【手続補正書】
【提出日】平成30年12月5日(2018.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変された齧歯類であって、該齧歯類のゲノムが内在性ＣＤ２７４遺伝子座においてヒト化ＣＤ２７４遺伝子を含み、該ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、
（ｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４ポリペプチドの細胞内配列及び膜貫通配列をコードする核酸配列と、
（ｉｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターと
に操作可能に結合された、ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする核酸配列を含み、
該齧歯類は、機能的ヒト化ＣＤ２７４ポリペプチドを発現する、遺伝子改変された齧歯類。
【請求項２】
内在性齧歯類ＣＤ２７４ポリペプチドの細胞内配列及び膜貫通配列をコードする前記核酸配列が、内在性齧歯類ＣＤ２７４遺伝子のエキソン６と、エキソン７と、エキソン５の一部とを含み、必要に応じて、前記ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、内在性齧歯類ＣＤ２７４遺伝子のエキソン１及びエキソン２をさらに含む、請求項１に記載の遺伝子改変された齧歯類。
【請求項３】
ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする前記核酸配列が、ヒトＣＤ２７４遺伝子のエキソン３と、エキソン４と、エキソン５の一部とを含む、請求項２に記載の遺伝子改変された齧歯類。
【請求項４】
単離された齧歯類細胞又は組織であって、該齧歯類細胞又は組織のゲノムが内在性ＣＤ２７４遺伝子座においてヒト化ＣＤ２７４遺伝子を含み、該ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、
（ｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４ポリペプチドの細胞内配列及び膜貫通配列をコードする核酸配列と、
（ｉｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターと
に操作可能に結合された、ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする核酸配列を含み、
該単離された齧歯類細胞又は組織は、機能的ヒト化ＣＤ２７４ポリペプチドを発現する、単離された齧歯類細胞又は組織。
【請求項５】
単離された齧歯類胚性幹（ＥＳ）細胞であって、該胚性幹細胞のゲノムが内在性ＣＤ２７４遺伝子座においてヒト化ＣＤ２７４遺伝子を含み、該ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、
（ｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４ポリペプチドの細胞内配列および膜貫通配列をコードする核酸配列と、
（ｉｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターと
に操作可能に結合された、ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする核酸配列を含み、
該ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、機能的ヒト化ＣＤ２７４ポリペプチドをコードする、胚性幹細胞。
【請求項６】
請求項５に記載の胚性幹細胞から生成された齧歯類胚。
【請求項７】
遺伝子改変された齧歯類を作製する方法であって、
（ａ）単離された齧歯類ＥＳ細胞において、内在性齧歯類ＣＤ２７４遺伝子に、ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする核酸配列を挿入することと、
（ｂ）（ａ）の齧歯類ＥＳ細胞を用いて齧歯類を作製することであって、該齧歯類のゲノムが、内在性齧歯類ＣＤ２７４遺伝子座にヒト化ＣＤ２７４遺伝子を含み、該ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、
（ｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４ポリペプチドの細胞内配列及び膜貫通配列をコードする核酸配列と、
（ｉｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターと
に操作可能に結合された、ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする核酸配列を含む、こととを含み、
該齧歯類は、機能的ヒト化ＣＤ２７４ポリペプチドを発現する、方法。
【請求項８】
遺伝子改変された齧歯類を作製する方法であって、該遺伝子改変された齧歯類のゲノムはヒト化ＣＤ２７４遺伝子を含み、該方法は、
齧歯類のゲノムを、改変されたゲノムが内在性ＣＤ２７４遺伝子座にヒト化ＣＤ２７４遺伝子を含むように改変することであって、該ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、
（ｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４ポリペプチドの細胞内配列及び膜貫通配列をコードする核酸配列と、
（ｉｉ）内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターと
に操作可能に結合された、ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする核酸配列を含む、ことを含み、
該齧歯類は、機能的ヒト化ＣＤ２７４ポリペプチドを発現する、方法。
【請求項９】
ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする前記核酸配列が、ヒトＣＤ２７４遺伝子のエキソン３と、エキソン４と、エキソン５の一部とを含む、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
ヒトＣＤ２７４ポリペプチドの細胞外配列をコードする前記核酸配列が、ヒトＣＤ２７４ポリペプチドのアミノ酸１９〜２３８をコードする、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１１】
内在性齧歯類ＣＤ２７４ポリペプチドの細胞内配列及び膜貫通配列をコードする前記核酸配列が、内在性齧歯類ＣＤ２７４遺伝子のエキソン６と、エキソン７と、エキソン５の一部とを含み、必要に応じて、前記ヒト化ＣＤ２７４遺伝子は、内在性齧歯類ＣＤ２７４遺伝子のエキソン１及びエキソン２をさらに含む、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１２】
腫瘍を処置することができる薬剤をスクリーニングするための方法であって、該方法は、
（ａ）請求項１に記載の齧歯類に、該齧歯類に腫瘍が形成されるように腫瘍細胞を投与する工程と、
（ｂ）工程（ａ）の該齧歯類に薬剤を投与する工程と、
（ｃ）工程（ｂ）の該齧歯類において腫瘍成長が低減されるかを決定する工程であって、ここで、腫瘍成長を低減する薬剤は、腫瘍を処置することができる、工程と
を含む、方法。
【請求項１３】
前記薬剤が、ヒトＣＤ２７４に対する抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記薬剤が、前記齧歯類に対して静脈内に、腹腔内に、筋肉内に、又は皮下に投与される、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記齧歯類がマウス又はラットである、請求項１〜３のいずれかに記載の遺伝子改変された齧歯類。
【請求項１６】
前記齧歯類がマウス又はラットである、請求項４に記載の単離された齧歯類細胞又は組織。
【請求項１７】
前記齧歯類がマウス又はラットである、請求項５に記載の単離された齧歯類胚性幹細胞。
【請求項１８】
前記齧歯類がマウス又はラットである、請求項６に記載の齧歯類胚。
【請求項１９】
前記齧歯類がマウス又はラットである、請求項７〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５１】
当業者は、典型的な標準偏差又は標準誤差が本明細書中に記載のアッセイ又は他のプロセスで得られた値に起因することを認識するであろう。発明の背景を記載し、その実施に関する更なる詳細を提供するために本明細書中で参照した刊行物、ウェブサイト、及び他の参考資料は、参照により本明細書に組み込まれる。
例えば、本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
（項目１）
ヒト部分と、内在性部分と、を含むＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを発現する齧歯類。
（項目２）
前記内在性部分が内在性ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞内部分を含む、項目１に記載の齧歯類。
（項目３）
前記内在性部分が内在性ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの膜貫通部分を更に含む、項目２に記載の齧歯類。
（項目４）
前記内在性部分が、図６に示すマウスＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの対応するアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を有する、項目３に記載の齧歯類。
（項目５）
前記ヒト部分が、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸１９〜２３８を含む、項目１〜４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目６）
前記ヒト部分が、図６に示すヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの対応するアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む、項目１〜４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目７）
ヒト部分と、内在性部分と、を含む前記ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドが、内在性ＣＤ２７４遺伝子座にあるＣＤ２７４遺伝子によってコードされる、項目１〜６のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目８）
前記ＣＤ２７４遺伝子が内在性ＣＤ２７４エキソン１、２、６、及び７を含む、項目７に記載の齧歯類。
（項目９）
前記ＣＤ２７４遺伝子が内在性ＣＤ２７４エキソン５の全体又は一部を更に含む、項目８に記載の齧歯類。
（項目１０）
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合された内在性部分及びヒト部分を含むＣＤ２７４遺伝子を含む齧歯類。
（項目１１）
前記齧歯類ＣＤ２７４プロモーターが内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターである、項目１０に記載の齧歯類。
（項目１２）
前記内在性部分が内在性ＣＤ２７４エキソン１、２、６、及び７を含む、項目１０又は１１に記載の齧歯類。
（項目１３）
前記内在性部分が内在性ＣＤ２７４エキソン５の全体又は一部を更に含む、項目１２に記載の齧歯類。
（項目１４）
前記内在性ＣＤ２７４遺伝子の内在性ＣＤ２７４エキソン１、２、５の全体又は一部、６、及び７が、図６に示すマウスＣｄ２７４遺伝子の対応するエキソン１、２、５の全体又は一部、６、及び７と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一である、項目１３に記載の齧歯類。
（項目１５）
前記ヒト部分が、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸１９〜２３８をコードする、項目１０〜１４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１６）
前記ヒト部分がヒトＣＤ２７４遺伝子のエキソン３及び４を含む、項目１０〜１４のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目１７）
前記ヒト部分が、ヒトＣＤ２７４エキソン５の全体若しくは一部、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸をコードするヌクレオチドを含むヒトＣＤ２７４エキソン５配列を更に含む、項目１６に記載の齧歯類。
（項目１８）
前記ヒトＣＤ２７４エキソン３、４、及び５の全体又は一部が、図６に示すヒトＣＤ２７４遺伝子の対応するエキソン３、４、及び５の全体又は一部と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一である、項目１７に記載の齧歯類。
（項目１９）
前記ヒト部分が、前記齧歯類での発現にコドン最適化される配列を含む、項目１７に記載の齧歯類。
（項目２０）
前記ヒト部分が配列番号８又は配列番号１２を含む、項目１０〜１９のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２１）
前記齧歯類がヒト化Ｐｄｃｄ１遺伝子を更に含み、前記ヒト化Ｐｄｃｄ１遺伝子が、ヒトＰＤ−１ポリペプチドの細胞外部分と、齧歯類ＰＤ−１ポリペプチドの細胞内部分と、を含む前記ＰＤ−１ポリペプチドを任意選択的にコードし、前記ヒト化Ｐｄｃｄ１遺伝子が、齧歯類Ｐｄｃｄ１エキソン１、４、及び５、ヒトＰｄｃｄ１エキソン２、並びにヒト部分と、非ヒト部分と、を含むＰｄｃｄ１エキソン３を任意選択的に含む、項目１〜２０のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２２）
前記齧歯類がラット又はマウスである、項目１〜２１のいずれか一項に記載の齧歯類。
（項目２３）
項目１〜２１のいずれか一項に記載の齧歯類によって産生されるＰＤ−Ｌ１ポリペプチドであって、図６に示すヒト化ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を任意選択的に含む、ＰＤ−Ｌ１ポリペプチド。
（項目２４）
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子をゲノムが含む、単離された齧歯類細胞又は組織。
（項目２５）
前記齧歯類ＣＤ２７４プロモーターが内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターである、項目２４に記載の単離された齧歯類細胞又は組織。
（項目２６）
前記ヒト部分が、ヒトＣＤ２７４エキソン３及び４を含み、前記ヒト部分が、任意選択的にヒトＣＤ２７４エキソン５の全体若しくは一部、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸をコードするヌクレオチドを含むヒトＣＤ２７４エキソン５配列を更に含む、項目２４又は２５に記載の単離された齧歯類細胞又は組織。
（項目２７）
ヒト化Ｐｄｃｄ１遺伝子を更に含み、前記ヒト化Ｐｄｃｄ１遺伝子が、ヒトＰＤ−１ポリペプチドの細胞外部分と、齧歯類ＰＤ−１ポリペプチドの細胞内部分と、を有するＰＤ−１ポリペプチドを任意選択的にコードし、前記ヒト化Ｐｄｃｄ１遺伝子が、齧歯類Ｐｄｃｄ１エキソン１、４、及び５、ヒトＰｄｃｄ１エキソン２、並びにヒト部分と、非ヒト部分と、を含むＰｄｃｄ１エキソン３を任意選択的に含む、項目２４〜２６のいずれか一項に記載の単離された齧歯類細胞又は組織。
（項目２８）
前記記齧歯類細胞又は組織がマウス細胞若しくはマウス組織、又はラット細胞若しくはラット組織である、項目２４〜２７のいずれか一項に記載の単離された齧歯類細胞又は組織。
（項目２９）
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子をゲノムが含む、齧歯類胚性幹細胞。
（項目３０）
前記齧歯類ＣＤ２７４プロモーターが内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターである、項目２９に記載の齧歯類胚性幹細胞。
（項目３１）
前記ヒト部分がヒトＣＤ２７４エキソン３及び４を含む、項目２９又は３０に記載の齧歯類胚性幹細胞。
（項目３２）
前記ヒト部分が、ヒトＣＤ２７４エキソン５の全体若しくは一部、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸をコードするヌクレオチドを含むヒトＣＤ２７４エキソン５配列を更に含む、項目３１に記載の齧歯類胚性幹細胞。
（項目３３）
項目２９〜３２のいずれか一項に記載の胚性幹細胞から生成された齧歯類胚。
（項目３４）
内在性ＣＤ２７４遺伝子座からＰＤ−Ｌ１ポリペプチドを発現する齧歯類を作製する方法であって、前記ＰＤ−Ｌ１ポリペプチドがヒト配列を含み、前記方法が、
（ａ）齧歯類胚性幹細胞内の内在性ＣＤ２７４遺伝子にゲノムフラグメントを挿入することであって、前記ゲノムフラグメントが、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの全体又は一部をコードするヌクレオチド配列を含む、ことと、
（ｂ）（ａ）で生成した齧歯類胚性幹細胞を得ることと、
（ｃ）（ｂ）の齧歯類胚性幹細胞を使用して齧歯類を作製することと、を含む、方法。
（項目３５）
前記ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの全体又は一部が、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸１９〜２３８を含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ヌクレオチド配列が、ヒトＣＤ２７４エキソン３及び４を含む、項目３４又は３５に記載の方法。
（項目３７）
前記ヌクレオチド配列が、ヒトＣＤ２７４エキソン５の全体若しくは一部、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸をコードするヌクレオチドを含むヒトＣＤ２７４エキソン５配列を更に含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子をゲノムが含む、齧歯類を作製する方法であって、この方法が、
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子を含むように齧歯類のゲノムを改変することであって、それによって該齧歯類を作製することを含む、方法。
（項目３９）
前記齧歯類ＣＤ２７４プロモーターが内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターである、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記ヒト部分が、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸１９〜２３８を含む、項目３８又は３９に記載の方法。
（項目４１）
前記ＣＤ２７４遺伝子が、ヒトＣＤ２７４エキソン３及び４を含むように改変される、項目３８〜４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
前記ＣＤ２７４遺伝子が、ヒトＣＤ２７４エキソン３、４、及び５の全体又は一部を含むように改変され、前記ＣＤ２７４遺伝子が、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸をコードするヌクレオチドを含むヒトＣＤ２７４エキソン５配列を任意選択的に含む、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記齧歯類がマウス又はラットである、項目３４〜４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
項目３４〜４３のいずれか一項に記載の方法から得られる齧歯類。
（項目４５）
前記齧歯類がマウス又はラットである、項目４４に記載の齧歯類。
（項目４６）
齧歯類での腫瘍成長を低減する方法であって、前記方法が、
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子をゲノムが含む齧歯類にヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤を投与する工程を含み、
前記投与する工程が、前記齧歯類での腫瘍成長を低減する十分な条件下で、かつかかる時間にわたって実行される、方法。
（項目４７）
齧歯類で腫瘍細胞を死滅させる方法であって、前記方法が、
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子をゲノムが含む齧歯類にヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤を投与する工程を含み、
前記投与する工程が、前記薬剤が前記齧歯類での腫瘍細胞の死滅を媒介する十分な条件下で、かつかかる時間にわたって実行される、方法。
（項目４８）
ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤の薬物動態特性を評価する方法であって、前記方法が、
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子をゲノムが含む齧歯類にヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤を投与する工程と、
前記ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤の１つ又は２つ以上の薬物動態特性を判定するアッセイを実行する工程と、を含む、方法。
（項目４９）
ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤の効果を評価する方法であって、前記方法が、
齧歯類ＣＤ２７４プロモーターに操作可能に結合されたヒト部分及び内在性部分を有するＰＤ−Ｌ１ポリペプチドをコードするＣＤ２７４遺伝子をゲノムが含む齧歯類にヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤を投与する工程と、
前記ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤の効果を判定するアッセイを実行する工程と、を含む方法。
（項目５０）
前記ヒト部分が、ヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドの細胞外部分のアミノ酸、又はヒトＰＤ−Ｌ１ポリペプチドのアミノ酸１９〜２３８を含む、項目４６〜４９のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤がＰＤ−Ｌ１アンタゴニストである、項目４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤がＰＤ−Ｌ１アゴニストである、項目４８〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５３）
前記ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤が抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、項目４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５４）
前記ヒトＰＤ−Ｌ１を標的化する薬剤が、前記齧歯類に対して静脈内に、腹腔内に、筋肉内に、又は皮下に投与される、項目４６〜５３のいずれか一項に記載の方法。
（項目５５）
前記齧歯類ＣＤ２７４プロモーターが内在性齧歯類ＣＤ２７４プロモーターである、項目４６〜５４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５６）
前記齧歯類がマウス又はラットである、項目４６〜５５のいずれか一項に記載の方法。