(57)【要約】本発明は、ＣＭＹＡ５遺伝子に存在するＳＮＰに関連する疾患の遺伝的リスクを検出する方法、診断薬、診断キットを提供する。詳しくは、心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因の検出方法であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ５）遺伝子が、その発現産物のアミノ酸変異をもたらす塩基配列等を有していることを検出する方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因の検出方法であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ５）遺伝子が、その発現産物の以下のいずれかのアミノ酸変異をもたらす塩基配列を有していることを検出することよりなる方法。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのリジンへの変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのヒスチジンへの変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのグリシンへの変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のリジンへの変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のアラニンへの変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのセリンへの変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのイソロイシンへの変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのバリンへの変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのバリンへの変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのチロシンへの変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのイソロイソンへの変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのアラニンへの変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのイソロイシンへの変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのアラニンへの変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのアスパラギン酸への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのセリンへの変異
【請求項２】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因の検出方法であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子がコードする以下のいずれかのコドン変異を有していることを検出することよりなる方法。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのコドン（ＡＡＣ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）への変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのコドン（ＣＡＧ）のヒスチジンのコドン（ＣＡＣ）への変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのコドン（ＡＧＡ）のグリシンのコドン（ＧＧＡ）への変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸（ＧＡＡ）のコドンのリジンのコドン（ＡＡＡ）への変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のコドン（ＧＡＣ）のグリシンのコドン（ＧＧＣ）への変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のコドン（ＧＡＡ）のアラニンのコドン（ＧＣＡ）への変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのコドン（ＧＣＴ）のセリンのコドン（ＴＣＴ）への変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのコドン（ＧＴＣ）のイソロイシンのコドン（ＡＴＣ）への変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのコドン（ＣＴＴ）のバリンのコドン（ＧＴＴ）への変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのコドン（ＧＣＴ）のバリンのコドン（ＧＴＴ）への変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのコドン（ＴＧＴ）のチロシンのコドン（ＴＡＴ）への変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）のグリシンのコドン（ＧＧＴ）への変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのコドン（ＧＴＡ）のイソロイソンのコドン（ＡＴＡ）への変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのコドン（ＧＴＡ）のアラニンのコドン（ＧＣＡ）への変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのコドン（ＡＡＴ）のイソロイシンのコドン（ＡＴＴ）への変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのコドン（ＧＴＧ）のアラニンのコドン（ＧＣＧ）への変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのコドン（ＧＧＴ）のアスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのコドン（ＧＧＣ）のセリンのコドン（ＡＧＣ）への変異
【請求項３】
請求項２記載の検出方法であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子のＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアミノ酸をコードするコドンが、アスパラギンのコドン（ＡＡＣ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）へのコドン変異を有していることを検出することよりなる検出方法。
【請求項４】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動が、ヒトの疾患、症状である請求項１〜３のいずれか一項記載の検出方法。
【請求項５】
前記生体組織が、ヒト由来の組織である請求項１〜３のいずれか一項記載の検出方法。
【請求項６】
前記生体組織が、血液または生検組織である請求項１〜３のいずれか一項記載の検出方法。
【請求項７】
前記心疾患が、心肥大、拡張障害である請求項１〜３のいずれか一項記載の検出方法。
【請求項８】
前記心疾患が、高血圧性心肥大、肥大型心筋症、拡張性心筋症または拡張性心機能不全である請求項１〜３記載の検出方法。
【請求項９】
前記筋疾患が、筋原性疾患（ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）である請求項１〜３のいずれか一項記載の検出方法。
【請求項１０】
前記筋原性疾患が、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）または炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）である請求項９記載の検出方法。
【請求項１１】
前記腎疾患が、慢性腎炎、膜性腎症、巣状糸球体硬化症、膜性増殖性糸球体腎炎、腎硬化症腎症、腎性骨異栄養症、急性腎不全、腎性高血圧、ネフローゼ症候群または無症候性蛋白尿・血尿症候群である請求項１〜３のいずれか一項記載の検出方法。
【請求項１２】
配列番号１、２、および２２〜２９に示される群から選択されるプライマーを用いることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項記載の検出方法。
【請求項１３】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因を検出するための診断薬であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ５）遺伝子が、その発現産物の以下のいずれかのアミノ酸変異をもたらす塩基配列を有していることを検出するための診断薬。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのリジンへの変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのヒスチジンへの変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのグリシンへの変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のリジンへの変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のアラニンへの変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのセリンへの変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのイソロイシンへの変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのバリンへの変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのバリンへの変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのチロシンへの変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのイソロイソンへの変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのアラニンへの変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのイソロイシンへの変異（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのアラニンへの変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのアスパラギン酸への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのセリンへの変異
【請求項１４】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因を検出するための診断薬であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子がコードする以下のいずれかのコドン変異を有していることを検出するための診断薬。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのコドン（ＡＡＣ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）への変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのコドン（ＣＡＧ）のヒスチジンのコドン（ＣＡＣ）への変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのコドン（ＡＧＡ）のグリシンのコドン（ＧＧＡ）への変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のコドン（ＧＡＡ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）への変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のコドン（ＧＡＣ）のグリシンのコドン（ＧＧＣ）への変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のコドン（ＧＡＡ）のアラニンのコドン（ＧＣＡ）への変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのコドン（ＧＣＴ）のセリンのコドン（ＴＣＴ）への変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのコドン（ＧＴＣ）のイソロイシンのコドン（ＡＴＣ）への変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのコドン（ＣＴＴ）のバリンのコドン（ＧＴＴ）への変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのコドン（ＧＣＴ）のバリンのコドン（ＧＴＴ）への変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのコドン（ＴＧＴ）のチロシンのコドン（ＴＡＴ）への変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）のグリシンのコドン（ＧＧＴ）への変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのコドン（ＧＴＡ）のイソロイソンのコドン（ＡＴＡ）への変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのコドン（ＧＴＡ）のアラニンのコドン（ＧＣＡ）への変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのコドン（ＡＡＴ）のイソロイシンのコドン（ＡＴＴ）への変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのコドン（ＧＴＧ）のアラニンのコドン（ＧＣＧ）への変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのコドン（ＧＧＴ）のアスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのコドン（ＧＧＣ）のセリンのコドン（ＡＧＣ）への変異
【請求項１５】
請求項１４記載の診断薬であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子のＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアミノ酸残基をコードするコドンが、アスパラギンのコドン（ＡＡＣ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）へのコドン変異を有していることを検出するための診断薬。
【請求項１６】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動が、ヒトの疾患、症状である請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項１７】
前記生体組織が、ヒト由来の組織である請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項１８】
前記生体組織が、血液または生検組織である請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項１９】
前記心疾患が、心肥大、拡張障害である請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項２０】
前記心疾患が、高血圧性心肥大、肥大型心筋症、拡張性心筋症または拡張性心機能不全である請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項２１】
前記筋疾患が、筋原性疾患（ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）である請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項２２】
前記筋原性疾患が、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）または炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）である請求項２１記載の診断薬。
【請求項２３】
前記腎疾患が、慢性腎炎、膜性腎症、巣状糸球体硬化症、膜性増殖性糸球体腎炎、腎硬化症腎症、腎性骨異栄養症、急性腎不全、腎性高血圧、ネフローゼ症候群または無症候性蛋白尿・血尿症候群、である請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項２４】
配列番号１、２、および２２〜２９に示される群から選択されるプライマーを用いることを特徴とする請求項１３〜１５のいずれか一項記載の診断薬。
【請求項２５】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因を検出するための診断キットであって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ５）遺伝子が、その発現産物の以下のいずれかのアミノ酸変異をもたらす塩基配列を有していることを検出するための診断キット。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのリジンへの変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのヒスチジンへの変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのグリシンへの変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のリジンへの変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のアラニンへの変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのセリンへの変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのイソロイシンへの変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのバリンへの変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのバリンへの変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのチロシンへの変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのイソロイソンへの変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのアラニンへの変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのイソロイシンへの変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのアラニンへの変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのアスパラギン酸への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのセリンへの変異
【請求項２６】
心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因を検出するための診断キットであって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子がコードする以下のいずれかのコドン変異を有していることを検出するための診断キット。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのコドン（ＡＡＣ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）への変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのコドン（ＣＡＧ）のヒスチジンのコドン（ＣＡＣ）への変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのコドン（ＡＧＡ）のグリシンのコドン（ＧＧＡ）への変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のコドン（ＧＡＡ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）への変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のコドン（ＧＡＣ）のグリシンのコドン（ＧＧＣ）への変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のコドン（ＧＡＡ）のアラニンのコドン（ＧＣＡ）への変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのコドン（ＧＣＴ）のセリンのコドン（ＴＣＴ）への変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのコドン（ＧＴＣ）のイソロイシンのコドン（ＡＴＣ）への変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのコドン（ＣＴＴ）のバリンのコドン（ＧＴＴ）への変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのコドン（ＧＣＴ）のバリンのコドン（ＧＴＴ）への変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのコドン（ＴＧＴ）のチロシンのコドン（ＴＡＴ）への変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）のグリシンのコドン（ＧＧＴ）への変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのコドン（ＧＴＡ）のイソロイソンのコドン（ＡＴＡ）への変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのコドン（ＧＴＡ）のアラニンのコドン（ＧＣＡ）への変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのコドン（ＡＡＴ）のイソロイシンのコドン（ＡＴＴ）への変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのコドン（ＧＴＧ）のアラニンのコドン（ＧＣＧ）への変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのコドン（ＧＧＴ）のアスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのコドン（ＧＧＣ）のセリンのコドン（ＡＧＣ）への変異
【請求項２７】
請求項２６記載の診断キットであって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子のＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアミノ酸残基をコードするコドンが、アスパラギンのコドン（ＡＡＣ）のリジンのコドン（ＡＡＡ）へのコドン変異を有していることを検出するための診断キット。
【請求項２８】
前記疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動が、ヒトの疾患、症状である請求項２５〜２７のいずれか一項記載の診断キット。
【請求項２９】
前記生体組織が、ヒト由来の組織である請求項２５〜２７のいずれか一項記載の診断キット。
【請求項３０】
前記生体組織が、血液あるいは生検組織である請求項２５〜２７のいずれか一項記載の診断キット。
【請求項３１】
前記心疾患が、心肥大、拡張障害である請求項２５〜２７のいずれか一項記載の診断キット。
【請求項３２】
前記心疾患が、高血圧性心肥大、肥大型心筋症、拡張性心筋症、拡張性心機能不全である請求項２５〜２７のいずれが一項記載の診断キット。
【請求項３３】
前記筋疾患が、筋原性疾患（ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）である請求項２５〜２７のいずれか一項記載の診断キット。
【請求項３４】
前記筋原性疾患が、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）、炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）、である請求項３３記載の診断キット。
【請求項３５】
前記腎疾患が、慢性腎炎、膜性腎症、巣状糸球体硬化症、膜性増殖性糸球体腎炎、腎硬化症腎症、腎性骨異栄養症、急性腎不全、腎性高血圧、ネフローゼ症候群、無症候性蛋白尿・血尿症候群、である請求項２５〜２７のいずれか一項記載の診断キット。
【請求項３６】
配列番号１、２、および２２〜２９に示される群から選択されるプライマーを用いることを特徴とする請求項２５〜２７のいずれか一項記載の診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＭＹＡ５（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ５）遺伝子に存在する遺伝子多型を検出することによる、心疾患、筋疾患、腎疾患等の遺伝的素因の検出方法、診断薬および診断キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＳＮＰ（一塩基多型：ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）とは、個人間における一遺伝暗号（一塩基）の違いを意味する。このＳＮＰを分析することにより、病気にかかりやすい体質をつきとめたり、個人の体質に合わせたより良い治療法や薬剤の選択（テーラーメード医療）、医薬品の開発が可能になるものと考えられている。近年、ＳＮＰと疾患の関連性について多くの研究がなされている。
疾患には、遺伝子の異常により引き起こされるものが少なくない。例えば、筋疾患の一種である筋ジストロフィーの多くは遺伝性であり、その遺伝形式により分類が行われてきた。しかし、近年、分子遺伝学の進歩により、遺伝子座が次々と明らかにされ、またクローニングされ、それに基づいた疾患分類が試みられるようになっている。
ＳＮＰ分析は、筋ジストロフィーのような明らかな遺伝性疾患にだけ用いられるものではなく、例えば高血圧や高脂血症等の生活習慣病のような環境因子の影響も大きく受けるような疾患（多因子遺伝病：ｍｕｌｔｉｆａｃｔｏｒｉａｌ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）に対しても、疾患感受性の違いという観点でテーラーメード医療に役立つものである。また、疾患治療薬の感受性等もＳＮＰにより左右されるということも分かっており、抗癌剤の効果あるいは副作用の予測等に役立つと考えられている。
例えば、心疾患の遺伝的リスクをマイクロアレイやＳＮＰによって診断する試みは幾つかなされている（ＪＰ−Ａ  ２００４−１０５１４５、ＪＰ−Ａ  ２００４−１１３０９３、ＪＰ−Ａ  ２００４−０２４０３６）。これらは、コネキシン３７や腫瘍壊死因子α等のＳＮＰを調べることにより、罹患リスクの予測を行っている。
また他にも、腎疾患（腎不全、蛋白尿関連疾患）の遺伝的リスクをＳＮＰによって診断する試みもなされている（ＪＰ−Ａ  ２００４−０２４１２５、ＪＰ−Ａ  ２００４−５２４８２２）。これらは、ＭＤＲ−１やＳＣＮＮ１Ａ等のＳＮＰを調べることにより、罹患リスクの予測を行っている。
これらの疾患の遺伝的リスクを早期に予測、診断することは、罹患リスクを軽減する意味でも非常に重要であり、さらにその有効な方法が求められている。
ＳＮＰを分析するには、そのターゲット遺伝子を決定することが不可欠である。マウスＭｙｏｓｐｒｙｎは、筋肉においてＤｙｓｂｉｎｄｉｎと相互作用し、機能発現していることが明らかとなっている。また、Ｍｙｏｓｐｒｙｎは主に心筋に発現していることも報告されている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００４；２７９（１１）：１０４５０−８）。従って、本遺伝子の異常は心筋に影響を及ぼすと考えられる。
Ｍｙｏｓｐｒｙｎのヒトホモローグは、ＣＭＹＡ５であることから、ＣＭＹＡ５は心筋またはその他の筋肉において何らかの病態予測マーカーになる可能性があると考えられる。健常人にはＣＭＹＡ５のＳＮＰが存在することが、ＳＮＰデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｎｓｅｍｂｌ．ｏｒｇ／Ｈｏｍｏ＿ｓａｐｉｅｎｓ／ｐｒｏｔｖｉｅｗ？ｐｅｐｔｉｄｅ＝ＥＮＳＰ０００００２３８５２２＆ｄｂ＝ｃｏｒｅ）より明らかとなっている。
ＣＭＹＡ５由来遺伝子（ＪＰ−Ａ  ２００４−０００１５５のＳＥＱ  ＩＤ＃４（ｍＲＮＡ））の遺伝子発現量を指標に、心不全の予測、診断、治療を行うという発明が開示されている（ＪＰ−Ａ  ２００４−０００１５５）。しかし、ＪＰ−Ａ  ２００４−０００１５５の発明は、遺伝子発現量を指標にしているので、その実施には組織からＲＮＡを調製するステップを必要とする。これは、熟練した実験技術をもった実験者が実施しなければ精度の高いデータを得ることができない。また、この方法はコンタミネーションのリスクを常に管理しなければならないという問題を含んでいる。加えて、健常人あるいは軽症の患者から心臓の一部を採取してｍＲＮＡを調べることは現実的にはありえないことであり、このような遺伝子発増量を基にしたテーラーメード医療の成立は困難である。
【発明の開示】
【０００３】
ＳＮＰ分析は、遺伝子発現量測定に比べて、検体の安定性や診断精度は極めて安定している。また、ＳＮＰ分析によって、遺伝子発現量に変化がない場合にも疾患の予測を行うことができる。
本発明が解決しようとする課題は、ＣＭＹＡ５遺伝子に存在するＳＮＰに関連する疾患の遺伝的リスクの検出方法、診断薬、診断キットを提供することである。
本発明者らは、ＣＭＹＡ５のＳＮＰに着目し、ＳＮＰと疾患との関連性を見い出し、下記の各発明を完成したものである。
本発明は、課題の解決手段として、心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因の検出方法であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子が、その発現産物の以下のいずれかのアミノ酸変異をもたらす塩基配列を有していることを検出することよりなる方法を提供する。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのリジンへの変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのヒスチジンへの変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのグリシンへの変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のリジンへの変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のアラニンへの変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのセリンへの変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのイソロイシンへの変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのバリンへの変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのバリンへの変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのチロシンへの変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのイソロイソンへの変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのアラニンへの変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのイソロイシンへの変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのアラニンへの変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのアスパラギン酸への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのセリンへの変異
本発明は、他の課題の解決手段として、心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因を検出するための診断薬であって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子が、その発現産物の以下のいずれかのアミノ酸変異をもたらす塩基配列を有していることを検出するための診断薬を提供する。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのリジンへの変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのヒスチジンへの変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのグリシンへの変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のリジンへの変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のアラニンへの変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのセリンへの変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのイソロイシンへの変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのバリンへの変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのバリンへの変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのチロシンへの変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのイソロイソンへの変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのアラニンへの変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのイソロイシンへの変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのアラニンへの変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのアスパラギン酸への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのセリンへの変異
本発明は、更に他の課題の解決手段として、心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動の遺伝的素因を検出するための診断キットであって、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子が、その発現産物の以下のいずれかのアミノ酸変異をもたらす塩基配列を有していることを検出するための診断キットを提供する。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアスパラギンのリジンへの変異
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するグルタミンのヒスチジンへの変異
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアルギニンのグリシンへの変異
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するグルタミン酸のリジンへの変異
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するグルタミン酸のアラニンへの変異
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアラニンのセリンへの変異
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するバリンのイソロイシンへの変異
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するロイシンのバリンへの変異
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアラニンのバリンへの変異
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するシステインのチロシンへの変異
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアスパラギン酸のグリシンへの変異
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するバリンのイソロイソンへの変異
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するバリンのアラニンへの変異
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアスパラギンのイソロイシンへの変異
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するバリンのアラニンへの変異
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するグリシンのアスパラギン酸への変異
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するグリシンのセリンへの変異
発明の詳細な説明
本発明の検出方法は、生体組織において、ゲノム中のＣＭＹＡ５遺伝子が、その発現産物の上記（１）〜（１８）のいずれかのアミノ酸変異をもたらす塩基配列を有していることを検出することにより、病気関連遺伝子を発見して、病気を診断することができる。
検出方法としては、公知のアソシエーション（関連）法（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ）罹患同胞対法（Ｓｉｂ−ｐａｉｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）、伝達不平衡解析法（ＴＤＴ：Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ  ｔｅｓｔ）等を使用することができる。
本発明で用いるＣＭＹＡ５の塩基配列は、公共のデータベースであるＥｎｓｅｍｂｌ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｎｓｅｍｂｌ．ｏｒｇ／）に登録されている公知の配列を基準として表される。
本発明において、疾患の遺伝的素因の検出方法に用いるＣＭＹＡ５のＳＮＰは、次に挙げる群の中から任意に単数または複数を選択することができる。ｒｓは上述のウェブサイトにおけるＳＮＰ  ＩＤ番号を表す。
ｒｓ２２７８２３９、ｒｓ３８２８６１１、ｒｓ２２７８２４０、ｒｓ１２５１４４６１、ｒｓ１５４１８１３、ｒｓ３７４９６８３、ｒｓ１６８７７１０９、ｒｓ１００４３９８６、ｒｓ１６８７７１１１、ｒｓ７３４３、ｒｓ６８９５６０５、ｒｓ１１３２３６４６、ｒｓ１０９４２９０１、ｒｓ２５９１０４、ｒｓ１３６６２７０、ｒｓ８８０１７９、ｒｓ１３６６２７１、ｒｓ１７２５３８６０、ｒｓ１６８７７１２４、ｒｓ６８９３８６９、ｒｓ４７０４５８５、ｒｓ１６８７７１３３、ｒｓ１６８７７１３５、ｒｓ６８９２２７４、ｒｓ３７４９６７７、ｒｓ３７４９６７８、ｒｓ１３１５５４１２、ｒｓ１１３１５６８７、ｒｓ７７２５５３１、ｒｓ１２１８９３２５、ｒｓ７７２２０３７、ｒｓ１３６６２７２、ｒｓ７７２９５２４、ｒｓ１６８７７１８３、ｒｓ２５９１２８、ｒｓ２３０２９７９、ｒｓ１１２９７７０、ｒｓ１００５２８６７、ｒｓ２２８７６７２、ｒｓ３７４９６８２、ｒｓ１４２８２２３、ｒｓ１４２８２２４、ｒｓ１４２８２２５、ｒｓ６８５９５９５、ｒｓ１６８７７１４１、ｒｓ１６８７７１４７、ｒｓ１６８７７１５０、ｒｓ１６８７７１５１。
これらの中でも、好ましくはｒｓ２２７８２３９、ｒｓ３８２８６１１、ｒｓ２２７８２４０、ｒｓ１２５１４４６１１、ｒｓ１３６６２７１、ｒｓ１４２８２２３、ｒｓ１４２８２２４、ｒｓ１４２８２２５、ｒｓ６８５９５９５、ｒｓ６８９３８６９、ｒｓ１６８７７１０９、ｒｓ１６８７７１２４、ｒｓ１６８７７１３３、ｒｓ１６８７７１３５、ｒｓ１６８７７１４１、ｒｓ１６８７７１４７、ｒｓ１６８７７１５０、ｒｓ１６８７７１５１の中から任意に単数または複数を選択したものを用いることができる。
これらのＳＮＰは、以下に挙げる（１）〜（４）のコドン中に存在する場合、各々のコドンは縮重していてもよい。すなわち、該アミノ酸をコードしていれば、コドン中のヌクレオチドの置換があってもよい。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９に該当するアミノ酸残基のアスパラギンのコドン（ＡＡＣ）→リジンのコドン（ＡＡＡ）（ＳＮＰは、配列番号３のｍで示される塩基に該当する。）
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１に該当するアミノ酸残基のヒスチジンのコドン（ＣＡＣ）→グルタミンのコドン（ＣＡＧ）（ＳＮＰは、配列番号４のｓで示される塩基に該当する。）
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０に該当するアミノ酸残基のグリシンのコドン（ＧＧＡ）→アルギニンのコドン（ＡＧＡ）（ＳＮＰは、配列番号５のｒで示される塩基に該当する。）
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１に該当するアミノ酸残基のグルタミン酸のコドン（ＧＡＡ）→リジンのコドン（ＡＡＡ）（ＳＮＰは、配列番号６のｒで示される塩基に該当する。）
また、本明細書においてＳＮＰはｒｓ番号を用いる他に、下記のとおり、アミノ酸番号で表されることもある。
（１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９は、Ｎ３０７Ｋ、Ｎ３３９ＫまたはＮ２９０６Ｋとも表される。
（２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ３８２８６１１は、Ｈ７５９Ｑ、Ｈ７９１ＱまたはＨ３３５８Ｑとも表される。
（３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２４０は、Ｒ３３６Ｇ、Ｒ３６８ＧまたはＲ２９３５Ｇとも表される。
（４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１２５１４４６１は、Ｋ９８４Ｅ、Ｋ１０１６ＥまたはＫ３５８３Ｅとも表される。
数字の両側のアルファベットは入れ替わっても同じＳＮＰを表す。
遺伝子の解析が進むにつれ、「Ｎ３３９Ｋ」といった表記方法はそのアミノ酸番号が変化するので、本明細書においては主にｒｓ番号を用いる。しかし、どちらの表記方法を用いても、意図するＳＮＰは同一であると解されるべきである。
また、（１）〜（４）のＳＮＰ以外にも、下記の（５）〜（１８）のいずれかのアミノ酸変異をもたらすＳＮＰを検出することによっても、病気関連遺伝子を発見して、病気を診断あるいは予測することができる。以下の表１に（１）〜（１８）のＳＮＰを示す。
【表１】
2007013641.tif 000002
2007013641.tif 000003
（表１中の語句は、次に表す意味を有する。ａｌｌｅｌｅｓ：両アレルにおける塩基、ｐｏｓｉｔｉｏｎ：ゲノム上での各々の塩基の位置（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ（ｃｈｒ．）５はゲノム上７９，０２１，４５６−７９，０６４，３６５の範囲にかかる）、ｃＤＮＡ（１−１２２１０）：開始コドン（ＡＴＧ）のＡを１としたときのこの分子内での位置、Ａ．Ａ．ｃｈａｎｇｅｓ（１−４０７０）：ＳＮＰによるアミノ酸の変異、開始コドンにコードされるメチオニンを１としたときのアミノ酸の位置。）
ここに示したＳＮＰは、以下に挙げる（５）〜（１８）のコドン中に存在する場合、各々のコドンは縮重していてもよい。すなわち、該アミノ酸をコードしていれば、コドン中のヌクレオチドの置換があってもよい。
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１に該当するアミノ酸残基のアスパラギン酸のコドン（ＧＡＣ）→グリシンのコドン（ＧＧＣ）（ＳＮＰは、配列番号８のＲで示される塩基に該当する）。
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３に該当するアミノ酸残基のグルタミン酸のコドン（ＧＡＡ）→アラニンのコドン（ＧＣＡ）（ＳＮＰは、配列番号９のＭで示される塩基に該当する）。
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４に該当するアミノ酸残基のアラニンのコドン（ＧＣＴ）→セリンのコドン（ＴＣＴ）（ＳＮＰは、配列番号１０のＫで示される塩基に該当する）。
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５に該当するアミノ酸残基のバリンのコドン（ＧＴＣ）→イソロイシンのコドン（ＡＴＣ）（ＳＮＰは、配列番号１１のＲで示される塩基に該当する）。
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５に該当するアミノ酸残基のロイシンのコドン（ＣＴＴ）→バリンのコドン（ＧＴＴ）（ＳＮＰは、配列番号１２のＳで示される塩基に該当する）。
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９に該当するアミノ酸残基のアラニンのコドン（ＧＣＴ）→バリンのコドン（ＧＴＴ）（ＳＮＰは、配列番号１３のＹで示される塩基に該当する）。
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９に該当するアミノ酸残基のシステインのコドン（ＴＧＴ）→チロシンのコドン（ＴＡＴ）（ＳＮＰは、配列番号１４のＲで示される塩基に該当する）。
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４に該当するアミノ酸残基のアスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）→グリシンのコドン（ＧＧＴ）（ＳＮＰは、配列番号１５のＲで示される塩基に該当する）。
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３に該当するアミノ酸残基のバリンのコドン（ＧＴＡ）→イソロイソンのコドン（ＡＴＡ）（ＳＮＰは、配列番号１６のＲで示される塩基に該当する）。
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５に該当するアミノ酸残基のバリンのコドン（ＧＴＡ）→アラニンのコドン（ＧＣＡ）（ＳＮＰは、配列番号１７のＹで示される塩基に該当する）。
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１に該当するアミノ酸残基のアスパラギンのコドン（ＡＡＴ）→イソロイシンのコドン（ＡＴＴ）（ＳＮＰは、配列番号１８のＷで示される塩基に該当する）。
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７に該当するアミノ酸残基のバリンのコドン（ＧＴＧ）→アラニンのコドン（ＧＣＧ）（ＳＮＰは、配列番号１９のＹで示される塩基に該当する）。
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０に該当するアミノ酸残基のグリシンのコドン（ＧＧＴ）→アスパラギン酸のコドン（ＧＡＴ）（ＳＮＰは、配列番号２０のＲで示される塩基に該当する）。
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１に該当するアミノ酸残基のグリシンのコドン（ＧＧＣ）→セリンのコドン（ＡＧＣ）（ＳＮＰは、配列番号２１のＲで示される塩基に該当する）。
また、（５）〜（１８）のＳＮＰはｒｓ番号を用いる他に、下記のように示されることもある。
（５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１３６６２７１は、Ｄ３４９Ｇとも表される。
（６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２３は、Ａ１５６７Ｅとも表される。
（７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２４は、Ａ１５９９Ｓとも表される。
（８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１４２８２２５は、Ｖ１７２１Ｉとも表される。
（９）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８５９５９５は、Ｌ２２６２Ｖとも表される。
（１０）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ６８９３８６９は、Ａ１００６Ｖとも表される。
（１１）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１０９は、Ｃ６４Ｙとも表される。
（１２）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１２４は、Ｄ５９１Ｇとも表される。
（１３）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３３は、Ｖ１３０９Ｉとも表される。
（１４）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１３５は、Ｖ１３３３Ａとも表される。
（１５）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４１は、Ｎ１７１３Ｉとも表される。
（１６）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１４７は、Ｖ１８７５Ａとも表される。
（１７）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５０は、Ｇ１９１７Ｄとも表される。
（１８）ＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ１６８７７１５１は、Ｇ１９２０Ｓとも表される。
本発明では、具体的には、ＣＭＹＡ５のＳＮＰ  ＩＤ  ｒｓ２２７８２３９が（Ａ／Ａ）の場合は、（Ａ／Ｃ）および（Ｃ／Ｃ）の場合に比べて有意に高い心疾患罹患率、高い血中クレアチニン値を示すことを見出した。
本発明の検出方法において、遺伝的素因を検出する心疾患、筋疾患、腎疾患、ホルモン不全または血中クレアチニン値変動は、例えば、ヒトの疾患、症状を示すものであり、生体組織は、例えば、ヒト由来の組織（血液または生検組織等）である。
心疾患は、例えば、心肥大、拡張障害であり、具体的には、高血圧性心肥大、ｓ肥大型心筋症、拡張性心筋症または拡張性心機能不全である。肥大型心筋症や拡張型心筋症等は、筋自体が肥大したり、変性する疾患である。例えば肥大型心筋症の患者数は、平成１１年の厚生省の調査では、全国推計２１，９００人であり、１０万人あたり１７．３人であった。しかし、この調査は病院を受診したヒトを対象としており、この病気は無症状の人が多いため、実際の患者数は更に多いと考えられており、心疾患を的確かつ早期に診断することは、心疾患の治療において重要である。
筋疾患は、例えば、筋原性疾患（ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）であり、具体的には、筋ジストロフィー、先天性ミオパチー（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）または炎症性筋疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）である。
腎疾患は、例えば、慢性腎炎、膜性腎症、巣状糸球体硬化症、膜性増殖性糸球体腎炎、腎硬化症腎症、腎性骨異栄養症、急性腎不全、腎性高血圧、ネフローゼ症候群または無症候性蛋白尿・血尿症候群である。
高い血中クレアチニン値（クレアチニン値の異常）は、腎機能の低下および／または筋肉の異常を表す。腎臓の機能は、血液検査と尿検査で調べることができ、血清クレアチニン値は、腎臓のろ過率を見積もることができる値である。クレアチニン値は、腎不全の段階や重症度を示す指標として一般に使われる。クレアチニンは、筋肉から血液中に出て腎臓から尿に排泄される。腎臓の機能が低下すると、血中のクレアチニンの濃度が高くなる。従って、クレアチニン値の異常は、筋肉あるいは腎臓の異常と関連づけることができる。よって、血中クレアチニン値の以上を的確かつ早期に診断することは、筋疾患および腎疾患の治療において重要である。
本発明の検出方法で用いるゲノムＤＮＡは、血液やその他生体組織から市販の試薬を用いて調製することができる。好ましくは血液を用いて調製する。
本発明の検出方法において、各遺伝子多型を解析する方法は特に限定されるものではなく、例えば、
（ｉ）アリル特異的プライマー（及びプローブ）を用い、ＰＣＲ法による増幅、及び増幅産物の多型を蛍光又は発光によって解析する方法、
（ｉｉ）ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）法を利用したＰＣＲ−ＲＦＬＰ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｌｅｎｇｔｈ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：制限酵素断片長多型）法、
（ｉｉｉ）ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：単鎖高次構造多型）法（Ｏｒｉｔａ，Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８６，２７６６−２７７０（１９８９）等）、
（ｉｖ）ＰＣＲ−ＳＳＯ（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ：特異的配列オリゴヌクレオチド）法、
（ｖ）ＰＣＲ−ＳＳＯ法とドットハイブリダイゼーション法を組み合わせたＡＳＯ（ａｌｌｅｌｅｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ：アレル特異的オリゴヌクレオチド）ハイブリダイゼーション法（Ｓａｉｋｉ，Ｎａｔｕｒｅ，３２４，１６３−１６６（１９８６）等）、又はＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法（Ｌｉｖａｋ，ＫＪ，ＧｅｎｅｔＡｎａｌ，１４，１４３（１９９９），Ｍｏｒｒｉｓ，Ｔ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，３４，２９３３（１９９６））、
（ｖｉ）Ｉｎｖａｄｅｒ法（Ｌｙａｍｉｃｈｅｖ  Ｖｅｔａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１７，２９２（１９９９））、
（ｖｉｉ）プライマー伸長法を用いたＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ（ｍａｔｒｉｘ）法（ＨａｆｆＬＡ，Ｓｍｉｒｎｏｖ  ＩＰ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ  ７，３７８（１９９７））、
（ｖｉｉｉ）ＲＣＡ（ｒｏｌｌｉｎｇ  ｃｙｃｌｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法（ＬｉｚａｒｄｉＰＭ  ｅｔａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ１９，２２５（１９９８））、
（ｉｘ）ＤＮＡチップ又はマイクロアレイを用いた方法（ＷａｎｇＤＧ  ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８０，１０７７（１９９８）等）、
（ｘ）プライマー伸長法、
（ｘｉ）サザンブロットハイブリダイゼーション法、
（ｘｉｉ）ドットハイブリダイゼーション法（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，Ｅ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９８，５０３−５１７（１９７５））等の公知の方法を利用できる。
さらに、解析対象の多型部分を直接シークエンシングすることにより解析してもよい。なお、これらの方法を任意に組み合わせて多型解析を行ってもよい。
試料ＤＮＡが少量の場合には、検出感度や精度の面からＰＣＲ法を利用した方法により解析することが好ましい。ＰＣＲ法は、当業者が通常使用する方法を用いて行うことができる。
本発明の診断薬としては、上記した検出方法で使用するものであり、ＰＣＲ反応混合液を用いることができる。ＰＣＲ反応混合液は、例えば以下のように調製できるが、これに限定されない。また本発明の診断キットは、上記した検出方法で使用するものであり、ＰＣＲ反応混合液に使用する各成分の組み合わせを含むもの（未調製の状態のもの）、又は予め調製したＰＣＲ反応混合液を含むものである。
（ＰＣＲ反応混合液の組成例）
フォワードプライマー（２５μＭ）            １μＬ
リバースプライマー（２５μＭ）              １μＬ
１０ｘＰＣＲバッファー                      ５μＬ
ｄＮＴＰ（２．５ｍＭ  ｅａｃｈ）            ４μＬ
Ｔａｑポリメラーゼ                          １μＬ
水                                        ３３μＬ
テンプレート（１０ｎｇ／μＬ）              ５μＬ
全体                                      ５０μＬ
ＰＣＲ法を実施するときのＤＮＡ増幅条件は、熱変性９０〜９８℃、１〜６０秒、アニーリング４５〜６５℃、１〜８０秒、合成６５〜７５℃、１〜６０秒、５〜５０サイクルで行うことができる。好ましくは、熱変性９４℃、３０秒、アニーリング５０℃、３０秒、合成７２℃、３０秒、３０サイクルで行うが、これに限定されない。
ＰＣＲ法またはＰＣＲ法を応用した方法等の遺伝子増幅法により、核酸試料を予め増幅（核酸試料の一部領域の増幅を含む）した後、上記いずれかの解析方法を適用することもできる。一方、多数の核酸試料を解析する場合には、アリル特異的ＰＣＲ法、アリル特異的ハイブリダイゼーション法、ＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法、Ｉｎｖａｄｅｒ法、プライマー伸長法を用いたＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ（ｍａｔｒｉｘ）法、ＲＣＡ（ｒｏｌｌｉｎｇｃｙｃｌｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法、又はＤＮＡチップ又はマイクロアレイを用いた方法等、多数の検体を比較的短時間で解析することが可能な解析方法を用いることが特に好ましい。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、ＣＭＹＡ５遺伝子をプローブに用いたノザンブロッティングの結果である。メンブレンには、（ａ）既製のノザンブロッティング用メンブレン（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｓ）、（ｂ）ＰＣ（培養細胞にＣＭＹＡ５を過剰発現した陽性コントロール）、ＨＡＥＣ（ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ）、ＨＳＭＣ（ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ）から抽出したＲＮＡをブロッティングしたものを各々用いた。
図２は、高血圧からうっ血性心不全へのプロセス（ＶａｓａｎＲＳ  ａｎｄ  Ｌｅｖｙ  Ｄ．Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．１９９６；１５６：１７８９−９６より）を示した図である。
図３は、ヒト肥大心臓の心室壁部切片におけるＣＭＹＡ５のｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎの顕微鏡写真である。（ａ）ＣＭＹＡ５のアンチセンスプローブ、（ｂ）ＣＭＹＡ５のセンスプローブを各々使用した結果である。上段より倍率は各々４ｘ、２００ｘ、４００ｘである。倍率２００ｘ、４００ｘの写真は、倍率４ｘの写真中の数字（１、２）が記された箇所を拡大撮影したものである。矢印は、ジゴキシゲニン標識されたプローブが局在して発色している箇所を示す。
【実施例】
【０００５】
以下の実施例は、本発明を具体的に説明するために提示されるものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
特記しない限り、本明細書において使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたのと類似するまたは同等の方法及び物質を、本発明の実施または試験に使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書において引用された全ての特許、特許出願、および公報は、参照として本明細書に組み入れられる。
なお、配列表におけるａ，ｇ，ｃ，ｔ以外の記号の意味は、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン、平成１４年７月、特許庁」の付属書２、表１の塩基表に基づくものである。
［実施例１］
（１）ＣＭＹＡ５遺伝子によるノザンブロッティング
体の各組織におけるＣＭＹＡ５のｍＲＮＡ発現量を調べるため、既製のノザンブロッティング用メンブレン（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｓ）を用いて、ＣＭＹＡ５遺伝子（ｐＣＭＶ１５、配列番号７）をプローブとし、ノザンブロッティングを行った。また他にも、ＰＣ（培養細胞にＣＭＹＡ５を過剰発現した陽性コントロール）、
ＨＡＥＣ（ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ）、ＨＳＭＣ（ｈｕｍａｎ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ）のＲＮＡをそれぞれブロッティングしたメンブレンも用いた。
結果として、ＣＭＹＡ５は心臓、骨格筋に多く発現していることが明らかとなった（図１参照）。
（２）候補ＳＮＰ部位の決定
（２−１）解析方法
第１ステップ
健常人サンプルを使用してＣＭＹＡ５遺伝子エクソン（ｅｘｏｎ）２のダイレクトシーケンシングを行い、解析対象となるＳＮＰを決定した。健常人ボランティア末梢血より、ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  Ｋ．Ｋ．，Ｔｏｋｙｏ）を使用してゲノムＤＮＡを抽出した。次に、ＣＭＹＡ５遺伝子のエクソン２の一部をＰＣＲ法にて増幅し、その産物のダイレクトシーケンシングを行った。
ＰＣＲに用いたプライマーペアの配列は、以下のとおりである。プライマーペアは簡易カラム法で精製されたものを用いた。
フォワードプライマー：５’−ＡＡＴＴＡＡＣＧＣＡＧＴＧＡＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡ−３’（配列番号１）
リバースプライマー  ：３’−ＣＴＴＴＣＴＣＴＴＣＣＡＡＡＴＡＴＴＣＴＡＡＴＴ−５’（配列番号２）
ＰＣＲには以下の試薬を用いた。
ＴａＫａＲａ  Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ  ＢＩＯ  Ｉｎｃ．，Ｓｈｉｇａ）
ｄＮＴＰ混合液（ＴＡＫＡＲＡ  ＢＩＯ  Ｉｎｃ．，ｓｈｉｇａ）
１０×ＰＣＲバッファー（ＴＡＫＡＲＡ  ＢＩＯ  Ｉｎｃ．，ｓｈｉｇａ，ｐｒｏｄｕｃｔ＃ＲＯＯ１Ａ）    ＰＣＲ反応液は、以下の組成のものを用いた。
反応液組成（１サンプルあたり）：
フォワードプライマー（２５μＭ）                １μＬ
リバースプライマー（２５μＭ）                  １μＬ
１０×ＰＣＲバッファー                          ５μＬ
ｄＮＴＰ混合液（２．５ｍＭ  ｅａｃｈ）          ４μＬ
水                                              ３μＬ
テンプレートゲノムＤＮＡ（１０ｎｇ／μＬ）      ５μＬ
全  体                                        ５０μＬ
ＰＣＲは、ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標）ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ９７００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用い、熱変性９４℃３０秒、アニーリング５０℃３０秒、合成７２℃３０秒、３０サイクルの条件で行った。得られたＰＣＲ産物のシーケンスは、当業者に周知の一般的なシーケンシング方法を用いて決定した。
第２ステップ
第１ステップで得られたＳＮＰの情報を基に、ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲを用いて一般成人サンプル（ｎ＝１，５１４）の遺伝子型の決定を行った。一般成人サンプルの末梢血より、ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  Ｋ．Ｋ．，Ｔｏｋｙｏ）を使用してゲノムＤＮＡを抽出した。
ＰＣＲには、以下の試薬を用いた。
ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＳＮＰ  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｓｓａｙ  ＩＤ  Ｃ＿１５９６５００５＿１０）
ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｒｏｄｕｃｔ＃４３０４４３７）
ＰＣＲ反応液は、以下の組成のものを用いた。
反応液組成（１サンプルあたり）
2007013641.tif 000004
2007013641.tif 000005
ＰＣＲは、ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標）ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ９７００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、熱変性９２℃１５秒、アニーリング及び合成６０℃１分、４０サイクルの条件で行った。
ＰＣＲ産物からの蛍光検出機器には、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。
解析ソフトは、ＳＤＳ  ｖｅｒ．２．１  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。
第３ステップ
第２ステップのジェノタイピング（Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ）結果と対象コホートの臨床データを用いて、関連解析（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ）を行った。
ゲノムＤＮＡが得られ、遺伝子型を決定することに成功し、かつ臨床データのある１１３０名を対象とした。これらについて、ＣＭＹＡ５  Ｎ２９０６Ｋ多型の遺伝子型と臨床データの関連をＳｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ検定・χ２検定・ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ（一元配置分散分析）による分散分析を用いて解析した。単変量解析で関連の認められた項目を、さらに交絡因子の影響を排除するため、多変量解析・多重ロジスティック回帰分析を用いて検討した。統計解析には、統計ソフトＪＭＰ  ｖｅｒ．５．１．１  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．，Ｃａｒｙ，ＮＣ，ＵＳＡ）を使用した。
第４ステップ
第３ステップで得られた結果と、ＣＭＹＡ５遺伝子が心筋・骨格筋に発現しているとの情報に基づき、より詳細な臨床データの揃っている患者サンプル（ｎ＝１８７）でのＮ２９０６Ｋ多型の遺伝子型を決定した。
患者サンプルの末梢血より、ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  Ｋ．Ｋ．，Ｔｏｋｙｏ）を使用してゲノムＤＮＡを抽出した。
ＰＣＲには、以下の試薬を用いた。
ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＳＮＰ  Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ａｓｓａｙｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｓｓａｙ  ＩＤ  Ｃ＿１５９６５００５＿１０）
ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｒｏｄｕｃｔ＃４３０４４３７）
ＰＣＲ反応液は、以下の組成のものを用いた。
反応液組成（１サンプルあたり）
2007013641.tif 000006
ＰＣＲは、ＧｅｎｅＡｍｐ（登録商標）ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ９７００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、熱変性９２℃１５秒、アニーリング及び合成６０℃１分、４０サイクルの条件で行った。
ＰＣＲ産物からの蛍光検出機器には、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７９００ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。解析ソフトには、ＳＤＤ  ｖｅｒ．２．１  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。
第５ステップ
第４ステップのジェノタイピング結果と対象サンプルの臨床データを用いて、関連解析を行った。
ゲノムＤＮＡが得られ、遺伝子型を決定することに成功し、かつ除外基準にマッチしない１７４名を対象とした。対象者の臨床データには、詳細な病歴、身体計測、血液検査データの他に心電図、心臓エコー上の測定値が含まれる。除外基準は、二次性高血圧、３ヶ月以内に虚血性心疾患・脳血管疾患を発症した症例、慢性腎不全症例である。
ＣＭＹＡ５  Ｎ２９０６Ｋの遺伝子型と臨床データの関連をＳｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ検定・χ２検定・ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡによる分散分析を用いて解析した。単変量解析で関連の認められた項目を、さらに交絡因子の影響を排除するため、多変量解析・多重ロジスティック回帰分析を用いて検討した。統計解析には、統計ソフトＪＭＰ  ｖｅｒ．５．１．１  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．，Ｃａｒｙ，ＮＣ，ＵＳＡ）を使用した。
（２−２）解析結果
第１ステップ
健常人サンプル（ｎ＝５１）につきＣＭＹＡ５遺伝子エクソン２のシーケンシングを行ったところ、２９０６番目のアミノ酸に対応するコドンの多型Ｎ２９０６Ｋ（コードされるアミノ酸ではアスパラギン（Ｎ）からリジン（Ｋ）への変異を伴う多型、塩基ではＣからＡへと変化している。以下、ｒｓ２２７８２３９と呼ぶことがある。）が、以下の頻度で見つかった。
ＡＡ：１９検体
ＡＣ：１９検体
ＣＣ：１３検体
よって、この部位のＳＮＰをマーカーとして、これ以降の解析を行うこととした。
第２ステップ・第３ステップ
一般成人サンプルを用いて、ＣＭＹＡ５遺伝子多型ｒｓ２２７８２３９がどのような疾患に関連しているか検討した。
対象コホートの主な臨床データとしては、血液学的検査として、ＷＢＣ（白血球）、ＲＢＣ（赤血球）、Ｈｂ（ヘモグロビン値）、Ｈｔ（ヘマトクリット値）等が、血液生化学検査としてＴＰ（総蛋白）、Ａ／Ｇ比（アルブミン／グロブリン値）、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、γＧＴＰ（γ−グルタミルトランスペプチダーゼ）（以上肝機能マーカー）、Ｃｒ（クレアチニン）、ＢＵＮ（尿素窒素）（以上、腎機能マーカー）、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール（善玉コレステロール）、ＴＧ（中性脂肪：ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、β−リポ蛋白、遊離脂肪酸、ナトリウム、カリウム、カルシウム（以上電解質）、ＦＢＳ（空腹時血糖：ｆａｓｔｉｎｇ  ｂｌｏｏｄ  ｓｕｇａｒ）、ＨｂＡｌｃ（血糖マーカー）、ｈｓＣＲＰ（高感度反応性Ｃ蛋白）、ＢＮＰ（心不全マーカー）、アディポネクチン等が、他には身長、体重、ＢＭＩ（肥満度指数：Ｂｏｄｙｍａｓｓ  Ｉｎｄｅｘ）、腹囲、体脂肪率、収縮血圧、拡張血圧、心疾患の有無、脳卒中の有無という項目がある。
これらの臨床データとＣＭＹＡ５遺伝子多型ｒｓ２２７８２３９との関連について単変量で解析を行った結果、心疾患の有無とＳＣｒ（血清クレアチニン）が多型と有意に関連するという結果が得られた。すなわち、劣性モデル（ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ  ｍｏｄｅｌ）（ＡＡ対ＡＣ＋ＣＣ）においてＳＮＰ部位がＡＡの方が、心疾患を有する割合とＳＣｒの値が有意に高値であり、そのｐ値はそれぞれ０．０４，０．０１であった（表２）。
【表２】
2007013641.tif 000007
（数値は、ｎもしくは平均値±標準誤差で示した。ＳＣｒ：血清クレアチニン。）
次に、心疾患の有無を目的変数として、多重ロジスティック回帰分析を行った。交絡因子として年齢、ＢＭＩ、高血圧罹患の有無を選択し、これらの影響を補正した上でＣＭＹＡ５遺伝子多型ｒｓ２２７８２３９との関連を解析した。その結果交絡因子で補正後も、心疾患とｒｓ２２７８２３９は劣性モデルで有意に関連し、ｒｓ２２７８２３９がＡＡの場合、心疾患のリスクがオッズ比１．７５倍（９５％信頼区間１．０−３．０）となった（表３）。
【表３】
2007013641.tif 000008
（ＢＭＩ：Ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ）
第４ステップ・第５ステップ
更に、一般成人サンプルで見出された、ｒｓ２２７８２３９多型と心疾患との関連が具体的にどのような病態に関連しているかを解明するため、患者サンプルを用いて解析を行った。
解析検体の主な臨床データとしては、年齢、性別、身長、体重、ＢＭＩ、高血圧有無、血液生化学検査（総コレステロール、ＴＧ、ＨＤＬコレステロール、糖尿病の有無、ＦＢＳ、ＨｂＡｌＣ（ヘモグロビンＡｌＣ）、Ｆ−ＩＲＩ（空腹時インスリン分泌量：ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ  ｉｎｓｕｌｉｎ）、ＵＡ（尿酸）、ＡＣＥ活性（アンジオテンシン変換酵素活性：ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ）、ＰＲＡ（血中レニン活性）、ＰＡＣ（血中アルドステロン濃度）等）、心臓超音波検査（ＩＶＳｔｈ：心室中隔壁厚、ＰＷｔｈ：心室後壁厚、ＬＶＤｄ：拡張末期左室径：ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ  ｄｉａｓｔｏｌｉｃ  ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ、ＬＶＭ：左室心筋重量、ＬＶＭＩ：拡張末期左室容量：ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、ＬＶＨ  ｂｙ  ＬＶＭＩ：拡張末期左室容量による左室肥大評価：ｌｅｆｔ  ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ  ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ  ｂｙ等）、ＨＯＭＡ（インスリン抵抗性指数）、心電図検査（ＲＶ５＋ＳＶ１、ＬＶＨｂｙ  ＥＣＧ、ＥＦ：左室駆出率〔（拡張末期容量−収縮末期容量）／拡張末期容量〕：ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ、ＦＳ：〔（拡張末期径−収縮末期径）／拡張末期径〕：ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ、Ａ／Ｒ：左室流入波の比（拡張能の指標）等）、血圧（ＳＢＰ：収縮期血圧、ＤＢＰ：拡張期血圧）、ＢＳＡ（体表面積：ｂｏｄｙ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｒｅａ）、胸部レントゲン検査（ＣＴＲ％：心胸郭比）、尿検査（ＣＲｎｎ：クレアチニン、ＣＣｒ：クレアチニン・クリアランス）、糖尿病家族歴といった項目がある。
上記ＨＯＭＡは、〔ＦＰＧ  ｍｇ／ｄＬ〕×Ｆ−ＩＲＩ（μＵ／Ｍ１）÷４０５で求められ数値が大きいほどインスリン抵抗性が強いとされる。正常上限値は約２．０とされ、２．５〜３．０以上ではインスリン抵抗性の存在が疑われる。また、Ｒｖ５＋ＳＶ１、ＬＶＨｂｙ  ＥＣＧは、両方とも心電図での心肥大の指標である。
はじめに、遺伝子多型と臨床データの関連解析を優性モデル（ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｍｏｄｅｌ）（ＡＡ＋ＡＣ対ＣＣ）と劣性モデル（ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ  ｍｏｄｅｌ）（ＡＡ対ＡＣ＋ＣＣ）の両方で行ったところ、心臓エコー上の測定値であるＡ／Ｒ（左心室拡張障害の指標）と心室中隔壁厚（左右両心室を隔てている壁の厚さ）の２つの値につき、劣性モデルで有意差を認め、そのｐ値はそれぞれ０．０３９、０．０３６であった。
次に、これら２つの値のうち、分布の偏りが少ない（正規分布に近い）心室中隔壁厚を用いて、年齢をマッチさせた症例対照研究を行った。心室中隔壁厚の中央値１０ｍｍを基準として、１０ｍｍを含まず１０ｍｍより大きい場合を症例（左心室肥大有り）、１０ｍｍ以下の場合を対照（左心室肥大なし）として２群に分け、この２群間での臨床背景と遺伝子型の比較を行った（表４、５）。その結果、２群間では性別、高血圧を罹患している割合、血圧値、遺伝子型とアレル頻度に有意差が認められた。
「アレル頻度」では、本ＳＮＰが両アレルにおいてＡＡの人はＡ：２、ＡＣの人はＡ：１、Ｃ：１と数える。従って、本実施例においてはＡのアレル頻度が高いという結論となった。
【表４】
2007013641.tif 000009
（数値は、平均値±標準誤差で示す。ＢＭＩ：Ｂｏｄｙｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ。高血圧罹患は、収縮期血圧１４０ｍＨｇ、拡張期血圧９０ｍＨｇ以上もしくは降圧薬服用ありと定義した。心室中隔厚・左室後壁厚ともにＭモード心臓エコーによる測定であり、値は拡張末期のものである。）
【表５】
2007013641.tif 000010
2007013641.tif 000011
さらに交絡因子の影響を除外するために、左心室肥大の有無を目的変数として多重ロジスティック回帰分析を行った。交絡因子として２群間で有意差が認められた性別、高血圧罹患の有無を用い、劣性モデル（ＡＡ対ＡＣ＋ＣＣ）での検討を行ったところ、これらの交絡因子で補正後も遺伝子多型と左心室肥大の有無は有意に関連し、そのオッズ比は３．５倍（９５％信頼区間１．６−８．２）であるという結果が得られた（表６）。
【表６】
2007013641.tif 000012
（Ｗａｌｄ  χ２：有意差検定法、ＡｄｊｕｓｔｅｄＯＲ（９５％  ＣＩ）：オッズ比）
一般成人サンプル及び患者データの解析より、ＣＭＹＡ５遺伝子多型ｒｓ２２７８２３９がＡＡのパターンであった場合、心疾患の有無と血清クレアチニン値が相関していることから、心疾患・腎疾患・筋疾患といった疾患に罹患するリスクが高くなることが示唆された。更に患者サンプルでの解析から、ｒｓ２２７８２３９多型は左心室肥大と左心室拡張障害に有意に関連するという結果が得られた。対照症例中、特発性心筋症は３例のみであり、心臓エコーによって測定された左心室肥大はその大部分が本態性高血圧の合併症と考えられる。
左心室肥大と左心室拡張障害は、ともに高血圧の重大な合併症であるうっ血性心不全の前段階に認められ、うっ血性心不全に至る重要なリスクである（図２）。
今回の検討では、これら２つの指標ともｒｓ２２７８２３９多型と有意な関連を認めた。したがって、ＣＭＹＡ５遺伝子は高血圧から左心室肥大・左心室拡張障害に至る経路において、主要な働きをしていることが考えられる。
また、既存のデータベース
（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｎｓｅｍｂｌ．ｏｒｇ／Ｈｏｍｏ＿ｓａｐｉｅｎｓ／ｐｒｏｔｖｉｅｗ？ｐｅｐｔｉｄｅ＝ＥＮＳＰ０００００２３８５２２＆ｄｂ＝ｃｏｒｅ）でも公開されている、ｒｓ１５４１８１３、ｒｓ３７４９６８３、ｒｓ１６８７７１０９、ｒｓ１００４３９８６、ｒｓ１６８７７１１１、ｒｓ７３４３、ｒｓ６８９５６０５、ｒｓ１１３２３６４６、ｒｓ１０９４２９０１、ｒｓ２５９１０４、ｒｓ１３６６２７０、ｒｓ８８０１７９、ｒｓ１３６６２７１、ｒｓ１７２５３８６０、ｒｓ１６８７７１２４、ｒｓ６８９３８６９、ｒｓ４７０４５８５、ｒｓ１６８７７１３３、ｒｓ１６８７７１３５、ｒｓ６８９２２７４、ｒｓ３７４９６７７、ｒｓ３７４９６７８、ｒｓ１３１５５４１２、ｒｓ１１３１５６８７、ｒｓ７７２５５３１、ｒｓ１２１８９３２５、ｒｓ７７２２０３７、ｒｓ１３６６２７２、ｒｓ７７２９５２４、ｒｓ１６８７７１８３、ｒｓ２５９１２８、ｒｓ２３０２９７９、ｒｓ１１２９７７０、ｒｓ１００５２８６７、ｒｓ２２８７６７２、ｒｓ３７４９６８２といったこれらのＳＮＰでも同様な結果を得ることが期待される。
［実施例２］
（１）他の候補ＳＮＰ部位の決定
実施例１と同様に健常人の末梢血由来ゲノムＤＮＡ（５１検体）をサンプルとして、ＣＭＹＡ５遺伝子のダイレクトシーケンシングを行い、ＣＭＹＡ５の解析対象となる他のＳＮＰ（５）〜（１８）を決定した。
健常人ボランティア末梢血より、ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  Ｋ．Ｋ．，Ｔｏｋｙｏ）を使用してゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡをテンプレートとして、ＣＭＹＡ５遺伝子の一部をＰＣＲ法にて増幅し、その産物をダイレクトシーケンシングした。
ＰＣＲ反応試薬は、以下のものを使用した。
ＴａＫａＲａ  Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ  ＢＩＯ  Ｉｎｃ．，Ｓｈｉｇａ）
ｄＮＴＰ  ｍｉｘｔｕｒｅ（ＴＡＫＡＲＡ  ＢＩＯ  Ｉｎｃ．，Ｓｈｉｇａ）
１０×ＰＣＲ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＴＡＫＡＲＡ  ＢＩＯ  Ｉｎｃ．，Ｓｈｉｇａ，  ｐｒｏｄｕｃｔ＃  Ｒ００１Ａ）
ＰＣＲ反応液組成は以下のように調製した。
反応液組成（１サンプルあたり）：
フォワードプライマー（２５ｍＭ）            １μＬ
リバースプライマー（２５ｍＭ）              １μＬ
１０×ＰＣＲバッファー                      ５μＬ
ｄＮＴＰ混合液（２．５ｍＭ  ｅａｃｈ）      ４μＬ
水                                          ３μＬ
テンプレートゲノムＤＮＡ（１０ｎｇ／ｍＬ）  ５μＬ
全体                                      ５０μＬ
ＰＣＲに用いたプライマーの配列は以下の通りである。
２Ｆ：５’−ＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＧＡＡＣＴＴＣＣＴＴＣＡＴＣＡ−３’（配列番号２２）
２Ｒ：５’−ＧＴＣＴＴＴＣＴＴＣＴＣＡＧＧＴＴＣＣＡＡＡＧＡＣ−３’（配列番号２３）
３Ｆ：５’−ＧＣＴＧＧＧＴＣＡＧＡＡＴＴＴＴＣＴＡＧＴＧＡＴ−３’（配列番号２４）
３Ｒ：５’−ＧＣＴＡＡＣＣＴＣＣＴＣＴＧＡＴＡＡＴＣＣＴＴＴＴ−３’（配列番号２５）
４Ｆ：５’−ＡＡＴＴＡＣＣＴＧＡＴＧＴＡＡＧＣＡＣＣＴＣＴＴＣ−３’（配列番号２６）
４Ｒ：５’−ＣＴＴＣＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＡＡＡＴＧＡＧＡＴＴＣ−３’（配列番号２７）
５Ｆ：５’−ＣＡＧＡＧＧＴＡＡＡＡＣＴＴＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡ−３’（配列番号２８）
５Ｒ：５’−ＴＡＴＴＴＴＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＧＧＡ−３’（配列番号２９）
ＰＣＲは、熱変性９４℃３０秒、アニーリング５５℃３０秒、合成７２℃６０秒、４０サイクルの条件で行った。得られたＰＣＲ産物のシーケンスは、当業者に周知の一般的なシーケンシング方法を用いて決定した。
前述のＰＣＲプライマーは、次のような組み合わせで用いた。アンダーラインはプライマー配列を示す。［  ］内の塩基は、その配列に含まれるＳＮＰ部位の塩基を表す。
プライマー：２Ｆ（配列番号２４）と２Ｒ（配列番号２５）、増幅産物２６２ｂｐ、
ＳＮＰ：（６）ｒｓ１４２８２２３、［Ｃ／Ａ］、（７）ｒｓ１４２８２２４、［Ｔ／Ｇ］を検出した。
2007013641.tif 000013
プライマー：３Ｆ（配列番号２６）と３Ｒ（配列番号２７）、増幅産物３６０ｂｐ、
ＳＮＰ：（８）ｒｓ１４２８２２５、［ａ／ｇ］、（１５）ｒｓ１６８７７１４１、［ｔ／ａ］を検出した。
2007013641.tif 000014
プライマー：４Ｆ（配列番号２８）と４Ｒ（配列番号２９）、増幅産物３７８ｂｐ、
ＳＮＰ：（１６）ｒｓ１６８７７１４７、［ｃ／ｔ］、（１７）ｒｓ１６８７７１５０、［ａ／ｇ］、（１８）ｒｓ１６８７７１５、［ａ／ｇ］を検出した。
2007013641.tif 000015
プライマー：５Ｆ（配列番号３０）とＦＡＲ（配列番号３１）、増幅産物４８３ｂｐ、
ＳＮＰ：（９）ｒｓ６８５９５９５、［Ｇ／Ｃ］を検出した。
2007013641.tif 000016
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（５）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）のＳＮＰについては、直接Ｔａｑｍａｎ  ＰＣＲを用いてＳＮＰの頻度を調べた。この方法を用いて検出したＳＮＰを表７に示した。
【表７】
2007013641.tif 000018
（表７中の語句は、次に表す意味を有する。ａｌｌｅｌｅｓ：両アレルにおける塩基、ｐｏｓｉｔｉｏｎ：ゲノム上での各々の塩基の位置（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ（ｃｈｒ．）５はゲノム上７９，０２１，４５６−７９，０６４，３６５の範囲にかかる）、ｄｉｓｔａｎｃｅ：染色体上の（ゲノム上の）位置、ｃＤＮＡ（１−１２２１０）：開始コドンのＡを１としたときのこの分子内での位置、Ａ．Ａ．ｃｈａｎｇｅｓ（１−４０７０）：ＳＮＰによるアミノ酸の変異、開始コドンにコードされるメチオニンを１としたときのアミノ酸の位置。）
（２）解析結果
健常人サンプル（ｎ＝５１）につき、前述のＰＣＲ産物のシーケンスを解析した。
代表例を表８に示す。
【表８】
2007013641.tif 000019
（表８中、ＳａｍｐｌｅＩＤは健常人サンプル番号を表す。−は、不確定であることを表す。（１）、（２）および（５）〜（１８）は、本明細書におけるＳＮＰの通し番号である。）
表中の数字１または２は対応する塩基を意味する。例えば、（１）ｒｓ２２７８２３９が１１と表示される場合、その両アリルにおける当該ＳＮＰ塩基は、Ａ／Ａであり、１２とある場合はＡ／Ｃである。
表８から分かるように、（１）、（２）および（５）〜（１８）の変異は、同一人物においては同時に起こっている。例えば、（１）ｒｓ２２７８２３９がＡ／Ａである者（Ｓａｍｐｌｅ  ＩＤ  ０１）は、（５）ｒｓ１３６６２７１は常にＡ／Ａである。また（１）ｒｓ２２７８２３９がＡ／Ｃである者（ＳａｍｐｌｅＩＤ  １５）は、（５）ｒｓ１３６６２７１は常にＡ／Ｇである。他のＳＮＰについても同様である。従って、（１）、（２）および（５）〜（１８）のＳＮＰは、連鎖不平衡の関係にあるといえる。
連鎖不平衡とは正確分配には家系のつながりが完全にわかっていない場合に見られる、異なる遺伝子座間のアレルの非独立をいう。即ち、複数の遺伝子座の対立遺伝子または遺伝的マーカー（ＳＮＰ）の間にランダムでない相関が見られることをいう。
一方、対象として挙げたｒｓ６８９５６０５には、このような現象は見られなかった（表８）。
従って、（５）〜（１８）のＳＮＰを検出することは、（１）または（２）のＳＮＰを検出した場合と同じ結果を導くことができることが明らかとなった。
また、表２の結果から、（１）ｒｓ２２７８２３９がＡ／Ａである場合に心疾患との関連性が高まるということが分かっている。そこで、（１）ｒｓ２２７８２３９がＡ／Ａである場合と同時に出現する（２）および（５）〜（１８）のＳＮＰ塩基を病態関連遺伝子とした（表９）。
【表９】
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（３）疾患との関連性
前述のように、（１）ｒｓ２２７８２３９のＳＮＰを解析する代わりに（２）または（５）〜（１８）のＳＮＰを解析しても、同じ結果を導き出せることが明らかとなった。そこでこれを裏付けるために、（１）ｒｓ２２７８２３９と（１０）ｒｓ６８９３８６９の心機能における関連性について調べたところ、両ＳＮＰは壁厚、拡張能において、同等の結果を示した。
今回の結果を今後、臨床へ応用する例として、遺伝子多型による左心室肥大・左心室拡張障害のリスク判定、また遺伝子の機能を改変するデコイやベクターを用いることにより、高血圧から左心室肥大・左心室拡張障害への進展を予防する遺伝子治療の可能性が考えられる。
［実施例３］
ヒト心臓でのＣＭＹＡ５発現部位を特定するために、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（以下、ＩＳＨと略す）を行った。
対象組織として、ヒト肥大心臓心室壁部の厚さ約６μｍのパラフィン切片を用いた。プローブ配列には、ＣＭＹＡ５遺伝子の領域９８３５−１０３０４ｂｐ（サイズ：４７０ｂｐ）を用いた（配列番号３４）。プローブは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ法によりジゴキシゲニン（ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ：ＤＩＧ）標識した（ＤＩＧ  ＲＮＡ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｍｉｘ；ロシュ社）。
ＩＳＨの抗体にはアルカリフォスファターゼ標識−抗ジコキシゲニン抗体（ロシュ社）、発色基質にはＮＢＴ（ｎｉｔｒｏ−ｂｌｕｅ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）／ＢＣＩＰ（５−Ｂｒｏｍｏ−４−Ｃｈｌｏｒｏ−３’−Ｉｎｄｏｌｙｌｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｐ−Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ  ｓａｌｔ）、対比染色にはケルネヒトロート液（Ｋｅｒｎｅｃｈｔｒｏｔ  Ｓｔａｉｎ  Ｓｏｌｕｔｌｏｎ；武藤化学薬品）、封入にはキシレン系封入剤（マリノール；武藤化学薬品）を用いた。
結果として、ＣＭＹＡ５プローブ（アンチセンスプローブ）を用いたところ、心筋切片において発色が確認された（図３（ａ）矢印部分）。発色は介在板（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄ  ｄｉｓｃ）に見られることから、ＣＭＹＡ５が介在板に局在していることが明らかとなった。一方、ネガティブコントロールであるセンスプローブによる発色は認められなかった（図３（ｂ））。
［配列表］
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2007013641.tif 000031
2007013641.tif 000032
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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