【手続補正書】
【提出日】令和1年6月5日(2019.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変のための組成物であって、
合成ポリマーベシクルと、
前記合成ポリマーベシクル中に封入された遺伝子編集システムであって、宿主細胞ゲノム内の標的配列と相互作用するように構成された核酸構成成分を含む遺伝子編集システムと
を含む組成物。
【請求項２】
前記遺伝子編集システムが、タンパク質構成成分をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記タンパク質構成成分が、リボ核酸（ＲＮＡ）指令型ヌクレアーゼを含み、
前記核酸構成成分が、前記標的配列に相補的なガイドＲＮＡを含む、
請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記核酸構成成分が、外因性デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）修復鋳型をさらに含み、
前記ＲＮＡ指令型ヌクレアーゼが、前記標的配列に隣接する前記宿主細胞ゲノムで二重鎖開裂を創出するように構成され、
前記宿主細胞内の修復プロセスが、前記宿主細胞ゲノムの再ライゲーション中に、前記外因性ＤＮＡ修復鋳型に基づいて前記宿主細胞ゲノムの改変を誘発する、
請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＤＮＡ修復鋳型が、前記ＲＮＡ指令型ヌクレアーゼにより誘導された前記二重鎖開裂に隣り合った前記宿主細胞ゲノムの領域に相同な末端領域を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記遺伝子編集システムが、前記組成物の総重量に対して少なくとも３重量％の量で、前記合成ポリマーベシクル中に含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
タンパク質構成成分が、ネイティブ形態の酵素、または前記宿主細胞への送達後に酵素に翻訳されるように構成されたメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記タンパク質構成成分が、酵素をコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）配列を含有する発現ベクターとして送達される、請求項２に記載の組成物。
【請求項９】
前記核酸構成成分が、ガイドリボ核酸（ＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記酵素および前記ガイドＲＮＡをコードする前記ＤＮＡ配列が、単一の発現ベクター上で提供される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記タンパク質構成成分が、前記宿主ゲノムの相補的セグメントへの前記核酸構成成分の結合に基づいて前記宿主ゲノムを切断するように構成された酵素を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項１２】
前記酵素が、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質９（Ｃａｓ９）を含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記核酸構成成分が、トランスポゾンを含む発現ベクターを含み、
前記タンパク質構成成分が、トランスポサーゼを含む、
請求項２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記トランスポサーゼが、
ネイティブ酵素、
前記宿主細胞への送達後に前記酵素に翻訳されるように構成されたメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）分子、および
前記酵素をコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）配列
の１つである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＤＮＡ配列が、前記トランスポゾンを含む前記発現ベクター上で提供される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記合成ポリマーベシクルが、
ポリ（エチレンオキシド）を含む親水性ブロックと
疎水性ブロックと
を含む少なくとも１つのブロックコポリマーから生成される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記疎水性ブロックが、脂肪族ポリ（無水物）、ポリ（核酸）、ポリ（エステル）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ペプチド）、ポリ（ホスファゼン）、および多（糖類）から選択される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記疎水性ブロックが、ポリ（ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）、またはポリ（トリメチレンカーボネート）（ＰＴＭＣ）の１つまたは１つより多くを含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
宿主細胞ゲノムを改変する方法において使用するための組成物であって、前記組成物は、ポリマーソーム中に封入された遺伝子編集システムを含み、
前記遺伝子編集システムが、
タンパク質構成成分、および
前記宿主細胞内の標的核酸配列と相互作用するように構成された核酸構成成分
を含み、
前記宿主細胞ゲノムを改変する方法が、前記封入された遺伝子編集システムを前記宿主細胞に送達することを含み、
前記ポリマーソームが、前記宿主細胞内で前記遺伝子編集システムを選択的に放出するように構成される、組成物。
【請求項２０】
前記封入された遺伝子編集システムを前記宿主細胞に送達することが、前記封入された遺伝子編集システムを含有する有効量の組成物を被験体に投与することを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
封入された遺伝子編集システムの作製における使用のための組合せ物であって、前記組合せ物は、タンパク質構成成分、および宿主細胞内の標的核酸配列と相互作用するように構成された核酸構成成分を含み、前記封入された遺伝子編集システムが、逐次飽和プロトコールを使用して調製される、組合せ物。
【請求項２２】
封入された遺伝子編集組成物の懸濁液を製造する方法であって、
ある分量のブロックコポリマーをある分量の低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と熱ブレンドして、ＰＥＧ／ポリマー配合物を創出することと、
前記遺伝子編集組成物の溶液の一定分量を、前記ＰＥＧ／ポリマー配合物を含有する試料に添加することと、
生成されたポリマーソームが、前記遺伝子編集組成物で逐次飽和されるように少なくとも１回の希釈ステップを行うことと
を含み、
前記遺伝子編集組成物が、
タンパク質構成成分、および
宿主細胞ゲノム内の標的配列と相互作用するように構成された核酸構成成分
を含む、方法。
【請求項２３】
前記ブロックコポリマーが、両親媒性ジブロックコポリマーを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記両親媒性ジブロックコポリマーが、ポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ（ブタジエン）（ＰＥＯ−ｂ−ＰＢＤ）を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記生成されたポリマーソームが、前記遺伝子編集組成物に対して少なくとも５０％の封入効率を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
キットであって、
合成ポリマーベシクル中に封入された遺伝子編集システムを含む医薬組成物であって、前記遺伝子編集システムが、
タンパク質構成成分、および
宿主細胞ゲノム内の標的配列と相互作用するように構成された核酸構成成分
を含む、医薬組成物と、
前記医薬組成物を静脈内に、吸入により、局所的に、経直腸的に、経膣的に、経皮的に、皮下に、腹腔内に、髄腔内に、筋内に、または経口で投与するための器具と
を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
図６Ｃは、第４の比較モデルで発生させたナノ粒子中に封入したＤＮＡの平均量（μｇ／ｍＬ）を、タンパク質分解前後で示す。図６Ｃ中の封入量は、ＤＮＡ結合白金のＩＣＰ−ＯＥＳを使用して定量した。図６Ｄは、得られたポリマーソーム中のＤＮＡ対ポリマーの平均最終重量割合（すなわち、ｗ／ｗ％  ＤＮＡ／ポリマー）としての、平均負荷容量を、タンパク質分解前後で示す。図６Ｅは、第４の比較モデルで発生させた最終ポリマーソームの平均サイズ（すなわち、直径）を示す。示されるように、Ｃａｓ９タンパク質についての約１ｍｇ／ｍＬの封入が、第４の比較モデルを使用して達成され、最終ポリマーソーム配合物の約３重量％に対応した。さらに、約５０μｇ／ｍＬの封入が、第４の比較モデルを使用してＤＮＡについて達成され、同じナノスケールベシクル構築物内にＣａｓ９タンパク質およびＤＮＡの両方を封入した最終ポリマーソーム配合物の約０．１５重量％に対応した。これらのポリマーソームは、直径約２２０ｎｍであった。
一実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
遺伝子改変のための組成物であって、
合成ポリマーベシクルと、
前記合成ポリマーベシクル中に封入された遺伝子編集システムであって、宿主細胞ゲノム内の標的配列と相互作用するように構成された核酸構成成分を含む遺伝子編集システムと
を含む組成物。
（項目２）
前記遺伝子編集システムが、タンパク質構成成分をさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記タンパク質構成成分が、リボ核酸（ＲＮＡ）指令型ヌクレアーゼを含み、
前記核酸構成成分が、前記標的配列に相補的なガイドＲＮＡを含む、
項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記核酸構成成分が、外因性デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）修復鋳型をさらに含み、
前記ＲＮＡ指令型ヌクレアーゼが、前記標的配列に隣接する前記宿主細胞ゲノムで二重鎖開裂を創出するように構成され、
前記宿主細胞内の修復プロセスが、前記宿主細胞ゲノムの再ライゲーション中に、前記外因性ＤＮＡ修復鋳型に基づいて前記宿主細胞ゲノムの改変を誘発する、
項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記ＤＮＡ修復鋳型が、前記ＲＮＡ指令型ヌクレアーゼにより誘導された前記二重鎖開裂に隣り合った前記宿主細胞ゲノムの領域に相同な末端領域を含む、項目４に記載の組成物。
（項目６）
前記遺伝子編集システムが、前記組成物の総重量に対して少なくとも３重量％の量で、前記合成ポリマーベシクル中に含まれる、項目１に記載の組成物。
（項目７）
タンパク質構成成分が、ネイティブ形態の酵素、または前記宿主細胞への送達後に酵素に翻訳されるように構成されたメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子を含む、項目１に記載の組成物。
（項目８）
前記タンパク質構成成分が、酵素をコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）配列を含有する発現ベクターとして送達される、項目２に記載の組成物。
（項目９）
前記核酸構成成分が、ガイドリボ核酸（ＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含む、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
前記酵素および前記ガイドＲＮＡをコードする前記ＤＮＡ配列が、単一の発現ベクター上で提供される、項目９に記載の組成物。
（項目１１）
前記タンパク質構成成分が、前記宿主ゲノムの相補的セグメントへの前記核酸構成成分の結合に基づいて前記宿主ゲノムを切断するように構成された酵素を含む、項目２に記載の組成物。
（項目１２）
前記酵素が、規則的な間隔をもってクラスター化された短鎖反復回文配列（ＣＲＩＳＰＲ）関連タンパク質９（Ｃａｓ９）を含む、項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
前記核酸構成成分が、トランスポゾンを含む発現ベクターを含み、
前記タンパク質構成成分が、トランスポサーゼを含む、
項目２に記載の組成物。
（項目１４）
前記トランスポサーゼが、
ネイティブ酵素、
前記宿主細胞への送達後に前記酵素に翻訳されるように構成されたメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）分子、および
前記酵素をコードするデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）配列
の１つである、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記ＤＮＡ配列が、前記トランスポゾンを含む前記発現ベクター上で提供される、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記合成ポリマーベシクルが、
ポリ（エチレンオキシド）を含む親水性ブロックと
疎水性ブロックと
を含む少なくとも１つのブロックコポリマーから生成される、項目１に記載の組成物。
（項目１７）
前記疎水性ブロックが、脂肪族ポリ（無水物）、ポリ（核酸）、ポリ（エステル）、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ペプチド）、ポリ（ホスファゼン）、および多（糖類）から選択される、項目１５に記載の組成物。
（項目１８）
前記疎水性ブロックが、ポリ（ラクチド）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）、またはポリ（トリメチレンカーボネート）（ＰＴＭＣ）の１つまたは１つより多くを含む、項目１５に記載の組成物。
（項目１９）
宿主細胞ゲノムを改変する方法であって、
ポリマーソーム中に、
タンパク質構成成分、および
前記宿主細胞内の標的核酸配列と相互作用するように構成された核酸構成成分
を含む遺伝子編集システムを封入することと、
前記封入された遺伝子編集システムを前記宿主細胞に送達することと
を含み、
前記ポリマーソームが、前記宿主細胞内で前記遺伝子編集システムを選択的に放出するように構成される、方法。
（項目２０）
前記封入された遺伝子編集システムを前記宿主細胞に送達することが、前記封入された遺伝子編集システムを含有する有効量の組成物を被験体に投与することを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記封入された遺伝子編集システムが、逐次飽和プロトコールを使用して調製される、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
封入された遺伝子編集組成物の懸濁液を製造する方法であって、
ある分量のブロックコポリマーをある分量の低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と熱ブレンドして、ＰＥＧ／ポリマー配合物を創出することと、
前記遺伝子編集組成物の溶液の一定分量を、前記ＰＥＧ／ポリマー配合物を含有する試料に添加することと、
生成されたポリマーソームが、前記遺伝子編集組成物で逐次飽和されるように少なくとも１回の希釈ステップを行うことと
を含み、
前記遺伝子編集組成物が、
タンパク質構成成分、および
宿主細胞ゲノム内の標的配列と相互作用するように構成された核酸構成成分
を含む、方法。
（項目２３）
前記ブロックコポリマーが、両親媒性ジブロックコポリマーを含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記両親媒性ジブロックコポリマーが、ポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ（ブタジエン）（ＰＥＯ−ｂ−ＰＢＤ）を含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記生成されたポリマーソームが、前記遺伝子編集組成物に対して少なくとも５０％の封入効率を有する、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
キットであって、
合成ポリマーベシクル中に封入された遺伝子編集システムを含む医薬組成物であって、前記遺伝子編集システムが、
タンパク質構成成分、および
宿主細胞ゲノム内の標的配列と相互作用するように構成された核酸構成成分
を含む、医薬組成物と、
前記医薬組成物を静脈内に、吸入により、局所的に、経直腸的に、経膣的に、経皮的に、皮下に、腹腔内に、髄腔内に、筋内に、または経口で投与するための器具と
を含むキット。