【手続補正書】
【提出日】平成31年2月26日(2019.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
5つの二価結合単位およびJ鎖またはその機能的断片もしくは変種を含む五量体結合分子であって、各結合単位が、抗原結合ドメインと各々会合している2つのIgM重鎖定常領域を含み、前記結合分子の少なくとも1つの抗原結合ドメインが、以下を含むCD20抗原結合ドメインである、前記五量体結合分子：
(a) 免疫グロブリン相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3を含む抗体重鎖可変領域(VH)、ならびに免疫グロブリン相補性決定領域LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含む抗体軽鎖可変領域(VL)であって、ここでHCDR1がSEQ ID NO: 39または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 39のアミノ酸配列を含み; HCDR2がSEQ ID NO: 40または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 40のアミノ酸配列を含み; HCDR3がSEQ ID NO: 41または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 41のアミノ酸配列を含み; LCDR1がSEQ ID NO: 43または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 43のアミノ酸配列を含み; LCDR2がSEQ ID NO: 44または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 44のアミノ酸配列を含み; およびLCDR3がSEQ ID NO: 45または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 45のアミノ酸配列を含む、該抗体重鎖可変領域(VH)および該抗体軽鎖可変領域(VL)、または
(b) 抗体重鎖可変領域(VH)および抗体軽鎖可変領域(VL)であって、ここでVHがSEQ ID NO: 38と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%同一なアミノ酸配列を含み、かつVLがSEQ ID NO: 42と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%同一なアミノ酸配列を含む、該抗体重鎖可変領域(VH)および該抗体軽鎖可変領域(VL)。
【請求項２】
各結合単位が、IgM定常領域またはその断片のアミノ末端に位置するVHを各々含む2本のIgM重鎖と、免疫グロブリン軽鎖定常領域のアミノ末端に位置するVLを各々含む2本の免疫グロブリン軽鎖とを含む、請求項1に記載の結合分子。
【請求項３】
IgM重鎖定常領域またはその断片が各々、Cμ2ドメイン、Cμ1ドメイン、Cμ3ドメイン、およびCμ4-tpドメインを含む、請求項1または請求項2に記載の結合分子。
【請求項４】
IgM重鎖定常領域がヒトIgM定常領域である、請求項3に記載の結合分子。
【請求項５】
結合単位が同一であり、各結合単位中のIgM重鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 56を含み、かつ各結合単位中の軽鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 58を含む、請求項4に記載の結合分子。
【請求項６】
J鎖またはその機能的断片もしくは変種が、アミノ酸配列SEQ ID NO：49またはその機能的断片を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項７】
J鎖またはその機能的断片もしくは変種が、異種ポリペプチドをさらに含む改変J鎖であり、該異種ポリペプチドがJ鎖またはその機能的断片もしくは変種に直接的または間接的に融合されている、請求項1〜6のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項８】
前記異種ポリペプチドが、ペプチドリンカーを介してJ鎖またはその機能的断片もしくは変種に融合されている、請求項7に記載の結合分子。
【請求項９】
前記異種ポリペプチドが、J鎖もしくはその機能的断片もしくは変種のN末端に、J鎖もしくはその機能的断片もしくは変種のC末端に、またはJ鎖もしくはその機能的断片もしくは変種のN末端とC末端の両方に融合されている、請求項7または請求項8に記載の結合分子。
【請求項１０】
前記異種ポリペプチドが抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項8または請求項9に記載の結合分子。
【請求項１１】
抗原結合断片が、Fab断片、Fab'断片、F(ab')2断片、Fd断片、Fv断片、一本鎖Fv (scFv)断片、ジスルフィド結合Fv (sdFv)断片、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項10に記載の結合分子。
【請求項１２】
前記異種ポリペプチドがCD3εに特異的に結合することができる、請求項10または請求項11に記載の結合分子。
【請求項１３】
改変J鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 64 (V15J)またはSEQ ID NO: 66 (J15V)を含む、請求項12に記載の結合分子。
【請求項１４】
CD20に特異的に結合する等量の単一特異性二価IgG1抗体またはその断片よりも高い効力で、CD20発現細胞の補体媒介性殺傷を導くことができる結合分子であって、
該単一特異性二価IgG1抗体が、1.5.3であり、アミノ酸配列SEQ ID NO: 38を有するVHとアミノ酸配列SEQ ID NO: 42を有するVLとを含む、
請求項1〜13のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項１５】
CD20発現細胞がRaji細胞株であり、かつ前記結合分子が、μg/ml単位で測定して、等量の単一特異性二価IgG1抗体のIC50の高くとも4分の1、高くとも10分の1、高くとも50分の1、または高くとも100分の1のIC50で補体媒介性殺傷を導くことができる、または
CD20発現細胞がRamos細胞株であり、かつ前記結合分子が、モル当量として測定して、等量の単一特異性二価IgG1抗体のIC50の高くとも10分の1、高くとも20分の1、高くとも30分の1、高くとも40分の1、高くとも50分の1、高くとも60分の1、高くとも70分の1、高くとも80分の1、高くとも90分の1、または高くとも100分の1のIC50で補体媒介性殺傷を導くことができる、
請求項14に記載の結合分子。
【請求項１６】
CD20発現細胞が、がんを有する対象における悪性B細胞である、請求項14に記載の結合分子。
【請求項１７】
がんがCD20陽性白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、請求項16に記載の結合分子。
【請求項１８】
がんが、リツキシマブ療法に対して最小応答性または非応答性である、請求項16または請求項17に記載の結合分子。
【請求項１９】
対象がヒトである、請求項16〜18のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項２０】
請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子および担体を含む、組成物。
【請求項２１】
IgM重鎖定常領域もしくはその断片またはIgA重鎖定常領域もしくはその断片と、CD20抗原結合ドメインの少なくとも抗体VH部分とを含む、請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子の重鎖ポリペプチドサブユニット
をコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項21に記載のポリヌクレオチドを含む、組成物。
【請求項２３】
請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子の軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列をさらに含む、請求項22に記載の組成物。
【請求項２４】
重鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列と軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列が、別々のベクター上にある、請求項23に記載の組成物。
【請求項２５】
重鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列および軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列が、単一のベクター上にある、請求項23に記載の組成物。
【請求項２６】
重鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列および/または軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列と別々のベクターまたは同じベクターに位置する請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子のJ鎖またはその機能的断片もしくは変種をコードする核酸配列をさらに含む、請求項22〜25のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
請求項21〜26のいずれか一項に記載の核酸配列を含む、ベクターまたはベクターの組み合わせ。
【請求項２８】
請求項21に記載のポリヌクレオチド、請求項22〜26のいずれか一項に記載の組成物、または請求項27に記載のベクターを含み、請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子またはそのサブユニットを発現することができる、宿主細胞。
【請求項２９】
請求項28に記載の宿主細胞を培養する段階、および結合分子を回収する段階を含む、請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子を産生する方法。
【請求項３０】
請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子または請求項20に記載の組成物とCD20発現細胞を接触させる段階を含む、CD20発現細胞の補体媒介性殺傷を導くためのインビトロ方法であって、前記結合分子が、CD20に特異的に結合する等量の単一特異性二価IgG1抗体またはその断片よりも高い効力でCD20発現細胞の補体媒介性殺傷を導くことができ、該単一特異性二価IgG1抗体が、1.5.3であり、アミノ酸配列SEQ ID NO: 38を有するVHとアミノ酸配列SEQ ID NO: 42を有するVLとを含む、前記方法。
【請求項３１】
その必要がある対象におけるがんの処置における使用のための、請求項1〜19のいずれか一項に記載の結合分子。
【請求項３２】
がんがCD20陽性白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、請求項31に記載の使用のための結合分子。
【請求項３３】
がんが、リツキシマブ療法に対して最小応答性または非応答性である、請求項31または請求項32に記載の使用のための結合分子。
【請求項３４】
対象がヒトである、請求項31〜33のいずれか一項に記載の使用のための結合分子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
これらの提供される方法によれば、CD20発現細胞は、がん、例えば、CD20陽性白血病、リンパ腫、または骨髄腫を有する対象における悪性B細胞であることができる。特定の局面において、がんは、リツキシマブ療法に対して最小応答性または非応答性である。特定の局面において、対象はヒトである。
[本発明1001]
少なくとも2つの二価結合単位またはその変種もしくは断片を含む多量体結合分子であって、各結合単位が、抗原結合ドメインと各々会合している少なくとも2つの重鎖定常領域またはその断片を含み、前記結合分子の少なくとも1つの抗原結合ドメインは、6つの免疫グロブリン相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むCD20抗原結合ドメインであり、ここでHCDR1がSEQ ID NO: 39または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 39のアミノ酸配列を含み; HCDR2がSEQ ID NO: 40または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 40のアミノ酸配列を含み; HCDR3がSEQ ID NO: 41または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 41のアミノ酸配列を含み; LCDR1がSEQ ID NO: 43または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 43のアミノ酸配列を含み; LCDR2がSEQ ID NO: 44または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 44のアミノ酸配列を含み; およびLCDR3がSEQ ID NO: 45または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 45のアミノ酸配列を含む、多量体結合分子。
[本発明1002]
少なくとも2つの二価結合単位またはその変種もしくは断片を含む多量体結合分子であって、各結合単位が、抗原結合ドメインと各々会合している少なくとも2つの重鎖定常領域またはその断片を含み、前記結合分子の少なくとも1つの抗原結合ドメインが、抗体重鎖可変領域(VH)および抗体軽鎖可変領域(VL)を含むCD20抗原結合ドメインであり、ここでVHがSEQ ID NO: 38と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%同一なアミノ酸配列を含み、かつVLがSEQ ID NO: 42と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%同一なアミノ酸配列を含む、多量体結合分子。
[本発明1003]
前記結合分子が、2つの二価IgA結合単位またはその断片およびJ鎖またはその断片もしくは変種を含む二量体結合分子であり、各結合単位が、抗原結合ドメインと各々会合している2つのIgA重鎖定常領域またはその断片を含む、本発明1001または本発明1002の結合分子。
[本発明1004]
分泌成分またはその断片もしくは変種をさらに含む、本発明1003の結合分子。
[本発明1005]
IgA重鎖定常領域またはその断片が各々、Cα2ドメインまたはCα3-tpドメインを含む、本発明1003の結合分子。
[本発明1006]
1つまたは複数のIgA重鎖定常領域またはその断片が、Cα1ドメインをさらに含む、本発明1005の結合分子。
[本発明1007]
少なくとも1つの結合単位がCD20抗原結合ドメインを2つ含み、かつ該少なくとも1つの結合単位内の2本の重鎖が同一である、本発明1003〜1006のいずれかの結合分子。
[本発明1008]
IgA重鎖定常領域がヒトIgA定常領域である、本発明1003〜1007のいずれかの結合分子。
[本発明1009]
各結合単位が、IgA定常領域またはその断片のアミノ末端に位置するVHを各々含む2本のIgA重鎖と、免疫グロブリン軽鎖定常領域のアミノ末端に位置するVLを各々含む2本の免疫グロブリン軽鎖とを含む、本発明1003〜1008のいずれかの結合分子。
[本発明1010]
前記結合分子が、5つまたは6つの二価IgM結合単位をそれぞれ含む五量体または六量体結合分子であり、各結合単位が、抗原結合ドメインと各々会合している2つのIgM重鎖定常領域またはその断片を含む、本発明1001または本発明1002の結合分子。
[本発明1011]
IgM重鎖定常領域またはその断片が各々、Cμ3ドメインおよびCμ4-tpドメインを含む、本発明1010の結合分子。
[本発明1012]
1つまたは複数のIgM重鎖定常領域またはその断片が、Cμ2ドメイン、Cμ1ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、本発明1010または本発明1011の結合分子。
[本発明1013]
五量体であり、かつJ鎖またはその機能的断片またはその機能的変種をさらに含む、本発明1010〜1012のいずれかの結合分子。
[本発明1014]
J鎖またはその断片が、アミノ酸配列SEQ ID NO：49またはその機能的断片を含む、本発明1013の結合分子。
[本発明1015]
J鎖またはその断片が、異種ポリペプチドをさらに含む改変J鎖であり、該異種ポリペプチドがJ鎖またはその断片に直接的または間接的に融合されている、本発明1013または本発明1014の結合分子。
[本発明1016]
前記異種ポリペプチドが、ペプチドリンカーを介してJ鎖またはその断片に融合されている、本発明1015の結合分子。
[本発明1017]
ペプチドリンカーが少なくとも5つのアミノ酸、しかし25以下のアミノ酸を含む、本発明1016の結合分子。
[本発明1018]
ペプチドリンカーが
2018508214.tif 000001
からなる、本発明1017の結合分子。
[本発明1019]
前記異種ポリペプチドが、J鎖もしくはその断片のN末端に、J鎖もしくはその断片のC末端に、またはJ鎖もしくはその断片のN末端とC末端の両方に融合されている、本発明1015〜1018のいずれかの結合分子。
[本発明1020]
前記異種ポリペプチドが結合ドメインを含む、本発明1016〜1019のいずれかの結合分子。
[本発明1021]
前記異種ポリペプチドの結合ドメインが、抗体またはその抗原結合断片である、本発明1020の結合分子。
[本発明1022]
抗原結合断片が、Fab断片、Fab'断片、F(ab')2断片、Fd断片、Fv断片、一本鎖Fv (scFv)断片、ジスルフィド結合Fv (sdFv)断片、またはそれらの任意の組み合わせを含む、本発明1021の結合分子。
[本発明1023]
抗原結合断片がscFv断片である、本発明1022の結合分子。
[本発明1024]
前記異種ポリペプチドがCD3εに特異的に結合することができる、本発明1020〜1023のいずれかの結合分子。
[本発明1025]
改変J鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 64 (V15J)またはSEQ ID NO: 66 (J15V)を含む、本発明1024の結合分子。
[本発明1026]
改変J鎖がシグナルペプチドをさらに含む、本発明1025の結合分子。
[本発明1027]
改変J鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 63 (V15J)またはSEQ ID NO: 65 (J15V)を含む、本発明1026の結合分子。
[本発明1028]
IgM重鎖定常領域がヒトIgM定常領域である、本発明1010〜1027のいずれかの結合分子。
[本発明1029]
各結合単位が、IgM定常領域またはその断片のアミノ末端に位置するVHを各々含む2本のIgM重鎖と、免疫グロブリン軽鎖定常領域のアミノ末端に位置するVLを各々含む2本の免疫グロブリン軽鎖とを含む、本発明1010〜1028のいずれかの結合分子。
[本発明1030]
少なくとも1つの結合単位がCD20抗原結合ドメインを2つ含み、かつ該少なくとも1つの結合単位内の2本の重鎖が同一である、本発明1010〜1029のいずれかの結合分子。
[本発明1031]
少なくとも1つの結合単位内の前記2本のIgM重鎖が、アミノ酸配列SEQ ID NO: 56を含む、本発明1030の結合分子。
[本発明1032]
2つの軽鎖定常領域が、ヒトλ定常領域またはヒトκ定常領域である、本発明1030または本発明1031の結合分子。
[本発明1033]
2つの軽鎖定常領域が、同一であり、かつアミノ酸配列SEQ ID NO: 58を含む、本発明1032の結合分子。
[本発明1034]
CD20抗原結合ドメインを少なくとも3コピー、少なくとも4コピー、少なくとも5コピー、少なくとも6コピー、少なくとも7コピー、少なくとも8コピー、少なくとも9コピー、少なくとも10コピー、少なくとも11コピー、または少なくとも12コピー含む、本発明1010〜1033のいずれかの結合分子。
[本発明1035]
結合単位の少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、または少なくとも6つが同一である、本発明1034の結合分子。
[本発明1036]
CD20抗原結合ドメインと同じCD20エピトープに特異的に結合する等量の単一特異性二価IgG1抗体またはその断片よりも高い効力で、CD20発現細胞の補体媒介性殺傷、T細胞媒介性殺傷、または補体媒介性殺傷とT細胞媒介性殺傷の両方を導くことができる、本発明1034または本発明1035の結合分子。
[本発明1037]
単一特異性二価IgG1抗体が、1.5.3であり、アミノ酸配列SEQ ID NO: 38を有するVHとアミノ酸配列SEQ ID NO: 42を有するVLとを含む、本発明1036の結合分子。
[本発明1038]
CD20発現細胞がリンパ腫細胞株である、本発明1036または本発明1037の結合分子。
[本発明1039]
細胞株がRamos細胞株、Raji細胞株、Daudi細胞株、Namalwa細胞株、Granta細胞株、Z138細胞株、DoHH2細胞株、またはDB細胞株である、本発明1038の結合分子。
[本発明1040]
CD20発現細胞がRaji細胞株であり、かつ前記結合分子が、μg/ml単位で測定して、等量の単一特異性二価IgG1抗体のIC50の高くとも4分の1、高くとも10分の1、高くとも50分の1、または高くとも100分の1のIC50で補体媒介性殺傷を導くことができる、本発明1036〜1039のいずれかの結合分子。
[本発明1041]
CD20発現細胞がRamos細胞株であり、かつ前記結合分子が、モル当量として測定して、等量の単一特異性二価IgG1抗体のIC50の高くとも10分の1、高くとも20分の1、高くとも30分の1、高くとも40分の1、高くとも50分の1、高くとも60分の1、高くとも70分の1、高くとも80分の1、高くとも90分の1、または高くとも100分の1のIC50で補体媒介性殺傷を導くことができる、本発明1036〜1039のいずれかの結合分子。
[本発明1042]
CD20発現細胞が、がんを有する対象における悪性B細胞である、本発明1036の結合分子。
[本発明1043]
がんがCD20陽性白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、本発明1042の結合分子。
[本発明1044]
がんが、リツキシマブ療法に対して最小応答性または非応答性である、本発明1042または本発明1043のいずれかの結合分子。
[本発明1045]
対象がヒトである、本発明1042〜1044のいずれかの結合分子。
[本発明1046]
本発明1001〜1045のいずれかの結合分子および担体を含む、組成物。
[本発明1047]
IgM重鎖定常領域もしくはその断片またはIgA重鎖定常領域もしくはその断片と、CD20抗原結合ドメインの少なくとも抗体VH部分とを含む、本発明1001〜1045のいずれかの結合分子の重鎖ポリペプチドサブユニット
をコードする核酸配列を含む、ポリヌクレオチド。
[本発明1048]
重鎖ポリペプチドサブユニットが、
(a) SEQ ID NO: 39または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 39のアミノ酸配列を含むHCDR1; SEQ ID NO: 40または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 40のアミノ酸配列を含むHCDR2; SEQ ID NO: 41または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 41のアミノ酸配列を含むHCDR3; あるいは
(b) SEQ ID NO: 38と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%同一なアミノ酸配列
を含むVHのC末端に融合されたヒトIgM定常領域またはその断片を含む、本発明1047のポリヌクレオチド。
[本発明1049]
アミノ酸配列SEQ ID NO: 56をコードする、本発明1048のポリヌクレオチド。
[本発明1050]
本発明1047〜1049のいずれかのポリヌクレオチドを含む、組成物。
[本発明1051]
CD20抗原結合ドメインの抗体VL部分を含む軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列をさらに含む、本発明1050の組成物。
[本発明1052]
軽鎖ポリペプチドサブユニットが、
(a) SEQ ID NO: 43または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 43のアミノ酸配列を含むLCDR1; SEQ ID NO: 44または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 44のアミノ酸配列を含むLCDR2; およびSEQ ID NO: 45または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 45のアミノ酸配列を含むLCDR3; あるいは
(b) SEQ ID NO: 42と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%同一なアミノ酸配列
を含むVLのC末端に融合されたヒト抗体軽鎖定常領域またはその断片を含む、本発明1051の組成物。
[本発明1053]
軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸が、アミノ酸配列SEQ ID NO: 58をコードする、本発明1052の組成物。
[本発明1054]
重鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列と軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列が、別々のベクター上にある、本発明1051〜1053のいずれかの組成物。
[本発明1055]
重鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列および軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列が、単一のベクター上にある、本発明1051〜1053のいずれかの組成物。
[本発明1056]
J鎖またはその機能的断片またはその機能的変種をコードする核酸配列をさらに含む、本発明1050〜1055のいずれかの組成物。
[本発明1057]
J鎖またはその断片が、アミノ酸配列SEQ ID NO: 49またはその機能的断片を含む、本発明1056の組成物。
[本発明1058]
J鎖またはその断片が、異種ポリペプチドをさらに含む改変J鎖であり、該異種ポリペプチドがJ鎖またはその断片に直接的または間接的に融合されている、本発明1056または本発明1057の組成物。
[本発明1059]
前記異種ポリペプチドが、抗体またはその抗原結合断片を含む、本発明1056〜1058のいずれかの組成物。
[本発明1060]
前記異種ポリペプチドが、CD3εに特異的に結合できるscFvを含む、本発明1059の組成物。
[本発明1061]
J鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 64 (V15J)またはSEQ ID NO: 66 (J15V)を含む、本発明1060の組成物。
[本発明1062]
J鎖がシグナルペプチドをさらに含む、本発明1061の組成物。
[本発明1063]
改変J鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 63 (V15J)またはSEQ ID NO: 65 (J15V)を含む、本発明1062の組成物。
[本発明1064]
J鎖またはその機能的断片またはその機能的変種をコードする核酸配列が、SEQ ID NO: 68またはSEQ ID NO: 69を含む、本発明1056〜1062のいずれかの組成物。
[本発明1065]
重鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列、軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列、およびJ鎖をコードする核酸配列が、単一のベクター上にある、本発明1056〜1064のいずれかの組成物。
[本発明1066]
重鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列、軽鎖ポリペプチドサブユニットをコードする核酸配列、およびJ鎖をコードする核酸配列が各々、別々のベクター上にある、本発明1056〜1064のいずれかの組成物。
[本発明1067]
本発明1055または本発明1065のベクター。
[本発明1068]
本発明1054または本発明1066のベクター。
[本発明1069]
本発明1047〜1049のいずれかのポリヌクレオチド、本発明1050〜1066のいずれかの組成物、または本発明1067もしくは本発明1068のベクターを含み、本発明1001〜1045のいずれかの結合分子またはそのサブユニットを発現することができる、宿主細胞。
[本発明1070]
本発明1069の宿主細胞を培養する段階、および結合分子を回収する段階を含む、本発明1001〜1045のいずれかの結合分子を産生する方法。
[本発明1071]
本発明1001〜1045のいずれかの結合分子または本発明1046の組成物とCD20発現細胞を接触させる段階を含む、CD20発現細胞の補体媒介性殺傷、T細胞媒介性殺傷、または補体媒介性殺傷とT細胞媒介性殺傷の両方を導くための方法であって、前記結合分子が、CD20抗原結合ドメインと同じCD20エピトープに特異的に結合する等量の単一特異性二価IgG1抗体またはその断片よりも高い効力でCD20発現細胞の補体媒介性殺傷を導くことができる、方法。
[本発明1072]
単一特異性二価IgG1抗体が、1.5.3であり、アミノ酸配列SEQ ID NO: 38を有するVHとアミノ酸配列SEQ ID NO: 42を有するVLとを含む、本発明1071の方法。
[本発明1073]
CD20発現細胞がリンパ腫細胞株である、本発明1071または本発明1072の方法。
[本発明1074]
細胞株がRamos細胞株、Raji細胞株、Daudi細胞株、Namalwa細胞株、Granta細胞株、Z138細胞株、DoHH2細胞株、またはDB細胞株である、本発明1073の方法。
[本発明1075]
CD20発現細胞がRaji細胞株であり、かつ前記結合分子が、μg/ml単位で測定して、等量の単一特異性二価IgG1抗体のIC50の高くとも4分の1、高くとも10分の1、高くとも50分の1、または高くとも100分の1のIC50で補体媒介性殺傷を導く、本発明1071〜1074のいずれかの方法。
[本発明1076]
CD20発現細胞がRamos細胞株であり、かつ前記結合分子が、モル当量として測定して、等量の単一特異性二価IgG1抗体のIC50の高くとも10分の1、高くとも20分の1、高くとも30分の1、高くとも40分の1、高くとも50分の1、高くとも60分の1、高くとも70分の1、高くとも80分の1、高くとも90分の1、または高くとも100分の1のIC50で補体媒介性殺傷を導くことができる、本発明1071〜1074のいずれかの方法。
[本発明1077]
CD20発現細胞が、がんを有する対象における悪性B細胞である、本発明1071または本発明1072の方法。
[本発明1078]
がんがCD20陽性白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、本発明1077の方法。
[本発明1079]
がんが、リツキシマブ療法に対して最小応答性または非応答性である、本発明1077〜1078のいずれかの方法。
[本発明1080]
2つ、5つ、または6つの二価結合単位をそれぞれ含む二量体、五量体、または六量体結合分子とCD20発現細胞を接触させる段階を含む、CD20発現細胞の補体媒介性殺傷、T細胞媒介性殺傷、または補体媒介性殺傷とT細胞媒介性殺傷の両方を導くための方法であって、各結合単位が、2つのIgAもしくはIgM重鎖定常領域またはその断片および2つの抗原結合ドメインを含み、前記結合分子の少なくとも1つの抗原結合ドメインがCD20抗原結合ドメインであり、かつ前記結合分子が、CD20抗原結合ドメインと同じCD20エピトープに特異的に結合する等量の単一特異性二価IgG1抗体またはその断片よりも高い効力でCD20発現細胞の補体媒介性殺傷を導くことができる、方法。
[本発明1081]
CD20抗原結合ドメインが、6つの免疫グロブリン相補性決定領域HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含み、ここでHCDR1がSEQ ID NO: 2または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 2のアミノ酸配列を含み; HCDR2がSEQ ID NO: 3または1つ、2つ、3つ、4つ、もしくは5つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 3のアミノ酸配列を含み; HCDR3がSEQ ID NO: 4または1つ、2つ、もしくは3つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 4またはSEQ ID NO: 10またはSEQ ID NO: 31のアミノ酸配列を含み; LCDR1がSEQ ID NO: 6または1つ、2つ、もしくは3つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 6のアミノ酸配列を含み; LCDR2がSEQ ID NO: 7または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 7のアミノ酸配列を含み; かつLCDR3がSEQ ID NO: 8または1つもしくは2つの単一アミノ酸置換を有するSEQ ID NO: 8のアミノ酸配列を含む、本発明1080の方法。
[本発明1082]
CD20抗原結合ドメインが、
(a) SEQ ID NO: 1と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列およびSEQ ID NO: 5と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列;
(b) SEQ ID NO: 9と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列およびSEQ ID NO: 11と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列;
(c) SEQ ID NO: 15と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列およびSEQ ID NO: 18と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列;
(d) SEQ ID NO: 22もしくはSEQ ID NO: 23と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列およびSEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、もしくはSEQ ID NO: 29と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列;
(e) SEQ ID NO: 30と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列およびSEQ ID NO: 32と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列; または
(f) SEQ ID NO: 35と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列およびSEQ ID NO: 37と少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、もしくは100%同一なアミノ酸配列
をそれぞれ含むVHおよびVLを含む、本発明1080の方法。
[本発明1083]
IgA重鎖定常領域またはその断片が各々、Cα2ドメインまたはCα3-tpドメインを含む、本発明1080〜1082のいずれかの方法。
[本発明1084]
1つまたは複数のIgA重鎖定常領域またはその断片が、Cα1ドメインをさらに含む、本発明1083の方法。
[本発明1085]
IgA重鎖定常領域がヒトIgA定常領域である、本発明1083または本発明1084の方法。
[本発明1086]
前記結合分子が分泌成分をさらに含む、本発明1083〜1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
前記結合分子のIgM重鎖定常領域またはその断片が各々、Cμ3ドメインおよびCμ4-tpドメインを含む、本発明1080〜1082のいずれかの方法。
[本発明1088]
前記結合分子の1つまたは複数のIgM重鎖定常領域またはその断片が、Cμ2ドメイン、Cμ1ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、本発明1087の方法。
[本発明1089]
前記結合分子が、五量体であり、かつJ鎖またはその機能的断片またはその機能的変種をさらに含む、本発明1083〜1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
J鎖またはその断片が、アミノ酸配列SEQ ID NO：49またはその機能的断片を含む、本発明1089の方法。
[本発明1091]
J鎖またはその断片が、異種ポリペプチドをさらに含み、該異種ポリペプチドがJ鎖またはその断片に直接的または間接的に融合されている、本発明1089または本発明1090の方法。
[本発明1092]
前記異種ポリペプチドが、ペプチドリンカーを介してJ鎖またはその断片に融合されている、本発明1091の方法。
[本発明1093]
ペプチドリンカーが少なくとも5つのアミノ酸、しかし25以下のアミノ酸を含む、本発明1092の方法。
[本発明1094]
ペプチドリンカーが
2018508214.tif 000002
からなる、本発明1093の方法。
[本発明1095]
前記異種ポリペプチドが、J鎖もしくはその断片のN末端に、J鎖もしくはその断片のC末端に、またはJ鎖もしくはその断片のN末端とC末端の両方に融合されている、本発明1091〜1094のいずれかの方法。
[本発明1096]
前記異種ポリペプチドが結合ドメインを含む、本発明1091〜1095のいずれかの方法。
[本発明1097]
前記異種ポリペプチドの結合ドメインが、抗体またはその抗原結合断片である、本発明1096の方法。
[本発明1098]
抗原結合断片が、Fab断片、Fab'断片、F(ab')2断片、Fd断片、Fv断片、一本鎖Fv (scFv)断片、ジスルフィド結合Fv (sdFv)断片、またはそれらの任意の組み合わせを含む、本発明1097の方法。
[本発明1099]
抗原結合断片がscFv断片である、本発明1098の方法。
[本発明1100]
前記異種ポリペプチドがCD3εに特異的に結合することができる、本発明1097〜1099のいずれかの方法。
[本発明1101]
改変J鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 64 (V15J)またはSEQ ID NO: 66 (J15V)を含む、本発明1100の方法。
[本発明1102]
改変J鎖がシグナルペプチドをさらに含む、本発明1101の方法。
[本発明1103]
改変J鎖がアミノ酸配列SEQ ID NO: 63 (V15J)またはSEQ ID NO: 65 (J15V)を含む、本発明1102の方法。
[本発明1104]
IgM重鎖定常領域がヒトIgM定常領域である、本発明1087〜1103のいずれかの方法。
[本発明1105]
前記結合分子の各結合単位が、IgAもしくはIgM定常領域またはその断片のアミノ末端に位置するVHを各々含む2本のIgAもしくはIgM重鎖と、免疫グロブリン軽鎖定常領域のアミノ末端に位置するVLを各々含む2本の免疫グロブリン軽鎖とを含む、本発明1083〜1104のいずれかの方法。
[本発明1106]
前記結合分子の少なくとも1つの結合単位が、2つの同一のCD20抗原結合ドメインを含み、かつ該少なくとも1つの結合単位内の2本のIgAまたはIgM重鎖が同一である、本発明1105の方法。
[本発明1107]
少なくとも1つの結合単位内の前記2本のIgM重鎖が、アミノ酸配列SEQ ID NO: 52を含む、本発明1106の方法。
[本発明1108]
2つの軽鎖定常領域がヒトλ定常領域またはヒトκ定常領域である、本発明1107の方法。
[本発明1109]
軽鎖が、同一であり、かつアミノ酸配列SEQ ID NO: 54を含む、本発明1108の方法。
[本発明1110]
前記結合分子が、少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、少なくとも9個、少なくとも10個、少なくとも11個、または少なくとも12個のCD20抗原結合ドメインを含む、本発明1080〜1109のいずれかの方法。
[本発明1111]
少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、少なくとも6個、少なくとも7個、少なくとも8個、少なくとも9個、少なくとも10個、少なくとも11個、または少なくとも12個のCD20抗原結合ドメインが同一である、本発明1110の方法。
[本発明1112]
前記結合分子内の結合単位の少なくとも2個、少なくとも3個、少なくとも4個、少なくとも5個、または少なくとも6個が同一である、本発明1110または本発明1111の方法。
[本発明1113]
単一特異性二価IgG1抗体が、リツキシマブであり、アミノ酸配列SEQ ID NO: 1を有するVHとアミノ酸配列SEQ ID NO: 5を有するVLとを含む、本発明1080〜1112のいずれかの方法。
[本発明1114]
CD20発現細胞がリンパ腫細胞株である、本発明1080〜1113のいずれかの方法。
[本発明1115]
細胞株がRamos細胞株、Raji細胞株、Daudi細胞株、Namalwa細胞株、Granta細胞株、Z138細胞株、DoHH2細胞株、またはDB細胞株である、本発明1114の方法。
[本発明1116]
細胞株がGranta細胞株であり、かつ前記結合分子が、リツキシマブの効力の約6倍の効力で該細胞株の補体媒介性殺傷を導くことができる、本発明1115の方法。
[本発明1117]
細胞株がRaji細胞株またはRamos細胞株であり、かつ前記結合分子が、リツキシマブの効力の約3倍の効力で該細胞株の補体媒介性殺傷を導くことができる、本発明1115の方法。
[本発明1118]
CD20発現細胞が、がんを有する対象における悪性B細胞である、本発明1080〜1112のいずれかの方法。
[本発明1119]
がんがCD20陽性白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、本発明1118の方法。
[本発明1120]
がんが、リツキシマブ療法に対して最小応答性または非応答性である、本発明1118または本発明1119のいずれかの方法。
[本発明1121]
対象がヒトである、本発明1118〜1120のいずれかの方法。