【手続補正書】
【提出日】令和1年8月23日(2019.8.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
農薬タンパク質をコードするポリヌクレオチドセグメントに機能可能に連結した異種プロモーターを含む組み換え核酸分子であって、
ａ．配列番号４、配列番号２、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６もしくは配列番号１８のアミノ酸配列を前記農薬タンパク質が含むか、
ｂ．配列番号４、配列番号２、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６もしくは配列番号１８に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を前記農薬タンパク質が含むか、または
ｃ．前記ポリヌクレオチドセグメントが、配列番号３、配列番号１、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５または配列番号１７のヌクレオチド配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、前記組み換え核酸分子。
【請求項２】
ａ．前記組み換え核酸分子が、植物において前記農薬タンパク質を発現させるように機能する配列を含むか、
ｂ．前記組み換え核酸分子が、植物細胞で発現して、前記農薬タンパク質を農薬として有効な量で産生するか、または
ｃ．前記組み換え核酸分子が、ベクターと機能可能に連結した状態であり、前記ベクターが、プラスミド、ファージミド、バクミド、コスミド及び細菌もしくは酵母人工染色体からなる群から選択されている、
請求項１に記載の組み換え核酸分子。
【請求項３】
前記宿主細胞が、細菌細胞と植物細胞からなる群から選択されている、請求項１に記載の組み換え核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項４】
前記細菌宿主細胞が、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐａｎｔｏｅａ及びＥｒｗｉｎｉａからなる群から選択した属の細菌に由来する、請求項３に記載の細菌宿主細胞。
【請求項５】
前記Ｂａｃｉｌｌｕｓの種が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓまたはＢａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓであり、前記Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓが、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｔｅｒｏｓｐｅｒｏｕｓであり、前記Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａが、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである、請求項４に記載の細菌宿主細胞。
【請求項６】
前記植物宿主細胞が、双子葉植物細胞または単子葉植物細胞である、請求項３に記載の植物宿主細胞。
【請求項７】
前記植物宿主細胞が、アルファルファ、バナナ、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャベツ、アブラナ、ニンジン、キャッサバ、ヒマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマメ、ハクサイ、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウモロコシ、クローバー、綿、ウリ、キュウリ、ベイマツ、ナス、ユーカリ、アマ、ニンニク、ブドウ、ホップ、リーキ、レタス、テーダマツ、アワ、メロン、ナッツ、オートムギ、オリーブ、タマネギ、観賞植物、ヤシ、牧草、エンドウ、ラッカセイ、コショウ、キマメ、マツ、ジャガイモ、ポプラ、パンプキン、ラジアータパイン、ダイコン、ナタネ、イネ、根茎、ライムギ、ベニバナ、低木、モロコシ、サザンパイン、ダイズ、ホウレンソウ、カボチャ、イチゴ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、スイートコーン、モミジバフウ、サツマイモ、アメリカクサキビ、チャ、タバコ、トマト、トリチカレ、芝草、スイカ及びコムギの植物細胞からなる群から選択されている、請求項６に記載の組み換え核酸。
【請求項８】
前記タンパク質が、Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ目の昆虫に対する活性を示す、請求項１に記載の組み換え核酸分子。
【請求項９】
前記Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ目の昆虫が、ベルベットビーンキャタピラー、サトウキビメイガ、モロコシマダラメイガ、アメリカタバコガ、タバコバッドワーム、ソイビーンルーパー、ブラックアーミーワーム、サザンアーミーワーム、フォールアーミーワーム、シロイチモンジヨトウ、アメリカンボールワーム、ハスモンヨトウ、ワタアカミムシ、タマナヤガ、南西部アワノメイガ、コットンリーフワーム、コナガ、スポッテドボールワーム、ハスモンヨトウ、ウエスタンビーンカットワーム及びヨーロッパアワノメイガからなる群から選択されている、請求項８に記載の組み換え核酸分子。
【請求項１０】
請求項１に記載の組み換え核酸分子を含む植物またはその部位。
【請求項１１】
前記植物が、単子葉植物または双子葉植物である、請求項１０に記載の植物またはその部位。
【請求項１２】
前記植物が、アルファルファ、バナナ、オオムギ、マメ、ブロッコリー、キャベツ、アブラナ、ニンジン、キャッサバ、ヒマ、カリフラワー、セロリ、ヒヨコマメ、ハクサイ、柑橘類、ココナッツ、コーヒー、トウモロコシ、クローバー、綿、ウリ、キュウリ、ベイマツ、ナス、ユーカリ、アマ、ニンニク、ブドウ、ホップ、リーキ、レタス、テーダマツ、アワ、メロン、ナッツ、オートムギ、オリーブ、タマネギ、観賞植物、ヤシ、牧草、エンドウ、ラッカセイ、コショウ、キマメ、マツ、ジャガイモ、ポプラ、パンプキン、ラジアータパイン、ダイコン、ナタネ、イネ、根茎、ライムギ、ベニバナ、低木、モロコシ、サザンパイン、ダイズ、ホウレンソウ、カボチャ、イチゴ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、スイートコーン、モミジバフウ、サツマイモ、アメリカクサキビ、チャ、タバコ、トマト、トリチカレ、芝草、スイカ及びコムギからなる群から選択されている、請求項１０に記載の植物。
【請求項１３】
前記組み換え核酸分子を含む、請求項１０に記載の植物の種子。
【請求項１４】
請求項１に記載の組み換え核酸分子を含む防虫組成物。
【請求項１５】
前記農薬タンパク質とは異なる少なくとも１つのその他の農薬剤をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１４に記載の防虫組成物。
【請求項１６】
前記少なくとも１つのその他の農薬剤が、防虫タンパク質、防虫ｄｓＲＮＡ分子及び補助タンパク質からなる群から選択されている、請求項１５に記載の防虫組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのその他の農薬剤が、Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ目、Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ目またはＨｅｍｉｐｔｅｒａ目の１つ以上の病害虫種に対して活性を示す、請求項１５に記載の防虫組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのその他の農薬タンパク質が、Ｃｒｙ１Ａ、Ｃｒｙ１Ａｂ、Ｃｒｙ１Ａｃ、Ｃｒｙ１Ａ．１０５、Ｃｒｙ１Ａｅ、Ｃｒｙ１Ｂ、Ｃｒｙ１Ｃ、Ｃｒｙ１Ｃバリアント、Ｃｒｙ１Ｄ、Ｃｒｙ１Ｅ、Ｃｒｙ１Ｆ、Ｃｒｙ１Ａ／Ｆキメラ、Ｃｒｙ１Ｇ、Ｃｒｙ１Ｈ、Ｃｒｙ１Ｉ、Ｃｒｙ１Ｊ、Ｃｒｙ１Ｋ、Ｃｒｙ１Ｌ、Ｃｒｙ２Ａ、Ｃｒｙ２Ａｂ、Ｃｒｙ２Ａｅ、Ｃｒｙ３、Ｃｒｙ３Ａバリアント、Ｃｒｙ３Ｂ、Ｃｒｙ４Ｂ、Ｃｒｙ６、Ｃｒｙ７、Ｃｒｙ８、Ｃｒｙ９、Ｃｒｙ１５、Ｃｒｙ３４、Ｃｒｙ３５、Ｃｒｙ４３Ａ、Ｃｒｙ４３Ｂ、Ｃｒｙ５１Ａａ１、ＥＴ２９、ＥＴ３３、ＥＴ３４、ＥＴ３５、ＥＴ６６、ＥＴ７０、ＴＩＣ４００、ＴＩＣ４０７、ＴＩＣ４１７、ＴＩＣ４３１、ＴＩＣ８００、ＴＩＣ８０７、ＴＩＣ８３４、ＴＩＣ８５３、ＴＩＣ９００、ＴＩＣ９０１、ＴＩＣ１２０１、ＴＩＣ１４１５、ＴＩＣ２１６０、ＴＩＣ３１３１、ＴＩＣ８３６、ＴＩＣ８６０、ＴＩＣ８６７、ＴＩＣ８６９、ＴＩＣ１１００、ＶＩＰ３Ａ、ＶＩＰ３Ｂ、ＶＩＰ３Ａｂ、ＡＸＭＩ−ＡＸＭＩ−、ＡＸＭＩ−８８、ＡＸＭＩ−９７、ＡＸＭＩ−１０２、ＡＸＭＩ−１１２、ＡＸＭＩ−１１７、ＡＸＭＩ−１００、ＡＸＭＩ−１１５、ＡＸＭＩ−１１３及びＡＸＭＩ−００５、ＡＸＭＩ１３４、ＡＸＭＩ−１５０、ＡＸＭＩ−１７１、ＡＸＭＩ−１８４、ＡＸＭＩ−１９６、ＡＸＭＩ−２０４、ＡＸＭＩ−２０７、ＡＸＭＩ−２０９、ＡＸＭＩ−２０５、ＡＸＭＩ−２１８、ＡＸＭＩ−２２０、ＡＸＭＩ−２２１ｚ、ＡＸＭＩ−２２２ｚ、ＡＸＭＩ−２２３ｚ、ＡＸＭＩ−２２４ｚ及びＡＸＭＩ−２２５ｚ、ＡＸＭＩ−２３８、ＡＸＭＩ−２７０、ＡＸＭＩ−２７９、ＡＸＭＩ−３４５、ＡＸＭＩ−３３５、ＡＸＭＩ−Ｒ１及びそれらのバリアント、ＩＰ３及びそのバリアント、ＤＩＧ−３、ＤＩＧ−５、ＤＩＧ−１０、ＤＩＧ−６５７及びＤＩＧ−１１のタンパク質からなる群から選択されている、請求項１５に記載の防虫組成物。
【請求項１９】
請求項１０に記載の植物またはその部位から作られた商品であって、前記組み換え核酸分子または農薬タンパク質を検出可能な量で含む前記商品。
【請求項２０】
フレーク、ケーキ、フラワー、ミール、シロップ、油、サイレージ、スターチ、シリアル、ジュース、濃縮物、ジャム、ゼリー、マーマレード、未加工または加工種子、綿屑、繊維、紙、バイオマス、燃料製品、タンパク質、ふすま、ミルク、チーズ、ワイン、動物用飼料、およびクリームからなる群から選択され；前記商品はダイズ、イネ、コムギ、モロコシ、キマメ、ラッカセイ、果実およびメロンから選択される植物に由来する宿主細胞から製造される、請求項１９に記載の商品。
【請求項２１】
種子の作製方法であって、
ａ．請求項１３に記載の第１の種子を播くことと、
ｂ．前記種子から植物を育てることと、
ｃ．前記植物から種子を採ることとを含み、採れた前記種子が、前記組み換え核酸分子を含む、前記方法。
【請求項２２】
昆虫の寄生に対する耐性を有する植物であって、前記植物の細胞が、請求項１に記載の組み換え核酸分子を含む前記植物。
【請求項２３】
Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ目の種の病害虫または病害虫の寄生の防除方法であって、
ａ．配列番号４、配列番号２、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号１８に定められているような農薬タンパク質を殺虫剤として有効な量で、前記病害虫と接触させるか、または
ｂ．配列番号４、配列番号２、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号１８に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８５％であるアミノ酸配列を含む１つ以上の農薬タンパク質を殺虫剤として有効な量で、前記病害虫と接触させること
を含む前記方法。
【請求項２４】
植物ゲノムＤＮＡを含む試料に、請求項１に記載の組み換え核酸分子が存在することの検出方法であって、
ａ．ストリンジェントなハイブリダイズ条件で、請求項１に記載の組み換え核酸分子を含む植物由来のゲノムＤＮＡとハイブリダイズするとともに、ストリンジェントなハイブリダイズ条件で、請求項１に記載の組み換え核酸分子を含まない別段の同種同系の植物由来のゲノムＤＮＡとハイブリダイズしない核酸プローブと、前記試料とを接触させることであって、配列番号３、配列番号１、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５もしくは配列番号１７、または配列番号３、配列番号１、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５もしくは配列番号１７に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８５％であるアミノ酸配列を含む農薬タンパク質をコードする配列と、前記プローブが相同または相補的であることと、
ｂ．前記試料と前記プローブをストリンジェントなハイブリダイズ条件に置くことと、
ｃ．前記核酸プローブと前記試料の前記植物ゲノムＤＮＡとのハイブリダイズを検出すること、
を含む前記方法。
【請求項２５】
タンパク質を含む試料に、農薬タンパク質またはその断片が存在することの検出方法であって、配列番号４、配列番号２、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号１８のアミノ酸配列を前記農薬タンパク質が含むか、または配列番号４、配列番号２、配列番号８、配列番号１２、配列番号１６もしくは配列番号１８に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８５％であるアミノ酸配列を前記農薬タンパク質が含み、
ａ．前記試料と免疫反応性の抗体を接触させることと、
ｂ．前記農薬タンパク質またはその断片の存在を検出することと、
を含む前記方法。
【請求項２６】
前記検出工程が、ＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロットを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
配列番号：４、配列番号：２、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１４、配列番号：１６、または配列番号：１８のアミノ酸配列を含む農薬タンパク質をさらに含む、請求項１４に記載の防虫組成物。