(57)【要約】  本発明は、粗比容の小さいＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶、及びその製造方法を提供することを目的とする。本発明は、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下である、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶及びその製造方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下である、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶。
【請求項２】
安息角が５０°以下である、請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
結晶が、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶である、請求項１又は２に記載の結晶。
【請求項４】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、１３．７±０．２°、２０．７±０．２°、及び３４．９±０．２°にピークを有する、請求項３に記載の結晶。
【請求項５】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、さらに、２１．５±０．２°、及び２２．３±０．２°にピークを有する、請求項４に記載の結晶。
【請求項６】
結晶が、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶である、請求項１又は２に記載の結晶（ただし、ｎは０より大きい任意の数を表わす）。
【請求項７】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、１０．７±０．２°、２０．７±０．２°、２１．４±０．２°、２３．３±０．２°、及び３４．８±０．２°にピークを有する、請求項６に記載の結晶。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、さらに、１８．４±０．２、２４．７±０．２°、２７．９±０．２°、及び３２．３±０．２°にピークを有する、請求項７に記載の結晶。
【請求項９】
結晶が、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶である、請求項１又は２に記載の結晶。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、１１．６±０．２°、２３．３±０．２°、２３．９±０．２°、２７．９±０．２°、及び３５．３°±０．２°にピークを有する、請求項９に記載の結晶。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、さらに、７．９±０．２°、１２．８±０．２°、１８．３±０．２°、２１．６±０．２°、及び２４．７±０．２°にピークを有する、請求項１０に記載の結晶。
【請求項１２】
下記の工程（１ａ）〜（１ｃ）を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の結晶の製造方法（ただし、ｎは請求項６と同義）。
（１ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液にエタノールを添加又は滴下することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を析出させる工程、又は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をエタノール水溶液に懸濁することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶に転移させる工程
（１ｂ）該析出した、又は該転移したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を、前記Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液又はエタノール水溶液から採取する工程
（１ｃ）該採取したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を通風乾燥することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を取得する工程
【請求項１３】
下記の工程（２ａ）〜（２ｃ）を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の結晶の製造方法。
（２ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に冷却することにより、又はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に保ちながら該水溶液にアルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる少なくとも１の溶媒を添加又は滴下することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させる工程
（２ｂ）該析出したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を採取する工程
（２ｃ）該採取したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を４０℃以上で乾燥させることにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を取得する工程
【請求項１４】
下記の工程（１ａ）及び（１ｂ）を含む、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の製造方法（ただし、ｎは請求項６と同義）。
（１ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液にエタノールを添加又は滴下することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を析出させる工程、又は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をエタノール水溶液に懸濁することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶に転移させる工程
（１ｂ）該析出した、又は該転移したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を、前記のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液又はエタノール水溶液から採取する工程
【請求項１５】
下記の工程（２ａ）及び（２ｂ）を含む、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の製造方法。
（２ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に冷却することにより、又はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に保ちながら該水溶液にアルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる少なくとも１の溶媒を添加又は滴下することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させる工程
（２ｂ）該析出したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を該水溶液から採取する工程
【請求項１６】
アルコール類が、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール及びイソプロピルアルコールからなる群より選ばれるアルコール類である、請求項１３又は１５に記載の製造方法。
【請求項１７】
ケトン類がアセトンである、請求項１３又は１５に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料もしくは中間体等として有用であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンは、Ｌ−アラニンとＬ−グルタミンから構成されるジペプチドであり、Ｌ−グルタミンと同様に、細胞分裂のエネルギー源として利用されること、創傷治癒促進効果を有すること等が知られている。一方、安定性及び水に対する溶解度は、Ｌ−グルタミンと比べて大きく向上しているため、輸液の成分などの医薬品原料、化粧品、又は無血清培地の成分として幅広く用いられている。【０００３】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶としては、無水和物（特許文献１）及び１水和物（特許文献２、並びに非特許文献１及び２）の結晶が知られている。これらの結晶は、例えば、発酵法、酵素法、又は化学合成法等により得られるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの水溶液に溶媒を添加して晶析を行うことにより製造される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】日本国特許第４９３１８０１号
【特許文献２】日本国特開昭３６−１１４７５号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Bulletin of the Chemical Society of Japan (1961)、34、p739
【非特許文献２】Bulletin of the Chemical Society of Japan (1962)、35、p1966-1970
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、特許文献１及び２並びに非特許文献１及び２に記載の製造方法では、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶成長速度が非常に遅いため、結晶が大型化しにくく、また、得られる結晶はいずれも針状結晶である。そのため、当該製造方法によって得られる結晶は、比容積と安息角がともに大きく、容器への充填率が低い、また、打錠性が悪い、という問題があった。【０００７】
したがって、本発明は、粗比容の小さいＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶、及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、以下の（１）〜（１７）に関する。
（１）粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下である、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶。
（２）安息角が５０°以下である、上記（１）に記載の結晶。
（３）結晶が、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶である、上記（１）又は（２）に記載の結晶。
（４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、１３．７±０．２°好ましくは±０．１°、２０．７±０．２°好ましくは±０．１°、及び３４．９±０．２°好ましくは±０．１°にピークを有する、上記（３）に記載の結晶。
（５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、さらに、２１．５±０．２°好ましくは±０．１°、及び２２．３±０．２°好ましくは±０．１°にピークを有する、上記（４）に記載の結晶。
（６）結晶が、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶である、上記（１）又は（２）に記載の結晶（ただし、ｎは０より大きい任意の数、好ましくは０より大きく５以下の任意の数、より好ましくは０より大きく３以下の任意の数、さらに好ましくは０より大きく１以下の任意の数、特に好ましくは０より大きく１以下である任意の小数第１位までの数、最も好ましくは０より大きく１以下である任意の少数第２位までの数を表わす）。
（７）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、１０．７±０．２°好ましくは±０．１°、２０．７±０．２°好ましくは±０．１°、２１．４±０．２°好ましくは±０．１°、２３．３±０．２°好ましくは±０．１°、及び３４．８±０．２°好ましくは±０．１°にピークを有する、上記（６）に記載の結晶。
（８）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、さらに、１８．４±０．２°好ましくは±０．１°、２４．７±０．２°好ましくは±０．１°、２７．９±０．２°好ましくは±０．１°、及び３２．３±０．２°好ましくは±０．１°にピークを有する、上記（７）に記載の結晶。
（９）結晶が、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶である、上記（１）又は（２）に記載の結晶。
（１０）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、１１．６±０．２°好ましくは±０．１°、２３．３±０．２°好ましくは±０．１°、２３．９±０．２°好ましくは±０．１°、２７．９±０．２°好ましくは±０．１°、及び３５．３°±０．２°好ましくは±０．１°にピークを有する、上記（９）に記載の結晶。
（１１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ°）が、さらに、７．９±０．２°好ましくは±０．１°、１２．８±０．２°好ましくは±０．１°、１８．３±０．２°好ましくは±０．１°、２１．６±０．２°好ましくは±０．１°、及び２４．７±０．２°好ましくは±０．１°にピークを有する、上記（１０）に記載の結晶。
（１２）下記の工程（１ａ）〜（１ｃ）を含む、上記（３）〜（５）のいずれか１つに記載の結晶の製造方法［ただし、ｎは上記（６）と同義］。
（１ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液にエタノールを添加又は滴下することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を析出させる工程、又は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をエタノール水溶液に懸濁することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶に転移させる工程
（１ｂ）該析出した、又は該転移したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を、前記Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液又はエタノール水溶液から採取する工程
（１ｃ）該採取したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を通風乾燥することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を取得する工程
（１３）下記の工程（２ａ）〜（２ｃ）を含む、上記（３）〜（５）のいずれか１つの結晶の製造方法。
（２ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に冷却することにより、又はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に保ちながら該水溶液にアルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる少なくとも１の溶媒を添加又は滴下することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させる工程
（２ｂ）該析出したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を採取する工程
（２ｃ）該採取したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を４０℃以上で乾燥させることにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を取得する工程、
（１４）下記の工程（１ａ）及び（１ｂ）を含む、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の製造方法［ただし、ｎは上記（６）と同義］。
（１ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液にエタノールを添加又は滴下することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を析出させる工程、又は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をエタノール水溶液に懸濁することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶に転移させる工程
（１ｂ）該析出した、又は該転移したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を、前記のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液又はエタノール水溶液から採取する工程
（１５）下記の工程（２ａ）及び（２ｂ）を含む、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の製造方法。
（２ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に冷却することにより、又はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に保ちながら該水溶液にアルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる少なくとも１の溶媒を添加又は滴下することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させる工程
（２ｂ）該析出したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を該水溶液から採取する工程
（１６）アルコール類が、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール及びイソプロピルアルコールからなる群より選ばれる少なくとも１のアルコール類である、上記（１３）又は（１５）に記載の製造方法。
（１７）ケトン類がアセトンである、上記（１３）又は（１５）に記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、粉体物性が改善されたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶、及びその製造方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、実施例１で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図２】図２は、実施例２で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶（９５℃にて６時間減圧乾燥）の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図３】図３は、実施例３で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図４】図４は、実施例５で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図５】図５は、実施例６で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図６】図６は、実施例８で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図７】図７は、実施例９で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図８】図８は、実施例１０で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図９】図９は、実施例１１で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【図１０】図１０は、実施例１２で得られた、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。縦軸は強度（ｃｐｓ）を、横軸は回折角２θ（°）を表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１．本発明の結晶
本発明の結晶は、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下、好ましくは４．５ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは４．０ｍＬ／ｇ以下、最も好ましくは３．７ｍＬ／ｇ以下である、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶である。
【００１２】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンとは、Ｌ−アラニンのカルボキシル基とＬ−グルタミンのアミノ基がペプチド結合して形成されたジペプチドをいう。
【００１３】
粗比容とは、容器に粉体を充填してその質量を測定した際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。粗比容が小さい結晶は、充填性に優れ、各種加工工程におけるハンドリングが容易であり、また輸送面でのコストも低い。そのため、粗比容は小さいことが好ましい。
【００１４】
粗比容は、５０ｍＬのガラスメスシリンダーに２段のガラス製漏斗を経由して４５ｍＬ程度の体積となるように結晶を投下し、該結晶の重量を測定する方法で測定することができる。測定した結晶の体積を重量で割った値を粗比容とする。
【００１５】
また、本発明の結晶の一態様としては、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下であり、かつ安息角が好ましくは５０°以下、より好ましくは４９°以下、さらに好ましくは４８°以下、最も好ましくは４７°以下であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶を挙げることができる。
【００１６】
安息角とは、粉体を漏斗のようなもので水平な面に静かに落下させた時に粉体で形成される円錐体の母線と水平面のなす角のことをいう。
【００１７】
安息角が大きい結晶は、ホッパーから排出する際、ホッパー底部の傾斜角が安息角の角度よりも大きくなければホッパー底部から完全に排出することができないので、装置が限定され、ハンドリングが煩雑となる。また、安息角が大きい結晶は、流動性が悪い。そのため、安息角は小さいことが好ましい。
【００１８】
安息角は、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って、下記に記載の条件で測定することができる。
【００１９】
［安息角の測定条件］
使用機器：マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）
ふるい：１．１８ｍｍ
振動幅：０．７〜０．８ｍｍ
安息角の測定方法の具体例：０．７〜０．８ｍｍの幅で振動させた１．１８ｍｍのふるいを経由して結晶を落下させながら、安息角テーブル（部品番号：ＭＴ−１０２８）の上に堆積させる。安息角テーブルに振動を与えないように回転させて、３ヶ所で角度を読み、それらの相加平均値を安息角とする。
【００２０】
本発明の結晶の態様として、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶が挙げられる。以下、各態様について説明する。
【００２１】
２．本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶
本発明の結晶の一態様としては、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下である、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を挙げることができる（以下、「本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶」ともいう。）。
【００２２】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の一態様としては、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下であり、かつ安息角が好ましくは５０°以下であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を挙げることができる。
【００２３】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶が、無水和物の結晶であることは、下記の測定例に記載の方法に従って熱分析を用いて測定した水分含量が、通常３．０重量％以下、好ましくは２．５重量％以下、より好ましくは２．０重量％以下であることにより確認することができる。
【００２４】
［熱分析による結晶中の水分含量の測定例］
使用機器：ＥＸＳＴＡＲ  ６０００  ＴＧ／ＤＴＡ  ６２００（セイコーインスツル社製）
測定条件：２０℃から３０℃まで２０℃／ｍｉｎで昇温→３０℃にて１５ｍｉｎ保持→３０℃から２５０℃まで５℃／ｍｉｎで昇温
窒素流速：３００ｍＬ／ｍｉｎ
サンプリング間隔：０．５秒
【００２５】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の一態様としては、密比容が、好ましくは３．０ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは２．９ｍＬ／ｇ以下の結晶を挙げることができる。
【００２６】
密比容とは、容器に粉体を充填してその質量を測定したのちに容器に一定の衝撃を加えた際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。
【００２７】
密比容が小さい結晶は、充填性に優れ、輸送面でのコストも低い。そのため、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶としては、密比容が小さいことが好ましい。
【００２８】
密比容は、５０ｍＬのガラスメスシリンダーに２段のガラス製漏斗を経由して４５ｍＬ程度の容積となるように結晶を投下し、該結晶の重量を測定しのちに該メスシリンダーを１００回上下させてタッピングし、該結晶の占める容積を測定する方法で測定することができる。測定した結晶の体積を重量で割った値を密比容とする。
【００２９】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の一態様としては、粗比容と密比容の差が、好ましくは２．５ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは２．０ｍＬ／ｇ以下の結晶を挙げることができる。粗比容と密比容の差とは、粗比容から密比容を引いた際の正の値のことをいう。
【００３０】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の一態様としては、崩壊角が、好ましくは４５°以下、より好ましくは４２°以下の結晶を挙げることができる。
【００３１】
崩壊角とは、粉体を漏斗のようなもので水平な面に静かに落下させた時に粉体で形成される円錐体に、間接的に一定の衝撃を加えた際形成される、円錐体の母線と水平面のなす角のことをいう。
【００３２】
崩壊角と安息角の差が大きい結晶は噴流性が高く制御が困難であるため、崩壊角と安息角の差は小さいことが好ましい。
【００３３】
崩壊角は、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用いて、付属のマニュアルに従って、下記の具体例に記載の方法で測定することができる。
【００３４】
［崩壊角の測定方法の具体例］
安息角を測定後、安息角テーブルユニット（部品番号：ＭＴ−１０２８）の下についている鍾をゆっくりタッピングテーブルの下まで持ち上げて落下させる。この操作を３回繰り返す。安息角の測定方法と同様の方法で３ヶ所の角度を読み、それらの相加平均値を崩壊角とする。
【００３５】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の一態様としては、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折において、下記（ｘ１）に記載の回折角（２θ°）にピークを有する結晶が好ましく、下記（ｘ１）に加えてさらに（ｘ２）に記載の回折角（２θ°）にピークを有する結晶がより好ましい。
（ｘ１）１３．７±０．２°好ましくは±０．１°、２０．７±０．２°好ましくは±０．１°、及び３４．９±０．２°好ましくは±０．１°
（ｘ２）２１．５±０．２°好ましくは±０．１°、及び２２．３±０．２°好ましくは±０．１°
【００３６】
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の一態様として、より具体的には、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図４、図８、図９、及び図１０に示すパターン、並びに表７、表１４、表１５、及び表１６に示される回折角の値で規定される結晶を挙げることができる。粉末Ｘ線回折は、下記の測定例に記載の方法に従って行うことができる。
【００３７】
［粉末Ｘ線回折の測定例］
使用機器：粉末Ｘ線回折装置（ＸＲＤ）Ｕｌｔｉｍａ  ＩＶ（リガク社製）
陽極：Ｃｕ
波長：１．５４１８Å
【００３８】
３．本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶
本発明の結晶の一態様としては、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下である、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を挙げることができる（以下、「本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶」ともいう。）。
【００３９】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物とは、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン１分子に対して、ｎ個のエタノール分子が配位して形成された化合物の結晶をいう。本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶において、ｎは０より大きい任意の数、好ましくは０より大きく５以下の任意の数、より好ましくは０より大きく３以下の任意の数、さらに好ましくは０より大きく１以下の任意の数、特に好ましくは０より大きく１以下である任意の小数第１位までの数、最も好ましくは０より大きく１以下である任意の少数代２位までの数を表わす。
【００４０】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶がｎエタノール和物結晶であることは、下記の分析例に記載の方法に従ってガスクロマトグラフを用いて測定したエタノール含量が、通常０．５〜１６重量％、好ましくは３．０〜１６重量％、より好ましくは５．０〜１６重量％であることにより確認することができる。
【００４１】
［ガスクロマトグラフを用いた分析例］使用機器：ＧＣ−２０１４（島津製作所製）
カラム充填剤：Ａｄｓｏｒｂ  Ｐ−１  ６０／８０ｍｅｓｈ（西尾工業社製）
カラム温度：１２０℃
気化室温度：１５０℃
ヘリウム流速：３０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器温度：２２０℃
試料調製方法：Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を約１．０ｇ秤量し、蒸留水に溶解させて１０ｍＬに調整したものを試料とする。
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶中のエタノール含量及びｎの値としては、具体的には、表６に示すエタノール含量及びｎの値を挙げることができる。
【００４２】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の一態様としては、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下であり、かつ安息角が好ましくは５０°以下である結晶を挙げることができる。
【００４３】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の一態様としては、密比容が、好ましくは３．０ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは２．５ｍＬ／ｇ以下の結晶を挙げることができる。
【００４４】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の一態様としては、粗比容と密比容の差が、好ましくは２．０ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは１．５ｍＬ／ｇ以下の結晶を挙げることができる。
【００４５】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の一態様としては、崩壊角が、好ましくは４５°以下、より好ましくは４０°以下の結晶を挙げることができる。
【００４６】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の一態様としては、Ｘ線源としてＣｕＫαを陽極として用いた粉末Ｘ線回折において、下記（ｙ１）に記載の回折角（２θ°）にピークを有する結晶が好ましく、下記（ｙ１）に加えてさらに（ｙ２）に記載の回折角（２θ°）にピークを有する結晶がより好ましい。
（ｙ１）１０．７±０．２°好ましくは±０．１°、２０．７±０．２°好ましくは±０．１°、２１．４±０．２°好ましくは±０．１°、２３．３±０．２°好ましくは±０．１°、及び３４．８±０．２°好ましくは±０．１°
（ｙ２）１８．４±０．２好ましくは±０．１°、２４．７±０．２°好ましくは±０．１°、２７．９±０．２°好ましくは±０．１°、及び３２．３±０．２°好ましくは±０．１°
【００４７】
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の一態様として、より具体的には、Ｘ線源としてＣｕＫαを陽極として用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図１、図２、及び図３に示すパターン、並びに表２、表３、及び表４に示される回折角の値で規定される結晶を挙げることができる。
【００４８】
結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、シミュレーションを行うことにより、単結晶構造から算出することもできる。単結晶構造を決定する方法としては、単結晶Ｘ線解析による構造解析を挙げることができる。例えば、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物の単結晶を回折計に取り付け、室温の大気中あるいは所定の温度の不活性ガス気流中で、所定の波長のＸ線を用いて、回折画像を測定し、回折画像から算出された画指数と回折強度の組から、直接法による構造決定と最小二乗法による構造精密化を行い、単結晶構造を得ることができる。具体的には、例えば、Ｒ−ＡＸＩＳ  ＲＡＰＩＤ−Ｆ（リガク社製）を用い、使用説明書に従い、単結晶構造を得ることができる。
【００４９】
単結晶構造から粉末Ｘ線回折パターンのシミュレーションを行う方法としては、例えば、結晶構造表示プログラムＭｅｒｃｕｒｙ（ケンブリッジ結晶学データセンター）やＰｏｗｄｅｒＣｅｌｌ（ドイツ連邦材料研究試験所）を用いることができる。結晶の格子定数と原子座標、そして計算に用いるＸ線の波長を入力することにより、粉末Ｘ線回折パターンを算出することができる。
【００５０】
４．本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶
本発明の結晶の一態様としては、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下である、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を挙げることができる（以下、「本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶」ともいう。）。
【００５１】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物とは、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン１分子に対して、２個の水分子が配位して形成された化合物をいう。
【００５２】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶が２水和物の結晶であることは、下記の測定例に記載のカールフィッシャー法を用いて測定した水分含量が、８〜２０重量％、好ましくは１０〜１８重量％、より好ましくは１２〜１６重量％であることにより確認することができる。
【００５３】
［カールフィッシャー法による結晶中の水分含量の測定例］
使用機器：ＭＫＡ−５１０Ｎ／ＭＫＳ−５１０Ｎ（京都電子工業社製）
測定方法の具体例：ＭＫＡ−５１０Ｎ／ＭＫＳ−５１０Ｎ（京都電子工業社製）の使用説明書に従って結晶中の水分含量を測定する。
【００５４】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の一態様としては、粗比容が５．０ｍＬ／ｇ以下であり、かつ安息角が好ましくは５０°以下のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を挙げることができる。
【００５５】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の一態様としては、密比容が、好ましくは３．０ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは２．８ｍＬ／ｇ以下の結晶を挙げることができる。
【００５６】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の一態様としては、粗比容と密比容の差が、好ましくは２．０ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは１．０ｍＬ／ｇ以下の結晶を挙げることができる。
【００５７】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の一態様としては、崩壊角が、好ましくは４５°以下、より好ましくは４０°以下の結晶を挙げることができる。
【００５８】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の一態様としては、Ｘ線源としてＣｕＫαを陽極として用いた粉末Ｘ線回折において、下記（ｚ１）に記載の回折角（２θ°）にピークを有する結晶が好ましく、下記（ｚ１）に加えてさらに（ｚ２）に記載の回折角（２θ°）にピークを有する結晶がより好ましい。
（ｚ１）１１．６±０．２°好ましくは±０．１°、２３．３±０．２°好ましくは±０．１°、２３．９±０．２°好ましくは±０．１°、２７．９±０．２°好ましくは±０．１°、及び３５．３°±０．２°好ましくは±０．１°
（ｚ２）７．９±０．２°好ましくは±０．１°、１２．８±０．２°好ましくは±０．１°、１８．３±０．２°好ましくは±０．１°、２１．６±０．２°好ましくは±０．１°、及び２４．７±０．２°好ましくは±０．１°
【００５９】
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の一態様として、より具体的には、Ｘ線源としてＣｕＫαを陽極として用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図５、図６、及び図７に示すパターン、並びに表１０、表１２、及び表１３に示される回折角の値で規定されるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を挙げることができる。
【００６０】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の粉末Ｘ線回折パターンは、上記３と同様の方法により、シミュレーションを行うことにより、単結晶構造から算出することができる。
【００６１】
５．本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶、及び本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の製造方法
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の製造方法としては以下の５．１に記載の製造方法を、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の製造方法としては以下の５．２に記載の製造方法を、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の製造方法としては以下の５．３又は５．４に記載の製造方法を挙げることができる。
【００６２】
５．１  本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の製造方法
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の製造方法は、下記の工程（１ａ）及び（１ｂ）を含む。
（１ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液にエタノールを添加又は滴下することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を析出させる工程、又は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をエタノール水溶液に懸濁することによりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶に転移させる工程
（１ｂ）該析出、又は該転移させて得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を、前記のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液又はエタノール水溶液から採取する工程
【００６３】
５．１．１  工程（１ａ）
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液に含有されるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンは、発酵法、酵素法、天然物からの抽出法、化学合成法等のいずれの製造方法によって製造されたものであってもよい。
【００６４】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液に、結晶化に障害となる固形物が含まれている場合には、遠心分離、濾過又はセラミックフィルタ等を用いて固形物を除去することができる。
【００６５】
また、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液に、結晶化の障害となる水溶性の不純物や塩が含まれる場合には、イオン交換樹脂等を充填したカラムに通塔すること等により、当該水溶液中の不純物や塩を除去することができる。
【００６６】
また、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液に、結晶化に障害となる疎水性の不純物が含まれる場合には、合成吸着樹脂や活性炭等を充填したカラムに通塔する等により、疎水性の不純物を除去することができる。
【００６７】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの濃度としては、通常３００ｇ／Ｌ以上、好ましくは４００ｇ／Ｌ以上、最も好ましくは４５０ｇ／Ｌ以上を挙げることができる。
【００６８】
エタノールの添加又は滴下時の条件としては、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を、通常１０〜５０℃、好ましくは１５〜５０℃、最も好ましくは２０〜５０℃に保ったまま、該水溶液に対して通常１〜５倍体積等量、好ましくは１〜３倍体積等量、最も好ましくは１〜２倍体積等量のエタノールを、通常１〜２４時間、好ましくは１〜２０時間、最も好ましくは１〜１６時間かけて添加又は滴下する条件を挙げることができる。
【００６９】
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の製造方法においては、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶が析出する前に、該水溶液中の濃度が通常０．２〜２５ｇ／Ｌ、好ましくは０．５〜１０ｇ／Ｌ、最も好ましくは２〜５ｇ／Ｌとなるように、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を種晶として添加してもよい。
【００７０】
種晶を添加する時間としては、エタノールの滴下又は添加を開始してから、通常１〜５時間後、好ましくは１〜４時間後、最も好ましくは１〜３時間後を挙げることができる。
【００７１】
上記のようにしてＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を析出させた後は、さらに、析出した結晶を通常５〜２５℃、好ましくは５〜２０℃、最も好ましくは５〜１５℃まで冷却し、１〜４８時間、好ましくは１〜２４時間、最も好ましくは１〜１２時間熟成させることができる。
【００７２】
結晶を熟成させるとは、エタノールを添加又は滴下する工程を停止して、結晶を成長させることをいう。
結晶を成長させるとは、析出した結晶を元にして、結晶を増大させることをいう。
結晶の熟成は、結晶を成長させることを主な目的として行うが、結晶の成長と同時に、新たな結晶の析出が起こっていてもよい。
【００７３】
結晶を熟成させた後は、エタノールを添加又は滴下する工程を再開してもよい。
【００７４】
また、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をエタノール水溶液に懸濁することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶に転移させることによっても取得することができる。
【００７５】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶は、日本国特許第４９３１８０１号公報に記載の方法に準じて取得することができる。
【００７６】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を、通常１０〜９０重量％、好ましくは２０〜８０重量％、最も好ましくは３０〜７０重量％のエタノール水溶液に、通常３００〜８００ｇ／Ｌ、好ましくは４００〜７５０ｇ／Ｌ、最も好ましくは５００〜７００ｇ／Ｌの濃度になるよう懸濁し、通常１０〜４０℃、好ましくは１５〜４０℃、最も好ましくは２０〜４０℃にて、通常４〜３２時間、好ましくは８〜２８時間、最も好ましくは１２〜２４時間、静置又は懸濁することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶をＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶に転移させることができる。
【００７７】
５．１．２  工程（１ｂ）  
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を水溶液から採取する工程においては、特に限定されないが、加圧濾過、吸引濾過、遠心分離等を行うことができる。さらに母液の付着を低減し、結晶の品質を向上させるために、適宜、結晶を洗浄することができる。
【００７８】
結晶洗浄に用いる溶液に特に制限はないが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、ｎ−プロパノール、イソプロピルアルコール及びそれらから選ばれる１種類又は複数種類を任意の割合で混合したものを用いることができる。
【００７９】
このようにして得られた湿晶を乾燥させることにより、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を取得することができる。
【００８０】
湿晶の乾燥条件としては、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を保持できる方法ならばいずれでもよく、例えば、減圧乾燥等を適用することができるが、通風乾燥は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を保持することができないことから、本工程では用いることはできない。乾燥温度としては、付着水分を除去できる範囲ならばいずれでもよいが、通常１０〜９５℃、より好ましくは２０〜６０℃を挙げることができる。
【００８１】
乾燥時間としては、通常４〜３６時間、好ましくは５〜２４時間、最も好ましくは６〜１６時間を挙げることができる。
【００８２】
５．２  本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の製造方法
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の製造方法は、下記の工程（２ａ）および（２ｂ）を含む。
（２ａ）Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に冷却することにより、又はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下に保ちながら該水溶液にアルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加又は滴下することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させる工程
（２ｂ）該析出したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を該水溶液から採取する工程
【００８３】
５．２．１  工程（２ａ）
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液に含有されるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンは、上記５．１．１と同様の方法で製造することができる。
【００８４】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液に、結晶化に障害となる固形物が含まれている場合、結晶化の障害となる水溶性の不純物や塩が含まれる場合、及び結晶化に障害となる疎水性の不純物が含まれる場合は、上記５．１．１と同様の方法をとることができる。
【００８５】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液を３５℃以下、好ましくは３０℃以下、より好ましくは２５℃以下に冷却することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させることができる。
【００８６】
Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの濃度としては、通常３００ｇ／Ｌ以上、好ましくは４００ｇ／Ｌ以上、最も好ましくは４５０ｇ／Ｌ以上を挙げることができる。
【００８７】
上記の方法に代えて、又は上記の方法によりＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させた後さらに、該水溶液を３５℃以下、好ましくは３０℃以下、より好ましくは２５℃以下に保ちながら、該水溶液にアルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加又は滴下することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させることができる。
【００８８】
アルコール類としては、好ましくはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール及びイソプロピルアルコールからなる群より選ばれるアルコール類を、より好ましくはメタノール、エタノール及びイソプロピルアルコールなる群より選ばれるアルコール類を、最も好ましくはイソプロピルアルコールを挙げることができる。
【００８９】
ケトン類としては、好ましくはアセトンを挙げることができる。
【００９０】
アルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加又は滴下する量としては、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンが溶解した水溶液の通常１〜５倍量、好ましくは１〜３倍量、最も好ましくは１〜２倍量を挙げることができる。
【００９１】
アルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる溶媒の添加又は滴下に要する時間としては、通常１〜１２時間、好ましくは２〜１１時間、最も好ましくは３〜１０時間を挙げることができる。
【００９２】
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の製造方法においては、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶が析出する前に、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有水溶液中の濃度が通常０．２〜２５ｇ／Ｌ、好ましくは０．５〜１０ｇ／Ｌ、最も好ましくは２〜５ｇ／Ｌとなるように、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を種晶として添加してもよい。
【００９３】
上記のようにしてＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を析出させた後は、さらに、析出した結晶を、通常０〜４０℃、好ましくは５〜３５℃、最も好ましくは１０〜３０℃にて、通常１〜４８時間、好ましくは１〜２４時間、最も好ましくは１〜１２時間熟成させることができる。
【００９４】
結晶を熟成させた後は、アルコール類及びケトン類からなる群より選ばれる溶媒を添加又は滴下する工程を再開してもよい。
【００９５】
５．２．２  工程（２ｂ）
工程（２ａ）において析出したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を該水溶液から採取する工程においては、特に限定されないが、例えば、加圧濾過、吸引濾過、遠心分離等を行うことができる。さらに母液の付着を低減し、結晶の品質を向上させるために、適宜、結晶を洗浄することができる。結晶洗浄に用いる溶液に特に制限はないが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、ｎ−プロパノール、イソプロピルアルコール及びそれらから選ばれる１種類または複数種類を任意の割合で混合したものを用いることができる。
【００９６】
このようにして得られた湿晶を乾燥させることにより、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を取得することができる。
【００９７】
湿晶の乾燥条件としては、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を保持できる方法ならばいずれでもよいが、例えば、減圧乾燥、通風乾燥、流動層乾燥等を適用することができる。
【００９８】
湿晶を乾燥させる温度としては、４０℃以上で乾燥させた場合、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶がＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶に転移するため、本工程では、通常０〜３５℃、より好ましくは１０〜３０℃にて乾燥させる。
【００９９】
５．３  本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の製造方法−１
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶は、５．１．２において上述した工程（１ｂ）により採取したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を乾燥させることにより、取得することができる。
【０１００】
具体的には、例えば、上記５．１．２で得られた本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を、通常１０〜４０℃、好ましくは１５〜３５℃の常温常圧の空気を用いて、通常１２〜３６時間、好ましくは１６〜３２時間、最も好ましくは２０〜２８時間、通風乾燥することにより、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を取得することができる。
【０１０１】
通風乾燥とは、例えば、湿晶をヌッチェ上に置いて吸引するか、フローコーターのような装置に入れるなどし、常温常圧の流動空気に曝して乾燥させる方法を挙げることができる。この際使用する流動空気は、予め湿度と温度を調整することができる。流動空気の湿度としては、通常３０％以上、好ましくは４０％以上、より好ましくは５０％以上を挙げることができる。
【０１０２】
また、上記の方法により取得された結晶に含有される残留エタノールは、上記３のガスクロマトグラフを用いた方法により測定することができる。本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶に含有される残留エタノールとしては、通常１．０重量％以下、好ましくは０．１重量％以下、最も好ましくは０．０１重量％以下を挙げることができる。
【０１０３】
５．４  本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の製造方法−２
本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶は、５．２．２において上述した工程（２ｂ）により採取したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物結晶を乾燥させることにより、取得することができる。
【０１０４】
具体的には、例えば、上記５．２．２で得られた本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を、減圧乾燥、通風乾燥等により、通常４０℃以上、好ましくは６０℃以上、最も好ましくは９５℃以上で乾燥させることにより、本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶を取得することができる。乾燥温度の上限値としては、通常２００℃以下、好ましくは１００℃以下を挙げることができる。
【０１０５】
乾燥時間としては、通常１〜３６時間、好ましくは２〜２４時間、最も好ましくは３〜１２時間を挙げることができる。
【実施例】
【０１０６】
以下に実施例を示すが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。【０１０７】
［実施例１］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の取得−１
日本国特許第４９３１８０１号公報に記載の方法に準じて取得したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶２００ｇを３００ｍＬの５０％エタノール水溶液に懸濁し、２５℃にて一晩静置した。その後、結晶を濾取して６０％エタノール水溶液で洗浄することにより、湿晶を得た。当該湿晶を２５℃にて６時間、減圧乾燥することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶（１７９．０ｇ）を得た。【０１０８】
当該結晶のエタノール含量をガスクロマトグラフを用いて測定した結果、１３．６重量％であった。また、熱分析による水分含量測定の結果、当該結晶は水分子を有しないことが分かった。これより、当該結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶（０．７４エタノール和物結晶）であることが分かった。【０１０９】
続いて、得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶を単結晶構造解析に供した。単結晶構造解析は、湾曲イメージングプレート単結晶自動Ｘ線構造解析装置  Ｒ−ＡＸＩＳ  ＲＡＰＩＤ−Ｆ（リガク社製）を用い、使用説明書に従って行った。ＣｕＫα線を用いて回折測定を行い、直接法によって初期構造を決定した後、最小二乗法によって構造精密化を行い、最終構造を得た。その結果、当該結晶が確かに分子内に水分子を有しないエタノール和物結晶であることが確認された。【０１１０】
さらに、得られた解析結果に基づき、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の粉末Ｘ線結晶回折パターンのシミュレーションを行った。シミュレーションは、単結晶Ｘ線解析によって決定された結晶構造を、Ｍｅｒｃｕｒｙに読み込ませて計算を行った。計算条件は以下の通りである。【０１１１】
Ｘ線の波長：１．５４０５６A（Ｃｕ  Ｋα１線相当）
２θ角の範囲：５−６０o
ピークの形状：擬フォークト関数
ピークの半値全幅（ＦＷＨＭ）：０．１o
シミュレーションの結果を表１に示す。【０１１２】
【表１】
2018117140.tif 000002
【０１１３】
また、当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表２に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。
【表２】
2018117140.tif 000003
【０１１４】
粉末Ｘ線回折の結果、得られた結晶は、上記シミュレーション結果から予想される回折角にピークを有したことから（表１及び表２）、シミュレーション結果が妥当であることが確認された。このことから、単結晶Ｘ線解析によって決定された結晶構造からシミュレーションした粉末Ｘ線結晶回折パターンは、実際の粉末Ｘ線回折の結果と一致することがわかった。【０１１５】
［実施例２］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の取得−２
実施例１で得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物の湿晶について、４０℃、６０℃、９５℃の各温度で減圧乾燥してＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶を得た。９５℃にて６時間減圧乾燥して得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表３に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１１６】
【表３】
2018117140.tif 000004
【０１１７】
粉末Ｘ線回折の結果、得られた結晶は、実施例１のシミュレーション結果から予想される回折角にピークを有した（表１及び表３）。また、当該結晶のエタノール含量をガスクロマトグラフを用いて測定した結果、７．３３重量％であり、熱分析による水分含量測定の結果、当該結晶は、水分子を有しないことが分かった。これより、当該結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶（０．３７エタノール和物結晶）であることが分かった。【０１１８】
また、後述の表６のとおり、４０℃、６０℃にて減圧乾燥した結晶のエタノール含量及び水分含量についても測定した結果、いずれの結晶も水分子を有しておらず、かつエタノールを含有していた。これより、これらの結晶もＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶であることが分かった。【０１１９】
［実施例３］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の取得−３
日本国特許第４９３１８０１号公報に記載の方法に準じて取得したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶３００ｇを水に溶解し、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有水溶液（６００ｍＬ、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有濃度：４８７．５ｇ／Ｌ）を調製した。【０１２０】
当該水溶液を４０℃に保って１２００ｍＬのエタノールを１２時間かけて添加し、結晶を析出させた。起晶には、種晶の接種は不要であった。得られた結晶スラリーを１０℃まで冷却して２時間熟成させ、結晶を濾取して６０％エタノール水溶液で洗浄することにより、湿晶を得た。当該湿晶を４０℃にて減圧乾燥することにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶（３０８．３ｇ）を得た。【０１２１】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表４に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１２２】
【表４】
2018117140.tif 000005
【０１２３】
粉末Ｘ線回折の結果、得られた結晶は、実施例１のシミュレーション結果から予想される回折角にピークを有した（表１及び表４）。また、当該結晶のエタノール含量をガスクロマトグラフを用いて測定した結果、１２．２重量％であり、熱分析による水分含量測定の結果、当該結晶は、水分子を有しないことが分かった。これより、当該結晶はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶（０．６６エタノール和物結晶）であることが分かった。【０１２４】
［実施例４］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶の取得−４
実施例３で得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのエタノール和物の湿晶について、２５℃、６０℃、９５℃の各温度で減圧乾燥してＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶を得た。【０１２５】
後述の表６のとおり、得られた結晶のエタノール含量及び水分含量を測定した結果、いずれの結晶も水分子を有しておらず、かついずれもエタノールを含有していたため、これらの結晶も、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶であることが分かった。【０１２６】
既知の無水和物の結晶並びに実施例１、２及び４で得られたエタノール和物結晶について、その粗比容、密比容、安息角及び崩壊角を測定した結果を表５に示す。【０１２７】
【表５】
2018117140.tif 000006
【０１２８】
表５に示す通り、実施例１、２及び４で得られたエタノール和物結晶は、粗比容、密比容、安息角及び崩壊角について、既知の無水和物の結晶と比較して、いずれも小さい値を示し、優れた粉体物性を示すことが分かった。【０１２９】
また、実施例１〜４で得られた結晶のエタノール含量をガスクロマトグラフを用いて測定した結果のまとめを表６に示す。【０１３０】
【表６】
2018117140.tif 000007
【０１３１】
表６に示す通り、実施例１〜４で得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物結晶のエタノール含量の実測値は７．１３〜１５．３重量％の値であり、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン１分子あたり、０より大きく１以下の分子数のエタノールが配位している結晶であることが確認された。【０１３２】
［実施例５］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の取得−１
実施例１で得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンのｎエタノール和物の湿晶をヌッチェに置き、吸引濾過機を用いて常温常圧の空気を通すことで、２４時間、通風乾燥を実施した。
当該方法によって得られた結晶の粉末Ｘ線回折の分析結果を表７に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１３３】
【表７】
2018117140.tif 000008
【０１３４】
ガスクロマトグラフを用いて測定した当該結晶に含まれるエタノールの量は０．００８％であり、また、熱分析により当該結晶の水分含量を測定した結果、当該結晶は水分子を有していないことが分かった。これより、当該結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶であることが分かった。【０１３５】
日本国特許第４９３１８０１号公報に記載の方法で取得した既知の結晶、及び、上記で得られた本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶について、粗比容、密比容、安息角及び崩壊角を測定した結果を表８に示す。【０１３６】
【表８】
2018117140.tif 000009
【０１３７】
表８に示す通り、上記で得られた本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶は、粗比容、安息角及び崩壊角について、既知の無水和物の結晶と比較していずれも小さい値を示し、優れた粉体物性を示すことが分かった。【０１３８】
［実施例６］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の取得−１  
日本国特許第４９３１８０１号公報に記載の方法に準じて取得したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶５５ｇを水に溶解し、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有水溶液（１００ｍＬ、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有濃度：５５０ｇ／Ｌ）を調製した。【０１３９】
当該水溶液を１０℃まで冷却して、結晶を析出させた。その際の起晶には、種晶の接種は不要であった。当該結晶を濾取し、室温下で減圧乾燥させることにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶を得た。  【０１４０】
得られた結晶の水分含量を、カールフィッシャー法により測定した結果、１４．９重量％であり、２水和物の理論値（１４．２重量％）とほぼ一致したことから、当該結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶であることが分かった。【０１４１】
続いて、得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶を単結晶構造解析に供した。実施例１と同様の手順で単結晶構造解析を行い、単結晶構造を得た。その結果、当該結晶が確かにＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶であることが確認された。
次に、単結晶構造解析及び解析結果に基づくＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の粉末Ｘ線結晶回折パターンのシミュレーションを、実施例１と同じ方法で行った。
結果を表９に示す。【０１４２】
【表９】
2018117140.tif 000010
【０１４３】
［実施例７］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の取得−２      
日本国特許第４９３１８０号公報に記載の方法に準じて取得したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶８１０ｇを水に溶解し、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有水溶液（１．５Ｌ、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有濃度：５４０ｇ／Ｌ）を調製した。【０１４４】
当該水溶液を１０℃まで冷却して、結晶を析出させた。その際の起晶には、種晶の接種は不要であった。当該結晶を濾取し、２５℃にて減圧乾燥させることにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶（２６８．７ｇ）を得た。【０１４５】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表１０に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１４６】
【表１０】
2018117140.tif 000011
【０１４７】
粉末Ｘ線回折の結果、得られた結晶は、実施例６のシミュレーション結果から予想される回折角にピークを有した（表９及び表１０）。これより、当該結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶であることが分かった。【０１４８】
日本国特許第４９３１８０１号公報に記載の方法で取得した既知の結晶及び上記で得られた２水和物の結晶について、粗比容、密比容、安息角及び崩壊角を測定した結果を表１１に示す。【０１４９】
【表１１】
2018117140.tif 000012
【０１５０】
表１１に示す通り、上記で得られた２水和物の結晶は、粗比容、安息角及び崩壊角について、既知の無水和物の結晶と比較していずれも小さい値を示し、優れた粉体物性を示すことが分かった。【０１５１】
［実施例８］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の取得−２
日本国特許第４９３１８０号公報に記載の方法に準じて取得したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶３２ｇを水に溶解し、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有水溶液（６４ｍＬ、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有濃度：５００ｇ／Ｌ）を調製した。【０１５２】
該水溶液を１０℃に冷却したのちにＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物を種晶として加え、結晶を析出させた。結晶を含む溶液を３０℃に保って、アセトン１０４ｍＬを９時間かけて添加したのち、１０℃まで冷却して熟成を行った。結晶を濾取し、２５℃にて減圧乾燥させることにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶（３１．５ｇ）を得た。【０１５３】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表１２に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１５４】
【表１２】
2018117140.tif 000013
【０１５５】
粉末Ｘ線回折の結果、得られた結晶は、実施例６のシミュレーション結果から予想される回折角にピークを有した（表９及び表１２）。これより、当該結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶であることが分かった。【０１５６】
［実施例９］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶の取得−３  
日本国特許第４９３１８０号公報に記載の方法に準じて取得したＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶２５ｇを水に溶解し、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有水溶液（５０ｍＬ、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン含有濃度：５００ｇ／Ｌ）を調製した。【０１５７】
当該水溶液を１０℃に冷却したのちにＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物を種晶として加え、結晶を析出させた。結晶を含む溶液を３０℃に保って、イソプロピルアルコール７５ｍＬを３時間かけて添加したのち、３０℃を保って熟成を行った。結晶を濾取し、２５℃にて減圧乾燥させることにより、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶（１３．２ｇ）を得た。【０１５８】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表１３に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１５９】
【表１３】
2018117140.tif 000014
【０１６０】
粉末Ｘ線回折の結果、得られた結晶は、実施例６のシミュレーション結果から予想される回折角にピークを有した（表９及び表１３）。これより、当該結晶は、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶であることが分かった。【０１６１】
［実施例１０］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の取得−２  
実施例７で得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶をセパラブルフラスコに入れ、減圧乾燥を行った。減圧乾燥は、４０℃に調整した水浴に接触させながら回転させ、６時間実施した。【０１６２】
当該結晶中の水分量を熱分析により測定した結果、当該結晶の水分含量の実測値は１．９重量％であったことから、当該結晶はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶であることを確認した。【０１６３】
上記の方法によって得られた結晶の粉末Ｘ線回折の分析結果を表１４に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１６４】
【表１４】
2018117140.tif 000015
【０１６５】
［実施例１１］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の取得−３  
実施例７で得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶をセパラブルフラスコに入れ、減圧乾燥を行った。減圧乾燥は、６０℃に調整した水浴に接触させながら、回転させ、４時間実施した。【０１６６】
当該結晶中の水分量を、熱分析により測定した結果、当該結晶の水分含量の実測値は１．９重量％であったことから、当該結晶はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶であることを確認した。【０１６７】
上記の方法によって得られた結晶の粉末Ｘ線回折の分析結果を表１５に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１６８】
【表１５】
2018117140.tif 000016
【０１６９】
［実施例１２］本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶の取得−４
実施例７で得られたＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・２水和物の結晶をセパラブルフラスコに入れ、減圧乾燥を行った。減圧乾燥は９０〜９５℃に調整した水浴に接触させながら、回転させ３時間実施した。【０１７０】
当該結晶中の水分量を、熱分析により測定した結果、当該結晶の水分含量の実測値は０．３重量％であったことから、当該結晶はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶であることを確認した。【０１７１】
上記の方法によって得られた結晶の粉末Ｘ線回折の分析結果を表１６に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比を表わす。【０１７２】
【表１６】
2018117140.tif 000017
【０１７３】
日本国特許第４９３１８０１号公報に記載の方法で取得した既知の結晶及び、実施例１０〜１２で得られた本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶について、粗比容、密比容、安息角、崩壊角、及び結晶中に含まれる水分を熱分析の乾燥減量として求めた結果を表１７に示す。【０１７４】
【表１７】
2018117140.tif 000018
【０１７５】
表１７に示す通り、実施例１０〜１２で得られた本発明のＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン・無水和物の結晶は、粗比容、安息角、及び崩壊角について、既知の無水和物の結晶と比較していずれも小さい値を示し、優れた粉体物性を示すことが分かった。【０１７６】
本発明を特定の態様を参照して詳細に説明したが、本発明の精神と範囲を離れることなく様々な変更および修正が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお、本出願は、２０１６年１２月２０日付けで出願された日本特許出願（特願２０１６−２４６１１６）に基づいており、その全体が引用により援用される。また、ここに引用されるすべての参照は全体として取り込まれる。
【産業上の利用可能性】
【０１７７】
本発明により、例えば、健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料もしくは中間体等として有用であるＬ−アラニル−Ｌ−グルタミンの結晶、及びその製造方法が提供される。
【図１】
2018117140.tif 000019
【図２】
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【図３】
2018117140.tif 000021
【図４】
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【図５】
2018117140.tif 000023
【図６】
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【図７】
2018117140.tif 000025
【図８】
2018117140.tif 000026
【図９】
2018117140.tif 000027
【図１０】
2018117140.tif 000028
【国際調査報告】
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2018117140.tif 000030
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