【手続補正書】
【提出日】平成19年11月12日(2007.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  低分子ペプチドを発現させるための核酸構築体であって、
シグナルペプチドをコードする核酸配列；
ソマトスタチンのプロ領域もしくは機能性フラグメントまたはそれらのアナログをコードする核酸配列；および
低分子ペプチドをコードする核酸配列；
を含むことを特徴とする核酸構築体。
【請求項２】  前記シグナルペプチドをコードする核酸配列がソマトスタチンのプレ領域由来であることを特徴とする請求項１記載の核酸構築体。
【請求項３】  前記低分子ペプチドが低分子ホルモンであることを特徴とする請求項１または２記載の核酸構築体。
【請求項４】  前記低分子ペプチドが抗糖尿病性ペプチドであることを特徴とする請求項３記載の核酸構築体。
【請求項５】  前記抗糖尿病性ペプチドが、グルカゴン様ペプチド−１（GLP-1）、エクセンディド−４（exendid-4）、胃抑制性ポリペプチドおよびそれらのアナログより成る群から選択されることを特徴とする請求項４記載の核酸構築体。
【請求項６】  前記低分子ペプチドがGLP-1であることを特徴とする請求項５記載の核酸構築体。
【請求項７】  低分子ペプチドをコードしている配列とプロ領域との間に存在する部位をさらに含むことを特徴とする請求項１から６いずれか１項記載の核酸構築体。
【請求項８】  前記低分子ペプチドをコードする配列と前記プロ領域との間に存在する部位が解裂され得ることを特徴とする請求項７記載の核酸構築体。
【請求項９】  前記部位が多塩基性解裂部位、二塩基性解裂部位または単塩基性解裂部位であることを特徴とする請求項８記載の核酸構築体。
【請求項１０】  前記解裂部位がエンドプロテアーゼ解裂部位であることを特徴とする請求項８記載の核酸構築体。
【請求項１１】  前記解裂部位がプロタンパク質コンベルターゼによって認識されることを特徴とする請求項１０記載の核酸構築体。
【請求項１２】  前記プロタンパク質コンベルターゼがフーリン、サブスチリシン関連プロタンパク質コンベルターゼ、PC1、PC2、PC6またはPC7であることを特徴とする請求項１１記載の核酸構築体。
【請求項１３】  前記解裂部位が血液凝集因子解裂部位であることを特徴とする請求項８記載の核酸構築体。
【請求項１４】  少なくとも１個の制御配列をさらに含むことを特徴とする請求項１から１３いずれか１項記載の核酸構築体。
【請求項１５】  シグナルペプチドをコードしている核酸配列、ならびにソマトスタチンのプロ領域またはそれらの機能性フラグメントもしくはアナログをコードしている核酸配列を含む外来性核酸配列；さらに、
低分子ペプチドをコードしている核酸配列；
を有しており、該低分子ペプチドを発現することができることを特徴とする細胞。
【請求項１６】  前記低分子ペプチドをコードしている核酸配列が内在性ゲノム配列であることを特徴とする請求項１５記載の細胞。
【請求項１７】  前記低分子ペプチドをコードしている核酸配列が外来性ゲノム配列であることを特徴とする請求項１５記載の細胞。
【請求項１８】  前記低分子ペプチドをコードしている配列とプロ領域との間に部位をさらに含むことを特徴とする請求項１５から１７いずれか１項記載の細胞。
【請求項１９】  前記低分子ペプチドをコードしている配列とプロ領域との間が解裂可能であることを特徴とする請求項１８記載の細胞。
【請求項２０】  成熟型の低分子ペプチドを発現することができることを特徴とする請求項１９記載の細胞。
【請求項２１】  プロ領域および低分子ペプチドを含む融合ペプチドを発現することができることを特徴とする請求項１９記載の細胞。
【請求項２２】  前記部位が多塩基性解裂部位、二塩基性解裂部位または単塩基性解裂部位であることを特徴とする請求項１９記載の細胞。
【請求項２３】   前記解裂部位がエンドプロテアーゼ解裂部位であることを特徴とする請求項２２記載の細胞。
【請求項２４】   前記解裂部位がプロタンパク質コンベルターゼによって認識されることを特徴とする請求項２３記載の細胞。
【請求項２５】  前記プロタンパク質コンベルターゼが、フーリン、PACE4、サブスチリシン関連プロタンパク質コンベルターゼ、PC1、PC2、PC6またはPC7であることを特徴とする請求項２４記載の細胞。
【請求項２６】  前記解裂部位が血液凝集因子解裂部位であることを特徴とする請求項１９記載の細胞。
【請求項２７】  前記細胞が一次細胞であることを特徴とする請求項１５から２６いずれか１項記載の細胞。
【請求項２８】  前記細胞が二次細胞であることを特徴とする請求項１５から２６いずれか１項記載の細胞。
【請求項２９】  前記細胞が哺乳類細胞であることを特徴とする請求項１５から２８いずれか１項記載の細胞。
【請求項３０】  前記細胞がヒト細胞であることを特徴とする請求項２９記載の細胞。
【請求項３１】  前記細胞が繊維芽細胞または筋原細胞であることを特徴とする請求項２９記載の細胞。
【請求項３２】  前記細胞が通常はソマトスタチンを発現しないことを特徴とする請求項１５から３１いずれか１項記載の細胞。
【請求項３３】  前記細胞が、外来性核酸配列の発現を行うのに十分な少なくとも１個の制御配列をさらに含むことを特徴とする請求項１５から３２いずれか１項記載の細胞。
【請求項３４】  シグナルペプチドをコードしている配列がソマトスタチンのプレ領域由来であることを特徴とする請求項１５から３３いずれか１項記載の細胞。
【請求項３５】  低分子ペプチドが低分子ホルモンであることを特徴とする請求項１５から３４いずれか１項記載の細胞。
【請求項３６】  前記低分子ペプチドが抗糖尿病性ペプチドであることを特徴とする請求項３５記載の細胞。
【請求項３７】  前記抗糖尿病性ペプチドが、グルカゴン様ペプチド−１（GLP-1）、エクセンディン−４（exendin-4）、胃抑制性ポリペプチドおよびそれらのアナログより成る群から選択されることを特徴とする請求項３６記載の細胞。
【請求項３８】  前期低分子ペプチドがGLP-1であることを特徴とする請求項３７記載の細胞。
【請求項３９】  低分子ペプチドを調製する方法であって、請求項１５から３８いずれか１項記載の細胞を培養することによって低分子ペプチドを得る段階を含むことを特徴とする方法。
【請求項４０】  低分子ペプチドを発現することができる細胞を作出する方法であって、
細胞を準備し；さらに、
請求項１から１４いずれか１項記載の核酸構築体を該細胞に導入することにより、低分子ペプチドを発現することができる細胞を得る；工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項４１】  低分子ペプチドを発現することができる細胞を作出する方法であって、
細胞を準備し；さらに、
低分子ペプチドをコードしている細胞のゲノム内の核酸配列に連結しているソマトスタチンのプロ領域を含む外来性核酸配列を該細胞のゲノムに導入することにより、低分子ペプチドを発現することができる細胞を得る；工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項４２】  前記外来性核酸配列がシグナルペプチドをコードしている核酸配列をさらに含むことを特徴とする請求項４１記載の方法。
【請求項４３】  シグナルペプチドをコードしている配列がソマトスタチンのプレ領域由来であることを特徴とする請求項４２記載の方法。
【請求項４４】  低分子ペプチドがGLP-1であることを特徴とする請求項４１から４３いずれか１項記載の方法。
【請求項４５】  前記細胞が一次細胞であることを特徴とする請求項４０から４４いずれか１項記載の方法。
【請求項４６】  前記細胞が二次細胞であることを特徴とする請求項４０から４４いずれか１項記載の方法。
【請求項４７】  前記細胞が哺乳類細胞であることを特徴とする請求項４０から４６いずれか１項記載の方法。
【請求項４８】  対象を治療するための組成物であって、請求項１−１４いずれか１項記載の核酸構築体を含み、該組成物が対象に投与されて対象内で前記低分子ペプチドが発現されることを特徴とする組成物。
【請求項４９】  前記低分子ペプチドが成熟型で発現されることを特徴とする請求項４８記載の組成物。
【請求項５０】  前記低分子ペプチドが、ソマトスタチンのプロ領域をさらに含む融合ペプチドの一部分として発現されることを特徴とする請求項４８記載の組成物。
【請求項５１】  対象がヒトであることを特徴とする請求項４８から５０いずれか１項記載の組成物。
【請求項５２】  疾患が低分子ペプチドの発現減少によって特徴づけられることを特徴とする請求項４８から５１いずれか１項記載の組成物。
【請求項５３】  対象を治療するための組成物であって、請求項１５から３８いずれか１項記載の細胞を含み、該組成物が対象に投与されて対象内で前記低分子ペプチドが発現されることを特徴とする組成物。
【請求項５４】  前記細胞が前記対象から得られたものであることを特徴とする請求項５３記載の組成物。
【請求項５５】  疾患が低分子ペプチドの発現減少によって特徴づけられることを特徴とする請求項５３または５４記載の組成物。
【請求項５６】  前記細胞が自己性、同種異型性または異種性であることを特徴とする請求項５３記載の組成物。
【請求項５７】  前記低分子ペプチドが抗糖尿病性ペプチドであり、対象が糖尿病であることを特徴とする請求項５３から５６いずれか１項記載の組成物。
【請求項５８】  GLP-1を発現させるための核酸構築体であって、
ソマトスタチンのプレ領域由来のシグナルペプチドをコードしている核酸配列；
ソマトスタチンのプロ領域またはそれらの機能性フラグメントもしくはアナログをコードしている核酸配列；ならびに
GLP-1をコードしている核酸配列
を含むことを特徴とする核酸構築体。