【誤訳訂正書】
【提出日】平成20年3月27日(2008.3.27)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
チューリップは、抽薹過程の研究[4]を介して、長期的な環境要因によって誘導される、植物の生長における変化のこれらの様々な局面について研究するためのモデルとして使用される種の一例である。低温がしばしば関与する別の過程は、種子の休眠である。低温によって誘導される茎の伸長は、休眠打破の一形態としてみなすことができ、樹木の芽のストラティフィケーション、春化、および休眠打破は、低温によって促進される同様の過程である。シロイヌナズナの休眠種子の発芽における、休眠を打破するための低温要求性のみならず、チューリップの抽薹と休眠種子の発芽の間における他の類似点は、休眠が除かれた後の迅速な生長を可能にするために、全ての器官が保護構造内にて形成されること、貯蔵物質が特殊化した葉様の器官に（例えばシロイヌナズナの子葉においてデンプンの形態で、および同様に、チューリップの球根鱗茎においてデンプンの形態で）保存されること、および、休眠の間は水ポテンシャルが低いことである[5]。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
本発明は、植物の発育の移行を調節し、それにより、例えば、発育休止の打破を与える方法を提供し、上記に議論されるような長期的な環境要因に本質的に依存しない方法であり、それにより、植物のある発育期から別の期への移行を調節する方法を提供する。特に、移行に、発芽、抽薹、花成または結実の開始が含まれるような、植物における発育移行を調節するための方法が提供される。本明細書においては、本発明者らは、発育調節因子と相互作用する（シロイヌナズナのような）他の植物のタンパク質との相同性を有する、チューリップに由来するRING-H2タンパク質のサブクラス、植物のRINGフィンガーの低温誘導性の発現産物の単離を示す。これが意味するものは、低温誘導のTGRING1の発現について本明細書にて示されるように、植物のRINGフィンガーまたはRING-H2のタンパク質の発現が、植物のABI3の相同体をタンパク質分解の標的とし、それにより、例えば休眠または休止の状態のような発育休止を終わらせ、植物をある発育期から別の発育期へ躍進（例えば超越）させ、その次なる発育状態に向かって生長させることである。RINGまたはRING-H2のタンパク質がユビキチン化またはタンパク質分解に関与するものとして以前に認識されている事実にも関わらず、植物の発育の変化におけるこれらのタンパク質の関与は、今までは示されてこなかった。これは、特に、発芽、ストラティフィケーション、抽薹、花成または結実の開始、低温誘導による茎の伸長、休眠打破、球根誘導、開花期に関連するもののような発育の変化については真実である。例えば、Stoop-Myerら[17]は、COP1のN末端断片がその機能性の部分を保持することを示している。彼らは、この断片が少なくとも2つの機能的ドメイン、RINGドメインおよびコイルドコイルドメインを有することを示している。しかし、重要なのは、彼らが、保持されている機能性とRINGドメインとを関連付けておらず、このドメイン単独の機能についての提案もしていないことである。さらに、McNellisら[18]は、COP1のN末端断片がその機能性の部分を保持することを示している。再度、彼らは、この断片が少なくとも2つの機能的ドメイン、RINGドメインおよびコイルドコイルドメインを有することを示している。再度、彼らは、保持されている機能性とRINGドメインとを関連付けていない。McNellisら[19]は、COP1の過剰発現によって、光形態形成におけるその役割を示している。彼らは、COP1が少なくとも3つの機能的ドメイン、RINGドメイン、コイルドコイルドメイン、およびWD-40反復ドメインを有することを示している。しかし、重要なのは、彼らが、COP1の機能性とRINGドメインとを関連付けておらず、このドメイン単独の機能についての提案もしていないことである。Kurupら[16]は、その論文において、AIP2がシロイヌナズナの発育調節因子ABI3と相互作用することを示している。彼らは、発育移行におけるAIP2および他のRING-H2タンパク質の役割を認識しておらず、それどころか、AIP2の転写活性化因子としての役割を提案している。Freemont[20]による論文は、ユビキチン化およびタンパク質分解の標的化におけるRINGドメインおよびRING-H2ドメインについての一般的な役割を提案する、最初に発表された論文である。彼の論文では、ある例外：PRT1を除いて、動物系に認められるRINGタンパク質に主に焦点を当て��いる[21]。シロイヌナズナのPRT1タンパク質は明らかに、特定の種類の経路、即ち「N末端則」ユビキチン化経路に関与している。しかし、本論文も、Potuschakら[21]による論文も、植物における発育の変化を得る目的で、発育調節因子のタンパク質レベルを操作するために、RINGフィンガーまたはRING-H2のタンパク質を用いることには何ら言及していない。RINGまたはRING-H2のタンパク質が、ユビキチン化またはタンパク質分解に関与するものとして以前に認識された事実にも関わらず、植物の発育の変化におけるこれらのタンパク質の関与は以前には示されてこなかった。これは、特に、発芽、ストラティフィケーション、抽薹、花成または結実の開始、低温誘導による茎の伸長、休眠打破、球根誘導、開花期に関連するもののような発育の変化については真実である。Tamminen[22]は、ABI3の異所性発現は耐凍性における変化をもたらすことを例証している。本発明は、ユビキチン化によってそれらをタンパク質分解の標的とすることにより、ABI3または他の発育調節因子のタンパク質レベルを操作することによる、植物の発育移行のためのRINGまたはRING-H2のタンパク質の使用を提供する。Toriiら[23]の論文は、シロイヌナズナのタンパク質CIP8がシロイヌナズナの光形態形成調節因子COP1と相互作用することを示している。相互作用は、COP1のRINGドメインおよびCIP8のRING-H2ドメインによるものである。しかし、本論文は、ユビキチン化またはタンパク質分解におけるRINGドメインまたはRING-H2ドメインについての機能的な役割を示していない、または提案していない。それは単に、タンパク質とタンパク質との相互作用ドメインとしての役割を提案しているにすぎない。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
望ましいRINGフィンガーモチーフまたはRING-H2モチーフを有する典型的な植物タンパク質は、図1Aおよび図1Bにおいて認められ、他は本明細書において示されるような簡単なアラインメントによって見出すことができる。好ましい態様においては、本発明は、植物またはその部分におけるRINGフィンガーもしくはRING-H2のタンパク質またはその機能的断片の発現を調節する段階を含む、植物の発育移行を調節するための方法であり、特に、この移行に発芽、ストラティフィケーション、抽薹、花成または結実の開始が含まれるような方法を提供する。本明細書において開示されるようなRINGフィンガーまたはRING-H2のタンパク質は、ある発育期から別の期への移行に関連する標的タンパク質（例えば、発育調節タンパク質）のユビキチン化および／またはタンパク質分解を提供し、それにより、例えば、関与する標的タンパク質（例えば調節タンパク質）のプロテアソーム仲介の分解および除去を与える。本明細書において使用されるような標的タンパク質は、植物の発育移行を調節できるタンパク質である。ここで言及される特定の調節タンパク質は、例えば、COP1、HY5、FLC、FRIGIDAおよびLDを含む。本明細書において好ましいのは、シロイヌナズナにおいてアブシジン酸非感受性3（abscisic acid-insensitive 3：ABI3）として知られる調節タンパク質またはその相同体の調節である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
特定の態様においては、本発明は、RINGフィンガーまたはRING-H2のタンパク質をコードする核酸の一過的な発現を含む、例えばチューリップの球根のような球根の、インビトロの増殖において有用な方法を提供する。説明される本発明によって影響される、または調節される（促進されるまたは遅延される）可能性のある移行の他の例は、それによって核酸が同様に一過的に発現され得る、発芽、ストラティフィケーション、抽薹、花成の開始、結実、開花期、低温誘導による茎の伸長、休眠打破または球根誘導を含む。本発明は、RINGフィンガーもしくはRING-H2のタンパク質またはその機能的断片をコードする核酸を（望ましい場合は単に一過的に）与えられた植物を、付加的に提供する。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
本発明はまた、植物もしくはその部分における、RINGフィンガーもしくはRING-H2の遺伝子産物（mRNAもしくはタンパク質またはその機能的断片）の発現を決定する段階を含む、および／または、RINGフィンガーもしくはRING-H2の遺伝子産物（mRNAもしくはタンパク質またはその機能的断片）と相互作用する、または関係する、標的タンパク質のユビキチン化および／もしくはタンパク質分解を決定する段階を含む、植物の発育移行段階または発育移行に至る段階を決定するための方法をも提供する。そのような方法は、例えば、植物が例えば発芽、ストラティフィケーション、抽薹、花成の開始、または結実のような明確な発育期にあるか、またはその発育期に近いかどうかを決定するためのように、植物またはその部分におけるRINGフィンガーもしくはRING-H2の遺伝子産物またはその機能的断片の発現を決定する段階を含む、発育の移行期にあることについて植物を選択するための方法において有用である。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
低温誘導による茎の伸長は、休眠打破の一形態としてみなすことができる。樹木の芽のストラティフィケーション、春化、および休眠打破は、低温によって促進される同様の過程である。ここで興味深いのは、TGRING1のシロイヌナズナ相同体AIP2が、ABI3相互作用因子であることである。シロイヌナズナのアブシジン酸非感受性3（abi3）突然変異体は最初、阻害濃度のアブシジン酸（ABA；[7]）の存在下において発芽するその能力について単離されたものであり、胚の成熟および休眠維持において一定の役割を有する[9]。最近の刊行物によって、ABI3が栄養生長停止過程においてもある役割を有することが示された。abi3-4突然変異体は、花成の急速な誘導を示し、ABI3は暗条件下において生長させた実生の頂部において発現される[8；11；12]。その他の最近の刊行物では、標的化ユビキチン仲介タンパク質分解におけるRINGフィンガードメインの機能について提案されている。RINGフィンガータンパク質はそこでE3ユビキチンタンパク質リガーゼとして作用する[6]。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
これら全てのことを併せて、本明細書において、本発明者らは、低温誘導のTGRING1の発現が、チューリップのABI3相同体のタンパク質分解のための標的化においてある役割を担い、それにより、休眠状態を取り除き、都合のよい条件下においてその植物を生長させることを示す。種子の休眠およびチューリップにおける低温誘導の花成という類似した現象を解析する2つの全く異なるアプローチでもやはり、上記に説明されるRING-H2モチーフを有する相同なタンパク質のクローニングがもたらされることを考えれば、ストラティフィケーションおよび春化のような過程の期間中におけるシロイヌナズナのAIP2の解析、ならびにABI3タンパク質レベルに対するその影響の解析が、この現象をさらに示すための方法といえる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
低温ストラティフィケーション期間中のAIP2の発現
実験の目的
種子の低温によるストラティフィケーション期間における、クローン化されたチューリップTGRING1のシロイヌナズナ相同体AIP2の発現パターンを決定する。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
図3cは、異なる処理の後の種子の発芽率を示す。種子は著しい休眠状態にはなかったが、発芽率は、低温処理により、20℃において保存された種子と比較して増加した。発芽は、3日またはそれ以上の4℃処理の後では100％であった。本結果は、低温ストラティフィケーション期間中にシロイヌナズナのAIP2 mRNAが著しくアップレギュレートされることを示す。これは、AIP2タンパク質は配列において保存されるのみならず、機能においても保存されること、さらに、それは、低温誘導が要求される異なる発育過程、即ち、チューリップにおける低温誘導による茎の伸長およびシロイヌナズナの種子のストラティフィケーションにおいてさえも、機能的に保存されることを示す。低温ストラティフィケーション期間中に増加した発現は、処理後の発芽率の増加と相関する。AIP2はABI3と相互作用し、RING-H2ドメインを有するため、休眠打破はユビキチン化を介したABI3タンパク質のタンパク質分解標的化によって起こり、それにより、休眠状態が取り除かれる可能性が高い。AIP2はその後、単量体型E3ユビキチンリガーゼとして作用する。相似によって、チューリップのTGRING1タンパク質は、休眠打破の一形態としてみなすことができる茎の伸長の低温誘導の過程において同じ機能を有する可能性がある。この実験は、AIP2および相同タンパク質が休眠打破の明らかなマーカーであることを示す。それはまた、チューリップにおける低温誘導による茎の伸長とは別の過程、即ち種子の低温ストラティフィケーションでの休眠打破における、RINGドメインタンパク質の関与をも示す。