【手続補正書】
【提出日】平成19年1月4日(2007.1.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
(vii)  化合物（９）とアミノエタノールとを反応させ、次いで、アミノ基を保護することにより、化合物（１０）が得られる。
使用するアミノエタノールの量は、基質に対して１〜１００当量であり、好ましくは１０〜５０当量である。
使用することができる溶媒としては、ヘキサン、ベンゼン、トルエンなどの炭化水素系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ジグライム、トリグライム、ジエチレングリコールモノメチルエーテル等のエーテル系溶媒、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等のケトン系溶媒、アセトニトリル等のニトリル系溶媒、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン等のハロゲン系溶媒、並びにこれらの混合溶媒等が好ましく挙げられる。
反応温度は-78℃から使用することができるよう溶媒の還流温度までであってよく、好ましくは0℃から25℃である。
アミノ基の保護は常法により行うことができるが、例えば、保護基がｔ−ブトキシカルボニル基である場合、二炭酸ジｔ−ブチルと炭酸カリウムを使用してよい。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
アミン７aの合成
3-OAcセラミド5a (400 mg, 0.690 mmol)、亜リン酸エステル6a (501 mg, 1.04 mmol) の塩化メチレン溶液(13.8 mL) に0℃でピリジン (0.22 mL, 2.76 mmol)、臭化ヨウ素 (285 mg, 1.38 mmol) を加えた。そのままの温度で、4.5時間攪拌した。反応溶液に10%亜硫酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(from 0% to 2% methanol in chloroform)により粗精製した。塩化メチレン(6.9 mL)を加え、0℃でトリフルオロ酢酸 (2.3 mL) を加え、そのままの温度で、7時間攪拌した。反応溶液を1N NaOH水溶液で中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (from 1% to 20% methanol in chloroform) により分離・精製し、アミン7a (652 mg, 83%) を得た。
【化２３】
2006022019.tif 000001
[α]D22.8 12.09 (c= 1.050 , CHCl3)
IR (KBr disk): 3302, 2919, 1734, 1649, 1520, 1468, 1236, 1182, 1040 cm-1
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ: 7.14 (md, J= 8.5 Hz, 2H), 6.91 (md, J= 8.8 Hz, 2H), 6.16 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 5.79 (td, J= 6.8, 14.9, 1H), 5.39-5.28 (m, 2H), 4.40 (m, 1H), 4.20-4.07 (m, 6H), 3.79-3.72 (m, 4H), 3.06 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 2.98 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 2.18-2.13 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 2.03-1.97 (m, 2H), 1.58 (m, 2H), 1.32-1.25 (m, 44H), 0.88 (t, J= 7.1 Hz, 6H) ; 13C NMR (CD3OD, 100 MHz) δ: 173.0 (1/2C), 172.9 (1/2C), 169.8 (1/2C), 169.7 (1/2C), 159.7, 137.9 (1/2C), 137.8 (1/2C), 128.1, 124.3, 122.2 (q, JC-F= 258 Hz), 121.2, 114.9, 73.0, 67.5 (m), 66.4 (m), 64.2, 54.6 (m), 50.9 (m), 49.2 (m), 48.2 (m), 44.4 (m), 36.7, 32.3, 31.9, 29.7, 29.5, 29.5, 29.4, 29.3, 29.3, 29.2, 28.9, 25.6, 22.7, 21.1, 14.1.
ESI HRMS m/z calcd for C49H84F3N4NaO8P (M+ + Na) 967.5887, found 967.5886.
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
光アフィニティー標識化スフィンゴミエリン1aの合成
アミン7a (544 mg, 0.576 mmol) のメタノール溶液 (5.8 mL) に室温で、30%トリメチルアミン水溶液 (2.9 mL) を加え、8時間攪拌した。反応溶液を減圧濃縮し、残渣をアセトニトリル、メタノール、水の混合溶媒(5.8 mL, 8:1:1)で溶解した。炭酸カリウム (796 mg, 5.76 mmol)、ヨウ化メチル (0.58 mL, 9.32 mmol) を加え、室温で1.5時間攪拌した。反応溶液を水で希釈し、クロロホルム、メタノールで抽出した。有機層を減圧濃縮し、その残渣をメタノール (5.8 mL) で溶解した。2N KOH水溶液 (1.9 mL) を加え、１時間攪拌した。反応溶液を水で希釈し、クロロホルム、メタノールで抽出した。有機層を減圧濃縮し、その残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(from 20% methanol in chloroform to CHCl3:MeOH:H2O = 65:25:4)により分離・精製し、光アフィニティー標識化スフィンゴミエリン1a (329 mg, 62%) を得た。
【化２４】
2006022019.tif 000002
[α]D23.0 1.069 (c= 0.6550 , CH3OH)
IR (KBr disk): 3380, 2920, 1644, 1520, 1468, 1236, 1057 cm-1
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ: 7.90 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.25 (md, J= 8.8 Hz, 2H), 7.12 (md. J= 9.0 Hz, 2H), 5.69 (td, J= 6.8, 14.9 Hz, 1H), 5.44 (dd, J= 7.6, 15.4 Hz, 1H), 4.84 (m, 2H), 4.54 (m, 2H), 4.32 (m, 2H), 4.12-3.98 (m, 4H), 3.96 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.77 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 3.30 (s, 6H), 2.17 (m, 2H), 2.02 (dt, J= 6.8, 6.8 Hz, 2H), 1.56 (m, 2H), 1.39-1.29 (m, 46H), 0.90 (t, J= 7.1 Hz, 6H); 13C NMR (CD3OD, 100 MHz) δ: 175.9, 160.2, 135.1, 131.3, 129.5, 123.7 (q, JC-F= 273.8 Hz), 123.0, 116.5, 72.6, 66.2 (d, JC-P= 6.6 Hz), 65.9 (d, JC-P= 5.8 Hz), 65.2, 63.2, 60.3 (d, JC-P= 5.0 Hz), 55.3 (d, JC-P= 7.4 Hz), 53.4, 49.0, 37.4, 33.5, 33.1, 30.8, 30.7, 30.6, 30.51, 30.47, 30.4, 27.2, 23.8, 14.5.   
ESI HRMS m/z calcd for C48H84F3N4NaO7P (M+ + Na) 939.5927, found 939.5927.