【手続補正書】
【提出日】平成31年4月4日(2019.4.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）野生型上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）もしくは変異上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）のいずれかまたは野生型上皮成長因子レセプターおよび変異上皮成長因子レセプターの両方（「ｗｔＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲ」）を認識し、抗ＥＧＦＲ重鎖（ＨＣ）可変領域および抗ＥＧＦＲ軽鎖（ＬＣ）可変領域またはそれらの各々の等価物を必要に応じて含む、抗ＥＧＦＲ抗体の抗原結合ドメイン；（ｂ）ヒンジドメインポリペプチド；（ｃ）４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＣＤ２８共刺激分子、ＯＸ４０、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７、またはそれらの各々の等価物の群から選択される共刺激分子または共刺激ポリペプチド；ならびに（ｄ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン、あるいはそれらの各々の等価物を含む、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）。
【請求項２】
前記ＨＣ可変領域が、
【化２９】
2018513687.tif 000001
（配列番号２４）またはその等価物を含み、および／または
前記ＬＣ可変領域が、
【化３０】
2018513687.tif 000002
（配列番号２６）またはその等価物を含む、請求項１に記載のＣＡＲ。
【請求項３】
前記抗ＥＧＦＲ  ＨＣ可変領域と前記抗ＥＧＦＲ  ＬＣ可変領域との間に配置され、アミノ酸配列
【化３１】
2018513687.tif 000003
（配列番号２２）またはその等価物を必要に応じて含む、リンカーポリペプチドをさらに含む、請求項１または２に記載のＣＡＲ。
【請求項４】
前記ＥＧＦＲ結合ドメインのアミノ末端へのシグナルポリペプチドならびに／または、前記ＣＡＲに付着された検出可能なマーカーおよび／もしくは精製マーカーをさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項５】
前記ヒンジポリペプチドが、
【化３２】
2018513687.tif 000004
（配列番号１）またはその等価物を含む、請求項１〜４のいずれかに記載のＣＡＲ。
【請求項６】
前記ＣＤ２８共刺激分子が、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＣＤ２８細胞内ドメインまたはそれらの各々の等価物を含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする、単離された核酸。
【請求項８】
請求項７に記載の単離された核酸配列を含み、必要に応じて、プラスミドまたはウイルスベクターである、ベクター。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲ、請求項７に記載の単離された核酸、または請求項８に記載のベクターを含む、必要に応じて、原核細胞または真核細胞である、単離された細胞。
【請求項１０】
前記細胞が、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の群から選択される、請求項９に記載の単離された細胞。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲならびにＥＧＦＲタンパク質もしくはそのフラグメントおよび／または変異ＥＧＦＲタンパク質もしくはそのフラグメント、ならびに／またはｗｔＥＧＦＲおよび／もしくは変異ＥＧＦＲを発現する細胞を含む、単離された複合体。
【請求項１２】
必要に応じて薬学的に許容され得るキャリアまたは固体支持体である、キャリア、および１つまたはそれより多くの請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲを含む組成物。
【請求項１３】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列を細胞に導入する工程を含む、ＥＧＦＲ  ＣＡＲ細胞を作製する方法。
【請求項１４】
必要に応じて被験体において、ＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲを細胞表面上に発現する細胞の成長を阻害するための組成物であって、有効量の請求項９または１０のいずれか１項に記載の単離された細胞を含み、前記組成物を前記細胞と接触させることを特徴とする、組成物。
【請求項１５】
前記細胞が、（ｉ）神経膠芽腫もしくは神経膠芽腫幹細胞および／または（ｉｉ）乳癌脳転移もしくは乳癌脳転移幹細胞から必要に応じて選択される腫瘍細胞または癌幹細胞である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
癌の処置を必要とする哺乳動物、マウス、イヌ、ウシ、マウス、ネコ、ウマまたはヒトの群から必要に応じて選択される被験体において癌を処置するための組成物であって、前記癌細胞はＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲを発現し、前記組成物は有効量の請求項９または１０のいずれか１項に記載の単離された細胞を含み、前記組成物が前記被験体に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１７】
前記単離された細胞が、処置される被験体にとって自家であり、および／または前記組成物が、頭蓋内注射もしくは静脈内投与によって投与されることを特徴とする、請求項１５または１６に記載の組成物。
【請求項１８】
癌細胞に結合した抗体の存在を、哺乳動物、ウマ、ネコ、イヌ、ウシ、マウスまたはヒトの群から必要に応じて選択される被験体が抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性があるかどうかの指標とする方法であって、患者から単離された前記癌細胞を有効量の抗ＥＧＦＲ抗体および変異ＥＧＦＲ抗体と接触させること、前記癌細胞に結合した前記抗体の存在を検出することを含み、ここで、前記癌細胞に結合した抗体の存在は、前記被験体が、前記抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性があることを示唆し、前記癌細胞に結合した抗体が存在しないことは、前記被験体が、前記抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性がないことを示唆する、方法。
【請求項１９】
前記被験体が前記抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性があると示唆される場合、前記被験体に有効量の請求項９または１０のいずれか１項に記載の単離された細胞を投与することができる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記癌細胞が、（ｉ）神経膠芽腫細胞もしくは神経膠芽腫幹細胞および／または（ｉｉ）乳癌転移もしくは乳癌転移幹細胞から必要に応じて選択される脳癌由来の細胞である、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
１つまたはそれより多くの請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣＡＲならびに必要に応じて使用の指示書および／または腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスを含む、キット。
【請求項２２】
癌の処置を必要とする被験体において、必要に応じて脳癌である癌を処置するための組み合わせ物であって、有効量の、必要に応じてＮＫ細胞および／または放射線照射された細胞である請求項９または１０に記載の単離された細胞、ならびに有効量の腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスまたはそれらの各々の等価物を含み、前記組み合わせ物は前記被験体に投与されることを特徴とする、組み合わせ物。
【請求項２３】
前記単離された細胞が、１０００ｃＧｙの線量で放射線照射された細胞である、請求項２２に記載の組み合わせ物。
【請求項２４】
前記腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスが、ＨＳＶ−１であるかまたはＨＳＶ−１由来である、請求項２２または２３に記載の組み合わせ物。
【請求項２５】
前記脳癌が、神経膠芽腫または乳癌脳転移から選択される、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の組み合わせ物。
【請求項２６】
請求項９または１０のいずれか１項に記載の単離された細胞および使用の指示書ならびに必要に応じて腫瘍退縮ヘルペスウイルスを含む、癌を処置するためのキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
１つまたはそれを超える上記組成物を含むキットがさらに提供される。それらを診断的または治療的に使用するための指示書がさらに提供される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
（ａ）野生型上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）もしくは変異上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）のいずれかまたは野生型上皮成長因子レセプターおよび変異上皮成長因子レセプターの両方（「ｗｔＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲ」）を認識した抗ＥＧＦＲ抗体の抗原結合ドメイン；（ｂ）ヒンジドメインポリペプチド；（ｃ）共刺激分子または共刺激ポリペプチド；および（ｄ）ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン、あるいはそれらの各々の等価物を含む、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）。
（項目２）
前記共刺激分子が、４−１ＢＢ共刺激シグナル伝達領域、ＣＤ２８共刺激分子、ＯＸ４０、ＩＣＯＳおよびＣＤ２７、またはそれらの各々の等価物の群から選択される分子またはポリペプチドを含む、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目３）
前記抗ＥＧＦＲ抗体の前記抗原結合ドメインが、抗ＥＧＦＲ重鎖（ＨＣ）可変領域および抗ＥＧＦＲ軽鎖（ＬＣ）可変領域またはそれらの各々の等価物を含む、項目１に記載のＣＡＲ。
（項目４）
前記ＨＣ可変領域が、
【化２９】
2018513687.tif 000005
またはその等価物を含む、項目３に記載のＣＡＲ。
（項目５）
前記ＬＣ可変領域が、
【化３０】
2018513687.tif 000006
またはその等価物を含む、項目３または４に記載のＣＡＲ。
（項目６）
前記抗ＥＧＦＲ  ＨＣ可変領域と前記抗ＥＧＦＲ  ＬＣ可変領域との間に配置されたリンカーポリペプチドをさらに含む、項目３に記載のＣＡＲ。
（項目７）
前記リンカーポリペプチドが、
【化３１】
2018513687.tif 000007
またはその等価物を含む、項目６に記載のＣＡＲ。
（項目８）
前記ＥＧＦＲ結合ドメインのアミノ末端にシグナルポリペプチドをさらに含む、項目１〜３のいずれかに記載のＣＡＲ。
（項目９）
前記ヒンジポリペプチドが、
【化３２】
2018513687.tif 000008
またはその等価物を含む、項目１〜３のいずれかに記載のＣＡＲ。
（項目１０）
前記ＣＤ２８共刺激分子が、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＣＤ２８細胞内ドメインまたはそれらの各々の等価物を含む、項目２に記載のＣＡＲ。
（項目１１）
前記ＣＡＲに付着された検出可能なマーカーおよび／または精製マーカーをさらに含む、項目１〜３のいずれかに記載のＣＡＲ。
（項目１２）
等価なポリペプチドが、前記ポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸同一性であるか、または該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドまたはその相補鎖と少なくとも８０％同一のポリヌクレオチドによってコードされるか、または高ストリンジェンシーの条件下で該ポリヌクレオチドまたはその相補鎖にハイブリダイズし、ここで、高ストリンジェンシーの条件は、約２５℃〜約３７℃のインキュベーション温度；約６×ＳＳＣ〜約１０×ＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液濃度；約０％〜約２５％のホルムアミド濃度；および約４×ＳＳＣ〜約８×ＳＳＣの洗浄液を含む、項目１〜３、５または６のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
（項目１３）
項目１〜３、５または６のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする、単離された核酸。
（項目１４）
項目１３に記載の単離された核酸配列を含む、ベクター。
（項目１５）
前記ベクターが、プラスミドである、項目１４に記載のベクター。
（項目１６）
前記ベクターが、ウイルスベクターである、項目１４に記載のベクター。
（項目１７）
前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターおよびアデノ随伴ウイルスベクターからなる群より選択される、項目１４に記載のベクター。
（項目１８）
前記ベクターが、レンチウイルスベクターである、項目１４に記載のベクター。
（項目１９）
検出可能な標識および／または精製マーカーをさらに含み、該検出可能な標識は、必要に応じて、天然に存在するポリヌクレオチドではない、項目１４〜１８のいずれか１項に記載のベクター。
（項目２０）
項目１〜３、５または６のいずれか１項に記載のＣＡＲを含む、単離された細胞。
（項目２１）
項目１３に記載の単離された核酸を含む、単離された細胞。
（項目２２）
項目１４に記載のベクターを含む、単離された細胞。
（項目２３）
前記細胞が、原核細胞または真核細胞である、項目２０に記載の単離された細胞。
（項目２４）
前記細胞が、原核細胞または真核細胞である、項目２１に記載の単離された細胞。
（項目２５）
前記細胞が、原核細胞または真核細胞である、項目２２に記載の単離された細胞。
（項目２６）
前記細胞が、真核細胞である、項目２３に記載の単離された細胞。
（項目２７）
前記細胞が、真核細胞である、項目２４に記載の単離された細胞。
（項目２８）
前記細胞が、真核細胞である、項目２５に記載の単離された細胞。
（項目２９）
前記真核細胞が、動物細胞、哺乳動物細胞、ウシ細胞、ネコ細胞、イヌ細胞、マウス細胞、ウマ細胞またはヒト細胞から選択される、項目２６に記載の単離された細胞。
（項目３０）
前記真核細胞が、動物細胞、哺乳動物細胞、ウシ細胞、ネコ細胞、イヌ細胞、マウス細胞、ウマ細胞またはヒト細胞から選択される、項目２７に記載の単離された細胞。
（項目３１）
前記真核細胞が、動物細胞、哺乳動物細胞、ウシ細胞、ネコ細胞、イヌ細胞、マウス細胞、ウマ細胞またはヒト細胞から選択される、項目２８に記載の単離された細胞。
（項目３２）
前記細胞が、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の群から選択される、項目２９に記載の単離された細胞。
（項目３３）
前記細胞が、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の群から選択される、項目３０に記載の単離された細胞。
（項目３４）
前記細胞が、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の群から選択される、項目３１に記載の単離された細胞。
（項目３５）
項目１〜３のいずれか１項に記載のＣＡＲならびにＥＧＦＲタンパク質もしくはそのフラグメントおよび／または変異ＥＧＦＲタンパク質もしくはそのフラグメントを含む、単離された複合体。
（項目３６）
項目１〜３のいずれか１項に記載のＣＡＲならびにｗｔＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲを発現する細胞を含む、単離された複合体。
（項目３７）
キャリアおよび項目１〜３のいずれか１項に記載の１つまたはそれを超えるＣＡＲを含む、組成物。
（項目３８）
前記キャリアが、薬学的に許容され得るキャリアまたは固体支持体である、項目３７に記載の組成物。
（項目３９）
項目１〜３のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列を細胞に導入する工程を含む、ＥＧＦＲ  ＣＡＲ細胞を作製する方法。
（項目４０）
前記ＥＧＦＲ  ＣＡＲによって形質導入された細胞を単離する工程をさらに含む、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記細胞が、哺乳動物細胞、イヌ細胞、ウシ細胞、マウス細胞、ネコ細胞、ウマ細胞またはヒト細胞からなる群の細胞、および必要に応じてＴ細胞またはＮＫ細胞である、項目３９に記載の方法。
（項目４２）
項目４０または４１に記載の方法によって作製された、単離されたＣＡＲ細胞。
（項目４３）
ＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲを細胞表面上に発現する細胞の成長を阻害する方法であって、該細胞を有効量の項目４２に記載の単離された細胞と接触させる工程を含む、方法。
（項目４４）
前記細胞が、腫瘍細胞または癌幹細胞である、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記腫瘍細胞が、（ｉ）神経膠芽腫もしくは神経膠芽腫幹細胞および／または（ｉｉ）乳癌脳転移もしくは乳癌脳転移幹細胞から必要に応じて選択される脳癌由来の細胞である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
ＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲを細胞表面上に発現する細胞の成長の阻害を必要とする被験体において該細胞の成長を阻害する方法であって、該被験体に有効量の項目４２に記載の単離された細胞を投与する工程を含む、方法。
（項目４７）
前記細胞が、腫瘍細胞または幹細胞である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記腫瘍細胞が、（ｉ）神経膠芽腫もしくは神経膠芽腫幹細胞および／または（ｉｉ）乳癌脳転移もしくは乳癌脳転移幹細胞から必要に応じて選択される脳癌由来の細胞である、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記単離された細胞が、該細胞を投与される被験体にとって自家である、項目４６に記載の方法。
（項目５０）
癌の処置を必要とする被験体において癌を処置するための方法であって、ここで、該癌細胞は、ＥＧＦＲおよび／または変異ＥＧＦＲを発現し、該方法は、該被験体に有効量の項目４２に記載の単離された細胞を投与する工程を含む、方法。
（項目５１）
前記単離された細胞が、処置される被験体にとって自家である、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記細胞が、頭蓋内注射または静脈内投与によって投与される、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記被験体が、哺乳動物、マウス、イヌ、ウシ、マウス、ネコ、ウマまたはヒトの群から選択される、項目５０に記載の方法。
（項目５４）
被験体が、抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性があるかまたは応答する可能性がないかを判定するための方法であって、該方法は、患者から単離された癌細胞を有効量の抗ＥＧＦＲ抗体および変異ＥＧＦＲ抗体と接触させる工程、該癌細胞に結合した任意の抗体の存在を検出する工程を含み、ここで、該癌細胞に結合した抗体の存在は、該被験体が、該抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性があることを示唆し、該癌細胞に結合した抗体が存在しないことは、該被験体が、該抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性がないことを示唆する、方法。
（項目５５）
前記抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療に応答する可能性があると判定された被験体に有効量の項目２６に記載の細胞を投与する工程をさらに含む、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記癌細胞が、（ｉ）神経膠芽腫細胞もしくは神経膠芽腫幹細胞および／または（ｉｉ）乳癌転移もしくは乳癌転移幹細胞から必要に応じて選択される脳癌由来の細胞である、項目５４または５５に記載の方法。
（項目５７）
前記被験体が、哺乳動物、ウマ、ネコ、イヌ、ウシ、マウスまたはヒトの群から選択される、項目５４または５５に記載の方法。
（項目５８）
有効量の抗癌治療を行う工程をさらに含む、項目５４または５５に記載の方法。
（項目５９）
前記抗癌治療が、放射線療法、手術または化学療法のうちの１つまたはそれを超えるものを含む、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記抗ＥＧＦＲ  ＣＡＲ治療が、一次治療、二次治療、三次治療、四次治療の群から選択される、項目５０に記載の方法。
（項目６１）
項目１〜３のいずれか１項に記載の１つまたはそれを超えるＣＡＲおよび必要に応じて使用の指示書を含む、キット。
（項目６２）
腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスをさらに含む、項目６１に記載のキット。
（項目６３）
癌の処置を必要とする被験体において癌を処置するための方法であって、有効量の項目４２に記載の単離された細胞および有効量の腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスまたはそれらの各々の等価物を被験体に投与する工程を含む、方法。
（項目６４）
前記単離された細胞が、ＮＫ細胞である、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記単離された細胞が、放射線照射された細胞である、項目６３または６４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記単離された細胞が、１０００ｃＧｙの線量で放射線照射された細胞である、項目５５に記載の方法。
（項目６７）
前記腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスが、ＨＳＶ−１であるかまたはＨＳＶ−１由来である、項目６３に記載の方法。
（項目６８）
前記有効量の単離された細胞が、前記有効量の腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスの前に投与される、項目６３に記載の方法。
（項目６９）
前記有効量の腫瘍退縮単純ヘルペスウイルスが、複数の日にわたって投与される、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記癌が、脳癌である、項目６３に記載の方法。
（項目７１）
前記脳癌が、神経膠芽腫または乳癌脳転移から選択される、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
項目４２に記載の単離された細胞および使用の指示書ならびに必要に応じて腫瘍退縮ヘルペスウイルスを含む、癌を処置するためのキット。