(57)【要約】下記式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心筋細胞保護剤。2007029889.tif 000047
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心筋細胞保護剤。
2007029889.tif 000038
〔式中、Ｚは、次式：
2007029889.tif 000039
［式中、Ｑ１は、式
2007029889.tif 000040
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｘ２は式−Ｓ（Ｏ）ｍ−（式中、ｍは０、１または２の整数を意味する。）、酸素原子、カルボニル基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する。）
で表わされる基を意味する。
Ｑ２ａは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。
で表わされる基を意味する。
Ｒ３ａはカルボニル基、メチレン基または単結合を意味する。
Ｒ３ｂは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、シアノ基または式−ＮＲ５ａＲ５ｂ（式中、Ｒ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。〕
【請求項２】
Ｒ３ａがカルボニル基である請求項１記載の保護剤。
【請求項３】
Ｒ３ｂがＣ１−６アルコキシ基又は水酸基である請求項１記載の保護剤。
【請求項４】
Ｑ２ａがＣ１−６アルコキシ基又は水酸基である請求項１記載の保護剤。
【請求項５】
Ｑ１が式−Ａ１−Ｓ（Ｏ）ｍ−Ｒ４ａ
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する；
ｍは０、１または２の整数を意味する。）
で表わされる基である請求項１記載の保護剤。
【請求項６】
Ｒ４ａが置換基を有していてもよいメチル基、置換基を有していてもよいエチル基、置換基を有していてもよいｎ−プロピル基または置換基を有していてもよいｉ−プロピル基である請求項１記載の保護剤。
【請求項７】
ｍが１である請求項１記載の保護剤。
【請求項８】
Ａ１がメチレン基である請求項１記載の保護剤。
【請求項９】
Ａ１がＣ１−６アルキレン基または単結合であり、Ｒ４ａが水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ６−１４芳香族炭化水素環式基、５ないし１４員芳香族複素環式基、Ｃ１−６アルコキシ基または水酸基である請求項１記載の保護剤。
【請求項１０】
Ｑ２ａが水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ２−７アシル基またはＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基である請求項１記載の保護剤。
【請求項１１】
式（Ｉａ）で表される化合物がセロフェンド酸である請求項１記載の保護剤。
【請求項１２】
式（Ｉａ）で表される化合物が、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルチオ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシンド、メチル  ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オエイト、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフォニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５α−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６β−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β，１９−ジヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１７−メチルスルフィニル−１５−オキソ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−プロピルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、及びｅｎｔ−１７−アセチル−１５β−ヒドロキシ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッドからなる群から選ばれるいずれかのものである請求項１記載の保護剤。
【請求項１３】
心虚血／再灌流障害から心筋細胞を保護するための請求項１〜１２のいずれか１項記載の保護剤。
【請求項１４】
活性酸素種による心筋細胞障害から心筋細胞を保護するための請求項１〜１２のいずれか１項記載の保護剤。
【請求項１５】
活性酸素種がヒドロキシラジカルである請求項１４記載の保護剤。
【請求項１６】
下記式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心疾患の予防及び／又は治療剤。
2007029889.tif 000041
〔式中、Ｚは、次式：
2007029889.tif 000042
［式中、Ｑ１は、式
2007029889.tif 000043
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｘ２は式−Ｓ（Ｏ）ｍ−（式中、ｍは０、１または２の整数を意味する。）、酸素原子、カルボニル基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する。）
で表わされる基を意味する。
Ｑ２ａは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。］
で表わされる基を意味する。
Ｒ３ａはカルボニル基、メチレン基または単結合を意味する。
Ｒ３ｂは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、シアノ基または式−ＮＲ５ａＲ５ｂ（式中、Ｒ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。〕
【請求項１７】
Ｒ３ａがカルボニル基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項１８】
Ｒ３ｂが水酸基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項１９】
Ｑ２ａが水酸基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２０】
Ｑ１が、式−Ａ１−Ｓ（Ｏ）ｍ−Ｒ４ａ
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する；
ｍは０、１または２の整数を意味する。）
で表わされる基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２１】
Ｒ４ａが置換基を有していてもよいメチル基、置換基を有していてもよいエチル基、置換基を有していてもよいｎ−プロピル基または置換基を有していてもよいｉ−プロピル基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２２】
ｍが１である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２３】
Ａ１がメチレン基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２４】
Ａ１がＣ１−６アルキレン基または単結合であり、Ｒ４ａが水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ６−１４芳香族炭化水素環式基、５ないし１４員芳香族複素環式基、Ｃ１−６アルコキシ基または水酸基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２５】
Ｑ２ａが水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ２−７アシル基またはＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２６】
式（Ｉａ）で表される化合物がセロフェンド酸である請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２７】
式（Ｉａ）で表される化合物が、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルチオ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、メチル  ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オエイト、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフォニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５α−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６β−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β，１９−ジヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１７−メチルスルフィニル−１５−オキソ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−プロピルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、及びｅｎｔ−１７−アセチル−１５β−ヒドロキシ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッドからなる群から選ばれるいずれかのものである請求項１６記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２８】
心疾患が、心筋症、心不全、狭心症及び心筋梗塞からなる群から選ばれる少なくとも一つである請求項１６〜２７のいずれか１項記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項２９】
下記式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心虚血／再灌流障害の予防及び／又は治療剤。
2007029889.tif 000044
〔式中、Ｚは、次式：
2007029889.tif 000045
［式中、Ｑ１は、式
2007029889.tif 000046
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｘ１はハロゲン原子またはシアノ基を意味する；
Ｘ２は式−Ｓ（Ｏ）ｍ−（式中、ｍは０、１または２の整数を意味する。）、酸素原子、カルボニル基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する；
Ｒ４ｂおよびＲ４ｃはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）
で表わされる基を意味する。
Ｑ２ａは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニ基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。］
で表わされる基を意味する。
Ｒ３ａはカルボニル基、メチレン基または単結合を意味する。
Ｒ３ｂは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、シアノ基または式−ＮＲ５ａＲ５ｂ（式中、Ｒ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。〕
【請求項３０】
Ｒ３ａがカルボニル基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３１】
Ｒ３ｂが水酸基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３２】
Ｑ２ａが水酸基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３３】
Ｑ１が式−Ａ１−Ｓ（Ｏ）ｍ−Ｒ４ａ
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する；
ｍは０、１または２の整数を意味する。）
で表わされる基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３４】
Ｒ４ａが置換基を有していてもよいメチル基、置換基を有していてもよいエチル基、置換基を有していてもよいｎ−プロピル基または置換基を有していてもよいｉ−プロピル基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３５】
ｍが１である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３６】
Ａ１がメチレン基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３７】
Ａ１がＣ１−６アルキレン基または単結合であり、Ｒ４ａが水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ６−１４芳香族炭化水素環式基、５ないし１４員芳香族複素環式基、Ｃ１−６アルコキシ基または水酸基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３８】
Ｑ２ａが水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ２−７アシル基またはＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項３９】
式（Ｉａ）で表される化合物がセロフェンド酸である請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【請求項４０】
式（Ｉａ）で表される化合物が、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルチオ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、メチル  ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オエイト、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフォニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５α−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６β−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β，１９−ジヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１７−メチルスルフィニル−１５−オキソ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−プロピルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、及びｅｎｔ−１７−アセチル−１５β−ヒドロキシ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッドからなる群から選ばれるいずれかのものである請求項２９記載の予防及び／又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セロフェンド酸を含む、心筋細胞保護剤及び心疾患治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ミトコンドリアは、酸化的リン酸化によるＡＴＰの合成を主な機能とする細胞内小器官であり、心筋の虚血／再灌流などの各種のストレスにより生じる細胞死において重要な役割を果たす（１−３）。ミトコンドリア膜の透過性遷移孔（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｐｏｒｅ；ＭＰＴＰ）の開口、すなわちミトコンドリア膜外膜と内膜との間の接着部位における開口（非特異的孔）は、ミトコンドリア膜電位の喪失（ΔΨｍ）、マトリックスの腫脹、並びにチトクロムｃの遊離、及び細胞死につながるアポトーシス因子の遊離を引き起こす（４−６）。また、ミトコンドリアのマトリックスカルシウム（［Ｃａ２＋］ｍ）過負荷及び活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ；ＲＯＳ）は、ＭＰＴＰ開口を促進する（７）。従って、［Ｃａ２＋］ｍ過負荷及びＲＯＳ生成を抑制することにより、ＭＰＴＰ開口を阻害することは、虚血／再灌流障害から心臓を保護するための戦略として有効である。
本発明者は、ミトコンドリア内膜に存在するＡＴＰ−感受性カリウムチャネル（ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネル）が、心室筋細胞（８，９）及び小脳顆粒ニューロン（１０，１１）における酸化ストレスに対する保護のシグナリングカスケードの中心的役割を果たすことを示した。ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルは、［Ｃａ２＋］ｍ過負荷及びＲＯＳ生成を抑制し、これにより、両タイプの細胞におけるＭＰＴＰ開口を阻害する（１０，１２−１４）。
ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルの選択的オープナーであるジアゾキシドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ（１５，１６）及びｉｎ  ｖｉｖｏ（１７，１８）の両者において心筋の虚血／再灌流に対する保護効果を有することが示された。しかしながら、この薬剤は、副作用（例えば過度の血圧降下及び浮腫）のために臨床的使用が困難であった。
本発明者は、以前、ウシ胎児血清の親油性画分から「セロフェンド酸」（ｓｅｒｏｆｅｎｄｉｃ  ａｃｉｄ；ＳＦＡ）と呼ばれる神経保護物質を精製した（１９）。この化合物はジテルペノイド物質であり、分子量３８２Ｄａの内在性の低分子物質である。質量分析及び核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析により、セロフェンド酸の化学構造は、スルホキシド基内に逆の立体配置を有するエピマー混合物である、硫黄含有のアチサン型ジテルペノイド（１５−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−アチサン−１９−酸）であることが明らかとなっている（２３）。植物に含まれる天然のアチサン誘導体は報告されているが、セロフェンド酸は哺乳動物で見つかった最初のアチサン誘導体である。セロフェンド酸は、グルタミン酸、一酸化窒素及びＨ２Ｏ２の細胞障害性に対し、培養皮膚及び線条体ニューロンを保護する能力を有することが知られている（１９−２２）。また、合成セロフェンド酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＲＯＳの細胞毒性に対して神経細胞に強力な保護作用を示すことが知られている。
（文献）
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３．Ｗｅｉｓｓ  ＪＮ，Ｋｏｒｇｅ  Ｐ，Ｈｏｎｄａ  ＨＭ，Ｐｉｎｇ  Ｐ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００３；９３：２９２−３０１．
４．Ｃｒｏｍｐｔｏｎ  Ｍ．Ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｐｏｒｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．１９９９；３４１（Ｐｔ２）：２３３−４９．
５．Ｃｒｏｗ  ＭＴ，Ｍａｎｉ  Ｋ，Ｎａｍ  ＹＪ，Ｋｉｔｓｉｓ  ＲＮ．Ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｅａｔｈ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｃｙｔｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００４；９５：９５７−７０．
６．Ｈａｌｅｓｔｒａｐ  ＡＰ，Ｃｌａｒｋｅ  ＳＪ，Ｊａｖａｄｏｖ  ＳＡ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｐｏｒｅ  ｏｐｅｎｉｎｇ  ｄｕｒｉｎｇ  ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ−−ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．２００４；６１：３７２−８５．
７．Ｂｒｏｏｋｅｓ  ＰＳ，Ｙｏｏｎ  Ｙ，Ｒｏｂｏｔｈａｍ  ＪＬ，Ａｎｄｅｒｓ  ＭＷ，Ｓｈｅｕ  ＳＳ．Ｃａｌｃｉｕｍ，ＡＴＰ，ａｎｄ  ＲＯＳ：ａ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｌｏｖｅ−ｈａｔｅ  ｔｒｉａｎｇｌｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００４；２８７：Ｃ８１７−３３．
８．Ａｋａｏ  Ｍ，Ｏｈｌｅｒ  Ａ，Ｏ’Ｒｏｕｒｋｅ  Ｂ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｃｅｌｌｓ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００１；８８：１２６７−７５．
９．Ａｋａｏ  Ｍ，Ｔｅｓｈｉｍａ  Ｙ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｎｉｃｏｒａｎｄｉｌ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｃｙｔｅｓ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２００２；４０：８０３−１０．
１０．Ｔｅｓｈｉｍａ  Ｙ，Ａｋａｏ  Ｍ，Ｌｉ  ＲＡ，Ｃｈｏｎｇ  ＴＨ，Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ  ＷＡ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ＭＶ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ｇｒａｎｕｌｅ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ．Ｓｔｒｏｋｅ．２００３；３４：１７９６−８０２。
１１．Ｔｅｓｈｉｍａ  Ｙ，Ａｋａｏ  Ｍ，Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ  ＷＡ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ｎｉｃｏｒａｎｄｉｌ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．２００３；９９０：４５−５０．
１２．Ａｋａｏ  Ｍ，Ｏ’Ｒｏｕｒｋｅ  Ｂ，Ｋｕｓｕｏｋａ  Ｈ，Ｔｅｓｈｉｍａ  Ｙ，Ｊｏｎｅｓ  ＳＰ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｅａｔｈ  ｐａｔｈｗａｙ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００３；９２：１９５−２０２．
１３．Ａｋａｏ  Ｍ，Ｏ’Ｒｏｕｒｋｅ  Ｂ，Ｔｅｓｈｉｍａ  Ｙ，Ｓｅｈａｒａｓｅｙｏｎ  Ｊ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃａｌｌｙ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｓｔｅｐｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｄｅａｔｈ  ｐａｔｈｗａｙ  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｂｙ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｍｙｏｃｙｔｅｓ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００３；９２：１８６−９４．
１４．Ｍｕｒａｔａ  Ｍ，Ａｋａｏ  Ｍ，Ｏ’Ｒｏｕｒｋｅ  Ｂ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ａｔｔｅｎｕａｔｅ  ｍａｔｒｉｘ  Ｃａ２＋  ｏｖｅｒｌｏａｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｓｉｍｕｌａｔｅｄ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ａｎｄ  ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ：ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００１；８９：８９１−８．
１５．Ｇａｒｌｉｄ  ＫＤ，Ｐａｕｃｅｋ  Ｐ，Ｙａｒｏｖ−Ｙａｒｏｖｏｙ  Ｖ，Ｍｕｒｒａｙ  ＨＮ，Ｄａｒｂｅｎｚｉｏ  ＲＢ，Ｄ’Ａｌｏｎｚｏ  ＡＪ，Ｌｏｄｇｅ  ＮＪ，Ｓｍｉｔｈ  ＭＡ，Ｇｒｏｖｅｒ  ＧＪ．Ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｉａｚｏｘｉｄｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．１９９７；８１：１０７２−８２．
１６．Ｌｉｕ  Ｙ，Ｓａｔｏ  Ｔ，Ｏ’Ｒｏｕｒｋｅ  Ｂ，Ｍａｒｂａｎ  Ｅ．Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ：ｎｏｖｅｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ？  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９９８；９７：２４６３−９．
１７．Ｆｒｙｅｒ  ＲＭ，Ｅｅｌｌｓ  ＪＴ，Ｈｓｕ  ＡＫ，Ｈｅｎｒｙ  ＭＭ，Ｇｒｏｓｓ  ＧＪ．Ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｉｎ  ｒａｔｓ：ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＫＡＴＰ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｉｎ  ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０００；２７８：Ｈ３０５−１２．
１８．Ｍｉｕｒａ  Ｔ，Ｌｉｕ  Ｙ，Ｋｉｔａ  Ｈ，Ｏｇａｗａ  Ｔ，Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ  Ｋ．Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ＡＴＰ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｋ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ａｎｄ  ＰＫＣ  ｉｎ  ａｎｔｉ−ｉｎｆａｒｃｔ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ａｆｆｏｒｄｅｄ  ｂｙ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ａｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２０００；３５：２３８−４５．
１９．Ｋｕｍｅ  Ｔ，Ａｓａｉ  Ｎ，Ｎｉｓｈｉｋａｗａ  Ｈ，Ｍａｎｏ  Ｎ，Ｔｅｒａｕｃｈｉ  Ｔ，Ｔａｇｕｃｈｉ  Ｒ，Ｓｈｉｒａｋａｗａ  Ｈ，Ｏｓａｋａｄａ  Ｆ，Ｍｏｒｉ  Ｈ，Ａｓａｋａｗａ  Ｎ，Ｙｏｎａｇａ  Ｍ，Ｎｉｓｈｉｚａｗａ  Ｙ，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ  Ｈ，Ｓｈｉｍｏｈａｍａ  Ｓ，Ｋａｔｓｕｋｉ  Ｈ，Ｋａｎｅｋｏ  Ｓ，Ａｋａｉｋｅ  Ａ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｒｏｍ  ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆｓｅｒｕｍ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００２；９９：３２８８−９３．
２０．Ａｋａｉｋｅ  Ａ，Ｋａｔｓｕｋｉ  Ｈ，Ｋｕｍｅ  Ｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｓｅｒｏｆｅｎｄｉｃ  ａｃｉｄ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．２００３；７４：２６３−９．
２１．Ｔａｇｕｃｈｉ  Ｒ，Ｎｉｓｈｉｋａｗａ  Ｈ，Ｋｕｍｅ  Ｔ，Ｔｅｒａｕｃｈｉ  Ｔ，Ｋａｎｅｋｏ  Ｓ，Ｋａｔｓｕｋｉ  Ｈ，Ｙｏｎａｇａ  Ｍ，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ  Ｈ，Ａｋａｉｋｅ  Ａ．Ｓｅｒｏｆｅｎｄｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ａｃｕｔｅ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００３；４７７：１９５−２０３．
２２．Ｏｓａｋａｄａ  Ｆ，Ｋａｗａｔｏ  Ｙ，Ｋｕｍｅ  Ｔ，Ｋａｔｓｕｋｉ  Ｈ，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ  Ｈ，Ａｋａｉｋｅ  Ａ．Ｓｅｒｏｆｅｎｄｉｃ  ａｃｉｄ，ａ  ｓｕｌｆｕｒ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｆｅｔａｌ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ，ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｓｔｒｉａｔａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．２００４；３１１：５１−９．
２３．Ｔｅｒａｕｃｈｉ，Ｔ．，Ａｓａｉ，Ｎ．，Ｙｏｎａｇａ，Ｍ．，Ｍａｎｏ，Ｎ．，Ｋｕｍｅ，Ｔ．，Ａｋａｉｋｅ，Ａ．，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｏｆｅｎｄｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．４３，３６２５−３６２８，２００２
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、アチサン型ジテルペン化合物を含む、心筋細胞保護剤及び心疾患治療剤を提供することを目的とする。
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、セロフェンド酸が心機能不全に対して、および虚血−再灌流によって引き起こされる障害に対して保護効果を有することを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下の通りである。
（１）下記式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心筋細胞保護剤。
2007029889.tif 000002
〔式中、Ｚは、次式：
2007029889.tif 000003
［式中、Ｑ１は、式
2007029889.tif 000004
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｘ２は式−Ｓ（Ｏ）ｍ−（式中、ｍは０、１または２の整数を意味する。）、酸素原子、カルボニル基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する。）
で表わされる基を意味する。
Ｑ２ａは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。］
で表わされる基を意味する。
Ｒ３ａはカルボニル基、メチレン基または単結合を意味する。
Ｒ３ｂは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、シアノ基または式−ＮＲ５ａＲ５ｂ（式中、Ｒ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）
で表わされる基を意味する。〕
（２）上記式（Ｉａ）に示す化合物において、Ｒ３ａとしては例えばカルボニル基が挙げられ、Ｒ３ｂとしては例えばＣ１−６アルコキシ基又は水酸基が挙げられ、Ｑ２ａとしては例えばＣ１−６アルコキシ基又は水酸基が挙げられる。
さらに、本発明において、Ｑ１は式−Ａ１−Ｓ（Ｏ）ｍ−Ｒ４ａ
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する；
ｍは０、１または２の整数を意味する。）
で表わされる基であることが好ましく、このうちＲ４ａは、置換基を有していてもよいメチル基、置換基を有していてもよいエチル基、置換基を有していてもよいｎ−プロピル基または置換基を有していてもよいｉ−プロピル基であることが好ましい。
上記式（Ｉａ）において、ｍは例えば１であり、Ａ１はメチレン基である。
さらに、本発明において、Ａ１がＣ１−６アルキレン基または単結合であり、Ｒ４ａが水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ６−１４芳香族炭化水素環式基、５ないし１４員芳香族複素環式基、Ｃ１−６アルコキシ基または水酸基であってもよい。
さらに、本発明において、Ｑ２ａとしては例えば水素原子、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ２−７アシル基またはＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を挙げることができる。
上記保護剤は、心虚血／再灌流障害から心筋細胞を保護するために使用することができ、また、活性酸素種（例えばヒドロキシラジカル）による心筋細胞障害から心筋細胞を保護するために使用することができる。
上記式（Ｉａ）で表される化合物としては、例えばセロフェンド酸、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルチオ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、メチル  ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オエイト、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフォニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５α−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６β−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β，１９−ジヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１７−メチルスルフィニル−１５−オキソ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−プロピルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、及びｅｎｔ−１７−アセチル−１５β−ヒドロキシ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッドからなる群から選ばれるいずれかのものが挙げられる。本発明においては、セロフェンド酸が好ましい。
（３）さらに、本発明は、（１）に記載の式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心疾患の予防及び／又は治療剤である。上記式（Ｉａ）で表される化合物としては、例えばセロフェンド酸、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルチオ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、メチル  ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オエイト、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフォニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５α−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６β−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β，１９−ジヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１７−メチルスルフィニル−１５−オキソ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−プロピルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、及びｅｎｔ−１７−アセチル−１５β−ヒドロキシ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッドからなる群から選ばれるいずれかのものが挙げられる。本発明においては、セロフェンド酸が好ましい。
（４）さらに、本発明は、（１）に記載の式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心虚血／再灌流障害の予防及び／又は治療剤である。上記式（Ｉａ）で表される化合物としては、例えばセロフェンド酸、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルチオ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、メチル  ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オエイト、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフォニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５α−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６β−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β，１９−ジヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン、ｅｎｔ−１７−メチルスルフィニル−１５−オキソ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−プロピルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド、及びｅｎｔ−１７−アセチル−１５β−ヒドロキシ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッドからなる群から選ばれるいずれかのものが挙げられる。本発明においては、セロフェンド酸が好ましい。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、ＴＵＮＥＬ染色及びＤＡＰＩ染色並びにＭＴＳアッセイの結果を示す図である。
図２は、新生児ラット心筋細胞におけるミトコンドリア内膜電位（ΔΨｍ）を示す図である。
図３は、新生児ラット心筋細胞におけるΔΨｍ喪失の経時的解析結果を示す図である。
図４は、新生児ラット心筋細胞における細胞内ＲＯＳ産生の経時的解析結果を示す図である。
図５は、新生児ラット心筋細胞における細胞内［Ｃａ２＋］ｍの経時的解析結果を示す図である。
図６は、ＳＤ系雄性ラットにおける血圧の経時的変動を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
なお、本明細書において引用した文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、２００５年９月８日に出願された本願優先権主張の基礎となる日本国特許出願（特願２００５−２６０２０５号）の明細書に記載の内容を包含する。
本発明は、式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物（例えばセロフェンド酸（ＳＦＡ））を含む、心筋細胞保護剤、並びに虚血／再灌流障害及び心疾患治療剤の予防及び／又は治療剤である。
本発明者は、式（Ｉａ）で表される化合物（例えばＳＦＡ）が心筋虚血／再灌流障害に対して心保護効果を有するものと考え、ＳＦＡが新生児ラットの心筋細胞における酸化ストレスに対して保護効果を有するかどうかを検討した。その結果、新生児ラット初代培養心筋細胞をＨ２Ｏ２による酸化ストレス状態に曝露すると、細胞死が誘導され、そして、細胞をＳＦＡで前処置すると、ＴＵＮＥＬ染色及び生細胞定量アッセイによりＨ２Ｏ２処理後１６時間で細胞死を有意に抑制する知見を得た。
ミトコンドリア膜電位の喪失（ΔΨｍ）は、マトリックスへのカルシウムの過負荷及び活性酸素種によって引き起こされる細胞死におけるステップであるが、ＳＦＡは、濃度依存的にＨ２Ｏ２により誘導されたΔΨｍ喪失を妨げ、Ｈ２Ｏ２−誘導のマトリックスカルシウム過負荷及び活性酸素種の細胞内蓄積を著しく抑制した。さらに、本発明者は、このＳＦＡの保護効果は、ミトコンドリアのＡＴＰ−感受性カリウム（ｍｉｔｏＫＡＴＰ）チャネル開口物質（オープナー）であるジアゾキシドの保護効果と同等であることを見出した。ジアゾキシドは、血圧低下や浮腫などの副作用を引き起こすのに対し、ＳＦＡは血管平滑筋に作用せず、血圧低下は起こさないことから、ＳＦＡは新たな心筋細胞保護剤として有用であるといえる。
さらに、ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルブロッカーである５−ヒドロキシデカノエート（５−ＨＤ）は、ＳＦＡの保護効果を消失させた。ＳＦＡ及びジアゾキシドを併用しても、相加的な効果は示されなかった。したがって、ＳＦＡはオキシダント−誘導性のミトコンドリア死の経路を阻害し、この保護効果はｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルの活性化を経ているものと思われる。
本発明は、以上の知見に基づいて完成されたものである。
１．本発明において使用される化合物
本発明において使用される化合物は、例えば、下記式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はそれらの溶媒和物を例示することができる。
2007029889.tif 000005
〔式中、Ｚは、次式：
2007029889.tif 000006
［式中、Ｑ１は、式
2007029889.tif 000007
（式中、Ａ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味する；
Ｘ１はハロゲン原子またはシアノ基を意味する；
Ｘ２は式−Ｓ（Ｏ）ｍ−（式中、ｍは０、１または２の整数を意味する。）、酸素原子、カルボニル基または単結合を意味する；
Ｒ４ａは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または水酸基を意味する；
Ｒ４ｂおよびＲ４ｃはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）
で表わされる基を意味する。
Ｑ２ａは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。］
で表わされる基を意味する。
Ｒ３ａはカルボニル基、メチレン基または単結合を意味する。
Ｒ３ｂは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、シアノ基または式−ＮＲ５ａＲ５ｂ（式中、Ｒ５ａおよびＲ５ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。〕
なお、本明細書中においては、化合物の構造式が便宜上一定の異性体を表すことがあるが、本発明には化合物の構造上生ずる総ての幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体等の異性体および異性体混合物を含み、便宜上の式の記載に限定されるものではなく、いずれか一方の異性体でも混合物でもよい。従って、分子内に不斉炭素原子を有し光学活性体およびラセミ体が存在することがあり得るが、本発明においては特に限定されず、いずれの場合も含まれる。さらに結晶多形が存在することもあるが同様に限定されず、いずれかの結晶形単一または混合物であってもよく、また、無水物であっても水和物であってもどちらでもよい。
本明細書中において「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を意味し、具体的には例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｉ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、１−メチルプロピル基、１，２−ジメチルプロピル基、２−エチルプロピル基、１−メチル−２−エチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基等があげられる。
本明細書中において表わされる「Ｃ１−６アルキレン基」とは前記定義「Ｃ１−６アルキル基」からさらに水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、具体的には例えば、メチレン基、エチレン基、メチルエチレン基、プロピレン基、エチルエチレン基、１，１−ジメチルエチレン基、１，２−ジメチルエチレン基、トリメチレン基、１−メチルトリメチレン基、１−エチルトリメチレン基、２−メチルトリメチレン基、１，１−ジメチルトリメチレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基などが挙げられ、好ましくはメチレン基、１，２−エチレン基、１，３−プロピレン基などが挙げられ、より好ましくはメチレン基である。
本明細書中において「Ｃ２−６アルケニル基」とは、炭素数２〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基を意味し、具体的には例えばビニル基、アリル基、１−プロペニル基、イソプロペニル基、１−ブテン−１−イル基、１−ブテン−２−イル基、１−ブテン−３−イル基、２−ブテン−１−イル基、２−ブテン−２−イル基等があげられる。
本明細書中において「Ｃ２−６アルキニル基」とは、炭素数２〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキニル基を意味し、具体的には例えばエチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基等があげられる。
本明細書中において「Ｃ６−１４芳香族炭化水素環式基」とは、炭素数６〜１４個の芳香族環基をいい、具体的には例えば、フェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、ａｓ−インダセニル基、ｓ−インダセニル基、アセナフチレニル基などが挙げられ、好ましくはフェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基である。
本明細書中において「５ないし１４員芳香族複素環式基」とは、環式基の環を構成する原子の数が５〜１４であり、環式基の環を構成する原子の種類が炭素原子またはヘテロ原子である芳香族である環式基を意味し、具体的には例えばピリジン、チオフェン、フラン、ピロール、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、トリアゾール、ピラゾール、フラザン、チアジアゾール、オキサジアゾール、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、イソインドール、インダゾール、クロメン、キノリン、イソキノリン、シンノリン、キナゾリン、キノキサリン、ナフチリジン、フタラジン、プリン、プテリジン、チエノフラン、イミダゾチアゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンズオキサゾール、ベンズチアゾール、ベンズチアジアゾール、ベンズイミダゾール、イミダゾピリジン、ピロロピリジン、ピロロピリミジン、ピリドピリミジンなどが挙げられる。
本明細書中において「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数３〜８個の環状の脂肪族炭化水素基を意味し、具体的には例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロプロペニル基、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基などが挙げられる。
本明細書中において「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を意味する。
本明細書中において「Ｃ１−６アルコキシ基」とは前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」が結合したオキシ基であることを意味し、具体的には、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、ｉ−ペンチルオキシ基、ｓｅｃ−ペンチルオキシ基、ｔ−ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−メチルブトキシ基、２−メチルブトキシ基、１，１−ジメチルプロポキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、ｉ−ヘキシルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、１−エチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、１，１，２−トリメチルプロポキシ基、１，２，２−トリメチルプロポキシ基、１−エチル−１−メチルプロポキシ基、１−エチル−２−メチルプロポキシ基などが挙げられる。
本明細書中において「Ｃ２−７アシル基」とは前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」が結合したカルボニル基を意味し、具体的には例えばアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基などの基が挙げられる。
本明細書中において「Ｃ１−６アルコキシカルボニル基」とは前記定義の「Ｃ１−６アルコキシ基」が結合したカルボニル基を意味し、具体的にはメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基、ｉ−プロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、ｉ−ブトキシカルボニル基、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基などが挙げられる。
本明細書中において「Ｃ１−６アルキルスルホニル基」とは前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」が結合したスルホニル基を意味し、具体的には例えばメチルスルホニル基、プロピルスルホニル基などの基が挙げられる。
本明細書中において表される「置換基を有していてもよい」とは、「置換可能な部位に、任意に組み合わせて１または複数個の置換基を有してもよい」と同意義である。当該置換基とは具体的には例えば、
（１）ハロゲン原子、
（２）水酸基、
（３）チオール基、
（４）ニトロ基、
（５）ニトリル基、
（６）オキソ基、
（７）アジド基、
（８）グアニジノ基、
（９）ヒドラジノ基、
（１０）イソシアノ基、
（１１）シアネート基、
（１２）イソシアネート基、
（１３）チオシアネート基、
（１４）イソチオシアネート基、
（１５）ニトロソ基、
（１６）カルバミド基
（１７）ホルミル基、
（１８）Ｃ１−６イミドイル基、
（１９）それぞれ１〜３個のハロゲン原子または水酸基で置換されていてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ２−６アルキニルオキシ基、Ｃ３−６シクロアルキルオキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ２−６アルケニルチオ基、Ｃ２−６アルキニルチオ基、Ｃ３−６シクロアルキルチオ基、またはＣ１−６アルキレンジオキシ基、
（２０）Ｃ６−１４アリール基、
（２１）５ないし１４員複素環式基、
（２２）カルボキシル基、
（２３）トリフルオロメチル基、
（２４）Ｃ６−１４アリールＣ１−６アルキル基、
（２５）５ないし１４員複素環Ｃ１−６アルキル基、
（２６）Ｃ１−６アルキルカルバモイル基、
（２７）Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、
（２８）Ｃ１−６アルキルカルボニル基、
（２９）Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、
（３０）Ｃ１−６アルキルスルホニル基；
（３１）Ｃ１−６アルキルスルフィニル基；
などの置換基をあげることができ、当該置換基において、好ましくは、
（１）ハロゲン原子、
（２）水酸基、
（５）ニトリル基、
（１６）カルバミド基
（１９）それぞれ１〜３個のハロゲン原子または水酸基で置換されていてもよい、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ３−６シクロアルキルオキシ基、
（２０）Ｃ６−１４アリール基、
（２１）５ないし１４員複素環式基、
（２２）カルボキシル基、
（２３）トリフルオロメチル基、
（２４）Ｃ６−１４アリールＣ１−６アルキル基、
（２５）５ないし１４員複素環Ｃ１−６アルキル基、
（２６）Ｃ１−６アルキルカルバモイル基、
（２７）Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、
（２８）Ｃ１−６アルキルカルボニル基、
（２９）Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、
（３０）Ｃ１−６アルキルスルホニル基；
（３１）Ｃ１−６アルキルスルフィニル基；
などの置換基をあげることができ、さらに、好ましくは、
（１ａ）ハロゲン原子、
（２ａ）水酸基、
（３ａ）ニトリル基、
（４ａ）Ｃ１−６アルキル基、
（５ａ）Ｃ３−８シクロアルキル基、
（６ａ）Ｃ１−６アルコキシ基、
（７ａ）フェニル基、
（８ａ）カルボキシル基、
（９ａ）Ｃ１−６アルキルカルボニル基、
（１０ａ）Ｃ１−６アルキルスルホニル基、
などの置換基をあげることができる。
Ｚは２から３個の炭素原子を含有する２価の有機基を意味する。ただしＺは式
2007029889.tif 000008
（式中、Ａ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃはそれぞれ前記定義と同意義を意味する。）で表される基、あるいはこれらの組み合わせから選ばれる２個の基を有する。
この「２から３個の炭素原子からなる２価の有機基」とは、カルボニル基として酸素原子１個を含んでもよく、Ｚ中で環の構成に関与する原子がメチレン基、メチン基、炭素原子またはカルボニル基であり、かつ２から３個の炭素原子からなる２価の有機基を意味し、具体的には例えば式
2007029889.tif 000009
で表わされる基を意味する。
この「２から３個の炭素原子からなる２価の有機基」としては好ましくは１，２−エチレン基、１，２−ビニレン基、エタノン−１，２−イレン基または１−プロペン−２、３−イレン基などがあげられ、より好ましくは式
2007029889.tif 000010
で表わされる基があげられ、さらに好ましくは式
2007029889.tif 000011
で表わされる基があげられ、もっとも好ましくは式
2007029889.tif 000012
で表わされる基があげられる。
式
2007029889.tif 000013
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）とは、式
2007029889.tif 000014
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）からなる群から選ばれる基の１から４個を任意の比で含む基であることを意味し、好ましくは前記（Ｑ−１ａ）、（Ｑ−１ｂ）、（Ｑ−１ｃ）または（Ｑ−１ｄ）で表わされる基である。
式
2007029889.tif 000015
（式中Ｑ１は前記定義と同意義を意味する。）とは、式
2007029889.tif 000016
（式中Ｑ１は前記定義と同意義を意味する。）からなる群から選ばれる基の１から２個を任意の比で含む基であることを意味し、好ましくは前記（Ｑ−２ａ）または（Ｑ−２ｂ）で表わされる基を意味し、より好ましくは前記（Ｑ−２ａ）で表わされる基を意味し、さらに好ましくは前記（Ｑ−２ｂ）で表わされる基である。
式
2007029889.tif 000017
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）とは式
2007029889.tif 000018
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）からなる群から選ばれる基の１から２個を任意の比で含む基であることを意味し、好ましくは前記（Ｑ−３ａ）または（Ｑ−３ｂ）で表わされる基を意味し、より好ましくは前記（Ｑ−３ａ）で表わされる基を意味し、さらに好ましくは前記（Ｑ−３ｂ）で表わされる基である。
前記化合物（Ｉａ）中、Ｚが式
2007029889.tif 000019
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基であるとは、前記化合物（Ｉａ）が、式
2007029889.tif 000020
（式中、Ｑ１、Ｑ２、Ｒ３ａ、Ｒ３ｂは前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味する。
Ｚは好ましくは、式
2007029889.tif 000021
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味し、より好ましくは式
2007029889.tif 000022
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味し、さらに好ましくは式
2007029889.tif 000023
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味し、もっとも好ましくは式
2007029889.tif 000024
（式中Ｑ１、Ｑ２は前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味する。
式−Ｒ３ａ−Ｒ３ｂは、前記定義の基を意味するが、好ましくはカルボキシル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキル基、シアノ基、式−ＣＯ−ＮＲ５ａＲ５ｂ（式中、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは前記定義と同意義を意味する。）または式−ＣＨ２−Ｒ３０ｂ（式中、Ｒ３０ｂはＣ１−６アルコキシ基またはハロゲン原子を意味する。）で表わされる基を意味し、より好ましくは、カルボキシル基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキル基、シアノ基、式−ＣＯ−ＮＲ５ａＲ５ｂ（式中、Ｒ５ａおよびＲ５ｂは前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基があげられ、さらに好ましくは、カルボキシル基、メトキシカルボニル基、メチル基またはシアノ基があげられ、もっとも好ましくは、カルボキシル基があげられる。
Ｑ２は前記定義の基を意味するが、好ましくは水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基、ハロゲン原子または式−ＮＲ４ｂＲ４ｃ（式中、Ｒ４ｂおよびＲ４ｃは前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味し、より好ましくは水酸基、ハロゲン原子または−ＮＨ２があげられ、さらに好ましくは水酸基である。
Ｑ２ａは水素原子、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味する。
このＱ２ａは好ましくは、ハロゲン原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、水酸基、または式−ＮＲ６ａＲ６ｂ（式中、Ｒ６ａおよびＲ６ｂはそれぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味する。）で表わされる基を意味し、より好ましくは、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基、水酸基、または−ＮＨ２を意味し、さらに好ましくは水酸基を意味する。
Ｑ２ｂは水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味し、好ましくは水素原子またはメチル基を意味し、より好ましくは水素原子を意味する。
Ｑ１は式−Ａ１０−Ｘ１０（式中、Ａ１０は、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基または単結合を意味し、Ｘ１０は−Ｘ１、−Ｘ２−Ｒ４ａまたは−Ｘ２−ＮＲ４ｂＲ４ｃ（各式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、Ｒ４ｃは前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味する。
Ａ１０として好ましくはＣ１−６アルキレン基または単結合があげられ、より好ましくは，式−（ＣＨ２）ｓ−（式中、ｓは０から６の整数を意味する。）で表わされる基があげられ、さらに好ましくは単結合、メチレン基またはエチレン基があげられ、もっとも好ましくはメチレン基である。
Ｘ１０として好ましくは、ハロゲン原子、シアノ基、式
2007029889.tif 000025
（式中、ｍ、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、Ｒ４ｃは前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味し、より好ましくは
2007029889.tif 000026
（式中、ｍ、Ｒ４ａ、Ｒ４ｂ、Ｒ４ｃは前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味し、さらに好ましくは−Ｓ（Ｏ）−Ｒ４ａ（式中、Ｒ４ｂは前記定義と同意義を意味する。）で表わされる基を意味する。
Ｒ４ａは前記定義の基を意味するが、好ましくは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基または置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基を意味し、より好ましくは、水素原子、Ｃ１−６アルキル基またはＣ６−１４芳香族炭化水素環式基を意味し、さらに好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基またはｉ−プロピル基を意味し、もっとも好ましくはメチル基である。
Ｒ４ｂおよびＲ４ｃは前記定義の基を意味するが、好ましくは水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１４芳香族炭化水素環式基、置換基を有していてもよい５ないし１４員芳香族複素環式基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルスルホニル基を意味し、より好ましくは、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ６−１４芳香族炭化水素環式基、Ｃ２−７アシル基またはＣ１−６アルキルスルホニル基を意味し、さらに好ましくは、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルキルスルホニル基を意味し、もっとも好ましくは水素原子、メチル基またはエチル基を意味する。
式（Ｉａ）に示す化合物は、国際公開第０２／０８８０６１号パンフレットに記載の方法（例えば「製造方法Ａ」〜「製造方法Ｇ」のいずれかの方法、あるいは実施例に記載の方法）により、化学合成することができる。
本発明においては、上記式（Ｉａ）に記載の化合物のうち、セロフェンド酸（式Ｉ）、及び式（ＩＩ）〜（Ｘ）で表される化合物から選ばれるいずれかのものを使用することが好ましい。セロフェンド酸（式Ｉ）、及び式（ＩＩ）〜（Ｘ）で表される化合物の構造式を以下に示す。
セロフェンド酸
2007029889.tif 000027
ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルチオ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド
2007029889.tif 000028
メチル  ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オエイト
2007029889.tif 000029
ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフォニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド
2007029889.tif 000030
ｅｎｔ−１５α−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６β−アチサン−１９−オイック  アシッド
2007029889.tif 000031
ｅｎｔ−１５β，１９−ジヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン
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ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−メチルスルフィニル−１６α−アチサン
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ｅｎｔ−１７−メチルスルフィニル−１５−オキソ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド
2007029889.tif 000034
ｅｎｔ−１５β−ヒドロキシ−１７−プロピルスルフィニル−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド
2007029889.tif 000035
ｅｎｔ−１７−アセチル−１５β−ヒドロキシ−１６α−アチサン−１９−オイック  アシッド
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上記式（ＩＩ）〜（Ｘ）で表される化合物は、国際公開第０２／０８８０６１号パンフレットに記載の方法（それぞれ、実施例５、実施例８、実施例９、実施例１２、実施例２２、実施例３８、実施例５６実施例、実施例６３又は実施例１００に記載の方法）により、化学合成することができる。
２．セロフェンド酸
本発明においては、上記化合物のうち、セロフェンド酸が好ましく用いられる。セロフェンド酸は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、培養大脳皮質ニューロンにおけるグルタミン酸神経毒性及びＮＯ神経毒性に対して著明な保護作用を発現する。セロフェンド酸は、ＮＯラジカルとは直接の反応を示さないが、ＮＯ神経毒性のカスケードにおいて細胞毒性発現の実行分子として知られるヒドロキシラジカル（ＯＨ・）の生成を抑制する。つまり、セロフェンド酸は、フリーラジカル誘発障害を減弱することにより、中枢神経系のニューロン生存を促進する低分子量生理活性物質であるといえる。さらに、セロフェンド酸は、ヒドロキシラジカルという活性酸素種の中では最も反応性の高い分子の生成を抑制することから、活性酸素の細胞障害が関与する難治性疾患や炎症性疾患に対する作用も期待される。そして、本発明により、活性酸素による心筋細胞障害に対するセロフェンド酸の保護作用が明らかとなった。
本発明のセロフェンド酸は、下記式（Ｉ）で表される分子量３８２のジテルペノイド物質である。
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セロフェンド酸は、マス・スペクトリー及びＮＭＲの解析から、その化学構造には硫黄分子が含まれ、基本骨格がアチサンと呼ばれる環状ジテルペンであり、側鎖にジメチルスルホキシド基、カルボキシル基などを持ち、スルホキシド基内に逆の立体配置を有する異性体（エピマー）混合物であることが明らかとなっている（国際公開第０２／０８８０６１号パンフレット又はＴｅｒａｕｃｈｉ，Ｔ．，Ａｓａｉ，Ｎ．，Ｙｏｎａｇａ，Ｍ．，Ｍａｎｏ，Ｎ．，Ｋｕｍｅ，Ｔ．，Ａｋａｉｋｅ，Ａ．，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｏｆｅｎｄｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．４３，３６２５−３６２８，２００２）。その化学構造（ｅｎｔ−１５β−ｈｙｄｒｏｘｙ−１７−ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｉｎｙｌ−１６α−ａｔｉｓａｎ−１９−ｏｉｃ  ａｃｉｄ又は１５−ｈｙｄｒｏｘｙ−１７−ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｉｎｙｌａｔｉｓａｎ−１９−ｏｉｃ  ａｃｉｄ）は、これまでに類のない独自のものである。本発明においては、このようなスルホキシド基を持つアチサン型ジテルペンを、本発明の心筋細胞保護剤及び心疾患治療剤として使用することができる。
本発明において、セロフェンド酸は、生体試料（例えば血清）から抽出したものでも、化学合成したものでもよい。例えば、セロフェンド酸の血清からの抽出は、ＫｕｍｅＴらの方法により行うことができ（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００２；９９：３２８８−９３）、セロフェンド酸の化学合成は、国際公開第０２／０８８０６１号パンフレット又はＴｅｒａｕｃｈｉ，Ｔ．，Ａｓａｉ，Ｎ．，Ｙｏｎａｇａ，Ｍ．，Ｍａｎｏ，Ｎ．，Ｋｕｍｅ，Ｔ，，Ａｋａｉｋｅ，Ａ．，Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｏｆｅｎｄｉｃ  ａｃｉｄｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．４３，３６２５−３６２８，２００２に記載の方法で、公知の化合物などを原料として用いて合成することができる。
３．薬学的に許容可能な塩及び溶媒和物
本発明においては、式（Ｉａ）で表される化合物（例えばセロフェンド酸）の任意の薬学的に許容可能な塩の使用を含むものとする。「薬学的に許容可能な塩」としては、特に限定されないが、例えばハロゲン化水素酸塩（例えばフッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩等）、無機酸塩（例えば硫酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、炭酸塩、重炭酸塩等）、有機カルボン酸塩（例えば酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩等）、有機スルホン酸塩（例えばメタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩等）、アミノ酸塩（例えばアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等）、四級アミン塩、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えばマグネシウム塩、カルシウム塩等）等を挙げることができる。
本発明において式（Ｉａ）で表される化合物又はその薬学的に許容可能な塩は、無水物であってもよく、水和物などの溶媒和物を形成していてもよい。溶媒和物は水和物、非水和物のいずれであってもよいが、水和物が好ましい。非水和物としては、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール）、ジメチルホルムアミドなどを使用することができる。
４．心筋保護作用
本発明において「虚血／再灌流」とは、血流が一時停止し、その後再開通することをいう。虚血／再灌流は、狭心症や心筋梗塞のように血流の低下や途絶が起きたとき、手術時に血流を一度止めて施術した後に血流を再び戻すとき、心臓や腎臓の機能が低下しているとき、薬物による副作用、細菌感染によるショック症状を誘発しているときなどに起こりやすい。
本発明において「虚血／再灌流障害」とは、血液が再灌流するときに、活性酸素種が発生し、その活性酸素種によって血管や組織が受ける障害をいう。
本発明において「活性酸素種」としては、ヒドロキシラジカルや、スーパーオキシドラジカル、オゾン、過酸化脂質等を挙げることができる。なお、活性酸素種は、狭心症や心筋梗塞のとき、手術や貧血などで一時的に血流が止まったとき、スポーツをしたとき、強い紫外線や放射線を浴びたとき、ストレスがかかったとき、細菌感染の際などに体内に発生するといわれている。
本発明において「虚血／再灌流障害保護」とは、虚血／再灌流により生じる障害から細胞を守ることを意味する。虚血／再灌流により心臓ではヒドロキシラジカルや、スーパーオキシドラジカルが特異的に発現することが知られているが、本発明のセロフェンド酸は、このヒドロキシラジカルや、スーパーオキシドラジカルの発現を抑制し、虚血／再灌流で誘導される活性酸素種による細胞障害から細胞を保護すると考えられる。
本発明において、心筋細胞への保護作用は、各種染色法による形態観察、セルソーターによる解析によって評価することができる。染色法としては、例えばＴＵＮＥＬ染色、ＤＡＰＩ染色、ＴＭＲＥ蛍光染色、ＤＣＦ蛍光染色、Ｒｈｏｄ−２蛍光染色などが挙げられるが（詳細は実施例参照）、これらに限定されるものではない。
本発明において、ＳＦＡの心筋細胞保護作用に関する主要な知見は以下の通りである。
（１）単離した心筋細胞において、ＳＦＡは、ΔΨｍのレベルを保持することにより濃度依存的に、Ｈ２Ｏ２により誘導された細胞死を抑制した。ミトコンドリアの生存は、［Ｃａ２＋］ｍ過負荷やＲＯＳ蓄積を部分的に阻害することによって達成される。従って、ＳＦＡを含む式（Ｉａ）に示す化合物は、ＳＦＡと共通しＲＯＳを抑制するため、心筋細胞を保護することができるといえる。
（２）ＳＦＡ及びｍｉｔｏＫＡＴＰオープナーは類似した保護効果を示した。これに対し、ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルブロッカーである５−ＨＤは、ＳＦＡの保護効果を消失させた。これらの結果は、ＳＦＡがｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルに対して直接作用するか、又は保護効果成立のシグナルカスケードのうちｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルより上流のいずれかに作用することを示すものである。
本発明者は、以前のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの研究において、ＳＦＡが神経保護効果を持つことを示したが、これは培養皮質ニューロンにおいては急性グルタミン酸神経毒性の抑制（Ｔａｇｕｃｈｉ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００３；４７７：１９５−２０３．）、そして培養線条体ニューロンにおいてはＲＯＳ−誘導酸化ストレスの減弱（Ｏｓａｋａｄａ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．２００４；３１１：５１−９．）によるものである。ＳＦＡ化合物は、電子スピン共鳴解析においてヒドロキシルラジカル捕捉活性を示したことから（Ｋｕｍｅ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２００２；９９：３２８８−９３．）、細胞内ＲＯＳの抑制は、ＳＦＡの神経保護作用の重要なメカニズムを構成すると言える。
最近の研究では、ＲＯＳ生成及び［Ｃａ２＋］ｍ過負荷は、心臓の虚血／再灌流障害の病因論を説明するために提案されている事項である（Ｗｅｉｓｓ  ＪＮ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００３；９３：２９２−３０１；Ｇｒｉｅｎｄｌｉｎｇ  ＫＫ，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＷ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９９７；９６：３２６４−５．）。ＲＯＳ及び［Ｃａ２＋］ｍは、ＭＰＴＰ開口の最も重要な誘導因子である。本発明者は、ＳＦＡがＭＰＴＰ開口を抑制し、部分的に［Ｃａ２＋］ｍ及びＲＯＳの増加を抑制することを見出した。
最近、本発明者は、酸化ストレスによる心筋細胞の変化は、定型的なステップを経て進行することを報告した（Ａｋａｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００３；９２：１８６−９４．）。この変化は、まず「プライミング」と呼ばれる相から始まる。プライミングの間にはミトコンドリアは［Ｃａ２＋］ｍ−依存性形態変化を起こしているが、ΔΨｍは無変化のままである。次に、ＭＰＴＰの開口によっておこるΔΨｍの突然の消失が続き（「脱分極」相）、最後に、細胞は小断片に破壊される（「断片化」相）。
ＳＦＡは、細胞がプライミングを受けることを著しく抑制し、［Ｃａ２＋］ｍ過負荷は減弱され、その結果、多数のミトコンドリアが十分にΔΨｍを維持した。ＳＦＡはΔΨｍの脱分極を受ける細胞の数を減少させるだけでなく、ΔΨｍ喪失の開始を遅延させることにより、心筋細胞に対する保護作用を発揮する。ＳＦＡの心筋細胞保護作用が直接的又は間接的にｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルによって媒介されるという点では、ＳＦＡの作用は、ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルオープナーであるジアゾキシドの作用と同じであると言える（Ａｋａｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００３；９２：１９５−２０２．）。
５．心筋細胞保護剤並びに心疾患の予防及び／又は治療剤
本発明の心筋細胞保護剤並びに心疾患の予防及び／又は治療剤は、心虚血／再灌流障害の治療、及び活性酸素種による心筋細胞障害の保護を目的として使用することができる。また、本発明の心筋細胞保護剤並びに心疾患の予防及び／又は治療剤は、例えば心筋症、心不全、狭心症、心筋梗塞などの循環器系疾患に適用することができる。
「予防及び／又は治療」とは、一般的に、所望の薬理学的効果及び／又は生理学的効果を得ることを意味する。効果は、疾病及び／又は症状を完全に又は部分的に防止する点では予防的であり、疾病及び／又は疾病に起因する悪影響の部分的又は完全な治癒という点では治療的である。本明細書において「治療」とは、患者哺乳動物、特にヒトの疾病の任意の治療を意味し、上記一般的治療の意味も包含する。「治療」には、例えば以下の（ａ）〜（ｃ）の事項を含む：
（ａ）疾病又は症状の素因を持ちうるが、まだ持っていると診断されていない患者において、疾病又は症状が起こることを予防すること；
（ｂ）疾病症状を阻害する、即ち、その進行を阻止又は遅延すること；
（ｃ）疾病症状を緩和すること、即ち、疾病又は症状の後退、消失、又は症状の進行の逆転を引き起こすこと。
心筋症としては、例えば拡張型心筋症、肥大型閉塞性心筋症、肥大型非閉塞性心筋症、特発性心筋症、収縮性心筋症、糖尿病性心筋症などが挙げられる。
心不全としては、例えば慢性心不全、慢性うっ血性心不全、急性うっ血性心不全、急性心不全、心代償不全、左心不全、うっ血性心不全、急性うっ血性心不全、代謝性心不全、拡張型心不全、高拍出性心不全、低拍出性心不全、難治性心不全、心筋梗塞予後心不全などが挙げられる。
本発明は、本発明の予防及び／又は治療剤としての式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物をヒトに投与することを特徴とする、心疾患の治療方法、並びに心虚血／再灌流障害の予防及び／又は治療方法も提供する。式（Ｉａ）で表される化合物（好ましくはセロフェンド酸）を心筋細胞障害保護剤として使用すると、活性酸素種による細胞障害が保護される。
また、式（Ｉａ）で表される化合物は、薬学的に許容可能な塩、エステルを形成していてもよい。上記化合物は、精製された成分のみを含むものに限定されず、粗精製物であってもよい。
式（Ｉａ）で表される化合物（例えばセロフェンド酸）、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物は、ヒト又は非ヒト哺乳動物に、種々の形態、経口又は非経口（例えば静脈注射、筋肉注射、皮下投与、直腸投与、経皮投与）のいずれかの投与経路で投与することができる。式（Ｉａ）で表される化合物（例えばセロフェンド酸）、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物は、単独で用いることも可能であるが、投与経路に応じて慣用される方法により医薬用担体を用いて適当な剤形に製剤化することが可能である。
好ましい剤形としては、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、被覆錠剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤等による経口剤、吸入剤、坐剤、注射剤（点滴剤を含む）、軟膏剤、点眼剤、眼軟膏剤、点鼻剤、点耳剤、貼付剤、パップ剤、ローション剤、リポソーム剤等による非経口剤が挙げられる。
これらの製剤の製剤化に用いる担体には、例えば通常用いられる溶剤、賦形剤、コーティング剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤や、必要により安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤、増量剤、湿潤化剤、表面活性化剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、懸濁化剤、粘稠剤、無痛化剤、等張化剤等を使用することができ、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分を配合して常法により製剤化することが可能である。使用可能な無毒性のこれらの成分としては、例えば大豆油、牛脂、合成グリセライド等の動植物油；例えば流動パラフィン、スクワラン、固形パラフィン等の炭化水素；例えばミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル等のエステル油；例えばセトステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール；シリコン樹脂；シリコン油；例えばポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー等の界面活性剤；例えばヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース等の水溶性高分子；例えばエタノール、イソプロパノール等の低級アルコール；例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトール、ポリエチレングリコール等の多価アルコール（ポリオール）；例えばグルコース、ショ糖等の糖；例えば無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウム等の無機粉体；塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムなどの無機塩；精製水等が挙げられる。
賦形剤としては、例えば乳糖、果糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素等が、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリプロピレングリコール・ポリオキシエチレン・ブロックコポリマー、メグルミン等が、崩壊剤としては、例えば澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、カルボキシメチルセルロース・カルシウム等が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末等が、ぞれぞれ用いられる。上記の成分は、その塩又はその溶媒和物であってもよい。
例えば経口製剤は、式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物に賦形剤、さらに必要に応じて例えば結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤等を加えた後、常法により例えば散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤等とする。
錠剤・顆粒剤の場合には、カルナウバロウ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、ヒドロキシプロピルメチルフタレート、セルロースアセテートフタレート、白糖、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、リン酸カルシウムのようなコーティング剤を用い、周知の方法でコーティングしてもよい。
シロップ剤製造に用いられる担体の具体例としては、白糖、ブドウ糖、果糖等の甘味剤、アラビアゴム、トラガント、カルメロースナトリウム、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、結晶セルロース、ビーガム等の懸濁化剤、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリソルベート８０等の分散剤が挙げられる。シロップ剤製造にあたっては、必要に応じて矯味剤、芳香剤、保存剤、溶解補助剤、安定化剤等を添加することができる。また、用時溶解又は懸濁するドライシロップの形であってもよい。
注射剤は、通常、例えば、式（Ｉａ）で表される化合物の薬学的に許容可能な塩を注射用蒸留水に溶解して調製するが、必要に応じて溶解補助剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、無痛化剤、保存剤、安定化剤等を添加し、常法により製剤化することができる。
注射剤の無菌化は、フィルターによる濾過滅菌、殺菌剤の配合などにより行えばよい。また、注射剤は、用時調製の形態として製造することができる。すなわち、凍結乾燥法などによって無菌の固体組成物とし、使用前に無菌の注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解して使用することができる。注射手法としては、例えば点滴静脈内注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、皮内注射が挙げられる。また、その投与量は、投与対象の年齢、投与経路、投与回数により異なり、広範囲に変えることができる。
外用剤の場合は、特に製法が限定されず、常法により製造することができる。使用する基剤原料としては、医薬品、医薬部外品、化粧品等に通常使用される各種原料を用いることが可能であり、例えば動植物油、鉱物油、エステル油、ワックス類、高級アルコール類、脂肪酸類、シリコン油、界面活性剤、リン脂質類、アルコール類、多価アルコール類、水溶性高分子類、粘土鉱物類、精製水等の原料が挙げられ、必要に応じ、ｐＨ調整剤、抗酸化剤、キレート剤、防腐防黴剤、着色料、香料等を添加することができる。吸入剤は、吸入による投与のために、式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物は、注入器、噴霧器もしくは加圧パック又はエアロゾルスプレーを送達する他の都合のよい様式から送達することができる。加圧パックは、適当な噴射剤を含むことができる。また、吸入による投与のために、式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物は、乾燥粉末組成物の形又は液体スプレーの形態で投与することもできる。貼布剤として経皮吸収により投与する場合には、塩を形成しない、いわゆるフリー体を選択することが好ましい。表皮への局所投与のために、式（Ｉａ）で表される化合物は、軟膏、クリームもしくはローションとして、又は経皮パッチのための活性成分として製剤化することができる。軟膏及びクリームは、例えば、水性又は油性基剤に適当な増粘及び／又はゲル化剤を加えて製剤化することができる。ローションは水性又は油性基剤を用いて製剤化することができ、また一般には１つ又は複数の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、及び／又は着色剤を含むこともできる。式（Ｉａ）で表される化合物はイオン浸透療法によって投与することもできる。
さらに、必要に応じて血流促進剤、殺菌剤、消炎剤、細胞賦活剤、ビタミン類、アミノ酸、保湿剤、角質溶解剤等の成分を配合することもできる。この時の有効成分の担体に対する割合は、１〜９０重量％の間で変動され得る。
本発明の方法に使用される心筋細胞保護剤及び心疾患治療剤は、通常、活性成分として式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を０．５重量％以上、好ましくは１０〜７０重量％の割合で含有することができる。
式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を前記治療に使用する場合は、少なくとも９０％以上、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上に精製されたものを使用するのが好ましい。
経口投与における式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物の投与量は、例えば投与経路、疾患の種類、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、塩の種類、疾患の具体的な種類、薬物動態及び毒物学的特徴などの薬理学的知見、薬物送達系が用いられるかどうか、ならびに他の薬物の組合せの一部として投与されるかどうかを含む様々な因子に従って選択されるため変動するが、当業者であれば適宜設定することができる。例えば、成人（体重６０ｋｇ）１人あたり、約０．０３〜１０００ｍｇ／日、好ましくは約０．１〜５００ｍｇ／日、より好ましくは約０．１〜１００ｍｇ／日であり、一日あたり１回又は数回に分けて投与することができる。但し、この範囲に限定されるものではない。小児に投与される場合は、用量は成人に投与される量よりも少ない可能性がある。
非経口投与において、貼布剤の場合、好ましい投与量としては、成人（体重６０ｋｇ）１人あたり、約５〜５０ｍｇ／日であり、さらに好ましくは約１０〜２０ｍｇ／日である。また、注射剤の場合には、生理食塩水又は市販の注射用蒸留水などの薬理学的に許容できる担体中に約０．１μｇ／ｍｌ担体〜約１０ｍｇ／ｍｌ担体の濃度となるように溶解又は懸濁することにより製造することができる。このようにして製造された注射剤の投与量は、処置を必要とする患者に対し、成人（体重６０ｋｇ）１人あたり、約０．０６〜１８０ｍｇ／日であり、好ましくは約０．１８〜６０ｍｇ／日であり、一日あたり１回又は数回に分けて投与することができる。小児に投与される場合は、用量は成人に投与される量よりも少ない可能性がある。
実際に用いられる投与法は、大幅に変動することもあり、本明細書に記載の好ましい投与法から逸脱してもよい。
また、式（Ｉａ）で表される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物は、他の心疾患の治療剤、又は活性酸素種による細胞障害の保護を目的とした医薬組成物と併用することも可能である。
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例により限定されるものではない。
【実施例１】
【０００６】
１．材料及び方法
（１）新生児ラット心室筋細胞の初代培養
心室筋細胞は、１−２日齢Ｗｉｓｔｅｒラットから調製し、公知方法に準じて培養した（Ａｋａｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００１；８８：１２６７−７５．）。すなわち、心臓を取り出し、心室を小断片に細切し、トリプシン解離により消化した。解離した細胞を予め１時間プレートに播き、心筋細胞を濃縮した。非接着心筋細胞を、次にプレーティング培地（５％ウシ胎児血清、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）及び２μｇ／ｍｌビタミンＢ１２を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）、Ｎａｃａｌａｉ  ｔｅｓｑｕｅ，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）に播いた。最終の心筋細胞培地は、９０％を超える心筋細胞を含有していた。細胞を、湿式インキュベータ中５％ＣＯ２の存在下３７℃で維持した。繊維芽細胞の増殖を抑制するため、ブロモデオキシウリジン（０．１ｍＭ）を加えて、プレーティング培地中で最初の３日間培養した。次いで、薬物処理の２４時間前にビタミンＢ１２及びトランスフェリンを含有する無血清ＤＭＥＭ培地に置換した。
（２）実験プロトコル
初代培養における新生児ラット心筋細胞は、無作為に次の３群のうち１つの群に割り当てた。
ｉ）コントロール群
ｉｉ）１００μＭ  Ｈ２Ｏ２とともに６０分インキュベートする群
ｉｉｉ）１００μＭ  ＳＦＡを３０分前処置した後、１００μＭ  Ｈ２Ｏ２とともに６０分インキュベートする群
実験開始時に、培養培地は、これらの薬物を含有する新鮮無血清ＤＭＥＭ培地に交換し、細胞は、全実験期間中これらの薬物に曝露した。
なお、ＳＦＡは、エーザイ株式会社から入手した。
（３）ＭＴＳアッセイ
細胞の生存率は、ＭＴＳアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いる代謝活性に基づき定量した。ＭＴＳテトラゾリウム化合物は、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミドの可溶性バージョンである。ＭＴＳは、生細胞によって還元され、組織培養培地に可溶である有色のホルマザン産物に変換される。この変換は、３７℃での代謝的に活性な細胞におけるＮＡＤＰＨ又はＮＡＤＨによって達成される。ホルマザン産物の定量値は、培養物中の生細胞の数に直接比例する（Ｚｈａｎｇ  ＨＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００２；９０：１２５１−８．）。
培養物は、２０μｌ／ｗｅｌｌのＭＴＳテトラゾリウム化合物を含有する無血清培地中、３７℃で３時間インキュベートした。ホルマザン産物の吸光度は、マイクロプレートリーダー（ＡＲＶＯｓｘ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ；Ｓｈｅｌｔｏｎ，ＷＡ））により４９０ｎｍで光度測定した。細胞の生存率は、コントロール群において測定した吸光度のパーセンテージとして表した。
（４）ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ−媒介ｄＵＴＰニックエンド−ラベリング（ＴＵＮＥＬ）染色
ＴＵＮＥＬ染色は、製造業者（Ｒｏｃｈｅ；Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）のプロトコールに従って行った。ヌクレオチドポリマーに取り込まれたフルオレセイン標識は、蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏｓｋｏｐ  ２  ｐｌｕｓ，Ｚｅｉｓｓ；Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ，ＮＹ）で検出した。
（５）４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）染色
細胞は、ＤＮＡ結合色素ＤＡＰＩ（５μＭ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ；Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）で染色した。細胞の核の形態は蛍光顕微鏡で可視化し、写真撮影した。
（６）蛍光インジケーターによる細胞のローディング
ΔΨｍをモニターするため、細胞を、テトラメチルローダミンエチルエステル（ＴＭＲＥ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）の１００ｎＭでロードした（３７℃で２０分）。［Ｃａ２＋］ｍをモニターするために、細胞を２μＭのｒｈｏｄ−２  ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）でロードした（３７℃で３０分）。細胞内ＲＯＳ産生のアッセイは、クロロメチル−２，７−ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート（ＤＣＦ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を用いて行った。細胞を４μＭ  ＤＣＦでロードし（３７℃で３０分）、酸化誘導体の形成を緑色蛍光の増加によってモニターした。
（７）蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）分析
ΔΨｍのＦＡＣＳ分析のため、ＴＭＲＥ−ロードした細胞を実験プロトコルの最後にトリプシン処理により回収し、ＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）（２０，０００細胞／サンプル）を用いて解析した。ＴＭＲＥの蛍光強度は、５８２ｎｍ（ＦＬ−２）でモニターした。ＦＡＣＳのデータは、解析ソフトウエア（ＷｉｎＭＤＩ；ｈｔｔｐ：／／ｆａｃｓ／ｓｃｒｉｐｐｓ．ｅｄｕ／ｓｏｆｔｗａｒｅ．ｈｔｍｌ）を用いて解析した。
（８）共焦点イメージング
３５ｍｍのガラス底培養皿上にプレートした細胞は、顕微鏡ステージ上に設置したヒータープラットフォームを用いて、５％ＣＯ２の存在下３７℃で維持し、細胞を無血清ＤＭＥＭ中においた。所望の温度に達した後、共焦点顕微鏡による経時的観察を、２分のインターバルで２０倍対物レンズを用いて開始させた。イメージは、レーザー走査共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ，ＬＳＭ５１０）で取得した。ＴＭＲＥ及びｒｈｏｄ−２ＡＭは、ヘリウム／ネオンレーザーの５４３ｎｍ線を用いて励起した。ＤＣＦは、アルゴンレーザーの４８８ｎｍ線を用いて励起した。
各スキャンにおいて２５個の細胞を無作為に選択し、赤又は緑色の蛍光強度を連続的にモニターした。
（９）イメージ解析
定量的イメージ解析は、イメージ解析ソフトウエア（ＩｍａｇｅＪ；ｈｔｔｐ：／／ｒｓｂ．ｉｎｆｏ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｉｊ／）を用いて行った。
（１０）統計解析
ＭＴＳアッセイの定量データは、平均±ＳＥＭとして表した。各群間の多重比較は、ｐｏｓｔ−ｈｏｃテストとしてのＦｉｓｈｅｒ’ｓ  ｌｅａｓｔ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅを用いたｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡにより行った。Ｐ＜０．０５のレベルは、統計的に有意であるとした。
２．結果
（１）ＴＵＮＥＬ染色及びＤＡＰＩ染色による形態観察
図１ａは、各実験群におけるＴＵＮＥＬ染色及びＤＡＰＩ染色を示す。
図１ａにおいて、左パネルは新生児ラット心筋細胞のＴＵＮＥＬ染色、右パネルは新生児ラットのＤＡＰＩによる核の対比染色を示す。「Ｃ」はコントロール細胞、「Ｈ」は１００μＭ  Ｈ２Ｏ２に１６時間曝露した細胞、「ＳＦＡ」は１００μＭ  ＳＦＡで前処置し、その後１００μＭ  Ｈ２Ｏ２に１６時間曝露した細胞を示す。スケールバーは２０μｍである。
ＴＵＮＥＬ染色は、アポトーシスの末期相の間に起こる核ＤＮＡ鎖の破断を検出する染色法である。コントロール細胞は、ＴＵＮＥＬ陽性核はほとんど示されなかったが、１００μＭのＨ２Ｏ２に１６時間曝露すると、明るいスポットとして見ることができるＴＵＮＥＬ陽性核の数が増加した。これは、Ｈ２Ｏ２の処理によりアポトーシスが高められたことを示すものである。ＳＦＡで処理した群では、Ｈ２Ｏ２群と比較して、同じ細胞密度であるにもかかわらず、ＴＵＮＥＬ陽性核は明らかに少数であった（図１ａ，ｂ）。１００μＭのＨ２Ｏ２と１６時間インキュベートした細胞もまた、ＤＮＡ結合色素ＤＡＰＩにより染色された。断片化又は縮小化した核は、Ｈ２Ｏ２群において観察されたが、ＳＦＡ群では核の形態保護に関し有意な保護効果を示した。
（２）細胞生存率の評価
本発明者は、酸化ストレスに曝露された培養心筋細胞の全体の生存率にＳＦＡが影響するかどうかを試験した。ＭＴＳアッセイにおいては、１００μＭのＳＦＡは、Ｈ２Ｏ２誘導細胞障害性に対し部分的ではあるが有意に保護することが明らかとなった（図１ｃ）。図１ｃは、細胞生存率をＭＴＳアッセイにより評価した結果を示す。この実験では、Ｈ２Ｏ２の処置を３時間とした。データは平均±ＳＥＭで表す（２つの独立した培養物から各群についてｎ＝１３）。ＳＦＡ群は、Ｈ群に対し有意に細胞を保護した（Ｐ＜０．０１）。
（３）ＴＭＲＥ蛍光染色によるＦＡＣＳ解析
ΔΨｍの喪失は、細胞死のプロセスの初期においては重要な事象であり、ＭＰＴＰの開口と関連する（Ｗｅｉｓｓ  ＪＮ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００３；９３：２９２−３０１．；Ｃｒｏｍｐｔｏｎ  Ｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．１９９９；３４１（Ｐｔ  ２）：２３３−４９．；Ｃｒｏｗ  ＭＴ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００４；９５：９５７−７０．）。ΔΨｍの維持がＳＦＡの心保護効果と関連するかどうかを調べるため、ＦＡＣＳを用いて、各群においてＨ２Ｏ２の刺激によるＴＭＲＥ蛍光の変化を試験した。
結果を図２ａ及び図２ｂに示す。図２ａはＴＭＲＥ−ロード細胞のＦＡＣＳデータのＦＬ−２ヒストグラムを示す。「Ｃ」はコントロール細胞、「Ｈ」は１００μＭ  Ｈ２Ｏ２に１時間曝露した細胞、「ＳＦＡ」は１００μＭ  ＳＦＡで前処置し、その後１００μＭ  Ｈ２Ｏ２に１時間曝露した細胞を示す。すべてのヒストグラムにおいて、コントロール群の主要集団の位置は縦の破線により示される。これらの結果は、少なくとも３回の独立した実験の代表データである。図２ｂは、高（＞２００）ＴＭＲＥ蛍光を維持する細胞のパーセンテージをまとめたデータである。細胞は、各種濃度のＳＦＡで前処置し、その後１００μＭ  Ｈ２Ｏ２で１時間処置した。「Ｃ」はコントロール細胞である。ＳＦＡは濃度依存的にΔΨｍを保持していることが分かる。
コントロール群では、細胞の大多数が高ＴＭＲＥ蛍光レベルの集団に属した（図２ａ，パネルｃ）（縦の破線）。Ｈ２Ｏ２に曝露すると、集団の多くが低ＴＭＲＥ蛍光にシフトした（図２ａ，パネルＨ）。ＳＦＡは、Ｈ２Ｏ２−誘導性ΔΨｍ喪失に対して保護し、通常のΔΨｍレベルを有する細胞の集団を維持している（図２ａ，パネルＳＦＡ）。これらの観察は、図２ｂに示されるように、高いＴＭＲＥ（この場合＞２００）を有する細胞のパーセンテージをプロットすることにより定量的に評価した。Ｈ２Ｏ２に１時間曝露すると、ミトコンドリアの脱分極が起こったが、ＳＦＡは濃度依存的にΔΨｍ喪失を抑制した。ＳＦＡのΔΨｍ−保護効果は、１００μＭでその最大レベルに達した。
本発明者はさらに、ＳＦＡの保護効果を、ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルオープナーであるジアゾキシドの保護効果と比較した。なお、単離した心筋細胞において、本発明者は、以前ジアゾキシドが酸化ストレスにより誘導されたΔΨｍの喪失を濃度依存的に抑制することを報告した（Ａｋａｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００１；８８：１２６７−７５．）。
結果を図２ｃ及び図２ｄに示す。図２ｃ及び図２ｄは、高（＞２００）ＴＭＲＥ蛍光を維持する細胞のパーセンテージをまとめたデータである。細胞は、図に示される各種薬物で前処置し、その後１００μＭ  Ｈ２Ｏ２で１時間処置した。「ＤＺ」は１００μＭジアゾキシド、「５ＨＤ」は５００μＭの５−ヒドロキシデカノエートを示す。
図２ｃに示すように、１００μＭのＳＦＡの保護効果は、１００μＭのＨ２Ｏ２により誘導されたΔΨｍの喪失を抑制する点において１００μＭのジアゾキシドと同等であった。ＳＦＡ及びジアゾキシドにより受けた保護は、ｍｉｔｏＫＡＴＰチャネルブロッカーである５−ヒドロキシデカノエート（５ＨＤ，５００μＭ）により完全にブロックされた。５ＨＤ単独では、１００μＭのＨ２Ｏ２のときに認められたΔΨｍの喪失は悪化しなかった。他の実験セットにおいて、１００μＭのジアゾキシドと１００μＭのＳＦＡとを併用したときは、ＳＦＡ単独使用以上の効果は示されなかった（図２ｄ）。さらに、Ｈ２Ｏ２不含のＳＦＡ単独では、ΔΨｍのコントロールレベルに影響はなかった（図２ｄ）。
（４）ＴＭＲＥ蛍光染色による形態観察
ΔΨｍの喪失を抑制する点についてＳＦＡの保護効果をさらに確認するため、本発明者は、単一細胞ベースでΔΨｍの時間依存的変化を試験した（図３）。ＴＭＲＥをロードした心筋細胞の経時的共焦点解析を２分のインターバルで行った。経時的スキャニングは、５０μＭ  Ｈ２Ｏ２の適用後すぐに始めた。
結果を図３に示す。図３ａは、各群におけるＴＭＲＥ蛍光の代表的経時変化の図である。「Ｃ」はコントロール細胞、「Ｈ」は１００μＭのＨ２Ｏ２に１時間曝露した細胞、「ＳＦＡ」は１００μＭ  ＳＦＡで前処置し、その後１００μＭＨ２Ｏ２で１時間処置した細胞である。０分のフレーム内のスケールバーは２０μｍである。
図３ｂは、各群において無作為に選択した２５個の細胞のＴＭＲＥ蛍光の経時変化を示す図である。なお、実験は独立して３回行い、いずれも同様の結果が得られた。
図３ｃは、各群において無作為に選択した２５個の細胞の平均蛍光強度の経時変化を示す図である。
最初に、我々は、コントロール群における６０分の観察の間、ＴＭＲＥ蛍光は変化しないことを確認した（図３ａ，パネルｃ）。これに対し、Ｈ２Ｏ２で処理した細胞は、赤色蛍光強度の消失が進行した（図３ａ，パネルＨ）。これは、ΔΨｍの不可逆的喪失を示すものである。ＳＦＡ処理群においては、ＴＭＲＥ蛍光が顕著に維持されていた（図３ａ，パネルＳＦＡ）。
各群において２５個の細胞を無作為に選択し、各個々の細胞からのＴＭＲＥ蛍光強度を図３ｂにプロットした。
ＳＦＡは、ΔΨｍの喪失を受ける細胞の数を減少させたのみならず、ΔΨｍの喪失を受ける時期を遅延させた。図３ｃは、各群の２５個の無作為選択細胞からのＴＭＲＥ蛍光強度の平均であり、これは、ＳＦＡの有意な保護効果を示している。
（５）ＤＣＦ蛍光染色による形態観察
ＲＯＳはＭＰＴＰ開口の最も重要な誘導因子のひとつである。ＲＯＳ産生を抑制することがＳＦＡの保護効果と関連するかどうかを調べるため、本発明者は、共焦点顕微鏡による経時的観察により、各群において５０μＭ  Ｈ２Ｏ２刺激によるＤＣＦ蛍光の変化を試験した（図４）。
結果を図４ａ〜図４ｃに示す。図４ａは、各群におけるＤＣＦ蛍光の代表的経時変化の図である。「Ｃ」はコントロール細胞、「Ｈ」１００μＭ  Ｈ２Ｏ２に３０分間曝露した細胞、「ＳＦＡ」は１００μＭ  ＳＦＡで前処置し、その後１００μＭ  Ｈ２Ｏ２で３０分処置した細胞である。０分のフレーム内のスケールバーは２０μｍである。
コントロール群の細胞では、ＤＣＦ蛍光強度が徐々に減少した（図４ａ，パネルＣ）。Ｈ２Ｏ２群では、ＤＣＦ蛍光はＨ２Ｏ２添加に伴い進行性に増加した（図４ａ，パネルＨ）。ＳＦＡは、ＤＣＦ蛍光の増加を抑制した（図４ａ，パネルＳＦＡ）。
各群から２５個の細胞を無作為に選択し、各個々の細胞からのＤＣＦ蛍光強度を経時的にプロットした（図４ｂ）。個々の細胞のＤＣＦ蛍光強度は、Ｈ２Ｏ２群では増加が進んだのに対し、ＳＦＡ処置群ではＨ２Ｏ２群と比較してＤＣＦ蛍光の全体的増加は鈍くなった。なお、実験は独立して３回行い、いずれも同様の結果が得られた。
図４ｃは、各群において２５個の無作為選択細胞からのＤＣＦ蛍光強度の平均を示す。
（６）Ｒｈｏｄ−２蛍光染色による形態観察
ミトコンドリアマトリックスにおけるカルシウム過負荷は、細胞死の決定的な引き金の一つであり、ＭＰＴＰ開口の重要な誘導因子である。［Ｃａ２＋］ｍのレベルをモニターするため、本発明者は、［Ｃａ２＋］ｍ感受性色素であるｒｈｏｄ−２を用いた共焦点顕微鏡による経時的観察を行い、各群において５０μＭ  Ｈ２Ｏ２刺激による蛍光の変化を観察した（図５）。
結果を図５に示す。図５ａは、各群におけるｒｈｏｄ−２蛍光の代表的経時変化の図である。「Ｃ」はコントロール細胞、「Ｈ」は１００μＭ  Ｈ２Ｏ２に１時間曝露した細胞、「ＳＦＡ」は１００μＭ  ＳＦＡで前処置し、その後１００μＭ  Ｈ２Ｏ２で１時間処置した細胞である。０分のフレーム内のスケールバーは２０μｍである。
図５ｂは、各群において無作為に選択した２５個の細胞のｒｈｏｄ−２蛍光の経時変化の図である。なお、実験は独立して３回行い、いずれも同様の結果が得られた。
図５ｃは、各群において無作為に選択した２５個の細胞におけるｒｈｏｄ−２蛍光強度の平均の経時変化を示す図である。
コントロール群における６０分のスキャニングの間、ｒｈｏｄ−２蛍光は変化しないことを確認した（図５ａ，パネルｃ）。Ｈ２Ｏ２群では、ｒｈｏｄ−２蛍光はＨ２Ｏ２添加後約２０分で顕著な上昇を示し、上昇はその後も持続した（図５ａ，パネルＨ）。ＳＦＡは、Ｈ２Ｏ２群で観察された［Ｃａ２＋］ｍ過負荷を部分的に減少させた（図５ａ，パネルＳＦＡ）。図５ｂは、各個々の細胞のｒｈｏｄ−２蛍光強度の経時変化を示す。ＳＦＡは、Ｈ２Ｏ２群と比較してｒｈｏｄ−２蛍光の全体的増加を鈍らせた。
【実施例２】
【０００７】
１．方法
（１）血圧測定
ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌ麻酔下で、８週齢のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラット（約２５０ｇ）の総頚動脈遠位端を結紮したのち、近位端にはｈｅｐａｒｉｎ含有ｓａｌｉｎｅを満たし、圧変換器と接続したポリエチレン管を挿入し、ペンレコーダーにより血圧の変動を記録した。
（２）大腿静脈内薬物投与
シリンジにチューブを介して接続した２４ゲージ注射針を大腿静脈内に挿入し、薬液を１〜２分間かけて注入した。血圧は薬液投与分前から投与１０分後までモニターした。
（３）薬物投与
セロフェンド酸は、Ｍｅｙｌｏｎ（メイロン）（７％ＮａＨＣＯ３）に４ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。各個体には、溶媒のみを投与して血圧を測定したのち、セロフェンド酸１０ｍｇ／ｋｇを投与した。ＳＦＡおよびメイロン投与前３分間の血圧の平均を１００％とした。
２．結果
結果を図６に示す。図６は、ＳＦＡおよび溶媒として用いたメイロンのラットの平均血圧への作用を示すものである。溶媒として用いたメイロンを投与しても、平均血圧に有意な変化は見られなかった。
また、セロフェンド酸（１０ｍｇ／ｋｇ）を投与してもＭｅｙｌｏｎと同様、平均血圧に有意な変化は見られなかった。従って、セロフェンド酸は、ジアゾキシドに認められる副作用（血圧降下作用）がなく、心筋細胞を保護する化合物であることが示された。
【産業上の利用可能性】
【０００８】
本発明により、式（Ｉａ）で示される化合物、その薬学的に許容可能な塩、又はこれらの溶媒和物を含む、心筋細胞保護剤、心疾患の予防及び／又は治療剤、並びに虚血／再灌流障害の予防及び／又は治療剤が提供される。また、本発明により、式（Ｉａ）で示される化合物、これらの薬理学的に許容し得る塩、又はこれらの溶媒和物を用いることを特徴とする心疾患、心虚血／再灌流障害の予防及び／又は治療方法が提供される。上記化合物は、心機能不全の治療効果及び虚血／再灌流障害の保護作用を有することから、心疾患治療剤、あるいは心虚血／再灌流障害の保護剤として有用である。
【図２】
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【図６】
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【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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