【手続補正書】
【提出日】令和1年11月6日(2019.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓ１００カルシウム結合タンパク質（Ｓ１００）ポリペプチド、ストロマ細胞由来因子１（ＳＤＦ）ポリペプチド、および血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）ポリペプチド；またはその断片もしくはバリアントをコードするポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記Ｓ１００ポリペプチドが、Ｓ１００Ａ１、その断片またはバリアントであり、前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１、ＳＤＦ−１α、ＳＤＦ−１β、並びにそれらの断片およびバリアントからなる群から選択され、かつ前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１９１、ＶＥＧＦ２０６、並びにそれらの断片およびバリアントからなる群から選択される、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記Ｓ１００ポリペプチドが配列番号１０４で示される配列を含み、前記ＳＤＦポリペプチドが配列番号１０２で示される配列を含み、および前記ＶＥＧＦポリペプチドが配列番号１０６で示される配列を含む、請求項１または２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記Ｓ１００ポリペプチド、前記ＳＤＦポリペプチドおよび前記ＶＥＧＦポリペプチドの少なくとも２つが、剛性リンカー、可動性リンカー、切断可能なリンカー、自己切断型リンカー、ペプチドリンカー、リボソームスキッピングによって切断可能なリンカー、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される１以上のリンカーによって結合される、請求項１から３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記１以上のリンカーが、ＲＡＫＲリンカー、ｆｐ２ａリンカー、ｐ２ａリンカー、ＧＳＧ−ｐ２ａリンカー、およびｆｍｄｖリンカーからなる群から選択される、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記１以上のリンカーが、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０で示される配列を含む、請求項４または５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記リンカーが、配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）、ＧＰＶＫＱ（配列番号４３）、Ｖ
ＰＶＫＱ（配列番号４４）、ＩＰＶＫＱ（配列番号４５）、ＭＰＶＫＱ（配列番号４６）
、ＡＰＩＫＱ（配列番号４７）、ＧＰＩＫＱ（配列番号４８）、ＶＰＩＫＱ（配列番号４
９）、ＩＰＩＫＱ（配列番号５０）、ＭＰＩＫＱ（配列番号５１）、ＡＰＡＫＱ（配列番
号５２）、ＧＰＡＫＱ（配列番号５３）、ＶＰＡＫＱ（配列番号５４）、ＩＰＡＫＱ（配
列番号５５）、ＭＰＡＫＱ（配列番号５６）、ＡＰＶＲＱ（配列番号５７）、ＧＰＶＲＱ
（配列番号５８）、ＶＰＶＲＱ（配列番号５９）、ＩＰＶＲＱ（配列番号６０）、ＭＰＶ
ＲＱ（配列番号６１）、ＡＰＩＲＱ（配列番号６２）、ＧＰＩＲＱ（配列番号６３）、Ｖ
ＰＩＲＱ（配列番号６４）、ＩＰＩＲＱ（配列番号６５）、ＭＰＩＲＱ（配列番号６６）
、ＡＰＡＲＱ（配列番号６７）、ＧＰＡＲＱ（配列番号６８）、ＶＰＡＲＱ（配列番号６
９）、ＩＰＡＲＱ（配列番号７０）、ＭＰＡＲＱ（配列番号７１）、ＡＰＶＫＮ（配列番
号７２）、ＧＰＶＫＮ（配列番号７３）、ＶＰＶＫＮ（配列番号７４）、ＩＰＶＫＮ（配
列番号７５）、ＭＰＶＫＮ（配列番号７６）、ＡＰＩＫＮ（配列番号７７）、ＧＰＩＫＮ
（配列番号７８）、ＶＰＩＫＮ（配列番号７９）、ＩＰＩＫＮ（配列番号８０）、ＭＰＩ
ＫＮ（配列番号８１）、ＡＰＡＫＮ（配列番号８２）、ＧＰＡＫＮ（配列番号８３）、Ｖ
ＰＡＫＮ（配列番号８４）、ＩＰＡＫＮ（配列番号８５）、ＭＰＡＫＮ（配列番号８６）
、ＡＰＶＲＮ（配列番号８７）、ＧＰＶＲＮ（配列番号８８）、ＶＰＶＲＮ（配列番号８
９）、ＩＰＶＲＮ（配列番号９０）、ＭＰＶＲＮ（配列番号９１）、ＡＰＩＲＮ（配列番
号９２）、ＧＰＩＲＮ（配列番号９３）、ＶＰＩＲＮ（配列番号９４）、ＩＰＩＲＮ（配
列番号９５）、ＭＰＩＲＮ（配列番号９６）、ＡＰＡＲＮ（配列番号９７）、ＧＰＡＲＮ
（配列番号９８）、ＶＰＡＲＮ（配列番号９９）、ＩＰＡＲＮ（配列番号１００）および
ＭＰＡＲＮ（配列番号１０１）からなる群から選択される配列を含む、請求項４または５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
第１の機能性ポリペプチド、第２の機能性ポリペプチド、および第３の機能性ポリペプチドを含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドであって、
（ｉ）前記第１の機能性ポリペプチドが、Ｓ１００カルシウム結合タンパク質（Ｓ１００）ポリペプチドまたはそのバリアントもしくは断片あり、前記第２の機能性ポリペプチドと異なり、
（ｉｉ）前記第２および第３の機能性ポリペプチドが、サイトカイン、ケモカイン、血管新生ポリペプチド、およびそれらのバリアントおよび断片のいずれか１つを含み、
（ｉｉｉ）前記Ｓ１００ポリペプチドが、第１の切断可能なリンカーによって前記第２の機能性ポリペプチドに結合され、かつ
（ｉｖ）前記第３の機能性ポリペプチドが、切断可能である第２のリンカーによって、前記Ｓ１００ポリペプチドおよび前記第２の機能性ポリペプチドのうちの少なくとも１つに結合される、ポリヌクレオチド。
【請求項９】
切断可能である前記リンカーのうちの少なくとも１つが、フリンポリペプチドおよび２Ａポリペプチドを含み、好ましくは、前記２ＡポリペプチドがＰ２Ａである、請求項４または８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
切断可能である前記リンカーが、「リボソームスキッピング」翻訳作用を媒介する２Ａポリペプチドである、請求項９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
切断可能である前記リンカーが、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０または配列番号４２で示される配列を含む、請求項８から１０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
【請求項１３】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項１４】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターであり、前記ポリヌクレオチドが、構成的プロモーター、組織特異的プロモーターまたは誘導性プロモーターに作動可能に連結される、発現ベクター。
【請求項１５】
前記誘導性プロモーターが、小分子リガンド誘導性２ポリペプチドエクジソン受容体ベ
ース遺伝子スイッチである、請求項１４に記載の発現ベクター。
【請求項１６】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、前記ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド、または請求項１４もしくは１５に記載の発現ベクターと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
対象における心疾患または障害を処置するための、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
心臓状態を処置するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記処置が、心筋細胞を、治療有効量の前記ポリヌクレオチドと接触させることを含む、医薬組成物。
【請求項１９】
対象における心疾患または障害を処置するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記処置が、
（ｉ）前記対象に、マイクロバブル複合体を含む組成物の治療有効量を投与するステップであって、前記マイクロバブル複合体が、脂質、ガス、および前記ポリヌクレオチドを含むプラスミドを含む、ステップと、
（ｉｉ）前記マイクロバブル複合体を、超音波標的マイクロバブル破壊（ＵＴＭＤ）をもたらすのに十分な超音波エネルギーと接触させるステップと
を含む、医薬組成物。
【請求項２０】
前記心疾患または障害が、血管発生、うっ血性心不全、心筋症、不整脈、心膜疾患、大動脈疾患、マルファン症候群、または冠状動脈疾患であり、前記対象がヒトである、請求項１７または１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記医薬組成物が、逆行性冠状静脈洞注入（ＲＣＳＩ）を通じて接触または投与されるものである、請求項１６から２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９２】
本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され説明されたが、当業者には、そのような実施形態は単なる例示として提供されることは明らかであろう。本発明から逸脱することなく、当業者にはここで数多くの変形、変更、および置換が可能である。本明細書に記載された本発明の実施形態に対する様々な代替物が、本発明の実施において採用され得ることを理解すべきである。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を定義していること、ならびにこれらの特許請求の範囲内の方法および構造ならびにそれらの等価物がその特許請求の範囲によってカバーされることが意図される。
本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
Ｓ１００カルシウム結合タンパク質（Ｓ１００）ポリペプチドおよび第２の機能性ポリ
ペプチドを含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドであって、前記第２の
機能性ポリペプチドが、サイトカイン、ケモカイン、血管新生ポリペプチド、およびそれ
らの任意の機能性誘導体のうちの少なくとも１つである、ポリヌクレオチド。
［２］
前記Ｓ１００ポリペプチドが、Ｓ１００Ａ１、その断片またはバリアントである、請求
項１に記載のポリヌクレオチド。
［３］
前記第２の機能性ポリペプチドが、血管新生ポリペプチドである、請求項１から２のい
ずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［４］
前記血管新生ポリペプチドが、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）ポリペプチドである、請
求項３に記載のポリヌクレオチド。
［５］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、
ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１９１、ＶＥＧＦ２０６
、それらの断片およびバリアントからなる群から選択される、請求項４に記載のポリヌク
レオチド。
［６］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１６５の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項４から５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［７］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１９１の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項４から５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［８］
前記第２の機能性ポリペプチドが、ケモカインである、請求項１から２のいずれか一項
に記載のポリヌクレオチド。
［９］
前記ケモカインが、ストロマ細胞由来因子１（ＳＤＦ）ポリペプチドである、請求項８
に記載のポリヌクレオチド。
［１０］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１、ＳＤＦ−１α、ＳＤＦ−１β、それらの断片お
よびバリアントからなる群から選択される、請求項９に記載のポリヌクレオチド。
［１１］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１の配列に対して少なくとも７０％の同一性を有す
る配列を含む、請求項９から１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１２］
前記Ｓ１００ポリペプチドが、第１のポリペプチドリンカーによって前記第２のポリペ
プチドに結合される、請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１３］
前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項１２に記載のポリヌクレオチド。
［１４］
前記ポリペプチド構築物が、第３の機能性ポリペプチドをさらに含む、請求項１から１
３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１５］
前記第３の機能性ポリペプチドが、サイトカイン、ケモカイン、血管新生ポリペプチド
、およびそれらの任意の機能性誘導体のうちの少なくとも１つである、請求項１４に記載
のポリヌクレオチド。
［１６］
前記第３の機能性ポリペプチドが、血管新生ポリペプチドである、請求項１４から１５
のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１７］
前記血管新生ポリペプチドが、ＶＥＧＦポリペプチドである、請求項１６に記載のポリ
ヌクレオチド。
［１８］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、
ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１９１、ＶＥＧＦ２０６
、およびそれらの断片またはバリアントからなる群から選択される、請求項１７に記載の
ポリヌクレオチド。
［１９］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１６５の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項１７から１８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［２０］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１９１の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項１７から１８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［２１］
前記第３の機能性ポリペプチドが、ケモカインである、請求項１４から１５のいずれか
一項に記載のポリヌクレオチド。
［２２］
前記ケモカインが、ＳＤＦポリペプチドである、請求項２１に記載のポリヌクレオチド
。
［２３］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１、ＳＤＦ−１α、ＳＤＦ−１β、それらの断片お
よびバリアントからなる群から選択される、請求項２２に記載のポリヌクレオチド。
［２４］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１の配列に対して少なくとも７０％の同一性を有す
る配列を含む、請求項２２から２３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［２５］
前記第３の機能性ポリペプチドが、任意選択で切断可能である第２のポリペプチドリン
カーによって、前記Ｓ１００ポリペプチドおよび前記第２の機能性ポリペプチドのうちの
少なくとも１つに結合される、請求項１４から２４のいずれか一項に記載のポリヌクレオ
チド。
［２６］
前記第１および第２のポリペプチドリンカーが、ｆｐ２ａ、ｐ２ａ、ＧＳＧ−ｐ２ａ、
およびｆｍｄｖからなるリストから独立して選択される、請求項１２から２５のいずれか
一項に記載のポリヌクレオチド。
［２７］
請求項１から２６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリ
ペプチド。
［２８］
請求項１から２６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
［２９］
心臓状態を処置する方法であって、細胞を、治療有効量の請求項１から２６のいずれか
一項に記載のポリヌクレオチドと接触させるステップを含む、方法。
［３０］
前記細胞が、心筋細胞である、請求項２９に記載の方法。
［３１］
対象における心筋症を処置する方法であって、前記対象に、請求項１から２６のいずれ
か一項に記載のポリヌクレオチドを含む治療有効量の組成物を提供するステップを含む、
方法。
［３２］
前記対象が、ヒト対象である、請求項３１に記載の方法。
［３３］
前記対象が、少なくとも１つの追加の療法によって処置される、請求項３１から３２の
いずれか一項に記載の方法。
［３４］
請求項１から２６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオ
チドによってコードされるポリペプチドと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組
成物。
［３５］
少なくとも第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含む少なくとも１つのポリ
ペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドであって、
ｉ．前記第１のポリペプチドが、血管新生ポリペプチドであり、
ｉｉ．前記第２のポリペプチドが、ケモカインまたはそのバリアントもしくは断片である
、ポリヌクレオチド。
［３６］
前記血管新生ポリペプチドが、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、
ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１９１、ＶＥＧＦ２０６
、それらの断片およびバリアントからなる群から選択されるＶＥＧＦポリペプチドである
、請求項３５に記載のポリヌクレオチド。
［３７］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１６５の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項３６に記載のポリヌクレオチド。
［３８］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１９１の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項３６に記載のポリヌクレオチド。
［３９］
前記第２のポリペプチドが、ＳＤＦポリペプチドである、請求項３５に記載のポリヌク
レオチド。
［４０］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１、ＳＤＦ−１α、ＳＤＦ−１β、それらの断片お
よびバリアントからなる群から選択される、請求項３９に記載のポリヌクレオチド。
［４１］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１の配列に対して少なくとも７０％の同一性を有す
る配列を含む、請求項３９から４０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［４２］
対象における血管発生を改善する方法であって、前記対象に、請求項３５から４１のい
ずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは前記ポリヌクレオチドによってコードされる
ポリペプチドを含む治療有効量の組成物を提供するステップを含む、方法。
［４３］
ＳＤＦ１ポリペプチド、Ｓ１００Ａ１ポリペプチド、ＶＥＧＦポリペプチド、ならびに
それらの断片およびバリアントから選択される少なくとも２つのポリペプチドに作動可能
に連結された少なくとも１つのプロモーターを含む発現ベクター。
［４４］
前記少なくとも２つのポリペプチドが、リンカーによって結合される、請求項４３に記
載の発現ベクター。
［４５］
前記少なくとも１つのプロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、Ｓ
Ｖ４０プロモーター、アデノウイルスプロモーター、ベータアクチンプロモーター、メタ
ロチオニンプロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ミオシン軽鎖プロモーター、ミオシン
重鎖プロモーター、およびＮＣＸ１プロモーターからなる群から選択される、請求項４３
から４４のいずれか一項に記載の発現ベクター。
［４６］
前記発現ベクターが、心臓発現ベクターである、請求項４３から４５のいずれか一項に
記載の発現ベクター。
［４７］
少なくとも第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含むポリペプチド構築物で
あって、
ｉ．前記第１のポリペプチドが、カルシウム結合タンパク質、またはそのバリアントもし
くは断片であり、
ｉｉ．前記第２のポリペプチドが、血管新生ポリペプチド、ケモカイン、またはそれらの
バリアントもしくは断片である、ポリペプチド構築物。
［４８］
少なくとも第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、および第３のポリペプチドを含
むポリペプチド構築物であって、
ｉ．前記第１のポリペプチドが、血管新生ポリペプチド、またはそのバリアントもしくは
断片であり、
ｉｉ．前記第２のポリペプチドが、ケモカイン、またはそのバリアントもしくは断片であ
り、
ｉｉｉ．前記第３のポリペプチドが、カルシウム結合タンパク質、またはそのバリアント
もしくは断片である、ポリペプチド構築物。
［４９］
Ｓ１００Ａ１、そのバリアントまたは断片を含む、請求項４７から４８のいずれか一項
に記載の構築物。
［５０］
ＳＤＦ１、そのバリアントまたは断片を含む、請求項４７から４９のいずれか一項に記
載の構築物。
［５１］
ＶＥＧＦ、そのバリアントまたは断片を含む、請求項４７から５０のいずれか一項に記
載の構築物。
［５２］
少なくとも１つの受容体と複合体を形成した、請求項４７から５１のいずれか一項に記
載の構築物を含む複合体。
［５３］
請求項４７から５１のいずれか一項に記載の構築物と、薬学的に許容される賦形剤とを
含む、医薬組成物。
［５４］
対象における心筋症を処置する方法であって、前記対象に、請求項４７から５１のいず
れか一項に記載の構築物を含む治療有効量の組成物を提供するステップを含む、方法。
［５５］
少なくとも１つの心細胞を、少なくとも第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド
を含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチドと接触させるステップを含み、
前記第１のポリペプチドが、血管新生ポリペプチド、そのバリアントまたは断片であり、
前記第２のポリペプチドが、ケモカイン、カルシウム結合タンパク質、またはそれらのバ
リアントもしくは断片である、方法。
［５６］
前記血管新生ポリペプチド、そのバリアントまたは断片が、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ
１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥ
ＧＦ１９１、ＶＥＧＦ２０６、それらの断片およびバリアントからなる群から選択される
ＶＥＧＦポリペプチドである、請求項５５に記載の方法。
［５７］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１６５の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項５６に記載のポリヌクレオチド。
［５８］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１９１の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項５６に記載のポリヌクレオチド。
［５９］
前記第２のポリペプチドが、ケモカインである、請求項５５から５８のいずれか一項に
記載の方法。
［６０］
前記ケモカインが、ストロマ細胞由来因子１（ＳＤＦ）ポリペプチドである、請求項５
９に記載の方法。
［６１］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１、ＳＤＦ−１α、ＳＤＦ−１β、それらの断片お
よびバリアントからなる群から選択される、請求項６０に記載の方法。
［６２］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１の配列に対して少なくとも７０％の同一性を有す
る配列を含む、請求項６０から６１のいずれか一項に記載の方法。
［６３］
ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、エクスビボで導入される、請求項
５５から６２のいずれか一項に記載の方法。
［６４］
ポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが、インビボで導入される、請求項５
５から６２７９のいずれか一項に記載の方法。
［６５］
前記インビボでの導入が、経皮冠状動脈カテーテル法、冠状静脈遮断、心臓再循環、順
行性冠状動脈注入、逆行性灌流、直接注射、超音波標的マイクロバブル破壊、およびそれ
らの任意の組合せからなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
［６６］
少なくとも１つの追加の療法の投与をさらに含む、請求項５５から６５のいずれか一項
に記載の方法。
［６７］
対象における血管発生を改善する方法であって、前記対象に、ＶＥＧＦポリペプチド、
ならびにＳＤＦポリペプチドおよびＳ１００ポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む
構築物をコードする、ある量のポリヌクレオチドを投与するステップを含む、方法。
［６８］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１２１ｂ、ＶＥＧＦ１４５、
ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１９１、ＶＥＧＦ２０６
、それらの断片およびバリアントからなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
［６９］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１６５の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項６８に記載の方法。
［７０］
前記ＶＥＧＦポリペプチドが、ＶＥＧＦ１９１の配列に対して少なくとも７０％の同一
性を有する配列を含む、請求項６８に記載の方法。
［７１］
前記ＳＤＦポリペプチドが、ＳＤＦ１、ＳＤＦ−１α、ＳＤＦ−１β、それらの断片お
よびバリアントからなる群から選択される、請求項６７から７０のいずれか一項に記載の
方法。
［７２］
前記Ｓ１００ポリペプチドが、Ｓ１００Ａ１、その断片またはバリアントである、請求
項６７から７１のいずれか一項に記載の方法。
［７３］
前記対象が心筋症を有する、請求項６７から７２のいずれか一項に記載の方法。
［７４］
前記心筋症が、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、拘束型心筋症（Ｒ
ＣＭ）、不整脈原性右室心筋症（ＡＲＶＣ）、およびそれらの任意の組合せからなる群か
ら選択される、請求項７３に記載の方法。
［７５］
対象における心血管状態を処置または予防する方法であって、前記対象に、Ｓ１００Ａ
ポリペプチドおよび第２の機能性ポリペプチドを含むある量の構築物を投与するステップ
を含み、前記第２の機能性ポリペプチドが、サイトカイン、ケモカイン、および血管新生
ポリペプチドのうちの少なくとも１つである、方法。
［７６］
前記投与が、予防的に行われる、請求項７５に記載の方法。
［７７］
前記投与が、治療的に行われる、請求項７５に記載の方法。
［７８］
前記対象への少なくとも１つの追加の処置の投与をさらに含む、請求項７５から７７の
いずれか一項に記載の方法。
［７９］
前記第２の機能性ポリペプチドが、ＶＥＧＦ、ＳＤＦ、またはそれらの組合せである、
請求項７５から７８のいずれか一項に記載の方法。
［８０］
遺伝子治療の方法であって、対象に、
ａ．機能性タンパク質またはその部分をコードする少なくとも２つの遺伝子、
ｂ．少なくとも１つのプロモーター、および
ｃ．少なくとも１つの操作された組換え部位
を含む、少なくとも１つの非ウイルスベクターを投与するステップを含み、
前記少なくとも１つのプロモーターが、前記少なくとも２つの遺伝子の発現を駆動する、
方法。
［８１］
前記少なくとも１つのプロモーターが、構成的である、請求項８０に記載の方法。
［８２］
前記少なくとも１つのプロモーターが、組織特異的である、請求項８０に記載の方法。
［８３］
前記少なくとも１つのプロモーターが、誘導性である、請求項８０に記載の方法。
［８４］
前記少なくとも１つの組織特異的プロモーターが、ミオシン軽鎖（ＭＬＣ）プロモータ
ーである、請求項８２に記載の方法。
［８５］
前記誘導性プロモーターが、小分子リガンド誘導性２ポリペプチドエクジソン受容体ベ
ース遺伝子スイッチである、請求項８３に記載の方法。
［８６］
前記誘導性プロモーターが、前記少なくとも２つの遺伝子の発現の用量調節型制御にリ
ガンドを利用する、請求項８３または８５に記載の方法。
［８７］
前記リガンドが、エクジステロイド、９シス−レチノイン酸、レチノイン酸の合成類似
体、Ｎ，Ｎ’−ジアシルヒドラジン、オキサジアゾリン、ジベンゾイルアルキルシアノヒ
ドラジン、Ｎ−アルキル−Ｎ，Ｎ’−ジアロイルヒドラジン、Ｎ−アシル−Ｎ−アルキル
カルボニルヒドラジン、Ｎ−アリール−Ｎ−アルキル−Ｎ’−アリールヒドラジン、アル
ニドケトン、３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−Ｎ−イソブチル−ベンズ
アミド、８−Ｏ−アセチルハルパギド、オキシステロール、２２（Ｒ）ヒドロキシコレス
テロール、２４（Ｓ）ヒドロキシコレステロール、２５−エポキシコレステロール、Ｔ０
９０１３１７、５−アルファ−６−アルファ−エポキシコレステロール−３−スルフェー
ト（ＥＣＨＳ）、７−ケトコレステロール−３−スルフェート、フラメソル、胆汁酸、１
，１−ビホスホネートエステル、幼若ホルモンＩＩＩ、ＲＧ−１１５８１９（３，５−ジ
メチル−安息香酸Ｎ−（１−エチル−２，２−ジメチル−プロピル）−Ｎ’−（２−メチ
ル−３−メトキシ−ベンゾイル）−ヒドラジド−）、ＲＧ−１１５９３２（（Ｒ）−３，
５−ジメチル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（２−エチル−
３−メトキシ−ベンゾイル）−ヒドラジド）、およびＲＧ−１１５８３０（３，５−ジメ
チル−安息香酸Ｎ−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−ブチル）−Ｎ’−（２−エチル−３−メト
キシ−ベンゾイル）−ヒドラジド）、ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択
される、請求項８６に記載の方法。
［８８］
前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項８０から８７のいずれか一項に記
載の方法。
［８９］
前記リンカーが、配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）、ＧＰＶＫＱ（配列番号４３）、Ｖ
ＰＶＫＱ（配列番号４４）、ＩＰＶＫＱ（配列番号４５）、ＭＰＶＫＱ（配列番号４６）
、ＡＰＩＫＱ（配列番号４７）、ＧＰＩＫＱ（配列番号４８）、ＶＰＩＫＱ（配列番号４
９）、ＩＰＩＫＱ（配列番号５０）、ＭＰＩＫＱ（配列番号５１）、ＡＰＡＫＱ（配列番
号５２）、ＧＰＡＫＱ（配列番号５３）、ＶＰＡＫＱ（配列番号５４）、ＩＰＡＫＱ（配
列番号５５）、ＭＰＡＫＱ（配列番号５６）、ＡＰＶＲＱ（配列番号５７）、ＧＰＶＲＱ
（配列番号５８）、ＶＰＶＲＱ（配列番号５９）、ＩＰＶＲＱ（配列番号６０）、ＭＰＶ
ＲＱ（配列番号６１）、ＡＰＩＲＱ（配列番号６２）、ＧＰＩＲＱ（配列番号６３）、Ｖ
ＰＩＲＱ（配列番号６４）、ＩＰＩＲＱ（配列番号６５）、ＭＰＩＲＱ（配列番号６６）
、ＡＰＡＲＱ（配列番号６７）、ＧＰＡＲＱ（配列番号６８）、ＶＰＡＲＱ（配列番号６
９）、ＩＰＡＲＱ（配列番号７０）、ＭＰＡＲＱ（配列番号７１）、ＡＰＶＫＮ（配列番
号７２）、ＧＰＶＫＮ（配列番号７３）、ＶＰＶＫＮ（配列番号７４）、ＩＰＶＫＮ（配
列番号７５）、ＭＰＶＫＮ（配列番号７６）、ＡＰＩＫＮ（配列番号７７）、ＧＰＩＫＮ
（配列番号７８）、ＶＰＩＫＮ（配列番号７９）、ＩＰＩＫＮ（配列番号８０）、ＭＰＩ
ＫＮ（配列番号８１）、ＡＰＡＫＮ（配列番号８２）、ＧＰＡＫＮ（配列番号８３）、Ｖ
ＰＡＫＮ（配列番号８４）、ＩＰＡＫＮ（配列番号８５）、ＭＰＡＫＮ（配列番号８６）
、ＡＰＶＲＮ（配列番号８７）、ＧＰＶＲＮ（配列番号８８）、ＶＰＶＲＮ（配列番号８
９）、ＩＰＶＲＮ（配列番号９０）、ＭＰＶＲＮ（配列番号９１）、ＡＰＩＲＮ（配列番
号９２）、ＧＰＩＲＮ（配列番号９３）、ＶＰＩＲＮ（配列番号９４）、ＩＰＩＲＮ（配
列番号９５）、ＭＰＩＲＮ（配列番号９６）、ＡＰＡＲＮ（配列番号９７）、ＧＰＡＲＮ
（配列番号９８）、ＶＰＡＲＮ（配列番号９９）、ＩＰＡＲＮ（配列番号１００）または
ＭＰＡＲＮ（配列番号１０１）を含む、請求項８８に記載の方法。
［９０］
前記少なくとも１つの組換え部位が、ファージゲノム組換え結合部位（ａｔｔＰ）また
は細菌ゲノム組換え結合部位（ａｔｔＢ）である、請求項８０から８９のいずれか一項に
記載の方法。
［９１］
前記対象に、少なくとも１つの二次ベクターを投与することをさらに含む、請求項８０
から９０のいずれか一項に記載の方法。
［９２］
前記少なくとも１つの二次ベクターが、ｍＲＮＡである、請求項９１に記載の方法。
［９３］
前記少なくとも１つの二次ベクターが、プラスミドである、請求項９１に記載の方法。
［９４］
前記少なくとも１つの二次ベクターが、少なくとも１つのリコンビナーゼを含む、請求
項９１から９３のいずれか一項に記載の方法。
［９５］
前記リコンビナーゼが、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）フ
ァージリコンビナーゼ、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcus pyogenes）フ
ァージリコンビナーゼ、バチルス・スブチリス（Bacillus subtilis）ファージリコンビ
ナーゼ、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Mycobacterium tuberculosis）ファー
ジリコンビナーゼ、マイコバクテリウム・スメグマチス（Mycobacterium smegmatis）フ
ァージリコンビナーゼ、およびＳＰＢｃ２リコンビナーゼからなる群から選択される、請
求項９２に記載の方法。
［９６］
前記少なくとも２つの遺伝子が、前記リコンビナーゼによって前記対象のゲノムに組み
込まれる、請求項８０から９５のいずれか一項に記載の方法。
［９７］
前記ベクターが、適正製造規範（good manufacturing practices）（ＧＭＰ）適合性で
ある、請求項８０から９６のいずれか一項に記載の方法。
［９８］
配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、および配列番号４０から
なる群から選択される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含むポリペ
プチド。
［９９］
配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、および配列番号４０から
なる群から選択される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９５％、または９９％の同一性を有する配列を含む、請求項９８に記載のポリ
ペプチド。
［１００］
配列番号１０２、配列番号１０４、および配列番号１０６からなる群から選択される配
列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含むポリペプチド。
［１０１］
配列番号１０２、配列番号１０４、および配列番号１０６からなる群から選択される配
列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、また
は９９％の同一性を有する配列を含む、請求項１００に記載のポリペプチド。
［１０２］
配列番号１０８の核酸配列によってコードされるポリペプチド配列に対して少なくとも
６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同
一性を有する配列を含むポリペプチド。
［１０３］
配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含
む第１のリンカーによって結合される第１の機能性ポリペプチドおよび第２の機能性ポリ
ペプチドを含むポリペプチド構築物をコードするポリヌクレオチド。
［１０４］
前記リンカー配列が、配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）に対して８０％または１００％
の同一性のアミノ酸配列を含む、請求項１０３に記載のポリヌクレオチド。
［１０５］
ＡＰＶＫＱ、ＧＰＶＫＱ、ＶＰＶＫＱ、ＩＰＶＫＱ、ＭＰＶＫＱ、ＡＰＩＫＱ、ＧＰＩ
ＫＱ、ＶＰＩＫＱ、ＩＰＩＫＱ、ＭＰＩＫＱ、ＡＰＡＫＱ、ＧＰＡＫＱ、ＶＰＡＫＱ、Ｉ
ＰＡＫＱ、ＭＰＡＫＱ、ＡＰＶＲＱ、ＧＰＶＲＱ、ＶＰＶＲＱ、ＩＰＶＲＱ、ＭＰＶＲＱ
、ＡＰＩＲＱ、ＧＰＩＲＱ、ＶＰＩＲＱ、ＩＰＩＲＱ、ＭＰＩＲＱ、ＡＰＡＲＱ、ＧＰＡ
ＲＱ、ＶＰＡＲＱ、ＩＰＡＲＱ、ＭＰＡＲＱ、ＡＰＶＫＮ、ＧＰＶＫＮ、ＶＰＶＫＮ、Ｉ
ＰＶＫＮ、ＭＰＶＫＮ、ＡＰＩＫＮ、ＧＰＩＫＮ、ＶＰＩＫＮ、ＩＰＩＫＮ、ＭＰＩＫＮ
、ＡＰＡＫＮ、ＧＰＡＫＮ、ＶＰＡＫＮ、ＩＰＡＫＮ、ＭＰＡＫＮ、ＡＰＶＲＮ、ＧＰＶ
ＲＮ、ＶＰＶＲＮ、ＩＰＶＲＮ、ＭＰＶＲＮ、ＡＰＩＲＮ、ＧＰＩＲＮ、ＶＰＩＲＮ、Ｉ
ＰＩＲＮ、ＭＰＩＲＮ、ＡＰＡＲＮ、ＧＰＡＲＮ、ＶＰＡＲＮ、ＩＰＡＲＮ、およびＭＰ
ＡＲＮ、またはそれらの任意の組合せからなる群から選択される配列に対して少なくとも
６０％、８０％、または１００％の同一性を有する配列を含む第１のリンカーによって結
合される第１の機能性ポリペプチドおよび第２の機能性ポリペプチドを含むポリペプチド
構築物をコードするポリヌクレオチド。
［１０６］
前記第１のリンカーが、剛性リンカー、可動性リンカー、切断可能なリンカー、自己切
断型リンカー、ペプチドリンカー、リボソームスキッピングによって切断可能なリンカー
、またはそれらの任意の組合せである、請求項１０３から１０５のいずれか一項に記載の
ポリヌクレオチド。
［１０７］
前記第１のリンカーが、タンパク質分解によって切断可能である、請求項１０６に記載
のポリヌクレオチド。
［１０８］
前記第１のリンカーが、１〜１０個の切断部位を含む、請求項１０７に記載のポリヌク
レオチド。
［１０９］
前記切断が、還元反応、酵素反応、または両方の組合せである、請求項１０７から１０
８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１１０］
前記切断が、酵素反応を含む、請求項１０９に記載のポリヌクレオチド。
［１１１］
酵素反応を含む前記切断が、プロテアーゼによって行われる、請求項１１０に記載のポ
リヌクレオチド。
［１１２］
前記プロテアーゼが、フリンおよびカテプシンＢからなる群から選択される、請求項１
１１に記載のポリヌクレオチド。
［１１３］
前記プロテアーゼが、フリンである、請求項１１２に記載のポリヌクレオチド。
［１１４］
前記フリンが、ＲＡＫＲを切断する、請求項１１３に記載のポリヌクレオチド。
［１１５］
前記第１の機能性ポリペプチドが、前記第２の機能性ポリペプチドと異なる、請求項１
０３から１１４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１１６］
前記第１および第２の機能性ポリペプチドのうちの少なくとも一方が、タンパク質、ホ
ルモン、糖タンパク質、またはそれらの誘導体もしくは断片である、請求項１０３から１
１５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１１７］
（ＧＳ）ｎ、（ＳＧ）ｎ、（ＧＳＧ）ｎ、および（ＳＧＳ）ｎから選択される少なくと
も１つの配列をさらに含み、ｎが、１から１５の数である、請求項１０３から１１６のい
ずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１１８］
前記ポリペプチドが、第２のリンカーをさらに含む、請求項１０３から１１６のいずれ
か一項に記載のポリヌクレオチド。
［１１９］
前記第２のリンカーが、第３の機能性ポリペプチドを前記第１の機能性ポリペプチドま
たは前記第２の機能性ポリペプチドに結合する、請求項１１８に記載のポリヌクレオチド
。
［１２０］
第３の機能性ポリペプチドを前記第１の機能性ポリペプチドまたは前記第２の機能性ポ
リペプチドに結合する前記第２のリンカーが、自己切断型リンカーである、請求項１１９
に記載のポリヌクレオチド。
［１２１］
前記自己切断型リンカーが、２Ａ配列を含む、請求項１２０に記載のポリヌクレオチド
。
［１２２］
前記２Ａ配列が、Ｆ２Ａ配列またはＰ２Ａ配列である、請求項１２１に記載のポリヌク
レオチド。
［１２３］
Ｋｏｚａｋ配列をさらに含む、請求項１０３から１２２のいずれか一項に記載のポリヌ
クレオチド。
［１２４］
前記ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドをさらに含む、請求項１０３
から１２３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
［１２５］
請求項１０３から１２４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされ
るポリペプチド、またはその誘導体もしくはバリアント。
［１２６］
請求項１０３から１２４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドと、少なくとも１つ
の薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
［１２７］
配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含
むポリ核酸を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、処置の方法。
［１２８］
前記配列が、配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）に対して６５％、７０％、７５％、８０
％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または最大１００％の
同一性を含む、請求項１２７に記載の方法。
［１２９］
前記ポリ核酸が、機能性ポリペプチドをコードする、請求項１２６から１２７のいずれ
か一項に記載の方法。
［１３０］
前記機能性ポリペプチドが、インビボで切断される、請求項１２９に記載の方法。
［１３１］
インビボで切断される前記機能性ポリペプチドが、少なくとも２つの機能性タンパク質
を産生する、請求項１２９から１３０のいずれか一項に記載の方法。
［１３２］
インビボで切断される前記機能性ポリペプチドが、少なくとも３つの機能性タンパク質
を産生する、請求項１２９から１３０のいずれか一項に記載の方法。
［１３３］
前記少なくとも２つまたは少なくとも３つの機能性タンパク質が、それを必要とする前
記対象を処置するための組合せ療法の一部である、請求項１３０から１３１のいずれか一
項に記載の方法。
［１３４］
前記投与が、予防的、治癒的、慣例的、またはそれらの組合せである、請求項１２４か
ら１２５のいずれか一項に記載の方法。
［１３５］
前記投与が、慣例的である、請求項１２７から１３４のいずれか一項に記載の方法。
［１３６］
前記投与が、１時間毎の投与、毎日投与、毎週投与、毎月投与、毎年投与、または定期
的投与を含む、請求項１３５に記載の方法。
［１３７］
前記対象が、急性疾患、慢性疾患、終末期疾患、またはそれらの組合せを有する、請求
項１２７から１３６のいずれか一項に記載の方法。
［１３８］
前記対象が、がん、心臓疾患、糖尿病、神経障害、眼障害、ウイルス障害、またはそれ
らの任意の組合せを有する、請求項１２４から１２８のいずれか一項に記載の方法。
［１３９］
少なくとも１つの二次処置をさらに含む、請求項１２４から１３０のいずれか一項に記
載の方法。
［１４０］
配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含
む第１のリンカーによって結合される第１の機能性ポリペプチドおよび第２の機能性ポリ
ペプチドを含むポリヌクレオチドを作製する方法。
［１４１］
配列ＡＰＶＫＱ（配列番号４２）に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含
むベクターから遺伝子を発現させる方法であって、前記遺伝子の切断効率が、質量分析法
によって測定すると、少なくとも５０％である、方法。
［１４２］
前記ベクターが、２つの生物学的に活性なポリペプチド、３つの生物学的に活性なポリ
ペプチド、または３つ超の生物学的に活性なポリペプチドの発現のための遺伝子を含む、
請求項１４１に記載の方法。
［１４３］
前記ベクターが、３つの生物学的に活性なポリペプチドの発現のための遺伝子を含む、
請求項１４２に記載の方法。
［１４４］
前記遺伝子が、切断の後に機能性となる、請求項１４１から１４３のいずれか一項に記
載の方法。
［１４５］
前記遺伝子の前記切断効率が、質量分析法によって測定すると、少なくとも５５％、６
０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または最大１００％
を含む、請求項１４１から１４４のいずれか一項に記載の方法。
［１４６］
フリンポリペプチドおよび２Ａポリペプチドを含むポリペプチド構築物をコードするポ
リヌクレオチドであって、前記フリンポリペプチドおよび前記２Ａポリペプチドが、少な
くとも３つの疎水性アミノ酸を含むポリペプチドリンカーによって結合される、ポリヌク
レオチド。
［１４７］
前記少なくとも３つの疎水性アミノ酸のうちの少なくとも１つが、グリシン（Ｇｌｙ）
、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ
）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、トリプ
トファン（Ｔｒｐ）からなるリストから選択される、請求項１４６に記載のポリヌクレオ
チド。
［１４８］
前記ポリペプチドリンカーが、配列ＡＰＶＫＱ、ＧＰＶＫＱ、ＶＰＶＫＱ、ＩＰＶＫＱ
、ＭＰＶＫＱ、ＡＰＩＫＱ、ＧＰＩＫＱ、ＶＰＩＫＱ、ＩＰＩＫＱ、ＭＰＩＫＱ、ＡＰＡ
ＫＱ、ＧＰＡＫＱ、ＶＰＡＫＱ、ＩＰＡＫＱ、ＭＰＡＫＱ、ＡＰＶＲＱ、ＧＰＶＲＱ、Ｖ
ＰＶＲＱ、ＩＰＶＲＱ、ＭＰＶＲＱ、ＡＰＩＲＱ、ＧＰＩＲＱ、ＶＰＩＲＱ、ＩＰＩＲＱ
、ＭＰＩＲＱ、ＡＰＡＲＱ、ＧＰＡＲＱ、ＶＰＡＲＱ、ＩＰＡＲＱ、ＭＰＡＲＱ、ＡＰＶ
ＫＮ、ＧＰＶＫＮ、ＶＰＶＫＮ、ＩＰＶＫＮ、ＭＰＶＫＮ、ＡＰＩＫＮ、ＧＰＩＫＮ、Ｖ
ＰＩＫＮ、ＩＰＩＫＮ、ＭＰＩＫＮ、ＡＰＡＫＮ、ＧＰＡＫＮ、ＶＰＡＫＮ、ＩＰＡＫＮ
、ＭＰＡＫＮ、ＡＰＶＲＮ、ＧＰＶＲＮ、ＶＰＶＲＮ、ＩＰＶＲＮ、ＭＰＶＲＮ、ＡＰＩ
ＲＮ、ＧＰＩＲＮ、ＶＰＩＲＮ、ＩＰＩＲＮ、ＭＰＩＲＮ、ＡＰＡＲＮ、ＧＰＡＲＮ、Ｖ
ＰＡＲＮ、ＩＰＡＲＮまたはＭＰＡＲＮを含む、請求項１４７に記載のポリヌクレオチド
。
［１４９］
ポリペプチド構築物の改善された発現を得る方法であって、
第１の機能性ポリペプチドおよび第２の機能性ポリペプチドを含む前記ポリペプチド構築
物をコードするポリヌクレオチドを提供するステップであって、前記第１の機能性ポリペ
プチドおよび第２の機能性ポリペプチドが、配列ＡＰＶＫＱに対して少なくとも６０％の
同一性を有する配列を含むポリペプチドリンカーによって結合される、ステップと、
前記ポリヌクレオチドを宿主細胞において発現させるステップであって、前記発現が、
配列ＡＰＶＫＱに対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含むポリペプチドリン
カーを有さない対応するポリペプチド構築物と比較して、前記ポリペプチド構築物の改善
された発現をもたらす、ステップと
を含む、方法。
［１５０］
前記改善された発現が、配列ＡＰＶＫＱに対して少なくとも６０％の同一性を有する配
列を含むポリペプチドリンカーを有さない対応するポリペプチド構築物と比較して、少な
くとも１０％、２０％，３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、ま
たは１００％である、請求項１４９に記載の方法。
［１５１］
少なくとも１つのプラスミドマイクロバブル複合体
を含む組成物であって、前記マイクロバブルが、脂質、ガス、ならびに請求項１から２７
および３５から４１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むプラスミドを含む、
組成物。
［１５２］
前記脂質が、前記ガスおよびプラスミドを封入するシェルを形成する、請求項１５１に
記載の組成物。
［１５３］
前記ガスが、パーフルオロカーボンガスである、請求項１５１から１５２のいずれか一
項に記載の組成物。
［１５４］
前記ガスが、パーフルオロプロパンである、請求項１５３に記載の組成物。
［１５５］
前記マイクロバブル複合体が、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフ
ァチジルコリンおよび１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルエ
タノールアミングリセロールのうちの少なくとも１つを含む、請求項１５１から１５４の
いずれか一項に記載の組成物。
［１５６］
対象に、請求項１５１から１５５のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップと
、
前記対象を、所定の組織または器官における少なくとも１つのマイクロバブルの超音波
破壊をもたらすのに十分な超音波エネルギーと接触させるステップと
を含む方法。
［１５７］
前記所定の組織または器官における前記少なくとも１つのマイクロバブルの破壊により
、前記プラスミドが前記組織または器官へ送達される、請求項１５６に記載の方法。
［１５８］
前記組織または器官が、器官であり、前記器官が、心臓である、請求項１５７に記載の
方法。
［１５９］
対象における心疾患または障害を処置する方法であって、
前記対象に、少なくとも１つのマイクロバブルを含むある量の組成物を投与するステップ
であって、前記マイクロバブルが、脂質、ガス、ならびに請求項１から２７および３５か
ら４１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むプラスミドを含む、ステップと、
前記対象を、前記少なくとも１つのマイクロバブルの超音波破壊をもたらすのに十分な
超音波エネルギーと接触させ、前記プラスミドを前記対象の心臓に送達するステップと
を含む、方法。
［１６０］
前記脂質が、前記ガスおよびプラスミドを封入するシェルを形成する、請求項１５９に
記載の方法。
［１６１］
前記ガスが、パーフルオロカーボンガスである、請求項１５９から１６０のいずれか一
項に記載の方法。
［１６２］
前記ガスが、パーフルオロプロパンである、請求項１６１に記載の方法。
［１６３］
前記マイクロバブルが、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジ
ルコリンおよび１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルエタノー
ルアミングリセロールのうちの少なくとも１つを含む、請求項１５９から１６２のいずれ
か一項に記載の方法。
［１６４］
前記心疾患または障害が、うっ血性心不全、心筋症、不整脈、心膜疾患、大動脈疾患、
マルファン症候群、および冠状動脈疾患のうちの少なくとも１つを含む、請求項１５９か
ら１６３のいずれか一項に記載の方法。