(57)【要約】本発明は、抗ＩＬ−７Ｒ抗体の抗体薬物コンジュゲートと、がんまたは炎症を処置することに用いるための、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。本発明によれば、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートと、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物であって、がんまたは炎症を処置することに用いるための医薬組成物とが提供される。
2018159808.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物であって、がんまたは炎症を処置することに用いるための医薬組成物。
【請求項２】
炎症を処置することに用いるための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
炎症が、ステロイド抵抗性の炎症である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
炎症が、潰瘍性大腸炎または関節リウマチである、請求項２または３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
がんを処置することに用いるための請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
がんが、白血病、リンパ腫、または転移性のがんである、請求項１または５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
がんが、ステロイド耐性のがんである、請求項１、５または６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
がんが、転移性のがんである、請求項１および５〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
がんが、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を中和する治療に対して抵抗性である、請求項１および５〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物であって、ステロイド耐性の疾患または状態を処置することに用いるための医薬組成物。
【請求項１１】
抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物であって、ステロイドと併用される、医薬組成物。
【請求項１２】
がんを処置することに用いるための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
細胞傷害剤が、放射性同位体、化学療法剤、または毒素である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片とモノメチルオーリスタチンＥとの抗体薬物コンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＩＬ−７Ｒ抗体（抗ＩＬ−７受容体抗体）の抗体薬物コンジュゲートと、がんまたは炎症を処置することに用いるための、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
トポイソメラーゼ1阻害剤であるＳＮ−３８は、その阻害効果から抗がん作用が期待されているが難溶性であり、血中移行性の点で改善の余地があった。ＳＫ−３８の血中移行性を改善する化合物として開発されたのがＣＰＴ−１１である。ＣＰＴ−１１は、ＳＮ−３８のプロドラッグであり、活性体への変換効率は固形腫瘍のがん組織では高いが、血中では低く、血中での活性が低かった。従って、白血病の治療にはＣＰＴ−１１を利用することはできなかった。【０００３】
ＩＬ−７は、Ｔ細胞の発生と恒常性維持において必須のサイトカインとして知られている（非特許文献１）。また、ＩＬ−７Ｒαは、ゆっくりと細胞内移行し、一部は細胞表面に戻るが一部は分解される（非特許文献１）。ＩＬ−７による刺激によってＩＬ−７Ｒαの半減期は約２４時間から３時間に短縮される（非特許文献１）。また、ＩＬ−７Ｒががんのステロイド耐性の原因になっていることが明らかとなっている（非特許文献２）。非特許文献２では、ＩＬ−７Ｒの下流シグナルを抑制することがステロイド耐性の処置に有効であることが示唆されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Li et al., 2016, PLOS Medicine, 13(12): e1002200
【非特許文献２】Henriques et al., 2010, Blood, 115(16): 3269-3277
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、抗ＩＬ−７Ｒ抗体の抗体薬物コンジュゲートと、がんまたは炎症を処置することに用いるための、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。
【０００６】
本発明者らは、ＩＬ−７Ｒがステロイド耐性と関連すること、およびＩＬ−７Ｒのノックダウンががん細胞株の細胞増殖を抑えることを見出した。本発明者らはまた、ＩＬ−７Ｒのノックダウンががん細胞（特にリンパ腫および白血病）のステロイド感受性を劇的に向上させること、これによりステロイドによる細胞殺傷作用を高めることができること、およびステロイド耐性を獲得するとＩＬ−７Ｒの発現が向上することを見出した。発明者らはさらに、ステロイド耐性にはＩＬ−７Ｒの下流シグナルのＳＴＡＴやＢＣＬ２の活性化は見られず、ＮＦκＢの活性化が生じていることを見出した。本発明者らはさらにまた、ステロイド系抗炎症剤を含む化学療法処置後にＩＬ−７Ｒの発現が向上すること、またステロイド系抗炎症薬で処置してステロイド耐性を得た細胞株においてＩＬ−７Ｒの発現が向上していることを見出した。本発明者らはさらにまた、抗ＩＬ−７Ｒ抗体が細胞に取り込まれるとライソゾームに集積すること、投与１週間後に腫瘍組織およびリンパ節に集積していることを見出した。一方で、がんの細胞生存機能に対しては、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を遮断する抗体の効果は弱く、他方で抗ＩＬ−７Ｒ抗体のＡＤＣが顕著な効果を示すこと、およびリンパ節腫大を抑制することを見出した。腫瘍に対するＡＤＣの効果は放射性同位体標識抗ＩＬ−７Ｒ抗体でも同様に示されることを見出した。本発明者らはさらにまた、免疫系のＩＬ−７Ｒ陽性細胞の減少を通じて炎症疾患（例えば、関節リウマチや潰瘍性大腸炎）の症状を軽減することを見出した。本発明はこれらの知見に基づくものである。
【０００７】
すなわち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物であって、がんまたは炎症を処置することに用いるための医薬組成物。
（２）炎症を処置することに用いるための、上記（１）に記載の医薬組成物。
（３）炎症が、ステロイド治療後のまたはステロイド抵抗性の炎症である、上記（１）または（２）に記載の医薬組成物。
（４）炎症が、潰瘍性大腸炎または関節リウマチである、上記（２）または（３）に記載の医薬組成物。
（５）がんを処置することに用いるための上記（１）に記載の医薬組成物。
（６）がんが、白血病、リンパ腫、または転移性のがんである、上記（１）または（５）に記載の医薬組成物。
（７）がんが、ステロイド治療後のまたはステロイド耐性のがんである、上記（１）、（５）または（６）に記載の医薬組成物。
（８）がんが、転移性のがんである、上記（１）および（５）〜（７）のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（９）がんが、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を中和する治療に対して抵抗性である、上記（１）および（５）〜（８）のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（１０）抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物であって、ステロイド治療後の若しくはステロイド耐性の疾患または状態を処置することに用いるための医薬組成物。
（１１）抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物であって、ステロイドと併用される、医薬組成物。
（１２）がんを処置することに用いるための、上記（１１）に記載の医薬組成物。
（１３）細胞傷害剤が、放射性同位体、化学療法剤、または毒素である、上記（１）〜（１２）のいずれか一項に記載の医薬組成物。
（１４）抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片とモノメチルオーリスタチンＥとの抗体薬物コンジュゲート。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１Ａ】図１Ａは、様々ながん細胞株におけるＩＬ−７Ｒの発現量をフローサイトメトリーにより調べた結果である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＩＬ−７Ｒノックダウンアッセイで実際に各種がん細胞株においてＩＬ−７Ｒの発現量が低下したことを示す図である。
【図１Ｃ】図１Ｃは、ＩＬ−７Ｒがノックダウンされたがん細胞株の増殖に対する影響を示す図である。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ヌードマウスの皮下移植モデルにおいて、皮下移植されたＩＬ−７Ｒがノックダウンされたがん細胞株の増殖に対する影響を示す図である。
【図１Ｅ】図１Ｅは、ＩＬ−７Ｒがノックダウンされたがん細胞株の生存能を示す顕微鏡写真である。
【図２Ａ】図２Ａは、デキサメタゾン（ステロイド系抗炎症薬の一種）に対する各種がん細胞株のＩＣ５０がＩＬ−７Ｒのノックダウンにより低下することを示す図である。
【図２Ｂ】図２Ｂは、デキサメタゾン耐性株を得て、インビトロでデキサメタゾンに対する耐性にＩＬ−７Ｒのノックダウンが及ぼす影響を示す図である。
【図２Ｃ】図２Ｃは、デキサメタゾン耐性株においてＩＬ−７Ｒの発現が向上していることを示す図である。
【図３】図３は、各種がん細胞株およびそのＩＬ−７Ｒノックダウン株を抗リン酸化ｐ６５／ＮＦκＢ抗体で染色した結果を示す図である。
【図４Ａ】図４Ａは、Ｂ細胞急性白血病において、ステロイドを含む化学療法の前後での遺伝子発現の変化を示す図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、Ｂ細胞急性白血病において、ステロイド治療によるステロイド耐性の獲得前後における遺伝子発現の変化を示す図である。
【図４Ｃ】図４Ｃは、Ｔ細胞急性白血病において、ステロイドを含む化学療法の前後での遺伝子発現の変化を示す図である。
【図５Ａ】図５Ａは、インビトロでがん細胞株にAlexa647標識抗ＩＬ−７Ｒ抗体を接触させ、ライソゾームとの共局在を確認した結果を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、腫瘍の皮下移植モデルに蛍光標識抗ＩＬ−７Ｒ抗体を投与し、１週間後に各種組織における抗ＩＬ−７Ｒ抗体の蓄積を調べた結果を示す。
【図５Ｃ】図５Ｃは、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合中和能を有する抗ＩＬ−７Ｒ抗体がＩＬ−７依存性に生存するＲＡＧ２−／−細胞に対しては効果が奏される一方で、がん細胞株ＣＹＧ８２に対してはほとんど効果を奏さないことを示す。
【図５Ｄ】図５Ｄは、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が、がん細胞株ＣＹＧ８２に対して殺傷作用を奏することを示す。
【図６Ａ】図６Ａは、がん細胞株の皮下移植モデルにおける、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートの腫瘍体積増加に対する効果を示す図である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ステロイド耐性になったがん細胞株の皮下移植モデルにおける、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートの腫瘍体積増加に対する効果を示す図である。
【図７Ａ】図７Ａは、がん細胞株ＣＹＧ８２の皮下移植モデルにおけるリンパ節腫大に対するＩＬ−７Ｒノックダウンの影響を示す図である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、がん細胞株ＣＹＧ８２の皮下移植モデルで所属リンパ節腫大を経て生じる腹腔内リンパ節腫大に対する抗ＩＬ−７ＲとＳＮ−３８とのＡＤＣの効果を示す図である。
【図８Ａ】図８Ａは、Ｔ細胞リンパ腫細胞株Ｓｕｐ−Ｔ１に対する放射線同位体標識（90Ｙ標識）抗ＩＬ−７Ｒ抗体の効果を示す図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、肺がん細胞株Ｈ２００９に対する放射線同位体標識（90Ｙ標識）抗ＩＬ−７Ｒ抗体の効果を示す図である。
【図９】図９は、抗ＩＬ−７ＲのＡＤＣの免疫系に与える影響を示す図である。
【図１０】図１０は、慢性関節リウマチおよび潰瘍性大腸炎でＩＬ−７Ｒの発現が向上していることを示す。
【図１１Ａ】図１１Ａは、関節リウマチモデルに対する抗ＩＬ−７Ｒ抗体とモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）のＡＤＣの影響を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、関節リウマチモデルに対する抗ＩＬ−７Ｒ抗体とＳＮ−３８のＡＤＣの影響を示す。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、関節リウマチモデルのマウス前足病変部の組織切片を作製し、ヘマトキシリン・エオシン染色した結果を示す。
【図１２Ａ】図１２Ａは、潰瘍性大腸炎モデルに対する抗ＩＬ−７Ｒ抗体とＭＭＡＥとのＡＤＣの効果を示す図である。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、潰瘍性大腸炎モデルに対する抗ＩＬ−７Ｒ抗体とＳＮ−３８とのＡＤＣの効果を示す図である。
【図１３】図１３は、潰瘍性大腸炎モデルの大腸の組織形態が抗ＩＬ−７Ｒ抗体とＭＭＡＥとのＡＤＣまたは抗ＩＬ−７Ｒ抗体とＳＮ−３８とのＡＤＣとで改善することを示す。
【図１４】図１４は、潰瘍性大腸炎モデルから摘出した大腸標本の病理組織像において抗ＩＬ−７Ｒ抗体とＭＭＡＥとのＡＤＣまたは抗ＩＬ−７Ｒ抗体とＳＮ−３８とのＡＤＣの効果を示す図である。
【発明の具体的説明】
【０００９】
本発明では、「対象」とは、哺乳動物を意味し、特にヒトであり得る。
【００１０】
本明細書では、「処置」とは、治療（治療的処置）と予防（予防的処置）とを含む意味で用いられる。本明細書では、「治療」とは、疾患若しくは障害の治療、治癒、防止若しくは、寛解の改善、または、疾患若しくは障害の進行速度の低減を意味する。本明細書では、「予防」とは、疾患もしくは病態の発症の可能性を低下させる、または疾患もしくは病態の発症を遅らせることを意味する。
【００１１】
本明細書では、「疾患」とは、治療が有益な症状を意味する。
【００１２】
本明細書では、「治療上有効量」とは、疾患や状態を処置（予防または治療）するために有効な薬剤の量を意味する。治療上有効量の薬剤は、疾患または状態の症状の悪化速度を低下させること、前記症状の悪化を止めること、前記症状を改善すること、前記症状を治癒すること、または前記症状の発症または発展を抑制することが可能である。
【００１３】
本明細書では、「抵抗性」とは、治療に対して有効性を示さないこと（例えば、有意な有効性を示さないこと）を意味する。本明細書では、「感受性」とは、治療に対して有効性を示すことを意味する。抵抗性を低下させることは感受性を増大させることとは同じ意味をもち、抵抗性を増大させることは感受性を低下させることと同じ意味を持つ。本明細書では、例えば、ステロイド抵抗性とは、ネフローゼ症候群の場合にはプレドニゾロンを４週間以上連日投与しても、完全寛解しないものと定義され得る。本明細書ではまた、他の炎症・自己免疫疾患或いは白血病・悪性リンパ腫などの悪性疾患に関しては、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメゾン、およびベタメタゾンなど各種の治療用ステロイドを投与しても症状が改善されないか、または症状が増悪するものとして扱われ得る。医師であれば、ステロイド治療の分野における知見に基づいて、抵抗性については、どのようなものであるかを理解し、把握することができ、また、適宜対象が抵抗性か否かを決定することができる。
【００１４】
本明細書では、「ＩＬ−７Ｒ」とは、インターロイキン７受容体を意味する。ＩＬ−７ＲにＩＬ−７（インターロイキン−７）が結合すると、ＪＡＫ１およびＪＡＫ３が活性化し、受容体の自己リン酸化が起こる。リン酸化された受容体には、ＳＴＡＴが結合し、ＪＡＫによりリン酸化を受けて二量体化する。二量体化したＳＴＡＴにより遺伝子の転写活性化が生じると考えられている。ＩＬ−７Ｒは、分子自体のインターナライズ活性が高く、膜上からインターナライズし、分解されるか再びリサイクリングして膜上に表出する。
【００１５】
本明細書では、「遮断」とは、２つのタンパク質の結合を中和することを意味する。遮断には、完全な解離に加えて部分的な解離も含まれる。例えば、２つのタンパク質の結合を５０％以上低減させる場合にも遮断するということができる。
【００１６】
本明細書では、「ステロイド」とは、ステロイド系抗炎症薬（ＳＡＩＤｓ）を意味する。ステロイドでは、主に糖質コルチコイドまたはその誘導体が有効成分となっている。ステロイドは、細胞内でグルココルチコイド受容体（ＧＲα）と結合するとＧＲαは、ｈｓｐ９０から解離し、二量体を形成して核内に移行し、転写調節を行う。合成系ステロイドとしては、ヒドロコルチゾンおよびコハク酸ヒドロコルチゾンなどのコルチゾール；プレドニゾロン、メチルプレドニゾロンおよびコハク酸メチルプレドニゾロンなどのプレドニゾロン；トリアムシノロンおよびトリアムシノロンアセトニドなどのトリアムシノロン；デキサメタゾン、並びにベタメタゾンなどが挙げられる。いずれもグルココルチコイドの誘導体であり、グルココルチコイドと同様のメカニズムで細胞内において機能する。
【００１７】
本明細書では、「抗体薬物コンジュゲート」（ＡＤＣ）とは、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片（以下、単に「抗体等」ということがある）と薬物とが連結した物質を意味する。ＡＤＣでは、モノクローナル抗体等と薬物とは適切なリンカーを介して連結させることができる。ＡＤＣは、細胞膜上の膜成分（例えば、受容体等の膜貫通タンパク質）に結合し、エンドサイトーシスやインターナライゼーションにより、細胞内に取り込まれ、抗体等と切り離されて細胞内に放出される。細胞内で抗体等と薬物との間に開裂性リンカーを導入しておくことで、細胞内、例えばエンドソーム内でリンカーを開裂させ薬物を抗体等から乖離させて細胞質内に放出させることが可能である。薬物として、細胞傷害剤を用いると薬物が送達された細胞を死滅させることが可能である。細胞傷害剤としては、化学療法剤、放射性同位体、および毒素を用いることができる。
【００１８】
本発明によれば、多くの腫瘍細胞でＩＬ−７Ｒの発現が向上していることを見出した。本発明によれば、向上したＩＬ−７Ｒの発現を減少させることにより、腫瘍の増殖が大きく抑制された。これらの細胞に対して、ＩＬ−７ＲのＡＤＣは強い殺傷能力を示した。一方で、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を遮断できる抗体は、細胞生存にはほとんど効果を示さなかった。従って、本発明のＡＤＣにおいて用いられる抗ＩＬ−７Ｒ抗体は、細胞膜上のＩＬ−７Ｒに結合する限り、そのＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合の遮断能力は問われず、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を遮断できる抗体であってもよいし、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を遮断しない抗体であってもよい。
【００１９】
従って、本発明によれば、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートが提供される。本発明の抗体薬物コンジュゲートでは、抗ＩＬ−７Ｒ抗体としては、細胞膜上に発現するＩＬ−７Ｒを認識する抗体を用いることができる。また、本発明のある態様では、抗体薬物コンジュゲートにおいて抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤とは、リンカーを介して連結している。細胞傷害剤としては、化学療法剤（例えば、市販の抗がん剤などの抗がん剤、例えば、アウリスタチン（アウリスタチンＥ、アウリスタチンＦフェニレンジアミン（ＡＦＰ）、モノメチルアウリスタチンＥ、モノメチルアウリスタチンＦとそれらの誘導体）、メイタンシノイドＤＭ１およびＤＭ４とそれらの誘導体）、カンプトテシン（ＳＮ−３８、トポテカンおよびエキソテカンとそれらの誘導体）、ＤＮＡ副溝結合剤（エネジイン、レキシトロプシン、デュオカルマイシンとそれらの誘導体）、タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセルとそれらの誘導体）、ポリケチド（ディスコデルモライドとその誘導体）、アントラキノン系（ミトキサントロンとその誘導体）、ベンゾジアゼピン（ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、およびオキサゾリジノベンゾジアゼピンとそれらの誘導体）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビンとそれらの誘導体）、ドキソルビシン類（ドキソルビシン、モルホリノ−ドキソルビシン、およびシアノモルホリノ−ドキソルビシンとそれらの誘導体）、強心配糖体（ジギトキシンやその誘導体）、カレキアマイシン、エポチロン、クリプトフィシン、セマドチン、セマドチン、リゾキシン、ネトロプシン、コンブレタスタチン、エリュテロビン、エトポシド、Ｔ６７（チュラリク）、およびノコダゾール）、放射性同位体（例えば、32Ｐ、60Ｃ、90Ｙ、111Ｉｎ、131Ｉ、125Ｉ、153Ｓｍ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、および212Ｂｉ）、および毒素（例えば、ジフテリアトキシンＡ、シュードモナスエンドトキシン、リシン、サポリン等）が挙げられ、本発明のＡＤＣにおける細胞傷害剤として用いることができる。細胞傷害剤はいずれも、がんの処置に用いられるものを用いることができる。
【００２０】
本発明のある態様では、リンカーはＡＤＣの作製において当業者であれば適宜選択し、合成することができる。本発明のある態様では、リンカーは開裂性リンカーであり得る。例えば、開裂性リンカーとしては、バリン−シトルリン（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）およびフェニルアラニン−リジン（Ｐｈｅ−ｌｙｓ）リンカーなどのペプチドリンカーや、ｐＨ依存的に開裂するヒドラゾンリンカーが挙げられる。開裂性リンカーとしてはまた、カルバメート結合またはエステル結合を含むリンカーが挙げられ、これらは酵素的に細胞内で分解されうる。これらのリンカーは組み合わせて用いてもよい。
抗体とリンカーとの結合は、例えば抗体のスルフヒドリル基にマレイミド基を介して連結することができる。リンカーには必要に応じてポリエチレングリコールブロックが含まれていてもよい。
【００２１】
また、本発明によれば、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、がんを処置することに用いるための医薬組成物が提供される。多くのがん細胞ではＩＬ−７Ｒが陽性である。従って、多くのがんが本発明の医薬の治療対象となり得る。また、有効性の高い対象集団を特定するために、本発明のある態様では、がんは、ＩＬ−７Ｒ陽性のがんまたはＩＬ−７Ｒ陽性であることが確認されたがんとすることができる。ＩＬ−７Ｒ陽性のがんとしては、白血病、リンパ腫、肺がん、膵臓がん、頭頸部がん、前立腺がん、膀胱がん、乳がん、食道がん、胃がん、大腸がん、子宮がん、卵巣がん、皮膚がん、甲状腺がん、胸腺がん、腎臓がん、精巣がん、陰茎がん、肝臓がん、胆道がん、脳腫瘍、骨軟部腫瘍、後腹膜腫瘍、血管・リンパ管肉腫、およびこれらの転移性のがん（例えば、転移性固形腫瘍）が挙げられる。多くのがん、例えば、白血病、リンパ腫、進行性のがん、および転移性のがんではＩＬ−７Ｒが陽性である。ＩＬ−７Ｒが陽性か陰性かは、免疫染色、抗ＩＬ−７Ｒ抗体を用いたＦＡＣＳなどの技術を用いて容易に決定することができる。
【００２２】
本発明の医薬組成物は、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を遮断する治療に抵抗性を有するＩＬ−７Ｒ陽性のがんを処置することに用い得る。
【００２３】
さらに、本発明によれば、ＩＬ−７Ｒはステロイド抵抗性の付与と関与していることが明らかとなった。特に、ステロイド抵抗性細胞では、ＩＬ−７Ｒが陽性になる。従って、本発明によれば、ステロイド抵抗性の疾患または状態を処置することに用いるための医薬組成物であって、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物が提供される。ある態様では、疾患または状態のステロイド抵抗性を低減させることに用いるための医薬組成物であって、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物が提供される。ある態様では、ステロイド抵抗性の疾患または状態は、がんまたは炎症である。さらにまた、本発明によれば、ＩＬ−７Ｒはステロイド処置後、発現が向上することも明らかとなった。特にステロイド処置後は、ＩＬ−７Ｒ陽性細胞が生き残り易いため、本発明のコンジュゲートの有効性が高まる。仮にＩＬ−７Ｒ陰性細胞が生き残っていたとしても（例えば、ステロイド処置後の患者において）治療効果が期待できる。これは、ＰＤＣによるバイスタンダー効果によりＩＬ−７Ｒ陽性細胞近傍のＩＬ−７Ｒ陰性細胞を死滅させる効果が期待できるためである。従って、本発明によれば、ステロイド治療を受けた対象において、がんまたは炎症などの疾患または状態を処置することに用いるための医薬組成物であって、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物が提供される。
【００２４】
ある態様では、本発明の医薬組成物でステロイド抵抗性を低減しながら、ステロイドを投与することも可能である。従って、本発明のある態様では、ステロイド抵抗性の疾患または状態を処置することに用いるための医薬組成物であって、ステロイドと併用する、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物が提供される。あるいは、本発明では、疾患または状態のステロイド抵抗性を低下させること（または疾患または状態のステロイド感受性を増大させること）に用いるための医薬組成物であって、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物が提供される。これらの態様では、対象は、ステロイド抵抗性の疾患または状態を有する対象であり得る。
【００２５】
さらにまた、本発明によれば、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートは、がんの対象においてリンパ節腫大を抑制することができる。従って、本発明によれば、がんの対象においてリンパ節腫大を抑制することに用いるための医薬組成物であって、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物が提供される。
【００２６】
本発明によれば、潰瘍性大腸炎や関節リウマチなどの炎症性疾患において、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートが症状の軽減効果を示した。これは、炎症疾患の発症または維持においてＩＬ−７Ｒ陽性細胞が強く関与していることを示唆するものであり、炎症状態でＩＬ−７Ｒ陽性細胞を殺傷することが炎症を緩和することに有用であることを意味するものである。従って、本明細書によれば、炎症性疾患を処置することに用いるための医薬組成物であって、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物が提供される。本明細書では、炎症性疾患には、膠原病が挙げられ、自己免疫疾患、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、全身性エリトマトーデス、アレルギー性疾患、臓器移植後の拒絶反応、および移植片対宿主病も含まれる。炎症性疾患にはさらにまた、クローン氏病などの炎症性腸疾患が含まれる。また、その他の自己免疫疾患および膠原病として、シェーグレン症候群、強皮症、皮膚筋炎、結節性多発動脈炎、混合性結合組織病、コーガン症候群、リウマチ性多発筋痛症、成人スティル病、巨細胞性動脈炎、抗リン脂質抗体症候群、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、原発性胆汁性胆管炎、高安動脈炎、 グッドパスチャー症候群、急速進行性糸球体腎炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、特発性血小板減少性紫斑病、バセドウ病、橋本病、原発性甲状腺機能低下症、特発性アジソン病、 天疱瘡、膿疱性乾癬、尋常性乾癬、類天疱瘡、妊娠性疱疹、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、後天性表皮水疱症、円形脱毛症、尋常性白斑、原田病、自己免疫性視神経症、自己免疫性内耳障害、特発性無精子症、および習慣性流産から選択される自己免疫疾患または膠原病が挙げられる。リンパ球が関与する４型アレルギーとしては、臓器移植での拒絶反応、自然リンパ球が原因となる気管支喘息などが挙げられる。多くの炎症においてリンパ球がＩＬ−７Ｒ陽性である。具体的には、獲得免疫系リンパ球である、Ｔリンパ球およびＢリンパ球において陽性であると共に自然免疫系リンパ球においても陽性であることから、これらの細胞が原因となる多くの炎症性疾患が、本発明の医薬組成物の治療対象であり得る。
【００２７】
本発明では、炎症性疾患は、ステロイドに抵抗性である、またはＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を遮断する治療に抵抗性である、疾患または状態であり得る。
【００２８】
本発明のある側面では、がんまたは炎症性疾患をその必要のある対象において処置する方法であって、該対象に抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを投与することを含む方法が提供される。コンジュゲートは、治療上有効量投与されうる。本発明のある態様では、前記対象は、ステロイド治療に耐性である対象であるか、またはステロイド治療を受けた対象であり得る。
本発明のある態様では、がんまたは炎症性疾患をその必要のある対象において処置する方法であって、該対象に抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを投与すること、および該対象にステロイド系抗炎症薬を投与することを含む方法が提供される。本発明のある態様では、前記対象は、ステロイド治療に耐性である対象であるか、またはステロイド治療を受けた対象であり得る。
【００２９】
本発明のある態様では、ステロイド抵抗性の疾患または状態をその必要のある対象において処置する方法であって、該対象に抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを投与することを含む方法が提供される。
【００３０】
本発明のある態様では、疾患または状態のステロイド抵抗性をその必要のある対象において低下させる方法であって、該対象に抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを投与することを含む方法が提供される。
【００３１】
本発明のある側面では、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、がんまたは炎症性疾患を処置することに用いるための医薬の製造における、抗ＩＬ−７Ｒ抗体の使用が提供される。本発明のある側面では、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートを含む、がんまたは炎症性疾患を処置することに用いるための医薬の製造における、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤の使用が提供される。本発明のある側面では、がんまたは炎症性疾患を処置することに用いるための医薬の製造における、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートの使用が提供される。
本発明のある側面では、抗ＩＬ−７Ｒ抗体またはその抗原結合性断片と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートの使用であって、がんまたは炎症性疾患を処置するための方法における使用が提供される。
【００３２】
本発明では、ＩＬ−７Ｒ発現細胞をＡＤＣにより殺傷することに代えて、ＩＬ−７Ｒ発現細胞においてＩＬ−７Ｒの発現を抑制してもよいであろう。従って、本発明のある側面では、ＩＬ−７Ｒの発現抑制剤を含む、がんまたは炎症性疾患を処置することに用いるための医薬組成物が提供される。本発明ではまた、ＩＬ−７Ｒの発現抑制剤を含む、ステロイド抵抗性の疾患または状態を処置することに用いるための医薬組成物が提供される。本発明ではさらに、ＩＬ−７Ｒの発現抑制剤を含む、疾患または状態のステロイド抵抗性を低下させることに用いるための医薬組成物が提供される。本発明ではさらにまた、ステロイド抵抗性の疾患または状態を処置することに用いるための医薬組成物であって、ステロイドと併用する、ＩＬ−７Ｒの発現抑制剤を含む、医薬組成物が提供される。本発明ではさらにまた、ＩＬ−７Ｒの発現抑制剤を含む、がんの対象においてリンパ節腫大を抑制することに用いるための医薬組成物が提供される。
【００３３】
ＩＬ−７Ｒの発現抑制剤としては、ＩＬ−７Ｒに対するｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴが挙げられ、本発明で用いることができる。ＩＬ−７Ｒの発現抑制剤としては、ｓｉＲＮＡやｓｈＲＮＡをコードするＤＮＡを含む発現ベクターも挙げられる。
【実施例】
【００３４】
以下実施例では、断りの無い限り、以下記号の意味は、＊：Ｐ＜０．０５，＊＊：Ｐ＜０．０１，＊＊＊：Ｐ＜０．００１である。【００３５】
実施例１：ＩＬ−７受容体と腫瘍細胞の生存活性
本実施例では、各種腫瘍細胞におけるＩＬ−７受容体（ＩＬ−７Ｒ）の発現とＩＬ−７Ｒの生理機能について調べた。【００３６】
（１）ＩＬ−７Ｒの細胞表面発現
ヒトＴ細胞悪性リンパ種細胞株ＳｕｐＴ１、肺がんリンパ節転移由来細胞株Ｈ２００９、肺がん肺胞転移由来細胞株Ｈ３５８、咽頭がんのがん性胸水由来細胞株Ｄｅｔｒｏｉｔｅ５６２、前立腺がん骨転移由来細胞株ＰＣ３、および骨転移を伴う膀胱がん細胞株ＴＣＣｓｕｐは、ＡＴＣＣ（米国細胞バンク）から入手した。ヒトＢ細胞リンパ性白血病細胞株ＮＡＬＭ６、肺がんのがん性胸水由来細胞株ＬＣ−２／ａｄ、膵臓がん肝転移由来細胞株ＰＫ−４５Ｈは、理研バイオリソースセンターから入手した。マウスリンパ性白血病細胞株ＣＹＧ８２は、下記参考文献１に記載の通りに樹立され、本実施例で使用した。
抗ヒトＩＬ−７Ｒ抗体（eBioRDR5, eBioscience; R34-R34, TONB0）と抗マウスＩＬ−７Ｒ抗体（A7R34或いはSB/199 ,eBioscience）を用いてフローサイトメトリーでＩＬ−７Ｒの発現を測定した。ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）は、下記参考文献２および３の通りに作製され、本実施例で使用した。結果は、図１Ａに示される通りであった。【００３７】
図１Ａに示されるように、ヒトＴ細胞悪性リンパ腫細胞株ＳｕｐＴ１、ヒトＢ細胞リンパ性白血病細胞株ＮＡＬＭ６、およびマウスリンパ性白血病細胞株ＣＹＧ８２において、ＩＬ−７Ｒが陽性であった。また、肺がんリンパ節転移由来細胞株Ｈ２００９、肺がん肺胞転移由来細胞株Ｈ３５８、肺がんのがん性胸水由来細胞株ＬＣ−２／ａｄ、膵臓がん肝転移由来細胞株ＰＫ−４５Ｈ、咽頭がんのがん性胸水由来細胞株Ｄｅｔｒｏｉｔｅ５６２、前立腺がん骨転移由来細胞株ＰＣ３、および骨転移を伴う膀胱がん細胞株ＴＣＣｓｕｐにおいてＩＬ−７Ｒが陽性であった（各図の右側のヒストグラムがＩＬ−７Ｒ発現で、左側のヒストグラムは陰性コントロール）。このように、調べたリンパ性悪性疾患と転移性固形腫瘍のすべての細胞株でＩＬ−７Ｒが陽性であった。転移性の固形腫瘍において発現が確認され、固形腫瘍では、ＩＬ−７Ｒ発現と転移との関係が示唆された。【００３８】
（２）ＩＬ−７Ｒノックダウン細胞株の作製
ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２、Ｈ２００９、ＰＫ−４５Ｈ細胞について、レンチウイルスベクターに組み込まれたショートヘアピンRNA(shRNA, Sigma)を発現させることで、ＩＬ−７Ｒ遺伝子ノックダウン（ＫＤ）細胞株（ＩＬ−７Ｒ−ＫＤ）を作製した。ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２にはＧＦＰ遺伝子のｓｈＲＮＡ(Sigma)を用いて、Ｈ２００９、ＰＫ−４５Ｈには非特異的ｓｈＲＮＡ(Sigma)を導入して、比較用のコントロール細胞（ＣＴＲ）を作製した。抽出キット（QIAGEN）と合成キット(Thermo Fisher Scientific或いはTakara)を用いて細胞のｔｏｔａｌ  ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。定量性ＲＴ−ＰＣＲを行った。すなわち、９μｌのｃＤＮＡ希釈液、1 μl TaqMan primers/probe mixture (Thermo Fisher Scientific)と10 μl TaqMan Fast Universal PCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific)の合計20 μlの反応液に対して、ABI7500Fast（Thermo Fisher Scientific）を用いて測定した。各遺伝子の発現は比較ＣＴ法を用いて、ヒト遺伝子の場合はＧＡＰＤＨを、マウス遺伝子の場合はＡＣＴｂの発現で標準化した。【００３９】
図１Ｂに示されるように、作製されたＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２、Ｈ２００９、ＰＫ−４５ＨのＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞株でＩＬ−７Ｒ遺伝子の発現量低下を確認した。【００４０】
（３）細胞増殖におけるＩＬ−７Ｒノックダウンの影響
ＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞とＣＴＲ細胞の試験管内での培養液中での増殖活性を調べた。細胞１０００もしくは３０００個を９６穴プレートにまき、連日細胞数をカウントした。結果は、図１Ｃに示される通りであった。
図１Ｃに示されるように、ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２、Ｈ２００９、ＰＫ−４５Ｈ  のＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞株は、いずれもＣＴＲ細胞株よりも、試験管内の細胞増殖能が低下していた。【００４１】
（４）腫瘍増殖活性とＩＬ−７Ｒノックダウンとの関係
ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２、Ｈ２００９細胞を雌のヌードマウス（１群５匹）の皮下に移植して、生着後に腫瘍体積を計測することで、腫瘍増殖活性を測定した。結果は図１Ｄに示される通りであった。
図１Ｄに示されるように、ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２、Ｈ２００９のＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞株は、ＣＴＲ細胞に比較してヌードマウスへの移植実験で腫瘍体積の増大率が低下していた。【００４２】
（５）細胞の状態の観察
ＰＫ−４５ＨのＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞株の試験管内での細胞生存状態を培養倒立顕微鏡ELIPSE TS100(ニコン)で観察した。結果は、図１Ｅに示される通りであった。
図１Ｅに示されるように、ＰＫ−４５ＨのＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞では、ＣＴＲ細胞と比較して細胞生存能が著明に低下していた。【００４３】
実施例２：ＩＬ−７Ｒの生理機能
本実施例では、ＩＬ−７Ｒの更なる生理機能を調べた。【００４４】
リンパ系悪性腫瘍ではステロイドの抗がん作用を利用した治療が行われるが、ステロイドに体制の腫瘍細胞が出現することが知られている。ステロイド耐性の獲得とＩＬ−７Ｒとに何らかの生理学的関連があるかについてまず調べた。【００４５】
ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２、Ｈ２００９、およびＰＫ４５ＨのそれぞれにおけるＩＬ−７Ｒシグナルとステロイド耐性との関係を調べるために、試験管内での各細胞におけるデキサメタゾンの殺細胞効果（ＩＣ５０；５０％細胞障害濃度）を確認した。細胞１０００〜３０００個を９６穴プレートに１００μＬ／ウエルでまき、デキサメタゾンを０．１μＭから１ｍＭの濃度で各ウエルに添加した。７２時間培養後、ＷＳＴ−８（同仁化学、Cell Counting Kit-8）を１０μＬ／ウエルで添加し、３時間培養後にマイクロプレートリーダー（Molecular Devices）で４５０ｎｍの吸光度を測定した。各濃度における細胞生存率を計算して、ＩＣ５０を算出した。結果は、図２Ａに示される通りであった。【００４６】
図２Ａに示されるように、ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、およびＣＹＧ８２のいずれにおいても、ＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞で、ステロイド（デキサメタゾン）のＩＣ５０が低下しており、ステロイド感受性が増加していることが判明した。Ｈ２００９、およびＰＫ４５Ｈでは、ＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞とＣＴＲ細胞に差を認めなかった。
このように、リンパ系悪性腫瘍においては、ステロイド感受性に対してＩＬ−７Ｒが大きく関与していることが明らかであるが、転移性固形腫瘍であるＨ２００９、およびＰＫ４５Ｈにおいては、ステロイド感受性に対してＩＬ−７Ｒの関与がほとんどないことが明らかとなった。【００４７】
さらに、ステロイド耐性株を得て、これに対してＩＬ−７Ｒのノックダウン株と、比特異的ｓｈＲＮＡによる対照株（ＣＴＲ）とを作製し、デキサメタゾン存在下におけるＩＬ−７Ｒノックダウンの影響を確認した。ＣＹＧ８２親株からＣＹＧ８２ステロイド耐性株が容易に得られることから、高濃度のステロイドを添加した状態での細胞の増殖性を観察した。６穴プレートに細胞１０6個を３ｍｌ／ウエルにまき、デキサメタゾンを１０ｎＭまたは１００ｎＭを添加して、１週間後と２週間後の細胞数をカウントした。結果は、図２Ｂに示される通りであった。【００４８】
図２Ｂに示されるように、ステロイド耐性株に非特異的ｓｈＲＮＡを導入したＣＴＲ細胞は、デキサメタゾン存在下で最初の１週間は増殖が抑制されたが、その後、細胞が増殖を示した。このことは、これに対して、ステロイド耐性株においてＩＬ−７Ｒをノックダウンした株では、細胞数が顕著に減少した。このことは、ＩＬ−７Ｒによりステロイド耐性が解除されること、および、ＩＬ−７Ｒノックダウン株では、耐性株の出現が抑えられることを示す。【００４９】
まず、デキサメタゾンのＩＣ５０の違いを比較した。さらに、ステロイド耐性の獲得とＩＬ−７Ｒとの関係を調べた。具体的には、抽出キット（QIAGEN）と合成キット(Thermo Fisher Scientific或いはTakara)を用いて細胞のｔｏｔａｌ  ＲＮＡからｃＤＮＡを合成して、定量性ＰＣＲを行い、ＩＬ−７Ｒ遺伝子とＣＤ１９遺伝子の発現を調べた。結果は、図２Ｃに示される通りであった。【００５０】
図２Ｃに示されるように、上記で得られたＣＹＧ８２細胞のステロイド耐性株は、デキサメタゾンに対して高いＩＣ５０を示す。そして、非耐性の親株と耐性株とでＩＬ−７Ｒの発現量を比較すると、耐性株においてＩＬ−７Ｒの発現が有意に向上していることが明らかとなった。一方で、ＣＤ１９の発現量については、親株と耐性株との間で有意な差は認められなかった。【００５１】
実施例３：ＩＬ−７Ｒシグナルの活性化とステロイド耐性との関係
本実施例では、ステロイド耐性におけるＩＬ−７Ｒシグナルの活性化との関係を調べた。【００５２】
ＳｕｐＴ１、ＮＡＬＭ６、ＣＹＧ８２  、ＲＡＧ２−／−細胞について、ＩＬ−７Ｒ下流のシグナル分子であるＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＢＣＬ２、およびＮＦκβの活性化に対する、ＩＬ−７Ｒ−ＫＤの影響を調べた。ＪＡＫ／ＳＴＡＴに関しては、細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定してメタノール処理を行い、抗phospho-STAT5抗体（eBioscience）を用いてリン酸化ＳＴＡＴ５を検出することで測定した。フローサイトメトリー検出装置であるGuava easyCyte 10HT (Merck Millipore) 或いは Aria flow cytometer (BD Biosciences)を用いて測定を行った。死細胞はPropidium iodide (Thermo Fisher Scientific)で染色して測定時に除外した。 データ解析にはFlowJo program (Tree Star)を用いた。
ＢＣＬ２のシグナルは、各細胞からｔｏｔａｌ  ＲＮＡ抽出・ｃＤＮＡ合成を経て、定量性ＰＣＲで、ＢＣＬ２の発現量を調べた。
ＮＦκβについては、細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定して、抗phospho-p65/NF-kβ 抗体 (Abcam) を反応させた。2次抗体はAlexa-488/555/647-標識した抗ウサギＩｇＧ抗体(Thermo Fisher Scientific)を用いた。核はＤＡＰＩ (Thermo Fisher Scientific)で染色した。画像は共焦点レーザー顕微鏡LSM-710 (Carl Zeiss)もしくはＨＳオールインワン蛍光顕微鏡BZ-9000 (Keyence Co.)で撮影した。ＲＡＧ２−／−細胞は参考文献３の通りに樹立・使用した。【００５３】
結果、ＪＡＬ／ＳＴＡＴとＢＣＬ２シグナルにはＩＬ−７Ｒのノックダウンの影響は無かったことから、ステロイド耐性とＩＬ−７Ｒシグナルの活性化とは関連性がほとんど無いであろうことが示唆された。
また、図３に示されるように、ＮＦｋＢシグナルがＣＴＲ細胞では核に認められたのに対して、ＩＬ−７Ｒ−ＫＤ細胞ではシグナルがほとんど認められなかった。このことから、ステロイド耐性株でＮＦκＢの活性化が生じていたのに対して、ＩＬ−７ＲのノックダウンによりＮＦκＢの活性化が抑制されたことが分かった。
さらに、増殖因子としてＩＬ−７が必要なＲＡＧ２−／−細胞では、ＩＬ−７の非存在下では、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、ＢＣＬ２、ＮＦｋＢのいずれのシグナルも抑制されていた。これらのことから、ステロイド耐性にはＪＡＫ／ＳＴＡＴおよびＢＣＬ２シグナルとの関係は認められないことが分かった。
さらにまた、ＮＦｋＢは、いずれの細胞でもＩＬ−７Ｒのノックダウンにより低下したがＨ２００９、ＰＫ−４５Ｈ細胞のＩＬ−７Ｒ−ＫＤでも低下した。これらの細胞では図２Ａに示されるようにステロイド耐性との関係が無かったことから、ＮＦｋＢはステロイド耐性よりも細胞増殖・生存に強く関与している可能性が高いと思われた。【００５４】
実施例４：ステロイド耐性の獲得と遺伝子発現の変化
本実施例では、臨床サンプルにおけるIL-7R遺伝子発現とステロイド耐性との関係を調べた。【００５５】
まず、Gene Expression Omnibus (GEO)から、GSE39339とGSE32962の臨床データを入手し、また、Array ExpressからE-MEXP-3916の臨床データを入手した。データは解析ソフトＲ（オープンソースフリーウエア）を用いて、ＲＭＡ処理で標準化した後に統計解析を行った。統計解析にはSPSS Statistics バージョン20 (IBM社)を用いて、P<0.05以下を判定の基準とした。結果は、図４に示される通りであった。図４Ａでは、GSE39339の解析結果が示され、図４Ｂでは、GSE32962の解析結果が示され、図４Ｃでは、E-MEXP-3916の解析結果が示されている。【００５６】
図４Ａに示されるように、ヒト急性リンパ性白血病のステロイド（デキサメタゾン）を含む化学療法後でリンパ球マーカーのＴｄＴ、ＣＤ１９、ＣＤ２２は有意に低下した。一方で、ＩＬ−７Ｒの発現は、治療後に上昇する傾向が見られた。化学療法は、デキサメタゾン以外には、アントラサイクリン、ビンクリスチン、およびＬ−アスパラキナーゼが含まれていた。【００５７】
図４Ｂに示されるように、ヒト急性Ｂリンパ性白血病の患者由来細胞からステロイド（プレドニゾロン）感受性と耐性株を樹立して、ＤＮＡマイクロアレイ解析を行ったものである。両群間で、ＴｄＴ、ＣＤ１９、ＣＤ２２に変化はないが、ステロイド（プレドニゾロン）耐性株でＩＬ−７Ｒが有意に高値を示した。【００５８】
図４Ｃに示されるように、ヒト急性Ｔリンパ性白血病の患者で、無治療群とステロイド（デキサメタゾン）を含む治療群でＤＮＡマイクロアレイ解析を行ったものである。治療群でＩＬ−７Ｒの発現が有意に高値を示した。化学療法は、デキサメタゾン以外には、ダウノルビシン、ビンクリスチン、Ｌ−アスパラキナーゼが含まれていた。【００５９】
図４Ａ〜４Ｃにおいて示されたように、臨床データからも、ステロイド治療によるステロイド耐性の獲得とＩＬ−７Ｒの発現とが関連することが分かる。【００６０】
実施例５：抗ＩＬ−７Ｒ抗体の特性
本実施例では、抗ＩＬ−７Ｒ抗体を細胞と接触させたときの動態について調べた。【００６１】
Ａｌｅｘａ６４７(Thermo Fisher Scientific)を抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）に標識した。試験管内の培養条件下でＣＹＧ６２細胞にＡｌｅｘａ６４７標識した抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）を投与して、１０分後と３０分後の細胞内取り込みを観察した。ライソゾームはライソトラッカー(Thermo Fisher Scientific)で可視化した。結果は、図５Ａに示される通りであった。【００６２】
図５Ａに示されるように、抗ＩＬ−７Ｒ抗体は、投与後３０分以内に細胞内に取り込まれ、ライソゾーム内に局在することが分かった。【００６３】
次に、インビボでの抗ＩＬ−７Ｒ抗体の動態を確認した。具体的には、ＣＹＧ８２親株を雌のヌードマウスの皮下移植後に腫瘍を形成させた後に、Ａｌｅｘａ６４７標識抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）或いはコントロール抗体をマウス尾静脈から投与した。投与１週間後に腫瘍、リンパ節、脾臓、骨、および肝臓を摘出して、各組織における抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）の集積を確認した。結果は、図５Ｂに示される通りであった。【００６４】
図５Ｂに示されるように、抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）は腫瘍と病変リンパ節に集積したのに対して、コントロール抗体はこれらの組織への集積は認めなかった。【００６５】
ＣＹＧ８２細胞とＩＬ−７依存性のＲＡＧ２−／−細胞とをそれぞれ２０００或いは４０００個／１００μＬ／ｗｅｌｌで各々９６ウェルプレートに添加し培養した。ＩＬ−７Ｒ抗体Ａ７Ｒ３４を１０-4〜１０2μｇ／ｍｌの希釈系列で添加して、７２時間後にＷＳＴ−８（同仁化学、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８）を１０μＬ／ｗｅｌｌで添加し、３時間培養後にマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で４５０ｎｍの吸光度を測定した。細胞生存率を算出して、抗体のＩＬ−７シグナルの中和活性による殺細胞効果を測定した。結果は、図５Ｃに示される通りであった。【００６６】
図５Ｃに示されるように、抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）はＩＬ−７依存性のＲＡＧ２−／−細胞には中和活性による殺細胞効果を認めたが、ＣＹＧ８２細胞には効果がほとんど認められなかった。このことから、ＣＹＧ８２細胞はＩＬ−７を必要としていなことが明らかとなった。ＣＹＧ８２細胞中では、ＩＬ−７Ｒの自己活性化により細胞増殖・生存が保たれており、ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）の中和活性の影響を回避していると考えられる。【００６７】
そこで、ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）の抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ，ＳＮ−３８を薬剤として使用）の殺細胞効果をＳＮ−３８のプロドラッグであるＣＰＴ−１１とフリーのＳＮ−３８を対照にして、図５Ｃと同様の方法で試験管内での殺細胞効果を確認した。ＡＤＣは、下記参考文献６〜９に従い作製した。【００６８】
【化１】
2018159808.tif 000003
【００６９】
すなわち、リンカーと薬剤は抗体への結合用にマレイミドを使用している。Mal‐PEG12‐OSuはQuanta Biodesign社もしくは、IRIS Biotech GMBH社から購入して極性を高めるために使用した。細胞内で薬剤をリリースさせるための切断用部位としてリンカー部位にカルバメート結合を導入した。ＳＮ−３８はジメチルスルホキシドに１０ｍＭの濃度で溶解して、マイナス８０℃で保存した。ＡＤＣは抗体内のＳＳ結合を還元して、リンカーのマレイミド基と薬剤を反応させることで作製した。抗体１個あたり４〜６個の薬剤が結合しているＡＤＣを得ることができた。結果は、図５Ｄに示される通りであった。【００７０】
図５Ｄに示されるように、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）はＣＰＴ−１１の１００倍効果が強く、フリーのＳＮ−３８と同様の殺細胞効果を示した。このことから、ＩＬ−７に依存せずに生存するＣＹＧ８２に対してはＡ７Ｒ３４−ＡＤＣが効果的であることが示された。
このことは、ＩＬ−７Ｒは、ＩＬ−７シグナル非存在下であっても恒常的にインターナライズすることを示す。
また、抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）は、ＩＬ−７とＩＬ−７Ｒとの中和活性は細胞生存率や腫瘍体積の抑制効果に大きな影響を与えなかった。抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤とのＡＤＣにより顕著な抗腫瘍効果が奏された。【００７１】
実施例６：白血病モデルにおける抗腫瘍効果
本実施例では、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と薬剤とのＡＤＣによる抗腫瘍効果を白血病モデルで確認した。【００７２】
ＣＹＧ８２親株を雌のヌードマウス（１群５匹）の皮下移植後に腫瘍体積が約５０ｍｍ3となったマウスを白血病モデルマウスとした。ＡＤＣは、実施例５で作製したＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）を用いた。Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）をマウス尾静脈より０，４，８日目にＡＤＣ量として５０ｍｇ／ｋｇ、ＳＮ−３８換算量では０．６ｍｇ／ｋｇを投与した。対照として生理食塩水、５０ｍｇ／ｋｇのＡ７Ｒ３４抗体、５０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ抗体ＡＤＣ（＝コントロール抗体のＡＤＣ）［ＳＮ−３８換算量では０．６ｍｇ／ｋｇ］、１０ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン、または２０ｍｇ／ｋｇのＣＰＴ−１１［ＳＮ−３８換算量では１１．６ｍｇ／ｋｇ］を投与した。２日間隔で腫瘍体積を計測して投与後２６日目まで計測した。同じくＣＹＧ８２のステロイド耐性株を移植後に、腫瘍体積が約５０ｍｍ3となったところで、５０ｍｇ／ｋｇのＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ［ＳＮ−３８換算量では０．６ｍｇ／ｋｇ］をマウス尾静脈より０，４，８日目に投与した。対照として生理食塩水、１０ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン、２０ｍｇ／ｋｇのＮＦｋβ阻害剤カフェイン酸フェネチルエステル（ＣＰＡＥ）を投与した。２日間隔で腫瘍体積を計測して投与後１８日目まで計測した。結果は、図６Ａおよび６Ｂに示される通りであった。【００７３】
図６Ａに示されるように抗ＩＬ−７Ｒ抗体と薬剤とのＡＤＣが最も優れた腫瘍体積増大の抑制効果を示した。一方で、抗ＩＬ−７Ｒ抗体単独では大きな効果は認められなかった。また、図６Ｂに示されるように抗ＩＬ−７Ｒ抗体と薬剤とのＡＤＣは、ステロイド耐性のリンパ性白血病モデルに対しても強い抗腫瘍効果を示した。【００７４】
実施例７：白血病モデルにおけるリンパ節腫大抑制
ＣＹＧ８２細胞を雌のヌードマウス（１群５匹）の前足底に移植して、移植後１６日目にリンパ節の体積の平均を計測した。結果は、図７Ａに示される通りであった。図７Ａに示されるように、ＩＬ−７Ｒノックダウンマウスでは、腋窩リンパ節の腫大が著明に抑制された。【００７５】
次に、ＣＹＧ８２親株を雌のヌードマウス（１群３匹）の皮下移植後に腫瘍が形成されるが、所属リンパ節の腫大を経て腹腔内のリンパ節が腫大する。抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）のＡＤＣに、リンパ節腫大抑制効果があるかどうかを評価した。図５同様に、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）をマウス尾静脈より０，４，８日目に投与した。対照として生理食塩水、Ａ７Ｒ３４抗体、アイソタイプ抗体ＡＤＣ（ＳＮ−３８）、デキサメタゾン、およびＣＰＴ−１１のいずれかを投与した。投与後１６日目にリンパ節の体積を測定した。結果は図７Ｂに示される通りであった。図７Ｂに示されるように、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）が、強いリンパ節腫大の抑制効果を認めた。Ａ７Ｒ３４単独療法で治療効果をほとんど認めなかった。【００７６】
実施例８：放射線同位体ラベルされた抗ＩＬ−７Ｒ抗体
本実施例では、ＡＤＣの代わりに、放射線同位体ラベルされた抗ＩＬ−７Ｒ抗体を投与して抗体の効果を確認した。【００７７】
90Ｙ標識抗体の作製は下記参考文献１０に従い行った。１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）と90ＹＣｌ3を１：１で混合し、室温で５分静置した。その後、市販の抗ＩＬ−７Ｒ抗体（クローン４０１３１，  Ｒ＆Ｄ社）を加えて室温で３０分静置した。反応終了後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ５０（ＧＥヘルスケア社製）カラム（０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）で膨潤）を用いて精製した。さらにその後、未標識の抗ヒトＩＬ−７Ｒ抗体換算で投与量を２０μｇになるように調整した。90Ｙ標識抗ＩＬ−７Ｒ抗体を、ＳｕｐＴ１およびＨ２００９のいずれかを皮下移植したヌードマウス尾静脈に投与し薬効を確認した。90Ｙ標識−抗ＩＬ−７Ｒ抗体２０μｇを単回投与した。結果は、図８ＡおよびＢに示される通りであった。【００７８】
図８Ａおよび８Ｂに示され得ように、１００μＣｉで90Ｙ標識抗ＩＬ−７Ｒ抗体が抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。このことから、抗ＩＬ−７Ｒ抗体はラジオイムノセラピーに用い得ることが明らかとなった。【００７９】
実施例９：免疫応答に対するＡＤＣの効果
上記実施例では、腫瘍に対するＡＤＣの効果を確認した。本実施例では、ＡＤＣを免疫反応の異常の治療に用い得るかを検討した。【００８０】
健常の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、生理食塩水、５０ｍｇ／ｋｇのＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）［ＳＮ−３８換算量では０．６ｍｇ／ｋｇ］、１０ｍｇ／ｋｇデキサメタゾン、または４０ｍｇ／ｋｇデキサメタゾンをそれぞれマウスの尾静脈から投与した。【００８１】
Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣでは、ＩＬ−７Ｒ陽性のＴ細胞およびＢ細胞は、胸腺、骨髄、脾臓のいずれにおいても１／１０以下に減少していた。一方デキサメタゾン投与では、胸腺のＩＬ−７Ｒ陽性Ｔ細胞を含むＴ細胞が全般的に減少していたが、逆に骨髄のＩＬ−７Ｒ陽性Ｂ細胞は２倍以上に増加していた。さらに、脾臓では全細胞数の減少にもかかわらず、ＩＬ−７Ｒ陽性のＴ細胞の比率は増加しており、生理的にもＩＬ−７ＲはＴ細胞およびＢ細胞のステロイド耐性に関与していることが示された。また、このＡ７Ｒ３４−ＡＤＣとステロイド（デキサメタゾン）との薬効性の違いは、両者が異なる機序で免疫細胞の制御ができることを示している。特に、ステロイド耐性のＩＬ−７Ｒ陽性細胞の制御にＡ７Ｒ３４−ＡＤＣが有効と考えられる。【００８２】
実施例１０：免疫疾患におけるＩＬ−７Ｒ陽性細胞の増加
本実施例では、実施例４と同様にして臨床サンプルにおけるＩＬ−７Ｒ遺伝子発現を調べた。【００８３】
Gene Expression Omnibus (GEO)からGSE55235とGSE14580の生データを入手した。データは解析ソフトQlucore Omics Explorer（Filgen）を用いて解析を行い、P<0.05以下を判定の基準とした。結果は図１０に示される通りであった。【００８４】
図１０に示されるように、慢性関節リウマチ（ＲＡ）患者において、ＩＬ−７Ｒの遺伝子発現が健常者よりも高い傾向が確認された。また、潰瘍性大腸炎（ＵＡ）患者においても、、ＩＬ−７Ｒの遺伝子発現が健常者よりも高い傾向が確認され、特に抗ＴＮＦ両方が奏功しなかった患者においてＩＬ−７Ｒ遺伝子の発現は亢進していた。【００８５】
実施例１１：抗ＩＬ−７Ｒ抗体を用いた関節リウマチモデルの治療効果
関節リウマチ炎モデルに対して、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と薬剤とのコンジュゲートを投与してその効果を調べた。【００８６】
抗ＩＬ−７Ｒ抗体と薬剤とのコンジュゲートとしては、Ａ７Ｒ３４モノクローナル抗体とモノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）とをＶａｌ−Ｃｉｔ結合（バリン−シトルリンジペプチド）によって連結したＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）を用いた。Ｖａｌ−Ｃｉｔ結合とＭＭＡＥとは、ｐ−アミノベンジルカルバメート（ＰＡＢＣ）により連結した。ＭＭＡＥはＳＮ−３８より細胞障害活性が強いことが知られている。
Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）は、実施例５と同じように以下参考文献６〜９の記載の通り作製した。Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）の化学構造式は以下の通りであった。【００８７】
【化２】
2018159808.tif 000004
【００８８】
関節リウマチ炎モデルは、下記参考文献７に記載の方法により作製した。すなわち、メスのＤＢＡ／１Ｊマウスに２ｍｇの抗コラーゲン４抗体（Chondrex）を腹腔内に投与した（０日目）。３日目に５０μｇのＬＰＳ（Chondrex）を腹腔内に投与した。
得られたマウスに対して、５日目に、５０ｍｇ／ｋｇのＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）［ＭＭＡＥ換算量では１ｍｇ／ｋｇ］または５０ｍｇ／ｋｇのＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）［ＳＮ−３８換算量では０．６ｍｇ／ｋｇ］を投与した。対照としては、生理食塩水、１ｍｇ／ｋｇＭＭＡＥ、５０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプコントロール抗体ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）［ＭＭＡＥ換算量では１ｍｇ／ｋｇ］、１０ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン、または５０ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦ製剤エタネルセプトをＡＤＣの代わりに投与した。５０ｍｇ／ｋｇのＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）［ＳＮ−３８換算量では０．６ｍｇ／ｋｇ］の場合には、対照に生理食塩水、５０ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）、５０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＤ１９抗体ＡＤＣ（ＳＮ−３８）［ＳＮ−３８換算量では０．６ｍｇ／ｋｇ］、１０ｍｇ／ｋｇデキサメタゾンを用いた。指示書に従い各個体の関節炎スコア（１６点満点で高いほど重症）を測定することで、関節炎の重症度を評価した。結果は、図１１Ａ〜Ｃに示される通りであった。
本実施例では、関節炎スコアは、各肢の指、甲、および手首の３つの関節を観察することにより求めた。具体的には、各肢の関節炎スコアは以下の基準に基づいて求めた。
各肢の関節炎スコアの評価基準
スコア０：いずれの関節にも炎症が認められない場合、
スコア１：いずれかの関節の１つで炎症が認められた場合、
スコア２：いずれかの関節の２つで炎症が認められた場合、
スコア３：全ての関節で炎症が認められた場合、
スコア４：すべての関節で炎症が認められ、肢全体が赤く腫れた場合。
上記スコアリングに基づいて各肢について関節炎スコアを測定（各肢４点満点）して、四肢について合計（１６点満点）して、個体の関節炎スコアを求めた。【００８９】
図１１Ａに示されるように、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）は、デキサメタゾン同様に関節リウマチ炎モデルにおける関節炎係数の増悪を顕著に抑制した。より詳細に確認したところ、デキサメタゾン投与群では、後肢と比較して前肢の炎症が著明な個体（炎症のコントロール不良例）が存在した。一方、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）投与群では、前肢および後肢共に安定して強い抗炎症作用を認めた。この抗炎症作用は、エタネルセプトによる抗ＴＮＦ療法よりも優れていた。また、デキサメタゾンによる炎症のコントロール不良例の関節組織を調べたところ、強い炎症所見が認められ、また、ＩＬ−７Ｒ陽性細胞が多く観察された。
また、図１１Ｂに示されるように、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）でも、同様の結果であった。また、抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４抗体）単独では、関節リウマチ炎モデルにおける関節炎係数の増悪の抑制効果が観察されたが、その効果は限定的であった（図１１Ｂ参照）。
図１１Ｃでは、薬剤投与後９日目のマウス前足病変部の組織切片を作製し、ヘマトキシリン・エオシン染色（ＨＥ染色）して観察した。図１１Ｃに示される通り、ＡＤＣ投与群では、炎症が大幅に改善していることが分かる。【００９０】
このことから、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を中和することでは効果が弱く、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤とのＡＤＣにおいて強い効果が確認された。【００９１】
実施例１２：抗ＩＬ−７Ｒ抗体を用いた潰瘍性大腸炎の治療効果
本実施例では、潰瘍性大腸炎に対する抗ＩＬ−７Ｒ抗体の効果を調べた。【００９２】
潰瘍性大腸炎モデルは、下記参考資料１１の通りに作製した。すなわち、メスのＢＡＬＢ／ｃマウスに、５％デキストラン硫酸塩（ＤＳＳ；MP Biomedicals）を飲水させた。ＤＳＳ飲水後２日目から、関節リウマチ炎モデル同様の投与方法・投与量でＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）またはＡ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）を腹腔内に投与した。対照としては、ＡＤＣの代わりに生理食塩水、ＭＭＡＥ、アイソタイプのコントロール抗体ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）、デキサメタゾン、または抗ＴＮＦ製剤エタネルセプトを投与した。Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）の場合には、対照に生理食塩水、抗ＩＬ−７Ｒ抗体（Ａ７Ｒ３４）、抗ＣＤ１９抗体ＡＤＣ（ＳＮ−３８）、デキサメタゾンを関節リウマチ炎モデル同様に用いた。飲水後８日目の大腸を摘出して全長を測定した。さらに、組織標本を作製してＨＥ染色で病理像を確認した。潰瘍性大腸炎の重症度は体重減少（体重低下が大きいほど重症）、大腸全長（大腸の全長が短くなっているほど重症）と組織学的変化で観察した。体重変化の結果は、図１２ＡおよびＢに示される通りであった。また、大腸全長の組織学的変化の結果は、図１３に示される通りであった。【００９３】
図１２Ａに示されるように、デキサメタゾンはほとんど治療有効性を示さなかったのに対して、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）は、５日目以降は体重低下が顕著に抑制された。この抑制効果は、エタネルセプト投与群における体重低下の抑制よりも顕著に高かった。ＭＭＡＥやコントロール抗体ＡＤＣでは体重低下の抑制効果はほとんど示されなかった。
また、図１２Ｂに示されるように、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）も、モデルマウスにおける体重低下が顕著に抑制された。
さらに図１３に示されるように、潰瘍性大腸炎のネガティブコントロールでは、ＤＳＳ未処置群と比較して全長が大幅に縮小していたが、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）投与群では、大腸全長がＤＳＳ未処置群と同等レベルに開腹していた。また、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）投与群でも、全長は長くなる傾向が見られた。【００９４】
このことから、ＩＬ−７ＲとＩＬ−７との結合を中和することでは効果が弱く、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤とのＡＤＣにおいて強い効果が確認された。【００９５】
さらに、上記においてＤＳＳ投与６日後の大腸摘出標本の病理組織像を観察した。その結果、図１４に示されるように、生食群では大腸の潰瘍形成と粘膜破壊が著しかった。また、デキサメタゾンやＡ７Ｒ３４単独療法の効果も弱かった。さらに、抗ＴＮＦ製剤エタネルセプトも炎症を抑えているが十分ではなかった。しかし、これらとは対照的に、Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＭＭＡＥ）は、完全に炎症を抑えている。Ａ７Ｒ３４−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）も炎症を抑えているが中心に一部潰瘍性病変を認める。抗ＣＤ１９抗体−ＡＤＣ（ＳＮ−３８）は炎症を抑えるどころか、粘膜全体が肉芽腫様に変化していた。関節炎モデル同様に、大腸炎モデルでもＳＮ−３８より細胞障害の強いＭＭＡＥの方が有効であることが判明した。【００９６】
ＩＬ−７Ｒは、獲得免疫系リンパ球であるＴ細胞およびＢ細胞、および、特に自然免疫系リンパ球に発現する。ＩＬ−７Ｒに対するＡＤＣにより炎症を鎮静化できたことから、当該ＡＤＣは、獲得免疫系リンパ球であるＴ細胞およびＢ細胞、および、特に自然免疫系リンパ球を介した炎症の鎮静化に対して有効であることが示唆された。従って、本発明によれば、自然免疫系リンパ球を介したあらゆる炎症、獲得免疫系の亢進による疾患（例えば、自己免疫疾患や移植片対宿主病等）およびその他上記の疾患または状態に対して、抗ＩＬ−７Ｒ抗体と細胞傷害剤との抗体薬物コンジュゲートが有効であることが示された。【００９７】
文献リスト
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【図１Ａ】
2018159808.tif 000005
【図１Ｂ】
2018159808.tif 000006
【図１Ｃ】
2018159808.tif 000007
【図１Ｄ】
2018159808.tif 000008
【図１Ｅ】
2018159808.tif 000009
【図２Ａ】
2018159808.tif 000010
【図２Ｂ】
2018159808.tif 000011
【図２Ｃ】
2018159808.tif 000012
【図３】
2018159808.tif 000013
【図４Ａ】
2018159808.tif 000014
【図４Ｂ】
2018159808.tif 000015
【図４Ｃ】
2018159808.tif 000016
【図５Ａ】
2018159808.tif 000017
【図５Ｂ】
2018159808.tif 000018
【図５Ｃ】
2018159808.tif 000019
【図５Ｄ】
2018159808.tif 000020
【図６Ａ】
2018159808.tif 000021
【図６Ｂ】
2018159808.tif 000022
【図７Ａ】
2018159808.tif 000023
【図７Ｂ】
2018159808.tif 000024
【図８Ａ】
2018159808.tif 000025
【図８Ｂ】
2018159808.tif 000026
【図９】
2018159808.tif 000027
【図１０】
2018159808.tif 000028
【図１１Ａ】
2018159808.tif 000029
【図１１Ｂ】
2018159808.tif 000030
【図１１Ｃ】
2018159808.tif 000031
【図１２Ａ】
2018159808.tif 000032
【図１２Ｂ】
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【図１３】
2018159808.tif 000034
【図１４】
2018159808.tif 000035
【国際調査報告】
2018159808.tif 000036
2018159808.tif 000037
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2018159808.tif 000039
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