【手続補正書】
【提出日】平成19年11月21日(2007.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】 （ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、および
（ｂ） 該幹細胞を真性糖尿病患者に移入するステップ、ここで該幹細胞がインスリン産生細胞に分化する、
を含む、真性糖尿病患者の治療のための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項２】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで培養するステップ、および
（ｃ） 前駆細胞を患者に移入するステップ、ここで該前駆細胞がインスリン産生β細胞に分化する、
を含む、真性糖尿病患者の治療のための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項３】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで拡張させて前駆細胞を作製するステップ、および
（ｃ） 該前駆細胞を真性糖尿病患者に移入するステップ、ここで該前駆細胞がインスリン産生β細胞に分化する、
を含む、真性糖尿病患者の治療のための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項４】（ｄ） 該患者を免疫抑制剤で処置するステップ
をさらに含む、請求項２または３記載の使用。
【請求項５】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞を拡張させて前駆細胞を作製するステップ、
（ｃ） 培養において該前駆細胞を分化させ、偽島様凝集塊を形成させるステップ、および
（ｄ） 該偽島様凝集塊を患者に移入するステップ
を含む、真性糖尿病患者の治療のための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項６】（ｅ） 該患者を免疫抑制剤で処置するステップ
をさらに含む、請求項５記載の使用。
【請求項７】（ａ） ドナーから膵島を取り出すステップ、
（ｂ） 該膵島由来の細胞を培養するステップ、および
（ｃ） 培養物からネスチン陽性クローンを選択するステップ
を含む、膵ランゲルハンス島から幹細胞を単離する方法。
【請求項８】培養を、最初はコンカナバリンＡをコートした容器内で行い、次いで、コンカナバリンＡをコートしていない容器内で再度行う、請求項７記載の方法。
【請求項９】（ｄ） ＥＧＦ、ｂＦＧＦ−２、高グルコース、ＫＧＦ、ＨＧＦ／ＳＦ、ＧＬＰ−１、エキセンジン−４、ＩＤＸ−１、ＩＤＸ−１をコードする核酸分子、ベータセルリン、アクチビンＡ、ＴＧＦ−βおよびその組合せからなる群より選ばれる薬剤での処理によりネスチン陽性クローンを拡張させる、さらなるステップ
を含む、請求項７記載の方法。
【請求項１０】ＥＧＦ、ｂＦＧＦ−２、高グルコース、ＫＧＦ、ＨＧＦ／ＳＦ、ＩＤＸ−１、ＩＤＸ−１をコードする核酸分子、ＧＬＰ−１、エキセンジン−４、ベータセルリン、アクチビンＡ、ＴＧＦ−βおよびその組合せからなる群より選ばれる薬剤でネスチン陽性膵臓幹細胞を処理するステップ、それにより、該幹細胞が、その後、膵臓前駆細胞に分化する、
を含む、膵臓前駆細胞へのネスチン陽性膵臓幹細胞の分化を誘導する方法。
【請求項１１】膵臓前駆細胞が、その後、偽島様凝集塊を形成する、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、および
（ｂ） 該幹細胞を哺乳動物に移入するステップ、ここで該幹細胞がインスリン産生細胞に分化する、
を含む、哺乳動物に移植するための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項１３】移入ステップの前に、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ−２、高グルコース、ＫＧＦ、ＨＧＦ／ＳＦ、ＧＬＰ−１、エキセンジン−４、ＩＤＸ−１、ＩＤＸ−１をコードする核酸分子、ベータセルリン、アクチビンＡ、ＴＧＦ−βおよびその組合せからなる群より選ばれる薬剤で幹細胞をエキソビボで処理する、請求項１または１２記載の使用。
【請求項１４】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで培養するステップ、および
（ｃ） 前駆細胞を哺乳動物に移入するステップ、ここで該前駆細胞がインスリン産生β細胞に分化する、
を含む、哺乳動物に移植するための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項１５】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで拡張させて前駆細胞を作製するステップ、および
（ｃ） 該前駆細胞を哺乳動物に移入するステップ、ここで該前駆細胞がインスリン産生β細胞に分化する、
を含む、哺乳動物に移植するための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項１６】（ｄ） 該哺乳動物を免疫抑制剤で処置するステップ
をさらに含む、請求項１４または１５記載の使用。
【請求項１７】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞を拡張させて前駆細胞を作製するステップ、
（ｃ）培養において該前駆細胞を分化させ、偽島様凝集塊を形成させるステップ、および
（ｄ） 該偽島様凝集塊を哺乳動物に移入するステップ
を含む、哺乳動物に移植するための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項１８】ＥＧＦ、ｂＦＧＦ−２、高グルコース、ＫＧＦ、ＨＧＦ／ＳＦ、ＧＬＰ−１、エキセンジン−４、ＩＤＸ−１、ＩＤＸ−１をコードする核酸分子、ベータセルリン、アクチビンＡ、ＴＧＦ−βおよびその組合せからなる群より選ばれる薬剤の存在下で拡張ステップを行なう、請求項３、５、１５または１７記載の使用。
【請求項１９】 移入ステップを内視鏡下の逆行性注入により行なう、請求項１、２、３、５、１２、１４、１５または１７記載の使用。
【請求項２０】（ｅ） 該哺乳動物を免疫抑制剤で処置するステップ
をさらに含む、請求項１７記載の使用。
【請求項２１】神経幹細胞でない、単離されたネスチン陽性ヒト膵臓幹細胞。
【請求項２２】分化してインスリン産生β細胞、グルカゴン産生α細胞、偽島様凝集塊または肝細胞を形成する、請求項２１記載の単離された幹細胞。
【請求項２３】細胞を、標識されたネスチン特異的抗体と接触させるステップ、それにより、該細胞が該抗体で標識されれば、該細胞を幹細胞であると同定する、
を含む、膵細胞を幹細胞であると同定する方法。
【請求項２４】細胞を、標識されたサイトケラチン−１９特異的抗体と接触させるステップ、それにより、該細胞が該抗体で標識されなければ、該細胞を幹細胞であると同定する、
をさらに含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】細胞を、標識された第ＩＶコラーゲン特異的抗体と接触させるステップ、それにより、該細胞が該抗体で標識されなければ、該細胞を幹細胞であると同定する、
をさらに含む、請求項２３または２４記載の方法。
【請求項２６】肝細胞に分化するように、または肝細胞に分化する前駆細胞に分化するようにネスチン陽性膵臓幹細胞を誘導する薬剤の有効量で、該幹細胞を処理するステップ
を含む、ネスチン陽性膵臓幹細胞の肝細胞への分化を誘導する方法。
【請求項２７】薬剤がシクロパミンである、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、および
（ｂ） 該幹細胞を患者に移入するステップ、ここで該幹細胞が肝細胞に分化する、
を含む、肝臓疾患患者の治療のための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項２９】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで拡張させて前駆細胞を作製するステップ、および
（ｃ） 該前駆細胞を患者に移入するステップ、ここで該前駆細胞は肝細胞に分化する、
を含む、肝臓疾患患者の治療のための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項３０】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで分化させて肝細胞を作製するステップ、および
（ｃ） 該肝細胞を患者に移入するステップ
を含む、肝臓疾患患者の治療のための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項３１】該患者をステップａの前記幹細胞のドナーとする、請求項１、２、３、５、２８、２９または３０記載の使用。
【請求項３２】該患者をステップａの前記幹細胞のドナーとしない、請求項１、２、３、５、２８、２９または３０記載の使用。
【請求項３３】該患者がヒトであり、ステップａの前記幹細胞のドナーが非ヒト哺乳動物である、請求項１、２、３、５、２８、２９または３０記載の使用。
【請求項３４】ステップ（ｂ）の前に該患者を免疫抑制剤で処置しない、請求項３２または３３記載の使用。
【請求項３５】 該患者を免疫抑制剤で処置するステップをさらに含む、請求項１、３２または３３記載の使用。
【請求項３６】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、および
（ｂ） 該幹細胞を前記哺乳動物に移入するステップ、ここで該幹細胞が肝細胞に分化する、
を含む、哺乳動物に移植するための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項３７】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで拡張させて前駆細胞を作製するステップ、および
（ｃ） 該前駆細胞を前記哺乳動物に移入するステップ、ここで該前駆細胞が肝細胞に分化する、
を含む、哺乳動物に移植するための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項３８】（ａ） ドナーの膵島からネスチン陽性膵臓幹細胞を単離するステップ、
（ｂ） 該幹細胞をエキソビボで分化させて肝細胞を作製するステップ、および
（ｃ） 該肝細胞を前記哺乳動物に移入するステップ
を含む、哺乳動物に移植するための医薬の製造におけるネスチン陽性膵臓幹細胞の使用。
【請求項３９】前記哺乳動物をステップａの前記幹細胞のドナーとする、請求項１２、１４、１５、１７、３６、３７または３８記載の使用。
【請求項４０】前記哺乳動物をステップａの前記幹細胞のドナーとしない、請求項１２、１４、１５、１７、３６、３７または３８記載の使用。
【請求項４１】前記哺乳動物がヒトであり、ステップａの前記幹細胞のドナーが非ヒト哺乳動物である、請求項１２、１４、１５、１７、３６、３７または３８記載の使用。
【請求項４２】ステップ（ｂ）の前に前記哺乳動物を免疫抑制剤で処置しない、請求項４０または４１記載の使用。
【請求項４３】 前記哺乳動物を免疫抑制剤で処置するステップをさらに含む、請求項１２、４０または４１記載の使用。
【請求項４４】前記免疫抑制剤が免疫応答を妨げる、請求項４、６、１６、２０、３５または４３記載の使用。
【請求項４５】前記免疫抑制剤が免疫応答の発現を遅滞させる、請求項４、６、１６、２０、３５または４３記載の使用。
【請求項４６】前記免疫抑制剤が免疫応答の強度を低下させる、請求項４、６、１６、２０、３５または４３記載の使用。
【請求項４７】 免疫応答が移植片拒絶である、請求項３５、４３、４４、４５または４６記載の使用。
【請求項４８】神経幹細胞でない、単離されたネスチン陽性ヒト肝臓幹細胞。
【請求項４９】免疫寛容である、請求項２１または４８記載の単離された幹細胞。
【請求項５０】ＭＨＣクラスＩ抗原を発現しない、請求項２１または４８記載の単離された幹細胞。
【請求項５１】ＭＨＣクラスＩＩ抗原を発現しない、請求項２１または４８記載の単離された幹細胞。
【請求項５２】ＭＨＣクラスＩ抗原もＭＨＣクラスＩＩ抗原も発現しない、請求項２１または４８記載の単離された幹細胞。
【請求項５３】対宿主性移植片拒絶を引き起こすことなく動物に移植が可能な、神経幹細胞でない、単離されたネスチン陽性ヒト幹細胞。
【請求項５４】主要組織適合性複合体のクラスＩ分子拘束性でもクラスＩＩ分子拘束性でもない、請求項５３記載の単離されたネスチン陽性ヒト幹細胞。
【請求項５５】生理学的に適合性のある担体と混合された請求項２１、４８または５３記載の単離された幹細胞を含有してなる医薬組成物。
【請求項５６】免疫抑制剤が、ＦＫ−５０６、シクロスポリンおよびＧＡＤ６５抗体からなる群より選ばれる、請求項４、６、１６、２０、３５または４３記載の使用。