【手続補正書】
【提出日】平成19年11月20日(2007.11.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬を送達する安定リポソーム組成物であって、
（ａ）適切な水性媒体；
（ｂ）適切なホスホリピッドから形成されたリポソーム；
（ｃ）前記リポソームに少なくとも部分的に封入され、かつ
（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および
（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、
前記安定リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記安定リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しいことを特徴とする安定リポソーム組成物。
【請求項２】
医薬を送達する無菌かつ安定リポソーム組成物であって、
（ａ）適切な水性媒体；
（ｂ）適切なホスホリピッドから形成されたリポソーム；
（ｃ）前記リポソームに少なくとも部分的に封入され、かつ
（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および
（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、
前記無菌かつ安定リポソーム組成物は、オートクレーブされ、かつ、前記無菌かつ安定リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記無菌かつ安定リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しいことを特徴とする安定リポソーム組成物。
【請求項３】
製薬剤を送達する安定リポソーム組成物の製造方法であって、下記：
（ａ）適切な水性媒体を用意する工程；
（ｂ）適切なホスホリピッドを用意する工程；
（ｃ）前記安定リポソーム組成物に少なくとも部分的に封入されることが可能であり、かつ
（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および
（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、
前記安定リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記安定リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しい少なくとも１種の製薬剤を用意する工程；
（ｄ）前記水性媒体、前記ホスホリピッドおよび前記製薬剤を配合して前記安定リポソーム組成物を形成する工程；および
（ｅ）前記安定リポソーム組成物を滅菌するのに有効な条件下で前記安定リポソーム組成物をオートクレーブし、それによりオートクレーブ前の安定性に対して向上した安定性を有する組成物を得る工程を備える、安定リポソーム組成物の製造方法。
【請求項４】
オートクレーブし、前記無菌かつ安定リポソーム組成物の凝固点より高い温度で貯蔵した際に、下記の特性
（ｉ）約５％以下の封入率（パーセント）の変化；
（ｉｉ）約１０重量％以下のホスホリピッド含量の変化；
（ｉｉｉ）化学的加水分解および／または酸化による約５重量％以下の親油性アミンの含量の変化；
（ｉｖ）可視的凝集体の形成がないこと；および
（ｖ）光学的に決定される約１０％以下の中央粒径の変化、の１つ以上を少なくとも１年の期間にわたって示す組成物が提供される
ことを特徴とする請求項２記載の無菌かつ安定リポソーム組成物。
【請求項５】
患者に医薬を送達するキットであって、前記キットは使用用のインストラクションと、請求項１に記載の安定リポソーム組成物を含むとともに患者による吸入用の前記安定リポソーム組成物のエロゾル液滴を生成する装置とを備えたことを特徴とするキット。
【請求項６】
リポソーム組成物の安定性向上方法であって、下記：
（ａ）適切な水性媒体を用意する工程；
（ｂ）適切なホスホリピッドを用意する工程；
（ｃ）前記リポソーム組成物に少なくとも部分的に封入されることが可能であり、かつ
（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および
（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、
前記リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しい少なくとも１種の製薬剤を用意する工程；
（ｄ）前記水性媒体、前記ホスホリピッドおよび前記製薬剤を配合して前記リポソーム組成物を形成する工程；および
（ｅ）前記リポソーム組成物を滅菌するのに有効な条件下で前記リポソーム組成物をオートクレーブし、それによりオートクレーブ前の安定性に対して向上した安定性を有する組成物を得る工程を備える、リポソーム組成物の安定性向上方法。
【請求項７】
前記（ｅ）工程は、不活性雰囲気下、約１２１℃で最低でも１５分間、オートクレーブする工程である、請求項６に記載のリポソーム組成物の安定性向上方法。
【請求項８】
前記オートクレーブする工程において、前記不活性雰囲気は、アルゴンまたは窒素を含有している、請求項７に記載のリポソーム組成物の安定性向上方法。
【請求項９】
相安定性リポソーム組成物の同定方法であって、下記：
（ａ）ホスホリピッド、水溶液、製薬剤、および任意にエタノールとステロールを含むリポソーム組成物を用意する工程；
（ｂ）任意に前記リポソーム組成物の質量中央径（ｄ（０．５））を決定する工程；
（ｃ）前記リポソーム組成物を約１０００ｇと約５０００ｇの間において約４℃で約２時間遠心する工程；
（ｄ）任意に前記遠心工程（ｃ）後の前記リポソーム組成物の上清部分の質量中央径（ｄ（０．５））を決定する工程；
（ｅ）遠心後の前記リポソーム組成物の前記質量中央径（ｄ（０．５））の、遠心前の前記リポソーム組成物の前記質量中央径（ｄ（０．５））に対する比を計算する工程を含み、
前記リポソーム組成物が工程（ｅ）における前記比を、約０．６以上有する場合に、前記相安定性リポソーム組成物として同定することを特徴とする相安定性リポソーム組成物の同定方法。
【請求項１０】
前記相安定性リポソーム組成物は、前記（ｅ）工程における前記比が約０．８または０．８以上である場合に、前記相安定性リポソーム組成物として同定される、請求項９に記載の相安定性リポソーム組成物の同定方法。
【請求項１１】
前記リポソーム組成物は、遠心前にオートクレーブされる、請求項９に記載の相安定性リポソーム組成物の同定方法。
【請求項１２】
請求項６から８のいずれか一項に記載の方法により、増強された安定性を有しているリポソーム組成物。
【請求項１３】
請求項９から１１のいずれか一項に記載の方法により、同定された相安定性リポソーム組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
リポソームはリン脂質その他の適切な両親媒性分子が水または水溶液中で膨潤することが可能である場合に形成される。この工程の間、水溶性物質が水相に含まれていると、この物質は脂質二重層の間の水相中に捕捉されることがある。同様に、親油性物質は脂質中に溶解されることが可能であり、二重層自体の中に取り込まれることが可能である。もっとも、親油性物質が極性基をも有している場合は、この基は内側または外側の水相中に延びていることがある。リポソーム中への物質の封入は当技術において知られている多数の方法によって達成することが可能である。もっとも一般的に用いられる方法は、有機溶媒を揮発させてフラスコの器壁にリン脂質の薄膜を成形することを含む。このフィルムが適切な水性媒体中に分散されると、リポソームが形成される。あるいはまた、リポソームは適切な脂質を水性媒体中に懸濁させることにより形成することが可能である。次いで、この混合物を超音波処理（高周波音波により攪拌）して閉じた小胞の分散物とする。リポソームを形成するさらなる方法は脂質をエタノールと水中で急速混合することである。これはしばしば脂質を水溶液中に射出することにより達成される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
このように、無菌ろ過はリポソームが充分に小さくて０．２ミクロンのフィルター・システムを通過する場合に限っての選択肢である。リポソーム処方の目的が所与の作用部位における医薬の滞留時間を向上させることであるならば、より大きな多層リポソームが望ましい。１〜５ミクロンのリポソームが肺への送達に適しているが、明らかに末端無菌ろ過（ｔｅｒｍｉｎａｌ ｓｔｅｒｉｌｅ ｆｉｔｒａｔｉｏｎ）には適していない。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
従って、本発明の一態様において、医薬を送達する安定リポソーム組成物であって、（ａ）適切な水性媒体；（ｂ）適切なホスホリピッドから形成されたリポソーム；（ｃ）前記リポソームに少なくとも部分的に封入され、かつ（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、前記安定リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記安定リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しいことを特徴とする安定リポソーム組成物が提供される。本発明のある実施形態では、前記安定リポソーム組成物はオートクレーブされ、それにより無菌かつ安定リポソーム組成物が提供される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
本発明の組成物では、前記リポソーム組成物中の医薬の封入率（パーセント）は少なくとも２０カ月の期間にわたって実質的に安定であることが可能である。また、本発明の組成物は、オートクレービングすると、少なくとも２０カ月の期間にわたって物理的および化学的に安定であることが可能である。この場合、ホスホリピッドの量は少なくとも２０ヶ月の期間にわたって１０％（重量／重量）を超えて化学的加水分解または酸化により減少することはない。あるオートクレーブされた組成物では、ホスホリピッドの量は少なくとも２０ヶ月の期間にわたって前記リポソーム組成物の約３ｍｇ／ｍｌを超えて化学的加水分解または酸化により減少することはない。同様に、本発明のオートクレーブされた組成物では、前記親油性アミンは少なくとも２０ヶ月の期間にわたって５％、または２％（重量／重量）を超えて化学的に分解されることはない。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
本発明のさらに別の態様において、医薬を送達する無菌かつ安定リポソーム組成物であって、（ａ）適切な水性媒体；（ｂ）適切なホスホリピッドから形成されたリポソーム；（ｃ）前記リポソームに少なくとも部分的に封入され、かつ（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、前記無菌かつ安定リポソーム組成物は、ある実施形態では不活性雰囲気下で、オートクレーブされ、かつ、前記無菌かつ安定リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記無菌かつ安定リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しいことを特徴とする無菌かつ安定リポソーム組成物が提供される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
本発明のさらに別の態様において、製薬剤を送達する本発明の前記安定リポソーム組成物の製造方法であって、下記：（ａ）適切な水性媒体を用意する工程；（ｂ）適切なホスホリピッドを用意する工程；（ｃ）前記安定リポソーム組成物に少なくとも部分的に封入されることが可能であり、かつ（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、前記安定リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記安定リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しい少なくとも１種の製薬剤を用意する工程；（ｄ）前記水性媒体、前記ホスホリピッドおよび前記製薬剤を配合して前記安定リポソーム組成物を形成する工程；および（ｅ）前記安定リポソーム組成物を滅菌するのに有効な条件下で前記安定リポソーム組成物をオートクレーブし、それによりオートクレーブ前の安定性に対して向上した安定性を有する組成物を得る工程を備える、安定リポソーム組成物の製造方法が提供される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
本発明のさらに別の態様において、本発明の無菌かつ安定リポソーム組成物であって、オートクレーブし、前記無菌かつ安定リポソーム組成物の凝固点より高い温度で貯蔵した際に、下記の特性
（ｉ）約５％以下の封入率（パーセント）の変化；（ｉｉ）約１０重量％以下のホスホリピッド含量の変化；（ｉｉｉ）化学的加水分解および／または酸化による約５重量％以下の親油性アミンの含量の変化；（ｉｖ）可視的凝集体の形成がないこと；および（ｖ）光学的に決定される約１０％以下の中央粒径の変化、の１つ以上を少なくとも１年の期間にわたって示す組成物が提供される。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
本発明のさらに別の態様において、リポソーム組成物の安定性向上方法であって、下記：（ａ）適切な水性媒体を用意する工程；（ｂ）適切なホスホリピッドを用意する工程；（ｃ）前記リポソームに少なくとも部分的に封入されることが可能であり、かつ（ｉ）親油性アミンおよび製薬的に許容し得る酸であって、有機酸または無機酸から選ばれる酸、および（ｉｉ）親油性アミンの製薬的に許容し得る有機酸塩、および任意に製薬的に許容し得る有機酸を含む製薬的に許容し得る酸、から選ばれる、少なくとも１種の製薬剤を含み、前記リポソーム組成物中に存在する前記製薬的に許容し得る酸の量は前記リポソーム組成物のｐＨが前記製薬的に活性な親油性アミンのアミノ基のｐＫａよりも低いかまたはほぼ等しい少なくとも１種の製薬剤を用意する工程；（ｄ）前記水性媒体、前記ホスホリピッドおよび前記製薬剤を配合して前記リポソーム組成物を形成する工程；および（ｅ）前記リポソーム組成物を滅菌するのに有効な条件下で前記リポソーム組成物をオートクレーブし、それによりオートクレーブ前の安定性に対して向上した安定性を有する組成物を得る工程を備える、リポソーム組成物の安定性向上方法が提供される。
本発明のさらに別の態様において、相安定性リポソーム組成物の同定方法であって、下記：（ａ）ホスホリピッド、水溶液、製薬剤、および任意にエタノールとステロールを含むリポソーム組成物を用意する工程；（ｂ）任意に前記リポソーム組成物の質量中央径（ｄ（０．５））を決定する工程；（ｃ）前記リポソーム組成物を約１０００ｇと約５０００ｇの間において約４℃で約２時間遠心する工程；（ｄ）任意に前記遠心工程（ｃ）後の前記リポソーム組成物の上清部分の質量中央径（ｄ（０．５））を決定する工程；（ｅ）遠心後の前記リポソーム組成物の前記質量中央径（ｄ（０．５））の、遠心前の前記リポソーム組成物の前記質量中央径（ｄ（０．５））に対する比を計算する工程を含み、前記リポソーム組成物が工程（ｅ）における前記比を、約０．６以上有する場合に、前記相安定性リポソーム組成物として同定することを特徴とする相安定性リポソーム組成物の同定方法が提供される。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
本発明の一つの利点は前記組成物は安定であり、貯蔵時に融合、分離、沈殿、凝集またはゲル化しないことである。従って、それらは少なくとも１週間、しばしばもっと長く、いくつかの実施形態では１２ヶ月を超えて、または１８カ月を超えて、あるいは２年を超えて均一な組成物のままである。従って、そのような組成物の品質保持期間は延びる。これにより、より大きなバッチから均等に単位用量を分配することが可能であり、割当（ａｌｌｏｃａｔｉｏｎ）前に組成物を再構成する必要がない。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
エタノールは普通、特にエタノールを用いて通常の方法によりリポソームを形成している場合、リポソーム組成物の部分を形成する。代替物が利用可能であるが、不所望の毒性を有しないものまたは吸入時に刺激性であることが知られていないものに限定される。好適な代替物としては、グリコール類およびグリセロール類であるそのような条件に合致するものである。本発明のリポソーム組成物中に存在するエタノールの含有量は本発明の安定リポソーム組成物を生じるものであればいずれでもよい。ある実施形態では、エタノールの濃度は前記リポソーム組成物の全体積の約２．５％と約１０％の間である。体積の１０％より多いエタノールを有する組成物も本発明の範囲内であるが、濃度が全体積の１５％に近づきまたは１５％を超えると、例えば２０％では、形成されるリポソーム粒子の品質が悪くなり始める。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
本発明の水性媒体は導かれたリポソーム組成物の形成に干渉しない任意の生理的に許容可能な水溶液、例えば緩衝液または水であり得る。ある実施形態では、緩衝液は低イオン強度の緩衝液を含む。乾燥液については、イオン強度が充分に低いものを用いて形成されたリポソームが製薬剤を封入する効率に影響を与えないようにする必要がある。好適な一実施形態では、水溶液は水である。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
本発明で用いるのに適切なオートクレービング条件としては、リポソーム封入医薬製品の滅菌を可能にし、かつ組成物の経時化学的安定性が実質的に低下させない条件が挙げられる。ある実施形態では、リポソーム封入医薬製品は約１２１℃で最低約１５分間、窒素またはアルゴンのような不活性雰囲気下でオートクレーブされる。一実施形態では、不活性雰囲気は一般に約１．５％未満の酸素を含有するものである。より高い温度も時間を短くして同様に用いることが可能である。処方が加熱／冷却サイクルに耐え得るならば、その場合は、末端滅菌すると着実、迅速かつ安価な無菌医薬製品の調製方法が得られる。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
本発明の特徴は、リポソーム封入医薬製品組成物が均質な分散物を構成していることにある。ある組成物では、前記均質分散物は半透明の外観を有し、それらが均質に分散されているので、末端ユーザーが乳濁した投与形態に対してそのような工程を含める傾向がみられるにもかかわらず、投与前に震盪する必要がない。前記安定組成物は長期間にわたって物理的および化学的に安定であることが観察され、いかなる可視的凝集体も、ある実施形態では２４ヶ月後でさえも示さなかった。不安定リポソーム封入医薬製品はある期間経過すると沈殿、分離および凝集を示す。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
さらに、本発明の安定リポソーム封入医薬製品は貯蔵時の粒径が経時で実質的に一貫していることを特徴としており、上述したようにオートクレービングにより滅菌された安定リポソーム封入医薬製品を含む。例えば、下記実施例４は本発明の種々のリポソーム組成物の粒径分布が貯蔵後２０カ月までの期間にわたって実質的に変化しないままであったことを示し、本発明の処方は貯蔵時間にわたって実質的に粒径が安定であることを証明している。さらなる詳細は以下の実施例に記載されている。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
さらに、本発明の安定リポソーム封入医薬製品は貯蔵時に実質的に経時安定な有効成分封入率を特徴とし、上述したようにオートクレービングにより滅菌された安定リポソーム封入医薬製品を含む。本発明のある組成物をオートクレーブすると有効成分の封入率（パーセント）がオートクレービング前の有効成分の封入率（パーセント）に対して影響があることが示されているが、ここで述べた封入率（パーセント）の経時変化はオートクレーブしなかったか、またはオートクレービングに引き続き貯蔵した際の組成物の封入率（パーセント）の経時変化をいうものであることが了解されるべきである。また、遊離医薬の封入された医薬に対する所望の割合（パーセント）は本組成物の使用において有効成分の性質、所望の用量および所望の治療効果に対する遊離医薬と封入された医薬の相対的な寄与率に応じて変えることが可能であることが了解されるべきである。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
本発明のリポソーム組成物のｐＨは典型的に約ｐＨ４と約ｐＨ８の間のｐＨ値において相および化学的安定性をともに有する。一実施形態では、本発明のリポソームは約ｐＨ４と約ｐＨ７の間のｐＨ値において相および化学的安定性を有する。他の実施形態では、本発明のリポソームは約ｐＨ４．５と約ｐＨ６．５の間、または約ｐＨ５と約ｐＨ６の間のｐＨ値において相および化学的安定性を有する。本発明のリポソーム組成物は約４未満のｐＨ値において相安定であることがあるけれども、そのような処方は典型的には化学的に安定ではなく、他の反応中、特にホスホリピッドの酸化および／または加水分解がそのような低いｐＨにおいて時間の経過とともに認めうるほどに起きることがある。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９７】
本発明のリポソーム組成物は帯電したアミノ基を有する親油性をリポソーム組成物に安定性を付与する有効成分として含む。帯電した親油性アミンの不存在下で調製されたリポソームは不安定であり急速に沈降することが観察された。リポソームの調製において慣用されるホスホリピッドとしてはホスファチジルコリンが挙げられる。いかなる特定の理論にも拘束されるつもりはないが、以下は、リポソーム組成物の安定化または脱安定化に寄与すると考えられる相互作用および力の説明である。生理的ｐＨ範囲において、ホスファチジルコリンは正味ゼロ電荷の中性分子として振る舞う。生理的ｐＨにおいて、ホスファチジル基の負電荷はコリン部分の４級アンモニウム窒素の電荷と平衡している。リポソーム内で、ホスファチジルコリン分子は一般に並列に整列しており、そのため１分子の正に帯電したコリン基は隣接する脂質分子のホスファチジル基と電気的に相互作用する。そのようなリポソーム製剤の正味電荷は（ゼータ電位測定により反映されているように）ゼロである。リポソーム製剤内に非帯電医薬を包含させてもリポソームの正味電荷は変化しない。親油性アミン医薬を用いるリポソームの安定化はリポソーム組成物のｐＨをｐＨが親油性アミンのｐＫａとほぼ等しいかまたはそれより低くなるように選択して、親油性アミンに正電荷を増加させるようにすることにより達成される。正に帯電した親油性アミンはそれゆえリポソーム構造のホスホリピッド二重層内に、アミンの正電荷が負に帯電したホスファチジル部分とより密接に整列するように、挿入可能になり、リポソームの表面の電荷のバランスを崩して生理的ｐＨにおいて正に帯電したリポソームを形成することが考えられる。親油性アミンのｐＫａよりも低いｐＨであることにより、このように表面に帯電したリポソームを配することによって、医薬のリポソーム処方自体における安定剤としての役割を向上させることが可能になる。帯電したリポソームはこのように相互に反発して凝集に対する抵抗性を与える。これも同様に、親油性アミンおよびその塩並びに製薬的に許容し得る酸を含まない安定プラセボ・リポソーム組成物を調製することができないことを説明できるであろう。さらに、これも同様に、大半が非帯電の中性分子として提供された親油性アミンを有する安定リポソーム組成物を調製することができないことを説明できるであろう。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
本発明のリポソーム製剤の相安定性のお蔭で製薬的に有用なリポソーム製剤が提供される。実施例１に記載された製剤の相安定性を沈降および凝集体の形成について目視観察した。相安定性が充分でない製剤は典型的に非常に速く、しばしば一夜で沈降するが、他は数年間貯蔵後も沈降の兆候を示さない。相安定リポソームの可視的外観の例を図２ａに示す。一方、図２ｂに示す相不安定製剤の可視的外観は明らかに沈降と相分離を示す。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
ｐＨに関する安定性： リポソームのオートクレービングに関する問題はホスホリピッドまたは医薬成分の化学的分解の可能性があることである。処方において化学的分解があるとｐＨの変化に反映されることが多い。図５に示すように、本発明のリポソーム組成物のオートクレービング後のｐＨとオートクレービング前のｐＨの関係は一般に式 ｐＨ（後）＝ｐＨ（前） と書くことができ、当初ｐＨ７未満であった処方のｐＨに変化がないことを示している。オートクレービング前にわずかにアルカリ性であったリポソーム製剤は特にｐＨ＞８の処方は、オートクレービング後は低いｐＨを有し、グラフ上の点は所望の直線関係から逸れる。処方をより高いｐＨ値においてオートクレーブすると、処方の成分の化学的分解が起きることが明らかである。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２８】
図１２および図１３を参照すると、これらのグラフは、親油性アミンとしてオンダンセトロン（ｐＫａ − ７．４）を含有する図４のリポソーム製剤のオートクレービング前後の相安定性指数を比較している。オンダンセトロンを有する組成物については、フェンタニルの場合よりも大きなデータの散乱が観察されるが、これは処方の２つの主要クラス、パルミチン酸を含有する処方と高濃度オンダンセトロンを含有する処方とに起因するものであることが分かる。パルミチン酸含有処方は粘稠な混合物を形成し易く、かつリポソーム含有量の均一性が少ないため挙動がよくない。オンダンセトロンの高濃度（２．４ｍＭ）においては医薬の可視的結晶が観察された。これら２つのサブクラスの処方が除外されると、オンダンセトロン処方の傾向はフェンタニルと一致し、すなわちオートクレービング後、親油性アミンのｐＫａより低いｐＨ値を持つ処方は相安定である（図１４および図１５）。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２９】
図４のスマトリプタンを含有する組成物に関する図１６および図１７を参照すると、遊離医薬を有する処方のみが最初の調製時に相安定であった。他の医薬の場合と同様に、処方をより低いｐＨに滴定すると、オートクレービング後に多数の処方に相安定性が付与された。必要とされるｐＨはスマトリプタンについてはより低い。重要なのは、スマトリプタンは親油性アミンであるが、スマトリプタンはその構造中にスルホンアミド基も有し、多数のイオン化可能な基と相当するｐＫａ値を有し、オクタノール／水の分配係数が最も低い（ＬｏｇＰ＝１．０５）。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３２】
（実施例４−貯蔵安定性）
遊離フェンタニルとリポソーム封入フェンタニルの混合物を含有する製剤はエタノール相を水相と種々のバッチサイズで混合することにより調製された。エタノール相はエタノール、クエン酸フェンタニル、ホスファチジルコリンおよびコレステロールを用いてなるものであった。水相は注射用水を用いてなるものであった。混合前に、両相を約５６℃〜６０℃に加熱した。２つの相を混合して、混合物をさらに１０分間５６℃〜６０℃で混合した。この混合物を室温まで約２時間かけて冷却した。典型的には、最終水性処方は１ｍｌ当り、フェンタニル５００ｍｃｇ（クエン酸フェンタニル８００ｍｃｇとして）、ホスファチジルコリン４０ｍｇ、コレステロール４ｍｇ、およびエタノール１００ｍｇを注射用水中に溶解したものである。充填後、製剤を最終的滅菌のためにオートクレーブする（若干の空気が存在する）。最終製剤は３０〜４０％のフェンタニルを遊離医薬として含有し、残部（７０〜６０％）は封入された部分にある。