【手続補正書】
【提出日】平成20年2月1日(2008.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中の酵素的に活性なリポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）を測定する方法であって：
（ａ）Ｌｐ−ＰＬＡ２に特異的に結合する固定化された結合剤を、試料と接触させること；
（ｂ）固定化された結合剤を洗浄して、酵素的に活性な未結合の物質または干渉物質（１種または２種以上）を除去すること；
（ｃ）結合したＬｐ−ＰＬＡ２を、Ｌｐ−ＰＬＡ２の存在下で検出可能な生成物に変換される基質と接触させること；および
（ｄ）試料中の酵素的に活性なＬｐ−ＰＬＡ２を示す検出可能な生成物を測定すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
試料中の酵素的に活性なリポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）を測定する方法であって：
（ａ）Ｌｐ−ＰＬＡ２に特異的に結合する結合剤を、試料と接触させて、結合剤−Ｌｐ−ＰＬＡ２複合体を形成すること；
（ｂ）結合剤−Ｌｐ−ＰＬＡ２複合体を固定化すること；
（ｃ）固定化された結合剤−Ｌｐ−ＰＬＡ２複合体を洗浄して、酵素的に活性な未結合の物質または干渉物質（１種または２種以上）を除去すること；
（ｄ）固定化された結合したＬｐ−ＰＬＡ２を、Ｌｐ−ＰＬＡ２の存在下で検出可能な生成物に変換される基質と接触させること；および
（ｅ）試料中の酵素的に活性なＬｐ−ＰＬＡ２を示す検出可能な生成物を測定すること
を含む、前記方法。
【請求項３】
試料が、血清試料、血漿試料またはＥＤＴＡ処理血漿試料である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
固定化された結合剤または結合剤が抗体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
抗体が、モノクローナル抗体、ファージディスプレイ抗体またはポリクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
基質が、
【化１】
2007523644.tif 000001
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓおよび−Ｏ（ＣＯ）−からなる群から選択されており；
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯおよびＣＨ２からなる群から選択されている；
【化２】
2007523644.tif 000002
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓおよび−Ｏ（ＣＯ）−からなる群から選択されており；
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯおよびＣＨ２からなる群から選択されている；
【化３】
2007523644.tif 000003
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓおよび−Ｏ（ＣＯ）−からなる群から選択されており；
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯまたはＣＨ２からなる群から選択されている、
からなる群から選択されるか、あるいは、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）の酸化された誘導体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
さらに、段階（ｄ）の測定された検出可能な生成物を、酵素的に活性なＬｐ−ＰＬＡ２標準を含む対照中の検出可能な生成物に対して比較することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項８】
結合剤−Ｌｐ−ＰＬＡ２複合体が、固定化された化合物に結合させることにより固定化され、該固定化された化合物が、結合剤−Ｌｐ−ＰＬＡ２複合体に結合することができる抗体、タンパク質または化合物を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
個体における血管疾患を検出するための方法であって、請求項１〜８のいずれかに記載の方法を用いて、試料中の個体のＬｐ−ＰＬＡ２活性を決定することを含み、ここで、試料中のＬｐ−ＰＬＡ２の増大した活性が血管疾患を示す、前記方法。
【請求項１０】
血管疾患を処置する療法のための個体を選択するための方法であって、請求項１〜８のいずれかに記載の方法を用いて、試料中の個体のＬｐ−ＰＬＡ２活性を決定することを含み、ここで、試料中のＬｐ−ＰＬＡ２の増大した活性が、血管疾患を処置する療法から利益を享受する個体を示す、前記方法。
【請求項１１】
血管疾患を処置する療法に対する個体の応答をモニタリングするための方法であって、請求項１〜８のいずれかに記載の方法を用いて、試料中の個体のＬｐ−ＰＬＡ２活性を決定することを含み、ここで、試料中のＬｐ−ＰＬＡ２の低下した活性が、血管疾患を処置する療法に対して好ましく応答する個体を示す、前記方法。
【請求項１２】
試料中の酵素的に活性なリポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）を測定するためのキットであって、Ｌｐ−ＰＬＡ２に特異的に結合する結合剤およびＬｐ−ＰＬＡ２の存在下で検出可能な生成物に変換される基質を含む、前記キット。
【請求項１３】
基質が、
【化４】
2007523644.tif 000004
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓおよび−Ｏ（ＣＯ）−からなる群から選択されており；
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯおよびＣＨ２からなる群から選択されている；
【化５】
2007523644.tif 000005
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓおよび−Ｏ（ＣＯ）−からなる群から選択されており；
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯおよびＣＨ２からなる群から選択されている；
【化６】
2007523644.tif 000006
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓおよび−Ｏ（ＣＯ）−からなる群から選択されており；
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯまたはＣＨ２からなる群から選択されている、
からなる群から選択されるか、あるいは、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）の酸化された誘導体である、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
試料中の酵素的に活性なリポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）を測定する方法であって：
（ａ）試料を、試料中の活性なチオール（１種または２種以上）を還元する化合物と共にインキュベートすること；
（ｂ）インキュベートした試料を、酵素的に活性なＬｐ−ＰＬＡ２の存在下で遊離のチオール生成物に変換される基質と接触させること；および
（ｃ）試料中の酵素的に活性なＬｐ−ＰＬＡ２を示す遊離のチオール生成物を測定すること
を含む、前記方法。
【請求項１５】
試料が、血清試料、血漿試料またはＥＤＴＡ処理血漿試料である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
試料を、室温または３７℃でインキュベートする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
試料を、約２〜約１２０分インキュベートする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
基質が、
【化７】
2007523644.tif 000007
式中、
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯおよびＣＨ２からなる群から選択されている、
からなる群から選択されるか、あるいは（ａ）または（ｂ）の酸化された誘導体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
さらに、段階（ｃ）の測定された遊離のチオール生成物を、酵素的に活性なＬｐ−ＰＬＡ２標準を含む対照中の遊離のチオール生成物に対して比較することを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
試料中の酵素的に活性なリポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２（Ｌｐ−ＰＬＡ２）を測定するためのキットであって、活性なチオール（１種または２種以上）を還元する化合物およびＬｐ−ＰＬＡ２の存在下で検出可能な生成物に変換される基質を含む、前記キット。
【請求項２１】
基質が、
【化８】
2007523644.tif 000008
式中、
Ｒは、（ＣＨ２）４ＣＨ３、（ＣＨ２）６ＣＨ３、（ＣＨ２）８ＣＨ３、（ＣＨ２）１０ＣＨ３、（ＣＨ２）１２ＣＨ３、（ＣＨ２）１４ＣＨ３、および（ＣＨ２）７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）２ＣＨ３からなる群から選択されており；
Ｙ１は、（ＣＯ）１−２および（ＣＨ２）２−７からなる群から選択されており；かつ
Ｙ２は、ＣＯおよびＣＨ２からなる群から選択されている、
からなる群から選択されるか、あるいは（ａ）または（ｂ）の酸化された誘導体である、請求項２０に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５３】
【表９】
2007523644.tif 000009