【手続補正書】
【提出日】令和1年11月7日(2019.11.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２８】
Ｒ１．感染性および非感染性ジカウイルス粒子、宿主細胞タンパク質および／または不確定の低分子量物質を分離するための、プロタミン、好ましくはプロタミン塩の使用。
Ｒ２．感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスであって、
（ａ）ジカウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、不純物が細胞基材上の前記ウイルス粒子の増殖から生成するステップ；
（ｂ）プロタミン、好ましくはプロタミン塩、より好ましくは硫酸プロタミン、さらにより好ましくは組換え硫酸プロタミンを含む試薬を用いて沈殿させることにより、粗ハーベスト（ａ）から不純物を低減させて、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップであって、ウイルス調製物（ｂ）中の感染性ウイルス粒子の濃縮が、粗ハーベスト（ａ）中の合計ウイルス生成物を基準にして、少なくとも５０％〜９５％の範囲、好ましくは少なくとも８０％であるステップを含むプロセス。
Ｒ３．Ｒ１に記載の使用またはＲ２に記載のプロセスであって、ウイルス粒子がジカウイルス由来である使用またはプロセス。
Ｒ４．感染性ジカウイルス粒子の精製プロセスであって、
（ａ）ジカウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）を用意するステップであって、不純物が細胞基材上の前記ウイルス粒子の増殖から生成するステップ；
（ｂ）プロタミン、好ましくはプロタミン塩、より好ましくは硫酸プロタミン、さらにより好ましくは組換え硫酸プロタミンを含む試薬を用いて沈殿させることにより、粗ハーベスト（ａ）から不純物を低減させて、ウイルス調製物（ｂ）を得るステップ；
（ｃ）（ｉ）ショ糖密度勾配遠心分離、（ｉｉ）カラム中に充填されたリガンド活性化コアおよび細孔を含む不活性シェルを含む固相マトリックスであって、細孔の分画分子量によりウイルス粒子がリガンド活性化コア中に入るのが排除され、細孔の分画分子量より小さい分子がリガンド活性化コア中に入ることができ、その結果、ウイルス粒子が収集される固相マトリックス、および／または（ｉｉｉ）感染性ウイルス粒子を含むウイルス調製物（ｃ）を得るためのサイズ排除クロマトグラフィーであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡが１００ｎｇ／ｍＬ未満であり、残留宿主細胞タンパク質および最終ウイルス調製物（ｃ）の残留感染性ウイルス粒子凝集体が１μｇ／ｍＬ未満であるサイズ排除クロマトグラフィーなどの１種または複数のサイズ排除方法により、ウイルス調製物（ｂ）をさらに精製するステップ、を含むプロセス。
Ｒ５．Ｒ４に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞ＤＮＡが、１０ｎｇ／ｍＬ未満であり、最終ウイルス調製物（ｃ）の残留宿主細胞タンパク質が１００ｎｇ／ｍＬ未満であるプロセス。
Ｒ６．Ｒ２〜Ｒ５のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス粒子および不純物を含む粗ハーベスト（ａ）が、ステップ（ｂ）の前に、１つまたは複数の予備精製ステップに供されるプロセス。
Ｒ７．Ｒ６に記載のプロセスであって、１つまたは複数の予備精製ステップが、
（ａ）細孔径が０．２μｍ以下のフィルターを使った濾過；および／または
（ｂ）酵素処理による宿主細胞ゲノムＤＮＡの消化；および／または
（ｃ）細孔径が３００ｋＤａ以上、好ましくは１００ｋＤａ以上の細孔径を有する中空繊維膜を用いた限外濾過／透析濾過、を含むプロセス。
Ｒ８．Ｒ２〜Ｒ７のいずれか１項に記載のプロセスであって、硫酸プロタミンの濃度が、０．５〜３ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１〜２ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．２〜１．８ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１．４〜１．６ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１．６ｍｇ／ｍｌであるプロセス。
Ｒ９．Ｒ２〜Ｒ８のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）中の、またはいずれかの最終ウイルス調製物中の感染性ウイルス粒子の濃縮が、粗ハーベスト（ａ）中の合計ウイルス生成物に対して、少なくとも５０％〜９５％の範囲、好ましくは少なくとも８０％であるプロセス。
Ｒ１０．Ｒ６〜Ｒ９のいずれか１項に記載のプロセスであって、Ｒ６〜Ｒ９のいずれか１項のステップ（ｂ）の前の１つまたは複数の予備精製ステップが、１μｍ以下、好ましくは０．２μｍの細孔径を有するフィルターを使って実施されるプロセス。
Ｒ１１．Ｒ２〜Ｒ１０のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルス調製物（ｃ）の残留不純物が、１０％未満であるプロセス。
Ｒ１２．Ｒ２〜Ｒ１１のいずれか１項に記載のプロセスであって、ウイルスが、ＥＢ６６細胞株、ベロ細胞株、ベロ−αＨｉｓ細胞株、ヒーラ細胞株、ヒーラ−Ｓ３細胞株、２９３細胞株、ＰＣ１２細胞株、ＣＨＯ細胞株、３Ｔ３細胞株、ＰｅｒＣ６細胞株、ＭＤＳＫ細胞株、ニワトリ胎仔線維芽細胞株、アヒル細胞株、および二倍体鳥類細胞株、からなる群より選択される細胞株中で増殖するプロセス。
Ｒ１３．Ｒ１２に記載のプロセスであって、前記細胞株が、ベロ細胞株であるプロセス。
Ｒ１４．Ｒ２〜Ｒ１３のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルスが、生ウイルス、減弱生ウイルス、キメラウイルス、改変生ウイルスまたは組換え生ウイルスであるプロセス。
Ｒ１５．Ｒ２〜Ｒ１４のいずれか１項に記載のプロセスであって、ジカウイルスが、アジア系統の株またはその免疫原性バリアントであるプロセス。
Ｒ１６．Ｒ２〜Ｒ１５のいずれか１項に記載のプロセスであって、最終ウイルス調製物（ｃ）を生じる前記プロセスが、不活化ステップの前に行われ、ウイルスが好ましくはホルムアルデヒドにより不活化されるプロセス。
Ｒ１７．ウイルス感染に対する免疫化のための組成物の製造のためのＲ１〜Ｒ１６のいずれか１項に記載のプロセスの使用。
Ｒ１８．Ｒ１７に記載の使用であって、ウイルス感染に対する免疫化のための組成物が、ジカウイルスに起因する感染である使用。
Ｒ１９．Ｒ２〜Ｒ１６のいずれか１項に記載のプロセスにより得ることができるまたは得られたウイルス粒子を含む、感染を処置および／または予防するための組成物。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
不活化ジカウイルス粒子を含むウイルスワクチンであって、前記ジカウイルス粒子が、前記ジカウイルスワクチンを投与されている対象の少なくとも７０％に有効防御免疫状態を付与できる、ジカウイルスワクチン。
（構成２）
前記ジカウイルス粒子が、前記ジカウイルスワクチンを投与されているワクチン接種した対象の少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも９９％に、好ましくは少なくとも対象の８０％に有効防御免疫状態を付与できる、構成１に記載のジカウイルス。
（構成３）
前記ジカウイルス粒子が、配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つの核酸配列で示されるＤＮＡ配列に対応するＲＮＡゲノムを有するか、または配列番号２〜１３または７２の内のいずれか１つに少なくとも８８％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアント核酸配列を有する、構成１または２に記載のワクチン。
（構成４）
前記ジカウイルス粒子が、配列番号１４〜６９の内のいずれか１つで示されるアミノ酸配列または配列番号１４〜６９の内のいずれか１つに少なくとも９５％同一であり、毒性ジカウイルスをパックできるバリアントアミノ酸配列から選択されるＥタンパク質を有する、構成１〜３のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成５）
前記ジカウイルスが、化学的不活化、熱失活、ｐＨ不活化、またはＵＶ不活化により不活化される、構成１〜４のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成６）
前記化学的不活化が、プラークアッセイにより測定して、前記ジカウイルスを完全に不活化するのに必要であるよりも長い時間、前記ジカウイルスを化学的不活化剤と接触させることを含む、構成５に記載のワクチン。
（構成７）
前記化学的不活化が、前記ジカウイルスをホルムアルデヒドと接触させることを含む、構成６に記載のワクチン。
（構成８）
前記ホルムアルデヒド不活性化が、前記ジカウイルスとホルムアルデヒドとを、２〜１０日間接触させることを含む、構成７に記載のワクチン。
（構成９）
前記化学的活性化が、約＋４℃または約＋２２℃で実施される、構成５〜８のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１０）
アジュバントをさらに含む、構成１〜９のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１１）
前記アジュバントがアルミニウム塩のアジュバントである、構成１０に記載のワクチン。
（構成１２）
前記アルミニウム塩のアジュバントが水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウム塩である、構成１１に記載のワクチン。
（構成１３）
前記ワクチンが、ペプチドおよびデオキシイノシン含有免疫賦活性オリゴデオキシ核酸分子（Ｉ−ＯＤＮ）を含むアジュバントを含むまたはさらに含む、構成１０〜１２のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１４）
前記ペプチドが配列ＫＬＫＬ５ＫＬＫ（配列番号７１）を含み、Ｉ−ＯＤＮがオリゴ−ｄ（ＩＣ）１３（配列番号７０）を含む、構成１３に記載のワクチン。
（構成１５）
１種または複数の薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む、構成１〜１４のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１６）
前記ワクチンが、ＨＰＬＣにより検出するには少なすぎる量、すなわち、１μｇ／ｍｌ未満、特に１００ｎｇ／ｍｌ未満の量の、硫酸プロタミンまたはＰＳの断片または分解生成物を含む、構成１〜１５のいずれか１項に記載のワクチン。
（構成１７）
前記硫酸プロタミンまたはＰＳの断片または分解生成物が、質量分析または別の高感度法により検出できる、構成１６に記載のワクチン。