【手続補正書】
【提出日】平成20年5月8日(2008.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
A  第一の発光スペクトルを有する第一の蛍光色素で標識される第一の抗体であって、試料中の白血球および非白血球のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合する抗体；
B（1）前記第一の蛍光色素で標識される追加の抗体であって、成熟および未熟顆粒球または骨髄細胞のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合する追加の抗体、および
（2）追加の蛍光色素で標識される追加の抗体であって、前記追加の抗体が成熟および未熟顆粒球または骨髄細胞のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合し、かつ前記追加の蛍光色素が前記第一の発光スペクトルと識別できる追加の発光スペクトルを有する追加の抗体
からなる群から選択される少なくとも1種類の追加の抗体；並びに
C（i）前記試料中に存在する非有核赤色血液細胞をそれぞれ違った形で溶血し、かつ前記試料中の白血球集団を保存する溶血系、
（ii）前記第一の発光スペクトルまたは前記追加の発光スペクトルの少なくとも一方と部分的に重なり合う発光スペクトルを有する核酸色素、および
（iii）（i）および（ii）の組合せ
からなる群から選択される成分
を含む組成物。
【請求項２】
前記第一の抗体が成熟白血球と未熟白血球を識別する、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
前記第一の抗体が、抗CD45、抗CD11a、抗CD50、抗CD18、抗CD53、および抗CD62Lからなる群から選択されるモノクローナル抗体である、請求項1に記載の組成物。
【請求項４】
前記追加の抗体が、2種類の抗原CD16αおよびCD16βと結合することができる抗CD16、抗CD16β、抗CD11b、抗CD15、抗CD35、抗CD24、抗CD10、抗CD49d、CD64、抗CD87、および抗CD15からなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
【請求項５】
前記第一の抗体が抗CD45であり、かつ前記追加の抗体が抗CD16または抗CD16βである、請求項1に記載の組成物。
【請求項６】
前記第一と第二の蛍光色素が異なる、請求項1に記載の組成物。
【請求項７】
前記第一と第二の蛍光色素が同じである、請求項1に記載の組成物。
【請求項８】
前記核酸色素が、細胞非浸透性色素または細胞浸透性色素である、請求項1に記載の組成物。
【請求項９】
球状化剤をさらに含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項１０】
前記成分Cが、前記第一の発光スペクトルまたは前記追加の発光スペクトルの少なくとも一方と部分的に重なり合う発光スペクトルを有する核酸色素である、請求項1に記載の組成物。
【請求項１１】
前記成分Cが、前記試料中に存在する非有核赤色血液細胞をそれぞれ違った形で溶血し、かつ前記試料中の白血球集団を保存する溶血系である、請求項1に記載の組成物。
【請求項１２】
生物試料中の細胞集団を計数するための方法であって、以下のステップ：
A  i  前記試料；
ii  第一の発光スペクトルを有する第一の蛍光色素で標識した第一の抗体であって、前記試料中の白血球および非白血球のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合する抗体；および
iii  （a）前記第一の蛍光色素で標識した追加の抗体であって、成熟および未熟顆粒球または骨髄細胞のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合する追加の抗体、および
（b）追加の蛍光色素で標識した追加の抗体であって、前記追加の抗体が成熟および未熟顆粒球または骨髄細胞のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合し、かつ前記追加の蛍光色素が前記第一の発光スペクトルと識別できる追加の発光スペクトルを有する追加の抗体
からなる群から選択される少なくとも1種類の追加の抗体、
を含む単一反応混合物中で反応させ；
B  前記単一反応混合物を、
（c）前記試料中に存在する非有核赤色血液細胞をそれぞれ違った形で溶血し、かつ前記試料中の白血球集団を保存する溶血試薬；
（d）前記第一の発光スペクトルまたは前記追加の発光スペクトルの少なくとも一方と部分的に重なり合う発光スペクトルを有する核酸色素；および
（e）（c）および（d）の組合せ
からなる群から選択される成分と接触させ；
C  1つまたは複数の蛍光のチャネル、1つまたは複数の光学的パラメータ、1つまたは複数の電気的パラメータ、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも2つの同一または相異なるパラメータについて前記混合物を測定する単一ステップにおいて、前記混合物を流動式血液分析計の単一フローアパーチュアに通過させ；並びに
D  前記集団のそれぞれについて少なくとも2つのパラメータを分析することによって前記試料中の血液学的細胞の集団を計数すること、
を含む、前記方法。
【請求項１３】
前記通過のステップに先立って前記試料中に追加の試薬を導入することによって前記溶血試薬の効果を遅らせるステップをさらに含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
電気的パラメータの測定をさらに含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１５】
光学的パラメータの測定をさらに含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１６】
前記第一と追加の蛍光色素が同じである、請求項12に記載の方法。
【請求項１７】
前記反応混合物を球状化剤と接触させるステップをさらに含む、請求項12に記載の方法。
【請求項１８】
前記核酸色素が細胞非浸透性色素または細胞浸透性色素である、請求項12に記載の方法。
【請求項１９】
前記第一の抗体の抗原決定基が、成熟白血球および未熟白血球上で違った形で発現する、請求項12に記載の方法。
【請求項２０】
生物試料中の細胞集団を計数するための方法であって、以下のステップ：
A  核酸着色剤の不在下で、
i  前記試料；
ii  第一の発光スペクトルを有する第一の蛍光色素で標識した第一の抗体であって、前記試料中の白血球および非白血球のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合する抗体；および
iii  （a）前記第一の蛍光色素で標識した追加の抗体であって、成熟および未熟顆粒球または骨髄細胞のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合する追加の抗体、および
（b）追加の蛍光色素で標識した追加の抗体であって、前記追加の抗体が成熟および未熟顆粒球または骨髄細胞のそれぞれの集団上で違った形で発現する抗原決定基と結合し、かつ前記追加の蛍光色素が前記第一の発光スペクトルと識別できる追加の発光スペクトルを有する追加の抗体
からなる群から選択される少なくとも1種類の追加の抗体
を含む単一反応混合物中で反応させ;
B  前記単一反応混合物を、前記試料中に存在する非有核赤色血液細胞をそれぞれ違った形で溶血し、かつ前記試料中の白血球集団を保存する溶血試薬と接触させ；
C  1つまたは複数の蛍光のチャネル、1つまたは複数の光学的パラメータ、1つまたは複数の電気的パラメータ、およびこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも2つの同一または相異なるパラメータについて前記混合物を測定する単一ステップにおいて、前記混合物を流動式血液分析計の単一フローアパーチュアに通過させ；並びに
D  前記集団のそれぞれについて少なくとも2つのパラメータを分析することによって前記試料中の血液学的細胞の集団を計数すること、
を含む、前記方法。