(57)【要約】  本発明は、安全性の高い、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物、その組成物を含有する医薬製剤、健康食品、又は機能性食品を提供することを目的とする。  下記式（Ｉ）で表されるアリールヘプタノイド化合物及びその類縁体を有効成分として含有することにより、骨疾患の予防及び／又は治療が可能である。2008016105.tif 000054（式（Ｉ）中、Ｒ1及びＲ5は、Ｈ、Ｃ１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基；Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基；Ｒ5は、また、他方のアリール基のヘプチレン基に対してメタ位に結合して環を形成してもよい。）
2008016105.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド化合物及びその類縁体化合物を有効成分として含有する、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【化１】
2008016105.tif 000041
（式（Ｉ）中、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、水素原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ5は、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であるか、他方のアリール基のヘプチレン基に対してメタ位に結合して環を形成してもよい。また、２つのアリール基が、それぞれ、ヘプチレン基に対してメタ位の炭素間で結合して、環を形成してもよい。）
【請求項２】
上記式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド化合物は、下記式（Ia）で表されるものであることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【化２】
2008016105.tif 000042
【請求項３】
前記式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド化合物及びその類縁体は、下記式（II）又は（III）で表される化合物であることを特徴とする、請求項１に記載の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【化３】
2008016105.tif 000043
【化４】
2008016105.tif 000044
（式（II）及び（III）中、Ｒ1及びＲ5は上記と同様に、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、それぞれ独立に、水素原子、酸素原子、ヒドロキシ基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基を表す。）
【請求項４】
前記式（II）で表されるジアリールヘプタノイド化合物及びその類縁体は、下記式（IIａ）〜（IIｇ）及び（IIｈ）からなる群から選ばれるものであることを特徴とする、請求項１又は３に記載の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【化５】
2008016105.tif 000045
【化６】
2008016105.tif 000046
【化７】
2008016105.tif 000047
【化８】
2008016105.tif 000048
【化９】
2008016105.tif 000049
【化１０】
2008016105.tif 000050
【化１１】
2008016105.tif 000051
【化１２】
2008016105.tif 000052
【請求項５】
下記式（ＩＶ）で表されるジアリールヘプタノイドの半量体化合物及びその類縁体化合物を有効成分として含有する、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【化１３】
2008016105.tif 000053
（式（ＩＶ）中、Ｒ１は上記と同様に、水素原子、炭素数が１から３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれる官能基であり；Ｒ２は、水素原子、酸素原子、ヒドロキシ基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基を表す。）
【請求項６】
メグスリノキ（Acer nikoense Maximowicz）、三花槭（サンファチ、和名：オニメグスリ）（Acer triflorum）、血皮槭（シュエピチ、Acer griseum）、ダケカンバ（Betula ermanii Cham.）、シラカンバ（Betula platyphylla）、ウダイカンバ（Betula maximowicziana）、ヤエガワカンバ（コオノオレ、Betula davurica Pall.）、ハンノキ（Alnus japonica Steud.）、及びボスウェリア・オバリフォリオラータ（Boswellia ovalifoliolata）からなる群から選ばれるいずれかの樹木の乾燥樹皮から抽出され、請求項１〜５のいずれかに記載のジアリールヘプタノイド化合物又はこれらの類縁体を含有する抽出物を含む、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【請求項７】
歯槽骨の増加作用を有する、請求項１〜６のいずれかに記載の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物を含有する骨疾患の予防及び／又は治療用医薬製剤。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物を少なくとも１種以上含有する、骨疾患の予防及び／又は治療を補助するための機能性食品。
【請求項１０】
メグスリノキ（Acer nikoense Maximowicz）、三花槭（サンファチ、和名：オニメグスリ）（Acer triflorum）、血皮槭（シュエピチ、Acer griseum）、ダケカンバ（Betula ermanii Cham.）、シラカンバ（Betula platyphylla）、ウダイカンバ（Betula maximowicziana）、ヤエガワカンバ（コオノオレ、Betula davurica Pall.）、ハンノキ（Alnus japonica Steud.）、及びボスウェリア・オバリフォリオラータ（Boswellia ovalifoliolata）からなる群から選ばれるいずれかの樹木の乾燥樹皮から抽出され、請求項１〜５のいずれかに記載のジアリールヘプタノイド化合物又はこれらの類縁体を含有する抽出物を含む、機能性食品。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物を少なくとも１種以上含有する、健康食品。
【請求項１２】
メグスリノキ（Acer nikoense Maximowicz）、三花槭（サンファチ、和名：オニメグスリ）（Acer triflorum）、血皮槭（シュエピチ、Acer griseum）、ダケカンバ（Betula ermanii Cham.）、シラカンバ（Betula platyphylla）、ウダイカンバ（Betula maximowicziana）、ヤエガワカンバ（コオノオレ、Betula davurica Pall.）、ハンノキ（Alnus japonica Steud.）、及びボスウェリア・オバリフォリオラータ（Boswellia ovalifoliolata）からなる群から選ばれるいずれかの樹木の乾燥樹皮から抽出され、請求項１〜５のいずれかに記載のジアリールヘプタノイド化合物又はこれらの類縁体を含有する抽出物を含む、健康食品。
【請求項１３】
骨疾患の予防及び／又は治療を補助するために使用されるものであることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれかに記載の健康食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生薬由来のジアリールヘプタノイド類化合物のうち、下記式（Ｉ）で表される化合物、これらの類縁体、及びこれらの化合物及び類縁体を含む植物からの抽出物の用途に関する。【０００２】
【化１】
2008016105.tif 000003
【０００３】
（式（Ｉ）中、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、水素原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ5は、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であるか、他方のアリール基のヘプチレン基に対してメタ位に結合して環を形成してもよい。また、２つのアリール基が、それぞれ、ヘプチレン基に対してメタ位の炭素間で結合して、環を形成してもよい。）【０００４】
より詳細には、上記式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド類化合物、又はこれらの類縁体を少なくとも１種以上含有する健康食品、機能性食品、骨疾患の予防及び／又は治療効果を有する医薬組成物、並びに前記医薬組成物を有効成分として含有する医薬製剤に関する。ここで、本明細書中、「類縁体」は、上記式（Ｉ）で表される化合物の生理学的に許容される塩、水和物及び配糖体を含むものとする。
【背景技術】
【０００５】
骨に関する疾患は、外傷性骨折や疲労骨折等に代表される外因性疾患と、骨多孔症、骨粗鬆症、高カルシウム血症、高副甲状腺ホルモン（以下、「PTH」ということがある。）血症、骨ページェット病、関節炎、リウマチ、乳ガンの骨転移、骨軟化症、悪性腫瘍その他の疾病に起因する骨組織の脆弱化、及び栄養障害による骨組織の脆弱化といった内因性の疾患とに大別される。本明細書中においては、「骨に関する疾患」という用語には、上述した外因性疾患及び内因性疾患以外に、歯槽骨の吸収及びそれに起因する疾患が含まれるものとする。【０００６】
ヒトの骨は、骨芽細胞による骨形成と破骨細胞による骨吸収とを絶えず繰り返しつつ、恒常性を維持している。しかし、加齢や炎症等により、恒常性が維持できなくなり、骨吸収が過剰になると、骨粗鬆症や関節リウマチ等の病態が生じる。【０００７】
こうした内因性の骨疾患の中でも、骨粗鬆症の患者数は高齢者数の増加につれて増加しつつある。また、食生活の変化と運動量の低下に伴って、カルシウムの摂取量の低下や骨組織への定着率の低下が生じ、骨組織の脆弱化が加速されているといわれている。【０００８】
骨折は、骨組織のある部分の連絡が外力によって断たれた状態をいい、骨折部位に著明な疼痛を伴う。健常人の場合には、例えば、交通事故等によってかなり大きな外力がかからない限り骨折は起こらないが、骨量が低下して骨組織が弱くなると、歩いたり走ったりしている最中にころんだ等、さほど大きくない外力がかかっただけでも骨折が起こる。また、上記のような骨粗鬆症等の内因性の疾患に起因して骨量が低下している場合には、階段で躓いたり、咳込んだりしたときにかかるわずかな外力によっても骨折が生じるようになる。【０００９】
骨折が起こった場合には、一般的には、ずれている骨の位置を牽引等によって修正し、ボルトやピンで固定できる場合には固定し、その後は患者の自然治癒力に委ねるという治療方法が採用されている。【００１０】
また、歯周炎に罹患することによって歯が失われると、歯を支える顎の骨である歯槽骨が吸収されて、他の歯を十分に支えることができなくなることにつながる。一般的に、歯が失われると、歯槽骨は歯を支える必要がなくなることから吸収され易くなり、さらに歯が失われ易くなる。そして、十分に食事が取れないことによって、骨形成に必要な栄養が摂取できず、骨形成と骨吸収のバランスが崩れるために、骨粗鬆症等の内因性の骨疾患を発症することにもつながる。【００１１】
一方で、骨粗鬆症等の内因性の疾患では骨の石灰質と骨基質とがともに減少しているため自然治癒が遅れることが多く、高齢者の場合にはその間に骨折部位以外の関節が固まって動かなくなり、寝たきりになるといったケースも少なくない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、骨折の治療、特に高齢者における骨折の治療の際に、治癒に要する期間を短縮することについては、要介護者数を減少させるという観点からも、強い社会的な要請がある。一方で、治療に薬剤を使用する場合には、こうした薬剤には、治療効果の高さのみならず、副作用が少ない等、安全性の高さも要求される。【００１３】
こうした治療には、従来、カルシウム代謝に重要な役割を果たすビタミンＤの誘導体である活性型ビタミンＤ3、カルシトニン及びその誘導体、エストラジオールを初めとするホルモン剤、並びに各種のカルシウム製剤等が臨床的に使用されてきた。【００１４】
しかし、こうした薬剤は、体内における吸収や代謝の関係から経口投与ができない場合もあり、また、受容体レベルの個人差が大きいために効果の予見性に欠けるといった問題もあった。このため、これらに代わる新たな治療剤が求められていた。【００１５】
一方で、従来、和漢の生薬や民間薬（以下、「生薬等」という。）として使用されてきた植物の葉、全草、根、果実等からの抽出の分析によって、これらの中には多くの化合物が含まれており、また、従来知られていた効能以外の効能があることも次第に明らかになってきている。【００１６】
例えば、メグスリノキ（Acer nikoense、別名、「長者の木」ともいう）は、古来、この木の樹皮を煎じて洗眼薬として用いてきたため、このように命名されているが、眼精疲労や肝臓によいとされてきている。さらに、近年では、この樹皮からの抽出物に、抗炎症作用（非特許文献１及び２参照）やメラニン合成抑制作用（特許文献１参照）、抗癌作用（非特許文献３及び４参照）があること等が報告されている。【００１７】
また、歯槽骨の吸収により、歯が失われるという事態を防止又は改善するためには、ＧＴＲ（Guided Tissue Regeneration)法や、エムドゲイン（登録商標）法が開発されている。ＧＴＲ法とは、１９８０年代の半ばに開発された方法で、骨吸収により骨がなくなった部分に医療用のゴアテックスの皮膜を設置することにより、骨を再生させようとする方法である。しかし、この方法では、歯肉の下にそっとゴアテックスの膜をはさんで縫合しなければならないが、欧米人に比べて歯肉が薄いアジア系の人種の場合、手術が煩雑になるだけでなく、術後、何日かして膜が露出することもある。こうなると、感染症が生じたりするため、骨は形成されない。【００１８】
エムドゲイン（登録商標）は、こうした問題点を改善すべく開発された生物由来の製剤である。この製剤は、幼弱豚の歯胚から抽出したタンパク質の１種を使用したものであり、歯が生えてくる時と同じ環境を作りだすことによって、再度骨を歯の周囲に呼び込んで骨を再生させようとするものである。【００１９】
しかし、この製剤は、部分的に骨が吸収されてしまった場合、すなわち、１壁性の垂直性骨欠損の場合には効果はあるもの、歯の周囲３６０度の骨が水平的に下がってしまった様な場合は適用外となる。また、生物由来製剤であることから、将来的に何らの問題も生じないとは言い切れない。【００２０】
【特許文献１】特開2006-137679
【非特許文献１】T. Morikawa, J. Tao, K. Ueda, H. Matsuda and M. Yoshikawa, Medicinal Foodstuffs. XXXI. Structure of New Aromatic Constituents and Inhibitors of Degranulation in RBL-2H3 Cells from a Japanese Folk Medicine, the Stem Bark of Acer nikoense., Chem. Pharm. Bull., 51(1),62-67(2003).
【非特許文献２】T. Morikawa, J. Tao, I. Toguchida, H. Matsuda and M. Yoshikawa, Structure of New Cyclic Diarylheptanoids and Inhibitors of Nitric Oxide Production from Japanese Folk Medicine Acer nikoense., J. Nat. Prod., 66,86-91(2003).
【非特許文献３】J. Ishida, M. Kozuka, H. Tokuda, H. Nishino, S. Nagumo, K. H. Lee and M. Nagai, Chemopreventive Potential of Cyclic Diarylheptanoids., Bioorg. Med. Chem., 10, 3361-3365(2002).
【非特許文献４】S. Okabe, M. Suganuma, Y. Imayoshi, S. Taniguchi, T. Yoshida and H. Fujiki, New TNF-a Releasing Inhibitors, Geraniin and Corilagin, in Leaves of Acer nikoense, Megusurino-ki., Biol. Pharm. Bull., 24(10), 1145-1148(2001).
【非特許文献５】「ブタ歯胚組織使用歯周組織再生材料  生物由来製品  エムドゲインゲル」（株式会社ヨシダ、生化学工業株式会社が作成したパンフレット）EMD5（RM）2005年6月作成
【００２１】
ところで、骨疾患の患者数を減少させる最も有効な手段は、骨疾患の予防である。すなわち、健常人の場合には、骨量又は骨密度の低下を防止すること、ある程度骨量又は骨密度が低下しているが未発症の者（いわゆる、骨疾患患者予備軍）の場合には、骨量又は骨密度の低下を抑え、できる限り骨量又は骨密度を上昇させること、が有効な予防手段となり得る。【００２２】
具体的には、その者がどの程度疾患の発症に近い段階にあるかによって、予防用医薬製剤を投与する、又は機能性食品等の摂取を行うといった予防策をとることになる。【００２３】
以上のように、骨疾患においても、上述したようにすでに疾患を発症した患者に対する治療手段ばかりでなく、未発症者又は健常人が発症しないようにするための有効な予防手段に対する社会的な要請がある。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
本発明は、上記のような状況の下で完成されたものである。すなわち、本発明の発明者らは、薬理効果の高さと安全性とに留意しつつ、古くから生薬等として使用されてきた植物に含まれる成分を中心として、骨形成促進作用を有する化合物のスクリーニングを進めた結果、公知の化合物に従来全く知られていなかった活性があることを見出し、本発明を完成したものである。【００２５】
すなわち、本発明は、下記の一般式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド類化合物及びそれらの配糖体を有効成分として含有する、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物である。
各種のスクリーニングの結果、生薬由来のジアリールヘプタノイド類化合物及びそれらの配糖体のうち、下記の一般式（Ｉ）で表されるものが、骨芽細胞の分化促進及び石灰化の促進という新たな活性を有することが明らかになった。【００２６】
【化２】
2008016105.tif 000004
【００２７】
ここで、式（Ｉ）中、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、水素原子、ヒドロキシ基、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ5は、水素原子、炭素数１〜３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であるか、他方のアリール基のヘプチレン基に対してメタ位に結合して環を形成してもよい。また、２つのアリール基が、それぞれ、ヘプチレン基に対してメタ位の炭素間で結合して、環を形成してもよい。【００２８】
上記式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド化合物は、下記式（Iａ）で表されるものであることが、全身的な骨芽細胞の分化及び石灰化の促進という活性を有する面で好ましい。【００２９】
【化３】
2008016105.tif 000005
【００３０】
また、上記式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド化合物及びその配糖体は、骨芽細胞の分化促進活性を有することから、下記式（II）又は（III）で表される化合物であることが好ましい。【００３１】
【化４】
2008016105.tif 000006
【００３２】
【化５】
2008016105.tif 000007
【００３３】
上記式（II）及び（III）中、Ｒ1及びＲ5は上記と同様に、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、それぞれ独立に、水素原子、酸素原子、ヒドロキシ基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基を表す。【００３４】
ここで、上記式（II）で表される化合物及び配糖体としては、下記式（IIａ）〜（IIｇ）及び（IIｈ）からなる群から選ばれる少なくとも１種以上の化合物又は配糖体であることが好ましく、骨芽細胞の分化促進活性及び石灰化の促進活性の高さから、下記式（IIａ）〜（IIｄ）であることがさらに好ましい。【００３５】
【化６】
2008016105.tif 000008
【００３６】
【化７】
2008016105.tif 000009
【００３７】
【化８】
2008016105.tif 000010
【００３８】
【化９】
2008016105.tif 000011
【００３９】
【化１０】
2008016105.tif 000012
【００４０】
【化１１】
2008016105.tif 000013
【００４１】
【化１２】
2008016105.tif 000014
【００４２】
【化１３】
2008016105.tif 000015
【００４３】
また、本発明の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物に有効成分として含まれる、上記式（III）で表される化合物及び配糖体としては、下記式（IIIa）で表されるジアリールヘプタノイド化合物の類縁体、その生理学的に許容される塩、又は水和物であることが好ましい。【００４４】
【化１４】
2008016105.tif 000016
【００４５】
さらにまた、本発明の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物に有効成分として含まれる化合物としては、下記式（IV）で表されるジアリールヘプタノイド化合物の類縁体、その生理学的に許容される塩、又は水和物であることが好ましい。【００４６】
【化１５】
2008016105.tif 000017
【００４７】
上記式（IV）中、Ｒ1は上記と同様に、水素原子、炭素数が１から３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれる官能基であり；Ｒ2は、水素原子、酸素原子、ヒドロキシ基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基を表す。【００４８】
ここで、本発明の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物に有効成分として含まれる、上記式（IV）で表される化合物及び配糖体としては、下記式（IVa）で表されるジアリールヘプタノイド化合物、及びその類縁体、その生理学的に許容される塩、又は水和物であることが好ましい。【００４９】
【化１６】
2008016105.tif 000018
【００５０】
すなわち、本発明は、上記式（Ｉ）、（II）、（III）及び（IV）のいずれかで表される化合物又はそれらの配糖体のうち、少なくとも１種以上を有効成分として含有する骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物である。【００５１】
これらの化合物又は配糖体のうち、上記式（Iａ）、（IIａ）〜（IIｈ）、（IIIａ）及び（IVａ）で表される化合物は、下記のような名称を有する化合物である。【００５２】
【表１】
2008016105.tif 000019
*1：グルコース      *2：アピオース【００５３】
上記式（Ｉ）で表される化合物は、上記式（Iａ）、（IIａ）〜（IIｈ）、（IIIａ）及び（IVａ）で表される化合物のうち、アセロシドＩ（Aceroside I：・-D-Glucopyranoside, (12S)-12-hydroxy-2-oxatricyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18 -hexaen-4-yl (9CI)）、アセロシドB1（Aceroside B1：・-D-Glucopyranoside,(10R)-10-hydroxy-2-oxatricyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaen-4-yl (9CI)）、アセロゲニンＡ（Acerogenin A：2-Oxatricyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaene-4,12-diol, (12R)- (9CI)）及び(R)-アセロゲニンＢ（(R)-Acerogenin B：2-Oxatricyclo[13.2.2.13,7]eicosa-3,5,7(20),15,17,18-hexaene-4,10-diol, (10R)- (9CI)）からなる群から選ばれる化合物は、高い骨芽細胞の分化促進作用及び骨芽細胞の石灰化作用を有することから、好適に使用することができる。【００５４】
以下、上記式（IIａ）〜（IIｈ）で表される化合物は、それらの配糖体も含めて「アセロゲニン等」ということがある。こうした化合物及び配糖体は、必要に応じて生理学的に許容される塩、水和物として用いることができる。塩を使用すると、後述する健康食品、機能性食品又は医薬製剤の調製が容易となるという利点がある。【００５５】
上述した上記式（Iａ）、（IIａ）〜（IIｈ）、（IIIａ）及び（IVａ）は、メグスリノキ（Acer nikoense Maximowicz）、三花槭（サンファチ、和名：オニメグスリ）（Acer triflorum）、血皮槭（シュエピチ、Acer griseum）、ダケカンバ（Betula ermanii Cham.）、シラカンバ（Betula platyphylla）、ウダイカンバ（Betula maximowicziana）、ヤエガワカンバ（コオノオレ、Betula davurica Pall.）、ハンノキ（Alnus japonica Steud.）、及びボスウェリア・オバリフォリオラータ（Boswellia ovalifoliolata）からなる群から選ばれるいずれかの樹木の乾燥樹皮の抽出物から得ることができる。【００５６】
メグスリノキは、別名を長者の木ともいい、秋田県及び青森県を除く本州全域及び四国、並びに宮崎県・鹿児島県を除く九州の山地に自生する。日本固有のカエデ科に属する落葉高木で、雌雄異株である。この木の灰色の樹皮を乾燥させ、煎じて洗眼薬にするため、「メグスリノキ」と呼ばれている。【００５７】
メグスリノキの歴史は古く、戦国時代に、北近江や播州で眼病の特効薬として評判になっていた。葉の部分には、トリペノイドであるβ−アミリン、ステロールであるβ−シトステロール配糖体、フラボノールであるクエルセチンやその配糖体、安息香酸誘導体であるエラグ酸、タンニンであるゲラニイン等が含まれる。【００５８】
また、材の部分には、上記のβ−シトステロール及びその配糖体、クマリン誘導体であるスコポレチン、配糖体であるアセロシドＩ、エピ−ロドデンドリン等が含まれる。
さらに、樹皮の部分には、葉にも含まれているα−アミリン、β−シトステロール及びその配糖体、スコポレチン、メチルヘマトメート（Methyl hematommate）、ロドデンドロール、アセロゲニン、カテキン、エピ−ロドデンドリン等が含まれる。【００５９】
中国の北部及び朝鮮を原産とする三花槭（オニメグスリ）（Acer triflorum）及び中国の四川、湖北を原産とする血皮槭（Acer griseum）の材の樹皮からは、アセロシドIX及びアセロシドＸが得られる。アセロシドIXを酸加水分解することによりアセロゲニンＧ、及びグルコース及びアピオースといった糖が得られる。【００６０】
ダケカンバ（Betula ermanii Cham.）、シラカンバ（Betula platyphylla）、ウダイカンバ（Betula maximowicziana）、及びヤエガワカンバ（コオノオレ、Betula davurica Pall.）は、いずれもカバノキ科カバノキ属（Betula）に属する。カバノキ属には３５種が含まれ、北半球の温帯〜亜寒帯にかけて広く分布することが知られている。
シラカンバ（Betula platyphylla）は、北海道（海抜０〜７００ｍ）及び岐阜県以東の本州（海抜７００ｍ〜１６００ｍ）に分布する落葉高木である。シラカンバからは、ロードデンドリン（rhododendrin、ベツロシド（betuloside）ともいうことがある）、アセロシドVII、アセロシドVIII、アセロゲニンＥ、(-)-ロードデンドロール、15-メトキシ-17-O-メチル-7-オキソアセロゲニンＥ、及びアセロゲニンＫ等が得られる。【００６１】
北海道及び本州中部分布するウダイカンバ（Betula maximowicziana）は、別名、マカバ又はマカンバとも呼ばれる。ウダイカンバの内皮からは、アセロゲニンＥ、16-ヒドロキシ-17-O-メチルアセロゲニンＥ等が得られる。
ダケカンバ（Betula ermanii Cham.）は、国内では、北海道、中部以北の本州、四国に分布する、また、国外では、朝鮮半島、中国東北部、内蒙古、樺太、千島、カムチャツカに分布する。ダケカンバの材の内皮からは、アセロゲニンＥ（(3R)-3,5'-ジヒドロキシ-4'-メトキシ-3',4”-オキソ-1,7-ジフェニル-1-ヘプテノン）等が得られる。また、ヤエガワカンバ（コオノオレ、Betula davurica Pall.）は、国内では、北海道、本州に、国外では、朝鮮、中国、ウスリー、アムール等に分布する。ヤエガワカンバの内皮からは、アセロゲニンＥ、17-O-メチル-7-オキソアセロゲニンＥ、15-メトキシ-17-O-メチル-7-オキソアセロゲニンＥ等が得られる。【００６２】
ハンノキ（Alnus japonica Steud.）は、カバノキ科ハンノキ属に属し、日本全国に分布する。ハンノキの実からは、アセロゲニンＬ等が得られる。インド全域に分布するボスウェリア・オバリフォリオラータ（Boswellia ovalifoliolata）からは、アセロゲニンＣ（3α-ヒドロキシャス-12-エン (3α-hydroxyous-12-ene)）等が得られる。【００６３】
本発明はまた、上述した式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド化合物及びその類縁体を、有効成分として含有する、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬製剤である。ここで、「類縁体」には、上記のジアリールヘプタノイド化合物及びその半量体、これらの配糖体、これらの生理学的に許容される塩、若しくは水和物が含まれる。また、本発明の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物は、歯槽骨の増加作用をも有するものである。【００６４】
本発明はさらにまた、上述した式（IV）で表されるジアリールヘプタノイド化合物及びその類縁体化合物を有効成分として含有する、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬製剤である。ここで、「類縁体」は上記と同様である。また、この骨疾患の予防及び／又は治療用医薬製剤も、歯槽骨の増加作用を有するものである。【００６５】
ここで、前記骨疾患の予防及び／又は治療用医薬製剤中における前記有効成分の含量は、製剤の１用量当たり０．１〜１００ｍｇであることが好ましく、０．１〜５０ｍｇであることがより好ましく、０．３〜１０ｍｇであることが特に好ましい。【００６６】
また、前記骨疾患の予防及び／又は治療用医薬製剤は、経口投与可能な剤形であることが好ましく、錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、トローチ剤、液剤、及び液剤を含浸させた球状のゲル剤からなる群から選ばれるものであることが好ましい。【００６７】
本願発明のこうした剤形の製剤が効果を有する骨疾患としては、内因性骨疾患、外因性骨疾患、又は栄養障害のいずれに起因するものも挙げることができる。前記内因性骨疾患の場合には、骨多孔症、骨粗鬆症、高カルシウム血症、高PTH血症、骨ページェット病、関節炎、関節リウマチ、乳癌の骨転移、骨軟化症、悪性腫瘍、及び栄養障害からなる群から選ばれる疾患に起因する骨組織の脆弱化に起因するものである場合に、本発明の骨疾患の予防及び／又は治療用医薬製剤を好適に使用することができる。また、前記外因性骨疾患の場合には、外傷性骨折又は疲労骨折等の場合に好適に使用することができ、歯槽骨の減少に対しても好適に使用することができる。
特に、骨芽細胞の分化が促進されることにより骨形成が促進されるため、こうした骨疾患の発症を予防し、又は症状を緩和させる上で治療効果が高い。【００６８】
本発明はさらにまた、上述した各化合物、これらの配糖体、これらの生理学的に許容される塩及び水和物からなる群から選ばれる１種以上を含有する機能性食品である。本発明の機能性食品は、メグスリノキをはじめとする上述した植物からの抽出物を含んでいてもよい。ここで、これらからの抽出物に含まれるこうした化合物の生理学的に許容される塩及び水和物は、上述したとおりである。【００６９】
本発明の機能性食品はまた、骨疾患の予防及び／又は治療を補助するために使用されるものであることが好ましい。ここで、前記化合物、それらの生理学的に許容される塩及び水和物からなる群から選ばれるものの含有量は、１００ｇ当たり０．１〜５ｍｇであることが好ましく、０．１〜３ｍｇであることがより好ましい。これらの含有量を０．３〜１ｍｇとすると、骨疾患の予防及び／又は治療を補助する効果が最も高くなる。【００７０】
本発明はさらにまた、上述した各化合物、これらの配糖体、これらの生理学的に許容される塩及びこれらの水和物からなる群から選ばれる１種以上を含有する健康食品である。本発明の健康食品は、メグスリノキをはじめとする上述した植物からの抽出物を含んでいてもよい。ここで、これらからの抽出物に含まれるこうした化合物の生理学的に許容される塩及び水和物は、上述したとおりである。【００７１】
上記健康食品は、骨疾患の予防及び／又は治療を補助するために使用されるものであることが好ましい。前記化合物、それらの生理学的に許容される塩及び水和物からなる群から選ばれるものの含有量は、１００ｇ当たり０．１〜５ｍｇであることが好ましく、０．１〜３ｍｇであることがより好ましい。これらの含有量を０．３〜１ｍｇとすると、骨疾患の予防及び／又は治療を補助する効果が最も高くなる。【００７２】
上述した化合物、これらの配糖体、これらの生理学的に許容される塩及びこれらの水和物からなる群から選ばれる１種以上のもの、又はメグスリノキをはじめとする上述した植物からの抽出物を、機能性食品や健康食品とすることにより、日常生活の中において骨芽細胞の分化を促進し、骨形成促進作用を有する素材を容易に摂取することができることになる。
【発明の効果】
【００７３】
本発明によれば、優れた骨芽細胞の分化を促進し骨形成を促進するという作用を有する、機能性食品、健康食品、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物、並びに骨疾患の予防及び／又は治療剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１Ａ】図１Ａは、MC3T3-E1細胞を用いた骨芽細胞分化に対するアセロシドＩの効果（ALPの活性の変化）を示す図である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、図１Ａと同じ細胞を用いたときのアセロシドB1の効果（ALPの活性の変化）を示す図である。
【図１Ｃ】図１Ｃは、図１Ａと同じ細胞を用いたときのアセロゲニンＡの効果（ALPの活性の変化）を示す図である。
【図１Ｄ】図１Ｄは、図１Ａと同じ細胞を用いたときの(R)‐アセロゲニンＢの効果（ALPの活性の変化）を示す図である。
【図２Ａ】図２Ａは、図１Ａと同じ細胞を用いたときのアセロシドＩの細胞毒性（全細胞数の変化）を示す図である。
【図２Ｂ】図２Ｂは、図１Ａと同じ細胞を用いたときのアセロシドB1の細胞毒性（全細胞数の変化）を示す図である。
【図２Ｃ】図２Ｃは、図１Ａと同じ細胞を用いたときのアセロゲニンＡの細胞毒性（全細胞数の変化）を示す図である。
【図２Ｄ】図２Ｄは、図１Ａと同じ細胞を用いたときの(R)‐アセロゲニンＢの細胞毒性（全細胞数の変化）を示す図である。
【図３】図３は、図１Ａと同じ細胞を用いたときのアセロシドＩ、アセロシドB1、アセロゲニンＡ及び(R)‐アセロゲニンＢのカルシウムの石灰化に対する影響を示す図である。
【図４Ａ】図４Ａは、後述する陰性対照群（ダルベッコ変法リン酸緩衝生理食塩水を含浸させたアガロースビーズローズ（以下、「D-PBS含浸ビーズ」という。）を埋入した群）において、摘出歯の移植培養後の状態を示す実体顕微鏡写真像である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、試料投与群（アセロゲニンＡを含浸させたアガロースビーズ（以下、「アセロゲニンＡ含浸ビーズ」という。）を埋入した群）において、摘出歯の移植培養後の状態を示す実体顕微鏡写真像である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７５】
以下に、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明の第一の態様は、下記式（Ｉ）で表されるジアリールヘプタノイド化合物及びその類縁体からなる群から選ばれる少なくとも１種以上を有効成分として含有する、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物である。【００７６】
【化１７】
2008016105.tif 000020
【００７７】
式（Ｉ）中、Ｒ1は水素原子、炭素数が１から３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、それぞれ独立に、水素原子、酸素原子、ヒドロキシ基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であり；Ｒ5は水素原子、炭素数が１から３のアルキル基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であるか、他方のアリール基のヘプチレン基に対してメタ位に結合して環を形成してもよい。また、２つのアリール基が、それぞれ、ヘプチレン基に対してメタ位同士で結合して環を形成してもよい。【００７８】
また、Ｒ5がもう一方のアリール基と結合して環を形成していない場合には、Ｒ3はヒドロキシ基であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4及びＲ5は、いずれも、水素原子であることがさらに好ましい。【００７９】
ここで、上記式（Ｉ）のＲ5が他のアリール基のヘプチレン基に対してメタ位に結合して環を形成している場合には、下記式（II）で表される化合物となり、上記式（Ｉ）の２つのアリール基が、それぞれ、ヘプチレン基に対してメタ位の炭素間で結合して環を形成している場合には、下記式（III）で表される化合物となる。【００８０】
【化１８】
2008016105.tif 000021
【００８１】
ここで、式（II）中、Ｒ1は水素原子又はグリコシル基であることが好ましく；Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、それぞれ独立に、水素原子、酸素原子、ヒドロキシ基、単糖及び二糖からなる群から選ばれるいずれかの官能基であることが好ましい。【００８２】
【化１９】
2008016105.tif 000022
【００８３】
ここで、式（III）中、Ｒ1及びＲ5は、それぞれ独立して水素原子又はメチル基であることが好ましい。【００８４】
また、こうした化合物は必要に応じて生理学的に許容される塩、水和物及び配糖体を用いることができるが、特に、水溶性の高い塩、例えば、塩酸塩等、を形成する場合には、こうした塩を使用すると、より高い骨芽細胞の分化及び骨形成の促進という効果が発揮される。【００８５】
本発明はまた、下記式（IV）で表される半量体化合物、これらの生理学的に許容される塩、及びこれらの水和物からなる群から選ばれる少なくとも１種以上を有効成分として含有する、骨疾患の予防及び／又は治療用医薬組成物である。【００８６】
【化２０】
2008016105.tif 000023
【００８７】
ここで、式（IV）中、Ｒ1は水素原子、Ｒ2は、ヒドロキシル基又はメチル基であることが好ましい。【００８８】
上記式（Ｉ）で表される化合物としては、下記式（Ia）で表される化合物であることが好ましい。【００８９】
【化２１】
2008016105.tif 000024
【００９０】
また、上記式（II）で表される化合物及びその類縁体としては、下記式（IIａ）で表されるアセロゲニンＡ（Acerogenin A）、下記式（IIｂ）で表される(R)-アセロゲニンＢ（(R)-Acerogenin B）、下記式（IIｃ）で表されるアセロシドＩ（Aceroside I）、下記式（IIｄ）で表されるアセロシドB1（Aceroside B1）、下記式（IIｅ）で表されるアセロシドIII（Aceroside III）、下記式（IIｆ）で表されるアセロシドＤ（Aceroside D）、下記式（IIｇ）で表されるアセロシドIV（Aceroside IV）、下記式（IIｈ）で表されるアセロシドＭ（Aceroside M）を挙げることができ、骨芽細胞分化を促進して骨形成を促進する活性が高いことから、これらを好適に使用することができる。【００９１】
【化２２】
2008016105.tif 000025
【００９２】
【化２３】
2008016105.tif 000026
【００９３】
【化２４】
2008016105.tif 000027
【００９４】
【化２５】
2008016105.tif 000028
【００９５】
【化２６】
2008016105.tif 000029
【００９６】
【化２７】
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【００９７】
【化２８】
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【００９８】
【化２９】
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【００９９】
上記式（III）で表される化合物及びその類縁体としては、下記式（IIIａ）で表されるアセロゲニンＫ（Acerogenin K）、また、下記式（IVa）で表される(+)-ロドデンドロール(Rhododendrol)を、好適に使用することができる。【０１００】
【化３０】
2008016105.tif 000033
【０１０１】
【化３１】
2008016105.tif 000034
【０１０２】
なお、生理学的に許容されるこれらの塩、これらの水和物、これらの配糖体は、上述のとおりである。【０１０３】
上述した各種のジアリールヘプタノイド化合物、それらの半量体化合物、及びそれらの類縁体（化合物等）は、単独で本発明の医薬組成物の製造に使用することもでき、必要に応じて２種以上を適宜組み合わせて使用してもよい。【０１０４】
上述した式（Ｉ）〜（IVａ）で表される化合物及びそれらの類縁体は、公知の方法又はそれに準ずる方法によって製造し、入手してもよく、市販品を購入して使用してもよい。また、上記のジアリールヘプタノイド化合物、それらの半量体化合物、生理学的に許容されるこれらの塩、これらの水和物、及びこれらの配糖体は、上述した植物材料から抽出、単離することによって入手することもできる。メグスリノキから、Aceroside I、Aceroside III、Aceroside B1等を単離する方法の一例を示す。【０１０５】
メグスリノキの樹皮を採取し、乾燥する。これを粉砕して、ｎ−ヘキサン等の他疎水性の高い有機溶媒で脂溶性の高い成分の抽出を行った後、抽出残渣をメタノール等の溶媒で抽出を行う。抽出は室温にて行うことが好ましい。抽出物を、例えば、水と酢酸エチル等の有機溶媒に分配して有機相と水相とを得る。【０１０６】
有機相をシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーに供し、例えば、ｎ−ヘキサン−酢酸エチル及び酢酸エチル−メタノールを溶離液として用いて、順次溶離液の極性を上げて溶出を行い、分画する。ここで得られた画分のうちの一の画分（例えば、画分９）から、以下のような手法を用いることにより、上述した式（IIｃ）〜（IIｅ）及び（IIｇ）に示すような配糖体を得ることができる。また、配糖体が得られる画分とは別の画分（例えば、画分７）から、上述した式（Iａ）、（IIａ）、（IIｂ）、（IIIａ）及び（IVａ）に示すような化合物を、以下のような手順を採用することにより、得ることができる。【０１０７】
上記の配糖体を得るためには、上記一の画分（画分９）を、さらに酢酸エチル−メタノールを溶離液とするシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーに供する。得られた画分のうちの一部（例えば、画分９−２）を、オクタデシルシリル（ODS）化シリカを用いたカラムクロマトグラフィーに供した後、さらにODS化シリカゲルカラム−高速液体クロマトグラフィー（HPLC）（展開溶媒  アセトニトリル：水＝３：７、流速  3.0mＬ/mＬ）にて分離することで、上述した式（IIｃ）〜（IIｅ）及び（IIｇ）で表されるような化合物を得ることができる。【０１０８】
また、上記他の画分（画分７）を、再度、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて分画し、この画分のうちの一部（例えば、画分７−１と７−２）とを、HPLC(ODS化シリカゲルカラム使用)に供し、メタノール−水を溶離液として用いると、上述した式（Iａ）、（IIａ）、（IIｂ）、（IIIａ）及び（IVａ）で表されるような化合物を分取することができる。【０１０９】
以上のようにして、メグスリノキの抽出物から、上記各式で示すような化合物及びその類縁体を得ることができる。上述した他の植物を用いる場合にも、同様にして上記各式で示すような化合物及びその類縁体を得ることができる。【０１１０】
得られた成分は、質量分析（MS）、核磁気共鳴分析（NMR）等に供して各種スペクトルデータを得、これらを文献値と比較することにより、どのような化合物等であるかを同定することができる。【０１１１】
以上のようにして得られた上記式（Ｉ）〜（IVａ）で表される化合物、生理学的に許容される塩若しくは水和物、及びこれらの混合物は、以下のようにして医薬組成物とすることができる。【０１１２】
アセロシドＩを単独で医薬組成物とする場合には、上述したように得られた化合物、生理学的に許容される塩若しくは水和物、及びこれらの混合物を常法に従って処理し、後述する賦形剤等と混合し、医薬組成物とすればよい。【０１１３】
また、アセロシドＩと他のジアリールヘプタノイド化合物等、とりわけ、各種アセロゲニンを組み合わせて使用する場合には、アセロシドＩを１としたときに、他のアセロゲニン０．１〜１０の割合として適宜混合し、この混合物をアセロシドＩ単独の場合と同様にして医薬組成物とすればよい。【０１１４】
本発明の第二の実施態様は、上述した医薬組成物を有効成分として含有する医薬製剤である。こうした医薬製剤としては、注射剤、坐剤、エアゾール剤、経皮吸収剤その他の非経口剤、錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤、液剤その他の剤形の製剤を挙げることができる。ここで、上記の錠剤には、糖衣錠、コーティング錠、バッカル錠が含まれ、カプセル剤には、硬カプセル剤、軟カプセル剤の双方が含まれる。また、顆粒剤には、コーティングされた顆粒剤も含まれる。さらに、上記の液剤には、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤等が含まれ、シロップ剤にはドライシロップも含まれる。【０１１５】
その他の剤形の製剤には、上記の医薬組成物を液状にしたもの、又は上記の液剤を、アガロースビーズに含浸させたゲル剤等も含まれる。なお、上述した各製剤には、徐放化されていないもの、徐放化されたものの双方が含まれる。【０１１６】
こうした製剤は、公知の製剤学的製法に従い、製剤の製造に際して薬理学的に許容され得る日本薬局方に記載の担体、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤等を用いて製造することができる。【０１１７】
こうした担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯デンプン、トウモロコシデンプン、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末等を挙げることができる。【０１１８】
結合剤としては、例えば、デンプン、トラガントゴム、ゼラチン、シロップ、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等を挙げることができる。【０１１９】
崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、ゼラチン末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなど、滑沢剤としては例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール等を使用することができる。【０１２０】
着色剤、医薬品に添加することが許容されているものであれば使用することができ、特に限定されない。また、これら以外に、矯味剤、矯臭剤等も、必要に応じて適宜使用することができる。【０１２１】
錠剤又は顆粒剤とする場合には、必要に応じて、白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、精製セラック、ゼラチン、グリセリン、ソルビトール、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート、メタアクリル酸重合体等を用いてコーティングしても良く、複数層でコーティングすることもできる。【０１２２】
さらに、顆粒剤や粉剤をエチルセルロースやゼラチンのようなカプセルに詰めてカプセル剤とすることもできる。【０１２３】
上記の化合物、又はそれらの生理学的に許容される塩、若しくは水和物を用いて、注射剤を調製する場合は、必要に応じて、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤などを添加することもできる。【０１２４】
上述したような骨疾患予防及び／又は治療剤を患者に投与する場合には、投与量は、患者の症状の重篤さ、年齢、体重、及び健康状態等の諸条件によって異なる。一般的には、成人１日当たり１ｍｇ／ｋｇ〜２，０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１，０００ｍｇ／ｋｇ程度を、経口又は非経口的に、１日１回若しくはそれ以上の回数にわたって投与すればよい。上記のような諸条件に応じて、投与の回数及び量を適宜増減すればよい。【０１２５】
また、歯槽骨を形成させる必要のある患者に投与する場合には、例えば、アガロースビーズ等に上述した精製物及び粗精製物を液状にするか、又は液剤を含浸させ、患部に外科的に埋め込めばよい。【０１２６】
アセロシドＩ単独、またはアセロシドＩと他のジアリールヘプタノイド化合物等、例えば、ロドデンドロールとを含有する医薬組成物が有効成分として製剤中に含まれる場合には、当該組成物中におけるアセロシドＩの含有量は、０．１〜１００ｍｇであることが好ましく、より好ましくは０．１〜５０ｍｇ、さらに好ましくは０．３〜１０ｍｇである。【０１２７】
有効成分であるアセロシドＩや他のジアリールヘプタノイド化合物等の含有量が下限値未満では骨吸形成促進作用が十分に発揮されず、逆に上限値を越えて添加しても、添加量に見合う効果が発揮されない。また、上限値を越えると、生体に対して望ましくない副作用を惹起するおそれがあることによる。【０１２８】
上述した本発明の組成物を必要に応じて適宜添加することにより、本発明の第三の実施形態である骨疾患の予防及び/又は治療効果を有する機能性食品、若しくは本発明の第四の実施形態である健康食品を提供することができる。【０１２９】
本明細書において、「機能性食品」とは、その食品自体が本来含有している栄養素によって、その食品を摂取した者に供与できる以上の利益を与え得る成分を含有する食品をいう。【０１３０】
また、「健康食品」とは、健康の維持・増進に役立つ成分を抽出し、製造した粗生成物又は精製物を主成分とする粉末、顆粒剤、錠剤、カプセル剤をいい、日頃不足しがちな栄養成分の摂取を補助するサプリメントも含むものとする。【０１３１】
上述した本発明の組成物は、例えば、パン、クッキー及びビスケット、米飯添加用麦及び雑穀、うどん、そば、パスタその他の麺類、チーズ、ヨーグルトその他の乳製品、ジャム、マヨネーズ、味噌、醤油その他の大豆製品、茶、コーヒー及びココア、清涼飲料、果実飲料その他の非アルコール性飲料、薬用酒その他のアルコール性飲料、キャンディー、チョコレートその他のスナック菓子、チューインガム、せんべい、羊羹その他の大豆を原料とする菓子等に添加して、機能性食品とすることができる。【０１３２】
なお、上記のヨーグルト、醤油、飲料等に添加する場合には、これらの中で本発明の組成物が結晶化して沈殿しないようにするために、溶解助剤や安定化剤を適宜加えることもできる。【０１３３】
また、本発明の組成物を単独で、又は２種以上を混合し、常法に従って粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤とすることにより、健康食品とすることができる。【０１３４】
ここで、本発明の組成物を粉末とするためには、生成過程で得られた抽出物を濃縮し、凍結乾燥、スプレードライ、真空乾燥等の方法を用いて乾燥させ、サンプルミル、ブレンダー、ミキサー等によって乾燥固体を粉砕すればよい。また、必要に応じて、コーンスターチ、馬鈴薯デンプン、デキストリン、シクロデキストリン、牡蠣殻粉末などを添加してもよい。【０１３５】
また、上記のようにして得た粉末に、適宜、上述した結合剤を加えて打錠し、錠剤とすることもできる。錠剤とした後に、上述した白糖又はゼラチン等のコーティング剤を用いて、糖衣錠としてもよく、他のコーティング剤を用いて腸溶剤等にすることもできる。【０１３６】
さらに、上述のようにして得た粉末を常法に従って顆粒とし、顆粒剤を製造することもできる。また、上記の粉末や顆粒を上述したカプセルに適当量充填することによって、カプセル剤とすることもできる。
【実施例】
【０１３７】
以下に、実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は、以下の実施例に何等限定されるものではない。【０１３８】
（実施例１）  ジアリールヘプタノイド化合物等の精製及び同定
アセロシドＩ、アセロシドB1、アセロゲニンＡ及び（Ｒ）−アセロゲニンＢを、以下のようにして精製した。
（１−１）カラムクロマトグラフィー用抽出物の調製
メグスリノキの乾燥樹皮（450g）をｎ−ヘキサン 2.5Ｌにて３回抽出し、ろ過にて残渣を除去した。次いで、減圧下にてろ液の溶媒を留去し、ｎ−ヘキサン抽出物（3.4g）を得た。ｎ−ヘキサンで抽出し、ろ過した残渣をさらにメタノール 2.5Ｌにて３回抽出し、ろ過して残渣を除去した。ついで、減圧下にてろ液の溶媒を留去し、メタノール抽出物（63.6 g）を得た。【０１３９】
メタノール抽出物を、酢酸エチル：水＝１：１の混合溶媒で抽出し、有機相（酢酸エチル相、26.2g）と水相とを得た。水相を、ｎ−ブタノールでさらに抽出し、有機相（ｎ−ブタノール相、26.6g）及び水相（4.5g）を得た。【０１４０】
（１−２）アセロシドＩ、アセロシドIII、アセロシドB1の精製
酢酸エチル相（25g）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、グラジエント溶出用の溶離液を用いて、溶出を行った。溶離液としては、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルと酢酸エチル：メタノールとを用いた。最初に、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルを用いて、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：０〜０：１まで、順次溶離液の極性を上げて溶出を行い、次いで、酢酸エチル：メタノールに代えて、酢酸エチル：メタノール＝１：０〜０：１まで、順次溶媒の極性を上げて溶出を行った。
Fr.１〜９に分画し、Fr.９を、再度、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶離液として、酢酸エチル：メタノールを用い、酢酸エチル：メタノール＝４：１〜０：１まで、順次、溶離液の極性を上げて溶出を行った。Fr.9-1〜9-5に分画した。【０１４１】
Fr.9-2をＯＤＳカラムクロマトグラフィーに供し、Fr.9-2-1と9-2-2とに分画した。Fr.9-2-2を、再度、ＯＤＳカラムクロマトグラフィーに供し、Fr.9-2-2-1〜Fr.9-2-2-5に分画した。そのうちFr.9-2-2-4及びFr.9-2-2-5をHPLCに供し、下記の溶出条件１で溶出させ、アセロシドＩ、アセロシドIII、アセロシドB1を分離した。【０１４２】
＜溶出条件１＞
カラム：Pegasil ODS-II 10φ×250 mm
溶離液：MeCN:H2O＝３：７
流  速：3.0mL/min【０１４３】
酢酸エチル相であるFr.7を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに供しFr.7-1〜7-11に分画した。これらの画分のうち、Fr.7-1及び7-2をHPLCに供し、以下の溶出条件２で溶出させ、アセロゲニンＡ、(R)-アセロゲニンＢ、アセロゲニンＫ、(-)-セントロロボール、及び(+)-ロドデンドロールを分離して得た。【０１４４】
＜溶出条件２＞
カラム：PEGASIL ODS-II 10φ×250 mm
溶離液：MeOH:H2O＝65：35（AcOH 0.1%）
流速 3.0 mL/min【０１４５】
（１−３）得られた化合物及び配糖体の同定
上記のようにして得られた各化合物及び配糖体は、各種スペクトルを文献値と比較することにより同定した。【０１４６】
（１−３−１）アセロシドＩのスペクトルデータ
HR-FAB-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(1)に記載のデータと対照し、同定した。【０１４７】
HR-FAB-MS： C25H32O8Na [M+Na]+ 483.19950, m/z 297 [M-C6H11O5]-, 
1H-NMR (400MHz, C5D5N) δ：1.00 (1H, m, 9-H), 1.12 (1H, m, 10-H), 1,26 (2H, m, 8,9-H), 1.39 (1H, m, 10-H), 1.50 (1H, m, 8-H), 1.71 (1H, m, 12-H), 2.13 (1H, m, 12-H), 2.42 (2H, m, 7-H2), 2.75 (1H, m, 13-H), 2.94 (1H, m, 13-H), 3.53 (1H, m, 11-H), 4.18 (1H, m, 5'-H), 4.43 (4H, m, 2',3',4',6'-H), 4.59 (1H, dd, J = 11.8, 1.7 Hz, 6'-H), 5.85 (1H, d, J = 6.6 Hz, 1'-H), 5.94 (1H, d, J = 1.0 Hz, 6-H), 6.69 (1H, dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 4-H), 6.97 (1H, dd, J = 8.1, 2.2 Hz, 16-H or 18-H), 7.21 (1H, d, J = 3.7 Hz, 15-H or 19-H), 7.24 (1H, d, J = 2.2 Hz, 16-H or 18-H), 7.29 (1H, dd, J = 8.3, 1.7 Hz, 15-H or 19-H), 7.55 (1H, d, J = 8.3 Hz, 3-H).【０１４８】
（１−３−２）アセロシドIIIのスペクトルデータ
ESI-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(2)に記載のデータと対照し、同定した。【０１４９】
ESI-MS： m/z 615 [M+Na]+, 591 [M-H]-, 
1H-NMR (400MHz, C5D5N) δ：0.86 (1H, m, 9-H), 1.08 (2H, m, 9,12-H), 1.22 (1H, m, 8-H), 1.43 (1H, m, 8-H), 1.54 (2H, m, 10,12-H), 2.36 (2H, m, 7,10-H), 2.50 (1H, m, 7-H), 2.87 (1H, m, 13-H), 3.14 (1H, m, 13-H), 3.57 (1H, m, 11-H), 4.02 (1H, m, 2'-H), 4.11 (2H, m, 4',5'-H), 4.14 (2H, s, 5''-H), 4.23 (2H, m, 3',6'-H), 4.35 (1H, d, J = 9.3 Hz, 4''-H), 4.60 (1H, d, J = 9.3 Hz, 4''-H), 4.77 (1H, d, J = 2.1 Hz, 2''-H), 4.80 (2H, m, 1',6'-H), 5.75 (1H, d, J = 2.4 Hz, 1''-H), 5.99 (1H, d, J = 2.1 Hz, 6-H), 6.72 (1H, dd, J = 7.9, 2.1 Hz, 4-H), 7.22 (3,16,18-H), 7.27 (1H, d, J = 7.9 Hz, 15-H or 19-H), 7.75 (1H, d, J = 8.2 Hz, 15-H or 19-H).【０１５０】
（１−３−３）アセロシドB1のスペクトルデータ
ESI-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(3)に記載のデータと対照し、同定した。【０１５１】
ESI-MS： m/z 483 [M+Na]+, 495 [M+Cl]-, 
1H-NMR (400 MHz, C5D5N) δ：0.96 (1H, m, H-10), 1.18 (1H, m, H-11), 1.48 (3H, m, H-10,11 and 12), 1.66 (1H, m, H-8), 1.68 (1H, m, H-12), 1.73 (1H, m, H-8), 2.48 (1H, m, H-13), 2.64 (1H, m, H-13), 2.69 (1H, m, H-7), 2.99 (1H, m, H-7), 5.82 (1H, d, J = 4.4 Hz, H-1'), 6.73 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-4), 6.91 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-16 or 18), 7.11 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-15 or 18), 7.54 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-3).【０１５２】
（１−３−４）アセロゲニンＡスペクトルデータ
ESI-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(1)に記載のデータと対照し、同定した。【０１５３】
ESI-MS： m/z 321 [M+Na]+, 297 [M-H]-, 
1H-NMR (400 MHz, C5D5N) δ：1.01 (1H, m, H-9), 1.13 (1H, m, H-10), 1.28 (2H, m, H-8 and 9), 1.40 (1H, m, H-10), 1.53 (1H, m, H-8), 1.72 (1H, m, H-12), 2.14 (1H, m, H-12), 2.47 (2H, m, H2-7), 2.76 (1H, m, H-13), 2.95 (1H, m, H-13), 3.54 (1H, m, H-11), 5.97 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 6.75 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-4).【０１５４】
（１−３−５）(R)-アセロゲニンＢのスペクトルデータ
ESI-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(3)に記載のデータと対照し、同定した。【０１５５】
ESI-MS： m/z 321 [M+Na]+, 297 [M-H]-, 
1H-NMR (400 MHz, C5D5N) δ：0.79 (1H, m, H-10), 1.00 (1H, m, H-11), 1.23 (1H, m, H-10), 1.30 (1H, m, H-11), 1.50 (2H, m, H2-8), 1.53 (1H, m, H-12), 1.76 (1H, m, H-12), 2.57 (1H, m, H-7), 2.63 (2H, m, H-7 and 13), 2.80 (1H, m, H-13), 3.07 (1H, m, H-9), 5.57 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-6), 6.63 (1H, dd, J = 8.2, 1.8 Hz, H-4), 6.84 (1H, d, J = 8.2 Hz, H-3), 6.93 (1H, dd, J = 2.5, 8.2 Hz, H-16 or 18), 7.13 (1H, dd, J = 2.5, 8.2 Hz, H-18 or 16), 7.23 (1H, dd, J = 2.1, 8.2 Hz, H-15 or 19), 7.30 (1H, dd, J = 2.1, 8.2 Hz, H-19 or 15).【０１５６】
（１−３−６）アセロゲニンＫのスペクトルデータ
ESI-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(4)に記載のデータと対照し、同定した。【０１５７】
ESI-MS： m/z 297 [M-H]-, 
1H-NMR (400MHz, C5D5N) δ：1.45 (1H, m, 11-H), 1.74-1.83 (2H, m, 11, 12-H), 1.90 (1H, m, 10-H), 1.95-2.10 (3H, m, 8,10,12-H), 2.46 (1H, m, 8-H), 2.51 (1H, m, 13-H), 2.88 (1H, d, J = 16.8 Hz, 13-H), 3.00 (1H, d, J = 17.1 Hz), 3.34 (1H, m, 7-H), 4.49 (1H, t, J = 9.5 Hz, 9-H), 7.13-7.22 (4H, m, 4,5,15,16-H), 7.48 (1H, br.s, 18-H), 7.6 (br.s, 19-H: overlapped with solvent signal).【０１５８】
（１−３−７）（-)-セントロロボールのスペクトルデータ
ESI-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(5)に記載のデータと対照し、同定した。【０１５９】
ESI-MS： m/z 323 [M+Na]+, 299 [M-H]-, 
1H-NMR (600 MHz, C5D5N) δ：1.58 (1H, m, 5-H), 1.68 (2H, m, 4 and 6-H), 1.72 (3H, m, 4, 5 and 6-H), 1.98 (2H, m, 2-H2), 2.61 (2H, m, 7-H2), 2.89 (1H, m, 1-H), 3.04 (1H, m, 1-H), 3.88 (1H, br.d, J = 3.8 Hz, 3-H), 7.16 (2H, d, J = 8.6 Hz, 3'' and 5''-H), 7.18 (2H, d, J = 8.6 Hz, 3' and 5'-H), 7.19 (2H, d, J = 8.9 Hz, 2'' and 3''-H), 7.29 (2H, d, J = 8.2 Hz, 2' and 6'-H), 13C-NMR (150MHz, C5D5N) δ26.0 (5-C), 31.9 (1-C), 32.5 (6-C), 35.5 (7-C), 38.4 (4-C), 40.8 (2-C), 70.3 (3-C), 116.2 (3' and 5'-C or 3'' and 5''-C), 116.3 (3'' and 5''-C or 3' and 5'-C), 129.9 (2' and 6'-C or 2'' and 6''-C), 130.3 (2'' and 6''-C or 2' and 6'-C), 133.5 (1''-C), 133.8 (1'-C), 157.0 (4' and 4''-C).【０１６０】
（１−３−８）(+)-ロドデンドロールのスペクトルデータ
ESI-MS及び1H-NMR (400MHz, C5D5N)による分析で得られたスペクトルデータを、参考文献(6)に記載のデータと対照し、同定した。【０１６１】
＜参考文献＞
(1) M. Nagai, M. Kubo, M. Fujita, T. Inoue and M. Matsuo, Studies on the Constituents of Aceraceae Plants. II. Structure of Aceroside Ｉ, a Glucoside of a Novel Cyclic Diarylheptanoid from Acer nikoense Maxim., Chem. Pharm. Bull., 26, 2805-2810 (1978).【０１６２】
(2) M. Nagai, M. Kubo, K. Takahashi, M. Fujita, and T. Inoue, Studies on the Constituents of Aceraceae Plants. Ｖ. Two Diarylheptanoid Glycosides and an Arylbutanol Apiosylglucoside from Acer nikoense., Chem. Pharm. Bull., 31, 1923-1928 (1983).【０１６３】
(3) T. Morikawa, J. Tao, I. Toguchida, H. Matsuda and M. Yoshikawa, Structures of New Cyclic Diarylheptanoids and Inhibitors of Nitric Oxide Production from Japanese Folk Medicine Acer nikoense, J. Nat. Prod., 66, 86-91 (2003).【０１６４】
(4) S. Nagumo, S. Ishizawa, M. Nagai and T. Inoue, Studies on the Constituents of Aceraceae Plants. XIII. Diarylheptanoids and Other Phenolics from Acer nikoense, Chem. Pharm. Bull., 45, 1086-1089 (1996).【０１６５】
(5) M. Nagai, N. Kenmochi, M. Fujita, N. Furukawa and T. Inoue, Studies on the Constituents of Aceraceae Plants. VI. Revised Stereochemistry of (-)-Centrolobol, and New Glycosides from Acer nikoense, Chem. Pharm. Bull., 34, 1056-1060(1986).【０１６６】
(6) B. Das, P. S. Rao, K. V. N. S. Srinivas and J. S. Yadav, Stereospecific Synthesis and Absolute Configuration of (+)-Rhododendrol, Phytochemistry, 33, 1529-1530 (1993).【０１６７】
（実施例１）  骨芽細胞分化の検討
（１）試薬等
アセロシドＩ、アセロシドB1、アセロゲニンＡ及び（Ｒ）−アセロゲニンＢは、上記のようにして精製し、同定したものを使用した。MC3T3-E1細胞（マウス前骨芽細胞株）は、RIKEN Cell Bankより購入した。アスコルビン酸、β−グリセロリン酸、塩化マグネシウムは、SIGMA社より購入した。また、α−MEMは、INVITROGEN社（カタログ番号11900-024）より購入した。96ウェルマイクロプレート及び100mmφディッシュは、Nunc社（カタログ番号161093、同172958）より購入した。【０１６８】
ｐ−ニトロフェニルリン酸、ナフトールAS-MXリン酸、ファストブルーBB塩及びアリザリンレッドSはSIGMA社より購入した。アスコルビン酸、グリセロリン酸、メタノール、酒石酸、クエン酸、酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、ホルマリン、及びエタノールは、和光純薬工業（株）より購入した。MTT（3-(4,5-Dimethyl-2-thizaolyl)-2,5-diphenyl- 2H-tetrazolium Bromide）試薬は和光純薬工業（株）より購入した。セルカウンティングキット−８は、同仁化学（株）より購入した。【０１６９】
（２）骨芽細胞分化に対する検討
マウス前骨芽細胞株であるMC3T3-E1細胞をα−MEMに縣濁して96ウェルマイクロプレートの各ウェルに、４×103cells/wellとなるようにまき、37℃、５％CO2インキュベータ中にて２日間前培養した。前培養開始３日目に、各濃度の試験サンプルと、50μg/mlアスコルビン酸及び10mMのβ−グリセロリン酸を含むα−MEMに培地を交換して７日間から21日間、本培養した。また、本培養中も、３〜４日ごとに培地を交換した。【０１７０】
培養終了後、メタノールで細胞を固定してディッシュを乾燥後、骨芽細胞の初期の分化マーカー酵素であるアルカリホスファターゼ（ALP）の活性を測定するとともに、ALP染色を行った。【０１７１】
ALP活性の測定には、6.7mMのp−ニトロフェニルリン酸を基質として含み、２mMの塩化マグネシウムおよび100mMのトリス−塩酸を含有するpH8.5の緩衝液を使用した。この緩衝液を各ウェルに100μlずつ入れて、37℃にて、30分反応させた後に、100μlの0.1Ｎ水酸化ナトリウムを加えて反応を停止させた。プレートリーダーにて405nmの吸光度を測定し、その吸光度をALP活性とした。【０１７２】
ALP染色は0.1mg/mlナフトールAS-MXリン酸、0.6mg/mlのファストブルーBB塩を含み２mMの塩化マグネシウム及び100mMのトリス−塩酸を含有するpH8.5の緩衝液を、各ウェルに50μlずつ入れて、室温にて30分から１時間反応させて染色した。【０１７３】
また、細胞毒性は上記と同じ条件で培養後、セルカウンティングキット−８又はMTTを用いて定法により測定した。
骨芽細胞の石灰化は、アリザリンレッドＳ染色にて確認した。【０１７４】
骨芽細胞分化に対するアセロシドＩ、アセロシドB1、アセロゲニンＡ、(R)‐アセロゲニンＢの効果を図１Ａ〜Ｄに示す。これら４種類の化合物及び配糖体は、いずれもALP活性を上昇させ、骨芽細胞の初期分化を促進することが示された。【０１７５】
図１Ａに示すように、アセロシドＩを添加すると、濃度依存的にALP活性が上昇したが、他の３種類を添加した場合には、30μＭまでは濃度依存的にALP活性が上昇したが、100μＭでは、活性の低下が見られた。【０１７６】
（３）細胞毒性についての検討
細胞毒性は上記（２）と同じ条件でMC3T3-E1細胞を培養した後、セルカウンティングキット−８又はMTTを用いて定法により測定した。結果を図２Ａ〜Ｄに示す。
図２Ａ及びＣに示すように、アセロシドＩ及びアセロゲニンＡを添加しても、細胞数にはほとんど影響は見られなかったが、高濃度になるとわずかに細胞数が減少する傾向が見られた。これは、骨芽細胞の分化が促進された結果、細胞の増殖が抑制されたものであり、細胞毒性によるものではないと考えられた。【０１７７】
また、図２Ｂ及びＤに示すように、アセロシドB1及び(R)‐アセロゲニンＢを添加した場合には、30μＭまでは細胞数の減少は見られず、100μＭまでは、細胞数にはほとんど影響は見られなかった。したがって、上記のALP活性の上昇は、これらの化合物が骨芽細胞の分化を選択的に促進したことを示している。【０１７８】
（４）骨芽細胞によるカルシウムの石灰化に対する検討
骨芽細胞によるカルシウムの石灰化に対する上記４種類の化合物及び配糖体の効果を、図５に示す。図５に示されるように、コントロールではアリザリンレッドＳによっても、ほとんど染色されなかった。一方、上記の化合物及び配糖体で処理を行うと、顕著な染色が認められ、これらは骨芽細胞分化を促進してカルシウムの石灰化も亢進させることが示された。【０１７９】
また、これらのカルシウムの石灰化活性の強さは、(R)‐アセロゲニンＢ＞アセロシドＩ≒アセロゲニンＡ＞アセロシドB1の順番となっていた。
なお、染色を行ったときの染色の濃さにより、これらによるこのカルシウムの石灰化の亢進は、濃度依存的な傾向があることが示された。【０１８０】
以上より、アセロシドＩ、アセロシドB1、アセロゲニンＡ及び(R)‐アセロゲニンＢは、骨芽細胞の分化を促進することによって骨形成を促進すると考えられる。したがって、骨減少性の多くの疾患、例えば、骨粗鬆症、関節リウマチ、歯周病、ページェット病、がんの骨転移等の予防に有用であり、また、これらに対して治療を行う際に、ほとんど副作用がなく、高い治療効果を発揮することが期待できる。【０１８１】
（実施例２）
（１）試薬等
ダルベッコ変法リン酸緩衝生理食塩水（Dulbecco's phosphate buffered saline, 以下「D-PBS」ということがある。）は、大日本製薬（株）より購入した。Affi-Gelアガロースビーズ（アフィゲルヘパリン  カタログ番号：15306173）は、BioRad社より購入した。
生後５日齢のC57BL/6マウスは、三協ラボサービス（株）より購入した。また、ホストマウスとしては、成体マウスの器官において、腎臓及び前眼房は免疫応答の非常に少ない組織であることが知られており、前記移植培養実験においては特にヌードマウスを用いる必要はないため、三協ラボサービス（株）より購入した生後10〜15週齢のC57BL/6マウス（雌）を２匹一群として使用した。【０１８２】
（２）アセロゲニンＡ含浸アガロースビーズの調製
アセロゲニンＡを含浸させたアガロースビーズ（以下、「アセロゲニンＡ含浸ビーズ」という。）を、以下のようにして調製した。
アセロゲニンＡを100μＭ（終濃度）となるように、D-PBSを用いて希釈した。Affi-Gelアガロースビーズを、PBSを用いて洗浄した。洗浄後のアガロースビーズを1.5ml角底エッペンドルフ型チューブに入れ、上記のように希釈した前記アセロゲニンＡ溶液を100μlの量で添加した。室温で45分間、インキュベートすることにより、アセロゲニンＡをアガロースビーズに含浸させた。得られたアセロゲニンＡ含浸アガロースビーズを下記の歯髄への埋入に供した。
また、陰性対照として、アセロゲニンＡを含まないD-PBSに含浸した以外は、アセロゲニンＡ含浸ビーズと同様にして調整したアガロースビーズ（以下、「D-PBS含浸ビーズ」という。）を使用した。【０１８３】
（３）歯髄への埋入
歯根-歯周組織形成直前の、生後５日齢のC57BL/6マウスを、エーテル麻酔後に断頭屠殺した。下顎を摘出後、下顎第１臼歯を、歯小嚢ごと摘出した。試料投与群には、アセロゲニンＡ含浸アガロースビーズを３粒、摘出歯（下顎第１臼歯）の歯髄に埋入した。また、対照群には、D-PBS含浸ビーズを３粒、摘出歯（下顎第１臼歯）の歯髄に埋入した。【０１８４】
（４）移植培養
アセロゲニンＡ含浸ビーズを埋入した摘出歯、及び、陰性対照としてD-PBS含浸ビーズを埋入した摘出歯を、ホストマウスの腎臓皮膜下に移植して培養した。ホストマウスは、12時間点灯、室温25℃の条件下におき、水と飼料は自由に摂取させて３週間飼育した。
上記の摘出歯の移植３週間後、ホストマウスを頸骨脱臼にて屠殺し、腎臓を摘出して、各群の培養後の摘出歯（移植歯）を回収した。
回収された培養後の移植歯における歯根-歯周組織形成（伸長）、歯根膜、及び骨を、実体顕微鏡下にて観察し、ＣＣＤカメラにて撮影した。前記移植培養後の各群における移植歯の観察結果を、図４に示す。【０１８５】
図４に示すように、陰性対照群（図４Ａ、「PBS」と表示した）では、わずかな歯根の伸長と周囲における骨の形成が観察された。骨形成部分は、右上から左下に向かう斜線で示した。一方、試料投与群（図４Ｂ、「アセロゲニンＡ」と表示した）では、陰性対照群と比較して、顕著な骨形成の促進が認められた。
なお、骨形成部分とは逆向きの斜線で示された部分は、歯根膜領域を示し、白色の部分は歯を示す。【０１８６】
これらの結果から、アセロゲニンＡを有効成分とする本発明の医薬組成物は、優れた歯槽骨形成（伸長）促進作用を有していることが示された。以上より、アセロゲニンＡを有効成分として含有する本発明の医薬組成物は、歯槽骨等の歯の周囲組織の形成を促進し、こうした組織のおける傷害の予防及び／又は治療において、非常に有効であることが示された。【０１８７】
（製剤例）
次に、本発明の組成物を含有する製剤例を示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。【０１８８】
（製剤例１  錠剤）
2008016105.tif 000035
【０１８９】
上記の成分をそれぞれ秤量し、均一に混合した後に圧縮打錠して重量300mgの錠剤を製造することができる。【０１９０】
（製剤例２  硬カプセル剤）
2008016105.tif 000036
【０１９１】
上記の成分をそれぞれ秤量し、均一に混合した後、硬カプセルに300mgずつ充填することにより、硬カプセル剤を製造することができる。ここで、組成物１は、(R)‐アセロゲニンＢと乳糖とを１：１で混合したものである。なお、製剤例３〜６で使用する組成物１は上記と同じものである。【０１９２】
（製剤例３  軟カプセル剤）
2008016105.tif 000037
【０１９３】
上記の成分をそれぞれ秤量し、均一に混合した後、軟カプセルに100mgずつ充填することにより、軟カプセル剤を製造することができる。【０１９４】
（製剤例４  顆粒剤）
2008016105.tif 000038
【０１９５】
上記の成分をそれぞれ秤量し、均一に混合した後、常法に従って顆粒剤を製造することができる。【０１９６】
（製剤例５  シロップ剤）
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【０１９７】
上記の成分をそれぞれ秤量し、糖及びサッカリンを注射用蒸留水60ｍLに溶解した後、グリセリン及びエタノールに溶解された組成物２及び調味料の溶液を加える。この混合物に精製水を加えて、最終容量を100ｍLにすることにより、経口投与用のシロップ剤を製造することができる。【０１９８】
（製剤例６  顆粒剤）
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【０１９９】
上記の成分をそれぞれ秤量し、組成物３を常法によって珪酸カルシウムに吸着させて微粒子とし、散剤を製造することができる。【０２００】
以上より、本発明の骨疾患の予防及び又は治療用医薬組成物は、広く応用の可能性が期待されるものであり、例えば、以下のような用途において、特に、歯槽骨の維持や形成促進が望まれる様々な場面において有用性が高いと考えられる。
【産業上の利用可能性】
【０２０１】
本発明によれば、本発明の化合物（Ｉ）〜（IVa）、これらの配糖体、生理学的に許容されるこれらの塩、これらの水和物、及びこれらを含む抽出物からなる群から選ばれる１種以上を有効成分として含有する医薬組成物、健康食品、機能性食品及び医薬製剤は、医薬及び食品の分野において有用である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【国際調査報告】
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