(57)【要約】  本発明は、メタノールを含有せず、かつ粉体物性が改善したシチジンジリン酸コリンの結晶、及びその製造方法を提供することを目的とする。本発明によれば、シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液にシチジンジリン酸コリンの結晶を析出させ、該析出したシチジンジリン酸コリンの結晶を採取し、該採取したシチジンジリン酸コリンの結晶を、含水量が５〜５０体積％である、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液で洗浄することにより、メタノールを含有せず、かつ粉体物性が改善したシチジンジリン酸コリンの結晶を取得することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタノールを含有せず、かつ粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下である、シチジンジリン酸コリンの結晶。
【請求項２】
安息角が５７度以下である、請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
崩壊角が５０度以下である、請求項１又は２に記載の結晶。
【請求項４】
密比容が２．１ｍＬ／ｇ以下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項５】
エタノール、アセトン、１−プロパノール、２−プロパノール、酢酸エチル、１−ブタノール、２−ブタノール、ヘプタン、酢酸イソプロピル、メチルエチルケトン、酢酸プロピル及びテトラヒドロフランからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒以外の有機溶媒を含有しない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項６】
エタノール、アセトン、１−プロパノール及び２−プロパノールからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒以外の有機溶媒を含有しない、請求項１〜５のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項７】
エタノール以外の有機溶媒を含有しない、請求項１〜６のいずれか１項に記載の結晶。
【請求項８】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液にシチジンジリン酸コリンの結晶を析出させる工程、該析出したシチジンジリン酸コリンの結晶を採取する工程、及び該採取したシチジンジリン酸コリンの結晶を、含水量が５〜５０体積％である、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液で洗浄する工程を含む、シチジンジリン酸コリンの結晶の製造方法。
【請求項９】
メタノール以外の有機溶媒が、エタノール、アセトン、１−プロパノール、２−プロパノール、酢酸エチル、１−ブタノール、２−ブタノール、ヘプタン、酢酸イソプロピル、メチルエチルケトン、酢酸プロピル及びテトラヒドロフランからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒である、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
メタノール以外の有機溶媒が、エタノール、アセトン、１−プロパノール及び２−プロパノールからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒である、請求項８又は９に記載の製造方法。
【請求項１１】
メタノール以外の有機溶媒がエタノールである、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、品質に優れたシチジンジリン酸コリンの結晶及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
シチジンジリン酸コリンは、脳機能の改善効果を有する生理活性物質であり、日本では医療用医薬品として、海外では健康食品素材として広く使用されている（特許文献１）。シチジンジリン酸コリンの結晶としては、１水和物の結晶が知られており（特許文献３）、その製造方法としては、シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液に有機溶媒を添加する方法が開示されている（特許文献２及び３）。    【０００３】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液にエタノールなどの有機溶媒を添加すると、常温下では有機層と水層が二層に分離し、結晶化に長時間を要する。そのため、シチジンジリン酸コリンの結晶を安定して得るためには、特許文献３に示される通り、５０〜７０℃の高温が必要となる。【０００４】
一方、シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液と混和性の高いメタノールを使用すれば、低温条件下においても１水和物の結晶を速やかに起晶させることができる（特許文献２及び後述の比較例１）。【０００５】
非特許文献１によれば、メタノールは医薬品中の残留量を規制すべき溶媒としてクラス２に指定されており、また、医師の処方管理の範囲外となる食品への残留も望ましくない。そのため、医薬品や食品に用いられる素材として、シチジンジリン酸コリンの結晶には、残留メタノールの低減が強く求められるとともに、合わせて、錠剤等に成型するために、良好な粉体物性を有することが求められる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】日本国特許第６１６６７８６号公報
【特許文献２】日本国特公昭５１−３２６３０号公報
【特許文献３】日本国特許第６４７３６７号公報
【特許文献４】日本国特許第３３６９２３６号公報
【特許文献５】日本国特許第４９７７６０８号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】医薬品の残留溶媒ガイドラインについて
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、晶析工程にエタノールを使用する場合、特許文献３に記載されているように、５０〜７０℃の高温でシチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液からシチジンジリン酸コリンの結晶を得ようとすると、シチジンジリン酸コリンが容易に分解し、分解により生成した不純物が製品中に高濃度で残留する（特許文献３及び後述の表３の比較例３）。【０００９】
これに対して、結晶化に長時間を要することを許容してでも晶析温度を低下させると、シチジンジリン酸コリンの分解は抑制できるものの、今度は得られる結晶の比容積が著しく増大し、粉体物性が悪化する（後述の表２の比較例４）。【００１０】
また、特許文献２に記載の方法では、結晶を濾別する際の洗浄工程にメタノールを使用せずとも、晶析工程に用いるメタノールが結晶中に高濃度で残留する（後述の表４の比較例１及び２）。【００１１】
現在、市場で流通しているシチジンジリン酸コリンの結晶にはすべからくメタノールが残留しており（後述の表４のＡ〜Ｃ社品）、メタノールを含有せず、かつ粉体物性の優れたシチジンジリン酸コリンの結晶はこれまで知られていない。【００１２】
したがって、本発明は、メタノールを含有せず、かつ粉体物性が改善したシチジンジリン酸コリンの結晶、及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、以下の（１）〜（１１）に関する。
（１）メタノールを含有せず、かつ粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下である、シチジンジリン酸コリンの結晶。
（２）安息角が５７度以下である、上記（１）に記載の結晶。
（３）崩壊角が５０度以下である、上記（１）又は（２）に記載の結晶。
（４）密比容が２．１ｍＬ／ｇ以下である、上記（１）〜（３）のいずれか１に記載の結晶。
（５）エタノール、アセトン、１−プロパノール、２−プロパノール、酢酸エチル、１−ブタノール、２−ブタノール、ヘプタン、酢酸イソプロピル、メチルエチルケトン、酢酸プロピル及びテトラヒドロフランからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒以外の有機溶媒を含有しない、上記（１）〜（４）のいずれか１に記載の結晶。
（６）エタノール、アセトン、１−プロパノール及び２−プロパノールからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒以外の有機溶媒を含有しない、上記（１）〜（５）のいずれか１に記載の結晶。
（７）エタノール以外の有機溶媒を含有しない、上記（１）〜（６）のいずれか１に記載の結晶。
（８）シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液にシチジンジリン酸コリンの結晶を析出させる工程、該析出したシチジンジリン酸コリンの結晶を採取する工程、及び該採取したシチジンジリン酸コリンの結晶を、含水量が５〜５０体積％である、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液で洗浄する工程を含む、シチジンジリン酸コリンの結晶の製造方法。
（９）メタノール以外の有機溶媒が、エタノール、アセトン、１−プロパノール、２−プロパノール、酢酸エチル、１−ブタノール、２−ブタノール、ヘプタン、酢酸イソプロピル、メチルエチルケトン、酢酸プロピル及びテトラヒドロフランからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒である、上記（８）に記載の製造方法。
（１０）メタノール以外の有機溶媒が、エタノール、アセトン、１−プロパノール及び２−プロパノールからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒である、上記（８）又は（９）に記載の製造方法。
（１１）メタノール以外の有機溶媒が、エタノールである、上記（８）〜（１０）のいずれか１に記載の製造方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、メタノールを含有せず、かつ粉体物性が改善したシチジンジリン酸コリンの結晶、及びその製造方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、比較例３及び４と実施例１〜４で得られたシチジンジリン酸コリンの結晶について、粗比容と結晶洗浄に使用したエタノール水溶液のエタノール濃度の相関を表わす。縦軸は粗比容（ｍＬ／ｇ）を、横軸はエタノール濃度（体積％）を表わす。黒ひし形は７０℃晶析、白ひし形は３０℃晶析の結果を表わす。
【図２】図２は、比較例３及び４と実施例１〜４で得られたシチジンジリン酸コリンの結晶について、密比容と結晶洗浄に使用したエタノール水溶液のエタノール濃度の相関を表わす。縦軸は密比容（ｍＬ／ｇ）を、横軸はエタノール濃度（体積％）を表わす。黒ひし形は７０℃晶析、白ひし形は３０℃晶析の結果を表わす。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
１．本発明の結晶
本発明の結晶は、メタノールを含有せず、かつ粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下である、シチジンジリン酸コリンの結晶である。
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、かつ粗比容が好ましくは３．６ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは３．１ｍＬ／ｇ以下、最も好ましくは２．６ｍＬ／ｇ以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
【００１７】
粗比容が小さい結晶は、充填性に優れ、各種加工工程におけるハンドリングが容易であり、また輸送面でのコストも低い。そのため、シチジンジリン酸コリンの結晶としては、粗比容が小さいことが好ましいが、粗比容の下限値としては、通常１．０ｍＬ／ｇ以上、好ましくは１．２ｍＬ／ｇ以上を挙げることができる。
【００１８】
ここで、粗比容とは、容器に粉体を充填してその質量を測定した際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。
【００１９】
粗比容は、第十七改正日本薬局方に準じ、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の条件で測定することができる。
【００２０】
［粗比容の測定条件］
使用機器：マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）
ふるい：１．１８ｍｍ
振動幅：０．７〜０．８ｍｍ
結晶容量：１００ｍＬ
粗比容の測定方法の具体例：０．７〜０．８ｍｍの幅で振動させた１．１８ｍｍのふるいを経由して結晶を落下させながら、ステンレス製の１００ｍＬ円筒形容器に充填する。容器の上面から過剰の粉体を注意深く擦り落とし、あらかじめ測定しておいた空の測定容器の質量を差し引くことで、粉体の質量を測定する。測定は独立して３回行い、平均値を求める。
【００２１】
本発明の結晶がメタノールを含有しないことは、以下のガスクロマトグラフを用いた分析例に記載の方法に従って確認することができる。
【００２２】
本発明の結晶がメタノールを含有しないとは、以下のガスクロマトグラフを用いた分析例に従って分析したときに、メタノールが検出限界以下であることをいう。
【００２３】
［ガスクロマトグラフを用いた分析例］
使用機器：ＧＣ−２０１４（島津製作所社製）
カラム充填剤：Ａｄｓｏｒｂ  Ｐ−１  ６０／８０ｍｅｓｈ（西尾工業社製）
カラム温度：１２０℃
気化室温度：１５０℃
ヘリウム流速：３０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器温度：２００℃試料調製方法：シチジンジリン酸コリンの結晶を約１．０ｇ秤量し、蒸留水に溶解させて１０ｍＬに調整したものを試料とする。
【００２４】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつ安息角が、好ましくは５７度以下、より好ましくは５５度以下、さらに好ましくは５３度以下、最も好ましくは５０度以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
【００２５】
安息角が大きい結晶は、ホッパーから排出する際、ホッパー底部の傾斜角が安息角の角度よりも大きくなければホッパー底部から完全に排出することができないので、装置が限定され、ハンドリングが煩雑となる。また、安息角が大きい結晶は、流動性が悪い。そのため、シチジンジリン酸コリンの結晶としては、安息角が小さいことが好ましいが、安息角の下限としては、通常３０度以上、好ましくは３５度以上を挙げることができる。
【００２６】
ここで、安息角とは、粉体を漏斗のようなもので水平な面に静かに落下させた時に粉体で形成される円錐体の母線と水平面のなす角のことをいう。
【００２７】
安息角は、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の条件で測定することができる。
【００２８】
［安息角の測定条件］
使用機器：マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）
ふるい：１．１８ｍｍ
振動幅：０．７〜０．８ｍｍ
安息角の測定方法の具体例：０．７〜０．８ｍｍの幅で振動させた１．１８ｍｍのふるいを経由して結晶を落下させながら、安息角テーブル（部品番号：ＭＴ−１０２８）の上に堆積させる。安息角テーブルに振動を与えないように回転させて、３ヶ所で角度を読み、それらの相加平均値を安息角とする。
【００２９】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつ崩壊角が、好ましくは５０度以下、より好ましくは４８度以下、さらに好ましくは４６度以下、最も好ましくは４４度以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。崩壊角の下限値としては、通常３０度以上、好ましくは３５度以上を挙げることができる。
【００３０】
ここで、崩壊角とは、粉体を漏斗のようなもので水平な面に静かに落下させた時に粉体で形成される円錐体に、間接的に一定の衝撃を加えた際形成される、円錐体の母線と水平面のなす角のことをいう。
【００３１】
崩壊角は、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の方法で測定することができる。
【００３２】
［崩壊角の測定方法の具体例］
安息角を測定後、安息角テーブルユニット（部品番号：ＭＴ−１０２８）の下についている鍾をゆっくりタッピングテーブルの下まで持ち上げて落下させる。この操作を３回繰り返す。安息角の測定方法と同様の方法で３ヶ所の角度を読み、それらの相加平均値を崩壊角とする。
【００３３】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつ密比容が、好ましくは２．１ｍＬ／ｇ以下、より好ましくは２．０ｍＬ／ｇ以下、さらに好ましくは１．９ｍＬ／ｇ以下、最も好ましくは１．７ｍＬ／ｇ以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
【００３４】
密比容が小さい結晶は、充填性に優れ、輸送面でのコストも低い。そのため、シチジンジリン酸コリンの結晶としては、密比容が小さいことが好ましいが、密比容の下限値としては、通常０．８ｍＬ／ｇ以上、好ましくは１．０ｍＬ／ｇ以上を挙げることができる。
【００３５】
ここで、密比容とは、容器に粉体を充填して一定の衝撃を加えたのちにその質量を測定した際、粉体の占める容積を該質量で割った値をいう。
【００３６】
密比容は、例えば、第十七改正日本薬局方に準じ、マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）を用い、付属のマニュアルに従って以下の条件で測定することができる。
【００３７】
［密比容の測定条件］
使用機器：マルチテスターＭＴ−１００１Ｔ型（セイシン企業社製）
ふるい：１．１８ｍｍ
振動幅：０．７〜０．８ｍｍ
結晶容量：１００ｍＬ
スペーサー：３２ｍｍ
タッピング速度：１回／秒
タッピング回数：４００回
密比容の測定方法の具体例：０．７〜０．８ｍｍの幅で振動させた１．１８ｍｍのふるいを経由して結晶を落下させながら、補助円筒を装着したステンレス製の１００ｍＬ円筒形容器に充填する。３２ｍｍのスペーサーを挟んで１回／秒のタッピングを４００回繰り返した後に補助円筒を外し、容器の上面から過剰の粉体を注意深く擦り落とし、あらかじめ測定しておいた空の測定容器の質量を差し引くことで、粉体の質量を測定する。測定は独立して３回行い、平均値を求める。
【００３８】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつ安息角と崩壊角の差が、好ましくは９．０以下、より好ましくは８．５以下、さらに好ましくは７．０以下、よりさらに好ましくは５．０以下、最も好ましくは４．０以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
安息角と崩壊角の差が大きい結晶は噴流性が高く制御が困難であるため、安息角と崩壊角の差は小さいことが好ましい。
【００３９】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつ、好ましくはエタノール、アセトン、１−プロパノール、２−プロパノール、酢酸エチル、１−ブタノール、２−ブタノール、ヘプタン、酢酸イソプロピル、メチルエチルケトン、酢酸プロピル及びテトラヒドロフランからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒以外の有機溶媒を、より好ましくはエタノール、アセトン、１−プロパノール及び２−プロパノールからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒以外の有機溶媒を、最も好ましくはエタノール以外の有機溶媒を含有しない、シチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
【００４０】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつ結晶中に含有される上記有機溶媒の含有量が、それぞれ好ましくは１０００質量ｐｐｍ以下、より好ましくは８００質量ｐｐｍ以下、さらに好ましくは６００質量ｐｐｍ以下、最も好ましくは５００質量ｐｐｍ以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
【００４１】
本発明の結晶中の有機溶媒の含有量は、例えば上記ガスクロマトグラフを用いた分析により測定することができる。
【００４２】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつ高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣという。）分析において、シチジンジリン酸コリンのピーク面積１００に対して、５’シチジル酸のピーク面積が、好ましくは０．２７以下、より好ましくは０．２０以下、さらに好ましくは０．１５以下、最も好ましくは０．１０以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
【００４３】
５’シチジル酸は、加熱又はｐＨの変動に依存してシチジンジリン酸コリンの分解によって生成する化合物である。
【００４４】
ＨＰＬＣ分析とは、分析対象である化合物を溶媒に溶解してＨＰＬＣによる分析に供することを意味する。
【００４５】
ＨＰＬＣ分析としては、シチジンジリン酸コリン、５’シチジル酸及びウリジンジリン酸コリンを同時に検出することができる分析方法であれば、分析条件等は特に限定されず、好ましくは２５４ｎｍの吸光度を検出・測定するＨＰＬＣ分析方法を挙げることができる。
【００４６】
ＨＰＬＣ分析方法の例としては、以下に記載のＨＰＬＣ分析例を挙げることができる。
【００４７】
［ＨＰＬＣ分析例］
使用機器：検出器（Ｌ−７４０５）、ポンプ（Ｌ−７１００）、オートサンプラー（Ｌ−７２００）、カラムオーブン（Ｌ−２３５０）（いずれも日立製作所社製）、クロマトパック（Ｃ−Ｒ８Ａ）、データ解析（ＰＡＣｓｏｌｕｔｉｏｎ）（いずれも島津製作所社製）
検出器：紫外吸光光度計（測定波長２５４ｎｍ）
カラム：Ｐａｒｔｉｓｉｌ  １０ＳＡＸ  粒径１０μｍ  ４．０×２５０ｍｍを２本直列連結（Ｈｉｃｈｒｏｍ）
移動相：リン酸でｐＨ３．５に調整された０．０６ｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素カリウム水溶液（リン酸二水素カリウム４０．８３ｇを蒸留水に溶解させ、リン酸を加えてｐＨ３．５に調整した後に蒸留水で５０００ｍＬに調整）
カラム温度：３０℃
流速：０．４〜０．５ｍＬ／ｍｉｎ（シチジンジリン酸コリンの保持時間が約２６ｍｉｎになるように調整）
試料注入量：２０μＬ
試料調製方法：シチジンジリン酸コリンの結晶を約０．１ｇ秤量し、蒸留水に溶解させて１００ｍＬに調整したものを試料とする。
【００４８】
本願明細書において、ＨＰＬＣ分析におけるピーク面積は、上記のＨＰＬＣ分析例に記載のＨＰＬＣ分析条件で測定したときの値である。ただし、当該分析条件と同等の分析条件も本願明細書におけるＨＰＬＣ分析条件に含まれる。
【００４９】
ピーク面積とは、ＨＰＬＣ分析を行ったとき、ベースラインとピークラインで囲まれた部分の面積のことをいい、ＨＰＬＣ分析によって検出された化合物ごとに求めることができる。
【００５０】
本発明の結晶の一態様としては、メタノールを含有せず、粗比容が４．１ｍＬ／ｇ以下であり、かつＨＰＬＣ分析において、シチジンジリン酸コリンのピーク面積１００に対して、ウリジンジリン酸コリンのピーク面積が、好ましくは０．５６以下、より好ましくは０．３０以下、さらに好ましくは０．１０以下、最も好ましくは０．０６以下のシチジンジリン酸コリンの結晶を挙げることができる。
【００５１】
ウリジンジリン酸コリンは、加熱又はｐＨの変動に依存してシチジンジリン酸コリンの分解によって生成する化合物である。
【００５２】
２．本発明の結晶の製造方法
本発明の結晶の製造方法は、シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液にシチジンジリン酸コリンの結晶を析出させる工程、該析出したシチジンジリン酸コリンの結晶を採取する工程、及び該採取したシチジンジリン酸コリンの結晶を、含水量が５〜５０体積％である、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液で洗浄する工程、を含む、シチジンジリン酸コリンの結晶の製造方法である。
【００５３】
以下、各工程について説明する。
【００５４】
（シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液にシチジンジリン酸コリンの結晶を析出させる工程）
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液に含有されるシチジンジリン酸コリンは、発酵法、酵素法、天然物からの抽出法、化学合成法等のいずれの製造方法によって製造されたものであってもよい。
【００５５】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液を取得する方法としては、例えば、上記得られたシチジンジリン酸コリンを水に溶解させる方法、シチジンジリン酸コリンを生産する能力を有する微生物を培養して得られるシチジンジリン酸コリンを含有する培養物［日本国特許第３３６９２３６号公報（特許文献４）］等から不溶物を除去する方法、及び日本国特許第４９７７６０８号公報（特許文献５）に記載の方法を挙げることができる。
【００５６】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液に、結晶化の障害となる固形物が含まれている場合には、遠心分離、濾過又はセラミックフィルタ等を用いて固形物を除去することができる。
【００５７】
また、シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液に、結晶化の障害となる水溶性の不純物や塩が含まれている場合には、イオン交換樹脂等を充填したカラムに通塔する等により、水溶性の不純物や塩を除去することができる。
【００５８】
また、シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液に、結晶化の障害となる疎水性の不純物が含まれる場合には、合成吸着樹脂や活性炭等を充填したカラムに通塔する等により、疎水性の不純物を除去することができる。
【００５９】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液におけるシチジンジリン酸コリンの濃度は、好ましくは２００ｇ／Ｌ以上、より好ましくは２５０ｇ／Ｌ以上、さらに好ましくは３００ｇ／Ｌ以上となるように調整することができる。
【００６０】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液のシチジンジリン酸コリンの濃度を上記の濃度とするために、該水溶液を加熱濃縮法又は減圧濃縮法などの一般的な濃縮方法により濃縮することができる。
【００６１】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液にシチジンジリン酸コリンの結晶を析出させる方法としては、例えば、該水溶液を冷却する方法、該水溶液を減圧濃縮する方法、該水溶液中にメタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下する方法、又はそれらの１以上を組み合わせた方法等を挙げることができるが、該水溶液中にメタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下する方法が好ましく、該水溶液中にメタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下する方法と該水溶液を冷却する方法を組み合わせた方法がより好ましい。
【００６２】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液を冷却する方法における、該水溶液の温度としては、好ましくは０〜３５℃、より好ましくは０〜３０℃、最も好ましくは０〜２５℃を挙げることができる。
【００６３】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液を冷却する方法における、冷却時間としては、好ましくは２〜１００時間、より好ましくは２〜７０時間、最も好ましくは２〜５０時間を挙げることができる。
【００６４】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液を減圧濃縮する方法における、該水溶液の温度としては、好ましくは０〜５０℃、より好ましくは５〜４５℃、最も好ましくは１０〜４０℃を挙げることができる。
【００６５】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液を減圧濃縮する方法における、減圧時間としては、好ましくは２〜１００時間、より好ましくは３〜７０時間、最も好ましくは５〜５０時間を挙げることができる。
【００６６】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液中にメタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下する方法における、メタノール以外の有機溶媒としては、例えば、好ましくはエタノール、アセトン、１−プロパノール、２−プロパノール、酢酸エチル、１−ブタノール、２−ブタノール、ヘプタン、酢酸イソプロピル、メチルエチルケトン、酢酸プロピル及びテトラヒドロフランからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒を、より好ましくはエタノール、アセトン、１−プロパノール及び２−プロパノールからなる群より選ばれる少なくとも１の有機溶媒を、最も好ましくはエタノールを挙げることができる。また、これらの有機溶媒は、複数種類を組み合わせて用いることもできる。
【００６７】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液中に添加又は滴下する、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液中の該有機溶媒の濃度としては、好ましくは３０体積％以上、より好ましくは４０体積％以上、さらに好ましくは５０体積％以上、最も好ましくは６０体積％以上を挙げることができる。
【００６８】
メタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下する際の温度としては、好ましくは０〜７０℃、より好ましくは０〜５０℃、さらに好ましくは５〜４５℃、最も好ましくは１０〜３５℃を挙げることができる。
【００６９】
メタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液の添加又は滴下に要する時間としては、好ましくは１〜１０時間、より好ましくは２〜８時間を挙げることができる。
【００７０】
メタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下する量としては、シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液の好ましくは１〜１０倍等量、より好ましくは２〜７倍等量を挙げることができる。
【００７１】
シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液中にメタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下することにより、シチジンジリン酸コリンの結晶を析出させる方法においては、メタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下した後、シチジンジリン酸コリンの結晶が析出する前に、種晶を添加してもよい。
【００７２】
種晶としては、例えば、日本国特許第６４７３６７号公報（特許文献３）に記載の方法で取得したシチジンジリン酸コリンの結晶を用いることができる。
該種晶を添加する時間としては、例えば、メタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液の滴下又は添加を開始してから、好ましくは０〜１２時間以内、より好ましくは０〜８時間以内、最も好ましくは０〜４時間以内を挙げることができる。
【００７３】
前記種晶は、種晶を添加する水溶液中の濃度が好ましくは０．１〜５．０ｇ／Ｌ、より好ましくは０．２〜１．０ｇ／Ｌとなるように添加することができる。
【００７４】
上記のようにしてシチジンジリン酸コリンの結晶を析出させた後、好ましくは０．５〜４８時間、より好ましくは０．５〜２４時間、最も好ましくは０．５〜１２時間、好ましくは０〜７０℃、より好ましくは３〜５０℃、最も好ましくは５〜３５℃にて当該結晶を含む水溶液を攪拌又は放置することにより熟成させることができる。
【００７５】
結晶を熟成させるとは、メタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液の添加を中断又は停止し、結晶を成長させることをいう。
結晶を成長させるとは、析出した結晶を元にして、結晶を増大させることをいう。
結晶の熟成は、結晶を成長させることを主な目的として行うが、結晶の成長と同時に、新たな結晶の析出が起こっていてもよい。
結晶を熟成させた後は、シチジンジリン酸コリンの結晶を析出させる工程を再開してもよい。
【００７６】
（析出したシチジンジリン酸コリンの結晶を採取する工程）析出したシチジンジリン酸コリンの結晶を採取する方法としては、例えば、濾取、加圧濾過、吸引濾過、遠心分離等を挙げることができる。
【００７７】
（採取したシチジンジリン酸コリンの結晶を、含水量が５〜５０体積％である、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液で洗浄する工程）
本発明の製造方法の一態様は、採取したシチジンジリン酸コリンの結晶を、含水量が５〜５０体積％、好ましくは１０〜４０体積％、より好ましくは２０〜３０体積％の、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液で洗浄する。当該工程により、結晶への母液の付着を低減し、結晶の品質を向上させることに加えて、結晶の粉体物性を制御することができる。
【００７８】
結晶洗浄に用いる、メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液の温度は、シチジンジリン酸コリンが分解しない温度であればいずれの温度でもよいが、好ましくは４０℃以下、より好ましくは３０℃以下、さらに好ましく２０℃以下、最も好ましくは１５℃以下を挙げることができる。温度の下限値としては、通常０℃以上、好ましくは５℃以上を挙げることができる。
【００７９】
シチジンジリン酸コリンの結晶を洗浄する工程に使用する、メタノール以外の有機溶媒としては、上記シチジンジリン酸コリンが溶解している水溶液中にメタノール以外の有機溶媒又は該有機溶媒を含有する水溶液を添加又は滴下する方法における、メタノール以外の有機溶媒と同様の有機溶媒を用いることができる。
【００８０】
結晶を洗浄する方法としては、例えば、結晶層に、上記メタノール以外の有機溶媒を含有する水溶液からなる結晶洗浄溶液を噴射又は噴霧する方法、結晶層を該結晶洗浄溶液に浸漬する方法、を挙げることができる。
【００８１】
結晶層を結晶洗浄溶液に浸漬する方法においては、結晶層を浸漬させた結晶洗浄溶液から結晶層を取り出し、再度結晶洗浄溶液に懸濁して撹拌し、再び濾取、加圧濾過、吸引濾過、遠心分離等の操作を行うこともできる。
【００８２】
結晶洗浄に使用する結晶洗浄溶液の量としては、シチジンジリン酸コリンの結晶の重量に対する体積比率で好ましくは０．５〜１０倍量、より好ましくは１〜９倍量、さらに好ましくは２〜８倍量を挙げることができる。
【００８３】
このようにして得られた湿晶を乾燥させることにより、本発明の結晶を取得することができる。乾燥条件としては、シチジンジリン酸コリンの結晶の形態を保持できる方法ならばいずれでもよく、例えば、減圧乾燥、真空乾燥、流動層乾燥、通風乾燥等を適用することができる。
【００８４】
乾燥温度としては、付着水分や溶媒を除去できる範囲ならばいずれでもよいが、好ましくは８０℃以下、より好ましくは７０℃以下、最も好ましくは６０℃以下を挙げることができる。乾燥時間としては、付着水分や溶媒を除去できる範囲ならばいずれでもよいが、好ましくは１〜４８時間、より好ましくは１〜２４時間を挙げることができる。
【００８５】
［比較例１］
日本国特公昭５１−３２６３０号公報（特許文献２）の実施例１に従い、７６０ｇのシチジンジリン酸コリン（協和発酵バイオ社製：Ｌｏｔ．１６０３２５）を蒸留水に溶かして１６００ｍＬとし、シチジンジリン酸コリンを４５０ｇ／Ｌの濃度で含む水溶液を調製した。そのうちの４００ｍＬに対し、２０℃にて１６００ｍＬのメタノールを２０分かけて添加した。メタノールの添加中に白濁が見られた時点で、０．８ｇのシチジンジリン酸コリンを種晶として添加した。
【００８６】
シチジンジリン酸コリンの起晶を確認後、８００ｍＬの酢酸エチルを３時間かけて添加し、その後、２０℃にて２時間の撹拌を行った。こうして得られた２５００ｍＬ程度の結晶スラリーのうち、２０００ｍＬを遠心分離にかけて結晶を濾別し、６４０ｍＬのメタノールで洗浄した。得られた湿晶を減圧条件下、２５℃にて３時間、さらに、減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、１００．９ｇの結晶を得た。
【００８７】
［比較例２］
比較例１で得られた結晶スラリーの残りを遠心分離にかけて結晶を濾別し、得られた湿晶を１６０ｍＬの９９．５体積％のエタノールに懸濁して撹拌することで、結晶表面に付着したメタノールを完全に洗い流した。この湿晶を減圧条件下、２５℃にて３時間、さらに減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、１３．２ｇの結晶を得た。
【００８８】
［比較例３］
日本国特許第６４７３６７号公報（特許文献３）の実施例３に従い、乾物換算で６３９．９ｇのシチジンジリン酸コリン（協和発酵バイオ社製：Ｌｏｔ．１６０３２５）を１３００ｍＬの蒸留水に加えて溶解したところ、１６９０ｍＬの水溶液となった。このうちの８３２ｍＬに対し、７０℃にて６４０ｍＬの９９．５体積％のエタノールを混合した。続いて、この混合液を７０℃に保ったまま１２８０ｍＬの８０体積％の含水エタノールを２時間かけて添加した。
【００８９】
その後、１．２８ｇのシチジンジリン酸コリンを種晶として添加し、３０分間撹拌を続けたのち、１２８０ｍＬの９９．５体積の％エタノールを１時間かけて添加した。その後、溶液を７０℃から２５℃まで徐々に冷却しながら１０時間撹拌を続けた。こうして得られた結晶スラリーを三等分し、そのうちの一つを遠心分離にかけて結晶を濾別したのち、５３３ｍＬの９９．５体積％のエタノールで洗浄した。得られた湿晶を減圧条件下、３０℃にて３時間、さらに減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、６５．８ｇの結晶を得た。
【００９０】
［比較例４］
比較例３と同じ方法で調製したシチジンジリン酸コリンの水溶液１０４０ｍＬを３０℃に保ち、８００ｍＬの９９．５体積％のエタノールを混合した。この混合液に対し、３０℃にて１６００ｍＬの９９．５体積％のエタノールを２時間かけて添加した。その後、１．６ｇのシチジンジリン酸コリンを種晶として添加し、起晶を確認したのち、１６００ｍＬの９９．５体積％のエタノールを２時間かけて添加した。
【００９１】
その後、溶液を３０℃に保ったまま３時間撹拌を続けたのち、２０℃まで３時間かけて冷却した。こうして得られた結晶スラリーを三等分し、そのうちの一つを遠心分離にかけて結晶を濾別したのち、６７０ｍＬの９９．５体積％のエタノールで洗浄した。得られた湿晶を減圧条件下、３０℃にて３時間、さらに減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、１１６．６ｇの結晶を得た。
【００９２】
［予備試験］
５０〜８０体積％の含水エタノール（含水量２０〜５０体積％）にシチジンジリン酸コリン（協和発酵バイオ社製：Ｌｏｔ．１６０３２５）を溶け残るまで溶解させ、３０℃、３５℃  又は４０℃にて十分に攪拌した。その後、各溶液をフィルター濾過し、得られた各濾液中のシチジンジリン酸コリン濃度（ｇ／Ｌ）を測定した。結果を表１に示す。
【００９３】
【表１】
2018066690.tif 000002
【００９４】
表１に示すように、いずれの温度においても、含水エタノール中の含水量が高くなるほど、シチジンジリン酸コリンの溶解度が高くなることがわかった。
【実施例】
【００９５】
以下に実施例を示すが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。【００９６】
［実施例１］
比較例３で得られた結晶スラリーの１／３分を遠心分離にかけて結晶を濾別したのち、１０℃に冷却した５３３ｍＬの８５体積％の含水エタノール（含水量１５体積％）で洗浄した。得られた湿晶を減圧条件下、３０℃にて３時間、さらに減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、６８．２ｇの結晶を得た。【００９７】
［実施例２］
比較例３で得られた結晶スラリーの１／３分を遠心分離にかけて結晶を濾別したのち、１０℃に冷却した５３３ｍＬの７０体積％の含水エタノール（含水量３０体積％）で洗浄した。得られた湿晶を減圧条件下、３０℃にて３時間、さらに減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、８２．５ｇの結晶を得た。【００９８】
［実施例３］
比較例４で得られた結晶スラリーの１／３分を遠心分離にかけて結晶を濾別したのち、１０℃に冷却した６７０ｍＬの８５体積％の含水エタノール（含水量１５体積％）で洗浄した。得られた湿晶を減圧条件下、３０℃にて３時間、さらに減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、１０９．６ｇの結晶を得た。【００９９】
［実施例４］
比較例４で得られた結晶スラリーの１／３分を遠心分離にかけて結晶を濾別したのち、１０℃に冷却した６７０ｍＬの７０体積％の含水エタノール（含水量３０体積％）で洗浄した。得られた湿晶を減圧条件下、３０℃にて３時間、さらに減圧条件下、６０℃にて３時間乾燥させ、１０５．８ｇの結晶を得た。【０１００】
現在市場に流通しているシチジンジリン酸コリンの結晶、及び上記の方法で得られたシチジンジリン酸コリンの結晶について、粗比容、密比容、安息角、及び崩壊角を測定した結果を図１、図２及び表２にそれぞれ示す。【０１０１】
【表２】
2018066690.tif 000003
【０１０２】
図１、図２及び表２に示すように、３０℃及び７０℃のいずれの晶析温度においても、結晶洗浄に用いるエタノール溶液の含水量を上げるに従って、シチジンジリン酸コリンの結晶の比容積（粗比容及び密比容）を低減できることが示された。特に、低温の条件である３０℃晶析において、該エタノール溶液の含水量を高めることによる比容積の低減効果がより顕著であった。さらに、含水エタノールを用いてシチジンジリン酸コリンの結晶を洗浄した結果、９９．５体積％のエタノールを用いて結晶洗浄した場合と比べ、安息角と崩壊角を低減できることが示された。【０１０３】
また、得られたシチジンジリン酸コリンの結晶について、結晶中に含まれる５’シチジル酸とウリジンジリン酸コリンの量をＨＰＬＣ分析で測定した結果を表３に示す。表３中の各値は、シチジンジリン酸コリンのピーク面積を１００とした時の各ピーク面積の値を示す。【０１０４】
【表３】
2018066690.tif 000004
【０１０５】
表３に示すように、低温で晶析を行った方が、結晶中に残留する５’シチジル酸とウリジンジリン酸コリンの含有量を低減できることが示された。【０１０６】
続いて、現在市場に流通しているシチジンジリン酸コリンの結晶、及び得られたシチジンジリン酸コリンの結晶について、結晶中に含まれる残留溶媒をガスクロマトグラフで測定した結果を表４に示す。表４において、「ｐｐｍ」は質量ｐｐｍを示す。また、「Ｎ．Ｄ．」は検出限界以下であることを示す。【０１０７】
ここで、比較例１、２については、シチジンジリン酸コリンの結晶を約０．５ｇ秤量し、蒸留水に溶解させて１０ｍＬに調整したものを試料とした。一方、比較例３、４及び実施例１〜４については、シチジンジリン酸コリンの結晶を約１ｇ秤量し、蒸留水に溶解させて１０ｍＬに調整したものを試料とした。【０１０８】
【表４】
2018066690.tif 000005
【０１０９】
表４に示すように、現在市場に流通しているシチジンジリン酸コリンの結晶は、いずれもメタノールを含有していることが分かった。また、比較例１及び２の結果から、エタノールによる結晶洗浄を行っても、シチジンジリン酸コリンの結晶中には晶析工程で添加したメタノールが高濃度で検出されることが分かる。これより、シチジンジリン酸コリンの結晶は、メタノールを取り込みやすい性質を有し、晶析工程で添加して結晶中に取り込まれたメタノールは、結晶洗浄によっては除去できないことが分かった。【０１１０】
一方、実施例１〜４では、晶析工程及び結晶洗浄工程にメタノールを用いていないため、得られたシチジンジリン酸コリンの結晶中には、メタノールは検出されなかった。【０１１１】
以上より、本発明の結晶の製造方法により、メタノールを含有せず、かつ既存のシチジンジリン酸コリンの結晶と比較して同等以上の粉体物性を示すシチジンジリン酸コリンの結晶が取得できることが分かった。【０１１２】
本発明を特定の態様を参照して詳細に説明したが、本発明の精神と範囲を離れることなく様々な変更および修正が可能であることは、当業者にとって明らかである。なお、本出願は、２０１６年１０月６日付けで出願された日本特許出願（特願２０１６−１９７６９５号）に基づいており、その全体が引用により援用される。また、ここに引用されるすべての参照は全体として取り込まれる。
【産業上の利用可能性】
【０１１３】
本発明により、不純物及び残留溶媒の低減と粉体物性の改善を両立させたシチジンジリン酸コリンの結晶、並びにその製造法が提供される。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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2018066690.tif 000009
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