(57)【要約】  課題  癌の診断及び／又は治療、特に乳癌又は膀胱癌の診断及び/又は治療に有用であることが期待される、抗ヒトＭＵＣ１抗体Fａｂフラグメント、及び当該Fａｂフラグメントを含む複合体を用いた診断手段及び／又は治療手段の提供。  解決手段  配列番号８又は１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント、及び当該Fａｂフラグメントを含む複合体。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号８又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号８又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号８又は配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【請求項２】
以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【請求項３】
以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【請求項４】
以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、請求項３に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【請求項５】
配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、請求項４に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【請求項６】
配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、請求項４に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【請求項７】
１以上の標識部と、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体。
【請求項８】
標識部が（ｉ）配位子及びリンカー、（ｉｉ）配位子、（ｉｉｉ）蛍光色素及びリンカー、又は（ｉｖ）蛍光色素である、請求項７に記載の複合体。
【請求項９】
標識部が（ｉ）配位子及びリンカー又は（ｉｉ）配位子である、請求項８に記載の複合体。
【請求項１０】
配位子が、下式（Ａ）で表される配位子である、請求項９に記載の複合体：
【化１】
2018092885.tif 000019
式中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント又はリンカーへの結合を表す。
【請求項１１】
標識部が、下式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーである、請求項１０に記載の複合体：
【化２】
2018092885.tif 000020
式中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントへの結合を表す。
【請求項１２】
抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、そのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｓ）基の炭素原子と結合している、請求項１１に記載の複合体。
【請求項１３】
以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される、複合体：
（ａ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、請求項１２に記載の複合体；
（ｂ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが請求項６に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、請求項１２に記載の複合体；並びに
（ｃ）上記（ａ）及び上記（ｂ）の混合物である、複合体。
【請求項１４】
更に金属を含む、請求項９ないし１３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１５】
金属が金属放射性同位元素である、請求項１４に記載の複合体。
【請求項１６】
金属が８９Ｚｒである、請求項１５に記載の複合体。
【請求項１７】
更に８９Ｚｒを含む、請求項１３に記載の複合体。
【請求項１８】
標識部が（ｉ）蛍光色素及びリンカー又は（ｉｉ）蛍光色素である、請求項８に記載の複合体。
【請求項１９】
蛍光色素が、下式（Ｂ）及び下式（Ｃ）からなる群より選択される蛍光色素である、請求項１８に記載の複合体：
【化３】
2018092885.tif 000021
【化４】
2018092885.tif 000022
式（Ｂ）及び（Ｃ）中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント又はリンカーへの結合を表す。
【請求項２０】
波線が抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントへの結合を表し、前記抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、そのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｏ）基の炭素原子と結合している、請求項１９に記載の複合体。
【請求項２１】
標識部が、式（Ｂ）で表される蛍光色素である、請求項２０に記載の複合体。
【請求項２２】
以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される、複合体：
（ａ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである請求項２１に記載の複合体；
（ｂ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが請求項６に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、請求項２１に記載の複合体；並びに
（ｃ）上記（ａ）及び上記（ｂ）の混合物である、複合体。
【請求項２３】
標識部が、式（Ｃ）で表される蛍光色素である、請求項２０に記載の複合体。
【請求項２４】
以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される、複合体：
（ａ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、請求項２３に記載の複合体；
（ｂ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが請求項６に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、請求項２３に記載の複合体；並びに
（ｃ）上記（ａ）及び上記（ｂ）の混合物である、複合体。
【請求項２５】
以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、ポリヌクレオチド：
（ａ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；及び
（ｂ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２６】
以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、ポリヌクレオチド：
（ａ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；及び
（ｂ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２７】
以下の（ａ）及び／又は（ｂ）を含む、発現ベクター：
（ａ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｂ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２８】
以下の（ａ）及び／又は（ｂ）を含む、発現ベクター：
（ａ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｂ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項２９】
以下の（ａ）から（ｄ）からなる群より選択される、宿主細胞：
（ａ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｄ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項３０】
以下の（ａ）から（ｄ）からなる群より選択される、宿主細胞：
（ａ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｄ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項３１】
以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程を含む、抗ヒ卜ＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法：
（ａ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、請求項１に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項３２】
以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法：
（ａ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、請求項５に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項３３】
請求項３１又は３２に記載の方法により抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程を含む、標識部と抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体を生産する方法。
【請求項３４】
Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程が、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程である、請求項３３に記載の複合体を生産する方法。
【請求項３５】
更に、当該複合体の配位子を金属放射性同位元素で標識させる工程を含む、請求項３４に記載の複合体を生産する方法。
【請求項３６】
Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程が、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）蛍光色素とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）蛍光色素と直接共有結合させる工程である、請求項３３に記載の複合体を生産する方法。
【請求項３７】
１種類以上の請求項７ないし請求項２４のいずれかに記載の複合体、及び薬学的に許容される担体を含む診断用組成物。
【請求項３８】
複合体が、請求項１７、２２及び２４のいずれか１項に記載の複合体である、請求項３７に記載の診断用組成物。
【請求項３９】
複合体が、請求項１７に記載の複合体である、請求項３８に記載の診断用組成物。
【請求項４０】
複合体が、請求項２２に記載の複合体である、請求項３８に記載の診断用組成物。
【請求項４１】
複合体が、請求項２４に記載の複合体である、請求項３８に記載の診断用組成物。
【請求項４２】
ヒトＭＵＣ１を発現する癌の診断に用いる、請求項３７ないし４１のいずれか１項に記載の診断用組成物。
【請求項４３】
癌が、乳癌又は膀胱癌である、請求項４２に記載の診断用組成物。
【請求項４４】
１種類以上の請求項７ないし請求項２４のいずれかに記載の複合体、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４５】
複合体が、請求項１７、２２及び２４のいずれか１項に記載の複合体である、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
複合体が、請求項２４に記載の複合体である、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
ヒトＭＵＣ１を発現する癌を治療するための医薬組成物である、請求項４４ないし４６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
癌が、乳癌又は膀胱癌である、請求項４７に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
乳癌又は膀胱癌の診断用組成物及び/又は乳癌又は膀胱癌を治療するための医薬組成物の製造のための、請求項７ないし２４のいずれか１項に記載の複合体の使用。
【請求項５０】
乳癌又は膀胱癌の診断及び/又は治療において使用するための、請求項７ないし２４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５１】
請求項７ないし２４のいずれか１項に記載の複合体を手術前又は手術中に対象に投与することを含む、乳癌又は膀胱癌の診断方法。
【請求項５２】
請求項７ないし２４のいずれか１項に記載の複合体の治療有効量を投与する工程を含む、乳癌又は膀胱癌の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントに関する。本発明はまた、当該抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む診断用及び/又は治療用組成物、及び、当該Ｆａｂフラグメントを用いて癌を診断及び/又は治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ムチン１（Ｍｕｃｉｎ１：ＭＵＣ１）は、乳腺、気管及び消化管等の上皮組織を構成する上皮細胞の内腔側に発現する膜結合型糖タンパク質である（Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ，  ２００４  Ｊａｎ；４（１）：４５−６０．）。ＭＵＣ１は乳癌（Ｍｏｄ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２００５  Ｏｃｔ；１８（１０）：１２９５−３０４．）、肺癌（Ｈｕｍ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２００８  Ｊａｎ；３９（１）：１２６−３６．）、大腸癌（Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｏｎｃｏｌ．，  ２０００  Ｊａｎ；１６（１）：５５−６４．）、膀胱癌（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，  ２０１４  Ｍａｒ；９（３）：ｅ９２７４２．）、皮膚癌（Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，  ２０００  Ｓｅｐ；３７（３）：２１８−２３．）、甲状腺癌（Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２００３  Ｊｕｌ；２００（３）：３５７−６９．）、胃癌（Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２０００  Ｍａｒ；１９０（４）：４３７−４３．）、膵臓癌（Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｏｎｃｏｌ．，  ２００４  Ｊａｎ；２４（１）：１０７−１３．）、腎臓癌（Ｍｏｄ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２００４  Ｆｅｂ；１７（２）：１８０−８．）、卵巣癌（Ｇｙｎｅｃｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．，  ２００７  Ｊｕｎ；１０５（３）：６９５−７０２．）及び子宮頚癌（Ａｍ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐａｔｈｏｌ．，  ２００４  Ｊｕｌ；１２２（１）：６１−９．）等の癌細胞で過剰に発現しており、ＭＵＣ１は癌病巣を検出するための標的分子として有用である（Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ，  ２００４  Ｊａｎ；４（１）：４５−６０．、Ｐａｔｈｏｌ．  Ｒｅｓ．  Ｐｒａｃｔ．，  ２０１０  Ａｕｇ１５；２０６（８）：５８５−９．）。【０００３】
ＭＵＣ１は細胞外ドメインに存在する２０アミノ酸のタンデムリピート配列であるＨＧＶＴＳＡＰＤＴＲＰＡＰＧＳＴＡＰＰＡ（配列番号１５）の９番目のスレオニンがＯ−グリコシル化される。癌細胞ではこのＯ−グリコシル化が不完全であり、Ｔ（Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα１−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）、Ｔｎ（ＧａｌＮＡｃα１−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）及び２，３ＳＴ（Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−Ｏ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）等のＯ−グリコシル化が癌特異的に起こることが知られている（特許文献１、非特許文献１）。正常組織のＭＵＣ１は、これらの癌特異的なＯ−グリコシル化は受けないため、ヒト癌特異的ＭＵＣ１はヒトでの各種癌を治療するための標的分子として特に有用である。【０００４】
このような抗ヒト癌特異的ＭＵＣ１抗体として、例えば１Ｂ２抗体（特許文献１）、ＰａｎｋｏＭａｂ抗体（非特許文献２）、５Ｅ５抗体（特許文献２）等が知られている。これらの抗体のうち、１Ｂ２抗体はＰａｎｋｏＭａｂ抗体に比較してヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する特異性が高いことが報告されている（特許文献１）。また、１Ｂ２抗体の解離定数は３．７×１０−１０Ｍ（特許文献１）であり、５Ｅ５抗体の解離定数は、１．７×１０−9Ｍ（非特許文献１）であることが報告されている。【０００５】
一方、癌病巣の可視化にも大きなニーズがある。まず、癌病巣の早期発見にニーズがある。現在のＸ線撮像やエコー、コンピューター断層撮影（Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：ＣＴ）、核磁気共鳴イメージング（Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ：ＭＲＩ）、陽電子放出断層撮影（Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：ＰＥＴ）、単一光子エミッション断層撮影（Ｓｉｎｇｌｅ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｃｏｍｐｕｔｅｄ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：ＳＰＥＣＴ）等の診断モダリティでは、微小癌を感度良く検出できない。微小癌を検出できれば、原発癌であれば手術や放射線療法により治癒できるし、転移癌であっても早期の薬剤介入により延命、治癒しうる。次に、癌病巣と良性病変との鑑別にニーズがある。現在の診断モダリティでは、良性病変を癌病巣と誤診してしまうことが多い。癌病巣と良性病変を鑑別できれば、不要な生検を減少できる。さらに、手術中の癌病巣の可視化にニーズがある。現在では、乳癌及び膀胱癌、皮膚癌をはじめとする癌の手術中において、癌病巣の位置や広がりを正確に把握できないために、癌病巣を完全に切除できず、癌細胞が遺残したまま手術を終了してしまう危険がある。更に、的確な癌病巣の位置の把握にニーズがある。血中の腫瘍マーカーの上昇で、術後の再発及び転移が疑われても、現在の診断モダリティでは微小な転移癌を可視化できないため、本当に転移しているのか、どの臓器に転移しているのか分からず、最適な治療の選択ができない。したがって、ヒト癌特異的ＭＵＣ１に特異的に結合する抗体を体内診断薬として用いて、蛍光イメージング及びγ線イメージング（ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ）等の分子イメージングの技法により癌病巣を可視化することも有用である。しかし現在までの抗ヒト癌特異的ＭＵＣ１抗体を体内診断薬として使用された例は、知られていない。【０００６】
また、抗体と癌治療薬を結合させた抗体医薬にニーズがある。抗体医薬は特異的に癌病巣に癌治療剤を送達しうる点から副作用の少ない癌治療方法として期待されており、放射性同位元素を結合させた抗体を用いる放射免疫療法（鶴尾隆著、「がんの分子標的治療」南山堂出版、２００８年９月１５日発行、ｐ．３３２〜３３６、Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．，２０１６  Ｊｕｌ；５７（７）：１１０５−１１．、Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．，２０１０  Ｎｏｖ；３７（８）：９４９−５５．）や、ＩＲＤｙｅ７００ＤＸを結合させた抗体を用いる光免疫療法（Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．，  ２０１１  Ｄｅｃ；１７（１２）：１６８５−９１．）等が報告されている。ＩＲＤｙｅ７００ＤＸは、診断にも用いることができる近赤外蛍光色素であり、これを癌細胞膜に発現する抗原に対する抗体に結合させ、癌組織に特異的に集積させた後に近赤外光を照射することで、ＩＲＤｙｅ７００ＤＸによる光毒性効果により、癌特異的に細胞死を誘導できることが報告されている（Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．，  ２０１１  Ｄｅｃ；１７（１２）：１６８５−９１．）。しかし現在まで、抗ヒト癌特異的ＭＵＣ１抗体を癌治療薬と結合させた抗体医薬を臨床応用した例は、知られていない。【０００７】
一般に抗体は血中半減期が長く、体内に投与後、癌を可視化するのに十分なシグナル対バックグラウンド比を与える腫瘍対血液比に達するのに４日〜５日の長い期間を必要とする（Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．，  ２０１０  Ｍａｙ；８７（５）：５８６−９２．）。また抗体のＦｃ領域は、抗体依存性細胞障害（Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＡＤＣＣ）や補体依存性細胞障害（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＣＤＣ）の薬理作用を引き起こす（非特許文献１、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ２００２  Ｄｅｃ；１３（６）：６０９−１４．）。また抗体は標的に関わらず肝臓に高集積するが、乳癌等の癌細胞は肝臓へ転移する場合が多く、遠隔転移による全身の癌病巣を診断するときに肝転移の検出に妨げとなる（Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．，  ２０１０  Ｍａｙ；８７（５）：５８６−９２．）。【０００８】
例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦＶ、ダイアボディ、ミニボディのような低分子化された組み換え抗体フラグメントは、組織浸透性が高いため病巣に届きやすく、大腸菌や酵母での発現系を用いた低コストでの製造が期待できることから治療用抗体として利用される一方、血中半減期が短く、腎排泄される特徴を有することから、診断薬としての利用も報告されている（Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ２００５  Ｓｅｐ；２３（９）：１１２６−３６．）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】ＷＯ２０１０／０５０５２８
【特許文献２】ＷＯ２００８／０４０３６２
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．  Ｊ．，  ２０１３  Ａｐｒ；３０（３）：２２７−３６．
【非特許文献２】Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，  ２００６  Ｎｏｖ；５５（１１）：１３３７−４７．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
一価のＦａｂフラグメントは、分子量約５０ｋＤａであり、約１５０ｋＤａの抗体より小さく、腎排泄され、血中半減期も短い。そのため、投与後２〜３２時間以内に癌を可視化するのに十分なシグナル対バックグラウンド比を与える腫瘍対血液比に達する。Ｆｃ領域がないためＡＤＣＣやＣＤＣを引き起こすこともない。Ｆａｂフラグメントは、主に腎排泄なため、肝転移の検出の妨げになることもない。このような特長から、抗体と比べ、Ｆａｂフラグメントは、体内診断薬としてより有効であることが期待できる。【００１２】
しかしながらＦａｂフラグメントでは、二価から一価になるため、その結合活性が減弱することが多い。さらに抗体を体内診断薬や光免疫療法で用いる薬剤として利用するためには、蛍光色素又は造影剤等の検出される物質で標識しなければならないが、そのような物質で標識されることにより、その結合活性が減弱するとの課題がある。【００１３】
本発明の課題は、優れた結合活性を有し、かつ投与後一定時間（例えば、２４時間）の間に癌病巣に集積することが期待される抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを提供することにある。また、本発明の課題は、当該Ｆａｂフラグメントを含む診断用組成物及びそれを利用した診断方法を提供すること、並びに、当該Ｆａｂフラグメントを含む治療用組成物及びそれを利用した治療方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、ヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する優れた結合活性を有する抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの作製において相当の鋭意検討を重ねた結果、配列番号８又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを作製し（実施例１）、当該抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントはヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する優れた結合活性を有し（実施例３）、蛍光標識化及びキレート剤標識化によってヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性が減弱しないこと（実施例５及び実施例７）、並びに当該抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体は、癌の診断に有用であること（実施例８、実施例１２及び実施例１３）、及び皮下担癌モデルにおいて抗腫瘍効果を示すこと（実施例１５）を見出した。【００１５】
これらの結果、前記抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント及び当該抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体を用いた診断手段及び治療手段を提供した。【００１６】
本発明は、医学上又は産業上有用な物質・方法として以下の発明を含むものである。【００１７】
すなわち、一態様において、本発明は以下のとおりであってよい。
［１］以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号８又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号８又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号８又は配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
［２］以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
［３］以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
［４］以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、上記［３］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント：
（ａ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント；及び
（ｂ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
［５］配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、上記［４］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
［６］配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、上記［４］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
［７］１以上の標識部と、上記［１］ないし［６］のいずれかに記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体。
［８］標識部が（ｉ）配位子及びリンカー、（ｉｉ）配位子、（ｉｉｉ）蛍光色素及びリンカー、又は（ｉｖ）蛍光色素である、上記［７］に記載の複合体。
［９］標識部が（ｉ）配位子及びリンカー又は（ｉｉ）配位子である、上記［８］に記載の複合体。
［１０］配位子が、下式（Ａ）で表される配位子である、上記［９］に記載の複合体：【００１８】
【化１】
2018092885.tif 000002
式中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント又はリンカーへの結合を表す。
［１１］標識部が、下式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーである、上記［１０］に記載の複合体：【００１９】
【化２】
2018092885.tif 000003
式中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントへの結合を表す。
［１２］抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、そのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｓ）基の炭素原子と結合している、上記［１１］に記載の複合体。
［１３］以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される、複合体：
（ａ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、上記［１２］に記載の複合体；
（ｂ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが上記［６］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、上記［１２］に記載の複合体；並びに
（ｃ）上記（ａ）及び上記（ｂ）の混合物である、複合体。
［１４］更に金属を含む、上記［９］ないし［１３］のいずれかに記載の複合体。
［１５］金属が金属放射性同位元素である、上記［１４］に記載の複合体。
［１６］金属が８９Ｚｒである、上記［１５］に記載の複合体。
［１７］更に８９Ｚｒを含む、上記［１３］に記載の複合体。
［１８］標識部が（ｉ）蛍光色素及びリンカー又は（ｉｉ）蛍光色素である、上記［８］に記載の複合体。
［１９］蛍光色素が下式（Ｂ）及び下式（Ｃ）からなる群より選択される蛍光色素である、上記［１８］に記載の複合体：【００２０】
【化３】
2018092885.tif 000004
【００２１】
【化４】
2018092885.tif 000005
式（Ｂ）及び（Ｃ）中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント又はリンカーへの結合を表す。
［２０］波線が抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントへの結合を表し、当該抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、そのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｏ）基の炭素原子と結合している、上記［１９］に記載の複合体。
［２１］標識部が、式（Ｂ）で表される蛍光色素である、上記［２０］に記載の複合体。
［２２］以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される、複合体：
（ａ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである上記［２１］に記載の複合体；
（ｂ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが上記［６］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、上記［２１］に記載の複合体；並びに
（ｃ）上記（ａ）及び上記（ｂ）の混合物である、複合体。
［２３］標識部が、式（Ｃ）で表される蛍光色素である、上記［２０］に記載の複合体。
［２４］以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される、複合体：
（ａ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、上記［２３］に記載の複合体；
（ｂ）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが上記［６］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、上記［２３］に記載の複合体；並びに
（ｃ）上記（ａ）及び上記（ｂ）の混合物である、複合体。
［２５］以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、ポリヌクレオチド：
（ａ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；及び
（ｂ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２６］以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群より選択される、ポリヌクレオチド：
（ａ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；及び
（ｂ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２７］以下の（ａ）及び／又は（ｂ）を含む、発現ベクター：
（ａ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｂ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２８］以下の（ａ）及び／又は（ｂ）を含む、発現ベクター：
（ａ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、
（ｂ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
［２９］以下の（ａ）から（ｄ）からなる群より選択される、宿主細胞：
（ａ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｄ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
［３０］以下の（ａ）から（ｄ）からなる群より選択される、宿主細胞：
（ａ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｄ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
［３１］以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程を含む、抗ヒ卜ＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法：
（ａ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、上記［１］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
［３２］以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法：
（ａ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、上記［５］に記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
［３３］上記［３１］又は［３２］に記載の方法により抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程を含む、標識部と抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体を生産する方法。
［３４］Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程が、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程である、上記［３３］に記載の複合体を生産する方法。
［３５］更に、当該複合体の配位子を金属放射性同位元素で標識させる工程を含む、上記［３４］に記載の複合体を生産する方法。
［３６］Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程が、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）蛍光色素とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）蛍光色素と直接共有結合させる工程である、上記［３３］に記載の複合体を生産する方法。
［３７］１種類以上の上記［７］ないし［２４］のいずれかに記載の複合体、及び薬学的に許容される担体を含む診断用組成物。
［３８］複合体が、上記［１７］、［２２］及び［２４］のいずれかに記載の複合体である、上記［３７］に記載の診断用組成物。
［３９］複合体が、上記［１７］に記載の複合体である、上記［３８］に記載の診断用組成物。
［４０］複合体が、上記［２２］に記載の複合体である、上記［３８］に記載の診断用組成物。
［４１］複合体が、上記［２４］に記載の複合体である、上記［３８］に記載の診断用組成物。
［４２］ヒトＭＵＣ１を発現する癌の診断に用いる、上記［３７］ないし［４１］のいずれかに記載の診断用組成物。
［４３］癌が、乳癌又は膀胱癌である、上記［４２］に記載の診断用組成物。
［４４］１種類以上の上記［７］ないし［２４］のいずれかに記載の複合体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
［４５］複合体が、上記［１７］、［２２］及び［２４］のいずれかに記載の複合体である、上記［４４］に記載の医薬組成物。
［４６］複合体が、上記［２４］に記載の複合体である、上記［４５］に記載の医薬組成物。
［４７］ヒトＭＵＣ１を発現する癌を治療するための医薬組成物である、上記［４４］ないし［４６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４８］癌が、乳癌又は膀胱癌である、上記［４７］に記載の医薬組成物。
［４９］乳癌又は膀胱癌の診断用組成物及び/又は乳癌又は膀胱癌を治療するための医薬組成物の製造のための、上記［７］ないし［２４］のいずれかに記載の複合体の使用。
［５０］乳癌又は膀胱癌の診断及び/又は治療において使用するための、上記［７］ないし［２４］のいずれかに記載の複合体。
［５１］上記［７］ないし［２４］のいずれかに記載の複合体を手術前又は手術中に対象に投与することを含む、乳癌又は膀胱癌の診断方法。
［５２］上記［７］ないし［２４］のいずれかに記載の複合体の治療有効量を投与する工程を含む、乳癌又は膀胱癌の治療方法。
【発明の効果】
【００２２】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、ヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する優れた結合活性を有し、乳癌等の癌の診断及び／又は治療に有用であることが期待される。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、Ｐ１０−１  Ｆａｂ、Ｐ１０−２  Ｆａｂ及び比較例である１Ｂ２  Ｆａｂのヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性を示すグラフ及び表である。
【図２】図２は、Ｐ１０−１  Ｆａｂ  Ｄｙｅ、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅ及び比較例である１Ｂ２  Ｆａｂ  Ｄｙｅのヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性を示すグラフ及び表である。
【図３】図３は、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯ及びＰ１０−２  Ｆａｂのヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性を示すグラフ及び表である。
【図４】図４は、Ｐ１０−２  Ｆａｂのヒト癌特異的ＭＵＣ１を発現する乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（ＭＭ−４６８細胞とも称する）及び膀胱癌細胞株６４７−Ｖ細胞に対する結合活性を示すグラフである。横軸は、Ｐ１０−２  Ｆａｂの濃度（Ｌｏｇ（ｍｇ／ｍＬ））を、縦軸は発光量（Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓｅ）を示す。
【図５Ａ】図５Ａは、皮下担癌モデルにＰ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅを３ｍｇ／ｋｇ静脈投与し、投与６時間後に通常のカメラ（左）、及び近赤外蛍光カメラ（中央、右）で撮像した代表的な写真である。
【図５Ｂ】図５Ｂは、腫瘍部分（Ｔｕｍｏｒ）及び腫瘍周囲の正常部分（Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）の蛍光輝度比（Ｔｕｍｏｒ／Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  Ｒａｔｉｏ）を定量化したグラフであり、平均値＋標準誤差を表す。横軸は、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅの投与量及び投与後の時間を示す。
【図６】図６は、ＭＭ−４６８細胞を移植したマウスにＰ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００を投与し、投与２時間後に動物を安楽死させ、腫瘍を摘出し、ＩＶＩＳ  ＳＰＥＣＴＲＵＭで撮像し、腫瘍部分の発光量を測定した結果を示すグラフである。縦軸は、発光量を示す。
【図７】図７は、ＭＭ−４６８細胞、６４７−Ｖ細胞又は比較例であるＣＨＯ−Ｋ１細胞に対して、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００を反応させた後、光照射を行い、細胞障害性を測定した結果を示すグラフである。各グラフの横軸は上段がＰ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００の濃度を、下段が光照射量を、それぞれ示す。縦軸は発光量であり、平均値＋標準誤差を表す。
【図８】図８は、ＭＭ−４６８細胞を移植したヌードマウスを用いて、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００投与時の光照射の有無（０Ｊ又は２００Ｊ）による、抗腫瘍効果を測定した結果を示すグラフである。横軸は、腫瘍体積が３００ｍｍ３になった日を1日としたときの日数（ｄａｙｓ）を示す。縦軸は腫瘍体積（ｖｏｌｕｍｅ（ｍｍ３））であり、平均値＋標準誤差を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
以下に、本発明について詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本明細書で特段に定義されない限り、本発明に関連して用いられる科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。
【００２５】
本発明者らは、抗ヒト癌特異的ＭＵＣ１抗体又はその抗原結合フラグメントの作製において相当の創意検討を重ねた結果、癌特異的ＭＵＣ１への強い結合能を有した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを作製することに成功した。
【００２６】
抗体分子の基本構造は、各クラス共通で、分子量５万〜７万の重鎖と２〜３万の軽鎖から構成される。重鎖は、通常約４４０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、クラスごとに特徴的な構造をもち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥに対応してγ、μ、α、δ、ε鎖とよばれる。さらにＩｇＧには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４が存在し、それぞれγ１、γ２、γ３、γ４とよばれている。軽鎖は、通常約２２０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、Ｌ型とＫ型の２種が知られており、それぞれλ、κ鎖とよばれる。抗体分子の基本構造のペプチド構成は、それぞれ相同な２本の重鎖及び２本の軽鎖が、ジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）及び非共有結合によって結合され、分子量１５万〜１９万である。２種の軽鎖は、どの重鎖とも対をなすことができる。個々の抗体分子は、常に同一の軽鎖２本と同一の重鎖２本からできている。
【００２７】
鎖内Ｓ−Ｓ結合は、重鎖に四つ（μ、ε鎖には五つ）、軽鎖には二つあって、アミノ酸１００〜１１０残基ごとに一つのループを成し、この立体構造は各ループ間で類似していて、構造単位あるいはドメインとよばれる。重鎖、軽鎖ともにＮ末端に位置するドメインは、同種動物の同一クラス（サブクラス）からの標品であっても、そのアミノ酸配列が一定せず、可変領域とよばれており、各ドメインは、それぞれ、重鎖可変領域（ＶＨドメイン）及び軽鎖可変領域（ＶＬドメイン）とよばれている。これよりＣ末端側のアミノ酸配列は、各クラスあるいはサブクラスごとにほぼ一定で定常領域とよばれており、各ドメインは、それぞれ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３あるいはＣＬと表される。
【００２８】
抗体と抗原との結合の特異性は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域によって構成される部分のアミノ酸配列によっている。一方、補体や各種細胞との結合といった生物学的活性は各クラスＩｇの定常領域の構造の差を反映している。重鎖と軽鎖の可変領域の可変性は、どちらの鎖にも存在する３つの小さな超可変領域にほぼ限られることがわかっており、これらの領域を相補性決定領域（ＣＤＲ；それぞれＮ末端側からＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）とよんでいる。可変領域の残りの部分はフレームワーク領域（ＦＲ）とよばれ、比較的一定である。
【００２９】
抗体の重鎖定常領域のＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間にある領域はヒンジ領域とよばれ、この領域は、プロリン残基を多く含み、２本の重鎖をつなぐ複数の鎖間Ｓ−Ｓ結合を含む。例えば、ヒトのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の各ヒンジ領域には、重鎖間のＳ−Ｓ結合を構成している、それぞれ、２個、４個、１１個、２個のシステイン残基を含む。ヒンジ領域は、パパインやペプシン等のタンパク質分解酵素に対する感受性が高い領域である。抗体をパパインで消化した場合、ヒンジ領域の重鎖間Ｓ−Ｓ結合よりもＮ末端側の位置で重鎖が切断され、２個のＦａｂフラグメントと１個のＦｃフラグメントに分解される。Ｆａｂフラグメントは、軽鎖と、重鎖可変領域、ＣＨ１ドメインとヒンジ領域の一部とを含む重鎖フラグメントから構成される。Ｆａｂフラグメントは可変領域を含み、抗原結合活性を有する。
【００３０】
＜本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント＞
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、以下の特徴を有するＦａｂフラグメントである：
配列番号８又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【００３１】
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである。
【００３２】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖定常領域としては、Ｉｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３又はＩｇγ４等のいずれの定常領域も選択可能であり得る。１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖定常領域は、ヒトＩｇγ１定常領域である。
【００３３】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖定常領域としては、Ｉｇλ又はＩｇκのいずれの定常領域も選択可能であり得る。１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖定常領域は、ヒトＩｇκ定常領域である。
【００３４】
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、以下のＦａｂフラグメントである：
配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【００３５】
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである。
【００３６】
Ｆａｂフラグメントを含め、抗体を細胞で発現させる場合、抗体が翻訳後に修飾を受けることが知られている。翻訳後修飾の例としては、重鎖Ｃ末端のリジンのカルボキシペプチダーゼによる切断、重鎖及び軽鎖Ｎ末端のグルタミン又はグルタミン酸のピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾、グリコシル化、酸化、脱アミド化、糖化等が挙げられ、種々の抗体において、このような翻訳後修飾が生じることが知られている（Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，２００８；９７：２４２６−４７．）。
【００３７】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントには、翻訳後修飾により生じたＦａｂフラグメントも含まれ得る。翻訳後修飾により生じ得る本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの例としては、重鎖Ｎ末端のピログルタミル化した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが挙げられる。このようなＮ末端のピログルタミル化による翻訳後修飾は、抗体の活性に影響を及ぼすものではないことは当該分野で知られている（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００６；３４８：２４−３９）。
【００３８】
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、下記の特徴を有する抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである：
配列番号８又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号８又は配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【００３９】
ある実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、下記の特徴を有する抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである：
配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【００４０】
別の実施形態において、本発明の抗ＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、下記の特徴を有する抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである：
配列番号２又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【００４１】
ある実施形態において、本発明の抗ＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、下記の特徴を有する抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである：
配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【００４２】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、ヒト癌特異的ＭＵＣ１に結合する。癌特異的ＭＵＣ１は、乳癌、肺癌、大腸癌、膀胱癌、皮膚癌、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、腎臓癌、卵巣癌又は子宮頚癌等の癌において発現している。得られた抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントのヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性を測定する方法としては、ＥＬＩＳＡやＦＡＣＳ等の方法がある。例えば、ＥＬＩＳＡを用いる場合、ヒト癌特異的ＭＵＣ１陽性細胞（例えば、Ｔ−４７Ｄ細胞）をＥＬＩＳＡプレートに固定化し、これに対してＦａｂフラグメントを添加して反応させた後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ等で標識した抗Ｉｇκ抗体等を反応させた後、その活性を検出する試薬（例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識の場合、化学発光ホースラディッシュペルオキシダーゼ基質）等を用いた活性測定により、二次抗体の結合を同定する。
【００４３】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、本明細書に開示される、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメント及び軽鎖の配列情報に基づいて、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に作製され得る。本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、特に限定されるものではないが、例えば、後述の＜本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法＞に記載の方法に従い製造することができる。
【００４４】
＜本発明の複合体＞
本発明の複合体は、標識部と本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体である。
【００４５】
「標識部」とは、（ｉ）配位子及びリンカー、（ｉｉ）配位子、（ｉｉｉ）蛍光色素及びリンカー、又は（ｉｖ）蛍光色素、である。ある態様としては、（ｉ）配位子及びリンカー、又は（ｉｉ）配位子が挙げられる。ある態様としては、（ｉ）蛍光色素及びリンカー、又は（ｉｉ）蛍光色素が挙げられる。「標識部」の配位子は更に金属を含んでいてもよく、ある態様としては、金属を含む（ｉ）配位子及びリンカー又は（ｉｉ）配位子であり、言い換えると、（ｉ）金属とキレート錯体を形成した配位子及びリンカー、又は、（ｉｉ）金属とキレート錯体を形成した配位子である。
【００４６】
金属又は蛍光色素を含む本発明の複合体は、各種造影剤及び／又は癌の治療剤に用いることができ、例えば、ＭＲＩ造影剤、ＰＥＴトレーサー、蛍光標識された分子イメージング剤、光免疫療法に使用される薬剤等に用いられる。
【００４７】
本明細書において、「金属」は、常磁性金属イオン又は金属放射性同位元素を意味する。
【００４８】
常磁性金属イオンはＭＲＩ造影剤に好適に用いられる。常磁性金属イオンの態様としては、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｃｕ２＋、Ｎｉ２＋、Ｒｈ２＋、Ｃｏ２＋、Ｇｄ３＋、Ｅｕ３＋、Ｄｙ３＋、Ｔｂ３＋、Ｐｍ３＋、Ｎｄ３＋、Ｔｍ３＋、Ｃｅ３＋、Ｙ３＋、Ｈｏ３＋、Ｅｒ３＋、Ｌａ３＋、Ｙｂ３＋、Ｍｎ３＋、又はＭｎ２＋が挙げられるが、これらに限定されない。ある態様としては、Ｇｄ３＋、Ｍｎ３＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ２＋、又はＦｅ３＋が挙げられる。ある態様としては、Ｍｎ３＋又はＭｎ２＋が挙げられる。この場合、複合体にはカウンターアニオンとしてハロゲン等用いることができる。また、カウンターアニオンは配位子のＣ（＝Ｏ）Ｏ−であってもよく、さらに複合体は、Ｎａ＋などのカウンターカチオンを有していてもよい。
【００４９】
金属放射性同位元素は、例えば、ＰＥＴトレーサー等に用いられる。ある態様としては、８９Ｚｒ、５１Ｍｎ、５２Ｆｅ、６０Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、９９ｍＴｃ、又は１１１Ｉｎが挙げられるが、これらに限定されない。ある態様としては、８９Ｚｒ、６０Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９９ｍＴｃ、又は１１１Ｉｎが挙げられる。ある態様としては、ジルコニウムの放射同位体が挙げられる。ある態様としては８９Ｚｒが挙げられる。
【００５０】
「配位子」とは、複合体において、金属とキレート錯体を形成しうる部分であり、キレート剤から構成される基を意味する。構成される基とは、キレート剤からプロトンが除かれて、結合手を有する基である。
【００５１】
「キレート剤」とは、金属と配位結合できる化合物である。
【００５２】
「キレート剤」としては、シデロホアと、非シデロホアが挙げられる。シデロホアとしては、ヒドロキサム酸型、カテコール型、又は、混合配位子型が挙げられる。ヒドロキサム酸型シデロホアとしては、例えば、フェリクローム、下式：
【００５３】
【化５】
2018092885.tif 000006
で表されるデフェロキサミン（ＤＦＯ）、フサリニンＣ、オルニバクチン、ロドトルル酸が挙げられる。カテコール型シデロホアとしては、例えば、エンテロバクチン、バチリバクチン、ビブリオバクチンが挙げられる。混合配位子型シデロホアとしては、例えば、アゾトバクチン、ピヨベルジン、エルシニアバクチンが挙げられる。なお、上記シデロホアの場合、ＤＦＯはその反応性官能基である−ＮＨ２を介してリンカー又はＦａｂフラグメントと反応させることができ、ＤＦＯ以外のシデロホアの場合には、カルボキシ基、水酸基、アミノ基等の反応性官能基を介して、当業者が通常用いる方法でリンカー又はＦａｂフラグメントと反応させることもできる。
【００５４】
非シデロホアとしては、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸、ＣＡＳ番号：６７−４３−６）、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ（１，７−ビス（メチルカルバモイルメチル）−１，４，７−トリアザヘプタン−１，４，７−三酢酸、ＣＡＳ番号：１１９８９５−９５−３）、ＥＯＢ−ＤＴＰＡ（エトキシベンジル基が結合したＤＴＰＡ、ＣＡＳ番号：１５８５９９−７２−５）、ＴＴＨＡ（トリエチレンテトラミン六酢酸、ＣＡＳ番号：８６９−５２−３）、ＤＯ３Ａ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸、ＣＡＳ番号：２１７９７３−０３−０）、ＨＰ−ＤＯ３Ａ（１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸、ＣＡＳ番号：１２００４１−０８−９）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸、ＣＡＳ番号：６０２３９−１８−１）、及びこれらの公知の反応性誘導体が挙げられる。
【００５５】
なお、本明細書中の化合物及び複合体は、特に記載がない限りフリー体及びその塩も包含する。ここに「その塩」とは、その化合物及び複合体の置換基の種類によって、酸付加塩又は塩基との塩を形成する場合があり、その化合物及び複合体が形成しうる塩である。具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、マンデル酸、酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジトルオイル酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リシン、オルニチン等の有機塩基との塩、アセチルロイシン等の各種アミノ酸及びアミノ酸誘導体との塩やアンモニウム塩等が挙げられる。例えば、ＤＦＯは、デフェロキサミンメタンスルホン酸塩としても存在し、他の塩としても存在する。ＤＴＰＡは、フリー体とともにナトリウム塩としても存在する。
【００５６】
ＭＲＩ造影剤に用いる「キレート剤」のある態様としては、上記のシデロホア及び非シデロホアキレート剤である。
【００５７】
ＰＥＴトレーサーに用いる「キレート剤」のある態様としては、上記のシデロホア及び非シデロホアキレート剤であり、更に、ある態様としては、ＭＡＧ３（メルカプト−アセチル−グリシン−グリシン−グリシン、ＣＡＳ番号：６６５１６−０９−４）である。ある態様としては、ＤＦＯである。
【００５８】
本発明の複合体に含まれる配位子を形成する「キレート剤」のある態様としては、ＤＦＯ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＥＯＢ−ＤＴＰＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰ−ＤＯ３Ａ、ＤＯＴＡが挙げられる。ある態様としては、ＤＦＯ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡが挙げられる。ある態様としては、ＤＦＯが挙げられる。
【００５９】
「リンカー」とは、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントと配位子の間に距離をつくる基である。複合体における「リンカー」のある態様としては、
下式：
【００６０】
【化６】
2018092885.tif 000007
（以下、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（１，４−フェニレン）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−と表記する）、−ＣＨ2−（１，４−フェニレン）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ１−20  アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−、が挙げられる。ここで「Ｃ１−20  アルキレン」とは、直鎖又は分岐の炭素数１〜２０のアルキレンである。Ｃ１−20  アルキレンのある態様としては、Ｃ１−１０  アルキレン、Ｃ１−２アルキレンが挙げられる。Ｃ１−20  アルキレンのある態様としては、エチレンが挙げられる。ある態様としては、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（１，４−フェニレン）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−が挙げられる。ある態様としては、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ２Ｈ４−Ｃ（＝Ｏ）−が挙げられる。リンカーとして用いることができる試薬としては、ＨＯ−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ１−20  アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ、コハク酸、ｐ−ジＮＣＳ−ベンゼン（ｐ−ジイソチオシアノベンゼン）等が挙げられる。
【００６１】
蛍光色素を含む本発明の複合体は、蛍光標識された分子イメージング剤、光免疫療法に使用される薬剤、又は蛍光標識された分子イメージング剤及び光免疫療法に使用される薬剤として用いることができる。
【００６２】
本発明の複合体に用いる蛍光色素としては、光イメージングに通常用いられる近赤外波長(６５０〜１０００ｎｍ）に吸収極大及び発光極大がある色素を用いることができる。蛍光色素のある態様としては、シアニン又はインドシアニン化合物が挙げられる。ある態様としては、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、及びＩＲＤｙｅ７００ＤＸ（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、Ｃｙ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ社）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ、ＢＯＤＩＰＹ、及びＤｙＬｉｇｈｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、ＣＦ７９０（Ｂｉｏｔｉｕｍ社）、ＤＹ（ＤＹＯＭＩＣＳ  ＧＭＢＨ社）、ＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ６８０、及びＨｉＬｙｔｅ  Ｆｌｕｏｒ７５０（Ａｎａｓｐｅｃ社）、ＰＵＬＳＡＲ６５０、及びＱＵＡＳＡＲ６７０（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）等が挙げられる。ある態様としては、以下の式で表されるＩＲＤｙｅ８００ＣＷ
【００６３】
【化７】
2018092885.tif 000008
及び以下の式で表されるＩＲＤｙｅ７００ＤＸ
【００６４】
【化８】
2018092885.tif 000009
が挙げられる。なお、蛍光色素は、そのカルボキシ基、水酸基、アミノ基等を介して、あるいは当業者が通常用いる方法で活性化基を導入し、Ｆａｂフラグメントあるいはリンカーと反応させることができる。活性化基が導入された蛍光色素のある態様としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）基でエステル化された蛍光色素が挙げられる。例えば、上述のＩＲＤｙｅ８００ＣＷ及びＩＲＤｙｅ７００ＤＸのＮＨＳエステルは市販されており、それらを利用可能である。
【００６５】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントと、標識部との結合は、公知の手法により、当業者が適宜行うことができる。例えば、標識部を本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの１以上のアミノ基（例えば、Ｎ末端アミノ基やアミノ酸側鎖のアミノ基）、１以上のチオール基（例えば、アミノ酸側鎖のチオール基）、又は1以上のカルボキシル基（例えば、Ｃ末端やアミノ酸の側鎖のカルボキシル基）に結合させることができる。ある態様として、本発明の複合体は、標識部が本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの1以上のアミノ基に結合した、複合体である。
【００６６】
本発明の複合体は、標識部が配位子及びリンカーである場合、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントとリンカーを反応させて得られた物質にキレート剤を反応させて製造することもできる。キレート剤にリンカーを反応させて得られた物質に本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを反応させて製造することもできる。反応例としては、キレート剤のアミノ基とリンカーとを反応させ得られた物質を、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの１以上のアミノ基（例えば、Ｎ末端アミノ基やリジン側鎖のアミノ基）と反応させることもできる。複合体の製造には、アミンにイソチオシアネートを加えてチオウレアを合成する反応や、アミンとカルボン酸を加えてアミドを合成する反応等を用いることができる。反応は、当業者に公知の方法を適用することにより行うことができる。なお、原料としてあらかじめキレート剤とリンカーが結合した化合物を用いることもできる。キレート剤とリンカーが結合した化合物の例としては、以下の式で表されるｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＦＯ（ｐ−イソチオシアノフェニルアミノチオカルボニル基が結合したＤＦＯ、ＣＡＳ番号：１２２２４６８−９０−７）、
【００６７】
【化９】
2018092885.tif 000010
ｐ−イソチオシアノベンジル基が結合したＤＴＰＡ（ｐ−ＮＣＳ−Ｂｎ−ＤＴＰＡ、ＣＡＳ番号：１０２６５０−３０−６）、ｐ−イソチオシアノベンジル基が結合したＤＯＴＡ（ｐ−ＮＣＳ−Ｂｎ−ＤＯＴＡ、ＣＡＳ番号：１２７９８５−７４−４）、及び、ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＣＨＸ−Ａ”−ＤＴＰＡ（［（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−イソチオシアナートフェニル）プロピル］−トランス−（Ｓ，Ｓ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミン-五酢酸、ＣＡＳ番号：１５７３８０−４５−５）が挙げられる。
【００６８】
上記製造方法により製造した、１以上の標識部が結合した本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントに金属（常磁性金属イオン又は金属放射性同位元素）を添加し、金属を含む本発明の複合体を得ることができる。
【００６９】
また、本発明の複合体は、Ｆａｂフラグメントの１以上のアミノ基（例えば、Ｎ末端アミノ基やアミノ酸の側鎖のアミノ基）と、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化されたカルボキシル基やイソチオシアン酸基を有する標識部とを反応させて、アミノ基を介して１以上の標識部が結合したＦａｂフラグメントである複合体を製造することもできる。
【００７０】
本発明の複合体は、１以上の標識部と、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体である。ある態様としては、１〜２７の標識部と結合した、ある態様としては、１〜２３の標識部と結合した、ある態様としては１〜１５の標識部と結合した、ある態様としては１〜１１の標識部と結合した、ある態様としては１〜９の標識部と結合した、ある態様としては１〜７の標識部と結合した、ある態様としては１〜５の標識部と結合した、更に、ある態様としては１〜４の標識部と結合した、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである。ある態様としては、更に金属を含む、１つ以上の標識部と結合した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである。
【００７１】
一つの実施形態として、本発明の複合体は、標識部が（ｉ）配位子及びリンカー、（ｉｉ）配位子、（ｉｉｉ）蛍光色素及びリンカー、又は（ｉｖ）蛍光色素である複合体である。
【００７２】
本発明の複合体のある実施形態としては、以下のものが挙げられる：
（１）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、複合体。
（２）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１）の複合体。
（３）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、複合体。
（４）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（２）の複合体。
（５）標識部が（ｉ）配位子及びリンカー、又は（ｉｉ）配位子である、（１）ないし（４）のいずれかの複合体。
（６）配位子がＤＦＯ、ＤＴＰＡ、ＤＴＰＡ−ＢＭＡ、ＥＯＢ−ＤＴＰＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰ−ＤＯ３Ａ及びＤＯＴＡからなる群より選択されるキレート剤から構成される基であり、リンカーが、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（１，４−フェニレン）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−、−ＣＨ2−（１，４−フェニレン）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−及び−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ１−20  アルキレン）−Ｃ（＝Ｏ）−からなる群より選択されるリンカーである、（１）ないし（４）のいずれかの複合体。
（７）配位子がＤＦＯ、ＤＴＰＡ、及びＤＯＴＡからなる群より選択されるキレート剤から構成される基である、（６）の複合体。
（８）配位子がＤＦＯから構成される基であり、リンカーが、−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（１，４−フェニレン）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｓ）−である、（６）の複合体。
（９）更に金属を含む、（５）ないし（８）のいずれかの複合体。
（１０）金属が金属放射性同位元素である、（９）の複合体。
（１１）金属が８９Ｚｒである、（１０）の複合体。
【００７３】
ある実施形態として、本発明の複合体は、標識部が（ｉ）配位子及びリンカー、又は（ｉｉ）配位子である、複合体である。
【００７４】
ある実施形態として、本発明の複合体は、
配位子が下式（Ａ）で表される配位子である、複合体である：
【００７５】
【化１０】
2018092885.tif 000011
式中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント又はリンカーへの結合を表す。
【００７６】
配位子が式（Ａ）で表される配位子である本発明の複合体のある実施形態としては、
標識部が、下式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーである、複合体である：
【００７７】
【化１１】
2018092885.tif 000012
式中、波線は、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントへの結合を表し、
抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントはそのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｓ）基の炭素原子と結合している。
【００７８】
ある実施形態として、本発明の複合体は、標識部が（ｉ）配位子及びリンカー、又は（ｉｉ）配位子である複合体であって、更に金属を含む複合体である。金属のある態様としては、金属放射性同位元素が挙げられる。金属放射性同位元素のある態様としては、８９Ｚｒが挙げられる。
【００７９】
また別の実施形態として、本発明の複合体は、標識部が（ｉ）蛍光色素及びリンカー、又は（ｉｉ）蛍光色素である、複合体である。
【００８０】
標識部に蛍光色素を含む本発明の複合体のある実施形態としては、
蛍光色素が下式（Ｂ）及び下式（Ｃ）からなる群から選択される蛍光色素である、複合体である：
【００８１】
【化１２】
2018092885.tif 000013
【００８２】
【化１３】
2018092885.tif 000014
式（Ｂ）及び（Ｃ）中、波線は抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント又はリンカーへの結合を表す。
【００８３】
標識部が式（Ｂ）で表される蛍光色素である本発明の複合体のある実施形態としては、式中、波線が、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントへの結合を表し、当該抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントがそのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｏ）基の炭素原子と結合している、複合体である。
【００８４】
標識部が式（Ｃ）で表される蛍光色素である本発明の複合体のある実施形態としては、式中、波線が、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントへの結合を表し、当該抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントがそのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｏ）基の炭素原子と結合している、複合体である。
【００８５】
さらなる、本発明の複合体のある実施形態を以下に示す：
（１）標識部が式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーであり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、複合体。
（２）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１）の複合体。
（３）標識部が式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーであり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、複合体。
（４）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（３）の複合体。
（５）１〜１１の標識部と結合した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（２）又は（４）の複合体。
（６）１〜４の標識部と結合した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（２）又は（４）の複合体。
（７）更に金属を含む、（１）ないし（６）のいずれかの複合体。
（８）金属が金属放射性同位元素である、（７）の複合体。
（９）金属が８９Ｚｒである、（８）の複合体。
（１０）標識部が式（Ｂ）又は式（Ｃ）で表される蛍光色素であり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、複合体。
（１１）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１０）の複合体。
（１２）標識部が式（Ｂ）又は式（Ｃ）で表される蛍光色素であり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域であって、配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖可変領域を含む重鎖フラグメント、及び、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、複合体。
（１３）抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１２）の複合体。
（１４）標識部が式（Ｃ）で表される蛍光色素である、（１０）ないし（１３）のいずれかの複合体。
（１５）１〜１１の標識部と結合した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１４）の複合体。
（１６）１〜５の標識部と結合した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１５）の複合体。
（１７）標識部が式（Ｂ）で表される蛍光色素である、（１０）ないし（１３）のいずれかの複合体。
（１８）１〜１１の標識部と結合した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１７）の複合体。
（１９）１〜５の標識部と結合した抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである、（１８）の複合体。
【００８６】
別の実施形態として、本発明の複合体は、下式(Ｉ)で表される、複合体である： 
【００８７】
【化１４】
2018092885.tif 000015
式中、Ａｂは抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを表し、
Ｌは（ｉ）配位子、又は（ｉｉ）蛍光色素を表し、
Ｘはリンカー又は結合を表し、
ｐは１〜２７の自然数であり、ｐのある態様としては１〜２３の自然数であり、ある態様としては１〜１５の自然数であり、ある態様としては１〜１１の自然数であり、ある態様としては１〜９の自然数であり、ある態様としては１〜７の自然数であり、ある態様としては１〜５の自然数であり、更に、ある態様としては１〜４の自然数である。
【００８８】
ある実施形態として、本発明の複合体は、式（I）の複合体であって、更に金属を含む複合体である。金属のある態様としては、金属放射性同位元素が挙げられる。金属放射性同位元素のある態様としては、８９Ｚｒが挙げられる。
【００８９】
式（I）の複合体のある実施形態としては、標識部が、式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーである本発明の複合体が挙げられ、当該複合体のある実施形態としては、
下式（II）で表される複合体である：
【００９０】
【化１５】
2018092885.tif 000016
式中、Ａｂは、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを表し、
ｐは１〜２７の自然数であり、ｐのある態様としては１〜２３の自然数であり、ある態様としては１〜１５の自然数であり、ある態様としては１〜１１の自然数であり、ある態様としては１〜９の自然数であり、ある態様としては１〜７の自然数であり、ある態様としては１〜５の自然数であり、更に、ある態様としては１〜４の自然数であり、
Ａｂはそのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｓ）基の炭素原子と結合している。
【００９１】
ある実施形態として、本発明の複合体は、式（II）の複合体であって、更に金属を含む複合体である。金属のある態様としては、金属放射性同位元素が挙げられる。金属放射性同位元素のある態様としては、８９Ｚｒが挙げられる。
【００９２】
式（I）の複合体のある実施形態としては、標識部が式（Ｂ）で表される蛍光色素である本発明の複合体が挙げられ、当該複合体のある実施形態としては、
下式（III）で表される複合体である：
【００９３】
【化１６】
2018092885.tif 000017
式中、Ａｂは、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを表し、
ｐは１〜２７の自然数であり、ｐのある態様としては１〜２３の自然数であり、ある態様としては１〜１５の自然数であり、ある態様としては１〜１１の自然数であり、ある態様としては１〜９の自然数であり、ある態様としては１〜７の自然数であり、ある態様としては１〜５の自然数であり、更に、ある態様としては１〜４の自然数であり、
Ａｂはそのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｏ）基の炭素原子と結合している。
【００９４】
式（I）の複合体のある実施形態としては、標識部が式（Ｃ）で表される蛍光色素である本発明の複合体が挙げられ、当該複合体のある実施形態としては
下式（IV）で表される複合体である：
【００９５】
【化１７】
2018092885.tif 000018
式中、Ａｂは、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを表し、
ｐは１〜２７の自然数であり、ｐのある態様としては１〜２３の自然数であり、ある態様としては１〜１５の自然数であり、ある態様としては１〜１１の自然数であり、ある態様としては１〜９の自然数であり、ある態様としては１〜７の自然数であり、ある態様としては１〜５の自然数であり、更に、ある態様としては１〜４の自然数であり、
Ａｂはそのアミノ基を介して、標識部末端Ｃ（＝Ｏ）基の炭素原子と結合している。
【００９６】
ある実施形態として、本発明の複合体は、検出可能分子で標識された本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである。検出可能分子で標識された本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントとは、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントと、検出可能分子とが、直接又は適切なリンカーを介して共有結合的に連結されたものである。本明細書において検出可能分子とは、当該技術分野で公知のイメージング診断技術において検出可能なあらゆる部分を意味する。例えば、イメージング診断技術が蛍光イメージングである場合、検出可能分子は蛍光色素である。イメージング診断技術がＰＥＴである場合、検出可能分子はＰＥＴによるイメージングが可能な化合物であり、ある態様としては、放射性核種により標識された配位子を含む化合物、又は非金属放射性核種により標識された糖残基が挙げられる。放射性核種により標識された配位子を含む化合物のある態様としては、金属放射性同位元素とキレート錯体を形成した配位子が挙げられる。イメージング診断技術がＭＲＩである場合、検出可能分子はＭＲＩ技術により検出可能な化合物であり、ある態様としては、常磁性金属イオンを有する標識された配位子を含む化合物が挙げられる。常磁性金属イオンを有する標識された配位子を含む化合物のある態様としては、常磁性金属イオンとキレート錯体を形成した配位子が挙げられる。
【００９７】
検出可能分子で標識された本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントにおいて、検出可能分子の意味で使用する場合、ＰＥＴによるイメージングが可能な化合物をＰＥＴトレーサーと称し、ＭＲＩ技術により検出可能な化合物をＭＲＩ造影剤と称する。
【００９８】
検出可能分子で標識された本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントのある実施形態としては、以下のものが挙げられる。
（１）検出可能分子が蛍光色素、ＰＥＴトレーサー、又はＭＲＩ造影剤である、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
（２）検出可能分子が蛍光色素である、（１）の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
（３）検出可能分子が式（Ｂ）で表される蛍光色素である、（２）の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
（４）検出可能分子が式（Ｃ）で表される蛍光色素である、（２）の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
（５）検出可能分子がＰＥＴトレーサー又はＭＲＩ造影剤である、（１）の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
（６）検出可能分子が式（Ａ）で表される配位子及び常磁性金属イオンを含むＭＲＩ造影剤であるか、又は同配位子及び金属放射性同位元素を含むＰＥＴトレーサーである、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
（７）検出可能分子及びリンカーが式（Ａ’）で表される配位子及びリンカー並びに常磁性金属イオンを含むＭＲＩ造影剤であるか、又は同配位子及びリンカー並びに金属放射性同位元素を含むＰＥＴトレーサーである、（６）の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメント。
【００９９】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントと、検出可能分子の連結は、前述の方法を利用することができる。
【０１００】
本発明の複合体には、複数種の本発明の複合体の混合物である複合体も含まれる。例えば、標識部と翻訳後修飾を受けていない本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体、及び、標識部と前記抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの翻訳後修飾により生じた本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを含む複合体、の混合物である複合体も、本発明の複合体に含まれる。
【０１０１】
複数種の本発明の複合体の混合物である本発明の複合体のある実施形態を以下に示す：
（１）標識部が式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーであり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである複合体、並びに、標識部が式（Ａ’）で表される配位子及びリンカーであり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである複合体、の混合物である複合体。
（２）更に金属を含む、（１）の複合体。
（３）金属が金属放射性同位元素である、（２）の複合体。
（４）金属が８９Ｚｒである、（３）の複合体。
（５）標識部が式（Ｂ）で表される蛍光色素であり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである複合体、並びに、標識部が式（Ｂ）で表される蛍光色素であり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである複合体、の混合物である複合体。
（６）標識部が式（Ｃ）で表される蛍光色素であり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメント及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである複合体、並びに、標識部が式（Ｃ）で表される蛍光色素であり、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントが、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントであって、配列番号４のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された重鎖フラグメント、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントである複合体、の混合物である複合体。
【０１０２】
＜本発明のポリヌクレオチド＞
本発明のポリヌクレオチドには、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが含まれる。
【０１０３】
１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメントコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
【０１０４】
配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号７に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域を含む重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号９に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
【０１０５】
１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、又は配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
【０１０６】
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号１に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号３に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
【０１０７】
１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
【０１０８】
配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号１１に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
【０１０９】
１つの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
【０１１０】
配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号５に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
【０１１１】
本発明のポリヌクレオチドは、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメント及び軽鎖のアミノ酸配列に基づいてデザインされた塩基配列に基づき、当該技術分野で公知の遺伝子合成方法を利用して合成することが可能である。このような遺伝子合成方法としては、国際公開第９０／０７８６１号に記載の抗体遺伝子の合成方法等の当業者に公知の種々の方法が使用され得る。
【０１１２】
＜本発明の発現ベクター＞
本発明の発現ベクターには、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター、並びに本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが含まれる。
【０１１３】
好ましい本発明の発現ベクターには、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター、並びに配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが含まれる。
【０１１４】
本発明の発現ベクターは、原核細胞及び／又は真核細胞の各種の宿主細胞中で本発明のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドを産生できるものであれば特に制限されない。このような発現ベクターとしては、例えば、プラスミドベクター、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス）等を挙げられ、好ましくは、ｐＥＥ６．４やｐＥＥ１２．４（Ｌｏｎｚａ社）を使用することができる。
【０１１５】
本発明の発現ベクターは、本発明のポリヌクレオチドの重鎖フラグメント及び／又は軽鎖をコードする遺伝子に機能可能に連結されたプロモーターを含み得る。宿主細胞中で本発明のＦａｂフラグメントを発現させるためのプロモーターとしては、宿主細胞がエシェリキア属菌の場合、例えば、Ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰＬプロモーター、ｌｐｐプロモーター、ｔａｃプロモーターなどが挙げられる。酵母中での発現用プロモーターとしては、例えば、ＰＨ０５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーターが挙げられ、バチルス属菌での発現用プロモーターとしては、ＳＬ０１プロモーター、ＳＰ０２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなどが挙げられる。また、宿主が哺乳動物細胞等の真核細胞である場合、ＣＭＶ、ＲＳＶ、ＳＶ４０などのウイルス由来のプロモーター、レトロウイルスのプロモーター、アクチンプロモーター、ＥＦ（ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）１αプロモーター、ヒートショックプロモーターなどが挙げられる。
【０１１６】
本発明の発現ベクターは、宿主細胞として細菌、特に大腸菌を用いる場合、開始コドン、終止コドン、ターミネーター領域及び複製可能単位をさらに含み得る。一方、宿主として酵母、動物細胞又は昆虫細胞を用いる場合、本発明の発現ベクターは、開始コドン、終止コドンを含み得る。また、この場合、エンハンサー配列、本発明の重鎖フラグメント及び／又は軽鎖をコードする遺伝子の５’側及び３’側の非翻訳領域、分泌シグナル配列、スプライシング接合部、ポリアデニレーション部位、又は複製可能単位などを含んでいてもよい。また、目的に応じて通常用いられる選択マーカー（例えば、テトラサイクリン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子）を含んでいてもよい。
【０１１７】
＜本発明の形質転換された宿主細胞＞
本発明の形質転換された宿主細胞には、以下の（ａ）から（ｄ）からなる群より選択される、本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞が含まれる：
（ａ）本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｄ）本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【０１１８】
１つの実施形態において、本発明の形質転換された宿主細胞は、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される、本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞である：
（ａ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｄ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【０１１９】
形質転換する宿主細胞としては、使用する発現ベクターに適合し、該発現ベクターで形質転換されて、Ｆａｂフラグメントを発現しうるものであれば特に限定されず、本発明の技術分野において通常使用される天然細胞又は人工的に樹立された細胞など種々の細胞（例えば、細菌（エシェリキア属菌、バチルス属菌）、酵母（サッカロマイセス属、ピキア属など）、動物細胞又は昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９）など）、哺乳動物細胞株（例えば、ＣＨＯ−Ｋ１ＳＶ細胞、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞、２９３細胞等の培養細胞）が例示される。形質転換自体は、例えば、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法など、公知の方法により行われ得る。
【０１２０】
＜本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法＞
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程を包含する。
【０１２１】
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法において培養する本発明の形質転換された宿主細胞は、以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される： 
（ａ）本発明の抗ヒ卜ＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメン卜の重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び本発明の記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）本発明の記載の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）本発明の抗ヒ卜ＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、本発明の抗ヒ卜ＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメン卜の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【０１２２】
ある態様としては、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法において培養する本発明の形質転換された宿主細胞は、以下の（ａ）から（ｃ）からなる群より選択される： 
（ａ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【０１２３】
好ましくは、使用される本発明の形質転換された宿主細胞は、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、あるいは、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの重鎖フラグメントをコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター及び本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞である。
【０１２４】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法において、形質転換された宿主細胞は、栄養培地中で培養され得る。栄養培地は、形質転換された宿主細胞の生育に必要な炭素源、無機窒素源もしくは有機窒素源を含んでいることが好ましい。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストラン、可溶性デンプン、ショ糖などが、無機窒素源もしくは有機窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、アミノ酸、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などが例示される。また所望により他の栄養素（例えば、無機塩（例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウム）、ビタミン類、抗生物質（例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、アンピシリン、カナマイシン等）など）を含んでいてもよい。
【０１２５】
形質転換された宿主細胞の培養自体は、公知の方法により行われる。培養条件、例えば、温度、培地のｐＨ及び培養時間は、適宜選択される。例えば、宿主が動物細胞の場合、培地としては、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地（Ｓｃｉｅｎｃｅ；１９５２；１２２：５０１）、ＤＭＥＭ培地（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ；１９５９；８：３９６−９７．）、ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．；１９６７；１９９：５１９−２４.）、１９９培地（Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．；１９５０；７３：１−８）等を用いることができる。培地のｐＨは約６〜８であるのが好ましく、培養は通常約３０〜４０℃で約１５〜３３６時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。宿主が昆虫細胞の場合、例えば、胎児牛血清を含むＧｒａｃｅ’ｓ培地（ＰＮＡＳ；１９８５；８２：８４０４−８.）等が挙げられ、そのｐＨは約５〜８であるのが好ましい。培養は通常約２０〜４０℃で１５〜１００時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。宿主が細菌、放線菌、酵母、糸状菌である場合、例えば、上記栄養源を含有する液体培地が適当である。好ましくは、ｐＨが５〜８である培地である。宿主がＥ．ｃｏｌｉの場合、好ましい培地としてＬＢ培地、Ｍ９培地（Ｍｉｌｌｅｒら、Ｅｘｐ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；１９７２：４３１）等が例示される。かかる場合、培養は、必要により通気、撹拌しながら、通常１４〜４３℃、約３〜２４時間行うことができる。宿主がＢａｃｉｌｌｕｓ属菌の場合、必要により通気、撹拌をしながら、通常３０〜４０℃、約１６〜９６時間行うことができる。宿主が酵母である場合、培地として、例えば、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒ最小培地（ＰＮＡＳ；１９８０；７７：４５０５−８．）が挙げられ、ｐＨは５〜８であることが望ましい。培養は通常約２０〜３５℃で約１４〜１４４時間行なわれ、必要により通気や撹拌を行うこともできる。
【０１２６】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程に加えて、発現させた抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを回収、好ましくは単離、精製する工程を含むことができる。単離、精製方法としては、例えば、塩析、溶媒沈澱法等の溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動など分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーやヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーなどの荷電を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。
【０１２７】
＜本発明の複合体を生産する方法＞
本発明の複合体を生産する方法は、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを、標識部と共有結合させる工程を含む。本発明の複合体を生産する方法はまた、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントと標識部とを共有結合させる工程を含んでいてもよい。本発明の複合体を生産する方法はまた、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、発現させた当該Ｆａｂフラグメントを回収する工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントと標識部とを共有結合させる工程を含んでいてもよい。本発明の複合体を生産する方法は、更に、金属を添加する工程を含んでもよい。使用されるリンカー、キレート剤、金属、又は蛍光色素等、及び連結の方法は、＜本発明の複合体＞に記載のものを使用することができる。
【０１２８】
１つの実施形態において、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程を含む方法である。ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、発現させた当該Ｆａｂフラグメントを回収する工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントを標識部と共有結合させる工程を含む方法である。
【０１２９】
ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程を含む方法である。ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、発現させた当該Ｆａｂフラグメントを回収する工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程を含む方法である。
【０１３０】
ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程、及び、当該複合体の配位子を金属で標識させる（即ち、キレート錯体を形成させる）工程を含む方法である。ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、発現させた当該Ｆａｂフラグメントを回収する工程、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程、及び、当該複合体の配位子を金属で標識させる工程を含む方法である。
【０１３１】
ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程、及び、当該複合体の配位子を金属放射性同位元素で標識させる（即ち、キレート錯体を形成させる）工程を含む方法である。ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、発現させた当該Ｆａｂフラグメントを回収する工程、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）配位子とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）配位子と直接共有結合させる工程、及び、当該複合体の配位子を金属放射性同位元素で標識させる工程を含む方法である。
【０１３２】
ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）蛍光色素とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）蛍光色素と直接共有結合させる工程を含む方法である。ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、発現させた当該Ｆａｂフラグメントを回収する工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントをｉ）蛍光色素とリンカーを介して結合させる又はｉｉ）蛍光色素と直接共有結合させる工程を含む方法である。
【０１３３】
ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントを検出可能分子で標識する工程を含む方法である。ある態様としては、本発明の複合体を生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを発現させる工程、発現させた当該Ｆａｂフラグメントを回収する工程、及び、当該Ｆａｂフラグメントを検出可能分子で標識する工程を含む方法である。
【０１３４】
本発明の複合体を生産する方法は、上記で特定する２以上の工程を一連の工程として含む方法として実施することもできるし、上記で特定する少なくとも一つの工程を含む方法として実施することもできる。例えば、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを標識部と結合させる工程を含む方法、及び、標識部を結合させた本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントに金属で標識する工程を含む方法もまた、本発明の複合体を生産する方法に含まれる。また、本発明の複合体を生産する方法には、工程の順番が異なる方法も含まれる。例えば、キレート剤に金属を標識した後に、当該キレート剤を本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントと共有結合させる方法も、本発明の複合体を生産する方法に含まれる。
【０１３５】
＜診断用組成物・診断方法＞
本発明は、金属又は蛍光色素を含む本発明の複合体（以下、検出可能な本発明の複合体と称する。）を含む、診断用組成物に関する。本発明の診断用組成物は、本発明の複合体を１種類以上含むものであってもよい。すなわち、本発明の診断用組成物は、本発明の複合体を１種類含むものであってもよく、または２種類以上の本発明の複合体の組合せを含むものであってもよい。検出可能な本発明の複合体は、常法に従って製剤化され、早期診断薬、病期診断薬又は術中診断薬（特に癌の診断薬）として利用することできる。術中診断薬とは、外科手術や内視鏡手術等の手術中に、病変部を特定し、その性質を検査することが可能な診断薬を意味する。本発明の診断用組成物を術中診断薬として使用する場合、当該診断用組成物は、例えば手術の２〜３２時間前、ある態様としては６〜２４時間前、また別の態様としては２時間前、に患者に投与される。
【０１３６】
早期診断薬とは、病状が観察されない、又は病期の早い段階で診断を行うことを目的とする診断薬を意味する。例えば、癌においては、病状が観察されないか、ステージ０又はステージ１の段階で用いる診断薬を意味する。
【０１３７】
病期診断薬とは、病状がどの程度進行しているかを検査することが可能な診断薬を意味する。例えば、癌については、そのステージを検査することが可能な診断薬を意味する。      
【０１３８】
本発明の診断用組成物により診断できることが期待される癌は、ヒトＭＵＣ１を発現する癌である。ある態様としては、乳癌、肺癌、大腸癌、膀胱癌、皮膚癌、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、腎臓癌、卵巣癌又は子宮頚癌が挙げられる。好ましくは、当該癌は乳癌又は膀胱癌である。
【０１３９】
本発明の診断用組成物の製剤化にあたっての本発明の複合体の添加量は、患者の症状の程度や年齢、使用する製剤の剤型、あるいはＦａｂフラグメントの結合力価等により異なるが、例えば、患者の単位体重あたりＦａｂフラグメントの質量ベースで０．００１ｍｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇ程度を用いればよい。
【０１４０】
本発明の診断用組成物の剤型の例としては、注射剤、点滴用剤等の非経口剤を挙げることができ、静脈内注射、標的組織局所への筋肉内注射、皮下注射、膀胱内投与等により投与することができる。また、製剤化にあたっては、薬学的に許容される範囲で、これら剤型に応じた担体や添加剤を使用することができる。薬学的に許容される担体や添加剤の種類は特に限定されず、当業者に周知の担体や添加剤を用いることができる。
【０１４１】
本発明はまた、癌の早期診断用組成物、病期診断用組成物または術中診断用組成物の製造のための、検出可能な本発明の複合体の使用に関する。本発明は、癌の早期診断、病期診断又は術中診断において使用するための、検出可能な本発明の複合体にも関する。
【０１４２】
そして、本発明は、検出可能な本発明の複合体を、手術前又は手術中に対象に投与することを含む癌の診断方法にも関する。ここにおいて、「対象」とは、その診断を受けることを必要とするヒト又はその他の哺乳動物であり、ある態様としては、その診断を受けることを必要とするヒトである。本発明の診断方法における検出可能な本発明の複合体の有効量は上記製剤化にあたっての本発明の複合体の有効量と同様の量であってもよい。本発明の診断方法において、検出可能な本発明の複合体は、標的組織局所への筋肉内注射、皮下注射等により投与することが好ましい。本発明の診断方法において、本発明の複合体を手術前に投与する場合、当該複合体は、例えば手術の２〜４８時間前、ある態様としては６〜２４時間前、また別の態様としては２時間前、に患者に投与される。
【０１４３】
別の実施形態において、本発明は、本発明の複合体の製造のための、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの使用にも関する。ある態様としては、本発明は、本発明の複合体を含む診断用組成物の製造のための、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの使用にも関する。
【０１４４】
また、金属放射性同位元素を含む本発明の診断用組成物が提供される際の態様としては、使用の直前に金属放射性同位元素で標識されてもよく、金属放射性同位元素を含む診断用組成物として提供されてもよい。
【０１４５】
＜治療用組成物・治療方法＞
本発明には、1種類以上の本発明の複合体及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が含まれる。すなわち、本発明の治療用組成物は、本発明の複合体を１種類含むものであってもよく、または２種類以上の本発明の複合体の組合せを含むものであってもよい。本発明の複合体は、当該分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用される方法によって医薬組成物の調製に用いることができる。これら医薬組成物の剤型の例としては、例えば、注射剤、点滴用剤等の非経口剤が挙げられ、静脈内投与、皮下投与、膀胱内投与等により投与することができる。製剤化にあたっては、薬学的に許容される範囲で、これら剤型に応じた賦形剤、担体、添加剤等を使用することができる。
【０１４６】
上記製剤化に当たっての本発明の複合体の添加量は、患者の症状の程度や年齢、使用する製剤の剤型、あるいはＦａｂフラグメントの結合力価等により異なるが、例えば、患者の単位体重あたりＦａｂフラグメントの質量ベースで０．００１ｍｇ／ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇ程度を用いることができる。
【０１４７】
本発明の複合体を含む医薬組成物は、癌の治療のために用いることができる。本発明の複合体を含む医薬組成物により治療できることが期待される癌は、ヒトＭＵＣ１を発現する癌であり、例えば、乳癌、肺癌、大腸癌、膀胱癌、皮膚癌、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、腎臓癌、卵巣癌又は子宮頚癌が挙げられる。
【０１４８】
ある態様としては、本発明の複合体を含む医薬組成物は、蛍光色素を含む複合体を含む医薬組成物であり、光免疫療法に適用して癌の治療に用いることができる。光免疫療法は、蛍光色素を含む複合体を癌組織に特異的に集積させた後に、当該複合体に含まれる蛍光色素を励起する波長の光を照射し、当該蛍光色素による光毒性効果により、癌特異的に細胞死を誘導する方法である。蛍光色素を含む本発明の複合体を光免疫療法に用いる場合、照射する光の波長は近赤外波長（６５０〜１０００ｎｍ）であってよい。
【０１４９】
本発明には、本発明の複合体を含む、乳癌又は膀胱癌を治療するための医薬組成物が含まれる。また、本発明には、本発明の複合体の治療有効量を投与する工程を包含する、乳癌又は膀胱癌を治療する方法が含まれ、当該工程に加えて、近赤外波長（６５０〜１０００ｎｍ、例えば６６０〜７４０ｎｍ、例えば６８０ｎｍ）の光を照射する工程を含むことができる。ある態様としては、光を照射する線量は少なくとも１Ｊ／ｃｍ２であり、ある態様としては少なくとも１０Ｊ／ｃｍ２であり、ある態様としては少なくとも１００Ｊ／ｃｍ２であり、ある態様としては１〜５００Ｊ／ｃｍ２であり、ある態様としては５０〜２００Ｊ／ｃｍ２である。ある実施形態においては、本発明の複合体を投与後に、複数回にわたって照射を実施することもできる。また、本発明には、本発明の複合体の治療有効量を投与する工程を包含する、乳癌又は膀胱癌の癌細胞の細胞死を誘導する方法が含まれる。
【０１５０】
癌を治療するための医薬組成物は、癌の診断にも用いることができる。例えば、乳癌又は膀胱癌を治療するための医薬組成物を、当該癌の診断にも用いることもできる。
【０１５１】
また、本発明には、乳癌又は膀胱癌の治療に使用するための、本発明の複合体が含まれる。さらに、本発明には、乳癌又は膀胱癌を治療するための医薬組成物の製造のための、本発明の複合体の使用が含まれる。
【０１５２】
別の実施形態において、本発明は、本発明の複合体を含む医薬組成物の製造のための、本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの使用にも関する。
【０１５３】
本発明について全般的に記載したが、さらに理解を得るために参照する特定の実施例をここに提供する。しかし、これらは例示を目的とするものであって、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０１５４】
（実施例１：抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントの作製）
Ｐ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂと称する２種類の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントを作製した。【０１５５】
Ｐ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、具体的には、マウス由来の抗ヒト癌特異的ＭＵＣ１抗体である１Ｂ２抗体を文献（Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．，  ２００８  Ｊａｎ  １；１３：１６１９−３３）に記載の方法を参考にしてヒト化後、文献（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  ２０１４  Ａｕｇ；８２（８）：１６２４−３５）に準じて構築したヒト化抗体の分子モデルを用いて、親和性の向上及び標識部を結合させても親和性が減弱しないことが期待される配列を設計した。【０１５６】
Ｐ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂの各重鎖可変領域遺伝子の５’側にシグナル配列（ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番号１３））をコードする遺伝子を、そして３’側にヒトＩｇγ１の定常領域遺伝子（配列番号１及び３の塩基番号３５５から６６９までの塩基配列からなる）をそれぞれ繋げてできる重鎖フラグメント遺伝子が挿入されたＧＳベクターｐＥＥ６．４（Ｌｏｎｚａ社）を作製した。ここで、Ｆａｂフラグメントとして発現させるために、重鎖定常領域遺伝子において、ＫａｂａｔらによるＥＵインデックスに基づく２２１番目のＡｓｐ（後述の配列番号２及び４のアミノ酸配列中の２２２番目のＡｓｐに対応）のコドンの後に停止コドンを挿入した。また、Ｐ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂ共通の軽鎖可変領域遺伝子の５’側にシグナル配列（ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号１４））をコードする遺伝子を、そして３’側にヒトκ鎖の定常領域遺伝子（配列番号５の塩基番号３４０から６６０までの塩基配列からなる）をそれぞれ繋げてできる軽鎖遺伝子が挿入されたＧＳベクターｐＥＥ１２．４（Ｌｏｎｚａ社）を作製した。【０１５７】
一過性発現の方法でＦａｂフラグメントの発現を行った。Ｅｘｐｉ２９３  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）で約２５０万個／ｍＬに培養されたＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）に対し、前述の重鎖フラグメント及び軽鎖のＧＳベクターをＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ  ２９３  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を用いてトランスフェクトし、８日間培養した。発現させた後、培養上清をＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いて精製し、各Ｆａｂフラグメントを得た。【０１５８】
Ｐ１０−１  Ｆａｂの重鎖フラグメントの塩基配列を配列番号１に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号２にそれぞれ示す。Ｐ１０−１  Ｆａｂの重鎖可変領域の塩基配列を配列番号７に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号８にそれぞれ示す。【０１５９】
Ｐ１０−２  Ｆａｂの重鎖フラグメントの塩基配列を配列番号３に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号４にそれぞれ示す。Ｐ１０−２  Ｆａｂの重鎖可変領域の塩基配列を配列番号９に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号１０にそれぞれ示す。【０１６０】
Ｐ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂの軽鎖は共通で、その塩基配列は配列番号５に、それによりコードされるアミノ酸配列は配列番号６にそれぞれ示す。Ｐ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂの軽鎖可変領域の塩基配列を配列番号１１に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号１２にそれぞれ示す。【０１６１】
（実施例２：Ｆａｂフラグメントのアミノ酸修飾分析）
精製したＰ１０−２  Ｆａｂのアミノ酸修飾を分析した結果、精製抗体の大部分において、重鎖Ｎ末端のグルタミンがピログルタミン酸に修飾されていることが示唆された。【０１６２】
（実施例３：Ｆａｂフラグメントの結合活性評価）
前述の方法で発現させたＰ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂについて、ヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性をＣｅｌｌ  ＥＬＩＳＡ法によりキメラ１Ｂ２抗体Ｆａｂフラグメント（以下、１Ｂ２  Ｆａｂと表記することがある。１Ｂ２抗体（特許文献１）のＶＨドメイン及びＶＬドメイン（配列情報は特許文献１から引用）に、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１ドメイン、κ鎖のＣＬドメインをそれぞれ連結して作製した。ＣＨ１ドメイン及びＣＬドメインを連結する都合上、ＶＨドメインのＫａｂａｔらによるＥＵインデックスに基づく１１３番目のアラニン残基がセリン残基に、ＶＬドメインのＫａｂａｔらによるＥＵインデックスに基づく１０９番目のアラニン残基がスレオニン残基に置換されている。）と比較した。すなわち、ヒト癌特異的ＭＵＣ１を発現する乳癌細胞株Ｔ−４７Ｄ細胞（ＡＴＣＣより購入可能；ＨＴＢ−１３３）を１ウェルあたり０．７５×１０４細胞、コラーゲンＩでコートした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに播種し、一晩培養後、細胞をホルマリンで固定化し、それに対して上記Ｐ１０−１  Ｆａｂ、Ｐ１０−２  Ｆａｂ又は１Ｂ２  Ｆａｂを反応させた後、二次抗体として西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ：ＨＲＰ）標識ヤギ抗ヒトＩｇκ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社）を反応させ、ＥＣＬ  Ｐｒｉｍｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を加えて発光させ、その発光度を調べた。その結果、図１に示したようにＰ１０−１  Ｆａｂ及びＰ１０−２  Ｆａｂは１Ｂ２  Ｆａｂの約１０倍以上のヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性を持つことが確認された。【０１６３】
（実施例４：Ｆａｂフラグメントの蛍光標識化）
次いで、本発明者らは、前述のＰ１０−１  Ｆａｂ、Ｐ１０−２  Ｆａｂ及び１Ｂ２  Ｆａｂに対して蛍光色素の導入を行った。【０１６４】
具体的には、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）にて約１ｍｇ／ｍＬに調整したＦａｂフラグメント溶液に、１／１０量の１Ｍリン酸水素二カリウム溶液（ｐＨ９）を添加してｐＨ８．５に整えた。これに終濃度３１０．８μｇ／ｍＬとなるようにＩＲＤｙｅ８００ＣＷ  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を添加し、室温及び遮光で２時間撹拌した。ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ  ＮＨＳ  ＥｓｔｅｒはＮ−ヒドロキシスクシンイミド基を有しているので、ＦａｂフラグメントのＬｙｓと速やかに反応する。これをアミコンウルトラ３Ｋ−０．５ｍＬ  遠心式フィルター（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）で回収し、蛍光標識化したＦａｂフラグメントを精製した。この蛍光色素を導入したＰ１０−１  Ｆａｂ、Ｐ１０−２  Ｆａｂ及び１Ｂ２  Ｆａｂを、Ｐ１０−１  Ｆａｂ  Ｄｙｅ、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅ及び１Ｂ２  Ｆａｂ  Ｄｙｅと称する。【０１６５】
（実施例５：蛍光標識化Ｆａｂフラグメントの結合活性評価）
前述の方法で標識したＰ１０−１  Ｆａｂ  Ｄｙｅ及びＰ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅについて、ヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性をＣｅｌｌ  ＥＬＩＳＡ法により１Ｂ２  Ｆａｂ  Ｄｙｅと比較した。すなわち、ヒト癌特異的ＭＵＣ１を発現する乳癌細胞株Ｔ−４７Ｄ細胞を１ウェルあたり０．７５×１０４細胞、コラーゲンＩでコートした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに播種し、一晩培養後、細胞をホルマリンで固定化し、それに対して上記Ｐ１０−１  Ｆａｂ  Ｄｙｅ、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅ又は１Ｂ２  Ｆａｂ  Ｄｙｅを反応させた後、二次抗体としてＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇκ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社）を反応させ、ＥＣＬ  Ｐｒｉｍｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を加えて発光させ、その発光度を調べた。その結果、図２に示したように１Ｂ２  Ｆａｂ  Ｄｙｅは標識によって結合活性が減弱するのに対して、Ｐ１０−１  Ｆａｂ  Ｄｙｅ及びＰ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅは標識によって結合活性が減弱しないことが確認された。【０１６６】
（実施例６：Ｆａｂフラグメントのキレート剤標識化）
次いで、本発明者らは、前述のＰ１０−２  Ｆａｂに対してキレート剤の導入を行った。【０１６７】
具体的には、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）にて１２．５ｍｇ／ｍＬに調整したＦａｂフラグメント溶液に、１０ｍＭとなるように１００ｍＭ炭酸ナトリウム溶液を添加してｐＨ９．０に整えた。これに終濃度１ｍＭとなるようにｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−デフェロキサミン（Ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ社）を添加し、３７℃で２時間反応した。ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−デフェロキサミンはイソチオシアネート基を有しているので、ＦａｂフラグメントのＬｙｓと速やかに反応する。これをアミコンウルトラ１０Ｋ−０．５ｍＬ  遠心式フィルターで回収し、キレート剤標識化したＦａｂフラグメントを精製した。このキレート剤標識化したＰ１０−２  Ｆａｂを、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯと称する。【０１６８】
（実施例７：キレート剤標識化Ｆａｂフラグメントの結合活性評価）
前述の方法で標識したＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯについて、ヒト癌特異的ＭＵＣ１に対する結合活性をＣｅｌｌ  ＥＬＩＳＡ法によりＰ１０−２  Ｆａｂと比較した。すなわち、ヒト癌特異的ＭＵＣ１を発現するＴ−４７Ｄ細胞を０．７５×１０４細胞、コラーゲンＩでコートした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに播種し、一晩培養後、細胞をホルマリンで固定化し、それに対して上記Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯ又はＰ１０−２  Ｆａｂを反応させた後、二次抗体としてＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇκ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社）を反応させ、ＥＣＬ  Ｐｒｉｍｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を加えて発光させ、その発光度を調べた。その結果、図３に示したようにＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯとＰ１０−２  Ｆａｂの結合活性は同等であり、Ｐ１０−２  Ｆａｂはキレート剤標識によって結合活性が減弱しないことが確認された。【０１６９】
（実施例８：ヒト膀胱癌組織サンプルにおけるＰ１０−２の反応性）
ヒト膀胱癌におけるＰ１０−２  Ｆａｂの反応性を検討するために、ヒト膀胱癌組織アレイ（ＵＳ  Ｂｉｏｍａｘ社  ＢＣ１２０１１ｂ）を用いた免疫染色法で検討した。Ｐ１０−２  Ｆａｂを一次抗体として用いると、二次抗体として用いる抗ヒト抗体がヒト組織に交差してしまうため、一次抗体にはマウスキメラＰ１０−２  ＩｇＧ（Ｐ１０−２  ＦａｂのＶＨドメイン及びＶＬドメインに、マウスＩｇＧ２ａのＣＨ１〜３ドメイン及びマウスκ鎖のＣＬドメインをそれぞれ融合した抗体）を作製して用いた。ヒト膀胱癌組織アレイサンプルを３％の過酸化水素溶液で５分間反応後、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。その後、マウスキメラＰ１０−２  ＩｇＧ（０．２５μｇ／ｍＬ）を反応させた後、二次抗体としてＯｎｅ−Ｓｔｅｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒ−ＨＲＰ抗体（Ｂｉｏｇｅｎｅｘ社）を反応させ、Ｓｕｐｅｒ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ＤＡＢ（Ｂｉｏｇｅｎｅｘ社）を加えて発色させた。癌組織に対する染色の陽性反応の判定は±：ごく軽度の陽性、＋：陽性、＋＋：中等度の陽性、＋＋＋：高度の陽性とし、癌組織が明らかでない１例を除外した。その結果、±は１１例、＋は２４例、＋＋は１７例、＋＋＋は５例であり、検討した５９例中５７例で陽性反応がみとめられた（陽性率９７％）。【０１７０】
（実施例９：キレート剤標識化Ｆａｂフラグメントの８９Ｚｒ標識化）
８９Ｚｒは１Ｍシュウ酸水溶液に溶解した８９Ｚｒ−Ｏｘａｌａｔｅ（岡山大学）として製造したものを使用した。２０μＬの８９Ｚｒ−Ｏｘａｌａｔｅ（２１．４ＭＢｑ）を１０μＬの２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液で中和した後、２５０ｍＭ酢酸ナトリウム水溶液に溶解した５ｍｇ／ｍＬゲンチジン酸溶液を７０μＬ加えた。さらに、０．１％ポリソルベート８０及び２０％グリセロールを含む５００ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（４−（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）水溶液を２００μＬ添加した。この８９Ｚｒを含む溶液に９．５ｍｇ／ｍＬのＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯを１００μＬ添加し、室温で３０分間反応させた。得られた反応混合物をアミコンウルトラ１０Ｋ−０．５ｍＬ遠心式フィルター（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を用いて精製し、さらにメンブランフィルター（Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶ  ０．２２μｍ  １３ｍｍ；Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）でろ過することで目的のＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯの８９Ｚｒ標識体（１６．１ＭＢｑ）を得た。この８９Ｚｒ標識したＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯをＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯ  ８９Ｚｒと称する。得られたＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯ  ８９Ｚｒ溶液を高速液体クロマトグラフィー（２０ＡＤシリーズ；島津製作所）を用いて分析し、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯの保持時間（ＵＶ：１０．１９２分）とＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯ  ８９Ｚｒの保持時間（ＵＶ：１０．１７８分、ＲＩ：１０．５１５分）を比較し、それぞれの保持時間が同等であったことからＰ１０−２  Ｆａｂ  ＤＦＯが８９Ｚｒによって標識されていることを確認した。ＨＰＬＣ分析は以下の条件で実施した。カラム：ＢｉｏＳｅｐ  ＳＥＣ  ｓ３０００  ３００×７．８ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社）、カラム温度：室温、ＵＶ検出器波長：２８０ｎｍ、移動相：リン酸緩衝液（Ｇｉｂｃｏ社、１００１０−０２３）、流速：１ｍＬ／ｍｉｎ【０１７１】
（実施例１０：ＦａｂフラグメントへのＩＲＤｙｅ７００ＤＸ付加）
ＩＲＤｙｅ７００ＤＸのＰ１０−２  Ｆａｂへの付加には、ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒ（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を使用した。【０１７２】
具体的には、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）にて１ｍｇ／ｍＬに調整したＰ１０−２  Ｆａｂ溶液に、１／１０量の１Ｍリン酸水素二カリウム溶液（ｐＨ９）を添加した。これに終濃度１５４μｇ／ｍＬとなるようにＩＲＤｙｅ７００ＤＸ  ＮＨＳ  Ｅｓｔｅｒを添加し、室温で２時間撹拌した。反応後、アミコンウルトラ１０Ｋ−１５ｍＬ遠心式フィルター（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）で回収し、ＩＲＤｙｅ７００ＤＸを付加したＰ１０−２  Ｆａｂを精製した。このようにＩＲＤｙｅ７００ＤＸを付加したＰ１０−２  ＦａｂをＰ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００と称する。【０１７３】
（実施例１１：Ｆａｂフラグメントの乳癌細胞株及び膀胱癌細胞株に対する結合活性評価）
ヒト乳癌及び膀胱癌におけるＰ１０−２  Ｆａｂの結合活性を検討した。【０１７４】
具体的には、ヒト癌特異的ＭＵＣ１を発現するヒト乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（ＡＴＣＣより購入可能；ＨＴＢ−１３２、以下ＭＭ−４６８細胞）及びヒト膀胱癌細胞株６４７−Ｖ細胞（ＤＳＭＺより購入可能；ＡＣＣ  ４１４）を９６ウェルプレートに１ウェルあたり１×１０４細胞播種し、一晩培養後、上記Ｐ１０−２  Ｆａｂを０．００００００３−０．００１ｍｇ／ｍＬの濃度で反応させた後、二次抗体として西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ：ＨＲＰ）標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｍｅｄｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社）を反応させ、ＥＣＬ  Ｐｒｉｍｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を加えて発光させ、その発光度を調べた。その結果、図４に示したようにＰ１０−２  Ｆａｂはヒト乳癌細胞株ＭＭ−４６８細胞及びヒト膀胱癌細胞株６４７−Ｖ細胞に結合活性を持つことが示された。【０１７５】
（実施例１２：皮下担癌モデルにおける蛍光標識化Ｆａｂフラグメントの造影評価）
免疫不全マウス（ＳＣＩＤマウス；日本チャールス・リバー社）の右背部の皮下にヒト癌特異的ＭＵＣ１陽性細胞としてヒト乳癌細胞株ＭＭ−４６８細胞を３×１０６細胞移植した。移植後約１か月に腫瘍形成されたマウスを選別し、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）に溶解したＰ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅを０．１、０．３、１又は３ｍｇ／ｋｇの用量で静脈投与した（０．１ｍｇ／ｋｇ投与群はＮ＝２で、０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇ投与群はＮ＝３で実施した）。Ｐ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅ投与６時間後、及び２４時間後に通常のカメラ及び近赤外蛍光カメラ（Ｆｌｕｏｂｅａｍ（８００ｎｍフィルター）；Ｆｌｕｏｐｔｉｃｓ社）で撮像し、赤外蛍光カメラで撮像した図の腫瘍部分（Ｔｕｍｏｒ）及び腫瘍周囲の正常部分（Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ）の蛍光輝度を測定した。その結果、図５Ａに示すようにＰ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅは、投与６時間後において、ヒト癌特異的ＭＵＣ１陽性ＭＭ−４６８腫瘍部位に集積し蛍光画像で明瞭に視認することが示された。また、図５Ｂに示すように０．１〜３ｍｇ／ｋｇの範囲においてＰ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅ投与用量依存的に腫瘍部位蛍光輝度／正常部位蛍光輝度比が上昇することが示された。さらにその効果は投与２４時間後においても持続していることが明らかになった。これらの結果から、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  Ｄｙｅは投与６時間後から２４時間後において、ヒトＭＵＣ１陽性の癌細胞を検出できることが明らかになった。【０１７６】
（実施例１３：ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ付加Ｆａｂフラグメントによる腫瘍の検出）
免疫不全マウス（ヌードマウス；日本チャ−ルス・リバー社）の右背部の皮下にＭＭ−４６８細胞を５×１０６細胞移植した。本試験はＮ＝２で実施した。移植４０日後、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００（３ｍｇ／ｋｇ）又はＶｅｈｉｃｌｅ（リン酸緩衝生理食塩水）を静脈投与した。Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００投与２時間後に動物を安楽死させ、腫瘍を摘出し、ＩＶＩＳ  ＳＰＥＣＴＲＵＭ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社）で６７５ｎｍの波長で励起して７４０ｎｍの波長で検出し、腫瘍部分の発光量を測定した。その結果、図６に示すようにＰ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００は、投与２時間後においてＭＭ−４６８細胞に集積することが示された。【０１７７】
（実施例１４：ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ付加Ｆａｂフラグメントの細胞障害性評価）
Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００の癌治療への利用を検討するために、光免疫療法による細胞障害性を評価した。【０１７８】
具体的には、ヒト乳癌細胞株ＭＭ−４６８細胞、ヒト膀胱癌細胞株６４７−Ｖ細胞又は比較例としてＣＨＯ−Ｋ１細胞（ＡＴＣＣより購入可能；ＣＣＬ−６１）を３８４ウェル白色プレートに１ウェルあたり５×１０３細胞播種し、一晩培養後、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００を０、０．０１、０．１、又は１μｇ／ｍＬで反応させた後、波長６８０ｎｍの光を０〜３０Ｊ／ｃｍ２になるように照射した。光照射後、一晩培養し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）加えて発光させ、発光量を測定することで細胞の生細胞数を測定した。なお、本試験は、条件ごとにそれぞれ３ウェルずつ実施した。その結果、図７に示したように、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００は、光照射により、ヒト癌特異的ＭＵＣ１の発現特異的に細胞障害性を示すことが明らかとなった。【０１７９】
（実施例１５：ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ付加Ｆａｂフラグメントの抗腫瘍活性評価）
免疫不全マウス（ヌードマウス；日本チャ−ルス・リバー社）の右背部の皮下にＭＭ−４６８細胞を５×１０６細胞、移植した。本試験はＮ＝４で実施した。腫瘍体積が３００ｍｍ３になった後、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００（０．３、１、又は３ｍｇ／ｋｇ）を１、５、８、１２及び１５日目に静脈投与した。Ｖｅｈｉｃｌｅ群にはリン酸緩衝生理食塩水を同様に投与した。薬物投与の翌日に波長６８０ｎｍの光を０又は２００Ｊ／ｃｍ２になるように照射し、経日的に腫瘍体積を測定した。その結果、図８に示すように、Ｐ１０−２  Ｆａｂ  ＩＲ７００は、投与量及び光照射依存的に抗腫瘍効果を示すことが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０１８０】
本発明の抗ヒトＭＵＣ１抗体Ｆａｂフラグメントは、乳癌、肺癌、大腸癌、膀胱癌、皮膚癌、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、腎臓癌、卵巣癌又は子宮頚癌等の癌の診断及び／又は治療に有用であることが期待される。
【配列表フリーテキスト】
【０１８１】
配列番号１：Ｐ１０−１  Ｆａｂ重鎖フラグメントをコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号２：Ｐ１０−１  Ｆａｂ重鎖フラグメントのアミノ酸配列
配列番号３：Ｐ１０−２  Ｆａｂ重鎖フラグメントをコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号４：Ｐ１０−２  Ｆａｂ重鎖フラグメントのアミノ酸配列
配列番号５：抗体軽鎖をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号６：抗体軽鎖のアミノ酸配列
配列番号７：Ｐ１０−１  Ｆａｂ重鎖可変領域をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号８：Ｐ１０−１  Ｆａｂ重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号９：Ｐ１０−２  Ｆａｂ重鎖可変領域をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１０：Ｐ１０−２  Ｆａｂ重鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号１１：抗体軽鎖可変領域をコードするＤＮＡの塩基配列
配列番号１２：抗体軽鎖可変領域のアミノ酸配列
配列番号１３：重鎖シグナル配列
配列番号１４：軽鎖シグナル配列
配列番号１５：ＭＵＣ１の細胞外ドメインのタンデムリピート配列
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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