【手続補正書】
【提出日】平成31年3月15日(2019.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
異種プロモーター配列に機能的に連結された組換え核酸であって
（ａ）配列番号１、配列番号３または配列番号１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するペプチドをコードする配列；または
（ｂ）配列番号１、配列番号３または配列番号１３から選択される連続する２２５アミノ酸を含むペプチドをコードする配列；または
（ｃ）配列番号２、配列番号４またはその相補のヌクレオチド配列にハイブリダイズする配列
を含んでいる、前記組換え核酸。
【請求項２】
発現ベクターを含んでいる、請求項１に記載の組換え核酸。
【請求項３】
請求項１に記載の組換え核酸を含んでいる、組換え宿主細胞。
【請求項４】
前記宿主細胞は、単離されたヒト細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞または植物細胞である、請求項３に記載の組換え宿主細胞。
【請求項５】
前記宿主細胞は単離された神経細胞であり、好ましくは前記宿主細胞は単離された電気的活性のある細胞である、請求項３に記載の組換え宿主細胞。
【請求項６】
対象の処置における医薬として使用するための組成物であって、陰イオン伝導チャネルロドプシンのロドプシンドメインをコードする配列番号１、配列番号３、及び配列番号１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター、または前記発現ベクターを含む細胞を含む、組成物。
【請求項７】
前記対象が、神経細胞が媒介する障害に罹患しており、前記組成物が、前記対象の細胞において膜過分極を提供する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記対象が、神経細胞が媒介する障害に罹患しており、前記組成物が、前記対象の細胞において神経細胞サイレンシングを提供する、請求項６に記載の組成物。
【請求項９】
前記対象が、失明または盲目に罹患しており、前記組成物が、前記対象の網膜の感光性を回復させる、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
前記対象が哺乳類であり、好ましくはヒトである、請求項６に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明のその他の目的、特徴、及び利点は、以下の詳細な説明から明らかになろう。なお、詳細な説明及び具体的な実施例では本発明の好ましい実施形態を示しているが、それらは例示のみを目的とするものと理解すべきである。当業者にとっては、本発明の精神及び範囲における様々な変更や改変が詳細な説明から明らかになるからである。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
異種プロモーター配列に機能的に連結された組換え核酸であって
（ａ）配列番号１、配列番号３または配列番号１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の相同性を有するペプチドをコードする配列；または
（ｂ）配列番号１、配列番号３または配列番号１３から選択される連続する２２５アミノ酸を含むペプチドをコードする配列；または
（ｃ）配列番号２、配列番号４またはその相補のヌクレオチド配列にハイブリダイズする配列
を含んでいる、前記組換え核酸。
（項目２）
発現ベクターを含んでいる、項目１に記載の組換え核酸。
（項目３）
項目１に記載の組換え核酸を含んでいる、組換え宿主細胞。
（項目４）
前記宿主細胞は単離されたヒト細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目５）
前記宿主細胞は非ヒト哺乳類細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目６）
前記宿主細胞は細菌細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目７）
前記宿主細胞は酵母細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目８）
前記宿主細胞は昆虫細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目９）
前記宿主細胞は植物細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目１０）
前記宿主細胞は単離された神経細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目１１）
前記宿主細胞は単離された電気的活性のある細胞である、項目３に記載の組換え宿主細胞。
（項目１２）
神経細胞が媒介する障害に罹患している対象の細胞の膜過分極の方法であって、
（ａ）前記対象の前記細胞に、前記細胞内で発現可能な、陰イオン伝導チャネルロドプシンのロドプシンドメインをコードする配列番号１、配列番号３、及び配列番号１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを送達すること；及び
（ｂ）前記ベクターを前記細胞内で発現させることが含まれ、ロドプシン発現によって前記神経細胞からのシグナルがサイレンシングされる、前記方法。
（項目１３）
神経細胞が媒介する障害に罹患している対象の神経細胞サイレンシングの方法であって、
（ａ）前記対象の標的神経細胞に、前記標的神経細胞内で発現可能な、陰イオン伝導チャネルロドプシンのロドプシンドメインをコードする配列番号１、配列番号３、及び配列番号１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを送達すること；及び
（ｂ）前記ベクターを前記標的神経細胞内で発現させることが含まれ、ロドプシン発現の結果として前記標的神経細胞からのシグナルのサイレンシングが生じる、前記方法。
（項目１４）
失明または盲目に罹患している対象の網膜の感光性を回復させる方法であって、
（ａ）前記対象の網膜に、網膜神経細胞内で発現可能な、陰イオン伝導チャネルロドプシンのロドプシンドメインをコードする配列番号１、配列番号３、及び配列番号１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを送達すること；及び
（ｂ）前記ベクターを前記網膜神経細胞内で発現させることが含まれ、ロドプシン発現により前記網膜神経細胞で高レベルの膜電位が得られる、前記方法。
（項目１５）
（ａ）前記対象の細胞にロドプシンドメインをコードする発現ベクターを送達することであって、前記ベクターは、配列番号１、配列番号３及び配列番号１３から選択される陰イオン伝導チャネルロドプシンのロドプシンドメインをコードしプロモーター配列に機能的に連結されたオープン読み枠を含む、前記送達すること；及び
（ｂ）前記ベクターを前記細胞で発現させることが含まれ、ロドプシン発現により前記細胞で高レベルの膜電位が得られる、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
ステップｃ）で、配列番号２またはその相補のヌクレオチド配列にハイブリダイズした前記配列は、さらに、フィルター結合ＤＮＡへの０．５Ｍ  ＮａＨＰＯ４、７％ドデシル硫酸ナトリウム、１ｍＭ  ＥＤＴＡ中６５℃でのハイブリダイゼーション、及び０．２ｘＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中４２℃での洗浄を含む、項目１に記載の組換え核酸。
（項目１７）
前記対象は哺乳類である、項目１３に記載の方法。
（項目１８）
前記対象はヒトである、項目１３に記載の方法。
（項目１９）
前記送達することには、製薬上許容される担体が含まれる、項目１３に記載の方法。
（項目２０）
配列番号１、配列番号３または配列番号１３を含むアミノ酸配列をコードする核酸配列を含んでいる、ｃＤＮＡ由来核酸。
（項目２１）
配列番号２、配列番号４、または配列番号１４〜１５の核酸配列を含んでいる、項目１９に記載のｃＤＮＡ由来核酸。
（項目２２）
項目１９に記載のｃＤＮＡ由来核酸を含んでいる、発現ベクター。
（項目２３）
電気的活性のある細胞が関与する障害に罹患している対象の電気的活性のある細胞の障害を治療する方法であって、
（ａ）前記対象の前記細胞に、前記細胞内で発現可能な、配列番号１、配列番号３、または配列番号１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを送達すること；及び
（ｂ）前記ベクターを前記電気的活性のある細胞内で発現させることが含まれ、ロドプシン発現によって前記電気的活性のある細胞からのシグナルがサイレンシングされる、前記方法。
（項目２４）
電気的活性のある細胞が関与する障害に罹患している対象の電気的活性のある細胞の障害を治療する方法であって、
（ａ）前記対象に、遺伝子導入細胞内で発現可能な、配列番号１、配列番号３、及び配列番号１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む前記遺伝子導入細胞を送達すること；及び
（ｂ）前記ベクターを前記遺伝子導入細胞内で発現させることが含まれ、発現によって電気的活性のある細胞からのシグナルがサイレンシングされる、前記方法。
（項目２５）
電気的活性のある細胞が媒介する障害に罹患している対象の電気的活性のある細胞のサイレンシングの方法であって、
（ａ）前記対象の標的神経細胞に、前記標的神経細胞で発現可能な陰イオン伝導チャネルロドプシンのロドプシンドメインをコードする配列番号１、配列番号３及び配列番号１３からなる群より選択される配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを送達すること；及び
（ｂ）前記ベクターを前記標的電気的活性のある細胞内で発現させることが含まれ、ロドプシン発現の結果として前記電気的活性のある細胞からのシグナルのサイレンシングが生じる、前記方法。
（項目２６）
配列番号１５〜２４の配列と少なくとも約９０％同一である配列を有する陰イオン伝導チャネルロドプシンをコードする配列を含んでいる、単離された核酸分子。
（項目２７）
配列番号１５〜２４の配列と少なくとも約９５％同一である配列を有する配列を含んでいる、項目２６に記載の単離された核酸分子。
（項目２８）
前記核酸はＤＮＡである、項目２６に記載の単離された核酸分子。
（項目２９）
前記核酸はＲＮＡである、項目２６に記載の単離された核酸分子。
（項目３０）
前記核酸はｍＲＮＡである、項目２９に記載の単離された核酸分子。
（項目３１）
項目２６に記載の核酸分子を含んでいる、発現ベクター。
（項目３２）
項目２６に記載の核酸を含んでいる、組換え宿主細胞。
（項目３３）
前記宿主細胞は単離されたヒト細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目３４）
前記宿主細胞は非ヒト哺乳類細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目３５）
前記宿主細胞は細菌細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目３６）
前記宿主細胞は酵母細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目３７）
前記宿主細胞は昆虫細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目３８）
前記宿主細胞は植物細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目３９）
前記宿主細胞は単離された神経細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目４０）
前記宿主細胞は単離された電気的活性のある細胞である、項目３２に記載の組換え宿主細胞。
（項目４１）
電気的活性のある細胞が関与する障害に罹患している対象を治療する方法であって、前記対象の前記電気的活性のある細胞の部位で有効量の陰イオン伝導チャネルロドプシンを発現させることが含まれる、前記方法。
（項目４２）
前記対象は神経因性疼痛を抱えており、前記対象の前記疼痛の部位で有効量の陰イオン伝導チャネルロドプシンを発現させることが含まれる、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記発現させることには、陰イオン伝導チャネルロドプシンを前記対象に投与することが含まれる、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
前記陰イオン伝導チャネルロドプシンは、さらに、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）配列または細胞受容体結合配列を含んでいる、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記発現させることには、陰イオン伝導チャネルロドプシンをコードするベクターを前記対象に投与することが含まれる、項目４１に記載の方法。
（項目４６）
前記ベクターはＲＮＡベクターである、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記ベクターはＤＮＡベクターである、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
前記陰イオン伝導チャネルロドプシンをコードしている前記配列は、異種プロモーターに機能的に連結されている、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記プロモーターは、誘導性または抑制性プロモーターである、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記プロモーターは、組織または細胞型に特異的なプロモーターである、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
前記プロモーターは、神経細胞に特異的なプロモーターである、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記ベクターは、プラスミド、ウイルスベクターまたはエピソームベクターである、項目４７に記載の方法。
（項目５３）
前記ベクターは、さらに、自殺遺伝子の誘導性発現カセットを含んでいる、項目４７に記載の方法。
（項目５４）
前記対象は、四肢のどれかが切断されているか、糖尿病もしくは多発性硬化症があるか、または手術を受けたことがある、項目４１に記載の方法。
（項目５５）
前記陰イオン伝導チャネルロドプシンは、配列番号１、３または１３の配列と少なくとも約９０％同一であるアミノ酸配列を含んでいる、項目４１に記載の方法。
（項目５６）
前記陰イオン伝導チャネルロドプシンは、配列番号２、４または１４〜１７の配列と約９０％同一である配列によってコードされている、項目４５に記載の方法。