【手続補正書】
【提出日】平成31年1月24日(2019.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）  足場部分と、
（ｉｉ）  Ｃ５ａまたはＣ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ）相互作用を経て抗動脈硬化性血管疾患反応を引き起こすことができる第１の種のエピトープと、
（ｉｉｉ）  前記Ｃ５ａまたはＣ５ａＲ相互作用と独立した第２の経路を経て抗動脈硬化性血管疾患を引き起こすことができる第２の種のエピトープであって、アポリポタンパク質（Ａｐｏ）エピトープ、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）エピトープ、肺炎クラミジア（chlamydia pneumonia）エピトープ、ＰＡＲ−１エピトープ、組織因子エピトープおよびペリリピンエピトープを含むまたはからなる群から選択されるものと
を含む組換え構築物。
【請求項２】
複数の第１および／または第２の種のエピトープを含む、請求項１に記載の構築物。
【請求項３】
前記第１の種のエピトープがＣ５ａまたはＣ５ａＲタンパク質であり、好ましくは前記Ｃ５ａエピトープが、配列番号２における５〜４０個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドであり、好ましくは、前記Ｃ５ａエピトープが、ＥＱＲＡＡＲＩＳＬＧＰＲ（配列番号３）、ＲＡＡＲＩＳＬＧＰＲＣＩＫＡＦＴＥ（配列番号４）およびＣＶＮＮＤＥＴＣＥＱ（配列番号５）を含む、もしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは抗原活性を有するその機能性断片である、請求項１または２に記載の構築物。
【請求項４】
前記Ｃ５ａＲエピトープが、配列番号６における５〜４５個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項３に記載の構築物。
【請求項５】
Ｃ５ａＲエピトープがＣまたはＮ末端配列であり、任意選択で前記エピトープが、ＭＮＳＦＮＹＴＴＰＤＹＧＨＹＤＤＫＤＴＬＤ（配列番号７）、ＴＬＤＬＮＴＰＶＤＫＴＳＮ（配列番号８）およびＭＮＳＦＮＹＴＴＰＤＹＧＨＹＤＤＫＤＴＬＤＬＮＴＰＶＤＫＴＳＮ（配列番号９）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含む、もしくはからなるポリペプチドまたは抗原活性を有するその機能性断片である、請求項３に記載の構築物。
【請求項６】
前記ＨＳＰがＨＳＰ６０またはＨＳＰ６５であり、任意選択で、前記ＨＳＰがＨＳＰ６０である場合、ヒトＨＳＰ６０またはマイコバクテリウム・ボビス（Mycobacterium bovis）ＨＳＰであり、好ましくは前記ＨＳＰ６０エピトープが、ペプチド１（ＡＡ）１５３〜１６０：ＡＥＬＫＫＱＳＫ；（配列番号１０）、ペプチド１（ＡＡ）１５３〜１６３：ＡＥＬＫＫＱＳＫＰＶＴ；（配列番号１１）、ペプチド１（ＡＡ）３０３〜３１２：ＰＧＦＧＤＮＲＫＮＱ（配列番号１２）、ペプチド２：ＡＡ２７７〜２８６  ＰＧＦＧＤＮＲＫＮＱ（配列番号１３）、ペプチド（ＡＡ）５１６〜５２８：ＫＧＩＩＤＰＴＫＶＶＲＴＡ（配列番号１４）およびマイコバクテリウム（ＡＡ）２５３〜２６８：ＥＧＥＡＬＳＴＬＶＶＮＫＩＲＧＴ（配列番号１５）を含む、もしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列または抗原活性を有するその機能性断片を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の構築物。
【請求項７】
前記肺炎クラミジア（chlamydia pneumonia）がＣｐｎ１またはＣｐｎ２であり、任意選択で、主要外膜タンパク質（ＭＯＭＰ）（アミノ酸配列（ＡＡ）６７〜７４：ＧＤＹＶＦＤＲＩ（配列番号１６））およびＣｐｎの推定外膜タンパク質（Ｐｏｍｐ）５（アミノ酸配列（ＡＡ）２８３〜２９１：ＱＡＶＡＮＧＧＡＩ（配列番号１７））を含む群から選択されるアミノ酸配列を含む、もしくはからなるポリペプチドまたは抗原活性を有するその機能性断片である、前記組織因子エピトープが、ＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含む、および／または、前記ＰＡＲ−１エピトープが、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の構築物。
【請求項８】
前記足場部分が配列番号１に示すデンドロアスピン足場タンパク質またはその断片もしくは変異体であり、好ましくは前記第１および／または第２の種のエピトープが、前記デンドロアスピン足場の（ａ）ループＩおよび／またはループＩＩ；（ｂ）ループＩおよび／またはループＩＩＩ；（ｃ）ループＩＩおよび／またはループＩＩＩ；（ｄ）ループＩ、ループＩＩおよびループＩＩＩ；（ｅ）ＮまたはＣ末端のいずれか１つまたは複数の位置に組み込まれる、請求項１から７のいずれか一項に記載の構築物。
【請求項９】
ＲＨＨＣ、ＲＰＨＣおよびＡＨＨＲを含む組換え構築物の群から選択される、請求項１に記載の構築物。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物に組み込まれた前記エピトープをコードする核酸を含む発現ベクター。
【請求項１１】
請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物と抗原性疎水性複合体とを含む抗原性組成物であって、任意選択で前記抗原性疎水性複合体が（ｉ）任意選択で反転ミクロソームである単離ミクロソームまたは（ｉｉ）ＭＨＣタンパク質または（ｉｉｉ）逆ミセルまたは（ｉｖ）合成産物を含む、前記組成物。。
【請求項１２】
注射用または経口製剤として製剤化された、請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物と、適切なアジュバント、賦形剤、希釈剤および／または担体とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物または請求項１０に記載のベクターまたは請求項１１に記載の抗原性組成物を含む医薬組成物。
【請求項１４】
医薬として用いる請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物または請求項１０に記載のベクター。
【請求項１５】
請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物または請求項１０に記載のベクターを含むワクチン。
【請求項１６】
哺乳動物における抗アテローム動脈硬化症反応を引き起こすための、請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の抗原性組成物、または、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
アテローム動脈硬化症を治療する、予防するまたは低減するための、または、早期アテローム動脈硬化症を有する個体またはアテローム動脈硬化症を発現するリスクがあると特定された個体を治療するための、請求項１から９のいずれか一項に記載の構築物、請求項１０に記載のベクター、請求項１１に記載の抗原性組成物、または、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
これらの結果は、本発明の構築物がアテローム動脈硬化症の治療のための細胞療法における魅力的な機会を提供することを示すものである。
また、本発明は以下を提供する。
［１］
（ｉ）  足場部分と、
（ｉｉ）  第１の経路を経て抗動脈硬化性血管疾患反応を引き起こすことができる第１の種のエピトープと、
（ｉｉｉ）  前記第１の経路と独立した第２の経路を経て抗動脈硬化性血管疾患を引き起こすことができる第２の種のエピトープと
を含む組換え構築物。
［２］
複数の第１および／または第２の種のエピトープを含む、［１］に記載の構築物。
［３］
アテローム動脈硬化症の形成に関連する前記第１の経路がＣ５ａまたはＣ５ａＲ相互作用を経由する、［１］または［２］に記載の構築物。
［４］
前記第１の種のエピトープがＣ５ａまたはＣ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ）タンパク質である、［１］から［３］のいずれか一項に記載の構築物。
［５］
前記Ｃ５ａエピトープが、配列番号２における５〜４０個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、［４］に記載の構築物。
［６］
前記Ｃ５ａエピトープが、ＥＱＲＡＡＲＩＳＬＧＰＲ（配列番号３）、ＲＡＡＲＩＳＬＧＰＲＣＩＫＡＦＴＥ（配列番号４）およびＣＶＮＮＤＥＴＣＥＱ（配列番号５）を含む、もしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは抗原活性を有するその機能性断片である、［４］または［５］に記載の構築物。
［７］
前記Ｃ５ａＲエピトープが、配列番号６における５〜４５個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、［４］に記載の構築物。
［８］
Ｃ５ａＲエピトープがＣまたはＮ末端配列であり、任意選択で前記エピトープが、ＭＮＳＦＮＹＴＴＰＤＹＧＨＹＤＤＫＤＴＬＤ（配列番号７）、ＴＬＤＬＮＴＰＶＤＫＴＳＮ（配列番号８）およびＭＮＳＦＮＹＴＴＰＤＹＧＨＹＤＤＫＤＴＬＤＬＮＴＰＶＤＫＴＳＮ（配列番号９）を含む群から選択されるアミノ酸配列を含む、もしくはからなるポリペプチドまたは抗原活性を有するその機能性断片である、［４］または［５］に記載の構築物。
［９］
抗動脈硬化性血管疾患反応に関連する前記第２の種のエピトープが、アポリポタンパク質（Ａｐｏ）エピトープ、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）エピトープ、肺炎クラミジア（chlamydia pneumonia）エピトープ、ＰＡＲ−１エピトープおよびペリリピンエピトープを含むまたはからなる群から選択される、［１］から［８］のいずれか一項に記載の構築物。
［１０］
前記ＨＳＰがＨＳＰ６０またはＨＳＰ６５であり、任意選択で、前記ＨＳＰがＨＳＰ６０である場合、ヒトＨＳＰ６０またはマイコバクテリウム・ボビス（Mycobacterium bovis）ＨＳＰである、［９］に記載の構築物。
［１１］
前記ＨＳＰ６０エピトープが、ペプチド１（ＡＡ）１５３〜１６０：ＡＥＬＫＫＱＳＫ；（配列番号１０）、ペプチド１（ＡＡ）１５３〜１６３：ＡＥＬＫＫＱＳＫＰＶＴ；（配列番号１１）、ペプチド１（ＡＡ）３０３〜３１２：ＰＧＦＧＤＮＲＫＮＱ（配列番号１２）、ペプチド２：ＡＡ２７７〜２８６  ＰＧＦＧＤＮＲＫＮＱ（配列番号１３）、ペプチド（ＡＡ）５１６〜５２８：ＫＧＩＩＤＰＴＫＶＶＲＴＡ（配列番号１４）およびマイコバクテリウム（ＡＡ）２５３〜２６８：ＥＧＥＡＬＳＴＬＶＶＮＫＩＲＧＴ（配列番号１５）を含む、もしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列または抗原活性を有するその機能性断片を含む、［１０］に記載の構築物。
［１２］
前記肺炎クラミジア（chlamydia pneumonia）がＣｐｎ１またはＣｐｎ２であり、任意選択で、主要外膜タンパク質（ＭＯＭＰ）（アミノ酸配列（ＡＡ）６７〜７４：ＧＤＹＶＦＤＲＩ（配列番号１６））およびＣｐｎの推定外膜タンパク質（Ｐｏｍｐ）５（アミノ酸配列（ＡＡ）２８３〜２９１：ＱＡＶＡＮＧＧＡＩ（配列番号１７））を含む群から選択されるアミノ酸配列を含む、もしくはからなるポリペプチドまたは抗原活性を有するその機能性断片である、［９］に記載の構築物。
［１３］
前記ＰＡＲ−１エピトープが、ＥＷＥＰＫＰＶＮＱＶＹＴ（配列番号１８）およびＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号１９）から選択されるアミノ酸を含む、［９］に記載の構築物。
［１４］
前記足場部分が配列番号１に示すデンドロアスピン足場タンパク質またはその断片もしくは変異体である、［１］から［１３］のいずれか一項に記載の構築物。
［１５］
前記第１および／または第２の種のエピトープが、前記デンドロアスピン足場の（ａ）ループＩおよび／またはループＩＩ；（ｂ）ループＩおよび／またはループＩＩＩ；（ｃ）ループＩＩおよび／またはループＩＩＩ；（ｄ）ループＩ、ループＩＩおよびループＩＩＩ；（ｅ）ＮまたはＣ末端のいずれか１つまたは複数の位置に組み込まれる、［１４］に記載の構築物。
［１６］
（ｉ）足場部分と、
（ｉｉ）Ｃｐｎエピトープと、
（ｉｉｉ）同じまたは異なるタンパク質に由来する１つまたは複数のさらなるエピトープと
を含む、［１］に記載の構築物。
［１７］
前記さらなるエピトープがＨＳＰ、ＰＡＲ−１およびＣ５ａＲに由来する、［１６］に記載の構築物。
［１８］
ＡＨＨＣ、ＲＨＨＣ、ＲＰＨＣおよびＡＨＨＲを含む群から選択される、［１６］または［１７］に記載の構築物。
［１９］
（ｉ）足場部分と、
（ｉｉ）２つのＨＳＰエピトープと、
（ｉｉｉ）異なるタンパク質に由来する１つまたは複数のさらなるエピトープと
を含む、［１］に記載の構築物。
［２０］
前記１つまたは複数のさらなるエピトープがＡｐｏＢおよび／またはＣａ５Ｒである、［１９］に記載の構築物。
［２１］
［１］から［２０］のいずれか一項に記載の構築物に組み込まれる前記エピトープをコードする核酸を含む発現ベクター。
［２２］
［１］から［２０］のいずれか一項に記載の構築物を含む抗原性組成物であって、任意選択で（ｉ）任意選択で反転ミクロソームである単離ミクロソームまたは（ｉｉ）ＭＨＣタンパク質または（ｉｉｉ）逆ミセルまたは（ｉｖ）合成産物を含む疎水性複合体である、前記組成物。。
［２３］
注射用または経口製剤として製剤化された、［１］から［２０］のいずれか一項に記載の免疫原性組成物を含み、任意選択で、適切なアジュバント、賦形剤、希釈剤および／または担体をさらに含む医薬組成物。
［２４］
［１］から［２０］のいずれか一項に記載の構築物または［２１］に記載のベクターまたは［２２］に記載の免疫原性組成物を含む医薬組成物。
［２５］
医薬として用いる［１］から［２０］のいずれか一項に記載の構築物または［２１］に記載のベクター。
［２６］
医薬の製造に用いる［１］から［２０］のいずれか一項に記載の構築物または［２１］に記載のベクター。
［２７］
アテローム動脈硬化症を治療するのに用いる［１］から［２０］のいずれか一項に記載の構築物または［２１］に記載のベクター。
［２８］
［１］から［２０］のいずれか一項に記載の構築物または［２１］に記載のベクターを含むワクチン。
［２９］
［１］から［２０］のいずれか一項に記載のタンパク質；［２１］に記載のベクター；［２２］に記載の免疫原性組成物および［２３］または［２４］に記載の医薬組成物から選択される製剤を個体に投与することを含む、哺乳動物における抗アテローム動脈硬化症反応を引き起こす方法。
［３０］
［１］から［２０］のいずれか一項に記載のタンパク質；［２１］に記載のベクター；［２２］に記載の免疫原性組成物および［２３］または［２４］に記載の医薬組成物から選択される製剤を個体に投与することを含む、アテローム動脈硬化症を治療する、予防するまたは低減する方法。
［３１］
［１］から［２０］のいずれか一項に記載のタンパク質；［２１］に記載のベクター；［２２］に記載の免疫原性組成物および［２３］または［２４］に記載の医薬組成物から選択される製剤を個体に投与することを含む、早期アテローム動脈硬化症を有する個体またはアテローム動脈硬化症を発現するリスクがあると特定された個体を治療する方法。
［３２］
アテローム動脈硬化症形成に関連する２つの独立した経路に関連するエピトープに対する免疫反応を引き起こす方法であって、
１．  ［１］から［２０］のいずれか一項に記載の少なくとも１つの第１および少なくとも１つの第２のエピトープを含むデンドロアスピン足場タンパク質を構築し、発現させることと、
２．  真核細胞を前記デンドロアスピン足場タンパク質とともにインキュベートすることと、
３．  前記真核細胞を用いて、ミクロソームを調製することと、
４．  前記ミクロソームおよびデンドロアスピン足場タンパク質を１つまたは複数の薬学的に許容される成分と混合して、経口または注射投与可能製剤を製造することと、
５．  前記製剤を哺乳動物またはヒトに投与することと
を含む方法。