【手続補正書】
【提出日】平成20年2月1日(2008.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  式(I)の化合物および薬学的に許容されるその塩または溶媒和物：
【化１】
2003522189.tif 000001
〔式中：
Aは式(a)または(b)：
【化２】
2003522189.tif 000002
の基であり：
R1はC3-C7炭素環、C1-C8アルキル、C2-C6アルケニルまたはC2-C6アルキニル基を表し、後者4つの基は、ハロゲン原子、-OR4、-NR5R6、-CONR5R6、-COOR7、-NR8COR9、-SR10、-SO2R10、-SO2NR5R6、-NR8SO2R10、アリールまたはヘテロアリールから独立して選択される1以上の置換基により所望により置換され得、この場合、当該アリールまたはヘテロアリールのいずれかは、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、-OR4、-NR5R6、-CONR5R6、-COOR7、-NR8COR9、-SR10、-SO2R10、-SO2NR5R6、-NR8SO2R10、C1-C6 アルキルまたはトリフルオロメチルから独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
R2およびR3は、水素原子、C3-C7炭素環基、C1-C8アルキル、C2-C6アルケニルまたはC2-C6アルキニル基をそれぞれ独立して表し、後者4つの基は、ハロゲン原子、-OR4、-NR5R6、-CONR5R6、-COOR7、-NR8COR9、-SR10、-SO2R10、-SO2NR5R6、-NR8SO2R10から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
または
O、S、NR8から選択される1以上の原子を所望により含み、そしてそれ自体C1-3アルキル、ハロゲンで所望により置換される3-8員環を表し、
R4は、水素、C1-C6アルキルまたはフェニル基を表し、後者の2つの基はハロゲン原子、フェニル、-OR11および-NR12R13から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
R5およびR6は、独立して、水素原子またはC1-C6アルキルまたはフェニル基を表し、後者の2つの基はハロゲン原子、フェニル、-OR14および-NR15R16、-CONR15R16、-NR15COR16、-SO2NR15R16、NR15SO2R16から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
または
R5およびR6はそれらが結合する窒素原子と一体となって、酸素および窒素原子から選択されるさらなるヘテロ原子を所望により含む4-から7-員の飽和複素環系を形成し、該環系はフェニル、-OR14、-COOR14、-NR15R16、-CONR15R16、-NR15COR16、-SO2NR15R16、NR15SO2R16またはC1-C6 アルキル(それ自身、ハロゲン原子および-NR15R16および-OR17基から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換されている)から独立して選択される1以上の置換基により所望により置換され得、
R10はC1-C6アルキル基またはフェニル基を表し、それらはそれぞれ、ハロゲン原子、フェニル、-OR17および-NR15R16から独立して選択される1以上の置換基により所望により置換され得、
XはNHまたはCR18R19であり、
YはNまたはCR18であり、そして
R7、R8、R9、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19は独立して水素原子、C1-C6アルキルまたはフェニル基を表す。〕。
【請求項２】  Aは式(b)のグループであり、YはNである、請求項1の化合物。
【請求項３】  R1は所望により置換されたベンジル基を表す、請求項1または請求項2の化合物。
【請求項４】  R2およびR3のうちの1つは水素原子であり、その他は1以上のヒドロキシ基で置換されたC3-C8アルキルである、請求項1、2または3の化合物。
【請求項５】  2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-5,7-ジヒドロ-4-[[(1R)-2-ヒドロキシ-1-メチルエチル]アミノ]- 6H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-オン、
7,9-ジヒドロ-6-[[(1R)-2-ヒドロキシ-1-メチルエチル]アミノ]-2-[(フェニルメチル)チオ]-8H-プリン-8-オン、
4-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-5,7-ジヒドロ-6H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-オン、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2-フルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1,3-プロパンジオール、
2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-2-メチル-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-ブタノール、
2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-2-メチル-1,3-プロパンジオール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-エタノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(3-クロロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[(フェニルメチル)チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)- 2-[[8-アミノ-2-[[(3-メチルフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2-メチルフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(3-メトキシフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(4-メチルフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2-ブロモフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(3-クロロ-2-フルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(3-クロロ-4-メトキシフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]- 1-プロパノール、
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[(1,3-ベンゾジオキソール-4-イルメチル)チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール、
およびそれらの薬学的に許容される塩および溶媒和物
から選択される請求項1の化合物。
【請求項６】  以下の処理を含む請求項1に定義の式(I)の化合物の製造方法：
(a)式(II)の化合物の、アミンHNR2R3による処理：
【化３】
2003522189.tif 000003
[式中、R1は式(I)の定義の通りであり、Lは脱離基である。]
または
(b)式(VI)の化合物の、アミン HNR2R3による処理：
【化４】
2003522189.tif 000004
[式中、R1は式(I)の定義の通りであり、Lは脱離基である。]
または
(c)式(XII)の化合物の、水酸化リチウムのような加水分解剤による処理：
【化５】
2003522189.tif 000005
[式中、R1、R2およびR3は式(I)の定義の通りである。]、
または
(d)式(XVIII)の化合物の、アミンHNR2R3による処理：
【化６】
2003522189.tif 000006
[R1は式(I)の定義の通りであり、Lは脱離基である。]、
または
(e)式(XXIII)の化合物の、アルキルハリドR1Xによる処理：
【化７】
2003522189.tif 000007
[R2およびR3は式(I)の定義の通りである。]、
または
(f)式(XXIV)の化合物の、アミン HNR2R3による処理：
【化８】
2003522189.tif 000008
[式中、R1は式(I)の定義の通りである。]、
および所望により(a)、(b)、(c)、(d)、(e)または(f)の後に薬学的に許容される塩を形成する。
【請求項７】  薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と組み合わせた、請求項1から5のいずれか1つに記載の式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を含む医薬組成物。
【請求項８】  請求項1から5のいずれか1つに記載の式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と混合することを含む、請求項7に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項９】  治療における使用のための、請求項1から5のいずれか1つに記載の式(I)の化合物または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１０】  治療における使用のための医薬の製造における、請求項1から5のいずれか1つに記載の式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項１１】  ケモカインが1以上のケモカインレセプターに結合するケモカイン介在性疾患の処置方法であって、治療上有効量の、請求項1から5のいずれか1つに記載の式(I)の化合物または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を患者に投与することを含む当該処置方法。
【請求項１２】  ケモカインレセプターがCXCケモカインレセプターサブファミリーに属する、請求項11の方法。
【請求項１３】  ケモカインレセプターがCXCR2レセプターである、請求項11または12の方法。
【請求項１４】  炎症性疾患の、当該疾患を患っているかまたはその危険性のある患者における処置方法であって、治療上有効量の、請求項1から5のいずれか1つに記載の式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を患者に投与することを含む当該方法。
【請求項１５】  当該疾患が乾癬、血管形成がCXCR2ケモカインレベルの上昇に関連している疾患、またはCOPDである、請求項14の方法。
【請求項１６】  当該疾患が乾癬である、請求項14の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
したがって、本発明は、式(I)：
【化９】
2003522189.tif 000009
〔式中：
Aは式(a)または(b)：
【化１０】
2003522189.tif 000010
の基であり：
R1はC3-C7炭素環、C1-C8アルキル、C2-C6アルケニルまたはC2-C6アルキニル基を表し、後者4つの基は、-OR4、-NR5R6、-CONR5R6、-COOR7、-NR8COR9、-SR10、-SO2R10、-SO2NR5R6、-NR8SO2R10、アリールまたはヘテロアリールから独立して選択される1以上の置換基により所望により置換され得、この場合、当該アリールまたはヘテロアリールのいずれかは、ハロゲン原子、シアノ、ニトロ、-OR4、-NR5R6、-CONR5R6、-COOR7、-NR8COR9、-SR10、-SO2R10、-SO2NR5R6、-NR8SO2R10、C1-C6 アルキルまたはトリフルオロメチルから独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
R2およびR3は、水素原子、C3-C7炭素環基、C1-C8アルキル、C2-C6アルケニルまたはC2-C6アルキニル基をそれぞれ独立して表し、後者4つの基は、ハロゲン原子、-OR4、-NR5R6、-CONR5R6、-COOR7、-NR8COR9、-SR10、-SO2R10、-SO2NR5R6、-NR8SO2R10から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
または
R2およびR3は、一体となって、O、S、NR8から選択される1以上の原子を所望により含み、そしてそれ自体C1-3アルキル、ハロゲンで所望により置換される3-8員環を表し、
R4は、水素、C1-C6 アルキルまたはフェニルを表し、後者の2つの基はハロゲン原子、フェニル、-OR11および-NR12R13から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
R5およびR6は、独立して、水素原子またはC1-C6 アルキルまたはフェニル基を表し、後者の2つの基はハロゲン原子、フェニル、-OR14および-NR15R16、-CONR15R16、-NR15COR16、-SO2NR15R16、NR15SO2R16から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、
または
R5およびR6はそれらが結合する窒素原子と一体となって、酸素および窒素原子から選択されるさらなるヘテロ原子を所望により含む4-から7-員の飽和複素環系を形成し、該環系はフェニル、-OR14、-COOR14、-NR15R16、-CONR15R16、-NR15COR16、-SO2NR15R16、NR15SO2R16またはC1-C6 アルキル(それ自身、ハロゲン原子および-NR15R16および-OR17基から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換されている)から独立して選択される1以上の置換基により所望により置換され得、
R10はC1-C6アルキル基またはフェニル基を表し、それらはそれぞれ、ハロゲン原子、フェニル、-OR17および-NR15R16から独立して選択される1以上の置換基により所望により置換され得、
XはNHまたはCR18R19であり、
YはNまたはCR18であり、そして
R7、R8、R9、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19は独立して水素原子、C1-C6アルキルまたはフェニル基を表す。〕
の化合物および薬学的に許容されるその塩または溶媒和物を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
適当には、R2およびR3が、水素原子、C3-C7炭素環基、C1-C8アルキル、C2-C6アルケニルまたはC2-C6アルキニル基をそれぞれ独立して表し、後者4つの基は、ハロゲン原子、-OR4、-NR5R6、-CONR5R6、-COOR7、-NR8COR9、-SR10、-SO2R10、-SO2NR5R6、-NR8SO2R10から独立して選択される1以上の置換基で所望により置換され得、またはR2およびR3は、一体となって、O、S、NR8から選択される1以上の原子を所望により含み、そしてそれ自体C1-3アルキル、ハロゲンで所望により置換される3-8員環を形成する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
(1)(気道)慢性閉塞性肺疾患(COPD)を含む閉塞性気道疾患；喘息、例えば、気管支性、アレルギー性、内因性、外因性およびダスト性喘息、特に慢性または難治性喘息(例えば、遅発性喘息、および気道過敏症)；気管支炎；乾酪性鼻炎、肥厚性鼻炎、化膿性鼻炎、乾燥性鼻炎および薬物性鼻炎を含む急性、アレルギー性、萎縮性鼻炎および慢性鼻炎；クループ性、線維素性および偽膜性鼻炎を含む膜性鼻炎および腺病性鼻炎(scrofoulous rhinitis)；神経性鼻炎(枯草熱)および血管神経性鼻炎を含む季節性鼻炎；サルコイドーシス、農夫肺および関連疾患、肺線維症および特発性間質性肺炎；
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
(6)(他の組織および全身性疾患)アテローム性動脈硬化症、後天性免疫不全症候群(AIDS)、紅斑性狼瘡、全身性狼瘡、エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、I型糖尿病、ネフローゼ症候群、好酸球増加症筋膜炎、過剰IgE症候群、らい腫らい、および特発性血小板減少性紫斑病(thrombocytopenia pupura)；術後の癒着、および敗血症。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
本発明のさらなる観点として、一定の式(I)の化合物は、CX3CR1レセプターのアンタゴニストとしての有用性を有する。このような化合物は、中枢および末梢神経系内の障害およびミクログリアの活性化および／または白血球の浸潤を特徴とする他の病状(例えば卒中／虚血および頭部外傷)の処置において特に有用であると期待される。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
本発明は、また、炎症性疾患、特に乾癬の、当該疾患を患っているかまたはその危険性のある患者における処置の方法を提供し、該方法は治療上有効量の、上記定義の式(I)の化合物、または薬学的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を患者に投与することを含む。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
(b)2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-4,6-ジヒドロキシ-5-ピリミジン酢酸, エチルエステル
油(1.37g)中の水素化ナトリウム、乾燥DMF(10ml)中60％の懸濁液に、乾燥DMF(30ml)中の実施例1、ステップ(a)の生成物(7.9g)の溶液を加えた。添加の後、当該混合物を室温で1時間攪拌した。当該溶液に2,3-ジフルオロベンジルブロミド(4.45 ml)を加え、当該混合物は一夜攪拌し得た。当該混合物を水(200ml)中に注ぎ、当該生成物を濾過により回収すると、副題化合物(8.1g)を得た。
MS: APCI   355 (M-H), 357 (M+H)
1H NMR: δ (DMSO) 7.50-7.18 (3H, m), 4.47 (2H, s), 4.04 (2H,q), 3.97 (2H. s), 1.67 (3H, t)
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
(c)4,6-ジクロロ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-5-ピリミジン酢酸, エチルエステル
実施例1、ステップ(b)の生成物(8.1g)およびオキシ塩化リン(100ml)の混合物を室温で攪拌しつつ、N,N-ジメチルアニリン(2.91 ml)を滴下した。次いで、当該溶液を還流で2時間加熱した。当該混合物を室温に冷却し得、破砕した氷／水に注いだ。当該粗生成物をエーテル中に抽出した。シリカのクロマトグラフィーを10%メタノール/イソヘキサンで抽出し、副題化合物(5.1g)を得た。
MS: APCI 392 (M-H),394 (M+H)
1H NMR: δ (DMSO) 7.32-6.98 (3H, m), 4.43 (2H, s), 4.23 (2H, q), 3.87 (2H, s), 1.28 (3H, t)
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
(d)4-クロロ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-6-[[(2,4-ジメトキシフェニル)メチル]アミノ]-5-ピリミジン酢酸, エチルエステル
乾燥DMF(30ml)中の実施例1、ステップ(c)の生成物(1.0g)の溶液に、2,4-ジメトキシベンジルアミンヒドロクロリド(0.52g)を加え、その後、N,N'-ジイソプロピルエチルアミン(1ml)を加え、そして当該混合物を40℃で1時間攪拌した。当該混合物を乾燥するまで乾燥させた。シリカのクロマトグラフィーを10%酢酸エチル/ジクロロメタンで抽出し、副題化合物(1.0g)を得た。
MS: APCI  522 (M-H), 524 (M+H)
1H NMR: δ (DMSO) 7.28-7.22 (1H, m), 7.13-6.97 (3H, m), 6.45-6.42 (2H, m), 6.08 (1H, t), 4.57 (2H, s), 4.41 (2H, s), 4.16 (2H, q), 3.82 (3H, s), 3.79 (3H, s), 3.54 (2H, s), 1.22 (3H, t)
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
(e)4-クロロ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-5,7-ジヒドロ-6H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-オン
p-トルエンスルホン酸(25mg)を含む乾燥トルエン(50ml)中の実施例1、ステップ(d)の生成物(0.5g)の溶液を還流で4時間加熱した[lc/msによる反応混合物の分析は、環化の完了と、酸不安定性ジメトキシベンジル付加物の喪失を示した]。当該反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、シリカのクロマトグラフィーにより精製した残渣を酢酸エチルで抽出し、副題化合物(0.20g)を得た。
MS: APCI 328 (M+H)
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
(f)2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-5,7-ジヒドロ-4-[[(1R)-2-ヒドロキシ-1-メチルエチル]アミノ]-6H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-オン
NMP(5ml)中の実施例1、ステップ(e)の生成物(0.20g)を(R)-2-アミノ-1-プロパノール(0.56g)で処理し、当該反応混合物を110℃で2時間加熱した。当該混合物を乾燥するまで蒸発させ、当該残渣を精製(HPLC、Symmetry(商標)C18カラム、0.1%水性酢酸アンモニウム：アセトニトリルアイソクラチック溶出  75:25)し、副題化合物(0.055g)を得た。
MS: APCI  367 (M+H)
1H NMR: δ (DMSO) 7.38-7.10 (3H, m), 6.74 (1H, d), 4.69 (1H, m), 4.38 (2H, s), 4.12 (1H, m), 3.43-3.29 (2H, m), 3.17 (2H, s), 1.08 (3H, d)
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
b)5-ニトロ-2-[(フェニルメチル)チオ]-4,6-ピリミジンジオール
実施例2、ステップ(a)の生成物(2g)を、氷酢酸(50ml)および濃硝酸(20ml)の混合物に添加し、当該反応混合物を50℃に加熱した。さらにステップ(a)の生成物28gを2時間かけて少しづつ添加し、反応温度は50℃と60℃との間を維持した。さらに1時間、50℃で反応混合物を攪拌した後、破砕した氷に注ぎ、濾過により、黄色固体として副題生成物を単離した(12.3g)。
1H NMR: δ (DMSO) 7.48-7.19 (5H, m), 4.47 (2H, s)
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
c)4,6-ジクロロ-5-ニトロ-2-[(フェニルメチル)チオ]-ピリミジン
POCl3 (100 ml)およびトルエン(400ml)の混合物中の実施例2、ステップ(b)の生成物(59.2g)の懸濁液を80℃に加熱した。トルエン(200ml)中の1-メチルイミダゾール(16.9ml)の溶液を1時間かけて滴下し、次いで当該反応混合物を100℃で24時間加熱した。室温に冷却後、当該溶媒を蒸発により取除き、水(2リッター)を残渣に注意深く加えた。当該混合物をジクロロメタン(4×500ml)で抽出し、合わせた有機抽出物をMgSO4で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、褐色のタールを得た。これをカラムクロマトグラフィーで精製し、イソヘキサン中10%ジクロロメタンで溶出し、黄色固体として副題生成物(29.7g)を得た。
MS: APCI (-ve) 315 (M-H)
1H NMR: δ (DMSO) 7.43-7.24 (5H, m), 4.40 (2H, s)
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
d)6-クロロ-5-ニトロ-2-[(フェニルメチル)チオ]-4-ピリミジンアミン
アンモニア溶液(14 ml、ジオキサン中0.5 M)を、THF(100ml)中の実施例2、ステップ(c)の生成物(2.0g)およびジイソプロピルエチルアミン(3.31ml)の溶液に、RTで1時間かけて滴下した。さらなる1時間の攪拌の後、当該反応物をシリカ上で真空で濃縮し、溶出液として9：1次いで4：1のイソヘキサン/酢酸エチルを用いカラムクロマトグラフィーにより精製し、黄色固体として副題生成物を得た(980 mg、52 %)
MS: ESI (-ve) 296 (M-H, 100 %)
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
e)6-クロロ-2-[(フェニルメチル)チオ]-4,5-ピリミジンジアミン
EtOH (100 ml)およびH2O (15 ml)中の実施例2、ステップ(d)の生成物(980mg)、NH4Cl(1.61g)および鉄粉末(559mg)の懸濁液を85℃で1.5時間加熱した。当該混合物をセライトでろ過し、温MeOH(100ml)で洗浄し、その後、濾液を減圧下で濃縮した。溶出液として1:1 イソヘキサン/酢酸エチルを用いるカラムクロマトグラフィーにより、黄色固体として副題生成物を得た(0.69g、78%)。
MS: ESI (-ve) 265 (M-H, 100 %)
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９０】
f)6-クロロ-7,9-ジヒドロ-2-[(フェニルメチル)チオ]-8H-プリン-8-オン
DCM(25ml)中のトリホスゲン(0.92g)の溶液を、DCM(25ml)中の実施例2、ステップ(e)の生成物(0.69g)およびトリエチルアミン(0.55ml)の溶液に-10℃で滴下した。次いで冷却槽を取除き、当該懸濁液を2.5時間攪拌した。0℃への冷却において、NaHCO3 (20 ml)を、激しく攪拌しつつ添加し、その後、DCM(3×50ml)で抽出することにより有機物質を回収した。有機抽出物を合わせ、乾燥させ(MgSO4)、真空で濃縮し、粗黄色固体を得た。この物質をEtOAcで破砕し、濾過しピンク色固体を得た(360 mg、48 %)。濾液を濃縮し、EtOAcで再び破砕し、第二のクロップを得た(170 mg、全体の70 %)。
MS: ESI (-ve) 291 (M-H, 100 %)
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
g)7,9-ジヒドロ-6-[[(1R)-2-ヒドロキシ-1-メチルエチル]アミノ]-2-[(フェニルメチル)チオ]-8H-プリン-8-オン
アラニノール(alaninol)(0.128g)、ジイソプロピルエチルアミン(0.35ml)およびN-メチルピロリジノン(3ml)の混合物中の実施例2、ステップ(f)の生成物(0.1g)の溶液を、100℃で48時間攪拌し、その後、H2O (75 ml)に注いだ。次いで、2M HCl溶液を加えpH＝2とし、形成した明褐色固体を濾過し、EtOHで再結晶し、副題化合物を得た(22 mg、19 %)。
m.p. 284 ℃
MS: ESI (-ve) 330 (M-H, 100 %)
1H NMR: δ (DMSO) 11.2 (1H, s), 9.82 (1H, s), 7.20-7.41 (5H, m), 6.40 (1H, d, J 10.8), 4.85 (2H, s), 4.30 (2H, s), 4.15 (1H, m), 3.43 (2H, m) and 1.14 (3H, d, J 7.4)
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
(b)4-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-5,7-ジヒドロ-6H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-6-オン
乾燥DMF(5ml)中の60%水素化ナトリウムの懸濁液に、DMF(10ml)中の実施例3、ステップ(a)の生成物(0.57g)の溶液を加えた。当該混合物を30分間攪拌し得た。当該溶液に2,3-ジフルオロベンジルブロミド(0.39ml)を加え、当該混合物を2時間攪拌した。水に注ぎ、粗生成物を酢酸エチルに抽出した。シリカのクロマトグラフィーを10%酢酸エチル/ジクロロメタンで抽出し、表題化合物(0.35g)を得た。
MS: APCI  309 (M+H)
1H NMR: δ (DMSO) 10.85 (1H, s), 7.45-10 (3H, m), 6.78 (2H, m), 4.36 (2H, s), 3.24 (2H, s)
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９５】
(b)6-クロロ-2-[[(2-フルオロフェニル)メチル]チオ]-4-ピリミジンアミン
実施例4、ステップ(a)の生成物(34g)をPOCl3 (150ml)中の2-ピコリン(20ml)の溶液に添加し、当該混合物を24時間還流した。当該反応混合物を真空でもとの体積の半分にまで濃縮し、氷に注ぎ、次いで、アンモニアで中性化し、褐色ガムを形成した。当該水相をデカンとし、有機残渣を酢酸エチルに溶解した。この溶液を水相と組合せ、1時間還流した。当該有機相を分離し、蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで生成し、ジクロロメタンで溶出し、淡黄色固体として副題化合物を得た(15.6g)
MS: APCI (+ve) 270 (M+H, 100 %)
1H NMR: δ (DMSO) 7.57 (1H, t), 7.37 (2H, br s), 7.33 (1H, m), 7.14 (2H, m), 6.20 (1H, s), 4.32 (2H, s)
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
(c)(2R)-2-[[6-アミノ-2-[[(2-フルオロフェニル)メチル]チオ]-4-ピリミジニル]アミノ]-1-プロパノール
実施例4、ステップ(b)の生成物(15g)、トリエチルアミン(15ml)およびD-アラニノール(10g)の溶液を160℃で18時間加熱した。当該反応混合物を室温にまで冷却し、水性塩化アンモニウム(1l)に注いだ。得られた白色沈殿をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、最初に1:1 DCM:酢酸エチル、次いで3:1 DCM:メタノールで溶出し、黄色の泡として副題生成物を得た(10.7g)。
MS: APCI (+ve) 309 (M+H, 100 %)
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
(e)(2R)-2-[[5,6-ジアミノ-2-[[(2-フルオロフェニル)メチル]チオ]-4-ピリミジニル]アミノ]-1-プロパノール
亜ジチオン酸ナトリウム(4g)を、100℃で、水(35ml)およびDMF(15ml)の混合物中の実施例4、ステップ(d)の生成物(8.4g)の懸濁液に少しづつ加えた。得られた黄色溶液を氷水浴中で冷却し、50%水性硫酸(15ml)を加えると、灰色沈殿を得た。当該混合物を10分間攪拌し、次いで濾過し、水、エタノールおよびジエチルエーテルで洗浄し、灰色固体として副題化合物(1.0g)を得た。
MS: APCI (+ve) 324 (M+H, 100 %)
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
(f)[2-[[(2-フルオロフェニル)メチル]チオ]-6-[[(1R)-2-ヒドロキシ-1-メチルエチル]アミノ]-9H-プリン-8-イル]-カルバミン酸, エチルエステル
窒素雰囲気下0℃で、乾燥アセトニトリル(20ml)中のエトキシカルボニルイソチオシアネート(0.48ml)の溶液に、2.5当量のトリエチルアミンを含む乾燥アセトニトリル(20ml)中の実施例4、ステップ(e)の生成物(1.15g)の懸濁液を加える。0℃で5分間の攪拌後、ジイソプロピルカルボジイミド(0.8ml)を加え、当該反応物を70℃で1時間温める。当該反応混合物を真空で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで2回精製し、何れの場合も3:1 酢酸エチル:DCMで溶出し、白色固体として副題化合物(0.045g)を得た。
MS: APCI (+ve) 421 (M+H, 100 %)
1H NMR: δ (DMSO) 11.87 (1H, br s), 11.41 (1H, br s), 7.56 (2H, m), 7.28 (1H, m), 7.14 (2H, m), 4.81 (1H, t), 4.36 (2H, s), 4.22 (3H, m), 3.46 (1H, m), 3.39 (1H, m), 1.28 (3H, t), 1.15 (3H, d)
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１００】
(g)(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2-フルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール
ジオキサン(4ml)および水(2ml)中の実施例4、ステップ(f)の生成物(0.042g)および水酸化リチウム一水和物(16mg)の溶液を還流の下、5時間加熱した。反応混合物を真空で濃縮し、当該残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、0.5% 880 アンモニアを含む4:1 DCM:エタノールで溶出し、白色固体として表題化合物(0.015g)を得た。
m.p. 250-255℃ (dec)
MS: APCI (+ve) 349 (M+H, 100 %)
1H NMR: δ (DMSO) 10.30 (1H, br s), 7.54 (1H, t), 7.28 (1H, m), 7.14 (2H, m), 6.64 (1H, br s), 6.47 (1H, br s), 4.77 (1H, br s), 4.34 (2H, s), 4.17 (1H, m), 3.45 (1H, m), 3.38 (1H, m), 1.13 (3H, d)
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
b)2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-5-ニトロソ-4,6-ピリミジンジアミン
実施例5、ステップ(a)の生成物(2.5g)を、酢酸(150ml)中に溶解させ、当該溶液を5℃に冷却した。水(50ml)中の亜硝酸ナトリウム(625mg)の溶液を滴下し、濃青色に着色した。当該反応物を室温で30分間攪拌し、その間、ピンク色の固体が溶液から沈殿した。これを濾過により単離し、水で洗浄し、次いで50℃で乾燥し、青色固体として副題生成物を得た(4.14g)。
MS: APCI (+ve) 298 (M+1)
1H NMR: δ (DMSO) 4.44 (s, 2H), 7.13-7.54 (m, 3H), 8.13 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 10.18 (s, 1H)
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
c)2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-4,5,6-ピリミジントリアミン
沸騰している水(40ml)中の実施例5、ステップ(b)の生成物(2g)の懸濁液にNa2S2O4(5.4g)を少しづつ加えた。当該懸濁液を冷却し得、次いで50%硫酸をゆっくりと加え、次いで当該混合物を0℃に冷却した。当該固体を濾過により単離し、氷水で洗浄し、次いで50℃、P2O5で乾燥させ黄色固体として副題生成物を得た。
MS: APCI (+ve) 284 (M+1)
1H NMR: δ (DMSO) 4.33 (s, 2H), 6.42 (br s, 3H), 7.10-7.48 (m, 3H)
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
d)エチル 6-アミノ-2-[(2,3-ジフルオロベンジル)チオ]-9H-プリン-8-イルカルバメート
アセトニトリル(50ml)およびトリエチルアミン(17ml)中の実施例5、ステップ(c)の生成物(10.5g)の溶液を、アセトニトリル(50ml)のエトキシカルボニルイソチオシアネート(3ml)の表冷攪拌溶液中に添加した。次いで、この混合物を室温で20分間攪拌した。次いで、ジイソプロピルカルボジイミド(4.5ml)を添加し、当該反応混合物を還流温度で2時間攪拌し、冷却し得た。当該反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー(酢酸エチル：ジクロロメタン、1：1)で精製し、黄色固体として副題化合物(3.0g)を得た。
MS: APCI (+ve) 381 (M+1)
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
e)エチル 6-ブロモ-2-[(2,3-ジフルオロベンジル)チオ]-9H-プリン-8-イルカルバメート
実施例5、ステップ(d)の生成物(1g)をブロモホルム(14ml)および亜硝酸イソアミル(0.1ml)中に溶解させ、40℃で5時間加熱した。次いで、当該反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、ジクロロメタン中の20％酢酸エチルを用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、黄色固体として副題化合物(208mg)を得た。
MS: APCI (+ve) 445 (M+1)
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０６】
f) 2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1,3-プロパンジオール
実施例5、ステップ(e)の生成物(40mg)をNMPおよび2-アミノ-1,3-プロパンジオール(49.2mg)中に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン(31μl)塩基を加え、当該溶液を150℃で36時間加熱した。次いで当該反応混合物を残渣となるまで蒸発し、その残渣は、分取HPLCにより精製され、淡黄色固体として表題化合物(9.5mg)を得た。
MS: APCI (+ve) 383 (M+1)
1H NMR: δ (DMSO) 3.52 (m, 4H), 4.17 (m, 1H), 4.41 (s, 2H), 4.78 (m, 2H), 7.13-7.45 (m, 3H), 7.59 (m, 1H)
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
実施例6
2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-2-メチル-1-プロパノール
表題化合物は、実施例5、ステップ(f)の方法を用い、実施例5、ステップ(e)の生成物(50mg)および2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール(66μl)から製造され、分取HPLCにより精製され、白色固体を得た。
MS: APCI (+ve) 381 (M+1)
1H NMR: δ (DMSO) 0.98 (s, 6H), 3.13 (s, 2H), 3.49 (s, 1H), 4.39 (s, 2H), 6.48 (br s, 1H), 7.13-7.37 (m, 3H)
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０８】
実施例7
(2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-ブタノール
表題化合物は、実施例5、ステップ(f)を用い、実施例5、ステップ(e)の生成物(50mg)および(2R)-2-アミノ-1-ブタノール(66μl)から製造され、分取HPLCにより精製し、白色固体を得た。
MS: APCI (+ve) 381 (M+1)
1H NMR: δ (CDCl-3) 0.89 (m, 3H), 1.55-1.73 (m, 2H), 3.27 (m, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 4.44 (s, 2H), 5.39 (br s, 2H), 5.73 (d, 1H), 6.97-7.34 (m,  3H)
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０９】
実施例8
2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-2-メチル-1,3-プロパンジオール
表題化合物は、実施例5、ステップ(f)を用い、実施例5、ステップ(e)の生成物(50mg)および2-アミノ-2-メチル-1,3-プロパンジオール(70mg)から製造され、分取HPLCにより精製され、白色固体を得た。
MS: APCI (+ve) 397 (M+1)
1H NMR: δ (DMSO) 7.37-7.11 (3H, m), 4.38 (2H, s), 3.63 (2H, d), 3.53 (2H, d), 1.25 (3H, s)
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１２】
c) (2R)-2-[[8-アミノ-2-[[(2,3-ジフルオロフェニル)メチル]チオ]-9H-プリン-6-イル]アミノ]-1-プロパノール
実施例9、ステップ(b)の生成物(5×1g)を、密封チューブ(5×10ml容積)中の温D-アラニノール(5×3ml)に溶解させ、200℃で24時間加熱した。得られた溶液を合わせ、蒸発させた。当該残渣を、最初にシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル:メタノール 10:1(+0.5% 880アンモニア)で溶出し、その後、分取HPLCにより、白色固体として表題生成物(72mg、2%)を得た。
MS: APCI (+ve) 367 (M+1)
1H NMR: δ (DMSO) 1.13 (d,3H), 3.41 (m,2H), 4.17 (m,1H), 4.37 (s,2H), 4.79 (bs,1H), 7.09-7.37 (m,3H)
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
(b)6-クロロ-2-[[(3-クロロフェニル)メチル]チオ]-4-ピリミジンアミン 
実施例１１、ステップの生成物(a)を用い、実施例4、ステップ(b)の方法により製造した。
MS: APCI (+ve) 286 (M+H, 100 %)
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
(2R)-2-[(8-アミノ-2-メルカプト-1H-プリン-6-イル)アミノ]-1-プロパノール
液体アンモニア中の実施例11、ステップ(f)の生成物(760mg)の溶液に、一貫して青色が持続すようになるまで金属ナトリウムを添加した。この混合物に、青色が消えるまで粉末状塩化アンモニウムを添加した。当該アンモニアは蒸発し得、次いで残渣固体を水(50ml)中に溶解させ、濾過し、次いで、塩酸の添加によりpHを6-7に調節した。次いで当該沈殿固体を濾過により回収し、真空で乾燥させ、副題化合物(220mg)を得た。
MS: APCI (+ve) 313 (M+H, 100 %)
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１３２】
薬理学的データ
リガンド結合アッセイ
2,000Ci/mmolの特異的活性を有する[125I]IL-8(ヒト、組換え)をAmersham, U.K.から購入した。他のすべての化学物質は分析用等級である。高レベルのhrCXCR2を、HEK293細胞(ヒト胚型腎臓(human embryo kidney)293細胞ECACC No. 85120602)において発現させた(Lee et al. (1992) J. Biol. Chem. 267 pp16283-16291)。hrCXCR2のcDNAを、ヒト好中球mRNAから増幅させ、クローニングした。該DNAをPCRScript(Stratagene)中にクローニングし、クローンをDNAを用いて同定した。コード配列を真核生物発現ベクターRcCMV(Invitrogen)中にサブクローニングした。プラスミドDNAをQuiagen Megaprep 2500を用いて調製し、リポフェクトアミン試薬(Gibco BRL)を用いてHEK293細胞中にトランスフェクトした。最も高発現のクローンの細胞を0.2％(w／v)エチレンジアミン四酢酸(EDTA)含有リン酸緩衝性生理食塩水中に回収し、遠心分離(200g、5分)した。細胞ペレットを氷冷した均質化用緩衝液[10mM HEPES(pH7.4)、1mMジチオトレイトール、1mM EDTAおよび一群の(a panel of)プロテアーゼ阻害剤(1mMフェニルメチルスルホニルフルオライド、2μg／ml大豆トリプシン阻害剤、3mMベンズアミジン、0.5μg／mlロイペプチンおよび100μg／mlバシトラシン)]中に再懸濁させ、細胞を10分間膨張させた。細胞調製物を手持ち用ガラス乳鉢／PTFE乳棒ホモジナイザーを用いて粉砕し、細胞膜を遠心分離(45分、100,000g、4℃)により回収した。膜調製物を-70℃でTyrode's塩溶液(137mM NaCl、2.7mM KCl、0.4mM NaH2PO4)、0.1％(w／v)ゼラチンおよび10％(v／v)グリセロールを補った均質緩衝液中で保存した。