【手続補正書】
【提出日】平成31年4月15日(2019.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白血病を有する小児対象を治療するのに使用するための、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）を発現するように操作するために好適な免疫エフェクター細胞の集団を取得する方法であって、以下のパラメーター：
（ｉ）白血病を有する小児対象からの前記免疫エフェクター細胞の集団の取得のタイミング；
（ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団の取得のタイミングに対する、白血病を有する小児対象への化学療法を施すタイミング；
（ｉｉｉ）白血病を有する小児対象に投与される化学療法の種類；または
（ｉｖ）白血病の種類
の２つ、３つ、または４つに従って、白血病を有する小児対象から前記免疫エフェクター細胞の集団を取得すること（例えば、得ることかまたは採取すること）を含む方法。
【請求項２】
化学療法と組み合わせて、白血病を有する小児対象を治療するか、または前記対象に抗腫瘍免疫を提供するのに使用するための、ＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団を含む組成物であって、前記免疫エフェクター細胞の集団が、以下のパラメーター：
（ｉ）白血病を有する小児対象からの前記免疫エフェクター細胞の集団の取得のタイミング；
（ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団の取得のタイミングに対する、白血病を有する小児対象への化学療法を施すタイミング；
（ｉｉｉ）白血病を有する小児対象に投与される化学療法の種類；または
（ｉｖ）白血病の種類
の２つ、３つ、または４つに従って、前記ＣＡＲ分子の導入の前に前記対象から取得される、組成物。
【請求項３】
白血病を有する小児対象を治療するか、または前記対象に抗腫瘍免疫を提供する方法において使用するためのＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞の集団であって、白血病を有する小児対象に、化学療法と組み合わせて、ＣＡＲ分子を発現するように操作された有効量の前記免疫エフェクター細胞の集団を投与することを含み、
前記免疫エフェクター細胞の集団が、以下のパラメーター：
（ｉ）白血病を有する小児対象からの前記免疫エフェクター細胞の取得のタイミング；
（ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団の取得のタイミングに対する、白血病を有する小児対象への化学療法を施すタイミング；
（ｉｉｉ）白血病を有する小児対象に投与される化学療法の種類；または
（ｉｖ）白血病の種類
の２つ、３つ、または４つに従って、前記ＣＡＲ分子を発現するように操作する前に前記対象から取得される、免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項４】
前記対象からの前記免疫エフェクター細胞の集団の取得は、免疫エフェクター細胞パラメーター、所望により、Ｔ細胞パラメーターのうちの１つもしくは複数に従って最適化される、所望により、Ｔ細胞パラメーターのうちの１つもしくは複数は、Ｔ細胞数、Ｔ細胞表現型、もしくはＴ細胞機能のうちの１つもしくは複数である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項５】
前記免疫エフェクター細胞の集団は、（ｉ）〜（ｉｖ）のうちのいずれかが、免疫エフェクター細胞の参照集団と比較して、最適化されている場合に、免疫細胞の集団のエキソビボ増殖、治療法に対する前記免疫細胞の集団の有効性、または前記免疫エフェクター細胞の集団の収率のうちの１つまたは複数において、免疫エフェクター細胞の参照集団と比較して増加を示す、請求項１〜４のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項６】
ＣＡＲ分子を発現するように操作された前記免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＡＲをコードする核酸を含む、所望により、前記ＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲである、所望により、前記ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＣＴＬ０１９である、
所望により、前記免疫エフェクター細胞の集団に、ＣＡＲをコードする核酸を導入することをさらに含む、所望により、前記ＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲである、所望により、前記ＣＤ１９  ＣＡＲは、ＣＴＬ０１９である、
所望により、前記ＣＡＲ分子は、表１または表４による配列を含む、
請求項２〜５のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項７】
前記小児対象は、年齢が１０歳またはそれよりも若い、請求項１〜６のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項８】
前記対象は、腫瘍関連抗原またはがん関連抗原の発現と関連する白血病を有する、
所望により、前記白血病は、Ｂ細胞性急性リンパ球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、Ｔ細胞性急性リンパ球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞性前骨髄球性白血病、または有毛細胞性白血病のうちの１つまたは複数から選択される、
請求項１〜７のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項９】
前記白血病は、ＣＬＬまたはＡＬＬである、請求項１〜８のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１０】
前記白血病を有する小児対象は、標準リスク、高リスク、または非常に高リスクのＡＬＬを有するとして分類される、所望により、前記対象は、リンパ腫を有さない、所望により、前記対象は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を有さない、所望により、前記白血病は、再発白血病ではない、請求項１〜９のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１１】
前記免疫エフェクター細胞の集団の取得は、
（ｉ）前記対象に前記化学療法を施す前に；
（ｉｉ）前記対象が２回、３回、４回、または５回の化学療法サイクルを受ける前に；または
（ｉｉｉ）前記対象が１回の化学療法サイクルを受けた後だが、前記対象が２回目の化学療法サイクルを受ける前に、
行う、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１２】
前記化学療法または前記化学療法サイクルは、寛解導入療法、地固め療法、中間維持療法、後期強化療法、または維持療法のうちの１つまたは複数であるか、または含む、所望により、
（ｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団は、前記対象が地固め療法または寛解導入療法を受ける前に、前記対象から取得される；
（ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団は、前記対象が地固め療法を受ける前に、前記対象から取得される；
（ｉｉｉ）前記対象は、高リスクまたは非常に高リスクのがん（所望により、前記高リスクまたは非常に高リスクのがんは、ＡＬＬである）を有するとして分類され、前記細胞は、前記対象が地固め療法を受ける前に採取される；
（ｉｖ）前記免疫エフェクター細胞の集団は、前記対象が、後期強化療法を受ける前に、前記対象から取得される；または、
（ｖ）前記対象は、高リスクまたは非常に高リスクのがん（所望により、前記高リスクまたは非常に高リスクのがんは、ＡＬＬである）を有するとして分類され、前記細胞は、前記対象が後期強化療法を受ける前に採取される、
請求項１〜１１のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１３】
前記化学療法は、表８中の１つまたは複数の化学療法から選択される、所望により、
（ｉ）前記化学療法は、表８に記載される薬物および投薬レジメンを含む；または
（ｉｉ）前記化学療法は、ビンクリスチン、デキサメタゾン、ＰＥＧ−Ｌ−アスパラギナーゼ、ダウノルビシン、６−メルカプトプリン、シクロホスファミド、シタラビン、メトトレキサート、ドキソルビシン、６−チオグアニン、および／またはプレドニゾンのうちの１つまたは複数を含む；
所望により、前記免疫エフェクター細胞の集団は、前記対象がシクロホスファミドおよび／またはシタラビンの投与を受ける前に前記白血病を有する小児対象から取得される、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１４】
取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、より多数の低分化度のＴ細胞、例えば、より多数のナイーブＴ細胞、ステムセントラルメモリーＴ細胞（ｓｔｅｍ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ）、および／またはセントラルメモリーＴ細胞のうちの１つまたは複数を含む、所望により、前記より多数の低分化度のＴ細胞は、免疫エフェクター細胞の参照集団と比較する、所望により、前記免疫エフェクター細胞の参照集団は、後の時点または１つまたは複数の化学療法または化学療法サイクルに曝露した後の前記対象から取得される、所望により、取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも２０％のナイーブＴ細胞、少なくとも２％のステムセントラルメモリーＴ細胞、および／または少なくとも４％のセントラルメモリーＴ細胞を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１５】
（ｉ）取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、少なくとも５０％のセントラルメモリーＴ細胞を含む；または
（ｉｉ）取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、合わせて５５％未満のエフェクターメモリーＴ細胞および末端エフェクターＴ細胞を含む、
請求項１４に記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１６】
（ｉ）取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、免疫エフェクター細胞の参照集団と比較して、Ｔ細胞絶対数（ＡＴＣ）の増加を示す、所望により、前記免疫エフェクター細胞の参照集団は、後の時点または１つまたは複数の化学療法サイクルに曝露した後の前記対象から取得される；または
（ｉｉ）取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、１マイクロリットル当たり少なくとも４００個のＴ細胞絶対数、１マイクロリットル当たり少なくとも２００個のナイーブＴ細胞絶対数、１マイクロリットル当たり少なくとも２０個のステムセントラルメモリーＴ細胞絶対数、および／または１マイクロリットル当たり少なくとも４０個のセントラルメモリーＴ細胞絶対数を含む、
請求項１４に記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１７】
取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、１つまたは複数のＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＯ、およびＣＤ９５の発現に基づいて選択されることをさらに含む請求項１〜１６のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団であって、所望により、取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＣＲ７＋およびＣＤ６２Ｌ＋  Ｔ細胞である、
所望により、
ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＤ９５−の発現パターンに基づいてナイーブＴ細胞；
ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＤ９５＋の発現パターンに基づいてステムセントラルメモリーＴ細胞；および／または
ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ９５＋の発現パターンに基づいてセントラルメモリーＴ細胞
のうちの１つまたは複数を特定することを含む、方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１８】
制御性Ｔ細胞を、取得された前記免疫エフェクター細胞の集団から除去し、所望により、前記制御性Ｔ細胞は、ＣＤ２５＋Ｔ細胞である、取得された前記免疫細胞の集団から除去し、それによって、制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団を得ることをさらに含む、所望により、前記制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団は、ＣＤ２５＋枯渇細胞の集団である、所望により、前記制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団は、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満のＣＤ２５＋細胞を含有する、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項１９】
前記白血病は、ＣＤ２５発現がんである、所望により、前記ＣＤ２５発現がんは、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である、所望により、取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、制御性Ｔ細胞を枯渇されており、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満のＣＤ２５＋細胞、および５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満の白血病細胞を含有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２０】
（ｉ）前記制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団は、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満の前記白血病細胞を含有する、所望により、前記白血病細胞は、ＣＬＬ細胞またはＡＬＬ細胞である；
（ｉｉ）前記制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団は、１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満のＣＤ２５＋細胞、および１５％未満、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満の白血病細胞を含有する、所望により、前記白血病細胞は、ＣＬＬ細胞である；または
（ｉｉｉ）前記制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団は、１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満のＣＤ２５＋細胞、および１０％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満の白血病細胞を含有する、所望により、前記白血病細胞は、ＣＬＬ細胞である、
請求項１９に記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２１】
（ｉ）取得された前記免疫エフェクター細胞の集団から、腫瘍抗原を発現する細胞を除去し、所望により、前記腫瘍抗原は、ＣＤ２５を含まない、所望により、前記腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４またはＣＤ１１ｂを含む、それによって、制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団を得ること、所望により、前記制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団は、ＣＤ２５＋枯渇細胞、およびＣＡＲの発現に好適な腫瘍抗原枯渇細胞の集団である；または
（ｉｉ）取得された前記免疫エフェクター細胞の集団から、チェックポイント阻害剤を発現する細胞、例えば、ＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞、およびＴＩＭ３＋細胞のうちの１つまたは複数を除去し、それによって、制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団を得ること、所望により、前記制御性Ｔ細胞枯渇細胞の集団は、ＣＤ２５＋枯渇細胞、ならびにチェックポイント阻害剤枯渇細胞、例えば、ＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋、および／またはＴＩＭ３＋枯渇細胞の集団である；または
所望により、取得された前記免疫エフェクター細胞の集団は、１つまたは複数マーカー、例えば、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ４５ＲＯの発現に基づいて選択されること、所望により、前記選択された免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＤ３＋および／またはＣＤ２８＋Ｔ細胞である、
をさらに含む、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２２】
前記免疫エフェクター細胞の集団由来の細胞に、ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターを形質導入することをさらに含む、所望により、前記ＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲである、所望により、免疫エフェクター細胞の集団を増殖させることをさらに含む、所望により、前記免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＡＲを発現するように操作されている、所望により、前記ＣＡＲは、ＣＤ１９  ＣＡＲである、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２３】
（ｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団を、８日間またはそれ未満、例えば、７日間、６日間、または５日間の期間、増殖させる；
（ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団を、５日間培養液で増殖させ、その結果得られる細胞は、同じ培養条件下において９日間培養液中で増殖させた同じ細胞よりも強力である；または
（ｉｉｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤および前記細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドの存在下において、前記細胞を培養することによって増殖させる、所望により、前記薬剤は、抗ＣＤ３抗体もしくはその断片、および／または抗ＣＤ２８抗体もしくはその断片とコンジュゲートしたビーズである、
請求項２２に記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２４】
（ｉ）前記５日間増殖させた免疫エフェクター細胞の集団は、抗原刺激時に、同じ培養条件下において９日間培養液中で増殖させた同じ細胞と比較して、細胞倍増の少なくとも１倍、２倍、３倍、または４倍の増加を示す；または
（ｉｉ）前記免疫エフェクター細胞の集団を、５日間培養液で増殖させ、その結果得られる細胞は、同じ培養条件下において９日間培養液で増殖させた同じ細胞と比較して、より高い炎症促進性サイトカイン産生、例えば、ＩＦＮ−γおよび／またはＧＭ−ＣＳＦレベルを呈する、
請求項２３に記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２５】
前記免疫エフェクター細胞の集団を、１つまたは複数のインターロイキンを含む適切な培地において増殖させ、これが、１４日間の増殖期間にわたって細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍、または３５０倍）の増加をもたらす、所望により、１４日間の増殖期間にわたって細胞の増加は、フローサイトメトリーによって測定される、所望により、前記免疫エフェクター細胞の集団を、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７の存在下において増殖させる（所望により、前記免疫エフェクター細胞を、ＩＬ−１５およびＩＬ−７の存在下において増殖させる）、請求項２２〜２４のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２６】
前記免疫エフェクター細胞の集団は、前記増殖期間後に凍結保存される、請求項２２〜２５のいずれかに記載の方法、組成物、または免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２７】
本特許請求の範囲に記載される方法のうちのいずれかにより作製された免疫エフェクター細胞の集団を含む免疫細胞調製物。
【請求項２８】
前記免疫エフェクター細胞の集団は、
（ｉ）少なくとも２０％のナイーブＴ細胞、少なくとも２％のステムセントラルメモリーＴ細胞、および／または少なくとも４％のセントラルメモリーＴ細胞を含む；
（ｉｉ）１マイクロリットル当たり少なくとも４００個のＴ細胞絶対数、１マイクロリットル当たり少なくとも２００個のナイーブＴ細胞絶対数、１マイクロリットル当たり少なくとも２０個のステムセントラルメモリーＴ細胞絶対数、および／もしくは１マイクロリットル当たり少なくとも４０個のセントラルメモリーＴ細胞絶対数を含む、所望により、前記免疫エフェクター細胞の集団は、１つまたは複数のマーカー、例えば、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＯ、およびＣＤ９５の発現に基づいて選択されている、所望により、前記免疫エフェクター細胞の集団は、ＣＣＲ７＋およびＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞である、さらに所望により、前記ナイーブＴ細胞は、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＤ９５−の発現パターンに基づいて特定され、前記ステムセントラルメモリーＴ細胞は、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＯ−、ＣＤ９５＋の発現パターンに基づいて特定され、前記セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ９５＋の発現パターンに基づいて特定される；および／または
（ｉｉｉ）ＣＡＲをコードする核酸を含む、
請求項２７に記載の免疫細胞調製物。