(57)【要約】  本発明は、ホログラフィック顕微鏡により得られたホログラムデータに基づいて位相情報及び強度情報の２次元分布が算出される細胞観察装置であり、表示部に表示される画像表示画面（１００）には、二つの画像表示枠（１２１、１２２）が設けられた画像表示欄（１２０）が配置される。画像表示枠（１２１、１２２）には、観察対象である細胞が培養されている細胞培養プレート（１２）上の、同じ観察範囲に対応する位相画像と強度画像がそれぞれ表示される。強度画像では、位相画像で殆ど見えないプレート上のウェルが明瞭に確認できる。逆に、位相画像では、強度画像で殆ど見えない生体細胞を観察可能である。そこで観察者は、強度画像においてウェル中の観察したい範囲を決定し、その範囲を拡大して位相画像で細胞を詳細に観察する。これにより、ウェル中の観察したい範囲に存在する細胞を確実に観察することができる。
2018158946.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホログラフィック顕微鏡を用いた細胞観察装置であって、
a)細胞を含む試料を前記ホログラフィック顕微鏡で測定することにより得られたホログラムデータに基づいて、該試料についての位相情報及び強度情報の２次元分布を算出する演算処理部と、
b)前記演算処理部で得られた位相情報及び強度情報の２次元分布に基づいて、前記試料の観察対象領域の全体又はその一部についての位相画像及び強度画像をそれぞれ作成する画像作成部と、
c)前記画像作成部により作成された、前記試料上の同じ範囲についての位相画像及び強度画像を並べて配置した表示画面を形成して表示部に表示する表示処理部と、
を備えることを特徴とする細胞観察装置。
【請求項２】
請求項１に記載の細胞観察装置であって、
前記試料は細胞培養容器であり、前記ホログラフィック顕微鏡によるホログラムデータの取得が可能な最大の領域は前記細胞培養容器全体又はその一部の領域であることを特徴とする細胞観察装置。
【請求項３】
請求項１に記載の細胞観察装置であって、
前記表示処理部により前記表示部の画面上に表示されている位相画像又は強度画像のいずれか一方についての倍率の変更又は観察位置の移動の操作をユーザが行うための操作部をさらに備え、
前記画像作成部は、前記操作部による操作に応じて、操作対象である位相画像又は強度画像の一方の倍率を変更した又は観察位置を移動した位相画像又は強度画像を作成するとともに、前記位相画像又は強度画像の他方について、該位相画像又は強度画像の一方に対する操作と同じだけ倍率を変更した又は観察位置を移動した位相画像又は強度画像を作成し、
前記表示処理部は該画像作成部で倍率を変更したあとの又は観察位置を移動したあとの位相画像及び強度画像を前記表示画面に表示することを特徴とする細胞観察装置。
【請求項４】
請求項１に記載の細胞観察装置であって、
前記表示処理部は、観察対象領域全体の強度画像を縮小したサムネイル画像に、その時点で表示されている位相画像及び強度画像の観察範囲を示すマークを重畳した画像を同じ画面上に表示することを特徴とする細胞観察装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞の状態を観察する細胞観察装置に関し、さらに詳しくは、デジタルホログラフィ顕微鏡により得られる、物体波と参照波との干渉縞を記録したホログラムに対する演算処理により物体の位相画像、強度画像等を作成する細胞観察装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
再生医療分野では、近年、ｉＰＳ細胞やＥＳ細胞等の多能性幹細胞を用いた研究が盛んに行われている。一般に細胞は透明であって通常の光学顕微鏡では観察しにくいため、従来、細胞の観察には位相差顕微鏡が広く利用されている。
しかしながら、位相差顕微鏡では顕微画像を撮影する際に焦点合わせを行う必要があるため、広い観察対象領域を細かく区画したそれぞれの小領域についての顕微画像を取得するような場合、測定に多大な時間が掛かり実用的でないという問題がある。これを解決するために、近年、デジタルホログラフィ技術を用いたホログラフィック顕微鏡が開発され実用に供されている（特許文献１、２等参照）。【０００３】
ホログラフィック顕微鏡では、光源からの光が物体表面で反射又は透過してくる物体光と同一光源から直接到達する参照光とがイメージセンサ等の検出面で形成する干渉縞（ホログラム）を取得し、そのホログラムに基づいた所定の演算処理を実施することで物体の再構成画像として強度画像や位相画像を作成する。こうしたホログラフィック顕微鏡では、ホログラムを取得したあとの位相回復等のための演算処理の段階で任意の距離における再構成画像を形成することができる。そのため、撮影時にいちいち焦点合わせを行う必要がなく、測定時間を短縮することができる。また、測定終了後の任意の時点で、焦点位置を適宜に変えた再構成画像を作成し、観察対象物を詳細に観察することができる。【０００４】
ホログラフィック顕微鏡を用いた細胞観察装置で培養中の多能性細胞を観察する場合、細胞を培養している細胞培養プレート等の細胞培養容器をホログラフィック顕微鏡の所定位置にセットし、その細胞培養容器全体又はその一部についてのホログラムデータを収集する。ホログラフィック顕微鏡を用いた細胞観察装置では、染色されていない細胞を位相画像上で良好に観察することができる。しかしながら、ホログラムデータに基づく逆光伝播計算などの演算処理によって求まる位相情報には、細胞などの光学厚みが比較的小さい、つまりは低位相差である物体についての情報しか反映されず、光学厚みが細胞に比べて格段に大きい容器などの物体についての情報は殆ど反映されない。これは、一般的なホログラフィック顕微鏡では、原理的に、使用している光源の波長程度の光学厚みまでしか測定することが難しいためである。【０００５】
そのため、例えば細胞培養プレート全体の位相画像を表示しても該細胞培養プレートに形成されている収容部（ウェル）の形状などは殆ど視認できず、観察している細胞がウェル内のどの辺りに存在しているのかを観察者が把握しにくいという問題がある。また、細胞に比べれば大きな、ヒトの毛髪、埃などの異物が細胞培養容器に混入していても、位相画像にはそれら異物が明瞭に現れず、観察者が見逃してしまうという問題もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際特許公開第２０１６／０８４４２０号
【特許文献２】特開平１０−２６８７４０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は上記課題を解決するためになされたものであり、ホログラフィック顕微鏡で得られたホログラムデータに基づいて位相画像等を作成して表示する細胞観察装置において、生体細胞を良好に観察することができるとともに、観察中の位置が細胞培養容器内のどの辺りであるのかを観察者が容易に把握できるようにすることを主たる目的としている。また、本発明の他の目的は、細胞に比べて大きな異物の混入を観察者が容易に把握することができる細胞観察装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために成された本発明は、ホログラフィック顕微鏡を用いた細胞観察装置であって、
a)細胞を含む試料を前記ホログラフィック顕微鏡で測定することにより得られたホログラムデータに基づいて、該試料についての位相情報及び強度情報の２次元分布を算出する演算処理部と、
b)前記演算処理部で得られた位相情報及び強度情報の２次元分布に基づいて、前記試料の観察対象領域の全体又はその一部についての位相画像及び強度画像をそれぞれ作成する画像作成部と、
c)前記画像作成部により作成された、前記試料上の同じ範囲についての位相画像及び強度画像を並べて配置した表示画面を形成して表示部に表示する表示処理部と、
を備えることを特徴としている。【０００９】
上記ホログラフィック顕微鏡はその方式を問わず、インライン型、オフアクシス型、位相シフト型などのいずれでもよい。【００１０】
本発明に係る細胞観察装置では、典型的には、前記試料は細胞培養容器であり、前記ホログラフィック顕微鏡によるホログラムデータの取得が可能な最大の領域は前記細胞培養容器全体又はその一部の領域であるものとすることができる。上記細胞培養容器は、一又は複数のウェルが形成された細胞培養プレート、シャーレ、大量培養を目的とした培養フラスコなどである。
したがって、本発明に係る細胞観察装置は、こうした細胞培養容器において培養中である生体細胞を観察するのに好適な装置である。【００１１】
本発明に係る細胞観察装置において、演算処理部は、試料をホログラフィック顕微鏡で測定することにより得られたホログラムデータに基づいて、所定の演算処理を行うことで位相情報の２次元分布、及び強度情報の２次元分布をそれぞれ求める。画像作成部は、算出された位相情報及び強度情報を２次元画像の各画素にそれぞれ対応付けることで位相画像及び強度画像を作成する。上述したように試料が例えば細胞培養プレートである場合、その細胞培養プレート全体を観察対象領域として位相画像及び強度画像を作成することができる。もちろん、細胞培養プレート全体ではなくそのうちの一部の領域のみについての位相画像及び強度画像を作成することもできる。【００１２】
表示処理部は、画像作成部により作成された、試料上の同じ範囲についての位相画像及び強度画像を横方向又は縦方向に並べて配置した表示画面を形成し、該表示画面を表示部に表示する。位相画像及び強度画像はそれぞれグレイスケール表示又はカラースケール表示とすればよい。こうした処理によって、例えば細胞培養プレート全体についての位相画像と強度画像とを横に並べた表示画面を表示部に表示することができる。【００１３】
この場合、位相画像では細胞培養プレート上のウェルの形状などは殆ど識別できないが、強度画像では殆ど見えない無色透明の細胞の輪郭や模様などが明瞭に現れる。一方、強度画像は光学顕微画像とほぼ同じであるので、強度画像には、ウェルの形状など、位相画像上では見えない光学厚さが大きな物体や大きい段差などが明瞭に現れる。そこで観察者は、着目している細胞の存在位置を位相画像上で確認し、その細胞の存在位置が細胞培養プレートの中の又はウェルの中のどの辺りであるかを強度画像上で把握することができる。また、細胞の大きさや形状などの詳細な観察は位相画像上で行うことができる。
また、培養細胞に比べてサイズが大きな、ヒトの毛髪、埃、プラスチック細片などの異物は位相画像では明瞭に見えないこともあるが、強度画像上ではこうした異物を明確に識別することができる。【００１４】
本発明に係る細胞観察装置において、好ましくは、
前記表示処理部により前記表示部の画面上に表示されている位相画像又は強度画像のいずれか一方についての倍率の変更又は観察位置の移動の操作をユーザが行うための操作部をさらに備え、
前記画像作成部は、前記操作部による操作に応じて、操作対象である位相画像又は強度画像の一方の倍率を変更した又は観察位置を移動した位相画像又は強度画像を作成するとともに、前記位相画像又は強度画像の他方について、該位相画像又は強度画像の一方に対する操作と同じだけ倍率を変更した又は観察位置を移動した位相画像又は強度画像を作成し、
前記表示処理部は該画像作成部で倍率を変更したあとの又は観察位置を移動したあとの位相画像及び強度画像を前記表示画面に表示する構成とするとよい。【００１５】
この構成では、観察者が例えば表示部に表示されている細胞培養プレート全体に対応する強度画像上でウェルの中の特定の範囲を操作部の操作により指定したうえで倍率の拡大を指示すると、画像作成部はこの操作に応じて、指定された範囲を認識し、その範囲を適宜の倍率だけ拡大した相対的に高い解像度の強度画像を作成する。また、これと連動して位相画像についても、指定された範囲を強度画像と同じ倍率だけ拡大した、相対的に高い解像度の位相画像を作成する。そして、表示処理部は、その直前まで表示部に表示されている画像を新たな、つまりは拡大された位相画像及び強度画像に更新する。
これにより、観察者は拡大された位相画像上で細胞の詳細な観察を行うことができる。【００１６】
また本発明に係る細胞観察装置において、好ましくは、
前記表示処理部は、観察対象領域全体の強度画像を縮小したサムネイル画像に、その時点で表示されている位相画像及び強度画像の観察範囲を示すマークを重畳した画像を同じ画面上に表示する構成とするとよい。【００１７】
位相画像及び強度画像の観察倍率を上げると、細胞培養プレート内での相対的位置を識別可能な物体が強度画像上で観察できなくなる（観察範囲から外れる）可能性がある。これに対し、上記構成によれば、観察対象領域全体の強度画像、つまりは細胞培養プレートやウェルが確認できる画像上にその時点における観察範囲が明瞭に示されるので、観察者は観察範囲の相対的位置を容易に把握することができる。
【発明の効果】
【００１８】
本発明に係る細胞観察装置によれば、観察者は位相画像を利用して生体細胞を良好に観察することができるとともに、位相画像と同時に表示される強度画像により、観察中である範囲が細胞培養プレート等の細胞培養容器中のどの辺りであるのかを容易に把握することができる。それによって、細胞観察の効率が向上するとともに、観察者が意図しない領域を間違って観察することを防止することができる。また、ヒトの毛髪、埃、プラスチック細片などの、不所望の異物が細胞培養容器に混入している場合に、観察者は強度画像から異物混入を容易に把握して除去することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】本発明の一実施例である細胞観察装置の要部の構成図。
【図２】本実施例の細胞観察装置における画像作成処理を説明するための概念図。
【図３】本実施例の細胞観察装置における画像表示画面を示す模式図。
【図４】図３中の情報表示欄の概略図。
【図５】本実施例の細胞観察装置において観察倍率を変更する際の画像作成処理を説明するための概念図。
【図６】本実施例の細胞観察装置において倍率（解像度）が相違する画像の関係を示す概念図。
【図７】本実施例の細胞観察装置において表示される位相画像及び強度画像の実例を示す図であり、（ａ）は低倍率のときの表示画像、（ｂ）は高倍率のときの表示画像を示す図。
【図８】本実施例の細胞観察装置において、ヒトの毛髪片が混入している場合の位相画像及び強度画像の実例を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、本発明に係る細胞観察装置の一実施例について、添付図面を参照して説明する。
図１は本実施例の細胞観察装置の要部の構成図である。
【００２１】
本実施例の細胞観察装置は、顕微観察部１と、制御・処理部２と、ユーザーインターフェイスである入力部３及び表示部４と、を備える。
顕微観察部１はインライン型ホログラフィック顕微鏡（In-line Holographic Microscopy：ＩＨＭ）であり、レーザダイオードなどを含む光源部１０とイメージセンサ部１１とを備え、光源部１０とイメージセンサ部１１との間に、観察対象である細胞１３を含む細胞培養プレート１２が配置される。細胞培養プレート１２は例えばモータ等の駆動源を含む移動部１４により、互いに直交するＸ軸、Ｙ軸の２軸方向に移動自在である。
【００２２】
制御・処理部２は顕微観察部１の動作を制御するとともに顕微観察部１で取得されたデータを処理するものであって、撮影制御部２０、測定データ記憶部２１、演算処理部２２、画像作成部２３、画像データ記憶部２４、表示処理部２５、表示画像作成部２６、操作受付処理部２７などを機能ブロックとして備える。
なお、この制御・処理部２の実体はパーソナルコンピュータ又はより高性能なワークステーションであり、そうしたコンピュータにインストールされた専用の制御・処理ソフトウェアを該コンピュータ上で動作させることで上記各機能ブロックの機能が実現される。したがって、入力部３はキーボードやマウス等のポインティングデバイスを含む。また、後述するように制御・処理部２の機能を一つのコンピュータでなく、通信ネットワークを介して接続された複数のコンピュータで分担する構成とすることもできる。
【００２３】
次に、本実施例の細胞観察装置において細胞観察を行う際の観察者の操作及び処理について図２〜図６を参照して説明する。
図２は本実施例の細胞観察装置における画像作成処理を説明するための概念図、図３は本実施例の細胞観察装置における画像表示画面を示す模式図、図４は図３中の情報表示欄の概略図、図５は本実施例の細胞観察装置において観察倍率を変更する際の画像作成処理を説明するための概念図、図６は本実施例の細胞観察装置において倍率が相違する画像の関係を示す概念図である。
【００２４】
観察者は観察対象である細胞（多能性細胞）１３が培養されている細胞培養プレート１２を顕微観察部１の所定位置にセットし、該細胞培養プレート１２を特定する識別番号や測定日時などの情報を入力部３から入力したうえで測定実行を指示する。本実施例では、図２（ａ）に示すように、細胞培養プレート１２には六個の上面視円形状のウェル５０が形成されており、その各ウェル５０内で細胞が培養される。そのため、一つの細胞培養プレート１２全体、つまりは六個のウェル５０を含む矩形状の範囲全体が観察対象領域である。上記測定指示を受けて撮影制御部２０は、顕微観察部１の各部を制御して以下のように監察対象領域についてのホログラムデータを取得する。
【００２５】
図１には示していないが、イメージセンサ部１１の同一のＸ−Ｙ平面上には四つのＣＭＯＳイメージセンサが設置されている。この四つのＣＭＯＳイメージセンサは、図２（ａ）に示した細胞培養プレート１２全体を４等分した四つの４分割範囲５１の撮影をそれぞれ担うものである。一つのＣＭＯＳイメージセンサが１回に撮影可能である範囲は図２（ｂ）及び（ｃ）に示すように、４分割範囲５１の中の１個のウェル５０のみを含む矩形状の範囲５２をＸ軸方向に１０等分、Ｙ軸方向に１２等分して得られる撮像単位５３に相当する範囲である。したがって、一つの４分割範囲５１は１５×１２＝１８０個の撮像単位５３から成る。四つのＣＭＯＳイメージセンサは、Ｘ軸方向に１５個の撮像単位に対応する長さの長辺、Ｙ軸方向に１２個の撮像単位に対応する長さの短辺を有する矩形の四つの頂点付近にそれぞれ配置されおり、細胞培養プレート１２の異なる四つの撮像単位の撮影を同時に行う。もちろん、これらの数値は単なる一例であり、適宜に変更可能であることは言うまでもない。
【００２６】
撮影制御部２０による制御の下で光源部１０は、１０°程度の微小角度の広がりを持つコヒーレント光を細胞培養プレート１２の所定の領域に照射する。細胞培養プレート１２及び細胞１３を透過したコヒーレント光（物体光１６）は、細胞培養プレート１２上で細胞１３に近接する領域を透過した光（参照光１５）と干渉しつつイメージセンサ部１１に到達する。物体光１６は細胞１３を透過する際に位相が変化した光であり、他方、参照光１５は細胞１３を透過しないので該細胞１３に起因する位相変化を受けない光である。したがって、イメージセンサ部１１に配置されている四つのＣＭＯＳイメージセンサの検出面（像面）上には、細胞１３により位相が変化した物体光１６と位相が変化していない参照光１５との干渉像（ホログラム）がそれぞれ形成され、このホログラムに対応する２次元的な光強度分布データ（ホログラムデータ）がイメージセンサ部１１から出力される。
【００２７】
細胞培養プレート１２は移動部１４により、Ｘ−Ｙ面内で上記撮像単位５３のサイズに相当する距離だけステップ状に移動される。これにより、光源部１０から発せられるコヒーレント光の照射領域は細胞培養プレート１２上で移動し、イメージセンサ部１１における各ＣＭＯＳイメージセンサでは、それぞれ一つの撮像単位５３に対応するホログラムデータを取得することができる。細胞培養プレート１２は移動部１４により、一つの４分割範囲５１内に含まれる撮像単位５３の数に相当する１８０回だけステップ状に移動され、その移動毎にホログラムデータが取得される。また、光源部１０から出射されるコヒーレント光の波長は複数段階（例えば４段階）に変更され、その各波長光に対してそれぞれホログラムデータが収集される。このようにして、顕微観察部１において、細胞培養プレート１２全体についてのホログラムデータを漏れなく得ることができる。
【００２８】
上述したように顕微観察部１のイメージセンサ部１１で得られたホログラムデータは逐次、制御・処理部２に送られ、測定データ記憶部２１に格納される。細胞培養プレート１２全体の測定が終了すると、制御・処理部２では、演算処理部２２が測定データ記憶部２１から上記撮像単位５３毎の複数の波長についてのホログラムデータを読み出し、光の逆伝播計算を実行することで細胞１３の光学厚さを反映した位相情報及び強度情報を算出する。即ち、撮像単位５３毎に位相情報及び強度情報の２次元分布が得られる。
【００２９】
画像作成部２３は、上述したように撮像単位５３毎に算出された位相情報の２次元分布に基づく狭い範囲の位相画像を繋ぎ合わせるタイリング処理（図２（ｄ）参照）を行うことで、観察対象領域つまりは細胞培養プレート１２全体についての位相画像を作成する。また画像作成部２３は、撮像単位５３毎に算出された強度情報の２次元分布に基づく狭い範囲の強度画像を繋ぎ合わせるタイリング処理を行うことで、観察対象領域つまりは細胞培養プレート１２全体についての強度画像も作成する。なお、こうしたタイリング処理の際には繋ぎ目が滑らかになるように適宜の補正処理を行ってもよい。
こうして作成された位相画像や強度画像を構成する画像データは画像データ記憶部２４に格納される。このときに作成される位相画像や強度画像は、ホログラムデータの空間分解能（つまりはＣＭＯＳイメージセンサの空間分解能）等で決まる最高解像度の画像である。
【００３０】
なお、上記のような位相情報や強度情報の計算、位相画像や強度画像の作成の際には、特許文献１、２等に開示されているような周知のアルゴリズムを用いればよく、その計算手法や処理手法は特定のものに限定されない。
【００３１】
測定終了後に観察者が細胞観察を行うために入力部３で所定の操作を行うと、操作受付処理部２７を通して受け付けられた操作に応じて表示処理部２５は、図３に示すような画像表示画面１００を作成し表示部４に表示する。この画像表示画面１００には、情報表示欄１１０と、画像表示欄１２０と、サムネイル画像表示欄１３０とが配置されており、画像表示欄１２０には、左右に並べて第１画像表示枠１２１、第２画像表示枠１２２が設けられている。
【００３２】
図４に示すように、情報表示欄１１０には、そのときに画像表示欄１２０に表示されている画像に対応する細胞培養プレート１２の名称（プレート名）や識別番号（プレートＩＤ）、測定日時などの測定に関する属性情報が表示される。また、情報表示欄１１０には、画像表示欄１２０に表示する画像の種類（位相画像、強度画像、擬似位相画像）を選択するための表示画像選択チェックボックス１１１と、その時点で画像表示欄１２０に表示している画像の観察範囲や位置を観察対象領域上のマーキングで示すためのナビゲータ画像１１２とが配置されている。
なお、この例では、位相画像と強度画像との二つにチェックマークが付されており、その二種類の画像を同時に表示するために第１、第２画像表示枠１２１、１２２が設けられているが、例えば一つのみにチェックマークが付された場合には画像表示欄１２０中の画像表示枠は一つのみである。
【００３３】
サムネイル画像表示欄１３０には、過去の測定日時にそれぞれ対応する画像（ここでは撮影対象領域全体の強度画像）がサムネイル画像で表示されている。ここに表示する画像の種類やその測定日時は、観察者が自在に指定することができる。
【００３４】
表示画像作成部２６は表示画像選択チェックボックス１１１でチェックマークが付されている種類の画像（ここでは位相画像及び強度画像）を構成する画像データを読み出し、画像表示欄１２０に描出する表示画像を作成する。例えば初期画面では、観察対象領域全体の表示画像を作成するとよい。これにより、画像表示画面１００の第１画像表示枠１２１には観察対象領域全体の位相画像が、第２画像表示枠１２２には同じ観察対象領域全体の強度画像が表示される。ただし、画像表示枠１２１、１２２のアスペクト比と観察対象領域全体のアスペクト比とは一致しないため、実際には観察対象領域全体の画像の一部を切り出して画像表示枠１２１、１２２中に表示する。また、画像データ記憶部２４に格納されている画像データは最高解像度の画像に対応するものであるが、表示上の画素数（画面画素数又は画面解像度）が決まっている画像表示枠１２１、１２２内に画像を表示するため、その画面画素数に合わせて解像度を落とした表示画像を作成する。
【００３５】
図６（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）は同じ観察対象領域に対する低解像度、中解像度、及び高解像度の画像の例であり、図中で格子状に区分された一つの矩形状の領域が表示上の一つの画素に対応する。この例では、低解像度画像（図６（ａ）参照）の１画素は中解像度画像（図６（ｂ）参照）では４画素分、高解像度画像（図６（ｃ）参照）では１６画素分に相当する。例えば画像データ記憶部２４に保存されている画像データが図６（ｃ）に示すような高解像度画像を構成する画像データであったとしても、これを表示する表示部４の画面上の画像表示枠の画素数が図６（ａ）に示したものである場合には、ビニング処理等によって解像度を下げたうえで表示画像を形成する必要がある。これは位相画像、強度画像のいずれでも同じである。
【００３６】
図５（ａ）に示すような細胞培養プレート１２全体に対して図５（ｂ）に示すような強度画像２００と図５（ｃ）に示すような位相画像２１０をそれぞれ構成する画像データが得られているものとする。このとき、強度画像２００の中の一部の範囲２０１に対応する部分画像１２２Ａが、図５（ｄ）に示す画像表示画面１００内の第２画像表示枠１２２に表示される。一方、位相画像２１０の中の一部の範囲２１１に対応する部分画像１２１Ａが、図５（ｄ）に示す画像表示画面１００内の第１画像表示枠１２１に表示される。ここで、強度画像２００の中の一部の範囲２０１と位相画像２１０の中の一部の範囲２１１とは細胞培養プレート１２上で全く同じ範囲である。即ち、表示画像作成部２６は複数種類の表示画像を作成する際に、全く同じ範囲の画像を作成する。そして、表示処理部２５はこうした作成された位相画像及び強度画像を画像表示画面１００内に描出することで、観察者に提示する。
【００３７】
図７（ａ）は観察倍率が低いときに実際に表示される位相画像と強度画像とを示す図である。位相画像ではウェルの外形を殆ど識別できないが、強度画像ではそれが明瞭に観察可能であることが分かる。上述したように両画像の観察範囲は全く同じであるので、観察者は強度画像に基づいて詳細に観察する位置や範囲を選択することができる。
【００３８】
観察者が強度画像に基づいて決めた所定の観察範囲に存在する細胞の詳細な観察を行いたい場合、観察者は入力部３により強度画像上の所望の位置や所望の範囲を指定したうえで拡大表示の操作を行う。
【００３９】
いま、一例として図５（ｂ）に示している強度画像２００の一部の範囲２０１の中で小範囲２０２を指定して拡大表示の操作を行ったものとする。すると操作受付処理部２７を通してこの指示を受けた表示画像作成部２６は、指定された小範囲２０２に対応する強度画像が第２画像表示枠１２２全体に表示されるように、拡大された強度画像１２２Ｂを作成する。このときには、第２画像表示枠１２２に表示すべき強度画像のサイズ自体は小さくなるから、拡大操作の前よりも解像度を上げることになる。一方、表示画像作成部２６は、位相画像についても、指定された小範囲２０２と全く同じ小範囲２１２に対応する位相画像が第１画像表示枠１２１全体に表示されるように、拡大された位相画像１２１Ｂを作成する。即ち、強度画像の拡大操作に対応して、位相画像についても全く同じ倍率の拡大操作を実施する。そして、表示処理部２５は、拡大後の位相画像及び強度画像をそれぞれ画像表示画面１００の第１、第２画像表示枠１２１、１２２に表示する（表示を更新する）。
【００４０】
こうして、観察者の強度画像についての拡大操作に対応して、強度画像のみならず位相画像も連動して拡大表示される。縮小操作についても全く同様である。また、拡大・縮小操作だけでなく、観察倍率を変更することなく観察範囲を移動させる操作でも全く同様であり、強度画像の観察範囲を移動させる操作を行うと、その操作に応じて強度画像と位相画像との観察範囲が移動する。また逆に、位相画像上で拡大・縮小操作や移動操作を行った場合でも同様に、その操作に応じて強度画像と位相画像とが共に拡大・縮小表示されたり、それら画像の観察範囲が移動したりする。
なお、画像表示欄１２０にその時点で表示されている位相画像及び強度画像の観察位置は、情報表示欄１１０中のナビゲータ画像１１２に表示されているマーキングによって把握することができる。
【００４１】
図７（ｂ）は観察倍率が高いときに表示される位相画像と強度画像の実測例を示す図である。この図から、強度画像では各細胞の形状等はあまり視認できないが、位相画像ではそれが明瞭に観察可能であることが分かる。このように、本実施例の細胞観察装置では、低倍率の強度画像上で観察位置や範囲を決めたあと、高倍率の位相画像上で細胞を詳細に観察することができる。
【００４２】
また図８は、本実施例の細胞観察装置において、ヒトの毛髪片が混入している場合の位相画像及び強度画像の実測例を示す図である。毛髪片のサイズは０．５mm程度であるが、培養中の細胞に比べればかなり大きい。図８を見れば分かるように、位相画像では毛髪片の輪郭は確認できないことはないものの、その像の色は周囲の細胞の色と殆ど同じであるため、観察者が把握するのは難しい。これに対し、強度画像では毛髪片が明瞭に観察可能である。これにより、観察者はこうした異物の混入を確実に把握することができる。
【００４３】
なお、上記説明では、細胞培養プレートで培養中の細胞を観察する場合を例に挙げたが、細胞培養プレートに代えて、培養フラスコやシャーレなどの他の各種細胞培養容器を用いてもよいことは言うまでもない。それら容器の構成部材は位相画像では十分に視認できなくても、強度画像では明瞭に観察可能である。
【００４４】
また図１に示した実施例の構成では、制御・処理部２において全ての処理を実施しているが、一般に、ホログラムデータに基づく逆光伝播の計算やその計算結果の画像化には膨大な量の計算が必要である。そのため、通常使用されているパーソナルコンピュータでは計算に多大な時間が掛かり効率的な解析作業は難しい。そこで、顕微観察部１に接続されたパーソナルコンピュータを端末装置とし、この端末装置と高性能なコンピュータであるサーバとがインターネットやイントラネット等の通信ネットワークを介して接続されたコンピュータシステムを利用してもよい。
【００４５】
この場合、ホログラムデータに基づく光伝播計算や位相画像、強度画像の作成などの複雑な処理はサーバ側で実施し、それによって作成された画像データを端末装置又は別の閲覧用端末が受け取って、この画像データに基づいて表示画像を作成する処理を端末装置側で行うようにしてもよい。こうした構成では、図１に示した制御・処理部２の機能ブロックが、端末装置側とサーバ側とに、又は、端末装置側とサーバ側と閲覧用端末とに分離されることになる。また、制御・処理部２の一つの機能ブロックに含まれる機能が、端末装置側とサーバ側とに、又は、端末装置側とサーバ側と閲覧用端末とに分離されることもあり得る。このように、制御・処理部２の機能は適宜、複数のコンピュータで分担しても構わない。
【００４６】
また上記実施例の細胞観察装置では、顕微観察部１としてインライン型ホログラフィック顕微鏡を用いていたが、ホログラムが得られる顕微鏡であれば、オフアクシス型、位相シフト型などの他の方式のホログラフィック顕微鏡に置換え可能であることは当然である。
【００４７】
さらにまた、上記実施例及び上記記載の変形例はいずれも本発明の一例であり、本発明の趣旨の範囲でさらに適宜の変更、修正、追加を行っても本願特許請求の範囲に包含されることは当然である。
【符号の説明】
【００４８】
１…顕微観察部
１０…光源部
１１…イメージセンサ部
１２…細胞培養プレート
１３…細胞
１４…移動部
１５…参照光
１６…物体光
２…制御・処理部
２０…撮影制御部
２１…測定データ記憶部
２２…演算処理部
２３…画像作成部
２４…画像データ記憶部
２５…表示処理部
２６…表示画像作成部
２７…操作受付処理部
３…入力部
４…表示部
１００…画像表示画面
１１０…情報表示欄
１１１…表示画像選択チェックボックス
１１２…ナビゲータ画像
１２０…画像表示欄
１２１…第１画像表示枠
１２２…第２画像表示枠
１３０…サムネイル画像表示欄
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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