(57)【要約】  本発明は、心疾患の病変を非侵襲的に検出するための技術を提供することを目的とし、アルドステロン合成酵素に結合能を有する放射性標識化合物又はその塩を有効成分として含有する、心疾患の非侵襲的画像診断剤を提供する。
2017213247.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルドステロン合成酵素に結合能を有する放射性標識化合物又はその塩を有効成分として含有する、心疾患の非侵襲的画像診断剤。
【請求項２】
前記放射性標識化合物は、炭素−１１、フッ素−１８、塩素−３４ｍ、臭素−７６、ヨウ素−１２３又はヨウ素−１２４で標識されたものである、請求項１に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項３】
前記放射性標識化合物が下記一般式（１）で表わされる、請求項１に記載の非侵襲的画像診断剤。
【化１】
2017213247.tif 000005
〔上記一般式（１）中、Ｒ１は、水素原子又はＣＯ２Ｒａを示し、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン原子又はＣＯ２Ｒａを示し、Ｒ３は、水素原子又は炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を示し、Ｒ４は、水素原子、ヒドロキシ基又は炭素数１〜１０のアルコキシ基を示し、Ｒ５は、水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよい、炭素数１〜５の鎖状アルキル基、水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよい、炭素数３〜５の環状アルキル基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、又は、ｏ-、ｐ-もしくはｍ-ハロベンジル基を示し、Ａは、ＣＨ又は窒素原子を示し、Ｘ１及びＸ３は、各々独立して、水素原子又はハロゲン原子を示し、Ｘ２は、水素原子、ハロゲン原子又はニトリル基を示すが、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の少なくとも１つはハロゲン原子であり、Ｒａは、各々独立して、炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ２、Ｒ５、又は、Ｘ２のいずれか１つが放射性ハロゲン原子を含む。〕
【請求項４】
前記放射性標識化合物が下記一般式（２）で表わされる、請求項３に記載の非侵襲的画像診断剤。
【化２】
2017213247.tif 000006
〔式中、Ｒ１２は、水素原子、ハロゲン原子又はＣＯ２Ｒａを示し、Ｘ１１は、水素原子又はハロゲン原子を示し、Ｘ１２は、ハロゲン原子を示し、Ｘ１４は、水素原子、ハロゲン原子又はヒドロキシ基を示し、ｎは、１〜５の整数を示し、Ｒａは、炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ１２、Ｘ１２、又は、Ｘ１４が放射性ハロゲン原子である。〕
【請求項５】
前記一般式（２）中、Ｒ１２は、水素原子であり、Ｘ１２、又は、Ｘ１４が放射性ハロゲン原子である、請求項４に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項６】
前記一般式（２）中、ｎは、１〜３の整数を示す、請求項４又は５に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項７】
前記放射性ハロゲン原子は、フッ素−１８、塩素−３４ｍ、臭素−７６、ヨウ素−１２３又はヨウ素−１２４である、請求項３乃至６いずれか一項に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項８】
ポジトロン放出断層撮影又はシングルフォトン断層撮影に用いられるための請求項１乃至７いずれか一項に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項９】
前記心疾患が虚血性心疾患である、請求項１乃至８いずれか一項に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項１０】
前記虚血性心疾患は、冠動脈性心疾患狭心症、心筋梗塞、急性冠症候群又は虚血性心不全である、請求項９に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項１１】
前記心疾患が非虚血性心疾患である、請求項１乃至８いずれか一項に記載の非侵襲的画像診断剤。
【請求項１２】
前記非虚血性心疾患が、心筋炎、高血圧性心疾患、拡張型心筋症、肥大型心筋症又は非虚血性心不全である、請求項１１に記載の非侵襲的画像診断剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心疾患の非侵襲的画像診断剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性心不全では、心臓において心室肥大や線維化などの左室リモデリングが進行するが、レニン−アンジオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）の亢進がこの過程に関連していることが報告されている。ＲＡＡＳは体内で血圧を調整する循環系の調節機構であるが、近年、この全身循環系のＲＡＡＳに加え、心臓局所でのＲＡＡＳやアルドステロン合成系の存在を示すデータが報告されている。【０００３】
例えば、非特許文献１には、ヒト不全心でアルドステロンが合成・分泌されていることが心カテーテル検査の採血で示されたことが記載されている。【０００４】
また、非特許文献２には、アルドステロン合成酵素であるＣＹＰ１１Ｂ２の遺伝子発現が亢進していることが剖検心を用いた検討で明らかにされている。そして、このＣＹＰ１１Ｂ２の遺伝子発現の亢進が心筋の線維化や心臓機能障害と関連することが示されている。【０００５】
また、ＣＹＰ１１Ｂ２を選択的に阻害する化合物を種々開発し、ＣＹＰ１１Ｂ２を選択的に阻害することで、心血管疾患を治療しようとする試みがなされている（特許文献１〜３、非特許文献３〜５）。【０００６】
心血管疾患を対象にするものではないが、副腎の病変を描出し原発性アルドステロン症の画像診断を可能にすることを目的として、ＣＹＰ１１Ｂ２に高い選択性を示す放射性化合物も種々開発されている（特許文献４〜１１、非特許文献６）
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２０１３−５１２２７１号公報
【特許文献２】特表２０１１−５２０７９９号公報
【特許文献３】特表２０１４−５２６５３９号公報
【特許文献４】特表２０１３−５３４９１１号公報
【特許文献５】特開２０１４−１２９３１５号公報
【特許文献６】特開２０１５−０９３８３１号公報
【特許文献７】特開２０１５−０９３８３２号公報
【特許文献８】特開２０１５−０９３８３３号公報
【特許文献９】特開２０１５−１１０５６３号公報
【特許文献１０】特開２０１５−１９３５４５号公報
【特許文献１１】国際公開２０１５／１９９２０５パンフレット
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Mizuno, Y. et al, Circulation, vol. 103, p. 72-7 (2001)
【非特許文献２】Satoh, M. et al., Clinical Science, vol. 102, p. 381-386 (2002)
【非特許文献３】Grombein, C. M., European Journal of Medicinal Chemistry, vol. 89, p. 597-605 (2015)
【非特許文献４】Grombein, C. M., European Journal of Medicinal Chemistry, vol. 90, p. 788-796 (2015)
【非特許文献５】Martin, R. E. et al., Journal of Medicinal Chemistry, vol. 58, p. 8054-8065 (2015)
【非特許文献６】Abe, T., Journal of Clinical Endocrinol Metabolism, vol. 101, p. 1008-1015 (2016)
【発明の概要】
【０００９】
心臓でのＣＹＰ１１Ｂ２の発現を検出することが、心不全など心疾患の進行過程の評価に繋がる可能性が考えられる。しかし、これらの病変を検出できる非侵襲的な方法は現在存在していない。
【００１０】
生体内における分子レベルの変化を検出する方法の一つにシングルフォトン断層撮影（ＳＰＥＣＴ）及びポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）を用いた核医学診断が挙げられる。特許文献４〜１１及び非特許文献６には、ＣＹＰ１１Ｂ２に高い選択性を示すＳＰＥＣＴ又はＰＥＴ用トレーサが報告されているが、これらは副腎を標的としたものであり、心臓でのイメージングに適しているかという点は明らかになっていない。
【００１１】
また、心疾患患者の心臓局所でのＣＹＰ１１Ｂ２の発現が核医学診断で描出可能なレベルまで亢進しているか否かの知見は未だ得られていない。
【００１２】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、心疾患の病変を非侵襲的に検出するための技術を提供することにある。
【００１３】
本発明によれば、アルドステロン合成酵素に結合能を有する放射性標識化合物又はその塩を有効成分として含有する、心疾患の非侵襲的画像診断剤が提供される。
【００１４】
本発明によれば、心疾患の病変を非侵襲的に検出することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
上述した目的、およびその他の目的、特徴および利点は、以下に述べる好適な実施の形態、およびそれに付随する以下の図面によってさらに明らかになる。【００１６】
【図１】虚血性心疾患モデルラット心臓組織切片を用いたＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。（ａ）が切片の全体図であり、（ｂ）が非虚血部位の拡大図であり、（ｃ）及び（ｄ）が虚血再灌流部位の拡大図である。
【図２】６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）を投与した個体のオートラジオグラムの結果を示す図である。（ａ）は、各切片のオートラジオグラムを心基部から心尖部に向かって並べた図であり、（ｂ）は、（ａ）中、破線で囲んだオートラジオグラムを９０度回転させた後の拡大図である。
【図３】図２（ｂ）で示す心臓組織切片の隣接切片の染色結果を示す図である。（ａ）は、ＨＥ染色の結果を示す図であり、（ｂ）は、マッソン・トリクローム染色の結果を示す図であり、（ｃ）は、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。
【図４】６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）を用いたインビトロオートラジオグラフィーの結果を示す図である。（ａ）は、正常ラットの心臓組織切片を６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。（ｂ）〜（ｄ）は、虚血性心疾患モデルラットの心臓組織切片を６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。（ｅ）は、正常ラットの心臓組織切片を６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）、及び、５μｍｏｌ／Ｌの６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物１）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。（ｆ）〜（ｈ）は、虚血性心疾患モデルラットの心臓組織切片を６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）、及び、５μｍｏｌ／Ｌの６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物１）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。
【図５】１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）を用いたインビトロオートラジオグラフィーの結果を示す図である。（ａ）は、正常ラットの心臓組織切片を１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。（ｂ）は、虚血性心疾患モデルラットの心臓組織切片を１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。（ｃ）は、正常ラットの心臓組織切片を１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）、及び、５μｍｏｌ／Ｌの１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−ヨードベンゾイミダゾール（化合物２）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。（ｄ）は、虚血性心疾患モデルラットの心臓組織切片を１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）、及び、５μｍｏｌ／Ｌの１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−ヨードベンゾイミダゾール（化合物２）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。
【図６】１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）を用いた虚血性心疾患モデルラット心臓組織切片のオートラジオグラフィー及び染色の結果を示す図である。（ａ）は、オートラジオグラフィーの結果を示す図であり、（ｂ）は、マッソン・トリクローム染色の結果を示す図であり、（ｃ）は、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。
【図７】６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）及び１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）を用いたオートラジオグラフィーの結果の比較を示す図である。（ａ）は、６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）を含む液に浸漬した切片のオートラジオグラム上に設定したＲＯＩ（関心領域；Ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）の例を示す図である。（ｂ）は、６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（化合物［１８Ｆ］１）の虚血再灌流部位のシグナル強度／非虚血部位のシグナル強度比を個体別に棒グラフで示す図である。（ｃ）は、１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）を含む液に浸漬した切片のオートラジオグラム上に設定したＲＯＩの例を示す図である。（ｄ）は、１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）の虚血再灌流部位のシグナル強度／非虚血部位のシグナル強度比を個体別に棒グラフで示す図である。
【図８】正常ラット並びに虚血性心疾患モデルラット作製後１日、３日及び１週間のラット心臓を用いた１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）のオートラジオグラフィー及び染色の結果を示す図である。（ａ）は、虚血再灌流部位のシグナル強度／非虚血部位のシグナル強度比を棒グラフで示す図であり、（ｂ）は、マッソン・トリクローム染色の結果を示す図である。
【図９】１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（化合物［１２３Ｉ］２）のＳＰＥＣＴイメージング画像をＣｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ画像と重ね合わせて表示した図である。（ａ）が正常ラットの短軸断面画像であり、（ｂ）が正常ラットの水平長軸断面画像であり、（ｃ）が正常ラットの垂直長軸断面画像であり、（ｄ）が虚血性心疾患モデルラットの短軸断面画像であり、（ｅ）が虚血性心疾患モデルラットの水平長軸断面画像であり、（ｆ）が虚血性心疾患モデルラットの垂直長軸断面画像である。
【図１０】心筋炎モデルラット及び正常ラットの各心臓組織切片を用いたＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。（ａ）は心筋炎モデルラットの心臓組織切片の全体図であり、（ｂ）は（ａ）の拡大図であり、（ｃ）は正常ラットの心臓組織切片の全体図であり、（ｄ）は（ｃ）の拡大図である。
【図１１】２−［５−｛（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨード−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（化合物［１２３Ｉ］３）のインビトロオートラジオグラフィーの結果を示す図である。（ａ）は、正常ラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を示す図であり、（ｂ）は、心筋炎モデルラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を示す図であり、（ｃ）は、正常ラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を示す図であり、（ｄ）は、心筋炎モデルラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を示す図であり、（ｅ）は、正常ラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２免疫染色の結果を示す図であり、（ｆ）は、心筋炎モデルラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。
【図１２】高血圧性心疾患モデルラット及び正常ラットの各心臓組織切片を用いたＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。（ａ）は高血圧性心疾患モデルの心臓組織切片の全体図であり、（ｂ）は（ａ）の拡大図であり、（ｃ）は正常ラットの心臓組織切片の全体図であり、（ｄ）は（ｃ）の拡大図である。
【図１３】２−［５−｛（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨード−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（化合物［１２３Ｉ］３）のインビトロオートラジオグラフィーの結果を示す図である。（ａ）は、正常ラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を示す図であり、（ｂ）は、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を示す図であり、（ｃ）は、正常ラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を示す図であり、（ｄ）は、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を示す図であり、（ｅ）は、正常ラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２免疫染色の結果を示す図であり、（ｆ）は、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。
【図１４】２−［５−｛（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨード−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（化合物［１２３Ｉ］３）を用いたインビトロオートラジオグラフィーの結果を示す図である。（ａ）は、正常ラットの心臓組織切片を２−［５−｛（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨード−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（化合物［１２３Ｉ］３）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。（ｂ）は、虚血性心疾患モデルラットの心臓組織切片を２−［５−｛（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨード−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（化合物［１２３Ｉ］３）を含む液に浸漬させた結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、アルドステロン合成酵素に結合能を有する放射性標識化合物又はその塩を有効成分として含有する、心疾患の非侵襲的画像診断剤である。本発明の画像診断剤によれば、心臓の線維化が進行している部位を描出することができる。
【００１８】
本発明において「非侵襲的画像診断剤」とは、核医学診断に用いられるものであり、好ましくは、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）又はシングルフォトン断層撮影（ＳＰＥＣＴ）に用いられるものである。
【００１９】
本発明において「心疾患」とは、虚血性心疾患と非虚血性心疾患とを含むものであり、好ましくは、心臓の線維化により生じる疾患であり、一例として、心不全が挙げられる。
本発明において「虚血性心疾患」とは、心筋虚血により生じる心疾患であれば限定されず、例えば、冠動脈性心疾患狭心症、心筋梗塞、急性冠症候群、虚血性心不全などが挙げられる。
また、本発明において「非虚血性心疾患」とは、心筋炎、高血圧性心疾患、拡張型心筋症、肥大型心筋症、非虚血性心不全などが挙げられる。
【００２０】
本発明において、「放射性標識化合物」とは、核医学診断で使用される放射性同位元素で標識された化合物であれば限定されない。放射性同位元素としては、例えば、炭素−１１、フッ素−１８、塩素−３４ｍ、臭素−７６、ヨウ素−１２３又はヨウ素−１２４が挙げられる。本発明の非侵襲的画像診断剤は、放射性同位元素として炭素−１１、フッ素−１８、塩素−３４ｍ、ヨウ素−１２４等の陽電子放出核種を用いた場合は、ポジトロン放出断層撮影用の画像診断剤として用いることができ、放射性ハロゲン原子としてヨウ素−１２３を用いた場合は、シングルフォトン断層撮影用の画像診断剤として用いることができる。
【００２１】
本発明において、「アルドステロン合成酵素に結合能を有する」とは、ヒトＣＹＰ１１Ｂ２に対し結合能を有することを意味する。
【００２２】
本発明において「アルドステロン合成酵素に結合能を有する放射性標識化合物」としては、ヒトＣＹＰ１１Ｂ２に対し結合能を有するものであれば限定されないが、例えば、米国出願公開２００５／００３３０６０号公報、特表２００９−５３９８２２号公報に記載された副腎皮質腺腫や副腎皮質癌に親和性を有する放射性標識化合物や、特表２０１３−５３４９１１号公報、特開２０１４−１２９３１５号公報、特開２０１５−０９３８３１号公報、特開２０１５−０９３８３２号公報、特開２０１５−０９３８３３号公報、特開２０１５−１１０５６３号公報、特開２０１５−１９３５４５号公報、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットに記載されたＣＹＰ１１Ｂ２選択性を有する放射性標識化合物が挙げられる。また、特表２０１３−５１２２７１号公報、特表２０１１−５２０７９９号公報、特表２０１１−５２５８９４号公報、特表２０１２−５２６７７４号公報、特表２０１３−５１０８９６号公報、特表２０１４−５２６５３９号公報、特表２０１４−５２７０７７号公報、特表２０１４−５３３７３６号公報に記載された化合物の構成元素の一つを前述の放射性同位元素に置き換えたものであってもよい。
【００２３】
本発明において好ましい放射性標識化合物は、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットに記載された下記一般式（１）で表わされるものである。
【００２４】
【化１】
2017213247.tif 000003
【００２５】
上記一般式（１）中、Ｒ１は、水素原子又はＣＯ２Ｒａを示す。Ｒ２は、水素原子、ハロゲン原子又はＣＯ２Ｒａを示す。Ｒ３は、水素原子又は炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を示す。Ｒ４は、水素原子、ヒドロキシ基又は炭素数１〜１０のアルコキシ基を示す。Ｒ５は、水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよい、炭素数１〜５の鎖状アルキル基、水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよい、炭素数３〜５の環状アルキル基、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基、又は、ｏ-、ｐ-もしくはｍ-ハロベンジル基を示す。Ａは、ＣＨ又は窒素原子を示す。Ｘ１及びＸ３は、各々独立して、水素原子又はハロゲン原子を示す。Ｘ２は、水素原子、ハロゲン原子又はニトリル基を示すが、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３の少なくとも１つはハロゲン原子である。
【００２６】
上記一般式（１）の放射性標識化合物において、「ＣＯ２Ｒａ」は、カルボン酸エステル基である。Ｒａは、各々独立して、炭素数１〜１０のアルキル基であり、アルキル基は、直鎖であっても分岐鎖であってもよいが、好ましくは、炭素数１〜５のアルキル基（メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基）であり、より好ましくは炭素数１〜３のアルキル基（メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基）である。「ＣＯ２Ｒａ」としては、Ｒａがメチル基の「カルボン酸メチルエステル基」が特に好ましい。
【００２７】
また、上記一般式（１）の放射性標識化合物において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子である。
【００２８】
また、上記一般式（１）の化合物において、「ヒドロキシアルキル基」とは、−（ＣＨ２）ｍＯＨで表される基である。例えば、一般式（１）中、Ｒ３においては、ｍが１〜１０の整数であるが、好ましくは、１〜３の整数である。一般式（１）中、Ｒ５においては、ｍが１〜５の整数であるが、好ましくは、１〜３の整数である。
【００２９】
また、上記一般式（１）の放射性標識化合物において、「アルコキシ基」とは、直鎖又は分岐鎖のアルキル基が酸素原子に結合した基であり、好ましくは、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基が挙げられ、より好ましくはメトキシ基である。
【００３０】
上記一般式（１）の放射性標識化合物において、「鎖状アルキル基」としては、非環状アルキル基であり、直鎖状であっても分岐鎖状であってもよく、好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基が挙げられる。これらの鎖状アルキル基は、１又は２以上の水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよく、フッ素原子で置換されることが好ましい。具体的には、フルオロメチル基、１−フルオロエチル基、１，１−ジフルオロエチル基、１，１，１−トリフルオロエチル基、１−フルオロプロピル基が挙げられる。
【００３１】
また、上記一般式（１）の放射性標識化合物において、「環状アルキル基」としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基が挙げられる。これらの環状アルキル基は、１又は２以上の水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよい。
【００３２】
また、上記一般式（１）の放射性標識化合物において「ハロベンジル基」とは、ベンジル基のベンゼン環の２位、３位、又は４位の水素原子がハロゲン原子に置換されたものであり、２位の水素原子がハロゲン原子に置換されたものが、ｏ−ハロベンジル基であり、３位の水素原子がハロゲン原子に置換されたものが、ｍ−ハロベンジル基であり、４位の水素原子がハロゲン原子に置換されたものが、ｐ−ハロベンジル基である。中でも、ｐ−ハロベンジル基が好ましい。
【００３３】
上記一般式（１）の放射性標識化合物は、Ｒ２、Ｒ５、又は、Ｘ２のいずれか１つが放射性ハロゲン原子を含むものであるが、好ましくは、以下の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の構成を備えるものである。
（ａ）Ｒ２にハロゲン原子として放射性ハロゲン原子を用いる。
（ｂ）Ｒ５を−（ＣＨ２）ｎＸ４で表される基とし、かつ、Ｘ４のハロゲン原子として放射性ハロゲン原子を用いる。
（ｃ）Ｒ５をｐ−ハロベンジル基とし、かつ、ベンジル基の４位の導入されたハロゲン原子として放射性ハロゲン原子を用いる。
（ｄ）Ｘ２のハロゲン原子として放射性ハロゲン原子を用いる。
【００３４】
ここで「放射性ハロゲン原子」とは、フッ素−１８、塩素−３４ｍ、臭素−７６、ヨウ素−１２３又はヨウ素−１２４のいずれかをいう。
【００３５】
より好ましくは、上記一般式（１）中、Ｒ３は水素原子であり、Ｒ４は水素原子又は炭素数１〜１０のアルコキシ基であり、Ｒ５は水素原子がハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１〜５の鎖状アルキル基、炭素数３〜５の環状アルキル基、又は、ｏ-、ｐ-もしくはｍ-ハロベンジル基であり、Ｘ２はハロゲン原子であり、Ｘ３は水素原子である。Ｒ５は、より好ましくは、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、−（ＣＨ２）ｎＸ４（ただし、ｎは１〜５の整数を示し、Ｘ４はハロゲン原子を示す。）で表される基、シクロプロピル基、又は、ｐ−ハロベンジル基である。
【００３６】
また、更に好ましくは、上記一般式（１）において、Ｒ２は、水素原子又はハロゲン原子である。
【００３７】
また、更に好ましくは、上記一般式（１）において、Ｒ５がメチル基、エチル基、−（ＣＨ２）ｎＸ４で表される基、又は、シクロプロピル基である。−（ＣＨ２）ｎＸ４で表される基において、ｎは、１〜３の整数が好ましく、２又は３であることがより好ましく、２であることが更に好ましい。Ｘ４は、好ましくはフッ素原子である。
【００３８】
本発明に係る化合物の具体的態様の一つとして、一般式（２）で表される化合物が挙げられる。
【００３９】
【化２】
2017213247.tif 000004
【００４０】
一般式（２）中、Ｒ１２は、水素原子、ハロゲン原子又はＣＯ２Ｒａを示し、Ｘ１１は水素原子又はハロゲン原子を示し、Ｘ１２は、ハロゲン原子を示し、Ｘ１４は、水素原子、ハロゲン原子又はヒドロキシ基を示し、ｎは、１〜５の整数を示す。上記一般式（２）の放射性標識化合物において、「ＣＯ２Ｒａ」は、上記一般式（１）における定義と同義である。
【００４１】
一般式（２）で表される化合物は、一般式（１）中、Ｒ１が水素原子であり、Ｒ２が水素原子、ハロゲン原子、又はＣＯ２Ｒａ（ただし、Ｒａが炭素数１〜１０のアルキル基）であり、Ｒ３、Ｒ４が水素原子であり、Ｒ５が炭素数１〜５の鎖状アルキル基、又は−（ＣＨ２）ｎＸ１４で表される基であり、ＡがＣＨであり、Ｘ１が水素原子又はハロゲン原子であり、Ｘ２がハロゲン原子であり、Ｘ３が水素原子のものである。一般式（２）中、Ｒ１２は、水素原子又はＣＯ２Ｒａを示すものとしてもよいが、水素原子が好ましい。また、Ｘ１４は、好ましくは、水素原子又はフッ素原子であり、ｎは１〜３の整数が好ましい。
【００４２】
一般式（２）中、Ｒ１２、Ｘ１２、又は、Ｘ１４が放射性ハロゲン原子であるが、Ｘ１２、又は、Ｘ１４を放射性ハロゲン原子とすることが好ましく、Ｒ１２が水素原子であり、Ｘ１２、又は、Ｘ１４が放射性ハロゲン原子であることがより好ましく、この場合、ｎは１〜３の整数であることが更により好ましい。なお、放射性ハロゲン原子の定義は、前述の定義と同義である。
【００４３】
上記一般式（１）及び（２）で表わされる化合物は、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットに記載の方法で得ることができる。
【００４４】
本発明において、「塩」とは、医薬として許容されるものであればよい。例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、又は、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸（グルクロン酸、ガラクツロン酸など）、α−ヒドロキシ酸（クエン酸、酒石酸など）、アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸など）、芳香族酸（安息香酸、ケイ皮酸など）、スルホン酸（ｐ−トルエンスルホン酸、エタンスルホン酸など）などの有機酸から誘導される塩にすることができる。
【００４５】
本発明の非侵襲的画像診断剤は、上記の放射性標識化合物又はその塩を生体内への投与に適した形態で含む処方物である。この非侵襲的画像診断剤は、非経口的に、即ち注射によって投与することが好ましく、水溶液であることがより好ましい。かかる組成物は適宜、ｐＨ調節剤、製薬学的に許容される可溶化剤、安定剤又は酸化防止剤などの追加成分を含んでいてもよい。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。
下記実施例において、実験に供する化合物の名称を以下のように定義した。
化合物１：６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール
化合物［１８Ｆ］１：６−クロロ−５−フルオロ−１−（２−［１８Ｆ］フルオロエチル）−２−［５−（イミダゾール−１−イルメチル）ピリジン−３−イル］ベンゾイミダゾール（一般式（２）で表わされる化合物において、Ｒ１２は水素原子を示し、Ｘ１１はフッ素原子を示し、Ｘ１２は塩素原子を示し、Ｘ１４はフッ素−１８を示し、ｎは整数２を示す化合物）
化合物２：１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−ヨードベンゾイミダゾール
化合物［１２３Ｉ］２：１−（２−フルオロエチル）−２−［５−｛（イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨードベンゾイミダゾール（一般式（２）で表わされる化合物において、Ｒ１２は水素原子を示し、Ｘ１１は水素原子を示し、Ｘ１２はヨウ素−１２３を示し、Ｘ１４はフッ素原子を示し、ｎは整数２を示す化合物）
化合物３：２−［５−｛（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール
化合物［１２３Ｉ］３：２−［５−｛（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）メチル｝ピリジン−３−イル］−６−［１２３Ｉ］ヨード−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール（一般式（２）で表わされる化合物において、Ｒ１２は水素原子を示し、Ｘ１１は水素原子を示し、Ｘ１２はヨウ素−１２３を示し、Ｘ１４は水素原子を示し、ｎは整数１を示す化合物）【００４７】
化合物１については、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットの化合物１００の合成法に従って合成した。
化合物［１８Ｆ］１については、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットの化合物［１８Ｆ］１００の合成法に従って合成し、同開示のＴＬＣ条件下で放射化学的純度９５％以上のものを使用した。
化合物２については、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットの化合物６０４の合成法に従って合成した。
化合物［１２３Ｉ］２については、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットの化合物［１２３Ｉ］６０４の合成法に従って合成し、同開示のＴＬＣ条件下で放射化学的純度９５％以上のものを使用した。
化合物３については、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットの化合物６０７の合成法に従って合成した。
化合物［１２３Ｉ］３については、国際公開２０１５／１９９２０５パンフレットの化合物［１２３Ｉ］６０７の合成法に従って合成し、同開示のＴＬＣ条件下で放射化学的純度９５％以上のものを使用した。【００４８】
（実施例１）虚血性心疾患モデルラット心臓でのＣＹＰ１１Ｂ２発現評価
Ｗｉｓｔａｒラット（雄）をイソフルラン麻酔下で開胸し、左冠動脈を３０分間結紮した後、再灌流し、閉胸し、虚血性心疾患モデルラットを作製した。手術後約１週間に、ラットを麻酔下で屠殺、心臓を取出し、心基部側から５μｍ厚の切片を作製した。作製した切片を用い、免疫染色を実施し、ＣＰＹ１１Ｂ２の発現・分布を確認した。抗ＣＹＰ１１Ｂ２抗体は、Ogishima T et al, Endocrinology, 1992, vol. 130, pp.2971-7記載の方法に従って作製されたものを用い、二次抗体にはHRP Labelled Polymer Anti-Rabbit（Ｄａｋｏ社製）を用いた。二次抗体に結合するＨＲＰに対してＤＡＢ＋（３、３’−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド）・基質キット（Ｄａｋｏ社製）を適用することで、ＣＹＰ１１Ｂ２発現部位を検出した。【００４９】
結果を図１に示す。図１は、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。図１（ａ）が切片の全体図であり、図１（ｂ）が非虚血部位（図１（ａ）中のＲＯＩａ）の２０倍拡大図であり、図１（ｃ）が虚血再灌流部位（図１（ａ）中のＲＯＩｂ）の２０倍拡大図であり、図１（ｄ）が虚血再灌流部位（図１（ａ）中のＲＯＩｃ）の２０倍拡大図である。図１で示すように、虚血再灌流部位でＣＹＰ１１Ｂ２が発現していることが確認された。また、非虚血部位では、ＣＹＰ１１Ｂ２が発現していないか、発現が低いことが確認された。【００５０】
（実施例２）虚血性心疾患モデルラットを用いたエクスビボオートラジオグラフィー
実施例１と同様に虚血性心疾患モデルラットを作製し、手術後１週から３週の間に、化合物［１８Ｆ］１を投与した（約５０ＭＢｑ／匹）。投与後２０分に麻酔下でラットを屠殺し、心臓を取出し、心基部から心尖部に向かって２０μｍ厚の凍結切片を作製した。作製した切片をイメージングプレート（BAS-SR2040、富士フイルム社製）に２時間曝露し、フルオロ・イメージアナライザー（FLA-7000、ＧＥヘルスケア社製）でオートラジオグラムを取得した。
また、心基部側切片の隣接切片を用いて、ＨＥ染色、マッソン・トリクローム染色、実施例１と同様、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色をそれぞれ実施した。【００５１】
化合物［１８Ｆ］１を投与した個体の結果を図２〜３に示す。図２は、化合物［１８Ｆ］１を投与した個体のオートラジオグラムの結果を示す。図２（ａ）には、各切片のオートラジオグラムを心基部から心尖部に向かって並べて示す。図２（ｂ）は、図２（ａ）中、破線で囲んだオートグラムを９０度回転させた後の拡大図である。また、図３は、図２（ｂ）で示す切片の隣接切片の染色結果を示す。図３（ａ）は、ＨＥ染色の結果を示し、図３（ｂ）は、マッソン・トリクローム染色の結果を示し、図３（ｃ）は、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す。
図２で図示するように、化合物［１８Ｆ］１の局所的な集積が確認された。また、図３の染色結果から、化合物［１８Ｆ］１の集積部分に対応する位置に、炎症反応、線維化、ＣＹＰ１１Ｂ２の発現が確認された。【００５２】
（実施例３）虚血性心疾患モデルラットを用いたインビトロオートラジオグラフィー
実施例１と同様に虚血性心疾患モデルラットを作製し、手術後１週から３週の間にイソフルラン麻酔下で屠殺後、心臓を摘出して５μｍの切片を作製し、使用時まで−８０℃下で保存した。切片を−８０℃から室温へ戻し、３０分間以上乾燥させた後、リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬し、次に１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬することで親水化を行った。化合物［１８Ｆ］１（放射能濃度：約４０ｋＢｑ／ｍＬ）又は化合物［１２３Ｉ］２（放射能濃度：約１０ｋＢｑ／ｍＬ）を含む１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水をそれぞれ調製し、親水化した切片を室温下で３０分間浸漬した。その後、１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水の各溶液について５分間ずつ浸漬し、切片の洗浄を行った。洗浄後の切片を十分に乾燥した後、イメージングプレート（BAS-SR2040、富士フイルム社製）上で化合物［１８Ｆ］１は約３時間、化合物［１２３Ｉ］２は約１６時間露光させ、フルオロ・イメージアナライザー（FLA-7000、ＧＥヘルスケア社製）を用いてオートラジオグラムを取得した。
また、化合物［１８Ｆ］１及び化合物１を５μｍｏｌ／Ｌを含む液、又は、化合物［１２３Ｉ］２及び化合物２を５μｍｏｌ／Ｌを含む液に同様に切片を浸漬させ、オートラジオグラムを取得した。
また、正常ラットから摘出した心臓を用いて同様の実験を行った。【００５３】
化合物［１８Ｆ］１の結果を図４に示す。図４（ａ）、図４（ｅ）が正常ラットの切片であり、図４（ｂ）〜（ｄ）、（ｆ）〜（ｈ）が虚血性心疾患モデルラットの切片である。図４（ａ）〜（ｄ）が、化合物［１８Ｆ］１を含む液に浸漬させたものであり、図４（ｅ）〜（ｈ）が、化合物［１８Ｆ］１及び化合物１（５μｍｏｌ／Ｌ）を含む液に浸漬させたものである。図４で示すように、病変領域への化合物［１８Ｆ］１の集積が確認された。また、過剰量の非標識化合物を添加することで、集積が阻害されたことから、結合が特異的であることが示唆された。【００５４】
化合物［１２３Ｉ］２の結果を図５に示す。図５（ａ）、図５（ｃ）が正常ラットの切片であり、図５（ｂ）、（ｄ）が虚血性心疾患モデルラットの切片である。図５（ａ）、（ｂ）が、化合物［１２３Ｉ］２を含む液に浸漬させたものであり、図５（ｃ）、（ｄ）が、化合物［１２３Ｉ］２及び化合物２（５μｍｏｌ／Ｌ）を含む液に浸漬させたものである。図５で示すように、病変領域への化合物［１２３Ｉ］２の集積が確認された。また、過剰量の非標識化合物を添加することで、集積が阻害されたことから、結合が特異的であることが示唆された。【００５５】
図５（ｂ）の切片については、染色も行った。結果を図６に示す。図６（ａ）は、オートラジオグラフィーの結果を示す。図６（ｂ）は、マッソン・トリクローム染色の結果を示し、図６（ｃ）は、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す。図６で図示するように、化合物［１２３Ｉ］２の集積は線維化領域とよく一致した。また、虚血再灌流部位でのＣＹＰ１１Ｂ２の発現が確認された。【００５６】
化合物［１８Ｆ］１及び化合物［１２３Ｉ］２のオートラジオグラフィーについて、虚血再灌流部位及び非虚血部位にＲＯＩをとり、各部位のシグナル強度の比を比較した。その結果を図７に示す（ｎ＝４）。図７（ａ）は、化合物［１８Ｆ］１に浸漬した切片のオートラジオグラムの一例である。図７（ｃ）は、化合物［１２３Ｉ］２に浸漬した切片のオートラジオグラムの一例である。図７（ａ）、（ｃ）ともに、実線で囲んだものが虚血再灌流部位のＲＯＩであり、破線で囲んだものが非虚血部位のＲＯＩである。図７（ｂ）には、各ラットにおける化合物［１８Ｆ］１の虚血再灌流部位のシグナル強度／非虚血部位のシグナル強度比を棒グラフで示す。図７（ｄ）には、各ラットにおける化合物［１２３Ｉ］２の虚血再灌流部位のシグナル強度／非虚血部位のシグナル強度比を棒グラフで示す。図７で示すように、化合物［１８Ｆ］１及び化合物［１２３Ｉ］２の虚血再灌流部位での非虚血部位に比較した集積増加が認められた。また、化合物［１２３Ｉ］２は、化合物［１８Ｆ］１と比べて、高い集積が認められた。【００５７】
（実施例４）虚血性心疾患モデルラット作製後の時間経過による化合物集積への影響の検討
実施例１と同様に虚血性心疾患モデルラットを作製し、手術後１日（３匹）、３日（４匹）及び１週（４匹）にイソフルラン麻酔下で屠殺後、心臓を摘出して５μｍの切片を作製し、使用時まで−８０℃下で保存した。切片を−８０℃から室温へ戻し、３０分間以上乾燥させた後、リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬し、次に１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬することで親水化を行った。化合物［１２３Ｉ］２（放射能濃度：約１０ｋＢｑ／ｍＬ）を含む１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水を調製し、親水化した切片を室温下で３０分間浸漬した。その後、１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水の各溶液について５分間ずつ浸漬し、切片の洗浄を行った。洗浄後の切片を十分に乾燥した後、イメージングプレート（BAS-SR2040、富士フイルム社製）上で約１６時間露光させ、フルオロ・イメージアナライザー（FLA-7000、ＧＥヘルスケア社製）を用いてオートラジオグラムを取得した。
また、正常ラット（２匹）から摘出した心臓を用いて同様の実験を行った。【００５８】
結果を図８に示す。図８（ａ）は、正常ラット並びに虚血性心疾患モデルラット作製後１日、３日及び１週間の心臓を用いたオートラジオグラフィーでの、化合物［１２３Ｉ］２の虚血再灌流部位のシグナル強度／非虚血部位のシグナル強度比を棒グラフで示したものである。図８（ｂ）は、図８（ａ）で用いた切片の隣接切片を使用したマッソン・トリクローム染色の結果を示す。図８（ａ）で示すように、化合物［１２３Ｉ］２の集積は術後の時間経過に伴い増加した。また、図８（ｂ）で示すように、術後の時間経過に伴う線維化の促進が確認された。【００５９】
（実施例５）虚血性心疾患モデルラットを用いたＳＰＥＣＴ撮像実験
実施例１と同様に虚血性心疾患モデルラットを作製し、手術後１週間に化合物［１２３Ｉ］２を投与し（約１００ＭＢｑ／匹）、投与後１５０分より、動物用ＳＰＥＣＴ装置（FX３０００、TriFoil社製）を用い、約８分間のstatic撮像を実施した。収集は、１４３−１７５ｋｅＶのエネルギーウィンドウで実施し、収集したデータはＯＳＥＭ（Ordered Subset Expectation Maximization）法により再構成して画像化した。心臓の位置を特定するためにComputed Tomography撮像を実施した。また、正常ラットを用いて同様の実験を行った。【００６０】
結果を図９に示す。図９（ａ）〜（ｃ）に、正常ラットを用いた化合物［１２３Ｉ］２によるＳＰＥＣＴ撮像の結果を示す。図９（ａ）〜（ｃ）中、Ｈの矢印が心臓を示し、Ｌの矢印が肝臓を示す。図９（ｄ）〜（ｆ）に、虚血性心疾患モデルラットを用いた化合物［１２３Ｉ］２によるＳＰＥＣＴ撮像の結果を示す。図９（ｄ）〜（ｆ）中、ｉの矢印が虚血再灌流部位を示す。図９（ａ）、（ｄ）が短軸断面画像であり、図９（ｂ）、（ｅ）が水平長軸断面画像であり、図９（ｃ）、（ｆ）が垂直長軸断面画像である。図９のＳＰＥＣＴ画像は、いずれもComputed Tomography画像と重ね合わせて表示した。図９で示すように、虚血性心疾患モデルラット心臓において、正常ラット心臓で認められない、化合物［１２３Ｉ］２の集積が確認された。【００６１】
（実施例６）心筋炎モデルラット心臓でのＣＹＰ１１Ｂ２発現評価
Porcine heart cardiac myosin（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を５ｍｇ／ｍＬになるようリン酸緩衝液を用いて希釈した（溶液Ａ）。アジュバントコンプリートフロイント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）１０ｍＬに結核菌Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ）１００ｍｇを添加し、混和した（溶液Ｂ）。溶液Ａ及び溶液Ｂを１：１の割合で溶液が均一になるまで混合した（溶液Ｃ）。溶液ＣをＬｅｗｉｓラット（雄、７週齢、日本チャールズリバー）の左右の後肢足蹠に５０μＬずつイソフルラン麻酔下で投与した。免疫化後２１日まで飼育後、ラットを麻酔下で屠殺、心臓を取出し、５μｍ厚の切片を作製した。作製した切片を用い、免疫染色を実施し、ＣＰＹ１１Ｂ２の発現・分布を確認した。抗ＣＹＰ１１Ｂ２抗体は、Ogishima T et al, Endocrinology, 1992, vol. 130, pp.2971-7記載の方法に従って作製されたものを用い、二次抗体にはHRP Labelled Polymer Anti-Rabbit（Ｄａｋｏ社製）を用いた。二次抗体に結合するＨＲＰに対してＤＡＢ＋（３、３’−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド）・基質キット（Ｄａｋｏ社製）を適用することで、ＣＹＰ１１Ｂ２発現部位を検出した。また、Ｌｅｗｉｓラットを通常飼育したラット（正常ラット）から摘出した心臓を用いて同様の実験を行った。【００６２】
結果を図１０に示す。図１０は、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。図１０（ａ）は、心筋炎モデルの心臓組織切片の全体図であり、図１０（ｂ）は、図１０（ａ）中の病変部の４０倍拡大図である。図１０（ｃ）は、正常ラットの心臓組織切片の全体図であり、図１０（ｄ）は、図１０（ｃ）中の正常部の４０倍拡大図である。図１０で示すように、心筋炎モデルラットの心臓で、ＣＹＰ１１Ｂ２が発現していることが確認された。また、正常ラットの心臓には、ＣＹＰ１１Ｂ２が発現していないか、発現が低いことが確認された。【００６３】
（実施例７）心筋炎モデルラットを用いたインビトロオートラジオグラフィー
実施例６と同様に心筋炎モデルラットを作製し、心臓を摘出して５μｍの切片を作製し、使用時まで−８０℃下で保存した。切片を−８０℃から室温へ戻し、３０分間以上乾燥させた後、リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬し、次に１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬することで親水化を行った。化合物［１２３Ｉ］３（放射能濃度：約１０ｋＢｑ／ｍＬ）を含む１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水をそれぞれ調製し、親水化した切片を室温下で３０分間浸漬した。その後、１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水の各溶液について５分間ずつ浸漬し、切片の洗浄を行った。洗浄後の切片を十分に乾燥した後、イメージングプレート（BAS-SR2040、富士フイルム社製）上で化合物［１２３Ｉ］３を約１６時間露光させ、フルオロ・イメージアナライザー（FLA-7000、ＧＥヘルスケア社製）を用いてオートラジオグラムを取得した。また、正常ラットから摘出した心臓を用いて同様の実験を行った。オートラジオグラフィーに使用した切片の隣接切片を用いて、マッソン・トリクローム染色、実施例６と同様のＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色をそれぞれ実施した。【００６４】
化合物［１２３Ｉ］３のインビトロオートラジオグラフィーの結果を図１１に示す。図１１（ａ）は、正常ラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を、図１１（ｂ）は、心筋炎モデルラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を示す。図１１（ｃ）は、正常ラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を、図１１（ｄ）は、心筋炎モデルラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を示す。図１１（ｅ）は、正常ラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２免疫染色の結果を、図１１（ｆ）は、心筋炎モデルラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す。図１１で図示するように、心筋炎モデルラットの心臓組織切片において、正常ラットの心臓組織切片に比較した化合物［１２３Ｉ］３の集積増加が確認された。また、化合物［１２３Ｉ］３の集積は線維化領域とよく一致し、線維化領域でのＣＹＰ１１Ｂ２の発現が確認された。【００６５】
（実施例８）高血圧性心疾患モデルラット心臓でのＣＹＰ１１Ｂ２発現評価
DIS/Eis（Dahl-Iwai S）ラット（雄、日本エスエルシー）に５週齢から８％食塩添加飼料（オリエンタル酵母）を給餌し、１１週齢まで飼育後、ラットを麻酔下で屠殺、心臓を取出し、５μｍ厚の切片を作製した。作製した切片を用い、免疫染色を実施し、ＣＰＹ１１Ｂ２の発現・分布を確認した。抗ＣＹＰ１１Ｂ２抗体は、Ogishima T et al, Endocrinology, 1992, vol. 130, pp.2971-7記載の方法に従って作製されたものを用い、二次抗体にはHRP Labelled Polymer Anti-Rabbit（Ｄａｋｏ社製）を用いた。二次抗体に結合するＨＲＰに対してＤＡＢ＋（３、３’−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド）・基質キット（Ｄａｋｏ社製）を適用することで、ＣＹＰ１１Ｂ２発現部位を検出した。また、DIS/Eisラットを食塩非添加の飼料で飼育したラット（正常ラット）から摘出した心臓を用いて同様の実験を行った。【００６６】
結果を図１２に示す。図１２は、ＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す図である。図１２（ａ）は、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片の全体図であり、図１２（ｂ）は、図１２（ａ）中の病変部の４０倍拡大図である。図１２（ｃ）は、正常ラットの心臓組織切片の全体図であり、図１２（ｄ）は、図１２（ｃ）中の正常部の４０倍拡大図である。図１２で示すように、高血圧性心疾患モデルラット心臓で、ＣＹＰ１１Ｂ２が発現していることが確認された。また、正常ラットでは、ＣＹＰ１１Ｂ２が発現していないか、発現が低いことが確認された。【００６７】
（実施例９）高血圧性心疾患モデルラットを用いたインビトロオートラジオグラフィー 
実施例８と同様に高血圧性心疾患モデルラットを作製し、心臓を摘出して５μｍの切片を作製し、使用時まで−８０℃下で保存した。切片を−８０℃から室温へ戻し、３０分間以上乾燥させた後、リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬し、次に１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬することで親水化を行った。化合物［１２３Ｉ］３（放射能濃度：約１０ｋＢｑ／ｍＬ）を含む１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水をそれぞれ調製し、親水化した切片を室温下で３０分間浸漬した。その後、１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水の各溶液について５分間ずつ浸漬し、切片の洗浄を行った。洗浄後の切片を十分に乾燥した後、イメージングプレート（BAS-SR2040、富士フイルム社製）上で化合物［１２３Ｉ］３を約１６時間露光させ、フルオロ・イメージアナライザー（FLA-7000、ＧＥヘルスケア社製）を用いてオートラジオグラムを取得した。また、正常ラットから摘出した心臓を用いて同様の実験を行った。オートラジオグラフィーに使用した切片の隣接切片を用いて、マッソン・トリクローム染色、実施例８と同様のＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色をそれぞれ実施した。【００６８】
化合物［１２３Ｉ］３のインビトロオートラジオグラフィーの結果を図１３に示す。図１３（ａ）は、正常ラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を、図１３（ｂ）は、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片のオートラジオグラフィーの結果を示す。図１３（ｃ）は、正常ラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を、図１３（ｄ）は、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片のマッソン・トリクローム染色の結果を示す。図１３（ｅ）は、正常ラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２免疫染色の結果を、図１３（ｆ）は、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片のＣＹＰ１１Ｂ２の免疫染色の結果を示す。図１３で図示するように、高血圧性心疾患モデルラットの心臓組織切片において、正常ラットの心臓組織切片に比較した化合物［１２３Ｉ］３の集積増加が確認された。また、化合物［１２３Ｉ］３の集積は線維化領域とよく一致し、線維化領域でのＣＹＰ１１Ｂ２の発現が確認された。【００６９】
（実施例１０）虚血性心疾患モデルラットを用いたインビトロオートラジオグラフィー
実施例１と同様に虚血性心疾患モデルラットを作製し、手術後１週の間にイソフルラン麻酔下で屠殺後、心臓を摘出して５μｍの切片を作製し、使用時まで−８０℃下で保存した。切片を−８０℃から室温へ戻し、３０分間以上乾燥させた後、リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬し、次に１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水に３０分間浸漬することで親水化を行った。化合物［１２３Ｉ］３（放射能濃度：約１０ｋＢｑ／ｍＬ）を含む１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水をそれぞれ調製し、親水化した切片を室温下で３０分間浸漬した。その後、１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水の各溶液について５分間ずつ浸漬し、切片の洗浄を行った。洗浄後の切片を十分に乾燥した後、イメージングプレート（BAS-SR2040、富士フイルム社製）上で約１６時間露光させ、フルオロ・イメージアナライザー（FLA-7000、ＧＥヘルスケア社製）を用いてオートラジオグラムを取得した。また、正常ラットから摘出した心臓を用いて同様の実験を行った。【００７０】
結果を図１４に示す。図１４（ａ）が正常ラットの切片を化合物［１２３Ｉ］３を含む液に浸漬させたものであり、図１４（ｂ）が虚血性心疾患モデルラットの切片を化合物［１２３Ｉ］３を含む液に浸漬させたものである。図１４で示すように、正常ラットに比較した病変領域への化合物［１２３Ｉ］３の集積増加が確認された。【００７１】
以上の結果から、アルドステロン合成酵素に結合能を有する放射性標識化合物により、心疾患患者において、線維化進行等の心筋リモデリング過程の核医学診断が行えることが示唆された。【００７２】
この出願は、２０１６年６月１０日に出願された日本出願特願２０１６−１１５８０６号を基礎とする優先権を主張し、その開示の総てをここに取り込む。
【図１】
2017213247.tif 000007
【図２】
2017213247.tif 000008
【図３】
2017213247.tif 000009
【図４】
2017213247.tif 000010
【図５】
2017213247.tif 000011
【図６】
2017213247.tif 000012
【図７】
2017213247.tif 000013
【図８】
2017213247.tif 000014
【図９】
2017213247.tif 000015
【図１０】
2017213247.tif 000016
【図１１】
2017213247.tif 000017
【図１２】
2017213247.tif 000018
【図１３】
2017213247.tif 000019
【図１４】
2017213247.tif 000020
【国際調査報告】
2017213247.tif 000021
2017213247.tif 000022
2017213247.tif 000023
2017213247.tif 000024