【手続補正書】
【提出日】平成20年5月8日(2008.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ムチン３ＥＧＦ様ドメインをコードする核酸分子から本質的になる、単離された核酸。
【請求項２】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号４および配列番号６からなる群より選択される配列を有する、核酸分子。
【請求項３】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号１２に示される配列を有する、核酸分子。
【請求項４】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号４に示される配列を有する、核酸分子。
【請求項５】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号１４に示される配列を有する、核酸分子。
【請求項６】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号９に示される配列を有する、核酸分子。
【請求項７】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号６に示される配列を有する、核酸分子。
【請求項８】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号１１に示される配列を有する、核酸分子。
【請求項９】
発現のために必要なエレメントに作動可能に連結された請求項１に記載の核酸から本質的になる、構築物。
【請求項１０】
請求項９に記載の構築物であって、該構築物は第２のムチン３ＥＧＦ様ドメインをコードする第２の核酸配列をさらに含む、構築物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の構築物であって、リンカー領域をコードする核酸配列が、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインをコードする核酸と、前記第２のムチン３ＥＧＦ様ドメインをコードする第２の核酸配列との間に位置する、構築物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の構築物であって、前記リンカー領域は、少なくとも１００アミノ酸長である、構築物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の構築物であって、前記リンカー領域は、配列番号１０または配列番号１３に示される配列を有する、構築物。
【請求項１４】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、マウスのムチン３ＥＧＦ様ドメインである、核酸分子。
【請求項１５】
請求項１に記載の核酸分子であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、ヒトのムチン３ＥＧＦ様ドメインである、核酸分子。
【請求項１６】
消化管の疾患もしくは状態を有するかまたは消化管の疾患もしくは状態を発症する危険がある個体を処置するための組成物であって、該組成物は、
ムチン３ＥＧＦ様ドメインを含むポリペプチドの有効量、
を含む、組成物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の組成物であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号３、配列番号４、配列番号５または配列番号６に示される配列を有する、組成物。
【請求項１８】
請求項１６に記載の組成物であって、前記消化管の疾患または状態は、胃炎、消化性潰瘍疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、および腸癌からなる群より選択される、組成物。
【請求項１９】
請求項１６に記載の組成物であって、前記有効量は、前記消化管における細胞遊走または創傷治癒を刺激するのに有効な量である、組成物。
【請求項２０】
個体において上皮の損傷を処置または防止するための組成物であって、該組成物は、
ムチン３ＥＧＦ様ドメインを含むポリペプチドの有効量、
を含む、組成物。
【請求項２１】
請求項２０に記載の組成物であって、前記ムチン３ＥＧＦ様ドメインが、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に示される配列を有する、組成物。
【請求項２２】
請求項２０に記載の組成物であって、前記上皮の損傷は、上部消化管、食道、真皮、表皮、膣、頚部、子宮、胃腸管、遠位腸、気道上皮、または角膜上皮の損傷である、組成物。
【請求項２３】
前記上皮損傷は、口内炎、粘膜炎、歯肉炎、胃食道逆流性疾患により引き起こされる損傷、外傷性損傷、熱傷、圧迫潰瘍、湿疹、接触皮膚炎、乾癬、疱疹性損傷、ざ瘡、腸炎、直腸炎、クローン病または潰瘍性大腸炎により引き起こされる損傷、角膜炎、角膜の潰瘍、角結膜炎、円錐角膜、結膜、眼性炎症、あるいは瘢痕性類天疱瘡である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ポリペプチドは、２つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインを含むムチン３ＥＧＦ様ドメインを含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２５】
前記２つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインの各々が、隣接する該2つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインから、リンカー領域によって分離されており、ここで各リンカー領域は、独立して、５〜１５０アミノ酸、化学的結合またはそれらの組み合わせを含む、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ポリペプチドは、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１４に示される配列を含むムチン３ＥＧＦ様ドメインを含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ポリペプチドは、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１４に示される配列を含むムチン３ＥＧＦ様ドメインを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ポリペプチドは、２つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインを含むムチン３ＥＧＦ様ドメインを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記２つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインの各々が、隣接する該2つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインから、リンカー領域によって分離されており、ここで各リンカー領域は、独立して、５〜１５０アミノ酸、化学的結合またはそれらの組み合わせを含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
消化管の疾患もしくは状態を有するかまたは消化管の疾患もしくは状態を発症する危険がある個体を処置するための組成物であって、該組成物は、
ムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含むポリペプチドの有効量、
を含む、組成物。
【請求項３１】
前記ムチン１７ＥＧＦ様ドメインが、配列番号７または配列番号８に示される配列を有する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３２】
請求項３０に記載の組成物であって、前記消化管の疾患または状態は、胃炎、消化性潰瘍疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、および腸癌からなる群より選択される、組成物。
【請求項３３】
請求項３０に記載の組成物であって、前記有効量は、前記消化管における細胞遊走または創傷治癒を刺激するのに有効な量である、組成物。
【請求項３４】
個体において上皮の損傷を処置または防止するための組成物であって、該組成物は、
ムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含むポリペプチドの有効量、
を含む、組成物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の組成物であって、前記ムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含むポリペプチドが、配列番号７または配列番号８に示される配列を有する、組成物。
【請求項３６】
請求項３４に記載の組成物であって、前記上皮の損傷は、上部消化管、食道、真皮、表皮、膣、頚部、子宮、胃腸管、遠位腸、気道上皮、または角膜上皮の損傷である、組成物。
【請求項３７】
前記上皮の損傷は、口内炎、粘膜炎、歯肉炎、胃食道逆流性疾患により引き起こされる損傷、外傷性損傷、熱傷、圧迫潰瘍、湿疹、接触皮膚炎、乾癬、疱疹性損傷、ざ瘡、腸炎、直腸炎、クローン病または潰瘍性大腸炎により引き起こされる損傷、角膜炎、角膜の潰瘍、角結膜炎、円錐角膜、結膜、眼性炎症、あるいは瘢痕性類天疱瘡である、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ポリペプチドは、２つ以上のムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含むムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３９】
前記２つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインの各々が、隣接する該２つ以上のムチン３ＥＧＦ様ドメインから、リンカー領域によって分離されており、ここで各リンカー領域は、独立して、５〜１５０アミノ酸、化学的結合またはそれらの組み合わせを含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
ムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含む前記ポリペプチドは、２つ以上のムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項４１】
前記２つ以上のムチン１７ＥＧＦ様ドメインの各々が、隣接する該２つ以上のムチン１７ＥＧＦ様ドメインから、リンカー領域によって分離されており、ここで各リンカー領域は、独立して、５〜１５０アミノ酸、化学的結合またはそれらの組み合わせを含む、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
ムチン３リンカードメインをコードする核酸分子から本質的になる、単離された核酸。
【請求項４３】
前記ムチン３リンカードメインは、配列番号１０および配列番号１３からなる群より選択される配列を有する、請求項４２に記載の核酸分子。
【請求項４４】
配列番号９、配列番号１０、または配列番号１１に示されるポリペプチドから本質的になる、精製されたポリペプチド。
【請求項４５】
配列番号１２、配列番号１３または配列番号１４に示されるポリペプチドから本質的になる、精製されたポリペプチド。
【請求項４６】
マウスムチン３ＥＧＦ１、マウスムチン３ＥＧＦ２、ヒトムチン３ＥＧＦ１、ヒトムチン３ＥＧＦ２、ヒトムチン１７ＥＧＦ１、ムチン１７ＥＧＦ２、マウスｍｕｃ３  ＥＧＦ１，２；ヒトＭＵＣ３  ＥＧＦ１，２；およびヒトＭＵＣ１７  ＥＧＦ１，２からなる群より選択されるポリペプチドから本質的になる、精製されたポリペプチド。
【請求項４７】
ムチン３ＥＧＦ様ドメインまたはムチン１７ＥＧＦ様ドメインを含むポリペプチドの有効量と、薬学的に受容可能なキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項４８】
消化管の疾患もしくは状態を有するかまたは消化管の疾患もしくは状態を発症する危険がある個体を処置するための組成物であって、該組成物は、マウスムチン３ＥＧＦ１、マウスムチン３ＥＧＦ２、ヒトムチン３ＥＧＦ１、ヒトムチン３ＥＧＦ２、ヒトムチン１７ＥＧＦ１、ヒトムチン１７ＥＧＦ２、マウスｍｕｃ３  ＥＧＦ１，２；ヒトＭＵＣ３  ＥＧＦ１，２；またはヒトＭＵＣ１７  ＥＧＦ１，２を含むポリペプチドの有効量を含む、組成物。
【請求項４９】
個体において上皮の損傷を処置または防止するための組成物であって、該組成物は、マウスムチン３ＥＧＦ１、マウスムチン３ＥＧＦ２、ヒトムチン３ＥＧＦ１、ヒトムチン３ＥＧＦ２、ヒトムチン１７ＥＧＦ１、ヒトムチン１７ＥＧＦ２、マウスｍｕｃ３  ＥＧＦ１，２；ヒトＭＵＣ３  ＥＧＦ１，２；またはヒトＭＵＣ１７  ＥＧＦ１，２を含むポリペプチドの有効量を含む、組成物。
【請求項５０】
請求項１０に記載の構築物を含む、宿主細胞。
【請求項５１】
前記宿主細胞は、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞から選択される、請求項５０に記載の宿主細胞。
【請求項５２】
請求項１０に記載の構築物でトランスフェクションされた宿主細胞または該宿主細胞の子孫であって、該宿主細胞は、ムチン３様ドメインを含むポリペプチドを発現する、宿主細胞。
【請求項５３】
前記宿主細胞は、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞から選択される、請求項５２に記載の宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
消化管疾患としては、胃炎、消化性潰瘍疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、または腸管癌が挙げられるがこれらに限定されない。本明細書中で使用される場合、上皮の損傷とは、限定なしに、上部消化管の損傷、食道の損傷、真皮の損傷、表皮の損傷、膣の損傷、頸部の損傷、子宮の損傷、胃腸管の損傷、腸末端（ｄｉｓｔａｌ  ｂｏｗｅｌ）の損傷、気道上皮の損傷、または角膜上皮の損傷をいう。特に、上皮損傷は、口内炎、粘膜炎（ｍｕｃｏｓｉｔｉｔｓ）、歯肉炎、胃食道逆流性疾患により引き起こされる損傷、外傷性損傷、熱傷、圧迫潰瘍、湿疹、接触皮膚炎、乾癬、疱疹性損傷、ざ瘡、腸炎、直腸炎、クローン病または潰瘍性大腸炎により引き起こされる損傷、角膜炎、角膜の潰瘍、角結膜炎、円錐角膜、結膜、眼性炎症、または瘢痕性類天疱瘡であり得る。例によって、本明細書中で記載される場合の損傷とは、細菌感染、ウイルス感染、寄生虫感染、または真菌感染によって引き起こされ得るか；アレルギー性反応、喘息、慢性閉塞性肺疾患によって引き起こされ得るか；喫煙、特定の物質もしくは化学物質の吸入により引き起こされ得るか；または抗新生物化学療法もしくは抗新生物放射線療法によって引き起こされ得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
【表１】
2008506365.tif 000001
ラットＭｕｃ３は、２つのＥＧＦ様ドメインの間に存在するＳＥＡモジュールおよび第２の部位において、翻訳後に切断されることが示された。得られる２つのサブユニットは、２％  ＳＤＳおよび煮沸によって破壊され得る非共有結合を介して再度会合する。組換えｍ３ＥＧＦ１，２は、５４ｋＤａの予測分子量にて、クマ−シー染色した還元性ゲル中の顕著な単一バンドとして認められた。２％  ＳＤＳ中で５分間の煮沸による組換えｍ３ＥＧＦ１，２の処理は、分子量の変化を生じず、このことは、この型の切断が組換えＧＳＴ融合タンパク質において起こらなかったことを示した。同様に、組換えｍ３ＥＧＦ１および組換えｍ３ＥＧＦ２は、クマ−シー染色した還元性ゲル上で、それぞれ、３４ｋＤａおよび４０ｋＤａの単一バンドとして認められた。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
【図１】（Ａ）マウスＭｕｃ３およびヒトＭＵＣ３およびヒトＭＵＣ１７のシステインリッチ領域の間隔。ＥＧＦおよび三葉型モチーフのシステイン間隔が比較のために示される。（Ｂ）Ｅ．ｃｏｌｉで発現され、Ｅ．ｃｏｌｉから精製された組み換えマウスＧＳＴ−Ｍｕｃ３融合タンパク質の図。数字は、以前に記載された本来のｃＤＮＡ配列におけるアミノ酸に対応する。（Ｓｈｅｋｅｌｓら、１９９８、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３３０：１３０１−１３０８）。
【図２−１】（Ａ）血清を含まない培地におけるコントロールの細胞数のパーセントとして表現した、２４時間後のＡ４３１細胞数についての、組み換えＧＳＴタンパク質のｍ３ＥＧＦ１，２および組み換えＥＧＦおよび組み換えＥＧＦの影響。
【図２−２】（Ｂ）２４時間後にＭＴＴによって測定された、Ｌｏｖｏ結腸癌細胞の増殖。ネガティブコントロールはＴｒｉｓ緩衝液中の血清を含まない培地から構成され、ポジティブコントロールは１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）中で増殖させた細胞であった。
【図３】創傷の閉鎖の合計パーセント。創傷は、若年成体マウス結腸（ＹＡＭＣ）細胞単層につけられ、２４時間で測定された。ＥＧＦ（１ｍｇ／ｍｌ）は、ポジティブコントロールとして使用され、２４時間後に１００％の創傷閉鎖をもたらした。
【図４】コントロールの血清を含まない（ＳＦ）培地におけるコントロールの遊走細胞数のパーセントとして表された、１８時間〜２４時間の、ｍ３ＥＧＦ１，２、ｍ３ＥＧＦ１、ｍ３ＲＧＦ２に応答したＡ４３１細胞の遊走。（Ｂ）２４時間後の、血清を含まない培地におけるコントロールの細胞遊走のパーセンテージで表された、種々の濃度のペプチドで処理されたＬｏｖｏ細胞の遊走。
【図５】（Ａ）特異的なＥＧＦ／ＥｒｂＢ１レセプターインヒビターチロホスチン（ｔｙｒｏｐｈｏｓｔｉｎ）のＡＧ１４７８（１５０ｎｍ）と一緒にかまたは含まずに、ｍ３ＥＧＦ１，２（１０μｇ／ｍｌ）またはＥＧＦ（１ｎｇ／ｍｌ）に応答して２４時間で遊走したｃＡ４３１細胞の平均数。（Ｂ）チロシンリン酸化の一般的なインヒビターであるゲニステイン（Ｇｅｎ，１５μｇ／ｍｌ）と一緒にかまたは含まずに、ｍ３ＥＧＦ１，２（１０μｇ／ｍｌ）またはＥＧＦ（１ｎｇ／ｍｌ）に応答して２４時間で遊走したｃＡ４３１細胞の平均数。ＳＦ＝血清を含まない培地、Ｎ＝各処理に対して６ウェル。
【図６】（Ａ）ＹＡＭＣ細胞を、ＥＧＦ（１ｎｇ／ｍｌ）に５分間曝露するか、または血清を含まない培地（ＳＦ）、ｍＥＧＦ１，２（１０μｇ／ｍｌ）もしくはＧＳＴ（１０μｇ／ｍｌ）に３０分間曝露した。
【図７】４８時間のＴＮＦ−α（１００ｎｇ／ｍｌ）処理あり（＋）またはなし（−）での、アポトーシスにおける変化パーセント。細胞株としては、親のＬｏｖｏ、ＬｈＭ３ｃ１４、Ｌｍｏｃｋ、およびＴＮＦ−αの添加１時間前にｍ３ＥＧＦ１，２（１０μｇ／ｍｌ）またはＧＳＴ（５μｇ／ｍｌ）で前処理された親のＬｏｖｏ細胞が挙げられる。（Ｂ）７２時間のインターフェロンγおよび抗ｆａｓ抗体連続処理あり（＋）またはなし（−）での、アポトーシスにおける変化パーセント。細胞株としては、ＬｈＭ３ｃ１４およびＬｍｏｃｋが挙げられる。
【図８−１】（Ａ）酢酸から１２時間および２４時間後に、直腸についてｍ３ＥＧＦ１，２（１００μｇ）またはＰＢＳ中のコントロールペプチドＢＳＡ（１００μｇ）での処置を受けたマウスにおける、酢酸投与から３０時間後での腺窩損傷スコア（ＣＤＳ）。（Ｂ）１００μｇのｍ３ＥＧＦ１，２またはＰＢＳ中１００μｇのコントロールペプチドであるＢＳＡで処置されたマウスにおける、酢酸投与から３０時間後での、等級ＩＩＩ潰瘍の標本当たりの低倍率（１０倍）視野の平均数。
【図８−２】（Ｃ）酢酸から１２時間および２４時間後に、直腸についてＧＳＴ、ｍ３ＥＧＦ（ＥＧＦ１）、ｍ３ＥＧＦ２（ＥＧＤ２）、またはｍ３ＥＧＦ１，２での処置を受けたマウスにおける、酢酸投与から３０時間後での腺窩損傷スコア（ＣＤＳ）。（Ｄ）ＧＳＴ、ｍ３ＥＧＦ（ＥＧＦ１）、ｍ３ＥＧＦ２（ＥＧＤ２）、またはｍ３ＥＧＦ１，２で処置されたマウスにおける、酢酸投与から３０時間後での、等級ＩＩＩ潰瘍の標本当たりの低倍率（１０倍）視野の平均数。
【図９−１】中央〜遠位マウス結腸（Ａ、Ｂ）および近位結腸（Ｃ）由来の等級ＩＩＩ潰瘍の、腺窩損傷スコアおよび視野／標本の平均数が示される。ＧＳＴおよびＢＳＡで処置されたコントロールマウス由来のスコアは、「総計」に一緒に加えられた。
【図９−２】中央〜遠位マウス結腸（Ａ、Ｂ）および近位結腸（Ｃ）由来の等級ＩＩＩ潰瘍の、腺窩損傷スコアおよび視野／標本の平均数が示される。ＧＳＴおよびＢＳＡで処置されたコントロールマウス由来のスコアは、「総計」に一緒に加えられた。
【図１０】ヒトムチン３およびマウスムチン３のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2008506365000001.app
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2008506365.tif 000002
【図２−１】
2008506365.tif 000003
【図２−２】
2008506365.tif 000004
【図３】
2008506365.tif 000005
【図４】
2008506365.tif 000006
【図５】
2008506365.tif 000007
【図６】
2008506365.tif 000008
【図７】
2008506365.tif 000009
【図８−１】
2008506365.tif 000010
【図８−２】
2008506365.tif 000011
【図９−１】
2008506365.tif 000012
【図９−２】
2008506365.tif 000013
【図１０】
2008506365.tif 000014