【手続補正書】
【提出日】平成30年12月19日(2018.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９０】
光開始
Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨ（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、脱気された無水ＤＭＦ（５００μＬ）中で溶解する。パルミチン酸ビニル（９０μＬ、０．３ｍｍｏｌ）及びＤＭＰＡ（５．０ｍｇ、２０μｍｏｌ）を、脱気されたＣＨ２Ｃｌ２（２００μＬ）中で溶解する。２つの溶液を複合し、結果として生じる混合物を、標準光化学装置中で６時間（３６５ｎｍのＵＶ）、照射する。ＴＬＣによって反応混合物中に更なる変化が認められなくなったら、溶媒を減圧下で除去する。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（３：１のＥｔＯＡｃ：ｎ−ヘキサン＋２％ＡｃＯＨ）によって精製し、続いて、１：１のＨ２Ｏ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させて、粉末状の白色固体（２４ｍｇ、１３％）としての標記化合物を得る。所望の生成物２００の構造を、質量分析法によって確認する。
１．４ペプチド複合体２０、２２、及び２６の調製
ペプチド
【化３１】
2018505152.tif 000001
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９２】
Ｆｍｏｃ脱保護の後、ＤＭＦ（３ｍＬ）中で、無水酢酸（５０μＬ）及びｉＰｒ２ＮＥｔ（５０μＬ）を樹脂に添加することでＮ−アセチル化を実行する。次いで、樹脂を室温で３０分間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して遊離アミンが残っていないことを確認する。樹脂を排水し、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、風乾する。ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＤＯＤＴ：ｉＰｒ３ＳｉＨ（９４：２．５：２．５：１％ｖ／ｖ、１０．０ｍＬ）の切断カクテルを乾燥樹脂に添加し、混合物を室温で４時間、振盪する。次いで、切断カクテルを冷たいジエチルエーテルで処理して、粗ペプチドを沈澱させ、これを４０００ｒｐｍで５分間、遠心分離させる。スピンステップを繰り返す前に、上澄みを廃棄し、ペレットをジエチルエーテルで洗浄する。次いで、エーテル相を廃棄し、Ｎ２フローでペプチドを乾燥させる。次いで、粗ペプチドを、Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させる。粗生成物を、以下に概説されるチオール−エン反応まで存続させる。
Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２［配列番号１０３］
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９３】
１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ中で予め膨潤させたアミノメチルポリスチレン（ＰＳ）樹脂（０．２０ｇ、１．０ｍｍｏｌ／ｇ充填、０．２ｍｍｏｌスケール）に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中、Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−アミド−ＯＨ（２１６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１５１．８ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、及びｉＰｒ２ＮＥｔ（１４０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の連結混合物を添加する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を確立する。次いで、ＤＭＦ（５ｍＬ）中、２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することによりリンカーアミノ基を脱保護する。Ｔｒｉｂｕｔｅ自動ペプチド合成機に樹脂を移す。一般的な自動連結法を使用して、Ｓｅｒ残基まで、かつそれを含む鎖伸長を実行する。１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ（２ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（２３５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（３６０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（１２０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及び２，４，６−コリジン（１２０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の混合物の添加により、Ｃｙｓ残基の連結を手動で実行する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を確立する。ＤＭＦ（５ｍＬ）中２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することにより最終的なＦｍｏｃ脱保護を達成する。樹脂を排水し、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、風乾する。ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＤＯＤＴ：ｉＰｒ３ＳｉＨ（９４：２．５：２．５：１％ｖ／ｖ、１０．０ｍＬ）の切断カクテルを乾燥樹脂に添加し、混合物を室温で４時間、振盪する。次いで、切断カクテルを冷たいジエチルエーテルで処理して、粗ペプチドを沈澱させ、これを４０００ｒｐｍで５分間、遠心分離させる。スピンステップを繰り返す前に、上澄みを廃棄し、ペレットをジエチルエーテルで洗浄する。次いで、エーテル相を廃棄し、Ｎ２フローでペプチドを乾燥させる。次いで、粗ペプチドを、Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させる。粗生成物を、以下に概説されるチオール−エン反応まで存続させる。
Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２２４［配列番号１０３］
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９４】
１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ中で予め膨潤させたアミノメチルポリスチレン（ＰＳ）樹脂（０．２０ｇ、１．０ｍｍｏｌ／ｇ充填、０．２ｍｍｏｌスケール）に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中、Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−アミド−ＯＨ（２１６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１５１．８ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、及びｉＰｒ２ＮＥｔ（１４０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の連結混合物を添加する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験が完全な連結を示した。次いで、ＤＭＦ（５ｍＬ）中、２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することによりリンカーアミノ基を脱保護する。Ｔｒｉｂｕｔｅ自動ペプチド合成機に樹脂を移す。一般的な自動連結法を使用して、Ｓｅｒ（Ｔｒｔ）残基まで、かつそれを含む鎖伸長を実行する。１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ（２ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（２３５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（３６０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（１２０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及び２，４，６−コリジン（１２０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の混合物の添加により、Ｃｙｓ残基の連結を手動で実行する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を確立する。Ｆｍｏｃ脱保護の後、ＤＭＦ（３ｍＬ）中で、無水酢酸（５０μＬ）及びｉＰｒ２ＮＥｔ（５０μＬ）を樹脂に添加することでＮ−アセチル化を実行する。次いで、樹脂を室温で３０分間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して遊離アミンが残っていないことを確立する。樹脂を排水し、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、風乾する。ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＤＯＤＴ：ｉＰｒ３ＳｉＨ（９４：２．５：２．５：１％ｖ／ｖ、１０．０ｍＬ）の切断カクテルを乾燥樹脂に添加し、混合物を室温で２時間、振盪する。次いで、切断カクテルを冷たいジエチルエーテルで処理して、粗ペプチドを沈澱させ、これを４０００ｒｐｍで５分間、遠心分離させる。スピンステップを繰り返す前に、上澄みを廃棄し、ペレットをジエチルエーテルで洗浄する。次いで、エーテル相を廃棄し、Ｎ２フローでペプチドを乾燥させる。次いで、粗ペプチドを、Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させる。粗生成物を、以下に概説されるチオール−エン反応まで存続させる。
ペプチド複合体
Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２２４［配列番号１０３］及びパルミチン酸ビニル２２のチオール-エン反応生成物
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９５】
ｎｍＰ（４ｍＬ）の溶液中の粗ペプチド２４（２５ｍｇ、３２．６μｍｏｌ）及びＤＭＰＡ（３．３ｍｇ、１３．１μｍｏｌ）に、パルミチン酸ビニル（５２．９μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加する。結果として生じる混合物を、３６５ｎｍで１時間、標準ＵＶ光化学装置中で撹拌しながら照射する。所望の生成物２２を、質量分析によって検出する。分取ＲＰ  ＨＰＬＣを介して、５〜６５％の勾配でＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ（毎分３％ＭｅＣＮ、５０℃）で運転されるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラムで粗生成物２２を精製する。質量分析法を使用して、所望の生成物２２の構造を確認する。
Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２［配列番号１０３］及びパルミチン酸ビニル２０のチオール-エン反応生成物
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４９６】
ｎｍＰ中、５当量のパルミチン酸ビニル、０．４当量のＤＭＰＡと、粗Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２との、３６５ｎｍでの１時間の照射によるチオール−エン反応によって所望の生成物２０（Ｐａｍ−ＣＳＫ４）を得て、その素性をＭＳ分析によって判定する。
ＡｃＮ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨ２５［配列番号１０２］及びパルミチン酸ビニル２６のチオール−エン反応生成物
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５３４】
ＴＦＡ／ＥＤＴでのペプチドの樹脂からの切断、及びエーテル中でのその沈澱に続き、固体を１：１の水／ＭｅＣＮ中で溶解し、凍結乾燥させる。ペプチドがメチオニン残基を含有する場合、凍結乾燥の前に、溶液を６０℃で１時間、加熱して、切断中に生じ得る任意のＳ−アルキル化を逆転させる。次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣによってペプチドを精製して、＞９５％の材料を得る。
【表３】
2018505152.tif 000002
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５４５】
ＨＰＬＣによって反応を分析し、所望の生成物（表４Ｂ）への変換を示し、該生成物を次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣによって単離する。
【表４】
2018505152.tif 000003
【表５】
2018505152.tif 000004
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５６１】
実施例５．複合されたＬＭＰ２  Ｓ４（ＳＫ４）の分析
１．１概略的な詳細
ペプチドＬＭＰ２  Ｓ４（ＳＫ４）（ＳＫＫＫＫＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ、配列番号１９）を、本質的に上記のように合成、アセチル化、及びＰａｍ１Ｃｙｓに複合して、Ｐａｍ１−Ｃ（Ａｃ）ＳＫ４−ＬＭＰ２  Ｓ４［配列番号１０７］を得た。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2018505152000001.app
【手続補正１１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｖ）、
【化１】
2018505152.tif 000005
の化合物であって、式中、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１が、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか；またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり；そして
ここでＡ１が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＲ９がＡ２であり、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含み、または
ここで（ｉ）Ａ１が配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含み、（ｉｉ）Ｒ９がＡ２であり、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含み、又は（ｉｉｉ）Ａ１が配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含み、かつＲ９がＡ２であり、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含み；
ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキル、並びにＲ３中の任意のシクロアルキルが、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、Ｎ（Ｃ１−６アルキル）（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１−６アルキル）（Ｃ１−６アルキル）、ＳＯ２（Ｃ１−６アルキル）、Ｏ（Ｃ１−６アルキル）、Ｓ（Ｃ１−６アルキル）、Ｓ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ（Ｏ）（Ｃ１−６アルキル）、及びＣ１−６脂肪族からなる群から独立して選択される１つ以上の置換基によって任意選択で置換されている、化合物、
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ９が独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２であり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであるが、
但し、
Ａ１及びＡ２のうちの少なくとも１つが、ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含み、かつ
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであることを条件とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｌ１がＣ５−２１アルキル又は線状Ｃ１５アルキルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ｍが０〜２の整数である、又はｍが０若しくは１である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
ｍが０である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が、水素である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４及びＲ５が各々、水素である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ６及びＲ７が各々、水素である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ８が水素であり、Ｒ９が、水素、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｌ３が、Ｍｅである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記ペプチドが、配列番号７６〜１０１のいずれか１つのアミノ酸配列からなる群から選択されるエピトープを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ａ１が、セリンであるか、またはＮ末端の最初のアミノ酸残基としてセリンを含むペプチドである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ａ１及び／またはＡ２が、前記ペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含む、ペプチドである、請求項１〜１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記ペプチドが、
ａ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｂ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基，
ｃ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｄ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｅ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｆ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列、
ｇ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｈ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｉ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｊ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｋ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｌ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列、
ｍ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｎ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｏ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｐ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｑ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｒ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列、
ｓ．または上記の（ａ）〜（ｒ）のうちの２つ以上の任意の組み合わせ、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、またはそれからなる、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
配列番号１〜７５のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になる、単離された、精製された、または組換えペプチド。
【請求項１７】
有効量の請求項１〜１５のいずれか１項に記載のペプチド複合体または請求項１６に記載のペプチド、あるいはその薬学的に許容される塩または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
対象にワクチン接種するまたは前記対象において免疫応答を引き出すための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のペプチド複合体または請求項１６に記載のペプチド、あるいはその薬学的に許容される塩または溶媒和物、あるいは請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
対象にワクチン接種するまたは前記対象において免疫応答を引き出すための医薬の製造における、有効量の請求項１〜１５に記載のペプチド複合体または請求項１６に記載のペプチド、あるいはその薬学的に許容される塩または溶媒和物、あるいは有効量の請求項１７に記載の薬学的組成物の使用。
【請求項２０】
請求項１に記載のペプチド複合体を作製するための方法であって、前記方法が、
（Ａ）脂質含有複合パートナーと、アミノ酸包含複合パートナーとを、前記脂質含有複合パートナーを前記アミノ酸包含複合パートナーに複合するのに有効な条件下で、炭素−炭素二重結合のチオールでのヒドロチオール化によって、反応させる工程、ここで前記方法は、前記アミノ酸複合体の前記アミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることを更に含み、前記ペプチド複合体は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む；又は
（Ｂ）脂質含有複合パートナーと、ペプチド包含複合パートナーとを、前記脂質含有パートナーを前記ペプチド包含複合パートナーに複合するのに有効な条件下で、炭素−炭素二重結合のチオールでのヒドロチオール化によって、反応させる工程、ここで前記ペプチド包含複合パートナーは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む；又は
（Ｃ）脂質付加（ｌｉｐｉｄｉｄａｔｅｄ）アミノ酸またはペプチドを取得し、前記脂質付加アミノ酸またはペプチドを１つ以上のアミノ酸又はペプチドに連結することにより、ペプチド複合体を取得する工程、ここで前記ペプチド複合体は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む；
を含む、
方法。