【手続補正書】
【提出日】平成20年10月30日(2008.10.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
表１（配列番号５、１０、１２、１４、１８、２０、２２、２４、２６、３０及び３２）に提供された薬剤番号１乃至１２のセンス鎖配列からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドであるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、表１（配列番号６、７、１１、１３、１５、１９、２１、２３、２５、２７、３１及び３３）に提供された薬剤番号１乃至１２のアンチセンス鎖配列からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖と、とからなるｉＲＮＡ剤。
【請求項２】
各々が、表１（センス鎖：配列番号５、１０、１２、１４、１８、２０、２２、２４、２６、３０及び３２並びにアンチセンス鎖：配列番号６、７、１１、１３、１５、１９、２１、２３、２５、２７、３１及び３３）の薬剤番号１乃至１２の配列のうちの一つと本質的に同一である少なくとも１６、１７又は１８個のヌクレオチドの配列を含むセンス鎖中のヌクレオチド配列とアンチセンス鎖中のヌクレオチド配列とを含むｉＲＮＡ剤であって、鎖あたり１、２又は３個以下のヌクレオチドがそれぞれ他のヌクレオチドによって置換されているが、培養ヒトＳＥＭ細胞中におけるＭＬＬ−ＡＦ４の発現を阻害する能力をほぼ維持している、ｉＲＮＡ剤。
【請求項３】
前記センス鎖は、表１に提供された薬剤番号１、２、５及び９のセンス鎖配列（配列番号５、１４及び２４）からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、前記アンチセンス鎖は表１に提供された薬剤番号１、２、５及び９のアンチセンス鎖配列（配列番号６、７、１５及び２５）からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、前記ｉＲＮＡ剤は、同剤とのインキュベーション後に、培養ヒトＳＥＭ細胞中のＭＬＬ−ＡＦ４ｍＲＮＡの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して６０％超減少させる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項４】
前記アンチセンスＲＮＡ鎖は長さが３０ヌクレオチド以下であり、前記ｉＲＮＡ剤の二重鎖領域の長さが１５乃至３０ヌクレオチド対である、請求項１乃至３のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項５】
１乃至４個の不対ヌクレオチドを有する少なくとも一つのヌクレオチド突出部分を含む、請求項１乃至３のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項６】
前記ヌクレオチド突出部分が２又は３の不対ヌクレオチドを有する、請求項５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項７】
前記ヌクレオチド突出部分ｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端に存在する、請求項５又は６に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項８】
請求項１に記載のｉＲＮＡ剤であって、
前記ｉＲＮＡ剤は、
（ａ）センス鎖配列の配列番号５、１０、１２、１４、１８、２０、２２、２４、２６、３０及び３２の（５’から３’へ向かって）１位〜１９位又は１位〜２１位のヌクレオチド配列の群から選択されるヌクレオチド配列から構成されたセンス鎖と、前記センス鎖が同センス鎖配列の１位〜２１位のヌクレオチドの配列を有することが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号６、７、１１、１３、１５、１９、２１、２３、２５、２７、３１及び３３の（５’から３’へ向かって）１位〜２１位又は３位〜２１位のヌクレオチドの配列、並びに前記センス鎖が同センス鎖配列の１位〜１９位のヌクレオチド配列を有することが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号６、７、１１、１３、１５、１９、２１、２３、２５、２７、３１及び３３の３位〜２１位のヌクレオチドの配列、の群から選択されるヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖と、により形成される２本鎖構造と、
（ｂ）前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖の少なくとも一方の３’−末端に１乃至４個の不対ヌクレオチドからなる少なくとも１つの１本鎖の突出部分であって、前記１本鎖突出部分は、前記センス鎖の３’−末端にある場合には同センス鎖配列の２０位及び２１位のヌクレオチドを各位置に選択的に含むことと、前記アンチセンス鎖の３’−末端にある場合には同アンチセンス鎖配列の２２位及び２３位のヌクレオチドを各位置に選択的に含むここと、のうちの少なくとも一方である、１本鎖の突出部分と、
から構成されており、
前記２本鎖構造が前記センス鎖配列の１位〜２１位のヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、前記アンチセンス鎖配列の１位〜２１位のヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖と、により形成されている場合には、前記ｉＲＮＡ剤は、同センス鎖の３’−末端に１乃至４個の不対オリゴヌクレオチドの１本鎖突出部分を含んでいない、ｉＲＮＡ剤。
【請求項９】
前記センス鎖のヌクレオチド配列は配列番号１４のヌクレオチド配列から構成され、かつ前記アンチセンス鎖のヌクレオチド配列は配列番号１５のヌクレオチド配列から構成される、請求項８に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１０】
前記ｉＲＮＡ剤は同剤とのインキュベーション後に、培養ヒトＳＥＭ細胞中のＭＬＬ−ＡＦ４ｍＲＮＡの量を、同剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して４０％超減少させる、請求項１乃至９のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１１】
前記ｉＲＮＡ剤に生物試料中での高い安定性を与える修飾を更に含む、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１２】
ホスホロチオエート又は２’−修飾ヌクレオチドを含む、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１３】
ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド；５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド；５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド；又は５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、を含む、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１４】
前記２’−修飾が、２−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、及び２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群より選択される、請求項１２又は１３に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１５】
コレステロール部分を含む、請求項１乃至１４のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１６】
前記コレステロール部分が前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖の３’−末端に結合している、請求項１５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１７】
前記ｉＲＮＡ剤は肝臓の細胞により取り込まれるように標的化されている、請求項１乃至１６のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１８】
前記ｉＲＮＡ剤は消化管の細胞により取り込まれるように標的化されている、請求項１乃至１６のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１９】
（ａ）請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤と、
（ｂ）製薬的に許容可能な担体と、
からなる製薬組成物。
【請求項２０】
前記ｉＲＮＡ剤のヒト及びマウスの少なくとも一方における血漿中での半減期を延長させるか、又は細胞中における同ｉＲＮＡ剤の取り込みを容易にするための処方化剤を更に含む、請求項１９に記載の製薬組成物。
【請求項２１】
前記処方化剤はポリカチオンを含む、請求項２０に記載の製薬組成物。
【請求項２２】
前記製薬組成物は増殖性疾患の治療に有用である、請求項１９乃至２１のいずれか一項に記載の製薬組成物。
【請求項２３】
前記増殖性疾患は、癌である、請求項２２に記載の製薬組成物。
【請求項２４】
前記製薬組成物は、ヒト対象に同製薬組成物を投与することにより、同対象の細胞又は組織中でのＭＬＬ−ＡＦ４融合遺伝子の発現を低減すること及びｔ（４；１１）−陽性細胞の増殖率を抑制することのうちの少なくとも一方を可能にする、請求項１９乃至２３のいずれか一項に記載の製薬組成物。
【請求項２５】
請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤の一つを製薬的に許容可能な担体と処方化させる工程を含む、製薬組成物を製造するための方法。
【請求項２６】
前記ｉＲＮＡ剤のヒト及びマウスの少なくとも一方における血漿中での半減期を延長させるか、又は細胞中における同ｉＲＮＡ剤の取り込みを容易にするための処方化剤とともに同ｉＲＮＡ剤を処方化する工程を更に含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記処方化剤はポリカチオンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記製薬組成物は増殖性疾患の治療に有用である、請求項２５乃至２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記増殖性疾患は、癌である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記製薬組成物は、ヒト対象に同製薬組成物を投与することにより、同対象の細胞又は組織中でのＭＬＬ−ＡＦ４融合遺伝子の発現を低減すること及びｔ（４；１１）−陽性細胞の増殖率を抑制することのうちの少なくとも一方を可能にする、請求項２５乃至２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
細胞中のＭＬＬ−ＡＦ４ＲＮＡの量を低減すること及びｔ（４；１１）−陽性細胞の増殖率を抑制することのうちの少なくとも一方をインビトロにて実施するための方法であって、前記単数又は複数の細胞を請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤と接触させる工程を含む、方法。
【請求項３２】
前記細胞が対象の細胞であり、かつ前記対象が増殖性疾患に罹患していると診断されている、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤を製造する方法であって、前記方法は、同ｉＲＮＡ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖を合成する工程を含み、前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖のうちの少なくとも一つは少なくとも一つのヌクレオチド修飾を含む、方法。
【請求項３４】
前記ヌクレオチド修飾は、前記ｉＲＮＡ剤に生物試料中での高い安定性を与える修飾である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ｉＲＮＡ剤を対象に投与する工程を更に含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記対象は増殖性疾患に罹患しているものとして診断されている、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記対象は急性リンパ芽球性白血病に罹患しているものとして診断されている、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記対象がヒトである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
ＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現を阻害すると考えられているｉＲＮＡ剤を評価するための方法であって、前記方法は、
（ａ）ｉＲＮＡ剤を提供する工程であって、第一の鎖がＭＬＬ−ＡＦ４ｍＲＮＡのヌクレオチド配列と十分に相補的であり、かつ第二の鎖が第一の鎖とハイブリダイズするべく同第一の鎖と十分に相補的である、工程と、
（ｂ）前記ｉＲＮＡ剤をＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子を含む細胞と接触させる工程と、
（ｃ）細胞と前記ｉＲＮＡ剤を接触させる前のＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現又は接触させていない対照細胞のＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現と、細胞と前記ｉＲＮＡ剤を接触させた後のＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現と、を比較する工程と、
（ｄ）前記ｉＲＮＡ剤がＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現を阻害するのに有用であるかどうかを判定する工程であって、細胞中に存在するＭＬＬ−ＡＦ４ＲＮＡの量又は同細胞によって分泌されるタンパク質の量が、細胞とｉＲＮＡ剤とを接触させる前の存在量若しくは分泌量よりも少ない場合、又はそのような接触を受けていない細胞による存在量若しくは分泌量よりも少ない場合、同ｉＲＮＡ剤は有用であると判定する工程と、
からなる方法。
【請求項４０】
前記ｉＲＮＡ剤は請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤である、請求項３９に記載の方法。