【手続補正書】
【提出日】令和1年6月21日(2019.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号:131〜136からなる群より選択される第1のSNPマーカーの第1の遺伝子座を含むNic1遺伝子座と、配列番号:137〜142からなる群より選択される第2のSNPマーカーの第2の遺伝子座を含むNic2遺伝子座とを含む、タバコ植物体またはその部分であって、
前記タバコ植物体が、同様な生育条件で生長させたときのコントロール植物体の葉のUSDA等級指標値の少なくとも約65%のUSDA等級指標値を有する葉を産出し；
前記コントロール植物体が、前記Nic1遺伝子座と前記Nic2遺伝子座を除いて前記タバコ植物体と本質的に同一の遺伝的バックグラウンドを共有し；
前記タバコ植物体が、2.0%未満のニコチンレベルを含み；
前記第1のSNPマーカーの第1の遺伝子座が、
配列番号:131の多形性部位でのヌクレオチドA、
配列番号:132の多形性部位でのヌクレオチドT、
配列番号:133の多形性部位でのヌクレオチドG、
配列番号:134の多形性部位でのヌクレオチドC、
配列番号:135の多形性部位でのヌクレオチドT、および
配列番号:136の多形性部位でのヌクレオチドG
からなる群より選択される1つ以上のヌクレオチドを含み；ならびに
前記第2のSNPマーカーの第2の遺伝子座が、
配列番号:137の多形性部位でのヌクレオチドC、
配列番号:138の多形性部位でのヌクレオチドA、
配列番号:139の多形性部位でのヌクレオチドA、
配列番号:140の多形性部位でのヌクレオチドA、
配列番号:141の多形性部位でのヌクレオチドG、および
配列番号:142の多形性部位でのヌクレオチドC
からなる群より選択される1つ以上のヌクレオチドを含む、
前記タバコ植物体またはその部分。
【請求項２】
前記タバコ植物体が、50以上のUSDA等級指標値を有する葉を産出することができる、請求項1に記載のタバコ植物体またはその部分。
【請求項３】
前記タバコ植物体が、同様な生育条件で生長させたときのコントロール植物体のニコチンレベルの25%より低いレベルのニコチンを含む、請求項1に記載のタバコ植物体またはその部分。
【請求項４】
請求項1に記載のタバコ植物体またはその部分に由来する、乾燥タバコ材料。
【請求項５】
鉄管乾燥、空気乾燥、直火乾燥、および天日乾燥からなる群より選択される乾燥プロセスによって製造される、請求項4に記載の乾燥タバコ材料。
【請求項６】
請求項4に記載の乾燥タバコ材料を含む、タバコ製品。
【請求項７】
紙巻きタバコ、シガリロ、非通気リセスフィルター紙巻きタバコ、通気リセスフィルター紙巻きタバコ、葉巻、かぎタバコ、パイプタバコ、葉巻のタバコ、紙巻きタバコのタバコ、かみタバコ、葉タバコ、刻みタバコ、およびカットタバコからなる群より選択される、請求項6に記載のタバコ製品。
【請求項８】
無煙タバコ製品である、請求項6に記載のタバコ製品。
【請求項９】
前記タバコ植物体またはその部分が、同様な生育条件で生長させたときのコントロールタバコ植物体のニコチンレベルの20%より低いレベルのニコチンを含む、請求項4に記載の乾燥タバコ材料。
【請求項１０】
前記タバコ植物体が、葉巻タバコ、鉄管乾燥タバコ、空気乾燥タバコ、ダーク直火乾燥タバコ、ガルパオタバコ、およびオリエンタルタバコからなる群より選択される品種に由来する、請求項4に記載の乾燥タバコ材料。
【請求項１１】
（a）タバコの生殖細胞質の収集物から核酸を単離する工程；
（b）前記核酸を、配列番号:131〜136からなる群より選択される第1のSNPマーカーの5センチモルガン(cM)以内に存在する1つ以上の第1のマーカーについてアッセイする工程；および
（c）前記マーカーアッセイに基づいて低ニコチン形質を有するタバコ植物体を選別する工程
を含む、請求項1に記載のタバコ植物体を選別する方法。
【請求項１２】
前記核酸を、配列番号:137〜142からなる群より選択される第2のSNPマーカーの5センチモルガン(cM)以内に存在する1つ以上の第2のマーカーについてアッセイする工程
をさらに含む、請求項11に記載の方法。
【請求項１３】
前記1つ以上の第1のマーカーが、配列番号:131〜136からなる群より選択され、かつ前記1つ以上の第2のマーカーが、配列番号:137〜142からなる群より選択される、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
請求項1に記載のタバコ植物体を生じる、タバコ種子。
【請求項１５】
前記Nic1遺伝子座、前記Nic2遺伝子座、またはその両方が、LA Burley 21にも存在する、請求項1に記載のタバコ植物体またはその部分。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本開示はまた、所望のレベルの総アルカノイド又はニコチン（例えば低ニコチン又は無ニコチン）を含むタバコの系統、栽培品種又は品種を交配する方法を提供する。いくつかの特徴では、本開示は低ニコチン形質をタバコの品種に導入する方法を提供し、前記方法は以下を含む：（a）低ニコチン形質を含む第一のタバコの品種を低ニコチン形質が存在しない第二のタバコの品種と交配して、1つ以上の子孫タバコ植物体を産出する工程；（b）当該1つ以上の子孫タバコ植物体を当該低ニコチン形質と連鎖する多形性マーカーについて遺伝子型判定する工程（ここで当該多形性マーカーは、表3に挙げられる多形性遺伝子座の任意の2つによってフランキングされるか又は表4に挙げられる多形性遺伝子座の任意の2つによってフランキングされる染色体間隔に存在する）；及び（c）低ニコチン形質を含む子孫タバコ植物体を選別する工程。
いくつかの特徴では、本開示は、低ニコチン形質をタバコの品種に遺伝子移入する方法を提供し、前記方法は以下を含む：（a）低ニコチン形質を含む第一のタバコの品種を低ニコチン形質が存在しない第二のタバコの品種と交配して、1つ以上の子孫タバコ植物体を産出する工程；（b）当該1つ以上の子孫タバコ植物体を当該低ニコチン形質と連鎖する多形性マーカーについて遺伝子型判定する工程（ここで当該多形性マーカーは、表3、4、16及び17に挙げられる多形性遺伝子座の任意の1つの20cM内に存在する）；及び（c）低ニコチン形質を含む子孫タバコ植物体を選別する工程。ある特徴では、多形性マーカーは、配列番号:131から144からなる群から選択されるSNPマーカーである。
他の特徴では、本開示は、低ニコチン形質を有するタバコの植物体を選別する方法を提供し、前記方法は以下を含む：（a）タバコの生殖細胞質の収集物から核酸を単離する工程；（b）Nic1遺伝子座と緊密に連鎖する1つ以上のマーカーについて核酸をアッセイする工程；及び（c）当該マーカーアッセイに基づいて低ニコチン形質を有するタバコ植物体を選別する工程。
[本発明1001]
Nic1遺伝子座の変異、Nic2遺伝子座の変異又は両方を含むタバコの植物体又はその部分であって、前記タバコ植物体が、同様な生育条件で生長させたときのコントロール植物体の葉のUSDA等級指標値の少なくとも約65%のUSDA等級指標値を有する葉を産出することができ、前記コントロール植物体が前記変異を除いて前記タバコ植物体と本質的に同一の遺伝的バックグラウンドを共有する、前記タバコの植物体又はその部分。
[本発明1002]
前記タバコ植物体が、50以上のUSDA等級指標値を有する葉を産出することができる、本発明1001のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1003]
前記タバコの植物体が、同様な生育条件で生長させたときのコントロール植物体のニコチンレベルの25%より低いレベルのニコチンを含み、前記コントロール植物体が前記変異を除いて前記タバコ植物体と本質的に同一の遺伝的バックグラウンドを共有する、本発明1001のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1004]
前記タバコの植物体が、2.0%未満のニコチンレベルを含む、本発明1001のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1005]
配列番号:49から68、84、116から130、147及び前記のフラグメントから成る群から選択される配列と少なくとも80%同一性を有するポリペプチドをコードする1つ以上の遺伝子内に1つ以上の変異を含む、タバコの植物体又はその部分であって、前記タバコ植物体が、同様な生育条件で生長させたときの前記1つ以上の変異のないコントロールタバコ植物体と比較してより低レベルのニコチンを含み、前記変異がLA Burley 21品種には存在しない、前記タバコの植物体又はその部分。
[本発明1006]
前記タバコ植物体が、同様な生育条件で生長させたときの前記1つ以上の変異のないコントロールタバコ植物体のニコチンレベルの20%より低いレベルのニコチンを含む、本発明1005のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1007]
前記タバコの植物体が、更にNic2遺伝子座の変異を含む、本発明1005のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1008]
前記1つ以上の遺伝子が、配列番号:53、68、116、117、147及び前記のフラグメントから成る群から選択される配列と少なくとも90%同一性を有するポリペプチドをコードする、本発明1005のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1009]
前記タバコの植物体が、葉巻タバコ、鉄管乾燥タバコ、空気乾燥タバコ、ダーク直火乾燥タバコ、ガルパオタバコ、及びオリエンタルタバコから成る群から選択される品種に由来する、本発明1005のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1010]
本発明1005のタバコ植物体の集団。
[本発明1011]
本発明1005のタバコの植物体に由来する乾燥タバコ材料。
[本発明1012]
前記乾燥タバコ材料が、前記変異のないコントロールタバコ植物体に由来する乾燥タバコ材料と比較してより低レベルのニコチンを含む、本発明1011の乾燥タバコ材料。
[本発明1013]
前記タバコの植物体が、0.2%から0.6%の間のレベルのニコチンを含む、本発明1011の乾燥タバコ材料。
[本発明1014]
前記乾燥タバコ材料が、鉄管乾燥、空気乾燥、直火乾燥、及び天日乾燥から成る群から選択される乾燥プロセスによって製造される、本発明1011の乾燥タバコ材料。
[本発明1015]
本発明1011の乾燥タバコ材料を含む、タバコ製品。
[本発明1016]
前記タバコ製品が、紙巻きタバコ、シガリロ、非通気リセスフィルター紙巻きタバコ、通気リセスフィルター紙巻きタバコ、葉巻、かぎタバコ、パイプタバコ、葉巻のタバコ、紙巻きタバコのタバコ、かみタバコ、葉タバコ、刻みタバコ及びカットタバコから成る群から選択される、本発明1015のタバコ製品。
[本発明1017]
前記タバコ製品が、無煙タバコ製品である、本発明1015のタバコ製品。
[本発明1018]
Nic1マーカー1番から207番のいずれか2つによってフランキングされかつそれらを含まない第一の染色体欠失、Nic2マーカー1番から340番のいずれか2つによってフランキングされかつそれらを含まない第二の染色体欠失、並びに前記第一及び前記第二の染色体欠失の両方から成る群から選択される変異を含むタバコの植物体又はその部分であって、前記タバコ植物体が、同様な生育条件で生長させたときのコントロール植物体の葉のUSDA等級指標値に匹敵するUSDA等級指標値を有する葉を産出することができ、前記コントロール植物体が前記変異を除いて前記タバコ植物体と本質的に同一の遺伝的バックグラウンドを共有する、前記タバコの植物体又はその部分。
[本発明1019]
前記タバコの植物体が、同様な生育条件で生長させたときの前記コントロール植物体のニコチンレベルの10%より低いレベルのニコチンを含む、本発明1018のタバコの植物体又はその部分。
[本発明1020]
前記タバコ植物体が、50以上のUSDA等級指標値を有する葉を産出することができる、本発明1018のタバコの植物体又はその部分。