【手続補正書】
【提出日】令和1年10月9日(2019.10.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
刺激物質に可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含む第1の試薬に可逆的に結合された該刺激物質の存在下で、標的細胞を含む組成物をインキュベートする工程を含む、細胞をモジュレートするための方法であって、
少なくとも複数の標的細胞が、該インキュベーションの少なくとも一部の間、支持体上に固定化されている；および
該標的細胞の表面上に発現された分子に該刺激物質が特異的に結合し、それによって該標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする条件下で、該インキュベーションが実施される、
方法。
【請求項２】
少なくとも複数の細胞の前記固定化が可逆的であり；かつ
前記インキュベーションの少なくとも一部が、(a)支持体上に固定化された第2の試薬、および(b)第2の試薬に可逆的に結合された選択物質の存在下で実施され；
少なくとも複数の標的細胞によって発現された選択マーカーへの該選択物質による特異的結合が、該支持体への該少なくとも複数の標的細胞の可逆的固定化をもたらす、
請求項1記載の方法。
【請求項３】
細胞をモジュレートする方法であって、
(1)(a)標的細胞を含む組成物と、(b)(i)少なくとも複数の標的細胞のうちの1つ以上により発現された選択マーカーに特異的に結合することができ、かつ(ii)支持体に直接的または間接的に固定化されているか、固定化することができる、選択物質と、(c)該支持体と、を組み合わせる工程であって、それによって、該少なくとも複数のうちの1つ以上の標的細胞が、該選択物質を介して該支持体上に固定化される、工程；および
(2)刺激物質に可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含む試薬に可逆的に結合された該刺激物質の存在下において、該刺激物質が、標的細胞の表面上に発現された分子に特異的に結合し、それによって該標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする条件下で、少なくとも複数の標的細胞をインキュベートする工程
を含む、方法。
【請求項４】
細胞をモジュレートする方法であって、
(a)標的細胞を含む組成物と、支持体上に固定化された試薬に可逆的に結合した刺激物質とを組み合わせる工程であって、該試薬が、該刺激物質にそれぞれ可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含み、かつ標的細胞の表面上に発現された分子に特異的に結合することができ、それによって、標的細胞を該支持体上に固定化する、工程；
(b)固定化された標的細胞から、該組成物の他の細胞を分離または除去する工程；および
(c)固定化された標的細胞の少なくとも一部を、該刺激物質の存在下において、少なくとも複数の標的細胞においてシグナルが誘導またはモジュレートされる条件下で、インキュベートする工程
を含む、方法。
【請求項５】
選択物質が、抗体フラグメント、一価抗体フラグメント、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、Igドメインを含む分子、サイトカイン、ケモカイン、アプタマー、MHC分子、MHC-ペプチド複合体；受容体リガンド；およびそれらの結合断片からなる群より選択される作用物質であるか、もしくはそれを含む；ならびに/または
選択物質が抗体フラグメントを含む；
選択物質がFabフラグメントであるか、もしくはそれを含む；
選択物質が、(Fab)2'フラグメントおよび二価単鎖Fv(scFv)フラグメントからなる二価抗体フラグメントの群より選択される；
選択物質が、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびscFvからなる群より選択される一価抗体フラグメントである；ならびに/または
選択物質が、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドをベースにしたムテイン、グルボディ(glubody)、アンキリンスキャホールドをベースにしたタンパク質、結晶性スキャホールドをベースにしたタンパク質、アドネクチン(adnectin)、およびアビマー(avimer)からなる群より選択される、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子である、
請求項2または請求項3記載の方法。
【請求項６】
選択マーカーがB細胞もしくはT細胞共受容体である；
選択マーカーがT細胞もしくはB細胞抗原受容体複合体のメンバーであるか、またはそれを含む；
選択マーカーがCD3鎖であるか、もしくはそれを含む；
選択マーカーがCD3ζ鎖であるか、もしくはそれを含む；
選択マーカーがCD8であるか、もしくはそれを含む；
選択マーカーがCD4であるか、もしくはそれを含む；および/または
選択物質と選択マーカーとの間の特異的結合が、標的細胞へのシグナルを誘導しない、または標的細胞への刺激シグナル、活性化シグナルもしくは増殖シグナルを誘導しない、
請求項2、3、および5のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
刺激物質が、抗体フラグメント、一価抗体フラグメント、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、Igドメインを含む分子、サイトカイン、ケモカイン、アプタマー、MHC分子、MHC-ペプチド複合体、受容体リガンド、およびそれらの結合断片からなる群より選択される作用物質であるか、もしくはそれを含む；ならびに/または
刺激物質が抗体フラグメントを含む；
刺激物質がFabフラグメントであるか、もしくはそれを含む；
刺激物質が、(Fab)2'フラグメントおよび二価単鎖Fv(scFv)フラグメントからなる二価抗体フラグメントの群より選択される；
刺激物質が、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびscFvからなる群より選択される一価抗体フラグメントである；ならびに/または
刺激物質が、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドをベースにしたムテイン、グルボディ、アンキリンスキャホールドをベースにしたタンパク質、結晶性スキャホールドをベースにしたタンパク質、アドネクチン、およびアビマーからなる群より選択される、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子である、
請求項1〜6のいずれか一項記載の方法。
【請求項８】
標的細胞の表面上に発現された分子が、T細胞もしくはB細胞抗原受容体複合体のメンバーであるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、CD3鎖であるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、CD3ζであるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、T細胞受容体もしくはB細胞受容体の抗原結合部分であるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、キメラ抗原受容体である；
刺激物質と該分子との特異的結合が、T細胞またはB細胞に一次シグナルを送達することができる、
請求項1〜7のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
刺激物質が、MHC I：ペプチド複合体もしくはその機能的部分、MHCII：ペプチド複合体もしくはその機能的部分を含み、かつ/またはT細胞におけるTCR/CD3複合体、T細胞におけるCD3含有複合体、および/もしくはT細胞におけるITAM含有分子を介して刺激シグナルを送達することができる、
請求項1〜8のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
標的細胞の表面上に発現された分子が第1の分子であり、刺激物質が第1の刺激物質であり、少なくとも複数の標的細胞の表面上に発現された第2の分子に結合することができる第2の刺激物質の存在下でインキュベーションをさらに実施する、請求項1〜9のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
第2の刺激物質が、第1の試薬に可逆的に結合される、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
(i) 前記第2の刺激物質の第2の分子への特異的結合が、第1の分子を介して送達されたシグナルを増強する、減衰させる、もしくは改変することができ；かつ/または
(ii) 第2の分子が共刺激分子である；
第2の分子がアクセサリー分子である；
第2の分子がサイトカイン受容体である；
第2の分子がケモカイン受容体である；
第2の分子が免疫チェックポイント分子である；または
第2の分子がTNFファミリーもしくはTNF受容体ファミリーのメンバーである、
請求項10または請求項11記載の方法。
【請求項１３】
第2の分子が、CD28、CD137、CD40リガンド、CD40、OX40、もしくはICOS、または上記のいずれかの機能的部分を含む、請求項10〜12のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
第2の刺激物質が、抗体フラグメント、一価抗体フラグメント、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、Igドメインを含む分子、サイトカイン、ケモカイン、アプタマー、MHC分子、MHC-ペプチド複合体、受容体リガンド、およびそれらの結合断片からなる群より選択される作用物質であるか、もしくはそれを含む；
第2の刺激物質が抗体フラグメントを含む；
第2の刺激物質がFabフラグメントであるか、もしくはそれを含む；
第2の刺激物質が、(Fab)2'フラグメントおよび二価単鎖Fv(scFv)フラグメントからなる二価抗体フラグメントの群より選択される；
第2の刺激物質が、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびscFvからなる群より選択される一価抗体フラグメントである；ならびに/または
第2の刺激物質が、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドをベースにしたムテイン、グルボディ、アンキリンスキャホールドをベースにしたタンパク質、結晶性スキャホールドをベースにしたタンパク質、アドネクチン、およびアビマーからなる群より選択される、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子である、
請求項10〜13のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
第1の刺激物質が、抗CD3抗体、抗CD3抗体の二価抗体フラグメント、抗CD3抗体の一価抗体フラグメント、および抗体様結合特性を有するタンパク質性CD3結合分子から選択される、CD3に特異的に結合する作用物質であり、
第2の刺激物質が、抗CD28抗体、抗CD28抗体の二価抗体フラグメント、抗CD28抗体の抗体フラグメント、および抗体様結合特性を有するタンパク質性CD28結合分子から選択される、CD28に特異的に結合する作用物質である、
請求項10〜14のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
第1および第2の刺激物質が、それぞれ、抗CD3および/もしくは抗CD28抗体またはその断片を含む、請求項10〜15のいずれか一項記載の方法。
【請求項１７】
支持体が固体支持体および/もしくは固定相であるか、またはそれを含む、請求項1〜16のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
支持体が樹脂もしくはマトリクスを含む；
支持体がゲル濾過マトリクスを含む；
支持体がクロマトグラフィーマトリクスを含む；および/または
支持体がセルロース系もしくは有機ポリマー系のメンブレンを含む、
請求項1〜17のいずれか一項記載の方法。
【請求項１９】
クロマトグラフィーマトリクスがカラム内に存在する；および/またはクロマトグラフィーがカラムクロマトグラフィーもしくは平面クロマトグラフィーである、請求項18記載の方法。
【請求項２０】
第1の試薬が、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチンに可逆的に結合するストレプトアビジンの類似体、ビオチンに可逆的に結合するアビジンの類似体、遷移金属イオンに結合することができる少なくとも2つのキレート化基Kを含む試薬、オリゴヒスチジン親和性タグに結合することができる作用物質、グルタチオン-S-トランスフェラーゼに結合することができる作用物質、カルモジュリンもしくはその類似体、カルモジュリン結合ペプチド(CBP)に結合することができる作用物質、FLAGペプチドに結合することができる作用物質、HAタグに結合することができる作用物質、マルトース結合タンパク質(MBP)に結合することができる作用物質、HSVエピトープに結合することができる作用物質、mycエピトープに結合することができる作用物質、および/またはビオチン化担体タンパク質に結合することができる作用物質であるか、またはそれを含む、請求項1、2、および5〜19のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
第2の試薬が、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチンに可逆的に結合するストレプトアビジンの類似体、ビオチンに可逆的に結合するアビジンの類似体、遷移金属イオンに結合することができる少なくとも2つのキレート化基Kを含む試薬、オリゴヒスチジン親和性タグに結合することができる作用物質、グルタチオン-S-トランスフェラーゼに結合することができる作用物質、カルモジュリンもしくはその類似体、カルモジュリン結合ペプチド(CBP)に結合することができる作用物質、FLAGペプチドに結合することができる作用物質、HAタグに結合することができる作用物質、マルトース結合タンパク質(MBP)に結合することができる作用物質、HSVエピトープに結合することができる作用物質、mycエピトープに結合することができる作用物質、および/またはビオチン化担体タンパク質に結合することができる作用物質であるか、またはそれを含む、請求項2および5〜20のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
試薬が、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチンに可逆的に結合するストレプトアビジンの類似体、ビオチンに可逆的に結合するアビジンの類似体、遷移金属イオンに結合することができる少なくとも2つのキレート化基Kを含む試薬、オリゴヒスチジン親和性タグに結合することができる作用物質、グルタチオン-S-トランスフェラーゼに結合することができる作用物質、カルモジュリンもしくはその類似体、カルモジュリン結合ペプチド(CBP)に結合することができる作用物質、FLAGペプチドに結合することができる作用物質、HAタグに結合することができる作用物質、マルトース結合タンパク質(MBP)に結合することができる作用物質、HSVエピトープに結合することができる作用物質、mycエピトープに結合することができる作用物質、および/またはビオチン化担体タンパク質に結合することができる作用物質であるか、またはそれを含む、請求項3〜21のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
第1の試薬が、ストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む、
請求項1、2、および5〜22のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
試薬が、ストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む、
請求項3〜23のいずれか一項記載の方法。
【請求項２５】
ストレプトアビジン結合ペプチドが、Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO: 8)、Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)3-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO: 17)、Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO:18)、およびTrp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys-(GlyGlyGlySer)2Gly-Gly-Ser-Ala-Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys (SEQ ID NO: 19)からなる群より選択される、請求項23または請求項24記載の方法。
【請求項２６】
第1の試薬が、
野生型ストレプトアビジンの44位から47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Val44-Thr45-Ala46-Arg47を含むストレプトアビジン類似体を含む、または
野生型ストレプトアビジンの44位から47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Ile44-Gly45-Ala46-Arg47を含むストレプトアビジン類似体を含む、
請求項1〜25のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
試薬が、
野生型ストレプトアビジンの44位から47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Val44-Thr45-Ala46-Arg47を含むストレプトアビジン類似体を含む、または
野生型ストレプトアビジンの44位から47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Ile44-Gly45-Ala46-Arg47を含むストレプトアビジン類似体を含む、
請求項3〜26のいずれか一項記載の方法。
【請求項２８】
ストレプトアビジン類似体が、SEQ ID NO:4またはSEQ ID NO:6に示される配列を含むか、SEQ ID NO:4またはSEQ ID NO:6に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、請求項20〜27のいずれか一項記載の方法。
【請求項２９】
第1の試薬に可逆的に結合した1つ以上の作用物質間の結合を破壊するために物質を添加する工程をさらに含む、請求項1〜28のいずれか一項記載の方法。
【請求項３０】
第1の試薬が、ストレプトアビジン、アビジン、ストレプトアビジン類似体、および/もしくはアビジン類似体、またはその生物学的に活性なフラグメントであるか、それを含み；かつ
前記物質が、ストレプトアビジン結合ペプチド、ビオチン、または生物学的に活性なフラグメントを含む、
請求項1、2、および5〜29のいずれか一項記載の方法。
【請求項３１】
試薬が、ストレプトアビジン、アビジン、ストレプトアビジン類似体、および/もしくはアビジン類似体、またはその生物学的に活性なフラグメントであるか、それを含み；かつ
前記物質が、ストレプトアビジン結合ペプチド、ビオチン、または生物学的に活性なフラグメントを含む、
請求項3〜30のいずれか一項記載の方法。
【請求項３２】
シグナルの誘導またはモジュレーションが、細胞による免疫応答を刺激する、免疫細胞増殖もしくは増大を増加させる、免疫細胞の活性化を増加させる、免疫細胞の分化を変更する、サイトカインの発現もしくは分泌を増加させる、細胞傷害活性を増加させる、または免疫細胞の1つもしくは複数の他の機能的活性を増加させる、請求項1〜31のいずれか一項記載の方法。
【請求項３３】
標的細胞が血液細胞を含む；
標的細胞が白血球を含む；
標的細胞がリンパ球を含む；
標的細胞がB細胞を含む；
標的細胞がB細胞集団を含む；
標的細胞がT細胞を含む；
標的細胞がT細胞集団を含む；および/または
標的細胞がナチュラルキラー(NK)細胞を含む、
請求項1〜32のいずれか一項記載の方法。
【請求項３４】
第1の試薬が支持体に固定化されていない、請求項1、2、および5〜33のいずれか一項記載の方法。
【請求項３５】
試薬が支持体に固定化されていない、請求項3および5〜34のいずれか一項記載の方法。
【請求項３６】
標的細胞を精製しかつモジュレートするための製造物品であって、
(a)標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする様式で、標的細胞の表面上の分子に特異的に結合することができる、刺激物質；
(b)それぞれが該刺激物質に可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含む、第1の試薬；
(c)第2の試薬；
(d)支持体；および
(e)第2の試薬に可逆的に結合することができ、かつ標的細胞上の選択マーカーに特異的に結合することができる、選択物質
を含む、製造物品。
【請求項３７】
第2の試薬が支持体上に固定化される、請求項36記載の製造物品。
【請求項３８】
請求項36または請求項37記載の製造物品を含む、装置。
【請求項３９】
(a)標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする様式で、標的細胞の表面上の分子に特異的に結合することができる、刺激物質；
(b)該刺激物質に可逆的に結合することができる、第1の試薬；
(c)第2の試薬；
(d)支持体；
(e)第2の試薬に可逆的に結合することができ、かつ標的細胞上の選択マーカーに特異的に結合することができる、選択物質
を含む、装置。
【請求項４０】
前記支持体がクロマトグラフィー用の固定相であるか、またはそれを含む、請求項39記載の装置。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
いくつかの態様において、該疾患または病気は、がん、自己免疫疾患もしくは障害、または感染性疾患である。
[本発明1001]
刺激物質に可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含む第1の試薬に可逆的に結合された該刺激物質の存在下で、標的細胞を含む組成物をインキュベートする工程を含む、細胞をモジュレートするための方法であって、
少なくとも複数の標的細胞が、該インキュベーションの少なくとも一部の間、支持体上に固定化されている；および
該標的細胞の表面上に発現された分子に該刺激物質が特異的に結合し、それによって該標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする条件下で、該インキュベーションが実施される、
方法。
[本発明1002]
少なくとも複数の細胞の固定化が可逆的である、本発明1001の方法。
[本発明1003]
複数の刺激物質結合部位が、結合パートナーC1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Z1を含む；および
刺激物質が、1つ以上の結合パートナーC1をさらに含む、
本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
複数の刺激物質結合部位が、2つ以上の前記結合部位Z1を含み、かつ/もしくは結合パートナーC1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Z2をさらに含む；および/または
刺激物質が、2つ以上の結合パートナーC1を含む、
本発明1003の方法。
[本発明1005]
刺激物質が結合部位B2をさらに含み、刺激物質と標的細胞の表面上の分子との間の特異的結合が、B2と該分子との相互作用を含む、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
支持体が固定相であるか、もしくはそれを含む；および/または
支持体が固体支持体であるか、もしくはそれを含む、
本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記試薬が第1の試薬であり、かつ前記インキュベーションの少なくとも一部が、(a)支持体上に固定化された第2の試薬、および(b)第2の試薬に可逆的に結合された選択物質の存在下で実施され；
少なくとも複数の標的細胞によって発現された選択マーカーへの該選択物質による特異的結合が、該支持体への該少なくとも複数の標的細胞の可逆的固定化をもたらす、
本発明1002〜1005のいずれかの方法。
[本発明1008]
細胞をモジュレートする方法であって、
(1)(a)標的細胞を含む組成物と、(b)(i)少なくとも複数の標的細胞のうちの1つ以上により発現された選択マーカーに特異的に結合することができ、かつ(ii)支持体に直接的または間接的に固定化されているか、固定化することができる、選択物質と、(c)該支持体と、を組み合わせる工程であって、それによって、該少なくとも複数のうちの1つ以上の標的細胞が、該選択物質を介して該支持体上に固定化される、工程；および
(2)刺激物質に可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含む試薬に可逆的に結合された該刺激物質の存在下において、該刺激物質が、標的細胞の表面上に発現された分子に特異的に結合し、それによって該標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする条件下で、少なくとも複数の標的細胞をインキュベートする工程
を含む、方法。
[本発明1009]
前記試薬が第1の試薬であり、前記選択物質が、支持体上に固定化された第2の試薬に可逆的に結合され、少なくとも複数の標的細胞により発現された選択マーカーへの該選択物質による特異的結合が、該支持体への該少なくとも複数の標的細胞の可逆的固定化をもたらす、本発明1008の方法。
[本発明1010]
第2の試薬が、前記選択物質にそれぞれが可逆的に結合することができる複数の選択物質結合部位を含む、本発明1007〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
複数の選択物質結合部位が、結合パートナーD1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Y1を含む；および
選択物質が、1つ以上の結合パートナーD1をさらに含む、
本発明1010の方法。
[本発明1012]
複数の選択物質結合部位が、2つ以上の前記結合部位Y1を含み、かつ/もしくは結合パートナーD1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Y2をさらに含む；および/または
選択物質が、2つ以上の結合パートナーD1を含む、
本発明1011の方法。
[本発明1013]
インキュベーションの少なくとも一部の間、少なくとも複数の標的細胞の可逆的固定化が、支持体への試薬の可逆的固定化によって促進される、本発明1002〜1007および1009〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
インキュベーションの間、第1の試薬が、固体支持体、固定相、ビーズ、微粒子、磁性粒子および/もしくはマトリクスではなく、それに結合も会合もされていない；ならびに/または
第1の試薬が、柔軟性であり、金属もしくは磁性コアを含まず、完全にもしくは主に有機多量体で構成され、球状でなく、実質的に球状もしくは均一な形状でなく、かつ/または硬直していない、
本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1015]
(a)少なくとも複数の標的細胞と；
(b)(i)該少なくとも複数の標的細胞のうちの1つ以上により発現された選択マーカーに特異的に結合することができ、かつ(ii)支持体上に直接的または間接的に固定化されているか、固定化することができる、選択物質と；
(c)該支持体と
を組み合わせる工程をさらに含み、
それによって、該少なくとも複数のうちの1つ以上の標的細胞が、該選択物質を介して該支持体上に固定化される、
本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1016]
選択物質が、結合部位Z1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合パートナーD1をさらに含む；および/または
選択物質が、結合部位Y1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合パートナーD1をさらに含む、
本発明1007〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
前記組み合わせる工程の後、固定化された標的細胞から、前記組成物の他の細胞を分離および/または除去する工程をさらに含む、本発明1015または1016の方法。
[本発明1018]
洗浄工程を行うことをさらに含む、本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記分離する工程および/または前記洗浄工程を、前記インキュベーションの開始前に実施する、本発明1017または1018の方法。
[本発明1020]
支持体が、固定相であるかもしくはそれを含み、かつ/または固体支持体であるかもしくはそれを含む、本発明1008〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記インキュベートする工程を、前記組み合わせる工程の前に実施および/もしくは開始する；または
前記インキュベートする工程を、前記組み合わせる工程に続いて実施および/もしくは開始する、
本発明1015〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
前記組み合わせる工程を、前記インキュベーションの少なくとも一部の間に実施する、本発明1015〜1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
支持体への選択物質の固定化が可逆的である、本発明1015〜1022のいずれかの方法。
[本発明1024]
複数の刺激物質結合部位が、結合パートナーC1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Z1を含む；および
刺激物質が、1つ以上の結合パートナーC1をさらに含む、
本発明1008〜1023のいずれかの方法。
[本発明1025]
複数の刺激物質結合部位が、2つ以上の前記結合部位Z1を含み、かつ/もしくは結合パートナーC1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Z2をさらに含む；および/または
刺激物質が、2つ以上の結合パートナーC1を含む、
本発明1024の方法。
[本発明1026]
刺激物質が結合部位B2をさらに含み、刺激物質と標的細胞の表面上の分子との間の特異的結合が、B2と該分子との相互作用を含む、本発明1013〜1024のいずれかの方法。
[本発明1027]
前記試薬が第1の試薬である；および
支持体への選択物質の固定化が、間接的であり、該支持体上に固定化された第2の試薬への該選択物質の可逆的結合を介して行われる、
本発明1015〜1026のいずれかの方法。
[本発明1028]
第2の試薬が、選択物質に可逆的に結合することができる複数の選択物質結合部位を含む、本発明1027の方法。
[本発明1029]
複数の選択物質結合部位が、結合パートナーD1に結合することができる結合部位Y1を含み、1つ以上の該結合パートナーD1が、選択物質に含まれる、本発明1028の方法。
[本発明1030]
複数の選択物質結合部位が、2つ以上の前記結合部位Y1を含み、かつ/もしくは結合パートナーD1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Y2をさらに含む；および/または
選択物質が、2つ以上の結合パートナーD1を含む、
本発明1029の方法。
[本発明1031]
第2の試薬と選択物質とが、前記組み合わせる工程の時点で一緒に可逆的に結合して複合体となり、前記細胞を該複合体と組み合わせることによって、前記組み合わせる工程を実施する、本発明1027〜1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
第2の試薬と選択物質とが、前記組み合わせる工程の時点で複合体ではなく、第2の試薬と選択物質とを別々に添加することによって、前記組み合わせる工程を実施する、本発明1027〜1030のいずれかの方法。
[本発明1033]
選択物質が結合部位B1をさらに含み、選択物質と選択マーカーとの間の特異的結合が、B1と選択マーカーとの相互作用を含む、本発明1007〜1012および1015〜1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
選択物質が、ただ1つの結合部位B1を含む；
選択物質が、選択マーカーに特異的に結合する単一の結合部位のみを含む；および/または
選択物質が、一価の様式で選択マーカーに特異的に結合する、
本発明1007〜1012および1015〜1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
選択物質が、抗体フラグメント、一価抗体フラグメント、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、Igドメインを含む分子、サイトカイン、ケモカイン、アプタマー、MHC分子、MHC-ペプチド複合体；受容体リガンド；およびそれらの結合断片からなる群より選択される作用物質であるか、もしくはそれを含む；ならびに/または
選択物質が抗体フラグメントを含む；
選択物質がFabフラグメントであるか、もしくはそれを含む；
選択物質が、(Fab)2'フラグメントおよび二価単鎖Fv(scFv)フラグメントからなる二価抗体フラグメントの群より選択される；
選択物質が、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびscFvからなる群より選択される一価抗体フラグメントである；ならびに/または
選択物質が、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドをベースにしたムテイン、グルボディ(glubody)、アンキリンスキャホールドをベースにしたタンパク質、結晶性スキャホールドをベースにしたタンパク質、アドネクチン(adnectin)、およびアビマー(avimer)からなる群より選択される、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子である、
本発明1007〜1012および1015〜1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
選択マーカーがB細胞もしくはT細胞共受容体である；
選択マーカーがT細胞もしくはB細胞抗原受容体複合体のメンバーであるか、またはそれを含む；
選択マーカーがCD3鎖であるか、もしくはそれを含む；
選択マーカーがCD3ζ鎖であるか、もしくはそれを含む；
選択マーカーがCD8であるか、もしくはそれを含む；
選択マーカーがCD4であるか、もしくはそれを含む；および/または
選択物質と選択マーカーとの間の特異的結合が、標的細胞へのシグナルを誘導しない、または標的細胞への刺激シグナル、活性化シグナルもしくは増殖シグナルを誘導しない、
本発明1007〜1012および1015〜1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
刺激物質が、ただ1つの結合部位B2を含む；
刺激物質が、前記分子に特異的に結合する単一の結合部位のみを含む；または
刺激物質が、一価の様式で前記分子に特異的に結合する、
本発明1001〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
刺激物質が、抗体フラグメント、一価抗体フラグメント、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、Igドメインを含む分子、サイトカイン、ケモカイン、アプタマー、MHC分子、MHC-ペプチド複合体、受容体リガンド、およびそれらの結合断片からなる群より選択される作用物質であるか、もしくはそれを含む；ならびに/または
刺激物質が抗体フラグメントを含む；
刺激物質がFabフラグメントであるか、もしくはそれを含む；
刺激物質が、(Fab)2'フラグメントおよび二価単鎖Fv(scFv)フラグメントからなる二価抗体フラグメントの群より選択される；
刺激物質が、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびscFvからなる群より選択される一価抗体フラグメントである；ならびに/または
刺激物質が、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドをベースにしたムテイン、グルボディ、アンキリンスキャホールドをベースにしたタンパク質、結晶性スキャホールドをベースにしたタンパク質、アドネクチン、およびアビマーからなる群より選択される、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子である、
本発明1001〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
標的細胞の表面上に発現された分子が、T細胞もしくはB細胞抗原受容体複合体のメンバーであるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、CD3鎖であるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、CD3ζであるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、T細胞受容体もしくはB細胞受容体の抗原結合部分であるか、またはそれを含む；
標的細胞の表面上に発現された分子が、キメラ抗原受容体である；
刺激物質と該分子との特異的結合が、T細胞またはB細胞に一次シグナルを送達することができる、
本発明1001〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
刺激物質が、MHC I：ペプチド複合体もしくはその機能的部分、MHCII：ペプチド複合体もしくはその機能的部分を含み、かつ/またはT細胞におけるTCR/CD3複合体、T細胞におけるCD3含有複合体、および/もしくはT細胞におけるITAM含有分子を介して刺激シグナルを送達することができる；ならびに/または
前記シグナルを誘導もしくはモジュレートすることが、標的細胞におけるサイトカインの発現の増加をもたらす、
本発明1001〜1039のいずれかの方法。
[本発明1041]
サイトカインがIL-2、IFN-γおよび/またはIL-4である、本発明1040の方法。
[本発明1042]
標的細胞の表面上に発現された分子が第1の分子であり、刺激物質が、少なくとも複数の標的細胞の表面上に発現された第2の分子にさらに結合することができる、本発明1001〜1041のいずれかの方法。
[本発明1043]
標的細胞の表面上に発現された分子が第1の分子であり、刺激物質が第1の刺激物質であり、少なくとも複数の標的細胞の表面上に発現された第2の分子に結合することができる第2の刺激物質の存在下でインキュベーションをさらに実施する、本発明1001〜1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
第2の刺激物質が、第1の試薬に可逆的に結合されるか、または第4の試薬に可逆的に結合される、本発明1043の方法。
[本発明1045]
第2の刺激物質が、1つ以上の結合パートナーC1を含む；
第2の刺激物質が、刺激物質結合部位に結合することができる1つ以上の結合パートナーC2を含む；および/または
第2の刺激物質が、結合部位Z2に結合することができる1つ以上の結合パートナーC2を含み、前記試薬が、1つ以上の結合部位Z2をさらに含む、
本発明1043または1044の方法。
[本発明1046]
C2およびC1が同じもしくは実質的に同じであるか、または同じもしくは実質的に同じ部分を含む；
Z1およびZ2が同じもしくは実質的に同じであるか、または同じもしくは実質的に同じ部分を含む、
本発明1045の方法。
[本発明1047]
第2の刺激物質が、第2の刺激物質と第2の分子との間の特異的結合を促進する1つ以上の結合部位B4を含む、本発明1043〜1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
刺激物質が、第2の分子へのその特異的結合を促進する1つ以上の結合部位B4をさらに含む、本発明1042の方法。
[本発明1049]
前記作用物質または前記第2の作用物質の第2の分子への特異的結合が、第1の分子を介して送達されたシグナルを増強する、減衰させる、もしくは改変することができる、本発明1042〜1048のいずれかの方法。
[本発明1050]
第2の分子が共刺激分子である；
第2の分子がアクセサリー分子である；
第2の分子がサイトカイン受容体である；
第2の分子がケモカイン受容体である；
第2の分子が免疫チェックポイント分子である；または
第2の分子がTNFファミリーもしくはTNF受容体ファミリーのメンバーである、
本発明1042〜1049のいずれかの方法。
[本発明1051]
第2の分子が、CD28、CD137、CD40リガンド、CD40、OX40、もしくはICOS、または上記のいずれかの機能的部分を含む、本発明1050の方法。
[本発明1052]
選択マーカーが第1の選択マーカーであり、選択物質が、少なくとも複数の標的細胞の表面上に発現される第2の選択マーカーにさらに結合することができる、本発明1007〜1012および1015〜1051のいずれかの方法。
[本発明1053]
選択マーカーが第1の選択マーカーであり、選択物質が第1の選択物質であり、少なくとも複数の標的細胞の表面上に発現される第2の選択マーカーに結合することができる第2の選択物質の存在下でインキュベーションをさらに実施する、本発明1007〜1012および1015〜1052のいずれかの方法。
[本発明1054]
第2の選択物質が、第2の試薬に可逆的に結合される；または
第2の選択物質が、前記支持体もしくは追加の支持体上に固定化された第3の試薬に可逆的に結合される、
本発明1053の方法。
[本発明1055]
第2の選択物質が、1つ以上の結合パートナーD1を含む；および/または
第2の選択物質が、結合部位Y1に結合することができる1つ以上の結合パートナーD2を含む；および/または
第2の選択物質が、結合部位Y2に結合することができる1つ以上の結合パートナーD2を含み、第2の試薬が、1つ以上の結合部位Y2をさらに含む、
本発明1053または1054の方法。
[本発明1056]
D2およびD1が同じもしくは実質的に同じであるか、または同じもしくは実質的に同じ部分を含む；
Y1およびY2が同じもしくは実質的に同じであるか、または同じもしくは実質的に同じ部分を含む；
C1およびD1が同じもしくは実質的に同じであるか、または同じもしくは実質的に同じ部分を含む；ならびに/または
Z1およびY1が同じもしくは実質的に同じであるか、または同じもしくは実質的に同じ部分を含む、
本発明1055の方法。
[本発明1057]
第2の選択物質が、第2の選択物質と第2の選択マーカーとの間の特異的結合を促進する1つ以上の結合部位B3を含む、本発明1053〜1056のいずれかの方法。
[本発明1058]
前記選択物質が、第2の選択マーカーへのその特異的結合を促進する1つ以上の結合部位B3をさらに含む、本発明1052および1054〜1057のいずれかの方法。
[本発明1059]
第2の刺激物質が、ただ1つの結合部位B4を含む；
第2の刺激物質が、第2の分子に特異的に結合する単一の結合部位のみを含む；
第2の刺激物質が、一価の様式で該分子に特異的に結合する、
本発明1043〜1058のいずれかの方法。
[本発明1060]
第2の刺激物質が、抗体フラグメント、一価抗体フラグメント、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、Igドメインを含む分子、サイトカイン、ケモカイン、アプタマー、MHC分子、MHC-ペプチド複合体、受容体リガンド、およびそれらの結合断片からなる群より選択される作用物質であるか、もしくはそれを含む；
第2の刺激物質が抗体フラグメントを含む；
第2の刺激物質がFabフラグメントであるか、もしくはそれを含む；
第2の刺激物質が、(Fab)2'フラグメントおよび二価単鎖Fv(scFv)フラグメントからなる二価抗体フラグメントの群より選択される；
第2の刺激物質が、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびscFvからなる群より選択される一価抗体フラグメントである；ならびに/または
第2の刺激物質が、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドをベースにしたムテイン、グルボディ、アンキリンスキャホールドをベースにしたタンパク質、結晶性スキャホールドをベースにしたタンパク質、アドネクチン、およびアビマーからなる群より選択される、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子である、
本発明1043〜1059のいずれかの方法。
[本発明1061]
第2の選択物質が、ただ1つの結合部位B3を含む；
第2の選択物質が、第2の選択マーカーに特異的に結合する単一の結合部位のみを含む；および/または
第2の選択物質が、一価の様式で第2の選択マーカーに特異的に結合する、
本発明1052〜1060のいずれかの方法。
[本発明1062]
第2の選択物質が、抗体フラグメント、一価抗体フラグメント、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子、Igドメインを含む分子、サイトカイン、ケモカイン、アプタマー、MHC分子、MHC-ペプチド複合体、受容体リガンド、およびそれらの結合断片からなる群より選択される物質であるか、もしくはそれを含む；
第2の選択物質が抗体フラグメントを含む；
第2の選択物質がFabフラグメントであるか、もしくはそれを含む；
第2の選択物質が、(Fab)2'フラグメントおよび二価単鎖Fv(scFv)フラグメントからなる二価抗体フラグメントの群より選択される；
第2の選択物質が、Fabフラグメント、Fvフラグメント、およびscFvからなる群より選択される一価抗体フラグメントである；ならびに/または
第2の選択物質が、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドをベースにしたムテイン、グルボディ、アンキリンスキャホールドをベースにしたタンパク質、結晶性スキャホールドをベースにしたタンパク質、アドネクチン、およびアビマーからなる群より選択される、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子である、
本発明1052〜1061のいずれかの方法。
[本発明1063]
第2の選択マーカーがB細胞もしくはT細胞共受容体である；
第2の選択マーカーがT細胞もしくはB細胞抗原受容体複合体のメンバーであるか、またはそれを含む；
第2の選択マーカーがCD3鎖であるか、もしくはそれを含む；
第2の選択マーカーがCD3ζ鎖であるか、もしくはそれを含む；
第2の選択マーカーがCD8であるか、もしくはそれを含む；
第2の選択マーカーがCD4であるか、もしくはそれを含む；および/または
第2の選択物質と第2の選択マーカーとの間の特異的結合が、標的細胞へのシグナルを誘導しない、または標的細胞への刺激シグナル、活性化シグナルもしくは増殖シグナルを誘導しない、
本発明1052〜1062のいずれかの方法。
[本発明1064]
細胞をモジュレートする方法であって、
(a)標的細胞を含む組成物と、支持体上に固定化された試薬に可逆的に結合した刺激物質とを組み合わせる工程であって、該試薬が、該刺激物質にそれぞれ可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含み、かつ標的細胞の表面上に発現された分子に特異的に結合することができ、それによって、標的細胞を該支持体上に固定化する、工程；
(b)固定化された標的細胞から、該組成物の他の細胞を分離または除去する工程；および
(c)固定化された標的細胞の少なくとも一部を、該刺激物質の存在下において、少なくとも複数の標的細胞においてシグナルが誘導またはモジュレートされる条件下で、インキュベートする工程
を含む、方法。
[本発明1065]
支持体が固体支持体および/もしくは固定相であるか、またはそれを含む、本発明1064の方法。
[本発明1066]
複数の刺激物質結合部位が、結合パートナーC1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Z1を含む；および
刺激物質が、1つ以上の結合パートナーC1をさらに含む、
本発明1064または1065の方法。
[本発明1067]
複数の刺激物質結合部位が、2つ以上の結合部位Z1を含み、かつ/もしくは結合パートナーC1に可逆的に結合することができる1つ以上の結合部位Z2をさらに含む；および/または
刺激物質が、2つ以上の結合パートナーC1を含む、
本発明1066の方法。
[本発明1068]
刺激物質が結合部位B2をさらに含み、該刺激物質と標的細胞の表面上の分子との間の特異的結合が、B2と該分子との相互作用を含む、本発明1064〜1067のいずれかの方法。
[本発明1069]
第1、第2および/または第3の試薬に可逆的に結合した1つ以上の作用物質間の結合が、細胞への物質の添加によって個々に破壊され得る、本発明1001〜1068のいずれかの方法。
[本発明1070]
刺激物質と第1の試薬との間の可逆的結合が、前記物質の添加によって破壊され得る；ならびに/または
選択物質と第1の試薬との間もしくは選択物質と第2の試薬との間の可逆的結合が、前記物質の添加によって破壊され得る；ならびに/または
刺激物質と第1の試薬との間の可逆的結合、ならびに選択物質と第2の試薬および/もしくは第1の試薬との間の可逆的結合のそれぞれが、前記物質の添加によって破壊され得る；
第2の刺激物質と第1の試薬もしくは第4の試薬との間の可逆的結合が、前記物質の添加によって破壊され得る；ならびに/または
第2の選択物質と第1の試薬との間および/もしくは第2の選択物質と第2の試薬との間および/もしくは第2の選択物質と第3の試薬との間の可逆的結合が、前記物質の添加によって破壊され得る；ならびに/または
第2の刺激物質と第1の試薬もしくは第4の試薬との間の可逆的結合、ならびに第2の選択物質と第1の試薬、第2の試薬および/もしくは第3の試薬との間の可逆的結合のそれぞれが、前記物質の添加によって破壊され得る、
本発明1069の方法。
[本発明1071]
前記物質が、遊離した結合パートナーであるか、もしくはそれを含む；または
前記物質が競合物質であるか、もしくはそれを含む；および/または
前記物質が、前記結合について競合する以外の方法で、前記結合を破壊する変化をもたらす、
本発明1069または1070の方法。
[本発明1072]
前記物質が、標的細胞もしくは標的細胞の大部分に弊害をもたらさず、かつ/または前記破壊をもたらすのに十分な量での前記物質の標的細胞への添加が、該物質が存在しないがその他の点では同じ条件下と比較して、該細胞の生存および/または増殖能力を90％、80％、70％、60％もしくは50％未満または約90％、約80％、約70％、約60％もしくは約50％未満に低下させない、本発明1071の方法。
[本発明1073]
前記物質がペプチドもしくはポリペプチドであるか、またはそれを含む、本発明1069〜1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
前記物質が、ストレプトアビジン結合分子；ビオチン；D-ビオチン；ビオチン類似体；ストレプトアビジン、または野生型ストレプトアビジンの44位から47位に対応する配列位置にアミノ酸配列Val44-Thr45-Ala46-Arg47もしくはIle44-Gly45-Ala46-Arg47を有するストレプトアビジン類似体に特異的に結合するビオチン類似体；ならびにSEQ ID NO: 1、4、5および7のいずれかに示される配列を含むもしくは該配列からなるペプチド、からなる群からの分子を含む；あるいは
前記物質が、任意でEDTAまたはEGTAである金属キレート化剤を含む、
本発明1069〜1073のいずれかの方法。
[本発明1075]
支持体が樹脂もしくはマトリクスを含む；
支持体がゲル濾過マトリクスを含む；
支持体がクロマトグラフィーマトリクスを含む；および/または
支持体がセルロース系もしくは有機ポリマー系のメンブレンを含む、
本発明1001〜1074のいずれかの方法。
[本発明1076]
クロマトグラフィーマトリクスがカラム内に存在する；および/またはクロマトグラフィーがカラムクロマトグラフィーもしくは平面クロマトグラフィーである、本発明1075の方法。
[本発明1077]
支持体が微粒子、硬質粒子、磁性粒子、またはビーズを含む、本発明1001〜1076のいずれかの方法。
[本発明1078]
支持体が固定相であり、前記インキュベーションおよび/または前記接触の全部または一部の間、容器内に存在する、本発明1001〜1077のいずれかの方法。
[本発明1079]
容器が、カラム、双方向の流れに適した容器、ピペットチップ、チューブ、および液体試料のフロースルーに適したカラムからなる群より選択される容器を含む、本発明1078の方法。
[本発明1080]
標的細胞が血液細胞を含む；
標的細胞が白血球を含む；
標的細胞がリンパ球を含む；
標的細胞がB細胞を含む；
標的細胞がB細胞集団を含む；
標的細胞がT細胞を含む；
標的細胞がT細胞集団を含む；および/または
標的細胞がナチュラルキラー(NK)細胞を含む、
本発明1001〜1079のいずれかの方法。
[本発明1081]
標的細胞が、抗原特異的T細胞もしくはその集団、Tヘルパー細胞もしくはその集団、細胞傷害性T細胞もしくはその集団、メモリーT細胞もしくはその集団、調節性T細胞もしくはその集団、NK細胞もしくはその集団、抗原特異的B細胞もしくはその集団、メモリーB細胞もしくはその集団、または調節性B細胞もしくはその集団を含む、本発明1080の方法。
[本発明1082]
シグナルの誘導またはモジュレーションが、活性化、増殖、生存および/または増大を誘導する、減衰させる、抑制する、または増強する、本発明1001〜1081のいずれかの方法。
[本発明1083]
第1の試薬、第2の試薬および/または第3の試薬が、独立して、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチンに可逆的に結合するストレプトアビジンの類似体、ビオチンに可逆的に結合するアビジンの類似体、遷移金属イオンに結合することができる少なくとも2つのキレート化基Kを含む試薬、オリゴヒスチジン親和性タグに結合することができる作用物質、グルタチオン-S-トランスフェラーゼに結合することができる作用物質、カルモジュリンもしくはその類似体、カルモジュリン結合ペプチド(CBP)に結合することができる作用物質、FLAGペプチドに結合することができる作用物質、HAタグに結合することができる作用物質、マルトース結合タンパク質(MBP)に結合することができる作用物質、HSVエピトープに結合することができる作用物質、mycエピトープに結合することができる作用物質、および/またはビオチン化担体タンパク質に結合することができる作用物質であるか、またはそれを含む、本発明1001〜1082のいずれかの方法。
[本発明1084]
第1の試薬、第2の試薬および/または第3の試薬が、独立して、オリゴマーもしくはポリマーであるか、またはそれを含む、本発明1083の方法。
[本発明1085]
第1の試薬、第2の試薬または第3の試薬が、独立して、ストレプトアビジン、アビジン、ストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体のオリゴマーまたはポリマーであるか、またはそれを含み、該オリゴマーまたはポリマーが、多糖もしくは2官能性リンカーによって架橋された該ストレプトアビジン、アビジンもしくは類似体の単量体を含む、本発明1001〜1084のいずれかの方法。
[本発明1086]
結合パートナーC1、結合パートナーC2、結合パートナーD1および/または結合パートナーD2が、独立して、ビオチン、またはストレプトアビジンもしくはアビジンに可逆的に結合するビオチン類似体を含む；ならびに/または
結合パートナーC1および結合パートナーC2のそれぞれが、独立して、ビオチン、またはストレプトアビジンもしくはアビジンに可逆的に結合するビオチン類似体を含む；ならびに/または
結合パートナーD1および結合パートナーD2のそれぞれが、独立して、ビオチン、またはストレプトアビジンもしくはアビジンに可逆的に結合するビオチン類似体を含む、
本発明1002〜1007、1016〜1063および1066〜1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
第1の試薬、第2の試薬および/または第3の試薬が、独立して、ビオチンに可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む；
第1の試薬、第2の試薬および/または第3の試薬が、独立して、ビオチン類似体に可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む；ならびに/または
第1の試薬、第2の試薬および/または第3の試薬が、独立して、ストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む；ならびに/または
第1の試薬、第2の試薬および/または第3の試薬が、独立して、
2018537964.tif 000001
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドに可逆的に結合するストレプトアビジン類似体もしくはアビジン類似体を含む、
本発明1001〜1086のいずれかの方法。
[本発明1088]
結合パートナーC1、結合パートナーC2、結合パートナーD1および/または結合パートナーD2が、独立して、
2018537964.tif 000002
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドを含む；
結合パートナーC1および結合パートナーC2のそれぞれが、独立して、
2018537964.tif 000003
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドを含む；ならびに/または
結合パートナーD1および結合パートナーD2のそれぞれが、独立して、
2018537964.tif 000004
からなる群より選択されるストレプトアビジン結合ペプチドを含む、
本発明1002〜1007、1016〜1063および1066〜1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
第1の試薬、第2の試薬および/または第3の試薬が、独立して、
野生型ストレプトアビジンの44位から47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Val44-Thr45-Ala46-Arg47を含むストレプトアビジン類似体を含む、または
野生型ストレプトアビジンの44位から47位に対応する配列位置に、アミノ酸配列Ile44-Gly45-Ala46-Arg47を含むストレプトアビジン類似体を含む、
本発明1001〜1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
結合パートナーC1および/または結合パートナーC2それぞれと、結合部位Z1および/またはZ2それぞれとの間の結合が、二価カチオンの存在下で起こることができ、かつ/または二価カチオンの非存在下では起こることができず、かつ/または二価カチオンの除去により破壊される、本発明1002〜1007、1016〜1063および1066〜1089のいずれかの方法。
[本発明1091]
結合パートナーC1および/もしくはC2のそれぞれ、ならびに/または結合パートナーD1および/もしくはD2のそれぞれが、独立して、カルモジュリン結合ペプチドを含み、かつ前記(第1の)試薬および/もしくは第2の試薬および/もしくは第3の試薬および/もしくは第4の試薬がカルモジュリンを含む；または
結合パートナーC1および/もしくはC2のそれぞれ、ならびに/または結合パートナーD1および/もしくはD2のそれぞれが、独立して、FLAGペプチドを含み、かつ前記(第1の)試薬および/もしくは第2の試薬および/もしくは第3の試薬および/もしくは第4の試薬が、FLAGペプチドに結合する抗体を含む；または
結合パートナーC1および/もしくはC2のそれぞれ、ならびに/または結合パートナーD1および/もしくはD2のそれぞれが、独立して、オリゴヒスチジンタグを含み、かつ前記(第1の)試薬および/もしくは第2の試薬および/もしくは第3の試薬および/もしくは第4の試薬が、オリゴヒスチジンタグに結合する抗体を含む、
本発明1002〜1007、1016〜1063および1066〜1090のいずれかの方法。
[本発明1092]
結合パートナーC1と結合部位Z1との間の結合、および/または結合パートナーC2と結合部位Z2との間の結合、および/または結合パートナーD1と結合部位Y1との間の結合、および/または結合パートナーD2と結合部位Y2との間の結合が、金属イオンキレート化によって破壊可能であり、任意でEDTAまたはEGTAの添加によってそれが達成される、本発明1002〜1007、1016〜1063および1066〜1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
結合パートナーC1およびC2が異なり、かつ/または前記(第1の)試薬とのその相互作用が、異なる物質の添加によって破壊可能であるか、もしくは同じ物質の添加によっては破壊可能でない；
結合パートナーD1およびD2が異なり、かつ/または第2の試薬とのその相互作用が、異なる物質の添加によって破壊可能であるか、もしくは同じ物質の添加によっては破壊可能でない；
結合パートナーC1および/またはC2が、結合パートナーD1および/またはD2と比較して異なり、かつ/または第1の試薬および第2の試薬それぞれとのその相互作用が、異なる物質の添加によって破壊可能であるか、もしくは同じ物質の添加によっては破壊可能でない、
本発明1002〜1007、1016〜1063および1066〜1092のいずれかの方法。
[本発明1094]
結合パートナーC1およびC2が、同一もしくは実質的に同一であり、かつ/または第1の試薬とのその相互作用が、同じ物質の添加によって破壊可能である；
結合パートナーD1およびD2が、同一もしくは実質的に同一であり、かつ/または第2の試薬とのその相互作用が、同じ物質の添加によって破壊可能である；
結合パートナーC1および/またはC2が、結合パートナーD1および/またはD2と比較して同一もしくは実質的に同一であり、かつ/または第1の試薬および第2の試薬それぞれとのその相互作用が、同じ物質の添加によって破壊可能である、
本発明1002〜1007、1016〜1063および1066〜1093のいずれかの方法。
[本発明1095]
第1、第2および/または第3の試薬に可逆的に結合した1つ以上の作用物質間の結合を破壊する工程をさらに含む、本発明1001〜1094のいずれかの方法。
[本発明1096]
前記破壊する工程が、前記インキュベーションの後に実施されるか、または前記インキュベーションの開始に続いて開始される、本発明1095の方法。
[本発明1097]
前記破壊が、結合パートナーC1および/またはC2と結合部位Z1および/またはZ2との間の相互作用を破壊する物質を導入することによって実施される、本発明1095または1096の方法。
[本発明1098]
前記破壊する工程が、
前記刺激物質の1つによって送達されたシグナルの終結もしくは減少；または
前記細胞の刺激、活性化、増大の終結もしくは減少
を引き起こす、本発明1095〜1097のいずれかの方法。
[本発明1099]
前記破壊が、前記物質を含む組成物を前記細胞に導入することを含む、本発明1097〜1098のいずれかの方法。
[本発明1100]
第2の試薬と接触する前記組成物が、非標的細胞をさらに含み、方法が、標的細胞を非標的細胞から分離する工程をさらに含む、本発明1001〜1099のいずれかの方法。
[本発明1101]
前記インキュベーションの前に、標的細胞の集団に含まれる細胞を増大させる工程をさらに含むか、または細胞が、前記インキュベーションの前にインビトロで増大されている、本発明1001〜1100のいずれかの方法。
[本発明1102]
前記インキュベーションの間に、少なくとも1回、培地を交換するまたは前記物質を補充することをさらに含む、本発明1001〜1101のいずれかの方法。
[本発明1103]
前記方法の1つ以上の工程を反復的方式で繰り返すことをさらに含み、それによって、1つ以上の集団の細胞を少なくとも2つのサイクルで連続的に分離しかつ増大させる、本発明1001〜1102のいずれかの方法。
[本発明1104]
集団中の標的細胞を、2つの異なる接触工程のそれぞれにおいて、2つの異なる選択マーカーに特異的に結合する少なくとも2つの異なる選択物質それぞれと接触させる工程を含み、
前記インキュベーションの少なくとも一部が、これら2つの異なる選択物質との接触工程同士の間に実施される、
本発明1103の方法。
[本発明1105]
集団の標的細胞に組換え核酸を導入する工程をさらに含み、
該核酸が組換えタンパク質をコードし、それによって、該細胞が該組換えタンパク質を発現する、
本発明1001〜1104のいずれかの方法。
[本発明1106]
前記導入する工程を、前記インキュベーションに続いてもしくはその間に、かつ/または細胞が支持体上に固定化されている状態で、実施する、本発明1105の方法。
[本発明1107]
前記細胞が、前記インキュベーションの少なくとも一部の間に、エクスビボで導入された組換えタンパク質を発現する、本発明1001〜1106のいずれかの方法。
[本発明1108]
核酸を導入する工程を、前記少なくとも2つの接触工程のうちの複数同士の間に実施する、本発明1105〜1107のいずれかの方法。
[本発明1109]
少なくとも2つの選択物質のうちの1つが、組換えタンパク質に特異的に結合する、および/または刺激物質のうちの1つが、組換えタンパク質に特異的に結合する、本発明1108の方法。
[本発明1110]
第1の試薬が支持体に固定化されていない、本発明1001〜1109のいずれかの方法。
[本発明1111]
前記インキュベーションに続いて、組成物の標的細胞を異なる環境に移す工程をさらに含み、
該環境が細胞培養または増大に適している、
本発明1001〜1110のいずれかの方法。
[本発明1112]
そのように移される細胞が、閉鎖システムもしくは閉鎖容器内で異なる環境に移される；または該移送が、そのように移される細胞を第1の容器から取り出して、該細胞を第2の容器に移すことを含む、本発明1111の方法。
[本発明1113]
異なる環境がインキュベータ内にある、本発明1111または1112の方法。
[本発明1114]
前記移送が閉鎖システム内で実施され、該移送が、細胞を含有する無菌密閉容器を無菌環境にもしくは該密閉容器内の異なる環境に移送することを含み、かつ/または該移送が、無菌環境内もしくは無菌条件下で実施される、本発明1111〜1113のいずれかの方法。
[本発明1115]
移送に続いて、前記可逆的結合を破壊することによって前記細胞を固定相から切り離し、任意で、該細胞を固定相の存在から取り出すことをさらに含む、本発明1114の方法。
[本発明1116]
取り出した細胞を増大させる工程をさらに含む、本発明1115の方法。
[本発明1117]
温度、pH、pO2、pCO2および/または温度を、任意で自動化された方式で、前記インキュベーションの少なくとも一部の間に制御する、本発明1001〜1116のいずれかの方法。
[本発明1118]
増大に適した環境にある状態で、クロマトグラフィー用の少なくとも1つの固定相のうちの少なくとも1つに含まれる細胞に栄養素を供給する、本発明1111〜1117のいずれかの方法。
[本発明1119]
固定相が、本発明1131〜1143のいずれかの装置に存在し、増大のための適切な環境への移送が、該固定相が該装置内に存在している状態で細胞から該固定相を切り離すことを含む、本発明1111〜1118のいずれかの方法。
[本発明1120]
標的細胞を精製しかつモジュレートするための製造物品であって、
(a)標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする様式で、標的細胞の表面上の分子に特異的に結合することができる、刺激物質；
(b)それぞれが該刺激物質に可逆的に結合することができる複数の刺激物質結合部位を含む、第1の試薬；
(c)第2の試薬；
(d)支持体；および
(e)第2の試薬に可逆的に結合することができ、かつ標的細胞上の選択マーカーに特異的に結合することができる、選択物質
を含む、製造物品。
[本発明1121]
支持体が固定相および/もしくは固体支持体であるか、またはそれを含む、本発明1120の方法。
[本発明1122]
第2の試薬が支持体上に固定化される、本発明1120または1121の製造物品。
[本発明1123]
第1の試薬が前記刺激物質に可逆的に結合され、かつ/または前記選択物質が第2の試薬に可逆的に結合される、本発明1120〜1122のいずれかの製造物品。
[本発明1124]
標的細胞の表面上の第2の分子に特異的に結合することができ、かつ第1の試薬および/もしくは第4の試薬に可逆的に結合することができる、第2の刺激物質；ならびに/または
(i)該標的細胞に含まれるか、もしくは(ii)別の標的細胞に含まれる、第2の選択マーカーに特異的に結合することができる第2の選択物質
をさらに含む、本発明1120〜1123のいずれかの製造物品。
[本発明1125]
他の標的細胞が、第1の刺激物質および/または第2の刺激物質が特異的に結合する分子を発現する、本発明1124の方法。
[本発明1126]
第2の選択物質が、第2の試薬に可逆的に結合することができるか、または前記物品が、第2の選択物質に可逆的に結合することができる第3の試薬をさらに含む、本発明1124または1125の製造物品。
[本発明1127]
第3の試薬が、前記支持体または別の支持体上に固定化される、本発明1126の製造物品。
[本発明1128]
前記支持体および第2の支持体が別々の容器に存在し、これらの異なる容器が任意で互いに流体接続されており、細胞懸濁液が支持体の一方を通ってまたは通り過ぎて他方の支持体へ通過することを可能にする、本発明1127の製造物品。
[本発明1129]
前記支持体が、クロマトグラフィーマトリクスであるかまたはそれを含む固定相であり、前記製造物品が、該クロマトグラフィーマトリクスの全部または一部が含まれる容器をさらに含む、本発明1120〜1128のいずれかの製造物品。
[本発明1130]
容器がカラムである、本発明1129の製造物品。
[本発明1131]
本発明1120〜1130のいずれかの製造物品を含む、装置。
[本発明1132]
前記装置の1つ以上の構成成分に流体接続された流体入口、および/または前記装置の1つ以上の構成成分に流体接続された流体出口をさらに含む、本発明1131の装置。
[本発明1133]
(a)標的細胞においてシグナルを誘導またはモジュレートする様式で、標的細胞の表面上の分子に特異的に結合することができる、刺激物質；
(b)該刺激物質に可逆的に結合することができる、第1の試薬；
(c)第2の試薬；
(d)支持体；
(e)第2の試薬に可逆的に結合することができ、かつ標的細胞上の選択マーカーに特異的に結合することができる、選択物質
を含む、装置。
[本発明1134]
前記支持体がクロマトグラフィー用の固定相であるか、またはそれを含む、本発明1133の装置。
[本発明1135]
(a)〜(e)の構成成分が、複数の容器内に存在し、該容器のうちの少なくとも一部が流体接続されており、それによって、該構成成分の1つ以上が装置内の1つの容器から別の容器へ通過する、本発明1133の装置。
[本発明1136]
閉鎖システムまたは無菌システム内にある、本発明1131〜1135のいずれかの装置。
[本発明1137]
クロマトグラフィー用の少なくとも1つの固定相のうちの1つに流体接続された試料出口をさらに含む、本発明1131および1134〜1136のいずれかの装置。
[本発明1138]
前記装置が、機能的に閉鎖されたシステムである、本発明1120〜1137のいずれかの製造物品または装置。
[本発明1139]
1つ以上の制御部をさらに含み、該制御部が、1つ以上の容器もしくはその構成成分の、ならびに/またはクロマトグラフィー用の少なくとも1つの固定相のうちの少なくとも1つの、pH、pO2、pCO2および/もしくは自動温度制御を調節または調整することができる、本発明1120〜1138のいずれかの製造物品または装置。
[本発明1140]
培地および/または1つ以上の栄養素および/または1つ以上の炭素源を含む容器への流体接続部をさらに含み、それによって、該接続部が、任意で細胞がクロマトグラフィー用の固定相に固定化されている場合に、そのような培地、栄養素および/または炭素源を装置内の細胞に送達することができる、本発明1120〜1139のいずれかの製造物品または装置。
[本発明1141]
列挙された構成成分のうちの少なくとも1つ、および/またはそれを含む容器が、滅菌的または無菌的方式で装置から取り外し可能である、本発明1131〜1140のいずれかの装置。
[本発明1142]
本発明1001〜1121のいずれかの方法を実施するのに有用であるか、または本発明1001〜1121のいずれかの方法を実施することができ、該方法が、任意で自動化された方式で実施される、本発明1131〜1141のいずれかの装置または本発明1122〜1130のいずれかの物品。
[本発明1143]
本発明1001〜1121のいずれかの方法に使用するためのものであり、該方法が、任意で自動化された方式で実施される、本発明1131〜1141のいずれかの装置または本発明1122〜1130のいずれかの物品。