【誤訳訂正書】
【提出日】平成20年1月4日(2008.1.4)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
小分子有機塩素系農薬に対して結合する卵黄抗体を生産するための方法であって、当該方法は：
（ａ）適切な家禽鳥類を選択し；
（ｂ）前記家禽鳥類を既知の完全アジュバントで免疫し、当該アジュバントの各１ｍｌが、熱殺菌し且つ乾燥させたマイコバクテリウム・チュベルクロ（登録商標）シス（Mycobacterium tuberculosis）（Ｈ３７Ｒａ、ＡＴＣＣ２５１７７）１ｍｇ、０．８５ｍｌのパラフィン及び０．１５ｍｌのマンニドモノオレエートを含んで成り；
（ｃ）前記鳥類を胸部筋肉において、ＤＤＴ−ＯＨハプテン、オクタクロロサイクリックハプテン、及び２，４，５トリクロロフォキシ酢酸βアラニンハプテンから選択されたハプテンを含有するハプテン−タンパク質接合体１０００μｇで免疫し；
（ｄ）前記鳥類を再度、段階（ｃ）で示したハプテン−タンパク質接合体、５００μｇの所望のハプテン−タンパク質接合体で免疫し；
（ｅ）前記鳥類をハプテン−タンパク質接合体で２、３及び５週の間隔にて免疫し；
（ｆ）この後、前記鳥類を当該鳥類が卵を産む限り５週間隔にてハプテン−タンパク質接合体で免疫せしめ；
（ｇ）前記鳥類の卵黄から抗体を収穫する、
段階を含んで成る方法。
【請求項２】
前記所望のハプテン−タンパク質接合体が、ＤＤＴ、エンドスルファン及びヘキサクロロへキサンに対する結合特性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１の段階（ｃ）において使用されている、ＤＤＴに対してＤＤＴ−ＯＨハプテンが結合してなるハプテン−タンパク質接合体が：
（ａ）２，２−ビス（４−クロロフェニル）−１，１，１−トリクロロエタノールを一晩、ピリジン中で過剰の無水コハク酸を使用しスクシニル化してＮ−ヒドロキシスクシンイミドを獲得し；
（ｂ）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド１８３．５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌをジクロロメタン中、ジシクロヘキシルウレアとジメチルアミノピリジン触媒の存在下１：１：１：１．２（ハプテン：ＮＨＳ：ＤＣＣ：ＤＭＡＰ）の比で反応せしめ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド活性エステルへと転換させ；そして
（ｃ）ジシクロへキシルウレアを単離してジクロロメタンを蒸発せしめることによって、接合において使用するためのＤＤＴ−ＯＨハプテンの活性エステルを獲得する
ことにより生産される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
請求項１の段階（ｃ）において使用されている、エンドスルファンに対してオクタクロロサイクリックハプテンが結合してなるハプテン−タンパク質接合体が：
（ａ）３．７３ｇのヘプタクロルを０．１ｍｏｌの氷酢酸中、加温することによって溶かし；
（ｂ）１．０８５ｇの次亜塩素酸Ｔｅｒｔ−ブチルを０．１ｍｍｏｌの氷酢酸中に溶かし、そして段階（ａ）で獲得した第一溶液に加え；
（ｃ）この混合物を水浴中１時間に渡り還流せしめ；
（ｄ）ヘプタクロルのアセチルクロロ誘導体の微細結晶を分離し；
（ｅ）前記結晶をアセトンで洗浄して空気で乾燥させ；
（ｆ）結晶生成物を、３．０２ｇの収量、融点２３８℃で獲得し；
（ｇ）前記結晶生成物を処理しプレハプテン１，３，４，５，６，７，８，８−オクタクロロ−２−ヒドロキシ−４，７−メタノ−３ａ、及び４，７，７ａ−テトラヒドロインダンを獲得し；
（ｈ）前記プレハプテンをジクロロメタン中、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加えることによって溶かしてこの混合物を０℃に冷却し；
（ｉ）ジシクロへキシルカルボジイミド、その後ジメチルアミノピリジンを加え；
（ｊ）この混合物を一晩撹拌し；そして
（ｋ）ジクロロメタンをろ過してジクロロメタンを蒸発せしめエンドスルファンの活性エステルを獲得する
ことにより生産される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
請求項１の段階（ｃ）において使用されている、ヘキサクロロへキサンに対して２，４，５−トリクロロフェノキシ酢酸β−アラニン（ＴＣＢ）ハプテンが結合してなるハプテン−タンパク質接合体が：
（ａ）５．９５ｍｌの塩化チオニル（９５０ｍｍｏｌ）中、１０ｍＭ、２．５５ｇの２，４，５トリクロロフェノキシ酢酸を懸濁することによってβ−アラニンスペーサーアームを２，４，５トリクロロフェノキシ酢酸に対して加え；
（ｂ）１時間に渡り還流し、そして反応しなかった塩化チオニルを蒸発によって除去し；
（ｃ）この生成物をβ−アラニン（９ｍｍｏｌ、７．４ｍｌの１ＭのＮａＯＨ中０．６６ｇ）と０℃で撹拌し；
（ｄ）前記生成物を１６時間超に渡り室温で加温し；
（ｅ）生成される酸を酸性化することによって単離し；
（ｆ）酢酸エチル中へと分配し；
（ｇ）水と塩水で洗浄し；
（ｈ）２，４，５−トリクロロフェノキシ酢酸（２，４，５−Ｔ）を不純物として含有する粗製生成物ハプテンをある収量で得て；
（ｉ）前記不純物をアセトン中に溶かしトリクロロベンゼン（ＴＣＢ）ハプテンの無色のフレークを獲得し；
（ｊ）前記無色ＴＣＢハプテンをろ過してアセトンで洗浄して空気中で乾燥させ；
（ｋ）シリカゲルで予め被覆されたアルミニウムプレート及び溶離液としてクロロホルムとメタノール８５：１５の混合物を使用し、アセトン中２％のｏ−トルイジンを噴霧してＵＶ光線／日光へ露らすことによって検出されたＴＬＣ分析におけるＲｆ値０．４５の単一のスポットが、融点１６９〜１７０℃の融解範囲にて示され；
（ｌ）融解範囲１０２〜１０４℃におけるハプテン２，４，５−Ｔ−βアラニンの活性エステルを、ジクロロメタン中に溶かすことによって合成し；
（ｍ）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを加えてこの混合物を氷浴中で冷却し；
（ｎ）ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を前記混合物に対しハプテンが溶ける迄滴下し；
（ｏ）ジシクロへキシルカルボジイミドを前記混合物に対して加え、しかる後にジメチルアミノピリジン触媒を加え；
（ｐ）前記混合物を一晩撹拌して温度を室温へと徐々に高め；
（ｑ）ろ過してアセトンを蒸発せしめ；そして
（ｒ）活性エステルを無色固体として分離する
ことにより生産される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１の段階（ｇ）に記載の抗体が：
（ａ）卵黄（yolk）を破裂せずに卵黄（eggyolk）を獲得し；
（ｂ）１００ｍｌのトリス緩衝液塩類溶液を卵黄１０ｍｌごとに加え；
（ｃ）遠心によって沈殿物を除去し；
（ｄ）上清に対して、塩化マグネシウムとリンタングステン酸の沈殿化溶液を遠心のために加え；
（ｅ）ペレットを捨て；
（ｆ）前記上清水溶性タンパク質画分に対して１２％ポリエチレングリコールを加え；
（ｇ）１０分に渡りインキュベートして再度遠心し；
（ｈ）抗体を沈殿させ；
（ｉ）沈殿を溶かすために１０ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝液を加え；
（ｊ）抗体溶液を０℃に冷却し；
（ｋ）１０ｍｌの予め冷却しておいたエタノールを加え；
（ｌ）溶液を４℃で遠心して沈殿物を１０ｍＭのリン酸緩衝液中に溶かし；そして
（ｍ）リン酸緩衝液に対する透析を４℃で２４時間に渡り行い抗体の産物を獲得する
ことにより収穫される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
請求項１の段階（ｇ）に記載の抗体が：
（ａ）卵黄を、卵黄膜を破裂させることなく卵殻から獲得し；
（ｂ）各１０ｍｌの卵黄ごとに、１０ｍｌの蒸留水を加え；
（ｃ）０．１５％のκカラーギナンを加えて３０分に渡り室温で撹拌し；
（ｄ）この溶液をろ過して１５分に渡り遠心し；
（ｅ）２０ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ８．０により調製したＤＥＡＥ−セファセルカラムを通過させ；
（ｆ）０．２Ｍのリン酸緩衝液ｐＨ８．０で溶出せしめ；
（ｇ）溶出物を回収して２８０ｎｍでの吸光度を読み；そして
（ｈ）抗体を含有するピーク画分をプールして４℃で保存する
ことにより収穫される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
卵黄から脂質が、リンタングステン酸と塩化マグネシウムの沈殿化溶液を使用することで２度沈殿され、そして遠心され、上清から抗体を最大７５％の収率で獲得する、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
脂質の除去後に獲得された水溶性タンパク質画分のｐＨは、抗体を更に沈殿させ、８０〜９０％の収率で獲得するために、ｐＨ５．０に調整されている、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
抗体の収率が最大７３％である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
超免疫卵(hyper immune egg)が毎日回収され、そして更なる使用迄４０℃で保存されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体の生産が免疫化後、第７日目に始まり、そして６０日に渡り続く、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
生産された抗体の力価が１６５〜２２５ｍｇ／ｍｌである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記卵黄抗体は、ホニュウ動物を使用して生産されたポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体のどちらとも同じか或いはそれ以上に感受性である、請求項１に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
本発明の更なる他の実施態様は、抗体の収率が最大７３％である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
実施例
実施例−１
卵黄を卵殻から慎重に卵膜を破裂させることなく取り出した。前記膜に対して接着していたアルブミンを全体的に洗い流した。そして卵黄膜を破裂せしめ、そして漏斗を介して測定用シリンダーへと移した。卵黄各１０ｍｌに対して、トリス塩類緩衝溶液を１００ｍｌ加えた。形成された沈殿を遠心によって除去した。この上清に対して、塩化マグネシウムとリンタングステン酸の沈殿化溶液を加えて再度遠心した。ペレットを捨て、そしてこの上清、いわゆる水溶性タンパク質画分に対して１２％ポリエチレングリコールを加え、そして１０分に渡りインキュベートして遠心した。抗体が沈殿する。１０ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝液を加えて沈殿を溶かした。次いで、この抗体溶液を０℃に冷却して１０ｍｌの予め冷却しておいたエタノールを加えた。この溶液を４℃で遠心して、沈殿物を１０ｍＭのリン酸緩衝液中に溶かしてリン酸緩衝液中４℃で２４時間に渡り透析した。収率６０％。