【手続補正書】
【提出日】平成31年2月22日(2019.2.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養キットであって、
合成ペプチドヒドロゲル溶液；
希釈溶液；および
以下を行う説明書：
該合成ペプチドヒドロゲル溶液の濃度を該希釈溶液で調節すると同時に、その張度を血漿重量オスモル濃度レベルにおいて、およびそのｐＨを約３．５以下のレベルにおいて維持する、ならびに
細胞培養実験を該希釈した合成ペプチドヒドロゲル溶液で行う、
を含む、キット。
【請求項２】
前記合成ペプチドヒドロゲルは、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ（ＲＡＤＡ１６）を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、希釈前に該合成ペプチドヒドロゲル溶液のｐＨレベルが約３．５以下にあり、該合成ペプチドヒドロゲル溶液の張度が、血漿重量オスモル濃度レベルにあるように製剤化される、請求項１に記載のキット。
【請求項４】
希釈前に前記合成ペプチドヒドロゲル溶液のｐＨレベルを約３．５以下に、および該合成ペプチドヒドロゲル溶液の張度を該血漿重量オスモル濃度レベルへと調節するように製剤化されたカクテル溶液をさらに含む、請求項１に記載のキット。
【請求項５】
前記カクテル溶液および前記希釈溶液のうちの少なくとも一方は、張度を制御するために１種もしくはこれより多くの等張剤を含む、請求項４に記載のキット。
【請求項６】
前記１種もしくはこれより多くの等張剤は、塩、糖、およびこれらの混合物を含む、請求項５に記載のキット。
【請求項７】
前記カクテル溶液および前記希釈溶液のうちの少なくとも一方は、ｐＨを制御するために、１種もしくはこれより多くのアルカリ塩または酸性塩を含む、請求項４に記載のキット。
【請求項８】
前記カクテル溶液は、高張性であり、約１〜約１４の間のｐＨレベルを有する、請求項４に記載のキット。
【請求項９】
培養される予定の細胞供給源、細胞培養培地、および等張性緩衝溶液のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項１に記載のキット。
【請求項１０】
前記等張性緩衝溶液は、ＰＢＳ、生理食塩水、スクロースが挙げられるがこれに限定されない糖ベースの等張剤、またはＤＭＥＭが挙げられるがこれに限定されない細胞培養培地を含む、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
洗浄溶液をさらに含む、請求項１に記載のキット。
【請求項１２】
前記説明書は、培養された細胞を前記洗浄溶液で単離する、および該単離された細胞を細胞特徴付けまたは分子特徴付けに供する指示をさらに提供する、請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
前記洗浄溶液が、等張性であり、約１〜約３．５のｐＨレベルを有する、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
前記説明書は、複数の細胞が緩衝溶液中に懸濁される３−Ｄ細胞培養プロトコルに関する、請求項１に記載のキット。
【請求項１５】
前記説明書は、２−Ｄ細胞培養プロトコルに関する、請求項１に記載のキット。
【請求項１６】
前記説明書は、標的細胞タイプに基づいて前記血漿重量オスモル濃度レベルを選択する、および前記カクテル溶液を使用して、前記合成ペプチドヒドロゲル溶液中で前記血漿重量オスモル濃度レベルを達成するさらなる指示を提供する、請求項４に記載のキット。
【請求項１７】
インビトロ細胞培養法であって、該方法は、
合成ペプチドヒドロゲル溶液のｐＨレベルを約３．５以下で維持する工程；
該合成ペプチドヒドロゲル溶液の張度を血漿重量オスモル濃度レベルで維持する工程；
該ペプチドヒドロゲル溶液を所定の濃度に希釈する工程；
細胞を該ペプチドヒドロゲル溶液中で所定の期間にわたって培養する工程；および
該培養された細胞を単離する工程、
を包含する細胞培養法。
【請求項１８】
前記単離された細胞を、フローサイトメトリー分析および画像観察、細胞ブロッティング、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験を含む分子特徴付けに供する工程をさらに包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ（ＲＡＤＡ１６）を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記培養工程は、３−Ｄ細胞培養実験に関する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記培養工程は、２−Ｄ細胞培養実験に関する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記培養工程は、細胞を、前記ヒドロゲルへと周囲の細胞からインビトロで動員することに関する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
前記培養工程は、インビトロでの細胞培養実験に関する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記培養工程は、薬物、サイトカイン、増殖因子、ペプチド、および／またはタンパク質と組み合わせて、細胞培養を改善ならびに細胞増殖および分化を起こすことを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
細胞培養実験の標的種または標的細胞タイプに基づいて、前記血漿重量オスモル濃度レベルを選択する工程をさらに包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記張度は、約２６０〜約３６０ｍＯｓｍ／Ｌの範囲にある、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
約１．５〜約３．５のｐＨレベル、ならびに標的種および標的細胞タイプに関して約２６０〜約３６０ｍＯｓｍ／Ｌの範囲の血漿重量オスモル濃度での張度を有する、合成ペプチドヒドロゲル溶液。
【請求項２８】
前記標的種は、マウス、ラット、ブタ、ウサギ、ウシ、ヒト、昆虫、細菌、および植物からなるが、これらに限定されない群より選択される、請求項２７に記載の溶液。
【請求項２９】
前記標的細胞タイプは、線維芽細胞、幹細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経系細胞、心臓細胞、腎臓細胞、血球、筋細胞、膵臓細胞、免疫細胞、樹状細胞、表皮細胞、がん細胞、星状細胞、脂肪細胞、肝細胞、骨芽細胞、および軟骨細胞からなるが、これらに限定されない群より選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ（ＲＡＤＡ１６）を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、１ｒａｄ／秒および１Ｐａの応力で測定される場合、０．５％濃度で少なくとも５Ｐａの貯蔵弾性率を特徴とする、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、張度を制御するための塩、糖、およびこれらの混合物を含む１種もしくはこれより多くの等張剤、ならびにｐＨレベルを制御するための１種もしくはこれより多くのアルカリ塩または酸性塩を含む、請求項２７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
いくつかの局面において、上記標的種は、マウス、ラット、ブタ、ウサギ、ウシ、ヒト、昆虫、細菌、および植物からなるが、これらに限定されない群より選択され得る。上記標的細胞タイプは、線維芽細胞、幹細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経系細胞、心臓細胞、腎臓細胞、血球、筋細胞、膵臓細胞、免疫細胞、樹状細胞、表皮細胞、がん細胞、星状細胞、脂肪細胞、肝細胞、骨芽細胞、および軟骨細胞からなるが、これらに限定されない群より選択され得る。上記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ（ＲＡＤＡ１６）を含み得る。上記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、１ｒａｄ／秒および１Ｐａの応力で測定される場合、０．５％濃度で少なくとも５Ｐａの貯蔵弾性率を特徴とし得る。上記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、張度を制御するための塩、糖、およびこれらの混合物を含む１種もしくはこれより多くの等張剤、ならびにｐＨレベルを制御するための１種もしくはこれより多くのアルカリ塩または酸性塩を含み得る。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
細胞培養キットであって、
合成ペプチドヒドロゲル溶液；
希釈溶液；および
以下を行う説明書：
該合成ペプチドヒドロゲル溶液の濃度を該希釈溶液で調節すると同時に、その張度を血漿重量オスモル濃度レベルにおいて、およびそのｐＨを約３．５以下のレベルにおいて維持する、ならびに
細胞培養実験を該希釈した合成ペプチドヒドロゲル溶液で行う、
を含む、キット。
（項目２）
前記合成ペプチドヒドロゲルは、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ（ＲＡＤＡ１６）を含む、項目１に記載のキット。
（項目３）
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、希釈前に該合成ペプチドヒドロゲル溶液のｐＨレベルが約３．５以下にあり、該合成ペプチドヒドロゲル溶液の張度が、血漿重量オスモル濃度レベルにあるように製剤化される、項目１に記載のキット。
（項目４）
希釈前に前記合成ペプチドヒドロゲル溶液のｐＨレベルを約３．５以下に、および該合成ペプチドヒドロゲル溶液の張度を該血漿重量オスモル濃度レベルへと調節するように製剤化されたカクテル溶液をさらに含む、項目１に記載のキット。
（項目５）
前記カクテル溶液および前記希釈溶液のうちの少なくとも一方は、張度を制御するために１種もしくはこれより多くの等張剤を含む、項目４に記載のキット。
（項目６）
前記１種もしくはこれより多くの等張剤は、塩、糖、およびこれらの混合物を含む、項目５に記載のキット。
（項目７）
前記カクテル溶液および前記希釈溶液のうちの少なくとも一方は、ｐＨを制御するために、１種もしくはこれより多くのアルカリ塩または酸性塩を含む、項目３に記載のキット。
（項目８）
前記カクテル溶液は、高張性であり、約１〜約１４の間のｐＨレベルを有する、項目３に記載のキット。
（項目９）
培養される予定の細胞供給源、細胞培養培地、および等張性緩衝溶液のうちの少なくとも１つをさらに含む、項目１に記載のキット。
（項目１０）
前記等張性緩衝溶液は、ＰＢＳ、生理食塩水、スクロースが挙げられるがこれに限定されない糖ベースの等張剤、またはＤＭＥＭが挙げられるがこれに限定されない細胞培養培地を含む、項目９に記載のキット。
（項目１１）
洗浄溶液をさらに含む、項目１に記載のキット。
（項目１２）
前記説明書は、培養された細胞を前記洗浄溶液で単離する、および該単離された細胞を細胞特徴付けまたは分子特徴付けに供する指示をさらに提供する、項目１１に記載のキット。
（項目１３）
前記説明書は、複数の細胞が緩衝溶液中に懸濁される３−Ｄ細胞培養プロトコルに関する、項目１に記載のキット。
（項目１４）
前記説明書は、２−Ｄ細胞培養プロトコルに関する、項目１に記載のキット。
（項目１５）
前記説明書は、標的細胞タイプに基づいて前記血漿重量オスモル濃度レベルを選択する、および前記カクテル溶液を使用して、前記合成ペプチドヒドロゲル溶液中で前記血漿重量オスモル濃度レベルを達成するさらなる指示を提供する、項目３に記載のキット。
（項目１６）
細胞培養法であって、該方法は、
合成ペプチドヒドロゲル溶液のｐＨレベルを約３．５以下で維持する工程；
該合成ペプチドヒドロゲル溶液の張度を血漿重量オスモル濃度レベルで維持する工程；
該ペプチドヒドロゲル溶液を所定の濃度に希釈する工程；
細胞を該ペプチドヒドロゲル溶液中で所定の期間にわたって培養する工程；および
該培養された細胞を単離する工程、
を包含する細胞培養法。
（項目１７）
前記単離された細胞を、フローサイトメトリー分析および画像観察、細胞ブロッティング、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試験を含む分子特徴付けに供する工程をさらに包含する、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ（ＲＡＤＡ１６）を含む、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記培養工程は、３−Ｄ細胞培養実験に関する、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記培養工程は、２−Ｄ細胞培養実験に関する、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記培養工程は、細胞を、前記ヒドロゲルへと周囲の細胞からインビトロまたはインビボで動員することに関する、項目１６に記載の方法。
（項目２２）
前記培養工程は、インビトロでの細胞培養実験に関する、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
前記培養工程は、エキソビボでの細胞培養実験に関する、項目１６に記載の方法。
（項目２４）
前記培養工程は、インビボでの動物またはヒトの実験に関する、項目１６に記載の方法。
（項目２５）
前記培養工程は、薬物、サイトカイン、増殖因子、ペプチド、および／またはタンパク質と組み合わせて、細胞培養を改善ならびに細胞増殖および分化を起こすことを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
細胞培養実験の標的種または標的細胞タイプに基づいて、前記血漿重量オスモル濃度レベルを選択する工程をさらに包含する、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記張度は、約２６０〜約３６０ｍＯｓｍ／Ｌの範囲にある、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
約１．５〜約３．５のｐＨレベル、ならびに標的種および標的細胞タイプに関して約２６０〜約３６０ｍＯｓｍ／Ｌの範囲の血漿重量オスモル濃度での張度を有する、合成ペプチドヒドロゲル溶液。
（項目２９）
前記標的種は、マウス、ラット、ブタ、ウサギ、ウシ、ヒト、昆虫、細菌、および植物からなるが、これらに限定されない群より選択される、項目２８に記載の溶液。
（項目３０）
前記標的細胞タイプは、線維芽細胞、幹細胞、上皮細胞、内皮細胞、神経系細胞、心臓細胞、腎臓細胞、血球、筋細胞、膵臓細胞、免疫細胞、樹状細胞、表皮細胞、がん細胞、星状細胞、脂肪細胞、肝細胞、骨芽細胞、および軟骨細胞からなるが、これらに限定されない群より選択される、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、ＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡＲＡＤＡ（ＲＡＤＡ１６）を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３２）
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、１ｒａｄ／秒および１Ｐａの応力で測定される場合、０．５％濃度で少なくとも５Ｐａの貯蔵弾性率を特徴とする、項目２８に記載の方法。
（項目３３）
前記合成ペプチドヒドロゲル溶液は、張度を制御するための塩、糖、およびこれらの混合物を含む１種もしくはこれより多くの等張剤、ならびにｐＨレベルを制御するための１種もしくはこれより多くのアルカリ塩または酸性塩を含む、項目２８に記載の方法。