【手続補正書】
【提出日】平成20年6月3日(2008.6.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
胸腺ストローマ細胞、又は、胸腺内リンパ球若しくはリンパ球前駆体のゲノムへ安定して組み込むことが可能であるウイルスベクターを含む、
遺伝性免疫不全、後天性免疫不全の予防又は治療用か、あるいは、自己又は非自己遺伝子産物、細胞、若しくは組織に対する生物体の免疫寛容の誘導用か、あるいは、自己免疫疾患の予防又は治療用医薬組成物。
【請求項２】
前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、レンチウイルス、スプマウイルス、又はアデノ随伴ウイルスから選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ウイルスベクターが、ヒト免疫不全ウイルスＩ型由来の配列に相当するレンチウイルスベクターである、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ウイルスベクターが、自己又は非自己遺伝子産物、細胞、若しくは組織に対する生物体の免疫寛容の誘導用か、あるいは、遺伝性免疫不全、後天性免疫不全、又は、自己免疫疾患の予防又は治療用である所定の組換えヌクレオチド配列を含み、
前記所定の組換えヌクレオチド配列が、真核細胞におけるその発現を導くエレメントの制御下にある、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
自己又は非自己遺伝子産物、細胞、若しくは組織に対する生物体の免疫寛容の誘導のフレームの胸腺ストローマ細胞の形質転換用、及び自己免疫疾患の予防又は治療用、及び／又は、遺伝性免疫不全又は後天性免疫不全を予防又は治療のフレームの胸腺内リンパ球又はリンパ球前駆体の形質転換用の、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
胸腺内投与用である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
自己又は非自己遺伝子産物、細胞、若しくは組織に対する生物体の免疫寛容の誘導のフレームの、胸腺ストローマ細胞を形質転換する胸腺内投与用、及び自己免疫疾患の予防又は治療用の、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
自己免疫疾患の予防又は治療用の、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
組換えヌクレオチド配列が、ミエリン自己抗原コード配列、アセチルコリンレセプタコード配列、又はインスリンコード配列から選択される、請求項７又は８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
移植拒絶の予防又は治療用である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
組換えヌクレオチド配列が、アロ抗原コード配列である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
免疫不全の治療のフレームの胸腺内リンパ球又はリンパ球前駆体を形質転換する胸腺内投与用の、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）の遺伝性免疫不全の治療用である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
組換えヌクレオチド配列が、ＡＤＡコード配列、ＩＬ２ＲＧコード配列、ＺＡＰ−７０コード配列、Ｒａｇ１／２コード配列、Ｊａｋ３コード配列、ＩＬ７ＲＡコード配列、ＣＤ３デルタ配列、又はＣＤ３イプシロン配列から選択される、請求項１２又は１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ＨＩＶ感染から生じる後天性免疫不全の治療用である、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
組換えヌクレオチド配列が、抑制ペプチドである、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ウイルスベクターが、Ｔ−細胞特異レンチウイルスベクター、すなわち、特異的に、Ｔリンパ球で治療用導入遺伝子を発現する性質を有するレンチウイルスベクターである、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
注入による胸腺内投与用であって、ベクターの用量が、ミリリットル当たり１０５〜１０１１の間の感染性粒子を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
遺伝性免疫不全、後天性免疫不全の予防又は治療用か、あるいは、自己又は非自己遺伝子産物、細胞、若しくは組織に対する生物体の免疫寛容の誘導用、及び、自己免疫疾患の予防又は治療用に有用な所定の配列で形質転換するレンチウイルスベクターであって、
以下：
−哺乳類ＺＡＰ−７０コード配列を含むＴ−細胞特異的レンチウイルスベクター、
−ウイルス性ＨＡコード配列を含むユビキタスレンチウイルスベクター、
−哺乳類インスリンコード配列を含む、ユビキタスレンチウイルスベクター、
から選択される、前記レンチウイルスベクター。
【請求項２０】
自己又は非自己遺伝子産物、細胞、若しくは組織に対する生物体の免疫寛容の誘導用か、あるいは、遺伝性免疫不全、後天性免疫不全の予防又は治療用であり、所定の組換えヌクレオチド配列を含み、それらのゲノムへ安定して組み込まれるウイルスベクターを含むことを特徴とする、形質転換された胸腺ストローマ細胞。
【請求項２１】
自己又は非自己遺伝子産物、細胞、若しくは組織に対する生物体の免疫寛容の誘導用か、あるいは、遺伝性免疫不全、後天性免疫不全の予防又は治療用であり、所定の組換えヌクレオチド配列を含み、それらのゲノムへ安定して組み込まれるウイルスベクターを含むことを特徴とする、Ｔ−細胞系列の形質転換された細胞。
【請求項２２】
適当な医薬担体と関連する、請求項１９に記載のレンチウイルスベクターか、あるいは、請求項２０又は２１に記載の形質転換された細胞を含む医薬組成物。
【請求項２３】
注入による胸腺内投与に適当な、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記レンチウイルスベクターの用量が、ミリリットルあたり１０５〜１０１１の感染性粒子を含む、請求項２２又は２３に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
本発明者らは、胸腺ストローマ細胞を、レンチウイルスベクターの胸腺内注入の後、効果的に形質導入することができることを、前記で報告した。従って、Ｔｒｅｇ分化における胸腺の同起源の抗原発現の役割を更に解決するために、本発明者らは、ＴＣＲ−ＨＡマウスの胸腺にＨＡコードレンチウイルスベクター（図１３Ａ）を注入した。このことは、６．５＋ＣＤ２５−胸腺細胞の欠失をもたらしたが、この欠失は注入後１週間で検出され、１ヶ月又は２ヶ月では検出されなかった（表２）。対照的に、ＣＤ２５＋ＣＤ４ＳＰ胸腺細胞中のＨＡ特異的細胞の頻度は注入後１週、そして１〜２カ月でも、２〜１０倍に増幅していた（表２）。増幅したＣＤ４ＳＰサブセットの６．５＋ＣＤ２５＋細胞の頻度は、その数においては１０倍の増加であった（図１３Ｂ）。注目すべきは、ＨＡ発現ベクターを注入されたマウスのＨＡ特異的ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の数値は、非処置のマウスにおける総ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞の絶対数に達し（図１３Ｂ）、同起源の抗原が、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞のポジティブ選択上の主要な影響を有していたことを示している。このことは、ＨＡ発現ベクターの６．５−ＣＤ２５＋細胞の平均数の中程度であるが顕著な増加であった（図１２Ｂ）。まとめると、これらの結果は、同起源の抗原の胸腺内発現は、予め全く抗原に暴露されていないマウスにおいて、ＨＡ特異的Ｔｒｅｇの頻度と数の増加を導いた。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
ｅＧＦＰ発現ベクターを注入されたコントロールマウスと比較して、ＨＡ発現ベクターを注入したマウスのリンパ節においても６．５＋ＣＤ２５＋の頻度は増加していた（表２）。ＣＤ２５＋細胞は総ＣＤ４＋細胞の５〜６％のみであるので、６．５＋ＣＤ２５＋頻度の増大は、６．５＋ＣＤ２５−細胞の活性化ＣＤ２５＋細胞への転換に起因しうるものである。胸腺内注入後に、ウイルスベクターは漏れるので、前記の転換は末梢におけるＨＡ発現細胞の認識により起こることができたものである。従って、本発明者らは、Ｉｎｓ−ＨＡトランスジェニックマウスの糖尿病を防御又は遅延させるそれらの能力によってレンチウイルス処置マウスからの精製ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の抑制活性を分析した（図１３Ｃ）。糖尿病を誘導するため、本発明者は、亜致死性の放射線照射したＩｎｓ−ＨＡトランスジェニックマウスに、ＴＣＲ−ＨＡマウスからのＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を注入し、そして次に、ＨＡで刺激した樹状細胞で免疫した。本発明者らは、ＨＡ発現ベクターを注入されたマウスからの末梢ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞が、コントロールマウスからのＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞と比較して糖尿病を防御する能力を著しく増加させていた（図１３Ｃ）ことを見出した。まとめると、これらの結果は、ＨＡ特異的ＴＣＲトランスジェニックマウスにおける、ＨＡコードレンチウイルスベクターの胸腺内注入は、胸腺及び末梢でのＨＡ特異的Ｔｒｅｇの濃縮をもたらす。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
表２．胸腺にレンチウイルスベクターを注入されたＴＣＲ−ＨＡトランスジェニックマウスの胸腺及びリンパ節からのＨＡ特異的ＣＤ４ＳＰのＴ細胞の頻度。
【表２】
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