【手続補正書】
【提出日】令和1年9月4日(2019.9.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組合せ物であって、
１７〜４０サブユニットを含み、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含むアンチセンスオリゴマーであって、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、ジストロフィンを標的とする前記オリゴマーと；
１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含むアンチセンスオリゴマーであって、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、ミオスタチンを標的とする前記オリゴマーと
を含む組合せ物。
【請求項２】
ジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する、デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を有する被験体を処置することに使用するための組成物であって、
前記組成物は、アンチセンスオリゴマーを含み、前記アンチセンスオリゴマーは、１７〜４０サブユニットを含み、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含み、前記アンチセンスオリゴマーが、前記エクソンのスキッピングを誘導し、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記組成物が、被験体におけるミオスタチン活性およびミオスタチン発現の一方または両方を阻害するミオスタチン治療剤と組み合わせて投与され、前記ミオスタチン治療剤が前記組成物の前に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項３】
前記アンチセンスオリゴマーが、配列番号７６〜配列番号３４８５から選択される配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アンチセンスオリゴマーが、エテプリルセン（ｅｔｅｐｌｉｒｓｅｎ）である、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記アンチセンスオリゴマーが、式（Ｉ）：
【化１０３】
2018530560.tif 000001
を含む化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、８から４８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ４から独立に選択され、式中、各Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アラルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ５は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ｎは、１から５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：
【化１０４】
2018530560.tif 000002
の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ７）２Ｒ８から選択され、式中、
各Ｒ７は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、
Ｒ８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ９）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および式：
【化１０５】
2018530560.tif 000003
の部分から選択され、式中、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｒ１０は、Ｇ、Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１ＯＨ、アシル、トリチル、４メトキシトリチル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＣ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
ｍは、１から５の整数であり、
Ｒ１１は、式−（Ｏ−アルキル）ｙ−を有し、式中、ｙは、３から１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ１２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１の各例は、
−Ｎ（Ｒ１３）２Ｒ１４［式中、各Ｒ１３は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、そしてＲ１４は、電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：
【化１０６】
2018530560.tif 000004
の部分［式中、
Ｒ１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＮＲ１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
Ｒ１８は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｑは、１から５の整数であり、
Ｒ１６は、電子対およびＨから選択され；
各Ｒ１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：
【化１０７】
2018530560.tif 000005
の部分［式中、
Ｒ１９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｒＮＲ２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）４ＮＨ２およびＧから選択され、式中、
Ｒ２２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｒは、１から５の整数であり、
Ｒ２０は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｓＮＲ２４Ｃ（＝ＮＨ
）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２および式：
【化１０８】
2018530560.tif 000006
の部分から選択され、式中、
Ｒ２３は、式−（Ｏ−アルキル）ｖ−ＯＨを有し、式中、ｖは、３から１０の整数であり、ｖ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ２４は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｓは、１から５の整数であり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）６Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２Ｓ２（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）−から選択され；
各Ｒ２５は、式−（ＣＨ２）２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２６）２を有し、式中、各Ｒ２６は、式−（ＣＨ２）６ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２を有し；
Ｒ３は、電子対、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：
【化１０９】
2018530560.tif 000007
を有し、式中、前記ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、前記ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、前記リンカー部分に結合している、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記ミオスタチン治療剤が、タンパク質であり、前記タンパク質が、抗ミオスタチン抗体または可溶性受容体であり、好ましくは前記可溶性受容体が、ＡＣＶＲ２である、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記ミオスタチン治療剤が、アンチセンスオリゴマーまたはｓｉＲＮＡのうちの少なくとも１つである核酸であり、好ましくは、前記核酸が、１２〜４０サブユニットを含み、ミオスタチンプレｍＲＮＡの標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含むアンチセンスオリゴマーであり、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害の処置において使用するための組合せ物であって、前記組合せ物は、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み；ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、１２〜４０サブユニットを含むアンチセンスオリゴマー化合物と；
機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤とを含む、組合せ物。
【請求項９】
デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置することに使用するための組成物であって、
前記組成物が、アンチセンスオリゴマーを含み、前記アンチセンスオリゴマーが、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含み、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記組成物が、前記被験体の筋細胞内で機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤と組み合わせて投与されることを特徴とし、そして
前記ジストロフィン治療剤が前記組成物の前に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１０】
前記標的領域が、（ｉ）少なくとも１つのヌクレオチドがイントロン１／エクソン２およびエクソン２／イントロン２に伴うスプライス接合部にわたるヌクレオチド配列、または、（ｉｉ）ヌクレオチドがイントロン１／エクソン２およびエクソン２／イントロン２に伴うスプライス接合部にわたらないヌクレオチド配列から選択され、
前記スプライス接合部が、スプライスアクセプター部位またはスプライスドナー部位を含む配列から選択され、
好ましくは、前記スプライスアクセプター部位が、配列番号２の内部に存在し、前記スプライスドナー部位が、配列番号３の内部に存在する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記アンチセンスオリゴマーが、式（ＩＶ）：
【化１３０】
2018530560.tif 000008
を含む化合物または薬学的に許容されるその塩であり、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、８から４８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ４から独立に選択され、式中、各Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ５は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ｎは、１から５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：
【化１３１】
2018530560.tif 000009
の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨおよび−Ｎ（Ｒ７）２Ｒ８から選択され、式中、
各Ｒ７は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、
Ｒ８は、電子対およびＨから選択され、
Ｒ６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ９）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および式：
【化１３２】
2018530560.tif 000010
の部分から選択され、式中、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
ｍは、１から５の整数であり、
Ｒ１１は、式−（Ｏ−アルキル）ｙ−を有し、式中、ｙは、３から１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ１２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３から選択され；
Ｒ３は、電子対、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ここで、前記ターゲティング配列は、配列番号１６〜７５から選択される配列を含むか、配列番号１６〜７５から選択されるか、配列番号１６〜７５から選択される配列の少なくとも１０の連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号１６〜７５から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する変異体である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
前記アンチセンスオリゴマーが、前記アンチセンスオリゴマーの３’末端または５’末端にコンジュゲートするアルギニンに富むペプチド配列をさらに含み、前記アルギニンに富むペプチド配列が、配列番号３４８６〜３５０１から選択される配列を含む、請求項２から７もしくは９から１１のいずれか一項に記載の組成物、または請求項８に記載の組合せ物。
【請求項１３】
Ｒ２が、Ｇであり、前記ＣＰＰが、配列番号３４８６〜３５０１から選択される配列を含む、請求項１２に記載の組成物または組合せ物。
【請求項１４】
前記組成物が、前記被験体において少なくとも約２００〜４００ｎＭのアンチセンスオリゴマーのピークの血中濃度を得るための有効量で投与されることを特徴とする、請求項２または５に記載の組成物。
【請求項１５】
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体において骨格筋量不足を処置することに使用するための組成物であって、前記組成物が、アンチセンスオリゴマーを含み、前記アンチセンスオリゴマーが、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含み、前記処置が、
（ａ）前記被験体におけるミオスタチンタンパク質の血液中または組織中レベルを測定するステップと、
（ｂ）前記被験体に、有効量の前記アンチセンスオリゴマーを投与するステップと、
（ｃ）ミオスタチンｍＲＮＡ転写物内のエクソン２の転写を阻害するステップと、
（ｄ）選択した時間以後、前記被験体におけるミオスタチンタンパク質レベルを測定するステップと、
（ｅ）（ｄ）で測定された前記レベルを使用して前記の投与を反復するステップであって、投与されるアンチセンスオリゴマーの量の用量または投薬スケジュールを調整するステップとを含み、前記被験体におけるミオスタチンタンパク質の前記レベルが、前記組成物の投与後に低下し、
前記被験体が、前記被験体の筋細胞において機能的なジストロフィン発現タンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与されている、組成物。
【請求項１６】
デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害の処置において使用するための組成物であって、
前記組成物は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み；ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、１２〜４０サブユニットを含むアンチセンスオリゴマー化合物を含み、
前記組成物は、機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１７】
デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害の処置において使用するための組成物であって、
前記組成物は、機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を含み、
前記組成物は、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み；ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、１２〜４０サブユニットを含むアンチセンスオリゴマー化合物と組み合わせて投与されることを特徴とする、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
一部の実施形態では、本明細書で記載される組成物および方法に使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド化合物は、細胞透過性ペプチドを含まない。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する、デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を有する被験体を処置する方法であって、
前記被験体に、１７〜４０サブユニットを含み、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、前記アンチセンスオリゴマーが、前記エクソンのスキッピングを誘導し、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記被験体が、前記被験体におけるミオスタチン活性およびミオスタチン発現の一方または両方を阻害するミオスタチン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは関連障害のうちの少なくとも１つを処置する、方法。
（項目２）
前記エクソンが、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１９、エクソン２３、エクソン４４、エクソン４５、エクソン５０、エクソン５１、エクソン５２、エクソン５３またはエクソン５５から選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記エクソンがエクソン２３を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記エクソンがエクソン４５を含む、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記エクソンがエクソン５１を含む、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記エクソンがエクソン５３を含む、項目２に記載の方法。
（項目７）
前記エクソンが、エクソン８、エクソン４４、エクソン５０、エクソン５２またはエクソン５５を含む、項目２に記載の方法。
（項目８）
前記アンチセンスオリゴマーが、２０〜３０サブユニットを含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記アンチセンスオリゴマーが、配列番号７６〜配列番号３４８５から選択される配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記アンチセンスオリゴマーが、エテプリルセン（ｅｔｅｐｌｉｒｓｅｎ）である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ターゲティング配列が、前記標的領域内の少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的である、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記ターゲティング配列が、前記標的領域内の少なくとも１７の連続ヌクレオチドと相補的である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ターゲティング配列が、前記標的領域と１００％相補的である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ミオスタチン治療剤が、タンパク質または核酸のうちの１つまたは複数から選択される、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記タンパク質が、抗ミオスタチン抗体である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記タンパク質が、可溶性受容体である、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
可溶性受容体が、ＡＣＶＲ２である、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
前記核酸が、アンチセンスオリゴマーまたはｓｉＲＮＡのうちの少なくとも１つである、項目１４に記載の方法。
（項目１９）
前記アンチセンスオリゴマーが、１２〜４０サブユニットを含み、ミオスタチンプレｍＲＮＡの標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含み、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記アンチセンスオリゴマーが、２０〜３０サブユニットを含む、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記ターゲティング配列が、前記標的領域内の少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的である、項目１９に記載の方法。
（項目２２）
前記ターゲティング配列が、前記標的領域内の少なくとも１７の連続ヌクレオチドと相補的である、項目１９に記載の方法。
（項目２３）
前記ターゲティング配列が、前記標的領域と１００％相補的である、項目１９に記載の方法。
（項目２４）
前記標的領域が、配列番号１を含む、項目１９に記載の方法。
（項目２５）
前記エクソンが、エクソン２を含む、項目１９に記載の方法。
（項目２６）
前記標的領域が、（ｉ）少なくとも１つのヌクレオチドが、イントロン１／エクソン２およびエクソン２／イントロン２に伴うスプライス接合部にわたるヌクレオチド配列、または、（ｉｉ）ヌクレオチドが、イントロン１／エクソン２およびエクソン２／イントロン２に伴うスプライス接合部にわたらないヌクレオチド配列から選択される項目１９に記載の方法。
（項目２７）
前記スプライス接合部が、スプライスアクセプター部位またはスプライスドナー部位を含む配列から選択される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記スプライスアクセプター部位が、配列番号２の内部に存在し、前記スプライスドナー部位が配列番号３の内部に存在する、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記（ｉ）のヌクレオチドが、配列番号１６〜４３から選択される、項目２６に記載の方法。
（項目３０）
前記（ｉｉ）のヌクレオチドが、配列番号４４〜７０から選択される、項目２６に記載の方法。
（項目３１）
前記被験体が、７歳またはこれを超える、項目１に記載の方法。
（項目３２）
デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置する方法であって、
被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記被験体が、前記被験体の筋細胞内で機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは関連障害のうちの少なくとも１つを処置する、方法。
（項目３３）
前記被験体が、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記アンチセンスオリゴマーが、２０〜３０サブユニットを含む、項目３２に記載の方法。
（項目３５）
前記ターゲティング配列が、標的領域内の少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的である、項目３２に記載の方法。
（項目３６）
前記ターゲティング配列が、標的領域内の少なくとも１７の連続ヌクレオチドと相補的である、項目３２に記載の方法。
（項目３７）
前記アンチセンスオリゴマーが、標的領域と１００％相補的である、項目３２に記載の方法。
（項目３８）
前記標的領域が、配列番号１を含む、項目３２に記載の方法。
（項目３９）
前記エクソンが、エクソン２を含む、項目３２に記載の方法。
（項目４０）
前記標的領域が、（ｉ）少なくとも１つのヌクレオチドがイントロン１／エクソン２およびエクソン２／イントロン２に伴うスプライス接合部にわたるヌクレオチド配列、または、（ｉｉ）ヌクレオチドがイントロン１／エクソン２およびエクソン２／イントロン２に伴うスプライス接合部にわたらないヌクレオチド配列から選択される、項目３２に記載の方法。
（項目４１）
前記スプライス接合部が、スプライスアクセプター部位またはスプライスドナー部位を含む配列から選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記スプライスアクセプター部位が、配列番号２の内部に存在し、前記スプライスドナー部位が、配列番号３の内部に存在する、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記（ｉ）のヌクレオチドが、配列番号１６〜４３から選択される、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
前記（ｉｉ）のヌクレオチドが、配列番号４４〜７０から選択される、項目４１に記載の方法。
（項目４５）
前記ジストロフィン治療剤が、タンパク質または核酸のうちの１つまたは複数から選択される、項目３２に記載の方法。
（項目４６）
前記核酸が、アンチセンスオリゴマーである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記アンチセンスオリゴマーが、２０〜５０サブユニットを含み、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１０またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含み、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記エクソンが、エクソン７、エクソン８、エクソン９、エクソン１９、エクソン２３、エクソン４４、エクソン４５、エクソン５０、エクソン５１、エクソン５２、エクソン５３またはエクソン５５から選択される、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記エクソンが、エクソン２３を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記エクソンが、エクソン４５を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
前記エクソンが、エクソン５１を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５２）
前記エクソンが、エクソン５３を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５３）
前記エクソンが、エクソン８、エクソン４４、エクソン５０、エクソン５２またはエクソン５５を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５４）
前記アンチセンスオリゴマーが、２０〜３０サブユニットを含む、項目４７に記載の方法。
（項目５５）
前記アンチセンスオリゴマーが、配列番号７６〜配列番号３４８５から選択される配列を含む、項目４７に記載の方法。
（項目５６）
前記アンチセンスオリゴマーが、エテプリルセンである、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記ターゲティング配列が、標的領域内の少なくとも１５の連続ヌクレオチドと相補的である、項目４６に記載の方法。
（項目５８）
前記ターゲティング配列が、標的領域内の少なくとも１７の連続ヌクレオチドと相補的である、項目４６に記載の方法。
（項目５９）
前記ターゲティング配列が、標的領域と１００％相補的である、項目４６に記載の方法。
（項目６０）
ジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体においてデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置する方法であって、
被験体に、式（Ｉ）：
【化１０３】
2018530560.tif 000011
を含む化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含み、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、８から４８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ４から独立に選択され、式中、各Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アラルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ５は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ｎは、１から５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：
【化１０４】
2018530560.tif 000012
の部分か選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ７）２Ｒ８から選択され、式中、
各Ｒ７は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、
Ｒ８は、電子対およびＨから選択され、そして
Ｒ６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ９）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および式：
【化１０５】
2018530560.tif 000013
の部分から選択され、式中、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｒ１０は、Ｇ、Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１ＯＨ、アシル、トリチル、４メトキシトリチル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＣ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
ｍは、１から５の整数であり、
Ｒ１１は、式−（Ｏ−アルキル）ｙ−を有し、式中、ｙは、３から１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ１２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１の各例は、
−Ｎ（Ｒ１３）２Ｒ１４［式中、各Ｒ１３は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、そしてＲ１４は、電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：
【化１０６】
2018530560.tif 000014
の部分［式中、
Ｒ１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＮＲ１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
Ｒ１８は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｑは、１から５の整数であり、
Ｒ１６は、電子対およびＨから選択され；
各Ｒ１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：
【化１０７】
2018530560.tif 000015
の部分［式中、
Ｒ１９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｒＮＲ２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）４ＮＨ２およびＧから選択され、式中、
Ｒ２２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｒは、１から５の整数であり、
Ｒ２０は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２１は、電子対およびＨから選択される］
から独立に選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｓＮＲ２４Ｃ（＝ＮＨ
）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２および式：
【化１０８】
2018530560.tif 000016
の部分から選択され、式中、
Ｒ２３は、式−（Ｏ−アルキル）ｖ−ＯＨを有し、式中、ｖは、３から１０の整数であり、ｖ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ２４は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｓは、１から５の整数であり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）６Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２Ｓ２（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）−から選択され；
各Ｒ２５は、式−（ＣＨ２）２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２６）２を有し、式中、各Ｒ２６は、式−（ＣＨ２）６ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２を有し；
Ｒ３は、電子対、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ−ＣＰＰから選択される細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：
【化１０９】
2018530560.tif 000017
を有し、式中、ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
ここで、前記ターゲティング配列は、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的であり、
ここで、前記被験体は、前記被験体におけるミオスタチン活性およびミオスタチン発現の一方または両方を阻害するミオスタチン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは関連障害のうちの少なくとも１つを処置する、方法。
（項目６１）
各Ｎｕが、独立に、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、イノシン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジンまたは１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル）である、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記標的領域が、（ｉ）少なくとも１つのヌクレオチドが前記エクソンに伴うスプライス接合部にわたるヌクレオチド配列；または（ｉｉ）ヌクレオチドが前記エクソン接合部に伴うスプライス接合部にわたらないヌクレオチド配列から選択される、項目６０に記
載の方法。
（項目６３）
前記ターゲティング配列が、配列番号７６〜３４８５から選択される配列を含むか、配列番号７６〜３４８５から選択されるターゲティング配列の少なくとも１０の連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号７６〜３４８５から選択されるターゲティング配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する変異体である、項目６０に記載の方法。
（項目６４）
ｉ）Ｙが、Ｏであり、Ｒ２が、ＨもしくはＧから選択され、Ｒ３が、電子対もしくはＨから選択されるか；
ｉｉ）Ｒ２が、Ｇであり、式中、前記ＣＰＰが配列番号３４８６〜３５０１から選択される配列を有するか；
ｉｉｉ）各Ｒ１が、−Ｎ（ＣＨ３）２であるか；
ｉｖ）少なくとも１つのＲ１が、
【化１１０】
2018530560.tif 000018
から選択されるか；または
ｖ）Ｒ１基の５０〜９０％が、−Ｎ（ＣＨ３）２である、項目６０に記載の方法。
（項目６５）
Ｔが、式：
【化１１１】
2018530560.tif 000019
を有し、式中、Ａは、−Ｎ（ＣＨ３）２であり、Ｒ６は、式：
【化１１２】
2018530560.tif 000020
を有し、式中、Ｒ１０は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１ＯＨである、項目６０に記載の方法。
（項目６６）
各Ｙが、Ｏであり、Ｔが、
【化１１３】
2018530560.tif 000021
から選択される、項目６０に記載の方法。
（項目６７）
Ｔが、式：
【化１１４】
2018530560.tif 000022
を有する、項目６０に記載の方法。
（項目６８）
ジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体においてデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置する方法であって、
被験体に、式（ＶＩ）：
【化１１５】
2018530560.tif 000023
を含む化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含み、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、８から４８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ４から独立に選択され、式中、各Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ５は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ｎは、１から５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：
【化１１６】
2018530560.tif 000024
の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨおよび−Ｎ（Ｒ７）２Ｒ８から選択され、式中
各Ｒ７は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、
Ｒ８は、電子対およびＨから選択され、
Ｒ６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ９）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および式：
【化１１７】
2018530560.tif 000025
の部分から選択され、式中、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｒ１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
ｍは、１から５の整数であり、
Ｒ１１は、式−（Ｏ−アルキル）ｙ−を有し、式中、ｙは、３から１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ１２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３から選択され；
Ｒ３は、電子対、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ここで、前記ターゲティング配列は、配列番号７６〜３４８５から選択される配列を含むか、
配列番号７６〜３４８５から選択されるか、配列番号７６〜３４８５から選択される配列の少なくとも１０の連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号７６〜３４８５から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する変異体であり、
ここで、前記被験体は、前記被験体におけるミオスタチン活性およびミオスタチン発現の一方または両方を阻害するミオスタチン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは関連障害のうちの少なくとも１つを処置する、方法。
（項目６９）
ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体においてデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置する方法であって、
被験体に、式（Ｉ）：
【化１１８】
2018530560.tif 000026
を含む化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含み、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、８から４８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ４から独立に選択され、式中、各Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アル
キル、アラルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ５は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ｎは１から５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：
【化１１９】
2018530560.tif 000027
の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨ、−Ｎ（Ｒ７）２Ｒ８から選択され、式中
Ｒ７は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、
Ｒ８は、電子対およびＨから選択され、
Ｒ６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ９）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および式：
【化１２０】
2018530560.tif 000028
の部分から選択され、式中、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１０は、Ｇ、Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１ＯＨ、アシル、トリチル、４メトキシトリチル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＣ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
ｍは、１から５の整数であり、
Ｒ１１は、式−（Ｏ−アルキル）ｙ−を有し、式中、ｙは、３から１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ１２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１の各例は、
−Ｎ（Ｒ１３）２Ｒ１４［式中、各Ｒ１３は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、Ｒ１４は、電子対およびＨから選択される］；
式（ＩＩ）：
【化１２１】
2018530560.tif 000029
の部分［式中、
Ｒ１５は、Ｈ、Ｇ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＮＲ１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）
５ＮＲ１８Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
Ｒ１８は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｑは、１から５の整数であり、
Ｒ１６は、電子対およびＨから選択され；そして
各Ｒ１７は、Ｈおよびメチルから独立に選択される］；および
式（ＩＩＩ）：
【化１２２】
2018530560.tif 000030
の部分［式中、
Ｒ１９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｒＮＲ２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ２２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）４ＮＨ２およびＧから選択され、式中、
Ｒ２２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｒは、１から５の整数であり、
Ｒ２０は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２１は、電子対およびＨから選択される］から独立に選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｓＮＲ２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ２４Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ（ＮＨ２）（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２および式：
【化１２３】
2018530560.tif 000031
の部分から選択され、式中、
Ｒ２３は、式−（Ｏ−アルキル）ｖ−ＯＨを有し、式中、ｖは、３から１０の整数であり、ｖ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ２４は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
ｓは、１から５の整数であり；
Ｌは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）６Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２Ｓ２（ＣＨ２）２Ｃ（Ｏ）−から選択され、
各Ｒ２５は、式−（ＣＨ２）２ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２６）２を有し、式中、各Ｒ２６は、式−（ＣＨ２）６ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２を有し；
Ｒ３は、電子対、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ここで、Ｇは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨ−ＣＰＰ、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＨ−ＣＰＰおよび−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＮＨ−ＣＰＰから選択される、細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）およびリンカー部分であるか、またはＧは、式：
【化１２４】
2018530560.tif 000032
を有し、式中、ＣＰＰは、Ｇの最大で１つの例が存在するという条件で、ＣＰＰのカルボキシ末端において、アミド結合により、リンカー部分に結合しており、
ここで、前記ターゲティング配列は、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１０またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的であり、
ここで、前記被験体は、前記被験体におけるミオスタチン活性およびミオスタチン発現の一方または両方を阻害するミオスタチン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは関連障害のうちの少なくとも１つを処置する、方法。
（項目７０）
各Ｎｕが、独立に、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、シトシン、イノシン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、Ｃ５−プロピニル修飾ピリミジンまたは１０−（９−（アミノエトキシ）フェノキサジニル）である、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記ターゲティング配列が、配列番号１６〜７５から選択される配列を含むか、配列番号１６〜７５から選択されるターゲティング配列の少なくとも１０の連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号１６〜７５から選択されるターゲティング配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する変異体である、項目６９に記載の方法。
（項目７２）
ｉ）Ｙが、Ｏであり、Ｒ２が、ＨもしくはＧから選択され、Ｒ３が、電子対もしくはＨから選択されるか；
ｉｉ）Ｒ２が、Ｇであり、前記ＣＰＰが、配列番号３４８６〜３５０１から選択される配列を有するか；
ｉｉｉ）各Ｒ１が、−Ｎ（ＣＨ３）２であるか；
ｉｖ）少なくとも１つのＲ１が、
【化１２５】
2018530560.tif 000033
から選択されるか、または
ｖ）Ｒ１基の５０〜９０％が、−Ｎ（ＣＨ３）２である、項目６９に記載の方法。
（項目７３）
Ｔが、式：
【化１２６】
2018530560.tif 000034
を有し、式中、Ａが、−Ｎ（ＣＨ３）２であり、Ｒ６が式：
【化１２７】
2018530560.tif 000035
を有し、式中、Ｒ１０が、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１ＯＨである、項目６９に記載の方法。
（項目７４）
各Ｙが、Ｏであり、Ｔが、
【化１２８】
2018530560.tif 000036
から選択される、項目６９に記載の方法。
（項目７５）
Ｔが、式：
【化１２９】
2018530560.tif 000037
を有する、項目６９に記載の方法。
（項目７６）
被験体においてデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置する方法であって、
被験体に、式（ＶＩ）：
【化１３０】
2018530560.tif 000038
を含む化合物または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含み、式中、
各Ｎｕは、一緒になってターゲティング配列を形成するヌクレオ塩基であり；
Ｚは、８から４８の整数であり；
各Ｙは、Ｏおよび−ＮＲ４から独立に選択され、式中、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アラルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ５Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２およびＧから独立に選択され、式中、Ｒ５は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ｎは、１から５の整数であり；
Ｔは、ＯＨおよび式：
【化１３１】
2018530560.tif 000039
の部分から選択され、式中、
Ａは、−ＯＨおよび−Ｎ（Ｒ７）２Ｒ８から選択され、式中、
各Ｒ７は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから独立に選択され、
Ｒ８は、電子対およびＨから選択され、
Ｒ６は、ＯＨ、−Ｎ（Ｒ９）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２および式：
【化１３２】
2018530560.tif 000040
の部分から選択され、式中、
Ｒ９は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ１０は、Ｇ、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１ＯＨ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）２ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２）５ＮＲ１２Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２から選択され、式中、
ｍは、１から５の整数であり、
Ｒ１１は、式−（Ｏ−アルキル）ｙ−を有し、式中、ｙは、３から１０の整数であり、
ｙ個のアルキル基の各々は、Ｃ２〜Ｃ６アルキルから独立に選択され；
Ｒ１２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｇ、アシル、トリチル、４−メトキシトリチル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２および−Ｃ（Ｏ）−Ｒ２３から選択され；
Ｒ３は、電子対、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ここで、前記ターゲティング配列は、配列番号１６〜７５から選択される配列を含むか、配列番号１６〜７５から選択されるか、配列番号１６〜７５から選択される配列の少なくとも１０の連続ヌクレオチドの断片であるか、または配列番号１６〜７５から選択される配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する変異体であり、
ここで、前記被験体は、前記被験体の筋細胞内で機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは関連障害のうちの少なくとも１つを処置する、方法。
（項目７７）
１２〜４０サブユニットのアンチセンスオリゴマー化合物と、薬学的に許容される担体とを含むミオスタチン関連医薬組成物であって、前記化合物が、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットと；
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列と
を含むミオスタチン関連組成物と組み合わせた、
１７〜４０サブユニットのアンチセンスオリゴマー化合物と、薬学的に許容される担体とを含むジストロフィン関連医薬組成物であって、前記化合物が、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または、（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットと；
ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１０またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列と
を含むジストロフィン関連医薬組成物。
（項目７８）
前記ジストロフィン関連組成物と前記ミオスタチン関連組成物とが、同じ医薬組成物として提供される、７７に記載の組成物。
（項目７９）
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得る遺伝子変異を有する被験体においてミオスタチン発現をモジュレートするための方法であって、
前記被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップであって、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、ステップと、
ミオスタチンプレｍＲＮＡ転写物内の標的領域に前記アンチセンスオリゴマーを結合させるステップと、
前記標的領域のヒトミオスタチンｍＲＮＡ転写物への転写を阻害するステップとを含み、
前記被験体が、前記被験体におけるジストロフィン発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与されている、方法。
（項目８０）
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得る遺伝子変異を有する被験体においてエクソン２の発現を減少させるための方法であって、
前記被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップと、ミオスタチンｍＲＮＡ転写物内のエクソン２の転写を阻害するステップとを含み、
前記被験体が、前記被験体におけるジストロフィン発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与されている、方法。
（項目８１）
ミオスタチンｍＲＮＡ転写物内のエクソン２の発現が、約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％減少する、項目８０に記載の方法。
（項目８２）
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体の筋細胞または組織における機能的なミオスタチンタンパク質の蓄積を減少させるための方法であって、
前記被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップと、
ミオスタチンｍＲＮＡ転写物内のエクソン２の転写を阻害するステップとを含み、
前記被験体が、前記被験体におけるジストロフィン発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与されている、方法。
（項目８３）
デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置するための医薬であって、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み；ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、１２〜４０サブユニットを含むアンチセンスオリゴマー化合物と；
機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤とを含む医薬。
（項目８４）
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体においてデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害の進行を阻害するための方法であって、
前記被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップと、ミオスタチンｍＲＮＡ転写物内のエクソン２の転写を阻害するステップとを含み、
前記被験体が、前記被験体におけるジストロフィン発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーの進行を阻害する、方法。
（項目８５）
デュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を有する被験体において機能的なミオスタチンタンパク質の蓄積を減少させる方法であって、
前記被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップと、
ミオスタチンｍＲＮＡ転写物内のエクソン２の転写を阻害するステップとを含み、
前記被験体における機能的なミオスタチンタンパク質の蓄積が減少し、
前記被験体が、前記被験体の筋細胞内で機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与されている、方法。
（項目８６）
そのような処置を必要とする被験体においてデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害を処置するための方法であって、
前記被験体において少なくとも約２００〜４００ｎＭのアンチセンスオリゴマーのピークの血中濃度を得るための有効量でアンチセンスオリゴマーを投与するステップを含む方法。
（項目８７）
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体において骨格筋量不足を処置する方法であって、
（ａ）前記被験体におけるミオスタチンタンパク質の血液中または組織中レベルを測定するステップと、
（ｂ）前記被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップと、
（ｃ）ミオスタチンｍＲＮＡ転写物内のエクソン２の転写を阻害するステップと、
（ｄ）選択した時間以後、前記被験体におけるミオスタチンタンパク質レベルを測定するステップと、
（ｅ）（ｄ）で測定された前記レベルを使用して前記の投与を反復するステップであって、投与されるアンチセンスオリゴマーの量の用量または投薬スケジュールを調整するステップとを含み、前記被験体におけるミオスタチンタンパク質の前記レベルが、前記アンチセンスオリゴマーの投与後に低下し、
前記被験体が、前記被験体の筋細胞において機能的なジストロフィン発現タンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与されている、方法。
（項目８８）
ジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得るジストロフィン遺伝子における変異を有する被験体においてデュシェンヌ型筋ジストロフィーおよび関連障害の進行を阻害する方法であって、
前記被験体に、１７〜４０サブユニットを含み、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、前記アンチセンスオリゴマーが、前記エクソンのスキッピングを誘導し、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記被験体が、前記被験体におけるミオスタチンの活性および発現のうちの一方または両方を阻害するミオスタチン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーまたは関連障害のうちの少なくとも１つの進行を阻害する、方法。
（項目８９）
デュシェンヌ型筋ジストロフィーの進行を阻害する方法であって、
被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記被験体が、前記被験体の筋細胞において機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与され、それによりデュシェンヌ型筋ジストロフィーの進行を阻害する、方法。
（項目９０）
前記アンチセンスオリゴマーの３’末端または５’末端にコンジュゲートするアルギニンに富むペプチド配列をさらに含み、前記アルギニンに富むペプチド配列が、配列番号３４８６〜３５０１から選択される配列を含む、前出の項目のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴマー。
（項目９１）
Ｒ２が、Ｇであり、前記ＣＰＰが、配列番号３４８６〜３５０１から選択される配列を含む、項目６０から７５のいずれか一項に記載の方法。
（項目９２）
アンチセンスオリゴマーの３’末端にコンジュゲートするアルギニンに富むペプチド配列をさらに含み、前記アルギニンに富むペプチド配列が、配列番号３４８６〜３５０１から選択される配列を含む、項目８３に記載の医薬。
（項目９３）
１７〜４０サブユニットを含み、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む標的領域内の１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含むアンチセンスオリゴマーであって、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、ジストロフィンを標的とする前記オリゴマーと；
１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含むアンチセンスオリゴマーであって、
（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含む、ミオスタチンを標的とする前記オリゴマーとを含む組成物。
（項目９４）
ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得る遺伝子変異を有する被験体においてジストロフィン発現をモジュレートするための方法であって、
前記被験体に、１７〜４０サブユニットを含み、ヒトジストロフィンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記被験体が、前記被験体におけるミオスタチン活性およびミオスタチン発現の一方または両方を阻害するミオスタチン治療剤を投与されている、方法。
（項目９５）
ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのプロセシングの間、エクソンスキッピングを誘導できるアンチセンスオリゴマーによって処置され得る遺伝子変異を有する被験体においてミオスタチン発現をモジュレートするための方法であって、
前記被験体に、１２〜４０サブユニットを含み、ヒトミオスタチンプレｍＲＮＡのエクソンを含む１２またはこれを超える連続ヌクレオチドと相補的なターゲティング配列をさらに含む、有効量のアンチセンスオリゴマーを投与するステップを含み、
前記オリゴマーが、（ｉ）修飾ヌクレオシド間連結、（ｉｉ）修飾糖部分、または（ｉｉｉ）前出の組合せを有するヌクレオチド類似体である少なくとも１つのサブユニットを含み、
前記被験体が、前記被験体の筋細胞内で機能的なジストロフィンタンパク質の発現を増加させるジストロフィン治療剤を投与されている、方法。
（項目９６）
前記アンチセンスオリゴマー、ジストロフィン治療剤またはミオスタチン治療剤の少なくとも１つが、前記被験体に全身投与される、項目１から９５のいずれかに記載の方法。
（項目９７）
前記被験体が、ヒトである、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記被験体が、７歳またはこれを超える、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
アンチセンスオリゴマーまたはジストロフィン治療剤が、配列番号９２７を含まない、項目９８に記載の方法。