【手続補正書】
【提出日】令和1年11月6日(2019.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）またはストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）を培養するための培地であって、アミノ酸の総量が１Ｌの細胞培養液に対して少なくとも６０ｍＭであり、０．１ｇ／Ｌ〜２５ｇ／Ｌのカリウム塩を含み、かつ炭素供給源を含む、多糖を生成する細菌細胞を培養する培地。
【請求項２】
炭素供給源が、グルコース、デキストロース、マンニトール、ラクトース、スクロース、フルクトース、ガラクトース、ラフィノース、キシロースおよびマンノースからなる群から選択される、請求項１に記載の培地。
【請求項３】
炭素供給源の濃度が、２５ｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌの間である、請求項１または２に記載の培地。
【請求項４】
炭素供給源の濃度が、５０ｇ／Ｌ〜９０ｇ／Ｌの間である、請求項３に記載の培地。
【請求項５】
リン酸塩を含有する成分をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の培地。
【請求項６】
リン酸塩を含有する成分が、Ｎａ２ＨＰＯ４、Ｋ２ＨＰＯ４またはＫＨ２ＰＯ４である、請求項５に記載の培地。
【請求項７】
少なくとも１種のビタミン、ヌクレオシドまたは無機塩をさらに含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の培地。
【請求項８】
１Ｌの細胞培養液に対して１．５ｍＭ〜６０．０ｍＭの間の総濃度のグリシンを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の培地。
【請求項９】
グリシンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して５．０ｍＭ〜１５．０ｍＭの間である、請求項８に記載の培地。
【請求項１０】
グリシンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して７．５ｍＭである、請求項９に記載の培地。
【請求項１１】
１Ｌの細胞培養液に対して１．０ｍＭ〜３０．０ｍＭの間の総濃度のアルギニンを含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の培地。
【請求項１２】
アルギニンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して１．０ｍＭ〜２０．０ｍＭの間である、請求項１１に記載の培地。
【請求項１３】
１Ｌの細胞培養液に対して０．１ｍＭ〜５．０ｍＭの間の総濃度のシステインを含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の培地。
【請求項１４】
システインの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して０．１ｍＭ〜３．５ｍＭの間である、請求項１３に記載の培地。
【請求項１５】
１Ｌの細胞培養液に対して５．０ｍＭ〜７５．０ｍＭの間の総濃度のセリンを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の培地。
【請求項１６】
セリンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して５．０ｍＭ〜１５．０ｍＭの間である、請求項１５に記載の培地。
【請求項１７】
セリンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して７．５ｍＭまたは１０ｍＭである、請求項１６に記載の培地。
【請求項１８】
１Ｌの細胞培養液に対して１．０ｍＭ〜３０．０ｍＭの間の総濃度のグルタミンを含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の培地。
【請求項１９】
グルタミンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して１．０ｍＭ〜２０．０ｍＭの間である、請求項１８に記載の培地。
【請求項２０】
１Ｌの細胞培養液に対して０．１ｍＭ〜５．０ｍＭの間の総濃度のチロシンを含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の培地。
【請求項２１】
チロシンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して１．０ｍＭ〜３．５ｍＭの間である、請求項２０に記載の培地。
【請求項２２】
１Ｌの細胞培養液に対して５．０ｍＭ〜５０．０ｍＭの間の総濃度のアスパラギンを含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の培地。
【請求項２３】
アスパラギンの総濃度が、１Ｌの細胞培養液に対して１０．０ｍＭ〜３０．０ｍＭの間である、請求項２２に記載の培地。
【請求項２４】
カリウム塩が、塩化カリウムまたは硫酸カリウムである、請求項１から２３のいずれか一項に記載の培地。
【請求項２５】
カリウム塩の総濃度が、０．２ｇ／Ｌ〜１．２５ｇ／Ｌの間である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の培地。
【請求項２６】
炭素供給源の総濃度が、２５ｇ／Ｌ〜８０ｇ／Ｌの間である、請求項１から２５のいずれか一項に記載の培地。
【請求項２７】
炭酸水素ナトリウムをさらに含む、請求項１から２６のいずれか一項に記載の培地。
【請求項２８】
０．１ｇ／Ｌ〜２０ｇ／Ｌの間の濃度の炭酸水素ナトリウムを含む、請求項２７に記載の培地。
【請求項２９】
炭酸水素ナトリウムの濃度が、０．５ｇ／Ｌ〜１．０ｇ／Ｌの間である、請求項２８に記載の培地。
【請求項３０】
酵母抽出物をさらに含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の培地。
【請求項３１】
酵母抽出物が、酵母自己溶解物、限外ろ過された酵母抽出物および合成酵母抽出物からなる群から選択される、請求項３０に記載の培地。
【請求項３２】
酵母抽出物の濃度が、１ｇ／Ｌ〜５０ｇ／Ｌの間である、請求項３０または３１に記載の培地。
【請求項３３】
酵母抽出物の濃度が、５ｇ／Ｌ〜２５ｇ／Ｌの間である、請求項３２に記載の培地。
【請求項３４】
１Ｌの細胞培養液に対して少なくとも５０ｍＭのアミノ酸、５．０ｍＭ〜１５．０ｍＭの間のグリシン、０．２ｇ／Ｌ〜１．２５ｇ／Ｌの間のカリウム塩、２５ｇ／Ｌ〜８０ｇ／Ｌの間の炭素供給源、および５ｇ／Ｌ〜２５ｇ／Ｌの間の酵母抽出物を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の培地。
【請求項３５】
１Ｌの細胞培養液に対して少なくとも６０ｍＭのアミノ酸、７．５ｍＭのグリシン、０．９ｇ／Ｌの塩化カリウム、５０ｇ／Ｌのグルコース、および１０ｇ／Ｌの限外ろ過された酵母抽出物を含む、請求項３４に記載の培地。
【請求項３６】
多糖を生成する、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）から選択される細菌を生育させる方法であって、ａ）請求項１から３５のいずれか一項に記載の培地をバイオリアクターに添加するステップと、ｂ）培地に、多糖を生成する細菌を播種するステップと、ｃ）細菌を、発酵により生育させるステップとを含み、前記生育が、培地への栄養素の一定速度での添加を含む、方法。
【請求項３７】
栄養素が、炭素供給源である、請求項３６に記載の生育方法。
【請求項３８】
炭素供給源が、グルコースである、請求項３７に記載の生育方法。
【請求項３９】
生育させた細菌が、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌの多糖の濃度を示す、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の生育方法。
【請求項４０】
多糖を生成する細菌を生育させる方法であって、ａ）請求項１から３５のいずれか一項に記載の培地をバイオリアクターに添加するステップと、ｂ）培地に、多糖を生成する細菌を播種するステップと、ｃ）細菌を、灌流により生育させるステップとを含み、生育が、（ｉ）培養物から、使用済みの培地を除去すること、（ｉｉ）新鮮な請求項１から３５のいずれか一項に記載の培地を添加すること、および（ｉｉｉ）細菌を保持することを含む、方法。
【請求項４１】
灌流速度が、０．０７ＶＶＨ〜２．００ＶＶＨの間である、請求項４０に記載の生育方法。
【請求項４２】
灌流速度が、０．６７ＶＶＨ〜１．３３ＶＶＨの間である、請求項４１に記載の生育方法。
【請求項４３】
灌流の持続期間が、１時間〜１５時間の間である、請求項４０から４２のいずれか一項に記載の生育方法。
【請求項４４】
灌流の持続期間が、１時間〜１０時間の間である、請求項４３に記載の生育方法。
【請求項４５】
生育させた細菌の細胞の成長が、回分発酵システムにおける細胞の成長よりも少なくとも２倍大きい、請求項４０から４４のいずれか一項に記載の生育方法。
【請求項４６】
生育させた細菌の、６００ｎｍにおける光学密度（ＯＤ）により決定される細胞密度が、少なくとも２０．０の細胞密度に達している、請求項４０から４５のいずれか一項に記載の生育方法。