【手続補正書】
【提出日】平成20年2月7日(2008.2.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  変異した抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むポリペプチドであって、変異した軽鎖可変領域（ＶＬ）を必要に応じて含み、
各領域は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、各領域のＣＤＲは、そのアミノ末端から開始してＣＤＲ１からＣＤＲ３へと連続的に番号を付されており、
該ポリペプチドは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ（ＰＥ）を含む免疫毒素またはＰＥの細胞傷害性フラグメントを含む免疫毒素へと組換え生成された場合に、３％以上の収率を有し、
（ａ）該ポリペプチドのＶＨのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ、親抗体ＭＲ１のＶＨのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３の配列それぞれを有するが、
（ｉ）抗体ＭＲ１の重鎖可変領域のＣＤＲ３の９８位のセリンが、プロリンおよびトリプトファンからなる群より選択されるアミノ酸で置換されており；
（ｉｉ）抗体ＭＲ１の重鎖可変領域のＣＤＲ３の９９位のトレオニンが、チロシン、アスパラギン、トリプトファン、イソロイシン、フェニルアラニン、セリン、およびバリンからなる群より選択されるアミノ酸で置換されており；
必要に応じて、（ｉｉｉ）該重鎖可変領域のＣＤＲ１もしくはＣＤＲ２において少なくとも１アミノ酸が置換されており、該アミノ酸は、ＡＧＹまたはＲＧＹＷから選択されるホットスポットモチーフに属するヌクレオチドを含むコドンによってコードされ、Ｒは、ＡまたはＧであり、Ｙは、ＣまたはＴであり、そしてＷは、ＡまたはＴであり；
（ｂ）該ポリペプチドのＶＬのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３はそれぞれ、
（ｉ）抗体ＭＲ１のＶＬのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３それぞれの配列を有するか；あるいは
（ｉｉ）抗体ＭＲ１のＶＬのＣＤＲ１〜ＣＤＲ３それぞれの配列を有するが、該ポリペプチドの該ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３のうちの１つ以上において少なくとも１アミノ酸が置換されており、該アミノ酸は、ＡＧＹまたはＲＧＹＷから選択されるホットスポットモチーフに属するヌクレオチドを含むコドンによってコードされ、Ｒは、ＡまたはＧであり、Ｙは、ＣまたはＴであり、そしてＷは、ＡまたはＴである、
ポリペプチド。
【請求項２】  請求項１に記載のポリペプチドであって、前記ＶＬのＣＤＲ３が、ＡＧＹまたはＲＧＹＷから選択されるホットスポットモチーフに属するヌクレオチドを含むコドンによってコードされるアミノ酸の置換を有し、Ｒは、ＡまたはＧであり、Ｙは、ＣまたはＴであり、そしてＷは、ＡまたはＴである、ポリペプチド。
【請求項３】  前記置換が、軽鎖可変領域のＣＤＲ１またはＣＤＲ２において生じる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】  前記置換が、重鎖可変領域のＣＤＲ１またはＣＤＲ２において生じる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】  前記ＶＨ鎖および前記ＶＬ鎖の両方が、ＣＤＲにおける少なくとも１つのアミノ酸のアミノ酸置換によって変異した、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】  前記置換が、Ｐ９８−Ｙ９９、Ｐ９８−Ｎ９９、Ｐ９８−Ｗ９９、Ｐ９８−Ｉ９９、Ｐ９８−Ｆ９９およびＰ９８−Ｖ９９からなる群より選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項７】  前記ポリペプチドが、ｓｃＦｖである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項８】  前記ポリペプチドが、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ’）２である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項９】  前記重鎖における置換が、Ｓ９８Ｐ−Ｔ９９Ｙであり、かつ前記軽鎖における置換が、Ｆ９２Ｗである（ＭＲ１−１）、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１０】  エフェクター分子、治療的成分、または検出可能な標識に結合した、請求項１に記載のポリペプチドを含む、キメラ分子。
【請求項１１】  前記治療的成分が、毒性成分である、請求項１０に記載のキメラ分子。
【請求項１２】  前記毒性成分が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素またはその細胞傷害性フラグメントである、請求項１１に記載のキメラ分子。
【請求項１３】  前記毒性成分が、ＰＥ３８である細胞傷害性フラグメントである、請求項１２に記載のキメラ分子。
【請求項１４】  前記免疫結合体が、７ｎｇ／ｍｌ以下のＩＣ５０を有する、請求項１２に記載のキメラ分子。
【請求項１５】  前記免疫結合体が、５ｎｇ／ｍｌ以下のＩＣ５０を有する、請求項１２に記載のキメラ分子。
【請求項１６】  前記免疫結合体が、約３．５ｎｇ／ｍｌのＩＣ５０を有する、請求項１２に記載のキメラ分子。
【請求項１７】  前記免疫結合体が、約７％の収率を有する、請求項１２に記載のキメラ分子。
【請求項１８】  請求項１１に記載のキメラ分子であって、ここで前記毒性成分が、ジフテリア毒素またはその細胞傷害性フラグメント、サポリンまたはその細胞傷害性フラグメント、アメリカヤマゴボウ抗ウイルス毒素またはその細胞傷害性フラグメント、リシンまたはその細胞傷害性フラグメント、およびブリオジン１またはその細胞傷害性フラグメントからなる群より選択される、キメラ分子。
【請求項１９】  前記重鎖における置換がＳ９８Ｐ−Ｔ９９Ｙであり、かつ前記軽鎖における置換がＦ９２Ｗである（ＭＲ１−１）、請求項１２に記載のキメラ分子。
【請求項２０】  繊維状ファージｐＩＩＩタンパク質と融合した、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項２１】  請求項１に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
【請求項２２】  前記ＶＨ鎖中の置換が、Ｓ９８Ｐ−Ｔ９９Ｙ、Ｓ９８Ｐ−Ｔ９９Ｗ、Ｓ９８Ｐ−Ｔ９９ＩおよびＳ９８Ｐ−Ｔ９９Ｖから選択される、請求項２１に記載の核酸分子。
【請求項２３】  前記重鎖における置換が、Ｓ９８Ｐ−Ｔ９９Ｙであり、かつ前記軽鎖における置換がＦ９２Ｗである（ＭＲ１−１）、請求項２１に記載の核酸分子。
【請求項２４】  プロモーターに作動可能に連結された、請求項２１に記載の核酸分子。
【請求項２５】  プロモーターに作動可能に連結された、請求項２２に記載の核酸分子。
【請求項２６】  プロモーターに作動可能に連結された、請求項２３に記載の核酸分子。
【請求項２７】  抗原を保有する細胞を殺すための組成物であって、
毒性成分および標的化成分を含む、免疫毒素
を含み、該標的化成分は、請求項１に記載のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項２８】  請求項２７に記載の組成物であって、ここで、少なくとも１つのアミノ酸が、変異した抗体重鎖可変領域のＣＤＲ１またはＣＤＲ２において置換され、あるいは変異した抗体軽鎖可変領域のＣＤＲ１またはＣＤＲ２において置換される、組成物。
【請求項２９】  請求項２７に記載の組成物であって、ここで、ＣＤＲ３が変異した重鎖可変領域が、Ｐ９８−Ｙ９９、Ｐ９８−Ｎ９９、Ｐ９８−Ｗ９９、Ｐ９８−Ｉ９９、Ｐ９８−Ｆ９９およびＰ９８−Ｖ９９からなる群より選択されるアミノ酸置換を含む、組成物。
【請求項３０】  ＣＤＲ３が変異した軽鎖可変領域が、９２位のフェニルアラニンを置換したトリプトファンを含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】  前記標的化成分がＭＲ１−１である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３２】  前記細胞が、悪性細胞である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３３】  前記悪性細胞が、神経膠腫細胞である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３４】  前記悪性細胞が、乳癌細胞である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３５】  前記悪性細胞が、肺癌細胞である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３６】  前記悪性細胞が、卵巣癌細胞である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３７】  抗原を保有する細胞を殺すための医薬の製造における免疫毒素の使用であって、
該免疫毒素は、毒性成分および標的化成分を含み、該標的化成分は、請求項１に記載のポリペプチドを含む、使用。
【請求項３８】  請求項３７に記載の使用であって、ここで、少なくとも１つのアミノ酸が、変異した抗体重鎖可変領域のＣＤＲ１またはＣＤＲ２において置換され、あるいは変異した抗体軽鎖可変領域のＣＤＲ１またはＣＤＲ２において置換される、使用。
【請求項３９】  請求項３７に記載の使用であって、ここで、ＣＤＲ３が変異した重鎖可変領域が、Ｐ９８−Ｙ９９、Ｐ９８−Ｎ９９、Ｐ９８−Ｗ９９、Ｐ９８−Ｉ９９、Ｐ９８−Ｆ９９およびＰ９８−Ｖ９９からなる群より選択されるアミノ酸置換を含む、使用。
【請求項４０】  ＣＤＲ３が変異した軽鎖可変領域が、９２位のフェニルアラニンを置換したトリプトファンを含む、請求項３７に記載の使用。
【請求項４１】  前記標的化成分がＭＲ１−１である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４２】  前記細胞が、悪性細胞である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４３】  前記悪性細胞が、神経膠腫細胞である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４４】  前記悪性細胞が、乳癌細胞である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４５】  前記悪性細胞が、肺癌細胞である、請求項３７に記載の使用。
【請求項４６】  前記悪性細胞が、卵巣癌細胞である、請求項３７に記載の使用。