【手続補正書】
【提出日】平成20年5月23日(2008.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物細胞の表面上で候補ポリペプチドを提示する方法であって、
ａ）  パッケージング細胞と、融合タンパク質をコードする核酸配列を含むウイルス提示ベクターとを、該パッケージング細胞が該核酸配列を含むウイルス粒子を１つ以上産生するような条件下で接触させる工程であって、該融合タンパク質は、
ｉ）リーダーペプチド；
ｉｉ）候補ポリペプチド；
ｉｉｉ）免疫グロブリン分子の少なくとも一部；
ｉｖ）膜貫通部分、
を含む、工程；ならびに
ｂ）該ウイルス粒子と哺乳動物細胞とを、該哺乳動物細胞内で該融合タンパク質を発現するのに十分な条件下で接触させる工程であって、該候補ポリペプチドが、該哺乳動物細胞の表面上で提示させる、工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
前記免疫グロブリン分子が、前記哺乳動物細胞の表面上にさらに提示される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記免疫グロブリン分子が、ＩｇＧ分子のヒンジ領域、ＣＨ２領域、またはＣＨ３領域、あるいはこれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ウイルス提示ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記候補ポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体が単鎖抗体、ドメイン抗体、二重特異性抗体、またはＦａｂフラグメントである、請求項５の方法。
【請求項７】
前記候補ポリペプチドがライブラリに由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ビスナウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、およびネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）から成る群から選択されるレンチウイルスから得られる、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記パッケージング細胞が、
（ｉ）  プロモーターおよびポリアデニル化配列に作動可能に連結されたｅｎｖ遺伝子を含み、ここで該ｅｎｖ遺伝子は、機能性エンベロープ遺伝子をコードする、エンベロープベクター；および
（ｉｉ）  １つ以上のウイルス構造遺伝子を含む、ヘルパーベクター、
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記候補ポリペプチドが、前記ウイルス粒子と前記哺乳動物細胞とを接触させる前に、該ウイルス粒子の表面上にて発現させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記膜貫通部分が、ウイルス膜貫通部分または哺乳動物膜貫通部分である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記哺乳動物細胞が、ラモス−バーキットリンパ腫細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ウイルス粒子の表面上に候補ポリペプチドを提示する方法であって、該ウイルス粒子上に該候補ポリペプチドが提示されるように、パッケージング細胞と、融合タンパク質をコードする核酸配列を含むウイルス提示ベクターとを、該パッケージング細胞が該融合タンパク質を含むウイルス粒子を１つ以上産生するような条件下で接触させる工程を包含し、該融合タンパク質は、
ｉ）  リーダーペプチド；
ｉｉ）  候補ポリペプチド；
ｉｉｉ）  免疫グロブリン分子の少なくとも一部；
ｉｖ）  膜貫通部分；および
ｖ）  エンベロープ組み込みシグナル、
を含む、方法。
【請求項１４】
前記候補ポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体が、単鎖抗体、ドメイン抗体、二重特異性抗体、またはＦａｂフラグメントである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記候補ポリペプチドがライブラリに由来する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記ウイルス提示ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ビスナウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、およびネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）から成る群から選択されるレンチウイルスから得られる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫グロブリン分子が、ＩｇＧ分子のヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、またはこれらの組合せを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記膜貫通部分が、ウイルス膜貫通部分あるいは哺乳動物膜貫通部分である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
前記パッケージング細胞が、さらに、
（ｉ）  プロモーターおよびポリアデニル化配列に作動可能に連結されたｅｎｖ遺伝子を含み、ここで該ｅｎｖ遺伝子は、機能性エンベロープ遺伝子をコードする、エンベロープベクター；および
（ｉｉ）  １つ以上のウイルス構造遺伝子を含む、ヘルパーベクター、
を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
標的抗原に結合する候補ポリペプチドを同定する方法であって、
ａ）パッケージング細胞と、融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸ベクターとを、該パッケージング細胞が該核酸配列を含む１つ以上のウイルス粒子を生成するような条件下で接触させる工程であって、該融合タンパク質は、
ｉ）  リーダーペプチド；
ｉｉ）  候補ポリペプチド；
ｉｉｉ）  免疫グロブリン分子の少なくとも一部；および
ｉｖ）  膜貫通部分、
を含む、工程；
ｂ）該ウイルス粒子と１つ以上の哺乳動物細胞とを、該１つ以上の哺乳動物細胞がそれぞれ、該哺乳動物細胞の表面上にて提示される単一種の該候補ポリペプチドを産生するような条件下で接触させる、工程；
ｃ）該哺乳動物細胞の表面上で該単一種の候補ポリペプチドを提示している該哺乳動物細胞を、選別する工程；
ｄ）該選別した哺乳動物細胞と、標的抗原とを接触させる工程；ならびに
ｅ）該標的抗原に結合する哺乳動物細胞を同定し、それによって該標的抗原に結合する候補ポリペプチドを同定する、工程、
を包含する、方法。
【請求項２３】
工程ｄ）およびｅ）を１回以上繰り返す工程をさらに包含する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記パッケージング細胞がさらに、
（ｉ）  プロモーターにプロモーターおよびポリアデニル化配列に作動可能に連結されたｅｎｖ遺伝子を含み、ここで該ｅｎｖ遺伝子は、機能性エンベロープ遺伝子をコードする、エンベロープベクター；および
（ｉｉ）  １つ以上のウイルス構造遺伝子を含むヘルパーベクター、
を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記候補ポリペプチドが抗体またはそのフラグメントである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記候補ポリペプチドがライブラリに由来する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記ウイルス提示ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ビスナウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）から成る群から選択されるレンチウイルスから得られる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記核酸ベクターが、選択マーカーをコードする核酸をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
前記選択マーカーが、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、フェレドキシンＩＶタンパク質、ルシフェラーゼタンパク質およびエクオリンタンパク質から成る群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記膜貫通部分は、ウイルス膜貫通部分または哺乳動物膜貫通部分である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
候補ポリペプチドを親和性成熟させる方法であって、
ａ）パッケージング細胞と、融合タンパク質をコードする核酸配列を含む核酸ベクターとを、該パッケージング細胞が該核酸配列を含む１つ以上のウイルス粒子を生成するよな条件下で接触させる工程であって、該融合タンパク質は、
ｉ）  リーダーペプチド、
ｉｉ）  候補ポリペプチド、
ｉｉｉ）  免疫グロブリン分子の少なくとも一部、および
ｉｖ）  膜貫通部分、
を含む、工程；
ｂ）該１つ以上のウイルス粒子と１つ以上の第２の哺乳動物細胞とを、該１つ以上の哺乳動物細胞がそれぞれ、該１つ以上の哺乳動物細胞の表面上にて提示される単一種の該候補ポリペプチドを産生するような条件下で接触させる工程；
ｃ）該哺乳動物細胞の表面上で単一種の該候補ポリペプチドを提示している該１つ以上の哺乳動物細胞を選別する工程；
ｄ）該選別された１つ以上哺乳動物細胞と標的抗原とを接触させる工程；
ｅ）該標的抗原に結合する哺乳動物細胞を同定する工程、
ｆ）該同定した哺乳動物細胞と漸減する濃度の該標的抗原とを接触させる工程；ならびに
ｇ）工程ｅ）およびｆ）を、１回以上繰り返す工程、
を包含する、方法。
【請求項３３】
前記パッケージング細胞がさらに、
（ｉ）  プロモーターにプロモーターおよびポリアデニル化配列に作動可能に連結されたｅｎｖ遺伝子を含み、ここで該ｅｎｖ遺伝子は、機能性エンベロープ遺伝子をコードする、エンベロープベクター；および
（ｉｉ）  １つ以上のウイルス構造遺伝子を含むヘルパーベクター、
を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記哺乳動物細胞が活性化誘導シトシン脱アミノ酵素（ＡＩＤ）タンパク質を発現する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記哺乳動物細胞がラモス−バーキットリンパ腫細胞である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記候補ポリペプチドがライブラリに由来する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記ウイルス提示ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記候補ポリペプチドが抗体またはそのフラグメントである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ビスナウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）から成る群から選択されるレンチウイルスから得られる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記核酸ベクターが選択マーカーを含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記選択マーカーが、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、フェレドキシンＩＶタンパク質、ルシフェラーゼタンパク質、およびエクオリンタンパク質から成る群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
可溶性候補ポリペプチドを産生する方法であって、
ａ）パッケージング細胞とウイルス提示ベクターとを、該パッケージング細胞が１つ以上のウイルス粒子を生成するような条件下で接触させる工程であって、該ウイルスベクターは、
ｉ）ａ）リーダーペプチド；
ｂ）候補ポリペプチド；
ｃ）免疫グロブリン分子の少なくとも一部；および
ｄ）ｌｏｘＰ部位に隣接する膜貫通部分、
を含む融合タンパク質をコードする第１核酸配列；
ｉｉ）誘導性プロモーターに作動可能に連結されたｃｒｅリコンビナーゼポリペプチドをコードする第２核酸配列、
を含む、工程；
ｂ）該ウイルス粒子と哺乳動物細胞とを、該哺乳動物細胞において該融合タンパク質および該ｃｒｅリコンビナーゼを発現するのに十分な条件下で接触させ、それによって可溶性候補ポリペプチドが該哺乳動物細胞によって産生される、工程；
という手順から成る可溶性候補ポリペプチドを産生する方法。
【請求項４３】
前記候補ポリペプチドが抗体である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗体が、単鎖抗体、ドメイン抗体、二重特異性抗体、またはＦａｂフラグメントである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記候補ポリペプチドがライブラリに由来する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
前記ウイルス提示ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ビスナウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）から成る群から選択されるレンチウイルスから得られる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ウイルス提示ベクターであって、
ｉ）リーダーペプチド；
ｉｉ）候補ポリペプチド；
ｉｉｉ）免疫グロブリン分子の少なくとも一部；および
ｉｖ）膜貫通部分、
を含む融合タンパク質をコードする第１核酸配列を含む、ウイルス提示ベクター。
【請求項４９】
前記免疫グロブリン分子が、ＩｇＧ分子のヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域、またはこれらの組み合わせを含む、請求項４８に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５０】
前記候補ポリペプチドが抗体またはそのフラグメントである、請求項４８に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５１】
前記抗体が、単鎖抗体、ドメイン抗体、二重特異性抗体、またはＦａｂフラグメントである、請求項５０に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５２】
前記候補ポリペプチドがライブラリに由来する、請求項４８に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５３】
前記ウイルス提示ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項４８に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５４】
前記レンチウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ビスナウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、およびネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）から成る群から選択されるレンチウイルスから得られる、請求項５３に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５５】
前記第１核酸が、選択マーカーをさらに含む、請求項４８に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５６】
前記選択マーカーが生物発光タンパク質部分である、請求項５５に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５７】
前記生物発光タンパク質部分が、緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、フェレドキシンＩＶタンパク質、ルシフェラーゼタンパク質、およびエクオリンタンパク質から成る群から選択される、請求項５６に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５８】
さらに２つ以上のｌｏｘＰ部位を含み、該ｌｏｘＰ部位が前記膜貫通部分に隣接する、請求項５３に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項５９】
作動可能に誘導性プロモーターに連結されたｃｒｅリコンビナーゼタンパク質をコードする第２核酸配列をさらに含む、請求項５３に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項６０】
前記第１核酸配列が、作動可能に誘導性プロモーターに連結されている、請求項５３に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項６１】
前記誘導性プロモーターが、テトラサイクリン誘導性プロモーター、アルコール誘導性プロモーター、ステロイド誘導性プロモーター、金属誘導性プロモーター、光誘導性プロモーター、および温度誘導性プロモーターから成る群から選択される、請求項６０に記載のウイルス提示ベクター。
【請求項６２】
ベクター系であって、
ａ）請求項５３に記載のウイルス提示ベクター、
ｂ）プロモーターおよびポリアデニル化配列に作動可能に連結されたｅｎｖ遺伝子を含み、ここで該ｅｎｖ遺伝子は、機能性エンベロープ遺伝子をコードする、エンベロープベクター；および
ｃ）１つ以上のウイルス構造遺伝子を含むヘルパーベクター、
を含む、ベクター系。
【請求項６３】
前記ｅｎｖ遺伝子が水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質遺伝子を含む、請求項６２に記載のベクター系。
【請求項６４】
前記１つ以上のウイルス構造遺伝子が、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｔａｔ、およびｒｅｖから成る群から選択される、請求項６２に記載のベクター系。
【請求項６５】
核酸ウイルス標的ベクターであって、
ａ）融合タンパク質をコードする第１核酸であって、該融合タンパク質は、
ｉ）リーダーペプチド；
ｉｉ）候補ポリペプチド；
ｉｉｉ）免疫グロブリン分子の少なくとも１部分、および
ｉｖ）ｌｏｘＰに隣接した膜貫通部分、
を含む、第１核酸配列；
ｂ）毒素を含む、第２核酸配列；
ｃ）作動可能に誘導性プロモーターに連結されたｃｒｅリコンビナーゼをコードする、第３核酸配列；ならびに
ｄ）侵入部分をコードする、第４核酸配列、
を含む、核酸ウイルス標的ベクター。
【請求項６６】
前記侵入部分が、ウイルスエンベロープタンパク質、融合活性を有する真核生物タンパク質、結合能欠損型赤血球凝集タンパク質、および結合能欠損型インフルエンザ赤血球凝集タンパク質から成る群から選択される、請求項６５に記載のウイルス標的ベクター。
【請求項６７】
核酸ウイルス標的ベクターであって、
ａ）融合タンパク質をコードする第１核酸であって、該融合タンパク質は、
ｉ）リーダーペプチド；
ｉｉ）候補ポリペプチド；
ｉｉｉ）免疫グロブリン分子の少なくとも１部分；
ｉｖ）毒素、および
ｖ）ｌｏｘＰに隣接する膜貫通部分、
を含む、第１核酸配列；
ｂ）作動可能に誘導性プロモーターに連結されたｃｒｅリコンビナーゼをコードする、第２核酸配列；および
ｃ）侵入部分をコードする、第３核酸配列、
を含む、核酸ウイルス標的ベクター。
【請求項６８】
前記侵入部分が、ウイルスエンベロープタンパク質、融合活性を有する真核生物タンパク質、結合能欠損型赤血球凝集タンパク質、および結合能欠損型インフルエンザ赤血球凝集タンパク質から成る群から選択される、請求項６７に記載のウイルス標的ベクター。
【請求項６９】
被験体における核酸配列の標的化送達のための組成物であって、該核酸配列は融合タンパク質をコードし、該融合タンパク質は、
ｉ）リーダーペプチド；
ｉｉ）候補ポリペプチド；
ｉｉｉ）免疫グロブリン分子の少なくとも１部分；
ｉｖ）膜貫通部分；および
ｖ）侵入部分、
を含み、
ここで、該核酸はウイルス粒子の表面上で発現され、該候補ポリペプチドは標的細胞表面の抗原に特異的に結合する組成物であって、
該組成物は該ウイルス粒子を含み、該組成物は、該候補ポリペプチドが該細胞に選択的に結合し、該核酸が該細胞を形質導入するような条件下で、該ウイルス粒子が該標的細胞の抗原を発現する細胞に接触するように該被験体内に導入されることを特徴とする、組成物。
【請求項７０】
前記侵入部分が、ウイルスエンベロープタンパク質、融合活性を有する真核生物タンパク質、結合能欠損型赤血球凝集タンパク質、および結合能欠損型インフルエンザ赤血球凝集タンパク質から成る群から選択される、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記１つ以上の哺乳動物細胞がカルシウム感受性生物発光タンパク質を発現する、請求項２２に記載の方法。
【請求項７２】
前記カルシウム感受性生物発光タンパク質がエクオリンである、請求項７１に記載の方法。