【手続補正書】
【提出日】令和1年9月19日(2019.9.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリカンを含むＮ−結合グリコシル化パターンを有する第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質であって、ここで、該グリコシル化パターンが、
（１）末端Ｎ−アセチルノイラミン酸を有するグリカンを実質的に含まず、
（２）式Ｉ：（ＧｌｃＮＡｃ）４（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）２（Ｆｕｃ）のグリカンである実質的なグリカンを含み、
（３）式ＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）５（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）（Ｆｕｃ）のグリカンおよび式ＩＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）６（Ｍａｎ）３（Ｆｕｃ）のグリカンからなる群から選択される微量以下の１以上のグリカンを含む、第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項２】
該グリコシル化パターンが、
（１）式ＩＶ：（ＧｌｃＮＡｃ）５（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）３（Ｆｕｃ）のグリカンおよび／または
（２）式Ｖ：（ＧｌｃＮＡｃ）６（Ｇａｌ）４（Ｍａｎ）３（Ｆｕｃ）のグリカン
を更に含む、請求項１記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項３】
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩのグリカンを有する、請求項１または２記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項４】
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩＩのグリカンを有する、請求項１または２記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項５】
該糖タンパク質が、配列番号２と比較して３つ以下の突然変異を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項６】
該糖タンパク質が第ＶＩＩａ因子糖タンパク質であり、重鎖を含み、ここで、該重鎖が、グリカンを含むＮ−結合グリコシル化パターンを有し、更に、該グリコシル化パターンが、
（１）末端Ｎ−アセチルノイラミン酸を有するグリカンを実質的に含まず、
（２）式Ｉ：（ＧｌｃＮＡｃ）４（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）２（Ｆｕｃ）のグリカンである実質的なグリカンを含み、
（３）式ＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）５（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）（Ｆｕｃ）のグリカンおよび式ＩＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）６（Ｍａｎ）３（Ｆｕｃ）のグリカンからなる群から選択される微量以下の１以上のグリカンを含む、請求項１記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項７】
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩのグリカンを有する、請求項６記載の第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項８】
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩＩのグリカンを有する、請求項５または６記載の第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項９】
該糖タンパク質が、配列番号２と比較して３つ以下の突然変異を有するアミノ酸配列を含む、請求項５〜８のいずれか１項記載の第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
【請求項１０】
シアリダーゼを発現するように組換え的に操作されたＣＨＯ  Ｋ−１宿主細胞において、第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質のアミノ酸配列をコードする組換え核酸を発現させ、
それにより産生された第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質を単離することを含む、請求項２〜９のいずれか１項記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質の製造方法。
【請求項１１】
シアリダーゼが配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項１０記載の製造方法。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか１項記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
血餅形成が望ましい疾患または障害を有する哺乳動物を治療するための請求項１２に記載の医薬組成物であって、ここで、該疾患または障害が、出血、胃腸管出血、無制御出血、移植または切除または手術を受けている哺乳動物における出血、静脈瘤出血、血小板減少症、血友病、頭蓋内出血、大動脈瘤および抗凝固薬の過剰投与からなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項１４】
該疾患または障害が、分娩後出血である出血である、請求項１３記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
本開示の第ＶＩＩ因子および第ＶＩＩａ因子糖タンパク質は、肝臓におけるアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）のようなクリアランス受容体に対するリガンドとして使用されうるグリカンを有する。この受容体は、末端ガラクトース残基を有するグリカンに結合する。特に、ＡＳＧＰＲは、ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌで終結する複数のアームを有するグリカンに結合する。現在開示されている糖タンパク質は、ＧｌｃＮＡｃで終結するグリカン、または他の組換え第ＶＩＩ因子および第ＶＩＩａ因子分子、例えばＮＯＶＯＳＥＶＥＮ組換え第ＶＩＩａ因子において見出されるグリカンの低減したレベルを示す。これらのグリカンは、マクロファージおよび他の細胞、例えば樹状細胞内への取り込みを促進するＭａｎ／ＧｌｃＮＡｃ受容体のような他の細胞受容体と相互作用する可能性がある。理論によって何ら限定されることを望むものではないが、そのようなグリカンは、現在開示されている糖タンパク質と比較して、異なるクリアランスメカニズムを促進することが可能であり、したがって、異なる臨床的有用性を有すると考えられる。例えば、マクロファージ内への取り込みの速度はＡＳＧＰＲによる取り込みとは異なる可能性があり、その結果、作用の持続期間および生体内分布が異なりうる。重要なことに、Ｍａｎ／ＧｌｃＮＡｃ受容体を介した樹状細胞内への取り込みは、より高い免疫原性率と関連づけられている。異なるグリカン構造の役割は、本発明のもののように、シアル酸を除去するために更に改変された分子のクリアランスに特に重要でありうる。
一態様において、本開示は以下を提供する。
[項目１]
グリカンを含むＮ−結合グリコシル化パターンを有する第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質であって、ここで、該グリコシル化パターンが、
（１）末端Ｎ−アセチルノイラミン酸を有するグリカンを実質的に含まず、
（２）式Ｉ：（ＧｌｃＮＡｃ）４（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）２（Ｆｕｃ）のグリカンである実質的なグリカンを含み、
（３）式ＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）５（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）（Ｆｕｃ）のグリカンおよび式ＩＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）６（Ｍａｎ）３（Ｆｕｃ）のグリカンからなる群から選択される微量以下の１以上のグリカンを含む、第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目２]
該グリコシル化パターンが、
（１）式ＩＶ：（ＧｌｃＮＡｃ）５（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）３（Ｆｕｃ）のグリカンおよび／または
（２）式Ｖ：（ＧｌｃＮＡｃ）６（Ｇａｌ）４（Ｍａｎ）３（Ｆｕｃ）のグリカン
を更に含む、項目１記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目３]
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩのグリカンを有する、項目１または２記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目４]
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩＩのグリカンを有する、項目１または２記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目５]
該糖タンパク質が、配列番号２と比較して３つ以下の突然変異を有するアミノ酸配列を含む、項目１〜４のいずれか１項記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目６]
該糖タンパク質が第ＶＩＩａ因子糖タンパク質であり、重鎖を含み、ここで、該重鎖が、グリカンを含むＮ−結合グリコシル化パターンを有し、更に、該グリコシル化パターンが、
（１）末端Ｎ−アセチルノイラミン酸を有するグリカンを実質的に含まず、
（２）式Ｉ：（ＧｌｃＮＡｃ）４（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）２（Ｆｕｃ）のグリカンである実質的なグリカンを含み、
（３）式ＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）５（Ｍａｎ）３（Ｇａｌ）（Ｆｕｃ）のグリカンおよび式ＩＩＩ：（ＧｌｃＮＡｃ）６（Ｍａｎ）３（Ｆｕｃ）のグリカンからなる群から選択される微量以下の１以上のグリカンを含む、項目１記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目７]
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩのグリカンを有する、項目６記載の第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目８]
該グリコシル化パターンが、微量以下の式ＩＩＩのグリカンを有する、項目５または６記載の第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目９]
該糖タンパク質が、配列番号２と比較して３つ以下の突然変異を有するアミノ酸配列を含む、項目５〜８のいずれか１項記載の第ＶＩＩａ因子糖タンパク質。
[項目１０]
シアリダーゼを発現するように組換え的に操作されたＣＨＯ  Ｋ−１宿主細胞において、第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質のアミノ酸配列をコードする組換え核酸を発現させ、
それにより産生された第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質を単離することを含む、項目２〜９のいずれか１項記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質の製造方法。
[項目１１]
シアリダーゼが配列番号５のアミノ酸配列を含む、項目１０記載の製造方法。
[項目１２]
血餅形成が望ましい疾患または障害を有する哺乳動物の治療方法であって、該方法が、それを要する哺乳動物に、項目１〜９のいずれか１項記載の第ＶＩＩ因子糖タンパク質の有効量を投与することを含み、ここで、該疾患または障害が、出血、胃腸管出血、無制御出血、移植または切除または手術を受けている哺乳動物における出血、静脈瘤出血、血小板減少症、血友病、頭蓋内出血、大動脈瘤および抗凝固薬の過剰投与からなる群から選択される、治療方法。
[項目１３]
該疾患または障害が、分娩後出血である出血である、項目１２記載の方法。
[項目１４]
項目１〜９のいずれか１項記載の第ＶＩＩ因子または第ＶＩＩａ因子糖タンパク質と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。