【手続補正書】
【提出日】令和1年5月10日(2019.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）フェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）をコードする１つまたは複数の遺伝子と、
ｂ）非天然フェニルアラニントランスポーターをコードする１つまたは複数の遺伝子と
を含む、遺伝子操作された細菌。
【請求項２】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子が、天然では前記ＰＡＬ遺伝子に付随していないプロモーターに作動可能に連結しており、前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子が、天然では前記フェニルアラニントランスポーター遺伝子に付随していないプロモーターに作動可能に連結している、請求項１に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項３】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターが、誘導可能なプロモーターであり、前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターが、誘導可能なプロモーターである、請求項２に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項４】
Ｌ−アミノ酸デアミナーゼ（ＬＡＡＤ）をコードする１つまたは複数の遺伝子であって、天然では前記ＬＡＡＤ遺伝子に付随していない誘導可能なプロモーターに作動可能に連結している遺伝子をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項５】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターおよび前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターが、同じプロモーターの別々のコピーである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項６】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子および前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子が、同じプロモーターの同じコピーに作動可能に連結している、請求項２〜４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項７】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターおよび前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターが、異なるプロモーターである、請求項２〜４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項８】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーター、前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーター、および前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターが、異なるプロモーターである、請求項４または請求項７に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項９】
前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子が、前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子および前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子のプロモーターとは異なるプロモーターに作動可能に連結している、請求項４〜８のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１０】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子、前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子、および前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーター（複数可）が、外因性環境条件によって誘導される、請求項４〜９のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１１】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子および前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーター（複数可）が、哺乳動物の小腸に見出される外因性環境条件によって誘導される、請求項３〜１０のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１２】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子および前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーター（複数可）が、低酸素または嫌気的条件下で誘導される、請求項３〜１１のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１３】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子および前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーター（複数可）が、ＦＮＲ応答性プロモーター、ＡＮＲ応答性プロモーター、およびＤＮＲ応答性プロモーターからなる群から選択される、請求項３〜１２のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１４】
前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子が、哺乳動物の消化管に天然に存在する環境要因によって誘導されるプロモーターの制御下にある、請求項４〜１３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１５】
前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子が、哺乳動物の消化管に天然には存在しない環境要因によって誘導されるプロモーターの制御下にある、請求項４〜１３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１６】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターおよび前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子に作動可能に連結している前記プロモーターが、哺乳動物の消化管に天然には存在しない環境要因によって誘導される、請求項３〜１５のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１７】
前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子が、前記細菌における染色体上に位置する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１８】
前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子が、前記細菌におけるプラスミド上に位置する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項１９】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子が、前記細菌におけるプラスミド上に位置する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２０】
前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子が、前記細菌における染色体上に位置する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２１】
前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子が、前記細菌におけるプラスミド上に位置する、請求項４〜２０のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２２】
前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子が、前記細菌における染色体上に位置する、請求項４〜２０のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２３】
前記ＰＡＬが、アナベナ・バリアビリス由来（ＰＡＬ１）またはフォトラブダス・ルミネセンス由来（ＰＡＬ３）である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２４】
前記フェニルアラニントランスポーターがＰｈｅＰである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２５】
前記操作された細菌が、前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子の１〜５個のコピー、前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子の１〜５個のコピー、および任意選択で前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子の１〜５個のコピーを含む、請求項４〜２４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２６】
前記操作された細菌が、前記ＰＡＬをコードする前記遺伝子の３〜５個のコピー、前記フェニルアラニントランスポーターをコードする前記遺伝子の２個のコピー、および前記ＬＡＡＤをコードする前記遺伝子の１個のコピーを含む、請求項２５に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２７】
前記細菌がプロバイオティクス細菌である、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２８】
前記細菌が、バクテロイデス属、ビフィドバクテリウム属、クロストリジウム属、エシェリキア属、ラクトバチルス属、およびラクトコッカス属からなる群から選択される、請求項２７に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項２９】
前記細菌が、大腸菌株Ｎｉｓｓｌｅである、請求項２８に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項３０】
前記細菌が、前記細菌が哺乳動物の消化管に存在する場合に相補される遺伝子の栄養要求株である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項３１】
前記哺乳動物の消化管がヒトの消化管である、請求項３０に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項３２】
前記細菌が、ジアミノピメリン酸またはチミジン生合成経路における酵素の栄養要求株である、請求項３０または３１に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項３３】
前記細菌が、前記細菌に対して有毒な物質をコードする遺伝子を保有するようにさらに操作され、前記遺伝子が、哺乳動物の消化管に天然には存在しない環境要因によって誘導されるプロモーターの制御下にある、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の遺伝子操作された細菌。
【請求項３４】
請求項１〜３３のいずれか一項に記載の細菌、および薬学的に許容される担体を含む薬学的に許容される組成物。
【請求項３５】
経口または直腸投与用に製剤化された、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
高フェニルアラニン血症を低減させるか、または高フェニルアラニン血症に関連する疾患を治療する方法であって、請求項３４または３５に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【請求項３７】
前記疾患が、フェニルケトン尿症、古典的または典型的フェニルケトン尿症、異型フェニルケトン尿症、永続的軽度高フェニルアラニン血症、非フェニルケトン尿症高フェニルアラニン血症、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ欠損症、補因子欠損症、ジヒドロプテリジンレダクターゼ欠損症、テトラヒドロプテリンシンターゼ欠損症、瀬川病、および肝疾患からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
高フェニルアラニン血症を低減させるか、または高フェニルアラニン血症に関連する疾患を治療するための薬剤の調製における、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の細菌の使用。
【請求項３９】
前記疾患が、フェニルケトン尿症、古典的または典型的フェニルケトン尿症、異型フェニルケトン尿症、永続的軽度高フェニルアラニン血症、非フェニルケトン尿症高フェニルアラニン血症、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ欠損症、補因子欠損症、ジヒドロプテリジンレダクターゼ欠損症、テトラヒドロプテリンシンターゼ欠損症、瀬川病、および肝疾患からなる群から選択される、請求項３８に記載の使用。