【手続補正書】
【提出日】令和1年5月17日(2019.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において、慢性腎臓病(CKD)、末期腎臓病(ESRD)、石灰沈着性尿毒症性動脈病(CUA)カルシフィラキシス、加齢と共に発生する動脈の硬化、または早老症のうちの1つまたは複数を治療または予防するのに用いるための薬学的組成物であって、該組成物が式(I)：
タンパク質-Z-ドメイン-X-Y (I)
の可溶性エクトヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ-1 (ENPP1)ポリペプチドを含み、
(I)において、
タンパク質は、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、およびSEQ ID NO:24からなる群より選択され；
ドメインは、ヒトIgG Fc(Fc)もしくはその断片、またはヒト血清アルブミンタンパク質(ALB)もしくはその断片を含み；
XおよびZは、独立して、存在しないか、または1〜20個のアミノ酸を含むポリペプチドであり；
Yは存在せず、かつ
該ポリペプチドが、負に荷電している骨標的化配列を欠いている、
前記薬学的組成物。
【請求項２】
前記可溶性ENPP1ポリペプチドが、哺乳動物細胞において発現された前駆体ポリペプチドの分泌産物であり、該前駆体ポリペプチドがシグナル配列およびENPP1を含み、該前駆体ポリペプチドがタンパク質分解プロセシングを受けて該ENPP1ポリペプチドとなる、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記前駆体ポリペプチドが、ENPP1 (SEQ ID NO:1)の1〜76番目の残基、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ-2 (ENPP2) (SEQ ID NO:2)の12〜30番目の残基、およびENPP1 (SEQ ID NO:1)の96〜925番目の残基を含み、該前駆体ポリペプチドがタンパク質分解プロセシングを受けて該可溶性ENPP1ポリペプチドとなる、請求項2記載の薬学的組成物。
【請求項４】
対象において細胞外ピロリン酸(PPi)濃度を上昇させることによって心臓石灰化を低減または予防するのに用いるための薬学的組成物であって、該組成物が式(I)：
タンパク質-Z-ドメイン-X-Y (I)
の可溶性エクトヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ-1(ENPP1)ポリペプチドを含み、
(I)において、
タンパク質は、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、およびSEQ ID NO:24からなる群より選択され；
ドメインは、ヒトIgG Fc(Fc)またはその断片を含み；
XおよびZは、独立して、存在しないか、または1〜20個のアミノ酸を含むポリペプチドであり；
Yは存在せず、かつ
該化合物が、負に荷電している骨標的化配列を欠いている、
前記薬学的組成物。
【請求項５】
前記可溶性ENPP1ポリペプチドが、ポリアスパラギン酸ドメインを欠いている、請求項1〜4のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記ポリペプチドが前記対象に、局所投与、局部投与、非経口投与、全身投与、短期間投与、または長期間投与される、請求項5記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記対象がヒトである、請求項6記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、約1ng/体重kg〜500mg/体重kgの用量範囲で前記対象に投与される、請求項7記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記ポリペプチドが、1日に1回、または1日に複数回、または1日おき、または1週間に1回、または2週間に1回、または1ヶ月に1回、前記対象に投与される、請求項7記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記シグナル配列が、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ-5 (ENPP5)のシグナル配列、またはエクトヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ-7 (ENPP7)のシグナル配列、またはエクトヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ-2 (ENPP2)のシグナル配列を含む、請求項4記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ENPP7のシグナル配列がENPP7の1〜22番目の残基 (SEQ ID NO:17の1〜22番目の残基)を含むか、または前記ENPP5のシグナル配列がENPP5の1〜24の残基 (SEQ ID NO:24の1〜24の残基)を含むか、または前記ENPP2のシグナル配列がENPP2の12〜30番目の残基 (SEQ ID NO:2の12〜30番目の残基)を含む、請求項10記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記ポリペプチドが、少なくとも1種類の薬学的に許容される担体および/または賦形剤をさらに含む薬学的組成物として前記対象に投与される、請求項9記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記ドメインが、前記ENPP1ポリペプチドのC末端に位置する、請求項9記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記ドメインがヒトIg Fcである、請求項13記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記ドメインが、ヒト血清アルブミンである、請求項13記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記タンパク質が、SEQ ID NO:15の93〜925番目のアミノ酸を含み、かつ前記ヒト血清アルブミンが、SEQ ID NO:27のアミノ酸配列を含む、請求項15記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前駆体エクトヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ-1 (ENPP1)ポリペプチドを含む安定的にトランスフェクトされた細胞を含む組成物であって、該ENPP1ポリペプチドが、
(1) (SEQ ID NO:15)-Z-(Fcもしくはその断片)、(SEQ ID NO:17)-Z-(Fcもしくはその断片)、(SEQ ID NO:19)-Z-(Fcもしくはその断片)、または(SEQ ID NO:24)-Z-(Fcもしくはその断片)のうちの1つを有するENPP1-Fc；あるいは
(2) (SEQ ID NO:15)-Z-(ALBもしくはその断片)、(SEQ ID NO:17)-Z-(ALBもしくはその断片)、(SEQ ID NO:19)-Z-(ALBもしくはその断片)、または(SEQ ID NO:24)-Z-(ALBもしくはその断片)のうちの1つを有するENPP1-アルブミン
を含み、
Zが、存在しないか、または1〜20個のアミノ酸を含むポリペプチドであり；
該ENPP1ポリペプチドが、負に荷電している骨標的化配列を欠いており；かつ
該安定的にトランスフェクトされた細胞が、可溶性細胞外ENPP1-Fcポリペプチドまたは可溶性細胞外ENPP1-アルブミンポリペプチドを分泌および蓄積する、
前記組成物。
【請求項１８】
前記前駆体ENPP1ポリペプチドが、ENPP7の1〜22番目の残基 (SEQ ID NO:17の1〜22番目の残基)、ENPP5の1〜24番目の残基 (SEQ ID NO:24の1〜24番目の残基)、またはENPP2の12〜30番目の残基 (SEQ ID NO:2の12〜30番目の残基)を含むシグナル配列を含む、請求項17記載の組成物。
【請求項１９】
前記前駆体ENPP1ポリペプチドが、ENPP1 (SEQ ID NO:1)の1〜76番目の残基と、ENPP1 (SEQ ID NO:1)の96〜925番目の残基とを含む、請求項17〜18のいずれか一項記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
ある特定の態様では、乳児は投与の前に「成長障害」を示し、かつ/または「成長障害」と診断されている。
[本発明1001]
式(I)：
タンパク質-Z-ドメイン-X-Y (I)
の化合物またはその塩であって、
(I)において、
タンパク質は、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、およびSEQ ID NO:24からなる群より選択され；
ドメインは、ヒトIgG Fcドメイン(Fc)、ヒト血清アルブミンタンパク質(ALB)、およびそれらの断片からなる群より選択され；
XおよびZは、独立して、存在しないか、または1〜20個のアミノ酸を含むポリペプチドであり；かつ
Yは、存在しないか、または
2018516566.tif 000001
からなる群より選択される配列であり、mは1〜15の整数であり、nは1〜10の整数である、
前記化合物またはその塩。
[本発明1002]
前記ドメインが、Fcまたはその断片である、本発明1001の化合物。
[本発明1003]
前記ドメインが、ALBまたはその断片である、本発明1001の化合物。
[本発明1004]
Yが存在せず、前記化合物が、負に荷電している骨標的化配列を欠いている、本発明1001の化合物。
[本発明1005]
前記タンパク質が、SEQ ID NO:1と比べて、Ser532、Tyr529、Tyr451、Ile450、Ser381、Tyr382、Ser377、Phe346、Gly531、Ser289、Ser287、Ala454、Gly452、Gln519、Glu526、Lys448、Glu508、Arg456、Asp276、Tyr434、Gln519、Ser525、Gly342、Ser343、およびGly536からなる群より選択される少なくとも1つの位置に変異を有する、本発明1001の化合物。
[本発明1006]
前記タンパク質またはその変異体のヌクレアーゼドメインが存在しない、本発明1001の化合物。
[本発明1007]
前記タンパク質またはその変異体において、SEQ ID NO:1と比べて約524番目〜約885番目の残基のヌクレアーゼドメインが存在しない、本発明1001の化合物。
[本発明1008]
NPP2の細胞外領域の、フューリンまたはシグナルペプチド切断部位を含有するセグメントが、置換によって前記タンパク質またはその変異体に導入されているかまたは導入されていない、本発明1001の化合物。
[本発明1009]
前記ドメインがFcまたはその断片であり、前記タンパク質-Z-ドメインが、
(SEQ ID NO:15)-Z-(Fcもしくはその断片)、(SEQ ID NO:17)-Z-(Fcもしくはその断片)、(SEQ ID NO:19)-Z-(Fcもしくはその断片)、(SEQ ID NO:24)-Z-(Fcもしくはその断片)、またはそれらの変異体であって、SEQ ID NO:1と比べて、Ser532、Tyr529、Tyr451、Ile450、Ser381、Tyr382、Ser377、Phe346、Gly531、Ser289、Ser287、Ala454、Gly452、Gln519、Glu526、Lys448、Glu508、Arg456、Asp276、Tyr434、Gln519、Ser525、Gly342、Ser343、およびGly536からなる群より選択される少なくとも1つの位置に少なくとも1つの変異を含む変異体
を含む、本発明1001の化合物。
[本発明1010]
前記タンパク質-Z-ドメインが、
SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、(SEQ ID NO:24)-Z-(SEQ ID NO:26)、またはそれらの変異体であって、SEQ ID NO:1と比べて、Ser532、Tyr529、Tyr451、Ile450、Ser381、Tyr382、Ser377、Phe346、Gly531、Ser289、Ser287、Ala454、Gly452、Gln519、Glu526、Lys448、Glu508、Arg456、Asp276、Tyr434、Gln519、Ser525、Gly342、Ser343、およびGly536からなる群より選択される少なくとも1つの位置に少なくとも1つの変異を含む変異体
を含む、本発明1009の化合物。
[本発明1011]
前記ドメインがALBまたはその断片であり、前記タンパク質-Z-ドメインが、
(SEQ ID NO:15)-Z-(ALBもしくはその断片)、(SEQ ID NO:17)-Z-(ALBもしくはその断片)、(SEQ ID NO:19)-Z-(ALBまもしくはその断片)、(SEQ ID NO:24)-Z-(ALBもしくはその断片)、またはそれらの変異体であって、SEQ ID NO:1と比べて、Ser532、Tyr529、Tyr451、Ile450、Ser381、Tyr382、Ser377、Phe346、Gly531、Ser289、Ser287、Ala454、Gly452、Gln519、Glu526、Lys448、Glu508、Arg456、Asp276、Tyr434、Gln519、Ser525、Gly342、Ser343、およびGly536からなる群より選択される少なくとも1つの位置に少なくとも1つの変異を含む変異体
を含む、本発明1001の化合物。
[本発明1012]
前記タンパク質-Z-ドメインが、
SEQ ID NO:21、(SEQ ID N:17)-Z-(SEQ ID NO:27)、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:25、またはそれらの変異体であって、SEQ ID NO:1と比べて、Ser532、Tyr529、Tyr451、Ile450、Ser381、Tyr382、Ser377、Phe346、Gly531、Ser289、Ser287、Ala454、Gly452、Gln519、Glu526、Lys448、Glu508、Arg456、Asp276、Tyr434、Gln519、Ser525、Gly342、Ser343、およびGly536からなる群より選択される少なくとも1つの位置に少なくとも1つの変異を含む変異体
を含む、本発明1011の化合物。
[本発明1013]
前記化合物が、3.4(±0.4)s-1酵素-1以上のkcat値を有し、該kcatが、該化合物のATP加水分解速度を測定することによって求められる、本発明1001の化合物。
[本発明1014]
前記化合物が、2μM以下のKM値を有し、該KMが、該化合物のATP加水分解速度を測定することによって求められる、本発明1001の化合物。
[本発明1015]
病的石灰化または病的骨化に関連する疾患または障害の治療または予防を必要とする対象において、病的石灰化または病的骨化に関連する疾患または障害を治療または予防する方法であって、本発明1001〜1014のいずれかの少なくとも1つの化合物の治療的有効量を該対象に投与する工程を含み、該疾患が、乳児全身性動脈石灰化症(GACI)、特発性乳児動脈石灰化症(IIAC)、後縦靭帯骨化症(OPLL)、低リン血症性くる病、変形性関節症、およびアテローム性動脈硬化プラークの石灰化からなる群より選択される少なくとも1つを含む、前記方法。
[本発明1016]
Yが存在せず、前記化合物が、負に荷電している骨標的化配列を欠いている、本発明1015の方法。
[本発明1017]
病的石灰化または病的骨化に関連する疾患または障害の治療または予防を必要とする対象において、病的石灰化または病的骨化に関連する疾患または障害を治療または予防する方法であって、本発明1001〜1014のいずれかの少なくとも1つの化合物の治療的有効量を該対象に投与する工程を含み、該疾患が、PXE、遺伝性および非遺伝性の変形性関節症、強直性脊椎炎、加齢と共に発生する動脈の硬化、末期腎臓病に起因するカルシフィラキシス、および早老症からなる群より選択される少なくとも1つを含む、前記方法。
[本発明1018]
Yが存在せず、前記化合物が、負に荷電している骨標的化配列を欠いている、本発明1017の方法。
[本発明1019]
GACIおよびPXEからなる群より選択される少なくとも1つの疾患または障害にかかっている乳児において心臓石灰化、動脈石灰化、および/または弾性線維石灰化を低減または予防する方法であって、エクトヌクレオチドピロリン酸/ホスホジエステラーゼ-1(NPP1)ポリペプチドとFcとを含む所定のポリペプチドの治療的有効量を該乳児に投与する工程を含み、該所定のポリペプチドがポリアスパラギン酸ドメインを欠いており、該所定のポリペプチドの投与によって該乳児における細胞外ピロリン酸(PPi)濃度が上昇し、それによって、該乳児において心臓石灰化、動脈石灰化、および/または弾性線維石灰化が低減または予防される、前記方法。
[本発明1020]
前記投与が皮下投与である、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記投与によって、前記乳児の細胞外ピロリン酸濃度が、GACIおよび/またはPXEにかかっていない乳児において見出される範囲内のレベルまで回復する、本発明1019の方法。
[本発明1022]
前記乳児が前記投与の前に「成長障害」を示し、かつ/または「成長障害」と診断されている、本発明1019の方法。
[本発明1023]
前記NPP1ポリペプチドが、エクトヌクレオチドピロリン酸/ホスホジエステラーゼ-2(NPP2)膜貫通ドメインを含む前駆体NPP1ポリペプチドの切断産物である、本発明1019の方法。
[本発明1024]
NPP2膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:23に相当する、NCBIアクセッション番号NP_001124335(SEQ ID NO:2)の12〜30番目の残基である、本発明1019の方法。
[本発明1025]
GACIおよびPXEからなる群より選択される少なくとも1つの疾患または障害にかかっている乳児において心臓石灰化、動脈石灰化、および/または弾性線維石灰化を低減または予防する方法であって、NPP1ポリペプチドとALBとを含む所定のポリペプチドの治療的有効量を該乳児に投与する工程を含み、該所定のポリペプチドがポリアスパラギン酸ドメインを欠いており、該投与によって該乳児における細胞外PPi濃度が上昇し、それによって、該乳児において心臓石灰化、動脈石灰化、および/または弾性線維石灰化が低減または予防される、前記方法。
[本発明1026]
前記投与が皮下投与を含む、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記投与によって、前記乳児の細胞外ピロリン酸濃度が、GACIおよび/またはPXEにかかっていない乳児において見出される範囲内のレベルまで回復する、本発明1025の方法。
[本発明1028]
前記乳児が前記投与の前に「成長障害」を示し、かつ/または「成長障害」と診断されている、本発明1025の方法。