(57)【要約】要約  効果的かつ根本的に細胞老化を抑制することができる新規な細胞老化抑制剤が開示されている。該細胞老化抑制剤は、Ｇタンパク質γサブユニット１１をコードする遺伝子の発現を阻害する物質又はＧタンパク質γサブユニット１１の細胞老化作用を阻害する物質を有効成分として含有する。該細胞老化抑制剤によれば、酸化ストレスによる細胞老化の誘導を防止できるので、細胞の若返りを基盤とする種々の応用が可能である。とくに、老化防止に効果のある化粧品、健康食品の開発、医薬品等として適用できる。
2007102572.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｇタンパク質γサブユニット１１をコードする遺伝子の発現を阻害する物質又はＧタンパク質γサブユニット１１の細胞老化作用を阻害する物質を有効成分として含有する細胞老化抑制剤。
【請求項２】
前記Ｇタンパク質γサブユニット遺伝子に対するアンチセンス核酸若しくは該アンチセンス核酸を含むベクター又は干渉RNAを有効成分として含有する請求項１記載の細胞老化抑制剤。
【請求項３】
Ｇタンパク質γサブユニット１１をコードする遺伝子の発現を阻害する物質又はＧタンパク質γサブユニット１１の細胞老化作用を阻害する物質の、細胞老化抑制剤の製造のための使用。
【請求項４】
前記Ｇタンパク質γサブユニット遺伝子に対するアンチセンス核酸若しくは該アンチセンス核酸を含むベクター又は干渉RNAの、請求項３記載の使用。
【請求項５】
Ｇタンパク質γサブユニット１１をコードする遺伝子の発現を阻害する物質又はＧタンパク質γサブユニット１１の細胞老化作用を阻害する物質の有効量を個体に投与することを含む細胞老化抑制方法。
【請求項６】
前記Ｇタンパク質γサブユニット遺伝子に対するアンチセンス核酸若しくは該アンチセンス核酸を含むベクター又は干渉RNAの有効量を個体に投与することを含む請求項５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞の老化を抑制する細胞老化抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト正常細胞は、分裂能力を失い、老化する（replicative senescence）。老化細胞は特定の形態学上及び生理学的な変化を経て、特定の遺伝子を誘導する。また、正常細胞は様々な処理によって上と同様な現象を示す（premature senescence）。この二つの現象は本質的に同等である。細胞老化は器官・組織の機能低下をもたらし、成人病やヒトの老化の直接原因となることが明らかになりつつある。実験的には種々の手段によって細胞老化を誘導できるが、生体内における主要な原因は活性酸素による細胞障害の蓄積であることに疑いはない。従来、活性酸素は多くの生体物質に障害を与え、それがストレスとなり、シグナル伝達経路（MAPキナーゼカスケード）を活性化し、細胞老化を誘導すると考えられて来た。しかし、活性酸素がなぜ細胞老化を効果的に誘導するかはまったく分かっていない。【０００３】
細胞の分裂寿命の延長に関しては、抗酸化物質の投与、MAPキナーゼ活性の抑制、細胞周期調節因子p21の破壊等が知られている。しかしながら、これらの公知技術は、老化の主要因子である酸化ストレスの作用機序には触れていない。【０００４】
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【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、効果的かつ根本的に細胞老化を抑制することができる新規な細胞老化抑制剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願発明者らは、老化した細胞内で発現が増える遺伝子を、遺伝子アレー解析によって種々検索した結果、種々の遺伝子が見出された。それらのうち、Ｇタンパク質のγサブユニット１１の遺伝子に着目した。そして、(1)正常なヒト線維芽細胞中でＧタンパク質のγサブユニット１１遺伝子を過剰発現させると直ちに細胞老化が誘導される、(2)Ｇタンパク質γサブユニット１１遺伝子に対するアンチセンスcDNAにより該遺伝子の発現を抑制することにより細胞寿命が延長される、(3) Ｇタンパク質γサブユニット１１遺伝子は、過酸化水素のような老化誘導剤により極めて迅速に誘導されることを実験的に確認し、それによってＧタンパク質γサブユニット１１又はその遺伝子を阻害することにより細胞老化を抑制できることを見出し本発明を完成した。【０００７】
すなわち、本発明は、Ｇタンパク質γサブユニット１１をコードする遺伝子の発現を阻害する物質又はＧタンパク質γサブユニット１１の細胞老化作用を阻害する物質を有効成分として含有する細胞老化抑制剤を提供する。また、本発明は、Ｇタンパク質γサブユニット１１をコードする遺伝子の発現を阻害する物質又はＧタンパク質γサブユニット１１の細胞老化作用を阻害する物質の、細胞老化抑制剤の製造のための使用を提供する。さらに、本発明は、Ｇタンパク質γサブユニット１１をコードする遺伝子の発現を阻害する物質又はＧタンパク質γサブユニット１１の細胞老化作用を阻害する物質の有効量を個体に投与することを含む細胞老化抑制方法を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、効果的かつ根本的に細胞老化を抑制することができる新規な細胞老化抑制剤が提供された。本発明の細胞老化抑制剤によれば、酸化ストレスによる細胞老化の誘導を防止できるので、細胞の若返りを基盤とする種々の応用が可能である。とくに、老化防止に効果のある化粧品、健康食品の開発、医薬品等として適用できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】老化したヒト正常線維芽細胞TIG-7におけるGNG-11 遺伝子の発現上昇を示す図である。若いヒト正常線維芽細胞TIG-7（32 PDL）、休止細胞（5日間血清飢餓）、老化細胞（75 PDL）から全mRNAサンプルを調製し、ノザンブロット解析によってGNG-11 mRNAレベルを定量した。
【図２】過酸化水素よるGNG-11遺伝子の発現誘導を示す図である。若いヒト正常線維芽細胞TIG-7(42PDL)の培養液に過酸化水素を添加し、全mRNAサンプルを調製した。ノザンブロット解析によりGNG-11mRNAレベルの変化を定量した。
【図３】細胞老化マーカー遺伝子の発現誘導を示す図である。若いヒト正常線維芽細胞（32PDL）へGNG-11 発現ベクターを導入し、培養3日後に調製した全mRNAサンプルについてノザンブロット解析を行った。
【図４】アンチセンスcDNAの導入による分裂寿命の延長老化を示す図である。直前のヒト正常線維芽細胞TIG-7（PDL62）へアンチセンスGNG-11 cDNA発現ベクターを導入し、遺伝子導入細胞をG418選択培地で選択た。コロニーを染色し、その数を計測した。
【図５】GNG-11発現プラスミドの導入による分裂寿命の変化を示す図である。若いヒト正常線維芽細胞TIG-7（PDL32 、矢印）へセンスGNG-11 cDNAまたはアンチセンスGNG-11 cDNA発現ベクターを導入し、遺伝子導入細胞をG418選択培地で選択した。コロニーを単離し、その分裂寿命を測定した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
Ｇタンパク質γサブユニット１１（以下、「GNG11」と略記することがある）は、Ｇタンパク質のγサブユニットファミリー（十数個が知られている）に属する。Ｇタンパク質はα、β、γのサブユニットから構成される。細胞膜レセプターへリガンドが結合すると、Ｇタンパク質は活性化され、αとβγまたγサブユニットへ解離する。GTPの結合したαサブユニット、βγ、γサブユニットが多くの酵素やイオン化チャネルの活性を制御することが示された。GNG11は他のサブユニットとは違い、farnesylグループによって修飾され、β2サブユニットと相互作用できないなどの特徴をもつ。GNG11はすべての組織で発現されているが、機能はまったく不明である。シグナリング伝達の分流器として機能する可能性があるが、その下流には近年細胞老化への関与が高まっているRasタンパク質が位置する。なお、GNG11遺伝子の塩基配列及びそれがコードするGNG11のアミノ酸配列は公知であり、例えばヒトのGNG11遺伝子のcDNAの塩基配列及びそれがコードするGNG11のアミノ酸配列は、GenBank Accession No. NM_004126に記載されている（配列表の配列番号１及び２）。【００１１】
下記実施例に具体的に記載するように、(1)正常なヒト線維芽細胞中でGNG11遺伝子を過剰発現させると直ちに細胞老化が誘導される、(2)GNG11遺伝子に対するアンチセンスcDNAにより該遺伝子の発現を抑制することにより細胞寿命が延長される、(3)GNG11遺伝子は、過酸化水素のような老化誘導剤により極めて迅速に誘導されることが実験的に確認された。これらの実験的事実は、GNG11が細胞老化を促進する遺伝子であり、GNG11の作用又はGNG11遺伝子の発現を阻害することにより細胞老化を抑制できることを示している。特に、上記(2)の知見から、GNG11遺伝子の発現を阻害する物質又はGNG11の細胞老化作用を阻害する物質が、細胞老化抑制作用を有することが明らかになった。【００１２】
なお、細胞の老化の程度は、細胞の形態観察（細胞は老化すると扁平化、肥大化が起きる）及び老化マーカーとして知られるβ−ガラクトシダーゼの染色像（老化が進むとβ−ガラクトシダーゼの染色像が大きくなる）を観察することにより調べることができる。【００１３】
本発明の細胞老化抑制剤は、GNG11遺伝子の発現を阻害する物質又はGNG11の細胞老化作用を阻害する物質を有効成分として含有する。GNG11遺伝子の発現を阻害する物質としては、GNG11遺伝子に対するアンチセンス核酸、干渉RNA、ペプチド、植物成分を挙げることができる。【００１４】
上記の通り、GNG11遺伝子の塩基配列は公知である（GenBank Accession No. NM_004126、配列番号１）ので、アンチセンス核酸は常法に基づき容易に作製することができる。アンチセンス核酸は、アンチセンスRNAであってもよいし、細胞内での転写によりアンチセンスRNAを生じるアンチセンスcDNAであってもよい。GNG11遺伝子に対するアンチセンスRNAとは、GNG11遺伝子から転写されたmRNAとハイブリダイズして該mRNAの翻訳を阻害するRNAである。アンチセンスRNAは、GNG11のmRNAと完全に相補的なものが最も好ましいが、細胞内でmRNAとハイブリダイズすることが可能な程度の相補性があれば、多少のミスマッチを有するものも用いることができる。この場合、アンチセンスRNAの、GNG11のmRNAの相補鎖に対する塩基配列の同一性は、９０％以上が好ましく、さらには９５％以上が好ましい。ここで、塩基配列の同一性は、一致する塩基の数が最も多くなるように配列を整列し、一致している塩基の数を全体の塩基の数（全体の塩基の数が異なる場合には短い方の塩基の数）で除したものを百分率で表したものであり、BLASTのような周知のソフトにより容易に算出できる。アンチセンスRNAのサイズは、GNG11のcDNAの全長又は全長の７０％以上のサイズを有することが好ましいが、GNG11のmRNAと特異的にハイブリダイズできるサイズ、好ましくは18塩基以上のサイズであれば利用可能である。配列番号１に示す塩基配列のうち、コード領域は、352nt〜573ntであるので、このコード領域の全長を含む領域又はコード領域内の領域にハイブリダイズするアンチセンスRNAが好ましい。アンチセンスRNAに代えて、アンチセンスcDNAを組み込んだ、細胞内で該アンチセンスcDNAが転写されてアンチセンスRNAを生じる組換えベクターを用いることもできる（下記実施例参照）。哺乳動物用の発現ベクターは、周知であり、種々のものが市販されているので、市販の発現ベクターを用いることができる。好ましくは、遺伝子治療や遺伝子ワクチンのベクターとして用いられている各種プラスミドベクター及びウイルスベクターを用いることができる。これらの市販の発現ベクターに、転写により上記したGNG11遺伝子に対するアンチセンスRNAを生じるDNAを組み込んだ組換えベクターを本発明の細胞老化抑制剤の有効成分として好ましく用いることができる。【００１５】
GNG11遺伝子の塩基配列はわかっているので、GNG11遺伝子の発現は、RNA干渉法(RNAi)によっても阻害することができる。RNAiは、標的とするRNAの部分領域と同一の塩基配列を有する二本鎖RNAが、標的とするRNAの前記部分領域を切断する作用を利用した技術である。ヒト細胞では、塩基数２１〜２３の、二本鎖の短鎖RNA(siRNA)が、該siRNAのうちの一本の鎖と同じ塩基配列を有するRNAを切断することがわかっているので、このようなsiRNAを利用してGNG11遺伝子の発現を阻害することが可能である。この場合、siRNAは、GNG11のcDNAの（配列番号１）任意の部分領域と同一の塩基配列を有する二本鎖RNAであればよいが、mRNAの切断によって確実にmRNAの翻訳を阻害できるように、配列番号１に示す塩基配列のうち、352nt〜573ntのコード領域内の領域と同じ塩基配列を有する干渉RNAが好ましい。【００１６】
GNG11遺伝子の発現を阻害することにより細胞老化を抑制できることが明らかになったので、GNG11自体の細胞老化作用を阻害する物質も当然ながら本発明の細胞老化抑制剤の有効成分として用いることができる。このような物質として、GNG11に対する抗体を挙げることができる。抗体はモノクローナル抗体でもポリクローナル抗体でもよいが、ポリクローナル抗体であれば、露出しているGNG11の全てのエピトープに対する抗体が含まれるので、GNG11の細胞老化作用を確実に阻害することができる。また、GNG11は、Ｇタンパク質の他のサブユニットと特異的に結合するので、Ｇタンパク質のα又はβサブユニットの結合ドメインも抗体と同様に用いることができる。GNG11は、Ｇタンパク質のα又はβサブユニットの結合ドメインと結合すると、もはやＧタンパク質のα又はβサブユニットとは結合できなくなるので、生理活性を発現することができなくなり、細胞老化作用も阻害されると考えられる。【００１７】
本発明の細胞老化抑制剤は、医薬品として、また、化粧品や健康食品の成分として用いることができる。医薬品としては、より具体的には、老人性皮膚疾患、アレルギー、アトピー、動脈硬化症、高血圧症等の疾患に対する医薬が挙げられる。また、皮膚細胞の老化抑制成分として、化粧品の中に含めることもできる。さらに、体全体の老化を防止するために飲食品の成分として用いることもできる。【００１８】
有効成分がGNG11遺伝子に対するアンチセンスRNA又は干渉RNAの場合、アンチセンスRNA又は干渉RNAを生理緩衝食塩液等の媒体に溶解した溶液を、細胞老化の抑制が望まれる組織に直接注射することができる。電気パルス法や超音波法に組織に導入することもできる。この場合の投与量は、症状等に応じて適宜選択されるが、通常、標的とする組織1g当りアンチセンスRNA又は干渉RNA1pmol〜1 nmol程度でよい。また、アンチセンスcDNAを組み込んだ組換えベクターの場合、該組換えベクターを生理緩衝食塩液等の媒体に溶解した溶液を、細胞老化の抑制が望まれる組織や、筋肉内、皮下に直接注射することができる。この場合の投与量は、症状等に応じて適宜選択されるが、通常、標的とする組織1g当り組み換えベクター1 pmol〜1 nmol程度でよい。また、有効成分が抗GNG11抗体の場合、生理緩衝食塩液等の媒体に溶解した溶液を、細胞老化の抑制が望まれる組織に直接注射することが好ましい。この場合の投与量は、症状等に応じて適宜選択されるが、通常、標的とする組織1g当り抗体1μg〜100μg程度でよい。なお、アンチセンスRNA、アンチセンスcDNAを組み込んだ組換えベクター、抗GNG11抗体等の有効成分は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等の非経口投与や経口投与により全身投与することも可能である。全身投与の場合の投与量は、症状等に応じて適宜選択されるが、通常、体重1gあたりの投与量が、上記した直接注射の場合の投与量の1/1000から同程度となるような量でよい。また、アンチセンスRNAや抗体の場合には、化粧品成分等として皮膚に塗布することもできる。この場合の化粧品中の含有量は、適宜選択されるが、化粧品製剤１gあたり1μg〜1mg程度でよい。【００１９】
医薬や化粧品として用いる場合、本発明の細胞老化抑制剤は、常法に従い製剤することができる。医薬の場合、有効成分を単に生理緩衝食塩液等の薬剤として許容できる媒体に溶解又は懸濁したものでよいが、これに常用される添加剤を添加してもよい。化粧品の場合は、皮膚に塗布する化粧品組成物中に単に本発明の細胞老化抑制剤の有効成分を溶解又は懸濁すればよい。電気パルス法や超音波法の併用も可能である。なお、細胞老化抑制剤の有効成分が、アンチセンスRNA、干渉RNA、アンチセンスcDNAを組み込んだ組換えベクター等の核酸である場合には、細胞内への核酸の取り込みを増加させるため、遺伝子導入用脂質を添加することが好ましい。これにより、細胞膜を構成している脂質二重膜を核酸が通過しやすくなる。遺伝子導入用脂質としては、種々のものが市販されており、例えば、Transfectin（商品名、Bio-Rad社製）やLipofectamine（商品名、Invitrogen社製）等を用いることができる。これらの遺伝子導入用脂質の添加量は、特に限定されないが、通常、導入する核酸の重量（1μg）を基準として、1μl〜100μl程度である。【００２０】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２１】
１．材料及び方法
1）細胞培養
ヒト正常線維芽細胞TIG-7（ヒューマンサイエンス研究資源バンクより入手可能）を本研究で用いた。細胞は、37℃、5%の二酸化炭素、95%の湿気の下、ダルベッコ改変イーグル培地に10%のウシ胎仔血清を添加し、プラスチックデッシュで培養した。本実験では、集団倍加レベル（Population doubling level、PDL）32のTIG-7細胞を若い細胞として用いた。TIG-7細胞はPDL72付近で分裂を停止し、老化する。【００２２】
2）トランスフェクション
GNG-11 cDNA (Genbank NM_004126)はTIG-7細胞の全RNAからプライマー対（5'-tggacccagtctcaaacttaac-3'（配列番号３）、5'-cccaagacaaaactttatttgaa-3'（配列番号４））を用いて増幅した。cDNA（812 bp）はpGEM-T easyベクター（プロメガ社から市販）に組み込み、配列確認後、pCDNA 3.1(-)(Invitrogen社から市販）にセンスとアンチセンスの向きでクローン化した。プラスミド（10μg）はTransfectin（30μL）（商品名、Bio-Radから市販）を用いて細胞へ導入した。ベクターはネオマイシン抵抗性遺伝子を含むので、安定なトランスフェクタントはG418（400μg/ml）(A.G. Scientific, Inc.より市販)を含む培地で選択した。【００２３】
3)ノザンブロット解析
細胞から全RNAサンプルを抽出キットを用いて調製した。サンプル（1レーンにつき15μg）を1%のホルムアルデヒド・アガロースゲルで電気泳動を行い、ナイロン膜（Hybond-N、アマシャム）に転写した。膜は、32Pで標識したhnRNPhnRNP（heterogeneous nuclear ribonucleo-protein)C1/C2またはGAPDH cDNA とハイブルダイゼーションを行った。次いで、0.1%SDSを含む0.1XSSC溶液と0.1%SDSを含む2X SSC溶液で二回ずつ洗い（65℃、30分）、オートラジオグラフィー（FUJI X線フィルム）を作成した。【００２４】
4）DNA合成試験
DNA合成能の検定にはBrdU標識と検出キットII（RocheDiagnostics）を用いた。細胞をカバーガラス上で50%飽和密度まで培養した。細胞は37℃で30分間BrdUで標識し、-20℃で30分間エチルアルコールで固定した。細胞は、37℃で30分間BrdU抗体と反応させ、次いで37℃で2時間Alexa Flour 546と保温し、蛍光顕微鏡で観察した。【００２５】
5）老化特異的β-ガラクトシダーゼアッセイ
細胞は2%のホルムアルデヒド/0.2%のグルタールアルデヒドで固定し、染色溶液[1mg/mlの5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-ガラクトシド、40mMのクエン酸リン酸ナトリウム（pH 6.0）、5mMのフェリシアン化カリウム、5mMのフェロシアン化カリウム、150mMの塩化ナトリウムと2mMの塩化マグネシウム]を加え、35℃で保温した。【００２６】
6）コロニー形成試験
細胞をディッシュに撒き。コロニーを形成させた。メチレンブルーで染色し、50細胞以上を含むコロニーを計測した。【００２７】
２．結果
1）GNG11遺伝子の発現解析
GNG11遺伝子の発現は、老化したTIG-7細胞（図１）細胞で顕著に誘導され、休止細胞でも有意に誘導された（図１）。BrdUを投与したHeLa細胞で顕著に誘導された。この事実は、GNG11が細胞老化の情報伝達に関与することを示唆する。細胞老化の主要原因である酸化ストレスに対する応答性を調べた（図２）。若いTIG-7細胞（PDL32）に種々の条件で過酸化素の処理を行い、GNG11遺伝子発現を調べた。その結果、低濃度と高濃度で強い発現誘導が見られた。また、処理後2時間以内に顕著な発現誘導が見られた。したがって、GNG11遺伝子は酸化ストレスに対する初期応答遺伝子であるといえる。【００２８】
2）GNG 11遺伝子の強制発現による細胞老化の誘導
若いTIG-7細胞（PDL32）へGNG11を発現するプラスミドを導入し、GNG11の過剰発現が細胞老化に及ぼす効果を解析した。遺伝子を安定に組み込んだクローンG418抵抗性細胞は、コロニー形成段階で細胞の肥大化と扁平化を示し、分裂を停止した。代表的な細胞老化マーカーである老化特異的β-ガラクトシダーゼ（SA-βGal）の強い染色像が見られた。細胞の形態変化と分裂停止は他の細胞老化誘導系より顕著で早かった。このため、老化マーカーの解析のために老化細胞を集めることは困難であった。そこで、GNG11発現ラスミドを細胞へ導入し、薬剤の選択を施さず、3日後に細胞を回収した。この細胞から全RNAサンプルを調製し、ノザンブロット解析を行った。その結果、細胞老化マーカー（コラーゲナーゼ-1）の誘導が観察された（図３）。【００２９】
3）GNG11遺伝子発現の抑制による細胞老化の防止
GNG11 のアンチセンスRNAを発現するプラスミドを老化直前のTIG-7細胞（62 PDL）へ導入し、細胞老化への影響を調べた。まず、コロニー形成を観察した。GNG11遺伝子発現を抑制すると、細胞は正常なコロニーを形成した（図４）。また、アンチセンスRNAを発現させた細胞では、老化マーカーの消失とDNA合成能の上昇（BrdU標識キットを用いて測定）が観察された。一方、プラスミドを若いTIG-7細胞（32 PDL）へ導入後、G418抵抗性クローンを選択し、その分裂寿命を追跡した（図５）。その結果、アンチセンスRNA発現細胞では、20回程度の分裂寿の延長が見られた。以上から、GNG11の発現を減少させれば、細胞老化が抑制され、寿命延長が見られることが示された。【００３０】
4．考察
本研究によって、GNG11の上昇は最も速やかに細胞老化を誘導し、アンチセンスRNAは細胞老化を抑制した。細胞老化の誘導にはRas やMAPキナーゼ（ERK、p38、JNKがおもな構成因子）の活性化が見られる。したがって、GNG11の下流に位置するエフェクター分子はRasかその上流に位置するMAPキナーゼ活性化因子である可能性が高い。酸化ストレスはMAPキナーゼを活性化し、細胞老化を誘導すると考えられる。最近、膜受容体が働くと活性酸素を発生し、これがG−タンパク質を活性化させることが報告されている。GNG11が活性酸素に応答するので、GNG11が細胞老化における最も重要な制御因子であることを示し、酸化ストレスから細胞老化に到る分子基盤が解明されたことになる。GNG11から派生するDNA、RNA、ペプチドなどや GNG11を標的とする天然および人造化合物を用いることによって、細胞老化を制御することが可能となった。これは美容健康をも目的とする医薬品、化粧品、健康サプリメントなどの商品化をもたらす。【００３１】
GNG11サブユニットのN末領域は他の成分と共通性が乏しく、サブユニット間相互作用も特異的であり、G蛋白質の新しい機能を示唆する。GNG11とGNG1は塩基相同性が高いが、前者は脳以外のすべて組織で発現が見られるのに対し、後者は網膜での光伝達への関与が示唆されている。各種の刺激によってG蛋白質は解離し、GTP結合型αサブユニットは下流のエフェクター分子の活性を制御する。最近、強固なβγ複合体が下流のエフェクター分子（アデニルシクラーゼサブユニットIIおよびIV、ホスホリパーゼ A2、ホスホリパーゼ C サブタイプ、Ca2+チャネル等）を制御することが明らかになっている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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