【手続補正書】
【提出日】令和1年7月8日(2019.7.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：２８、２９、３０および３８から選択されるインスレーター配列を含む１つまたは２つのスペーサー配列、野生型セルピン１エンハンサーもしくは変異セルピン１エンハンサーからなる肝臓特異的エンハンサー配列、野生型トランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーターもしくは変異ＴＴＲプロモーターからなるプロモーター配列および導入遺伝子を含む、ポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項２】
イントロンをさらに含む請求項１に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクトであって、前記イントロン配列が野生型マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン配列もしくは変異ＭＶＭイントロン配列を含む、前記コンストラクト。
【請求項３】
前記肝臓特異的エンハンサー配列、前記プロモーター配列、前記イントロン配列および前記導入遺伝子に隣接する、２つのスペーサー配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項４】
前記導入遺伝子が血友病またはリソソーム蓄積症において欠如または欠損するタンパク質をコードする、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項５】
前記導入遺伝子が、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＴｔＡｇｏおよびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系から選択される１つまたは複数のヌクレアーゼをさらにコードする、請求項４に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項６】
肝臓特異的エンハンサー配列、プロモーター配列、配列番号：１５、１６、１７または配列番号：３７のヌクレオチド３４０〜４３２のうちの任意の１つ中で示されるようなイントロン配列、および導入遺伝子を含む、ポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項７】
前記エンハンサー配列が野生型セルピン１エンハンサーまたは変異セルピン１エンハンサーを含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項８】
前記プロモーター配列が野生型トランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーターもしくは変異ＴＴＲプロモーターを含む、請求項６に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項９】
インスレーター配列を含む１つまたは２つのスペーサー配列をさらに含む、請求項６〜８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１０】
ポリアデニル化シグナルをさらに含む、請求項６〜８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１１】
前記導入遺伝子が血友病またはリソソーム蓄積症において欠如または欠損するタンパク質をコードする、請求項６〜１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１２】
前記導入遺伝子が、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＴｔＡｇｏおよびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系から選択される１つまたは複数のヌクレアーゼをさらにコードする、請求項６〜１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１３】
配列番号：１〜１３のうちの任意のものの位置１、５、１４、３２および３９のいずれかで突然変異を有する肝臓特異的エンハンサー配列を含むポリヌクレオチド発現コンストラクトであって、プロモーター配列、および導入遺伝子をさらに含む、ポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１４】
イントロン配列をさらに含む請求項１３に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１５】
前記プロモーター配列が野生型トランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーターもしくは変異ＴＴＲプロモーターを含む、請求項１３に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１６】
前記イントロン配列が野生型マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン配列もしくは変異ＭＶＭイントロン配列を含む、請求項１４に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１７】
インスレーター配列を含む１つまたは２つのスペーサー配列、ポリアデニル化シグナルまたはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１８】
前記導入遺伝子が血友病またはリソソーム蓄積症において欠如または欠損するタンパク質をコードする、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項１９】
前記導入遺伝子が、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＴｔＡｇｏおよびＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系から選択される１つまたは複数のヌクレアーゼをさらにコードする、請求項１３〜１８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項２０】
配列番号：３７を含むポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項２１】
配列番号：３４を含むポリヌクレオチド発現コンストラクト。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクトを含むＡＡＶベクターであって、前記ポリヌクレオチド発現コンストラクトが前記ＡＡＶベクターの５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）と３’ＩＴＲとの間にある、前記ベクター。
【請求項２３】
請求項２２に記載のＡＡＶベクターを含む、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
これらおよび他の態様は、開示に照らして全体として当業者に容易に明らかである。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
インスレーター配列を含む少なくとも１つのスペーサー配列、肝臓特異的エンハンサー配列、プロモーター配列および導入遺伝子を含む、ポリヌクレオチド発現コンストラクト。
（項目２）
イントロン配列をさらに含む項目１に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクトであって、前記エンハンサー配列が野生型セルピン１エンハンサーもしくは変異セルピン１エンハンサーを含む；および／または、前記プロモーター配列が野生型トランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーターもしくは変異ＴＴＲプロモーターを含む；および／または、前記イントロン配列が野生型マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン配列もしくは変異ＭＶＭイントロン配列を含む、前記コンストラクト。
（項目３）
前記インスレーター配列が、配列番号：２８、２９および／または３０のうちの任意の１つである、項目１または項目２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目４）
前記肝臓特異的エンハンサー配列、前記プロモーター配列、前記イントロン配列および前記導入遺伝子に隣接する、２つのスペーサー配列を含む、項目１〜３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目５）
前記インスレーター配列が、配列番号：２８、２９、３０および／または３８である、項目４に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目６）
前記導入遺伝子が血友病またはリソソーム蓄積症において欠如または欠損するタンパク質をコードする、項目１〜５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目７）
前記導入遺伝子が１つまたは複数のヌクレアーゼをさらにコードする、項目６に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目８）
肝臓特異的エンハンサー配列、プロモーター配列、配列番号：１５、１６または１７のうちの任意の１つ中で示されるようなイントロン配列、および導入遺伝子を含む、ポリヌクレオチド発現コンストラクト。
（項目９）
前記エンハンサー配列が野生型セルピン１エンハンサーまたは変異セルピン１エンハンサーを含む；および／または、前記プロモーター配列が野生型トランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーターもしくは変異ＴＴＲプロモーターを含む、項目８に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクト。
（項目１０）
インスレーター配列を含む少なくとも１つのスペーサー配列および／またはポリアデニル化シグナルをさらに含む、項目８または項目９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目１１）
前記導入遺伝子が血友病またはリソソーム蓄積症において欠如または欠損するタンパク質をコードする、項目８〜１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目１２）
前記導入遺伝子が１つまたは複数のヌクレアーゼをさらにコードする、項目８〜１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目１３）
配列番号：１〜１３のうちの任意のものの位置１、５、１４、３２および／または３９で突然変異を有する肝臓特異的エンハンサー配列、プロモーター配列、および導入遺伝子を含む、ポリヌクレオチド発現コンストラクト。
（項目１４）
イントロン配列をさらに含む項目１３に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクトであって、前記プロモーター配列が野生型トランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーターもしくは変異ＴＴＲプロモーターを含む、および／または、前記イントロン配列が野生型マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロン配列もしくは変異ＭＶＭイントロン配列を含む、前記コンストラクト。
（項目１５）
インスレーター配列を含む少なくとも１つのスペーサー配列および／またはポリアデニル化シグナルをさらに含む、項目１３または１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目１６）
前記導入遺伝子が血友病またはリソソーム蓄積症において欠如または欠損するタンパク質をコードする、項目１３〜１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目１７）
前記導入遺伝子が１つまたは複数のヌクレアーゼをさらにコードする、項目１３〜１６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット。
（項目１８）
項目１〜１７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現コンストラクトを含むＡＡＶベクターであって、前記ポリヌクレオチド発現コンストラクトが前記ＡＡＶベクターの５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）と３’ＩＴＲとの間にある、前記ベクター。
（項目１９）
前記ＡＡＶベクターがＣＲＭＳＢＳ１（配列番号：３４）またはＣＲＭＳＢＳ２（配列番号：３７）と表記される、項目１８に記載のＡＡＶベクター。
（項目２０）
項目１８または１９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターを含む、医薬組成物。
（項目２１）
タンパク質を、それを必要とする被験体へ提供する方法であって、項目１８もしくは１９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターを前記被験体の肝臓へ、または項目２０に記載の医薬組成物を前記被験体へ、投与することを含み、前記導入遺伝子が前記タンパク質をコードし、前記タンパク質が前記被験体中で産生される、前記方法。
（項目２２）
前記導入遺伝子が肝細胞のゲノムの中へ組み込まれる、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
１つまたは複数のヌクレアーゼを被験体へ投与することをさらに含む、項目２１または２２のいずれか一項に記載の方法であって、前記ヌクレアーゼが内在性アルブミン遺伝子を切断し、前記導入遺伝子が内在性アルブミン遺伝子の中へ組み込まれる、前記方法。
（項目２４）
哺乳動物において治療用タンパク質への寛容を誘導する方法であって、項目２１〜２３のいずれか一項に記載の方法に従ってタンパク質を産生するように前記哺乳動物における細胞を修飾すること、ならびに前記哺乳動物が治療用タンパク質へ寛容化されるようになるように、１つまたは複数のステロイドおよび／またはＢ細胞阻害因子により哺乳動物を治療することを含む、前記方法。
（項目２５）
項目１〜１７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド発現カセット、項目１８もしくは項目１９のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、および／または項目２０に記載の医薬組成物を含む、キット。