【手続補正書】
【提出日】平成20年10月22日(2008.10.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号１４および１８よりなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子、
（ｂ）０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで６５℃、および２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで洗浄、次いで０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳのハイブリダイゼーション条件下で（ａ）とハイブリダイズする単離された核酸分子、または
（ｃ）（ａ）または（ｂ）と完全に相補である単離された核酸分子
よりなる群から選択される、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする単離された核酸分子。
【請求項２】
請求項１に記載の単離された核酸分子によってコードされるポリペプチド。
【請求項３】
配列番号１４に記載の配列を有するポリペプチドと比較して、ＢＬＡＳＴＰ法によるアラインメントに基づいて少なくとも７０％の同一性を有する少なくともアミノ酸５２６個のジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする第１のヌクレオチド配列、または
第１のヌクレオチド配列の相補体を含んでなる第２のヌクレオチド配列
を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項４】
配列番号１８に記載の配列を有するポリペプチドと比較して、ＢＬＡＳＴＰ法によるアラインメントに基づいて少なくとも７０％の同一性を有する少なくともアミノ酸５２５個のジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする第１のヌクレオチド配列、または
第１のヌクレオチド配列の相補体を含んでなる第２のヌクレオチド配列
を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項５】
（ａ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列をコードする単離された核酸分子、
（ｂ）０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで６５℃、および２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳで洗浄、次いで０.１×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳのハイブリダイゼーション条件下で（ａ）とハイブリダイズする単離された核酸分子、または
（ｃ）（ａ）または（ｂ）と完全に相補である単離された核酸分子
よりなる群から選択される、アシル−ＣｏＡ：ステロール−アシルトランスフェラーゼをコードする単離された核酸分子。
【請求項６】
請求項５に記載の単離された核酸分子によってコードされるポリペプチド。
【請求項７】
配列番号１６に記載の配列を有するポリペプチドと比較して、ＢＬＡＳＴＰ法によるアラインメントに基づいて少なくとも７０％の同一性を有する少なくともアミノ酸５４３個のアシル−ＣｏＡ：ステロール−アシルトランスフェラーゼをコードする第１のヌクレオチド配列、または
第１のヌクレオチド配列の相補体を含んでなる第２のヌクレオチド配列
を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項８】
適切な制御配列に作動的に結合した請求項１または５のいずれかに記載の単離された核酸分子を含んでなるキメラ遺伝子。
【請求項９】
請求項８に記載のキメラ遺伝子を含んでなる形質転換宿主細胞。
【請求項１０】
ａ）ゲノムライブラリーを請求項１に記載の核酸分子で探索し、
ｂ）請求項１に記載の核酸分子とハイブリダイズするＤＮＡクローンを同定し、
ｃ）ステップ（ｂ）で同定されたクローンを含んでなるゲノム断片を配列決定することを含んでなり、
配列決定されたゲノム断片が、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする、
ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする核酸分子の取得方法。
【請求項１１】
ａ）配列番号１３および１７よりなる群から選択される配列の一部に対応する少なくとも１つのオリゴヌクレオチドプライマーを合成し、
ｂ）ステップ（ａ）のオリゴヌクレオチドプライマーを使用してクローニングベクター中に存在するインサートを増幅させることを含んでなり、
増幅されたインサートが、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１をコードするアミノ酸配列の一部をコードする
ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする核酸分子の取得方法。
【請求項１２】
請求項１０または１１に記載の方法の生成物。
【請求項１３】
ａ）配列番号３１、
ｂ）配列番号３２、
ｃ）配列番号３３、
ｄ）配列番号３４、
ｅ）配列番号３５、
ｆ）配列番号３６、
ｇ）配列番号３７、
ｈ）配列番号２３、
ｉ）配列番号２４、
ｊ）配列番号２５、
ｋ）配列番号２６、
ｌ）配列番号２７、
ｍ）配列番号２８、
ｎ）配列番号２９、および
ｏ）配列番号３０よりなる群から選択されるアミノ酸モチーフをコードする単離された核酸分子。
【請求項１４】
ａ）配列番号３１、
ｂ）配列番号３２、
ｃ）配列番号３３、
ｄ）配列番号３４、
ｅ）配列番号３５、
ｆ）配列番号３６、
ｇ）配列番号３７、
ｈ）配列番号２３、
ｉ）配列番号２４、
ｊ）配列番号２５、
ｋ）配列番号２６、
ｌ）配列番号２７、
ｍ）配列番号２８、
ｎ）配列番号２９、および
ｏ）配列番号３０よりなる群から選択されるアミノ酸モチーフ配列。
【請求項１５】
（ａ）（ｉ）適切な制御配列の制御下にある配列番号１４、１８、１９、２０、２１、および２２よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子、および
（ii）脂肪酸供給源
を含んでなる、形質転換された宿主細胞を準備し、
（ｂ）ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子が発現する条件下でステップ（ａ）の細胞を生育させて、脂肪酸をトリアシルグリセロールに転移させ、
（ｃ）ステップ（ｂ）のトリアシルグリセロールを場合により回収すること
を含んでなる形質転換された宿主細胞中のトリアシルグリセロール含量の増大方法。
【請求項１６】
（ａ）（ｉ）機能性ω−３／ω−６脂肪酸生合成経路をコードする遺伝子、
（ii）適切な制御配列の制御下にある配列番号１４、１８、１９、２０、２１、および２２よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子
を含んでなる形質転換された宿主細胞を準備し、
（ｂ）（ｉ）および（ii）の遺伝子が発現する条件下でステップ（ａ）の細胞を生育させて、少なくとも１つのω−３またはω−６脂肪酸の生産、およびそのトリアシルグリセロールへの転移がもたらされ、
（ｃ）ステップ（ｂ）のトリアシルグリセロールを場合により回収すること
を含んでなる形質転換された宿主細胞中のトリアシルグリセロールのω−３またはω−６脂肪酸含量の増大方法。
【請求項１７】
（ａ）（ｉ）適切な制御配列の制御下にある、
１）配列番号３１、
２）配列番号３２、
３）配列番号３３、
４）配列番号３４、
５）配列番号３５、
６）配列番号３６、および
７）配列番号３７に記載のアミノ酸モチーフの全てを含んでなる、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子、および
（ii）脂肪酸供給源
を含んでなる形質転換宿主細胞を準備し、
（ｂ）ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子が発現し、脂肪酸をトリアシルグリセロールに転移させる条件下で、ステップ（ａ）の細胞を生育させ、
（ｃ）ステップ（ｂ）のトリアシルグリセロールを場合により回収すること
を含んでなる形質転換宿主細胞中のトリアシルグリセロール含量の増大方法。
【請求項１８】
（ａ）（ｉ）適切な制御配列の制御下にある、
１）配列番号２３、
２）配列番号２４、
３）配列番号２５、
４）配列番号２６、
５）配列番号２７、
６）配列番号２８、
７）配列番号２９、および
８）配列番号３０に記載のアミノ酸モチーフの全てを含んでなる、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子、および
（ii）脂肪酸供給源
を含んでなる形質転換宿主細胞を準備し、
（ｂ）ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子が発現し、脂肪酸をトリアシルグリセロールに転移させる条件下で、ステップ（ａ）の細胞を生育させ、
（ｃ）ステップ（ｂ）のトリアシルグリセロールを場合により回収すること
を含んでなる形質転換宿主細胞中のトリアシルグリセロール含量の増大方法。
【請求項１９】
（ａ）（ｉ）機能性のω−３／ω−６脂肪酸生合成経路をコードする遺伝子、および
（ii）適切な制御配列の制御下にある、
１）配列番号３１、
２）配列番号３２、
３）配列番号３３、
４）配列番号３４、
５）配列番号３５、
６）配列番号３６、および
７）配列番号３７に記載のアミノ酸モチーフの全てを含んでなる、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子
を含んでなる形質転換宿主細胞を準備し、
（ｂ）（ｉ）および（ｉｉ）の遺伝子が発現し、少なくとも１つのω−３またはω−６脂肪酸の生成、およびそのトリアシルグリセロールへの転移がもたらされる条件下で、ステップ（ａ）の細胞を生育させ、
（ｃ）ステップ（ｂ）のトリアシルグリセロールを場合により回収すること
を含んでなる形質転換宿主細胞中のトリアシルグリセロールのω−３またはω−６脂肪酸含量の増大方法。
【請求項２０】
（ａ）（ｉ）機能性のω−３／ω−６脂肪酸生合成経路をコードする遺伝子、および
（ii）適切な制御配列の制御下にある、
１）配列番号２３、
２）配列番号２４、
３）配列番号２５、
４）配列番号２６、
５）配列番号２７、
６）配列番号２８、
７）配列番号２９、および
８）配列番号３０に記載のアミノ酸モチーフの全てを含んでなる、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子
を含んでなる形質転換宿主細胞を準備し、
（ｂ）（ｉ）および（ii）の遺伝子が発現し、少なくとも１つのω−３またはω−６脂肪酸の生成、およびそのトリアシルグリセロールへの転移がもたらされる条件下で、ステップ（ａ）の細胞を生育させ、
（ｃ）ステップ（ｂ）のトリアシルグリセロールを場合により回収すること
を含んでなる形質転換宿主細胞中のトリアシルグリセロールのω−３またはω−６脂肪酸含量の増大方法。
【請求項２１】
（ａ）ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１活性を有することが疑われるポリペプチドのアミノ酸配列を得て、
（ｂ）ステップ（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列中で、
１）配列番号３１、
２）配列番号３２、
３）配列番号３３、
４）配列番号３４、
５）配列番号３５、
６）配列番号３６、および
７）配列番号３７に記載のアミノ酸モチーフ配列の全ての存在を同定すること
を含んでなり、
ポリペプチド中のステップ（ａ）のモチーフ配列全ての存在が、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１活性の徴候である
ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１活性を有するポリペプチドの同定法。
【請求項２２】
（ａ）ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１活性を有することが疑われる真菌ポリペプチドのアミノ酸配列を得て、
（ｂ）ステップ（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列中で、
１）配列番号２３、
２）配列番号２４、
３）配列番号２５、
４）配列番号２６、
５）配列番号２７、
６）配列番号２８、
７）配列番号２９、および
８）配列番号３０に記載のアミノ酸モチーフ配列の全ての存在を同定すること
を含んでなり、
ポリペプチド中のステップ（ａ）のモチーフ配列の全ての存在が、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１活性の徴候である
ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−１活性を有する真菌ポリペプチドの同定法。