【手続補正書】
【提出日】平成30年12月21日(2018.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ジアミン（ＤＡ）を生成して、ＤＡ炭酸塩、ＤＡ重炭酸塩、ＤＡビス重炭酸塩（本書において纏めてＤＡ炭酸塩類という）、および／またはＤＡカルバミン酸塩もしくはＤＡビスカルバミン酸塩（本書において纏めてＤＡカルバミン酸塩類という）のうちの１つ以上を培養した培地中に形成する工程であって、ｉ）二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が当該培地のｐＨを主に制御しているか；ｉｉ）当該培地中の溶存無機炭素（ＤＩＣ）のパーセントが４０％以上であり、当該ＤＩＣのパーセントが式：ＤＩＣ／ＴＤＣＡ×１００（ＴＤＣＡは、全溶存カウンターアニオンであり、ＤＩＣおよび他のアニオンの合計である）によって決定されるか；またはｉｉｉ）当該培地中のジアミン種の少なくとも４０％がＤＡ炭酸塩類および／またはＤＡカルバミン酸塩類のうちの１つ以上を含む、工程；
ｂ）少なくとも１つ以上の上記ＤＡ炭酸塩類または上記ＤＡカルバミン酸塩類を、ＤＡ遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程；および
ｃ）上記ＤＡ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ジアミン（ＤＡ）の製造方法。
【請求項２】
ａ）遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類のうちの１つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程；
ｂ）任意で、上記培養した培地を殺菌し、任意で、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をＤＡ遊離塩基に転換して二酸化炭素を放出する工程；
ｃ）上記培養した培地から固体を除去して、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程；
ｄ）上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物を、ＤＡ遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｅ）上記ＤＡ遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｆ）抽出器中で上記ＤＡ遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたＤＡ遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程；
ｇ）上記ＤＡ遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたＤＡ遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程；および
ｈ）精製されたＤＡ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ＤＡの製造方法。
【請求項３】
ａ）遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類のうちの１つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程；
ｂ）任意で、上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をＤＡ遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程；
ｃ）上記培養した培地から固体を除去して、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程；
ｄ）上記培養した培地から上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類を直接転換して、ＤＡ遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および／または二酸化炭素を放出する工程；および
ｅ）精製されたＤＡ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ＤＡの製造方法。
【請求項４】
ａ）遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類のうちの１つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程；
ｂ）任意で、上記培養した培地を殺菌し、任意で、上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の少なくとも一部をＤＡ遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程；
ｃ）上記培養した培地から固体を除去して、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程；
ｄ）上記炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および／または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｅ）上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物をＤＡ遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｆ）任意で、上記培養した培地から上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類を直接転換して、ＤＡ遊離塩基混合物を形成し、任意で、上記発酵槽へ再循環してもよい水および／または二酸化炭素を放出する工程；および
ｇ）精製されたＤＡ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ＤＡの製造方法。
【請求項５】
ａ）遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類のうちの１つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程；
ｂ）上記培養した培地から固体を除去して、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程；
ｃ）上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｄ）上記培養した培地から上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類を直接転換して、ＤＡ遊離塩基混合物を形成する工程；および
ｅ）精製されたＤＡ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ＤＡの製造方法。
【請求項６】
ａ）遺伝子組み換え微生物を発酵槽中の培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類のうちの１つ以上を、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸の存在下で、培養した培地中に形成する工程；
ｂ）任意で、上記培養した培地を殺菌する工程；
ｃ）上記培養した培地から固体を除去して、ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物を形成する工程；
ｄ）上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物から水を除去し、任意で、水および／または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｅ）上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の混合物をＤＡ遊離塩基混合物および二酸化炭素に転換し、任意で、当該二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｆ）上記ＤＡ遊離塩基混合物から水を除去し、任意で、水および／または二酸化炭素を上記発酵槽へ再循環する工程；
ｇ）水性塩基を添加して、上記ＤＡ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類を上記ＤＡ遊離塩基混合物から除去する工程；
ｈ）抽出器中で上記ＤＡ遊離塩基混合物を有機溶媒で抽出して、抽出されたＤＡ遊離塩基溶液および水性ラフィネートを形成し、任意で、当該水性ラフィネートを当該抽出器へ再循環する工程；
ｉ）上記ＤＡ遊離塩基溶液を蒸留して、精製されたＤＡ遊離塩基および有機溶媒を形成し、任意で、当該溶媒を上記抽出器へ再循環し、任意で、望ましくない不純物を除去する工程；および
ｊ）精製されたＤＡ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ＤＡの製造方法。
【請求項７】
上記ジアミンが、Ｃ２〜Ｃ１２メチレンセグメントまたはＣ２〜Ｃ７メチレンセグメントを含む、請求項１〜６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
上記ジアミンが、ヘキサメチレンジアミン、カダベリン、プトレッシン、エチレンジアミンまたはヘプタメチレンジアミンを含む、請求項１〜７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
上記培地中の上記ジアミンの５０％以上が、ＤＡ炭酸塩類（ＤＡ炭酸塩、ＤＡ重炭酸塩もしくはＤＡビス重炭酸塩）またはＤＡカルバミン酸塩類（ＤＡカルバミン酸塩もしくはＤＡビスカルバミン酸塩）のうちの１つ以上を含む、請求項１〜８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
上記遺伝子組み換え微生物が、二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸のうちの１つ以上をさらに形成する、請求項１〜９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸のうちの１つ以上が、上記培地に外部から添加される、請求項１〜１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ａ）遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ＨＭＤ炭酸塩、ＨＭＤ重炭酸塩、ＨＭＤビス重炭酸塩、ＨＭＤカルバミン酸塩またはＨＭＤビスカルバミン酸塩のうちの１つ以上を培養した培地中に形成する工程であって、ｉ）二酸化炭素、炭酸塩、重炭酸塩または炭酸が当該培地のｐＨを培養した培地として主に制御しているか；ｉｉ）当該培地中の炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の少なくとも４０％が、ＨＭＤ炭酸塩、ＨＭＤ重炭酸塩、ＨＭＤビス重炭酸塩、またはＨＭＤカルバミン酸塩のうちの１つ以上を含むか；またはｉｉｉ）溶存無機炭素（ＤＩＣ）のパーセントが４０％以上であり、当該ＤＩＣのパーセントが式：ＤＩＣ／ＴＤＣＡ×１００（ＴＤＣＡは、全溶存カウンターアニオンであり、ＤＩＣおよび他のアニオンの合計である）によって決定される、工程；
ｂ）上記ＨＭＤ炭酸塩、ＨＭＤ重炭酸塩、ＨＭＤビス重炭酸塩またはＨＭＤカルバミン酸塩もしくはビスカルバミン酸塩を、ＨＭＤ遊離塩基および二酸化炭素に転換する工程；および
ｃ）上記ＨＭＤ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤ）の製造方法。
【請求項１３】
ａ）遺伝子組み換え微生物を培地中で適切な条件下で十分な期間にわたって培養し、ＨＭＤ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類を形成する工程であって、培養した培地中のＨＭＤ炭酸塩類またはカルバミン酸塩類の少なくとも４０％が、ＨＭＤ炭酸塩、ＨＭＤ重炭酸塩、ＨＭＤビス重炭酸塩、またはＨＭＤカルバミン酸塩のうちの１つ以上を含む工程；
ｂ）細胞を含む固体フラクションからＨＭＤに富んだ液体フラクションを分離する工程；
ｃ）上記液体フラクションから水を除去し、上記液体フラクションから塩を除去して、ＨＭＤを精製する工程；
ｄ）ＨＭＤ炭酸塩類またはカルバミン酸塩類を、式Ｃ６Ｈ１６Ｎ２の脱プロトンＨＭＤ遊離塩基に転換する工程；および
ｅ）上記ＨＭＤ遊離塩基を単離する工程：
を含む、ヘキサメチレンジアミン（ＨＭＤ）の製造方法。
【請求項１４】
上記培養した培地が、約６〜９．５のｐＨを有する、請求項１〜１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
カルボニックアンヒドラーゼが、（ａ）二酸化炭素を重炭酸塩および／もしくは炭酸塩イオンに転換することによってＤＡ炭酸塩類もしくはＤＡカルバミン酸塩類の形成を促進するか、（ｂ）重炭酸塩および／もしくは炭酸塩イオンを二酸化炭素に転換することによってＤＡ炭酸塩類もしくはＤＡカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進するか、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の両方を行う、のに十分な量において存在する、請求項１〜１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
上記カルボニックアンヒドラーゼが、操作された酵素であり、任意で安定性、熱安定性、アルカリｐＨ安定性または増加した活性を促進するよう操作されている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
上記ＤＡを含み、任意でＤＡ炭酸塩、ＤＡ重炭酸塩、ＤＡビス重炭酸塩、ＤＡカルバミン酸塩、ＤＡビスカルバミン酸塩またはＤＡ以外の窒素含有化合物のうちの１つ以上から選択される不純物を含み、当該窒素含有化合物が、アミノ酸、タンパク質、アンモニウム塩、尿素、および発酵微生物に由来し、任意で当該窒素含有化合物が約０．０１〜約１０００ｐｐｍである、組成物。
【請求項１８】
請求項１７のＤＡを含む、または、請求項１７のＤＡを用いて作製された、ポリマー。
【請求項１９】
遺伝子組み換え微生物であって、遺伝子組み換え微生物は、ｉ）ＨＭＤ合成経路の少なくとも１つの酵素をコードする少なくとも１つの外因性の核酸、および、ＣＯ２利用能が増加する少なくとも１つの遺伝子改変と共にＨＭＤ合成経路を備え、当該遺伝子改変は、当該遺伝子改変がない遺伝子組み換え微生物と比較してＣＯ２化合物からのＨＭＤ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類の生成を増加させるためのものであるか、ｉｉ）ＨＭＤ合成経路の少なくとも１つの酵素、ならびに、少なくとも１つのＨＭＤ炭酸塩類および／またはカルバミン酸塩類を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも２つの外因性の核酸と共にＨＭＤ合成経路を備えるか、またはｉｉｉ）ＨＭＤ合成経路の少なくとも１つの酵素、ならびに、少なくとも１つ以上のＨＭＤ遊離塩基、および二酸化炭素を生成するのに十分な量において発現するカルボニックアンヒドラーゼ酵素または変異体、をコードする少なくとも２つの外因性の核酸と共にＨＭＤ合成経路を備える、遺伝子組み換え微生物。
【請求項２０】
カルボニックアンヒドラーゼが、（ａ）二酸化炭素を重炭酸塩および／もしくは炭酸塩イオンに転換することによってＤＡ炭酸塩類もしくはＤＡカルバミン酸塩類の形成を促進するか、（ｂ）重炭酸塩および／もしくは炭酸塩イオンを二酸化炭素に転換することによってＤＡ炭酸塩類もしくはＤＡカルバミン酸塩類の溶液からの二酸化炭素の放出を促進するか、または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の両方を行う、のに十分な量において存在し、上記カルボニックアンヒドラーゼが、操作された酵素であり、任意で安定性、熱安定性、アルカリｐＨ安定性または増加した活性を促進するよう操作されている、請求項１９に記載の遺伝子組み換え微生物。