【手続補正書】
【提出日】平成19年11月19日(2007.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然ポリペプチドには存在しない生体分子パーティションモチーフを含む、細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項２】
生体分子パーティションモチーフをコードする塩基配列が、配列番号１から配列番号２４８より成る群から選択される、請求項１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項３】
生体分子パーティションモチーフがＳＷＴＹモチーフである、請求項１又は２に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項４】
ＳＷＴＹモチーフをコードする塩基配列が、配列番号１から配列番号１８より成る群から選択される、請求項３に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項５】
ポリヌクレオチドがＤＮＡ分子である、請求項１〜４のいずれかに記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項６】
ポリヌクレオチドがＲＮＡ分子である、請求項１〜４のいずれかに記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項６に記載のＲＮＡ分子に相補的であるＲＮＡ分子を含む、請求項６に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項８】
生体分子パーティションモチーフが、ポリペプチドをコードする核酸配列のＣ末端に接着したものである請求項１〜７のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項９】
ポリペプチドが、抗体、Ｇタンパク質共役型受容体、サイトカイン受容体、膜内輸送タンパク質及び膜結合酵素から成る群から選択されるいずれかのメンバーをコードするポリペプチドである、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１０】
ポリペプチドが、一つ又はそれ以上の抗体をコードする、請求項１〜９のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１１】
ポリペプチド又はその一部が、一つ又はそれ以上の免疫原性決定因子をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１２】
ポリペプチドが、一つ又はそれ以上の治療用の生体物質をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１３】
治療用の生体物質が、抗体、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、インターロイキン−１から２９、ＴＮＦα、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インスリン、ヒト成長ホルモン、エリスロポエチン及びそれらの断片から成る群から選択される、請求項１１に記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１４】
ポリペプチド又はその一部が、カリウムチャンネルの一つ又はそれ以上のサブユニットをコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１５】
カリウムチャンネルが、ｈＥＲＧカリウムチャンネルである、請求項１３に記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１６】
ポリペプチド又はその一部が、一つ又はそれ以上のβアミロイドタンパク質をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１７】
ポリペプチド又はその一部が一つ又はそれ以上の嚢胞性繊維症膜貫通調節タンパク質をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１８】
ポリペプチド又はその一部が、一つ又はそれ以上のｐ−糖タンパク質をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項１９】
ポリペプチド又はその一部が、一つ又はそれ以上のインスリン受容体をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項２０】
ポリペプチド又はその一部が、水チャンネル、アクアポリン２、をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項２１】
ポリペプチド又はその一部が、一つ又はそれ以上の多剤耐性タンパク質をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項２２】
ポリペプチド又はその一部が、ロドプシンをコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項２３】
生体分子パーティションモチーフが、ポリペプチドに親和性を有するタグによってポリペプチドに接着されている、請求項１〜２２のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチド。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれかに記載の組換えポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項２５】
組換えポリヌクレオチドがエンハンサー及び／又はプロモーターに動作可能なように連結されている、請求項２４に記載の発現ベクター。
【請求項２６】
請求項１〜２３のいずれかに記載の組換えポリヌクレオチドを含む形質転換細胞。
【請求項２７】
組換えポリヌクレオチドが、請求項２４又は２５に記載の発現ベクターを含むものである請求項２６に記載の形質転換細胞。
【請求項２８】
組換えポリヌクレオチドが、細胞のトランスフェクション、エレクトロポレーション又はトランスフォーメーションによって細胞に導入されたものである、請求項２６又は２７に記載の形質転換細胞。
【請求項２９】
細胞が組換えポリヌクレオチドを発現し、それによって細胞表面にポリペプチドを産生する、請求項２６〜２８のいずれかに記載の形質転換細胞。
【請求項３０】
組換え細胞表面ポリペプチドが天然のポリペプチドには存在しない生体分子パーティションモチーフを含む、組換え細胞表面ポリペプチドを含む請求項２６〜２９のいずれかに記載の形質転換細胞。
【請求項３１】
ａ）請求項１〜２３のいずれかに記載の組換えポリヌクレオチドをトランスフェクティング、エレクトロポレーティング又はトランスフォーミングし、そして
ｂ）ステップａ）のポリペプチドの発現に充分な条件下にステップａ）の細胞を保持する、
ステップを含む、形質転換細胞を調製する方法。
【請求項３２】
ポリペプチドをコードする核酸配列のＣ末端に生体分子パーティションモチーフを接着させて、次いで
細胞に当該核酸配列を含む組換えポリヌクレオチドを導入し、
当該組換えポリヌクレオチドでコードされるポリペプチドを発現させ、小胞体においてプロセシングを受け、そこから分泌され、細胞外膜に挿入され、
それによって当該ポリペプチドが細胞表面に供給される、
ことを含む、細胞の表面に当該核酸配列でコードされるポリペプチドを発現させる方法。
【請求項３３】
ポリペプチドをコードする核酸配列のＣ末端に生体分子パーティションモチーフを接着させてなる組換えポリヌクレオチドが、請求項１〜２３のいずれかに記載の組換えポリヌクレオチドである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ポリペプチドの翻訳後修飾が天然のポリペプチドの翻訳後修飾に較べて修飾されている、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３５】
ポリペプチドのグリコシル化パターンが天然のポリペプチドのグリコシル化パターンに較べて減少している、請求項３２〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
グリコシル化パターンがＯ−結合グリコシル化パターンである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
細胞の表面におけるポリペプチドの発現量が、非天然の生体分子パーティションモチーフを一つも有していないポリペプチドを発現している細胞の表面でのポリペプチドの発現量に較べて増加しているものである、請求項３２〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
生体分子パーティションモチーフが、ポリペプチドに親和性を有するタグによってポリペプチドに接着されている、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
生体分子パーティションモチーフが、生体分子パーティションモチーフを有する別のポリペプチドと複合体を形成してポリペプチドに接着されている、請求項３７又は３８に記載の方法。
【請求項４０】
少なくとも一つの非天然の生体分子パーティションモチーフを有するポリペプチドが、非天然の生体分子パーティションモチーフを一つも含むことなく、細胞内凝集体を形成する、請求項３２〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
ポリペプチドが、免疫原決定因子をコードするポリペプチドであって、細胞の表面に免疫原を産生するものである、請求項３２〜４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
免疫原がウイルスポリペプチドに由来するものである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
免疫原が細菌ポリペプチドに由来するものである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
免疫原が真菌ポリペプチドに由来するものである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
請求項３２〜４４のいずれかに記載の方法が、検査薬の薬理活性を定量するためのアッセイに採用されるものである、請求項３２〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
ポリペプチドを細胞表面に供給するのに充分な条件下で、請求項１〜２３のいずれかに記載の組換えポリヌクレオチドでコードされる少なくとも一つの非天然の生体分子パーティションモチーフを有するポリペプチドを発現させ、そして
当該ポリペプチドを細胞表面から単離する、、
ことを含む、細胞の表面から当該ポリペプチドを製造する方法。
【請求項４７】
請求項３２〜４４のいずれかに記載された方法を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１〜２３のいずれかに記載の細胞表面ポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドを含有してなる、細胞の表面にポリペプチドを供給することによるポリペプチドの細胞内保有によって特徴づけられる患者の障害を治療するための医薬組成物。
【請求項４９】
障害が、急性冠不全症候群、アルツハイマー病、嚢胞性繊維症、糖尿病、腎性糖尿病、デュービン・ジョンソン症候群、又は常染色体優性網膜色素変性症である、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
生体分子パーティションモチーフが付着されたポリペプチドを含有してなる、ポリペプチドの細胞内保有によって特徴づけられる患者の障害を治療するための医薬組成物。
【請求項５１】
生体分子パーティションモチーフが付着されたポリペプチドが、請求項４６又は４７に記載された方法により製造されたものである請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
障害が、急性冠不全症候群、アルツハイマー病、嚢胞性繊維症、糖尿病、腎性糖尿病、デュービン・ジョンソン症候群、又は常染色体優性網膜色素変性症である、請求項５０又は５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
請求項２４又は２５に記載の免疫原性ポリペプチド及び一つ又はそれ以上の生体分子パーティションモチーフをコードする組換えポリヌクレオチドを含む発現ベクター、及び好適な医薬賦形剤を含む、ＤＮＡワクチン組成物。
【請求項５４】
免疫原性ポリペプチドが、ウイルスポリペプチド若しくはその断片、細菌ポリペプチド若しくはその断片、又は、真菌ポリペプチド若しくはその断片である、請求項５３に記載のＤＮＡワクチン組成物。
【請求項５５】
ａ）Ｋｉｒ２．１及び公知のＥＲ局在化シグナルを含むプラスミドを調製し、ここで、前記ＥＲ局在化シグナルは、Ｋｉｒ２．１のＥＲコンパートメントへの再配置を生じさせるものであり、
ｂ）ランダムペプチド配列を各々更に含むステップａの複数のプラスミドのライブラリーを生成させ、ここで、各ランダムペプチド配列は、ステップａのプラスミドにおいてＥＲ局在化シグナルの下流に位置しており、
ｃ）ステップｂに由来するプラスミドのライブラリーで酵母を形質転換し、
ｄ）４ｍＭのカリウムプレート上で増殖させるプラスミドを選択し、そして
ｅ）ステップｄの選択されたプラスミド内でポリペプチド配列を単離する、
ステップを含む、細胞表面発現を誘導することができるアミノ酸配列モチーフを同定するための遺伝子スクリーニング方法。