【手続補正書】
【提出日】令和1年11月12日(2019.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
二重特異性タンパク質であって、
ａ）１以上の変異を含むヒトアネキシンＡ５のバリアントを含むターゲティングドメインであって、該１以上の変異が、Ｃ３１６に対応する位置および要すればＲ６３、Ｋ７０、Ｋ１０１、Ｅ１３８、Ｄ１３９、Ｎ１６０に対応する１以上の位置における置換、ならびにそれらの組合せからなる、ターゲティングドメイン；および
ｂ）組織の細胞の表面と関連する受容体に結合特異性を有するアクティベータードメインであって、該アクティベータードメインが、１以上の変異を含むヒトインスリン増殖因子１（ＩＧＦ−１）のバリアントを含み、該１以上の変異が、Ｅ３、Ｙ２４、Ｙ３１、Ｙ６０に対応する１以上の位置における置換およびそれらの組合せからなり、該ＩＧＦ−１のバリアントが、野生型ＩＧＦ−１と比較してＩＧＦ−１受容体活性化を減少させる、アクティベータードメイン
を含み、
標的分子ホスファチジルセリンを含む細胞に選択的に結合し、受容体または下流エフェクター分子のリン酸化により測定して、標的分子を含まない細胞と比較して、標的分子を含む細胞に少なくとも２倍強いＩＧＦ−１受容体活性化を示す、二重特異性タンパク質。
【請求項２】
セリン／スレオニンプロテインキナーゼＢ（ＡＫＴ）のリン酸化により測定して、標的分子を含まない細胞と比較して、標的分子を含む細胞に少なくとも２倍強いＩＧＦ−１受容体活性化を示す、請求項１に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項３】
野生型ヒト血清アルブミンアミノ酸配列と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有する半減期モジュレーターをさらに含み、ここで、該半減期モジュレーターが二重特異性タンパク質の半減期を延長する、請求項１または請求項２に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項４】
ＩＧＦ−１のバリアントが、野生型ＩＧＦ−１のＥ３およびＹ３１に対応する位置にアミノ酸置換を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項５】
アネキシンＡ５のバリアントが、配列番号１２２に示すアミノ酸配列を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項６】
組織再生、細胞生存、細胞分化を促進し、アポトーシスを阻害し、細胞増殖を誘発し、細胞成長を促進し、幹細胞の運動性を促進し、幹細胞の分化を促進し、細胞損傷を予防しおよび／または血管形成を促進する、請求項１から５のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項７】
（ａ）１以上の変異を含むヒトＩＧＦ−１のバリアントを含むアクティベータードメインであって、該１以上の変異が、Ｅ３、Ｙ２４、Ｙ３１、Ｙ６０に対応する１以上の位置における置換およびそれらの組合せからなる、アクティベータードメイン；および（ｂ）１以上の変異を含むアネキシンＡ５のバリアントを含むターゲティングドメインであって、該１以上の変異が、Ｃ３１６に対応する位置および要すればＲ６３、Ｋ７０、Ｋ１０１、Ｅ１３８、Ｄ１３９、Ｎ１６０に対応する１以上の位置における置換、ならびにそれらの組合せからなる、ターゲティングドメイン、を含む二重特異性タンパク質であって、ここで、該二重特異性タンパク質は健常組織(ＥＣ５０健常)より低い損傷組織(ＥＣ５０損傷)における半数効果濃度を有する、二重特異性タンパク質。
【請求項８】
損傷組織が虚血性組織である、請求項７に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項９】
損傷組織が、腎組織、心組織または脳組織である、請求項７または８に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１０】
ＩＧＦ−１のバリアントが少なくとも１０：１のＥＣ５０健常／ＥＣ５０損傷比を有する、請求項７から９のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１１】
ＩＧＦ−１のバリアントがＡＫＴのリン酸化を誘発する、請求項７から１０のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１２】
さらにペプチドリンカーを含む、請求項７から１１のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１３】
ペプチドリンカーがヒト血清アルブミン、Ｆｃフラグメントまたはそのバリアントである、請求項１２に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１４】
ヒト血清アルブミンまたはそのバリアントが配列番号５４〜５６または１２４の何れかに示すアミノ酸配列を有する、請求項１３に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１５】
ＩＧＦ−１のバリアントが配列番号１２、２３〜２５、２７〜３０または１２０の何れかに示すアミノ酸配列を有する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１６】
アネキシンＡ５のバリアントが配列番号２〜４または１２２の何れかに示すアミノ酸配列を有する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１７】
アネキシンＡ５のバリアントがアネキシンＡ５の非内部移行バリアントであり、ここで、二重特異性タンパク質が、野生型ヒトアネキシンＡ５のアミノ酸配列を含む二重特異性タンパク質と比較して延長した半減期を有する、請求項１から１６のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質。
【請求項１８】
二重特異性タンパク質であって、
ａ）１以上の変異を含むヒトアネキシンＡ５のバリアントであって、該１以上の変異が、Ｃ３１６に対応する位置および要すればＲ６３、Ｋ７０、Ｋ１０１、Ｅ１３８、Ｄ１３９、Ｎ１６０に対応する１以上の位置における置換、ならびにそれらの組合せからなる、ヒトアネキシンＡ５のバリアント；および
ｂ）１以上の変異を含むヒトインスリン増殖因子１（ＩＧＦ−１）のバリアントであって、該１以上の変異が、Ｅ３に対応する位置における置換、Ｙ２４、Ｙ３１、Ｙ６０に対応する位置における置換またはそれらの組合せ、アミノ酸１〜３の欠失、アミノ酸６８〜７０の欠失、Ｎ末端１３残基伸張あるいはそれらの組合せからなる、ヒトＩＧＦ−１のバリアント
を含み、
ＩＧＦ−１のバリアントが、野生型ＩＧＦ−１と比較してＩＧＦ−１受容体活性化を減少させ、
標的分子ホスファチジルセリンを含む細胞に選択的に結合し、受容体または下流エフェクター分子のリン酸化により測定して、標的分子を含まない細胞と比較して、標的分子を含む細胞に少なくとも２倍強いＩＧＦ−１受容体活性化を示す、
二重特異性タンパク質。
【請求項１９】
請求項１から１８のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質を含む、医薬組成物。
【請求項２０】
対象において組織再生または生存を促進するための医薬組成物であって、
（１）１以上の変異を含むヒトＩＧＦ−１のバリアントを含むアクティベータードメインであって、該１以上の変異が、Ｅ３、Ｙ２４、Ｙ３１、Ｙ６０に対応する１以上の位置における置換およびそれらの組合せからなる、アクティベータードメイン；および（２）１以上の変異を含むアネキシンＡ５のバリアントを含むターゲティングドメインであって、該１以上の変異が、Ｃ３１６に対応する位置および要すればＲ６３、Ｋ７０、Ｋ１０１、Ｅ１３８、Ｄ１３９、Ｎ１６０に対応する１以上の位置における置換、ならびにそれらの組合せからなる、ターゲティングドメイン、を有する二重特異性タンパク質を含み、
ここで、該組成物の投与後に、アネキシンＡ５のバリアントにより組織の第一細胞に二重特異性融合タンパク質が標的化され、該第一細胞は細胞膜の外葉にホスファチジルセリンを発現しており、それによりＩＧＦ−１バリアントが第二細胞の表面でＩＧＦ−１受容体に曝されたとき、ＩＧＦ−１受容体が組織再生を促進するように特異的に活性化される、
医薬組成物。
【請求項２１】
組織を損傷から保護するための医薬組成物であって、
（１）１以上の変異を含むヒトＩＧＦ−１のバリアントを含むアクティベータードメインであって、該１以上の変異が、Ｅ３、Ｙ２４、Ｙ３１、Ｙ６０に対応する１以上の位置における置換およびそれらの組合せからなる、アクティベータードメイン；および（２）１以上の変異を含むアネキシンＡ５のバリアントを含むターゲティングドメインであって、該１以上の変異が、Ｃ３１６に対応する位置および要すればＲ６３、Ｋ７０、Ｋ１０１、Ｅ１３８、Ｄ１３９、Ｎ１６０に対応する１以上の位置における置換、ならびにそれらの組合せからなる、ターゲティングドメイン、を有する二重特異性タンパク質を含み、
ここで、該組成物の投与後に、アネキシンＡ５のバリアントにより組織の第一細胞に二重特異性融合タンパク質が標的化され、該第一細胞は細胞膜の外葉にホスファチジルセリンを発現しており、それによりＩＧＦ−１バリアントが第二細胞の表面でＩＧＦ−１受容体に曝されたとき、ＩＧＦ−１受容体が組織を損傷から保護するように特異的に活性化される、
医薬組成物。
【請求項２２】
アポトーシスを阻害するための医薬組成物であって、
（１）１以上の変異を含むヒトＩＧＦ−１のバリアントを含むアクティベータードメインであって、該１以上の変異が、Ｅ３、Ｙ２４、Ｙ３１、Ｙ６０に対応する１以上の位置における置換およびそれらの組合せからなる、アクティベータードメイン；および（２）１以上の変異を含むアネキシンＡ５のバリアントを含むターゲティングドメインであって、該１以上の変異が、Ｃ３１６に対応する位置および要すればＲ６３、Ｋ７０、Ｋ１０１、Ｅ１３８、Ｄ１３９、Ｎ１６０に対応する１以上の位置における置換、ならびにそれらの組合せからなる、ターゲティングドメイン、を有する二重特異性タンパク質を含み、
ここで、該組成物の投与後に、アネキシンＡ５のバリアントにより組織の第一細胞に二重特異性融合タンパク質が標的化され、該第一細胞は細胞膜の外葉にホスファチジルセリンを発現しており、それによりＩＧＦ−１バリアントが第二細胞の表面でＩＧＦ−１受容体に曝されたとき、ＩＧＦ−１受容体がアポトーシスを阻害するように特異的に活性化される、
医薬組成物。
【請求項２３】
細胞生存を促進するための医薬組成物であって、
（１）１以上の変異を含むヒトＩＧＦ−１のバリアントを含むアクティベータードメインであって、該１以上の変異が、Ｅ３、Ｙ２４、Ｙ３１、Ｙ６０に対応する１以上の位置における置換およびそれらの組合せからなる、アクティベータードメイン；および（２）１以上の変異を含むアネキシンＡ５のバリアントを含むターゲティングドメインであって、該１以上の変異が、Ｃ３１６に対応する位置および要すればＲ６３、Ｋ７０、Ｋ１０１、Ｅ１３８、Ｄ１３９、Ｎ１６０に対応する１以上の位置における置換、ならびにそれらの組合せからなる、ターゲティングドメイン、を有する二重特異性タンパク質を含み、
ここで、該組成物の投与後に、アネキシンＡ５のバリアントにより組織の第一細胞に二重特異性融合タンパク質が標的化され、該第一細胞は細胞膜の外葉にホスファチジルセリンを発現しており、それによりＩＧＦ−１バリアントが第二細胞の表面でＩＧＦ−１受容体に曝されたとき、ＩＧＦ−１受容体が細胞生存を促進するように特異的に活性化される、
医薬組成物。