(57)【要約】  ステロイド系ないし非ステロイド系抗炎症剤のような、ホルモン作用などの副作用や、消化管障害などがなく、しかもこれら抗炎症剤に匹敵するような抗炎症作用を有する化合物を自然界から見つけ出すことを課題とし、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を有効成分とする抗炎症剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を有効成分とする抗炎症剤。
【請求項２】
抽出に用いる水がアルカリ性水である請求項第１項記載の抗炎症剤。
【請求項３】
抽出に用いる親水性溶媒が低級アルコールである請求項第１項記載の抗炎症剤。
【請求項４】
脱顆粒阻害活性およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を有するものである請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の抗炎症剤。
【請求項５】
医薬品である請求項第１項ないし第４項の何れかの項記載の抗炎症剤。
【請求項６】
飲食品添加用剤である請求項第１項ないし第４項の何れかの項記載の抗炎症剤。
【請求項７】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を食品素材に添加してなる飲食品。
【請求項８】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を有効成分とする脱顆粒阻害剤。
【請求項９】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を有効成分とするシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤。
【請求項１０】
炎症が生じている患者もしくは炎症の発生が予想される患者に、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を投与することを特徴とする炎症の治療ないし予防方法。
【請求項１１】
抗炎症剤製造のための、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症剤に関し、更に詳細には、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉から抽出され、脱顆粒阻害活性およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を有する抗炎症剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、アレルギー性疾患を始めとする多くの炎症に対してこれを抑制するためにステロイド系および非ステロイド系の医薬が広く使用されている。しかし、ステロイド系の抗炎症剤は、ホルモン作用などの副作用が出るという問題があり、また非ステロイド性抗炎症剤は、胃腸障害などの消化管障害が臨床上問題となることがあった。【０００３】
また、花粉症など一定期間継続するアレルギー性疾患については、医薬としてよりもあらかじめ健康食品などの食品として摂取することが好ましく、これに対応した天然物由来の抗炎症剤の提供が求められていた。【０００４】
ところで、抗炎症作用を有する天然物由来の成分としては、ヤマモモ（Myrica rubra）の樹皮抽出物等、様々な植物から得られた抽出物がヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性を示すことが報告されている（非特許文献１）。【０００５】
また、抗炎症剤の一つの作用機序であるシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性については、茶（Camellia sinensis）とその組成物であるエピガロカテキン−３−ガレートがシクロオキシゲナーゼ−２の発現とその酵素活性を阻害することが報告されており（非特許文献２）、その他にも、甜茶抽出物がシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有することが報告されている（特許文献１）。【０００６】
上記で述べたように、現在でも天然物の有する抗炎症作用についての研究が継続して行われており、更に優れた天然物由来の抗炎症作用を示す物質の探索が求められている。また、これらの天然物由来の抗炎症作用において、脱顆粒阻害活性ならびにシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性の両方を報告しているものはない。【０００７】
【特許文献１】特開平９−１１８６２６号
【非特許文献１】Matsuda, H.; Morikawa,T.; Tao, J.; Ueda, K.; Yoshikawa, M. Chem Pharm Bull(Tokyo). 2002, 50(2), 208-215
【非特許文献２】Hussain, T.; Gupta, S.;  Adhami, VM.; Mukhtar, H. Int. J. Cancer2005, 113(4), 660-669
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、ステロイド系ないし非ステロイド系抗炎症剤のような、ホルモン作用などの副作用や、消化管障害などがなく、しかもこれら抗炎症剤に匹敵するような抗炎症作用を有する化合物を自然界から見つけ出すことが強く求められており、このような物質およびこれを利用した抗炎症剤の提供が本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、前記目的を達成するため、天然物から抗炎症作用を発現する化合物を鋭意検索していたところ、ヤブツバキ、ツバキ、サザンカの葉の抽出物が、強力な抗炎症作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。【００１０】
すなわち本発明は、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を有効成分とする抗炎症剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の抗炎症剤は、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水、親水性溶媒またはこれらの混液で抽出して得た抽出物を有効成分とするものである。このものは、優れた脱顆粒阻害活性およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を有するものであり、現在市販されている抗炎症剤と同等あるいはそれ以上の抗炎症作用を有するものである。【００１２】
したがって、それ自体で、あるいは健康食品等として種々の炎症、例えば、花粉症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎や、インフルエンザまたは他のウイルス感染に関連する痛み、発熱、炎症等の症状、細菌感染による咽頭炎、咽頭の痛み、気管支炎、扁桃腺、歯周炎、歯槽骨炎、歯痛、歯肉炎、痛風、関節炎、腎炎、肝炎、月経困難症、頭痛、潰瘍性大腸炎、捻挫および挫傷、筋肉痛、神経痛、滑膜炎、やけど並びに外科的・歯科的治療後の炎症等を治療、予防するために利用できるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の抗炎症剤の有効成分である、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉の抽出物（以下、「ツバキ類抽出物」という）は、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉から、常法に従って抽出しうるものである。ヤブツバキ（Camellia japonica L.）は、ツバキ科の双子葉植物であり、ヤマツバキとも呼ばれる野生種である。ツバキの園芸品種の大部分はヤブツバキから分化したもので、変種を含み、種間雑種が多様に作出されている（以下、「ツバキ（Camellia japonica L. cv.）」とする）。サザンカ（Camellia sasanqua T.）はツバキ科の双子葉植物である。【００１４】
原料である、ヤブツバキ、ツバキおよびサザンカの葉は、特にその産地や葉の採取時期が限定されるものではない。また、未乾燥葉を用いてもよいが、通常、乾燥した葉が使用され、この葉は、粉末ないしは細断された後に抽出操作に供されることが好ましい。【００１５】
このヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を抽出するために使用する溶媒としては、水、親水性溶媒またはこれらの混液が好ましい。このうち、水としては、ｐＨ８から１２程度のアルカリ性の水を用いることが好ましい。また、親水性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどのアルコール類；セロソルブ類；アセトンなどのケトン類；ジオキサン、テトラヒドロフランなどのエーテル類；ピリジン、モルホリン、アセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの含有窒素溶媒などが挙げられる。これらの抽出溶媒は、単独又は二種類以上の混合溶媒あるいは水との混合溶媒として使用してもよい。【００１６】
親水性溶媒を水との混合溶媒として使用する際の、それらの割合は、例えば、水／溶媒＝９５／５〜５／９５（容量比）の範囲から適当に選択することができる。【００１７】
上記した抽出溶媒のうち、特に好ましいものとしては、熱水、メタノール、エタノールなどの低級アルコール類と水との混合溶媒が挙げられ、更に、低級アルコールを水/溶媒＝３０/７０ないし７０/３０（容量比）で含有する低級アルコール−水混液が好ましい。【００１８】
上記した溶媒を使用する抽出は、適当な温度、例えば、１０℃〜溶媒の還流温度で実施することができ、好ましくは１５〜８０℃程度で行うこともできる。また、室温で冷浸抽出してもよい。また、抽出時間は、抽出温度によっても相違するが、５分ないし２４時間程度、好ましくは、３０分ないし１時間程度である。【００１９】
前記のように抽出された抽出液は、通常濃縮され、濃縮エキスとされる。更に、必要により、この濃縮エキスは、公知の精製手段により更に精製することができる。例えば、得られた濃縮エキスに、水を添加し、疎水性溶媒で分配することにより、より精製することができる。【００２０】
上記分配操作において用いられる疎水性溶媒としては、水と分液可能な種々の溶媒、例えば、ブタノール、イソブタノール、ヘキサノール、オクタノール、２−エチルヘキサノール、シクロヘキサノールなどのアルコール類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエチレンなどのハロゲン化炭化水素；エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ブチルエーテル、などのエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル類などが挙げられる。これらの疎水性溶媒は、単独で又は、二種以上の混合溶媒として使用できる。これらの疎水溶媒の中で、ブタノールなどが繁用される。【００２１】
また、前記のようにして得られた抽出液は、各種のカラムを用いて、更に精製することもできる。例えば、得られた抽出液を、ＨＰ−２０、ＨＰ−２１、セパビーズＳＰ−８２５、ＳＰ−８５０、ＳＰ−２０７（何れも三菱化学製）、セファデックス（Sephadex）ＬＨ２０（Amersham Biosciences）、アンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ（ローム・アンド・ハース社製）、トヨパール（Toyopearl）ＨＷ４０Ｆ(東ソー製)等の吸着剤カラムに通し、１種以上の適当な溶出液で分離することにより、より活性の高い画分として精製抽出物を得ることができる。【００２２】
上記の吸着剤カラムクロマトグラフィーにおいて、有利に用いることのできる溶媒としては、例えば、水や、メタノール、エタノール等の親水性溶媒あるいはこれらの混合溶媒を使用することができる。この工程では、２つ以上の吸着カラムクロマトグラフィーを組み合わせてもよい。【００２３】
以上のようにして得られるツバキ類抽出物は、濃縮あるいは非濃縮状態のエキスとして、または公知の乾燥手段、例えば凍結乾燥法等により乾燥した粉末として最終製品とすることができる。このものは、そのまま医薬品として使用することもできる。また、飲食品添加用剤とし、他の飲食品素材に添加し、健康食品あるいは一般の飲食品とすることもできる。【００２４】
また、本発明のツバキ類抽出物は、公知の医薬より優れた脱顆粒阻害活性およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を有するので、脱顆粒阻害剤ないしシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性阻害剤として、抗炎症以外の上記活性に起因する疾病の治療剤ないしこれを予防する飲食品への添加剤として利用することもできる。【００２５】
更に、本発明のツバキ類抽出物は、炎症が生じている患者もしくは炎症の発生が予想される患者に、投与することにより、現在生じている炎症の治療をしたり、あるいは予測される炎症を予防することができる。例えば、花粉などのアレルゲンの飛散が予想される場合に予め本発明のツバキ類抽出物を摂取することにより、アレルギー性の炎症を予防することが可能である。
【実施例】
【００２６】
以下に、実施例および実験例を挙げ、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例等に何ら制約されるものではない。【００２７】
実  施  例  １
ヤブツバキ抽出物の調製（水−アルコール溶媒使用）：
ヤブツバキ（沖縄産）の葉２０ｋｇを室内で３〜７日間乾燥したあと、粉砕機で３ｍｍ幅程度に粉砕した。このヤブツバキの葉の粉砕物８.６ｋｇを、その約８重量倍の水／メタノール（３／７）混液７０Ｌに加え、一晩撹拌抽出した。抽出終了後、上清部分を採取し、ろ紙により吸引ろ過し、抽出液を得た。抽出液をろ紙でろ過した後、ろ液を２１Ｌとなるまで減圧濃縮した。【００２８】
この減圧濃縮した液の一部（約２５０ｍｌ）について、ＨＰ２０（ダイヤイオン、２５０ｍｌ）を担体とする樹脂吸着カラムクロマトグラフィーに付し、移動層として、まず、水／エタノール（８／２）混液６００ｍｌを用いて溶出し、ついで水／エタノール（４／６）混液６００ｍｌ、水／エタノール（１／９）混液６００ｍｌおよびエタノール５００ｍｌにて溶出した。それぞれの溶出画分について、それぞれ減圧乾固させ、抽出物を得た。各抽出物の収量は、水／エタノール（８／２）画分が７．３ｇ、水／エタノール（４／６）画分が１．８６ｇ、水／エタノール（１／９）画分が９１．９ｍｇ、エタノール画分が８．８ｍｇであった。【００２９】
実  施  例  ２
ヤブツバキおよびカンツバキ抽出物の調製（熱水抽出）：
（１）ヤブツバキ（沖縄産）の葉約２ｇを乾燥し、６０℃で２時間乾燥し、ミキサーで粉砕した。このヤブツバキの葉の粉砕物を熱水（９５〜１００℃程度）５０ｍｌに加え、３０分間抽出した。熱水抽出後、４０℃程度に冷まし、ろ紙によりろ過し、抽出液を得た。【００３０】
（２）カンツバキ[シシガシラ：サザンカの園芸品種]（宮城産）の葉を室内乾燥し、粉砕機で約３〜５ｍｍ幅程度に粉砕した。このサザンカの葉の粉砕物１００ｇを熱水（９５〜１００℃程度）に加え、３０分間抽出した。熱水抽出後、４０℃程度に冷まし、ろ紙によりろ過し、抽出液を得た。  【００３１】
実  施  例  ３
ヤブツバキ抽出物の調製（アルカリ抽出）：
ヤブツバキの葉、２.６ｇを６０℃で２時間乾燥し、ハサミで約６ｍｍ程度に荒切りした。これに、０.０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍｌを加え、ホモジナイザーで２分間粉砕し、３０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心し、得られた上清部分を採取した。残部に、新たに０.０１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５０ｍｌを加え、同様の操作を２回繰り返した。得られた上清を合わせ、ろ過後、ｐＨ７.０に調製し、減圧乾固し、抽出物を得た。【００３２】
実  施  例  ４
ツバキ抽出物の調製（還流抽出）：
ツバキの生葉、約５０ｇをハサミで約６ｍｍ程度に荒切りし、水／メタノール（２／８）混液０.５Ｌに浸漬し、溶媒の還流温度で３０分間抽出した。得られた上清をろ過後、減圧乾固し、抽出物を得た。【００３３】
実  施  例  ５
産地別ツバキ類抽出物の調製：
各地に生育するヤブツバキ、ツバキ、サザンカおよびそれらの園芸種の葉を入手し、約１〜２ｇを６０℃で２時間乾燥し、ハサミで約６ｍｍ程度に荒切りした。これに、水／エタノール（３／７）混液５０ｍｌを加え、ホモジナイザーで２分間粉砕および撹拌抽出を行った。更に、３０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心し、得られた上清部分を採取した。【００３４】
残部に、新たに水／エタノール（３／７）混液５０ｍｌを加え、同様の操作を２回繰り返した。得られた上清を合わせ、ろ過後、減圧乾固し、抽出物を得た。【００３５】
実  施  例  ６
脱顆粒阻害活性の測定：
脱顆粒阻害活性の測定は、非特許文献１および非特許文献３(Kataoka M.,
Takagaki  Y.,  Shoyakugaku  Zasshi.,  46(1),  25-29,  1992）を参考に、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性試験を行った。まず、ラット好塩基性白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製後、９６穴プレートに播腫し、抗ＤＮＰ−ＢＳＡマウスＩｇＥ抗体を最終濃度０.２９μｇ／ｍｌになるように添加し、５％ＣＯ２、３７℃インキュベーター内で一晩培養し、細胞を感作した。その後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｍｉｘｔｕｒｅ（116.9  mM  NaCl、5.4  mM  KCl、0.8  mM  MgSO4、2.0
mM  CaCl2、5.6  mM  Glucose、0.1%牛血清アルブミン,  25  mM  HEPES）を１３０μｌ添加した。【００３６】
ついで本発明の各抽出物および画分１０μｌ（最初に５０％エタノールに溶解し、１％エタノールで最終濃度を１０μｇ／ｍｌになるように溶解したもの）を、５ないし６段階の濃度となるように調製し、５％ＣＯ２、３７℃インキュベーターで１０分間静置した。次に抗原ＤＮＰ−ＢＳＡ（２μｇ／ｍｌ）を１０μｌ添加し、１時間インキュベーターで静置し脱顆粒を惹起させ、遠心分離し上清を回収した。上清４５μｌに５ｍＭヘキソサミニダーゼ基質溶液（p-nitrophenyl-β-D-glucosaminide）１５μｌを添加し、３７℃で３時間反応させ、反応停止液１８０μｌ（0.1M  NaHCO3/Na2CO3、pH  10.0）を加えた。反応終了後、４１５ｎｍの吸光度を測定し、下式からヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性を算出した。ヤブツバキについての結果を表１に、それ以外のものについての結果を表２に示す。なお、陽性コントロール（フマル酸ケトチフェン  ２００μＭ）および陰性コントロールを被験物質の最終溶媒濃度に合わせて設けた。【００３７】
ヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性（％）＝[１−（Ｓ−Ｂ／Ｃ−ｂ）]×１００
Ｓ ： 被験物質の細胞添加時の吸光度
Ｂ ： 細胞非存在下の被験物質添加時の吸光度
Ｃ ： 陰性コントロールの吸光度
ｂ ： 細胞非存在下の吸光度【００３８】
【表１】
2007108042.tif 000002
【００３９】
【表２】
2007108042.tif 000003
【００４０】
この結果、本発明の実施例１のヤブツバキ抽出物（沖縄産）のＩＣ５０値は、水／メタノール（３／７）混液の抽出物での阻害活性は７.７５μｇ／ｍｌであった。また、ＨＰ２０分画後の水／エタノール（８／２）画分は、５５.０６μｇ／ｍｌ、水／エタノール（４／６）画分は、５.３８μｇ／ｍｌ、水／エタノール（１／９）画分は、５.３４μｇ／ｍｌであった。中でも、水／エタノール（４／６）画分と水／エタノール（１／９）画分がほぼ同等の高い活性を示した。実施例１の収量をふまえると、水／エタノール（４／６）画分が活性値も高く収量も高いので好ましい。更に、熱水抽出物は、ツバキで９.４１μｇ／ｍｌ、カンツバキで１０.９５μｇ／ｍｌであった。これに対し、陽性コントロールのフマル酸ケトチフェンは７１.７５μｇ／ｍｌであり、本発明の抽出物およびこれから得た画分は、いずれもフマル酸ケトチフェンより高い活性を示した。【００４１】
実  施  例  ７
シクロオキシゲナーゼ−２阻害活性測定：
シクロオキシゲナーゼ−２阻害活性（ＣＯＸ−２阻害活性）は、ＣＯＸ  インヒビター
スクリーニング キット（Cayman  Chemical社）を用いたエンザイムイムノアッセイ法により、次のように行った。０.１Ｍトリス塩酸緩衝液（５ｍＭエチレンジアミン四酢酸、２ｍＭフェノール含有、ｐＨ８.０）９７０μｌ、ヘム溶液１０μｌ、シクロオキシゲナーゼ−２（ヒト由来リコンビナント）溶液１０μｌと試料溶液２０μｌをマイクロチューブ中で混合し、３７℃で１０分間プレインキュベートした。これにアラキドン酸溶液１０μｌを添加し、３７℃で２分間反応させた。０.２Ｍ塩酸５０μｌを加えて反応を停止し、０.２Ｍ塩化第一錫溶液１００μｌを添加して、室温で５分間静置した。なお、予め酵素を失活させて同様の操作を行ったブランクと、サンプル無添加で酵素反応が阻害されないコントロールを設けた。【００４２】
キット付属のエンザイムイムノアッセイ用９６穴プレートに、酵素反応液５０μｌ、プロスタグランジンスクリーニングトレーサー５０μｌおよびプロスタグランジンスクリーニング抗血清５０μｌを添加し、室温で１８時間反応させた。洗浄緩衝液で５回洗浄した後、エレマンズ（Ellman's）試薬２００μｌを加え、室温で３０分間インキュベートした。インキュベート後、４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、反応生成物であるプロスタグランジンＦ２αを定量した。シクロオキシゲナーゼ−２阻害活性は次の式から算出される阻害率で表した。【００４３】
シクロオキシゲナーゼ−２阻害率（％）
＝［（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｂ）］／（Ａ−Ｂ）×１００
Ａ：コントロールのプロスタグランジンＦ２α生成量
Ｂ：ブランクのプロスタグランジンＦ２α生成量
Ｃ：試料添加時のプロスタグランジンＦ２α生成量【００４４】
実施例１ないし５で得た、各地のヤブツバキ抽出物および分画画分についてのシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を表３に、ツバキ、サザンカ抽出物についてのものを表４に示した。この結果、すべてのヤブツバキ、ツバキ、サザンカおよびそれらの園芸品種の抽出物にシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性が認められた。【００４５】
【表３】
2007108042.tif 000004
【００４６】
【表４】
2007108042.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００４７】
一般に炎症の原因となるアレルギー反応には、アナフィラキシー（Ｉ型）、細胞障害型（II型）、アルザス型（III型）及び細胞介在型（遅延型）（IV型）の４つの型があるが、最近特に問題になっている花粉症はＩ型アレルギー（即時型アレルギー）に分類される。また、アトピー性皮膚炎もＩ型アレルギー反応が主体と言われているが、さらに最近では、ＩＶ型アレルギー反応の関与もあることが判明してきている。【００４８】
このＩ型（即時型）アレルギーの反応機序としては、Ｂ細胞により産生されたＩｇＥは肥満細胞あるいは好塩基球の細胞膜上に存在する高親和性ＩｇＥ受容体に結合し、外来からの抗原が細胞膜上のＩｇＥに架橋することでヒスタミンやロイコトリエン等のメディエーターが放出されアレルギーの症状に至るというものである。また、ヘキソサミニダーゼは白血球から放出される酵素で、ヒスタミン遊離に相関があることが知られている。従って、Ｉ型アレルギー反応を防ぐためには、上記経路の何れかを切断すれば良いことになる。【００４９】
また、非ステロイド性抗炎症剤の作用機序の一つは、シクロオキシゲナーゼ阻害作用である。シクロオキシゲナーゼは、アラキドン酸からプロスタグランジン類を生成する反応を触媒する。プロスタグランジン類は気管支収縮、子宮収縮、血小板凝集といった様々な生理活性を示すとともに、生体内のあらゆる部位で炎症反応を誘発、増大させる。  【００５０】
ところで、本発明のヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉の抽出物は、前記各実施例で示したように、優れた脱顆粒阻害活性およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を有するものであるから、炎症に起因する疾患の治療、予防にきわめて有効なものである。【００５１】
したがって、本発明のヤブツバキ、ツバキ、サザンカの抽出物は、抗炎症剤ないし抗炎症成分として、ヒト及び動物用医薬品、医薬品原料あるいは食品原料等として使用することができる。
【手続補正書】
【提出日】平成20年1月11日(2008.1.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水または水と親水性溶媒の混液で抽出して得た抽出物を有効成分とする抗炎症剤。
【請求項２】
抽出に用いる水がアルカリ性水である請求項第１項記載の抗炎症剤。
【請求項３】
抽出に用いる親水性溶媒が低級アルコールである請求項第１項記載の抗炎症剤。
【請求項４】
脱顆粒阻害活性およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を有するものである請求項第１項ないし第３項の何れかの項記載の抗炎症剤。
【請求項５】
医薬品である請求項第１項ないし第４項の何れかの項記載の抗炎症剤。
【請求項６】
飲食品添加用剤である請求項第１項ないし第４項の何れかの項記載の抗炎症剤。
【請求項７】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水または水と親水性溶媒の混液で抽出して得た抽出物を食品素材に添加してなる飲食品。
【請求項８】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水または水と親水性溶媒の混液で抽出して得た抽出物を有効成分とする脱顆粒阻害剤。
【請求項９】
ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水または水と親水性溶媒の混液で抽出して得た抽出物を有効成分とするシクロオキシゲナーゼ−２阻害剤。
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
抗炎症剤製造のための、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水または水と親水性溶媒の混液で抽出して得た抽出物の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
非特許文献１：Ｍａｔｓｕｄａ，Ｈ．；Ｍｏｒｉｋａｗａ，Ｔ．；Ｔａｏ，Ｊ．；Ｕｅｄａ，Ｋ．；Ｙｏｓｈｉｋａｗａ，Ｍ．Ｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）．２００２，５０（２），２０８−２１５
非特許文献２：Ｈｕｓｓａｉｎ，Ｔ．；Ｇｕｐｔａ，Ｓ．；Ａｄｈａｍｉ，ＶＭ．；Ｍｕｋｈｔａｒ，Ｈ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００５，１１３（４），６６０−６６９
発明の開示
発明が解決しようとする課題
［０００８］
したがって、ステロイド系ないし非ステロイド系抗炎症剤のような、ホルモン作用などの副作用や、消化管障害などがなく、しかもこれら抗炎症剤に匹敵するような抗炎症作用を有する化合物を自然界から見つけ出すことが強く求められており、このような物質およびこれを利用した抗炎症剤の提供が本発明の課題である。
課題を解決するための手段
［０００９］
本発明者らは、前記目的を達成するため、天然物から抗炎症作用を発現する化合物を鋭意検索していたところ、ヤブツバキ、ツバキ、サザンカの葉の抽出物が、強力な抗炎症作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
［００１０］
すなわち本発明は、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水または水と親水性溶媒の混液で抽出して得た抽出物を有効成分とする抗炎症剤を提供するものである。
発明の効果
［００１１］
本発明の抗炎症剤は、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を、水または水と親水性溶媒の混液で抽出して得た抽出物を有効成分とするものである。このものは、優れた脱顆粒阻害活性およびシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を有するものであり、現在市販されている抗炎症剤と同等あるいはそれ以上の抗炎症作用を有するものである。
［００１２］
したがって、それ自体で、あるいは健康食品等として種々の炎症、例えば、花粉症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎や、インフルエンザまたは他のウイルス感染に関連する痛み、発熱、炎症等の症状、細菌感染による咽頭炎、咽頭の痛み、気管支炎、扁桃腺、歯周炎、歯槽骨炎、歯痛、歯肉炎、痛風、関節炎、腎炎、肝炎、月経困難
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
症、頭痛、潰瘍性大腸炎、捻挫および挫傷、筋肉痛、神経痛、滑膜炎、やけど並びに外科的・歯科的治療後の炎症等を治療、予防するために利用できるものである。
発明を実施するための最良の形態
［００１３］
本発明の抗炎症剤の有効成分である、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉の抽出物（以下、「ツバキ類抽出物」という）は、ヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉から、常法に従って抽出しうるものである。ヤブツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｌ．）は、ツバキ科の双子葉植物であり、ヤマツバキとも呼ばれる野生種である。ツバキの園芸品種の大部分はヤブツバキから分化したもので、変種を含み、種間雑種が多様に作出されている（以下、「ツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｌ．ｃｖ．）」とする）。サザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓａｓａｎｑｕａ  Ｔ．）はツバキ科の双子葉植物である。
［００１４］
原料である、ヤブツバキ、ツバキおよびサザンカの葉は、特にその産地や葉の採取時期が限定されるものではない。また、未乾燥葉を用いてもよいが、通常、乾燥した葉が使用され、この葉は、粉末ないしは細断された後に抽出操作に供されることが好ましい。
［００１５］
このヤブツバキ、ツバキまたはサザンカの葉を抽出するために使用する溶媒としては、水または水と親水性溶媒の混液が好ましい。このうち、水としては、ｐＨ８から１２程度のアルカリ性の水を用いることが好ましい。また、親水性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどのアルコール類；セロソルブ類；アセトンなどのケトン類；ジオキサン、テトラヒドロフランなどのエーテル類；ピリジン、モルホリン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの含有窒素溶媒などが挙げられる。これらの抽出溶媒は、単独又は二種類以上の混合溶媒あるいは水との混合溶媒として使用してもよい。
［００１６］
親水性溶媒を水との混合溶媒として使用する際の、それらの割合は、例えば、水／溶媒＝９５／５〜５／９５（容量比）の範囲から適当に選択することができる。
［００１７］
上記した抽出溶媒のうち、特に好ましいものとしては、熱水、メタノール、エタノールなどの低級アルコール類と水との混合溶媒が挙げられ、更に、低級アルコールを水／溶媒＝３０／７０ないし７０／３０（容量比）で含有する低級アルコール−水混液が好まし
【国際調査報告】
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