【手続補正書】
【提出日】令和1年9月4日(2019.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一定量のヒト多能性幹細胞（「hPSC」）を提供する工程、
後期原始線条細胞を生成する工程、
後方中間中胚葉細胞の形成を誘導する工程、および
後腎間葉細胞に分化させる工程
を含む、後腎間葉を生成するための方法。
【請求項２】
ヒト多能性幹細胞が、ヒト胚性幹細胞（「hESC」）である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
ヒト多能性幹細胞が、ヒト人工多能性幹細胞（「hiPSC」）である、請求項1記載の方法。
【請求項４】
後期原始線条細胞を生成する工程が、CHIR99021中で約3〜5日間培養することを含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】
ノギンの添加をさらに含む、請求項4記載の方法。
【請求項６】
後方中間中胚葉細胞の形成を誘導する工程が、アクチビンの存在下で約2〜4日間培養することを含む、請求項1記載の方法。
【請求項７】
後腎間葉細胞に分化させる工程が、FGF9の添加を含む、請求項1記載の方法。
【請求項８】
CHIR99021の添加によって後腎間葉系細胞をネフロン前駆細胞（NPC）にさらに分化させる、請求項7記載の方法。
【請求項９】
後期原始線条細胞が、TおよびTBXのうちの1つまたは複数を発現する、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
後方中間中胚葉細胞が、WT1およびHOXD11のうちの1つまたは複数を発現する、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
後腎間葉系細胞が、SIX2、SALL1、WT1およびPAX2のうちの1つまたは複数を発現する、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
NPCが、SIX2、SALL1、WT1、PAX2およびEYA1のうちの1つまたは複数を発現する、請求項8記載の方法。
【請求項１３】
後腎間葉細胞への分化が、少なくとも50％の効率である、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
後腎間葉細胞への分化が、少なくとも70％の効率である、請求項1記載の方法。
【請求項１５】
請求項1記載の方法によって生成される後腎間葉細胞の組成物。
【請求項１６】
請求項8記載の方法によって生成されるネフロン前駆細胞の組成物。
【請求項１７】
一定量のネフロン前駆細胞（「NPC」）を提供する工程、および
懸濁培養下で約11日間該NPCを培養する工程
を含む、腎臓オルガノイドを生成する方法。
【請求項１８】
CHIR99021およびFGF9のうちの1つまたは複数の添加をさらに含む、請求項17記載の方法。
【請求項１９】
腎臓オルガノイドが、蛸足細胞様細胞、近位尿細管、ヘンレの下行脚、ヘンレの太い上行脚および遠位曲尿細管から選択される1つまたは複数の細胞型を含む、請求項17記載の方法。
【請求項２０】
蛸足細胞様細胞が、NPHS1+、PODXL+およびWT1+のうちの1つまたは複数を発現する、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
近位尿細管が、LTL+およびAQP1+のうちの1つまたは複数を発現する、請求項19記載の方法。
【請求項２２】
ヘンレの下行脚が、CDH1+およびAQP1+のうちの1つまたは複数を発現する、請求項19記載の方法。
【請求項２３】
ヘンレの太い上行脚が、CDH1+およびUMOD+のうちの1つまたは複数を発現する、請求項19記載の方法。
【請求項２４】
遠位曲尿細管が、CDH1+ UMOD-のうちの1つまたは複数を発現する、請求項19記載の方法。
【請求項２５】
NPCが、ヒト多能性幹細胞（「hPSC」）由来である、請求項17記載の方法。
【請求項２６】
hPSCが、疾患変異を有する患者由来である、請求項25記載の方法。
【請求項２７】
hPSCが、CRISPRを用いてゲノム編集されたものである、請求項25記載の方法。
【請求項２８】
請求項17記載の方法によって作製される、一定量のオルガノイド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
一定量のネフロン前駆細胞（「NPC」）を提供する工程、および懸濁培養下でNPCを約11日間培養する工程を含む腎臓オルガノイドを生成する方法によって作製される一定量のオルガノイドもまた、本明細書に記載されている。他の態様において、この方法は、CHIR99021およびFGF9のうちの1つまたは複数の添加を含む。他の態様において、腎臓オルガノイドは、蛸足細胞様細胞、近位尿細管、ヘンレの下行脚、ヘンレの太い上行脚および遠位曲尿細管から選択される1つまたは複数の細胞型を含む。他の態様において、蛸足細胞様細胞は、NPHS1+、PODXL+およびWT1+のうちの1つまたは複数を発現する。他の態様において、近位尿細管は、LTL+およびAQP1+のうちの1つまたは複数を発現する。他の態様において、ヘンレの下行脚は、CDH1+およびAQP1+のうちの1つまたは複数を発現する。他の態様において、ヘンレの太い上行脚は、CDH1+およびUMOD+のうちの1つまたは複数を発現する。他の態様において、遠位曲尿細管は、CDH1+ UMOD-のうちの1つまたは複数を発現する。他の態様において、NPCは、ヒト多能性幹細胞（「hPSC」）由来である。他の態様において、hPSCは、疾患変異を有する患者由来である。他の態様において、hPSCは、CRISPRを用いてゲノム編集されたものである。
[本発明1001]
一定量のヒト多能性幹細胞（「hPSC」）を提供する工程、
後期原始線条細胞を生成する工程、
後方中間中胚葉細胞の形成を誘導する工程、および
後腎間葉細胞に分化させる工程
を含む、後腎間葉を生成するための方法。
[本発明1002]
ヒト多能性幹細胞が、ヒト胚性幹細胞（「hESC」）である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
ヒト多能性幹細胞が、ヒト人工多能性幹細胞（「hiPSC」）である、本発明1001の方法。
[本発明1004]
後期原始線条細胞を生成する工程が、CHIR99021中で約3〜5日間培養することを含む、本発明1001の方法。
[本発明1005]
ノギンの添加をさらに含む、本発明1004の方法。
[本発明1006]
後方中間中胚葉細胞の形成を誘導する工程が、アクチビンの存在下で約2〜4日間培養することを含む、本発明1001の方法。
[本発明1007]
後腎間葉細胞に分化させる工程が、FGF9の添加を含む、本発明1001の方法。
[本発明1008]
CHIR99021の添加によって後腎間葉系細胞をネフロン前駆細胞（NPC）にさらに分化させる、本発明1007の方法。
[本発明1009]
後期原始線条細胞が、TおよびTBXのうちの1つまたは複数を発現する、本発明1001の方法。
[本発明1010]
後方中間中胚葉細胞が、WT1およびHOXD11のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1001の方法。
[本発明1011]
後腎間葉系細胞が、SIX2、SALL1、WT1およびPAX2のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1001の方法。
[本発明1012]
NPCが、SIX2、SALL1、WT1、PAX2およびEYA1のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1008の方法。
[本発明1013]
後腎間葉細胞への分化が、少なくとも50％の効率である、本発明1001の方法。
[本発明1014]
後腎間葉細胞への分化が、少なくとも70％の効率である、本発明1001の方法。
[本発明1015]
本発明1001の方法によって生成される後腎間葉細胞の組成物。
[本発明1016]
本発明1008の方法によって生成されるネフロン前駆細胞の組成物。
[本発明1017]
一定量のネフロン前駆細胞（「NPC」）を提供する工程、および
懸濁培養下で約11日間該NPCを培養する工程
を含む、腎臓オルガノイドを生成する方法。
[本発明1018]
CHIR99021およびFGF9のうちの1つまたは複数の添加をさらに含む、本発明1017の方法。
[本発明1019]
腎臓オルガノイドが、蛸足細胞様細胞、近位尿細管、ヘンレの下行脚、ヘンレの太い上行脚および遠位曲尿細管から選択される1つまたは複数の細胞型を含む、本発明1017の方法。
[本発明1020]
蛸足細胞様細胞が、NPHS1+、PODXL+およびWT1+のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1019の方法。
[本発明1021]
近位尿細管が、LTL+およびAQP1+のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1019の方法。
[本発明1022]
ヘンレの下行脚が、CDH1+およびAQP1+のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1019の方法。
[本発明1023]
ヘンレの太い上行脚が、CDH1+およびUMOD+のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1019の方法。
[本発明1024]
遠位曲尿細管が、CDH1+ UMOD-のうちの1つまたは複数を発現する、本発明1019の方法。
[本発明1024]
NPCが、ヒト多能性幹細胞（「hPSC」）由来である、本発明1017の方法。
[本発明1025]
hPSCが、疾患変異を有する患者由来である、本発明1024の方法。
[本発明1026]
hPSCが、CRISPRを用いてゲノム編集されたものである、本発明1024の方法。
[本発明1027]
本発明1017の方法によって作製される、一定量のオルガノイド。