【手続補正書】
【提出日】平成20年5月15日(2008.5.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
パルボウイルスキャプシドと、
５’から３’方向に、
（ｉ）５’末端反復配列と、
（ｉｉ）第１の異種ヌクレオチド配列と、
（ｉｉｉ）パルボウイルスのＲｅｐタンパク質により分離不能な非分離末端反復配列と、
（ｉｖ）前記第１の異種ヌクレオチド配列に本質的に完全に相補的である別個の異種ヌクレオチド配列と、
（ｖ）３’末端反復配列と
を含むベクターゲノムであって、パルボウイルスキャプシドから放出されたとき、適切な条件において異種ヌクレオチド配列間で鎖内塩基対合することができる、ベクターゲノムと
を含む、二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２】
パルボウイルスキャプシドと、
５’から３’方向に、
（ｉ）５’末端反復配列と、
（ｉｉ）第１の異種ヌクレオチド配列と、
（ｉｉｉ）パルボウイルスのＲｅｐタンパク質により分離不能な非分離末端反復配列と、
（ｉｖ）前記第１の異種ヌクレオチド配列に本質的に完全に相補的である別個の異種ヌクレオチド配列と、
（ｖ）３’末端反復配列と
を含むベクターゲノムであって、各末端反復配列と非分離末端反復配列との間のヌクレオチド配列が少なくとも９０％互いに相補的であり、さらにパルボウイルスキャプシドから放出されたとき、適切な条件において異種ヌクレオチド配列間で鎖内塩基対合することができる、ベクターゲノムと
を含む、二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項３】
前記末端反復配列がパルボウイルス末端反復配列である、請求項１又は２に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項４】
前記末端反復配列がアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）末端反復配列である、請求項３に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項５】
前記ＡＡＶ末端反復配列が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５およびＡＡＶ６の末端反復配列からなる群から選択される、請求項４に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項６】
前記非分離末端反復配列が、パルボウイルスの分離不能な末端反復配列である請求項１又は２に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項７】
前記非分離末端反復配列が、ＡＡＶの分離不能な末端反復配列である請求項６に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項８】
前記末端分離部位（ｔｒｓ）が、パルボウイルスの分離不能な末端反復配列から欠失している、請求項６又は７に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項９】
Ｄエレメントの本質的に全てが、前記分離不能な末端反復配列から欠失している、請求項６〜８のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１０】
前記分離不能な末端反復配列のＤエレメントにおける欠失が、Ａ／Ｄ接合部を超えてＡエレメント内に及ぶ、請求項９に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１１】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、Ｄエレメントに挿入物を含む、請求項６又は７に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１２】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、末端分離部位（ｔｒｓ）配列に挿入物を含む、請求項６又は７に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１３】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、末端分離部位（ｔｒｓ）配列に１つ以上のヌクレオチド塩基置換を含む、請求項６又は７に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１４】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、ＡＡＶ２のＲｅｐタンパク質により認識されないＡＡＶ血清型からの末端反復配列である、又は、ＡＡＶのＲｅｐタンパク質により認識されない自律パルボウイルスからの末端反復配列である、請求項６〜１３のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１５】
前記ベクターゲノムが、ほぼ野生型ＡＡＶゲノムのサイズである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１６】
ポリペプチドが前記ベクターゲノムにコードされている、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１７】
前記ポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項１６に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１８】
前記ポリペプチドが免疫原性ポリペプチドである、請求項１６に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項１９】
前記ポリペプチドが、エンドスタチン、アンギオスタチン、スーパーオキシドジスムターゼ、エリスロポイエチン、モノクローナル抗体、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、リソソーム酵素（ヘキソサミニダーゼＡ及びイズロン酸スルファターゼを含む）、グロビン、レプチン、カタラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、サイトカイン（α−インターフェロン、β−インターフェロン、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−１２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びリンホトキシンを含む）、ペプチド成長因子又はホルモン（ソマトトロピン、インスリン、インスリン様成長因子１、インスリン様成長因子２、血小板由来成長因子、上皮成長因子、線維芽細胞成長因子、神経成長因子、神経栄養因子−３、神経栄養因子−４、脳由来神経栄養因子、グルア由来成長因子、トランスフォーミング成長因子−αおよびトランスフォーミング成長因子−βを含む）、受容体（腫瘍壊死因子受容体を含む）、自殺遺伝子産物（チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、チトクロームＰ４５０、デオキシシチジンキナーゼ、および腫瘍壊死因子を含む）、癌治療薬に対する耐性を与えるタンパク質、および腫瘍サプレッサー遺伝子産物からなる群から選択される請求項１７に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２０】
前記ポリペプチドが、がん抗原又は腫瘍抗原である請求項１８に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが、細菌抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、又は寄生性生物抗原である請求項１８に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２２】
前記ベクターゲノムが、アンチセンス核酸、リボソーム、スプライセオソーム介在性トランススプライシングを生じさせるＲＮＡ、干渉ＲＮＡ（ｉＲＮＡ）、又はガイドＲＮＡをコードする、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２３】
前記パルボウイルスキャプシドが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）キャプシドである、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２４】
前記パルボウイルスキャプシドが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５およびＡＡＶ６キャプシドからなる群から選択される、請求項２３に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２５】
鎖内塩基対合により形成される二本鎖異種ヌクレオチド配列が、プロモーター又はエンハンサーエレメントと機能的に関連している、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２６】
各末端反復配列と分離不能な末端反復配列の間のヌクレオチド配列が、本質的に完全に互いに相補的である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２７】
ハイブリッドパルボウイルス粒子である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２８】
キメラパルボウイルス粒子である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項２９】
標的化されたパルボウイルス粒子である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子。
【請求項３０】
薬理学的に許容可能な担体中に請求項１〜２９のいずれか１項に記載の複数の二本鎖パルボウイルス粒子を含む医用製剤。
【請求項３１】
パルボウイルスキャプシドにパッケージングされるビリオンＤＮＡを産生するための鋳型を含む核酸であって、前記鋳型が、末端反復配列および分離不能な末端反復配列に挟まれた異種ヌクレオチド配列を含む、核酸。
【請求項３２】
パルボウイルスキャプシドにパッケージングされるビリオンＤＮＡを産生するためのダイマー鋳型を含む核酸であって、前記鋳型が、５’から３’方向に、
５’末端反復配列と、
第１の異種ヌクレオチド配列と、
パルボウイルスのＲｅｐタンパク質により分離不能な非分離末端反復配列と、
前記第１の異種ヌクレオチド配列に本質的に完全に相補的である、別個の異種ヌクレオチド配列と、
３’末端反復配列と
を含み、
前記ビリオンＤＮＡが、パルボウイルスキャプシドから放出されるとき、適切な条件下で、異種ヌクレオチド配列間で鎖内塩基対合することができる、核酸。
【請求項３３】
パルボウイルスキャプシドにパッケージングされるビリオンＤＮＡを産生するためのダイマー鋳型を含む核酸であって、前記鋳型が、５’から３’方向に、
５’末端反復配列と、
第１の異種ヌクレオチド配列と、
パルボウイルスのＲｅｐタンパク質により分離不能な非分離末端反復配列と、
前記第１の異種ヌクレオチド配列に本質的に完全に相補的である、別個の異種ヌクレオチド配列と、
３’末端反復配列と
を含み、
各末端反復配列と非分離末端反復配列との間のヌクレオチド配列が、少なくとも９０％互いに相補的であり、さらにパルボウイルスキャプシドから放出されたとき、適切な条件において異種ヌクレオチド配列間で鎖内塩基対合することができる、核酸。
【請求項３４】
前記末端反復配列が、パルボウイルス末端反復配列である、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項３５】
前記末端反復配列がアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）末端反復配列である、請求項３４に記載の核酸。
【請求項３６】
前記ＡＡＶ末端反復配列が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５およびＡＡＶ６の末端反復配列からなる群から選択される、請求項３５に記載の核酸。
【請求項３７】
前記非分離末端反復配列が、パルボウイルスの分離不能な末端反復配列である請求項３１〜３３に記載の核酸。
【請求項３８】
前記非分離末端反復配列が、ＡＡＶの分離不能な末端反復配列である請求項３７に記載の核酸。
【請求項３９】
前記末端分離部位（ｔｒｓ）が、パルボウイルスの分離不能な末端反復配列から欠失している、請求項３７又は３８に記載の核酸。
【請求項４０】
Ｄエレメントの本質的に全てが、前記分離不能な末端反復配列から欠失している、請求項３９に記載の核酸。
【請求項４１】
前記分離不能な末端反復配列のＤエレメントにおける欠失が、Ａ／Ｄ接合部を超えてＡエレメント内に及ぶ、請求項４０に記載の核酸。
【請求項４２】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、Ｄエレメントに挿入物を含む、請求項３７又は３８に記載の核酸。
【請求項４３】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、末端分離部位（ｔｒｓ）配列に挿入物を含む、請求項３７又は３８に記載の核酸。
【請求項４４】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、末端分離部位（ｔｒｓ）配列に１つ以上のヌクレオチド塩基置換を含む、請求項３７又は３８に記載の核酸。
【請求項４５】
前記分離不能なパルボウイルス末端反復配列が、ＡＡＶ２のＲｅｐタンパク質により認識されないＡＡＶ血清型からの末端反復配列である、又は、ＡＡＶのＲｅｐタンパク質により認識されない自律パルボウイルスからの末端反復配列である、請求項３７〜４４のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項４６】
前記異種ヌクレオチド配列又はその相補的な配列が、ポリペプチドをコードする、請求項３１、又は請求項３１に従属する場合の請求項３４〜４５のいずれか１項に記載された核酸。
【請求項４７】
前記鋳型がポリペプチドをコードする、請求項３２又は３３、又は請求項３２又は３３に従属する場合の３４〜４５のいずれか１項に記載された核酸。
【請求項４８】
前記ポリペプチドが、治療用ポリペプチド又は免疫原性ポリペプチドである請求項４６又は４７に記載の核酸。
【請求項４９】
前記ポリペプチドが、エンドスタチン、アンギオスタチン、スーパーオキシドジスムターゼ、エリスロポイエチン、モノクローナル抗体、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、リソソーム酵素（ヘキソサミニダーゼＡ及びイズロン酸スルファターゼを含む）、グロビン、レプチン、カタラーゼ、チロシンヒドロキシラーゼ、サイトカイン（α−インターフェロン、β−インターフェロン、インターフェロン−γ、インターロイキン−２、インターロイキン−４、インターロイキン−１２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びリンホトキシンを含む）、ペプチド成長因子又はホルモン（ソマトトロピン、インスリン、インスリン様成長因子１、インスリン様成長因子２、血小板由来成長因子、上皮成長因子、線維芽細胞成長因子、神経成長因子、神経栄養因子−３、神経栄養因子−４、脳由来神経栄養因子、グルア由来成長因子、トランスフォーミング成長因子−αおよびトランスフォーミング成長因子−βを含む）、受容体（腫瘍壊死因子受容体を含む）、自殺遺伝子産物（チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、チトクロームＰ４５０、デオキシシチジンキナーゼ、および腫瘍壊死因子を含む）、癌治療薬に対する耐性を与えるタンパク質、および腫瘍サプレッサー遺伝子産物からなる群から選択される請求項４８に記載の核酸。
【請求項５０】
前記ポリペプチドが、がん抗原又は腫瘍抗原である請求項４８に記載の核酸。
【請求項５１】
前記ポリペプチドが、細菌抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、又は寄生性生物抗原である請求項４８に記載の核酸。
【請求項５２】
前記異種ヌクレオチド配列又はその相補的な配列が、アンチセンス核酸、リボソーム、スプライセオソーム介在性トランススプライシングを生じさせるＲＮＡ、干渉ＲＮＡ（ｉＲＮＡ）、又はガイドＲＮＡをコードする、請求項３１又は、請求項３１に従属する場合請求項３４〜４５のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５３】
前記鋳型が、アンチセンス核酸、リボソーム、スプライセオソーム介在性トランススプライシングを生じさせるＲＮＡ、干渉ＲＮＡ（ｉＲＮＡ）、又はガイドＲＮＡをコードする、請求項３２若しくは３３又は、請求項３２若しくは３３に従属する場合請求項３４〜４５のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５４】
前記核酸が、プラスミド、裸のＤＮＡベクター、細菌の人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）又はウイルスベクターからなる群から選択される、請求項３１〜５３のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５５】
前記核酸が、哺乳動物細胞の染色体に安定して組み込まれる、請求項３２〜５３のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項５６】
請求項３１〜５５のいずれか１項に記載のヌクレオチド配列から産生されるビリオンＤＮＡ。
【請求項５７】
請求項３１〜５５のいずれか１項に記載の核酸を含む培養細胞。
【請求項５８】
二本鎖パルボウイルス粒子をインビトロで産生する方法であって、
（ａ）請求項３１〜５５のいずれか１項に記載の鋳型をコードする核酸と、
（ｂ）ベクターゲノムを産生するための鋳型の複製に十分な核酸と、
（ｃ）ベクターゲノムをパルボウイルスキャプシドにパッケージングするのに十分なヌクレオチド配列と
を、前記ベクターゲノムの複製、および前記ベクターゲノムの前記パルボウイルスキャプシドへのパッケージングに十分な条件で、細胞に提供することを含み、
それによって、パルボウイルスキャプシド内に包まれているベクターゲノムを含む二本鎖パルボウイルス粒子が細胞内で産生される、方法。
【請求項５９】
前記鋳型を含む核酸が、プラスミド又はウイルスベクター、好ましくはヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター又はバキュロウイルスベクターである請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記鋳型を含む核酸が、哺乳動物細胞の染色体に安定して組み込まれる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
二本鎖パルボウイルスが細胞内に入る条件下で、細胞に請求項１〜２９のいずれか１項に記載の二本鎖パルボウイルス粒子を接触させることを含む、細胞にヌクレオチド配列を送達するインビトロの方法。
【請求項６２】
前記細胞が、がん細胞、腫瘍細胞、神経細胞（末梢神経系および脳細胞を含む中枢神経系の細胞を含む）、肺細胞、筋細胞、上皮細胞（腸管および呼吸器上皮細胞を含む）、肝細胞、樹状細胞、眼細胞（網膜細胞を含む）、膵細胞（島細胞を含む）、心筋細胞、骨細胞、脾細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、内皮細胞、前立腺細胞、生殖細胞、前駆細胞、神経幹細胞及び臓幹細胞からなる群から選択される請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
嚢胞性線維症および他の肺疾患、Ａ型血友病、Ｂ型血友病、サラセミア、貧血および他の血液障害、ＡＩＤＳ、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、癲癇および他の神経学的障害、がん、糖尿病、筋ジストロフィ（デュシェンヌ型筋ジストロフィ、ベッカー型筋ジストロフィを含む）、ゴーシェ病、フルラー病及びその他の代謝欠損症、及び網膜変性疾患（および他の眼疾患）からなる群から選択される疾患の治療ための、請求項３０の医用製剤。
【請求項６４】
がん又は腫瘍の治療のための請求項３０に記載の医用製剤。