【手続補正書】
【提出日】平成20年9月30日(2008.9.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物細胞内で複数の標的配列をダウン制御する方法であって、
（ａ）二重鎖ＲＮＡ又はヘアピンを形成することができる修飾されたｍｉＲＮＡ前駆体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物を細胞に導入するが、その際、修飾されたｍｉＲＮＡ前駆体は修飾されたｍｉＲＮＡ及び当該修飾されたｍｉＲＮＡに相補な配列を含み、但し、修飾されたｍｉＲＮＡは、（ｉ）標的配列に対して完全相補であるか、（ｉｉ）ＧＵ塩基対を除く標的配列に対して完全相補であるか、又は（ｉｉｉ）ｍｉＲＮＡの５’エンドから数えて最初の１０ヌクレオチド中の標的配列に完全相補であるように修飾されたｍｉＲＮＡであり、そして
（ｂ）ｍｉＲＮＡを生産するのに十分な時間、核酸構築物を発現させるが、その際、修飾されたｍｉＲＮＡが標的配列の発現をダウン制御する、
方法。
【請求項２】
２つ又はそれより多い標的配列をダウン制御することをさらに含む請求項１記載の方法であって、核酸構築物が互いに作動可能なように連結した２つ又はそれより多いポリヌクレオチドを含み、各ポリヌクレオチドは二重鎖ＲＮＡ又はヘアピンを形成することのできる修飾されたｍｉＲＮＡ前駆体をコードし、各修飾ｍｉＲＮＡ前駆体は修飾されたｍｉＲＮＡ及び当該修飾されたｍｉＲＮＡに相補な配列を含み、各修飾されたｍｉＲＮＡは、（ｉ）標的配列に対して完全相補であるか、（ｉｉ）ＧＵ塩基対を除く標的配列に対して完全相補であるか、又は（ｉｉｉ）ｍｉＲＮＡの５’エンドから数えて最初の１０ヌクレオチド中の標的配列に完全相補であるように修飾されたｍｉＲＮＡであり、各修飾されたｍｉＲＮＡは標的配列をダウン制御し、そして核酸構築物は作動可能に連結したポリヌクレオチドに対して作動可能に連結したプロモーターを任意さらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
細胞が、トウモロコシ、コムギ、イネ、オオムギ、エンバク、モロコシ属、キビ、ヒマワリ、ベニバナ、ワタ、ダイズ、カノーラ、アルファルファ、アラビドプシス、及びタバコからなる群から選択される、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
修飾されたｍｉＲＮＡが、標的配列に対して完全相補になるように修飾された植物のｍｉＲＮＡである、請求項１乃至３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
修飾されたｍｉＲＮＡが、ＧＵ塩基対の使用を除いて、標的配列に対して完全相補になるように修飾された植物のｍｉＲＮＡである、請求項１乃至３のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
植物ｍｉＲＮＡが、アラビドプシス、トマト、ダイズ、イネ及びトウモロコシからなる群から選択される、請求項４又は５記載の方法。
【請求項７】
標的配列が植物病原体のＲＮＡである、請求項１乃至６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
プロモーターが病原体により誘導可能なプロモーターである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
標的配列を含む植物病原体が植物ウイルス又は植物ウイロイドである、請求項７又は８項記載の方法。
【請求項１０】
標的配列がウイルスの必須領域の配列、ウイルスのファミリーの保存された配列及び別のウイルスファミリーのメンバー間の保存された配列からなる群から選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
核酸構築物が２つ又はそれより多い修飾ｍｉＲＮＡ前駆体配列を含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
核酸構築物がヘテロ重合体前駆体ｍｉＲＮＡ又はホモ重合体前駆体ｍｉＲＮＡである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
標的配列がＲＮＡの非コーディング領域中の標的配列、ＲＮＡのコーディング領域中の標的配列及びＲＮＡのスプライス部位を含む標的配列からなる群から選択される、請求項１乃至６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
核酸構築物が細胞の遺伝子又はトランス遺伝子のイントロンに挿入された、請求項１乃至６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
標的配列がウイルスの遺伝子サイレンシングサプレッサーをコードする、請求項７記載の方法。
【請求項１６】
標的配列を含むＲＮＡがＨＣ−Ｐｒｏ及びＰ６９からなる群から選択されるポリヌクレオチドをコードする、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
二重鎖ＲＮＡ又はヘアピンを形成することができる修飾されたｍｉＲＮＡ前駆体をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸であって、但し、修飾されたｍｉＲＮＡ前駆体は修飾されたｍｉＲＮＡ及び当該修飾されたｍｉＲＮＡに相補な配列を含み、但し、修飾されたｍｉＲＮＡは、（ｉ）標的配列に対して完全相補であるか、（ｉｉ）ＧＵ塩基対を除く標的配列に対して完全相補であるか、又は（ｉｉｉ）ｍｉＲＮＡの５’エンドから数えて最初の１０ヌクレオチド中の標的配列に完全相補であるように修飾されたｍｉＲＮＡである、単離された核酸。
【請求項１８】
互いに作動可能なように連結した２つ又はそれより多いポリヌクレオチドを含む請求項１７記載の単離された核酸であって、各ポリヌクレオチドは二重鎖ＲＮＡ又はヘアピンを形成することのできる修飾されたｍｉＲＮＡ前駆体をコードし、各修飾ｍｉＲＮＡ前駆体は修飾されたｍｉＲＮＡ及び当該修飾されたｍｉＲＮＡに相補な配列を含み、各修飾されたｍｉＲＮＡは、（ｉ）標的配列に対して完全相補であるか、（ｉｉ）ＧＵ塩基対を除く標的配列に対して完全相補であるか、又は（ｉｉｉ）ｍｉＲＮＡの５’エンドから数えて最初の１０ヌクレオチド中の標的配列に完全相補であるように修飾されたｍｉＲＮＡであり、各修飾されたｍｉＲＮＡは標的配列をダウン制御し、そして核酸構築物は作動可能に連結したポリヌクレオチドに対して作動可能に連結したプロモーターを任意さらに含む、請求項１７載の単離された核酸。
【請求項１９】
修飾されたｍｉＲＮＡが、標的配列に対して完全相補になるように修飾された植物のｍｉＲＮＡである、請求項１７又は１８記載の単離された核酸。
【請求項２０】
修飾されたｍｉＲＮＡが、ＧＵ塩基対の使用を除いて、標的配列に対して完全相補になるように修飾された植物のｍｉＲＮＡである、請求項１７又は１８記載の単離された核酸。
【請求項２１】
植物ｍｉＲＮＡが、アラビドプシス、トマト、ダイズ、イネ及びトウモロコシからなる群から選択される、請求項１９又は２０記載の単離された核酸。
【請求項２２】
標的配列が植物病原体のＲＮＡである、請求項１７乃至２０のいずれか１項記載の単離された核酸。
【請求項２３】
プロモーターが病原体により誘導可能なプロモーターである、請求項２２記載の単離された核酸。
【請求項２４】
標的配列を含む植物病原体が植物ウイルス又は植物ウイロイドである、請求項２２又は２３項記載の単離された核酸。
【請求項２５】
標的配列がウイルスの必須領域の配列、ウイルスのファミリーの保存された配列及び別のウイルスファミリーのメンバー間の保存された配列からなる群から選択される、請求項２４記載の単離された核酸。
【請求項２６】
核酸構築物が２つ又はそれより多い修飾ｍｉＲＮＡ前駆体配列を含む、請求項２５記載の単離された核酸構築物。
【請求項２７】
核酸構築物がヘテロ重合体前駆体ｍｉＲＮＡ又はホモ重合体前駆体ｍｉＲＮＡである、請求項２６記載の単離された核酸。
【請求項２８】
標的配列がＲＮＡの非コーディング領域中の標的配列、ＲＮＡのコーディング領域中の標的配列及びＲＮＡのスプライス部位を含む標的配列からなる群から選択される、請求項１７乃至２１のいずれか１項記載の単離された核酸。
【請求項２９】
標的配列がウイルスの遺伝子サイレンシングサプレッサーをコードする、請求項２０記載の単離された核酸。
【請求項３０】
標的配列を含むＲＮＡがＨＣ−Ｐｒｏ及びＰ６９からなる群から選択されるポリヌクレオチドをコードする、請求項２９記載の単離された核酸。
【請求項３１】
請求項１７乃至３０のいずれか１項記載の単離された核酸を含む植物細胞。
【請求項３２】
植物が、トウモロコシ、コムギ、イネ、オオムギ、エンバク、モロコシ属、キビ、ヒマワリ、ベニバナ、ワタ、ダイズ、カノーラ、アルファルファ、アラビドプシス、及びタバコからなる群から選択される、請求項３１記載の植物細胞。
【請求項３３】
単離された核酸構築物が細胞の遺伝子又はトランス遺伝子のイントロンに挿入された、請求項３１又は３２記載の植物細胞。
【請求項３４】
請求項１７乃至３０のいずれか１項記載の単離された核酸を含むトランスジェニック植物。
【請求項３５】
植物が、トウモロコシ、コムギ、イネ、オオムギ、エンバク、モロコシ属、キビ、ヒマワリ、ベニバナ、ワタ、ダイズ、カノーラ、アルファルファ、アラビドプシス、及びタバコからなる群から選択される、請求項３４記載のトランスジェニック植物。
【請求項３６】
単離された核酸が細胞の遺伝子又はトランス遺伝子のイントロンに挿入された、請求項３４記載の細胞。
【請求項３７】
請求項３４乃至３６のいずれか１項記載のトランスジェニック植物の種子。