【手続補正書】
【提出日】令和1年11月15日(2019.11.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む、選好性の植物微生物を培養するための方法、前記選好性の植物微生物は天然の宿主外においては生育しない植物微生物である：
植物を選好性の植物微生物と接触させること；
１つ又は２つ以上の前記植物の部分から、前記植物微生物がコロニー形成している組織を選択して外植片源とし、外植片を作製すること；
前記選好性の植物微生物によってコロニー形成された外植片を、毛状根の誘導を可能にする条件下でＲｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの懸濁液と手動により接触させて、コロニー形成された毛状根を形成すること、及び
前記コロニー形成された毛状根を増殖させて、増殖した毛状根を形成すること。
【請求項２】
植物が、トマト植物、ジャガイモ植物、及び柑橘類植物から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
選好性の植物微生物が、Ｘｙｌｅｌｌａ  ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ  ｓｐｐ．及びＣａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．が、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ（Ｌｓｏ）及びＣａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｓｉａｔｉｃｕｓ（Ｌａｓ）からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
選好性の植物微生物によってコロニー形成された外植片を、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの懸濁液と接触させることが、外植片物の１つ又は２つ以上の表面を損傷させて、損傷部位を形成すること、及び前記損傷部位をＲｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの前記懸濁液へ曝露することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
選好性の植物微生物によってコロニー形成された外植片を、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの懸濁液と接触させることが、
外植片の光合成部分を除去して、損傷部位を生じること、
前記損傷部位をロックウールマトリックスで被覆すること、及び
前記ロックウールマトリックスをＲｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの懸濁液へ曝露することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
選好性の植物微生物によってコロニー形成された外植片を、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの懸濁液と接触させることが、
外植片の光合成部分を除去して損傷部位を生じること、
Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの前記懸濁液中に前記損傷部位を浸すこと、
Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの前記懸濁液の少なくとも一部を前記損傷部位中へ真空浸潤させること、及び
前記損傷部位を蛭石マトリックスで被覆することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
増殖した毛状根における選好性の植物微生物の存在を評価することを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によりマーカー遺伝子を増幅すること用いることにより、さらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
コロニー形成された毛状根を増殖させて、増殖した毛状根を形成することが、
付着した毛状根又は収穫した毛状根を、１つ又は２つ以上の選択的条件へ曝露すること、
前記付着した毛状根又は前記収穫した毛状根を
蛭石マトリックス、
水耕システム、
インビトロシステム、及び
バイオリアクタシステム
のうちの少なくとも１つへ転移させることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓがＲｉ−ＤＮＡプラスミド及びＴ−ＤＮＡプラスミドの両方を含み、かつ前記Ｔ−ＤＮＡプラスミドは第一の外来性導入遺伝子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
第一の外来性導入遺伝子が自己蛍光タンパク質をコードする、請求項１０に記載の方法
【請求項１２】
植物が第一の外来性導入遺伝子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
以下を含む、選好性の植物病原体に及ぼす試験組成物の作用を評価するための方法：
前記選好性の植物微生物によってコロニー形成された植物を、前記選好性の植物微生物によってコロニー形成された毛状根の誘導を可能にする条件下でＲｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの懸濁液と接触させて、コロニー形成された毛状根を形成すること、
前記コロニー形成された毛状根を増殖させて、増殖した毛状根を形成すること、
前記増殖した毛状根を前記試験組成物と接触させること、及び
前記選好性の植物微生物の存在又は活力度のうちの少なくとも１つの測定結果を評価すること。
【請求項１４】
植物が、トマト植物、ジャガイモ植物、及び柑橘類植物から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
選好性の植物微生物が、Ｘｙｌｅｌｌａ  ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ  ｓｐｐ．及びＣａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．が、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ（Ｌｓｏ）及びＣａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｓｉａｔｉｃｕｓ（Ｌａｓ）からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
試験組成物が、感染した植物中に条件的に又は恒常的に存在する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
選好性の植物微生物によってコロニー形成された植物が、外来性導入遺伝子、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ＴＡＬＥＮ、及びＲＮＡｉコンストラクトのうちの少なくとも１つを含み、かつ試験組成物がそれぞれ、前記導入遺伝子、前記ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、前記ＴＡＬＥＮ、及び前記ＲＮＡｉコンストラクトの遺伝子産物であるか又はそれらの遺伝子産物を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
増殖した毛状根を前記試験組成物に接触させ、該試験組成物はＮＲＰ１タンパク質を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
以下を含む、毛状根を用いて選好性の植物微生物を培養する方法：
少なくとも１つの選好性微生物によってコロニー形成された植物の１つ又は２つ以上の部分から組織を選択して外植片源とすること、
Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓを含む培地中で前記外植片源を培養すること、
前記外植片源を複数の断片に切断すること、
前記外植片源の少なくともいくつかの断片から毛状根の増殖を誘導すること、
毛状根の増殖を確認すること、及び
前記毛状根中における選好性の植物微生物の存在を確認すること。
【請求項２１】
植物が、第一の外来性導入遺伝子及び第二の外来性導入遺伝子を含む、請求項２０に記載の選好性の植物微生物を培養する方法。
【請求項２２】
第一の外来性導入遺伝子が自己蛍光タンパク質をコードする、請求項２１に記載の選好性の植物微生物を培養する方法。
【請求項２３】
培地が、セファトキシム（ｃｅｆａｔｏｘｉｍｅ）、カルベンシリン（ｃａｒｂｅｎｃｉｌｌｉｎ）及びカナマイシンを含有しない、請求項２１に記載の選好性の植物微生物を培養する方法。
【請求項２４】
毛状根の増殖を確認することが、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓのｒｏｌＢもしくはｒｏｌＣのマーカー遺伝子のポリメラーゼ連鎖反応による増幅を実施することを含むか、又は
毛状根中の選好性の植物微生物の存在を確認することが、選好性の植物微生物の１６Ｓ  ｒＤＮＡマーカー遺伝子のＰＣＲ増幅を実施することを含む、請求項２０に記載の選好性の植物微生物を培養する方法。
【請求項２５】
以下を含む、選好性の植物微生物を培養するための方法、前記選好性の植物微生物は天然の宿主外においては生育しない植物微生物である：
１つ又は２つ以上の前記植物の部分を選択して外植片源とし、外植片を作製すること；
前記外植片を、毛状根の誘導を可能にする条件下でＲｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓの懸濁液と手動により接触させて、毛状根を外植片上に形成すること、
前記毛状根を増殖させて、増殖した毛状根を形成させること、及び
増殖した毛状根に手動により前記選好性の植物微生物を接触させて、選好性の植物微生物がコロニー形成した毛状根を形成させること。