【手続補正書】
【提出日】平成31年3月1日(2019.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロ流体装置で胚を作成する工程であって、前記マイクロ流体装置は、流体培地及び隔離囲いを含むように構成されたチャネルを備え、前記隔離囲いが、単一の開口部を有する隔離領域と、前記チャネルへの近位開口部及び前記隔離領域への遠位開口部を有する接続領域と、を備え、
前記マイクロ流体装置の前記隔離囲い内に卵細胞を導入することと、
前記マイクロ流体装置内に少なくとも１つの精子を導入することと、
前記卵細胞の受精を促す条件下で前記少なくとも１つの精子と前記卵細胞とを接触させることと、
接触させた前記卵細胞と前記少なくとも１つの精子とを前記マイクロ流体装置内で、少なくとも前記卵細胞と前記少なくとも１つの精子とが前記胚を形成するのに十分な長さの時間にわたってインキュベートすることと、を含む工程。
【請求項２】
前記隔離囲い内に前記卵細胞を導入することが誘電泳動（ＤＥＰ）力を用いることを含む、請求項１に記載の工程。
【請求項３】
前記ＤＥＰ力が光電子ピンセット（ＯＥＴ）構造によって発生する、請求項２に記載の工程。
【請求項４】
前記隔離囲い内に前記少なくとも１つの精子を導入することが誘電泳動（ＤＥＰ）力を用いることを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の工程。
【請求項５】
前記隔離囲い内に前記卵細胞を導入することがエレクトロウェッティング力を用いることを含む、請求項１に記載の工程。
【請求項６】
前記エレクトロウェッティング力がＯＥＷ構造によって発生する、請求項５に記載の工程。
【請求項７】
前記隔離囲い内に前記少なくとも１つの精子を導入することがエレクトロウェッティング力を用いることを含む、請求項１〜３又は５〜６に記載の工程。
【請求項８】
前記隔離囲い内に前記卵細胞を導入することが、流体流動及び／又は重力を用いて前記卵細胞を輸送することを含む、請求項１に記載の工程。
【請求項９】
前記マイクロ流体装置内に前記少なくとも１つの精子を導入することが、流体流動及び／又は重力を用いて前記少なくとも１つの精子を輸送することを含む、請求項１又は８に記載の工程。
【請求項１０】
前記卵細胞の状態を確認することをさらに含み、
前記マイクロ流体装置内に前記少なくとも１つの精子を導入する前に前記確認することを実施する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の工程。
【請求項１１】
前記卵細胞の状態を確認することをさらに含み、
前記隔離囲い内に前記卵細胞を導入する前に前記確認することを実施する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の工程。
【請求項１２】
前記マイクロ流体装置内に前記少なくとも１つの精子を導入する前に、前記卵細胞に少なくとも１つの調整処理を実施する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の工程。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの調整処理が電気処理又は化学処理である、請求項１２に記載の工程。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの調整処理が体細胞への曝露である、請求項１３に記載の工程。
【請求項１５】
前記体細胞が卵丘細胞である、請求項１４に記載の工程。
【請求項１６】
前記卵細胞を前記隔離囲い内で前記体細胞に曝露する、請求項１４又は１５に記載の工程。
【請求項１７】
前記卵細胞の受精を促す条件が、卵細胞を取り囲む培地の組成を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の工程。
【請求項１８】
前記マイクロ流体装置内に前記少なくとも１つの精子を導入する前に前記卵細胞を取り囲む培地の組成を変化させることをさらに含む、請求項１７に記載の工程。
【請求項１９】
前記マイクロ流体装置内に前記少なくとも１つの精子を導入した後に前記卵細胞に少なくとも１つの調整処理を実施する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の工程。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの調整処理が電気処理又は化学処理である、請求項１９に記載の工程。
【請求項２１】
接触させた前記卵細胞と前記少なくとも１つの精子が前記胚を形成したことを判定することをさらに含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の工程。
【請求項２２】
前記胚が形成されたことを判定することが目視検査を含む、請求項２１に記載の工程。
【請求項２３】
前記胚に少なくとも１つの調整処理を実施することをさらに含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の工程。
【請求項２４】
前記胚に実施する前記少なくとも１つの調整処理が体細胞への曝露である、請求項２３に記載の工程。
【請求項２５】
前記胚を曝露する前記体細胞が、卵丘細胞、子宮内膜細胞、無線毛分泌細胞、ＰＥＧ細胞又はその任意の組合せである、請求項２４に記載の工程。
【請求項２６】
前記胚が形成されたことを判定することが、前記卵細胞が導入された前記隔離囲い内にある分泌物又は前記隔離囲いから出る分泌物を検出することを含む、請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の工程。
【請求項２７】
前記分泌物の検出が、タンパク質又は核酸を検出することを含む、請求項２６に記載の工程。
【請求項２８】
前記卵細胞及び前記少なくとも１つの精子が、それぞれ哺乳動物から採取されるものである、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の工程。
【請求項２９】
前記隔離囲いが単一の卵細胞を収納する、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の工程。
【請求項３０】
前記マイクロ流体装置が複数の隔離囲いを含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の工程。
【請求項３１】
前記複数の隔離囲いのうち２つ以上の隔離囲いにそれぞれ少なくとも１つの卵細胞を導入する、請求項３０に記載の工程。
【請求項３２】
前記複数の隔離囲いのうち２つ以上の隔離囲いにそれぞれ単一の卵細胞を導入する、請求項３０に記載の工程。
【請求項３３】
接触させた前記卵細胞と前記少なくとも１つの精子が前記胚を形成したことを判定することと、
前記隔離囲い内の前記胚を取り囲む培地の組成を変化させることと、をさらに含む、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の工程。
【請求項３４】
前記胚が単細胞細胞胚から桑実胚又は胞胚に発生するにつれて、前記培地の組成を２回以上変化させる、請求項３３に記載の工程。
【請求項３５】
前記培地の組成を変化させることが、前記培地のｐＨを変化させることを含む、請求項３３又は３４に記載の工程。
【請求項３６】
前記隔離囲いから前記胚を排出することをさらに含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の工程。
【請求項３７】
前記マイクロ流体装置から前記胚を排出することをさらに含む、請求項３６に記載の工程。
【請求項３８】
前記隔離領域が、前記隔離領域内の流体培地の成分と、前記チャネル内の前記流体培地の成分とを交換する、請求項１に記載の工程。
【請求項３９】
前記接続領域の前記近位開口部は、約１００ミクロン〜約２００ミクロンの範囲の幅Ｗｃｏｎを有し、前記近位開口部から前記遠位開口部までの前記接続領域の長さＬｃｏｎは前記近位開口部の幅Ｗｃｏｎの少なくとも１．０倍である、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の工程。
【請求項４０】
前記近位開口部から前記遠位開口部までの前記接続領域の長さＬｃｏｎは、前記近位開口部の幅Ｗｃｏｎの少なくとも２．０倍である、請求項３９に記載の工程。
【請求項４１】
前記マイクロ流体装置は、前記チャネル及び前記隔離囲いを備えるマイクロ流体回路を囲む筐体を備え、前記筐体は、土台と、前記土台上に配置されたマイクロ流体回路材料と、カバーと、を備え、前記土台、前記マクロ流体回路材料及び前記カバーはともに前記マイクロ流体回路を規定する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の工程。
【請求項４２】
前記カバー及び前記土台は、微小物体に誘電泳動（ＤＥＰ）力を選択的に誘導するためのＤＥＰ構造の一部である、請求項４１に記載の工程。