【手続補正書】
【提出日】平成20年1月28日(2008.1.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも約１２ｋＤａの分子量を有するポリアルキレンオキシドポリマーに結合したインターフェロン；ならびに必要に応じて
ｂ）界面活性剤；
ｃ）賦形剤；および
ｄ）バッファー；
を含み、溶液のｐＨ範囲が約３〜約１１であることを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記インターフェロンが、インターフェロン−ベータ１ｂであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビトールエステルおよびポリエチレングリコールより成る群から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記ｐＨ範囲が、約２．５〜約８．５であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記ｐＨ範囲が、約３．０〜約５．０であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記ｐＨ範囲が、約３．０〜約４．０であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記バッファーが、グリシン−ＨＣｌ、酢酸、酢酸ナトリウム、アスパラギン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムより成る群から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項８】
前記バッファーが、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムおよびグリシンＨＣｌから選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項９】
前記バッファーのイオン強度が、約１０ｍＭであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
前記バッファーが、約３ｍＭ〜約１０ｍＭの濃度で存在することを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
前記賦形剤が、非イオン性であり、単糖類、二糖類およびアルジトールより成る群から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
前記賦形剤が、グルコース、リボース、ガラクトース、Ｄ−マンノース、ソルボース、フルクトース、キシルロース、スクロース、マルトース、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マルトデキストリン、デキストラン、グリセロール、ソルビトール、マンニトールおよびキシリトールより成る群から選択されることを特徴とする請求項７記載の組成物。
【請求項１３】
前記賦形剤が、スクロース、トレハロース、マンニトールおよびグリセロール、またはそれらの組み合わせより成る群から選択されることを特徴とする請求項８記載の組成物。
【請求項１４】
前記賦形剤が、マンニトールおよびスクロースまたはそれらの組み合わせより成る群から選択されることを特徴とする請求項９記載の組成物。
【請求項１５】
前記界面活性剤が、非イオン性であり、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、およびポリエチレングリコールより成る群から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
前記ポリアルキレンオキシドポリマーが、直鎖または分枝であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１７】
前記直鎖ポリアルキレンオキシドポリマーが、次式で表されるものであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【化１】
2007526317.tif 000001
（式中、
Ａは、キャッピング基であり、
Ｒ７は、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜１２分枝アルキル、Ｃ３〜８シクロアルキル、Ｃ１〜６置換アルキル、Ｃ３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ１〜６アルケニル、Ｃ３〜１２分枝アルケニル、Ｃ１〜６アルキニル、Ｃ３〜１２分枝アルキニル、Ｃ１〜６ヘテロアルキル、置換されたＣ１〜６ヘテロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシアルキル、フェノキシアルキル、およびＣ１〜６ヘテロアルコキシから選択され、
ｘは、重合度である。）
【請求項１８】
前記キャッピング基が、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、ＮＨ２、ＳＨ、およびＣ１〜６アルキル部分より成る群から選択されることを特徴とする請求項５記載の組成物。
【請求項１９】
前記分枝ポリアルキレンオキシドポリマーが、以下のものより成る群から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【化２】
2007526317.tif 000002
（式中、
（ａ）は、約１〜約５の整数であり；
Ｚは、Ｏ、ＮＲ８、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、ここで、Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８分枝アルキル、Ｃ１〜８置換アルキル、アリール、またはアラルキルであり；
（ｘ）は、重合度であり；
（ｎ）は、０または１であり；
（ｐ）は、正の整数、好ましくは約１〜約６であり；
ｍ−ＰＥＧは、ＣＨ３−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｘ−であり、
リガンドは、インターフェロン−β１ｂである。）
【請求項２０】
前記インターフェロン−ベータ１ｂが、配列番号１のアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２１】
前記インターフェロン−ベータ１ｂが、以下のものから選択されるポリアルキレンオキシドポリマーに結合していることを特徴とする請求項２０記載の組成物。
【化３】
2007526317.tif 000003
【請求項２２】
前記ポリアルキレンオキシドポリマーの分子量が、約１２ｋＤａ〜約６０ｋＤａの範囲であることを特徴とする請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
前記ポリアルキレンオキシドポリマーの分子量が、約３０ｋＤａであることを特徴とする請求項２１記載の組成物。
【請求項２４】
前記ポリアルキレンオキシドポリマーの分子量が、約４０ｋＤａであることを特徴とする請求項２１記載の組成物。
【請求項２５】
前記ポリアルキレンオキシドポリマーが、ウレタン、第二級アミン、アミドおよびチオエーテルより成る群から選択される連結によって、インターフェロン−ベータ１ｂに結合していることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２６】
前記インターフェロン−ベータ１ｂが、前記インターフェロン−ベータ１ｂのアルファ−アミノ末端基を介して、ポリアルキレンオキシドポリマーに結合していることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２７】
前記インターフェロン−ベータ１ｂが、該インターフェロン−ベータ１ｂのＬｙｓのイプシロンアミノ基を介してポリアルキレンオキシドポリマーに結合していることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２８】
前記インターフェロン結合体が、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在することを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２９】
前記インターフェロン結合体が、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在することを特徴とする請求項２８記載の組成物。
【請求項３０】
ａ）０．０５〜３．０ｍｇ／ｍｌの、少なくとも約１２ｋＤａの分子量を有するポリアルキレンオキシドポリマーに結合したインターフェロン−ベータ１ｂ、
ｂ）１％〜５％のマンニトール、および
ｃ）３〜１０ｍＭの酢酸を含み、ｐＨが約３．７であることを特徴とする組成物。
【請求項３１】
ＥＭＣ／ＶｅｒｏまたはＥＭＣ／Ａ５４９抗ウイルスバイオアッセイを使用した場合に、天然のインターフェロン−ベータ１ｂと比較して抗ウイルス活性の少なくとも約６５パーセントが保持されている生物学的に活性なポリマー−インターフェロン結合体組成物であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３２】
ＥＭＣ／ＶｅｒｏまたはＥＭＣ／Ａ５４９抗ウイルスバイオアッセイを使用した場合に、天然のインターフェロン−ベータ１ｂと比較して抗ウイルス活性の少なくとも約２０パーセントが保持されている生物学的に活性なポリマー−インターフェロン結合体組成物であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３３】
請求項１記載の組成物を調製する方法であって、活性化ポリアルキレンオキシドポリマーをインターフェロン−ベータ１ｂに結合させるのに十分な条件下で、少なくとも約３０ｋＤａの分子量を有する活性化ポリアルキレンオキシドポリマーと、インターフェロン−ベータ１ｂを反応させ、得られた結合体を精製し、前記結合体を、必要に応じて賦形剤および界面活性剤を含有する、約３．０〜約８．０のｐＨを有する緩衝溶液中に再懸濁させる工程を含み、前記組成物が、ＥＭＣ／ＶｅｒｏまたはＥＭＣ／Ａ５４９抗ウイルスバイオアッセイを使用した場合に、天然のインターフェロン−ベータ１ｂと比較して抗ウイルス活性の少なくとも約２０％が保持されている生物学的に活性なポリマー−インターフェロン結合体組成物であることを特徴とする方法。
【請求項３４】
前記条件が、前記活性化ポリアルキレンオキシドポリマーを前記インターフェロン−ベータ１ｂのアミノ末端基に結合させるのに十分なものであることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
前記条件が、前記活性化ポリアルキレンオキシドポリマーを前記インターフェロン−ベータ１ｂのＬｙｓのイプシロンアミノ基に結合させるのに十分なものであることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３６】
前記活性化ポリアルキレンオキシドポリマーの分子量が、約３０ｋＤａ〜約４０ｋＤａの範囲であることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３７】
前記活性化ポリアルキレンオキシドポリマーの分子量が、約３０ｋＤａであることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３８】
前記活性化ポリアルキレンポリマーの分子量が、約４０ｋＤａであることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項３９】
前記活性化ポリアルキレンポリマーが、活性化ポリエチレングリコールであることを特徴とする請求項３３記載の方法。
【請求項４０】
前記活性化ポリエチレングリコールが、末端反応性のアルデヒド部分を含むことを特徴とする請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
前記活性化ポリエチレングリコールが、ｍＰＥＧ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＯ、ｍＰＥＧ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＯ、ｍＰＥＧ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＯおよびｍＰＥＧ２−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨＯより成る群から選択されることを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
前記活性化ポリエチレングリコールが、以下のものより成る群から選択されることを特徴とする請求項３９記載の方法。
【化４】
2007526317.tif 000004
（式中、
（ａ）は、約１〜約５の整数であり；
Ｚは、Ｏ、ＮＲ８、Ｓ、ＳＯ、またはＳＯ２であり、ただし、Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１〜８アルキル、Ｃ１〜８分枝アルキル、Ｃ１〜８置換アルキル、アリール、またはアラルキルであり；
（ｘ）は、重合度であり；
（ｎ）は、０または１であり、
（ｐ）は、正の整数、好ましくは約１〜約６であり、
ｍ−ＰＥＧは、ＣＨ３−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）Ｘ−である。）
【請求項４３】
前記活性化ポリエチレングリコールが、以下のものより成る群から選択される末端反応性の部分を含むことを特徴とする請求項３３記載の方法。
【化５】
2007526317.tif 000005
【請求項４４】
必要とする患者に投与される前に中和されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項４５】
リン酸ナトリウムで中和されることを特徴とする請求項４４記載の組成物。
【請求項４６】
経口的に、静脈内に、皮下に、あるいは筋肉内に投与されることを特徴とする請求項４４記載の組成物。
【請求項４７】
請求項１記載の組成物を活性成分として含む、インターフェロン−ベータに反応性の疾患または異常をもつ哺乳類を治療するための医薬組成物。
【請求項４８】
ポリアルキレンオキシド−タンパク質結合体を調製する方法であって、
（ａ）タンパク質を可溶化させる量の適合性のある界面活性剤の存在下で、適合性のある水溶液に該タンパク質を可溶化させる工程；
（ｂ）前記可溶化されたタンパク質を活性化ポリアルキレンオキシドポリマーと反応させて、ポリアルキレンオキシド−タンパク質結合体および界面活性剤を含む溶液を作成する工程；
（ｃ）前記工程（ｂ）の溶液を、前記ポリアルキレンオキシド−タンパク質結合体から前記界面活性剤を解離させるのに有効なｐＨに調整する工程；
（ｄ）前記解離された界面活性剤を前記ポリアルキレンオキシド−タンパク質結合体から分離して、前記ポリアルキレンオキシド−タンパク質結合体を回収する工程；を含むことを特徴とする方法。
【請求項４９】
前記工程（ｃ）において、約ｐＨ３〜約ｐＨ４の範囲にｐＨを調整することを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記活性化ポリアルキレンオキシドポリマーが、約１２ｋＤａ〜約６０ｋＤａのサイズ範囲のポリエチレングリコールポリマーであることを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
前記界面活性剤が、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤、およびそれらの組み合わせより成る群から選択されることを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
前記界面活性剤が、両性イオン性界面活性剤であることを特徴とする請求項５１記載の方法。
【請求項５３】
前記タンパク質が、インターフェロンであることを特徴とする請求項４８記載の方法。
【請求項５４】
前記タンパク質が、ＩＦＮ−ベータであることを特徴とする請求項５３記載の方法。