【手続補正書】
【提出日】平成20年5月14日(2008.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  インターロイキン−１５受容体（ＩＬ−１５Ｒ）を標的とする第１作用物質と、Ｔ細胞と抗原呈示細胞（ＡＰＣ）との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む治療組成物。
【請求項２】  第１作用物質がＩＬ−１５Ｒのサブユニットに結合する実質的に純粋な突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項３】  サブユニットがＩＬ−１５Ｒαサブユニットである、請求項２に記載の治療組成物。
【請求項４】  突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドが配列番号２の１４９位に突然変異を有する、請求項３に記載の治療組成物。
【請求項５】  突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドが配列番号２の１５６位に突然変異を有する、請求項３に記載の治療組成物。
【請求項６】  突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドがさらに配列番号２の１４９位にも突然変異を有する、請求項５に記載の治療組成物。
【請求項７】  配列番号２の１５６位の突然変異は、グルタミンがアスパラギン酸に置き換わった置換である、請求項５に記載の治療組成物。
【請求項８】  配列番号２の１４９位の突然変異は、グルタミンがアスパラギン酸に置き換わった置換である、請求項６に記載の治療組成物。
【請求項９】  突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号２の１４９位および１５６位のグルタミンがアスパラギン酸に置き換わった置換を有する、請求項６に記載の治療組成物。
【請求項１０】  第１作用物質がＩＬ−１５Ｒ産生細胞の除去を引き起こす部分をさらに含む、請求項２に記載の治療組成物。
【請求項１１】  ＩＬ−１５Ｒ産生細胞を溶解する部分がＩｇＧ分子のＦｃ領域である、請求項１０に記載の治療組成物。
【請求項１２】  第１作用物質が実質的に純粋な抗ＩＬ−１５Ｒ抗体を含む請求項１に記載の治療組成物。
【請求項１３】  第２作用物質がＢ７分子に結合する実質的に純粋なポリペプチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項１４】  Ｂ７分子がＢ７−１である、請求項１３に記載の治療組成物。
【請求項１５】  Ｂ７分子がＢ７−２である、請求項１３に記載の治療組成物。
【請求項１６】  Ｂ７に結合するポリペプチドがＣＴＬＡ４／Ｉｇを含むポリペプチドである、請求項１３に記載の治療組成物。
【請求項１７】  Ｂ７に結合するポリペプチドが抗Ｂ７抗体を含む、請求項１３に記載の治療組成物。
【請求項１８】  第２作用物質がＣＤ２８に結合する実質的に純粋なポリペプチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項１９】  ＣＤ２８に結合するポリペプチドが抗ＣＤ２８抗体を含む、請求項１８に記載の治療組成物。
【請求項２０】  第２作用物質がＣＤ４０Ｌに結合する実質的に純粋なポリペプチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項２１】  ＣＤ４０Ｌに結合するポリペプチドが抗ＣＤ４０Ｌ抗体を含むポリペプチドである、請求項２０に記載の治療組成物。
【請求項２２】  第２作用物質がＣＤ４０に結合する実質的に純粋なポリペプチドを含む、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項２３】  ＣＤ４０に結合するポリペプチドが抗ＣＤ４０抗体を含むポリペプチドである、請求項１に記載の治療組成物。
【請求項２４】  患者の免疫応答を抑制する方法であって、患者に、ＩＬ−１５Ｒを標的とする第１作用物質と、Ｔ細胞と抗原呈示細胞（ＡＰＣ）との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む治療組成物を投与するステップから成る方法。
【請求項２５】  ＩＬ−１５の受容体を発現する細胞を除去する方法であって、前記細胞を、ＩＬ−１５Ｒを標的とする第１作用物質と、免疫系細胞と抗原提示細胞との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む治療組成物に暴露するステップから成る方法。
【請求項２６】  前記細胞が免疫系細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】  前記細胞が悪性細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】  患者を、請求項１に記載の治療組成物を用いて治療し得る疾患または症状を有すると診断する方法であって、患者から組織試料を得るステップと、ＩＬ−１５Ｒを標的とする抗原標識ポリペプチドに前記試料を暴露するステップとを含んでなり、前記ポリペプチドと試料中の細胞との結合は、試料細胞が、ｉｎ  ｖｉｖｏでＩＬ−１５Ｒを標的とする作用物質により結合され、それによって、ｉｎ  ｖｉｖｏで野生型ＩＬ−１５に応答して増殖することが抑止され得ることを示す方法。
【請求項２９】  ＩＬ−１５Ｒのサブユニットに結合する突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドとＢ７分子に結合するポリペプチドとを含む治療組成物を製造する方法であって、
（ａ）  発現系から突然変異ＩＬ−１５ポリペプチドを精製するステップ、  （ｂ）  発現系からＢ７に結合するポリペプチドを精製するステップ、および  （ｃ）  ＩＬ−１５ポリペプチドと、Ｂ７に結合するポリペプチドとを組み合わせるステップから成る方法。
【請求項３０】  患者の免疫応答を抑制するための薬剤の製造における、インターロイキン−１５受容体（ＩＬ−１５Ｒ）を標的とする第１作用物質と、Ｔ細胞と抗原呈示細胞（ＡＰＣ）との間で伝達される同時刺激シグナルを阻害する第２作用物質とを含む治療組成物の使用方法。
【請求項３１】  患者が、リューマチ性疾患、慢性関節リューマチ、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、甲状腺の自己免疫疾患、中枢神経系の自己免疫疾患、多様な天疱瘡、炎症性腸疾患、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を有するか、生物臓器、組織もしくは細胞の移植片を受容しているか、または血管損傷を受けている、請求項３０に記載の治療組成物の使用方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
（発明の要旨）
本発明は、いくつかの新規な免疫応答抑制法の発見に基づいている。いずれの方法においても、免疫応答の抑制は、インタロイキン−１５受容体（ＩＬ−１５Ｒ）を標的とする第１作用物質と、抗原呈示細胞（ＡＰＣ）からＴ細胞に通常伝達される同時刺激シグナルをブロックする第２作用物質とを投与することにより達成される。したがって、本発明は、上述の第１作用物質および第２作用物質をそれぞれ１種以上含む治療組成物をその特徴とする。本発明の作用物質およびそれらの使用方法を以下に説明する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
プラスミドＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５を構築するために、合成オリゴヌクレオチド〔センス  ５′−ＧＧＡＡＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡ―３′（配列番号５；ＦｃｏＲＩ部位（下線）＋塩基１４５−１６２）；アンチセンス  ５′−ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＡ−３′（配列番号６；ＢａｍＨＩ部位［下線］＋塩基４７２−４８９）〕を利用するＰＣＲにより、成熟ＩＬ−１５タンパク質をコードする３２２ｂｐのｃＤＮＡフラグメントを増幅させた。鋳型ＤＮＡはＰＨＡ活性化ヒトＰＢＭＣから得た。ＰＣＲ産物を精製、ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩで消化し、上述のようにＥｃｏＲＩ−ＢａｍＨＩで消化したｐＡＲ（ＤＲＩ）５９／６０プラスミドにクローン化した（Ｂｌａｎａｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１０１４，１９９２；ＬｅＣｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：８１４５，１９９２）。ｐＡＲ（ＤＲＩ）５９／６０プラスミドの主鎖は、枠中にＦＬＡＧおよびＨＭＫ認識ペプチド配列をコードする配列を含んでいる（Ｂｌａｎａｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１０１４，１９９２；ＬｅＣｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：８１４５，１９９２）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
ＩＬ−１５Ｒを標的とする突然変異ＩＬ−１５ポリペプチド
突然変異ＩＬ−１５の遺伝子構築
ＩＬ−２Ｒγサブユニットとの結合に重要な推定部位を標的とする二重突然変異（Ｑ１４９Ｄ；Ｑ１５６Ｄ）を有するヒトＩＬ−１５タンパク質を設計した。ＰＣＲ支援突然変異誘発を利用して、１４９位および１５６位の極性ではあるが無荷電のグルタミン残基をアスパラギン酸の酸性残基に突然変異させた。合成センスオリゴヌクレオチド［５′−ＧＧＡＡＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＡＡＴＡ−３′（配列番号５）；ＥｃｏＲＩ部位（下線を付したヘキサマー）＋塩基１４５−１６２］および合成アンチセンスオリゴヌクレオチド［５′−ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＡＣＡＴＧＴＣＧＡＣＡＡＴＡＴＧＴＡＣＡＡＡＡＣＴＧＴＣＣＡＡＡＡＡＴ−３′（配列番号７）；ＢａｍＨＩ部位（下線を付したヘキサマー）＋塩基４３８−４８９；突然変異塩基は個別に下線が付されている］を利用するＰＣＲにより、ＩＬ−１５の二重突然変異体をコードするｃＤＮＡを増幅させた。鋳型は、ヒトＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５をコードするｃＤＮＡを含むプラスミドであった。増幅されたフラグメントをＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ
で消化し、上述のように、ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩで消化したｐＡＲ（ＤＲＩ）５９／６０プラスミド中にクローン化した（ＬｅＣｌａｉｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：８１４５，１９８９）。１５６残基に突然変異が存在するか否かを、ＳａｌＩで消化して確認した。その突然変異により新規なＳａｌＩ制限部位が導入される。さらに、標準技術に従ってＤＮＡ配列決定して突然変異を検証した。ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５（Ｑ１４９Ｄ；Ｑ１５６Ｄ）二重突然変異タンパク質を産生させ、精製し、ＦＬＡＧ−ＨＭＫ−ＩＬ−１５野生型タンパク質について上述したように配列決定して検証した。