【手続補正書】
【提出日】平成31年2月26日(2019.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の構造：
Ａ−Ｘ−Ｂ
を含む核酸構築物であって、
式中
ＡおよびＢは、第１の目的のポリペプチド（ＰＯＩ）および第２のＰＯＩをコードする核酸配列であり；
Ｘは切断部位をコードする核酸配列であり、
前記第１のＰＯＩまたは前記第２のＰＯＩのいずれかが細胞内保持シグナルを含む膜貫通タンパク質である、核酸構築物。
【請求項２】
前記膜貫通タンパク質が前記細胞内保持シグナルを含むエンドドメインを含む、請求項１に記載の核酸構築物。
【請求項３】
前記細胞内保持シグナルが前記膜貫通タンパク質を分泌経路に向かわないように方向付ける、請求項１または２に記載の核酸構築物。
【請求項４】
前記細胞内保持シグナルが前記膜貫通タンパク質を膜結合細胞内コンパートメントへと方向付ける、請求項１から３のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項５】
前記細胞内保持シグナルが前記膜貫通タンパク質をリソソーム、エンドソームまたはゴルジコンパートメントへと方向付ける、請求項１から４のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項６】
前記細胞内保持シグナルが、次の群：エンドサイトーシスシグナル；ゴルジ保持シグナル；ｔｒａｎｓ−ゴルジネットワーク（ＴＧＮ）リサイクリングシグナル；小胞体（ＥＲ）保持シグナル；およびリソソームソーティングシグナルから選択される、請求項１から５のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項７】
前記細胞内保持シグナルが、チロシンベースソーティングシグナル、ジロイシンベースソーティングシグナル、酸性クラスターシグナル、リソソーム回避シグナル、ＮＰＦＸ’（１，２）Ｄ型シグナル、ＫＤＥＬ、ＫＫＸ’Ｘ’またはＫＸ’ＫＸ’Ｘ’シグナル（式中Ｘ’は任意のアミノ酸である）である、請求項１から６のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項８】
前記細胞内保持シグナルが、ＮＰＸ’Ｙ、ＹＸ’Ｘ’Ｚ、［ＤＥ］Ｘ’Ｘ’Ｘ’Ｌ［ＬＩ］、ＤＸ’Ｘ’ＬＬ、ＤＰ［ＦＷ］、ＦＸ’ＤＸ’Ｆ、ＮＰＦ、ＬＺＸ’Ｚ［ＤＥ］、ＬＬＤＬＬ、ＰＷＤＬＷ、ＫＤＥＬ、ＨＤＥＬ、ＫＫＸ’Ｘ’またはＫＸ’ＫＸ’Ｘ’の群から選択される配列を含み；式中Ｘ’は任意のアミノ酸であり、Ｚ’はかさ高い疎水性側鎖を有するアミノ酸である、請求項１から７のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項９】
前記細胞内保持シグナルが、表２から６に示される任意の配列を含む、請求項１から８のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１０】
前記細胞内保持シグナルが、チロシナーゼ関連タンパク質（ＴＹＲＰ）−１細胞内保持シグナルまたはアデノウイルスＥ３／１９Ｋ保持シグナルを含む、請求項１から９のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１１】
前記細胞内保持シグナルが、配列ＮＱＰＬＬＴＤ（配列番号３５）、ＫＹＫＳＲＲＳＦＩＤＥＫＫＭＰ（配列番号３６）またはＤＥＫＫＭＰ（配列番号３７）を含む、請求項１から１０のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１２】
前記細胞内保持シグナルが、前記膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインに対して近位である、請求項１から１１のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１３】
前記細胞内保持シグナルが、前記膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインに対して遠位である、請求項１から１１のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１４】
Ｘが、自己切断ペプチド、フューリン切断部位またはタバコエッチウイルス切断部位をコードする核酸配列である、請求項１から１３のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１５】
Ｘが、アフトもしくはカルジオウイルス由来の２Ａ自己切断ペプチドまたは２Ａ様ペプチドをコードする、請求項１４に記載の核酸構築物。
【請求項１６】
前記膜貫通タンパク質がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１５に記載の核酸構築物。
【請求項１７】
前記第１のＰＯＩおよび前記第２のＰＯＩのそれぞれが膜貫通タンパク質であり、前記膜貫通タンパク質の少なくとも１つが、請求項３から１１のいずれかに記載の細胞内保持シグナルを含む、請求項１から１６のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１８】
前記第１のＰＯＩおよび前記第２のＰＯＩの１つまたは両方が、１回貫通型膜貫通タンパク質である、請求項１から１７のいずれかに記載の核酸構築物。
【請求項１９】
前記第１のＰＯＩおよび前記第２のＰＯＩの１つまたは両方が、Ｉ型膜貫通タンパク質である、請求項１８に記載の核酸構築物。
【請求項２０】
次の構造：
Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ
を含む核酸構築物であって、
式中
Ａ、ＢおよびＣは、第１の目的のポリペプチド（ＰＯＩ）、第２のＰＯＩおよび第３のＰＯＩをコードする核酸配列であり；
ＸおよびＹは、同じまたは異なっていてよい核酸配列であり、それぞれが切断部位をコードし、
前記ＰＯＩの少なくとも２つが細胞内保持シグナルを含む膜貫通タンパク質である、核酸構築物。
【請求項２１】
膜貫通タンパク質であり、細胞内保持シグナルを含む前記少なくとも２つが：
（ａ）異なる細胞内保持シグナルを含む；および／または
（ｂ）前記核酸が細胞において発現される場合に、細胞表面での前記少なくとも２つのＰＯＩの相対発現に差があるように前記ＰＯＩ中の異なる位置に位置している前記細胞内保持シグナルを有する、
請求項２０に記載の核酸構築物。
【請求項２２】
請求項１から２１のいずれかに記載の核酸構築物を含むベクター。
【請求項２３】
請求項２２に記載のレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターまたはトランスポゾン。
【請求項２４】
請求項１から２１のいずれか一項に記載の核酸構築物または請求項２２もしくは２３に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２５】
膜貫通タンパク質をコードする核酸配列中に細胞内保持シグナルを含めることによって、第２のタンパク質を伴って単一の核酸構築物から発現される前記膜貫通タンパク質の相対的な細胞表面発現を調節するための方法。
【請求項２６】
前記核酸配列が、請求項１から２１のいずれかにおいて規定される、請求項２５に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
本発明は、連結されたポリペプチドとして発現され、切断部位によって分離される３つまたはそれを超えるタンパク質の相対発現およびさまざまな活性の保持シグナルによって決定される相対表面発現を調節するために拡張されてよい。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
次の構造：
Ａ−Ｘ−Ｂ
を含む核酸構築物であって、
式中
ＡおよびＢは、第１の目的のポリペプチド（ＰＯＩ）および第２のＰＯＩをコードする核酸配列であり；
Ｘは切断部位をコードする核酸配列であり、
前記第１のＰＯＩまたは前記第２のＰＯＩのいずれかが細胞内保持シグナルを含む膜貫通タンパク質である、核酸構築物。
（項目２）
前記膜貫通タンパク質が前記細胞内保持シグナルを含むエンドドメインを含む、項目１に記載の核酸構築物。
（項目３）
前記細胞内保持シグナルが前記膜貫通タンパク質を分泌経路に向かわないように方向付ける、項目１または２に記載の核酸構築物。
（項目４）
前記細胞内保持シグナルが前記膜貫通タンパク質を膜結合細胞内コンパートメントへと方向付ける、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目５）
前記細胞内保持シグナルが前記膜貫通タンパク質をリソソーム、エンドソームまたはゴルジコンパートメントへと方向付ける、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目６）
前記細胞内保持シグナルが、次の群：エンドサイトーシスシグナル；ゴルジ保持シグナル；ｔｒａｎｓ−ゴルジネットワーク（ＴＧＮ）リサイクリングシグナル；小胞体（ＥＲ）保持シグナル；およびリソソームソーティングシグナルから選択される、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目７）
前記細胞内保持シグナルが、チロシンベースソーティングシグナル、ジロイシンベースソーティングシグナル、酸性クラスターシグナル、リソソーム回避シグナル、ＮＰＦＸ’（１，２）Ｄ型シグナル、ＫＤＥＬ、ＫＫＸ’Ｘ’またはＫＸ’ＫＸ’Ｘ’シグナル（式中Ｘ’は任意のアミノ酸である）である、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目８）
前記細胞内保持シグナルが、ＮＰＸ’Ｙ、ＹＸ’Ｘ’Ｚ、［ＤＥ］Ｘ’Ｘ’Ｘ’Ｌ［ＬＩ］、ＤＸ’Ｘ’ＬＬ、ＤＰ［ＦＷ］、ＦＸ’ＤＸ’Ｆ、ＮＰＦ、ＬＺＸ’Ｚ［ＤＥ］、ＬＬＤＬＬ、ＰＷＤＬＷ、ＫＤＥＬ、ＨＤＥＬ、ＫＫＸ’Ｘ’またはＫＸ’ＫＸ’Ｘ’の群から選択される配列を含み；式中Ｘ’は任意のアミノ酸であり、Ｚ’はかさ高い疎水性側鎖を有するアミノ酸である、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目９）
前記細胞内保持シグナルが、表２から６に示される任意の配列を含む、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１０）
前記細胞内保持シグナルが、チロシナーゼ関連タンパク質（ＴＹＲＰ）−１細胞内保持シグナルまたはアデノウイルスＥ３／１９Ｋ保持シグナルを含む、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１１）
前記細胞内保持シグナルが、配列ＮＱＰＬＬＴＤ（配列番号３５）、ＫＹＫＳＲＲＳＦＩＤＥＫＫＭＰ（配列番号３６）またはＤＥＫＫＭＰ（配列番号３７）を含む、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１２）
前記細胞内保持シグナルが、前記膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインに対して近位である、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１３）
前記細胞内保持シグナルが、前記膜貫通タンパク質の膜貫通ドメインに対して遠位である、項目１から１１のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１４）
Ｘが、自己切断ペプチド、フューリン切断部位またはタバコエッチウイルス切断部位をコードする核酸配列である、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１５）
Ｘが、アフトもしくはカルジオウイルス由来の２Ａ自己切断ペプチドまたは２Ａ様ペプチドをコードする、項目１４に記載の核酸構築物。
（項目１６）
前記膜貫通タンパク質がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目１５に記載の核酸構築物。
（項目１７）
前記第１のＰＯＩおよび前記第２のＰＯＩのそれぞれが膜貫通タンパク質であり、前記膜貫通タンパク質の少なくとも１つが、項目３から１１のいずれかに記載の細胞内保持シグナルを含む、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１８）
前記第１のＰＯＩおよび前記第２のＰＯＩの１つまたは両方が、１回貫通型膜貫通タンパク質である、前記項目のいずれかに記載の核酸構築物。
（項目１９）
前記第１のＰＯＩおよび前記第２のＰＯＩの１つまたは両方が、Ｉ型膜貫通タンパク質である、項目１８に記載の核酸構築物。
（項目２０）
次の構造：
Ａ−Ｘ−Ｂ−Ｙ−Ｃ
を含む核酸構築物であって、
式中
Ａ、ＢおよびＣは、第１の目的のポリペプチド（ＰＯＩ）、第２のＰＯＩおよび第３のＰＯＩをコードする核酸配列であり；
ＸおよびＹは、同じまたは異なっていてよい核酸配列であり、それぞれが切断部位をコードし、
前記ＰＯＩの少なくとも２つが細胞内保持シグナルを含む膜貫通タンパク質である、核酸構築物。
（項目２１）
膜貫通タンパク質であり、細胞内保持シグナルを含む前記少なくとも２つが：
（ａ）異なる細胞内保持シグナルを含む；および／または
（ｂ）前記核酸が細胞において発現される場合に、細胞表面での前記少なくとも２つのＰＯＩの相対発現に差があるように前記ＰＯＩ中の異なる位置に位置している前記細胞内保持シグナルを有する、
項目２０に記載の核酸構築物。
（項目２２）
前記項目のいずれかに記載の核酸構築物を含むベクター。
（項目２３）
項目２２に記載のレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターまたはトランスポゾン。
（項目２４）
項目１から２１のいずれか一項に記載の核酸構築物または項目２２もしくは２３に記載のベクターを含む細胞。
（項目２５）
膜貫通タンパク質をコードする核酸配列中に細胞内保持シグナルを含めることによって、第２のタンパク質を伴って単一の核酸構築物から発現される前記膜貫通タンパク質の相対的な細胞表面発現を調節するための方法。
（項目２６）
前記核酸配列が、項目１から２１のいずれかにおいて規定される、項目２５に記載の方法。