【手続補正書】
【提出日】令和1年8月8日(2019.8.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プログラム可能な普遍的細胞受容体をコードする単離核酸配列であって、ここで、該プログラム可能な普遍的細胞受容体が
ａ. 反応性アミノ酸残基を含む触媒的抗体またはその触媒的部分；
ｂ. 膜貫通ドメイン；および
ｃ. 細胞内ドメイン
を含む、単離核酸配列。
【請求項２】
触媒的抗体またはその触媒的部分がアルドラーゼ触媒的抗体、ベータラクタマーゼ触媒的抗体、アミダーゼ触媒的抗体、チオエステラーゼ触媒的抗体およびその触媒的部分からなる群から選択される、請求項１に記載の単離核酸配列。
【請求項３】
触媒的抗体またはその触媒的部分がアルドラーゼ触媒的抗体またはその触媒的部分である、請求項１または２に記載の単離核酸配列。
【請求項４】
反応性アミノ酸残基が反応性システイン残基、反応性チロシン残基、反応性リシン残基および反応性チロシン残基からなる群から選択される、請求項１〜３の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項５】
反応性アミノ酸残基が反応性リシン残基である、請求項１〜４の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項６】
触媒的抗体またはその触媒的部分がヒト化モノクローナル抗体３８Ｃ２またはその触媒的部分である、請求項１〜５の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項７】
触媒的抗体またはその触媒的部分が配列番号４のアミノ酸配列またはその触媒的部分を含む、請求項１に記載の単離核酸配列。
【請求項８】
触媒的抗体またはその触媒的部分がヒト化モノクローナル抗体３３Ｆ１２またはその触媒的部分である、請求項１に記載の単離核酸配列。
【請求項９】
触媒的抗体またはその触媒的部分がマウスモノクローナル抗体３８Ｃ２または３３Ｆ１２またはその触媒的部分である、請求項１に記載の単離核酸配列。
【請求項１０】
触媒的部分が一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)である、請求項１〜９の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項１１】
触媒的部分がＦａｂフラグメントである、請求項１〜１０の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項１２】
触媒的部分がｓｃＦａｂ、二重特異性抗体、Ｆ(ａｂ’)２フラグメント、ＶＨドメインとＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメントおよびｄＡｂフラグメントからなる群から選択される、請求項１〜１１の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項１３】
細胞内ドメインがシグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜１２の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項１４】
シグナル伝達ドメインがＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインである、請求項１３に記載の単離核酸配列。
【請求項１５】
シグナル伝達ドメインがＣＤ２８シグナル伝達ドメインである、請求項１３に記載の単離核酸配列。
【請求項１６】
細胞内ドメインが共刺激性シグナル伝達ドメインを含む、請求項１〜１５の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項１７】
共刺激性シグナル伝達ドメインがＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１(ＬＦＡ−１)、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ８３リガンドおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるタンパク質の細胞内ドメインを含む、請求項１６に記載の単離核酸配列。
【請求項１８】
膜貫通ドメインがＴ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、Ｔ細胞受容体のゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ−１Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ８アルファおよびこれらのフラグメントからなる群から選択される、タンパク質の膜貫通ドメインを含む、請求項１〜１７の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項１９】
プログラム可能な普遍的細胞受容体がさらにヒンジ領域を含む、請求項１〜１８の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項２０】
ヒンジ領域がＣＤ８ヒンジ領域である、請求項１９に記載の単離核酸配列。
【請求項２１】
プログラム可能な普遍的細胞受容体がさらに検出可能部分を含む、請求項１〜２０の何れかに記載の単離核酸配列。
【請求項２２】
検出可能部分がポリペプチドである、請求項２１に記載の単離核酸配列。
【請求項２３】
検出可能部分がＧＳＴタグ、ＨＩＳタグ、ｍｙｃタグおよびＨＡタグからなる群から選択される、請求項２１に記載の単離核酸配列。
【請求項２４】
プログラム可能な普遍的細胞受容体が配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む、プログラム可能な普遍的細胞受容体をコードする単離核酸配列。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６０】
図１２および１３に示すとおり、ＮＫＬ細胞において発現されたＰＵＣＲは、１μMまたは１０μMのＡＺＤ−ＰＥＧ８−ビオチンを使用してプログラムが成功した。ＡＺＤ−ＰＥＧ８−ビオチン濃度を上げたとき、非特異的背景染色の濃度が増加したが、発現ＰＵＣＲの特異的コンジュゲーション(すなわち、プログラミング)が観察され、非ＰＵＣＲ発現ＮＫＬ細胞とＰＵＣＲ発現ＮＫＬ細胞は、標識の程度の比較により容易に確認された(図１２参照)。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７７】
図１６Ａに示すとおり、野生型ＫＨＹＧ−１  ＮＫ細胞はＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａＰ細胞を殺せなかった。対照的に、ＤＫ−ＰＥＧ５−ＤＵＰＡでプログラムされたＰＵＣＲを発現するＫＨＹＧ−１  ＮＫ細胞は、ＰＳＭＡ陽性ＬＮＣａＰ細胞を特異的に殺した。図１６Ｂに示すとおり、ＤＫ−ＰＥＧ５−ＤＵＰＡでプログラムされたＰＵＣＲを発現するＫＨＹＧ−１  ＮＫ細胞の細胞毒性の特異性を、ＰＳＭＡ陰性ＰＣ−３細胞を使用してさらに確認した。野生型ＫＨＹＧ−１  ＮＫ細胞およびＤＫ−ＰＥＧ５−ＤＵＰＡでプログラムされたＰＵＣＲを発現するＫＨＹＧ−１  ＮＫ細胞でＰＳＭＡ陰性ＰＣ−３細胞殺滅に有意差は見られなかった。それ故に、この実験は、ＰＳＭＡターゲティング特異性作用物質でプログラムされたＰＵＣＲを発現するＮＫ細胞が、ＰＳＭＡ陽性細胞を特異的に標的とし、殺すために首尾よく使用できることを示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８２】
【表３８】
2018537076.tif 000001
【表３９】
2018537076.tif 000002
【表４０】
2018537076.tif 000003
【表４１】
2018537076.tif 000004
さらに、本発明は次の態様を包含する。
１. プログラム可能な普遍的細胞受容体をコードする単離核酸配列であって、ここで、該プログラム可能な普遍的細胞受容体が
ａ. 反応性アミノ酸残基を含む触媒的抗体またはその触媒的部分；
ｂ. 膜貫通ドメイン；および
ｃ. 細胞内ドメイン
を含む、単離核酸配列。
２. 触媒的抗体またはその触媒的部分がアルドラーゼ触媒的抗体、ベータラクタマーゼ触媒的抗体、アミダーゼ触媒的抗体、チオエステラーゼ触媒的抗体およびその触媒的部分からなる群から選択される、項１に記載の単離核酸配列。
３. 触媒的抗体またはその触媒的部分がアルドラーゼ触媒的抗体またはその触媒的部分である、項１または２に記載の単離核酸配列。
４. 反応性アミノ酸残基が反応性システイン残基、反応性チロシン残基、反応性リシン残基および反応性チロシン残基からなる群から選択される、項１〜３の何れかに記載の単離核酸配列。
５. 反応性アミノ酸残基が反応性リシン残基である、項１〜４の何れかに記載の単離核酸配列。
６. 触媒的抗体またはその触媒的部分がヒト化モノクローナル抗体３８Ｃ２またはその触媒的部分である、項１〜５の何れかに記載の単離核酸配列。
７. 触媒的抗体またはその触媒的部分が配列番号４のアミノ酸配列またはその触媒的部分を含む、項１に記載の単離核酸配列。
８. 触媒的抗体またはその触媒的部分がヒト化モノクローナル抗体３３Ｆ１２またはその触媒的部分である、項１に記載の単離核酸配列。
９. 触媒的抗体またはその触媒的部分がマウスモノクローナル抗体３８Ｃ２または３３Ｆ１２またはその触媒的部分である、項１に記載の単離核酸配列。
１０. 触媒的部分が一本鎖可変フラグメント(ｓｃＦｖ)である、項１〜９の何れかに記載の単離核酸配列。
１１. 触媒的部分がＦａｂフラグメントである、項１〜１０の何れかに記載の単離核酸配列。
１２. 触媒的部分がｓｃＦａｂ、二重特異性抗体、Ｆ(ａｂ’)２フラグメント、ＶＨドメインとＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメントおよびｄＡｂフラグメントからなる群から選択される、項１〜１１の何れかに記載の単離核酸配列。
１３. 細胞内ドメインがシグナル伝達ドメインを含む、項１〜１２の何れかに記載の単離核酸配列。
１４. シグナル伝達ドメインがＣＤ３−ζシグナル伝達ドメインである、項１３に記載の単離核酸配列。
１５. シグナル伝達ドメインがＣＤ２８シグナル伝達ドメインである、項１３に記載の単離核酸配列。
１６. 細胞内ドメインが共刺激性シグナル伝達ドメインを含む、項１〜１５の何れかに記載の単離核酸配列。
１７. 共刺激性シグナル伝達ドメインがＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原−１(ＬＦＡ−１)、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ８３リガンドおよびこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるタンパク質の細胞内ドメインを含む、項１６に記載の単離核酸配列。
１８. 膜貫通ドメインがＴ細胞受容体のアルファ鎖、Ｔ細胞受容体のベータ鎖、Ｔ細胞受容体のゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＬＦＡ−１Ｔ細胞共受容体、ＣＤ２Ｔ細胞共受容体／接着分子、ＣＤ８アルファおよびこれらのフラグメントからなる群から選択される、タンパク質の膜貫通ドメインを含む、項１〜１７の何れかに記載の単離核酸配列。
１９. プログラム可能な普遍的細胞受容体がさらにヒンジ領域を含む、項１〜１８の何れかに記載の単離核酸配列。
２０. ヒンジ領域がＣＤ８ヒンジ領域である、項１９に記載の単離核酸配列。
２１. プログラム可能な普遍的細胞受容体がさらに検出可能部分を含む、項１〜２０の何れかに記載の単離核酸配列。
２２. 検出可能部分がポリペプチドである、項２１に記載の単離核酸配列。
２３. 検出可能部分がＧＳＴタグ、ＨＩＳタグ、ｍｙｃタグおよびＨＡタグからなる群から選択される、項２１に記載の単離核酸配列。
２４. プログラム可能な普遍的細胞受容体が配列番号１０に示すアミノ酸配列を含む、プログラム可能な普遍的細胞受容体をコードする単離核酸配列。
２５. 項１〜２４の何れかに記載の核酸配列を含む、ベクター。
２６. ウイルスベクターである、項２５に記載のベクター。
２７. ウイルスベクターがレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群から選択される、項２６に記載のベクター。
２８. 項１〜２７の何れかに記載の単離核酸を含む、単離宿主細胞。
２９. プログラム可能な普遍的細胞受容体が反応性部分により特異性作用物質にコンジュゲートし、ここで、反応性部分が触媒的抗体またはその触媒的部分の反応性アミノ酸残基に結合される、項２８に記載の宿主細胞。
３０. プログラム可能な普遍的細胞受容体が反応性部分により特異性作用物質に共有結合により結合される、項２９に記載の宿主細胞。
３１. 反応性部分がジケトン、Ｎ−スルホニル−ベータ−ラクタムおよびアゼチジノンからなる群から選択される、項２９または３０に記載の宿主細胞。
３２. 特異性作用物質がリンカーによりコンジュゲートされる反応性部分を含む、項２９〜３１の何れかに記載の宿主細胞。
３３. リンカーがペプチド、小分子、アルキルリンカーおよびＰＥＧリンカーからなる群から選択される、項２８に記載の宿主細胞。
３４. 特異性作用物質が癌と関連するタンパク質と結合する、項２９〜３３の何れかに記載の宿主細胞。
３５. 癌と関連するタンパク質がＣＤ１９、インテグリン、ＶＥＧＦＲ２、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖIII、ＨＥＲ２、ＩＬ−１３ＲおよびＭＵＣ−１からなる群から選択される、項３４に記載の宿主細胞。
３６. 特異性作用物質がウイルスタンパク質に結合する、項２９〜３４の何れかに記載の宿主細胞。
３７. ウイルスタンパク質がＨＩＶタンパク質、肝炎ウイルスタンパク質、インフルエンザウイルスタンパク質、ヘルペスウイルスタンパク質、ロタウイルスタンパク質、呼吸器多核体ウイルスタンパク質、ポリオウイルスタンパク質、ライノウイルスタンパク質、サイトメガロウイルスタンパク質、サル免疫不全ウイルスタンパク質、脳炎ウイルスタンパク質、水痘帯状疱疹ウイルスタンパク質またはエプスタイン・バーウイルスタンパク質である、項３６に記載の宿主細胞。
３８. 特異性作用物質が疾患原因生物により発現されるタンパク質に結合する、項２９〜３４の何れかに記載の宿主細胞。
３９. 疾患原因生物が単細胞である、項３８に記載の宿主細胞。
４０. 疾患原因生物が多細胞である、項３８に記載の宿主細胞。
４１. 疾患原因生物がウイルス、プリオン、細菌、真菌、原生動物および寄生虫からなる群から選択される、項３８に記載の宿主細胞。
４２. 特異性作用物質が結合タンパク質、小分子、ペプチド、ペプチド模倣体、治療剤、ターゲティング剤、タンパク質アゴニスト、タンパク質アンタゴニスト、代謝制御因子、ホルモン、毒素または増殖因子を含む、項２９〜４１の何れかに記載の宿主細胞。
４３. 小分子が葉酸またはＤＵＰＡである、項４２に記載の宿主細胞。
４４. 結合タンパク質が抗体、抗体の抗原結合部分、リガンド、サイトカインまたは受容体である、項４２に記載の宿主細胞。
４５. 第一抗原に特異的な特異性作用物質にコンジュゲートしたプログラム可能な普遍的細胞受容体および
第一抗原と異なる第二抗原に特異的な特異性作用物質にコンジュゲートしたプログラム可能な普遍的細胞受容体
を含む、項２９〜４１の何れかに記載の宿主細胞。
４６. 免疫細胞である、項２９〜４５の何れかに記載の宿主細胞。
４７. 免疫細胞が樹状細胞、単球、肥満細胞、好酸球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、細胞毒性Ｔリンパ球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、単球およびナチュラルキラーＴ(ＮＫＴ)細胞からなる群から選択される、項４６に記載の宿主細胞。
４８. ＮＫ細胞がＮＫ−９２細胞または修飾ＮＫ−９２細胞である、項４７に記載の宿主細胞。
４９. 免疫細胞が修飾ＮＫ−９２細胞(ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６６７２)である、項４８に記載の宿主細胞。
５０. 癌を有するヒト対象から単離される、項４６に記載の宿主細胞。
５１. ａ. 第一抗原に結合する特異性作用物質に結合したプログラム可能な普遍的細胞受容体を含む宿主細胞の亜集団および
ｂ. 第一抗原と異なる第二抗原に結合する特異性作用物質に結合したプログラム可能な普遍的細胞受容体を含む宿主細胞の亜集団
を含む、項２９〜５０の何れかに記載の宿主細胞の集団。
５２. 対象における癌を処置するまたは腫瘍増殖を阻害する方法であって、対象に項２９〜３５または４２〜５０の何れかに記載の宿主細胞または項５１に記載の宿主細胞の集団を投与し、それにより対象における癌を処置するまたは腫瘍増殖を阻害することを含む、方法。
５３. 処置を必要とする対象における疾患原因生物により引き起こされる医学的状態を処置する方法であって、対象に項３６〜４１の何れかに記載の宿主細胞または項５１に記載の宿主細胞の集団を投与し、それにより対象における疾患原因生物により引き起こされる医学的状態を処置することを含む、方法。
５４. 処置を必要とする対象における癌処置に使用するためのカスタマイズされた治療的宿主細胞を製造する方法であって、
免疫細胞と、該免疫細胞の細胞膜に発現されるプログラム可能な普遍的細胞受容体に結合する特異性作用物質を接触させることを含み、ここで、特異性作用物質が処置を必要とする対象の癌抗原プロファイルに対応する癌関連抗原と結合する、方法。
５５. 免疫細胞が樹状細胞、肥満細胞、単球、好酸球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、細胞毒性Ｔリンパ球、マクロファージ、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、単球およびナチュラルキラーＴ(ＮＫＴ)細胞からなる群から選択される、項５４に記載の方法。
５６. 免疫細胞がＴ細胞またはＮＫ細胞である、項５４または５５に記載の方法。
５７. ＮＫ細胞がＮＫ−９２細胞または修飾ＮＫ−９２細胞である、項５５または５６に記載の方法。
５８. ＮＫ細胞が修飾ＮＫ−９２細胞(ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６６７２)である、項５７に記載の方法。
５９. 癌関連抗原がＣＤ１９、インテグリン、ＶＥＧＦＲ２、ＰＳＭＡ、ＣＥＡ、ＧＭ２、ＧＤ２、ＧＤ３、シアリルＴｎ(ＳＴｎ)、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖIII、ＨＥＲ２、ＩＬ−１３ＲおよびＭＵＣ−１からなる群から選択される、項５４〜５８の何れかに記載の方法。
６０. 特異性作用物質が結合タンパク質、小分子、ペプチド、ペプチド模倣体、治療剤、ターゲティング剤、タンパク質アゴニスト、タンパク質アンタゴニスト、代謝制御因子、ホルモン、毒素または増殖因子を含む、項５４〜５８の何れかに記載の方法。
６１. 結合タンパク質が抗体またはその抗原結合フラグメントである、項６０に記載の方法。
６２. 抗原結合フラグメントがｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントである、項６１に記載の方法。
６３. 抗体またはその抗体結合フラグメントが可変カッパ軽鎖を含む、項６１に記載の方法。
６４. 処置を必要とする対象における癌を処置する方法であって、
(ａ)対象における癌抗原プロファイルを決定し、
(ｂ)(ａ)において同定された抗原に結合する特異性作用物質を選択し、そして
(ｃ)(ｂ)において同定された特異性作用物質に結合するプログラム可能な普遍的細胞受容体を含む免疫細胞を投与し、
それにより処置を必要とする対象における癌を処置することを含む、方法。
６５. プログラム可能な普遍的細胞受容体を含む宿主細胞の集団を含む容器を含むキットであって、
プログラム可能な普遍的細胞受容体が
基質に結合しない反応性アミノ酸残基を含む触媒的抗体またはその触媒的部分；
膜貫通ドメインおよび
細胞内ドメイン
を含むものである、キット。
６６. 宿主細胞が免疫細胞である、項６５に記載のキット。
６７. 免疫細胞が修飾ＮＫ−９２細胞(ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−６６７２)である、項６６に記載のキット。
６８. さらに特異性作用物質を含む、項６５〜６７の何れかに記載のキット。
６９. 約１×１０２〜約１×１０１６免疫細胞を含む、項６５〜６８の何れかに記載のキット。
７０. 項１〜２４の何れかに記載の核酸を含む容器を含む、キット。
７１. 項２５〜２７の何れかに記載のベクターを含む容器を含む、キット。