【手続補正書】
【提出日】平成20年8月26日(2008.8.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
大規模生産細胞培養における抗−Ａベータの製造方法であって、下記工程：
細胞培養条件下で発現し、抗−Ａベータをコードする遺伝子を含有する哺乳動物細胞；および
グルタミンを含有し、（ｉ）約７０ｍＭを超える単位体積あたりの累積アミノ酸量、（ｉｉ）約２未満の累積アスパラギンに対するモル累積グルタミン比、（ｉｉｉ）約０．２未満の総累積アミノ酸に対するモル累積グルタミン比、（ｉｖ）約０．４〜１の総累積アミノ酸に対するモル累積無機イオン比、（ｖ）約１６ｍＭを超える単位体積あたりのグルタミンおよびアスパラギンを合わせた累積量、およびその組合せからなる群から選択される培地特性を有する培地；
を含む細胞培養物を供給すること；
初期成長フェーズにおいて、該培養物が第１の培養条件下に維持された場合に、可能な最大生存細胞密度の約２０％〜８０％の範囲内の生存細胞密度まで該細胞に再生産させるのに十分な第１の期間、第１の培養条件下で該培養物を維持すること；
少なくとも１つの培養条件を変更して、第２の培養条件を適用すること；
第２の条件下、第２の期間、該培養物を維持して、抗−Ａベータを細胞培養物中に堆積させること；
を含む方法。
【請求項２】
大規模生産細胞培養における抗−Ａベータの製造方法であって、下記工程：
細胞培養条件下で発現し、抗−Ａベータをコードする遺伝子を含む哺乳動物細胞；および
累積アスパラギンに対する比が約２未満であるモル累積グルタミンを含有する培地；
ここに、該培地は、グルタミンを含有し；
さらに、該培地は、（ｉ）約７０ｍＭを超える単位体積あたりの累積アミノ酸量を含有する培地、（ｉｉ）約０．２未満の総累積アミノ酸に対するモル累積グルタミン比、（ｉｉｉ）約０．４〜１の総累積アミノ酸に対するモル累積無機イオン比、（ｉｖ）約１６ｍＭを超える単位体積あたりのグルタミンおよびアスパラギンを合わせた累積量、およびその組合せからなる群から選択される２つの培地特性を有する；
を含む細胞培養物を供給すること；
初期成長フェーズにおいて、該培養物が第１の培養条件下に維持された場合に、可能な最大生存細胞密度の約２０％〜８０％の範囲内の生存細胞密度まで該細胞に再生産させるのに十分な第１の期間、第１の培養条件下で該培養物を維持すること；
少なくとも１つの培養条件を変更して、第２の培養条件を適用すること；
第２の条件下で第２の期間、該培養物を維持して、抗−Ａベータを細胞培養物中に堆積させること；
を含む方法。
【請求項３】
少なくとも１つの培養条件を変更する工程における該細胞培養条件が、（ｉ）温度、（ｉｉ）ｐＨ、（ｉｉｉ）重量オスモル濃度、（ｉｖ）化学誘導剤レベル、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項４】
該培地の初期グルタミン濃度が１０ｍＭ以下である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
該培地の初期グルタミン濃度が４ｍＭ以下である、請求項１記載の方法。
【請求項６】
該培地のグルタミンの単位体積あたりの総累積量が１０ｍＭ以下である、請求項１記載の方法。
【請求項７】
該培地のグルタミンの単位体積あたりの総累積量が４ｍＭ以下である、請求項１記載の方法。
【請求項８】
グルタミンが、細胞培養の開始時に初期培地にのみ与えられる、請求項１記載の方法。
【請求項９】
該哺乳動物細胞の初期密度が少なくとも２×１０５細胞／ｍＬである、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
該哺乳動物細胞の初期密度が少なくとも２×１０６細胞／ｍＬである、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
供給工程が少なくとも約１０００Ｌの培養物を供給することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
供給工程が少なくとも約１０，０００Ｌの培養物を供給することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
該第１の条件が約３０〜４２℃の第１の温度範囲を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
該第１の条件が約３７℃の第１の温度範囲を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
該第２の条件が約２５〜４１℃の第２の温度範囲を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
該第２の条件が約２９〜３５℃の第２の温度範囲を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
該第２の条件が約３１℃の第２の温度範囲を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
さらに、少なくとも１つの培養条件を変更する第１の変更に続く、少なくとも１つの培養条件を変更し、第３の条件を培養物に適用する第２の変更段階を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１９】
第２の変更段階が、（ｉ）温度、（ｉｉ）ｐＨ、（ｉｉｉ）重量オスモル濃度、（ｉｖ）化学誘導剤レベル、およびその組合せからなる群から選択される、少なくとも１つの培養条件を変更することを含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
該第３の条件が約２７〜３７℃の第３の温度範囲を含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
該第１の期間が１〜７日である、請求項１記載の方法。
【請求項２２】
該第１の期間が約４日である、請求項１記載の方法。
【請求項２３】
該第１の期間と第２の期間の合計が少なくとも５日である、請求項１記載の方法。
【請求項２４】
第２の期間、該培養物を維持する工程において、培地における乳酸レベルが最大限のレベルに到達した後に減少する、請求項１記載の方法。
【請求項２５】
第２の期間、該培養物を維持する工程において、培地におけるアンモニウムレベルが最大限のレベルに到達した後に減少する、請求項１記載の方法。
【請求項２６】
該生産された抗−Ａベータの総量が、該培地特性を欠くが他は同一の培地における他は同一の条件下で生産された抗−Ａベータの量の少なくとも１．５倍を超える、請求項１記載の方法。
【請求項２７】
該生産された抗−Ａベータの総量が、該培地特性を欠くが他は同一の培地における他は同一の条件下で生産された抗−Ａベータの量の少なくとも２倍を超える、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
さらに、該細胞培養物に補足成分を供給する、請求項１記載の方法。
【請求項２９】
該補足成分を複数回供給する、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
該補足成分が、ホルモンおよび／または他の成長因子、特定のイオン（例えば、ナトリウムイオン、塩化物イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオンまたはリン酸イオン）、緩衝液、ビタミン、ヌクレオシドまたはヌクレオチド、微量元素（通常、非常に低い最終濃度で存在する無機化合物）、アミノ酸、脂質またはグルコースあるいは他のエネルギー源からなる群から選択される、請求項２８記載の方法。
【請求項３１】
大規模生産細胞培養における抗−Ａベータの製造方法であって、下記工程：
細胞培養条件下で発現し、抗−Ａベータをコードする遺伝子を含有する哺乳動物細胞；および
グルタミンを含有し、ｉ）約７０ｍＭを超える出発アミノ酸濃度、ｉｉ）約２未満のアスパラギンに対するモルグルタミン比、ｉｉｉ）約０．２未満の総アミノ酸に対するモルグルタミン比、ｉｖ）約０．４〜１の総アミノ酸に対するモル無機イオン比、およびｖ）約１６ｍＭを超えるグルタミンとアスパラギンの組合せ濃度からなる群から選択される少なくとも２つの培地特性を有する合成培地；
を含む細胞培養物を供給すること；
初期成長フェーズにおいて、該培養物が第１の培養条件下に維持された場合に、可能な最大生存細胞密度の約２０％〜８０％の範囲内まで該細胞に再生産させるのに十分な第１の期間、第１の培養条件下で該培養物を維持すること；
少なくとも１つの培養条件を変更して、第２の培養条件を適用すること；
第２の条件下、第２の期間、該培養物を維持して、抗−Ａベータを細胞培養物中に堆積させること；
を含む方法。
【請求項３２】
大規模生産細胞培養における抗−Ａベータの製造方法であって、下記工程：
細胞培養条件下で発現し、抗−Ａベータをコードする遺伝子を含有する哺乳動物細胞；および
グルタミンを含有し、ｉ）約７０ｍＭを超える出発アミノ酸濃度、ｉｉ）約２未満のアスパラギンに対するモルグルタミン比、ｉｉｉ）約０．２未満の総アミノ酸に対するモルグルタミン比、ｉｖ）約０．４〜１の総アミノ酸に対するモル無機イオン比、およびｖ）約１６ｍＭを超えるグルタミンとアスパラギンの組合せ濃度により特徴付けられる合成培地；
を含む細胞培養物を供給すること；
初期成長フェーズにおいて、該培養物が第１の培養条件下に維持された場合に、可能な最大生存細胞密度の約２０％〜８０％の範囲内まで該細胞に再生産させるのに十分な第１の期間、第１の培養条件下で該培養物を維持すること；
少なくとも１つの培養条件を変更して、第２の培養条件を適用すること；
第２の条件下、第２の期間、該培養物を維持して、抗−Ａベータを細胞培養物中に堆積させること；
を含む方法。
【請求項３３】
該培地が、グルタミンを含有し、（ｉ）約７０ｍＭを超える出発アミノ酸濃度、（ｉｉ）約２未満の出発アスパラギンに対する出発グルタミン比、（ｉｉｉ）約０．２未満の出発総アミノ酸に対するモル出発グルタミン比、（ｉｖ）約０．４〜１の出発総アミノ酸に対するモル出発無機イオン比、（ｖ）約１６ｍＭを超える出発グルタミンと出発アスパラギンの組合せ濃度、およびその組合せからなる群から選択される培地特性を有する培地を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３４】
該乳酸レベルが、該培地特性を欠くが他は同一の培地における他は同一の条件下で観察される乳酸レベルよりも低く、
該アンモニウムレベルが、該培地特性を欠くが他は同一の培地における他は同一の条件下で観察されるアンモニウムレベルよりも低く、
生産された抗−Ａベータの総量が、該培地特性を欠くが他は同一の培地における他は同一の条件下で観察される量より少なくとも多い、
請求項１〜２または３１〜３３いずれか１項記載の方法。
【請求項３５】
該培養物に、該抗−Ａベータの生産の間さらなる成分を補足しない、請求項１記載の方法。
【請求項３６】
該培養物において、グルタミンの代わりにグリシルグルタミンを用いる、請求項１記載の方法。
【請求項３７】
該培地における、単位体積あたりのヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびプロリンの総累積量が約２５ｍＭを超える、請求項１記載の方法。
【請求項３８】
該培地における、単位体積あたりのヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびプロリンの総累積量が約３５ｍＭを超える、請求項１記載の方法。
【請求項３９】
該培地が：
（ｉ）約１．７ｍＭを超える、単位体積あたりのヒスチジンの総累積量；
（ｉｉ）約３．５ｍＭを超える、単位体積あたりのイソロイシンの総累積量；
（ｉｉｉ）約５．５ｍＭを超える、単位体積あたりのロイシンの総累積量；
（ｉｖ）約２．０ｍＭを超える、単位体積あたりのメチオニンの総累積量；
（ｖ）約２．５ｍＭを超える、単位体積あたりのフェニルアラニンの総累積量；
（ｖｉ）約２．５ｍＭを超える、単位体積あたりのプロリンの総累積量；
（ｖｉｉ）約１．０ｍＭを超える、単位体積あたりのトリプトファンの総累積量；
（ｖｉｉｉ）約２．０ｍＭを超える、単位体積あたりのチロシンの総累積量；および
（ｉｘ）約２．５ｍＭを超える、単位体積あたりのプロリンの総累積量、
からなる群から選択される培地特性を有する、請求項１記載の方法。
【請求項４０】
該培地における単位体積あたりのセリンの総累積量が約１０ｍＭを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４１】
該培地における単位体積あたりのアスパラギンの総累積量が約８ｍＭを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４２】
該培地における単位体積あたりのアスパラギンの総累積量が約１２ｍＭを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４３】
該培地における単位体積あたりのリンの総累積量が約５ｍＭを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４４】
該培地における単位体積あたりのグルタミン酸塩の総累積量が約１ｍＭ未満である、請求項１記載の方法。
【請求項４５】
該培地における単位体積あたりのパントテン酸カルシウムの総累積量が約２０ｍｇ／Ｌを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４６】
該培地における単位体積あたりのニコチンアミドの総累積量が約２５ｍｇ／Ｌを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４７】
該培地における単位体積あたりのピリドキシンおよびピリドキサルの総累積量が約３５ｍｇ／Ｌを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４８】
該培地における単位体積あたりのリボフラビンの総累積量が約２．０ｍｇ／Ｌを超える、請求項１記載の方法。
【請求項４９】
該培地における単位体積あたりのチアミン塩酸塩の総累積量が約３５ｍｇ／Ｌを超える、請求項１記載の方法。