【手続補正書】
【提出日】令和1年10月3日(2019.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Iの化合物:
【化１】
2018530617.tif 000001
(式中
Cyは
−1つ以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている単環式C3-7シクロアルキル、又は
−N、S、及びOから独立に選択される1又は2つのヘテロ原子を含み、1つ以上の独立に選択されるR3により任意に置換されている4〜7員単環式ヘテロシクロアルキルであり;
R1は
−H、
−-SO3H、
−-P(=O)(OH)2、
−C1-4アルキル、
−-C(=O)-(N、S、及びOから独立に選択される1又は2つのヘテロ原子を含む4〜7員単環式ヘテロシクロアルキル)、又は
−C1-6アルキルが1つ以上の独立に選択されるR4基により任意に置換されている-C(=O)C1-6アルキルであり;
R2は、H又はC1-4アルキルであり;
各R3は:
−OH、
−=O、
−ハロ、及び
−C1-4アルキル
から独立に選択され;
各R4は:
−-NR5aR5b、
−-C(=O)OH、
−N、S、及びOから独立に選択される1又は2つのヘテロ原子を含み、1つ以上の独立に選択されるC1-4アルキルにより任意に置換されている4〜7員単環式ヘテロシクロアルキル、及び
−-NHC(=O)-C1-4アルキル-NH2
から独立に選択され;且つ
R5a及びR5bは、独立に、H又はC1-4アルキルである）;
又はその医薬として許容し得る塩若しくは溶媒和物又は溶媒和物の塩。
【請求項２】
Cyが、1又は2つの独立に選択されるR3により置換されている単環式C3-7シクロアルキルである、請求項１記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項３】
Cyが、それぞれ1又は2つの独立に選択されるR3により任意に置換されているテトラヒドロピラニル又はテトラヒドロチオピラニルである、請求項１記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項４】
R3が、OH、=O、F、及び-CH3から選択される、請求項１〜３のいずれか一項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項５】
式IIa、IIb、IIc、IId、IIe又はIIfによる、請求項１記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩:
【化２】
2018530617.tif 000002
。
【請求項６】
R1が、H、-CH3、-SO3H、又は-P(=O)(OH)2である、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項７】
R1が、C1-6アルキルが1又は2つの独立に選択されるR4により置換されている-C(=O)C1-6アルキルである、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項８】
R1が、C1-6アルキルが1又は2つの独立に選択される-C(=O)OH、-NH2、-NHCH3、又は-N(CH3)2により置換されている-C(=O)C1-6アルキルである、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項９】
R2がH又は-CH3である、請求項１〜８のいずれか一項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩。
【請求項１０】
下記から選択される請求項１記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩:
6-[6-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル]-ニコチノニトリル、及び
(S)-2-アミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステル。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか一項記載の化合物又はその医薬として許容し得る塩を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
さらなる治療剤を含む、請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記さらなる治療剤が、炎症性疾患、自己免疫疾患、及び/又は増殖性疾患の予防及び/又は治療のための薬剤である、請求項１２記載の医薬組成物。
【請求項１４】
医薬に使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項記載の化合物若しくはその医薬として許容し得る塩又は請求項１１〜１３のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１５】
炎症性疾患、自己免疫疾患、及び/又は増殖性疾患の予防及び/又は治療に使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項記載の化合物若しくはその医薬として許容し得る塩又は請求項１１〜１３のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１６】
炎症性疾患、自己免疫疾患、及び/又は増殖性疾患の予防及び/又は治療に使用するための医薬の製造における、請求項１〜１０のいずれか一項記載の化合物若しくはその医薬として許容し得る塩又は請求項１１〜１３のいずれか一項記載の医薬組成物の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
「アルキル」は、明示された数の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の脂肪族炭化水素を意味する。特定のアルキル基は、1〜6つの炭素原子又は1〜4つの炭素原子を有する。分岐鎖は、メチル、エチル、又はプロピルなどの１つ以上のアルキル基が直鎖アルキル鎖に結合していることを意味する。特定のアルキル基は、メチル(-CH3)、エチル(-CH2-CH3)、n-プロピル(-CH2-CH2-CH3)、イソプロピル(-CH(CH3)2)、n-ブチル(-CH2-CH2-CH2-CH3)、tert-ブチル(-CH2-C(CH3)3)、sec-ブチル(-CH2-CH(CH3)2)、n-ペンチル(-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3)、n-ヘキシル(-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3)、及び1,2-ジメチルブチル(-CH(CH3)-CH(CH3)-CH2-CH3)である。特定のアルキル基は1〜4つの炭素原子を有する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
経皮組成物は、通常、有効成分(複数可)を、一般に、約0.01〜約20重量％、好ましくは、約0.1〜約20重量％、好ましくは、約0.1〜約10重量％、より好ましくは、約0.5〜約15重量％の範囲の量で含有する局所軟膏剤又はクリーム剤として製剤化される。軟膏剤として製剤化される場合、有効成分は、通常、パラフィン性軟膏基剤か水混和性軟膏基剤のいずれかと組み合わされる。或いは、有効成分は、例えば、水中油型クリーム基剤とともにクリーム中に製剤化することができる。そのような経皮製剤は当技術分野で周知であり、通常、有効成分又は製剤の皮膚透過性又は安定性を増進する追加成分を含む。全てのそのような公知の経皮製剤及び成分は、本発明の範囲内に含まれる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７２】
（一般的方法Dの例示的合成:）
（6-[5-[2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エトキシ]-3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル(中間体19)）
【化２２】
2018530617.tif 000003
LiOtBu(2.87g、35.8mmol、3当量)を、2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-エタノール(5.7mL、59.7mmol、5当量)の乾燥1,4-ジオキサン(50mL)溶液に少量ずつ加える。6-[5-ブロモ-3-ニトロ-6-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-ピリジン-2-イルアミノ]-ニコチノニトリル(中間体11、5.0g、11.9mmol、1当量)を加え、それに続いてCuI(1.36g、7.2mmol、0.6当量)を加える。次いで、該反応物を120℃に4時間加熱する。該混合物を0℃に冷却し、HClの1N水溶液(50mL)を加え、生じた混合物を室温で20分間撹拌する。沈殿物をろ過し、真空下で乾燥させる。次いで、残渣を、DCM中0〜5%のMeOHで溶出させてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、所望の化合物を与える。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８３】
（一般的方法Fの例示的合成:）
（(S)-2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-3-メチル-酪酸2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチルエステル(中間体30)）
【化２８】
2018530617.tif 000004
化合物1(42mg、0.1mmol、1当量)、boc-(S)-バリン(33mg、0.15mmol、1.5当量)、DMAP(19mg、0.15mmol、1.5当量)、及びEDCI(45mg、0.225mmol、2.25当量)の混合物を、DCM(5mL)中で、室温で3時間撹拌する。該反応物をH2Oによりクエンチし、DCMで抽出し、次いで、有機層をMgSO4で乾燥させ、蒸発乾固させる。残渣を、ヘプタン中0〜100%のEtOAcで溶出させてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、所望の化合物を与える。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９５】
(2.2.化合物8:硫酸モノ-(2-{2-[3-(5-シアノ-ピリジン-2-イル)-5-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イルオキシ]-エトキシ}-エチル)エステル）
【化３４】
2018530617.tif 000005
化合物1(84mg、0.2mmol、1当量)を、ピリジン-SO3錯体(127mg、0.8mmol、4当量)のピリジン(5mL)溶液に加え、該反応物を16時間還流に加熱する。次いで、該混合物を蒸発乾固させ、100% EtOAcから100%(DCM/MeOH/AcOH/H2O:90/10/1/1)へ、次いで100%(DCM/MeOH/AcOH/H2O:85/15/2/2)で溶出させてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、所望の化合物を与える。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０３】
(2.10.化合物33:4-[2-[2-[3-(5-シアノ-2-ピリジル)-5-(テトラヒドロピラン-4-イルアミノ)イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル]オキシエトキシ]エトキシ]-4-オキソ-ブタン酸）
【化４２】
2018530617.tif 000006
中間体37(90mg、0.16mmol、1当量)をTFA/DCM混合物(1/5mL)中に配置し、該反応物を室温で2時間撹拌する。次いで、トルエンを加え、溶媒を蒸発乾固させる。残渣を、DCM中の0〜6% MeOHで溶出させてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、得られた生成物をMeOHから沈殿させると、ろ過後に所望の化合物を与える。
表III.例示的な本発明の化合物
SM=出発物質、Mtd=方法、MS Mes'd=測定された質量
【表３】
2018530617.tif 000007
2018530617.tif 000008
2018530617.tif 000009
2018530617.tif 000010
2018530617.tif 000011
2018530617.tif 000012
2018530617.tif 000013
2018530617.tif 000014
表IV.代表的な本発明の化合物のNMRデータ
【表４】
2018530617.tif 000015
2018530617.tif 000016
2018530617.tif 000017
2018530617.tif 000018
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４４】
DMSO中の化合物の10mMストック溶液を、最初にDMSOに希釈して(40倍)、250μM濃度を得る。この化合物溶液を、さらに水で希釈して(5倍)、50μM化合物使用溶液を得る(1μMの化合物最終濃度を得るため)。ヒドララジン(アルデヒドオキシダーゼの選択的阻害剤)を、5mMで水中に調製する(100μMの最終濃度を得るため)。インキュベーション混合物を、10μLの肝臓S9懸濁液(ヒト、ラット、マウス、サル、BD Gentest（商標）、20mg/mL)を37℃の86μLの50mMリン酸カリウム緩衝液、pH 7.4に加える(2mgタンパク質/mLの最終濃度)ことにより調製する。2μLの5mMヒドララジンを、選択的阻害剤又は2μLの水の添加と一緒のインキュベーションのために、阻害剤なしのインキュベーションのために加える。5分の予備加温の後、該反応を、2μLの50μM試験化合物のインキュベーション混合物への添加により開始させる。0、3、6、12、18、及び30分のインキュベーションの後、該反応物(100μL)を、分析内部標準としての10ng/mLのワルファリンを含む1%酢酸を含む300μLのMeCN:MeOH(2:1)混合物により停止させる。該試料を混合し、遠心分離し、上清をLC-MS/MSにより分析する。フタラジンを陽性対照として含める。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５２】
化合物を、最終DMSO濃度を0.3%として、3.3及び10μMで試験する。化合物を酵素と共に15分間インキュベートしてから、補因子基質ミックスを加える。CYP3A4(BD Biosciences社製、456202)、CYP2C9(BD Biosciences社製、456258)、CYP2C19(BD Biosciences社製、456259)、及びCYP1A2(BD Biosciences社製、456203)アッセイ用の補因子ミックスの最終反応濃度は、0.4U/mLグルコース-6-リン酸-デヒドロゲナーゼ(G6PDH、Roche社製、10165875001)、3.3mM MgCl2(Sigma社製、M2670)、3.3mM D-グルコース-6-リン酸(Sigma社製、G7879)及び1.3mM NADP+(Sigma社製、N0505)である。CYP2D6(BD Biosciences社製、456217)では、アッセイ中の最終反応濃度は、0.4U/mL G6PDH、0.41mM MgCl2、0.41mM D-グルコース-6-リン酸、及び8.2μM NADP+である。酵素及び基質の濃度を表Xに報告する。インキュベーション期間の後に、該反応を、停止液の添加により停止させる。基質としてDBFを使用する実験では2N NaOH停止液を使用し、他の全ての基質では、停止液は80% MeCN/20% 0.5Mトリス塩基である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６４】
(5.1.2.データ分析）
標準曲線を、x軸上の濃度に対して平均吸光度をy軸にプロットすることにより作成し、ベストフィットカーブをグラフ上の点を通して描く。線形回帰分析を実施して、式(y=ax +b)及びR2乗値を決定する。各血液試料反復実験のために、TNFα濃度を、希釈係数を考慮して、下記式を使用して計算する:
TNFα濃度試料1=40*(OD試料1-b)/a
[264a]次いで、データを、各反復実験に関して、下記式を利用して阻害のパーセンテージ(PIN)として表す:
【数２】
2018530617.tif 000019
式中、「平均TNFαCL097あり」は、CL097によりトリガーされた反復実験試料の平均TNFα濃度であり;「TNFα試料1」は、試料1のTNFα濃度であり;「平均TNFαビヒクルあり」は、ビヒクルにより処理された反復実験試料の平均TNFα濃度である。
カーブフィッティングを、平均PIN±SEMを使用して生成する。グラフ及びIC50計算を、GraphPad Prism(登録商標)ソフトウェアを利用して誘導する。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５１】
(6.6.7.組織学）
犠死後に、左の腎臓を回収し、縦方向に2つの部分に切断する。一方の部分を、3.7%ホルムアルデヒド中で固定してからパラフィンに包埋する。4μm厚さの切片を作製し、過ヨウ素酸-シッフ(PAS)により染色するか、又はCD3(T細胞)、CD20(B細胞)、及びF4/80(マクロファージ)により免疫染色する。