【手続補正書】
【提出日】令和1年9月3日(2019.9.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾リソソームタンパク質を調製する方法であって、該方法が：
ａ）グリコシル化リソソームタンパク質を過ヨウ素酸アルカリ金属塩と４時間以下の期間にわたり反応させ、および
ｂ）前記リソソームタンパク質を水素化ホウ素アルカリ金属塩と２時間以下の期間にわたり反応させること、
を含み、
それによって、該リソソームタンパク質のグリカン部分を修飾し、グリカン認識受容体に関して該リソソームタンパク質の活性を低下させ、但し、前記タンパク質がスルファミダーゼでないことを条件とする、方法。
【請求項２】
ステップｂ）が、以下のｉ）〜ｉｖ）：
ｉ）前記水素化ホウ素アルカリ金属塩が水素化ホウ素ナトリウムである；
ｉｉ）前記水素化ホウ素が、前記過ヨウ素酸塩の濃度の４倍以下、例えば前記過ヨウ素酸塩の濃度の３倍以下、例えば前記過ヨウ素酸塩の濃度の２．５倍以下、例えば前記過ヨウ素酸塩の濃度の０．５〜４倍以下の濃度にて使用される；
ｉｉｉ）前記反応が、２時間以下、例えば１．５時間以下、例えば１時間以下、例えば０．７５時間以下、例えば約０．５時間の期間にわたりおこなわれる、および、
ｉｖ）前記反応が、０〜８℃の温度にておこなわれる、
のうちの少なくとも１つ、例えば少なくとも２つ、例えばそのすべてによってさらに特徴づけられる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップａ）が、以下のｉ）〜ｖ）：
ｉ）前記過ヨウ素酸アルカリ金属塩がメタ過ヨウ素酸ナトリウムである；
ｉｉ）前記過ヨウ素酸塩が、２０ｍＭ以下、例えば１５ｍＭ以下、例えば約１０ｍＭの濃度にて使用される；
ｉｉｉ）前記反応が、０〜２２℃の温度、例えば０〜８℃の温度、例えば０〜４℃の温度、例えば約８℃、例えば約０℃にておこなわれる；
ｉｖ）前記反応が、３時間以下、例えば２時間以下、例えば１時間以下、例えば約０．５時間の期間にわたりおこなわれる；および、
ｖ）前記ステップａ）の反応が、３〜７のｐＨにておこなわれる、
のうちの少なくとも１つ、例えば少なくとも２つ、例えば少なくとも３つ、例えば少なくとも４つ、例えば少なくともすべてによってさらに特徴づけられる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ステップａ）が３時間以下の期間にわたりおこなわれ、およびステップｂ）が１時間以下にわたりおこなわれ、そして、前記水素化ホウ素が、前記過ヨウ素酸塩の濃度の４倍以下の濃度にて任意に使用される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ステップａ）およびステップｂ）を、透析、限外濾過、沈殿または緩衝液の交換をおこなうことなく、順におこなわれる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
修飾リソソームタンパク質を調製する方法であって、該方法が：
ａ）グリコシル化リソソームタンパク質を過ヨウ素酸アルカリ金属塩と４時間以下の期間にわたり反応させ、および
ｂ）前記リソソームタンパク質を水素化ホウ素アルカリ金属塩と２時間以下の期間にわたり反応させること、
を含み；
それによって、該リソソームタンパク質のグリカン部分を修飾し、グリカン認識受容体に関して該リソソームタンパク質の活性を低下させ、ここで、前記リソソームタンパク質の活性部位または機能的エピトープを、ステップａ）およびｂ）の少なくとも一方の間、酸化および／または還元反応に利用不可能にする、方法。
【請求項７】
ステップｂ）が、以下のｉ）〜ｉｖ）：
ｉ）前記水素化ホウ素アルカリ金属塩が水素化ホウ素ナトリウムである；
ｉｉ）前記水素化ホウ素が、前記過ヨウ素酸塩の濃度の４倍以下、例えば前記過ヨウ素酸塩の濃度の３倍以下、例えば前記過ヨウ素酸塩の濃度の２．５倍以下、例えば前記過ヨウ素酸塩の濃度の０．５〜４倍以下の濃度にて使用される；
ｉｉｉ）前記反応が、２時間以下、例えば１．５時間以下、例えば１時間以下、例えば０．７５時間以下、例えば約０．５時間の期間にわたりおこなわれる；および、
ｉｖ）前記反応が、０〜８℃の温度にておこなわれる、
のうちの少なくとも１つ、例えば少なくとも２つ、例えばそのすべてによってさらに特徴づけられる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ステップａ）が、以下のｉ）〜ｖ）：
ｉ）前記過ヨウ素酸アルカリ金属塩がメタ過ヨウ素酸ナトリウムである；
ｉｉ）前記過ヨウ素酸塩が、２０ｍＭ以下、例えば１５ｍＭ以下、例えば約１０ｍＭの濃度にて使用される；
ｉｉｉ）前記反応が、０〜２２℃の温度、例えば０〜８℃の温度、例えば０〜４℃の温度、例えば約８℃、例えば約０℃にておこなわれる；
ｉｖ）前記反応が、３時間以下、例えば２時間以下、例えば１時間以下、例えば約０．５時間の期間にわたりおこなわれる；および、
ｖ）前記ステップａ）の反応が、３〜７のｐＨにておこなわれる、
のうちの少なくとも１つ、例えば少なくとも２つ、例えば少なくとも３つ、例えば少なくとも４つ、例えば少なくともすべてによってさらに特徴づけられる、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
ステップａ）が３時間以下の期間にわたりおこなわれ、およびステップｂ）が１時間以下にわたりおこなわれ、そして、前記水素化ホウ素が、前記過ヨウ素酸塩の濃度の４倍以下の濃度にて任意に使用される、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ステップａ）およびステップｂ）を、透析、限外濾過、沈殿または緩衝液の交換をおこなうことなく、順におこなわれる、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記修飾リソソームタンパク質が、スルファターゼ；グリコシドヒドロラーゼ、またはプロテアーゼである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記リソソームタンパク質が、デオキシリボヌクレアーゼ−２−α；β−マンノシダーゼ；リボヌクレアーゼＴ２；リソソームα−マンノシダーゼ；α−Ｌ−イズロニダーゼ；トリペプチジル−ペプチダーゼ１；ヒアルロニダーゼ−３；カテプシンＬ２；セロイド−リポフスチノーシスニューロンタンパク質５；グルコシルセラミダーゼ；組織α−Ｌ−フコシダーゼ；ミエロペルオキシダーゼ；α−ガラクトシダーゼＡ；β−ヘキソサミニダーゼサブユニットα；カテプシンＤ；プロサポシン；β−ヘキソサミニダーゼサブユニットβ；カテプシンＬ１；カテプシンＢ；β−グルクロニダーゼ；プロカテプシンＨ；カテプシンＨ；非分泌性リボヌクレアーゼ；リソソームα−グルコシダーゼ；リソソーム保護タンパク質；γ−インターフェロン誘導性リソソームチオールレダクターゼ；タルトラート−耐性酸性ホスファターゼ５型；アリールスルファターゼＡ；前立腺酸性ホスファターゼ；Ｎ−アセチルグルコサミン−６−スルファターゼ；アリールスルファターゼＢ；β−ガラクトシダーゼ；α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ；スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ；ガングリオシドＧＭ２アクチベーター；Ｎ（４）−（β−Ｎ−アセチルグルコサミニル）−Ｌ−アスパラギナーゼ；イズロン酸２−スルファターゼ；カテプシンＳ；Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ；リソソーム酸性リパーゼ／コレステリルエステルヒドロラーゼ；リソソームＰｒｏ−Ｘカルボキシペプチダーゼ；カテプシンＯ；カテプシンＫ；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１；アリールスルファターゼＤ；ジペプチジルペプチダーゼ１；α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ；ガラクトセレブロシダーゼ；精巣上体分泌タンパク質Ｅ１；ジ−Ｎ−アセチルキトビアーゼ；Ｎ−アシルエタノールアミン加水分解酸性アミダーゼ；ヒアルロニダーゼ−１；キトトリオシダーゼ−１；酸性セラミダーゼ；ホスホリパーゼＢ様１；前駆タンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型；ＸＶ型ホスホリパーゼＡ２；推定ホスホリパーゼＢ様２；デオキシリボヌクレアーゼ−２−β；γ−グルタミルヒドロラーゼ；アリールスルファターゼＧ；Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ； シアリダーゼ−１；レグミン；シアル酸Ｏ−アセチルエステラーゼ；胸腺特異的セリンプロテアーゼ；カテプシンＺ；カテプシンＦ；プレニルシステインオキシダーゼ１；ジペプチジルペプチダーゼ２；リソソームチオエステラーゼＰＰＴ２；ヘパラナーゼ；カルボキシペプチダーゼＱ；β−グルクロニダーゼ、およびスルファターゼ修飾因子１、から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記方法のステップａ）およびｂ）の少なくとも一方が、保護リガンドの存在下でおこなわれる、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記方法のステップａ）およびｂ）が、リソソームタンパク質を樹脂で固定したままおこなわれる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
リソソームタンパク質の未修飾形態と比較して、グリカン部分の５０％以下が未修飾のまま維持されていることを特徴とする、低い含量の未修飾グリカン部分を有する修飾リソソームタンパク質であって、それによって、グリカン認識受容体について低下した活性を有するが、但し、スルファミダーゼ、β−グルクロニダーゼ、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）またはα−Ｌ−イズロニダーゼでないことを条件とする、タンパク質。
【請求項１６】
前記タンパク質が、デオキシリボヌクレアーゼ−２−α；β−マンノシダーゼ；リボヌクレアーゼＴ２；リソソームα−マンノシダーゼ；ヒアルロニダーゼ−３；カテプシンＬ２；セロイド−リポフスチノーシスニューロンタンパク質５；グルコシルセラミダーゼ；組織α−Ｌ−フコシダーゼ；ミエロペルオキシダーゼ；α−ガラクトシダーゼＡ；β−ヘキソサミニダーゼサブユニットα；カテプシンＤ；プロサポシン；β−ヘキソサミニダーゼサブユニットβ；カテプシンＬ１；カテプシンＢ；プロカテプシンＨ；カテプシンＨ；非分泌性リボヌクレアーゼ；リソソームα−グルコシダーゼ；リソソーム保護タンパク質；γ−インターフェロン誘導性リソソームチオールレダクターゼ；タルトラート−耐性酸性ホスファターゼ５型；アリールスルファターゼＡ；前立腺酸性ホスファターゼ；Ｎ−アセチルグルコサミン−６−スルファターゼ；アリールスルファターゼＢ；β−ガラクトシダーゼ；α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ；スフィンゴミエリンホスホジエステラーゼ；ガングリオシドＧＭ２アクチベーター；Ｎ（４）−（β−Ｎ−アセチルグルコサミニル）−Ｌ−アスパラギナーゼ；イズロン酸２−スルファターゼ；カテプシンＳ；Ｎ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ；リソソーム酸性リパーゼ／コレステリルエステルヒドロラーゼ；リソソームＰｒｏ−Ｘカルボキシペプチダーゼ；カテプシンＯ；カテプシンＫ；パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１；アリールスルファターゼＤ；ジペプチジルペプチダーゼ１；α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ；ガラクトセレブロシダーゼ；精巣上体分泌タンパク質Ｅ１；ジ−Ｎ−アセチルキトビアーゼ；Ｎ−アシルエ
タノールアミン加水分解酸性アミダーゼ；ヒアルロニダーゼ−１；キトトリオシダーゼ−１；酸性セラミダーゼ；ホスホリパーゼＢ様１；前駆タンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシン９型；ＸＶ型ホスホリパーゼＡ２；推定ホスホリパーゼＢ様２；デオキシリボヌクレアーゼ−２−β；γ−グルタミルヒドロラーゼ；アリールスルファターゼＧ；Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ； シアリダーゼ−１；レグミン；シアル酸Ｏ−アセチルエステラーゼ；胸腺特異的セリンプロテアーゼ；カテプシンＺ；カテプシンＦ；プレニルシステインオキシダーゼ１；ジペプチジルペプチダーゼ２；リソソームチオエステラーゼＰＰＴ２；ヘパラナーゼ；カルボキシペプチダーゼＱ、およびスルファターゼ修飾因子１、から選択される、請求項１５に記載の修飾リソソームタンパク質。
【請求項１７】
リソソームタンパク質の未修飾形態と比較して、未修飾グリカン部分の４５％以下が未修飾を維持し、例えば４０％以下、３５％以下、３０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、１％以下のグリカン認識受容体のエピトープが、リソソームタンパク質の未修飾形態から維持される、請求項１５または１６に記載の修飾リソソームタンパク質。
【請求項１８】
前記リソソームタンパク質の未修飾グリカン部分が、単結合切断および二重結合切断によって破壊され、単結合切断の程度が、オリゴマンノースグリカンにおいて少なくとも６０％である、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の修飾リソソームタンパク質。
【請求項１９】
前記未修飾グリカン部分が、少なくとも１個の前記修飾リソソームタンパク質のＮ−グリコシル化部位を欠き、例えば、前記リソソームタンパク質のＮ−グリコシル化部位の少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２、少なくとも１３個を欠き、好ましくは前記エピトープがすべてのＮ−グリコシル化部位を欠く、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の修飾リソソームタンパク質。
【請求項２０】
前記リソソームタンパク質が、対応する未修飾リソソームタンパク質の触媒活性の少なくとも５０％の触媒活性を維持した、請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の修飾リソソームタンパク質。
【請求項２１】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法によって取得可能な修飾リソソームタンパク質（但し、当該タンパク質はスルファミダーゼでない）。
【請求項２２】
治療法に使用するための、請求項１５〜２１のいずれか１項に記載の修飾リソソームタンパク質。
【請求項２３】
リソソーム蓄積症に罹患している哺乳動物の治療に使用するための、請求項２２に記載の修飾リソソームタンパク質。
【請求項２４】
治療的有効量の、請求項１５〜２１のいずれか１項に記載の修飾リソソームタンパク質を含む、リソソーム蓄積症に罹患している哺乳動物を治療するための医薬組成物であって、該哺乳動物に投与される、医薬組成物。