【手続補正書】
【提出日】平成20年9月4日(2008.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ＣＹＰ２Ｃ９、４’位においてトリチウム標識されたトリチウム標識ジクロフェナック（［４’−３Ｈ］−ジクロフェナック）、ＮＡＤＰＨ及び検体を含有する混合物を提供することと；
（ｂ）ＣＹＰ２Ｃ９活性が４’位においてトリチウム標識されたジクロフェナックをヒドロキシル化するのに十分な時間、混合物をインキュベートすることと；
（ｃ）水性混合物からＣＹＰ２Ｃ９を除去することと；
（ｄ）非極性化合物に選択的に結合する吸着剤に水性混合物を添加して、混合物からトリチウム標識ジクロフェナックを除去することと；及び
（ｅ）トリチウム標識ジクロフェナックが除去された段階（ｄ）の混合物中のトリチウム量を測定することと（トリチウム量の減少は、検体がＣＹＰ２Ｃ９の活性を阻害することを示す。）
を含む、チトクロムＰ４５０アイソフォーム２Ｃ９（ＣＹＰ２Ｃ９）の活性を阻害する検体を同定するための方法。
【請求項２】
吸着剤が、ポリマーが加湿性となり及び有機溶質保持において有効となるように十分な割合で、少なくとも１個の親水性モノマー及び少なくとも１個の脂溶性モノマーをコポリマー化することにより形成される加湿性ポリマー、シリカ基材に結合された非極性基を含有するシリカ基材並びに活性炭からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項３】
吸着剤がポリ（ビニルベンゼン−コ−Ｎ−ビニルピロリドンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
４’位において標識されたジクロフェナックが、２−ヨードフェニル酢酸及び２，６−ジクロロ４−ブロモアニリンの混合物を提供すること、前記混合物を銅触媒の存在下にインキュベートして、２−［（２，６−ジクロロ，４−ブロモフェニル）アミノ］フェニル酢酸を生成させること、及び２−［（２，６−ジクロロ，４−ブロモフェニル）アミノ］フェニル酢酸をパラジウム触媒存在下でトリチウムと共にインキュベートして、４’位において標識されたジクロフェナックを生成させることにより生成される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
水性混合物が、ＮＡＤＰＨ再生系をさらに含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
段階（ｅ）における混合物中のトリチウムが、ＣＹＰ２Ｃ９、フェニル環の４’位においてトリチウムにより標識されたジクロフェナック及びＮＡＤＰＨを含有しており検体を含有していない対照混合物からの混合物中のトリチウム量と比較される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ＣＹＰ２Ｃ９がミクロソーム中において提供される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ミクロソームがヒト肝臓ミクロソームである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ミクロソームが、哺乳動物及び昆虫細胞からなる群から選択される細胞（これらの細胞は、ＣＹＰ２Ｃ９を発現するベクターを含む。）から産生される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）マルチウェルプレート及び、固相抽出カートリッジのアレイを有するカラムプレート又はカラム（非極性化合物に選択的に結合する吸着剤をその中に有する。）を提供することと；
（ｂ）マルチウェルプレートのウェルのそれぞれに、ＣＹＰ２Ｃ９、４’位においてトリチウムにより標識されたトリチウム標識ジクロフェナック及び検体を含有する混合物を添加することと；
（ｃ）段階（ｂ）のウェルのそれぞれの中の混合物にＮＡＤＰＨを接触させ、ＣＹＰ２９が４’位におけるトリチウム標識ジクロフェナックをヒドロキシル化するのに十分な時間、インキュベートすることと；
（ｄ）マルチウェルプレートのウェルのそれぞれの中の段階（ｃ）での水性混合物からＣＹＰ２Ｃ１９を分離することと；
（ｅ）カラムプレートの個々のミニカラムに段階（ｄ）での各水性混合物を添加して、混合物からトリチウム標識ジクロフェナックを除去することと；及び
（ｆ）トリチウム標識ジクロフェナックが除去された段階（ｅ）の水性混合物中のトリチウム量を測定することと（トリチウム量の減少は、検体がＣＹＰ２Ｃ９の活性を阻害することを示す。）
を含む、チトクロムＰ４５０アイソフォーム２Ｃ９（ＣＹＰ２Ｃ９）の活性を阻害する検体を同定するための方法。
【請求項１１】
吸着剤が、ポリマーが加湿性となり及び有機溶質保持において有効となるように十分な割合で、少なくとも１個の親水性モノマー及び少なくとも１個の脂溶性モノマーをコポリマー化することにより形成される加湿性ポリマー、シリカ基材に結合された非極性基を含有するシリカ基材並びに活性炭からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）肝細胞の培養物を提供することと；
（ｂ）ＣＹＰ２Ｃ９がトリチウム標識ジクロフェナックをヒドロキシル化するのに十分な時間、４’位においてトリチウム標識されたジクロフェナックを含有する培地中で肝細胞をインキュベートすることと；
（ｃ）肝細胞の培養物から培地を除去することと；
（ｄ）非極性化合物に選択的に結合する吸着剤に培地を添加して、培地からトリチウム標識ジクロフェナックを除去することと；及び
（ｅ）トリチウム標識ジクロフェナックが除去された段階（ｄ）の培地中のトリチウム量を測定することと（これは、肝細胞におけるＣＹＰ２Ｃ９の相対活性を測定する。）
を含む、肝細胞においてチトクロム２Ｃ９（ＣＹＰ２Ｃ９）の相対的活性を測定するための方法。
【請求項１３】
吸着剤が、ポリマーが加湿性となり及び有機溶質保持において有効となるように十分な割合で、少なくとも１個の親水性モノマー及び少なくとも１個の脂溶性モノマーをコポリマー化することにより形成される加湿性ポリマー、シリカ基材に結合された非極性基を含有するシリカ基材並びに活性炭からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）肝細胞の培養物を提供することと；
（ｂ）検体を含有する培地中で肝細胞をインキュベートすることと；
（ｃ）４’位においてトリチウム標識されたジクロフェナックを含有する第二の培地で検体を含有する培地を置き換え、ＣＹＰ２Ｃ９が４’位でトリチウム標識ジクロフェナックをヒドロキシル化するのに十分な時間、肝細胞をインキュベートすることと；
（ｄ）肝細胞の培養物から第二の培地を除去することと；
（ｅ）非極性化合物に選択的に結合する吸着剤に第二の培地を添加して、第二の培地からトリチウム標識ジクロフェナックを除去することと；及び
（ｆ）トリチウム標識ジクロフェナックが除去された段階（ｅ）の第二の培地中のトリチウム量を測定することと（トリチウム量の増加は、検体がＣＹＰ２Ｃ９発現を誘導することを示す。）
を含む、チトクロム２Ｃ９（ＣＹＰ２Ｃ９）発現を誘導する検体を同定するための方法。
【請求項１５】
吸着剤が、ポリマーが加湿性となり及び有機溶質保持において有効となるように十分な割合で、少なくとも１個の親水性モノマー及び少なくとも１個の脂溶性モノマーをコポリマー化することにより形成される加湿性ポリマー、シリカ基材に結合された非極性基を含有するシリカ基材並びに活性炭からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
（ａ）肝細胞の培養物を提供することと；
（ｂ）ＣＹＰ２Ｃ９がトリチウム標識ジクロフェナックをヒドロキシル化するのに十分な時間、４’位においてトリチウム標識されたジクロフェナック及び検体を含有する培地中で肝細胞をインキュベートすることと；
（ｃ）肝細胞の培養物から培地を除去することと；
（ｄ）非極性化合物に選択的に結合する吸着剤に培地を添加して、培地からトリチウム標識ジクロフェナックを除去することと；及び
（ｅ）トリチウム標識ジクロフェナックが除去された段階（ｄ）の培地中のトリチウム量を測定することと（トリチウム量の減少は、検体がＣＹＰ２Ｃ９の活性を阻害することを示す。）
を含む、チトクロム２Ｃ９（ＣＹＰ２Ｃ９）の活性を阻害する検体を同定するための方法。
【請求項１７】
吸着剤が、ポリマーが加湿性となり及び有機溶質保持において有効となるように十分な割合で、少なくとも１個の親水性モノマー及び少なくとも１個の脂溶性モノマーをコポリマー化することにより形成される加湿性ポリマー、シリカ基材に結合された非極性基を含有するシリカ基材並びに活性炭からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（ａ）２−ヨードフェニル酢酸及び２，６−ジクロロ，４−ブロモアニリンの混合物を提供することと；
（ｂ）前記混合物を銅触媒の存在下にインキュベートして、２−［（２，６−ジクロロ，４−ブロモフェニル）アミノ］フェニル酢酸を生成させることと；及び
（ｃ）段階（ｂ）で生成された２−［（２，６−ジクロロ，４−ブロモフェニル）アミノ］フェニル酢酸を、パラジウム触媒存在下にトリチウムと共インキュベートして、４’位において標識されたジクロフェナックを生成させることと
を含む、４’位において標識されたジクロフェナックを生成させるための請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
式：
【化１】
2008515426.tif 000001
（式中、Ｔはトリチウムである。）を有する、４’位において標識されたジクロフェナック。
【請求項２０】
式：
【化２】
2008515426.tif 000002
（式中、Ｂｒは臭素であり、Ｃｌは塩素である。）を有する、２−［（２，６−ジクロロ，４−ブロモフェニル）アミノ］フェニル酢酸。
【請求項２１】
（ａ）ＣＹＰ２Ｃ９、ＮＡＤＰＨ再生系及び検体を含有する混合物を提供することと；
（ｂ）様々な時間、前記混合物をインキュベートすることと；
（ｃ）前記混合物を希釈し、次いで希釈混合物に４’位においてトリチウムにより標識されたジクロフェナック及びＮＡＤＰＨを添加することと；
（ｄ）ＣＹＰ２Ｃ９が４’位においてトリチウム標識ジクロフェナックをヒドロキシル化するのに十分な時間、前記希釈混合物をインキュベートすることと；
（ｅ）混合物からＣＹＰ２Ｃ９を除去することと；
（ｆ）非極性化合物に選択的に結合する吸着剤に前記混合物を添加して、前記混合物からトリチウム標識ジクロフェナックを除去することと；及び
（ｇ）トリチウム標識ジクロフェナックが除去された段階（ｄ）の混合物中のトリチウム量を測定することと（トリチウム量の減少は、検体が不可逆的にＣＹＰ２Ｃ９の活性を阻害することを示す。）
を含む、チトクロム２Ｃ９（ＣＹＰ２Ｃ９）の活性を不可逆的に阻害する検体を同定するための方法。