【手続補正書】
【提出日】平成31年3月12日(2019.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝臓特異的プロモーターおよび導入遺伝子に動作可能に連結された、
配列番号５により定義される核酸断片、または前記核酸断片の配列と９５％以上の同一性を有する配列を含んでなる、またはからなる肝臓特異的核酸調節エレメントのトリプルリピート、および
配列番号１２により定義される核酸断片、または前記核酸断片の配列と９５％以上の同一性を有する配列を含んでなる、またはからなる核酸調節エレメント
を含んでなる、核酸発現カセット。
【請求項２】
トリプルリピートが、タンデムに配置されている、請求項１に記載の核酸発現カセット。
【請求項３】
前記肝臓特異的プロモーターが、最小ＴＴＲプロモーター（ＴＴＲｍ）、ＡＡＴプロモーター、アルブミン（ＡＬＢ）プロモーターまたはその最小プロモーター、アポリポタンパク質Ａ１（ＡＰＯＡ１）プロモーターまたはその最小プロモーター、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）プロモーター、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）プロモーター、ヘモペキシン（ＨＰＸ）プロモーターまたはその最小プロモーター、ニコチンアミドＮ−メチルトランスフェラーゼ（ＮＮＭＴ）プロモーターまたはその最小プロモーター、（肝臓）カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）プロモーターまたはその最小プロモーター、プロテインＣ（ＰＲＯＣ）プロモーターまたはその最小プロモーター、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）プロモーターまたはその最小プロモーター、マンナン結合レクチンセリンプロテアーゼ２（ＭＡＳＰ２）プロモーターまたはその最小プロモーター、ヘプシジン抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）プロモーターまたはその最小プロモーター、Ｓｅｒｐｉｎペプチダーゼ阻害因子、クレードＣ（アンチトロンビン）、および、メンバー１（ＳＥＲＰＩＮＣ１）プロモーターまたはその最小プロモーターを含んでなる群から選択される、請求項１または２に記載の核酸発現カセット。
【請求項４】
前記肝臓特異的プロモーターが、配列番号６により定義される最小ＴＴＲプロモーター（ＴＴＲｍ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項５】
前記肝臓特異的プロモーターが、配列番号６４により定義されるＡＡＴプロモーターである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項６】
前記トリプルリピートが、配列番号１１により定義される核酸断片または前記核酸断片の配列と９５％以上の同一性を有する配列からなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項７】
プロモーターおよび導入遺伝子に動作可能に連結された配列番号１３により定義される調節エレメントを含んでなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項８】
調節エレメントが、プロモーターおよび導入遺伝子に動作可能に連結された配列番号５７により定義される調節エレメントである、請求項７に記載の核酸発現カセット。
【請求項９】
前記導入遺伝子が凝固第ＩＸ因子（ＦＩＸ）をコードする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項１０】
前記導入遺伝子がコドン最適化凝固因子ＦＩＸである、請求項９に記載の核酸発現カセット。
【請求項１１】
前記凝固因子ＦＩＸが高活性化変異を含む、請求項９に記載の核酸発現カセット。
【請求項１２】
前記高活性化変異がＲ３３８Ｌアミノ酸置換に相当する、請求項１１に記載の核酸発現カセット。
【請求項１３】
前記凝固因子ＦＩＸをコードする前記導入遺伝子が配列番号９により定義される塩基配列を有する、請求項１２に記載の核酸発現カセット。
【請求項１４】
前記導入遺伝子が凝固第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）をコードする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項１５】
前記導入遺伝子がコドン最適化凝固因子ＦＶＩＩＩである、請求項１４に記載の核酸発現カセット。
【請求項１６】
前記凝固第ＶＩＩＩ因子がＢドメインの欠失を有する、請求項１４に記載の核酸発現カセット。
【請求項１７】
前記ＦＶＩＩＩのＢドメインが配列番号５９により定義されるリンカーで置換されている、請求項１６に記載の核酸発現カセット。
【請求項１８】
凝固第ＶＩＩＩ因子をコードする前記導入遺伝子が配列番号１８により定義される塩基配列を有する、請求項１７に記載の核酸発現カセット。
【請求項１９】
前記プロモーターがトランスサイレチン（ＴＴＲ）プロモーターであり、配列番号６９により定義されるＴＴＲｅおよびＴＴＲｍ核酸の組合せを含んでなる、請求項１〜４および６〜１８のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項２０】
マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンをさらに含んでなる、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項２１】
マウス微小ウイルス（ＭＶＭ）イントロンが、配列番号８により定義されるＭＶＭイントロンである、請求項２０に記載の核酸発現カセット。
【請求項２２】
ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ＢＧＨｐＡ）に由来する、もしくはシミアンウイルス４０ポリアデニル化シグナル（ＳＶ４０ｐＡ）に由来する転写終結シグナル、または配列番号５６により定義される合成ポリアデニル化シグナルをさらに含んでなる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の核酸発現カセット。
【請求項２３】
ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ＢＧＨｐＡ）が、配列番号１０により定義されるＢＧＨｐＡである、請求項２２に記載の核酸発現カセット。
【請求項２４】
シミアンウイルス４０ポリアデニル化シグナル（ＳＶ４０ｐＡ）が、配列番号１９により定義されるＳＶ４０ｐＡである、請求項２２に記載の核酸発現カセット。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項に記載の核酸発現カセットを含んでなるベクター。
【請求項２６】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項２５に記載のベクター。
【請求項２７】
前記ベクターがアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に由来する、請求項２５に記載のベクター。
【請求項２８】
血友病Ａの治療に使用するためのＦＶＩＩＩ導入遺伝子を含んでなる、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載のベクター、または血友病Ｂの治療に使用するためのＦＩＸ導入遺伝子を含んでなる、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載のベクター。
【請求項２９】
ベクターの対象への形質導入またはトランスフェクション後に、前記対象における１０ｍＵ／ｍｌ血漿の治療閾値濃度以上の血漿中の第ＩＸ因子またはＦＶＩＩＩのレベルが得られる、請求項２８に記載のベクター。
【請求項３０】
前記対象への前記ウイルスベクターの前記形質導入が、２×１０１１ｖｇ／ｋｇ未満の用量で行われる、請求項２９に記載のベクター。
【請求項３１】
前記対象への前記ウイルスベクターの前記形質導入が、６×１０１１ｖｇ／ｋｇ以下の用量で行われ、１００ｍＵ／ｍｌの治療濃度以上の血漿中の第ＩＸ因子もしくはＦＶＩＩＩのレベルが前記対象において得られる、または、
前記対象への前記ウイルスベクターの前記形質導入が、６×１０１１ｖｇ／ｋｇ以下の用量で行われ、５０ｍＵ／ｍｌの治療濃度以上の血漿中の第ＩＸ因子もしくはＦＶＩＩＩのレベルが、前記対象において得られる、または、
前記対象への前記ウイルスベクターの前記形質導入が、２×１０１２ｖｇ／ｋｇ以下の用量で行われ、２００ｍＵ／ｍｌの治療濃度以上の血漿中の第ＩＸ因子もしくはＦＶＩＩＩのレベルが、前記対象において得られる、または、
前記対象への前記ウイルスベクターの前記形質導入が、２×１０１２ｖｇ／ｋｇ以下の用量で行われ、１５０ｍＵ／ｍｌの治療濃度以上の血漿中の第ＩＸ因子もしくはＦＶＩＩＩのレベルが、前記対象において得られる、
請求項３０に記載のベクター。
【請求項３２】
前記ベクター中の前記導入遺伝子がＦＶＩＩＩである場合に、血友病Ａを治療するための活性成分を任意でさらに含んでなり、または、
前記ベクター中の前記導入遺伝子がＦＩＸである場合に、血友病Ｂを治療するための活性成分を任意でさらに含んでなる、
請求項２５〜２８のいずれか一項に記載のベクターと、薬剤的に許容できる担体とを含んでなる医薬組成物。