【手続補正書】
【提出日】平成31年3月7日(2019.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポンペ病の治療のための組成物であって、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードするｍＲＮＡを含み、前記組成物は、治療を必要とする被験体に有効な用量及び投与間隔で投与され、ポンペ病の少なくとも１つの症状または特徴の強度、重症度、または頻度を低減するか、または発症を遅らせることを特徴とする、前記組成物。
【請求項２】
ポンペ病の治療のための組成物であって、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードするｍＲＮＡを含み、前記組成物の治療有効量は、治療を必要とする被験体に投与されて、被験体の肥大性心筋症を治療することを特徴とする、前記組成物。
【請求項３】
前記ｍＲＮＡが、リポソーム内に封入される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２‐２００、ＭＣ３、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ‐Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾール系）、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴ５００１、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ及びＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ‐Ｋ‐ＤＭＡ、ＤＬｉｎ‐Ｋ‐ＸＴＣ２‐ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、ならびにそれらの混合物からなる群から選択されるカチオン性脂質を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記１つ以上のカチオン性脂質が、ｃＫＫ‐Ｅ１２：
【化７】
2018511588.tif 000001
を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォチジルコリン）  ＤＰＰＥ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２‐ジミリストイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（，２‐ジオレオイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホ‐（１’‐ｒａｃ‐グリセロール））及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項４〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロール及び／またはＰＥＧ化コレステロールである、請求項４〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、鎖長Ｃ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合した最大鎖長５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、請求項４〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記カチオン性脂質が、前記リポソームの約３０〜５０重量％を占める、請求項４〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
カチオン性脂質が、リポソームの約４０重量％を占める、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール：ＰＥＧ化脂質の比が、モル比でおよそ４０：３０：２０：１０である、請求項４〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール：ＰＥＧ化脂質の比が、重量比でおよそ４０：３０：２５：５である、請求項４〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール：ＰＥＧ化脂質の比が、重量比でおよそ４０：３２：２５：３である、請求項４〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記リポソームが：
ｃＫＫ‐Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋ；
Ｃ１２‐２００、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋ；
ＨＧＴ４００３、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋ；または、
ＩＣＥ、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋから選択される組み合わせを含む、請求項３〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記リポソームが約１００ｎｍ未満のサイズを有する、請求項３〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物は、前記ｍＲＮＡが、約０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の有効用量で投与されるように投与されることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物は、前記ｍＲＮＡが、約０．１〜３．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の有効用量で投与されるように投与されることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物は、前記ｍＲＮＡが、約０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の有効用量で投与されるように投与されることを特徴とする、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物は、前記ｍＲＮＡが、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重の有効用量で投与されるように投与されることを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物は静脈内に投与されることを特徴とする、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物は筋肉内に投与されることを特徴とする、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記筋肉内投与を、骨格筋、平滑筋、心筋及びそれらの組合せからなる群から選択される筋肉に対して行う、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物は週１回投与されることを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物は週２回投与されることを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物は月２回投与されることを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物は月１回投与されることを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物は１４日に１回投与されることを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物の前記投与は、肝臓内でのＧＡＡタンパク質の発現をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物の前記投与は、筋肉組織または筋肉細胞内でのＧＡＡタンパク質の発現をもたらすことを特徴とする、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記筋肉組織が、骨格筋、平滑筋、心筋及びそれらの組合せから選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記筋肉細胞が、筋細胞、筋管、筋芽細胞、心筋細胞、心筋芽細胞及びそれらの組合せからなる群より選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記組成物の投与は、血清中でのＧＡＡタンパク質発現をもたらすことを特徴とする、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の尿中Ｇｌｃ４レベルが、治療前のベースラインの尿中Ｇｌｃ４レベルに比べて低下することを特徴とする、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の筋グリコーゲンレベルが、治療前のベースラインの筋グリコーゲンレベルに比べて低下することを特徴とする、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の肝グリコーゲンレベルが、治療前のベースラインの肝グリコーゲンレベルに比べて低下することを特徴とする、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清アスパラギン酸トランスアミナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清アスパラギン酸トランスアミナーゼレベルに比べて低下することを特徴とする、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清アラニントランスアミナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清アラニントランスアミナーゼレベルに比べて低下することを特徴とする、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清クレアチンキナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清クレアチンキナーゼレベルに比べて低下することを特徴とする、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清乳酸デヒドロゲナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清乳酸デヒドロゲナーゼレベルに比べて低下することを特徴とする、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体由来の生物学的試料中のＧＡＡ酵素活性レベルが、治療前の生物学的試料中のベースラインのＧＡＡ酵素活性レベルに比べて上昇することを特徴とする、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ｍＲＮＡがコドン最適化されている、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記コドン最適化ｍＲＮＡが配列番号３を有する、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記ｍＲＮＡが、配列番号８の５’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記ｍＲＮＡが、配列番号９または配列番号１０の３’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
前記ｍＲＮＡが、配列番号１１または配列番号１２を有する、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４８】
前記１つ以上の修飾ヌクレオチドが、プソイドウリジン、Ｎ‐１‐メチル‐プソイドウリジン、２‐アミノアデノシン、２‐チオチミジン、イノシン、ピロロ‐ピリミジン、３‐メチルアデノシン、５‐メチルシチジン、Ｃ‐５プロピニル‐シチジン、Ｃ‐５プロピニル‐ウリジン、２‐アミノアデノシン、Ｃ５‐ブロモウリジン、Ｃ５‐フルオロウリジン、Ｃ５‐ヨードウリジン、Ｃ５‐プロピニル‐ウリジン、Ｃ５‐プロピニル‐シチジン、Ｃ５‐メチルシチジン、２‐アミノアデノシン、７‐デアザアデノシン、７‐デアザグアノシン、８‐オキソアデノシン、８‐オキソグアノシン、Ｏ（６）‐メチルグアニン及び／または２‐チオシチジンを含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記ｍＲＮＡが未修飾である、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５０】
酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする有効量のｍＲＮＡをリポソーム内に封入して含むポンペ病の治療用組成物であって、前記リポソームが、カチオン性脂質ｃＫＫ‐Ｅ１２：
【化８】
2018511588.tif 000002
を含む、前記治療用組成物。
【請求項５１】
前記リポソームが、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質をさらに含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ））  ＤＰＰＥ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２‐ジミリストイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（，２‐ジオレオイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホ‐（１’‐ｒａｃ‐グリセロール））及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロール及び／またはＰＥＧ化コレステロールから選択される、請求項５１または５２に記載の組成物。
【請求項５４】
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、鎖長Ｃ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合している最大鎖長５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５５】
前記リポソームが、ｃＫＫ‐Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋを含む、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５６】
前記カチオン性脂質が、リポソームの約３０〜５０ｍｏｌ％を占める、請求項５０〜５５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５７】
前記カチオン性脂質が、リポソームの約４０ｍｏｌ％を占める、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
ｃＫＫ‐Ｅ１２：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋの比が、モル比でおよそ４０：３０：２０：１０である、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５９】
ｃＫＫ‐Ｅ１２：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋの比が、モル比でおよそ４０：３０：２５：５である、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６０】
ｃＫＫ‐Ｅ１２：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋの比が、モル比でおよそ４０：３２：２５：３である、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６１】
前記リポソームが約１００ｎｍ未満のサイズを有する、請求項５０〜６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６２】
前記組成物を静脈内投与用に製剤化する、請求項５０〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６３】
前記組成物を筋肉内投与用に製剤化する、請求項５０〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６４】
前記ｍＲＮＡが配列番号３を有する、請求項５０〜６３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６５】
前記ｍＲＮＡが、配列番号８の５’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
前記ｍＲＮＡが、配列番号９または配列番号１０の３’ＵＴＲ配列をさらに含む、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ｍＲＮＡが、配列番号１１または配列番号１２を有する、請求項５０〜６６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６８】
ポンペ病の治療用組成物であって、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする有効量のｍＲＮＡをリポソーム内に封入して含み、前記ｍＲＮＡが配列番号３を有し、及び、
前記リポソームが、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール系脂質及びＰＥＧ修飾脂質をさらに含む、前記治療用組成物。
【請求項６９】
ポンペ病の治療用組成物であって、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする有効量のｍＲＮＡをリポソーム内に封入して含み、前記ｍＲＮＡが配列番号１１または配列番号１２を有し、及び、
前記リポソームが、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール系脂質及びＰＥＧ修飾脂質をさらに含む、前記治療用組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
本発明の他の特徴、目的、及び利点は、以下に記載する発明を実施するための形態、添付の図面及び特許請求の範囲において明らかである。しかしながら、発明を実施するための形態、図面、及び特許請求の範囲は、本発明の実施形態を示してはいるが、これらは単なる例示に過ぎず、限定するものではないことを理解すべきである。本発明の範囲内の様々な変更及び修正は、当業者にとって明らかなものとなるであろう。
特定の実施形態において、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ポンペ病の治療方法であって、治療を必要とする被験体に、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードするｍＲＮＡを含む組成物を、有効な用量及び投与間隔で投与し、ポンペ病の少なくとも１つの症状または特徴の強度、重症度、または頻度を低減するか、または発症を遅らせることを含む、前記治療方法。
（項目２）
ポンペ病の治療方法であって、治療を必要とする被験体に、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードするｍＲＮＡを含む組成物の治療有効量を投与し、被験体の肥大性心筋症を治療することを含む、前記治療方法。
（項目３）
前記ｍＲＮＡをリポソーム内に封入する、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記リポソームが、１つ以上のカチオン性脂質、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質を含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記１つ以上のカチオン性脂質が、Ｃ１２‐２００、ＭＣ３、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎｋＣ２ＤＭＡ、ｃＫＫ‐Ｅ１２、ＩＣＥ（イミダゾール系）、ＨＧＴ５０００、ＨＧＴ５００１、ＤＯＤＡＣ、ＤＤＡＢ、ＤＭＲＩＥ、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＧＳ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＤＭＡ及びＤＭＤＭＡ、ＤＯＤＡＣ、ＤＬｅｎＤＭＡ、ＤＭＲＩＥ、ＣＬｉｎＤＭＡ、ＣｐＬｉｎＤＭＡ、ＤＭＯＢＡ、ＤＯｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＤＡＰ、ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ、ＤＬｉｎＣＤＡＰ、ＫＬｉｎ‐Ｋ‐ＤＭＡ、ＤＬｉｎ‐Ｋ‐ＸＴＣ２‐ＤＭＡ、ＨＧＴ４００３、ならびにそれらの混合物からなる群から選択されるカチオン性脂質を含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記１つ以上のカチオン性脂質が、ｃＫＫ‐Ｅ１２：
【化７】
2018511588.tif 000003
を含む、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォチジルコリン）  ＤＰＰＥ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２‐ジミリストイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（，２‐ジオレオイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホ‐（１’‐ｒａｃ‐
グリセロール））及びそれらの組合せからなる群から選択される、項目４〜６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロール及び／またはＰＥＧ化コレステロールである、項目４〜７に記載の方法。
（項目９）
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、鎖長Ｃ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合した最大鎖長５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、項目４〜８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記カチオン性脂質が、前記リポソームの約３０〜５０重量％を占める、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
カチオン性脂質が、リポソームの約４０重量％を占める、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール：ＰＥＧ化脂質の比が、モル比でおよそ４０：３０：２０：１０である、項目４〜１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール：ＰＥＧ化脂質の比が、重量比でおよそ４０：３０：２５：５である、項目４〜１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
カチオン性脂質：非カチオン性脂質：コレステロール：ＰＥＧ化脂質の比が、重量比でおよそ４０：３２：２５：３である、項目４〜１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記リポソームが：
ｃＫＫ‐Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋ；
Ｃ１２‐２００、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋ；
ＨＧＴ４００３、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋ；または、
ＩＣＥ、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋから選択される組み合わせを含む、項目３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記リポソームが約１００ｎｍ未満のサイズを有する、項目３〜１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記ｍＲＮＡを、約０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の有効用量で投与する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記ｍＲＮＡを、約０．１〜３．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の有効用量で投与する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記ｍＲＮＡを、約０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の有効用量で投与する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記ｍＲＮＡを、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重の有効用量で投与する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記組成物を静脈内に投与する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記組成物を筋肉内に投与する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記筋肉内投与を、骨格筋、平滑筋、心筋及びそれらの組合せからなる群から選択される筋肉に対して行う、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記組成物を週１回投与する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記組成物を週２回投与する、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記組成物を月２回投与する、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記組成物を月１回投与する、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記組成物を１４日に１回投与する、項目１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記組成物の前記投与が、肝臓内でのＧＡＡタンパク質の発現をもたらす、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記組成物の前記投与が、筋肉組織または筋肉細胞内でのＧＡＡタンパク質の発現をもたらす、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記筋肉組織が、骨格筋、平滑筋、心筋及びそれらの組合せから選択される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記筋肉細胞が、筋細胞、筋管、筋芽細胞、心筋細胞、心筋芽細胞及びそれらの組合せからなる群より選択される、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記組成物の投与が、血清中でのＧＡＡタンパク質発現をもたらす、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の尿中Ｇｌｃ４レベルが、治療前のベースラインの尿中Ｇｌｃ４レベルに比べて低下する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の筋グリコーゲンレベルが、治療前のベースラインの筋グリコーゲンレベルに比べて低下する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の肝グリコーゲンレベルが、治療前のベースラインの肝グリコーゲンレベルに比べて低下する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清アスパラギン酸トランスアミナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清アスパラギン酸トランスアミナーゼレベルに比べて低下する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清アラニントランスアミナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清アラニントランスアミナーゼレベルに比べて低下する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清クレアチンキナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清クレアチンキナーゼレベルに比べて低下する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体の血清乳酸デヒドロゲナーゼレベルが、治療前のベースラインの血清乳酸デヒドロゲナーゼレベルに比べて低下する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記組成物の前記投与の結果、前記被験体由来の生物学的試料中のＧＡＡ酵素活性レベルが、治療前の生物学的試料中のベースラインのＧＡＡ酵素活性レベルに比べて上昇する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記ｍＲＮＡがコドン最適化されている、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記コドン最適化ｍＲＮＡが配列番号３を有する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記ｍＲＮＡが、配列番号８の５’ＵＴＲ配列をさらに含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記ｍＲＮＡが、配列番号９または配列番号１０の３’ＵＴＲ配列をさらに含む、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
前記ｍＲＮＡが、配列番号１１または配列番号１２を有する、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
前記ｍＲＮＡが、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、先行項目のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記１つ以上の修飾ヌクレオチドが、プソイドウリジン、Ｎ‐１‐メチル‐プソイドウリジン、２‐アミノアデノシン、２‐チオチミジン、イノシン、ピロロ‐ピリミジン、３‐メチルアデノシン、５‐メチルシチジン、Ｃ‐５プロピニル‐シチジン、Ｃ‐５プロピニル‐ウリジン、２‐アミノアデノシン、Ｃ５‐ブロモウリジン、Ｃ５‐フルオロウリジン、Ｃ５‐ヨードウリジン、Ｃ５‐プロピニル‐ウリジン、Ｃ５‐プロピニル‐シチジン、Ｃ５‐メチルシチジン、２‐アミノアデノシン、７‐デアザアデノシン、７‐デアザグアノシン、８‐オキソアデノシン、８‐オキソグアノシン、Ｏ（６）‐メチルグアニン及び／または２‐チオシチジンを含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記ｍＲＮＡが未修飾である、項目１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする有効量のｍＲＮＡをリポソーム内に封入して含むポンペ病の治療用組成物であって、前記リポソームが、カチオン性脂質ｃＫＫ‐Ｅ１２：
【化８】
2018511588.tif 000004
を含む、前記治療用組成物。
（項目５１）
前記リポソームが、１つ以上の非カチオン性脂質、１つ以上のコレステロール系脂質、及び１つ以上のＰＥＧ修飾脂質をさらに含む、項目５０に記載の組成物。
（項目５２）
前記１つ以上の非カチオン性脂質が、ＤＳＰＣ（１，２‐ジステアロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＰＰＣ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン）、ＤＯＰＥ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＣ（１，２‐ジオレイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスフォチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ））  ＤＰＰＥ（１，２‐ジパルミトイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＭＰＥ（１，２‐ジミリストイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン）、ＤＯＰＧ（，２‐ジオレオイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホ‐（１’‐ｒａｃ‐グリセロール））及びそれらの組合せからなる群から選択される、項目５１に記載の組成物。
（項目５３）
前記１つ以上のコレステロール系脂質が、コレステロール及び／またはＰＥＧ化コレステロールから選択される、項目５１または５２に記載の組成物。
（項目５４）
前記１つ以上のＰＥＧ修飾脂質が、鎖長Ｃ６〜Ｃ２０のアルキル鎖（複数可）を有する脂質に共有結合している最大鎖長５ｋＤａのポリ（エチレン）グリコール鎖を含む、項目５１〜５３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５５）
前記リポソームが、ｃＫＫ‐Ｅ１２、ＤＯＰＥ、コレステロール及びＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋを含む、項目５０〜５４のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５６）
前記カチオン性脂質が、リポソームの約３０〜５０ｍｏｌ％を占める、項目５０〜５５のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５７）
前記カチオン性脂質が、リポソームの約４０ｍｏｌ％を占める、項目５６に記載の組成物。
（項目５８）
ｃＫＫ‐Ｅ１２：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋの比が、モル比でおよそ４０：３０：２０：１０である、項目５５〜５７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目５９）
ｃＫＫ‐Ｅ１２：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋの比が、モル比でおよそ４０：３０：２５：５である、項目５５〜５７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６０）
ｃＫＫ‐Ｅ１２：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ‐ＰＥＧ２Ｋの比が、モル比でおよそ４０：３２：２５：３である、項目５５〜５７のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６１）
前記リポソームが約１００ｎｍ未満のサイズを有する、項目５０〜６０のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６２）
前記組成物を静脈内投与用に製剤化する、項目５０〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６３）
前記組成物を筋肉内投与用に製剤化する、項目５０〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６４）
前記ｍＲＮＡが配列番号３を有する、項目５０〜６３のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６５）
前記ｍＲＮＡが、配列番号８の５’ＵＴＲ配列をさらに含む、項目６４に記載の組成物。
（項目６６）
前記ｍＲＮＡが、配列番号９または配列番号１０の３’ＵＴＲ配列をさらに含む、項目６４に記載の組成物。
（項目６７）
前記ｍＲＮＡが、配列番号１１または配列番号１２を有する、項目５０〜６６のいずれか一項に記載の組成物。
（項目６８）
ポンペ病の治療用組成物であって、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする有効量のｍＲＮＡをリポソーム内に封入して含み、前記ｍＲＮＡが配列番号３を有し、及び、
前記リポソームが、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール系脂質及びＰＥＧ修飾脂質をさらに含む、前記治療用組成物。
（項目６９）
ポンペ病の治療用組成物であって、酸性αグルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする有効量のｍＲＮＡをリポソーム内に封入して含み、前記ｍＲＮＡが配列番号１１または配列番号１２を有し、及び、
前記リポソームが、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、コレステロール系脂質及びＰＥＧ修飾脂質をさらに含む、前記治療用組成物。