【手続補正書】
【提出日】平成20年8月4日(2008.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
反応要素の微小付着物を担持する反応ゾーンを含むスライドを読み取り及び／又は分析するための装置であって、前記装置はスライドを配置するための手段と、反応ゾーンを照射するための手段及び集光光学部品を含み、
前記反応ゾーンを照射するための手段が、光軸、すなわち微小付着物によって発せられる蛍光が集光光学部品によって捕捉されるところの軸に対して斜めの照射を可能にするようにチャネル中に配設された発光ダイオードを含み、
前記装置が、それぞれが特定の励起光を発するダイオードの少なくとも二つのチャネルを含み、
前記集光光学部品が、微小付着物の画像をセンサ上に形成する対物レンズを含むことを特徴とする装置。
【請求項２】
照射チャネルの軸が、光軸に対し、１５°以上の角度で斜めである、請求項１記載の装置。
【請求項３】
照射チャネルの軸が、光軸に対し、２０°以上の角度で斜めである、請求項１記載の装置。
【請求項４】
少なくとも２個のダイオードを含み、各ダイオードが、近ＵＶ又は可視領域の波長を有する特定の照射を発し、それらの波長が、蛍光分子の選択的励起を可能にするために十分に離れている、請求項１〜３のいずれか１項記載の装置。
【請求項５】
励起波長が１００nm以上の間隔によって離れている、請求項４記載の装置。
【請求項６】
各ダイオードによって発せられる照射光が別個の経路をたどる、請求項４記載の装置。
【請求項７】
スライド上の付着物のゾーンの照射を均一化する要素を含む、請求項１〜６のいずれか１項記載の装置。
【請求項８】
ケーラータイプの光均一化装置を含む、請求項７記載の装置。
【請求項９】
各チャネルが、少なくとも一つのダイオード、前記ダイオードによって発せられる励起光のスペクトルを制限するためのフィルタならびに、場合によっては、光の空間的分布を均一化するための光学素子及び／又は光をスライドの反応ゾーンに向ける集光素子を連続的に含む、請求項１〜８のいずれか１項記載の装置。
【請求項１０】
光の空間的分布を均一化するための光学素子がホログラフィーディフューザを含む、請求項９記載の装置。
【請求項１１】
集光光学部品が付着物の画像をＣＣＤセンサ上に形成する、請求項１〜１０のいずれか１項記載の装置。
【請求項１２】
集光光学部品が、スライドの反応ゾーンと合致する一つの焦点を有する第一の対物レンズ、フィルタホイール及び画像を形成する第二の対物レンズを含む、請求項１〜１１のいずれか１項記載の装置。
【請求項１３】
自動スライド送り機構及び、場合によっては、スライド識別情報リーダをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項記載の装置。
【請求項１４】
スライドを配置する手段、反応ゾーンを照射する手段及び集光光学部品をいっしょに保持する強固なベース及び／又はコンソールをさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項記載の装置。
【請求項１５】
一つは３６５nmを中心とし、第二のものは４７０nmを中心とし、第三のものは５９４nmを中心とする三つの励起光チャネルを含む、請求項１〜１４のいずれか１項記載の装置。
【請求項１６】
同じスポットの蛍光レベルを異なる波長で比較し、異なるスポットの蛍光レベルを同じ波長で比較することができるソフトウェアによって操作又は命令される、請求項１〜１５のいずれか１項記載の装置。
【請求項１７】
ソフトウェアが、均一な表面、蛍光性表面、又は単純拡散性の表面の予め記録された画像を使用して、異なる波長でのスポットの蛍光の微修正を計算する、請求項１６記載の装置。
【請求項１８】
生物学的作用物質、たとえば感染媒体、病原体、アレルゲン又は自己抗原の一連の付着物を含む反応ゾーンを含む血清学用スライドを患者からの血清試料又はその希釈物とともにインキュベートしたのち、付着物に結合した試料中の抗体を標識試薬によって顕色させることを含む血清学的分析法であって、標識の読み取り及び分析を、請求項１〜１７のいずれか１項記載の装置によって実施することを特徴とする血清学的分析法。
【請求項１９】
３種の染料、すなわち、血清学的反応の前の、付着物に対応する第一の染料、タイプＧ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する第二の染料及びタイプＭ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する第三の染料を選択的に励起させる三つの分析波長を含む、請求項１８記載の血清学的分析法。
【請求項２０】
付着物に対応する染料を約３６５nmで励起することができ、タイプＧ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する染料を約４７０nmで励起することができ、タイプＭ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する染料を約５９４nmで励起することができる、請求項１９記載の血清学的分析法。
【請求項２１】
実施例３の式を具現化する、請求項１〜１７のいずれか１項記載の装置を具現化するためのソフトウェアを含むサポート。
【請求項２２】
血清学的分析又は分子生物学における生物学的試料のリボ核酸又はデオキシリボ核酸の分析のための、請求項１〜１７のいずれか１項記載の装置の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】生物学的反応をサポートする微小付着物を支えるプレートを読み取るための装置
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
発明の背景
過去数年間、生物学的試料と接触したときの生化学的反応のサポートである一連の整列した付着物を含む、顕微鏡スライド又はより一般的には平らな支持体上の多重試験装置が開発されてきた。蛍光顕色試薬との最終的な反応ののち、装置は読み取られ、すなわち、各スポット上の反応が定量化される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
第一の態様にしたがって、付着物は、核酸配列（ＤＮＡ、デオキシリボ核酸）で構成され、試験される生物学的試料は、核酸配列の混合物、たとえば、相補的ＤＮＡ（ＣＤＮＡ）と呼ばれるそのメッセンジャＲＮＡ（リボ核酸）の増幅形態の混合物を含む。各付着物はその対応するＣＤＮＡをハイブリダイズする。ハイブリダイズ反応は、ＣＤＮＡそのものを標識することにより、又はハイブリダイゼーションの区域を特定の染料で標識することにより、蛍光によって視覚化し、定量化することができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
すべての場合で、各スポットに特定のシグナルが読み取られるような処理を実施する必要がある。前記シグナルは、放射性同位元素、酵素的増幅から生じる呈色反応又は蛍光シグナルであることができる。この後者の場合でこそ、スポット密度の増大によって求められる解像度を達成することが可能になる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
発明の概要
本発明は、血清学又は分子生物学的ハイブリダイゼーション用スライドのための蛍光読み取り装置に関する。本発明はまた、一つのそのような装置を含む機器ならびに分析法又は診断法における前記機器及び／又は装置の使用に関する。以下、術語「照明」及び「照射」は、蛍光励起光を指すために互換的に使用する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明の目的は、特に、蛍光シグナルが信頼性が高く、且つ自動的なやり方で記録され、処理されることを保証することにより、上述の欠点を回避させる、血清学又は分子生物学的ハイブリダイゼーション用スライドのための読み取り装置を提供することである。本発明の装置の具体的な特徴は、特に、チャネリング励起光を供給するための発光ダイオードの使用ならびに読み取り及び分析の信頼性を高める励起光源及び集光光学部品の配設に基づく。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
したがって、本発明の特定の目的は、反応要素の微小付着物を担持する反応ゾーンを含むスライドを読み取り及び／又は分析するための、スライドを配置するための手段、反応ゾーンを照射するための手段及び集光光学部品を含む装置であって、
反応ゾーンを照射するための手段が、光軸、すなわち微小付着物によって発せられる蛍光が集光光学部品によって捕捉されるところの軸に対して斜めの照射を可能にするようにチャネル中に配設された発光ダイオード（ＬＥＤ）を含み、
装置が、それぞれが特定の励起光を発するダイオードの少なくとも二つのチャネルを含み、
集光光学部品が、微小付着物の画像をセンサ上に形成する対物レンズを含むことを特徴とする装置に基づく。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
有利には、
ダイオードチャネルの軸は、光軸に対し、１５°以上、好ましくは２０°以上の角度で斜めである、及び／又は
装置は、少なくとも２個のダイオードを含み、各ダイオードは、近ＵＶ又は可視領域の波長を有する特定の照射光を発し、それらの波長は、蛍光分子の選択的励起を可能にするために十分に離れており、好ましくは、励起波長は１００nm以上の間隔によって離れており、及び／又は
各ダイオードによって発せられる照射光は別個の経路をたどり、及び／又は
装置は、スライド上の付着物のゾーンの照射を均一化する要素を含み、及び／又は
各チャネルは、少なくとも一つのダイオード、コリメータ、前記ダイオードによって発せられる励起光のスペクトルを制限するためのフィルタならびに、任意には、光の空間的分布を均一化するための光学素子及び／又は光をスライドの反応ゾーンに向ける集光素子を連続的に含み、及び／又は
集光光学部品は、スライドの反応ゾーンと合致する一つの焦点を有する第一の対物レンズ、フィルタホルダ、好ましくはフィルタホイール及び画像を形成する第二の対物レンズを含み、及び／又は
装置は、スライドを配置する手段、反応ゾーンを照射する手段及び集光光学部品をいっしょに保持する強固なベース及び／又はコンソールをさらに含む。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明の特に好ましい実施態様では、３個のダイオードが、同じチャネル中、光軸に隣接した状態で寄せ集められている。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明の特に好ましい実施態様では、
装置は、一般にはすべての摂動原因、すなわちスポッティングのランダムさ、照射の不規則さ及び蛍光試薬の品質のばらつきを考慮してシグナルを修正する専用ソフトウェアによって命令又は操作される。好ましくは、ソフトウェアは、同じスポットの蛍光レベルを異なる波長で比較し、異なるスポットの蛍光レベルを同じ波長で比較することができる。好ましくは、ソフトウェアは、異なる波長でのスポットの蛍光の微修正を計算するために、均一な表面、蛍光性表面、又は単純拡散性の表面の予め記録された画像を使用して、及び／又は、
装置は、種々の染料の選択的な励起を可能にするのに十分な程度に波長どうしが離れている励起光の三つのチャネルを含み、好ましくは、一つは３６５nmを中心とし、第二のものは４７０nmを中心とし、第三のものは５９４nmを中心とする励起光の三つのチャネルを含む。近ＵＶから赤外線まで波長の他の組み合わせが可能であり、及び／又は
励起光均一化装置は、光の多重反射を可能にするのに適当な直径の導光管又はケーラータイプの装置である。好ましくは、光均一化装置はケーラータイプである。そのうえ、均一化は、ディフューザ、たとえばホログラフィータイプのディフューザを加えることによって改善することができ、及び／又は
支持体が顕微鏡スライド又は平行面を有する他の支持体である場合、励起光はスライドを透過して試料に達し、及び／又は
センサ側の集光光学部品の対物レンズは、被写体側の対物レンズの焦点距離以下の焦点距離を有して、使用されるセンサにしたがって１未満又は１を超える倍率を生じさせ、及び／又は
フィルタホイールは電動化され、励起波長の変化に結合され、及び／又は
集光光学部品は、スポットの画像をたとえばＣＣＤ（「電荷結合素子」）タイプのマトリックスセンサ上に形成し、及び／又は
装置はスライド識別情報リーダを含み、及び／又は
装置は自動スライドフィーダを含む。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
これらの特徴は、特に長所であり、反応要素を信頼性が高く、且つ自動的なやり方で読み取ることを可能にして、再現精度の高い結果をもたらす。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明のさらなる目的は、生物学的作用物質、たとえば感染媒体、病原体、アレルゲン又は自己抗原の一連の付着物を含む反応ゾーンを含む血清学用スライドを患者からの血清試料又はその希釈物とともにインキュベートしたのち、付着物に結合した試料中の抗体（たとえばＩｇＧ及び／又はＩｇＭ）を標識試薬によって顕色させることを含む血清学的分析法であって、標識（たとえば蛍光標識）の読み取り及び分析を、先に定義したような装置によって実施することを特徴とする方法に関する。好ましくは、分析法は、３種の染料、すなわち、血清学的反応の前の、付着物に対応する第一の染料、タイプＧ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する第二の染料及びタイプＭ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する第三の染料を選択的に励起させる三つの分析波長を含む。好ましい実施態様では、付着物に対応する染料は、約３６５nmで励起することができ、タイプＧ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する染料は、約４７０nmで励起することができ、タイプＭ免疫グロブリンの顕色試薬に対応する染料は、約５９４nmで励起することができる。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明のもう一つの目的は、分析を実行し、好ましくは、
スポット中の量を示す蛍光１、タイプＧ免疫グロブリンを計測する蛍光２及びタイプＭ免疫グロブリンを計測する蛍光３にそれぞれ対応する三つの波長における３枚のデジタル画像を含み、及び／又は
スポッティングのランダムさ、照射の不均一さ及び顕色試薬のばらつきに関する蛍光の正規化、及び／又は
フランス国出願ＦＲ２，８６４，６２４に記載されているような血清コントロールに基づく又は内部コントロールに基づく陽性度についてのシグナルの比較
を含むソフトウェアの機能に関する。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
したがって、本発明は、実施例３に示す式又は他の類似の式を具現化する、本発明の装置を作動させるためのソフトウェアシステムを含むサポートに関する。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
各発光ダイオード（３）は、均一化装置を含むケーシング（４）に包囲され、全体が、スライドホルダチャンバ（６）が固着された支持体（５）に挿入された照射チャネルを構成する。このポイントを超えたところに第一の対物レンズ（７）があり、そのものが、フィルタホイールハウジング（８）に接合されたスリーブに挿入されている。フィルタホイールを越えた対称的なところには、ＣＣＤカメラ（１０）に取り付けられた第二の対物レンズ（９）がある。制御モジュール（１１）を介するダイオードの起動、フィルタホルダの配置及びカメラの起動は、本発明の分析ソフトウェアをも含むマイクロコンピュータによって行われる。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
特に有利なやり方で、本発明の装置では、診断に使用されるスライド（又はマイクロアレイ）は、４００個を超える付着物を含まず、たとえば、それが１回の撮影で蛍光画像を形成することを可能にする。先に示したように、スライドは、支持体によって、又はスライドをスロットに滑り込ませることにより、配置することができる。黒い材料の中に凹ませて設けられた前記スロットは導入されたときに、たとえ過って導入されたときでさえ、付着物に対する損傷を避けるため、皿穴を備えている。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
本発明はまた、分子生物学的分析のために、上記のような蛍光モード又は光学密度モードで具現化することもできる。後者の場合、スライドは、スポットが付着されるところのナイロンサポートを担持し、光がナイロンによって拡散され、スポットが光を吸収する。スポットは検出され、明るい背景上の暗いスポットとして定量化される。