(57)【要約】  新規な白内障の予防剤、治療剤、およびこれらを製造するためのＨＡＴ阻害剤の使用を提供する。本発明の白内障の予防剤または治療剤は、ＨＡＴ阻害剤を有効成分として含有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＡＴ阻害剤を有効成分として含有している、白内障の予防剤または治療剤。
【請求項２】
上記ＨＡＴ阻害剤は、ＨＡＴ１、ＮＡＡ６０、ＧＣＮ５、ＰＣＡＦ、ＴＩＰ６０、ＭＯＺ、ＭＯＲＦ、ＨＢＯ１、ＭＯＦ、Ｐ３００、ＣＢＰ、ＴＡＦ１、ＴＩＦＩＩＩＣ９０、ＳＲＣ１、ＳＣＲ３、Ｐ６００、ＣＬＯＣＫおよびＮＡＴ１０からなる群より選択される１種以上の物質を標的とするものである、請求項１に記載の白内障の予防剤または治療剤。
【請求項３】
上記ＨＡＴ阻害剤は、ポリフェノール由来の化合物、構造中にヘテロ環を含んでいる化合物、安息香酸誘導体、またはα−β不飽和カルボニル化合物である、請求項１または２に記載の白内障の予防剤または治療剤。
【請求項４】
上記ＨＡＴ阻害剤は、２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサン、ＣＴＫ７Ａ、Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｌｉｇａｎｄ、ＭＧ１４９、Ｃ６４６、ＮＵ９０５６、ＣＰＴＨ２、５−クロロ−２−（４−ニトロフェニル）−３（２Ｈ）−イソチアゾロン、ブチロラクトン３、ＥＭＬ４２５、Ｌ００２、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＴＨ１８３４、ＳＰＶ１０６、Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎ、ケトミン、Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎ、エンベリン、Ｉｓｃｈｅｍｉｎ、ＣＢＰ３０およびＫＧ５０１からなる群より選択される１種以上の物質、または当該物質の誘導体もしくは塩である、請求項１または２に記載の白内障の予防剤または治療剤。
【請求項５】
投与剤型が点眼剤である、請求項１〜４の何れか１項に記載の白内障の予防剤または治療剤。
【請求項６】
上記白内障は、糖尿病白内障である、請求項１〜５の何れか１項に記載の白内障の予防剤または治療剤。
【請求項７】
白内障の予防剤または治療剤を製造するための、ＨＡＴ阻害剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白内障の予防剤、治療剤、およびこれらを製造するためのＨＡＴ阻害剤の使用に関する。より具体的には、ＨＡＴ阻害剤を有効成分として含有している白内障の予防剤または治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
白内障は、水晶体が混濁することによって、視力の低下が引き起こされる疾患である。白内障の種類によって異なるが、白内障に罹患した水晶体は、核、皮質または後嚢に白濁を生じる。白内障の種類には、加齢白内障、糖尿病白内障などが存在する。このうち罹患者数が最も多い加齢白内障は、加齢と共に有所見率が増加し、初期の混濁も含めると、日本国における６０歳代の有所見率は６６〜８５％、７０歳代の有所見率は８４〜９７％、８０歳以上では１００％に達する。これに対し、糖尿病白内障は６０歳以下の罹患者が多く、若年層でも発症しうる疾患である。【０００３】
白内障への処置は、混濁の発生後における外科手術による治療が主であるが、予防剤または治療剤の投与も行われている。上記予防剤または進行抑制剤の一例として、非特許文献１はグルタチオン、非特許文献２はピレノキシンを報告している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Matensson.J et.al. (1989) Glutathione ester prevents buthionine sulfoximine-induced cataracts and lens epithelial cell damage, Proc Natl Acad Sci U S A, vol.86, pp.8727-8731.
【非特許文献２】Ciuffi.M et.al. (1999) Protective Effect of Pirenoxine and U74389F on Induced Lipid Peroxidation in Mammalian Lenses. An in vitro, ex vivo and in vivo study, EXPERIMENTAL EYE RESEARCH, vol.68, pp.347-359.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、上述のような従来技術は、白内障の予防または治療効果において、改善の余地を残していた。【０００６】
本発明は、上記従来の問題点に鑑みなされたものであって、新規な白内障の予防剤、治療剤、およびこれらを製造するためのＨＡＴ阻害剤の使用を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、ＨＡＴ阻害剤が白内障を予防および治療しうることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下の構成からなるものである。【０００８】
＜１＞ＨＡＴ阻害剤を有効成分として含有している、白内障の予防剤または治療剤。【０００９】
＜２＞上記ＨＡＴ阻害剤は、ＨＡＴ１、ＮＡＡ６０、ＧＣＮ５、ＰＣＡＦ、ＴＩＰ６０、ＭＯＺ、ＭＯＲＦ、ＨＢＯ１、ＭＯＦ、Ｐ３００、ＣＢＰ、ＴＡＦ１、ＴＩＦＩＩＩＣ９０、ＳＲＣ１、ＳＣＲ３、Ｐ６００、ＣＬＯＣＫおよびＮＡＴ１０からなる群より選択される１種以上の物質を標的とするものである、＜１＞に記載の白内障の予防剤または治療剤。【００１０】
＜３＞上記ＨＡＴ阻害剤は、ポリフェノール由来の化合物、構造中にヘテロ環を含んでいる化合物、安息香酸誘導体、またはα−β不飽和カルボニル化合物である、＜１＞または＜２＞に記載の白内障の予防剤または治療剤。【００１１】
＜４＞上記ＨＡＴ阻害剤は、２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサン、ＣＴＫ７Ａ、Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｌｉｇａｎｄ、ＭＧ１４９、Ｃ６４６、ＮＵ９０５６、ＣＰＴＨ２、５−クロロ−２−（４−ニトロフェニル）−３（２Ｈ）−イソチアゾロン、ブチロラクトン３、ＥＭＬ４２５、Ｌ００２、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＴＨ１８３４、ＳＰＶ１０６、Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎ、ケトミン、Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎ、エンベリン、Ｉｓｃｈｅｍｉｎ、ＣＢＰ３０およびＫＧ５０１からなる群より選択される１種以上の化合物、または当該化合物の誘導体もしくは塩である、＜１＞または＜２＞に記載の白内障の予防剤または治療剤。【００１２】
＜５＞投与剤型が点眼剤である、＜１＞〜＜４＞の何れか１つに記載の白内障の予防剤または治療剤。【００１３】
＜６＞上記白内障は、糖尿病白内障である、＜１＞〜＜５＞の何れか１つに記載の白内障の予防剤または治療剤。【００１４】
＜７＞白内障の予防剤または治療剤を製造するための、ＨＡＴ阻害剤の使用。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の一態様によれば、新規な白内障の予防剤または治療剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】（ａ）本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤の、作用機序の例を表すモデル図である。（ｂ）本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤の、他の作用機序の例を表すモデル図である。（ｃ）本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤の、更に他の作用機序の例を表すモデル図である。
【図２】（ａ）２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサンによる白内障の予防効果を示す写真である。（ｂ）ＣＴＫ７Ａによる白内障の予防効果を示す写真である。（ｃ）ガルシノールによる白内障の予防効果を示す写真である。（ｄ）アナカルド酸による白内障の予防効果を示す写真である。（ｅ）ＭＧ１４９による白内障の予防効果を示す写真である。
【図３】（ａ）Ｃ６４６による白内障の予防効果を示す写真である。（ｂ）ＣＰＴＨ２による白内障の予防効果を示す写真である。（ｃ）ブチロラクトン３による白内障の予防効果を示す写真である。（ｄ）没食子酸による白内障の予防効果を示す写真である。（ｅ）（−）−エピガロカテキンガラートによる白内障の予防効果を示す写真である。
【図４】（ａ）ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬによる白内障の予防効果を示す写真である。（ｂ）プルンバギンによる白内障の予防効果を示す写真である。（ｃ）ＴＨ１８３４による白内障の予防効果を示す写真である。（ｄ）ＳＰＶ１０６による白内障の予防効果を示す写真である。（ｅ）Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎによる白内障の予防効果を示す写真である。
【図５】（ａ）Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎによる白内障の予防効果を示す写真である。（ｂ）エンベリンによる白内障の予防効果を示す写真である。（ｃ）ＥＭＬ４２５による白内障の予防効果を示す写真である。（ｄ）ＣＢＰ３０による白内障の予防効果を示す写真である。（ｅ）ＴＳＡによる白内障の促進効果を示す写真である。
【図６】ＨＤＡＣ阻害剤による水晶体白濁の促進、およびＨＡＴ阻害剤による水晶体白濁の抑制を定量化したグラフである。
【図７】ＨＡＴ阻害剤（Ｃ６４６）による白内障治療効果を示す写真である。
【図８】（ａ）ＣＢＰ３０とＣＰＴＨ２との組み合わせによる、白内障治療効果を示す写真である。（ｂ）ＣＢＰ３０とＣＰＴＨ２との組み合わせを投与してから４日後における、水晶体の切片を示す写真である。
【図９】（ａ）ＣＢＰ３０による白内障治療効果を示す写真である。（ｂ）ＣＰＴＨ２による白内障治療効果を示す写真である。
【図１０】Ｃ６４６とＣＰＴＨ２との組み合わせによる、白内障治療効果を示す写真である。
【図１１】（ａ）Ｃ６４６による白内障治療効果を示す写真である。（ｂ）ＣＰＴＨ２による白内障治療効果を示す写真である。
【図１２】（ａ）in vivoにおける、ＨＡＴ阻害剤（Ｃ６４６）の白内障予防効果を検討する実験の概要を示す模式図である。（ｂ）図１２の（ａ）の実験結果を示す写真である。
【図１３】ＴＨ１８３４による白内障治療効果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の一実施形態について説明すると以下の通りであるが、本発明はこれに限定されるものではない。本発明は、以下に説明する各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態及び実施例にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態及び実施例についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された文献の全てが、本明細書中において参考文献として援用される。
【００１８】
本明細書中、数値範囲に関して「Ａ〜Ｂ」と記載した場合、当該記載は「Ａ以上Ｂ以下」を意図する。
【００１９】
〔１．用語の定義〕
［１−１．白内障］
本明細書において「白内障」とは、水晶体に混濁を生じる疾患一般を意図する。白内障によって水晶体に生じる混濁には、例えば、皮質混濁、核混濁、後嚢下混濁、皮質スポーク状混濁、前嚢下混濁、線維ひだ、水隙、核周囲の徹照下点状混濁、水疱、点状混濁、冠状混濁などの類型がある。また、本明細書において「白内障」とは、加齢白内障の他に、糖尿病白内障、先天白内障、外傷性白内障、アトピー白内障、放射線白内障、ステロイド白内障といった併発白内障などの病型を総称した疾患を意図する。
【００２０】
本明細書において「糖尿病白内障」とは、血液中または血漿中のグルコース濃度が持続的に上昇している状態によって特徴づけられる疾患の罹患者において発症している、水晶体の混濁を意図する。一例において、上記疾患は、高血糖症または糖尿病である。一例において、上記糖尿病は、一型糖尿病または二型糖尿病である。上記糖尿病白内障においては、水晶体の皮質または後嚢下に混濁が生じることが多いことが大規模疫学調査で知られているが、混濁の生じる箇所はこれらに限定されない。
【００２１】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、糖尿病白内障の予防または治療を目的として用いられることが好ましい。
【００２２】
［１−２．予防剤］
本明細書において「予防剤」とは、予防効果をもたらす薬剤を意図する。上記予防効果とは、以下に例示される効果を意図するが、これらに限定されるものではない。
【００２３】
（１）予防剤を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の発症を防止する、またはリスクを低減する。
【００２４】
（２）予防剤を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の再発を防止する、またはリスクを低減する。
【００２５】
（３）予防剤を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の兆候が生じることを防止する、またはリスクを低減する。
【００２６】
なお、上記疾患に係る１つ以上の症状は、全身的なものであってもよいし、局所的なものであってもよい。
【００２７】
［１−３．治療剤］
本明細書において「治療剤」とは、治療効果をもたらす薬剤を意図する。上記治療効果とは、以下に例示される効果を意図するが、これらに限定されるものではない。
【００２８】
（１）治療剤を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の重症度を低減する。
【００２９】
（２）治療剤を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の重症度の増加、または進行を防止する。
【００３０】
（３）治療剤を投与しなかった場合と比較して、疾患に係る１つ以上の症状の重症度の増加速度、または進行速度を低減する。
【００３１】
なお、上記疾患に係る１つ以上の症状は、全身的なものであってもよいし、局所的なものであってもよい。
【００３２】
〔２．ＨＡＴ阻害剤〕
本発明の一態様は、ＨＡＴ阻害剤を有効成分として含有している。本明細書において、ＨＡＴ阻害剤とは、ヒストンアセチル化酵素（Histone Acetyl Transferase：ＨＡＴ）の機能を阻害する物質を意図する。
【００３３】
ＨＡＴは、ヒストンに含まれる特定のリジン残基のアミノ基を、アセチル基に置換する。このことにより、ＤＮＡとヒストンとが形成しているクロマチン構造が部分的に緩み、ヒストンがアセチル化された部位近傍の遺伝子が発現しやすくなる。ＨＡＴ阻害剤は、上述の過程を阻害することにより、特定の遺伝子の発現を抑制する結果を生じさせる。したがって、本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、エピジェネティックな遺伝子発現制御に作用していることになる。
【００３４】
［２−１．ＨＡＴ阻害剤の標的］
本明細書において、特定のＨＡＴ阻害剤により機能が阻害されるＨＡＴのことを、当該ＨＡＴ阻害剤の「標的」と呼ぶ。ＨＡＴ阻害剤は、標的であるＨＡＴと結合するなどして、「直接的に」ＨＡＴの機能を阻害してよい。一方、ＨＡＴ阻害剤は、ＨＡＴの機能に必要な物質を捕捉するなどして、「間接的に」ＨＡＴの機能を阻害してもよい（この場合、上記ＨＡＴの機能に必要な物質もまた、上記ＨＡＴと同じく「ＨＡＴ阻害剤の標的」と呼ぶ）。すなわち、ＨＡＴ阻害剤の標的は、ＨＡＴである場合もあれば、ＨＡＴでない場合もある。
【００３５】
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤が標的とするＨＡＴは、下表に記載されたＨＡＴ群のうち、１つ以上のサブタイプのＨＡＴでありうる。一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤が標的とするＨＡＴは、下記表１に記載されたＨＡＴ群のうち、１つ以上のファミリーに属するＨＡＴ群でありうる。
【００３６】
【表１】
2018079149.tif 000002
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤が標的とする物質は、ＮＡＴ１０またはＢＲＤ４でありうる。
【００３７】
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤の標的は、本明細書においてＨＡＴ阻害剤の標的になりうると記載されている物質、および当業者がＨＡＴ阻害剤の標的と認める物質から選択される、１種類以上である。すなわち、上記ＨＡＴ阻害剤の標的は、１種類のみでもよいし、２種類以上でもよい。また、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＨＡＴである物質およびＨＡＴ以外の物質を、共に標的としてもよい。更に、上記ＨＡＴ阻害剤の標的は、上述されている物質を含む複合体であってもよい。
【００３８】
［２−２．ＨＡＴ阻害剤］
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、クルクミンである。上記クルクミンのＩＵＰＡＣ名は(1E,6E)-1,7-bis (4-hydroxy-3-methoxyphenyl) -1,6-heptadiene-3,5-dione、ＣＡＳ番号は４５８−３７−７、構造式は下式１である。上記クルクミンは、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とする。
【００３９】
【化１】
2018079149.tif 000003
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサン（別名HAT inhibitor II）である。上記２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサンのＩＵＰＡＣ名は2,6-bis((e)-3-bromo-4-hydroxybenzylidene)cyclohexan、ＣＡＳ番号は９３２７４９−６２−７、構造式は下式２である。上記２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサンは、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とする。
【００４０】
【化２】
2018079149.tif 000004
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＣＴＫ７Ａ（別名HAT inhibitor VII）である。上記ＣＴＫ７ＡのＩＵＰＡＣ名はSodium-4-(3,5-bis(4-hydroxy-3-methoxystyryl)-1H-pyrazol-1-yl)benzoate、ＣＡＳ番号は１２９７２６２−１６−８、構造式は下式３である。上記ＣＴＫ７Ａは、Ｐ３００およびＰＣＡＦを標的とする。
【００４１】
【化３】
2018079149.tif 000005
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ
Ｌｉｇａｎｄである。上記Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ＬｉｇａｎｄのＩＵＰＡＣ名は3,5-bis(3,5-Dibromo-4-hydroxybenzylidene)-tetrahydro-2H-pyran-4-one、ＣＡＳ番号は１０２０３９９−５２−３、構造式は下式４である。上記Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｌｉｇａｎｄは、Ｐ３００を標的とする。
【００４２】
【化４】
2018079149.tif 000006
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ガルシノールである。上記ガルシノールのＩＵＰＡＣ名は3-［(3,4-Dihydroxyphenyl)-hydroxymethylidene］-6,6-dimethyl-5,7-bis(3-methylbut-2-enyl)-1-(5-methyl-2-prop-1-en-2-ylhex-4-enyl)bicyclo［3.3.1］nonane-2,4,9-trione、ＣＡＳ番号は７８８２４−３０−３、構造式は下式５である。上記ガルシノールは、Ｐ３００およびＰＣＡＦを標的とする。
【００４３】
【化５】
2018079149.tif 000007
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、アナカルド酸である。上記アナカルド酸のＩＵＰＡＣ名は2-hydroxy-6-［(8Z,11Z)-pentadeca-8,11,14-trienyl］benzoic acid、ＣＡＳ番号は１１０３４−７７−８、構造式は下式６である。上記アナカルド酸は、Ｐ３００およびＰＣＡＦを標的とする。
【００４４】
【化６】
2018079149.tif 000008
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＭＧ１４９である。上記ＭＧ１４９のＩＵＰＡＣ名は2-(4-heptylphenethyl)-6-hydroxybenzoic acid、ＣＡＳ番号は１２４３５８３−８５−８、構造式は下式７である。上記ＭＧ１４９は、ＴＩＰ６０およびＭＯＺを標的とする。
【００４５】
【化７】
2018079149.tif 000009
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、Ｃ６４６である。上記Ｃ６４６のＩＵＰＡＣ名は4-［4-［［5-(4,5-Dimethyl-2-nitrophenyl)-2-furanyl］methylene］-4,5-dihydro-3-methyl-5-oxo-1H-pyrazol-1-yl］benzoic acid、ＣＡＳ番号は３２８９６８−３６−１、構造式は下式８である。上記Ｃ６４６は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とする。
【００４６】
【化８】
2018079149.tif 000010
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＮＵ９０５６である。上記ＮＵ９０５６のＩＵＰＡＣ名は5-(1,2-Thiazol-5-yldisulfanyl)-1,2-thiazole、ＣＡＳ番号は１４５０６４４−２８−６、構造式は下式９である。上記ＮＵ９０５６は、ＴＩＰ６０を標的とする。
【００４７】
【化９】
2018079149.tif 000011
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＣＰＴＨ２である。上記ＣＰＴＨ２のＩＵＰＡＣ名は2-［4-(4-chlorophenyl)-2-thiazolyl］hydrazone-cyclopentanone, monohydrochloride、ＣＡＳ番号は３５７６４９−９３−５、構造式は下式１０である。上記ＣＰＴＨ２は、ＧＣＮ５を標的とする。
【００４８】
【化１０】
2018079149.tif 000012
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、５−クロロ−２−（４−ニトロフェニル）−３（２Ｈ）−イソチアゾロンである。上記５−クロロ−２−（４−ニトロフェニル）−３（２Ｈ）−イソチアゾロンのＩＵＰＡＣ名は5-Chloro-2-(4-nitrophenyl)-3(2H)-isothiazolone、ＣＡＳ番号は７４８７７７−４７−１、構造式は下式１１である。上記５−クロロ−２−（４−ニトロフェニル）−３（２Ｈ）−イソチアゾロンは、Ｐ３００およびＰＣＡＦを標的とする。
【００４９】
【化１１】
2018079149.tif 000013
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ブチロラクトン３（別名ＭＢ−３）である。上記ブチロラクトン３のＩＵＰＡＣ名は3-Methylene-4-hydroxycarbonyl-5-(1-propyl)-tetrahydrofuran-2-one、ＣＡＳ番号は７７８６４９−１８−６、構造式は下式１２である。上記ブチロラクトン３は、ＧＣＮ５を標的とする。
【００５０】
【化１２】
2018079149.tif 000014
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、没食子酸である。上記没食子酸のＩＵＰＡＣ名は3,4,5-trihydroxybenzoic acid、ＣＡＳ番号は１４９−９１−７、構造式は下式１３である。上記没食子酸は、非特異的なＨＡＴ阻害剤である。
【００５１】
【化１３】
2018079149.tif 000015
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、（−）−エピガロカテキンガラートである。上記（−）−エピガロカテキンガラートのＩＵＰＡＣ名は［(2R,3R)-5,7-dihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)chroman-3-yl］ 3,4,5-trihydroxybenzoate、ＣＡＳ番号は９８９−５１−５、構造式は下式１４である。上記（−）−エピガロカテキンガラートは、非特異的なＨＡＴ阻害剤である。
【００５２】
【化１４】
2018079149.tif 000016
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＥＭＬ４２５である。上記ＥＭＬ４２５のＩＵＰＡＣ名は5-［(4-Hydroxy-2,6-dimethylphenyl)methylene］-1,3-bis(phenylmethyl)-2,4,6(1H,3H,5H)-pyrimidinetrione、ＣＡＳ番号は１６７５８２１−３２−５、構造式は下式１５である。上記ＥＭＬ４２５は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とする。
【００５３】
【化１５】
2018079149.tif 000017
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、Ｌ００２である。上記Ｌ００２のＩＵＰＡＣ名は4-［O-［(4-Methoxyphenyl)sulfonyl］oxime］-2,6-dimethyl-2,5-cyclohexadiene-1,4-dione、ＣＡＳ番号は３２１６９５−５７−２、構造式は下式１６である。上記Ｌ００２は、Ｐ３００を標的とする。
【００５４】
【化１６】
2018079149.tif 000018
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬである。上記ＩＳＯＸ
ＤＵＡＬのＩＵＰＡＣ名は［3-［4-［2-［5-(Dimethyl-1,2-oxazol-4-yl)-1-［2-(morpholin-4-yl)ethyl］-1H-1,3-benzodiazol-2-yl］ethyl］phenoxy］propyl］dimethylamine、ＣＡＳ番号は登録されておらず、構造式は下式１７である。上記ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬは、ＣＢＰおよびＢＲＤ４のブロモドメインを標的とする。
【００５５】
【化１７】
2018079149.tif 000019
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、プルンバギンである。上記プルンバギンのＩＵＰＡＣ名は5-Hydroxy-2-methyl-1,4-naphthalened-ione、ＣＡＳ番号は４８１−４２−５、構造式は下式１８である。上記プルンバギンは、Ｐ３００を標的とする。
【００５６】
【化１８】
2018079149.tif 000020
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＴＨ１８３４である。上記ＴＨ１８３４のＩＵＰＡＣ名は2-(5-(4-((phenethyl(4-(4-(pyrrolidin-1-ylmethyl)phenoxy)butyl)amino)methyl)phenyl)-2H-tetrazol-2-yl)acetic acid dihydrochloride、ＣＡＳ番号は登録されておらず、構造式は下式１９である。上記ＴＨ１８３４は、ＴＩＰ６０を標的とする。
【００５７】
【化１９】
2018079149.tif 000021
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＳＰＶ１０６である。上記ＳＰＶ１０６のＩＵＰＡＣ名は2-Pentadecylidene-Propanedioic acid 1,3-diethyl ester、ＣＡＳ番号は１０３６９３９−３８−４、構造式は下式２０である。上記ＳＰＶ１０６は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とする。また、上記ＳＰＶ１０６は、ＰＣＡＦのアクチベーターでもある。
【００５８】
【化２０】
2018079149.tif 000022
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎである。上記ＷｉｎｄｏｒｐｈｅｎのＩＵＰＡＣ名は(E) & (Z)-3-Chloro-2,3-bis(4-methoxyphenyl)acrylaldehyde、ＣＡＳ番号は１９８８１−７０−０、構造式は下式２１である。上記Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎは、非特異的なＨＡＴ阻害剤である。
【００５９】
【化２１】
2018079149.tif 000023
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ケトミンである。上記ケトミンのＩＵＰＡＣ名は2,3S,5aR,6,10bS,11-hexahydro-3-(hydroxymethyl)-10b-［(1S,4S)-3-［［4-(hydroxymethyl)-5,7-dimethyl-6,8-dioxo-2,3-dithia-5,7-diazabicyclo［2.2.2］oct-1-yl］methyl］-1H-indol-1-yl］-2-methyl-3,11aS-epidithio-11aH-pyrazino［1',2':1,5］pyrrolo［2,3-b］indole-1,4-dione、ＣＡＳ番号は１４０３−３６−７、構造式は下式２２である。上記ケトミンは、Ｈ１Ｆ１α／Ｐ３００複合体のＴＡＺ１ドメインを標的とする。
【００６０】
【化２２】
2018079149.tif 000024
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎである。上記ＲｅｍｏｄｅｌｉｎのＩＵＰＡＣ名は4-［2-(2-cyclopentylidenehydrazinyl)-1,3-thiazol-4-yl］benzonitrile;hydrobromide、ＣＡＳ番号は１６２２９２１−１５−６、構造式は下式２３である。上記Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎは、ＮＡＴ１０を標的とする。
【００６１】
【化２３】
2018079149.tif 000025
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、エンベリンである。上記エンベリンのＩＵＰＡＣ名は2,5-Dihydroxy-3-undecyl-1,4-benzoquinone、ＣＡＳ番号は５５０−２４−３、構造式は下式２４である。上記エンベリンは、ＰＣＡＦを標的とする。
【００６２】
【化２４】
2018079149.tif 000026
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、Ｉｓｃｈｅｍｉｎである。上記ＩｓｃｈｅｍｉｎのＩＵＰＡＣ名は5-［(1E)-2-(2-Amino-4-hydroxy-5-methylphenyl)diazenyl］-2,4-dimethylbenzenesulfonic acid sodium salt、ＣＡＳ番号は１３５７０５９−００−７、構造式は下式２５である。上記Ｉｓｃｈｅｍｉｎは、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴのブロモドメインを標的とする。
【００６３】
【化２５】
2018079149.tif 000027
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＣＢＰ３０である。上記ＣＢＰ３０のＩＵＰＡＣ名は8-(3-chloro-4-methoxy-phenethyl)-4-(3,5-dimethyl-isoxazol-4-yl)-9-(2-(morpholin-4-yl)-propyl)-7,9-diaza-bicyclo［4.3.0］nona-1(6),2,4,7-tetraene、ＣＡＳ番号は１６１３６９５−１４−９、構造式は下式２６である。上記ＣＢＰ３０は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴのブロモドメインを標的とする。
【００６４】
【化２６】
2018079149.tif 000028
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、ＫＧ５０１（別名ナフトールＡＳ−Ｅホスフェート）である。上記ＫＧ５０１のＩＵＰＡＣ名は3-［(4-chlorophenyl)carbamoyl］-2-naphthyl dihydrogen phosphate; N-(4-Chlorophenyl)-3-(phosphonooxy)naphthalene-2-carboxamide、ＣＡＳ番号は１８２２８−１７−６、構造式は下式２７である。上記ＫＧ５０１は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴのＫＩＸドメインを標的とする。
【００６５】
【化２７】
2018079149.tif 000029
上述した物質のうち、２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサン、ＣＴＫ７Ａ、ガルシノール、アナカルド酸、ＭＧ１４９、没食子酸、（−）−エピガロカテキンガラート、プルンバギンおよびエンベリンは、ポリフェノール由来の化合物である。
【００６６】
上述した物質のうち、ＣＴＫ７Ａ、アナカルド酸、ＭＧ１４９、Ｃ６４６、没食子酸、（−）−エピガロカテキンガラートおよびプルンバギンは、安息香酸誘導体である。
【００６７】
上述した物質のうち、ＣＴＫ７Ａ、Ｃ６４６、ＣＰＴＨ２、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ、ＴＨ１８３４およびＲｅｍｏｄｅｌｉｎは、構造中にヘテロ環を含んでいる。
【００６８】
上述した物質のうち、２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサン、ブチロラクトン３、ＳＰＶ１０６、Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎは、α−β不飽和カルボニル化合物である。
【００６９】
一実施形態において、上記ＨＡＴ阻害剤は、上述した物質の誘導体または塩であってよい。上述した物質の誘導体または塩をＨＡＴ阻害剤として用いることにより、（１）白内障の予防効果または治療効果が増大する、（２）物質の人体に対する安全性が増大する、（３）製剤に当たって扱いやすい物性を得る、などの効果を付与しうる。
【００７０】
本明細書において、「誘導体」とは、特定の化合物に対して、当該化合物の分子内の一部が、他の官能基または他の原子と置換されることにより生じる化合物群を意図する。
【００７１】
上記他の官能基の例としては、アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリール基、アリールオキシ基、アリールチオ基、アリールアルキル基、アリールアルコキシ基、アリールアルキルチオ基、アリールアルケニル基、アリールアルキニル基、アリル基、アミノ基、置換アミノ基、シリル基、置換シリル基、シリルオキシ基、置換シリルオキシ基、アリールスルフォニルオキシ基、アルキルスルフォニルオキシ基、ニトロ基などが挙げられる。上記他の原子の例としては、炭素原子、水素原子、酸素原子、窒素原子、硫黄原子、リン原子、ハロゲン原子などが挙げられる。
【００７２】
本明細書において、「塩」とは、医薬品として被験体に投与することが生理学的に許容されうる塩であるならば、限定されない。塩の例としては、アルカリ金属塩（カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩など）、アンモニウム塩、有機塩基塩（トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩など）、有機酸塩（酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、蟻酸塩、トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩など）、無機酸塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩など）を挙げられる。
【００７３】
ＨＡＴ阻害剤の例として上述した物質の誘導体または塩は、公知の手法により製造することができる。
【００７４】
〔３．白内障の予防剤または治療剤〕
［３−１．投与形態および剤型］
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、被験体に対して投与される。一実施形態において、上記被験体はヒトである。他の実施形態において、上記被験体は、ヒト以外の動物である。上記ヒト以外の動物の例としては、ヒト以外の哺乳類（ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ラットなど）が挙げられる。
【００７５】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、任意の投与経路によって被験体に投与されうる。上記投与経路の例としては、経口投与、非経口投与、経皮投与、経粘膜投与、経静脈投与が挙げられる。したがって、上記白内障の予防剤または治療剤の剤型は、内服薬、外用薬、注射剤、坐剤、吸入剤、点眼剤などでありうる。
【００７６】
上述した投与経路の中でも、非経口投与が好ましく、点眼投与、結膜嚢内投与、硝子体内投与、結膜下投与、テノン嚢下投与がより好ましく、点眼投与が更に好ましい。したがって、上述した剤型の中でも、点眼剤または注射剤が好ましく、点眼剤がより好ましい。点眼剤が好ましい理由としては、有効成分を水晶体に送達するまでの経路が短いこと、他の器官を刺激しにくいこと、侵襲がほとんどないこと、全身への影響が小さいこと（点眼後の涙点圧迫によりさらに全身への影響を抑えることができる）、投与が簡便であること、反復投与が可能であること、患者が自己管理できることなどが挙げられる。このため、白内障の予防効果または治療効果を、より迅速にすること、より増大させることなどが期待できる。
【００７７】
［３−２．含有成分］
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、有効成分としてＨＡＴ阻害剤を含んでいる。本明細書において、「有効成分」とは、１つ以上の症状に対して予防効果または治療効果をもたらすことのできる物質を意図する。
【００７８】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、１種類のＨＡＴ阻害剤のみを含んでいてもよいし、２種類以上のＨＡＴ阻害剤を組み合わせて含んでいてもよい。２種類以上のＨＡＴ阻害剤を組み合わせることにより、個々のＨＡＴ阻害剤の効果からは予想できない、相乗的な効果を得ることができる。
【００７９】
このような相乗的な効果が得られるＨＡＴ阻害剤の組み合わせの一例としては、（１）ＣＢＰ３０とＣＰＴＨ２との組み合わせ、および（２）Ｃ６４６とＣＰＴＨ２との組み合わせ、が挙げられる。
【００８０】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤に含まれるＨＡＴ阻害剤の濃度は、当該ＨＡＴ阻害剤の種類、並びに選択される投与経路および剤型などによって異なる。一例において、上記ＨＡＴ阻害剤の濃度の下限は、０．００１μＭ以上、０．００２μＭ以上、０．００５μＭ以上、０．０１μＭ以上、０．０２μＭ以上、０．０５μＭ以上、０．１μＭ以上、０．２μＭ以上、０．５μＭ以上、１μＭ以上、２μＭ以上、３μＭ以上、４μＭ以上、５μＭ以上、６μＭ以上、７μＭ以上、８μＭ以上、９μＭ以上、１０μＭ以上、２０μＭ以上、３０μＭ以上、４０μＭ以上、５０μＭ以上、６０μＭ以上、７０μＭ以上、８０μＭ以上、９０μＭ以上、１００μＭ以上、２００μＭ以上、３００μＭ以上、４００μＭ以上または５００μＭ以上である。
【００８１】
一例において、上記ＨＡＴ阻害剤の濃度の上限は、０．０１μＭ以下、０．０２μＭ以下、０．０５μＭ以下、０．１μＭ以下、０．２μＭ以下、０．５μＭ以下、１μＭ以下、２μＭ以下、３μＭ以下、４μＭ以下、５μＭ以下、６μＭ以下、７μＭ以下、８μＭ以下、９μＭ以下、１０μＭ以下、２０μＭ以下、３０μＭ以下、４０μＭ以下、５０μＭ以下、６０μＭ以下、７０μＭ以下、８０μＭ以下、９０μＭ以下、１００μＭ以下、２００μＭ以下、３００μＭ以下、４００μＭ以下、５００μＭ以下、１０００μＭ以下、２０００μＭ以下または５０００μＭ以下である。
【００８２】
一例において、上記ＨＡＴ阻害剤の濃度は、０．００１〜０．０１μＭ、０．００２〜０．０２μＭ、０．００５〜０．０５μＭ、０．０１〜０．１μＭ、０．０２〜０．２μＭ、０．０５〜０．５μＭ、０．１〜１μＭ、０．２〜２μＭ、０．３〜３μＭ、０．４〜４μＭ、０．５〜５μＭ、０．６〜６μＭ、０．７〜７μＭ、０．８〜８μＭ、０．９〜９μＭ、１〜１０μＭ、２〜２０μＭ、３〜３０μＭ、４〜４０μＭ、５〜５０μＭ、６〜６０μＭ、７〜７０μＭ、８〜８０μＭ、９〜９０μＭ、１０〜１００μＭ、２０〜２００μＭ、３０〜３００μＭ、４０〜４００μＭ、５０〜５００μＭ、６０〜６００μＭ、７０〜７００μＭ、８０〜８００μＭ、９０〜９００μＭ、１００〜１０００μＭ、２００〜２０００μＭまたは５００〜５０００μＭである。
【００８３】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、ＨＡＴ阻害剤以外の成分を含有していてよい。上記ＨＡＴ阻害剤以外の成分は、有効成分であってもよいし、有効成分でなくともよい。
【００８４】
上記ＨＡＴ阻害剤以外の成分のうち、有効成分は、白内障に関連する症状（白内障の症状、白内障の合併症の症状など）に対する有効成分であってもよいし、白内障に関連しない症状に対する有効成分であってもよい。
【００８５】
上記ＨＡＴ阻害剤以外の成分のうち、有効成分でない成分の類型としては、緩衝剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、防腐剤、抗酸化剤、高分子量重合体、賦形剤、担体、希釈剤、溶媒、可溶化剤、安定剤、充填剤、結合剤、界面活性剤、安定化剤などが挙げられる。
【００８６】
上記緩衝剤の例としては、リン酸またはリン酸塩、ホウ酸またはホウ酸塩、クエン酸またはクエン酸塩、酢酸または酢酸塩、炭酸または炭酸塩、酒石酸または酒石酸塩、ε−アミノカプロン酸、トロメタモールなどが挙げられる。上記リン酸塩としては、リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウムなどが挙げられる。上記ホウ酸塩としては、ホウ砂、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウムなどが挙げられる。上記クエン酸塩としては、クエン酸ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、クエン酸三ナトリウムなどが挙げられる。上記酢酸塩としては、酢酸ナトリウム、酢酸カリウムなどが挙げられる。上記炭酸塩としては、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどが挙げられる。上記酒石酸塩としては、酒石酸ナトリウム、酒石酸カリウムなどが挙げられる。
【００８７】
ｐＨ調整剤の例としては、塩酸、リン酸、クエン酸、酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどが挙げられる。
【００８８】
上記等張化剤の例としては、イオン性等張化剤（塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウムなど）、非イオン性等張化剤（グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、マンニトールなど）が挙げられる。
【００８９】
上記防腐剤の例としては、ベンザルコニウム塩化物、ベンザルコニウム臭化物、ベンゼトニウム塩化物、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、クロロブタノールなどが挙げられる。
【００９０】
上記抗酸化剤の例としては、アスコルビン酸、トコフェノール、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エリソルビン酸ナトリウム、没食子酸プロピル、亜硫酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００９１】
上記高分子量重合体の例としては、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、アテロコラーゲンなどが挙げられる。
【００９２】
特に、アテロコラーゲンを高分子量重合体として添加することは、ＨＡＴ阻害剤の吸収率が上がるため、好ましい。
【００９３】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤は、上に例示した以外にも、当業者に知られている有効成分および／または医薬品用添加剤を含んでいてよい。
【００９４】
［３−３．製剤および処方］
ＨＡＴ阻害剤および上に例示されているＨＡＴ阻害剤以外の成分を原料として、公知の手法により、本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤が製剤できる。
【００９５】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤を点眼剤として投与する場合、所望の効果が得られるならば、投与量に制限はない。
【００９６】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤を点眼剤として投与する場合、所望の効果が得られるならば、投与間隔に制限はない。上記投与間隔は、通常１時間〜６箇月間に１回であり、好ましくは１時間に１回、２時間に１回、３時間に１回、６時間に１回、１２時間に１回、１日間に１回、２日間に１回、３日間に１回、４日間に１回、５日間に１回、６日間に１回、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１箇月間に１回、２箇月間に１回、３箇月間に１回、４箇月間に１回、５箇月間に１回、６箇月間に１回であり、より好ましくは少なくとも１日に１回、少なくとも２日間に１回、少なくとも３日間に１回、少なくとも４日間に１回、少なくとも５日間に１回、少なくとも６日間に１回、少なくとも１週間に１回である。
【００９７】
本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤を、白内障および／または他の疾患を予防または治療するための薬剤と併用して処方してもよい。
【００９８】
〔４．作用機序〕
以下、図１に基づいて、本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤の推定上の作用機序を説明する。なお、以下に説明されるのは作用機序の例示であり、ＨＡＴ阻害剤を含む白内障の予防剤または治療剤の、他の作用機序を排除するものではない。
【００９９】
図１の（ａ）は、本発明の一実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤の作用機序である。この作用機序は、アポトーシス関連遺伝子Ｐ５３の上流に位置するＰＬＫ３の発現を、ＨＡＴ阻害剤によって抑制するモデルである。
【０１００】
ＨＡＴ阻害剤を投与しない場合は、ＨＡＴの機能によりＰ５３が活性化し、水晶体上皮細胞のアポトーシスが誘導される。このことにより、水晶体上皮細胞を通した物質の輸送、および水晶体上皮細胞層から水晶体皮質への細胞の供給が妨げられ、水晶体皮質の恒常性が変化する。すると、従前は水晶体内部の水分に溶解していたタンパク質が析出し、混濁が発生する。図１の（ａ）に示されている作用機序では、ＨＡＴ阻害剤によってＨＡＴ（例えば、［２−１］に記載の物質）の機能が阻害されることにより、ＰＬＫ３の発現が抑制され、結果的に白内障を予防または治療している。なお、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤を投与した場合は、逆の作用機序により、白内障の進行が促進されると考えられる。
【０１０１】
図１の（ｂ）は、本発明の他の実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤の作用機序である。この作用機序は、ＡＬＤＨ１Ａ１の発現を、ＨＡＴ阻害剤によって促進するモデルである。
【０１０２】
ＨＡＴ阻害剤を投与しない場合は、ＨＡＴの機能によりＡＬＤＨ１Ａ１が抑制され、したがってＡＬＤＨ１Ａ１の機能であるアルデヒド蓄積の抑制が抑制される。結果として水晶体内にアルデヒドが蓄積され、アルデヒドにより変質したタンパク質が蓄積して、混濁が生じる。図１の（ｂ）に示されている作用機序では、ＨＡＴ阻害剤によってＨＡＴ（例えば、［２−１］に記載の物質）の機能が阻害されることにより、ＡＬＤＨ１Ａ１の発現が促進され、結果的に白内障を予防または治療している。なお、ＨＤＡＣ阻害剤を投与した場合は、逆の作用機序（ＡＬＤＨ１Ａ１が抑制され、したがってＡＬＤＨ１Ａ１の機能であるアルデヒド蓄積の抑制が抑制される）により、白内障の進行が促進されると考えられる。
【０１０３】
図１の（ｃ）は、本発明のさらに他の実施形態に係る白内障の予防剤または治療剤の作用機序である。この作用機序は、ＧＪＡ１発現が、ＨＡＴ阻害剤によって促進されるモデルである。
【０１０４】
ＨＡＴ阻害剤を投与しない場合は、ＨＡＴのＧＪＡ１を活性化する機能が抑制され、水晶体上皮細胞の細胞間接着が低下する。このことにより、水晶体に水分が取り込まれ、浸透圧上昇に伴い混濁が発生する。図１の（ｃ）に示されている作用機序では、ＨＡＴ阻害剤によってＨＡＴ（例えば、［２−１］に記載の物質）の機能が促進されることにより、ＧＪＡ１の発現が促進され、結果的に白内障を予防または治療している。なお、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤を投与した場合は、逆の作用機序により、白内障の進行が促進されると考えられる。このような作用機序を有するＨＡＴ阻害剤の例としては、アナカルド酸が挙げられる。
【０１０５】
このように、ＨＡＴ阻害剤は遺伝子発現のエピジェネティックな制御機構に介入することにより、白内障を予防または治療している。したがって、ＨＡＴ阻害剤としての機能を有する物質を有効成分として含む白内障の予防剤または治療剤は、全て本発明の範囲に含まれる。
【０１０６】
なお、上述した３種類の作用機序モデルは、〔実施例４〕において裏付けられている。
【０１０７】
また、本発明の一態様は、ＨＡＴ阻害剤を有効成分とする白内障の予防薬または治療薬を用いる、白内障の予防方法または治療方法である。
【実施例】
【０１０８】
〔実施例１〕
ガラクトース添加培地を用いた糖尿病白内障モデルを利用して、以下のＨＡＴ阻害剤における白内障の予防効果を調査した。【０１０９】
［実施例１−１］
６週齢のＳＤラット（三協ラボサービス社製）の左右の眼球から、水晶体を摘出した。右眼から摘出した水晶体は、Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に３０ｍＭのガラクトースを添加した培地にて培養し、糖尿病白内障を発症させたモデルとした。一方、左眼から摘出した水晶体は、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭの２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサン（abcam社製）を添加した培地にて培養した。培養にはインキュベーターを使用し、温度は３７℃に保った。なお、２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサンは、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とするＨＡＴ阻害剤である。【０１１０】
培養開始から４日後、上記水晶体をそれぞれ培地から取り出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により２０倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。上記顕微鏡写真を、図２の（ａ）に示す。【０１１１】
図２の（ａ）に示されているように、上記２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサンを添加した培地にて培養した水晶体は、上記２，６−ビス（（ｅ）−３−ブロモ−４−ヒドロキシベンジリデン）シクロヘキサンを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１１２】
［実施例１−２］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび１００μＭのＣＴＫ７Ａ（EMD Millipore社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＣＴＫ７Ａは、Ｐ３００およびＰＣＡＦを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図２の（ｂ）に示す。【０１１３】
図２の（ｂ）に示されているように、上記ＣＴＫ７Ａを添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＣＴＫ７Ａを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１１４】
［実施例１−３］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび２μＭのガルシノール（Selleckchem社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ガルシノールは、Ｐ３００およびＰＣＡＦを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図２の（ｃ）に示す。【０１１５】
図２の（ｃ）に示されているように、上記ガルシノールを添加した培地にて培養した水晶体は、上記ガルシノールを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１１６】
［実施例１−４］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび２０μＭのアナカルド酸（abcam社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、アナカルド酸は、Ｐ３００およびＰＣＡＦを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図２の（ｄ）に示す。【０１１７】
図２の（ｄ）に示されているように、上記アナカルド酸を添加した培地にて培養した水晶体は、上記アナカルド酸を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１１８】
［実施例１−５］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび５０μＭのＭＧ１４９（Selleckchem社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＭＧ１４９は、ＴＩＰ６０およびＭＯＺを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図２の（ｅ）に示す。【０１１９】
図２の（ｅ）に示されているように、上記ＭＧ１４９を添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＭＧ１４９を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁がやや低く抑えられていた。【０１２０】
［実施例１−６］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのＣ６４６（SIGMA社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、Ｃ６４６は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図３の（ａ）に示す。【０１２１】
図３の（ａ）に示されているように、上記Ｃ６４６を添加した培地にて培養した水晶体は、上記Ｃ６４６を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１２２】
［実施例１−７］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのＣＰＴＨ２（Cayman社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＣＰＴＨ２は、ＧＣＮ５を標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図３の（ｂ）に示す。【０１２３】
図３の（ｂ）に示されているように、上記ＣＰＴＨ２を添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＣＰＴＨ２を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１２４】
［実施例１−８］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび５００μＭのブチロラクトン３（abcam社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ブチロラクトン３は、ＧＣＮ５を標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図３の（ｃ）に示す。【０１２５】
図３の（ｃ）に示されているように、上記ブチロラクトン３を添加した培地にて培養した水晶体は、上記ブチロラクトン３を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１２６】
［実施例１−９］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび１００μＭの没食子酸（SIGMA社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、没食子酸は、非特異的なＨＡＴ阻害剤である。結果を図３の（ｄ）に示す。【０１２７】
図３の（ｄ）に示されているように、上記没食子酸を添加した培地にて培養した水晶体は、上記没食子酸を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁がやや低く抑えられていた。【０１２８】
［実施例１−１０］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび５０μＭの（−）−エピガロカテキンガラート（和光純薬工業社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、（−）−エピガロカテキンガラートは、非特異的なＨＡＴ阻害剤である。結果を図３の（ｅ）に示す。【０１２９】
図３の（ｅ）に示されているように、上記（−）−エピガロカテキンガラートを添加した培地にて培養した水晶体は、上記（−）−エピガロカテキンガラートを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁がやや低く抑えられていた。【０１３０】
［実施例１−１１］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび２０μＭのＩＳＯＸ  ＤＵＡＬ（SIGMA社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬは、ＣＢＰおよびＢＲＤ４のブロモドメインを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図４の（ａ）に示す。【０１３１】
図４の（ａ）に示されているように、上記ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬを添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＩＳＯＸ  ＤＵＡＬを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１３２】
［実施例１−１２］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび２μＭのプルンバギン（SIGMA社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、プルンバギンは、Ｐ３００を標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図４の（ｂ）に示す。【０１３３】
図４の（ｂ）に示されているように、上記プルンバギンを添加した培地にて培養した水晶体は、上記プルンバギンを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１３４】
［実施例１−１３］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび１００μＭのＴＨ１８３４（axon medchem社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＴＨ１８３４は、ＴＩＰ６０を標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図４の（ｃ）に示す。【０１３５】
図４の（ｃ）に示されているように、上記ＴＨ１８３４を添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＴＨ１８３４を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１３６】
［実施例１−１４］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび１００μＭのＳＰＶ１０６（SIGMA社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＳＰＶ１０６は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図４の（ｄ）に示す。【０１３７】
図４の（ｄ）に示されているように、上記ＳＰＶ１０６を添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＳＰＶ１０６を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１３８】
［実施例１−１５］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのＷｉｎｄｏｒｐｈｅｎ（SIGMA社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎは、非特異的なＨＡＴ阻害剤である。結果を図４の（ｅ）に示す。【０１３９】
図４の（ｅ）に示されているように、上記Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎを添加した培地にて培養した水晶体は、上記Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１４０】
［実施例１−１６］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのＲｅｍｏｄｅｌｉｎ（Cayman社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、Ｒｅｍｏｄｅｌｉｎは、ＮＡＴ１０を標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図５の（ａ）に示す。【０１４１】
図５の（ａ）に示されているように、上記Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎを添加した培地にて培養した水晶体は、上記Ｗｉｎｄｏｒｐｈｅｎを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１４２】
［実施例１−１７］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのエンベリン（abcam社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、エンベリンは、ＰＣＡＦを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図５の（ｂ）に示す。【０１４３】
図５の（ｂ）に示されているように、上記エンベリンを添加した培地にて培養した水晶体は、上記エンベリンを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１４４】
［実施例１−１８］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび２００μＭのＥＭＬ４２５（axon medchem社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＥＭＬ４２５は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図５の（ｃ）に示す。【０１４５】
図５の（ｃ）に示されているように、上記ＥＭＬ４２５を添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＥＭＬ４２５を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１４６】
［実施例１−１９］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび５μＭのＣＢＰ３０（Cayman社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＣＢＰ３０は、Ｐ３００／ＣＢＰファミリーのＨＡＴのブロモドメインを標的とするＨＡＴ阻害剤である。結果を図５の（ｄ）に示す。【０１４７】
図５の（ｄ）に示されているように、上記ＣＢＰ３０を添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＣＢＰ３０を添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１４８】
［参考例１−１］
左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび０．８μＭのＴＳＡ（和光純薬工業社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により実験を行った。なお、ＴＳＡは、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）阻害剤である。結果を図５の（ｅ）に示す。【０１４９】
図５の（ｅ）に示されているように、上記ＴＳＡを添加した培地にて培養した水晶体は、上記ＴＳＡを添加しない培地にて培養した水晶体と比較して、皮質部の混濁が増加していた。【０１５０】
以上の実施例および参考例で観察された現象からは、ヒストンがアセチル化されている程度が白内障の発症に関係しており、ヒストンのアセチル化が阻害されると白内障が予防され、ヒストンの脱アセチル化が阻害されると白内障が促進されることが示唆される。【０１５１】
〔実施例２〕
培地に添加するＨＡＴ阻害剤（Ｃ６４６）またはＨＤＡＣ阻害剤（ＴＳＡ）の濃度を変化させ、水晶体に生じる混濁を定量化した。【０１５２】
まず、左眼から摘出した水晶体を、上記Ｍ１９９培地に、３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのＣ６４６（SIGMA社製）を添加した培地にて培養した以外は、実施例１−１と同様の手順により、培養後の水晶体を写した顕微鏡写真を得た。次に、ａｄｏｂｅ  ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ（登録商標）  ｃｓ６を利用して、上記顕微鏡写真をグレースケール画像に変換した。次に、左眼の水晶体（ＨＡＴ阻害剤添加培地にて培養）を写した上記グレースケール画像から、右眼の水晶体（ＨＡＴ阻害剤無添加培地にて培養）を写した上記グレースケール画像を減算し、輝度を測定した。当該測定によって求められた輝度を、「水晶体の混濁度」として、グラフに示した（図６）。【０１５３】
上記実験に加えて、添加するＨＡＴ阻害剤の濃度を、２０μＭ、１０μＭにそれぞれ変更し、同様の手順により水晶体の混濁度を測定した。結果を図６に示した。【０１５４】
更に、ＨＡＴ阻害剤の代わりにＨＤＡＣ阻害剤を、それぞれ０．８μＭ、０．４μＭ、０．２μＭ添加した培地を用意し、同様の手順により水晶体の混濁度を測定した。結果を図６に示した。【０１５５】
本実験結果は、ＨＡＴ阻害剤が水晶体の混濁を抑制するのに対し、ＨＤＡＣ阻害剤は水晶体の混濁を促進することを示している。【０１５６】
〔実施例３〕
６週齢のＳＤラット（三協ラボサービス社製）の左右の眼球から、水晶体を摘出した。左右両眼から摘出した水晶体を、Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に３０ｍＭのガラクトースを添加した培地にて２日間培養し、糖尿病白内障を発症させたモデルとした。その後、左眼の水晶体を３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのＣ６４６を添加した培地に移した。一方、右眼の水晶体は培地を変更しなかった。培地変更から０日目（培養開始から２日目）、培地変更から２日目（培養開始から４日目）、培地変更から４日目（培養開始から６日目）に、上記水晶体をそれぞれ培地から取り出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により２０倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。それぞれの写真を図７に示す。【０１５７】
図７に示されているように、上記Ｃ６４６を添加した培地に移して培養した水晶体は、上記Ｃ６４６を添加しない培地にて培養し続けた水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１５８】
以上の結果より、Ｃ６４６には、白内障の治療効果（進行を抑制する効果）があることが示された。【０１５９】
〔実施例４〕
マイクロアレイを用いて遺伝子の発現を調査し、ＨＡＴ阻害剤が白内障を予防または治療するメカニズムを推定した。【０１６０】
Ｍ１９９培地（SIGMA社製）、上記Ｍ１９９培地に３０ｍＭのガラクトースを添加した培地、上記Ｍ１９９培地に３０ｍＭのガラクトースおよび４０μＭのＨＡＴ阻害剤（Ｃ６４６）を添加した培地、並びに、上記Ｍ９９培地に３０ｍＭのガラクトースおよび０．８μＭのＨＤＡＣ阻害剤（ＴＳＡ）を添加した培地、を用意した。上述したそれぞれの培地にて、６週齢のＳＤラット（三協ラボサービス社製）の眼球から摘出した水晶体を培養した。培養にはインキュベーターを用い、培養温度は３７℃、培養期間は４日間であった。【０１６１】
４日後、上記水晶体をそれぞれの培地から取り出し、ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）（LifeTechnologies社製）に含浸してからバイオマッシャー（登録商標）（和光純薬工業社製）よって破砕し、ＲＮＡを抽出した。なお、詳細なＲＮＡの抽出方法は、ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）の取扱説明書に記載されている。以上の手順にて作製した試料を、マイクロアレイ分析用の試料とした。【０１６２】
上記試料に、マイクロアレイ用チップ（Affymetrix社製）を用いて、それぞれの水晶体における遺伝子の発現を調査した。得られたデータはＥｘｃｅｌ（登録商標）を用いて分析した。分析結果から、ＨＡＴ阻害剤添加培地で培養した水晶体と、ＨＤＡＣ阻害剤添加培地で培養した水晶体との間で異なる発現量を示した遺伝子を選抜した。具体的には、ガラクトースのみを添加した培地で培養した水晶体における遺伝子の発現量を１とし、以下の条件（ｉ）または（ｉｉ）に該当する遺伝子を選抜した。【０１６３】
（ｉ）Ｍ１９９培地（コントロール）並びにガラクトースおよびＨＡＴ阻害剤を添加した培地における発現量が１．５以上、かつ、ガラクトースおよびＨＤＡＣ阻害剤を添加した培地における発現量が０．５以下。【０１６４】
（ｉｉ）Ｍ１９９培地（コントロール）並びにガラクトースおよびＨＡＴ阻害剤を添加した培地における発現量が０．５以下、かつ、ガラクトースおよびＨＤＡＣ阻害剤を添加した培地における発現量が１．５以上。【０１６５】
上記条件に該当した遺伝子および当該遺伝子の発現量を、表２に示す。【０１６６】
【表２】
2018079149.tif 000030
表２に記載の遺伝子のうち、ＰＬＫ３の挙動から推定される、ＨＡＴ阻害剤による白内障の予防または治療効果の作用機序の一例が、図１の（ａ）である。ＡＬＤＨ１Ａ１の挙動から推定される、ＨＡＴ阻害剤による白内障の予防または治療効果の作用機序の一例が、図１の（ｂ）である。ＧＪＡ１（Ｃｘ４３）の挙動から推定される、ＨＡＴ阻害剤による白内障の予防または治療効果の作用機序の一例が、図１の（ｃ）である。【０１６７】
〔実施例５〕
ＨＡＴ阻害剤の組み合わせによる、白内障の治療効果について検討した。【０１６８】
［実施例５−１］
Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に、３０ｍＭのガラクトース、およびＤＭＳＯ（最終濃度が０．８％になるように調製したもの）を添加した培地を用意した。上記培地にて、６週齢のＳＤラット（三協ラボサービス社製）の左右両眼から摘出した水晶体を、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４日間培養し、糖尿病白内障を発症させたモデルとした。【０１６９】
その後、左眼の水晶体を、（１）３０ｍＭのガラクトース、ならびに（２）ＣＢＰ３０およびＣＰＴＨ２（共にＤＭＳＯに溶解させたもの）を添加した培地に移した。上記培地におけるＣＰＢ３０の最終濃度は１０μＭ、ＣＰＴＨ２の最終濃度は８０μＭ、ＤＭＳＯの最終濃度は０．８％であった。一方、右眼の水晶体は、Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に、３０ｍＭのガラクトース、およびＤＭＳＯ（最終濃度が０．８％になるように調製したもの）を添加した培地を再度調製し、当該培地に移した。培地変更から０日目（培養開始から４日目）、培地変更から２日目（培養開始から６日目）、培地変更から４日目（培養開始から８日目）に、上記水晶体をそれぞれ培地から取り出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により１０倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。その結果を図８の（ａ）に示す。【０１７０】
上記水晶体を、ＦＧ（Formalin-Glutaraldehyde）液（Formalin：武藤化学製、Glutaraldehyde：和光純薬工業製）中に、４℃にて３日間浸漬した後、１０％ホルマリン液に浸漬した。染色した切片の作製は、新組織化学研究所に依頼した。【０１７１】
上記切片をＩＸ７０（Olympas社製）により１００倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。その結果を図８の（ｂ）に示す。同図において、左側は上記切片の全体像、右側は赤道部近傍の拡大像である。【０１７２】
さらに、上述の培養条件を以下の条件に変更した実験を行った。
実験１−１：左眼の水晶体を、３０ｍＭのガラクトースおよびＣＢＰ３０（最終濃度が１０μＭになるように調製したもの）を添加した培地にて培養した。
実験１−２：左眼の水晶体を、３０ｍＭのガラクトースおよびＣＰＴＨ２（最終濃度が８０μＭになるように調製したもの）を添加した培地にて培養した。【０１７３】
それぞれの実験において、培地変更から０日目（培養開始から４日目）、培地変更から２日目（培養開始から６日目）、培地変更から４日目（培養開始から８日目）に、上記水晶体をそれぞれ培地から取り出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により１０倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。実験１−１の結果を図９の（ａ）に、実験１−２の結果を図９の（ｂ）に、それぞれ示す。【０１７４】
（結果）
図８の（ａ）に示されているように、ＣＢＰ３０およびＣＰＴＨ２の組み合わせを添加した培地に移して培養した水晶体は、ＣＢＰ３０およびＣＰＴＨ２の組み合わせを添加しない培地にて培養し続けた水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。このことは、図８の（ｂ）において、ＣＢＰ３０およびＣＰＴＨ２の組み合わせを添加した培地に移して培養した水晶体では、皮質部の崩壊が観察されないことからも判る。【０１７５】
また、図８の（ａ）と、図９の（ａ）および（ｂ）とを比較すると、ＣＢＰ３０およびＣＰＴＨ２の組み合わせを添加した培地に移して培養した水晶体は、ＣＢＰ３０またはＣＰＴＨ２の一方のみを添加した培地に移して培養した水晶体よりも、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１７６】
以上の結果より、ＣＢＰ３０およびＣＰＴＨ２の組み合わせには、白内障の治療効果（進行を抑制する効果）があることが示された。さらに、上記治療効果は、ＣＢＰ３０またはＣＰＴＨ２のみによる白内障の治療効果よりも、顕著に優れたものであった。【０１７７】
［実施例５−２］
Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に、３０ｍＭのガラクトース、およびＤＭＳＯ（最終濃度が０．８％になるように調製したもの）を添加した培地を用意した。上記培地にて、６週齢のＳＤラット（三協ラボサービス社製）の左右両眼から摘出した水晶体を、３７℃、５％ＣＯ２条件下で３日間培養し、糖尿病白内障を発症させたモデルとした。【０１７８】
その後、左眼の水晶体を、（１）３０ｍＭのガラクトース、ならびに（２）Ｃ６４６およびＣＰＴＨ２（共にＤＭＳＯに溶解させたもの）を添加した培地に移した。上記培地におけるＣ６４６の最終濃度は４０μＭ、ＣＰＴＨ２の最終濃度は８０μＭ、ＤＭＳＯの最終濃度は０．８％であった。一方、右眼の水晶体は、Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に、３０ｍＭのガラクトース、およびＤＭＳＯ（最終濃度が０．８％になるように調製したもの）を添加した培地を再度調製し、当該培地に移した。培地変更から０日目（培養開始から３日目）、および培地変更から３日目（培養開始から６日目）に、上記水晶体をそれぞれ培地から取り出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により１０倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。その結果を図１０の（ａ）に示す。【０１７９】
また、上述の培養条件を以下の条件に変更した実験を行った。実験２−１の結果を図１１の（ａ）に、実験２−２の結果を図１１の（ｂ）に、それぞれ示す。
実験２−１：左眼の水晶体を、３０ｍＭのガラクトースおよびＣ６４６（最終濃度が４０μＭになるように調製したもの）を添加した培地にて培養した。
実験２−２：左眼の水晶体を、３０ｍＭのガラクトースおよびＣＰＴＨ２（最終濃度が８０μＭになるように調整したもの）を添加した培地にて培養した。【０１８０】
それぞれの実験において、培地変更から０日目（培養開始から３日目）、および培地変更から３日目（培養開始から６日目）に、上記水晶体をそれぞれ培地から取り出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により１０倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。実験２−１の結果を図１１の（ａ）に、実験２−２の結果を図１１の（ｂ）に、それぞれ示す。【０１８１】
（結果）
図１０に示されているように、Ｃ６４６およびＣＰＴＨ２の組み合わせを添加した培地に移して培養した水晶体は、Ｃ６４６およびＣＰＴＨ２の組み合わせを添加しない培地にて培養し続けた水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１８２】
また、図１０と、図１１の（ａ）および（ｂ）とを比較すると、Ｃ６４６およびＣＰＴＨ２の組み合わせを添加した培地に移して培養した水晶体は、Ｃ６４６またはＣＰＴＨ２の一方のみを添加した培地に移して培養した水晶体よりも、皮質部の混濁が低く抑えられていた。【０１８３】
以上の結果より、Ｃ６４６およびＣＰＴＨ２の組み合わせには、白内障の治療効果（進行を抑制する効果）があることが示された。さらに、上記治療効果は、Ｃ６４６またはＣＰＴＨ２のみによる白内障の治療効果よりも、顕著に優れたものであった。【０１８４】
〔実施例６〕
in vivo条件において、ＨＡＴ阻害剤による白内障の予防効果を検討した。【０１８５】
３週齢のＳＤラット（三協ラボサービス社製）を、ガラクトース２５％を含有させた餌を摂餌させながら３日間飼育して、白内障を発症させた。４日目の摂餌前に、上記ＳＤラットの、左眼の前房内には５ｍＭのＣ６４６（１００％のＤＭＳＯに溶解させたもの）を、右眼の前房内には１００％のＤＭＳＯを、それぞれ２μＬずつ注入した。注入には、マイクロシリンダー（伊藤製作所製、イトー  マイクロシリンジ MS-NE05）に３３Ｇの注射針（テルモ製）を組み合わせた器具を用いた。以上の実験手法の概要を、図１２の（ａ）に示す。【０１８６】
注入から３日後、左右両眼から水晶体を摘出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により１０に拡大した顕微鏡写真を撮影した。その結果を図１２の（ｂ）に示す。なお、前房内への注入を行ったのは１回のみであった。また、注入後も、ガラクトース２５％を含有させた餌を摂餌させ続けた。【０１８７】
（結果）
図１２の（ｂ）に示されているように、Ｃ６４６の注入により、in vivo条件においても皮質部の混濁が低く抑えられていた。このことは、ＨＡＴ阻害剤の白内障の予防効果（進行を抑制する効果）を、より強く示唆している。【０１８８】
〔実施例７〕
Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に、３０ｍＭのガラクトース、およびＤＭＳＯ（最終濃度が０．８％になるように調製したもの）を添加した培地を用意した。上記培地にて、６週齢のＳＤラット（三協ラボサービス社製）の左右両眼から摘出した水晶体を、３７℃、５％ＣＯ２条件下で３日間培養し、糖尿病白内障を発症させたモデルとした。【０１８９】
その後、左眼の水晶体を、３０ｍＭのガラクトース、およびＴＨ１８３４（ＤＭＳＯに溶解させたもの）を添加した培地に移した。上記培地におけるＴＨ１８３４の最終濃度は５０μＭ、ＤＭＳＯの最終濃度は０．８％であった。一方、右眼の水晶体は、Ｍ１９９培地（SIGMA社製）に、３０ｍＭのガラクトース、およびＤＭＳＯ（最終濃度が０．８％になるように調製したもの）を添加した培地を再度調製し、当該培地に移した。培地変更から０日目（培養開始から３日目）、および培地変更から３日目（培養開始から６日目）に、上記水晶体をそれぞれ培地から取り出し、ＳＺＸ１２（Olympas社製）により１０倍に拡大した顕微鏡写真を撮影した。その結果を図１３に示す。【０１９０】
（結果）
図１３に示されているように、ＴＨ１８３４を添加した培地に移して培養した水晶体は、ＴＨ１８３４を添加しない培地にて培養し続けた水晶体と比較して、皮質部の混濁が低く抑えられていた。このことから、ＴＨ１８３４は、一剤のみで白内障の治療効果を有していることが示唆される。
【産業上の利用可能性】
【０１９１】
本発明は、白内障の予防剤または治療剤に利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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