【手続補正書】
【提出日】平成31年4月26日(2019.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
一部の態様では、本開示は、本開示によって記載されるマルチウェルプレートを含むキットであって、ＢＨ３プロファイリング緩衝液を収容するバイアルおよび治療剤に対する細胞の感受性を予測するためにキットを使用するための指示をさらに含むキットを提供する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
試験作用因子に対する細胞の感受性を予測する方法であって、
ａ）血清を有する培養培地中、試験作用因子の存在下および非存在下で、接着性固体表面上にて細胞を培養するステップ；
ｂ）培養された前記細胞を、ＢＨ３プロファイリング緩衝液およびアポトーシス促進性ＢＨ３ドメインペプチドと接触させるステップ；
ｃ）前記細胞におけるＢＨ３ドメインペプチド誘導型ミトコンドリア外膜透過化（ＭＯＭＰ）の量を測定するステップ；および
ｄ）前記試験作用因子の存在下で培養された前記細胞におけるＢＨ３ドメインペプチド誘導型ＭＯＭＰの量を、前記試験作用因子の非存在下で培養された前記細胞におけるＢＨ３ドメインペプチド誘導型ＭＯＭＰの量と比較するステップ
を含み、
前記試験作用因子の非存在下で培養された前記細胞におけるＢＨ３ドメインペプチド誘導型ＭＯＭＰの量と比較した、前記試験作用因子の存在下で培養された前記細胞におけるＭＯＭＰの増加が、前記細胞が前記試験作用因子に対して感受性であることを示す、方法。
（項目２）
前記細胞を前記ＢＨ３プロファイリング緩衝液および前記アポトーシス促進性ＢＨ３ドメインペプチドと接触させる前に、前記細胞から前記培養培地を洗浄するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ＢＨ３プロファイリング緩衝液が、２×、３×または４×の濃度で添加される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記ＢＨ３プロファイリング緩衝液が、２×の濃度で添加され、ＢＨ３ドメインペプチド誘導型ＭＯＭＰの量が、顕微鏡法によって測定される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記ＢＨ３プロファイリング緩衝液が、３×または４×の濃度で添加され、ＢＨ３ドメインペプチド誘導型ＭＯＭＰの量が、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によって測定される、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記接着性固体表面が、１種または複数の接着促進化合物でコーティングされている、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記１種または複数の接着促進化合物が、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質である、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＥＣＭタンパク質が、コラーゲン１、ラミニン、コラーゲン４およびフィブロネクチンからなる群より選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記ＥＣＭタンパク質が、動物組織に由来するＥＣＭタンパク質混合物である、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記１種または複数の接着促進化合物が抗体である、項目６に記載の方法。
（項目１１）
前記１種または複数の接着促進化合物が、ストレプトアビジンまたはニュートラアビジンである、項目６に記載の方法。
（項目１２）
前記ＢＨ３プロファイリング緩衝液が、トレハロース由来実験緩衝液（ＤＴＥＢ）またはマンニトール実験緩衝液（ＭＥＢ）である、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記ＢＨ３ドメインペプチドとの接触の後、その前、またはそれと同時に前記細胞が透過化される、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記ＢＨ３プロファイリング緩衝液に透過化剤が補充される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記透過化剤が、ジギトニンまたはサポニンである、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
ＢＨ３ドメインペプチド誘導型ＭＯＭＰの量が、ｉ）電位差測定用色素と接触した細胞における前記電位差測定用色素の発光、またはｉｉ）ミトコンドリア膜間腔からの分子の放出を決定することによって測定される、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
ＢＨ３ドメインペプチド誘導型ＭＯＭＰの量が、ＦＡＣＳ、プレート蛍光定量法、蛍光イメージングまたは自動画像解析によって測定される、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
ＭＯＭＰを測定する前に前記細胞を固定するステップをさらに含む、項目１から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
固定された前記細胞が、電位差測定用色素と接触する、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記電位差測定用色素が、５，５’，６，６’−テトラクロロ−１，１’，３，３’−テトラエチルベンゾイミダゾリルカルボシアニンヨージド（ＪＣ−１）、ジヒドロローダミン１２３、テトラメチルローダミンメチルエステル（ＴＭＲＭ）またはテトラメチルローダミンエチルエステル（ＴＭＲＥ）である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
固定された前記細胞が、チトクロームＣ、ＳＭＡＣ／Ｄｉａｂｌｏ、Ｏｍｉ、アデニル酸キナーゼ−２またはアポトーシス誘導因子に対する抗体と接触する、項目１８に記載の方法。
（項目２２）
固定された前記細胞が、Ｔｏｍ２０またはＶＤＡＣに対する抗体と接触する、項目１８に記載の方法。
（項目２３）
前記ＢＨ３ドメインペプチドが、ＢＩＤ、ＢＩＭ、ＢＡＤ、ＮＯＸＡ、ＰＵＭＡ、ＢＭＦ、またはＨＲＫポリペプチドのＢＨ３ドメインに由来する、項目１から２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記ＢＨ３ドメインペプチドが、配列番号１〜１５からなる群より選択される、項目１から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記試験作用因子が治療剤である、項目１から２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
試験治療剤が化学療法剤である、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記細胞が初代ヒト腫瘍細胞である、項目１から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記細胞が、患者由来異種移植片（ＰＤＸ）から得られる、項目１から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記細胞が培養ヒト細胞である、項目１から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記細胞が、初代動物腫瘍細胞である、項目１から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記細胞が、ヒトまたは動物組織に由来する健康な細胞である、項目１から２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
複数の試験作用因子を用いて繰り返される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
各ウェルが接着性作用因子でコーティングされている、試験治療剤およびＢＨ３ドメインペプチドを含むマルチウェルプレート。
（項目３４）
前記ＢＨ３ドメインペプチドが、ＢＩＤ、ＢＩＭ、ＢＡＤ、ＮＯＸＡ、ＰＵＭＡ、ＢＭＦ、またはＨＲＫポリペプチドのＢＨ３ドメインに由来する、項目３３に記載のマルチウェルプレート。
（項目３５）
前記ＢＨ３ドメインペプチドが、配列番号１〜１５からなる群より選択される、項目３３に記載のマルチウェルプレート。
（項目３６）
前記試験治療剤が化学療法剤である、項目３３から３５のいずれか一項に記載のマルチウェルプレート。
（項目３７）
前記接着性作用因子が細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質である、項目３３から３６のいずれか一項に記載のマルチウェルプレート。
（項目３８）
前記ＥＣＭタンパク質が、コラーゲン１、ラミニン、コラーゲン４およびフィブロネクチンからなる群より選択される、項目３７に記載のマルチウェルプレート。
（項目３９）
前記接着性作用因子が抗体である、項目３３から３６のいずれか一項に記載のマルチウェルプレート。
（項目４０）
項目３３から３９のいずれか一項に記載のマルチウェルプレートを含むキットであって、ＢＨ３プロファイリング緩衝液を収容するバイアルおよび治療剤に対する細胞の感受性を予測するために前記キットを使用するための指示をさらに含む、キット。