【手続補正書】
【提出日】平成19年12月13日(2007.12.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非２μｍ系プラスミドタンパク質を製造する方法であって、
（ａ）シャペロンタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている遺伝子と、非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている遺伝子とを含む２μｍ系プラスミドを含んでなる宿主細胞を準備すること、
（ｂ）該宿主細胞を、培養培地中、シャペロンタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている遺伝子と、非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている遺伝子の同時発現を可能とする条件下で培養すること、および
（ｃ）発現した非２μｍ系プラスミドタンパク質を培養宿主細胞または培養培地から精製すること
を含んでなる、方法。
【請求項２】
精製された非２μｍ系プラスミドタンパク質を担体または希釈剤とともに製剤化する工程、および、所望により、このようにして製剤化されたタンパク質を単位投与形で提供する工程をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
真菌（好ましくは、酵母）または脊椎動物の非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている遺伝子とシャペロンタンパク質をコードしている遺伝子とを同じ２μｍ系プラスミド上に提供することにより、前記非２μｍ系プラスミドタンパク質の生産を増強するための発現ベクターとしての、２μｍ系プラスミドの使用。
【請求項４】
シャペロンタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている遺伝子と非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている遺伝子とを含んでなる２μｍ系プラスミドであって、このプラスミドが２μｍプラスミドに基づく場合には、非組込みベクターである、プラスミド。
【請求項５】
シャペロンが真菌シャペロン（好ましくは、酵母シャペロン）または哺乳類シャペロン（好ましくは、ヒトシャペロン）の配列を有するものである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項６】
シャペロンが、ＡＨＡ１、ＣＣＴ２、ＣＣＴ３、ＣＣＴ４、ＣＣＴ５、ＣＣＴ６、ＣＣＴ７、ＣＣＴ８、ＣＮＳ１、ＣＰＲ３、ＣＰＲ６、ＥＰＳ１、ＥＲＯ１、ＥＵＧ１、ＦＭＯ１、ＨＣＨ１、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ１２、ＨＳＰ１０４、ＨＳＰ２６、ＨＳＰ３０、ＨＳＰ４２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７８、ＨＳＰ８２、ＪＥＭ１、ＭＤＪ１、ＭＤＪ２、ＭＰＤ１、ＭＰＤ２、ＰＤＩ１、ＰＦＤ１、ＡＢＣ１、ＡＰＪ１、ＡＴＰ１１、ＡＴＰ１２、ＢＴＴ１、ＣＤＣ３７、ＣＰＲ７、ＨＳＣ８２、ＫＡＲ２、ＬＨＳ１、ＭＧＥ１、ＭＲＳ１１、ＮＯＢ１、ＥＣＭ１０、ＳＳＡ１、ＳＳＡ２、ＳＳＡ３、ＳＳＡ４、ＳＳＣ１、ＳＳＥ２、ＳＩＬ１、ＳＬＳ１、ＵＢＩ４、ＯＲＭ１、ＯＲＭ２、ＰＥＲ１、ＰＴＣ２、ＰＳＥ１およびＨＡＣ１または末端切断型イントロンレスＨＡＣ１のいずれか１つによりコードされているタンパク質の配列を含むものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項７】
シャペロンがタンパク質ジスルフィドイソメラーゼであるか、またはＰＳＥ１、ＯＲＭ２もしくはＳＳＡ１によりコードされているタンパク質またはその変異体もしくは断片の配列を含むものである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項８】
宿主細胞が、前記プラスミドによりコードされている第一のシャペロンとは異なるシャペロンをコードしている第二の組換え遺伝子も発現する、請求項１、２、５、６または７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
シャペロンをコードしている第二の組換え遺伝子が染色体に組み込まれている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
プラスミドが、異なるシャペロンをコードしている２つの異なる遺伝子を含み、その遺伝子の１つが請求項８により定義されたシャペロンをコードしている第二の組換え遺伝子である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１１】
前記シャペロンの１つがタンパク質ジスルフィドイソメラーゼである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１２】
前記シャペロンの１つがＯＲＭ２である、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１３】
前記２つのシャペロンがタンパク質ジスルフィドイソメラーゼとＯＲＭ２である、請求項８または９に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１４】
前記非２μｍ系プラスミドタンパク質が、酵母において分泌を引き起こすのに有効なリーダー配列を含むものである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１５】
前記非２μｍ系プラスミドタンパク質が、真核生物タンパク質、またはその断片もしくは変異体、好ましくは脊椎動物または真菌（例えば、酵母）タンパク質である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１６】
前記非２μｍ系プラスミドタンパク質が商業上有用なタンパク質である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１７】
前記非２μｍ系プラスミドタンパク質が、アルブミン、モノクローナル抗体、エトポシド、血清タンパク質（例えば、血液凝固因子）、アンチスタシン、ｔｉｃｋ抗凝固ペプチド、トランスフェリン、ラクトフェリン、エンドスタチン、アンギオスタチン、コラーゲン、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンに基づく分子またはいずれかの断片（例えば、ｄＡｂ、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＡｂ、ｓｃＦｖまたはｓｃＦｖ断片）、Ｋｕｎｉｔｚドメインタンパク質、インターフェロン、インターロイキン、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ２、インターフェロンα種および亜種、インターフェロンβ種および亜種、インターフェロンγ種および亜種、レプチン、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＡＸ１５（Ａｘｏｋｉｎ（商標））、ＩＬ１−受容体アンタゴニスト、エリスロポエチン（ＥＰＯ）およびＥＰＯ模倣体、トロンボポエチン（ＴＰＯ）およびＴＰＯ模倣体、プロサプチド、シアノビリン−Ｎ，５−ヘリックス、Ｔ２０ペプチド、Ｔ１２４９ペプチド、ＨＩＶｇｐ４１、ＨＩＶｇｐ１２０、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ｔＰＡ、ヒルディン、血小板由来増殖因子、副甲状腺ホルモン、プロインスリン、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、インスリン様増殖因子、カルシトニン、成長ホルモン、トランスフォーミング増殖因子β、腫瘍壊死因子、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、プレ型および活性型双方の凝固因子（限定されるものではないが、プラスミノーゲン、フィブリノーゲン、トロンビン、プレトロンビン、プロトロンビン、フォン・ウィルブランド因子、α１アンチトリプシン、プラスミノーゲンアクチベーター、因子VII、因子VIII、因子IX、因子Ｘおよび因子XIIIを含む）、神経増殖因子、ＬＡＣＩ、血小板由来内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、グルコースオキシダーゼ、血清コリンエステラーゼ、アプロチニン、アミロイド前駆体タンパク質、インターαトリプシン阻害剤、抗トロンビンIII、アポリポタンパク質種、Ｃタンパク質、Ｓタンパク質、または上記のいずれかの変異体もしくは断片から選択される配列を含むものである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１８】
前記非２μｍ系プラスミドタンパク質が、アルブミンまたはその変異体もしくは断片の配列を含むものである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項１９】
前記非２μｍ系プラスミドタンパク質が、トランスフェリンファミリーメンバー、好ましくはトランスフェリンもしくはラクトフェリンまたはその変異体もしくは断片の配列を含むものである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項２０】
非２μｍ系プラスミドタンパク質が、融合タンパク質、例えば、アルブミンもしくはトランスフェリンファミリーメンバーまたはいずれかの変異体もしくは断片が別のタンパク質配列と直接的または間接的に融合された融合タンパク質を含むものである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法、使用またはプラスミド。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれか一項で定義されたプラスミドを含んでなる、宿主細胞。
【請求項２２】
プラスミドによりコードされているシャペロンが必須遺伝子である、請求項２１に記載の宿主細胞。
【請求項２３】
プラスミドの不在下では、前記シャペロンを産生しない、請求項２２に記載の宿主細胞。
【請求項２４】
酵母細胞である、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項２５】
プラスミドがｐＳＲ１、ｐＳＢ３もしくはｐＳＢ４に基づくものであって、酵母細胞がチゴサッカロミセス・ルクシーであるか、プラスミドがｐＳＢ１もしくはｐＳＢ２に基づくものであって、酵母細胞がチゴサッカロミセス・バイリーであるか、プラスミドがｐＳＭ１に基づくものであって、酵母細胞がチゴサッカロミセス・フェルメンタチであるか、プラスミドがｐＫＤ１に基づくものであって、酵母細胞がクルイベロミセス・ドロソフィラルムであるか、プラスミドがｐＰＭ１に基づくものであって、酵母細胞がピキア・メンブラネファシエンスであるか、またはプラスミドが２μｍプラスミドに基づくものであって、酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエもしくはサッカロミセス・カルルスベルゲネシスである、請求項２４に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
プラスミドが２μｍプラスミドに基づくものであって、酵母細胞がサッカロミセス・セレビシエまたはサッカロミセス・カルルスベルゲネシスである、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
宿主細胞が、請求項２１〜２６のいずれか一項で定義された宿主細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
宿主細胞が、請求項２３またはそれに従属する他のいずれかの請求項で定義された宿主細胞である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
工程（ｂ）が、宿主細胞を富栄養培地などの非選択培地中で培養することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
非２μｍ系プラスミドタンパク質を製造する方法であって、
（ａ）第一のシャペロンタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子、第二のシャペロンタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子、および非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている第三の組換え遺伝子を含む宿主細胞であって、第一のシャペロンと第二のシャペロンが異なるものである、宿主細胞を準備すること、
（ｂ）該宿主細胞を、培養培地中、第一、第二および第三の遺伝子の発現を可能とする条件下で培養すること、および
（ｃ）所望により、発現した非２μｍ系プラスミドタンパク質を培養宿主細胞または培養培地から精製すること、および
（ｄ）所望により、精製されたタンパク質を凍結乾燥すること
を含んでなる、方法。
【請求項３１】
精製された非２μｍ系プラスミドタンパク質を担体または希釈剤とともに製剤化する工程、および、所望により、このようにして製剤化されたタンパク質を単位投与形で提供する工程をさらに含んでなる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
第一および第二のシャペロンが、ＡＨＡ１、ＣＣＴ２、ＣＣＴ３、ＣＣＴ４、ＣＣＴ５、ＣＣＴ６、ＣＣＴ７、ＣＣＴ８、ＣＮＳ１、ＣＰＲ３、ＣＰＲ６、ＥＰＳ１、ＥＲＯ１、ＥＵＧ１、ＦＭＯ１、ＨＣＨ１、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ１２、ＨＳＰ１０４、ＨＳＰ２６、ＨＳＰ３０、ＨＳＰ４２、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７８、ＨＳＰ８２、ＪＥＭ１、ＭＤＪ１、ＭＤＪ２、ＭＰＤ１、ＭＰＤ２、ＰＤＩ１、ＰＦＤ１、ＡＢＣ１、ＡＰＪ１、ＡＴＰ１１、ＡＴＰ１２、ＢＴＴ１、ＣＤＣ３７、ＣＰＲ７、ＨＳＣ８２、ＫＡＲ２、ＬＨＳ１、ＭＧＥ１、ＭＲＳ１１、ＮＯＢ１、ＥＣＭ１０、ＳＳＡ１、ＳＳＡ２、ＳＳＡ３、ＳＳＡ４、ＳＳＣ１、ＳＳＥ２、ＳＩＬ１、ＳＬＳ１、ＵＢＩ４、ＯＲＭ１、ＯＲＭ２、ＰＥＲ１、ＰＴＣ２、ＰＳＥ１およびＨＡＣ１または末端切断型イントロンレスＨＡＣ１のいずれか１つによりコードされているタンパク質の配列を含むものである、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
第一のシャペロンがタンパク質ジスルフィドイソメラーゼである、請求項３０〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
第二のシャペロンがＯＲＭ２である、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
第一または第二のシャペロンの少なくとも１つが、染色体に組み込まれた組換え遺伝子によりコードされている、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
第一または第二のシャペロンの少なくとも１つが、プラスミド上の遺伝子によりコードされている、請求項３０〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記プラスミドが請求項１〜２６のいずれか一項で定義されたプラスミドである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子と、トランスフェリンに基づくタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子とを含んでなる、宿主細胞。
【請求項３９】
トランスフェリンに基づくタンパク質の発現を増強するための、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）の配列を含むタンパク質をコードしている組換え遺伝子の使用。
【請求項４０】
トランスフェリンに基づくタンパク質が、トランスフェリンまたはトランスフェリンファミリーの他のメンバー（例えば、ラクトフェリン）、その変異体もしくは断片、またはトランスフェリン、その変異体もしくは断片を含む融合タンパク質の配列を含むものである、請求項３８に記載の宿主細胞または請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子がプラスミド上に提供される、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４２】
前記プラスミドが２μｍ系プラスミドである、請求項４１に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４３】
タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子が染色体に組み込まれる、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４４】
タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子が、内因的にコードされているＰＤＩ遺伝子の遺伝子座で、好ましくは内因性ＰＤＩ遺伝子の発現を妨げることなく、染色体に組み込まれる、請求項４３に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４５】
トランスフェリンに基づくタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子がプラスミド上に提供される、請求項３８〜４４のいずれか一項に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４６】
前記プラスミドが２μｍ系プラスミドである、請求項４５に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４７】
トランスフェリンに基づくタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子が染色体に組み込まれる、請求項３８〜４４のいずれか一項に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４８】
トランスフェリンに基づくタンパク質の配列を含むタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子が、内因的にコードされているＰＤＩ遺伝子の遺伝子座で、好ましくは内因性ＰＤＩ遺伝子の発現を妨げることなく、染色体に組み込まれる、請求項４７に記載の宿主細胞または使用。
【請求項４９】
非２μｍ系プラスミドタンパク質を製造する方法であって、
（ａ）ＯＲＭ２またはその変異体もしくは断片の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子と、非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子とを含む宿主細胞を準備すること、および
（ｂ）該宿主細胞を、培養培地中、第一および第二の遺伝子の発現を可能とする条件下で培養すること
を含んでなる、方法。
【請求項５０】
精製された非２μｍ系プラスミドタンパク質を担体または希釈剤とともに製剤化する工程、および、所望により、このようにして製剤化されたタンパク質を単位投与形で提供する工程をさらに含んでなる、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
ＯＲＭ２またはその変異体もしくは断片の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子が、宿主細胞の染色体に組み込まれている、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＯＲＭ２またはその変異体もしくは断片の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子がプラスミド上に存在する、請求項４９または５０に記載の方法。
【請求項５３】
ＯＲＭ２またはその変異体もしくは断片の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子と、非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子とを含んでなる、宿主細胞。
【請求項５４】
宿主細胞中における非２μｍ系プラスミドタンパク質の発現を増強するための、ＯＲＭ２またはその変異体もしくは断片の配列を含むタンパク質をコードしている組換え遺伝子の使用。
【請求項５５】
ＯＲＭ２またはその変異体もしくは断片の配列を含むタンパク質をコードしている第一の組換え遺伝子と、非２μｍ系プラスミドタンパク質をコードしている第二の組換え遺伝子とを含んでなる、プラスミド。
【請求項５６】
２μｍ系プラスミドである、請求項５５に記載のプラスミド。
【請求項５７】
非２μｍ系プラスミドタンパク質が請求項１４〜２０のいずれか一項で定義されたものである、請求項４９〜５６のいずれか一項に記載の方法、使用、宿主細胞またはプラスミド。
【請求項５８】
トランスフェリンの配列および酵母において分泌を引き起こすのに有効なリーダー配列を含んでなる異種タンパク質であって、該リーダー配列がインベルターゼタンパク質由来のリーダー配列の配列を有するものである、異種タンパク質。
【請求項５９】
前記トランスフェリン配列が、ヒトトランスフェリン配列またはその変異体もしくは断片である、請求項５８に記載の異種タンパク質。
【請求項６０】
前記トランスフェリン配列が、グリコシル化の改変を有するトランスフェリン変異体である、請求項５８または５９に記載の異種タンパク質。
【請求項６１】
前記トランスフェリン配列が、グリコシル化の低下を有するトランスフェリン変異体である、請求項６０に記載の異種タンパク質。
【請求項６２】
前記トランスフェリン配列が、配列Ｎ−Ｘ−ＳまたはＮ−Ｘ−Ｔを有するアミノ酸グリコシル化コンセンサス配列の付加または除去によって変異している、請求項６０または６１に記載の異種タンパク質。
【請求項６３】
配列Ｎ−Ｘ−ＳまたはＮ−Ｘ−Ｔを有する前記アミノ酸グリコシル化コンセンサス配列が、Ｎ、Ｘ、ＳまたはＴの位置のいずれか、または総てにおいて変異している、請求項６２に記載の異種タンパク質。
【請求項６４】
前記トランスフェリン配列が、金属イオンとの結合の改変を有するトランスフェリン変異体である、請求項５８〜６３のいずれか一項に記載の異種タンパク質。
【請求項６５】
前記トランスフェリン配列が、他のタンパク質との結合の改変を有するトランスフェリン変異体である、請求項５８〜６４のいずれか一項に記載の異種タンパク質。
【請求項６６】
前記トランスフェリン配列が、トランスフェリン受容体との結合の改変を有するトランスフェリン変異体である、請求項５８〜６５のいずれか一項に記載の異種タンパク質。
【請求項６７】
請求項５８〜６６のいずれか一項に記載の異種タンパク質をコードする、遺伝子。
【請求項６８】
真核生物種宿主細胞において請求項６７に記載の遺伝子を発現させることを含んでなる、トランスフェリンタンパク質を製造する方法。
【請求項６９】
前記真核生物種宿主細胞が酵母である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記酵母が、サッカロミセス・セレビシエ、チゴサッカロミセス種、クルイベロミセス・ラクチスおよびピキア・パストリスから選択されるものである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
精製されたタンパク質を凍結乾燥する工程をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７２】
発現した非２μｍ系プラスミドタンパク質を培養宿主細胞または培養培地から精製する工程をさらに含んでなる、請求項４９に記載の方法。
【請求項７３】
精製されたタンパク質を凍結乾燥する工程をさらに含んでなる、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
精製または凍結乾燥された非２μｍ系プラスミドタンパク質を担体または希釈剤とともに製剤化する工程をさらに含んでなる、請求項７２または７３に記載の方法。
【請求項７５】
製剤化されたタンパク質を単位投与形で提供する工程をさらに含んでなる、請求項７４に記載の方法。