(57)【要約】  本発明は、エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を患者に投与することにより、患者において、子宮がん、食道がん、すい臓がん、肝臓がん、胆道がん、十二指腸がん、肺がん、腎臓がん、肉腫、脳腫瘍、尿路上皮がん、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から選ばれる少なくとも一つの腫瘍の成長を抑制する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を患者に投与することにより、患者において、子宮がん、食道がん、すい臓がん、肝臓がん、胆道がん、十二指腸がん、肺がん、腎臓がん、肉腫、脳腫瘍、尿路上皮がん、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から選ばれる少なくとも一つの腫瘍の成長を抑制する方法。
【請求項２】
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩がメシル酸エリブリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を含み、患者において、子宮がん、食道がん、すい臓がん、肝臓がん、胆道がん、十二指腸がん、肺がん、腎臓がん、肉腫、脳腫瘍、尿路上皮がん、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から選ばれる少なくとも一つの腫瘍の成長を抑制するための医薬組成物。
【請求項４】
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩がメシル酸エリブリンである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を含み、子宮がん、食道がん、すい臓がん、肝臓がん、胆道がん、十二指腸がん、肺がん、腎臓がん、肉腫、脳腫瘍、尿路上皮がん、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から選ばれる少なくとも一つの腫瘍に対する治療剤。
【請求項６】
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩がメシル酸エリブリンである、請求項５に記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を投与することにより、腫瘍の成長を抑制する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記式（Ｉ）で表されるエリブリンは、微小管の伸長を阻害することにより細胞周期を停止させる微小管ダイナミクス阻害剤であり、乳癌の治療において、医薬品として利用されている。【０００３】
【化１】
2017188350.tif 000002
【０００４】
特許文献１には、エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩およびその製造方法が開示されている。
特許文献２および３には、エリブリンおよびそのメシル酸（メタンスルホン酸）塩であるメシル酸エリブリンの製造方法が開示されている。
特許文献４には、エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を患者に投与することによる患者のがんの成長を抑制する方法が開示されている。
また、特許文献５には、特定の第二の抗がん剤と併用してエリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を患者に投与することによる患者のがんの治療方法が開示されている。
さらに、特許文献６には、第二の治療手段と併用してエリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を患者に投与することによる患者のがんの治療方法が開示されている。
特許文献７には、メシル酸エリブリンを含むリポソーム組成物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第９９／６５８９４号
【特許文献２】国際公開第２００５／１１８５６５号
【特許文献３】国際公開第２０１１／０９４３３９号
【特許文献４】米国特許第６４６９１８２号明細書
【特許文献５】米国公開２００６／１０４９８４号明細書
【特許文献６】米国特許第６６５３３４１号明細書
【特許文献７】国際公開第２０１０／１１３９８４号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、患者のある種の腫瘍の成長を抑制する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは鋭意検討を行った結果、エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を患者に投与することにより、上記課題を解決することができることを見出し、本発明を完成した。【０００８】
すなわち、本発明は、以下のとおりである。
［１］
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を患者に投与することにより、患者において、子宮がん（子宮内膜がん、子宮頸がん）、食道がん、すい臓がん、肝臓がん（肝細胞がん、胆管がん）、胆道がん、十二指腸がん、肺がん（中皮腫）、腎臓がん（副腎皮質がん）、肉腫（脂肪肉腫、悪性線維性組織球腫、平滑筋肉腫、ユーイング肉腫）、脳腫瘍（神経膠芽腫）、尿路上皮がん（膀胱がん）、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から選ばれる少なくとも一つの腫瘍の成長を抑制する方法。
［２］
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩がメシル酸エリブリンである、［１］に記載の方法。
［３］
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を含み、患者において、子宮がん（子宮内膜がん、子宮頸がん）、食道がん、すい臓がん、肝臓がん（肝細胞がん、胆管がん）、胆道がん、十二指腸がん、肺がん（中皮腫）、腎臓がん（副腎皮質がん）、肉腫（脂肪肉腫、悪性線維性組織球腫、平滑筋肉腫、ユーイング肉腫）、脳腫瘍（神経膠芽腫）、尿路上皮がん（膀胱がん）、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から選ばれる少なくとも一つの腫瘍の成長を抑制するための医薬組成物。
［４］
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩がメシル酸エリブリンである、［３］に記載の医薬組成物。
［５］
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を含み、子宮がん（子宮内膜がん、子宮頸がん）、食道がん、すい臓がん、肝臓がん（肝細胞がん、胆管がん）、胆道がん、十二指腸がん、肺がん（中皮腫）、腎臓がん（副腎皮質がん）、肉腫（脂肪肉腫、悪性線維性組織球腫、平滑筋肉腫、ユーイング肉腫）、脳腫瘍（神経膠芽腫）、尿路上皮がん（膀胱がん）、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から選ばれる少なくとも一つの腫瘍に対する治療剤。
［６］
エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩がメシル酸エリブリンである、［５］に記載の治療剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩を含むリポソーム組成物を患者に投与することにより、患者において、ある種の腫瘍の成長を抑制する新規な方法を提供することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】各種腫瘍発生ヌードマウスにおけるメシル酸エリブリンを含むリポソーム組成物のin vivo 抗腫瘍活性を示す。
【図１Ｂ】各種腫瘍発生ヌードマウスにおけるメシル酸エリブリンを含むリポソーム組成物のin vivo 抗腫瘍活性を示す。
【図１Ｃ】各種腫瘍発生ヌードマウスにおけるメシル酸エリブリンを含むリポソーム組成物のin vivo 抗腫瘍活性を示す。
【図１Ｄ】各種腫瘍発生ヌードマウスにおけるメシル酸エリブリンを含むリポソーム組成物のin vivo 抗腫瘍活性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明を、発明を実施するための形態により具体的に説明するが、本発明は、以下の発明を実施するための形態に限定されるものではなく、種々変形して実施することができる。
本発明において参照される文献に開示されている内容は、本発明に参照として取り込まれる。
【００１２】
本発明におけるリポソーム組成物は、エリブリンまたはその薬剤学的に許容される塩（以下、「エリブリン等」と記載する）を含む。
本発明において、「薬剤学的に許容される塩」は、無機酸塩、有機酸塩のいずれであってもエリブリンと塩を形成するものであれば特に限定されないが、例えば、塩酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メシル酸（メタンスルホン酸）塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（pamoate）等が挙げられ、好ましくは、塩酸塩、硫酸塩、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩およびメシル酸塩であり、より好ましくはメシル酸塩である。
エリブリンの薬剤学的に許容される塩としては、エリブリンと、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カルシウム、ナトリウム、亜鉛またはジエタノールアミンとの塩であってもよい。
本発明において、エリブリン等として、メシル酸エリブリンが好ましい。
エリブリン等は、特許文献１または米国特許第６２１４８６５号公報に記載される化合物またはその塩であり、抗腫瘍および抗有糸分裂活性を含めて薬理学的活性を有する。特許文献１は、エリブリン等が、抗腫瘍剤として、メラノーマ、線維肉腫、単球性白血病、結腸ガン、卵巣ガン、乳ガン、骨肉腫、前立腺ガン、肺ガンおよびｒａｓ−転換繊維芽細胞等に抗腫瘍活性を有することを開示する。エリブリン等は、特許文献１−３に記載の製造法で得られる。
【００１３】
本発明において、「リポソーム」とは、脂質二重層により包囲された内相を有する微細閉鎖小胞を意味する。リポソームは、小さな１枚膜リポソーム（ＳＵＶ：small unilamellar vesicle）、大きな１枚膜リポソーム（ＬＵＶ：large unilamellar vesicle）、さらに大きな１枚膜リポソーム（ＧＵＶ：giant unilamellar vesicle）、同心円状の複数の膜を有する多重層リポソーム（ＭＬＶ：multilamellar vesicle）、同心円状でなく不規則に複数の膜を有するリポソーム（ＭＶＶ：Multivesicular vesicle）等を含む。
【００１４】
本発明において、「リポソーム内相」とは、リポソームの脂質二重層に包囲された水性領域を意味し、「内水相」および「リポソーム内水相」と同義で用いる。「リポソーム外相」とは、リポソームが液体中に分散している場合に、リポソームの脂質二重層に包囲されていない領域（すなわち、内相および脂質二重層以外の領域）を意味する。
【００１５】
本発明において、「リポソーム組成物」とは、リポソームを含み、リポソーム内相にエリブリン等をさらに含む組成物を意味する。本発明において、リポソーム組成物は、固体状および液体状のものを含む。
【００１６】
本発明において、「リポソーム分散液」とは、リポソームを含む組成物であって、リポソーム内相にエリブリン等が封入される前の組成物を意味する。
【００１７】
本発明において、「リポソーム準備液」とは、リポソームを含む組成物であって、リポソーム内相にエリブリン等を封入するために、リポソーム外相を調整する前の組成物を意味する。
【００１８】
［脂質］
本発明において、リポソームは、膜構成成分として、リン脂質および／またはリン脂質誘導体を含むことが好ましい。
リン脂質およびリン脂質誘導体としては、例えば、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、力ルジオリビン、スフィンゴミエリン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロール、セラミドホスホリルグリセロールホスフアート、１，２−ジミリストイル−１，２ーデオキシホスファチジルコリン、プラスマロゲンおよびホスファチジン酸等が挙げられる。
リン脂質およびリン脂質誘導体は、これらのうち１種または２種以上の組み合わせであってもよい。
リン脂質およびリン脂質誘導体における脂肪酸残基は特に限定されないが、例えば、炭素数１２〜２０の飽和または不飽和の脂肪酸残基等が挙げられ、具体的には、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸およびリノール酸等の脂肪酸由来のアシル基が挙げられる。また、リン脂質およびリン脂質誘導体として、卵黄レシチンおよび大豆レシチン等の天然物由来のリン脂質ならびに不飽和脂肪酸残基に部分的にまたは完全に水素添加した部分水素添加卵黄レシチン、(完全)水素添加卵黄レシチン、部分水素添加大豆レシチンおよび(完全)水素添加大豆レシチン等を用いることもできる。
リポソームを調製する際に用いるリン脂質および／またはリン脂質誘導体の配合量(モル分率)は、特に限定されないが、リボソーム膜成分全体に対して、１０〜８０％が好ましく、３０〜６０％がより好ましい。
【００１９】
本発明において、リポソームは、膜構成成分として、リン脂質および／またはリン脂質誘導体以外に、膜安定化剤として、コレステロールおよびコレスタノール等のステロール類、炭素数８〜２２の飽和または不飽和のアシル基を有する脂肪酸類、ならびにα−トコフェロール等の酸化防止剤を含んでもよい。
リポソームを調製する際に用いるステロール類の配合量（モル分率）は、特に限定されないが、リポソーム膜成分全体に対して、１〜６０％が好ましく、１０〜５０％がより好ましく、３０〜５０％がさらに好ましい。
脂肪酸類の配合量（モル分率）は、特に限定されないが、リポソーム膜成分全体に対して、０〜３０％が好ましく、０〜２０％がより好ましく、０〜１０％がさらに好ましい。
酸化防止剤の配合量（モル分率）は酸化防止効果が得られる量が添加されれば特に限定されないが、リポソーム膜成分全体に対して、０〜１５％が好ましく、０〜１０％がより好ましく、０〜５％がさらに好ましい。
【００２０】
本発明において、リポソームは、膜構成成分として、機能性脂質または修飾脂質を含んでいてもよい。
機能性脂質として、例えば、血中滞留性脂質誘導体、温度変化感受性脂質誘導体およびｐＨ感受性脂質誘導体等が挙げられる。
修飾脂質として、例えば、ＰＥＧ化脂質、糖脂質、抗体修飾脂質およびペプチド修飾脂質等が挙げられる。
【００２１】
血中滞留性脂質誘導体としては、例えば、ホスフォエタノールアミンとメトキシポリエチレングリコールの縮合体である、Ｎ−｛カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−２０００｝−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォエタノールアミン、Ｎ−｛カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−５０００｝−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォエタノールアミン、Ｎ−｛カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−７５０｝−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォエタノールアミン、Ｎ−｛カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−２０００｝−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォエタノールアミン（ＭＰＥＧ２０００−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン）およびＮ−｛カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−５０００｝−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフォエタノールアミン等のポリエチレングリコール誘導体（メトキシポリエチレングリコール縮合体など）等が挙げられる。
【００２２】
リポソームを調製する際に用いる血中滞留性脂質誘導体の配合量（モル分率）は、特に限定されないが、リポソーム膜成分全体の０〜５０％が好ましく、０〜３０％がより好ましく、０〜２０％がさらに好ましい。
【００２３】
温度変化感受性脂質誘導体としては、例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリン等が挙げられる。リポソームが温度変化感受性脂質誘導体を含有することにより、特定の温度においてリポソームを崩壊させる、リポソームの表面特性を変化させるなどが可能となる。さらに腫瘍等の標的部位の加温と組み合わせることで、標的部位でリポソームが崩壊し、標的部位に活性化合物を放出させることなどが可能となる。
【００２４】
ｐＨ感受性脂質誘導体としては、例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン等が挙げられる。リポソームがｐＨ感受性脂質誘導体を含有することにより、エンドサイトーシスによりリポソームが細胞へ取り込まれる際にリポソームとエンドソームとの膜融合を促し、活性化合物の細胞質への送達を改良することなどが可能となる。
【００２５】
糖脂質、抗体修飾脂質およびペプチド修飾脂質としては、標的細胞または標的組織に親和性のある糖、抗体またはペプチドを結合した脂質が挙げられる。修飾脂質を用いることで、能動的にリポソームを標的細胞または標的組織に送達することができる。
【００２６】
実用可能なレベルで膜透過性を有するリポソームのための膜構成成分の組成は、当業者であれば、必要に応じて後述する実施例を参照することで、活性化合物や標的組織などに応じて適宜設定することができる（菊池寛他、「リポソームI−調製法と検定法−」、細胞工学、(1983) 2(9)：pp.1136-1149および当該文献に引用される文献等参照）。また、リポソーム組成物は、固形癌などの標的組織へのターゲティングばかりでなく、血液癌などへの活性化合物の送達にも用いることができる。
リポソームの膜構成成分は、好ましくは、リン脂質、コレステロールおよびメトキシポリエチレングリコール縮合体を含む。
【００２７】
［リポソーム組成物］
本発明におけるリポソーム組成物において、エリブリン等は脂質膜を有するリポソームに封入されている。リポソーム組成物において、エリブリン等は脂質二重層に分配されていてもよい。
本発明のリポソーム組成物は、特許文献７に記載された方法によって得ることが可能である。
リポソーム組成物が固体状である場合、後述するように所定の溶媒に溶解または懸濁することで、液体状のリポソーム組成物とすることができる。また、リポソーム組成物が凍結した固体の場合には室温放置等により融解させることで、液体状のリポソーム組成物とすることができる。
【００２８】
本発明におけるリポソーム組成物は、（１）エリブリン等を含む限り、限定されるものではない。本発明におけるリポソーム組成物は、さらに、（２）少なくとも一つのアンモニウム塩ならびに（３）少なくとも一つの酸、塩、塩基および／またはアミノ酸を含んでいてもよい。
【００２９】
（２）の少なくとも一つのアンモニウム塩として、例えば、塩化アンモニウム、ホウ酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム、酒石酸アンモニウム、コハク酸アンモニウムおよびリン酸アンモニウム等が挙げられ、好ましくは硫酸アンモニウム、クエン酸アンモニウムおよび酒石酸アンモニウムである。
【００３０】
（３）の酸、塩、塩基および／またはアミノ酸は、酸として、例えば、アスコルビン酸、安息香酸、コハク酸、クエン酸、グルタミン酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、酒石酸、炭酸、乳酸、ホウ酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、アジピン酸、塩酸および硫酸、塩として、例えば、前記酸のナトリウム塩、前記酸のカリウム塩および前記酸のアンモニウム塩、塩基として、例えば、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、アンモニア、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウム、ならびにアミノ酸として、例えば、アルギニン、ヒスチジンおよびグリシン等が挙げられる。
好ましくは、リポソーム内相の（３）の酸、塩、塩基および／またはアミノ酸が、塩酸、酢酸、乳酸、酒石酸、コハク酸、クエン酸およびリン酸、前記酸のナトリウム塩、ならびに水酸化ナトリウムおよびアンモニアであり、より好ましくは、酢酸、乳酸、酒石酸、クエン酸およびリン酸、前記酸のナトリウム塩、ならびに水酸化ナトリウムおよびアンモニアである。
【００３１】
リポソーム組成物の各成分の一例は、表１に記載される。別の具体例では、９ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムの代わりに、９６ｍｇ／ｍＬシュクロースを浸透圧剤（リポソーム外相）として使用することができる。
【００３２】
【表１】
2017188350.tif 000003
【００３３】
［医薬組成物］
本発明のリポソーム組成物は、抗腫瘍剤の医薬組成物として用いることができる。
【００３４】
本発明のリポソーム組成物を医薬組成物として用いる場合、リポソーム組成物は、注射（静注、動注、局所注射）、経口、経鼻、経皮、経肺および点眼等により投与することができ、特に静脈注射、皮下注射、皮内注射、動脈内注射の他、標的とする細胞や臓器に対しての局所注射等の注射が好ましい。経口投与する場合のリポソーム組成物の剤形としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、カプセル剤および内服液剤等が挙げられる。非経口投与する場合のリポソーム組成物の剤形としては、例えば、注射剤、点滴剤、点眼剤、軟膏剤、座剤、懸濁剤、パップ剤、ローション剤、エアゾール剤およびプラスター剤等が挙げられ、中でも、注射剤および点滴剤が好ましい。
【００３５】
リポソーム組成物が液剤である場合、そのまま使用に供することができる。リポソーム組成物を医薬として用いる場合、医者や患者により、例えば固形製剤を封入したバイアルに溶媒を注入することで、このような用時調製を行うことができる。また、液体状のリポソーム組成物を凍結させた固形製剤の場合、凍結状態で保存し、使用時に室温で放置融解または加温による急速融解により液体状に戻すことで液剤として使用に供することができる。
【００３６】
医薬組成物の投与量は、対象となる疾患の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程度等により著しく異なる。エリブリン等の投与量は、特に限定されないが、例えば、好適な塩であるメシル酸エリブリンは、通常、成人１日当たり、０．１〜１０ｍｇ／ｍ２（体表面積）である。メシル酸エリブリンは、１週間、２週間または３週間に１回、０．５〜３ｍｇ／ｍ２（体表面積）の用量で投与されることが好ましい。メシル酸エリブリンは、１週間、２週間または３週間に１回、０．５〜２ｍｇ／ｍ２（体表面積）の用量で投与されることがより好ましい。
別の態様としては、メシル酸エリブリンは、１週間、２週間または３週間に１回、約1．５ｍｇ／ｍ２（体表面積）の用量で投与されることが好ましい。
より具体的には、リポソーム組成物に含まれるメシル酸エリブリンの投与用量は、２１日サイクルで１日目に０．５〜１．４ｍｇ／ｍ２の静脈投与、あるいは２８日サイクルで１日目および１５日目に、０．５〜１．５ｍｇ／ｍ２の静脈投与である。
【００３７】
リポソーム組成物に含まれるエリブリン等は、１日１回で、あるいは１日用量を数回にわけて投与することができる。
【００３８】
本発明の医薬組成物として、例えば、リポソーム内相にエリブリン等を、０．０１〜３００ｍｇ／ｍＬ含むリポソーム組成物を投与することができる。
【００３９】
本発明の注射剤の医薬組成物の具体例の１つは、ＨＳＰＣ、コレステロールおよびＭＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥからなる脂質膜を有するリポソームに取り込まれた０．２０ｍｇ／ｍＬメシル酸エリブリン（０．１８ｍｇ／ｍＬ エリブリン）を含み、注射剤として製剤化される。また、その医薬組成物は、等張化剤としてのシュクロースまたは塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、クエン酸およびＬ−ヒスチジン、ｐＨを調整するための水酸化ナトリウムおよび塩酸を含む。その医薬組成物は、患者に直接投与するか、あるいは、患者への投与前に、０.００３５ｍｇ／ｍＬ以上から０．２ｍｇ／ｍＬ未満の濃度範囲に生理食塩水で希釈される。
【００４０】
［腫瘍の種類］
本発明の腫瘍の成長を阻害する方法の対象となる腫瘍のタイプは、子宮がん（子宮内膜がん、子宮頸がん）、食道がん、すい臓がん、肝臓がん（肝細胞がん、胆管がん）、胆道がん、十二指腸がん、肺がん（中皮腫）、腎臓がん（副腎皮質がん）、肉腫（脂肪肉腫、悪性線維性組織球腫、平滑筋肉腫、ユーイング肉腫）、脳腫瘍（神経膠芽腫）、尿路上皮がん（膀胱がん）、甲状腺がん、胃がんおよびリンパ腫からなる群から少なくとも一つの腫瘍が選択される。
好ましい腫瘍のタイプは、子宮がん（子宮内膜がん、子宮頸がん）、すい臓がん、肝臓がん（肝細胞がん、胆管がん）、胆道がん、肉腫（脂肪肉腫、平滑筋肉腫、ユーイング肉腫）、脳腫瘍（神経膠芽腫）、尿路上皮がん（膀胱がん）、甲状腺がんおよび胃がんである。
より好ましい腫瘍のタイプは、子宮がん（子宮内膜がん、子宮頸がん）、すい臓がん、肝細胞がん、平滑筋肉腫、ユーイング肉腫、神経膠芽腫、尿路上皮がん（膀胱がん）、甲状腺がんおよび胃がんである。
さらに好ましい腫瘍のタイプは、子宮がん（子宮内膜がん、子宮頸がん）、すい臓がん、平滑筋肉腫、尿路上皮がん（膀胱がん）および胃がんである。
【実施例】
【００４１】
本発明を実施例および比較例を挙げて具体的に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。【００４２】
［実施例１］
メシル酸エリブリンを含有するリポソーム組成物（以下、「Ｅ７３８９−ＬＦ」と記載する場合がある）は、表１に記載された成分で、以下の方法に従って製造した。得られたＥ７３８９−ＬＦの抗腫瘍活性を評価した。【００４３】
＜リポソーム内相用水溶液の調製＞
硫酸アンモニウムおよびクエン酸一水和物を純水で溶解し、希釈して、２００ｍＭ  硫酸アンモニウム／６０ｍＭ  クエン酸水溶液を作成した。２００ｍＭ  硫酸アンモニウム／６０ｍＭ  クエン酸水溶液のｐＨをアンモニア水でｐＨ５．５に調整後、純水を用いて希釈し、１００ｍＭ  硫酸アンモニウム／３０ｍＭ  クエン酸水溶液を得た。【００４４】
＜リポソーム準備液の調製＞
水素添加大豆ホスファチジルコリンおよびコレステロールおよびＭＰＥＧ２０００−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンを７１：２３：２７の重量比に従い、それぞれ秤量した。それぞれクロロホルムに溶解し、これらの溶液を混合した後にロータリーエバポレーターでクロロホルムを減圧留去し、リピッドフィルムを作成した。得られたリピッドフィルムに、作成したリポソーム内相用水溶液を約８０℃に加温して添加し、撹拌してリポソーム準備液を調製した。約８０℃に加温したエクストルーダー（Ｌｉｐｅｘ  Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ社製）を用いて整粒し、整粒したリポソーム準備液を得た。【００４５】
＜リポソーム分散液の調製＞
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−５０カラムを用い、得られたリポソーム準備液を０．９％塩化ナトリウム／１０ｍＭ  ヒスチジン水溶液（ｐＨ＝７．６）で溶出することで、リポソーム外相を０．９％塩化ナトリウム／１０ｍＭ  ヒスチジン水溶液へと置換した。リポソーム外相を置換した後、４００，０００×ｇで３０分間遠心した。遠心後、再分散し、０．９％塩化ナトリウム／１０ｍＭ  ヒスチジン水溶液を用いて液量を調整し、リポソーム分散液を得た。【００４６】
＜メシル酸エリブリン溶液の調製＞
メシル酸エリブリンを０．９％塩化ナトリウム／１０ｍＭ  ヒスチジン水溶液で溶解し、メシル酸エリブリン溶液を得た。【００４７】
＜リポソーム組成物の調製＞
ガラス容器中、リポソーム分散液とメシル酸エリブリン溶液をそれぞれ混合し、６０℃の水浴中で３分間インキュベートすることにより、リポソーム内相にメシル酸エリブリンが導入されたリポソーム組成物を得た。リポソーム組成物に０．９％塩化ナトリウム／１０ｍＭ  ヒスチジン水溶液を添加し、０．２２μｍのポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）フィルターを用いて濾過滅菌することで、０．１ｍｇ／ｍＬから０．５ｍｇ／ｍＬのメシル酸エリブリンの目標濃度(例えば、０．２４ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ)のリポソーム組成物を得た。【００４８】
＜メシル酸エリブリン水溶液の調製＞
５ｍｇ／ｍＬまたは３．５ｍｇ／ｍＬのメシル酸エリブリン水溶液（以下、「Ｅ７３８９」と記載する場合がある）を得るため、メシル酸エリブリンを、０．９％塩化ナトリウム／１０ｍＭ  ヒスチジン水溶液に溶解した。【００４９】
＜抗腫瘍活性の測定＞
がん細胞株は、理研バイオリソースセンター（Riken Bioresource Center: ＲＢＣ、日本（茨城））、American Type Culture Collection (ＡＴＣＣ、アメリカ合衆国(Manassas, VA))、Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH（German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH： ＤＳＭＺ、ドイツ(Braunschweig)）、ヒューマンサイエンス研究資源バンク（ヒューマンサイエンス振興財団： ＨＳＲＲＢ、日本（大阪））またはＤＳファーマバイオメディカル株式会社（ＤＳ−Ｐｈａｒｍａ、日本（大阪））から購入、あるいは九州がんセンター、鹿児島大学または東北大学加齢医学研究所医用細胞資源センターからご厚意で譲り受けた。
各がん細胞株における培養条件および移植条件を表２および表３に示す。表中の「馴化」において○として記載するがん細胞株については、各がん細胞株を事前にマウス皮下に接種し、成長した腫瘍から得た。
表２においてがん細胞株として示すＫＢ細胞は、当初口腔上皮がん由来とされてきていたが、近年ＨｅＬａ細胞（子宮頸がん）のコンタミネーションであることが明らかとなった（http://www.atcc.org/products/all/CCL-17.aspx#characteristics）。また、ＩＴＳはとして、ITS-G supplement(和光純薬，#090-06741)を用いた。【００５０】
【表２】
2017188350.tif 000004
【表３】
2017188350.tif 000005
【００５１】
接種の初日に、がん細胞はトリプシン処理で採取し、各々の培地で洗浄および懸濁した。次に、採取したがん細胞のいくつかは、ＧｅｌＴｒｅｘ（Ｇｉｂｃｏ，#12760-021またはA14132-02）と１：１で混合した。これらのがん細胞は、２６ゲージの注射針を使用して、０．１ｍＬ容量で、マウス（ＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕ）の右腋窩部の近くに接種した。【００５２】
腫瘍体積が１２０ｍｍ３から４２０ｍｍ３に達した後、腫瘍体積およびマウス体重が、試験群間（試験グループあたり、５−９マウス）で、実質的に等しくなるように、マウスを群分けした（０日）。各々のモデルでの初期の平均腫瘍体積（０日でのＴＶ）を表２および表３に治療開始時の腫瘍体積（ｍｍ３）として示した。【００５３】
群分け後投与直前に、Ｅ７３８９−ＬＦまたはＥ７３８９を、生理食塩水で希釈して、投与検体を調製した。投与検体は、群分け後（０日）および群分け7日後に、体重１０ｇあたり０．１ｍＬの投与容量で静脈内に投与した。【００５４】
ノギスを使って、経時的に腫瘍サイズを測定し、以下の計算式に基づいて、腫瘍体積を決定した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅の２乗（ｍｍ２）×１／２
長さ：腫瘍の最長径
幅：長さに対する垂直径
相対的腫瘍体積（ＲＴＶ）＝腫瘍体積（Ｘ日）／腫瘍体積（０日）
各試験群の腫瘍体積の平均±ＳＤを計算した。
結果を図１Ａ〜図１Ｄに示す。【００５５】
＜統計解析＞
各々投与群の統計処理は、log RTVを使って、two-way RM-ANOVAで行った。有意確率P値が、P＜０．０５（５％）の時、統計的に有意差があるとした。統計解析には、Prism6ソフトウェア（Graphpad Software, Inc.）を使用した。【００５６】
＜結果＞【００５７】
表４および表５に、各種ヒト腫瘍移殖モデルにおけるＥ７３８９−ＬＦとＥ７３８９の抗腫瘍活性に関して、Log RTVの値を使ったＲＭ−ＡＮＯＶＡ法による統計解析結果を示した。１８のヒト異種移植モデルのすべてにおいて、Ｅ７３８９−ＬＦおよびＥ７３８９の抗抗腫瘍活性は、ｖｅｈｉｃｌｅ群よりも統計的に有意に強かった。また、１１モデルにおいて、Ｅ７３８９−ＬＦの抗腫瘍活性が、Ｅ７３８９の抗腫瘍活性よりも統計的に有意に強かった。
表中、「Ｙｅｓ１」は、Ｅ７３８９−ＬＦまたはＥ７３８９の腫瘍体積変化をｖｅｈｉｃｌｅ群の腫瘍体積変化と比較して、統計的に有意な差があることを示す。また、「Ｙｅｓ２」は、Ｅ７３８９−ＬＦの腫瘍体積変化をＥ７３８９の腫瘍体積変化と比較して、統計的に有意な差があることを示す。一方、「ＮＳ」は、Ｅ７３８９−ＬＦの腫瘍体積変化をＥ７３８９の腫瘍体積変化と比較して、統計的に有意な差がないことを示す。
「day○」との記載は、RM-ANOVAにて検定を行った実験期間を示す。【００５８】
【表４】
2017188350.tif 000006
【表５】
2017188350.tif 000007
【図１Ａ】
2017188350.tif 000008
【図１Ｂ】
2017188350.tif 000009
【図１Ｃ】
2017188350.tif 000010
【図１Ｄ】
2017188350.tif 000011
【国際調査報告】
2017188350.tif 000012
2017188350.tif 000013
2017188350.tif 000014
2017188350.tif 000015
2017188350.tif 000016
2017188350.tif 000017