【手続補正書】
【提出日】平成18年11月30日(2006.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中の標的核酸の存在を検出する検出方法であって、
（１）前記標的核酸を増幅するべく溶液中でPCRを行なう工程と、
（２）前記（１）で得られた増幅産物と、前記標的核酸と特異的にハイブリダイズするプローブと、をハイブリダイズさせる工程と、
（３）前記（２）の結果、前記プローブからのシグナルを増幅産物が有する標識に基づき検出する工程と、
を有し、
前記溶液が下記ａ）、ｂ）又はｃ）からなるデオキシヌクレオチド混合物を含み、
a) dATP, dCTP, dGTP 及び dTTP;
b) dATP, dCTP, dGTP 及び dUTP; または
c) dATP, dCTP, dGTP, dTTP 及び dUTP；
また該デオキシヌクレオチド混合物から選ばれる１つのデオキシヌクレオチドは、標識されたもの及び非標識のものを含み、該標識されたものの該非標識のものに対するモル比が１以上であり、且つ該溶液中の該標識されたものと非標識のものとの総濃度が、他の非選択デオキシヌクレオチドの濃度よりも低い（但し、選択されたデオキシヌクレオチドがｄＵＴＰである場合、該非標識のものはｄＴＴＰであってもよい）
ことを特徴とする検出方法。
【請求項２】
ターゲット核酸を含む検体を固相上に固定されたプローブと反応させ、固相上のプローブとハイブリダイズした前記ターゲット核酸を、標識を用いて検出するターゲット核酸の検出方法において、
前記検体を請求項１に記載の方法により該検体中に含まれるターゲット核酸に標識を施したＰＣＲ産物としてから前記固相上のプローブと反応させることを特徴とするターゲット核酸の検出方法。
【請求項３】
前記プローブがＤＮＡマイクロアレイとして固相上に配置されている請求項２に記載の検出方法。
【請求項４】
前記ＤＮＡマイクロアレイにおける前記プローブを含むスポットの面積は１０-6平方メートル以下であることを特徴とする、請求項３に記載の検出方法。
【請求項５】
ＰＣＲ法によってターゲット核酸の増幅を行なった前記検体からのＰＣＲ産物の塩基長が100〜2000bpである請求項２に記載の検出方法。
【請求項６】
標識基質を取り込みながらＰＣＲ法によってターゲット核酸の増幅を行なう場合のＡＴＣＧ４種のデオキシヌクレオチドを含む液組成物であって、
１種類から３種類のデオキシヌクレオチドを選択し、選択されなかった残りのデオキシヌクレオチドに比べて前記選択されたデオキシヌクレオチドの濃度を少なくし、前記選択されたデオキシヌクレオチドに対して標識付きのデオキシヌクレオチドが含まれることを特徴とする、液組成物。
【請求項７】
試料中の標的核酸の存在を検出する検出方法であって、
（１）以下の組成からなるデオキシリボヌクレオチド混合物を含む溶液中で前記標的核酸を増幅するべくPCRを行う工程、
ａ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdATPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ｃ、Ｇ及びＴとＵの少なくとも１つであり、前記溶液中の前記dATPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dATP の 非標識dATP に対するモル比が1以上である、
ｂ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdCTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｇ及びＴとＵの少なくとも１つであり、前記溶液中の前記dCTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dCTP の 非標識dCTP に対するモル比が1以上である、
ｃ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdGTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＴとＵの少なくとも１つであり、前記溶液中の前記dGTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dGTP の 非標識dGTP に対するモル比が1以上である、
ｄ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdTTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記dTTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dTTP の非標識dTTPに対するモル比が1以上である、
ｅ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdUTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記dUTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dUTPの非標識dUTP に対するモル比が1以上である、
ｆ）標識されたdUTP、非標識のdTTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記標識されたdUTP及び非標識のdTTPの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ標識されたdUTPの非標識dTTPに対するモル比が1以上である、  
または、
ｇ）標識されたdTTP、非標識のdUTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記標識されたdTTP及び非標識のdUTPの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ標識されたdTTPの非標識dUTPに対するモル比が1以上である、
（２）前記（１）の工程で得られた増幅産物と、基板上に固定された、標的核酸に特異的に結合可能なプローブとをハイブリダイズさせる工程と、
（３）前記（２）の結果、前記プローブからのシグナルを増幅産物が有する標識に基づき検出する工程と、
を有することを特徴とする検出方法。
【請求項８】
試料中の標的核酸の存在を検出する検出方法であって、
（１）dATP, dGTP, dCTP, dTTP 及び標識されたdUTPを含み、標識 dUTP 及び dTTP の総濃度が dATP, dGTP 及びdCTPの濃度より低く、且つ 標識 dUTP の dTTP に対するモル比が1以上である溶液中で前記標的核酸を増幅するべくPCRを行う工程と、
（２）前記（１）の工程で得られた増幅産物と、基板上に固定された、標的核酸に特異的にハイブリダイズするプローブと、をハイブリダイズさせる工程と、
（３）前記（２）の工程の結果、前記プローブからのシグナルを増幅産物が有する標識に基づき検出する工程と、
を有することを特徴とする検出方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】核酸検出方法及び液組成物
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、標識ＰＣＲを用いた試料中の標的核酸の検出方法及びそれに用いる核酸標識用液組成物に関するものである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
また、基質となるATCGの４種のデオキシヌクレオチド(dATP、dCTP、dGTP、dTTP：総称してdNTP)と標識付きデオキシヌクレオチド(例えば、Cy3-dUTP)をそれぞれ調製して、各dNTPの終濃度をそろえるという方法もある。特許第3001919号明細書で開示されているように、4種の基質ヌクレオチドのうち一種の基質について蛍光標識されたヌクレオチドに置換し、標識物質の取り込みを行なっている。
【特許文献１】米国特許第6410229号明細書
【特許文献２】特開2001-128683号公報
【特許文献３】特許第3001919号明細書
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
また、各dNTPの終濃度をそろえる取り込み方法では、ある程度標識付きデオキシヌクレオチドを多くすれば効率良く標識物質が取り込まれるが、標識付きデオキシヌクレオチドは非常に高価であり、その適用範囲が限定される場合がある。本発明の目的は、上記問題点を解決すべく、標識物質の使用量をできるだけ抑え、かつ効率良く標識物質を検体（検出対象としてのターゲット核酸）に取り込ませることのできる核酸標識方法を用いた標的核酸の検出方法およびそれに用いる核酸標識用液組成物を提供することにある。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の標的核酸の第一の検出方法は、試料中の標的核酸の存在を検出する検出方法であって、
（１）前記標的核酸を増幅するべく溶液中でPCRを行なう工程と、
（２）前記（１）で得られた増幅産物と、前記標的核酸と特異的にハイブリダイズするプローブと、をハイブリダイズさせる工程と、
（３）前記（２）の結果、前記プローブからのシグナルを増幅産物が有する標識に基づき検出する工程と、
を有し、
前記溶液が下記ａ）、ｂ）又はｃ）からなるデオキシヌクレオチド混合物を含み、
a) dATP, dCTP, dGTP 及び dTTP;
b) dATP, dCTP, dGTP 及び dUTP; または
c) dATP, dCTP, dGTP, dTTP 及び dUTP；
また該デオキシヌクレオチド混合物から選ばれる１つのデオキシヌクレオチドは、標識されたもの及び非標識のものを含み、該標識されたものの該非標識のものに対するモル比が１以上であり、且つ該溶液中の該標識されたものと非標識のものとの総濃度が、他の非選択デオキシヌクレオチドの濃度よりも低い（但し、選択されたデオキシヌクレオチドがｄＵＴＰである場合、該非標識のものはｄＴＴＰであってもよい）
ことを特徴とする検出方法である。
本発明の標的核酸の第二の検出方法は、ターゲット核酸を含む検体を固相上に固定されたプローブと反応させ、固相上のプローブとハイブリダイズした前記ターゲット核酸を、標識を用いて検出するターゲット核酸の検出方法において、
前記検体を上記の第一の検出方法における核酸標識方法により該検体中に含まれるターゲット核酸に標識を施したＰＣＲ産物としてから前記固相上のプローブと反応させることを特徴とするターゲット核酸の検出方法である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明の標的核酸の第三の検出方法は、試料中の標的核酸の存在を検出する検出方法であって、
（１）以下の組成からなるデオキシリボヌクレオチド混合物を含む溶液中で前記標的核酸を増幅するべくPCRを行う工程、
ａ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdATPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ｃ、Ｇ及びＴとＵの少なくとも１つであり、前記溶液中の前記dATPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dATP の 非標識dATP に対するモル比が1以上である、
ｂ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdCTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｇ及びＴとＵの少なくとも１つであり、前記溶液中の前記dCTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dCTP の 非標識dCTP に対するモル比が1以上である、
ｃ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdGTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＴとＵの少なくとも１つであり、前記溶液中の前記dGTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dGTP の 非標識dGTP に対するモル比が1以上である、
ｄ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdTTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記dTTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dTTP の非標識dTTPに対するモル比が1以上である、
ｅ）標識されたもの及び非標識のものとを含むdUTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記dUTPの非標識のもの及び標識のものとの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ 標識 dUTPの非標識dUTP に対するモル比が1以上である、
ｆ）標識されたdUTP、非標識のdTTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記標識されたdUTP及び非標識のdTTPの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ標識されたdUTPの非標識dTTPに対するモル比が1以上である、  
または、
ｇ）標識されたdTTP、非標識のdUTPおよび非標識のdNTPs、ここでＮは、Ａ、Ｃ及びＧであり、前記溶液中の前記標識されたdTTP及び非標識のdUTPの総濃度は、前記非標識のdNTPｓの濃度より低く、且つ標識されたdTTPの非標識dUTPに対するモル比が1以上である、
（２）前記（１）の工程で得られた増幅産物と、基板上に固定された、標的核酸に特異的に結合可能なプローブとをハイブリダイズさせる工程と、
（３）前記（２）の結果、前記プローブからのシグナルを増幅産物が有する標識に基づき検出する工程と、
を有することを特徴とする検出方法である。
本発明の標的核酸の第四の検出方法は、試料中の標的核酸の存在を検出する検出方法であって、
（１）dATP, dGTP, dCTP, dTTP 及び標識されたdUTPを含み、標識 dUTP 及び dTTP の総濃度が dATP, dGTP 及びdCTPの濃度より低く、且つ 標識 dUTP の dTTP に対するモル比が1以上である溶液中で前記標的核酸を増幅するべくPCRを行う工程と、
（２）前記（１）の工程で得られた増幅産物と、基板上に固定された、標的核酸に特異的にハイブリダイズするプローブと、をハイブリダイズさせる工程と、
（３）前記（２）の工程の結果、前記プローブからのシグナルを増幅産物が有する標識に基づき検出する工程と、
を有することを特徴とする検出方法である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明の検出方法に用いられる核酸標識方法により、標識基質を取り込みながらＰＣＲ法によって標識核酸（ターゲット核酸）の増幅を行なう場合において、標識付きデオキシヌクレオチドを入れる基質に関しては濃度を低く調製することで、効率良く標識物質を取り込むことができる。そして、本発明のターゲット核酸の検出方法によれば、固相ハイブリダイゼーションによるターゲット核酸の検出感度を向上させることができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
本発明において用いられる核酸標識方法は、標識基質を取り込みながらＰＣＲ(Polymerase Chain Reaction)法によってターゲット核酸の増幅を行なう場合において、Ａ(アデニン)・Ｔ(チミン)・Ｃ(シトシン)・Ｇ(グアニン)の４種のデオキシヌクレオチドからなる基質のうち、１種類から３種類の基質を標識を付与するものとして選択し、選択されなかった残りの基質に比べて選択された基質の濃度を少なくし、かつ、選択された基質に標識付きのデオキシヌクレオチドが含まれていることを特徴とする。選択された基質としての「標識なしデオキシヌクレオチド」と「標識付きデオキシヌクレオチド」をあわせた総濃度は、選択されなかった各基質のそれぞれの濃度に比べて低くすることを特徴とする。このような標識化の条件を用いたＰＣＲ増幅を介して検体を調製することによって、ターゲット核酸は増幅過程において効率良く標識物質を取り込むことが可能となる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
標識物質としては、どのような標識物質でも特に制限なく本発明に用いることが可能であるが、一般に高感度な検出が可能な蛍光物質等を用いる。中でも、Ｃｙ３、Ｃｙ５を代表とするＣｙＤｙｅ(アマシャムバイオサイエンス社製)は、核酸標識用の蛍光物質として良く用いられ、これらの蛍光物質は本発明において特に有効である。また、ビオチン、アミノアリル系化合物等の核酸標識用物質も本発明における核酸標識方法に有効である。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
検体調製を行なったターゲット核酸は、固相上ハイブリダイゼーションによって検出するのに用いることができる。本発明の検出方法におけるＰＣＲでは産物量は低下する場合があるものの、少ない検体を感度良く検出できる検出デバイスで特に効果を発揮する。中でも、ＤＮＡマイクロアレイに特に有効である。さらに、ＤＮＡマイクロアレイの一スポットあたりの面積は10-6平方メートル以下が望ましい。また、本発明は上記調製方法に用いる液組成物も提供するものである。スポット面積の下限は、目的とする分析用途に応じて用いられるスキャナなどの結果を測定するための機器の感度などに応じて設定でき、例えば、１０-12平方メートル程度まで小さくすることもできる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本発明に用いられる核酸標識方法についてさらに詳しく説明する。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
この核酸標識方法では、ターゲットとしての核酸配列をＰＣＲで増幅する際に用いる基質としてのＡＴＣＧ4種のデオキシヌクレオチドのうち、1種類から3種類の基質を選択し、選択されなかった基質に比べて、選択された基質の濃度を少なくし、かつ選択された基質として少なくとも標識付きのデオキシヌクレオチドを用いることによって実施される。特に、標識を付与するものとして選択した基質としては、標識付きのものと、標識を施さないものとを混合して用いることができ、標識を施さないものの濃度を、標識を施すものとして選択しなかったものの濃度よりも低く調整し、標識付きのものが占める割合を大きくすることで、効率良く標識物質を取り込むことができる。例えば、Ｔを標識すべき基質として選択した場合は、標識していないｄTTPと標識化ｄUTPを併用し、ｄTTPの量を標識化しないdATP、dCTP及びdGTPのそれぞれの濃度よりも低くする（ｄTTPの濃度＜（dATP、dCTPまたはdGTPの濃度））。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
ＰＣＲにおいて、酵素が効率良く働くデオキシヌクレオチドの濃度は、200μＭ程度とされている(TaKaRa 社製Ex Taq等)。酵素の基質特異性の観点から、本来標識付きデオキシヌクレオチドは取り込まれにくい。そこで、標識すべきものとして選択した基質に関しては、その全体の調製濃度を例えば100μＭくらいに低くし、標識付きデオキシヌクレオチドを例えばそのうちの50μＭに調整することが好ましい。その結果、得られるターゲット核酸の配列を含むＰＣＲ産物にはより多くの標識物質が取り込まれるようになる。標識すべきものとして選択された基質のうちの標識されていないデオキシヌクレオチドの量を少くしていることにより、反応が少し止まり、嵩高くて取り込まれにくい標識付きデオキシヌクレオチドを取り込みやすくする効果がある。また、デオキシヌクレオチドの量を30％程増減させても本発明は有効である。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
標識物質には蛍光物質等を用いることができる。中でも、Ｃｙ３、Ｃｙ５を代表とするＣｙＤｙｅ(アマシャムバイオサイエンス社製)は、核酸標識用の蛍光物質として良く用いられ、これらの蛍光物質は本発明において特に有効である。また、ビオチン、アミノアリル等も本発明において有効である。ビオチンはＣｙ３に比べて分子の大きさが小さいので、ＰＣＲの際の立体障害は比較的少ないが、本発明で用いられる核酸標識方法により、より効果的に標識物質をＰＣＲ産物に取り込ませることが可能となる。標識されるデオキシヌクレオチドとしては、チミンが一般に良く用いられており、対応する標識試薬も多く市販されており、本発明はそれにも好適に用いることができる。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
上述の核酸標識方法により標識されたターゲット核酸は、固相上あるいは固相表面に固定されたプローブとのハイブリダイゼーションによって2本鎖を形成させ、このプローブと結合しているターゲット核酸の有する標識物質のシグナルを測定することによって高感度に検出することができる。固相ハイブリダイゼーションを利用した高感度な検出デバイスとしては、様々な物質、形態が知られているが、これらに対して本発明は制限なく適用可能である。このうち、ガラス基板に核酸を固定化したＤＮＡマイクロアレイはその代表例であり、上述の核酸標識方法により作成されたターゲット核酸の検出に特に好適である。固相に用いられる材質としてはその他にも、樹脂、金属、金属薄膜、繊維等がある。またその概観上の形態も、微粒子、光ファイバー先端、多孔質材料、繊維等がある。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
固相へのプローブの結合様式としては吸着、化学結合等様々な方式が存在するが、いずれの結合様式でも、本発明のターゲット核酸の検出方法に適用可能である。例えば、イオン結合では、アミノ基をコートしてあるガラス基板或いは樹脂表面に対し、通常の核酸を供するだけでイオン的に結合させることができる。また、5'末端、3'末端にアミノ基、チオール基等の官能基を修飾した修飾オリゴヌクレオチドを用いて固定化することも可能である。例えばアミノ基を利用する場合、固相表面にアミノ基と効率的に反応するスクシイミド基をあらかじめ結合させておき、5'末端、もしくは3'末端にアミノ基を修飾したオリゴヌクレオチドを固相表面に供給することにより、容易に共有結合を形成させることができ、ターゲット核酸を検出するためのプローブとして好適に用いることが可能である。またチオール基を用いる場合には、例えば固相にマレイミド基を結合させておくことにより、アミノ基の場合と同様、共有結合を容易に形成し、ターゲット核酸を検出するためのプローブとして好適に用いることが可能である。固相への供給方法としては、インクジェット法によってＤＮＡ溶液を固相に印字する方法等がある。このインクジェット法で作製されたＤＮＡマイクロアレイは、プローブのスポットが小さいことが特長であり、検出にはＳ/Ｎ比も重要なファクターになるが、上述の標識方法によって増幅されたターゲット核酸は、ターゲット当たりの標識量が多いためＳ/Ｎ比の向上の効果もあり、特に効果的である。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
また、本発明で用いられる標識方法は、1種類のターゲットを増幅するシングルＰＣＲだけでなく、Multiplex PCRや、プライマーの濃度に差をつけ、どちらか一方の1本鎖を積極的に増幅させる非対称ＰＣＲにおいても有効である。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
また、本発明で用いられる検体調製方法により見出したデオキシヌクレオチドを含む液組成物は、診断キット、ＰＣＲプレミックスとして提供することも可能である。液組成物は、例えばＰＣＲ用として利用できる適当な水を主体とする水性媒体中に、上記のデオキシヌクレオチドの組合わせに加えて、酵素が機能するために必要な成分及びプライマーがアニールするために必要な塩濃度を得るための各種添加剤等、具体的にはTris-Cl、KCl、(NH4)2SO4、MgCl2などを含有することができる。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
従って、本発明において用いられる標識方法によれば、検体（試料）中に含まれる検出対象としてのターゲット核酸配列を標識しつつ増幅することができ、固相ハイブリダイゼーション法などの核酸試料側を標識してプローブとハイブリダイズさせる分析方法に供給する検体（試料）の調製方法として好適に利用できる。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
更に、表9のＣ、Ｄのサンプルの輝度値は、従来方法Std.に比べて約10倍にも及ぶ。すなわち、本実施例にかかる核酸標識方法では、標識付きデオキシヌクレオチドを加えない塩基のデオキシヌクレオチド(ここでは、dATP、dCTP、dGTP)の濃度に対し、標識付きデオキシヌクレオチドを加える塩基の標識なしデオキシヌクレオチド(ここでは、dUTP)の濃度を10から40モル％に調製することにより、最も効率良く核酸標識が行なわれる。なお、本実施例では1種類の塩基についてのみ標識物質を取り込ませたが、複数の塩基について標識物質を取り込ませても、同様の効果が得られる。