【手続補正書】
【提出日】平成19年11月12日(2007.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体を用いることによって、電気泳動による分離時に該抗体を生体試料のグロブリンの泳動帯から外れた位置の帯域へ泳動させることを含み、前記抗体が所定の目的単クローン性蛋白質に対して抗原特異性を有すること、及び前記抗体がＥＤＣＩ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・ヒドロクロリド）の存在下において、(i)メリト酸または(ii)少なくとも１つのカルボン酸基を含む無水物、と反応させることによって得られることを含む方法。
【請求項２】
生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する請求項１による方法であって、以下の工程、即ち、
ａ）特定の抗原特異性を有し、生体試料中に存在する可能性のある単クローン性蛋白質と抗原−抗体型の複合体を形成することができる負に過剰に帯電した修飾抗体の存在下に、電気泳動によって生体試料の第１のアリコート部分の成分を分離し、分離した生体試料の成分を検出する工程と、
ｂ）工程ａ）で得られた電気泳動プロフィルと、所定の抗原特異性を有する上記負に過剰に帯電した修飾抗体の非存在下にキャピラリ電気泳動により分離した同じ試料からの別のアリコート部分の成分の電気泳動プロフィルとを比較する工程
を含む方法。
【請求項３】
請求項１または請求項２による方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体を用い、異なる抗原特異性を有する一連の抗体を形成し、生体試料の同一アリコート部分と接触させてキャピラリ電気泳動により試料の成分を分離する方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記一連の抗体において各タイプの抗体は免疫グロブリン・アイソタイプに対し所定の抗原特異性を有するものである方法。
【請求項５】
少なくとも２つのアリコート部分に分けた生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する、請求項２ないし請求項４のいずれか一項に記載の方法であって、電気泳動により生体試料の成分を分離する前に、以下の工程、即ち、
１）特定の抗原特異性を有する負に過剰に帯電した修飾抗体と、生体試料中に存在する該抗体により特異的に認識される目的単クローン性蛋白質との間の免疫反応を可能にするインキュベーション条件の下に、該抗体を含むメジウムと該生体試料の１つのアリコート部分とを接触させ、該生体試料の別のアリコート部分と、修飾抗体を含まない該メジウムとを接触させる工程と、
２）工程１）でインキュベートした生体試料の両アリコート部分を電気泳動キャピラリに注入する工程
を含む方法。
【請求項６】
生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する請求項１または請求項２による方法であって、電気泳動により生体試料の成分を分離する前に、以下の工程、即ち、
１）特定の抗原特異性を有する負に過剰に帯電した修飾抗体を含むメジウムを該電気泳動キャピラリに注入し、該修飾抗体を含まない該メジウムを別の電気泳動キャピラリに注入する工程と、
２）該抗体と生体試料中に存在する目的単クローン性蛋白質または蛋白質類との免疫反応を可能にする条件下で、工程１）によって処理された電気泳動キャピラリに生体試料を注入する工程
を含む方法。
【請求項７】
請求項１ないし６の何れか１項に記載の方法であって、一連の負に過剰に帯電した修飾抗体が所定の異なる特異性を有するｎ種のタイプの抗体を含む場合、生体試料を少なくともｎ＋１個のアリコート部分に分ける方法。
【請求項８】
請求項１ないし７の何れか１項に記載の方法であって、抗体が抗ＩｇＧ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＭ、抗カッパおよび抗ラムダ抗体から選ばれることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１ないし８の何れか１項に記載の方法であって、抗ＩｇＧ抗体、抗ＩｇＡ抗体、抗ＩｇＭ抗体、抗カッパ抗体、抗ラムダ抗体、抗遊離型カッパ抗体および抗遊離型ラムダ抗体を用いることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項１ないし９の何れか１項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が、生体試料中に存在する場合に認識する目的単クローン性蛋白質に対して過剰であることを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項１ないし１０の何れか１項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が無水１，２，４−ベンゼントリカルボン酸との反応生成物である方法。
【請求項１２】
請求項１ないし１１の何れか１項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が抗体と少なくとも１つのカルボン酸基を含む無水物との反応生成物であり、該反応が、無水物をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に即座に溶かし、溶かした無水物を抗体溶液と接触させて無水物と抗体とを反応させることを含み、該反応が、負電荷を抗体に付加することができる条件下に３７℃で行われる方法。
【請求項１３】
請求項１ないし１２の何れか１項に記載の方法であって、キャピラリ電気泳動はｐＨが９ないし１１の範囲にあるアルカリ性緩衝液中で行い、該緩衝液は緩衝剤と該分析用緩衝液のイオン強度を増大させることが可能な少なくとも１種の添加剤を含む方法。
【請求項１４】
請求項１ないし１３の何れか１項に記載の方法であって、生体試料が血漿、尿もしくは頭脊柱液の試料から選ばれる方法。
【請求項１５】
請求項１ないし１３の何れか１項に記載の方法であって、生体試料が血清試料である方法。
【請求項１６】
請求項１ないし１５の何れか１項に記載の方法によって生体試料の種々のアリコート部分をキャピラリ電気泳動を用いて分析することを含み、各アリコート部分を、修飾して負に過剰に帯電させた抗ＩｇＧ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＭ、抗カッパ、抗ラムダ、抗遊離型カッパおよび抗遊離型ラムダ免疫グロブリンからそれぞれ選ばれる抗体に接触させる、生体試料中のＭｃ蛋白質と呼ばれる単クローン性蛋白質を検査し、タイピングする方法。
【請求項１７】
生体試料中の単クローン性蛋白質（Ｍｃ蛋白質）を検査し、タイピングする方法であって、生体試料中のＭｃ蛋白質の有無を検出するために、生体試料からの蛋白質の電気泳動プロフィルにおいて該Ｍｃ蛋白質に相当するピークのイムノサブトラクションを行い、負に過剰に帯電した修飾抗体−Ｍｃ蛋白質複合体を生体試料のグロブリンの電気泳動プロフィルの帯域を超えて泳動させる方法であって、前記負に過剰に帯電した抗体はＥＤＣＩ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・ヒドロクロリド）の存在下において、(i)メリト酸または(ii)少なくとも１つのカルボン酸基を含む無水物、と反応させることによって得られるものである方法。
【請求項１８】
以下の工程、即ち、
少なくとも１つのカルボン酸基を含む無水物を即座にジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解させる工程と、
該無水物と抗体を反応させてアルカリ性ｐＨで負に過剰に帯電した修飾抗体を得ることができる条件下で、該溶解させた無水物に該抗体を接触させる工程
を含む、負に過剰に帯電した修飾抗体を調製する方法。
【請求項１９】
請求項１８に記載の方法であって、無水物がベンゼントリカルボン酸無水物である方法。
【請求項２０】
請求項１８または請求項１９に記載の方法であって、無水物をＤＭＦの純品に即座に溶解させる方法。
【請求項２１】
抗体に酸性官能基が付加されることにより、同一のキャピラリ電気泳動分離条件下で分離されるタイプＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＤ免疫グロブリンの泳動プロフィルの帯域を超えて電気泳動する能力が抗体に付与されていることを特徴とする、負に過剰に帯電した修飾抗体であって、前記抗体に酸性官能基が付加されることは、該抗体をＥＤＣＩ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・ヒドロクロリド）の存在下において(i)メリト酸または(ii)少なくとも１つのカルボン酸基を含む無水物、と反応させることで付加される抗体。
【請求項２２】
請求項１８ないし２０の何れか１項に記載の方法を実施することにより得られる、請求項２１に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体。
【請求項２３】
抗ＩｇＧ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＭ、抗カッパ、抗ラムダ、抗遊離型カッパおよび抗遊離型ラムダ免疫グロブリンから選ばれる、請求項２１または請求項２２に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体。
【請求項２４】
上記負に過剰に帯電した修飾抗ＩｇＧ、抗ＩｇＡ、抗ＩｇＭ、抗カッパおよび抗ラムダ抗体を含む５価抗血清として、または上記負に過剰に帯電した修飾抗ＩｇＧ、抗ＩｇＡおよび抗ＩｇＭ抗体を含む３価抗血清として混合されている、請求項２１または請求項２２に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体。
【請求項２５】
請求項２１ないし２４の何れか１項に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体であって、ポリクロナール抗体であることを特徴とする修飾抗体。
【請求項２６】
請求項２１ないし２５の何れか１項に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体と、適切な希釈液を含む、生体試料中の単クローン性蛋白質を検出しタイピングするためのキット。
【請求項２７】
キャピラリ電気泳動および免疫転位により生体試料中に存在する単クローン性蛋白質を検出するための、請求項２１ないし２５の何れか１項に記載の抗体の使用。
【請求項２８】
生体試料中に存在する単クローン性蛋白質をタイピングするための、請求項２１ないし２５の何れか１項による抗体の使用。