【手続補正書】
【提出日】令和1年7月18日(2019.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上の核酸活性剤を含む脂質ナノ粒子の固体の凍結乾燥物を作製するための組成物であって、 
薬学的に許容可能な溶液における脂質ナノ粒子の水性懸濁液、ここで、脂質ナノ粒子は１以上の核酸活性剤を封入する； 
デキストリン化合物；および 
サッカライド糖化合物 
を含む、前記組成物。 
【請求項２】
デキストリンおよび糖化合物の総量が、組成物の２％〜２０％（ｗ／ｖ）である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項３】
デキストリン化合物が、デキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜７０％（ｗ／ｖ）である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項４】
デキストリン化合物が、デキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜５５％（ｗ／ｖ）である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項５】
デキストリン化合物が、デキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜４５％（ｗ／ｖ）である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項６】
組成物の凍結乾燥および再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化が、元の組成物におけるそれらの大きさの１０％以内である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項７】
組成物の凍結乾燥、保存および再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化が、元の組成物におけるそれらの大きさの１０％以内である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項８】
凍結乾燥された組成物が、５℃で少なくとも１ヶ月間保存される、請求項７に記載の組成物。 
【請求項９】
凍結乾燥された組成物が、−２０℃で少なくとも１ヶ月間保存される、請求項７に記載の組成物。 
【請求項１０】
ナノ粒子が、４５ｎｍ〜１１０ｎｍの平均的な直径を有する、請求項１に記載の組成物。 
【請求項１１】
核酸活性剤の濃度が、１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の組成物。 
【請求項１２】
脂質ナノ粒子が、化合物Ａ６、化合物Ａ９、化合物ＡＡ、化合物ＡＢ、化合物Ｃ２、化合物Ｆ５、化合物Ｆ７、化合物Ｃ２４、およびＨＥＤＣから選択される化合物を含む、請求項１に記載の組成物。 
【請求項１３】
１以上の核酸活性剤が、ＲＮＡ干渉を仲介することが可能なＲＮＡｉ分子である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項１４】
ＲＮＡｉ分子が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｄｄＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、またはｒａｓｉＲＮＡである、請求項１３に記載の組成物。 
【請求項１５】
１以上の核酸活性剤が、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、プラスミド、ハイブリッドオリゴヌクレオチド、またはアプタマーである、請求項１に記載の組成物。 
【請求項１６】
薬学的に許容可能な溶液が、ＨＥＰＥＳ緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを含有する緩衝液である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項１７】
デキストリン化合物がシクロデキストリンである、請求項１に記載の組成物。 
【請求項１８】
シクロデキストリン化合物が、スルホアルキル、ベンゼンスルホアルキル、アセトアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルスクシナート、ヒドロキシアルキルマロナート、ヒドロキシアルキルグルタラート、ヒドロキシアルキルアジパート、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルマレアート、ヒドロキシアルキルオキサラート、ヒドロキシアルキルフマラート、ヒドロキシアルキルシトラート、ヒドロキシアルキルタルトラート、ヒドロキシアルキルマラート、またはヒドロキシアルキルシトラコナート基で置換された１以上の２，３および６ヒドロキシル位置を有する、請求項１７に記載の組成物。 
【請求項１９】
シクロデキストリン化合物が、（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンスクシナート、（２−ヒドロキシプロピル）−γ−シクロデキストリン、または２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンスクシナートである、請求項１７に記載の組成物。 
【請求項２０】
シクロデキストリン化合物が、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルγ−シクロデキストリンである、請求項１７に記載の組成物。 
【請求項２１】
シクロデキストリン化合物が、メチル−β−シクロデキストリンまたはメチル−γ−シクロデキストリンである、請求項１７に記載の組成物。 
【請求項２２】
シクロデキストリン化合物が、ポリマー鎖またはネットワークに結合されている、請求項１７に記載の組成物。 
【請求項２３】
シクロデキストリン化合物が吸着化合物を含む、請求項１７に記載の組成物。 
【請求項２４】
吸着化合物が、コレステロール、ラノステロール、ジモステロール、ジモステノール、デスモステロール、スティグマスタノール、ジヒドロラノステロール、７−デヒドロコレステロール、ＰＥＧ化コレステロール、コレステリルアセタート、コレステリルアラキドナート、コレステリルブチラート、コレステリルヘキサノアート、コレステリルミリスタート、コレステリルパルミタート、コレステリルベヘナート、コレステリルステアラート、コレステリルカプリラート、コレステリルｎ−デカノアート、コレステリルドデカノアート、コレステリルネルボナート、コレステリルペラルゴナート、コレステリルｎ−バレラート、コレステリルオレアート、コレステリルエライダート、コレステリルエルカート、コレステリルヘプタノアート、コレステリルリノレライダート、コレステリルリノレアート、ベータ−シトステロール、カンペステロール、エルゴステロール、ブラッシカステロール、デルタ−７−スチグマステロール、およびデルタ−７−アベナステロールから選択される、請求項２３に記載の組成物。 
【請求項２５】
サッカライド糖化合物が、モノサッカライドまたはジサッカライド糖化合物である、請求項１に記載の組成物。 
【請求項２６】
糖化合物が、スクロース、ラクトース、ラクツロース、マルトース、トレハロース、セロビオース、コウジビオース、サケビオース、イソマルトース、ソホロース、ラミナリビオース、ゲンチオビオース、ツラノース、マルツロース、イソマルツロース、ゲンチオビウロース、マンノビオース、メリビオース、メリビウロース、およびキシロビオースから選択される、請求項２５に記載の組成物。 
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の組成物を凍結乾燥することを含む、１以上の核酸活性剤の固体の凍結乾燥物を作製するためのプロセス。 
【請求項２８】
請求項２７に記載のプロセスによって作製された、固体の凍結乾燥物。 
【請求項２９】
請求項２７に記載の固体の凍結乾燥物を再構成することを含む、製剤を作製するためのプロセス。 
【請求項３０】
請求項２９に記載のプロセスによって作製された、製剤。 
【請求項３１】
脂質ナノ粒子を合成すること、ここで脂質ナノ粒子は１以上の核酸活性剤を封入する；
薬学的に許容可能な溶液における脂質ナノ粒子の水性懸濁液を提供すること；
デキストリン化合物を脂質ナノ粒子を含有する溶液に加えること；
サッカライド糖化合物を脂質ナノ粒子を含有する溶液に加えること； 
脂質ナノ粒子を含有する溶液を凍結乾燥し、それによって固体の凍結乾燥物を形成することを含む、固体の凍結乾燥物を作製するためのプロセス。 
【請求項３２】
デキストリンおよびサッカライド糖化合物の総量が、脂質ナノ粒子を含有する溶液の２％〜２０％（ｗ／ｖ）である、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項３３】
デキストリン化合物が、デキストリンおよびサッカライド糖化合物の総量の４０％〜７０％（ｗ／ｖ）である、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項３４】
デキストリン化合物が、デキストリンおよびサッカライド糖化合物の総量の４０％〜５５％（ｗ／ｖ）である、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項３５】
デキストリン化合物が、デキストリンおよびサッカライド糖化合物の総量の４０％〜４５％（ｗ／ｖ）である、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項３６】
ナノ粒子が４５ｎｍ〜１１０ｎｍの平均的な直径を有する、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項３７】
核酸活性剤の濃度が１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬである、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項３８】
１以上の核酸活性剤が、ＲＮＡ干渉を仲介することが可能なＲＮＡｉ分子である、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項３９】
デキストリン化合物がシクロデキストリンである、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項４０】
シクロデキストリン化合物が、スルホアルキル、ベンゼンスルホアルキル、アセトアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルスクシナート、ヒドロキシアルキルマロナート、ヒドロキシアルキルグルタラート、ヒドロキシアルキルアジパート、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルマレアート、ヒドロキシアルキルオキサラート、ヒドロキシアルキルフマラート、ヒドロキシアルキルシトラート、ヒドロキシアルキルタルトラート、ヒドロキシアルキルマラート、またはヒドロキシアルキルシトラコナート基で置換された１以上の２，３および６ヒドロキシル位置を有する、請求項３９に記載のプロセス。 
【請求項４１】
シクロデキストリン化合物が、（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンスクシナート、（２−ヒドロキシプロピル）−γ−シクロデキストリン、または２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリンスクシナートである、請求項３９に記載のプロセス。 
【請求項４２】
シクロデキストリン化合物が、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンまたはスルホブチルエーテルγ−シクロデキストリンである、請求項３９に記載のプロセス。 
【請求項４３】
シクロデキストリン化合物が、メチル−β−シクロデキストリンまたはメチル−γ−シクロデキストリンである、請求項３９に記載のプロセス。 
【請求項４４】
シクロデキストリン化合物が吸着化合物を含む、請求項３９に記載のプロセス。 
【請求項４５】
サッカライド糖化合物が、モノサッカライドまたはジサッカライド糖化合物である、請求項３１に記載のプロセス。 
【請求項４６】
組成物の凍結乾燥および再構成時、０．２μｍ超の大きさを有する凝集粒子が、０．００１％（ｗ／ｖ）未満である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４７】
核酸製剤が、６カ月の保存期間後に再構成され、少なくとも８０％の活性を保持する、請求項７に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
デキストリンおよび糖化合物の総量が、組成物の２％〜２０％（ｗ／ｖ）である、上記の組成物。 
デキストリン化合物が、デキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜７０％（ｗ／ｖ）である、上記の組成物。 
デキストリン化合物が、デキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜５５％（ｗ／ｖ）である、上記の組成物。 
デキストリン化合物が、デキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜４５％（ｗ／ｖ）である、上記の組成物。 
組成物の凍結乾燥および再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化が、元の組成物におけるそれらの大きさの１０％以内である、上記の組成物。 
組成物の凍結乾燥、保存および再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化が、元の組成物におけるそれらの大きさの１０％以内である、上記の組成物。 
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化が、合成されたときのそれらの大きさの１０％以内である、上記のプロセス。 
凍結乾燥物を再構成前に保存することをさらに含む、上記のプロセス。 
凍結乾燥物の保存および再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化が、合成されたときのそれらの大きさの１０％以内である、上記のプロセス。 
凍結乾燥物が５℃で少なくとも１ヶ月間保存される、上記のプロセス。 
凍結乾燥物が−２０℃で少なくとも１ヶ月間保存される、上記のプロセス。 
ナノ粒子が４５ｎｍ〜１１０ｎｍの平均的な直径を有する、上記のプロセス。 
核酸活性剤の濃度が１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬである、上記のプロセス。 
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
いくつかの態様において、デキストリン化合物は、保護剤組成物におけるデキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜７０％（ｗ／ｖ）であり得る。一定の態様において、デキストリン化合物は、保護剤組成物におけるデキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜５５％（ｗ／ｖ）であり得る。さらなる態様において、デキストリン化合物は、保護剤組成物におけるデキストリンおよび糖化合物の総量の４０％〜４５％（ｗ／ｖ）であり得る。これらの組成物は、再構成されたナノ粒子懸濁液の予想外に有利な特性（例えば、ナノ粒子の大きさまたは活性のわずかな変化）を提供し得る。 
いくつかの側面において、ナノ粒子の保護された懸濁液の凍結乾燥および再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化は、凍結乾燥前の元の組成物におけるそれらの大きさの１０％以内であり得る。一定の側面において、ナノ粒子の保護された懸濁液の凍結乾燥および再構成時、ナノ粒子の平均的な大きさの変化は、凍結乾燥前の元の組成物におけるそれらの大きさの５％以内であり得る。 
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
一定の側面において、再構成された核酸製剤は低減されたサイトカイン活性化を有し得る。 
追加の側面において、核酸製剤は６ヶ月の保存時間後に再構成され、核酸剤の８０％の活性を保持し得る。 
いくつかの態様において、核酸製剤は６ヶ月の保存時間後に再構成され得、脂質ナノ粒子の平均的な粒子の大きさは凍結乾燥前の１２５％未満であり得る。 
一定の態様において、核酸製剤は２４ヶ月の保存時間後に再構成され、核酸剤の９０％の活性を保持し得る 
さらなる態様において、核酸製剤は２４ヶ月の保存時間後に再構成され得、脂質ナノ粒子の平均的な粒子の大きさは凍結乾燥前の２５％超未満であり得る。 
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
イオン化可能脂質の例は、以下の化合物を含む： 
（（２−（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）アザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル）（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−ビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）である、化合物ＡＡ 
【化７】
2018521083.tif 000001
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
イオン化可能脂質の例は、以下の化合物を含む： 
（（２−（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）アセチル）アザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル）（９Ｚ，９’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ）−ビス（オクタデカ−９，１２−ジエノアート）である、化合物ＡＢ 
【化８】
2018521083.tif 000002
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
安定剤脂質 
安定剤脂質の例は、双性イオン性脂質を含む。 
安定剤脂質の例は、リン脂質などの化合物を含む。 
リン脂質の例は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リソホスファチジルコリン、リソホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリンおよびジリノレオイルホスファチジルコリンを含む。 
安定剤脂質の例は、ホスファチジルエタノールアミン化合物およびホスファチジルコリン化合物を含む。 
安定剤脂質の例は、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）を含む。 
安定剤脂質の例は、ジフィタノイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰｈＰＥ）および１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰｈＰＣ）を含む。 
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
ナノ粒子処方物を、スクロースおよび（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリンを含有する保護剤組成物で凍結乾燥した。総保護剤含量は１０％〜１２．５％、または１０％〜１５％（ｗ／ｖ）であった。（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリンの含量は４０％（ｗ／ｖ）、スクロースは６０％であった。シクロデキストリンはCAVITRON W7 HP5 PHARMAシクロデキストリンであった。 
バイアルを表７に示す温度で４週間保存した。保存および再構成の後、表７に示すように、ナノ粒子の平均的な大きさ（ＰＳ、Ｚ−平均）は驚くほどに安定であった。 
表７に示されるように、ｓｉＲＮＡナノ粒子の大きさは、元の組成物におけるそれらの大きさの４％以内であった。 
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
ナノ粒子製剤を、スクロースおよび（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリンを含有する保護剤組成物で凍結乾燥させた。総保護剤含量は１０％〜１２．５％、または１０％〜１５％（ｗ／ｖ）であった。（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリンの含量は４０％（ｗ／ｖ）、スクロースは６０％であった。シクロデキストリンは、CAVITRON W7 HP7 PHARMAシクロデキストリンであった。 
バイアルを表８に示す温度で４週間保存した。保存および再構成後、表８に示すように、ナノ粒子の平均的な大きさ（ＰＳ、Ｚ−平均）は驚くほどに安定であった。 
表８に示すように、ｓｉＲＮＡナノ粒子の大きさは、元の組成物のそれらの大きさの５％以内であった。