【手続補正書】
【提出日】令和1年6月28日(2019.6.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離され、部分的に成熟し、かつ最適に活性化されたヒト樹状細胞を生成するための方法であって、該方法は、
ｉ）ヒトＰＢＭＣを含む細胞集団を、ヒト単球性樹状細胞前駆体に関して富化する工程であって、ヒトＰＢＭＣを含む該細胞集団は末梢血から単離されている、工程；
ｉｉ）ヒト単球性樹状細胞前駆体に関して富化された該細胞集団を、有効量の樹状細胞分化薬剤を補充した組織培養培地とともに、該ヒト単球性樹状細胞前駆体を未成熟ヒト樹状細胞へと分化させるために十分な期間にわたって培養する工程；
ｉｉｉ）未成熟ヒト樹状細胞に関して富化された該細胞集団を、有効量の樹状細胞成熟化薬剤とともに培養して、該未成熟ヒト樹状細胞を約１０〜約１９時間にわたって活性化する工程；ならびに
ｉｖ）該活性化されたヒト樹状細胞を単離および洗浄する工程、
を包含する方法。
【請求項２】
単離され、部分的に成熟し、かつ活性化されたヒト樹状細胞を生成するための方法であって、該方法は、
ｉ）ヒト単球性樹状細胞前駆体を含む細胞集団を、有効量の樹状細胞分化薬剤を補充した組織培養培地とともに、該ヒト単球性樹状細胞前駆体を未成熟ヒト樹状細胞へと分化させるために十分な期間にわたって培養する工程であって、ヒト単球性樹状細胞前駆体を含む該細胞集団は単離されている、工程；
ｉｉ）未成熟ヒト樹状細胞に関して富化された該細胞集団を、有効量の樹状細胞成熟化薬剤とともに培養して、該未成熟ヒト樹状細胞を約１０〜約１９時間にわたって活性化する工程；ならびに
ｉｉｉ）該活性化されたヒト樹状細胞を単離および洗浄する工程、
を包含する方法。
【請求項３】
前記単球性樹状細胞前駆体は、皮膚、脾臓、骨髄、胸腺、リンパ節、臍帯血、または末梢血から得られたものである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記単球性樹状細胞前駆体細胞は、活性化されていない単球性樹状細胞前駆体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記単球性樹状細胞前駆体は、処置される個々の被験体から得られたものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記単球性樹状細胞前駆体は、処置される個々の被験体にＨＬＡマッチした健康な個々の被験体から得られたものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記樹状細胞分化薬剤は、いかなる他のサイトカインもなしのＧＭ−ＣＳＦ、またはＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３もしくはＩＬ−１５との組み合わせでのＧＭ−ＣＳＦである、請求項１および２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記樹状細胞成熟化薬剤は、不活性化カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、イミダゾキノリン化合物、合成２本鎖ポリリボヌクレオチド、Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）のアゴニスト、樹状細胞の成熟化を誘導することが公知の非メチル化ＣｐＧモチーフを含む核酸の配列、またはこれらの任意の組み合わせである、請求項１および２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記不活性化ＢＣＧは、全ＢＣＧ、ＢＣＧの細胞壁構成要素、ＢＣＧ由来リポアラビノマンナン、またはＢＣＧ成分を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記不活性化ＢＣＧは、熱不活性化ＢＣＧ、ホルマリン処理ＢＣＧ、または熱不活性化かつホルマリン処理ＢＣＧである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記有効量のＢＣＧは、約１０５〜１０７ｃｆｕ／ミリリットル  組織培養培地であり、前記有効量のＩＦＮγは、約１００〜約１，０００ユニット／ミリリットル  組織培養培地である、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記イミダゾキノリン化合物は、イミダゾキノリン−４−アミン化合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記イミダゾキノリン−４−アミン化合物は、４−アミノ−２−エトキシメチル−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾール［４，５−ｃ］キノリン−ｌ−５  エタノールまたは１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン、またはこれらの誘導体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記合成２本鎖ポリリボヌクレオチドは、ポリ［Ｉ］：ポリ［Ｃ（１２）Ｕ］である、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法によって生成された部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞を含む組成物であって、該組成物は、腫瘍へと直接、該腫瘍の外科的除去または切除の後に腫瘍床へと、該腫瘍を取り囲む組織領域に、腫瘍領域から直接排出するリンパ節へと、該腫瘍もしくは腫瘍罹患器官へと血液もしくはリンパを送達する循環性脈管に直接、または該腫瘍もしくは腫瘍罹患器官に該細胞が送達されるように循環系へと投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法によって生成された部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞を含む組成物、または請求項１５に記載の組成物であって、該組成物は、放射線療法、化学療法、もしくはこれらの組み合わせに対する補助的手段として投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法によって生成された部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞を含む組成物、または請求項１５に記載の組成物であって、該組成物は、放射線療法、化学療法、もしくはこれらの組み合わせの前に、同時に、または後に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１８】
抗腫瘍免疫応答を生成するための、ヒト樹状細胞成熟化薬剤とともに約１０〜約１９時間にわたってインビトロで部分的に成熟させかつ最適に活性化させたヒト樹状細胞に関して富化した細胞集団および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物であって、ここで該組成物は、このような処置の必要性のある個体において、腫瘍、腫瘍床もしくは腫瘍を取り囲む組織領域へと投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１９】
未成熟樹状細胞をヒト樹状細胞成熟化薬剤とともに約１０〜約１９時間にわたって培養することによって成熟を誘導された、部分的に成熟し、かつ最適に活性化されたヒト樹状細胞を含む組成物であって、ここで該部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞は、炎症応答と関連するサイトカインを生成する、組成物。
【請求項２０】
前記サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、および／またはインターロイキン８（ＩＬ−８）である、請求項１９に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
さらに別の実施形態において、ヒト樹状細胞成熟化薬剤とともに約１０〜約１９時間にわたって培養することによって成熟を誘導された、部分的に成熟し、かつ最適に活性化されたヒト樹状細胞を含む組成物が提供され、ここで上記部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞は、炎症応答と関連するサイトカインを生成する。例えば、上記サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、および／またはインターロイキン８（ＩＬ−８）を含み得る。
（項目１）
単離され、部分的に成熟し、かつ最適に活性化されたヒト樹状細胞を生成するための方法であって、該方法は、
ｉ）ヒトＰＢＭＣを含む細胞集団を末梢血から単離する工程；
ｉｉ）ヒトＰＢＭＣを含む該細胞集団を、ヒト単球性樹状細胞前駆体に関して富化する工程；
ｉｉｉ）ヒト単球性樹状細胞前駆体に関して富化された該細胞集団を、有効量の樹状細胞分化薬剤を補充した組織培養培地とともに、該ヒト単球性樹状細胞前駆体を未成熟ヒト樹状細胞へと分化させるために十分な期間にわたって培養する工程；
ｉｖ）未成熟ヒト樹状細胞に関して富化された該細胞集団を、有効量の樹状細胞成熟化薬剤とともに培養して、該未成熟ヒト樹状細胞を約１０〜約１９時間にわたって活性化する工程；ならびに
ｖ）該活性化されたヒト樹状細胞を単離および洗浄する工程、
を包含する方法。
（項目２）
単離され、部分的に成熟し、かつ活性化されたヒト樹状細胞を生成するための方法であって、該方法は、
ｉ）ヒト単球性樹状細胞前駆体を含む細胞集団を単離する工程；
ｉｉ）ヒト単球性樹状細胞前駆体に関して富化された該細胞集団を、有効量の樹状細胞分化薬剤を補充した組織培養培地とともに、該ヒト単球性樹状細胞前駆体を未成熟ヒト樹状細胞へと分化させるために十分な期間にわたって培養する工程；
ｉｉｉ）未成熟ヒト樹状細胞に関して富化された該細胞集団を、有効量の樹状細胞成熟化薬剤とともに培養して、該未成熟ヒト樹状細胞を約１０〜約１９時間にわたって活性化する工程；ならびに
ｉｖ）該活性化されたヒト樹状細胞を単離および洗浄する工程、
を包含する方法。
（項目３）
前記単球性樹状細胞前駆体は、皮膚、脾臓、骨髄、胸腺、リンパ節、臍帯血、または末梢血から得られる、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記単球性樹状細胞前駆体細胞は、活性化されていない単球性樹状細胞前駆体である、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
前記単球性樹状細胞前駆体は、処置される個々の被験体から得られる、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記単球性樹状細胞前駆体は、前記処置される個々の被験体にＨＬＡマッチした健康な個々の被験体から得られる、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記樹状細胞分化薬剤は、いかなる他のサイトカインもなしのＧＭ−ＣＳＦ、またはＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１３もしくはＩＬ−１５との組み合わせでのＧＭ−ＣＳＦである、項目１および２のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記樹状細胞成熟化薬剤は、不活性化カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、イミダゾキノリン化合物、合成２本鎖ポリリボヌクレオチド、Ｔｏｌｌ様レセプター（ＴＬＲ）のアゴニスト、樹状細胞の成熟化を誘導することが公知の非メチル化ＣｐＧモチーフを含む核酸の配列、またはこれらの任意の組み合わせである、項目１および２のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記不活性化ＢＣＧは、全ＢＣＧ、ＢＣＧの細胞壁構成要素、ＢＣＧ由来リポアラビノマンナン、またはＢＣＧ成分を含む、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記不活性化ＢＣＧは、熱不活性化ＢＣＧ、ホルマリン処理ＢＣＧ、または熱不活性化かつホルマリン処理ＢＣＧである、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記有効量のＢＣＧは、約１０５〜１０７ｃｆｕ／ミリリットル  組織培養培地であり、前記有効量のＩＦＮγは、約１００〜約１，０００ユニット／ミリリットル  組織培養培地である、項目８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記イミダゾキノリン化合物は、イミダゾキノリン−４−アミン化合物である、項目８に記載の方法。
（項目１３）
前記イミダゾキノリン−４−アミン化合物は、４−アミノ−２−エトキシメチル−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾール［４，５−ｃ］キノリン−ｌ−５  エタノールまたは１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン、またはこれらの誘導体である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記合成２本鎖ポリリボヌクレオチドは、ポリ［Ｉ］：ポリ［Ｃ（１２）Ｕ］である、項目８に記載の方法。
（項目１５）
前記部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞は、腫瘍へと直接、該腫瘍の外科的除去または切除の後に腫瘍床へと、該腫瘍を取り囲む組織領域に、腫瘍領域から直接排出するリンパ節へと、該腫瘍もしくは腫瘍罹患器官へと血液もしくはリンパを送達する循環性脈管に直接、または該腫瘍もしくは腫瘍罹患器官に該細胞が送達されるように循環系へと投与される、項目１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞は、放射線療法、化学療法、もしくはこれらの組み合わせに対する補助的手段として投与される、項目１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記活性化された樹状細胞は、放射線療法、化学療法、もしくはこれらの組み合わせの前に、同時に、または後に投与される、項目１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
抗腫瘍免疫応答を生成するための方法であって、該方法は、ヒト樹状細胞成熟化薬剤とともに約１０〜約１９時間にわたってインビトロで部分的に成熟させかつ最適に活性化させたヒト樹状細胞に関して富化した細胞集団および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物を投与する工程を包含し；ここで該組成物は、このような処置の必要性のある個体において、腫瘍、腫瘍床もしくは腫瘍を取り囲む組織領域へと投与される、方法。
（項目１９）
未成熟樹状細胞をヒト樹状細胞成熟化薬剤とともに約１０〜約１９時間にわたって培養することによって成熟を誘導された、部分的に成熟し、かつ最適に活性化されたヒト樹状細胞を含む組成物であって、ここで該部分的に成熟し、かつ最適に活性化された樹状細胞は、炎症応答と関連するサイトカインを生成する、組成物。
（項目２０）
前記サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、および／またはインターロイキン８（ＩＬ−８）である、項目１９に記載の組成物。