【手続補正書】
【提出日】平成31年1月24日(2019.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト網膜色素上皮（RPE）細胞を含む、乾燥型の加齢性黄斑変性を有する対象を治療する方法において使用するための薬学的組成物であって、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回り、該組成物が、治療有効量での該対象の網膜下への投与用である、薬学的組成物。
【請求項２】
ヒト多角形網膜色素上皮（RPE）細胞を含む、網膜疾患または網膜異常を有する対象を治療する方法において使用するための薬学的組成物であって、その細胞の少なくとも85%、または少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%、または少なくとも100%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回り、該組成物が、治療有効量での該対象の網膜への投与用である、薬学的組成物。
【請求項３】
ヒト多角形網膜色素上皮（RPE）細胞を含む、網膜疾患または網膜異常を有する対象を治療する方法において使用するための薬学的組成物であって、その細胞の少なくとも85%、または少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%、または少なくとも100%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回り、該組成物が、治療有効量での該対象の網膜への投与用であり、該治療有効量が投与1回当たり細胞50,000〜5,000,000個である、薬学的組成物。
【請求項４】
ヒト網膜色素上皮（RPE）細胞を含む、網膜疾患または網膜異常を有する対象を治療する方法において使用するための薬学的組成物であって、該組成物が、デバイスを使用した、治療有効量での該対象の網膜への投与用であり、該細胞を投与する該デバイスの外径が90〜100μmである、薬学的組成物。
【請求項５】
PRE細胞を投与する前記デバイスの内径が、65〜75μmである、請求項4に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
(i)前記デバイスが41G（ゲージ）である、
(ii)前記デバイスがカニューレを含む、または
(iii)前記デバイスが注射針を含む、
請求項4に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記カニューレが、25G、38G、または41Gである、請求項6に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記注射針が、18Gまたは24Gである、請求項6に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記デバイスが、18Gの注射針および25G/41Gのカニューレを含む、請求項4に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
投与が、硝子体切除術による、請求項4に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
RPE細胞の投与のためのブレブが形成される、請求項10に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記その細胞の少なくとも95%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回るか、または150オームを上回るか、200オームを上回るか、または900オームを上回る、請求項4〜11のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
PMEL17発現が、非分化細胞に比べて3〜50倍増加している、請求項1、2、または3に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記治療有効量が投与1回当たり細胞50,000〜1,000,000個である、請求項1、2、および4〜12のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記治療有効量が、投与1回当たり細胞50,000個、投与1回当たり細胞200,000個、投与1回当たり細胞500,000個、および投与1回当たり細胞1,000,000個からなる群より選択される、請求項1、2、および4〜12のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
硝子体腔、内側または外側網膜、網膜周辺、または脈絡膜内への投与用である、請求項1〜15のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記対象の網膜下腔への投与用である、請求項1〜15のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
単回投与用である、請求項1〜17のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記薬学的組成物が1μl当たり細胞500個〜1μl当たり細胞10,000個を含む、請求項3または15に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
(i)前記量が投与1回当たり細胞50,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約500〜1000個を含む、
(ii)前記量が投与1回当たり細胞200,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約2,000個を含む、
(iii)前記量が投与1回当たり細胞500,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約5,000個を含む、または
(iv)前記量が投与1回当たり細胞1,000,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約10,000個を含む、
請求項3または15に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記網膜疾患または前記網膜異常が、色素性網膜炎、網膜剥離、網膜形成異常、網膜萎縮、網膜症、黄斑ジストロフィー、錐体ジストロフィー、錐体杆体ジストロフィー、マラッティア・レベンティネーズ（Malattia Leventinese）、ドイン蜂巣状ジストロフィー、ソーズビージストロフィー、パターン／蝶形ジストロフィー（pattern／butterfly dystrophy）、ベスト卵黄様ジストロフィー（Best vitelliform dystrophy）、ノースカロライナジストロフィー（North Carolina dystrophy）、中心性輪紋状脈絡膜ジストロフィー、網膜色素線条症、中毒性黄斑症、スタルガルト病、病的近視、色素性網膜炎、および黄斑変性からなる群より選択される、請求項2、3、または4に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記疾患が加齢性黄斑変性である、請求項21に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記加齢性黄斑変性が、乾燥型の加齢性黄斑変性である、請求項22に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
前記対象が、
(i)55歳またはそれ以上であること；
(ii)少なくとも1つの眼において0.5乳頭面積（disc area）を超える、黄斑における地図状萎縮を伴う乾性AMDの眼底検査所見を有すること；
(iii)モニターされた麻酔管理の下で硝子体網膜外科手術を受けることができること；および
(iv)免疫不全症を有さないこと
からなる群より選択される基準のうちの少なくとも1つを満たす、請求項1、2、3、4、または15に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
前記対象がAMD以外の網膜疾患を有さない、請求項24に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
前記対象が基準(i)〜(iv)の各々を満たす、請求項24または25のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】
前記細胞を投与する前記デバイスの外口径が90〜100μmである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】
前記デバイスが、カニューレまたは注射針を含む、請求項27に記載の薬学的組成物。
【請求項２９】
前記カニューレのゲージが25Gである、請求項28に記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
組成物中のOct4+TRA-1-60+細胞の数が1:250,000を下回る、請求項1〜29のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
免疫染色によって測定された場合、前記細胞の約80%〜100%がベストロフィン1（Bestropihn 1）を発現する、請求項1〜30のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
免疫染色によって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%が、小眼球症関連転写因子(MITF)を発現する、請求項1〜31のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
FACSによって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%がペアードボックス遺伝子6(PAX-6)を発現する、請求項1〜32のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
FACSによって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%がペアードボックス遺伝子6(PAX-6)を発現しない、請求項1〜32のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
前記細胞が、1日1ml当たり500 ng、または1000 ng、または2000 ng、または3000 ng、または4000 ngを上回る色素上皮由来因子(PEDF)を分泌する、請求項1〜34のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
前記細胞が、PEDFおよび血管内皮成長因子(VEGF)を極性化（polarized）様式で分泌する、請求項1〜35のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
PEDFの基底部分泌に対するPEDFの頂端分泌の比率が1を上回る、または1.5を上回る、または2を上回る、または3を上回る、または4を上回る、または5を上回る、または6を上回る、請求項36に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記比率が、2〜8℃における8時間のインキュベーション後に、1を上回ったままであるか、または安定したままである、請求項37に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
前記細胞の前記経上皮電気抵抗が、2〜8℃における6〜24時間のインキュベーション後に100オームを上回ったままである、請求項1、2、3、または11のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
VEGFの頂端分泌に対するVEGFの基底部分泌の比率が1を上回る、または1.5を上回る、または2を上回る、または3を上回る、または4を上回る、または5を上回る、または6を上回る、請求項36に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
前記比率が、2〜8℃における6〜24時間のインキュベーション後に、1を上回ったままであるか、または安定したままである、請求項40に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記細胞が、網膜下投与後にRCSラットにおける視力をレスキューすることができる、請求項1〜41のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
前記細胞が、RCSラットにおいて網膜下投与後最大180日間、光受容体をレスキューすることができる、請求項1〜42のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
前記細胞がヒト胚性幹細胞のエクスビボ分化によって生成される、請求項1〜43のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４５】
前記細胞が、
TGFβスーパーファミリーの1つまたは複数のメンバーを含む培地中で、多能性幹細胞を培養することか、または分化細胞を培養することを含む、指向分化法
によって生成される、請求項1〜44のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
前記トランスフォーミング成長因子β(TGFβ)スーパーファミリーの1つまたは複数のメンバーが、TGFβ1、TGFβ3、またはアクチビンAを含む、請求項45に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
前記TGFβスーパーファミリーのメンバーが、アクチビンAである、請求項46に記載の薬学的組成物。
【請求項４８】
前記多能性幹細胞または前記分化細胞が、TGFβスーパーファミリーのメンバーを含む培地中で培養される前に、ニコチンアミドを含む培地中で培養される、請求項47に記載の薬学的組成物。
【請求項４９】
ヒト臍帯線維芽細胞上で前記胚性幹細胞が培養される、請求項48に記載の薬学的組成物。
【請求項５０】
大気酸素レベルが約10%未満である、請求項44〜49のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項５１】
前記細胞の生成が、ニコチンアミドの存在下で大気酸素レベルが約10%を上回る条件下において、培地中で胚性幹細胞または人工多能性幹細胞を培養することをさらに含む、請求項50に記載の薬学的組成物。
【請求項５２】
前記投与デバイスによる投与後に、約80%〜95%のRPE細胞が生存可能である、請求項4記載の薬学的組成物。
【請求項５３】
経上皮電気抵抗(TEER)ならびにPEDFおよびVEGFの極性化分泌が、送達前後で同様である、請求項4記載の薬学的組成物。
【請求項５４】
乾燥型の加齢性黄斑変性を有する対象を治療するための組成物の製造における、ヒト網膜色素上皮（RPE）細胞の使用であって、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回り、該組成物が、治療有効量での該対象の網膜下への投与用である、使用。
【請求項５５】
網膜疾患または網膜異常を有する対象を治療するための組成物の製造における、ヒト多角形網膜色素上皮（RPE）細胞の使用であって、その細胞の少なくとも85%、または少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%、または少なくとも100%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回り、該組成物が、治療有効量での該対象の網膜への投与用である、使用。
【請求項５６】
網膜疾患または網膜異常を有する対象を治療するための組成物の製造における、ヒト多角形網膜色素上皮（RPE）細胞の使用であって、その細胞の少なくとも95%、または少なくとも96%、または少なくとも97%、または少なくとも98%、または少なくとも99%、または少なくとも100%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回り、該組成物が、治療有効量での該対象の網膜への投与用であり、該治療有効量が投与1回当たり細胞50,000〜5,000,000個である、使用。
【請求項５７】
網膜疾患または網膜異常を有する対象を治療するための組成物の製造における、ヒト網膜色素上皮（RPE）細胞の使用であって、該組成物が、デバイスを使用した、治療有効量での該対象の網膜への投与用であり、該細胞を投与する該デバイスの外径が90〜100μmである、使用。
【請求項５８】
PRE細胞を投与する前記デバイスの内径が、65〜75μmである、請求項57に記載の使用。
【請求項５９】
(i)PRE細胞を投与する前記デバイスが41G（ゲージ）である、
(ii)前記デバイスがカニューレを含む、または
(iii)PRE細胞を投与する前記デバイスが注射針を含む、
請求項57に記載の使用。
【請求項６０】
前記カニューレが、25G、38G、または41Gである、請求項59に記載の使用。
【請求項６１】
前記注射針が、18Gまたは24Gである、請求項60に記載の使用。
【請求項６２】
前記デバイスが、18Gの注射針および25G/41Gのカニューレを含む、請求項57に記載の使用。
【請求項６３】
投与が、硝子体切除術による、請求項57に記載の使用。
【請求項６４】
RPE細胞の投与のためのブレブが形成される、請求項63に記載の使用。
【請求項６５】
前記その細胞の少なくとも95%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回るか、または150オームを上回るか、200オームを上回るか、または900オームを上回る、請求項57〜64のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６６】
PMEL17発現が、非分化細胞に比べて3〜50倍増加している、請求項54、55、または56に記載の使用。
【請求項６７】
前記治療有効量が投与1回当たり細胞50,000〜1,000,000個である、請求項54、55、および56〜65のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６８】
前記治療有効量が、投与1回当たり細胞50,000個、投与1回当たり細胞200,000個、投与1回当たり細胞500,000個、および投与1回当たり細胞1,000,000個からなる群より選択される、請求項53、54、および56〜65のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６９】
硝子体腔、内側または外側網膜、網膜周辺、または脈絡膜内への投与用である、請求項54〜68のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７０】
前記対象の網膜下腔への投与用である、請求項54〜68のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７１】
単回投与用である、請求項54〜70のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７２】
前記組成物が1μl当たり細胞500個〜1μl当たり細胞10,000個を含む、請求項56または68に記載の使用。
【請求項７３】
(i)前記量が投与1回当たり細胞50,000個である場合、前記組成物が1μl当たり細胞約500〜1000個を含む、
(ii)前記量が投与1回当たり細胞200,000個である場合、前記組成物が1μl当たり細胞約2,000個を含む、
(iii)前記量が投与1回当たり細胞500,000個である場合、前記組成物が1μl当たり細胞約5,000個を含む、または
(iv)前記量が投与1回当たり細胞1,000,000個である場合、前記組成物が1μl当たり細胞約10,000個を含む、
請求項56または78に記載の使用。
【請求項７４】
前記網膜疾患または前記網膜異常が、色素性網膜炎、網膜剥離、網膜形成異常、網膜萎縮、網膜症、黄斑ジストロフィー、錐体ジストロフィー、錐体杆体ジストロフィー、マラッティア・レベンティネーズ（Malattia Leventinese）、ドイン蜂巣状ジストロフィー、ソーズビージストロフィー、パターン／蝶形ジストロフィー（pattern／butterfly dystrophy）、ベスト卵黄様ジストロフィー（Best vitelliform dystrophy）、ノースカロライナジストロフィー（North Carolina dystrophy）、中心性輪紋状脈絡膜ジストロフィー、網膜色素線条症、中毒性黄斑症、スタルガルト病、病的近視、色素性網膜炎、および黄斑変性からなる群より選択される、請求項55、56、または57に記載の使用。
【請求項７５】
前記疾患が加齢性黄斑変性である、請求項74に記載の使用。
【請求項７６】
前記加齢性黄斑変性が、乾燥型の加齢性黄斑変性である、請求項75に記載の使用。
【請求項７７】
前記対象が、
(i)55歳またはそれ以上であること；
(ii)少なくとも1つの眼において0.5乳頭面積（disc area）を超える、黄斑における地図状萎縮を伴う乾性AMDの眼底検査所見を有すること；
(iii)モニターされた麻酔管理の下で硝子体網膜外科手術を受けることができること；および
(iv)免疫不全症を有さないこと
からなる群より選択される基準のうちの少なくとも1つを満たす、請求項54、55、56、57、68、69に記載の使用。
【請求項７８】
前記対象がAMD以外の網膜疾患を有さない、請求項77に記載の使用。
【請求項７９】
前記対象が基準(i)〜(iv)の各々を満たす、請求項77または78のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８０】
前記細胞を投与する前記デバイスの外口径が90〜100μmである、請求項54〜56のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８１】
前記デバイスが、カニューレまたは注射針を含む、請求項80に記載の使用。
【請求項８２】
前記カニューレのゲージが25Gである、請求項81に記載の使用。
【請求項８３】
組成物中のOct4+TRA-1-60+細胞の数が1:250,000を下回る、請求項54〜82のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８４】
免疫染色によって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%がベストロフィン1（Bestropihn 1）を発現する、請求項54〜83のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８５】
免疫染色によって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%が、小眼球症関連転写因子(MITF)を発現する、請求項54〜84のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８６】
FACSによって測定された場合、前記細胞の80%超がペアードボックス遺伝子6(PAX-6)を発現する、請求項54〜85のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８７】
FACSによって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%がペアードボックス遺伝子6(PAX-6)を発現しない、請求項54〜85のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８８】
前記細胞が、1日1ml当たり500 ng、または1000 ng、または2000 ng、または3000 ng、または4000 ngを上回る色素上皮由来因子(PEDF)を分泌する、請求項54〜87のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８９】
前記細胞が、PEDFおよび血管内皮成長因子(VEGF)を極性化（polarized）様式で分泌する、請求項54〜88のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９０】
PEDFの基底部分泌に対するPEDFの頂端分泌の比率が1を上回る、または1.5を上回る、または2を上回る、または3を上回る、または4を上回る、または5を上回る、または6を上回る、請求項89に記載の使用。
【請求項９１】
前記比率が、2〜8℃における6〜24時間のインキュベーション後に、1を上回ったままであるか、または安定したままである、請求項90に記載の使用。
【請求項９２】
前記細胞の前記経上皮電気抵抗が、2〜8℃における8時間のインキュベーション後に100オームを上回ったままである、請求項54、55、または56のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９３】
VEGFの頂端分泌に対するVEGFの基底部分泌の比率が1を上回る、請求項89または90に記載の使用。
【請求項９４】
前記比率が、2〜8℃における8時間のインキュベーション後に、1を上回ったままであるか、または安定したままである、請求項93に記載の使用。
【請求項９５】
前記細胞が、網膜下投与後にRCSラットにおける視力をレスキューすることができる、請求項54〜94のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９６】
前記細胞が、RCSラットにおいて網膜下投与後最大180日間、光受容体をレスキューすることができる、請求項54〜94のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９７】
前記細胞がヒト胚性幹細胞のエクスビボ分化によって生成される、請求項54〜96のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９８】
前記細胞が、
TGFβスーパーファミリーの1つまたは複数のメンバーを含む培地中で、多能性幹細胞を培養することか、または分化細胞を培養することを含む、指向分化法
によって生成される、請求項54〜97のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９９】
前記TGFβスーパーファミリーのメンバーが、アクチビンAである、請求項98に記載の使用。
【請求項１００】
前記多能性幹細胞または前記分化細胞が、TGFβスーパーファミリーのメンバーを含む培地中で培養される前に、ニコチンアミドを含む培地中で培養される、請求項99に記載の使用。
【請求項１０１】
ヒト臍帯線維芽細胞上で前記胚性幹細胞が培養される、請求項97に記載の使用。
【請求項１０２】
大気酸素レベルが約10%未満である、請求項97〜100のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０３】
前記細胞の生成が、ニコチンアミドの存在下で大気酸素レベルが約10%を上回る条件下において、培地中で胚性幹細胞または人工多能性幹細胞を培養することをさらに含む、請求項100に記載の使用。
【請求項１０４】
前記投与デバイスによる投与後に、約80%〜95%のRPE細胞が生存可能である、請求項54〜58のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０５】
経上皮電気抵抗(TEER)ならびにPEDFおよびVEGFの極性化分泌が、送達前後で同様である、請求項54〜58のいずれか一項に記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
[本発明1001]
乾燥型の加齢性黄斑変性(AMD)を有する対象の網膜下へ、ヒトRPE細胞を含む薬学的組成物の治療有効量を投与し、それによって該対象を治療する工程であって、その細胞の少なくとも95%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該対象に対する該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回る、工程
を含む、該対象を治療する方法。
[本発明1002]
網膜疾患または網膜異常を有する対象の網膜へ、ヒト多角形RPE細胞を含む薬学的組成物の治療有効量を投与し、それによって該対象を治療する工程であって、その細胞の少なくとも95%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、該対象に対する該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回り、該治療有効量が投与1回当たり細胞50,000〜5,000,000個である、工程
を含む、該対象を治療する方法。
[本発明1003]
デバイスを使用して、網膜疾患または網膜異常を有する対象の網膜へ、ヒトRPE細胞を含む薬学的組成物の治療有効量を投与し、それによって該対象を治療する工程であって、該細胞を投与する該デバイスの外径が90〜100μmである、工程
を含む、該対象を治療する方法。
[本発明1004]
前記デバイスがカニューレである、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記その細胞の少なくとも95%が、プレメラノソームタンパク質(PMEL17)および細胞性レチンアルデヒド結合タンパク質(CRALBP)を同時発現し、前記対象に対する該細胞の経上皮電気抵抗が100オームを上回る、本発明1003の方法。
[本発明1006]
前記治療有効量が投与1回当たり細胞50,000〜1,000,000個である、本発明1001または1003の方法。
[本発明1007]
前記治療有効量が、投与1回当たり細胞50,000個、投与1回当たり細胞200,000個、投与1回当たり細胞500,000個、および投与1回当たり細胞1,000,000個からなる群より選択される、本発明1002または1006の方法。
[本発明1008]
前記対象の網膜下腔へ前記細胞を投与する、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1009]
単回投与で前記細胞を投与する、本発明1001〜1007のいずれかの方法。
[本発明1010]
前記薬学的組成物が1μl当たり細胞500個〜1μl当たり細胞10,000個を含む、本発明1002または1007の方法。
[本発明1011]
前記量が投与1回当たり細胞50,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約500〜1000個を含む、本発明1002または1007の方法。
[本発明1012]
前記量が投与1回当たり細胞200,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約2,000個を含む、本発明1002または1007の方法。
[本発明1013]
前記量が投与1回当たり細胞500,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約5,000個を含む、本発明1002または1007の方法。
[本発明1014]
前記量が投与1回当たり細胞1,000,000個である場合、前記薬学的組成物が1μl当たり細胞約10,000個を含む、本発明1002または1007の方法。
[本発明1015]
前記網膜疾患または前記網膜異常が、色素性網膜炎、網膜剥離、網膜形成異常、網膜萎縮、網膜症、黄斑ジストロフィー、錐体ジストロフィー、錐体杆体ジストロフィー、マラッティア・レベンティネーズ（Malattia Leventinese）、ドイン蜂巣状ジストロフィー、ソーズビージストロフィー、パターン／蝶形ジストロフィー（pattern／butterfly dystrophy）、ベスト卵黄様ジストロフィー（Best vitelliform dystrophy）、ノースカロライナジストロフィー（North Carolina dystrophy）、中心性輪紋状脈絡膜ジストロフィー、網膜色素線条症、中毒性黄斑症、スタルガルト病、病的近視、色素性網膜炎、および黄斑変性からなる群より選択される、本発明1002または1003の方法。
[本発明1016]
前記疾患が加齢性黄斑変性である、本発明1015の方法。
[本発明1017]
前記加齢性黄斑変性が、乾燥型の加齢性黄斑変性である、本発明1016の方法。
[本発明1018]
前記対象が、
(i)55歳またはそれ以上であること；
(ii)少なくとも1つの眼において0.5乳頭面積（disc area）を超える、黄斑における地図状萎縮を伴う乾性AMDの眼底検査所見を有すること；
(iii)モニターされた麻酔管理の下で硝子体網膜外科手術を受けることができること；および
(iv)免疫不全症を有さないこと
からなる群より選択される基準のうちの少なくとも1つを満たす、本発明1001または1017の方法。
[本発明1019]
前記対象がAMD以外の網膜疾患を有さない、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記対象が基準(i)〜(iv)の各々を満たす、本発明1018または1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記細胞を投与する前記デバイスの外口径が90〜100μmである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1022]
前記デバイスがカニューレである、本発明1021の方法。
[本発明1023]
前記デバイスが注射針をさらに備える、本発明1004または1022の方法。
[本発明1024]
前記カニューレのゲージが25Gである、本発明1004または1022の方法。
[本発明1025]
集団中のOct4+TRA-1-60+細胞の数が1:250,000を下回る、本発明1001〜1024のいずれかの方法。
[本発明1026]
免疫染色によって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%がベストロフィン1（Bestropihn 1）を発現する、本発明1001〜1025のいずれかの方法。
[本発明1027]
免疫染色によって測定された場合、前記細胞の少なくとも80%が、小眼球症関連転写因子(MITF)を発現する、本発明1001〜1026のいずれかの方法。
[本発明1028]
FACSによって測定された場合、前記細胞の80%超がペアードボックス遺伝子6(PAX-6)を発現する、本発明1001〜1027のいずれかの方法。
[本発明1029]
前記細胞が、1日1ml当たり500 ngを上回る色素上皮由来因子(PEDF)を分泌する、本発明1001〜1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
前記細胞が、PEDFおよび血管内皮成長因子(VEGF)を極性化（polarized）様式で分泌する、本発明1001〜1029のいずれかの方法。
[本発明1031]
PEDFの基底部分泌に対するPEDFの頂端分泌の比率が1を上回る、本発明1030の方法。
[本発明1032]
前記比率が、2〜8℃における8時間のインキュベーション後に1を上回ったままである、本発明1031の方法。
[本発明1033]
前記細胞の前記経上皮電気抵抗が、2〜8℃における8時間のインキュベーション後に100オームを上回ったままである、本発明1001、1002、または1005のいずれかの方法。
[本発明1034]
VEGFの頂端分泌に対するVEGFの基底部分泌の比率が1を上回る、本発明1030または1031の方法。
[本発明1035]
前記比率が、2〜8℃における8時間のインキュベーション後に1を上回ったままである、本発明1034の方法。
[本発明1036]
前記細胞が、網膜下投与後にRCSラットにおける視力をレスキューすることができる、本発明1001〜1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
前記細胞が、RCSラットにおいて網膜下投与後最大180日間、光受容体をレスキューすることができる、本発明1001〜1035のいずれかの方法。
[本発明1038]
前記細胞をヒト胚性幹細胞のエクスビボ分化によって生成する、本発明1001〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
前記細胞を、
(a)分化細胞を生成するように、ニコチンアミドを含みアクチビンAを欠如している培地中で、ヒト胚性幹細胞または人工多能性幹細胞を培養すること；
(b)ニコチンアミドおよびアクチビンAを含む培地中で該分化細胞を培養して、RPE系統へさらに分化している細胞を生成すること；ならびに
(c)ニコチンアミドを含みアクチビンAを欠如している培地中で、RPE系統へさらに分化している該細胞を培養すること
によって生成する、本発明1001〜1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
bFGFおよびTGFβを含む培地中で、前記胚性幹細胞または前記人工多能性幹細胞を増殖させる、本発明1039の方法。
[本発明1041]
ヒト臍帯線維芽細胞上で前記胚性幹細胞を培養する、本発明1039の方法。
[本発明1042]
大気酸素レベルが約10%未満である条件下において、工程(a)〜(c)が行われる、本発明1039〜1041のいずれかの方法。
[本発明1043]
工程(a)の前に、ニコチンアミドの存在下で大気酸素レベルが約10%を上回る条件下において、培地中で胚性幹細胞または人工多能性幹細胞を培養する工程をさらに含む、本発明1042の方法。
[本発明1044]
工程(c)の後に、ニコチンアミドの存在下で大気酸素レベルが約10%を上回る条件下において、培地中で前記分化細胞を培養する工程をさらに含む、本発明1042または1043の方法。
特に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術および／または科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様のまたは均等な方法および材料が本発明の態様の実施または試験において使用され得るが、例示的な方法および／または材料を以下に記載する。矛盾する場合は、定義を含む、本特許明細書が、制御する。さらに、材料、方法、および例は、説明のために過ぎず、必ずしも限定であるようには意図されない。