【手続補正書】
【提出日】令和1年7月24日(2019.7.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．少なくとも１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）と、
ｂ．配列番号１６４の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、少なくとも１つの３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）とを含み、
高い翻訳効率によって特徴付けられることを特徴とする人工核酸分子。
【請求項２】
前記高い翻訳効率が、前記少なくとも１つの３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）によって提供される請求項１に記載の人工核酸分子。
【請求項３】
前記人工核酸分子の翻訳効率が、レファレンス核酸分子の翻訳効率と比較され、
前記レファレンス核酸分子が、前記人工核酸分子の少なくとも１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）と同一である少なくとも１つのＯＲＦを含み、前記レファレンス核酸分子が、前記人工核酸分子の３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）を含まず、
前記人工核酸分子の前記翻訳効率及び前記レファレンス核酸分子の前記翻訳効率が、
（ｉ）哺乳類細胞に前記人工核酸分子をトランスフェクトし、トランスフェクション後の特定の時点（例えば、２４時間又は４８時間）において、前記人工核酸分子の前記ＯＲＦによってコードされているタンパク質の発現量を測定する工程、
（ｉｉ）哺乳類細胞に前記レファレンス核酸分子をトランスフェクトし、トランスフェクション後の同時点において、前記レファレンス核酸分子の前記ＯＲＦによってコードされているタンパク質の発現量を測定する工程、
（ｉｉｉ）前記人工核酸分子から発現したタンパク質の量の前記レファレンス核酸分子から発現したタンパク質の量に対する比を計算する工程
を含む方法によって比較され、
（ｉｉｉ）において計算される前記比が、≧１、好ましくは＞１である請求項１から２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項４】
前記レファレンス核酸分子が、前記人工核酸分子中には存在しない３’−ＵＴＲエレメントを含む請求項３に記載の人工核酸分子。
【請求項５】
前記レファレンス核酸分子が、アルブミン遺伝子の３’−ＵＴＲ、好ましくは配列番号２０７に係る配列に対応する３’−ＵＴＲに由来する３’−ＵＴＲエレメントを含む請求項４に記載の人工核酸分子。
【請求項６】
前記レファレンス核酸分子が任意の３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）を含まない請求項３に記載の人工核酸分子。
【請求項７】
前記オープンリーディングフレームが、前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが由来する遺伝子とは異なる遺伝子に由来する請求項１から６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項８】
少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントを含む請求項１から７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項９】
前記人工核酸分子の前記オープンリーディングフレームが、レポータータンパク質をコードしていない請求項１から８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、３’−ＵＴＲが欠損しているレファレンス核酸分子からのタンパク質産生と比べて少なくとも１．２倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、更により好ましくは少なくとも２．５倍、前記人工核酸分子の翻訳効率を増加させる、及び／又は前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、３’−ＵＴＲが欠損しているレファレンス核酸分子からのタンパク質産生と比べて少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも２．５倍高い翻訳効率を前記人工核酸分子に与える請求項１から９のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、５’−ＵＴＲが欠損しているレファレンス核酸分子からのタンパク質産生と比べて少なくとも１．２倍、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、更により好ましくは少なくとも２．５倍、前記人工核酸分子の翻訳効率を増加させる、及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、５’−ＵＴＲが欠損しているレファレンス核酸分子からのタンパク質産生と比べて少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも２倍、より好ましくは少なくとも２．５倍高い翻訳効率を前記人工核酸分子に与える請求項８から１０のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、ＺＮＦ４６０−５’−ＵＴＲ、ＴＧＭ２−５’−ＵＴＲ、ＩＬ７Ｒ−５’−ＵＴＲ、ＢＧＮ−５’−ＵＴＲ、ＴＫ１−５’−ＵＴＲ、ＲＡＢ３Ｂ−５’−ＵＴＲ、ＣＢＸ６−５’−ＵＴＲ、ＦＺＤ２−５’−ＵＴＲ、ＣＯＬ８Ａ１−５’−ＵＴＲ、ＮＤＵＦＳ７−５’−ＵＴＲ、ＰＨＧＤＨ−５’−ＵＴＲ、ＰＬＫ２−５’−ＵＴＲ、ＴＳＰＯ−５’−ＵＴＲ、ＰＴＧＳ１−５’−ＵＴＲ、ＦＢＸＯ３２−５’−ＵＴＲ、ＮＩＤ２−５’−ＵＴＲ、ＡＴＰ５Ｄ−５’−ＵＴＲ、ＥＸＯＳＣ４−５’−ＵＴＲ、ＮＯＬ９−５’−ＵＴＲ、ＵＢＢ４Ｂ−５’−ＵＴＲ、ＶＰＳ１８−５’−ＵＴＲ、ＯＲＭＤＬ２−５’−ＵＴＲ、ＦＳＣＮ１−５’−ＵＴＲ、ＴＭＥＭ３３−５’−ＵＴＲ、ＴＵＢＡ４Ａ−５’−ＵＴＲ、ＥＭＰ３−５’−ＵＴＲ、ＴＭＥＭ２０１−５’−ＵＴＲ、ＣＲＩＰ２−５’−ＵＴＲ、ＢＲＡＴ１−５’−ＵＴＲ、ＳＥＲＰＩＮＨ１−５’−ＵＴＲ、ＣＤ９−５’−ＵＴＲ、ＤＰＹＳＬ２−５’−ＵＴＲ、ＣＤＫ９−５’−ＵＴＲ、ＴＦＲＣ−５’−ＵＴＲ、ＰＳＭＢ３  ５’−ＵＴＲ、ＦＡＳＮ−５’−ＵＴＲ、ＰＳＭＢ６−５’−ＵＴＲ、ＰＲＳＳ５６−５’−ＵＴＲ、ＫＰＮＡ６−５’−ＵＴＲ、ＳＦＴ２Ｄ２−５’−ＵＴＲ、ＰＡＲＤ６Ｂ−５’−ＵＴＲ、ＬＰＰ−５’−ＵＴＲ、ＳＰＡＲＣ−５’−ＵＴＲ、ＳＣＡＮＤ１−５’−ＵＴＲ、ＶＡＳＮ−５’−ＵＴＲ、ＳＬＣ２６Ａ１−５’−ＵＴＲ、ＬＣＬＡＴ１−５’−ＵＴＲ、ＦＢＸＬ１８−５’−ＵＴＲ、ＳＬＣ３５Ｆ６−５’−ＵＴＲ、ＲＡＢ３Ｄ−５’−ＵＴＲ、ＭＡＰ１Ｂ−５’−ＵＴＲ、ＶＭＡ２１−５’−ＵＴＲ、ＣＹＢＡ−５’−ＵＴＲ、ＳＥＺ６Ｌ２−５’−ＵＴＲ、ＰＣＯＬＣＥ−５’−ＵＴＲ、ＶＴＮ−５’−ＵＴＲ、ＡＬＤＨ１６Ａ１−５’−ＵＴＲ、ＲＡＶＥＲ１−５’−ＵＴＲ、ＫＰＮＡ６−５’−ＵＴＲ、ＳＥＲＩＮＣ５−５’−ＵＴＲ、ＪＵＰ−５’−ＵＴＲ、ＣＰＮ２−５’−ＵＴＲ、ＣＲＩＰ２−５’−ＵＴＲ、ＥＰＴ１−５’−ＵＴＲ、ＰＮＰＯ−５’−ＵＴＲ、ＳＳＳＣＡ１−５’−ＵＴＲ、ＰＯＬＲ２Ｌ−５’−ＵＴＲ、ＬＩＮ７Ｃ−５’−ＵＴＲ、ＵＱＣＲ１０−５’−ＵＴＲ、ＰＹＣＲＬ−５’−ＵＴＲ、ＡＭＮ−５’−ＵＴＲ、ＭＡＰ１Ｓ−５’−ＵＴＲ（いずれも好ましくはヒト）及びＤｐｙｓｌ２−５’−ＵＴＲ、Ｃｃｎｄ１−５’−ＵＴＲ、Ａｃｏｘ２−５’−ＵＴＲ、Ｃｂｘ６−５’−ＵＴＲ、Ｕｂｃ−５’−ＵＴＲ、Ｌｄｌｒ−５’−ＵＴＲ、Ｎｕｄｔ２２−５’−ＵＴＲ、Ｐｃｙｏｘ１ｌ−５’−ＵＴＲ、Ａｎｋｒｄ１−５’−ＵＴＲ、Ｔｍｅｍ３７−５’−ＵＴＲ、Ｔｓｐｙｌ４−５’−ＵＴＲ、Ｓｌｃ７ａ３−５’−ＵＴＲ、Ｃｓｔ６−５’−ＵＴＲ、Ａａｃｓ−５’−ＵＴＲ、Ｎｏｓｉｐ−５’−ＵＴＲ、Ｉｔｇａ７−５’−ＵＴＲ、Ｃｃｎｄ２−５’−ＵＴＲ、Ｅｂｐ−５’−ＵＴＲ、Ｓｆ３ｂ５−５’−ＵＴＲ、Ｆａｓｎ−５’−ＵＴＲ、Ｈｍｇｃｓ１−５’−ＵＴＲ、Ｏｓｒ１−５’−ＵＴＲ、Ｌｍｎｂ１−５’−ＵＴＲ、Ｖｍａ２１−５’−ＵＴＲ、Ｋｉｆ２０ａ−５’−ＵＴＲ、Ｃｄｃａ８−５’−ＵＴＲ、Ｓｌｃ７ａ１−５’−ＵＴＲ、Ｕｂｑｌｎ２−５’−ＵＴＲ、Ｐｒｐｓ２−５’−ＵＴＲ、Ｓｈｍｔ２−５’−���ＴＲ、Ａｕｒｋｂ−５’−ＵＴＲ、Ｆｉｇｎｌ１−５’−ＵＴＲ、Ｃａｄ−５’−ＵＴＲ、Ａｎｌｎ−５’−ＵＴＲ、Ｓｌｆｎ９−５’−ＵＴＲ、Ｎｃａｐｈ−５’−ＵＴＲ、Ｐｏｌｅ−５’−ＵＴＲ、Ｕｈｒｆ１−５’−ＵＴＲ、Ｇｊａ１−５’−ＵＴＲ、Ｆａｍ６４ａ−５’−ＵＴＲ、Ｋｉｆ２ｃ−５’−ＵＴＲ、Ｔｓｐａｎ１０−５’−ＵＴＲ、Ｓｃａｎｄ１−５’−ＵＴＲ、Ｇｐｒ８４−５’−ＵＴＲ、Ｆａｄｓ３−５’−ＵＴＲ、Ｃｅｒｓ６−５’−ＵＴＲ、Ｃｘｃｒ４−５’−ＵＴＲ、Ｇｐｒｃ５ｃ−５’−ＵＴＲ、Ｆｅｎ１−５’−ＵＴＲ、Ｃｓｐｇ４−５’−ＵＴＲ、Ｍｒｐｌ３４−５’−ＵＴＲ、Ｃｏｍｔｄ１−５’−ＵＴＲ、Ａｒｍｃ６−５’−ＵＴＲ、Ｅｍｒ４−５’−ＵＴＲ、Ａｔｐ５ｄ−５’−ＵＴＲ、１１１０００１Ｊ０３Ｒｉｋ−５’−ＵＴＲ、Ｃｓｆ２ｒａ−５’−ＵＴＲ、Ａａｒｓｄ１−５’−ＵＴＲ、Ｋｉｆ２２−５’−ＵＴＲ、Ｃｔｈ−５’−ＵＴＲ、Ｔｐｇｓ１−５’−ＵＴＲ、Ｃｃｌ１７−５’−ＵＴＲ、Ａｌｋｂｈ７−５’−ＵＴＲ、Ｍｓ４ａ８ａ−５’−ＵＴＲ（いずれも好ましくはマウス）からなる群から選択される遺伝子の転写物の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含む請求項８から１１のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、配列番号１〜配列番号１５１からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、更により好ましくは少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなる、或いは、前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、配列番号１〜配列番号１５１からなる群から選択される核酸配列に対して少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、更により好ましくは少なくとも９５％、更により好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列の断片を含むか又はからなる請求項８から１２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１４】
ｃ．ポリ（Ａ）配列及び／又はポリアデニル化シグナルを更に含み、
前記ポリ（Ａ）配列又は前記ポリアデニル化シグナルが、好ましくは、前記３’−ＵＴＲエレメントの３’に位置する請求項１から１３のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１５】
５’−キャップ構造、ポリ（Ｃ）配列、ヒストンステムループ、及び／又はＩＲＥＳモチーフを更に含む請求項１から１４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１６】
前記核酸が、５’−ＴＯＰ  ＵＴＲを含む請求項１から１５のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１７】
前記人工核酸分子、好ましくは前記オープンリーディングフレームが、少なくとも部分的にＧ／Ｃ改変されており、好ましくは、前記オープンリーディングフレームのＧ／Ｃ含量が、野生型オープンリーディングフレームに比べて増加している、及び／又は
前記オープンリーディングフレームが、コドンが最適化されている領域を含み、好ましくは、前記オープンリーディングフレームのコドンが最適化されている請求項１から１６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１８】
ＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡ分子である請求項１から１７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１９】
請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子を含むことを特徴とするベクター。
【請求項２０】
請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子、又は請求項１９に記載のベクターを含むことを特徴とする細胞。
【請求項２１】
請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１９に記載のベクター、又は請求項２０に記載の細胞を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２２】
医薬として使用するための請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１９に記載のベクター、請求項２０に記載の細胞、又は請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
ワクチンとして使用するための又は遺伝子治療において使用するための請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１９に記載のベクター、請求項２０に記載の細胞、又は請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
人工核酸分子の、好ましくはｍＲＮＡ分子又はベクターの翻訳効率を上昇させる方法であって、オープンリーディングフレームを３’−ＵＴＲエレメント（前記３’−ＵＴＲエレメントは、配列番号１６４の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなり、得られる人工核酸分子からの翻訳効率を上昇させる）と連結させて、請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子、好ましくはｍＲＮＡ分子、又は請求項１９に記載のベクターを得る工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項２５】
人工核酸分子の、好ましくはｍＲＮＡ分子又はベクターからの翻訳効率を上昇させるための３’−ＵＴＲエレメントのインビトロにおける使用であって、前記３’−ＵＴＲエレメントが、配列番号１６４の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなることを特徴とするインビトロにおける使用。
【請求項２６】
請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項１９に記載のベクター、請求項２０に記載の細胞、及び／又は請求項２１に記載の医薬組成物を含むことを特徴とするキット又はキットオブパーツ。