【手続補正書】
【提出日】平成19年2月15日(2007.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離された核酸。
（ａ）配列番号：９に示されるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸
（ｂ）（ａ）の核酸のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列の核酸と、緊縮性条件下でハイブリッド形成する核酸であって、内耳支持細胞の分裂促進因子であるポリペプチド又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチドをコードする核酸
【請求項２】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離された核酸。
（ａ）配列番号：８に示されるヌクレオチド配列を含む核酸
（ｂ）（ａ）の核酸のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列の核酸と、緊縮性条件下でハイブリッド形成する核酸であって、内耳支持細胞の分裂促進因子であるポリペプチド又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチドをコードする核酸
【請求項３】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離された核酸。
（ａ）配列番号：８に示されるヌクレオチド配列の全長コード配列を含む核酸
（ｂ）（ａ）の核酸のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列の核酸と、緊縮性条件下でハイブリッド形成する核酸であって、内耳支持細胞の分裂促進因子であるポリペプチド又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチドをコードする核酸
【請求項４】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離された核酸。
（ａ）ＡＴＣＣ登録番号２０３５８３で寄託されたＤＮＡの全長コード配列を含む核酸
（ｂ）（ａ）の核酸のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列の核酸と、緊縮性条件下でハイブリッド形成する核酸であって、内耳支持細胞の分裂促進因子であるポリペプチド又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチドをコードする核酸
【請求項５】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離された核酸。
（ａ）配列番号：９に示されるアミノ酸配列を含んでなり、その関連シグナルペプチドを欠くポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸
（ｂ）（ａ）の核酸のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列の核酸と、緊縮性条件下でハイブリッド形成する核酸であって、内耳支持細胞の分裂促進因子であるポリペプチド又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチドをコードする核酸
【請求項６】
請求項１ないし５の何れか１項に記載の核酸を含むベクター。
【請求項７】
ベクターで形質転換された宿主細胞に認識されるコントロール配列に作用可能に結合した請求項６に記載のベクター。
【請求項８】
請求項６に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９】
前記細胞がＣＨＯ細胞である請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項１０】
前記細胞が大腸菌である請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項１１】
前記細胞が酵母細胞である請求項８に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１ないし５の何れか１項に記載の核酸によってコードされるポリペプチドの製造方法であって、請求項８に記載の宿主細胞を、前記ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、細胞培地から前記ポリペプチドを回収することを含んでなる方法。
【請求項１３】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離されたポリペプチド。
（ａ）配列番号：９に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチド
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加によって得られるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドであって、内耳支持細胞の分裂促進因子である又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチド
【請求項１４】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離されたポリペプチド。
（ａ）配列番号：９に示されるアミノ酸配列を含んでなり、その関連シグナルペプチドを欠くポリペプチド
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加によって得られるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドであって、内耳支持細胞の分裂促進因子である又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチド
【請求項１５】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離されたポリペプチド。
（ａ）配列番号：８のヌクレオチド配列の全長コード配列によってコードされるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加によって得られるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドであって、内耳支持細胞の分裂促進因子である又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチド
【請求項１６】
下記の（ａ）又は（ｂ）の単離されたポリペプチド。
（ａ）ＡＴＣＣ登録番号２０３５８３で寄託されたＤＮＡの全長コード配列によってコードされるアミノ酸配列含んでなるポリペプチド
（ｂ）（ａ）に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加によって得られるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドであって、内耳支持細胞の分裂促進因子である又は哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチド
【請求項１７】
異種アミノ酸配列に融合した請求項１３ないし１６の何れか１項に記載のポリペプチドを含むキメラ分子。
【請求項１８】
前記異種アミノ酸配列がタグポリペプチド配列である請求項１７に記載のキメラ分子。
【請求項１９】
前記異種アミノ酸配列が免疫グロブリンのＦｃ領域である請求項１７に記載のキメラ分子。
【請求項２０】
請求項１３ないし１６の何れか１項に記載のポリペプチドに特異的に結合する、単離された抗体。
【請求項２１】
前記抗体がモノクローナル抗体、ヒト化抗体又は一本鎖抗体である請求項２０に記載の抗体。
【請求項２２】
請求項１３ないし１６の何れか１項に記載のポリペプチドであって内耳支持細胞の分裂促進因子であるポリペプチドを含む、聴覚毛細胞の再生誘発のための医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１３ないし１６の何れか１項に記載のポリペプチドであって内耳支持細胞の分裂促進因子であるポリペプチドを含む、難聴の治療のための医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１３ないし１６の何れか１項に記載のポリペプチドであって哺乳動物線維芽細胞の増殖を誘発するポリペプチドを含む、哺乳動物線維芽細胞の増殖誘発のための医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３６】
実施例１５：ラット小嚢支持細胞の増殖（アッセイ５４）
このアッセイは本発明のあるポリペプチドが聴覚毛細胞前駆体である内耳支持細胞の有糸分裂促進剤として作用し、したがって哺乳動物における聴覚毛細胞の再生誘発と難聴の治療に利用できることを示す。アッセイは次のように実施される。ラットＵＥＣ−４小嚢上皮細胞が３３℃、２００μｌの血清添加培地で密度３０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに等分される。細胞は一晩培養され、ついで３７℃で無血清培地に移される。ついで様々な希釈率のＰＲＯポリペプチド（又はコントロールには不含有）が培地に加えられ、ついで細胞は２４時間インキュベートされる。２４時間のインキュベーションの後、３Ｈ−チミジン（１μＣｉ/ウェル）が加えられ、ついでさらに２４時間培養される。次に培地は組み込まれなかった放射能標識を取り除くために洗浄され、細胞を取り出し、１ウェルあたりのCpmが決定される。コントロール培地と比較してＰＲＯポリペプチドで処置した培地で少なくとも３０％又はそれ以上のＣｐｍであった場合にはアッセイで陽性と判断される。
このアッセイで次のポリペプチドは陽性と検定された：ＰＲＯ９８２