【手続補正書】
【提出日】平成31年2月22日(2019.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書に記載の発明。
【請求項２】
ヒトＣＤ３εおよびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインである、２つの標的に特異的に結合する二特異性抗体であって、
ａ）ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する第１の抗体の第１の軽鎖および第１の重鎖と；
ｂ）ＣＤ３εに特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖および第２の重鎖であって、前記第２の抗体の前記第２の軽鎖および第２の重鎖内の可変ドメインＶＬおよびＶＨが、互いに置きかえられている、第２の軽鎖および第２の重鎖とを含み；
ａ）の前記第１の軽鎖の定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、ａ）の前記第１の重鎖の定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
を特徴とする二特異性抗体。
【請求項３】
ヒトＣＤ３εおよびヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインである、２つの標的に特異的に結合する二特異性抗体であって、
ａ）ヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインに特異的に結合する第１の抗体の第１の軽鎖および第１の重鎖と；
ｂ）ヒトＣＤ３εに特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖および第２の重鎖であって、前記第２の抗体の前記第２の軽鎖および第２の重鎖内の可変ドメインＶＬおよびＶＨが、互いに置きかえられている、第２の軽鎖および第２の重鎖とを含み；
ｂ）の前記第２の軽鎖の定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、ｂ）の前記第２の重鎖の定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと
を特徴とする二特異性抗体。
【請求項４】
前記第１の抗体のＦａｂ断片（さらにまた、「ＲＯＲ１−Ｆａｂ」とも称する）を含み、前記ＲＯＲ１−Ｆａｂの定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されており（Ｋａｂａｔに従う番号付け）、前記ＲＯＲ１−Ｆａｂの定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）により独立に置換されている（Ｋａｂａｔに従う番号付け）こと、任意選択で、前記二特異性抗体が、さらに、前記第１の抗体の第２のＦａｂ断片（「ＲＯＲ１−Ｆａｂ」）を含むことを特徴とする、請求項２に記載の二特異性抗体。
【請求項５】
ヒトＣＤ３εに特異的に結合する抗体部分、好ましくは、前記Ｆａｂ断片が、
（ａ）配列番号２３、２４および２５の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨを含み、前記可変ドメインＶＬが、配列番号２６、２７および２８の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬにより置きかえられており、任意選択で、前記可変ドメインが、配列番号２１および２２に示される配列を有するか；または
（ｂ）配列番号１２、１３および１４の重鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＨと、配列番号１５、１６および１７の軽鎖ＣＤＲを、それぞれ、前記抗ＣＤ３ε抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３として含む可変ドメインＶＬとを含み、任意選択で、前記可変ドメインが、配列番号１０および１１に示される配列を有する、
ことを特徴とする、請求項２から４のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項６】
前記定常ドメインＣＬ内の１２４位における前記アミノ酸の置きかえに加えて、１２３位におけるアミノ酸が、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈ）により独立に置換されていることを特徴とする、請求項２から５のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項７】
アミノ酸１２４がＫであり、アミノ酸１４７がＥであり、アミノ酸２１３がＥであり、およびアミノ酸１２３がカッパ軽鎖についてはＲであり、ラムダ軽鎖についてはＫであることを特徴とする、請求項２から６のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項８】
一方の重鎖のＣＨ３ドメインおよび他方の重鎖のＣＨ３ドメインの各々が、抗体のＣＨ３ドメインの間の、元の界面を含む界面において向かい合い、前記界面が、前記二特異性抗体の形成を促進するように変更されていることを特徴とし、前記変更が、
ａ）前記二特異性抗体内の前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記元の界面と向かい合う、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記元の界面内で、アミノ酸残基が、より大きい側鎖体積を有するアミノ酸残基で置きかえられ、これにより、一方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記界面内に、前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインの前記界面内の空洞にはまる突起が作出されるように、一方の重鎖のＣＨ３ドメインが変更されていることと、
ｂ）前記二特異性抗体内の前記第１のＣＨ３ドメインの前記元の界面と向かい合う、前記第２のＣＨ３ドメインの前記元の界面内で、アミノ酸残基が、より小さい側鎖体積を有するアミノ酸残基で置きかえられ、これにより、前記第２のＣＨ３ドメインの前記界面内に、前記第１のＣＨ３ドメインの前記界面内の突起がはまる空洞が作出されるように、前記他方の重鎖のＣＨ３ドメインが変更されていることと
を特徴とする、請求項２から７のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項９】
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃパート内に、Ｐｒｏ３２９のグリシンもしくはアルギニンによるアミノ酸置換、ならびに／またはＬｅｕ２３４のアラニンによる置換およびＬｅｕ２３５のアラニンによる置換を含むことを特徴とする、請求項２から８のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項１０】
構築物ＲＯＲ１  Ｆａｂ−Ｆｃ−ＣＤ３  Ｆａｂ−ＲＯＲ１  Ｆａｂであり、前記抗ＣＤ３ε抗体のＦａｂ断片内にＶＬ／ＶＨクロスオーバーを含むこと、ならびに、前記ヒトＩｇＧ１  Ｆｃパート内に、Ｐｒｏ３２９のグリシンによるアミノ酸置換、Ｌｅｕ２３４のアラニンによるアミノ酸置換およびＬｅｕ２３５のアラニンによるアミノ酸置換を含むこと、
任意選択で、両方のＲＯＲ１  Ｆａｂの定常ドメインＣＬ内で、１２４位におけるアミノ酸がリシン（Ｋ）により置換されており、１２３位におけるアミノ酸がカッパ軽鎖についてはアルギニン（Ｒ）により置換されており、ラムダ軽鎖についてはリシン（Ｋ）により置換されており、前記定常ドメインＣＨ１内で、１４７位におけるアミノ酸および２１３位におけるアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されていることを特徴とする、請求項９に記載の二特異性抗体。
【請求項１１】
前記二特異性抗体が、細胞ベースのアッセイにおいて、ＲＯＲ１陽性初代Ｂ−ＣＬＬ細胞を使用し、１ｎＭの抗体濃度で使用した場合、３７℃で２時間の間に内部化しないことを特徴とし、内部化しないとは、０時間において測定される、フローサイトメトリーにより検出される前記二特異性抗体のＲＯＲ１陽性初代Ｂ−ＣＬＬ細胞への結合の際における平均蛍光強度（ＭＦＩ）が、３７℃で２時間のインキュベーション後の再測定のときに、５０％を超えて低減しないか、好ましくは３０％を超えて低減しないことを意味する、請求項２から１０のいずれか一項に記載の二特異性抗体。
【請求項１２】
請求項２から１１のいずれか一項に記載の二特異性抗体を調製するための方法であって、
ａ）宿主細胞を、請求項２から１１のいずれか一項に記載の抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
ｂ）前記宿主細胞を、前記抗体分子の合成を可能とする条件下で培養するステップと、
ｃ）前記抗体分子を、前記培養物から回収するステップと
を含む方法。
【請求項１３】
請求項２から１１のいずれか一項に記載の二特異性抗体の軽鎖および重鎖をコードする核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞。
【請求項１４】
請求項２から１１のいずれか一項に記載の二特異性抗体および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項１５】
医薬としての使用のための、請求項２から１１のいずれか一項に記載の二特異性抗体を含む組成物、または請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ＲＯＲ１陽性血液悪性腫瘍、ＲＯＲ１陽性固形腫瘍または形質細胞障害の処置における医薬としての使用のための請求項１５に記載の組成物または医薬組成物であって、前記ＲＯＲ１陽性血液悪性腫瘍が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞系系統の慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）（Ｂ−ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、および腫瘍細胞の表面上にＲＯＲ１を有する他の血液悪性腫瘍からなる群から選択され、前記ＲＯＲ１陽性固形腫瘍が、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がんおよび膵がんからなる群から選択され、任意選択で、前記形質細胞障害が、多発性骨髄腫またはＲＯＲ１を発現する他のＢ細胞障害から選択される、請求項１５に記載の組成物または医薬組成物。