【手続補正書】
【提出日】平成20年8月22日(2008.8.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  血小板粘着を予防する治療有効量のサラチンを血管組織に投与することを含む、血管損傷または動脈内膜切除術後における血小板集積の抑制、それによる血栓症および再狭窄抑制のための医薬の製造へのポリペプチドサラチンの使用。
【請求項２】  血管損傷が、動脈硬化、心臓移植血管症、冠動脈インターベンションに続発した冠動脈再狭窄、バルーン血管形成術、ステント留置、ロータブレータ、頚動脈内膜切除術を含む動脈内膜切除術、透析グラフトのシャントおよび他のグラフトの吻合、不安定狭心症、急性心筋梗塞、卒中、良性肥大症、または良性前立腺肥大症に関連している、請求項１に記載の使用。
【請求項３】  ヒドロゲルで被覆された表面および抗血栓原性表面を提供するためのコーティングに関する手段を有するデバイスであって、該ヒドロゲルに、生物学的に活性な量のサラチンが、そこから局所に送達されるために組込まれている、前記デバイス。
【請求項４】  サラチンがカテーテルを介して局所投与され、または、サラチンが、組織に局所的に向けられたカテーテルの内腔内ペイビング中に組込まれている、請求項１に記載の使用。
【請求項５】  サラチンが、サラチンの局所における持続的放出を可能にする局所投与されたポリマー中に組込まれている、請求項１に記載の使用。
【請求項６】  ポリマーに製剤されたサラチンが、カテーテルを介して局所投与される、請求項５に記載の使用。
【請求項７】  ポリマー材料がデバイスの一部であり、かつサラチンを含有することを特徴とする、カテーテルデバイス。
【請求項８】  サラチンが、組織上または組織中に局所留置されるステントまたはステントのコーティングに組込まれている、請求項１に記載の使用。
【請求項９】  サラチンが、組織上または組織中に局所留置される血管内グラフトまたは血管内グラフトのコーティングに組込まれている、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】  請求項１〜９のいずれかに記載の事項を含むキット。
【請求項１１】  損傷血管組織を処置する方法であって、治療上有効な、血小板粘着を抑制する量のサラチンを該損傷血管組織に局所投与し、それにより該損傷血管組織を処置する、前記方法。
【請求項１２】  血管損傷が、動脈硬化、心臓移植血管症、冠動脈インターベンションに続発した冠動脈再狭窄、バルーン血管形成術、ステント留置、ロータブレータ、頚動脈内膜切除術を含む動脈内膜切除術、透析グラフトのシャントおよび他のグラフトの吻合、不安定狭心症、急性心筋梗塞、卒中、良性肥大症、または良性前立腺肥大症に関連している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】  血管損傷が、動脈硬化または再狭窄に関連している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】  サラチンが、カテーテルを介して局所投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】  サラチンが、組織に局所的に向けられたカテーテルの内腔内ペイビング中に組込まれている、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】  サラチンが、サラチンの局所における持続的放出を可能にする局所投与されたポリマー中に組込まれている、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】  ポリマーに製剤されたサラチンが、カテーテルを介して局所投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】  サラチンが、組織上または組織中に局所留置されるステントまたはステントのコーティングに組込まれている、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】  サラチンが、組織上または組織中に局所留置される血管内グラフトまたは血管内グラフトのコーティングに組込まれている、請求項１１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
サラチン処置ラットは、対照ラットより18.9％大きい内腔径を有した。頚動脈内膜切除術後2週間目で、15頭の対照ラットのうち5頭（３３％）が、組織学的分析上完全な頚動脈の血栓を発症していたが、サラチン処置ラット15頭のうち0頭（0％）が頚動脈血栓症を発症していた。カイ二乗分析の尤度比により、オッズ比が16.238であることが明らかになり、これは、対照群が閉塞性血栓症を発症するオッズ比が、サラチンで処置したラットより16倍高いことを示唆している（Ｐ＝0.0156）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
いくつかのヒドロキシアルキル−およびシアノアクリレートが手術用途のために研究され、いくつかのイソブチルシアノアクリレートが、特に好適であることが見出された。
典型的なヒドロゲルポリマーは、単一のオレフィン二重結合を有するヒドロキシアルキルアクリレート40〜60重量部、1つのオレフィン二重結合を含むメタクリルモノマー40〜60重量部、および重合開始剤0.001〜5重量部から製造し得る。重合は、バルク重合、溶液重合、懸濁重合またはエマルジョン重合の慣用の技術によって達成し得る。用いられる重合技術は、必要とされるポリマーの用量および製造される最終生成物の性質に左右される。典型的なヒドロゲル生成物は、モノエステルに対するメタクリルモノマーのモル比が、1:1から2.3:1の範囲、好ましくは1.5:1であり、ここで、ポリマーの細孔径が90オングストロームより大きいことにより説明される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
例１２
サラチンコートされたヒドロゲルカテーテルの製造
ＰＡ−１２ベースの材料の表面を、デバイスを2モル％のマクロ開始剤（ポリ（オクタデセン−マレオイル酢酸無水物））（poly(octadecen-alt-malein acetic acid anhydrid））の溶液中に、イソプロパノールに溶解したパー−エステル（per-ester）（11〜16モル％）およびマクロ開始剤1モルに対し0.5モルのエチレングリコール−ジメタクリレート（ＥＧＤＭＡ）とともに浸漬し、活性化させた。その後、マクロ開始剤／ＥＧＤＭＡコーティングを乾燥させた。コーティングをさらに5〜10分、120℃でアニールした。これは、マクロ開始剤の表面への固定を改善することを補助し、その結果、架橋を改善した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
コーティング条件を最適化するために、ＰＡ−１２担体シート上に生成したヒドロゲルコーティングを用いた。コーティングの前に、シートをイソプロパノールまたはアセトンで洗浄し、乾燥させた。
Vestamid (PA-12)からなるBlue Medical Devises GO（RX PTCA catheter）型バルーンカテーテルを、ヒドロゲルでのコーティングに用いた。5モル％のアクリル酸100ｍｌおよび0.2〜0.8モル％のメチレン−ビス−アクリル酸（methylen-bis-acrylic）の水溶液を混合し、シートまたはカテーテルをコートするのに用いた。重合後、コートしたデバイスを水で洗浄し、さらに24時間ＰＢＳバッファーで洗浄した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
これに続き、ポリマーをオーブンで60〜80℃にて0.5〜3時間アニールした。
乾燥ヒドロゲルコーティングの厚さは1〜4μｍの範囲であり、水性溶液中でのヒドロゲルの膨潤は、乾燥ヒドロゲル1ｇ当たり湿潤ヒドロゲル10〜50ｇの範囲であった。
サラチンの緩衝ＰＢＳバッファー溶液（ｐＨ7.4）に浸漬する場合（30分）、50μｇｍｌ−１の濃度を用いた。
バルーンカテーテルに噴霧する場合、コーティング溶液の調製には有機溶媒を用い、ＥＦＤから入手できるような標準的な小型噴霧コーティング装置を用いた。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】
精製ヒトｖＷＦのヒトI型（円）およびIII型（四角）コラーゲン、および仔ウシ皮膚コラーゲン（三角）への結合に対するサラチンの効果を示した図である。ＩＣ50は、I型＝0.23±0.004μｇｍｌ-1、III型＝0.81±0.04μｇｍｌ-1および仔ウシ皮膚コラーゲン＝0.44±0.008μｇｍｌ-1。
【図2】
in vitroでのフローチャンバーにおける、ヒトIII型コラーゲン上の血小板凝集塊形成のサラチンによる抑制へのずりの効果を示した図である。円は、2700ｓ-1のずり速度（ＩＣ50＝0.96±0.25μｇｍｌ-1）を示し、一方四角は1300ｓ-1のずり速度（ＩＣ50＝5.2±1.4μｇｍｌ-1）を示す。
【図3】
表面プラズモン共鳴により検出された固定化ヒトコラーゲンへのサラチンの結合のスキャッチャード分析を示した図である。III型コラーゲン上のサラチンに対する高親和性（Ｋｄ＝5 x 10-8 Ｍ、実線）および低親和性（Ｋｄ＝2ｘ10-6Ｍ、破線）結合部位の存在を示している。
【図4】
頚動脈内膜切除術後3時間目における露出内皮下層表面への粘着血小板数を、サラチン適用群（ｎ＝7）と対照群（ｎ＝10）とで比較した図である。血小板は、走査型電子顕微鏡を用いて計数した。サラチン群は、露出した内皮下層表面に5μｌのサラチン溶液の局所適用を受けた。
【図5】
頚動脈内膜切除術後24時間目における露出内皮下層表面への粘着血小板数を、サラチン適用群（ｎ＝９）と対照群（ｎ＝10）とで比較した図である。血小板は、走査型電子顕微鏡を用いて計数した。サラチン群は、露出した内皮下層表面に5μｌのサラチン溶液の局所適用を受けた。
【図6】
頚動脈内膜切除術後3時間目の動脈内膜切除されたラット頚動脈の電子顕微鏡写真（2000ｘ）である。Ａは対照表面である。Ｂは、サラチン（5μｌ）の局所投与を受けた表面である。対照表面には、フィブリン鎖、赤血球、および血小板を含む多量の細胞要素が認められる。サラチン処置表面は、細胞要素の顕著な減少を示している。
【図7】
頚動脈内膜切除術後24時間目の動脈内膜切除されたラット頚動脈の電子顕微鏡写真（2000ｘ）である。Ａは対照表面である。Ｂは、サラチン（5μｌ）の局所投与を受けた表面である。対照表面には、多数の赤血球および血小板が認められる。サラチン処置表面は、血小板粘着の顕著な減少を示している。
【図8】
頚動脈内膜切除術後2週間目における、内膜過形成に続発した内腔狭窄パーセントを示した図である。サラチン群（ｎ＝15）および対照群（ｎ＝10）を示した。サラチン群は、露出した内皮下層表面に5μｌのサラチン溶液の局所適用を受けた。
【図9】
頚動脈の断面を示した写真である。ラットにおいて、サラチン処置動脈（Ｂ）では、無処置対照（Ａ）に比べ内膜過形成が低減していることを示している。ＩＨ＝内膜過形成。