【手続補正書】
【提出日】平成20年6月23日(2008.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アジュバントと脱Ｎ−アセチル化多糖（ＰＳ）誘導体とを含む組成物であって、当該脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、Ｎ−アセチルシアル酸、遊離のアミン基を持つＮ−アセチルシアル酸、及びアセチル以外のアミン保護基を持つＮ−アセチルシアル酸を含むヘテロポリマーであり、前記ヘテロポリマーは、Ｎ−アセチルシアル酸及び遊離のアミン基を持つＮ−アセチルシアル酸を含む少なくとも１つのダイマーを更に含む組成物。
【請求項２】
Ｎ−アセチルシアル酸、遊離のアミン基を持つＮ−アセチルシアル酸、及びアセチル以外のアミン保護基を持つＮ−アセチルシアル酸を含むヘテロポリマーを含み、
式：
【化１】
2008509886.tif 000001
（式中、Ｘ及びＹは独立してＨ又はアセチル基であり、ただし、Ｘ及びＹの少なくとも１つはＨであり、Ｘ及びＹの少なくとも１つはアセチルであり、ｎは少なくとも１である）で表される構造を含む脱Ｎ−アセチル化多糖（ＰＳ）誘導体を含有し、
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が担体タンパク質にコンジュゲートしているか、又はＰＳ誘導体の非還元末端にアルキル第２級アミンを有するシアル酸残基を更に含み、
前記脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が脱Ｎ−アセチルシアル酸及びＮ−アセチルシアル酸を含む少なくとも１つのダイマーを含む組成物。
【請求項３】
Ｎ−アセチルシアル酸残基、遊離のアミン基を持つＮ−アセチルシアル酸残基、及びアセチル以外のアミン保護基を持つＮ−アセチルシアル酸残基を含むヘテロポリマーを含むみ、
式：
【化２】
2008509886.tif 000002
（式中、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つはＨであり、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つは飽和アシル基であるという条件で、Ｘ、Ｙ及びＺは独立してＨ又は飽和アシル基であり、ｎは少なくとも１である）で表される構造を含む脱Ｎ−アセチル化多糖（ＰＳ）誘導体を含有し、
ＰＳ誘導体は任意に担体タンパク質にコンジュゲートしているか、又はＰＳ誘導体の非還元末端にアルキル第２級アミンを有するシアル酸残基を更に含み、
前記脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が脱Ｎ−アセチルシアル酸及びＮ−アセチルシアル酸を含む少なくとも１つのダイマーを含む組成物。
【請求項４】
Ｘ、Ｙ及びＺのうち２つがアシル基であり、それらのアシル基が異なるアシル基である請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つがアセチル基であり、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つがプロピオニル基である請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
ＸがＨである場合、Ｙ及びＺは異なるアシル基であり；Ｘがアシル基である場合、Ｙ及びＺは異なる成分であって、Ｈ又はアシル基のいずれかであり；Ｘがアシル基である場合、Ｙ及びＺは異なる成分であって、Ｈ又はアシル基のいずれかである請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
Ｘ、Ｙ及びＺがアセチル及びプロピオニルから選択される異なるアシル基である場合；
Ｘがアセチル基のとき、Ｙ及びＺは異なる成分であって、Ｈ又はプロピオニル基のいずれかであり、
Ｘがプロピオニル基のとき、Ｙ及びＺは異なる成分であって、Ｈ又はアシル基のいずれかである請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体の非還元末端にアルキル第２級アミンを持つアミド化シアル酸残基を含む請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、担体タンパク質にコンジュゲートしている請求項１から３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、ラクトン成分又は環状第２級アミンを持つシアル酸残基を含む請求項１から３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｎ−アセチルシアル酸残基、遊離のアミン基を持つＮ−アセチルシアル酸残基、及びアセチル以外のアミン保護基を持つＮ−アセチルシアル酸残基を含むヘテロポリマーを含み、
式：
【化３】
2008509886.tif 000003
（式中、Ｘ及びＹは独立してアミン保護基、又は飽和あるいは不飽和のアシル基であり、ｎは少なくとも１である）で表される構造を含む脱Ｎ−アセチル化多糖（ＰＳ）誘導体を含有し、
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が任意に脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体のシアル酸残基にコンジュゲートした担体タンパク質を更に含むか、又は任意に脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体の非還元末端にアルキル第２級アミンを持つシアル酸残基を更に含み、
前記脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が脱Ｎ−アセチルシアル酸及びＮ−アセチルシアル酸を含む少なくとも１つのダイマーを含む組成物。
【請求項１２】
アシル基が飽和アシル基及びアセチル又はプロピオニル基である請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
脱Ｎ−アセチル化多糖（ＰＳ）誘導体が、式：
【化４】
2008509886.tif 000004
（式中、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つはアミン保護基であり、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つは飽和又は付飽和のアシル基であるという条件で、Ｘ、Ｙ及びＺは独立してアミン保護基であり、ｎは少なくとも１である）で表される構造を含む請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
アシル基が飽和アシル基及びアセチルあるいはプロピオニル基である請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ヘテロポリマーで保護された多糖（ＰＳ）誘導体の製造方法であって、当該方法が、
遊離のアミノ基を持つ脱Ｎ−アセチルシアル酸残基及び最低約２０％のＮアセチルシアル酸残基を含む脱-Ｎ-アセチル化されたＰＳを、アミン保護試薬及びアシル化試薬の混合物と、有機溶媒の存在下で反応させることを含み、
前記反応が、脱Ｎ−アセチルシアル酸の遊離アミノ基の全部ではないが約９０％以上をアシル化し、Ｎ−アセチルシアル酸残基及び遊離のアミン基を持つ脱Ｎ−アセチルシアル酸残基を含む少なくとも一つのダイマーを有するヘテロポリマーで保護されたＰＳ誘導体を生成する方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法によって製造される、ヘテロポリマーで保護された保護された多糖（ＰＳ）誘導体。
【請求項１７】
ヘテロポリマーで保護されたＰＳ誘導体をアミン保護基を除去する条件下で処理することを更に含み、ヘテロポリマーＰＳ誘導体が生成される請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
当該方法が、
ヘテロポリマーで保護されたＰＳ誘導体を担体タンパク質にコンジュゲートさせてコンジュゲートしたヘテロポリマー保護ＰＳ誘導体を生成させ、
コンジュゲートしたヘテロポリマー保護ＰＳ誘導体をアミン保護基を除去する条件下で処理することを更に含み、
コンジュゲートしたヘテロポリマーＰＳ誘導体が生成される請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
当該方法が、
ヘテロポリマーで保護されたＰＳ誘導体をＮ-アシルアミンと反応させて、アルキル第２級アミンを有するアミド化シアル酸残基を持つ保護ＰＳ誘導体を生成させ、
アミド化したヘテロポリマー保護ＰＳ誘導体をアミン保護基を除去する条件下で処理することを更に含み、
アルキル第２級アミンを有するアミド化したシアル酸残基を持つヘテロポリマーＰＳ誘導体が生成される請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
多糖（ＰＳ）誘導体を製造する方法であって、当該方法が、
Ｂ群髄膜炎菌細菌を、Ｎ-アシル-マンノサミン及びアミン-保護マンノサミンを含有する増殖培地中で培養することを含み、マンノサミンを追加しないと細菌は莢膜多糖を十分に生産せず、
前記増殖培地が、アミン保護基及びＮ-アシル化基を持つ保護されたＰＳ誘導体の生産を提供する方法。
【請求項２１】
当該方法が、
保護されたＰＳ誘導体を担体タンパク質にコンジュゲートさせてコンジュゲートした保護ＰＳ誘導体を生成させ、
コンジュゲートした保護ＰＳ誘導体をアミン保護基を除去する条件下で処理することを更に含み、
コンジュゲートしたＰＳ誘導体が生成される請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
当該方法が、
保護されたＰＳ誘導体をＮ-アシルアミン試薬と反応させて、アルキル第２級アミンを有するアミド化シアル酸残基を持つ保護ＰＳ誘導体を生成させ、
アミド化した保護ＰＳ誘導体をアミン保護基を除去する条件下で処理することを更に含み、
アルキル第２級アミンを有するアミド化したシアル酸残基を持つＰＳ誘導体が生成される請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
抗体が結合したポリシアル酸（ＰＳＡ）エピトープを同定する方法であって、
ＰＳＡ誘導体を抗体と接触させるること、前記接触は抗体とＰＳ誘導体との抗原−抗体複合体の形成に適した条件下であり、
抗原−抗体複合体を、抗原−抗体複合体のシアリダーゼが接近しうるＰＳＡ誘導体残基の除去に適した条件下でシアリダーゼと接触させることを含み、
シアリダーゼ処理の後に抗原−抗体複合体に残存するＰＳＡ誘導体残基が抗体の結合したエピトープを特定する方法。
【請求項２４】
脱Ｎ−アセチルＰＳ誘導体が、式：
【化５】
2008509886.tif 000005
（式中、Ｘ、Ｙ及びＺは独立してＨ又はアセチル基であり、ただし、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つはＨであり、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つはアセチル基であり、
ｎは少なくとも１であり、
Ｒ１は飽和又は不飽和のアシルアミンであり、
Ｒ２はヒドロキシル又はアルデヒド、１又はそれ以上のアシル化アミン、脱Ｎ−アセチル化シアル酸残基、又は脱Ｎ−アセチル化シアル酸残基及びアシル化シアル酸残基のポリマーである）で表される構造を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
Ｒ２が脱Ｎ−アセチル化シアル酸残基及びアシル化シアル酸残基のポリマーであり、前記シアル酸残基がアセチル化シアル酸残基、プロピオニル化シアル酸残基又はそれらの組み合わせである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
脱Ｎ−アセチルＰＳ誘導体が、式：
【化６】
2008509886.tif 000006
（式中、Ｘ１、Ｘ、Ｙ及びＺは独立してＨあるいは飽和又は不飽和のアシル基であり、ただし、Ｘ１、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つはＨであり、Ｘ１、Ｘ、Ｙ及びＺの少なくとも１つは飽和又は不飽和のアシル基であり、
ｎは少なくとも１であり、
Ｒ１は飽和又は不飽和のアシルアミンであり、
Ｒ２はヒドロキシル又はアルデヒド、１又はそれ以上のアシル化アミン、脱Ｎ−アセチル化シアル酸残基、又は脱Ｎ−アセチル化シアル酸残基及びアシル化シアル酸残基のポリマーである）で表される構造を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
Ｒ２が脱Ｎ−アセチル化シアル酸残基及びアシル化シアル酸残基のポリマーであり、前記シアル酸残基がアセチル化シアル酸残基、プロピオニル化シアル酸残基又はそれらの組み合わせである、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
脱Ｎ−アセチルＰＳ誘導体が、式：
【化７】
2008509886.tif 000007
（式中、ｎは少なくとも１であり、
Ｘ、Ｙ、Ｒ１及びＲ２は独立してＨ、飽和又は不飽和のアシル基、あるいは飽和又は不飽和のアシルアミンであり、ただし、Ｘ、Ｙ、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つはＨであり、Ｘ、Ｙ、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つは飽和又は不飽和のアシル基であり、Ｘ、Ｙ、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つは飽和又は不飽和のアシルアミンである）で表される構造を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
ｎが少なくとも２であり、Ｘがアセチル基であり、Ｙがアセチル基であり、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がアセチル基である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、担体タンパク質を含むように更に修飾されている、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
式：
【化８】
2008509886.tif 000008
（式中、ｎは少なくとも１であり、
Ｘ及びＹは独立してＨ、あるいは飽和又は不飽和のアシル基であり、ただし、Ｘ及びＹの少なくとも１つは飽和又は不飽和のアシル基であり、
Ｒ１及びＲ２は独立してＨ、飽和又は不飽和のアシル基、あるいは飽和又は不飽和のアシルアミンであり、ただし、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つはＨ又は飽和又は不飽和のアシル基である）で表される構造を含む脱Ｎ−アセチルＰＳ誘導体を含有し、
前記脱Ｎ−アセチルＰＳ誘導体は担体タンパク質及び/又はアシルアミンを含むように更に修飾されている組成物。
【請求項３２】
ｎが少なくとも２であり、Ｘがアセチル基であり、Ｙがアセチル基であり、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がアセチル基である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、担体タンパク質にコンジュゲートされている、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、約２〜約６０の重合度を有する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３５】
脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体が、約２〜約１０の重合度を有する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３６】
当該組成物が、アジュバントを更に含有する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３７】
請求項１から１０の何れか一項に記載の脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を含有する、患者を免疫化するための薬剤であって、
前記脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を免疫反応を誘発するのに十分な量含有し、
前記免疫反応が、１以上のＢ群髄膜炎菌株によって生じた疾患に対する保護免疫を与える薬剤。
【請求項３８】
請求項１から１０の何れか一項に記載の脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を含有する、患者を免疫化するための薬剤であって、
前記脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を免疫反応を誘発するのに十分な量含有し、
前記免疫反応が、１以上の大腸菌Ｋ１株によって生じた疾患に対する保護免疫を与える薬剤。
【請求項３９】
請求項１から１０の何れか一項に記載の脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体で宿主を免疫化することによって誘発された患者の細菌性抗体を含有する、細菌感染に対する受動的防御を与えるための薬剤であって、
前記受動的防御が、１以上のＢ群髄膜炎菌株又は大腸菌Ｋ１株に対する保護免疫を与える薬剤。
【請求項４０】
請求項３１に記載の脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を含有する、患者を免疫化するための薬剤であって、
前記脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を免疫反応を誘発するのに十分な量含有し、
前記免疫反応が、１以上のＢ群髄膜炎菌株によって生じた疾患に対する保護免疫を与える薬剤。
【請求項４１】
請求項３１に記載の脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を含有する、患者を免疫化するための薬剤であって、
前記脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体を免疫反応を誘発するのに十分な量含有し、
前記免疫反応が、１以上の大腸菌Ｋ１株によって生じた疾患に対する保護免疫を与える薬剤。
【請求項４２】
請求項３１に記載の脱Ｎ−アセチル化ＰＳ誘導体で宿主を免疫化することによって誘発された患者の細菌性抗体を含有する、細菌感染に対する受動的防御を与えるための薬剤であって、
前記受動的防御が、１以上のＢ群髄膜炎菌株又は大腸菌Ｋ１株に対する保護免疫を与える薬剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
「ＰＳ誘導体に関して免疫学的に未処置である（immunologically naive with respect to a PS derivative）」なる用語は、単独または巨大分子との関連で、免疫応答を引き起こす（例えば、プライムすること）のに十分な量で本発明のＰＳ誘導体に曝露されたことのない個体（例えば、ヒト患者などの哺乳動物）を意味する。個体がＰＳコンジュゲートワクチン（１回またはそれ以上の投与）に曝露されたことがある場合、その個体は防御抗体および自己反応性抗体を産生する性向がある（例えば、ＰＳコンジュゲートワクチンは防御および自己反応性の抗体の混合物を発現する性向がある）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７７】
受動的免疫化およびその他の抗体に基づく治療法
さらに、本発明の手法で産生される抗体は、哺乳類を対象とした髄膜炎菌に仲介される、または大腸菌K1に仲介される病気の治療または予防のために使用できる。特に、本発明に従って、脱-N-アセチル化PSまたはそのコンジュゲートを用いて産生される抗体は、被験体の髄膜炎菌または大腸菌K1によって起こる病気に対する受容的保護、またはガン治療を助長するために、被験体への投与に適した医薬組成物に入れて提供することができる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７８】
また特に、本書に記載された手法に従って産生される免疫保護抗体、およびナイセリアPSまたは大腸菌K1エピトープを認識する免疫保護抗体は、感染または病気が起こるのを予防するため、またはすでに病気が確立した患者の臨床結果を改善する療法（例としてショックなどの合併症の減少、死亡率の減少、または聴覚障害などの罹患率の減少）として、ナイセリアによる病気に対する受動的免疫を誘発するために、被験体（例としてヒトの患者）に投与することができる。抗体をガン治療のために投与する場合、抗体は任意にガン細胞を標的にする薬、例として毒素（リシンなど）、放射性核種などに添付して腫瘍死滅や排除に効果をもたらすことができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８４】
抗体を生成と被験体（例えばヒトの被験体）への投与に適した調製の方法は、当技術分野ではよく知られている。例えば、抗体は、効果的な量の抗体と、医薬的な賦形剤（生理食塩水など）から構成される、医薬品の組成物から構成される。医薬品の組成物は、任意に他の添加剤を加えてもよい（例として緩衝液、安定剤、保存料など）。抗体の効果的な量は一般的に、目的とする期間内、例えば少なくとも約2日から10日、または1ヶ月から2ヶ月、のナイセリアによる病気または大腸菌K1による病気または症状に対する保護のために必要な量である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９２】
ほとんどのアミノ基はこの手順中でアシル化されたが（＞＝90%）いくらかのアミノ基は誘導体化されておらず、遊離アミノ基のままであった。アシル化の効率は無水酸の水中での溶解性に依存する。従って、無水酢酸よりも水中溶解性が低い無水プロピオン酸のアシル化は無水酢酸よりも遊離アミノ基の量が多い結果となるであろう。脱-N-アセチル部位を持つPSを含む残基はSEAM mAbsによって結合され（下記の実施例３参照）、従って保護性、非自己反応性の抗NmB莢膜抗体を誘発するための重要な決定因子である。