【手続補正書】
【提出日】平成19年4月24日(2007.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【課題の解決手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常に対して有効な予防或いは改善手段を求めて、鋭意研究を重ねた結果、キンポウゲ科のアキカラマツ（学名：Thalictrum minus var. hypoleucum）及び／又はオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）の植物体のエッセンス、好ましくは根茎のエッセンスに優れたメラノサイトのデンドライトの伸長抑制作用を見出し、かかる作用を有する物質を皮膚外用剤に含有させることにより、この様な皮膚外用剤が、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常の予防・改善に有用であることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は次に示す技術に関するものである。
（１）キンポウゲ科のアキカラマツ（学名：Thalictrum minus var. hypoleucum）及び／又はオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）のエッセンスからなる、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（２）エッセンスが根茎の極性溶媒による抽出物であることを特徴とする、（１）に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（３）デンドライトの伸長抑制が、マクロファージ由来のデンドライト伸長促進因子の抑制作用に起因することを特徴とする、（１）又は（２）に記載のメラノサイトの伸長抑制剤。
（４）（１）〜（３）何れか一項に記載のメラノサイトの伸長抑制剤を含有することを特徴とする、メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
（５）化粧料であることを特徴とする、（４）に記載のメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
（６）メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象が、光による炎症を伴った、皮膚の黒化現象或いはソバカスである、（４）又は（５）に記載のメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
以下、本発明について、実施の形態を中心に詳細に説明を加える。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤
本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤は、キンポウゲ科のアキカラマツ（学名：Thalictrum minus var. hypoleucum）及び／又はオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）のエッセンスからなる。ここで、エッセンスとは、かかる植物の植物体それ自身、植物体を乾燥或いは細切、粉砕など加工した加工物等を溶媒で抽出した抽出物、抽出物の溶媒を除去した、溶媒除去物、抽出物乃至はその溶媒除去物をカラムクロマトグラフィーや液液抽出で精製した精製分画物などの総称を意味する。これらの内、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤としては、根茎の溶媒抽出物乃至はその溶媒除去物が好ましく例示でき、かかる溶媒としては、極性溶媒が特に好ましく例示できる。この様な極性溶媒としては、例えば、水、エタノール、メタノール、１，３−ブタンジオール、プロピレングリコールなどのアルコール類、酢酸エチルや蟻酸メチルなどのエステル類、アセトンやメチルエチルケトンなどのケトン類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフランなどのエーテル類から選ばれる１種乃至は２種以上が好ましく例示できる。これらの内、特に好ましいものは、水及び／又はアルコール類である。この様な抽出物を作成するには、植物体乃至はその加工物に１〜１０倍量の溶媒を加え、室温であれば数日、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。しかる後に、不溶物を濾過などで除去し、必要に応じて減圧濃縮後、凍結乾燥により溶媒除去することが出来る。キンポウゲ科のアキカラマツ（学名：Thalictrum minus var.hypoleucum）及び／又はオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）の根茎の場合、根茎部分をメタノール抽出後、減圧濃縮し、そして場合によって凍結乾燥するのがエッセンスとして特に好ましい。それは、根茎の部分がメラノサイトのデンドライドの伸長抑制成分が多く含まれており、特に好ましいからである。かくして得られた、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤である、キンポウゲ科のアキカラマツ（学名：Thalictrum minus var. hypoleucum）及び／又はオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）の根茎のエッセンスは、メラノサイトがデンドライトを伸長するのを抑制する作用に優れ、以て、メラノサイトより皮膚組織へメラニン顆粒が移動するのを抑制し、この様なメラニン顆粒の移動をメカニズムとする、光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用を有する。この様な作用は、マクロファージが放出するメラノサイトのデンドライトの伸長因子がメラノサイトに働きかけるのを阻害することを機序としていると考えられる。勿論、色素異常が、メラニン顆粒の産生にあたってこの様なルートをとることから、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤は、光照射による炎症を伴った黒化やソバカス以外の色素異常も抑制するが、この様な色素異常は他の手段でも予防や改善が可能であるため、本発明の効果の特徴は前記の光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用と言える。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
＜実施例３＞
上記実施例１，２のオウレンのエッセンス１及び／又はアキカラマツのエッセンス２のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤を用いて、デンドライト伸長抑制作用を調べた。即ち、予め常法に従い、マウス腹腔より、マクロファージを回収し、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地で希釈し、２×１０6セル／ｍｌの濃度のマクロファージ液を調整しておいた。このものを９０μｌずつ３５ｍｍシャーレに分注し、これに０．０５ｍＷ／ｃｍ2で２０分間の紫外線照射を行った。これらのメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であ
るキンポウゲ科のオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）及び／又は、アキカラマツ（学名：Thalictrum minus var. hypoleucum）の根茎のエッセンス１、２を乾燥重量％で０．００５％となるようＤＭＳＯに溶かして加え３７℃で１晩培養した。又、他方マウスの尾を切り、尾の表皮を細かく刻みシャーレに入れ０．５％トリプシンにて３７℃で一晩処理し、ピンセットを用いて、表皮と真皮に分離し、表皮のみを回収し、０．５％トリプシンにて３７℃で２０分間処理し、フィルター濾過でメラノサイトのみを濾液として集めた。このメラノサイトを含む濾液を、イーグルの最少培地に１０％ＦＢＳ、１０-4ＭのＩＢＭＸ及び１０ｎｇ／ｍｌのＴＰＡを加えた培地で、３７℃、４８時間培養した。これを同培地で懸濁させ、９６穴ウェルに１０００セル／ウェルずつ分注し、３７℃で一晩培養した。メラノサイトの培地を捨て、ＰＢＳで３回洗浄した後、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地３５μｌに置換した。これに前記検体を含むマクロファージの培養上清３５μｌずつ添加し、３７℃で二晩培養し、光学顕微鏡下写真撮影を行い、この写真よりデンドライトの長さを測定した。結果を表１に示す。これより、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるキンポウゲ科のオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）及び／又は、アキカラマツ（学名：Thalictrum minus var. hypoleucum）のエッセンス１、２は、デンドライト伸長の抑制作用に優れることが分かる。
（検体）
１）メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるキンポウゲ科のオウレン（学名：Coptis chinensis Franch）の根茎のエッセンス１のＤＭＳＯ溶液（０．００５％）
２）メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるキンポウゲ科のアキカラマツ（学名：Thalictrum minus var. hypoleucum）のエッセンス２の根茎のエッセンスのＤＭＳＯ溶液（０．００５％）
３）ＤＭＳＯ（ポジティブコントロール）
４）マクロファージ上清を加えない（ネガティブコントロール）
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
＜実施例４＞
以下に示す処方で化粧水を作成した。即ち、処方成分を室温で攪拌可溶化して化粧水を得た。この化粧水について、シミ、そばかすに悩むパネラー1群３名を用いて、1ヶ月間、朝晩1日2回使用してもらいそのシミ、そばかすの予防及び改善効果を評価してもらった。評価基準は、評点2：著しい改善、評点1：明らかな改善、評点0.5：わずかな改善、評点0：改善なしの基準である。平均評点は０．７８であった。本発明のメラノサイトのデンドライドの伸長抑制効果のあるオウレンのエッセンス１を含有する化粧水は、シミ、そばかすの改善に効果のあることが認められた。
オウレンのエッセンス１    1  重量部
１，３−ブタンジオール    5  重量部
グリセリン                3  重量部
クエン酸ナトリウム        0.1重量部
メチルパラベン            0.2重量部
エタノール                8  重量部
水                       82.7重量部
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
＜実施例５＞
以下に示す処方で化粧水を作成した。即ち、処方成分を室温で攪拌可溶化して化粧水を得た。この化粧水について、シミ、そばかすに悩むパネラー1群３名を用いて、1ヶ月間、朝晩1日2回使用してもらいそのシミ、そばかすの予防及び改善効果を評価してもらった。評価基準は、評点2：著しい改善、評点1：明らかな改善、評点0.5：わずかな改善、評点0：改善なしの基準である。平均評点は０．８１であった。本発明のメラノサイトのデンドライドの伸長抑制効果のあるアキカラマツのエッセンス２を含有する化粧水は、シミ、そばかすの改善に効果のあることが認められた。
アキカラマツのエッセンス２    1  重量部
１，３−ブタンジオール        5  重量部
グリセリン                    3  重量部
クエン酸ナトリウム            0.1重量部
メチルパラベン                0.2重量部
エタノール                    8  重量部
水                           82.7重量部
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
＜実施例６＞
下記に示す処方に従って、皮膚外用剤を作成した。即ち、処方成分を攪拌分散して、皮膚外用剤を得た。このものは光による炎症を伴った、光による皮膚の黒化現象或いはソバカスに対して著効を示した。
オウレンのエッセンス        ０．５重量部
プレドニゾロン              １    重量部
ワセリン                  ８５    重量部