【手続補正書】
【提出日】令和1年8月2日(2019.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合するモノクローナル抗体であって、前記抗体は、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域と、配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域と、
ａ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域、ならびに
ｂ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域、
の群から選択した、ＣＤＲ１Ｈ領域、ＣＤＲ２Ｈ領域、ＣＤＲ１Ｌ領域及びＣＤＲ２Ｌ領域の組み合わせとを含む、前記抗体。
【請求項２】
前記抗体が、ＶＨ領域として、配列番号１０のＶＨ領域を含み、ＶＬ領域として、配列番号１３及び１４のＶＬ領域からなる群から選択したＶＬ領域を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
ＢＣＭＡとヒトＣＤ３ε（さらには「ＣＤ３」ともいう）に特異的に結合する二重特異性抗体であって、前記二重特異性抗体は、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域と、配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域と、
ａ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域、ならびに
ｂ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域、
の群から選択した、ＣＤＲ１Ｈ領域、ＣＤＲ２Ｈ領域、ＣＤＲ１Ｌ領域及びＣＤＲ２Ｌ領域の組み合わせとを含む、前記抗体。
【請求項４】
前記二重特異性抗体が、ＢＣＭＡ  ＶＨとして、配列番号１０のＶＨ領域を含み、ＶＬ領域として、配列番号１３のＶＬ領域を含むか、またはＢＣＭＡ  ＶＨとして、配列番号１０のＶＨ領域を含み、ＶＬ領域として、配列番号１４のＶＬ領域を含む、請求項３に記載の二重特異性抗体。
【請求項５】
前記二重特異性抗体が、ＣＤ３に特異的に結合する抗体の軽鎖と重鎖を含み、その可変ドメインのＶＬとＶＨまたは定常ドメインのＣＬとＣＨ１が、互いに入れ替わっており、
必要に応じて、前記抗ＣＤ３抗体部分の可変ドメインＶＨ（さらには「ＣＤ３  ＶＨ」という）が、重鎖ＣＤＲ１として、配列番号１の重鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ２として、配列番号２の重鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ３として、配列番号３の重鎖ＣＤＲを含み、前記抗ＣＤ３抗体部分の可変ドメインＶＬ（さらには「ＣＤ３  ＶＬ」という）が、軽鎖ＣＤＲ１として、配列番号４の軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ２として、配列番号５の軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ３として、配列番号６の軽鎖ＣＤＲを含む、請求項３または４に記載の二重特異性抗体。
【請求項６】
前記二重特異性抗体が、
ａ）抗ＣＤ３抗体部分のＦａｂ断片を１個以下と、抗ＢＣＭＡ抗体部分のＦａｂ断片を２個以下と、Ｆｃ部分を１個以下含み；
ｂ）前記ＣＤ３抗体Ｆａｂ断片のＣ末端と、前記ＢＣＭＡ抗体Ｆａｂ断片の１つのＣ末端とに、そのＮ末端が連結しているＦｃ部分を含み；および／または
ｃ）前記抗ＢＣＭＡ抗体部分の第２のＦａｂ断片であって、前記二重特異性抗体のＣＤ３抗体部分のＮ末端に、そのＣ末端が連結されている前記第２のＦａｂ断片を含み、必要に応じて前記抗ＣＤ３抗体Ｆａｂ断片のＶＬドメインが、前記第２の抗ＢＣＭＡ抗体Ｆａｂ断片のＣＨ１ドメインに連結されている、請求項３〜５のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
【請求項７】
前記二重特異性抗体が、
ｉ）配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３及び配列番号５４（２×）、ならびに
ｉｉ）配列番号４８、配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７（２×）
のポリペプチドからなる群から選択した、重鎖と軽鎖のセットを含む、請求項３に記載の二重特異性抗体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体の調製方法であって、
ａ）宿主細胞を
ｂ）請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体の軽鎖と重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
ｃ）前記抗体分子の合成を可能にする条件で、前記宿主細胞を培養するステップと、
ｄ）前記抗体分子を前記培養物から回収するステップと、
を含む前記方法。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、医薬として用いるための医薬組成物であり、必要に応じて前記医薬組成物は、形質細胞障害の治療で医薬として用いるためのものである、医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、多発性骨髄腫、全身性ループスエリテマトーデス、形質細胞性白血病またはＡＬアミロイドーシスの治療において医薬として用いるための医薬組成物。
【請求項１２】
ＢＣＭＡに対する抗原認識部分と、Ｔ細胞活性化部分とを含むキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、前記抗原認識部分が、請求項１または２に記載のモノクローナル抗体または抗体断片である、前記ＣＡＲ。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体をコードする核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
本発明のさらに好ましい実施形態は、本発明による抗体を含む診断用組成物である。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ヒトＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合するモノクローナル抗体であって、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域と、配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域と、
ａ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｂ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｃ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｄ）配列番号２９のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号３０のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｅ）配列番号３４のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号３５のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域、ならびに
ｆ）配列番号３６のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号３７のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域、
の群から選択した、ＣＤＲ１Ｈ領域、ＣＤＲ２Ｈ領域、ＣＤＲ１Ｌ領域及びＣＤＲ２Ｌ領域の組み合わせとを含むことを特徴とする前記抗体。
（項目２）
ＢＣＭＡに特異的に結合するモノクローナル抗体であって、配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域と、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域とを含むＶＨ領域と、配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域と、
ａ）配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｂ）配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域または
ｃ）配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域
の群から選択した、ＣＤＲ１Ｌ領域及びＣＤＲ２Ｌ領域の組み合わせを含むＶＬ領域とを含むことを特徴とする前記抗体。
（項目３）
ＶＨ領域として、配列番号１０のＶＨ領域を含み、ＶＬ領域として、配列番号１２、１３及び１４のＶＬ領域からなる群から選択したＶＬ領域を含むを含むことを特徴とする、項目１または２に記載の抗体。
（項目４）
ＢＣＭＡとヒトＣＤ３ε（さらには「ＣＤ３」ともいう）に特異的に結合する二重特異性抗体であって、配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域と、配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域と、ａ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｂ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｃ）配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｄ）配列番号２９のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号３０のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｅ）配列番号３４のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号３５のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域、ならびに
ｆ）配列番号３６のＣＤＲ１Ｈ領域及び配列番号３７のＣＤＲ２Ｈ領域と、配列番号３１のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号３２のＣＤＲ２Ｌ領域、
の群から選択した、ＣＤＲ１Ｈ領域、ＣＤＲ２Ｈ領域、ＣＤＲ１Ｌ領域及びＣＤＲ２Ｌ領域の組み合わせとを含むことを特徴とする前記抗体。
（項目５）
ヒトＢＣＭＡ（さらには「ＢＣＭＡ」ともいう）とヒトＣＤ３ε（さらには「ＣＤ３」
ともいう）という細胞外ドメインである２つの標的に特異的に結合する二重特異性抗体であって、配列番号２１のＣＤＲ１Ｈ領域、配列番号２２のＣＤＲ２Ｈ領域及び配列番号１７のＣＤＲ３Ｈ領域を含むＶＨ領域と、配列番号２０のＣＤＲ３Ｌ領域、ならびに
ａ）配列番号２３のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２４のＣＤＲ２Ｌ領域、
ｂ）配列番号２５のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２６のＣＤＲ２Ｌ領域または
ｃ）配列番号２７のＣＤＲ１Ｌ領域及び配列番号２８のＣＤＲ２Ｌ領域
の群から選択した、ＣＤＲ１Ｌ領域及びＣＤＲ２Ｌ領域の組み合わせを含むＶＬ領域とを含むことを特徴とする前記抗体。
（項目６）
ＢＣＭＡ  ＶＨ領域として、配列番号１０のＶＨ領域を含み、ＶＬ領域として、配列番号１２のＶＬ領域を含むか、ＢＣＭＡ  ＶＨとして、配列番号１０のＶＨ領域を含み、ＶＬ領域として、配列番号１３のＶＬ領域を含むか、またはＢＣＭＡ  ＶＨとして、配列番号１０のＶＨ領域を含み、ＶＬ領域として、配列番号１４のＶＬ領域を含むことを特徴とする、項目５に記載の二重特異性抗体。
（項目７）
ＣＤ３に特異的に結合する抗体の軽鎖と重鎖を含むことを特徴とし、その可変ドメインのＶＬとＶＨまたは定常ドメインのＣＬとＣＨ１が、互いに入れ替わっている、項目４〜６のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
（項目８）
前記抗ＣＤ３抗体部分の可変ドメインＶＨ（さらには「ＣＤ３  ＶＨ」という）が、重鎖ＣＤＲ１として、配列番号１の重鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ２として、配列番号２の重鎖ＣＤＲを含み、重鎖ＣＤＲ３として、配列番号３の重鎖ＣＤＲを含み、前記抗ＣＤ３抗体部分の可変ドメインＶＬ（さらには「ＣＤ３  ＶＬ」という）が、軽鎖ＣＤＲ１として、配列番号４の軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ２として、配列番号５の軽鎖ＣＤＲを含み、軽鎖ＣＤＲ３として、配列番号６の軽鎖ＣＤＲを含むことを特徴とする、項目４〜７のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
（項目９）
ＢＣＭＡとＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体であって、
ａ）項目１〜３のいずれか１項に記載の第１の抗体の第１の軽鎖及び第１の重鎖と、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖及び第２の重鎖であって、前記第２の抗体の第２の軽鎖の可変ドメインＶＬと第２の重鎖の可変ドメインＶＨが、互いに入れ替わっている前記第２の軽鎖及び第２の重鎖とを含むことを特徴とし、
ｃ）ａ）の前記第１の軽鎖の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、ａ）の前記第１の重鎖の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸と、２１３位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換されていることを特徴とする前記抗体。
（項目１０）
さらに、前記第１の抗体のＦａｂ断片（さらには「ＢＣＭＡ−Ｆａｂ」ともいう）を含み、前記ＢＣＭＡ−Ｆａｂの定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、前記ＢＣＭＡ−Ｆａｂの定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸と、２１３位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔによる番号付け）ことを特徴とする（例えば、図２Ａ、２Ｃを参照されたい）、項目９に具体的に記載の二重特異性抗体。
（項目１１）
ＢＣＭＡとＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体であって、
ａ）項目１〜３のいずれか１項に記載の第１の抗体の第１の軽鎖及び第１の重鎖と、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の抗体の第２の軽鎖及び第２の重鎖であって、第２の抗体の前記第２の軽鎖の可変ドメインＶＬと第２の重鎖の可変ドメインＶＨが、互いに入
れ替わっている前記第２の軽鎖及び第２の重鎖とを含むことを特徴とし、
ｃ）ｂ）の前記第２の軽鎖の定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が独立して、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、ｂ）の前記第２の重鎖の定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸と、２１３位のアミノ酸が独立して、グルタミン酸（Ｅ）またはアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔによる番号付け）前記抗体。
（項目１２）
抗ＣＤ３抗体部分のＦａｂ断片を１個以下と、抗ＢＣＭＡ抗体部分のＦａｂ断片を２個以下と、Ｆｃ部分を１個以下含むことを特徴とする、項目４〜１１のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
（項目１３）
前記ＣＤ３抗体Ｆａｂ断片のＣ末端と、前記ＢＣＭＡ抗体Ｆａｂ断片の１つのＣ末端とに、そのＮ末端が連結しているＦｃ部分を含むことを特徴とする、項目４〜１２のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
（項目１４）
前記抗ＢＣＭＡ抗体部分の第２のＦａｂ断片であって、前記二重特異性抗体のＣＤ３抗体部分のＮ末端に、そのＣ末端が連結されている前記第２のＦａｂ断片を含むことを特徴とする、項目４〜１３のいずれか１項に記載の二重特異性抗体。
（項目１５）
前記抗ＣＤ３抗体Ｆａｂ断片のＶＬドメインが、前記第２の抗ＢＣＭＡ抗体Ｆａｂ断片のＣＨ１ドメインに連結されていることを特徴とする、項目１４に記載の二重特異性抗体。
（項目１６）
ＢＣＭＡとＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗体であって、
ｉ）配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１（２×）、
ｉｉ）配列番号４８、配列番号５２、配列番号５３及び配列番号５４（２×）、ならびにｉｉｉ）配列番号４８、配列番号５５、配列番号５６及び配列番号５７（２×）
のポリペプチドからなる群から選択した、重鎖と軽鎖のセットを含むことを特徴とする前記抗体。
（項目１７）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体の調製方法であって、
ａ）宿主細胞を
ｂ）項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体の軽鎖と重鎖をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換するステップと、
ｃ）前記抗体分子の合成を可能にする条件で、前記宿主細胞を培養するステップと、
ｄ）前記抗体分子を前記培養物から回収するステップと、
を含む前記方法。
（項目１８）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目１９）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、医薬として用いるための医薬組成物。
（項目２０）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、形質細胞障害の治療で医薬として用いるための医薬組成物。
（項目２１）
項目１〜１６のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物であって、多発性骨髄腫または全身性ループスエリテマトーデスまたは形質細胞性白血病またはＡＬアミロイドーシスの治療において医薬として用いるための医薬組成物。
（項目２２）
ＢＣＭＡに対する抗原認識部分と、Ｔ細胞活性化部分とを含むキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）であって、前記抗原認識部分が、項目１〜３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体または抗体断片であることを特徴とする前記ＣＡＲ。
（項目２３）
ＢＣＭＡに特異的に結合するモノクローナル抗体の生成方法であって、前記モノクローナル抗体は、項目４〜１６のいずれか１項に記載の二重特異性抗体として、多発性骨髄腫（ＭＭ）骨髄穿刺液中のヒト悪性形質細胞を、１０ｎＭ以上、１ｆＭ以下の濃度の抗ＢＣＭＡ抗体で４８時間処理後に少なくとも８０％までになる形で除去し、前記方法は、
ａ）配列番号９の可変重鎖（ＶＨ）ファージディスプレイライブラリーを１〜５０ｎＭのカニクイザルＢＣＭＡで１〜３ラウンドパニングして、配列番号１１の可変軽鎖と組み合わせて項目４〜１６のいずれか１項に記載の二重特異性抗体にしたときに、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する可変重鎖を選択することと、
ｃ）配列番号１１の可変軽鎖（ＶＬ）ファージディスプレイライブラリーを１〜５０ｎＭのカニクイザルＢＣＭＡで１〜３ラウンドパニングして、ｂ）配列番号９の可変重鎖と組み合わせて項目４〜１６のいずれか１項に記載の二重特異性抗体にしたときに、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する可変軽鎖を選択することと、
選択した前記可変重鎖と、選択した前記可変軽鎖を組み合わせて、項目４〜１６のいずれか１項に記載の二重特異性抗体であって、上記のようなヒト悪性形質細胞を上記のような形で除去する前記抗体にすることとを特徴とする前記方法。