【手続補正書】
【提出日】平成19年12月12日(2007.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）Ａβペプチドまたはそのアナログであるペプチド免疫原のアミノ酸残基中に反応性基を導入する工程；
（ｂ）担体タンパク質の官能基の１個若しくはそれ以上を誘導体化して、該担体タンパク質上に活性化された官能基を生じさす工程；
（ｃ）免疫原性結合物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）を形成する条件下で、工程（ａ）のペプチド免疫原と工程（ｂ）の誘導体化されたタンパク質担体を反応させる工程であって、ペプチド免疫原の反応性基が担体タンパク質上の活性化された官能基に共有結合される工程；および
（ｄ）工程（ｃ）の結合物を、キャッピング試薬とさらに反応させて、担体タンパク質上に残存する活性化官能基の全てを不活性化し免疫性結合物を生成する工程
を含んでなる、免疫原性結合物の製造方法。
【請求項２】
担体タンパク質が、ヒト血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、免疫グロブリン分子、チログロブリン、卵アルブミン、インフルエンザヘマグルチニン、ＰＡＤＲＥポリペプチド、マラリアスポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ１９−２８）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）６５、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、コレラトキシン、低下した毒性を伴うコレラトキシン変異体、ジフテリアトキシン、ジフテリアトキシンと交差反応性であるＣＲＭ197タンパク質、組換え連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１２２４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１６６４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ２４５２、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ニューモリシン、低下した毒性を伴うニューモリシン変異体、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ３６７、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ８５８、破傷風トキソイド、ＨＩＶ  ｇｐ１２０  Ｔ１、微生物表面の接着マトリックス分子を認識する成分（ＭＳＣＲＡＭＭＳ）、成長因子、ホルモン、サイトカインおよびケモカインよりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
担体タンパク質がＣＲＭ197である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ペプチド免疫原がＡβフラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ａβフラグメントが、Ａβ１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−９、１−１０、１−１１、１−１２、１−１６、１−２８、３−６、３−７、１３−２８、１５−２４、１６−２２、１６−２３、１７−２３、１７−２４、１８−２４、１８−２５、１７−２８、２５−３５、３３−４２、３５−４０および３５−４２よりなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
担体タンパク質の官能基が、架橋剤を使用して誘導体化される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
官能基がハロアセチル化剤を用いて誘導体化される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
担体タンパク質上の活性化官能基の全てを不活性化するのに使用されるキャッピング試薬が、システアミン、Ｎ−アセチルシステアミン、エタノールアミン、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸アンモニウムおよびアンモニアよりなる試薬群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
担体タンパク質に共有結合されたペプチド免疫原を含んでなる免疫原性結合物であって、式：
【化３】
2007534650.tif 000001
式中、
Ｃは担体タンパク質であり、かつ、Ｘは該担体タンパク質上のアミノ酸残基の誘導体化可能な官能基であり、そして、式中、ｍは０より大きいがしかし８５未満若しくはそれに等しい整数である
で表され、かつ、免疫原性結合物が、式：
【化４】
2007534650.tif 000002
式中、
Ｃは担体タンパク質であり、かつ、Ｘdは、担体タンパク質のアミノ酸残基の誘導体化された官能基であり、そして、式中、Ｐは、担体タンパク質のアミノ酸残基の誘導体化された官能基にペプチド免疫原のアミノ酸残基の反応性基を介して共有結合されたＡβペプチドまたはＡβのフラグメントからなるペプチド免疫原であり、Ｒは、担体タンパク質のアミノ酸残基の誘導体化された官能基に共有結合されて、それにより担体を用いない別の方法で生じないとみられるＡβペプチドまたはＡβ若しくはそのアナログのフラグメントを含んでなるペプチド免疫原に対する所望の免疫応答を誘発するその能力をそれが保持するような担体タンパク質の官能性を保存するキャッピング分子であり、ｎは０より大きいがしかし８５未満若しくはそれに等しい整数であり、およびｐは０より大きいがしかし８５未満の整数である、
で表される、上記の免疫原性結合物。
【請求項１０】
担体タンパク質が、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、免疫グロブリン分子、チログロブリン、卵アルブミン、インフルエンザヘマグルチニン、ＰＡＤＲＥポリペプチド、マラリアスポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ１９−２８）、ｅａｔショックタンパク質（ＨＳＰ）６５、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、コレラトキシン、低下した毒性を伴うコレラトキシン変異体、ジフテリアトキシン、ジフテリアトキシンと交差反応性であるＣＲＭ197タンパク質、組換え連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１２２４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１６６４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ２４５２、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ニューモリシン、低下した毒性を伴うニューモリシン変異体、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ３６７、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ８５８、破傷風トキソイド、ＨＩＶ  ｇｐ１２０  Ｔ１、微生物表面の接着マトリックス分子を認識する成分（ＭＳＣＲＡＭＭＳ）、成長因子、ホルモン、サイトカインおよびケモカインよりなる群から選択される、請求項９に記載の免疫原性結合物。
【請求項１１】
担体タンパク質がＣＲＭ197である、請求項１０に記載の免疫原性結合物。
【請求項１２】
ペプチド免疫原がＡβフラグメントである、請求項９に記載の免疫原性結合物。
【請求項１３】
Ａβフラグメントが、Ａβ１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−９、１−１０、１−１１、１−１２、１−１６、１−２８、３−６、３−７、１３−２８、１５−２４、１６−２２、１６−２３、１７−２３、１７−２４、１８−２４、１８−２５、１７−２８、２５−３５、３３−４２、３５−４０および３５−４２よりなる群から選択される、請求項１２に記載の免疫原性結合物。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法に従って生成され、かつ、式：
【化５】
2007534650.tif 000003
式中、
Ｃは担体タンパク質であり、かつ、Ｘdは、担体タンパク質のアミノ酸残基の誘導体化された官能基であり、そして、式中、Ｐは、担体タンパク質のアミノ酸残基の誘導体化された官能基にペプチド免疫原のアミノ酸残基の反応性基を介して共有結合されたＡβペプチドまたはＡβのフラグメントからなるペプチド免疫原であり、Ｒは、担体タンパク質のアミノ酸残基の誘導体化された官能基に共有結合されて、それにより担体を用いない別の方法で生じないとみられるＡβペプチドまたはＡβ若しくはそのアナログのフラグメントを含んでなるペプチド免疫原に対する所望の免疫応答を誘発するその能力をそれが保持するような担体タンパク質の官能性を保存するキャッピング分子であり、ｎは０より大きいがしかし８５未満若しくはそれに等しい整数であり、およびｐは０より大きいがしかし８５未満の整数である、
で表される、免疫原性結合物。
【請求項１５】
担体タンパク質が、ヒト血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、免疫グロブリン分子、チログロブリン、卵アルブミン、インフルエンザヘマグルチニン、ＰＡＤＲＥポリペプチド、マラリアスポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ１９−２８）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）６５、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、コレラトキシン、低下した毒性を伴うコレラトキシン変異体、ジフテリアトキシン、ジフテリアトキシンと交差反応性であるＣＲＭ197タンパク質、組換え連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１２２４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１６６４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ２４５２、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ニューモリシン、低下した毒性を伴うニューモリシン変異体、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ３６７、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ８５８、破傷風トキソイド、ＨＩＶ  ｇｐ１２０  Ｔ１、微生物表面の接着マトリックス分子を認識する成分（ＭＳＣＲＡＭＭＳ）、成長因子、ホルモン、サイトカインおよびケモカインよりなる群から選択される、請求項１４に記載の免疫原性結合物。
【請求項１６】
担体タンパク質がＣＲＭ197である、請求項１５に記載の免疫原性結合物。
【請求項１７】
ペプチド免疫原がＡβフラグメントである、請求項１４に記載の免疫原性結合物。
【請求項１８】
Ａβフラグメントが、Ａβ１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−９、１−１０、１−１１、１−１２、１−１６、１−２８、３−６、３−７、１３−２８、１５−２４、１６−２２、１６−２３、１７−２３、１７−２４、１８−２４、１８−２５、１７−２８、２５−３５、３３−４２、３５−４０および３５−４２よりなる群から選択される、請求項１７に記載の免疫原性結合物。
【請求項１９】
１種若しくはそれ以上の製薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤および／若しくはアジュバントと一緒に、請求項１に記載の方法により生成される担体タンパク質とのペプチド免疫原の免疫原性結合物を含んでなる、免疫原性組成物。
【請求項２０】
担体タンパク質が、ヒト血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、免疫グロブリン分子、チログロブリン、卵アルブミン、インフルエンザヘマグルチニン、ＰＡＤＲＥポリペプチド、マラリアスポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ１９−２８）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）６５、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、コレラトキシン、低下した毒性を伴うコレラトキシン変異体、ジフテリアトキシン、ジフテリアトキシンと交差反応性であるＣＲＭ197タンパク質、組換え連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１２２４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ１６６４、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＯＲＦ２４５２、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ニューモリシン、低下した毒性を伴うニューモリシン変異体、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ３６７、クラミジア肺炎病原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＯＲＦ  Ｔ８５８、破傷風トキソイド、ＨＩＶ  ｇｐ１２０  Ｔ１、微生物表面の接着マトリックス分子を認識する成分（ＭＳＣＲＡＭＭＳ）、成長因子、ホルモン、サイトカインおよびケモカインよりなる群から選択される、請求項１９に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
担体タンパク質がＣＲＭ197である、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
ペプチド免疫原がＡβフラグメントである、請求項１９に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
Ａβフラグメントが、Ａβ１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−９、１−１０、１−１１、１−１２、１−１６、１−２８、３−６、３−７、１３−２８、１５−２４、１６−２２、１６−２３、１７−２３、１７−２４、１８−２４、１８−２５、１７−２８、２５−３５、３３−４２、３５−４０および３５−４２よりなる群から選択される、請求項２２に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
１種若しくはそれ以上のアジュバントが、ＧＭ−ＣＳＦ、５２９  ＳＥ、ＩＬ−１２、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、細菌リポ多糖、リン酸アミノアルキルグルコサミン化合物、ＭＰＬTM（３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ）、ポリペプチド、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＳＴＩＭＵＬＯＮTM  ＱＳ−２１、百日咳トキシン（ＰＴ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）熱不安定性トキシン（ＬＴ）、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−βよりなる群から選択される、請求項１９に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
ペプチド免疫原中に反応性基を導入する工程が、反応性基を有するアミノ酸残基の付加を含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
アミノ酸残基が、反応性基として−ＳＨを含むシステイン残基、反応性基としてグアニジル基を含むアルギニン、反応性基として−ＣＯＯＨ基を含むグルタミン酸残基若しくはアスパラギン酸残基、または反応性基として−ＮＨ２を含むリジン残基である請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ペプチド免疫原中へ導入された反応性基が、システイン残基の−ＳＨを含み、かつ、該システイン残基が、ペプチド合成中の付加によりＡβペプチド免疫原に導入される請求項５に記載の方法。
【請求項２８】
システイン残基がＡβペプチド免疫原のカルボキシル末端に局在化されている請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ペプチド免疫原中への反応性基の導入工程が、かような修飾に感受性のアミノ酸残基上にチオール化剤を介してペンダントチオール基を生じせしめることを含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
チオール化剤が、Ｎ−アセチルホモシステインチオラクトンを含む請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
アミノ酸残基が、Ａβペプチド免疫原のアミノ末端またはＡβペプチド免疫原のカルボキシル末端に局在化されている、請求項２５または２９に記載の方法。
【請求項３２】
担体タンパク質が該担体タンパク質に共有結合した１種もしくはそれ以上のポリペプチドリンカーをさらに含んでなり、かつ、１個若しくはそれ以上の官能基が１種もしくはそれ以上のポリペプチドリンカーの置換基を含む請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
ペプチド免疫原野アミノ酸残基の反応性基が、遊離のスルフヒドリル基を含む請求項９または１４に記載の免疫原性結合物。
【請求項３４】
遊離のスルフヒドリル基が、システイン残基の側鎖またはリジン残基のチオール化側鎖である請求項３３に記載の免疫原性結合物。
【請求項３５】
ペプチド免疫原のアミノ酸残基の反応性基が、グアニジル基、カルボキシル基またはε−アミノ基を含む請求項９または１４に記載の免疫原性結合物。
【請求項３６】
アミノ酸残基の反応性基が、システイン残基の遊離のスルフヒドリル基を含む請求項１３または１８に記載の免疫原性結合物。
【請求項３７】
システイン残基が、ペプチド免疫原のカルボキシル末端に局在化されている請求項３６に記載の免疫原性結合物。
【請求項３８】
担体タンパク質が該担体タンパク質に共有結合されたペプチドリンカーをさらに含み、かつ、官能基が該ペプチドリンカーの置換基を含む請求項９または１４に記載の免疫原性結合物。