(57)【要約】  分離分析機器（１０）と質量分析計５０のインターフェイス２０に溶液を送液するようにされた質量分析装置において、前記溶液（キャピラリ電気泳動装置１０の泳動緩衝液１６や液体クロマトグラフの移動相や分離分析機器と質量分析計の電気的な接触を得るためのシース液）に質量較正用の内部標準物質を混入して、検出質量を較正する。これにより、較正用のスプレーを必要とせずに、且つ、ポストカラム導入法を用いることなく、測定物質の質量の較正を簡便に行なう。【特許請求の範囲】
【請求項１】
分離分析機器と質量分析計のインターフェイスに溶液を送液するようにされた質量分析装置において、
前記溶液に質量較正用の内部標準物質を混入して、検出質量を較正することを特徴とする質量分析装置の検出質量較正方法。
【請求項２】
前記内部標準物質が複数であることを特徴とする請求項１に記載の質量分析装置の検出質量較正方法。
【請求項３】
前記溶液が、キャピラリ電気泳動装置の泳動緩衝液であることを特徴とする請求項１又は２に記載の質量分析装置の検出質量較正方法。
【請求項４】
前記溶液が、液体クロマトグラフの移動相であることを特徴とする請求項１又は２に記載の質量分析装置の検出質量較正方法。
【請求項５】
前記溶液が、分離分析機器と質量分析計の電気的な接触を得るためのシース液であることを特徴とする請求項１又は２に記載の質量分析装置の検出質量較正方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、質量分析装置の検出質量較正方法に係る。特に、メタボローム研究で数多く使用されるキャピラリ電気泳動（ＣＥ）−質量分析計（ＭＳ）や液体クロマトグラフ（ＬＣ）−質量分析計（ＭＳ）で不可欠な質量の較正を、簡便に行なうことが可能な、質量分析装置の検出質量較正方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、メタボローム研究が盛んに行なわれるようになり、ＣＥ−ＭＳやＬＣ−ＭＳが数多く使用されるようになってきている。ＭＳで測定される対象物質の質量は、ＭＳの真空度や温度等の環境の変化の影響を大きく受ける。そのため、対象物質の質量を正確に測定するためには、質量較正用の内部標準物質（以下ＩＳと称する）を用いて、ＭＳの質量較正を頻繁に行なうことが必要不可欠である。【０００３】
近年、エレクトロスプレー−イオン化法（ＥＳＩ）は、液体クロマトグラフ（ＬＣ）、キャピラリ電気泳動（ＣＥ）やイオンクロマトグラフ（ＩＣ）等の分離分析機器をＭＳに導入するためのインターフェイスとして広範囲に利用されている。この方法は、図１に例示する如く、分離分析機器の例えばキャピラリ１２から生ずる液流を、サンプル用スプレー２２により、インターフェイス（イオン化部とも称する）２０内にスプレー噴霧させてイオン化を行なう。【０００４】
該インターフェイス２０の下流側（図では右側）に接続されたＭＳ４０で測定される質量の較正は、Ｐalmer，Ｍ．Ｅ．，et  al．Ｒapid  Ｃommun．Ｍass  Ｓpectrum．(2003)，13，256-263に記載されているように、サンプル用と較正ＩＳ用の複数のスプレーを使用するのが一般的である。即ち、ＩＳ用ポンプ３０により、別に設けたＩＳ用スプレー３２からＩＳ溶液をインターフェイス２０内に噴霧し、サンプルとＩＳを同時測定する。そして、データ採取をしながら、若しくは解析時に質量較正を行なう。【０００５】
しかしながら、サンプル用と較正ＩＳ用の複数のスプレーを用いる方法では、ＩＳスプレー用に別途送液ポンプ３０や噴霧のためのネブライザガスが必要となり、インターフェイス２０の構造自体が複雑化してしまう。又、複数スプレーでは、互いの噴霧が干渉し合って、感度低下が生ずるという問題点を有する。【０００６】
一方、市販されているインターフェイスには、スプレーが１つしかないものもあり、このような機器では、質量較正を必要とする測定を行なうこと自体が難しい。ＬＣの場合、Ｎassar，Ａ．−Ｅ．Ｆ．＆Ａdams，Ｐ．Ｅ．，Ｃurrent  Ｄrug  Ｍetabolism(2003)，4(4)，259-271に記載されているように、図２に示す如く、分離カラム５０による分離後、Ｔ字コネクタ５２によりＩＳ溶液をポンプ３０で加圧混入させ、サンプルと同時測定することが可能である。【０００７】
しかしながら、ポストカラム導入法では、配管が複雑となり、分離に悪影響を及ぼすこともあるという問題点を有していた。
【発明の開示】
【０００８】
本発明は、前記従来の問題点を解決するべくなされたもので、較正用のスプレーを必要とせず、且つ、ポストカラム導入法を用いることなく、測定物質の質量の較正を簡便に行なえるようにすることを課題とする。
【０００９】
本発明は、分離分析機器と質量分析計のインターフェイスに溶液を送液するようにされた質量分析装置において、前記溶液に質量較正用の内部標準物質を混入して、検出質量を較正することにより、前記課題を解決したものである。
【００１０】
前記内部標準物質は複数とすることができる。
【００１１】
又、前記溶液は、キャピラリ電気泳動装置の泳動緩衝液、（高速）液体クロマトグラフの移動相、又は、分離分析機器と質量分析計の電気的な接触を得るためのシース液とすることができる。
【００１２】
ＣＥでは、泳動緩衝液をキャピラリからインターフェイスに送液する。そこで、発明者は、この泳動緩衝液に質量較正用ＩＳを混入する方法を考案した。
【００１３】
又、ＬＣと違い、ＣＥとＭＳの接続には、電気的な接触が必須となる。この接触を得るため、且つ、スプレーを安定させるために、メイクアップ液（シース液とも称する）と呼ばれる電解質溶液を送液している。そこで、発明者は、このシース液に質量較正用ＩＳを混入する方法も考案した。
【００１４】
これらの方法により、ポストカラム導入法が難しいＣＥ−ＭＳにおいても、感度低下無しに較正を行なうことができる。
【００１５】
又、ＭＳも、四重極型（ＱＭＳ）、イオントラップ型（ＩＴＭＳ）、飛行時間型（ＴＯＦ−ＭＳ）、フーリエ変換イオンサイクロトロン型（ＦＴ−ＩＣＲＭＳ）等、種類を選ばすに全てに応用可能である。
【００１６】
これらの手法は、ＬＣ／ＭＳ、マイクロチップＭＳ等、あらゆる分離分析とＭＳを組み合わせた測定法の質量較正に使用することができる。
【００１７】
本発明によれば、較正用のスプレーを必要とせずに、且つ、ポストカラム導入法を用いることなく、測定物質の質量の較正を簡便に行なうことが可能となる。
【００１８】
特に、ＩＳを複数とし、低分子から高分子までの何点かのＩＳを混入した場合には、質量を広範囲に較正できる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】従来の複数スプレーイオン源の概要を示す断面図
【図２】従来のポストカラム導入法の概念を示す流路図
【図３】本発明の実施形態の構成を示す断面図
【図４】第２実施形態による質量誤差の測定例を示す図
【図５】同じく感度の向上を示す図
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下図面を参照して、本発明の実施形態を詳細に説明する。【００２１】
本発明の第１実施形態は、本発明を、ＣＥ−ＭＳに適用したもので、図３に示す如く、試料８の分離を行なうためのキャピラリ１２、試料容器１４中の試料８と共に該キャピラリ１２の中に導入され、試料８を分離するための泳動緩衝液（バッファとも称する）１６、及び、キャピラリ１２の両端に高電圧を印加するための、前記バッファ１６に挿入される電極１８を備えた、従来と同様のキャピラリ電気泳動装置（ＣＥ）１０と、前記試料容器１４に蓋をして密閉し、加圧することによってバッファ１６に注入されて、前記キャピラリ１２から生ずる液流をスプレー噴霧させイオン化を行なうための、サンプル用スプレー２２及びシース液用ポンプ２４を備えたインターフェイス２０と、該インターフェイス２０により噴霧された試料を質量分析するための質量分析計（ＭＳ）４０とを備えた質量分析装置において、前記バッファ１６にＩＳを混入するようにしたものである。【００２２】
図において、４２は、インターフェイス２０でイオン化された分子をサンプリングして、運動エネルギの方向を揃えるための、イオンを加速して窒素ガスに衝突させ、フラグメントイオンを生成するためのフラグメンタ電圧が印加されると共に、ＣＥ１０から入って来た溶媒を揮発させるための乾燥ガス（例えば窒素ガス）が供給されるサンプリングコーン、４４は、該サンプリングコーン４２を通過したイオンを収束するためのイオンレンズ、４６はスキマーコーン、４８はプレフィルタ、５０は、真空度が下がるのを防止するための隔壁、５２は、イオンの質量を選択するためのマスフィルタ、５４は、該マスフィルタ５２を通過して来た測定質量のイオンを計数するための検出器である。【００２３】
又、本発明の第２実施形態は、第１実施形態と同様の質量分析装置において、図３中に示した如く、ＩＳを混入したシース液を、前記シース液用ポンプ２４からインターフェイス２０のスプレー２２に供給するようにしたものである。【００２４】
なお、前記第１、第２実施形態を併用して、バッファ１６とシース液の両者にＩＳを混入することもできる。【００２５】
この場合には、複数のＩＳを容易にＭＳ４０に供給できる。【００２６】
第２実施形態において、前記ＣＥ１０の分析条件としては、キャピラリ１２には、内径５０μｍ、外径３５０μｍ、全長１００ｃｍのフューズドシリカキャピラリを用いた。前記バッファ１６には、１Ｍギ酸（ｐＨ約１．８）を用いた。印加電圧は＋３０ｋＶ、キャピラリ温度は２０℃で測定した。試料は、加圧法を用いて、５０ｍｂａｒで３秒間注入した。【００２７】
前記ＭＳ４０の分析条件としては、正イオンモードを用い、イオン化電圧は４ｋＶ、フラグメンタ電圧は７０Ｖに設定した。乾燥ガスには窒素を使用し、温度を３００℃で測定した。シース液は、５０％メタノール溶液を用い、ＩＳとしてレゼルピン（ｍ／ｚ609.2807）を１μＭとなるよう混入し、この質量で得られた全てのデータを自動較正した。【００２８】
本発明により質量較正を行ない、３３８成分の混合物（濃度２０μＭ）の測定を行なった。時間を置いて別々に３回（Ｒｕｎ＃１、＃２、＃３）測定したが、図４に示したように、質量５０から７００までの殆どの測定質量範囲において、質量誤差は１０ｐｐｍ以下に較正された。【００２９】
このようにして、較正用スプレーを用いることなく、質量較正を行なうことができる。従って、追加ポンプや追加ガス等の較正用スプレーのための付帯設備が不要である。又、複数スプレー同士の干渉がなく、感度の劣化が見られないため、図５に１０μＭアルギニン標準溶液の測定例を示す如く、従来法と比較して、感度が約３０倍に向上した。
【産業上の利用の可能性】
【００３０】
本発明は、メタボローム研究だけでなく、メタボロミクス一般、プロテオミクス、バイオ、代謝工学、化学、農学、薬学、食品、医学等広い範囲に適用できる。
【図１】
2007029431.tif 000002
【図２】
2007029431.tif 000003
【図３】
2007029431.tif 000004
【図４】
2007029431.tif 000005
【図５】
2007029431.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成19年7月4日(2007.7.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャピラリ電気泳動装置と質量分析計のインターフェイスに溶液を送液するようにされた質量分析装置において、
少なくともキャピラリ電気泳動装置と質量分析計の電気的な接触を得るためのシース液に質量較正用の内部標準物質を混入して、検出質量を較正することを特徴とする質量分析装置の検出質量較正方法。
【請求項２】
前記内部標準物質が複数であることを特徴とする請求項１に記載の質量分析装置の検出質量較正方法。
【請求項３】
キャピラリ電気泳動装置の泳動緩衝液にも、質量較正用の内部標準物質を混入することを特徴とする請求項２に記載の質量分析装置の検出質量較正方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
技術分野
［０００１］
本発明は、質量分析装置の検出質量較正方法に係る。特に、メタボローム研究で数多く使用されるキャピラリ電気泳動（ＣＥ）−質量分析計（ＭＳ）で不可欠な質量の較正を、簡便に行なうことが可能な、質量分析装置の検出質量較正方法に関する。
背景技術
［０００２］
近年、メタボローム研究が盛んに行なわれるようになり、ＣＥ−ＭＳやＬＣ−ＭＳが数多く使用されるようになってきている。ＭＳで測定される対象物質の質量は、ＭＳの真空度や温度等の環境の変化の影響を大きく受ける。そのため、対象物質の質量を正確に測定するためには、質量較正用の内部標準物質（以下ＩＳと称する）を用いて、ＭＳの質量較正を頻繁に行なうことが必要不可欠である。
［０００３］
近年、エレクトロスプレー−イオン化法（ＥＳＩ）は、液体クロマトグラフ（ＬＣ）、キャピラリ電気泳動（ＣＥ）やイオンクロマトグラフ（ＩＣ）等の分離分析機器をＭＳに導入するためのインターフェイスとして広範囲に利用されている。この方法は、図１に例示する如く、分離分析機器の例えばキャピラリ１２から生ずる液流を、サンプル用スプレー２２により、インターフェイス（イオン化部とも称する）２０内にスプレー噴霧させてイオン化を行なう。
［０００４］
該インターフェイス２０の下流側（図では右側）に接続されたＭＳ４０で測定される質量の較正は、Ｐａｌｍｅｒ，Ｍ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．Ｒａｐｉｄ  Ｃｏｍｍｕｎ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ．（２００３），１３，２５６−２６３に記載されているように、サンプル用と較正ＩＳ用の複数のスプレーを使用するのが一般的である。即ち、ＩＳ用ポンプ３０により、別に設けたＩＳ用スプレー３２からＩＳ溶液をインターフェイス２０内に噴霧し、サンプルとＩＳを同時測定する。そして、データ採取をしながら、若しくは解析時に質量較正を行なう。
［０００５］
しかしながら、サンプル用と較正ＩＳ用の複数のスプレーを用いる方法では、ＩＳスプレー用に別途送液ポンプ３０や噴霧のためのネブライザガスが必要となり、インターフェイス２０の構造自体が複雑化してしまう。又、複数スプレーでは、互いの噴霧が干渉
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
し合って、感度低下が生ずるという問題点を有する。
［０００６］
一方、市販されているインターフェイスには、スプレーが１つしかないものもあり、このような機器では、質量較正を必要とする測定を行なうこと自体が難しい。ＬＣの場合、Ｎａｓｓａｒ，Ａ．−Ｅ．Ｆ．＆Ａｄａｍｓ，Ｐ．Ｅ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ（２００３），４（４），２５９−２７１に記載されているように、図２に示す如く、分離カラム５０による分離後、Ｔ字コネクタ５２によりＩＳ溶液をポンプ３０で加圧混入させ、サンプルと同時測定することが可能である。
［０００７］
しかしながら、ポストカラム導入法では、配管が複雑となり、分離に悪影響を及ぼすこともあるという問題点を有していた。
発明の開示
［０００８］
本発明は、前記従来の問題点を解決するべくなされたもので、較正用のスプレーを必要とせず、且つ、ポストカラム導入法を用いることなく、測定物質の質量の較正を簡便に行なえるようにすることを課題とする。
［０００９］
本発明は、キャピラリ電気泳動装置と質量分析計のインターフェイスに溶液を送液するようにされた質量分析装置において、少なくともキャピラリ電気泳動装置と質量分析計の電気的な接触を得るためのシース液に質量較正用の内部標準物質を混入して、検出質量を較正することにより、前記課題を解決したものである。
［００１０］
前記内部標準物質は複数とすることができる。
［００１１］
又、キャピラリ電気泳動装置の泳動緩衝液にも、質量較正用の内部標準物質を混入することができる。
［００１２］
ＣＥでは、泳動緩衝液をキャピラリからインターフェイスに送液する。そこで、発明者は、この泳動緩衝液に質量較正用ＩＳを混入する方法を考案した。
［００１３］
又、ＬＣと違い、ＣＥとＭＳの接続には、電気的な接触が必須となる。この接触を得るため、且つ、スプレーを安定させるために、メイクアップ液（シース液とも称する）と呼ばれる電解質溶液を送液している。そこで、発明者は、このシース液に質量較正用ＩＳを混入する方法も考案した。
［００１４］
これらの方法により、ポストカラム導入法が難しいＣＥ−ＭＳにおいても、感度低下無しに較正を行なうことができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
［００１５］
又、ＭＳも、四重極型（ＱＭＳ）、イオントラップ型（ＩＴＭＳ）、飛行時間型（ＴＯＦ−ＭＳ）、フーリエ変換イオンサイクロトロン型（ＦＴ−ＩＣＲＭＳ）等、種類を選ばすに全てに応用可能である。
［００１６］
［００１７］
本発明によれば、較正用のスプレーを必要とせずに、且つ、ポストカラム導入法を用いることなく、測定物質の質量の較正を簡便に行なうことが可能となる。
［００１８］
特に、ＩＳを複数とし、低分子から高分子までの何点かのＩＳを混入した場合には、質量を広範囲に較正できる。
図面の簡単な説明
［００１９］
［図１］従来の複数スプレーイオン源の概要を示す断面図
［図２］従来のポストカラム導入法の概念を示す流路図
［図３］本発明の実施形態の構成を示す断面図
［図４］第２実施形態による質量誤差の測定例を示す図
［図５］同じく感度の向上を示す図
発明を実施するための最良の形態
［００２０］
以下図面を参照して、本発明の実施形態を詳細に説明する。
［００２１］
本発明の第１実施形態は、本発明を、ＣＥ−ＭＳに適用したもので、図３に示す如く、試料８の分離を行なうためのキャピラリ１２、試料容器１４中の試料８と共に該キャピラリ１２の中に導入され、試料８を分離するための泳動緩衝液（バッファとも称する）１６、及び、キャピラリ１２の両端に高電圧を印加するための、前記バッファ１６に挿入される電極１８を備えた、従来と同様のキャピラリ電気泳動装置（ＣＥ）１０と、前記試料容器１４に蓋をして密閉し、加圧することによってバッファ１６に注入されて、前記キャピラリ１２から生ずる液流をスプレー噴霧させイオン化を行なうための、サンプル用スプレー２２及びシース液用ポンプ２４を備えたインターフェイス２０と、該インターフェイス２０により噴霧された試料を質量分析するための質量分析計（ＭＳ）４０とを備えた質量分析装置において、前記バッファ１６にＩＳを混入するようにしたものである。
【国際調査報告】
2007029431.tif 000007
2007029431.tif 000008
2007029431.tif 000009
2007029431.tif 000010