(57)【要約】本発明の目的は、新規ジオクタチン誘導体、及び該新規ジオクタチン誘導体の製造方法、並びにアフラトキシン生産阻害剤として有用な新規ジオクタチン誘導体、さらに、該ジオクタチン誘導体を含む前記アフラトキシン生産阻害剤を用いたアフラトキシン汚染防除方法を提供することにある。したがって、本発明は、下記構造式（Ｉ）で表されることを特徴とするジオクタチン誘導体である。【化２０】2007091528.tif 000024  ただし、前記構造式（Ｉ）中、  Ｒ１及びＲ２は、それぞれ水素原子、ＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、  ｎは２〜６の整数を表し、  Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表し、  Ｙは、２−アミノ−２−ブテン酸、及びアミノ酸残基のいずれかを表す。  ただし、Ｒ１及びＲ２がともにＣＨ３（ＣＨ２）４−であり、Ｘ２が水素原子であり、かつＹが２−アミノ−２−ブテン酸である化合物を除く。
2007091528.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式（Ｉ）で表されることを特徴とするジオクタチン誘導体。
【化１】
2007091528.tif 000019
ただし、前記構造式（Ｉ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表し、
Ｙは、２−アミノ−２−ブテン酸、及びアミノ酸残基のいずれかを表す。
ただし、Ｒ１及びＲ２がともにＣＨ３（ＣＨ２）４−であり、Ｘ２が水素原子であり、かつＹが２−アミノ−２−ブテン酸である化合物を除く。
【請求項２】
下記構造式（II）で表される請求項１に記載のジオクタチン誘導体。
【化２】
2007091528.tif 000020
ただし、前記構造式（II）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１は、水素原子及びＣＨ３のいずれかを表し、
Ｘ2は、水素原子を表し、
Ｙは、２−アミノ−２−ブテン酸、及びアミノ酸残基のいずれかを表す。
ただし、Ｒ１及びＲ２がともにＣＨ３（ＣＨ２）４−であり、かつＹが２−アミノ−２−ブテン酸である化合物を除く。
【請求項３】
アミノ酸残基が、グリシン、ザルコシン、Ｌ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ-フェニルアラニン、Ｌ−チオプロリン、及び４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンから選択されるいずれかの残基である請求項１から２のいずれかに記載のジオクタチン誘導体。
【請求項４】
下記構造式（ｂ）で表される化合物とカルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体とを縮合してジペプチド化合物を合成し、
得られた前記ジペプチド化合物のアミノ基の保護基を除去した後、下記構造式（ａ）で表される化合物と縮合してトリペプチド化合物を合成し、
得られた前記トリペプチド化合物の保護基を除去することを含むことを特徴とするジオクタチン誘導体の製造方法。
【化３】
2007091528.tif 000021
ただし、前記構造式（ａ）及び（ｂ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表す。
Ｑ１及びＱ３は、Ｂｏｃ基、カルボベンゾキシ基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、及びアリルオキシカルボニル基のいずれかを表し、
Ｑ２及びＱ４は、水素原子を表す。
【請求項５】
下記構造式（ａ）で表される化合物と、下記構造式（ｂ）で表される化合物とを縮合してジペプチド化合物を合成し、
得られた前記ジペプチド化合物のカルボキシル基の保護基を除去した後、カルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体と縮合してトリペプチド化合物を合成し、
得られた前記トリペプチド化合物の保護基を除去することを含むことを特徴とするジオクタチン誘導体の製造方法。
【化４】
2007091528.tif 000022
ただし、前記構造式（ａ）及び（ｂ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表す。
Ｑ１は、Ｂｏｃ基、カルボベンゾキシ基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、及びアリルオキシカルボニル基のいずれかを表し、
Ｑ２及びＱ３は、水素原子を表し、
Ｑ４は、水素原子、メチル基、エチル基、ベンジル基、ｔ−ブチル基、及び２，２，２−トリクロロエチル基のいずれかを表す。
【請求項６】
前記構造式（ａ）及び前記構造式（ｂ）の３位の立体配置がＳである請求項４から５のいずれかに記載のジオクタチン誘導体の製造方法。
【請求項７】
前記構造式（ａ）中、Ｘ１がＣＨ３であり、その立体配置がＲである請求項４から６のいずれかに記載のジオクタチン誘導体の製造方法。
【請求項８】
アミノ酸誘導体が、グリシン、ザルコシン、Ｌ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ-フェニルアラニン、Ｌ−チオプロリン、及び４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンのいずれかの誘導体である請求項４から７のいずれかに記載のジオクタチン誘導体の製造方法。
【請求項９】
請求項１から３のいずれかに記載のジオクタチン誘導体を含有することを特徴とするアフラトキシン生産阻害剤。
【請求項１０】
ジオクタチン誘導体が、下記構造式（III）で表される請求項９に記載のアフラトキシン生産阻害剤。
【化５】
2007091528.tif 000023
ただし、前記構造式（III）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、及び（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−のいずれかを表し、
Ｘ１は、水素原子及びＣＨ３のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｙは、アミノ酸残基を表す。
【請求項１１】
請求項９から１０のいずれかに記載のアフラトキシン生産阻害剤を用い、アフラトキシン生産菌によるアフラトキシン生産を阻害することを特徴とするアフラトキシン汚染防除方法。
【請求項１２】
アフラトキシン生産阻害剤を農作物に投与し、該農作物に感染したアフラトキシン生産菌のアフラトキシン生産を阻害する請求項１１に記載のアフラトキシン汚染防除方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ジオクタチン誘導体及びその製造方法に関し、また前記新規ジオクタチン誘導体を含むアフラトキシン生産阻害剤、さらに前記アフラトキシン生産阻害剤を用いたアフラトキシン汚染防除方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジオクタチンは、ジペプチジルアミノペプチダーゼII（ＤＰＰII）を特異的に阻害する生理活性物質として特定され、ジオクタチン生産菌（放線菌ストレプトミセス属  sp.SA−2581）の培養物から分離採取されることが知られている（特許文献１参照）。
前記特許文献１において、ジオクタチンの物性及び平面構造が明らかにされているが、その立体構造については明らかにされていない。前記特許文献１で明らかにされたジオクタチンの構造式は、下記構造式（１）で示すとおりである。【０００３】
【化６】
2007091528.tif 000003
ただし、前記構造式（１）中、Ｒは水素、及びメチル基のいずれかを表す。
前記構造式（１）中、Ｒがメチル基であるジオクタチンＡには不斉炭素が３個、Ｒが水素であるジオクタチンＢには不斉炭素が２個含まれているが、前記特許文献１には、それらの絶対構造は示されていない。【０００４】
ところで、カビの二次代謝物には、有用な化合物が含まれる一方、マイコトキシンと呼ばれる毒性を示す化合物も多い。現在、マイコトキシンによる農作物の汚染は、世界的に深刻な問題となっており、安全な食糧を安定して得るために、マイコトキシン汚染防除の手段が求められている。
マイコトキシンによる農作物の汚染のうち、最も深刻な問題となっているのが、アフラトキシンによる農作物の汚染である。アフラトキシンは、既知の天然物質中で最も強い発ガン性を有することが知られており、また、通常の調理方法等では分解されない化合物であることから、農作物汚染の規制値が１０ｐｐｂ程度と低く設けられている。このため、アフラトキシンで汚染された農作物を破棄することによる損害額も高額にのぼっている。【０００５】
アフラトキシンは二次代謝物であるため、その産生を阻害しても生産菌の生育には影響を与えないと考えられることから、アフラトキシン生産のみを特異的に阻害する化合物を利用することができれば、有効な汚染防除方法になりうると考え、公知の生理活性物質の探索を行ったところ、ジオクタチンが、アフラトキシン生産菌の生育を阻害することなく、アフラトキシン生産を阻害することが明らかになった（特許文献２）。
このように、ジオクタチンは、前記ＤＰＰII阻害活性を有する化合物として有用であるとともに、前記アフラトキシン生産阻害活性を有する化合物として有用であることが本出願人らによる前記特許文献２により明らかにされている。【０００６】
ジオクタチンを、ジオクタチン生産菌培養物から分離採取することにより製造する方法は、ジオクタチンの収率が安定しないことがあり、また培養物からの精製工程が簡便ではないという問題がある。一方、化学合成による製造方法は、ジオクタチンの絶対構造が明らかにされていないことがから、困難であった。【０００７】
これに対し、特許文献２において、本発明者らは、ジオクタチン生産菌の培養物から得られた天然ジオクタチンの平面構造に基づき、いくつかの立体異性体を化学合成し、得られた化合物の物性を比較することにより、天然ジオクタチンの立体構造を明らかにした。
ここで、ジオクタチンの化学合成の過程で得られる立体異性体や、構造類似のジオクタチン誘導体にも、天然ジオクタチンと同等乃至それ以上のＤＰＰII阻害活性、及びアフラトキシン生産阻害活性を有する新規化合物が存在することが期待されるが、このような新規ジオクタチン誘導体、及び該新規ジオクタチン誘導体の製造方法は未だ提供されていないのが現状である。【０００８】
【特許文献１】特許第２９６６８５９号公報
【特許文献２】特願２００６−０１５５３７号
【発明の開示】
【０００９】
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。
即ち、本発明は、新規ジオクタチン誘導体、及び該新規ジオクタチン誘導体の製造方法、並びに前記新規ジオクタチン誘導体のうち、ＤＰＰIIを特異的に阻害し、ＤＰＰII阻害剤として有用な新規ジオクタチン誘導体、及びアフラトキシン生産を特異的かつ効果的に阻害し、アフラトキシン生産阻害剤として有用な新規ジオクタチン誘導体、さらに、該ジオクタチン誘導体を含む前記アフラトキシン生産阻害剤を用いたアフラトキシン汚染防除方法を提供することを目的とする。
【００１０】
前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討した結果、以下の知見を得た。即ち、天然型のジオクタチン（ジオクタチンＡ及びジオクタチンＢ）を化学合成により製造する方法を確立する過程において、天然型ジオクタチンの立体異性体や構造類似の新規ジオクタチン誘導体が得られ、これら新規ジオクタチン誘導体について、アフラトキシン生産阻害活性及びＤＰＰII阻害活性をそれぞれ調べたところ、天然型ジオクタチンと同程度あるいはそれ以上の生理活性を示す化合物が存在し、そのような新規ジオクタチン誘導体は、前記天然型ジオクタチンの製造方法と同様に効率よく容易に製造できるという知見である。
【００１１】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段は、以下の通りである。即ち、
＜１＞  下記構造式（Ｉ）で表されることを特徴とするジオクタチン誘導体である。
【化７】
2007091528.tif 000004
ただし、前記構造式（Ｉ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表し、
Ｙは、２−アミノ−２−ブテン酸、及びアミノ酸残基のいずれかを表す。
ただし、Ｒ１及びＲ２がともにＣＨ３（ＣＨ２）４−であり、Ｘ２が水素原子であり、かつＹが２−アミノ−２−ブテン酸である化合物を除く。
＜２＞  下記構造式（II）で表される前記＜１＞に記載のジオクタチン誘導体である。
【化８】
2007091528.tif 000005
ただし、前記構造式（II）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１は、水素原子及びＣＨ３のいずれかを表し、
Ｘ2は、水素原子を表し、
Ｙは、２−アミノ−２−ブテン酸、及びアミノ酸残基のいずれかを表す。
ただし、Ｒ１及びＲ２がともにＣＨ３（ＣＨ２）４−であり、かつＹが２−アミノ−２−ブテン酸である化合物を除く。
＜３＞  アミノ酸残基が、グリシン、ザルコシン、Ｌ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ-フェニルアラニン、Ｌ−チオプロリン、及び４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンから選択されるいずれかの残基である前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のジオクタチン誘導体である。
【００１２】
＜４＞  下記構造式（ｂ）で表される化合物とカルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体とを縮合してジペプチド化合物を合成し、
得られた前記ジペプチド化合物のアミノ基の保護基を除去した後、下記構造式（ａ）で表される化合物と縮合してトリペプチド化合物を合成し、
得られた前記トリペプチド化合物の保護基を除去することを含むことを特徴とするジオクタチン誘導体の製造方法である。
【化９】
2007091528.tif 000006
ただし、前記構造式（ａ）及び（ｂ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表す。
Ｑ１及びＱ３は、Ｂｏｃ基、カルボベンゾキシ基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、及びアリルオキシカルボニル基のいずれかを表し、
Ｑ２及びＱ４は、水素原子を表す。
＜５＞  下記構造式（ａ）で表される化合物と、下記構造式（ｂ）で表される化合物とを縮合してジペプチド化合物を合成し、
得られた前記ジペプチド化合物のカルボキシル基の保護基を除去した後、カルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体と縮合してトリペプチド化合物を合成し、
得られた前記トリペプチド化合物の保護基を除去することを含むことを特徴とするジオクタチン誘導体の製造方法である。
【化１０】
2007091528.tif 000007
ただし、前記構造式（ａ）及び（ｂ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表す。
Ｑ１は、Ｂｏｃ基、カルボベンゾキシ基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、及びアリルオキシカルボニル基のいずれかを表し、
Ｑ２及びＱ３は、水素原子を表し、
Ｑ４は、水素原子、メチル基、エチル基、ベンジル基、ｔ−ブチル基、及び２，２，２−トリクロロエチル基のいずれかを表す。
＜６＞  前記構造式（ａ）及び前記構造式（ｂ）の３位の立体配置がＳである前記＜４＞から＜５＞のいずれかに記載のジオクタチン誘導体の製造方法である。
＜７＞  前記構造式（ａ）中、Ｘ１がＣＨ３であり、その立体配置がＲである前記＜４＞から＜６＞のいずれかに記載のジオクタチン誘導体の製造方法である。
＜８＞  アミノ酸誘導体が、グリシン、ザルコシン、Ｌ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ-フェニルアラニン、Ｌ−チオプロリン、及び４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンのいずれかの誘導体である前記＜４＞から＜７＞のいずれかに記載のジオクタチン誘導体の製造方法である。
【００１３】
＜９＞  前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載のジオクタチン誘導体を含有することを特徴とするアフラトキシン生産阻害剤である。
＜１０＞  ジオクタチン誘導体が、下記構造式（III）で表される前記＜９＞に記載のアフラトキシン生産阻害剤である。
【化１１】
2007091528.tif 000008
ただし、前記構造式（III）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、及び（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−のいずれかを表し、
Ｘ１は、水素原子及びＣＨ３のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｙは、アミノ酸残基を表す。
【００１４】
＜１１＞  前記＜９＞から＜１０＞のいずれかに記載のアフラトキシン生産阻害剤を用い、アフラトキシン生産菌によるアフラトキシン生産を阻害することを特徴とするアフラトキシン汚染防除方法である。
＜１２＞  アフラトキシン生産阻害剤を農作物に投与し、該農作物に感染したアフラトキシン生産菌のアフラトキシン生産を阻害する前記＜１１＞に記載のアフラトキシン汚染防除方法である。
【００１５】
本発明によると、従来における問題を解決することができ、新規ジオクタチン誘導体、及び該新規ジオクタチン誘導体の製造方法、並びにアフラトキシン生産阻害剤として有用な新規ジオクタチン誘導体、さらに、該ジオクタチン誘導体を含む前記アフラトキシン生産阻害剤を用いたアフラトキシン汚染防除方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（ジオクタチン誘導体）
本発明のジオクタチン誘導体は、下記構造式（Ｉ）で表される化合物である。
【化１２】
2007091528.tif 000009
【００１７】
ただし、前記構造式（Ｉ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表し、
Ｙは、２−アミノ−２−ブテン酸、及びアミノ酸残基のいずれかを表す。【００１８】
ただし、構造式（Ｉ）中、Ｒ１及びＲ２がともにＣＨ３（ＣＨ２）４−であり、Ｘ２が水素原子であり、かつＹが２−アミノ−２−ブテン酸である化合物、すなわち下記構造式（２）で表される化合物を除く。
【化１３】
2007091528.tif 000010
【００１９】
前記構造式（Ｉ）で表される化合物の中でも、下記構造式（II）で表される立体構造を有する化合物が好ましい。【００２０】
【化１４】
2007091528.tif 000011
【００２１】
ただし、前記構造式（II）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１は、水素原子及びＣＨ３のいずれかを表し、
Ｘ2は、水素原子を表し、
Ｙは、２−アミノ−２−ブテン酸、及びアミノ酸残基のいずれかを表す。【００２２】
ただし、Ｒ１及びＲ２がともにＣＨ３（ＣＨ２）４−であり、かつＹが２−アミノ−２−ブテン酸である化合物、すなわち下記構造式（３）で表される化合物を除く。
【化１５】
2007091528.tif 000012
【００２３】
前記アミノ酸残基としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、グリシン、ザルコシン、Ｌ−アラニン、β−アラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ-フェニルアラニン、Ｌ−チオプロリン、及び４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン等の残基が好ましく、グリシン、Ｌ−アラニン、及びＬ−プロリンの残基がより好ましい。【００２４】
前記構造式（Ｉ）及び（II）で表されるジオクタチン誘導体は、後述する本発明のジオクタチン誘導体の製造方法により製造される。
前記構造式（Ｉ）及び（II）で表されるジオクタチン誘導体は、アフラトキシン生産阻害活性を有する生理活性物質であることが好ましい。【００２５】
＜アフラトキシン生産阻害剤＞
本発明のアフラトキシン生産阻害剤は、前記構造式（II）に記載のジオクタチン誘導体を有効成分として含む限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した担体等のその他の成分を含んでいてもよい。
前記アフラトキシン生産阻害剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、医薬品や農園芸用製剤に用いられる公知の担体を用いて製剤化したものが挙げられ、例えば、固形剤、粉末剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤、ゲル剤、クリーム剤、及びスプレー剤等が挙げられる。
本発明のアフラトキシン生産阻害剤は、後述するアフラトキシン汚染防除方法に好適に使用される。【００２６】
前記アフラトキシン生産阻害剤の成分として好適なジオクタチン誘導体としては、例えば、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−プロリン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−Ｌ−プロリン、（Ｓ）−３−アミノヘキサノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−プロリン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−グリシン、（Ｓ）−３−アミノヘキサノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシン、（Ｓ）−３−アミノ5-メチルヘキサノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−アラニン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−バリン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−ロイシン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−フェニルアラニン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−β−アラニン、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−ザルコシン、（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ-プロリン、及び（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンなどが挙げられる。【００２７】
これらの中でも、下記構造式（III）で表されるジオクタチン誘導体が好ましい。
【化１６】
2007091528.tif 000013
【００２８】
ただし、前記構造式（III）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、及び（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−のいずれかを表し、Ｘ１は、水素原子及びＣＨ３のいずれかを表し、ｎは２〜６の整数を表し、Ｙは、アミノ酸残基を表す。【００２９】
下記表１に、好ましいジオクタチン誘導体の例を示す。
なお、下記表１中のＲ１、Ｒ２、Ｘ１、Ｘ２、及びＹは、前記構造式（II）中のＲ１、Ｒ２、Ｘ１、Ｘ２、及びＹを示す。【００３０】
【化１７】
2007091528.tif 000014
【００３１】
【表１】
2007091528.tif 000015
表１中、「Ｓ」はＳ体を表し、「Ｒ」はＲ体を表す。【００３２】
（アフラトキシン汚染防除方法）
本発明のアフラトキシン汚染防除方法は、前記本発明のアフラトキシン生産阻害剤を用い、アフラトキシン生産菌によるアフラトキシン生産を阻害する方法であり、前記アフラトキシン生産菌が付着乃至感染した対象物に対し、前記アフラトキシン生産阻害剤を投与する方法であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。【００３３】
前記対象物としては、例えば、植物体、農作物などが挙げられ、前記農作物としては、例えば、トウモロコシ、コメ、ソバ、ハトムギ等の穀類、ピーナッツ、ピスタチオナッツ、ブラジルナッツ等のナッツ類、ナツメグ、唐辛子、パプリカ等の香辛料、及びコーヒー豆等の豆類などが挙げられる。【００３４】
前記アフラトキシン生産菌が付着乃至感染した対象物に対し、前記アフラトキシン生産阻害剤を投与する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、通常の農業製剤の剤型に製剤化し、前記アフラトキシン生産菌が付着乃至感染した対象物に対して、塗布、噴霧等を行う方法が挙げられる。【００３５】
前記アフラトキシン汚染防除方法に用いられる、前記アフラトキシン生産阻害剤中の前記ジオクタチン誘導体の濃度としては、前記アフラトキシン生産菌の種類や繁殖の程度に応じて適宜調整されるが、例えば、１０〜５０，０００ｐｐｍが好ましく、１００〜５，０００ｐｐｍがより好ましい。【００３６】
（ジオクタチン誘導体の製造方法）
本発明のジオクタチン誘導体の製造方法は、（１）前記構造式（II）で表されるジオクタチン誘導体をＣ末端側から合成する第一の態様、及び（２）前記構造式（II）で表されるジオクタチン誘導体をＮ末端側から合成する第二の態様のいずれかである。【００３７】
＜第一の態様＞
前記ジオクタチン誘導体の製造方法の第一の態様は、下記構造式（ｂ）で表される化合物とカルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体とを縮合してジペプチド化合物を合成し、
得られた前記ジペプチド化合物のアミノ基の保護基を除去した後、下記構造式（ａ）で表される化合物と縮合してトリペプチド化合物を合成し、
得られた前記トリペプチド化合物の保護基を除去することを含む方法である。【００３８】
前記縮合方法、及び保護基の除去方法としては、特に制限はなく、公知の方法から適宜選択することができる。【００３９】
【化１８】
2007091528.tif 000016
【００４０】
ただし、前記構造式（ａ）及び（ｂ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表す。
Ｑ１及びＱ３は、Ｂｏｃ基、カルボベンゾキシ基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、及びアリルオキシカルボニル基のいずれかを表し、
Ｑ２及びＱ４は、水素原子を表す。【００４１】
天然型のジオクタチンを化学合成により製造する方法においては、前記天然型のジオクタチンが不飽和アミノ酸を含有するため、最終に保護基を除去する工程に接触還元を用いることが出来ないが、本発明のジオクタチン誘導体のうちアミノ酸置換体は、接触還元を用いることが出来る。
よって、カルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体（例えば、アミノ酸ベンジルエステル）に、前記構造式（ｂ）で表される化合物（例えば、３−アミノアルカン酸のＮ保護体（例えば、３-アミノ酸のＢｏｃ体））を縮合し、Ｂｏｃ基で保護されている場合には該Ｂｏｃ基をＴＦＡ又は塩酸・ジオキサンで除去し、さらに前記構造式（ａ）で表される化合物（例えば、３−アミノアルカン酸のＮ保護体（例えば、３-アミノ酸のＢｏｃ体））を縮合し、保護−トリペプチドベンジルエステルとし、Ｂｏｃ基で保護されている場合には該Ｂｏｃ基をＴＦＡで除去した後、最終脱保護に接触還元を用いてベンジルエステルを除去し、前記構造式（Ｉ）で表される本発明の新規ジオクタチン誘導体を得ることが出来る。【００４２】
前記カルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、アミノ酸ベンジルエステルｐ−トルエンスルフォン酸塩などが挙げられ、これらの中でも、グリシンベンジルエステル  ｐ−トルエンスルフォン酸塩、Ｌ−アラニンベンジルエステル  ｐ−トルエンスルフォン酸塩、及びＬ−バリンベンジルエステル  ｐ−トルエンスルフォン酸塩などが好ましい。【００４３】
前記構造式（ａ）で表される化合物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸、Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノヘキサン酸、Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノ−５-メチルヘキサン酸、及びＢｏｃ−（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸などが好ましい。【００４４】
前記構造式（ｂ）で表される化合物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸、及びＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノデカン酸などが好ましい。【００４５】
前記ジオクタチン誘導体は、トリペプチドの中央のアミノ酸がβアミノ酸であるため、通常のαアミノ酸のペプチド合成の際に起きうるラセミ化の危険性がないので、Ｃ末端からＮ末端へペプチド鎖を伸ばしていく前記第一の態様のみならず、Ｎ末端ジペプチドに第３のアミノ酸を縮合する後述の第二の態様によって製造することができる。【００４６】
＜第二の態様＞
前記ジオクタチン誘導体の製造方法の第二の態様は、下記構造式（ａ）で表される化合物と、下記構造式（ｂ）で表される化合物とを縮合してジペプチド化合物を合成し、得られた前記ジペプチド化合物とカルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体とを縮合してトリペプチド化合物を合成し、得られた前記トリペプチド化合物の保護基を除去することを含む方法である。【００４７】
前記縮合方法、及び保護基の除去方法としては、特に制限はなく、公知の方法から適宜選択することができる。【００４８】
【化１９】
2007091528.tif 000017
【００４９】
ただし、前記構造式（ａ）及び（ｂ）中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれＣＨ３−（ＣＨ２）ｎ−、（ＣＨ３）２ＣＨ−ＣＨ２−、及びＣ６Ｈ５−ＣＨ２−のいずれかを表し、
ｎは２〜６の整数を表し、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれＣＨ３及び水素のいずれかを表す。
Ｑ１は、Ｂｏｃ基、カルボベンゾキシ基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、及びアリルオキシカルボニル基のいずれかを表し、
Ｑ２及びＱ３は、水素原子を表し、
Ｑ４は、水素原子、メチル基、エチル基、ベンジル基、ｔ−ブチル基、及び２，２，２−トリクロロエチル基のいずれかを表す。【００５０】
前記構造式（ａ）で表される化合物（例えば、３−アミノアルカン酸の製造中間体である３-アミノアルカン酸エチル（例えば、３-アミノデカン酸エチル、３-アミノノナン酸エチル、３-アミノヘプタン酸エチル、３-アミノヘキサン酸エチルなど））と、前記構造式（ｂ）で表される化合物（例えば、３-アミノ酸のＢｏｃ体）とを縮合し、得られたＢｏｃジペプチドエチルエステルをケン化後、カルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体（例えば、グリシン、ザルコシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−プロリン、β−アラニンなどのｔ-ブチルエステル）と縮合し、Ｂｏｃ−トリペプチド−ｔ−ブチルエステルとして、ＴＦＡまたは塩酸・ジオキサン溶液で処理してＢｏｃ基、ｔ−ブチルエステル基を一挙に除去し、前記構造式（Ｉ）で表される本発明の新規ジオクタチン誘導体を得ることが出来る。【００５１】
前記カルボキシル基を保護したアミノ酸誘導体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、アミノ酸ｔ−ブチルエステル塩酸塩などが好ましく、これらの中でも、Ｌ−プロリン  ｔ−ブチルエステル、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩、Ｌ−アラニン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩、β−アラニン  ｔ−ブチルエステル、ザルコシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩、Ｌ−バリン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩、Ｌ−ロイシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩、及びＬ−フェニルアラニン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩などがより好ましい。【００５２】
前記構造式（ａ）で表される化合物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、（Ｓ）−３−アミノオクタン酸  エチルエステル、及び（Ｓ）−３−アミノデカン酸  エチルエステルなどが好ましい。【００５３】
前記構造式（ｂ）で表される化合物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸、Ｂｏｃ−（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸、及びＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノヘキサン酸などが好ましい。
【実施例】
【００５４】
以下に本発明の実施例を説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。【００５５】
（実施例１）
＜（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタノイル−（Ｓ）−４−アミノオクタノイル−グリシンの製造＞
Ｂｏｃ−（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸、Ｂｏｃ−３−アミノオクタン酸、及びＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイルグリシンベンジルエステルを合成し、これらを用い、以下の方法により（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンを製造した。【００５６】
〔１〕Ｂｏｃ−（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸の合成
〔１−１〕２-メチル−２−オクテン酸  エチルエステルの合成
窒素雰囲気下、水素化ナトリウム（５０％油性）3201.5mg（67.51mmol）をｎ−ヘキサンで洗浄し、無水テトラヒドロフラン（THF）80.0ｍＬを加え、氷浴で0℃に冷却し、ジエチルホスホノ酢酸エチル15.0ｍＬ（69.85mmol）をゆっくり加え、そのまま1時間攪拌した。続いて、ｎ−ヘキサナール6148.3mg（61.38mmol）の無水THF溶液10.0ｍＬを加え、室温に戻しながら1時間攪拌した。水２００ｍＬを加えて反応を止め、酢酸エチルで抽出（50ｍＬ×５）し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥、溶媒を留去した後、得られた油状の残渣をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル60N  60g、１：９酢酸エチル／ｎ−ヘキサン→１：４酢酸エチル／ｎ−ヘキサン）で精製し表題化合物（Ｅ：Ｚ＝６：１）を10557.0mg得た。収率は９３％であった。【００５７】
〔１−２〕Ｎ−ベンジル−Ｎ−（1−フェニルエチルアミノ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸エチルエステルの合成
窒素雰囲気下、氷浴で0℃に冷却した（Ｓ）−(−)−Ｎ−ベンジル−１−フェニルエチルアミン8.1ｍＬ（41.45mmol）のトルエン溶液40.5ｍＬにｎ-ブチルリチウム、1.58Mヘキサン溶液24.0ｍＬ（37.92mmol）をゆっくり加え、20分攪拌した。次にこの反応溶液をドライアイス-アセトン浴で-78℃に冷却し、前記〔１−１〕で得た２-メチル−２−オクテン酸  エチルエステル4715.8mg（25.9mmol）のトルエン溶液20.0ｍＬを加え、そのまま3時間攪拌した。
次に、無水テトラヒドロフラン（THF）180.0ｍＬを加え、続いて２,６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノール15011.5mg（72.75mmol）の無水THF溶液20ｍＬを加え，室温に温度を上げながら1時間攪拌した．この反応溶液の溶媒を留去し、水200ｍＬを加えて酢酸エチルで抽出（100ｍＬ×４）し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥、溶媒を留去した後，得られた油状の残渣をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル60N  100g，ｎ−ヘキサン→6:94エーテル／ｎ−ヘキサン）で精製し、Ｎ−ベンジル−Ｎ−（１−フェニルエチルアミノ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸エチルエステルを2535.2mg得た。収率は２５％であった。【００５８】
〔１−３〕（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸の合成
前記〔１−２〕で得たＮ−ベンジル−Ｎ−（１−フェニルエチルアミノ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸エチルエステル2106.5mg（5.33mmol）のメタノール溶液30.0ｍＬに、水2.6ｍＬ、酢酸1.6ｍＬを加えた後に、水酸化パラジウム(II)／活性炭（２０％）を261.5mg加え、反応容器を水素で置換し、室温で16時間攪拌した。この溶液を濾過し、溶媒を留去してアミノ酸のエチルエステルの粗生成物を得た。これに4M塩酸30.0ｍＬを加え85℃に加温し20時間攪拌した。その後、この反応溶液を室温に冷却し、水210.0ｍＬを加えてイオン交換樹脂（Dowex  50w×２，φ22mm×260mm）で塩化物イオンを除去し，表題化合物の粗結晶を得た。
前記〔１−２〕で得たＮ−ベンジル−Ｎ−（１−フェニルエチルアミノ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸エチルエステル2115.4mg（5.34mmol）を用いて上記の操作を再度行い、同様に表題化合物の粗結晶を得た。このようにして得られた（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸の租結晶2334.6mgをメタノール-酢酸エチルの混合溶媒に溶かし、再結晶を行い精製し、高純度の（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸を1367.8mg（1番晶  856.8mg，2番晶  230.5mg，3番晶  280.5mg，）得た。収率は７４％であった。分析値を以下に示す。【００５９】
[α]25D  +5.28(c  1.05,MeOH)
ESI  MS  m/z  174.15[M+H]+
1H  NMR(D2O,600MHz)  δ0.90(3H,t-like,J=7.8Hz,H-8),1.19(3H,d,J=7.6Hz,H-9),1.34(4H,m,H-6,7),1.39(1H,m,H-5a),1.44(1H,m,H-5b),1.66(2H,m,H-4),2.60(1H,dq,J=5.2,7.6Hz,H-2),3.43(1H,dt,J=7.4,5.2Hz,H-3)
13C  NMR(D2O,600MHz)  δ14.7,15.8,21.0,35.0,45.6,56.1,185.1【００６０】
〔１−４〕Ｂｏｃ−（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸の合成
前記〔１−３〕で得た（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸４２０ｍｇを水２．１ｍＬ、ジオキサン２．１ｍＬに溶解し、１ＭＮａＯＨ  ２．１ｍＬとＢｏｃ２Ｏ  ５０４ｍｇの２．１ｍＬジオキサン溶液を氷冷攪拌下に交互に加えた。室温で１時間攪拌後減圧濃縮し、５％ＫＨＳＯ４水溶液でｐＨを３にして、酢酸エチルで３回抽出した。酢酸エチル抽出液を水洗後無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮して残渣を１夜冷蔵すると固化し、Ｂｏｃ−（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸を得た。収量は２３８ｍｇであった。分析値を以下に示す。【００６１】
［α］Ｄ２５＝−１４．５８  （ｃ＝１、ＥｔＯＡｃ）
1H  NMR(CDCl3,600MHz)  δ0.88(3H,t,J=6.9),1.17(3H,d,J=7.2Hz),1.31(6H,m),1.44(9H,s)Boc,1.51(2H,m)4-CH2,2.68(1H,br  s)2-CH2,3.80(1H,br,s)3-CH-NHBoc,4.74(1H,br,s)NH,【００６２】
〔２〕Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンベンジルエステルの合成
〔２−１〕（Ｓ）−３−アミノオクタン酸の合成
（Ｓ）−Ｎ−ベンジル−１−フェニルエチルアミン  １０ｍＬを１５０ｍＬの脱水テトラヒドロフランに溶解し、ドライアイス−アセトンで冷却し、窒素気流下でブチルリチウム１．６Ｍヘキサン溶液２８ｍＬを滴下した。ドライアイス−アセトン冷却下３０分攪拌し、次に２−オクテン酸エチルエステル５．２ｍＬをテトラヒドロフラン２０ｍＬに溶かした溶液を滴下し、さらに２時間ドライアイス−アセトン冷却下に攪拌した。次に塩化アンモンの飽和水溶液４０ｍＬを加えて攪拌した。反応液をロータリーエバポレーターで濃縮して大半のテトラヒドロフランを留去した後、クロロフォルムで２回抽出した。クロロフォルム溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮すると付加体と過剰にあったＳ−Ｎ−ベンジル−１−フェニルエチルアミンの混合物が得られた。これをヘキサンに溶解し、ヘキサンで充填した２００ｍＬのシリカゲルカラムに注入し、ヘキサン、次いでヘキサン−エーテル５０：３で展開しＵＶ吸収でモニターし最初に出てくるＵＶ吸収を示す分画を集めて濃縮すると６．２ｇの付加体が得られた。【００６３】
得られた前記付加体を水１６ｍＬ、酢酸４ｍＬ、メタノール８０ｍＬの混合液にとかし、１０％水酸化パラジウム−炭素８８０ｍｇを加え水素圧４０ｐｓｉで１６時間還元して、３−アミノオクタン酸エチルエステルとした。触媒を濾過して除き残渣を濃縮した後４Ｎ塩酸６０ｍＬを加えて８０度１６時間加水分解した。反応液を濃縮して大部分の塩酸を除去した後水に溶かしてイオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０（Ｈ型）１００ｍＬカラムに吸着させ、水洗後、２Ｎアンモニア水で溶出した。溶出液を分画し、ニンヒドリン反応陽性の分画を集め濃縮乾固すると１．９ｇの（Ｓ）−３−アミノオクタン酸が無色固体として得られた。分析値を以下に示す。【００６４】
［α］Ｄ２１  ＋２９．１  （ｃ＝１、Ｈ２Ｏ）
（文献値）［α］Ｄ２１＋３１．１  （ｃ＝１．１１、Ｈ２Ｏ）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．３４巻４５５−４５６頁（１９９５年）
ＮＭＲ  (D2O)400MHz0.7(3H,t)1.1〜1.3(6H,m)1.5(2H,q)2.25(1H,q)2.4(1H,q)3.3(1H,m)【００６５】
〔２−２〕（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノオクタン酸の合成
前記〔２−１〕で得た（Ｓ）−３−アミノオクタン酸９３０ｍｇを水５．８４ｍＬ、ジオキサン５．８４ｍＬに溶解し、１ＭＮａＯＨ５．８４ｍＬとＢｏｃ２Ｏ１４０７ｍｇの５．８４ｍＬジオキサン溶液を氷冷攪拌下に交互に加えた。室温で１時間攪拌後減圧濃縮し、５％ＫＨＳＯ４水溶液でｐＨを３にして、酢酸エチルで３回抽出した。酢酸エチル抽出液を水洗後無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮して残渣を１夜冷蔵すると固化し、（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノオクタン酸が得られた。収量は１４７２ｍｇであった。分析値を以下に示す。【００６６】
1H  NMR  (CDCl3,600MHz)  δ0.87(3H,t-like,J=6.9Hz,H-8),1.22-1.37(6H,m),1.43(9H,Boc),1.51(2H,q,H-4),2.55(2H,m,H-2),3.89(1H,mH-3)【００６７】
〔２−３〕Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンベンジルエステルの合成
前記〔２−２〕で得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸３００ｍｇ、グリシンベンジルエステルのｐ−トルエンスルフォン酸塩４３０ｍｇ、Ｂｏｐ試薬５６２ｍｇ、ＨＯＢＴ１７２ｍｇ、をＤＭＦ２ｍＬに溶解しＴＥＡ  ０．５１８ｍＬを加えて１夜攪拌した。反応液に酢酸エチル５０ｍＬを加えて、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後濃縮乾固して４６６ｍｇのＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンベンジルエステルを得た。分析値を以下に示す。【００６８】
1H  NMR  (DMSO,600MHz)δ0.87(3H,t,J=7.0),1.27(6H,m),1.43(9H,s)Boc,1.51(2H,br-q,J=7.2)4-CH2,2.43(1H,dd,J=5.8,14.9),2.46(1H.Br  d,J=13.9),3.84(1H,m),4.06(2H,ABtype),5.08(1H,br  s)NH,5.18(2H,s)  -O-CH2-Ph,6.35(1H,br  s)NH,7.36(5H,m)Ph,【００６９】
〔３〕（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンの製造
前記〔２〕で得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンベンジルエステル２２１ｍｇを４ｍＬトリフロロ酢酸に溶解し室温1時間放置後減圧で濃縮乾固した。残渣にトルエン４ｍＬを加え再度減圧で濃縮乾固し（Ｓ）−３−アミノオクタノイルグリシンベンジルエステルとした。これに前記〔１〕で得たＢｏｃ−（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタン酸１５５．３ｍｇとＢｏｐ試薬２６６ｍｇ、ＨＯＢｔ８２ｍｇを加えて２ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。氷冷下攪拌してトリエチルアミン２５７μＬを加え、３０分後に室温に戻して１６時間攪拌した。反応液に５０ｍＬの酢酸エチルを加えて分液ロートに取り、同量の１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄して、無水硫酸ナトリウムで1時間乾燥してから減圧で濃縮乾固し２９２ｍｇのＢｏｃ−（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−２−メチルオクタノイル−（Ｓ）−４−アミノオクタノイル−グリシンベンジルエステルを得た。次にこれを４ｍＬのトリフロロ酢酸に溶解し室温1時間放置後減圧で濃縮乾固した。これを１０ｍＬのメタノールに溶解し、パラジウム黒２０ｍｇを加え水素気流中1時間攪拌してベンジルエステルを加水素分解した。触媒を濾過後減圧で濃縮乾固し残渣をクロロフォルム−メタノール−アンモニア水１００：２０：１に溶解し、１００ｍＬのシリカゲルカラムに注ぎ、前記混合溶媒で展開し次いで１００：３０：１で展開して目的物質を精製した。分析値を以下に示す。【００７０】
1H  NMR(DMSO,600MHz)  δ0.85(3H,t,J=7.2),0.87(3H,t,J=7.2),1.07(3H,d,J=7.0),1.26(11H,m),1.37(2H,m),1.47(3H,m),2.27(2H,d,J=6.9),2.50(1H,m),3.20(1H,m),3.73(2H,ABtype)q-like,4.04(1H,m),7.80(3H,br  d),8.00(1H,d,J=8.5),8.18(1H,t,J=5.9),【００７１】
（実施例２）
＜（Ｓ）−３−アミノヘキシル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンの製造＞
以下の方法により、Ｂｏｃ−（３Ｓ）−３−アミノヘキサン酸を合成し、実施例１と同様にしてＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンベンジルエステルを合成
し、これらを用い、以下の方法により（Ｓ）−３−アミノヘキシル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンを製造した。【００７２】
〔１〕Ｂｏｃ−（３Ｓ）−３−アミノヘキサン酸の合成
実施例１の〔２−１〕（Ｓ）−３−アミノオクタン酸の合成において、２−オクテン酸エチルエステルの代わりに２−ヘキセン酸エチルエステルを用いた以外は同様にして、S-３−アミノヘキサン酸を合成した。次いで、Ｂｏｃ２Ｏを用い、実施例１の〔２−２〕と同様にしてＢｏｃ−（３Ｓ）−３−アミノヘキサン酸を合成した。【００７３】
〔２〕（Ｓ）−３−アミノヘキシル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンの製造
実施例１と同様にして得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイルグリシンベンジルエステルと、前記〔１〕で得たＢｏｃ−（３Ｓ）−３−アミノヘキサン酸とを、実施例１と同様に処理して、（Ｓ）−３−アミノヘキシル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンを得た。分析値を以下に示す。【００７４】
1H  NMR(D2O,600MHz)δ  0.85(3H,t,J=7.2),0.87(3H,t,J=7.2),1.20,1.25,1.34(9H,m),1.48(3H,m),2.28(2H,ABtype),2.35(1H,dd,J=6.8,15.4),2.44(1H,dd,j=5.9,15.5),3.37(1H,m),3.73(2H,ABtype),4.08(1H,m),7.79(3H,br  s),8.00(1H,d,J=8.6),8.22(1H,t,J=5.9)【００７５】
（実施例３）
＜（Ｓ）−３−アミノ−５−メチルヘキシル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンの製造＞
実施例１の〔２−３〕と同様にして得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンベンジルエステルと、Ｂｏｃ−（３Ｓ）−３−アミノ−５−メチルヘキサン酸（アルドリッチ社製、Ｂｏｃ−β−ｈｏｍｏｌｅｕｃｉｎｅ）とを、実施例１と同様に処理して、（Ｓ）−３−アミノ−５−メチルヘキシル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンを得た。分析値を以下に示す。【００７６】
1H  NMR(D2O,600MHz)  δ0.86(9H,m),1.20-1.25(7H,m),1.32(1H,m),1.42(1H,m),1.46(1H,m),1.79(1H,m),2.28(2H,ABtype),2.35(1H,dd,J=6.4,15.4),2.43(1H,dd,j=5.9,15.3),3.41(1H,m),3.73(2H,ABtype),4.08(1H,m),7.77(3H,br  s),8.01(1H,d,J=8.6),8.22(1H,t,J=5.9)【００７７】
（実施例４）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンの製造＞
以下の方法により合成したＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸と、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩とを用い、以下の方法により（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンを製造した。【００７８】
〔１〕Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸の合成
〔１−１〕（Ｓ）−３−アミノオクタン酸エチルエステル塩酸塩の合成
実施例１の〔２−１〕（Ｓ）−３−アミノオクタン酸の合成において、還元工程の生成物を加水分解せず、１等量の塩化水素・ジオキサン溶液を加えて濃縮後クロロフォルムに溶解し、シリカゲルカラムでクロロフォルム−メタノール１５：１で精製することにより、（Ｓ）−３−アミノオクタン酸エチルエステル塩酸塩を、微かに着色した吸湿性固体として得た。【００７９】
〔１−２〕Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸  エチルエステルの合成
前記〔１−１〕で得た（Ｓ）−３−アミノオクタン酸エチルエステル塩酸塩２６０ｇ、実施例１の〔１−２〕と同様にして得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸２５１ｍｇ、Ｂｏｐ試薬４７１ｍｇ、及びＨＯＢｔ１４４ｍｇをＤＭＦに３ｍＬに溶解し、４３４μＬのトリエチルアミンを加えて１６時間攪拌した。反応液を定法どおり酸、アルカリで洗浄後乾燥し、濃縮乾固して粗製のＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸  エチルエステルを得た。これをシリカゲルカラム（クロロフォルムで精製した。分析値を以下に示す。【００８０】
1H  NMR(４ｄ−ＭｅＯＨ，600MHz)  ae;0.90(3H,t,J=7.0Hz),1.24(3H,t,J=7.2Hz),1.32(13H,m,),1.43(9H,s,Boc),1.4-1.55(3H,m),2.26(1H,dd,J=13.8,7.0),2.31(1H,dd,J=6.8,13.9),2.45(2H,AB  type  m),3.81(1H,m),4.11(2H,dq,J=7.1,2.0Hz),4.18(1H,m),【００８１】
〔１−３〕Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタン酸の合成
前記〔１−２〕で得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタン酸  エチルエステル２４８ｍｇを、メタノール８ｍＬに溶解し、５ＮＮａＯＨ５８２μＬを加えて攪拌した。７時間後、５Ｎ塩酸５８２μＬを加えて中和した後濃縮し、少量のメタノールに溶解し、セファデックスＬＨ２０の２００ｍＬのカラムで精製し、Ｂｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸を得た。分析値を以下に示す。【００８２】
1H  NMR(４ｄ−ＭｅＯＨ，600MHz)  δ0.90(3H,t,J=7.1Hz),1.32(13H,m,),1.43(9H,s,Boc),1.47(2H,m),1.55(1H,m),2.27(1H,dd,J=13.9,7.0),2.32(1H,dd,J=6.9,13.9),2.42(1H,dd  J=15.6,6.8),2.46(1H,dd,J=6.5,15.7),3.82(1H,m),4.17(1H,m),
1H  NMR(CDCl3,600MHz)  δ0.86(6H,t-like,J=6.7Hz),1.28(14H,m),1.42(9H,s,Boc),1.54(2H,m),2.40(2H,m),2.54(2H,m),3.81(1H,m),4.21(1H,m),4.06(1H,br  s.),6.49(1H,d,J=14.6NH)【００８３】
〔２〕（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシンの製造
前記〔１〕で得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸２３８ｍｇ、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、カタログ番号３４７９５７−５Ｇ）１１２０ｍｇ、Ｂｏｐ試薬２９０ｍｇ、及びＨＯＢｔ８９ｍｇをＤＭＦに２ｍＬに溶解し、２６７μＬのトリエチルアミンを加えて１６時間攪拌した。反応液を定法どおり酸、アルカリで洗浄後乾燥して濃縮乾固すると粗製のＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−グリシン  ｔ−ブチルエステルが得られた。これをトリフロロ酢酸４ｍＬに溶解し１時間室温で攪拌後濃縮乾固した。これをシリカゲルカラム（クロロフォルム−メタノール−アンモニア水  １００：２０：１、１００：３０：１）で精製した。分析値を以下に示す。【００８４】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)  δ0.85(3H,t,J=7.1Hz),0.87(3H,t,J=7.1Hz),1.26(13H,m,),1.48(3H,m),2.28(2H,m  AB  type),2.35(1H  dd,J=6.6,15.4),2.44(1H,dd,J=6.1,15.5),3.37(1H,m),3.73(2H,m  AB  type),4.08(1H,m),7.78(3H,br  s,NH3+),8.00(1H,d,J=8.6NH),8.21(1H  t,J=5.8NH)
13C  NMR(DMSO-6d+TFA,150MHz)  δ13.8,13.9,21.9,22.1,24.1,25.1,30.0,31.2,32.0,33.5,37.2,40.6,48.4,168.7,170.4,171.4【００８５】
（実施例５）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−ザルコシンの製造＞
実施例４において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をザルコシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩（Aldrich社製、４６０６１３−５Ｇ）に代えた以外は同様にして、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−ザルコシンを製造した。分析値を以下に示す。【００８６】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)  δ0.85(3H,t,J=7.1Hz),0.87(3H,t,J=7.1Hz),1.26(13H,m,),1.50(3H,m),2.28+2.43(2H,m  AB  type),2.35(1Hm),2.44(1H,dd,J=6.1,15.5),2.52(1H,m),2.81+3.01(3H,s,N-CH3,cis  and  trans),3.37(1H,m),3.97(1H,dd,J=17.1,40.0),4.13(1H,dd,J=18.6,35.0),7.79(3H  br  s,NH3+),8.01(1H,dd,J=8.5,21.6NH)【００８７】
（実施例６）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−アラニンの製造＞
実施例４において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をＬ−アラニン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩（国産化学社、商品コード２５１７０４）に代えた以外は同様にして、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−ザルコシンを製造した。分析値を以下に示す。【００８８】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)δ  0.85(3H,t,J=7.1Hz),0.87(3H,t,J=7.1Hz),1.26(13H,m,),1.26(3H,d,J=7.3Hz  Ala-CH3),1.48(3H,m),2.26(2H,m  AB  type),2.35(1H  dd,J=6.2,15.4Hz),2.43(1H,dd,J=6.2,15.4Hz),3.37(1H,m),4.08(1H,m),4.19(1H,q,J=7.3Hz),7.79(3H,br  s,NH3+),8.00(1H,d,J=8.8HzNH),8.18(1H,d,J=7.2Hz)【００８９】
（実施例７）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−β−アラニンの製造＞
実施例４において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をβ−アラニン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩に代えた以外は同様にして、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−β−アラニンを製造した。【００９０】
β−アラニン  ｔ−ブチルエステルはアクリル酸  ｔ−ブチルエステル１．７６ｇをジオキサン１６ｍＬに溶かし、濃アンモニア水４ｍＬを加えて室温２０時間攪拌し、減圧濃縮後シリカゲルクロマトグラフィー、クロロフォルム−メタノール２０：１で精製して油状物質として得た。（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−β−アラニンの分析値を以下に示す。【００９１】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)  δ0.85(3H,t,J=7.1Hz),0.87(3H,t,J=7.1Hz),1.25(13H,m,),1.47(3H,m),1.91(2H,s  CH2CH2COOH),2.28(2H,m  AB  type),2.35(1H  dd,J=6.4,15.2Hz),2.35(1H,dd,J=6.3,15.4Hz),3.37(1H,m),3.73(2H,m  AB  typeCH2CH2COOH),4.07(1H,m),7.78(3H,br  s,NH3+),7.99(1H,d,J=8.6Hz  NH),8.21(1H,t,J=5.9Hz)【００９２】
（実施例８）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−プロリンの製造＞
実施例４において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をＬ−プロリン  ｔ−ブチルエステル(国産化学、商品コード２５１７３０２)に代えた以外は同様にして、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−プロリンを製造した。分析値を以下に示す。【００９３】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)  δ0.85(3H,t,J=7.0),0.87(3H,t,J=7.0),1.25(13H,m),1.51(3H,m),1.7-2.5(m,8H),3.37-3.52(3H),4.09(1H,m),4.20(0.75H,dd,J=3.9,8.8),4.49(0.25H,dd,J=2.5,8.8),7.78(3H,br  s),8.02(0.25H,d,J=8.6),8.05(0.75H,d,J=8.7),【００９４】
（実施例９）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−バリンの製造＞
実施例４において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をＬ−バリン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩(国産化学、商品コード２５１７３７０)に代えた以外は同様にして、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−バリンを製造した。分析値を以下に示す。【００９５】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)  δ0.85(3H,t,J=7.1),0.88(9H,m),1.25(13H,m),1.42(1H,m),1.49(2H,m),2.03(1H,m)Val-3,2.27(1H,dd,J=6.1,14.0),2.36(2H,m),2.44(1H,dd,j=6.2,15.4),3.37(1H,m),4.09(1H,m),4.16(1H,dd,J=5.9,8.5),7.79(3H,br  s),8.00(1H,d,J=8.6),8.04(1H,d,J=8.6),【００９６】
（実施例１０）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−ロイシンの製造＞
実施例４において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をＬ−ロイシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩(国産化学、商品コード２５１７７２８)に代えた以外は同様にして、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−ロイシンを製造した。分析値を以下に示す。【００９７】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)  δ0.84(3H,d,J=6.7),0.85(3H,t,J=7.3),0.87(3H,t,J=7.1),0.90(3H,d,J=6.6),1.25(13H,m),1.41(1H,m),1.51(4H,m),1.64(1H,m),2.27(2H,m),2.34(1H,dd,J=6.5,15.3),2.44(1H,dd,j=6.2,15.3),3.37(1H,m),4.08(1H,m),4.23(1H,m),7.79(3H,br  d(J=4.0)),8.01(1H,d,J=8.6),8.16(1H,d,J=8.1),【００９８】
（実施例１１）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−フェニルアラニンの製造＞
実施例４において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をＬ−フェニルアラニン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩(国産化学、商品コード２５１７２５６)に代えた以外は同様にして、（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−Ｌ−フェニルアラニンを製造した。分析値を以下に示す。【００９９】
1H  NMR(DMSO-6d+TFA,600MHz)  δ0.84(3H,t,J=7.2),0.87(3H,t,J=7.1),1.09+1.17+1.22+1.27(14H,m),1.48(2H,m),2.19(1H,dd,J=8.5,14.1),2.23(1H,dd,j=5.5,14.1),2.33(1H,dd,J=6.6,15.4),2.41(1H,dd,j=6.2,15.4),2.85(1H,dd,J=9.7,13.9)Phe-b,3.07(1H,dd,J=4.8,13.9)  Phe-b,3.36(1H,m),3.99(1H,m),4.48(1H,m),7.24(5H,m),7.78(3H,br  d,(J=3.8)),7.94(1H,d,J=8.7),8.23(1H,t,J=8.3),【０１００】
（実施例１２）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−グリシンの合成＞
実施例１の〔１−２〕で得たＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタン酸と、以下の方法により合成した（Ｓ）−３−アミノデカン酸  エチルエステル  とからＢｏｃ−（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカン酸を合成し、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩とを用い、実施例４と同様にして（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−グリシンを製造した。【０１０１】
〔（Ｓ）−３−アミノデカン酸  エチルエステルの合成〕
実施例１の（Ｓ）−３−アミノオクタン酸の合成において、２−オクテン酸の代わりに２−デセン酸  エチルエステル（東京化成工業商品コードＤ２７６７）を用いて不斉アミンを付加後、接触還元をして粗製の３−アミノデカン酸  エチルエステルを得た。これを計算量の塩酸で塩酸塩として、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロフォルム−メタノール１５：１)で精製した。【０１０２】
（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−グリシンの分析値を以下に示す。
1H  NMR(D2O,600MHz)  δ0.86(3H,t,J=7.1),0.87(3H,t,J=7.1),1.24(17H,m),1.48(3H,m),2.28(2H,ABtype),2.35(1H,dd,J=6.5,15.4),2.43(1H,dd,j=6.3,15.4),3.38(1H,m),3.73(2H,AB  type),4.07(1H,m),7.79(3H,br  s),7.99(1H,d,J=8.5),8.21(1H,t,J=5.9)【０１０３】
（実施例１３）
＜（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−Ｌ−プロリンの合成＞
実施例１２の（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−グリシンの合成において、グリシン  ｔ−ブチルエステル塩酸塩をＬ−プロリン  ｔ−ブチルエステルに代えた以外は実施例１２と同様にして（Ｓ）−３−アミノオクタノイル−（Ｓ）−３−アミノデカノイル−Ｌ−プロリンを製造した。分析値を以下に示す。【０１０４】
1H  NMR(D2O,600MHz)  δ0.86(3H,t,J=7.2),0.87(3H,t,J=7.1),1.24(17H,m),1.51(3H,m),1.7-2.36(m,7H),2.44(1H,dd,5.8,15.3),3.37-3.52(3H),4.08(1H,m),4.20(0.75H,dd,J=3.9,8.7),4.49(0.25H,dd,J=2.5,8.5),7.79(3H,br  s),8.01(0.25H,d,J=8.6),8.04(0.75H,d,J=8.6),【０１０５】
（実施例１４）
＜アフラトキシン生産阻害活性の評価＞
−アフラトキシン生産菌の胞子懸濁液の調製−
アフラトキシン生産菌として、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ  ＮＲＲＬ２９９９を、ポテトデキストロース寒天培地（ＰＤＡ培地、日水製薬社製）の斜面培地上で、２７℃で１４日間培養後、その菌叢より胞子を白金耳で掻きとり、０．０１％のＴｗｅｅｎ  ８０（Ｓｉｇｍａ社製）水溶液に懸濁して胞子懸濁液を調製した。
前記胞子懸濁液の希釈液を、ＰＤＡ培地上に塗布して２日間培養した後、出現したコロニー数を懸濁液中の胞子数とした。【０１０６】
−アフラトキシン生産阻害剤活性の測定−
オートクレーブしたＰＤ液体培地（ＤＩＦＣＯ社製）１ｍＬに、実施例１、４、５、６、７、８、及び１２で得たジオクタチン誘導体（アフラトキシン生産阻害剤）を、０〜２０μｇ／ｍＬとなるように無菌的に添加したものに、前記アフラトキシン生産菌の胞子懸濁液を、１０μＬ（１．９×１０４ＣＦＵ）ずつ植菌し、これを、２７℃で３日間静置培養した。その際、培養容器として２４ウェルプレート（IWAKI製）を使用し、各アフラトキシン生産阻害剤は、メタノール−塩酸（容量比＝１００：０．００９）溶液２０μＬとして添加した。
得られた各培養液５０μＬを蒸留水で１０００倍希釈し、希釈液５０μＬに含まれるアフラトキシン（アフラトキシンB1,B2,G1,G2の合計）量を市販のELISAキット（RIDASCREEN  FAST  Aflatoxin,  r-biopharm社製）で定量した。実験は三連で行い、各濃度の阻害剤を添加して得られた培養液３サンプルに含まれるアフラトキシン量の平均（Ｂ）、無添加の場合のアフラトキシン量（Ａ）より阻害％[(（Ａ）−（Ｂ）)／（Ａ）×１００]を算出した。得られた各濃度での阻害％をもとに表に示したＩＣ５０値（５０％阻害濃度）を計算した。結果を表２に示す。
なお、参考例として、化学合成により製造した天然型の立体構造のジオクタチンＡ（参考例１）及びジオクタチンＢ（参考例２）の結果をあわせて示す。【０１０７】
【表２】
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【０１０８】
表２の結果から、本発明のジオクタチン誘導体は、天然型の立体構造のジオクタチンと同様に優れたアフラトキシン生産阻害活性を有し、特に、実施例４で得たグリシンで置換されたジオクタチン誘導体、並びに実施例６及び実施例８で得たＬ体のアミノ酸残基で置換されたジオクタチン誘導体は、きわめて優れたアフラトキシン生産阻害活性を示すことがわかった。
【産業上の利用可能性】
【０１０９】
本発明のジオクタチン誘導体は、アフラトキシン生産阻害剤として有用であり、アフラトキシン生産菌が付着乃至感染した各種対象物に投与することにより、簡便にアフラトキシン生産を阻害することができ、本発明のアフラトキシン汚染防除方法に好適に用いられ、特に、植物体、及び農作物に対するアフラトキシン汚染防除方法に好適である。
【国際調査報告】
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