(57)【要約】生体細胞移植具（１）は、生体細胞（１２）を収納可能な可撓性チューブ（２）と、チューブ（２）に挿入された細胞押出シャフト（３）とを備える。チューブ（２）は、貫通したルーメン（２４）と、縮径先端開口部（２３）を備える。シャフト（３）は、縮径先端開口部（２３）より小径である小径先端部（３２）と、縮径先端開口部（２３）より大径である拡径部３３を備える。シャフト（３）の拡径部（３３）とチューブ（２）の縮径先端開口部（２３）の当接により、シャフト（３）の挿入進行が規制され、かつ、両者の当接後、シャフト（３）を押し込むことにより、拡径部（３３）は縮径先端開口部（２３）を押し広げ通過し、チューブ（２）の縮径先端開口部（２３）より突出する。
2018066616.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体細胞を収納可能な可撓性チューブと、前記可撓性チューブ内に挿入された細胞押出シャフトとを備える生体細胞移植具であって、  前記可撓性チューブは、先端から後端まで貫通したルーメンと、縮径先端開口部とを備え、  前記細胞押出シャフトは、前記可撓性チューブの前記縮径先端開口部より小径である小径先端部と、前記小径先端部および前記縮径先端開口部より大径であり、かつ、前記可撓性チューブの内径より若干小さい外径を有する拡径部とを備え、前記拡径部の先端は、前記小径先端部と近接しかつ前記細胞押出シャフトの後端側に位置し、  前記細胞押出シャフトの前記拡径部と前記可撓性チューブの縮径先端開口部の当接により、前記可撓性チューブ内における前記細胞押出シャフトの挿入進行が規制され、かつ、前記拡径部と前記縮径先端開口部との当接後、前記細胞押出シャフトを押し込むことにより、前記拡径部は、前記縮径先端開口部を押し広げ通過し、前記チューブの前記縮径先端開口部より突出可能であることを特徴とする生体細胞移植具。
【請求項２】
前記縮径先端開口部は、内径および外径が、先端に向かってテーパー状に縮径している請求項１に記載の生体細胞移植具。
【請求項３】
前記細胞押出シャフトは、塑性変形可能な金属製棒状部材からなる内芯を備えている請求項１または２に記載の生体細胞移植具。
【請求項４】
前記細胞押出シャフトは、前記拡径部が前記可撓性チューブの前記縮径先端開口部より突出後に、前記可撓性チューブの後端と当接する先端部突出長規制部材を備えている請求項１ないし３のいずれかに記載の生体細胞移植具。
【請求項５】
前記生体細胞移植具は、湾曲した先端領域を備えている請求項１ないし４のいずれかに記載の生体細胞移植具。
【請求項６】
前記可撓性チューブは、前記チューブの先端側部分の側面に設けられた生体細胞挿入用側口を備えている請求項１ないし５のいずれかに記載の生体細胞移植具。
【請求項７】
前記生体細胞移植具は、湾曲先端領域を備え、前記可撓性チューブは、前記チューブの先端側部分の側面に設けられた生体細胞充填用の側口を備え、前記側口は、前記湾曲先端領域の湾曲方向の側部側となる位置に形成されている請求項１ないし４のいずれかに記載の生体細胞移植具。
【請求項８】
前記生体細胞移植具は、多数の生体組織小断片化物を移植するためのものである請求項１ないし７のいずれかに記載の生体細胞移植具。
【請求項９】
前記生体細胞移植具は、卵巣の小断片化物を卵管の漿膜と卵管間に移植するためのものである請求項１ないし８のいずれかに記載の生体細胞移植具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、生体細胞を生体内に移植するための生体細胞移植具に関するものである。具体的には、卵巣（もしくは卵巣皮質）の小断片化物である生体細胞を卵管の漿膜と卵管間に移植するための卵巣細胞卵管漿膜下移植具である。
【背景技術】
【０００２】  卵巣内には卵子の源となる原始卵胞が存在する。原始卵胞の数は胎生期にピークとなるが、その数は出生以降増加せず、加齢と共に減少する。月経が発来すると毎月１,０００個程度の原始卵胞が休眠状態から活性化されて発育を開始し、卵巣局所で産生される因子および下垂体から分泌されるゴナドトロピンの内分泌作用を受けて発育を続け排卵に至る。卵巣内の残存原始卵胞の数が約１,０００個以下となると、定期的な卵胞の活性化がおこらなくなり、発育した卵胞の顆粒膜細胞より分泌されるエストロゲンが欠乏し、更年期症状や子宮内膜増殖不全による無月経を呈する。同時に排卵もおこらなくなり、閉経となる．【０００３】  卵巣内の卵胞数が急激に減少し、４０歳未満で残存卵胞数が限界値（約１,０００個以下）以下となり閉経する疾患が早発卵巣不全（ＰＯＩ；ｐｒｉｍａｒｙ  ｏｖａｒｉａｎ  ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）である。早発卵巣不全は、全女性の１００人に１人に自然発生する。原因としては、染色体・遺伝子異常、自己免疫疾患、医原性（卵巣手術、化学療法、放射線療法）などが知られているが、原因不明のものも多い。早発卵巣不全の有効な治療法は、提供卵子（ドナー卵子）を用いた体外受精胚移植であり、自らの卵子で妊娠することは非常に困難である。しかし、日本では、提供卵子による体外受精は普及していない。その理由として、他人の卵子ではなく自分の卵子で妊娠したいという強い思いがあると考えられる。また、日本における卵子提供は禁止されてはいないものの、卵子の無償提供の原則と、卵子採取のためリスクのある卵巣刺激、採卵をドナーが受ける必要があることから、卵子提供者が非常に少ない。【０００４】  河村氏および他のグループにより提案された休眠原始卵胞の人為的活性化法（ＩＶＡ；ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）が、早発卵巣不全に対して、有効であり、今後、臨床応用が進むものと考える。  休眠原始卵胞の人為的活性化法では、以下のような手技が行われる。１）腹腔鏡下卵巣摘出２）卵巣組織凍結、残存卵胞組織検査３）卵巣組織培養：解凍した卵巣皮質を１−２ｍｍ大の立方、直方体状に小断片化し、ＰＴＥＮ抑制剤およびＰＩ３Ｋ活性化剤を用いて卵巣組織培養を４８時間行い、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔシグナルを活性化させる。４）卵巣自家移植：培養終了後に卵巣組織を十分に洗浄し、腹腔鏡下に卵巣自家移植を行う。早発卵巣不全患者は卵巣の血流が悪く、移植した卵巣の正着が難しいと考えられる。そこで、血流が豊富で、かつ、経腟超音波で観察しやすく採卵手技が容易である卵巣漿膜下への移植を選択している。５）卵胞発育モニター、体外受精胚移植  卵巣自家移植後は、ホルモン検査（ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２）および経腟超音波を行い、卵胞発育を２週間毎に調べる．卵胞が発育した際には、通常の体外受精と同様に採卵する。成熟卵子が得られた場合は、媒精または顕微授精により受精させ、胚をガラス化法により一旦凍結保存する．消退出血を発来させ、ホルモン補充周期下に解凍胚移植を行う。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  休眠原始卵胞の人為的活性化法は、新たな手技であり、この手技を行うためには、卵巣自家移植、具体的には、卵巣（もしくは卵巣皮質）の小断片化物である生体細胞を卵管の漿膜と卵管間に良好に移植することが重要である。【０００６】  本発明の目的は、卵巣（もしくは卵巣皮質）の小断片化物である生体細胞を卵管の漿膜と卵管間に良好に移植することができる生体細胞移植具を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  上記目的を達成するものは、以下のものである。  生体細胞を収納可能な可撓性チューブと、前記可撓性チューブ内に挿入された細胞押出シャフトとを備える生体細胞移植具であって、  前記可撓性チューブは、先端から後端まで貫通したルーメンと、縮径先端開口部とを備え、  前記細胞押出シャフトは、前記可撓性チューブの前記縮径先端開口部より小径である小径先端部と、前記小径先端部および前記縮径先端開口部より大径であり、かつ、前記可撓性チューブの内径より若干小さい外径を有する拡径部とを備え、前記拡径部の先端は、前記小径先端部と近接しかつ前記細胞押出シャフトの後端側に位置し、  前記細胞押出シャフトの前記拡径部と前記可撓性チューブの縮径先端開口部の当接により、前記可撓性チューブ内における前記細胞押出シャフトの挿入進行が規制され、かつ、前記拡径部と前記縮径先端開口部との当接後、前記細胞押出シャフトを押し込むことにより、前記拡径部は、前記縮径先端開口部を押し広げ通過し、前記チューブの前記縮径先端開口部より突出可能である生体細胞移植具。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、本発明の実施例の生体細胞移植具の正面図である。
【図２】図２は、図１に示した生体細胞移植具の先端部の拡大縦断面図である。
【図３】図３は、図１に示した生体細胞移植具の基端部の拡大縦断面図である。
【図４】図４は、図１に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【図５】図５は、図１に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【図６】図６は、図１に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【図７】図７は、図１に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【図８】図８は、図１に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【図９】図９は、本発明の生体細胞移植具の他の実施例の正面図である。
【図１０】図１０は、本発明の生体細胞移植具の他の実施例の正面図である。
【図１１】図１１は、図１０に示した生体細胞移植具の側口付近の拡大正面図である。
【図１２】図１２は、図１０に示した生体細胞移植具の側口付近の拡大右側面図である。
【図１３】図１３は、図１０に示した生体細胞移植具に使用される可撓性チューブの側口部分を説明するための拡大縦断面図である。
【図１４】図１４は、図１０に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【図１５】図１５は、図１０に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【図１６】図１６は、本発明の他の実施例の生体細胞移植具の先端部の拡大縦断面図である。
【図１７】図１７は、本発明の他の実施例の生体細胞移植具の基端部の拡大縦断面図である。
【図１８】図１８は、本発明の生体細胞移植具の他の実施例の正面図である。
【図１９】図１９は、図１８に示した生体細胞移植具の側口付近の拡大正面図である。
【図２０】図２０は、図１８に示した生体細胞移植具の側口付近の拡大右側面図である。
【図２１】図２１は、図１８に示した生体細胞移植具に使用される可撓性チューブの側口部分を説明するための拡大縦断面図である。
【図２２】図２２は、図１８に示した生体細胞移植具の作用を説明するための説明図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】  本発明の生体細胞移植具を図面に示した実施例を用いて説明する。  本発明の生体細胞移植具１は、生体細胞１２を収納可能な可撓性チューブ２と、可撓性チューブ２内に摺動可能に挿入された細胞押出シャフト３とを備える。可撓性チューブ２は、先端から後端まで貫通したルーメン２４と、縮径先端開口部２３とを備える。細胞押出シャフト３は、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より小径である小径先端部３２と、小径先端部３２および縮径先端開口部２３より大径であり、かつ、可撓性チューブ２の内径より若干小さい外径を有する拡径部３３とを備え、拡径部３３の先端は、小径先端部３２と近接しかつ細胞押出シャフト３の後端側に位置する。細胞押出シャフト３の拡径部３３と可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３の当接により、可撓性チューブ２内における細胞押出シャフト３の挿入進行が規制され、かつ、拡径部３３と縮径先端開口部２３との当接後、細胞押出シャフト３を押し込むことにより、拡径部３３は、縮径先端開口部２３を押し広げ通過し、可撓性チューブ２の縮径先端開口部３２より突出可能なものとなっている。
【００１０】  図示する実施例の生体細胞移植具１は、多数の生体組織小断片化物を移植部位に同時に移植するためのものである。特に、図示する生体細胞移植具１は、卵巣の小断片化物を多数、同時に卵管の漿膜と卵管間への移植に有効な卵巣細胞卵管漿膜下移植具に応用した実施例である。  この実施例の生体細胞移植具（卵巣細胞卵管漿膜下移植具）１は、生体細胞１２を収納可能な可撓性チューブ２と、可撓性チューブ２内に摺動可能に挿入された細胞押出シャフト３とを備える。  可撓性チューブ２は、図１ないし図３に示すように、チューブ本体２１と、チューブ本体２１の先端に形成された縮径先端開口部２３と、チューブ本体２１の後端部に形成されたテーパー状拡径部２６を備える。そして、可撓性チューブ２は、先端（縮径先端開口部２３）から後端（テーパー状拡径部２６の後端２７）まで貫通したルーメン２４を備えている。
【００１１】  可撓性チューブは、長さ５０〜３００ｍｍ、好ましくは、１００〜２５０ｍｍである。また、外径は、１〜５ｍｍ、好ましくは、１．５〜３．５ｍｍである。また、内径は、０．８〜４．８ｍｍ、好ましくは、１．３〜３．３ｍｍである。可撓性チューブの形成材料としては、ある程度の保形性を備えるものが好ましい。可撓性チューブの形成材料としては、ポリエステル、ポリオレフィン（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−プロピレンコポリマー）、ポリアミド（例えば、６ナイロン、６６ナイロン）、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート）、フッ素樹脂（例えば、ＰＴＦＥ、ＥＴＦＥ）などが使用できる。さらに、チューブ２の外面には、図１に示すように、複数の挿入深度確認用マーカー２２を付すことが好ましい。
【００１２】  縮径先端開口部２３は、少なくとも内径が他の部分（縮径先端開口部２３より後端側部分）より小径となっている。この実施例の生体細胞移植具１では、チューブ２の先端の内径は、先端に向かってテーパー状に縮径している。このようにすることにより、細胞押出シャフト３の押し込時における縮径先端開口部２３のシャフト３の拡径部の通過が容易となる。なお、縮径先端開口部２３の内径は、縮径先端開口部２３より後端側部分の内径の６５／１００〜９５／１００が好ましく、特に、７０／１００〜９０／１００が好ましい。
【００１３】  また、この実施例の生体細胞移植具１では、チューブ２の先端部は、外径も先端に向かってテーパー状に縮径している。このため、チューブの先端部の移植部位への挿入が容易なものとなっている。テーパー状縮径部の長さは、１〜１０ｍｍが好ましく、特に、２〜７ｍｍが好ましい。
【００１４】  テーパー状拡径部２６は、内径、外径ともに他の部分（テーパー状拡径部２６より先端側部分）より大径となっている。テーパー状拡径部２６の外径は、テーパー状拡径部２６より先端側部分の外径の１．１〜１．５倍が好ましく、特に、１．２〜１．４倍が好ましい。また、テーパー状拡径部２６の長さは、５〜５０ｍｍが好ましく、特に、１０〜４０ｍｍが好ましい。
【００１５】  細胞押出シャフト３は、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より小径である小径先端部３２と、小径先端部３２および縮径先端開口部２３より大径であり、かつ、可撓性チューブ２の内径より若干小さい外径を有する拡径部３３とを備える。拡径部３３の先端は、小径先端部３２と近接しかつ細胞押出シャフト３の後端側に位置する。具体的には、小径先端部３２の先端と拡径部３３の先端間の距離は、０．２〜１０ｍｍ程度が好ましく、特に、０．５〜５ｍｍ程度が好ましい。
【００１６】  この実施例の細胞押出シャフト３は、図２および図３に示すように、シャフト本体３１と、シャフト本体３１の先端に設けられた小径先端部３２と、小径先端部３２より大径である拡径部３３とを備えている。また、実施例の細胞押出シャフト３は、内芯３５と、内芯３５を被包する内芯被覆部３６と、内芯被覆部３６を被包する外層３７とを備えている。そして、この実施例の細胞押出シャフト３では、外層３７の先端が、内芯被覆部３６の先端より所定長基端側に位置し、外層３７の先端部により、拡径部３３が形成されている。
【００１７】  内芯３５としては、ある程度の剛性を有するものが好ましい。具体的には、内芯３５としては、金属製線状部材もしくは硬質樹脂部製線状部材が好適である。特に、塑性変形可能な金属製棒状部材が好適である。棒状部材としては、中実状もしくは中空状のいずれのものであってもよい。内芯３５として、塑性変形可能な金属製棒状部材を用いることにより、シャフト３および生体細胞移植具１の先端部の所用形状への形状付けが可能となる。金属製棒状部材としては、ステンレス鋼などの金属線が好適であり、特に、焼き鈍ししたステンレス鋼が好ましい。
【００１８】  シャフト３の小径先端部３２の先端（内芯被覆部３６の先端）は、図２に示すように先端に向かって縮径する半球状に形成されている。このため、生体内への挿入および抜去時に生体内壁に損傷を与えることを防止できる。また、内芯被覆部３６は、内芯３５の先端および後端を含む全体を被包するものとなっている。
【００１９】  内芯被覆部３６の形成材料としては、ポリエステル、ポリオレフィン（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−プロピレンコポリマー）、ポリアミド（例えば、６ナイロン、６６ナイロン）、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート）、フッ素樹脂（例えば、ＰＴＦＥ、ＥＴＦＥ）などが使用できる。
【００２０】  さらには、内芯被覆部３６の形成材料としては、可撓性を有するものを用いてもよい。例えば、ウレタンゴム、シリコーンゴム、ブタジエンゴムなどの合成ゴム、ラテックスゴムなどの天然ゴム、軟質塩化ビニール、ポリオレフィン（ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−プロピレンコポリマー、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ポリプロピレンとポリエチレンもしくはポリブテンの混合物）、ポリエステル（ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート）、ポリアミド、ポリオレフィン系エラストマー、ポリアミド系エラストマー、スチレン系エラストマー（例えば、スチレン−ブタジエン−スチレンコポリマー、スチレン−イソプレン−スチレンコポリマー、スチレン−エチレンブチレン−スチレンコポリマー）などのエラストマー、ポリウレタン、特に、熱可塑性ポリウレタン（熱可塑性ポリエーテルポリウレタン、熱可塑性ポリエステルポリウレタン、特に、好ましくは、ソフトセグメント部分とハードセグメント部分を有するセグメント化熱可塑性ポリエーテルポリウレタン、より具体的には、ソフトセグメントの主成分としては、ポリテトラメチレンエーテルグリコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールなどが好ましく、ハードセグメントの主成分としては、１、４−ブタンジオールなどが好ましい。）等が使用できる。好ましくは、シリコーンゴムなどのゴム、もしくはエラストマーである。特に、好ましくは、シリコーンゴムである。シリコーンゴムとしては、２００％モジュラス３０〜９０ｋｇ／ｃｍ２程度、好ましくは、４０〜６０ｋｇ／ｃｍ２のものが用いられる。
【００２１】  この実施例の外層３７は、内芯被覆部３６の先端部および基端部が露出するように、内芯被覆部３６の側部を被覆している。なお、外層３７は、内芯被覆部３６の後端部を被覆してもよい。また、内芯被覆部と外層は、一体に形成されたものであってもよい。外層３７の形成材料としては、上述した内芯被覆部３６にて説明した形成材料が使用できる。特に、外層３７は、可撓性チューブ２の内面との摺接抵抗が少ないことが好ましい。この点より、外層３７の形成材料としては、フッ素樹脂（例えば、ＰＴＦＥ、ＥＴＦＥ）が好適である。  また、細胞押出シャフト３の先端部およびチューブ２の先端部内面は、細胞難付着性表面となっていてもよい。このようにすることにより、付着に起因する細胞残留が極めて少ないものとなる。細胞難付着性表面は、例えば、生体投与可能なシリコーンオイル、植物性オイルなどのオイルを用いることができる。
【００２２】  なお、この実施例の生体細胞移植具１では、シャフト３のほぼ全体に外層３７が形成されている。外層３７を備えることにより、操作安定性、具体的には、シャフト３の前後の摺動操作性が良好となる。しかし、外層３７を有するものに限定されるものではなく、例えば、図１６および図１７に示す生体細胞移植具１ｄのように、シャフト３ｃの先端部分にのみ外層３７ａが形成されたものであってもよい。この実施例のシャフト３ｃでは、シャフト本体３１ｃの先端側部分にのみ外層３７ａが形成されており、外層３７ａの後端より後方は、内芯３５と内芯被覆部３６により構成され、拡径部３３より、小径なものとなっている。
【００２３】  細胞押出シャフト３は、可撓性チューブ２より、所定長長いものとなっている。シャフト３の全長は、５０〜３００ｍｍ、好ましくは、１００〜２５０ｍｍである。また、外径は、１〜３ｍｍ、好ましくは、１〜２．５ｍｍである。  また、この実施例のシャフト２では、後端部にチューブ状の把持部３４が設けられている。把持部３４は、シャフトの摺動操作時に把持される。
【００２４】  さらに、この実施例の細胞押出シャフト３では、基端側部分に、先端部突出長規制部材３８が設けられている。この規制部材３８は、シャフト３の押込により、チューブ２の後端２７に当接し、それ以上のシャフトの押込を防止する。このような規制部材３８を設けることにより、シャフト３の押込時におけるシャフトの先端部の突出長を設定することができ、過剰な先端部の突出を防止できる。また、当接するまで押し込む必要があることを術者が認識できるため、確実にシャフトの先端部の拡径部をチューブの先端より突出させることができ、細胞のチューブ内に残留を防止できる。
【００２５】  この実施例の規制部材３８は、図３に示すように、チューブ２の後端２７の後端面に当接可能なリング状部材である。規制部材３８の形成材料としては、内芯被覆部３６の形成材料として説明したものが好適に使用できる。  そして、この実施例の生体細胞移植具（卵巣細胞卵管漿膜下移植具）１は、細胞押出シャフト３の拡径部３３と可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３の当接により、可撓性チューブ２内における細胞押出シャフト３の挿入進行が規制されるものとなっている。図２に示すように、可撓性チューブ２内に挿入された細胞押出シャフト３は、シャフト３の小径先端部３３の先端部が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より突出し、シャフト３の拡径部３３が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３に当接することにより、それ以上の挿入が規制される。
【００２６】  この状態において、シャフト３の小径先端部３３の先端部は、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より若干突出している。シャフト３の小径先端部３３の可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３からの突出長としては、０．２〜５ｍｍが好適であり、特に、０．５〜３ｍｍが好ましい。  また、シャフト３の拡径部３３が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３に当接した状態において、図３に示すように、シャフト３の後端側部分は、チューブ２の後端２７より突出している。また、シャフト３の規制部材３８は、チューブ２の後端２７に当接していない。
【００２７】  そして、シャフト３の拡径部３３と可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３が当接した状態において、細胞押出シャフト３を押し込むと、図５に示すように、シャフト３の拡径部３３は、チューブ２の縮径先端開口部２３を押し広げ通過し、拡径部３３の先端が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部３２より突出する。また、拡径部３３の先端が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より突出した後、シャフト３の規制部材３８が、チューブ２の後端２７に当接する。これにより、それ以上のシャフト３の先端方向への摺動が規制される。
【００２８】  次に、本発明の生体細胞移植具１の作用を図６ないし図８を用いて説明する。  例えば、腹腔鏡下にて卵巣を摘出し、摘出した卵巣組織を凍結保存する。そして、解凍した卵巣組織（卵巣皮質）を１〜２ｍｍ程度の大きさに小断片化し、ＰＴＥＮ抑制剤およびＰＩ３Ｋ活性化剤を用いて卵巣組織培養を４８時間行い、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔシグナルを活性化させる。そして、培養終了後に卵巣組織を十分に洗浄し、腹腔鏡下に卵巣自家移植を行う。最初に、細胞押出シャフト３を若干、後端側に引き、可撓性チューブ２の先端部内に、細胞収納部が形成された本発明の生体細胞移植具１を準備する。続いて、多数の小断片化卵巣組織を必要によりアプリケータを用いて、可撓性チューブ２の先端開口部より、チューブ２の先端部の細胞収納部に充填する。
【００２９】  腹腔鏡下にて、卵管付近を部分切開し、切開により発現した卵管の漿膜と卵管間１３に、上記のように準備した本発明の生体細胞移植具１の先端部を配置する。そして、シャフト３を先端側に摺動させることにより、チューブ２内に充填された小断片化卵巣組織は、卵管の漿膜と卵管間１３に徐々に移植される。そして、シャフト３の先端方向の進行が進むことにより、図７に示すように、シャフト３の規制部材３８が、チューブ２の後端２７に当接する。これにより、チューブ２内の大半の小断片化卵巣組織の移植が進行したことが確認できる。さらに、シャフト３を押し込むことにより、図８に示すように、シャフト３の拡径部３３は、チューブ２の縮径先端開口部２３を押し広げ通過し、拡径部３３の先端が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より突出する。これにより、シャフト２内のほぼすべての小断片化卵巣組織は、卵管の漿膜と卵管間１３に移植される。
【００３０】  また、本発明の生体細胞移植具は、図９に示す生体細胞移植具１ａのように、湾曲先端領域１０を備えるものであってもよい。湾曲先端領域１０は、細胞押出シャフト３の先端部を湾曲形状に形状付けし、これにより、可撓性チューブ２ａを湾曲追従するものとすることにより形成できる。さらには、細胞押出シャフト３の先端部および可撓性チューブの先端部をともに湾曲形状に形状付けすることにより、形成することもできる。湾曲先端領域１０は、生体細胞移植具１ａの先端から２０〜１００ｍｍの部分を湾曲させることにより形成することが好ましい。
【００３１】  また、本発明の生体細胞移植具は、図１０に示す生体細胞移植具１ｂのように、生体細胞充填用の側口２５を備えるものであってもよい。生体細胞充填用の側口２５は、可撓性チューブ２ｂの先端側領域に形成することが好ましい。  生体細胞充填用の側口２５としては、図１１ないし図１５に示すように、可撓性チューブ２ｂの先端方向に向かって、側口が深くなるものが好ましい。この実施例のものでは、側口２５は、基端側に位置する開始端２５ａと、開始端２５ａより、可撓性チューブ２ｂの中心軸方向かつ先端方向に延びる傾斜開口面２５ｃと、傾斜開口面２５ｃの先端に位置する起立開口面２５ｂを備えている。側口２５は、開始端２５ａから起立開口面２５ｂに向かって開口幅が広がっている。また、側口２５は、開始端２５ａから起立開口面２５ｂに向かって、側口の深さが深くなっている。
【００３２】  側口２５の軸方向長としては、５〜１５ｍｍが好適であり、特に、７〜１２ｍｍが好ましい。側口（開口）２５の最大幅における幅は、可撓性チューブ２ｂの内径と同じもしくは近いものであることが好ましい。起立面２５ｂは、可撓性チューブ２ｂの中心軸に直交するものが好ましい。そして、側口２５を上記のような形態とすることにより、図１４に示す様に、側口２５より、可撓性チューブ２ｂの先端側に確実かつ容易に、生体細胞を充填することができる。また、図１５に示すように、細胞押出シャフト３をその小径先端部３２が、側口２５の先端付近に位置する状態にて、生体に挿入することができ、挿入時における側口２５でのキンクを防止できる。
【００３３】  また、図１０に示す生体細胞移植具１ｂでは、上述した生体細胞移植具１ｂと同様に、湾曲先端領域１０を備えている。この実施例の生体細胞移植具１ｂでは、湾曲先端領域１０の基端側である非湾曲先端領域（ストレート部分）の先端部に、生体細胞充填用の側口２５が設けられている。なお、開口２５は、湾曲先端領域１０に設けてもよく、位置は、先端部でも基端部でもよい。
【００３４】  そして、この実施例では、側口２５は、図１２に示す様に、湾曲先端領域１０の湾曲方向の側部側となる位置に形成されている。言い換えれば、側口２５は、図１２に示す様に、湾曲先端領域１０の湾曲方向の内側および外側ではなく、側面側となる位置に形成されている。このため、可撓性チューブ２ｂを作業台等の平面部に、湾曲先端領域も平面部に接触するように載置したとき、側口２５が上面を向くものとなる。これにより、側口への細胞充填操作が容易なものとなる。  また、湾曲先端領域を備えない可撓性チューブに生体細胞充填用の側口を設ける場合には、側口は、先端付近に設けることが好ましい。
【００３５】  また、本発明の生体細胞移植具における生体細胞充填用の側口は、図１８ないし図２２に示す生体細胞移植具１ｃが備える側口８５のような形態のものであってもよい。この実施例においても生体細胞充填用の側口８５は、可撓性チューブ２ｃの先端側領域に形成することが好ましい。  この実施例における生体細胞充填用の側口８５は、図１８ないし図２２に示すように、可撓性チューブ２ｃの基端方向に向かって、側口が深くなるとなっている。また、側口８５は、先端側に位置する開始端８５ａと、開始端８５ａより、可撓性チューブ２ｃの中心軸方向かつ基端方向に延びる傾斜開口面８５ｃと、傾斜開口面８５ｃの終端に位置する起立開口面８５ｂを備えている。側口８５は、開始端８５ａから起立開口面８５ｂに向かって開口幅が広がっている。また、側口８５は、開始端８５ａから起立開口面８５ｂに向かって、側口の深さが深くなっている。
【００３６】  側口８５の軸方向長としては、５〜１５ｍｍが好適であり、特に、７〜１２ｍｍが好ましい。側口（開口）８５の最大幅における幅は、可撓性チューブ２ｃの内径と同じもしくは近いものであることが好ましい。起立面８５ｂは、可撓性チューブ２ｃの中心軸に直交するものが好ましい。そして、側口８５を上記のような形態とすることにより、図２２に示す様に、側口８５より、可撓性チューブ２ｃの基端側に確実かつ容易に、生体細胞を充填することができる。
【００３７】  また、この実施例の生体細胞移植具１ｃでは、図１８に示すように、上述した生体細胞移植具１ｂと同様に、湾曲先端領域１０を備えている。この実施例の生体細胞移植具１ｃでは、湾曲先端領域１０の基端側である非湾曲先端領域（ストレート部分）の先端部に、生体細胞充填用の側口８５が設けられている。なお、開口８５は、湾曲先端領域１０に設けてもよく、位置は、先端部でも基端部でもよい。
【００３８】  そして、この実施例の生体細胞移植具１ｃにおいても、側口８５は、図１８に示す様に、湾曲先端領域１０の湾曲方向の側部側となる位置に形成されている。言い換えれば、側口８５は、図１８に示す様に、湾曲先端領域１０の湾曲方向の内側および外側ではなく、側面側となる位置に形成されている。このため、可撓性チューブ２ｃを作業台等の平面部に、湾曲先端領域も平面部に接触するように載置したとき、側口８５が上面を向くものとなる。これにより、側口への細胞充填操作が容易なものとなる。  また、湾曲先端領域を備えない可撓性チューブに生体細胞充填用の側口を設ける場合には、側口は、先端付近に設けることが好ましい。
【産業上の利用可能性】
【００３９】  本発明の生体細胞移植具は、以下のものである。  （１）  生体細胞を収納可能な可撓性チューブと、前記可撓性チューブ内に挿入された細胞押出シャフトとを備える生体細胞移植具であって、  前記可撓性チューブは、先端から後端まで貫通したルーメンと、縮径先端開口部とを備え、  前記細胞押出シャフトは、前記可撓性チューブの前記縮径先端開口部より小径である小径先端部と、前記小径先端部および前記縮径先端開口部より大径であり、かつ、前記可撓性チューブの内径より若干小さい外径を有する拡径部とを備え、前記拡径部の先端は、前記小径先端部と近接しかつ前記細胞押出シャフトの後端側に位置し、  前記細胞押出シャフトの前記拡径部と前記可撓性チューブの縮径先端開口部の当接により、前記可撓性チューブ内における前記細胞押出シャフトの挿入進行が規制され、かつ、前記拡径部と前記縮径先端開口部との当接後、前記細胞押出シャフトを押し込むことにより、前記拡径部は、前記縮径先端開口部を押し広げ通過し、前記チューブの前記縮径先端開口部より突出可能である生体細胞移植具。【００４０】  この生体細胞移植具によれば、可撓性チューブに生体細胞、例えば、多数の卵巣の小断片化物を充填した後、充填部位にシャフトの先端部が当接もしくは近接する状態にて、細胞移植部位、例えば、卵管の漿膜と卵管間に、生体細胞移植具の先端部を配置した後、シャフトを先端方向に進行させることにより、生体細胞を移植部位に移植可能である。また、シャフトの進行により、シャフトの拡径部が、チューブの縮径先端開口部に当接し、充填細胞の大半が移植具より吐出されたことを操作者は容易に認識する。さらに、シャフトを押し込むことにより、チューブ内残留生体細胞が、チューブより押し出され、移植部位に移植される。チューブ内の生体細胞を確実に押出し可能であり、かつ、残留細胞押出し作業をおこなっていることを、押込抵抗より、操作者が容易に認識できる。これにより、良好に、生体細胞を目的移植部位に移植することができる。【００４１】  また、上記の実施態様は、以下のものであってもよい。  （２）  前記縮径先端開口部は、内径および外径が、先端に向かってテーパー状に縮径している上記（１）に記載の生体細胞移植具。  （３） 前記細胞押出シャフトは、塑性変形可能な金属製棒状部材からなる内芯を備えている上記（１）または（２）に記載の生体細胞移植具。  （４） 前記細胞押出シャフトは、前記拡径部が前記可撓性チューブの前記縮径先端開口部より突出後に、前記可撓性チューブの後端と当接する先端部突出長規制部材を備えている上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の生体細胞移植具。  （５）  前記生体細胞移植具は、湾曲した先端領域を備えている上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の生体細胞移植具。  （６）  前記可撓性チューブは、前記チューブの先端側部分の側面に設けられた生体細胞挿入用側口を備えている上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の生体細胞移植具。  （７）  前記生体細胞移植具は、湾曲先端領域を備え、前記可撓性チューブは、前記チューブの先端側部分の側面に設けられた生体細胞充填用の側口を備え、前記側口は、前記湾曲先端領域の湾曲方向の側部側となる位置に形成され���いる上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の生体細胞移植具。  （８）  前記生体細胞移植具は、多数の生体組織小断片化物を移植するためのものである上記（１）ないし（７）のいずれかに記載の生体細胞移植具。  （９）  前記生体細胞移植具は、卵巣の小断片化物を卵管の漿膜と卵管間に移植するためのものである上記（１）ないし（８）のいずれかに記載の生体細胞移植具。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【手続補正書】
【提出日】平成31年4月18日(2019.4.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
河村氏および他のグループにより提案された休眠原始卵胞の人為的活性化法（ＩＶＡ；ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）が、早発卵巣不全に対して、有効であり、今後、臨床応用が進むものと考える。
休眠原始卵胞の人為的活性化法では、以下のような手技が行われる。
１）腹腔鏡下卵巣摘出
２）卵巣組織凍結、残存卵胞組織検査
３）卵巣組織培養：解凍した卵巣皮質を１−２ｍｍ大の立方、直方体状に小断片化し、ＰＴＥＮ抑制剤およびＰＩ３Ｋ活性化剤を用いて卵巣組織培養を４８時間行い、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔシグナルを活性化させる。
４）卵巣自家移植：培養終了後に卵巣組織を十分に洗浄し、腹腔鏡下に卵巣自家移植を行う。早発卵巣不全患者は卵巣の血流が悪く、移植した卵巣の生着が難しいと考えられる。そこで、血流が豊富で、かつ、経腟超音波で観察しやすく採卵手技が容易である卵巣漿膜下への移植を選択している。
５）卵胞発育モニター、体外受精胚移植
卵巣自家移植後は、ホルモン検査（ＬＨ、ＦＳＨ、Ｅ２）および経腟超音波を行い、卵胞発育を２週間毎に調べる．卵胞が発育した際には、通常の体外受精と同様に採卵する。成熟卵子が得られた場合は、媒精または顕微授精により受精させ、胚をガラス化法により一旦凍結保存する．消退出血を発来させ、ホルモン補充周期下に解凍胚移植を行う。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の生体細胞移植具を図面に示した実施例を用いて説明する。
本発明の生体細胞移植具１は、生体細胞１２を収納可能な可撓性チューブ２と、可撓性チューブ２内に摺動可能に挿入された細胞押出シャフト３とを備える。可撓性チューブ２は、先端から後端まで貫通したルーメン２４と、縮径先端開口部２３とを備える。細胞押出シャフト３は、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より小径である小径先端部３２と、小径先端部３２および縮径先端開口部２３より大径であり、かつ、可撓性チューブ２の内径より若干小さい外径を有する拡径部３３とを備え、拡径部３３の先端は、小径先端部３２と近接しかつ細胞押出シャフト３の後端側に位置する。細胞押出シャフト３の拡径部３３と可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３の当接により、可撓性チューブ２内における細胞押出シャフト３の挿入進行が規制され、かつ、拡径部３３と縮径先端開口部２３との当接後、細胞押出シャフト３を押し込むことにより、拡径部３３は、縮径先端開口部２３を押し広げ通過し、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より突出可能なものとなっている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
内芯３５としては、ある程度の剛性を有するものが好ましい。具体的には、内芯３５としては、金属製線状部材もしくは硬質樹脂製線状部材が好適である。特に、塑性変形可能な金属製棒状部材が好適である。棒状部材としては、中実状もしくは中空状のいずれのものであってもよい。内芯３５として、塑性変形可能な金属製棒状部材を用いることにより、シャフト３および生体細胞移植具１の先端部の所用形状への形状付けが可能となる。金属製棒状部材としては、ステンレス鋼などの金属線が好適であり、特に、焼き鈍ししたステンレス鋼が好ましい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
細胞押出シャフト３は、可撓性チューブ２より、所定長長いものとなっている。シャフト３の全長は、５０〜３００ｍｍ、好ましくは、１００〜２５０ｍｍである。また、外径は、１〜３ｍｍ、好ましくは、１〜２．５ｍｍである。
また、この実施例のシャフト３では、後端部にチューブ状の把持部３４が設けられている。把持部３４は、シャフトの摺動操作時に把持される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
この実施例の規制部材３８は、図３に示すように、チューブ２の後端２７の後端面に当接可能なリング状部材である。規制部材３８の形成材料としては、内芯被覆部３６の形成材料として説明したものが好適に使用できる。
そして、この実施例の生体細胞移植具（卵巣細胞卵管漿膜下移植具）１は、細胞押出シャフト３の拡径部３３と可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３の当接により、可撓性チューブ２内における細胞押出シャフト３の挿入進行が規制されるものとなっている。図２に示すように、可撓性チューブ２内に挿入された細胞押出シャフト３は、シャフト３の小径先端部３２の先端部が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より突出し、シャフト３の拡径部３３が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３に当接することにより、それ以上の挿入が規制される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
この状態において、シャフト３の小径先端部３２の先端部は、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より若干突出している。シャフト３の小径先端部３２の可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３からの突出長としては、０．２〜５ｍｍが好適であり、特に、０．５〜３ｍｍが好ましい。
また、シャフト３の拡径部３３が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３に当接した状態において、図３に示すように、シャフト３の後端側部分は、チューブ２の後端２７より突出している。また、シャフト３の規制部材３８は、チューブ２の後端２７に当接していない。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
そして、シャフト３の拡径部３３と可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３が当接した状態において、細胞押出シャフト３を押し込むと、図５に示すように、シャフト３の拡径部３３は、チューブ２の縮径先端開口部２３を押し広げ通過し、拡径部３３の先端が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より突出する。また、拡径部３３の先端が、可撓性チューブ２の縮径先端開口部２３より突出した後、シャフト３の規制部材３８が、チューブ２の後端２７に当接する。これにより、それ以上のシャフト３の先端方向への摺動が規制される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
また、図１０に示す生体細胞移植具１ｂでは、上述した生体細胞移植具１ａと同様に、湾曲先端領域１０を備えている。この実施例の生体細胞移植具１ｂでは、湾曲先端領域１０の基端側である非湾曲先端領域（ストレート部分）の先端部に、生体細胞充填用の側口２５が設けられている。なお、開口２５は、湾曲先端領域１０に設けてもよく、位置は、先端部でも基端部でもよい。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
また、本発明の生体細胞移植具における生体細胞充填用の側口は、図１８ないし図２２に示す生体細胞移植具１ｃが備える側口８５のような形態のものであってもよい。この実施例においても生体細胞充填用の側口８５は、可撓性チューブ２ｃの先端側領域に形成することが好ましい。
この実施例における生体細胞充填用の側口８５は、図１８ないし図２２に示すように、可撓性チューブ２ｃの基端方向に向かって、側口が深くなるものとなっている。また、側口８５は、先端側に位置する開始端８５ａと、開始端８５ａより、可撓性チューブ２ｃの中心軸方向かつ基端方向に延びる傾斜開口面８５ｃと、傾斜開口面８５ｃの終端に位置する起立開口面８５ｂを備えている。側口８５は、開始端８５ａから起立開口面８５ｂに向かって開口幅が広がっている。また、側口８５は、開始端８５ａから起立開口面８５ｂに向かって、側口の深さが深くなっている。
【国際調査報告】
2018066616.tif 000025
2018066616.tif 000026
2018066616.tif 000027
2018066616.tif 000028