【手続補正書】
【提出日】平成20年5月14日(2008.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
(A)m-(N-Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5-C)n-(B)p
（式中：mは0、4、5、6、7、8、9、又は10; 
pは0、4、5、6、7、8、9、10;
AはLys又はAsp;
BはLys又はAsp;
nは1又は2;
Nは配列番号1の残基1-16;
Cは配列番号1の残基22-30;
Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、及びXaa5はそれぞれLeu、Val、Phe、Phe、及びAlaであり、0、1又は2の残基Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、及びXaa5はLys、Asp、又はGluで置換され;
置換される残基が0の場合、m又はpのいずれか又は両方が0ではない）により表わされる、単離されたペプチド(配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号7、配列番号8、配列番号9、及び配列番号10)。
【請求項２】
mが0でない場合、pが0であり;
pが0でない場合、mが0であり;且つ
Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、及びXaa5はそれぞれLeu、Val、Phe、Phe、及びAlaであり、1又は2の残基Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、及びXaa5はLys、Asp、又はGluで置換される
請求項１記載のペプチド(配列番号2〜5)。
【請求項３】
pが0である、請求項２記載のペプチド。
【請求項４】
前記ペプチドのC末端がアミド化されている請求項３記載のペプチド。
【請求項５】
AがLysである、請求項３記載のペプチド。
【請求項６】
AがAspである、請求項３記載のペプチド。
【請求項７】
前記ペプチドのアミノ酸配列が配列番号２である請求項３記載のペプチド。
【請求項８】
前記ペプチドのアミノ酸配列が配列番号３である請求項３記載のペプチド。
【請求項９】
mが0である、請求項２記載のペプチド。
【請求項１０】
BがLysである、請求項９記載のペプチド。
【請求項１１】
BがAspである、請求項９記載のペプチド。
【請求項１２】
前記ペプチドのアミノ酸配列が配列番号４である請求項９記載のペプチド。
【請求項１３】
前記ペプチドのアミノ酸配列が配列番号５である請求項９記載のペプチド。
【請求項１４】
mが0でなくpが0でない請求項１記載のペプチド。
【請求項１５】
前記ペプチドのアミノ酸配列が配列番号７であり、C末端残基がアミド化されていてもよい請求項１記載のペプチド。
【請求項１６】
前記ペプチドのアミノ酸配列が配列番号６であり、C末端残基がアミド化されていてもよい請求項１記載のペプチド。
【請求項１７】
前記ペプチドのアミノ酸配列が配列番号８である請求項１記載のペプチド。
【請求項１８】
前記ペプチドのアミノ酸配列が、配列番号９及び配列番号１０からなる群より選択される請求項１記載のペプチド。
【請求項１９】
前記ペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３からなる群より選択される請求項１記載のペプチド。
【請求項２０】
ポリマー分子と架橋した請求項１又は２のペプチドのコンジュゲート。
【請求項２１】
前記ポリマー分子が、乱雑Tヘルパー細胞エピトープを含むペプチドである請求項２０記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
前記ペプチドが破傷風毒、百日咳毒、ジフテリア毒、麻疹ウイルス、B型肝炎ウィルス表面抗原、Chlamydia trachomititis主要外膜タンパク、Plasmodium falciparumスポロゾイト周囲物、Schistosoma mansoniトリオースホスフェートイソメラーゼ、又はEscherichia coli TraTの乱雑Tヘルパー細胞エピトープを含むペプチドである請求項２１記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
前記ポリマーがマンナン、グルカン、トリパルミトイル-5-グリセリン システイン、ポリ(ラクチド-co-グリコリド)からなる群より選択される請求項２０記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
免疫化有効量の請求項１又は２記載の単離されたペプチド又はそのコンジュゲートと、薬剤学的に許容しうる担体、賦形剤、希釈剤又は添加剤を含む免疫化組成物。
【請求項２５】
前記薬剤学的に許容しうる添加剤がアジュバントである、請求項２４記載の免疫化組成物。
【請求項２６】
前記アジュバントがアルムである請求項２５記載の免疫化組成物。
【請求項２７】
アミロイドβペプチド及びアミロイド沈着物に対する免疫応答誘導剤であって、請求項２４記載の免疫化組成物を含む免疫応答誘導剤。
【請求項２８】
前記被験者がヒトである請求項２７記載の免疫応答誘導剤。
【請求項２９】
請求項１又は２記載のペプチドに対して惹起された抗体の抗原結合部分を含む分子。
【請求項３０】
前記分子がモノクローナル抗体である請求項２９記載の分子。
【請求項３１】
前記分子がキメラ化又はヒト化された抗体である請求項２９記載の分子。
【請求項３２】
請求項２９記載の分子及び薬剤学的に許容しうる担体、希釈剤、賦形剤又は添加剤を含む薬剤組成物。
【請求項３３】
アミロイドフィブリル及び沈着物の形成減少剤であって、請求項２９記載の分子を含む形成減少剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
免疫原は、主要組織適合性(MHC)クラスII抗原と関連して処方し、効率的な抗体応答を起こさなければならないこともまたよく知られている。抗原提供細胞(APC)により産生されたMHCクラスII抗原は、配列特異的な様式で免疫原中に存在するT細胞エピトープに結合する。このMHCクラスII免疫原複合体はCD4+リンパ球(Th細胞)により認識され、提供された免疫原からのB細胞エピトープを認識しうる特異的B細胞の増殖、及びそのようなB細胞によるB細胞エピトープ特異的抗体の産生を起こす。本発明の合成ペプチドの免疫原性をさらに増加させるための追加のアプローチは、ヒトワクチンにおける使用について現在認可されているマンナン(マンノースのポリマー)、グルカン(β1-2グルコースのポリマー)、トリパルミトイル-S-グリセリン システイン、及びペプチド等の免疫刺激性ポリマー分子とのコンジュゲートを形成させることである。ワクチンにおいて使用が認可されているそのようなペプチドは、破傷風毒、百日咳毒、麻疹ウイルスFタンパク、及び肝炎Bウイルス表面抗原(HBsAg)等の有効な免疫原からの強力なTヘルパー細胞(Th)エピトープを提供する。合成ペプチドとコンジュゲートするよう選択されるThエピトープは、好ましくは、様々なMHCハプロタイプを発現する多くの個体においてTヘルパー細胞応答を引き出す能力を有する。これらのエピトープは、異種集団の多くの異なる個体において機能し、乱雑なThエピトープであると考えられる。乱雑なThエピトープは、遺伝的に多様な集団の多くの構成員において有効な抗体応答を引き出す利点を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
さらに、本発明の合成ペプチドとコンジュゲート/架橋したTヘルパー細胞エピトープはまた、ある集団の多くの構成員において免疫応答を起こす能力のためだけでなく記憶/想起応答を起こす能力のためにも有利に選択される。哺乳類がヒトである場合、本発明の合成ペプチドで免疫治療を受けるヒト被験者/患者の大多数は小児ワクチン(麻疹＋おたふく＋風疹及びジフテリア＋百日咳＋破傷風ワクチン)免疫化されたことがある可能性が高く、B型肝炎ワクチンで免疫化された可能性もある。したがってこれらの患者は小児ワクチンに存在する少なくとも１つのThエピトープに前もって晒されている。標準的なワクチンを用いた免疫化によりThエピトープに先だって晒されると、Th細胞クローンが確立されるはずであり、これは合成ペプチドが投与されると直ちに増殖し(即ち想起応答)、それによりAβペプチド及びアミロイド沈着物に対する迅速なB細胞応答を刺激する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
本発明の合成ペプチドとのコンジュゲートに用いられ得るThエピトープは、乱雑なものであり、普遍的なものではない。この特徴は、Thエピトープは異なるMHC抗原を発現する異系交配集団の大きなセグメントにおいて反応性である(集団の50〜90％において反応性である)が、その集団の全ての構成員に対しては反応性でないことを意味する。本発明の合成非アミロイド原性ペプチドについて包括的で、普遍的に近い免疫反応性を提供するためには、合成ペプチドに架橋された異なるThエピトープを有するコンジュゲートの混合物を調製することができる。例えば、破傷風及び百日咳毒、麻疹ウイルスFタンパクおよびHBsAgからの乱雑なThエピトープの4つのコンジュゲートの組み合わせが、より有効なものとなりうる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
本発明の合成非アミロイド原性ペプチドに架橋された免疫刺激ペプチド中のThエピトープは、肝炎B表面抗原Tヘルパー細胞エピトープ、百日咳毒Tヘルパー細胞エピトープ、破傷風毒Tヘルパー細胞エピトープ、麻疹ウイルスFタンパクTヘルパー細胞エピトープ、Chlamydia trachomitis主要外膜タンパクTヘルパー細胞エピトープ、ジフテリア毒Tヘルパー細胞エピトープ、Plasmodium falciparum スポロゾイト周囲物 Tヘルパー細胞エピトープ、Schistosoma mansoniトリオースホスフェートイソメラーゼTヘルパー細胞エピトープ、Escherichia coli TraT Tヘルパー細胞エピトープを含み、米国特許第5843446号明細書に開示され、この全体の開示は参照によりここに組み込まれる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
抗体は、分子と特異的に反応しその分子が抗体と結合する能力を有する場合、その分子に「結合能を有する」といわれる。用語「エピトープ」は、抗体による結合能を有するいずれかの分子の部分であって、それもまたその抗体により認識されうるものを示すものを意味する。エピトープ又は「抗原決定基」は通常、アミノ酸又は糖側鎖等の、分子の化学的に活性な表面の分子グループから構成され、特異的３次元構造的特徴ならびに特異的荷電的特徴を有する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
可溶AβレベルについてのサンドイッチELISAアッセイ：脳組織からのAβの抽出に先立ち、10%(w/v)ホモジネートを、組織ホモジネーション緩衝液(20mMトリスpH7.4、250mMショ糖、1mM EDTA、1mM EGTA)中に調製した。使用直前に、1/100容量の100mMフェニルメチルスルホニル フルオリド ストック溶液(エタノール中)及び1/1000容量のLAP(N-N-ジメチルホルムアミドml当りそれぞれ5mgのロイペプチン、アンチパイン及びペプスタチンAβ)をホモジナイズ化緩衝液に添加した。ホモジネートを、続いて等容量の0.4%ジエチルアミン/100mM NaClに完全に混合し、135000×gで1時間4℃で回転させ、続いて1/10容量の0.5MトリスpH6.8で中性化した。続いて試料を分け、ドライアイスで急速冷凍し、プレートに載せるまで-80℃で保存した。左半球において、可溶Aβレベルを、モノクローナル抗体6E10(Aβの1-16アミノ酸残基上に存在するエピトープに特異的)、ウサギ抗血清R162(Aβ40に特異的)及びウサギ抗血清165(Aβ42に特異的)を用いて、従来記載される通りの二重抗体サンドイッチELISA(Mehta et al., 1998及び2000)において測定した。光学密度(OD)を450nmにおいて、microELISAリーダーで測定した。ODとAβ40又はAβ42濃度との関係を、4パラメーターのロジスティックlog関数により決定した。非線形曲線適合を、KlinetCalcプログラム(Biotek Instruments, Inc. Winooski, VT)で行ない、血漿のODを濃度の見積に変換した。全ての試料をコード化し、調査員は、レベルが測定され記録されるまで盲検的にグループ割り当てされた。アッセイの検出限界は、Aβ40及びAβ42について、10pg/mlである。変分の%係数は、通常8〜14％(アッセイ間)及び10〜18％(アッセイ内)にわたる。