【手続補正書】
【提出日】平成31年2月1日(2019.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを含むか、または発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２】
導入遺伝子及びＴＹＭＳＳＳを含むか、または発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３】
導入遺伝子、ＤＨＦＲＦＳ、及びＴＹＭＳＳＳを含むか、または発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項４】
ＤＨＦＲＦＳ及びＴＹＭＳＳＳを含むか、または発現する単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項５】
前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項６】
哺乳類Ｔ細胞におけるＡＴｈｙ毒性の阻害方法であって、前記哺乳類Ｔ細胞におけるＡＴｈｙＲ導入遺伝子の発現を含む、前記阻害方法。
【請求項７】
前記ＡＴｈｙＲ導入遺伝子が、ＤＨＦＲＦＳである、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記ＡＴｈｙＲ導入遺伝子が、ＴＹＭＳＳＳである、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
哺乳類Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、請求項６〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
対象導入遺伝子を発現するＴ細胞の選択方法であって、
ａ）前記対象導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを発現するＴ細胞を含む複数のＴ細胞に対するチミジン合成阻害剤の適用と、
ｂ）前記チミジン合成阻害剤の適用から７日後以降に生存している１つまたは複数のＴ細胞の選択と、
を含み、前記１つまたは複数のＴ細胞が、前記対象導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを含むベクターを発現する、前記選択方法。
【請求項１１】
前記チミジン合成阻害剤が、トトレキサート（ＭＴＸ）、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセドからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ＭＴＸ及び５−ＦＵに対する耐性を有する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の選択的増殖方法であって、
ａ）ＡＴｈｙＲ遺伝子を含むベクターを用いたＰＢＭＣへの遺伝子導入と、
ｂ）チミジン合成阻害剤を用いた前記遺伝子導入ＰＢＭＣの処理と、
ｃ）前記ＡＴｈｙＲ遺伝子を発現するＰＢＭＣの選択と、
を含む、前記選択的増殖方法。
【請求項１４】
前記遺伝子導入ＰＢＭＣに由来するＴ細胞集団の増殖をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記チミジン合成阻害剤が、ＭＴＸである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記チミジン合成阻害剤が、メトトレキサート（ＭＴＸ）、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセドからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＡＴｈｙＲ遺伝子が、ＴＹＭＳＳＳである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＡＴｈｙＲ遺伝子が、ＤＨＦＲＦＳである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸配列を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２０】
対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸配列を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２１】
対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列と、が機能可能なように連結される、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２２】
前記対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、請求項２１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２３】
前記対象導入遺伝子をコードする前記配列と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、請求項２１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２４】
前記対象導入遺伝子が、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列に対して、３’側に位置する、請求項２１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２５】
対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列と、が機能可能なように連結される、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２６】
前記対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、請求項２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２７】
前記対象導入遺伝子をコードする前記配列と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、請求項２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２８】
前記対象導入遺伝子が、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列に対して、３’側に位置する、請求項２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項２９】
ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３０】
前記対象導入遺伝子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物、ポリペプチドホルモン、自殺遺伝子、またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする、請求項２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３１】
前記対象導入遺伝子が、増殖因子またはサイトカインをコードする、請求項２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３２】
前記サイトカインが、ＩＬ−１２である、請求項３１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３３】
前記サイトカインが、ＩＬ−１５である、請求項３１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３４】
導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記Ｔ細胞が、（１）前記導入遺伝子をコードする配列を含むポリヌクレオチドと、（２）前記ＤＨＦＲＦＳをコードする配列を含むポリヌクレオチドと、を含む、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３５】
導入遺伝子及びＴＹＭＳＳＳを発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記Ｔ細胞が、（１）前記導入遺伝子をコードする配列を含むポリヌクレオチドと、（２）前記ＴＹＭＳＳＳをコードする配列を含むポリヌクレオチドと、を含む、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３６】
前記Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、請求項１９〜３５のいずれかに記載の単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項３７】
癌を有する患者を治療するための組成物であって、請求項１〜４及び請求項１６〜２１のいずれかに記載の単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞の、治療上有効な量を含む、前記組成物。
【請求項３８】
前記図のいずれかにおいて示されるか、または前記説明に記載の対象導入遺伝子を発現するＴ細胞の、選択方法。
【請求項３９】
前記図のいずれかにおいて示されるか、または前記説明に記載の、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
【請求項４０】
前記図のいずれかにおいて示されるか、または前記説明に記載の、ＭＴＸ、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセドのうちの１つまたは複数に対する耐性を有するヒトＴ細胞の、選択的増殖方法。
【請求項４１】
前記Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
哺乳類から単離されたＴ細胞集団における制御性Ｔ細胞の濃縮方法であって、前記Ｔ細胞集団と、ＭＴＸ、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択されるチミジン合成阻害剤と、の接触によって、前記集団におけるエフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させる、前記濃縮方法。
【請求項４３】
哺乳類から単離された前記Ｔ細胞集団が、ＭＴＸ及び５−ＦＵの両方と接触する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
哺乳類から単離されたＴ細胞集団における制御性Ｔ細胞の枯渇方法であって、１つまたは複数のアミノグリコシドの存在下で前記Ｔ細胞集団を培養して、前記培養において前記制御性Ｔ細胞を選択的に枯渇させることによる前記枯渇方法としてさらに定義される、請求項４０〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記Ｔ細胞が、ＤＨＦＲＦＳ及びＴＹＭＳＳＳのうちの１つまたは複数を発現する、請求項４０〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
哺乳類から単離された制御性Ｔ細胞の選択方法であって、
ａ）チミジン合成阻害剤を用いた、ＤＨＦＲＦＳ及びＴＹＭＳＳＳのうちの１つまたは複数を発現する複数のＴ細胞の処理と、
ｂ）制御性Ｔ細胞のマーカーを発現する制御性Ｔ細胞の選択と、
を含む、前記選択方法。
【請求項４７】
前記複数のＴ細胞が、ＤＨＦＲＦＳを発現する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記選択段階が、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ１５２抗体、及び抗ＬＡＰ抗体のうちの１つまたは複数を使用する、磁気ビーズによる選別を用いた細胞の単離を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記選択段階が、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ１５２抗体、抗ＫＩ−６７抗体、及び抗ＦｏｘＰ３抗体のうちの１つまたは複数を使用する、磁気ビーズによる選別を用いた細胞の単離を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記チミジン合成阻害剤が、メトトレキサート（ＭＴＸ）である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
前記チミジン合成阻害剤が、５−ＦＵである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
前記チミジン合成阻害剤が、ラルチトレキセドまたはペメトレキセドである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５３】
ｃ）葉酸（ｆｏｌａｔｅ）を用いた、前記制御性Ｔ細胞の処理、
をさらに含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５４】
ｃ）制御性Ｔ細胞における葉酸（ｆｏｌａｔｅ）合成の回復、
をさらに含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５５】
ｃ）ロイコボリン及びＦＵのうちの１つまたは複数を用いた、前記制御性Ｔ細胞の処理、
をさらに含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５６】
ｃ）ロイコボリン及びＭＴＸのうちの１つまたは複数を用いた、前記制御性Ｔ細胞の処理、
をさらに含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５７】
哺乳類から単離された第１の複数のＴ細胞と、チミジン合成阻害剤と、を含む組成物であって、哺乳類から単離され、チミジン合成阻害剤を含まない第２の複数のＴ細胞と比較して、前記第１の複数のＴ細胞の制御性Ｔ細胞が濃縮される、前記組成物。
【請求項５８】
第１の導入遺伝子の発現制御の提供方法であって、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列に機能可能なように連結された前記第１の導入遺伝子を含む核酸を含む遺伝子導入哺乳類細胞の提供を含み、前記細胞が、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、前記提供方法。
【請求項５９】
前記第１の導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記第１の導入遺伝子をコードする前記配列と、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記第１の対象導入遺伝子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６２】
前記第１の対象導入遺伝子が、ポリペプチドホルモン、ケモカイン、またはサイトカインである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
前記サイトカインが、ＩＬ−１２である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記サイトカインが、ＩＬ−１５である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列が、機能可能なように第２の導入遺伝子に連結される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６６】
前記第２の導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記第２の対象導入遺伝子をコードする前記配列と、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記第２の導入遺伝子が、自殺遺伝子、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ポリペプチドホルモン、サイトカイン、ケモカイン、または転写因子である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記自殺遺伝子が、誘導性自殺遺伝子である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記自殺遺伝子が、誘導性カスパーゼ９である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
前記哺乳類細胞が、Ｔ細胞である、請求項５８に記載の方法。
【請求項７２】
ＴＹＭＳＳＳと、第１の導入遺伝子をコードする配列と、をコードする、組換えＲＮＡ。
【請求項７３】
５’から３’に向かって、ＴＹＭＳＳＳをコードする配列と、ＩＬ−１２をコードする配列と、を含む組換え核酸分子であって、発現に際して、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記配列と、ＩＬ−１２をコードする配列と、が同一ＲＮＡにコードされる、前記組換え核酸分子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７４】
本出願において引用及び参照される特許及び刊行物はすべて、それらの全体が参照によって本明細書に援用される。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを含むか、または発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２）
導入遺伝子及びＴＹＭＳＳＳを含むか、または発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３）
導入遺伝子、ＤＨＦＲＦＳ、及びＴＹＭＳＳＳを含むか、または発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目４）
ＤＨＦＲＦＳ及びＴＹＭＳＳＳを含むか、または発現する単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目５）
前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、項目１〜４のいずれかに記載の単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目６）
哺乳類Ｔ細胞におけるＡＴｈｙ毒性の阻害方法であって、前記哺乳類Ｔ細胞におけるＡＴｈｙＲ導入遺伝子の発現を含む、前記阻害方法。
（項目７）
前記ＡＴｈｙＲ導入遺伝子が、ＤＨＦＲＦＳである、項目５に記載の方法。
（項目８）
前記ＡＴｈｙＲ導入遺伝子が、ＴＹＭＳＳＳである、項目５に記載の方法。
（項目９）
哺乳類Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、項目６〜８のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
対象導入遺伝子を発現するＴ細胞の選択方法であって、
ａ）前記対象導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを発現するＴ細胞を含む複数のＴ細胞に対するチミジン合成阻害剤の適用と、
ｂ）前記チミジン合成阻害剤の適用から７日後以降に生存している１つまたは複数のＴ細胞の選択と、
を含み、前記１つまたは複数のＴ細胞が、前記対象導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを含むベクターを発現する、前記選択方法。
（項目１１）
前記チミジン合成阻害剤が、トトレキサート（ＭＴＸ）、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセドからなる群から選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
ＭＴＸ及び５−ＦＵに対する耐性を有する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の選択的増殖方法であって、
ａ）ＡＴｈｙＲ遺伝子を含むベクターを用いたＰＢＭＣへの遺伝子導入と、
ｂ）チミジン合成阻害剤を用いた前記遺伝子導入ＰＢＭＣの処理と、
ｃ）前記ＡＴｈｙＲ遺伝子を発現するＰＢＭＣの選択と、
を含む、前記選択的増殖方法。
（項目１４）
前記遺伝子導入ＰＢＭＣに由来するＴ細胞集団の増殖をさらに含む、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記チミジン合成阻害剤が、ＭＴＸである、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
前記チミジン合成阻害剤が、メトトレキサート（ＭＴＸ）、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセドからなる群から選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１７）
前記ＡＴｈｙＲ遺伝子が、ＴＹＭＳＳＳである、項目１３に記載の方法。
（項目１８）
前記ＡＴｈｙＲ遺伝子が、ＤＨＦＲＦＳである、項目１３に記載の方法。
（項目１９）
対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸配列を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２０）
対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸配列を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２１）
対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列と、が機能可能なように連結される、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２２）
前記対象導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、項目２１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２３）
前記対象導入遺伝子をコードする前記配列と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、項目２１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２４）
前記対象導入遺伝子が、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列に対して、３’側に位置する、項目２１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２５）
対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列と、を含む核酸を含む、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列と、が機能可能なように連結される、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２６）
前記対象導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、項目２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２７）
前記対象導入遺伝子をコードする前記配列と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、項目２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２８）
前記対象導入遺伝子が、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列に対して、３’側に位置する、項目２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目２９）
ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、項目２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３０）
前記対象導入遺伝子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物、ポリペプチドホルモン、自殺遺伝子、またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする、項目２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３１）
前記対象導入遺伝子が、増殖因子またはサイトカインをコードする、項目２５に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３２）
前記サイトカインが、ＩＬ−１２である、項目３１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３３）
前記サイトカインが、ＩＬ−１５である、項目３１に記載の遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３４）
導入遺伝子及びＤＨＦＲＦＳを発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記Ｔ細胞が、（１）前記導入遺伝子をコードする配列を含むポリヌクレオチドと、（２）前記ＤＨＦＲＦＳをコードする配列を含むポリヌクレオチドと、を含む、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３５）
導入遺伝子及びＴＹＭＳＳＳを発現する、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞であって、前記Ｔ細胞が、（１）前記導入遺伝子をコードする配列を含むポリヌクレオチドと、（２）前記ＴＹＭＳＳＳをコードする配列を含むポリヌクレオチドと、を含む、前記単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３６）
前記Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、項目１９〜３５のいずれかに記載の単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目３７）
癌を有する患者の治療方法であって、項目１〜４及び項目１６〜２１のいずれかに記載の単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞の、治療上有効な量での患者に対する投与を含む、前記治療方法。
（項目３８）
前記図のいずれかにおいて示されるか、または前記説明に記載の対象導入遺伝子を発現するＴ細胞の、選択方法。
（項目３９）
前記図のいずれかにおいて示されるか、または前記説明に記載の、単離された遺伝子導入哺乳類Ｔ細胞。
（項目４０）
前記図のいずれかにおいて示されるか、または前記説明に記載の、ＭＴＸ、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセドのうちの１つまたは複数に対する耐性を有するヒトＴ細胞の、選択的増殖方法。
（項目４１）
前記Ｔ細胞が、ヘルパーＴ細胞（ＴＨ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ細胞またはＣＴＬ）、メモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターＴ細胞（ＴＥＭ細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、粘膜関連インバリアントＴ細胞、アルファ−ベータＴ細胞（Ｔαβ細胞）、及びガンマ−デルタＴ細胞（Ｔγδ細胞）からなる群から選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
哺乳類から単離されたＴ細胞集団における制御性Ｔ細胞の濃縮方法であって、前記Ｔ細胞集団と、ＭＴＸ、５−ＦＵ、ラルチトレキセド、及びペメトレキセド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択されるチミジン合成阻害剤と、の接触によって、前記集団におけるエフェクターＴ細胞を選択的に枯渇させる、前記濃縮方法。
（項目４３）
哺乳類から単離された前記Ｔ細胞集団が、ＭＴＸ及び５−ＦＵの両方と接触する、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
哺乳類から単離されたＴ細胞集団における制御性Ｔ細胞の枯渇方法であって、１つまたは複数のアミノグリコシドの存在下で前記Ｔ細胞集団を培養して、前記培養において前記制御性Ｔ細胞を選択的に枯渇させることによる前記枯渇方法としてさらに定義される、項目４０〜４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記Ｔ細胞が、ＤＨＦＲＦＳ及びＴＹＭＳＳＳのうちの１つまたは複数を発現する、項目４０〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
哺乳類から単離された制御性Ｔ細胞の選択方法であって、
ａ）チミジン合成阻害剤を用いた、ＤＨＦＲＦＳ及びＴＹＭＳＳＳのうちの１つまたは複数を発現する複数のＴ細胞の処理と、
ｂ）制御性Ｔ細胞のマーカーを発現する制御性Ｔ細胞の選択と、
を含む、前記選択方法。
（項目４８）
前記複数のＴ細胞が、ＤＨＦＲＦＳを発現する、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記選択段階が、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ１５２抗体、及び抗ＬＡＰ抗体のうちの１つまたは複数を使用する、磁気ビーズによる選別を用いた細胞の単離を含む、項目４７に記載の方法。
（項目５０）
前記選択段階が、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ４５抗体、抗ＣＤ１５２抗体、抗ＫＩ−６７抗体、及び抗ＦｏｘＰ３抗体のうちの１つまたは複数を使用する、磁気ビーズによる選別を用いた細胞の単離を含む、項目４７に記載の方法。
（項目５１）
前記チミジン合成阻害剤が、メトトレキサート（ＭＴＸ）である、項目４７に記載の方法。
（項目５２）
前記チミジン合成阻害剤が、５−ＦＵである、項目４７に記載の方法。
（項目５３）
前記チミジン合成阻害剤が、ラルチトレキセドまたはペメトレキセドである、項目４７に記載の方法。
（項目５４）
ｃ）葉酸（ｆｏｌａｔｅ）を用いた、前記制御性Ｔ細胞の処理、
をさらに含む、項目４７に記載の方法。
（項目５５）
ｃ）制御性Ｔ細胞における葉酸（ｆｏｌａｔｅ）合成の回復、
をさらに含む、項目４７に記載の方法。
（項目５６）
ｃ）ロイコボリン及びＦＵのうちの１つまたは複数を用いた、前記制御性Ｔ細胞の処理、
をさらに含む、項目４７に記載の方法。
（項目５７）
ｃ）ロイコボリン及びＭＴＸのうちの１つまたは複数を用いた、前記制御性Ｔ細胞の処理、
をさらに含む、項目４７に記載の方法。
（項目５８）
哺乳類から単離された第１の複数のＴ細胞と、チミジン合成阻害剤と、を含む組成物であって、哺乳類から単離され、チミジン合成阻害剤を含まない第２の複数のＴ細胞と比較して、前記第１の複数のＴ細胞の制御性Ｔ細胞が濃縮される、前記組成物。
（項目５９）
第１の導入遺伝子の発現制御の提供方法であって、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列に機能可能なように連結された前記第１の導入遺伝子を含む核酸を含む遺伝子導入哺乳類細胞の提供を含み、前記細胞が、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列をさらに含む、前記提供方法。
（項目６０）
前記第１の導入遺伝子と、ＴＹＭＳＳＳをコードするヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記第１の導入遺伝子をコードする前記配列と、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
前記第１の対象導入遺伝子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物である、項目５９に記載の方法。
（項目６３）
前記第１の対象導入遺伝子が、ポリペプチドホルモン、ケモカイン、またはサイトカインである、項目５９に記載の方法。
（項目６４）
前記サイトカインが、ＩＬ−１２である、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記サイトカインが、ＩＬ−１５である、項目６３に記載の方法。
（項目６６）
ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列が、機能可能なように第２の導入遺伝子に連結される、項目５９に記載の方法。
（項目６７）
前記第２の導入遺伝子と、ＤＨＦＲＦＳをコードする前記ヌクレオチド配列とが、発現に際して、同一のｍＲＮＡにコードされる、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記第２の対象導入遺伝子をコードする前記配列と、ＤＨＦＲＦＳをコードするヌクレオチド配列とが、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）またはリボソームスリップ配列によって分離される、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記第２の導入遺伝子が、自殺遺伝子、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ポリペプチドホルモン、サイトカイン、ケモカイン、または転写因子である、項目６７に記載の方法。
（項目７０）
前記自殺遺伝子が、誘導性自殺遺伝子である、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記自殺遺伝子が、誘導性カスパーゼ９である、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記哺乳類細胞が、Ｔ細胞である、項目５９に記載の方法。
（項目７３）
ＴＹＭＳＳＳと、第１の導入遺伝子をコードする配列と、をコードする、組換えＲＮＡ。
（項目７４）
５’から３’に向かって、ＴＹＭＳＳＳをコードする配列と、ＩＬ−１２をコードする配列と、を含む組換え核酸分子であって、発現に際して、ＴＹＭＳＳＳをコードする前記配列と、ＩＬ−１２をコードする配列と、が同一ＲＮＡにコードされる、前記組換え核酸分子。