【手続補正書】
【提出日】平成20年6月2日(2008.6.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１および第２ドメインを含む一本鎖ポリペプチドであって：
該第１ドメインが、クロストリジウム菌神経毒素軽鎖またはそのフラグメントもしくは改変体であり、該第１ドメインが、エキソサイトーシスに必須の１以上の小胞または形質膜結合タンパク質を切断することが可能であり；そして
該第２ドメインが、クロストリジウム菌神経毒素重鎖ＨＮ部分またはそのフラグメントもしくは改変体であり、該第２ドメインが、（ｉ）該ポリペプチドを細胞にトランスロケートし、または（ii）該第１ドメイン自体の溶解性と比較して該ポリペプチドの溶解性を増加させ、または（iii）該ポリペプチドを細胞にトランスロケートしそして該第１ドメイン自体の溶解性と比較して該ポリペプチドの溶解性を増加させる両方が可能であり；そして該第２ドメインが、ＨＣと命名されたクロストリジウム菌神経毒素重鎖の機能的Ｃ末端部分を欠き、それによって該ポリペプチドが、天然のクロストリジウム菌神経毒素が結合する天然の細胞表面レセプターである細胞表面レセプターに結合できなくなり；そして該一本鎖ポリペプチドが、該第１ドメインと該第２ドメインとの間の位置に位置するエンテロキナーゼ切断部位を含む、ポリペプチド。
【請求項２】
前記エンテロキナーゼ切断部位が、アミノ酸配列Ｄ−Ｄ−Ｄ−Ｄ−Ｋを含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記一本鎖ポリペプチドが、配列番号３０もしくは配列番号３２、またはエキソサイトーシスに必須の１以上の小胞または形質膜結合タンパク質を切断し得る第１ドメインを有するそのフラグメントもしくは改変体から選択される配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記クロストリジウム菌毒素重鎖が、ボツリヌス菌神経毒素重鎖である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記クロストリジウム菌毒素重鎖が、破傷風菌神経毒素重鎖である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記第１ドメインが、SNAP-25、シナプトブレビン／VAMP、およびシンタキシンの１以上から選択される基質に特異的なエンドペプチダーゼ活性を示す、請求項１から５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項７】
前記第２ドメインが、クロストリジウム菌毒素重鎖ＨＮ部分である、請求項１から６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
前記クロストリジウム菌神経毒素重鎖が、ボツリヌス菌神経毒素Ａ型鎖である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記第２ドメインが、ボツリヌス菌毒素Ａ型重鎖の４２３個のＮ末端アミノ酸を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
前記クロストリジウム菌神経毒素重鎖が、ボツリヌス菌神経毒素Ｂ型鎖である、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記第２ドメインが、ボツリヌス菌毒素Ｂ型重鎖の１０７個のＮ末端アミノ酸を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記第２ドメインが、ボツリヌス菌毒素Ｂ型重鎖の４１７個のＮ末端アミノ酸を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記第２ドメインが、破傷風菌重鎖の４２２個のＮ末端アミノ酸を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記第２ドメインが、クロストリジウム菌神経毒素重鎖の１００個のＮ末端アミノ酸を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記エンテロキナーゼ切断部位が、天然のクロストリジウム菌神経毒素に存在しない、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記エンテロキナーゼ切断部位が、前記第１および第２ドメインのタンパク質分解切断を可能にし、そしてそのように切断される場合、該第１ドメインが、該タンパク質分解切断前の前記ポリペプチドが示す１以上の小胞または形質膜結合タンパク質を切断する酵素活性よりも大きい酵素活性を示す、請求項１から３、または１５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１７】
請求項１に記載のペプチドをコードする第２の核酸配列内に、前記エンテロキナーゼ切断部位をコードする第１の核酸配列を提供することによって得られる、請求項１から３、１５または１６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１８】
前記第２ドメインが、ＨＣと命名されたクロストリジウム菌神経毒素重鎖のＣ末端部分を欠く、請求項１から１７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記ポリペプチドを細胞に結合する第３ドメインをさらに含む、請求項１から１８のいずれかに記載のポリペプチドであって、該結合が、第３ドメインの細胞への直接的な結合によって、あるいは細胞に結合する１または複数のリガンドへの第３ドメインの結合によって行われる、ポリペプチド。
【請求項２０】
前記第３ドメインが、前記ポリペプチドを免疫グロブリンに結合するためのものである、請求項１９に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
前記第３ドメインが、ブドウ球菌のプロテインＡのドメインｂに由来するタンデムリピート合成ＩｇＧ結合ドメインである、請求項２０に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
前記第３ドメインが、細胞表面レセプターに結合するアミノ酸配列を含む、請求項１９に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
前記第３ドメインが、インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）である、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
前記第１ドメインと前記第２ドメインとの間にスペーサー分子を含む、請求項１から２３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２５】
前記第２ドメインと前記第３ドメインとの間にスペーサー分子を含む、請求項１９から２３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２６】
アフィニティーマトリクスに結合する精製タグをさらに含み、それによって該マトリクスを用いる前記ポリペプチドの精製を容易にする、請求項１から２５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２７】
前記精製タグと前記ポリペプチドとの間にスペーサー分子を含む、請求項２６に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
前記精製タグが、グルタチオンセファロースのアフィニティーマトリクスに結合する、請求項２６または２７に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
第１のプロテアーゼ切断部位が、請求項１から２３のいずれかに記載のポリペプチドと前記精製タグとの間に組み込まれ、該プロテアーゼ切断部位が、該精製タグからの該ポリペプチドのタンパク質分解分離を可能にする、請求項２６から２８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３０】
エンテロキナーゼ切断部位が、請求項１から２３のいずれかに記載のポリペプチドの前記第１ドメインと前記第２ドメインとの間に組み込まれ、該エンテロキナーゼ切断部位が、該第１ドメインと該第２ドメインとのタンパク質分解切断を可能にする、請求項２６から２９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３１】
請求項１から３０のいずれかに記載のポリペプチドをコードする、核酸。
【請求項３２】
前記核酸が、クロストリジウム菌神経毒素のＨＣと命名された部分をコードするヌクレオチドを欠く、請求項３１に記載の核酸。
【請求項３３】
ボツリヌス菌毒素Ａ型重鎖ＨＮドメインの残基１から４２３をコードするヌクレオチドを含む、請求項３１または３２に記載の核酸。
【請求項３４】
ボツリヌス菌毒素Ｂ型重鎖ＨＮドメインの残基１から４１７をコードするヌクレオチドを含む、請求項３１または３２に記載の核酸。
【請求項３５】
エンテロキナーゼ切断部位をコードするヌクレオチドを含む、請求項３１から３４のいずれかに記載の核酸。
【請求項３６】
前記エンテロキナーゼ切断部位が、天然のクロストリジウム菌神経毒素に存在しない、請求項３５に記載の核酸。
【請求項３７】
前記エンテロキナーゼ切断部位が、前記ポリペプチドの前記第１ドメインと前記第２ドメインとの間に位置する、請求項３６に記載の核酸。
【請求項３８】
請求項２９に記載の核酸配列内に前記切断部位をコードする核酸配列を提供することによって得られる、請求項３６または３７に記載の核酸。
【請求項３９】
配列番号２９、３１、または請求項１に記載の一本鎖ポリペプチドのフラグメントもしくは改変体からなる群より選択される、核酸配列。