【手続補正書】
【提出日】平成31年2月26日(2019.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３６または配列番号３７であるＤＮＡポリヌクレオチドによってコードされる単離された豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）。
【請求項２】
組成物は、ＰＥＤＶの変異株及びプロトタイプ株の両方によるチャレンジから豚を保護すること、及びＰＥＤＶ感染に関連する１つ以上の症状を予防または治療することが可能であり、保護の達成は、ＰＥＤＶ感染の症状である脱水、発熱、下痢、嘔吐、授乳能力の低下、生殖能力の低下、死亡のいずれかの予防または管理、及び体重減少もしくは体重増加失敗の予防または管理からなる群から選択されるエンドポイントによって決定される、請求項１に記載の豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）、及び担体を含む、ワクチン組成物。
【請求項３】
前記ウイルスは、生または不活化ウイルスである、請求項２に記載のワクチン組成物。
【請求項４】
前記担体は、希釈剤である、請求項２に記載のワクチン組成物。
【請求項５】
アジュバントをさらに含む、請求項２に記載のワクチン組成物。
【請求項６】
前記保護される豚は、経産豚、未経産豚、種豚、成豚、及び子豚のいずれかを含む、請求項２に記載のワクチン組成物。
【請求項７】
前記ワクチンは、単回用量プログラムにおいて有効である、請求項６に記載のワクチン組成物。
【請求項８】
前記ワクチンは、２回用量プログラムにおいて有効である、請求項６に記載のワクチン組成物。
【請求項９】
第１の用量は、前記子豚が約１〜７日齢のときに投与され、第２の用量は、前記子豚が２〜５週齢のときに投与される、請求項８に記載のワクチン組成物。
【請求項１０】
前記単回用量は、約１〜２１日齢で投与される、請求項７に記載のワクチン組成物。
【請求項１１】
最小有効量は、約１０〜約１０６  ｌｏｇ１０  ＴＣＩＤ５０／用量である、請求項２に記載のワクチン組成物。
【請求項１２】
前記アジュバントは、油に溶解させた脱油レシチン、及び水酸化アルミニウムである、請求項５に記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
前記アジュバントは、ＣｐＧ／ＤＥＡＥ−デキストラン／鉱油（ＴＸＯ）である、請求項５に記載のワクチン組成物。
【請求項１４】
ＰＥＤＶによって子豚に引き起こされる疾患を予防する方法であって、請求項３のワクチン組成物を前記子豚に投与することを含み、前記ワクチンの第1の用量が、前記子豚が約１〜７日齢のときに投与される、前記方法。
【請求項１５】
前記投与することは、前記子豚が約２〜５週齢のときに、第２の用量の前記ワクチンを投与することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
２つの用量が前記子豚に投与され、雌親豚は、種付け前にはワクチン接種されるが、分娩前にはワクチン接種されない、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
２つの用量が前記子豚に投与され、前記雌親豚は分娩前にワクチン接種される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記子豚に単回用量のみが投与され、そして、母豚は、ＰＥＤＶに曝露されておらず、かついかなる時もワクチン接種されない、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
ヌクレオチド配列は、（１）配列番号４６の５５１位に対応するそのアミノ酸位置にプロリン残基を有するＯＲＦ１ａ／１ｂタンパク質、及び（２）配列番号４７の９７３位に対応するそのアミノ酸位置にヒスチジン残基を有するスパイクタンパク質のうちの一方または両方を含む、配列番号３７と全長ヌクレオチドレベルで少なくとも９５％または９９％同一なＤＮＡポリヌクレオチド配列、によってコードされる単離された豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）。
【請求項２０】
請求項１に記載のコードするＤＮＡポリヌクレオチドに対応する全長ＲＮＡポリヌクレオチド、またはその相補体。
【請求項２１】
感染性クローンである、請求項２０に記載のＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項１に記載のコードするＤＮＡポリヌクレオチドを含む、プラスミドまたは細菌人工染色体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２４】
このように本発明を説明したが、本発明が様々に変更され得ることは明らかであろう。そのような変更は、本発明の趣旨及び範囲からの逸脱であると見なされるべきではない。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
配列番号６７と全長ヌクレオチドレベルで少なくとも９５％同一であり、かつ以下のアミノ酸の特徴のうちの１つ以上を含むＤＮＡポリヌクレオチドによってコードされる、単離された豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）：
（ａ）配列番号４６の参照によって決定されるポリタンパク質１ａ／１ｂの５５１位のＬもしくはＰ（ＤＡＴの直後）、またはその保存的置換、
（ｂ）配列番号４７の参照によって決定されるスパイクタンパク質の１００９位のＰ（ＮＩＴの直後）、またはその保存的置換、
（ｃ）配列番号４７の参照によって決定されるスパイクタンパク質の９７３位のＨ（ＰＦＳの直後）、またはその保存的置換、及び
（ｄ）ＯＲＦ３の翻訳の早期終止をもたらすＯＲＦ３のコード配列の修飾。
［態様２］
配列番号３５、３６、または３７に記載の配列を有するポリヌクレオチドによってコードされる、態様１に記載のウイルス。
［態様３］
前記ウイルスをコードする前記ＤＮＡポリヌクレオチドは、配列番号６７と全長ヌクレオチドレベルで少なくとも９８％同一である、態様１に記載のウイルス。
［態様４］
前記ウイルスをコードする前記ＤＮＡポリヌクレオチドは、配列番号６７と全長ヌクレオチドレベルで少なくとも９９％同一である、態様１に記載のウイルス。
［態様５］
前記ウイルスをコードする前記ＤＮＡポリヌクレオチドは、配列番号６７と全長ヌクレオチドレベルで少なくとも９９．５％同一である、態様１に記載のウイルス。
［態様６］
前記ＯＲＦ３の修飾は、１３８〜１４３位のアミノ酸ＬＴＡＮＰＬ（配列番号４８のＮＧＫＡＡの直後）に生じる欠失、及び１４３位の後のＯＲＦタンパク質の切断を含む、態様１に記載のウイルス。
［態様７］
示されるアミノ酸のうちの１つ以上の保存的置換は、（１）ロイシンに対するバリンまたはイソロイシン、（２）プロリンに対するグリシン、及び（３）ヒスチジンに対するリジンまたはアルギニンから選択される、態様１に記載のウイルス。
［態様８］
組成物は、ＰＥＤＶの変異株及びプロトタイプ株の両方によるチャレンジから豚を保護すること、及びＰＥＤＶ感染に関連する１つ以上の症状を予防または治療することが可能であり、保護の達成は、ＰＥＤＶ感染の症状である脱水、発熱、下痢、嘔吐、授乳能力の低下、生殖能力の低下、死亡のいずれかの予防または管理、及び体重減少もしくは体重増加失敗の予防または管理からなる群から選択されるエンドポイントによって決定される、態様１に記載の豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）、及び担体を含む、ワクチン組成物。
［態様９］
前記ウイルスは、生または不活化ウイルスである、態様８に記載のワクチン組成物。
［態様１０］
前記担体は、希釈剤である、態様８に記載のワクチン組成物。
［態様１１］
アジュバントをさらに含む、態様９に記載のワクチン組成物。
［態様１２］
前記保護される豚は、経産豚、未経産豚、種豚、成豚、及び子豚のいずれかを含む、態様８に記載のワクチン組成物。
［態様１３］
前記ワクチンは、単回用量プログラムにおいて有効である、態様１２に記載のワクチン組成物。
［態様１４］
前記ワクチンは、２回用量プログラムにおいて有効である、態様１２に記載のワクチン組成物。
［態様１５］
第１の用量は、前記子豚が約１〜７日齢のときに投与され、第２の用量は、前記子豚が２〜５週齢のときに投与される、態様１４に記載のワクチン組成物。
［態様１６］
前記単回用量は、約１〜２１日齢で、好ましくは約１〜７日齢で投与される、態様１３に記載のワクチン組成物。
［態様１７］
最小有効量は、約１０〜約１０６  ｌｏｇ１０  ＴＣＩＤ５０である、態様８のいずれかに記載のワクチン組成物。
［態様１８］
前記アジュバントは、油、通常は軽質流動パラフィンに溶解させた脱油レシチン、及び水酸化アルミニウムである、態様１１に記載のワクチン組成物。
［態様１９］
前記アジュバントは、ＣｐＧ／ＤＥＡＥ−デキストラン／鉱油（ＴＸＯ）である、態様１１に記載のワクチン組成物。
［態様２０］
ヌクレオチド配列は、（１）配列番号４６の５５１位（ＤＡＴの直後）に対応するそのアミノ酸位置にプロリン残基を有するＯＲＦ１ａ／１ｂタンパク質、及び（２）配列番号４７の９７３位（ＰＦＳの直後）に対応するそのアミノ酸位置にヒスチジン残基を有するスパイクタンパク質のうちの一方または両方を含む、配列番号３７と全長ヌクレオチドレベルで少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一なヌクレオチド配列によってコードされる単離された豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）。
［態様２１］
ＰＥＤＶによって子豚に引き起こされる疾患を治療または予防する方法であって、前記子豚が約１〜７日齢のときに、前記子豚に第１の用量の態様８に記載のワクチン組成物を投与することを含む、方法。
［態様２２］
前記投与することは、前記子豚が約２〜５週齢のときに、第２の用量の前記ワクチンを投与することをさらに含む、態様２１に記載の方法。
［態様２３］
２つの用量が前記子豚に投与され、雌親豚は、種付け前にはワクチン接種されるが、分娩前にはワクチン接種されない、態様２２に記載の方法。
［態様２４］
２つの用量が前記子豚に投与され、前記雌親豚は分娩前にワクチン接種される、態様２２に記載の方法。
［態様２６］
ＰＥＤＶによって子豚に引き起こされる疾患を治療または予防する方法であって、前記子豚が約１〜７日齢のときに、前記子豚に単回有効量の態様８に記載のワクチン組成物を投与することを含み、母豚は、ＰＥＤＶに曝露されておらず、かついかなる時もワクチン接種されない、方法。
［態様２７］
態様１に記載のコードするＤＮＡポリヌクレオチドに対応する全長ＲＮＡポリヌクレオチド、またはその相補体。
［態様２８］
感染性クローンである、態様２７に記載のＲＮＡポリヌクレオチド。
［態様２９］
態様１に記載のコードするＤＮＡポリヌクレオチドを含む、プラスミドまたは細菌人工染色体。
［態様３０］
継代したＩＮＤＥＬ変異株豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）と、
担体と、を含み、
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、以下のアミノ酸置換もしくは欠失のうちの１つ以上を有する以下のタンパク質のうちの１つ以上、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、弱毒生ウイルス組成物：
配列番号４６の参照によって決定されるＰＥＤＶスパイクタンパク質、それに対応する相同体、またはその保存的置換の、６３３位のリジン（Ｋ）（ＫＰＬの直後のＫ）、８８４位のアルギニン（Ｒ）（ＤＰＡの直後のＲ）、９５９位のアラニン（Ａ）（ＧＧＭの直後のＡ）、３４５位のバリン（Ｖ）（ＬＳＦの直後）、４８位のロイシン（Ｌ）（ＡＶＶの直後のＬ）、１２２５位のアスパラギン酸（Ｄ）（ＳＬＶの直後のＤ）、９７３位のヒスチジン（Ｈ）（ＰＦＳの直後のＨ）、及び１２７２位のスレオニン（Ｔ）（ＦＮＡの直後のＴ）；
配列番号４８の参照によって決定されるＰＥＤＶ  ＯＲＦ３タンパク質、それに対応する相同体、またはその保存的置換の、１８９位のロイシン（Ｌ）の欠失（ＮＰＬの直後のＬ）、１３８〜１４４の欠失（ＫＡＡの直後）、８位のチロシン（Ｙ）の欠失（ＬＦＯの直後のＹ）、及び１７４〜１８９位の欠失（ＬＡＩの直後）；
配列番号５１の参照によって決定されるＰＥＤＶヌクレオカプシドタンパク質、それに対応する相同体、またはその保存的置換の２７位ヒスチジン（Ｈ）（ＶＴＮの直後のＨ）；
配列番号４６の参照によって決定されるＰＥＤＶポリタンパク質１ａ／１ｂ、それに対応する相同体、またはその保存的置換の、１５９１位のメチオニン（Ｍ）（ＫＶＳの直後Ｍ）、５０８７位のセリン（Ｓ）（ＦＳＴの直後のＳ）、及び６１３８位のＳ（ＴＦＳの直後のＳ）；
配列番号４９の参照によって決定されるＰＥＤＶエンベロープタンパク質、それに対応する相同体、またはその保存的置換の６２位のフェニルアラニン（Ｆ）（ＶＹＫの直後のＦ）；ならびに
配列番号４５の参照によって決定されるＰＥＤＶ膜タンパク質、それに対応する相同体、またはその保存的置換の５位のアラニン（Ａ）（ＳＮＧの直後のＡ）及び１８３位のイソロイシン（Ｉ）（ＹＧＧの直後のＩ）。
［態様３１］
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、示されるアミノ酸置換を有する以下のタンパク質、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、態様１に記載の弱毒生ウイルス組成物：
ＰＥＤＶスパイクタンパク質（例えば、配列番号４７）の６３３位のＫ（ＫＰＬの直後のＫ）；及び
ＰＥＤＶ  ＯＲＦ３タンパク質（配列番号４８）の１８９位のＬの欠失（ＮＰＬの直後のＬ）。
［態様３２］
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、示されるアミノ酸置換を有する以下のタンパク質、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、態様１に記載の弱毒生ウイルス組成物：
ＰＥＤＶスパイクタンパク質（配列番号４７）の６３３位のＫ（ＫＰＬの直後のＫ）及び８８４位のＲ（ＤＰＡの直後のＲ）；
ＰＥＤＶ  ＯＲＦ３タンパク質（配列番号４８）の１８９位のＬの欠失（ＮＰＬの直後のＬ）。
［態様３３］
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、示されるアミノ酸置換を有する以下のタンパク質、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、態様１に記載の弱毒生ウイルス組成物：
ＰＥＤＶスパイクタンパク質（配列番号４７）の８８４位のＲ（ＤＰＡの直後のＲ）及び９５９位のＡ（ＧＧＭの直後のＡ）；
ＰＥＤＶ  ＯＲＦ３タンパク質（配列番号４８）の１８９位のＬの欠失（ＮＰＬの直後のＬ）。
［態様３４］
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、示されるアミノ酸置換を有する以下のタンパク質、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、態様１に記載の弱毒生ウイルス組成物：
ＰＥＤＶスパイクタンパク質（配列番号４７）の、４８位のＬ（ＡＶＶの直後のＬ）、３４５位のＶ（ＬＳＦの直後）、８８４位のＲ（ＤＰＡの直後のＲ）、及び９５９位のＡ（ＧＧＭの直後のＡ）；
ＰＥＤＶ  ＯＲＦ３タンパク質（配列番号４８）の１３８〜１４４の欠失（ＫＡＡの直後）及び１８９のＬの欠失（ＮＰＬの直後のＬ）；ならびに
ＰＥＤＶ  ヌクレオカプシドタンパク質（配列番号５１）の２７位のＨ（ＶＴＮの直後のＨ）。
［態様３５］
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、示されるアミノ酸置換を有する以下のタンパク質、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、態様１に記載の弱毒生ウイルス組成物：
ＰＥＤＶスパイクタンパク質（配列番号４７）の、８８４位のＲ（ＤＰＡの直後のＲ）、９５９位のＡ（ＬＩＧＧＭの直後のＡ）、及び１２２５位のＤ（ＳＬＶの直後のＤ）；
ＰＥＤＶ  ＯＲＦ３タンパク質（配列番号４８）の、８位のＹの欠失（ＬＦＯの直後のＹ）、１３８〜１４４の欠失（ＫＡＡの直後）、及び１７４〜１８９位の欠失（ＬＡＩの直後）；
ＰＥＤＶポリタンパク質１ａ／１ｂ（配列番号４６）の、１５９１位のＭ（ＫＶＳの直後Ｍ）、５０８７位のＳ（ＦＳＴの直後のＳ）、及び６１３８位のＳ（ＴＦＳの直後のＳ）；
ＰＥＤＶエンベロープタンパク質（配列番号４９）の６２位のＦ（ＶＹＫの直後のＦ）；ならびに
ＰＥＤＶ膜タンパク質の１８３位のＩ（ＹＧＧの直後のＩ）。
［態様３６］
前記株は、配列番号４０、４１、４２、４３、４４、または４５のアミノ酸配列を有するタンパク質、またはそれらの保存的に修飾された変異体を含む、態様３６に記載の株。
［態様３７］
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、示されるアミノ酸置換を含む以下のタンパク質、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、態様１に記載の弱毒生ウイルス組成物：
ＰＥＤＶスパイクタンパク質（配列番号４７）の、８８４位のＲ（ＤＰＡの直後）、９５９位のＡ（ＬＩＧＧＭの直後）、９７３位のＨ（ＰＦＳの直後のＨ）、及び１２２５位のＤ（ＳＬＶの直後のＤ）；
ＰＥＤＶ  ＯＲＦ３タンパク質（配列番号４８）の、８位のＹの欠失（ＬＧＬＦＯの直後のＹ）、１３８〜１４４の欠失（ＫＡＡの直後）、及び１７４〜１８９位の欠失（ＬＹＬＡＩの直後）、
ＰＥＤＶポリタンパク質１ａ／１ｂ（配列番号４６）の、１５９１位のＭ（ＫＶＳの直後のＭ）、５０８７位のＳ（ＦＳＴの直後のＳ）、及び６１３８位のＳ（ＴＦＳの直後のＳ）；
ＰＥＤＶエンベロープタンパク質（配列番号４９）の６２位のＦ（ＶＹＫの直後のＦ）；ならびに
ＰＥＤＶ膜タンパク質の５位のＡ（ＳＮＧの直後のＡ）及び１８３位のＩ（ＹＧＧの直後のＩ）。
［態様３８］
前記継代したＩＮＤＥＬ変異株は、示されるアミノ酸置換を含む以下のタンパク質、またはその保存的に修飾された変異体をコードする、態様１に記載の弱毒生ウイルス組成物：
ＰＥＤＶスパイクタンパク質（配列番号４７）の、４８位のＬ（ＡＶＶの直後）、３４５位のＶ（ＬＳＦの直後）、及び１２７２位のＴ（ＦＮＡの直後のＴ）；
ＰＥＤＶエンベロープタンパク質（配列番号４９）の６２位のＳ（ＶＹＫの直後のＳ）；ならびに
ＰＥＤＶヌクレオカプシドタンパク質（配列番号５１）の２７位のＨ（ＶＴＮの直後のＨ）。
［態様３９］
弱毒生変異豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）及び担体を含むワクチン組成物であって、前記株は、態様３０に列挙される置換もしくは欠失、またはそれらの保存的変異体のうちの１つ以上をコードし、前記組成物は、ＰＥＤＶの変異株及びプロトタイプ株の両方によるチャレンジから豚を保護すること、及びＰＥＤＶ感染に関連する１つ以上の症状を予防または治療することが可能であり、前記保護は、脱水、発熱、下痢、嘔吐、授乳能力の低下、生殖能力の低下、死亡、及び体重減少もしくは体重増加失敗の予防または管理からなる群から選択されるエンドポイントによって評価される、ワクチン組成物。
［態様４０］
前記担体は、希釈剤である、態様３０に記載のワクチン組成物。
［態様４１］
前記希釈剤は、滅菌希釈剤である、態様４０に記載のワクチン組成物。
［態様４２］
アジュバントをさらに含む、態様４０に記載のワクチン組成物。
［態様４３］
前記保護される豚は、経産豚、未経産豚、種豚、成豚、及び子豚のいずれかを含む、態様３９に記載のワクチン組成物。
［態様４４］
１日齢以上の子豚に有効である、態様４３に記載のワクチン組成物。
［態様４５］
前記ワクチンは、単回用量プログラムにおいて有効である、態様４４に記載のワクチン組成物。
［態様４６］
前記ワクチンは、２回用量プログラムにおいて有効である、態様４４に記載のワクチン組成物。
［態様４７］
第１の用量は、前記子豚が約１〜７日齢のときに投与され、第２の用量は、前記子豚が２〜５週齢のときに投与される、態様４６に記載のワクチン組成物。
［態様４８］
最小有効量は、約１０〜約１０６  ｌｏｇ１０  ＴＣＩＤ５０である、態様１０のいずれかに記載のワクチン組成物。
［態様４９］
前記アジュバントは、油、通常は軽質流動パラフィンに溶解させた脱油レシチン、及び水酸化アルミニウムである、態様４２に記載のワクチン組成物。
［態様５０］
前記アジュバントは、ＣｐＧ／ＤＥＡＥ−デキストラン／鉱油（ＴＸＯ）である、態様４２に記載のワクチン組成物。
［態様５１］
弱毒生変異豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）及び担体を含むワクチン組成物であって、前記組成物は、ＰＥＤＶの変異株及びプロトタイプ株の両方によるチャレンジから豚を保護すること、及びＰＥＤＶ感染に関連する１つ以上の症状を予防または治療することが可能であり、保護の達成は、ＰＥＤＶ感染の症状である脱水、発熱、下痢、嘔吐、授乳能力の低下、生殖能力の低下、死亡のいずれかの予防または管理、及び体重減少もしくは体重増加失敗の予防または管理からなる群から選択されるエンドポイントによって決定され、前記ワクチン組成物に使用される前記ウイルスは、ＰＥＤＶ配列番号３９または配列番号５９と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である、ワクチン組成物。
［態様５２］
ＰＥＤＶによって子豚に引き起こされる疾患を治療または予防する方法であって、前記子豚が約１〜７日齢のときに、前記子豚に第１の用量の態様３９に記載のワクチン組成物を投与することと、任意選択的に、前記子豚が２〜５週齢のときに第２の用量の前記ワクチンを投与することと、を含む、方法。
［態様５３］
２つの用量が前記子豚に投与され、前記雌親豚は、種付け前にはワクチン接種されるが、分娩前にはワクチン接種されない、態様５２に記載の方法。
［態様５４］
１つの用量が前記子豚に投与され、前記雌親豚は、種付け前及び分娩前の両方にワクチン接種される、態様５２に記載の方法。
［態様５５］
ＰＥＤＶによって子豚に引き起こされる疾患を治療または予防する方法であって、最初に、分娩前または種付け前に前記子豚の母豚に態様３９に記載のワクチン組成物を投与することと、その後、前記ワクチン組成物の１つ以上の用量を出生後の前記子豚に投与することと、を含む、方法。
［態様５６］
ＰＥＤＶによって健康な豚に引き起こされる疾患を予防する方法であって、最初に、前記豚に態様３９に記載のワクチン組成物をワクチン接種することと、その後、さらなる用量の不活化ＰＥＤＶワクチンを年１回または分娩前に投与することと、を含む、方法。
［態様５７］
前記変異ＩＮＤＥＬ株は、３週齢の豚においてより毒性が高いが、７週齢の豚においてより毒性が低い、態様３０に記載の組成物。
［態様５８］
ＰＥＤＶによって健康な豚に引き起こされる疾患を予防する方法であって、最初に、３週齢の豚である前記豚にプロトタイプ弱毒生ＰＥＤＶワクチン組成物をワクチン接種することと、その後、７週齢以上の豚に態様３０に記載のワクチン組成物を２回目にワクチン接種することと、を含む、方法。
［態様５９］
ＰＥＤＶの弱毒化プロトタイプ継代株及び担体を含むワクチン組成物であって、前記ＰＥＤＶの株は、以下の位置に置換を有する１つ以上のタンパク質をコードする核酸配列を含む、ワクチン組成物：
配列番号５２の参照によって決定されるポリタンパク質１ａ／１ｂの８１４、１０７６、１５６４、１８９６、２３１０、２６００、３２４７、３４７３、または３５２２位；
配列番号５４の参照によって決定されるスパイクタンパク質の２５７、３２６、３７５、４９１、８８１、８８８、１２７７、１３３９、または１３５８位；
配列番号５５の参照によって決定されるＯＲＦ３の３９位以降の切断；
配列番号５６の参照によって決定されるエンベロープタンパク質の６９または６２位；
配列番号５７の参照によって決定される膜タンパク質の２０８位；
配列番号５８の参照によって決定されるヌクレオカプシドタンパク質の１４１、４１８、４２４、または４３９位。
［態様６０］
前記ＰＥＤＶの株は、以下の置換またはそれらの保存的変異体を含む、態様５９に記載のワクチン組成物：
配列番号５２の参照によって決定されるポリタンパク質１ａ／１ｂの８１４位のＶ、１０７６位のＡ、１５６４位のＦ、１８９６位のＩ、２３１０位のＨ、２６００位のＹ、３２４７位のＦ、３４７３位のＶ、または３５２２位のＲ；
配列番号５４の参照によって決定されるスパイクタンパク質の２５７位のＮ、３２６位のＩ、３７５位のＦ、４９１位のＹ、８８１位のＲ、８８８位のＲ、１２７７位のＦ、１３３９位のＴ、または１３５８位のＬ；
配列番号５５の参照によって決定されるＯＲＦ３の３９位以降の切断；
配列番号５６の参照によって決定されるエンベロープタンパク質の６９位のＩ；
配列番号５７の参照によって決定される膜タンパク質の２０８位のＴ；
配列番号５８の参照によって決定されるヌクレオカプシドタンパク質の１４１位のＬ、４１８位のＱ、４２４位のＮ、または４３９位のＩ。
［態様６１］
弱毒生プロトタイプ豚流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）及び担体を含むワクチン組成物であって、
前記組成物は、ＰＥＤＶの変異株及びプロトタイプ株の両方によるチャレンジから豚を保護すること、及びＰＥＤＶ感染に関連する１つ以上の症状を予防または治療することが可能であり、保護の達成は、ＰＥＤＶ感染の症状である脱水、発熱、下痢、嘔吐、授乳能力の低下、生殖能力の低下、死亡のいずれかの予防または管理、及び体重減少もしくは体重増加失敗の予防または管理からなる群から選択されるエンドポイントによって決定され、前記ウイルスは、態様６０に記載の株である、ワクチン組成物。
［態様６２］
ＰＥＤＶによって健康な豚に引き起こされる疾患を予防する方法であって、最初に、３週齢の豚である前記豚に態様５９に記載のプロトタイプ弱毒生ＰＥＤＶワクチン組成物をワクチン接種することと、その後、７週齢以上の豚に変異ＩＮＤＥＬウイルスのワクチン組成物を２回目にワクチン接種することと、を含む、方法。