【手続補正書】
【提出日】令和1年7月11日(2019.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子及び第２の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含む多標的分子であって、前記第１のｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖がその３’末端に一本鎖突出部を含み、及び前記第２のｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖がその３’末端に一本鎖突出部を含み、前記２つの一本鎖突出部の核酸配列が互いに対して実質的に相補的であり、前記２つの一本鎖突出部が二重鎖を形成し、さらに前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡがそれぞれ少なくとも１つのリガンドと共役する、多標的分子。
【請求項２】
第１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子及び第２の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含む多標的分子であって、前記第１のｓｉＲＮＡのセンス鎖がその３’末端に一本鎖突出部を含み、及び前記第２のｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖がその３’末端に一本鎖突出部を含み、前記センス鎖の一本鎖突出部の核酸配列が前記アンチセンス鎖の一本鎖突出部のヌクレオチド配列と実質的に相補的であり、前記２つの一本鎖突出部が二重鎖を形成し、さらに前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡがそれぞれ少なくとも１つのリガンドと共役する、多標的分子。
【請求項３】
前記第１及び第２のｓｉＲＮＡが、独立に、前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが一緒に連結されていない場合と比べて少なくとも７０％まで、それぞれの標的核酸の遺伝子発現を調節する、請求項１又は２に記載の多標的分子。
【請求項４】
前記第１のｓｉＲＮＡが第１の標的核酸の遺伝子発現を調節し、かつ前記第２のｓｉＲＮＡが第２の核酸の遺伝子発現を調節する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項５】
前記第１の標的核酸と前記第２の標的核酸が同じである、請求項４に記載の多標的分子。
【請求項６】
前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが同じ核酸配列をターゲティングする、請求項５に記載の多標的分子。
【請求項７】
少なくとも１つのリガンドがセンス鎖の１つと共役する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項８】
少なくとも１つのリガンドが、前記センス鎖の１つの３’末端、５’末端又は内部位置において共役する、請求項７に記載の多標的分子。
【請求項９】
少なくとも１つのリガンドがアンチセンス鎖の１つと共役する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項１０】
少なくとも１つのリガンドが、前記アンチセンス鎖の１つの３’末端、５’末端又は内部位置において共役する、請求項９に記載の多標的分子。
【請求項１１】
第１のリガンドがセンス鎖と共役し、かつ第２のリガンドがアンチセンス鎖と共役する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項１２】
前記第１のリガンドと共役するセンス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来し、かつ前記第２のリガンドと共役するアンチセンス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来する、請求項１１に記載の多標的分子。
【請求項１３】
前記第１のリガンドと共役するセンス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来し、かつ前記第２のリガンドと共役するアンチセンス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来する、請求項１１に記載の多標的分子。
【請求項１４】
前記第１のｓｉＲＮＡの一本鎖突出部が、全てＤＮＡ、全てＲＮＡ、又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドの混合物を含み、前記ＤＮＡ及びＲＮＡが天然又は修飾されたものであり得る、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項１５】
前記第２のｓｉＲＮＡの一本鎖突出部が、全てＤＮＡ、全てＲＮＡ、又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドの混合物を含み、前記ＤＮＡ及びＲＮＡが天然又は修飾されたものであり得る、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項１６】
前記２つの一本鎖突出部によって形成される二重鎖の５％未満がヌクレアーゼによって切断される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項１７】
前記２つの一本鎖突出部によって形成される二重鎖の少なくとも５０％がヌクレアーゼによって切断される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項１８】
修飾ヌクレオシド間結合、修飾核酸塩基、修飾糖、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される少なくとも１つの修飾を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の多標的分子。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの修飾が、センス鎖、アンチセンス鎖、前記第１のｓｉＲＮＡの一本鎖突出部、前記第２のｓｉＲＮＡの一本鎖突出部又はこれらの任意の組合せに含まれる、請求項１８に記載の多標的分子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０６１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０６１２】
本明細書において好ましい実施形態を示し、詳細に説明してきたが、当業者には、様々な改変形態、追加形態、代替形態などが本発明の趣旨を逸脱することなくなされ得、従って、これらは、以下の特許請求の範囲に定義する通り、本発明の範囲内であるとみなされることは明らかであろう。さらに、当業者であれば、既述していない範囲まで本明細書で説明及び例示した様々な実施形態のいずれか１つをさらに改変して、本明細書に開示する他の実施形態のいずれかに示される特徴を組み込み得ることは理解されよう。
他の実施形態
１．少なくとも２つのエフェクター分子を含む多標的分子であって、前記エフェクター分子が一緒に連結され、少なくとも１つのリガンドが前記多標的分子と共役され、前記多標的分子が、前記エフェクター分子が一緒に連結されていない場合と比べてそれぞれ少なくとも７０％だけ少なくとも２つの標的核酸の遺伝子発現を調節し、前記少なくとも２つのエフェクター分子が互いに重ならない、多標的分子。
２．前記少なくとも２つのエフェクター分子が互いに非共有的に連結され、及び前記少なくとも２つのエフェクター分子の各々が少なくとも１つのリガンドと共役される、実施形態１に記載の多標的分子。
３．前記非共有結合が前記少なくとも２つのエフェクター分子間のヌクレオチドのハイブリダイゼーションである、実施形態２に記載の多標的分子。
４．前記エフェクター分子が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、マイクロＲＮＡ、抗マイクロＲＮＡ又は抗ｍｉｒ、スーパーｍｉｒ、アンタゴｍｉｒ、リボザイム、三重鎖形成性オリゴヌクレオチド、デコイオリゴヌクレオチド、スプライススイッチングオリゴヌクレオチド、免疫刺激オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ活性化剤、Ｕ１アダプター、ＣＲＩＳＰＲ  Ｃａｓ及びこれらの組合せから選択される、実施形態１に記載の多標的分子。
５．前記エフェクター分子が一緒に連結されていない場合と比べてそれぞれ少なくとも７５％だけ少なくとも２つの標的核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態１に記載の多標的分子。
６．前記少なくとも２つのエフェクター分子の１つが第１の標的核酸の遺伝子発現を調節し、及び前記少なくとも２つのエフェクター分子のもう１つが第２の核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態５に記載の多標的分子。
７．前記第１の標的核酸及び前記第２の標的核酸が同じである、実施形態６に記載の多標的分子。
８．前記第１の標的核酸及び前記第２の標的核酸が同じヌクレオチド配列をターゲティングする、実施形態７に記載の多標的分子。
９．前記リガンドが前記少なくとも２つのエフェクター分子の１つの３’末端において共役される、実施形態１に記載の多標的分子。
１０．前記リガンドが前記少なくとも２つのエフェクター分子の１つの５’末端において共役される、実施形態１に記載の多標的分子。
１１．第１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子及び第２の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含む多標的分子であって、前記第１のｓｉＲＮＡのセンス鎖がその３’末端に一本鎖突出部を含み、及び前記第２のｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖がその３’末端に一本鎖突出部を含み、前記センス鎖の前記一本鎖突出部の核酸配列が前記アンチセンス鎖の前記一本鎖突出部のヌクレオチド配列と実質的に相補的であり、前記２つの一本鎖突出部が二重鎖を形成し、前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡがそれぞれ少なくとも１つのリガンドと共役される、多標的分子。
１２．前記第１及び第２のｓｉＲＮＡが、独立に、前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが一緒に連結されていない場合と比べて少なくとも７０％だけそれらのそれぞれの標的核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態１１に記載の多標的分子。
１３．前記第１のｓｉＲＮＡが第１の標的核酸の遺伝子発現を調節し、及び前記第２のｓｉＲＮＡが第２の核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態１１又は１２に記載の多標的分子。
１４．前記第１の標的核酸及び前記第２の標的核酸が同じである、実施形態１３に記載の多標的分子。
１５．前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが同じ核酸配列をターゲティングする、実施形態１４に記載の多標的分子。
１６．少なくとも１つのリガンドが前記センス鎖の１つと共役される、実施形態１１〜１５のいずれかに記載の多標的分子。
１７．少なくとも１つのリガンドが前記センス鎖の１つの前記３’末端、５’末端又は内部位置において共役される、実施形態１６に記載の多標的分子。
１８．少なくとも１つのリガンドが前記アンチセンス鎖の１つと共役される、実施形態１１〜１６のいずれかに記載の多標的分子。
１９．少なくとも１つのリガンドが前記アンチセンス鎖の１つの前記３’末端、５’末端又は内部位置において共役される、実施形態１８に記載の多標的分子。
２０．第１のリガンドがセンス鎖と共役され、及び第２のリガンドがアンチセンス鎖と共役される、実施形態１１〜１９のいずれかに記載の多標的分子。
２１．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態２０に記載の多標的分子。
２２．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態２０に記載の多標的分子。
２３．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖も前記第１のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態２０に記載の多標的分子。
２４．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖も前記第２のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態２０に記載の多標的分子。
２５．前記センス鎖の前記一本鎖突出部が全てＤＮＡ、全てＲＮＡ又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドの混合物を含み、前記ＤＮＡ及びＲＮＡが天然又は修飾されたものであり得る、実施形態１１〜２４のいずれかに記載の多標的分子。
２６．前記アンチセンス鎖の前記一本鎖突出部が全てＤＮＡ、全てＲＮＡ又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドの混合物を含み、前記ＤＮＡ及びＲＮＡが天然又は修飾されたものであり得る、実施形態１１〜２５のいずれかに記載の多標的分子。
２７．前記２つの一本鎖突出部によって形成される前記二重鎖の５％未満がヌクレアーゼによって切断される、実施形態１１〜２６のいずれかに記載の多標的分子。
２８．前記２つの一本鎖突出部によって形成される前記二重鎖の少なくとも５０％がヌクレアーゼによって切断される、実施形態１１〜２６のいずれかに記載の多標的分子。
２９．修飾ヌクレオシド間結合、修飾核酸塩基、修飾糖、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの修飾を含む、実施形態１１〜１８のいずれかに記載の多標的分子。
３０．前記少なくとも１つの修飾が、センス鎖、アンチセンス鎖、前記センス鎖の一本鎖突出部、前記アンチセンス鎖の一本鎖突出部又はこれらの任意の組合せに含まれる、実施形態２９に記載の多標的分子。
３１．第１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子及び第２の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含む多標的分子であって、前記第１のｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖が３’末端に一本鎖突出部を含み、及び前記第２のｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖が３’末端に一本鎖突出部を含み、前記２つの一本鎖突出部核酸配列の核酸配列が互いに対して実質的に相補的であり、及び前記２つの一本鎖突出部が二重鎖を形成し、前記２つの一本鎖突出部が二重鎖を形成し、前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡがそれぞれ少なくとも１つのリガンドと共役される、多標的分子。
３２．前記第１及び第２のｓｉＲＮＡが、独立に、前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが一緒に連結されていない場合と比べて少なくとも７０％だけそれらのそれぞれの標的核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態３１に記載の多標的分子。
３３．前記第１のｓｉＲＮＡが第１の標的核酸の遺伝子発現を調節し、及び前記第２のｓｉＲＮＡが第２の核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態３１又は３２に記載の多標的分子。
３４．前記第１の標的核酸及び前記第２の標的核酸が同じである、実施形態３３に記載の多標的分子。
３５．前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが同じ核酸配列をターゲティングする、実施形態３４に記載の多標的分子。
３６．前記リガンドの少なくとも１つがセンス鎖の１つと共役される、実施形態３１〜３５のいずれかに記載の多標的分子。
３７．前記リガンドの少なくとも１つが前記センス鎖の１つの３’末端、５’末端又は内部位置において共役される、実施形態３６に記載の多標的分子。
３８．前記リガンドの少なくとも１つが前記アンチセンス鎖の１つと共役される、実施形態３１〜３６のいずれかに記載の多標的分子。
３９．前記リガンドの少なくとも１つが前記アンチセンス鎖の１つの前記３’末端、５’末端又は内部位置において共役される、実施形態３８に記載の多標的分子。
４０．第１のリガンドがセンス鎖と共役され、及び第２のリガンドがアンチセンス鎖と共役される、実施形態３１〜３９のいずれかに記載の多標的分子。
４１．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態４０に記載の多標的分子。
４２．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態４０に記載の多標的分子。
４３．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第１のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖も前記第１のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態４０に記載の多標的分子。
４４．前記第１のリガンドと共役される前記センス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡに由来し、及び前記第２のリガンドと共役される前記アンチセンス鎖も前記第２のｓｉＲＮＡに由来する、実施形態４０に記載の多標的分子。
４５．前記第１のｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖の前記一本鎖突出部が全てＤＮＡ、全てＲＮＡ又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドの混合物を含む、実施形態３１〜４４のいずれかに記載の多標的分子。
４６．前記第２のｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖の前記一本鎖突出部が全てＤＮＡ、全てＲＮＡ又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチドの混合物を含む、実施形態３１〜４５のいずれかに記載の多標的分子。
４７．前記２つの一本鎖突出部によって形成される前記二重鎖の５％未満がヌクレアーゼによって切断される、実施形態３１〜４６のいずれかに記載の多標的分子。
４８．前記２つの一本鎖突出部によって形成される前記二重鎖の少なくとも５０％がヌクレアーゼによって切断される、実施形態３１〜４６のいずれかに記載の多標的分子。
４９．修飾ヌクレオシド間結合、修飾核酸塩基、修飾糖、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの修飾を含む、実施形態３１〜４８のいずれかに記載の多標的分子。
５０．前記少なくとも１つの修飾が、センス鎖、アンチセンス鎖、前記第１のｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖の一本鎖突出部、前記第２のｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖の一本鎖突出部、又はこれらの任意の組合せに含まれる、実施形態３９に記載の多標的分子。
５１．第１の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子及び第２の二本鎖ｓｉＲＮＡ分子を含む多標的分子であって、前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが互いに共有結合され、少なくとも１つのリガンドが前記多標的分子と共役される、多標的分子。
５２．前記第１のｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖に共有結合される、実施形態５１に記載の多標的分子。
５３．前記第１のｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス鎖に共有結合される、実施形態５１に記載の多標的分子。
５４．前記第１のｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス鎖が前記第２のｓｉＲＮＡ分子のアンチセンス鎖に共有結合される、実施形態５１に記載の多標的分子。
５５．前記第１及び第２のｓｉＲＮＡが、独立に、前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが前記多標的分子の一部でない場合と比べて少なくとも７０％だけそれらのそれぞれの標的核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態５１〜５３のいずれかに記載の多標的分子。
５６．前記第１のｓｉＲＮＡが第１の標的核酸の遺伝子発現を調節し、及び前記第２のｓｉＲＮＡが第２の核酸の遺伝子発現を調節する、実施形態５１〜５５のいずれかに記載の多標的分子。
５７．前記第１の標的核酸及び前記第２の標的核酸が同じである、実施形態５６に記載の多標的分子。
５８．前記第１のｓｉＲＮＡ及び前記第２のｓｉＲＮＡが同じ核酸配列をターゲティングする、実施形態５７に記載の多標的分子。
５９．前記リガンドが前記センス鎖の１つと共役される、実施形態５１〜５８のいずれかに記載の多標的分子。
６０．前記リガンドが前記センス鎖の１つの３’末端において共役される、実施形態５９に記載の多標的分子。
６１．前記リガンドが前記センス鎖の１つの５’末端において共役される、実施形態５９に記載の多標的分子。
６２．前記リガンドが前記アンチセンス鎖の１つの３’末端において共役される、実施形態５９に記載の多標的分子。
６３．前記リガンドが前記アンチセンス鎖の１つの５’末端において共役される、実施形態５９に記載の多標的分子。
６４．前記第１のｓｉＲＮＡ分子及び前記第２のｓｉＲＮＡ分子がヌクレオチドベースのリンカーを介して互いに連結される、実施形態５１〜６０のいずれかに記載の多標的分子。
６５．前記リンカーが一本鎖である、実施形態６４に記載の多標的分子。
６６．前記リンカーが二本鎖である、実施形態６４に記載の多標的分子。
６７．前記二本鎖リンカーが一本鎖領域を含む、実施形態６６に記載の多標的分子。
６８．前記第１のｓｉＲＮＡ分子及び前記第２のｓｉＲＮＡ分子が非ヌクレオチドベースのリンカーを介して互いに連結される、実施形態５１〜６０のいずれかに記載の多標的分子。
６９．前記２つのセンス鎖を連結する前記リンカーが切断可能なリンカーである、実施形態６４〜６８のいずれかに記載の多標的分子。
７０．前記リガンドが前記リンカーに共役される、実施形態６４〜６８のいずれかに記載の多標的分子。
７１．修飾ヌクレオシド間結合、修飾核酸塩基、修飾糖、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの修飾を含む、実施形態５１〜７０のいずれかに記載の多標的分子。
７２．前記少なくとも１つの修飾が、センス鎖、アンチセンス鎖又は前記少なくとも２つのｓｉＲＮＡ分子を連結する前記リンカーに含まれる、実施形態７１に記載の多標的分子。
７３．前記リンカーが、ロックド核酸、２’−Ｏ−アルキルヌクレオシド、２’−ハロヌクレオシド、２’−アミノヌクレオシド、２’−Ｓ−アルキルヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、２’−シアノヌクレオシド、２’−メルカプトヌクレオシド；２’−ＭＯＥヌクレオシド、アクリルヌクレオシド、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの核酸修飾を含む、実施形態７１又は７２に記載の多標的分子。
７４．前記リンカーが、リン酸ジエステル、リン酸トリエステル、ホスホン酸水素、アルキル又はアリールホスホネート、ホスホロアミデート、ホスホロチオエート、メチレンメチルイミノ、チオジエステル、チオノカルバメート、Ｎ，Ｎ’−ジメチルヒドラジン、ホスホロセレネート、ボラノホスフェート、ボラノリン酸エステル、アミド、ヒドロキシアミノ、シロキサン、ジアルキルシロキサン、カルボキサミド、炭酸塩、カルボキシメチル、カルバメート、カルボン酸エステル、チオエーテル、エチレンオキシドリンカー、硫化物、スルホン酸塩、スルホンアミド、スルホン酸エステル、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンカルボニルアミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾ、メチレンオキシメチルイミノ、エーテル、チオエーテル、チオアセトアミド、これらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、実施形態５１〜７３のいずれかに記載の多標的分子。