【手続補正書】
【提出日】平成31年4月12日(2019.4.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトCD47に特異的に結合するモノクローナル抗-CD47抗体であって、該抗-CD47抗体が、無細胞系を使用し生成される場合、該無細胞系を使用し生成された親抗体と比べ、より高い抗体発現力価又は収量を有し、かつ該親抗体に対する1以上のアミノ酸修飾を含む、前記モノクローナル抗-CD47抗体。
【請求項２】
前記抗体発現力価又は収量が、前記親抗体と比べ、少なくとも1倍、少なくとも2倍、又は少なくとも3倍だけ高い、請求項１記載の抗-CD47抗体。
【請求項３】
ヒト化抗体である、請求項1記載の抗-CD47抗体。
【請求項４】
IgG1抗体又はIgG4抗体である、請求項1記載の抗-CD47抗体。
【請求項５】
EUナンバリングインデックスに従いS228Pアミノ酸置換を含むIgG4抗体、又はEUナンバリングインデックスに従いS228P及びL235Eアミノ酸置換を含むIgG4抗体である、請求項1記載の抗-CD47抗体。
【請求項６】
前記親抗体が、(i)  配列番号:1のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、又は(ii)  配列番号:2、3又は4のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項1〜5のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項７】
前記親抗体が、配列番号:1のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項6記載の抗-CD47抗体。
【請求項８】
(i)抗体2A1の相補性決定領域(CDR)1、2、及び3を含む、重鎖可変領域；並びに、(ii)抗体2A1のCDR1、CDR2、及びCDR3を含む、軽鎖可変領域：を含む、請求項1記載の抗-CD47抗体。
【請求項９】
(i)各々、アミノ酸配列
【化１】
2018506964.tif 000001
を含む相補性決定領域(CDR)1、2、及び3を含む、重鎖可変領域；並びに、(ii)各々、アミノ酸配列
【化２】
2018506964.tif 000002
を含むCDR1、CDR2、及びCDR3を含む、軽鎖可変領域：を含む、請求項1記載の抗-CD47抗体。
【請求項１０】
(a)  前記1以上のアミノ酸置換が、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域のフレームワーク領域内にある、
(b)  前記重鎖可変領域のフレームワーク領域内の13又は14アミノ酸修飾を含む、又は、
(c)  前記重鎖可変領域のフレームワーク領域内の1〜15アミノ酸修飾を含む、請求項１記載の抗-CD47抗体。
【請求項１１】
前記アミノ酸修飾が、保存的アミノ酸置換である、請求項10記載の抗-CD47抗体。
【請求項１２】
アミノ酸配列：
【化３】
2018506964.tif 000003
を含む重鎖可変領域(VH)を含み、ここで、位置X1のアミノ酸は、任意のアミノ酸であるか、又は位置X1にはアミノ酸が存在せず、かつ位置X2-X14の各々のアミノ酸は、任意のアミノ酸である、請求項1〜11のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項１３】
X1はMであるか、又は位置X1にはアミノ酸が存在せず、X2は、M又はVなどの疎水性側鎖を伴うアミノ酸であり、X3は、T又はPであり、X4は、S又はAであり、X5は、A又はGなどの脂肪族型側鎖を有するアミノ酸であり、X6は、F又はLであり、X7は、D又はGであり、X8は、I又はMなどの疎水性側鎖を伴うアミノ酸であり、X9は、R又はTであり、X10は、R又はTであり、X11は、M又はTであり、X12は、S又はRであり、X13は、E又はDなどの負帯電したアミノ酸であり、並びにX14は、M又はVなどの疎水性側鎖を伴うアミノ酸である、請求項12記載の抗-CD47抗体。
【請求項１４】
前記VHが、配列番号:21又は22のアミノ酸配列を含む、請求項12又は13記載の抗-CD47抗体。
【請求項１５】
配列番号:5、6、7、8、9、10又は11のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項12又は13記載の抗-CD47抗体。
【請求項１６】
配列番号:13のアミノ酸配列又はN-末端のアミノ酸Mを伴わない配列番号:13のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項12〜15のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項１７】
(i)  投与後に実質的な赤血球枯渇、貧血、又は赤血球枯渇と貧血の両方を引き起こさない、
(ii)  CD47がシグナル-制御-タンパク質α(SIRPα)と相互作用するのを阻害する、
(iii)  CD47-発現細胞のマクロファージ媒介性貪食を促進する、
(iv)  有意なレベルのエフェクター機能を引き起こさない、又は
(v)  有意なレベルのADCC又はCDCを引き起こさない又は促進しない、請求項1〜16のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項１８】
投与後に実質的な赤血球枯渇、貧血、又は赤血球枯渇と貧血の両方を引き起こさず、かつ投与後に実質的な血小板枯渇、細胞凝集又は赤血球の血球凝集を引き起こさない、請求項17記載の抗-CD47抗体。
【請求項１９】
(i)  無細胞系を使用し発現される場合に、CHO細胞を使用して発現された場合よりも、FcγRへより低い結合親和性を示すか、若しくは結合しない、又は
(ii)  無細胞系を使用し発現される場合に、CHO細胞において発現された場合と比べ、グリコシル化されないか、又はより少ないグリコシル化を有する、請求項1〜18のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項２０】
無細胞系を使用し発現される場合に、CHO細胞を使用して発現された場合よりも、FcγRへより低い結合親和性を示すか、又は結合しない、かつ該より低い結合親和性が、少なくとも1 logより低いか又は少なくとも2 logより低い、請求項19記載の抗-CD47抗体。
【請求項２１】
前記FcγRが、FcγRI、FcγRIIA R131、FcγRIIA H131、FcγRIIB、又はFcγRIIIA V158である、請求項19又は20記載の抗-CD47抗体。
【請求項２２】
前記無細胞系が、S30無細胞抽出物を使用することを含む、請求項1〜21のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項２３】
前記S30無細胞抽出物が、原核生物のジスルフィド結合イソメラーゼDsbCを含む、請求項22記載の抗-CD47抗体。
【請求項２４】
二重特異性抗体である、請求項1〜23のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項２５】
薬剤と結合しており、該薬剤が標識又は毒素である、請求項1〜24のいずれか一項記載の抗-CD47抗体。
【請求項２６】
請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体又はその抗原-結合断片を含む、医薬組成物。
【請求項２７】
医薬として許容し得る担体を更に含有する、請求項26記載の医薬組成物。
【請求項２８】
(i)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体の、VH鎖領域、VL鎖領域、もしくはVL鎖領域とVH鎖領域の両方をコードしているヌクレオチド配列、又は(ii)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体の重鎖、軽鎖、もしくは重鎖と軽鎖の両方をコードしているヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
【請求項２９】
請求項1記載の抗-CD47抗体の重鎖、軽鎖、又は重鎖と軽鎖の両方をコードしているヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードしている配列番号:26-32のいずれか一つのヌクレオチド配列、及び/又は軽鎖をコードしている配列番号:33のヌクレオチド配列を含む、請求項28記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
(i)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体のVH又は重鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む第一のポリヌクレオチド、及び(ii)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体のVL又は軽鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む第二のポリペプチド：を含む、ポリヌクレオチド集団。
【請求項３１】
請求項28又は29記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項３２】
(i)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体のVH又は重鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む第一のベクター、及び(ii)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体のVL又は軽鎖をコードしているヌクレオチド配列を含む第二のベクター：を含む、ベクター集団。
【請求項３３】
無細胞抽出物及び請求項31記載の1種以上のベクターを含有する、無細胞タンパク質発現のための組成物。
【請求項３４】
S30無細胞抽出物を更に含有する、請求項33記載の組成物。
【請求項３５】
原核生物のジスルフィド結合イソメラーゼDsbCを更に含有する、請求項33又は34記載の組成物。
【請求項３６】
請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体を含む、癌を治療する、又は癌の症状を緩和するための医薬組成物。
【請求項３７】
前記癌が血液癌又は固形癌である、請求項36記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記癌が、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病(AML)、乳癌、膀胱癌、非小細胞肺癌/癌腫、肝細胞癌(HCC)、肉腫、又は頭頸部癌である、請求項36記載の医薬組成物。
【請求項３９】
請求項28又は29記載のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞。
【請求項４０】
請求項29記載のポリヌクレオチド集団を含む、単離された細胞。
【請求項４１】
請求項31記載のベクターを含む、単離された細胞。
【請求項４２】
請求項32記載のベクター集団を含む、単離された細胞。
【請求項４３】
請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体又はその抗原結合性断片を生成する、単離された細胞。
【請求項４４】
(i)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体のVH又は重鎖をコードしているヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む第一の宿主細胞、及び(ii)請求項1〜25のいずれか一項記載の抗-CD47抗体のVL又は軽鎖をコードしているヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む第二の宿主細胞：を含む、宿主細胞集団。
【請求項４５】
請求項33〜35のいずれか一項記載の無細胞タンパク質発現のための組成物により、抗-CD47抗体を発現することを含む、抗-CD47抗体を製造する方法。
【請求項４６】
請求項39〜43のいずれか一項記載の細胞により、抗-CD47抗体を発現することを含む、抗-CD47抗体を製造する方法。