【手続補正書】
【提出日】平成19年11月15日(2007.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＫ細胞レセプターの特性を活性化する単離されたポリペプチドにおいて、
ＣＤ３ζシグナル伝達ペプチドと結合でき、
（１）配列番号：２、４、５または６のアミノ酸配列、
（２）配列番号：２、４、５または６のアミノ酸配列の免疫原性断片、及び
（３）配列番号：７のアミノ酸配列
から選択されたアミノ酸配列と少なくとも８０％の相同性を有する
ことを特徴とする単離されたポリペプチド。
【請求項２】
さらに１つのＣＤ３ζ鎖を含有することを特徴とする、請求項１に記載の単離された化合物。
【請求項３】
配列番号：１、配列番号：１０、配列番号：１２または配列番号：１３ポリヌクレオチド配列；ならびに共通の遺伝子コードに従い、かつその冗長性を考慮して、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：５または配列番号：６のアミノ酸配列、および配列番号：２、配列番号：４、配列番号：５または配列番号：６の任意の免疫原性フラグメントのアミノ酸配列、さらに配列番号：７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列；から成る群より選択されるポリヌクレオチド配列に対して、その全長に対して少なくとも８０％相同な少なくとも１種のポリヌクレオチド配列を含有することを特徴とする、単離された化合物。
【請求項４】
配列番号：８と配列番号：９の対、配列番号：８と配列番号：１１の対、配列番号：１０のポリヌクレオチド、配列番号：１２のポリヌクレオチドから選択されることを特徴とする、ポリヌクレオチド化合物。
【請求項５】
た少なくとも１種の化合物である、請求項１に記載の単離された化合物の少なくとも１種を、任意選択的に免疫原性エンハンサーと組み合わせて哺乳動物を免疫化し、こうして形成された抗血清を回収することにより得られることを特徴とする、抗血清タイプの組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の少なくとも１種の単離された化合物に対することを特徴とする、単離された抗体。
【請求項７】
Ｔ細胞表面分子だけでなくＢ細胞表面分子に結合しないことを特徴とする、請求項６に記載の単離された抗体。
【請求項８】
標的細胞の存在下に、標的細胞と１：１の割合で置かれたＮＫ細胞によって引き起こされる天然細胞毒性の、少なくとも５倍の増加を誘導できることを特徴とする、請求項６または７に記載の単離された抗体。
【請求項９】
モノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項６から８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
ハイブリドーマＩ−２５７６（Ｃ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．インスティテュート  パスツール、パリ、フランス）から生産されることを特徴とする、単離されたモノクローナル抗体。
【請求項１１】
請求項６から１０のいずれか一項に記載の抗体の単離された免疫反応性フラグメント。
【請求項１２】
請求項１１に記載のフラグメントを含有することを特徴とする、人体に適応させた抗体。
【請求項１３】
請求項６から１０及び１２のいずれか一項に記載の単離された抗体の少なくとも１つと結合していることを特徴とする、固体支持体。
【請求項１４】
請求項６から１０のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体を生産することを特徴とする、ハイブリドーマ。
【請求項１５】
ハイブリドーマＩ−２５７６（Ｃ．Ｎ．Ｃ．Ｍ．インスティテュート  パスツール、、パリ、フランス）。
【請求項１６】
生物学的サンプル中のＮＫ細胞の存在を検出かつ／または定量化する方法において、該方法が、
請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１１に記載の単離された免疫反応性フラグメント、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマから成る群より選択される少なくとも１種の物質と生物学的サンプルとを接触させ、
これにより形成された免疫複合体を検出しかつ／または定量化する
ことを含むことを特徴とする、生物学的サンプル中のＮＫ細胞の存在を検出しかつ／または定量化する方法。
【請求項１７】
生物学的サンプル中のＮＫ細胞の存在を検出しかつ／または定量化する方法において、該方法が、
請求項３に記載の単離された化合物、請求項４に記載のポリヌクレオチド化合物から成る群より選択される少なくとも１種の生成物と、生物学的サンプルとを、ポリヌクレオチドハイブリダイゼーション生成物の形成に適した条件下に接触させ、
これにより形成されたハイブリダイゼーション生成物を検出しかつ／または定量化する
ことを含むことを特徴とする、生物学的サンプル中のＮＫ細胞の存在を検出かつ／または定量化する方法。
【請求項１８】
請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１１に記載の単離された免疫反応性フラグメント、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマ、請求項３に記載の単離された化合物、及び、請求項４に記載のポリヌクレオチド化合物から成る群より選択される少なくとも１種の物質を、コンテナー中に封入して含有することを特徴とする、生物学的サンプルからＮＫ細胞を検出しかつ／または定量化するためのキット。
【請求項１９】
生物学的サンプルからＮＫ細胞を選択的に除去するための方法において、該方法が、
請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１１に記載の単離された免疫反応性フラグメント、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマから成る群より選択される少なくとも１種の物質と生物学的サンプルとを接触させ、
これにより形成される免疫複合体を除去する
ことを含むことを特徴とする、生物学的サンプルからＮＫ細胞を選択的に除去するための方法。
【請求項２０】
生物学的サンプルからＮＫ細胞をポジティブかつ選択的に精製するための方法において、該方法が、
請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１１に記載の単離された免疫反応性フラグメント、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマから成る群より選択される少なくとも１種の物質と生物学的サンプルとを接触させ、
これにより形成される免疫複合体から細胞を回収する
ことを含むことを特徴とする、生物学的サンプルからＮＫ細胞をポジティブかつ選択的に精製するための方法。
【請求項２１】
請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１１に記載の単離された免疫反応性フラグメント、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマから成る群より選択される少なくとも１種を、コンテナー中に封入して含有することを特徴とする、生物学的サンプルからＮＫ細胞を除去しかつ／またはポジティブに精製するためのキット。
【請求項２２】
ＮＫ細胞の細胞毒性をｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激するための方法において、該方法が、
生理学的条件下にｉｎ  ｖｉｔｒｏで、請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマから成る群より選択される少なくとも１種の生成物と前記ＮＫ細胞とを接触させる
ことを含むことを特徴とする、ＮＫ細胞の細胞毒性をｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激するための方法。
【請求項２３】
請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマから成る群より選択される少なくとも１種の生成物を、コンテナー中に封入して有することを特徴とする、ＮＫ細胞の細胞毒性を刺激するためのキット。
【請求項２４】
抗−ＮＫｐ４６抗体および抗−ＮＫｐ４４抗体から成る群より選択される抗体をさらに有することを特徴とする、請求項１８、２１及び２３のいずれかに記載のキット。
【請求項２５】
移植の改善、ＧｖＨの阻害、ＧｖＴおよび特にＧｖＬの刺激を意図することを特徴とする、請求項１８、２１、２３及び２４のいずれかに記載のキット。
【請求項２６】
生理学的条件下にｉｎ  ｖｉｔｒｏで、請求項６から１０のいずれかに記載の抗体のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）2フラグメントとＮＫ細胞とを接触させることを含むことを特徴とする、ＮＫ細胞の細胞毒性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害のための方法。
【請求項２７】
請求項６から１０のいずれかに記載の抗体のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）2フラグメントを有することを特徴とする、ＮＫ細胞の細胞毒性を阻害するためのキット。
【請求項２８】
請求項５に記載の抗血清タイプの組成物、請求項６から１０及び１２のいずれかに記載の単離された抗体、請求項１３に記載の固体支持体、請求項１４または１５に記載のハイブリドーマ、請求項２０に記載の精製法により得られる単離されたＮＫ細胞、請求項２２に記載の刺激法により得られる単離されたＮＫ細胞から成る群より選択される少なくとも１種の生成物を、製薬学的に使用可能な賦形剤といっしょに含有することを特徴とする、医薬品組成物。
【請求項２９】
前記の選択された少なくとも１種の生成物が、直接または間接的に、抗腫瘍抗体、抗微生物抗体または抗ウイルス抗体と結合していることを特徴とする、請求項２８に記載の医薬品組成物。
【請求項３０】
前記の単離されたＮＫ細胞が、人間、特に移植ドナー、またはメラノーマ等の腫瘍を患っている患者から回収されたものであることを特徴とする、請求項２８または２９に記載の医薬品組成物。
【請求項３１】
抗−ＮＫｐ４６抗体および抗−ＮＫｐ４４抗体から成る群より選択される抗体をさらに含有することを特徴とする、請求項２８から３０までのいずれか一項に記載の医薬品組成物。
【請求項３２】
薬剤としての、請求項２８から３１のいずれかに記載の医薬品組成物の使用。
【請求項３３】
移植の強化、ＧｖＨの阻害、ＧｖＴおよび特にＧｖＬの刺激、および／または固形または液性腫瘍および／または微生物感染、特にウイルス感染の予防、軽減および／または治療のための薬剤としての、請求項２８から３１までのいずれか一項に記載の医薬品組成物の使用。
【請求項３４】
抗−メラノーマ、抗−肝癌、抗−肺の腺癌の薬剤としての、請求項２８から３１までのいずれか一項に記載の医薬品組成物の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
（発明の概要）
本発明の課題は、標的細胞の認識および殺傷に関する、ＮＫ細胞中に含まれる新規トリガリングレセプターを同定することである。ＳＤＳ−ＰＡＧＥから約３０ｋＤであるこの新規レセプターはＮＫｐ３０と呼称され、単一のＶ−タイプドメイン、膜貫通部位での荷電残基、および細胞質尾中のＩＴＡＭモチーフの不在により特徴付けられるＩｇスーパーファミリーの一員である。ＥＭＢＬ／Ｇｅｎｂａｎｋ／ＤＤＢＪデータベースを検索すると、クローン化ＮＫｐ３０ｃＤＮＡが、以前に同定された任意選択的なスプライシング形の１Ｃ７遺伝子（寄託番号ＡＦ０３１１３８で入手可能）と一致することが分かった。しかし、これまで、特異的モノクローナル抗体がないので、１Ｃ７遺伝子の推定生成物の機能も表面分布も確認できなかった。ＮＫｐ３０はヒト成熟ＮＫ細胞の表面上に選択的に発現し、細胞活性化時にチロシンホスホリル化されるＣＤ３ζシグナル伝達ペプチドに関連する。ＷＯ９９／２３８６７には、新規なトリガリングレセプターをコードするが、異なる生物学的活性のタンパク質、すなわち、ミエリン  オリゴデンドロサイト  糖タンパク質ファミリーのメンバーであるタンパク質としてのＢＭＯＧをコードする配列と相同性を有するヌクレオチド配列が開示されている。ＷＯ９５／０６２４７には、ＮＫ細胞に特異的であるが、ＰＥＮ５−α及びＰＥＮ５−βに対する糖タンパク質からなる分子が開示されている。ＥＭＢＬデータベース  ０１．Ｓｅｐｔ．１９９９  アクセッションＮｏ．ＡＪ２２３１５３は、配列番号：１に特異的に相当するヌクレオチド配列のみを開示しており、ＳＷＩＳＳＰＲＯＴデータベース  ０１．Ｊａｎ．１９９８  アクセッションＮｏ．０１４９３２は、配列番号：２に特異的に相当するアミノ酸配列のみを開示している。ＡｃＮＫｐ３０は、多くの標的細胞に対するＮＫ−媒介細胞毒性誘導時にＮＫｐ４６および／またはＮＫｐ４４といっしょに働くことができ、したがって標的細胞（例えばＭＥＬ１５タイプのヒトメラノーマ）の殺傷時の主要トリガリングレセプターである。