【手続補正書】
【提出日】令和1年5月23日(2019.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼと
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ゲノム内のＥ６遺伝子またはＥ７遺伝子内の第１の標的部位を切断するために前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを標的に向かわせるガイドＲＮＡと
をコードする核酸を含む組成物。
【請求項２】
ヒト患者への送達のためにさらにパッケージされている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
局所送達のためにさらにパッケージされている、請求項１〜２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４】
前記ガイドＲＮＡが、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有さない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、およびプラスミドから選択されるベクターをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、マイクロバブル、細胞透過性ペプチド、およびリポスフェアから選択されるベクターをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が、前記ＨＰＶゲノム内のＥ６遺伝子またはＥ７遺伝子内の第２の標的部位を切断するために前記Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを標的に向かわせる第２のガイドＲＮＡをさらに含み、前記第２の標的部位が、前記第１の標的部位と同じではない、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ＨＰＶ感染を処置する方法において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
ＨＰＶ感染細胞を死滅させる方法において使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＨＰＶ感染細胞がケラチノサイトである、請求項９に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
前記ＨＰＶがＨＰＶ−１６である、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
リボ核タンパク質（ＲＮＰ）を含む組成物であって、前記ＲＮＰが、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ、およびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）のウイルス核酸内の標的部位に相補的なガイドＲＮＡを含む、組成物。
【請求項１３】
ＲＮＰを包み込むリポソームをさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記標的部位が、Ｅ６またはＥ７遺伝子内に存在する、請求項１２〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＨＰＶがＨＰＶ−１６である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＨＰＶがＨＰＶ−１８である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
前記Ｃａｓ９ヌクレアーゼが少なくとも１つの核局在化シグナルをさらに含む、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ガイドＲＮＡが、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）である、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
第２のＲＮＰをさらに含み、前記第２のＲＮＰは、第２のＣａｓ９ヌクレアーゼおよび前記ＨＰＶのウイルス核酸内の異なる標的部位に相補的な第２のガイドＲＮＡを含む、請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記第２のＲＮＰを包み込む第２のリポソームをさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
請求項１２〜２０のいずれか一項に記載の組成物、および医薬的に許容される希釈剤、アジュバントまたは担体を含む、医薬製剤。
【請求項２２】
前記医薬製剤が、局所投与のために製剤化されている、請求項２１に記載の医薬製剤。
【請求項２３】
前記ＲＮＰが、リポソーム内に包まれている、請求項２２に記載の医薬製剤。
【請求項２４】
ＨＰＶ感染を処置するかまたはＨＰＶ感染細胞を死滅させる方法において使用するための、請求項１２〜２３のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
【請求項２５】
請求項２２に記載の医薬製剤が投与される、請求項２４に記載の使用のための組成物または医薬製剤。
【請求項２６】
前記ＨＰＶ感染細胞が、ケラチノサイトである、請求項２４〜２５のいずれか一項に記載の使用のための組成物または医薬製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
好ましい実施形態では、宿主細胞はケラチノサイトであり、ベクターは、ケラチノサイト内の標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび標的指向性配列の発現を促進する特徴を含む。発現を促進する特徴は、他のタイプの宿主細胞よりも、ケラチノサイト内の標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび標的指向性配列の発現を選択的に好むプロモーター−エンハンサーカセットであり得る。ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、またはメガヌクレアーゼ等の任意の好適なヌクレアーゼを使用することができる。本方法の好ましい態様では、ヌクレアーゼはＣａｓ９エンドヌクレアーゼであり、標的指向性配列はガイドＲＮＡを含む。標的指向性配列は、Ｅ６遺伝子、Ｅ７遺伝子、その他、またはそれらの組合せ等の、ＨＰＶゲノム内の特定の遺伝子を切断するためにヌクレアーゼを標的に向かわせてもよく、標的指向性配列は、ヒトゲノム内で７０％超の一致を有していないガイドＲＮＡである。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび前記ヌクレアーゼをＨＰＶゲノムへと標的に向かわせる標的指向性配列をコードするベクターを含む、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染を処置するための組成物。
（項目２）
ベクターが、ケラチノサイト内での前記標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび前記標的指向性配列の発現を促進する特徴を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
発現を促進する前記特徴が、他の型の宿主細胞よりも前記ケラチノサイト内での前記標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび前記標的指向性配列の発現を選択的に好むプロモーター−エンハンサーカセットを含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼからなる群から選択されるヌクレアーゼである、項目２に記載の組成物。
（項目５）
前記ヌクレアーゼがＣａｓ９エンドヌクレアーゼを含み、前記標的指向性配列がガイドＲＮＡを含む、項目２に記載の組成物。
（項目６）
前記標的指向性配列が、前記ＨＰＶゲノム内のＥ６遺伝子を切断するために前記ヌクレアーゼを標的に向かわせる、項目２に記載の組成物。
（項目７）
前記ベクターが、前記ＨＰＶゲノム内のＥ７遺伝子を切断するために前記ヌクレアーゼを標的に向かわせる第２の標的指向性配列をさらに含む、項目６に記載の組成物。
（項目８）
ヒト患者への送達のためにさらにパッケージされる、項目１に記載の組成物。
（項目９）
前記標的指向性配列がガイドＲＮＡであり、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有さない、項目１に記載の組成物。
（項目１０）
前記ベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、プラスミド、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、マイクロバブル、細胞透過性ペプチド、およびリポスフェアからなる群から選択されるベクターを含む、項目１に記載の組成物。
（項目１１）
ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染を処置するための方法であって、
宿主細胞に、標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよびＨＰＶゲノムへと前記ヌクレアーゼを標的に向かわせる標的指向性配列を導入するステップ；ならびに
宿主ゲノム上の遺伝子に干渉することなく、前記宿主細胞内において前記ヌクレアーゼで前記ＨＰＶゲノムを切断するステップ
を含む方法。
（項目１２）
前記標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび前記標的指向性配列が、前記標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび前記標的指向性配列をコードするベクターを使用して導入される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記宿主細胞がケラチノサイトであり、前記ベクターが、前記ケラチノサイト内での前記標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび前記標的指向性配列の発現を促進する特
徴を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
発現を促進する前記特徴が、他の型の宿主細胞よりも前記ケラチノサイト内での前記標的に向かうことが可能なヌクレアーゼおよび前記標的指向性配列の発現を選択的に好むプロモーター−エンハンサーカセットを含む、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記ベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、プラスミド、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属ナノ粒子、ナノロッド、リポソーム、マイクロバブル、細胞透過性ペプチド、およびリポスフェアからなる群から選択されるベクターを含む、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼからなる群から選択されるヌクレアーゼである、項目１１に記載の方法。
（項目１７）
前記ヌクレアーゼがＣａｓ９エンドヌクレアーゼを含み、前記標的指向性配列がガイドＲＮＡを含む、項目１１に記載の方法。
（項目１８）
前記標的指向性配列が、前記ＨＰＶゲノム内のＥ６遺伝子を切断するために前記ヌクレアーゼを標的に向かわせる、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記ベクターが、前記ＨＰＶゲノム内のＥ７遺伝子を切断するために前記ヌクレアーゼを標的に向かわせる第２の標的指向性配列をさらに含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記標的指向性配列がガイドＲＮＡであり、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有さない、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記宿主が生体ヒト患者であり、前記ステップがｉｎ  ｖｉｖｏで行われる、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
ＲＮＡでガイドされるヌクレアーゼ；および
ウイルスのウイルス核酸内の標的部位に相補的な部分を有するＲＮＡ
を含むリボ核タンパク質（ＲＮＰ）を含む組成物。
（項目２３）
前記ＲＮＡでガイドされるヌクレアーゼが、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質およびＣｐｆ１からなる群より選択される、項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
前記ＲＮＰを包み込むリポソームをさらに含む、項目２３に記載の組成物。
（項目２５）
前記ウイルスがヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）である、項目２３に記載の組成物。
（項目２６）
前記標的部位が、前記ＨＰＶのゲノムのＥ６またはＥ７遺伝子内に存在する、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
前記ＲＮＡでガイドされるヌクレアーゼが、核局在化シグナルをさらに含む、項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
少なくとも第２のＲＮＰをさらに含み、前記第２のＲＮＰは、第２のＲＮＡでガイドさ
れるヌクレアーゼおよび第２のＲＮＡを含む、項目２６に記載の組成物。
（項目２９）
前記第２のＲＮＡが、前記ウイルス核酸内の第２の標的部位に相補的な第２の部分を含み、前記第２の標的部位が、前記Ｅ６またはＥ７遺伝子内に存在し、前記標的部位と同じでない、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記ＲＮＰを包み込むリポソームおよび前記第２のＲＮＰを包み込む第２のリポソームをさらに含む、項目２８に記載の組成物。
（項目３１）
前記ＲＮＡでガイドされるヌクレアーゼがＣａｓ９である、項目２８に記載の組成物。
（項目３２）
前記ウイルスに感染した細胞に送達されたときに前記ウイルス核酸を複数の位置で切断する複数のＲＮＰをさらに含む、項目２３に記載の組成物。
（項目３３）
前記複数のＲＮＰを包み込む複数のリポソームをさらに含む、項目３１に記載の組成物。
（項目３４）
前記標的部位に相補的な前記部分が、ヒトゲノム内で６０％超の一致を有さない、項目２２〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３５）
項目２２〜３３のいずれか一項に記載の組成物をｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞または組織に送達するステップ、およびウイルス核酸を前記ＲＮＰで切断するステップを含む、細胞から外来核酸を除去する方法。