【手続補正書】
【提出日】平成20年1月4日(2008.1.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  機能的ヒトＭＨＣクラスＩ重鎖をコードする第２ポリヌクレオチドの上流に並進して（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ）融合されている、機能的ヒトβ−２ミクログロブリンをコードする第１ポリヌクレオチドを含む第１核酸配列を包含する核酸構築物。
【請求項２】  前記第１核酸配列は前記第１および前記第２ポリヌクレオチドの間に内挿されたリンカーペプチドをコードするインフレームリンカーポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１記載の核酸構築物。
【請求項３】  前記リンカーペプチドは配列番号１０に示される、請求項２記載の核酸構築物。
【請求項４】  前記第１核酸配列は結合部分を含むように酵素的に変性されることが可能であるペプチドをコードするインフレームタグ配列をさらに含む、請求項１記載の核酸構築物。
【請求項５】  抗原性ペプチドをコードする第２核酸配列をさらに包含し、前記抗原性ペプチドはヒトＭＨＣクラスＩ複合体を結合することが可能である、請求項１記載の核酸構築物。
【請求項６】  前記第２ポリヌクレオチドは前記ヒトＭＨＣクラスＩ重鎖のα１−３ドメインをコードする、請求項１記載の核酸構築物。
【請求項７】  前記第１核酸配列の発現を制御する第１シス作用制御配列をさらに包含する、請求項２記載の核酸構築物。
【請求項８】  前記第２核酸配列の発現を制御する第２シス作用制御配列をさらに包含する、請求項５記載の核酸構築物。
【請求項９】  前記シス作用制御配列は、細菌宿主において機能的である、請求項７記載の核酸構築物。
【請求項１０】  配列番号４に示される核酸配列を含む核酸構築物。
【請求項１１】  請求項１記載の核酸構築物を含む形質転換細胞。
【請求項１２】  細胞は哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母細胞および原生動物細胞からなる群から選択される真核生物細胞である、請求項１１記載の形質転換細胞。
【請求項１３】  細胞は細菌細胞である、請求項１１記載の形質転換細胞。
【請求項１４】  請求項５記載の核酸構築物を含む形質転換細胞。
【請求項１５】  細胞は哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母細胞および原生動物細胞からなる群から選択される真核生物細胞である、請求項１４記載の形質転換細胞。
【請求項１６】  細胞は細菌細胞である、請求項１４記載の形質転換細胞。
【請求項１７】  機能的ヒトＭＨＣクラスＩ重鎖に直接または間接に共有結合された機能的ヒトβ−２ミクログロブリンを含むアミノ酸配列を包含する組換えポリペプチド。
【請求項１８】  前記機能的ヒトβ−２ミクログロブリンと前記機能的ヒトＭＨＣクラスＩ重鎖との間に内挿されたリンカーペプチドをさらに包含する、請求項１７記載の組換えポリペプチド。
【請求項１９】  配列番号５に示されるアミノ酸配列を包含する組換えポリペプチド。
【請求項２０】  機能的哺乳動物ＭＨＣクラスＩ重鎖に直接または間接に共有結合された機能的哺乳動物β−２ミクログロブリンを含むアミノ酸配列を含む３０重量％以上の組換えポリペプチドを包含する細菌由来の封入体の調製物。
【請求項２１】  （ａ）機能的ＭＨＣクラスＩ重鎖をコードする第２ポリヌクレオチドの上流に並進して融合されている、機能的哺乳動物β−２ミクログロブリンをコードする第１ポリヌクレオチドを含む第１発現構築物；および（ｂ）抗原性ペプチドをコードする第３ポリヌクレオチドを含む第２発現構築物で共形質転換された宿主細胞であって、前記第１、第２および第３ポリヌクレオチドが宿主細胞中で共発現されるとき、ＭＨＣクラスＩ−抗原性ペプチド複合体が形成される宿主細胞。
【請求項２２】  前記第１発現構築物は前記第１および前記第２ポリヌクレオチド間に内挿されたリンカーペプチドをコードするインフレームリンカーポリヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２１記載の宿主細胞。
【請求項２３】  前記細胞は真核生物細胞である、請求項２１記載の宿主細胞。
【請求項２４】  前記細胞は細菌細胞である、請求項２１記載の宿主細胞。
【請求項２５】  （ａ）（ｉ）機能的哺乳動物β−２ミクログロブリンをコードする第１ポリヌクレオチド；および（ｉｉ）機能的哺乳動物ＭＨＣクラスＩ重鎖をコードする第２ポリヌクレオチドを含む第１核酸配列（ただし、前記第２ポリヌクレオチドは前記第１ポリヌクレオチドの下流に並進して融合されている）、および（ｂ）細菌中で前記第１核酸配列の発現を指示することができるように選択されているシス作用制御配列を含む核酸構築物。
【請求項２６】  前記シス作用制御配列は、細菌由来シス作用制御配列およびファージ由来シス作用制御配列からなる群から選択される、請求項２５記載の核酸構築物。
【請求項２７】  前記第１核酸配列は前記第１および前記第２ポリヌクレオチド間に内挿されたリンカーペプチドをコードするインフレームリンカーポリヌクレオチドをさらに含む、請求項２５記載の核酸構築物。
【請求項２８】  前記リンカーペプチドは配列番号１０に示される、請求項２６記載の核酸構築物。
【請求項２９】  抗原性ペプチドをコードする第２核酸配列をさらに包含し、前記抗原性ペプチドは哺乳動物ＭＨＣクラスＩ複合体を結合することが可能である、請求項２５記載の核酸構築物。
【請求項３０】  前記第２ポリヌクレオチドは前記哺乳動物ＭＨＣクラスＩ重鎖のα１−３ドメインをコードする、請求項２５記載の核酸構築物。
【請求項３１】  請求項２５記載の核酸構築物を包含する形質転換細胞。
【請求項３２】  細胞は真核生物細胞である、請求項３１記載の形質転換細胞。
【請求項３３】  細胞は細菌細胞である、請求項３１記載の形質転換細胞。
【請求項３４】  請求項２７記載の核酸構築物を包含する形質転換細胞。
【請求項３５】  （ａ）細菌中で、機能的哺乳動物ＭＨＣクラスＩ重鎖アミノ酸配列に直接または間接に共有結合された機能的哺乳動物β−２ミクログロブリンアミノ酸配列を含む１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドを発現し；そして（ｂ）前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドを単離する工程を包含する機能的ＭＨＣクラスＩ分子を生産する方法。
【請求項３６】  （ｃ）前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドに結合することができる抗原性ペプチドの存在下に前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドをリフォールドし、それによってＭＨＣクラスＩ−抗原性ペプチド複合体を生成する工程をさらに包含する、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】  （ｄ）サイズ排除クロマトグラフィーにより前記ＭＨＣクラスＩ−抗原性ペプチド複合体を単離する工程をさらに包含する、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】  前記抗原性ペプチドは前記細菌中で前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドとともに共発現される、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】  工程（ａ）は前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドが前記細菌中で封入体を形成するように行われる、請求項３５記載の方法。
【請求項４０】  前記抗原性ペプチドおよび前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドは前記細菌中で封入体を形成する、請求項３８記載の方法。
【請求項４１】  前記ポリペプチドを単離する前記工程は、（ｉ）前記封入体からタンパク質分子を放出するように、前記封入体を変性し；そして（ｉｉ）前記タンパク質分子を再生する工程をさらに含む、請求項３９記載の方法。
【請求項４２】  前記タンパク質分子を再生する前記工程は、前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドを結合することができる抗原性ペプチドの存在下に行われる、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】  前記抗原性ペプチドは前記細菌中で前記１本鎖ＭＨＣクラスＩポリペプチドとともに共発現される、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】  前記哺乳動物β−２ミクログロブリンアミノ酸配列はヒトβ−２ミクロブロブリンアミノ酸配列であり、さらに前記哺乳動物ＭＨＣクラスＩ重鎖アミノ酸配列はヒトＭＨＣクラスＩ重鎖アミノ酸配列である、請求項３５記載の方法。
【請求項４５】  機能的ヒトＭＨＣクラスＩ重鎖に直接または間接に共有結合された機能的ヒトβ−２ミクログロブリンをそれぞれ含む複数の組換えポリペプチド単量体を包含する多量体ＭＨＣクラスＩ複合体。
【請求項４６】  前記複数の組換えポリペプチド単量体は共通基質に結合される、請求項４５記載の多量体ＭＨＣクラスＩ複合体。