【手続補正書】
【提出日】平成20年6月12日(2008.6.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
すなわち、本発明は、
（１）ルビスコ大サブユニットとアセチルＣｏＡカルボキシラーゼのサブユニット遺伝子の間にＦＢＰａｓｅ活性及び／又はＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むＤＮＡフラグメントを含んだ光合成活性を高める発現カセットを有する遺伝子組み換えベクター、
（２）ＦＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質が、次のいずれかである上記（１）に記載のベクター；
（ａ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質；
（ｂ）配列表の配列番号１において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質；又は
（ｃ）配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％以上の相同性を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質、
（３）ＦＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子が、次のいずれかのＤＮＡからなる遺伝子である、上記（１）に記載のベクター；
（ａ）配列表の配列番号２に記載の塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列表の配列番号２において、１又は数個の塩基が欠失、置換、付加もしくは挿入された塩基配列を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ；又は
（ｃ）配列表の配列番号２に記載の塩基配列からなるＤＮＡと相補的な塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＦＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする塩基配列からなるＤＮＡ；又は
（ｄ）配列表の配列番号２に記載の塩基配列からなるＤＮＡと少なくとも６０％以上の相同性を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする塩基配列からなるＤＮＡ、
（４）ＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質が、次のいずれかである上記（１）に記載のベクター；
（ａ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質；
（ｂ）配列表の配列番号３において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列を有し、かつＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質；又は
（ｃ）配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％以上の相同性を有し、かつＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質、
（５）ＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子が、次のいずれかのＤＮＡからなる遺伝子である、上記（１）に記載のベクター；
（ａ）配列表の配列番号４に記載の塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列表の配列番号４において、１又は数個の塩基が欠失、置換、付加もしくは挿入された塩基配列を有し、かつＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ；
（ｃ）配列表の配列番号４に記載の塩基配列からなるＤＮＡと相補的な塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする塩基配列からなるＤＮＡ；又は
（ｄ）配列表の配列番号４に記載の塩基配列からなるＤＮＡと少なくとも６０％以上の相同性を有し、かつＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする塩基配列からなるＤＮＡ、
（６）ＦＢＰａｓｅ活性及びＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質が、次のいずれかである上記（１）に記載のベクター；
（ａ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列からなるタンパク質；
（ｂ）配列表の配列番号５において、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、付加もしくは挿入されたアミノ酸配列を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性及びＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質；又は
（ｃ）配列表の配列番号５に記載のアミノ酸配列と少なくとも６０％以上の相同性を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性及びＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質、
（７）ＦＢＰａｓｅ活性及びＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子が、次のいずれかのＤＮＡからなる遺伝子である、上記（１）に記載のベクター；
（ａ）配列表の配列番号６に記載の塩基配列からなるＤＮＡ；
（ｂ）配列表の配列番号６において、１又は数個の塩基が欠失、置換、付加もしくは挿入された塩基配列を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性及びＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ；
（ｃ）配列表の配列番号６に記載の塩基配列からなるＤＮＡと相補的な塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつＦＢＰａｓｅ活性及びＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする塩基配列からなるＤＮＡ；又は
（ｄ）配列表の配列番号６に記載の塩基配列からなるＤＮＡと少なくとも６０％以上の相同性を有し、かつＦＢＰａｓｅ活性及びＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする塩基配列からなるＤＮＡ、
（８）発現カセットが、ＦＢＰａｓｅ活性及び／又はＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むＤＮＡフラグメントの翻訳開始点の上流にリボゾーム結合部位を有することを特徴とする上記（１）〜（７）のいずれかに記載のベクター、
（９）発現カセットが、リボゾーム結合部位の上流にプロモーター、及びＦＢＰａｓｅ活性及び／又はＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むＤＮＡフラグメントの下流にターミネーターを有することを特徴とする上記（８）に記載のベクター、
（１０）  プロモーター及びターミネーターがそれぞれタバコ葉緑体由来のプロモーター及びターミネーターであることを特徴とする上記（９）に記載のベクター、
（１１）ルビスコ大サブユニット遺伝子とアセチルＣｏＡカルボキシラーゼのサブユニット遺伝子がそれぞれタバコ由来の遺伝子である上記（１）〜（１０）のいずれかに記載のベクター、
（１２）タバコ由来のルビスコ大サブユニット遺伝子とアセチルＣｏＡカルボキシラーゼのサブユニット遺伝子の間に、ＦＢＰａｓｅ活性及び／又はＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を含むＤＮＡフラグメントを有し、上記ＤＮＡフラグメントの翻訳開始点の上流にリボゾーム結合部位を有し、さらに、上記ルビスコ大サブユニット遺伝子とリボゾーム結合部位の間にタバコ由来のプロモーターを有し、そして上記アセチルＣｏＡカルボキシラーゼのサブユニット遺伝子とＤＮＡフラグメントの間にタバコ由来のターミネーターを有する発現カセットを有する遺伝子組み換えベクター、
（１３）上記（１）〜（１２）のいずれかに記載のベクターを葉緑体に導入した形質転換葉緑体、
（１４）上記（１３）に記載の形質転換葉緑体を有する植物、
（１５）植物がタバコである上記（１４）に記載の植物、及び
（１６）葉緑体形質転換の手法を用いて、高等植物の葉緑体ゲノムにＦＢＰ／ＳＢＰ遺伝子を導入、発現させることにより、ＦＢＰａｓｅ活性を元の植物の２倍以上に高めた植物、
に関する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
まず、ｐＬＤ６ベクターを作製する工程である。かかるベクターは、実施例の〔工程１〕に記載の方法で容易に作製することができる。ｐＬＤ６の全塩基配列を配列番号１０に示す。ｐＬＤ６のＮｏｔＩとＳａｌＩの切断部位に構築遺伝子群を挿入する。構築遺伝子群は、（ａ）配列番号１１で表される塩基配列からなるマルチクローニング領域（配列番号１０中の３６９８−３７４８に位置する）と、その上流に配列番号７で表されるタバコ葉緑体由来のｐｓｂＡプロモーター（配列番号１０中の３５６９−３７０１に位置する）と、マルチクローニング領域の下流に配列番号８で表されるタバコ葉緑体由来のｒｐｓ１６ターミネーター（配列番号１０中の３７５５−３９１３に位置する）とからなる群と、その群の上流に（ｂ）遺伝子組換え体を識別するための遺伝子としての配列番号９で表されるスペクチノマイシン耐性遺伝子であるａａｄＡ遺伝子（配列番号１０中の２３６９−３１７３に位置する）と、ａａｄＡ遺伝子の上流に配列番号１２で表されるタバコ葉緑体由来のｒｒｎプロモーター（配列番号１０中の２２２７−２３６８に位置する）と、ａａｄＡ遺伝子の下流に配列番号１３で表されるタバコ葉緑体由来のｐｓｂＡターミネーター（配列番号１０中の３１７５−３５６４に位置する）とを有している。上記マルチクローニング領域の制限酵素認識部位（ＢｇｌＩＩ、ＳｐｈＩ、ＣｌａＩ及びＥｃｏＲＩ）に、ＦＢＰａｓｅ活性及び／又はＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子を挿入する。より具体的には、ｐＬＤ６ベクターのマルチクローニング領域のＳｐｈＩとＥｃｏＲＩの切断部位に、例えば配列番号２で示されるホウレンソウ由来のＦＢＰａｓｅをコードする遺伝子又は配列番号４で示されるホウレンソウ由来のＳＢＰａｓｅをコードする遺伝子、あるいはラン藻由来の配列番号６で示されるＦＢＰ／ＳＢＰａｓｅをコードする遺伝子等を挿入する。この場合、配列番号の第１３〜１７位の塩基配列（５’−ａｇｇａｇ−３’）がＳＤ配列に相当し、リボソーム結合部位として働く。以下、ＦＢＰａｓｅ活性及び／又はＳＢＰａｓｅ活性を有するタンパク質をコードする遺伝子が挿入された構築遺伝子群をＦＢＰ／ＳＢＰ遺伝子群と称し、該遺伝子群が挿入されたｐＬＤ６ベクターをｐＬＤ６−ＦＢＰ／ＳＢＰと称する。