【手続補正書】
【提出日】令和1年6月12日(2019.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
本開示は以下の実施形態を含む。
［１］
xが4〜8の整数である、PEGx-GCSF。
［２］
xが5である、［１］に記載のPEGx-GCSF。
［３］
xが6である、［１］に記載のPEGx-GCSF。
［４］
xが7である、［１］に記載のPEGx-GCSF。
［５］
PEGが、GCSF由来のアミンを介してGCSFに結合している、［１］に記載のPEGx-GCSF。
［６］
非加水分解性の連結部を含む、［１］に記載のPEGx-GCSF。
［７］
前記非加水分解性の連結部はウレタン連結部である、［６］に記載のPEGx-GCSF。
［８］
GCSFは、配列番号1、配列番号3、配列番号4、ならびにそれらの機能的な誘導体およびホモログからなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質である、［１］に記載のPEGx-GCSF。
［９］
前記アミノ酸配列は、配列番号1、配列番号1の機能的誘導体、または配列番号1のホモログであり、前記GCSFは、第17位のリジン残基、第35位のリジン残基、第41位のリジン残基、第44位のヒスチジン残基、第53位のヒスチジン残基、第80位のヒスチジン残基、第157位のヒスチジン残基、および第171位のヒスチジン残基を有する、［８］に記載のPEGx-GCSF。
［１０］
各PEGが、N末端、第17位のリジン残基、第35位のリジン残基、第41位のリジン残基、第44位のヒスチジン残基、第53位のヒスチジン残基、第80位のヒスチジン残基、第157位のヒスチジン残基、および第171位のヒスチジン残基からなる群から選択される位置においてGCSFに結合している、［９］に記載のPEGx-GCSF。
［１１］
前記PEGは、約3〜約15 kDaの平均分子量を有する、［１］に記載のPEGx-GCSF。
［１２］
前記PEGは、約5〜約6 kDaの平均分子量を有する、［１１］に記載のPEGx-GCSF。
［１３］
[x]がxの平均値であり、[x]は約4以上である、PEGx-GCSFの集団を含むPEG[x]-GCSF。
［１４］
[x]は約4〜約8である、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［１５］
[x] は約4〜約6である、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［１６］
[x] は約5〜約6である、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［１７］
xが1〜3であるPEGx-GCSF を10%未満含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［１８］
xが4であるPEGx-GCSFを少なくとも約15%含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［１９］
xが5であるPEGx-GCSFを少なくとも約30%含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２０］
xが6であるPEGx-GCSFを少なくとも約10%含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２１］
xが7であるPEGx-GCSFを15%未満含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２２］
xが6〜7であるPEGx-GCSFを少なくとも約15%含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２３］
xが5〜7であるPEGx-GCSFを少なくとも約35%含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２４］
GCSFに由来するアミンを介してPEGがGCSFに結合している、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２５］
前記PEGx-GCSFは非加水分解性の連結部を含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２６］
前記非加水分解性の連結部はウレタン連結部である、［２５］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２７］
GCSFは、配列番号1、配列番号3、配列番号4、ならびにそれらの機能的な誘導体およびホモログからなる群から選択される配列を有するアミノ酸である、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２８］
前記アミノ酸配列は、配列番号1、配列番号1の機能的誘導体、または配列番号1のホモログであり、前記GCSFは、第17位のリジン残基、第35位のリジン残基、第41位のリジン残基、第44位のヒスチジン残基、第53位のヒスチジン残基、第80位のヒスチジン残基、第157位のヒスチジン残基、および第171位のヒスチジン残基を有する、［２７］に記載のPEG[x]-GCSF。
［２９］
各PEGが、N末端、第17位のリジン残基、第35位のリジン残基、第41位のリジン残基、第44位のヒスチジン残基、第53位のヒスチジン残基、第80位のヒスチジン残基、第157位のヒスチジン残基、および第171位のヒスチジン残基からなる群から選択される位置においてGCSFに結合している、［２８］に記載のPEG[x]-GCSF。
［３０］
前記PEGは、約3〜約15 kDaの平均分子量を有する、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［３１］
前記PEGは、約5〜約6 kDaの平均分子量を有する、［３０］に記載のPEG[x]-GCSF。
［３２］
前記集団は、
約0%〜約5%の、xが3であるPEGx-GCSF；
約22%〜約32%の、xが4であるPEGx-GCSF；
約38%〜約42%の、xが5であるPEGx-GCSF；
約18%〜約28%の、xが6であるPEGx-GCSF；および
約0%〜約9%の、xが7であるPEGx-GCSF
を含む、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［３３］
前記PEGがウレタン連結部を介して前記GCSFに結合しており、前記PEGは約3〜約15 kDaの平均分子量を有する、［１３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［３４］
前記PEGは約5〜約6 kDaの平均分子量を有する、［３３］に記載のPEG[x]-GCSF。
［３５］
［１３］に記載のPEG[x]-GCSFの薬学的活性量とタンパク質非含有担体とを含む医薬製剤。
［３６］
必要とする患者において白血球細胞数を増加させる方法であって、前記患者に、［３５］に記載の医薬製剤の治療的有効量を投与することを含む、方法。
［３７］
前記患者は、好中球減少症の危険にあるか、または好中球減少症に罹患している、［３６］に記載の方法。
［３８］
前記患者は、前記患者の白血球細胞数を減少させる薬剤で処置されたか、または処置されている、［３６］に記載の方法。
［３９］
前記患者は、内因性GCSFレベルが低下している、［３６］に記載の方法。
［４０］
前記患者は、放射線治療を受けている、［３６］に記載の方法。
［４１］
前記患者は、癌の治療を受けている、［３８］に記載の方法。
［４２］
前記癌は、骨髄癌である、［４１］に記載の方法。
［４３］
前記患者は、重症慢性好中球減少症または重症先天性好中球減少症または重症複合好中球減少症に罹患している、［３７］に記載の方法。
［４４］
前記患者は、自家幹細胞移植に先立って処置される、［３６］に記載の方法。
［４５］
必要とする患者において重症敗血症または敗血症性ショックを治療する方法であって、前記患者に、［３５］に記載の医薬製剤の治療的有効量を投与することを含む、方法。
［４６］
［１］に記載のPEGx-GCSFを調製するための方法であって、
(a)約5.0 mg/mlの濃度を有するGCSF溶液を得る工程と；
(b)前記GCSF溶液をPEGと組み合わせる工程であって、PEGは前記GCSFのモル量の約65〜約75倍であるモル量において存在する工程と；
(c)前記GCSFとPEGとが反応してPEGx-GCSFを産生するために十分な時間を経過させる工程と；
(d)残余PEGと反応するために十分な量のヒドロキシルアミンを添加する工程と；
(e)未反応PEG、N-ヒドロキシスクシンイミド、およびヒドロキシルアミンからPEG[x]-GCSFを単離する工程と；
(f) PEGx-GCSFを単離する工程と
を含む、方法。
［４７］
約5.0 mg/mlの前記GCSF溶液は、GCSFの溶液を濃縮する工程により得られる、［４６］に記載の方法。
［４８］
前記単離されたPEGx-GCSFを溶液中で約5.5〜6 mg/mlに濃縮する工程(g)をさらに含む、［４６］に記載の方法。
［４９］
前記濃縮する工程は膜透析濾過により達成される、［４７］に記載の方法。
［５０］
前記濃縮する工程は膜透析濾過により達成される、［４８］に記載の方法。
［５１］
工程(a)から(e)までpHが約7.75に維持される、［４６］に記載の方法。
［５２］
前記方法全体を通して温度は室温に維持される、［４６］に記載の方法。
［５３］
工程(b)および(c)は約1時間行われる、［４６］に記載の方法。
［５４］
工程(d)は約2時間行われる、［４６］に記載の方法。
［５５］
［１３］に記載のPEG[x]-GCSFを調製するための方法であって、
(a)約5.0 mg/mlの濃度を有するGCSF溶液を得る工程と；
(b)前記GCSF溶液をPEGと組み合わせる工程であって、PEGは前記GCSFのモル量の約65〜約75倍であるモル量において存在する工程と；
(c)前記GCSFとPEGとが反応してPEGx-GCSFを産生するために十分な時間を経過させる工程と；
(d)残余PEGと反応するために十分な量のヒドロキシルアミンを添加する工程と；
(e)未反応PEG、N-ヒドロキシスクシンイミド、およびヒドロキシルアミンからPEGx-GCSFを単離する工程と；
を含む、方法。
［５６］
約5.0 mg/mlの前記GCSF溶液は、GCSFの溶液を濃縮する工程により得られる、［５５］に記載の方法。
［５７］
前記単離されたPEGx-GCSFを溶液中で約5.5〜6 mg/mlに濃縮する工程(f)をさらに含む、［５５］に記載の方法。
［５８］
前記濃縮する工程は膜透析濾過により達成される、［５６］に記載の方法。
［５９］
前記濃縮する工程は膜透析濾過により達成される、［５７］に記載の方法。
［６０］
工程(a)から(e)までpHが約7.75に維持される、［５５］に記載の方法。
［６１］
前記方法全体を通して温度は室温に維持される、［５５］に記載の方法。
［６２］
工程(b)および(c)は約1時間行われる、［５５］に記載の方法。
［６３］
工程(d)は約2時間行われる、［５５］に記載の方法。
本開示の例示的実施形態は、部分的に本開示と添付の図面とを参照することにより理解され得、これら図面を下記に手短に説明する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
PEGx-GCSFの集団を含むPEG[x]-GCSFであって、xは1〜8の整数であり、前記集団の異なる構成員は異なる値のxを有し得、[x]はxの平均値であり、[x]は4より大きい値を有する、PEG[x]-GCSF。
【請求項２】
[x] は4超〜約6である、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項３】
xが1〜3であるPEGx-GCSF を10%未満含む、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項４】
xが4であるPEGx-GCSFを少なくとも約15%含む、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項５】
xが5であるPEGx-GCSFを少なくとも約30%含む、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項６】
xが6であるPEGx-GCSFを少なくとも約10%含む、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項７】
xが7であるPEGx-GCSFを15%未満含む、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項８】
xが6〜7であるPEGx-GCSFを少なくとも約15%含む、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項９】
xが5〜7であるPEGx-GCSFを少なくとも約35%含む、請求項１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１０】
GCSFに由来するアミンを介してPEGがGCSFに結合している、請求項１〜９のいずれか一項に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１１】
前記PEGx-GCSFは非加水分解性の連結部を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１２】
前記非加水分解性の連結部はウレタン連結部である、請求項１１に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１３】
GCSFは、配列番号1、配列番号3、配列番号4、ならびにそれらの機能的な誘導体およびホモログからなる群から選択される配列を有するアミノ酸である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１４】
GCSFは、配列番号1、配列番号1の機能的誘導体、または配列番号1のホモログのアミノ酸であり、前記GCSFは、第17位のリジン残基、第35位のリジン残基、第41位のリジン残基、第44位のヒスチジン残基、第53位のヒスチジン残基、第80位のヒスチジン残基、第157位のヒスチジン残基、および第171位のヒスチジン残基を有する、請求項１３に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１５】
各PEGが、N末端、第17位のリジン残基、第35位のリジン残基、第41位のリジン残基、第44位のヒスチジン残基、第53位のヒスチジン残基、第80位のヒスチジン残基、第157位のヒスチジン残基、および第171位のヒスチジン残基からなる群から選択される位置においてGCSFに結合している、請求項１４に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１６】
前記PEGは、約3〜約15 kDaの平均分子量を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１７】
前記PEGは、約5〜約6 kDaの平均分子量を有する、請求項１６に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１８】
前記集団は、
約0%〜約5%の、xが3であるPEGx-GCSF；
約22%〜約32%の、xが4であるPEGx-GCSF；
約38%〜約42%の、xが5であるPEGx-GCSF；
約18%〜約28%の、xが6であるPEGx-GCSF；および
約0%〜約9%の、xが7であるPEGx-GCSF
を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のPEG[x]-GCSF。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のPEG[x]-GCSFの薬学的活性量とタンパク質非含有担体とを含む医薬製剤。
【請求項２０】
必要とする患者において白血球細胞数を増加させる方法であって、前記患者に、請求項１９に記載の医薬製剤の治療的有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２１】
前記患者は、好中球減少症の危険にあるか、もしくは好中球減少症に罹患しているか、または
前記患者は、前記患者の白血球細胞数を減少させる薬剤で処置されたか、もしくは処置されているか、または
前記患者は、内因性GCSFレベルが低下しているか、または
前記患者は、放射線治療を受けているか、または
前記患者は、癌の治療を受けているか、または
前記患者は、重症慢性好中球減少症もしくは重症先天性好中球減少症もしくは重症複合好中球減少症に罹患しているか、または
前記患者は、自家幹細胞移植に先立って処置される、
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者は骨髄癌の治療を受けている、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
必要とする患者において重症敗血症または敗血症性ショックを治療する方法であって、前記患者に、請求項１９に記載の医薬製剤の治療的有効量を投与することを含む、方法。
【請求項２４】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のPEGx-GCSFを調製するための方法であって、
(a)約5.0 mg/mlの濃度を有するGCSF溶液を得る工程と；
(b)前記GCSF溶液をPEGと組み合わせる工程であって、PEGは前記GCSFのモル量の約65〜約75倍であるモル量において存在する工程と；
(c)前記GCSFとPEGとが反応してPEGx-GCSFを産生するために十分な時間を経過させる工程と；
(d)残余PEGと反応するために十分な量のヒドロキシルアミンを添加する工程と；
(e)未反応PEG、N-ヒドロキシスクシンイミド、およびヒドロキシルアミンからPEG[x]-GCSFを単離する工程と；
(f) PEGx-GCSFを単離する工程と
を含む、方法。
【請求項２５】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のPEG[x]-GCSFを調製するための方法であって、
(a)約5.0 mg/mlの濃度を有するGCSF溶液を得る工程と；
(b)前記GCSF溶液をPEGと組み合わせる工程であって、PEGは前記GCSFのモル量の約65〜約75倍であるモル量において存在する工程と；
(c)前記GCSFとPEGとが反応してPEGx-GCSFを産生するために十分な時間を経過させる工程と；
(d)残余PEGと反応するために十分な量のヒドロキシルアミンを添加する工程と；
(e)未反応PEG、N-ヒドロキシスクシンイミド、およびヒドロキシルアミンからPEGx-GCSFを単離する工程と；
を含む、方法。