【手続補正書】
【提出日】令和1年11月6日(2019.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプトイド骨格を形成する連続して結合したペプトイド残基からなり、該ペプトイド骨格のペプトイド残基の窒素原子に１又はそれ以上の官能基が付加された、ペプトイド化合物を含有するペプトイド親和性リガンドであって、
該１又はそれ以上の官能基が、任意の順序であるが、該ペプトイド骨格上の連続したペプトイド残基に結合し、少なくとも２個の芳香族官能基と塩基性又は酸性の官能基のいずれかとを含み、
（i）塩基性残基、（ii）芳香族残基、及び（iii）塩基性残基又は親水性残基の官能基を有する３個のペプトイド残基の連続部分を含むペプトイド親和性リガンドはそれらから除外されることを条件として、
該ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質に特異的に結合し、該免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質がＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ又はＩｇＹのうちの１又はそれ以上である、
ペプトイド親和性リガンド。
【請求項２】
前記ペプトイド骨格のN末端からC末端へ、及びN末端位置に、（i）塩基性残基、（ii）芳香族残基、及び（iii）塩基性残基又は親水性残基の官能基を有する３個のペプトイド残基の連続部分を含むペプトイド親和性リガンドはそれらから除外されることを条件とする、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項３】
芳香族官能基がヘテロ芳香族官能基を含む、請求項２に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項４】
前記ペプトイド骨格を形成する連続して結合したペプトイド残基が、３〜１０個のペプトイド残基を含む、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項５】
前記ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質に対して、０．０５ｘ１０−６〜５０ｘ１０−６モルの平衡解離定数（Ｋｄ）を有する、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項６】
前記ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質に結合し、つづいてｐＨ３〜７において、結合した免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質を放出する、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項７】
免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質がＩｇＭを含む、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項８】
前記ペプトイド親和性リガンドが、ＩｇＭに対して０．０５×１０−６〜５０×１０−６モルの平衡解離定数（Ｋｄ）を有する、請求項７に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項９】
前記免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質が哺乳動物、鳥類又は軟骨魚類由来である、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項１０】
前記ペプトイド親和性リガンドが固体支持体に結合しており、該固体支持体が粒子、無機材料、有機ポリマー材料、又は膜繊維を含む、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項１１】
前記ペプトイド親和性リガンドが、アミノ結合によって固前記体支持体に結合している、請求項１０に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項１２】
前記ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質に対して、チオール結合を有するペプトイド親和性リガンドよりも少なくとも１０％優れた結合親和性を有する、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項１３】
前記ペプトイド骨格が環化されている、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項１４】
前記官能基が、Ｄ−アミノ酸及びβ−アミノ酸を含む非天然アミノ酸官能基を含む、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項１５】
前記ペプトイド親和性リガンドが複数の精製サイクルに適していて、前記ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリンに結合するタンパク質ベースのリガンドよりも５０％以上タンパク質分解に耐性である、請求項１に記載のペプトイド親和性リガンド。
【請求項１６】
以下からなる群から選択されるペプトイド親和性リガンドであって、該ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質に対する結合親和性を有する、親和性リガンド。
【化６】
2019510817.tif 000001
【化７】
2019510817.tif 000002
【化８】
2019510817.tif 000003
及び
【化９】
2019510817.tif 000004
【請求項１７】
以下からなる群から選択されるペプトイド親和性リガンドであって、該ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質に対する結合親和性を有する、親和性リガンド。
【化１０】
2019510817.tif 000005
【化１１】
2019510817.tif 000006
【化１２】
2019510817.tif 000007
【化１３】
2019510817.tif 000008
【化１４】
2019510817.tif 000009
【化１５】
2019510817.tif 000010
【化１６】
2019510817.tif 000011
【化１７】
2019510817.tif 000012
【化１８】
2019510817.tif 000013
【化１９】
2019510817.tif 000014
【化２０】
2019510817.tif 000015
【化２１】
2019510817.tif 000016
及び
【化２２】
2019510817.tif 000017
【請求項１８】
以下からなる群から選択されるペプトイド親和性リガンドであって、該ペプトイド親和性リガンドが、免疫グロブリン、免疫グロブリン断片、又はそれらの免疫グロブリン融合タンパク質に対する結合親和性を有する、親和性リガンド。
【化２３】
2019510817.tif 000018
【化２４】
2019510817.tif 000019
【化２５】
2019510817.tif 000020
【化２６】
2019510817.tif 000021
【化２７】
2019510817.tif 000022
【化２８】
2019510817.tif 000023
【化２９】
2019510817.tif 000024
及び
【化３０】
2019510817.tif 000025
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
式中：
Rは、結合部分（例えば、Rは-OH、-NH2、-NHR''、-OR''、-OOR''などであり、R''はアルキルなどを表す。）又はZ-R'を表す。式中、Zは結合基を表し、R'は固体支持体を表す。
例えば、Zは、-NH-、-O-NH-、-O-R''-S-、-NH-R''-S-、O-NH-R''-S-、-O-R''-SS-、-NH-R''-SS-、-O-NH-R''-S-S-、エーテル（-O-）、チオエーテル（-S-）、チオエステル、カーバメート、カーボネート、アミド、エステル、二級/三級アミン（例えば、還元的アミノ化カップリング反応によって得られる。）、アルキル（例えば、メタセシスカップリング反応によって得られる。）、アルケニル、ホスホジエステル、ホスホエーテル、オキシム、イミン、ヒドラゾン、アセタール、ヘミアセタール、セミカルバゾン、ケトン、ケテン、アミナール、ヘミアミナール、エナミン、エノール、ジスルフィド、スルホン、システアミン、システイン、リシン、2-アジドグリシン、2-アルキニルグリシン等である。
R1', R2', R3', R4', R5', R6', 及びR7'は、それぞれ独立して、不存在又はC1〜C4アルキレン基である。
R1, R2, R3, R4, R5, R6, 及びR7は、それぞれ独立して、本明細書に記載のように、得られたペプトイドが、本明細書に記載のような１又はそれ以上の免疫グロブリンに対して結合親和性を有するように、本明細書に記載の任意の順序で配列した１又はそれ以上の官能基又は機能的残基を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
表１に、限定ではなく一例として、本発明のペプトイド及びペプトイド親和性リガンドの例示的なR基又は官能基を示す。
【表１】
2019510817.tif 000026
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
実施例５
IgAに対するペプトイド親和性樹脂の選択性
50mgの樹脂18-63,18-80及びPV-19-1A（構造を下式に示す。）をスピンカラムに添加し、18CV（10mg/mLアジピン酸/0.8M NaCl pH5.8）で平衡化した。樹脂1mlあたり10.0mgのヒトIgAのサンプル負荷量を、CHOコンディショニング培地の存在下で負荷した。非結合タンパク質を18CVの平衡/洗浄緩衝液を用いてカラムから洗浄した。0.1M酢酸ナトリウムを含む18CV（pH4.0）を用いて生成物溶出を行った。
結果を図4A及び4Bに示す。図4Aは、フロースルー及び溶出画分のポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）（還元条件）を示す。図中、「MM」は分子量マーカー、「SL」は サンプル負荷、「FT」はフロースルー画分、「EL」は溶出画分を示す。図4Bは、フロースルー及び溶出画分の酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）の結果を示す。ヒトIgA ELISA定量キットにより、回収した画分中のIgAの量を定量した。IgAの収率は、負荷された全IgAに対する溶出されたIgAの比として計算した。図中、「FT」はフロースルー画分、「EL」は溶出画分を示す。
【化３１】
2019510817.tif 000027