(57)【要約】１つの容器で、細胞観察とＰＣＲ処理を行うことができるＰＣＲ用容器を提供する。内部の底面１７ａが、平坦であり、かつ、底面の形状が円形または四角形以上の多角形であり、底面１７ａの大きさは、底面１７ａを外接する円に近似した時の直径Ｌが０．０５ｍｍφ以上１ｍｍφ以下であり、底面１７ａと隣接する側面１７ｂと、１７ａ底面とのなす側面側の角θＢの角度が５０°以上８０°以下であるＰＣＲ用容器である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＣＲ用容器であって、
内部の底面が、平坦であり、かつ、前記底面の形状が円形または四角形以上の多角形であり、
前記底面の大きさは、前記底面を外接する円に近似した時の直径が０．０５ｍｍφ以上１ｍｍφ以下であり、
前記底面と隣接する側面と、前記底面とのなす前記側面側の角度が５０°以上８０°以下であるＰＣＲ用容器。
【請求項２】
側面は、前記底面に対して異なる角度を有する二段以上の複数の傾斜面を有する請求項１に記載のＰＣＲ用容器。
【請求項３】
前記複数の傾斜面のうち、前記底面と接している傾斜面以外の傾斜面と、前記底面の平行線とのなす角で、側面側の角度が４０°以上９０°以下である請求項２に記載のＰＣＲ用容器。
【請求項４】
前記複数の傾斜面のうち、前記底面と接している傾斜面以外の傾斜面と、前記底面の平行線とのなす角で、側面側の角度が、前記ＰＣＲ用容器の開口部から前記底面に向かって小さくなる請求項２または３に記載のＰＣＲ用容器。
【請求項５】
前記底面に外接する円に近似した時の円の中心と前記ＰＣＲ用容器の開口部の端部とを結ぶ線が前記底面に対して垂直な直線となす角度の２倍の角が、４５°以下である請求項２から４のいずれか１項に記載のＰＣＲ用容器。
【請求項６】
前記底面の厚みが、０．２ｍｍ以上１ｍｍ以下である請求項１から５のいずれか１項に記載のＰＣＲ用容器。
【請求項７】
３５０ｎｍ以上８００ｎｍ以下の波長の光に対する透過率が６０％以上である請求項１から６のいずれか１項に記載のＰＣＲ用容器。
【請求項８】
材質が、ポリプロピレンまたはポリスチレンである請求項１から７のいずれか１項に記載のＰＣＲ用容器。
【請求項９】
前記ＰＣＲ用容器の内側に、細胞低付着処理が施されている請求項１から８のいずれか１項に記載のＰＣＲ容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＣＲ用容器に係り、特に、細胞撮影とＰＣＲ処理を兼用することができるＰＣＲ用容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
複数の細胞から目的細胞を取得する方法として、フローサイトメトリーにより、目的細胞を分取することが行われている。フローサイトメトリーは、細胞を流体中に分散させ、その流体を細かく流して、細胞を光学的に分析し、この分析結果に基づいて取得する細胞の判定、および、分取を行い、その後の細胞の解析を行うものである。【０００３】
また、複数の細胞をまとめてウエルスライド上に滴下し、微小なウエルに細胞を落とし、顕微鏡検査によって細胞画像を撮影し、得られた画像を解析して目的細胞を特定した後に、その特定した目的細胞をキャピラリーにより吸引し、ＰＣＲ（polymerase chain reaction）処理に用いられるウエルプレートに移す操作が行われている。【０００４】
このような顕微鏡検査や、ＰＣＲ処理に用いられるウエルプレートとしては、例えば、下記の特許文献１から５に記載のウエルプレートが挙げられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２０１０−５３１６４４号公報
【特許文献２】特表２００７−５２６７６７号公報
【特許文献３】特開２００９−２０４４５１号公報
【特許文献４】特表２０１４−５１８７５８号公報
【特許文献５】特表２００１−５０９２７２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１から５に記載されているウエルプレートは、画像撮影用、または、ＰＣＲ用のいずれかで使用されるものであって、細胞の画像撮影、および、ＰＣＲ処理の両方を行えるウエルプレートではなかった。また、この方法においては、操作が難しい、時間がかかる、キャピラリーが高額などの問題があった。【０００７】
また、フローサイトメトリーにおいては、分取した細胞の中において、目的の細胞である割合は、７割から８割程度であり、そのため、フローサイトメトリーにより分取した細胞の全てに対して、解析、または解析のための前処理を行うことは非効率であった。更に、ＰＣＲプレートの底面が平坦な構造ではないため、細胞に焦点を合わせることが難しく、ＰＣＲプレート上での細胞の観察は行われていなかった。【０００８】
本発明はこのような事情に鑑みてなされたものであり、１つの容器により、細胞観察とＰＣＲ処理のどちらも行うことが可能なＰＣＲ用容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は上記目的を達成するために、ＰＣＲ用容器であって、内部の底面が、平坦であり、かつ、底面の形状が円形または四角形以上の多角形であり、底面の大きさは、底面を外接する円に近似した時の直径が０．０５ｍｍφ以上１ｍｍφ以下であり、底面と隣接する側面と、底面とのなす側面側の角度が５０°以上８０°以下であるＰＣＲ用容器を提供する。【００１０】
本発明のＰＣＲ用容器によれば、容器内部の底面を平坦とすることにより、顕微鏡などを用いて細胞を撮像する際に、細胞全体に焦点を合わせることが容易となり、細胞の撮像を確実に行うことが可能となる。また、底面の形状を円形または四角形以上の多角形とし、底面の大きさを上記範囲とすることにより、通常用いられる倍率（５倍以上６３倍以下）の対物レンズを用いて撮像することにより、好ましい細胞の大きさで、かつ底面全体を１枚の画像により撮像することが可能となる。したがって、効率良く撮像、画像の解析を行うことができる。【００１１】
また、底面と隣接する側面と、底面とのなす側面側の角度を５０°以上とすることにより、底面と側面により形成される空間を狭くすることができる。そのため、少ない培養液の使用量で、細胞を液中に浸すことができ、また、容器中の培養液の深さを保つことができるので、細胞の乾燥を防止することができる。なお、「側面と底面とのなす側面側の角度」とは、側面と底面とのなす角の、容器の内部側と側面側の角のうち、側面側の角度のことをいう。【００１２】
さらに、底面に隣接する側面と底面とのなす側面側の角度を８０°以下とすることにより、ＰＣＲ用容器内の培養液中の気泡が抜け易くなり、気泡に影響されない良好な画像を撮像することができる。【００１３】
本発明の別の態様においては、側面は、底面に対して異なる角度を有する二段以上の複数の傾斜面を有することが好ましい。【００１４】
この態様において、複数の傾斜面のうち、底面と隣接している傾斜面以外の傾斜面と、底面の平行線とのなす角度が、底面に隣接する側面と底面とがなす側面側の角度よりも浅い角度を有する傾斜面を、少なくとも１つ有する態様のＰＣＲ容器である場合には、容器の開口部を広くすることが可能となり、細胞を容器内に導入することが容易となる。【００１５】
本発明の別の態様においては、底面と隣接していない傾斜面と、底面の平行線とのなす角で、側面側の角度が４０°以上９０°以下であることが好ましい。【００１６】
この態様によれば、側面を二段以上の複数の傾斜面を有し、底面と隣接していない側面と、底面の平行線とのなす角度を４０°以上とすることにより、細胞を容器内に導入した場合に、細胞が底面まで到達せずに側面である傾斜面にとどまってしまうことを防止することができる。【００１７】
本発明の別の態様においては、複数の傾斜面のうち、底面と接している傾斜面以外の傾斜面と、底面の平行線とのなす角で、側面側の角度が、ＰＣＲ用容器の開口部から底面に向かって小さくなることが好ましい。【００１８】
この態様によれば、側面を形成する傾斜面で、底面と接していない傾斜面の角度を、底面に向かって徐々に小さくすることにより、側面である傾斜面にとどまることなく、細胞を底面まで導入しやすくすることができる。【００１９】
本発明の別の態様においては、底面に外接する円に近似した時の円の中心と開口部の端部とを結ぶ線が底面に対して垂直な直線となす角度の２倍の角が、４５°以下であることが好ましい。【００２０】
この態様によれば、底面に外接する円に近似した時の円の中心と、開口部の端部とを結ぶ線が底面に対して垂直な直線となす角度の２倍の角を４５°以下とすることにより、開口部が広くなることを防止し、プレート上に配置した際のスペースを狭くすることができる。また、開口部を狭くすることにより、側面の傾斜の角度が大きくなるので、細胞を底面まで導きやすくすることができる。【００２１】
本発明の別の態様においては、底面の厚みが、０．２ｍｍ以上１ｍｍ以下であることが好ましい。【００２２】
この態様によれば、底面の厚みを上記範囲とすることにより、ＰＣＲ用容器の底面側から細胞を撮像した際に、細胞にレンズの焦点を当てることができ、良好な画像を撮像することができる。底面の厚みが０．２ｍｍ以上であると、焦点深度により、容器の外側のキズや付着したゴミなどが、撮像される画像に影響を及ぼすことがなくなり、細胞の画像のみを撮像することが可能となる。また、底面の厚みが１ｍｍ以下であると、レンズを細胞に接近させることが可能となるので、細胞の拡大画像を容易に取得することが可能となる。【００２３】
本発明の別の態様においては、３５０ｎｍ以上８００ｎｍ以下の波長の光に対する透過率が６０％以上であることが好ましい。【００２４】
この態様によれば、ＰＣＲ用容器に用いられる材料の上記波長の光に対する透過率を６０％以上とすることにより、良好な画像を撮像することができる。【００２５】
本発明の別の態様においては、材質が、ポリプロピレンまたはポリスチレンであることが好ましい。【００２６】
この態様は、ＰＣＲ用容器に用いられる材料を限定したものであり、ポリプロピレンまたはポリスチレンを用いることにより、容器の透明性を得ることができ、良好な画像を撮像することができる。また、ＰＣＲ処理においては、温度をかけて処理するため、上記の材料を用いることにより、耐熱性を確保することができる。【００２７】
本発明の別の態様においては、ＰＣＲ容器の内側に、細胞低付着処理が施されていることが好ましい。【００２８】
細胞低付着処理は、細胞すなわちタンパク質を、容器に付着させないようにする処理であり、ＰＣＲ容器の内部表面にタンパク質を吸着させない材料をコートする処理である。この態様によれば、容器の内壁への細胞付着を防止して、底面に確実に細胞を到達させることができ、細胞観察が可能となる。
【発明の効果】
【００２９】
本発明のＰＣＲ用容器によれば、細胞の撮像（観察）とＰＣＲ処理を、同じ容器内において行うことができる。したがって、画像を撮像した後に、容器内の細胞を移動させる操作が不要であり、効率良く、解析を行うことができる。また、キャピラリーなどの高価な器具が不要であり、解析に要するコストを下げることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】細胞を撮像する装置の構成を示す概略構成図である。
【図２】ＰＣＲ用容器の形状を示す断面図である。
【図３】撮像される画像とＰＣＲ用容器の底面のサイズとの関係を示した図である。
【図４】他の実施形態のＰＣＲ用容器の形状を示す断面図である。
【図５】さらに他の実施形態のＰＣＲ用容器の形状を示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、添付図面に従って本発明に係るＰＣＲ用容器について説明する。なお、本明細書において、「〜」とは、その前後に記載される数値を下限値および上限値として含む意味で使用される。
【００３２】
≪解析装置≫
まず、本実施形態のＰＣＲ用容器を適用し、画像を撮像する撮像装置を備える解析装置について説明する。
【００３３】
図１は、ＰＣＲ用容器に分取された目的細胞の撮像や、細胞からの光学情報を取得する装置の構成を示す概略構成図である。好ましい態様として、抗原抗体反応などによって分取した細胞に標識した蛍光色素からの蛍光発光の情報の取得や、可視光による細胞の光透過画像の取得が可能な解析装置である。
【００３４】
図１に示す解析装置１０は、対象となる細胞の発する蛍光を測定するための光を照射する蛍光用励起光源装置１２、細胞の透過光を測定するための光（可視光）を照射する明視野用光源装置１４、撮像の対象となる細胞１６を収納するＰＣＲ用容器１７およびプレート１８からなるトレー１９、および、レンズ２０、励起フィルタ２２、ダイクロイックミラー２４および蛍光フィルタ２６を保持したフィルタ群（フィルタキューブ）２８、ならびに、細胞１６からの蛍光および透過光を撮像する撮像装置３０を備える。
【００３５】
蛍光用励起光源装置１２は、高圧水銀ランプ、高圧キセノンランプ、ＬＥＤ（light emitting diode）、または、ＬＡＳＥＲ（light amplification by stimulated emission of radiation）などを用いることができる。これらの光源を用いることにより、細胞１６に照射する照射光の波長領域を狭くすることにより、精度の高い分析を確実に行うことが可能となる。また、蛍光用励起光源装置１２としては、タングステンランプ、ハロゲンランプ、白色ＬＥＤなどを用いることができる。これらの光源を用いる場合でも、励起フィルタ２２で、目的の波長のみ透過させることで、細胞１６に目的の波長の光を照射させることができる。なお、明視野用光源装置１４としても、蛍光用励起光源装置１２と同様の光源を用いることができる。
【００３６】
トレー１９は、プレート１８と、本実施形態のＰＣＲ用容器１７と、からなり、ＰＣＲ用容器１７は、観察対象となる細胞１６を保持する。細胞１６は、細胞培養液とともに、ＰＣＲ用容器１７に供される。ＰＣＲ用容器１７については、後述する。
【００３７】
レンズ２０は、蛍光用励起光源装置１２から出力された光により細胞１６が発した蛍光、および、明視野用光源装置１４から出力された光が細胞１６を透過した透過光を拡大する。レンズ２０は、光学測定に使用されるレンズを用いることができる。
【００３８】
フィルタ群２８は、励起フィルタ２２、ダイクロイックミラー２４、蛍光フィルタ２６を備える。このようなフィルタ群２８の具体例としては、フィルタキューブを用いることが好ましく、例えば、Zeiss Filter Set49 (DAPI)を用いることができる。蛍光用励起光源装置１２から照射された光は、励起フィルタ２２により、目的の波長領域の光のみを透過する。励起フィルタ２２を透過した光は、ダイクロイックミラー２４において、トレー１９の方向に反射する。蛍光用励起光源装置１２から出射した励起光により生じた、細胞１６からの蛍光発光は、レンズ２０、ダイクロイックミラー２４、蛍光フィルタ２６を経て撮像装置３０により撮像される。励起光により発光する蛍光は、励起光に比べてより長波長側の波長帯域を有するので、ダイクロイックミラー２４を使用することにより、蛍光発光のみを透過させることが可能となる。更に、励起光は透過させずに、蛍光のみを透過させる蛍光フィルタ２６を用いることにより、撮像装置３０によって細胞１６からの蛍光発光のみの情報により撮像することが可能となる。従って、撮像装置３０により撮像される画像が、励起光に影響されることなく、画像を取得することができ、蛍光発光情報による検査の精度を向上させることができる。
【００３９】
蛍光用励起光源装置１２から照射された光による蛍光撮影は、細胞の検査目的に応じて１つの細胞に対する複数の情報を取得するために、通常は複数の種類からなる色素を用いて免疫染色がなされる。この場合、この免疫染色された細胞の複数の種類の色素から生じる蛍光に対して、それぞれの色素の蛍光波長に適した透過特性または反射特性を有するフィルタ群を用いて撮影することにより、異なる波長の光学情報を独立して手得することができる。なお、明視野用光源装置１４により細胞１６の透過光を撮像する場合は、フィルタ群２８を取り外した状態で撮像する。これにより、透過光を撮像装置３０により撮像することができる。
【００４０】
撮像装置３０としては、トレー１９上のＰＣＲ用容器１７中に分取された細胞１６の蛍光または透過光を撮像することができれば特に限定されず、例えば、ＣＣＤ（charge-coupled device）カメラを用いることができる。
【００４１】
ＰＣＲ用容器に細胞を分取する方法としては、例えば、フローサイトメトリーにより行うことができる。また、複数の細胞をまとめて、ＰＣＲ用容器とプレートが一体となったトレー上に滴下し、遠心（１００ｒｐｍ・１分）または静置してＰＣＲ用容器に落とすことにより、ＰＣＲ用容器に分取することができる。ＰＣＲ用容器とプレートが一体となって形成されている場合には、プレートに、溝、切り取り線、または、印刷線などの切断導入機構を設けることが好ましい。この切断導入機構に従って、プレートを切断することにより、ＰＣＲ用容器を個別に処理することが可能となる。
【００４２】
≪ＰＣＲ用容器≫
図２は、本実施形態で用いられるＰＣＲ用容器１７の形状を示す断面図である。図１に示す解析装置１０においては、ＰＣＲ用容器１７の裏面側から励起光を照射し、ＰＣＲ用容器１７を透過したその励起光により発光した細胞から蛍光発光が生じる。この細胞の情報を含む蛍光を受光するため、これらの蛍光に対して、ＰＣＲ用容器１７の材質が、透明であること、自家蛍光しないこと、散乱しないこと、ＰＣＲにおいて行う温度サイクルに耐えられることなどの条件を満たす材質であることが必要となる。また、細胞１６を撮像するため、ＰＣＲ用容器１７の内部の底面１７ａが、平坦な形状である。ＰＣＲ用容器１７の底面１７ａを平坦とすることにより、焦点を細胞１６に合わせることが可能となり、底面１７ａに存在する細胞１６の画像解析を精度良く行うことができる。
【００４３】
また、底面１７ａの形状は、円形または四角形以上の多角形である。また、底面１７ａの大きさは、底面１７ａに外接する円に近似した時、円の直径Ｌが０．０５ｍｍφ以上１ｍｍφ以下であり、０．２ｍｍφ以上０．５ｍｍφ以下であることがより好ましい。なお、図２は、底面１７ａを円形として記載されている。底面１７ａの形状、大きさを上記の形状、サイズとすることにより、そして、５倍以上６３倍以下の倍率の対物レンズを用いることにより、好ましい細胞画像の大きさで、かつ１視野による撮影（ワンショット撮影）で、底面１７ａ全体を撮像することができる。細胞の検査目的に応じて１つの細胞に対する複数の情報を取得するために、通常は複数種類の色素を用いて免疫染色を行うことが好ましい。従って、細胞１６の撮像は、それぞれの色素からの蛍光情報と、明視野撮影を行って、撮影後に各画像を重ね合わせて、細胞の解析を行うことができる。
【００４４】
図３は、顕微鏡により撮像される画像撮像領域４０とＰＣＲ用容器の内部の平坦な底面との関係を示した図である。底面のサイズは、底面の直径Ｌが、画像撮影領域４０の直交する２辺、長辺ｅ、短辺ｄのうち短辺ｄの長さより短く、かつ、短辺ｄの長さの１／２以上とすることが好ましい。このように、底面の直径Ｌの長さをｄ＞Ｌ＞ｄ／２とすることにより、細胞が収納されるＰＣＲ用容器の内部の平坦な底面１７ａを、画像撮影領域４０内において、好ましい細胞画像の大きさで、かつ１視野による細胞の撮影が可能となる。この画像撮影領域４０のサイズは、顕微鏡の対物レンズの倍率と撮影カメラにより決定される。通常用いられるカメラを用いることにより、例えば、２０倍の対物レンズであれば、底面の直径Ｌを０．４ｍｍφとすることにより、画像撮影領域４０内に１枚で底面１７ａを撮像することができる。また、４０倍の対物レンズであれば底面の直径Ｌを０．２ｍｍφ、６３倍の対物レンズであれば直径Ｌを０．１ｍｍφ、５倍の対物レンズであれば直径Ｌを１ｍｍφとすることにより、１枚の画像で底面１７ａを撮像することができる。細胞を観察する倍率は高倍率が好ましいが、倍率が高くなるとＰＣＲ用容器の底面の凹凸などにより、画像解析の精度に影響が出始めることから、対物レンズの倍率は２０倍程度が好ましい。
【００４５】
図２において、底面１７ａに接している側面１７ｂは、底面１７ａと側面１７ｂとがなす角で側面側の角θＢの角度が５０°以上８０°以下である。底面１７ａと側面１７ｂとがなす角θＢの角度を８０°以下とすることにより、培養液中の気泡を抜きやすくすることができる。また、角θＢの角度を５０°以上、底面のサイズを、外接する円に近似した時、円の直径Ｌが０．０５ｍｍφ以上１ｍｍφ以下とすることにより、底面１７ａと側面１７ｂとで形成される空間を狭くすることができ、少ない培養液量で、細胞１６を培養液に浸すことができる。さらに、培養液、および、細胞１６が乾燥することを防止することができるとともに、培養液の深さを確保することにより、培養液の液面のメニスカスにより、光が屈折し、画像解析に影響を及ぼすことを防止することができる。この角θＢの角度は、５５°以上７０°以下とすることがより好ましい。
【００４６】
また、ＰＣＲ用容器１７の底面１７ａの厚みｔは０．２ｍｍ以上１ｍｍ以下とすることが好ましい。図１に示すように、細胞１６の撮像は、ＰＣＲ用容器１７の底面１７ａ側から撮像する態様が好ましい。底面１７ａの厚みが１ｍｍ以内であれば、レンズ２０が細胞１６に接近することが可能となり、好ましい。また、０．２ｍｍ以上であれば、焦点深度から、ＰＣＲ用容器１７の外側のキズや付着したゴミ、汚れなどの焦点がずれて、撮像される画像に影響を及ぼさず、細胞の画像のみを撮像することが可能となるため好ましい。底面１７ａの厚みｔは、０．３ｍｍ以上０．５ｍｍ以下が更に好ましく、０．４ｍｍが最も好ましい。
【００４７】
ＰＣＲ用容器１７の材質としては、画像を撮像する際に、光を透過しやすい材質とすることが好ましく、具体的には、ポリプロピレン、または、ポリスチレンから選択される材料を用いることができる。また、これらの材料を用いたＰＣＲ用容器は、耐熱性も優れており、ＰＣＲサーマルサイクラーに適用してもＰＣＲ用容器が劣化することなくＰＣＲ処理を行うことができる。これらの材料を用いて製造されたＰＣＲ用容器は、３５０ｎｍ以上８００ｎｍ以下の波長の光に対する透過率が６０％以上であることが好ましく、７０％以上であることがより好ましく、８０％以上であることがさらに好ましい。なお、本発明において、「透過率」とは、透過光を入射光により割った値（透過率＝透過光／入射光）であり、例えば１００の光束を入射させたときに透過した光束が６０であれば透過率は６０％と算出される。
【００４８】
ＰＣＲ用容器１７の外側の形状は、ＰＣＲ処理を行う装置、好ましくは、ＰＣＲサーマルサイクラーへの搭載が可能な形状であることが好ましい。ＰＣＲ処理を行う装置に対応させることにより、画像を撮像したＰＣＲ用容器のまま、ＰＣＲ処理を行うことができる。ＰＣＲサーマルサイクラーに搭載可能とする場合、ＰＣＲ処理を行う装置とＰＣＲ用容器１７の外形の隙間が狭いことが好ましい。ＰＣＲ用容器１７との隙間を小さくすることにより、温度を効率良くＰＣＲ用容器１７にかけることができる。また、ＰＣＲ処理を行う際に、温度を効率良くかけるためには、ＰＣＲ用容器の外側形状と内側形状がほぼ同じ（相似形）であることが好ましく、更には底面から開口部にかけて側面の厚さが均一であることがより好ましい。厚みを均一にすることにより、ＰＣＲ用容器内の細胞、および、培養液に効率良く、均一に熱が伝わることにより、ＰＣＲ処理を精度よく制御することが可能となる。
【００４９】
また、ＰＣＲ用容器１７の内部には、細胞低付着処理が施されていることが好ましい。細胞低付着処理は、細胞、すなわち、タンパク質がＰＣＲ用容器１７の内部に付着しないようにする処理であり、表面にタンパク質を吸着させない材料をコートする処理である。。ＰＣＲ用容器１７の内部へのタンパク質吸着の原因は、ＰＣＲ用容器１７の材料である樹脂表面の疎水性基とタンパク質中の疎水性基が結合する疎水性相互作用が主な原因とされている。したがって、細胞低付着処理は、親水性基を有する材料を用いてコーティングすることにより可能となる。
【００５０】
細胞低付着処理に用いられる材料として、ホスホコリン基を含む高分子（例えば、リピジュア（登録商標）（別名：ＭＰＣ（2-methacryloyloxyethylphosphorylcholine）ポリマー）（日油株式会社製））、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ＰＶＡ（polyvinyl alcohol）ヒドロゲル、ＢＳＡ（Bovine serum albumin）などの親水性基を有する材料を用いることができる。コーティング方法としては、上記材料を溶媒に分散させた分散液に、ディップ浸漬後、乾燥することにより、コーティングを行うことができる。
【００５１】
ＰＣＲ用容器１７の内部に細胞低付着処理を施すことにより、ＰＣＲ用容器１７の内壁への細胞の付着を防止して、底面１７ａに確実に細胞を到達させて、細胞観察を可能とすることができる。
【００５２】
図４は、他の実施形態のＰＣＲ用容器１１７の形状を示す断面図である。図４に示すように、側面は、多段で屈曲し、二段以上の傾斜面により形成することもできる。多段で屈曲している場合、底面１１７ａと接している側面１１７ｂ以外の側面１１７ｃは、それぞれの側面１１７ｃと底面１１７ａの平行線とがなす角で側面側の角θＣ１〜θＣ３の角度が４０°以上９０°以下であることが好ましい。角度が４０°以上であると、側面１１７ｃの傾斜面に細胞がとどまることがなくなり、細胞が底面までに確実に収納することが可能となる。また、角度が４０°以上であることにより、ＰＣＲ用容器１１７の開口部１１７ｄを狭くすることが可能となり、トレー１９の狭いスペースにおいて複数のＰＣＲ用容器を収納することが可能となるため、好ましい。
【００５３】
さらに、多段で屈曲している場合、底面１１７ａに接している側面１１７ｂを除き、開口部１１７ｄから底面１１７ａに向かって、角θＣ１〜θＣ３が、徐々に小さくなる、すなわち、θＣ１＞θＣ２＞θＣ３とすることが好ましい。このような構成とすることにより、ＰＣＲ用容器１１７内に分取された細胞を底面１７ａに導きやすくすることが可能となる。また、ＰＣＲ用容器１１７内の底面から二段目の角度（図４においては、角θＣ３）を小さくすることにより、ＰＣＲ用容器１１７内の培養液の量の調節を容易に行うことが可能となる。ピペットなどを用いてＰＣＲ用容器１１７内の培養液を抜く場合、側面１１７ｃにピペットをあてて培養液を抜くことにより、底面１１７ａと側面１１７ｂとにより形成されるＰＣＲ用容器の底面に近い空間にのみ培養液を残すことが可能となる。角θＣ１〜θＣ３の角度は、例えば、図４において、θＣ１＝９０°、θＣ２＝７５°、θＣ３＝４５°とすることができる。
【００５４】
また、底面１１７ａの中心（外接する円に近似した時の円の中心）と開口部１１７ｄの端部とを結ぶ線が底面に対して垂直な直線となす角度の２倍の角である角θＡの角度で最も広い角度が４５°未満であることが好ましい。角θＡの角度を４５°未満とすることにより、ＰＣＲ用容器１１７の開口部１１７ｄが広くなることを防止し、トレー１９のスペースを小さくすることが可能となる。
【００５５】
図５は、さらに別の実施形態のＰＣＲ用容器２１７の形状を示す断面図である。図４に示す実施形態のＰＣＲ用容器１１７とは、側面の屈曲する段数が異なっている。側面の屈曲する段数は限定されず、底面２１７ａに隣接する側面２１７ｂと、角θＢと異なる角度の角θＣで屈曲する側面２１７ｃの２段の傾斜面で形成することが可能である。
【符号の説明】
【００５６】
１０  解析装置
１２  蛍光用励起光源装置
１４  明視野光源装置
１６  細胞
１７、１１７、２１７  ＰＣＲ用容器
１７ａ、１１７ａ、２１７ａ  底面
１７ｂ、１１７ｂ、１１７ｃ、２１７ｂ、２１７ｃ  側面
１１７ｄ  開口部
１８  プレート
１９  トレー
２０  レンズ
２２  励起フィルタ
２４  ダイクロイックミラー
２６  蛍光フィルタ
２８  フィルタ群（フィルタキューブ）
３０  撮像装置
４０  画像撮影領域
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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