【手続補正書】
【提出日】令和1年8月2日(2019.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第ＩＸ因子（ＦＩＸ）ポリペプチドと、配列番号２のアミノ酸１０３、配列番号２のアミノ酸１０５、配列番号２のアミノ酸１４２、配列番号２のアミノ酸１４９、配列番号２のアミノ酸１６２、配列番号２のアミノ酸１６６、配列番号２のアミノ酸１７４、配列番号２のアミノ酸２２４、配列番号２のアミノ酸２２６、配列番号２のアミノ酸２２８、配列番号２のアミノ酸４１３、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸に対応する挿入部位で前記ＦＩＸポリペプチド内に挿入された少なくとも１のＸＴＥＮとを含み、凝血促進活性を示すＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項２】
前記挿入部位が、配列番号２のアミノ酸１４９、配列番号２のアミノ酸１６２、配列番号２のアミノ酸１６６、配列番号２のアミノ酸１７４及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸に対応する、請求項１に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項３】
前記ＸＴＥＮが、少なくとも約５アミノ酸、少なくとも約６のアミノ酸、少なくとも約１２のアミノ酸、少なくとも約３６のアミノ酸、少なくとも約４２のアミノ酸、約７２のアミノ酸、少なくとも約１４４のアミノ酸、または少なくとも約２８８のアミノ酸を含む、請求項１または２に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項４】
第２のＸＴＥＮを更に含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項５】
前記ＸＴＥＮが、配列番号２のアミノ酸１６６に対応する挿入部位で前記ＦＩＸポリペプチド内に挿入され、第２のＸＴＥＮが前記ＦＩＸポリペプチドのＣ末端に融合された、請求項４に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項６】
Ｆｃドメインを更に含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項７】
第２のＦｃドメインを含む、請求項６に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項８】
２のポリペプチド鎖を含み、前記第１のポリペプチド鎖が前記Ｆｃドメインに融合された前記ＦＩＸポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチド鎖が第２のＦｃドメインを含み、前記第１のＦｃドメインと前記第２のＦｃドメインとが共有結合によって会合している、請求項７に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項９】
前記ＦＩＸポリペプチドがＲ３３８Ｌ  ＦＩＸ変異体である、請求項１〜８のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１１】
請求項１０に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１２】
請求項１０に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質、請求項１０に記載のポリヌクレオチド、請求項１１に記載の発現ベクター、または請求項１２に記載の宿主細胞、及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質、請求項１０に記載のポリヌクレオチド、請求項１１に記載の発現ベクター、または請求項１２に記載の宿主細胞、または請求項１３に記載の組成物を含む、それを必要とする患者における凝固疾患もしくは疾病の予防、治療、改善、または管理のための組成物。
【請求項１５】
第１の連鎖及び第２の連鎖を含む第ＩＸ因子（ＦＩＸ）融合タンパク質であって、
ａ．前記第１の連鎖が、
ｉ．ＦＩＸポリペプチドと、
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸１６６に対応する挿入部位で前記ＦＩＸポリペプチド内に挿入され、少なくとも約７２のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１のＸＴＥＮと、
ｉｉｉ．前記少なくとも１のＸＴＥＮの前記ＦＩＸポリペプチドに融合された第１のＦｃドメインと
を含み、
ｂ．前記第２の連鎖が第２のＦｃドメインを含み、
前記第１のＦｃドメインと前記第２のＦｃドメインとが共有結合によって会合しており、凝血促進活性を示す前記ＦＩＸ融合タンパク質。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明はまた、ＦＩＸポリペプチドの半減期の延長方法であって、配列番号２のアミノ酸１０３、配列番号２のアミノ酸１０５、配列番号２のアミノ酸１４２、配列番号２のアミノ酸１４９、配列番号２のアミノ酸１６２、配列番号２のアミノ酸１６６、配列番号２のアミノ酸１７４、配列番号２のアミノ酸２２４、配列番号２のアミノ酸２２６、配列番号２のアミノ酸２２８、配列番号２のアミノ酸４１３、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸に対応する挿入部位で上記ＦＩＸポリペプチド内にＸＴＥＮを挿入し、それによってＦＩＸ融合タンパク質を構築することを含み、上記ＦＩＸタンパク質が凝血促進活性を示す、上記方法も提供する。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
第ＩＸ因子（ＦＩＸ）ポリペプチドと、配列番号２のアミノ酸１０３、配列番号２のアミノ酸１０５、配列番号２のアミノ酸１４２、配列番号２のアミノ酸１４９、配列番号２のアミノ酸１６２、配列番号２のアミノ酸１６６、配列番号２のアミノ酸１７４、配列番号２のアミノ酸２２４、配列番号２のアミノ酸２２６、配列番号２のアミノ酸２２８、配列番号２のアミノ酸４１３、及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸に対応する挿入部位で前記ＦＩＸポリペプチド内に挿入された少なくとも１のＸＴＥＮとを含み、凝血促進活性を示すＦＩＸ融合タンパク質。
（項目２）
前記挿入部位が、配列番号２のアミノ酸１４９、配列番号２のアミノ酸１６２、配列番号２のアミノ酸１６６、配列番号２のアミノ酸１７４及びそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるアミノ酸に対応する、項目１に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目３）
前記ＸＴＥＮが、少なくとも約５アミノ酸、少なくとも約６のアミノ酸、少なくとも約１２のアミノ酸、少なくとも約３６のアミノ酸、少なくとも約４２のアミノ酸、約７２のアミノ酸、少なくとも約１４４のアミノ酸、または少なくとも約２８８のアミノ酸を含む、項目１または２に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目４）
第２のＸＴＥＮを更に含む、項目１〜３のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目５）
前記ＸＴＥＮが、配列番号２のアミノ酸１６６に対応する挿入部位で前記ＦＩＸポリペプチド内に挿入され、第２のＸＴＥＮが前記ＦＩＸポリペプチドのＣ末端に融合された、項目４に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目６）
Ｆｃドメインを更に含む、項目１〜５のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目７）
第２のＦｃドメインを含む、項目６に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目８）
２のポリペプチド鎖を含み、前記第１のポリペプチド鎖が前記Ｆｃドメインに融合された前記ＦＩＸポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチド鎖が第２のＦｃドメインを含み、前記第１のＦｃドメインと前記第２のＦｃドメインとが共有結合によって会合している、項目７に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目９）
前記ＦＩＸポリペプチドがＲ３３８Ｌ  ＦＩＸ変異体である、項目１〜８のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質。
（項目１０）
項目１〜９のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
（項目１１）
項目１０に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（項目１２）
項目１０に記載のポリヌクレオチドまたは項目１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目１３）
項目１〜９のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質、項目１０に記載のポリヌクレオチド、項目１１に記載の発現ベクター、または項目１２に記載の宿主細胞、及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
（項目１４）
有効量の項目１〜９のいずれか１項に記載のＦＩＸ融合タンパク質、項目１０に記載のポリヌクレオチド、項目１１に記載の発現ベクター、項目１２に記載の宿主細胞、または項目１３に記載の組成物を投与することを含む、それを必要とする患者における凝固疾患もしくは疾病の予防、治療、改善、または管理方法。
（項目１５）
第１の連鎖及び第２の連鎖を含む第ＩＸ因子（ＦＩＸ）融合タンパク質であって、
ａ．前記第１の連鎖が、
ｉ．ＦＩＸポリペプチドと、
ｉｉ．配列番号２のアミノ酸１６６に対応する挿入部位で前記ＦＩＸポリペプチド内に挿入され、少なくとも約７２のアミノ酸を有するアミノ酸配列を含む少なくとも１のＸＴＥＮと、
ｉｉｉ．前記少なくとも１のＸＴＥＮの前記ＦＩＸポリペプチドに融合された第１のＦｃドメインと
を含み、
ｂ．前記第２の連鎖が第２のＦｃドメインを含み、
前記第１のＦｃドメインと前記第２のＦｃドメインとが共有結合によって会合しており、凝血促進活性を示す前記ＦＩＸ融合タンパク質。