【手続補正書】
【提出日】平成30年12月18日(2018.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象試料から得た標的細胞を単離、遺伝子改変、及び製剤化する方法であって、前記方法が、
（ｉ）試料投入口、緩衝液投入口及び処理チャンバーを備える前記対象試料のプロセシング用回路と；
前記回路の１個以上の流路を選択的に閉じるための複数の弁と；
前記対象試料の前記標的細胞を前記対象試料の非標的細胞から分離するための１個以上の標的細胞セレクターと；
前記回路の少なくとも一部を通して前記対象試料を灌流させるための少なくとも１個のポンプと；
前記処理チャンバー、前記複数の弁、前記標的細胞セレクター及び前記ポンプの動作を制御するために１個以上のプロセッサにより実行可能な命令
を含むポイントオブケア及び／又はポータブルデバイスに前記対象試料を仕込む工程及び；
（ｉｉ）前記１個以上のプロセッサによる前記命令の実行を開始し、
前記対象試料を前記処理チャンバーから前記標的細胞セレクターへと移送する作業と；
２個以上のセレクターを使用する場合には、前記標的細胞セレクターの動作により前記標的細胞を前記非標的細胞から同時又はタンデムに分離する作業と；
前記標的細胞を前記処理チャンバーに戻す作業と；
前記処理チャンバー及び／又は前記標的細胞セレクター内の前記標的細胞に遺伝子モディファイヤーを導入し、遺伝子改変された標的細胞を作製する作業及び；
望ましくない培地成分を以下の工程により、最終製剤から除去する工程、
遠心により前記処理チャンバー内の遺伝子改変された標的細胞をペレット化し、ペレット化された細胞懸濁液を作り出す工程、
ペレット化された細胞懸濁液から、特定の上清体積を除去する工程、
ペレット化された細胞懸濁液を、最終製剤培地で洗浄する工程、及び
さらなる上清を除去して、最終細胞産物製剤を総体積とする工程、
により、前記遺伝子改変された標的細胞を対象への投与用の最終細胞産物製剤として製剤化する作業を
前記複数の弁のうち少なくとも１個、前記１個以上の標的細胞セレクター、又は前記少なくとも１個のポンプに実施させる工程
を含む前記方法。
【請求項２】
前記対象試料の初期体積を測定する工程、
前記対象試料のヘマトクリット値を測定する工程、
一定体積の緩衝液を前記対象試料に添加し、前記ヘマトクリット値を少なくとも２５％まで低下させる工程であって、
前記対象試料に添加する緩衝液の体積が下式：
【数１】
2018510615.tif 000001
に従って計算され、
緩衝液を前記対象試料に添加されたあと、対象試料の体積を決定する工程、及び、
２５％のヘマトクリット値をデバイスのユーザーインターフェースに入力する工程を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
現行の適正製造規範（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｇｏｏｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ）の適合を確認するための放出試験を実施する工程を含み、前記放出試験が以下の試験を含む、請求項１に記載の方法。
【表１】
2018510615.tif 000002
【請求項４】
遺伝子モディファイヤーの導入が、ＡＢＣＤ１、ＡＢＣＡ３、ＡＢＬ１、ＡＤＡ、ＡＫＴ１、ＡＰＣ、ＡＰＰ、ＡＲＳＡ、ＡＲＳＢ、ＢＣＬ１１Ａ、ＢＬＣ１、ＢＬＣ６、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＢＲＩＰ１、Ｃ９ＯＲＦ７２、Ｃ４６又は他のＣペプチド、ＣＡＲ、ＣＡＳ９、Ｃ−ＣＡＭ、ＣＢＦＡ１、ＣＢＬ、ＣＣＲ５、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ４０、ＣＤＡ、ＣＦＴＲ、ＣＬＮ３、Ｃ−ＭＹＣ、ＣＲＥ、ＣＳＣＲ４、ＣＳＦＩＲ、ＣＴＬＡ、ＣＴＳ−１、ＣＹＢ５Ｒ３、ＤＣＣ、ＤＨＦＲ、ＤＫＣ１、ＤＬＬ１、ＤＭＤ、ＥＧＦＲ、ＥＲＢＡ、ＥＲＢＢ、ＥＢＲＢ２、ＥＴＳ１、ＥＴＳ２、ＥＴＶ６、Ｆ８、Ｆ９、ＦＡＮＣＡ、ＦＡＮＣＢ、ＦＡＮＣＣ、ＦＡＮＣＤ２、ＦＡＮＣＥ、ＦＡＮＣＦ、ＦＡＮＣＧ、ＦＡＮＣＩ、ＦＡＮＣＬ、ＦＡＮＣＭ、ＦａｓＬ、ＦＣＣ、ＦＧＲ、ＦＯＸ、ＦＵＳ、ＦＵＳ１、ＦＹＮ、ＧＡＬＮＳ、ＧＡＴＡ１、ＧＬＢ１、ＧＮＳ、ＧＵＳＢ、ＨＢＢ、ＨＢＤ、ＨＢＥ１、ＨＢＧ１、ＨＢＧ２、ＨＣＲ、ＨＧＳＮＡＴ、ＨＯＸＢ４、ＨＲＡＳ、ＨＹＡＬ１、ＩＣＡＭ−１、ｉカスパーゼ、ＩＤＵＡ、ＩＤＳ、ＪＵＮ、ＫＬＦ４、ＫＲＡＳ、ＬＣＫ、ＬＲＲＫ２、ＬＹＮ、ＭＣＣ、ＭＤＭ２、ＭＧＭＴ、ＭＬＬ、ＭＭＡＣ１、ＭＹＢ、ＭＥＮ−Ｉ、ＭＥＮ−ＩＩ、ＭＹＣ、ＮＡＧＬＵ、ＮＡＮＯＧ、ＮＦ−１、ＮＦ−２、ＮＫＸ２．１、ＮＯＴＣＨ、ＯＣＴ４、ｐ１６、ｐ２１、ｐ２７、ｐ５３、ｐ５７、ｐ７３、ＰＡＬＢ２、ＰＡＲＫ２、ＰＡＲＫ７、ｐｈｏｘ、ＰＩＮＫ１、ＰＫ、ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、ＰＴＰＮ２２、ＲＡＤ５１Ｃ、ｒａｓ、ＲＰＬ３〜ＲＰＬ４０、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＲＰＳ２〜ＲＰＳ３０、ＲＰＳＡ、ＳＦＴＰＢ、ＳＦＴＰＣ、ＳＧＳＨ、ＳＬＸ４、ＳＮＣＡ、ＳＯＤ１、ＳＯＸ２、ＴＥＲＣ、ＴＥＲＴ、ＴＤＰ４３、ＴＩＮＦ２、ＴＫ、ユビキリン２、ＶＨＬ、ＷＡＳ及びＷＴ−１からなる群から選択される遺伝子を挿入又は改変する請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記単離され、遺伝子改変され、及び製剤化された細胞が、造血幹細胞（ＨＳＣ）、造血前駆細胞（ＨＰＣ）、造血幹・前駆細胞（ＨＳＰＣ）、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、単球、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、白血球（ＷＢＣ）、単核細胞（ＭＮＣ）、内皮細胞（ＥＣ）、間質細胞及び／又は骨髄線維芽細胞である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記単離され、遺伝子改変され、及び製剤化された細胞がＣＤ３４＋ＨＳＰＣである請求項１に記載の方法。
【請求項７】
遺伝子モディファイヤーが、シュードタイプエンベロープ糖タンパク質及びレンチウイルスＲＮＡ分子を含む、レンチウイルスベクターを含み、シュードタイプエンベロープ糖タンパク質が、水泡性口内炎ウイルス糖タンパク質（ＶＳＶＧ）、Ｃｏｃａｌウイルス糖タンパク質（ｃｏｃａｌ）、ネコ内在性ウイルス糖タンパク質（ＲＤ１１４）又は改変型フォーミーウイルス糖タンパク質（ｍＦｏａｍｙ）を含み、及びレンチウイルスＲＮＡ分子が、組込み欠損型のＨＩＶ−１由来自己不活性化型レンチウイルスバックボーンを含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
遺伝子モディファイヤーが、シュードタイプエンベロープ糖タンパク質及びフォーミーウイルスＲＮＡ分子を含む、フォーミーウイルスベクターを含み、
前記シュードタイプエンベロープ糖タンパク質が、フォーミーウイルスエンベロープタンパク質（Ｆｏａｍｙ）又は改変型フォーミーウイルスエンベロープタンパク質（ｍＦｏａｍｙ）を含み、
前記フォーミーウイルスＲＮＡ分子が、組込み欠損型の自己不活性化型フォーミーウイルスバックボーンを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記デバイスに連結したチューブセットに１個以上の漏斗形クライオバッグを無菌溶接する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記対象試料を沈降させるために前記チューブセットに仕込むために必要な段階数を入力する工程を含み、前記必要な段階数が前記希釈後の試料体積（ｍＬ）を段階毎に３００ｍＬで割り、次の整数に切り上げることにより得られる請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
沈降が完了し、ＲＢＣ除去を開始してもよいことを前記デバイスに通知する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ＲＢＣ沈降層から除去する初期体積（ｍＬ）を入力する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５６、ＣＤ７１、ＣＤ９０又はＣＤ１３３と選択的に結合するビーズ又は抗体を前記デバイスに仕込む工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
マイクロビーズとＩＶＩｇを前記デバイスに仕込む工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
標的細胞を収容した標的細胞バッグのルアー接続部の上部にチューブセットをシールする工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
形質導入培地を前記デバイスに仕込む工程を含み、
前記形質導入培地が、
（ｉ）基礎培地、
（ｉｉ）組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ｆｌｉｇｈｔｌｅｓｓ  ３リガンド（ｆｌｔ３又はｆｌｔ３Ｌ）及び／又はインターロイキン３（ＩＬ３）及び／又はインターロイキン６（ＩＬ６）から選択されるインターロイキンを含む、サイトカイン及び／又はケモカイン、及び
（ｉｉｉ）細胞生存と遺伝子導入を助長するための下記の剤、
（ａ）ＳｔｅｍＲｅｇｅｎｉｎ１、ＧＮＦ３５１及び／又はＣＨ２２３１９１から選択される、芳香族炭化水素受容体拮抗薬、
（ｂ）ＵＭ１７１及び／又はＵＭ１１８４２８から選択される、ピリミドインドール誘導体、
（ｃ）ミフェプリストン、ＲＵ−４３０４４、ミコナゾール、１１−オキサコルチゾール、１１−オキサプレドニゾロン及び／又はデキサメタゾンメシラートから選択されるグルココルチコイド受容体拮抗薬、
（ｄ）プロタミン硫酸塩、
（ｅ）ラパマイシン、
（ｆ）ポリブレン、
（ｇ）フィブロネクチンフラグメント、
（ｈ）プロスタグランジンＥ２、
（ｉ）抗酸化剤及び／又は
（ｊ）セレコキシブ、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、サルサレート、スリンダク及び／又はトルメチンから選択される非ステロイド性抗炎症薬、
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
第１の体積の濃縮レンチウイルス、又はフォーミーウイルスを適当な寸法のシリンジ内に吸引する工程と、前記シリンジをルアーフィッティングに接続する工程、及び
第２の体積の濃縮レンチウイルス、又はフォーミーウイルスを適当な寸法のシリンジ内に吸引する工程と、前記シリンジをルアーフィッティングに接続する工程を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
無針スパイクアダプターを製剤化用緩衝液のバッグに差し込む工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
標的細胞バッグを製剤化用緩衝液のバッグに交換する工程を含む請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
クライオバッグから廃棄物バッグへの弁経路を手動で開き、チューブセットを通して製剤化用緩衝液を排出させる工程を含む請求項１に記載の方法。