【手続補正書】
【提出日】平成31年3月5日(2019.3.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
低酸素下培養間葉幹細胞（ＭＳＣ）を含む、筋骨格障害処置のための組成物であって、低酸素下培養ＭＳＣが酸素濃度１０％未満の低酸素状態でＭＳＣを培養することによって得られたものである、組成物。
【請求項２】
筋骨格障害が、捻挫、靱帯、腱、筋肉および軟骨の捻れおよび裂傷、腱炎、腱鞘炎、線維筋痛症、骨関節炎、関節リウマチ、リウマチ性多発筋痛症、滑液包炎、急性および慢性背部痛、骨粗鬆症、手根管症候群、ドゥケルヴァン病、ばね指、テニス肘、回旋筋腱板、神経節嚢胞、骨形成不全症、ディシェンヌ症候群（Duschennes）、ハーラー症候群ならびにハンター症候群からなる群から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
筋骨格障害が骨関節炎である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
ＭＳＣが自己または非自己ＭＳＣである、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
低酸素下培養ＭＳＣが、酸素濃度０％から７％の範囲の低酸素状態下でＭＳＣを培養することによって得られる、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
低酸素下培養ＭＳＣが、酸素濃度１％から７％の範囲の低酸素状態下で自己または非自己ＭＳＣを培養することによって得られる、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
低酸素下培養ＭＳＣが、酸素濃度１％から３％の範囲の低酸素状態下で自己または非自己ＭＳＣを培養することによって得られる、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
ＭＳＣが非自己ＭＳＣである、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
低酸素下培養ＭＳＣが、酸素濃度およそ１％下でＭＳＣを培養することによって得られる、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
低酸素下培養ＭＳＣが以下の工程の方法によって得られる、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物：
（ａ）培地中にＭＳＣを含む哺乳類細胞懸濁液を調製する；
（ｂ）培養皿で、低酸素状態下で哺乳類細胞懸濁液を培養する；
（ｃ）培地を交換し、上記の低酸素状態下で細胞を最低でも１代継代培養する；
（ｄ）（ｃ）の工程で得られるＭＳＣを回収する。
【請求項１１】
ＭＳＣがおよそ９日またはそれ以上の間、低酸素状態下で培養される、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
直接移植、静脈内注射、筋肉内注射、骨内注射、腹腔内注射、皮内注射、皮下注射または関節内注射により投与される、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
関節内注射により投与される、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
直接移植により投与される、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
注射用の媒体を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
注射用の媒体が、生体高分子、天然高分子による生体模倣複合体および合成高分子からなる群から選択される、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
天然高分子による生体模倣複合体が、ヒアルロン酸、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、アルギン酸またはキトサンである、請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
合成高分子が、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）または高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）などのポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリクロロトリフルオロエチレン（ＰＣＴＦＥ）、ポリアクリル酸、ポリアミド、ポリエステル、ポリウレタン、多硫化物または酸素、硫黄および窒素からなる群から選択された元素を含むポリカーボネイトである、請求項１６記載の組成物。
【請求項１９】
注射用の媒体が、コラーゲン、フィブリン糊またはヒアルロン酸である、請求項１５記載の組成物。
【請求項２０】
注射用の媒体がヒアルロン酸である、請求項１９記載の組成物。
【請求項２１】
ＭＳＣが骨髄ＭＳＣである、請求項１〜２０のいずれかに記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明の一以上の態様において、低酸素下培養ＭＳＣを含む組成物は、直接移植、静脈内注射、筋肉内注射、骨内注射、腹腔内注射、皮内注射、皮下注射または関節内注射により投与される。一つの特徴的な態様において、低酸素下培養ＭＳＣを含む組成物は、関節内注射または直接移植により、投与される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本明細書において、用語「筋骨格障害」は骨、関節、靱帯、筋肉、腱、神経、腱、軟骨ならびに肢、首および背中を支える構造体の障害や痛みを指す。そしてこれは、痛みを生じ、通常の活動を損なう変性疾患および炎症状態である。具体的な筋骨格障害の例として、骨、関節、靱帯、筋肉、神経、腱、軟骨ならびに肢、首および背中を支える構造体に関する全ての疾患を含む。筋骨格障害は、捻挫、靱帯、腱、筋肉および軟骨の捻れおよび裂傷、腱炎、腱鞘炎、線維筋痛症、骨関節炎、関節リウマチ、リウマチ性多発筋痛症、滑液包炎、急性および慢性背部痛、骨粗鬆症、手根管症候群、ドゥケルヴァン病、ばね指、テニス肘、回旋筋腱板、神経節嚢胞、骨形成不全症、ディシェンヌ症候群(Duschennes)、ハーラー症候群、ハンター症候群ならびにこれらの合併症からなる群から選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
本発明において、移植用細胞は低酸素下培養ＭＳＣで作製されている。本発明の一態様において、低酸素下培養ＭＳＣは、以下の工程の方法によって得られる：
（ａ）培地中にＭＳＣを含む哺乳類細胞の懸濁液を調製する；
（ｂ）培養皿で、０％から７％Ｏ２による低酸素状態下、好ましくは１％〜７％Ｏ２、より好ましくは１％〜３％Ｏ２、最も好ましくはおよそ１％Ｏ２で、哺乳類細胞の懸濁液を培養する；
（ｃ）培地を交換し、上記の低酸素状態下で細胞を最低でも１代、好ましくは２代継代培養する；
（ｄ）（ｃ）の工程で得られるＭＳＣを回収する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
本発明において、移植用細胞は低酸素下培養ＭＳＣから作製されるが、これらはさらに、欠陥部にＭＳＣを運ぶのに適した、注射用の媒体を含み得る。そしてこの媒体は、生体高分子、天然高分子による生体模倣複合体および合成高分子からなる群から選択される。天然高分子による生体模倣複合体は、ヒアルロン酸、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、アルギン酸、キトサンなどでもよい。合成高分子は、低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）や高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）などのポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリクロロトリフルオロエチレン（ＰＣＴＦＥ）、ポリアクリル酸、ポリアミド、ポリエステル、ポリウレタン、多硫化物および酸素、硫黄および窒素からなる群から選ばれた元素を含むポリカーボネイトなどでもよい。本発明の一以上の態様において、注射用の媒体はコラーゲン、フィブリン糊またはヒアルロン酸である。一つの特徴的な態様において、注射用の媒体はヒアルロン酸である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
上記の例によって、低酸素下培養ＭＳＣを含む組成物の投与を通して、関節面から軟骨の剥離、骨棘の形成、軟骨下骨の露出が減少したことが証明された。対象の軟骨内のプロテオグリカンの減少もまた改善された。さらに、低酸素下培養ＭＳＣを含む構成物の投与を通して、対象の軟骨内のＩＩ型コラーゲンの生成が増加し、対象の軟骨内のＸ型コラーゲンの生成が抑制された。