【手続補正書】
【提出日】平成20年8月12日(2008.8.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能的内因性免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項２】
前記有蹄動物が、内因性重鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項３】
前記有蹄動物が、内因性軽鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項４】
前記有蹄動物が、内因性κ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項５】
前記有蹄動物が、内因性λ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、請求項３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項６】
前記有蹄動物が、ブタ、ウシ、ヒツジ、およびヤギからなる群から選択される、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項７】
前記有蹄動物がブタである、請求項６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項８】
前記有蹄動物が、核移植によって生成される、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項９】
前記有蹄動物が、外因性免疫グロブリン遺伝子座を発現する、請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、軽鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１２】
前記軽鎖遺伝子座が、κ鎖遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１３】
前記軽鎖遺伝子座が、λ鎖遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１１に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１４】
前記外因性遺伝子座が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１５】
人工染色体が、前記外因性免疫グロブリンを含む、請求項９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１６】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項１５に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１７】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項１６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１８】
内因性λ鎖免疫グロブリンのいかなる発現も欠く、トランスジェニック哺乳動物。
【請求項１９】
外因性免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを発現するトランスジェニック有蹄動物であって、前記免疫グロブリンが、内因性有蹄動物染色体内に組み込まれた免疫グロブリン遺伝子座から発現される、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項２０】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２１】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、子孫に遺伝する、請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２２】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、雄生殖系列を介して子孫に遺伝する、請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２３】
前記有蹄動物が、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシである、請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２４】
前記有蹄動物がブタである、請求項２３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２５】
前記有蹄動物が、核移植を介して生成される、請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２６】
前記免疫グロブリン遺伝子座がＢ細胞において発現されて、１つ以上の抗原への曝露に応答して外因性免疫グロブリンを生成する、請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２７】
人工染色体が、前記外因性免疫グロブリンを含む、請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２８】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項２７に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項２９】
前記人工染色体が、酵母人工染色体を含む、請求項２８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項３０】
前記人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項２７に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項３１】
請求項１に記載のトランスジェニック有蹄動物に由来する、トランスジェニック有蹄動物の細胞、組織、または器官。
【請求項３２】
請求項１９に記載のトランスジェニック有蹄動物に由来する、トランスジェニック有蹄動物の細胞、組織、または器官。
【請求項３３】
前記細胞が、体細胞、生殖細胞、または胚細胞である、請求項３１または請求項３２に記載の細胞。
【請求項３４】
前記細胞が、Ｂ細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３５】
前記細胞が、線維芽細胞である、請求項３４に記載の細胞。
【請求項３６】
外因性免疫グロブリン遺伝子座を含む、ブタ動物。
【請求項３７】
人工染色体が、前記外因性遺伝子座を含む、請求項３６に記載のブタ。
【請求項３８】
前記人工染色体が、再配列する１つ以上の外因性免疫グロブリン遺伝子座を含み、かつ該人工染色体は、１つ以上の抗原への曝露に応答して外因性免疫グロブリンを生成し得る、請求項３７に記載のブタ。
【請求項３９】
請求項３６に記載の動物に由来する、ブタ細胞。
【請求項４０】
前記細胞が、体細胞、Ｂ細胞、または線維芽細胞である、請求項３９に記載のブタ細胞。
【請求項４１】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリンである、請求項３６に記載のブタ。
【請求項４２】
前記１つ以上の人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項３７に記載のブタ。
【請求項４３】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項４２に記載のブタ。
【請求項４４】
外因性抗体を生成する方法であって、該方法は、
（ａ）１つ以上の目的の抗原を有蹄動物に投与する工程であって、有蹄動物の細胞は、１つ以上の人工染色体を含み、かつ機能的内因性免疫グロブリンのいかなる発現も欠き、それぞれの人工染色体は、再配列して該１つ以上の抗原に対する外因性抗体を生成する１つ以上の外因性免疫グロブリン遺伝子座を含む、工程；および
（ｂ）該有蹄動物から該外因性抗体を回収する工程；
を包含する、方法。
【請求項４５】
前記免疫グロブリン遺伝子座が、Ｂ細胞中で再配列する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記外因性免疫グロブリン遺伝子座が、軽鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記外因性遺伝子座が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
人工染色体が、前記外因性免疫グロブリンを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項５０】
前記人工染色体が、哺乳動物人工染色体を含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記哺乳動物人工染色体が、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、およびヒト第２２染色体、またはそれらのフラグメントのうちの１つ以上を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ブタ重鎖免疫グロブリンまたはそのフラグメントを含む単離ヌクレオチド配列であって、該重鎖免疫グロブリンは、少なくとも１つの連結領域および少なくとも１つの免疫グロブリン定常領域を含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項５３】
前記重鎖免疫グロブリンが、少なくとも１つの可変領域、少なくとも２つの多様性領域、少なくとも４つの連結領域、および少なくとも１つの定常領域を含む、請求項５２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５４】
前記重鎖免疫グロブリンが、配列番号２９を含む、請求項５３に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５５】
前記重鎖免疫グロブリンが、配列番号４を含む、請求項５２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５６】
前記配列が、配列番号４または配列番号２９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％相同である、請求項５４または請求項５５に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５７】
前記配列が、配列番号４の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドまたは配列番号２９の残基１〜９，０７０を含む、請求項５４または請求項５５に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５８】
前記配列が、配列番号２９の残基９，０７０〜１１０３９を含む、請求項５４または請求項５５に記載のヌクレオチド配列。
【請求項５９】
配列番号４または配列番号２９とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項６０】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号２９と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列、
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）前記第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号２９と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項６１】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項６０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６２】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項６０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６３】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項６０に記載のターゲッティングベクター。
【請求項６４】
請求項６０に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項６５】
ブタ重鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化されている、請求項６４に記載の細胞。
【請求項６６】
請求項６４に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項６７】
有蹄動物のκ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項６８】
前記有蹄動物がブタである、請求項６７に記載のヌクレオチド配列。
【請求項６９】
前記有蹄動物のκ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、少なくとも１つの連結領域、１つの定常領域、および／または１つのエンハンサー領域を含む、請求項６７に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７０】
前記ヌクレオチド配列が、少なくとも５つの連結領域、１つの定常領域、および１つのエンハンサー領域を含む、請求項６７に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７１】
配列番号３０を含む、請求項７０に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７２】
配列番号１２を含む、請求項７０に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７３】
前記配列が、配列番号１２または配列番号３０の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドを含む、請求項７１または請求項７２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項７４】
配列番号１２または配列番号３０とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項７５】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号３０と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）前記第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号３０と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項７６】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項７５に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７７】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項７５に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７８】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項７５に記載のターゲッティングベクター。
【請求項７９】
請求項７５に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項８０】
κ鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化されている、請求項７９に記載の細胞。
【請求項８１】
請求項８０に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項８２】
有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を含む、単離ヌクレオチド配列。
【請求項８３】
前記有蹄動物がブタである、請求項８２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８４】
前記有蹄動物がウシである、請求項８２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８５】
前記有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、Ｊ単位〜Ｃ単位のコンカテマーを含む、請求項８２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８６】
前記有蹄動物のλ軽鎖免疫グロブリン遺伝子座が、例えば、配列番号３１に示す、少なくとも１つの連結領域−定常領域対および／または少なくとも１つの可変領域を含む、請求項８２に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８７】
配列番号２８を含む、請求項８３に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８８】
配列番号３１を含む、請求項８４に記載のヌクレオチド配列。
【請求項８９】
前記配列が、配列番号２８または配列番号３１の少なくとも１７個、２０個、２５個、または３０個連続するヌクレオチドを含む、請求項８７または請求項８８に記載のヌクレオチド配列。
【請求項９０】
配列番号２８または配列番号３１とハイブリダイズする、単離ヌクレオチド配列。
【請求項９１】
ターゲッティングベクターであって、
（ａ）配列番号２８または配列番号３１と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第１のヌクレオチド配列；
（ｂ）選択マーカー遺伝子；および
（ｃ）該第１のヌクレオチド配列と重複しない、配列番号２８または配列番号３１と相同な少なくとも１７個連続する核酸を含む、第２のヌクレオチド配列；
を含む、ターゲッティングベクター。
【請求項９２】
前記選択マーカーが、抗生物質耐性遺伝子を含む、請求項９１に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９３】
前記第１のヌクレオチド配列が、５’組換えアームに相当する、請求項９１に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９４】
前記第２のヌクレオチド配列が、３’組換えアームに相当する、請求項９１に記載のターゲッティングベクター。
【請求項９５】
請求項９１に記載のターゲッティングベクターでトランスフェクトされた、細胞。
【請求項９６】
λ鎖免疫グロブリン遺伝子座の少なくとも１つの対立遺伝子が不活化された、請求項９５に記載の細胞。
【請求項９７】
請求項９６に記載の細胞を含む、ブタ動物。
【請求項９８】
少なくとも１００ｋｂのＤＮＡを環状化する方法であって、
その後、該ＤＮＡを部位特異的リコンビナーゼによって宿主ゲノムに組み込み得る、
方法。
【請求項９９】
少なくとも１００ｋｂ、２００ｋｂ、３００ｋｂ、４００ｋｂ、５００ｋｂ、１０００ｋｂ、２０００ｋｂ、５０００ｋｂ、１０，０００ｋｂのＤＮＡを環状化し得る、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記ＤＮＡの環状化が、前記ＤＮＡ配列の各末端にて部位特異的リコンビナーゼ標的部位を結合すること、およびその後、該ＤＮＡ配列への部位特異的リコンビナーゼを適用すること、によって行われ得る、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
前記部位特異的リコンビナーゼ標的部位が、Ｌｏｘである、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０２】
人工染色体が、前記ＤＮＡ配列を含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項１０３】
前記人工染色体が、酵母人工染色体または哺乳動物人工染色体である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記人工染色体が、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ配列を含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】
前記ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントが、ヒト第１４染色体、ヒト第２染色体、および／またはヒト第２２染色体を含む、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
内因性免疫グロブリンの少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠くトランスジェニック有蹄動物であって、該免疫グロブリンは、重鎖、κ軽鎖、およびλ軽鎖、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、トランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０７】
外因性免疫グロブリンが発現される、請求項１０６に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１０８】
請求項１０７に記載のトランスジェニック有蹄動物を生成するための方法であって、
内因性免疫グロブリンの少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠くトランスジェニック有蹄動物が、外因性免疫グロブリンを発現する有蹄動物と交配させられ、該内因性免疫グロブリンは、重鎖、κ軽鎖、およびλ軽鎖、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、方法。
【請求項１０９】
前記有蹄動物が、ブタである、請求項１０６〜請求項１０８のうちいずれか１項に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１０】
前記外因性免疫グロブリンが、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントである、請求項１０７または請求項１０８に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１１】
人工染色体が、前記ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはそのフラグメントを含む、請求項１１０に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１２】
請求項１０６に記載の有蹄動物に由来する、細胞。
【請求項１１３】
異種抗原の発現を消失させるためのさらなる遺伝子改変をさらに含む、請求項１、請求項１９、請求項１０６、または請求項１０７に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１４】
前記有蹄動物が、α−１，３−ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子の少なくとも１つの対立遺伝子の発現を欠く、請求項１１３に記載のトランスジェニック有蹄動物。
【請求項１１５】
前記有蹄動物がブタである、請求項１１３に記載のトランスジェニック有蹄動物。