【手続補正書】
【提出日】令和1年9月6日(2019.9.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも４つの導入遺伝子を含むトランスジェニックブタであって、前記少なくとも４つの導入遺伝子は、少なくとも２つのプロモーターの制御下で単一の遺伝子座において組み込まれ、発現されており、前記ブタは、アルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼの発現を欠く、トランスジェニックブタ。
【請求項２】
（ａ）前記単一の遺伝子座が天然の遺伝子座であるか；
（ｂ）前記単一の遺伝子座が改変された天然の遺伝子座であり、必要に応じて、ｉ）前記改変された天然の遺伝子座が遺伝子編集媒介挿入、欠失または置換を含むか、またはｉｉ）トランスジェニックＤＮＡを含み、さらに必要に応じて、前記トランスジェニックＤＮＡが選択可能マーカー遺伝子またはランディングパッドを含むか；
（ｃ）前記単一の遺伝子座が、ＡＡＶＳ１、ＲＯＳＡ２６、ＣＭＡＨ、β４ＧａｌＮＴ２およびＧＧＴＡ１からなる群から選択されるか；
（ｄ）前記単一の遺伝子座が天然のＧＧＴＡ１遺伝子座であるか；
（ｅ）前記単一の遺伝子座が改変されたＧＧＴＡ１遺伝子座であるか；
（ｆ）前記単一の遺伝子座がトランスジェニックＧＧＴＡ１遺伝子座であるか；
（ｇ）前記プロモーターの少なくとも１つが構成的プロモーターであるか；
（ｈ）前記プロモーターの少なくとも１つが調節可能なプロモーターであり、必要に応じて、前記調節可能なプロモーターが組織特異的プロモーターまたは誘導可能なプロモーターであるか；
（ｉ）前記プロモーターの少なくとも１つが外因性プロモーターであるか；
（ｊ）少なくとも４つのプロモーターを含み、前記少なくとも４つの導入遺伝子の各々が専用のプロモーターによって制御されるか；または
（ｋ）前記少なくとも２つのプロモーターがＣＡＧおよびＩＣＡＭ−２を含む、請求項１に記載のトランスジェニックブタ。
【請求項３】
前記少なくとも４つの導入遺伝子が第１のポリシストロンおよび第２のポリシストロンとして発現され、前記少なくとも２つのプロモーターが前記第１のポリシストロンの発現を制御する第１のプロモーターおよび前記第２のポリシストロンの発現を制御する第２のプロモーターを含み、必要に応じて、
（ｉ）前記第１のプロモーターが構成的プロモーターであり、前記第２のプロモーターが組織特異的プロモーターであり、必要に応じて、前記組織特異的プロモーターが内皮細胞特異的プロモーターであるか、または
（ｉｉ）前記第１のプロモーターおよび前記第２のプロモーターが構成的プロモーターである、請求項１に記載のトランスジェニックブタ。
【請求項４】
前記少なくとも４つの導入遺伝子が抗凝固因子、補体阻害因子、免疫調節因子、細胞保護導入遺伝子およびそれらの組合せからなる群から選択され、必要に応じて、
（ａ）前記抗凝固因子がＴＢＭ、ＴＦＰＩ、ＥＰＣＲ、ＣＤ３９およびそれらの組合せからなる群から選択されるか；
（ｂ）前記補体阻害因子がＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９およびそれらの組合せからなる群から選択されるか；
（ｃ）前記免疫調節因子が免疫抑制因子であり、必要に応じて、前記免疫抑制因子がブタのＣＬＴＡ４−ＩＧ、ＣＩＩＴＡ−ＤＮおよびそれらの組合せからなる群から選択されるか；
（ｄ）前記免疫調節因子がＣＤ４７であるか；または
（ｅ）前記細胞保護導入遺伝子がＨＯ−１、Ａ２０およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載のトランスジェニックブタ。
【請求項５】
前記導入遺伝子の少なくとも２つが抗凝固因子であり、必要に応じて、前記導入遺伝子の少なくとも１つが：
（ａ）細胞保護導入遺伝子である
（ｂ）免疫調節因子である；および／または
（ｃ）補体阻害因子である、請求項１に記載のトランスジェニックブタ。
【請求項６】
少なくとも１つのさらなる遺伝子改変をさらに含み、
（ａ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ヒト血小板の自発的な凝集を低減または排除するためのブタｖＷＦ遺伝子座の改変を含むか；
（ｂ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がキメラのブタ−ヒトｖＷＦの組み込みおよび発現を含むか；または
（ｃ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ブタｖＷＦ遺伝子のターゲティング化された不活性化ならびにヒトｖＷＦ遺伝子の断片の組み込みおよび発現を含む、請求項１に記載のトランスジェニックブタ。
【請求項７】
少なくとも１つのさらなる遺伝子改変をさらに含み、
（ａ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入；またはそれらの組合せからなる群から選択されるか；
（ｂ）前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１でなく、前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がアルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子のノックアウトを含むか；
（ｃ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がヒトＣＤ４６の組み込みおよび発現を含むか；
（ｄ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がヒトＨＬＡ−Ｅの組み込みおよび発現を含むか；
（ｅ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がβ４ＧａｌＮＴ２遺伝子のノックアウトを含むか；
（ｆ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がＣＭＡＨ遺伝子のノックアウトを含むか；
（ｇ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が少なくとも２つのさらなる導入遺伝子の組み込みおよび発現を含むか；
（ｈ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、第２の単一の遺伝子座における少なくとも２つのさらなる導入遺伝子の組み込みおよび発現を含み、必要に応じて、前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１であり、前記第２の単一の遺伝子座がβ４ＧａｌＮＴ２であるか、または前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１であり、前記第２の単一の遺伝子座がＣＭＡＨであるか；
（ｉ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、第２の単一の遺伝子座における少なくとも４つのさらなる導入遺伝子の組み込みおよび発現を含むか；または
（ｊ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が少なくとも１つの天然遺伝子の発現の排除または低減をもたらし、必要に応じて、前記少なくとも１つの天然遺伝子が、ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃヒドロキシラーゼ、イソグロボシド３シンターゼ、β４ＧａｌＮＴ２、ｖＷＦ、フォルスマンシンターゼまたはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載のトランスジェニックブタ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のトランスジェニックブタに由来する器官、肺もしくは肺断片、組織または細胞。
【請求項９】
ブタｖＷＦ遺伝子座の遺伝子改変を含み、アルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼの発現を欠くトランスジェニックブタ。
【請求項１０】
少なくとも１つのさらなる遺伝子改変をさらに含み、必要に応じて、
（ａ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入およびそれらの組合せからなる群から選択されるか、または
（ｂ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が少なくとも４つの導入遺伝子の組み込みおよび発現を含む、請求項９に記載のトランスジェニックブタ。
【請求項１１】
少なくとも４つのトランスジェニック遺伝子を発現するが、アルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼの発現を欠くトランスジェニックブタを作製する方法であって、（ｉ）ポリジーンブタゲノムを提供するためにブタゲノム中の単一の遺伝子座に少なくとも２つのプロモーターの制御下の少なくとも４つの導入遺伝子を組み込むこと；（ｉｉ）前記ポリジーンブタゲノムを含む細胞がトランスジェニックブタに成熟することを可能にすることを含む方法。
【請求項１２】
（ａ）前記ブタゲノムが体細胞ブタゲノムであり、前記細胞はブタ接合体であり、前記ブタ接合体は体細胞核移植（ＳＣＮＴ）によって、かつマイクロインジェクションにより前記ポリジーンブタゲノムを再構築されたＳＣＮＴ接合体に移すことによって提供されるか；または
（ｂ）前記ブタゲノムが、生殖体ブタゲノム、接合体ブタゲノム、胚ブタゲノムまたは胚盤胞ブタゲノムからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ブタゲノムが少なくとも１つのさらなる遺伝子改変を含むか、および／または、前記方法が少なくとも１つのさらなる遺伝子改変を前記ポリジーンブタゲノムに導入することをさらに含み、必要に応じて、前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入；またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記組み込むことが、
（ａ）生物学的トランスフェクション、化学的トランスフェクション、物理的トランスフェクション、ウイルス媒介形質導入もしくは形質転換またはそれらの組合せからなる群から選択される方法；または
（ｂ）細胞質マイクロインジェクションおよび前核マイクロインジェクションを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
（ａ）前記単一の遺伝子座が天然の遺伝子座であるか；
（ｂ）前記単一の遺伝子座が改変された天然の遺伝子座であり、必要に応じて、前記改変された天然の遺伝子座が遺伝子編集媒介挿入または欠失または置換を含むか；
（ｃ）前記単一の遺伝子座が天然のＧＧＴＡ１遺伝子座であるか；または
（ｄ）前記単一の遺伝子座が改変されたＧＧＴＡ１遺伝子座である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記改変された天然の遺伝子座または前記改変されたＧＧＴＡ１遺伝子座がトランスジェニックＤＮＡを含む、請求項１５（ｂ）または（ｄ）に記載の方法。
【請求項１７】
前記トランスジェニックＤＮＡがａ）選択可能マーカー遺伝子またはｂ）ランディングパッドを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記トランスジェニックＤＮＡがポリヌクレオチド改変酵素のための１つまたは複数の認識配列を含み、必要に応じて、前記ポリヌクレオチド改変酵素が、ｉ）工学操作エンドヌクレアーゼであって、必要に応じて、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼおよびクラスター化規則的間隔短鎖回文反復配列／Ｃａｓ９ヌクレアーゼからなる群から選択される、工学操作エンドヌクレアーゼ；ｉｉ）部位特異的リコンビナーゼであって、必要に応じて、ラムダインテグラーゼ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、ＦＬＰリコンビナーゼ、ガンマ−デルタレゾルバーゼ、Ｔｎ３レゾルバーゼ、ΦＣ３１インテグラーゼ、Ｂｘｂ１−インテグラーゼ、Ｒ４インテグラーゼまたはそれらの組合せからなる群から選択される、部位特異的リコンビナーゼ；ｉｉｉ）インテグラーゼまたはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１７（ｂ）に記載の方法。
【請求項１９】
前記単一の遺伝子座が、ＣＭＡＨ、β４ＧａｌＮＴ２、ＡＡＶＳ１遺伝子座およびＲｏｓａ２６からなる群から選択される天然の遺伝子座または改変された遺伝子座である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１遺伝子座でなく、前記さらなる遺伝子改変がアルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子をノックアウトすることを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ヒト血小板の自発的な凝集を低減または排除するためのブタｖＷＦ遺伝子座の改変を含むか；
（ｂ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がキメラのブタ−ヒトｖＷＦの組み込みおよび発現を含むか；
（ｃ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ブタｖＷＦ遺伝子のターゲティング化された不活性化ならびにヒトｖＷＦ遺伝子の断片の挿入および発現を含むか；
（ｄ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、天然のｖＷＦ遺伝子内のヌクレオチド置換によって、または天然のｖＷＦ遺伝子のノックアウトおよび完全ヒトｖＷＦ遺伝子との交換によって生産されるブタｖＷＦの改変を含むか；
（ｅ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がＣＤ４６の組み込みおよび発現を含むか；
（ｆ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がヒトＨＬＡ−Ｅの組み込みおよび発現を含むか；または
（ｇ）前記少なくとも１つの遺伝子改変が、β４ＧａｌＮＴ２遺伝子、ＣＭＡＨ遺伝子、β４ＧａｌＮＴ２遺伝子およびＧＧＴＡ１遺伝子からなる群から選択される遺伝子のノックアウトを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
前記トランスジェニックブタを第２のトランスジェニックブタに交配することをさらに含み、前記第２のトランスジェニックブタは少なくとも１つの遺伝子改変を含む、請求項１１または１２（ｂ）に記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの遺伝子改変が：
（ａ）少なくとも１つの導入遺伝子の組み込みおよび発現；
（ｂ）少なくとも１つのブタ遺伝子のノックアウト；または
（ｃ）キメラのブタ−ヒトｖＷＦの組み込みおよび発現
を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
（ａ）前記少なくとも１つの導入遺伝子が抗凝固因子、補体阻害因子、免疫調節因子、細胞保護導入遺伝子およびそれらの組合せからなる群から選択されるか；または
（ｂ）前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ヒト血小板の自発的な凝集を低減または排除するためのブタｖＷＦ遺伝子座の改変を含み、必要に応じて、改変された前記ブタｖＷＦが、天然のｖＷＦ遺伝子内のヌクレオチド置換によって、または前記天然のｖＷＦ遺伝子のノックアウトおよび完全ヒトｖＷＦ遺伝子との交換によって生産される、請求項２３（ａ）に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１１、請求項１３または請求項２３（ａ）に記載の方法によって生産される、トランスジェニック動物または生産群。
【請求項２６】
それを必要とする対象を処置するための、請求項１〜７に記載のトランスジェニックブタに由来する器官、器官断片、組織または細胞を含む製品であって、前記製品は前記対象に移植されることを特徴とする、製品。
【請求項２７】
（ａ）前記器官が、肺、心臓、腎臓、肝臓、膵臓またはそれらの組合せからなる群から選択され、必要に応じて、前記少なくとも１つの器官が肺であるか；
（ｂ）前記器官断片が、肺断片、心臓断片、腎臓断片、膵臓断片またはそれらの組合せから選択されるか；
（ｃ）前記対象が進行性の肺疾患を有し、肺または肺断片が移植され、必要に応じて、前記進行性の肺疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、アルファ１−アンチトリプシン疾患または原発性肺高血圧と関連するか；または
（ｄ）１つまたは複数の治療剤が前記製品と併せて投与され、必要に応じて、前記治療剤が、抗拒絶剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗菌剤および抗ウイルス剤、ならびにそれらの組合せから選択されることを特徴とする、請求項２６に記載の製品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
例示的な実施形態では、トランスジェニックブタはブタｖＷＦ遺伝子座の遺伝子改変を有し、少なくとも４つの導入遺伝子を組み込み、発現し、ならびにアルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼの発現を欠く。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
少なくとも４つの導入遺伝子を含むトランスジェニックブタであって、前記少なくとも４つの導入遺伝子は、少なくとも２つのプロモーターの制御下で単一の遺伝子座において組み込まれ、発現されており、前記ブタは、アルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼの発現を欠く、トランスジェニックブタ。
（項目２）
前記単一の遺伝子座が天然の遺伝子座である、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３）
前記単一の遺伝子座が改変された天然の遺伝子座である、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４）
前記改変された天然の遺伝子座が遺伝子編集媒介挿入、欠失または置換を含む、項目３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目５）
前記改変された天然の遺伝子座がトランスジェニックＤＮＡを含む、項目３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目６）
前記トランスジェニックＤＮＡが選択可能マーカー遺伝子を含む、項目５に記載のトランスジェニックブタ。
（項目７）
前記トランスジェニックＤＮＡがランディングパッドを含む、項目５に記載のトランスジェニックブタ。
（項目８）
前記単一の遺伝子座が、ＡＡＶＳ１、ＲＯＳＡ２６、ＣＭＡＨ、β４ＧａｌＮＴ２およびＧＧＴＡ１からなる群から選択される、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目９）
前記単一の遺伝子座が天然のＧＧＴＡ１遺伝子座である、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１０）
前記単一の遺伝子座が改変されたＧＧＴＡ１遺伝子座である、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１１）
前記単一の遺伝子座がトランスジェニックＧＧＴＡ１遺伝子座である、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１２）
前記プロモーターの少なくとも１つが構成的プロモーターである、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１３）
前記プロモーターの少なくとも１つが調節可能なプロモーターである、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１４）
前記調節可能なプロモーターが組織特異的プロモーターまたは誘導可能なプロモーターである、項目１３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１５）
前記プロモーターの少なくとも１つが外因性プロモーターである、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１６）
前記少なくとも４つの導入遺伝子が第１のポリシストロンおよび第２のポリシストロンとして発現され、前記少なくとも２つのプロモーターが前記第１のポリシストロンの発現を制御する第１のプロモーターおよび前記第２のポリシストロンの発現を制御する第２のプロモーターを含む、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１７）
少なくとも４つのプロモーターを含み、前記少なくとも４つの導入遺伝子の各々が専用のプロモーターによって制御される、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１８）
前記第１のプロモーターが構成的プロモーターであり、前記第２のプロモーターが組織特異的プロモーターである、項目１６に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１９）
前記組織特異的プロモーターが内皮細胞特異的プロモーターである、項目１８に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２０）
前記第１のプロモーターおよび前記第２のプロモーターが構成的プロモーターである、項目１６に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２１）
前記少なくとも２つのプロモーターがＣＡＧおよびＩＣＡＭ−２を含む、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２２）
前記少なくとも４つの導入遺伝子が抗凝固因子、補体阻害因子、免疫調節因子、細胞保護導入遺伝子およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２３）
前記抗凝固因子がＴＢＭ、ＴＦＰＩ、ＥＰＣＲ、ＣＤ３９およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目２２に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２４）
前記補体阻害因子がＣＤ４６、ＣＤ５５、ＣＤ５９およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目２２に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２５）
前記免疫調節因子が免疫抑制因子である、項目２２に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２６）
前記免疫抑制因子がブタのＣＬＴＡ４−ＩＧ、ＣＩＩＴＡ−ＤＮおよびそれらの組合せからなる群から選択される、項目２５に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２７）
前記免疫調節因子がＣＤ４７である、項目２２に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２８）
前記細胞保護導入遺伝子がＨＯ−１、Ａ２０およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目２２に記載のトランスジェニックブタ。
（項目２９）
前記導入遺伝子の少なくとも２つが抗凝固因子である、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３０）
前記導入遺伝子の少なくとも１つが細胞保護導入遺伝子である、項目２９に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３１）
前記導入遺伝子の少なくとも１つが免疫調節因子である、項目３０に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３２）
前記導入遺伝子の少なくとも１つが補体阻害因子である、項目３１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３３）
少なくとも１つのさらなる遺伝子改変をさらに含む、項目１に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３４）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入；またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３５）
前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１でなく、前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がアルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子のノックアウトを含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３６）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がヒトＣＤ４６の組み込みおよび発現を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３７）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ヒト血小板の自発的な凝集を低減または排除するためのブタｖＷＦ遺伝子座の改変を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３８）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がキメラのブタ−ヒトｖＷＦの組み込みおよび発現を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目３９）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ブタｖＷＦ遺伝子のターゲティング化された不活性化ならびにヒトｖＷＦ遺伝子の断片の組み込みおよび発現を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４０）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がヒトＨＬＡ−Ｅの組み込みおよび発現を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４１）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がβ４ＧａｌＮＴ２遺伝子のノックアウトを含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４２）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がＣＭＡＨ遺伝子のノックアウトを含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４３）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が少なくとも２つのさらなる導入遺伝子の組み込みおよび発現を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４４）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、第２の単一の遺伝子座における少なくとも２つのさらなる導入遺伝子の組み込みおよび発現を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４５）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、第２の単一の遺伝子座における少なくとも４つのさらなる導入遺伝子の組み込みおよび発現を含む、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４６）
前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１であり、前記第２の単一の遺伝子座がβ４ＧａｌＮＴ２である、項目４４に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４７）
前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１であり、前記第２の単一の遺伝子座がＣＭＡＨである、項目４４に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４８）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が少なくとも１つの天然遺伝子の発現の排除または低減をもたらす、項目３３に記載のトランスジェニックブタ。
（項目４９）
前記少なくとも１つの天然遺伝子が、ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃヒドロキシラーゼ、イソグロボシド３シンターゼ、β４ＧａｌＮＴ２、ｖＷＦ、フォルスマンシンターゼまたはそれらの組合せからなる群から選択される、項目４８に記載のトランスジェニックブタ。
（項目５０）
項目１〜４９に記載のトランスジェニックブタに由来する器官。
（項目５１）
項目１〜４９に記載のトランスジェニックブタに由来する肺または肺断片。
（項目５２）
項目１〜４９に記載のトランスジェニックブタに由来する組織。
（項目５３）
項目１〜４９に記載のトランスジェニックブタに由来する細胞。
（項目５４）
少なくとも４つのトランスジェニック遺伝子を発現するが、アルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼの発現を欠くトランスジェニックブタを作製する方法であって、（ｉ）ポリジーンブタゲノムを提供するためにブタゲノム中の単一の遺伝子座に少なくとも２つのプロモーターの制御下の少なくとも４つの導入遺伝子を組み込むこと；（ｉｉ）前記ポリジーンブタゲノムを含む細胞がトランスジェニックブタに成熟することを可能にすることを含む方法。
（項目５５）
前記ブタゲノムが体細胞ブタゲノムであり、前記細胞はブタ接合体であり、前記ブタ接合体は体細胞核移植（ＳＣＮＴ）によって、かつマイクロインジェクションにより前記ポリジーンブタゲノムを再構築されたＳＣＮＴ接合体に移すことによって提供される、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記体細胞ブタゲノムが少なくとも１つのさらなる遺伝子改変を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５７）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入；またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
少なくとも１つのさらなる遺伝子改変を前記ポリジーンブタゲノムに導入することをさらに含む、項目５５に記載の方法。
（項目５９）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入；またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目５６または５８に記載の方法。
（項目６０）
前記ブタゲノムが、生殖体ブタゲノム、接合体ブタゲノム、胚ブタゲノムまたは胚盤胞ブタゲノムからなる群から選択される、項目５４に記載の方法。
（項目６１）
前記ブタゲノムが少なくとも１つのさらなる遺伝子改変を含む、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入；またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
少なくとも１つのさらなる遺伝子改変を前記ポリジーンブタゲノムに導入することをさらに含む、項目６０に記載の方法。
（項目６４）
前記少なくとも１つの遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目６１または６３に記載の方法。
（項目６５）
前記組み込むことが、生物学的トランスフェクション、化学的トランスフェクション、物理的トランスフェクション、ウイルス媒介形質導入もしくは形質転換またはそれらの組合せからなる群から選択される方法を含む、項目５４に記載の方法。
（項目６６）
組み込むことが、細胞質マイクロインジェクションおよび前核マイクロインジェクションを含む、項目５４に記載の方法。
（項目６７）
前記単一の遺伝子座が天然の遺伝子座である、項目５４に記載の方法。
（項目６８）
前記単一の遺伝子座が改変された天然の遺伝子座である、項目５４に記載の方法。
（項目６９）
前記改変された天然の遺伝子座が遺伝子編集媒介挿入または欠失または置換を含む、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記改変された天然の遺伝子座がトランスジェニックＤＮＡを含む、項目６８に記載の方法。
（項目７１）
前記トランスジェニックＤＮＡが選択可能マーカー遺伝子を含む、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記トランスジェニックＤＮＡがランディングパッドを含む、項目７０に記載の方法。
（項目７３）
前記トランスジェニックＤＮＡがポリヌクレオチド改変酵素のための１つまたは複数の認識配列を含む、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
前記ポリヌクレオチド改変酵素が、工学操作エンドヌクレアーゼ、部位特異的リコンビナーゼ、インテグラーゼまたはそれらの組合せからなる群から選択される、項目７３に記載の方法。
（項目７５）
前記工学操作エンドヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼおよびクラスター化規則的間隔短鎖回文反復配列／Ｃａｓ９ヌクレアーゼからなる群から選択される、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記部位特異的リコンビナーゼが、ラムダインテグラーゼ、Ｃｒｅリコンビナーゼ、ＦＬＰリコンビナーゼ、ガンマ−デルタレゾルバーゼ、Ｔｎ３レゾルバーゼ、ΦＣ３１インテグラーゼ、Ｂｘｂ１−インテグラーゼ、Ｒ４インテグラーゼまたはそれらの組合せからなる群から選択される、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記単一の遺伝子座が天然のＧＧＴＡ１遺伝子座である、項目５４に記載の方法。
（項目７８）
前記単一の遺伝子座が改変されたＧＧＴＡ１遺伝子座である、項目５４に記載の方法。
（項目７９）
前記改変されたＧＧＴＡ１遺伝子座がトランスジェニックＧＧＴＡ１遺伝子座である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記トランスジェニックＧＧＴＡ１遺伝子座が選択可能マーカー遺伝子を含む、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
前記トランスジェニックＧＧＴＡ１遺伝子座が工学操作ランディングパッドを含む、項目７９に記載の方法。
（項目８２）
前記単一の遺伝子座が、ＣＭＡＨ、β４ＧａｌＮＴ２、ＡＡＶＳ１遺伝子座およびＲｏｓａ２６からなる群から選択される天然の遺伝子座である、項目５４に記載の方法。
（項目８３）
前記単一の遺伝子座が、ＣＭＡＨ、β４ＧａｌＮＴ２、ＡＡＶＳ１遺伝子座およびＲｏｓａ２６からなる群から選択される改変された遺伝子座である、項目５４に記載の方法。
（項目８４）
前記単一の遺伝子座がＧＧＴＡ１遺伝子座でなく、前記さらなる遺伝子改変がアルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼ遺伝子をノックアウトすることを含む、項目５６または６１に記載の方法。
（項目８５）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がＣＤ４６の組み込みおよび発現を含む、項目５６、５８、６１または６３に記載の方法。
（項目８６）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がヒトＨＬＡ−Ｅの組み込みおよび発現を含む、項目５６、５８、６１または６３に記載の方法。
（項目８７）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ヒト血小板の自発的な凝集を低減または排除するための前記ブタｖＷＦ遺伝子座の改変を含む、項目５６、５８、６１または６３に記載の方法。
（項目８８）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変がキメラのブタ−ヒトｖＷＦの組み込みおよび発現を含む、項目５６、５８、６１または６３に記載の方法。
（項目８９）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、前記ブタｖＷＦ遺伝子のターゲティング化された不活性化ならびに前記ヒトｖＷＦ遺伝子の断片の挿入および発現を含む、項目５６、５８、６１または６３に記載の方法。
（項目９０）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、天然のｖＷＦ遺伝子内のヌクレオチド置換によって、または前記天然のｖＷＦ遺伝子のノックアウトおよび完全ヒトｖＷＦ遺伝子との交換によって生産されるブタｖＷＦの改変を含む、項目５６、５８、６１または６３に記載の方法。
（項目９１）
前記少なくとも１つの遺伝子改変が、β４ＧａｌＮＴ２遺伝子、ＣＭＡＨ遺伝子、β４ＧａｌＮＴ２遺伝子およびＧＧＴＡ１遺伝子からなる群から選択される遺伝子のノックアウトを含む、項目５６、５８、６１または６３に記載の方法。
（項目９２）
項目５４または６１に記載の方法によって生産される、トランスジェニック動物または生産群。
（項目９３）
前記トランスジェニックブタを第２のトランスジェニックブタに交配することをさらに含み、前記第２のトランスジェニックブタは少なくとも１つの遺伝子改変を含む、項目５４または６０に記載の方法。
（項目９４）
前記少なくとも１つの遺伝子改変が少なくとも１つの導入遺伝子の組み込みおよび発現を含む、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
前記少なくとも１つの導入遺伝子が抗凝固因子、補体阻害因子、免疫調節因子、細胞保護導入遺伝子およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目９４に記載の方法。
（項目９６）
前記少なくとも１つの遺伝子改変が少なくとも１つのブタ遺伝子のノックアウトを含む、項目９３に記載の方法。
（項目９７）
前記少なくとも１つの遺伝子改変がキメラのブタ−ヒトｖＷＦの組み込みおよび発現を含む、項目９３に記載の方法。
（項目９８）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、ヒト血小板の自発的な凝集を低減または排除するためのブタｖＷＦ遺伝子座の改変を含む、項目９４に記載の方法。
（項目９９）
改変された前記ブタｖＷＦが、天然のｖＷＦ遺伝子内のヌクレオチド置換によって、または前記天然のｖＷＦ遺伝子のノックアウトおよび完全ヒトｖＷＦ遺伝子との交換によって生産される、項目９８に記載の方法。
（項目１００）
項目９４に記載の方法によって生産される、トランスジェニック動物または生産群。
（項目１０１）
それを必要とする対象を処置するための方法であって、前記対象に項目１〜５３に記載のトランスジェニックブタに由来する少なくとも１つの器官、器官断片、組織または細胞を移植することを含む方法。
（項目１０２）
前記少なくとも１つの器官が、肺、心臓、腎臓、肝臓、膵臓またはそれらの組合せからなる群から選択される、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
前記少なくとも１つの器官が肺である、項目１０２に記載の方法。
（項目１０４）
前記少なくとも１つの器官断片が、肺断片、心臓断片、腎臓断片、膵臓断片またはそれらの組合せから選択される、項目１０１に記載の方法。
（項目１０５）
前記対象が進行性の肺疾患を有し、肺または肺断片が移植される、項目１０１に記載の方法。
（項目１０６）
前記進行性の肺疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、アルファ１−アンチトリプシン疾患または原発性肺高血圧と関連する、項目１０５に記載の方法。
（項目１０７）
前記対象に１つまたは複数の治療剤を投与することをさらに含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０８）
前記治療剤が、抗拒絶剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗菌剤および抗ウイルス剤、ならびにそれらの組合せから選択される、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
ブタｖＷＦ遺伝子座の遺伝子改変を含み、アルファ１，３ガラクトシルトランスフェラーゼの発現を欠くトランスジェニックブタ。
（項目１１０）
少なくとも１つのさらなる遺伝子改変をさらに含む、項目１０９に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１１１）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が、遺伝子ノックアウト；遺伝子ノックイン；遺伝子交換；点突然変異；遺伝子、遺伝子断片もしくはヌクレオチドの欠失、挿入もしくは置換；大きなゲノム挿入およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目１１０に記載のトランスジェニックブタ。
（項目１１２）
前記少なくとも１つのさらなる遺伝子改変が少なくとも４つの導入遺伝子の組み込みおよび発現を含む、項目１１０に記載のトランスジェニックブタ。