【手続補正書】
【提出日】平成31年1月8日(2019.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
宿主または宿主細胞においてロタウイルス様粒子(ＲＬＰ)を産生する方法であって、
ａ)第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列および第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸を含む宿主または宿主細胞を提供し、該第一、第二および第三ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードし、該第二ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードし、該第三ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ７またはＶＰ４の一方をコードし；
ｂ)該宿主または宿主細胞を、ＮＳＰ４、ＶＰ６およびＶＰ７またはＶＰ４の各々が発現され、それにより、ＲＬＰが産生されるように、１つ以上の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートする
ことを含む、
方法。
【請求項２】
１つ以上の核酸がさらに第四ロタウイルスタンパク質をコードする第四ヌクレオチド配列を含み、該第一、第二、第三および第四ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
第一ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードし、第二ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードし、第三および第四ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４またはＶＰ７をコードし、ＮＳＰ４、ＶＰ６およびＶＰ２、ＶＰ４およびＶＰ７の２個の各々は、１つ以上の核酸から発現される、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
１つ以上の核酸がさらに第五ロタウイルスタンパク質をコードする第五ヌクレオチド配列を含み、該第一、第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一、第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列は、ロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７またはＮＳＰ４の一つをコードし、ここで、ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７およびＮＳＰ４の各々は１つ以上の核酸から発現される、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
１つ以上の核酸が該第一、第二、第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする該第一、第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列を含む１つの核酸を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
１つ以上の核酸が、第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸および第二、第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列を含む第二核酸の２つの核酸を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
１つ以上の核酸が、第一および第二ロタウイルスタンパク質をコードする第一および第二ヌクレオチド配列を含む第一核酸および第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第三、第四および第五ヌクレオチド配列を含む第二核酸の２核酸を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
１以上の核酸が第一および第二ロタウイルスタンパク質をコードする第一および第二ヌクレオチド配列を含む第一核酸、第三および第四ロタウイルスタンパク質をコードする第三および第四ヌクレオチド配列を含む第二核酸および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第五ヌクレオチド配列を含む第三核酸の３つの核酸を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
１つ以上の核酸が第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列を含む第二核酸および第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第三、第四および第五ヌクレオチド配列を含む第三核酸の３つの核酸を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
１つ以上の核酸が第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列を含む第二核酸、第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む第三核酸および第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第四および第五ヌクレオチド配列を含む第四核酸の４つの核酸を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
１つ以上の核酸が第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列を含む第二核酸、第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む第三核酸、第四ロタウイルスタンパク質をコードする第四ヌクレオチド配列を含む第四核酸および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第五ヌクレオチド配列を含む第五核酸の５つの核酸を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
宿主または宿主細胞が昆虫細胞、哺乳動物細胞、植物、植物の一部または植物細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
宿主または宿主細胞が植物、植物の一部または植物細胞からなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
植物がベンサミアナタバコ(Nicotiana benthamiana)である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
１つ以上のヌクレオチド配列が１つ以上の発現エンハンサーに操作可能に結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
発現エンハンサーがＣＰＭＶ  ＨＴ、ＣＰＭＶ  １６０、ＣＰＭＶ  １６０＋およびＣＰＭＶ  ＨＴ＋からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
さらに
ｃ)宿主または宿主細胞を採取し、そして
ｄ)宿主または宿主細胞からＲＬＰを精製する
工程を含み、ここで、ＲＬＰは、７０〜１００nmのサイズの範囲である、
請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項１７】
ａ)宿主または宿主細胞に第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列および第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸を導入し、該第一、第二および第三ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードし、該第二ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードし、該第三ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ７またはＶＰ４の一方をコードし；
ｂ)宿主または宿主細胞を、ＮＳＰ４、ＶＰ６およびＶＰ７またはＶＰ４の各々が発現され、それにより、ＲＬＰが産生されるように、１つ以上の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートする
ことを含む、宿主または宿主細胞においてロタウイルス様粒子(ＲＬＰ)を産生する方法。
【請求項１８】
１つ以上の核酸がさらに第四ロタウイルスタンパク質をコードする第四ヌクレオチド配列を含み、該第一、第二、第三および第四ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
第一ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードし、第二ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードし、第三および第四ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４またはＶＰ７をコードし、ＮＳＰ４、ＶＰ６およびＶＰ２、ＶＰ４およびＶＰ７の２個の各々は、１つ以上の核酸から発現される、
請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
１つ以上の核酸がさらに第五ロタウイルスタンパク質をコードする第五ヌクレオチド配列を含み、該第一、第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一、第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列は、ロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７またはＮＳＰ４の一つをコードし、ここで、ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７およびＮＳＰ４の各々は１つ以上の核酸から発現される、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
導入の工程(工程ａ)において、１つ以上の核酸が２つの核酸
ｉ)第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸および第二、第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列を含む第二核酸；または
ii)第一および第二ロタウイルスタンパク質をコードする第一および第二ヌクレオチド配列を含む第一核酸および第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第三、第四および第五ヌクレオチド配列を含む第二核酸を含み、
宿主または宿主細胞に導入された第一核酸の量対第二核酸の量の比率が１：０.８〜１：２である、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
第一ロタウイルスタンパク質がＮＳＰ４であり、第二、第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質がＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６およびＶＰ７である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
該比率が１：１である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
導入の工程(工程ａ)において、１つ以上の核酸が３つの核酸
ｉ)第一および第二ロタウイルスタンパク質をコードする第一および第二ヌクレオチド配列、第三および第四ロタウイルスタンパク質をコードする第三および第四ヌクレオチド配列を含む第二核酸および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第五ヌクレオチド配列を含む第三核酸または
ii)第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列を含む第二核酸および第三、第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第三、第四および第五ヌクレオチド配列を含む第三核酸を含み、
宿主または宿主細胞に導入された第一核酸の量対第二核酸の量および第三核の量の比が１：１：１である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
導入の工程(工程ａ)において、１つ以上の核酸が、第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列を含む第二核酸、第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む第三核酸および第四および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第四および第五ヌクレオチド配列を含む第四核酸の４つの核酸を含み、宿主または宿主細胞に導入される第一核酸の量対第二核酸の量、第三核酸の量および第四核酸の量の比が１：１：１：１である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
導入の工程(工程ａ)において、１つ以上の核酸が、第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列を含む第一核酸、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列を含む第二核酸、第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む第三核酸、第四ロタウイルスタンパク質をコードする第四ヌクレオチド配列を含む第四核酸および第五ロタウイルスタンパク質をコードする第五ヌクレオチド配列を含む第五核酸の５核酸を含み、宿主または宿主細胞に導入される第一核酸の量対第二核酸の量、第三核酸の量、第四核酸の量および第五核酸の量の比が１：１：１：１：１である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
請求項３または１９に記載の方法により産生されたＲＬＰであって、ＲＬＰがロタウイルスタンパク質を含む三層ＲＬＰであり、ロタウイルスタンパク質がＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６およびＶＰ７からなる、ＲＬＰ。
【請求項２７】
対象における免疫応答の誘導のための有効用量の請求項２６に記載のＲＬＰおよび薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項２８】
対象に請求項２７に記載の組成物を投与することを含む、対象にロタウイルス感染に対する免疫を誘発する方法。
【請求項２９】
組成物を対象に経口、皮内、鼻腔内、筋肉内、腹腔内、静脈内または皮下で投与する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
請求項１、２または３に記載の方法により産生されたＲＬＰを含む植物。
【請求項３１】
請求項１７、１８または１９に記載の方法により産生された、ＲＬＰを含む植物。
【請求項３２】
ロタウイルス様粒子(ＲＬＰ)におけるＶＰ４、ＶＰ７またはＶＰ４およびＶＰ７両者の取り込みを増加する方法であって、
ａ)第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列および第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸を含む宿主または宿主細胞を提供し、該第一、第二および第三ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードし、該第二ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードし、該第三ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ７またはＶＰ４の一方をコードし；
ｂ)該宿主または宿主細胞を、ＮＳＰ４、ＶＰ６およびＶＰ７またはＶＰ４の各々が発現され、それにより、ＮＳＰ４を含まない１つ以上の核酸を発現する第二宿主または宿主細胞により、同じ条件下で産生されたＶＰ４またはＶＰ７のレベルと比較したとき、ＶＰ４、ＶＰ７またはＶＰ４およびＶＰ７両者のレベルが増強されたＲＬＰが産生されるように、１つ以上の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートする
ことを含む、方法。
【請求項３３】
ロタウイルス様粒子(ＲＬＰ)におけるＶＰ４、ＶＰ７またはＶＰ４およびＶＰ７両者の取り込みを増加する方法であって、
ａ)宿主または宿主細胞に第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列および第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸を導入し、該第一、第二および第三ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードし、該第二ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードし、該第三ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ７またはＶＰ４の一方をコードし；
ｂ)該宿主または宿主細胞を、ＮＳＰ４、ＶＰ６およびＶＰ７またはＶＰ４の各々が発現され、それにより、ＮＳＰ４を含まない１つ以上の核酸を発現する第二宿主または宿主細胞により、同じ条件下で産生されたＶＰ４またはＶＰ７のレベルと比較したとき、ＶＰ４、ＶＰ７またはＶＰ４およびＶＰ７両者のレベルが増強されたＲＬＰが産生されるように、１つ以上の核酸の発現を可能にする条件下でインキュベートする
ことを含む、方法。
【請求項３４】
１つ以上の核酸がさらに第四ロタウイルスタンパク質をコードする第四ヌクレオチド配列を含み、該第一、第二、第三および第四ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードし、該第二ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードし、該第三および第四ヌクレオチド配列はロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４またはＶＰ７をコードし、ここで、ＮＳＰ４、ＶＰ６およびＶＰ２、ＶＰ４およびＶＰ７の２個の各々は、１つ以上の核酸から発現される、
請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３５】
１つ以上の核酸がさらに第五ロタウイルスタンパク質をコードする第五ヌクレオチド配列を含み、該第一、第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一、第二、第三、第四および第五ヌクレオチド配列は、ロタウイルスタンパク質ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７またはＮＳＰ４のうちの１つをコードし、ここで、ＶＰ２、ＶＰ４、ＶＰ６、ＶＰ７およびＮＳＰ４の各々は１つ以上の核酸から発現される、
請求項３２または３３に記載の方法。
【請求項３６】
さらに
ｃ)宿主または宿主細胞を採取し、
ｄ)宿主または宿主細胞からＲＬＰを精製する
工程を含み、ここで、ＲＬＰは、７０〜１００nmのサイズの範囲である、
請求項３２、３３、３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
昆虫細胞、哺乳動物細胞、植物、植物の一部または植物細胞において産生されたロタウイルス様粒子(ＲＬＰ)の表面におけるＶＰ４、ＶＰ７またはＶＰ４およびＶＰ７両者の取り込みを増加させるための、ＮＳＰ４の使用。
【請求項３８】
ロタウイルス様粒子(ＲＬＰ)におけるＶＰ４、ＶＰ７またはＶＰ４およびＶＰ７両者の取り込みを増加する方法であって、
ａ)第一ロタウイルスタンパク質をコードする第一ヌクレオチド配列、第二ロタウイルスタンパク質をコードする第二ヌクレオチド配列、第三ロタウイルスタンパク質をコードする第三ヌクレオチド配列および第四ロタウイルスタンパク質をコードする第四ヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸を含む宿主または宿主細胞を提供し；該第一、第二、第三および第四ヌクレオチド配列は、該宿主または宿主細胞で活性な１つ以上の制御領域に操作可能に結合されており；そして
該第一、第二、第三および第四ヌクレオチド配列は、ロタウイルスタンパク質ＶＰ７、ＶＰ４、ＮＳＰ４およびＶＰ２のうちの１つまたはＶＰ６をコードし；
ｂ)ＶＰ７、ＶＰ４、ＮＳＰ４およびＶＰ２またはＶＰ６の各々が発現され、それにより同じ条件下で、ＮＳＰ４を含まない１つ以上の核酸を発現する第二宿主または宿主細胞により産生されたＶＰ４またはＶＰ７のレベルと比較したとき、ＶＰ４、ＶＰ７またはＶＰ４およびＶＰ７両者の増強されたレベルを有するＲＬＰを産生するように１つ以上の核酸の発現を可能にする条件下で宿主または宿主細胞をインキュベートする
ことを含む、方法。
【請求項３９】
前記ロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードする第一ヌクレオチド配列、ロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードする第二ヌクレオチド配列、およびロタウイルスタンパク質ＶＰ７またはＶＰ４のうちの１つをコードする第三ヌクレオチド配列が全て、遺伝子型Ｇ１〜Ｇ２７を有するロタウイルス株から取得される、請求項１、１７、３２、３３、および３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ロタウイルスタンパク質ＮＳＰ４をコードする第一ヌクレオチド配列、ロタウイルスタンパク質ＶＰ６をコードする第二ヌクレオチド配列、およびロタウイルスタンパク質ＶＰ７またはＶＰ４のうちの１つをコードする第三ヌクレオチド配列が全て、遺伝子型Ｇ１またはＧ４を有するロタウイルス株から取得される、請求項１、１７、３２、３３、および３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
請求項１、２、３、１７、１８、または１９に記載の方法によって産生されるＲＬＰを含む、植物、植物の一部、または植物細胞。
【請求項４２】
請求項１、２、３、１７、１８、または１９に記載の方法によって産生されるＲＬＰを含む、植物の抽出物。