【手続補正書】
【提出日】令和1年6月19日(2019.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを含む細胞であって、ここで、前記第１および第２のＣＡＲは、同じリガンド上の異なるエピトープに結合する、細胞。
【請求項２】
前記リガンドが、可溶性リガンドである、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記リガンドが、サイトカイン、ケモカインまたは代謝産物である、請求項２に記載の細胞。
【請求項４】
各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）スペーサー；および
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン
を含み、ここで、前記第１および第２のＣＡＲのスペーサーは異なる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５】
各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）スペーサー；および
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン
を含み、ここで、前記第１および／または第２のＣＡＲのスペーサーは、三量体または多価である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項６】
細胞表面抗原に結合する第３のＣＡＲを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項７】
前記第１および／または第２ならびに第３のＣＡＲが、それぞれ、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および
（ｉｉｉ）エンドドメイン
を含み、ここで、前記リガンドが前記第１および第２のＣＡＲに結合され、かつ細胞表面抗原が前記第３のＣＡＲに結合されたとき、細胞の活性化が生じるように、前記第３のＣＡＲのエンドドメインと前記第１および／または第２のＣＡＲのエンドドメインは、相補的である、請求項６に記載の細胞。
【請求項８】
前記第３のＣＡＲが、ＣＤ３ゼータエンドドメインを含み、前記第１および／または第２のＣＡＲが、ＣＤ２８エンドドメインおよびＯＸ４０または４１ＢＢエンドドメインを含む、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
前記第３のＣＡＲが、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合し、前記第１および第２のＣＡＲが、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）に結合する、請求項６〜８のいずれかに記載の細胞。
【請求項１０】
前記第１および第２のＣＡＲが前記リガンドに結合したとき、前記細胞表面抗原に結合する前記第３のＣＡＲによって引き起こされる細胞の活性化が阻害されるように、前記第１および／または第２のＣＡＲが、阻害性エンドドメインを含む、請求項６に記載の細胞。
【請求項１１】
前記第１のＣＡＲが、２つの抗原結合ドメインを含み、１つが前記可溶性リガンドに結合し、１つが細胞表面抗原に結合する、請求項２に記載の細胞。
【請求項１２】
前記第１および第２のＣＡＲが、前記可溶性リガンドに結合したとき、前記細胞表面抗原に結合する前記第１のＣＡＲによって引き起こされる細胞の活性化が阻害されるように、前記第２のＣＡＲが、阻害性エンドドメインを含む、請求項１〜５のいずれかに記載の細胞。
【請求項１３】
前記阻害性エンドドメインが、ＰＴＰＮ６または免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）の触媒ドメインであるかまたはそれを含む、請求項１０または１２に記載の細胞。
【請求項１４】
前記第１および第２のＣＡＲが、ＩＬ−６に結合する、請求項１０〜１３のいずれかに記載の細胞。
【請求項１５】
前記第１および／または第２のＣＡＲが、阻害性エンドドメインを含み、
前記リガンドの非存在下では、前記細胞表面抗原に結合する前記第３のＣＡＲによって引き起こされる細胞の活性化が阻害され；
リガンドの存在下では、前記第１および第２のＣＡＲは凝集して前記第３のＣＡＲから分離し、前記第３のＣＡＲが前記細胞表面抗原に結合したとき、シグナル伝達が生じ得る、請求項６に記載の細胞。
【請求項１６】
前記阻害性エンドドメインが、ＣＤ４５またはＣＤ１４８のエンドドメインであるかまたはそれを含む、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
前記第１のＣＡＲが、機能性エンドドメインを欠き、前記第２のＣＡＲが、単量体であって機能性エンドドメインを含み、その結果、前記可溶性リガンドの結合が、前記第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとの共局在を引き起こし、前記第１のＣＡＲが前記細胞表面抗原に結合したとき、Ｔ細胞シグナル伝達を生じさせる、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１８】
前記第２のＣＡＲが、単量体のスペーサーを含む、請求項１７に記載の細胞。
【請求項１９】
前記単量体のスペーサーが、ＣＤ２２由来の１つまたはそれを超えるＩｇドメインを含む、請求項１８に記載の細胞。
【請求項２０】
前記第２のＣＡＲ上の機能性エンドドメインが、前記ＣＤ３−ゼータエンドドメインを含む、請求項１７〜１９のいずれかに記載の細胞。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれかにおいて規定されたような第１のＣＡＲをコードする第１の核酸配列；および請求項１から２０のいずれかにおいて規定されたような第２のＣＡＲをコードする第２の核酸配列を含む、核酸構築物。
【請求項２２】
以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−エンド１−ｃｏｅｘｐｒ−ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−エンド２
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド１は、前記第１のＣＡＲのエンドドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｅｘｐｒは、両ＣＡＲの共発現を可能にする核酸配列であり、
ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド２は、前記第２のＣＡＲのエンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する請求項２１に記載の核酸構築物であって、その核酸構築物は、Ｔ細胞において発現されたとき、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲが該Ｔ細胞表面に共発現されるように、切断部位で切断されるポリペプチドをコードする、
請求項２１に記載の核酸構築物。
【請求項２３】
ｃｏｅｘｐｒが、自己切断性ペプチドを含む配列をコードする、請求項２２に記載の核酸構築物。
【請求項２４】
相同組換えを回避するために、代替的コドンが、同一または類似のアミノ酸配列をコードする配列の領域で使用される、請求項２２または２３に記載の核酸構築物。
【請求項２５】
請求項６〜１０、１５および１６のいずれかにおいて規定されたような第３のＣＡＲをコードする核酸配列も含む、請求項２１〜２４のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項２６】
請求項２１〜２５のいずれかに記載の核酸構築物を含む、ベクター。
【請求項２７】
請求項２６に記載の、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターまたはトランスポゾン。
【請求項２８】
ｉ）請求項１〜５のいずれかにおいて規定されたような第１のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｉ）請求項１〜５のいずれかにおいて規定されたような第２のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクター
を含む、キット。
【請求項２９】
請求項６において規定されたような第３のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターも含む、請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
請求項１から２０のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、請求項２１〜２５のいずれかに記載の核酸構築物；請求項２６もしくは２７に記載のベクター；または請求項２８もしくは２９に記載のベクターのキットを細胞に導入する工程を含み、該細胞が、被験体から単離された試料に由来する、方法。
【請求項３１】
請求項１から２０のいずれかに記載の複数の細胞を含む、医薬組成物。
【請求項３２】
疾患を処置および／または予防するための請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
（ｉ）前記細胞が請求項２１〜２５のいずれかに記載の核酸構築物；請求項２６もしくは２７に記載のベクター；または請求項２８もしくは２９に記載のベクターのキットで形質導入またはトランスフェクションされ；および
（ｉｉ）被験体に（ｉ）からの該細胞が投与されること
を特徴とする、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記試料が、Ｔ細胞含有試料である、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記疾患が、がんである、請求項３３または３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
疾患の処置および／または予防において使用するための請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
疾患を処置および／または予防するための医薬の製造における請求項１から２０のいずれかに記載の細胞の使用。
【請求項３８】
請求項１から２０のいずれかに記載の細胞を含む、疾患を処置および／または予防するための組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
免疫療法のアプローチを用いて可溶性リガンドを標的にすることが可能であれば、腫瘍組織または非腫瘍組織に特徴的な可溶性リガンド（例えば、ケモカイン、サイトカインまたは代謝産物）の存在と膜抗原の存在との組み合わせに基づいて細胞を標的にすることが可能であり得る。これもまた、オンターゲットオフ腫瘍毒性をかなり減少させると予想され得る。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
第１のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）および第２のＣＡＲを含む細胞であって、ここで、前記第１および第２のＣＡＲは、同じリガンド上の異なるエピトープに結合する、細胞。
(項目２)
前記リガンドが、可溶性リガンドである、項目１に記載の細胞。
(項目３)
前記リガンドが、サイトカイン、ケモカインまたは代謝産物である、項目２に記載の細胞。
(項目４)
各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）スペーサー；および
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン
を含み、ここで、前記第１および第２のＣＡＲのスペーサーは異なる、前述のいずれかの項目に記載の細胞。
(項目５)
各ＣＡＲが、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）スペーサー；および
（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン
を含み、ここで、前記第１および／または第２のＣＡＲのスペーサーは、三量体または多価である、前述のいずれかの項目に記載の細胞。
(項目６)
細胞表面抗原に結合する第３のＣＡＲを含む、前述のいずれかの項目に記載の細胞。
(項目７)
前記第１および／または第２ならびに第３のＣＡＲが、それぞれ、
（ｉ）抗原結合ドメイン；
（ｉｉ）膜貫通ドメイン；および
（ｉｉｉ）エンドドメイン
を含み、ここで、前記リガンドが前記第１および第２のＣＡＲに結合し、かつ細胞表面抗原が前記第３のＣＡＲに結合したとき、細胞の活性化が生じるように、前記第３のＣＡＲのエンドドメインと前記第１および／または第２のＣＡＲのエンドドメインは、相補的である、項目６に記載の細胞。
(項目８)
前記第３のＣＡＲが、ＣＤ３ゼータエンドドメインを含み、前記第１および／または第２のＣＡＲが、ＣＤ２８エンドドメインおよびＯＸ４０または４１ＢＢエンドドメインを含む、項目７に記載の細胞。
(項目９)
前記第３のＣＡＲが、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）に結合し、前記第１および第２のＣＡＲが、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）に結合する、項目６〜８のいずれかに記載の細胞。
(項目１０)
前記第１および第２のＣＡＲが前記リガンドに結合したとき、前記細胞表面抗原に結合する前記第３のＣＡＲによって引き起こされる細胞の活性化が阻害されるように、前記第１および／または第２のＣＡＲが、阻害性エンドドメインを含む、項目６に記載の細胞。
(項目１１)
前記第１のＣＡＲが、２つの抗原結合ドメインを含み、１つが前記可溶性リガンドに結合し、１つが細胞表面抗原に結合する、項目２に記載の細胞。
(項目１２)
前記第１および第２のＣＡＲが、前記可溶性リガンドに結合したとき、前記細胞表面抗原に結合する前記第１のＣＡＲによって引き起こされる細胞の活性化が阻害されるように、前記第２のＣＡＲが、阻害性エンドドメインを含む、項目１〜５のいずれかに記載の細胞。
(項目１３)
前記阻害性エンドドメインが、ＰＴＰＮ６または免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）の触媒ドメインであるかまたはそれを含む、項目１０または１２に記載の細胞。
(項目１４)
前記第１および第２のＣＡＲが、ＩＬ−６に結合する、項目１０〜１３のいずれかに記載の細胞。
(項目１５)
前記第１および／または第２のＣＡＲが、阻害性エンドドメインを含み、
前記リガンドの非存在下では、前記細胞表面抗原に結合する前記第３のＣＡＲによって引き起こされる細胞の活性化が阻害され；
リガンドの存在下では、前記第１および第２のＣＡＲは凝集して前記第３のＣＡＲから分離し、前記第３のＣＡＲが前記細胞表面抗原に結合したとき、シグナル伝達が生じ得る、項目６に記載の細胞。
(項目１６)
前記阻害性エンドドメインが、ＣＤ４５またはＣＤ１４８のエンドドメインであるかまたはそれを含む、項目１５に記載の細胞。
(項目１７)
前記第１のＣＡＲが、機能性エンドドメインを欠き、前記第２のＣＡＲが、単量体であって機能性エンドドメインを含み、その結果、前記可溶性リガンドの結合が、前記第１のＣＡＲと第２のＣＡＲとの共局在を引き起こし、前記第１のＣＡＲが前記細胞表面抗原に結合したとき、Ｔ細胞シグナル伝達を生じさせる、項目１１に記載の細胞。
(項目１８)
前記第２のＣＡＲが、単量体のスペーサーを含む、項目１７に記載の細胞。
(項目１９)
前記単量体のスペーサーが、ＣＤ２２由来の１つまたはそれを超えるＩｇドメインを含む、項目１８に記載の細胞。
(項目２０)
前記第２のＣＡＲ上の機能性エンドドメインが、前記ＣＤ３−ゼータエンドドメインを含む、項目１７〜１９のいずれかに記載の細胞。
(項目２１)
項目１から２０のいずれかにおいて規定されたような第１のＣＡＲをコードする第１の核酸配列；および項目１から２０のいずれかにおいて規定されたような第２のＣＡＲをコードする第２の核酸配列を含む、核酸構築物。
(項目２２)
以下の構造：
ＡｇＢ１−スペーサー１−ＴＭ１−エンド１−ｃｏｅｘｐｒ−ＡｂＢ２−スペーサー２−ＴＭ２−エンド２
（ここで、
ＡｇＢ１は、前記第１のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー１は、前記第１のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ１は、前記第１のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド１は、前記第１のＣＡＲのエンドドメインをコードする核酸配列であり；
ｃｏｅｘｐｒは、両ＣＡＲの共発現を可能にする核酸配列であり、
ＡｇＢ２は、前記第２のＣＡＲの抗原結合ドメインをコードする核酸配列であり；
スペーサー２は、前記第２のＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり；
ＴＭ２は、前記第２のＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり；
エンド２は、前記第２のＣＡＲのエンドドメインをコードする核酸配列である）
を有する項目２１に記載の核酸構築物であって、その核酸構築物は、Ｔ細胞において発現されたとき、前記第１のＣＡＲおよび前記第２のＣＡＲが該Ｔ細胞表面に共発現されるように、切断部位で切断されるポリペプチドをコードする、
項目２１に記載の核酸構築物。
(項目２３)
ｃｏｅｘｐｒが、自己切断性ペプチドを含む配列をコードする、項目２２に記載の核酸構築物。
(項目２４)
相同組換えを回避するために、代替的コドンが、同一または類似のアミノ酸配列をコードする配列の領域で使用される、項目２２または２３に記載の核酸構築物。
(項目２５)
項目６〜１０、１５および１６のいずれかにおいて規定されたような第３のＣＡＲをコードする核酸配列も含む、項目２１〜２４のいずれかに記載の核酸構築物。
(項目２６)
項目２１〜２５のいずれかに記載の核酸構築物を含む、ベクター。
(項目２７)
項目２６に記載の、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターまたはトランスポゾン。
(項目２８)
ｉ）項目１〜５のいずれかにおいて規定されたような第１のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｉ）項目１〜５のいずれかにおいて規定されたような第２のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクター
を含む、キット。
(項目２９)
項目６において規定されたような第３のＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターも含む、項目２８に記載のキット。
(項目３０)
項目１から２０のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、項目２１〜２５のいずれかに記載の核酸構築物；項目２６もしくは２７に記載のベクター；または項目２８もしくは２９に記載のベクターのキットを細胞に導入する工程を含む、方法。
(項目３１)
前記細胞が、被験体から単離された試料に由来する、項目３０に記載の方法。
(項目３２)
項目１から２０のいずれかに記載の複数の細胞を含む、医薬組成物。
(項目３３)
項目３２に記載の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、疾患を処置および／または予防するための方法。
(項目３４)
以下の工程：
（ｉ）被験体からの細胞含有試料の単離；
（ｉｉ）項目２１〜２５のいずれかに記載の核酸構築物；項目２６もしくは２７に記載のベクター；または項目２８もしくは２９に記載のベクターのキットでの該細胞の形質導入またはトランスフェクション；および
（ｉｉｉ）該被験体に（ｉｉ）からの該細胞を投与すること
を含む、項目３３に記載の方法。
(項目３５)
前記試料が、Ｔ細胞含有試料である、項目３４に記載の方法。
(項目３６)
前記疾患が、がんである、項目３４または３５に記載の方法。
(項目３７)
疾患の処置および／または予防において使用するための項目３２に記載の医薬組成物。
(項目３８)
疾患を処置および／または予防するための医薬の製造における項目１から２０のいずれかに記載の細胞の使用。