【手続補正書】
【提出日】平成31年3月29日(2019.3.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
3つの相補性決定領域(CDR1〜CDR3)及び4つのフレームワーク領域を含む免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドであって、
(a)CDR1、CDR2、及び/又はCDR3における少なくとも1個のリジン残基が、少なくとも1個のヒスチジン残基で置換されており、かつ/又は
(b)CDR1、CDR2、及び/又はCDR3における少なくとも1個のアルギニン残基が、少なくとも1個のヒスチジン残基で置換されており;
該ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドと比較して増加した腸安定性を有する、前記ポリペプチド。
【請求項２】
免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドの腸安定性を増加させる方法であって、該免疫グロブリン鎖可変ドメインが、3つの相補性決定領域(CDR1〜CDR3)及び4つのフレームワーク領域を含み、該方法が、
(a)CDR1、CDR2、及び/又はCDR3における少なくとも1個のリジン残基を、少なくとも1個のヒスチジン残基で置換する工程、及び/又は
(b)CDR1、CDR2、及び/又はCDR3における少なくとも1個のアルギニン残基を、少なくとも1個のヒスチジン残基で置換する工程を含む、前記方法。
【請求項３】
免疫グロブリン鎖可変ドメインを含むポリペプチドを作製する方法であって、該免疫グロブリン鎖可変ドメインが、3つの相補性決定領域(CDR1〜CDR3)及び4つのフレームワーク領域を含み、該方法が、
(a)CDR1、CDR2、及び/又はCDR3における少なくとも1個のリジン残基を、少なくとも1個のヒスチジン残基で置換する工程、及び/又は
(b)CDR1、CDR2、及び/又はCDR3における少なくとも1個のアルギニン残基を、少なくとも1個のヒスチジン残基で置換する工程を含み、
該ポリペプチドが、該ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドと比較して増加した腸安定性を有する、前記方法。
【請求項４】
前記置換が、腸管における、例えば、小腸及び/又は大腸における、例えば、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸、及び/又は肛門管における前記ポリペプチドの安定性を、該ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドと比較して増加させる、請求項1〜3のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項５】
前記置換が、腸管のモデルにおける、例えば、小腸及び/又は大腸における、例えば、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸、及び/又は肛門管における前記ポリペプチドの安定性を、該ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドと比較して増加させる、請求項1〜4のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項６】
前記腸管のモデルが、標準ヒト糞便上清腸管モデルである、請求項5記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項７】
前記ポリペプチドの安定性が、前記標準ヒト糞便上清腸管モデルにおける1時間のインキュベーション後に、前記ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドと比較して少なくとも5％、より好適には30％、より好適には50％増加する、請求項6記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項８】
前記置換が、小腸又は大腸において産生される1以上のプロテアーゼに対する前記ポリペプチドの安定性を、該ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドと比較して増加させる、請求項1〜7のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項９】
前記1以上のプロテアーゼが、トリプシン、キモトリプシン、MMP、カテプシン、エンテロペプチダーゼ、宿主炎症性プロテアーゼ、微生物細胞の溶解によって活発に分泌されるかつ/又は放出される腸内共生ミクロフローラ及び/又は病原性細菌由来のプロテアーゼ、及び病原性細菌由来のプロテアーゼ、例えば、C.ディフィシル特異的プロテアーゼからなる群から選択される、請求項8記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１０】
前記ポリペプチドのポテンシーが、前記ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドのポテンシーと実質的に同じである、請求項1〜9のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１１】
前記ポリペプチドのEC50が、前記ヒスチジン置換を有しない対応するポリペプチドと比較して、400％以下増加している、請求項10記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１２】
前記置換が、合成的に導入される、請求項1〜11のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１３】
前記置換が:エラープローンPCR、シャフリング、オリゴヌクレオチド指定変異誘発、アセンブリPCR、PCR変異誘発、インビボ変異誘発、カセット変異誘発、リカーシブアンサンブル変異誘発、指数関数的アンサンブル変異誘発、部位特異的変異誘発、遺伝子リアセンブリ、遺伝子部位飽和変異誘発(GSSM)、合成的ライゲーションリアセンブリ(SLR)、組換え、リカーシブ配列組換え、ホスホチオエート修飾DNA変異誘発、ウラシル含有テンプレート変異誘発、ギャップド・デュプレックス変異誘発、ポイントミスマッチ修復変異誘発、修復欠損宿主株変異誘発、化学的変異誘発、放射線誘発性変異誘発、欠失変異誘発、制限選択変異誘発、制限精製変異誘発、アンサンブル変異誘発、キメラ核酸マルチマー作製、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって導入される、請求項12記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１４】
前記少なくとも1個のリジン残基が、CDR1の第2三分位、及び/又はCDR2の第2三分位、及び/又はCDR3の第2三分位として定義されるウィンドウ内に存在し、及び/又は
前記少なくとも1個のアルギニン残基が、CDR1の第2三分位、及び/又はCDR2の第2三分位、及び/又はCDR3の第2三分位として定義されるウィンドウ内に存在する、請求項1〜13のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１５】
CDR1、CDR2、及び/又はCDR3における各リジン及び/又はアルギニン残基が、それぞれ、少なくとも1個のヒスチジン残基で置換されている、請求項1〜13のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１６】
前記ポリペプチドが、抗体、追加の抗体結合領域を含有する修飾抗体、抗体断片、例えば、scFv、Fab断片、F(ab')2断片、及び免疫グロブリン鎖可変ドメイン、例えば、VHH、VH、VL、V-NARからなる群から選択される、請求項1〜15のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。
【請求項１７】
前記ポリペプチドが、腸管経由で到達可能な標的、例えば、腸管内の標的に結合する、請求項1〜16のいずれか1項記載のポリペプチド、ポリペプチドの腸安定性を増加させる方法、又はポリペプチドを作製する方法。