【手続補正書】
【提出日】平成31年2月21日(2019.2.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
条件的活性型生物学的タンパク質を調製する方法であって、前記条件的活性型生物学的タンパク質が、異常条件下でのアッセイにおける条件的活性型生物学的タンパク質の活性と比較して正常生理条件下でのアッセイにおいて低い活性を呈するタンパク質であり、該方法は、
野生型タンパク質のライブラリから条件的活性型生物学的タンパク質を選択する工程であって、該条件的活性型生物学的タンパク質が、異常条件下での前記アッセイにおける条件的活性型生物学的タンパク質の活性と比較して、正常生理条件下でのアッセイにおいて低い活性を呈する、工程
を含み、
正常生理条件下でのアッセイ及び異常条件下でのアッセイは
（ａ）ホウ酸、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、リン酸二アンモニウム、硫酸マグネシウム、リン酸一アンモニウム、リン酸一カリウム、硫酸カリウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、カルシウムキレート、銅キレート、鉄キレート、マンガンキレート、亜鉛キレート、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸カルシウム、リン酸マグネシウム、重炭酸カリウム、硝酸カリウム、塩酸、二酸化炭素、硫酸、リン酸、炭酸、尿酸、塩化水素、及び尿素から選択される無機化合物；
（ｂ）アンモニウムイオン、鉄イオン、亜鉛イオン、リンイオン、硫酸イオン、銅イオン、マグネシウムイオン、硫酸イオン、重硫酸イオン、炭酸イオン、重炭酸イオン、硝酸イオン、亜硝酸イオン、リン酸イオン、リン酸水素イオン、リン酸二水素イオン、過硫酸イオン、モノ過硫酸イオン、及びホウ酸イオンから選択されるイオン；
及び
（ｃ）有機分子
から選択される、少なくとも１つの構成成分を含むアッセイ溶液中で実施される、方法。
【請求項２】
前記選択する工程が、（ａ）正常生理条件下でのアッセイにおける参照タンパク質と比較した活性の低下、及び（ｂ）異常条件下での前記アッセイにおける前記参照タンパク質と比較した活性の増加の両方を呈する条件的活性型生物学的タンパク質を選択する工程を含み、前記参照タンパク質が、正常生理条件下でのアッセイ及び異常条件下でのアッセイの両方で実質的に同じ活性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記野生型タンパク質が野生型抗体である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記野生型タンパク質ライブラリが、ｃＤＮＡによってコードされるタンパク質のコレクションである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記野生型タンパク質ライブラリがバクテリオファージディスプレイライブラリである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記野生型タンパク質ライブラリが組換えタンパク質のコレクションである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記選択された条件的活性型生物学的タンパク質が、
ｉ．前記選択された条件的活性型生物学的タンパク質をコードするＤＮＡを、変異ＤＮＡを作り出す１つ以上の発達技術を用いて発達させる工程と、
ｉｉ．前記変異ＤＮＡを発現させる工程であって、それにより変異タンパク質を得る、工程と、
ｉｉｉ．前記変異タンパク質から、（ａ）前記正常生理条件下でのアッセイにおける前記選択された条件的活性型生物学的タンパク質と比較した活性の低下、及び（ｂ）前記異常条件下でのアッセイにおける前記選択された条件的活性型生物学的タンパク質と比較した活性の増加の両方を呈する改良された条件的活性型生物学的タンパク質を選択する工程と、
に供される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記改良された条件的活性型生物学的タンパク質が、工程（ｉ）で用いられる前記選択された条件的活性型生物学的タンパク質と比較したとき、前記異常条件下でのアッセイにおける活性の、前記正常生理条件下での活性に対する増加した比率を有する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記改良された条件的活性型生物学的タンパク質が、工程（ｉ）で用いられる前記選択された条件的活性型生物学的タンパク質と比較したとき、改良された結合親和性、発現及びヒト化のうちの１つ以上を有する、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
条件的活性型生物学的タンパク質を調製する方法であって、該条件的活性型生物学的タンパク質が、異常条件でのアッセイにおける活性と比較して、正常生理条件下でのアッセイにおける同活性の低下を示すタンパク質であり、
ｉ．野生型生物学的タンパク質及び変異タンパク質から親ポリペプチドを選択する工程と、
ｉｉ．変異ＤＮＡを作り出す１つ以上の発達技術を用いて、親ポリペプチドをコードするＤＮＡを発達させる工程と、
ｉｉｉ．その少なくとも１つが、前記異常条件下でのアッセイにおける活性と比較して、前記正常生理条件下でのアッセイにおける同活性の低下を示す変異タンパク質を得るために、前記変異ＤＮＡを発現させる工程と、
ｉｖ．前記変異タンパク質から、前記異常条件下でのアッセイにおける活性と比較して、前記正常生理条件下でのアッセイにおける同活性の低下を示す前記条件的活性型生物学的タンパク質を選択する工程と、
を含み、
前記正常生理条件下での前記アッセイ及び前記異常条件下での前記アッセイが、無機化合物、イオン及び有機分子から選択される少なくとも１つの構成成分を含有するアッセイ溶液で実施され、
正常生理条件下でのアッセイ及び異常条件下でのアッセイは
（ａ）ホウ酸、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、リン酸二アンモニウム、硫酸マグネシウム、リン酸一アンモニウム、リン酸一カリウム、硫酸カリウム、硫酸銅、硫酸鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、カルシウムキレート、銅キレート、鉄キレート、マンガンキレート、亜鉛キレート、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸カルシウム、リン酸マグネシウム、重炭酸カリウム、硝酸カリウム、塩酸、二酸化炭素、硫酸、リン酸、炭酸、尿酸、塩化水素、及び尿素から選択される無機化合物；
（ｂ）アンモニウムイオン、鉄イオン、亜鉛イオン、リンイオン、硫酸イオン、銅イオン、マグネシウムイオン、硫酸イオン、重硫酸イオン、炭酸イオン、重炭酸イオン、硝酸イオン、亜硝酸イオン、リン酸イオン、リン酸水素イオン、リン酸二水素イオン、過硫酸イオン、モノ過硫酸イオン、及びホウ酸イオンから選択されるイオン；及び
（ｃ）有機分子
から選択される、少なくとも１つの構成成分を含むアッセイ溶液中で実施される、方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの構成成分が、前記正常生理条件下でのアッセイ及び前記異常条件下でのアッセイの両方のアッセイ溶液中において実質的に同じ濃度を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの構成成分が正常生理的濃度で哺乳動物の体液中に存在する構成成分である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの構成成分が、体液中の前記正常生理的濃度の約５％〜約５００％の、又は体液中の前記正常生理的濃度の約１０％〜約４００％、又は体液中の前記正常生理的濃度の約３０％〜約３００％、又は体液中の前記正常生理的濃度の約５０％〜約２００％、又は体液中の前記正常生理的濃度の約７５％〜約１５０％の範囲のアッセイ溶液中濃度を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの構成成分が、２〜７．０ｍｇ／ｄＬの濃度範囲の尿酸、８．２〜１１．６ｍｇ／ｄＬの濃度範囲のカルシウムイオン、３５５〜３８１ｍｇ／ｄＬの濃度範囲の塩化物イオン、０．０２８〜０．２１０ｍｇ／ｄＬの濃度範囲の鉄イオン、１２．１〜２５．４ｍｇ／ｄＬの濃度範囲のカリウムイオン、３００〜３３０ｍｇ／ｄＬの濃度範囲のナトリウムイオン及び１５〜３０ｍＭの濃度範囲の炭酸のうちの１つ以上から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの構成成分が、ヒスチジン、アラニン、イソロイシン、アルギニン、ロイシン、アスパラギン、リジン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、ピロリシン、プロリン、セレノシステイン、セリン、及びチロシンから選択されるアミノ酸を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの構成成分が、クエン酸、α−ケトグルタル酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、アセト酢酸、β−ヒドロキシ酪酸、乳酸、ピルビン酸、α−ケトン酸、酢酸及び炭酸から選択される有機酸を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの構成成分が、グルコース、ペントース、ヘキソース、キシロース、リボース、マンノース、ガラクトース、ラクトース、ＧｌｃＮＡｃβ１−３Ｇａｌ、Ｇａｌα１−４Ｇａｌ、Ｍａｎα１−２Ｍａｎ、ＧａｌＮＡｃβ１−３Ｇａｌ並びにＯ−、Ｎ−、Ｃ−、及びＳ−グリコシドから選択される糖を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの構成成分が、前記正常生理的濃度の約５％〜約５００％、又は前記正常生理的濃度の約１０％〜約４００％、又は前記正常生理的濃度の約３０％〜約３００％、又は前記正常生理的濃度の約５０％〜約２００％、又は前記正常生理的濃度の約７５％〜約１５０％の範囲の濃度を有するイオンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
前記異常条件が、正常生理的ｐＨと異なるｐＨである、請求項１０に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの構成成分が、前記異常条件のｐＨから約１ｐＨ単位、又は前記異常条件のｐＨから約０．８ｐＨ単位、又は前記異常条件のｐＨから約０．６ｐＨ単位、又は前記異常条件のｐＨから約０．５ｐＨ単位、又は前記異常条件のｐＨから約０．４ｐＨ単位、又は前記異常条件のｐＨから約０．３ｐＨ単位、又は前記異常条件のｐＨから約０．２ｐＨ単位の範囲内のｐＫａを有するイオンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２１】
親ポリペプチドが抗体又は抗体フラグメントである、請求項１０に記載の方法。
【請求項２２】
工程（ｉｖ）で選択された前記条件的活性型生物学的タンパク質を発達させて、少なくとも１つの改良された特性を有する改良された条件的活性型生物学的タンパク質を作成する、請求項１０に記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの改良された特性が、結合親和性、発現レベル及びヒト化から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記少なくとも１つの改良された特性が、工程（ｉｖ）で選択された前記条件的活性型生物学的タンパク質と比較したときの、前記異常条件下での前記アッセイにおける活性の前記正常生理条件下での活性に対する比の増加である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
工程（ｉｖ）で選択された前記条件的活性型タンパク質を、サイトカイン、インターロイキン、酵素、ホルモン、成長因子、細胞傷害剤、化学療法薬、放射性粒子及び診断用薬剤から選択される薬剤とコンジュゲートする工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２６】
前記改良された条件的活性型タンパク質を、サイトカイン、インターロイキン、酵素、ホルモン、成長因子、細胞傷害剤、化学療法薬、放射性粒子及び診断用薬剤から選択される薬剤とコンジュゲートする工程をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
工程（ｉｖ）で選択された前記改良された条件的活性型生物学的タンパク質が条件的活性型抗体であり、工程（ｉｖ）で選択された前記条件的活性型抗体を二重特異性抗体になるように操作する工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項２８】
前記改良された条件的活性型生物学的タンパク質が改良された条件的活性型抗体であり、前記改良された条件的活性型抗体を二重特異性抗体になるように操作する工程をさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記操作する工程が、前記二重特異性抗体を免疫エフェクター細胞表面抗原及び異なる標的抗原の両方に結合するように操作する、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫エフェクター細胞が、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、リンホカイン活性化キラー細胞及びＴ細胞から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記免疫エフェクター細胞がＴ細胞であり、且つ前記免疫エフェクター細胞表面抗原がＣＤ３である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記標的抗原が罹患細胞又は罹患組織に特異的な抗原である、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記罹患組織が腫瘍組織である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
工程（ｉｖ）で選択された前記条件的活性型生物学的タンパク質を、マスキング部分及び切断可能部分の少なくとも一方が含まれるように操作する工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項３５】
前記マスキング部分及び前記切断可能部分の一方又は両方が、罹患細胞又は罹患組織に近接すると前記条件的活性型生物学的タンパク質から切断されるように適合される、請求項３４に記載の方法。