【手続補正書】
【提出日】平成20年4月22日(2008.4.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルブミン結合体及び非結合アルブミンを含む溶液中、非結合アルブミンからアルブミン結合体を分離する方法であって、以下のステップ：
ａ）高塩濃度をもつ水性緩衝液中で、平衡にある疎水性固形支持体上に、上記溶液を充填し；
ｂ）前記支持体に低減する塩濃度勾配を適用し；そして
ｃ）前記アルブミン結合体を回収する、
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記アルブミン結合体が、アルブミンに共有結合するマイケル受容体を有する分子から成る、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記結合が、前記マイケル受容体と前記アルブミンのシステイン３４との間にある、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記マイケル受容体がマレイミド基である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記マレイミド基がマレイミド−プロピオン酸（ＭＰＡ）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記アルブミンが、血清アルブミン、及び組換えアルブミンからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記アルブミンが、ヒトアルブミン、ラットアルブミン、マウスアルブミン、ブタアルブミン、ウシアルブミン、イヌアルブミン、及びウサギアルブミンからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記アルブミンが、ヒト血清アルブミンである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記アルブミンが、脂肪酸、金属イオン、及び糖からなる群より選択される少なくとも１つで修飾される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記アルブミンが、グルコース、ラクトース、及びマンノースからなる群より選択される糖で修飾される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記分子がペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びその組合わせからなる群より選択され、前記マイケル受容体が当該分子に場合によりリンカーを介して共有結合する、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記分子が、少なくとも５７ダルトンの分子量を有するペプチドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ペプチドが、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、クリングル５（Ｋ５）、ダイノルフィン、エキセンディン−４、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、インシュリン、ナトリウム利尿ペプチド、エンフビルチド（Ｔ−２０）、Ｔ−１２４９、Ｃ−３４、可溶性Ｃ−３５ペプチドＥＦ（ＳＣ−３５）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、及びそれらの類似体からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記分子が、ビノレルビン、ゲムシタビン、及びパクリタキセルからなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記分子が、酸感受性共有結合又は蛋白質分解的開裂の影響を受けやすいペプチド配列を介して前記アルブミンに共有結合し、それにより、前記分子とアルブミンの分離、及び細胞内への当該分子の侵入が可能となる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記疎水性固形支持体が疎水性樹脂を含むカラムである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記疎水性樹脂が、オクチルセファロース、フェニルセファロース、及びブチルセファロースからなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記疎水性樹脂がブチルセファロースである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記塩が、リガンド−蛋白質相互作用を促進するのに十分な塩析効果を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記塩が、リン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、及びリン酸マグネシウムからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記塩が、リン酸アンモニウム又は硫酸アンモニウムである、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記塩が硫酸アンモニウムである、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記低減する塩濃度勾配が、３０００ｍＭ未満の出発塩濃度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記低減する塩濃度勾配が、５００〜１０００ｍＭの出発塩濃度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記分子が、前記マイケル受容体が場合によりリンカーを介して共有結合するペプチドである、請求項２、４又は５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ペプチドが、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、クリングル５（Ｋ５）、ダイノルフィン、エキセンディン−４、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、インシュリン、ナトリウム利尿ペプチド、エンフビルチド（Ｔ−２０）、Ｔ−１２４９、Ｃ−３４、可溶性Ｃ−３５ペプチドＥＫ（ＳＣ−３５）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）の類似体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記分子が、ＧＬＰ−１（７−３６）ｄＡｌａ８Ｌｙｓ３７（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号１）、ＧＲＦ（１−２９）ｄＡｌａ２Ｇｌｎ８Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｌｙｓ３０（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２）、Ａｃ−Ｋ５Ｌｙｓ８（ε−ＭＰＡ）−ＮＨ２（配列番号３）、インシュリンＢ１−ＭＰＡ（配列番号４）、インシュリンＡ１−ＭＰＡ（配列番号５）、ＭＰＡ−ＡＥＥＡ−Ｃ３４−ＣＯＮＨ２（配列番号６）、Ｃ３４（１−３４）Ｌｙｓ３５（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号７）、Ｃ３４（１−３４）Ｌｙｓ１３（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号８）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ３７（ε−ＭＰＡ）−ＮＨ２（配列番号９）、ＧＬＰ−１（７−３６）ｄＡｌａ８Ｌｙｓ３７（ε−ＭＰＡ）−ＮＨ２（配列番号１０）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ２６（ε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）（配列番号１１）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ３４（ε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）（配列番号１２）、エキセンディン−４−（１−３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＭＰＡ）−ＮＨ２（配列番号１３）、エキセンディン−４（９−３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号１４）、ＤｙｎＡ（１−１３）（ＭＰＡ）−ＮＨ２（配列番号１５）、ＭＰＡ−ＡＥＥＡ−ＡＮＰ（９９−１２６）−ＣＯＮＨ２（配列番号１６）、ＤｙｎＡ（７−１３）Ｌｙｓ１３（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号１７）、アセチル−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−シクロヘキシルスタチル−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号１８）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ２３（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号１９）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ１８（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２０）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ２６（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２１）、ＧＬＰ−１（７−３７）Ｌｙｓ２７（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２２）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ３７（ε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２３）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ３７（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２４）、エキセンディン−４−（１−３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２５）、ＧＬＰ−１（７−３６）Ｌｙｓ３４（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２６）、インシュリンＢ１−ＯＡ−ＭＰＡ（配列番号２７）、インシュリンＢ２９−ＭＰＡ（配列番号２８）、ＧＲＦ（１−２９）Ｌｙｓ３０（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号２９）、ＧＲＦ（１−２９）ｄＡｌａ２Ｇｌｎ８ｄＡｒｇ１１Ａｌａ１５Ｌｅｕ２７Ｌｙｓ３０（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３０）、ＧＲＦ（１−２９）ｄＡｌａ２Ｌｙｓ３０（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３１）、ＧＬＰ−１（９−３６）Ｌｙｓ３７（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３２）、Ａｃ−Ｔ２０（１−３６）Ｌｙｓ３７（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３３）、Ａｃ−Ｔ１２４９（１−３９）Ｌｙｓ４０（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３４）、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デオキシ−Ｃ’−ノルビンカレウコブラスチン−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ、Ｃ３４（１−３４）Ｌｙｓ１３（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３６）、Ｃ３４（１−３４）Ｌｙｓ３５（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３７）、ＭＰＡ−Ｃ３４（１−３４）−ＣＯＮＨ２（配列番号３８）、Ａｃ−Ｃ３４（１−３４）Ｇｌｕ２Ｌｙｓ６Ｌｙｓ７Ｇｌｕ９Ｇｌｕ１０Ｌｙｓ１３Ｌｙｓ１４Ｇｌｕ１６Ｇｌｕ１７Ｌｙｓ２０Ｌｙｓ２１Ｇｌｕ２３Ｇｌｕ２４Ｌｙｓ２７Ｇｌｕ３１Ｌｙｓ３４Ｌｙｓ３５Ｌｙｓ３６（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号３９）、ＭＰＡ−ＡＥＥＡ−Ｃ３４（１−３４）Ｇｌｕ２Ｌｙｓ６Ｌｙｓ７Ｇｌｕ９Ｇｌｕ１０Ｌｙｓ１３Ｌｙｓ１４Ｇｌｕ１６Ｇｌｕ１７Ｌｙｓ２０Ｌｙｓ２１Ｇｌｕ２３Ｇｌｕ２４Ｌｙｓ２７Ｇｌｕ３１Ｌｙｓ３４Ｌｙｓ３５−ＣＯＮＨ２（配列番号４０）、ＰＹＹ（３−３６）Ｌｙｓ４（ε−ＯＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号４１）、ＭＰＡ−ＯＡ−ＰＹＹ（３−３６）−ＣＯＮＨ２（配列番号４２）、インシュリンＢ２９−ＡＥＥＳ２−ＭＰＡ（配列番号４３）、インシュリンＢ１−ＡＥＥＳ２−ＭＰＡ（配列番号４４）、インシュリンＢ２９−ＯＡ−ＭＰＡ（配列番号４５）、ＭＰＡ−ＰＹＹ（３−３６）−ＣＯＮＨ２（配列番号４６）、ＭＰＡ−ＰＹＹ（３−３６）Ｌｙｓ３７（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号４７）、ＭＰＡ−ＰＹＹ（２２−３６）−ＣＯＮＨ２（配列番号４８）、アセチル−ＰＹＹ（２２−３６）Ｌｙｓ３７（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号４９）、ＭＰＡ−ＡＮＰ（９９−１２６）−ＣＯＮＨ２（配列番号５０）、ＭＰＡ−ＥＥＥＥＰ−ＡＮＰ（９９−１２６）（配列番号５１）、及びＧＬＰ−２（１−３３）Ｇｌｙ２Ｌｙｓ３４（ε−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２（配列番号５２）からなる群より選択される、請求項２、４又は５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ペプチドが、ＧＬＰ−１（７−３６）ｄＡｌａ８Ｌｙｓ３７である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ペプチドが、エキセンディン−４−（１−３９）Ｌｙｓ４０である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記ペプチドが、ＧＬＰ−１（７−３６）ｄＡｌａ８Ｌｙｓ３７（ε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＣＯＮＨ２である、請求項２、４又は５のいずれか１項に記載の方法。