【手続補正書】
【提出日】平成19年12月10日(2007.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  主要ヌクレオキャプシド（N）タンパク質、ヌクレオキャプシドリンタンパク質（P）、大きなポリメラーゼタンパク質（L）、及びキメラパラインフルエンザウィルス（PIV）ゲノム又はアンチゲノム形成するために１又は複数の異種病原体の１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントと共に組合される部分又は完全PIVベクターゲノム又はアンチゲノムを含んで成る、単離された感染性キメラインフルエンザウィルス（PIV）。
【請求項２】  前記抗原決定基をコードする前記１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントが、前記部分又は完全PIVベクターゲノム又はアンチゲノムの非コード領域に隣接して又はその領域内に余分の遺伝子又はゲノムセグメントとして付加される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項３】  前記抗原決定基をコードする前記１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントが、部分PIVベクターゲノム又はアンチゲノムにおける１又は複数のカウンターパート遺伝子又はゲノムセグメントにより置換される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが部分又は完全ヒトPIV（HPIV）ゲノム又はアンチゲノムであり、そして前記抗原決定基をコードする異種遺伝子又はセグメントが１又は複数の異種PIVのものである請求項１記載のキメラPIV。
【請求項５】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが部分又は完全HPIVゲノム又はアンチゲノムであり、そして前記抗原決定基をコードする異種遺伝子又はゲノムセグメントが１又は複数の異種HPIVのものである請求項４記載のキメラPIV。
【請求項６】  HPIV1 HN及びF糖タンパク質及び抗原性ドメイン、そのフラグメント及びエピトープから選択されたHPIV1の１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の遺伝子又はゲノムセグメントが、前記部分又は完全HPIV3 JSゲノム又はアンチゲノムに付加され、又はそのアンチゲノム内で置換される請求項５記載のキメラPIV。
【請求項７】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、JS cp45のTyr942, Leu992又はThr1558に対応する位置でのLタンパク質；JS cp45の残基Val96又はSer389に対応する位置でのNタンパク質；JS cp45のIle96に対応する位置でのCタンパク質におけるアミノ酸置換、JS cp45のヌクレオチド23, 24, 28又は45に対応する位置でのキメラウィルスの3’リーダー配列におけるヌクレオチド置換、及び/又はJS cp45のヌクレオチド62に対応する位置でのN遺伝子開始配列における突然変異を特定する突然変異から選択されたPIV3 JS cp45内に存在する、少なくとも１つ及び全数の弱毒化突然変異を更に組み込んでいる請求項１記載のキメラPIV。
【請求項８】  多数の異種PIVの抗原決定基をコードする多くの異種遺伝子又はゲノムセグメントが、部分又は完全HPIVベクターゲノム又はアンチゲノムに付加されるか、又はその内部に組み込まれる請求項４記載のキメラPIV。
【請求項９】  HPIV1及びHPIV2の両者からの抗原決定基をコードする多くの異種遺伝子又はゲノムセグメントが、部分又は完全HPIVベクターゲノム又はアンチゲノムに付加されるか、又はその内部に組み込まれる請求項８記載のキメラPIV。
【請求項１０】  １又は複数のHN及び/又はF糖タンパク質又は抗原性ドメイン、そのフラグメント又はエピトープをコードする１又は複数のHPIV１遺伝子又はゲノムセグメント、及び１又は複数のHN及び/又はF糖タンパク質又は抗原性ドメイン、そのフラグメント又はエピトープをコードする１又は複数のHPIV2遺伝子又はゲノムセグメントが、前記部分又は完全HPIV3ベクターゲノム又はアンチゲノムに付加されるか又はそのアンチゲノム内に組み込まれる請求項９記載のキメラPIV。
【請求項１１】  rPIV3-1.2HN, 又はrPIV3−1cp45.2HNから選択される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項１２】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、部分又は完全ヒトPIV（HPIV）ゲノム又はアンチゲノムであり、そして前記異種病原体が、はしかウィルス、サブグループA及びBのRSウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、ヒト乳頭腫ウィルス、タイプ１及び２ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、狂犬病ウィルス、エプスタイン−バーウィルス、フィロウィルス（filoviruses）、ブニアウィルス（bunyaviruses）、フラビウィルス（flaviviruses）、アルファウィルス（alphaviruses）及びインフルエンザウィルスから選択される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項１３】  前記異種病原体が、はしかウィルスであり、そして前記異種抗原決定基が、はしかウィルスHA及びFタンパク質及びその抗原性ドメイン、フラグメント及びエピトープから選択される請求項12記載のキメラPIV。
【請求項１４】  rPIV3 (HA HN-L), rPIV3 (HA N-P), rcp45L (HA N-P), rPIV3 (HA P-M), 又はrcp45L (HA P-M)から選択される請求項13記載のキメラPIV。
【請求項１５】  はしかウィルスHA遺伝子のオープンリーディングフレーム（ORF）を含んで成る転写単位が、HPIV1のHN及びF ORFにより置換されるHPIV3 HN及びF ORFの両者を有するHPIV3−１ベクターゲノム又はアンチゲノムに付加されるか又はそのアンチゲノム内に組み込まれる請求項10記載のキメラPIV。
【請求項１６】  rPIV3-1 HAP-M又はｒPIV3-1 HAP-M cp45Lから選択される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項１７】  rHPIV3 1HNN-P, rHPIV3 1HNP-M, rHPIV3 2HNH-P, rHPIV3 2HMP-M, rHPIV3 1HNN-P 2HNP-M, rHPIV3 1HNN-P 2HNP-M HAHN-L 及びrHPIV3 1HNN-P 2HNP-M 3918GUHN-Lから選択される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項１８】  HPIV3, HPIV1, HPIV2及びはしかウィルスから選択された１〜４種の病原体からの保護抗原を含む請求項１記載のキメラPIV。
【請求項１９】  前記１又は複数の余分の異種遺伝子又はゲノムセグメントが、上部及び/又は下部気道において少なくとも10〜100倍の低下を示すキメラPIVの弱毒表現型を特定する請求項２記載のキメラPIV。
【請求項２０】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、ヒト−ウシキメラPIVゲノム又はアンチゲノムである請求項１記載のキメラPIV。
【請求項２１】  前記ヒト−キメラベクターゲノム又はアンチゲノムが、はしかウィルス、サブグループA及びBのRSウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、ヒト乳頭腫ウィルス、タイプ１及び２ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、狂犬病ウィルス、エプスタイン−バーウィルス、フィロウィルス、ブニアウィルス、フラビウィルス、アルファウィルス及びインフルエンザウィルスから選択された異種病原体の１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントと組合される請求項20記載のキメラPIV。
【請求項２２】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、BPIVからの１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントと組合される部分又は完全HPIVゲノム又はアンチゲノムを含んで成る請求項20記載のキメラPIV。
【請求項２３】  BPIV3 N ORFのオープンリーディングフレーム（ORF）を含んで成る転写単位が、HPIV3ベクターゲノムの対応するN ORFにより前記ベクターゲノム又はアンチゲノムにおいて置換される請求項22記載のキメラPIV。
【請求項２４】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、余分の遺伝子挿入体として、はしかウィルスHA遺伝子と組合される請求項23記載のキメラPIV。
【請求項２５】  rHPIV3-NBHAP-Mである請求項19記載のキメラPIV。
【請求項２６】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、HPIVからの１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントにより組み合わされる部分又は完全BPIVゲノム又はアンチゲノムを含んで成る請求項20記載のキメラPIV。
【請求項２７】  HN及び/又はF糖タンパク質をコードする１又は複数のHPIV遺伝子又はゲノムセグメント、又は１又は複数の免疫原ドメイン、そのフラグメント又はエピトープが、ベクターゲノム又はアンチゲノムを形成するために、部分又は完全ウシゲノム又はアンチゲノムに付加されるか又はそのアンチゲノム内に組み込まれる請求項26記載のキメラPIV。
【請求項２８】  NH及びF糖タンパク質をコードする両HPIV3遺伝子が、ベクターゲノム又はアンチゲノムを形成するために、対応するBPIV3 HN及びF遺伝子により置換される請求項27記載のキメラPIV。
【請求項２９】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、余分の遺伝子挿入体として、RSウィルス（RSV）F又はG遺伝子による組合される請求項28記載のキメラPIV。
【請求項３０】  rBHPIV3-G1又はrB/HPIV3-F1から選択される請求項29記載のキメラPIV。
【請求項３１】  １又は複数の免疫原ドメイン、そのフラグメント又はエピトープをコードする１又は複数のHPIV１ HN及び/又はF遺伝子又はゲノムセグメントが、ベクターゲノム又はアンチゲノムを形成するために、部分又は完全ウシゲノム又はアンチゲノム内に組み込まれ、これはさらに、両HPIV1及びHPIV2から保護抗原を発現するキメラゲノム又はアンチゲノムを形成するために、１又は複数の免疫原ドメイン、そのフラグメント又はエピトープをコードする１又は複数のHPIV2 HN及び/又はF遺伝子又はゲノムセグメントの組み込みにより修飾される請求項27記載のキメラPIV。
【請求項３２】  rB/HPIV3.1-2F; rB/HPIV3.1-2HN; 又はrB/HPIV3.1-2F, 2HNから選択される請求項31記載のキメラPIV。
【請求項３３】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、複数のHPIVからの抗原性ドメイン、フラグメント又はエピトープを有するキメラ糖タンパク質をコードする請求項１記載のキメラPIV。
【請求項３４】  rPIV3-2TMである請求項33記載のキメラPIV。
【請求項３５】  rPIV3-2TMcp45である請求項33記載のキメラPIV。
【請求項３６】  rPIV3-2CTである請求項33記載のキメラPIV。
【請求項３７】  rPIV3-2CTcp45である請求項33記載のキメラPIV。
【請求項３８】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、HPIV3 Lタンパク質の位置456でのフェニルアラニンのアミノ酸置換を包含する弱毒化突然変異の導入により修飾される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項３９】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、RSウィルス（RSV）又ははしかウィルスからの１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントを組み込む請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４０】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、生物学的に誘導された変異体PIV、又はセグメント化されていない陰性鎖変異体RNAウィルスにおいて同定される１又は複数の弱毒化点突然変異の導入により更に修飾される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４１】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、突然変異を特定するコドンにおける複数のヌクレオチド変化により安定化された少なくとも１つの更なる弱毒化点突然変異を包含する請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４２】  １又は複数のPIV遺伝子が完全に又は一部、欠失され、又は前記遺伝子の発現が、RNA修正部位における突然変異、フレームシフト突然変異、開始コドンにより特定されるアミノ酸を変更する突然変異、又は遺伝子のオープンリーディングフレーム（ORF）における１又は複数の停止コドンの導入により低められるか、又は除去される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４３】  前記追加のヌクレオチド修飾が、１又は複数のC, D又はV  ORFの部分的又は完全な欠失、又は前記１又は複数のC, D又はV ORFの発現を低めるか又は除去する１又は複数のヌクレオチド変化を含んで成る請求項42記載のキメラPIV。
【請求項４４】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、サイトカインをコードするよう、さらに修飾される請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４５】  RSウィルス（RSV）からの異種遺伝子又はゲノムセグメントを組み込む請求項39記載のキメラPIV。
【請求項４６】  前記異種遺伝子又はゲノムセグメントが、RSV F及び/又はG糖タンパク質、又は免疫原ドメイン、そのフラグメント又はエピトープをコードする請求項45記載のキメラPIV。
【請求項４７】  ウィルスである請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４８】  サブウィルス粒子である請求項１記載のキメラPIV。
【請求項４９】  免疫学的に十分な量の請求項１記載のキメラPIV及び生理学的に許容できるキャリヤーを含んで成る、PIVに対する免疫応答を誘発するための免疫原組成物。
【請求項５０】  103〜107PFUの用量で配合される請求項49記載の組成物。
【請求項５１】  噴霧、液滴又はエアロゾルにより上部気道に投与するために配合される請求項49記載の組成物。
【請求項５２】  前記キメラPIVが、HPIV1、HPIV2及びHPIV3から選択された１又は複数のウィルスに対して免疫応答を誘発する請求項49記載の組成物。
【請求項５３】  前記キメラPIVが、HPIV3、及びHPIV1及びHPIV2から選択されたもう１つのウィルスに対して免疫応答を誘発する請求項49記載の組成物。
【請求項５４】  前記キメラPIVが１又は複数のHPIV、及びはしかウィルス、サブグループA及びBのRSウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、ヒト乳頭腫ウィルス、タイプ１及び２ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、狂犬病ウィルス、エプスタイン−バーウィルス、フィロウィルス、ブニアウィルス、フラビウィルス、アルファウィルス及びインフルエンザウィルスから選択された異種病原体に対して多特異的免疫応答を誘発する請求項49記載の組成物。
【請求項５５】  前記キメラPIVが、HPIV3及びはしかウィルスRSウィルスに対する多特異的免疫応答を誘発する請求項54記載の組成物。
【請求項５６】  請求項１記載の第２キメラPIVをさらに含んで成る請求項49記載の組成物。
【請求項５７】  前記第１及び第２キメラPIVがHPIVの抗原的に明確な変異体である請求項56記載の組成物。
【請求項５８】  前記異種病原体が、はしかウィルス、サブグループA及びBのRSウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、ヒト乳頭腫ウィルス、タイプ１及び２ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、狂犬病ウィルス、エプスタイン−バーウィルス、フィロウィルス、ブニアウィルス、フラビウィルス、アルファウィルス及びインフルエンザウィルスから選択される請求項56記載の組成物。
【請求項５９】  前記異種病原体が、はしかウィルス又はRSVから選択される請求項56記載の組成物。
【請求項６０】  キメラPIVゲノム又はアンチゲノム形成するために１又は複数の異種病原体の１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントと共に組合される部分又は完全PIVベクターゲノム又はアンチゲノムを包含するキメラPIVゲノム又はアンチゲノムを含んで成る単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６１】  前記抗原決定基をコードする前記１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントが、前記部分又は完全PIVベクターゲノム又はアンチゲノムの非コード領域に隣接して又はその領域内に付加される請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６２】  前記抗原決定基をコードする前記１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントが、部分PIVベクターゲノム又はアンチゲノムにおける１又は複数のカウンターパート遺伝子又はゲノムセグメントにより置換される請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６３】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが部分又は完全ヒトPIV（HPIV）ゲノム又はアンチゲノムであり、そして前記抗原決定基をコードする異種遺伝子又はゲノムセグメントが１又は複数の異種PIVのものである請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６４】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、部分又は完全ヒトPIV（HPIV）ゲノム又はアンチゲノムであり、そして前記異種病原体が、はしかウィルス、サブグループA及びBのRSウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、ヒト乳頭腫ウィルス、タイプ１及び２ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、狂犬病ウィルス、エプスタイン−バーウィルス、フィロウィルス、ブニアウィルス、フラビウィルス、アルファウィルス及びインフルエンザウィルスから選択される請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６５】  前記異種病原体が、はしかウィルスであり、そして前記異種抗原決定基が、はしかウィルスHA及びFタンパク質及びその抗原性ドメイン、フラグメント及びエピトープから選択される請求項64記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６６】  前記部分又は完全PIVベクターゲノム又はアンチゲノムが、キメラPIVゲノム又はアンチゲノムを形成するために、１又は複数の余分の異種遺伝子又はゲノムセグメントと組合される請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６７】  HPIV1 HN, HPIV2 HN及びはしかウィルスHA ORFの１種、２種又はすべてが前記ベクターゲノム又はアンチゲノムに付加される請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６８】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、ヒト−ウシキメラPIVゲノム又はアンチゲノムである請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６９】  前記ヒト−キメラベクターゲノム又はアンチゲノムが、はしかウィルス、サブグループA及びBのRSウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、ヒト乳頭腫ウィルス、タイプ１及び２ヒト免疫不全ウィルス、単純ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、狂犬病ウィルス、エプスタイン−バーウィルス、フィロウィルス、ブニアウィルス、フラビウィルス、アルファウィルス及びインフルエンザウィルスから選択された異種病原体の１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントと組合される請求項68記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７０】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、BPIVからの１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントと組合される部分又は完全HPIVゲノム又はアンチゲノムを含んで成る請求項69記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７１】  BPIV3 N ORFのオープンリーディングフレーム（ORF）を含んで成る転写単位が、HPIV3ベクターゲノムの対応するN ORFにより前記ベクターゲノム又はアンチゲノムにおいて置換される請求項70記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７２】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、余分の遺伝子挿入体として、はしかウィルスHA遺伝子と組合される請求項71記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７３】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、HPIVからの１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントにより組み合わされる部分又は完全BPIVゲノム又はアンチゲノムを含んで成る請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７４】  HN及び/又はF糖タンパク質をコードする１又は複数のHPIV遺伝子又はゲノムセグメント、又は１又は複数の免疫原ドメイン、そのフラグメント又はエピトープが、ベクターゲノム又はアンチゲノムを形成するために、部分又は完全ウシゲノム又はアンチゲノムに付加されるか又はそのアンチゲノム内に組み込まれる請求項73記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７５】  NH及びF糖タンパク質をコードする両HPIV3遺伝子が、ベクターゲノム又はアンチゲノムを形成するために、対応するBPIV3 HN及びF遺伝子により置換される請求項74記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７６】  前記ベクターゲノム又はアンチゲノムが、余分の遺伝子挿入体として、RSウィルス（RSV）F又はG遺伝子による組合される請求項75記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７７】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、ヒトPIV（HPIV）及び異種病原体の両者からの抗原性ドメイン、フラグメント又はエピトープを有するキメラ糖タンパク質をコードする請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７８】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、複数のHPIVからの抗原性ドメイン、フラグメント又はエピトープを有するキメラ糖タンパク質をコードする請求項77記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７９】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、生物学的に誘導された変異体PIV、又はセグメント化されていない陰性鎖変異体RNAウィルスにおいて同定される１又は複数の弱毒化突然変異の導入により修飾される請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８０】  前記キメラゲノム又はアンチゲノムが、PIV3 JScp45内に存在する少なくとも１つの及び十分な数までの弱毒化突然変異を組み込んでいる請求項60記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８１】  弱毒化された感染性キメラPIVをコードする１又は複数の単離されたポリヌクレオチド分子から前記PIVを生成するための方法であって、
キメラPIVゲノム又はアンチゲノム、及びPIV  N, P及びLタンパク質を形成するために、１又は複数の異種病原体の１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントにより組合されたヒト又はウシPIVの部分又は完全PIVベクターゲノム又はアンチゲノムを含んで成る単離されたポリヌクレオチドを含んで成る発現ベクターを、細胞又は細胞フリーの溶解物において発現することを含んで成る方法。
【請求項８２】  前記キメラPIVゲノム又はアンチゲノム、及びN, P及びLタンパク質が複数の異なった発現ベクターにより発現される請求項81記載の方法。
【請求項８３】  操作可能的に連結された転写プロモーター、キメラPIVゲノム又はアンチゲノムを形成するために、１又は複数の異種病原体の１又は複数の抗原決定基をコードする１又は複数の異種遺伝子又はゲノムセグメントにより組合されたヒト又はウシPIVの部分又は完全PIVベクターゲノム又はアンチゲノムを包含するポリヌクレオチド配列、及び転写ターミネーターを含んで成る発現ベクター。
【請求項８４】  主要ヌクレオキャプシド（N）タンパク質、ヌクレオキャプシドリンタンパク質（P）、大きなポリメラーゼタンパク質（L）、及びゲノム又はアンチゲノムの非コード領域（NCR）において、又は別の遺伝子単離（GU）として、長さ150個〜4,000個のヌクレオチド（nt）のポリヌクレオチド挿入体（前記ポリヌクレオチド挿入体は、完全なオープンリーディングフレーム（ORF）を欠いており、そして組換えPIVにおける弱毒化された表現型を特定する）を有するPIVゲノム又はアンチゲノムを含んで成る、単離された感染性組換えパラインフルエンザウィルス（PIV）。
【請求項８５】  前記組換えPIVがインビトロで効果的に複製し、そしてインビボで弱毒化された表現型を示す請求項84記載の組換えPIV。