(57)【要約】  本発明者らは、トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）の遺伝子多型と抗うつ薬に対する反応性との関連性の有無について解析を行った。その結果、抗うつ薬に対する反応性予測に有用な遺伝子多型をＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域に見出すと共に、当該遺伝子多型を用いて抗うつ薬反応性を高精度に予測できることを明らかにした。さらに、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）およびチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）の遺伝子多型が、抗うつ薬に対する反応性予測に有用であることを見出した。本発明は、抗うつ薬とりわけ選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）を用いたうつ病治療における検査、診断に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）遺伝子、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子、またはゲノム上それらの近傍に存在する１又は２以上の多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
【請求項２】
トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）遺伝子またはゲノム上その近傍に存在する多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
【請求項３】
ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子またはゲノム上その近傍に存在する多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
【請求項４】
チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子またはゲノム上その近傍に存在する多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
【請求項５】
抗うつ薬として使用される、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）またはセロトニン＆ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）に対する反応性を予測する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
上記ＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域に存在する多型を検査することによって、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項１又は２記載の方法。
【請求項７】
上記ＤＲＤ２遺伝子のＴａｑ１Ａ多型を検査することによって、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項１又は３記載の方法。
【請求項８】
上記ＴＨ遺伝子のＴＣＡＴリピート多型を検査することによって、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項１又は４記載の方法。
【請求項９】
さらに、セロトニントランスポーター遺伝子、またはセロトニン受容体遺伝子、あるいはゲノム上それらの近傍に存在する多型を検査し、その結果を加味して、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
セロトニントランスポーター遺伝子に関連するＬＰＲ多型を検査し、その結果を加味して、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
うつ病の改善を目的とした薬物治療において、抗うつ薬に対する患者の反応性予測に使用する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の検査結果をもとに、被検者の抗うつ薬反応性予測をコンピュータに実行させる、抗うつ薬反応性予測支援プログラム。
【請求項１３】
請求項１記載の方法において、遺伝子多型の検査は、被検者から調製したゲノムＤＮＡを鋳型にして、多型部位を挟む遺伝子領域を増幅する工程と、得られた増幅断片をもとに遺伝子型を決定する工程とを含む方法。
【請求項１４】
請求項１記載の方法において、ＤＮＡチップ等の遺伝子多型検査器具を用いて遺伝子多型を検査する方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法に使用される、遺伝子多型検査用オリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項１記載の方法に使用される、遺伝子多型検査用キット。
【請求項１７】
トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子またはチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子を標的とした抗うつ薬のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被検者の遺伝子多型に基づいて抗うつ薬に対する反応性を予測する方法に関するものである。本発明は、特に、うつ病の改善を目的とした薬物治療における検査、診断に有用な技術を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、「うつはこころの風邪」といわれるように、うつ病は身近な病気であるとの認識が一般的となっている。これまで、主なうつ病発症の生物学的仮説として、モノアミン（セロトニン、ノルアドレナリン）神経系機能異常、視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）系機能異常（ストレス適応機能不全）、生態リズム異常、神経可塑性異常などが想定されてきたが、未だ確定されてはいない。うつ病の親族の有病率は一般対象よりも高いことから、発症機序に何らかの遺伝的素因が存在することは間違いない。うつ病は、何らかのストレス脆弱性ともとらえることができ、その基盤にモノアミン神経系、ＨＰＡ系や神経可塑性の異常が存在し、ストレス影響を過剰に受け、脳内ストレス適応機構が破綻を来して発病に至ることが想定される。【０００３】
現在、うつ病治療の第一選択薬として、抗うつ薬ＳＳＲＩが用いられているが、その臨床効果には大きな個人差が存在することが知られている。ＳＳＲＩとは、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（Selective Serotonin Reuptake Inhibitors）の略称であり、神経終末においてセロトニントランスポーターを介したセロトニンの再取り込みを選択的に阻害する新世代の一群の抗うつ薬を指す名称である。このＳＳＲＩのほかに、新世代の抗うつ薬としてＳＮＲＩを挙げることができる。ＳＮＲＩとは、セロトニン＆ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（(Selective) Serotonin & Noradorenaline Reuptake Inhibitors）の略称であり、セロトニンおよびノルアドレナリンの再取り込みを選択的に阻害する一群の物質を指す名称である。【０００４】
上記したように、抗うつ薬ＳＳＲＩの臨床効果には大きな個人差が存在するが、この個人差の背景には遺伝的因子の関与が想定され、ＳＳＲＩの作用部位であるセロトニントランスポーターのＬＰＲ多型は、最も有力な因子としてこれまでにも研究が行われている（下記の非特許文献１・２参照）。このうち、非特許文献２は、本発明者らの発表によるものであり、ＳＳＲＩに属する代表的な２つの抗うつ薬パロキセチン（paroxetine）とフルボキサミン（fluvoxamine）による臨床効果と患者の遺伝子多型との相関を検討し、上記ＬＰＲ多型における遺伝子型がｓ／ｓの場合には、フルボキサミンに比べてパロキセチンの臨床効果が高かったことなどを報告した。【０００５】
このほかにも、種々のセロトニン関連因子の遺伝子多型からＳＳＲＩの反応性を予測しようとする研究が行われているが、多くは一定の結論に至っていない。ところで近年、セロトニン生合成の律速段階を担うトリプトファンヒドロキシラーゼ（ＴＰＨ）に、新規脳特異的バリアントであるトリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）が発見された（下記非特許文献３）。その後、このＴＰＨ２について様々な研究が行われ、これまでに次のような報告がなされている。
（１）  ＴＰＨ２遺伝子のエキソンに存在し、in vitroでセロトニン産生量を８０％低下させる多型が報告されている（下記非特許文献４）。うつ病患者で変異が多く検出されたことから、この変異はＴＰＨ２の酵素活性に重要な領域であり、うつ病の発症に関わる可能性が示唆された。
（２）  そのほかにも、ＴＰＨ２遺伝子のエキソン上、およびイントロン上のＳＮＰ（１塩基多型）が報告されている（下記非特許文献５・６）。これらの報告では、当該ＳＮＰとうつ病の罹患率との相関について検討されている一方、抗うつ薬の反応性との相関については検討されていない。
（３）  最近、ＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域の多型と統合失調症及び自殺との相関を検討し、両者の相関は認められなかった旨の報告がなされている（下記非特許文献７）。
（４）  ごく最近では、ＴＰＨ２遺伝子に関連する多型と注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）との間に相関がある旨の報告がなされている（下記非特許文献８・９）。【０００６】
【非特許文献１】Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2005,29:1062-1073
【非特許文献２】Int Clin Psychopharmacol. 2005,20:151-156
【非特許文献３】Science. 2003,299:76
【非特許文献４】Neuron. 2005,45:11-16
【非特許文献５】Mol Psychiatry. 2004,9:980-983
【非特許文献６】Mol Psychiatry. 2004,9:1030-1036
【非特許文献７】Psychiatry Res. 2005,134:195-198
【非特許文献８】Mol Psychiatry. 2005 Oct;10(10):944-9.
【非特許文献９】Mol Psychiatry. 2005 Dec;10(12):1126-32.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
うつ病の改善を目的とした薬物治療において、安全で有効な治療を行うには適応となる患者を正しく選定することが重要である。特に、前述のように抗うつ薬ＳＳＲＩの臨床効果には大きな個人差が存在するため、患者のＳＳＲＩ反応性を治療初期の段階で客観的に予測し、個々の患者に適した薬物治療を行うことの重要性が指摘されている。【０００８】
本発明は、上記の問題点、即ち抗うつ薬反応性を投与前に予測することの重要性に鑑みなされたものであり、その目的は、被検者の遺伝子多型（polymorphism）に基づいて抗うつ薬に対する反応性を予測する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、抗うつ薬による臨床効果に大きな個人差が存在する原因に遺伝的因子の関与を想定し鋭意研究を進め、これまでに抗うつ薬ＳＳＲＩの作用部位であるセロトニントランスポーターのＬＰＲ多型がその一因であることを報告した。今回さらに脳内セロトニン量に着目し、前記トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）を含む複数のセロトニン関連因子の遺伝子多型を取り上げ、抗うつ薬の臨床効果に及ぼす影響を検討した。その結果、ＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域に存在する遺伝子多型が抗うつ薬の臨床効果の個人差の予測に有用であり、当該遺伝子多型を用いて抗うつ薬に対する反応性を高精度に予測できること、また上記ＬＰＲ多型など他の遺伝子多型の検査結果と組み合わせることによって更にきめ細かい反応性予測が可能になり、個々の患者に適した治療計画の立案に資すること、を見出した。【００１０】
さらに、ドパミン神経系における検討因子の中から、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子のＴａｑ１Ａ多型、および、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子のＴＣＡＴリピート多型が、抗うつ薬に対する反応性予測に有用であること、等を見出し、本発明を完成させるに至った。【００１１】
即ち、本発明は、産業上有用な発明として、下記Ａ）〜Ｌ）の発明を包含するものである。
Ａ）  トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）遺伝子、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子、またはゲノム上それらの近傍に存在する１又は２以上の多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
上記トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（tryptophan hydroxylase-2）は、トリプトファン水酸化酸素タイプ２などとも称され、脳内セロトニン生合成の律速段階を担う酵素と考えられる。本明細書では、この酵素を「ＴＰＨ２」と略称し、またその遺伝子を「ＴＰＨ２遺伝子」と称する。
上記ドパミンＤ２受容体（Dopamine D2 receptor）は、ドパミン受容体のサブタイプの１つであり、本明細書では、この受容体を「ＤＲＤ２」と略称し、またその遺伝子を「ＤＲＤ２遺伝子」と称する。また、上記チロシンヒドロキシラーゼ（Tyrosine hydroxylase）は、チロシンをＬ-ＤＯＰＡへ変換するドパミン生合成関連酵素であり、本明細書では、この酵素を「ＴＨ」と略称し、またその遺伝子を「ＴＨ遺伝子」と称する。
本発明は、ＴＰＨ２遺伝子、ＤＲＤ２遺伝子、ＴＨ遺伝子、またはゲノム上それらの近傍に存在する多型を検査するものであるが、これは換言すれば、これらの遺伝子に関連する少なくとも１つの多型を検査することを意味する。これらゲノム遺伝子のエキソン領域あるいはイントロン領域に存在する多型の検査に制限されず、そのプロモーター領域など転写調節領域、制御領域あるいは非翻訳領域などに存在する多型を検査するものであってもよい。本明細書において、「遺伝子多型」とは、このようなプロモーター領域などに存在する多型を含み、当該遺伝子に関連する多型という広義の意味である。
また、本発明において、上記３つの遺伝子のいずれかに関連する多型を複数検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法は好ましい方法であるが、単独で抗うつ薬に対する反応性との相関が認められた１つの多型を検査し、その結果に基づき、反応性予測するものであってもよい。【００１２】
Ｂ）  抗うつ薬として使用される、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）またはセロトニン＆ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）に対する反応性を予測する、上記Ａ）記載の方法。
上記抗うつ薬ＳＳＲＩとしては、パロキセチン（paroxetine）、フルボキサミン（fluvoxamine）、フルオキセチン（fluoxetine）、セルトラリン（sertraline）などが代表的であるが、そのほかに、ネファゾドン（nefazodone）、シタロプラム（citalopram）、デクスフェンフルラミン（dexfenfluramine）などを挙げることができる。他方、上記抗うつ薬ＳＮＲＩとしては、ミルナシプラン（milnacipran）などが代表的であるが、そのほかに、ベンラファキシン（venlafaxine）、デュロキセチン（duloxetine）などを挙げることができる。
本発明は、上記抗うつ薬ＳＳＲＩあるいはＳＮＲＩに対する反応性予測に好適に使用できるが、セロトニン再取り込み阻害作用を有するその他の抗うつ薬（三環系抗うつ薬、四環系抗うつ薬など）に対する反応性予測に使用することも可能と考えられる。【００１３】
Ｃ）  上記ＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域に存在する多型、上記ＤＲＤ２遺伝子のＴａｑ１Ａ多型、および、上記ＴＨ遺伝子のＴＣＡＴリピート多型の少なくとも１つを検査することによって、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、上記Ａ）又はＢ）記載の方法。
後述のように、本発明者らは、ＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域に存在する多型（rs11178997遺伝子多型）、ＤＲＤ２遺伝子のＴａｑ１Ａ多型（rs1800497遺伝子多型）またはＴＨ遺伝子のＴＣＡＴリピート多型（TH tetranucleotide (TCAT) repeat多型）を検査、判定することによって、いずれも各多型単独で抗うつ薬ＳＳＲＩに対する治療反応性を高精度に予測できることを明らかにした。したがって、これらの遺伝子多型の少なくとも１つを直接、または間接的に検査、判定することによって、抗うつ薬ＳＳＲＩに対する治療反応性を高精度に予測することが可能である。【００１４】
Ｄ）  さらに、セロトニントランスポーター遺伝子、またはセロトニン受容体遺伝子、あるいはゲノム上それらの近傍に存在する多型を検査し、その結果を加味して、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、上記Ａ）記載の方法。
前述と同様に、上記の「それらの近傍に存在する多型」とは、換言すれば、セロトニントランスポーター遺伝子（またはセロトニン受容体遺伝子）に関連する多型を意味し、即ちこれら遺伝子のプロモーター領域など転写調節領域、制御領域あるいは非翻訳領域などに存在する多型を検査するものであってもよい。【００１５】
Ｅ）  セロトニントランスポーター遺伝子に関連するＬＰＲ多型を検査し、その結果を加味して、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、上記Ｄ）記載の方法。
後述のように、本発明者らは、ＴＰＨ２遺伝子に関連する上記rs11178997多型の検査結果と、セロトニントランスポーター遺伝子のプロモーター領域に存在するＬＰＲ多型（Int Clin Psychopharmacol. 2005,20:151-156参照）の検査結果とを組み合わせることによって更にきめ細かい反応性予測が可能になることを明らかにした。このように、複数の遺伝子多型に基づいて薬効予測することは好ましく、ゲノム情報に基づく個々の患者に適した適正な薬物治療の実現に資するものである。【００１６】
Ｆ）  うつ病の改善を目的とした薬物治療において、抗うつ薬に対する患者の反応性予測に使用する、上記Ａ）〜Ｅ）のいずれかに記載の方法。
Ｇ）  上記Ａ）〜Ｅ）のいずれかに記載の検査結果をもとに、被検者の抗うつ薬反応性予測をコンピュータに実行させる、抗うつ薬反応性予測支援プログラム。
Ｈ）  上記Ａ）記載の方法において、遺伝子多型の検査は、被検者から調製したゲノムＤＮＡを鋳型にして、多型部位を挟む遺伝子領域を増幅する工程と、得られた増幅断片をもとに遺伝子型を決定する工程とを含む方法。
Ｉ）  上記Ａ）記載の方法において、ＤＮＡチップ等の遺伝子多型検査器具を用いて遺伝子多型を検査する方法。
Ｊ）  上記Ｉ）記載の方法に使用される、遺伝子多型検査用オリゴヌクレオチド。
Ｋ）  上記Ａ）記載の方法に使用される、遺伝子多型検査用キット。
Ｌ）  トリプトファンヒドロキシラーゼ-２（ＴＰＨ２）、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子またはチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子を標的（創薬ターゲット）とした抗うつ薬のスクリーニング方法。
今回の解析により、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨの各遺伝子多型と抗うつ薬反応性との間に相関が認められたが、この結果は、これらの遺伝子多型に基づくＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨの発現量（または活性等）の個体差が、抗うつ薬の反応性に影響を及ぼすことを示すものといえる。したがって、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２またはＴＨを標的（創薬ターゲット）とし、その発現量または活性等を変化させる物質を探索することは、ＳＳＲＩ等の抗うつ薬と併用し、その薬効を向上させる薬剤の開発に有用である。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、ＴＰＨ２やＤＲＤ２、ＴＨの遺伝子多型に基づいて抗うつ薬に対する反応性を簡易迅速かつ客観的に予測することができるので、抗うつ薬を用いたうつ病治療において、抗うつ薬に対する患者の反応性予測に好適に使用することができる。前述のように、抗うつ薬とりわけＳＳＲＩの臨床効果は個人差が非常にあり、しかもうつ病は重症化すると自殺企図につながる恐れが高いことから、使用予定の抗うつ薬に対する患者の反応性を治療初期の段階で客観的に予測し、個々の患者に適した適正な薬物治療を行うことが強く望まれていた。本発明は、投与前に患者の抗うつ薬反応性を高精度に予測することを可能とし、有効で安全なうつ病治療を実現し、医療の質の向上、並びに治療効率の向上に寄与するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】ＴＰＨ２の遺伝子多型（rs11178997多型）と抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との相関を調べた結果を示すグラフである。
【図２】セロトニントランスポーター遺伝子のＬＰＲ多型がｓ／ｓのグループ内における、ＴＰＨ２の遺伝子多型（rs11178997多型）と抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との相関を調べた結果を示すグラフである。
【図３】上記ＴＰＨ２の遺伝子多型（rs11178997多型）と上記ＬＰＲ多型とを組み合わせ、これと抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との相関を調べた結果を示すグラフである。
【図４】ＤＲＤ２遺伝子上の多型を説明する図である。
【図５】上記ＤＲＤ２遺伝子のＴａｑ１Ａ多型（rs1800497多型）と抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との相関を調べた結果を示すグラフである。
【図６】ＴＨ遺伝子上の多型を説明する図である。
【図７】上記ＴＨ遺伝子のＴＣＡＴリピート多型と抗うつ薬ＳＳＲＩ（パロキセチン）に対する反応性との相関を調べた結果を示すグラフである。
【図８】上記ＴＨ遺伝子のＴＣＡＴリピート多型と抗うつ薬ＳＳＲＩ（フルボキサミン）に対する反応性との相関を調べた結果を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明の好ましい態様について説明する。なお、本明細書および図面において、塩基・アミノ酸等を略号で表記する場合、その表記はIUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、たとえばＤＮＡの塩基の表記については以下のとおりである。
Ａまたはａ：アデニン、Ｇまたはｇ：グアニン、Ｃまたはｃ：シトシン、Ｔまたはｔ：チミン、Ｒまたはｒ：アデニンまたはグアニン、Ｍまたはｍ：アデニンまたはシトシン、Ｗまたはｗ：アデニンまたはチミン、Ｓまたはｓ：グアニンまたはシトシン、Ｋまたはｋ：グアニンまたはチミン、Ｙまたはｙ：シトシンまたはチミン、である。【００２０】
また、遺伝子多型、遺伝子配列等に関する番号、数値その他の情報は、米国国立バイオテクノロジー情報センター（National Center for Biotechnology Information：NCBI）のウェブページなどで利用可能な主要な遺伝子データベースにおいて使用されている番号、数値等を参酌して解釈されるものとする。【００２１】
［１］抗うつ薬の反応性予測に有用な遺伝子多型とそれを利用した予測法
［1-1］ＴＰＨ２遺伝子多型を利用した反応性予測
本発明者らは、前述のように、上記ＴＰＨ２の遺伝子多型と抗うつ薬に対する反応性との関連性の有無について解析を行った結果、抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性予測に有用な遺伝子多型（rs11178997多型）をＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域に見出した。図１は、このrs11178997多型と抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との間に有意な相関が認められたことを示すグラフである。【００２２】
解析方法は概略以下のとおりである。即ち、大うつ病または気分変調障害と診断され、書面にて同意の得られた患者１００名（平均年齢 43.7±14.9）を対象とし、投与薬剤としてＳＳＲＩのパロキセチンまたはフルボキサミンを封筒法により無作為に割り当てた。薬剤用量はそれぞれ20mg、50mgで開始し、症状改善程度によりそれぞれ40mg、150mgまで増量可能とした。臨床効果はうつ病の尺度であるHamilton Depression Rating Scale (HAM-D) scoreにより経時的に評価した。図１のグラフは、フルボキサミンを服用したうつ病患者４１名の結果であり、グラフ縦軸の「ＨＡＭＤ変化率（％）」が低くなるほど薬剤による改善率即ち臨床効果は高いと評価される。【００２３】
患者の遺伝子多型（rs11178997多型）の検査、判定は、各患者の末梢血からゲノムＤＮＡを抽出後、ＰＣＲ法によって行った（検査方法については後述する）。ここで、上記rs11178997多型について説明すると、ヒト第１２染色体のＴＰＨ２遺伝子のプロモーター領域内、より詳しくはＴＰＨ２遺伝子の翻訳開始点を「＋１」とするとその上流「−６１４」番目に位置し、転写開始点を「＋１」とするとその上流「−４７３」番目に位置する、当該位置の塩基がＴ（チミン）またはＡ（アデニン）の１塩基多型（ＳＮＰ）である（Psychiatry Res. 2005,134:195-198参照）。以下に、当該多型部位を含む長さ５１ヌクレオチドの塩基配列を示す。この塩基配列中、rs11178997多型は第２６番目に位置する。
gattaccttatttgatcattacaca[T/A]tgtacgcttgtgtcaaaatatcaca【００２４】
配列表の配列番号１にも同一の配列が示されるが、多型部位の塩基をユニバーサルコード「ｗ」により表記した点で異なる。配列番号２は、ＳＮＰのデータベースに「rs11178997」の番号を付されて登録・掲載されているデータ中の配列であり、当該配列中、rs11178997多型は第４００番目に位置する。【００２５】
図１に示すように、上記rs11178997多型における塩基が「Ｔ」のアレルをホモで有する「T/T」保有群は、「Ｔ」アレルと「Ａ」アレルをヘテロで有する「T/A」保有群に比べてフルボキサミンの臨床効果が高く、薬剤投与２週目の早期段階から有意に良好な治療効果が得られた。なお、今回の解析では「Ａ」アレルをホモで有する「A/A」保有者は検出されなかった。図中、「1/2」「3/4」「5/6」はそれぞれ１〜２週、３〜４週、５〜６週を示し、「ｎ」は各群の患者数を示し、「*」「#」「+」はｔ検定のｐ値を示す（他のグラフも同様である）。【００２６】
さらに、各患者のセロトニントランスポーター遺伝子のＬＰＲ多型についても検査を行った。このＬＰＲ多型の遺伝子型がｓ／ｓの場合には、「ｌ」（エル）アレルを保有する群に比べてフルボキサミンの臨床効果は有意に低くなるという結果が得られている（Int Clin Psychopharmacol. 2005,20:151-156参照）。そこで、ＬＰＲ多型の影響を除外するため、低改善率群であるｓ／ｓ群内において、上記rs11178997多型とフルボキサミンに対する反応性との相関を検討した。図２は、その結果を示すグラフである。同図に示すように、上記rs11178997多型の遺伝子型が「T/T」の患者のフルボキサミンに対する良好な反応性傾向は、ｓ／ｓ群内においても保持されていた。【００２７】
このように、上記rs11178997多型は、ＳＳＲＩ薬フルボキサミンに対する反応性と有意に相関することが示された。これらの結果に基づき、うつ病患者のrs11178997多型を検査し、当該多型部位の塩基が「Ｔ」のアレルをホモで有する遺伝子型「T/T」の場合には、ＳＳＲＩに対して効果を示すレスポンダー（responder）であると反応性予測することができる。他方、当該多型部位の塩基が「Ａ」のアレルを有する遺伝子型「T/A」または「A/A」の場合には、ＳＳＲＩに対して効果を示さないノンレスポンダー（non responder）であるか、または効果の低いレスポンダー（poor responder）であると反応性予測することができる。このように、rs11178997多型を検査、判定することによって、抗うつ薬に対する患者の応答性（反応性）、即ち患者がレスポンダーであるかノンレスポンダー（又はpoor responder）であるかを投与前に予測することができ、これにより効率的かつ適正なうつ病治療に貢献することができる。【００２８】
本発明は、上記ＴＰＨ２の遺伝子多型（rs11178997多型）の検査結果に基づいて被検者の抗うつ薬反応性を予測する方法であるが、検査方法は当該遺伝子多型を直接検査する方法に制限されるものではない。たとえば、上記rs11178997多型と連鎖し、ハプロタイプを形成するようなＴＰＨ２遺伝子上の他の遺伝子多型を検査することによって間接的にrs11178997多型を検査し、抗うつ薬の反応性を予測することができる。また、今回の解析によりＴＰＨ２の遺伝子多型と抗うつ薬反応性との間に相関が認められたので、ＴＰＨ２遺伝子上に存在する他の遺伝子多型に基づいて抗うつ薬反応性を予測することも可能である。【００２９】
たとえば、rs11178997多型は、ＴＰＨ２遺伝子上のrs11178998多型(-52A/G)と完全にリンクし、rs11178998多型が「Ａ」アレルのときは、rs11178997多型は「Ｔ」アレルと判断できる。このように、rs11178997多型の検査は他のリンクする変異で検査してもよい。【００３０】
ＴＰＨ２遺伝子上の他の遺伝子多型を検査する場合、当該遺伝子多型は１塩基多型に制限されるものではなく、たとえば欠損部分の有無による多型、即ち、２以上の塩基からなる特定の塩基配列を有する挿入型とこの塩基配列を欠く欠失型との違いを有する遺伝子型、であってもよい。本発明は、１塩基多型に限らず、このような欠損部分の有無による遺伝子多型に基づいて抗うつ薬反応性を予測してもよいし、転位など他の遺伝子多型に基づいて抗うつ薬反応性を予測してもよい。【００３１】
遺伝子多型の検査、判定は、たとえば患者の血液から調製したＤＮＡ試料中のゲノムＤＮＡを鋳型にして、多型部位を挟む遺伝子領域をＰＣＲ法などで増幅し、得られた増幅断片をもとにプライマー伸長法などで遺伝子型を決定することにより行うことができる。ＰＣＲ法に使用するプライマー配列、プライマー伸長法に使用するプローブ配列は、たとえば配列番号１・２に示される配列などを参考に設計することができる。また、ＴＰＨ２遺伝子のゲノム配列は、GenBank等の遺伝子配列データベースにアクセッション番号「NC_000012 REGION: 70618893..70712488」（GeneID：121278）で登録・掲載されており、ＴＰＨ２のｃＤＮＡ配列はアクセッション番号「NM_173353」などで登録・掲載されているので、これらのデータベースに開示されている塩基配列などを参考に設計してもよい（特に、ＴＰＨ２遺伝子のエキソン領域またはイントロン領域の遺伝子多型を検査する場合）。【００３２】
上記rs11178997多型の検査、判定は、PCR-SSCP（single strand conformation polymorphism）法を用いて次のように行った。まずPCR法について、PCR反応液（20μl）は、患者末梢血から抽出したゲノムDNA 60ngに、至適バッファー、酵素、dNTP（各0.2mM）、フォワードプライマー（0.5μM）及びリバースプライマー（0.5μM）を含む組成とした。設計したフォワードプライマー（TPH2 -473F）及びリバースプライマー（TPH2 -473R）の配列はそれぞれ下記(a),(b) に示すとおりである。PCRの反応条件は、94℃  30秒、50℃  30秒、72℃  30秒を１サイクルとして、これを35サイクル行うステップによってＤＮＡを増幅した。
(a) 5’-GGCAATGGATATCTTGATTA-3’（配列番号３）
(b) 5’-AACCTCAGTCTTTAAGCAAT-3’（配列番号４）【００３３】
次に、得られたPCR産物をSSCP（single strand conformation polymorphism）と呼ばれる方法で分離し、その電気泳動パターンで遺伝子の差異を判定した。この方法では、まずトリスバッファーでPCR産物を4倍希釈し、このサンプル3μLに対し、変性溶液6μLを加えた。変性溶液は94％ホルムアミド、 0.05％キシレンシアノールブルー溶液、0.04％ブロモフェノールブルーの溶液である。次に95℃、5分間処理し、PCR産物を熱変性させた。そして、GeneGel Excel 12.5/24 kit（アマシャム社）を用いて電気泳動後、銀染色を行った。この銀染色によって得られた電気泳動パターンから遺伝子の差異を判定し、上記rs11178997多型における遺伝子型を決定した。さらに、遺伝子の差異を確認するため、上記SSCP法により得られた差異をダイレクトシークエンス法及びTaqMan法でも確認した。【００３４】
［1-2］ＤＲＤ２遺伝子多型を利用した反応性予測
近年、セロトニンやノルアドレナリン神経系だけではなく、ドパミン神経系も抗うつ薬の臨床効果に影響を及ぼしているとの報告が多々見られるようになってきた（Journal of Affective Disorders.2005,86:37-45）。そこで、本発明者らは、抗うつ薬の反応性予測に有用な遺伝子多型として、ドパミン神経系の因子の探索を行ったところ、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）およびチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）の遺伝子多型について、抗うつ薬の臨床効果との相関が認められた。【００３５】
ＤＲＤ２の遺伝子多型と精神病との相関については、以前より注目され、研究が進められていた。例えば、ＤＲＤ２のプロモーター領域や３’ＵＴＲ領域の多型と統合失調症（Human Molecular Genetics. 1997,6:577-582）や躁うつ病（Psychiatry Research. 1999,86:193-201）との相関を検討した報告がある。また、抗うつ薬ＳＳＲＩに対するレスポンダーにおいて、線条体でのＤＲＤ２に対するリガンドの結合量が増加していたとの報告がある（Psychiatry  Research. 1999,90:91-101）。しかし、抗うつ薬の反応性とＤＲＤ２の遺伝子多型との関係を検討した報告はない。もちろん、大うつ病の罹患率と同遺伝子多型との相関の報告もない。【００３６】
図４には、ＤＲＤ２の代表的な遺伝子多型が示されるが、この中でも、プロモーター領域の-141C Ins/Del多型、３’ＵＴＲ領域のＴａｑ１Ａ多型（rs1800497多型）、およびエキソン７のSer311Cys多型が、多くの疾患で研究されている。図５は、本発明者らによる解析の結果、この中のＴａｑ１Ａ多型と抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との間に有意な相関が認められたことを示すグラフである。解析方法は前記ＴＰＨ２の場合と同様であり、図５のグラフは、フルボキサミンを服用したうつ病患者４１名の結果である。グラフ縦軸の「ＨＡＭＤ変化率（％）」が低くなるほど薬剤による改善率即ち臨床効果は高いと評価される。【００３７】
同図に示すように、上記Ｔａｑ１Ａ多型において、Ａ２アレル保有群（即ち、「A1」アレルと「A2」アレルをヘテロで有する「A1/A2」および「A2」アレルをホモで有する「A2/A2」）は、Ａ１アレルをホモで有する「A1/A1」群に比べてフルボキサミンの臨床効果が高く、薬剤投与２週目の早期段階から有意に良好な治療効果が得られた。なお、図中の「★」は、反復測定分散分析（repeated measure ANOVA）でＡ２アレル保有群とＡ１アレルホモ群との間に有意差があったことを示す（図７、図８も同様に同分析で有意差があったことを示す）。【００３８】
このように、上記Ｔａｑ１Ａ多型は、ＳＳＲＩ薬フルボキサミンに対する反応性と有意に相関することが示された。これらの結果に基づき、うつ病患者のＴａｑ１Ａ多型を検査し、当該多型がＡ２アレル保有群（「A1/A2」または「A2/A2」）の場合には、ＳＳＲＩに対して効果を示すレスポンダーであると反応性予測することができる。他方、当該多型がＡ１アレルホモ群「A1/A1」の場合には、ＳＳＲＩに対して効果を示さないノンレスポンダーであるか、または効果の低いレスポンダー（poor responder）であると反応性予測することができる。このように、Ｔａｑ１Ａ多型単独を検査することによっても、抗うつ薬に対する患者の応答性（治療反応性）、即ち患者がレスポンダーであるかノンレスポンダー（又はpoor responder）であるかを投与前に予測することができ、これにより効率的かつ適正なうつ病治療に貢献することができる。【００３９】
上記Ｔａｑ１Ａ多型の検査、判定は、PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)法を用いて次のように行った。まずPCR法について、PCR反応液（20μl）は、患者末梢血から抽出したゲノムDNA 30ngに、至適バッファー、酵素、dNTP（各0.2mM）、フォワードプライマー（0.5μM）及びリバースプライマー（0.5μM）を含む組成とした。設計したフォワードプライマー（D2-Taq1A F）及びリバースプライマー（D2-Taq1A R）の配列はそれぞれ下記(a),(b) に示すとおりである。PCRの反応条件は、94℃  30秒、58℃  30秒、72℃  30秒を１サイクルとして、これを35サイクル行うステップによってＤＮＡを増幅した。
(a) 5’-CCGTCGACCCTTCCTGAGTGTCATCA-3’（配列番号５）
(b) 5’-CCGTCGACGGCTGGCCAAGTTGTCTA-3’（配列番号６）
次に、得られたPCR産物5μlに対して5Uの制限酵素Taq Iを用い、65℃で3時間以上反応させ切断した。そして、3％アガロースゲルで電気泳動（100 V、20分）を行い、EtBr染色により判定を行った。【００４０】
もちろん、Ｔａｑ１Ａ多型の検査方法は上記の方法に制限されるものではない。また、Ｔａｑ１Ａ多型を直接検査する方法以外に、Ｔａｑ１Ａ多型と連鎖し、ハプロタイプを形成するようなＤＲＤ２遺伝子上の他の遺伝子多型を検査することによって間接的にＴａｑ１Ａ多型を検査し、抗うつ薬の反応性を予測してもよい。さらに、今回の解析によりＤＲＤ２の遺伝子多型と抗うつ薬反応性との間に相関が認められたので、ＤＲＤ２遺伝子上に存在する他の遺伝子多型に基づいて抗うつ薬反応性を予測することも可能である。【００４１】
以下に、Ｔａｑ１Ａ多型部位を含む長さ２０１ヌクレオチドの塩基配列を示す。この塩基配列中、Ｔａｑ１Ａ多型部位は第１０１番目に位置し、前記Ａ１アレルは当該部位が「Ｔ」（チミン）であり、Ａ２アレルは当該部位が「Ｃ」（シトシン）である。Ｔａｑ１Ａ多型の検査においては、この配列情報に基づきプローブやプライマーを設計し、当該多型を検査することができる。
CCCTCTAGGAAGGACATGATGCCCTGCTTTCGGCTGCGGAGGGCCAGTTG
CAGGGGTGTGCAGCTCACTCCATCCTGGACGTCCAGCTGGGCGCCTGCCT
(T/C)
GACCAGCACTTTGAGGATGGCTGTGTTGCCCTTGAGGGCGGCCAGGTGGG
CGGGTGTCCAGCCCACCTTGTTGCGGGCGTGGACATTTGCGTGATGTTCT
配列表の配列番号７にも同一の配列が示されるが、多型部位の塩基をユニバーサルコード「Ｙ」により表記した点で異なる。【００４２】
［1-3］ＴＨ遺伝子多型を利用した反応性予測
本発明者らは、上記Ｔａｑ１Ａ（rs1800497）多型に加え、ドパミン生合成の律速段階を担うチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）のＴＣＡＴリピート多型（TH tetranucleotide (TCAT) repeat多型）も、抗うつ薬に対する反応性予測に有用であることを明らかにした。【００４３】
図６には、ＴＨの代表的な遺伝子多型が示される。ＴＨ遺伝子では、イントロン１にある上記ＴＣＡＴリピート多型が様々な疾患との関連においてもっとも多く検討されているが、他にはアミノ酸置換のVal81Met多型があり、統合失調症との相関をみたものがある（Neuropsychiatric Genetics. 2003,116B:23-26、Molecular Psychiatry. 2001,6:315-319）。ＴＣＡＴリピート多型では、ノルアドレナリン性神経系の活性化（Hypertension. 1999,32:676-682、Life Science. 1997,61:1341-1347）や、健常人において外向性低下（Neuroscience Research. 2006,54:180-185）に影響するとの報告がある。その他、躁うつ病および大うつ病の罹患率との関連検討もあるが、相関は認められなかった（American Journal of Medical Genetics. 1997,74:176-178、同1999,88:88-94)。ＴＣＡＴリピート多型も、ＤＲＤ２多型と同様に、抗うつ薬に対する反応性との関連を検討した報告はなされていない。なお、ＴＣＡＴリピート多型には、６〜１０リピート（Ｔ６〜Ｔ１０）のアレルが存在し、日本人は９リピート、Caucasianは１０リピートがメジャーアレルとされている。【００４４】
図７および図８は、上記ＴＣＡＴリピート多型と抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との間に有意な相関が認められたことを示すグラフである。解析方法は前記ＴＰＨ２、ＤＲＤ２の場合と同様であるが、図７のグラフは、パロキセチンを服用したうつ病患者３９名の結果、一方、図８のグラフは、フルボキサミンを服用したうつ病患者４１名の結果である。【００４５】
図７に示すように、上記ＴＣＡＴリピート多型において、９リピートアレル以外のアレルを有する群（即ち、９リピートアレル「9+」とそれ以外のアレル「9-」をヘテロで有する「9+/9-」および９リピートアレル以外のアレルをホモで有する「9-/9-」）は、９リピートアレルをホモで有する「9+/9+」群に比べてパロキセチンの臨床効果が高く、薬剤投与２週目の早期段階から有意に良好な治療効果が得られた。【００４６】
これに対して、フルボキサミンの臨床効果については、上記２群における改善率が逆の傾向を示した。即ち、図８に示すように、９リピートアレルをホモで有する「9+/9+」群のほうが、９リピートアレル以外のアレルを有する群（「9+/9-」または「9-/9-」）に比べてフルボキサミンの臨床効果が有意に高かった。【００４７】
このように、上記ＴＣＡＴリピート多型は、抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性と有意に相関する。これらの結果に基づき、うつ病患者のＴＣＡＴリピート多型を検査し、当該多型が９リピートアレルをホモで有する「9+/9+」群の場合には、パロキセチンよりも、フルボキサミン（または同様の傾向を示す抗うつ薬）を服用したほうが、当該患者にとって治療反応性がより高いと予測することができる。他方、当該多型が９リピートアレル以外のアレルを有する群（「9+/9-」または「9-/9-」）の場合には、フルボキサミンよりも、パロキセチン（または同様の傾向を示す抗うつ薬）を服用したほうが、当該患者にとって治療反応性がより高いと予測することができる。このように、ＴＣＡＴリピート多型を検査することによって、使用する抗うつ薬に対する患者の応答性（治療反応性）、即ちその薬が当該患者にとってより治療効果を期待できるものかどうかを投与前に予測することができ、これにより効率的かつ適正なうつ病治療に貢献することができる。【００４８】
上記ＴＣＡＴリピート多型の検査、判定は、PCR法を用いて次のように行った。まずPCR法について、PCR反応液（20μl）は、患者末梢血から抽出したゲノムDNA 60ngに、至適バッファー、酵素、dNTP（各0.2mM）、フォワードプライマー（1μM）及びリバースプライマー（1μM）を含む組成とした。設計したフォワードプライマー（TH 1F）及びリバースプライマー（TH 1R）の配列はそれぞれ下記(a),(b) に示すとおりである。PCRの反応条件は、94℃  30秒、58℃  30秒、72℃  30秒を１サイクルとして、これを40サイクル行うステップによってＤＮＡを増幅した。
(a) 5’-CAGCTGCCCTAGTCAGCAC-3’（配列番号８）
(b) 5’-GCTTCCGAGTGCAGGTCACA-3’（配列番号９）
次に、得られたPCR産物をキャピラリーを用いて電気泳動し、4bpの差を観察・判定した。【００４９】
もちろん、ＴＣＡＴリピート多型の検査方法は上記の方法に制限されるものではない。また、ＴＣＡＴリピート多型を直接検査する方法以外に、ＴＣＡＴリピート多型と連鎖し、ハプロタイプを形成するようなＴＨ遺伝子上の他の遺伝子多型を検査することによって間接的にＴＣＡＴリピート多型を検査し、抗うつ薬の反応性を予測してもよい。さらに、今回の解析によりＴＨの遺伝子多型と抗うつ薬反応性との間に相関が認められたので、ＴＨ遺伝子上に存在する他の遺伝子多型に基づいて抗うつ薬反応性を予測することも可能である。【００５０】
以下に、ＴＣＡＴリピート多型部位を含む長さ２３４ヌクレオチドの塩基配列を示す。この配列は、９リピートアレルの配列であり、カッコ内の部位が多型部位に相当する。ＴＣＡＴリピート多型の検査においては、この配列情報に基づきプローブやプライマーを設計し、当該多型を検査することができる。
AGCTCATGGTGGGGGGTCCTGGGCAAATAGGGGGCAAAATTCAAAGGGTA
TCTGGGCTCTGGGGTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTCCCTTATTTCCC
(TCAT/TCAT/TCAT/TCAT/TCAT/TCAT/TCAT/TCAT/TCAT)
TCACCATGGAGTCTGTGTTCCCTGTGACCTGCACTCGGAAGCCCTGTGTA
CAGGGGACTGTGTGGGCCAGGCTGGATAATCGGGAGCTTTTCAGCCCACA
配列表の配列番号１０にも同一の配列（９リピートアレル）が示される。【００５１】
［1-4］複数の遺伝子多型を利用した反応性予測
本発明は、ＴＰＨ２遺伝子、ＤＲＤ２遺伝子またはＴＨ遺伝子に関連する少なくとも１つの多型を検査し、抗うつ薬に対する反応性予測を行うものであるが、これらの遺伝子に関連する複数の遺伝子多型を検査し、その検査結果をもとに抗うつ薬に対する反応性予測を行う方法は好ましい方法であるし、同様に、これらの遺伝子に関連する遺伝子多型と他の遺伝子の多型とを組み合わせて、抗うつ薬に対する反応性予測を行う方法もまた好ましい方法である。【００５２】
たとえば、図３は、ＴＰＨ２の遺伝子多型（rs11178997多型）と前記ＬＰＲ多型の検査結果を組み合わせ、これと患者の抗うつ薬フルボキサミンに対する反応性との相関を調べた結果を示すグラフである。図中、「wild」「hetero」はそれぞれ、rs11178997多型の遺伝子型が「T/T」「T/A」であることを示し、「l/s」「l/l」「s/s」はＬＰＲ多型の遺伝子型を示す。同図に示すように、「l/l」及び「wild」の組み合わせの場合に最も治療反応性が高く、反対に、「s/s」及び「hetero」の組み合わせの場合に最も治療反応性が低かった。「s/s」及び「wild」、「l/s」及び「hetero」、「l/s」及び「wild」の各組み合わせは両者の中間程度の治療反応性を示し、ＳＳＲＩに対して一定の効果を示すレスポンダーであると反応性予測することができる。このように、複数の遺伝子多型の検査結果を組み合わせることによって、更にきめ細かい反応性予測が可能になる。【００５３】
このほかに、セロトニン受容体（HTR）のサブタイプ（1A,2A,3A,3B）に関連する下記（１）〜（６）の複数の遺伝子多型と、抗うつ薬ＳＳＲＩに対する反応性との間においても相関が認められたので、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２またはＴＨの遺伝子多型とセロトニン受容体の遺伝子多型とを組み合わせて、抗うつ薬に対する反応性を予測することも好ましい方法である。
（１）HTR1A 272Gly/Asp：rs1800042
CTGGGCGTGG AGAGCAAGGC TGGGG
(G/A)
TGCTCTGTGC GCCAATGGCG CGGTG
（２）HTR1A -1019C/G：rs6295
GTTGTTGTCGTCGTTGTTCGTTTGTTTTTGGAGACGGAGTCTCGCTCTGT
CGCCCAGGCTGGAGTGCAATGGCGCGAGAACGGAGGTAGCTTTTTAAAAA
(C/G)
GAAGACACACTCGGTCTTCTTCCATCAATTAGCAATAATTGGGAGACTGA
CCCAGGACTGTTCACCTTCCCATTCAGGCTCCCTATGCTTCCTTTTCTCA
（３）HTR2A -1438A/G：rs6311
TAAGTGGCACTGTGGTAATTTTTTAGGCTGAAGGGTGAAGAGAGAACATA
AATAAGGCTAGAAAACAGTATGTCCTCGGAGTGCTGTGAGTGTC
(T/C)
GGCACTTCCATCCAAAGCCAACAGTGTTTGTGTCCAGAGTGGAATTACTG
ACATTGGCCACATAGGCTCAGGGTGGCTAGGCACGTCTGTGGTGATAACT
CTGATAAACTATTAGCACTATTTTTATTTAATAGATACACCATTGAACTG
GCTTATTTTCTTCAGCAGAAATATGCCACCCAGATATTATTCAAAACCTC
ACATGTGGTAGGAAATAAGTTGGTTTCGCAGTACCAATTTTTTTCCCCCA
CCAGTAATGACAACTTGCCTTACTTGTAAAGAAAGCCCTTTCCCAAGTAG
GTTTCTAAAGGAGGCAGTTCGATCTCTCTCTTTTTGCAGGCATGAAAATA
TTTTCCTCAATAGTTGGGTTTTGCTACAGTTCTATCACCTTCTGTTCTTC
ACATTCTCCCTGGACAAATTCAACCACTCTCATGCCTTCAATATGTTTGT
GGCCAAGTCTGTACCTTCATAGCTGATTATTTCTCTCAGTTCCAGACCTA
（４）HTR2A 102T/C：rs6313
GCCTCAGTGTTACAGAGTGTGGGTACATCAAGGTGAATGGTGAGCAGAAAC
TATAACCTGTTAGTCCTTCTACACCTCATCTGCTACAAGTTCTGGCTTAGA
CATGGATATTCTTTGTGAAGAAAATACTTCTTTGAGCTCAACTACGAACTC
CCTAATGCAATTAAATGATGACACCAGGCTCTACAGTAATGACTTTAACTC
(T/C)
GGAGAAGCTAACACTTCTGATGCATTTAACTGGACAGTCGACTCTGAAAA
TCGAACCAACCTTTCCTGTGAAGGGTGCCTCTCACCGTCGTGTCTCTCCT
TACTTCATCTCCAGGAAAAAAACTGGTCTGCTTTACTGACAGCCGTAGTG
ATTATTCTAACTATTGCTGGAAACATACTCGTCATCATGGCAGTGTCCCTA
（５）HTR3A 178C/T：rs1062613
CAGGCTGGCTGGGACATGAGGTTGGCAGAGGGCAGGCAAGCTGGCCCTTG
GTGGGCCTCG
(C/T)
CCTGAGCACTCGGAGGCACTCCTATGCTTGGAAAGCTCGCTATGCTGCTG
TGGGTCCAGC
（６）HTR3B -100_-102AAG ins/del
GTGTTTACAAAATAGCACCAGTAAGGATAGCATCAACTGGCAAACGGAG
(AAG/-)
GAGGAGAACAGAGTGGAGAGGAACCCTGTTAGGAGAAATTGAGCGGCATT
CCATCT【００５４】
上記（１）〜（６）の各遺伝子多型の下に記載される配列は、多型部位を含むその前後近傍の塩基配列であり、カッコ内の部位が多型部位に相当する。これらの塩基配列はそれぞれ配列表の配列番号１１〜１６にも記載されているが、配列表では多型部位の塩基はユニバーサルコードにより１文字表記されている。なお、上記（６）の遺伝子多型は欠損部分の有無による多型であり、配列番号１６には挿入型（ins）の塩基配列を記載した。また、上記（３）の遺伝子多型（HTR2A -1438A/G）はReverse complemented strandにしたときの番号なので、上記の配列ではT/Cとなっている（配列番号１３も同様）。【００５５】
セロトニン受容体（HTR）の上記（１）〜（６）の各遺伝子多型と、抗うつ薬ＳＳＲＩに対する治療反応性との具体的な相関について説明すれば、以下のとおりである。まず、（１）の多型（HTR1A 272Gly/Asp：rs1800042）については、Aspアレル保有者で早期に改善率が高い傾向が認められた。また、（２）の多型（HTR1A -1019C/G：rs6295）については、C/C群で改善率が高い傾向が、（３）の多型（HTR2A -1438A/G：rs6311）については、G/G群で改善率が高い傾向が、それぞれ認められた。（４）の多型（HTR2A 102T/C：rs6313）については、上記（３）の多型と完全にリンク（連鎖不平衡）していたため、C/C群で改善率が高い傾向が認められた。（５）の多型（HTR3A 178C/T：rs1062613）については、C/C群で改善率が高い傾向が、（６）の多型（HTR3B -100_-102AAG ins/del）については、ins/ins群で改善率が高い傾向が、それぞれ認められた。【００５６】
また、抗うつ薬ＳＳＲＩのフルボキサミンおよびパロキセチンについて、薬剤別にロジスティック解析を行った。まず、フルボキサミンの臨床効果と３つの遺伝子多型（前記rs11178997多型、Ｔａｑ１Ａ多型およびＬＰＲ多型）についてロジスティック解析をそれぞれの因子で行ったところ、オッズ比が3.50（rs11178997）、4.58（Ｔａｑ１Ａ）、7.50（ＬＰＲ）であったのに対して、３つの遺伝子多型を組み合わせて解析したところ、オッズ比が32.86とフルボキサミンに対する反応性の予測率がより一層向上した。同様に、パロキセチンの臨床効果と２つの遺伝子多型（前記rs11178997多型およびＴＣＡＴリピート多型）について、２つの多型を組み合わせて解析したところ、オッズ比が15.5となり、この場合も反応性の予測率が向上した。このように、複数の遺伝子多型を組み合わせて、抗うつ薬に対する反応性を予測する方法は好ましい方法である。【００５７】
複数の遺伝子多型の検査結果を組み合わせて抗うつ薬の反応性予測を行う場合は、予測方法があまり複雑にならないよう留意することが好ましい。たとえば国際出願番号ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３１２５１９の明細書に開示されるような判別分析による予測方法、および決定木による予測方法は、複数の遺伝子多型の検査結果を組み合わせて反応性予測を行う場合に好ましい方法である。【００５８】
以上説明した各予測方法をプログラムを利用して行うことは好ましく、本発明はこのような抗うつ薬反応性予測支援プログラムを包含するものである。即ち、本発明の予測支援プログラムは、（１）ＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨのいずれかに関連する１又は２以上の遺伝子多型に基づいて、使用する抗うつ薬に対する患者の治療反応性を予測する方法、（２）ＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨのいずれかに関連する１又は２以上の遺伝子多型と、セロトニントランスポーター遺伝子のＬＰＲ多型とを組み合わせて、抗うつ薬に対する反応性を予測する方法、（３）ＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨのいずれかに関連する１又は２以上の遺伝子多型と、セロトニン受容体の遺伝子多型とを組み合わせて、抗うつ薬に対する反応性を予測する方法、などをコンピュータに実行させ、これにより遺伝子多型の検査結果から被検者の抗うつ薬反応性予測をコンピュータに実行させるものである。本発明のプログラムは、これを記録した、コンピュータで読み取り可能な記録媒体として提供することができる。このような記録媒体としては、フレキシブルディスク、ハードディスク、磁気テープ等の磁気記憶媒体、ＣＤ−ＲＯＭ、ＣＤ−Ｒ、ＣＤ−ＲＷ、ＤＶＤ−ＲＯＭ、ＤＶＤ−ＲＡＭ、ＤＶＤ−ＲＷ等の光学記憶媒体、ＲＡＭやＲＯＭ等の電気記憶媒体、およびＭＯ等の磁気／光学記憶媒体を例示することができるが、これらに限定されるものではない。【００５９】
［２］遺伝子多型の検査方法
本発明において、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２、ＴＨの遺伝子多型および他の遺伝子多型を調べる方法は特に制限されるものではなく、遺伝子上の多型を直接的または間接的に調べることが可能な従来公知の方法を適用することができ、今後開発される方法を使用してもよい。今回の解析に用いた、ＰＣＲ法により遺伝子多型を検査する方法は簡易な方法であり、精度も良好であるので、以下ではこの方法について簡単に説明する。【００６０】
検査に供するＤＮＡ試料は、被検者の任意の器官・組織・細胞（血液、羊水中の細胞、採取した組織等を培養した細胞を含む）から常法に従ってＤＮＡを精製・抽出すればよい。なお、ＰＣＲ法による遺伝子増幅が可能な限りにおいて、ＤＮＡの精製・抽出工程は省略又は簡略化してもよい。【００６１】
次に、多型部位に基づく遺伝子型の同定（遺伝子タイピング）のため、上記の方法で調製したＤＮＡ試料中のゲノムＤＮＡを鋳型にしてＰＣＲ法を行い、多型部位を挟む遺伝子領域を増幅する。その後、得られた増幅断片をもとに、Primer extension法（プライマー伸長法）、PCR-RFLP法、または電気泳動により増幅断片の長さを調べる方法などによって遺伝子型を決定する。【００６２】
上記ＰＣＲ法における各条件、使用する試薬・プライマーなどは特に制限されるものではない。また、遺伝子多型の検査は、ＰＣＲ法以外の方法を使用してもよい。遺伝子上の多型を直接的または間接的に検定可能な方法であれば、一塩基多型（ＳＮＰ）における塩基を検定する方法（ＳＮＰタイピング）、欠損部分の有無による多型を検定する方法、など従来公知の種々の方法を適用することができる（例えば、文献「ポストシークエンスのゲノム科学（１）  ＳＮＰ遺伝子多型の戦略」（中山書店）参照）。【００６３】
一例として、ＤＮＡチップ等の遺伝子多型検査器具を用いた検査方法を挙げることができる。この方法は、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨの遺伝子多型を検定するためのプローブ、あるいは更に他の遺伝子多型を検定するためのプローブを基板上に配置したＤＮＡチップ（または同種の器具）を作製し、このＤＮＡチップ等を用いて被検者からの遺伝子試料とプローブとのハイブリダイゼーションシグナルの有無により、遺伝子のタイピングを行う方法である。プローブには、多型部位の塩基を含む近傍の塩基配列（たとえば長さ８〜３０ヌクレオチド程度）またはその相補配列等からなるオリゴヌクレオチドを用いることができる。尚、ここで、「ＤＮＡチップ」とは、主として、合成したオリゴヌクレオチドをプローブに用いる合成型ＤＮＡチップを意味するが、ＰＣＲ産物などのｃＤＮＡをプローブに用いる貼り付け型ＤＮＡマイクロアレイを使用してもよい。このようなＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨの遺伝子多型検定用のプローブを含むＤＮＡチップは、抗うつ薬ＳＳＲＩの反応性予測チップとして利用することができる。【００６４】
その他にも、遺伝子多型の検査方法として、PCR-SSCP法、Allele specific PCR法などの点変異検出法を用いてもよいし、PCR法以外の他の増幅方法（例えば、RCA法など）を用いてもよい。また、ＤＮＡ増幅後に塩基配列決定装置（シークエンサー）などで直接増幅断片の塩基配列を決定し、遺伝子のタイピングを行ってもよい。【００６５】
勿論、遺伝子多型の検査は、タンパク質をコードするコード配列以外に、イントロン配列や制御配列などに存在する多型に基づいて行ってもよい。また、多型（変異）がコード配列上の変異であれば、ＲＮＡ、またはｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡをもとに、当該多型（変異）を検出することも可能である。さらに、アミノ酸置換を伴う多型（変異）であれば、タンパク質のアミノ酸配列などから当該多型（変異）を検出してもよい。【００６６】
本発明の遺伝子多型検査用キットは、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨの遺伝子多型を直接的または間接的に検査するため、これらの遺伝子配列またはその近傍配列に基づいて設計されたプライマーあるいはプローブなどを含むものであればよく、さらに、（１）試料の調製に用いる酵素や試薬、（２）逆転写反応に用いる酵素や試薬、（３）ＰＣＲ法に用いる酵素や試薬、（４）塩基配列の決定に用いる酵素や試薬、などのうち１又は２以上を含むものであってもよい。【００６７】
［３］本発明のスクリーニング方法
今回の解析により、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨの各遺伝子多型と抗うつ薬反応性との間に相関が認められたが、この結果は、これらの遺伝子多型に基づくＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨの発現量（または活性等）の個体差が、抗うつ薬の反応性に影響を及ぼすことを示すものといえる。したがって、ＴＰＨ２、ＤＲＤ２またはＴＨを標的（創薬ターゲット）とし、その発現量、活性、他の物質との結合などに影響を与える物質を探索することによって、効率の良い抗うつ薬の開発、とりわけＳＳＲＩ等の抗うつ薬と併用し、その薬効を向上させる薬剤の開発が期待できる。本発明は、このようなＴＰＨ２、ＤＲＤ２およびＴＨを標的とした抗うつ薬のスクリーニング方法を包含するものである。【００６８】
本発明のスクリーニング方法としては、遺伝子・タンパク質の発現量、タンパク質の活性変化、分子間の結合等を調べる従来公知の種々の方法を適用することができ、特に限定されるものではない。また、本発明以降に新たに開発されたスクリーニング方法を使用するものであってもよい。in vitro及びin vivoスクリーニング系のいずれであってもよいし、cell-free systemでスクリーニングを行ってもよい。また、スクリーニングに使用する遺伝子・タンパク質は、ヒト由来のもののほか、マウスその他の動物由来のものを使用してもよい。勿論、タンパク質の立体構造に関する情報を利用してスクリーニングを行ってもよい。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明は、以上のように、ＴＰＨ２やＤＲＤ２、ＴＨの遺伝子多型に基づいて被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法に関するものであり、前述したとおり、抗うつ薬とりわけＳＳＲＩを用いたうつ病治療における検査、診断などに利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年7月13日(2007.7.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリプトファンヒドロキシラーゼ−２（ＴＰＨ２）遺伝子、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子、またはゲノム上それらの近傍に存在する１又は２以上の多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
【請求項２】
トリプトファンヒドロキシラーゼ−２（ＴＰＨ２）遺伝子のプロモーター領域に存在するｒｓ１１１７８９９７多型を直接または間接的に検査し、その結果に基づき、当該多型部位の塩基が「Ｔ」のアレルをホモで有する「Ｔ／Ｔ」保有者は、当該多型部位の塩基が「Ａ」のアレルを有する者に比べて抗うつ薬に対する反応性が高いと予測する方法。
【請求項３】
ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子またはゲノム上その近傍に存在する多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
【請求項４】
チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子またはゲノム上その近傍に存在する多型を検査し、その結果に基づき、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する方法。
【請求項５】
抗うつ薬として使用される、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）またはセロトニン＆ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）に対する反応性を予測する、請求項２記載の方法。
【請求項６】
抗うつ薬として使用される、フルボキサミンに対する反応性を予測する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
上記ＤＲＤ２遺伝子のＴａｑ１Ａ多型を検査することによって、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項１又は３記載の方法。
【請求項８】
上記ＴＨ遺伝子のＴＣＡＴリピート多型を検査することによって、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項１又は４記載の方法。
【請求項９】
さらに、セロトニントランスポーター遺伝子、またはセロトニン受容体遺伝子、あるいはゲノム上それらの近傍に存在する多型を検査し、その結果を加味して、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項２記載の方法。
【請求項１０】
セロトニントランスポーター遺伝子に関連するＬＰＲ多型を検査し、その結果を加味して、被検者の抗うつ薬に対する反応性を予測する、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
うつ病の改善を目的とした薬物治療において、抗うつ薬に対する患者の反応性予測に使用する、請求項２記載の方法。
【請求項１２】
請求項２記載の検査結果をもとに、被検者の抗うつ薬反応性予測をコンピュータに実行させる、抗うつ薬反応性予測支援プログラム。
【請求項１３】
請求項２記載の方法において、遺伝子多型の検査は、被検者から調製したゲノムＤＮＡを鋳型にして、多型部位を挟む遺伝子領域を増幅する工程と、得られた増幅断片をもとに遺伝子型を決定する工程とを含む方法。
【請求項１４】
請求項２記載の方法において、ＤＮＡチップ等の遺伝子多型検査器具を用いて遺伝子多型を検査する方法。
【請求項１５】
請求項１４記載の方法に使用される、遺伝子多型検査用オリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
請求項２記載の方法に使用される、遺伝子多型検査用キット。
【請求項１７】
トリプトファンヒドロキシラーゼ−２（ＴＰＨ２）、ドパミンＤ２受容体（ＤＲＤ２）遺伝子またはチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）遺伝子を標的とした抗うつ薬のスクリーニング方法。
【国際調査報告】
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