【手続補正書】
【提出日】平成19年12月20日(2007.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１の２４〜３６個の連続アミノ酸からなるＨＳＶ-２ペプチドを含む組成物。
【請求項２】
前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸５〜３２からなる配列を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなる配列を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ペプチドが、配列番号１の配列を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ペプチドが、二量化される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ペプチドが、ジスルフィド結合を介して二量化される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ペプチドが、キャリアに結合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記キャリアが、カルボキシル化されたマイクロスフィアである、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記キャリアが、カルボキシル化されたラテックス又は磁性マイクロスフィアである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ペプチドが、当該ペプチドのＮ末端又はＣ末端において、リンカーを介してキャリアに結合される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、当該ペプチドの内部アミノ酸残基においてリンカーを介してキャリアに結合される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１２】
前記リンカーが、異種ペプチドを含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記リンカーが、異種タンパク質からなる、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記リンカーが、異種タンパク質をさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記異種タンパク質が、ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記異種タンパク質が、キーホール・リンペット・ヘモシアニンである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記リンカーが、異種ペプチドからなる、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１８】
前記異種ペプチドが、１のシステイン残基、１のリジン残基、及び少なくとも２個のグリシン残基を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１９】
前記リンカーが、分枝状アミノ酸ポリマーを含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２０】
前記分枝状アミノ酸ポリマーが、以下の：
【化１】
2007526919.tif 000001
で表される構造を含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアが、カルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり；
(３)  前記リンカーが、４-(マレイミドメチル)-１-シクロヘキサンカルボン酸(ＳＭＣＣ)及び異種ペプチドであって、ＧＧＣＫ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドを含み；並びに
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＣ-末端において当該ペプチドに結合する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２２】
前記リンカーが、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡをさらに含み、ここでＳＭＣＣがＢＳＡに結合され、そして異種ペプチドを介して前記ペプチドに結合される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸５〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアが、カルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり；
(３)  前記リンカーが、ＳＭＣＣ及び異種ペプチドであって、ＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドを含み；そして
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合する、
請求項１２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記リンカーがさらに、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡを含み、ここで、ＳＭＣＣがＢＳＡに結合され、そして前記異種ペプチドを介して前記ペプチドに結合される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアが、カルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり；
(３)  前記リンカーが、ＳＭＣＣ及び異種ペプチドであって、ＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドを含み；そして
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＣ末端で当該ペプチドに結合される；
請求項１２に記載の組成物。
【請求項２６】
前記リンカーがさらに、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡを含み、ここで、ＳＭＣＣがＢＳＡに結合され、そして前記異種ペプチドを介して前記ペプチドに結合される、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアがカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり；
(３)  前記リンカーが、ＳＭＣＣ及び異種ペプチドであって、ＫＣＧＧＧＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドを含み；そして
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＮ末端において当該ペプチドに結合される、
請求項１２に記載の組成物。
【請求項２８】
前記リンカーが、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡを含み、ここでＳＭＣＣがＢＳＡに結合され、そして前記異種ペプチドを介して前記ペプチドに結合される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアがカルボキシル化されたマイクロスフィアであり；そして
(３)  前記分枝状アミノ酸ポリマーがさらに、ＣＫという短いペプチドを含み、ここで当該短いペプチドは、そのＣ残基を介して、前記分枝状アミノ酸ポリマーの末端Ｋ残基に直接結合される、
請求項２０に記載の組成物。
【請求項３０】
生物学的サンプルにおけるＨＳＶ-２抗体の特異的検出方法であって、以下のステップ：
(ａ)  配列番号１の２４〜３６個の連続アミノ酸からなるペプチドであって、キャリアに結合される上記ペプチドを含む組成物と、生物学的サンプルを接触させ、
(ｂ)  抗原-抗体結合が、上記ペプチドと上記生物学的サンプルの抗体構成要素との間で生じるかを検出し、ここで当該抗原-抗体結合の検出が、上記生物学的サンプル中におけるＨＳＶ-２抗体の存在を指す、
を含む、前記検出方法。
【請求項３１】
前記ステップ(ｂ)が、フローサイトメトリーにより行われる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記生物学的サンプルが全血、血清、血漿、脳脊髄液、精嚢液、又は粘液である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸５〜３２からなる配列を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなる配列を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記ペプチドが、配列番号１の配列を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
前記キャリアが、カルボキシル化されたマイクロスフィアである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
前記キャリアが、カルボキシル化されたラテックス又は磁性マイクロスフィアである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ペプチドが、二量化される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３９】
前記ペプチドが、ジスルフィド結合を介して二量化される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ペプチドが、当該ペプチドのＮ-末端又はＣ-末端でリンカーを介して前記キャリアに結合される、請求項３０に記載の方法。
【請求項４１】
前記ペプチドが、当該ペプチドの内部アミノ酸残基においてリンカーを介して前記キャリアに結合される、請求項３０に記載の方法。
【請求項４２】
前記リンカーが、異種ペプチドを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記リンカーが、異種タンパク質からなる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記リンカーがさらに異種タンパク質を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記異種タンパク質が、ＢＳＡである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記異種タンパク質が、ＫＬＨである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記リンカーが、異種ペプチドからなる、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
前記異種ペプチドが、１のシステイン残基、１のリジン残基、及び少なくとも２のグリシン残基を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４９】
前記リンカーが、分枝状アミノ酸ポリマーを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項５０】
前記リンカーが、以下の：
【化２】
2007526919.tif 000002
で表される構造を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアが、カルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり；
(３)  前記リンカーが、ＳＭＣＣ及び異種ペプチドであって、ＧＧＣＫ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドであり；
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合され；そして
(５)  前記ステップ(ｂ)がフローサイトメトリーにより行われる、
請求項４２に記載の方法。
【請求項５２】
前記リンカーが、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡをさらに含み、ここでＳＭＣＣがＢＳＡに結合され、そして当該異種ペプチドを介して、前記ペプチドに結合される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸５〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアが、カルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり：
(３)  前記リンカーが、ＳＭＣＣ及び異種ペプチドであって、ＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドを含み、
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合され；そして
(５)  前記ステップ(ｂ)がフローサイトメトリーにより行われる、
請求項４２に記載の方法。
【請求項５４】
前記リンカーが、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡをさらに含み、ここでＳＭＣＣがＢＳＡに結合し、そして前記異種ペプチドを介して前記ペプチドに結合される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアが、カルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり；
(３)  前記リンカーが、ＳＭＣＣ及び異種ペプチドであって、ＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドを含み；
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合され；
(５)  前記ステップ(ｂ)が、フローサイトメトリーにより行われる、
請求項４２に記載の方法。
【請求項５６】
前記リンカーがさらに、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡを含み、ここでＳＭＣＣがＢＳＡに結合され、そして前記異種ペプチドを介して前記ペプチドに結合される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアが、カルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり；
(３)  前記リンカーが、ＳＭＣＣ及び異種ペプチドであって、ＫＣＧＧＧＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する当該異種ペプチドを含み；
(４)  上記異種ペプチドが、上記ペプチドのＮ末端において当該ペプチドに結合され；そして
(５)  前記ステップ(ｂ)が、フローサイトメトリーにより行われる、
請求項４２に記載の方法。
【請求項５８】
前記リンカーがさらに、前記キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡを含み、ここで、ＳＭＣＣがＢＳＡに結合され、そして前記異種ペプチドを介して前記ペプチドに結合される、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
(１)  前記ペプチドが、配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し；
(２)  前記キャリアがカルボキシル化されたマイクロスフィアであり；
(３)  前記分枝状アミノ酸ポリマーが、ＣＫの短いペプチドをさらに含み、ここで、短いペプチドは、そのＣ残基を介して、当該分枝状アミノ酸ポリマーの末端Ｋ残基に直接結合され；そして
(４)  前記ステップ(ｂ)がフローサイトメトリーにより行われる、
請求項５０に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
[0010]  一の好ましい実施態様では、ペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーは４-(マレイミドメチル)-１-シクロヘキサンカルボン酸(ＳＭＣＣ)及びＧＧＣＫ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、そして当該異種ペプチドは上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合されている。別の好ましい実施態様では、リンカーは、キャリアに直接結合された異種タンパク質ＢＳＡを含み、そしてＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして異種ペプチドを介して当該ペプチドに結合される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
[0011]  別の好ましい実施態様では、ペプチドは、配列番号１のアミノ酸５〜３２からなるアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーはＳＭＣＣ及びＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、そして当該異種ペプチドは上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合されている。別の好ましい実施態様では、当該リンカーは、さらに、キャリアに直接結合された異種タンパク質ＢＳＡを含み、そしてＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして異種ペプチドを介して当該ペプチドに結合される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
[0012]  さらに別の好ましい実施態様では、ペプチドは配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーはＳＭＣＣ及びＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、そして当該異種ペプチドは、上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合されている。別の好ましい実施態様では、リンカーはさらにキャリアに直接結合された異種タンパク質ＢＳＡを含み、そしてＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして異種ペプチドを介して当該ペプチドに結合される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
[0013]  さらに別の好ましい実施態様では、ペプチドは配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーはＳＭＣＣ及びＫＣＧＧＧＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、そして当該異種ペプチドは上記ペプチドのＮ末端において当該ペプチドに結合される。別の好ましい実施態様では、リンカーはさらにキャリアに直接結合された異種タンパク質ＢＳＡを含み、そしてＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして異種ペプチドを介して当該ペプチドに結合される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
[0019]  一の好ましい実施態様では、ペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーはＳＭＣＣ及びＧＧＣＫ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、当該異種ペプチドは上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合され、そしてそして抗原-抗体結合の検出はフローサイトメトリーにより行われる。他の好ましい実施態様では、リンカーはさらに、キャリアに直接結合されている異種タンパク質ＢＳＡを含み、ＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして当該異種ペプチドを介して当該ペプチドに結合されている。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
[0020]  別の好ましい実施態様では、ペプチドは配列番号１のアミノ酸５〜３２からなるアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーはＳＭＣＣ、及びＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、当該異種ペプチドは上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合され、そして抗原-抗体結合の検出は、フローサイトメトリーにより達成される。別の好ましい実施態様では、リンカーはさらに、キャリアに直接結合される異種タンパク質ＢＳＡを含み、そしてＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして異種ペプチドを介してペプチドに結合される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
[0021]  さらに別の好ましい実施態様では、ペプチドは配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーはＳＭＣＣ、及びＧＧＧＧＣＫ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、当該異種ペプチドは上記ペプチドのＣ末端において当該ペプチドに結合され、そして抗原-抗体結合の検出がフローサイトメトリーにより達成される。別の好ましい実施態様では、リンカーはさらに、キャリアに直接結合された異種タンパク質ＢＳＡを含み、そしてＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして異種ペプチドを介してペプチドに結合される。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
[0022]  さらに別の好ましい実施態様では、ペプチドは配列番号１のアミノ酸９〜３２からなるアミノ酸配列を有し、キャリアはカルボキシル化された磁性マイクロスフィアであり、リンカーはＳＭＣＣ、及びＫＣＧＧＧＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する異種ペプチドを含み、そして当該異種ペプチドは、上記ペプチドのＮ-末端において当該ペプチドに結合される。別の好ましい実施態様では、リンカーはさらに、キャリアに直接結合された異種タンパク質ＢＳＡを含み、そしてＳＭＣＣはＢＳＡに結合され、そして異種タンパク質を介してペプチドに結合される。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
[0036]  本明細書中に使用される「リンカー」は、本発明のペプチドをキャリアに結合する任意の手段を指す。リンケージは、ペプチドのＮ末端又はＣ末端のいずれかに位置しうる。幾つかの実施態様では、リンケージは、ペプチドの内部アミノ酸残基の側鎖、例えばペプチドのＮ又はＣ末端に存在しないアスパラギン酸の第二カルボキシル基を通して達成されうる。リンカーは、本発明のペプチドとは異種性であるペプチド(例えば、ＧＧＧＧＣＫ(配列番号３）又はＧＧＣＫ（配列番号２）といった短いアミノ酸配列)又はタンパク質(例えば、ＢＳＡ又はＫＬＨ)を含みうる。異種ペプチドに加えて、リンカーは、さらに異種タンパク質、例えばＢＳＡ又はＫＬＨをさらに含んでもよい。非ポリペプチドリンカー、例えば直鎖又は分枝鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、又はポリエチレンリンカーは、本発明のペプチドをキャリアに結合する目的のために適しているか、複数の構成要素リンカーの一部として適切でありうる。一の好ましい非ポリペプチド・リンカーはＳＭＣＣである。さらに、リンカーは、１超の本発明のペプチドをキャリアに結合できる分枝状のアミノ酸ポリマーを含みうる。異種二機能性及び同一二機能性リンカーは、本発明の実行の際に適している。リンカーは、本発明のペプチドがキャリアに直接結合される場合、共有結合、例えばペプチド結合又はジスルフィド結合、又は非共有結合、例えばイオン結合又は疎水結合を含みうる。非共有結合の例は、抗原-抗体間、又はビオチン-アビジン間の相互作用である。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
Ｉ.ペプチド合成
[0089]  表１に記載されるペプチドを、Ｎ-α-保護基であるＢｏｃ又はＦｍｏｃを用いてモノマーとして合成した。
【表１】
2007526919.tif 000003
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
【図１】図１は、配列番号１：
【化６】
2007526919.tif 000004
を示す。
【図２】図２は、市販のＨＳＶ-２型特異的酵素結合免疫学的検定を用いたＨＳＶ-２特異的抗体の検出と、ペプチド１-ＳＭＣＣ-ＢＳＡ複合体：
【化７】
2007526919.tif 000005
をＨＳＶ-２特異的抗原として用いる本発明の方法を使用したＨＳＶ-２特異的抗体の検出との間の相関を示す。
【図３】図３は、市販のＨＳＶ-２型特異的酵素結合免疫学的検定を用いたＨＳＶ-２特異的抗体の検出と、ペプチド２-ＳＭＣＣ-ＢＳＡ複合体：
【化８】
2007526919.tif 000006
をＨＳＶ-２特異的抗原として用いる本発明の方法を使用したＨＳＶ-２特異的抗体の検出との間の相関を示す。
【図４】図４は、市販のＨＳＶ-２型特異的酵素結合免疫学的検定を用いたＨＳＶ-２特異的抗体検出と、ＢＳＡ-ＳＭＣＣ-ペプチド５複合：
【化９】
2007526919.tif 000007
をＨＳＶ-２特異的抗原として用いる本発明の方法を使用したＨＳＶ-２特異的抗体の検出との間の相関を示す。
【図５】図５は、市販のＨＳＶ-２型特異的酵素結合免疫学的検定を用いたＨＳＶ-２特異的抗体検出と、ペプチド５：
【化１０】
2007526919.tif 000008
をＨＳＶ-２特異的抗原として用いる本発明の方法を使用したＨＳＶ-２特異的抗体の検出との間の相関を示す。