【手続補正書】
【提出日】令和1年11月7日(2019.11.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中のリソソーム酵素（ＬＥ）特異的中和因子を検出するための方法であって、
（ａ）体液試料を、検出部分と共役するリソソーム酵素と接触させて、前記体液試料中のＬＥ特異的中和因子を検出するステップであって、前記ＬＥ特異的中和因子及びリソソーム酵素検出部分が複合体を形成する、ステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記ＬＥ特異的中和因子／リソソーム酵素複合体を、カチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）を含む細胞と接触させるステップと、
（ｃ）前記細胞の内部または前記細胞の表面上において前記検出部分で標識された前記リソソーム酵素の存在を判定することにより、前記体液試料からＬＥ特異的中和因子の存在を判定するステップと、を含む、方法。
【請求項２】
前記体液試料が、対象からのものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、酵素補充療法を受けている、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
対象中のリソソーム酵素（ＬＥ）特異的中和因子の存在を判定するための方法であって、
（ａ）前記対象からの体液試料を、検出部分と共役するリソソーム酵素と接触させて、前記体液試料中のＬＥ特異的中和因子を検出するステップであって、前記ＬＥ特異的中和因子及びリソソーム酵素検出部分が複合体を形成する、ステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記ＬＥ特異的中和因子／リソソーム酵素複合体を、カチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）を含む細胞と接触させるステップと、
（ｃ）前記細胞の内部または前記細胞の表面上において前記検出部分で標識された前記リソソーム酵素を検出することにより、前記体液試料からＬＥ特異的中和因子の存在を判定するステップであって、少量の検出可能なＬＥ−検出部分共役体が、前記試料中のＬＥ特異的中和因子の存在を示す、ステップと、を含む、方法。
【請求項５】
前記体液試料及びリソソーム酵素−検出部分共役体を、細胞との接触前に、同じ溶液中で共に接触させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
対象中のリソソーム酵素（ＬＥ）特異的中和因子によるリソソーム酵素活性の阻害パーセントを判定するための方法であって、
（ａ）前記対象からの体液試料を、ＬＥ共役磁気ビーズと接触させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記ＬＥ特異的中和因子／ＬＥビーズを、検出部分と共役する前記リソソーム酵素を含む組成物と接触させて、ＬＥ特異的中和因子を検出するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）からのＬＥ特異的中和因子／ＬＥビーズ／リソソーム酵素を、カチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）を含む細胞と接触させるステップと、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）の組み合わせからＬＥ特異的中和因子の存在を判定し、捕捉されたＬＥ特異的中和因子のレベルを、既知量のＬＥ特異的中和抗体を有する対照試料と比較して、前記体液試料中の中和因子によるＬＥ活性の阻害パーセントを判定するステップと、を含む、方法。
【請求項７】
前記体液試料中のＬＥ特異的中和因子のレベルが、前記細胞の内部または前記細胞の表面上において前記検出部分で標識された前記リソソーム酵素の存在を判定することにより判定される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
対照と比較して前記体液試料の存在下での検出の低減したレベルが、前記体液試料がＬＥ取り込みを阻害する中和因子を含有することを示す、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記体液試料、リソソーム酵素−ビーズ共役体、及びリソソーム酵素−検出部分共役体を、細胞との接触前に、同じ溶液中で共に接触させる、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記体液試料、リソソーム酵素−ビーズ共役体、及びリソソーム酵素−検出部分共役体を、細胞との接触前に、少なくとも約６時間にわたり共に接触させる、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記リソソーム酵素−検出部分共役体のモル濃度が、前記リソソーム酵素−ビーズ共役体のモル濃度とほぼ同じであるかまたはこれより低い、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
前記リソソーム酵素−ビーズ共役体及びリソソーム酵素−検出部分共役体が、ほぼ等モル比で使用される、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
前記検出が、フローサイトメトリーによる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞が、Ｔ細胞である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記試料を、前記ＬＥ−検出部分共役体と、少なくとも約６時間にわたり接触させる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記試料を、少なくとも６時間にわたり約４℃で放置する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記試料を、前記細胞と、約３時間にわたり接触させる、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記試料を、少なくとも３時間にわたり約３７℃で放置する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記検出限界が、約５００ｎｇ／ｍＬ未満である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記検出限界が、約１００ｎｇ／ｍＬ未満である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記検出限界が、約１．７ｎｇ／ｍＬ〜約８．５ｎｇ／ｍＬである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
対象中のＬＥ特異的抗体を、ヒト、カニクイザル、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ラット、及びマウスからなる群から選択される種から検出することができる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記種が、ヒトである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記体液が、血清である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記リソソーム酵素が、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ｒｈＧＡＬＮＳ）、Ｎ−アセチル−グルコサミニダーゼ（Ｎａｇｌｕ）、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、及び酸性α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）からなる群から選択される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記リソソーム酵素が、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ｒｈＧＡＬＮＳ）である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記検出限界が、約４５μｇ／ｍＬ以下である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記検出部分が、フルオロフォアである、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記中和因子が、中和抗体である、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記中和因子が、中和抗体であり、前記検出部分が、フルオロフォアである、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
第１の洗浄ステップが、ステップ（ａ）後に行われ、第２の洗浄ステップが、ステップ（ｂ）後に行われる、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項５のステップ（ｃ）後に行われる洗浄ステップをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
本明細書において記載されている、各特性もしくは実施形態、または組み合わせは、本開示の態様のいずれかの非限定的な説明例であり、そのようなものとして、本明細書において記載されている、いずれかの他の特性もしくは実施形態、または組み合わせと組み合わせ可能であることを意味することが理解されている。例えば、特性が「１つの実施形態」、「いくつかの実施形態」、「さらなる実施形態」、「特定の例となる実施形態」、及び／または「別の実施形態」のような言葉で説明される場合、これらのタイプの実施形態の各々は、すべての可能な組み合わせを列挙する必要なく、本明細書において記載されている、いずれかの他の特性、または特性の組み合わせと組み合わされることを意図する特性の非限定的な例である。こうした特性または特性の組み合わせは、本開示の態様のいずれにも適用される。同様に、方法が、特定の特性により特徴付けられる、抗体のような、ポリペプチド結合剤を使用または同定することを説明する場合、それらの特性により特徴付けられるポリペプチド結合剤も、本開示により考慮される。範囲内に該当する値の例が開示される場合、これらの例のいずれも範囲の可能な端点として考慮され、こうした端点間のあらゆるすべての数値が考慮され、上及び下端点のあらゆるすべての組み合わせが想定される。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
試料中のリソソーム酵素（ＬＥ）特異的中和因子を検出するための方法であって、
（ａ）体液試料を、検出部分と共役するリソソーム酵素と接触させて、前記体液試料中のＬＥ特異的中和因子を検出するステップであって、前記ＬＥ特異的中和因子及びリソソーム酵素検出部分が複合体を形成する、ステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記ＬＥ特異的因子／リソソーム酵素複合体を、カチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）を含む細胞と接触させるステップと、
（ｃ）前記細胞の内部または前記細胞の表面上において前記検出部分で標識された前記リソソーム酵素の存在を判定することにより、前記体液試料からＬＥ特異的中和因子の存在を判定するステップと、を含む、方法。
（項目２）
前記体液試料が、対象からのものである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記対象が、酵素補充療法を受けている、項目２に記載の方法。
（項目４）
対象中のリソソーム酵素（ＬＥ）特異的中和因子の存在を判定するための方法であって、
（ａ）前記対象からの体液試料を、検出部分と共役するリソソーム酵素と接触させて、前記体液試料中のＬＥ特異的中和因子を検出するステップであって、前記ＬＥ特異的中和因子及びリソソーム酵素検出部分が複合体を形成する、ステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記ＬＥ特異的中和因子／リソソーム酵素複合体を、カチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）を含む細胞と接触させるステップと、
（ｃ）前記細胞の内部または前記細胞の表面上において前記検出部分で標識された前記リソソーム酵素を検出することにより、前記体液試料からＬＥ特異的中和因子の存在を判定するステップであって、少量の検出可能なＬＥ−検出部分共役体が、前記試料中のＬＥ特異的中和因子の存在を示す、ステップと、を含む、方法。
（項目５）
前記体液及びリソソーム酵素−検出部分共役体を、細胞との接触前に、同じ溶液中で共に接触させる、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
対象中のリソソーム酵素（ＬＥ）特異的中和因子によるリソソーム酵素活性の阻害パーセントを判定するための方法であって、
（ａ）前記対象からの体液試料を、ＬＥ共役磁気ビーズと接触させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）からの前記ＬＥ特異的中和因子／ＬＥビーズを、検出部分と共役する前記リソソーム酵素を含む組成物と接触させて、ＬＥ特異的中和因子を検出するステップと、
（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の組み合わせを、カチオン非依存性マンノース−６−リン酸受容体（ＣＩ−ＭＰＲ）を含む細胞と接触させるステップと、
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）の組み合わせからＬＥ特異的中和因子の存在を判定し、捕捉されたＬＥ特異的中和因子のレベルを、既知量のＬＥ特異的中和抗体を有する対照試料と比較して、前記体液試料中の中和因子によるＬＥ活性の阻害パーセントを判定するステップと、を含む、方法。
（項目７）
前記体液試料中のＬＥ特異的中和因子のレベルが、前記細胞の内部または前記細胞の表面上において前記検出部分で標識された前記リソソーム酵素の存在を判定することにより判定される、項目６に記載の方法。
（項目８）
対照と比較して前記体液試料の存在下での検出の低減したレベルが、前記体液試料がＬＥ取り込みを阻害する中和因子を含有することを示す、項目６に記載の方法。
（項目９）
前記体液、リソソーム酵素−ビーズ共役体、及びリソソーム酵素−検出部分共役体を、細胞との接触前に、同じ溶液中で共に接触させる、項目６に記載の方法。
（項目１０）
前記体液、リソソーム酵素−ビーズ共役体、及びリソソーム酵素−検出部分共役体を、細胞との接触前に、少なくとも約６時間にわたり共に接触させる、項目６に記載の方法。
（項目１１）
前記リソソーム酵素−検出部分共役体のモル濃度が、前記リソソーム酵素−ビーズ共役体のモル濃度とほぼ同じであるかまたはこれより低い、項目６に記載の方法。
（項目１２）
前記リソソーム酵素−ビーズ共役体及びリソソーム酵素−検出部分共役体が、ほぼ等モル比で使用される、項目６に記載の方法。
（項目１３）
前記検出が、フローサイトメトリーによる、項目１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記細胞が、Ｔ細胞である、項目１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記試料を、前記ＬＥ−検出部分共役体と、少なくとも約６時間にわたり接触させる、項目１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記試料を、少なくとも６時間にわたり約４℃で放置する、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記試料を、前記細胞と、約３時間にわたり接触させる、項目１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記試料を、少なくとも３時間にわたり約３７℃で放置する、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記検出限界が、約５００ｎｇ／ｍＬ未満である、項目１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記検出限界が、約１００ｎｇ／ｍＬ未満である、項目１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記検出限界が、約１．７ｎｇ／ｍＬ〜約８．５ｎｇ／ｍＬである、項目１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
対象中のＬＥ特異的抗体を、ヒト、カニクイザル、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ラット、及びマウスからなる群から選択される種から検出することができる、項目１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記種が、ヒトである、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記体液が、血清である、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記リソソーム酵素が、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ｒｈＧＡＬＮＳ）、Ｎ−アセチル−グルコサミニダーゼ（Ｎａｇｌｕ）、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、及び酸性α−グルコシダーゼ（ＧＡＡ）からなる群から選択される、項目１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記リソソーム酵素が、Ｎ−アセチルガラクトサミン６−スルファターゼ（ｒｈＧＡＬＮＳ）である、項目１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記検出限界が、約４５μｇ／ｍＬ以下である、項目１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記検出部分が、フルオロフォアである、項目１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記中和因子が、中和抗体である、項目１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記中和因子が、中和抗体であり、前記検出部分が、フルオロフォアである、項目１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
第１の洗浄ステップが、ステップ（ａ）後に行われ、第２の洗浄ステップが、ステップ（ｂ）後に行われる、項目１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
項目５のステップ（ｃ）後に行われる洗浄ステップを任意で含む、項目３１に記載の方法。