【手続補正書】
【提出日】平成31年3月15日(2019.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号９９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号２５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｃ）配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｄ）配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｅ）配列番号３７に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｆ）配列番号４１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｇ）配列番号４５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｈ）配列番号４９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｉ）配列番号５３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｊ）配列番号５７に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｋ）配列番号６１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｌ）配列番号６５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｍ）配列番号６９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｎ）配列番号７３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号７５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｏ）配列番号７７に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号７９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｐ）配列番号８１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｑ）配列番号８５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号８７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｒ）配列番号８９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号９１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｓ）配列番号２１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｔ）配列番号９３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号９５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｕ）配列番号９３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号９７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；または
（ｖ）配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域
を含むモノクローナル抗体、または、当該領域を含む抗体とヒトＭＦＩ２タンパク質への結合について競合するモノクローナル抗体。
【請求項２】
ヒトＭＦＩ２タンパク質に結合するモノクローナル抗体であって、
（ｉ）モノクローナル抗体がＭＦＩ２のＴＦＬＤ２ドメインに結合する、
（ｉｉ）モノクローナル抗体がＭＦＩ２タンパク質中のエピトープに結合し、当該エピトープがアミノ酸Ｄ４６０、Ｈ４６３およびＮ５６６を含む、
（ｉｉｉ）ＭＦＩ２タンパク質中のアミノ酸Ｄ４６０、Ｈ４６３およびＮ５６６の少なくとも１つを変異させることは、ＭＦＩ２に対する抗体の結合の喪失を示す、
（ｉｖ）モノクローナル抗体が配列番号３を有するＭＦＩ２を発現する腫瘍開始細胞に結合する、
（ｖ）モノクローナル抗体が内在化抗体である、
（ｖｉ）モノクローナル抗体がヒトトランスフェリンタンパク質に結合しない、および／または
（ｖｉｉ）モノクローナル抗体が請求項１に記載のモノクローナル抗体である、モノクローナル抗体。
【請求項３】
キメラ抗体、ＣＤＲグラフト化抗体、またはヒト化抗体である、請求項１または２に記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】
（ａ）配列番号９９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域、および配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の３つの相補性決定領域；
（ｂ）配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域、および配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の３つの相補性決定領域；
（ｃ）配列番号９３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域、および配列番号９５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の３つの相補性決定領域；または
（ｄ）配列番号９３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域、および配列番号９７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域の３つの相補性決定領域を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
（ａ）ＣＤＲ残基をＫａｂａｔに従い番号付けすると、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号９９の残基２４〜３４、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号９９の残基５０〜５６、ＣＤＲ−Ｌ３について配列番号９９の残基８９〜９７、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号１０１の残基３１〜３５、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号１０１の残基５０〜６５、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号１０１の残基９５〜１０２、
（ｂ）ＣＤＲ残基をＣｈｏｔｈｉａに従い番号付けすると、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号９９の残基２４〜３４、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号９９の残基５０〜５６、ＣＤＲ−Ｌ３について配列番号９９の残基８９〜９７、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号１０１の残基２６〜３２、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号１０１の残基５２〜５６、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号１０１の残基９５〜１０２、
（ｃ）ＣＤＲ残基をＭａｃＣａｌｌｕｍに従い番号付けすると、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号９９の残基３０〜３６、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号９９の残基４６〜５５、ＣＤＲ−Ｌ３について配列番号９９の残基８９〜９６、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号１０１の残基３０〜３５、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号１０１の残基４７〜５８、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号１０１の残基９３〜１０１、または
（ｄ）ＣＤＲ残基をＡｂＭに従い番号付けすると、ＣＤＲ−Ｌ１について配列番号９９の残基２４〜３４、ＣＤＲ−Ｌ２について配列番号９９の残基５０〜５６、ＣＤＲ−Ｌ３について配列番号９９の残基８９〜９７、ＣＤＲ−Ｈ１について配列番号１０１の残基２６〜３５、ＣＤＲ−Ｈ２について配列番号１０１の残基５０〜５８、およびＣＤＲ−Ｈ３について配列番号１０１の残基９５〜１０２を含む、請求項４に記載のモノクローナル抗体。
【請求項６】
モノクローナル抗体が、
（ａ）配列番号９９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１０１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｂ）配列番号２５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｃ）配列番号２９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｄ）配列番号３３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｅ）配列番号３７に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号３９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｆ）配列番号４１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号４３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｇ）配列番号４５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号４７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｈ）配列番号４９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｉ）配列番号５３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｊ）配列番号５７に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号５９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｋ）配列番号６１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号６３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｌ）配列番号６５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号６７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｍ）配列番号６９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号７１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｎ）配列番号７３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号７５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｏ）配列番号７７に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号７９に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｐ）配列番号８１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号８３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｑ）配列番号８５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号８７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｒ）配列番号８９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号９１に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｓ）配列番号２１に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｔ）配列番号９３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号９５に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｕ）配列番号９３に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号９７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；
（ｖ）配列番号９９に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１０３に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；または
（ｗ）配列番号１０５に示すアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、および配列番号１０７に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項７】
モノクローナル抗体が（ｉ）重鎖の２２０位におけるシステイン残基、および軽鎖の２１４位におけるシステイン残基の欠失、（ｉｉ）重鎖の２２０位におけるシステイン残基、および軽鎖の２１４位におけるシステイン残基の置換、（ｉｉｉ）軽鎖の２１４位おけるシステイン残基、および重鎖の２２０位におけるシステイン残基の欠失、または（ｉｖ）軽鎖の２１４位おけるシステイン残基、および重鎖の２２０位におけるシステイン残基の置換を含むＩｇＧ１抗体であり、および
モノクローナル抗体が、重鎖の２２６位および２２９位における天然のシステイン残基を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項８】
モノクローナル抗体が、
（ａ）配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む重鎖；
（ｂ）配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１３に示すアミノ酸配列を含む重鎖；
（ｃ）配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１５に示すアミノ酸配列を含む重鎖；
（ｄ）配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１７に示すアミノ酸配列を含む重鎖；または
（ｅ）配列番号１１６に示すアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１８に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項９】
細胞毒性剤とコンジュゲートしている、請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１０】
細胞毒性剤が、ドラスタチン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、オーリスタチン、アマニチン、マイタンシノイド、カリチアマイシン、または放射性同位体である、請求項９に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１１】
請求項１から８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体の軽鎖可変領域または重鎖可変領域をコードする核酸。
【請求項１２】
請求項１１に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１３】
請求項１１に記載の核酸または請求項１２に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１４】
細胞毒性剤とコンジュゲート、連結、または他の方法で会合されているモノクローナル抗体を含む抗体薬物コンジュゲートであって、当該モノクローナル抗体が請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体である、抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１５】
式：Ａｂ−［Ｌ−Ｄ］ｎ
（式中、
Ａｂは、前記モノクローナル抗体を含み、
Ｌは、任意選択のリンカーを含み、
Ｄは、細胞毒性剤である薬物を含み、および
ｎは、１から２０の整数である。）
を含む、請求項１４に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１６】
細胞毒性剤が、ドラスタチン、デュオカルマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、オーリスタチン、アマニチン、マイタンシノイド、カリチアマイシン、または放射性同位体である、請求項１４または１５に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１７】
１、２、３、４、５、６、７または８の薬物負荷を有する、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１８】
モノクローナル抗体が、配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項１９】
（ｉ）請求項９または１０に記載のモノクローナル抗体、または請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート、および（ｉｉ）医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２０】
１、２、３、４、５、６、７または８でそれぞれ＋／−０．４の薬物抗体比（ＤＡＲ）を含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
優勢抗体薬物コンジュゲート種が７０％超の濃度で存在する、請求項１９〜２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
（ｉ）請求項９または１０に記載のモノクローナル抗体、または請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート、および（ｉｉ）医薬として許容される担体を含む、医薬に使用するために医薬組成物。
【請求項２３】
（ｉ）がんの治療、または（ｉｉ）腫瘍開始細胞の出現頻度の減少に使用するための、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
（ｉ）がんを治療するため、または（ｉｉ）腫瘍開始細胞の出現頻度を減少させるための医薬の製造における、請求項９または１０に記載のモノクローナル抗体、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート、または請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２５】
（ａ）請求項９または１０に記載のモノクローナル抗体、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート、または請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む１つ以上の容器、および
（ｂ）前記１つ以上の容器上における、または前記１つ以上の容器に付随した標識または添付文書であって、前記モノクローナル抗体、抗体薬物コンジュゲート、または医薬組成物が（ｉ）がんを治療するため、または（ｉｉ）腫瘍開始細胞の出現頻度を減少させるために使用されることを示す標識または添付文書
を含むキット。
【請求項２６】
がんが、乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、肺がん（例えば、肺腺がん）、結腸直腸がん、皮膚がん（例えば、転移性メラノーマ、野生型ＢＲＡＦを発現する皮膚がん、または変異型ＢＲＡＦを発現する皮膚がん）、および／または再発性、再燃性または不応性であるがんである、請求項２３に記載の医薬組成物、請求項２４に記載の使用、または請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
がんがトリプルネガティブ乳がんである、請求項２３に記載の医薬組成物、請求項２４に記載の使用、または請求項２５に記載のキット。
【請求項２８】
モノクローナル抗体が、配列番号１１２に示すアミノ酸配列を含む軽鎖、および配列番号１１４に示すアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１９〜２７のいずれか一項に記載の医薬組成物、使用またはキット。
【請求項２９】
請求項９または１０に記載のモノクローナル抗体または請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲートを作製する方法であって、モノクローナル抗体を細胞毒性剤にコンジュゲートする工程を含み、
任意選択的に、モノクローナル抗体が１つ以上の不対システイン残基を含み、および、当該方法が前記１つ以上の不対システイン残基を選択的に還元することを含み、
任意選択的に、前記１つ以上の不対システイン残基を選択的に還元する工程が、モノクローナル抗体を、塩基性ｐＫａを有する少なくとも１つのアミン部分を含む（例えば、アルギニンまたはリシンを含む）剤のような安定化剤と接触させることを含み、
任意選択的に、モノクローナル抗体を選択的に還元する工程が、モノクローナル抗体を、単一の遊離チオールを有する化合物を含む還元剤のような穏やかな還元剤（例えば、グルタチオン、ｎ−アセチルシステイン、システイン、２−アミノエタン−１−チオールまたは２−ヒドロキシエタン−１−チオール）と接触させることを含み、および、
任意選択的に、当該方法が分取クロマトグラフィーを使用して前記モノクローナル抗体または抗体薬物コンジュゲートを精製する工程をさらに含む、方法。
【請求項３０】
細胞を、請求項９または１０に記載のモノクローナル抗体または請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲートと接触させる工程を含む、細胞毒性剤をＭＦＩ２発現がん細胞に送達するためのインビトロ方法。
【請求項３１】
（ａ）がん細胞を、請求項９または１０に記載のモノクローナル抗体または請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲートと接触させる工程、および（ｂ）がん細胞死を決定する工程を含む、モノクローナル抗体または抗体薬物コンジュゲートの細胞毒性を決定するためのインビトロ方法。
【請求項３２】
乳がん細胞（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、肺がん細胞（例えば、肺腺がん）、結腸直腸がん細胞、皮膚がん細胞（例えば、転移性メラノーマ、野生型ＢＲＡＦを発現する皮膚がん、または変異型ＢＲＡＦを発現する皮膚がん）、および／または再発性、再燃性または不応性であるがん細胞のようながん細胞を検出、診断または監視するためのインビトロ方法であって、当該方法が、腫瘍試料を請求項１〜８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体と接触させる工程、および腫瘍試料に結合した抗体を検出する工程を含む、方法。