【手続補正書】
【提出日】令和1年5月31日(2019.5.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２のアミノ酸配列を有するエピトープに結合する、Mcm5に特異的に結合するモノクローナル抗体。
【請求項２】
配列番号１のアミノ酸配列を有するエピトープに結合する、Mcm5に特異的に結合するモノクローナル抗体。
【請求項３】
配列番号２１の配列を有する4B4 CDRH1、配列番号２３の配列を有する4B4 CDRH2、配列番号２５の配列を有する4B4 CDRH3、配列番号１５の配列を有する4B4 CDRL1、配列番号１７の配列を有する4B4 CDRL2、及び配列番号１９の配列を有する4B4 CDRL3を含む、Mcm5に特異的に結合するモノクローナル抗体。
【請求項４】
配列番号９の配列を有する12A7 CDRH1、配列番号１１の配列を有する12A7 CDRH2、配列番号１３の配列を有する12A7 CDRH3、配列番号３の配列を有する12A7 CDRL1、配列番号５の配列を有する12A7 CDRL2、及び配列番号７の配列を有する12A7 CDRL3を含む、Mcm5に特異的に結合するモノクローナル抗体。
【請求項５】
1〜10nMの範囲のMcm5に対する親和性を有する、請求項１〜４のいずれか１項記載の抗体。
【請求項６】
配列番号２９の配列に対して少なくとも98％同一である配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２７の配列に対して少なくとも98％同一である配列を有する軽鎖可変領域とを含む、請求項２又は４記載の抗体。
【請求項７】
配列番号３３の配列に対して少なくとも98％同一である配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１の配列に対して少なくとも98％同一である配列を有する軽鎖可変領域とを含む、請求項１又は３記載の抗体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項記載の抗体を含む組成物。
【請求項９】
(i) 配列番号２８の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、及び配列番号３０の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、又は、
(ii) 配列番号３２の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、及び配列番号３４の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、又は、
(iii) 配列番号２８の核酸配列を有する核酸、及び配列番号３０の核酸配列を有する核酸、又は、
(iv) 配列番号３２の核酸配列を有する核酸、及び配列番号３４の核酸配列を有する核酸、
を含む組成物。
【請求項１０】
(i) 配列番号２８の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、及び配列番号３０の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、又は、
(ii) 配列番号３２の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、及び配列番号３４の核酸配列に対して少なくとも98％、99％若しくは100％同一である核酸配列を有する核酸、又は、
(iii) 配列番号２８の核酸配列を有する核酸、及び配列番号３０の核酸配列を有する核酸、又は、
(iv) 配列番号３２の核酸配列を有する核酸、及び配列番号３４の核酸配列を有する核酸、
を含む宿主細胞。
【請求項１１】
CHO細胞又は大腸菌細胞である、請求項１０記載の宿主細胞。
【請求項１２】
(i) 請求項１０又は１１記載の宿主細胞を増殖させるステップ、及び、
(ii) 前記宿主細胞から抗体を単離するステップ
を含む、抗体を作製する方法。
【請求項１３】
(i) 前記抗体を放射標識にコンジュゲートさせることにより該抗体を標識するステップをさらに含むか、又は、
(ii) 前記抗体を固体支持体に固定化するステップをさらに含む、
請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
(i) 請求項１、３及び７のいずれか１項記載の第１の抗体を含む組成物と、
(ii) 請求項２、４及び６のいずれか１項記載の第２の抗体を含む組成物と、
を含むキット。
【請求項１５】
試料中のMcm5の濃度又は量を決定する方法であって、
(i) 固体支持体に固定化された、請求項１〜７のいずれか１項記載の抗体である、固定化された第１の抗体を用意するステップ、
(ii) 前記固定化された第１の抗体に前記試料中のMcm5が結合できるように、該固定化された第１の抗体に該試料を曝露して、固定化されたMcm5を用意するステップ、
(iii) 標識にコンジュゲートさせた、請求項１〜７のいずれか１項記載の抗体である、標識された第２の抗体を用意するステップ、
(iv) 前記標識された第２の抗体がMcm5に結合できるように、該標識された第２の抗体に前記固定化されたMcm5を曝露するステップ、及び
(v) 前記標識された第２の抗体の濃度を検出するステップ
を含み、
第１の抗体及び第２の抗体がともにMcm5に結合するが、第１の抗体及び第２の抗体がMcm5の異なるエピトープに結合する、
前記方法。
【請求項１６】
第１の抗体及び第２の抗体がともにMcm5に結合するが、第１の抗体及び第２の抗体がMcm5の異なるエピトープに結合し、且つ、
(a) 第１の抗体がELISAプレートに固定化されている、及び/又は、
(b) 第２の抗体がELISAプレートに固定化されている、及び/又は、
(c) 第２の抗体が放射性標識にコンジュゲートしている、及び/又は、
(d) 第１の抗体が放射性標識にコンジュゲートしている、
請求項１４記載のキット。
【請求項１７】
前記放射性標識がユーロピウム3+である、請求項１６記載のキット。
【請求項１８】
第１の抗体及び第２の抗体がともにMcm5に結合するが、第１の抗体及び第２の抗体がMcm5の異なるエピトープに結合し、且つ、
(a) (i) 第１の抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有するエピトープに結合し、且つ、第２の抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を有するエピトープに結合するか、若しくは、
(ii) 第１の抗体が、配列番号２のアミノ酸配列を有するエピトープに結合し、且つ、第２の抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を有するエピトープに結合する、及び/又は、
(b) 第１の抗体がELISAプレートに固定化されている、及び/又は、
(c) 第２の抗体がELISAプレートに固定化されている、及び/又は、
(d) 第２の抗体が放射性標識にコンジュゲートしている、及び/又は、
(e) 第１の抗体が放射性標識にコンジュゲートしている、
請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記放射性標識がユーロピウム3+である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記標識された第２の抗体の濃度を検出するステップが、Eu3+の免疫蛍光検出を含む、請求項１５、１８及び１９のいずれか１項記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２８】
データを定量化し、その後、ペプチドマップ及び強度マップ、並びに濃度1μg/ml及び10μg/mlのマウスモノクローナル抗体4B4によるアッセイについての強度プロットを作成した。後者の強度プロットは、より明確なデータ概要をもたらすように均一化した。抗体濃度10μg/mlでは、エピトープ様のスポットパターンの未加工の強度は同様であったが、バックグラウンド相互作用がわずかに増加したことから、正規化されたシグナル強度の低下につながった。シグナルは、マイクロアレイスキャンで観察され、コンセンサスモチーフDDRVAIH及びWDETKGEを有するペプチドに起因するエピトープ様のスポットパターンに基づくものであった。
以下、本発明の実施形態を示す。
（１）Mcm5に特異的に結合する抗体であって、
(i)配列番号2又は1のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合し、
(ii)
a.配列番号21の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号21と異なる配列を有する4B4 CDRH1、
b.配列番号23の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号23と異なる配列を有する4B4 CDRH2、
c.配列番号25の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号25と異なる配列を有する4B4 CDRH3、
d.配列番号15の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号15と異なる配列を有する4B4 CDRL1、
e.配列番号17の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号17と異なる配列を有する4B4 CDRL2、
f.配列番号19の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号19と異なる配列を有する4B4 CDRL3、
g.配列番号9の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号9と異なる配列を有する12A7 CDRH1、
h.配列番号11の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号11と異なる配列を有する12A7 CDRH2、
i.配列番号13の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号13と異なる配列を有する12A7 CDRH3、
j.配列番号3の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号3と異なる配列を有する12A7 CDRL1、
k.配列番号5の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号5と異なる配列を有する12A7 CDRL2、及び
l.配列番号7の配列、又は1アミノ酸置換により配列番号7と異なる配列を有する12A7 CDRL3
から成る群から選択される少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)を含み、
(iii)配列番号33又は29に対し少なくとも85%、90%、95%、98%、99%又は100%同一である配列を有する重鎖可変領域を含み、
(iv)配列番号31又は27に対し少なくとも85%、90%、95%、98%、99%又は100%同一である配列を有する軽鎖可変領域配列を含み、又は
(v)(i)、(ii)、(iii)又は(iv)の抗体と競合する、前記抗体。
（２）1〜10nMの範囲のMcm5に対する親和性を有する、（１）記載の抗体。
（３）Fab'2、F'(ab)2、Fv、一本鎖抗体又はダイアボディである、（１）又は（２）記載の抗体。
（４）配列番号1のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する、（１）〜（３）のいずれか１記載の抗体。
（５）配列番号2のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する、（１）〜（３）のいずれか１記載の抗体。
（６）12A7 CDRH1、12A7 CDRH2、12A7 CDRH3、12A7 CDRL1、12A7 CDRL2、及び12A7 CDRL3から成る群から選択される、2つ以上、3つ以上、4つ以上、又は5つ以上のCDRを含む、（１）〜（４）のいずれか１記載の抗体。
（７）12A7 CDRH1、12A7 CDRH2、及び12A7 CDRH3を含む、（６）記載の抗体。
（８）12A7 CDRL1、12A7 CDRL2及び12A7 CDRL3を含む、（６）又は（７）記載の抗体。
（９）配列番号9の配列を有する12A7 CDRH1、配列番号11の配列を有する12A7 CDRH2、及び配列番号13の配列を有する12A7 CDRH3を含む、（６）〜（８）のいずれか１記載の抗体。
（１０）配列番号3の配列を有する12A7 CDRL1、配列番号5の配列を有する12A7 CDRL2、及び配列番号7の配列を有する12A7 CDRL3を含む、（６）〜（９）のいずれか１記載の抗体。
（１１）4B4 CDRH1、4B4 CDRH2、4B4 CDRH3、4B4 CDRL1、4B4 CDRL2、及び4B4 CDRL3から成る群から選択される、2つ以上、3つ以上、4つ以上、又は5つ以上のCDRを含む、（１）〜（３）のいずれか１記載の抗体。
（１２）4B4 CDRH1、4B4 CDRH2、及び4B4 CDRH3を含む、（１１）記載の抗体。
（１３）4B4 CDRL1、4B4 CDRL2及び4B4 CDRL3を含む、（１１）又は（１２）記載の抗体。
（１４）配列番号21の配列を有する4B4 CDRH1、配列番号23の配列を有する4B4 CDRH2、及び配列番号25の配列を有する4B4 CDRH3を含む、（１１）〜（１３）のいずれか１記載の抗体。
（１５）配列番号15の配列を有する4B4 CDRL1、配列番号17の配列を有する4B4 CDRL2、及び配列番号19の配列を有する4B4 CDRL3を含む、（１１）〜（１４）のいずれか１記載の抗体。
（１６）配列番号29に対し少なくとも95%同一である配列を有する重鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（４）又は（６）〜（１０）のいずれか１記載の抗体。
（１７）配列番号29に対し少なくとも98%同一である配列を有する重鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（４）、（６）〜（１０）又は（１６）のいずれか１記載の抗体。
（１８）配列番号27に対し少なくとも95%同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（４）、（６）〜（１０）又は（１６）〜（１７）のいずれか１記載の抗体。
（１９）配列番号27に対し少なくとも98%同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（４）、（６）〜（１０）又は（１６）〜（１８）のいずれか１記載の抗体。
（２０）配列番号33に対し少なくとも95%同一である配列を有する重鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（５）又は（１１）〜（１５）のいずれか１記載の抗体。
（２１）配列番号33に対し少なくとも98%同一である配列を有する重鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（５）、（１１）〜（１５）又は（２０）のいずれか１記載の抗体。
（２２）配列番号31に対し少なくとも95%同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（５）、（１１）〜（１５）又は（２０）〜（２１）のいずれか１記載の抗体。
（２３）配列番号31に対し少なくとも98%同一である配列を有する軽鎖可変領域を含む、（１）、（２）、（３）、（５）、（１１）〜（１５）又は（２０）〜（２２）のいずれか１記載の抗体。
（２４）（１）〜（２３）のいずれか１記載の抗体を含む組成物。
（２５）（１）〜（２３）のいずれか１記載の抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞株。
（２６）抗体がモノクローナル抗体である、（１）〜（２５）のいずれか１記載の抗体、組成物又はハイブリドーマ。
（２７）抗体が放射標識で標識されている、（１）〜（２６）のいずれか１記載の抗体、組成物又はハイブリドーマ。
（２８）放射標識がユーロピウムである、（２７）記載の抗体、組成物、又はハイブリドーマ。
（２９）（１）〜（２３）又は（２６）のいずれか１記載の抗体の重鎖を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
（３０）（１）〜（２３）又は（２６）のいずれか１記載の抗体の軽鎖を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
（３１）配列番号4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32又は34に対し少なくとも85%、90%、95%、98%、99%、又は100%同一である核酸配列を含むポリヌクレオチド。
（３２）配列番号4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32又は34の核酸配列を含むポリヌクレオチド。
（３３）（２９）〜（３２）のいずれか１記載の核酸を含むベクター。
（３４）（２９）〜（３２）のいずれか１記載の核酸又は（３３）記載のベクターを含む宿主細胞。
（３５）CHO細胞又は大腸菌細胞である、（３４）記載の宿主細胞。
（３６）(i)（２５）記載のハイブリドーマ細胞株又は（３４）若しくは（３５）記載の宿主細胞を増殖させるステップ、及び
(ii)ハイブリドーマ細胞株又は宿主細胞から抗体を単離するステップ
を含む、抗体を作製する方法。
（３７）抗体を放射標識にコンジュゲートさせることにより抗体を標識するステップをさらに含む、（３６）記載の方法。
（３８）抗体を固体支持体に固定化するステップをさらに含む、（３６）記載の方法。
（３９）(i)（１）〜（２３）のいずれか１記載の第1の抗体を含む組成物、及び
(ii)Mcm5に結合する第2の抗体を含む組成物
を含むキット。
（４０）(i)（４）、（６）〜（１０）又は（１６）〜（１９）のいずれか１記載の第1の抗体を含む組成物、及び
(ii)（５）、（１１）〜（１５）又は（２０）〜（２３）のいずれか１記載の第2の抗体を含む組成物
を含むキット。
（４１）試料中のMcm5の濃度又は量を決定する方法であって、
(i)固体支持体に固定化された、（１）〜（２３）又は（２６）のいずれか１記載の抗体である、固定化された第1の抗体を用意するステップ、
(ii)固定化された第1の抗体に試料中のMcm5が結合できるように、固定化された第1の抗体に試料を曝露して、固定化されたMcm5を用意するステップ、
(iii)標識にコンジュゲートさせた、（１）〜（２３）又は（２６）〜（２８）のいずれか１記載の抗体である、標識された第2の抗体を用意するステップ、
(iv)標識された第2の抗体がMcm5に結合できるように、標識された第2の抗体に固定化されたMcm5を曝露するステップ、及び
(v)標識された第2の抗体の濃度を検出するステップ
を含む、前記方法。
（４２）第1の抗体及び第2の抗体がともにMcm5に結合するが、第1の抗体及び第2の抗体がMcm5の異なるエピトープに結合する、（３９）若しくは（４０）記載のキット又は（４１）記載の方法。
（４３）第1の抗体が配列番号1に結合する、（３９）又は（４１）〜（４２）のいずれか１記載のキット又は方法。
（４４）第1の抗体が配列番号2に結合する、（３９）又は（４１）〜（４２）のいずれか１記載のキット又は方法。
（４５）第2の抗体が配列番号1に結合する、（３９）、（４１）〜（４２）又は（４４）のいずれか１記載のキット又は方法。
（４６）第2の抗体が配列番号2に結合する、（３９）又は（４１）〜（４４）のいずれか１記載のキット又は方法。
（４７）第1の抗体がELISAプレートに固定化されている、（３９）〜（４６）のいずれか１記載のキット又は方法。
（４８）第2の抗体がELISAプレートに固定化されている、（３９）〜（４０）又は（４２）〜（４６）のいずれか１記載のキット。
（４９）第2の抗体が放射性標識にコンジュゲートしている、（３９）〜（４７）のいずれか１記載のキット又は方法。
（５０）第1の抗体が放射性標識にコンジュゲートしている、（３９）〜（４０）、（４２）〜（４６）又は（４８）のいずれか１記載のキット。
（５１）放射性標識がユーロピウム3+である、（４９）又は（５０）記載のキット又は方法。
（５２）標識された第2の抗体の濃度を検出するステップが、Eu3+の免疫蛍光検出を含む、（４１）〜（５１）のいずれか１記載の方法。
（５３）（４１）〜（４７）又は（４９）のいずれか１記載の方法の実施における、（３９）〜（４０）若しくは（４２）〜（５１）のいずれか１記載のキット又は（１）〜（２３）若しくは（２６）のいずれか１記載の抗体の使用。