【手続補正書】
【提出日】平成31年3月28日(2019.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、リン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフリン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に結合するがホスファターゼドメインを欠くタンパク質由来のＳＨ２ドメインを含む切断型タンパク質とを含む、細胞。
【請求項２】
前記シグナル伝達改変タンパク質が、ＰＴＰＮ６  ＳＨ２を含むがＰＴＰＮ６ホスファターゼドメインを欠く切断型タンパク質である、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記シグナル伝達改変タンパク質が、ＳＨＰ−２  ＳＨ２ドメインを含むがＳＨＰ−２ホスファターゼドメインを欠く切断型タンパク質である、請求項１に記載の細胞。
【請求項４】
キメラ抗原受容体をコードする第１の核酸配列；および
請求項１〜３のいずれかで定義される切断型タンパク質をコードする第２の核酸配列
を含む、核酸構築物。
【請求項５】
請求項４に記載の核酸構築物を含む、ベクター。
【請求項６】
レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである、請求項５に記載のベクター。
【請求項７】
複数の請求項１〜３のいずれかに記載の細胞を含む、医薬組成物。
【請求項８】
疾患の処置における使用のための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の使用のための医薬組成物であって、
処置の方法が、以下：
（ｉ）被験体から細胞含有試料を単離する工程；
（ｉｉ）請求項４に記載の核酸構築物、あるいは請求項５または６に記載のベクターを前記細胞に形質導入またはトランスフェクトする工程；および
（ｉｉｉ）（ｉｉ）の細胞を前記被験体に投与する工程
を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
疾患の処置および／または予防のための医薬の製造における、請求項８に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１１】
前記疾患が癌である、請求項８に記載の使用のための医薬組成物、または請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
請求項１〜３のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、請求項４に記載の核酸構築物、あるいは請求項５または６に記載のベクターをエクスビボで前記細胞に導入する工程を含む、方法。
【請求項１３】
前記細胞が、被験体から単離された試料に由来する、請求項１３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明者らは、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの免疫細胞におけるシグナル伝達経路をモジュレートおよび／または操作するための系を開発した。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、以下：
（ｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）に結合するがキナーゼドメインを欠くタンパク質由来のＳＨ２ドメインを含む切断型タンパク質；
（ｉｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフリン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に結合するがホスファターゼドメインを欠くタンパク質由来のＳＨ２ドメインを含む切断型タンパク質；
（ｉｉｉ）（ａ）リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）に結合するタンパク質由来の、またはリン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に結合するタンパク質由来のＳＨ２ドメイン；および（ｉｉ）異種ドメインを含む融合タンパク質
のうちの１つから選択されるシグナル伝達改変タンパク質とを含む、細胞。
（項目２）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、ＺＡＰ７０  ＳＨ２ドメインを含むがＺＡＰ７０キナーゼドメインを欠く切断型タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目３）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、ＰＴＰＮ６  ＳＨ２を含むがＰＴＰＮ６ホスファターゼドメインを欠く切断型タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目４）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、ＳＨＰ−２  ＳＨ２ドメインを含むがＳＨＰ−２ホスファターゼドメインを欠く切断型タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目５）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、（ｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）に結合するタンパク質由来のＳＨ２ドメイン；および（ｉｉ）ホスファターゼドメインを含む融合タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目６）
前記融合タンパク質がＺＡＰ７０  ＳＨ２ドメインを含む、項目５に記載の細胞。
（項目７）
前記融合タンパク質が、ＰＴＰＮ６またはＳＨＰ−２ホスファターゼドメインを含む、項目５または６に記載の細胞。
（項目８）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、（ｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に結合するタンパク質由来のＳＨ２ドメイン；および（ｉｉ）キナーゼドメインを含む融合タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目９）
前記融合タンパク質が、ＰＴＰＮ６またはＳＨＰ−２由来のＳＨ２ドメインを含む、項目８に記載の細胞。
（項目１０）
前記融合タンパク質がＺａｐ７０キナーゼドメインを含む、項目８または９に記載の細胞。
（項目１１）
前記融合タンパク質が、ＡＫＴまたはＪＡＫキナーゼドメインを含む、項目８または９に記載の細胞。
（項目１２）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、（ｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）に結合するタンパク質由来の、またはリン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に結合するタンパク質由来のＳＨ２ドメイン；および（ｉｉ）異種シグナル伝達ドメインを含む融合タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目１３）
前記融合タンパク質が、ＺＡＰ７０、ＰＴＰＮ６またはＳＨＰ−２由来のＳＨ２ドメインを含む、項目１２に記載の細胞。
（項目１４）
前記異種シグナル伝達ドメインが、ＩＴＡＭまたはＩＴＩＭ含有受容体によって通常は活性化されないシグナル伝達分子に由来する、項目１２または１３に記載の細胞。
（項目１５）
前記異種シグナル伝達ドメインが共刺激性ドメインである、項目１２、１３または１４に記載の細胞。
（項目１６）
前記融合タンパク質が、ＣＤ２８、ＯＸ４０または４１ＢＢ共刺激性ドメインを含む、項目１５に記載の細胞。
（項目１７）
前記異種シグナル伝達ドメインが阻害性ドメインである、項目１２、１３または１４に記載の細胞。
（項目１８）
前記阻害性ドメインが、ＣＤ１４８またはＣＤ４５のエンドドメインを含む、項目１７に記載の細胞。
（項目１９）
前記異種シグナル伝達ドメインが、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＧＩＴＲまたはＨＶＥＭのエンドドメインであるか、またはこれを含む、項目１７に記載の細胞。
（項目２０）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、（ｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）に結合するタンパク質由来のＳＨ２ドメイン；および（ｉｉ）ＩＴＡＭ含有ドメインを含む融合タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目２１）
前記融合タンパク質がＺＡＰ７０  ＳＨ２ドメインを含む、項目２０に記載の細胞。
（項目２２）
前記ＩＴＡＭ含有ドメインがＣＤ３ゼータのエンドドメインであるか、またはこれを含む、項目２０または２１に記載の細胞。
（項目２３）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、（ｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に結合するタンパク質由来のＳＨ２ドメイン；および（ｉｉ）ＩＴＩＭ含有ドメインを含む融合タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目２４）
前記融合タンパク質が、ＰＴＰＮ６またはＳＨＰ−２由来のＳＨ２ドメインを含む、項目２３に記載の細胞。
（項目２５）
前記ＩＴＩＭ含有ドメインが、ＰＤ１、ＰＤＣＤ１、ＢＴＬＡ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＡＩＲ１、ＣＴＬＡ４、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５、ＫＩＲ３ＤＬ１またはＫＩＲ３ＤＬ３由来のエンドドメインであるか、またはこれを含む、項目２３または２４に記載の細胞。
（項目２６）
前記シグナル伝達改変タンパク質が、（ｉ）リン酸化免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）に結合するタンパク質由来の、またはリン酸化免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）に結合するタンパク質由来のＳＨ２ドメイン；および（ｉｉ）プロテアーゼドメインを含む融合タンパク質である、項目１に記載の細胞。
（項目２７）
前記融合タンパク質が、ＺＡＰ７０、ＰＴＰＮ６またはＳＨＰ−２由来のＳＨ２ドメインを含む、項目２６に記載の細胞。
（項目２８）
前記プロテアーゼドメインがタバコエッチウイルスプロテアーゼ（ＴｅＶ）であるか、またはこれを含む、項目２６または２７に記載の細胞。
（項目２９）
プロテアーゼ切断部位を有する膜繋留転写因子も含む、項目２６〜２８のいずれかに記載の細胞。
（項目３０）
前記プロテアーゼ切断部位における切断が、標的遺伝子の発現増加をもたらす前記転写因子を放出する、項目２９に記載の細胞。
（項目３１）
前記標的遺伝子がサイトカインをコードする、項目３０に記載の細胞。
（項目３２）
前記サイトカインが、以下の群：ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１５およびＩＬ−１２から選択される、項目３１に記載の細胞。
（項目３３）
前記キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が、細胞内プロテアーゼ切断部位を含む標的ＣＡＲである、項目２６〜２８のいずれかに記載の細胞。
（項目３４）
前記標的ＣＡＲが活性化または共刺激性エンドドメインを含み、前記プロテアーゼ切断部位における切断が、前記標的ＣＡＲからエンドドメインを除去する、項目３３に記載の細胞。
（項目３５）
前記標的ＣＡＲが阻害性エンドドメインを含み、前記プロテアーゼ切断部位における切断が、前記標的ＣＡＲから前記阻害性エンドドメインを除去する、項目３３に記載の細胞。
（項目３６）
前記阻害性エンドドメインが、ＣＤ１４８またはＣＤ４５エンドドメインを含む、項目３５に記載の細胞。
（項目３７）
２つのＣＡＲ：ＩＴＡＭ含有エンドドメインを含む活性化ＣＡＲ；および項目３３〜３６のいずれかで定義される標的ＣＡＲを含む、項目１に記載の細胞。
（項目３８）
２つのＣＡＲ：ＩＴＩＭ含有エンドドメインを含む阻害性ＣＡＲ；および項目３３〜３６のいずれかで定義される標的ＣＡＲを含む、項目１に記載の細胞。
（項目３９）
キメラ抗原受容体をコードする第１の核酸配列；および
上記項目のいずれかで定義される切断型タンパク質または融合タンパク質をコードする第２の核酸配列
を含む、核酸構築物。
（項目４０）
項目２９〜３２のいずれかで定義される膜繋留転写因子をコードする第３の核酸配列も含む、項目３９に記載の核酸構築物。
（項目４１）
項目３３〜３６のいずれかで定義される標的ＣＡＲをコードする第３の核酸配列も含む、項目３９に記載の核酸構築物。
（項目４２）
項目３７で定義される活性化ＣＡＲまたは項目３８で定義される阻害性ＣＡＲをコードする第４の核酸配列も含む、項目４１に記載の核酸構築物。
（項目４３）
項目３９〜４２のいずれかに記載の核酸構築物、または項目３９〜４２のいずれかで定義される第１および第２のならびに場合により第３および／もしくは第４（ｆｏｕｔｈ）の核酸配列を含む、ベクター。
（項目４４）
項目３９〜４２のいずれかで定義される第１および第２のならびに場合により第３および／または第４（ｆｏｕｔｈ）の核酸配列を含む、ベクターのセット。
（項目４５）
レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクター（複数も可）である、項目４３または４４に記載のベクターまたはベクターのセット。
（項目４６）
複数の項目１〜３８のいずれかに記載の細胞を含む、医薬組成物。
（項目４７）
疾患の処置および／または予防において使用するための、項目４６に記載の医薬組成物。
（項目４８）
疾患を処置および／または予防するための方法であって、項目４６に記載の医薬組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
（項目４９）
以下：
（ｉ）被験体から細胞含有試料を単離する工程；
（ｉｉ）項目４１または４２に記載の核酸構築物、項目４３〜４５のいずれかに記載のベクターまたはベクターのセットを前記細胞に形質導入またはトランスフェクトする工程；および
（ｉｉｉ）（ｉｉ）の細胞を前記被験体に投与する工程
を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
疾患の処置および／または予防のための医薬の製造における、項目４６に記載の医薬組成物の使用。
（項目５１）
前記疾患が癌である、項目４７に記載の使用のための医薬組成物、または項目４８もしくは４９に記載の方法、または項目５０に記載の使用。
（項目５２）
項目１〜３８のいずれかに記載の細胞を作製するための方法であって、項目４１または４２に記載の核酸構築物、項目４３〜４５のいずれかに記載のベクターまたはベクターのセットを前記細胞に導入する工程を含む、方法。
（項目５３）
前記細胞が、被験体から単離された試料に由来する、項目５２に記載の方法。