【手続補正書】
【提出日】令和1年9月24日(2019.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷治癒を促進することを必要とする被験体における創傷治癒を促進するための組成物であって、ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤を含む、組成物。
【請求項２】
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤により、ｍｉＲ−１９の機能または活性が低下する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤が、表１から選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
創傷治癒を促進するための追加的な薬剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記追加的な薬剤が、ｍｉＲ−９２と相補的な配列を含むｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与により、ｍｉＲ−９２の機能または活性が低下する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤が、表２から選択される、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項８】
前記被験体が、糖尿病に罹患している、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記創傷治癒が、慢性創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈うっ血性下腿潰瘍または褥瘡に対するものである、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物の投与により、無処置と比較して、創傷治癒の間の再上皮化、肉芽形成、および／または新血管新生の速度が増大する、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤および前記組成物の投与により、無処置または前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤または前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかを単独で用いた処置と比較して、創傷治癒の間の再上皮化、肉芽形成、および／または新血管新生の速度が増大する、請求項５から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むオリゴヌクレオチド阻害剤であって、該配列が、１つまたは複数のロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドおよび１つまたは複数の非ロックドヌクレオチドをさらに含み、該非ロックドヌクレオチドの少なくとも１つが、化学修飾を含む、オリゴヌクレオチド阻害剤。
【請求項１３】
ｍｉＲ−１９ａまたはｍｉＲ−１９ｂと相補的である、請求項１２に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
【請求項１４】
前記配列が表１から選択される、請求項１２に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
【請求項１５】
請求項１２から１４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容されるキャリアもしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１６】
ｍｉＲ−９２と相補的な配列を含むｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤をさらに含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記配列が表２から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１６または１７に記載の医薬組成物であって、該組成物中の前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤の量と前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤の量のモル比が、約１：９９から約９９：１までである、医薬組成物。
【請求項１９】
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤と前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤のモル比が約１：１である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
創傷を処置することを必要とする被験体における創傷を処置するための、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記創傷が、慢性創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈うっ血性下腿潰瘍または褥瘡である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤が、少なくとも１６ヌクレオチドの配列を含み、該配列が、３つ以下の連続したロックド核酸（ＬＮＡ）を含み、該配列の５’末端から３’末端までの、１位、５位、６位、８位、１０位、１１位、１３位、１５位および１６位がＬＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤が、少なくとも１６ヌクレオチドの配列を含み、該配列が、３つ以下の連続したＬＮＡを含み、該配列の５’末端から３’末端までの、１位、６位、１０位、１１位、１３位および１６位がＬＮＡである、請求項５に記載の組成物。
【請求項２４】
前記配列が、少なくとも１６ヌクレオチドを含み、該配列が、３つ以下の連続したロックド核酸（ＬＮＡ）を含み、該配列の５’末端から３’末端までの、１位、５位、６位、８位、１０位、１１位、１３位、１５位および１６位がＬＮＡである、請求項１２に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
【請求項２５】
前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤が、少なくとも１６ヌクレオチドの配列を含み、該配列が、３つ以下の連続したＬＮＡを含み、該配列の５’末端から３’末端までの、１位、６位、１０位、１１位、１３位および１６位がＬＮＡである、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
創傷治癒を促進することを必要とする被験体において創傷治癒を促進するための組み合わせ物であって、ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤、およびｍｉＲ−９２と相補的な配列を含むｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤を含む、組み合わせ物。
【請求項２７】
創傷治癒を促進することを必要とする被験体において創傷治癒を促進するための組成物であって、ｍｉＲ−９２と相補的な配列を含むｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤を含み、ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項２８】
創傷治癒を促進することを必要とする被験体において創傷治癒を促進するための組み合わせ物であって、ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤、および増殖因子を含む、組み合わせ物。
【請求項２９】
創傷治癒を促進することを必要とする被験体において創傷治癒を促進するための組成物であって、増殖因子を含み、ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
さらに別の態様では、創傷治癒を調節するための治療薬の有効性を、該治療薬を受けた被験体において評価またはモニタリングするための方法であって、ａ．）被験体由来の試料からの、ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；およびｂ．）ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中のｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子のレベルと比較し、比較により治療薬の有効性が示されることを含み、ここで、治療薬が、表１から選択される配列を含むオリゴヌクレオチドである、方法が本明細書に提供される。一実施形態では、ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子は、ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４（ＦＺＤ４）または低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質６（ＬＲＰ６）である。一実施形態では、治療薬は、ｍｉＲ−１９の機能および／または活性を調節する。一実施形態では、被験体は、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢もしくは冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、糖尿病、慢性創傷（複数可）、末梢血管疾患または末梢動脈疾患に罹患している。一実施形態では、被験体は、ヒトである。別の態様では、血管新生または創傷治癒を促進する薬剤の能力を評価するための方法であって、ａ．）細胞を、表１から選択される配列を含むオリゴヌクレオチド阻害剤である薬剤と接触させること；ｂ．）薬剤と接触させた細胞における、ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；およびｃ．）ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中のｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子のレベルと比較し、比較により血管新生または創傷治癒を促進する薬剤の能力が示されることを含む方法が本明細書に提供される。一実施形態では、ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子は、ＦＺＤ４またはＬＲＰ６である。一実施形態では、方法は、薬剤と接触させた細胞におけるｍｉＲ−１９の機能および／または活性を決定することをさらに含む。一実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。一実施形態では、細胞は、心臓細胞、筋肉細胞、線維細胞、線維芽細胞、ケラチノサイトまたは内皮細胞である。一実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにある。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
創傷治癒を促進することを必要とする被験体における創傷治癒を促進するための方法であって、ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤を投与することを含む方法。
（項目２）
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤により、ｍｉＲ−１９の機能または活性が低下する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤が、表１から選択される、項目１に記載の方法。
（項目４）
創傷治癒を促進するための追加的な薬剤を投与することをさらに含む、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
前記追加的な薬剤が、ｍｉＲ−９２と相補的な配列を含むｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤である、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与により、ｍｉＲ−９２の機能または活性が低下する、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤が、表２から選択される、項目５または６に記載の方法。
（項目８）
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤および前記追加的な薬剤を逐次的に投与する、項目４から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤および前記追加的な薬剤を同時に投与する、項目４から７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
増殖因子を追加することをさらに含む、項目１から９に記載の方法。
（項目１１）
前記増殖因子が、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）および／または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記被験体がヒトである、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記被験体が、糖尿病に罹患している、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記創傷治癒が、慢性創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈うっ血性下腿潰瘍または褥瘡に対するものである、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与により、無処置と比較して、創傷治癒の間の再上皮化、肉芽形成、および／または新血管新生の速度が増大する、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤および前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与により、無処置または前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤または前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかを単独で用いた処置と比較して、創傷治癒の間の再上皮化、肉芽形成、および／または新血管新生の速度が増大する、項目５から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
ｍｉＲ−１９と相補的な配列を含むオリゴヌクレオチド阻害剤であって、該配列が、１つまたは複数のロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドおよび１つまたは複数の非ロックドヌクレオチドをさらに含み、該非ロックドヌクレオチドの少なくとも１つが、化学修飾を含む、オリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目１８）
ｍｉＲ−１９ａと相補的である、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目１９）
ｍｉＲ−１９ｂと相補的である、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目２０）
前記ロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチドが、２’−４’メチレン架橋を有する、項目１７から１９のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目２１）
前記化学修飾が、２’Ｏ−アルキル修飾または２’ハロ修飾である、項目１７から２０のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目２２）
５’キャップ構造、３’キャップ構造、または５’および３’キャップ構造を有する、項目１７から２１のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目２３）
ペンダント親油基をさらに含む、項目１７から２２のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目２４）
前記配列が表１から選択される、項目１７に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤。
（項目２５）
項目１７から２４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容されるキャリアもしくは希釈剤を含む医薬組成物。
（項目２６）
ｍｉＲ−９２と相補的な配列を含むｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤をさらに含む、項目２５に記載の医薬組成物。
（項目２７）
前記配列が表２から選択される、項目２６に記載の医薬組成物。
（項目２８）
項目２６または２７に記載の医薬組成物であって、該組成物中の前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤の量と前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤の量のモル比が、約１：９９から約９９：１までである、医薬組成物。
（項目２９）
前記ｍｉＲ−１９のオリゴヌクレオチド阻害剤と前記ｍｉＲ−９２のオリゴヌクレオチド阻害剤のモル比が約１：１である、項目２８に記載の医薬組成物。
（項目３０）
創傷を処置することを必要とする被験体における創傷を処置する方法であって、該被験体に項目２５から２９のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
（項目３１）
前記創傷が、慢性創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈うっ血性下腿潰瘍または褥瘡である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
創傷治癒を調節するための治療薬の有効性を、該治療薬を受けた被験体において評価またはモニタリングするための方法であって、
ａ）被験体由来の試料から、ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｂ）ｍｉＲ−１９の標的である該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中のｍｉＲ−１９の標的である該１つまたは複数の遺伝子のレベルと比較し、該比較により該治療薬の有効性が示されることを含み、ここで、該治療薬が、表１から選択される配列を含むオリゴヌクレオチドである、方法。
（項目３３）
ｍｉＲ−１９の標的である前記１つまたは複数の遺伝子が、ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４（ＦＺＤ４）または低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質６（ＬＲＰ６）である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記治療薬が、ｍｉＲ−１９の機能および／または活性を調節する、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３５）
前記被験体が、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢もしくは冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、糖尿病、慢性創傷（複数可）、末梢血管疾患または末梢動脈疾患に罹患している、項目３２から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体がヒトである、項目３２から３５のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
血管新生または創傷治癒を促進する薬剤の能力を評価するための方法であって、
ａ）細胞を、表１から選択される配列を含むオリゴヌクレオチド阻害剤である該薬剤と接触させること；
ｂ）該薬剤と接触させた該細胞における、ｍｉＲ−１９の標的である１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｃ）ｍｉＲ−１９の標的である該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中のｍｉＲ−１９の標的である該１つまたは複数の遺伝子のレベルと比較し、ここで、該比較により血管新生または創傷治癒を促進する該薬剤の能力が示されること
を含む方法。
（項目３８）
ｍｉＲ−１９の標的である前記１つまたは複数の遺伝子が、ＦＺＤ４またはＬＲＰ６である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記薬剤と接触させた前記細胞におけるｍｉＲ−１９の機能および／または活性を決定することをさらに含む、項目３７または３８に記載の方法。
（項目４０）
前記細胞が、哺乳動物細胞である、項目３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記細胞が、心臓細胞、筋肉細胞、線維細胞、線維芽細胞、ケラチノサイトまたは内皮細胞である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにある、項目３７から４１のいずれか一項に記載の方法。