【手続補正書】
【提出日】令和1年7月5日(2019.7.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞膜における摂動を引き起こすためのマイクロ流体システムであって、
内腔を画成し、バッファー中に懸濁された細胞がそれを介して通過できるように構成される、少なくとも１つのマイクロ流体チャネルを含み、前記マイクロ流体チャネルが、長さ、深さ、及び幅を含む少なくとも１つの細胞変形狭窄を含み、前記狭窄の幅が４μｍ未満である、前記システム。
【請求項２】
細胞が
（i）無核である；
（ii）非修飾血液を含むバッファー中に懸濁される；
（iii）健康な細胞である；または
（iv）疾患細胞若しくは感染細胞である;
請求項１に記載のマイクロ流体システム。
【請求項３】
細胞が、赤血球、網状赤血球、または血小板のうちの１つまたは複数である、請求項２に記載のマイクロ流体システム。
【請求項４】
（i）幅が０．５μｍ〜４μｍである;
（ii）長さが３０μｍ以下である;
（iii）深さが１μｍ〜１ｍｍである;及び／または
（iv）チャネルの横断面が、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、及び三角形からなる群から選択される;
請求項１〜３のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。
【請求項５】
（i）幅が１μｍ〜３μｍである；
（ii）長さが１０μｍ〜３０μｍである；及び／または
（iii）深さが１μｍ〜１００μｍである;
請求項４に記載のマイクロ流体システム。
【請求項６】
（i）幅が細胞の最大直径未満である；
（ii）長さが１０μｍ〜２０μｍである；及び／または
（iii）深さが７０μｍである;
請求項４または５に記載のマイクロ流体システム。
【請求項７】
幅が細胞の最大直径の約２０％〜約９９％である、請求項４〜６のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。
【請求項８】
複数のマイクロ流体チャネル及び／または複数の細胞変形狭窄を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のマイクロ流体システム。
【請求項９】
（i）マイクロ流体システムが、並列または連続する複数のマイクロ流体チャネルを含む；
（ii）前記マイクロ流体システムが、複数の細胞変形狭窄を含み、
前記複数の細胞変形狭窄が同じマイクロ流体チャネル中で並列して配置される；及び／または
（iii）前記マイクロ流体システムが、複数の細胞変形狭窄を含み、
前記複数の細胞変形狭窄が同じマイクロ流体チャネル中で連続して配置される；
請求項８に記載のマイクロ流体システム。
【請求項１０】
（i）細胞駆動装置が、バッファーへ９０ｐｓｉを超える圧力を適用するように適合される;及び／または
（ii）前記細胞駆動装置が、圧力ポンプ、ガスボンベ、コンプレッサー、真空ポンプ、シリンジポンプ、ペリスタポンプ、ピペット、ピストン、キャピラリーアクター、ヒト心臓、ヒト筋肉、重力、マイクロ流体ポンプ、及びシリンジからなる群から選択される;
請求項９に記載のマイクロ流体システム。
【請求項１１】
圧力を細胞へ適用してペイロードの通過に十分な大きさの前記細胞の摂動を引き起こすように、バッファー中に懸濁された前記細胞を細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを介して通過させるステップであって、前記狭窄の幅が４μｍ未満である、前記通過させるステップと、
前記細胞が前記狭窄を介して通過する前または後に所定時間にわたってペイロード含有溶液中で前記細胞をインキュベーションするステップと、
を含む方法。
【請求項１２】
細胞が、
（i）無核である;
（ii）健康な細胞である;
（iii）感染細胞若しくは疾患細胞である；または
（iv）非修飾血液を含むバッファー中に懸濁される;
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞が、赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）、赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ）、網状赤血球、及び血小板のうちの１つまたは複数である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ｉ）幅が０．５μｍ〜４μｍである；
（ii）狭窄が、３０μｍ以下の長さを有する；
（iii）前記狭窄が、１μｍ〜１ｍｍの深さを有する；
（iv）細胞へ適用される圧力が９０ｐｓｉより大きい；
（ｖ）バッファーが前記細胞を膨潤させる低張バッファーである；及び／または
（ｖi）マイクロ流体チャネルの横断面が、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、及び三角形からなる群から選択される;
請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
幅が１μｍ〜３μｍである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
幅が細胞の最大直径未満である、請求項１４または１５に記載の方法。
【請求項１７】
幅が細胞の最大直径の約２０％〜約９９％である、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
マイクロ流体チャネルが、複数のマイクロ流体チャネル及び／または複数の細胞変形狭窄を含むシステム中にある、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
システムが、
（i）並列または連続する複数のマイクロ流体チャネル;
（ii）同じマイクロ流体チャネル中で並列して配置される、複数の細胞変形狭窄；及び／または
（iii）同じマイクロ流体チャネル中で連続して配置される、複数の細胞変形狭窄;
を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ペイロード含有溶液が、タンパク質、ペプチド、小分子、核酸、脂質、炭水化物、マクロ分子、ビタミン、ポリマー、蛍光色素、フルオロフォア、カーボンナノチューブ、量子ドット、ナノ粒子、及び／またはステロイドのうちの１つまたは複数を含む、請求項１１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ペイロード含有溶液が、
（i）タンパク質またはポリマーを含む；
（ii）タンパク質及びポリマーを含む；
（iii）小分子またはタンパク質を含む；
（iv）小分子及びタンパク質を含む；あるいは
（ｖ）クロロキン、アトバクオン−プログアニル、アルテメテル／リメファントリン（ｌｙｍｅｆａｎｔｒｉｎｅ）、キニーネ硫酸塩、メフロキン、ヒドロキシクロロキン、プリマキン、キニジン、アルテスネート、アルテミシニン、スルファドキシン／プリメサミン（ｐｒｙｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、アモジアキン、スルホンアミド、ハロファントリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、クリンダマイシン、ヒドロキシ尿素、ハイドレア、ビタミンＥ、Ｌ−グルタミン、アシクロビル、ガンシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、トリ−ペプチド、またはテトラ−ペプチドのうちの１つまたは複数を含む；
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
圧力を細胞へ適用してペイロードの通過に十分な大きさの前記細胞の摂動を引き起こすように、バッファー中に懸濁された前記細胞を細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを介して通過させるステップであって、前記狭窄の幅が４μｍ未満である、前記通過させるステップと；
前記細胞が前記狭窄を介して通過する前または後に所定時間にわたってペイロード含有溶液中で前記細胞をインキュベーションするステップと；
前記ペイロードが細胞内に含有されるように、前記細胞の摂動が停止するのを所定時間にわたって待機するステップと；
を含む方法。
【請求項２３】
細胞が、
（i）無核である；
（ii）非修飾血液を含むバッファー中に懸濁される；
（iii）健康な細胞である；または
（iv）感染細胞または疾患細胞である；
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
細胞が、赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）、赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ）、及び網状赤血球のうちの１つまたは複数である、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項２５】
（i）幅が０．５μｍ〜４μｍである；
（ii）狭窄が、３０μｍ以下の長さを有する；
（iii）前記狭窄が、１μｍ〜１ｍｍの深さを有する；
（iv）細胞へ適用される圧力が９０ｐｓｉより大きい；
（ｖ）バッファーが前記細胞を膨潤させる低張バッファーである；
（ｖi）マイクロ流体チャネルの横断面が、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、及び三角形からなる群から選択される；及び／または
（ｖii）ペイロード含有溶液中での前記細胞のインキュベーションが、０．０００１秒〜２０分間にわたって前記細胞をインキュベーションすることを含む；
請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
幅が１μｍ〜３μｍである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
幅が細胞の最大直径未満である、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
幅が細胞の最大直径の約２０％〜約９９％である、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
マイクロ流体チャネルが、複数のマイクロ流体チャネル及び／または複数の細胞変形狭窄を含むシステム内にある、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
システムが、
（i）並列または連続する複数のマイクロ流体チャネル;
（ii）同じマイクロ流体チャネル中で並列して配置される、複数の細胞変形狭窄；及び／または
（iii）同じマイクロ流体チャネル中で連続して配置される、複数の細胞変形狭窄；
を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ペイロード含有溶液が、タンパク質、ペプチド、小分子、核酸、脂質、炭水化物、マクロ分子、ビタミン、ポリマー、蛍光色素、フルオロフォア、カーボンナノチューブ、量子ドット、ナノ粒子、及び／またはステロイドのうちの１つまたは複数を含む、請求項２２〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ペイロード含有溶液が、
（i）小分子またはタンパク質を含む；
（ii）小分子及びタンパク質を含む；または
（iii）ヒドロキシ尿素、ハイドレア、ビタミンＥ、Ｌ−グルタミン、アシクロビル、ガンシクロビル、バラシクロビル、ペンシクロビル、トリ−ペプチド、及びテトラ−ペプチドのうちの１または複数を含む；
請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
細胞内ペイロードを含む無核細胞を含む組成物であって、
前記無核細胞を含む懸濁液を、ペイロードの通過に十分な大きさの前記無核細胞の摂動を引き起こすように、細胞変形狭窄を含むマイクロ流体チャネルを介して通過させることであって、前記狭窄の幅が４μｍ未満である、前記通過させること、及び
前記無核細胞が前記狭窄を介して通過する前または後に所定時間にわたって前記ペイロードを含む溶液中で前記無核細胞をインキュベーションすること
を含む方法によって調製される、前記組成物。
【請求項３４】
細胞が、赤血球、網状赤血球、及び血小板のうちの１つまたは複数である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
懸濁液中の細胞が、非修飾血液を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
幅が細胞の最大直径未満である、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
幅が細胞の最大直径の約２０％〜約９９％である、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
（i）幅が０．５μｍ〜４μｍである;
（ii）狭窄が３０μｍ以下の長さを有する;
（iii）前記狭窄が１μｍ〜１ｍｍの深さを有する;及び／または
（iv）マイクロ流体チャネルの横断面が、円形、楕円形、細長いスリット、正方形、六角形、及び三角形からなる群から選択される;
請求項３３または３４に記載の組成物。
【請求項３９】
組成物を調製するための方法が、細胞懸濁液を細胞変形狭窄を通過させるために、前記懸濁液に圧力を適用することをさらに含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
マイクロ流体チャネルが、複数のマイクロ流体チャネル及び／または複数の細胞変形狭窄を含むシステム中にある、請求項３３〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
システムが、
（i）並列または連続する複数のマイクロ流体チャネル；
（ii）同じマイクロ流体チャネル中で並列して配置される、複数の細胞変形狭窄；及び／または
（iii）同じマイクロ流体チャネル中で連続して配置される、複数の細胞変形狭窄；
を含む、請求項４０に記載の組成物。