【手続補正書】
【提出日】令和1年7月18日(2019.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とする対象における幹細胞移植用の細胞集団を製造する方法であって、
該方法は、造血幹細胞または造血前駆細胞（ＨＳＰＣ）を、ＨＳＰＣの増殖を可能にする条件下で、内皮細胞（ＥＣ）と、初期ＥＣ／ＨＳＰＣ比で第１の期間接触させることにより増殖させて、ＨＳＰＣおよびＥＣを増殖ＨＳＰＣ／ＥＣ比で含む増殖細胞集団を製造することを含み、それにより幹細胞移植用の細胞集団が製造され、
前記幹細胞移植は、幹細胞移植用の細胞集団を対象へ輸注することを含み、
増殖および輸注の工程を通してＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な相互作用が維持される、方法。
【請求項２】
ＨＳＰＣが、造血幹細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＨＳＰＣが、対象と同種である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＨＳＰＣが、臍帯血ＨＳＰＣである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＨＳＰＣが、対象に関して自己由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ＨＳＰＣが、遺伝子修飾定常状態骨髄由来ＨＳＰＣである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＥＣが、血管ＥＣである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＥＣが、増殖に先立って有糸分裂が不活性化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ１＋改変ＥＣである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ１＋ＥＴＶ２＋改変ＥＣである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ６＋でもある、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＥＣが、ＥＴＶ２ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ＥＣが、アデノウイルスＥ４ＯＲＦ１ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
ＥＣが、アデノウイルスＥ４ＯＲＦ６ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
核酸分子が、プラスミドベクターの形態である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
核酸分子が、改変ＥＣのゲノムＤＮＡに組み込まれている、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ＥＣが、分化したＥＣである、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＥＣが、成体ＥＣである、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＥＣが、胚ＥＣではない、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＥＣが、ヒトＥＣである、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＥＣが、初代ＥＣである、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＥＣが、ヒト臍帯静脈ＥＣ（ＨＵＶＥＣ）である、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
初期ＥＣ／ＨＳＰＣ比が、少なくとも約２００：１である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
第１の期間が、約１日〜約２４日である、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
増殖細胞集団が、対象１ｋｇ当たり約１．０×１０６個〜約１．０×１０８個のＨＳＰＣを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
増殖ＨＳＰＣ／ＥＣ比が、約１０：１〜約１：１０である、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
ＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な相互作用が、増殖工程中のＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な接触、ならびに組み合わせた増殖工程および輸注工程中のＨＳＰＣおよびＥＣの連続的な近接を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
対象の循環血液中の血小板数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１５日〜約３５日後までに少なくとも約２００００／μＬとなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約５日〜約２０日後までに少なくとも約１００／μＬとなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１０日〜約２５日後までに少なくとも約５００／μＬとなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１０００日後に少なくとも約５００／μＬとなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
対象が、骨髄破壊的処置によって引き起こされる造血不全を有するか、または、血液疾患、骨髄造血幹細胞移植を要する障害、感染による免疫不全、Ｔ細胞に影響を及ぼす感染性疾患、ＨＩＶ、遺伝性免疫不全、重症複合免疫不全、赤血球に影響を及ぼす遺伝性疾患、貧血およびファンコニ貧血から選択される障害を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法により製造される細胞集団。
【請求項３５】
請求項３４に記載の細胞集団を含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
本発明の実施形態を、以下、さらに記載する：
［項１］
必要とする対象における幹細胞移植の方法であって、
（ａ）造血幹細胞または造血前駆細胞（ＨＳＰＣ）を、ＨＳＰＣの増殖を可能にする条件下で、内皮細胞（ＥＣ）と、初期ＥＣ／ＨＳＰＣ比で第１の期間接触させることにより増殖させて、ＨＳＰＣおよびＥＣを増殖ＨＳＰＣ／ＥＣ比で含む増殖細胞集団を製造すること、および
（ｂ）工程（ａ）から得た増殖細胞集団を対象へ輸注すること、
を含み、増殖および輸注の工程を通してＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な相互作用が維持される、方法。
［項２］
ＨＳＰＣが、造血幹細胞である、上記項１に記載の方法。
［項３］
ＨＳＰＣが、対象と同種である、上記項１に記載の方法。
［項４］
ＨＳＰＣが、臍帯血ＨＳＰＣである、上記項３に記載の方法。
［項５］
ＨＳＰＣが、対象に関して自己由来である、上記項１に記載の方法。
［項６］
ＨＳＰＣが、遺伝子修飾定常状態骨髄由来ＨＳＰＣである、上記項５に記載の方法。
［項７］
ＥＣが、血管ＥＣである、上記項１に記載の方法。
［項８］
ＥＣが、増殖に先立って有糸分裂が不活性化されている、上記項１に記載の方法。
［項９］
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ１＋改変ＥＣである、上記項１に記載の方法。
［項１０］
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ１＋ＥＴＶ２＋改変ＥＣである、上記項１に記載の方法。
［項１１］
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ６＋でもある、上記項１０に記載の方法。
［項１２］
ＥＣが、ＥＴＶ２ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、上記項１０に記載の方法。
［項１３］
ＥＣが、アデノウイルスＥ４ＯＲＦ１ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、上記項１０に記載の方法。
［項１４］
ＥＣが、アデノウイルスＥ４ＯＲＦ６ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、上記項１１に記載の方法。
［項１５］
核酸分子が、プラスミドベクターの形態である、上記項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
［項１６］
核酸分子が、改変ＥＣのゲノムＤＮＡに組み込まれている、上記項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
［項１７］
ＥＣが、分化したＥＣである、上記項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
［項１８］
ＥＣが、成体ＥＣである、上記項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
［項１９］
ＥＣが、胚ＥＣではない、上記項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
［項２０］
ＥＣが、ヒトＥＣである、上記項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
［項２１］
ＥＣが、初代ＥＣである、上記項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
［項２２］
ＥＣが、ヒト臍帯静脈ＥＣ（ＨＵＶＥＣ）である、上記項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
［項２３］
初期ＥＣ／ＨＳＰＣ比が、少なくとも約２００：１である、上記項１に記載の方法。
［項２４］
第１の期間が、約１日〜約２４日である、上記項１に記載の方法。
［項２５］
増殖細胞集団が、対象１ｋｇ当たり約１．０×１０６個〜約１．０×１０８個のＨＳＰＣを含む、上記項１に記載の方法。
［項２６］
増殖ＨＳＰＣ／ＥＣ比が、約１０：１〜約１：１０である、上記項１に記載の方法。
［項２７］
ＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な相互作用が、増殖工程中のＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な接触、ならびに組み合わせた増殖工程および輸注工程中のＨＳＰＣおよびＥＣの連続的な近接を含む、上記項１に記載の方法。
［項２８］
対象の循環血液中の血小板数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１５日〜約３５日後までに少なくとも約２００００／μＬとなる、上記項１に記載の方法。
［項２９］
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約５日〜約２０日後までに少なくとも約１００／μＬとなる、上記項１に記載の方法。
［項３０］
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１０日〜約２５日後までに少なくとも約５００／μＬとなる、上記項１に記載の方法。
［項３１］
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１０００日後に少なくとも約５００／μＬとなる、上記項１に記載の方法。
［項３２］
対象が、骨髄破壊的処置によって引き起こされる造血不全を有するか、または、血液疾患、骨髄造血幹細胞移植を要する障害、感染による免疫不全、Ｔ細胞に影響を及ぼす感染性疾患、ＨＩＶ、遺伝性免疫不全、重症複合免疫不全、赤血球に影響を及ぼす遺伝性疾患、貧血およびファンコニ貧血から選択される障害を有する、上記項１に記載の方法。
［項３３］
対象がヒトである、上記項１に記載の方法。
［項３４］
必要とする対象における幹細胞移植に使用するためのＨＳＰＣおよびＥＣを含む組成物であって、幹細胞移植が、上記項１に記載の方法を含む、組成物。
［項３５］
ＨＳＰＣが、造血幹細胞である、上記項３４に記載の組成物。
［項３６］
ＨＳＰＣが、対象と同種である、上記項３４または３５に記載の組成物。
［項３７］
ＨＳＰＣが、臍帯血ＨＳＰＣである、上記項３６に記載の組成物。
［項３８］
ＨＳＰＣが、対象に関して自己由来である、上記項３４または３５に記載の組成物。
［項３９］
ＨＳＰＣが、遺伝子修飾定常状態骨髄由来ＨＳＰＣである、上記項３８に記載の組成物。
［項４０］
ＥＣが、血管ＥＣである、上記項３４に記載の組成物。
［項４１］
ＥＣが、増殖に先立って有糸分裂が不活性化されている、上記項３４に記載の組成物。
［項４２］
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ１＋改変ＥＣである、上記項３４に記載の組成物。
［項４３］
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ１＋ＥＴＶ２＋改変ＥＣである、上記項３４に記載の組成物。
［項４４］
ＥＣが、Ｅ４ＯＲＦ６＋でもある、上記項４３に記載の組成物。
［項４５］
ＥＣが、ＥＴＶ２ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、上記項４３に記載の組成物。
［項４６］
ＥＣが、アデノウイルスＥ４ＯＲＦ１ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、上記項４３に記載の組成物。
［項４７］
ＥＣが、アデノウイルスＥ４ＯＲＦ６ポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含む、上記項４４に記載の組成物。
［項４８］
核酸分子が、プラスミドベクターの形態で存在する、上記項４５に記載の組成物。
［項４９］
核酸分子が、改変ＥＣのゲノムＤＮＡに組み込まれている、上記項４５に記載の組成物。
［項５０］
ＥＣが、分化したＥＣである、上記項４５に記載の組成物。
［項５１］
ＥＣが、成体ＥＣである、上記項４５に記載の組成物。
［項５２］
ＥＣが、胚ＥＣではない、上記項４５に記載の組成物。
［項５３］
ＥＣが、ヒトＥＣである、上記項４５に記載の組成物。
［項５４］
ＥＣが、初代ＥＣである、上記項４５に記載の組成物。
［項５５］
ＥＣが、ヒト臍帯静脈ＥＣ（ＨＵＶＥＣ）である、上記項４５に記載の組成物。
［項５６］
初期ＥＣ／ＨＳＰＣ比が、少なくとも約２００：１である、上記項３４に記載の組成物。
［項５７］
第１の期間が、約１日〜約２４日である、上記項３４に記載の組成物。
［項５８］
増殖細胞集団が、対象１ｋｇ当たり約１．０×１０６個〜約１．０×１０８個のＨＳＰＣ細胞を含む、上記項３４に記載の組成物。
［項５９］
増殖ＨＳＰＣ／ＥＣ比が、約１０：１〜約１：１０である、上記項３４に記載の組成物。
［項６０］
ＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な相互作用が、増殖工程中のＨＳＰＣとＥＣの間の連続的な接触、ならびに組み合わせた増殖工程および輸注工程中のＨＳＰＣおよびＥＣの連続的な近接を含む、上記項３４に記載の組成物。
［項６１］
対象の循環血液中の血小板数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１５日〜約３５日後までに少なくとも約２００００／μＬとなる、上記項３４に記載の組成物。
［項６２］
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約５日〜約２０日後までに少なくとも約１００／μＬとなる、上記項３４に記載の組成物。
［項６３］
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１０日〜約２５日後までに少なくとも約５００／μＬとなる、上記項３４に記載の組成物。
［項６４］
対象の循環血液中の好中球絶対数が、対象への増殖細胞集団輸注から約１０００日後に少なくとも約５００／μＬとなる、上記項３４に記載の組成物。
［項６５］
対象が、骨髄破壊的処置によって引き起こされる造血不全を有するか、または、血液疾患、骨髄造血幹細胞移植を要する障害、感染による免疫不全、Ｔ細胞に影響を及ぼす感染性疾患、ＨＩＶ、遺伝性免疫不全、重症複合免疫不全、赤血球に影響を及ぼす遺伝性疾患、貧血およびファンコニ貧血から選択される障害を有する、上記項３４に記載の組成物。
［項６６］
対象がヒトである、上記項３４に記載の組成物。
本発明の特定の実施形態の上記記載は、説明を目的とするものである。それらは、網羅的であること、または本発明を開示される特定の形態に限定するものであること、を意図するものではなく、明らかに、上記の教示に照らして多くの修飾および変更が可能である。上記の実施形態は、本発明の原理およびその実際の適用を最も良く説明するため、そしてそれにより、他の当業者が、本発明および様々な実施形態を、意図する特定の使用に適するように様々な修飾を伴って、最も良く利用できるようにするために、選択し記載したものである。