【手続補正書】
【提出日】令和1年9月19日(2019.9.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体の組織中の標的ウイルス遺伝物質を破壊するための組成物であって、該組成物は、該組織の浸透性を増大させるように該組織にエネルギーを加え、それにより核酸を該組織の細胞に進入させることによって、該組織に送達されることを特徴とし、ここで、該組成物は、５’ｃａｐを含み、Ｃａｓ９をコードするｍＲＮＡ核酸を含み、該組成物は、ウイルスゲノムの一部に相補的であり、ヒトゲノム中にマッチを有さない、少なくとも１つのガイドＲＮＡをさらに含む、組成物。
【請求項２】
前記エネルギーが電気穿孔法または超音波により加えられる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ウイルスゲノムがＢ型肝炎ウイルスゲノムであり、前記ガイドＲＮＡが該Ｂ型肝炎ウイルスゲノム中の位置を標的化する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ガイドＲＮＡが、ＰｒｅＳ１、ＤＲ１、ＤＲ２、ポリメラーゼの逆転写酵素（ＲＴ）ドメイン、ＨｂｘおよびコアＯＲＦから選択される前記Ｂ型肝炎ウイルスゲノム中の位置を標的とする、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ウイルスゲノムがＨＰＶゲノムであり、前記ガイドＲＮＡが該ＨＰＶゲノム中の位置を標的とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項６】
前記ガイドＲＮＡが、Ｅ６遺伝子またはＥ７遺伝子上の位置を標的とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
被験体を処置するための組成物であって、該組成物が、組織の浸透性を増大させるように該組織にエネルギーを加え、それにより該組織の細胞にプログラム可能なヌクレアーゼを進入させることによって、該組織に送達されることを特徴とし、該組成物は、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）としてガイドＲＮＡと複合体化された、プログラム可能なＣａｓ９ヌクレアーゼを含む、組成物。
【請求項８】
前記エネルギーを加えることが前記組織の電気穿孔を含む、または前記加えられるエネルギーが超音波エネルギーを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ウイルスゲノムがＢ型肝炎ウイルスゲノムであり、前記ガイドＲＮＡが該Ｂ型肝炎ウイルスゲノム中の位置を標的とする、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ガイドＲＮＡが、ＰｒｅＳ１、ＤＲ１、ＤＲ２、ポリメラーゼのＲＴドメイン、ＨｂＸおよびコアＯＲＦから選択される前記Ｂ型肝炎ウイルスゲノム中の位置を標的とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ウイルスゲノムがＨＰＶであり、前記ガイドＲＮＡが該ＨＰＶゲノム中の位置を標的とする、請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ガイドＲＮＡが、Ｅ６遺伝子またはＥ７遺伝子上の位置を標的とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
抗ウイルス治療を送達するためのキットであって、
（ａ）組織にエネルギーを加えるように作動可能なデバイス；および
（ｂ）
（ｉ）Ｃａｓ９をコードするｍＲＮＡ；または
（ｉｉ）活性ＲＮＰとしてガイドＲＮＡと複合体化されたＣａｓ９
を含み、該ガイドＲＮＡが、ウイルス遺伝子物質内の標的に相補的であり、ヒトゲノム内のあらゆる標的に相補的でない、キット。
【請求項１４】
前記デバイスが、電気穿孔発生器および少なくとも１つの電極を含む電気穿孔デバイスである、または前記キットが、超音波振動子を含む、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
請求項１３または１４に記載のキットであって、内腔を有する細長部材をさらに含み、ここで、該内腔が被験体内の処置部位への前記核酸の送達のために構成されている、キット。
【請求項１６】
前記ｍＲＮＡまたはＲＮＰが、ナノ粒子に被包されている、請求項１３または１４に記載のキット。
【請求項１７】
前記ナノ粒子が脂質を含む、請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
前記ｍＲＮＡまたはＲＮＰが前記細長部材内のマイクロバブル中で提供される、請求項１５に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
標的遺伝物質は、ウイルスであってよい、すなわちｓｇＲＮＡがウイルスゲノムの一部に相補的である。一部の実施形態では、ウイルスゲノムは、Ｂ型肝炎ウイルスゲノムであり、１つまたは複数のｓｇＲＮＡは、ＰｒｅＳ１、ＤＲ１、ＤＲ２、ポリメラーゼの逆転写酵素（ＲＴ）ドメイン、Ｈｂｘ、コアＯＲＦまたはこれらの組合せなどのＢ型肝炎ウイルスゲノム中の位置を標的とする。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
被験体由来の標的遺伝物質を破壊するための方法であって、該方法は、組織の浸透性を増大させるように該組織にエネルギーを加え、それにより核酸を該組織の細胞に進入させることによって、該組織に該核酸を含む組成物を送達するステップを含み、ここで、該核酸がプログラム可能なヌクレアーゼをコードしている、方法。
（項目２）
前記プログラム可能なヌクレアーゼがＣａｓ９である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記エネルギーが電気穿孔法により加えられる、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記加えられるエネルギーが超音波である、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記核酸がｃａｓ９遺伝子およびショートガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）の少なくとも１つの遺伝子を含むプラスミドである、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記標的遺伝物質がウイルス性である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記ｓｇＲＮＡがウイルスゲノムの一部に相補的であり、ヒトゲノムにマッチを有さない、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ウイルスゲノムがＢ型肝炎ウイルスゲノムであり、前記プラスミドが該Ｂ型肝炎ウイルスゲノム中の位置を標的化する１つまたは複数のｓｇＲＮＡの遺伝子を含有する、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記１つまたは複数のｓｇＲＮＡが、ＰｒｅＳ１、ＤＲ１、ＤＲ２、ポリメラーゼの逆転写酵素（ＲＴ）ドメイン、ＨｂｘおよびコアＯＲＦから選択される前記Ｂ型肝炎ウイルスゲノム中の位置を標的とする、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記１つまたは複数のｓｇＲＮＡが、ｓｇＨＢＶ−ＣｏｒｅおよびｓｇＨＢＶ−ＰｒｅＳ１からなる群から選択される１つを含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記標的遺伝物質がウイルスのゲノムであり、前記核酸がｃａｓ９遺伝子および該ウイルスの該ゲノムを標的化する少なくとも１つのｓｇＲＮＡを含むプラスミドである、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記プラスミドがウイルス複製開始点をさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ウイルスがＢ型肝炎ウイルスであり、前記少なくとも１つのｓｇＲＮＡが、ｓｇＨＢＶ−ＲＴ、ｓｇＨＢＶ−Ｈｂｘ、ｓｇＨＢＶ−Ｃｏｒｅおよびｓｇ−ＨＢＶ−ＰｅｒＳ１からなる群から選択される、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記核酸が、５’ｃａｐを含むｍＲＮＡを含む、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記酵素が転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である、項目１に記載の方法。
（項目１６）
組織の浸透性を増大させるように該組織にエネルギーを加え、それにより該組織の細胞にプログラム可能なヌクレアーゼを進入させることによって、該組織に該プログラム可能なヌクレアーゼを含む組成物を送達するステップを含む、被験体を処置するための方法。
（項目１７）
前記プログラム可能なヌクレアーゼが、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）としてガイドＲＮＡと複合体化されたＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記プログラム可能なヌクレアーゼがＣａｓ９である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記エネルギーを加えることが前記組織の電気穿孔を含む、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
前記加えられるエネルギーが超音波エネルギーを含む、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
組織にエネルギーを加えるように作動可能なデバイス；および
ウイルスの遺伝物質中の標的を切断するようにプログラムされたプログラム可能なヌクレアーゼをコードする核酸
を含む、抗ウイルス治療を送達するためのキット。
（項目２２）
前記デバイスが、電気穿孔発生器および少なくとも１つの電極を含む電気穿孔デバイスである、項目２１に記載のキット。
（項目２３）
前記プログラム可能なヌクレアーゼがＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼである、項目２２に記載のキット。
（項目２４）
項目２３に記載のキットであって、内腔を有する細長部材をさらに含み、ここで、該内腔が被験体内の処置部位への前記核酸の送達のために構成されている、キット。
（項目２５）
前記少なくとも１つの電極が前記核酸でコーティングされている、項目２３に記載のキット。
（項目２６）
前記プログラム可能なヌクレアーゼをコードしている前記核酸が、該プログラム可能なヌクレアーゼをコードしているｍＲＮＡであり、ナノ粒子に被包されている、項目２３に記載のキット。
（項目２７）
前記ナノ粒子が脂質を含む、項目２６に記載のキット。
（項目２８）
前記ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼがＣａｓ９である、項目２７に記載のキット。
（項目２９）
前記デバイスが超音波振動子を含む、項目２１に記載のキット。
（項目３０）
前記核酸が、前記プログラム可能なヌクレアーゼをコードしているｍＲＮＡである、項目２９に記載のキット。
（項目３１）
項目３０に記載のキットであって、内腔を有する細長部材をさらに含み、ここで、該内腔が被験体内の処置部位への前記核酸の送達のために構成されている、キット。
（項目３２）
前記核酸が前記細長部材内のマイクロバブル中で提供される、項目３１に記載のキット。
（項目３３）
前記プログラム可能なヌクレアーゼがＣａｓ９であり、前記マイクロバブルが１つまたは複数のガイドＲＮＡをさらに含む、項目３２に記載のキット。
（項目３４）
前記細長部材が針である、項目３３に記載のキット。
（項目３５）
前記超音波振動子が低強度、非キャビテーション超音波を提供するように作動する、項目３４に記載のキット。
（項目３６）
組織にエネルギーを加えるように作動可能なデバイス；および
ウイルスの遺伝物質中の標的を切断するようにプログラムされたプログラム可能なヌクレアーゼ
を含む、抗ウイルス治療を送達するためのキット。
（項目３７）
前記デバイスが、電気穿孔発生器および少なくとも１つの電極を含む電気穿孔デバイスである、項目３６に記載のキット。
（項目３８）
前記プログラム可能なヌクレアーゼが、活性リボ核タンパク質（ＲＮＰ）としてガイドＲＮＡと複合体化されたＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼであり、該ガイドＲＮＡがウイルス遺伝物質内の標的に相補的であり、ヒトゲノム内のいかなる標的にも相補的でない、項目３７に記載のキット。
（項目３９）
項目３８に記載のキットであって、内腔を有する細長部材をさらに含み、ここで、該内腔が被験体内の処置部位への前記ＲＮＰの送達のために構成されている、キット。
（項目４０）
前記ＲＮＰがナノ粒子に被包されている、項目３９に記載のキット。
（項目４１）
前記ナノ粒子が脂質を含む、項目４０に記載のキット。
（項目４２）
前記ＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼがＣａｓ９である、項目４１に記載のキット。
（項目４３）
前記デバイスが超音波振動子を含む、項目３６に記載のキット。
（項目４４）
前記プログラム可能なヌクレアーゼが、活性リボ核タンパク質（ＲＮＰ）としてガイドＲＮＡと複合体化されたＲＮＡ誘導型ヌクレアーゼであり、ここで、該ガイドＲＮＡがウイルス遺伝物質内の標的に相補的であり、ヒトゲノム内のいかなる標的にも相補的でない、項目４３に記載のキット。
（項目４５）
項目４４に記載のキットであって、内腔を有する細長部材をさらに含み、ここで、該内腔が被験体内の処置部位への前記核酸の送達のために構成されている、キット。
（項目４６）
前記ＲＮＰが前記細長部材内のマイクロバブル中で提供される、項目４５に記載のキット。
（項目４７）
前記プログラム可能なヌクレアーゼがＣａｓ９である、項目４５に記載のキット。
（項目４８）
前記細長部材が針である、項目４７に記載のキット。
（項目４９）
前記超音波振動子が低強度、非キャビテーション超音波を提供するように作動する、項目４８に記載のキット。