【手続補正書】
【提出日】平成20年9月29日(2008.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  最初のＡＴＧコドンから残基８１（Ｌ２２Ｍ２）までの配列の逐次的欠失により発生するＨＣＰ１のＮＨ2末端欠失よりなる配列としてミカエリ等（Michaeli et al.，1993，J．Biol．Chem.，268，12925-12932）により開示されたアミノ酸配列を例外としてＰＤＥ７の触媒ドメインを少なくとも有する、内因性完全長ＰＤＥ７蛋白のホスホジエステラーゼ触媒活性より少なくとも約６倍、好ましくは約８または１０倍、最も好ましくは１５〜２０倍高値のホスホジエステラーゼ触媒活性を保有するポリペプチド。
【請求項２】  ホスホジエステラーゼ７触媒ドメインを保有し、そして、配列番号１、２または３のアミノ酸配列よりなる群から選択される配列の連続するアミノ酸少なくとも３１２個を有する、約４２７アミノ酸長までの請求項１記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項３】  配列番号１、２または３の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４位に位置するアミノ酸残基から始まり、
配列番号１、２または３の３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７位に位置するアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列を有する請求項２記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項４】  配列番号１、２または３の５位のアミノ酸残基で始まり、４２７位のアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列を有する請求項３記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項５】  配列番号１、２または３の２５位のアミノ酸残基で始まり、４２７位のアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列を有する請求項３記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項６】  配列番号１、２または３の４５位のアミノ酸残基で始まり、４２７位のアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列を有する請求項３記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項７】  配列番号１、２または３の５位のアミノ酸残基で始まり、３９４位のアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列を有する請求項３記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項８】  配列番号１、２または３の２５位のアミノ酸残基で始まり、３９４位のアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列を有する請求項３記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項９】  配列番号１、２または３の４５位のアミノ酸残基で始まり、３９４位のアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列を有する請求項３記載のポリペプチド；またはその相同ポリペプチド。
【請求項１０】  請求項１〜９の何れか１項に記載のポリペプチドと少なくとも８０％の相同性または同一性、好ましくは８５％の相同性または同一性を有するポリペプチド。
【請求項１１】  請求項１〜９の何れか１項に記載のポリペプチドと少なくとも９０％の相同性または同一性、好ましくは９５％の相同性または同一性、最も好ましくは９９％の相同性または同一性を有するポリペプチド。
【請求項１２】  最初のＡＴＧコドンから残基８１（Ｌ２２Ｍ２）までの配列の逐次的欠失により発生するＨＣＰ１のＮＨ2末端欠失よりなる配列としてミカエリ等（Michaeli et al.，1993，J．Biol．Chem.，268，12925-12932）により開示されたアミノ酸配列を例外として、完全長ＰＤＥ７（Ａ）蛋白質のアミノ酸５７〜１００の間のアミノ酸で始まり、アミノ酸４５０〜４８３の間で終わる、アミノ酸配列を有するポリペプチド。
【請求項１３】  ＰＤＥ７Ａ蛋白質がヒトＰＤＥ７Ａ１またはＰＤＥ７Ａ２である請求項１２記載のポリペプチド。
【請求項１４】  請求項１〜１３の何れか１項に記載のポリペプチドをコードする核酸配列またはそれに相補的な配列。
【請求項１５】  配列番号４、５または６の核酸配列よりなる群から選択される請求項１４記載の核酸配列；またはそれに相補的な配列。
【請求項１６】  請求項１４〜１５記載の核酸配列の欠失の後に残存する完全長ＰＤＥ７（Ａ）の配列の部分を有する核酸配列。
【請求項１７】  ゲノム起源の請求項１４〜１６の何れか１項に記載の核酸配列。
【請求項１８】  欠失した核酸部分が異種ポリヌクレオチド配列により置き換えられている請求項１６または１７に記載の核酸配列。
【請求項１９】  ＰＤＥ７（Ａ）がヒト、マウスまたはラット起源、最も好ましくはヒト起源のものである、請求項１〜１３の何れか１項に記載のポリペプチドまたは、請求項１４〜１８の何れか１項に記載の核酸配列。
【請求項２０】  異種ポリヌクレオチドが選択マーカーを有する請求項１８記載の核酸配列。
【請求項２１】  異種ポリヌクレオチドがその５′末端に少なくともｌｏｘＰ配列およびその３′末端に少なくともｌｏｘＰ配列を有する請求項１８記載の核酸配列。
【請求項２２】  請求項２のポリペプチドをコードする核酸配列が調節配列に作動可能に連結している請求項１４〜２１の何れか１項に記載の核酸配列。
【請求項２３】  調節配列が誘導性プロモーターよりなる請求項２２記載の核酸配列。
【請求項２４】  調節配列がポナステロンのようなインデューサーにより誘導可能なプロモーターよりなる請求項２３記載の核酸配列。
【請求項２５】  請求項１４〜２４に記載の核酸配列を有する組み換えベクター。
【請求項２６】  請求項１４〜２４に記載の核酸配列を有する組み換え宿主細胞。
【請求項２７】  請求項２５記載の組み換えベクターを有する組み換え宿主細胞。
【請求項２８】  真核生物である請求項２６または２７に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項２９】  接合体、胚、胎仔または成体の多能性幹細胞、哺乳類の分割球または胚盤胞に由来する組み換え宿主細胞およびＥＳ細胞よりなる組み換え宿主細胞の群から選択される請求項２６〜２８の何れか１項に記載の組み換え宿主細胞。
【請求項３０】  請求項１４〜２４の何れか１項に記載の核酸配列の欠失の後に残存する完全長ＰＤＥ７の部分を伴った配列を有するポリヌクレオチド構築物を有するベクターの使用により発生したノックアウト動物であって、該構築物が即ちこの動物のゲノム内の天然のＰＤＥ７配列の部分を置き換えている、上記動物。
【請求項３１】  哺乳類起源の請求項３０記載のノックアウト動物。
【請求項３２】  ネズミまたはラット起源の請求項３１記載のノックアウト動物。
【請求項３３】  請求項１〜１３に記載のポリペプチドの製造方法であって、下記工程：
ａ）請求項２６〜２９に記載の組み換え宿主細胞を適切な培地中で培養すること、
ｂ）このように条件付けされた培地を採取すること、または、組み換え宿主細胞を溶解すること；
ｃ）該培地から、または、得られた細胞溶解物から、上記のとおり製造されたポリペプチドを分離または精製すること、
を有する上記方法。
【請求項３４】  ＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ活性を阻害する化合物のインビトロのスクリーニング方法であって、該方法は下記工程：
ａ）請求項１〜１３に記載のポリペプチドの所望の量を準備すること；
ｂ）工程ａ）において準備したポリペプチドの所望の量を試験すべき候補化合物の所望の量を含有する緩衝溶液に添加すること；
ｃ）ホスホジエステラーゼ酵素活性を測定すること；および、
ｄ）工程ｃ）で得られた測定値酵素活性を候補化合物の非存在下に得られた酵素活性と比較すること
を包含する上記方法。
【請求項３５】  工程ａ）で準備したポリペプチドが配列番号１の４５位のアミノ酸残基で始まり、４２７位のアミノ酸残基で終わるアミノ酸配列またはその相同ポリペプチドよりなる請求項３４記載の方法。
【請求項３６】  ポリペプチドが請求項１４〜２４に記載の核酸配列により、または、請求項２５記載の組み換えベクターによりトランスフェクトされた宿主細胞の細胞溶解物に由来する請求項３４または３５記載の方法。
【請求項３７】  ホスホジエステラーゼ触媒活性がｃＡＭＰの加水分解の水準として測定される請求項３４または３６記載の方法。
【請求項３８】  ＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ活性を阻害する化合物のインビトロのスクリーニング方法であって、該方法が下記工程：
ａ）適切な培地中で請求項２６〜２９に記載の組み換え宿主細胞を培養すること；
ｂ）試験すべき候補化合物の所望の濃度を該培地に添加すること；
ｃ）細胞内ホスホジエステラーゼ酵素活性を測定すること；および、
ｄ）工程ｃ）で得られた酵素活性を工程ｂ）を省略した場合に得られる酵素活性と比較すること
を包含する上記工程。
【請求項３９】  組み換え宿主細胞が２量体エクジソン受容体を発現するＣＨＯ細胞系統よりなる請求項３８記載の方法。
【請求項４０】  誘導性調節配列に作動可能に連結した請求項１〜１３に記載のポリペプチドをコードする核酸を有する組み換えベクターで組み換え宿主細胞がトランスフェクトされている請求項３８記載の方法。
【請求項４１】  調節配列がインデューサーにより誘導可能である請求項４０記載の方法。
【請求項４２】  インデューサーがポナステロンである請求項４１記載の方法。
【請求項４３】  工程ｂ）の前に、組み換え宿主細胞を、工程ａ）の間に誘導性調節配列を活性化するインデューサーの存在下に培養する請求項３８〜４２の何れか１項に記載の方法。
【請求項４４】  アデニレートサイクラーゼ活性化物質を工程ｂ）の終了時、停止溶液の添加前に添加する請求項３８〜４３の何れか１項に記載の方法。
【請求項４５】  工程ｂ）の間に生成した細胞内ｃＡＭＰの量の測定を介して細胞溶解後にホスホジエステラーゼ酵素活性を測定する請求項３８〜４４の何れか１項に記載の方法。
【請求項４６】  ＰＤＥ７活性を阻害する化合物のインビトロのスクリーニング方法であって、該方法が下記工程：
ａ）適切な培地中に請求項１〜１３の何れか１項に記載のポリペプチドおよびレポーター遺伝子を同時発現する組み換え宿主細胞を準備すること；
ｂ）試験すべき候補化合物の所望の濃度を該培地に添加すること；
ｃ）レポーター遺伝子発現を測定すること；および、
ｄ）工程ｃ）で得られた酵素活性を工程ｂ）を省略した場合に得られる酵素活性と比較すること
を包含する上記方法。
【請求項４７】  組み換え宿主細胞が２量体エクジソン受容体を発現するＣＨＯ細胞系統よりなる請求項４６記載の方法。
【請求項４８】  誘導性調節配列に作動可能に連結した請求項１〜１３に記載のポリペプチドをコードする核酸を有する組み換えベクターで組み換え宿主細胞がトランスフェクトされている請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項４９】  調節配列がポナステロンのようなインデューサーにより誘導可能である請求項４８記載の方法。
【請求項５０】  工程ｂ）の前に、組み換え宿主細胞を、工程ａ）の間に誘導性調節配列を活性化するインデューサーの存在下に培養する請求項４６〜４９の何れか１項に記載の方法。
【請求項５１】  アデニル酸シクラーゼ活性化物質を工程ｂ）の終了時、停止溶液の添加前に添加する請求項４６〜５０の何れか１項に記載の方法。
【請求項５２】  レポーター遺伝子がβ−ラクタマーゼ遺伝子である請求項４６〜５１の方法。
【請求項５３】  ＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ触媒活性を阻害する化合物のインビトロのスクリーニングのためのキットであって、該キットが下記成分：ａ）請求項１〜１３記載のポリペプチド；
ｂ）場合により、ホスホジエステラーゼ触媒活性測定を行なうために必要な試薬；
を包含する上記キット。
【請求項５４】  ＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ活性を阻害する化合物のインビトロのスクリーニングのためのキットであって、該キットが下記成分：
ａ）請求項２６〜２９記載の組み換え宿主細胞；
ｂ）場合により、ホスホジエステラーゼ触媒活性測定を行なうために必要な試薬；
を包含する上記キット。
【請求項５５】  ＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ活性を阻害する化合物のインビトロのスクリーニングのためのキットであって、該キットが下記成分：ａ）請求項１〜１３記載のポリペプチドおよびレポーター遺伝子を同時発現する本発明の組み換え宿主細胞；
ｂ）場合により、レポーター遺伝子発現測定を実施するために必要な試薬；
を包含する上記キット。
【請求項５６】  ＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ活性を阻害する化合物をインビトロで選択するための方法であって、該方法が下記工程：
ａ）候補化合物を用いて請求項３４〜３７に記載の方法を実施すること；および、該候補
化合物がホスホジエステラーゼ活性を阻害することがわかった場合は、次に、
ｂ）工程ａ）で選択された阻害剤化合物を用いて請求項３８〜５２に記載の方法を実施すること；
を包含する上記方法。
【請求項５７】  ＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ活性を選択的に阻害する化合物を選択するための方法であって、該方法が下記工程：
ａ）請求項３４〜３７、３８〜５２および５６に記載の方法を実施することによりＰＤＥ７ホスホジエステラーゼ活性を阻害する化合物を選択すること；および、
ｂ）ＰＤＥ７以外のＰＤＥ酵素の少なくとも１つのホスホジエステラーゼ活性を阻害する能力がないことを、選択された阻害剤化合物について調べること；
を包含する上記方法。
【請求項５８】  ＰＤＥ３およびＰＤＥ４酵素のホスホジエステラーゼ活性を阻害する能力がないことを、選択された阻害剤について調べる、請求項５７記載の方法。
【請求項５９】  ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４、ＰＤＥ５およびＰＤＥ６酵素のホスホジエステラーゼ活性を阻害する能力がないことを、選択された阻害剤について調べる、請求項５７記載の方法。
【請求項６０】  請求項３４〜３７、３８〜５２、５６および５７〜５９に記載の方法に従って選択されたホスホジエステラーゼ阻害剤化合物。
【請求項６１】  医薬組成物の製造のための請求項３４〜３７、３８〜５２、５６および５７〜５９に記載の方法に従って選択されたホスホジエステラーゼ阻害剤化合物の使用。
【請求項６２】  ヒトまたは動物の治療、診断または手術において使用するための医薬組成物の製造のための請求項３４〜５２および５６〜５９の何れか１項に記載の方法により入手可能、同定可能、選択可能または特性化可能な化合物の使用。
【請求項６３】  ヒトまたは動物の治療、診断または手術において使用するための医薬組成物の製造のための請求項３４〜５２および５６〜５９の何れか１項に記載の方法により入手、同定、選択または特性化される化合物の使用。
【請求項６４】  免疫系に影響する疾患、例えば、ＡＩＤＳ、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、例えばＴ細胞関連疾患、例えば慢性関節リューマチ；炎症性疾患、例えば呼吸器炎症性疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息；胃腸炎症性疾患、例えばクローン病、結腸炎、膵臓炎、並びに白血病を含む種々の癌のような種々の病理学的状態の治療または予防のための医薬組成物の製造のための、請求項３４〜５２および５６〜５９の何れか１項に記載の方法により入手、同定、選択または特性化される化合物の使用。
【請求項６５】  免疫系に影響する疾患、例えば、ＡＩＤＳ、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、例えばＴ細胞関連疾患、例えば慢性関節リューマチ；炎症性疾患、例えば呼吸器炎症性疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息；胃腸炎症性疾患、例えばクローン病、結腸炎、膵臓炎、並びに白血病を含む種々の癌のような種々の病理学的状態の治療または予防のための医薬組成物の製造のための請求項３４〜５２および５６〜５９の何れか１項に記載の方法により入手可能、同定可能、選択可能または特性化可能である化合物の使用。
【請求項６６】  免疫系に影響する疾患、例えば、ＡＩＤＳ、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、例えばＴ細胞関連疾患、例えば慢性関節リューマチ；炎症性疾患、例えば呼吸器炎症性疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息；胃腸炎症性疾患、例えばクローン病、結腸炎、膵臓炎、並びに白血病を含む種々の癌のような種々の病理学的状態の治療または予防のための化合物の合成における、請求項３４〜５２および５６〜５９の何れか１項に記載の方法により入手、同定、選択または特性化される化合物の使用。