【手続補正書】
【提出日】平成20年5月16日(2008.5.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ａ）第一のプロモータと、
ｂ）第二のプロモータと、
を含むＤＮＡ構築物であって、
第一のプロモータ及び第二のプロモータは互いに対立して配位しており、
ｃ）第一のプロモータの３’末端下流及び第二のプロモータの３’末端下流に位置する、インタープロモータ領域を定義し、
前記ＤＮＡ構築物が、
ｄ）インタープロモータ領域に位置する、少なくとも１つのクローニング部位と、
ｅ）第一のプロモータの３’末端側から見て、第一のプロモータの下流及び少なくとも１つのクローニング部位の下流に位置する、少なくとも１つの第一の転写ターミネータと
を更に含み、
前記第一の転写ターミネータは、第一のプロモータに操作的に連結されており、かつ、インタープロモータ領域に位置している、前記ＤＮＡ構築物。
【請求項２】  ｆ）第二のプロモータの３’末端側から見て、第二のプロモータの下流及び少なくとも１つのクローニング部位の下流に位置する、少なくとも１つの第二の転写ターミネータであって、第二のプロモータに操作的に連結されている前記第二の転写ターミネータを更に含む、請求項１に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項３】  第二の転写ターミネータ−が、インタープロモータ領域に位置している、請求項２に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項４】  第二の転写ターミネータが、第二のプロモータの３’末端側から見て第二のプロモータの下流、少なくとも１つのクローニング部位の下流、及び第一のプロモータの５’末端下流に位置している、請求項２又は３に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項５】  第二の転写ターミネータの３’末端が、第一のプロモータの５’末端から、２０００以下のヌクレオチド、好ましくは１０００以下のヌクレオチド、より好ましくは５００以下のヌクレオチド、更により好ましくは２００以下のヌクレオチド、とりわけ好ましくは１００以下のヌクレオチド、よりとりわけ好ましくは５０以下のヌクレオチド、更によりとりわけ好ましくは２０以下のヌクレオチド、特に好ましくは１０以下のヌクレオチド、より特に好ましくは６以下のヌクレオチド、隔てられた、請求項４に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項６】  第一の転写ターミネータが、第一のプロモータの３’末端側から見て、第一のプロモータの下流及び少なくとも１つのクローニング部位の下流に位置しており、第二の転写ターミネータが、第二のプロモータの３’末端側から見て、第二のプロモータの下流及び少なくとも１つのクローニング部位の下流に位置している、請求項３に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項７】  第一のプロモータ及び第二のプロモータが、それぞれ独立に原核生物由来、真核生物由来、ファージ由来及びバクテリオファージ由来のプロモータからなる群より選択される、請求項１乃至６のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項８】  第一のプロモータと第二のプロモータが同一である、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の構築物。
【請求項９】  第一のプロモータと第二のプロモータが同一でない、請求項１乃至７のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１０】  第一のプロモータ及び第二のプロモータが、それぞれ独立に原核生物由来、真核生物由来、ファージ由来及びバクテリオファージ由来のプロモータからなる群より選択される、請求項１乃至９のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１１】  クローニング部位が、少なくとも１つの制限部位を含む、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の構築物。
【請求項１２】  クローニング部位が、スタッファーＤＮＡ配列の側面に位置している少なくとも２つの制限部位を含む、請求項１１に記載のＤＮＡ。
【請求項１３】  少なくとも２つの制限部位が同一である、請求項１２に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１４】  少なくとも１つの制限部位又は少なくとも２つの制限部位が、ＢｓｔＸＩ部位である、請求項１１乃至１３のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１５】  制限部位がＸｃｍＩ部位である、請求項１１乃至１３のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１６】  クローニング部位が、ａｔｔＲ１及びａｔｔＲ２組換え配列を更に含む、請求項１乃至１５のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１７】  クローニング部位が、ｃｃｄＢヌクレオチド配列を更に含む、請求項１乃至１６のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１８】  ｃｃｄＢヌクレオチド配列が、少なくとも１つのユニークな制限部位を更に含む、請求項１７に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項１９】  少なくとも１つのユニークな制限部位が、平滑末端制限部位である、請求項１８に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２０】  平滑末端制限部位がＳｒｆＩ部位である、請求項１９に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２１】 少なくとも１つのクローニング部位に挿入されたＤＮＡ断片を更に含む、請求項１乃至２０のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２２】  ２本鎖ＲＮＡ生成用テンプレートを形成するヌクレオチド配列を更に含む、請求項１乃至２１のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２３】  プラスミド又はベクターである、請求項１乃至２２のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２４】  図１０、図１１、図１２、図１３、図１４又は図１５に例示されたヌクレオチド配列を有する、請求項２３に記載のプラスミド又はベクター。
【請求項２５】  ａ）第一のプロモータと、
ｂ）第二のプロモータと、
を含むＤＮＡ構築物であって、
第一のプロモータ及び第二のプロモータは互いに対立して配位しており、
ｃ）第一のプロモータの３’末端下流及び第二のプロモータの３’末端下流に位置している、インタープロモータ領域を定義し、
前記インタープロモータ領域が２本鎖ＲＮＡ生成用テンプレートを形成するヌクレオチド配列を含み、
前記ＤＮＡ構築物が、ｄ）インタープロモータ領域に位置しており、かつ、第一のプロモータの３’末端側から見て、第一のプロモータの下流に位置する、第一の転写ターミネータ、を更に含み、
前記第一の転写ターミネータが第一のプロモータに操作的に連結されている、前記ＤＮＡ構築物。
【請求項２６】  ｇ）インタープロモータ領域に位置しており、かつ、第二のプロモータの３’末端側から見て、第二のプロモータの下流に位置する、第二の転写ターミネータを更に含み、前記第二の転写ターミネータが第二のプロモータに操作的に連結されている、請求項２５に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２７】 第一のプロモータと第二のプロモータが同一である、請求項２５又は２６に記載の構築物。
【請求項２８】  第一のプロモータと第二のプロモータが同一でない、請求項２５又は２６に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項２９】  第一のプロモータ及び第二のプロモータが、それぞれ独立に原核生物由来、真核生物由来、ファージ由来及びバクテリオファージ由来のプロモータからなる群より選択される、請求項２７又は２８に記載のＤＮＡ構築物。
【請求項３０】  ＲＮＡ阻害に対する２本鎖ＲＮＡの生産方法であって、クローニング部位に挿入されたＤＮＡ断片、又は、２本鎖ＲＮＡ生成用テンプレートを形成するヌクレオチド配列から２本鎖ＲＮＡを発現させるために、請求項１乃至２９のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物を使用することを含む、方法。
【請求項３１】  請求項１乃至２９のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物を宿している菌株。
【請求項３２】  前記菌株が大腸菌株である、請求項３１に記載の菌株。
【請求項３３】  ＲＮＡ阻害に対する２本鎖ＲＮＡの生産のための、請求項３１又は３２に記載の菌株の使用。
【請求項３４】  生物におけるＲＮＡ発現の阻害方法であって、前記生物と、請求項１乃至２９のいずれか一項に記載のＤＮＡ構築物を使用して生成した２本鎖ＲＮＡとを接触させることを含む、方法。
【請求項３５】  前記生物が線虫である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】  前記２本鎖ＲＮＡを前記生物に組み込まれるよう前記生物に供与することによって、前記生物と前記２本鎖ＲＮＡとを接触させる、請求項３４又は３５に記載の方法。
【請求項３７】  生物におけるＲＮＡ発現の阻害方法であって、前記生物と、請求項３１又は３２に記載の菌株とを接触させることを含む、方法。
【請求項３８】  前記生物が線虫である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】  前記菌株を前記生物に供与することによって、前記生物と前記菌株とを接触させる、請求項３７又は３８に記載の方法。