【手続補正書】
【提出日】令和1年6月20日(2019.6.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドに連結された活性薬剤を含むペプチドコンジュゲートであって、
前記ペプチドが、
ａ）配列番号２４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、もしくはその機能的断片、あるいは
ｂ）配列番号２５３、配列番号２５７、配列番号４０４、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４８、配列番号１９５、配列番号２３４、配列番号２５、配列番号３６、配列番号４３、配列番号４６、配列番号５０、配列番号８１、配列番号２４５、配列番号２５２、配列番号２５５、配列番号２５９、配列番号２９０、配列番号１７、配列番号４２、配列番号２２６、配列番号２５１、配列番号８７、配列番号２９６、配列番号４０５、配列番号１９６、配列番号３３３、配列番号１２４、配列番号１、配列番号１３２、配列番号３４１、配列番号２１０、配列番号８３、配列番号８４、配列番号１９４、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号４０３、配列番号５５〜配列番号７９のいずれか１つ、もしくは配列番号２６４〜配列番号２８８のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその機能的断片
を含む、ペプチドコンジュゲート。
【請求項２】
前記ペプチドが、
ａ）少なくとも３０個のアミノ酸残基；
ｂ）少なくとも８個のシステイン残基；および
ｃ）システイン残基間に形成された複数のジスルフィド架橋
をさらに含む、請求項１に記載のペプチドコンジュゲート。
【請求項３】
前記ペプチドが、少なくとも３６個のアミノ酸残基を含む、請求項１または請求項２に記載のペプチドコンジュゲート。
【請求項４】
前記ペプチドが、ジスルフィドノットを介するジスルフィドをさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート。
【請求項５】
前記活性薬剤が、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、一本鎖変数断片、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、チェックポイント阻害剤、免疫修飾物質、神経伝達物質、化学薬剤、細胞毒性分子、毒素、放射線増感剤、放射線防護体、治療用小分子、ナノ粒子、リポソーム、ポリマー、デンドリマー、脂肪酸、ペプチド模倣剤、補体結合ペプチドまたはタンパク質、ポリエチレングリコール、脂質、Ｆｃ領域、抗炎症剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗感染症薬、化学療法剤、検出可能薬剤、ニューロテンシンペプチド、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート。
【請求項６】
前記活性薬剤が、以下：
ａ）化学療法剤；
ｂ）抗体もしくは抗体断片；
ｃ）神経伝達物質；または
ｄ）ニューロテンシンペプチド
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲート。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチドコンジュゲートと、薬学的に許容できる担体とを含む、医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物が、注射のために製剤化される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
疾患または病状を治療する際に使用するための組成物であって、前記組成物は、ペプチドコンジュゲートを含み、
前記ペプチドコンジュゲートは、ペプチドに連結された活性薬剤を含み、前記ペプチドは、
ａ）配列番号２４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、もしくはその機能的断片、あるいは
ｂ）配列番号２５３、配列番号２５７、配列番号４０４、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４８、配列番号１９５、配列番号２３４、配列番号２５、配列番号３６、配列番号４３、配列番号４６、配列番号５０、配列番号８１、配列番号２４５、配列番号２５２、配列番号２５５、配列番号２５９、配列番号２９０、配列番号１７、配列番号４２、配列番号２２６、配列番号２５１、配列番号８７、配列番号２９６、配列番号４０５、配列番号１９５、配列番号４０４、配列番号１９６、配列番号３３３、配列番号１２４、配列番号１、配列番号１３２、配列番号３４１、配列番号２１０、配列番号８３、配列番号８４、配列番号１９４、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号４０３、配列番号５５〜配列番号７９のいずれか１つ、もしくは配列番号２６４〜配列番号２８８のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその機能的断片
を含み、
前記組成物は、それを必要とする対象へ投与されることを特徴とし、
前記活性薬剤は、中枢神経系中の領域に送達されることを特徴とする、組成物。
【請求項１０】
前記ペプチドが、
ａ）少なくとも３０個のアミノ酸残基；
ｂ）少なくとも８個のシステイン残基；および
ｃ）システイン残基間に形成された複数のジスルフィド架橋
をさらに含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、ジスルフィドノットを介するジスルフィドをさらに含む、請求項９または請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記中枢神経系中の領域が、脳の領域または脳脊髄液である、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記脳の領域が、脳室、脳脊髄液、海馬、髄膜、吻側移動流、歯状回、脳室下領域、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記活性薬剤が、前記中枢神経系の前記領域におけるがん性または患部の組織、構造または細胞に送達されることを特徴とする、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記活性薬剤が、以下：
ａ）化学療法剤；
ｂ）抗体もしくは抗体断片；
ｃ）神経伝達物質；または
ｄ）ニューロテンシンペプチド
のうちのいずれか１つを含む、請求項９〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記疾患または前記病状が、疼痛である、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記疾患または前記病状が、脳の機能に関連する、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記疾患または前記病状が、記憶障害または記憶機能、アルツハイマー病、パーキンソン病、多系統萎縮症、統合失調症、てんかん、進行性多巣性白質脳症、真菌感染症、うつ病、双極性障害、心的外傷後ストレス障害、脳卒中、外傷性脳損傷、感染症、多発性硬化症または脳がんである、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記疾患または前記病状が、神経変性疾患であり、前記ペプチドコンジュゲートが、前記神経変性疾患に関連するタンパク質凝集を低下させる、請求項９〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記神経変性疾患に関連するタンパク質が、タウまたはアミロイドβペプチドである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記活性薬剤が、イオンチャネルに結合している前記ペプチドコンジュゲートによって送達されることを特徴とする、請求項９〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記中枢神経系中の前記領域が、さらにイメージングされることを特徴とする、請求項９〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
腫瘍またはがんを治療する際に使用するための組成物であって、前記組成物は、ペプチドコンジュゲートを含み、
前記ペプチドコンジュゲートは、ペプチドに連結された活性薬剤を含み、前記ペプチドは、
ａ）配列番号２４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、もしくはその機能的断片、あるいは
ｂ）配列番号２５３、配列番号２５７、配列番号４０４、配列番号３７、配列番号３８、配列番号４４、配列番号４８、配列番号１９５、配列番号２３４、配列番号２５、配列番号３６、配列番号４３、配列番号４６、配列番号５０、配列番号８１、配列番号２４５、配列番号２５２、配列番号２５５、配列番号２５９、配列番号２９０、配列番号１７、配列番号４２、配列番号２２６、配列番号２５１、配列番号８７、配列番号２９６、配列番号４０５、配列番号１９５、配列番号４０４、配列番号１９６、配列番号３３３、配列番号１２４、配列番号１、配列番号１３２、配列番号３４１、配列番号２１０、配列番号８３、配列番号８４、配列番号１９４、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号４０３、配列番号５５〜配列番号７９のいずれか１つ、もしくは配列番号２６４〜配列番号２８８のいずれか１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、またはその機能的断片
を含み、
前記組成物は、それを必要とする対象へ投与されることを特徴とし、
前記活性薬剤は、前記それを必要とする対象における前記腫瘍またはがん性細胞に送達されることを特徴とする、組成物。
【請求項２４】
前記ペプチドが、
ａ）少なくとも３０個のアミノ酸残基；
ｂ）少なくとも８個のシステイン残基；および
ｃ）システイン残基間に形成された複数のジスルフィド架橋
をさらに含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ペプチドが、ジスルフィドノットを介するジスルフィドをさらに含む、請求項２３または請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ペプチドが、投与後に前記それを必要とする対象のがんの領域、組織、構造また細胞にホーミング、標的化、指向化、蓄積または移動する、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記腫瘍または前記がん性細胞が、脳がん、結腸がん、トリプルネガティブ乳がん、転移性がん、または肉腫に由来する、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記腫瘍または前記がんが、神経膠芽腫である、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記がんが脳がんであり、前記ペプチドコンジュゲートが、前記脳がんに関連する経路を阻害する、請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記がんが脳がんであり、前記活性薬剤が、化学療法剤である、請求項２３〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記化学療法剤が、抗体または抗体断片を含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記化学療法剤が、チェックポイント阻害剤、化学薬剤、細胞毒性分子または毒素からなる群から選択される、請求項３０〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記活性薬剤が、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、一本鎖変数断片、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、チェックポイント阻害剤、免疫修飾物質、神経伝達物質、化学薬剤、細胞毒性分子、毒素、放射線増感剤、放射線防護体、治療用小分子、ナノ粒子、リポソーム、ポリマー、デンドリマー、脂肪酸、ペプチド模倣剤、補体結合ペプチドまたはタンパク質、ポリエチレングリコール、脂質、Ｆｃ領域、抗炎症剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗感染症薬、化学療法剤、検出可能薬剤、ニューロテンシンペプチド、またはそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項２３〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記それを必要とする対象が、イメージングされることを特徴とする、請求項２３〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記腫瘍または前記癌細胞が除去されることを特徴とする、請求項２３〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
いくつかの態様では、方法の外科手術は、対象のがんまたは病的領域、組織、構造または細胞を除去するステップを含んでなる。さらなる態様では、方法は、外科的除去の後に、対象のがんまたは病的領域、組織、構造、または細胞をイメージングするステップを含んでなる。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
配列番号１９８〜配列番号２０９または配列番号４０７〜配列番号４１８のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなるペプチド。
（項目２）
配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるペプチド。
（項目３）
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、項目２に記載のペプチド。
（項目４）
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２または配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片である、項目２〜３のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目５）
配列番号１９８〜配列番号２０９のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなる、ペプチド。
（項目６）
配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含んでなるペプチド。
（項目７）
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、項目６に記載のペプチド。
（項目８）
前記配列が、配列番号１〜配列番号１９２のいずれか１つまたはその断片である、項目６〜７のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目９）
配列番号４０７〜配列番号４１８のいずれか１つの配列またはその断片を含んでなる、ペプチド。
（項目１０）
配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列、またはその断片を含んでなるペプチド。
（項目１１）
前記配列が、配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する、項目１０に記載のペプチド。
（項目１２）
前記配列が、配列番号２１０〜配列番号４０１のいずれか１つまたはその断片である、項目１０〜１１のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目１３）
前記ペプチドがノットペプチドである、項目１〜１２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目１４）
前記ペプチドが、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、または少なくとも１６のシステイン残基を含んでなる、項目１〜１３のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目１５）
前記ペプチドが、システイン残基間に形成された複数のジスルフィド架橋を含んでなる、項目１〜１４のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目１６）
前記残基の少なくとも５％以上が、分子内ジスルフィド結合を形成するシステインである、項目１〜１５のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目１７）
前記ペプチドが、ジスルフィドノットを介してジスルフィドを含んでなる、項目１〜１６のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目１８）
前記ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基がＬ立体配置であるか、または前記ペプチドの少なくとも１つのアミノ酸残基がＤ立体配置である、項目１〜１７のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目１９）
前記配列が、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０、少なくとも５１、少なくとも５２、少なくとも５３、少なくとも５４、少なくとも５５、少なくとも５６、少なくとも５７、少なくとも５８残基、少なくとも５９、少なくとも６０、少なくとも６１、少なくとも６２、少なくとも６３、少なくとも６４、少なくとも６５、少なくとも６６、少なくとも６７、少なくとも６８、少なくとも６９、少なくとも７０、少なくとも７１、少なくとも７２、少なくとも７３、少なくとも７４、少なくとも７５、少なくとも７６、少なくとも７７、少なくとも７８、少なくとも７９、少なくとも８０、または少なくとも８１残基長である、項目１〜１８のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目２０）
前記ペプチドが、少なくとも１つのその他のペプチドを有する多量体構造に配置される、項目１〜１９のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目２１）
前記ペプチドが、生理学的ｐＨで０．５より高い正の正味電荷を有する、項目１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目２２）
前記ペプチドが、生理学的ｐＨで−０．５より低い負の正味電荷を有する、項目１〜２０のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目２３）
対象への投与時に、前記対象の特定の領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、蓄積，移動、または指向化する、項目１〜２２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目２４）
前記ペプチドの少なくとも１つの残基が、化学修飾を含んでなる、項目１〜２３のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目２５）
前記化学修飾が、前記ペプチドのＮ末端をブロックする、項目２４に記載のペプチド。
（項目２６）
前記修飾が、メチル化、アセチル化、またはアシル化である、項目２４に記載のペプチド。
（項目２７）
前記化学修飾が、１つまたは複数のリジン残基またはそれらの類似体のメチル化；Ｎ末端のメチル化；または１つまたは複数のリジン残基または類似体それらのメチル化およびＮ末端のメチル化である項目２４に記載のペプチド。
（項目２８）
前記ペプチドが、アシル付加物に連結される、項目１〜２７のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目２９）
前記ペプチドが、活性薬剤に連結される、項目１〜２８のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目３０）
前記活性薬剤が、前記ペプチドのＮ末端またはＣ末端で前記ペプチドと融合される、項目２９に記載のペプチド。
（項目３１）
前記活性薬剤が、ニューロテンシンペプチドである、項目３０に記載のペプチド。
（項目３２）
前記ニューロテンシンペプチドが、配列番号４２０の配列を有する、項目３１に記載のペプチド。
（項目３３）
ニューロテンシンペプチドと融合した前記ペプチドが、連続配列を含んでなる、項目３０〜３２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目３４）
１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の活性薬剤が、前記ペプチドに連結される、項目２９〜３３のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目３５）
前記ペプチドが、切断可能リンカーを介して前記活性薬剤に連結される、項目２９〜３４のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目３６）
前記ペプチドが、リンカーによって、前記ペプチドのＮ末端で、内部リジン残基のεアミンで、アスパラギンまたはグルタミン残基のカルボン酸で、またはＣ末端で、前記活性薬剤に連結される、項目２９〜３５のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目３７）
前記内部リジン残基が、配列番号３７のアミノ酸残基１７、配列番号３７のアミノ酸残基２５、または配列番号３７のアミノ酸残基２９に対応する位置にある、項目３６に記載のペプチド。
（項目３８）
前記内部リジン残基が、配列番号２４６のアミノ酸残基１５、配列番号２４６のアミノ酸残基２３、または配列番号２４６のアミノ酸残基２７に対応する位置にある、項目３６に記載のペプチド。
（項目３９）
非天然アミノ酸をさらに含んでなり、前記非天然アミノ酸が、挿入、付加、または別のアミノ酸への置換である、項目２９〜３８のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目４０）
前記ペプチドが、リンカーによって、非天然アミノ酸で前記活性薬剤に連結される、項目３９に記載のペプチド。
（項目４１）
前記リンカーが、アミド結合、エステル結合、カルバメート結合、炭酸結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、ジスルフィド結合、チオエステル結合または炭素−窒素結合を含んでなる、項目３６〜３４０のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目４２）
前記切断可能リンカーが、マトリックスメタロプロテイナーゼ、トロンビン、カテプシ
ン、またはβ−グルクロニダーゼのための切断部位を含んでなる、項目３５に記載のペプチド。
（項目４３）
前記ペプチドが、切断不能リンカーを介して前記活性薬剤に連結される、項目２９〜４２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目４４）
前記活性薬剤が、ペプチド、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、抗体、一本鎖変数断片（ｓｃＦｖ）、抗体断片、サイトカイン、ホルモン、増殖因子、チェックポイント阻害剤、免疫修飾物質、神経伝達物質、化学薬剤、細胞毒性分子、毒素、放射線増感剤、放射線防護体、治療用小分子、ナノ粒子、リポソーム、ポリマー、デンドリマー、脂肪酸、ペプチド模倣剤、補体結合ペプチドまたはタンパク質、ポリエチレングリコール、脂質、またはＦｃ領域からなる群から選択される、項目２９に記載のペプチド。
（項目４５）
前記活性薬剤が、ポリデオキシリボヌクレオチドまたはポリリボヌクレオチド配列である、項目２９に記載のペプチド。
（項目４６）
前記活性薬剤が、抗炎症剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、または抗感染症薬である、項目２９に記載のペプチド。
（項目４７）
前記活性薬剤が、化学療法剤である、項目２９に記載のペプチド。
（項目４８）
前記活性薬剤がノットペプチドである、項目２９に記載のペプチド。
（項目４９）
前記活性薬剤が、放射線増感剤または光増感剤である、項目２９に記載のペプチド。
（項目５０）
前記細胞毒性分子が、オーリスタチン、ＭＭＡＥ、メイタンシノイド、ＤＭ１、ＤＭ４、ドキソルビシン、カリケアマイシン、白金化合物、シスプラチン、タキサン、パクリタキセル、ＳＮ−３８、ＢＡＣＥ阻害剤、Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤、ＷＥＨＩ−５３９、ベネトクラクス、ＡＢＴ−１９９、ナビトクラクス、ＡＴ−１０１、オバトクラクス、ピロロベンゾジアゼピンまたはピロロベンゾジアゼピン二量体、またはドラスタチンである、項目２９に記載のペプチド。
（項目５１）
前記ペプチドが、検出可能薬剤に連結される、項目１〜５０のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目５２）
前記検出可能薬剤が、前記ペプチドのＮ末端またはＣ末端で前記ペプチドと融合される、項目５１に記載のペプチド。
（項目５３）
１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の検出可能薬剤がペプチドに連結される、項目５１〜５２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目５４）
前記ペプチドが、切断可能リンカーを介して前記検出可能薬剤に連結される、項目５１〜５３のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目５５）
前記ペプチドが、リンカーによって、ペプチドのＮ末端で、内部リジン残基のεアミンで、またはＣ末端で、検出可能薬剤に連結される、項目５１〜５３のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目５６）
前記内部リジンが、配列番号３７のアミノ酸残基１７、配列番号３７のアミノ酸残基２５、または配列番号３７のアミノ酸残基２９に対応する位置にある、項目５５に記載の
ペプチド。
（項目５７）
前記内部リジン残基が、配列番号２４６のアミノ酸残基１５、配列番号２４６のアミノ酸残基２３、または配列番号２４６のアミノ酸残基２７に対応する位置にある、項目５５に記載のペプチド。
（項目５８）
非天然アミノ酸をさらに含んでなり、前記非天然アミノ酸が、挿入、付加、または別のアミノ酸への置換である、項目５１〜５７のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目５９）
前記ペプチドが、リンカーによって非天然アミノ酸で前記活性薬剤に連結される、項目５８に記載のペプチド。
（項目６０）
前記リンカーが、アミド結合、エステル結合、カルバメート結合、ヒドラゾン結合、オキシム結合、または炭素−窒素結合を含んでなる、項目５５〜５９のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目６１）
前記切断可能リンカーが、マトリックスメタロプロテイナーゼ、トロンビン、カテプシン、またはβ−グルクロニダーゼのための切断部位を含んでなる、項目５４に記載のペプチド。
（項目６２）
前記ペプチドが、切断不能リンカーを介して前記検出可能薬剤に連結される、項目５１〜６１のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目６３）
前記検出可能薬剤が、フルオロフォア、近赤外線色素、造影剤、ナノ粒子、金属含有ナノ粒子、金属キレート、Ｘ線造影剤、ＰＥＴ薬剤、放射性同位体、または放射性核種キレート剤である、項目５１〜６２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目６４）
前記検出可能薬剤が、蛍光染料である、項目に５１記載のペプチド。
（項目６５）
前記ペプチドが、腫瘍またはがん性細胞に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、項目１〜６４のいずれか１項に記載のペプチド。
（項目６６）
前記腫瘍が、固形腫瘍である、項目６５に記載のペプチド。
（項目６７）
前記腫瘍が、血液悪性疾患である、項目６５〜６６のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目６８）
前記ペプチドが固形腫瘍に浸透する、項目６６〜６７のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目６９）
前記ペプチドが、がん性細胞に内在化または浸透する、項目６６〜６７のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７０）
前記腫瘍またはがん性細胞が、脳がん、神経膠芽腫、結腸がん、トリプルネガティブ乳がん、転移性がん、または肉腫に由来する、項目６５〜６９のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７１）
前記ペプチドが、血液脳関門を通過して前記腫瘍に接近する、項目６５〜７０のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７２）
前記ペプチドが、血液脳脊髄液関門を通過して前記腫瘍に接近する、項目６５〜７１のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７３）
前記ペプチドが、対象の血液脳関門または血液脳脊髄液関門を通過する、項目１〜７２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７４）
前記ペプチドが、対象の血液脳脊髄液関門を通過する、項目１〜７３のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７５）
前記ペプチドが、血液脳関門を通過した後に、対象の腫瘍または病的領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、項目７３〜７４のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７６）
対象への投与時に、前記ペプチドが、対象の特定の脳領域前記に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、項目１〜７５のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７７）
前記脳の特定の領域が、脳室、脳脊髄液、海馬、髄膜、吻側移動流、歯状回、脳室下領域、またはそれらの任意の組み合わせを含んでなる、項目７６に記載のペプチド。
（項目７８）
前記ペプチドが、神経学的障害、リソソーム蓄積症、てんかん、髄膜炎、脳内感染症、脳卒中、および多発性硬化症に影響を及ぼす、項目１〜７７のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目７９）
前記ペプチドが、神経変性疾患に関連するタンパク質凝集に影響を及ぼす、項目１〜７８のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目８０）
前記ペプチドが、脳がんに関連する経路を阻害する、項目１〜７９のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目８１）
前記ペプチドが、イオンチャネルを阻害または活性化する、項目１〜８０のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目８２）
前記ペプチドが、プロテアーゼ阻害活性を示す、項目１〜８１のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目８３）
前記ペプチドが、抗菌、抗真菌、または抗ウイルス活性を有する、項目１〜８２のいずれか一項に記載のペプチド。
（項目８４）
項目１〜８３のいずれか一項に記載のペプチドまたはそれらの塩と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる、医薬組成物。
（項目８５）
前記医薬組成物が、対象への投与のために製剤化される、項目８４に記載の医薬組成物。
（項目８６）
前記医薬組成物が、吸入、鼻腔内投与、経口投与、局所投与、静脈内投与、皮下投与、関節内投与、筋肉内投与、クモ膜下腔内、腹腔内投与、またはそれらの組み合わせのために製剤化される、項目８４〜８５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（項目８７）
項目１〜８３のいずれか一項に記載のペプチド、または項目８４〜８６のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与するステップ
を含んでなる、それを必要とする対象における病状を治療する方法。
（項目８８）
前記ペプチドまたは医薬組成物が、吸入、鼻腔内、経口、局所、静脈内、皮下、関節内、筋肉内投与、腹腔内、またはそれらの組み合わせによって投与される、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記ペプチドまたは医薬組成物が、投与に続いて、前記対象のがん性または病的領域、組織、構造、または細胞に、ホーミング、標的化、蓄積、移動、または指向化する、項目８７〜８８のいずれか一項に記載の方法。
（項目９０）
前記病状が、腫瘍またはがんである、項目８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
（項目９１）
前記病状が、固形腫瘍である、項目８７〜９０のいずれか一項に記載の方法。
（項目９２）
前記腫瘍が血液悪性疾患である、項目８７〜９０のいずれか一項に記載の方法。
（項目９３）
前記病状が、脳腫瘍、トリプルネガティブ乳がん、結腸がん転移、転移性がんまたは肉腫である、項目８７〜８９のいずれか一項に記載の方法。
（項目９４）
脳腫瘍が、手術不能である、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
前記ペプチドが血液脳関門を通過して、脳内腫瘍にホーミング、標的化、移動、蓄積、または指向化する、項目９１〜９４のいずれか一項に記載の方法。
（項目９６）
前記ペプチドが血液脳脊髄液関門を通過して、脳内腫瘍にホーミング、標的化、移動、蓄積、または指向化する、項目９１〜９５のいずれか一項に記載の方法。
（項目９７）
前記方法がその他の治療法と組み合わされる、項目８７〜９５のいずれか一項に記載の方法。
（項目９８）
前記その他の治療法が、化学療法、放射線療法、または免疫調節療法を含んでなる、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
前記ペプチドが、投与に続いて前記対象の血液脳関門を通過する、項目８７〜９８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１００）
前記ペプチドが、投与に続いて前記対象の血液脳脊髄液関門を通過する、項目８７〜９９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０１）
前記ペプチドが、投与に続いて、対象の脳室、脳脊髄液、髄膜、吻側移動流、または海馬に、ホーミング、標的化、指向化、蓄積、または移動する、項目８７〜１００のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０２）
前記病状が、脳の病状である、項目８７〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０３）
前記病状が、脳室、脳脊髄液、または海馬の機能に関連する、項目８７〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０４）
前記脳の病状が、脳の機能に関連する、項目１０３に記載の方法。
（項目１０５）
前記ペプチドが、脳の病状を診断、予防、または治療する、項目１０３〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０６）
前記脳の病状が、脳腫瘍または脳がんである、項目１０３〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０７）
前記脳の病状が、記憶障害または記憶機能、アルツハイマー病、パーキンソン病、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、統合失調症、てんかん、進行性多巣性白質脳症、真菌感染症、うつ病、双極性障害、心的外傷後ストレス障害、脳卒中、外傷性脳損傷、感染症、または多発性硬化症である、項目１０３〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０８）
項目１〜８３のいずれか一項に記載のペプチド、または項目８４〜８７のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与するステップと、
前記対象の臓器または身体領域をイメージングするステップと
を含んでなる、対象の臓器または身体領域をイメージングする方法。
（項目１０９）
前記対象のがんまたは病的領域、組織、構造または細胞を検出するステップをさらに含んでなる、項目１０８に記載の方法。
（項目１１０）
前記対象において手術を実施するステップをさらに含んでなる、項目１０８〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１１）
前記がんを治療するステップをさらに含んでなる、項目１０８〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１２）
前記手術が、前記対象のがんまたは病的領域、組織、構造または細胞を除去するステップを含む、項目１０８〜１１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１３）
外科的除去後に、前記対象のがんまたは病的領域、組織、構造、または細胞をイメージングするステップをさらに含んでなる、項目１１２に記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
【図１】リジンをメチル化することによって、放射性標識されたペプチドである。図１Ａは天然リジンを例示し、図１Ｂはジメチル化リジンを示す。
【図２】フルオキセチン（上）およびイヌリン（下）対照群について、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。
【図３】配列番号１の放射性標識ペプチドについて、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。
【図４】配列番号３の放射性標識ペプチドについて、脳およびその他の組織における１４Ｃシグナルを示す。
【図５】配列番号１のペプチドのＨＰＬＣプロファイルを示す。
【図６】配列番号２のペプチドの非還元型および還元型サンプルの双方について、ＨＰＬＣプロファイルのオーバーレイを示す。
【図７】配列番号３のペプチドの非還元型および還元型サンプルの双方について、ＨＰＬＣプロファイルのオーバーレイを示す。
【図８】配列番号４のペプチドのＨＰＬＣプロファイルを示す。
【図９】配列番号１〜配列番号４を発現するコンストラクトの例示的な構成を示す。
【図１０】本開示のペプチドを製造する方法の概略図を示す。
【図１１Ａ−Ｂ】図１１は、配列番号４（図１１Ａ）、配列番号６（図１１Ｂ）、配列番号１７（図１１Ｃ）、配列番号２５（図１１Ｄ）、および配列番号３２（図１１Ｅ）のペプチド小規模発現試行からの品質管理データを示す。
【図１１Ｃ−Ｄ】図１１は、配列番号４（図１１Ａ）、配列番号６（図１１Ｂ）、配列番号１７（図１１Ｃ）、配列番号２５（図１１Ｄ）、および配列番号３２（図１１Ｅ）のペプチド小規模発現試行からの品質管理データを示す。
【図１１Ｅ】図１１は、配列番号４（図１１Ａ）、配列番号６（図１１Ｂ）、配列番号１７（図１１Ｃ）、配列番号２５（図１１Ｄ）、および配列番号３２（図１１Ｅ）のペプチド小規模発現試行からの品質管理データを示す。
【図１２Ａ−Ｂ】図１２は、配列番号３９ペプチドのＨＰＬＣデータ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の還元型バンドと比較した非還元型；および配列番号２５ペプチドのＭＡＬＤＩ質量分析グラフを示す。図１２Ａは、配列番号３９のＨＰＬＣプロファイルを示す。図１２Ｂは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の配列番号３９の非還元型および還元型バンドを示す。
【図１２Ｃ】図１２は、配列番号３９ペプチドのＨＰＬＣデータ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の還元型バンドと比較した非還元型；および配列番号２５ペプチドのＭＡＬＤＩ質量分析グラフを示す。図１２Ｃは、配列番号２５のＭＡＬＤＩ質量分析グラフの全スペクトルを示す。
【図１２Ｄ】図１２は、配列番号３９ペプチドのＨＰＬＣデータ、およびＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上の還元型バンドと比較した非還元型；および配列番号２５ペプチドのＭＡＬＤＩ質量分析グラフを示す。図１２Ｄは、配列番号２５のＭＡＬＤＩ質量分析グラフの全スペクトルの拡大部分を示す。
【図１３】Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１３Ａは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｂは、図１３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１３Ｃは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１３Ａおよび図１３Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｄは、図１３Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１３Ｅは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１３Ａ〜図１３Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｆは、図１３Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１３Ｇは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１３Ｅおよび図１３Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１３Ｈは、図１３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１４】図１４は、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射能標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１４Ａは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｂは、図１４Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１４Ｃは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１４Ａおよび図１４Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｄは、図１４Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号３の放射性標識ペプチド投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１４Ｅは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド投与の２４時間後における、図１４Ａ〜図１４Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｆは、図１４Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１４Ｇは、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１４Ｅおよび図１４Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１４Ｈは、図１４Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、Ａｌｅｘａ  ６４７蛍光色素（配列番号５−ＲＡペプチドコンジュゲート）にコンジュゲートされた９ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１５】図１５は、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１５Ａは、バリン−シトルリンリンカーによってＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｂは、図１５Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１５Ｃは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１５Ａおよび図１５Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｄは、図１５Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１５Ｅは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１５Ａ〜図１５Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｆは、図１５Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１５Ｇは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１５Ｅおよび図１５Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１５Ｈは、図１５Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１６】図１６は、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１６Ａは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｂは、図１６Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１６Ｃは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｚペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１６Ａおよび図１６Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｄは、図１６Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１６Ｅは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１６Ａ〜図１６Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｆは、図１６Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１６Ｇは、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号１５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１６Ｅおよび図１６Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１６Ｈは、図１６Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、バリン−シトルリンリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされた１１ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＺペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１７】図１７は、１２．８ナノモルの配列番号５ペプチドの放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１７Ａは、１２．８ナノモルの配列番号５ペプチドの放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｂは、図１７Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１７Ｃは、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、図１７Ａおよび図１７Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｄは、図１７Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１７Ｅは、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、図１７Ａ〜図１７Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｆは、図１７Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１７Ｇは、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、図１７Ｅおよび図１７Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１７Ｈは、図１７Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１２．８ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−Ｒペプチド）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１８】図１８は、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１８Ａは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｂは、図１８Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１８Ｃは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１８Ａおよび図１８Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｄは、図１８Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１８Ｅは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１８Ａ〜図１８Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｆは、図１８Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１８Ｇは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、図１８Ｅおよび図１８Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１８Ｈは、図１８Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の３時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図１９】図１９は、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウス白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図１９Ａは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｂは、図１９Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１９Ｃは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１９Ａおよび図１９Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｄは、図１９Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１９Ｅは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１９Ａ〜図１９Ｄに示されるのと異なるマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｆは、図１９Ｆに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、マウスのＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。  図１９Ｇは、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、図１９Ｅおよび図１９Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図１９Ｈは、図１９Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、切断不能リンカーを介してＤＭ−１にコンジュゲートされた１４ナノモルの配列番号５の放射性標識ペプチド（配列番号５−ＲＹペプチドコンジュゲート）投与の２４時間後における、ＲＨ−２８腫瘍を含む組織に分布するペプチド分布を同定する。
【図２０Ａ−Ｆ】図２０は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２０Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｂは、図２０Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａおよび図２０Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｄは、図２０Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａ〜図２０Ｄと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｆは、図２０Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２０Ｇ−Ｌ】図２０は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２０Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ａ〜図２０Ｆに示されるのと異なる非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｈは、図２０Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｉは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ｇおよび図２０Ｈと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｊは、図２０Ｉに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２０Ｋは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２０Ｇ〜図２０Ｊと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２０Ｌは、図２０Ｋに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウスに分布するペプチドを同定する。
【図２１】図２１は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２１Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｂは、図２１Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２１Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ａおよび図２１Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｄは、図２１Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２１Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ａ〜図２１Ｄに示されるのと異なる、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｆは、図２１Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２１Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、図２１Ｅおよび図２１Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２１Ｈは、図２１Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を図示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３７ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２２】図２２は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２２Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｂは、図２２Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、非損傷腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２２Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ａおよび図２２Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｄは、図２２Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２２Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ａ〜図２２Ｄに示されるのと異なる、非損傷腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｆは、図２２Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２２Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２２Ｅおよび図２２Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２２Ｈは、図２２Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２３】図２３は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスからの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図２３Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｂは、図２３Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２３Ｃは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ａおよび図２３Ｂと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｄは、図２３Ｃに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２３Ｅは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ａ〜図２３Ｄに示されるのと異なる、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｆは、図２３Ｅに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。  図２３Ｇは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、図２３Ｅおよび図２３Ｆと同じマウスの異なる凍結切片の白色光画像を示す。  図２３Ｈは、図２３Ｇに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３５ペプチド投与の３時間後における、マウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図２４】配列番号５ペプチドの投与後の半減期のグラフを示す。
【図２５】図２５は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）、またはＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウス、またはいかなるペプチドも投与されていないマウスのいずれかから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外線蛍光画像の比較を示す。  図２５Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２５Ａとは異なるマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｃは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｄは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、図２５Ｃとは異なるマウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｅは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｆは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。  図２５Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、ユーイング肉腫腫瘍の近赤外蛍光画像を示す。
【図２６】図２６は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）、またはＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウス、またはいかなるペプチドも投与されていないマウスのいずれかから摘出されたユーイング肉腫腫瘍の近赤外線蛍光画像の比較を示す。  図２６Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２６Ａとは異なるマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｃは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｄは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、図２６Ｃとは異なるマウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｅは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｆは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２６Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、腎臓の近赤外蛍光画像を示す。
【図２７】図２７は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）、またはＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウス、またはいかなるペプチドも投与されていないマウスのいずれかから摘出された摘出された（ｅｘｃｉｓｅｄ  ｅｘｃｉｓｅｄ）肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号４ペプチド（配列番号４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２７Ａとは異なるマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｃは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｄは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのインペラトキシン（インペラトキシン−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、図２７Ｃとは異なるマウスから摘出された肝臓の赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｅは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルのコノトキシンＣＶＩＣ（コノトキシン−Ａコンジュゲート）投与の４時間後における、マウスから摘出された肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｆは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後におけるマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。  図２７Ｇは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、肝臓の近赤外蛍光画像を示す。
【図２８Ａ−Ｂ】図２８は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、いかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。  図２８Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。上段の左から右への組織は、腫瘍、腎臓、肝臓、心臓、および排液リンパ節である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、肺、側方リンパ節である。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。  図２８Ｂは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に摘出された、図２８Ａの様々な組織の近赤外蛍光画像を示すが、画像は腎臓なしで撮影された。上段の左から右への組織は、腫瘍、肝臓、心臓、および排液リンパ節である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、肺、側方リンパ節である。組織の蛍光は、ペプチドコンジュゲートの存在を示す。
【図２８Ｃ】図２８は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後における、いかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。  図２８Ｃは、陰性対照としていかなるペプチドも投与されていないマウスから摘出された、様々な組織の近赤外蛍光画像を示す。上段の左から右への組織は、腫瘍、腎臓、肝臓、および心臓である。下段の左から右への組織は、脳、脾臓、骨格筋、および肺である。組織蛍光は、自己蛍光を示す。
【図２９】図２９は、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に安楽死させた、腎臓摘出または非摘出マウスの体腔内の生体外近赤外蛍光画像を示す。  図２９Ａは、ＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に安楽死させたマウスの体腔内の生体外近赤外蛍光画像を示す。Ｌｖは肝臓の位置を示す。Ｔｍは腫瘍の位置を示す。Ｋｄは腎臓の位置を示す。Ｂｌは膀胱の位置を示す。  図２９Ｂは、図２９Ａに示されるＡＦ６４７蛍光染料にコンジュゲートされた１０ナノモルの配列番号５４ペプチド（配列番号５４−Ａペプチドコンジュゲート）投与の４時間後に安楽死させたマウスの体腔内の生体外近赤外蛍光画像を示すが、腎臓は除去されている。Ｌｖは肝臓の位置を示す。Ｔｍは腫瘍の位置を示す。Ｂｌは膀胱の位置を示す。Ｈｔは心臓の位置を示す。Ｌｇは肺の位置を示す。
【図３０】配列番号５５ペプチドについて、脳における１４Ｃシグナルを示す。
【図３１】還元型および非還元型クロマトグラムを重ね合わせた、配列番号５５のペプチドのＨＰＬＣプロファイルを示す。
【図３２】図３２は、全脳ホモジネート中の配列番号５５の１４Ｃ標識ペプチドのＨＰＬＣ放射線写真を示す。  図３２Ａは、粗脳ホモジネートにスパイクされて、シンチレーション検出器を装着した疎水性カラム上のＨＰＬＣ上で、アセトニトリル勾配および０．１％ＴＦＡを使用して泳動されたペプチドを示す。  図３２Ｂは、放射性標識ペプチドの全身投与後における、３匹のマウスの脳のシンチレーションＨＰＬＣトレースを示す。矢印は、図３２Ａに示されるスパイク対照と同じ保持時間における、無処理１４Ｃで標識された配列番号５５ペプチドに対応するピークを示す。
【図３３】脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への配列番号５５ペプチドの局在を示唆する、矢状（図３３Ａ）および冠状（図３３Ｂ）の脳切片を示す。図３３Ａと図３３Ｂの双方で、放射能スキャンが左側に示され、暗い領域はより高い活性を有する。通常光の組織の画像は、右側に示される。
【図３４】図３４は、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図３４Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３４Ｂは、図３４Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３９ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図３５】図３５は、１００ナノモルの放射性標識された配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図３５Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３５Ｂは、図３５Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では、１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号３６ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図３６】図３６は、マウス冠状脳切片の白色光およびオートラジオグラフィー画像を示し、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第１の精製画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与、または同じＨＰＬＣからの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、ペプチド分布が同定される。  図３６Ａは、右側にマウスの冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、ペプチド分布を同定し、１００ナノモルのペプチド投与の３時間後における、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への、配列番号５５のペプチドの放射性標識第１精製画分（第１ＨＰＬＣペプチドピーク）の局在を示唆する。  図３６Ｂは、右側にマウスの冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、ペプチド分布を同定し、１００ナノモルのペプチド投与の３時間後における、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造への、配列番号５５のペプチドの第２精製画分（図３６ＡのＨＰＬＣからの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）の局在化を示唆する。
【図３７】図３７は、結紮腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示し、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第１の精製画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、ペプチド分布を同定する。  図３７Ａは、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第１の精製画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結紮腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３７Ｂは、３７Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中で１４Ｃシグナルは、１００ナノモルの配列番号５５ペプチドの放射性標識第１の画分（第１のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織中のペプチド分布を同定する。
【図３８】図３８は、結紮腎臓を有するマウスの白色光画像および対応するオートラジオグラフィー画像を示し、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７からのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、ペプチド分布を同定する。  図３８Ａは、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７からのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３８Ｂは、図３８Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの配列番号５５のペプチドの放射性標識第２の精製画分（図３７からのＨＰＬＣの第２のＨＰＬＣペプチドピーク）投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織におけるペプチド分布を同定する。
【図３９】図３９は、１００ナノモルの放射性標識された配列番号８３ペプチド投与の３時間後におけるペプチド分布を同定する、結索腎臓を有するマウスの白色光および対応するオートラジオグラフィー画像を示す。  図３９Ａは、１００ナノモルの放射性標識配列番号８３ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウスの凍結切片の白色光画像を示す。  図３９Ｂは、図３９Ａに対応するオートラジオグラフィー画像を示し、その中では１４Ｃシグナルが、１００ナノモルの放射性標識配列番号８３ペプチド投与の３時間後における、結索腎臓を有するマウス組織に分布するペプチドを同定する。
【図４０】右側に冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、放射性標識配列番号３４投与の３時間後におけるペプチド分布を同定し、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造へのペプチドの局在を示唆する。
【図４１】右側に冠状脳切片の白色光画像、左側に白色光画像に対応するオートラジオグラフィー画像を示す。オートグラフ画像中の１４Ｃシグナルは、放射性標識配列番号８３投与の３時間後におけるペプチド分布を同定し、脳室およびＣＳＦなどの脳内の特定の構造へのペプチドの局在を示唆する。
【図４２】Ｃｏｌｏ２０５腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに対する、１０ナノモルのＣｙ５．５にコンジュゲートされた配列番号３７のペプチド投与の２４時間後に摘出された、Ｃｏｌｏ２０５腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示す。
【図４３】ＭＤＡ−ＭＢ−２３腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに対する、１０ナノモルのＣｙ５．５にコンジュゲートされた配列番号３７のペプチド投与の２４時間後に摘出された、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示す。
【図４４】Ｕ８７腫瘍を有するメスハーラン胸腺欠損マウスに対する、１０ナノモルのＣｙ５．５にコンジュゲートされた配列番号３７（ＳＥＱ  Ｄ  ＮＯ：３７）のペプチド投与の２４時間後に摘出された、Ｕ８７腫瘍（左上）、結腸（中央上）、肝臓（右上）、脳（中央左）、脾臓（中央右）、筋肉（左下）、皮膚（中央下）、および腎臓（右下）の近赤外蛍光画像を示す。
【図４５】配列番号２１２と整列させた配列番号２１１の配列をループ位置のアノテーションと共に示し、配列番号２１１の構造を左に、配列番号２１２の構造を右に、それらの対応する３Ｄ構造を示す。
【図４６】配列番号４２５および配列番号４２６の配列アライメントをアノテートされたループ位置と共に示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３０】
化学修飾は、例えば、ペプチドの半減期を延長し、または生体内分布または薬物動態プロファイルを変化させ得る。化学修飾は、ポリマー、ポリエーテル、ポリエチレングリコール、生体高分子、ポリアミノ酸、脂肪酸、デンドリマー、Ｆｃ領域、パルミチン酸またはミリスチン酸（ｍｙｒｉｓｔｏｌａｔｅ）などの単純飽和炭素鎖、またはアルブミンを含んでなり得る。ポリアミノ酸としては、例えば、反復される単一アミノ酸（例えば、ポリグリシン）を有するポリアミノ酸配列、およびパターンに従っても従わなくてもよい混合ポリアミノ酸配列（例えば、ｇｌｙ−ａｌａ−ｇｌｙ−ａｌａ（配列番号４２４））を有するポリアミノ酸配列、または前述の任意の組み合わせが挙げられる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０７】
実施例３１
改善されたペプチド変異型を判定する方法
本実施例は、スキャフォールドペプチドの一次配列および三次構造を比較および分析することによって、ペプチド変異型を改善する方法を判定する方法を示す。配列番号２１１ペプチドおよび配列番号２１２の一次配列および三次構造を比較した。これらのペプチドはどちらも、セラホトキシンファミリー由来であり、ＢＢＢ透過体であると考えられている。この方法を用いて、セラホトキシンファミリーのその他のメンバー上に潜在的にグラフトされて、そのファミリーの非ＢＢＢ透過メンバーをＢＢＢ透過体にすることができる、配列番号２１１または配列番号２１２の配列の部分を同定した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０８】
図４５は、配列番号２１２と整列させた配列番号２１１の配列をループ位置のアノテーションと共に示し、配列番号２１１の構造を左に、配列番号２１２の構造を右に、それらの対応する３Ｄ構造を示す。２つのスキャフォールドの配列アラインメントを用いて、タンパク質−タンパク質結合相互作用およびＢＢＢ透過に重要であり得る、芳香族ファルマコフォアを同定した。配列番号２１１および配列番号２１２の配列および３Ｄ立体配座の検査に基づいて、配列番号２１１のＦ５、Ｆ３２、およびＦ３４残基、ならびにＷ５、Ｗ３０、およびＷ３２残基は、これらのペプチドのＢＢＢ透過特性にとって重要な残基であってもよい。さらに、配列番号２１１のＷ６および配列番号２１２のＷ２７もまた、ＢＢＢ透過にとって重要な残基であってもよい。この比較はまた、配列番号２１１および配列番号２１２の双方が、典型的なノッチンよりもはるかに高い芳香族残基百分率をその配列中に有し、したがって、これらのペプチドのＢＢＢ浸透特性にとって、潜在的に重要であり得ることを示した。さらに、構造的相同性の比較は、改善された折り畳み特性を有する変異型の設計をもたらした。例えば、必須のβ−ヘアピンを形成するループ（ループ４）の変異が変異型中に作られて、折り畳みを改善し、ループ（ループ１〜４）のいずれかの特定の変異は、変異型の挙動および活性に劇的な効果を有することが示された。比較はまた、配列番号２１２がより短いループを有して発現中の折り畳みがあまり良好でないことから、配列番号２１１ループ２のより長い長さが、折り畳みにとって重要であり得ることを示した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０９】
さらに、一次配列および構造誘導相同性を用いて、配列番号４２５のペプチドおよび配列番号４２６のペプチドを比較した。これらのペプチドはクロロトキシンファミリーに由来し、クロロトキシンファミリーのメンバーまたは類似体は、ＢＢＢ透過体であってもよい。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３１０】
図４６は、配列番号４２５の折り畳みおよび安定性にとって重要な位置を同定するために用いられた、アノテートされたループ部位と共に、配列番号４２５および配列番号４２６の配列アラインメントを示す。例えば、Ｃ末端に追加的な残基を付加することで、スキャフォールドの安定性を劇的に変化させ得る。その結果、配列番号４２５のＣ末端Ｃｙｓ残基の後に付加された追加的な残基を有する作られた変異体は、配列番号４２５よりもより良好に折り畳まれた。しかし、付加された残基のアイデンティティーは重要であった。付加されたＡｒｇを有する変異体は、あまり好ましくなかったが、これは、良好に折り畳まれたＡｓｎと比較した酵素的クリッピングに起因してもよい。さらに、ループ２の長さは、異なる長さでの折り畳みを許容することが示され、ループ２が、製造可能性および安定性を改善するために、または新たな生物学的活性を導入するために改変され得ることが示唆された。
【手続補正９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４５】
2018521994.tif 000001
【手続補正１０】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図４６】
2018521994.tif 000002