはＡまたはＷであり、
Ｘ2は、ＨまたはＡであり、
Ｘ3は、ＴまたはＩであり、
Ｘ4は、ＮまたはＩであり、
Ｘ5は、ＰまたはＮであり、
Ｘ6は、ＳまたはＩまたはＴであり、
Ｘ7は、ＨまたはＤまたはＥまたはＰまたはＲまたはＷであり、
Ｘ8は、ＹまたはＮであり、
Ｘ9は、ＥまたはＡまたはＤまたはＦまたはＧまたはＨまたはＩまたはＬまたはＭまたはＮまたはＲまたはＶまたはＹであり、
Ｘ10は、ＳまたはＤまたはＭまたはＮまたはＱであり、
Ｘ11は、ＹまたはＣまたはＥまたはＰであり、
Ｘ12は、ＦまたはＥまたはＮまたはＳまたはＴまたはＶであり、
Ｘ13は、ＡまたはＤまたはＧまたはＬまたはＹであり、
Ｘ14は、ＭまたはＥまたはＦであり、
Ｘ15は、ＷまたはＡまたはＤまたはＨまたはＬまたはＮまたはＰまたはＲまたはＴであり、
Ｘ16は、ＧまたはＨである、
単離ポリペプチド。
【請求項２】
前記重鎖可変領域が、配列番号１１〜１３の配列から選択されるＤＮＡ配列によりコードされる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
３つの相補性決定領域Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３配列を含む単離軽鎖可変領域との組合せの、請求項１または２に記載のポリペプチドであって、
（ａ）前記Ｌ１配列は、ＫＡＳＱＤＸ17Ｘ18ＳＸ19ＶＸ20（配列番号４）であり；
（ｂ）前記Ｌ２配列は、Ｘ21Ｘ22Ｘ23ＴＲＸ24Ｔ（配列番号５）であり；
（ｃ）前記Ｌ３配列は、ＱＥＸ25Ｘ26ＳＸ27Ｘ28Ｘ29Ｘ30（配列番号６）であり、
Ｘ17は、ＶまたはＤまたはＧまたはＮまたはＷであり、
Ｘ18は、ＳまたはＶであり、
Ｘ19は、ＡまたはＬまたはＭであり、
Ｘ20は、ＡまたはＤまたはＮまたはＱであり、
Ｘ21は、ＷまたはＦであり、
Ｘ22は、ＡまたはＩまたはＮまたはＰまたはＱであり、
Ｘ23は、ＳまたはＤであり、
Ｘ24は、ＨまたはＤであり、
Ｘ25は、ＨまたはＣまたはＦまたはＩまたはＬまたはＱまたはＳまたはＴまたはＶまたはＹであり、
Ｘ26は、ＦまたはＣまたはＤまたはＥまたはＧまたはＮまたはＳであり、
Ｘ27は、ＴまたはＣまたはＰであり、
Ｘ28は、ＰまたはＡまたはＣまたはＤまたはＥまたはＨまたはＫまたはＳまたはＴまたはＶまたはＷであり、
Ｘ29は、ＬまたはＧまたはＲであり、
Ｘ30は、ＴまたはＩまたはＲである、
ポリペプチド。
【請求項４】
前記軽鎖可変領域が、配列番号７〜１０から選択されるＤＮＡ配列によりコードされる、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
Ａｘｌタンパク質に特異的に結合する単離ポリペプチドであって、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３配列を有する３つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域を含み、
（ａ）前記Ｌ１配列は、ＫＡＳＱＤＸ17Ｘ18ＳＸ19ＶＸ20（配列番号４）であり；
（ｂ）前記Ｌ２配列は、Ｘ21Ｘ22Ｘ23ＴＲＸ24Ｔ（配列番号５）であり；
（ｃ）前記Ｌ３配列は、ＱＥＸ25Ｘ26ＳＸ27Ｘ28Ｘ29Ｘ30（配列番号６）であり、
Ｘ17は、ＶまたはＤまたはＧまたはＮまたはＷであり、
Ｘ18は、ＳまたはＶであり、
Ｘ19は、ＡまたはＬまたはＭであり、
Ｘ20は、ＡまたはＤまたはＮまたはＱであり、
Ｘ21は、ＷまたはＦであり、
Ｘ22は、ＡまたはＩまたはＮまたはＰまたはＱであり、
Ｘ23は、ＳまたはＤであり、
Ｘ24は、ＨまたはＤであり、
Ｘ25は、ＨまたはＣまたはＦまたはＩまたはＬまたはＱまたはＳまたはＴまたはＶまたはＹであり、
Ｘ26は、ＦまたはＣまたはＤまたはＥまたはＧまたはＮまたはＳであり、
Ｘ27は、ＴまたはＣまたはＰであり、
Ｘ28は、ＰまたはＡまたはＣまたはＤまたはＥまたはＨまたはＫまたはＳまたはＴまたはＶまたはＷであり、
Ｘ29は、ＬまたはＧまたはＲであり、
Ｘ30は、ＴまたはＩまたはＲである、
単離ポリペプチド。
【請求項６】
前記軽鎖可変領域が、配列番号７〜１０から選択されるＤＮＡ配列によりコードされる、請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】
請求項１に記載の単離重鎖可変領域ポリペプチドを含む抗Ａｘｌ抗体または抗体断片。
【請求項８】
３つの相補性決定領域Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３配列を含む単離軽鎖可変領域をさらに含む、請求項７に記載の抗体または抗体断片であって、
（ａ）前記Ｌ１配列は、ＫＡＳＱＤＸ17Ｘ18ＳＸ19ＶＸ20（配列番号４）であり；
（ｂ）前記Ｌ２配列は、Ｘ21Ｘ22Ｘ23ＴＲＸ24Ｔ（配列番号５）であり；
（ｃ）前記Ｌ３配列は、ＱＥＸ25Ｘ26ＳＸ27Ｘ28Ｘ29Ｘ30（配列番号６）であり、
Ｘ17は、ＶまたはＤまたはＧまたはＮまたはＷであり、
Ｘ18は、ＳまたはＶであり、
Ｘ19は、ＡまたはＬまたはＭであり、
Ｘ20は、ＡまたはＤまたはＮまたはＱであり、
Ｘ21は、ＷまたはＦであり、
Ｘ22は、ＡまたはＩまたはＮまたはＰまたはＱであり、
Ｘ23は、ＳまたはＤであり、
Ｘ24は、ＨまたはＤであり、
Ｘ25は、ＨまたはＣまたはＦまたはＩまたはＬまたはＱまたはＳまたはＴまたはＶまたはＹであり、
Ｘ26は、ＦまたはＣまたはＤまたはＥまたはＧまたはＮまたはＳであり、
Ｘ27は、ＴまたはＣまたはＰであり、
Ｘ28は、ＰまたはＡまたはＣまたはＤまたはＥまたはＨまたはＫまたはＳまたはＴまたはＶまたはＷであり、
Ｘ29は、ＬまたはＧまたはＲであり、
Ｘ30は、ＴまたはＩまたはＲである、
抗体または抗体断片。
【請求項９】
腫瘍微小環境中の条件の値において、非腫瘍微小環境中で生じる同一条件の異なる値と比較してＡｘｌタンパク質に対する高い結合親和性を有する、請求項７または８に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１０】
前記条件がｐＨである、請求項９に記載の抗体または抗体断片。
【請求項１１】
前記腫瘍微小環境中のｐＨが５．８〜７．０の範囲であり、前記非腫瘍微小環境中のｐＨが７．０〜７．６の範囲である、請求項１０に記載の抗体または抗体断片。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
別の態様において、本発明は、図１Ａに表される重鎖可変領域および図１Ｂに提示される軽鎖可変領域を同定した。一部の重鎖可変領域は、配列番号１１〜１３を有するＤＮＡ配列によりコードされる。図１Ａの重鎖可変領域は、配列番号１４〜６７に記載のアミノ酸配列を有する。一部の軽鎖可変領域は、配列番号７〜１０を有するＤＮＡ配列によりコードされる。図１Ｂの軽鎖可変領域は、配列番号６８〜１１６に記載のアミノ酸配列を有する。これらの重鎖および軽鎖可変領域は、Ａｘｌに特異的に結合し得る。これらの重鎖および軽鎖可変領域の１つを含む抗体は、非腫瘍微小環境中のｐＨよりも腫瘍微小環境中に見出されるｐＨにおいてＡｘｌに対して高い結合親和性を有することが見出された。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2019513784000001.app