【手続補正書】
【提出日】令和1年8月29日(2019.8.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性を有する天然に存在しないポリペプチド又は単離ポリペプチドであって、１００ａ．ｍ．ｕ．未満の分子量及び第１のｐＨから最大４ｐＨ単位離れたｐＫａを有する小分子又はイオンの存在下で前記活性がｐＨ依存性であり、前記小分子又はイオンの存在下におけるｐＨ依存性活性が、第１のｐＨにおける活性の、第２のｐＨにおける活性に対する比が少なくとも３．０であり、前記小分子又はイオンの非存在下における前記タンパク質の前記活性がｐＨ依存性ではなく、
前記小分子又はイオンが、ヒスチジン、ヒスタミン、水素付加アデノシン二リン酸、水素付加アデノシン三リン酸、クエン酸塩、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム、リン酸二水素及びこれらの任意の組み合わせから選択される、天然に存在しないポリペプチド又は単離ポリペプチド。
【請求項２】
前記第１のｐＨにおける活性の、前記第２のｐＨにおける活性に対する比が少なくとも４．０、又は少なくとも６．０、又は少なくとも８．０、又は少なくとも１０．０、又は少なくとも２０．０、又は少なくとも４０．０、又は少なくとも６０．０、又は少なくとも１００．０である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記第１のｐＨが酸性ｐＨであり、且つ前記第２のｐＨがアルカリ性ｐＨ又は中性ｐＨである、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記第１のｐＨが５．５〜７．２の範囲であるか、又は６．２〜６．８の範囲である、請求項３に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記第２のｐＨが７．２〜７．６の範囲である、請求項３又は４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、親ポリペプチドから進化させた天然に存在しない変異ポリペプチドである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記変異ポリペプチドが、前記親ポリペプチドよりも高い割合の荷電アミノ酸残基を有する、請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、抗体、一本鎖抗体、及び抗体フラグメントから選択され、前記活性が抗原に対する結合活性である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記小分子又はイオンが重炭酸塩である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
前記小分子又はイオンが６．２より高いｐＫａを有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記第１のｐＨにおける活性の、前記第２のｐＨにおける活性に対する比が少なくとも４．０である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記小分子又はイオンが、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム及び硫化ナトリウムからなる群から選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記小分子又はイオンが第１の条件から最大０．５、１、２、又３ｐＨ単位離れたｐＫａを有する、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記小分子又はイオンが第１のｐＨと第２のｐＨの間のｐＫａを有する、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記小分子又はイオンが６．２より大きく７．２未満のｐＫａを有する、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記第１のｐＨが５．５〜７．２の範囲であり、前記第２のｐＨが７．２〜７．６の範囲である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか一項に記載のポリペプチドの有効量と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項１８】
親ポリペプチドから条件的活性型ポリペプチドを作製する方法であって、
（ｉ）少なくとも１つのアミノ酸を突然変異させることにより前記親ポリペプチドを進化させて、１つ以上の変異ポリペプチドを作製する工程；
（ｉｉ）前記１つ以上の変異ポリペプチドを、１００ａ．ｍ．ｕ．未満の分子量及び第１のｐＨから最大４ｐＨ単位離れたｐＫａを有する小分子又はイオンの存在下で第１のｐＨのもとで前記１つ以上の変異ポリペプチドのための第１のアッセイ、および前記小分子又はイオンの存在下で第２のｐＨのもとで前記１つ以上の変異ポリペプチドのための第２のアッセイに供する工程；
（ｉｉｉ）第１のアッセイにおける活性の、第２のアッセイにおける活性に対する比が少なくとも３．０である変異ポリペプチドを選択する工程；および
（ｉｖ）小分子またはイオンの非存在下で活性がｐＨ依存性ではない、工程（ｉｉｉ）で選択された１つの変異ポリペプチドを選択することによって条件的活性型ポリペプチドを得る工程
を含み、
前記小分子又はイオンが、ヒスチジン、ヒスタミン、水素付加アデノシン二リン酸、水素付加アデノシン三リン酸、クエン酸塩、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム、リン酸二水素及びこれらの任意の組み合わせから選択される、方法。
【請求項１９】
前記親ポリペプチドが抗体の重鎖又は軽鎖であり、及び前記少なくとも１つのアミノ酸が前記親ポリペプチドの相補性決定領域にある、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つのアミノ酸が前記親ポリペプチドのＦｃ領域にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記進化工程が、前記Ｆｃ領域を別個の抗体の可変領域に置換して二重特異性抗体を形成することを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記進化工程が、前記Ｆｃ領域を別個の抗体の可変領域に置換して一本鎖抗体を形成することを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つのアミノ酸が前記親ポリペプチドのフレームワーク領域にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記進化工程が、置換、挿入、欠失、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１８〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
工程（ｉｉ）が前記１つ以上の変異ポリペプチドを、前記小分子又はイオンの非存在下で第１のｐＨのもとで前記１つ以上の変異ポリペプチドのための第３のアッセイ、および前記小分子又はイオンの非存在下で第２のｐＨのもとで前記１つ以上の変異ポリペプチドのための第４のアッセイに供することを更に含み；
工程（ｉｉｉ）第４のアッセイにおける活性に対する第３のアッセイにおける活性の比が少なくとも３．０である変異ポリペプチドを選択することを更に含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１のアッセイにおける活性の、前記第２のアッセイにおける活性に対する比が少なくとも４．０である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
前記小分子又はイオンが、重炭酸塩、酢酸塩、乳酸塩、二硫化物、硫化水素、アンモニウム及び硫化ナトリウムからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
前記小分子又はイオンが第１のｐＨから最大０．５、１、２、又３ｐＨ単位離れたｐＫａを有する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
前記小分子又はイオンが第１のｐＨと第２のｐＨの間のｐＫａを有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３０】
前記小分子又はイオンが６．２より大きく７．２未満のｐＫａを有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１のｐＨが５．５〜７．２の範囲であり、前記第２のｐＨが７．２〜７．６の範囲である、請求項１８に記載の方法。
【請求項３２】
前記ポリペプチドが、抗体、一本鎖抗体又は抗体フラグメントであり、活性が抗原に対する結合活性である、請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
前記ポリペプチドが、前記親ポリペプチドから進化した天然に存在しない変異ポリペプチドである、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
前記変異ポリペプチドが、前記親ペプチドよりも高い割合の荷電アミノ酸残基を有する、請求項３３に記載のポリペプチド。