(57)【要約】  食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養剤、栄養補助剤、動物薬、飲料、飼料、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等として有用な、還元型補酵素Ｑ10類縁体含量の低い還元型補酵素Ｑ10、並びに当該還元型補酵素Ｑ10の製造方法を提供することを目的とする。  還元型補酵素Ｑ10を酸化から防護された条件下にクロマトグラフィーに供するか、酸化型補酵素Ｑ10をクロマトグラフィーで精製した後に、還元型補酵素Ｑ10に変換することを特徴とする還元型補酵素Ｑ10の製造方法を提供する。当該方法により、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールから選択される少なくとも１種の含有量が１重量％以下である、高品質な還元型補酵素Ｑ10を提供できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールよりなる群から選択される還元型補酵素Ｑ10類縁体のうち、少なくとも１種の含有量が１重量％以下である実質的に純粋な還元型補酵素Ｑ10結晶。
【請求項２】
cis-還元型補酵素Ｑ10の含有量が１重量％以下である請求項１記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
【請求項３】
還元型補酵素Ｑ11の含有量が１重量％以下である請求項１記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
【請求項４】
ユビクロメノールの含有量が１重量％以下である請求項１記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
【請求項５】
cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの総含有量が３重量％以下である請求項１〜４のいずれか1項に記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
【請求項６】
cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの含有量が各々１重量％以下である請求項１記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
【請求項７】
cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールよりなる群から選択される還元型補酵素Ｑ10類縁体のうち、少なくとも１種の含有量が１重量％以下である還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
【請求項８】
cis-還元型補酵素Ｑ10の含有量が１重量％以下である請求項７記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
【請求項９】
還元型補酵素Ｑ11の含有量が１重量％以下である請求項７記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
【請求項１０】
ユビクロメノールの含有量が１重量％以下である請求項７記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
【請求項１１】
cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの総含有量が３重量％以下である、請求項７〜１０のいずれか1項に記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
【請求項１２】
cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの含有量が各々１重量％以下である請求項７記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
【請求項１３】
請求項１記載の還元型補酵素Ｑ10結晶または請求項７記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物の製造方法であって、クロマトグラフィーにて不純物を除去する工程を含むことを特徴とする製造方法。
【請求項１４】
前記クロマトグラフィーがカラムクロマトグラフィーである請求項１３記載の製造方法。
【請求項１５】
クロマトグラフィーの担体がシリカゲルまたは化学修飾されたシリカゲルであることを特徴とする請求項１３または１４記載の製造方法。
【請求項１６】
化学修飾されたシリカゲルがオクタデシル基で修飾されたシリカゲルであることを特徴とする請求項１５記載の製造方法。
【請求項１７】
不純物として、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、またはユビクロメノールの少なくとも１種を含有する還元型補酵素Ｑ10を、クロマトグラフィーで精製する工程を含む、請求項１３〜１６のいずれか1項に記載の製造方法。
【請求項１８】
クロマトグラフィーが、還元型補酵素Ｑ10が酸化から防護された環境下に行われる請求項１７記載の製造方法。
【請求項１９】
展開溶媒としてヘキサン、２−プロパノール、および酢酸の混合溶媒を用い、cis-還元型補酵素Ｑ10を除去することを特徴とする請求項１７または１８記載の製造方法。
【請求項２０】
展開溶媒としてヘキサン、メタノールもしくはエタノールまたはその混合溶媒のいずれか用い、還元型補酵素Ｑ11および／またはユビクロメノールを除去することを特徴とする請求項１７または１８記載の製造方法。
【請求項２１】
不純物としてcis-酸化型補酵素Ｑ10、酸化型補酵素Ｑ11、またはユビクロメノールの少なくとも１種を含む酸化型補酵素Ｑ10をクロマトグラフィーで精製し、精製された酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと変換することを特徴とする、請求項１３〜１６のいずれか1項に記載の製造方法。
【請求項２２】
展開溶媒としてヘキサン、２−プロパノール、および酢酸エチルから選ばれる２種以上の混合溶媒を用い、cis-酸化型補酵素Ｑ10を除去することを特徴とする請求項２１に記載の製造方法。
【請求項２３】
展開溶媒としてヘキサン、メタノールもしくはエタノールまたはその混合溶媒のいずれか用い、酸化型補酵素Ｑ11および／またはユビクロメノールを除去することを特徴とする請求項２１記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、cis体の還元型補酵素Ｑ10（以下、cis-還元型補酵素Ｑ10）、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノール等の還元型補酵素Ｑ10類縁体の含有量が低い還元型補酵素Ｑ10結晶、組成物、並びにこれらの製造方法に関する。還元型補酵素Ｑ10は、酸化型補酵素Ｑ10と比較して高い経口吸収性を示し、優れた、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、動物薬、飲料、飼料、ペットフード、化粧品、医薬品、治療薬、予防薬等として有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
補酵素Ｑ１０はミトコンドリア、リソゾーム、ゴルジ体、ミクロソーム、ペルオキシソーム或いは細胞膜などに局在し、ミトコンドリアでは電子伝達系の構成成分としてＡＴＰ産生賦活、生体内での抗酸化作用、膜安定化に関与していることが知られている生体の機能維持に不可欠な物質であり、食品、医薬品、化粧品等に使用されている。また、補酵素Ｑ10には酸化型と還元型が存在する。そのうち、還元型補酵素Ｑ10は、合成、発酵、天然物からの抽出等の方法により得られた補酵素Ｑ10中から公知の方法で精製することにより得られることが知られている（特許文献１）。この場合には、上記還元型補酵素Ｑ10中に含まれる酸化型補酵素Ｑ10を、水素化ホウ素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム（次亜硫酸ナトリウム）等の一般的な還元剤を用いて還元した後、精製を行っても良いこと、また、還元型補酵素Ｑ10は、既存の高純度補酵素Ｑ10に上記還元剤を作用させる方法によっても得られることが、該特許公報中に記載されている。【０００３】
上述した合成、発酵、天然物からの抽出等により還元型補酵素Ｑ10を得た場合には、種々の還元型補酵素Ｑ10の類縁体（例えば、cis−還元型補酵素Ｑ10、ユビクロメノール、還元型補酵素Ｑ11等）が含まれている。一般に不純物の除去には、不純物と目的物の混合物を溶媒に溶解させた後、目的物をその溶液から結晶化する方法（晶析法）が有効である。例えば、晶析法により還元型補酵素Ｑ10よりその類縁体である還元型補酵素Ｑ９、還元型補酵素Ｑ８、還元型補酵素Ｑ７を除去する方法は既に知られている（特許文献２、３）。
【特許文献１】特開平１０−１０９９３３号公報
【特許文献２】ＷＯ０３／６４０８号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ０３／６４０９号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らが検討したところ、晶析法などの従来の方法によると還元型補酵素Ｑ10類縁体のうち、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、ユビクロメノール等は容易に除去できないことが判明した。
本発明は、上記に鑑み、上記類縁体を簡便に除去できる還元型補酵素Ｑ10の製造方法ならびに該類縁体の含有量が低い高品質の還元型補酵素Ｑ10を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、特定のクロマトグラフィー条件において、通常除去しにくい還元型補酵素Ｑ10の類縁体を、効率よく除去でき、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの含有量の低い実質的に純粋な還元型補酵素Ｑ10結晶などが得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。【０００６】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
〔１〕cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールよりなる群から選択される還元型補酵素Ｑ10類縁体のうち、少なくとも１種の含有量が１重量％以下である実質的に純粋な還元型補酵素Ｑ10結晶。
〔２〕cis-還元型補酵素Ｑ10の含有量が１重量％以下である〔１〕記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
〔３〕還元型補酵素Ｑ11の含有量が１重量％以下である〔１〕記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
〔４〕ユビクロメノールの含有量が１重量％以下である〔１〕記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
〔５〕cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの総含有量が３重量％以下である〔１〕〜〔４〕のいずれか1項に記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
〔６〕cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの含有量が各々１重量％以下である〔１〕記載の還元型補酵素Ｑ10結晶。
〔７〕cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールよりなる群から選択される還元型補酵素Ｑ10類縁体のうち、少なくとも１種の含有量が１重量％以下である還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
〔８〕cis-還元型補酵素Ｑ10の含有量が１重量％以下である〔７〕記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
〔９〕還元型補酵素Ｑ11の含有量が１重量％以下である〔７〕記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
〔１０〕ユビクロメノールの含有量が１重量％以下である〔７〕記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
〔１１〕cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの総含有量が３重量％以下である、〔７〕〜〔１０〕のいずれか1項に記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
〔１２〕cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの含有量が各々１重量％以下である〔７〕記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物。
〔１３〕〔１〕記載の還元型補酵素Ｑ10結晶または〔７〕記載の還元型補酵素Ｑ10含有組成物の製造方法であって、クロマトグラフィーにて不純物を除去する工程を含むことを特徴とする製造方法。
〔１４〕前記クロマトグラフィーがカラムクロマトグラフィーである〔１３〕記載の製造方法。
〔１５〕クロマトグラフィーの担体がシリカゲルまたは化学修飾されたシリカゲルであることを特徴とする〔１３〕または〔１４〕記載の製造方法。
〔１６〕化学修飾されたシリカゲルがオクタデシル基で修飾されたシリカゲルであることを特徴とする〔１５〕記載の製造方法。
〔１７〕不純物として、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、またはユビクロメノールの少なくとも１種を含有する還元型補酵素Ｑ10を、クロマトグラフィーで精製する工程を含む、〔１３〕〜〔１６〕のいずれか1項に記載の製造方法。
〔１８〕クロマトグラフィーが、還元型補酵素Ｑ10が酸化から防護された環境下に行われる〔１７〕記載の製造方法。
〔１９〕展開溶媒としてヘキサン、２−プロパノール、および酢酸の混合溶媒を用い、cis-還元型補酵素Ｑ10を除去することを特徴とする〔１７〕または〔１８〕記載の製造方法。
〔２０〕展開溶媒としてヘキサン、メタノールもしくはエタノールまたはその混合溶媒のいずれか用い、還元型補酵素Ｑ11および／またはユビクロメノールを除去することを特徴とする〔１７〕または〔１８〕記載の製造方法。
〔２１〕不純物としてcis-酸化型補酵素Ｑ10、酸化型補酵素Ｑ11、またはユビクロメノールの少なくとも１種を含む酸化型補酵素Ｑ10をクロマトグラフィーで精製し、精製された酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと変換することを特徴とする、〔１３〕〜〔１６〕のいずれか1項に記載の製造方法。
〔２２〕展開溶媒としてヘキサン、２−プロパノール、および酢酸エチルから選ばれる２種以上の混合溶媒を用い、cis-酸化型補酵素Ｑ10を除去することを特徴とする〔２１〕記載の製造方法。
〔２３〕展開溶媒としてヘキサン、メタノールもしくはエタノールまたはその混合溶媒のいずれか用い、酸化型補酵素Ｑ11および／またはユビクロメノールを除去することを特徴とする〔２１〕記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、通常除去しにくい還元型補酵素Ｑ10の類縁体を簡便に除去し、高品質の還元型補酵素Ｑ10を作業性および経済性良く得ることができる。
特に還元型補酵素Ｑ10を食品や医薬品等に含有する場合は、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、および、ユビクロメノール等の還元型補酵素Ｑ10類縁体の含量を低くすることにより、有効成分である還元型補酵素Ｑ10の絶対量の低下を抑制し、一般的にヒトの生体には存在しない不純物の摂取による予期し得ない影響を排除することができる。さらに、従来、還元型補酵素Ｑ10を食品等として長期間大量に摂取することは知られていなかったが、そのような場合において、特に上述したような不純物の悪影響を排除することは非常に有効となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。なお、本明細書において、補酵素Ｑ10とのみ記載した場合は、酸化型、還元型を問わず、両者が混在する場合には混合物全体を表すものである。また、trans、cisの記載がない場合は、all−trans型の補酵素Ｑ10を表すものである。【０００９】
本発明に使用する還元型補酵素Ｑ10は、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により得ることができる。好ましくは、合成、発酵、天然物からの抽出等から得られる還元型補酵素Ｑ10中に含まれる酸化型補酵素Ｑ10、或いは、酸化型補酵素Ｑ10を還元することにより得られたものであり、より好ましくは、アスコルビン酸類およびそのエステルまたは塩、ハイドロサルファイトナトリウム（次亜硫酸ナトリウム）等の還元剤により酸化型補酵素Ｑ10を還元して得られたものである。【００１０】
本発明の還元型補酵素Ｑ10結晶（本発明の結晶ということもある）は、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールから選択される還元型補酵素Ｑ10類縁体のうち、少なくとも１種の含有量が１重量％以下である実質的に純粋な還元型補酵素Ｑ10結晶である。【００１１】
本発明の結晶においては、cis-還元型補酵素Ｑ10の含有量は、通常１重量％以下、好ましくは０．８重量％以下、より好ましくは０．５重量％以下である。cis-還元型補酵素Ｑ10を除去することにより、有効成分である還元型補酵素Ｑ10の絶対量の低下を抑制し、一般的にヒトの生体には存在しない不純物の摂取による予期し得ない影響を排除することができる。特にcis-還元型補酵素Ｑ10はその立体構造から充分に抗酸化活性を発揮しにくい可能性があり、また、プロオキシダントとして働く可能性もあることから、cis-還元型補酵素Ｑ10を除去することにより、酸化ストレスの発生という危険性を排除することもできる。【００１２】
本発明の結晶においては、還元型補酵素Ｑ11の含有量は、通常１重量％以下、好ましくは０．８重量％以下、より好ましくは０．５重量％以下である。還元型補酵素Ｑ11を除去することにより、有効成分である還元型補酵素Ｑ10の絶対量の低下を抑制し、一般的にヒトでは生合成されない成分の摂取による予期し得ない影響を排除することができる。【００１３】
本発明の結晶においては、ユビクロメノールの含有量が、通常１重量％以下、好ましくは０．８重量％以下、より好ましくは０．５重量％以下である。ユビクロメノールを除去することにより、有効成分である還元型補酵素Ｑ10の絶対量の低下を抑制し、一般的にヒトの生体には存在しない不純物の摂取による予期し得ない影響を排除することができる。【００１４】
本発明の結晶においては、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの総含有量は、通常３重量％以下、好ましくは２重量％以下、より好ましくは１重量％以下である。上記類縁体の含有量が上記好適範囲にある場合おいて、例えば、有効成分である還元型補酵素Ｑ10の絶対量の低下を抑制し、一般的にヒトの生体には存在しない不純物の摂取による予期し得ない影響を排除することができる。したがって、上記類縁体の含有量が上記好適範囲にある場合においては、例えば、食品やサプリメント等として、毎日大量に消費する場合においても、長期間、安全に使用することができる。【００１５】
また、後述する製造方法により得られる高品質の還元型補酵素Ｑ10、もしくはその結晶を有効成分として使用することにより、還元型補酵素Ｑ10類縁体含量の少ない、高品質な還元型補酵素Ｑ10含有組成物を得ることができる。
すなわち本発明の還元型補酵素Ｑ10含有組成物（本発明の組成物ともいう）は、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールから選択される還元型補酵素Ｑ10類縁体のうち、少なくとも１種の含有量が１重量％以下である還元型補酵素Ｑ10（結晶）を含む。【００１６】
cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの好適範囲は、上記本発明の結晶において述べた範囲と同じである。同様に本発明の組成物は、例えばサプリメントに含有して毎日大量に消費する場合においても有効成分である還元型補酵素Ｑ10の絶対量の低下を抑制し、一般的にヒトの生体には存在しない不純物の摂取による予期し得ない影響を排除することができるので安全で長期間服用できる。【００１７】
本発明の上記組成物は、そのまま使用することもできるが、それをカプセル剤（マイクロカプセル、ハードカプセル、ソフトカプセル）、錠剤、シロップ、飲料等の経口投与形態に加工して好ましく使用しうるし、クリーム、坐薬、練り歯磨き等の非経口投与形態に加工しても使用しうる。特に好ましくは、カプセル剤であり、とりわけ、ソフトカプセルである。カプセル基材としては特に制限されず、牛骨、牛皮、豚皮、魚皮等を由来とするゼラチンをはじめとして、他の基材（例えば、増粘安定剤（食品添加物として使用しうるカラギーナン、アルギン酸等の海藻由来品やローカストビーンガム、グアーガム等の植物種子由来品等）や製造用剤（セルロース類など）など）も使用しうる。【００１８】
本発明の還元型補酵素Ｑ10含有組成物を、上記の経口投与形態、その他の形態に加工するに際しては、その目的に応じて他の素材を適宜添加してもよい。このようなものとしては、特に制限されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、有効成分の溶解補助剤、安定化剤等が挙げられる。言うまでもなく、補酵素Ｑ10以外の他の活性成分を共存させることを妨げない。【００１９】
上記賦形剤としては特に制限されないが、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等を挙げることができる。【００２０】
上記崩壊剤としては特に制限されないが、例えば、でんぷん、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント等を挙げることができる。【００２１】
上記滑沢剤としては特に制限されないが、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等を挙げることができる。【００２２】
上記結合剤としては特に制限されないが、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等を挙げることができる。【００２３】
上記酸化防止剤としては特に制限されないが、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸等を挙げることができる。【００２４】
上記着色剤としては特に制限されないが、例えば、医薬品、食品に添加することが許可されているもの等を挙げることができる。【００２５】
上記凝集防止剤としては特に制限されないが、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸等を挙げることができる。【００２６】
上記吸収促進剤としては特に制限されないが、例えば、高級アルコール類、高級脂肪酸類、ショ糖脂肪酸エステルやソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等の界面活性剤等を挙げることができる。【００２７】
上記有効成分の溶解補助剤としては特に制限されないが、例えば、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸等の有機酸等を挙げることができる。【００２８】
上記安定化剤としては特に制限されないが、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチル等が挙げられる。【００２９】
上記補酵素Ｑ10以外の活性成分としては、例えば、アミノ酸、ビタミン、ミネラル、ポリフェノール、有機酸、糖類、ペプチド、タンパク質等を挙げることができる。【００３０】
本発明の組成物中に含まれる還元型補酵素Ｑ10の量は特に制限されないが、全組成物中に含まれる還元型補酵素Ｑ10の重量として、通常約０.０１重量％以上、好ましくは約０.１重量％以上、より好ましくは約１重量％以上、特に好ましくは約２重量％以上、さらに好ましくは約３重量％以上である。上限は特に制限されないが、組成物の粘性等も考慮して通常約７０％以下、好ましくは約６０重量％以下、より好ましくは約５０重量％以下である。【００３１】
本発明の結晶または組成物の製造方法は、クロマトグラフィーにて不純物を除去する工程を含むことを特徴とする製造方法である。クロマトグラフィーで除去できる不純物としては、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、ユビクロメノール等を挙げることができる。言うまでもなく、上記以外の不純物を該クロマトグラフィーにて除去することも妨げない。【００３２】
別の態様として、本発明の製造方法は、不純物として、cis-還元型補酵素Ｑ10、還元型補酵素Ｑ11、またはユビクロメノールの少なくとも１種を含有する還元型補酵素Ｑ10を、クロマトグラフィーで精製する工程を含む、還元型補酵素Ｑ10の製造方法である。【００３３】
クロマトグラフィーとしては、特に制限されないが、例えば、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等を挙げることができる。好ましくは、カラムクロマトグラフィーである。【００３４】
クロマトグラフィーに使用する担体としては特に制限されないが、市販のシリカゲル等を挙げることができる。担体に使用されるシリカゲルは化学修飾されていてもよい。このようなシリカゲルとしては、例えば、オクタデシル基で化学修飾されたシリカゲル、オクチル基で化学修飾されたシリカゲル、ブチル基で化学修飾されたシリカゲル、トリメチル基で化学修飾されたシリカゲル、フェニル基で化学修飾されたシリカゲル等をあげることができる。好ましくは、オクタデシル基で化学修飾されたシリカゲルである。【００３５】
尚、還元型補酵素Ｑ10は空気中でシリカゲルと接触させると、容易に酸化される。したがって、クロマトグラフィーは、還元型補酵素Ｑ10が酸化から防護された環境下で行うことが望ましい。【００３６】
一例として、展開溶媒中に含まれる酸素を除去し、かつ、脱酸素雰囲気下にて実施することが挙げられる。展開溶媒からの酸素の除去や脱酸素雰囲気は、不活性ガスによる置換、減圧、沸騰やこれらを組み合わせることにより達成できる。少なくとも、不活性ガスによる置換、即ち、不活性ガス雰囲気を用いるのが好適である。上記不活性ガスとしては、例えば、窒素ガス、ヘリウムガス、アルゴンガス、水素ガス、炭酸ガス等を挙げることができ、好ましくは窒素ガスである。【００３７】
また、展開溶媒にｐＫａが２．５以下の強酸、クエン酸類、またはアスコルビン酸類等を共存させることにより、還元型補酵素Ｑ10の酸化を防護することもできる。上記の脱酸素雰囲気下と上記酸類の共存とを組み合わせるのが、より好ましい。【００３８】
クロマトグラフィーに使用する展開溶媒としては特に制限されず、除去すべき還元型補酵素Ｑ10の類縁体に合わせて選択すればよい。このような展開溶媒としては、例えば、炭化水素類、脂肪酸エステル類、ニトリル類、エーテル類、ケトン類、アルコール類、脂肪酸類、および、これらの混合溶媒等を挙げることができる。【００３９】
炭化水素類としては、特に制限されないが、例えば、脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素、ハロゲン化炭化水素等を挙げることができる。特に、脂肪族炭化水素、芳香族炭化水素が好ましく、とりわけ、脂肪族炭化水素が好ましい。【００４０】
脂肪族炭化水素としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、通常、炭素数３〜２０、好ましくは、炭素数５〜１２のものが用いられる。【００４１】
具体例としては、例えば、プロパン、ブタン、イソブタン、ペンタン、２−メチルブタン、シクロペンタン、２−ペンテン、ヘキサン、２−メチルペンタン、２，２−ジメチルブタン、２，３−ジメチルブタン、メチルシクロペンタン、シクロヘキサン、１−ヘキセン、シクロヘキセン、ヘプタン、２−メチルヘキサン、３−メチルヘキサン、２、３−ジメチルペンタン、２，４−ジメチルペンタン、メチルシクロヘキサン、１−ヘプテン、オクタン、２，２，３−トリメチルペンタン、イソオクタン、エチルシクロヘキサン、１−オクテン、ノナン、２，２，５−トリメチルヘキサン、１−ノネン、デカン、１−デセン、ｐ−メンタン、ウンデカン、ドデカン等を挙げることができる。【００４２】
中でもペンタン、２−メチルブタン、シクロペンタン、ヘキサン、２−メチルペンタン、２，２−ジメチルブタン、２，３−ジメチルブタン、メチルシクロペンタン、シクロヘキサン、ヘプタン、２−メチルヘキサン、３−メチルヘキサン、２，３−ジメチルペンタン、２，４−ジメチルペンタン、メチルシクロヘキサン、オクタン、２，２，３−トリメチルペンタン、イソオクタン、エチルシクロヘキサンが好ましく用いられる。【００４３】
芳香族炭化水素としては、特に制限されないが、通常、炭素数６〜２０、特に炭素数６〜１２、とりわけ炭素数７〜１０のものが好適に用いられる。具体例としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、エチルベンゼン、クメン、メシチレン、テトラリン、ブチルベンゼン、ｐ−シメン、シクロヘキシルベンゼン、ジエチルベンゼン、ペンチルベンゼン、ジペンチルベンゼン、ドデシルベンゼン、スチレン等を挙げることができる。好ましくは、トルエン、キシレン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、エチルベンゼン、クメン、メシチレン、テトラリン、ブチルベンゼン、ｐ−シメン、シクロヘキシルベンゼン、ジエチルベンゼン、ペンチルベンゼンであり、より好ましくは、トルエン、キシレン、ｏ−キシレン、ｍ−キシレン、ｐ−キシレン、クメン、テトラリンであり、最も好ましくは、クメンである。【００４４】
ハロゲン化炭化水素としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に、非環状のものが好ましく用いられる。普通、塩素化炭化水素、フッ素化炭化水素が好ましく、特に塩素化炭化水素が好ましい。炭素数１〜６、特に炭素数１〜４、とりわけ炭素数１〜２のものが好適に用いられる。【００４５】
具体例としては、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，１−ジクロロエタン、１，２−ジクロロエタン、１，１，１−トリクロロエタン、１，１，２−トリクロロエタン、１，１，１，２−テトラクロロエタン、１，１，２，２−テトラクロロエタン、ペンタクロロエタン、ヘキサクロロエタン、１，１−ジクロロエチレン、１，２−ジクロロエチレン、トリクロロエチレン、テトラクロロエチレン、１，２−ジクロロプロパン、１，２，３−トリクロロプロパン、クロロベンゼン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン等を挙げることができる。【００４６】
好ましくは、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，１−ジクロロエタン、１，２−ジクロロエタン、１，１，１−トリクロロエタン、１，１，２−トリクロロエタン、１，１−ジクロロエチレン、１，２−ジクロロエチレン、トリクロロエチレン、クロロベンゼン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンであり、より好ましくは、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエチレン、トリクロロエチレン、クロロベンゼン、１，１，１，２−テトラフルオロエタンである。【００４７】
脂肪酸エステル類としては、特に制限されないが、例えば、プロピオン酸エステル、酢酸エステル、ギ酸エステル等を挙げることができる。特に、酢酸エステル、ギ酸エステルが好ましく、とりわけ、酢酸エステルが好ましい。特に制限されないが、一般に、エステル基としては、炭素数１〜８のアルキルエステルまたはアラルキルエステル、好ましくは炭素数１〜６のアルキルエステル、より好ましくは炭素数１〜４のアルキルエステルが好ましく用いられる。【００４８】
プロピオン酸エステルとしては、例えば、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸ブチル、プロピオン酸イソペンチルを挙げることができる。【００４９】
酢酸エステルとしては、例えば、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチル、酢酸ｓｅｃ−ブチル、酢酸ペンチル、酢酸イソペンチル、酢酸ｓｅｃ−ヘキシル、酢酸シクロヘキシル、酢酸ベンジル等を挙げることができる。好ましくは、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチル、酢酸ｓｅｃ−ブチル、酢酸ペンチル、酢酸イソペンチル、酢酸ｓｅｃ−ヘキシル、酢酸シクロヘキシルであり、より好ましくは、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、酢酸イソブチルであり、最も好ましくは、酢酸エチルである。【００５０】
ギ酸エステルとしては、例えば、ギ酸メチル、ギ酸エチル、ギ酸プロピル、ギ酸イソプロピル、ギ酸ブチル、ギ酸イソブチル、ギ酸ｓｅｃ−ブチル、ギ酸ペンチル等を挙げることができる。好ましくは、ギ酸メチル、ギ酸エチル、ギ酸プロピル、ギ酸ブチル、ギ酸イソブチル、ギ酸ペンチルであり、最も好ましくは、ギ酸エチルである。【００５１】
ニトリル類としては、特に制限されないが、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に飽和のものが好ましく用いられる。普通、炭素数２〜２０、特に炭素数２〜１２、とりわけ炭素数２〜８のものが好適に用いられる。【００５２】
具体例としては、例えば、アセトニトリル、プロピオニトリル、マロノニトリル、ブチロニトリル、イソブチロニトリル、スクシノニトリル、バレロニトリル、グルタロニトリル、ヘキサンニトリル、ヘプチルシアニド、オクチルシアニド、ウンデカンニトリル、ドデカンニトリル、トリデカンニトリル、ペンタデカンニトリル、ステアロニトリル、クロロアセトニトリル、ブロモアセトニトリル、クロロプロピオニトリル、ブロモプロピオニトリル、メトキシアセトニトリル、シアノ酢酸メチル、シアノ酢酸エチル、トルニトリル、ベンゾニトリル、クロロベンゾニトリル、ブロモベンゾニトリル、シアノ安息香酸、ニトロベンゾニトリル、アニソニトリル、フタロニトリル、ブロモトルニトリル、メチルシアノベンゾエート、メトキシベンゾニトリル、アセチルベンゾニトリル、ナフトニトリル、ビフェニルカルボニトリル、フェニルプロピオニトリル、フェニルブチロニトリル、メチルフェニルアセトニトリル、ジフェニルアセトニトリル、ナフチルアセトニトリル、ニトロフェニルアセトニトリル、クロロベンジルシアニド、シクロプロパンカルボニトリル、シクロヘキサンカルボニトリル、シクロヘプタンカルボニトリル、フェニルシクロヘキサンカルボニトリル、トリルシクロヘキサンカルボニトリル等を挙げることができる。【００５３】
好ましくは、アセトニトリル、プロピオニトリル、スクシノニトリル、ブチロニトリル、イソブチロニトリル、バレロニトリル、シアノ酢酸メチル、シアノ酢酸エチル、ベンゾニトリル、トルニトリル、クロロプロピオニトリルであり、より好ましくは、アセトニトリル、プロピオニトリル、ブチロニトリル、イソブチロニトリルであり、最も好ましくは、アセトニトリルである。【００５４】
エーテル類としては、特に制限されないが、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に、飽和のものが好ましく用いられる。普通、炭素数３〜２０、特に炭素数４〜１２、とりわけ炭素数４〜８のものが好適に用いられる。【００５５】
具体例としては、例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、ジヘキシルエーテル、エチルビニルエーテル、ブチルビニルエーテル、アニソール、フェネトール、ブチルフェニルエーテル、メトキシトルエン、ジオキサン、フラン、２−メチルフラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル等を挙げることができる。【００５６】
好ましくは、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、ジヘキシルエーテル、アニソール、フェネトール、ブチルフェニルエーテル、メトキシトルエン、ジオキサン、２−メチルフラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、エチレングリコールジブチルエーテル、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテルであり、より好ましくは、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アニソール、ジオキサン、テトラヒドロフラン、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテルであり、さらに好ましくは、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、アニソール等であり、最も好ましくは、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルである。【００５７】
ケトン類としては、特に制限されないが、普通炭素数３〜６のものが好適に用いられる。具体例としては、例えば、アセトン、メチルエチルケトン、メチルブチルケトン、メチルイソブチルケトン等を挙げることができ、好ましくは、アセトン、メチルエチルケトンであり、最も好ましくは、アセトンである。【００５８】
アルコール類としては、環状、非環状を問わず、又、飽和、不飽和を問わず、特に制限されないが、一般に、飽和のものが好ましく用いられる。普通、炭素数１〜２０、特に炭素数１〜１２、とりわけ炭素数１〜６、なかでも炭素数１〜５、なかんずく炭素数１〜３、更には、炭素数２〜３の１価アルコールが好ましく、又、炭素数２〜５の２価アルコールが好ましく、又、炭素数３の３価アルコールが好ましい。【００５９】
１価のアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコール、ｔｅｒｔ−ペンチルアルコール、３−メチル−２−ブタノール、ネオペンチルアルコール、１−ヘキサノール、２−メチル−１−ペンタノール、４−メチル−２−ペンタノール、２−エチル−１−ブタノール、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、３−ヘプタノール、１−オクタノール、２−オクタノール、２−エチル−１−ヘキサノール、１−ノナノール、１−デカノール、１−ウンデカノール、１−ドデカノール、アリルアルコール、プロパルギルアルコール、ベンジルアルコール、シクロヘキサノール、１−メチルシクロヘキサノール、２−メチルシクロヘキサノール、３−メチルシクロヘキサノール、４−メチルシクロヘキサノール等を挙げることができる。【００６０】
好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコール、ｔｅｒｔ−ペンチルアルコール、３−メチル−２−ブタノール、ネオペンチルアルコール、１−ヘキサノール、２−メチル−１−ペンタノール、４−メチル−２−ペンタノール、２−エチル−１−ブタノール、シクロヘキサノールであり、より好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコール、ｔｅｒｔ−ペンチルアルコール、３−メチル−２−ブタノール、ネオペンチルアルコールであり、さらに好ましくは、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、２−メチル−１−ブタノール、イソペンチルアルコールであり、とりわけ、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールが好ましく、更に、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールが好ましく、最も好ましくは、エタノールである。【００６１】
２価のアルコールとしては、１，２−エタンジオール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオール、１，２−ブタンジオール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、２，３−ブタンジオール、１，５−ペンタンジオール等を挙げることができる。好ましくは、１，２−エタンジオール、１，２−プロパンジオール、１，３−プロパンジオールであり、最も好ましくは、１，２−エタンジオールである。【００６２】
３価のアルコールとしてはグリセリン等を好適に用いることができる。【００６３】
脂肪酸類としては、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸等を挙げることができる。好ましくは、ギ酸、酢酸であり、最も好ましくは酢酸である。【００６４】
上記溶媒の中でも、cis-還元型補酵素Ｑ10を除去する目的には、炭化水素類、アルコール類、脂肪酸類から選ばれる少なくとも２種以上の混合溶媒を使用するのが好ましく、中でも、炭化水素類、アルコール類、脂肪酸類をそれぞれ１種ずつ使用した混合溶媒を使用するのが特に好ましい。最も好ましくは、ヘキサン、２−プロパノールおよび酢酸の混合溶媒である。混合溶媒として使用したときには、混合溶媒の溶媒比は、使用するシリカゲル、還元型補酵素Ｑ10と除去する不純物との分離性等から判断して適宜設定すればよく、特に制限されない。例えば、上記ヘキサン、２−プロパノールおよび酢酸の混合溶媒を使用する場合、全溶媒中の２−プロパノールの割合は容積比として５％以下であるのが好ましく、３％以下であるのがより好ましく、１％以下であるのが特に好ましく、また、全溶媒中の酢酸の割合は容積比として５％以下であるのが好ましく、３％以下であるのがより好ましく、１％以下であるのが特に好ましい。【００６５】
また、ユビクロメノールおよび／または還元型補酵素Ｑ11を除去する目的には、炭化水素類、脂肪酸エステル類、エーテル類から選ばれる少なくとも２種以上の混合溶媒を使用するのが好ましく、中でも、炭化水素類、アルコール類の混合溶媒を使用するのが特に好ましい。なかでもヘキサン、メタノール、エタノールのいずれかを用いるのが好ましく、最も好ましくは、ヘキサンおよびメタノールからなる混合溶媒、もしくは、メタノールおよびエタノールからなる混合溶媒である。混合溶媒として使用したときには、混合溶媒の溶媒比は、使用するシリカゲル、還元型補酵素Ｑ10と除去する不純物との分離性等から判断して適宜設定すればよく、特に制限されない。例えば、上記、ヘキサンおよびメタノールからなる溶媒の場合、全溶媒中のメタノールの割合は容積比として８０％以上であるのが好ましく、８５％以上であるのがより好ましく、９０％以上であるのが特に好ましい。メタノールおよびエタノールからなる溶媒の場合、特に制限されないが、全溶媒中のメタノールの割合は容積比として４０％以上であるのが好ましく、４５％以上であるのがより好ましく、５０％以上であるのが特に好ましい。【００６６】
言うまでもなく、一度のクロマトグラフィーにて、２種以上の還元型補酵素Ｑ10の類縁体を除去する態様も本発明に含まれる。【００６７】
また、別の態様の本発明の結晶または組成物の製造方法は、不純物としてcis-酸化型補酵素Ｑ10、酸化型補酵素Ｑ11、またはユビクロメノールの少なくとも１種を含む酸化型補酵素Ｑ10をクロマトグラフィーで精製し、精製された酸化型補酵素Ｑ10を還元型補酵素Ｑ10へと変換することを特徴とする製造方法である。すなわちcis-酸化型補酵素Ｑ、酸化型補酵素Ｑ11、およびユビクロメノールの少なくとも１種を含有する酸化型補酵素Ｑ10（酸化型補酵素Ｑ10と還元型補酵素Ｑ10の混合物の場合も含む）をクロマトグラフィーに供してこれら不純物を除去し、その後に還元して高品質な還元型補酵素Ｑ10に導くことによる還元型補酵素Ｑ10結晶または還元型補酵素Ｑ10含有組成物の製造方法である。【００６８】
酸化型補酵素Ｑ10、もしくは、酸化型補酵素Ｑ10と還元型補酵素Ｑ10をクロマトグラフィーで精製した後、還元型補酵素Ｑ10へ変換する態様においては、クロマトグラフィー工程を厳密に酸化防護条件に保持する必要がなく、より簡便かつ安価に、高品質の還元型補酵素Ｑ10を製造し得る。【００６９】
この場合に使用できるクロマトグラフィーの担体としては、前述と同様の担体を挙げることができる。【００７０】
展開溶媒は、前記の展開溶媒が使用できる。cis-酸化型補酵素Ｑ10を除去する目的には、炭化水素類、アルコール類、脂肪酸エステル類、脂肪酸類から選ばれる少なくとも２種以上の混合溶媒を使用するのが好ましく、中でも、炭化水素類とアルコール類、または、炭化水素類と脂肪酸エステル類の組み合わせが好ましい。具体的には、ヘキサン、２−プロパノール、および酢酸エチルから選ばれる２種以上の混合溶媒が好ましく、より好ましくは、ヘキサンおよび２−プロパノールからなる混合溶媒、もしくは、ヘキサンおよび酢酸エチルからなる混合溶媒である。混合溶媒の溶媒比は、使用するシリカゲル、還元型補酵素Ｑ10と除去する不純物との分離性等から判断して適宜設定すればよく、特に制限されない。例えば、上記ヘキサンおよび２−プロパノールからなる溶媒の場合、全溶媒中の２−プロパノールの割合は容積比として５％以下であるのが好ましく、３％以下であるのがより好ましく、１％以下であるのが特に好ましく、また、上記ヘキサンおよび酢酸エチルからなる溶媒の場合、全溶媒中の酢酸エチルの割合は容積比として５％以下であるのが好ましく、３％以下であるのがより好ましく、１％以下であるのが特に好ましい。【００７１】
また、ユビクロメノールおよび／または還元型補酵素Ｑ11を除去する目的には、炭化水素類、脂肪酸エステル類、エーテル類から選ばれる少なくとも２種以上の混合溶媒を使用するのが好ましく、炭化水素類、アルコール類の混合溶媒を使用するのがより好ましい。具体的にはヘキサン、メタノール、エタノールのいずれか用いるのが好ましく、最も好ましくは、ヘキサンおよびメタノールからなる混合溶媒、もしくは、メタノールおよびエタノールからなる混合溶媒である。混合溶媒の溶媒比は、使用するシリカゲル、還元型補酵素Ｑ10と除去する不純物との分離性等から判断して適宜設定すればよく、特に制限されない。例えば、上記ヘキサンおよびメタノールからなる溶媒の場合、全溶媒中のメタノールの割合は容積比として８０％以上であるのが好ましく、８５％以上であるのがより好ましく、９０％以上であるのが特に好ましい。また、上記メタノールおよびエタノールからなる溶媒の場合、全溶媒中のメタノールの割合は容積比として４０％以上であるのが好ましく、４５％以上であるのがより好ましく、５０％以上であるのが特に好ましい。【００７２】
クロマトグラフィーで得られた酸化型補酵素Ｑ10、もしくは、酸化型補酵素Ｑ10と還元型補酵素Ｑ10の混合物は、例えば、ＷＯ０３／６４０８記載の方法により還元することにより、高品質の還元型補酵素Ｑ10へと導くことができる。【００７３】
このようにして得られた還元型補酵素Ｑ10は、そのまま、濃縮・乾固等により、高品質の還元型補酵素Ｑ10としても良いし、ＷＯ０３／６４０８やＷＯ０３／６４０９等に記載の方法により結晶化して、還元型補酵素Ｑ10類縁体含量の少ない、実質的に純粋な還元型補酵素Ｑ10の結晶とすることができる。取り扱いの容易さや更なる高品質化の観点からは、還元型補酵素Ｑ10の結晶とするのがより好ましい。【００７４】
本発明の効果を最大限に発揮するためには、例えば、前述したような窒素等の不活性ガス雰囲気等の脱酸素雰囲気下において、本発明の方法を実施するのが好ましく、又、本発明の組成物を調製および／または保存するのが好ましい。上記の加工や加工後の保存も上記の不活性ガス雰囲気等の脱酸素雰囲気下に行うのが好ましい。【００７５】
本発明により、通常除去しにくい還元型補酵素Ｑ10の類縁体を簡便に除去することができ、高品質の還元型補酵素Ｑ10を作業性、経済性良く得ることができる。
【実施例】
【００７６】
以下に実施例を揚げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。また、実施例中の還元型補酵素Ｑ10の純度、還元型補酵素Ｑ10の類縁体の含量等は、本発明における純度の限界値を規定するものではなく、その上限値を規定するものでもない。【００７７】
（実施例１）
ユビクロメノール１．２％を含む還元型補酵素Ｑ10（５ｇ）を１０ｇのヘキサンに溶解させた。オクタデシル基で修飾したシリカゲルを充填したカラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン／メタノール（３／１７）溶液で展開し、還元型補酵素Ｑ10を含む画分を得た。尚、使用した溶媒はすべて、減圧・窒素復圧の繰り返しにより溶媒中の酸素を除去したものを使用し、操作はすべて窒素雰囲気下にて実施した。この溶液を濃縮・乾固させ、還元型補酵素Ｑ10の結晶を得た。この還元型補酵素Ｑ10にはユビクロメノールが０．３％含まれていた。【００７８】
（実施例２）
cis-還元型補酵素Ｑ10２．１％を含む還元型補酵素Ｑ10（５ｇ）を１０ｇのヘキサンに溶解させた。シリカゲルを充填したカラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン／イソプロパノール／酢酸（９５／０．５／０．５）溶液で展開し、還元型補酵素Ｑ10を含む画分を得た。尚、使用した溶媒はすべて、減圧・窒素復圧の繰り返しにより溶媒中の酸素を除去したものを使用し、操作はすべて窒素雰囲気下にて実施した。この溶液を濃縮・乾固させ、還元型補酵素Ｑ10の結晶を得た。この還元型補酵素Ｑ10にはcis-還元型補酵素Ｑ10が０．６％含まれていた。【００７９】
（実施例３）
還元型補酵素Ｑ11１．２％を含む還元型補酵素Ｑ10（５ｇ）を１０ｇのヘキサンに溶解させた。オクタデシル基で修飾したシリカゲルを充填したカラムに吸着させ、エタノール／メタノール（４／３）溶液で展開し、還元型補酵素Ｑ10を含む画分を得た。尚、使用した溶媒はすべて、減圧・窒素復圧の繰り返しにより溶媒中の酸素を除去したものを使用し、操作はすべて窒素雰囲気下にて実施した。この溶液を濃縮・乾固させ、還元型補酵素Ｑ10の結晶を得た。この還元型補酵素Ｑ10には還元型補酵素Ｑ11が０．３％含まれていた。【００８０】
（実施例４）
ユビクロメノール１．２％、還元型補酵素Ｑ11１．２％を含む還元型補酵素Ｑ10（５ｇ）を１０ｇのヘキサンに溶解させた。オクタデシル基で修飾したシリカゲルを充填したカラムに吸着させ、ヘキサン／メタノール（１／９）溶液で展開し、還元型補酵素Ｑ10を含む画分を得た。尚、使用した溶媒はすべて、減圧・窒素復圧の繰り返しにより溶媒中の酸素を除去したものを使用し、操作はすべて窒素雰囲気下にて実施した。この溶液を濃縮・乾固させ、還元型補酵素Ｑ10の結晶を得た。この還元型補酵素Ｑ10にはユビクロメノールが０．３％、還元型補酵素Ｑ11が０．３％含まれていた。【００８１】
（実施例５）
ユビクロメノール１．２％を含む還元型補酵素Ｑ10（５ｇ）を１０ｇのヘキサンに溶解させた。オクチル基で修飾したシリカゲルを充填したカラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン／メタノール（１／９）溶液で展開し、還元型補酵素Ｑ10を含む画分を得た。尚、使用した溶媒はすべて、減圧・窒素復圧の繰り返しにより溶媒中の酸素を除去したものを使用し、操作はすべて窒素雰囲気下にて実施した。この溶液を濃縮・乾固させ、還元型補酵素Ｑ10の結晶を得た。この還元型補酵素Ｑ10にはユビクロメノールが０．８％含まれていた。【００８２】
（実施例６）
ユビクロメノール１．４％を含む還元型補酵素Ｑ１０（５ｇ）を１０ｇのヘキサンに溶解させた。オクタデシル基で修飾したシリカゲルを充填したカラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン／メタノール（１／１９）溶液で展開し、還元型補酵素Ｑ１０を含む画分を得た。尚、使用した溶媒はすべて、減圧・窒素復圧の繰り返しにより溶媒中の酸素を除去したものを使用し、操作はすべて窒素雰囲気下にて実施した。この溶液を濃縮・乾固させ、還元型補酵素Ｑ１０の結晶を得た。この還元型補酵素Ｑ１０にはユビクロメノールが０．２％含まれていた。【００８３】
（実施例７）
ユビクロメノール１．２％を含む酸化型補酵素Ｑ１０（５ｇ）を１０ｇのヘキサンに溶解させた。オクタデシル基で修飾したシリカゲルを充填したカラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン／メタノール（１／９）溶液で展開し、酸化型補酵素Ｑ１０を含む画分を得た後、この画分を濃縮し、酸化型補酵素Ｑ１０を４．８ｇ含む溶液５０ｇを得た。この酸化型補酵素Ｑ１０にはユビクロメノールが０．４％含まれていた。この溶液に１０％次亜硫酸ナトリウム水溶液５０ｇを加えて、窒素雰囲気下、還元反応を行った。２時間後、反応液から水相を除去し、脱気した飽和食塩水５０ｇでヘキサン相を水洗した。還元反応からヘキサン相の水洗までの一連の操作は、窒素雰囲気下にて実施した。このヘキサン相を濃縮・乾固させ、還元型補酵素Ｑ10の結晶を得た。この還元型補酵素Ｑ１０にはユビクロメノールが０．４％含まれていた。【００８４】
（比較例１）
晶析による還元型補酵素Ｑ１１の除去
還元型補酵素Ｑ１１１．２％を含む還元型補酵素Ｑ１０（５ｇ）を８３ｇのエタノールに加え、５０℃にて溶解させた後、同温を維持しながら、水５ｇを加えた。このエタノール溶液を攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却し、白色のスラリーを得た。得られたスラリーを減圧ろ過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールの順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに、湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶４．８５ｇを得た。なお、以上すべての操作は窒素雰囲気下で実施した。取得した還元型補酵素Ｑ１０には還元型補酵素Ｑ１１が１．２％含まれていた。【００８５】
（比較例２）
晶析によるユビクロメノールの除去
ユビクロメノール１．４％を含む還元型補酵素Ｑ１０（５ｇ）を８３ｇのエタノールに加え、５０℃にて溶解させた後、同温を維持しながら、水５ｇを加えた。このエタノール溶液を攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却し、白色のスラリーを得た。得られたスラリーを減圧ろ過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールの順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに、湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶４．８５ｇを得た。なお、以上すべての操作は窒素雰囲気下で実施した。取得した還元型補酵素Ｑ１０にはユビクロメノールが１．１％含まれていた。【００８６】
以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことは可能である。従って、そのような修正および変更も、すべて後記の請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。【００８７】
本出願は日本で出願された特願２００６−１２６９００を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。
【国際調査報告】
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