【手続補正書】
【提出日】平成30年11月21日(2018.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における創傷治癒を促進するための方法において使用するための、ｍｉＲ−９２と少なくとも部分的に相補的な配列を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物であって、該組成物はｍｉＲ−９２の機能または活性を低下させ、それにより、創傷治癒を促進する、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の使用のための組成物であって、
（ａ）前記オリゴヌクレオチドが、２’−４’メチレン架橋を含有する少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）を含み；ならびに／または
（ｂ）ｍｉＲ−９２と少なくとも部分的に相補的な配列を含む該オリゴヌクレオチドが、少なくとも１６ヌクレオチドの配列を含み、該配列が、３つ以下の連続したＬＮＡを含み、該配列の５’末端から３’末端までの、１位、６位、１０位、１１位、１３位および１６位がＬＮＡであり、任意選択で、該配列が、５’末端から３’末端までの、３位、９位、および１４位もしくは３位、８位、および１４位もしくは５位、８位、および１５位にＬＮＡをさらに含み；ならびに／または
（ｃ）該配列が、５’末端から３’末端までの、２番目のヌクレオチド位置にデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドをさらに含み、任意選択で、該２番目のヌクレオチド位置の該ＤＮＡヌクレオチドが、化学修飾された窒素塩基を含有し、任意選択で、該化学修飾された窒素塩基が、５−メチルシトシンであり；ならびに／または
（ｄ）該オリゴヌクレオチドが、２’−デオキシ、２’Ｏ−アルキルもしくは２’ハロ修飾された少なくとも１つのヌクレオチドを含み；ならびに／または
（ｅ）該オリゴヌクレオチドが、５’キャップ構造、３’キャップ構造、もしくは５’および３’キャップ構造を有し；ならびに／または
（ｆ）該オリゴヌクレオチドが、１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含み、任意選択で、該オリゴヌクレオチドが完全にホスホロチオエート結合しており；ならびに／または
（ｇ）該オリゴヌクレオチドがペンダント親油基をさらに含む、
使用のための組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の使用のための組成物であって、
（ａ）前記オリゴヌクレオチドが、表１もしくは２から選択される配列を含み；ならびに／または
（ｂ）前記被験体がヒトであり；ならびに／または
（ｃ）該被験体が、糖尿病に罹患しており；ならびに／または
（ｄ）前記創傷治癒が、慢性創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈うっ血性下腿潰瘍もしくは褥瘡に対するものであり；ならびに／または
（ｅ）該オリゴヌクレオチドの投与により、無処置、もしくは創傷治癒を促進することが公知の薬剤を用いた処置と比較して、創傷治癒の間の再上皮化、肉芽、および／もしくは新血管新生の速度が増大し、任意選択で、創傷治癒を促進することが公知の該薬剤が、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）もしくは血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）である、
使用のための組成物。
【請求項４】
表２から選択される配列を含むオリゴヌクレオチド。
【請求項５】
請求項４に記載のオリゴヌクレオチドであって、
（ａ）該オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの非ロックドヌクレオチドが、２’デオキシ、２’Ｏ−アルキルもしくは２’ハロ修飾されており；ならびに／または
（ｂ）該オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）が、２’−４’メチレン架橋を有し；ならびに／または
（ｃ）該オリゴヌクレオチドが、５’キャップ構造、３’キャップ構造、もしくは５’および３’キャップ構造を有し；ならびに／または
（ｄ）該オリゴヌクレオチドが、１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含み、任意選択で、該オリゴヌクレオチドが完全にホスホロチオエート結合しており；ならびに／または
（ｅ）ペンダント親油基をさらに含む、
オリゴヌクレオチド。
【請求項６】
有効量の請求項４または５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容されるキャリアもしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項７】
前記薬学的に許容されるキャリアが、コロイド分散系、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、水中油エマルション、ミセル、混合ミセル、またはリポソームを含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
細胞におけるｍｉＲ−９２の活性を低下させるまたは阻害する方法であって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで該細胞を請求項４または５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと接触させることを含む方法。
【請求項９】
被験体における血管新生を促進または処置する方法において使用するための、請求項４または５のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを含む組成物。
【請求項１０】
表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を、血管新生または創傷治癒を調節するための治療薬の、該治療薬を受けている被験体における有効性の指標とする方法であって、
ａ）該被験体から得られた試料中の、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｂ）該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の該１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により該治療薬の有効性が示されること
を含む方法。
【請求項１１】
前記治療薬が、ｍｉＲ−９２の機能および／または活性を調節する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を、血管新生または創傷治癒を促進する薬剤の能力の指標とする方法であって、
ａ）該薬剤と接触させた細胞における、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定することであって、該細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにあるか、または該細胞がｉｎ  ｖｉｖｏにある非ヒト細胞である、こと；および
ｂ）該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の該１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により、血管新生または創傷治癒を促進する該薬剤の能力が示されること
を含む方法。
【請求項１３】
表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を、ｍｉＲ−９２の機能および／または活性を調節する治療薬を用いた処置のために被験体が選択されるべきかどうかの指標とする方法であって、
ａ）該治療薬で処置される該被験体から得られた試料中の、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｂ）該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の該１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により該被験体が該治療薬を用いた処置のために選択されるべきかどうかが示されること
を含む方法。
【請求項１４】
前記被験体が、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢もしくは冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、糖尿病、慢性創傷（複数可）、末梢血管疾患もしくは末梢動脈疾患に罹患しており、および／または該被験体が、ヒトである、請求項１０、１１または１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）、前記被験体に対する歩行時間試験、該被験体に対する動脈造影もしくは血管造影または該被験体に対するＳＰＥＣＴ分析の試験結果を指標とする、請求項１０または１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記試料中の前記ｍｉＲ−９２の機能および／または活性を指標とする、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記治療薬が、ｍｉＲ−９２オリゴヌクレオチド阻害剤であり、任意選択で、該ｍｉＲ−９２オリゴヌクレオチド阻害剤が、表１および２から選択される、請求項１１、１３または１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記細胞が、哺乳動物細胞であり、任意選択で、該細胞が、心臓細胞、筋肉細胞、線維細胞、線維芽細胞、ケラチノサイトまたは内皮細胞である、請求項８または１２に記載の方法。
【請求項１９】
前記被験体が、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢もしくは冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、糖尿病、慢性創傷（複数可）、末梢血管疾患もしくは末梢動脈疾患に罹患しており、および／または該被験体が、ヒトである、請求項９に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
創傷治癒を促進する薬剤の能力を評価するための方法であって、薬剤と接触させた細胞における、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により創傷治癒を促進する薬剤の能力が示されることを含む方法も本明細書に提供される。一部の実施形態では、方法は、薬剤と接触させた細胞におけるｍｉＲ−９２の機能および／または活性を決定することをさらに含む。一部の実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。さらに他の実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにある。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
被験体における創傷治癒を促進するための方法であって、ｍｉＲ−９２と少なくとも部分的に相補的な配列を含むオリゴヌクレオチドを投与することを含み、該オリゴヌクレオチドの投与によりｍｉＲ−９２の機能または活性が低下し、それにより、創傷治癒を促進する、方法。
（項目２）
前記オリゴヌクレオチドが、２’−４’メチレン架橋を含有する少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
ｍｉＲ−９２と少なくとも部分的に相補的な配列を含む前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１６ヌクレオチドの配列を含み、該配列が、３つ以下の連続したＬＮＡを含み、該配列の５’末端から３’末端までの、１位、６位、１０位、１１位、１３位および１６位がＬＮＡである、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記配列が、５’末端から３’末端までの、３位、９位、および１４位にＬＮＡをさらに含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記配列が、５’末端から３’末端までの、３位、８位、および１４位にＬＮＡをさらに含む、項目３に記載の方法。
（項目６）
前記配列が、５’末端から３’末端までの、５位、８位、および１５位にＬＮＡをさらに含む、項目３に記載の方法。
（項目７）
前記配列が、５’末端から３’末端までの、２番目のヌクレオチド位置にデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドをさらに含む、項目４から６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記２番目のヌクレオチド位置の前記ＤＮＡヌクレオチドが、化学修飾された窒素塩基を含有する、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記化学修飾された窒素塩基が、５−メチルシトシンである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記オリゴヌクレオチドが、２’−デオキシ、２’Ｏ−アルキルまたは２’ハロ修飾された少なくとも１つのヌクレオチドを含む、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記オリゴヌクレオチドが、５’キャップ構造、３’キャップ構造、または５’および３’キャップ構造を有する、項目１から１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記オリゴヌクレオチドが、１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含む、項目１から１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
完全にホスホロチオエート結合している、項目１２に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１４）
ペンダント親油基をさらに含む、項目１から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記オリゴヌクレオチドが、表１または２から選択される配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記被験体がヒトである、項目１から１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記被験体が、糖尿病に罹患している、項目１から１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記創傷治癒が、慢性創傷、糖尿病性足部潰瘍、静脈うっ血性下腿潰瘍または褥瘡に対するものである、項目１から１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記オリゴヌクレオチドの投与により、無処置または創傷治癒を促進することが公知の薬剤を用いた処置と比較して、創傷治癒の間の再上皮化、肉芽、および／または新血管新生の速度が増大する、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
創傷治癒を促進することが公知の前記薬剤が、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）または血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
表２から選択される配列を含むオリゴヌクレオチド。
（項目２２）
前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの非ロックドヌクレオチドが、２’デオキシ、２’Ｏ−アルキルまたは２’ハロ修飾されている、項目２１に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２３）
前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのロックド核酸（ＬＮＡ）が、２’−４’メチレン架橋を有する、項目２１または２２に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２４）
５’キャップ構造、３’キャップ構造、または５’および３’キャップ構造を有する、項目２１から２３のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２５）
１つまたは複数のホスホロチオエート結合を含む、項目２１から２４のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２６）
完全にホスホロチオエート結合している、項目２５に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２７）
ペンダント親油基をさらに含む、項目２１から２６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目２８）
有効量の項目２１から２７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、または薬学的に許容されるその塩、および薬学的に許容されるキャリアもしくは希釈剤を含む医薬組成物。
（項目２９）
前記薬学的に許容されるキャリアが、コロイド分散系、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、水中油エマルション、ミセル、混合ミセル、またはリポソームを含む、項目２８に記載の医薬組成物。
（項目３０）
細胞におけるｍｉＲ−９２の活性を低下させるまたは阻害する方法であって、該細胞を項目２１から２７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドと接触させることを含む方法。
（項目３１）
前記細胞が、哺乳動物細胞である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記細胞が、心臓細胞、筋肉細胞、線維細胞、線維芽細胞、ケラチノサイトまたは内皮細胞である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにある、項目３０から３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
被験体における血管新生を促進させる方法であって、該被験体に、項目２１から２７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを投与することを含む方法。
（項目３５）
前記被験体が、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢もしくは冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、糖尿病、慢性創傷（複数可）、末梢血管疾患または末梢動脈疾患に罹患している、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体が、ヒトである、項目３４または３５に記載の方法。
（項目３７）
糖尿病、慢性創傷（複数可）、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢もしくは冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、または末梢動脈疾患を処置する方法であって、前記被験体に、項目２１から２７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドを投与することを含む方法。
（項目３８）
前記被験体が、ヒトである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
血管新生を調節するための治療薬の、該治療薬を受けている被験体における有効性を評価またはモニタリングするための方法であって、
ａ）該被験体由来の試料中の、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｂ）該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の該１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により該治療薬の有効性が示されること
を含む方法。
（項目４０）
前記被験体に対して歩行時間試験を実施すること、前記被験体についての足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）を決定すること、前記被験体に対して動脈造影または血管造影を実施すること、または前記被験体に対してＳＰＥＣＴ分析を実施することをさらに含む、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
創傷治癒を調節するための治療薬の、該治療薬を受けている被験体における有効性を評価またはモニタリングするための方法であって、
ａ）該被験体由来の試料中の、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｂ）該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の該１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により該治療薬の有効性が示されること
を含む方法。
（項目４２）
前記治療薬が、ｍｉＲ−９２の機能および／または活性を調節する、項目３９から４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記治療薬が、ｍｉＲ−９２オリゴヌクレオチド阻害剤である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記ｍｉＲ−９２オリゴヌクレオチド阻害剤が、表１および２から選択される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記被験体が、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、糖尿病、慢性創傷（複数可）、末梢血管疾患または末梢動脈疾患に罹患している、項目３９から４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記被験体がヒトである、項目３９から４５のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
血管新生または創傷治癒を促進する薬剤の能力を評価するための方法であって、
ａ）該薬剤と接触させた細胞における、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｂ）該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の該１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により、血管新生または創傷治癒を促進する該薬剤の能力が示されること
を含む方法。
（項目４８）
前記薬剤と接触させた前記細胞におけるｍｉＲ−９２の機能および／または活性を決定することをさらに含む、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記細胞が、哺乳動物細胞である、項目４７または４８に記載の方法。
（項目５０）
前記細胞が、心臓細胞、筋肉細胞、線維細胞、線維芽細胞、ケラチノサイトまたは内皮細胞である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにある、項目４７から５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
ｍｉＲ−９２の機能および／または活性を調節する治療薬を用いた処置のために被験体を選択するための方法であって、
ａ）該治療薬で処置される該被験体由来の試料中の、表３に列挙されている１つまたは複数の遺伝子の発現を測定すること；および
ｂ）該１つまたは複数の遺伝子の発現を、所定の参照レベルまたは対照試料中の該１つもしくは複数の遺伝子のレベルと比較し、その比較により該被験体が該治療薬を用いた処置のために選択されるべきかどうかが示されること
を含む方法。
（項目５３）
前記被験体に対して歩行時間試験を実施すること、前記被験体についての足関節上腕血圧比（ＡＢＩ）を決定すること、前記被験体に対して動脈造影または血管造影を実施すること、または前記被験体に対してＳＰＥＣＴ分析を実施することをさらに含む、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記試料中のｍｉＲ−９２の機能および／または活性を決定することをさらに含む、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
前記治療薬が、ｍｉＲ−９２オリゴヌクレオチド阻害剤である、項目５２から５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記ｍｉＲ−９２オリゴヌクレオチド阻害剤が、表１および２から選択される、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記被験体が、虚血、心筋梗塞、慢性虚血性心疾患、末梢もしくは冠動脈閉塞、虚血性梗塞、脳卒中、アテローム性動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、冠動脈疾患、頸動脈疾患、糖尿病、慢性創傷（複数可）、末梢血管疾患または末梢動脈疾患に罹患している、項目５２から５６のいずれか一項に記載の方法。
（項目５８）
前記被験体が、ヒトである、項目５２から５７のいずれか一項に記載の方法。