【手続補正書】
【提出日】平成20年1月8日(2008.1.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ｉ）G-CSF活性を有するポリペプチドであって、該ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１に示されるアミノ酸配列と１−１５アミノ酸残基において相違し、そして、以下の群から選ばれる少なくとも１つの置換を含有する、G-CSF活性を有するポリペプチド：  T1K、P2K、L3K、G4K、P5K、A6K、S7K、S8K、L9K、P10K、Q11K、S12K、F13K、L14K、L15K、E19K、Q20K、V21K、Q25K、G26K、D27K、A29K、A30K、E33K、A37K、T38K、Y39K、L41K、H43K、P44K、E45K、E46K、V48K、L49K、L50K、H52K、S53K、L54K、I56K、P57K、P60K、L61K、S62K、S63K、P65K、S66K、Q67K、A68K、L69K、Q70K、L71K、A72K、G73K、S76K、Q77K、L78K、S80K、F83K、Q86K、G87K、Q90K、E93K、G94K、S96K、P97K、E98K、L99K、G100K、P101K、T102K、D104K、T105K、Q107K、L108K、D109K、A111K、D112K、F113K、T115K、T116K、W118K、Q119K、Q120K、M121K、E122K、E123K、L124K、M126K、A127K、P128K、A129K、L130K、Q131K、P132K、T133K、Q134K、G135K、A136K、M137K、P138K、A139K、A141K、S142K、A143K、F144K、Q145K、S155K、H156K、Q158K、S159K、L161K、E162K、V163K、S164K、Y165K、V167K、L168K、H170K、L171K、A172K、Q173K およびP174K；および
ｉｉ）該ポリペプチドのリジン残基に結合している少なくとも１つの非ポリペプチド部分、
を含有するポリペプチド結合体。
【請求項２】  配列番号１のアミノ酸残基：K16、K23、K34およびK40の少なくとも１つが欠失しているか、または別のアミノ酸残基と置換されている、請求項１記載の結合体。
【請求項３】  配列番号１のアミノ酸残基：K16、K23、K34およびK40の少なくとも１つがRまたはQ残基と置換されている、請求項２記載の結合体。
【請求項４】  置換K16R+K34R+K40Rを含む、請求項３記載の結合体。
【請求項５】  以下の群から選ばれる少なくとも１つの置換を含むポリペプチドである、請求項１−４のいずれか記載の結合体：
P5K、A6K、S7K、S8K、L9K、P44K、E45K、E46K、V48K、L49K、L50K、H52K、S53K、L54K、I56K、P57K、P60K、L61K、S62K、S63K、P65K、S66K、Q67K、A68K、L69K、Q70K、L71K、A72K、G73K、S76K、Q77K、L78K、S80K、F83K、Q86K、G87K、Q90K、E93K、G94K、S96K、P97K、E98K、L99K、P101K、D104K、T105K、Q107K、L108K、D109K、A111K、D112K、F113K、T115K、T116K、W118K、Q119K、Q120K、M121K、E122K、E123K、L124K、M126K、A127K、P128K、A129K、L130K、Q131K、P132K、T133K、Q134K、G135K、A136K、M137K、P138K、A139K、A141K、S142K、A143K、F144K、Q145K、S155K、H156K、Q158K、S159K、L161K、E162K、V163K、S164K、Y165K、V167K、L168K、H170K、L171K、A172K、Q173K、およびP174K。
【請求項６】  ポリペプチドが、Q70K、Q90K、T105K、Q120K、T133KおよびS159Kからなる群から選ばれる少なくとも１つの置換を含む、請求項５記載の結合体。
【請求項７】  非ポリペプチド部分が天然および合成ホモ重合体およびヘテロ重合体からなる群から選ばれる、請求項１−６のいずれか記載の結合体。
【請求項８】  重合体が、線状または分枝状ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリカルボン酸およびポリ（ビニルピロリドン）からなる群から選ばれる合成ホモ重合体およびヘテロ重合体である、請求項７記載の結合体。
【請求項９】  重合体が線状または分枝状ポリエチレングリコールである、請求項８記載の結合体。
【請求項１０】  ポリエチレングリコールが分子量約1000-15,000 Daである、請求項９記載の結合体。
【請求項１１】  ２−８個のポリエチレングリコール部分を含む、請求項９または１０記載の結合体。
【請求項１２】  ３−６個のポリエチレングリコール部分を含む、請求項１１記載の結合体。
【請求項１３】  該ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列と２−１０アミノ酸残基において相違している、請求項１−１２のいずれか記載の結合体。
【請求項１４】  該ポリペプチドのアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列と３−８アミノ酸残基において相違している、請求項１３記載の結合体。
【請求項１５】  該ポリペプチドがグリコシル化されている、請求項１−１４のいずれか記載の結合体。
【請求項１６】  該ポリペプチドが少なくとも１つの非天然グリコシル化部位を含む、請求項１５記載の結合体。
【請求項１７】  単一のN末端結合20 kDa PEG部分を含有する、機能的なインビボ半減期および／または血清半減期がrhG-CSFと比較して増大している、請求項１−１６のいずれか記載の結合体。
【請求項１８】  以下に示す(A)-(D)の少なくとも１つの基準を満たす、請求項１−１７のいずれか記載の結合体：
(A)  ラットへの100μg/kg体重（該結合体のポリペプチド部分の重量基準）での一回皮下投与後に、
ｉ）投与後の12時間に、非結合hG-CSFを100μg/kg体重で投与する場合と少なくともほぼ同じ速度および少なくともほぼ同じレベルに白血球形成（細胞数／Ｌ血液として測定）を増大させ、および
ｉｉ）少なくとも約96時間に、白血球レベル（細胞数／Ｌ血液として測定）を投与前の白血球レベル以上に増大させる；
(B)  ラットへの25μg/kg体重（該結合体のポリペプチド部分の重量基準）での一回皮下投与後に、
ｉ）投与後の12時間に、非結合hG-CSFを100μg/kg体重で投与する場合と少なくともほぼ同じ速度および少なくともほぼ同じレベルに白血球形成（細胞数／Ｌ血液として測定）を増大させ、および
ｉｉ）少なくとも約72時間に、白血球レベル（細胞数／Ｌ血液として測定）を投与前の白血球レベル以上に増大させる；
(C)  ラットへの100μg/kg体重（該結合体のポリペプチド部分の重量基準）での一回皮下投与後に、
ｉ）投与後の12時間に、非結合hG-CSFを100μg/kg体重で投与する場合と少なくともほぼ同じ速度および少なくともほぼ同じレベルに好中球形成（細胞数／Ｌ血液として測定）を増大させ、および
ｉｉ）少なくとも約96時間に、好中球レベル（細胞数／Ｌ血液として測定）を投与前の好中球レベル以上に増大させる；
(D)  ラットへの25μg/kg体重（該結合体のポリペプチド部分の重量基準）での一回皮下投与後に、
ｉ）投与後の12時間に、非結合hG-CSFを100μg/kg体重で投与する場合と少なくともほぼ同じ速度および少なくともほぼ同じレベルに好中球形成（細胞数／Ｌ血液として測定）を増大させ、および
ｉｉ）少なくとも約72時間に、好中球レベル（細胞数／Ｌ血液として測定）を投与前の好中球レベル以上に増大させる。
【請求項１９】  請求項１−６いずれかに規定するアミノ酸配列を有する、G-CSF活性を有するポリペプチド。
【請求項２０】  請求項１９記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列。
【請求項２１】  請求項２０記載のヌクレオチド配列を含有する発現ベクター。
【請求項２２】  請求項２０記載のヌクレオチド配列または請求項２１記載の発現ベクターを含有する宿主細胞。
【請求項２３】  請求項１−１８のいずれか記載のポリペプチド結合体を調製する方法であって、請求項２２記載の宿主細胞を、ポリペプチド発現を誘導する条件下に培養し、そして、該ポリペプチドを回収することを含み、ここで、該ポリペプチドは非ポリペプチド部分とインビトロで結合させられている、方法。
【請求項２４】  請求項１−１８のいずれか記載の結合体および製薬的に許容される担体または賦形剤を含有する組成物。
【請求項２５】  請求項１−１８のいずれか記載のポリペプチド結合体または請求項２４記載の組成物の、医薬としての使用。
【請求項２６】  放射線治療または化学療法に由来する障害を含む全身造血性障害の処置、白血球減少症、AIDSまたは他の免疫不全症の処置、および細菌または他の感染症の処置のための医薬の製造における、請求項１−１８いずれか記載の結合体または請求項２４記載のポリペプチドの使用。
【請求項２７】  医薬が、化学療法に起因する白血球減少症の処置用である、請求項２６記載の使用。