(57)【要約】水溶性二量体鉄塩の水溶液を含有する化粧料であって、前記水溶液はマグネシウムイオン及びカルシウムイオンを含有することを特徴とする。
2007078009.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性二量体鉄塩の水溶液を含有する化粧料であって、前記水溶液はマグネシウムイオン及びカルシウムイオンを含有することを特徴とする化粧料。
【請求項２】
請求項１に記載の化粧料において、前記水溶性二量体鉄塩としての濃度が0.01〜10000μg/Lであることを特徴とする化粧料。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の化粧料において、前記マグネシウムイオンの濃度が0.01〜5000 mg/Lであることを特徴とする化粧料。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化粧料において、前記カルシウムイオンの濃度が0.1〜10000 mg/Lであることを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、日焼けやしみ・そばかすに影響するケラチノサイト及びメラノサイトに作用し、優れた美容効果を発揮する化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
紫外線の照射を受けると、皮膚に紅斑が生じ、次いで黒化が起こって、いわゆる日焼けとなる。紫外線が過度に照射された場合には、火傷のように水泡を生じることもある。紫外線の照射を受け続けると皮膚の老化が早まるだけでなく、しみやそばかすもできると考えられている。しみ及びそばかすの発症メカニズムには未だに不明な点が多いが、表皮基底層に存在するメラノサイトが紫外線によって活性化され、メラニン色素の産生が過剰になることためであると考えられている。【０００３】
しみ及びそばかすを除去するいわゆる「美白効果」を有する化粧料に対して消費者の関心は極めて高く、従来から多くの美白化粧料が市販されている。美白化粧料に従来から用いられている成分として、過酸化水素、過酸化亜鉛、過酸化マグネシウム等の過酸化物、アスコルビン酸の各種の天然物がある。しかしながら、アスコルビン酸は安定性及び保持性等に問題があり、かつその効果も十分なものとは言い難い。米国等ではハイドロキノンが皮膚脱色剤として使用されているが、安全性（刺激性、アレルギー性等）の面から化粧料に配合するには問題がある。そのため、安全性等の問題がなく、かつ皮膚美白効果を有する種々の化粧料が研究されている。【０００４】
より安全な化粧料として、コウジ酸及びその誘導体、ハイドロキノン配糖体及びその誘導体を有効成分とするものが提案されている。しかし、これらの成分を含有する化粧料は細胞レベルでは効果が認められるものの、ヒトレベルでは効果が十分発揮されていない。【０００５】
特開平9-241145号は、極微量の二価鉄及び三価鉄を含む水溶液に銀杏葉エキスを配合してなる化粧料を開示している。特開平9-241145号は、希釈した二価鉄／三価鉄と銀杏葉エキスとが皮膚細胞に浸透して皮膚をみずみずしくするほか、血管内にも浸透して白血球中の好中球の貪食作用を強化して免疫力を高めると記載している。しかし、この化粧料は美白効果をほとんど有さない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って本発明の目的は、健康に全く無害でありながら優れた美白効果を発揮する化粧料を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的に鑑み鋭意研究の結果、本発明者等は、水溶性二量体鉄塩の水溶液をベースとし、さらにマグネシウムイオン及びカルシウムイオンを含有する化粧料は、ケラチノサイト及びメラノサイトの増殖及び分化を促進することにより、優れた美容効果を発揮することを発見し、本発明に想到した。【０００８】
すなわち本発明の化粧料は、水溶性二量体鉄塩の水溶液をベースとし、さらにマグネシウムイオン及びカルシウムイオンを含有することを特徴とする。【０００９】
水溶性二量体鉄塩の含有量は0.01〜10000μg/Lであるのが好ましい。マグネシウムの濃度は0.01〜5000 mg/Lであるのが好ましい。カルシウムの濃度は1〜10000 mg/Lであるのが好ましい。
【発明の効果】
【００１０】
水溶性二量体鉄塩の水溶液にマグネシウムイオン及びカルシウムイオンを含有させた本発明の化粧料は、ケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖及び分化を促進するので、白くみずみずしい肌の維持、しみ・そばかすの予防及び治療といった優れた美白効果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】参考例1(i)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図２】参考例1(i)の分化率を示すグラフである。
【図３】参考例1(ii)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図４】参考例1(ii)の分化率を示すグラフである。
【図５】参考例1(iii)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図６】参考例1(iii)の分化率を示すグラフである。
【図７】参考例1(iv)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図８】参考例1(iv)の分化率を示すグラフである。
【図９】参考例2(i)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図１０】参考例2(i)の分化率を示すグラフである。
【図１１】参考例2(ii)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図１２】参考例2(ii)の分化率を示すグラフである。
【図１３】参考例2(iii)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図１４】参考例2(iii)の分化率を示すグラフである。
【図１５】参考例2(iv)におけるメラノサイトの細胞分裂指数を示すグラフである。
【図１６】参考例2(iv)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図１７】参考例2(iv)の分化率を示すグラフである。
【図１８】参考例2(iv)におけるメラノブラストの細胞分裂指数を示すグラフである。
【図１９】比較例1(i)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図２０】比較例1(i)の分化率を示すグラフである。
【図２１】比較例1(ii)の培養前後の細胞数を示すグラフである。
【図２２】比較例1(ii)の分化率を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
[1] 化粧料
本発明の化粧料は水溶性二量体鉄塩の水溶液に、マグネシウムイオン及びカルシウムイオンを含有させてなる。本明細書に用いる用語「化粧料」は、化粧水、乳液、クリーム、美容液、リップクリーム等の基礎化粧料に限らず、ファンデーション、口紅、アイシャドー等のメーキャップ化粧料も含む。以下、化粧料に含まれる各成分について説明する。【００１３】
(1) 水溶性二量体鉄塩
水溶性二量体鉄塩（Ferrous Ferric Chloride）は、二価の鉄イオンと三価の鉄イオンを含む複合体であり、典型的にはFe2Cl5により表される組成を有する。水溶性二量体鉄塩の水溶液は大きな表面張力及び浸透圧を有し、表皮に存在するケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖及び分化を促進して美白効果を発揮するとともに、白血球中の好中球の貪食作用を強化して免疫力を高めたり老化を防止したりする効果を発揮する。水溶性二量体鉄塩が溶解してなる二価の鉄イオンと三価の鉄イオンの比は、水溶性二量体鉄塩の合成条件によって異なり、両者は任意の比率で存在しえる。そこで、両イオンをまとめて二価の鉄イオン／三価の鉄イオンと呼ぶ。【００１４】
化粧料中の二価の鉄イオン／三価の鉄イオンの濃度（水溶性二量体鉄塩の含有量により表す）は0.01〜10000μg/Lであるのが好ましく、0.1〜1000μg/Lであるのがより好ましく、1〜500μg/Lであるのが特に好ましい。二価の鉄イオン／三価の鉄イオンの濃度が0.01μg/L未満であると、塗布しても美白効果が小さい。一方、二価の鉄イオン／三価の鉄イオンの濃度を10000μg/L超としても、メラノブラスト等の増殖及び分化を促進する効果は飽和し、さらなる増大は期待できない。【００１５】
カルシウムイオン及びマグネシウムイオンを含有する水溶性二量体鉄塩の水溶液を含む培養液中で幼マウスの皮膚細胞を培養したところ、この水溶液を含まない培養液中で培養した皮膚細胞に比べて、ケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖が2〜2.5倍も促進されることが分った。これにより、しみ及びそばかすを予防及び／又は軽減したり、皮膚を白くしたりする効果が得られると推定できる。【００１６】
(2) カルシウムイオン
化粧料中のカルシウムイオンの濃度は0.1〜10000 mg/Lであるのが好ましく、1〜5000 mg/Lであるのがより好ましい。カルシウムイオンの濃度が1 mg/L未満であると、メラノブラスト及びメラノサイトに有効に作用せず、十分な美白効果を示さない。しかしカルシウムイオンの濃度が10000 mg/L超となると、メラノブラスト及びメラノサイトの成長はかえって阻害される。カルシウムイオンの濃度は、皮膚細胞の培地として一般に使用されているHam's F-10培養液（ギブコ社製等）と同程度であるのが特に好ましい。後述するマグネシウムイオンの濃度と、カルシウムイオンの濃度とをHam's F-10培養液と同程度にすることにより、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖及び分化を促進し、非常に優れた美白効果を得ることができる。二価の鉄イオン／三価の鉄イオンとカルシウムイオンとのモル比（水溶性二量体鉄塩／カルシウム）は1〜10000であるのが好ましく、10〜5000であるのがより好ましく、100〜1000であるのが特に好ましい。なおカルシウムイオンを生成する無機塩は、皮膚に対して無害である限り限定されない。【００１７】
(3) マグネシウムイオン
化粧料中のマグネシウムイオンの濃度は0.01〜5000 mg/Lであるのが好ましく、0.05〜500 mg/Lであるのがより好ましい。マグネシウムイオンの濃度が0.01 mg/L未満であると、メラノブラスト及びメラノサイトに有効に作用せず、十分な美白効果を示さない。しかしマグネシウムイオンの濃度が5000 mg/L超となると、メラノブラスト及びメラノサイトの成長が阻害される。マグネシウムイオンの濃度も、カルシウムイオンの濃度と同様に、Ham's F-10培養液と同程度であるのが特に好ましい。なおマグネシウムイオンを生成する無機塩は、皮膚に対して無害である限り限定されない。【００１８】
カルシウムイオンとマグネシウムイオンとのモル比は1/10〜10であるのが好ましい。二価の鉄イオン／三価の鉄イオンとマグネシウムイオンとのモル比（水溶性二量体鉄塩／マグネシウムイオン）は1〜100000であるのが好ましく、10〜10000であるのがより好ましく、100〜1000であるのが特に好ましい。カルシウムイオンとマグネシウムイオンとのモル比、及び二価の鉄イオン／三価の鉄イオンとマグネシウムイオンとのモル比がこの範囲であると、メラノサイト等の増殖効果が大きいので、非常に大きな美白効果を発揮する。【００１９】
(4) 任意成分
本発明の化粧料は任意成分として、細胞培養液（例えばHam's F-10）に含まれる成分（無機塩類、アミノ酸等、アデニン、エタノールアミン、ホスホエタノールアミン、フェノールレッドNa、プトレシン2HCl、チアミンHCl、チオクト酸、チミジン、グルコース、HEPES、抗生物質等）、通常の化粧料に配合されている成分（油分、界面活性剤、保湿剤、低級アルコール、増粘剤、酸化防止剤、キレート剤、pH調整剤、防腐剤、香料、色素、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、ビタミン等）、生薬、蛋白分解酵素等を含有してもよい。化粧料の組成をHam's F-10培養液に近づけると、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖及び分化を一層促進することができる。任意成分の濃度は、Ham's F-10中の濃度の1/100〜100倍程度であるのが好ましく、1/10〜10倍であるのがより好ましい。【００２０】
水溶性二量体鉄塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩以外の無機塩類の例として、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ピルビン酸ナトリウム、塩化カリウム、硫酸カリウム、リン酸二水素カリウム、ヨウ化カリウム、塩化アンモニウム、無水ケイ酸、メタケイ酸、硫酸銅(II)、硫酸鉄(III)、塩化マンガン、硫酸ニッケル、塩化スズ、硫酸亜鉛、硫酸アルミニウム、珪酸アルミニウム、ホウ砂、メタバナジン酸アンモニウム、モリブデン酸アンモニウム等が挙げられる。【００２１】
アミノ酸の例として、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-システイン、L-シスチン、L-グルタミン酸、グルタミン、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リシン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-トレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン等が挙げられる。【００２２】
油分としては、ハッカ油、ジャスミン油、ショウノウ油、ヒノキ油、トウヒ油、リュウ油、テレピン油、ケイヒ油、ベルガモット油、ミカン油、ショウブ油、パイン油、ラベンダー油、ベイ油、クローブ油、ヒバ油、バラ油、ユーカリ油、レモン油、タイム油、ペパーミント油、ローズ油、セージ油、メントール、シネオール、オイゲノール、シトラール、シトロネラール、ボルネオール、リナロール、ゲラニオール、カンファー、チモール、スピラントール、ピネン、リモネン等の精油類、オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、カカオ脂、椿油、ヤシ油、木ロウ、グレープシード油、アボカド油、ミンク油、卵黄油、硬化油等の油脂類、鯨ロウ、蜜ロウ、ラノリン、カルナウバロウ、キャンデリラロウ等のロウ類、流動パラフィン、セレシン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス、パラフィンワックス、ワセリン等の炭化水素類、ステアリン酸、オレイン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、イソステアリン酸、パルミチン酸、ベヘニン酸等の脂肪酸類、セタノール、ステアリルアルコール、ラノリルアルコール、オクチルドデカノール、ヘキシルデカノール等の高級アルコール類、ミリスチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、コレステロールオレート等のエステル類が挙げられる。【００２３】
界面活性剤としては、(a) ステアリン酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸、ラウリルリン酸ナトリウム、パルミチン酸トリエタノールアミン、N-アシルグルタミン酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤、(b) 塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤、(c) 塩化アルキルアミノエチレングリシン液、レシチン等の両性界面活性剤、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、ショ糖脂肪酸エステル、モノステアリン酸プロピレングリコール、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、モノステアリン酸ポリエチレングリコール、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ポリオキシエチレンヤシ脂肪酸モノエタノールアミド、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンラノリン等の非イオン界面活性剤が挙げられる。【００２４】
保湿剤としては、グリセリン、1,3-ブチレングリコール、プロピレングリコール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール、アミノ酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等のNMF成分、ヒアルロン酸、コラーゲン、ムコ多糖類、コンドロイチン硫酸等の水溶性高分子物質が挙げられる。【００２５】
低級アルコールとしては、エタノール、イソプロピルアルコールが挙げられる。【００２６】
増粘剤としては、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、マルメロ種子抽質物、トラガカントガム、デンプン、カゼイン、水溶性ゼラチン、ペクチン、カラヤゴム、ローカストビーンガム、カラギナン、カーボポール、アカシヤゴム、カンテン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カチオン化セルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール等が挙げられる。【００２７】
酸化防止剤としては、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸が挙げられる。キレート剤としては、エデト酸二ナトリウム、エタンヒドロキシジホスフェート、ピロリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、クエン酸、酒石酸、グルクロン酸が挙げられる。pH調整剤としては、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ホウ酸、リン酸一水素ナトリウムが挙げられる。防腐剤としては、パラオキシ安息香酸メチル、デヒドロ酢酸、サリチル酸、安息香酸、ソルビン酸、塩化ベンザルコニウムが挙げられる。紫外線吸収剤としては、2-ヒドロキシ-4-メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベンゾエート、エチルヘキシルパラメトキシサイナメートが挙げられる。紫外線散乱剤としては、酸化チタン、カオリン、タルク等を、ビタミンとしては、ビタミンA、ビタミンB、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンE、ビタミンF、ビタミンK、ビタミンP、ビタミンU、カルニチン、フエルラ酸、γ-オリザノール、α-リポ酸、オロツト酸及びこれらの誘導体が挙げられる。【００２８】
生薬としては、ソウジュツ、ビャクジュツ、カノコソウ、ケイガイ、コウボク、センキュウ、トウヒ、トウキ、ショウキョウ、オウゴン、サンシン、ガイヨウ、アロエ、ニンジン、ケイヒ、シャクヤク、ハッカ葉、ブクリョウ、ショウブ、マツブサ、ビヤクシ、サフラン、オウバク、ウイキョウ、チンピ、ガンピ、カミツレ、ダイコン、ヤナギ、クスノキ、ニワトコ、ソクズ、ナキナタコウジュ、ヤツデ、セキショウ、ヨモギ、オトギリソウ、ユズ、ダイダイ、モモ、サイカチ、ビワ、スイカズラ、ヨロイグサ、ボダイジュ、トチノキ、ノコギリソウ、ホップ、ローズマリー、カバノ、マツ、ヤレンズラ、ランタナ、カンゾウ、キツソウコン、マロニエ等が挙げらる。【００２９】
[2] 化粧料の製造方法
水溶性二量体鉄塩は、例えば杉二郎、外１名、「水溶性二量体鉄塩の製造法」、日本海水学会年会研究技術発表会講演要旨集 Vol. 42nd, p. 11 (1991) に記載の以下の合成方法によって作製することができる。【００３０】
2 molのギ酸アンモニウム、1 molのヒドロキシルアミン及び1 molのフォルムアミドの混合液に、1molの塩化第二鉄（FeCl3・6H2O）を加える。この調製液を順次蒸留水で希釈し、α液（10-8 mM）、β液（10-12 mM）及びγ液（10-14 mM）を得る。得られたα、β及びγ液にそれぞれ塩化第二鉄（FeCl3・6H2O）を1 g/10 mLの割合で溶解し、100℃以下で徐々に蒸発乾固して塩化鉄の結晶α、β及びγを得る。これらの合成法により得られた二価三価鉄塩中の2価鉄：3価鉄の比率をメスバウアー法で測定した結果、結晶αは4：6、結晶βは6：4、結晶γは7：3であり、またイオンクロマト法、X線解析法等により塩化鉄中の2価鉄と3価鉄は単なる混合状態ではなく、いずれも二量体の形をとっていることが推測されると上記文献に記載されている。本発明で使用する二価三価鉄塩は、上記合成方法に限定されず、また2価鉄：3価鉄の比率も上記値に限定されるものではない。【００３１】
また市販の飲料水等のうち水溶性二量体鉄塩を含有するものも、化粧料の材料として使用することができる。例えばパイロゲン（有限会社アトムジャパンの登録商標、販売：株式会社赤塚）の名称で市販されている飲料や、FFCセラミックス（「FFC」は有限会社アトムジャパンの登録商標、販売：株式会社エフエフシー・ジャパン）を浸漬した水が挙げられる。FFCセラミックスを水1L当たり10〜100個程度（25〜250 cm3）になるように水に入れ、室温で3〜48時間浸漬しておくと、上述の好ましい濃度で水溶性二量体鉄塩の水溶液を得ることができる。パイロゲンやFFCセラミックスを浸漬した水は、水溶性二量体鉄塩の水溶液、カルシウムイオン及びマグネシウムイオンを上述の好ましい濃度で含有する上、塗布することにより皮膚に素早く浸透して、ケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖を活発にする効果を発揮するため、特に好ましい。【００３２】
なお本発明者らによる研究の結果、パイロゲンやFFCセラミックスを浸漬した水を原料に用いた化粧水は、特に優れた美白効果を奏することが明らかになった。パイロゲンやFFCセラミックスを浸漬した水には銅、モリブデン、亜鉛、ストロンチウム、バリウム、バナジウム、ホウ素等の様々な元素が含まれ、水溶性二量体鉄塩の水溶液等の必須要素と相乗的に作用しているためこの様な効果が得られると考えられる。従って、パイロゲンやFFCセラミックスを浸漬した水を含有する化粧料中で、ケラチノサイト、メラノブラスト又はメラノサイトの増殖及び分化は一層促進されると考えられる。これらの元素の好ましい濃度を質量基準で示すと、銅濃度は0.001〜100 ppbであり、モリブデン濃度は0.001〜100 ppbであり、亜鉛濃度は0.001〜100 ppbであり、ストロンチウム濃度は0.001〜1 ppmであり、バリウム濃度は0.0001〜1 ppmであり、バナジウム濃度は0.0001〜0.1 ppmであり、ホウ素濃度は0.001〜100 ppbである。【００３３】
上述のように、パイロゲンやFFCセラミックスを浸漬した水にはカルシウムイオン及びマグネシウムイオンが含まれているが、Ham's F-10培養液と同じ組成又はこれに近い組成にするために、これらの金属を添加しても良い。Ham's F-10培養液と同じ組成又はこれに近い組成にすることで、化粧料の美白効果を一層高めることができる。パイロゲンやFFCセラミックスを浸漬した水に、カルシウム等を含む塩を添加しても良いし、カルシウム等を分散させたクリームに水溶性二量体鉄塩の水溶液を添加しても良い。つまり、作製する化粧料の種類（化粧水、乳液、クリーム等）に応じて、所望の性状になるようにすればよい。【００３４】
水溶性二量体鉄塩の水溶液と、カルシウムと、マグネシウムとを含有する化粧料はケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトに働きかけ、これらの増殖及び分化を促進する。本発明者らによる研究の結果、水溶性二量体鉄塩の水溶液を含有し、Ham's F-10培養液程度の濃度のカルシウムイオンと、マグネシウムイオンとを含有する溶液中で、ケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖が2〜2.5倍に促進されることが分かっている。なお水溶性二量体鉄塩の水溶液、カルシウムイオン及びマグネシウムイオンのいずれかを含有していない場合には、このような効果を得ることはできない。例えばカルシウム又はマグネシウムを含有していない溶液中では、ケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトの培養をすることができない。また水溶性二量体鉄塩の水溶液を含有していない溶液中では、培養は可能であるものの、ケラチノサイト、メラノブラスト及びメラノサイトの増殖及び分化を促進する効果を得ることはできない。従って、水溶性二量体鉄塩の水溶液、カルシウムイオン及びマグネシウムイオンのいずれかを含有していない化粧料は、十分な美白効果を奏することができない。【００３５】
本発明を以下の実施例によってさらに詳細に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。【００３６】
実施例1
(i) FFC水の組成分析
超純水で２分間洗浄した40個のFFCセラミックス（直径約16 mmの球状）を、900 mLの超純水に24時間浸漬させ、グラスファイバー濾紙（１μm）でろ過した。得られた水水溶液中の鉄イオン（二価の鉄イオン／三価の鉄イオン）、カルシウムイオン及びマグネシウムイオンの濃度を測定した。結果を表1に示す。【００３７】
【表１】
2007078009.tif 000003
【００３８】
(ii) 臨床実験
脱イオン後に蒸留した2 Lの水(DDW)に、60 gのFFCセラミックス（直径約16 mmの球状）を８時間浸漬させFFC水を調製した。得られたFFC水、又はパイロゲン（水溶性二量体鉄塩、ブドウ糖果糖液糖、大豆オリゴ糖、ハチミツ、リンゴ果汁、米酢、リンゴ酢、柿酢、梅酢、クエン酸、リンゴ酸、梅エキス、ステビア、ビタミンC、ビタミンB2、ビタミンB6、香料、その他天然ミネラルウオーターからなる飲料水）をFFC水で10〜100倍程度に希釈したものを被験者の顔に1〜3回／日程度かける処置を３ヶ月間行い、実験前と３ヶ月経過後の肌の色を比較した。結果を表2に示す。【００３９】
【表２】
2007078009.tif 000004
【００４０】
表2から分かるように、被験者23人中19人に美白効果が認められ、82.6％という極めて高い有効率であることが分かった。【００４１】
参考例1
本発明者らが開発した表皮細胞（主にケラチノサイトとメラノサイトからなる）の無血清初代培養法を用い、水溶性二量体鉄塩の水溶液を含むパイロゲンが動物の皮膚、特にケラチノサイト、メラノサイトに与える作用を次に示すようにして調べた。【００４２】
(i) MDM＋パイロゲン
メラノサイトのもとになるメラノブラストを純粋に培養するためのメラノブラスト純化培養液（MDM）に、パイロゲンを加え、生後0.5日の黒色純系マウス（未だ皮膚は黒くない）の表皮細胞を初代培養した。メラノブラスト純化培養液（MDM）は、Ham's F-10（ギブコ社製）培養液に、10μg/mLのインスリン、0.5 mg/mLの牛血清アルブミン、1μMのエタノールアミン、1μMのホスホエタノールアミン及び1nMの亜セレン酸ナトリウムが含有する様に調製した。試料（MDM及びパイロゲンを含有する培養液）のパイロゲン濃度は、パイロゲンの100倍希釈、1000倍希釈、10000倍希釈とした。いずれのパイロゲン濃度の試料においても対照よりケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。各試料のケラチノサイト数は、対照の2〜2.5倍になった。メラノブラスト数及びメラノサイト数の計測結果及び分化率を図1及び2に示す。パイロゲンを添加した培養液においては、メラニンを作っているメラノサイトが多く現れた。メラノサイトの成熟を早める効果は、パイロゲンを培養液で100倍に薄めたものが最も大きく、1000倍、10000倍と薄いものほど小さかった（図2）。一方、細胞の数についてはパイロゲンの添加による効果は認められなかった（図1）。【００４３】
(ii) MDM＋パイロゲン＋メラノサイト刺激ホルモン(MSH)
MDMに、パイロゲンとメラノサイト刺激ホルモン(MSH)とを加えた以外、参考例1(i)と同様にして、マウスの表皮細胞を初代培養した。いずれのパイロゲン濃度の試料においても対照よりケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。各試料のケラチノサイト数は、対照の2〜2.5倍になった。メラノブラスト数及びメラノサイト数の計測結果及び分化率を図3及び4に示す。パイロゲンを添加した培養液においては、添加していないものと比較してメラノサイトの成熟が早く、メラニンの量が多く、メラノサイトが樹枝状突起をよく伸ばすことが分かった。メラノサイトの成熟を早める効果は、パイロゲンを培養液で100倍に薄めたものが最も大きく、1000倍、10000倍と薄いものほど小さかった（図4）。一方、細胞の数についてはパイロゲンの添加による効果は認められなかった（図3）。【００４４】
(iii) MDM＋パイロゲン＋ジブチリル環状アデノシン１リン酸（DBcAMP）
MDMに、パイロゲンとメラノサイトの増殖に重要なジブチリル環状アデノシン１リン酸(DBcAMP)とを加えた以外、参考例1(i)と同様にして、マウスの表皮細胞を初代培養した。いずれのパイロゲン濃度の試料においても対照よりケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。各試料のケラチノサイト数は、対照の2〜2.5倍になった。またメラノブラスト数及びメラノサイト数を計測し、分化率を求めた。結果を図5及び6に示す。パイロゲンを添加したものは、添加していないものと比較してケラチノサイトの増殖が大きく、メラノサイトの成熟が早く、メラニンの増加量も多く、樹枝状突起をよく伸ばし、細胞が大きくなった。また3〜4日後から細胞が増え始め、14日後には添加していないものの約2倍になった。メラノサイトの成熟を早める効果は、パイロゲンを培養液で100倍に薄めたものが最も大きく、1000倍、10000倍と薄いものほど小さかった（図6）。一方、メラノサイトを増やす働きは、一番薄い10000倍のものが最も大きかった（図5）。【００４５】
(iv) MDM＋パイロゲン＋DBcAMP＋塩基性繊維芽細胞増殖因子(bFGF)
MDMに、パイロゲンとメラノブラストを増やす効果を発揮するDBcAMP及び塩基性繊維芽細胞増殖因子(bFGF)を加えた以外、参考例1(i)と同様にして、マウスの表皮細胞を初代培養した。いずれのパイロゲン濃度の試料においても対照よりケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。各試料のケラチノサイト数は、対照の2〜2.5倍になった。またメラノブラスト数及びメラノサイト数を計測し、分化率を求めた。結果を図7及び8に示す。パイロゲンを添加したものは、添加していないものと比較してケラチノサイトがよく増えた。また3〜4日後からメラノブラストが増え始め、14日後には添加していないものの2倍になった。またパイロゲンの添加により、メラノサイトの割合も大きくなった。メラノサイトの成熟を早める効果は、パイロゲンを培養液で100倍に薄めたものが最も大きく、1000倍、10000倍と薄いものほど小さかった（図8）。一方、メラノサイトを増やす働きは、一番薄い10000倍のものが最も大きく、1000倍、100倍と濃いものほど小さかった（図7）。【００４６】
参考例2
脱イオン後に蒸留した2 Lの水(DDW)に、60 gのFFCセラミックスを8時間浸漬させた後、グラスファイバー濾紙（1μm）でろ過し、FFC水を調製した。【００４７】
得られたFFC水と未処理のDDWとにそれぞれ培養液用粉末（Ham’s F-10、シグマ社製）を溶かした後、すぐに濾過滅菌し、FFC処理培養液とFFCを含有しない培養液（対照）を得た。得られた培養液は冷蔵庫に保存した。【００４８】
(i) FFC処理培養液（MDM＋FFC処理DDW）
FFC処理培養液を用いた以外参考例1(i)と同様にして、黒色マウスの表皮細胞を初代培養し、細胞数を計測し、分化率を求めた。結果を図9及び10に示す。FFC処理培養液で初代培養すると、ケラチノサイトがよく増殖し、ケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。FFC処理培養液においては、対照の2〜2.5倍のケラチノサイトが生成した。またメラニン作っているメラノサイトが多く現れ、14日目には分化したメラノサイトの割合が40％を越えた（図10）。FFC処理培養液においては、メラノブラスト及びメラノサイトの数は、FFC処理していない培養液と比較して少し増加したが、統計学的に有意な差ではなかった（図9）。【００４９】
(ii) FFC処理培養液＋メラノサイト刺激ホルモン（MSH）
FFC処理培養液にMSHを加えた培養液を用いた以外参考例1(i)と同様にして、黒色マウスの表皮細胞を初代培養し、細胞数を計測し、分化率を求めた。結果を図11及び12に示す。このFFC処理培養液で初代培養すると、ケラチノサイトがよく増殖し、ケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。このFFC処理培養液のケラチノサイトの数は、対照の2〜2.5倍になった。またメラノサイトの成熟が早まり、メラノサイトが大きくなり、メラニンの量が増えるほか、樹枝状突起を伸ばすことがわかった。このFFC処理培養液においては、メラノブラスト及びメラノサイトの数は、FFC処理していない培養液と比較して少し増加したが、統計学的に有意な差ではなかった（図11）。【００５０】
(iii) FFC処理培養液＋ジブチリル環状アデノシン１リン酸（DBcAMP）
FFC処理培養液にDBcAMPを加えた培養液を用いた以外、参考例1(i)と同様にして黒色マウスの表皮細胞を初代培養し、細胞数を計測し、分化率を求めた。結果を図13及び14に示す。また細胞分裂指数を図15に示す。このFFC処理培養液で初代培養すると、ケラチノサイトがよく増殖し、ケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。このFFC処理培養液中のケラチノサイトの数は、対照の2〜2.5倍になった。またメラノサイトの成熟が早まり、メラノサイトが大きくなり、メラニンの量が増えるほか、樹枝状突起を伸ばすことがわかった。しかも3〜4日後から細胞が増え始め、14日後には対照の約2.5倍になった他、分裂頻度も高かった（図15）。FFCを含有する培養液は、DBcAMPと相乗的にメラノサイトを増殖させる働きを示すことが分かった。【００５１】
(iv) FFC処理培養液＋DBcAMP＋塩基性繊維芽細胞増殖因子（bFGF）
FFC処理培養液にDBcAMP及びbFGFを加えた培養液を用いた以外、参考例1(i)と同様にして黒色マウスの表皮細胞を初代培養し、細胞数を計測し、分化率を求めた。結果を図16及び17に示す。また細胞分裂指数を図15及び18に示す。このFFC処理培養液で初代培養すると、ケラチノサイトがよく増殖し、ケラチノサイトのコロニーが大きくなり、コロニー中のケラチノサイトの数も増えた。このFFC処理培養液においては、対照の2〜2.5倍のケラチノサイトが生成した。また培養開始の3〜4日後からメラノブラストが活発に増え始め、14日後にはFFC処理していない培養液の約2倍になった。また分裂頻度も高く、メラノサイトの割合も高かった（図18）。FFCを含有する培養液は、DBcAMPやbFGFと相乗的にメラノブラストを増殖させる働きを示すことが分かった。【００５２】
FFC処理培養液で黒色マウスの表皮細胞を初代培養すると、ケラチノサイトの増殖が促進された上、メラノブラストとメラノサイトの増殖・分化が促進された。このことから、FFC処理水によって、皮膚を構成している細胞の恒常性を保つことができることが分かった。【００５３】
比較例1
FFCセラミックスの代わりに麦飯石セラミックス（木曽根物産製、約400 g）を用いた以外参考例2と同様にして、麦飯石セラミックスから溶出した金属イオンを含有する培養液を得た。麦飯石セラミックスを浸漬した蒸留水に含まれる主な金属の濃度を表3に示す。【００５４】
【表３】
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【００５５】
(i) 麦飯石処理培養液＋ジブチリル環状アデノシン１リン酸（DBcAMP）
麦飯石処理培養液にDBcAMP及びbFGFを加えた培養液を用いた以外、参考例1(i)と同様にして黒色マウスの表皮細胞を初代培養した。ケラチノサイトのコロニー中のケラチノサイトの数を表4に示す。またメラノサイトの増殖細胞数及び分化度を図19及び20に示す。図19から分かるように、この麦飯石処理培養液で表皮細胞を初代培養すると、麦飯石処理していない蒸留水を用いた培養液と比較してメラノサイトの分化は抑制された。増殖細胞数は対照とほぼ同じであった。【００５６】
【表４】
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【００５７】
(ii) 麦飯石処理培養液＋DBcAMP＋塩基性繊維芽細胞増殖因子（bFGF）
麦飯石処理培養液にDBcAMPを加えた培養液を用いた以外参考例1(i)と同様にして、黒色マウスの表皮細胞を初代培養した。ケラチノサイトのコロニー中のケラチノサイトの数を表4に併せて示す。またメラノサイトの増殖細胞数及び分化度を図21及び22に示す。図21から分かるように、この麦飯石処理培養液で表皮細胞を初代培養すると、麦飯石処理していない蒸留水を用いた培養液と比較してメラノサイトの分化は抑制された。増殖細胞数は対照とほぼ同じであった。【００５８】
麦飯石処理培養液で黒色マウスの表皮細胞を初代培養すると、ケラチノサイトの増殖が促進されるものの、メラノブラストとメラノサイトの増殖には影響しなかった。麦飯石セラミックスは、ケラチノサイトに対して作用するものの、メラノブラスト及びメラノサイトを活性化しないため、表皮細胞の恒常性を保つ効果は奏しないことが分かった。メラノブラストやメラノサイトの増殖について、参考例2と比較例1とがこのような相違を示すのは、FFC処理水に含まれる鉄分は水溶性二量体鉄であるのに対し、麦飯石処理水に含まれる鉄分は水溶性二量体鉄ではないためであると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【国際調査報告】
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