【手続補正書】
【提出日】平成20年1月23日(2008.1.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織系の輪部幹細胞の少なくとも約３０〜９０％が未分化幹細胞である、該輪部幹細胞を含む、組織系。
【請求項２】
請求項１に記載の組織系であって、前記未分化幹細胞がＳＳＥＡ−４、ＳＳＥＡ−３、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、Ｒｅｘ−１、幹細胞因子、Ｔｒａ−１−６０、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３１、ＣＤ５４およびＣＤ１１７よりなる群から選択される１種以上の幹細胞特異的マーカーを発現する、組織系。
【請求項３】
請求項１に記載の組織系であって、前記未分化幹細胞がＳＳＥＡ−４を発現する、組織系。
【請求項４】
請求項３に記載の組織系であって、ＳＳＥＡ−４を発現する前記未分化幹細胞が組織系中の前記輪部幹細胞の少なくとも約５０〜９０％を含む、組織系。
【請求項５】
請求項１に記載の組織系であって、前記輪部幹細胞が、Ｋ３／Ｋ１２、Ｋ１９およびｐ６３よりなる群から選択される１種以上の細胞表面マーカーを発現する、組織系。
【請求項６】
請求項１に記載の組織系であって、該組織系が、角強膜輪部組織に由来する、組織系。
【請求項７】
請求項６に記載の組織系であって、前記角強膜輪部組織が、ヒト組織である、組織系。
【請求項８】
請求項１に記載の組織系であって、前記組織系が、多層組織系である、組織系。
【請求項９】
請求項１に記載の組織系であって、該組織系が、レシピエントへの移植、インプラント処置又はグラフト処置に適している、組織系。
【請求項１０】
輪部幹細胞を含む組織系を形成する方法であって、該方法が、以下の工程：
（ａ）ドナーから単離された角膜輪部組織を培養して培養物中の角膜輪部細胞を増殖させる工程；
（ｂ）１種以上の幹細胞特異的表面マーカーを選択するために該角膜輪部細胞を分類することにより培養された角膜輪部細胞から輪部幹細胞の集団を単離する工程であって、ここで、該幹細胞特異的表面マーカーが、未分化幹細胞により発現される工程；
（ｃ）輪部幹細胞の単離された集団を培養して、該組織系を形成する工程；
を包含する、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記輪部幹細胞が、未分化幹細胞を含む、方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法であって、前記未分化幹細胞が、前記組織系中の前記輪部幹細胞のうちの少なくとも約７０％を含む、方法。
【請求項１３】
請求項１１に記載の方法であって、前記未分化幹細胞が、ＳＳＥＡ−４、ＳＳＥＡ−３、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、Ｒｅｘ−１、幹細胞因子、Ｔｒａ−１−６０、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３１、ＣＤ５４およびＣＤ１１７よりなる群から選択される１種以上の幹細胞特異的マーカーを発現する、方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、前記未分化幹細胞が、ＳＳＥＡ−４を発現する、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、ＳＳＥＡ−４を発現する前記未分化幹細胞が、前記組織系中の前記輪部幹細胞のうちの少なくとも約５０〜９０％を含む、方法。
【請求項１６】
請求項１０に記載の方法であって、前記未分化幹細胞が、Ｋ３／Ｋ１２、Ｋ１９およびｐ６３よりなる群から選択される１種以上の細胞表面マーカーを発現する、方法。
【請求項１７】
請求項１０に記載の方法であって、前記角膜輪部組織が、ヒトのドナーから単離される、方法。
【請求項１８】
請求項１０に記載の方法であって、前記組織系が、レシピエントへの移植、インプラント処置又はグラフト処置に適している、方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、前記レシピエントが、片方又は両方の眼において輪部幹細胞欠損を有する、方法。
【請求項２０】
請求項１８に記載の方法であって、前記ドナーが、前記レシピエントと同様である、方法。
【請求項２１】
請求項１８に記載の方法であって、前記ドナーが、前記レシピエントと生体適合性である、方法。
【請求項２２】
請求項１０に記載の方法であって、前記角膜輪部組織が、生体コーティング表面又は細胞外マトリックス担体で培養される、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、前記生体コーティング表面が、生体コーティングペトリ皿である、方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であって、前記ペトリ皿が、フィブリノーゲン、ラミニン、コラーゲンＩＶ、テナシン、フィブロネクチン、コラーゲン、ウシ下垂体抽出物、ＥＧＦ、肝細胞成長因子、ケラチノサイト成長因子及びヒドロコルチゾンよりなる群から選択される１種以上の付着因子で生体コーティングされる、方法。
【請求項２５】
請求項２２に記載の方法であって、前記細胞外マトリックスが、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）、哺乳類羊膜、ラミニン、Ｒｅｌｉｓｅａｌ（商標）、トロンビン、テナシン、エンタクチン、ヒアルロン、フィブリノーゲン、コラーゲン−ＩＶ、ポリ−Ｌ−リジン、ゼラチン、ポリ−Ｌ−オルニチン、フィブロネクチン及び血小板誘導成長因子（ＰＤＧＦ）よりなる群から選択される、方法。
【請求項２６】
請求項２２に記載の方法であって、前記細胞外マトリックスが、ヒト羊膜である、方法。
【請求項２７】
請求項２２に記載の方法であって、前記輪部幹細胞を単離する前に培養された角膜輪部細胞を解離させる工程をさらに包含する、方法。
【請求項２８】
請求項１０に記載の方法であって、ジメチルスルホキシド、組み換えヒト表皮成長因子、インスリン、亜セレン酸ナトリウム、トランスフェリン、ヒドロコルチゾン、塩基性線維芽細胞成長因子及び白血病抑制因子よりなる群から選択される１種以上の可溶性因子を添加した培地中で前記角膜輪部組織を培養する、方法。
【請求項２９】
請求項１０に記載の方法であって、前記角膜輪部細胞が、磁気親和性細胞分類（ＭＡＣＳ）を用いて分類される、方法。
【請求項３０】
請求項１０に記載の方法であって、前記角膜輪部細胞が蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）を用いて分類される、方法。
【請求項３１】
請求項１０に記載の方法であって、前記角膜輪部細胞を単離するための１種以上の幹細胞特異的表面マーカーが、ＳＳＥＡ−４、ＳＳＥＡ−３、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、Ｒｅｘ−１、幹細胞因子、Ｔｒａ−１−６０、ＣＤ７３、ＣＤ１０５、ＣＤ３１、ＣＤ５４及びＣＤ１１７よりなる群から選択される、方法。
【請求項３２】
請求項１０に記載の方法であって、前記角膜輪部細胞を単離するための幹細胞特異的表面マーカーが、ＳＳＥＡ−４である、方法。
【請求項３３】
請求項１０に記載の方法であって、前記輪部幹細胞の単離された集団が、前記組織系を形成するための組織基材上で培養される、方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法であって、前記組織基材が、生体コーティング支持体物質を含む、方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法であって、前記生体コーティング支持体物質が、フィブリノーゲン、ラミニン、コラーゲンＩＶ、テナシン、フィブロネクチン、コラーゲン、ウシ下垂体抽出物、ＥＧＦ、肝細胞成長因子、ケラチノサイト成長因子及びヒドロコルチゾンよりなる群から選択される１種以上の付着因子である、方法。
【請求項３６】
請求項３３に記載の方法であって、前記組織基材が、ヒト羊膜、ラミニン、コラーゲンＩＶ、テナシン、フィブリノーゲン、エンタクチン、ヒアルロン、Ｒｅｌｉｓｅａｌ（商標）、トロンビン、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）及びフィブロネクチンよりなる群から選択される、方法。
【請求項３７】
請求項３３に記載の方法であって、前記組織基材が、ヒト羊膜である、方法。
【請求項３８】
請求項３５に記載の方法であって、前記ヒト羊膜が、ラミニン、コラーゲンＩＶ、テナシン、フィブリノーゲン、エンタクチン、ヒアルロン、Ｒｅｌｉｓｅａｌ（商標）、トロンビン、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）及びフィブロネクチンよりなる群から選択される１種以上の付着因子で生体コーティングされる、方法。
【請求項３９】
請求項１０に記載の方法であって、前記輪部幹細胞の単離された集団が、不活性化ヒト胚性線維芽細胞から得た調整された培地を用いてリッチ化された培地中で培養される、方法。
【請求項４０】
請求項１０に記載の方法であって、前記輪部幹細胞の単離された集団が、ヒト白血病抑制因子でリッチ化された培地中で培養される、方法。
【請求項４１】
請求項１０に記載の方法であって、前記輪部幹細胞の単離された集団が、ジメチルスルホキシド、組み換えヒト表皮成長因子、インスリン、亜セレン酸ナトリウム、トランスフェリン及びヒドロコルチゾンよりなる群から選択される１種以上の可溶性因子を添加した培地中で培養される、方法。
【請求項４２】
請求項１０に記載の方法であって、前記単離された輪部幹細胞の集団を少なくとも１０、１５又は２０継代に亘り連続継代する工程をさらに包含する、方法。
【請求項４３】
請求項１０に記載の方法であって、凍結培地中に輪部幹細胞の集団を低温保存する工程をさらに包含する、方法。
【請求項４４】
請求項４３に記載の方法であって、前記凍結培地が、１０〜９０％熱不活性化ヒト臍帯血血清及び５〜１０％ＤＭＳＯを添加した培地を含む、方法。
【請求項４５】
請求項４２に記載の方法であって、前記輪部幹細胞の集団が、好ましくは各継代後に低温保存される、方法。
【請求項４６】
請求項１８に記載の方法であって、輸送培地を含む輸送用受容器中で前記レシピエントに前記組織系を輸送する工程をさらに包含する、方法。
【請求項４７】
請求項４６に記載の方法であって、前記輸送用受容器が、前記組織系を支持するためのハウジングベースの上端内に位置する平行手段を伴った該組織系を受容するために上端において開口し、下端において閉鎖している携帯用の円筒形のハウジングベース、及び、ハウジングベースの上端の開口部を閉鎖するためのキャップを含む、方法。
【請求項４８】
請求項４７に記載の方法であって、前記輸送用受容器が、特殊組織培養等級のプラスチック−１又は医療用等級のステンレスから構築されている、方法。