【誤訳訂正書】
【提出日】平成31年4月26日(2019.4.26)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
米国特許出願公開第２０１３／００６８２４０号には、概して、少なくとも一つのアミノ酸を低減させることを示した遺伝子組み換えたばこ植物体とたばこ製品とが記載され、そのたばこは、加熱および／または燃焼の際に、少なくとも一つのアミノ酸由来の化合物の発生レベルを、組み換えしていない親たばこ植物体と比べて低減させるようにしている。また、アスパラギンのレベルを低減させ、かつ紙巻たばこの煙中のアクリルアミドのレベルを低減させる突然変異体たばこ系統を得るために、エチルメタンスルホン酸（ＥＭＳ）で種子を突然変異誘発させることについて記載されている。種々のＥＭＳ突然変異体が、米国特許出願公開第２０１３／００６８２４０号に記述されている。熱風送管キュアリング処理済みの上部の茎の葉において、三つのＥＭＳ突然変異体、すなわち、ＦＣ  Ｕｐ  １０ＮＨ−５、ＦＣ  Ｕｐ  １０ＮＨ−１８、およびＦＣ−Ｕｐ  １０ＮＨ−２３が示したのは、（ｉ）アスパラギンのそれぞれ７１％、３０％、６２％低減；（ｉｉ）たばこの煙中アクリルアミドのそれぞれ４７％、４２％、４４％低減；（ｉｉｉ）熱風送管キュアリング処理済みの上部の茎たばこにおけるニコチンのそれぞれ３８％低減、１１１％増加、１９％低減である。このように、最も高いアスパラギンおよびアクリルアミドの低減率はそれぞれ７１％および４７％であり、突然変異体ＦＣ−Ｕｐ  １０ＮＨ−５で成し遂げられた。しかしながら、この突然変異体では、対照と比較してニコチンレベルが３８％低減していた。熱風送管キュアリング処理済みの中間部の茎の葉において、三つのＥＭＳ突然変異体、すなわち、ＦＣ  Ｍｉｄ１０ＮＨ−５、ＦＣ  Ｕｐ  １０ＮＨ−１８、およびＦＣ−Ｕｐ  １０ＮＨ−２３が示したのは、（ｉ）アスパラギンのそれぞれ６％低減、５３１％増加、２９％低減；（ｉｉ）たばこの煙中アクリルアミドのそれぞれ１９％低減、１４０％増加、２００％増加；（ｉｉｉ）熱風送管キュアリング処理済みの中間部の茎たばこにおけるニコチンのそれぞれ３６％低減、１１３％増加、１９％低減である。このように、最も高いアクリルアミドの低減率は１９％であり、ＦＣ  Ｕｐ  １０ＮＨ−５で成し遂げられたが、アスパラギンの低減率はわずか６％であり、ニコチンレベルが３６％低減していた。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
最も高いアスパラギンおよびアクリルアミドの低減率はそれぞれ７１％および４７％であり、ＦＣ−Ｕｐ  １０ＮＨ−５である熱風送管キュアリング処理済みの上部の茎の葉で見られている。しかし、この突然変異体では、対照と比較してニコチンレベルが３８％低減していた。ＦＣ  Ｕｐ  １０ＮＨ−５である熱風送管キュアリング処理済み中間部の茎の葉において、アクリルアミドレベルはわずか１９％低減し、アスパラギンレベルはわずか６％低減するのみであり、対照と比較したニコチンレベルはまたも低減（３６％）した。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
ＮｔＡＳＮ１−Ｓ（配列番号：１）、ＮｔＡＳＮ１−Ｔ（配列番号：３）、ＮｔＡＳＮ３−Ｓ（配列番号：９）、ＮｔＡＳＮ３−Ｔ（配列番号：１１）、ＮｔＡＳＮ５−Ｓ（配列番号：５）、およびＮｔＡＳＮ５−Ｔ（配列番号：７）と称する六つの完全長アスパラギンシンテターゼ遺伝子を、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ  ｔａｂａｃｕｍ）において特定した。ＡＳＮ３−Ｓ遺伝子およびＡＳＮ３−Ｔ遺伝子は、キュアリング処理中、不完全に発現するのみであることがわかったのに対し、驚いたことに、ＮｔＡＳＮ１−Ｓ、ＮｔＡＳＮ１−Ｔ、ＮｔＡＳＮ５−Ｓ、およびＮｔＡＳＮ５−Ｔは、キュアリング処理中（例えば、キュアリング処理の最初の１０時間、２０時間、３０時間、４０時間、５０時間、６０時間、７０時間、８０時間、９０時間または１００時間の間に）、高発現することがわかった。ＡＳＮ３−Ｓ遺伝子もしくはＡＳＮ３−Ｔ遺伝子、またはそれによりコードされるタンパク質は、本開示では使用しないのが適切である。ＮｔＡＳＮ１および／もしくはＮｔＡＳＮ５の発現、またはそれによりコードされるタンパク質の活性を低減させることは、キュアリング処理済みの葉（キュアリング処理済みの中間下部の茎の葉など）のアスパラギンレベルの低減に寄与すると、本明細書に示されている。これにより、キュアリング処理済みの葉を加熱または燃焼させる際に生成するエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが減じることになる。米国特許出願公開第２０１３／００６８２４０号で得られた結果とは対照的に、ＮｔＡＳＮ１またはＮｔＡＳＮ５の発現を低減させることで、葉中のアスパラギンが低減するだけでなく、エアロゾル中のアクリルアミドも一様に低減する。アスパラギンレベルおよびアクリルアミドレベルを一様に低減させても、対照植物体と比して多くはないにせよ、略同等のキュアリング処理済みの葉中のニコチンレベルをもたらす。有利なことには、本開示の特定の実施形態では、実質的にニコチン含有量への影響を最小限にするかまたは影響を及ぼさずに、アスパラギンの約８９％低減およびアクリルアミドの約７０％の低減といった減じた値が得られうる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
理論に束縛されることを望まないが、たばこエアロゾルで生成されるアクリルアミドは、葉のキュアリング処理中に発生するアスパラギンのプールに依存することがさらに明らかになっている。従って、キュアリング処理または乾燥の初期段階で活性であるアスパラギンシンテターゼの発現または活性を調節する（例えば、減じる）ことにより、キュアリング処理または乾燥中に発生するアスパラギンのプールを低減させることで、エアロゾル中のアクリルアミドレベルを調節（例えば、減少）することができる。アスパラギンの含有量を低減させた、かつアスパラギンシンテターゼの発現または機能を低減させた植物体が記載されている。実施形態では、これは、キュアリング処理もしくは乾燥間に発現する本明細書に記載のアスパラギンシンテターゼコード配列のＲＮＡ干渉または突然変異を用いることで達成される。アスパラギンレベルを低減させることで、エアロゾル中に存在するアクリルアミドの量を減じる。これをたばこに適用すると、喫煙物品（加熱式または燃焼式たばこ製品を含む）の消費者によって吸入されるエアロゾル中に存するアクリルアミドの量を減じることになる。本発明のさらなる利点が本明細書で述べられる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
好適には、アスパラギンシンテターゼの発現または活性を低減させることにより、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉におけるアスパラギンのレベルを、対照植物体由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉におけるアスパラギンのレベルと比べて低減させ、そこで好適には、アスパラギンのレベルを、対照植物体と比べて少なくとも約１７％低減させる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
好適には、アスパラギンシンテターゼの発現または活性を低減させることにより、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉を加熱または燃焼させる際に生成するエアロゾル中のアクリルアミドのレベルを、対照植物体由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉と比べて低減させ、そこで好適には、エアロゾル中のアクリルアミドのレベルを、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉と比べて少なくとも２０％低減させる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
好適には、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉におけるアスパラギンのレベルは、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉よりも少なくとも約２２％少なく、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉を加熱または燃焼させる際に生成するエアロゾル中のアクリルアミドの量は、対照植物体のエアロゾルよりも少なくとも２４％少なく；そこで好適には、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉におけるアスパラギンのレベルは、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉と比べて少なくとも約４４％少なく、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉を加熱または燃焼させる際に生成するエアロゾル中のアクリルアミドの量は、対照植物体のエアロゾルと比べて少なくとも６６％少なく；そこで好適には、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉におけるアスパラギンのレベルは、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉と比べて少なくとも約７０％少なく、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉を加熱または燃焼させる際に生成するエアロゾル中のアクリルアミドの量は、対照植物体のエアロゾルと比べて少なくとも約８８％少ない。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
好適には、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉におけるニコチンのレベルは、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉におけるニコチンのレベルと実質的に同じである。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
好適には、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸は、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分由来のキュアリング処理または乾燥済みの葉において、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉と比べてより多く形成される。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
好適には、葉は空気キュアリング処理され、そこで好適には、空気キュアリング処理済みの葉は、日光キュアリング処理または火力キュアリング処理されている。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
別の態様では、本開示の植物体由来の植物材料、またはキュアリング処理もしくは乾燥済みの植物材料が提供されている。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
別の態様では、植物材料であって、対照植物体由来の植物材料と比べて、アスパラギンのレベルが低減し、かつ該植物材料由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが低減した該植物材料の調製方法であって、該方法が、（ａ）アスパラギンシンテターゼをコードし、かつ配列番号１に対して少なくとも７２％もしくは少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号３、もしくは配列番号５、もしくは配列番号７に対して少なくとも７２％の配列同一性を持つ配列を、含むか、それから成るか、またはそれから実質的に成るポリヌクレオチドを含む、植物体またはその部分を提供する工程と；（ｂ）該植物体またはその部分において、ポリヌクレオチドの発現、またはそれによってコードされるタンパク質の活性を低減させる工程と；（ｃ）該植物体またはその部分由来の植物材料を収穫する工程と；（ｄ）該植物材料を乾燥またはキュアリング処理する工程と；（ｅ）任意選択的に、該植物体もしくはその部分におけるアスパラギンのレベルを測定する、および／または該植物体もしくはその部分由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルを測定する工程と；（ｆ）キュアリング処理または乾燥済みの植物材料であって、アスパラギンのレベルが低減し、かつ該植物材料由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが低減した、該キュアリング処理または乾燥済みの植物材料を取得する工程と、を含み、好適には、ニコチンのレベルが、対照植物体におけるニコチンのレベルと実質的に同じであり；好適には、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸が、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉と比べてより多く形成される、該方法が提供されている。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
好適には、植物材料は、収穫後、少なくとも約３日間の間、キュアリング処理または乾燥される。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
好適には、植物材料は空気キュアリング処理され、好ましくは、該空気キュアリング処理済みの葉は、日光キュアリング処理または火力キュアリング処理されている。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
別の態様では、植物体において一つ以上の遺伝子改変を識別する方法であって、該植物体が、該一つ以上の遺伝子改変を含まない対照植物体に比べて、該植物体由来のキュアリング処理または乾燥済みの植物材料におけるアスパラギンのレベルの低減と、該キュアリング処理もしくは乾燥済みの植物体またはその部分由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルの低減とに関連する、該方法が、（ａ）対照植物体由来の植物材料と比べて、該植物体由来の植物材料におけるアスパラギンのレベルが低減し、かつキュアリング処理または乾燥済み植物材料由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが低減した、キュアリング処理または乾燥済みの植物体を識別する工程と；（ｂ）工程（ａ）で識別された植物体由来の核酸試料を提供する工程と；（ｃ）工程（ｂ）からの核酸試料において、アスパラギンシンテターゼをコードし、かつ配列番号１に対して少なくとも７２％もしくは少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号３、もしくは配列番号５、もしくは配列番号７に対して少なくとも７２％の配列同一性を持つ、ポリヌクレオチド配列内の一つ以上の遺伝子改変を識別する工程と、を含む、該方法が提供されている。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
別の態様では、対照植物体と比べて、アスパラギンのレベルが低減し、かつキュアリング処理または乾燥済み植物材料由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが低減した、植物材料の生成方法であって、該方法が、（ａ）  本開示の植物体または植物材料を提供する工程と；（ｂ）該植物体由来の植物材料を収穫する工程と；（ｃ）該植物材料をある期間の間、キュアリング処理または乾燥する工程と；（ｄ）キュアリング処理または乾燥済みの植物材料であって、アスパラギンのレベルが低減し、かつ該キュアリング処理または乾燥済み植物材料由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが低減した、該キュアリング処理または乾燥済みの植物材料を得る工程と、を含み、好適には、ニコチンのレベルが、対照植物体におけるニコチンのレベルと実質的に同じであり；好適には、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸が、対照植物体と比べてより多く形成される、該方法が提供されている。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
別の態様で、本明細書で説明した細胞を含む、キュアリング処理または乾燥済みの植物材料が提供されている。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
アスパラギンはキュアリング処理の間に盛んに生成されることが本明細書に示されている。アスパラギンの蓄積は、キュアリング処理済み植物材料が加熱または燃焼される際に生成するエアロゾル中のアクリルアミドの形成をもたらすことが示されている。好都合なことに、ＮｔＡＳＮ１−Ｓ、ＮｔＡＳＮ１−Ｔ、ＮｔＡＳＮ５−Ｓ、およびＮｔＡＳＮ５−Ｔは、キュアリング処理の間、特にキュアリング処理の初期から、高発現する。これらの遺伝子のうちの一つ以上の発現を低減させることにより、アスパラギンのレベルをキュアリング処理工程の間を通して低減させることができるため、その結果としてエアロゾル中のアクリルアミドのレベルを減じることができる。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
本明細書で説明した方法は、キュアリング処理または乾燥の間にアスパラギンの蓄積を低減させ、かつエアロゾル中のアクリルアミドの形成も減じる植物体を一様にもたらす。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
【図１】図１は、同一圃場（五つのプロット反復の平均）で栽培され、一斉にキュアリング処理された、３種の異なるバーレーたばこにおけるアスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、およびすべての遊離アミノ酸（ａａ）の含有量を示す。３種のバーレーは、ＴＮ９０（Ａ）、Ｂａｎｋｅｔ  Ａ１（Ｂ）、およびＫｅｎｔｕｃｋｙ  １４（Ｃ）である。
【図２】図２は、バーレー葉をキュアリング処理する間の、アスパラギン、グルタミン、およびアスパラギン酸の発生量の経時変化を示す。
【図３】図３は、アスパラギンシンテターゼ活性化経路を示す。
【図４】図４は、たばこの単一グレードであるバージニア（ＦＣ）、オリエント（ＯＲ）、カストリ（ＫＳ）、またはバーレー（ＢＵ）、およびバージニア（ＦＣ）とカストリ（ＫＳ）とオリエント（ＯＲ）との混合を含むブレンド（ＲＲＰと称する）におけるアスパラギンの存在間にある相関を示す。
【図５】図５は、スイスで栽培されたスイスバーレーＳｔｅｌｌａが、空気キュアリング処理室で１０週間（伝統的な農作業、ＢＵ−ＡＣ）か、または熱風送管キュアリング処理オーブン（スイスバージニアたばこと全く同様、ＢＵ−ＦＣ）のいずれかでキュアリング処理された場合に得られた結果を示す。キュアリング処理後、葉身を粉砕し、アスパラギンの定量を行った（Ａ）。均質化したたばこ材料の粉末（２００ミクロン以下）を作製した。均質化したたばこ材料は、エアロゾル発生装置と共に使用するのに、基本的に国際公開第２０１３０９８４０５号に記載の通りにエアロゾル発生物品で使用された。エアロゾル発生物品を、カナダ保健省の喫煙方式を用いて喫煙して、エアロゾル中のアクリルアミドの含有量を算出した（Ｂ）。
【図６】図６は、アラビドプシス（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）タンパク質のＡｔＡＳＮ１（Ａｔ３ｇ４７３４０）、ＡｔＡＳＮ２（Ａｔ５ｇ６５０１０）、およびＡｔＡＳＮ３（Ａｔ５ｇ１０２４０）、ならびにトマトタンパク質Ｓｏｌｙｃ０６ｇ００７１８０およびＳｏｌｙｃ０４ｇ０５５２００と比較した、ＮｔＡＳＮ１−Ｓ、ＮｔＡＳＮ１−Ｔ、ＮｔＡＳＮ３−Ｓ、ＮｔＡＳＮ３−Ｔ、ＮｔＡＳＮ５−Ｓ、ＮｔＡＳＮ５−Ｔに相当するたばこ遺伝子から推定されるアミノ酸配列の系統樹を示す。
【図７】図７は、２０１０年にスイスで栽培されたスイスバーレーたばこ（Ｓｔｅｌｌａ）をキュアリング処理する間の、ＡＳＮ遺伝子の発現を示す。ＡＲＮは、圃場で（約４時間）、および９６時間のキュアリング処理の間に空気キュアリング処理室内で、経時的に採取された葉の試料（中間部の茎位置）から単離された。特異的プローブでの遺伝子発現は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ製Ｔｏｂａｒｒａｙチップを用いたマイクロアレイ分析を用いることにより算出された。
【図８】図８は、４８時間キュアリング処理した後のスイスバーレー（Ｓｔｅｌｌａ、Ａ＆Ｃ）とスイスバージニア（ブライト、ＩＴＢ  ６８３、Ｂ＆Ｂ）たばこにおけるＡＳＮ遺伝子の発現を示す。
【図９】図９は、２０１３年にパイェルヌの圃場で栽培された４種の異なるバーレー葉（下部の茎位置）における６０時間空気キュアリング処理後のＡＳＮ１、ＡＳＮ５（Ａ）およびＡＳＮ３（Ｂ）の収穫後の発現を示す。
【図１０】図１０は、圃場で栽培された成熟したバーレーたばこから採取した８つの組織（未成熟花（Ｉｍ＿花）；下部の茎位置の葉（＿ＬＳ）、中間部の茎位置の葉（＿ＭＳ）、および上部の茎位置の葉（＿ＵＳ）；花弁、根、咢片、ならびに茎）におけるＡＳＮ１、ＡＳＮ５（左側パネル）およびＡＳＮ３（右側パネル）の発現を示す。
【図１１】図１１は、ＭＭＶプロモーターまたはＥ４プロモーターの制御下、温室栽培されたＡＳＮ１−ＲＮＡｉ植物体におけるアスパラギンの含有量と、３日間のキュアリング処理後に測定されたＡＳＮ１の転写レベルとを示す。アスパラギンの量は、各形質転換事象を有する１５個の植物体に由来した中間下部の茎の葉位置で測定された（Ａ）。ＡＳＮ１転写物の相対的発現量は、各形質転換事象由来の１５個の植物体において、３日間のキュアリング処理後に採取したＲＮＡを用いたｑＰＣＲで見積もられた（Ｂ）。
【図１２】図１２は、ＭＭＶプロモーターまたはＥ４プロモーターの制御下、温室栽培されたＡＳＮ１−ＲＮＡｉ植物体におけるグルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸およびニコチンの含有量を示す。Ｇｌｎ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｂ）、Ｇｌｕ（Ｃ）、およびニコチン（Ｄ）の量は、各形質転換事象を有する１５個の植物体に由来した中間下部の茎の葉位置で測定された。
【図１３】図１３は、ＭＭＶプロモーターまたはＥ４プロモーターの制御下、温室栽培されたＡＳＮ５−ＲＮＡｉ植物体におけるアスパラギンの含有量と、３日間のキュアリング処理後に測定されたＡＳＮ５の転写レベルとを示す。アスパラギンの量は、各形質転換事象を有する１５個の植物体に由来した中間下部の茎の葉位置で測定された（Ａ）。ＡＳＮ５転写物の相対的発現量は、各形質転換事象由来の１５個の植物体において、３日間のキュアリング処理後に採取したＲＮＡを用いたｑＰＣＲで見積もられた（Ｂ）。
【図１４】図１４は、ＭＭＶプロモーターまたはＥ４プロモーターの制御下、温室栽培されたＡＳＮ５−ＲＮＡｉ植物体におけるグルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸およびニコチンの含有量を示す。Ｇｌｎ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｂ）、Ｇｌｕ（Ｃ）、およびニコチン（Ｄ）の量は、各形質転換事象を有する１５個の植物体に由来した中間下部の茎の葉位置で測定された。
【図１５】図１５は、ＡＳＮ１−ＲＮＡｉ系統およびＡＳＮ５−ＲＮＡｉ系統の葉バイオマスを示す。四つの葉が各形質転換事象を有する４個の植物体から中間部の茎位置で採取され、ランダムに選択、および秤量された。重量平均および標準偏差が示されている。
【図１６】図１６は、スイスバーレー（Ｓｔｅｌｌａ）の空気キュアリング処理初期段階におけるＣＹＰ８２Ｅ４の発現を示す。転写量は、シトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼＣＹＰ８２Ｅ４に対する特異的プローブＮｔＰＭＩａ１ｇ２ｅ２＿ｓｔに基づくＴｏｂａｒｒａｙ  Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘチップを用いて測定された。
【図１７】図１７は、ＡＳＮ変異体におけるアスパラギンの低減率を示す。各変異体系統の百分率の値が、野生型（ＷＴ）ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔに対して計算された。
【図１８】図１８は、中間下部の茎位置で収穫されたキュアリング処理済みの葉（４）のバイオマスを示す。
【図１９】図１９は、ＡＳＮ１−ＲＮＡｉ葉、ＡＳＮ５−ＲＮＡｉ葉、およびそのそれぞれの対照葉から作製されたエアロゾル形成物品（国際公開第２０１３／０９８４０５号に記載）を加熱することより発生するエアロゾル中のアクリルアミドを定量した値を示す。５０％バージニアたばことブレンドした後、ＡＳＮ１−ＲＮＡｉ葉、ＡＳＮ５−ＲＮＡｉ葉、および対照葉の微粉中のアスパラギンを定量した（図１１および図１３を参照）（Ａ、Ｃ）。たばこブレンドをキャストリーフにし、エアロゾル形成物品内で加熱した。続いて、エアロゾル中のアクリルアミドを定量した（Ｂ、Ｄ）。
【図２０】図２０は、ＡＳＮ１−ＲＮＡｉおよびその各対照の中間部の茎の葉身からなるカットフィラーから作製された、可燃性紙巻たばこの煙中のアクリルアミドを定量した値を示す。ＡＳＮ１−ＲＮＡｉ葉および対照葉から調製されたカットフィラー中のアスパラギンを定量した（パネルＡ）。可燃性紙巻たばこを喫煙し、煙中のアクリルアミドを分析する。
【図２１】図２１は、ＡＳＮ１−Ｓ＿停止変異体および対照（野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔ）の葉から作製されたエアロゾル発生物品からのエアロゾル中のアクリルアミドを定量した値を示す。５０％バージニアたばことブレンドした後、ＡＳＮ１−Ｓ＿停止変異体の葉と対照の葉の微粉中にあるアスパラギンを定量した（Ａ）。たばこブレンドをキャストリーフにし、エアロゾルをエアロゾル形成物品から発生させた。続いて、エアロゾル中のアクリルアミドを定量した（Ｂ）。
【図２２】図２２は、ＡＳＮ−ＲＮＡｉ植物体を産するのに使用するベクターの例を示す。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
対照植物体または対照植物体細胞の文脈での「対照」という用語およびこれに類するものは、対象の遺伝子またはタンパク質の発現または活性が調節されておらず、それゆえに酵素の発現または活性が改変された植物体または植物体細胞との比較または参照を提供できる、植物体または植物体細胞を意味する。従って、本発明の文脈では、対照は、アスパラギンシンテターゼの発現または活性を低減させる遺伝子改変を一つも含むことはないことになる。対照植物体または植物体細胞は、空のベクターを備えうる。対照植物体または植物体細胞は、野生型植物体または野生型植物体細胞などに対応しうる。こうしたすべての場合において、被験植物および対照植物体は、比較目的で同一のプロトコルを使用して培養および収穫がなされる。本明細書に記載された遺伝子もしくはポリペプチドのレベル、比率、活性、もしくは分布の変化、または植物体の表現型の変化、特にアスパラギンの蓄積の低減、および／もしくはアクリルアミドの蓄積の低減、および／もしくはグルタミンの蓄積の増加、および／もしくはアスパラギン酸の蓄積の増加、および／もしくはグルタミン酸の蓄積の増加は、被験植物体を対照植物体と比較することにより測定することができ、そこで好適には、該被験植物体および対照植物体は、同一のプロトコルを使用して栽培および／または収穫されたものである。対照植物体は、被験植物体の表現型の変化を測定するための基準点を提供することができる。表現型の変化の測定は、植物の成長中、老化時、またはキュアリング処理後を含めて、植物中で任意の時点で測定されうる。表現型の変化の測定は、グロースチャンバー内、温室内、または野原で成長した植物体からのものを含め、任意の条件下で成長した植物体中で測定することができる。表現型の変化は、アスパラギン含有量、および／もしくはグルタミン含有量、および／もしくはアスパラギン酸含有量、および／もしくはグルタミン酸含有量（Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕ  （２００５）に記載）を測定することによって計測することができ、ならびに／またはアクリルアミド含有量（Ｐａｐｏｕｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１４、および／またはＯｎｏａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３、および／またはアメリカ合衆国環境保護庁Ｍｅｔｈｏｄ  ８０３２Ａ−Ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｂｙ  Ｇａｓ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ  １，  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １９９６）、および／もしくはニコチン含有量（ＣＯＲＥＳＴＡ（Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｔｏ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ）Ｍｅｔｈｏｄ  Ｎｕｍｂｅｒ  ６２を使用、Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｃｏｔｉｎｅ  ｉｎ  ｔｏｂａｃｃｏ  ａｎｄ  ｔｏｂａｃｃｏ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｂｙ  ｇａｓ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  （Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００５））は、キュアリング処理もしくは乾燥の前、および／またはその間、および／またはその後に、当業界で周知の方法を用いてモニターすることができる。遊離アミノ酸分析を、Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕ  （２００５）を基にした方法を用いて行った。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３３】
タバコ（Ｎｉｃｏｔｉｎｉａ  ｔａｂａｃｕｍ）のバーレー品種において、キュアリング処理する間にアスパラギンの合成に関与するとして識別された遺伝子は、他の植物体および他の種々の植物体に適用可能である。従って、本開示は、他の植物体で再現可能であり、また変異体系統での育種に適用可能であると考えられる。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３９】
特に有用なNicotiana tabacum品種には、バーレータイプ、ダークタイプ、熱風送管キュアリング処理タイプ、およびオリエンタルタイプのたばこが含まれる。品種または栽培品種の非限定的な例は：BD 64、CC 101、CC 200、CC 27、CC 301、CC 400、CC 500、CC 600、CC 700、CC 800、CC 900、Coker 176、Coker 319、Coker 371 Gold、Coker 48、CD 263、DF911、DT 538 LC Galpao tobacco、GL 26H、GL 350、GL 600、GL 737、GL 939、GL 973、HB04P、HB 04P LC、HB3307PLC、Hybrid 403LC、Hybrid 404LC、Hybrid 501 LC、K 149、K 326、K 346、K 358、K394、K 399、K 730、KDH 959、KT 200、KT204LC、KY10、KY14、KY 160、KY 17、KY 171、KY 907、KY907LC、KY14xL8 LC、Little Crittenden、McNair 373、McNair 944、msKY 14xL8、Narrow Leaf Madole、Narrow Leaf Madole LC、NBH 98、N-126、N-777LC、N-7371LC、NC 100、NC 102、NC 2000、NC 291、NC 297、NC 299、NC 3、NC 4、NC 5、NC 6、NC7、NC 606、NC 71、NC 72、NC 810、NC BH 129、NC 2002、Neal SmithMadole、OXFORD 207、PD 7302 LC、PD 7309 LC、PD 7312 LC、'Periqe' tobacco、PVH03、PVH09、PVH19、PVH50、PVH51、R 610、R 630、R 7-11、R 7-12、RG 17、RG 81、RG H51、RGH 4、RGH 51、RS 1410、Speight 168、Speight 172、Speight 179、Speight 210、Speight 220、Speight 225、Speight 227、Speight 234、Speight G-28、Speight G-70、Speight H-6、Speight H20、Speight NF3、TI 1406、TI 1269、TN 86、TN86LC、TN 90、TN97、TN97LC、TN D94、TN D950、TR（Tom Rosson）Madole、VA 309、VA359、AA 37-1、B13P、Xanthi（Mitchell-Mor）、Bel-W3、79-615、Samsun Holmes NN、KTRDC number 2 Hybrid 49、Burley 21、KY8959、KY9、MD 609、PG01、PG04、PO1、PO2、PO3、RG11、RG 8、VA509、AS44、Banket A1、Basma Drama B84/31、Basma I Zichna ZP4/B、Basma Xanthi BX2A、Batek、Besuki Jember、C104、Coker 347、Criollo Misionero、Delcrest、Djebel 81、DVH 405、Galpao Comum、HB04P、Hicks Broadleaf、Kabakulak Elassona、Kutsage E1、LA BU 21、NC 2326、NC 297、PVH 2110、Red Russian、Samsun、Saplak、Simmaba、Talgar 28、Wislica、Yayaldag、Prilep HC-72、Prilep P23、Prilep PB 156/1、Prilep P12-2/1、Yaka JK-48、Yaka JB 125/3、TI-1068、KDH-960、TI-1070、TW136、Basma、TKF 4028、L8、TKF 2002、GR141、Basma xanthi、GR149、GR153、Petit Havanaである。本明細書で具体的に識別されていない場合であっても、上記の低コンバーター亜種も意図されている。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４５】
なおさらなる態様は、突然変異体であるか、非天然であるか、または遺伝子組み換えの植物体または細胞から誘導されるかまたは誘導可能なキュアリング処理済み植物材料（キュアリング処理済みの葉またはキュアリング処理済みたばこなど）であって、本明細書で説明したポリヌクレオチドのうちの一つ以上の発現またはそれによってコードされるタンパク質の活性が低減し、これが結果的にそこでのアスパラギンレベルの低減をもたらす、該キュアリング処理済み植物材料に関連する。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４７】
実施形態は、本明細書で説明したポリヌクレオチドまたはポリペプチドのうちの一つ以上の発現または活性を調節するために修飾された突然変異体であるか、非天然であるか、または遺伝子組み換えの植物体または植物体細胞を生成する組成および方法も対象とするが、これは、アスパラギンのレベルが低減した植物体、または植物体成分（例えば、葉（キュアリング処理または乾燥済みの葉など））、または植物体細胞をもたらしうるものである。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４９】
別の態様において、アスパラギンの量を少なくとも植物体の一部分（例えば、葉（キュアリング処理または乾燥済みの葉など）またはたばこ）において調節（例えば、低減）するための方法が提供され、この方法は、（ｉ）本明細書で説明したポリペプチドのうちの一つ以上の発現または活性を調節（例えば、低減）する工程であって、好適には、該ポリペプチドが、本明細書で説明した対応するポリヌクレオチド配列によりコードされる工程と、（ｉｉ）工程（ｉ）で入手した突然変異体であるか、非天然であるか、または遺伝子組み換えの植物体の少なくとも一部分（例えば、葉（キュアリング処理済みの葉など））内のアスパラギン含有量を測定する工程と、（ｉｉｉ）該アスパラギン含有量が対照植物体と比較して低減した、突然変異体であるか、非天然であるか、または遺伝子組み換えの植物体を識別する工程とを含む。前述の突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体の視覚的外観は、実質的に対照植物体と同一であることが適切である。植物体はたばこ植物体であることが適切である。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５０】
別の態様で、アスパラギンの量を、キュアリング処理または乾燥済み植物材料（例えば、キュアリング処理または乾燥済みの葉など）の少なくとも一部分において低減させるための方法が提供されているが、この方法は、（ｉ）本明細書で説明したポリペプチドのうちの一つ以上の発現または活性を低減させる工程であって、そこで好適には、該ポリペプチドは、本明細書で説明した対応するポリヌクレオチド配列によりコードされる該工程と、（ｉｉ）植物材料（葉のうちの一つ以上など）を収穫し、ある期間の間にキュアリング処理または乾燥する工程と、（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で得られたキュアリング処理または乾燥済み植物材料の少なくとも一部分のアスパラギン含有量を測定する工程と、（ｉｖ）該アスパラギン含有量が、対照植物体と比較して低減したキュアリング処理または乾燥済み植物材料を識別する工程とを含む。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５８】
本明細書に記載した方法の一部の実施形態では、標準現場手続きを使用して、変異体遺伝子のための育種およびスクリーニングからもたらされた系統が現場で評価される。最初の変異誘発されていない親を含む対照遺伝子型が含められ、無作為化完全ブロックデザインまたはその他の適切な現場設計で、エントリーが現場で配列される。たばこについては、標準的な農業方法が使用され、例えば、たばこは、収穫され、秤量され、キュアリング処理または乾燥の前およびその途中に化学的およびその他の一般的な試験用に標本化される。データの統計分析が実行され、選択した系統の親系統に対する類似性が確認される。選択した植物体の細胞遺伝子学的分析が随意に実施され、染色体補体および染色体対合関係が確認される。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６５】
限定はされないが、本明細書で説明した植物体は、発現または活性が本開示に従い調節される前かその後かのいずれかに、他の目的で改変されうる。以下の一つ以上の遺伝的修飾が、突然変異体であるか、非天然であるか、または遺伝子組み換えの植物体内に存在できる。一つの実施形態で、窒素性代謝性の中間体の変換に関与する一つ以上の遺伝子が修飾され、結果的に、キュアリング処理時に、対照植物体よりも低いレベルの少なくとも一つのタバコ特異的ニトロソアミンが生成される植物体（葉など）となる。修飾されうる遺伝子の非限定的な例は、本明細書に記載する通り、ニコチンからノルニコチンへの変換に係わるＣＹＰ８２Ｅ４、ＣＹＰ８２Ｅ５、およびＣＹＰ８２Ｅ１０などのアスパラギンシンテターゼをコードする遺伝子を含み、国際公開第２００６０９１１９４号、国際公開第２００８０７０２７４号、国際公開第２００９０６４７７１号、および国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１０８８号に記載されており、また本明細書に記載される通りである。別の実施形態では、重金属摂取または重金属輸送に関与する一つ以上の遺伝子が修飾され、結果的に、修飾のない対照植物体またはその部分よりも低い重金属含有量を持つ植物体または植物体の部分（葉など）となる。非限定的な例には、多剤耐性に関連するタンパク質ファミリー、陽イオン拡散ファシリテーター（ＣＤＦ）ファミリー、Ｚｒｔ−、Ｉｒｔ様タンパク質（ＺＩＰ）ファミリー、陽イオン交換体（ＣＡＸ）ファミリー、銅トランスポーター（ＣＯＰＴ）ファミリー、重金属Ｐ−ｔｙｐｅ  ＡＴＰａｓｅｓファミリー（例えば、ＨＭＡ、ＷＯ２００９０７４３２５号に記載のあるもの）、自然耐性に関連するマクロファージタンパク質（ＮＲＡＭＰ）の相同体ファミリー、およびＡＴＰ−結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターファミリー（例えば、ＭＲＰ、ＷＯ２０１２／０２８３０９号に記載のあるもので、重金属（カドミウムなど）の輸送に係わる）に属する遺伝子が含まれる。本明細書で使用されるとき、重金属という用語は遷移金属を含む。その他の修飾の例には除草剤耐性が含まれ、例えば、グリホサートは、広分野での数多くの除草剤の有効成分である。グリホサート耐性遺伝子組み換えの植物体は、ａｒｏＡ遺伝子（ネズミチフス菌および大腸菌に由来するグリホサートＥＰＳＰ合成酵素）の移入により開発されたものである。スルホニル尿素耐性植物体は、アラビドプシス（シロイヌナズナ）に由来する突然変異体ＡＬＳ（アセト乳酸合成酵素）遺伝子の形質転換により作成されたものである。突然変異体Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ  ｈｙｂｒｉｄｕｓに由来する光化学系ＩＩのＯＢタンパク質が植物体に移入され、アトラジン耐性遺伝子組み換えの植物体が作成され、またブロモキシニル耐性遺伝子組み換えの植物体は、バクテリアＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに由来するｂｘｎ遺伝子を組み入れることにより作成された。別の模範的な修飾によって、昆虫に対する耐性のある植物体がもたらされる。Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ  （Ｂｔ）毒素は、Ｂｔ−耐性害虫の発生を遅らせる効果的な方法を提供でき、このことは、最近、ブロッコリで明らかになったが、錐体のｃｒｙ１Ａｃおよ��ｃｒｙ１ＣＢｔ遺伝子が、どちらかの単一のタンパク質に対する耐性を持つコナガ（ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ  ｍｏｔｈ）を駆除し、かつ耐性昆虫の進化を著しく遅らせた。別の模範的な修飾も、病原体（例えば、ウイルス、バクテリア、菌類）によって生じた疾患に対して抵抗性を持つ植物体をもたらした。Ｘａ２１遺伝子（細菌性胴枯れ病に対する耐性）を発現する植物体と、Ｂｔ融合遺伝子およびキチナーゼ遺伝子（イッテンオオメイガへの耐性および葉鞘への耐性）の両方を発現する植物体が作り出された。別の模範的な修飾によって、生殖能力（雄性不稔など）が変更された。別の模範的な修飾によって、非生物的ストレス（例えば、乾燥、温度、塩分）に対する耐性のある植物体がもたらされ、また耐性の遺伝子組み換え植物体がアラビドプシス（シロイヌナズナ）に由来するアシルグリセロールリン酸塩酵素を移入することにより作り出され、またマンニトールおよびソルビトールの合成に関与するマンニトール脱水素酵素およびソルビトール脱水素酵素をコードする遺伝子が、乾燥への耐性を改善する。その他の模範的な修飾によって、タンパク質および油の貯蔵能力が改善された植物体、光合成効率が高められた植物体、有効期間が延長された植物体、炭水化物含有量が増えた植物体、および菌類への耐性のある植物体、アルカロイドの生合成に関与する酵素をコードする植物体をもたらすことができる。Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭ）および／またはシスタチオニンγ−合成酵素（ＣＧＳ）の発現が調節された遺伝子組み換えの植物体も意図されている。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６９】
こうした植物体、具体的にはたばこ植物体の部分は、またさらに具体的にはたばこ植物体の葉身および中央脈は、様々な消費可能製品に組み入れたり、その製造に使用したりでき、これにはエアロゾル形成材料、エアロゾル形成装置、喫煙物品、喫煙可能物品、無煙製品、およびたばこ製品が含まれるが、これに限定されない。エアロゾル形成材料の例には、たばこ組成物、たばこ、たばこ抽出物、刻みたばこ、刻み充填剤、キュアリング処理または乾燥済みのたばこ、拡張したたばこ、均質化したたばこ、再構成たばこ、およびパイプたばこが含まれるが、これらに限定されない。喫煙物品および喫煙可能物品は、エアロゾル形成装置の種類である。喫煙物品または喫煙可能物品の例には、紙巻たばこ、シガリロ、および葉巻たばこが含まれるが、これに限定されない。無煙製品の例は、噛みたばこ、および嗅ぎたばこを含む。特定のエアロゾル形成装置では、燃焼（または発火）ではなく、例えば一つ以上の電気発熱体要素または炭素熱源によって、たばこ組成物または別のエアロゾル形成材料が加熱されてエアロゾルを生成する。典型的には、こうした加熱式喫煙物品において、エアロゾルは、熱源の内部、周りまたは下流に位置しうる、物理的に離れたエアロゾル形成基体または材料への熱源からの熱伝達によって生成される。喫煙中、揮発性化合物は、熱源からの熱伝達によってエアロゾル形成基体から放出され、喫煙物品を介して引き出される空気中に一緒に運ばれる。放出された化合物が冷えるにつれて、これらは、凝縮してユーザーによって吸入されるエアロゾルを形成する。こうした装置として、例えば、電気加熱式エアロゾル発生装置が挙げられ、該装置では，このエアロゾル発生装置から加熱式喫煙物品のエアロゾル形成基体への熱伝達によってエアロゾルを発生させる。好適には、エアロゾル形成基体の加熱中には、たばこの燃焼も発火も生じない。適切なエアロゾル形成物品は、国際公開第２０１３／０９８４０５号に記載されており、エアロゾル発生装置の内部発熱体によって加熱したときに、吸入可能なエアロゾルを発生させるためのエアロゾル形成基体を含んでいる。エアロゾル形成物品は、内部発熱体を備えた電気加熱式エアロゾル発生装置を含みうる。エアロゾル発生物品は、直線的かつ連続的に配置され、エアロゾル形成基体と、エアロゾル形成基体のすぐ下流に位置する支持要素と、支持要素の下流に位置するエアロゾル冷却要素と、該エアロゾル形成基体、該支持要素、および該エアロゾル冷却要素を囲む外側ラッパーとをさらに含みうる。支持要素は、エアロゾル形成基体に隣接しうる。エアロゾル形成基体は、エアロゾル発生装置の発熱体により貫通されうる。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７２】
一つの実施形態で、本明細書で説明した突然変異体、遺伝子組み換え、および非天然のたばこ植物体に由来するキュアリング処理済み植物材料も提供されている。たばこ緑葉をキュアリング処理する工程は、当業者にとって公知であり、空気キュアリング処理、火力キュアリング処理、熱風送管キュアリング処理、および日光キュアリング処理が含まれるがこれらに限定されない。たばこ緑葉をキュアリング処理する工程は、収穫されたたばこの種類に依存する。例えば、バーレーおよびある種のダークストレインは通常空気キュアリング処理され、パイプたばこ、噛みたばこ、および嗅ぎたばこは通常火力キュアリング処理される。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７３】
別の実施形態で、本明細書で説明した突然変異体である植物体、遺伝子組み換えの植物体、および非天然の植物体に由来する乾燥済みの植物材料も提供されている。葉を乾燥する工程は、当業者に既知であり、空気乾燥と日光乾燥とが含まれるがこれらに限定されない。葉を乾燥する厳密な工程は、収穫した植物体のタイプによって決まる。好適には、植物材料は、収穫の後に乾燥される。従って、乾燥済みの材料および収穫後の乾燥済みの材料の使用が、本明細書で意図される。乾燥工程は、一つ以上の老化関連遺伝子を活性化しうる。本明細書で説明した遺伝子およびタンパク質の活性の発現は、キュアリング処理または乾燥中にモニターされうる。同様に、アスパラギン、ニコチン、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸のレベルは、キュアリング処理または乾燥中にモニターされうる。一例として、測定は、キュアリング処理または乾燥の０時間、１０時間、２０時間、３０時間、４０時間、５０時間、６０時間、７０時間、８０時間、９０時間、または１００時間後に行われうる。さらなる一例として、測定は、０日、１日、２日、３日、４日、５日、もしくは１０日後、またはそれ以上の後に行われうる。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７４】
別の実施形態で、たばこ含有エアロゾル形成材料を含むたばこ製品は、本明細書で説明した突然変異体であるたばこ植物体、遺伝子組み換えのたばこ植物体、または非天然のたばこ植物体に由来する植物材料（葉、好ましくはキュアリング処理または乾燥済みの葉など）を含むものとして描写されている。本明細書で説明したたばこ製品は、ブレンドしたたばこ製品とすることができ、未変性のたばこをさらに備えうる。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７５】
キュアリング処理または乾燥（例えば、３日のキュアリング処理または乾燥）後の、本明細書で説明した植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品におけるアスパラギン量は、対照植物体と比較して、約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％少ない（約２００％または３００％少ないなど）。好適には、キュアリング処理または乾燥（例えば、３日のキュアリング処理または乾燥）後の、本明細書で説明した植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品におけるアスパラギン量は、対照と比較して、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％少なく（約２００％または３００％少ないなど）、より好適には、対照と比較して、少なくとも約８０％少なく、または少なくとも約９０％少ない。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７６】
キュアリング処理または乾燥（例えば、３日のキュアリング処理または乾燥）後の、本明細書で説明した植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品における、アスパラギン量は、１ｇの葉の乾燥重量あたり約４０ｍｇ以下、より好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約３５ｍｇ以下、より好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約３０ｍｇ以下、より好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約２５ｍｇ以下、より好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約２０ｍｇ以下、より好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約１５ｍｇ以下、より好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約１２ｍｇ乾燥重量、より好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約１０ｍｇ以下、またはより好適には１ｇの葉の乾燥重量あたり約５ｍｇ以下である。好適には、葉は、植物体の下中間部の茎位置から収穫される。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７７】
キュアリング処理または乾燥後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品に由来するエアロゾルにおける、加熱によって得られたアクリルアミド量は、対照と比較して、少なくとも約７０％少ない。一例として、キュアリング処理または乾燥後のたばこ製品に由来するエアロゾルにおける、加熱によって得られたアクリルアミド量は、一本の紙巻たばこあたり約１．５μｇである。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７８】
キュアリング処理または乾燥後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品に由来するエアロゾルにおける、燃焼によって得られたアクリルアミド量は、対照と比較して、少なくとも約５５％少ない。一例として、キュアリング処理または乾燥後のたばこ製品に由来するエアロゾルにおける、燃焼によって得られたアクリルアミド量は、一本の紙巻たばこあたり約２．５μｇである。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７９】
キュアリング処理または乾燥後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品に由来するエアロゾルにおける、燃焼または加熱によって得られたアクリルアミド量は、対照と比較して、少なくとも約５５％〜約７０％少ない。一例として、キュアリング処理または乾燥後のたばこ製品に由来するエアロゾルにおける、燃焼または加熱によって得られたアクリルアミド量は、一本の紙巻たばこあたり約１．５μｇ〜約２．５μｇである。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８１】
一実施形態では、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量は、対照よりも少なくとも約２０％少なく（例えば少なくとも約２２％少なく）、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）由来のエアロゾルにおけるアクリルアミドの量は、対照よりも少なくとも約２５％少ない（例えば、少なくとも約２４％以下である）。別の実施形態では、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量は、１ｇの乾燥重量あたり約１２  ｍｇ以下であり、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）由来のエアロゾルにおけるアクリルアミドの量は、一本の紙巻たばこあたり約２．５μｇ以下である。好適には、ニコチンのレベルは、対照におけるニコチンのレベルと実質的に同じである。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８２】
別の実施形態では、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量は、対照よりも少なくとも約７０％少なく（例えば少なくとも約６６％少なく）、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品由来のエアロゾルにおけるアクリルアミドの量は、対照よりも少なくとも約４５％少ない（例えば、少なくとも約４４％少ない）。別の実施形態では、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量は、１ｇの乾燥重量あたり約１２ｍｇ以下であり、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品由来のエアロゾルにおけるアクリルアミドの量は、一本の紙巻たばこあたり約３μｇ以下である。好適には、ニコチンのレベルは、対照におけるニコチンのレベルと実質的に同じである。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８３】
別の実施形態では、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量は、対照よりも少なくとも約９０％少なく（例えば少なくとも約８８％以下）、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品由来のエアロゾルにおけるアクリルアミドの量は、対照よりも少なくとも約７０％少ない。別の実施形態では、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量は、１ｇの乾燥重量あたり約５ｍｇ以下であり、キュアリング処理後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品由来のエアロゾルにおけるアクリルアミドの量は、一本の紙巻たばこあたり約１．５μｇ以下である。好適には、ニコチンのレベルは、対照におけるニコチンのレベルと実質的に同じである。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８４】
別の実施形態では、ＲＮＡｉを介したＮｔＡＳＮ１の発現の調節により：（ｉ）キュアリング処理または乾燥後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量が、２４％〜約８９％（例えば約５ｍｇ／ｇ〜約３５ｍｇ／ｇに）減少し；（ｉｉ）ニコチンのレベルが、対照植物体に存在するニコチンの量（例えば、１ｇの葉の乾燥重量バイオマスあたり約１５ｍｇおよび２０ｍｇ）の約２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％以下に維持され；（ｉｉｉ）エアロゾルにおけるアクリルアミドのレベルが、少なくとも約７０％から一本の紙巻たばこあたり１．５  ３μｇ以下まで低減されうる。葉のバイオマス量は、約３００ｇ〜４００ｇであるのが一般的である。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８５】
別の実施形態では、ＲＮＡｉを介したＮｔＡＳＮ５の発現の調節により：（ｉ）キュアリング処理または乾燥後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量が、約３５％〜約６６％（例えば約１８ｍｇ／ｇ〜約３１ｍｇ／ｇに）減少し；（ｉｉ）ニコチンのレベルが、対照植物体に存在するニコチンの量（例えば、１ｇの葉の乾燥重量バイオマスあたり約１５ｍｇおよび２０ｍｇ）の約２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％以下に維持され；（ｉｉｉ）エアロゾルにおけるアクリルアミドのレベルが、少なくとも約４４％から一本の紙巻たばこあたり３μｇ以下まで低減されうる。葉のバイオマス量は、約３００ｇ〜４００ｇであるのが一般的である。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８６】
別の実施形態では、突然変異誘発を介したＮｔＡＳＮ１の発現の調節により：（ｉ）キュアリング処理または乾燥後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量が、１７％〜約８３％（例えば約４．７ｍｇ／ｇ〜約１９．４ｍｇ／ｇに）減少し；（ｉｉｉ）エアロゾルにおけるアクリルアミドのレベルが、少なくとも約２４％から一本の紙巻たばこあたり２．５μｇ以下まで低減されうる。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２８７】
別の実施形態では、突然変異誘発を介したＮｔＡＳＮ５の発現の調節により、キュアリング処理または乾燥後の植物体、植物体の部分、植物材料、植物産物、またはたばこ製品（例えば、キュアリング処理済みキャストリーフ）におけるアスパラギンの量が、約４４％（例えば約１４．５  ｍｇ／ｇに）減少しうる。突然変異体であるか、非天然であるか、または遺伝子組み換えの植物体は、例えば農業において、他の用途を持ちうる。例えば、本明細書で説明した突然変異体であるか、非天然であるか、または遺伝子組み換えの植物体は、動物の飼料およびヒトの食品を製造するために使用できる。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９１】
さらなる態様において、試料中の本明細書に説明されているポリヌクレオチド（または、本明細書に説明されているようにその任意の組み合わせ）を検出する方法も提供され、この方法は、（ａ）ポリヌクレオチドを含むか、またはそれを含むとみられている試料を提供する工程と、（ｂ）ポリヌクレオチドの少なくとも一部分を特異的に検出するために、前述の試料を一つ以上のプライマーまたは一つ以上のプローブと接触させる工程と、（ｃ）増幅生成物の存在を検出する工程とを含み、ここで、増幅生成物の存在は、試料中のポリヌクレオチドの存在を示すものである。さらなる態様で、ポリヌクレオチドの少なくとも一部分を特異的に検出するための一つ以上のプライマーまたはプローブの用途も提供されている。ポリヌクレオチドの少なくとも一部分を検出するためのキットも提供されており、これは、ポリヌクレオチドの少なくとも一部分を特異的に検出するための一つ以上のプライマーまたはプローブを備える。キットは、ポリヌクレオチド増幅（ＰＣＲなど）のための試薬、またはプローブハイブリッド形成−検出技術（サザンブロット、ノーザンブロット、ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリッド形成、またはマイクロアレイなど）のための試薬を備えうる。キットは、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ＳＥＬＤＩ質量分析法または試験片などの抗体結合検出技術のための試薬を備えうる。キットは、ＤＮＡ配列決定のための試薬を備えうる。キットは、植物材料、キュアリング処理もしくは乾燥済み植物材料、またはキュアリング処理もしくは乾燥済みの葉中の、少なくともアスパラギン含有量、および／またはアクリルアミドエアロゾル含有量の算出のための試薬および説明書を備えうる。
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９４】
一つの実施形態で、本明細書で説明した突然変異体である植物体、遺伝子組み換えの植物体、および非天然の植物体に由来するキュアリング処理または乾燥済みの植物材料も提供されている。例えば、たばこ葉をキュアリング処理または乾燥する工程は、当業者にとって公知であり、空気キュアリング処理、火力キュアリング処理、熱風送管キュアリング処理および日光キュアリング処理を含むがこれらに限定はされない。たばこ緑葉をキュアリング処理する工程は、本明細書で説明したように、収穫されたたばこの種類に依存する。
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９５】
別の実施形態で、本明細書で説明した、または本明細書に記載した方法で製造された、突然変異体である植物体、遺伝子組み換えの植物体、および非天然の植物体に由来する植物材料（葉などであって、キュアリング処理または乾燥済みの葉などのキュアリング処理済み植物材料であることが適切である）を含むたばこ製品を含めた、たばこ製品が説明されている。本明細書で説明したたばこ製品は、未変性のたばこをさらに備えうる。
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９６】
別の実施形態で、たばこ製品は、本明細書に記載した突然変異体である植物体、遺伝子組み換えの植物体、および非天然の植物体に由来する植物材料（キュアリング処理または乾燥済みの葉などの葉であることが好ましい）を含むものとして描写されている。例えば、植物材料をたばこ製品の内部または外部に加えて、燃焼時に望ましい芳香を放出させうる。この実施形態によるたばこ製品は、さらには未変性のたばこまたは変性たばこともしうる。この実施形態によるたばこ製品は、さらには、本明細書で開示された遺伝子以外の一つ以上の遺伝子に修飾がある、突然変異体、遺伝子組み換え、または非天然の植物体に由来するものとしうる。
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９８】
実施例１−キュアリング処理済みのたばこ葉におけるアスパラギンの合成
たばこ葉、特にバーレー栽培品種の葉をキュアリング処理する間に、アスパラギンが活発に生成され、キュアリング処理済みの葉に存在する全アミノ酸の約５０％を占めるようになる。図１では、同一の圃場および処理室で並行して栽培および空気キュアリング処理された３種のバーレーたばこ栽培品種のキュアリング処理済みの葉に、アスパラギンおよび全遊離アミノ酸の増加が示されているが、これは、主としてアスパラギンが増加したためである。驚くべきことに、アスパラギンは、キュアリング処理中に著しく蓄積される唯一のアミノ酸である。アスパラギンが初期のキュアリング処理段階で合成されることを考慮すると、その反応は、グルタミンとアスパラギン酸とを基質として用いるアスパラギンシンテターゼ活性に依存する。一方、図１では、ＡｓｐおよびＧｌｎは、アスパラギンと比較してわずかな増加のみを示し、従って、ＧｌｎとＡｓｐのプールは、長期にわたる空気キュアリング処理工程（２か月超）の間では変動する可能性があることが示唆される。グルタミン酸のプールの変動は観察されなかった（データ非表示）。
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２９９】
図２は、Ｇｌｎがキュアリング処理の最初の４日間（９６時間）の間に増加した後、アスパラギンの蓄積が開始すると減少することを示している。対照的に、アスパラギン酸のプールは、多少のゆらぎが観察されうるものの、ほとんど変化がないままである。いかなる特定の理論に束縛されることも望まないが、観察されたグルタミンのプールは、キュアリング処理の最初の４〜５日間の間にアスパラギンシンテターゼの基質として機能して、アスパラギンを生成すると考えられる（図３を参照）。
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３００】
上述したように、キュアリング処理中に見られるアスパラギンの蓄積は、老化誘導アスパラギンシンテターゼの特異的活性の結果であると考えられる。アスパラギンおよび還元糖は、一端加熱または燃焼すると、メイラード反応を介してエアロゾル中にアクリルアミドを発生させる可能性がある。キュアリング処理済みのたばこ葉またはたばこブレンドに蓄積されたアスパラギンと、エアロゾル中で測定されるアクリルアミドとの間には良好な相関がある（図４を参照）。いかなる特定の理論に束縛されることも望まないが、このことは、エアロゾル中のアクリルアミドの増加が、アスパラギンの存在に強く依存していることを示唆するものである。さらに、図５に示すように、葉組織内のアスパラギンの存在は、使用されたキュアリング処理プロセスとも関連している。
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０３】
アスパラギンがバーレーたばこの空気キュアリング処理工程の間に急速に増加することがわかっているので、キュアリング処理の初期段階におけるアスパラギンの生成（図１および図２を参照）は、タンパク質またはポリペプチドのタンパク質分解に直接起因するのではなく、キュアリング処理中の新規な（ｄｅｎｏｖｏ）合成に起因しうる。その場合、上述したように、アスパラギン合成は、活性アスパラギンシンテターゼにのみ由来しうる。
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０４】
キュアリング処理の間のアスパラギンシンテターゼ遺伝子の発現を測定するために、Ｔｏｂａｒｒａｙ  Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子チップを用いたマイクロアレイ分析（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２０１２，  １３：６７４）から収集されたデータを解析する。葉のＲＮＡを、キュアリング処理の最初の９６時間の間、経時的に単離する。六つのＡＳＮコード配列（ＡＳＮ１−Ｔに対してはＮｔＰＭＩａ１ｇ４７３７５ｅ１＿ｓｔ、ＡＳＮ１−Ｓに対してはＮｔＰＭＩａ１ｇ３１３９５ｅ１＿ｓｔ、ＡＳＮ５−Ｔに対してはＮｔＰＭＩａ１ｇ２５２５５ｅ１＿ｓｔ、ＡＳＮ５−Ｓに対してはＮｔＰＭＩａ１ｇ５７３３７ｅ１＿ｓｔ、ＡＳＮ３−Ｔに対してはＮｔＰＭＩａ１ｇ１５２３４８ｅ１＿ｓｔ、およびＡＳＮ３−Ｓに対してはＮｔＰＭＩａ１ｇ１２１５８２ｅ１＿ｓｔ）とマッチングする特異的プローブ（１００％同一性）を特定する。ＲＮＡの調製のため、葉をＳｔｅｌｌａ（スイスバーレー）の中間部の茎位置で圃場にて直接収集し（約４時間）、時間０を、その葉が空気キュアリング処理室に吊された時とする。ＡＳＮ３−ＳおよびＡＳＮ３−Ｔは、空気キュアリング処理中、バーレー葉内でわずかに発現されたのみである。対照的に、ＡＳＮ１−Ｓ、ＡＳＮ１−Ｔ、およびＡＳＮ５−Ｓは、キュアリング処理の初期（老化、黄変段階）に高発現する一方で、ＡＳＮ５−Ｔは、収穫直後のみ発現上昇した後、キュアリング処理の初期９６時間の間中減り続ける（図７）。
【誤訳訂正５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０５】
マイクロアレイ分析において、高い配列相同性を共有する遺伝子に特に見られうる交差ハイブリッド形成を調査するために、ＡＳＮ１−Ｓ／ＴおよびＡＳＮ５−Ｓ／Ｔの発現をＲＮＡｓｅｑ技術を用いて分析する。そのデータを図８に示す。スイスバーレー「Ｓｔｅｌｌａ」（図８Ａ）において、ＡＳＮ５−Ｔは、キュアリング処理の間、他の三つのＡＳＮ１／５コピーよりも誘導されず（図７を参照）、ＡＳＮ１−Ｔは、初期の空気乾燥２日後、最も高発現した遺伝子であるということが、ＲＮＡ−ｓｅｑデータから確認された。こうしたＡＳＮ遺伝子活性は、伝統的な方法でオーブンでキュアリング処理したスイスブライトバージニア「ＩＴＢ  ６８３」においては、同様の強度を伴って生じることはない。かかるたばこでは、ＡＳＮ１−Ｓ／ＴおよびＡＳＮ５−Ｓ／Ｔの発現は、４８時間のキュアリング処理後も低いままである。この両方のたばこにおいて、ＡＳＮ３Ｓ／Ｔの発現はキュアリング処理によって誘導されず（図８ＣおよびＤ）、従って、これは図７に示したＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのデータを裏付けるものである。
【誤訳訂正５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０６】
バーレーキュアリング処理の初期段階の間におけるＡＳＮ遺伝子誘導のロバスト性を評価するために、スイス圃場で同時期（２０１３年）に栽培された４種の異なるバーレー登録品種（ＢＵ１−４：Ｓａｐｌａｃｋ、ＢａｎｋｅｔＡ１、Ｓｔｅｌｌａ、およびＴＮ９０）から、処理室での６０時間キュアリング処理前と処理後に葉のＲＮＡを単離する。ＲＮＡを単離する時点が６０時間まで延長されたのは、スイスではＴＮ９０が黄変し始めるのに時間がかかるためである。発現データ（図９Ａ）には、すべてのバーレー葉において、ＡＳＮ１−ＴおよびＡＳＮ５−Ｔが、空気キュアリング処理の間、それぞれ最も高発現および最も低発現のＡＳＮ遺伝子である（ＢＵ２におけるＡＳＮ１−Ｔを除く）ことが先と同様に示されており、従って、これは図８に示したデータを裏付けるものである。転写物ＡＳＮ１−ＳおよびＡＳＮ５−Ｓは、異なるバーレー登録品種の葉において、キュアリング処理の初期段階の間に連続して堅調に発現される。図９Ｂには、Ｎ．トメトシフォルミス（Ｎ．  ｔｏｍｅｎｔｏｓｉｆｏｒｍｉｓ）とＮ．シルヴェストリス（Ｎ．  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）とに由来する二つのＡＳＮ３コピーの両方が、キュアリング処理の間に誘導されず、それにより、ＡｔＡＳＮ２に類似したこれらの二つのコピーは（図６を参照）、栄養植物体の組織にアスパラギンの生理学的プールを維持するためのより基本的な機能を有する可能性が高いことが間接的に確認される。
【誤訳訂正５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０８】
実施例３−ＡＳＮ１およびＡＳＮ５のＲＮＡｉ  ＴＮ９０ｅ３系統
バーレーたばこ植物体におけるＡＳＮ１−Ｓ／ＡＳＮ１−ＴコピーおよびＡＳＮ５−Ｓ／ＡＳＮ５−Ｔコピーのサイレンシングを調べて、それがキュアリング処理済みバーレー葉におけるアスパラギン低減に寄与するかを判定する。特定のＤＮＡ断片を、強力な構成的ＭＭＶ（ミラビリスモザイクウイルス）プロモーターまたは老化プロモーターＥ４（アスパラギンシンテターゼ）の間にクローニングする。ＡＳＮ遺伝子断片は、ＭＭＶまたはＥ４と、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓのノパリン合成酵素遺伝子の３’ＮＯＳターミネータ配列との間に隣接する（Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ−Ｐｌａｎｔ，  ３９  ５９５  ６０４）。この研究で使用した構築物の略図を図２２に示す。バーレーたばこ系統ＴＮ９０ｅ４ｅ５ｅ１０（Ｚｙｖｅｒｔ）を、標準アグロバクテリウム媒介形質転換プロトコルを使用して、五つの各構築物で個別に形質転換する。ＴＮ９０ｅ４ｅ５ｅ１０（Ｚｙｖｅｒｔ）は、ノルニコチン生成を抑制するために、たばこの主要アスパラギンシンテターゼ遺伝子であるＣＹＰ８２Ｅ４、ＣＹＰ８２Ｅ５ｖ２、およびＣＹＰ８２Ｅ１０（Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）においてノックアウト変異を含む、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）変異誘発させたバーレー集団からの選抜を表す。こうしたバックグラウンド系統を用いることで、今後得られるＴＳＮＡデータを解釈する際に、複雑化の可能性を回避することができる。
【誤訳訂正５８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１０】
三つの独立した形質転換事象を、Ｔ０のＡＳＮ１−ＲＮＡｉ植物体およびＡＳＮ５−ＲＮＡｉ植物体において、ＡＳＮ１転写物およびＡＳＮ５転写物のレベルに基づいて選択する。ＡＳＮ１−ＲＮＡｉ植物体は、ＭＭＶプロモーターまたはＥ４プロモーターのいずれかの制御下、ＡＳＮ１−ＴコピーとＡＳＮ１−Ｓコピーの両方をサイレンシングするように生成され、ＡＳＮ５−ＲＮＡｉ植物体は、ＭＭＶプロモーターまたはＥ４プロモーターのいずれかの制御下、ＡＳＮ５−ＴコピーとＡＳＮ５−Ｓコピーの両方をサイレンシングするように生成される。１５個の植物体を、各形質転換事象に対してカナマイシンに基づいて選択し、温室で栽培する。成熟すると、各植物体から中間下部位置で四つの葉を採取し、７週間空気キュアリング処理を行う。
【誤訳訂正５９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１２】
アスパラギンは、キュアリング処理済みの葉身で測定する。黄変段階の間に３日間キュアリング処理を行った後、葉身の穿孔を抽出し、ＲＮＡを各植物体から単離し、ｑＰＣＲを行う。図１１Ａでは、ＭＭＶプロモーターとＥ４プロモーターとの両方の制御下、ＡＳＮ１ＲＮＡｉ遺伝子断片が、キュアリング処理済みの葉試料におけるアスパラギンのレベルに影響を及ぼし、アスパラギンの量は、それぞれの形質転換事象で異なることが示されている。並行して栽培したバックグラウンド植物体のＴＮ９０ｅ４ｅ５ｅ１０（Ｚｙｖｅｒｔ）と比較して、Ｅ２８４−４はアスパラギンの２４％低減を示す一方、Ｅ２８４−６はアスパラギンの８９％低減を示した。ＭＭＶまたはＥ４の両プロモーターに関して、アスパラギン含有量は、３日間のキュアリング処理後に測定されたＡＳＮ１ＲＮＡのレベルと相関し（図１１Ｂ）、これは、アスパラギンがキュアリング処理の間に合成され、ＡＳＮ１−Ｔコピーおよび／またはＡＳＮ１−Ｓコピーがキュアリング処理の初期段階の間にアスパラギン生成に関与していることを裏付けるものである。ＭＭＶなどの構成的プロモーターおよびＥ４などの老化プロモーターの両方が、ＡＳＮ１をサイレンシングする活性がある。Ｅ４プロモーターの効率から、ＡＳＮ１遺伝子の活性が主にあるのは、恐らくソース葉から種子へ窒素を再分配するために、キュアリング処理済みの葉においてアスパラギンを生成させる老化（黄変）の間であることが証明される。３日間のキュアリング処理の後、転写分析と並行してアスパラギンも測定され、六つの評価系統について同様のアスパラギン低減プロファイルを既に示したが、このアミノ酸のうちの約三分の一がこのキュアリング処理期間の後に合成されており（対照ＴＮ９０ｅ４ｅ５ｅ１０（Ｚｙｖｅｒｔ）において１６．４ｍｇ／ｇ、データ非表示）、アスパラギンのピークは、葉収穫の後の９日〜１０日間空気キュアリング処理後に最大となる（図２を参照）。
【誤訳訂正６０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１４】
従って、同一試料で、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびニコチンの量も同様に分析した。アスパラギンの大幅低減を呈示した試料（すなわち、Ｅ２８１−６およびＥ２８２−１）において、Ｇｌｎの随伴的増加が見られるが、逆に、アスパラギンがあまり低減しなかった試料（すなわちＥ２８２−７）においては、少ないＧｌｎ量である（図１２Ａ）。Ｇｌｎとアスパラギンの両方について、ＡＳＮ１遺伝子をサイレンシングすることから生じるアミノ酸バランスは、キュアリング処理済みの葉内で対照的な方向に調整されることになる。同様の影響は、ＡｓｐおよびＧｌｕにも見られるが、Ｇｌｎよりも顕著ではない。同様のＧｌｎプロファイルを示す全ての形質転換系統において、ＡｓｐとＧｌｕとの両方が増加（約１．５〜３倍）している（ただし、Ｅ２８２−７のＡｓｐは除く）。アスパラギンシンテターゼ活性に鑑みて（図３を参照）、Ｇｌｕの増加を予想していなかった。
【誤訳訂正６１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１６】
同様の実験が行われて、ＲＮＡｉ形質転換系統を用いてＡＳＮ５−ＳとＡＳＮ５−Ｔとをサイレンシングする。示したデータによると、アスパラギンは、ＡＳＮ５ＲＮＡｉ断片が構成的プロモーターＭＭＶの制御下で発現する場合に、特に二つの系統で効率的に低減されたが、Ｅ４プロモーターの制御下では、低減されないか、またはわずかに低減されるのみである（図１３Ａ）。興味深いことに、このデータは、３日間のキュアリング処理後のｑＰＣＲにより概算されたＡＳＮ５ｍＲＮＡのレベルと部分的にのみ相関している（図１３Ｂ）。第一に、Ｅ４プロモーター制御下の形質転換事象では、ＭＭＶの制御下よりも多くのＡＳＮ５ｍＲＮＡが示され、これは、ＡＳＮ５のサイレンシングに対して、Ｅ４プロモーターがＭＭＶプロモーターよりも効果的ではないことを明らかにし、可能性として、ＡＳＮ５タンパク質合成プログラムが、葉収穫後、ＡＳＮ１タンパク質の生成よりも迅速かつ早期に動き出すことを示している（図７）。特定の系統（例えばＥ３０３−１４とＥ３０３−１６、またはＥ３０５−５とＥ３０５−１５とを比較した場合）では、アスパラギンの割合はｍＲＮＡのレベルと相関が見られない。このことは、キュアリング処理済みの葉には存在しないか、またはわずかに存在するのみであるが（図９）、むしろ花成組織内に存在する（図１０）活性に、ＡＳＮ５−Ｔコピーが関与しているという事実による可能性がある。３日間のキュアリング処理の後、アスパラギンも測定され、六つの系統でＡＳＮ１形質転換系統（上述本文参照）と同様のアスパラギンの低減プロファイルが見られている。
【誤訳訂正６２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１９】
結論として、ＡＳＮ１とＡＳＮ５の遺伝子ファミリーの両方が、対応するＭＭＶのＲＮＡｉ系統でサイレンシングされ、それにより、ＡＳＮ１とＡＳＮ５の遺伝子コピーの両方が、バーレーキュアリング処理の間のアスパラギン合成に関与していることを示している。
【誤訳訂正６３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２０】
ＡＳＮ１とＡＳＮ５の転写ファミリーの両方が、ＭＭＶプロモーター下で制御された対応するＡＳＮ１−ＲＮＡｉ植物体およびＡＳＮ５−ＲＮＡｉ植物体においてサイレンシングされるか否かを判定するために、交差ｑＰＣＲ（Ｃｒｏｓｓ−ｑＰＣＲ）分析を行う。表２のデータには、ＡＳＮ５−ＲＮＡｉ植物体においてＡＳＮ１とＡＳＮ５の転写物の両方がサイレンシングされているが、ＡＳＮ１−ＲＮＡｉ植物体においては、特に系統ＡＳＮ１−１およびＡＳＮ１−２についてあまり明確ではないことが示されている。この測定結果は、ＡＳＮ５とＡＳＮ１（Ｓ＆Ｔ）の遺伝子の両方が非常に類似しており、同一の遺伝子クラスターに属するという事実に起因すると考えられる（図６）。一方で、これは、キュアリング処理済みの葉におけるアスパラギン合成を改変するには、ＡＳＮ１遺伝子クラスターを不活性化するだけで十分であることも示している。
【誤訳訂正６４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２１】
バーレーキュアリング処理の間のＣＹＰ８２Ｅ４発現分析により、Ｅ４プロモーターは、４８時間のキュアリング処理の後のみに完全に活性を有するようになることが示され、これにより、Ｅ４プロモーター制御下のすべての導入遺伝子構築物または遺伝子断片は、初期のキュアリング処理段階（４８時間超）の後半に発現することが示唆される。従って、図１１および図１３に示すデータに基づけば、ＡＳＮ１サイレンシングはＭＭＶプロモーターおよびＥ４プロモーターによって同じ程度に駆動されうるため、ＡＳＮ１−ＴおよびＡＳＮ１−Ｓは、キュアリング処理工程の初期段階のうちの後半に活性化されていることが予測される。Ｅ４プロモーターは、ＡＳＮ５のサイレンシングを弱く制御するが、これは、ＡＳＮ１遺伝子が、誘導された葉の老化プログラムに関連する事象の配列によって制御されることを示唆するものである。
【誤訳訂正６５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２３】
突然変異（変異体）を保有するか、または選択遺伝子（野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔ）において非変異である子孫種子を、Ｍ２親から遺伝子型同定し、識別し、圃場に植え付ける。各選択変異体の１０個の植物体を、個々のプロットにて、対応する野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔの１０個の植物体の脇で栽培して、圃場変動（すなわち、不均質な硝酸塩施肥および土壌変動）の影響を受けないようにする。四つの中間下部の茎の葉を収穫時に採取し、空気キュアリング処理室に２か月間糸で吊した。葉を剥ぎ、葉身を粉砕して細粉にする。アスパラギン（ｍｇ／ｇ）を各葉のプールにおいて測定する。いくらかの変動がプロット毎の変動に起因して観察されうるが、ＡＳＮ１−Ｓ＿Ｗ１５６＊、ＡＳＮ１−Ｔ＿Ｗ１５６＊、およびＡＳＮ５−Ｓ＿Ｑ６６＊には、対応する野生型分離個体（ｓｅｇｒｅｇａｎｔ）と比べてアスパラギンが低減する顕著な傾向が見られる一方、ＡＳＮ５−Ｔ＿Ｇ５９Ｄには見られない（表３を参照）。
【誤訳訂正６６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２４】
図１７には、アスパラギンの低減率を示す。最も高い低減率はＡＳＮ１−Ｔ＿Ｗ１５６＊（８３％）で見られ、次いでＡＳＮ５−Ｓ＿Ｑ６６＊（４４％）、ＡＳＮ１−Ｓ＿Ｗ１５６＊（１７％）の順となる。系統ＡＳＮ５−Ｔ＿Ｇ５９Ｄでは、アスパラギンのわずかな増加が見られた。ＡＳＮ変異体におけるアスパラギンの含有量は、キュアリング処理中の遺伝子活性化のレベルと相関がある。実際、ＡＳＮ１−Ｔは、４８時間および６０時間のキュアリング処理の後のＡＳＮ５−ＳやＡＳＮ１−Ｓよりも、キュアリング処理の間に高発現する（図８および図９を参照）。しかしながら、この測定結果には注意が必要であり、その理由は、ＡＳＮ１−Ｔ＿Ｗ１５６＊のデータは圃場における一つのプロットのみから得ており、この圃場の実験において、ＡＳＮ１−Ｔ＿Ｗ１５６＊と該系統の野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔ植物体の両方が、バイオマスの大幅な減少を呈したからである（図１８を参照）。
【誤訳訂正６７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２６】
第二の実地試験を、ＡＳＮ１−Ｔ（１０個のｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔ植物体と１０個の停止変異体の植物体とを含む６プロット）、ＡＳＮ１−Ｓ（１０個のｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔ植物体と１０個の停止変異体の植物体とを含む６プロット）、およびＡＳＮ５−Ｓ（１０個のｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔ植物体と１０個の停止変異体の植物体とを含む９プロット）について類似の停止変異体を用いて行う。葉（中間部の茎位置の六つの葉）のキュアリング処理後、ＡＳＮ１−Ｔ停止変異体の植物体は、葉身においてｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔと比較して１９％のアスパラギン低減を示し、ＡＳＮ１−Ｓ停止変異体の植物体は、葉身においてｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔと比較して２３％のアスパラギン低減を示し、ＡＳＮ５−Ｓ停止変異体の植物体は、葉身においてｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔと比較して約１０％のアスパラギン低減を示している。これらの結果は、表３に示した先の結果を追認し、選択した停止変異体が、キュアリング処理済みの葉においてアスパラギンを低減させるのに効果的であることを証明している。ＡＳＮ−ＲＮＡｉ系統のアスパラギンに関するデータを比較すると、三つの停止変異体であるＡＳＮ１−Ｔ＿Ｗ１５６＊と、ＡＳＮ１−Ｓ＿Ｗ１５６＊と、ＡＳＮ５−Ｓ＿Ｑ６６＊との組み合わせは、キュアリング処理済みの葉の葉身において、同様のアスパラギンの低減をもたらすはずである。
【誤訳訂正６８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２７】
これらのデータから、ＡＳＮ１−Ｓ、ＡＳＮ１−Ｔ、およびＡＳＮ５−Ｓは、バーレーたばこの葉の空気キュアリング処理中におけるアスパラギン形成に関与すると結論付けられる。
【誤訳訂正６９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２９】
アクリルアミドは、喫煙者の生物学的マーカー（Ｎａｕｆａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）である。また、アクリルアミドの生成は、可燃性紙巻たばこの煙で分析される（図２０）。可燃性紙巻たばこは、以下の手順を用いて、ＡＳＮ１−ＲＮＡｉ植物体のキュアリング処理済みの中間部の茎の葉から調製される。たばこ葉を、２２℃にて６０％周囲湿度で調整する。中央脈を取り外した後に、カットフィラーを葉身から調製する。紙巻たばこは手製であり、標準の紙巻たばこチューブを用いて電動紙巻たばこインジェクタ機「Ｐｏｗｅｒｍａｔｉｃ  ２」で充填される。紙巻たばこに挿入されるカットフィラーの重量は、１２０  ｍｍ〜１４０ｍｍ水位に相当する引き出し抵抗を得るように変動する（８００  ｍｇ前後）。続いて、各紙巻たばこの堅さ（硬さ）を手で制御する。一組のカットフィラーに対してパラメータが定まると、一連の作製された各紙巻たばこスティック（一試料あたり２００本）に対してそのパラメータが保持される。
【誤訳訂正７０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３０】
対照の植物体では、たばこカットフィラー内のアスパラギン含有量（図２０）は、キャストリーフのブレンド粉末で測定されたアスパラギン含有量に匹敵し（図１９を参照）、図１１で測定された量と比較して約１０％少なかった。こうした差異は、収穫時の葉の茎位置に起因しており、バーレーキュアリング処理後、アスパラギンは上部の茎の葉よりも下部の茎の葉により多くなっている。一方で、野生型植物体と比較した際のＡＳＮ−ＲＮＡｉにおけるアスパラギンの低減は、図１１および図１９に示すデータと類似した。興味深いことに、アクリルアミドの低減効率は、エアロゾル発生物品のエアロゾル（７０％）よりも可燃性紙巻たばこの煙（５７％）の方が低かったが、このことは、燃焼式または可燃式たばこ製品よりも加熱式たばこ製品で、アスパラギンを形成させるメイラード反応の効率が高いことを示している可能性がある。
【誤訳訂正７１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３１】
また、アクリルアミドは、ＡＳＮ１−Ｓ停止変異体由来の葉身で作製されたエアロゾル形成物品からのエアロゾル中でも効率的に低減される（図２１）。しかしながら、この場合、キュアリング処理済みの葉におけるアスパラギン合成への寄与体として唯一であるＡＳＮ１−Ｓの影響が、例えばＡＳＮ１−Ｔと比較して限られているため（図１７に示すデータに基づく）、この低減は限定的である。ＡＳＮ−ＲＮＡｉ形質転換系統およびＡＳＮ突然変異体系統の両方において、キュアリング処理済みの葉身におけるアスパラギンの低減は、それに続く可燃性紙巻たばこの煙中および加熱によって発生するエアロゾル中のアクリルアミドの低減を伴うことが、データにより示されている。言い換えると、ＡＳＮ１とＡＳＮ５の遺伝子コピーをノックアウトすることにより、たばこ基質内のアスパラギンを減少させ、かつ可燃性紙巻たばこの煙中および加熱によって発生するエアロゾル中のアクリルアミドの形成を低減させる。
【誤訳訂正７２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３３】
さらなる態様は、アスパラギンシンテターゼの発現または活性を低減させた、突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分であって、該アスパラギンシンテターゼが、（ｉ）配列番号１、もしくは配列番号３、もしくは配列番号５、もしくは配列番号７に対して少なくとも７２％の配列同一性を持つ配列を含むか、それから成るか、もしくはそれから実質的に成るポリヌクレオチド配列；または（ｉｉ）（ｉ）に記載したポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチド；または（ｉｉｉ）配列番号２、もしくは配列番号４、もしくは配列番号６、もしくは配列番号８に対して少なくとも７８％の配列同一性を持つポリペプチドを、含むか、それから成るか、もしくはそれから実質的に成り；（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）に記載した該アスパラギンシンテターゼの発現または活性が、対照植物体と比較して低減された、該突然変異体であるか、非天然であるか、もしくは遺伝子組み換えの植物体、またはその部分に関する。
さらなる態様は、植物材料であって、対照植物体由来の植物材料と比べて、アスパラギンのレベルが低減し、かつ該植物材料由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが低減した該植物材料の調製方法であって、該方法が、（ａ）アスパラギンシンテターゼをコードし、かつ配列番号１、または配列番号３、または配列番号５、または配列番号７に対して少なくとも７２％の配列同一性を持つ配列を、含むか、それから成るか、またはそれから実質的に成るポリヌクレオチドを含む、植物体またはその部分を提供する工程と；（ｂ）該植物体またはその部分において、ポリヌクレオチドの発現、またはそれによってコードされるタンパク質の活性を低減させる工程と；（ｃ）該植物体またはその部分由来の植物材料を収穫する工程と；（ｄ）該植物材料を乾燥またはキュアリング処理する工程と；（ｅ）任意選択的に、該植物体もしくはその部分におけるアスパラギンのレベルを測定する、および／または該植物体もしくはその部分由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルを測定する工程と；（ｆ）キュアリング処理または乾燥済みの植物材料であって、アスパラギンのレベルが低減し、かつ該植物材料由来のエアロゾル中のアクリルアミドのレベルが低減した、該キュアリング処理または乾燥済みの植物材料を取得する工程と、を含み、好適には、ニコチンのレベルが、対照植物体におけるニコチンのレベルと実質的に同じであり；好適には、グルタミン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸が、対照植物体のキュアリング処理または乾燥済みの葉と比べてより多く形成される、該方法に関する。
本明細書で引用または記述されたあらゆる刊行物は、本出願の出願日以前に開示された関連情報を提供する。本明細書における記載は、発明者がこのような開示に先だって権利を与えられないことの承認としては解釈されない。上記の明細書で言及したすべての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。発明についての様々な改良や変形が、本発明の範囲および精神を逸脱することなく、当業者にとって明らかとなる。本発明は特定の好ましい実施形態に関連して記述してきたが、当然のことながら、本発明は主張の通り、こうした特定の実施形態に不当に限定されるべきではない。実際に、本発明を実施するための記述された方法について、細胞生物学、分子生物学および植物体生物学の分野または関連する分野の当業者にとって明らかである様々な改良は、以下の特許請求の範囲の範囲内に収まるものであることが意図される。
【誤訳訂正７３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３３６】
表３  以下の四つのＡＳＮ変異体における、下部／中間部の茎位置で収穫された空気キュアリング処理済みの葉中のアスパラギン（ｍｇ／ｇ）分析：ＡＳＮ１−Ｓ＿Ｗ１５６＊およびその対応する野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔのＡＳＮ１−Ｓ＿ＷＴ＊、ＡＳＮ１−Ｔ＿Ｗ１５６＊  およびその対応する野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔのＡＳＮ１−Ｔ＿ＷＴ＊、ＡＳＮ５−Ｓ＿Ｑ６６＊およびその対応する野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔのＡＳＮ５−Ｓ＿ＷＴ＊、ならびにＡＳＮ５−Ｔ＿Ｇ５９Ｄおよびその対応する野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔのＡＳＮ５−Ｔ＿ＷＴ＊。変異体と野生型ｏｕｔ−ｓｅｇｒｅｇａｎｔの各々は、いかなる望ましくない圃場の影響（すなわち硝酸塩および土壌の変動）をも受けないように、個々のプロットで隣り合わせに栽培された。
【表４】
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