【手続補正書】
【提出日】令和1年5月9日(2019.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液細胞を分離するための方法であって、
血液試料の赤血球を溶解し、前記試料を希釈する工程と；
少なくとも第１の端部および第２の端部を有するスパイラル形状フローチャネルを含むマイクロ流体デバイスであって、前記スパイラル形状フローチャネルは、前記第１の端部もしくはその付近の２つの入口ポートと前記第２の端部もしくはその付近の少なくとも２つの出口ポートとを有し、前記２つの入口ポートの一方は前記スパイラル形状フローチャネルの内壁に位置し、かつ他方の入口ポートは前記スパイラル形状フローチャネルの外壁に位置し、前記出口ポートの少なくとも１つは血液細胞の貯蔵を可能にする容器に接続され、前記スパイラル形状フローチャネルが１１０〜１３０μｍの高さを有する、マイクロ流体デバイスを提供する工程と；
溶解赤血球を含む希釈した前記試料を前記スパイラル形状フローチャネルの前記外壁に位置する前記入口ポートに導入し、シース液を前記スパイラル形状フローチャネルの前記内壁に位置する前記入口ポートに導入する工程と；
前記試料および前記シース液を、前記スパイラル形状フローチャネルを通すように駆動する工程と；
前記少なくとも１つの出口ポートに接続された前記少なくとも１つの容器内の前記血液細胞を回収する工程と、
を含む、方法。
【請求項２】
遠心分離工程、標識工程、またはその両方を含まず、少なくとも１つのタイプの血液細胞がマーカー分子で標識される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記試料が指穿刺から提供されるまたは静脈穿刺から生成される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも２つの出口ポートが少なくとも４つの出口ポートを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記スパイラル形状フローチャネル内を流れる前記試料のレイノルズ数（Ｒｅ）が５０〜１００である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記スパイラル形状フローチャネルが、
ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）；
３００〜６００μｍの幅；
１１０〜１３０μｍの高さ；
７〜１３ｃｍの全長；および
それらの組み合わせ、のうちの１つ以上を含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記スパイラル形状フローチャネルが前記出口ポートの分岐部で８００〜１２００μｍの幅まで徐々に拡大する、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
拡大した前記幅が約１０００μｍである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
第１の出口ポートが、前記内壁から前記外壁にかけて形成される前記スパイラル形状フローチャネルの０〜１００μｍの幅をカバーし、第２の出口ポートが１０１〜２５０μｍの幅をカバーし、第３の出口ポートが２５１〜６５０μｍの幅をカバーし、かつ第４の出口ポートが６５１〜１０００μｍの幅をカバーする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記血液細胞が、好中球、単球、リンパ球、血小板、赤血球、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるうちの１つ以上を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
前記好中球および前記単球を第２の前記出口ポートから回収する工程か、前記リンパ球を第３の前記出口ポートから回収する工程か、またはその両方をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記シース液の流速が、希釈した前記試料の流速よりも少なくとも５倍高い；
希釈した前記試料の流速が１２０〜１３０μＬ／分である、またはその両方である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記血液細胞が緩衝液で回収される；
前記血液試料が緩衝液で少なくとも１：５に希釈される、またはその両方である、
請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
回収された前記血液細胞が好中球であり、
被験者の前記試料の単離された前記好中球が、少なくとも１名の健常者との比較可能な対照試料の単離された好中球と比べて、糖尿病または炎症性疾患を示す、増加した平均ローリング速度を有するか否か；
前記被験者の前記試料の単離された前記好中球が、少なくとも１名の健常者との比較可能な対照試料の単離された好中球と比べて、糖尿病または炎症性疾患を示す、減少した好中球真円度（ＮＣ）指数を有するか否か、
前記被験者の前記試料の単離された前記好中球が、少なくとも１名の健常者との比較可能な対照試料の単離された好中球と比べて、糖尿病、前記炎症性疾患、またはその両方を示す、細胞内反応性酸素種（ＲＯＳ）の増加した発現と、ＣＤ１１ｂの増加した発現と、ＰＳＧＬ−１の低下した発現とのうちの１つ以上を有するか否か、
を判定する工程を含む、方法。
【請求項１５】
前記増加した平均ローリング速度が少なくとも５．３０μｍ／秒である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記増加した平均ローリング速度の測定がＥ−セレクチンでコーティングされたチャネル内で行われる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記減少した好中球真円度（ＮＣ）指数が、少なくとも０．８５の好中球真円度（ＮＣ）を有する被験好中球の７６％未満と定義される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
（ａ）前記被験者の前記試料の単離された前記好中球における前記細胞内反応性酸素種（ＲＯＳ）もしくはＣＤ１１ｂの発現が、前記比較可能な対照試料における前記発現と比べて少なくとも１０％増加する；
（ｂ）前記被験者の前記試料の単離された前記好中球における前記ＰＳＧＬ−１の発現が、前記比較可能な対照試料における前記発現と比べて少なくとも１０％減少する、またはその両方である、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも第１の端部および第２の端部を有するスパイラル形状フローチャネルを含むマイクロ流体デバイスであって、前記スパイラル形状フローチャネルが、前記第１の端部もしくはその付近に２つの入口ポートおよび前記第２の端部もしくはその付近に少なくとも２つの出口ポートを有し、ここで前記２つの入口ポートの一方が前記スパイラル形状フローチャネルの内壁に位置し、かつ他方の入口ポートが前記スパイラル形状フローチャネルの外壁に位置し、かつ前記出口ポートの少なくとも１つが血液細胞の貯蔵を可能にする容器に接続され；ここで前記スパイラル形状フローチャネルが１１０〜１３０μｍの高さを有する、マイクロ流体デバイス。
【請求項２０】
血液細胞から微小粒子を分離するための方法であって、
血液試料の赤血球を溶解し、前記試料を希釈する工程と；
少なくとも第１の端部および第２の端部を有するスパイラル形状フローチャネルを含むマイクロ流体デバイスであって、前記スパイラル形状フローチャネルは、前記第１の端部もしくはその付近の２つの入口ポートと前記第２の端部もしくはその付近の少なくとも２つの出口ポートとを有し、前記２つの入口ポートの一方は前記スパイラル形状フローチャネルの内壁に位置し、かつ他方の入口ポートは前記スパイラル形状フローチャネルの外壁に位置し、前記出口ポートの少なくとも１つは血液細胞の貯蔵を可能にする容器に接続され、前記スパイラル形状フローチャネルが１１０〜１３０μｍの高さを有する、マイクロ流体デバイスを提供する工程と；
溶解赤血球を含む希釈した前記試料を前記スパイラル形状フローチャネルの前記外壁に位置する前記入口ポートに導入し、シース液を前記スパイラル形状フローチャネルの前記内壁に位置する前記入口ポートに導入する工程と；
前記試料および前記シース液を、前記スパイラル形状フローチャネルを通すように駆動する工程と；
前記少なくとも１つの出口ポートに接続された前記少なくとも１つの容器内の前記血液細胞から前記微小粒子を回収する工程であって、前記微小粒子が約０．１μｍから約１μｍまでの範囲である平均粒径を有する、工程と、
を含む、方法。