【手続補正書】
【提出日】平成31年3月15日(2019.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２２】
本研究におけるTMT(登録商標)キャリブレーター分析の適用の成功により、活性化ミクログリアに由来し、CSF中に循環している可能性が高く、かつ非AD対象と比較してAD患者で示差発現されている新規の潜在的バイオマーカー候補のリストが提供された。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
マーカー:
i)配列番号1のアミノ酸配列を含むか又は該アミノ酸配列を有するホスホグルコムターゼ1又はそのアイソフォームもしくは変異体もしくは断片;
及び/或いは
ii)配列番号2のアミノ酸配列を含むか又は該アミノ酸配列を有するチモシンβ-4又はその変異体もしくは断片
を含むバイオマーカーパネル。
（構成２）
前記パネルが、配列番号4のアミノ酸配列を含むか又は該アミノ酸配列を有するユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼL1又はそのアイソフォームもしくは変異体もしくは断片をさらに含む、構成1記載のバイオマーカーパネル。
（構成３）
前記パネルが、配列番号5のアミノ酸配列を含むか又は該アミノ酸配列を有するビタミンD結合タンパク質又はそのアイソフォームもしくは変異体もしくは断片をさらに含む、構成1又は構成2のいずれか一項記載のバイオマーカーパネル。
（構成４）
前記パネルが、補体及び凝固カスケード、解糖/グリコーゲン合成、プリオン病、アミノ及びヌクレオチド糖代謝、抗原プロセシング及び提示、細胞外マトリックス-受容体相互作用、焦点接着、アクチン細胞骨格の調節、又はアラニン/アスパラギン酸/グルタミン酸代謝の群から選択されるKEGG経路に関与するタンパク質から選択される1以上のバイオマーカーをさらに含む、構成1〜3のいずれか一項記載のバイオマーカーパネル。
（構成５）
前記パネルが、表1、2、3、4、5、6、7、8、もしくは9のいずれか1つから選択される少なくとも1つ、任意に、2つもしくはそれより多くのバイオマーカー又はそれらの断片をさらに含む、構成1〜4のいずれか一項記載のバイオマーカーパネル。
（構成６）
前記パネルが、ダイナクチンサブユニット1、コフィリン-1、ペルオキシレドキシン-1、MARCKS関連タンパク質、モエシン、アクチン、タンパク質TMSB4XP4、ApoE、ゲルゾリン、セクレトグラニン、アルブミン、及び補体タンパク質の群から選択される少なくとも2つ又はそれより多く、任意に、少なくとも3つ又はそれより多くのバイオマーカーをさらに含む、構成1〜4のいずれか一項記載のバイオマーカーパネル。
（構成７）
対象の神経認知障害を診断する方法であって:
a)該対象から得られた試料を構成1〜6のいずれか一項記載のバイオマーカーパネルのバイオマーカーについてアッセイすること;
b)該試料中で該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の濃度又は量を測定すること;
c)該試料中の該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の該濃度又は量を該バイオマーカーの参照濃度又は量と比較することにより、その対象が神経認知障害を有するかどうかを決定すること
を含む、前記方法。
（構成８）
対象の神経認知障害の病期を判定する方法であって:
a)該対象から得られた試料を構成1〜6のいずれか一項記載のバイオマーカーパネルのバイオマーカーについてアッセイすること;
b)該試料中で該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の濃度又は量を測定すること;
c)該試料中の該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の該濃度又は量を該バイオマーカーの参照濃度又は量と比較することにより、該対象の神経認知障害の病期を決定すること
を含む、前記方法。
（構成９）
神経認知障害を発症する可能性を対象で評価する方法であって:
a)該対象から得られた試料を構成1〜6のいずれか一項記載のバイオマーカーパネルのバイオマーカーについてアッセイすること;
b)該試料中で該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の濃度又は量を測定すること;
c)該試料中の該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の該濃度又は量を該バイオマーカーの参照濃度又は量と比較することにより、その対象が神経認知障害を発症する可能性があるかどうかを決定すること
を含む、前記方法。
（構成１０）
前記神経認知障害がミクログリア活性化を特徴とする、構成7〜9のいずれか一項記載の方法。
（構成１１）
前記神経認知障害が、軽度認知障害、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、又はこれらの組合せの群から選択される、構成7〜10のいずれか一項記載の方法。
（構成１２）
前記神経認知障害がアルツハイマー病である、構成11記載の方法。
（構成１３）
対象のアルツハイマー病を治療する方法であって:
a)該対象から得られた試料を構成1〜6のいずれか一項記載のバイオマーカーパネルのバイオマーカーについてアッセイすること;
b)該試料中で該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の濃度又は量を測定すること;
c)該試料中の該バイオマーカーの各々の該濃度又は量を該バイオマーカーの参照濃度又は量と比較することにより、その対象がアルツハイマー病を有するかどうかを決定すること;
d)該対象にメマンチン(例えば、Namenda(登録商標))、ガランタミン(例えば、Razadyne(登録商標))、リバスチグミン(例えば、Exelon(登録商標))、ドネペジル(例えば、Aricept(登録商標))、ソラネズマブ、5HT5アンタゴニスト、又はこれらの組合せの群から選択されるアルツハイマー病治療を施すこと
を含む、前記方法。
（構成１４）
対象のアルツハイマー病の治療の予後判定を助ける方法であって:
a)該対象から得られた試料を構成1〜6のいずれか一項記載のバイオマーカーパネルのバイオマーカーについてアッセイすること;
b)該試料中で該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々の濃度又は量を測定すること;
c)該試料中の該バイオマーカーの各々の該濃度又は量を該バイオマーカーの参照濃度又は量と比較することにより、該アルツハイマー病の治療が成功しているかどうかを決定すること
を含む、前記方法。
（構成１５）
前記アルツハイマー病の治療が、メマンチン(例えば、Namenda(登録商標))、ガランタミン(例えば、Razadyne(登録商標))、リバスチグミン(例えば、Exelon(登録商標))、ドネペジル(例えば、Aricept(登録商標))、ソラネズマブ、5HT5アンタゴニスト、又はこれらの組合せの群から選択される、構成14記載の方法。
（構成１６）
前記試料が、脳脊髄液(CSF)、血液、血漿、血清、唾液、尿、組織(例えば、脳組織)、又はこれらの組合せの群から選択される、構成7〜15のいずれか一項記載の方法。
（構成１７）
前記試料がCSFである、構成7〜16のいずれか一項記載の方法。
（構成１８）
前記対象がヒト対象である、構成7〜17のいずれか一項記載の方法。
（構成１９）
前記対象が以前に軽度認知障害と診断されたヒト対象である、構成18記載の方法。
（構成２０）
前記対象が認知症のさらなる臨床評価を受けているヒト対象である、構成18又は19のいずれか一項記載の方法。
（構成２１）
アッセイする工程a)及び/又は測定する工程b)が:
i)前記試料を前記バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々に対する1以上の結合剤と接触させること;又は
ii)該試料中で該バイオマーカーの各々に特異的な自己抗体を検出すること;又は
iii)任意に、該試料を1以上のアイソバリックな反応性質量標識で事前に標識することにより、該試料中で、質量分析により、該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々を検出すること;又は
iv)該試料中で、2Dゲル電気泳動により、該バイオマーカーパネルのバイオマーカーの各々を検出すること;又は
v) i)、ii)、iii)、もしくはiv)のいずれかの組合せ
を含む、構成7〜20のいずれか一項記載の方法。
（構成２２）
工程a)のアッセイすること及び/又は工程b)の測定することが、前記バイオマーカーパネル中のバイオマーカーの1以上の断片を検出することを含む、構成21記載の方法。
（構成２３）
前記試料が固体支持体上に固定化されている、構成21又は構成22記載の方法。
（構成２４）
対象から得られた試料中のバイオマーカーを同定する方法であって、該バイオマーカーがアルツハイマー病の診断又は病期判定に好適であり、ここで、該方法が、活性化ミクログリア細胞(例えば、BV2細胞)及び/もしくはその培養培地を質量分析で使用することを含み、並びに/又は該バイオマーカーが、活性化ミクログリア細胞を参照として使用することにより、該試料中で同定される、前記方法。
（構成２５）
前記バイオマーカーパネルが構成1〜6のいずれか一項記載のバイオマーカーを含む、構成24記載の方法。
（構成２６）
該試料が、CSF、血液、血清、又は血漿の群から選択される、構成24又は25のいずれか一項記載の方法。
（構成２７）
構成1〜6のいずれか一項記載のバイオマーカーパネルのバイオマーカーを試料中でアッセイ及び/又は測定するための試薬を含むキット。
（構成２８）
前記試薬が、前記バイオマーカーパネルのバイオマーカーに特異的に結合する1以上の結合剤を含む、構成27記載のキット。
（構成２９）
前記1以上の結合剤が一次抗体であり、ここで、各々の一次抗体が前記バイオマーカーパネルの異なるバイオマーカーに特異的に結合する、構成28記載のキット。
（構成３０）
前記試薬が、前記一次抗体に特異的に結合する1以上の二次抗体をさらに含む、構成29記載のキット。
（構成３１）
前記二次抗体が標識されている、構成30記載のキット。
（構成３２）
該試料が、脳脊髄液(CSF)、血液、血漿、血清、唾液、尿、組織(例えば、脳組織)、又はこれらの組合せの群から選択される、構成27〜31のいずれか一項記載のキット。