【手続補正書】
【提出日】平成31年4月8日(2019.4.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）傷害後の心組織の修復を必要とする被験体において傷害後に心組織を修復するための方法における使用のための、低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドを含む組成物であって、前記方法が、前記心組織を前記組成物と接触させるステップを含む、組成物、または
（Ｂ）傷害後の心組織の修復を必要とする被験体において傷害後に心組織を修復するための方法における使用のための、心外膜由来パラクリン因子を含む組成物であって、前記方法が、前記心組織を前記組成物と接触させるステップを含む、組成物、または
（Ｃ）傷害後の心組織の修復を必要とする被験体において傷害後に心組織を修復するための方法における使用のための、組換え低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドが播種または注入された三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチを含む組成物であって、前記方法が、前記心組織または心外膜を前記組成物と接触させるステップを含む、組成物。
【請求項２】
（Ａ）前記傷害が、虚血再灌流心傷害である、虚血性心臓疾患によるものである、および／または発育不全心によるものであるか、または
（Ｂ）前記傷害が心筋梗塞であり、および／または心臓が瘢痕組織を含有する、
請求項１（Ａ）に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
（Ａ）心組織の修復が、前記心組織における心筋細胞の数を増加させることを含み、任意選択で、心筋細胞の数が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における心筋細胞の数と比較して少なくとも３倍に増加するか、または
（Ｂ）心組織の修復が、心筋細胞および／または心血管系を含む損傷を受けた心組織の回復の増大を含み、任意選択で、心筋細胞の数が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における心筋細胞の数と比較して少なくとも３倍に増加する、
請求項１（Ａ）および２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
（Ａ）心組織の修復が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における短縮率の量と比較した心組織の短縮率の改善を含むか、または
（Ｂ）心組織の修復が、傷害後の心外膜由来パラクリン因子の接触、送達、またはゲノム編集による処置前の同一心臓における線維化の量と比較して、少なくとも２％の瘢痕面積（線維化）の低減を含むか、または
（Ｃ）心臓組織の修復が、傷害後の心外膜由来パラクリン因子の接触、送達、またはゲノム編集による処置前の同一心臓における灌流面積の量と比較して、少なくとも２％の血管灌流面積の増大を含むか、または
（Ｄ）心組織の修復が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における心筋細胞の細胞質分裂の量と比較した前記心組織における心筋細胞の細胞質分裂の量の増大を含み、
任意選択で、心筋細胞の細胞質分裂の量の増大が、Ａｕｒｏｒａ  Ｂキナーゼの発現によって決定される、
請求項１（Ａ）および２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
（Ａ）心組織の修復が、心筋細胞のアポトーシスの減少を含む、かつ／または
（Ｂ）前記方法が、心筋細胞における心特異的収縮性タンパク質をコードする転写物のレベルの増大をもたらし、任意選択で、
（ｉ）前記方法が、心筋細胞における心特異的収縮性タンパク質をコードする転写物のレベルの２倍の増大をもたらす、かつ／または
（ｉｉ）前記心特異的収縮性タンパク質が、ｍｙｈ６、ｍｌｃ２ｖ、およびｍｌｃ２ａからなる群より選択される、
請求項１（Ａ）および２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
（Ａ）前記方法が、心筋細胞における律動的収縮性Ｃａ２＋を伴うアクチニン＋細胞の増加をもたらすか、または
（Ｂ）前記心組織が、前記傷害の直後に前記心外膜由来パラクリン因子と接触させられるか、または
（Ｃ）前記心組織が、前記傷害後、任意の時間で前記心外膜由来パラクリン因子と接触させられるか、または
（Ｄ）前記方法が、心事象および入院を減少させるか、または
（Ｅ）前記方法が、前記傷害後に前記心組織における線維化を減弱させる、
請求項１（Ａ）および２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記方法が前記心組織の傷害を受けた領域の血管新生の増大をもたらす、かつ／または前記血管新生の増大が血管細胞中のフォン・ビルブラント因子（ｖＷＦ）または平滑筋アクチンの発現によって決定される、請求項２に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
前記方法が心筋細胞の細胞周期のエントリーを誘起し、任意選択で、
（Ａ）前記心筋細胞の細胞周期のエントリーがホスホ−ヒストンＨ３の発現によって評価される、かつ／または
（Ｂ）前記方法が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における心筋細胞の細胞周期のエントリーの量と比較して、心筋細胞の細胞周期のエントリーの少なくとも２倍の増大をもたらす、
請求項１（Ａ）および２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
請求項１（Ａ）に記載の使用のための組成物であって、
（Ａ）前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、原核細胞中で合成されるか、または
（Ｂ）前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、グリコシル化阻害剤で処理された真核細胞中で合成されるか、または
（Ｃ）前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、１つまたは複数のグリコシル化アミノ酸を１つまたは複数のグリコシル化に不適格なアミノ酸で置換することによって産生されるか、または
（Ｄ）前記１つまたは複数のグリコシル化アミノ酸が、Ｎ１４４、Ｎ１７５、Ｎ１８０、およびＮ２２３からなる群より選択され、任意選択で、
（ｉ）前記組成物が心組織を修復するか、または
（ｉｉ）前記組成物が、傷害後に心筋細胞をアポトーシスから保護する、
組成物。
【請求項１０】
請求項１（Ａ）および２のいずれか一項に記載の使用のための組成物であって、
（Ａ）前記組成物が、コラーゲンパッチによって傷害を受けた心筋組織に送達されるか、または
（Ｂ）前記組成物が、傷害を受けた心筋組織に直接注入されるか、または
（Ｃ）前記組成物が全身に送達されるか、または
（Ｄ）前記組成物が、心内膜に送達され、任意選択で、前記心内膜送達がカテーテルによるか、または
（Ｅ）前記組成物が、心外膜にカテーテルによって送達されるか、または
（Ｆ）前記組成物が、薬物溶出ステントを使用してカテーテルによって送達されるか、または
（Ｇ）前記組成物が、三次元コラーゲンパッチ中に埋め込まれるか、または播種されているか、または
（Ｈ）前記心組織が、心外膜部位、心内膜部位の１つもしくは複数から、および／または心筋への直接注入によって接触させられるか、または
（Ｉ）前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、修飾されたＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）の使用によって前記心臓内で発現されるか、または
（Ｊ）前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、ゲノム編集によって発現される、
組成物。
【請求項１１】
低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドおよび１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む、無菌の医薬組成物。
【請求項１２】
（Ａ）
（ｉ）ＦＳＴＬ１のグリコシル化阻害剤をさらに含み、任意選択で、前記ＦＳＴＬ１のグリコシル化阻害剤が、ツニカマイシンを含むか、または
（ｉｉ）前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、原核細胞中で合成され、任意選択で、前記原核細胞が細菌細胞であるか、または
（ｉｉｉ）前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、グリコシル化阻害剤で処理された真核細胞中で合成され、任意選択で、前記グリコシル化阻害剤がツニカマイシンである、
かつ／または
（Ｂ）
（ｉ）傷害を受けた心組織に直接注入するために製剤化されているか、または
（ｉｉ）全身投与のために製剤化されている、
請求項１１に記載の無菌の医薬組成物。
【請求項１３】
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、修飾されたＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）を含む細胞中で合成されるか、または前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、ゲノム編集によって発現される、請求項１１に記載の無菌の医薬組成物。
【請求項１４】
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチ中に埋め込まれるか、または播種されており、任意選択で、前記３Ｄコラーゲンパッチが、１２±４ｋＰａの弾性係数を有する、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の無菌の医薬組成物。
【請求項１５】
（ｉ）低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチド；および（ｉｉ）１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む、キットであって、
（Ａ）任意選択で、（ｉｉｉ）三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチをさらに含む、かつ／または
（Ｂ）
（ｉ）任意選択で、前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチ中に埋め込まれるか、または播種されているか、または
（ｉｉ）任意選択で、前記３Ｄコラーゲンパッチが、１２±４ｋＰａの弾性係数を有する、
キット。
【請求項１６】
（ｉｖ）前記３Ｄコラーゲンパッチを傷害を受けた心臓の心外膜または心筋に接着させるための接着手段をさらに含み、任意選択で、前記接着手段が縫合糸である、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
（Ａ）前記傷害が虚血再灌流傷害または心筋梗塞である、かつ／または
（Ｂ）前記３Ｄコラーゲンパッチが、前記心組織または心外膜に縫合される、
請求項１（Ｃ）に記載の使用のための組成物。
【請求項１８】
組換え低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドが注入または播種された三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチであって、任意選択で、
（Ａ）
（ｉ）前記組換え低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、原核細胞中で合成され、さらに任意選択で、前記原核細胞が細菌細胞であるか、または
（ｉｉ）前記組換え低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、グリコシル化阻害剤で処理された真核細胞中で合成され、さらに任意選択で、前記グリコシル化阻害剤がツニカマイシンである、かつ／または
（Ｂ）１２±４ｋＤａの弾性係数を有する、
三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本明細書を通して、種々の特許、特許出願および他の種類の刊行物（たとえば、雑誌記事、電子的データベースエントリー等）が参照される。本明細書で引用する全ての特許、特許出願、および他の刊行物の開示は、全ての目的のため参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
傷害後の心組織の修復を必要とする被験体において傷害後に心組織を修復するための方法であって、前記心組織を低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドと接触させるステップを含む、方法。
（項目２）
前記傷害が、虚血再灌流心傷害である、虚血性心臓疾患によるものである、および／または発育不全心によるものである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記傷害が心筋梗塞であり、および／または心臓が瘢痕組織を含有する、項目１に記載の方法。
（項目４）
心組織の修復が、前記心組織における心筋細胞の数を増加させることを含む、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
心組織の修復が、心筋細胞および／または心血管系を含む損傷を受けた心組織の回復の増大を含む、項目１から３のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
心筋細胞の数が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における心筋細胞の数と比較して少なくとも３倍に増加する、項目４または５に記載の方法。
（項目７）
心組織の修復が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における短縮率の量と比較した心組織の短縮率の改善を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
心組織の修復が、傷害後の心外膜由来パラクリン因子の接触、送達、またはゲノム編集による処置前の同一心臓における線維化の量と比較して、少なくとも２％の瘢痕面積（線維化）の低減を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
心臓組織の修復が、傷害後の心外膜由来パラクリン因子の接触、送達、またはゲノム編集による処置前の同一心臓における灌流面積の量と比較して、少なくとも２％の血管灌流面積の増大を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
心組織の修復が、傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における心筋細胞の細胞質分裂の量と比較した前記心組織における心筋細胞の細胞質分裂の量の増大を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
心筋細胞の細胞質分裂の量の増大が、Ａｕｒｏｒａ  Ｂキナーゼの発現によって決定される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
心組織の修復が、心筋細胞のアポトーシスの減少を含む、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
心筋細胞における心特異的収縮性タンパク質をコードする転写物のレベルの増大をもたらす、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
心筋細胞における心特異的収縮性タンパク質をコードする転写物のレベルの２倍の増大をもたらす、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記心特異的収縮性タンパク質が、ｍｙｈ６、ｍｌｃ２ｖ、およびｍｌｃ２ａからなる群より選択される、項目１３または項目１４に記載の方法。
（項目１６）
心筋細胞における律動的収縮性Ｃａ２＋を伴うアクチニン＋細胞の増加をもたらす、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記心組織を、前記傷害の直後に前記心外膜由来パラクリン因子と接触させる、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記心組織を、前記傷害後、任意の時間で前記心外膜由来パラクリン因子と接触させる、項目１から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
心事象および入院を減少させる、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記傷害後に前記心組織における線維化を減弱させる、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記心組織の傷害を受けた領域の血管新生の増大をもたらす、項目２または項目３に記載の方法。
（項目２２）
前記血管新生の増大が血管細胞中のフォン・ビルブラント因子（ｖＷＦ）または平滑筋アクチンの発現によって決定される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
心筋細胞の細胞周期のエントリーを誘起する、項目１から２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記心筋細胞の細胞周期のエントリーがホスホ−ヒストンＨ３の発現によって評価される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
傷害後に心外膜由来パラクリン因子が接触しなかった心組織における心筋細胞の細胞周期のエントリーの量と比較して、心筋細胞の細胞周期のエントリーの少なくとも２倍の増大をもたらす、項目２３または項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、原核細胞中で合成される、項目１に記載の方法。
（項目２７）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、グリコシル化阻害剤で処理された真核細胞中で合成される、項目１に記載の方法。
（項目２８）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、１つまたは複数のグリコシル化アミノ酸を１つまたは複数のグリコシル化に不適格なアミノ酸で置換することによって産生される、項目１に記載の方法。
（項目２９）
前記１つまたは複数のグリコシル化アミノ酸が、Ｎ１４４、Ｎ１７５、Ｎ１８０、およびＮ２２３からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目３０）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが心組織を修復する、項目２６から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１が、傷害後に心筋細胞をアポトーシスから保護する、項目２６から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、コラーゲンパッチによって傷害を受けた心筋組織に送達される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、傷害を受けた心筋組織に直接注入される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが全身に送達される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、心内膜に送達される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記心内膜送達がカテーテルによる、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、心外膜にカテーテルによって送達される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、薬物溶出ステントを使用してカテーテルによって送達される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記低グリコシル化Ｆｓｔｌ１ポリペプチドが、三次元コラーゲンパッチ中に埋め込まれるか、または播種されている、項目１から３８のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記心組織を、心外膜部位、心内膜部位の１つもしくは複数から、および／または心筋への直接注入によって接触させる、項目１から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、修飾されたＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）の使用によって前記心臓内で発現される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、ゲノム編集によって発現される、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
傷害後の心組織の修復を必要とする被験体において傷害後に心組織を修復するための方法であって、前記心組織を心外膜由来パラクリン因子と接触させるステップを含む、方法。
（項目４４）
低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドおよび１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む、無菌の医薬組成物。
（項目４５）
ＦＳＴＬ１のグリコシル化阻害剤をさらに含む、項目４４に記載の無菌の医薬組成物。
（項目４６）
前記ＦＳＴＬ１のグリコシル化阻害剤が、ツニカマイシンを含む、項目４５に記載の無菌の医薬組成物。
（項目４７）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、原核細胞中で合成される、項目４４に記載の無菌の医薬組成物。
（項目４８）
前記原核細胞が細菌細胞である、項目４７に記載の無菌の医薬組成物。
（項目４９）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、グリコシル化阻害剤で処理された真核細胞中で合成される、項目４４に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５０）
前記グリコシル化阻害剤がツニカマイシンである、項目４９に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５１）
傷害を受けた心組織に直接注入するために製剤化されている、項目４４から５０のいずれか一項に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５２）
全身投与のために製剤化されている、項目４４から５０のいずれか一項に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５３）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、修飾されたＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）を含む細胞中で合成される、項目４４に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５４）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、ゲノム編集によって発現される、項目４４に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５５）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチ中に埋め込まれるか、または播種されている、項目４４から５４のいずれか一項に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５６）
前記３Ｄコラーゲンパッチが、１２±４ｋＰａの弾性係数を有する、項目５５に記載の無菌の医薬組成物。
（項目５７）
（ｉ）低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチド；および（ｉｉ）１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む、キット。
（項目５８）
（ｉｉｉ）三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチをさらに含む、項目５７に記載のキット。
（項目５９）
前記低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチ中に埋め込まれるか、または播種されている、項目５７または５８に記載のキット。
（項目６０）
前記３Ｄコラーゲンパッチが、１２±４ｋＰａの弾性係数を有する、項目５７または５８に記載のキット。
（項目６１）
（ｉｖ）前記３Ｄコラーゲンパッチを傷害を受けた心臓の心外膜または心筋に接着させるための接着手段をさらに含む、項目５７から６０のいずれか一項に記載のキット。
（項目６２）
前記接着手段が縫合糸である、項目６１に記載のキット。
（項目６３）
傷害後の心組織の修復を必要とする被験体において傷害後に心組織を修復するための方法であって、前記心組織または心外膜を、組換え低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドが播種または注入された三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチと接触させるステップを含む、方法。
（項目６４）
前記傷害が虚血再灌流傷害である、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記傷害が心筋梗塞である、項目６３に記載の方法。
（項目６６）
前記３Ｄコラーゲンパッチが、前記心組織または心外膜に縫合される、項目６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
（項目６７）
組換え低グリコシル化フォリスタチン様１（ＦＳＴＬ１）ポリペプチドが注入または播種された三次元（３Ｄ）コラーゲンパッチ。
（項目６８）
前記組換え低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、原核細胞中で合成される、項目６７に記載のコラーゲンパッチ。
（項目６９）
前記原核細胞が細菌細胞である、項目６８に記載のコラーゲンパッチ。
（項目７０）
前記組換え低グリコシル化ＦＳＴＬ１ポリペプチドが、グリコシル化阻害剤で処理された真核細胞中で合成される、項目６７に記載のコラーゲンパッチ。
（項目７１）
前記グリコシル化阻害剤がツニカマイシンである、項目７０に記載のコラーゲンパッチ。
（項目７２）
１２±４ｋＤａの弾性係数を有する、項目６７から７１のいずれか一項に記載のコラーゲンパッチ。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
ＲＮＡ抽出およびＱ−ＲＴ−ＰＣＲ：総ＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で抽出して、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ逆転写キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、メーカーの指示に従ってｃＤＮＡに逆転写した。１００ｎｇの総ＲＮＡから合成されたｃＤＮＡ試料を、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ４８０リアルタイムのＰＣＲシステム（Ｒｏｃｈｅ）を用いて実施するＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ４８０  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ  Ｍａｓｔｅｒキット（Ｒｏｃｈｅ）を用いてＲＴ−ＱＰＣＲに供した。この実施例ならびに本明細書で開示される他の実施例で使用されたプライマーの配列を下に列挙する。
【表１−１】
2018512456.tif 000001