【手続補正書】
【提出日】令和1年6月5日(2019.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、サンプル内のＶδ２−ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を増殖する方法：
（１）インターロイキン４−様活性（interleukin-4-like activity）を有する成長因子、およびＴ細胞マイトージェンを含む第１の培地中のサンプル中の細胞を、インターロイキン１５−様活性を有する成長因子の非存在下で培養すること；および
（２）インターロイキン４−様活性を有する成長因子の非存在下で、インターロイキン１５−様活性を有する成長因子およびＴ細胞マイトージェンを含む第２の培地中で、ステップ（１）で得られた細胞を培養すること。
【請求項２】
インターロイキン４−様活性を有する成長因子がインターロイキン−４である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
インターロイキン１５−様活性を有する成長因子が、インターロイキン１５、インターロイキン−２またはインターロイキン−７である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
第１または第２の培地、または両方の培地が、さらに第２の成長因子を含み、好ましくは前記成長因子がインターフェロン−γまたはそのミメティック、または機能的な等価物である、請求項１から３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
第１または第２の培地、または両方の培地が、さらに第２および第３の成長因子を含み、好ましくは前記成長因子がインターフェロン−γ、インターロイキン−２１、またはそれらのミメティック、または機能的な等価物である、請求項１から３のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
第１または第２の培地、または両方の培地が、さらに第２、第３および第４の成長因子を含み、好ましくは前記成長因子がインターフェロン−γ、インターロイキン−２１、インターロイキン−１β、またはそれらのミメティック、または機能的な等価物である、請求項１から３のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
第１または第２の培地、または両方の培地が、さらにＶδ２−ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の共刺激性分子を含み、好ましくは該共刺激性分子が、ＳＬＡＭレセプターの分子リガンドまたはアゴニスト、またはＣＤ２７レセプターの分子リガンドまたはアゴニスト、またはＣＤ７レセプターの分子リガンドまたはアゴニストのいずれかである、請求項１から３のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
第１および第２の培地がさらに血清または血漿を含む、請求項１から７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞のＴ細胞が富化される、請求項１から８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞のＴＣＲγδ＋Ｔ細胞が富化される、請求項１から９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞のＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を消耗させる、請求項１から１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞のＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を最初に消耗させ、次にＣＤ３＋細胞が富化される、請求項１から１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞の非ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を消耗させる、請求項１から１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
サンプルが血液または組織またはそのフラクションであり、好ましくはサンプルが、末梢血、臍帯血、リンパ組織、上皮、胸腺、骨髄、ひ臓、肝臓、ガン組織、感染した組織、リンパ節組織またはそのフラクションから選ばれ、より好ましくは出発サンプルが人間の末梢血またはそのフラクションである、請求項１から１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
サンプルが低密度単核細胞（ＬＤＭＣ）または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）から成る、請求項１から１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
第１の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約１０から約５０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン４−様活性を有する成長因子が約１から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、好ましくは第１の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約２０から約２０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン４−様活性を有する成長因子が約５から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、より好ましくは第１の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約５０から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン４−様活性を有する成長因子が約２０から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、さらに好ましくは第１の培地が、Ｔ細胞マイトージェンを７０ナノグラム／ｍｌで含み、インターロイキン４−様活性を有する成長因子を１００ナノグラム／ｍｌで含む、請求項１から１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
第２の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約０．１から約５０μｇ／ｍｌの量、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子が約１から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、好ましくは第２の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約０．３から約１０μｇ／ｍｌの量、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子が約２から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、より好ましくは第２の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約０．５から約５μｇ／ｍｌの量、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子が約２０から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、さらに好ましくは第２の培地が、Ｔ細胞マイトージェンを１μｇ／ｍｌで含み、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子を７０ナノグラム／ｍｌの量で含む、請求項１から１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
第１または第２の培地、または両方の培地中に、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子が約１から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子およびインターロイキン−２１−様活性を有する成長因子が１から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、好ましくは第１または第２の培地、または両方の培地中に、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子が約２から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子およびインターロイキン−２１−様活性を有する成長因子が２から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、より好ましくは第１または第２の培地、または両方の培地中に、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子が約２０から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子およびインターロイキン−２１−様活性を有する成長因子が５から約１００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、さらに好ましくは第１または第２の培地、または両方の培地がさらに、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子を７０ナノグラム／ｍｌ、インターロイキン−２１−様活性を有する成長因子をが２から１５ナノグラム／ｍｌ、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子を１５ナノグラム／ｍｌで含む、請求項１から１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１９】
Ｔ細胞マイトージェンが抗体またはそのフラグメントであり、好ましくは抗体がＣＤ３またはそのフラグメントに結合する、請求項１から１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
血清または血漿が約０．５から約２５体積％の量で存在し、好ましくは血清または血漿が約２から約２０体積％の量で存在し、より好ましくは血清または血漿が約２．５から約１０体積％の量で存在し、さらに好ましくは血清または血漿が約５体積％の量で存在する、請求項８から１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれか１項記載の方法によって調製された、ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞が富化された細胞調製物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８０】
注：いくつかの製品はＥＵおよび／または米国での使用のための公認された医療器具として販売されている。他の全ての製品は臨床検査のための細胞−ベースの製品として販売されている。臨床試験用の新医薬品承認制度（ＩＮＤ）または医療機器承認制度（ＩＤＥ）の下で臨床試験用に使用する事ができる。
本発明は以下の実施態様を包含する。
実施態様第１項：  サンプル内のＶδ２−ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を増殖する方法：
（１）インターロイキン４−様活性（interleukin-4-like activity）を有する少なくとも１つの成長因子、およびＴ細胞マイトージェンを含む第１の培地中のサンプル中の細胞を、インターロイキン１５−様活性を有する成長因子の非存在下で培養すること；および
（２）インターロイキン４−様活性を有する成長因子の非存在下で、インターロイキン１５−様活性を有する少なくとも１つの成長因子およびＴ細胞マイトージェンを含む第２の培地中で、ステップ（１）で得られた細胞を培養すること。
実施態様第２項：  インターロイキン４−様活性を有する成長因子がインターロイキン−４であることを特徴とする実施態様第１項記載の方法。
実施態様第３項：  インターロイキン１５−様活性を有する成長因子が、インターロイキン１５、インターロイキン−２またはインターロイキン−７であることを特徴とする実施態様第１または２項記載の方法。
実施態様第４項：  インターロイキン−１５−様活性を有する成長因子が、インターロイキン−１５であることを特徴とする実施態様第３項記載の方法。
実施態様第５項：  第１または第２の培地、または両方の培地が、さらに第２の成長因子を含む、実施態様第１から４のいずれか１項記載の方法。
実施態様第６項：  前記成長因子がインターフェロン−γまたはそのミメティック、または機能的な等価物であることを特徴とする実施態様第５項記載の方法。
実施態様第７項：  第１または第２の培地、または両方の培地が、さらに第２および第３の成長因子を含む、実施態様第１から４のいずれか１項記載の方法。
実施態様第８項：  前記成長因子がインターフェロン−γ、インターロイキン−２１、またはそれらのミメティック、または機能的な等価物であることを特徴とする実施態様第７項記載の方法。
実施態様第９項：  第１または第２の培地、または両方の培地が、さらに第２、第３および第４の成長因子を含む、実施態様第１から４のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１０項：  前記成長因子がインターフェロン−γ、インターロイキン−２１、インターロイキン−１β、またはそれらのミメティック、または機能的な等価物であることを特徴とする実施態様第９項記載の方法。
実施態様第１１項：  第１または第２の培地、または両方の培地、さらにＶδ２−ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の共刺激性分子を含む、実施態様第１から４のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１２項：  共刺激性分子が、ＳＬＡＭレセプターの分子リガンドまたはアゴニスト、またはＣＤ２７レセプターの分子リガンドまたはアゴニスト、またはＣＤ７レセプターの分子リガンドまたはアゴニストのいずれかであることを特徴とする実施態様第１１項記載の方法。
実施態様第１３項：  第１および第２の培地が血清または血漿を含むことを特徴とする実施態様第１から１２のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１４項：  ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞のＴ細胞が富化されることを特徴とする実施態様第１から１３のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１５項：  ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞のＴＣＲγδ＋Ｔ細胞が富化されることを特徴とする実施態様第１から１４のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１６項：  ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞がＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を消耗させることを特徴とする実施態様第１から１５のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１７項：  ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞がＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を最初に消耗され、次にＣＤ３＋細胞が富化されることを特徴とする実施態様第１から１６のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１８項：  ステップ（１）に先立って、サンプル中の細胞が非ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を消耗されることを特徴とする実施態様第１から１７のいずれか１項記載の方法。
実施態様第１９項：  サンプルが血液または組織またはそのフラクションであることを特徴とする実施態様第１から１８のいずれか１項記載の方法。
実施態様第２０項：  サンプルが、末梢血、臍帯血、リンパ組織、上皮、胸腺、骨髄、ひ臓、肝臓、ガン組織、感染した組織、リンパ節組織またはそのフラクションから選ばれることを特徴とする実施態様第１９項記載の方法。
実施態様第２１項：  出発サンプルが人間の末梢血またはそのフラクションであることを特徴とする実施態様第１９または２０項記載の方法。
実施態様第２２項：  サンプルが低密度単核細胞（ＬＤＭＣ）または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）から成ることを特徴とする実施態様第１から２１のいずれか１項記載の方法。
実施態様第２３項：  第１の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約１０から約５０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン４−様活性を有する成長因子が約１から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第１から２２のいずれか１項記載の方法。
実施態様第２４項：  第１の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約２０から約２０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン４−様活性を有する成長因子が約５から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第２３記載の方法。
実施態様第２５項：  第１の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約５０から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン４−様活性を有する成長因子が約２０から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第２４記載の方法。
実施態様第２６項：  第１の培地が、Ｔ細胞マイトージェンを７０ナノグラム／ｍｌ含み、インターロイキン４−様活性を有する成長因子を１００ナノグラム／ｍｌ含む、実施態様第２５記載の方法。
実施態様第２７項：  第２の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約０．１から約５０μｇ／ｍｌの量、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子が約１から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第１から２２のいずれか１項記載の方法。
実施態様第２８項：  第２の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約０．３から約１０μｇ／ｍｌの量、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子が約２から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第２７記載の方法。
実施態様第２９項：  第２の培地中に、Ｔ細胞マイトージェンが約０．５から約５μｇ／ｍｌの量、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子が約２０から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第２８記載の方法。
実施態様第３０項：  第２の培地が、Ｔ細胞マイトージェンを１μｇ／ｍｌで含み、およびインターロイキン１５−様活性を有する成長因子を７０ナノグラム／ｍｌの量で含む、実施態様第２９記載の方法。
実施態様第３１項：  第１または第２の培地、または両方の培地中に、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子が約１から約１０００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子およびインターロイキン−２１−様活性を有する成長因子が１から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第１から３０のいずれか１項記載の方法。
実施態様第３２項：  第１または第２の培地、または両方の培地中に、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子が約２から約５００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子およびインターロイキン−２１−様活性を有する成長因子が２から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第３１記載の方法。
実施態様第３３項：  第１または第２の培地、または両方の培地中に、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子が約２０から約２００ナノグラム／ｍｌの量で存在し、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子およびインターロイキン−２１−様活性を有する成長因子が５から約１００ナノグラム／ｍｌの量で存在する、実施態様第３２記載の方法。
実施態様第３４項：  第１または第２の培地、または両方の培地がさらに、インターフェロン−γ−様活性を有する成長因子を７０ナノグラム／ｍｌ、インターロイキン−２１−様活性を有する成長因子をが２から１５ナノグラム／ｍｌ、インターロイキン−１β−様活性を有する成長因子を１５ナノグラム／ｍｌで含む、実施態様第３３記載の方法。
実施態様第３５項：  Ｔ細胞マイトージェンが抗体またはそのフラグメントであることを特徴とする実施態様第１から３４のいずれか１項記載の方法。
実施態様第３６項：  抗体がＣＤ３またはそのフラグメントに結合することを特徴とする実施態様第３５項記載の方法。
実施態様第３７項：  血清または血漿が約２から約２０積％の量で存在することを特徴とする実施態様第１から３６のいずれか１項記載の方法。
実施態様第３８項：  血清または血漿が約０．５から約２５体積％の量で存在することを特徴とする、実施態様第３７記載の方法。
実施態様第３９項：  血清または血漿が約２．５から約１０体積％の量で存在することを特徴とする、実施態様第３８記載の方法。
実施態様第４０項：  血清または血漿が５体積％の量で存在することを特徴とする、実施態様第３９記載の方法。
実施態様第４１項：  実施態様第１から３０のいずれか１項記載の方法によって調製された、ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞が富化された細胞調製物。
実施態様第４２項：  細胞の合計の８０％以上がＴＣＲγδ＋Ｔ細胞であることを特徴とするＴＣＲγδ＋Ｔ細胞が富化された細胞調製物。
実施態様第４３項：  細胞の合計の９０％以上がＴＣＲγδ＋Ｔ細胞であることを特徴とする実施態様第４１または４２項記載の細胞調製物。
実施態様第４４項：  細胞の合計の９５％以上がＴＣＲγδ＋Ｔ細胞であることを特徴とする実施態様第４１から４３のいずれか１項記載の細胞調製物。
実施態様第４５項：  Ｖδ１＋ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞およびＶδ２＋ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の両方を含む、実施態様第４１から４４のいずれか１項記載の細胞調製物。
実施態様第４６項：  調製物中の合計のＴＣＲγδ＋Ｔ細胞に対して、約５５−９０％のＶδ１＋ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞および約１−１０％のＶδ２＋ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を含む、実施態様第４５項記載の細胞調製物。
実施態様第４７項：  調製物中の合計のＴＣＲγδ＋Ｔ細胞に対して、約６０−８０％のＶδ１＋ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞および約１−５％のＶδ２＋ＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を含む、実施態様第４５項記載の細胞調製物。
実施態様第４８項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の、免疫反応を調整するための医薬品の製造のための使用。
実施態様第４９項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の、感染を治療するための医薬品の製造のための使用。
実施態様第５０項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の、癌を治療するための医薬品の製造のための使用。
実施態様第５１項：  癌は慢性リンパ球性白血病であることを特徴とする実施態様第５０項記載の使用。
実施態様第５２項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の、ワクチンの製造のための使用。
実施態様第５３項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞の、抗原認識、活性化、信号伝達または機能を研究するための使用。
実施態様第５４項：  免疫反応を調整する方法において使用するために、実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞。
実施態様第５５項：  感染の治療方法において使用するために、実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞。
実施態様第５６項：  癌の治療方法において使用するために、実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞。
実施態様第５７項：  癌は慢性リンパ球性白血病であることを特徴とする実施態様第５５項記載の使用のためのＴＣＲγδ＋Ｔ細胞。
実施態様第５８項：  動物に予防注射をする方法において使用するための、実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞。
実施態様第５９項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を、必要とする動物に有効量を投与することを含む、免疫反応を調整する方法。
実施態様第６０項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を、必要とする動物に有効量を投与することを含む、感染の治療方法。
実施態様第６１項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を、必要とする動物に有効量を投与することを含む、癌の治療方法。
実施態様第６２項：  癌は慢性リンパ球性白血病である、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、またＴ細胞およびＢ細胞白血病、リンパ腫（ホジキンのおよび非ホジキン）、リンパ増殖性障害、形質細胞腫、組織球腫、黒色腫、腺腫、肉腫、健全な組織の癌、低酸素性の腫瘍、りん状細胞癌、尿生殖器の癌（頚部および膀胱癌）、造血器癌、頭頸部癌、また神経系癌である、実施態様第６０項記載の方法。
実施態様第６３項：  実施態様第１から４０のいずれか１項記載の方法によって調製されたか、実施態様第４１から４７のいずれか１項記載の細胞調製物から得られたＴＣＲγδ＋Ｔ細胞を、必要とする動物に有効量を投与することを含む、動物に予防注射をする方法。