【手続補正書】
【提出日】平成31年4月10日(2019.4.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脱分化した植物細胞懸濁培地の増殖を先にサポートした無細胞上清または前記無細胞上清の画分を含む皮膚治療のための医薬であって、
前記無細胞上清または前記画分は、４〜３００アミノ酸長の、ペプチド植物成長因子、植物転写因子、エピジェネティック因子、およびこれらの混合物から選択されるペプチドを含み、
前記無細胞上清または前記画分は、細胞溶解による細胞質性細胞内含有物ならびに膜および／または細胞壁を有していない、医薬。
【請求項２】
前記無細胞上清または前記画分は、５〜３００アミノ酸長の、ペプチド植物成長因子、植物転写因子、およびこれらの混合物から選択されるペプチドを含み、前記無細胞上清または前記画分は、細胞溶解による細胞質性細胞内含有物ならびに膜および／または細胞壁を有していない、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
皮膚の瘢痕の治療のための、および／または皮膚創傷の治療のための、および／または皮膚の若返りの促進のためのものである、請求項１〜２のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項４】
前記脱分化した植物細胞培養懸濁液は、ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒ
ｏｔａ）、ツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）、ザクロ（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ）、ワタ（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｅｒｂａｃｅｕｍ）、Ｓａｒｃｏｃａｐｎｏｓ  ｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａ、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）、アマ（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ）、Ｌｉｔｈｏｐｓ  ｐｓｅｕｄｏｔｒｕｎｃａｔｅｌｌａ、アルニカ（Ａｒｎｉｃａ  ｍｏｎｔａｎａ）、ヤエヤマアオキ（Ｍｏｒｉｎｄａ  ｃｉｔｒｉｆｏｌｉａ）、ヒレハリソウ（Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、アサ（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａ）、オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ）、およびカメリアシネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される植物由来である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項５】
前記上清または前記無細胞上清の画分は、ファイトスルフォカイン−α（ＰＳＫ−α）、ファイトスルフォカイン−β（ＰＳＫ−β）、硫酸化チロシン−１を含む植物ペプチド（ＰＳＹ１）、ＲＡＬＦ（Ｒａｐｉｄ  Ａｌｋａｌｉｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ）、管状要素分化抑制因子（ＴＤＩＦ）、Ｃｌａｖａｔａ−３（ＣＬＶ３）、ＣＬＥ（Ｃｌａｖａｔａ−Ｅｍｂｒｙｏ  Ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎ−Ｒｅｌａｔｅｄ）、ＴＰＤ１（Ｔａｐｅｔｕｍ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ−１）、表皮パターン形成因子−１（ＥＰＦ１）、花の器官脱離欠損（ＩＤＡ）、ＥＳＲ（Ｅｍｂｒｙｏ  Ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ  Ｒｅｇｉｏｎ−Ｒｅｌａｔｅｄ）、Ｐｏｌａｒｉｓペプチド（ＰＬＳ）、根分裂組織成長因子（ＲＧＦ）、ＥＣ１（Ｅｇｇ  Ｃｅｌｌ−Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＣＥＰ（Ｃ−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  Ｅｎｃｏｄｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ）、初期ノジュリン４０（ＥＮＯＤ４０）、システミン、ＳＣＲ（Ｓ−ｌｏｃｕｓ  Ｃｙｓｔｅｉｎ  Ｒｉｃｈ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、およびこれらの混合物からなる群から選択される植物ペプチド成長因子を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項６】
前記無細胞上清またはその画分は、
（ａ）  液体栄養培養培地中で脆いカルス由来の脱分化した植物細胞を５〜１５日間増殖させ、前記脱分化した植物細胞の増殖をサポートする馴化培地を得ることと、
（ｂ）  前記細胞を溶解させることなく前記馴化培地から植物細胞全体を取り除き、４〜３００アミノ酸長の、ペプチド植物成長因子、植物転写因子、エピジェネティック因子、およびそれらの混合物から選択されるペプチドを含む無細胞上清を得ることと、
（ｃ）  場合により、クロマトグラフィー、ろ過、限外ろ過、タンパク質沈殿、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分離技術を用いてタンパク質分離プロセスを実行し、前記無細胞上清の画分を得ることと、
を含む方法によって得ることができる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項７】
前記無細胞上清またはその画分は、ステップ（ｂ）の後に前記無細胞上清を凍結乾燥して、凍結乾燥上清を得ることを含む方法によって得ることができる、請求項６に記載の医薬。
【請求項８】
前記無細胞上清またはその画分は、前記得られた凍結乾燥無細胞上清をさらに１００〜５００倍濃縮することによって得ることができる、請求項７に記載の医薬。
【請求項９】
前記脱分化した植物細胞懸濁培地は、１×１０５細胞／懸濁培地ｍＬ〜１×１０７細胞／懸濁培地ｍＬの、懸濁培地の体積単位あたりの細胞数として表される細胞密度で培養される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１０】
前記脱分化した植物細胞懸濁培地は、誘導プロセスを用いることによりストレス条件に供される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬。
【請求項１１】
ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）、ツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）、ザクロ（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ）、ワタ（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ  ｈｅｒｂａｃｅｕｍ）、Ｓａｒｃｏｃａｐｎｏｓ  ｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａ、ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）、アマ（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ）、Ｌｉｔｈｏｐｓ  ｐｓｅｕｄｏｔｒｕｎｃａｔｅｌｌａ、アルニカ（Ａｒｎｉｃａ  ｍｏｎｔａｎａ）、ヤエヤマアオキ（Ｍｏｒｉｎｄａ  ｃｉｔｒｉｆｏｌｉａ）、ヒレハリソウ（Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、アサ（Ｃａｎｎａｂｉｓ  ｓａｔｉｖａ）、オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａｅａ）、およびカメリアシネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される植物由来の脱分化した植物細胞培養懸濁培地の増殖を先にサポートした無細胞上清の画分であって、
−  ４〜３００アミノ酸長の、ペプチド植物成長因子、植物転写因子、エピジェネティック因子、およびこれらの混合物から選択されるペプチドを含み、前記画分は細胞溶解による細胞質性細胞内含有物ならびに膜および／または細胞壁を有しておらず、
（ａ）  液体栄養培養培地中で脆いカルス由来の前記脱分化した植物細胞を５〜１５日間増殖させ、前記脱分化した植物細胞の増殖をサポートする馴化培地を得ることと、
（ｂ）  前記細胞を溶解させることなく前記馴化培地から植物細胞全体を取り除き、４〜３００アミノ酸長のペプチドを含む無細胞上清を得ることと、
（ｃ）  固相抽出クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ろ過、限外ろ過、タンパク質沈殿、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分離技術を用いてタンパク質分離プロセスを実行し、前記無細胞上清の画分を得ることと、
を含む方法によって得ることができる、画分。
【請求項１２】
前記画分は、
−  ５〜３００アミノ酸長の、ペプチド植物成長因子、植物転写因子、およびこれらの混合物から選択されるペプチドを含み、前記画分は細胞溶解による細胞質性細胞内含有物ならびに膜および／または細胞壁を有しておらず、
（ａ）  液体栄養培養培地中で脆いカルス由来の前記脱分化した植物細胞を５〜１５日間増殖させ、前記脱分化した植物細胞の増殖をサポートする馴化培地を得ることと、
（ｂ）  前記細胞を溶解させることなく前記馴化培地から植物細胞全体を取り除き、５〜３００アミノ酸長のペプチドを含む無細胞上清を得ることと、
（ｃ）  固相抽出クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ろ過、限外ろ過、タンパク質沈殿、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分離技術を用いてタンパク質分離プロセスを実行し、前記無細胞上清の画分を得ることと、
を含む方法によって得ることができる、請求項１１に記載の無細胞画分。
【請求項１３】
ステップ（ｃ）は固相抽出クロマトグラフィーによって実行される、請求項１１〜１２のいずれか一項に記載の無細胞画分。
【請求項１４】
請求項１１〜１３のいずれか一項に定義される脱分化した植物細胞懸濁培地の上清の無細胞画分の有効量と、１つまたは複数の適切な局所用の薬学的にまたは美容的に許容される賦形剤または担体と、を一緒に含む、皮膚局所用組成物。
【請求項１５】
局所用の薬学的にまたは美容的に許容される賦形剤のうち少なくとも１つとしてグリセリンを含む、請求項１４に記載の皮膚局所用組成物。