【手続補正書】
【提出日】平成20年3月13日(2008.3.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
集団中の１つ以上の選択された細胞を精製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞と、産物に選択的に結合する因子とを接触させる工程であって、該捕獲マトリックスは、１つ以上の該細胞により分泌された該産物を局在化し、該因子は、光の特性として検出可能なシグナルを発生する、工程；
（ｂ）該細胞の集団に照明する工程であって、該集団はフレームに含まれる、工程；
（ｃ）該フレームから方向付けられる２つ以上の光の特性を検出する工程であって、第１の光の特性は、該集団の実質的に全ての細胞を同定し、そして第２の光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化される産物を同定する、工程；
（ｄ）（ｉ）該検出された第１の光の特性に関して該集団の実質的に全ての細胞を位置決定する工程；
（ｅ）該検出された第２の光の特性に関して１つ以上の細胞を選択する工程、ならびに
（ｆ）１つ以上の非選択細胞に放射線を照射する工程であって、該１つ以上の非選択細胞は、実質的に致死的な線量の放射線を受容し、それによって、所望の産物分泌プロファイルを有する１つ以上の選択された細胞が精製される工程を包含する、方法。
【請求項２】
集団中の１つ以上の選択された細胞を精製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）フレーム内の細胞の集団に照明する工程であって、該照明される細胞は、捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞に含まれ、該捕獲マトリックスは、該細胞の１つ以上により分泌された産物を局在化する、工程；
（ｂ）該フレームから方向付けられた２つ以上の光の特性を検出する工程であって、第１の光の特性は、該集団の実質的に全ての細胞を同定し、第２の光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｃ）該検出された第１の光の特性に関連して該集団の実質的に全ての細胞を位置決定する工程；
（ｄ）該検出された第２の光の特性に関連して１つ以上の細胞を選択する工程、ならびに
（ｅ）１つ以上の非選択細胞を照射する工程であって、各々の１つ以上の非選択細胞は、実質的に致死的な線量の放射線を受容し、それによって、所望の産物分泌プロファイルを有する１つ以上の選択された細胞が精製される工程を包含する、方法。
【請求項３】
（ｆ）前記細胞のさらなる集団に照明する工程であって、該さらなる集団は、さらなるフレームに含まれる工程、および工程（ｂ）から工程（ｅ）を繰り返すことをさらに包含する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記複数の細胞における前記非選択細胞の実質的に全てが、実質的に致死的な線量の放射線を受容するまで、工程（ｆ）の後に工程（ｂ）から工程（ｅ）を繰り返すことをさらに包含する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記実質的に致死的な線量の放射線が、１つ以上の放射線パルスで、各非選択細胞に送達される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
照明の前に、前記複数の細胞が、該細胞の実質的に全てと結合する試薬と接触させられ、該試薬が、第１の光の特性として検出可能なシグナルを発生する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
細胞の集団中の１つ以上の選択された細胞を精製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）フレーム内の細胞の集団に照明する工程であって、該照明される細胞は、捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞に含まれ、該捕獲マトリックスは、該細胞の１つ以上により分泌された産物を局在化する、工程；
（ｂ）該フレームから方向付けられた少なくとも１つの光の特性を検出する工程であって、光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｃ）（ｉ）該検出された光の特性に関して１つ以上の選択された細胞、および（ｉｉ）該フレーム内の１つ以上のドメインであって、各ドメインは、少なくとも１つの選択された細胞により占められた領域に対応する、ドメインを位置決定および選択する工程であって、該１つ以上のドメインは、該検出された光の特性に関して位置決定される、工程、ならびに
（ｄ）該フレーム内に含まれる非ドメイン領域に照射する工程であって、該非ドメイン領域内に存在する実質的に全ての細胞は、実質的に致死的な線量の放射線を受容し、それによって、所望の産物プロファイルを有している１つ以上の選択された細胞が精製される工程を包含する、方法。
【請求項８】
（ｅ）前記細胞のさらなる集団に照明する工程であって、該さらなる集団はさらなるフレームに含まれる工程、および工程（ｂ）から工程（ｄ）を繰り返すことを包含する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記複数の細胞における前記非選択細胞の実質的に全てが、実質的に致死的な線量の放射線を受容するまで、工程（ｅ）の後に工程（ｂ）から工程（ｄ）を繰り返すことをさらに包含する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
細胞の集団中の１つ以上の選択された細胞を精製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞と、産物に選択的に結合する因子とを接触させる工程であって、該捕獲マトリックスは、該複数の細胞のうちの１つ以上により分泌された該産物を局在化し、該因子は、光の特性として検出可能なシグナルを発生する、工程；
（ｂ）該複数の細胞の集団に照明する工程であって、該集団はフレームに含まれる、工程；
（ｃ）該フレームから方向付けられた少なくとも１つの光の特性を検出する工程であって、光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｄ）該検出された光の特性に関して１つ以上の選択された細胞を位置決定および選択する工程；
（ｅ）該フレーム内の１つ以上のドメインを選択する工程であって、各ドメインは、少なくとも１つの選択された細胞により占められた領域に対応し、該１つ以上のドメインは、該検出された光の特性に関して局在化される工程、ならびに
（ｆ）該フレーム内に含まれる非ドメイン領域に照射する工程であって、該非ドメイン領域内に存在する各細胞は、実質的に致死的な線量の放射線を受容し、それによって、所望の産物分泌プロファイルを有している１つ以上の選択された細胞が精製される工程を包含する、方法。
【請求項１１】
（ｇ）前記細胞のさらなる集団に照明する工程であって、該さらなる集団はさらなるフレームに含まれる工程、および工程（ｃ）から工程（ｅ）を繰り返すことをさらに包含する、請求項１または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記複数の細胞における前記非選択細胞の実質的に全てが、実質的に致死的な線量の放射線を受容するまで、工程（ｇ）の後に工程（ｃ）から工程（ｆ）を繰り返すことをさらに包含する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記１つ以上の選択された細胞が、（ａ）前記複数の他の細胞に比べて高レベルの産物を産生する細胞であるか、（ｂ）前記複数他の細胞に比べて低レベルの産物を産生する細胞であるか、または（ｃ）前記複数の他の細胞に比べて検出不可能なレベルの産物を産生する細胞である、請求項１、２、４、７、９、１０または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記精製された１つ以上の選択された細胞を増殖させる工程をさらに包含する、請求項１、２、７、または１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記フレームが視野の一部であり、該視野が、４０ｍｍ２超の面積を有している視野の一部である、請求項１、２、３、４、７、８、９、１０、１１または１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記フレームが視野の一部であり、該視野が、８０ｍｍ２超の面積を有している視野の一部である、請求項１、２、３、４、７、８、９、１０、１１または１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記産物と選択的に結合する因子が、抗体、抗体フラグメント、アプタマー、基質、及び該産物に対するリガンドからなる群より選択される、請求項１または１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記１つ以上の選択された細胞が、前記１つ以上の選択された細胞の近傍の前記捕獲マトリックスに局在化された産物の量に対応するシグナル値に関して同定される、請求項１、２、７または１０に記載の方法。
【請求項１９】
前記実質的に致死的な線量の放射線が、１つ以上の放射線パルスで、非ドメイン領域内に存在する各細胞に送達される、請求項７または１０に記載の方法。
【請求項２０】
前記実質的に致死的な線量の放射線が、０．１Ｊ／ｃｍ２超のエネルギー密度を有している、請求項１、２、７または１０に記載の方法。
【請求項２１】
前記実質的に致死的な線量の放射線が、１０７Ｗ／ｃｍ２超の照射量を有している、請求項１、２、７または１０に記載の方法。
【請求項２２】
前記放射線が、２００〜３０００ｎｍの間の波長を有している電磁放射線を含む、請求項１、２、７または１０に記載の方法。
【請求項２３】
細胞の集団中の１つ以上の細胞の産物分泌プロファイルを決定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）フレーム内の細胞の集団に照明する工程であって、該照明される細胞は、捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞に含まれ、該捕獲マトリックスは、該細胞の１つ以上により分泌された産物を局在化する、工程；
（ｂ）該フレームから方向付けられた光のうちの少なくとも１つの特性を検出する工程であって、該光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
（ｃ）該検出された光の特性に関連して１つ以上の細胞を位置決定する工程；
（ｄ）該１つ以上の細胞の該産物分泌プロファイルの指標である該光の特性から定量的シグナル値を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２４】
細胞の集団中の１つ以上の細胞の産物分泌プロファイルを決定するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）捕獲マトリックスの近位に固定化された複数の細胞と、産物に選択的に結合する因子とを接触させる工程であって、該捕獲マトリックスは、１つ以上の該細胞により分泌された該産物を局在化し、該因子は、光の特性として検出可能なシグナルを発生する、工程；
（ｂ）該細胞の集団に照明する工程であって、該集団はフレームに含まれ、該照明される集団は、該複数の細胞内に含まれる、工程；
（ｃ）該フレームから方向付けられる光のうちの少なくとも１つの特性を検出する工程であって、該光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化される産物を同定する、工程；
（ｄ）該検出された光の特性に関して１つ以上の細胞を位置決定する工程；
（ｅ）産物分泌プロファイルを示す該光の特性から定量的シグナル値を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２５】
前記定量的シグナル値は、精製のための細胞を選択するために使用される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記選択された細胞は、前記集団中の他の細胞と比較して高レベルの組換えヒト化抗体を生成する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
細胞の集団中で１つ以上の選択された細胞を精製するための方法であって、該方法は、以下の工程：
捕獲マトリックスの近位に固定化された細胞の集団を提供する工程であって、該捕捉マトリクスは、１つ以上の該細胞により分泌された該産物を局在化する、工程；
該細胞の集団と、該産物に選択的に結合する因子とを接触させる工程であって、該因子は、光の特性として検出可能なシグナルを発生する、工程；
該細胞の集団に照明する工程；
２つ以上の光の特性を検出する工程であって、第１の光の特性は、該細胞の集団の実質的に全ての細胞を同定し、第２の光の特性は、該捕獲マトリックスに局在化された産物を同定する、工程；
該検出された第１の光の特性に関連して該集団の実質的に全ての細胞を位置決定する工程；
該検出された第２の光の特性に関連して該細胞の集団から１つ以上の細胞を選択する工程；ならびに
非選択細胞を照射する工程であって、該非選択細胞は、実質的に致死的な線量の放射線を受容し、それによって、所望の産物分泌プロファイルを有する１つ以上の選択された細胞が精製される工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記産物が、ポリペプチド、抗体、抗体フラグメント、サイトカイン、増殖因子、酵素、ホルモン、神経伝達物質、シグナル伝達分子、および治療用タンパク質またはこれらの組み合わせである、請求項１、２、７、１０、２３、２４または２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記捕獲マトリックスが、プロテインＧ、プロテインＡ、抗体、抗体フラグメント、アプタマー、及び前記産物についてのリガンドまたはこれらの組み合わせである、請求項１、２、７、１０、２３、２４または２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記捕獲マトリックスがゲルを含む、請求項１、２、７、１０、２３、２４または２７に記載の方法。