【手続補正書】
【提出日】令和1年10月16日(2019.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多孔性型内に包埋された組織球状体のアレイを含む球状体組織マイクロアレイ。
【請求項２】
前記多孔性型がアガロースゲルまたは寒天ゲルから形成される請求項１に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項３】
格子状に規則正しく配置された孔を有する請求項１または２に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項４】
前記孔の直径が０．２〜３．０ｍｍである請求項３に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項５】
前記孔の深さが２〜５ｍｍである請求項３または請求項４に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項６】
前記多孔性型が１００〜３００個の孔を有する請求項３〜５のいずれかに記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項７】
前記球状体の中心から水平方向に１００マイクロメートル以下の位置に、隣り合う球状体の中心を位置決めするようにして、前記球状体を正方形状に規則正しく並べることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項８】
１ｃｍ２あたり球状体の密度が１００〜５００個配置された請求項１〜７のいずれかに記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項９】
前記組織球状体が、人工多能性幹細胞、初代培養細胞、がん組織に由来する細胞株、神経細胞、皮膚細胞、肝臓細胞、腫瘍細胞、間質細胞、免疫細胞および内皮細胞のうちの１つまたは複数に由来する組織を含む請求項１〜８のいずれか一項に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１０】
前記組織球状体が細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ３次元培養物から形成される請求項１〜９のいずれか一項に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１１】
前記組織球状体の直径が５０〜５００μｍである請求項１〜１０のいずれか一項に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１２】
細胞培養用の土台上で培養されて前記組織球状体が、該土台ごと包埋される請求項１〜１１のいずれかに記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１３】
前記土台がポリスチレン（アンバーライト）その他のプラスチック材料から形成されたビーズである請求項１２に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１４】
前記組織球状体がヒト皮膚細胞を含む請求項１２または１３に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１５】
前記組織球状体が組織学的解析のために染色される請求項１〜１４のいずれか一項に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１６】
パラフィンワックスまたは樹脂で含浸される請求項１〜１５のいずれか一項に記載の球状体組織マイクロアレイ。
【請求項１７】
球状体組織マイクロアレイの製造方法であって、
鋳型に液状の型材を流し込み、それを凝固させることで多孔性型前駆体を形成するステップ、
鋳型から該多孔性型前駆体を取り出すステップ；
該多孔性型前駆体の凹部に、さらに液状の型材を注入し、注入した型材が凝固する際の収縮を利用して孔を形成し、多孔性型を得るステップ；
該多孔性型の孔内に組織球状体を配置するステップ；
該孔内を液状の型材で満たし、型材を凝固させ、孔内に組織球状体を密閉するステップ；
を含む製造方法。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれかに記載の球状体組織マイクロアレイを製造するための請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記形材が０．５〜４％アガロース水溶液である請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記形材を６０〜７０℃に加温して前記鋳型に流し込む請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記鋳型が好適な温度にあらかじめ加温される請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記型材を室温で２０〜４５分間凝固した後、０〜５℃で２０〜４５分間冷却する請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記多孔性型前駆体を前記鋳型から取り出すために約−２０℃で５〜１５分間冷却する
請求項１７〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記多孔性型前駆体を６０〜７０℃で１０〜３０分間密閉状態で加温した後に、前記多孔性型前駆体の凹部に型材料を注入する請求項１７〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記多孔性型前駆体の凹部に０．１〜１．０％アガロース水溶液を注入する請求項１７〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記多孔性型前駆体の凹部に注入するアガロース水溶液に好適な染料マーカーが添加されている請求項１７〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記孔が、前記多孔性型の上部１ｍｍ以内の領域に形成される請求項１７〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記組織球状体が、６０〜７０℃に加温して液状にした型材によって前記孔内に密封される請求項１７〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記孔内に前記組織球状体を密封した後、０〜５℃で約３０分間することで形材を凝固させる請求項１７〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記球状体組織マイクロアレイがパラフィンワックスまたは樹脂で含浸される請求項１７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
球状体組織マイクロアレイの製造方法であって、
鋳型内で液状の型材から多孔性型を形成するステップ；
該液状の型材を凝固させるステップ；
該鋳型から該多孔性型を取り出すステップ；
多孔性型の孔に球状体を入れるステップ；
該孔内にさらに該型材料を注入し、球状体を該孔内に密閉するステップを含み、
該鋳型がＵ字状凸部を有し、該Ｕ字状凸部がその先端にさらに小さな乳頭状凸部を有し
ており、該孔が、該乳頭状凸部によって形成されることを特徴とする製造方法。
【請求項３２】
前記マイクロアレイをパラフィンワックスまたは樹脂で含浸する続くステップをさらに含む請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
同時に多数の球状体を切片にするために前記球状体組織マイクロアレイを切片化すること及び該切片を解析することを含む、解析方法における請求項１〜１６のいずれかに記載の球状体組織マイクロアレイの使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
国際公開第２０１５／０６９７４２号には、規則正しく並べられた仕切りがあらかじめ水で満たされている型が開示されている。水で満たされた仕切りに球状体がピペットで移され、次いで、その仕切りの中にアガロースが注入され、アガロースが凝固したら、型から取り出される。球状体は、アガロースゲルの塊内に包埋されるのではなく、アガロースゲルの底部に保持されていると考えられる。当該先行技術の方法では、型からの取り出し時に、球状体がアガロース部材の底部にきちんと保持された状態のものが、どれほどの収率で得られるのかは不明である。
尚、当該で開示された型は、可塑性物質またはシリコーン製である。
当該文献には、球状体が切片にされ且つ１枚のスライド上で染色され得るように、球状体が同じ平面上にあることが示されている。しかしながら、当該文献には、球状体の水平方向での位置決め方法が示されておらず、単に球状体が個別の仕切り内に配置されることが開示されているのみである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の球状体組織マイクロアレイは、多孔性型に組織球状体を包埋することにより構成される。多孔性型の材料は任意のものでよく、好ましくは、アガロースまたは寒天ゲルである。