(57)【要約】  本発明は、取り扱いしやすく、溶解度の高い、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を提供すること、およびその製造方法を提供することを目的とする。本発明によれば、アルコール類を含む溶媒にＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを溶解させ、該溶媒を静置または撹拌することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させることができる。また、ｐＨ２．５〜１１．０であるＨＭＢアミノ酸塩の水溶液を濃縮することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させることができる。
2017222043.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−ヒドロキシイソ吉草酸（以下、ＨＭＢという）のアミノ酸塩の結晶。
【請求項２】
ＨＭＢアミノ酸塩が、ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩である、請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢアルギニン塩である、請求項２に記載の結晶。
【請求項４】
ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢリジン塩である、請求項２に記載の結晶。
【請求項５】
ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢオルニチン塩である、請求項２に記載の結晶。
【請求項６】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、７．５±０．２°、１４．５±０．２°、１５．１±０．２°、１９．２±０．２°および２０．２±０．２°にピークを有する、請求項３に記載の結晶。
【請求項７】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１１．６±０．２°、１２．７±０．２°、１７．９±０．２°、２１．５±０．２°および２３．３±０．２°にピークを有する、請求項６に記載の結晶。
【請求項８】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１９．６±０．２°、２１．９±０．２°、２５．２±０．２°、２５．５±０．２°および３３．６±０．２°にピークを有する、請求項７に記載の結晶。
【請求項９】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、８．５±０．２°、１７．０±０．２°、１８．１±０．２°、１８．５±０．２°および１９．５±０．２°にピークを有する、請求項４に記載の結晶。
【請求項１０】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、２２．２±０．２°、２５．５±０．２°、２５．８±０．２°、２６．６±０．２°および３４．４±０．２°にピークを有する、請求項９に記載の結晶。
【請求項１１】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、４．８±０．２°、２０．４±０．２°、３１．０±０．２°、３３．８±０．２°および３６．５±０．２°にピークを有する、請求項１０に記載の結晶。
【請求項１２】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、５．１±０．２°、１４．０±０．２°、１５．３±０．２°、２０．４±０．２°および２１．９±０．２°にピークを有する、請求項５に記載の結晶。
【請求項１３】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１６．４±０．２°、１６．８±０．２°、１９．４±０．２°、２１．４±０．２°および２５．５±０．２°にピークを有する、請求項１２に記載の結晶。
【請求項１４】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１０．９±０．２°にピークを有する、請求項１３に記載の結晶。
【請求項１５】
アルコール類を含む溶媒にＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを溶解させる工程、該溶媒を静置または撹拌することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程、および該溶媒からＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する工程、を含むＨＭＢアミノ酸塩の結晶の製造方法。
【請求項１６】
ｐＨが２．５〜１１．０であるアミノ酸含有化合物を含むＨＭＢの水溶液を濃縮することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程、および該水溶液からＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する工程、を含むＨＭＢアミノ酸塩の結晶の製造方法。
【請求項１７】
ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程において、さらに、アルコール類、ニトリル類およびケトン類からなる群より選ばれる少なくとも１の溶媒を添加または滴下する工程を含む、請求項１６に記載の製造方法。
【請求項１８】
アルコール類が、Ｃ１〜Ｃ６のアルコールからなる群より選ばれる少なくとも１のアルコール類である、請求項１５または１７に記載の製造方法。
【請求項１９】
ニトリル類が、アセトニトリルである請求項１７または１８に記載の製造方法。
【請求項２０】
ケトン類が、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンおよびジエチルケトンからなる群より選ばれる少なくとも１のケトン類である、請求項１７〜１９のいずれか1項に記載の製造方法。
【請求項２１】
ＨＭＢアミノ酸塩が、ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩である、請求項１５〜２０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２２】
ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢアルギニン塩、ＨＭＢリジン塩、またはＨＭＢオルニチン塩である、請求項２１に記載の製造方法。
【請求項２３】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、４．９±０．２°、５．２±０．２°、５．５±０．２°、１０．９±０．２°および１５．５±０．２°にピークを有する、請求項５に記載の結晶。
【請求項２４】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１５．９±０．２°、１６．４±０．２°、１７．４±０．２°、１９．２±０．２°および２０．４±０．２°にピークを有する、請求項２３に記載の結晶。
【請求項２５】
粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、２０．８±０．２°、２１．３±０．２°、２１．８±０．２°、２２．２±０．２°および２２．８±０．２°にピークを有する、請求項２４に記載の結晶。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料または中間体等として有用である３−ヒドロキシイソ吉草酸（β-hydroxy-β-methylbutyrate）（以下、ＨＭＢという）のアミノ酸塩の結晶、および該結晶の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＭＢは、例えば、健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料または中間体等として有用である。ＨＭＢは、体内でのロイシン代謝により得られる有機酸であり、筋肉の増強効果や分解抑制に効果があるとされている（非特許文献１および２）。【０００３】
商業上ＨＭＢは、遊離カルボン酸体またはカルシウム塩のいずれかの形態でのみ市場に流通している。特にサプリメント・健康食品用途としては、カルシウム塩がハンドリングに優れた粉末であることからカルシウム塩が使用されることがほとんどである（非特許文献３）。特許文献４には、アルギニン塩の結晶が取得されたとの記載はあるが、取得された結晶の性質に関する記載はない。【０００４】
カルシウムは体内で骨の形成、神経の働き、筋肉運動等を担う重要なミネラルである。しかしながら最近、カルシウムの過剰摂取によって、心臓血管疾患や虚血性心疾患による死亡リスクが増加することが報告されている（非特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１４／１６６２７３号公報
【特許文献２】米国特許第６，２４８，９２２号明細書
【特許文献３】国際公開第２０１３／０２５７７５号公報
【特許文献４】米国特許出願公開第２００４／０１７６４４９号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Journal of Applied Physiology, Vol. 81, p2095, 1996
【非特許文献２】Nutrition & Metabolism, Vol. 5, p1, 2008
【非特許文献３】Journal of the International Society of Sports Nutrition Vol. 10, p6, 2013
【非特許文献４】The BMJ., Vol. 346, p228, 2013
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
調剤分野では、カルシウム塩由来のカルシウムがリン酸などの他の成分と結合して不溶性塩を作りやすく、高濃度の溶液を調製できないなどの課題がある。特許文献１−３、特許文献１、および特許文献４には、それぞれ、ＨＭＢカルシウム塩（特許文献１−３）、ＨＭＢマグネシウム塩（特許文献１）、およびＨＭＢアルギニン塩（特許文献４）の製造方法が記載されているが、いずれの方法においても、結晶を取得することはできない。すなわち、いずれの塩形態についても結晶は知られておらず、産業上有用なＨＭＢ塩の結晶および製造方法が求められている。【０００８】
本発明の課題は、溶解性に優れ、取り扱いしやすいＨＭＢアミノ酸塩の結晶を提供すること、およびその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、以下の（１）〜（２５）に関する。
（１）３−ヒドロキシイソ吉草酸（以下、ＨＭＢという）のアミノ酸塩の結晶。
（２）ＨＭＢアミノ酸塩が、ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩である、上記（１）に記載の結晶。
（３）ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢアルギニン塩である、上記（２）に記載の結晶。
（４）ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢリジン塩である、上記（２）に記載の結晶。
（５）ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢオルニチン塩である、上記（２）に記載の結晶。
（６）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、７．５±０．２°、１４．５±０．２°、１５．１±０．２°、１９．２±０．２°および２０．２±０．２°にピークを有する、上記（３）に記載の結晶。
（７）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１１．６±０．２°、１２．７±０．２°、１７．９±０．２°、２１．５±０．２°および２３．３±０．２°にピークを有する、上記（６）に記載の結晶。
（８）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１９．６±０．２°、２１．９±０．２°、２５．２±０．２°、２５．５±０．２°および３３．６±０．２°にピークを有する、上記（７）に記載の結晶。
（９）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、８．５±０．２°、１７．０±０．２°、１８．１±０．２°、１８．５±０．２°および１９．５±０．２°にピークを有する、上記（４）に記載の結晶。
（１０）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、２２．２±０．２°、２５．５±０．２°、２５．８±０．２°、２６．６±０．２°および３４．４±０．２°にピークを有する、上記（９）に記載の結晶。
（１１）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、４．８±０．２°、２０．４±０．２°、３１．０±０．２°、３３．８±０．２°および３６．５±０．２°にピークを有する、上記（１０）に記載の結晶。
（１２）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、５．１±０．２°、１４．０±０．２°、１５．３±０．２°、２０．４±０．２°および２１．９±０．２°にピークを有する、上記（５）に記載の結晶。
（１３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１６．４±０．２°、１６．８±０．２°、１９．４±０．２°、２１．４±０．２°および２５．５±０．２°にピークを有する、上記（１２）に記載の結晶。
（１４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１０．９±０．２°にピークを有する、上記（１３）に記載の結晶。
（１５）アルコール類を含む溶媒にＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを溶解させる工程、該溶媒を静置または撹拌することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程、および該溶媒からＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する工程、を含むＨＭＢアミノ酸塩の結晶の製造方法。
（１６）ｐＨが２．５〜１１．０であるアミノ酸含有化合物を含むＨＭＢの水溶液を濃縮することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程、および該水溶液からＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する工程、を含むＨＭＢアミノ酸塩の結晶の製造方法。
（１７）ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程において、さらに、アルコール類、ニトリル類およびケトン類からなる群より選ばれる少なくとも１の溶媒を添加または滴下する工程を含む、上記（１６）に記載の製造方法。
（１８）アルコール類が、Ｃ１〜Ｃ６のアルコールからなる群より選ばれる少なくとも１のアルコール類である、上記（１５）または（１７）に記載の製造方法。
（１９）ニトリル類が、アセトニトリルである上記（１７）または（１８）に記載の製造方法。
（２０）ケトン類が、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンおよびジエチルケトンからなる群より選ばれる少なくとも１のケトン類である、上記（１７）〜（１９）のいずれか1つに記載の製造方法。
（２１）ＨＭＢアミノ酸塩が、ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩である、上記（１５）〜（２０）のいずれか１つに記載の製造方法。
（２２）ＨＭＢ塩基性アミノ酸塩が、ＨＭＢアルギニン塩、ＨＭＢリジン塩、またはＨＭＢオルニチン塩である、上記（２１）に記載の製造方法。
（２３）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、４．９±０．２°、５．２±０．２°、５．５±０．２°、１０．９±０．２°および１５．５±０．２°にピークを有する、上記（５）に記載の結晶。
（２４）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、１５．９±０．２°、１６．４±０．２°、１７．４±０．２°、１９．２±０．２°および２０．４±０．２°にピークを有する、上記（２３）に記載の結晶。
（２５）粉末Ｘ線回折において、回折角（２θ）が、さらに、２０．８±０．２°、２１．３±０．２°、２１．８±０．２°、２２．２±０．２°および２２．８±０．２°にピークを有する、上記（２４）に記載の結晶。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、取り扱いしやすいＨＭＢアミノ酸塩の結晶およびその製造方法が提供される。本発明のＨＭＢアミノ酸塩の結晶は、ＨＭＢカルシウム塩と比較して高い溶解度を示し、不溶性の塩を作らず、電解質異常を誘発しないなど、優位性のある塩結晶である。また、本発明のＨＭＢアミノ酸塩の結晶は、ＨＭＢカルシウム塩と比較して溶解性が高く、風味を改善する効果において優れている。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、実施例２で得られた、ＨＭＢアルギニン塩・無水物の種結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。
【図２】図２は、実施例３で得られた、ＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。
【図３】図３は、実施例３で得られた、ＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶の赤外分光（ＩＲ）分析の結果を表わす。
【図４】図４は、実施例４で得られた、ＨＭＢリジン塩・無水物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。
【図５】図５は、実施例４で得られた、ＨＭＢリジン塩・無水物の結晶の赤外分光（ＩＲ）分析の結果を表わす。
【図６】図６は、実施例６で得られた、ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。
【図７】図７は、実施例６で得られた、ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶の赤外分光（ＩＲ）分析の結果を表わす。
【図８】図８は、実施例７で得られた、ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶の粉末Ｘ線回折の結果を表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．本発明の結晶
本発明の結晶は、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶（以下、「本発明の結晶」ともいう。）である。ＨＭＢアミノ酸塩の結晶としては、好ましくはＨＭＢの塩基性アミノ酸塩の結晶を、より好ましくは、ＨＭＢアルギニン塩の結晶、ＨＭＢリジン塩の結晶、ＨＭＢヒスチジン塩の結晶およびＨＭＢオルニチン塩の結晶を、最も好ましくは、ＨＭＢアルギニン塩の結晶、ＨＭＢリジン塩の結晶およびＨＭＢオルニチン塩の結晶を挙げることができる。
【００１３】
本発明の結晶がＨＭＢの結晶であることは、後述の分析例に記載のＨＰＬＣを用いた方法により確認することができる。本発明の結晶中のアミノ酸としては、Ｌ体、Ｄ体のいずれでもよいが、Ｌ体が好ましい。
【００１４】
本発明の結晶がアミノ酸塩の結晶であることは、当該結晶中に含まれるアミノ酸の含量を、後述の分析例に記載のＨＰＬＣを用いて測定することにより確認することができる。
【００１５】
例えば、本発明の結晶が１アルギニン塩の結晶であることは、該結晶中のアルギニン含量が、通常５９．６±５．０重量％、好ましくは５９．６±４．０重量％、最も好ましくは５９．６±３．０重量％であることにより確認することができる。
【００１６】
また、例えば、本発明の結晶が１リジン塩の結晶であることは、該結晶中のリジン含量が、通常５５．３±５．０重量％、好ましくは５５．３±４．０重量％、最も好ましくは５５．３±３．０重量％であることにより確認することができる。
【００１７】
また、例えば、本発明の結晶が１オルニチン塩の結晶であることは、該結晶中のオルニチン含量が、通常５２．８±５．０重量％、好ましくは５２．８±４．０重量％、最も好ましくは５２．８±３．０重量％であることにより確認することができる。
【００１８】
本発明の結晶が無水物の結晶であることは、後述の分析例に記載のカールフィッシャー法を用いて測定した水分含量が、通常２．５重量％以下、好ましくは２．３重量％以下、最も好ましくは２．０重量％以下であることにより確認することができる。
【００１９】
ＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶としては、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図１および２、並びに表１および２に示す値で規定される、ＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶を挙げることができる。なお、図１および表１、並びに図２および表２はそれぞれのＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶の回折結果に対応する。
【００２０】
前記粉末Ｘ線回折パターンが図２および表２に示す値で規定されるＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶としては、後述の分析例に記載の赤外（ＩＲ）分析に供した場合、図３に示す赤外吸収スペクトルを示すＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶を挙げることができる。
【００２１】
ＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶としては、具体的には、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折において、下記（i）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶が好ましく、下記（i）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（ii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶がより好ましく、下記（i）および（ii）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（iii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶がさらに好ましい。
（i）７．５±０．２°、好ましくは７．５±０．１°、１４．５±０．２°、好ましくは１４．５±０．１°、１５．１±０．２°、好ましくは１５．１±０．１°、１９．２±０．２°、好ましくは１９．２±０．１°、および２０．２±０．２°、好ましくは２０．２±０．１°
（ii）１１．６±０．２°、好ましくは１１．６±０．１°、１２．７±０．２°、好ましくは１２．７±０．１°、１７．９±０．２°、好ましくは１７．９±０．１°、２１．５±０．２°、好ましくは２１．５±０．１°、および２３．３±０．２°、好ましくは２３．３±０．１°
（iii）１９．６±０．２°、好ましくは１９．６±０．１°、２１．９±０．２°、好ましくは２１．９±０．１°、２５．２±０．２°、好ましくは２５．２±０．１°、２５．５±０．２°、好ましくは２５．５±０．１°、および３３．６±０．２°、好ましくは３３．６±０．１°
【００２２】
ＨＭＢリジン塩・無水物の結晶としては、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図４および表４に示す値で規定される、ＨＭＢリジン塩・無水物の結晶を挙げることができる。
【００２３】
前記粉末Ｘ線回折パターンが図４および表４に示す値で規定されるＨＭＢリジン塩・無水物の結晶としては、後述の分析例に記載の赤外分光（ＩＲ）分析に供した場合、図５に示す赤外吸収スペクトルを示すＨＭＢリジン塩・無水物の結晶を挙げることができる。
【００２４】
ＨＭＢリジン塩・無水物の結晶としては、具体的には、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折において、下記（i）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢリジン塩・無水物の結晶が好ましく、下記（i）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（ii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢリジン塩・無水物の結晶がより好ましく、下記（i）および（ii）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（iii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢリジン塩・無水物の結晶がさらに好ましい。
（i）８．５±０．２°、好ましくは８．５±０．１°、１７．０±０．２°、好ましくは１７．０±０．１°、１８．１±０．２°、好ましくは１８．１±０．１°、１８．５±０．２°、好ましくは１８．５±０．１°、および１９．５±０．２°、好ましくは１９．５±０．１°
（ii）２２．２±０．２°、好ましくは２２．２±０．１°、２５．５±０．２°、好ましくは２５．５±０．１°、２５．８±０．２°、好ましくは２５．８±０．１°、２６．６±０．２°、好ましくは２６．６±０．１°、および３４．４±０．２°、好ましくは３４．４±０．１°
（iii）４．８±０．２°、好ましくは４．８±０．１°、２０．４±０．２°、好ましくは２０．４±０．１°、３１．０±０．２°、好ましくは３１．０±０．１°、３３．８±０．２°、好ましくは３３．８±０．１°、および３６．５±０．２°、好ましくは３６．５±０．１°
【００２５】
ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶としては、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図６および表６に示す値で規定されるＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶、並びに図８および表９に示す値で規定されるＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶を挙げることができる。なお、図６および表６、並びに図８および表９はそれぞれのＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶の回折結果に対応する。
【００２６】
前記粉末Ｘ線回折パターンが図６および表６に示す値で規定されるＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶としては、後述の分析例に記載の赤外分光（ＩＲ）分析に供した場合、図７に示す赤外吸収スペクトルを示すＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶を挙げることができる。
【００２７】
ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶としては、具体的には、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折において、下記（i）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶が好ましく、下記（i）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（ii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶がより好ましく、下記（i）および（ii）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（iii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶がさらに好ましい。
（i）５．１±０．２°、好ましくは５．１±０．１°、１４．０±０．２°、好ましくは１４．０±０．１°、１５．３±０．２°、好ましくは１５．３±０．１°、２０．４±０．２°、好ましくは２０．４±０．１°、および２１．９±０．２°、好ましくは２１．９±０．１°
（ii）１６．４±０．２°、好ましくは１６．４±０．１°、１６．８±０．２°、好ましくは１６．８±０．１°、１９．４±０．２°、好ましくは１９．４±０．１°、２１．４±０．２°、好ましくは２１．４±０．１°、および２５．５±０．２°、好ましくは２５．５±０．１°
（iii）０．９±０．２°、好ましくは０．９±０．１°
【００２８】
また、ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶としては、具体的には、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折において、下記（i）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶が好ましく、下記（i）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（ii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶がより好ましく、下記（i）および（ii）に記載の回折角（２θ）に加えてさらに下記（iii）に記載の回折角（２θ）にピークを有するＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶がさらに好ましい。
（i）４．９±０．２°、好ましくは４．９±０．１°、５．２±０．２°、好ましくは５．２±０．１°、５．５±０．２°、好ましくは５．５±０．１°、１０．９±０．２°好ましくは１０．９±０．１°、および１５．５±０．２°、好ましくは１５．５±０．１°
（ii）１５．９±０．２°、好ましくは１５．９±０．１°、１６．４±０．２°、好ましくは１６．４±０．１°、１７．４±０．２°、好ましくは１７．４±０．１°、１９．２±０．２°好ましくは１９．２±０．１°、および２０．４±０．２°、好ましくは２０．４±０．１°
（iii）２０．８±０．２°、好ましくは２０．８±０．１°、２１．３±０．２°、好ましくは２１．３±０．１°、２１．８±０．２°、好ましくは２１．８±０．１°、２２．２±０．２°好ましくは２２．２±０．１°、および２２．８±０．２°、好ましくは２２．８±０．１°
【００２９】
２．本発明の結晶の製造方法
本発明の結晶の製造方法は、以下の（１）または（２）に記載の製造方法（以下、「本発明の結晶の製造方法」ともいう。）である。
【００３０】
（１）本発明の結晶の製造方法−１
本発明の結晶の製造方法としてはアルコール類を含む溶媒にＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを溶解させる工程、該溶媒を静置または撹拌することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程、および該溶媒からＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する工程、を含むＨＭＢアミノ酸塩の結晶の製造方法を挙げることができる。
【００３１】
アミノ酸としては、好ましくは塩基性アミノ酸を、より好ましくは、アルギニン、オルニチン、リジンおよびヒスチジンを、さらに好ましくは、アルギニン、オルニチンおよびリジンを、最も好ましくはアルギニンを挙げることができる。アミノ酸は、Ｌ体、Ｄ体のいずれも用いることができるが、Ｌ体が好ましい。
【００３２】
アルコール類としては、好ましくはＣ１〜Ｃ６のアルコールからなる群から選ばれる少なくとも１のアルコール類を、より好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルコール類からなる群から選ばれる少なくとも１のアルコール類を、さらに好ましくはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノールおよびイソプロピルアルコールからなる群より選ばれる少なくとも１のアルコール類を、よりさらに好ましくはメタノールおよびエタノールからなる群より選ばれる少なくとも１のアルコール類を、最も好ましくはエタノールを挙げることができる。
【００３３】
前記アルコール類は、１種以上を混合して用いることができる。また、上記のアルコール類を含む溶媒には水が含有されていてもよい。アルコール類を含む溶媒の含水量としては、通常４０重量％以下、好ましくは２０重量％以下、さらに好ましくは１０重量％以下、最も好ましくは５重量％以下を挙げることができる。
【００３４】
アルコール類を含む溶媒にＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを溶解させる方法としては、ＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを該溶媒に懸濁させた後、加熱して溶解液を得る方法、または該溶媒を濾過して濾液を得る方法を挙げることができる。
【００３５】
ＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを前記溶媒に懸濁させた後、加熱して溶解液を得る方法における、加熱温度としては、通常０〜８０℃、好ましくは２０〜７０℃、最も好ましくは４０〜６０℃を挙げることができる。加熱時間としては、通常１０分〜６時間、好ましくは２０分〜４時間、最も好ましくは３０分〜２時間を挙げることができる。
【００３６】
ＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスは、後述する実施例１に記載の方法によって取得することができる。ＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを溶解させて得られた前記溶媒を、静置または撹拌することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させることができる。
【００３７】
アルコール類を含む溶媒に溶解させるＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスの濃度としては、好ましくは５０ｇ／Ｌ以上、より好ましくは１００ｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは１５０ｇ／Ｌ以上を挙げることができる。
【００３８】
ＨＭＢアミノ酸塩のアモルファスを溶解させたアルコール類を含む溶媒に、種晶としてＨＭＢアミノ酸塩の結晶を添加した後に、該溶媒を静置または撹拌することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させてもよい。該種晶を該溶媒に添加することにより、析出速度を速めることができる。該種晶の該溶媒中の濃度は通常０．０５〜１５重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、最も好ましくは２〜７重量％となるように添加する。
ＨＭＢアミノ酸塩の結晶は、後述する実施例２、４、または５に記載の方法によって取得することができる。
【００３９】
前記溶媒を静置または撹拌する温度としては、通常０〜８０℃、好ましくは５〜５０℃、最も好ましくは１０〜３０℃を挙げることができる。静置または撹拌する時間としては、通常１〜１００時間、好ましくは３〜４８時間、最も好ましくは５〜２４時間を挙げることができる。
【００４０】
前記溶媒からＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する方法としては、特に限定されないが、濾取、加圧濾過、吸引濾過または遠心分離等を挙げることができる。さらに母液の付着を低減し、結晶の品質を向上させるために、適宜、結晶を洗浄することができる。
【００４１】
結晶の洗浄に用いる溶液に特に制限はないが、水、メタノール、エタノール、アセトン、ｎ−プロパノールおよびイソプロピルアルコールから選ばれる１種類または複数種類を任意の割合で混合したものを用いることができる。
【００４２】
このようにして得られた湿晶を乾燥させることにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を取得することができる。乾燥条件としては、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶の形態を保持できる方法ならばいずれでもよく、減圧乾燥、真空乾燥、流動層乾燥または通風乾燥等を適用することができる。乾燥温度としては、付着水分や溶媒を除去できる範囲ならばいずれでもよいが、好ましくは８０℃以下、より好ましくは６０℃以下を挙げることができる。
【００４３】
上記の晶析条件によって、高純度のＨＭＢアミノ酸塩の結晶を取得することができる。当該結晶の純度としては、通常９５％以上、好ましくは９６％以上、より好ましくは９７％以上、最も好ましくは９７．５％以上を挙げることができる。
【００４４】
上記の製造方法によって製造することができるＨＭＢアミノ酸塩の結晶としては、例えば、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図１および２、並びに表１および２に示す値で規定されるＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶を挙げることができる。
【００４５】
（２）本発明の結晶の製造方法−２
本発明の結晶の製造方法としては、アミノ酸含有化合物を含むｐＨが２．５〜１１．０であるＨＭＢの水溶液を濃縮して、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を該水溶液に析出させる工程、並びに該水溶液からＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する工程、を含むＨＭＢアミノ酸塩の結晶の製造方法を挙げることができる。
【００４６】
ＨＭＢの水溶液に含有されるＨＭＢは、発酵法、酵素法、天然物からの抽出法または化学合成法等のいずれの製造方法によって製造されたものであってもよい。
【００４７】
ＨＭＢの水溶液に、結晶化の障害となる固形物が含まれる場合には、遠心分離、濾過またはセラミックフィルタ等を用いて固形物を除去することができる。また、ＨＭＢの水溶液に、結晶化の障害となる水溶性の不純物や塩が含まれる場合には、イオン交換樹脂等を充填したカラムに通塔する等により、水溶性の不純物または塩を除去することができる。
【００４８】
また、ＨＭＢの水溶液に、結晶化の障害となる疎水性の不純物が含まれる場合には、合成吸着樹脂または活性炭等を充填したカラムに通塔する等により、疎水性の不純物を除去することができる。該水溶液は、ＨＭＢの濃度が通常５００ｇ／Ｌ以上、好ましくは６００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは７００ｇ／Ｌ以上、最も好ましくは８００ｇ／Ｌ以上となるように調製することができる。
【００４９】
アミノ酸含有化合物としては、好ましくは塩基性アミノ酸含有化合物を、より好ましくは、アルギニン含有化合物、リジン含有化合物、オルニチン含有化合物およびヒスチジン含有化合物を、最も好ましくは、アルギニン含有化合物、リジン含有化合物およびオルニチン含有化合物を挙げることができる。アミノ酸含有化合物中のアミノ酸は、Ｌ体、Ｄ体のいずれも用いることができるが、Ｌ体が好ましい。
【００５０】
アルギニン含有化合物としては、例えば、フリー体のアルギニンおよびアルギニン塩酸塩を挙げることができる。アルギニン含有化合物として、フリー体のアルギニンを用いる場合、アルギニンを使用してＨＭＢの水溶液のｐＨを調整することにより、ｐＨが通常２．５〜１１．０、好ましくは２．８〜１０．５、最も好ましくは３．０〜１０．０であるアルギニン含有化合物を含むＨＭＢの水溶液を取得することができる。
【００５１】
リジン含有化合物としては、例えば、フリー体のリジンおよびリジン塩酸塩を挙げることができる。リジン含有化合物として、フリー体のリジンを用いる場合、リジンを使用してＨＭＢの水溶液のｐＨを調整することにより、ｐＨが通常２．５〜１１．０、好ましくは２．８〜１０．５、最も好ましくは３．０〜１０．０であるリジン含有化合物を含むＨＭＢの水溶液を取得することができる。
【００５２】
オルニチン含有化合物としては、例えば、フリー体のオルニチンおよびオルニチン塩酸塩を挙げることができる。オルニチン含有化合物として、フリー体のオルニチンを用いる場合、オルニチンを使用してＨＭＢの水溶液のｐＨを調整することにより、ｐＨが通常２．５〜１１．０、好ましくは２．８〜１０．５、最も好ましくは３．０〜１０．０であるオルニチン含有化合物を含むＨＭＢの水溶液を取得することができる。
【００５３】
ＨＭＢの水溶液を濃縮して、該水溶液中に、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる方法としては、該水溶液を減圧濃縮する方法等を挙げることができる。
【００５４】
ＨＭＢの水溶液を減圧濃縮する方法における、該水溶液の温度としては、通常０〜１００℃、好ましくは１０〜９０℃、最も好ましくは２０〜６０℃を挙げることができる。該水溶液を減圧濃縮する方法における、減圧時間としては、通常１〜１２０時間、好ましくは２〜６０時間、最も好ましくは３〜５０時間を挙げることができる。
【００５５】
ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を該水溶液に析出させる工程においては、ＨＭＢの水溶液中にＨＭＢアミノ酸塩の結晶を種晶として添加してもよい。種晶の水溶液中の濃度は、通常０．０５〜１５重量％、好ましくは０．５〜１０重量％、最も好ましくは２〜７重量％となるように添加する。ＨＭＢアミノ酸塩の結晶は、具体的には例えば、後述する実施例２、４または５に記載の方法によって取得することができる。
【００５６】
ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を該水溶液に析出させる工程においては、ＨＭＢの水溶液中にアルコール類、ニトリル類およびケトン類からなる群より選ばれる少なくとも１の溶媒を添加または滴下することにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させてもよい。アルコール類、ニトリル類およびケトン類は１種類を単独で用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。
【００５７】
さらに、前記溶媒を添加または滴下する際、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶が析出する前に、前記種晶を添加してもよい。前記種晶を添加する時間としては該溶媒の滴下または添加を開始してから、通常０〜５時間以内、好ましくは０〜４時間以内、最も好ましくは０〜３時間以内を挙げることができる。また、ＨＭＢの水溶液中に該溶媒を添加または滴下する前に、前記種晶を添加してもよい。
【００５８】
アルコール類としては、上記２．（１）に記載と同じ例を挙げることができる。ニトリル類としては、好ましくはアセトニトリルを挙げることができる。ケトン類としては、好ましくはアセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンおよびジエチルケトンからなる群より選ばれる少なくとも１のケトン類を、より好ましくは、アセトンおよびメチルエチルケトンからなる群より選ばれる少なくとも１のケトン類を、最も好ましくはアセトンを挙げることができる。
【００５９】
ＨＭＢの水溶液に前記溶媒を添加または滴下するときの該水溶液の温度としては、ＨＭＢが分解しない温度であればいずれの温度でもよいが、溶解度を下げてＨＭＢアミノ酸塩・無水物の結晶の結晶化率を向上させるために、通常８０℃以下、好ましくは７０℃以下、より好ましくは６０℃以下、最も好ましくは５０℃以下を挙げることができる。温度の下限値としては、通常０℃以上、好ましくは１０℃以上を挙げることができる。
【００６０】
ＨＭＢの水溶液に前記溶媒を添加または滴下する量としては、該水溶液の通常０．５〜３０倍量、好ましくは０．５〜２５倍量、最も好ましくは０．５〜１０倍量を挙げることができる。
【００６１】
ＨＭＢの水溶液に前記溶媒を添加または滴下する時間としては、通常３０分〜４８時間、好ましくは２〜３０時間、最も好ましくは３〜２０時間を挙げることができる。
【００６２】
上記のようにしてＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させた後、さらに析出した結晶を通常１〜４８時間、好ましくは１〜２４時間、最も好ましくは１〜１２時間熟成させることができる。熟成させるとは、ＨＭＢアミノ酸塩・無水物の結晶を析出させる工程を一旦停止して、結晶を成長させることをいう。結晶を熟成させた後は、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を析出させる工程を再開してもよい。
【００６３】
ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を採取する方法としては、特に限定されないが、例えば、濾取、加圧濾過、吸引濾過および遠心分離等を挙げることができる。さらに母液の付着を低減し、結晶の品質を向上させるために、適宜、結晶を洗浄することができる。
【００６４】
結晶の洗浄に用いる溶液に特に制限はないが、水、メタノール、エタノール、アセトン、ｎ−プロパノール、イソプロピルアルコール、アセトニトリル、アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンおよびジエチルケトンから選ばれる１種類または複数種類を任意の割合で混合したものを用いることができる。
【００６５】
このようにして得られた湿晶を乾燥させることにより、ＨＭＢアミノ酸塩の結晶を取得することができる。乾燥条件としては、減圧乾燥、真空乾燥、流動層乾燥または通風乾燥を適用することができる。乾燥温度としては、付着水分や溶媒を除去できる範囲ならばいずれでもよいが、好ましくは８０℃以下、より好ましくは６０℃以下を挙げることができる。
【００６６】
上記の晶析条件によって、高純度のＨＭＢアミノ酸塩の結晶を取得することができる。ＨＭＢアミノ酸塩の結晶の純度としては、通常９３％以上、好ましくは９４％以上、より好ましくは９５％以上、最も好ましくは９６％以上を挙げることができる。
【００６７】
上記の製造方法によって製造することができるＨＭＢアミノ酸塩の結晶としては、例えば、Ｘ線源としてＣｕＫαを用いた粉末Ｘ線回折パターンが、図４および表４に示す値で規定されるＨＭＢリジン塩・無水物の結晶、図６および表６に示す値で規定されるＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶、並びに図８および表９に示す値で規定されるＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶を挙げることができる。
【００６８】
［分析例］
（１）粉末Ｘ線回折
粉末Ｘ線回折装置（ＸＲＤ）Ｕｌｔｉｍａ  ＩＶ（リガク社製）を用い、測定は使用説明書に従って行った。
（２）濃度・純度測定
以下のＨＰＬＣ分析条件を用いてＨＭＢ濃度および各種塩の純度を測定した。
ガードカラムＳｈｏｄｅｘ  ＳＵＧＡＲ  ＳＨ−Ｇ  φ６．０×５０ｍｍ
カラム：ＳＵＧＡＲ  ＳＨ１０１１  φ８．０×３００ｍｍ×２本直列
カラム温度：６０℃
緩衝液：０．００５ｍｏｌ／Ｌの硫酸水溶液
流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（波長２１０ｎｍ）
（３）カールフィッシャー法による結晶の水分含量の測定
自動水分測定装置ＡＱＶ−２２００（平沼産業社製）を用い、使用説明書に従って、結晶の水分含量を測定した。
（４）結晶のアミノ酸含量の測定
蛍光検出器を有するＨＰＬＣを用いてアミノ酸含量をフタルアルデヒド（ＯＰＡ）法で測定した。
（５）融点の測定
Ｍｅｌｔｉｎｇ  Ｐｏｉｎｔ  Ｍ−５６５（ＢＵＣＨＩ社製）を用い、使用説明書に従って、以下の条件を用いて融点を測定した。
１００℃〜２５０℃、２℃／ｍｉｎ
（６）赤外分光（ＩＲ）分析
ＦＴＩＲ−８４００型（島津製作所製）を用い、使用説明書に従って行った。
【００６９】
［参考例１］
ＨＭＢフリー体溶液の作製
フリー体換算で７６．５ｇの試薬ＨＭＢカルシウム塩を８５０ｍＬの水に溶解させた。該水溶液を、６４０ｍＬの強カチオン性交換樹脂ＸＵＳ−４０２３２．０１（Ｈ＋）（ダウケミカル社製）に通液して脱Ｃａを行い、ＨＭＢフリー体７６．４ｇを含有する溶液１．２５Ｌを取得した。
【００７０】
［参考例２］
ＨＭＢアルギニン塩の結晶化検討
米国特許出願公開第２００４／０１７６４４９号明細書の記載を参考にＨＭＢアルギニン塩の結晶化を試みた。参考例１と同様の手法からＨＭＢフリー体２．３１ｇを含有する水溶液４８ｍＬを取得した。得られた水溶液を濃縮して１２ｍＬとした後、イソブタノール２４ｍＬを添加し、さらにアルギニンフリー体２．４１ｇを添加して室温下で１時間撹拌したところ、白色透明の溶液が二相で得られた。水相のみを取得して水相を５０℃、１５ｍｂａｒ条件下で２０時間濃縮したところ、白色の析出物が６．５ｇ得られた。当該粉末を偏光顕微鏡で観察したところ、偏光を示さない無定形のアメ状固体であることが確認され、非結晶性アモルファスであることがわかった（融点：９８〜１２６℃、１０℃／ｍｉｎ）。以上より、米国特許出願公開第２００４／０１７６４４９号明細書記載の方法ではＨＭＢアルギニン塩の結晶は得られなかった。
【実施例】
【００７１】
以下に実施例を示すが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。【００７２】
［実施例１］
ＨＭＢアルギニン塩の非結晶アモルファスの取得
参考例１で得られたＨＭＢフリー体水溶液２００ｍＬに、１２８ｇ／ＬのＬ−アルギニン水溶液を１６０ｍＬ加え、ｐＨを７．０５に調整した。得られた水溶液を次の工程に供した。【００７３】
当該水溶液３６０ｍＬを５０℃、１５ｍｂａｒ下で減圧濃縮し、溶媒を除去することによって３１．１ｇの白色の粉末を得た。当該粉末を偏光顕微鏡で観察したところ、偏光を示さなかったことから、当該粉末は非結晶性アモルファスであるであることがわかった。【００７４】
［実施例２］
ＨＭＢアルギニン塩・無水物の種結晶の取得
参考例１で得られたＨＭＢアルギニン塩の非結晶性アモルファス１５０ｍｇに、１００％−ＥｔＯＨを１．５ｍＬ加え、５０℃に加熱して完全に溶解させた。【００７５】
当該水溶液を２５℃にて１２時間撹拌することによって、結晶を自然起晶させた。当該結晶スラリーをさらに１２時間熟成させた後に当該結晶を濾取し、２５℃にて１２時間通風乾燥させることにより、６０ｍｇの結晶を得た。【００７６】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を図１および表１に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比（Ｉ／Ｉ０）を示す。また、相対強度比は１以上を表示する。【００７７】
【表１】
2017222043.tif 000003
【００７８】
［実施例３］
ＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶の取得
参考例１で得られたＨＭＢアルギニン塩の非結晶性アモルファス２７．８ｇに、１００％−ＥｔＯＨを１６０ｍＬ加え、５０℃に加熱して完全に溶解させた。【００７９】
当該水溶液に、実施例２に従って得られるＨＭＢアルギニン塩の種結晶を０．１ｇ添加し、結晶を起晶させた。当該結晶スラリーを２５℃にて１２時間撹拌し、熟成させた後に当該結晶を濾取し、２５℃にて通風乾燥させることにより２３．６ｇの結晶を得た。【００８０】
得られた結晶のうち１１．６ｇをさらに減圧（１５ｍｂａｒ）下、４０℃にて２４時間乾燥させることにより、９．０ｇの結晶を得た。ＨＰＬＣによる純度測定では９７．８％（面積％）以上のＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶を取得することができた。【００８１】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を図２および表２に、赤外分光（ＩＲ）分析の結果を図３に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比（Ｉ／Ｉ０）を示す。また、相対強度比は５以上を表示する。【００８２】
【表２】
2017222043.tif 000004
【００８３】
当該結晶のＬ−アルギニン含量をＨＰＬＣにより測定した結果、６１．７重量％であり、１アルギニン塩の理論値（５９．６重量％）とほぼ一致した。また、当該結晶に含まれる水分量をカールフィッシャー法により測定した結果、０．５重量％であった。【００８４】
以上から、当該結晶はＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶であることがわかった。実施例３で取得した結晶の各種物性を表３に示す。【００８５】
【表３】
2017222043.tif 000005
【００８６】
［実施例４］
ＨＭＢリジン塩・無水物の結晶の取得
参考例１で得られたＨＭＢフリー体水溶液２００ｍＬに、２００ｇ／ＬのＬ−リジン水溶液を９４ｍＬ加え、ｐＨを６．０３に調整した。得られた水溶液を次の工程に供した。当該水溶液を５０℃、１５ｍｂａｒ条件下で濃縮液重量が３３．４ｇとなるまで濃縮したところ、結晶が自然起晶し、白色のスラリーが得られた。該スラリーにアセトニトリル２０ｍＬを加え、５０℃にて１時間撹拌して熟成させた後に、当該結晶を濾取した。【００８７】
得られた結晶をアセトニトリル２０ｍＬで洗浄した後、減圧（１５ｍｂａｒ）下、４０℃にて２４時間乾燥させることにより、５．０ｇの結晶を得た。ＨＰＬＣによる純度測定では９７．４％（面積％）以上のＨＭＢリジン塩・無水物の結晶を取得することができた。【００８８】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を図４および表４に、赤外分光（ＩＲ）分析の結果を図５に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比（Ｉ／Ｉ０）を示す。また、相対強度比は２以上を表示する。【００８９】
【表４】
2017222043.tif 000006
【００９０】
当該結晶のＬ−リジン含量をＨＰＬＣにより測定した結果、５４．８重量％であり、１リジン塩の理論値（５５．３重量％）とほぼ一致した。また、当該結晶に含まれる水分量をカールフィッシャー法により測定した結果、０．１重量％であった。【００９１】
以上から、当該結晶はＨＭＢリジン塩・無水物の結晶であることがわかった。実施例４で取得した結晶の各種物性を表５に示す。【００９２】
【表５】
2017222043.tif 000007
【００９３】
［実施例５］
ＨＭＢオルニチン塩・無水物の種結晶の取得
参考例１で得られたＨＭＢフリー体水溶液２０ｍＬに、５１０ｇ／ＬのＬ−オルニチン水溶液を加え、ｐＨを７．８０に調整した。得られた水溶液を次の工程に供した。当該水溶液を５０℃、１５ｍｂａｒ条件下で濃縮したところ、白色の析出物が２．８ｇ得られた。当該粉末を偏光顕微鏡で観察したところ、偏光を示したことから、当該粉末は結晶であることがわかった。【００９４】
［実施例６］
ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶の取得−１
参考例１で得られたＨＭＢフリー体水溶液２０ｍＬに、５１０ｇ／ＬのＬ−オルニチン水溶液を２．１ｍＬ加え、ｐＨを７．０８に調整した。得られた水溶液を次の工程に供した。当該水溶液を５０℃、１５ｍｂａｒ条件下で濃縮液重量が３．９ｇとなるまで濃縮した後、実施例５に従って得られるＨＭＢオルニチン塩・無水物の種結晶を０．１ｇ添加した後、９ｍＬの１００％−エタノールを３０分間かけて滴下添加し、結晶を析出させた。【００９５】
結晶スラリーを１２時間熟成させた後に当該結晶を濾取し、１００％エタノール水溶液で洗浄した後、２５℃にて通風乾燥させ、さらに減圧（１５ｍｂａｒ）下、室温で２４時間乾燥させることにより、２５０ｍｇの結晶を得た。【００９６】
ＨＰＬＣによる純度測定では９６．３％（面積％）以上のＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶を取得することができた。当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を図６および表６に、赤外分光（ＩＲ）分析の結果を図７に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比（Ｉ／Ｉ０）を示す。また、相対強度比は１以上を表示する。【００９７】
【表６】
2017222043.tif 000008
【００９８】
当該結晶のＬ−オルニチン含量をＨＰＬＣにより測定した結果、５３．６重量％であり、１オルニチン塩の理論値（５２．８重量％）とほぼ一致した。また、当該結晶に含まれる水分量をカールフィッシャー法により測定した結果、２．０重量％であった。【００９９】
以上から、当該結晶はＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶であることがわかった。実施例６で取得した結晶の各種物性を表７に示す。【０１００】
【表７】
2017222043.tif 000009
【０１０１】
[実施例７]
ＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶の取得−２
参考例１と同様の手法からＨＭＢフリー体２８０．３ｇを含有する水溶液４．６Ｌを取得した。得られた水溶液を５１０ｇ／Ｌのオルニチン水溶液を６１５ｍＬ加え、ｐＨを６．２に調整した。当該水溶液を５０℃、１５ｍｂａｒ条件下で濃縮液重量が６９６ｇとなるまで濃縮した。当該溶液を室温下に維持しつつ、実施例５に従って得られるＨＭＢオルニチン塩・無水物の種結晶１．８ｇを添加し、結晶を析出させた。結晶スラリーを室温下で２４時間熟成させた後に当該結晶を遠心分離することにより結晶を濾取し、さらに当該結晶を３０ｈＰａ、４０℃の条件下にて２４時間真空乾燥させることにより、１８０ｇの結晶を得た。【０１０２】
当該結晶のオルニチン含量をＨＰＬＣにより測定した結果、５１．６重量％であり、１オルニチン塩の理論値（５２．８重量％）とほぼ一致した。また、当該結晶に含まれる水分量をカールフィッシャー法により測定した結果、０．５重量％であった。【０１０３】
以上から、当該結晶はＨＭＢオルニチン塩・無水物の結晶であることがわかった。実施例７で取得した結晶の各種物性を表８に示す。【０１０４】
【表８】
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【０１０５】
当該結晶の粉末Ｘ線回折の結果を図８および表９に示す。表中、「２θ」は回折角（２θ°）を、「相対強度」は、相対強度比（Ｉ／Ｉ０）を示す。また、相対強度比は２以上を表示する。【０１０６】
【表９】
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【０１０７】
実施例７で取得した結晶のチャート図である図８と実施例６で取得した結晶のチャート図である図６とを比較したところ、これらは一致しなかった。よって、当該結晶は、実施例６で取得した結晶と異なる結晶形であることが確認された。【０１０８】
［実施例８］
溶解度の測定
実施例３で得られたＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶、ＨＭＢカルシウム塩・水和物（東京化成工業社製）を室温下で水に溶け残るまでそれぞれ添加し、十分な時間、撹拌保持した後、結晶を含まない上澄み液を採取し、ＨＰＬＣを用いてＨＭＢ濃度を測定した。その結果を表１０に示す。【０１０９】
【表１０】
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【０１１０】
表１０に示すように、取得したＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶は、既存のＨＭＢカルシウム塩と比較して水に対する溶解度が大幅に向上することがわかった。【０１１１】
［実施例９］
ＨＭＢアルギニン塩の結晶、ＨＭＢリジン塩の結晶とリン酸緩衝液との混合
実施例３で得られたＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶、実施例４で得られたＨＭＢリジン塩・無水物の結晶、ＨＭＢカルシウム塩・水和物（東京化成工業社製）をそれぞれフリー体換算で１００ｇ／Ｌ溶液とし、０．２Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６．８０）と任意の混合比率で混合した。混合した後の液の光透過率（６６０ｎｍ）を測定し、不溶性塩の形成有無を評価した。その結果を表１１に示す。【０１１２】
【表１１】
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【０１１３】
表１１に示すように、リン酸緩衝液との混合において、既存のＨＭＢカルシウム塩は不溶性の塩を生成するのに対して、取得したＨＭＢアルギニン塩・無水物およびＨＭＢリジン塩・無水物の結晶は、不溶性塩を形成しないことがわかった。【０１１４】
［実施例１０］
ＨＭＢアルギニン塩の結晶と糖アミノ酸電解質輸液製剤との混合
実施例３で得られたＨＭＢアルギニン塩・無水物、ＨＭＢカルシウム塩・水和物（東京化成工業社製）をそれぞれフリー体換算で終濃度０、０．１１、０．２１および０．４２重量／体積％となるよう、末梢静脈栄養用糖アミノ酸電解質輸液製剤［ｐＨ約６．７、製品名：アミノフリード輸液（株式会社大塚製薬工場）］に混合した直後及び室温放置２４時間後の光透過率Ｔ％（６６０ｎｍ）を紫外可視分光光度計により測定し、不溶性塩の形成の有無を評価した。その結果を表１２に示す。【０１１５】
【表１２】
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【０１１６】
表１２に示すように、アミノフリード輸液との混合において、既存のＨＭＢカルシウム塩では不溶性塩を形成するのに対して、取得したＨＭＢアルギニン塩・無水物は、不溶性塩を形成しないことがわかった。【０１１７】
［実施例１１］
ＨＭＢアルギニン塩の結晶を含有する糖電解質輸液製剤投与時の体内電解質への影響
実施例３で得られたＨＭＢアルギニン塩・無水物、ＨＭＢカルシウム塩・水和物（東京化成工業社製）をそれぞれフリー体換算で終濃度０および０．４２重量／体積％となるよう、リン酸イオンを含まない、糖電解質輸液製剤［製品名：ソリタＴ３号輸液（エイワイファーマ株式会社）］に混合し、腸管擦過術により手術侵襲を加えたラットに対して標準的用量（２４０ｍＬ／ｋｇ／日）で３日間持続投与した。最終投与日に２４時間の畜尿を行った尿を採取し、尿中電解質濃度を測定した。その結果を表１３および表１４に示す。【０１１８】
【表１３】
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【０１１９】
【表１４】
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【０１２０】
表１３および表１４に示すように、ソリタＴ３号輸液との混合投与において、既存のＨＭＢカルシウム塩は尿中カルシウムの上昇及び尿中リン排泄の減少を誘発するのに対して、取得したＨＭＢアルギニン塩・無水物の結晶は、上記の電解質異常を誘発しないことが分かった。【０１２１】
［実施例１２］
官能評価試験−１
〔飲料（１）の調製〕
水２００ｍＬに実施例７で得られたＨＭＢオルニチン塩・無水物６ｇ、マルチトール（三菱商事フードテック社製）４ｇ、りんご香料（高田香料社製）１２０μＬ、シュガーフレーバー（小川香料社製）１２０μＬ、アスパルテーム（味の素社製）２００ｍｇを加えて溶解させた。その溶液に、クエン酸（三菱フードスペシャリティーズ社製）を適量加えてｐＨ３．７０に調整後、１００ｍＬずつガラス瓶に分注し、アルミキャップを施した。該ガラス瓶を９０℃にて５分間加熱した後、室温放置にて冷却し、飲料（１）を作製した。室温放置した直後に沈殿及び濁りの有無を目視で確認した結果、沈殿及び濁りは確認されなかった。【０１２２】
〔比較飲料（１）の調製〕
ＨＭＢオルニチン塩・無水物の代わりにＨＭＢカルシウム塩（ＨＭＢ協和、協和発酵バイオ社製）を用いた以外は、飲料（１）と同様にして比較飲料（１）を調製した。室温放置した直後に沈殿及び濁りの有無を目視で確認した。その結果、大量の白色沈殿が確認された。【０１２３】
上記飲料（１）および比較飲料（１）の風味のどちらが好ましいかを、８名のパネリストが二点識別法にて評価した。その結果、８名中８名が、飲料（１）の方が比較飲料（１）よりも明らかに風味が好ましいと評価した。この結果から、取得したＨＭＢオルニチン塩は、ＨＭＢカルシウム塩と比較して、溶解性および風味を改善する効果において優れていることがわかった。【０１２４】
［実施例１３］
官能評価試験−２
〔飲料（２）の調製〕
水２００ｍＬに実施例３で得られたＨＭＢアルギニン塩・無水物６ｇ、マルチトール（三菱商事フードテック社製）４ｇ、カシス香料（小川香料社製）１２０μＬ、糖蜜フレーバー（三井製糖社製）６０ｍｇ、ステビア（物産フードサイエンス社製）２００ｍｇを加えて溶解させた。その溶液に、７５％リン酸（大洋化学工業社製）を適量加えてｐＨ３．７０に調整後、１００ｍＬずつガラス瓶に分注し、アルミキャップを施した。該ガラス瓶を９０℃にて５分間加熱した後、室温放置にて冷却し、直後に沈殿及び濁りの有無を目視で確認した。その結果、沈殿及び濁りは確認されなかった。【０１２５】
〔比較飲料（２）の調製〕
ＨＭＢアルギニン塩・無水物の代わりにＨＭＢカルシウム塩（ＨＭＢ協和、協和発酵バイオ社製）を用いた以外は、飲料（２）と同様にして比較飲料（２）を調製した。室温放置した直後に沈殿及び濁りの有無を目視で確認した。その結果、加熱前と同様の白色沈殿が確認された。【０１２６】
飲料（２）と比較飲料（２）の風味のどちらが好ましいかを、８名のパネリストが二点識別法にて評価した。その結果、８名中８名が、飲料（２）の方が比較飲料（２）よりも明らかに風味が好ましいと評価した。この結果から、取得したＨＭＢアルギニン塩は、ＨＭＢカルシウム塩と比較して、溶解性および風味を改善する効果において優れていることがわかった。【０１２７】
本発明を特定の態様を参照して詳細に説明したが、本発明の精神と範囲を離れることなく様々な変更および修正が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお、本出願は、２０１６年６月２４日付けで出願された日本特許出願（特願２０１６−１２５２８０）に基づいており、その全体が引用により援用される。また、ここに引用されるすべての参照は全体として取り込まれる。
【産業上の利用可能性】
【０１２８】
本発明により、例えば、健康食品、医薬品、化粧品等の製品、原料または中間体等として有用であるＨＭＢアミノ酸塩・無水物の結晶、およびその製造方法が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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