【手続補正書】
【提出日】令和1年9月10日(2019.9.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数のＴ細胞レセプター(TCR)が
i) α鎖可変ドメインを含むα鎖と、TRBV5-1、5-3、5-4、5-5、5-6、5-7又は5-8遺伝子産物の１又は２以上を含まないβ鎖可変ドメインを含むβ鎖とを含んでなるTCRから本質的になり；
ii) １より多いTRAV遺伝子産物及び/又は１より多いTRBV遺伝子産物を含んでなり；
iii) 天然レパートリからのTRAV12-2遺伝子産物と天然レパートリからのTRBV6遺伝子産物とを含んでなるTCR及び天然レパートリからのTRAV21遺伝子産物と天然レパートリからのTRBV6遺伝子産物とを含んでなるTCRから本質的になるものでない
複数のTCRをディスプレイする粒子のライブラリ。
【請求項２】
β鎖可変ドメインがTRBV10-2遺伝子産物及びTRBV10-3遺伝子産物の一方又は両方を含まず、β鎖可変ドメインはTRBV2遺伝子産物及び/又はTRBV9遺伝子産物及び/又はTRBV14遺伝子産物を含んでも含まなくてもよく、β鎖可変ドメインはTRBV5遺伝子産物を含んでも含まなくてもよい、請求項１に記載のライブラリ。
【請求項３】
α鎖及び/又はβ鎖可変ドメインのCDR3配列が天然レパートリから得られるか、又はα鎖及び/又はβ鎖可変ドメインのCDR3配列が人工的に設計されたものである、請求項１又は２に記載のライブラリ。
【請求項４】
α及び/又はβ可変ドメインのフレームワーク領域、定常領域、CDR1、CDR2及び/又はCDR3配列が少なくとも１つの非天然変異を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のライブラリ。
【請求項５】
α鎖可変ドメイン及びβ鎖可変ドメインが単一ポリペプチド鎖としてディスプレイされる、請求項１〜４のいずれか１項に記載のライブラリ。
【請求項６】
TCRがα鎖の定常領域とβ鎖の定常領域との間の非天然型ジスルフィド結合を含んでなるか、又はTCRがα鎖の定常領域とβ鎖の定常領域との間の天然型ジスルフィド結合を含んでなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載のライブラリ。
【請求項７】
粒子がファージ粒子、リボソーム、酵母細胞又は哺乳動物細胞である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のライブラリ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のライブラリから得られる、α鎖可変ドメイン及びβ鎖可変ドメインを含んでなり、可溶性であってもなくてもよい、単離された非天然Ｔ細胞レセプター(TCR)。
【請求項９】
ペプチド抗原に特異的に結合するTCRを同定するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載のライブラリの使用。
【請求項１０】
ペプチド抗原を用いて、請求項１〜７のいずれか１項に記載のライブラリをスクリーニングすることを含んでなり、
ａ) 標的としてペプチド抗原を用いて、ライブラリをパニングし；
ｂ) 工程ａ)を１回又は２回以上繰り返し；
ｃ) 工程ａ)又はｂ)で同定したファージクローンをスクリーニングし；そして
ｄ) ペプチド抗原に特異的に結合するTCRを同定する
ことを含んでなる、ペプチド抗原に特異的に結合するＴ細胞レセプターを取得する方法。
【請求項１１】
請求項８に記載のTCRのα鎖可変ドメイン及び/又はβ鎖可変ドメインをコードする核酸。
【請求項１２】
i) 異なるTRAV α鎖可変ドメインをコードする複数の核酸を取得し；
ii) 異なるTRBV β鎖可変ドメインをコードする複数の核酸(ただし、TRBV5-1、5-3、5-4、5-5、5-6、5-7又は5-8 β鎖可変ドメインの１又は２以上をコードする核酸を除き、場合により、TRBV10-2、TRBV10-3、TRBV2、TBVB9及び/又はTRBV14遺伝子産物の１つ又は２以上をコードする核酸を除き、場合により、TRBV5遺伝子産物をコードする核酸を除く)を取得し；
iii) TRAV α鎖可変ドメインをコードする核酸を発現ベクターにクローニングし；
iv) TRBV β鎖可変ドメインをコードする核酸を同じ又は異なるベクターにクローニングし；そして
v) ベクターを粒子において発現させることにより、前記核酸がコードするα鎖可変ドメイン及びβ鎖可変ドメインを含んでなるTCRから本質的になるライブラリを作製する
ことを含んでなる、複数の異なるTCRをディスプレイする粒子のライブラリを製造する方法。
【請求項１３】
i) TRAV α鎖可変ドメインをコードする核酸にハイブリダイズするプライマーを用いて、異なるTRAV α鎖可変ドメインをコードする複数の核酸を取得し；
ii) TRBV β鎖可変ドメインをコードする核酸にハイブリダイズするプライマー(ただし、TRBV5-1、5-3、5-4、5-5、5-6、5-7又は5-8 β鎖可変ドメインをコードする１又は２以上の核酸にハイブリダイズするプライマーを除き、場合により、TRBV10-2及びTRBV10-3 β鎖可変ドメインをコードする核酸の一方又は両方にハイブリダイズするプライマーを除き、場合により、TRBV2及び/又はTRBV9及び/又はTRBV14 β鎖可変ドメインの１又は２以上をコードする核酸にハイブリダイズするプライマーを除き、場合により、TRBV5 β鎖可変ドメインをコードする核酸にハイブリダイズするプライマーを除く)を用いて、異なるTRBV β鎖可変ドメインをコードする複数の核酸を取得し；
iii) TRAV α鎖可変ドメインをコードする核酸を発現ベクターにクローニングし；
iv) TRBV β鎖可変ドメインをコードする核酸を同じ又は異なるベクターにクローニングし；そして
v) ベクターを粒子において発現させることにより、前記プライマーがハイブリダイズする核酸がコードするα鎖可変ドメイン及びβ鎖可変ドメインを含んでなるTCRから本質的になるライブラリを作製する
ことを含んでなる、複数の異なるTCRをディスプレイする粒子のライブラリを製造する方法。
【請求項１４】
工程(i)及び/又は工程(ii)のTRAV遺伝子産物又はTRVB遺伝子産物をコードする複数の核酸の各々の全て又は一部、例えば、可変ドメイン、フレームワーク領域、CDR1、CDR2及び/又はCDR3の全ての又は一部が合成により得られ、及び/又は人工的に設計されたものである、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
工程(i)及び工程(ii)の核酸のうち少なくともCDR3配列が天然レパートリから得られるものである、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
１又は２以上の核酸に非天然変異を導入することを含んでなり、非天然変異が工程iii)の前に１又は２以上の核酸に導入されてもされなくてもよい、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
TCR α鎖可変ドメイン及びTCR β鎖可変ドメインが単鎖ポリペプチドとして発現される、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
ペプチド抗原を用いて、請求項１〜７のいずれか１項に記載のライブラリをスクリーニングすることを含んでなり、ペプチド抗原はHLA-A2又はHLA-A3を含んでも含まなくてもよい、ペプチド抗原に特異的に結合するＴ細胞レセプターを取得する方法。
【請求項１９】
ファージ粒子、リボソーム、酵母細胞又は哺乳動物細胞であってもなくてもよい、請求項８に記載のTCRを表面にディスプレイする粒子。