【手続補正書】
【提出日】令和1年9月9日(2019.9.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ファージミド粒子のゲノム内のウイルスゲノムを含む組換えＡＡＶベクターを産生するための、組換えＡＡＶファージミド粒子または系によって産生された組換えＡＡＶファージミド粒子の使用であって、
前記組換えＡＡＶファージミド粒子は、前記粒子により形質導入された標的細胞において導入遺伝子を発現させるためにあり、前記ＡＡＶファージミド粒子は、前記標的細胞への送達のための作用因子をコードする少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットを含み、前記ＡＡＶファージミド粒子は、原核宿主からの前記粒子の形成、パッケージングまたは排出に必要とされるバクテリオファージ構造遺伝子を欠くゲノムを含み、前記ＡＡＶファージミド粒子はカプシドタンパク質をコードする構造遺伝子を欠き、
または前記系は、原核宿主から組換えＡＡＶファージミド粒子を産生するための系であって、前記系は、
（ｉ）原核宿主内で存続するように構成された第１のベクターであって、少なくとも１つの導入遺伝子発現カセット、及び前記ベクターの一本鎖ＤＮＡへの複製を可能にするための、複製輝点であるパッケージングシグナルを含む、第１のベクターと、
（ｉｉ）前記一本鎖ＤＮＡをパッケージングし、前記原核宿主からの組換えＡＡＶファージミド粒子の形成及び排出をもたらすために必要とされる、カプシドタンパク質である構造タンパク質をコードする核酸を含む、第２のベクターと、を含む、使用。
【請求項２】
組換えウイルスベクターを産生する方法であって、前記方法は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ファージミド粒子または系によって産生された組換えＡＡＶファージミド粒子を真核宿主細胞に導入し、前記宿主細胞に組換えＡＡＶベクターを産生させることを含み、
前記組換えＡＡＶファージミド粒子は、前記粒子により形質導入された標的細胞中に導入遺伝子を発現させるためにあり、前記ＡＡＶファージミド粒子は、前記標的細胞への送達のための作用因子をコードする少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットを含み、前記ＡＡＶファージミド粒子は、原核宿主からの前記粒子の形成、パッケージングまたは排出に必要とされるバクテリオファージ構造遺伝子を欠くゲノムを含み、前記ＡＡＶファージミド粒子は前記カプシドタンパク質をコードする構造遺伝子を欠き、
または前記系は、原核宿主から組換えＡＡＶファージミド粒子を産生するための系であって、
前記系は、
（ｉ）原核宿主内で存続するように構成された第１のベクターであって、少なくとも１つの導入遺伝子発現カセット、及び前記ベクターの一本鎖ＤＮＡへの複製を可能にするための、複製輝点であるパッケージングシグナルを含む、第１のベクターと、
（ｉｉ）前記一本鎖ＤＮＡをパッケージングし、前記原核宿主からの組換えＡＡＶファージミド粒子の形成及び排出をもたらすために必要とされる、カプシドタンパク質である構造タンパク質をコードする核酸を含む、第２のベクターと、を含み、
前記方法は治療によるヒトまたは動物体のための治療方法ではない、方法。
【請求項３】
前記ファージミド粒子または前記系は、前記真核宿主細胞内部のＡＡＶファージミド粒子のゲノムによって決定される、ＡＡＶの産生に必要な他の遺伝子要素の送達及び／または存在と共に、シス及び／またはトランスで使用され、及び／または前記真核宿主細胞は哺乳動物であり、随意に、前記宿主細胞は、ヒト胎児腎細胞（ＨＥＫ２９３）、スポドプテラ・フルギペルダ蛹卵巣組織（Ｓｆ９）、昆虫細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）を含むか、またはこれらに由来する、
請求項１または２のどちらか一方に記載の使用または方法。
【請求項４】
前記宿主細胞は、レンチウイルス、カプシド、複製、ヘルパータンパク質をコードする遺伝子、及び前記哺乳動物ウイルスの発現及びパッケージングに必要な任意の他の遺伝子からなる群から選択され、随意に、前記宿主細胞は、更に遺伝子を保有する１つ以上のファージミド粒子ゲノムを含むように形質転換される遺伝子を保有するｒＡＡＶファージミド粒子ゲノムを含むように形質転換され、及び／または、前記宿主細胞は遺伝子を保有するｒＡＡＶファージミド粒子ゲノム及び前記ｒＡＡＶ遺伝子は、前記組換えファージミドウイルス粒子によって保有され、前記アデノヘルパー及びｒｅｐ−ｃａｐ遺伝子は、別々のベクター上に保有されるかまたは前記真核生物宿主ゲノムに組込まれるように形質転換され、随意に、前記ｒＡＡＶ、ｒｅｐ−ｃａｐ及びアデノヘルパー遺伝子が単一のベクター上に保有される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用または方法。
【請求項５】
ｒＡＡＶ、ｒｅｐ−ｃａｐ及びアデノヘルパー遺伝子を含む組換えベクター。
【請求項６】
請求項１１に記載のベクターを含む組換えファージミド粒子。
【請求項７】
インビボで、インビトロで、またはインサイチュで、前記ファージミド粒子のウイルスゲノムを含む組換えＡＡＶウイルスベクターを産生するための、随意に、前記組換えファージミド粒子は、指定された真核宿主である標的真核細胞のための標的部分を含み、随意に、前記指定された真核宿主細胞型が疾患細胞であり、随意に、前記疾患細胞が悪性または良性の腫瘍である、請求項５に記載のベクターまたは請求項６に記載の粒子の使用。
【請求項８】
インビボで、インビトロで、またはインサイチュで、組換えＡＡＶウイルスベクターを産生する方法であって、前記方法は、真核宿主細胞に請求項５に記載のベクターまたは請求項６に記載の粒子を導入し、前記宿主細胞に組換えウイルスベクターを産生させることを含み、随意に、前記組換えファージミド粒子は、指定された真核宿主である標的真核細胞のための標的部分を含み、随意に、前記指定された真核宿主細胞型が疾患細胞であり、随意に、前記疾患細胞が悪性または良性の腫瘍である、方法。
【請求項９】
インビボで、インビトロで、またはインサイチュで、同じ真核宿主細胞に導入された場合、ベクター上のｒｅｐ−ｃａｐ遺伝子及びアデノヘルパー遺伝子は、ｒＡＡＶ産生の状況下において、トランス作用もしくはシス作用として、またはＡＡＶウイルスカプシドにおけるｒＡＡＶゲノムのパッケージングを促進する両方の要素の組み合わせとして挙動し、随意に、前記組換えファージミド粒子は、指定された真核宿主である標的真核細胞のための標的部分を含み、及び随意に、前記指定された真核宿主細胞型が疾患細胞である、請求項７に記載の使用または請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
組換えＡＡＶファージミド粒子が形質導入された標的細胞中に導入遺伝子を発現させるための組換えＡＡＶファージミド粒子であって、前記ＡＡＶファージミド粒子は、１つ以上の導入遺伝子発現カセットで、前記１つ以上の導入遺伝子発現カセットはＡＡＶ血清型の左及び右末端逆位反復配列（ＩＴＲ）を含み、前記少なくとも１つの導入遺伝子発現カセットは、前記標的細胞への送達のための作用因子をコードし、前記ＡＡＶファージミド粒子は、原核宿主からの粒子の形成、パッケージングまたは排出に必要とされるバクテリオファージ構造遺伝子を欠くゲノムを含み、前記ＡＡＶファージミド粒子は前記カプシドタンパク質をコードする構造遺伝子を欠き、前記ＡＡＶファージミド粒子は構造カプシドタンパク質を含み、カプシド少数コートタンパク質は前記粒子の前記標的細胞への送達を可能にする細胞標的化リガンドをディスプレイするように構成され、前記細胞標的化リガンドは、配列番号７のＲＧＤ４Ｃ標的化ペプチドまたは配列番号７と少なくとも７０％の同一配列を有するそのフラグメントまたは変異体である組換えＡＡＶファージミド粒子。
【請求項１１】
前記組換えファージミド粒子は、カチオン性ポリマーと組み合わされて正味の正電荷を有する複合体を形成し、随意に前記カチオン性ポリマーは、キトサン、ポリ−Ｄ−リジン（ＰＤＬ）、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）、ジエチルアミノエチル−デキストラン（ＤＥＡＥ．ＤＥＸ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリブレン、硫酸プロタミン、及びカチオン性脂質からなる群から選択される、請求項１０に記載の粒子。
【請求項１２】
請求項５に記載の組換えベクター、請求項６の組換えファージミド粒子、または治療または診断に用いるための、請求項１０または請求項１１のどちらか一方に記載の組換えファージミド粒子。
【請求項１３】
請求項５に記載の組換えベクター、請求項６の組換えファージミド粒子、または遺伝子治療技術における使用のための、請求項１０または請求項１１のどちらか一方に記載の組換えファージミド粒子。
【請求項１４】
請求項５に記載の組換えベクター、請求項６の組換えファージミド粒子、または前記遺伝子治療技術を、癌を治療、予防、または寛解させるために使用する、請求項１０または請求項１１のどちらか一方に記載の組換えファージミド粒子。
【請求項１５】
請求項５に記載の組換えベクター、請求項６の組換えファージミド粒子、または対象へのワクチン送達に使用し、随意に、前記ワクチンがペプチドワクチンまたはＤＮＡワクチンである、請求項１０または請求項１１のどちらか一方に記載の組換えファージミド粒子。