【誤訳訂正書】
【提出日】平成20年10月28日(2008.10.28)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
敗血症の検出を行うための方法であって、患者の採取された生物学的流体または採取された組織サンプル中のGNATの存在を測定し、前記サンプル中のGNATの存在から、敗血症の存在について結論を導き出すことを特徴とする方法。
【請求項２】
免疫診断アッセイ法であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記GNATの測定を、対応するGNAT-mRNAまたはGNAT酵素活性の測定として間接的に行うことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも1種の別の敗血症パラメータを同時に測定するマルチパラメータの測定過程で行い、測定された結果は少なくとも2つの測定変数からなるひと組の形で得られ、敗血症の高精度の診断のために評価されることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記マルチパラメータの測定の過程で、プロカルシトニン；CA19-9；CA125；S100B；S100Aタンパク質；CYFRA21、TPS、および/または溶解性サイトケラチン-1断片(sCY1F);ペプチドインフラミンおよびCHP;ペプチドプロホルモン;およびC-反応性タンパク質(CRP)からなる群から選択される少なくとも1種の別のパラメータをGNATの他に測定することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記マルチパラメータ測定はチップ技法測定装置または免疫クロマトグラフィー測定装置による同時測定として行われることを特徴とする請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記測定装置を使用して得られた複合的測定結果の評価が、コンピュータプログラムを用いて行われることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
動物モデル(複数のヒヒ)での内毒素投与による感染シミュレーション
内毒素の注射によってプロカルシトニン分泌を刺激する、複数のヒヒで実施された実験に基づいて(H.Redlら「外傷および敗血症のヒヒモデルにおけるプロカルシトニン分泌パターン:サイトカインおよびネオプテリンに対する関係」「procalcitonin release pattern in a baboon model of trauma and sepsis:relationship to cytokines and neopterin」、Crit Care Med 2000、Vol.28、No.11、3659-3663;およびH.Redlら、「敗血症の非ヒト霊長類モデル」「Non-Human Primate Models of Sepsis」in:Sepsis 1998;2:243-253参照)、複数のヒヒ(雄、約2歳、27〜29kg)それぞれに、体重kgあたり100μgのLPS(サルモネラティフィムリウム由来のリポポリサッカライド:供給源はシグマ)を静脈内投与した。投与5〜5.5時間後に、10mlのドレータルを静脈内投与して動物を犠牲にした。その死から60分以内に、すべての器官および組織を切開し、液体窒素で凍らせることによって安定化した。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
さらに処理を行う間に、1.5mlの緩衝液A(50mMトリス/塩酸、pH7.1、100mM ＫＣｌ、20%グリセロール)を、窒素で冷却中の個々の冷凍された複数の組織(1g)のサンプルに加え、複数のサンプルを磁器すり鉢中で粉砕し粉体とした (J.Klose、「2次元電気泳動のためのネズミおよびヒト由来の全組織タンパクの分画抽出」「Fractionated Extraction of Total Tissue Proteins from Mouse and Human for 2-D Electrophoresis」、in Methods in Molecular Biology、Vol.112:2-D Proteome Analysis Protocols Humana Press Inc、Totowa、NJを参照のこと)。引き続いて遠心分離を1時間100,000g、+4℃で行った後、得られた上澄み液を回収して、別の処理に必要とされるまで-80℃で貯蔵した。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
上記のように得られた複数のサンプルによる実験では、最大量のプロカルシトニンが複数の処理動物の肝臓組織で見い出されることがわかったので、ヒヒの肝臓からのタンパク抽出物を、新規な敗血症特異的生体マーカーの探索に使用した。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
複数のヒヒの肝臓細胞の細胞質タンパクを使用したプロテオームの分析
一方では、複数の健常なヒヒ(対照)、他方では、LPSが注入されている複数のヒヒの肝臓細胞の複数の細胞質タンパク抽出物をプロテオーム分析に使用した。初回の2次元ゲル電気泳動分析では、タンパク100μgを含む肝臓抽出物を、9M尿素、70mMDTT、2%両性電解質、pH2〜4に対して安定化させ、次に2次元ゲル電気泳動分析で、J.Kloseら(「タンパクの2次元電気泳動:ゲノムの機能的分析の最新プロトコルおよび含意」、「Two-dimensional electrophoresis of proteins:An updated protocol and implications for a functional analysis of the genome」、Electrophoresis 1995、16、1034-1059)に記載のように分離した。2次元電気泳動ゲルにおけるタンパクの視覚化は、銀染色(J.Huekeshovenら「ファストシステム開発ユニットIにおける高速染色のための改良銀染色手順:ソディウムドデシルゲルの染色」「Improved silver staining procedure for fast staining in Phast-System Development Unit.I.Staining of sodium dodecyl gels」、Electrophoresis 1988、9、28-32)で行った。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
評価のために、複数の非処理動物の複数のサンプルのタンパクのスポットパターンと、複数の処理動物の複数の肝臓組織サンプルから得られたタンパクのスポットパターンとを比べた。対照サンプル中で発生しておらず、すべての処理動物中で付加的に生じた物質を、さらに分析調査するために選択した。図1は、対照サンプル(A)と処理動物のサンプル(B)についての2次元電気泳動ゲルの比較を示す。(B)における付加的タンパクのスポットはGNATに対応し、その位置は矢印および丸印で選び出してある。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
GNATの同定
図1(A)および1(B)に示すように、LPSの注入物が予め投与されている複数のヒヒの肝臓細胞抽出物が、とりわけ新規タンパクを含んでいた。このタンパクは、ゲル電気泳動のデータを基にして既知分子量のマーカー物質と比べて、分子量が約37000±700ダルトンであると推定され、一方、1次元のタンパク相対的位置から等電点が約7.0から8.0であると推定された。