【手続補正書】
【提出日】平成20年6月23日(2008.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  生物試料中のヘキソースモノリン酸を検出および定量分析する方法において：
（ａ）イオン化に適した形態の生物試料抽出物を得る；
（ｂ）前記抽出物をイオン化してガス相イオン流を形成する；
（ｃ）ヘキソースモノリン酸の質量電荷比を有するプレカーサ分子イオンを選択する；
（ｄ）前記プレカーサ分子イオンをフラグメント化してヘキソースモノリン酸のプロダクトイオンを得る；
（ｅ）質量電荷比によって他のプロダクトイオンから関心プロダクトイオンを選択する；
（ｆ）前記関心プロダクトイオンを検出し、そのイオン強度を得る；
（ｇ）前記プロダクトイオンのイオン強度を用いて、
（ｉ）前記生物試料中のヘキソースモノリン酸の定量的存在量をスペクトル分析によって特定する；および／または
（ii）対照試料または既知濃度のヘキソースモノリン酸および／または特定種類のヘキソースモノリン酸を含む試料のイオン強度と比較することによって、前記生物試料中のヘキソースモノリン酸または特定種類のヘキソースモノリン酸の濃度を特定する；および／または
（iii）前記生物試料中に存在する特定種類のヘキソースモノリン酸の相対量を示唆するイオン存在量比（ＩＡＲ）を特定する；
各工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】  前記工程（ａ）において、分析すべき生物試料を乾燥させ、さらに該試料からヘキソースモノリン酸を抽出するのに適した溶媒で前記乾燥試料を抽出することによって、イオン化に適した生物試料のヘキソースモノリン酸抽出物を得ることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】  前記生物試料を適切な媒体上にブロットし、その後乾燥することを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項４】  前記適切な媒体が濾紙であることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】  前記ヘキソースモノリン酸を抽出するのに適した溶媒が、メタノールより高親水性の溶媒であることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項６】  前記溶媒が、アセトニトリル／水、酢酸エチル／水、テトラヒドロフラン／水、メタノール／水、およびイソプロテレノール／水、ならびにそれらと同様の特性を有する溶媒よりなる群から選択されることを特徴とする請求項５記載の方法。
【請求項７】  前記溶媒が、３０：７０から７０：３０（ｖ／ｖ）までのアセトニトリル／水であることを特徴とする請求項６記載の方法。
【請求項８】  前記溶媒が、１：１（ｖ／ｖ）のアセトニトリル／水であることを特徴とする請求項７記載の方法。
【請求項９】  前記生物試料が、全血、分画血液成分、組織、尿、便、胆汁、唾液、汗、およびその他の腺分泌物よりなる群から選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１０】  前記生物試料が全血試料であることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１１】  前記血液試料を適切な媒体上にブロットし、乾燥し、その後ヘキソースモノリン酸の抽出に適した溶媒を用いて抽出することを特徴とする請求項１０記載の方法。
【請求項１２】  前記適切な媒体が濾紙であることを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項１３】  前記工程（ｂ）から（ｃ）までがタンデム質量分析計において行われることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１４】  イオン強度が陰イオンモードで記録されることを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１５】  前記工程（ｂ）が、エレクトロスプレーまたは空圧補助エレクトロスプレーイオン化によってイオン流を形成することを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１６】  前記ヘキソースモノリン酸のプレカーサ分子イオンの質量電荷比が259.02 Da/eであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１７】  前記関心プロダクトイオンが、[ＰＯ３]-、[Ｈ２ＰＯ４]-、および[(Ｃ２Ｈ３Ｏ)ＨＰＯ４]-であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項１８】  前記関心プロダクトイオンの質量電荷比が、[ＰＯ３]-に関して78.96 Da/e、[Ｈ２ＰＯ４]-に関して96.97 Da/e、[(Ｃ２Ｈ３Ｏ)ＨＰＯ４]-に関して138.98 Da/eであることを特徴とする請求項１７記載の方法。
【請求項１９】  [ＰＯ３]-プロダクトイオンがアルドヘキソース−１−モノリン酸の最良の指標となり、かつ[Ｈ２ＰＯ４]-プロダクトイオンがアルドヘキソース−６−モノリン酸あるいはケトヘキソース−１−モノリン酸またはケトヘキソース−６−モノリン酸の何れかの最良の指標となることを特徴とする請求項１８記載の方法。
【請求項２０】  Ｇａｌ−１−Ｐがアルドヘキソース−１−モノリン酸であり、かつ生物試料中の[ＰＯ３]-フラグメントのイオン強度を既知濃度のＧａｌ−１−Ｐを含む対照試料のイオン強度と比較することによって、[ＰＯ３]-フラグメントを用いて生物試料中のＧａｌ−１−Ｐの濃度の指標となるアルドヘキソース−１−モノリン酸の濃度を特定することを特徴とする請求項１９記載の方法。
【請求項２１】  質量電荷比が78.96 Da/eから96.97 Da/eまでのプロダクトイオンのイオン存在量比を、生物試料中のＧａｌ−１−Ｐ濃度の指標として用いることを特徴とする請求項１８記載の方法。
【請求項２２】  それぞれ請求項２０または２１記載の方法を用いて編成された、正常およびガラクトース血症の患者のＧａｌ−１−Ｐ濃度および／またはＩＡＲレベルのデータベース。
【請求項２３】  ガラクトース血症の指標となるヘキソースモノリン酸濃度およびＩＡＲレベルのカットオフレベルを特定するための請求項２２記載のデータベース。
【請求項２４】  請求項２０または２１記載の方法によって特定された試験患者の生物試料中のヘキソースモノリン酸濃度および／またはＩＡＲレベルを、ガラクトース血症の指標となるカットオフレベルの値と比較することによって、ガラクトース血症をスクリーニングおよび／または検査する方法。
【請求項２５】  ヘキソースモノリン酸のカットオフレベルが０．９５−２．６ｍｍｏｌ／ｌヘキソースモノリン酸濃度および／または１．４１−１．６８ ＩＡＲであり、カットオフ値を越えるレベルがガラクトース血症の指標となることを特徴とする請求項２４記載の方法。
【請求項２６】  カットオフレベルが１．２ｍｍｏｌ／ｌヘキソースモノリン酸濃度および／または１．５ ＩＡＲであることを特徴とする請求項２５記載の方法。
【請求項２７】  前記生物試料が、ヘキソースモノリン酸を抽出するのに適した溶媒で抽出された全血試料であることを特徴とする請求項２４記載の方法。
【請求項２８】  前記溶媒が、３０：７０から７０：３０（ｖ／ｖ）までのアセトニトリル／水であることを特徴とする請求項２７記載の方法。
【請求項２９】  請求項１記載の方法を用いて開発された、正常個体およびヘキソースモノリン酸関連疾患を有する個体のヘキソースモノリン酸濃度および／またはＩＡＲレベルのデータベース。
【請求項３０】  ヘキソースモノリン酸関連疾患の指標となるカットオフレベルを特定するための請求項２９記載のデータベースの使用。
【請求項３１】  請求項１記載の方法を用いてヘキソースモノリン酸レベル特定し、さらに、疾患の指標となるヘキソースモノリン酸のカットオフレベルと前記患者のヘキソースモノリン酸レベルとを比較することによって、ヘキソースモノリン酸関連疾患を検査する方法。
【請求項３２】  前記ヘキソースモノリン酸関連疾患が、ガラクトース血症(OMIM 230400)、遺伝性果糖不耐性(OMIM 229600)、果糖尿症（肝フルクトキナーゼ欠損）(OMIM 229800)、フルクトース１,６−ビスホスファターゼ欠損(OMIM 229700)、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損(OMIM 305900)、ＵＤＰ−ガラクトース−４−プライム−エピメラーゼ(EC 5.1.3.2)欠損、および糖尿病よりなる群から選択されることを特徴とする請求項３１記載の方法。
【請求項３３】  ヘキソースモノリン酸を抽出するのに適した溶媒で生物試料を抽出する前に、適切な溶媒を用いて乾燥生物試料からアミノ酸およびアシルカルニチンを抽出し、最初の抽出物を形成してそれを定量分析のために除去し、さらに残りの生物試料を再乾燥させることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項３４】  前記生物試料が全血であることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３５】  前記適切な溶媒がメタノールであることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３６】  アミノ酸、有機酸、および脂肪酸の代謝障害、ならびにヘキソースモノリン酸の代謝障害の両方をスクリーニングするための方法であることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３７】  フェニルケトン尿症およびガラクトース血症の両方をスクリーニングするための方法であることを特徴とする請求項３６記載の方法。
【請求項３８】  前記関心プロダクトイオンが[ＰＯ３]-であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３９】  [ＰＯ３]-のイオン強度を用いて、生物試料中のアルドヘキソース−１−モノリン酸の濃度またはレベルを特定することを特徴とする請求項３８記載の方法。
【請求項４０】  アルドヘキソース−１−モノリン酸関連疾患の検査に用いられ、アルドヘキソース−１−モノリン酸の濃度またはレベルを、疾患の指標となるアルドヘキソース−１−モノリン酸のカットオフ濃度またはレベルと比較することを特徴とする、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】前記疾患がガラクトース血症であることを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４２】  前記関心プロダクトイオンが、[Ｈ２ＰＯ４]-であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４３】  [Ｈ２ＰＯ４]-のイオン強度を用いて、生物試料中のアルドヘキソース−６−モノリン酸および／またはケトヘキソース−１−モノリン酸および／またはケトヘキソース−６−モノリン酸の濃度またはレベルを特定することを特徴とする請求項４２記載の方法。
【請求項４４】  ヘキソースモノリン酸レベルおよび対応するヘキソースモノリン酸関連疾患の状態のデータベースを作成する方法において：
（ａ）請求項１記載の方法に従って個体のヘキソースモノリン酸レベルを特定する；
（ｂ）前記個体のヘキソースモノリン酸関連疾患の状態を特定する；
（ｃ）前記工程（ａ）および（ｂ）からの情報を用いてデータベースを作成する；
（ｄ）必要に応じて、他の個体からの生物試料を用いて前記工程（ａ）および（ｂ）を繰り返す；
（ｅ）前記工程（ｄ）からの情報を前記データベースに入力する；
各工程を含んでなる方法。
【請求項４５】  ヘキソースモノリン酸関連疾患を有する個体と有さない個体とのヘキソースモノリン酸レベルを比較することを含む、ヘキソースモノリン酸関連疾患の指標となるヘキソースモノリン酸カットオフレベルを特定するための請求項４４記載の方法によって作成されたデータベースの使用。
【請求項４６】  請求項１記載の方法に従ってヘキソースモノリン酸レベルを特定し、該ヘキソースモノリン酸レベルを、データベースのヘキソースモノリン酸レベルおよび対応するヘキソースモノリン酸関連疾患の状態と比較し、前記特定されたヘキソースモノリン酸レベルがヘキソースモノリン酸関連疾患を示唆するか否かを特定することを含む、ヘキソースモノリン酸関連疾患の診断における請求項４４記載の方法によって作成されたデータベースの使用。
【請求項４７】  ヘキソースモノリン酸関連疾患診断ビジネスを実施する方法において：
ヘキソースモノリン酸関連疾患の診断および／またはスクリーニングおよび／またはヘキソースモノリン酸レベルのデータベースの開発において用いることができる、請求項１記載の方法に従って生物試料からヘキソースモノリン酸レベルを特定する方法を提供する；
ヘキソースモノリン酸関連疾患の診断に用いることができるヘキソースモノリン酸レベルを特定する方法に対する権利を第三者にライセンス付与または売却する；
ことを含む方法。
【請求項４８】  ヘキソースモノリン酸関連疾患診断ビジネスを実施する方法において：
第三者によって提供された生物試料のヘキソースモノリン酸レベルを請求項１記載の方法に従って特定する；
前記ヘキソースモノリン酸レベルがヘキソースモノリン酸関連疾患を示唆するか否かを特定する；
手数料を徴収してその結果を第三者に提供する：
ことを含む方法。