【手続補正書】
【提出日】平成31年3月25日(2019.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
目的の多重特異性抗体（ＭＡＩ）の精製方法であって、前記ＭＡＩが第１重鎖可変領域を含む第１重鎖ポリペプチド及び第２重鎖可変領域を含む第２重鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体を含み、前記第１及び前記第２可変領域が異なる抗原特異性及び異なる等電点を有し、
ｉ）前記ＭＡＩ、前記第１重鎖ポリペプチドの少なくとも１つのコピーまたは前記第１重鎖ポリペプチドの少なくとも２つのコピーのいずれかを含む第１親ホモ二量体抗体種、及び前記第２重鎖ポリペプチドの少なくとも１つのコピーまたは前記第２重鎖ポリペプチドの少なくとも２つのコピーのいずれかを含む第２親ホモ二量体抗体種を含む組成物を入手すること；ならびに
ｉｉ）前記ＭＡＩを前記第１及び前記第２親ホモ二量体抗体種から分離するクロマトグラフィーを実施すること；
を含み、
それによって前記ＭＡＩを精製する前記方法。
【請求項２】
ステップｉｉ）が
ａ．前記組成物をクロマトグラフィー材料と接触させてクロマトグラフィー材料−組成物複合物を形成すること；ならびに
ｂ．ｐＨ依存的に前記ＭＡＩ及び親ホモ二量体抗体種を溶出可能な溶離液のサンプルと前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を接触させる溶出ステップを実施すること；を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記溶離液がそれぞれ異なる負対数酸解離定数（ｐＫａ）を有する少なくとも２種の緩衝剤を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ｃ．前記溶出ステップを実施する前に前記溶離液の第１サンプル中、望ましい開始ｐＨで
ｉ）前記組成物；または
ｉｉ）前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物；
のいずれかを調製または平衡化すること；および／または
ｄ．望ましい終了ｐＨに調製された大量の前記溶離液の第２サンプルを前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物に流すことをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記溶離液が前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を流れるにつれてｐＨ勾配が発生する、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記ＭＡＩ、前記第１親ホモ二量体抗体種、及び前記第２親ホモ二量体抗体種が実質的に区別可能な溶出体積で前記クロマトグラフィー材料から溶出する、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記溶離液が
次の緩衝剤：Ｎシクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＨＥＰＰＳＯ）、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、３−（Ｎ−モルホリニル）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、酢酸、及びギ酸の
少なくとも２つ；
少なくとも３つ；
少なくとも４つ；
少なくとも５つ；
少なくとも６つ；
少なくとも７つ；もしくは
８つ；または
次の緩衝剤：メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンの
少なくとも２つ；
少なくとも３つ；
少なくとも４つ；
少なくとも５つ；もしくは
少なくとも６つ；
のいずれかを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記溶離液が次のイミダゾール、ピペラジンまたはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）のいずれも含まないという条件の、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記溶離液がＮａＣｌ、ＫＣｌ、及びＮａ２ＳＯ４からなる群から選択される少なくとも１つの塩を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記異なる等電点が、実際の等電点または計算等電点であり、
ａ．前記第１重鎖ポリペプチドの実際の等電点及び前記第２重鎖ポリペプチドの実際の等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０ｐＨ単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；
ｂ．前記第１親ホモ二量体種の実際の等電点及び前記第２親ホモ二量体種の実際の等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０ｐＨ単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；
ｃ．前記第１重鎖ポリペプチドの計算等電点及び前記第２重鎖ポリペプチドの計算等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０ｐＨ単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；または
ｄ．前記第１親ホモ二量体種の計算等電点及び前記第２親ホモ二量体種の計算等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０ｐＨ単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；
のいずれかである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
（ｉ）前記望ましい開始ｐＨが、９．０未満；８．５未満；８．０未満；７．５未満；７．０未満；６．５未満；６．０未満；５．５未満；５．０未満；４．５未満；４．０未満；３．５未満；もしくは３．０未満；または前述の値のいずれかの間のｐＨ値である；及び／または（ｉｉ）前記望ましい終了ｐＨが、７．０超；７．５超；８．０超；８．５超；９．０超；９．５超；１０．０超；１０．５超；もしくは１１．０超；１１．５超；１２．０超；１２．５超；１３．０超；１３．５超；または前述の値のいずれかの間のｐＨ値である、請求項４に記載の方法。
【請求項１２】
前記溶離液が少なくとも２種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数（ｐＫａ）が約３〜１１である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＭＡＩが、（ｉ）第１軽鎖可変領域を含む第３ポリペプチドをさらに含む；または（ｉｉ）第３ポリペプチド及び第４ポリペプチドをさらに含み、そのそれぞれが第２軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドそれぞれが、
（ｉ）野生型Ｆｃ領域；
（ｉｉ）ＩｇＧ１アイソタイプＦｃ領域、ＩｇＧ２アイソタイプＦｃ領域、ＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域、またはＩｇＧ４アイソタイプＦｃ領域；および／または
（ｉｉｉ）前記第１親ホモ二量体抗体種、前記第２親ホモ二量体抗体種、または前記ＭＡＩのｐＩを変化させるために改変されてはいないＦｃ領域
から選択されるＦｃ領域をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
（ｉ）前記ＭＡＩが天然抗体型であるか；少なくとも前記第１親ホモ二量体抗体種が天然型であるか；少なくとも前記第２親ホモ二量体抗体種が天然型であるか；前記第１親ホモ二量体抗体種が天然型であり、かつ、前記第２親ホモ二量体抗体種が天然型であるか；または前記ＭＡＩが天然抗体型であり、前記第１親ホモ二量体抗体種が天然型であり、かつ、前記第２親ホモ二量体抗体種が天然型である；および／または
（ｉｉ）前記ＭＡＩが、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、もしくはＩｇＧ４型であるか；前記第１親ホモ二量体抗体種が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、もしくはＩｇＧ４型であるか；前記第２親ホモ二量体抗体種が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、もしくはＩｇＧ４型であるか；前記第１親ホモ二量体抗体種及び前記第２親ホモ二量体抗体種が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、もしくはＩｇＧ４型であるか；または前記ＭＡＩ、前記第１親ホモ二量体抗体種及び前記第２親ホモ二量体抗体種が、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、もしくはＩｇＧ４型であるか；またはハイブリッド型である、
のいずれかである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記溶離液のイオン強度が前記溶出ステップの間中実質的に同じままである、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記クロマトグラフィーがイオン交換クロマトグラフィーである、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１重鎖ポリペプチド及び前記第２重鎖ポリペプチドをコードする核酸配列を発現する原核宿主細胞または真核宿主細胞から前記組成物が得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
（ｉ）ＣＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＴＡＰＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、酢酸、ギ酸、及び塩；または
（ｉｉ）メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンならびに塩；
のいずれかを含み、前記塩がＮａＣｌ、ＫＣｌ及びＮａ２ＳＯ４からなる群から選択される、イオン交換溶離液。
【請求項２０】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、ピペラジン、またはイミダゾールを含まないという条件の、請求項１９に記載のイオン交換溶離液。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４４６】
本発明の特定の実施形態を例示の目的で上記したが、添付の特許請求の範囲に記載の本発明から逸脱することなく、詳細に対する多数の変形形態が可能であることが当業者によって理解されよう。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
目的の多重特異性抗体（ＭＡＩ）の精製方法であって、前記ＭＡＩが第１重鎖（ＨＣ）可変領域を含む第１重鎖ポリペプチド及び第２ＨＣ可変領域を含む第２重鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体を含み、前記第１及び前記第２可変領域が異なる抗原特異性及び異なる等電点を有し、
ｉ）前記ＭＡＩ、前記第１重鎖ポリペプチドの少なくとも１つのコピーまたは前記第１重鎖ポリペプチドの少なくとも２つのコピーのいずれかを含む第１親ホモ二量体抗体種、及び前記第２重鎖ポリペプチドの少なくとも１つのコピーまたは前記第２重鎖ポリペプチドの少なくとも２つのコピーのいずれかを含む第２親ホモ二量体抗体種を含む組成物を入手すること；ならびに
ｉｉ）前記ＭＡＩを前記第１及び前記第２親ホモ二量体抗体種から分離するクロマトグラフィーを実施すること；
を含み、
それによって前記ＭＡＩを精製する前記方法。
（項目２）
前記実施ステップｉｉ）が
ａ．前記組成物をクロマトグラフィー材料と接触させて組成物−クロマトグラフィー材料複合物を形成すること；ならびに
ｂ．ｐＨ依存的に前記ＭＡＩ及び親ホモ二量体抗体種を溶出可能な溶離液のサンプルと前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を接触させる溶出ステップを実施すること；を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記溶離液がそれぞれ異なる負対数酸解離定数（ｐＫａ）を有する少なくとも２種の緩衝剤を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記溶出ステップを実施する前に前記溶離液の第１サンプル中、望ましい開始ｐＨで
ｉ）前記組成物；または
ｉｉ）前記組成物−クロマトグラフィー材料複合物；
のいずれかを調製または平衡化することをさらに含む、項目２または項目３に記載の方法。
（項目５）
望ましい終了ｐＨに調製された大量の前記溶離液の第２サンプルを前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物に流すことをさらに含む、項目２〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記溶離液が前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を流れるにつれてｐＨ勾配が発生する、項目２〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記溶離液が前記クロマトグラフィー材料−組成物複合物を流れるにつれてｐＨ勾配が発生し、前記ｐＨ勾配が
（ｉ）リニアｐＨ勾配段階の前のステップｐＨ勾配段階；
（ｉｉ）リニア勾配段階の後のステップｐＨ勾配段階；
（ｉｉｉ）ステップｐＨ勾配段階を伴わないリニアｐＨ勾配段階、少なくとも１つのリニアｐＨ勾配段階；または
（ｉｖ）実質的にリニアなｐＨ勾配段階；
を含む、項目２〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記ＭＡＩ、前記第１親ホモ二量体抗体種、及び前記第２親ホモ二量体抗体種が実質的に区別可能な溶出体積で前記クロマトグラフィー材料から溶出する、項目２〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記溶離液が
次の緩衝剤：Ｎシクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＨＥＰＰＳＯ）、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、３−（Ｎ−モルホリニル）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、酢酸、及びギ酸の
少なくとも２つ；
少なくとも３つ；
少なくとも４つ；
少なくとも５つ；
少なくとも６つ；
少なくとも７つ；もしくは
８つ；または
次の緩衝剤：メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンの
少なくとも２つ；
少なくとも３つ；
少なくとも４つ；
少なくとも５つ；もしくは
少なくとも６つ；
のいずれかを含む、項目２〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記溶離液が（ｉ）ＣＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＴＡＰＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、酢酸、及びギ酸；または
（ｉｉ）メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンのいずれかを含む、項目２〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記溶離液が
次の緩衝剤：Ｎシクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）（ＨＥＰＰＳＯ）、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、３−（Ｎ−モルホリニル）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、酢酸、及びギ酸の
少なくとも２つ；
少なくとも３つ；
少なくとも４つ；
少なくとも５つ；
少なくとも６つ；
少なくとも７つ；または
８つ；
を含むが、ただし、前記溶離液が次のイミダゾール；ピペラジン；トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）のいずれも含まない、項目２〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記溶離液が（ｉ）ＣＡＰＳ；ＣＨＥＳ；ＴＡＰＳ；ＨＥＰＰＳＯ；ＭＯＰＳＯ；ＭＥＳ；酢酸；及びギ酸；ならびに任意により少なくとも１つの塩；または
（ｉｉ）メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも１つの塩から本質的になる、項目２〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記溶離液が（ｉ）ＣＡＰＳ；ＣＨＥＳ；ＴＡＰＳ；ＨＥＰＰＳＯ；ＭＯＰＳＯ；ＭＥＳ；酢酸；及びギ酸；ならびに少なくとも１つの塩；または
（ｉｉ）メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも１つの塩ならびに任意により少なくとも１つの塩からなる、項目２〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記溶離液がＮａＣｌ、ＫＣｌ、及びＮａ２ＳＯ４からなる群から選択される少なくとも１つの塩を含む、項目２〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記溶離液の各サンプルが０ｍＭ〜約１００ｍＭ；０ｍＭ〜約６０ｍＭ；０ｍＭ〜約５０ｍＭ；０ｍＭ〜約４０ｍＭ；０ｍＭ〜約３０ｍＭ；０ｍＭ〜約２０ｍＭ；０ｍＭ〜約１０ｍＭ；０ｍＭ〜約５ｍＭ；約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ；約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ；約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ；約１０ｍＭ〜約４０ｍＭ；約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ；約１０ｍＭ〜約２０ｍＭ；約２０ｍＭ〜約２００ｍＭ；約２０ｍＭ〜約１００ｍＭ；約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ；約２０ｍＭ〜約３０ｍＭ；約３０ｍＭ〜約２００ｍＭ；約３０ｍＭ〜約１００ｍＭ；及び約３０ｍＭ〜約５０ｍＭ；ならびに約５ｍＭ〜約１５ｍＭからなる群から選択される濃度範囲で少なくとも１つの塩を含む、項目２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記溶離液の各サンプルが約１０ｍＭの濃度で少なくとも１つの塩を含む、項目２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記溶離液の各サンプルが約１０ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む、項目２〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
ａ．前記第１重鎖ポリペプチドの実際の等電点及び前記第２重鎖ポリペプチドの実際の等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；
ｂ．前記第１親ホモ二量体種の実際の等電点及び前記第２親ホモ二量体種の実際の等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；
ｃ．前記第１重鎖ポリペプチドの計算等電点及び前記第２重鎖ポリペプチドの計算等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；または
ｄ．前記第１親ホモ二量体種の計算等電点及び前記第２親ホモ二量体種の計算等電点の差が、７．０ｐＨ単位未満；６．５ｐＨ単位未満；６．０ｐＨ単位未満；５．５ｐＨ単位未満；５．０ｐＨ単位未満；４．５ｐＨ単位未満；４．０単位未満；３．５ｐＨ単位未満；２．５ｐＨ単位未満；２．４ｐＨ単位未満；２．３ｐＨ単位未満；２．２ｐＨ単位未満；２．１ｐＨ単位未満；２．０ｐＨ単位未満；１．９ｐＨ単位未満；１．８ｐＨ単位未満；１．７ｐＨ単位未満；１．６ｐＨ単位未満；１．５ｐＨ単位未満；１．４ｐＨ単位未満；１．３ｐＨ単位未満、１．２ｐＨ単位未満；１．１ｐＨ単位未満；１．０ｐＨ単位未満；０．９５ｐＨ単位未満；０．９０ｐＨ単位未満；０．８５ｐＨ単位未満；０．８０ｐＨ単位未満；０．７５ｐＨ単位未満；０．７０ｐＨ単位未満；０．６５ｐＨ単位未満；０．６０ｐＨ単位未満；０．５５ｐＨ単位未満；０．５０ｐＨ単位未満；０．４５ｐＨ単位未満；０．４０ｐＨ単位未満；０．３５ｐＨ単位未満；０．３０ｐＨ単位未満；０．２５ｐＨ単位未満；０．２０ｐＨ単位未満；０．１５ｐＨ単位未満；０．１４ｐＨ単位未満；０．１３ｐＨ単位未満；０．１２ｐＨ単位未満；０．１１ｐＨ単位未満；０．１０ｐＨ単位未満；０．０９ｐＨ単位未満；０．０８ｐＨ単位未満；０．０７ｐＨ単位未満；０．０６ｐＨ単位未満；０．０４ｐＨ単位未満；０．０３ｐＨ単位未満；０．０２５ｐＨ単位未満；０．０２ｐＨ単位未満；もしくは前述の値のいずれかの間のｐＨ値であるか；
のいずれかである、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記望ましい開始ｐＨが、９．０未満；８．５未満；８．０未満；７．５未満；７．０未満；６．５未満；６．０未満；５．５未満；５．０未満；４．５未満；４．０未満；３．５未満；もしくは３．０未満；または前述の値のいずれかの間のｐＨ値である、項目４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記望ましい終了ｐＨが、７．０超；７．５超；８．０超；８．５超；９．０超；９．５超；１０．０超；１０．５超；もしくは１１．０超；１１．５超；１２．０超；１２．５超；１３．０超；１３．５超；または前述の値のいずれかの間のｐＨ値である、項目５〜１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記溶離液が少なくとも２種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数（ｐＫａ）が約３〜１１である、項目２〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記溶離液が少なくとも２種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数（ｐＫａ）が、約３．２５〜約３．８５；約４．５〜約４．８５；約６．０〜約６．４５；約６．６０〜約７．０；約７．５〜約８．１５；約８．３５〜約８．５５；約９．２５〜約９．６５；及び約１０．００〜約１１．５からなる群から選択される範囲にある、項目２〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記溶離液が少なくとも２種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数（ｐＫａ）が、約３．２５〜約３．８５；約４．５〜約４．８５；約６．０〜約６．４５；約６．６０〜約７．０；約７．５〜約８．１５；約８．３５〜約８．５５；約９．２５〜約９．６５；及び約１０．００〜約１１．５からなる群から選択される異なる範囲にある、項目２〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記溶離液が少なくとも２種の緩衝剤を含み、各緩衝剤の酸解離定数（ｐＫａ）が、約３．７５；約４．７６；約６．１０；約６．９０；約８．０４；約８．４４；約９．３９；及び約１０．５０からなる群から選択される、項目２〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記ＭＡＩが第１軽鎖可変領域を含む第３ポリペプチドをさらに含む、項目１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記ＭＡＩが第３ポリペプチド及び第４ポリペプチドをさらに含み、前記第３ポリペプチド及び前記第４ポリペプチドのそれぞれが第２軽鎖可変領域を含む、項目１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記第１軽鎖可変領域及び前記第２軽鎖可変領域が同一である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記第３ポリペプチド及び前記第４ポリペプチドが同一である、項目２６または項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドそれぞれがＦｃ領域をさらに含む、項目１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドそれぞれが野生型Ｆｃ領域をさらに含む、項目１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドそれぞれがＩｇＧ１アイソタイプＦｃ領域、ＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域、ＩｇＧ３アイソタイプＦｃ領域、またはＩｇＧ４アイソタイプＦｃ領域をさらに含む、項目１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドそれぞれがＩｇＧ１アイソタイプＦｃ領域をさらに含む、項目１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドそれぞれが、前記第１親ホモ二量体抗体種、前記第２親ホモ二量体種、または前記ＭＡＩのｐＩを変化させるために改変されてはいないＦｃ領域をさらに含む、項目１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドそれぞれが、前記第１親ホモ二量体抗体種、前記第２親ホモ二量体種、または前記ＭＡＩのｐＩを変化させるために改変されてはいないＩｇＧ１アイソタイプＦｃ領域をさらに含む、項目１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
前記ＭＡＩが天然抗体型であるか；少なくとも前記第１親ホモ二量体抗体種が天然型であるか；少なくとも前記第２親ホモ二量体抗体種が天然型であるか；前記第１親ホモ二量体抗体種が天然型であり、かつ、前記第２親ホモ二量体抗体種が天然型であるか；または前記ＭＡＩが天然抗体型であり、前記第１親ホモ二量体抗体種が天然型であり、かつ、前記第２親ホモ二量体抗体種が天然型であるかのいずれかである、項目１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
前記ＭＡＩ；前記第１親ホモ二量体抗体種；前記第２親ホモ二量体抗体種；前記第１親ホモ二量体抗体種及び前記第２親ホモ二量体抗体種；または前記ＭＡＩ、前記第１親ホモ二量体抗体種及び前記第２親ホモ二量体抗体種が、ＩｇＧ１型、及びＩｇＧ２型、及びＩｇＧ３型、もしくはＩｇＧ４型であるか；またはハイブリッド型であるかのいずれかである、項目１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記クロマトグラフィーが実質的に同じイオン強度で実施される、項目１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
前記溶離液のイオン強度が前記溶出ステップの間中実質的に同じままである、項目２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目３９）
前記溶離液の前記第１サンプル及び前記溶離液の前記第２サンプルがそれぞれ実質的に同じイオン強度を有する、項目４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
前記クロマトグラフィーがイオン交換クロマトグラフィーである、項目１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
（項目４１）
前記クロマトグラフィーが、カチオン交換クロマトグラフィー；アニオン交換クロマトグラフィー；多モードクロマトグラフィー；及び混合モードクロマトグラフィーからなる群から選択される、項目１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
前記クロマトグラフィーが項目２〜４１からなる群から選択されるクロマトグラフィー材料を用いることをさらに含み、前記クロマトグラフィー材料が、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｓ、Ｓａｒｔｏｂｉｎｄ  Ｓ、Ｓ０３  Ｍｏｎｏｌｉｔｈ、Ｓ  Ｃｅｒａｍｉｃ  ＨｙｐｅｒＤ、Ｐｏｒｏｓ  ＸＳ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＳ５０、Ｐｏｒｏｓ  ＨＳ２０、ＨＳ２０、ＳＰＳＦＦ、Ｐｏｒｏｒｓ  ＧｏＰｕｒｅ  ＨＳ、Ｐｏｒｏｓ  ＧｏＰｕｒｅ  ＸＳ、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＸＬ  （ＳＰＸＬ）、ＣＭ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ、Ｃａｐｔｏ  Ｑ  ＩｍｐＲｅｓ、Ｃａｐｔｏ  ＳＰ  ＩｍｐＲｅｓ、Ｃａｐｔｏ  Ｓ、Ｃａｐｔｏ  ＭＭＣ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  Ｓｅ  ＨｉＣａｐ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  Ｓ０３、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＣＯＯ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＱ  ５０、Ｐｏｒｏｓ  ＰＩ  ５０、Ｐｏｒｏｓ  Ｄ、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｑ、Ｑ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ、ＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ、ＵＮＯｓｈｅｒｅ  Ｓ、Ｍａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ  Ｈｉｇｈ  Ｓ、ＤＥＡＥ、Ｍｏｎｏ  Ｓ、Ｍｏｎｏ  Ｓ  ５／５０  ＧＬ、Ｍｏｎｏ  Ｑ、Ｍｏｎｏ  Ｑ  ５／５０  ＧＬ、Ｍｏｎｏ  Ｓ  １０／１００  ＧＬ、ＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰ、Ｓｏｕｒｃｅ  ３０Ｓ、Ｐｏｒｏｓ  ＸＱ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＱ、Ｑ  ＨＰ、及びＳｏｕｒｃｅ  ３０Ｑからなる群から選択される、項目１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記クロマトグラフィーが、Ｍｏｎｏ  Ｓ、Ｍｏｎｏ  Ｓ  ５／５０  ＧＬ、Ｍｏｎｏ  Ｑ、Ｍｏｎｏ  Ｑ  ５／５０  ＧＬ、ＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰ、Ｓｏｕｒｃｅ  ３０Ｓ、Ｐｏｒｏｓ  ＸＱ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＱ、Ｑ  ＨＰ、及びＳｏｕｒｃｅ  ３０Ｑ、及びＭｏｎｏ  Ｓ  １０／１００  ＧＬからなる群から選択されるクロマトグラフィー材料を用いることをさらに含む、項目１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
前記クロマトグラフィー材料がイオン交換クロマトグラフィー材料である、項目２〜４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４５）
前記クロマトグラフィー材料が、カチオン交換クロマトグラフィー材料；アニオン交換クロマトグラフィー材料；多モードクロマトグラフィー材料；及び混合モードクロマトグラフィー材料からなる群から選択される、項目２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記イオン交換クロマトグラフィー材料が
Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｓ、Ｓａｒｔｏｂｉｎｄ  Ｓ、Ｓ０３  Ｍｏｎｏｌｉｔｈ、Ｓ  Ｃｅｒａｍｉｃ  ＨｙｐｅｒＤ、Ｐｏｒｏｓ  ＸＳ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＳ５０、Ｐｏｒｏｓ  ＨＳ２０、ＨＳ２０、ＳＰＳＦＦ、Ｐｏｒｏｒｓ  ＧｏＰｕｒｅ  ＨＳ、Ｐｏｒｏｓ  ＧｏＰｕｒｅ  ＸＳ、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＸＬ  （ＳＰＸＬ）、ＣＭ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ、Ｃａｐｔｏ  Ｑ  ＩｍｐＲｅｓ、Ｃａｐｔｏ  ＳＰ  ＩｍｐＲｅｓ、Ｃａｐｔｏ  Ｓ、Ｃａｐｔｏ  ＭＭＣ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  Ｓｅ  ＨｉＣａｐ、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  Ｓ０３、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＣＯＯ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＱ  ５０、Ｐｏｒｏｓ  ＰＩ  ５０、Ｐｏｒｏｓ  Ｄ、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｑ、Ｑ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ、ＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ、ＵＮＯｓｈｅｒｅ  Ｓ、Ｍａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ  Ｈｉｇｈ  Ｓ、ＤＥＡＥ、Ｍｏｎｏ  Ｓ、Ｍｏｎｏ  Ｓ  ５／５０  ＧＬ、Ｍｏｎｏ  Ｑ、Ｍｏｎｏ  Ｑ  ５／５０  ＧＬ、Ｍｏｎｏ  Ｓ  １０／１００  ＧＬ、ＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰ、Ｓｏｕｒｃｅ  ３０Ｓ、Ｐｏｒｏｓ  ＸＱ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＱ、Ｑ  ＨＰ、及びＳｏｕｒｃｅ  ３０Ｑからなる群から選択されるか；または
Ｍｏｎｏ  Ｓ、Ｍｏｎｏ  Ｓ  ５／５０  ＧＬ、Ｍｏｎｏ  Ｑ、Ｍｏｎｏ  Ｑ  ５／５０  ＧＬ、ＳＰ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＨＰ、Ｓｏｕｒｃｅ  ３０Ｓ、Ｐｏｒｏｓ  ＸＱ、Ｐｏｒｏｓ  ＨＱ、Ｑ  ＨＰ、及びＳｏｕｒｃｅ  ３０Ｑ、及びＭｏｎｏ  Ｓ  １０／１００  ＧＬからなる群から選択される、項目２〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記第１重鎖可変領域または前記第２重鎖可変領域のいずれかが、固有の重鎖可変領域を含む第１ライブラリーから第１抗原に対して第１選別を実施することによって得られる、項目１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
前記第１重鎖可変領域及び前記第２重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第１ライブラリーから第１抗原に対して第１選別を実施することによって得られる、項目１〜４７のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
前記第１重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第１ライブラリーから第１抗原に対して第１選別を実施することによって得られ、前記第２重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第２ライブラリーから第２抗原に対して第２選別を実施することによって得られる、項目１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
前記第１重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第１ライブラリーから第１抗原に対して第１選別を実施することによって得られ、前記第２重鎖可変領域が、固有の重鎖可変領域を含む第２ライブラリーから第２抗原に対して第２選別を実施することによって得られる、項目１〜４９のいずれか１項に記載の方法。
（項目５１）
前記ライブラリーの少なくとも１つが、少なくとも１つの軽鎖をさらに含む、項目１〜５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目５２）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドをコードする核酸配列それぞれが導入された原核宿主細胞または真核宿主細胞によって前記組成物が発現される、項目１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目５３）
前記第１ポリペプチド及び前記第２ポリペプチドをコードする核酸配列それぞれが導入された原核宿主細胞または真核宿主細胞によって前記組成物が発現される、項目２５〜５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目５４）
前記第１ポリペプチド、前記第２ポリペプチド、前記第３ポリペプチド、及び前記第４ポリペプチドをコードする核酸配列それぞれが導入された原核宿主細胞または真核宿主細胞によって前記組成物が発現される、項目２６〜５３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５５）
各コードされたポリペプチドが前記宿主細胞によって発現される、項目５２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
前記組成物が前記宿主細胞によって発現される、項目５２〜５５のいずれか１項に記載の方法。
（項目５７）
実質的にすべての宿主細胞が、第１ポリペプチド、第２ポリペプチド、第３ポリペプチド、及び第４ポリペプチドで形質転換または形質移入されている、項目５２〜５６のいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
実質的にすべての宿主細胞が、前記ＭＡＩ、前記第１親抗体種及び前記第２親抗体種を発現する、項目５２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
（項目５９）
前記宿主細胞が、真核細胞；真菌細胞；酵母細胞；昆虫細胞；哺乳類細胞；Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞；Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞；哺乳類細胞；ＣＯＳ細胞；ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞；及びＣＨＯ細胞からなる群から選択される、項目５２〜５８のいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
（ｉ）ＣＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＴＡＰＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、酢酸、ギ酸、及び塩；または
（ｉｉ）メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも１つの塩；
のいずれかを含むイオン交換溶離液。
（項目６１）
ＣＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＴＡＰＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、酢酸、ギ酸、及びＮａＣｌを含むイオン交換溶離液。
（項目６２）
ＴＲＩＳ、ピペラジン、またはイミダゾールを含まないという条件の、項目６０または項目６１に記載のイオン交換溶離液。
（項目６３）
（ｉ）ＣＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＴＡＰＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、酢酸、ギ酸、及び塩；または
（ｉｉ）（ｉｉ）メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも１つの塩；
のいずれかから本質的になるイオン交換溶離液。
（項目６４）
（ｉ）ＣＡＰＳ、ＣＨＥＳ、ＴＡＰＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＭＯＰＳＯ、ＭＥＳ、酢酸、ギ酸、及び塩；または
（ｉｉ）メチルアミン、１，２−エタンジアミン、１−メチルピペラジン、１，４−ジメチルピペラジン、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−１，３−ジオール（ビス−トリス）、及びヒドロキシルアミンならびに任意により少なくとも１つの塩；
のいずれかからなるイオン交換溶離液。
（項目６５）
前記塩がＮａＣｌ、ＫＣｌ、またはＮａ２ＳＯ４からなる群から選択される、項目６１〜６４のいずれか１項に記載のイオン交換溶離液。
（項目６６）
ＭＡＩ及び親ホモ二量体抗体種を含む組成物から前記ＭＡＩを精製するために用いられる、項目６０〜６５のいずれか１項に記載のイオン交換溶離液。
（項目６７）
０ｍＭ〜約１００ｍＭ；０ｍＭ〜約６０ｍＭ；０ｍＭ〜約５０ｍＭ；０ｍＭ〜約４０ｍＭ；０ｍＭ〜約３０ｍＭ；０ｍＭ〜約２０ｍＭ；０ｍＭ〜約１０ｍＭ；０ｍＭ〜約５ｍＭ；約１０ｍＭ〜約２００ｍＭ；約１０ｍＭ〜約１００ｍＭ；約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ；約１０ｍＭ〜約４０ｍＭ；約１０ｍＭ〜約３０ｍＭ；約１０ｍＭ〜約２０ｍＭ；約２０ｍＭ〜約２００ｍＭ；約２０ｍＭ〜約１００ｍＭ；約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ；約２０ｍＭ〜約３０ｍＭ；約３０ｍＭ〜約２００ｍＭ；約３０ｍＭ〜約１００ｍＭ；及び約３０ｍＭ〜約５０ｍＭ；ならびに約５ｍＭ〜約１５ｍＭからなる群から選択される濃度範囲で少なくとも１つの塩を含む、項目６１〜６６のいずれか１項に記載のイオン交換溶離液。
（項目６８）
前記溶離液の各サンプルが約１０ｍＭの濃度で少なくとも１つの塩を含む、項目６１〜６７のいずれか１項に記載のイオン交換溶離液。
（項目６９）
前記塩がＮａＣｌである、項目６１〜６８のいずれか１項に記載のイオン交換溶離液。
（項目７０）
前記溶離液の各サンプルが約１０ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む、項目６１〜６９のいずれか１項に記載のイオン交換溶離液。