【手続補正書】
【提出日】令和1年11月7日(2019.11.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリＡアプタマーポリヌクレオチドを含む、遺伝子発現の調節のためのシステムであって、該ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、５’から３’に向かって：
ａ）少なくとも１つのポリＡ切断シグナルを内部に含む少なくとも１つのリガンド結合アプタマー；及び
ｂ）発現可能なポリヌクレオチド
を含む、
システム。
【請求項２】
ａ）前記ポリＡ切断シグナルを含む前記リガンド結合アプタマーは、前記発現可能なポリヌクレオチドの５’非翻訳領域内に存在し、及び／又は
ｂ）前記システムは、前記リガンドを発現するポリヌクレオチドを含み；そして任意で、
ｉ）前記リガンドを発現する前記ポリヌクレオチドは、前記アプタマー及び発現可能なポリヌクレオチドを含む前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドと同一のものである；又は
ｉｉ）前記リガンドを発現する前記ポリヌクレオチドは、前記アプタマー及び発現可能なポリヌクレオチドを含む前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドと異なるポリヌクレオチドである、及び／又は；
ｉｉｉ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、前記発現可能なポリヌクレオチドの前記５’非翻訳領域に、２つ、３つ、またはそれより多くのポリＡシグナルを含む；
及び／又は、
ｃ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドが：
Ａ）少なくとも１つのポリＡシグナル；
Ｂ）前記少なくとも１つのポリＡシグナルを含む少なくとも１つのリガンド結合アプタマー；及び
Ｃ）少なくとも１つのＵ／ＵＧリッチ領域、少なくとも１つのＧリッチ領域、または少なくとも１つのＵ／ＵＧリッチ領域と少なくとも１つのＧリッチ領域の両方、
を含み；任意で：
Ｉ）前記リガンド結合アプタマーは、１つ、２つ、３つ、またはそれより多くのＵ／ＵＧリッチ領域を含む；又は
ＩＩ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、少なくとも１つのポリＡシグナルは、少なくとも１つのＵ／ＵＧリッチ領域の上流に存在する；又は
ＩＩＩ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、前記リガンド結合アプタマーは、１つ、２つ、またはそれより多くのＵ／ＵＧリッチ領域の上流に存在する；又は
ＩＶ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、少なくとも１つのポリＡシグナルは、少なくとも１つのＧリッチ領域の上流に存在する、
請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、前記リガンド結合アプタマーは、１つ、２つ、またはそれより多くのＧリッチ領域の上流に存在する、請求項２の（ｂ）に記載のシステム。
【請求項４】
ａ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、前記アプタマーは、２つのポリＡシグナル及び２つのＵ／ＵＧリッチ領域を含み；及び／又は
ｂ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれより多くのアプタマーを含み、そして任意で：
ｉ）第一のアプタマー及び第二のアプタマーは、５’から３’の直線方向で、同じ方向を向いている；又は
ｉｉ）第一のアプタマー及び第二のアプタマーは、５’から３’の直線方向で、異なる方向を向いている；及び／又は
ｉｉｉ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、１つのＧリッチ領域を含み、任意で：
Ｉ）前記Ｇリッチ領域は、前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって最も３’側のアプタマー中にある；又は
ＩＩ）前記Ｇリッチ領域は、前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって２番目のアプタマー中にある；及び／又は
ｉｖ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、２つ以上のアプタマー間で塩基対形成していない；又は
ｖ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、２つ以上のアプタマー間で塩基対形成している；及び／又は
ｖｉ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの２つの異なるアプタマーのループの少なくとも一部の間で、塩基対形成している；及び／又は
ｃ）アプタマー内の２つのループ間のヌクレオチド数は、１０〜２５ヌクレオチドである；又は
ｄ）アプタマー内の２つのループ間のヌクレオチド数は、１８〜２０ヌクレオチドである；及び／又は
ｅ）前記リガンドは、ポリペプチド、ペプチド、核酸、小分子、薬物、代謝産物、またはそれらの組み合わせである；及び／又は
ｆ）アプタマーは、長さが、１４〜２５０ヌクレオチドである；及び／又は
ｇ）前記発現可能なポリヌクレオチドは、レポーター遺伝子、治療遺伝子、または細胞の代謝状態を変更する産物をもたらす遺伝子である；及び／又は
ｈ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、ベクターの少なくとも一部分であり、任意で、前記ベクターがプラスミド、ウイルスベクター、又は直鎖ＤＮＡである、
請求項１から３のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項５】
前記リガンドを発現する前記ポリヌクレオチドは、ベクターの少なくとも一部分であり、任意で、前記ベクターは、プラスミド、ウイルスベクター、または直鎖ＤＮＡである、請求項２の（ｂ）に記載のシステム。
【請求項６】
ａ）前記発現可能なポリヌクレオチドは、前記リガンドをコードする；及び／又は、
ｂ）前記発現可能なポリヌクレオチドの発現は、組織特異的プロモーターにより制御される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のシステム。
【請求項７】
遺伝子発現の調節方法であって、以下の工程：
ａ）システムを用意する工程であって、前記システムはポリＡアプタマーポリヌクレオチドを含み、ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは５’から３’に向かって：
１）少なくとも１つのポリＡ切断シグナルを内部に含む少なくとも１つのリガンド結合  アプタマー；
２）発現可能なポリヌクレオチド；及び
３）任意選択でリガンド発現構築物；を含む工程、及び
ｂ）前記システムを適切な条件に供する工程であって、前記発現可能なポリヌクレオチド由来のｍＲＮＡが所望のものでない場合、前記リガンドは、前記リガンド結合アプタマーに結合しないか、または前記システムもしくはその環境に存在せず、かつ前記発現可能なポリヌクレオチド由来のｍＲＮＡは分解される工程；または
ｃ）前記リガンド発現構築物を含む前記システムを適切な条件に供する工程であって、前記発現可能なポリヌクレオチドの発現が望まれる場合、前記リガンドは、前記アプタマーに結合する、及び／または前記システムもしくはその環境に存在し、かつ前記発現可能なポリヌクレオチド由来のｍＲＮＡは分解されない工程、
を含み、任意でｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、方法。
【請求項８】
遺伝子発現の調節方法であって、以下の工程：
ａ）システムを用意する工程であって、前記システムはポリＡアプタマーポリヌクレオチドを含み、ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは５’から３’に向かって：
１）少なくとも１つのポリＡ切断シグナルを内部に含む少なくとも１つのリガンド結合アプタマー；
２）発現可能なポリヌクレオチド；及び
３）任意選択でリガンド発現構築物；を含む工程、及び
ｂ）前記システムを適切な条件に供する工程であって、前記リガンドが、前記システムもしくはその環境に存在しない、または前記リガンド結合アプタマーに結合しない場合、前記発現可能なポリヌクレオチド由来のｍＲＮＡは分解される前記工程；または
ｃ）前記リガンド発現構築物を含む前記システムを適切な条件に供する工程であって、前記リガンドが前記アプタマーに結合する場合、前記発現可能なポリヌクレオチド由来のｍＲＮＡは分解されず、かつ遺伝子産物は、前記発現可能なポリヌクレオチドから発現可能である工程、
を含み、任意でｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる、方法。
【請求項９】
ａ）前記方法は、細胞中で行われ、任意で、前記リガンドは、前記細胞にとって内因性である；及び／又は
ｂ）前記細胞は、幹細胞、癌細胞、または遺伝子の遺伝子治療を必要とする疾患細胞もしくは欠損細胞であり、任意で、前記遺伝子は、ジストロフィン、アルブミン、または第ＩＸ因子である；及び／又は
ｃ）前記方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏで行われる；及び／又は
ｄ）前記方法は、哺乳類で行われ、任意で、前記哺乳類は、ヒトであり；及び／又は：
ｉ）前記方法は、個体の１つまたは複数の細胞で行われ、前記リガンドは、グルコースであり、前記個体は、糖尿病、糖尿病前症、もしくは糖尿病合併症を有しており、及び／または前記発現可能なポリヌクレオチドは、インシュリンである；又は
ｉｉ）前記方法は、個体の１つまたは複数の細胞で行われ、前記リガンドは、癌バイオマーカーの遺伝子産物であり、かつ前記発現可能なポリヌクレオチドは、自殺遺伝子である；又は
ｉｉｉ）前記方法は、個体で行われ、前記発現可能なポリヌクレオチドは、レポーター遺伝子であり、前記レポーター遺伝子の前記発現の場所及び／または強度は、前記個体の１つまたは複数の細胞中のリガンドの、空間分布、時間変動、またはこれらの両方に関する情報を提供する；及び／又は
ｅ）さらに、前記リガンドと適切に結合する前記アプタマーを設計する工程を含む；及び／又は
ｆ）前記方法は、個体、組織、または細胞で行われ、前記発現可能なポリヌクレオチドは、検出可能な遺伝子産物をコードし、前記個体、組織、または細胞の個々がイメージングされる、
請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
個体用治療のモニタリング方法であって、前記個体に：
ａ）ポリＡアプタマーポリヌクレオチドを含むベクターであって、前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、５’から３’に向かって、：
１）少なくとも１つのポリＡ切断シグナルを内部に含む少なくとも１つのリガンド結合アプタマー；及び
２）発現可能なポリヌクレオチド；を含む、ベクター、及び／または
ｂ）前記ａ）のベクターを含む１つまたは複数の細胞、
を提供する工程を含み、
前記リガンドは、前記治療の有効性の指標であるタンパク質の特定遺伝子産物であり；
任意で、前記ａ）のベクター及び／または前記ｂ）の細胞は、前記治療前、前記治療中、及び／または前記治療後に、前記個体に提供される、方法。
【請求項１１】
個体における病的状態の存在、危険性、または易罹患性のアッセイ方法であって、前記個体に以下：
ａ）ポリＡアプタマーポリヌクレオチドを含むベクターであって、前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、５’から３’に向かって、：
１）少なくとも１つのポリＡ切断シグナルを内部に含む少なくとも１つのリガンド結合アプタマー；及び
２）発現可能なポリヌクレオチド；を含む、ベクター、及び／または
ｂ）前記ａ）のベクターを含む１つまたは複数の細胞、
を提供する工程を含み、
前記発現可能なポリヌクレオチドの発現、または発現可能なポリヌクレオチドの発現の不在は、前記リガンドが存在して前記アプタマーと結合したかどうかを同定し、前記個体またはその細胞中の前記リガンドの個々の存在または不在は、前記病的状態の存在、易罹患性、または危険性の指標である、方法。
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドが５’から３’に向かって、以下：
ａ）少なくとも１つのポリＡ切断シグナルを内部に含む少なくとも１つのリガンド結合アプタマー；及び
ｂ）発現可能なポリヌクレオチド
を含む、ポリＡアプタマーポリヌクレオチド。
【請求項１３】
ａ）前記リガンド結合アプタマーは、前記発現可能なポリヌクレオチドの５’非翻訳領域に位置する；及び／又は
ｂ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドは、さらに、少なくとも１つのＵ／ＵＧリッチ領域、少なくとも１つのＧリッチ領域、または少なくとも１つのＵ／ＵＧリッチ領域と少なくとも１つのＧリッチ領域の両方を含み、そして任意で、
ｉ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、少なくとも１つのポリＡシグナルは、少なくとも１つのＵ／ＵＧリッチ領域の上流に存在する；又は
ｉｉ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、前記リガンド結合アプタマーは、１つ、２つ、またはそれより多くのＵ／ＵＧリッチ領域の上流に存在する；又は
ｉｉｉ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、少なくとも１つのポリＡシグナルは、少なくとも１つのＧリッチ領域の上流に存在する；又は
ｉｖ）前記ポリＡアプタマーポリヌクレオチドの５’から３’に向かって、前記リガンド結合アプタマーは、１つ、２つ、またはそれより多くのＧリッチ領域の上流に存在する、
請求項１２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１２又は１３に記載のポリヌクレオチドを含み、任意で、前記細胞は、哺乳類細胞であり、さらに任意で、前記哺乳類細胞は、ヒト細胞である、及び／又は、
前記細胞はヒトに存在する、細胞。
【請求項１５】
請求項１〜６の（ｂ）に記載のシステムを含み、任意で、前記細胞は、哺乳類細胞であり、さらに任意で、前記哺乳類細胞は、ヒト細胞である、細胞。
【請求項１６】
ａ）ウイルスベクターであり、任意で、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、またはレンチウイルスベクター、又は
ｂ）プラスミド、であり、
請求項１２又は１３に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。