【手続補正書】
【提出日】平成30年12月26日(2018.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ調節性細胞が枯渇し、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作されている免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団の製造法であって、
免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団を提供し、
Ｔ調節性細胞、例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞を細胞の集団から除去し、それにより、ＣＡＲ発現に適するＴ調節性枯渇細胞、例えば、ＣＤ２５＋枯渇細胞の集団を提供する
ことを含み、Ｔ調節性枯渇細胞の集団が５０％未満のＣＤ２５＋細胞を含む、方法。
【請求項２】
Ｔ調節性枯渇細胞の集団が、
（ｉ）４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％より少ないＣＤ２５＋細胞；または
（ｉｉ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
免疫エフェクター細胞の集団が癌を有する対象、例えば、ＣＤ２５発現性癌を有する対象の細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｔ調節性細胞、例えば、ＣＤ２５＋Ｔ細胞が、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントを使用して集団から除去されており、所望により、抗ＣＤ２５抗体またはそのフラグメントが基質、例えば、ビーズにコンジュゲートされている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
免疫エフェクター細胞の集団が、血液癌、例えば、白血病（例えば、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）または急性リンパ性白血病（ＡＬＬ））またはリンパ腫（例えば、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）またはホジキンリンパ腫（ＨＬ））を有する対象から得られている、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
Ｔ調節性枯渇細胞の集団が、
（ｉ）３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の白血病細胞またはリンパ腫細胞；
（ｉｉ）１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の白血病細胞またはリンパ腫細胞；または
（ｉｉｉ）１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞、例えば、ＣＬＬ細胞
を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
腫瘍抗原、例えば、ＣＤ２５を含まない腫瘍抗原、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ２０、ＣＤ１４またはＣＤ１１ｂを発現する集団から細胞を除去し、それによりＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲの発現に適するＴ調節性枯渇、例えば、ＣＤ２５＋枯渇および腫瘍抗原枯渇細胞の集団を提供することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
チェックポイント阻害物質を発現する集団、例えば、ＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞およびＴＩＭ３＋細胞の１以上から細胞を除去し、それによりＴ調節性枯渇、例えば、ＣＤ２５＋枯渇細胞およびチェックポイント阻害物質枯渇細胞、例えば、ＰＤ１＋、ＬＡＧ３＋および／またはＴＩＭ３＋枯渇細胞の集団を提供することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
提供される免疫エフェクター細胞の集団が、１以上のマーカー、例えば、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ４５ＲＯの発現に基づき選択されている、例えば、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の提供される集団がＣＤ３＋および／またはＣＤ２８＋である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
（ｉ）Ｔ調節性枯渇細胞、例えば、ＣＤ２５＋枯渇細胞の集団を活性化することおよび／またはＴ調節性枯渇細胞の集団、例えば、ＣＤ２５＋枯渇細胞の集団からの細胞をＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸を含むベクターで形質導入すること；または
（ｉｉ）例えば、ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲを発現するように操作された、Ｔ調節性枯渇細胞の集団を拡張すること
をさらに含む、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
細胞の集団が、
（ｉ）８日以下、例えば、７日、６日、５日、４日または３日の期間；
（ｉｉ）５日の培養において、ここで、得られた細胞が、同じ培養条件下で９日の培養により拡張させた同じ細胞よりも強力である、例えば、５日拡張させた細胞が、同じ培養条件下で９日の培養により拡張させた同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍または４倍増加を示す；または
（ｉｉｉ）５日の培養において、ここで、得られた細胞が、同じ培養条件下で９日の培養により拡張させた同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えば、ＩＦＮ−γおよび／またはＧＭ−ＣＳＦレベルを示す、
拡張される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞の集団が、例えば、ここに記載するような、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナル（抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントおよび／または抗ＣＤ２８抗体またはそのフラグメントとコンジュゲートしたビーズ）を刺激する物質および細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドの存在下に細胞を培養することにより拡張される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
細胞の集団が、
（ａ）例えば、フローサイトメトリーにより測定して、１４日拡張期間にわたり細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍または３５０倍）の増加をもたらす１以上のインターロイキンを含む適切な培地；または
（ｂ）ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７の存在下、所望により、ここで、ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７の存在下で拡張されたＴ調節性枯渇細胞の集団が、
（ｉ）サイトカインの非存在下で拡張された集団と比較して、より大きいパーセンテージのＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞を含む；
（ｉｉ）ＩＬ−２の存在下で拡張された集団と比較して、より大きいパーセンテージのＣＤ２７＋Ｔ細胞を含む；
（ｉｉｉ）ＩＬ−２の存在下で拡張された集団と比較して、より大きいパーセンテージのＣＤ２８＋Ｔ細胞を含む；
（ｉｖ）ＩＬ−２の存在下で拡張された集団と比較して、より大きいパーセンテージのＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞を含む；
（ｖ）サイトカインの非存在下でまたはＩＬ−２の存在下で拡張された集団と比較して、より小さいパーセンテージのＩＬ７Ｒα＋Ｔ細胞を含む；
（ｖｉ）サイトカインの非存在下で拡張された集団と比較して、より大きいパーセンテージの記憶幹Ｔ細胞を含む；
（ｖｉｉ）サイトカインの非存在下で拡張された集団と比較して、より大きいパーセンテージのＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ９５＋ＣＣＲ７＋Ｔ細胞を含む；または
（ｖｉｉｉ）Ｔ調節性細胞を除去することなしで拡張された集団と比較して、またはＩＬ−１５単独またはＩＬ−１７単独の存在下で拡張された集団と比較して、細胞増殖能の増加を示す、
で拡張される、請求項１０〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
細胞の集団が適切な拡張期間後凍結保存される、請求項１０〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
Ｔ調節性枯渇細胞の集団が、免疫エフェクター細胞の抗ＣＤ３選択集団と比較して、レンチウイルス形質導入効率の増加を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＡＲを発現するように操作されているＴ調節性枯渇免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団を含む反応混合物であって、Ｔ調節性枯渇細胞の集団が、５０％未満のＣＤ２５＋細胞を含む、反応混合物。
【請求項１７】
Ｔ調節性枯渇細胞の集団が、
（ｉ）４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞；
（ｉｉ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞；または
（ｉｉｉ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５発現腫瘍細胞、例えば、ＣＬＬ細胞；または
（ｉｖ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のチェックポイント阻害物質発現細胞、例えば、ＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞またはＴＩＭ３＋細胞
を含む、請求項１６に記載の反応混合物。
【請求項１８】
Ｔ調節性枯渇細胞の集団が、
（ｉ）１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞、例えば、ＣＤ２５発現腫瘍細胞、例えば、ＣＬＬ細胞；または
（ｉｉ）１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞、例えば、ＣＤ２５発現腫瘍細胞、例えば、ＣＬＬ細胞
を含む、請求項１７に記載の反応混合物。
【請求項１９】
反応混合物が集団の細胞を活性化および／または拡張する物質、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する物質および／または細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドをさらに含み、例えば、物質が抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントおよび／または抗ＣＤ２８抗体またはそのフラグメントとコンジュゲートしたビーズである、請求項１６〜１８のいずれかに記載の反応混合物。
【請求項２０】
（ｉ）血清（例えば、ウシ胎児またはヒト血清）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インスリン、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＴＧＦβおよびＴＮＦ−αまたは細胞増殖用の何らかの他の添加物を含む増殖および／または生存能のための１以上の因子、所望により、ここで、反応混合物は、さらにＩＬ−１５および／またはＩＬ−７を含む；または
（ｉｉ）例えば、サッカライド、オリゴサッカライド、多糖またはポリオール（例えば、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、スクロース、グルコースまたはデキストラン）、塩およびクラウンエーテルのような凍結保護物質または安定剤、所望により、ここで、凍結保護物質はデキストランである
をさらに含む、請求項１６〜１９のいずれかに記載の反応混合物。
【請求項２１】
反応混合物における複数の細胞の集団が、
ＣＡＲコード化配列、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲコード化配列を含む、核酸分子；または
ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクター、所望により、ここで、ベクターが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターからなる群から選択されるベクターである、
を含む、請求項１６〜２０のいずれかに記載の反応混合物。
【請求項２２】
請求項１〜１５のいずれかに記載の方法により製造される免疫エフェクター細胞の集団。
【請求項２３】
ＣＡＲを発現するように操作した免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団の製造法であって、
免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団であって、複数の免疫エフェクター細胞がＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸を含むものを提供し、
細胞の集団を、例えば、フローサイトメトリーにより測定して、１４日拡張期間にわたり細胞の少なくとも２００倍（例えば、２００倍、２５０倍、３００倍または３５０倍）の増加をもたらす１以上のインターロイキン存在下で拡張させることを含む、
方法。
【請求項２４】
細胞の集団が
（ｉ）ＩＬ−１５および／またはＩＬ−７の存在下で；
（ｉｉ）８日未満、例えば、７日、６日、５日、４日または３日の期間において；または
（ｉｉｉ）５日の培養において、ここで、得られた細胞が、同じ培養条件下で９日の培養により拡張させた同じ細胞よりも強力である、所望により、５日拡張させた細胞が、同じ培養条件下で９日の培養により拡張させた同じ細胞と比較して、抗原刺激による細胞倍加の少なくとも１倍、２倍、３倍または４倍増加を示す；または
（ｉｖ）５日の培養において、ここで、得られた細胞が、同じ培養条件下で９日の培養により拡張させた同じ細胞と比較して、高い炎症誘発性サイトカイン産生、例えば、ＩＦＮ−γおよび／またはＧＭ−ＣＳＦレベルを示す；
（ｖ）細胞を、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する物質および細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンド、例えば、抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントおよび／または抗ＣＤ２８抗体またはそのフラグメントとコンジュゲートしたビーズの存在下で培養することにより、
拡張される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
提供される免疫エフェクター細胞の集団が、
（ｉ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞；
（ｉｉ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞；
（ｉｉｉ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５発現腫瘍細胞、例えば、ＣＬＬ細胞；または
（ｉｖ）５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のチェックポイント阻害物質発現細胞、例えば、ＰＤ１＋細胞、ＬＡＧ３＋細胞またはＴＩＭ３＋細胞
を含むＴ調節性枯渇細胞の集団である、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
提供される細胞の集団が、
（ｉ）１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および１５％、１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞、例えば、ＣＤ２５発現腫瘍細胞、例えば、ＣＬＬ細胞；または
（ｉｉ）１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満のＣＤ２５＋細胞および１０％、５％、４％、３％、２％または１％未満の腫瘍細胞、例えば、ＣＤ２５発現腫瘍細胞、例えば、ＣＬＬ細胞
を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
免疫エフェクター細胞の集団を含む反応混合物であって、その中の複数の細胞の集団が、
（ｉ）ＣＡＲコード化配列、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲコード化配列を含む、核酸分子、または
（ｉｉ）ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクター、所望により、ここで、ベクターが、ここに記載するベクター、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターからなる群から選択されるベクターである；および
（ｉｉｉ）ＩＬ−７、ＩＬ−１５またはＩＬ−７およびＩＬ−１５の両者
を含む、反応混合物。
【請求項２８】
さらに集団の細胞を活性化および／または拡張する物質、例えば、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する物質および／または細胞の表面上の共刺激性分子を刺激するリガンドを含み、所望により、ここで、物質が抗ＣＤ３抗体またはそのフラグメントおよび／または抗ＣＤ２８抗体またはそのフラグメントとコンジュゲートしたビーズである、請求項２７に記載の反応混合物。
【請求項２９】
ＣＡＲを発現するように操作されている免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団の製造法であって、
免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の集団を提供し、ここで、複数の免疫エフェクター細胞はＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９  ＣＡＲをコードする核酸を含む；および
細胞の集団を、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）ポリペプチド；インターロイキン−１５受容体アルファ（ＩＬ−１５Ｒａ）ポリペプチド；またはＩＬ−１５ポリペプチドおよびＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両者の組み合わせと接触させる
ことを含む、方法。
【請求項３０】
細胞の集団を、ＩＬ−１５ポリペプチドおよびＩＬ−１５Ｒａポリペプチドの両者の組み合わせ、例えば、ｈｅｔＩＬ−１５と接触させる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
腫瘍抗原と関係する疾患または癌を処置するための、請求項１−１５、２３−２６または２９−３０のいずれかに記載の方法によって製造された免疫エフェクター細胞の集団を含む組成物。
【請求項３２】
腫瘍抗原と関係する疾患または癌を処置するための医薬の製造のための、請求項１−１５、２３−２６または２９−３０のいずれかに記載の方法によって製造された免疫エフェクター細胞の集団の使用。
【請求項３３】
（ｉ）癌が血液癌、例えば、白血病（例えば、ＣＬＬ、ＡＬＬ）またはリンパ腫（例えば、ＭＣＬ、ＨＬ）であるか；または
（ｉｉ）腫瘍抗原と関係する疾患がＣＤ１９と関係する疾患である、
請求項３１に記載の組成物または請求項３２に記載の使用。