【手続補正書】
【提出日】平成18年11月29日(2006.11.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原タンパク質を含んだ絹糸を、粉末化、粒子化、または可溶化した絹組成物であって、動物に投与したときに、その血中に抗原タンパク質に対する抗体を誘導できることを特徴とする絹組成物。
【請求項２】
さらに免疫を賦活化する物質を含むことを特徴とする請求項１に記載の絹組成物。
【請求項３】
抗原タンパク質が、イヌパルボウイルスＶＰ２タンパク質遺伝子であることを特徴とする請求項１または２に記載の絹組成物。
【請求項４】
染色体に抗原タンパク質遺伝子を組み込んだ遺伝子組換えカイコを作製し、得られた遺伝子組換えカイコの絹糸腺または絹糸に組換え抗原タンパク質を生産させた後、その絹糸から調製することを特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項５】
絹糸腺特異的に発現するプロモーターの下流に結合された抗原タンパク質遺伝子を、染色体に組み込むことを特徴とする請求項４に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項６】
絹糸腺特異的に発現するプロモーターが、フィブロインＨ鎖遺伝子のプロモーターであることを特徴とする請求項５に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項７】
抗原タンパク質遺伝子がトランスポゾン由来の２対の末端逆位配列の間に位置することを特徴とする請求項６に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項８】
トランスポゾン由来の末端逆位配列が、昆虫由来であることを特徴とする請求項７に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項９】
トランスポゾンが、鱗翅目昆虫由来のトランスポゾンpiggyBac由来であることを特徴とする請求項８に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項１０】
抗原タンパク質遺伝子が、ウイルス由来の遺伝子であることを特徴とする請求項４から９のいずれか１項に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項１１】
ウイルス由来の遺伝子が、イヌパルボウイルスＶＰ２タンパク質遺伝子であることを特徴とする請求項１０に記載の絹組成物の製造方法。
【請求項１２】
染色体に抗原タンパク質遺伝子を組み込んだ遺伝子組換えカイコを作製し、得られた遺伝子組換えカイコの絹糸腺または絹糸に組換え抗原タンパク質を生産させた後、その絹糸腺または絹糸から、抗原性を有する抗原タンパク質を回収することを特徴とする組換え抗原タンパク質の製造方法。
【請求項１３】
絹糸腺または絹糸を可溶化剤で水溶液にする工程並びに透析処理、硫酸アンモニウム処理、ゲル濾過及びカラム担体による吸脱着から選択される絹糸タンパク質を除去する工程を含む請求項１２に記載の組換え抗原タンパク質の製造方法。
【請求項１４】
請求項１から３のいずれか１項に記載の絹組成物を含むワクチン。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、動物に対して抗原となるタンパク質を含むカイコの絹糸の絹組成物、該絹組成物の製造方法、該絹組成物を含むワクチン、及び組換え抗原タンパク質の製造方法に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明は、動物に対して抗原となるタンパク質を含むカイコの絹糸の絹組成物、該絹組成物の製造方法、該絹組成物を含むワクチン、及び組換え抗原タンパク質の製造方法である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
すなわち、本発明は、次の（１）〜（１４）である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
（１）抗原タンパク質を含んだ絹糸を、粉末化、粒子化、または可溶化した絹組成物であって、動物に投与したときに、その血中に抗原タンパク質に対する抗体を誘導できることを特徴とする絹組成物。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
（２）さらに免疫を賦活化する物質を含むことを特徴とする（１）に記載の絹組成物。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
（３）抗原タンパク質が、イヌパルボウイルスＶＰ２タンパク質遺伝子であることを特徴とする（１）または（２）に記載の絹組成物。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
（４）染色体に抗原タンパク質遺伝子を組み込んだ遺伝子組換えカイコを作製し、得られた遺伝子組換えカイコの絹糸腺または絹糸に組換え抗原タンパク質を生産させた後、その絹糸から調製することを特徴とする（１）から（３）のいずれか１項に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
（５）絹糸腺特異的に発現するプロモーターの下流に結合された抗原タンパク質遺伝子を、染色体に組み込むことを特徴とする（４）に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
（６）絹糸腺特異的に発現するプロモーターが、フィブロインＨ鎖遺伝子のプロモーターであることを特徴とする（５）に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
（７）抗原タンパク質遺伝子がトランスポゾン由来の２対の末端逆位配列の間に位置することを特徴とする（６）に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
（８）トランスポゾン由来の末端逆位配列が、昆虫由来であることを特徴とする（７）に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
（９）トランスポゾンが、鱗翅目昆虫由来のトランスポゾンpiggyBac由来であることを特徴とする（８）に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
（１０）抗原タンパク質遺伝子が、ウイルス由来の遺伝子であることを特徴とする（４）から（９）のいずれか１項に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
（１１）ウイルス由来の遺伝子が、イヌパルボウイルスＶＰ２タンパク質遺伝子であることを特徴とする（１０）に記載の絹組成物の製造方法。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
（１２）染色体に抗原タンパク質遺伝子を組み込んだ遺伝子組換えカイコを作製し、得られた遺伝子組換えカイコの絹糸腺または絹糸に組換え抗原タンパク質を生産させた後、その絹糸腺または絹糸から、抗原性を有する抗原タンパク質を回収することを特徴とする組換え抗原タンパク質の製造方法。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
（１３）絹糸腺または絹糸を可溶化剤で水溶液にする工程並びに透析処理、硫酸アンモニウム処理、ゲル濾過及びカラム担体による吸脱着から選択される絹糸タンパク質を除去する工程を含む（１２）に記載の組換え抗原タンパク質の製造方法。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
（１４）（１）から（３）のいずれか１項に記載の絹組成物を含むワクチン。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正３９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正４４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
このようにして得られた遺伝子組換えカイコより抗原タンパク質を回収することにより、組換え抗原タンパク質を製造することができる。遺伝子組換えカイコが生産した絹糸腺または絹糸から抗原性を有する抗原タンパク質を回収する方法としては、絹糸とともに回収する方法以外にもさまざまな方法が考えられる。例えば、絹糸腺または絹糸は極めて均一な水難溶性成分（フィブロインおよびセリシンなどの絹糸タンパク質）により大部分が構成されているため、カイコ絹糸腺または絹糸より回収することにより夾雑物の種類を極めて少なく回収することができる。また抗原タンパク質のみ可溶化し回収することが困難な場合には絹糸タンパク質ごと高塩濃度水溶液やアルカリにより可溶化した後、水に難溶な絹糸タンパク質を透析処理や限外濾過により除く方法も用いることができる。高塩濃度の水溶液を作製する際の可溶化剤として用いる塩としては、リチウムチオシアネート、塩化カルシウム、グアニジンチオシアネート、尿素などがあげられる。溶解後、透析処理、硫酸アンモニウム処理、ゲル濾過、カラム担体による吸脱着などの精製操作により、純度の高い抗原タンパク質を得ることが可能となる。ワクチンとしての使用を考えた場合、抗原タンパク質は高い純度が要求され、好ましくは80％以上であり、さらに好ましくは95％以上である。このためには１段階のカラム担体による吸脱着が有効である。このように本発明によれば、従来複雑な精製工程が必要であった高純度への抗原タンパク質の精製が容易に可能となる。