(57)【要約】  還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造方法及び製造装置、並びにその製造方法を用いて製造される還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を提供する。（１）アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造すること；及び（２）その混合液を透析して、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を製造することを含み、（３）アルブミンの濃度を調節することを含んでよい、アルブミンを含む溶液の製造方法である。この方法によって製造されるアルブミンを含む溶液は、増加した還元型アルブミンの割合を長期間維持し得る。
2018092241.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造すること；及び
（２）その混合液を透析して、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を製造すること
を含み、
（３）アルブミンの濃度を調節することを含んでよい、
還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造方法。
【請求項２】
（１）で、アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合してから１０〜９０分間後に、
（２）で、その混合液を、１０〜１２０分間透析する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
ＳＨ基を有する還元剤は、システインを含む、及び／又は
ＳＨ基を有する還元剤とアルブミンとのモル比（ＳＨ基を有する還元剤／アルブミン）は、０．２〜５．０である、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液は、透析後、２０〜３０℃で一日間保管し、更に４℃で二日間の合計で三日間保管後、還元型アルブミンの割合が５０％以上である、又はアルブミン含有溶液の還元型アルブミンの割合より少なくとも１０％高い、請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項５】
（３）調節工程を含み、更に（４）ろ過工程を含む製造方法であり、
アルブミン含有溶液は、腹水を含み、（４）ろ過工程で、ろ過されてアルブミンより大きな分子が除去され、（３）調節工程でアルブミン濃度が増加される、請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法で製造される、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液。
【請求項７】
（１）におけるアルブミン含有溶液が、腹水から選択される、請求項６記載のアルブミンを含む溶液。
【請求項８】
（Ｉ）アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造する混合部；及び
（II）その混合液を透析して、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を製造する透析部、を含み、
（III）アルブミン濃度を調節する調節部を含んでよい
還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造装置。
【請求項９】
少なくとも下記（ｉ）〜（iv）の少なくとも一を満たす、請求項８に記載の製造装置。
（ｉ）  （Ｉ）混合部で、アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを、１０〜９０分間混合後、（II）透析部で、その混合液を透析する；
（ii）  （II）透析部で、混合液を１０分間〜１２０分間透析する；
（iii）  ＳＨ基を有する還元剤は、システインを含む；及び
（iv）  ＳＨ基を有する還元剤と、アルブミン含有溶液中のアルブミンとのモル比（ＳＨ基を有する還元剤／アルブミン）は、０．２〜５．０である。
【請求項１０】
（III）調節部を含み、（IV）ろ過部を更に含む製造装置であって、
アルブミン含有溶液は、腹水を含み、（IV）ろ過部で、ろ過されてアルブミンより大きな分子が除去され、（III）調節部で、アルブミン濃度が増加される、請求項８又は９に記載の製造装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液のより容易で簡便な製造方法及び製造装置、並びにその製造方法を用いて製造される還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液に関する。本発明に関する製造方法及び装置によって製造される還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液は、増加した還元型アルブミンの割合をより長期間維持することができる。
【背景技術】
【０００２】
アルブミン（alb）は、約６００個のアミノ酸からできた分子量約６６，０００のたんぱく質であり、血漿タンパク質のうち約６０％を占め、血漿膠質浸透圧の維持及び物質の輸送等の生理機能を有する。
アルブミンは、Ｎ末端から３４番目に存在するシステイン残基のＳＨ基が遊離の状態の還元型アルブミン（ＨＭＡ）と、血中のシステイン（Cys）やグルタチオン等とジスルフィド（Ｓ−Ｓ）結合した状態の酸化型アルブミン（ＨＮＡ）との混合物として存在する。本発明者の検討では、健常人の血液中のアルブミンは、約７０％の還元型と約３０％の酸化型を含む。しかし、肝硬変患者、慢性腎不全患者、糖尿病患者、麻酔及び手術時の患者等では、還元型アルブミンの割合が減少することが報告されている。【０００３】
そこで、近年、アルブミン全体の量のみならず、アルブミン全体に占める還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）及び酸化型アルブミンの割合（ＨＮＡ％）が注目されている。種々の病気の患者では、ＨＭＡ％が減少するので、ＨＭＡ％を増加させることが検討されている（特許文献１〜３参照）。【０００４】
特許文献１は、生体内においてＨＮＡ％を低下させる薬剤として、イソロイシン、ロイシン、及びバリンから選ばれる少なくとも１種の分岐鎖アミノ酸を含有する酸化型アルブミン低下剤を提案する（特許文献１特許請求の範囲参照）。具体的には、イソロイシン、ロイシン及びバリンの重量比が１：２：１．２である顆粒を、７名の肝硬変患者が１日３回食後に服用し、その血清アルブミン中のＨＮＡ％が測定された。投与開始時のＨＮＡ％は、約４０％であったが、８週間後に約３３％になった（特許文献１実施例１及び図１参照）。【０００５】
特許文献２は、アルブミンを有効成分とする第１静注剤と、システイン又はその類縁化合物を含有する第２静注剤を混合してなるアルブミン含有静注剤を使用すると、ＨＭＡ％が増加し、より高い治療効果が期待できることを提案する（特許文献２特許請求の範囲及び［００１１］参照）。具体的には、約３０％のＨＭＡ％を有する静注用アルブミン製剤に、システイン塩酸塩を含む強力ネオミノファーゲンシー（登録商標）静注を混合して、ＨＭＡ％の変化を調べた。混合後１０分でＨＭＡ％は約６４％に上昇し、１５分でＨＭＡ％は約７０％（最大値）になった。しかし、６０分でＨＭＡ％は約６６％になり、９時間後に、ＨＭＡ％は約４０％に減少した（特許文献２実施例１参照）。
尚、特許文献２では、より具体的には、アルブミンを有効成分とする第１静注剤と、システイン又はその類縁化合物を含有する第２静注剤を混合して得られるアルブミン含有静注剤をそのまま患者に点滴で投与する（特許文献２請求項９〜１６、［００６１］〜［００７２］、図１〜図６参照）。【０００６】
特許文献３は、ＨＮＡ％が６０％未満のアルブミンを提供する工程（１）、及び工程（１）のアルブミンを水性溶媒に溶解する工程（２）を含む、肝疾患に伴う浮腫の予防又は治療用アルブミン製剤の製造方法を記載する（特許文献３［００６４］参照）。
特許文献３の方法は、工程（１）において、システインを還元剤として使用して、ＨＮＡ％が６０％未満であるアルブミンを製造する場合、還元反応後の混合物から未反応のシステインを含む低分子化合物を除去して、ＨＮＡ％が６０％未満のアルブミンを精製することを含み、工程（２）において、精製したアルブミンを水性溶媒に溶解し、１０〜５０ｍｇ／１００ｍＬのシステインを還元型維持剤として添加することを含む（特許文献３［００６９］参照）。アルブミンの精製は、クロマトグラフィー又は限外ろ過によって行われ、抽出液として、ギ酸−アセトニトリル水溶液が使用される（特許文献３［００５７］、［００８５］〜［００８７］）。
特許文献３は、アルブミンを精製することで、ＨＰＬＣを用いて、ＨＮＡ％とＨＭＡ％を安定に高精度で定量できることを示す（特許文献３［００２１］参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１５−２８０５２号公報
【特許文献２】ＷＯ２０１２／１２１０９４Ａ１
【特許文献３】ＷＯ２００９／１２３１６２Ａ１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ところで、肝疾患又は種々の侵襲で消耗した患者のアルブミンを補うため、人の血液から製造されるアルブミン製剤がしばしば使用される。アルブミン製剤は、「加熱人血漿たんぱく」及び「人血清アルブミン」の２種類に分類され、総たんぱく質を基準とするアルブミン純度とアルブミン濃度が、規定されている。アルブミン（Alb）製剤のＨＭＡ％は、本発明者らの検討によると、約３９％〜約４２％であり、上述の健常者の血液中アルブミンのＨＭＡ％と比較すると明らかに低い。血液ドナーの身体的背景、血漿からアルブミン画分を分離する工程、及び保管中の自然酸化などにより、還元型アルブミンが酸化されたと考えられる。
このアルブミン製剤の形態（濃度及び純度）そのままで、そのＨＭＡ％を増加させて、その増加したＨＭＡ％を長期間維持することができれば、上述の種々の患者にそのアルブミン製剤をそのまま使用できることが期待される。【０００９】
一方、末期の肝硬変及び癌性腹膜炎に伴う難治性腹水症の患者には、腹水の貯留による膨満感及び呼吸困難などが生ずるので、対症療法として腹水の穿刺排液が行われている。しかし、腹水の排液によって、患者の体内の貴重な蛋白質が喪失される。即ち、アルブミンも失われるという問題がある。
そこで、腹水ろ過器（例えば、旭化成メディカル社製AHF-MO（商品名））及び腹水濃縮器（例えば、旭化成メディカル社製AHF-UNH（商品名））を用いて、患者の腹水からろ過で不要の細胞等を除去し、過剰の水分を除去して（例えば、約１０〜約１５倍に濃縮して）、アルブミンの濃度等を調節した、ろ過濃縮後の腹水を、患者本人の血液へ戻す腹水濃縮再静注療法(Cell-free and Concentrated Ascites Reinfusion Therapy，以下「CART」ともいう)が行われている。【００１０】
本発明者は、CART症例患者の腹水中のアルブミンのＨＭＡ％を測定した。肝障害症例患者の腹水中のアルブミンのＨＭＡ％は著しく低かった（約３．８％〜約２０．１％）。アルブミンは肝臓で合成される。肝障害のために機能低下した肝臓で作られるアルブミンは少なく、それが患者の体内を長時間循環し、ＨＭＡ％が低下したと考えられる。
従って、CART症例患者の腹水のアルブミンのＨＭＡ％を増加させ、その増加したＨＭＡ％を長期間維持することができれば、その腹水を患者に有用に使用できると期待される。【００１１】
特許文献１では、ＨＭＡ％が低いアルブミンについて、ＨＭＡ％を増加させて、その増加したＨＭＡ％を長期間維持することが可能か否か、不明である。しかも、特許文献１の薬剤を、長期間（具体的には２月間）毎日３回食後に服用しなければならない。【００１２】
特許文献２では、アルブミン製剤に、還元剤を加えることで、ＨＭＡ％を増加した静注剤が得られる。
しかし、増加したＨＭＡ％は、長時間維持されない。本発明者の検討では、還元剤を加えた３日後に、ＨＭＡ％は、元の値（例えば、約３０％〜約３６％）に戻る。特許文献２の静注剤の効果は、１日持続することを期待できない。【００１３】
特許文献３では、システインと混合したアルブミンを、限外ろ過又はクロマトグラフィーによって精製する。精製するために、ギ酸−アセトニトリル水溶液を使用するので、人に投与することは困難である。アルブミンの安定性及び還元状態を維持することを目的として、アセチルトリプトファン及びシステインが添加されると考えられる（特許文献３［００６２］参照）。しかし、これらの化合物は患者にとって必ずしも必要ではないので含まない方が好ましい（特許文献３［００８８］〜［００８９］参照）。そして、アセチルトリプトファン及びシステインを添加したとしても、増加したＨＭＡ％が、長期間維持されるか不明であり、その効果の持続性も不明である。【００１４】
更に、酸化型アルブミン（ＨＮＡ）には、１型（ＨＮＡ１）と２型（ＨＮＡ２）がある。従って、ＨＮＡの割合（ＨＮＡ％）は、ＨＮＡ１の割合（ＨＮＡ１％）とＨＮＡ２の割合（ＨＮＡ２％）の合計である（ＨＮＡ％＝ＨＮＡ１％＋ＨＮＡ２％）。還元型アルブミン（ＨＭＡ）と１型の酸化型アルブミン（ＨＮＡ１）は、相互に変換可能である。１型の酸化型アルブミン（ＨＮＡ１）は、２型の酸化型アルブミン（ＨＮＡ２）に変換され得るが、ＨＮＡ２は、ＨＮＡ１に変換されることはない。従って、ＨＮＡ１からＨＮＡ２に変換されないようにすること、即ち、ＨＮＡ２％の増加を抑制することが重要と考えられる。一旦、ＨＮＡ２に変換されたら、ＨＮＡ１に変換できず、その結果ＨＭＡにも変換できないからである。ゆえに、ＨＮＡ１からＨＮＡ２に変換されないような（又は変換され難いような）、方法が求められている。特許文献１〜３は、いずれも、ＨＮＡには、ＨＮＡ１とＨＮＡ２があること、ＨＮＡ１％とＨＮＡ２％について、何ら言及するものではない。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、驚くべきことに、アルブミン溶液に、ＳＨ基を有する還元剤を加えて混合後、透析することで、還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）が増加したアルブミン溶液を得ることができ、しかもその増加したＨＭＡ％が長期間にわたって維持され得ることを見出した。【００１６】
即ち、本発明は、一の要旨において、
（１）アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造すること；及び
（２）その混合液を透析して、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を製造すること、を含み、
（３）還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液のアルブミンの濃度を調節することを含んでよい、
還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造方法を提供する。【００１７】
本発明は、他の要旨において、本発明の製造方法で製造される、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を提供する。【００１８】
本発明は、更なる要旨において、
（Ｉ）アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造する混合部；及び
（II）その混合液を透析して、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を製造する透析部、を含み、
（III）還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液のアルブミン濃度を調節する調節部を、更に含んでよい、
還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造装置を提供する。
【発明の効果】
【００１９】
本発明に関する還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）が増加したアルブミンを含む溶液の製造方法及び製造装置によって、より容易で簡便に、ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を製造することができる。そのＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、増加したＨＭＡ％を長期間維持し得る。そのアルブミンを含む溶液は、好ましくは、特別な処理、添加剤の添加等を要することなく、そのままの形態で患者に使用することができる。ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、アルブミン本来の役割である血中膠質浸透圧の保持及び物質運搬能等を長時間持続でき、病態の改善により寄与する可能性が有る。【００２０】
更に、本発明に関する製造方法を使用すると、ＨＭＡ％が増加した、腹水（又はろ過濃縮後腹水）を製造することができ、腹水はその増加したＨＭＡ％を長時間維持し得る。従って、CART症例患者について、本発明の製造方法を利用して、処理した腹水（又はろ過濃縮後腹水）を、患者本人に用いることができるので、患者本人由来のアルブミンを用いることができる。従って、そのまま患者本人の血管内に戻すことができる。その腹水に含まれるアルブミンのＨＭＡ％は増加し、その増加が長時間維持され得るので、アルブミン本来の役割である血中膠質浸透圧の保持及び物質運搬能等を長時間持続し得、患者の病態の改善に、より寄与する可能性が有る。【００２１】
また、本発明に関する製造方法を使用すると、ＨＭＡ％を増加しながら（又は減少させることなく）、２型の酸化型アルブミンの割合（ＨＮＡ２％）の増加を抑制可能な、アルブミン製剤を製造することができる。そのアルブミン製剤はそのＨＭＡ％を長時間維持し、ＨＮＡ２％の増加を抑制することができる。従って、本発明の製造方法を利用して、アルブミン製剤を製造すると、増加したＨＭＡ％を維持し得、アルブミン本来の役割である膠質浸透圧の保持、物質運搬ならびに抗酸化作用などを長時間持続し得、患者の病態の改善に、より寄与する可能性が有る。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、本発明の一の形態の還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造装置を示す。
【図２】図２は、本発明の他の形態の還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造装置を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、添付した図面も参照しながら、本発明の実施の形態を詳細に説明する。ただし、本発明は、これらの形態によって制限されることはない。
【００２４】
本発明の形態の還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）が増加したアルブミン溶液の製造方法は、
（１）アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造すること；及び
（２）その混合液を透析して、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を製造することを含み、
（３）アルブミンの濃度を調節することを含んでよい。
【００２５】
（１）工程において、原料としてのアルブミン含有溶液と、酸化型アルブミンを還元するＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造する。
アルブミン含有溶液（原料）は、有効成分として少なくともアルブミンを含む溶液で有り、本発明が目的とするＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を得られる限り、特に、制限されることはない。
アルブミン含有溶液の溶媒は、水性媒体であることが好ましく、「水性媒体」として、例えば、減菌水、生理食塩水、生理的緩衝液等を例示することができる。
【００２６】
アルブミン含有溶液は、本発明が目的とするＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を得られる限り、医薬上許容される添加剤（例えば、ビタミン類、電解質、微量元素、栄養素、安定化剤、酸化防止剤等）を含むことができる。
【００２７】
アルブミン含有溶液（原料）は、特に制限されることはないが、例えば、「加熱人血漿たんぱく」及び「人血清アルブミン」等の人のアルブミン製剤、腹水症患者の腹水、血漿、遺伝子組み換え技術により製造された組み換え型アルブミンを含む溶液等を例示することができる。
アルブミン製剤として、例えば、日本赤十字社製の赤十字アルブミン２５％静注（商品名）、ベネシス社製の献血アルブミン２５％静注（商品名）及び献血アルブミン５％静注（商品名）、化血研社製の献血アルブミン２５（商品名）、日本製薬社製の献血アルブミン２５（商品名）及び献血アルブミン５（商品名）、ＣＳＬベーリング社製のアルブミナー２５％静注（商品名）及びアルブミナー５％静注（商品名）、バクスター社製のブミネート静注液２５％（商品名）及びブミネート静注液５％（商品名）等を例示することができる。
腹水症患者の腹水には、例えば、末期の肝硬変、癌性腹膜炎等に伴う腹水症の患者の腹水が含まれる。
血漿には、例えば、新鮮凍結血漿製剤などが含まれる。
遺伝子組み換え技術により製造された組み換え型アルブミンを含む溶液には、田辺三菱製薬社製のメドウェイ注などが含まれる。
【００２８】
アルブミン含有溶液（原料）のアルブミン濃度は、アルブミン含有溶液の流動性とアルブミン利用の効率性から、０．１〜３０ｇ／１００ｍＬであることが好ましく、０．５〜２５ｇ／１００ｍＬであることがより好ましく、５〜２５ｇ／１００ｍＬであることが特に好ましい。
原料としてのアルブミン含有溶液のＨＭＡ％は、特に制限されることはない。アルブミン含有溶液のＨＭＡ％は、６０％以下であることが好ましく、４５％以下であることがより好ましい。原料として腹水症患者の腹水の場合は、２〜３５％であることが好ましく、４〜２５％であることが特に好ましい。
【００２９】
「ＳＨ基を有する還元剤」として、例えば、システイン及びその誘導体を例示することができる。ＳＨ基を有する還元剤は、システインを含むことが好ましい。システインとして、例えば、Ｌ−システイン、Ｄ−システイン及びＤＬ−システインを例示することができ、Ｌ−システインを含むことがより好ましい。システインの誘導体として、ＳＨ基以外の部分が修飾されたシステインを例示することができ、例えば、Ｎ−アセチルシステイン、システインの塩（システイン塩酸塩など）を含む。
ＳＨ基を有する還元剤は、溶液の形態で、アルブミン含有溶液と混合することができる。その溶媒は、上述の水性媒体であることが好ましい。
【００３０】
ＳＨ基を有する還元剤は、そのまま固体で使用することができるが、溶液にして使用することができる。その溶液は、本発明が目的とするＨＭＡ％が増加したアルブミン溶液を得られる限り、医薬上許容される添加剤（例えば、ビタミン類、電解質、微量元素、栄養素、安定化剤、酸化防止剤等）を含むことができる。
ＳＨ基を有する還元剤を含む溶液のＳＨ基を有する還元剤の濃度は、特に制限されることはないが、０．０５〜５ｇ／１００ｍＬであることが好ましく、０．０８〜３ｇ／１００ｍＬであることがより好ましく、０．２〜１ｇ／１００ｍＬであることが特に好ましい。
【００３１】
ＳＨ基を有する還元剤とアルブミン含有溶液のアルブミンとのモル比（ＳＨ基を有する還元剤／アルブミン）は、０．２〜５．０であることが好ましく、０．５〜２．０であることがより好ましく、１．０〜２．０であることが特に好ましい。ＳＨ基を有する還元剤と原料アルブミン溶液のアルブミンとのモル比（ＳＨ基を有する還元剤／アルブミン）が、０．２〜５．０である場合、ＨＮＡ１からＨＭＡへの転換がより効率的に行われるので、好ましい。
【００３２】
ＳＨ基を有する還元剤とアルブミン含有溶液の混合方法は、特に制限されることはなく、通常使用される方法を用いて混合することができる。そのような混合方法として、例えば、滅菌注射器を使用する方法を例示することができる。混合条件は、特に制限されることはないが、例えば、４〜４０℃の温度、好ましくは４〜３５℃の温度、より好ましくは４〜３０℃、更により好ましくは１５〜３０℃、特に好ましくは２０〜３０℃の温度を含むことができる。１０〜９０分間の混合時間が好ましく、１５〜９０分間の混合時間がより好ましく、２０〜７５分間の混合時間が更に好ましく、３０〜６０分間の混合時間が特に好ましい。
【００３３】
本発明の形態の製造方法は、ろ過工程（４）を有することができる。ろ過工程（４）は、（１）工程と（２）工程の間で行うことが好ましい。ろ過工程（４）では、アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤との混合液をろ過して、アルブミンより大きな不要な物質（例えば、細胞等）を除去することができる。不要な物質は、ろ過工程で、排出することができる。尚、上述の混合時間中にろ過が行われても良い。
【００３４】
（２）工程で、アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤との混合液を透析して、ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を製造することができる。
アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合したときから１０〜９０分後に透析する（透析を開始する）ことが好ましく、１５〜９０分後に透析することがより好ましく、２０〜７５分間後に透析することが更に好ましく、３０〜９０分後に透析することがより好ましく、３０〜６０分後に透析することが特に好ましい。
【００３５】
透析方法及び条件は、本発明が目的とするＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を得ることができる限り特に制限されることはない。アルブミン含有溶液に応じて、適宜透析方法及び条件を選択することができる。例えば、血液透析などに使用されるダイアライザー及び透析装置を用いて、透析することができる。中空糸膜を用いる（中空糸型）ダイアライザーが好ましく、ポリスルホン中空糸膜を用いるダイアライザーが好ましい。更に、アルブミン非漏出型のダイアライザーを用いて透析することが好ましい。アルブミン非漏出型のダイアライザーに含まれる中空繊維の孔の大きさは、アルブミンの透過を阻止するための大きさに適するので、好ましい。
【００３６】
透析温度は、４〜４０℃であることが好ましく、４〜３５℃であることがより好ましく、４〜３０℃であることが更に好ましく、１５〜３０℃であることが更により好ましく、２０〜３０℃であることが特に好ましい。
透析時間は、１０〜１２０分間であることが好ましく、２０〜９０分間であることがより好ましく、３０〜６０分間であることが最も好ましい。
混合液の流速は、０〜１０００ｍｌ／ｍｉｎであることが好ましく、４０〜７００ｍｌ／ｍｉｎであることがより好ましく、７０〜４００ｍｌ／ｍｉｎであることが更により好ましく、１００〜２００ｍｌ／ｍｉｎであることが特に好ましい。
透析液は、生理食塩水、リンゲル液、血液透析用透析液（又は透析剤）等が好ましく、生理食塩水、血液透析用透析液がより好ましい。
透析液の流速は、０〜７００ｍｌ／ｍｉｎであることが好ましく、１００〜６６０ｍｌ／ｍｉｎであることがより好ましく、２５０〜６３０ｍｌ／ｍｉｎであることが更により好ましく、４００〜６００ｍｌ／ｍｉｎであることが特に好ましい。
透析は、混合液と透析液を半透膜で隔てて静置して行うこともできるので、混合液の流速と透析液の流速はともに、０ｍｌ／ｍｉｎであり得る。
【００３７】
透析液として、市販の血液透析液（又は透析剤）を使用することができる。液体の透析剤は、適宜水で希釈して、粉末の透析剤は、適宜水に溶解して使用することができる。そのような透析剤として、例えば、扶桑薬品工業社製のキンダリー透析剤（商品名）、富田製薬社製のキドライム透析剤（商品名）、ニプロファーマ社製のリンパック透析剤（商品名）、日機装社製のＤドライ透析剤（商品名）、味の素製薬社製のハイソルブ透析剤（商品名）及びカーボスター透析剤（商品名）等を使用することができる。
【００３８】
ダイアライザーは、原料としてのアルブミン含有溶液に応じて、市販の血液透析用のダイアライザー及び腹水用の濃縮器等を適宜使用することができる。
ダイアライザーの膜面積は０．０００１〜５．０ｍ２であることが好ましく、０．００１〜３．０ｍ２であることがより好ましく、０．０１〜２．０ｍ２であることが更により好ましく、０．１〜１．０ｍ２であることが特に好ましい。
そのようなダイアライザーとして、例えば、旭化成メディカル社製の中空糸型透析器（ポリスルホンダイアライザー）ＡＰＳ−ＳＡ（商品名）、ＶＰＳ−ＨＡ（商品名）等、東レメディカル社製のＴＳ−Ｓ（商品名）、ＣＳ−Ｓ（商品名）等、フレゼニウス社製のＦＸ（商品名）、ＦＸ−Ｓ（商品名）等、ニプロ社製のＦＢ−ＥＧ（商品名）、ＦＢ−ＵＨ（商品名）等、を例示できる。
【００３９】
透析の間に、アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤との混合液は、少なくとも１回、ダイアライザーを通過する。少なくとも２回通過することが好ましく、少なくとも３回通過することがより好ましく、２回〜３回通過することが特に好ましい。
【００４０】
（３）工程で、アルブミンの濃度を、更に調節することができる。アルブミンの濃度が、目的とする濃度より高ければ低くすることができ、アルブミンの濃度が、目標とする濃度より低ければ高くすることができる。
アルブミン濃度の調節は、既知の方法を用いて行うことができ、例えば、ダイアライザー、限外濾過膜、真空凍結乾燥装置等を使用することができる。
アルブミン含有溶液（原料）が、腹水、血漿等の場合、アルブミンの濃度を、高めることが好ましい。
アルブミンの濃度の測定方法は、公知の方法を用いることができる。
【００４１】
本発明では、上述の製造方法で製造されるＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を提供する。
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、アルブミンを１〜３０ｇ／１００ｍＬ含むことが好ましく、アルブミンを２〜３０ｇ／１００ｍＬ含むことがより好ましく、３〜２５ｇ／１００ｍＬ含むことが更により好ましく、アルブミンを５〜２５ｇ／１００ｍＬ含むことが特に好ましい。
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液のアルブミンの濃度は、アルブミン含有溶液（原料）の濃度と対応してもしなくてもよく、適切な濃度であることが好ましいが、透析の際に、濃度を適宜調節することもできる。
【００４２】
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液のＨＭＡ％は、透析終了時から、好ましくは室温（２０〜３０℃の温度）で約１日後に、好ましくは更に４℃で２日（合計で３日）後に、アルブミン含有溶液（原料）のＨＭＡ％より、少なくとも１０％高いことが好ましく、少なくとも１５％高いことがより好ましく、少なくとも２０％高いことが更に好ましく、少なくとも２５％高いことが更により好ましく、少なくとも３０％高いことが特に好ましい。
【００４３】
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液のＨＭＡ％は、透析終了時から、好ましくは室温（２０〜３０℃の温度）で約１日後に、好ましくは更に４℃で２日（合計で３日）、より好ましくは更に４℃で６日（合計で７日）、又はより好ましくは更に１４日（合計で１５日）後に、少なくとも５０％であることが好ましく、少なくとも５５％であることがより好ましく、少なくとも６０％であることが更により好ましく、少なくとも６５％であることが特に好ましい、少なくとも７０％であることが最も好ましい。
【００４４】
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、透析終了時から、好ましくは室温（２０〜３０℃の温度）で１日保存後に、好ましくは更に４℃の温度で２日（合計３日）保存後に、還元型アルブミンの割合が５０％以上であることが好ましく、５５％以上であることがより好ましく、６０％以上であることが更により好ましく、６５％以上であることが特に好ましく、７０％以上であることが最も好ましい。
【００４５】
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、透析終了時から１日間は、好ましくは４〜３０℃の温度で、より好ましくは２０〜３０℃の温度で、密閉して、外気と遮断した状態で、暗所にて、常圧で保存することができる。４℃の温度（冷蔵庫内）で保存することができ、−１０〜−２０℃の温度（冷凍庫内）で保管することができ、−６０〜−８０℃の温度（ディープフリーザー内）で保存することができる。更に、例えば、窒素及びアルゴン等の不活性気体の雰囲気下で保存することが好ましい。
【００４６】
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、透析終了時から１日以上保存する場合、４℃の温度（冷蔵庫内）で保存することがより好ましく、−１０〜−２０℃の温度（冷凍庫内）で保管することがより好ましく、−６０〜−８０℃の温度（ディープフリーザー内）で保存することがより好ましい。密閉して、外気と遮断した状態で、常圧で保存することが好ましい。更に、例えば、窒素及びアルゴン等の不活性気体の雰囲気下で保存することが好ましい。
【００４７】
ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、透析されているので、特別な処理、添加剤の添加等を要することなく、そのままの形態で患者に使用することができる。
ところで、例えば、「人血清アルブミン」等の人のアルブミン製剤をアルブミン含有溶液（原料）として使用して、その溶液を、ＳＨ基を有する還元剤と混合して、ＭＨＡ％を増加した混合液を得ることができる。原料のアルブミン製剤には、添加剤としてＮ−アセチルトリプトファンが大量に添加されているので、得られた混合液にも、その添加剤が大量に含まれる。そのような添加剤は、必ずしも摂取しない方が、患者にとって好ましい。本発明では、混合液を透析する。添加剤のＮ−アセチルトリプトファンは小分子なので、混合液から除去することができ、得られるＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液には、多量のＮ−アセチルトリプトファンが含まれることはなくより好ましい。
更に、ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、透析されているので、より生理的に好ましい電解質濃度を有し得る。
尚、本発明の形態のＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液は、医薬上許容される添加剤（例えば、ビタミン類、電解質、微量元素、栄養素、安定化剤、酸化防止剤等）を、必要に応じて、含むことができる。
【００４８】
ところで、ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液には、ＳＨ基を有する還元剤を加えないことが好ましい。未反応のＨＮＡ１が存在すると、ＨＮＡ１とＳＨ基を有する還元剤（例えば、システイン）によって、更にＨＭＡが得られる。しかし、ＳＨ基を有する還元剤（例えば、システイン）が残留し、それからジスルフィド結合を有する化合物（例えば、シスチン）が生成し、それが滞留し得る。そのジスルフィド結合を有する化合物とＨＭＡが反応して、ＨＮＡ１が再度生成し得る。従って、長期間保存する場合、ＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液に、ＳＨ基を有する還元剤（例えば、システインなど）を加えないことが好ましい。
【００４９】
本発明は、更に、
（Ｉ）アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤とを混合して、混合液を製造する混合部；及び
（II）その混合液を透析して、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を製造する透析部を含み、
（III）アルブミン濃度を調節する調節部を、更に含んでよい、
還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）が増加したアルブミンを含む溶液の製造装置を提供する。
【００５０】
（Ｉ）混合部における、「アルブミン含有溶液」、「ＳＨ基を有する還元剤」、「混合液」、「混合」、（II）透析部における、「透析」、「還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液」等は、上述した通りである。
【００５１】
（Ｉ）混合部は、本発明が目的とするＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を得ることができる限り、特に制限されることはなく、通常使用される混合装置であってよい。そのような混合部として、例えば、滅菌状態を有する容器及び袋等を例示することができる。
（Ｉ）混合部で、アルブミン含有溶液と、ＳＨ基を有する還元剤が混合される。その混合条件は、上述のＳＨ基を有する還元剤とアルブミンとのモル比（ＳＨ基を有する還元剤／アルブミン）、混合温度、混合時間などであることが好ましい。
【００５２】
本発明の形態の製造装置は、ろ過部（IV）を有することができる。ろ過部（IV）は、（Ｉ）混合部と（II）透析部の間に設けることが好ましい。ろ過部はろ過器を有し、アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤との混合液をろ過して、アルブミンより大きな不要な物質（例えば、細胞等）を除去することができる。不要な物質は、適宜ろ過器から排出することができる。
【００５３】
（II）透析部は、本発明が目的とするＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液を得ることができる限り、特に制限されることはなく、通常使用される透析装置であってよい。そのような透析部として、例えば、血液透析装置、アフェレーシス装置等を例示することができる。透析部は、ダイアライザー及び透析液供給装置等を含むことができる。
【００５４】
（II）透析部は、アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤との混合液を透析し、その際の透析条件は、上述の透析温度、透析時間、透析液などであることが好ましい。
【００５５】
（III）調節部では、アルブミンの濃度を、更に調節することができる。アルブミンの濃度が、目的とする濃度より高ければ低くすることができ、アルブミンの濃度が、目標とする濃度より低ければ高くすることができる。
調節部は、既知の濃度調節デバイスを用いることができる。そのようなデバイスとして、例えば、ダイアライザー、真空凍結乾燥装置、限外濾過膜、アフェレーシス装置等を例示することができる。
アルブミン含有溶液（原料）が、腹水、血漿等の場合、アルブミンの濃度を、（III）調節部で高めることが好ましい。
【００５６】
図１は、本発明の一の形態の還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）が増加したアルブミンを含む溶液の製造装置１を示す。
製造装置１は、混合部１０と透析部３０を含む。混合部１０は、原料アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤とを混合して得られる混合液１２を含む。透析部３０は、透析用ダイアライザー３２と透析液供給装置３４を含む。
混合部１０で、原料アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤とを混合して混合液１２を製造することができる。更に、別の場所で予めその混合液１２を製造し、その後、混合液１２を混合部１０に移してもよい。また、別の場所でその混合液１２を半分製造しつつ、混合部１０に移して引き続き残りを製造して全体として混合液１２を製造してもよい。適宜混合部１０で混合液１２を製造することができる。混合部１０での混合条件等は上述した通りである。
【００５７】
原料アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤との混合から、好ましくは所定時間経過後、混合液１２を透析部３０の透析用ダイアライザー３２に通して透析する。その際透析液供給装置３４から透析液３６を透析用ダイアライザー３２に供給する。ダイアライザー３２を通った混合液１４は、混合部１０に戻る。ダイアライザー３２を通った透析液３８は、透析液供給装置３４に戻る。混合液１２は、更に、繰り返しダイアライザーを通り、透析される。
【００５８】
尚、透析液３６の流速と、透析液３８の流速を相違させることで、混合液１２がダイアライザー３２を通り、混合液１４を得られるときに、混合液のアルブミン濃度を濃縮又は希釈することができる。これは、混合液１２の流速と混合液１４の流速を相違させることで行うこともできる。例えば、透析液３６の流速より透析液３８の流速を速くすると、負圧を生じるので、混合液は、濃縮される。逆にすると希釈される。また、混合液１４の流速より混合液１２の流速を速くすると、加圧を生じるので、この場合も混合液は濃縮される。逆にすると希釈される。透析液３６及び３８の流速と混合液１２及び１４の流速を調節することで、混合液１４のアルブミン濃度を適宜調節することができる。
図１の製造装置１は、原料アルブミン含有溶液が種々のものに使用することができるが、例えば、「加熱人血漿たんぱく」及び「人血清アルブミン」等の人のアルブミン製剤等に好ましく使用することができる。
【００５９】
図２は、本発明の他の形態の還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）が増加したアルブミンを含む溶液の製造装置２を示す。
製造装置２は、混合部５０、ろ過部６０及び調節部を兼ねる透析部７０を含む。
混合部５０は、原料アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤とを混合して得られる混合液５６を含む。混合部５０で、原料アルブミン含有溶液５２とＳＨ基を有する還元剤５４とを混合して混合液５６を製造することができる。更に、別の場所で予めその混合液５６を製造し、その後、混合液５６を混合部５０に移してもよい。これらのことは、図１と同様である。
ろ過部６０は、ろ過器６２を含む。混合液５６は、ろ過器６２でろ過されて、アルブミンより大きな不要な物質（例えば、細胞等）が除去された混合液６６を与える。不溶物が含まれる廃棄物６８は、適宜ろ過器６２から排出される。
【００６０】
調節部を兼ねる透析部７０は、ダイアライザー７２と調節兼透析装置７４を含む。ろ過部６０からの混合液６６は、ダイアライザー７２に入る。調節兼透析装置７４から透析液７５が、ダイアライザー７２に送られる。混合液６６は、ダイアライザー７２で、透析され、濃度が調節されて、混合液７８を与える。透析液７５は、ダイアライザー７２から、使用済透析液７６を与える。
混合液７８のアルブミン濃度が高い又は低い場合、必要に応じて、ダイアライザー７２を繰り返し通して、アルブミンの濃度等を調節することができる。
尚、混合液５６の全部が、ろ過、濃縮及び透析されて、一旦混合液７８が得られた後、ダイアライザー７２を繰り返し通して、混合液７８の濃度を調節することが好ましい。
図２の製造装置は、原料アルブミン含有溶液５２が、ろ過で除去すべき大きな不要物質を有し、更に、アルブミンの濃度が所望の濃度と相違する場合、好ましく使用することができる。図２の製造装置では、例えば、アルブミン含有溶液５２が、腹水、血液製剤等であることが好ましい。
尚、図１の混合液１２、１４、透析液３６、３８、図２の混合液５６、混合液６６、透析液７５、混合液７８について、それらを取り扱う要素（ライン、容器、袋等）は、閉鎖されていることが、外気から遮断され滅菌状態を保つためにより好ましい。
【００６１】
また、本発明に関する製造方法を、人のアルブミン製剤を製造する際に使用すると、還元型アルブミンの割合（ＨＭＡ％）を増加しながら（又は減少させることなく）、２型の酸化型アルブミンの割合（ＨＮＡ２％）の増加を抑制しながら、人のアルブミン製剤を製造することができる。
本発明者の検討では、健常者の血液のＨＮＡ２％は、約２％〜約３％である。これに対し、市販のアルブミン製剤のＨＮＡ２％は、約１５％〜約１８％であり、遥かに高値である。
通常、アルブミン画分は、ヒト血漿からConeのエタノール抽出を行い、凝固因子及びフィブリノーゲン等の成分を抽出した最終の液から、抽出して製造される。従って、アルブミン製剤の製造の間に、様々な酸化修飾を受け、ＨＮＡ２％が高くなると考えられる。
従って、ヒト血漿を集める段階、Coneのエタノール抽出をした段階、凝固因子及びフィブリノーゲン等の成分を抽出した段階などの種々の段階で、本発明に係る製造を使用して、ＨＭＡ％を高く維持すれば、その結果ＨＮＡ２％の増加を抑制することができる。
【００６２】
例えば、図１の製造装置１を使用して、人の血漿を集めた液を、原料アルブミン含有溶液５２とする方法、Coneのエタノール抽出をした液を、原料アルブミン含有溶液５２とする方法、凝固因子及びフィブリノーゲン等の成分を抽出した最終の液を、原料アルブミン含有溶液５２とする方法等が考えられる。
いずれの方法においても、得られるＨＭＡ％が増加したアルブミン溶液１４は、ＨＭＡ％を高く維持し、その結果ＨＮＡ２％の増加を抑制することができる。
従って、その後得られるアルブミン製剤も、ＨＭＡ％を高く維持し、ＨＮＡ２％の増加を抑制することができる。
ゆえに、本発明の製造方法を利用して、アルブミン製剤を製造すると、ＨＭＡ％を高く維持し、アルブミン本来の役割である膠質浸透圧の保持と物質運搬ならびに抗酸化作用などが長時間持続し得、患者の病態の改善に、より寄与する可能性が有る。
更に、ＨＮＡ２％を低く維持し得るので、アルブミンを結果的により有効に利用することができる。
【００６３】
本発明は、上述のような優れた効果を奏し、その理由は以下のように思われるが、本発明はその理由によって何ら制限されるものではない。
難治性腹水患者の濃縮された腹水及びアルブミン製剤は、本発明に係る方法によってＨＭＡ％を増加させることができ、その増加したＨＭＡ％を長期間にわたって維持することができる。
本発明者の検討（本願比較例）及び特許文献２の結果から、この増加したＨＭＡ％は、単に還元剤及び酸化防止剤等を添加することのみでは、維持することができない。
健常者は、その血清アルブミンについて約６５％のＨＭＡ％を有し、その値を維持することができる。この健常人のＨＭＡ％の値は、難治性腹水患者の腹水のアルブミンのＨＭＡ％（約６％〜約２０％）及びアルブミン製剤のＨＭＡ％（約３９％〜約４２％）より、かなり高い。
このことから、本発明者らは、たとえアルブミンのＨＭＡ％を増加させたとしても、アルブミンの周囲の環境が、アルブミンにストレスを与える環境である場合、又は病的な環境である場合、ＨＭＡ％に悪影響を与えると考えた。一方、増加したＨＭＡ％を有するアルブミンの周囲の環境を、健常人の体内の環境に置き換えることができれば、長期間にわたって、その増加したＨＭＡ％を維持することができると考えた。
その健常人の体内の環境を実現することを種々検討し、透析を試したところ、驚くべきことに長期間にわたり、ＨＭＡ％が維持できることを見いだした。
【実施例】
【００６４】
以下、本発明を実施例及び比較例により具体的かつ詳細に説明するが、これらの実施例は本発明の一態様にすぎず、本発明はこれらの例によって何ら限定されるものではない。【００６５】
実施例及び比較例で使用した、（Ａ）アルブミン含有溶液及び（Ｂ）ＳＨ基を有する還元剤などを以下に示す。【００６６】
（Ａ）アルブミン含有溶液
（ａ１）５％アルブミン製剤（ＣＳＬベーリング株式会社社製のアルブミナー5％静注（商品名）、アルブミン濃度：約０．７５ｍｍｏｌ／Ｌ、本発明者の測定によるとＨＭＡ％：約３９％（比較例８参照））
（ａ２）難治性腹水症患者の腹水濃縮液（ＨＭＡ％が低い患者６名の腹水濃縮液、アルブミン濃度：１５μｍｏｌ／Ｌ及び約１ｇ／Ｌ、本発明者の測定によるとＨＭＡ％：約１３．５％（比較例９参照））【００６７】
（Ｂ）ＳＨ基を有する還元剤
（ｂ１）アスコルビン酸とＬ−システインの混合液（日新製薬株式会社製のクリストファン注（商品名）、２０ｍＬ中にアスコルビン酸を１０００ｍｇ（２８４ｍｍｏｌ／Ｌ）及びＬ−システインを８０ｍｇ（３３ｍｍｏｌ／Ｌ）含む）
（ｂ２）Ｌ−システイン溶液（和光純薬工業社製のＬ−システイン（商品名）の８．２ｍｍｏｌ／Ｌ水溶液）
（ｂ３’）アスコルビン酸溶液（和光純薬工業社製のアスコルビン酸（商品名）の３４０ｍｍｏｌ／Ｌ水溶液）
透析液として、生理食塩水を使用した。【００６８】
実施例１
（ａ１）１２．５ｇのアルブミンを含む５％アルブミン製剤（２５０ｍＬ、アルブミン：０．１９ｍｍｏｌ）と（ｂ１）アスコルビン酸とＬ−システインの混合液（１２ｍＬ、アスコルビン酸：３．４ｍｍｏｌ、Ｌ−システイン：０．４ｍｍｏｌ）を混合した。アルブミン：Ｌ−システイン＝１：２．１（モル比）であり、アルブミン：アスコルビン酸＝１：１７（モル比）であった。２５℃にて、しずかに攪拌後６０分間静置して、混合液を得た。その混合液を、下記の条件で、透析して、還元型アルブミンの割合が増加した実施例１のアルブミン溶液を得た。
中空糸型透析器（ポリスルホン中空糸ダイアライザー）（膜面積：０．０１ｍ２）を使用して、混合液を５０ｍｌ／ｍｉｎの流量で流通させ、３Ｌの生理食塩水を１２５ｍｌ／ｍｉｎの流量で流通させて、６０分間透析した。透析液の廃液中に未反応のＳＨ基を有する還元剤が出現したことは、ＤＴＮＢ試薬（２００μＬ）と透析液の廃液（１００μＬ）を混合して、試薬と廃液の混合液の色調が黄変することによって確認した。【００６９】
混合液及び透析液中のアルブミンの還元型の割合（ＨＭＡ％）は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いる方法（Sogami M., J. Chromatogr., 332, 19-27, 1985; Int. J. Peptide Protein Res. 24:96; 1984）を用いて行った。即ち、還元型アルブミンと酸化型アルブミンをＨＰＬＣで分離して検出し、分離したクロマトグラム上のピーク面積の比から、ＨＭＡ％を求めた。
より具体的には、ＨＰＬＣ装置として島津製作所社製のＳＣＬ−１０Ａ（商品名）を使用した。カラムとして、昭和電工社製のＥＳ−５２０Ｎ（商品名）を、３５℃のカラム温度で用いた。０．０５Ｍ酢酸ナトリウム、０．４Ｍ硫酸ナトリウム（ｐＨ４．８５）緩衝液と１００％エタノールを用いた。２μＬの試料を分析した。初めは１．０ｍＬ／ｍｉｎの流量で緩衝液を流し、４９分間かけて、緩衝液の流量を０．９ｍＬ／ｍｉｎに減少させた。これに対し、初めは０ｍＬ／ｍｉｎの流量の１００％エタノールの流量を４９分間かけて０．１ｍＬ／ｍｉｎに増加した。緩衝液と１００％エタノールの総流量は、合計で１．０ｍＬ／ｍｉｎであった。励起波長２８０ｎｍ、蛍光放出波長３４０ｎｍの波長の蛍光検出器を用いて、検出した。結果は、表１に示した。
アルブミンにＳＨ基を有する還元剤を加えた後、透析することで製造された、実施例１のアルブミン溶液は、透析終了後、室温（２０〜３０℃）で１日間、その後４℃の冷蔵庫内で更に２日間、従って、合計で３日以上の長期間にわたって、増加したＨＭＡ％を維持することができた。【００７０】
実施例２〜４及び比較例１
（ｂ１）アスコルビン酸とＬ−システインの混合液を加える量を、減少させた以外は、実施例１と同様の方法で、（ａ１）５％アルブミン製剤と（ｂ１）アスコルビン酸とＬ−システインの混合液を混合して、得られた混合液を透析して、実施例２〜４及び比較例１のアルブミン溶液を得た。
即ち、（ａ１）５％アルブミン製剤（１２５０ｍＬ）と（ｂ１）アスコルビン酸とＬ−システインの混合液（３０ｍＬ、１５ｍＬ、７．５ｍＬ又は３．８ｍＬ）を混合した。
アルブミン：Ｌ−システイン＝１：１（モル比）（実施例２）、１：０．５（モル比）（実施例３）、１：０．２５（モル比）（実施例４）又は１：０．１３（モル比）（比較例１）であり、アルブミン：アスコルビン酸＝１：８．５（モル比）（実施例２）、１：４．２５（モル比）（実施例３）、１：２．１３（モル比）（実施例４）又は１：１．０６（モル比）（比較例１）であった。
結果は、表１に示した。
アルブミン１モル当たり、０．１３モルを超えるＬ−システインを加え、透析することで製造された、実施例２〜４のアルブミン溶液は、ＨＭＡ％が増加し、透析終了後、室温（２０〜３０℃）で１日間、その後４℃の冷蔵庫内で更に２日間、従って、合計で３日以上の長期間にわたって、増加したＨＭＡ％を維持できることがわかった。【００７１】
比較例２〜５
透析を行わなかった以外は、実施例１〜４と同様の方法で得られた、比較例２〜５のアルブミン溶液では、アルブミン製剤とシステイン溶液を加えた直後は、ＨＭＡ％が増加した。しかし、アルブミン製剤とシステイン溶液の混合終了後から、室温（２０〜３０℃）で１日後には、ＨＭＡ％は急激に低下し、その後４℃の冷蔵庫内で更に２日、従って、合計で３日後に、ＨＭＡ％は元の値に戻ることがわかる。【００７２】
【表１】
2018092241.tif 000003
*) (A)の数値は、アルブミンのｍｍｏｌを示す。
**) (B)の(b1)及び(b2)の数値は、システインのｍｍｏｌを示す。【００７３】
実施例５及び比較例６〜８
表２に記載したように、（ｂ１）の代わりに（ｂ２）又は（ｂ３’）を用いたこと等を除いて、実施例１記載の方法と同様な方法を用いて、ＨＭＡ、ＨＮＡ１及びＨＮＡ２の各々の得られたピークの面積から、下記式に基づいてＨＭＡ％、ＨＮＡ１％及びＨＮＡ２％を得た。
ＨＭＡ％＝ＨＭＡ／（ＨＭＡ＋ＨＮＡ１＋ＨＮＡ２）×１００
ＨＮＡ１％＝ＨＮＡ１／（ＨＭＡ＋ＨＮＡ１＋ＨＮＡ２）×１００
ＨＮＡ２％＝ＨＮＡ２／（ＨＭＡ＋ＨＮＡ１＋ＨＮＡ２）×１００
そして、実施例５及び比較例６〜８の混合液のＨＭＡ％を求めた。結果は、表２に示した。
ＳＨ基を有する還元剤（L-システイン）を加えるだけ（比較例６）、他の酸化防止剤（アスコルビン酸）を加えるだけ（比較例７）、又は透析するだけ（比較例８）では、長期間にわたって、アルブミンの高いＨＭＡ％を維持できず、アルブミンを、ＳＨ基を有する還元剤と混合後に透析することで（実施例５）、長期間にわたって、高いＨＭＡ％を維持できることが明らかになった。【００７４】
実施例５のＨＮＡ１％と比較例６のＨＮＡ１％を比べると、時間経過と共に、比較例６のＨＮＡ１％は増加して、実施例５のＨＮＡ１％との間に差が拡大することがわかる。
実施例５のＨＮＡ２％と比較例６のＨＮＡ２％を比べると、時間経過と共に、比較例６のＨＮＡ２％は増加して、実施例５のＨＮＡ２％との間に差が拡大することもわかる。
従って、透析をすることによって、ＨＮＡ１％の増加を抑制するのみならず、ＨＮＡ２％の増加も抑制し得ることがわかる。ＨＮＡ２％の増加を抑制し得ることが、長期的に高いＨＭＡ％を維持し得ることに貢献すると考えられる。【００７５】
【表２】
2018092241.tif 000004
*) (A)の数値は、アルブミンのｍｍｏｌを示す。
**) (B)の(b1)及び(b2)の数値は、システインのｍｍｏｌを示す。【００７６】
実施例６
（ａ２）難治性腹水症患者の腹水濃縮液（１０ｍＬ）と（ｂ２）Ｌ−システイン溶液８．２ｍｍｏｌ／Ｌ（２．６ｍＬ）を混合した。（腹水濃縮液中の）アルブミン：Ｌ−システイン＝１：２（モル比）。２５℃にて、しずかに攪拌して、６０分間静置後、混合液を、下記の条件で、透析して、実施例６のＨＭＡ％が増加した実施例６のアルブミン溶液を製造した。
中空糸型透析器（ポリスルホン中空糸ダイアライザー）（膜面積：０．００１ｍ２）を使用して、混合液を５ｍｌ／ｍｉｎの流量で流通させ、透析液を１５ｍｌ／ｍｉｎの流量で流通させて、３０分間透析した。透析液廃液中にＳＨ基を有する還元剤が透析することで出現することは、ＤＴＮＢ試薬（２００μＬ）と透析廃液（１００μＬ）を混合して、その色調が黄変することによって確認した。【００７７】
混合液及び透析液のＨＭＡ％は、実施例１に記載の方法を用いて求めた。
結果は、表２に示した。
腹水にＳＨ基を有する還元剤を加えた後、透析することで、透析終了後、２０〜３０℃の温度で１日以上の長期間にわたって、腹水中のアルブミンについて、高いＨＭＡ％を維持可能なことがわかった。【００７８】
比較例９
表２に記載したように、透析をしなかったことを除いて、実施例６と同様な方法を用いて、比較例５のアルブミン溶液を製造した。結果は、表２に示した。
腹水濃縮液を、ＳＨ基を有する還元剤と混合後に透析しないと、透析終了後、２０〜３０℃の温度で、短時間で、アルブミンについてＨＭＡ％が低下することがわかった。
従って、アルブミンを含む腹水についても、ＳＨ基を有する還元剤と混合後に、透析することが重要であることが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明は、還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液の製造方法及び製造装置、並びにその製造方法を用いて製造される還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液を提供する。本発明に関する方法及び装置によって製造される還元型アルブミンの割合が増加したアルブミンを含む溶液は、増加した還元型アルブミンの割合を長期間維持することができる。
【符号の説明】
【００８０】
１：本発明の一の形態のＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液製造装置
２：本発明の他の形態のＨＭＡ％が増加したアルブミンを含む溶液製造装置
１０：混合部
１２：アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤との混合液
１４：透析された混合液
３０：透析部
３２：透析用ダイアライザー
３４：透析液供給装置
３６：透析液
３８：透析用ダイアライザーに通された透析液
５０：混合部
５２：アルブミン含有溶液
５４：ＳＨ基を有する還元剤
５６：アルブミン含有溶液とＳＨ基を有する還元剤との混合液
６０：ろ過部
６２：ろ過器
６６：ろ過された混合液
６８：混合液から除去された廃棄物
７０：調節部を兼ねる透析部
７２：ダイアライザー
７４：調節装置を兼ねる透析装置
７５：透析液
７６：使用された透析液
７８：濃度調節され透析された溶液
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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