(57)【要約】  本発明は、非電解質または弱電解質の天然物の結晶またはアモルファスと、強電解質が溶解した母液とを含むスラリーから、高い純度で結晶またはアモルファスを分離精製するための洗浄効率の高い洗浄方法を提供する。本発明の洗浄方法において、非電解質または弱電解質の結晶またはアモルファスの洗浄時に発生する洗浄液の電気伝導度を連続的に測定することによって、サンプリング作業を行わずに、結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非電解質または弱電解質の結晶またはアモルファスと、強電解質が溶解した母液とを含むスラリーから結晶またはアモルファスを分離する工程、洗浄液を用いて分離された結晶またはアモルファスを洗浄する工程および洗浄液を脱液する工程を含み、
かつ、洗浄液の脱液工程で、脱液された洗浄液の電気伝導度を測定することにより、結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知することを特徴とする結晶またはアモルファスの洗浄方法。
【請求項２】
非電解質または弱電解質が、中性アミノ酸、ペプチド、核酸塩基、ヌクレオシド、糖類およびビタミン類よりなる群から選択される請求項１に記載の洗浄方法。
【請求項３】
中性アミノ酸が、セリン、グルタミン、アラニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グリシン、フェニルアラニン、プロリン、チロシン、スレオニン、トリプトファン、メチオニン、システイン、シスチンおよびアスパラギンよりなる群から選択される請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項４】
ペプチドが、ジペプチドまたはトリペプチドである請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項５】
ペプチドが、グルタチオンまたはアラニルグルタミンである請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項６】
核酸塩基が、アデニン、シトシン、グアニン、ヒポキサンチン、チミン、ウラシルおよびキサンチンよりなる群から選択される請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項７】
ヌクレオシドが、アデノシン、シチジン、グアノシン、イノシンおよびウリジンよりなる群から選択される請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項８】
糖類が単糖または２〜５糖のオリゴ糖である請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項９】
糖類が６糖以上のオリゴ糖である請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項１０】
ビタミン類が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、ビオチン、イノシトール、コリン、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＬ１、ビタミンＰ、パラアミノ安息香酸、リポ酸、オロット酸、カルニチンおよびメチルメチオニンよりなる群から選択される請求項２に記載の洗浄方法。
【請求項１１】
非電解質または弱電解質の結晶またはアモルファスと、強電解質が溶解した母液とを含むスラリーから結晶またはアモルファスを分離する手段、洗浄液を用いて分離された結晶またはアモルファスを洗浄する手段、洗浄液を脱液する手段および脱液された洗浄液の電気伝導度を測定する手段を有する結晶またはアモルファスの洗浄装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、濃縮晶析等による精製過程で生じるスラリーから高純度の結晶またはアモルファスを得るための結晶またはアモルファスの洗浄方法および洗浄装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミノ酸やペプチド等の天然物や合成物等の成分を含有する溶液から目的の成分を単離精製する方法としては、例えば、濃縮晶析等による結晶化が行われている。このような結晶化の過程で、母液と結晶またはアモルファスとを含むスラリーが得られ、このスラリーから固液分離によって結晶またはアモルファスを回収する。【０００３】
固液分離の方法としては、遠心ろ過や吸引ろ過が知られている。遠心ろ過には、バスケット型の遠心ろ過装置が広く使用されている。吸引ろ過には、吸引びんおよび吸引ロートからなる吸引ろ過装置が広く使用されている。【０００４】
通常、天然物を単離する際に得られるスラリーの母液には、目的物質の他に、天然物を発酵等で製造するときの添加物や、天然物を精製するときの酸処理、アルカリ処理または中和処理に用いる処理剤として、硫酸ナトリウム、リン酸アンモニウム、塩化ナトリウム等の塩のごとき強電解質や不純物が溶解している。
スラリーの固液分離の際に、充分に母液が脱液されず、上記の強電解質や不純物が結晶に付着して残ると、製品純度の低下を引き起こすことになる。そこで、母液を洗い流すことを目的として、分離された結晶等の固体部分を洗浄する。【０００５】
図４のアクティビティ図を参照して、結晶またはアモルファスを洗浄し、精製するための従来の方法を説明する。
最初に脱液すべきスラリーを固液分離装置に給液する。固液分離装置としては、一般的なバスケット型遠心ろ過装置や吸引ろ過装置を用いる。
スラリー給液後、固液分離によって一定時間母液を脱液し、結晶またはアモルファスの固体部分の洗浄工程に移行する。洗浄液として水またはメタノール等の有機溶媒または含水溶媒を用いて、固体表面に付着している母液を洗い流し、次いで、洗浄液を脱液する。【０００６】
１回洗浄するごとに、洗浄操作を停止して固体部分をサンプリングし、固体部分に含まれる不純物量を測定する。予め設定した基準値を下回れば洗浄終了を決定し、最終脱液工程に移行する。また、独立して上記洗浄工程を複数回試行し、不純物の含有量が基準値以下である固体を取得するために必要な洗浄回数を把握し、その回数に基づいて予め洗浄工程における洗浄回数を設定する。設定回数の洗浄を行ったら洗浄工程を終了し、最終の脱液工程に移行する。【０００７】
固体部分をサンプリングして測定する方法は、人手と時間を要するという欠点を有し、予め洗浄回数を設定する方法は、分離状態の振れにも確実に対応できるように、過剰な洗浄を実施せざるを得ないという欠点を有していた。
そこで、洗浄ごとに固体部分をサンプリングして分析することなく、結晶またはアモルファスの洗浄状態を迅速に検知する方法が求められていた。【０００８】
特開２００４−２３１６４２号公報には、遠心分離する際の操作圧力をフラッシュ冷却して晶析する工程の最終晶析圧力よりも高くすることによって高純度テレフタル酸を製造する方法が開示され、特開２００４−２６１７１０号公報には、結晶の粒度調整を行って洗浄の安定性および洗浄効率を向上した結晶の分離洗浄方法が開示されているが、いずれの方法も、洗浄状態を検知し、理想的な状態で洗浄工程を終了することについては考慮されていない。【０００９】
【特許文献１】特開２００４−２３１６４２号公報
【特許文献２】特開２００４−２６１７１０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、アミノ酸、ペプチド、核酸塩基、ヌクレオシド、糖類またはビタミン類の天然物のごとき非電解質または弱電解質の結晶またはアモルファスと、強電解質が溶解した母液とを含むスラリーから、母液を脱液することによって結晶またはアモルファスを分離し、分離した結晶またはアモルファスを洗浄液を用いて洗浄し、洗浄液を脱液する工程において、結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知して、適切な時期に洗浄を終了させて、高純度な天然物を効率的に単離精製することができる洗浄方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、非電解質または弱電解質の結晶またはアモルファスと、強電解質が溶解した母液とを含むスラリーから固液分離装置を用いて母液を脱液することにより結晶またはアモルファスを分離し、分離された結晶またはアモルファスをそのままその固液分離装置内で洗浄液を用いて洗浄する際に、洗浄操作を停止することなく、結晶またはアモルファスの洗浄状態を迅速に検知し、適切な状態で洗浄を終了することができる方法について鋭意研究を行った。
その結果、脱液された洗浄液に含まれる電解質を検出することによって、結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知し、洗浄操作を終了する最適な時期を決定できることを見出した。【００１２】
通常、非電解質または弱電解質の天然物を精製する際に生じるスラリーには目的の天然物の他に、天然物を発酵等で製造するときの添加物や、天然物を精製するときの酸処理、アルカリ処理または中和処理に用いる処理剤として、硫酸ナトリウム、リン酸アンモニウム、塩化ナトリウム等の塩のごとき強電解質も含まれている。また、固液分離により分離された天然物の結晶またはアモルファスの表面には母液が付着しているため、前記結晶またはアモルファスは、上記塩などの強電解質を含有することになる。その後の洗浄工程においては、洗浄液を結晶またはアモルファスの表面に噴霧することで、洗浄液と母液が接触し、上記塩などの強電解質が洗浄液中に拡散する。したがって、脱液された洗浄液の電気伝導度を測定すれば、前記結晶またはアモルファスに含有される強電解質の量を検出することができる。洗浄を繰り返す場合においても、結晶またはアモルファスの表面に塩などの強電解質が拡散した前回の洗浄液が付着しているため、上記と同様に脱液された洗浄液の電気伝導度を測定することにより、洗浄中の結晶またはアモルファスに含有される強電解質の量を検出することができる。【００１３】
目的の天然物が非電解質である場合、脱液された洗浄液の電気伝導度が洗浄液自体の電気伝導度になれば、結晶またはアモルファスから強電解質が完全に除去されたことが確認でき、これによって、天然物の結晶またはアモルファスの洗浄を終了することができる。また、脱液された洗浄液の電気伝導度が、洗浄液自体の電気伝導度を含めた所定値以下になれば、結晶またはアモルファスに含まれる強電解質量が所定値から導き出される濃度以下であることが確認でき、これによって、結晶またはアモルファスの洗浄を終了することもできる。上記の所定値は、スラリーに含まれる強電解質の種類、洗浄液の種類、強電解質の残存許容濃度などに基づき設定される。【００１４】
目的の天然物が弱電解質である場合、結晶またはアモルファスを洗浄する溶液がその弱電解質を実質的に溶解しないものであれば、上記した非電解質の結晶またはアモルファスを洗浄するときと同様に、脱液される洗浄液の電気伝導度を測定することにより、前記結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知することができる。また、洗浄液がその弱電解質を溶解する溶液であっても、溶解した弱電解質の一部が電離することに起因する電気伝導度は小さく、脱液された洗浄液の電気伝導度の測定値にはほとんど影響を及ぼさない。したがって、上記した非電解質の結晶またはアモルファスを洗浄する場合と同様に、脱液される洗浄液の電気伝導度を測定することにより、前記結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知することができる。【００１５】
より具体的には、本発明は、以下の（１）〜（１１）に関する。
（１）  非電解質または弱電解質の結晶またはアモルファスと、強電解質が溶解した母液とを含むスラリーから結晶またはアモルファスを分離する工程、洗浄液を用いて分離された結晶またはアモルファスを洗浄する工程および洗浄液を脱液する工程を含み、
かつ、洗浄液の脱液工程で、脱液された洗浄液の電気伝導度を測定することにより、結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知することを特徴とする結晶またはアモルファスの洗浄方法。
（２）  非電解質または弱電解質が、中性アミノ酸、ペプチド、核酸塩基、ヌクレオシド、糖類およびビタミン類よりなる群から選択される（１）に記載の洗浄方法。
（３）  中性アミノ酸が、セリン、グルタミン、アラニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グリシン、フェニルアラニン、プロリン、チロシン、スレオニン、トリプトファン、メチオニン、システイン、シスチンおよびアスパラギンよりなる群から選択される（２）に記載の洗浄方法。
（４）  ペプチドが、ジペプチドまたはトリペプチドである（２）に記載の洗浄方法。
（５）  ペプチドが、グルタチオンまたはアラニルグルタミンである（２）に記載の洗浄方法。
（６）  核酸塩基が、アデニン、シトシン、グアニン、ヒポキサンチン、チミン、ウラシルおよびキサンチンよりなる群から選択される（２）に記載の洗浄方法。
（７）  ヌクレオシドが、アデノシン、シチジン、グアノシン、イノシンおよびウリジンよりなる群から選択される（２）に記載の洗浄方法。
（８）  糖類が単糖または２〜５糖のオリゴ糖である（２）に記載の洗浄方法。
（９）  糖類が６糖以上のオリゴ糖である（２）に記載の洗浄方法。
（１０）  ビタミン類が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、ビオチン、イノシトール、コリン、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＬ１、ビタミンＰ、パラアミノ安息香酸、リポ酸、オロット酸、カルニチンおよびメチルメチオニンよりなる群から選択される（２）に記載の洗浄方法。
（１１）  非電解質または弱電解質の結晶またはアモルファスと、強電解質が溶解した母液とを含むスラリーから結晶またはアモルファスを分離する手段、洗浄液を用いて分離された結晶またはアモルファスを洗浄する手段、洗浄液を脱液する手段および脱液された洗浄液の電気伝導度を測定する手段を有する結晶またはアモルファスの洗浄装置。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の方法では、固液分離装置により分離された結晶またはアモルファスを、そのまま、その固液分離装置内で洗浄するため、効率よく洗浄することが可能であり、１回の洗浄に必要な洗浄液の量を少なくすることができる。また、洗浄工程においてリアルタイムに電気伝導度を測定することで最小限度の洗浄回数で洗浄を完了することができるため、洗浄工程全体で使用する洗浄液の量を大幅に削減することができる。1回あたりの洗浄量および洗浄回数の削減により、強電解質やその他の不純物の洗浄効率が良好であるにもかかわず、分離された結晶またはアモルファスを溶解させてしまうため従来では使用できなかった洗浄液も使用することができるようになった。
かくして、本発明によれば、スラリーの状態や用いる固液分離の方法によらず、結晶またはアモルファスの洗浄状態を検知し、求められる結晶またはアモルファスの純度に達した段階で洗浄操作を終了することによって、過剰な洗浄液の使用の防止、洗浄時間の短縮、過度の洗浄による結晶またはアモルファスの損失、洗浄液やその廃液処理にかかるコストの削減を達成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の第１の具体例の結晶洗浄装置の概略図。
【図２】本発明の第２の具体例の結晶洗浄装置の概略図。
【図３】本発明による結晶洗浄方法を示すアクティビティ図。
【図４】従来の結晶洗浄方法を示すアクティビティ図。
【図５】本発明の方法による結晶洗浄における電気伝導度測定値と洗浄回数との関係を示すグラフ。
【図６】ろ液の電気伝導度と得られた結晶中の塩化物イオン濃度との関係を示すグラフ図。
【符号の説明】
【００１８】
１  遠心ろ過装置
１０  外槽
１１  内槽
１２  スラリー給液口
１３  洗浄ノズル
１４  ろ液ライン
１５  電気伝導度計
２  吸引ろ過装置
２０  吸引ロート
２１  ろ布
２２  ろ液ライン
２３  電気伝導度計
２４  吸引びん
２５  真空ライン
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
図３のアクティビティ図を参照して、結晶またはアモルファスを洗浄し、精製するための本発明による方法を説明する。
最初に脱液すべきスラリーを固液分離装置に給液する。固液分離装置としては、一般的なバスケット型遠心ろ過装置や吸引ろ過装置を用いる。
スラリー給液後、固液分離装置を用いて固液分離によって母液を脱液し、そのまま、その固液分離装置内で結晶またはアモルファスの洗浄工程に移行する。洗浄液として水またはメタノール等の有機溶媒または含水溶媒を用いて、固体表面に付着している母液を洗い流し、次いで、洗浄液を脱液する。【００２０】
図４で示す従来の方法では、スラリー給液および母液脱液を行った後、結晶洗浄・脱水を一回実施する。その後、分離機を停止させ、結晶のサンプリングを実施し、残留する不純物含量を分析する。残留する不純物が設定値以上であった場合は、再度洗浄、脱水を行い、サンプリングを行う。この作業を残留する不純物が設定値未満になるまで繰り返す。残留する不純物が設定値未満になったことを確認した後に、最終の脱液工程に移行する。
一方、本発明の方法によれば、図３に示すように、洗浄や脱液工程の実施と同時に、固液分離により分離された洗浄液の電気伝導度を連続的に計測し、その値が設定値を下回るまで洗浄および脱液を繰り返す。電気伝導度の値が設定値に達すれば、洗浄を終了し、最終脱液工程に移行する。
洗浄や脱液工程の実施と同時に、固液分離により分離された洗浄液の電気伝導度を連続的に計測するため、洗浄工程を停止して固体部分をサンプリングする必要がないので、無駄な時間や労力を省くことができる。【００２１】
図１に本発明の第１の具体例における結晶洗浄装置の構成を示す。第１の具体例では、遠心分離によってスラリーの固液分離を行う。この具体例において用いる遠心ろ過装置１は一般的なバスケット型遠心ろ過機であるが、それに限るものではない。
この遠心ろ過装置１の本体は外槽１０および内槽１１からなる。外槽１０は筐体（図示せず）に固定され、内槽１１は微小孔が多数設けられた回転筒であり、高速回転させることができる。遠心ろ過装置１には、さらに、スラリーを内槽１１内に給液するためのスラリー給液口１２、遠心ろ過によりスラリーから分離された結晶またはアモルファスを洗浄するための洗浄液を噴霧する洗浄ノズル１３、および遠心ろ過によって分離された母液または洗浄液のろ液を排出するろ液ライン１４が取り付けられている。スラリーを給液したときに、スラリーを均一に飛散させる目的で、内槽１１の底部中心に、例えば、円錐型の突出部を設けることができる。
また、ろ液ライン１４には、遠心ろ過によりスラリーから脱液されたろ液の電気伝導度を測定するための電気伝導度計１５が取り付けられている。【００２２】
スラリーを内槽１１内に供給し、結晶と母液の分離を開始する。結晶は遠心力により内槽１１の内面に張り付けられる。一方、母液は内槽１１に設けられた多数の微小孔を通して脱液される。母液脱液後、結晶に洗浄ノズル１３から洗浄液を噴霧して、結晶を洗浄する。このとき、洗浄液は内槽１１に設けられた多数の微小孔を通って脱液される。脱液された母液や洗浄液は、ろ液ライン１４を通って排出される。
脱液および洗浄と並行して、電気伝導度計１５によって、この脱液された母液や洗浄液の電気伝導度を連続的に測定し、この測定データを制御部（図示せず）に送り、解析する。電気伝導度計の測定値をモニター表示することもできる。
ろ液ライン１４を通って排出される母液や洗浄液の電気伝導度を測定するので、洗浄脱液操作を停止することなく、迅速に洗浄状態を検知することができる。【００２３】
図２に本発明の第２の具体例における結晶洗浄装置の構成を示す。第２の具体例では、吸引ろ過によってスラリーの固液分離を行う。この具体例において用いる吸引ろ過装置２は一般的な実験用真空ろ過器具であるが、それに限るものではない。この吸引ろ過装置２は吸引ロート２０および吸引びん２４を備え、両者はろ液ライン２２によって連結されている。ろ液ライン２２には電気伝導度計２３が取り付けられ、吸引びん２４には真空ライン２５が取り付けられている。
まず、吸引ロート２０の底部にろ布２１を敷いた後、その上にスラリーを供給し真空ライン２５から真空をかけることによって結晶と母液の分離を開始する。結晶は真空吸引によりろ布２１に張り付けられる。脱液された母液は、ろ液ライン２２を通過し、吸引びん２４に溜まる。吸引ロート２０上部から結晶表面に洗浄液を噴霧することによって、結晶洗浄を行う。脱液された洗浄液は、ろ液ライン２２を通過し、吸引びん２４に溜まる。
脱液および洗浄と並行して、電気伝導度計２３によって、この脱液された母液や洗浄液の電気伝導度を連続的に測定する。
ろ液ライン２２を通って排出される母液や洗浄液の電気伝導度を測定するので、洗浄脱液操作を停止することなく、迅速に洗浄状態を検知することができる。【００２４】
本発明の方法による結晶洗浄における電気伝導度測定値と洗浄回数との関係を示すグラフの一例を図５に示す。このグラフ中、各記号は、それぞれ、独立して母液分離および結晶洗浄工程を実施したときのろ液の電気伝導度の経時変化を示す
スラリー給液中（Ａ領域）は電気伝導度値が高い母液が排出されているため、電気伝導度計測定値は高い値を示している。その後結晶が洗浄されるに従い、洗浄液の塩濃度が減少するため、電気伝導度計の測定値も減少する（Ｂ領域）。
洗浄および洗浄液の脱液工程のろ液の電気伝導度のピークが設定値を下回るのを確認した後、洗浄を終了し、最終的に脱液を行い、結晶を回収する。【００２５】
本発明の方法を適用して結晶を得ることができる天然物としては、中性アミノ酸、ペプチド、核酸塩基、ヌクレオシド、糖類、またはビタミン類等の非電解質または弱電解質が挙げられる。
弱電解質としては、洗浄液に１ｍｏｌ／Ｌの濃度で溶解させたときの電離度が０．０５以下、好ましくは０．０１以下の物質が挙げられる。
中性アミノ酸としては、例えば、セリン、グルタミン、アラニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グリシン、フェニルアラニン、プロリン、チロシン、スレオニン、トリプトファン、メチオニン、システイン、シスチン、アスパラギン等が挙げられる。
ペプチドとしては、ジペプチドまたはトリペプチドが挙げられ、具体的には、例えば、アラニルグルタミン、グルタチオン等が挙げられる。
核酸塩基としては、例えば、アデニン、シトシン、グアニン、ヒポキサンチン、チミン、ウラシル、キサンチン等が挙げられる。
ヌクレオシドとしては、アデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、ウリジン等が挙げられる。
糖類としては、単糖またはオリゴ糖が挙げられる。オリゴ糖としては、２〜５糖のオリゴ糖および６糖以上のオリゴ糖が挙げられる。
ビタミン類としては、例えば、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ニコチン酸、パントテン酸、葉酸、ビオチン、イノシトール、コリン、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＬ１、ビタミンＰ、パラアミノ安息香酸、リポ酸、オロット酸、カルニチン、メチルメチオニン等が挙げられる。【００２６】
本発明において、スラリー中に含有される強電解質としては、洗浄液に１ｍｏｌ／Ｌの濃度で溶解させたときの電離度が０．１以上、好ましくは０．５以上、さらに好ましくは０．７以上、最も好ましくは０．９以上の物質が挙げられ、無機物や有機物の塩が挙げられる。
強電解質としては、例えば、ナトリウム塩、アンモニウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等を挙げることができ、具体的には、硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム、硫酸カリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム等の無機塩が挙げられる。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００２８】
実施例１
Ｌ−バリン７０ｋｇを３ｍｏｌ／Ｌの塩酸２００Ｌに添加後、加水し、Ｌ−バリン塩酸溶解液２８０Ｌを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水７５Ｌを３０Ｌ／ｈで添加し、Ｌ−バリンの結晶スラリー３５５Ｌを取得した。このスラリーを、図１に示すような電気伝導度計（横河電機社製）を取り付けたバスケット型遠心ろ過機（タナベウィルテック社製径３６インチ）で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき５０Ｌの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。【００２９】
また、最終産物であるＬ−バリン結晶中に含まれる残存塩化物イオン濃度を９０ｐｐｍ以下に設定した。
予め別の実験により、洗浄液の脱液により生じたろ液の電気伝導度とＬ−バリン結晶中の残存塩化物イオン濃度との関係を調べた結果（図６）、サンプル間の変動や測定誤差を考慮して、電気伝導度が１００μＳ／ｃｍであれば、塩化物イオン濃度が７０〜９０ｐｐｍの範囲にあることが分かった。
この結果を基に、実施例において、洗浄完了の基準となる洗浄液の電気伝導度を１００μＳ／ｃｍと設定した。【００３０】
脱液された洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに達していない場合は、５０％メタノールによる結晶洗浄を繰り返し、洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに到達した時点で最終の脱水工程に移行し、得られた結晶を乾燥し、Ｌ−バリン５０ｋｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は９０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は１３０分であった。結果を表１に示す。【００３１】
比較例１
Ｌ−バリン７０ｋｇを３ｍｏｌ／Ｌの塩酸２００Ｌに添加後、加水し、Ｌ−バリン塩酸溶解液２８０Ｌを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水７５Ｌを３０Ｌ／ｈで添加し、Ｌ−バリンの結晶スラリー３５５Ｌを取得した。このスラリーを、図１に示すような電気伝導度計（横河電機社製）を取り付けたバスケット型遠心ろ過機（タナベウィルテック社製径３６インチ）で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき５０Ｌの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
洗浄および洗浄液の脱液後、遠心ろ過機を停止し、結晶のサンプリングを行い、硝酸銀を用いて結晶に含まれる塩化物イオン濃度を測定した（日局塩化物試験法）。塩化物イオンが９０ｐｐｍに到達するまで、洗浄、サンプリング、分析操作を繰り返した。得られた結晶を乾燥し、Ｌ−バリン５０ｋｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は９０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は２１０分であった。結果を表１に示す。【００３２】
【表１】
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【００３３】
実施例２
Ｌ−イソロイシン７０ｋｇを２．０ｍｏｌ／Ｌの塩酸２６０Ｌに添加後、加水し、Ｌ−イソロイシン塩酸溶解液３５０Ｌを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水６５Ｌを３０Ｌ／ｈで添加し、Ｌ−イソロイシンの結晶スラリー４１５Ｌを取得した。このスラリーを、図１に示すような電気伝導度計（横河電機社製）を取り付けたバスケット型遠心ろ過機（タナベウィルテック社製径３６インチ）で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき５０Ｌの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
脱液された洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに達していない場合は、５０％メタノールによる洗浄を繰り返し、洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに到達した時点で最終の脱水工程に移行し、得られた結晶を乾燥し、Ｌ−イソロイシン５２ｋｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は７０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は１３０分であった。結果を表２に示す。【００３４】
比較例２
Ｌ−イソロイシン７０ｋｇを２．０ｍｏｌ／Ｌの塩酸２６０Ｌに添加後、加水し、Ｌ−イソロイシン塩酸溶解液３５０Ｌを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水６５Ｌを３０Ｌ／ｈで添加し、Ｌ−イソロイシンの結晶スラリー４１５Ｌを取得した。このスラリーを、図１に示すような電気伝導度計（横河電機社製）を取り付けたバスケット型遠心ろ過機（タナベウィルテック社製径３６インチ）で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき５０Ｌの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
洗浄および洗浄液の脱液後、遠心ろ過機を停止し、結晶のサンプリングを行い、硝酸銀を用いて結晶に含まれる塩化物イオン濃度を測定した（日局塩化物試験法）。塩化物イオン濃度が７０ｐｐｍに到達するまで、洗浄、サンプリング、分析操作を繰り返した。得られた結晶を乾燥し、Ｌ−イソロイシン５２ｋｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は７０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は２１０分であった。結果を表２に示す。【００３５】
【表２】
2007052787.tif 000004
【００３６】
実施例３
Ｌ−ロイシン７０ｋｇを２．０ｍｏｌ／Ｌの塩酸２６０Ｌに添加後、加水し、Ｌ−ロイシン塩酸溶解液３５０Ｌを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水６５Ｌを３０Ｌ／ｈで添加し、Ｌ−ロイシンの結晶スラリー４１５Ｌを取得した。このスラリーを、図１に示すような電気伝導度計（横河電機社製）を取り付けたバスケット型遠心ろ過機（タナベウィルテック社製径３６インチ）で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき５０Ｌの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
脱液された洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに達していない場合は、５０％メタノールによる結晶洗浄を繰り返し、洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに到達した時点で最終の脱水工程に移行し、得られた結晶を乾燥し、Ｌ−ロイシン５８ｋｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は８０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は１２０分であった。結果を表３に示す。【００３７】
比較例３
Ｌ−ロイシン７０ｋｇを２．０ｍｏｌ／Ｌの塩酸２６０Ｌに添加後、加水し、Ｌ−ロイシン塩酸溶解液３５０Ｌを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水６５Ｌを３０Ｌ／ｈで添加し、Ｌ−ロイシンの結晶スラリー４１５Ｌを取得した。このスラリーを、図１に示すような電気伝導度計（横河電機社製）を取り付けたバスケット型遠心ろ過機（タナベウィルテック社製径３６インチ）で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき５０Ｌの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
洗浄および洗浄液の脱液後、遠心ろ過機を停止し、結晶のサンプリングを行い、硝酸銀を用いて結晶に含まれる塩化物イオン濃度を測定した（日局塩化物試験法）。塩化物イオン濃度が８０ｐｐｍに到達するまで、洗浄、サンプリング、分析操作を繰り返した。得られた結晶を乾燥し、Ｌ−ロイシン５８ｋｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は８０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は１８０分であった。結果を表３に示す。【００３８】
【表３】
2007052787.tif 000005
【００３９】
実施例４
Ｌ−バリン１００ｇを３ｍｏｌ／Ｌの塩酸２８０ｍＬに添加後、加水し、Ｌ−バリン塩酸溶解液４００ｍＬを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水１０５ｍＬを３０ｍＬ／ｈで添加し、Ｌ−バリンの結晶スラリー４３０ｍＬを取得した。このスラリーを、図２に示すような電気伝導度計（堀場製作所製）を取り付けた吸引ロート(１２５ｍｍΦ)で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき１００ｍＬの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
脱液された洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに達していない場合は、５０％メタノールによる洗浄を繰り返し、洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに到達した時点で最終の脱水工程に移行し、得られた結晶を乾燥し、Ｌ−バリン７０ｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は９０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は４２分であった。結果を表４に示す。【００４０】
比較例４
Ｌ−バリン１００ｇを３ｍｏｌ／Ｌの塩酸２８０ｍＬに添加後、加水し、Ｌ−バリン塩酸溶解液４００ｍＬを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水１０５ｍＬを３０ｍＬ／ｈで添加し、Ｌ−バリンの結晶スラリー４３０ｍＬを取得した。このスラリーを、図２に示すような電気伝導度計（堀場製作所製）を取り付けた吸引ロート(１２５ｍｍΦ)で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき１００ｍＬの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
洗浄および洗浄液の脱液後、結晶のサンプリングを行い、硝酸銀を用いて結晶に含まれる塩化物イオン濃度を測定した（日局塩化物試験法）。塩化物イオン濃度が９０ｐｐｍに到達するまで、洗浄、サンプリング、分析操作を繰り返した。
結晶に含まれる塩化物イオン濃度が９０ｐｐｍに達した時点で、最終の脱水工程に移行し、得られた結晶を乾燥し、Ｌ−バリン７０ｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は９０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は８２分であった。結果を表４に示す。【００４１】
【表４】
2007052787.tif 000006
【００４２】
実施例５
Ｌ−イソロイシン１００ｇを１．５ｍｏｌ／Ｌの塩酸３８０ｍＬに添加後、加水し、Ｌ−イソロイシン塩酸溶解液５００ｍＬを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水９５ｍＬを３０ｍＬ／ｈで添加し、Ｌ−イソロイシンの結晶スラリー５９５ｍＬを取得した。このスラリーを、図２に示すような電気伝導度計（堀場製作所製）を取り付けた吸引ロート(１２５ｍｍΦ)で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき１００ｍＬの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
脱液された洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに達していない場合は、５０％メタノールによる洗浄を繰り返し、洗浄液の電気伝導度が１００μＳ／ｃｍに到達した時点で最終の脱水工程に移行し、得られた結晶を乾燥し、Ｌ−イソロイシン７５ｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は９０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は４２分であった。結果を表５に示す。【００４３】
比較例５
Ｌ−イソロイシン１００ｇを１．５ｍｏｌ／Ｌの塩酸３８０ｍＬに添加後、加水し、Ｌ−イソロイシン塩酸溶解液５００ｍＬを調製した。この溶液に８ｍｏｌ／Ｌのアンモニア水９５ｍＬを３０ｍＬ／ｈで添加し、Ｌ−イソロイシンの結晶スラリー５９５ｍＬを取得した。このスラリーを、図２に示すような電気伝導度計（堀場製作所製）を取り付けた吸引ロート(１２５ｍｍΦ)で、結晶と母液を分離後、１回の洗浄につき１００ｍＬの５０％メタノールを用いて結晶洗浄を行った。
洗浄および洗浄液の脱水後、結晶のサンプリングを行い、硝酸銀を用いて結晶に含まれる塩化物イオン濃度を測定した（日局塩化物試験法）。塩化物イオン濃度が９０ｐｐｍに到達するまで、洗浄、サンプリング、分析操作を繰り返した。
結晶に含まれる塩化物イオン濃度が９０ｐｐｍに到達した時点で、最終の脱水工程に移行し、得られた結晶を乾燥し、Ｌ−イソロイシン７５ｇを得た。
イオンクロマト分析にて確認した結果、得られた結晶中の残存塩化物イオン濃度は９０ｐｐｍであった。また、結晶分離に要する時間は８２分であった。結果を表５に示す。【００４４】
【表５】
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【００４５】
実施例１〜４の結果と比較例１〜４の結果とを比較すると、本発明の結晶洗浄方法を用いれば、従来の結晶洗浄方法と同等の残存塩化物イオン濃度にまで低下させるための結晶洗浄時間を約５０〜７０％に短縮することができることが明らかとなった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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