【手続補正書】
【提出日】平成19年1月19日(2007.1.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚より採取された角層細胞の形状の鑑別法であって、落射光条件下で撮影した角層細胞標本の拡大イメージを画像として取り込み、該画像から背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の３領域の画像を抽出し、該画像の物理量を計測し、該物理量及び／又はその変換値を指標として、角層細胞を鑑別することを特徴とする角層細胞の鑑別法。
【請求項２】
前記角層細胞標本の拡大イメージが、非染色の角層細胞標本のモノクロ画像、又は拡大カラー画像をモノクロ画像に変換したものであることを特徴とする、請求項１に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項３】
前記３領域の画像を抽出するにあたり、それぞれの画像の輝度領域を設定し、抽出を行うことを特徴とする、請求項１又は２に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項４】
前記画像計測により得られる物理量が、輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び画像の位置に関する物理量から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする、請求項１〜３の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項５】
前記変換値が、前記物理量を多変量解析して得られた多変量解析の結果であることを特徴とする、請求項１〜４の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項６】
角層細胞の鑑別が、角層細胞の剥がれ具合の鑑別であることを特徴とする、請求項１〜５何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項７】
前記角層細胞の鑑別が自動処理により行われることを特徴とする、請求項１〜６の何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
【請求項８】
角層細胞の剥がれ具合の鑑別法であって、次に示す工程を構成要素とすることを特徴とする、請求項１〜７何れか１項に記載の角層細胞の鑑別法。
（工程１）テープストリッピング法により採取された角層細胞を、拡大ビデオを用い、モノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２） 取り込んだ画像がカラー画像であれば、モノクロ画像に変換し、該モノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分とを判別し、背景部の画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
（工程３） 背景部の画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
（工程４） 予め剥がれ具合の程度が計測されている複数の角層細胞であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について工程１〜工程３で物理量を計測し、この物理量と剥がれ具合について多変量解析を行い回帰式を作成し、該回帰式に工程３によって得られた試験角層細胞標本の物理量を代入し、角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
このような状況を鑑みて、本発明者らは、どこでも、迅速且つ精度良く、角層細胞の形状、特に角層細胞の剥がれ具合を鑑別できる技術を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、落射光条件下で撮影した角層細胞標本の拡大イメージを画像として取り込み、モノクロ画像を背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分との３領域の画像を抽出し、該画像の物理量の多変量解析の結果を指標とする角層細胞の鑑別法によって、どこでも、迅速且つ精度良く、角層細胞の鑑別を行えることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
（１）皮膚より採取された角層細胞の形状の鑑別法であって、落射光条件下で撮影した角層細胞標本の拡大イメージを画像として取り込み、該画像から背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の３領域の画像を抽出し、該画像の物理量を計測し、該物理量及び／又はその変換値を指標として、角層細胞を鑑別することを特徴とする角層細胞の鑑別法。
（２）前記角層細胞標本の拡大イメージが、非染色の角層細胞標本のモノクロ画像、又は拡大カラー画像をモノクロ画像に変換したものであることを特徴とする、（１）に記載の角層細胞の鑑別法。
（３）前記３領域の画像を抽出するにあたり、それぞれの画像の輝度領域を設定し、抽出を行うことを特徴とする、（１）又は（２）に記載の角層細胞の鑑別法。
（４）前記画像計測により得られる物理量が、輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び画像の位置に関する物理量から選択される１種乃至は２種以上であることを特徴とする、（１）〜（３）の何れか１つに記載の角層細胞の鑑別法。
（５）前記変換値が、前記物理量を多変量解析して得られた多変量解析の結果であることを特徴とする、（１）〜（４）の何れか１つに記載の角層細胞の鑑別法。
（６）角層細胞の鑑別が、角層細胞の剥がれ具合の鑑別であることを特徴とする、（１）〜（５）何れか１つに記載の角層細胞の鑑別法。
（７）前記角層細胞の鑑別が自動処理により行われることを特徴とする、（１）〜（６）の何れか１つに記載の角層細胞の鑑別法。
（８）角層細胞の剥がれ具合の鑑別法であって、次に示す工程を構成要素とすることを特徴とする、（１）〜（７）何れか１つに記載の角層細胞の鑑別法。
（工程１）テープストリッピング法により採取された角層細胞を、拡大ビデオを用い、モ
ノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２） 取り込んだ画像がカラー画像であれば、モノクロ画像に変換し、該モノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分とを判別し、背景部の画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
（工程３） 背景部の画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
（工程４） 予め剥がれ具合の程度が計測されている複数の角層細胞であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について工程１〜工程３で物理量を計測し、この物理量と剥がれ具合について多変量解析を行い回帰式を作成し、該回帰式に工程３によって得られた試験角層細胞標本の物理量を代入し、角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
前記落射光条件下とは、上又は斜め方向から標本に対して光源から光を照射し、対物レンズを通して標本を観察する条件である。一般的には、標本に対して透過させた光を拡大して観察する透過光条件では、光が透過しやすい標本の観察に適し、一方、落射光条件においては光が透過しにくい標本の観察に適している。前記拡大イメージを取り込む画像としては、モノクロ画像で取り込むこともできるし、カラー画像として取り込むこともできる。カラー画像として取り込んだ場合には、後述のソフトウェアを用いて、これをモノクロ画像に変換することが好ましい。この様な処理をすることにより、因子が３種ある画像を、因子が輝度の１つのみにすることができるためである。又、この様な拡大イメージを取り込むべき角層細胞の標本としては、テープストリッピング法により採取した、角層細胞を染色することなく用いることもできる。これは、通常は、角層細胞の剥がれ具合については、染色工程を経て得られた標本でなければ、その程度を鑑別できないが、本発明の鑑別法による落射光条件下で撮影した角層細胞の拡大イメージの画像においては、染色することなく鑑別でき、染色に要する時間と、環境の負担を軽減することができることを本発明者は見出している。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
この様に角層細胞を採取し、拡大イメージとして取り込まれたモノクロ画像に対して、背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分との３領域を抽出処理し、該領域画像の画像計測を行って得られる輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び／又は画像の位置に関する物理量等のデータを作成し、該データを、予め、標準角層細胞サンプルを同様に処理し得られた物理量と、角層細胞の剥がれ具合の肉眼判定値とを多変量解析して、作成しておいた、予測式（回帰式）に導入して角層細胞の剥がれ具合を推定する角層細胞の鑑別法に関するフローチャートを図１に示す。又、好ましい作業形態を工程毎に分けて、記述すれば、次に示す如くになる。かかる工程は、これ以外の鑑別の的確性を向上させる工
程を含むこともできるし、多少の順番を本発明の効果を損なわない範囲で変えることもできる。
（工程１）テープストリッピング法により採取された角層細胞を、拡大ビデオを用い、モノクロ画像、又はカラー画像として取り込む工程。
（工程２） 取り込んだ画像がカラー画像であれば、モノクロ画像に変換し、該モノクロ画像を構成する輝度から、背景部、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分とを判別し、背景部の画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像とを抽出する工程。
（工程３） 背景部の画像、角層細胞の他の角層細胞と重なっている部分の画像及び角層細胞の他の角層細胞と重なっていない部分の画像の物理量を計測する工程。
（工程４） 予め剥がれ具合の程度が計測されている複数の角層細胞であって、剥がれ具合の程度が分布している標準角層細胞標本について工程１〜工程３で物理量を計測し、この物理量と剥がれ具合について多変量解析を行い回帰式を作成し、該回帰式に工程３によって得られた試験角層細胞標本の物理量を代入し、角層細胞の剥がれ具合の推定値を算出する。
以下に、更に詳細に説明を加える。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
前記角層細胞の形状を画像として取り込む方法として、デジタル式のマイクロスコープが好ましい。デジタル式マイクロスコープを使用することで、コンピュータ上でデジタル画像データの自動処理を経て、角層細胞の形状、特に角層細胞の剥がれ具合等の角層細胞の鑑別が可能となる。このようなデジタル式マイクロスコープとしては、例えば、（株)モリテックスのコスメティック用マイクロスコープ（図２参照）、（有）フォルテシモのＵＳＢビデオマイクロスコープ、スカラ（株）のＤＥＧＩＴＡＬ ＭＩＣＲＯＳＣＯＰＥ、或いは（株）キーエンスのデジタルマイクロスコープ等が例示できる。画像の撮影倍率は、角層細胞の形状の鑑別の種類に応じて変えることが好ましく、例えば、角層細胞の剥がれ具合の鑑別では、５０〜２００倍が好ましく例示できる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
該予測式は以下のように作成されることが好ましい。即ち、５０名以上、より好ましくは１００名以上の女性被験者の頬部より粘着テープを用いて採取した角層細胞を２分割し、一方の角層細胞をゲンチアナバイオレットで染色し、標準化された評価方式に従って訓練された評価者が角層細胞の剥がれ具合の評価を行う。人数は、多変量解析の正確性を維持するために好適な数値である。２分割した残りの非染色の角層細胞をカラー画像として取り込み、モノクロ画像に変換後、背景部、角層細胞の重なっている部分及び角層細胞の重なっていない部分の３領域の抽出処理し、該領域画像の画像計測を行って得られる輝度に関する物理量、面積に関する物理量、ヒストグラムに関する物理量及び画像の位置に関する物理量を算出する。これらの物理量データ及び角層細胞の剥がれ具合の評価値について多変量解析を行う。該多変量解析として、例えば、重回帰分析、判別分析、因子分析、
主成分分析、数量化一類、数量化二類及び数量化三類等が例示できる。これらの内、特に好ましいのは、重回帰分析、判別分析及び数量化一類である。これは、重回帰分析、判別分析及び数量化一類によって作成される予測式を利用できるためである。例えば、４５項目の物理量を説明変数とし、前記染色した角層細胞の剥がれ具合の評価値を目的変数に重回帰分析を行い、重回帰式を求める。該重回帰式をもって予測式とする。かような、予め設定された、予測式を用いて、これから角層細胞の鑑別を行われるべき被験者の角層細胞標本における角層細胞の剥がれ具合を求め、皮膚水分量、肌性、肌質等の角層細胞の鑑別を行うことができる。尚、前記の多変量解析において、角層細胞の剥がれ具合の評価値の対象を非染色の角層細胞に変更したり、物理量を算出する対象を染色した角層細胞に変更することもでき、対応する組み合わせ毎に、前記の多変量解析を行い予測式を作成することが好ましい。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
表２に、角層細胞の剥がれ具合について、目視評価と本発明による推定値（自動評価）との集計表を示す。両評価値の一致率は、完全な一致は６３％、１段階のずれを許容すると９５％であり、本発明の自動評価が満足できる精度を有することが分かる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
表３に、角層細胞の剥がれ具合について、目視評価と本発明による推定値（自動評価）との集計表を示す。両評価値の一致率は、完全な一致は７３％、１段階のずれを許容すると１００％であり、本発明の自動評価が満足できる精度を有することが分かる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
表４に、角層細胞の剥がれ具合について、目視評価と本発明による推定値（自動評価）との集計表を示す。両評価値の一致率は、完全な一致は７４％、１段階のずれを許容すると１００％であり、本発明の自動評価が満足できる精度を有することが分かる。また、非染色角層細胞を用いて、染色した角層細胞の剥がれ具合を自動評価を行うことで、非染色且つコンピュータ故に、どこでも、容易に、迅速且つ正確に評価でき、場所、人、時間の大きなメリットを提供できる。