【手続補正書】
【提出日】令和1年9月10日(2019.9.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を認識する抗原認識ドメインと
膜貫通ドメインと
活性化受容体の細胞内シグナル伝達部分および／または共刺激受容体の細胞内シグナル伝達部分を含むシグナル伝達ドメインと
を含むキメラ抗原受容体。
【請求項２】
抗原認識ドメインが、抗体の抗原結合部位または抗体のフラグメントの抗原結合部位に配列相同性を有する部分を含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項３】
抗原認識ドメインが、少なくとも、抗体の重鎖または抗体の軽鎖由来の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に配列相同性を有する部分を含む、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項４】
抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）結合部位と関連するエピトープを認識する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項５】
機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体が、野生型（機能性）Ｐ２Ｘ７受容体のＡＴＰ結合能力と比較して低減されたＡＴＰに結合する能力を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項６】
機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体が、受容体を機能障害性にする立体配置の変化を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項７】
受容体を機能障害性にする立体配置の変化が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体のアミノ酸２１０位のプロリンのトランス配置からシス配置への変化である、請求項６に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項８】
抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体のアミノ酸２１０位のプロリンを含むエピトープを認識する、請求項１から６のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項９】
活性化受容体が、ＣＤ３共受容体複合体のメンバーおよび／またはＦｃ受容体であり、かつ／または共刺激性受容体が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＤＡＰ１０、ＯＸ４０、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、およびＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸分子を含む、核酸ベクター。
【請求項１２】
請求項１から９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体、または請求項１０に記載の核酸分子、または請求項１１に記載の核酸ベクターを含む、遺伝子改変された細胞。
【請求項１３】
白血球、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、リンパ球、Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞またはナチュラルキラーＴ細胞である、請求項１２に記載の遺伝子改変された細胞。
【請求項１４】
機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を殺滅させる方法における使用のための請求項１２または１３に記載の遺伝子改変された細胞であって、該方法は、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を、該遺伝子改変された細胞に曝露するステップを含む、前記遺伝子改変された細胞。
【請求項１５】
機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞にとって自己である、請求項１４に記載の遺伝子改変された細胞。
【請求項１６】
機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞が、がん細胞である、請求項１２または１３に記載の遺伝子改変された細胞。
【請求項１７】
対象におけるがんを治療する方法であって、請求項１４または１５に記載の遺伝子改変された細胞を対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項１８】
がん細胞が、脳のがん、食道がん、口腔がん、舌がん、甲状腺がん、肺がん、胃がん、膵臓がん、腎臓がん、結腸がん、直腸がん、前立腺がん、膀胱がん、子宮頸がん、上皮細胞がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、および精巣がんのうちの１つまたは複数から選択される、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞または請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ウイルスベクターの調製のための、請求項１０に記載の核酸分子、または請求項１１に記載の核酸ベクター。
【請求項２０】
宿主細胞のウイルス形質導入のための、請求項１０に記載の核酸分子を含むウイルスベクター、または請求項１１に記載の核酸ベクター。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
【図１】[0045]本発明の実施形態による抗非機能性（ｎｆ）Ｐ２Ｘ７受容体キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の配置を示す概略図である。
【図２】[0046]図１の抗ｎｆ  Ｐ２Ｘ７受容体ＣＡＲの発現に使用されるＢＬＩＶプラスミドを示す概略図である。
【図３】[0047]ＢＬＩＶプラスミドを形質転換した大腸菌クローンから単離した、ＢａｍＨＩで制限酵素処理したＤＮＡに由来する制限酵素処理フラグメントを示す電気泳動ゲルである。
【図４】[0048]ＢＬＩＶプラスミドを形質導入した選択された大腸菌クローンから単離した、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、およびＰｓｔＩで制限酵素処理したＤＮＡに由来する制限酵素処理フラグメントを示す電気泳動ゲルである。
【図５】[0049]ＢＬＩＶ−ＣＡＲ−短ヒンジコンストラクトを含有するレンチウイルスベクターの構築に必要とされるプラスミドをトランスフェクト下２９３Ｔ細胞およびレンチウイルスベクターを含有する上清を形質導入した２９３Ｔ細胞の顕微鏡画像を示す図である。
【図６】[0050]ＢＬＩＶ−ＣＡＲ−長ヒンジコンストラクトを含有するレンチウイルスベクターの構築に必要とされるプラスミドをトランスフェクト下２９３Ｔ細胞およびレンチウイルスベクターを含有する上清を形質導入した２９３Ｔ細胞の顕微鏡画像を示す図である。
【図７】[0051]ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒトＣＤ８＋Ｔ細胞エンリッチメントキットで精製したＴ細胞の細胞純度のＦＡＣＳ分析である。
【図８】[0052]ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＢＴ５４９細胞の共培養を含む、殺滅アッセイのＦＡＣＳ分析である。
【図９】[0053]ＢＬＩＶ−ＣＡＲ−短ヒンジプラスミドおよびＢＬＩＶ−ＣＡＲ−長ヒンジプラスミドを含有するレンチウイルスベクターを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞の４８時間の共培養後に消失した色素標識した標的細胞の割合を、形質導入していないＣＤ８＋Ｔ細胞および空のＢＬＩＶプラスミドを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞と比較して図示するグラフである。
【図１０】[0054]ＰＥＰ２−２−１−１、ＰＥＰ２−４７２−２、およびＰＥＰ２−２−１２結合ペプチドと、ｎｆ−Ｐ２Ｘ７受容体に方向付けられた抗体とのアライメントである。
【図１１】[0055]本発明のさらなる実施形態による抗ｎｆ  Ｐ２Ｘ７受容体ＣＡＲの配置を示す概略図である。
【図１２】[0056]図１１の抗ｎｆ  Ｐ２Ｘ７受容体ＣＡＲの発現に使用されるｐＣＤＨプラスミドを示す概略図である。
【図１３】[0057]ｐＣＤＨプラスミドを形質転換した選択されたＳｕｒｅ  ２クローンから単離した、ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔ  Ｉで制限酵素処理したＤＮＡに由来する制限酵素処理フラグメントを示す電気泳動ゲルの図である。
【図１４】[0058]ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のトランスフェクション効率のＦＡＣＳ分析である。
【図１５】[0059]レンチウイルス形質導入効率のＦＡＣＳ分析の代表的なヒストグラムである。
【図１６】[0060]ＧＦＰを発現する形質転換したＣＤ８細胞の割合のＦＡＣＳ分析である。
【図１７】[0061]非機能性Ｐ２Ｘ７受容体および機能性Ｐ２Ｘ７受容体の生成のための融合タンパク質の骨格の図である。
【図１８】[0062]ｐＤＯＮＲ−１０７ベクターを含有するＥＸＤ２＿Ｋ１９３ＡまたはＥＸＤ２＿ＷＴを形質転換した選択されたＥ．ｃｌｏｎｉ（登録商標）１０Ｇクローンから単離した、Ｂａｍ  ＨＩおよびＰｍｅＩで制限酵素処理したＤＮＡに由来する制限酵素処理フラグメントを示す電気泳動ゲルの図である。
【図１９】[0063]ｐＬＶ−４１６ベクターを含有するＥＸＤ２＿Ｋ１９３ＡまたはＥＸＤ２＿ＷＴを形質転換した選択されたＥ．ｃｌｏｎｉ（登録商標）１０Ｇクローンから単離した、Ｂａｍ  ＨＩで制限酵素処理したＤＮＡに由来する制限酵素処理フラグメントを示す電気泳動ゲルの図である。
【図２０】[0064]ＨＥＫ２９３細胞への、ｐＬＶ−４１６−ＥＸＤ２＿Ｋ１９３ＡおよびｐＬＶ−４１６−ＥＸＤ２＿ＷＴのレンチウイルスパッケージングの形質導入のＦＡＣＳ分析である。
【図２１】[0065]ＨＥＫ２９３への、ｐＬＶ−４１６−ＥＸＤ２＿Ｋ１９３ＡコンストラクトまたはｐＬＶ−４１６−ＥＸＤ２＿ＷＴコンストラクトのいずれかを含有するレンチウイルスの形質導入のＦＡＣＳ分析である。
【図２２】[0066]ＰＥＰ２−２−１−１、ＰＥＰ２−４７２−２  ＣＡＲを発現するＴ細胞による、ｎｆＰ２Ｘ７を発現するＨＥＫ標的細胞および２３１乳がん細胞の殺滅を図示するグラフである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５０】
[0271]例えば、本出願による優先権を主張すること、分割状態を請求することによって、および／または継続状態を請求することによって、本出願に基づいて、今後の特許出願が出願されてもよい。以下の特許請求の範囲が、任意のそのような今後の出願において特許出願され得る範囲を制限するように意図するものではないことが理解される。
発明の態様
［態様１］抗原認識ドメインとシグナル伝達ドメインとを含むキメラ抗原受容体であって、抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を認識する、キメラ抗原受容体。
［態様２］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）結合部位と関連するエピトープを認識する、請求項１に記載のキメラ抗原受容体。
［態様３］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体が、野生型（機能性）Ｐ２Ｘ７受容体のＡＴＰ結合能力と比較して低減されたＡＴＰに結合する能力を有する、請求項１または２に記載のキメラ抗原受容体。
［態様４］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体が、受容体を機能障害性にする立体配置の変化を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様５］立体配置の変化が、アミノ酸のトランス配置からシス配置への変化である、請求項４に記載のキメラ抗原受容体。
［態様６］トランス配置からシス配置へ変化したアミノ酸が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体のアミノ酸２１０位のプロリンである、請求項５に記載のキメラ抗原受容体。
［態様７］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体のアミノ酸２１０位のプロリンを含むエピトープを認識する、請求項１から６のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様８］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体のアミノ酸２００位のグリシンからアミノ酸２１６位システインにわたる１つまたは複数のアミノ酸残基を含むエピトープを認識する、請求項１から７のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様９］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に結合する抗体またはそのフラグメントのアミノ酸配列に対するアミノ酸配列相同性を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１０］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に結合する抗体の抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）部分のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列相同性を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１１］前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項９または１０に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１２］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に結合する一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列相同性を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１３］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に結合する多価一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列相同性を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１４］多価一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）が、二価ｓｃＦｖまたは三価ｓｃＦｖである、請求項１３に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１５］抗原認識ドメインが、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に結合する単一抗体ドメイン（ｓｄＡｂ）のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列相同性を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１６］シグナル伝達ドメインが、活性化受容体に由来する部分を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１７］活性化受容体が、ＣＤ３共受容体複合体のメンバーである、請求項１６に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１８］ＣＤ３共受容体複合体に由来する部分が、ＣＤ３−ζである、請求項１７に記載のキメラ抗原受容体。
［態様１９］活性化受容体が、Ｆｃ受容体である、請求項１６に記載のキメラ抗原受容体。
［態様２０］Ｆｃ受容体に由来する部分が、ＦｃεＲＩまたはＦｃγＲＩである、請求項１９に記載のキメラ抗原受容体。
［態様２１］シグナル伝達ドメインが、共刺激性受容体に由来する部分を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様２２］シグナル伝達ドメインが、活性化受容体に由来する部分と、共刺激性受容体に由来する部分とを含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体。
［態様２３］共刺激性受容体が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＤＡＰ１０、ＯＸ４０、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、およびＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項２１または２２に記載のキメラ抗原受容体。
［態様２４］請求項１から２３のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
［態様２５］請求項２４に記載の核酸分子を含む、核酸コンストラクト。
［態様２６］核酸分子の発現が、転写制御配列の制御下にある、請求項２５に記載の核酸コンストラクト。
［態様２７］転写制御配列が、構成的プロモーターである、請求項２６に記載の核酸コンストラクト。
［態様２８］転写制御配列が、誘導性プロモーターである、請求項２６に記載の核酸コンストラクト。
［態様２９］内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をさらに含む、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の核酸コンストラクト。
［態様３０］核酸コンストラクトが、ベクターである、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の核酸コンストラクト。
［態様３１］ベクターが、ウイルスベクターである、請求項３０に記載の核酸コンストラクト。
［態様３２］請求項１から２３のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体を含む、遺伝子改変された細胞。
［態様３３］２つまたはそれ以上の異なるキメラ抗原受容体を含む、請求項３２に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様３４］請求項２４に記載の核酸分子、または請求項２５から３１のいずれか一項に記載の核酸コンストラクト、または前記核酸コンストラクトのゲノム組込み形態を含む、遺伝子改変された細胞。
［態様３５］核酸分子または核酸コンストラクトが、２つまたはそれ以上の異なるキメラ抗原受容体をコードする、請求項３４に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様３６］２つまたはそれ以上の異なるキメラ抗原受容体が、異なるシグナル伝達ドメインを有する、請求項３３または３５に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様３７］活性化受容体に由来する部分を含むシグナル伝達ドメインを有する第１のキメラ抗原受容体と、共刺激性受容体に由来する部分を含むシグナル伝達ドメインを有する第２のキメラ抗原受容体とを含む、請求項３２から３６のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様３８］活性化受容体が、ＣＤ３共受容体複合体のメンバーであるか、またはＦｃ受容体である、請求項３７に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様３９］共刺激性受容体が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＤＡＰ１０、ＯＸ４０、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、およびＩＣＯＳからなる群から選択される、請求項３７または３８に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４０］共刺激性受容体を構成的に発現するようにさらに改変される、請求項３２から３６のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４１］共刺激性受容体のリガンドを発現し、それによって細胞の自己刺激が促進されるように、さらに改変される、請求項４０に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４２］サイトカインを分泌するようにさらに改変される、請求項３２から４１のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４３］サイトカインが、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、およびＩＬ−２１、またはそれらの組合せからなる群から選択される、請求項４２に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４４］白血球である、請求項３２から４３のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４５］末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項３２から４４のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４６］リンパ球である、請求項３２から４５のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４７］Ｔ細胞である、請求項３２から４６のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４８］Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞である、請求項４７に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様４９］Ｔ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項４７に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様５０］ナチュラルキラー細胞である、請求項３２から４６のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様５１］ナチュラルキラーＴ細胞である、請求項３２から４６のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞。
［態様５２］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を殺滅させる方法であって、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を、キメラ抗原受容体を有する遺伝子改変された細胞に曝露するステップを含み、キメラ抗原受容体が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に方向付けられている、方法。
［態様５３］キメラ抗原受容体が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を直接的に認識する、請求項５２に記載の方法。
［態様５４］キメラ抗原受容体が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を、仲介物を介して認識する、請求項５２に記載の方法。
［態様５５］仲介物が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に結合するプローブであり、キメラ抗原受容体が、プローブを認識する、請求項５４に記載の方法。
［態様５６］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を、プローブに曝露するステップをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
［態様５７］プローブが、抗体またはアプタマーである、請求項５５または５６に記載の方法。
［態様５８］プローブが、タグを含み、キメラ抗原受容体が、タグを認識する、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の方法。
［態様５９］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を殺滅させる方法であって、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を、請求項３２から５１のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞に曝露するステップを含む、方法。
［態様６０］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞を、外因性サイトカインに曝露するステップをさらに含む、請求項５２から５９のいずれか一項に記載の方法。
［態様６１］遺伝子改変された細胞が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞にとって自己である遺伝子改変された細胞である、請求項５２から６０のいずれか一項に記載の方法。
［態様６２］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞が、対象の体内にある、請求項５２から６１のいずれか一項に記載の方法。
［態様６３］機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体を発現する細胞が、がん細胞である、請求項５２から６２のいずれか一項に記載の方法。
［態様６４］がん細胞が、脳のがん、食道がん、口腔がん、舌がん、甲状腺がん、肺がん、胃がん、膵臓がん、腎臓がん、結腸がん、直腸がん、前立腺がん、膀胱がん、子宮頸がん、上皮細胞がん、皮膚がん、白血病、リンパ腫、骨髄腫、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、および精巣がんのうちの１つまたは複数から選択される、請求項６３に記載の方法。
［態様６５］がん細胞が、肺がん、食道がん、胃がん、結腸がん、前立腺がん、膀胱がん、子宮頸がん、膣がん、上皮細胞がん、皮膚がん、血液関連のがん、乳がん、子宮内膜がん、子宮がん、および精巣がんのうちの１つまたは複数から選択される、請求項６３に記載の方法。
［態様６６］がんが、転移性である、請求項６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
［態様６７］がんが、ステージＩＩＩのがんである、請求項６３から６６のいずれか一項に記載の方法。
［態様６８］がんが、ステージＩＶのがんである、請求項６３から６６のいずれか一項に記載の方法。
［態様６９］請求項３２から５１のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞を、インビトロで増殖させる方法であって、前記細胞を、キメラ抗原受容体の抗原に曝露するステップを含む、方法。
［態様７０］前記細胞を、サイトカインに曝露するステップをさらに含む、請求項６９に記載の方法。
［態様７１］請求項３２から５１のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞を、インビトロで増殖させる方法であって、前記細胞を、キメラ抗原受容体の抗原に曝露し、同時に前記細胞をサイトカインに曝露するステップを含む、方法。
［態様７２］サイトカインが、ＩＬ−２サブファミリー、インターフェロンサブファミリー、ＩＬ−１０サブファミリー、ＩＬ−１サブファミリー、ＩＬ−１７サブファミリー、またはＴＧＦ−βサブファミリーのメンバーである、請求項７０または７１に記載の方法。
［態様７３］サイトカインが、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、およびＧＭ−ＣＳＦ、またはこれらの組合せからなる群から選択される、請求項７０または７１に記載の方法。
［態様７４］請求項３２から５１のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞を、インビトロで増殖させる方法であって、前記細胞を、固定化された抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体に曝露するステップを含む、方法。
［態様７５］請求項３２から５１のいずれか一項に記載の遺伝子改変された細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
［態様７６］サイトカインをさらに含む、請求項７５に記載の医薬組成物。
［態様７７］サイトカインが、ＩＬ−２サブファミリー、インターフェロンサブファミリー、ＩＬ−１０サブファミリー、ＩＬ−１サブファミリー、ＩＬ−１７サブファミリー、またはＴＧＦ−βサブファミリーのメンバーである、請求項７６に記載の医薬組成物。
［態様７８］サイトカインが、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、およびＧＭ−ＣＳＦ、またはこれらの組合せからなる群から選択される、請求項７６に記載の医薬組成物。
［態様７９］仲介物をさらに含む、請求項７５から７８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
［態様８０］仲介物が、機能障害性Ｐ２Ｘ７受容体に結合するプローブであり、キメラ抗原受容体が、プローブを認識する、請求項７９に記載の医薬組成物。
［態様８１］プローブが、抗体またはアプタマーである、請求項８０に記載の医薬組成物。
［態様８２］プローブが、タグを含み、キメラ抗原受容体が、タグを認識する、請求項８０または８１に記載の医薬組成物。