【手続補正書】
【提出日】平成20年8月28日(2008.8.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  分岐転写される発現単位間の転写における方向の偏りを減らす方法であって、該方法は、該分岐転写される発現単位間にヌクレオチド配列を挿入する工程を包含し、該ヌクレオチド配列は、少なくとも２つのハウスキーピング遺伝子からの伸長したメチル化のないＣｐＧ島を含むゲノム領域の組み合わせを含む、方法。
【請求項２】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトプログラム細胞死−２（ＰＤＣＤ２）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトβ−アクチン遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトβ−アクチン遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメント、およびヒトプログラム細胞死−２（ＰＤＣＤ２）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトリボヌクレオタンパク質（ＲＮＰ）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる４ｋｂのＤＮＡフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトリボヌクレオタンパク質（ＲＮＰ）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域、およびヒトβ−アクチンのＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】  前記ヌクレオチド配列が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、伸長因子−１α（ＥＦ−１α）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲおよびヒト免疫不全２（ＨＩＶ２）ＬＴＲまたはそれらの組み合わせから選択されるプロモーターをさらに含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】  前記ＣＭＶプロモーターが、マウスＣＭＶプロモーターである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトβ−アクチン遺伝子の５’末端からのＣｐＧ島を含む２ｋｂのフラグメント、およびヒトプログラム細胞死−２遺伝子の５’末端からのＣｐＧ島を含む３．２ｋｂのフラグメントを含み、各フラグメントは、プロモーターを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】  前記プロモーターは、分岐転写する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】  前記ヌクレオチド配列は、ＣＭＶプロモーターをさらに含む、請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】  前記ヌクレオチド配列は、配列番号１に示す配列、またはクロマチンを開放させるかまたはクロマチンを開放状態で維持することができるそのフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】  前記ヌクレオチド配列は、配列番号２に示す配列、またはクロマチンを開放させるかまたはクロマチンを開放状態で維持することができるそのフラグメントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】  前記分岐転写される発現単位は、免疫グロブリン／抗体の重鎖および軽鎖を発現する、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】  ヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、該ヌクレオチド配列は、分岐転写される発現単位の間に位置する、少なくとも２つのハウスキーピング遺伝子からの伸長したメチル化のないＣｐＧ島を含むゲノム領域の組み合わせを含み、該ヌクレオチド配列は、分岐転写される発現単位間の転写における方向の偏りを減らすことができる、ポリヌクレオチド。
【請求項１６】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトプログラム細胞死−２（ＰＤＣＤ２）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１７】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトβ−アクチン遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１８】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトβ−アクチン遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメント、およびヒトプログラム細胞死−２（ＰＤＣＤ２）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１９】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトリボヌクレオタンパク質（ＲＮＰ）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる４ｋｂのＤＮＡフラグメントを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２０】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトリボヌクレオタンパク質（ＲＮＰ）遺伝子のＣｐＧ島／プロモーター領域、およびヒトβ−アクチンのＣｐＧ島／プロモーター領域にわたる、１００ｂｐ〜３．０ｋｂの範囲内のＤＮＡフラグメントを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２１】  前記ヌクレオチド配列が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、伸長因子−１α（ＥＦ−１α）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲおよびヒト免疫不全２（ＨＩＶ２）ＬＴＲまたはそれらの組み合わせから選択されるプロモーターをさらに含む、請求項１５〜２０のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２２】  前記ＣＭＶプロモーターが、マウスＣＭＶプロモーターである、請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２３】  前記ヌクレオチド配列が、ヒトβ−アクチン遺伝子の５’末端からのＣｐＧ島を含む２ｋｂのフラグメント、およびヒトプログラム細胞死−２遺伝子の５’末端からのＣｐＧ島を含む３．２ｋｂのＤＮＡフラグメントを含み、各フラグメントは、プロモーターを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２４】  前記プロモーターは、分岐転写する、請求項２３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】  前記ヌクレオチド配列は、ＣＭＶプロモーターをさらに含む、請求項２３または請求項２４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】  前記ヌクレオチド配列は、配列番号１に示す配列、またはクロマチンを開放させるかまたはクロマチンを開放状態で維持することができるそのフラグメントを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】  前記ヌクレオチド配列は、配列番号２に示す配列、またはクロマチンを開放させるかまたはクロマチンを開放状態で維持することができるそのフラグメントを含む、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】  前記分岐転写される発現単位は、免疫グロブリン／抗体の重鎖および軽鎖を発現する、請求項１５〜２７のいずれかに記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】  ２つ以上のポリペプチド鎖を含むポリペプチドを調製するための方法であって、
請求項１５〜２８のいずれかに記載のポリヌクレオチドで形質転換／トランスフェクトされた細胞を提供する工程、
該ポリペプチドの生成を導く条件下で該細胞を増殖させる工程；および
該細胞またはその増殖環境から該ポリペプチドを精製する工程、
を包含する、方法。
【請求項３０】  請求項１５〜２８のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３１】  請求項３０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３２】  分岐転写される発現単位の間に位置する、少なくとも２つのハウスキーピング遺伝子からの伸長したメチル化のないＣｐＧ島を含むゲノム領域の組み合わせを含む、医薬として使用するための、ポリヌクレオチド。
【請求項３３】  分岐転写される発現単位の間に位置する、少なくとも２つのハウスキーピング遺伝子からの伸長したメチル化のないＣｐＧ島を含むゲノム領域の組み合わせを含むポリヌクレオチドの、疾患の予防および／または治療処置のための医薬の製造のための使用であって、該疾患は、遺伝子治療によって処置され得る、使用。
【請求項３４】  分岐転写される発現単位の間に位置する、少なくとも２つのハウスキーピング遺伝子からの伸長したメチル化のないＣｐＧ島を含むゲノム領域の組み合わせを含むポリヌクレオチドであって、遺伝子治療によって処置され得る疾患の予防および／または治療処置のための、ポリヌクレオチド。