【手続補正書】
【提出日】平成31年4月5日(2019.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞油を産生する油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞であって、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）をコードする内因性ポリヌクレオチドの１つ以上の対立遺伝子のアブレーションを含み、任意選択で、前記ＬＰＡＡＴをコードする前記内因性ポリヌクレオチドが配列番号１０５又は１０６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する、細胞。
【請求項２】
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；
（ｄ）リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼＬＰＡＡＴ；及び
（ｅ）脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）
からなる群から選択される活性酵素をコードする外来遺伝子を更に含む、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記外来遺伝子が、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０２、又は１０８と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼをコードするか、又は前記外来遺伝子が、配列番号９３のホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードするか、又は外来遺伝子が、配列番号９５又は９６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードするか、又は前記外来遺伝子が、配列番号１２、２９、３０、３２、３３、又は３４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼをコードするか、又は前記外来遺伝子が、配列番号１９、２０、８４又は８５のアミノ酸配列をコードする少なくとも８０、８５、９０又は９５％配列を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする、請求項２に記載の細胞。
【請求項４】
活性ショ糖インベルターゼ又はαガラクトシダーゼをコードする外来遺伝子を更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項５】
油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞によって産生される油であって、前記細胞が、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）をコードする内因性ポリヌクレオチドの１つ以上の対立遺伝子のアブレーションを含み、任意選択で、前記ＬＰＡＡＴをコードする前記内因性ポリヌクレオチドが、配列番号１０５又は１０６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する、油。
【請求項６】
前記油産生真核微細藻類細胞が、
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；
（ｄ）リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）；及び
（ｅ）脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）
からなる群から選択される活性酵素をコードする外来遺伝子を更に含み、任意選択で、
前記外来遺伝子が、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０２、又は１０８と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼをコードするか、又は前記外来遺伝子が、配列番号９３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードするか、又は前記外来遺伝子が、配列番号９５又は９６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードするか、又は前記外来遺伝子が、配列番号１２、２９、３０、３２、３３、又は３４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼをコードするか、又は前記外来遺伝子が、配列番号１９、２０、８４又は８５と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする、請求項５に記載の油。
【請求項７】
前記細胞が、活性ショ糖インベルターゼをコードする外来遺伝子を更に含む、請求項５又は６に記載の油。
【請求項８】
少なくとも１０％のＣ１８：２、少なくとも１％のＣ１８：３、少なくとも１％のＣ２０：１、又は少なくとも１％のＣ２２：１を含む、請求項５〜７のいずれか一項に記載の油。
【請求項９】
細胞油を産生する油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞であって、以下のタイプのうちの１つの活性酵素：
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；又は
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；
（ｄ）ＬＰＡＡＴ；
をコードする第１の外来遺伝子、
（ｅ）及び任意選択で脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）をコードする第２の外来遺伝子
を含み、任意選択で、
前記細胞が、配列番号２０、８４又は８５と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する脂肪酸エロンガーゼ酵素、配列番号９３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０２、又は１０８と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ、配列番号１２、２９、３０、３２、３３、又は３４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するＬＰＡＡＴを含む、細胞。
【請求項１０】
乾燥重量基準で少なくとも２０％の油を産生する細胞、任意選択で微細藻類細胞であって、前記油が５％以下の飽和脂肪酸の脂肪酸プロフィールを有し、任意選択で、
前記脂肪酸プロフィールが、（ａ）２．０％未満のＣ１６：０；（ｂ）２％未満のＣ１８：０；及び／又は（ｃ）２０より大きいＣ１８：１／Ｃ１８：０比を有するか、又は前記脂肪酸プロフィールが、（ｄ）１．９％未満のＣ１６：０；（ｅ）１％未満のＣ１８：０；及び／又は（ｆ）１００より大きいＣ１８：１／Ｃ１８：０比を有するか、又は前記脂肪酸プロフィールが、２．５％以下、又は任意選択で２．２％以下のＣ１６：０とＣ１８：０との合計を有する、細胞。
【請求項１１】
ＫＡＳＩＩ遺伝子及びＳＡＤ遺伝子の両方を過剰発現する、請求項１０に記載の細胞であって、任意選択で、前記ＫＡＳＩＩ遺伝子が、配列番号１８又は６４と少なくとも８０、８５、９０、又は９５％の配列同一性を有する成熟ＫＡＳＩＩタンパク質をコードし、及び／又は前記ＳＡＤ遺伝子が、配列番号６５と少なくとも８０、８５、９０、又は９５％の配列同一性を有する成熟ＳＡＤタンパク質をコードする、細胞。
【請求項１２】
内因性ＦＡＴＡ遺伝子の破壊、及び／又は内因性ＦＡＤ２遺伝子の破壊を更に含む、請求項１０又は１１に記載の細胞であって、任意選択で、前記細胞は、デサチュラーゼの発現を下方調節する阻害性ＲＮＡをコードする核酸を更に含み、
好ましくは、前記阻害性ＲＮＡが、ＦＡＤ２遺伝子を下方調節するヘアピンＲＮＡである、細胞。
【請求項１３】
請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の油産生真核微細藻類細胞によって産生される油。
【請求項１４】
（ａ）請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の細胞を培養する工程と、
（ｂ）前記細胞から前記油を抽出する工程と、任意選択で、
（ｃ）前記油を化学反応に供する工程と
を含む方法。
【請求項１５】
細胞油を産生する油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞であって、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ、ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ、又はエノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含み、任意選択で、前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼをコードするか、又は前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼをコードするか、又は前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４２のエノイル−ＣｏＡレダクターゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性エノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、細胞。
【請求項１６】
リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）、ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）、ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）、脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）、ショ糖インベルターゼ、αガラクトシダーゼ、デサチュラーゼ及び／又はケトアシルシンターゼをコードする外因性核酸を更に含む、請求項１５に記載の油産生真核微細藻類細胞。
【請求項１７】
内因性ＦＡＴＡ遺伝子の破壊又は内因性ＦＡＤ２遺伝子の破壊を更に含み、任意選択で、前記油産生真核微細藻類細胞は、デサチュラーゼの発現を下方調節する阻害性ＲＮＡをコードする核酸を更に含む、請求項１５又は１６に記載の油産生真核微細藻類細胞。
【請求項１８】
油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞によって産生される油であって、前記細胞が、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ、ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ、又はエノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含み、任意選択で、前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼをコードするか、前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼをコードするか、又は前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４２のエノイル−ＣｏＡレダクターゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性エノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、油。
【請求項１９】
前記細胞が、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）、ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）、ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）、脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）、ショ糖インベルターゼ又はαガラクトシダーゼをコードする外因性核酸を更に含み、任意選択で、前記油が少なくとも１０％のＣ１８：２を含むか、前記油が少なくとも１％のＣ１８：３を含むか、前記油が少なくとも１％のＣ２０：１を含むか、又は前記油が少なくとも１％のＣ２２：１を含む、請求項１８に記載の油。
【請求項２０】
β−シトステロールに対して過剰のエルゴステロール及び／又は２２，２３−ジヒドロブラシカステロール、ポリフェラステロール又はクリオナステロールの存在によって特徴付けられるステロールプロフィールを有するステロール類を含む、請求項１８又は１９に記載の油。
【請求項２１】
細胞油を産生するＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属又はＣｈｌｏｒｅｌｌａ属の細胞であって、内因性遺伝子の内因性調節エレメントを置換する外因性ポリヌクレオチドを含み、任意選択で、前記内因性調節エレメントが、内因性アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの発現を制御するプロモーターであり、任意選択で、前記細胞が活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ、ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ、又はエノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする外因性核酸を更に含む、細胞。
【請求項２２】
前記外因性核酸が配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼをコードするか、前記外因性核酸が配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼをコードするか、又は前記外因性核酸が配列番号１４２のエノイル−ＣｏＡレダクターゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性エノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、請求項２１に記載の細胞。
【請求項２３】
リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）、ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）、ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）、脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）、デサチュラーゼ及び／又はケトアシルシンターゼをコードする外因性核酸を更に含む、請求項２１又は２２に記載の細胞。
【請求項２４】
内因性ＦＡＴＡ遺伝子の破壊、内因性ＦＡＤ２遺伝子の破壊、又は任意選択で、デサチュラーゼの発現を下方調節する阻害性ＲＮＡをコードする核酸を更に含む、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項２５】
請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の細胞によって産生される油。
【請求項２６】
（ａ）請求項１５〜１７又は２１〜２４のいずれか一項に記載の細胞を培養して油を産生させる工程と、
（ｂ）前記細胞から前記油を抽出する工程と、任意選択で、
（ｃ）前記油を化学反応に供する工程と
を含む方法。
【請求項２７】
請求項１８〜２０及び２５のいずれか一項に記載の油を別の食用原料に添加する工程を含む、食品の調製方法。
【請求項２８】
配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド、配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド、配列番号１４２のヌクレオチド４８８４〜５８１６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド、又は配列番号１４２のヌクレオチド４８８４〜５８１６のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２９】
配列番号１４４のヌクレオチド配列によってコードされるケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ、又は配列番号１４３のヌクレオチド配列によってコードされるヒドロキシルアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ、又は配列番号１４２のヌクレオチド４８８４〜５８１６のヌクレオチド配列によってコードされるエノイル−ＣｏＡレダクターゼ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
本発明の様々な実施形態において、上記又は本明細書で考察される２つ以上の特徴を共に組み合わせることができる。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
細胞油を産生する油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞であって、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）をコードする内因性ポリヌクレオチドの１つ以上の対立遺伝子のアブレーションを含む細胞。
（項目２）
前記ＬＰＡＡＴをコードする前記内因性ポリヌクレオチドが配列番号１０５又は１０６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する、項目１に記載の細胞。
（項目３）
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；
（ｄ）リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼＬＰＡＡＴ；及び
（ｅ）脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）
からなる群から選択される活性酵素をコードする外来遺伝子を更に含む、項目１又は２に記載の細胞。
（項目４）
前記外来遺伝子が、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０２、又は１０８と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼをコードする、項目３に記載の細胞。
（項目５）
前記外来遺伝子が、配列番号９３のホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードする、項目３に記載の細胞。
（項目６）
外来遺伝子が、配列番号９５又は９６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードする、項目３に記載の細胞。
（項目７）
前記外来遺伝子が、配列番号１２、２９、３０、３２、３３、又は３４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼをコードする、項目３に記載の細胞。
（項目８）
前記外来遺伝子が、配列番号１９、２０、８４又は８５のアミノ酸をコードする少なくとも８０、８５、９０又は９５％配列を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする、項目３に記載の細胞。
（項目９）
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；及び
（ｄ）リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼＬＰＡＡＴ
からなる群から選択される活性酵素をコードする第１の外来遺伝子と、
（ｅ）活性脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）をコードする第２の外来遺伝子と、
を含む、項目１又は２に記載の細胞。
（項目１０）
活性ショ糖インベルターゼ又はαガラクトシダーゼをコードする外来遺伝子を更に含む、項目１〜９のいずれか一項に記載の細胞。
（項目１１）
油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞によって産生される油であって、前記細胞が、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）をコードする内因性ポリヌクレオチドの１つ以上の対立遺伝子のアブレーションを含む、油。
（項目１２）
前記ＬＰＡＡＴをコードする前記内因性ポリヌクレオチドが、配列番号１０５又は１０６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する、項目１１に記載の油。
（項目１３）
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；
（ｄ）リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）；及び
（ｅ）脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）
からなる群から選択される活性酵素をコードする外来遺伝子を更に含む、項目１１又は１２に記載の油。
（項目１４）
前記外来遺伝子が、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０２、又は１０８と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼをコードする、項目１３に記載の油。
（項目１５）
前記外来遺伝子が、配列番号９３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードする、項目１３に記載の油。
（項目１６）
前記外来遺伝子が、配列番号９５又は９６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードする、項目１３に記載の油。
（項目１７）
前記外来遺伝子が、配列番号１２、２９、３０、３２、３３、又は３４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼをコードする、項目１３に記載の油。
（項目１８）
前記外来遺伝子が、配列番号１９、２０、８４又は８５と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する脂肪酸エロンガーゼをコードする、項目１３に記載の油。
（項目１９）
前記細胞が、
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；及び
（ｄ）リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）
からなる群から選択される活性酵素をコードする第１の外来遺伝子と、
（ｅ）活性脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）をコードする第２の外来遺伝子と、
を含む、項目１１又は１２に記載の油。
（項目２０）
前記細胞が、活性ショ糖インベルターゼをコードする外来遺伝子を更に含む、項目１１〜１９のいずれか一項に記載の油。
（項目２１）
少なくとも１０％のＣ１８：２を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２２）
少なくとも１５％のＣ１８：２を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２３）
少なくとも１％のＣ１８：３を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２４）
少なくとも５％のＣ１８：３を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２５）
少なくとも１０％のＣ１８：３を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２６）
少なくとも１％のＣ２０：１を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２７）
少なくとも５％のＣ２０：１を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２８）
少なくとも７％のＣ２０：１を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目２９）
少なくとも１％のＣ２２：１を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目３０）
少なくとも５％のＣ２２：１を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目３１）
少なくとも７％のＣ２２：１を含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の油。
（項目３２）
細胞油を産生する油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞であって、以下のタイプのうちの１つの活性酵素：
（ａ）リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）；
（ｂ）ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）；又は
（ｃ）ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）；
（ｄ）ＬＰＡＡＴ；
をコードする第１の外来遺伝子、
（ｅ）及び任意選択で以下をコードする第２の外来遺伝子
（ｆ）脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）
を含む、細胞。
（項目３３）
配列番号２０、８４又は８５と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有する脂肪酸エロンガーゼ酵素を含む、項目３２に記載の細胞。
（項目３４）
前記第１の外来遺伝子が、配列番号９３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼをコードする、項目３２又は３３に記載の細胞。
（項目３５）
前記第１の外来遺伝子が、配列番号９８、９９、１００、１０１、１０２、又は１０８と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するリゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼをコードする、項目３２又は３３に記載の細胞。
（項目３６）
前記第１の外来遺伝子が、配列番号１２、２９、３０、３２、３３、又は３４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するＬＰＡＡＴをコードする、項目３２又は３３に記載の細胞。
（項目３７）
乾燥重量基準で少なくとも２０％の油を産生する細胞、任意選択で微細藻類細胞であって、前記油が５％以下の飽和脂肪酸の脂肪酸プロフィールを有する、細胞。
（項目３８）
前記脂肪酸プロフィールが４％以下の飽和脂肪酸を含む、項目３７に記載の細胞。
（項目３９）
前記脂肪酸プロフィールが３％以下の飽和脂肪酸を含む、項目３７に記載の細胞。
（項目４０）
前記脂肪酸プロフィールが、（ａ）２．０％未満のＣ１６：０；（ｂ）２％未満のＣ１８：０；及び／又は（ｃ）２０より大きいＣ１８：１／Ｃ１８：０比を有する、項目３７〜３９のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４１）
前記脂肪酸プロフィールが、（ａ）１．９％未満のＣ１６：０；（ｂ）１％未満のＣ１８：０；及び／又は（ｃ）１００より大きいＣ１８：１／Ｃ１８：０比を有する、項目３７〜４０のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４２）
前記脂肪酸プロフィールが、２．５％以下、又は任意選択で２．２％以下のＣ１６：０とＣ１８：０との合計を有する、項目３７〜４１のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４３）
ＫＡＳＩＩ遺伝子及びＳＡＤ遺伝子の両方を過剰発現する、項目３７〜４２のいずれか一項に記載の細胞。
（項目４４）
前記ＫＡＳＩＩ遺伝子が、配列番号１８又は６４と少なくとも８０、８５、９０、又は９５％の配列同一性を有する成熟ＫＡＳＩＩタンパク質をコードし、及び／又は前記ＳＡＤ遺伝子が、配列番号６５と少なくとも８０、８５、９０、又は９５％の配列同一性を有する成熟ＳＡＤタンパク質をコードする、項目４３に記載の細胞。
（項目４５）
内因性ＦＡＴＡ遺伝子の破壊を更に含む、項目４４に記載の細胞。
（項目４６）
内因性ＦＡＤ２遺伝子の破壊を更に含む、項目４５に記載の細胞。
（項目４７）
デサチュラーゼの発現を下方調節する阻害性ＲＮＡをコードする核酸を更に含む、項目４６に記載の細胞。
（項目４８）
前記阻害性ＲＮＡが、ＦＡＤ２遺伝子を下方調節するヘアピンＲＮＡである、項目４７に記載の細胞。
（項目４９）
前記細胞が真核微細藻類細胞であり、前記油が、β−シトステロールに対して過剰のエルゴステロール及び／又は２２，２３−ジヒドロブラシカステロール、ポリフェラステロール又はクリオナステロールの存在によって特徴付けられるステロールプロフィールを有するステロール類を含む、項目３７〜４８のいずれか一項に記載の細胞。
（項目５０）
項目３７〜４９のいずれか一項に記載の油産生真核微細藻類細胞によって産生される油。
（項目５１）
（ａ）項目３７〜４９のいずれか一項に記載の組換え細胞を培養する工程と、
（ｂ）前記細胞から前記油を抽出する工程と、を含む方法。
（項目５２）
項目１１〜３１又は５０のいずれか一項に記載の油を化学反応に供する工程を含む、組成物の調製方法。
（項目５３）
項目１１〜３１又は５０のいずれか一項に記載の油を別の食用原料に添加する工程を含む、食品の調製方法。
（項目５４）
細胞油を産生する油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞であって、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ、ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ、又はエノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む細胞。
（項目５５）
前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、項目５４に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目５６）
前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目５４に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目５７）
前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４２のエノイル−ＣｏＡレダクターゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性エノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、項目５４に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目５８）
リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）、ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）、ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）又は脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）をコードする外因性核酸を更に含む、項目５４〜５７のいずれか一項に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目５９）
ショ糖インベルターゼ及びαガラクトシダーゼからなる群から選択される酵素をコードする外因性核酸を更に含む、項目５８に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目６０）
デサチュラーゼ及び／又はケトアシルシンターゼをコードする外因性核酸を更に含む、項目５４〜５９のいずれか一項に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目６１）
内因性ＦＡＴＡ遺伝子の破壊を更に含む、項目５４〜６０のいずれか一項に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目６２）
内因性ＦＡＤ２遺伝子の破壊を更に含む、項目５４〜６０のいずれか一項に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目６３）
デサチュラーゼの発現を下方調節する阻害性ＲＮＡをコードする核酸を更に含む、項目６１又は６２に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目６４）
前記細胞油が、β−シトステロールに対して過剰のエルゴステロール及び／又は２２，２３−ジヒドロブラシカステロール、ポリフェラステロール又はクリオナステロールの存在によって特徴付けられるステロールプロフィールを有するステロール類を含む、項目５４〜６３のいずれか一項に記載の油産生真核微細藻類細胞。
（項目６５）
油産生真核微細藻類細胞、任意選択でＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属の細胞によって産生される油であって、前記細胞が、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ、ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ、又はエノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む、油。
（項目６６）
前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、項目６５に記載の油。
（項目６７）
前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目６５に記載の油。
（項目６８）
前記外因性ポリヌクレオチドが配列番号１４２のエノイル−ＣｏＡレダクターゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性エノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、項目６５に記載の油。
（項目６９）
前記細胞が、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）、ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）、ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）又は脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）をコードする外因性核酸を更に含む、項目６５〜６８のいずれか一項に記載の油。
（項目７０）
前記細胞が、ショ糖インベルターゼ及びαガラクトシダーゼからなる群から選択される酵素をコードする外因性核酸を更に含む、項目６９に記載の油。
（項目７１）
少なくとも１０％のＣ１８：２を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７２）
少なくとも１５％のＣ１８：２を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７３）
少なくとも１％のＣ１８：３を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７４）
少なくとも５％のＣ１８：３を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７５）
少なくとも１０％のＣ１８：３を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７６）
少なくとも１％のＣ２０：１を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７７）
少なくとも５％のＣ２０：１を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７８）
少なくとも７％のＣ２０：１を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目７９）
少なくとも１％のＣ２２：１を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目８０）
少なくとも５％のＣ２２：１を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目８１）
少なくとも７％のＣ２２：１を含む、項目６５〜７０のいずれか一項に記載の油。
（項目８２）
β−シトステロールに対して過剰のエルゴステロール及び／又は２２，２３−ジヒドロブラシカステロール、ポリフェラステロール又はクリオナステロールの存在によって特徴付けられるステロールプロフィールを有するステロール類を含む、項目６５〜８１のいずれか一項に記載の油。
（項目８３）
細胞油を産生するＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ属又はＣｈｌｏｒｅｌｌａ属の細胞であって、内因性遺伝子の内因性調節エレメントを置換する外因性ポリヌクレオチドを含む細胞。
（項目８４）
Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ細胞である、項目８３に記載の細胞。
（項目８５）
Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ  ｍｏｒｉｆｏｒｍｉｓ細胞である、項目８４に記載の細胞。
（項目８６）
前記内因性調節エレメントが、内因性アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの発現を制御するプロモーターである、項目８５に記載の細胞。
（項目８７）
前記外因性ポリヌクレオチドがＰｒｏｔｏｔｈｅｃａ  ｍｏｒｉｆｏｒｍｉｓ  ＡＭＴ０３プロモーターである、項目８６に記載の細胞。
（項目８８）
活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ、ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ、又はエノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする外因性核酸を更に含む、項目８３〜８７のいずれか一項に記載の細胞。
（項目８９）
前記外因性核酸が配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ケトアシル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、項目８８に記載の細胞。
（項目９０）
前記外因性核酸が配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性ヒドロキシアシル−ＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目８８に記載の細胞。
（項目９１）
前記外因性核酸が配列番号１４２のエノイル−ＣｏＡレダクターゼコード部分と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有し、活性エノイル−ＣｏＡレダクターゼをコードする、項目８８に記載の細胞。
（項目９２）
リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼ（ＬＰＣＡＴ）、ホスファチジルコリンジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＰＤＣＴ）、ＣＤＰ−コリン：１，２−ｓｎ−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラーゼ（ＤＡＧ−ＣＰＴ）、リゾホスファチジン酸アシルトランスフェラーゼ（ＬＰＡＡＴ）又は脂肪酸エロンガーゼ（ＦＡＥ）をコードする外因性核酸を更に含む、項目８８〜９１のいずれか一項に記載の細胞。
（項目９３）
デサチュラーゼ及び／又はケトアシルシンターゼをコードする外因性核酸を更に含む、項目８８〜９２のいずれか一項に記載の細胞。
（項目９４）
内因性ＦＡＴＡ遺伝子の破壊を更に含む、項目８８〜９３のいずれか一項に記載の細胞。
（項目９５）
内因性ＦＡＤ２遺伝子の破壊を更に含む、項目８８〜９３のいずれか一項に記載の細胞。
（項目９６）
デサチュラーゼの発現を下方調節する阻害性ＲＮＡをコードする核酸を更に含む、項目９４又は９５に記載の細胞。
（項目９７）
前記細胞油が、β−シトステロールに対して過剰のエルゴステロール及び／又は２２，２３−ジヒドロブラシカステロール、ポリフェラステロール又はクリオナステロールの存在によって特徴付けられるステロールプロフィールを有するステロール類を含む、項目８３〜９６のいずれか一項に記載の細胞。
（項目９８）
項目８３〜９７のいずれか一項に記載の細胞によって産生される油。
（項目９９）
（ａ）項目５４〜６４又は８３〜９７のいずれか一項に記載の細胞を培養して油を産生させる工程と、
（ｂ）前記細胞から前記油を抽出する工程と、
を含む方法。
（項目１００）
項目６５〜８２又は９８のいずれか一項に記載の油を化学反応に供する工程を含む、組成物の調製方法。
（項目１０１）
項目６５〜８２及び９８のいずれか一項に記載の油を別の食用原料に添加する工程を含む、食品の調製方法。
（項目１０２）
配列番号１４４と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド。
（項目１０３）
配列番号１４４のヌクレオチド配列を含む、項目１０２に記載のポリヌクレオチド。
（項目１０４）
配列番号１４３と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド。
（項目１０５）
配列番号１４３のヌクレオチド配列を含む、項目１０４に記載のポリヌクレオチド。
（項目１０６）
配列番号１４２のヌクレオチド（ｎｕｃｌｅｔｏｉｄｅｓ）４８８４〜５８１６と少なくとも８０、８５、９０又は９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチド。
（項目１０７）
配列番号１４２のヌクレオチド４８８４〜５８１６のヌクレオチド配列を含む、項目１０６に記載のポリヌクレオチド。
（項目１０８）
配列番号１４４のヌクレオチド配列によってコードされるケトアシル−ＣｏＡレダクターゼ。
（項目１０９）
配列番号１４３のヌクレオチド配列によってコードされるヒドロキシルアシル−ＣｏＡデヒドラターゼ。
（項目１１０）
配列番号１４２のヌクレオチド４８８４〜５８１６のヌクレオチド配列によってコードされるエノイル−ＣｏＡレダクターゼ。