【手続補正書】
【提出日】平成20年6月26日(2008.6.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  免疫促進性医薬組成物の製造のための、式（Ｉ）：
【化１】
2003535146.tif 000001
（式中、ＸはいずれもＯまたはＳ、
ＮＭＰはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシイノシン−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミジン−、２−メチル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−、デオキシプソイドウリジン−、デオキシリボースプリン−、２−アミノ−デオキシリボースプリン−、６−Ｓ−デオキシグアニン−、２−ジメチル−デオキシグアノシン−またはＮ−イソペンテニル−デオキシアデノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、
ＮＵＣは、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシイノシン−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミジン−、２−メチル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−、デオキシプソイドウリジン−、デオキシリボースプリン−、２−アミノ−デオキシリボースプリン−、６−Ｓ−デオキシグアニン−、２−ジメチル−デオキシグアノシン−またはＮ−イソペンテニル−デオキシアデノシンよりなる群から選ばれた２'デオキシヌクレオシド、
ａおよびｂは０〜１００の整数であり、ただしａ＋ｂは４〜１５０である、
ＢおよびＥは核酸分子の５'末端または３'末端の一般的な基）
の構造を有する オリゴデオキシ核酸分子（ＯＤＮ）の使用。
【請求項２】  ＮＭＰが、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシイノシン−、デオキシシトシン−、デオキシウリジン−、デオキシチミジン−、２−メチル−デオキシイノシン−、５−メチル−デオキシシトシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれる、請求項１に記載の使用。
【請求項３】  ａ＋ｂが１０〜６０、好ましくは１５〜４０である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】  Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方がＳであり、Ｘ３およびＸ４の少なくとも一方がＯであり、好ましくはＮＭＰがいずれもヌクレオシド−モノチオホスフェートである、請求項１ないし３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】  該ＯＤＮが、下記配列：
ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈ、
ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｎｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎ、
ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｎ ｈｈｈ ｈｄｉ ｎｄｉ ｎｈ、
ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎまたは
ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｄ ｈｈｈ ｈｄｉ ｄｄｉ ｄｈ
（式中、ｎはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−、デオキシシトシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、
ｈはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシシトシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、
ｉは、デオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、
ｗはいずれも、デオキシアデノシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート、
ｄはいずれも、デオキシアデノシン−、デオキシグアノシン−またはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートよりなる群から選ばれた２'−デオキシヌクレオシドモノホスフェートまたはモノチオホスフェート）
を含む、請求項１ないし４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】  該ＯＤＮが、２'−デオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートに３'側にて隣接した２'−デオキシシトシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェートを少なくとも一つ含む、とりわけデオキシイノシン−デオキシシトシン２６−ｍｅｒである、請求項１ないし５のいずれかに記載の使用。
【請求項７】  該ＯＤＮが、下記配列：
ｇａｃｉｔｔ、
ｉａｃｉｔｔ、
ｇａｉｃｔｔ、
ｉａｉｃｔｔ
（式中、ａはデオキシアデノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、
ｇはデオキシグアノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、
ｉはデオキシイノシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、
ｃはデオキシシトシン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート、
ｔはデオキシチミジン−モノホスフェートまたは−モノチオホスフェート）
を含む、とりわけｔｃｃ ａｔｇ ａｃｉ ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔである、請求項１ないし６のいずれかに記載の使用。
【請求項８】  該ＯＤＮが、下記配列：
ｗｄｉ、
ｗｄｉｄ、
ｗｄｉｄｉｎまたは
ｗｄｉｄｉｄ
（式中、ｗ、ｄ、ｉおよびｎは前記と同じ）
を含む、請求項１ないし７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】  ＢおよびＥが、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＯＨ、−ＣＯＣＨ３、−ＯＨ、−ＣＨＯ、−ＰＯ４、−ＰＳＯ３、−ＰＳ２Ｏ２、−ＰＳ３Ｏ、−ＰＳ４、−ＳＯ３、−ＰＯ４−(ＣＨ２)１−６−ＮＨ２または−ＰＯ４−(ＣＨ２)１−６−ＮＨ−標識よりなる群から独立に選ばれる、請求項１ないし８のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】  該免疫促進性医薬組成物がワクチンである、請求項１ないし９のいずれかに記載の 使用。
【請求項１１】  請求項１ないし９のいずれかに記載のＯＤＮを含む医薬組成物。
【請求項１２】  請求項１ないし９のいずれかに記載のＯＤＮおよび抗原を含む医薬組成物。
【請求項１３】  さらにポリカチオン性ポリマー、好ましくはポリカチオン性ペプチド、とりわけポリアルギニン、ポリリシンまたは抗菌性ペプチド、とりわけカテリシジン由来の抗菌性ペプチド、３〜７の疎水性アミノ酸のリンカーによって隔てられた少なくとも２つのＫＬＫモチーフを含む合成ペプチドまたは成長ホルモン、とりわけヒト成長ホルモンを含む、請求項１１または１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】  さらに活性成分、とりわけサイトカイン、抗炎症性物質、抗菌性物質またはそれらの組み合わせを含む、請求項１１ないし１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】  さらに補助物質、とりわけ薬理学的に許容しうる担体、緩衝液物質、安定化剤またはそれらの組み合わせを含む、請求項１１ないし１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】  請求項１ないし９のいずれかに記載の１またはそれ以上のＯＤＮを１ｎｇ〜１ｇ、好ましくは１００ｎｇ〜１０ｍｇ、とりわけ１０μｇ〜１ｍｇ含む、請求項１１ないし１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
実施例１：種々のＩ−ＯＤＮとポリＬ−アルギニン（ｐＲ６０）とを組み合わせた注射は卵アルブミン由来のペプチドに対する免疫応答を相乗的に促進する
マウス：
Ｃ５７ＢＩ／６（Harlan/Olac）
ペプチド：
ニワトリ卵アルブミンのＭＨＣクラスＩ（Ｈ−２Ｋｂ）拘束エピトープであるＯＶＡ２５７−２６４ペプチド（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）(ロッツシュク（Rotzschke）ら、１９９１）を標準固相Ｆ−ｍｏｃ化学合成法を用いて合成し、ＨＰＬＣ精製し、ついで純度をマススペクトロメトリーにより分析した。投与量：３００μｇ／マウス。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
ポリＬ−アルギニン６０（ｐＲ６０）：
平均重合度が６０アルギニン残基のポリＬ−アルギニン；SIGMA chemicals。投与量：１００μｇ／マウス。
ＣｐＧ−ＯＤＮ１６６８：
ＣｐＧモチーフを含むチオホスフェート置換ＯＤＮ：ｔｃｃ ａｔｇ ａｃｇ ｔｔｃ ｃｔｇ ａｔｇ ｃｔをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
第０日目にマウスの後ろ足に上記化合物を含む全量１００μｌ（各足当たり５０μｌ）を注射した。注射４日後に動物を屠殺し、膝窩リンパ節を回収した。リンパ節を７０μｍセルストレーナーに通し、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、SIGMA chemicals）を含むＤＭＥＭ培地（GIBCO BRL）で２回洗浄した。細胞をＤＭＥＭ／５％／ＦＣＳ中に３×１０６細胞／ｍｌに調節した。ＩＦＮ−ｇ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを記載に従って（ミヤヒラ（Miyahira）ら、１９９５）３回ずつ行った。この方法は、抗原特異的なＴ細胞の定量をするために広く用いられている手順である。リンパ球をイクスビボにて培地バックグラウンド−コントロール、ＯＶＡ２５７−２６４ペプチドまたはコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）で刺激した。単一のＩＦＮ−ｇ産生Ｔ細胞を表すスポットをカウントし、バックグラウンドスポットの数を全試料から差し引いた。ＣｏｎＡで刺激した後に検出された多数のスポット（データは示していない）は、使用したリンパ球が良好な状態にあることを示している。マウスの各実験群について図１にスポット数／１×１０６細胞を示す。
注射１時間後に尾静脈より採血し、血清を調製して全身的なＴＮＦ−ａの誘発をＥＬＩＳＡを用いて決定した（図２）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
ｗｄｉ：
チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｎｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス。
ｗｄｉｄｉｎ：
チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｎ ｈｈｈ ｈｄｉ ｎｄｉ ｎｈをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス。
ｗｄｉｄ：
チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｈｈｈ ｗｄｉ ｄｈｈ ｈｈｈ ｈｈｈ ｗｎをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス。
ｗｄｉｄｉｄ：
チオホスフェート置換ＯＤＮ：ｎｈｈ ｗｄｉ ｄｉｄ ｈｈｈ ｈｄｉ ｄｄｉ ｄｈをNAPS GmbH、ゲッチンゲンにより合成した。投与量：５ナノモル／マウス。