【手続補正書】
【提出日】令和1年8月16日(2019.8.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換えポリペプチドを作成するための方法であって、
ａ．ｉ．前記組換えポリペプチドアスホターゼアルファ（配列番号１）を発現可能な細胞、及び
ｉｉ．このような発現を行うのに適している培養培地であって、前記培養培地が約２５μＭ〜約３００μＭの亜鉛を含む、前記培養培地、を含む、１００Ｌ〜２５，０００Ｌの流加バイオリアクターを提供すること、
ｂ．前記組換えアスホターゼアルファを発現するのに好適な条件下で前記細胞を培養すること、を含み、前記培養培地のｐＨが約６．７〜約７．１であり、ならびに前記培養培地の亜鉛濃度が約２５μＭ〜約３００μＭの亜鉛の濃度で維持されるように亜鉛が前記培養培地内に加えられる、前記方法。
【請求項２】
前記培養培地の亜鉛濃度が約２５μＭ〜約１５０μＭの亜鉛の濃度で維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記培養培地の亜鉛濃度が約６０μＭ〜約１５０μＭの亜鉛の濃度で維持される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記培養培地の亜鉛濃度が約２８μＭの亜鉛の濃度で維持される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記培養培地のｐＨが約６．８〜約７．０で維持される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記培養培地のｐＨが約６．９で維持される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
亜鉛が、前記培養培地内に少なくとも１つのボーラスで連続的にまたは半連続的に添加される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つの供給ボーラス（複数可）を、培養中、前記培養培地に加えることを更に含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも４つの供給ボーラスが前記培養培地に添加される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記供給ボーラスが亜鉛、アミノ酸、及びビタミンのうち１以上を含み、ならびに前記供給ボーラスの添加が前記組換えポリペプチドの比活性を改善する、請求項８または請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも約２．５×１０６生細胞の細胞密度に達するまで第１の温度で前記細胞を培養すること、及び組換えポリペプチド発現のため前記第１の温度より低い第２の温度へシフトすることを更に含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の温度が約３５℃〜約３７．５℃である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の温度が約２９℃〜約３５℃である、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１の温度が約３７℃であり、前記第２の温度が約３０℃である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第１の温度が約３６．５℃であり、前記第２の温度が約３３℃である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞が、ＣＨＯ、ＮＳ０／１、ＰＥＲ．Ｃ６、ＣＯＳ−７、ヒト胚腎臓株、ＢＨＫ、ＴＭ４、ＣＶｌ、ＶＥＲＯ−７６、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＢＲＬ３Ａ、Ｗ１３８、Ｈｅｐ  Ｇ２、ＭＭＴ０６０５６２、ＴＲＩ、ＭＲＣ５、ＦＳ４細胞及びＨｅｐ  Ｇ２細胞からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ａ．前記細胞がＣＨＯ細胞であるか、または
ｂ．前記ヒト胚腎臓株が懸濁培養の増殖のためにサブクローニングした２９３または２９３細胞である、
請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
アスホターゼアルファ（配列番号１）、及び／またはアスホターゼアルファ（配列番号１）を発現可能な細胞を含む流加バイオリアクターであって、前記バイオリアクターは約２５μＭ〜約３００μＭの亜鉛を含む少なくとも１００Ｌの容量の培養培地を含み、かつ前記培養培地のｐＨは６．７〜７．１である、前記バイオリアクター。
【請求項１９】
前記培養培地が哺乳動物細胞培養を含み、かつ前記アスホターゼアルファ（配列番号１）が、
ａ．約０．９〜約３．５シアル酸モル／タンパク質モノマーモルの間の総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）、
ｂ．約５．２〜約６．７の間の等電点電気泳動（ＩＥＦ）、
ｃ．図４１または図４２で示す主要なグリカン構造、
ｄ．図３８または図３９で示す、２−ＡＢ標識化オリゴ糖クロマトグラムプロファイル、
ｅ．図４０または図４４〜４９で示す、ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦグリコペプチドフィンガープリントプロファイル、
ｆ．約８８〜１０８ｋＤａの分子量、及び生成された組換えポリペプチドの総量の約８５％以上を有する、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの主バンド、
ｇ．約１９４〜約２７３ｋＤａの分子量、及び生成された組換えポリペプチドの総量の約８５％以上を有する、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの主バンド、
ｈ．サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による、約９５．０％以上の組換えポリペプチドの二量体、及び約５．０％以下の凝集物、
ｉ．逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を介した約９５．０％以上の純度、
ｊ．アニオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）を介した約９０．０％以上のメインピーク、約６．０％以下の酸性ピーク、及び約４．０％以下の塩基性ピーク、
ｋ．約７５〜約１２５％の割合のヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合、
ｌ．約６２０単位／ｍｇ〜約１２５０単位／ｍｇの生成物の比活性（ｐＮＰＰ）、
ｍ．無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）加水分解アッセイの約１３μＭ〜約６９μＭのＫｍ、
ｎ．無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）加水分解アッセイの約６５ｓ−１〜約１６５ｓ−１のＫｃａｔ、
ｏ．キャピラリー電気泳動のすべてのピークについて約６．４５〜約６．９５のｐＩ範囲、
ｐ．脱グリコシル後、図３４Ａで示すようなＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｑ．還元及び脱グリコシル後、図３４Ｂで示すようなＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｒ．図３５で示すＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｓ．図３６で示すリン酸化プロファイル、
ｔ．図３７Ａで示す、負イオンＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のシアル化グリカンプロファイル、
ｕ．図３７Ｂで示す、正イオンＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上の中性グリカンプロファイル、
ｖ．約０．０３〜約０．１５の組換えポリペプチドの１モル当たりのマグネシウムのモル比、
ｗ．約０．５〜約１．５の組換えポリペプチドの１モル当たりのカルシウムのモル比、ならびに
ｘ．約０．５〜約３．０の組換えポリペプチドの１モル当たりの亜鉛のモル比
からなる群から選択される少なくとも１つの特性を有する、請求項１８に記載の流加バイオリアクター。
【請求項２０】
前記アスホターゼアルファが、
ａ．半分子当たり約０．７〜約１．１９の遊離システイン、
ｂ．約１３．５％〜約３５．７％の割合のＳｅｒ９３のリン酸化、
ｃ．ＡＥＸクロマトグラムの約９０．０％以上のメインピーク、約６．０％以下の酸性ピーク、及び約４．０％以下の塩基性ピーク、
ｄ．ＡＥＸクロマトグラムの約９３．７％以上のメインピーク、約４．９％以下の酸性ピーク、及び約３．４％以下の塩基性ピーク、
ｅ．約０．９〜約３．５シアル酸モル／タンパク質モノマーモルの間の総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）、
ｆ．１モノマー当たり約１．２〜約３．０シアル酸モル／モルの平均総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）値、
ｇ．約０．１５未満のマグネシウムのモル比、
ｈ．サイズ排除ＨＰＬＣにより測定される、少なくとも約９５．０％の前記組換えポリペプチドの二量体、及び約５．０％以下のポリペプチド凝集物
ｉ．ＲＰ−ＨＰＬＣで測定される、約９５．０％以上の純度
ｊ．約７５％〜約１２５％の割合の平均ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合、ならびに
ｋ．約６２０〜約１２５０単位／ｍｇの比活性（ｐＮＰＰ）
からなる群から選択される少なくとも１つの特性を有する、請求項１８または１９に記載の流加バイオリアクター。
【請求項２１】
ａ．平均総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）値が、１モノマー当たり約１．９〜約２．７シアル酸モル／モル、もしくは１モノマー当たり約１．８５〜約２．２８シアル酸モル／モルである、
ｂ．マグネシウムのモル比が約０．０５〜約０．１０、もしくは約０．１２である、
ｃ．前記組換えポリペプチドが少なくとも約９６．８％の二量体及び約３．２％以下のポリペプチド凝集物であるか、もしくは少なくとも約９７．６％の二量体及び約２．４％以下の凝集物である、
ｄ．純度がＲＰ−ＨＰＬＣで測定される場合に約９７．６％以上である、
ｅ．平均ＨＡ結合が約８５％〜約９７％、もしくは約９０％〜約９１％であるか、または
ｆ．平均比活性（ｐＮＰＰ）が約９０４．０〜約９０７．７Ｕ／ｍｇである、
請求項２０に記載の流加バイオリアクター。
【請求項２２】
前記流加バイオリアクターが２００Ｌ〜２０，０００Ｌであるか、もしくは２，０００Ｌ〜２０，０００Ｌである、請求項１８〜２１のいずれか一項に記載の流加バイオリアクター。
【請求項２３】
アスホターゼアルファ（配列番号１）を含む組換えポリペプチドを含む組成物であって、前記組換えポリペプチドが、
ａ．約０．９〜約３．５シアル酸モル／タンパク質モノマーモルの間の総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）、
ｂ．約５．２〜約６．７の間の等電点電気泳動（ＩＥＦ）、
ｃ．図４１または図４２で示す主要なグリカン構造、
ｄ．図３８または図３９で示す、２−ＡＢ標識化オリゴ糖クロマトグラムプロファイル、ｅ．図４０または図４４〜４９で示す、ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦグリコペプチドフィンガープリントプロファイル、
ｆ．約８８〜１０８ｋＤａの分子量、及び生成された組換えポリペプチドの総量の約８５％以上を有する、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの主バンド、
ｇ．約１９４〜約２７３ｋＤａの分子量、及び生成された組換えポリペプチドの総量の約８５％以上を有する、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの主バンド、
ｈ．サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による、約９５．０％以上の組換えポリペプチドの二量体、及び約５．０％以下の凝集物、
ｉ．逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を介した約９５．０％以上の純度、
ｊ．アニオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）を介した約９０．０％以上のメインピーク、約６．０％以下の酸性ピーク、及び約４．０％以下の塩基性ピーク、
ｋ．約７５〜約１２５％の割合のヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合、
ｌ．約６２０単位／ｍｇ〜約１２５０単位／ｍｇの生成物の比活性（ｐＮＰＰ）、
ｍ．無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）加水分解アッセイの約１３μＭ〜約６９μＭのＫｍ、
ｎ．無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）加水分解アッセイの約６５ｓ−１〜約１６５ｓ−１のＫｃａｔ、
ｏ．キャピラリー電気泳動のすべてのピークについて約６．４５〜約６．９５のｐＩ範囲、
ｐ．脱グリコシル後、図３４Ａで示すようなＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｑ．還元及び脱グリコシル後、図３４Ｂで示すようなＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｒ．図３５で示すＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｓ．図３６で示すリン酸化プロファイル、
ｔ．図３７Ａで示す、負イオンＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のシアル化グリカンプロファイル、
ｕ．図３７Ｂで示す、正イオンＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上の中性グリカンプロファイル、
ｖ．約０．０３〜約０．１５の組換えポリペプチドの１モル当たりのマグネシウムのモル比、
ｗ．約０．５〜約１．５の組換えポリペプチドの１モル当たりのカルシウムのモル比、ならびに
ｘ．約０．５〜約３．０の組換えポリペプチドの１モル当たりの亜鉛のモル比
からなる群から選択される少なくとも１つの特性を有する、前記組成物。
【請求項２４】
ａ）前記組換えポリペプチドが請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法によって作成されるものであるか、または
ｂ）前記組成物が少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤もしくは賦形剤をさらに含むものである、
請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
ａ）対象の無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）の開裂を増加させる、または
ｂ）アルカリホスファターゼ欠乏に関連する病態を患っている対象を治療する
使用のための請求項２３または２４に記載の組成物であって、前記組成物は、アルカリホスファターゼ欠乏に関連する病態を治療するため、治療に有効な量を前記対象に投与するために製剤化されている、前記組成物。
【請求項２６】
アルカリホスファターゼ欠乏に関連する前記病態が、低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）または神経線維腫症Ｉ型（ＮＦ１）である、請求項２５に記載の使用のための組成物。
【請求項２７】
前記低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）が周産期、乳児、若年性または成人ＨＰＰである、請求項２６に記載の使用のための組成物。
【請求項２８】
アルカリホスファターゼ欠乏に関連する前記病態が、骨及び歯の非石灰化骨基質及び／または低石灰化によって特徴づけられる、請求項２７に記載の使用のための組成物。
【請求項２９】
前記非石灰化骨基質がくる病及び／または骨軟化症を引き起こす、請求項２８に記載の使用のための組成物。
【請求項３０】
前記対象がヒトである、請求項２５〜２９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
いくつかの実施形態で、そのような対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態で、そのような対象はヒトである。
本発明はまた、以下に関する。
［項目１］組換えポリペプチドを作成するための方法であって、
ａ．ｉ．前記組換えポリペプチドアスホターゼアルファ（配列番号１）を発現可能な細胞、及び
ｉｉ．このような発現を行うのに適している培養培地であって、前記培養培地が約２５μＭ〜約３００μＭの亜鉛を含む、前記培養培地、を含む、１００Ｌ〜２５，０００Ｌの流加バイオリアクターを提供すること、
ｂ．前記組換えアスホターゼアルファを発現するのに好適な条件下で前記細胞を培養すること、を含み、前記培養培地のｐＨが約６．７〜約７．１であり、ならびに前記培養培地の亜鉛濃度が約２５μＭ〜約３００μＭの亜鉛の濃度で維持されるように亜鉛が前記培養培地内に加えられる、前記方法。
［項目２］前記培養培地の亜鉛濃度が約２５μＭ〜約１５０μＭの亜鉛の濃度で維持される、項目１に記載の方法。
［項目３］前記培養培地の亜鉛濃度が約６０μＭ〜約１５０μＭの亜鉛の濃度で維持される、項目２に記載の方法。
［項目４］前記培養培地の亜鉛濃度が約２８μＭの亜鉛の濃度で維持される、項目３に記載の方法。
［項目５］前記培養培地のｐＨが約６．８〜約７．０で維持される、項目１〜４のいずれか一項に記載の方法。
［項目６］前記培養培地のｐＨが約６．９で維持される、項目１〜５のいずれか一項に記載の方法。
［項目７］亜鉛が、前記培養培地内に少なくとも１つのボーラスで連続的にまたは半連続的に添加される、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
［項目８］少なくとも１つ、２つ、３つまたは４つの供給ボーラス（複数可）を、培養中、前記培養培地に加えることを更に含む、項目１〜６のいずれか一項に記載の方法。
［項目９］少なくとも４つの供給ボーラスが前記培養培地に添加される、項目８に記載の方法。
［項目１０］前記供給ボーラスの添加が前記組換えポリペプチドの比活性を改善する、項目８または項目９に記載の方法。
［項目１１］少なくとも約２．５×１０６生細胞の細胞密度に達するまで第１の温度で前記細胞を培養すること、及び組換えポリペプチド発現のため前記第１の温度より低い第２の温度へシフトすることを更に含む、項目１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
［項目１２］前記第１の温度が約３５℃〜約３７．５℃である、項目１１に記載の方法。
［項目１３］前記第２の温度が約２９℃〜約３５℃である、項目１１または項目１２に記載の方法。
［項目１４］前記第１の温度が約３７℃であり、前記第２の温度が約３０℃である、項目１１に記載の方法。
［項目１５］前記第１の温度が約３６．５℃であり、前記第２の温度が約３３℃である、項目１１に記載の方法。
［項目１６］前記細胞が、ＣＨＯ、ＮＳ０／１、ＰＥＲ．Ｃ６、ＣＯＳ−７、ヒト胚腎臓株（懸濁培養の増殖のためにサブクローニングした２９３または２９３細胞）、ＢＨＫ、ＴＭ４、ＣＶｌ、ＶＥＲＯ−７６、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＢＲＬ３Ａ、Ｗ１３８、Ｈｅｐ  Ｇ２、ＭＭＴ０６０５６２、ＴＲＩ、ＭＲＣ５、ＦＳ４細胞及びＨｅｐ  Ｇ２細胞を含む群から選択される、項目１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
［項目１７］前記細胞がＣＨＯ細胞である、項目１６に記載の方法。
［項目１８］項目１〜１７のいずれか一項によって作成される組換えポリペプチド。
［項目１９］哺乳動物細胞で作成される組換えポリペプチドであって、前記組換えポリペプチドがアスホターゼアルファ（配列番号１）を含み、及び
ａ．約０．９〜約３．５シアル酸モル／タンパク質モノマーモルの間の総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）、
ｂ．約５．２〜約６．７の間の等電点電気泳動（ＩＥＦ）、
ｃ．図４１または図４２で示す主要なグリカン構造、
ｄ．図３８または図３９で示す、２−ＡＢ標識化オリゴ糖クロマトグラムプロファイル、ｅ．図４０または図４４〜４９で示す、ＭＡＬＤＩ−ＴｏＦグリコペプチドフィンガープリントプロファイル、
ｆ．約８８〜１０８ｋＤａ及び生成された組換えポリペプチドの総量の約８５％以上の分子量を有する、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの主バンド、
ｇ．約１９４〜約２７３ｋＤａ及び生成された組換えポリペプチドの総量の約８５％以上の分子量を有する、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥの主バンド、
ｈ．サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による、約９５．０％以上の組換えポリペプチドの二量体、及び約５．０％以下の凝集物、
ｉ．逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を介した約９５．０％以上の純度、
ｊ．アニオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）を介した約９０．０％以上のメインピーク、約６．０％以下の酸性ピーク、及び約４．０％以下の塩基性ピーク、
ｋ．約７５〜約１２５％の割合のヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合、
ｌ．約６２０単位／ｍｇ〜約１２５０単位／ｍｇの生成物の比活性（ｐＮＰＰ）、
ｍ．無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）加水分解アッセイの約１３μＭ〜約６９μＭのＫｍ、
ｎ．無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）加水分解アッセイの約６５ｓ−１〜約１６５ｓ−１のＫｃａｔ、
ｏ．キャピラリー電気泳動のすべてのピークについて約６．４５〜約６．９５のｐＩ範囲、
ｐ．脱グリコシル後、図３４Ａで示すようなＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｑ．還元及び脱グリコシル後、図３４Ｂで示すようなＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｒ．図３５で示すＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のピーク、
ｓ．図３６で示すリン酸化プロファイル、
ｔ．図３７Ａで示す、負イオンＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上のシアル化グリカンプロファイル、
ｕ．図３７Ｂで示す、正イオンＭＡＬＤＩ−ＴｏＦ質量スペクトル上の中性グリカンプロファイル、
ｖ．約０．０３〜約０．１５の組換えポリペプチドの１モル当たりのマグネシウムのモル比、
ｗ．約０．５〜約１．５の組換えポリペプチドの１モル当たりのカルシウムのモル比、及び
ｘ．約０．５〜約３．０の組換えポリペプチドの１モル当たりの亜鉛のモル比、を含む群から選択される少なくとも１つの特性を有する、前記組換えポリペプチド。
［項目２０］半分子当たり約０．７〜約１．１９の遊離システインを有する、項目１８または項目１９に記載の組換えポリペプチド。
［項目２１］約１３．５％〜約３５．７％の割合でＳｅｒ９３にてリン酸化を有する、項目１８、１９または２０のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目２２］ＡＥＸクロマトグラムの約９０．０％以上のメインピーク、約６．０％以下の酸性ピーク及び約４．０％以下の塩基性ピークを有する、項目１４〜２１のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目２３］ＡＥＸクロマトグラムの約９３．７％以上のメインピーク、約４．９％以下の酸性ピーク及び約３．４％以下の塩基性ピークを有する、項目２２に記載の組換えポリペプチド。
［項目２４］約０．９〜約３．５シアル酸モル／タンパク質モノマーモルの間の総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）を有する、項目１８〜２３のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目２５］１モノマー当たり約１．２〜約３．０シアル酸モル／モルの平均総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）を有する、項目２４に記載の組換えポリペプチド。
［項目２６］１モノマー当たり約１．９〜約２．７シアル酸モル／モルの平均総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）値を有する、項目２５に記載の組換えポリペプチド。
［項目２７］１モノマー当たり約１．８５〜約２．２８シアル酸モル／モルの平均総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）値を有する、項目２６に記載の組換えポリペプチド。
［項目２８］約０．１５未満のマグネシウムのモル比を有する、項目１８〜２７のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目２９］約０．０５〜約０．１０のマグネシウムのモル比を有する、項目２８に記載の組換えポリペプチド。
［項目３０］約０．１２のマグネシウムのモル比を有する、項目２８に記載の組換えポリペプチド。
［項目３１］サイズ排除ＨＰＬＣで測定されるように、少なくとも約９５．０％の前記組換えポリペプチドの二量体、及び約５．０％以下のポリペプチド凝集物を含む、項目１８〜３０のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目３２］特にサイズ排除ＨＰＬＣで測定されるように、少なくとも約９６．８％の前記組換えポリペプチドの二量体、及び約３．２％以下のポリペプチド凝集物を含む、項目３１に記載の組換えポリペプチド。
［項目３３］特にサイズ排除ＨＰＬＣで測定されるように、少なくとも約９７．６％の前記組換えポリペプチドの二量体、及び約２．４％以下の凝集物を含む、項目３２に記載の組換えポリペプチド。
［項目３４］特にＲＰ−ＨＰＬＣで測定されるように、少なくとも約９５．０％の純度を含む、項目１８〜３３のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目３５］ＲＰ−ＨＰＬＣで測定されるように、少なくとも約９７．６％の純度を含む、項目３４に記載の組換えポリペプチド。
［項目３６］約７５〜約１２５％の割合のヒドロキシアパタイト（ＨＡ）結合を含む、項目１８〜３５のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目３７］約８５％〜約９７％の平均ヒドロキシアパタイト結合％を含む、項目３６に記載の組換えポリペプチド。
［項目３８］約９０％〜約９１％の平均ヒドロキシアパタイト結合％を有する、項目３７に記載の組換えポリペプチド。
［項目３９］約６２０〜約１２５０単位／ｍｇの比活性（ｐＮＰＰ）を有する、項目１８〜３８のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目４０］約９０４．０〜約９０７．７Ｕ／ｍｇの平均比活性（ｐＮＰＰ）を有する、項目３９に記載の組換えポリペプチド。
［項目４１］前記組換えポリペプチドが、配列番号１の配列、または配列番号１に完全に相補的な配列を含む、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドによってコードされる、項目１８〜４０のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目４２］前記流加リアクターが２００Ｌ〜２０，０００Ｌである、項目１８〜４１のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド。
［項目４３］前記流加リアクターが２，０００Ｌ〜２０，０００Ｌである、項目４２に記載の組換えポリペプチド。
［項目４４］項目１８〜４３のいずれか一項に記載の組換えポリペプチド、及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、組成物を含む、医薬製剤。
［項目４５］対象の無機ピロホスフェート（ＰＰｉ）の開裂を増加させるための、項目１８〜４３のいずれか一項に記載の組換えポリペプチドまたは項目４４に記載の医薬製剤の使用方法。
［項目４６］アルカリホスファターゼ欠乏に関連する病態を患っている対象を治療する方法であって、前記方法が、項目１８〜４３のいずれか一項に記載の組換えポリペプチドまたは項目４４に記載の医薬製剤の治療に有効な量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
［項目４７］アルカリホスファターゼ欠乏に関連する前記病態が、低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）または神経線維腫症Ｉ型（ＮＦ１）である、項目４６に記載の方法。
［項目４８］前記低ホスファターゼ血症（ＨＰＰ）が周産期、乳児、若年性または成人ＨＰＰである、項目４７に記載の方法。
［項目４９］アルカリホスファターゼ欠乏に関連する前記病態が、骨及び歯の非石灰化骨基質及び／または低石灰化によって特徴づけられる、項目４８に記載の方法。
［項目５０］前記非石灰化骨基質がくる病及び／または骨軟化症を引き起こす、項目４９に記載の方法。
［項目５１］前記対象がヒトである、項目４５〜５０のいずれか一項に記載の方法。