(57)【要約】有利な特性を有する［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン及びその製薬上許容される塩の新規な結晶を提供する。本発明により提供される、［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン及びその製薬上許容される塩は、安定性に優れ、医薬品の原薬として良好な物性を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶。
【請求項２】
請求項１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、３．９±０．２、１１．８±０．２、１５．２±０．２、１５．８±０．２、２１．７±０．２、２２．０±０．２、及び２５．３±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項３】
請求項１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、９．１±０．２、１３．９±０．２、１４．７±０．２、１７．４±０．２、１７．６±０．２、２０．０±０．２、２０．４±０．２、及び２０．９±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項４】
請求項１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．６±０．２、１０．６±０．２、１３．３±０．２、１４．８±０．２、１９．８±０．２、２０．８±０．２、及び２２．６±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項５】
請求項１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、６．９±０．２、１５．２±０．２、１７．４±０．２、１８．０±０．２、１８．８±０．２、２０．８±０．２、２１．５±０．２、及び２７．２±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項６】
請求項１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、７．２±０．２、８．７±０．２、１７．６±０．２、１８．５±０．２、２０．０±０．２、２０．９±０．２、及び２１．７±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項７】
請求項１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．１±０．２、８．３±０．２、１０．０±０．２、１２．４±０．２、１５．５±０．２、１６．４±０．２、１７．９±０．２及び１８．４±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項８】
請求項１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、３．９±０．２、１２．０±０．２、１５．２±０．２、１６．３±０．２、２１．２±０．２、２１．６±０．２、２２．１±０．２、及び２４．４±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項９】
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  ｐ−トルエンスルホン酸塩の結晶。
【請求項１０】
請求項９に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、２．８±０．２、５．６±０．２、８．４±０．２、１１．２±０．２、１５．０±０．２、２１．４±０．２、２２．９±０．２、及び２５．７±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項１１】
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  クエン酸塩の結晶。
【請求項１２】
請求項１１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、６．５±０．２、９．５±０．２、１０．６±０．２、１４．５±０．２、１５．１±０．２、１７．０±０．２、２０．７±０．２、及び２６．３±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも６つのピークを有する結晶。
【請求項１３】
請求項１１に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．５±０．２、６．４±０．２、９．１±０．２、１０．２±０．２、１３．５±０．２、１４．５±０．２、１６．９±０．２、及び２５．８±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも６つのピークを有する結晶。
【請求項１４】
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  シュウ酸塩の結晶。
【請求項１５】
請求項１４に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、３．２±０．２、１１．６±０．２、１５．２±０．２、１６．６±０．２、１６．９±０．２、２２．５±０．２、２５．３±０．２、及び２６．１±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項１６】
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  グルタル酸塩の結晶。
【請求項１７】
請求項１６に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、５．６±０．２、８．７±０．２、１１．２±０．２、１７．５±０．２、１８．４±０．２、２１．５±０．２、２２．７±０．２、及び２４．９±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項１８】
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  リンゴ酸塩の結晶。
【請求項１９】
請求項１８に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．６±０．２、９．３±０．２、９．６±０．２、１４．１±０．２、１５．４±０．２、２０．６±０．２、２５．０±０．２、及び２７．８±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
【請求項２０】
請求項１乃至請求項１９のいずれか１項に記載の結晶を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項２１】
乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんに用いられる請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１乃至請求項１９のいずれか１項に記載の結晶を有効成分とする、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼδ（ＰＩ３Ｋδ）阻害剤。
【請求項２３】
乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんに用いられる請求項２２に記載の阻害剤。
【請求項２４】
請求項１乃至請求項１９のいずれか１項に記載の結晶を投与することを特徴とする、ＰＩ３Ｋδを阻害することにより治療することができる疾患の治療方法。
【請求項２５】
疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんである請求項２４に記載の治療方法。
【請求項２６】
ＰＩ３Ｋδを阻害することにより治療することができる疾患の治療に使用のための請求項１乃至請求項１９のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項２７】
疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんである請求項２６に記載の結晶。
【請求項２８】
ＰＩ３Ｋδを阻害することにより治療することができる疾患の治療用医薬組成物の製造のための請求項１乃至請求項１９のいずれか１項に記載の結晶の使用。
【請求項２９】
疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんである請求項２８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有利な特性を有する［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン及びその製薬上許容される塩の結晶に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）ファミリーは、脂質キナーゼであり、クラスＩ、クラスＩＩ、クラスＩＩＩの３つのクラスに分類される。この分類は、構造、制御、及びインビトロにおける脂質の基質特異性に基づくものである。クラスＩ ＰＩ３Ｋは最も幅広く研究されており、Ｇタンパク質結合受容体、増殖因子、及びインスリンのような細胞表面レセプターによって活性化される。クラスＩ ＰＩ３Ｋは、更にＩＡとＩＢという２つのサブクラスに分類される。ＰＩ３Ｋ ＩＡは、触媒的ｐ１１０サブユニット（α、β、またはδ）と調節サブユニット（ｐ８５、ｐ５５、ｐ５０）から構成されるヘテロダイマーである。ＰＩ３Ｋ ＩＢは、ＰＩ３Ｋ γの一員である。ＰＩ３Ｋαは、グルコース代謝及びインスリンシグナル伝達に関与している。これに対し、ＰＩ３Ｋδ及びＰＩ３Ｋγは、主に造血器系に発現している。ＰＩ３Ｋδについて、炎症メディエーターの発現及び活性化、炎症細胞の誘導、気道リモデリング、及び慢性のコルチコステロイド非感受性気道炎症を含む先天性及び適応免疫応答の両方の組織化に必須であることが薬理的に、及び遺伝子操作によって明らかにされた（非特許文献１−３）。【０００３】
ＰＩ３Ｋは、創薬標的として様々な製薬会社により研究されている。ＰＩ３Ｋδ阻害剤は、特許文献１−２１等に記載されているが、ピラゾール構造を有したものは開示されていない。【０００４】
また、一般に、原薬保存・製剤加工あるいは保存時に、非結晶固体の原薬では光・空気・湿度・温度等の環境条件に対し安定性が悪く、極めて高純度が求められる医薬品においては大きな問題となりえるため、より有利な物性化学的性質を示すことの多い、結晶の取得が望まれている。【０００５】
さらに、結晶に多形が存在する化合物は、結晶毎に異なる物性を示すことがある。特に医薬品の分野においては、溶解度、溶解速度、安定性、吸収性等の点に違いが出ることが知られている。そのため、同一化合物を使用した場合においても、結晶形の違いにより所期の作用強度が得られなかったり、また、予測と異なる作用強度を生じ、不測の事態を招いたりすることが考えられる。そのため、常に一定の作用強度が期待できる同一品質の化合物を提供することが望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】WO2012/082997
【特許文献２】WO2012/037226
【特許文献３】WO2012/007493
【特許文献４】WO2012/107465
【特許文献５】WO2011/058027
【特許文献６】WO2010/136491
【特許文献７】WO2010/138589
【特許文献８】WO2010/044401
【特許文献９】WO2009/146406
【特許文献１０】WO2009/045174
【特許文献１１】WO2009/045175
【特許文献１２】WO2009/053716
【特許文献１３】GB2431156
【特許文献１４】WO2012/104776
【特許文献１５】WO2010/005558
【特許文献１６】WO2010/114494
【特許文献１７】WO2009/100406
【特許文献１８】WO2009/034386
【特許文献１９】WO2008/116129
【特許文献２０】WO2005/000404
【特許文献２１】WO2004/035740
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Rommel C, et al. Nat. Rev. Immunol. 2007;7(3):191-201
【非特許文献２】Medina-Tato DA, et. al. Immunology. 2007; 121(4):448-61
【非特許文献３】Foster JG et.al. Pharmacol. Rev. 2012; 64(4):1027-54
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、ＰＩ３Ｋδの調節不全による炎症性疾患及び自己免疫疾患の治療剤として、ピラゾール誘導体骨格を有したＰＩ３Ｋδ阻害剤を提供すると共に、医薬品あるいは医薬品原料として、保存安定性、製剤時の取り扱い易さなどの点で優れた特性を有する結晶を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、かかる課題を解決するために鋭意研究を行う中で、新規なＰＩ３Ｋδ阻害剤として、下記式（Ｉ）で示される［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（以下、化合物（Ｉ）とも表記することがある。）及びその製薬上許容される塩を見出し、当該化合物において医薬品あるいは医薬品原料として、保存安定性、製剤時の取り扱い易さなどの点で優れた特性を有する結晶を見出して本発明を完成させた。【００１０】
【化１】
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【００１１】
本発明は、次の（１）〜（２９）に関する。
（１）［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶。
（２）（１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、３．９±０．２、１１．８±０．２、１５．２±０．２、１５．８±０．２、２１．７±０．２、２２．０±０．２、及び２５．３±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（３）（１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、９．１±０．２、１３．９±０．２、１４．７±０．２、１７．４±０．２、１７．６±０．２、２０．０±０．２、２０．４±０．２、及び２０．９±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（４）（１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．６±０．２、１０．６±０．２、１３．３±０．２、１４．８±０．２、１９．８±０．２、２０．８±０．２、及び２２．６±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（５）（１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、６．９±０．２、１５．２±０．２、１７．４±０．２、１８．０±０．２、１８．８±０．２、２０．８±０．２、２１．５±０．２、及び２７．２±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（６）（１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、７．２±０．２、８．７±０．２、１７．６±０．２、１８．５±０．２、２０．０±０．２、２０．９±０．２、及び２１．７±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（７）（１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．１±０．２、８．３±０．２、１０．０±０．２、１２．４±０．２、１５．５±０．２、１６．４±０．２、１７．９±０．２及び１８．４±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（８）（１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、３．９±０．２、１２．０±０．２、１５．２±０．２、１６．３±０．２、２１．２±０．２、２１．６±０．２、２２．１±０．２、及び２４．４±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（９）［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  ｐ−トルエンスルホン酸塩の結晶。
（１０）（９）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、２．８±０．２、５．６±０．２、８．４±０．２、１１．２±０．２、１５．０±０．２、２１．４±０．２、２２．９±０．２、及び２５．７±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（１１）［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  クエン酸塩の結晶。
（１２）（１１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、６．５±０．２、９．５±０．２、１０．６±０．２、１４．５±０．２、１５．１±０．２、１７．０±０．２、２０．７±０．２、及び２６．３±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも６つのピークを有する結晶。
（１３）（１１）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．５±０．２、６．４±０．２、９．１±０．２、１０．２±０．２、１３．５±０．２、１４．５±０．２、１６．９±０．２、及び２５．８±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも６つのピークを有する結晶。
（１４）［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  シュウ酸塩の結晶。
（１５）（１４）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、３．２±０．２、１１．６±０．２、１５．２±０．２、１６．６±０．２、１６．９±０．２、２２．５±０．２、２５．３±０．２、及び２６．１±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（１６）［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  グルタル酸塩の結晶。
（１７）（１６）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、５．６±０．２、８．７±０．２、１１．２±０．２、１７．５±０．２、１８．４±０．２、２１．５±０．２、２２．７±０．２、及び２４．９±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（１８）［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  リンゴ酸塩の結晶。
（１９）（１８）に記載の結晶であって、ＣｕＫα放射線を用いた粉末Ｘ線回折において、４．６±０．２、９．３±０．２、９．６±０．２、１４．１±０．２、１５．４±０．２、２０．６±０．２、２５．０±０．２、及び２７．８±０．２から選択される回折角度（２θ）に、少なくとも５つのピークを有する結晶。
（２０）（１）乃至（１９）のいずれか１つに記載の結晶を有効成分として含有する医薬組成物。
（２１）乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんに用いられる（２０）に記載の医薬組成物。
（２２）（１）乃至（１９）のいずれか１つに記載の結晶を有効成分とする、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼδ（ＰＩ３Ｋδ）阻害剤。
（２３）乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんに用いられる（２２）に記載の阻害剤。
（２４）（１）乃至（１９）のいずれか１つに記載の結晶を投与することを特徴とする、ＰＩ３Ｋδを阻害することにより治療することができる疾患の治療方法。
（２５）疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんである（２４）に記載の治療方法。
（２６）ＰＩ３Ｋδを阻害することにより治療することができる疾患の治療に使用のための（１）乃至（１９）のいずれか１つに記載の結晶。
（２７）疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんである（２６）に記載の結晶。
（２８）ＰＩ３Ｋδを阻害することにより治療することができる疾患の治療用医薬組成物の製造のための（１）乃至（１９）のいずれか１つに記載の結晶の使用。
（２９）疾患が、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、アレルギー性喘息、重症喘息、ステロイド抵抗性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、全身性エリマトーデス、原発性免疫不全症候群、又はがんである（２８）に記載の使用。【００１２】
本発明において、結晶とは、その内部構造が三次元的に構成原子や分子の規則正しい繰り返しで出来てなる固体をいい、そのような規則正しい内部構造を持たない無定形の固体、または非晶質体とは区別される。【００１３】
本発明において、結晶には、化合物（Ｉ）の結晶、化合物（Ｉ）の水和物結晶、化合物（Ｉ）の溶媒和物結晶、化合物（Ｉ）の製薬上許容される塩の結晶、化合物（Ｉ）の製薬上許容される塩の水和物結晶、及び化合物（Ｉ）の製薬上許容される塩の溶媒和物結晶が包含される。【００１４】
本発明においては、化合物（Ｉ）、及びその製薬上許容される塩が結晶形態であることは、偏光顕微鏡による観察、粉末Ｘ線結晶分析、または、単結晶Ｘ線回析測定を利用することによって確認することができる。さらに、結晶の特徴を予め測定しておいた各指標に基づくデータと比較することにより、その結晶のタイプを特定することもできる。よって、本発明の好ましい態様によれば、本発明による結晶は、このような測定手段を利用して結晶であることが確認できるものである。【００１５】
本発明においては、粉末Ｘ線回折における回折角度が完全に一致する結晶だけでなく、回折角度が±０．２の範囲内で一致する結晶も本発明に含まれる。これは、一般に、計測器、試料及び試料調製の差に起因して、ピーク値に内在する変動があることから、一般的な慣行である。粉末Ｘ線回折における回折角度（２θ）は±０．２の範囲内で誤差が生じうるから、上記回折角度の値は±０．２程度の範囲内の数値も含むものとして理解される必要があるためである。また、粉末Ｘ線回折測定では、測定に用いる機器の測定誤差や測定試料の状態により、同じ結晶を測定した場合であっても、常に相対強度は一致するものではなく、ピークの強度は、結晶の粒径や成長面等の違い（晶癖）等によって変化することがある。従って、本発明を粉末Ｘ線回折のデータに基づき表した場合、本明細書に記載の結晶と回折角度および相対強度が一致する結晶、及び本明細書に記載の結晶と相対強度が異なっていたとしても回折角度が一致する結晶のいずれも本発明の範囲に包含される。【００１６】
本発明の［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン及びその製薬上許容される塩の新規な結晶（以下、それぞれ「本発明実施例１の結晶」、「本発明実施例２の結晶」、「本発明実施例３の結晶」、「本発明実施例４の結晶」、「本発明実施例５の結晶」、「本発明実施例６の結晶」、「本発明実施例７の結晶」、「本発明実施例８の結晶」、「本発明実施例９の結晶」、「本発明実施例１０の結晶」、「本発明実施例１１の結晶」、「本発明実施例１２の結晶」、「本発明実施例１３の結晶」ということがある）は、医薬の製造に用いられる原薬の結晶として安定的に供給することが可能で、吸湿性または安定性に優れるものである。これらの結晶形の相違は、特に、粉末Ｘ線回折によって区別される。【００１７】
すなわち、本発明実施例１の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）３．９±０．２、７，８±０．２、１１．８±０．２、１５．２±０．２、１５．８±０．２、２１．７±０．２、２２．０±０．２、及び２５．３±０．２にピークを有するものである。【００１８】
すなわち、本発明実施例２の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）９．１±０．２、１３．９±０．２、１４．７±０．２、１７．４±０．２、１７．６±０．２、２０．０±０．２、２０．４±０．２、及び２０．９±０．２にピークを有するものである。【００１９】
すなわち、本発明実施例３の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）４．６±０．２、１０．６±０．２、１３．３±０．２、１４．８±０．２、１９．８±０．２、２０．８±０．２、及び２２．６±０．２にピークを有するものである。【００２０】
すなわち、本発明実施例４の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）６．９±０．２、１５．２±０．２、１７．４±０．２、１８．０±０．２、１８．８±０．２、２０．８±０．２、２１．５±０．２、及び２７．２±０．２にピークを有するものである。【００２１】
すなわち、本発明実施例５の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）７．２±０．２、８，７±０．２、１７．６±０．２、１８．５±０．２、２０．０±０．２、２０．９±０．２及び２１．７±０．２にピークを有するものである。【００２２】
すなわち、本発明実施例６の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）４．１±０．２、８．３±０．２、１０．０±０．２、１２．４±０．２、１５．５±０．２、１６．４±０．２、１７．９±０．２及び１８．４±０．２にピークを有するものである。【００２３】
すなわち、本発明実施例７の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）３．９±０．２、１２．０±０．２、１５．２±０．２、１６．３±０．２、２１．２±０．２、２１．６±０．２、２２．１±０．２、及び２４．４±０．２にピークを有するものである。【００２４】
すなわち、本発明実施例８の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）２．８±０．２、５．６±０．２、８．４±０．２、１１．２±０．２、１５．０±０．２、２１．４±０．２、２２．９±０．２、及び２５．７±０．２にピークを有するものである。【００２５】
すなわち、本発明実施例９の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）６．５±０．２、９．５±０．２、１０．６±０．２、１４．５±０．２、１５．１±０．２、１７．０±０．２、２０．７±０．２、及び２６．３±０．２にピークを有するものである。【００２６】
すなわち、本発明実施例１０の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）４．５±０．２、６．４±０．２、９．１±０．２、１０．２±０．２、１３．５±０．２、１４．５±０．２、１６．９±０．２、及び２５．８±０．２にピークを有するものである。【００２７】
すなわち、本発明実施例１１の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）３．２±０．２、１１．６±０．２、１５．２±０．２、１６．６±０．２、１６．９±０．２、２２．５±０．２、２５．３±０．２、及び２６．１±０．２にピークを有するものである。【００２８】
すなわち、本発明実施例１２の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）５．６±０．２、８．７±０．２、１１．２±０．２、１７．５±０．２、１８．４±０．２、２１．５±０．２、２２．７±０．２、及び２４．９±０．２にピークを有するものである。【００２９】
すなわち、本発明実施例１３の結晶は、粉末Ｘ線回折で２θ（°）４．６±０．２、９．３±０．２、９．６±０．２、１４．１±０．２、１５．４±０．２、２０．６±０．２、２５．０±０．２、及び２７．８±０．２にピークを有するものである。
【発明の効果】
【００３０】
本発明により提供される、［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン及びその製薬上許容される塩の結晶は、保存安定性に優れ、工業生産における大量合成に好適であり、医薬品の原薬として良好な物性を有する。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
以下、本発明の内容について詳細に説明する。
【００３２】
本発明の別の態様は、本発明の結晶を有効成分として含有する医薬組成物に関する。
本願発明の結晶を有効成分として含む医薬組成物は、好ましくは、本発明の結晶と１種または２種以上の薬学的に許容し得る添加物を含む医薬組成物の形態で提供される。
【００３３】
投与は錠剤、丸剤、力プセル剤、頼粒剤、散剤、液剤等による経口投与、又は、関節肉、静脈肉、筋肉内等の注射剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏、経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤、経粘膜液剤、経粘膜貼付剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。
【００３４】
経口投与のための固形製剤としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、またはトローチ剤が挙げられる。これらの固形製剤は、本発明の結晶とともに薬学的に許容し得る添加物を含んでもよい。添加物としては、例えば、充填剤類、増量剤類、結合剤類、崩壊剤類、溶解促進剤類、湿潤剤類または滑沢剤類が挙げられ、これらを必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。
【００３５】
例えば、錠剤の場合には、医薬組成物中、結合剤の含量は、通常、１〜１０重量部(好適には、２〜５重量部)であり、崩壊剤の含量は、通常、１から４０重量部(好適には、５〜３０重量部)であり、滑沢剤の含量は、通常、０．１乃至１０重量部(好適には、０．５乃至３重量部)であり、流動化剤の含量は、０．１〜１０重量部(好適には、０．５〜５重量部）である。
【００３６】
経口投与のための液体製剤としては、例えば、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、または懸濁剤が挙げられる。これらの液体製剤は、本発明の結晶とともに薬学的に許容し得る添加物を含んでもよい。添加物としては、例えば、懸濁化剤または乳化剤が挙げられ、これらを必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。
【００３７】
非経口投与のための吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤は固体、液体又は半固体状のものが用いられ、従来公知の方法に従って製造することができる。例えば公知の賦形剤や、更に、pH調整剤、防腐剤、界面活性剤、滑沢剤、安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。投与は、適当な吸入又は吹送のためのデバイスを使用することができる。例えば、計量投与吸入デバイス等の公知のテバイスや噴霧器を使用して、化合物を単独で又は処方された混合物の粉末として、もしくは医薬的に許容し得る担体と組み合わせて溶液又は懸濁液として投与することができる。乾燥粉末吸入器等は、単回又は多数回の投与用のものであってもよく、乾燥粉末又は粉末含有力プセルを使用することができる。あるいは、適当な駆出剤、例えば、クロロフルオロアル力ン、ヒドロフルオロアル力ン又は二酸化炭素等の好適な気体を使用した加圧エアゾールスプレー等の形態であってもよい。
【００３８】
本発明の医薬組成物は、温血動物（特にヒト）に投与することができ、有効成分である結晶形態の化合物（Ｉ）又はその製薬上許容される塩の投与量は、患者の症状、年齢、体重等の種々の条件により変化し得るが、例えば経口投与の場合、1回当たり０．１ｍｇ／ｂｏｄｙ〜３０ｍｇ／ｂｏｄｙ（好適には０．５ｍｇ／ｂｏｄｙ〜１０ｍｇ／ｂｏｄｙ）をヒトに対して、1日当たり１〜３回症状に応じて投与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】実施例１の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図２】実施例２の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図３】実施例３の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図４】実施例４の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図５】実施例５の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図６】実施例６の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図７】実施例７の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図８】実施例８の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図９】実施例９の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図１０】実施例１０の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図１１】実施例１１の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図１２】実施例１２の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図１３】実施例１３の結晶の粉末Ｘ線回折パターンを示す。図の縦軸は、回折強度を相対的線強度（カウント）で示し、横軸は回折角度２θの値を示す。
【図１４】実施例１の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図１５】実施例２の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図１６】実施例３の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図１７】実施例４の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図１８】実施例５の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図１９】実施例６の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、左縦軸は重量変化（重量％）を示す。
【図２０】実施例７の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、左縦軸は重量変化（重量％）を示し、右横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図２１】実施例８の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図２２】実施例９の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図２３】実施例１０の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図２４】実施例１１の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図２５】実施例１２の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【図２６】実施例１３の結晶の熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）のチャートを示す。図の横軸は、温度（℃）を示し、右縦軸は重量変化（重量％）を示し、左横軸は吸（発）熱量（ｕＶ）を示す。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
なお、実施例等で用いる略号は、次のような意義を有する。
μｇ：マイクログラム、ｍｇ：ミリグラム、ｇ：グラム、μＬ：マイクロリットル、ｍＬ：ミリリットル、Ｌ：リットル、ｍｍｏｌ：ミリモル、ＭＨｚ：メガヘルツ、μｍ：マイクロメートル、ｒｐｍ：ｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｅｒ  ｍｉｎｕｔｅ（回転数／分）
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＴＡ：示差熱分析（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）
ＴＧ：熱質量（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｇｒａｖｉｍｅｔｒｙ）
ＲＨ：相対湿度（Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｈｕｍｉｄｉｔｙ）【００４１】
１．粉末Ｘ線測定条件
（実施例１〜５、８〜１３）
装置：株式会社リガク  試料水平型強力Ｘ線回折装置  ＲＩＮＴ−ＴＴＲ  ＩＩＩ
線源：ＣｕＫα線
波長：１．５４０５６Å
測定回折角範囲（２θ）：２〜４０°
サンプリング幅：０．０２°
走査速度：２０°／分
管電圧：５０ｋＶ
管電流：３００ｍＡ
発散スリット：０．５ｍｍ
散乱スリット：０．５ｍｍ
受光スリット：０．５ｍｍ
（実施例６，７）
装置：株式会社リガク  デスクトップＸ線回折装置 ＭｉｎｉＦｌｅｘ３００／６００
線源：ＣｕＫα線
波長：１．５４１８６２Å
測定回折角範囲（２θ）：３〜５０°
サンプリング幅：０．０２°
走査速度：１０°／分
管電圧：４０ｋＶ
管電流：１５ｍＡ
データ処理を含む装置の取り扱いは、各装置で指示された方法及び手順に従った。なお、回折角及び回折強度は、その結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件等によって多少の変動がある。【００４２】
２．熱分析（ＴＧ／ＤＴＡ）分析条件
（実施例１〜５、８〜１３）
装置：ＳＩＩナノテクノロジー株式会社  ＴＧ／ＤＴＡ６２００
昇温速度：１０℃／ｍｉｎ
雰囲気ガス：窒素
窒素ガス流量：２００  ｍＬ／ｍｉｎ
（実施例６，７）
装置：ＴＡインスツルメント株式会社   ＤＳＣ  Ｑ１００  Ｖ９．９  Ｂｕｌｉｄ３０３
試料およそ４ｍｇを専用のアルミニウム製サンプルパンに充填し、窒素雰囲気下（２００ｍＬ／分）において、測定範囲を３０℃から３３０℃とし、昇温速度１０℃／分で試料とリファレンス（空のアルミニウム製サンプルパン）との間に発生する熱量変化を連続的に測定し記録した。なお、データ処理を含む装置の取り扱いは、各装置で指示された方法及び手順に従った。【００４３】
３．元素分析機器
装置：ＣＨＮ：ジェイ・サイエンスラボ社  有機元素分析マイクロコーダー  ＪＭ１０
装置：ＣＨＮ：ヤナコ・テクニカルサイエンス社  ＣＨＮ  ＣＯＲＤＥＲ  ＭＴ−６型
Ｆ：ＤＩＯＮＥＸ社  ＩＣＳ−１５００−１  Ｉｏｎ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ
ａｐｈｙ【００４４】
核磁気共鳴（以下、１Ｈ  ＮＭＲ）スペクトルは、テトラメチルシランを標準物質として、ケミカルシフト値をδ値（ｐｐｍ）にて記載した。分裂パターンは一重線をｓ、二重線をｄ（ダブルダブレットはｄｄ）、多重線をｍ、ブロード一重線をｂｒｓで示した。【００４５】
［実施例１］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶の製造【００４６】
【化２】
2018062382.tif 000003
【００４７】
Step 1: ２，６−ジクロロ−９−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２イル）−９Ｈ−プリン（２）の製造
２，６−ジクロロ−９Ｈ−プリン（５０ｇ、２６４．５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（５００ｍｌ）にｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．３６ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）を加え、次いで滴下ロートを用いて３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（５５．３６ｇ、６６１．４ｍｍｏｌ）加えた後に７０−８０℃にて4時間攪拌した。反応液を室温に冷却し、アンモニア（１５ｍｌ）を加えて１５分間攪拌した。次いで水（４００ｍｌ）を加えて酢酸エチル（３００ｍｌ×３）にて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮した。得られた残渣をヘキサン（５００ｍｌ）中で攪拌し、析出した固体をろ過して減圧乾燥し、表記化合物（７０ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δppm: 8.96 (s, 1H), 5.75 (dd, J=2.01, 10.79 Hz, 1H), 3.99-4.12 (m, 1H), 3.69-3.83 (m, 1H), 2.20-2.34 (m, 1H), 1.93-2.07 (m, 2H), 1.69-1.84 (m, 1H), 1.39-1.67 (m, 2H).【００４８】
Step 2：２−クロロ−６−（モルホリン−４−イル）−９−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−９Ｈ−プリン（３）の製造
２，６−ジクロロ−９−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２イル）−９Ｈ−プリン（１７ｇ、６２．２ｍｏｌ）のメタノール溶液（３００ｍｌ）に、０℃でモルホリン（１１．９２ｇ、１３６．９ｍｏｌ）を加え、室温にて３時間攪拌した。溶媒を減圧留去した後に、水（３００ｍｌ）を加え、ジクロロメタン（５００ｍｌ×３）にて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムにて乾燥した後に減圧濃縮し、表記化合物（２０ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δppm: 8.42 (s, 1H), 5.60 (dd, J=2.13, 10.92 Hz, 1H), 4.01 (dd, J=1.76, 10.79 Hz, 2H), 3.64-3.77 (m, 7H), 2.51 (td, J=1.76, 3.51 Hz, 1H), 2.11-2.25 (m, 1H), 1.90-2.01 (m, 2H), 1.69-1.81 (m, 1H), 1.53-1.62 (m, 2H) .【００４９】
Step 3：［２−クロロ−６−（モルホリン−４−イル）−９−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−９Ｈ−プリン−８イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（４）の製造
２，６−ジクロロ−９−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２イル）−９Ｈ−プリン（１ｇ、３．０９ｍｏｌ）及び、下記方法にて製造されたエチル−４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２．２ｇ、９．２８ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（７０ｍｌ）にリチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ）テトラヒドロフラン溶液（４．６ｍｌ、９，２８ｍｏｌ）を−７８℃にて滴下し、３０分攪拌した後、室温にて９０分攪拌した。反応液を飽和塩化アンモニウム溶液（１００ｍｌ）に注ぎ、酢酸エチル（１５０ｍｌ×２）にて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（２−５％メタノール／ジクロロメタン）にて精製し、表記化合物（１．０７ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δppm:5.67-5.84 (m, 1H), 4.57-4.85 (m, 1H), 3.95-4.55 (m, 5H), 3.80 (t, J=3.76 Hz, 4H), 3.52-3.77 (m, 7H), 2.80-3.18 (m, 2H), 2.48-2.64 (m, 5H), 2.45 (td, J=3.45, 7.15 Hz, 1H), 1.98 (br. s., 4H), 1.96 (m, 4H).【００５０】
エチル−４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートの製造
モルホリンピペリジン（５ｇ、２９．２mol：ＡＫサイエンティフィック社製）のアセトニトリル／ジクロロメタン溶液（１００：２０ｍｌ）に室温にてトリエチルアミン（５．９ｇ、５８．５mmol）を加え、０℃に冷却した。エチルクロロホルメート（３．８ｇ、３５．１mmol）を加えて０℃で１０分攪拌した後、室温にて２−３時間攪拌した。反応終了後、反応混合物をろ過した。ろ液に水（４００ｍｌ）を加え、ジクロロメタン（５００ｍｌ×２）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後に減圧濃縮し、表記化合物（５．８ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δppm:3.86-4.09 (q, 2H), 3.86-4.09 (bs, 2H), 3.50-3.62 (m, 4H), 2.76 (br. s., 2H), 2.36-2.46 (m, 4H), 2.30 (tt, J=3.54, 11.01 Hz, 1H), 1.65-1.82 (m, 2H), 1.05-1.35 (m, 2H), 1.05-1.35 (t, 3H).【００５１】
Step 4：［２−クロロ−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（５）の製造
［２−クロロ−６−（モルホリン−４−イル）−９−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−９Ｈ−プリン−８イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（４００ｍｇ、０．７７mmol）のエタノール溶液（１５ｍｌ）にｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１４６ｍｇ、０．７７mmol）を加え、２時間加熱還流した。ＴＬＣにてチェックしたところ未反応の出発物質が検出されたため、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（４３ｍｇ、０．２３mmol）を加え、１時間加熱還流した。反応液を室温に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）を加え、ジクロロメタン（１５０ｍｌ×２）にて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムにて乾燥した後に減圧濃縮した。得られた残渣をヘキサン中で攪拌し、析出した固体をろ過して減圧乾燥し、表記化合物（２９０ｍｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δppm:13.57-14.14 (m, 1H), 4.88 (d, J=14.15 Hz, 1H), 4.46 (d, J=13.39 Hz, 1H), 4.01 (br s, 5H), 3.73 (t, J=4.55 Hz, 4H), 3.49-3.63 (m, 4H), 3.23 (t, J=11.62 Hz, 1H), 2.84-2.95 (m, 1H), 2.41-2.49 (m, 4H), 1.75-1.96 (m, 2H), 1.24-1.51 (m, 2H).【００５２】
Step 5：［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（５）の製造
［２−クロロ−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（２００ｍｇ、０．４６mmol）のアセトニトリル溶液（４ｍｌ）に１−メチル ４−ピラゾールボロン酸ピナコールエステル（１４３ｇ、０．６９mmol）、炭酸ナトリウム水溶液（１２１．５５ｍｇ、１．１mmol、２ｍｌ）及び［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロリド（１８．７ｍｇ、０．０２２mmol）を加え、アルゴンガスを用いて１５分間パージした。次いで１４０℃で８−１０時間攪拌した。反応混合物を室温に冷却した後に水（８０ｍｌ）を加え、１０％メタノール／ジクロロメタン（１００ｍｌ×２）にて抽出した。有機層を硫酸ナトリウムにて乾燥した後に減圧濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィ−（８−２０％メタノール／ジクロロメタン）を用いて精製し、減圧濃縮して表記化合物の結晶（１８３ｍｇ）を得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折及びＮＭＲを測定した。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δppm: 13.41-13.53 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.85-4.97 (m, 1H), 4.43-4.53 (m, 1H), 4.08-4.39 (m, 4H), 3.88 (s, 3H), 3.76 (d, J=4.77 Hz, 4H), 3.56 (d, J=4.27 Hz, 4H), 3.17-3.29 (m, 2H), 2.83-2.94 (m, 1H), 2.46 (d, J=5.02 Hz, 4H), 1.78-1.94 (m, 2H), 1.30-1.48 (m, 2H).
表１に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００５３】
【表１】
2018062382.tif 000004
【００５４】
［実施例２］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶の製造
実施例１にて製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（２．０ｇ）に２，２，２−トリフルオロエタノール（２００ｍＬ）、ＤＭＳＯ（２００ｍＬ）を室温で加えて、完全に溶解させた。エバポレーターを用いて、２，２，２−トリフルオロエタノールを除き、超低温フリーザー（−８０  ℃）により内容物を凍結させた。ＶｉｒＴｉｓの凍結乾燥機（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｐｌｕｓ）で凍結乾燥し、得られたアモルファス（２．０ｇ）に、水／メタノール（３：９７，  ４０ｍＬ）を加え、室温で３日間攪拌させ、析出した固体をろ取した。その後、室温で３時間減圧乾燥し、結晶１．９ｇ（収率９５％）を得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折を測定した。
表２に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００５５】
【表２】
2018062382.tif 000005
【００５６】
［実施例３］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶の製造
実施例２で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（６６０ｍｇ）にジオキサン（６６ｍＬ）を加え、完全に溶解させた。この溶液をガラス製試験管２１本に２  ｍＬずつ分注した。超低温フリーザー（−８０℃）により内容物を凍結させ、ＶｉｒＴｉｓの凍結乾燥機（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｐｌｕｓ）で凍結乾燥した。得られたアモルファス（２０ｍｇ）に水（４００  μＬ）を加え、１５℃で４日間攪拌させ、析出した固体をろ取した。上記方法で調製したアモルファスを用い、同様の操作をさらに２回繰り返し、ろ取して得られた個体を合わせた。その後、室温で３時間減圧乾燥し、結晶６０ｍｇ（収率１００％）を得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折を測定した。
表３に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００５７】
【表３】
2018062382.tif 000006
【００５８】
［実施例４］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶の製造
実施例２で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（６６０ｍｇ）にジオキサン（６６ｍＬ）を加え、完全に溶解させた。この溶液をガラス製試験管２１本に２  ｍＬずつ分注した。
超低温フリーザー（−８０℃）により内容物を凍結させ、ＶｉｒＴｉｓの凍結乾燥機（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｐｌｕｓ）で凍結乾燥した。得られたアモルファス（２０ｍｇ）に１−ＰｒＯＨ（４００μＬ）を加え、１５℃で３日間攪拌させ、析出した固体をろ取した。その後、室温で３時間減圧乾燥し、結晶２０ｍｇ（収率１００％）を得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折を測定した。
表４に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００５９】
【表４】
2018062382.tif 000007
【００６０】
［実施例５］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶の製造
実施例１にて製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（１１  ｍｇ）を、示差熱熱重量同時測定装置（ＴＧ−ＤＴＡ）用のアルミパンに入れ、示差熱熱重量同時測定装置内で毎分１０℃の昇温速度で室温から２３０℃まで昇温させた後、速やかにアルミパンを取り出した。この操作を約１００回繰り返し、結晶１．１ｇを得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折を測定した。
表５に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００６１】
【表５】
2018062382.tif 000008
【００６２】
［実施例６］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶の製造
実施例１で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（５ｇ）をカラムクロマトグラフィー（５−１０％メタノール（３％アンモニア含有）／ジクロロメタン）を用いて精製した。溶液を減圧濃縮した残渣をジクロロメタン（３００ｍｌ）、メタノール（２５ｍｌ）及びＭＰＴＭＴレジン（２．５ｇ）に懸濁させ、５−６時間攪拌した。攪拌終了後、レジンをろ過した溶液を減圧にて濃縮し、そこへヘキサン（３００ｍｌ）を加えて攪拌した。そのものをろ過して５０℃で乾燥し、結晶（５ｇ）を得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折を測定した。
表６に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００６３】
【表６】
2018062382.tif 000009
【００６４】
［実施例７］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶の製造
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン（１１．９ｇ）をジクロロメタン（６００ｍＬ）に溶解させたものにメタノール（１００ｍＬ）と金属スカベンジャーとしてＭＰ−ＴＭＴレジン（６．７ｇ）を加えて室温にて7時間程度攪拌した後、セライトを用いてろ過した。エバポレーターにて減圧濃縮後、ヘキサン（１００ｍＬ）を加えて再び減圧濃縮を行なった。本操作を5回繰り返した後にヘキサン（４５０ｍＬ）を加えて15分程度攪拌し、析出した固体をろ過して５０℃で減圧乾燥し、結晶を得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折を測定した。
表７に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００６５】
【表７】
2018062382.tif 000010
【００６６】
［実施例８］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  ｐ−トルエンスルホン酸塩の結晶の製造
実施例１で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（１．２ｇ）に、水／アセトニトリル（３：９７，  １２ｍＬ）を加え、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（４８５ｍｇ）を加え、室温で３日間攪拌させ、析出した固体をろ取した。その後３時間減圧下乾燥し、標記の結晶１．７  ｇを得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折及びＮＭＲを測定した。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δppm: 13.57 (1H, brs), 8.24 (1H, s), 7.94 (1H, s), 7.49-7.46 (2H, m), 7.12-7.08 (2H, m), 5.29 (1H, d, J = 12.47 Hz), 4.65 (1H, d, J = 11.62 Hz), 4.25 (4H, brs), 4.03 (2H, d, J= 11.90 Hz), 3.89 (3H, s), 3.76 (4H, dd, J= 4.82 Hz), 3.70-3.64 (2H, m), 3.56 (1H, brs), 3.47 (2H, d, J = 11.34 Hz), 3.23-3.11 (3H, m), 2.88-2.82 (1H, m), 2.51-2.49 (1H, m), 2.28 (3H, s), 2.22-2.14 (2H, m), 1.68-1.57 (2H, m)
表８に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００６７】
【表８】
2018062382.tif 000011
【００６８】
［実施例９］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  クエン酸塩の結晶の製造
実施例２で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（５０ｍｇ）にエタノール（１０００μＬ）を加え、１．０００ｍｏｌ／Ｌ濃度のクエン酸水溶液１０３．８μＬを加え、４０℃で３日間攪拌させた。析出した固体をろ取し、標記の結晶４８ｍｇを得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折及びＮＭＲを測定した。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δppm: 13.49 (1H, brs), 12.50-10.00 (2H, brs), 8.23 (1H, s), 7.93 (1H, s), 4.99 (1H, d, J= 12.47 Hz), 4.51 (1H, d, J = 13.32 Hz), 4.25 (4H, brs), 3.88 (3H, s), 3.76 (4H, dd, J = 4.82 Hz), 3.62 (4H, dd, J = 4.25 Hz), 3.25-3.20 (1H, m), 2.90-2.85 (1H, m), 2.73-2.59 (9H, m), 2.51-2.49 (2H, m), 1.98-1.90 (2H, m), 1.50-1.40 (2H, m)
表９に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００６９】
【表９】
2018062382.tif 000012
【００７０】
［実施例１０］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  クエン酸塩の結晶の製造
実施例２で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（１．２ｇ）にメタノール（１０００μＬ）を加え、１．０００ｍｏｌ／Ｌ濃度のクエン酸水溶液１０３．８μＬを加え、４０℃で３日間攪拌させた。析出した固体をろ取し、標記の結晶５３ｍｇを得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折及びＮＭＲを測定した。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δppm: 13.48 (1H, brs), 12.50-10.00 (2H, brs), 8.23 (1H, s), 7.93 (1H, s), 4.99 (1H, d, J= 12.75 Hz), 4.51 (1H, d, J = 12.19 Hz), 4.25 (4H, brs), 3.88 (3H, s), 3.76 (4H, dd, J = 4.82 Hz), 3.62 (4H, dd, J = 4.39 Hz), 3.25-3.20 (1H, m), 2.90-2.85 (1H, m), 2.73-2.59 (9H, m), 2.51-2.49 (2H, m), 1.98-1.90 (2H, m), 1.51-1.38 (2H, m)
表１０に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００７１】
【表１０】
2018062382.tif 000013
【００７２】
［実施例１１］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  シュウ酸塩の結晶の製造
実施例２で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（３３０ｍｇ）にジオキサン（６６ｍＬ）を加え溶解させた。この溶液をナス型フラスコに２０  ｍＬ分注し、０．５００ｍｏｌ／Ｌ濃度のシュウ酸水溶液４１６  μＬを加え、超低温フリーザー（−８０℃）により内容物を凍結させた。ＶｉｒＴｉｓの凍結乾燥機（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｐｌｕｓ）で凍結乾燥し、得られたアモルファスに水／メタノール（３：９７，  ２ｍＬ）を加え、室温で１２日間攪拌させ、析出した結晶をろ取した。得た結晶を１日間風乾し、標記の結晶９７ｍｇを得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折及びＮＭＲを測定した。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δppm: 13.49 (1H, brs), 8.24 (1H, s), 7.93 (1H, s), 5.09 (1H, d, J = 12.52 Hz), 4.55 (1H, d, J = 13.17 Hz), 4.29-4.24 (4H, brs), 3.89 (3H, s), 3.76 (4H, dd, J = 4.82 Hz), 3.70 (4H, dd, J = 3.85 Hz), 3.24-3.19 (1H, m), 2.98 (1H, brs), 2.95-2.85 (5H, m), 2.51-2.49 (2H, m), 2.06-1.99 (2H, m), 1.59-1.45 (2H, m)
表１１に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００７３】
【表１１】
2018062382.tif 000014
【００７４】
［実施例１２］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  グルタル酸塩の結晶の製造
実施例２で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（３３０ｍｇ）にジオキサン（６６ｍＬ）を加え溶解させた。この溶液をナス型フラスコに２０ｍＬ分注し、１．０００ｍｏｌ／Ｌ濃度のグルタル酸水溶液２０８  μＬを加え、超低温フリーザー（−８０℃）により内容物を凍結させた。ＶｉｒＴｉｓの凍結乾燥機（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｐｌｕｓ）で凍結乾燥し、得られたアモルファスにエタノール  ２  ｍＬを加え、室温で３日間攪拌させ、析出した固体をろ取した。得た結晶を１日間風乾し、標記の結晶１０１ｍｇを得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折及びＮＭＲを測定した。
1H NM(500MHz,DMSO-d6)：δppm: 13.46 (1H, brs), 12.05 (2H, brs), 8.23 (1H, s), 7.93 (1H, s), 4.92 (1H, d, J= 12.75 Hz), 4.47 (1H, d, J = 12.47 Hz), 4.25 (4H, brs), 3.89 (3H, s), 3.75 (4H, dd, J = 4.82 Hz), 3.57 (4H, dd, J = 4.54 Hz), 3.26-3.20 (1H, m), 2.91-2.85 (1H, m), 2.51-2.47 (5H, m), 2.26-2.22 (4H, m), 1.92-1.83 (2H, m), 1.73-1.67 (2H, m), 1.48-1.33 (2H, m)
表１２に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００７５】
【表１２】
2018062382.tif 000015
【００７６】
［実施例１３］
［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルホリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルホリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノン  リンゴ酸塩の結晶の製造
実施例２で製造した［２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−６−（モルフォリン−４−イル）−９Ｈ−プリン−８−イル］［４−（モルフォリン−４−イル）ピペリジン−１−イル］メタノンの結晶（１．２ｇ）にジオキサン（６６ｍＬ）を加え溶解させた。この溶液をナス型フラスコに２０  ｍＬ分注し、１．０００ｍｏｌ／Ｌ濃度のりんご酸水溶液２０８μＬを加え、超低温フリーザー（−８０℃）により内容物を凍結させた。ＶｉｒＴｉｓの凍結乾燥機（Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｐｌｕｓ）で凍結乾燥し、得られたアモルファスにメタノール２ｍＬを加え、室温で３日間攪拌させ、析出した固体をろ取した。得た結晶を１日間風乾し、標記の結晶１０２ｍｇを得た。本結晶について、粉末Ｘ線回折及びＮＭＲを測定した。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：δppm: 13.47 (1H, brs), 12.50-9.00 (1H, brs), 8.23 (1H, s), 7.93 (1H, s), 4.95 (1H, d, J= 13.04 Hz), 4.49 (1H, d, J = 12.75 Hz), 4.24 (4H, brs), 4.22-4.19 (1H, m), 3.88 (3H, s), 3.75 (4H, dd, J = 4.82 Hz), 3.59 (4H, dd, J = 4.54 Hz), 3.26-3.20 (1H, m), 2.90-2.85 (1H, m), 2.62-2.39 (9H, m), 1.95-1.86 (2H, m), 1.50-1.35 (2H, m)
表１３に粉末Ｘ線回折スペクトルにおける回折角（２θ）、格子面間隔（Ｄ値）、及び相対強度を記載する。【００７７】
【表１３】
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【００７８】
［ＴＧ／ＤＴＡ分析］
実施例１〜１３の結晶について、ＴＧ／ＤＴＡ分析を行った。結果を図１４〜図２６に示す。
いずれの結晶も２００℃以上の融点を有しており、実施例１〜１３の結晶について、熱安定性が高いことが明らかとなった。【００７９】
（試験例１）ｉｎ  ｖｉｔｒｏ酵素アッセイ
Ｋｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ発光キナーゼアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ製）を、キナーゼ活性を測定するのに使用した。このアッセイでは、キナーゼ反応後に溶液中に残っているＡＴＰの量を測定した。ＰＩ３Ｋδ阻害に対する化合物の効果を確認するため、３８４ウェルプレートにおいて１５μｌ／ウェルの最終体積で、化合物（Ｉ）の非存在下および存在下で、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＤＴＴ、６０μＭのホスファチジルイノシトール二リン酸（ＰＩＰ２）、および１０μＭのＡＴＰを補充したアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＣＨＡＰＳ）を含有する反応混合物に２．２９μｇ／ｍｌの組換えＰＩ３Ｋδ酵素（Ｐｒｏｔｅｒｏｓ、ドイツ）を添加した。反応混合物を室温で２時間インキュベートした。インキュベーション期間の最後に、等体積のＫｉｎａｓｅ−Ｇｌｏ  ｐｌｕｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｖ３７７２）を１ウェル当たりに添加し、暗所で室温にて１０分間インキュベートした後に、発光を測定した。結果を、酵素を含有しないブランクに対する試験試料の発光単位を測定することによって計算した。【００８０】
化合物（Ｉ）について、特異的な組換え酵素（Ｐｒｏｔｅｒｏｓ、ドイツ）ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、およびＰＩ３Ｋγを使用して、各キナーゼについての阻害活性を試験した。キナーゼアッセイ（ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ、およびＰＩ３Ｋδ）のアッセイ条件は、以下の通りであった。
酵素：２．２９μｇ／ｍＬ、ＡＴＰ：１０μＭ、ＰＩＰ２基質：６０μＭ
反応時間：２時間
略語：
ＨＥＰＥＳ：２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸
ＣＨＡＰＳ：３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート
ＭｇＣｌ２：塩化マグネシウム
ＰＩＰ２：ホスファチジルイノシトール４，５−二リン酸
ＤＴＴ：ジチオトレイトール
ＡＴＰ：アデノシン三リン酸【００８１】
実施例１に準じて製造した化合物（Ｉ）のＰＩ３Ｋδに対する阻害活性（ＩＣ５０）は、１４ｎＭであり、極めて良好な阻害活性を有していた。これに対して、その他のキナーゼに対する阻害活性（ＩＣ５０）は、ＰＩ３Ｋα：１０００ｎＭ以上、ＰＩ３Ｋβ：１００００ｎＭ以上、ＰＩ３Ｋγ：１０００ｎＭ以上となっており、化合物（Ｉ）はＰＩ３Ｋδを選択的に阻害することが明らかとなった。【００８２】
（試験例２）マウス脾細胞におけるフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）誘導インターフェロン（ＩＦＮ）−ガンマ放出
細胞ベースアッセイ系において、マウス脾細胞におけるマイトジェン誘導ＩＦＮ−γ放出に対する化合物の効果を評価した［Ｂｌｏｏｄ（２０１０）１１５：２２０３〜２２１３ページ；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００４）３．１２．１〜３．１２．２０］。
マウス脾細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスの脾臓から得、９６ウェル組織培養プレート中で細胞２５万個／ウェルの密度で蒔いた。化合物（Ｉ）で脾細胞を処置し、その後、ＰＨＡ（１０μｇ／ｍｌ）で４８時間刺激することによって、化合物（Ｉ）がＩＦＮ−γ放出を阻害する効果を評価した。細胞培養液上清中のＩＦＮ−γ放出を、製造者のプロトコール（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５５１３８）に従ってＥＬＩＳＡによって定量した。【００８３】
化合物（Ｉ）の活性（ＩＣ５０）は、６ｎＭであり、極めて良好な結果を示した。【００８４】
（試験例３）治療効果を試験するための方法
（試験例３ａ）ブラウンノルウェーラットにおけるオボアルブミン誘導気道好酸球増多モデル
プロトコールは、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１；１２６：９〜１５ページ、およびＪ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２０１１；３３７：１４５〜５４ページに記載されているものに従った。雄のブラウンノルウェーラットを、０日目および７日目にオボアルブミン１ｍｇおよび水酸化アルミニウム１００ｍｇの懸濁液（滅菌した０．９％の生理食塩水中）を腹腔内注射することによって感作した。１４日目に、化合物（Ｉ）を経口強制飼養によってラットに投与した。経口投与して１時間後に、動物をパースペックスチャンバー内に入れ、５％のオボアルブミンのエアロゾルに１０分間曝露した。化合物（Ｉ）を、１日１回または２回、１４日目および１５日目に投与した。オボアルブミンチャレンジをして４８時間後に、動物を安楽死させ、気管支肺胞洗浄液を収集した。細胞懸濁液を処理し、絶対好酸球数を数えた。
化合物（Ｉ）は、０．３ｍｇ／Ｋｇ,ｂｉｄのＥＤ５０を示したことにより、有効であることが確認された。【００８５】
（試験例３ｂ）Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるイエダニ（ＨＤＭ）誘導慢性喘息モデル
プロトコールは、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、２００４；１６９：３７８〜３８５ページに記載された通りに従った。雌のＢａｌｂ／ｃマウスを、精製したＨＤＭ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ）抽出物に、最大で５連続週にわたって５日／１週間で鼻腔内に曝露した（生理食塩水２０μｌ中のタンパク質２５μｇ）。化合物（Ｉ）を、３週目から５週目に１日２回経口投与した。最後のＨＤＭ曝露から４８時間後に、動物を安楽死させ、気管支肺胞洗浄液を収集した。細胞懸濁液を処理し、絶対好酸球数を数えた。
化合物（Ｉ）は、０．１ｍｇ／Ｋｇ，ｂｉｄのＥＤ５０を示したことにより、有効であることが確認された。【００８６】
（試験例４）ラットおよびマウスにおける経口生物学的利用能（ＢＡ）を試験するための方法
（試験例４ａ）ラットにおける経口生物学的利用能（ＢＡ）
雌のウィスターラット（２１０±１０ｇ）に、化合物（Ｉ）を、静脈内によるポリソルベートおよびデキストロース（ｐＨ５．０）を含有するビヒクル中の２．０ｍｇ／ｍＬの溶液として、または経口経路のためのメチルセルロース中の１．０ｍｇ／ｍＬの懸濁液として投与した。最終的な用量は、３．０ｍｇ／体重１ｋｇ（静脈内）または１０．０ｍｇ／体重１ｋｇ（経口）であった。血漿試料を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ方法を使用して化合物（Ｉ）について分析した。薬物動態パラメータの推定は、モーメント解析を使用して行った。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア６．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ）を、ＰＫパラメータを推定するのに利用した。経口生物学的利用能は、用量正規化経口および静脈内血漿曝露を使用して計算した。
化合物（Ｉ）は、経口療法として使用するのに適用できる生物学的利用能を示し、生物学的利用能は８８であった。【００８７】
（試験例４ｂ）マウスにおける経口生物学的利用能（ＢＡ）
雄のスイスマウス（２３±３ｇ）に、化合物（Ｉ）を、静脈内によるポリソルベートおよびデキストロース（ｐＨ５．０）を含有するビヒクル中の０．３ｍｇ／ｍＬの溶液として、または経口経路のためのメチルセルロース中の１．０ｍｇ／ｍＬの懸濁液として投与した。最終的な用量は、３．０ｍｇ／体重１ｋｇ（静脈内）または１０．０ｍｇ／体重１ｋｇ（経口）であった。血漿試料は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ方法を使用して化合物（Ｉ）について分析した。薬物動態パラメータの推定は、モーメント解析を使用して行った。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア６．１（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ）を、ＰＫパラメータを推定するのに利用した。経口生物学的利用能は、用量正規化経口および静脈内血漿曝露を使用して計算した。
化合物（Ｉ）は、経口療法として使用するのに適用できる生物学的利用能を示し、生物学的利用能は、１００であった。【００８８】
（試験例５）溶解性を試験する方法
化合物（Ｉ）の１０ｍｍｏｌ／Ｌの溶液をＤＭＳＯ中に調製し、１０ｍｍｏｌ／ＬのＤＭＳＯ原液１００μＬを、標識したガラス管中に、日本薬局方第１液（ＪＰ１）について１個、および日本薬局方第２液（ＪＰ２）について１個の、計２個に分注した。各ガラス管からＤＭＳＯを蒸発させた後、ＪＰ１およびＪＰ２液５００μＬをそれぞれ、各ガラス管中に添加した。これらのガラス管を１分間超音波処理し、５分毎に３０秒の間隔で３０分間シェーカー上に置いた。ガラス管を、暗所で室温にて１時間置き、溶液をメンブレンフィルターによって濾過した。濾液を２倍および１０倍に希釈した。得られた試験溶液を、ＵＰＬＣ（標準品−ＤＭＳＯ中の１０ｍｍｏｌ／Ｌの溶液を５０％の水性アセトニトリル溶液で連続希釈して、２つの溶液；１００μｍｏｌ／Ｌの標準液および５μｍｏｌ／Ｌの標準液を調製する）を使用して標準に対して分析および定量した。
化合物（Ｉ）のＪＰ１に対する溶解度は１２００μｇ／ｍＬ以上、ＪＰ２に対する溶解度は１７０μｇ／ｍＬであり、極めて良好な溶解性を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【国際調査報告】
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