(57)【要約】  本発明は、タンパク質の凝集を防止するために用いられるタンパク質凝集防止剤であって、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーに由来する繰り返し単位を有する末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーと、貴金属粒子とを含有し、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、スルファニル基によって貴金属粒子に化学吸着しているタンパク質凝集防止剤を提供する（下記式中の基の定義は明細書に記載した通りである）。2018003909.tif 000012
2018003909.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質の凝集を防止するために用いられるタンパク質凝集防止剤であって、
式（ＩＩ）：
【化１】
2018003909.tif 000009
（式（ＩＩ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示す）で表されるスルホベタインモノマーに由来する繰り返し単位を有する末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーと、
貴金属粒子と
を含有し、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、スルファニル基によって貴金属粒子に化学吸着していることを特徴とするタンパク質凝集防止剤。
【請求項２】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、さらにカルボキシル基を有する請求項１に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項３】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマー、および式（ＩＩＩ）：
ＨＯＯＣ−Ｒ６−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−Ｒ７      （ＩＩＩ）
（式（ＩＩＩ）中、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、およびＲ７は、カルボキシル基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜１８のアルキル基を示す）
で表される化合物を含むモノマー成分を重合することによってスルホベタインポリマーを調製し、得られたスルホベタインポリマーを還元することによって得られるものである、請求項１または２に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項４】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量が、３，０００〜１４０，０００である請求項１〜３のいずれか一項に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項５】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの量が、貴金属粒子１００質量部あたり、５〜６０質量部である請求項１〜４のいずれか一項に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項６】
タンパク質の凝集を防止するために用いられるタンパク質凝集防止剤であって、式（Ｉ）：
【化２】
2018003909.tif 000010
（式（Ｉ）中、ｎ個のＲ１は、それぞれ独立して水素原子またはメチル基を示し、ｎ個のＲ２は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、ｎ個のＲ３は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ５は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、ｎ個のＸは、それぞれ独立して−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示し、およびｎは、平均重合度であって、１０〜５００の数を示す）
で表される基を表面に有する貴金属粒子を含有することを特徴とするタンパク質凝集防止剤。
【請求項７】
式（Ｉ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、炭素数１〜８のアルキレンを示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示す請求項６に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項８】
式（Ｉ）で表される基の量が、貴金属粒子１００質量部あたり、５〜６０質量部である請求項６または７に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項９】
貴金属が、金である請求項１〜８のいずれか一項に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項１０】
貴金属粒子の平均粒子径が、１〜１００ｎｍである請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンパク質凝集防止剤。
【請求項１１】
タンパク質の凝集を防止するために用いられるタンパク質凝集防止剤の製造方法であって、
式（ＩＩ）：
【化３】
2018003909.tif 000011
（式（ＩＩ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示す）
で表されるスルホベタインモノマー、および式（ＩＩＩ）：
ＨＯＯＣ−Ｒ６−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−Ｒ７      （ＩＩＩ）
（式（ＩＩＩ）中、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、およびＲ７は、カルボキシル基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜１８のアルキル基を示す）
で表される化合物を含むモノマー成分を重合することによって、スルホベタインポリマーを調製し、
得られたスルホベタインポリマーを還元することによって、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを調製し、
得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを貴金属粒子と混合することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質凝集防止剤に関する。本発明のタンパク質凝集防止剤は、界面活性剤を使用しなくても、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集を防止することから、例えば、酵素の保存剤、抗体医薬、体内のアミロイド凝集抑制剤などの種々のタンパク質の凝集防止が望まれる用途に使用することが期待されるものである。
【背景技術】
【０００２】
酸性条件下でのタンパク質の凝集を防止することができるタンパク質凝集防止剤として、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレンミリスチルエーテルおよびポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテルからなる群より選ばれた少なくとも１種の非イオン性界面活性剤を含むタンパク質凝集防止剤が提案されている（例えば、特許文献１参照）。【０００３】
前記タンパク質凝集防止剤は、界面活性剤が使用されていることから、酸性条件下である程度のタンパク質の凝集を抑制することができる。【０００４】
しかし、タンパク質凝集防止剤に界面活性剤が含まれている場合、当該タンパク質凝集防止剤の用途に制約があることから、近年、界面活性剤を使用しなくてもタンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−３４３２０１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、界面活性剤を使用しなくても、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下のものに関する。
［１］  タンパク質の凝集を防止するために用いられるタンパク質凝集防止剤であって、
式（ＩＩ）：【０００８】
【化１】
2018003909.tif 000003
【０００９】
（式（ＩＩ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示す）で表されるスルホベタインモノマーに由来する繰り返し単位を有する末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーと、
貴金属粒子と
を含有し、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、スルファニル基によって貴金属粒子に化学吸着していることを特徴とするタンパク質凝集防止剤。
［２］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、さらにカルボキシル基を有する前記［１］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００１０】
［３］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマー、および式（ＩＩＩ）：
ＨＯＯＣ−Ｒ６−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−Ｒ７      （ＩＩＩ）
（式（ＩＩＩ）中、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、およびＲ７は、カルボキシル基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜１８のアルキル基を示す）
で表される化合物を含むモノマー成分を重合することによってスルホベタインポリマーを調製し、得られたスルホベタインポリマーを還元することによって得られるものである、前記［１］または［２］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００１１】
［４］  Ｒ６が、シアノ基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基である前記［３］に記載のタンパク質凝集防止剤。
［５］  Ｒ６が、炭素数１〜８のアルキレン基である前記［３］に記載のタンパク質凝集防止剤。
［６］  Ｒ６が、炭素数１〜６のアルキレン基である前記［３］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００１２】
［７］  Ｒ７が、カルボキシル基を有していてもよい炭素数１〜１８のアルキル基である前記［３］〜［６］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［８］  Ｒ７が、炭素数１〜１８のアルキル基である前記［３］〜［６］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［９］  Ｒ７が、炭素数１〜１２のアルキル基である前記［３］〜［６］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００１３】
［１０］  式（ＩＩＩ）で表される化合物が、２−（ドデシルチオカルボノチオイルチオ）−２−メチルプロピオン酸、４−［（２−カルボキシエチルスルファニルチオカルボニル）スルファニル］−４−シアノペンタン酸、２−｛［（２−カルボキシエチル）スルファニルチオカルボニル］スルファニル｝プロパン酸、４−シアノ−４−［（ドデシルスルファニルチオカルボニル）スルファニル］ペンタン酸および２−［（ドデシルスルファニルチオカルボニル）スルファニル］プロパン酸からなる群から選ばれる少なくとも一つである前記［３］に記載のタンパク質凝集防止剤。
［１１］  式（ＩＩＩ）で表される化合物が、２−（ドデシルチオカルボノチオイルチオ）−２−メチルプロピオン酸である前記［３］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００１４】
［１２］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量が、３，０００〜１４０，０００である前記［１］〜［１１］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［１３］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量が、４，０００〜７０，０００である前記［１］〜［１１］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［１４］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量が、４，５００〜５６，０００である前記［１］〜［１１］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００１５】
［１５］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、式（ＩＶ）：【００１６】
【化２】
2018003909.tif 000004
【００１７】
（式（ＩＶ）中、ｎ個のＲ１は、それぞれ独立して水素原子またはメチル基を示し、ｎ個のＲ２は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、ｎ個のＲ３は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ５は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、ｎ個のＸは、それぞれ独立して−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示し、およびｎは、平均重合度であって、１０〜５００の数を示す）
で表される前記［１］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００１８】
［１６］  式（ＩＶ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、炭素数１〜８のアルキレンを示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示す前記［１５］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００１９】
［１７］  Ｒ６が、シアノ基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基である前記［１５］または［１６］に記載のタンパク質凝集防止剤。
［１８］  Ｒ６が、炭素数１〜８のアルキレン基である前記［１５］または［１６］に記載のタンパク質凝集防止剤。
［１９］  Ｒ６が、炭素数１〜６のアルキレン基である前記［１５］または［１６］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００２０】
［２０］  ｎが、１５〜４００である前記［１５］〜［１９］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［２１］  ｎが、２０〜２００である前記［１５］〜［１９］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００２１】
［２２］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの量が、貴金属粒子１００質量部あたり、５〜６０質量部である前記［１］〜［２１］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［２３］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの量が、貴金属粒子１００質量部あたり、１０〜４０質量部である前記［１］〜［２１］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００２２】
［２４］  タンパク質の凝集を防止するために用いられるタンパク質凝集防止剤であって、式（Ｉ）：【００２３】
【化３】
2018003909.tif 000005
【００２４】
（式（Ｉ）中、ｎ個のＲ１は、それぞれ独立して水素原子またはメチル基を示し、ｎ個のＲ２は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、ｎ個のＲ３は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ５は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、ｎ個のＸは、それぞれ独立して−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示し、およびｎは、平均重合度であって、１０〜５００の数を示す）
で表される基を表面に有する貴金属粒子を含有することを特徴とするタンパク質凝集防止剤。【００２５】
［２５］  式（Ｉ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、炭素数１〜８のアルキレンを示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示す前記［２４］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００２６】
［２６］  Ｒ６が、シアノ基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基である前記［２４］または［２５］に記載のタンパク質凝集防止剤。
［２７］  Ｒ６が、炭素数１〜８のアルキレン基である前記［２４］または［２５］に記載のタンパク質凝集防止剤。
［２８］  Ｒ６が、炭素数１〜６のアルキレン基である前記［２４］または［２５］に記載のタンパク質凝集防止剤。【００２７】
［２９］  ｎが、１５〜４００である前記［２４］〜［２８］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［３０］  ｎが、２０〜２００である前記［２４］〜［２８］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００２８】
［３１］  式（Ｉ）で表される基の量が、貴金属粒子１００質量部あたり、５〜６０質量部である前記［２４］〜［３０］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［３２］  式（Ｉ）で表される基の量が、貴金属粒子１００質量部あたり、１０〜４０質量部である前記［２４］〜［３０］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００２９】
［３３］  Ｒ１が、水素原子である前記［１］〜［３２］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３０】
［３４］  Ｒ２が、−（ＣＨ２）−基、−（ＣＨ２）２−基または−（ＣＨ２）３−基である前記［１］〜［３３］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［３５］  Ｒ２が、−（ＣＨ２）３−基である前記［１］〜［３３］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３１】
［３６］  Ｒ３が、メチル基、エチル基またはプロピル基である前記［１］〜［３５］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［３７］  Ｒ３が、メチル基またはエチル基である前記［１］〜［３５］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［３８］  Ｒ３が、メチル基である前記［１］〜［３５］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３２】
［３９］  Ｒ４が、メチル基、エチル基またはプロピル基である前記［１］〜［３８］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［４０］  Ｒ４が、メチル基またはエチル基である前記［１］〜［３８］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［４１］  Ｒ４が、メチル基である前記［１］〜［３８］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３３】
［４２］  Ｒ５が、−（ＣＨ２）−基、−（ＣＨ２）２−基または−（ＣＨ２）３−基である前記［１］〜［４１］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［４３］  Ｒ５が、−（ＣＨ２）３−基である前記［１］〜［４１］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３４】
［４４］  Ｘが、−ＮＨ−基である前記［１］〜［４３］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３５】
［４５］  貴金属が、金、白金または銀である前記［１］〜［４４］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［４６］  貴金属が、金である前記［１］〜［４４］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３６】
［４７］  貴金属粒子の平均粒子径が、１〜１００ｎｍである前記［１］〜［４６］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［４８］  貴金属粒子の平均粒子径が、１〜２０ｎｍである前記［１］〜［４６］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。
［４９］  貴金属粒子の平均粒子径が、１〜１０ｎｍである前記［１］〜［４６］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤。【００３７】
［５０］  タンパク質の凝集を防止するために用いられるタンパク質凝集防止剤の製造方法であって、前記式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマー、および前記式（ＩＩＩ）で表される化合物を含むモノマー成分を重合することによって、スルホベタインポリマーを調製し、
得られたスルホベタインポリマーを還元することによって、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを調製し、
得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを貴金属粒子と混合することを含む方法。【００３８】
［５１］  式（ＩＩＩ）で表される化合物の量が、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマー１モルあたり、０．０１〜０．５モルである前記［５０］に記載の方法。
［５２］  式（ＩＩＩ）で表される化合物の量が、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマー１モルあたり、０．０３〜０．３モルである前記［５０］に記載の方法。【００３９】
［５３］  貴金属粒子の量が、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマー１００質量部あたり、１０〜１００質量部である前記［５０］〜［５２］のいずれか一つに記載の方法。
［５４］  貴金属粒子の量が、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマー１００質量部あたり、２０〜７０質量部である前記［５０］〜［５２］のいずれか一つに記載の方法。【００４０】
［５５］  タンパク質と、溶媒または分散媒と、前記［１］〜［４９］のいずれか一つに記載のタンパク質凝集防止剤とを混合することを含む、タンパク質の凝集を防止する方法。【００４１】
［５６］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子の量または式（Ｉ）で表される基を表面に有する貴金属粒子の量が、タンパク質１質量部あたり、０．０１〜１０質量部となるように、タンパク質凝集防止剤を使用する前記［５５］に記載の方法。
［５７］  末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子の量または式（Ｉ）で表される基を表面に有する貴金属粒子の量が、タンパク質１質量部あたり、０．１〜１質量部となるように、タンパク質凝集防止剤を使用する前記［５５］に記載の方法。【００４２】
［５８］  タンパク質と、溶媒または分散媒と、タンパク質凝集防止剤とを含む混合物中のタンパク質の含有率が０．００１〜２０質量％となるように、タンパク質と、溶媒または分散媒と、タンパク質凝集防止剤とを混合する前記［５５］〜［５７］のいずれか一つに記載の方法。
［５９］  タンパク質と、溶媒または分散媒と、タンパク質凝集防止剤とを含む混合物中のタンパク質の含有率が０．０１〜１０質量％となるように、タンパク質と、溶媒または分散媒と、タンパク質凝集防止剤とを混合する前記［５５］〜［５７］のいずれか一つに記載の方法。
【発明の効果】
【００４３】
本発明によれば、界面活性剤を使用しなくても、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明のタンパク質凝集防止剤は、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーと、貴金属粒子とを含有し、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが、スルファニル基によって貴金属粒子に化学吸着していることを特徴とする。ここで、化学吸着とは、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーのスルファニル基（−ＳＨ）の硫黄原子と貴金属粒子とが配位結合を形成しているか、またはスルファニル基から水素原子が脱離し、その硫黄原子と貴金属粒子とが共有結合を形成していることを意味する。
【００４５】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーは、式（ＩＩ）：
【００４６】
【化４】
2018003909.tif 000006
【００４７】
で表されるスルホベタインモノマーに由来する繰り返し単位を有する。前記繰り返し単位は、１種のみでもよく、２種以上でもよい。
【００４８】
式（ＩＩ）において、Ｒ１は、水素原子またはメチル基であり、好ましくは水素原子である。
【００４９】
Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基である。本発明において、アルキレン基は、直鎖状でもよく、分枝鎖状でもよい。以下に記載のアルキレン基も同様である。炭素数１〜４のアルキレン基としては、例えば、メチレン基（−（ＣＨ２）−）、エチレン基（−（ＣＨ２）２−）、プロピレン基（例、−（ＣＨ２）３−）およびブチレン基（例、−（ＣＨ２）４−）が挙げられる。これらの基のなかでは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、メチレン基、エチレン基およびプロピレン基が好ましく、−（ＣＨ２）−基、−（ＣＨ２）２−基および−（ＣＨ２）３−基がより好ましく、−（ＣＨ２）３−基がさらに好ましい。
【００５０】
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基である。本発明において、アルキル基は、直鎖状でもよく、分枝鎖状でもよい。以下に記載のアルキル基も同様である。炭素数１〜４のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基およびブチル基が挙げられる。これらの基のなかでは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、メチル基、エチル基およびプロピル基が好ましく、メチル基およびエチル基がより好ましく、メチル基がさらに好ましい。
【００５１】
Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基である。炭素数１〜４のアルキレン基としては、例えば、メチレン基（−（ＣＨ２）−）、エチレン基（−（ＣＨ２）２−）、プロピレン基（例、−（ＣＨ２）３−）およびブチレン基（例、−（ＣＨ２）４−）が挙げられる。これらの基のなかでは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、メチレン基、エチレン基およびプロピレン基が好ましく、−（ＣＨ２）−基、−（ＣＨ２）２−基および−（ＣＨ２）３−基がより好ましく、−（ＣＨ２）３−基がさらに好ましい。
【００５２】
Ｘは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基である。これらの基のなかでは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、−ＮＨ−基が好ましい。
【００５３】
式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーとしては、例えば、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドメチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドメチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドエチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドエチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドプロピル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリルアミドブチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリルアミドブチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネートなどの３−［（３−（メタ）アクリルアミドアルキル）ジアルキルアンモニオ］アルカン−１−スルホネート；
【００５４】
３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジメチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジエチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジプロピルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジブチルアンモニオ］エタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジエチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジプロピルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジブチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシメチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシメチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシエチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシエチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシプロピル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシプロピル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジメチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジエチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジプロピルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−アクリロイルオキシブチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネート、３−［（３−メタクリロイルオキシブチル）ジブチルアンモニオ］ブタン−１−スルホネートなどの３−［（３−（メタ）アクリロイルオキシアルキル）ジアルキルアンモニオ］アルカン−１−スルホネートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのスルホベタインモノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００５５】
なお、本発明において、「（メタ）アクリルアミド」は、アクリルアミドまたはメタクリルアミドを意味する。アクリルアミドおよびメタクリルアミドは、それぞれ単独で用いてもよく、併用してもよい。
【００５６】
「（メタ）アクリロイルオキシ」は、アクリロイルオキシまたはメタクリロイルオキシを意味する。アクリロイルオキシおよびメタクリロイルオキシは、それぞれ単独で用いてもよく、併用してもよい。
【００５７】
「（メタ）アクリレート」は、アクリレートまたはメタクリレートを意味する。アクリレートおよびメタクリレートは、それぞれ単独で用いてもよく、併用してもよい。
【００５８】
「（メタ）アクリル酸」は、アクリル酸またはメタクリル酸を意味する。アクリル酸およびメタクリル酸は、それぞれ単独で用いてもよく、併用してもよい。
【００５９】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーは、本発明の目的を阻害しない範囲内で、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーとは異なる他のモノマーに由来する繰り返し単位を有していてもよい。他のモノマーとしては、例えば、水溶性モノマーが挙げられる。
【００６０】
水溶性モノマーは、２５℃の水１００ｇに対して５０ｇ以上の量で溶解する性質を有するモノマーを意味する。水溶性モノマーとしては、例えば、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、（メタ）アクリロニトリル、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、４−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、Ｎ−（メタ）アクリルモルホリド、Ｎ−メトキシメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシエチル（メタ）アクリルアミド、２−ヒドロキシエチルビニルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−モノメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−モノエチル（メタ）アクリルアミドなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの水溶性モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。これらの水溶性モノマーのなかでは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドンおよび（メタ）アクリロニトリルが好ましく、（メタ）アクリルアミドおよびＮ−ビニルピロリドンがより好ましい。
【００６１】
また、他のモノマーとしては、例えば、水不溶性モノマーが挙げられる。水不溶性モノマーは、２５℃の水１００ｇに対して５０ｇ未満の量で溶解する性質を有するモノマーを意味する。
【００６２】
水不溶性モノマーとしては、例えば、アルキル（メタ）アクリレート、アルコキシ基含有（メタ）アクリレート、脂環基含有（メタ）アクリレート、アリール基含有（メタ）アクリレート、アリール基含有（メタ）アクリレート以外の芳香族系モノマーなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの水不溶性モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００６３】
アルキル（メタ）アクリレートとしては、例えば、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ｎ−プロピル（メタ）アクリレート、イソプロピル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、イソブチル（メタ）アクリレート、ｔｅｒｔ−ブチル（メタ）アクリレート、ｓｅｃ−ブチル（メタ）アクリレート、ｎ−ペンチル（メタ）アクリレート、ｎ−ヘキシル（メタ）アクリレート、ｎ−オクチル（メタ）アクリレート、イソオクチル（メタ）アクリレート、ｎ−ノニル（メタ）アクリレート、イソノニル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、デシル（メタ）アクリレート、ドデシル（メタ）アクリレート、トリデシル（メタ）アクリレート、テトラデシル（メタ）アクリレート、ヘキサデシル（メタ）アクリレート、オクタデシル（メタ）アクリレート、イソステアリル（メタ）アクリレート、エイコシル（メタ）アクリレート、ベヘニル（メタ）アクリレート、テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリレートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのアルキル（メタ）アクリレートは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００６４】
アルコキシ基含有（メタ）アクリレートとしては、例えば、２−メトキシエチル（メタ）アクリレート、２−エトキシエチル（メタ）アクリレート、メトキシエチレングリコール（メタ）アクリレート、エチルカルビトール（メタ）アクリレートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのアルコキシ基含有（メタ）アクリレートは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００６５】
脂環基含有（メタ）アクリレートとしては、例えば、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル（メタ）アクリレート、イソボルニル（メタ）アクリレート、ジシクロペンタニル（メタ）アクリレート、ジシクロペンテニル（メタ）アクリレート、アダマンチル（メタ）アクリレート、ジシクロペンテニル（メタ）アクリレートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの脂環基含有（メタ）アクリレートは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００６６】
アリール基含有（メタ）アクリレートとしては、例えば、ベンジル（メタ）アクリレート、フェノキシエチル（メタ）アクリレートなどの炭素数６〜１５のアリール基含有（メタ）アクリレートなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのアリール基含有（メタ）アクリレートは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００６７】
アリール基含有（メタ）アクリレート以外の芳香族系モノマーとしては、例えば、スチレン、α−メチルスチレンなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの芳香族系モノマーは、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００６８】
式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーとは異なる他のモノマーに由来する繰り返し単位の量は、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーおよび他のモノマーに由来する全ての繰り返し単位の量あたり、好ましくは５０モル％未満、より好ましくは３０モル％未満、さらに好ましくは１０モル％未満である。
【００６９】
式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーおよび必要に応じて他のモノマーを含むモノマー成分を重合させる方法としては、例えば、塊状重合法、溶液重合法、乳化重合法、懸濁重合法などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの重合法のなかでは、溶液重合法が好ましい。
【００７０】
モノマー成分を溶液重合法によって重合させる場合には、例えば、モノマー成分を水性溶媒に溶解させ、得られた溶液を攪拌しながら重合開始剤を当該溶液に添加することによってモノマー成分を重合させることができるほか、重合開始剤を水性溶媒に溶解させ、得られた溶液を撹拌しながらモノマー成分を当該溶液に添加することによってモノマー成分を重合させることができる。
【００７１】
水性溶媒は、水または水と水以外の親水性有機溶媒との混合溶媒である。水性溶媒における水の含有率は、通常、５０質量％以上、１００質量％以下である。
【００７２】
親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノールなどの炭素数が１〜４の１価の脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン；テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジグライムなどのエーテル；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノンなどのアミド；ジメチルスルホキシド、スルホランなどのイオウ含有有機溶媒などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの親水性有機溶媒は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。これらの親水性有機溶媒のなかでは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、炭素数が１〜４の１価の脂肪族アルコールが好ましく、メタノール、エタノールおよびプロパノールがより好ましく、メタノールおよびエタノールがさらに好ましい。
【００７３】
水性溶媒の量は、特に限定されないが、通常、モノマー成分１００質量部あたり、５０〜４００質量部であることが好ましく、１００〜３５０質量部であることがより好ましい。
【００７４】
モノマー成分を重合させる際には、得られるスルホベタインポリマーの分子量を調製するために連鎖移動剤を用いることが好ましい。好適な連鎖移動剤としては、例えば、カルボキシル基を有するチオカルボニルチオ基含有化合物などが挙げられる。
【００７５】
カルボキシル基を有するチオカルボニルチオ基含有化合物は、好ましくは式（ＩＩＩ）：
ＨＯＯＣ−Ｒ６−Ｓ−Ｃ（＝Ｓ）−Ｓ−Ｒ７      （ＩＩＩ）
（式（ＩＩＩ）中、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、およびＲ７は、カルボキシル基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜１８のアルキル基を示す）で表される化合物である。式（ＩＩＩ）で表される化合物は、単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。
【００７６】
式（ＩＩＩ）のＲ６のなかでは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、シアノ基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基であることが好ましく、炭素数１〜８のアルキレン基であることがより好ましく、炭素数１〜６のアルキレン基であることがさらに好ましい。
【００７７】
Ｒ７は、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、カルボキシル基を有していてもよい炭素数１〜１８のアルキル基であることが好ましく、炭素数１〜１８のアルキル基であることがより好ましく、炭素数１〜１２のアルキル基であることがさらに好ましい。
【００７８】
式（ＩＩＩ）で表される化合物としては、例えば、２−（ドデシルチオカルボノチオイルチオ）−２−メチルプロピオン酸、４−［（２−カルボキシエチルスルファニルチオカルボニル）スルファニル］−４−シアノペンタン酸、２−｛［（２−カルボキシエチル）スルファニルチオカルボニル］スルファニル｝プロパン酸、４−シアノ−４−［（ドデシルスルファニルチオカルボニル）スルファニル］ペンタン酸、２−［（ドデシルスルファニルチオカルボニル）スルファニル］プロパン酸などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらのカルボキシル基を有するチオカルボニルチオ基含有化合物は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。これらの中で、２−（ドデシルチオカルボノチオイルチオ）−２−メチルプロピオン酸が好ましい。
【００７９】
モノマー成分中において、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマー１モルあたりの、式（ＩＩＩ）で表される化合物の量は、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、好ましくは０．０１〜０．５モル、より好ましくは０．０３〜０．３モルである。
【００８０】
式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーおよび式（ＩＩＩ）で表される化合物を含むモノマー成分を重合することによってスルホベタインポリマーを調製し、得られたスルホベタインモノマーを後述するように還元することによって、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを製造することが好ましい。
【００８１】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーは、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーとは異なる他のモノマーに由来する繰り返し単位を有していてもよいが、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマーに由来する繰り返し単位、並びに式（ＩＩＩ）で表されるチオカルボニルチオ基含有化合物に由来する構造（ＨＯＯＣ−Ｒ６−）およびスルファニル基（−ＳＨ）からなることが好ましい。
【００８２】
モノマー成分を重合させる際には、重合開始剤を用いることが好ましい。重合開始剤としては、例えば、アゾビスイソブチロニトリル、アゾイソブチロニトリル、アゾイソ酪酸メチル、アゾビスジメチルバレロニトリル、過酸化ベンゾイル、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、ベンゾフェノン誘導体、ホスフィンオキサイド誘導体、ベンゾケトン誘導体、フェニルチオエーテル誘導体、アジド誘導体、ジアゾ誘導体、ジスルフィド誘導体などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの重合開始剤は、それぞれ単独で用いてもよく、２種類以上を併用してもよい。重合開始剤の量は、特に限定されないが、通常、モノマー成分１００質量部あたり０．０５〜２０質量部程度であることが好ましい。
【００８３】
モノマー成分を重合させる際の重合反応温度および雰囲気については、特に限定がない。通常、重合反応温度は、５０〜１２０℃程度である。重合反応時の雰囲気は、例えば、窒素ガスなどの不活性ガス雰囲気であることが好ましい。また、モノマー成分の重合反応時間は、重合反応温度などによって異なるので一概には決定することができないが、通常、３〜２０時間程度である。
【００８４】
以上のようにしてモノマー成分を重合させることにより、スルホベタインポリマーが得られる。スルホベタインポリマーの重量平均分子量は、好ましくは３，０００〜１４０，０００、より好ましくは４，０００〜７０，０００、さらに好ましくは４，５００〜５６，０００である。スルホベタインポリマーの重量平均分子量は、以下の実施例の欄（調製例１）に記載の方法に基づいて測定したときの値である。
【００８５】
スルホベタインポリマーの平均重合度は、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、好ましくは１０〜５００、より好ましくは１５〜４００、さらに好ましくは２０〜２００である。
【００８６】
スルホベタインポリマーの平均重合度は、以下の実施例の欄（調製例１）に記載の方法に基づいて測定した重量平均分子量、並びにポリマーの合成に使用したスルホベタインモノマー（特に、式（ＩＩ）で表されるスルホベタインモノマー）および連鎖移動剤（特に、式（ＩＩＩ）で表される化合物）の分子量から算出される値である。
【００８７】
前記で得られたスルホベタインポリマーを還元させることにより、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを製造することができる。
【００８８】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量は、好ましくは３，０００〜１４０，０００、より好ましくは４，０００〜７０，０００、さらに好ましくは４，５００〜５６，０００である。末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量は、以下の実施例の欄（調製例１）に記載の方法と同様にして測定することができる。また、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量は、以下の実施例の欄（調製例１）に記載の方法に基づいて測定した、前駆体であるスルホベタインポリマーの重量平均分子量から算出することができる。
【００８９】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーは、好ましくは、式（ＩＶ）：
【００９０】
【化５】
2018003909.tif 000007
【００９１】
（式（ＩＶ）中、ｎ個のＲ１は、それぞれ独立して水素原子またはメチル基を示し、ｎ個のＲ２は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、ｎ個のＲ３は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ５は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、ｎ個のＸは、それぞれ独立して−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示し、およびｎは、平均重合度であって、１０〜５００の数を示す）
で表される末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーである。
【００９２】
ｎは、式（ＩＶ）で表される末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの平均重合度である。ｎは、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集抑制効果に優れたタンパク質凝集防止剤を得る観点から、好ましくは１５〜４００、より好ましくは２０〜２００である。
【００９３】
式（ＩＶ）で表される末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの平均重合度は、その前駆体であるスルホベタインポリマーの平均重合度と同じである。そのため、前駆体であるスルホベタインポリマーの平均重合度を上述のようにして算出することによって、式（ＩＶ）で表される末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの平均重合度も算出することができる。また、式（ＩＶ）で表される末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量を、以下の実施例の欄（調製例１）に記載の方法と同様にして測定することよって、その平均重合度を算出してもよい。
【００９４】
式（ＩＶ）で表される末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーにおける繰り返し単位は、１種のみでもよく、２種以上でもよい。即ち、ｎ個のＲ１は、それぞれ同じものでもよく、異なるものでもよい。ｎ個のＲ２、ｎ個のＲ３、ｎ個のＲ４、ｎ個のＲ５およびｎ個のＸも同様である。
【００９５】
式（ＩＶ）で表される末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーにおける繰り返し単位は、１種のみであることが好ましい。即ち、式（ＩＶ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示すことが好ましい。この態様において、Ｒ６が、炭素数１〜８のアルキレンであることがより好ましい。
【００９６】
式（ＩＶ）中のＲ１〜Ｒ５およびＸの好ましい基の説明は、式（ＩＩ）における上記説明と同じであり、式（ＩＶ）中のＲ６の好ましい基の説明は、式（ＩＩＩ）における上記説明と同じである。
【００９７】
前記スルホベタインポリマーの還元のために、還元剤を使用することが望ましい。その還元剤としては、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、ギ酸、ホルムアルデヒド、ヒドラジン、ジメチルアミンボランなどが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。
【００９８】
前記還元剤は、通常、濃度が１〜２０質量％程度の水溶液として用いられる。前記スルホベタインポリマーを当該水溶液と混合し、得られた混合物に含まれているスルホベタインポリマーを室温〜８０℃程度の温度にて２〜１０時間程度還元剤で還元させることにより、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを得ることができる。
【００９９】
前記で得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーは、必要により、濾取し、水洗してもよい。
【０１００】
前記で得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーおよび貴金属粒子を混合することによって、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子を製造することができる。但し、本発明は、このような方法のみに限定されるものではない。
【０１０１】
貴金属粒子としては、例えば、金、白金、銀などが挙げられるが、本発明は、かかる例示のみに限定されるものではない。これらの貴金属のなかでは、タンパク質凝集抑制効果を向上させる観点から、金が好ましい。貴金属粒子の平均粒子径は、特に限定されないが、分散安定性の観点から、１〜１００ｎｍであることが好ましく、１〜２０ｎｍであることがより好ましく、１〜１０ｎｍであることがさらに好ましい。この平均粒子径は、レーザー回析粒度分布測定装置〔（株）島津製作所製、品番：ＳＡＬＤ７０００〕で測定したときの値であり、体積平均粒子径を意味する。
【０１０２】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーと貴金属粒子とを混合する際、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマー１００質量部あたりの貴金属粒子の量は、特に限定されないが、表面被覆率の観点から、好ましくは１０〜１００質量部、より好ましくは２０〜７０質量部である。
【０１０３】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーと貴金属粒子とを混合するときの温度は、室温〜８０℃程度であり、混合時間は、混合手段によって異なるが、通常、１０〜３０時間程度である。
【０１０４】
次に、前記混合物を、必要により遠心分離することによって、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子と、化学吸着していない末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーとを分離することができる。遠心分離された末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子は、水中に分散させ、得られた水分散体を濾過することにより、回収することができる。
【０１０５】
本発明のタンパク質凝集防止剤中における末端スルファニル基含有スルホベタインポリマー（即ち、貴金属粒子に化学吸着した末端スルファニル基含有スルホベタインポリマー）の量は、特に限定されないが、タンパク質凝集抑制効果を向上させるとともに分散安定性を向上させる観点から、貴金属粒子１００質量部あたり、好ましくは５〜６０質量部、より好ましくは１０〜４０質量部である。
【０１０６】
本発明のタンパク質凝集防止剤は、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子を含有するものであり、前記貴金属粒子のみで構成されていてもよく、必要により、本発明の目的を阻害しない範囲内で、水などの溶媒、添加剤を含有していてもよい。
【０１０７】
末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子は、好ましくは、式（Ｉ）：
【０１０８】
【化６】
2018003909.tif 000008
【０１０９】
（式（Ｉ）中、ｎ個のＲ１は、それぞれ独立して水素原子またはメチル基を示し、ｎ個のＲ２は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、ｎ個のＲ３は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎ個のＲ５は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ６は、シアノ基およびフェニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい炭素数１〜８のアルキレン基を示し、ｎ個のＸは、それぞれ独立して−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示し、およびｎは、平均重合度であって、１０〜５００の数を示す）
で表される基を表面に有する貴金属粒子である。
【０１１０】
式（Ｉ）中のｎ（平均重合度）の説明は、式（ＩＶ）におけるｎ（平均重合度）の説明と同じである。
【０１１１】
式（Ｉ）で表される基における繰り返し単位は、１種のみでもよく、２種以上でもよい。即ち、ｎ個のＲ１は、それぞれ同じものでもよく、異なるものでもよい。ｎ個のＲ２、ｎ個のＲ３、ｎ個のＲ４、ｎ個のＲ５およびｎ個のＸも同様である。
【０１１２】
式（Ｉ）で表される基における繰り返し単位は、１種のみであることが好ましい。即ち、式（Ｉ）中、Ｒ１は、水素原子またはメチル基を示し、Ｒ２は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して炭素数１〜４のアルキル基を示し、Ｒ５は、炭素数１〜４のアルキレン基を示し、およびＸは、−ＮＨ−基または−Ｏ−基を示すことが好ましい。この態様において、Ｒ６が、炭素数１〜８のアルキレンであることがより好ましい。
【０１１３】
式（Ｉ）中のＲ１〜Ｒ５およびＸの好ましい基の説明は、式（ＩＩ）における上記説明と同じであり、式（Ｉ）中のＲ６の好ましい基の説明は、式（ＩＩＩ）における上記説明と同じである。
【０１１４】
本発明のタンパク質凝集防止剤中における式（Ｉ）で表される基の量は、特に限定されないが、タンパク質凝集抑制効果を向上させるとともに分散安定性を向上させる観点から、貴金属粒子１００質量部あたり、好ましくは５〜６０質量部、より好ましくは１０〜４０質量部である。
【０１１５】
本発明のタンパク質凝集防止剤は、タンパク質凝集抑制効果に優れていることから、例えば、酵素の保存剤、抗体医薬、体内のアミロイド凝集抑制剤などの種々のタンパク質の凝集防止が望まれる用途に使用することが期待されるものである。
【０１１６】
本発明は、タンパク質と、溶媒または分散媒と、上述のタンパク質凝集防止剤とを混合することを含む、タンパク質の凝集を防止する方法を提供する。この方法において、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子の量または式（Ｉ）で表される基を表面に有する貴金属粒子の量は、タンパク質１質量部あたり、好ましくは０．０１〜１０質量部、より好ましくは０．１〜１質量部である。なお、前記「末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーが化学吸着した貴金属粒子の量」とは「化学吸着した末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの量と貴金属粒子の量との合計」を意味し、「式（Ｉ）で表される基を表面に有する貴金属粒子の量」とは「式（Ｉ）で表される基の量と貴金属粒子の量との合計」を意味する。
【０１１７】
溶媒または分散媒としては、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、水、トリスバッファー等が挙げられる。
タンパク質としては、例えば、リゾチーム、アルブミン、グロブリン、プロラミン、グルテリン、サイトカイン、インスリン、抗体、膜タンパク、糖タンパク等が挙げられる。
タンパク質と、溶媒または分散媒と、上述のタンパク質凝集防止剤とを含む混合物中のタンパク質の含有率は、好ましくは０．００１〜２０質量％、より好ましくは０．０１〜１０質量％である。
【実施例】
【０１１８】
次に、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明は、かかる実施例のみに限定されるものではない。【０１１９】
調製例１
攪拌棒、ジムロート、温度計および窒素ガス導入管を備えた１Ｌ容のフラスコ内に、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート１２ｍｍｏｌ、２−（ドデシルチオカルボノチオイルチオ）−２−メチルプロピオン酸０．６ｍｍｏｌおよび重合開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル０．１２ｍｍｏｌをメタノール４５ｍＬおよび水１５ｍＬからなる混合溶媒６０ｍＬに溶解させることにより、溶液を得た。得られた溶液をフラスコ内に入れ、フラスコ内に窒素ガスを導入しながらフラスコ内の内容物を７０℃に昇温し、１時間撹拌した。その後、フラスコ内のモノマー成分を６時間重合させることにより、反応混合物を得た。得られた反応混合物を濾取し、メタノールおよび水を用いて洗浄し、乾燥させることにより、スルホベタインポリマーを得た。【０１２０】
次に、得られたスルホベタインポリマーの平均重合度をゲルパーミエイションクロマトグラフィー（以下、ＧＰＣという）分析装置〔フェノメネックス社（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｉｎｋ）製、商品名：ＢｉｏＳｅｐｓ２０００〕および高速液体クロマトグラフィーデータシステム〔（株）島津製作所製、示差屈折率検出器〕で調べたところ、スルホベタインポリマーの重量平均分子量は６，０００であった。この重量平均分子量、スルホベタインモノマー（即ち、３−［（３−アクリルアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］プロパン−１−スルホネート）の分子量（２７８）および式（ＩＩＩ）で表される化合物（即ち、２−（ドデシルチオカルボノチオイルチオ）−２−メチルプロピオン酸）の分子量（３６４）を用いた次式から平均重合度（ｎ）は２０と算出された：ｎ＝（６，０００−３６４）／２７８＝２０。【０１２１】
なお、前記で得られたスルホベタインポリマーの平均重合度をＧＰＣで調べる際に展開液として０．１Ｍ臭化ナトリウム水溶液（ｐＨ：７．４）を用いた。また、標準液として昭和電工（株）製のプルランを用いた。【０１２２】
次に、前記で得られたスルホベタインポリマー１０ｇを常温の５％水素化ホウ素ナトリウム水溶液１００ｇに添加し、４時間撹拌することにより、末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを含有する反応溶液を得た。得られた末端スルファニル基スルファニル基含有スルホベタインポリマーの重量平均分子量は、その前駆体であるスルホベタインポリマーの重量平均分子量から５，８００と算出した。【０１２３】
前記で得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを含有する反応溶液を濾過することにより、生成した末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを回収し、回収された末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーを水洗することにより、精製した。【０１２４】
実施例１
調製例１で得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマー１００ｇおよび金微粒子（平均粒子径：５ｎｍ）３０ｇを混合し、得られた混合物を室温下で２４時間撹拌することにより、式（Ｉ）で表される基を表面に有する金微粒子を含有する混合物を得た。【０１２５】
前記で得られた式（Ｉ）で表される基を表面に有する金微粒子を含有する混合物を遠心分離機に入れ、室温で回転数１２，０００ｒｐｍにて１８０分間撹拌することにより、式（Ｉ）で表される基を表面に有する金微粒子を分離し、分離された前記金微粒子を水中に分散させ、濾過により、前記金微粒子を回収し、これをタンパク質凝集防止剤として用いた。得られたタンパク質凝集防止剤中の式（Ｉ）で表される基の量（即ち、化学吸着した末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーの量）は、金微粒子１００質量部あたり、２５質量部であった。【０１２６】
式（Ｉ）で表される基を表面に有する金微粒子を水に添加して、前記金微粒子の含有量が１質量％である分散液を調製した。得られた分散液に、リゾチームを含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を添加および混合して、混合物を得た（タンパク質（リゾチーム）１質量部あたりの式（Ｉ）で表される基を表面に有する金微粒子の量：０．５６質量部、混合物中のタンパク質（リゾチーム）の含有率：０．０５質量％）。得られた混合物を目視によって観察したが、リゾチームの凝集が認められなかった。【０１２７】
次に、前記で得られた混合物を９０℃の温度で３０分間加熱した後、室温に冷却した。この冷却した混合物を室温下で回転数１２，０００ｒｐｍにて３０分間撹拌した後、上澄み液を回収し、波長２８０ｎｍにおける吸光度を分光光度計〔（株）島津製作所、品番：ＵＶ−１６００ＰＣ〕で測定し、リゾチーム由来の２８０ｎｍの吸光度から上澄み液中の溶存リゾチーム量を定量した。【０１２８】
前記で定量した溶存リゾチーム量から、タンパク質凝集抑制率（％）を次式：
［タンパク質凝集抑制率（％）］
＝（［溶存リゾチーム量］÷［分散液に添加したリゾチーム量］）×１００
に基づいて求めたところ、タンパク質凝集抑制率は１３％であった。【０１２９】
比較例１
調製例１で得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーをタンパク質凝集防止剤として用い、実施例１と同様にしてタンパク質凝集抑制効果を調べた。その結果、タンパク質凝集抑制率は０．０２％であった。【０１３０】
比較例２
金微粒子（平均粒子径：５ｎｍ）をタンパク質凝集防止剤として用い、実施例１と同様にしてタンパク質凝集抑制効果を調べた。その結果、タンパク質凝集抑制率は９．０％であった。【０１３１】
実施例１および比較例１〜２の結果から、実施例１で得られたタンパク質凝集抑制剤（即ち、式（Ｉ）で表される基を表面に有する金微粒子）は、比較例１で得られた末端スルファニル基含有スルホベタインポリマーからなるタンパク質凝集抑制剤および比較例２で得られた金微粒子からなるタンパク質凝集抑制剤と対比して、タンパク質凝集抑制効果に格別顕著に優れていることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【０１３２】
本発明のタンパク質凝集防止剤は、界面活性剤を使用しなくても、リゾチーム活性を維持し、タンパク質の凝集を効果的に抑制することができることから、例えば、酵素の保存剤、抗体医薬、体内のアミロイド凝集抑制剤などの種々のタンパク質の凝集防止が望まれる用途に使用することが期待されるものである。【０１３３】
したがって、本発明のタンパク質凝集防止剤は、例えば、食品加工分野、抗体医薬分野、移植医療分野、酵素製造分野、製薬関連分野などの種々の分野で使用することが期待される。【０１３４】
本願は、日本で出願された特願２０１６−１３０５９６号を基礎としており、その内容は本願明細書に全て包含される。
【国際調査報告】
2018003909.tif 000013
2018003909.tif 000014
2018003909.tif 000015
2018003909.tif 000016