【事件の表示】
　特願２００１−１０９９４０「生体高分子検出方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１４年１０月２３日出願公開、特開２００２−３１１０２７〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
I．手続の経緯
　本願は、平成１３年４月９日の出願であって、平成１８年７月２７日付けで拒絶査定がなされ、これに対し、同年８月３１日に拒絶査定に対する審判請求がなされるともに、同日付けで手続補正がなされたものである。
　
II．平成１８年８月３１日付け手続補正についての補正却下の決定
［補正却下の決定の結論］
　平成１８年８月３１日付け手続補正（以下、「本件補正」という。）を却下する。
　
［理由］
１．補正の内容
　本件補正は特許請求の範囲についてするもので、
（ａ）本件補正前の特許請求の範囲（平成１８年３月９日付けの手続補正による）
「【請求項１】　フローサイトメータを用いて生体高分子を検出する方法であって、
　少なくとも２種類の粒径１〜１０nmの半導体ナノ微粒子によりビーズ表面を染色するステップと、
　前記染色したビーズ上の半導体ナノ微粒子にＤＮＡを共有結合するステップと、
　所望のｍＲＮＡを鋳型とし、前記ＤＮＡをプライマーとし、少なくとも１種類の塩基に標識を施した塩基を材料として逆転写反応を行うことにより、少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識するステップと、
　前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、
　前記注入されたビーズにＵＶレーザーを照射するステップと、
　励起された前記ビーズから発光される所定の蛍光波長の組を選択的に検出することにより、前記ビーズを識別し、前記レポーターを測定して生体高分子を検出するステップとを含む方法。
【請求項２】　フローサイトメータを用いて生体高分子を検出する方法であって、
　少なくとも２種類の粒径１〜１０nmの半導体ナノ微粒子によりビーズ表面を染色するステップと、
　前記染色したビーズ上の半導体ナノ微粒子にＤＮＡを共有結合するステップと、
　所望のｍＲＮＡを鋳型とし、前記ＤＮＡをプライマーとし、少なくとも１種類の塩基に標識を施した塩基を材料としてＰＣＲを行うことにより、少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識するステップと、
　前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、
　前記注入されたビーズにＵＶレーザーを照射するステップと、
　励起された前記ビーズから発光される所定の蛍光波長の組を選択的に検出することにより、前記ビーズを識別し、前記レポーターを測定して生体高分子を検出するステップとを含む方法。
　　【請求項３】　前記共有結合するステップは、末端に置換基が存在する塩基をビーズ表面に固定し、ビーズを生物反応器内に充填した後に、前記置換基に対してさらに塩基を連結結合することによりＤＮＡ合成を固相ビーズ上で行うことを特徴とする請求項１又は２記載の方法。
　　【請求項４】　複数のビーズそれぞれに対して、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
　　【請求項５】　フローサイトメータを用いて生体高分子を検出する方法であって、
　少なくとも２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子をそれぞれ異なる比率で混合した複数の混合物を調整するステップと、
　複数のビーズそれぞれの表面を、前記半導体ナノ微粒子の混合物のそれぞれにより染色するステップと、
　前記複数のビーズを生体高分子に結合させるステップと、
　前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、
　前記注入されたビーズに対して励起光を照射するステップと、
　前記半導体ナノ微粒子の混合物からの発光を検出し、その波長の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする方法。」を、
　
（ｂ）本件補正後の特許請求の範囲
「　【請求項１】　フローサイトメータを用いて生体高分子を検出する方法であって、
　少なくとも２種類の粒径１〜１０nmの半導体ナノ微粒子によりビーズ表面を染色するステップと、
　前記染色したビーズ上の半導体ナノ微粒子にＤＮＡを共有結合するステップと、
　所望のｍＲＮＡを鋳型とし、前記ＤＮＡをプライマーとし、少なくとも１種類の塩基に標識を施した塩基を材料として逆転写反応を行うことにより、少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識するステップと、
　前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、
　前記注入されたビーズにＵＶレーザーを照射するステップと、
　励起された前記ビーズから発光される所定の蛍光波長の組を選択的に検出することにより、前記ビーズを識別し、前記レポーターを測定して生体高分子を検出するステップとを
含み、複数のビーズそれぞれに対して、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする
　　【請求項２】　フローサイトメータを用いて生体高分子を検出する方法であって、
　少なくとも２種類の粒径１〜１０nmの半導体ナノ微粒子によりビーズ表面を染色するステップと、
　前記染色したビーズ上の半導体ナノ微粒子にＤＮＡを共有結合するステップと、
　所望のｍＲＮＡを鋳型とし、前記ＤＮＡをプライマーとし、少なくとも１種類の塩基に標識を施した塩基を材料としてＰＣＲを行うことにより、少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識するステップと、
　前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、
　前記注入されたビーズにＵＶレーザーを照射するステップと、
　励起された前記ビーズから発光される所定の蛍光波長の組を選択的に検出することにより、前記ビーズを識別し、前記レポーターを測定して生体高分子を検出するステップとを
含み、複数のビーズそれぞれに対して、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする
　　【請求項３】　前記共有結合するステップは、末端に置換基が存在する塩基をビーズ表面に固定し、ビーズを生物反応器内に充填した後に、前記置換基に対してさらに塩基を連結結合することによりＤＮＡ合成を固相ビーズ上で行うことを特徴とする請求項１又は２記載の方法。
　　【請求項
４
　少なくとも２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子をそれぞれ異なる比率で混合した複数の混合物を調整するステップと、
　複数のビーズそれぞれの表面を、前記半導体ナノ微粒子の混合物のそれぞれにより染色するステップと、
　前記複数のビーズを生体高分子に結合させるステップと、
　前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、
　前記注入されたビーズに対して励起光を照射するステップと、
　前記半導体ナノ微粒子の混合物からの発光を検出し、その波長の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする方法。」
と補正するものである。（下線は補正箇所である。）
　
２．補正内容の検討
　本件補正は、（ｉ）本件補正前の請求項１のビーズに関して「複数のビーズそれぞれに対して、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする」と限定し、（ｉｉ）本件補正前の請求項２のビーズに関して「複数のビーズそれぞれに対して、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする」と限定し、（ｉｉｉ）本件補正前の請求項３を削除し、（ｉｖ）本件補正前の請求項５を、新たな請求項４とするものであり、平成１８年改正前特許法第１７条の２第４項第１号及び第２号に規定する、請求項の削除及び特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。
　
３．独立特許要件について
　そこで、本件補正後の特許請求の範囲請求項１に記載されている事項により特定される発明（以下「本件補正発明」という。）が特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるか（平成１８年改正前特許法第１７条の２第５項において準用する同法第１２６条第５項に規定する要件を満たすか）否かについて以下に検討する。
　
３−１．引用刊行物
（１）原査定の拒絶の理由に引用され、本願優先日前に頒布された国際公開第９９／３７８１４号（以下、「刊行物１」という。）には、次の事項が記載されている。（以下の訳文は、国際公開第９９／３７８１４号に対応する国内公表公報である特表２００２−５０１１８４号公報による。）
　
（１ａ）ナノ粒子及び微小粒子を有する物品、ナノ粒子の粒径について
「   （発明の要約）    
　したがって、本発明の目的は、新規の物品を提供することであり、それはその表面に、１つ以上の蛍光で染色されたナノ粒子の集団を持つ微小粒子を含む。与えられた集団内のすべてのナノスフェアは同一の濃度の染料で染色され、異なる染料で染色された既知の量の他のナノスフェアと共に、微小粒子に既知の量のこれらのナノスフェアを結合することで多数の蛍光ミクロスフェアができる。異なる集団のナノスフェアの量と比を変えることで、固有の放射スペクトルを持つ担体粒子の目立たない集団の多くの量を確定させ区別できる。
・・・・・
　ナノ粒子の好ましいサイズは、直径で約１ナノメーター（ｎｍ）から約１００，０００ｎｍの範囲である。最適な好ましい直径は約１０と１，０００ｎｍの間であり、好ましくは１００と８００ｎｍの間、さらに好ましくは２００と５００ｎｍの間である。」（第３ページ２１行−第４ページ５行：対応する国内公表公報の段落【００１４】〜【００１６】）
　
（１ｂ）担体微小粒子に結合させるナノ粒子の混合による、独特の蛍光シグナルを持つ物品のセットの調製について
「本発明の一つの実施態様では、ナノ粒子の一つ以上のセットを調製し、各々のセットを所定の濃度で異なる染料を使って染色する。本発明のもう一つの実施態様では、担体マイクロスフェアを一つ以上の蛍光染料を使って染色する。
　単一染料ナノ粒子のセットを、望む割合で混合し、次に担体ミクロスフェアの調製物にそれらを付着もしくは共役させるのに用いる。この構築物は、本発明の物品である。得られた蛍光物品を検証し、調製物の蛍光活性／強度を決定する。ナノ粒子−微小粒子の共役体の各々のセットもしくは集団は、物品の特別なセットもしくは集団に固有な光学パターンもしくは蛍光シグナル（光学的サイン）を示している。物品の他の集団は、例えば、同数の蛍光ナノ粒子の全数量を有するが、異なる割合でそれらが混合されている。このように、たった二種類の染料を有することによって、独特の蛍光シグナルを持つ物品のセットを数多く調製することができる。他の染料を使って染色した微小粒子の調製物を有することによって、数多くの多色物品さえ得ることができる。この事は、従前の事柄を凌ぐ著しい改善である。発明者は、最初に本発明を実施に移すことができたのである。」（第２２ページ１３−２８行：対応する国内公表公報の段落【００８１】、【００８２】）
　
（１ｃ）粒子の異なる集団から作る多数の集団の調製について
「相異なる蛍光特質を有するビーズのもう一つの集団を作るためには、集団における適当な増強によって、赤色／オレンジ色染料を有するナノ粒子集団の割合を変えるので、得られた割合は光学的に以前の割合と重複することがない。本発明は、光学的に異なる担体ビーズの非常に数多くのセットを、二種類の異なる染料で染色したナノ粒子の２集団の割合を変えることによって提供する。この例は、通常の技術の一つが、この教示を用いることによって、容易により小さくて数多くのビーズのサブセットを生成することができるので、いずれにしろ限定されるものではない。」（第２３ページ２３−３２行：対応する国内公表公報の段落【００８６】）
　
（１ｄ）蛍光物品に共有結合を用いて核酸を結合させることについて
「本発明の蛍光物品は、生物学的物質、即ちハプテン、抗原、抗体、酵素又は核酸のような分析物もしくは分析反応物、の不動あるいは共有結合のカップリングに用いることができ、免疫検定、核酸（ＤＮＡもしくはＲＮＡ）検定、親和性精製、細胞分離のような様々なタイプの分析物分析、及びその他の医療用、診断用及び産業用用途に用いることができる。」（第１６ページ３１行−第１７ページ２行：対応する国内公表公報の段落【００６２】）
　
（１ｅ）蛍光物質への光の照射及び測定について
「蛍光粒子、蛍光共役抗体等のような蛍光マーカーを有することによって、試料を蛍光物質によって吸収される光で照射し、光測定装置を使って発散された光を測定する。染料は、標識として用いることができ、もしくは反応、例えば酵素的触媒反応の結果として生み出される場合がある。
　同様にハイブリダイゼーションを扱う核酸分析を用いて、相補的配列が存在するかどうかを決定する不可欠な段階を遂行することができ、様々なプロトコルを用いることにより、相補的配列の存在もしくはそれがないことを示唆することになる、着色または蛍光標識、もしくは標識の生成物を提供することができる。」（第２１ページ８−１５行：対応する国内公表公報の段落【００７５】【００７６】）
　
（１ｆ）蛍光ビーズ及び標識物質の検出について
「反応物をビーズ表面へ付着させた後、各サブセットから取り出したアリコートを混合して、各サブセット内に既知の量のビーズを含んでいるプールを作る。プールされたセットは各サブセットから等容量のビーズで調製され、セットが各サブセットもしくは集団由来のビーズをほぼ等しい数含有するのが好ましい。このピールを、血清もしくは血漿のような対象の液体試料と共に培養し、ビーズ上の抗体と反応する液体中の抗原（分析物）の存在を検証する。培養は、一般にはビーズ表面の分析物との液体試料中分析反応物の特異的反応を促進する温度、ｐＨ、イオン濃度等の条件下で行なう。十分な時間の経過後、混合物中のビーズを、例えば抗原決定基から対象の分析物と結合する蛍光標識ヤギ抗体のような“標識試薬”と共にもう一期間培養する。この抗原決定基は、分析物の抗体結合断片で、ウサギ抗体の結合抗原決定基とは異なるものである。ウサギ抗体を捕捉してビーズに結合する第二の抗体もしくは標識試薬を、対象の分析物に結合させる。洗浄後（もしくは洗浄せずに）、ビーズをフローサイトメーターで処理し、四つの分類パラメーター前方光散乱、側方光散乱、赤色蛍光、及びオレンジ蛍光を測定し、各ビーズが属しているサブセットもしくは集団を同定するのに用いる。同時に各ビーズに行なう緑色蛍光測定（標識試薬に関連する測定パラメータ）は、ビーズに結合した抗体をビーズが持っているかどうかを決定させるものである。ビーズが属しているサブセットは、特定の抗原、例えば一連の草アレルゲン、様々な基質乱用薬物、一連の病原菌のような存在と相関するので、容易にそれが属しているサブセットの機能としてビーズに結合した抗体の特異性を決定することができる。」（第２５ページ５−２６行：対応する国内公表公報の段落【００９０】）
　
（１ｇ）核酸の検出について
「例１０．核酸分析
　この分析に用いる核酸は、改質を施していない標本中に見出される、例えば血液細胞もしくは病原菌のような天然の核酸、もしくはそれに代ってプラスミドのクローニングやポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）の結果得られた増幅核酸である。
　ＰＣＲの威力と感受性は、その中でＤＮＡもしくはＲＮＡオリゴヌクレオチド配列の検出が求められる広い範囲の分析問題へのその使用を見出した。ＰＣＲ技法に伴う主要な困難さの一つは、最終生成物、即ち増幅ＤＮＡを測定及び分析する方法の厄介な特質である。フローサイトメトリーのビーズをベースにしたハイブリダイゼーション分析は、非常に迅速かつ正確な対象の遺伝子配列の検出を可能にする。この発明の好ましい実施形態では、対象の核酸セグメントがカップリングしているビーズを提供する。対象のＰＣＲ生成物を（もしくは、ＰＣＲ工程で必ずしも得られない他のＤＮＡまたはｃＤＮＡセグメント）、ビーズ上の核酸セグメントと、相補的蛍光ＤＮＡプローブとの間のハイブリダイゼーションを競合的に阻害するその能力によって検出する。」（第２９ページ１９−３３行：対応する国内公表公報の段落【０１０３】【０１０４】）
　
（１ｈ）微小粒子、ミクロスフェア、またはミクロビーズという用語、また、ナノスフェア、ナノ粒子、ナノビーズという用語、粒子、スフェア、ビーズという用語の互換的使用について
「 （発明の背景）
　蛍光ポリマー粒子はしばしば様々な生物医学的アッセイにおいてマーカーおよびインジケーターとして利用されている。本明細書で以下使用しているところの微小粒子、ミクロスフェア、またはミクロビーズという用語は互換的に使用され、全体の直径が基本的にマイクロメーターの範囲内である小さな粒子を示す同様の意味を持つ。ナノスフェア、ナノ粒子、ナノビーズは全体のサイズが基本的にナノメーターの範囲であるより小さな粒子を示す。本明細書で以下使用されているところの粒子、スフェア、ビーズの一般的な語は、微小粒子、ナノ粒子の両方を示し、これらは固体支持体または固相として効果的に役立つ。」（第１ページ１３−２１行：対応する国内公表公報の段落【０００３】）
　
（１ｉ）使用する染料について
「染料
　本発明で使用される蛍光染料はシアニン染料として知られている一般的なクラスからなり、５５０ｎｍと９００ｎｍの間の放射波長を持つ。これらの染料はメチン基を含んでよく、これらの数は染料のスペクトル特性に影響する。ピリジンであるモノメチン染料は一般的に青色から青−緑色蛍光放射を持ち、一方キノリンは緑色から黄色−緑色蛍光放射を持つ。トリメチン染料類似体は本質的に赤色波長に移動し、ペンタメチン染料はたとえ移動しても赤外蛍光放射を示す（例えば米国特許第５，７６０，２０１号を参照のこと）。
　しかしながら、有機溶媒に可溶性の任意の染料が使用されうる。スクアレン酸ベースの蛍光染料は文献に記載されている方法によって合成されうる。・・・・・さらに、非対称に置換されたスクアレン酸化合物は  Ｌａｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ５７，３２７８，（１９９２）に記載されているような方法によって合成されうる。・・・・・例えばフタロシアニン、２，３−ナフタロシアニン、スクアレンおよびクロコン酸誘導体などの上記記載の蛍光染料の実際の使用は、Ｋｒｕｔａｋらに付与された米国特許第５，５２５，５１６号に開示されている。
　この好ましい実施形態において使用された蛍光染料に加えて、関連する染料をシクロブテンジオン誘導体、置換セファロスポリン化合物、フッ素化スクアレン混合物、対象および非対称スクアレン、アルキルアルコキシスクアレン、スクアリリウム化合物からさらに選択してよい。これらの染料のいくつかは約１，０００ｎｍまでの放射スペクトルの範囲が効果的に広がる可能性のある赤外波長と同様に赤外近くで蛍光を発する。スクアレン、すなわちスクアレン酸から由来したものに加えて、フタロシアニンとナフタロシアニン等の疎水性染料もまたより長い波長で扱うように選択してもよい。フルオロクロムの他のクラスが本発明に従う染料としての使用に同様に適用する。これらの染料のいくつかは本明細書の以下に列挙する。３−ヒドロキシピレン  ５，８，１０−三硫酸、５−ヒドロキシトリプタミン、５−ヒドロキシトリプタミン（５−ＨＴ）、アシッドフーシン（Ａｃｉｄ  Ｆｕｈｓｉｎ）、アクリジンオレンジ（Ａｃｒｉｄｉｎｅ  Ｏｒａｎｇｅ）、アクリジンレッド（Ａｃｒｉｄｉｎｅ  Ｒｅｄ）、アクリジンイエロー（Ａｃｒｉｄｉｎｅ  Ｙｅｌｌｏｗ）、アクリフラビン（Ａｃｒｉｆｌａｖｉｎ）、ＡＦＡ（アクリフラビンフュールゲン  ＳＩＴＳＡ）、アリザリンコンプレキソン（Ａｌｉｚａｒｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘｏｎ）、アリザリンレッド（Ａｌｉｚａｒｉｎ  Ｒｅｄ）、アロフィコシアニン（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ）、ＡＣＭＡ、アミノアクチノマイシン  Ｄ（Ａｍｉｎｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ）、アミノクマリン（Ａｍｉｎｏｃｏｕｍａｒｉｎ）、アントロイルステアリン酸（Ａｎｔｈｒｏｙｌ  Ｓｔｅａｒａｔｅ）、アリル−またはヘテロアリル−置換ポリオレフィン、アストラゾンブリリアントレッド  ４Ｇ（Ａｓｔｒａｚｏｎ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｒｅｄ  ４Ｇ）、アストラゾンオレンジ  Ｒ（Ａｓｔｒａｚｏｎ  Ｏｒａｎｇｅ  Ｒ）、アストラゾンレッド  ６Ｂ（Ａｓｔｒａｚｏｎ  Ｒｅｄ  ６Ｂ）、アストラゾンイエロー  ７ＧＬＬ（Ａｓｔｒａｚｏｎ  Ｙｅｌｌｏｗ  ７ＧＬＬ）、アテブリン（Ａｔａｂｒｉｎｅ）、オーラミン（Ａｕｒａｍｉｎｅ）、オーロホスフィン（Ａｕｒｏｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）、オーロホスフィンＧ（Ａｕｒｏｐｈｏｓｐｈｉｎｅ  Ｇ）、ＢＡＯ  ９（ビスアミノフェニルオキサジアゾール）、ＢＣＥＣＦ、硫酸ベルベリン（Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ  Ｓｕｌｐｈａｔｅ）、ビスベンザミド（Ｂｉｓｂｅｎｚａｍｉｄｅ）、ＢＯＢＯ  １、ブランコフォア  ＦＦＧ溶液（Ｂｌａｎｃｏｐｈｏｒ  ＦＦＧ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、ブランコフォア  ＳＶ、ボディファイ  Ｆ１（Ｂｏｄｉｐｙ  Ｆ１）、ＢＯＰＲＯ  １、ブリリアントスルフォフラビン  ＦＦ（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｓｕｌｐｈｏｆｌａｖｉｎ  ＦＦ）、カルセインブルー（Ｃａｌｃｉｅｎ  Ｂｌｕｅ）、カルシウムグリーン（Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｇｒｅｅｎ）、カルコフルオア  ＲＷ  溶液（Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ  ＲＷ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、カルコフルオアホワイト（Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ  Ｗｈｉｔｅ）、カルコフルオアホワイト  ＡＢＴ  溶液（Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ  Ｗｈｉｔｅ  ＡＢＴ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、カルコフルオアホワイト標準溶液（Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ  Ｗｈｉｔｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｓ��ｌｕｔｉｏｎ）、カルボシアニン（Ｃａｒｂｏｃｙａｎｉｎｅ）、カルボスチリル（Ｃａｒｂｏｓｔｙｒｙｌ）、カスケードブルー（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ）、カスケードイエロー（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｙｅｌｌｏｗ）、カテコールアミン（Ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅ）、チナクリン（Ｃｈｉｎａｃｒｉｎｅ）、コリホスフィン  Ｏ（Ｃｏｒｉｐｈｏｓｐｈｉｎｅ  Ｏ）、クマリン（Ｃｏｕｍａｒｉｎ）、クマリン−ファロイジン（Ｃｏｕｍａｒｉｎ−Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）、ＣＹ３．１  ８、ＣＹ５．１  ８、ＣＹ７、Ｄａｎｓ（１−ジメチルアミノナファリン５スルホン酸）、Ｄａｎｓａ（ジアミノナファチルスルホン酸）、ダンシルＮＨ−ＣＨ３、ＤＡＰＩ、ジアミノフェニルオキシジアゾール（ＤＡＯ：Ｄｉａｍｉｎｏ  Ｐｈｅｎｙｌ  Ｏｘｙｄｉａｚｏｌｅ）、ジメチルアミノ−５−スルホン酸（Ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−５−Ｓｕｌｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ジフッ化ジピロメテンボロン（Ｄｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈｅｎｅｂｏｒｏｎ  Ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ）、ジフェニルブリリアントフラビン  ７ＧＦＦ（Ｄｉｐｈｅｎｙｌ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｆｌａｖｉｎｅ  ７ＧＦＦ）、ドーパミン（Ｄｏｐａｍｉｎｅ）、エオシン（Ｅｏｓｉｎ）、エリスロシン  ＩＴＣ（Ｅｒｙｔｈｒｏｓｉｎ  ＩＴＣ）、臭化エチジウム（Ｅｔｈｉｄｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ）、オイクリシン（Ｅｕｃｈｒｙｓｉｎ）、ＦＩＦ（ホルムアルデヒド誘導フルオレセンス  Ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）、フラゾオレンジ（Ｆｌａｚｏ  Ｏｒａｎｇｅ）、フルオ  ３（Ｆｌｕｏ  ３）、フルオレスカミン（Ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）、Ｆｕｒａ−２、ゲナクリルブリリアントレッド  Ｂ（Ｇｅｎａｃｒｙｌ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｒｅｄ  Ｂ）、ゲナクリルブリリアントイエロー  １０ＧＦ（Ｇｅｎａｃｒｙｌ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｙｅｌｌｏｗ  １０ＧＦ）、ゲナクリルピンク  ３Ｇ（Ｇｅｎａｃｒｙｌ  Ｐｉｎｋ  ３Ｇ）、ゲナクリルイエロー  ５ＧＦ（Ｇｅｎａｃｒｙｌ  Ｙｅｌｌｏｗ  ５ＧＦ）、グロキサン酸（Ｇｌｏｘａｌｉｃ  Ａｃｉｄ）、グラニュラーブルー（Ｇｒａｎｕｌａｒ  Ｂｌｕｅ）、ヘマトポルフィリン（Ｈａｅｍａｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎ）、ホエチェスト３３２５８（Ｈｏｅｃｈｅｓｔ  ３３２５８）、Ｉｎｄｏ−１、イントラホワイト  Ｃｆ  液体（Ｉｎｔｒａｗｈｉｔｅ  Ｃｆ  Ｌｉｑｕｉｄ）、ロイコフォア  ＰＡＦ（Ｌｅｕｃｏｐｈｏｒ  ＰＡＦ）、ロイコフォア  ＳＦ（Ｌｅｕｃｏｐｈｏｒ  ＳＦ）、ロイコフォア  ＷＳ（Ｌｅｕｃｏｐｈｏｒ  ＷＳ）、リサミンローダミン  Ｂ２００（ＲＤ２００：Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ  Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）、ルシファイエロー  ＣＨ（Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ  ＣＨ）、ルシファイエロー  ＶＳ（Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ  ＶＳ）、マグダーラレッド（Ｍａｇｄａｌａ  Ｒｅｄ）、マリーナブルー（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ）、マキシロンブリリアントフラビン  １０  ＧＦＦ  （Ｍａｘｉｌｏｎ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｆｌａｖｉｎ  １０  ＧＦＦ）、マキシロンブリリアントフラビン  ８  ＧＦＦ  （Ｍａｘｉｌｏｎ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｆｌａｖｉｎ  ８  ＧＦＦ）、ＭＰＳ（メチルグリーンピロニンスチルベン：Ｍｅｔｈｙｌ  Ｇｒｅｅｎ  Ｐｙｒｏｎｉｎｅ  Ｓｔｉｌｂｅｎｅ）、ミトラマイシン（Ｍｉｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、ＮＢＤ  アミン、ニールレッド（Ｎｉｌｅ  Ｒｅｄ）、ニトロベンゾキシアジドール（Ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｘａｄｉｄｏｌｅ）、ノルアドレナリン（Ｎｏｒａｄｏｒｅｎａｌｉｎｅ）、ニュークリアファストレッド（Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｆａｓｔ  Ｒｅｄ）、ユークリアイエロー（Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｙｅｌｌｏｗ）、ニロサンブリリアントフラビン  Ｅ８Ｇ（Ｎｙｌｏｓａｎ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｆｌａｖｉｎ  Ｅ８Ｇ）、オレゴングリーン（Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ）、オキサジン（Ｏｘａｚｉｎｅ）、オキサゾール（Ｏｘａｚｏｌｅ）、オキサジアゾール（Ｏｘａｄｉａｚｏｌｅ）、パシフィックブルー（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ）、パラロサニリン（フュールゲン）（Ｐａｒａｒｏｓａｎｉｌｉｎｅ（Ｆｅｕｌｇｅｎ））、ホルワイト  ＡＲ  溶液（Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＡＲ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、ホルワイト  ＢＫＬ（Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＢＫＬ）、ホルワイト  Ｒｅｖ（Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  Ｒｅｖ）、ホルワイト  ＲＰＡ（Ｐｈｏｒｗｉｔｅ  ＲＰＡ）、ホスフィン  ３Ｒ（Ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ  ３Ｒ）、フタロシアニン（Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ）、フィコエリスリン  Ｒ（Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  Ｒ）、ポリアザインダセンポントクロームブルーブラック（Ｐｏｌｙａｚａｉｎｄａｃｅｎｅ  Ｐｏｎｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｂｌｕｅ  Ｂｌａｃｋ）、ポルフィリン（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ）、プリムリン（Ｐｒｉｍｕｌｉｎｅ）、プロシオンイエロー（Ｐｒｏｃｉｏｎ  Ｙｅｌｌｏｗ）、ヨウ化プロピジウム（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  Ｉｏｄｉｄ）、ピロニン（Ｐｙｒｏｎｉｎｅ）、ピロニン  Ｂ（Ｐｙｒｏｎｉｎｅ  Ｂ）、ピロザールブリリアントフラビン  ７ＧＦ（Ｐｙｒｏｚａｌ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｆｌａｖｉｎ  ７ＧＦ）、キナクリンマスタード（Ｑｕｉｎａｃｒｉｎｅ  Ｍｕｓｔａｒｄ）、ローダミン  １２３（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  １２３）、ローダミン  ５  ＧＬＤ（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  ５  ＧＬＤ）、ローダミン  ６Ｇ（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  ６Ｇ）、ローダミン  Ｂ（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ）、ローダミン  Ｂ  ２００（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ  ２００）、ローダミン  Ｂ  エクストラ（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ  Ｅｘｔｒａ）、ローダミン  ＢＢ（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  ＢＢ）、ローダミン  ＢＧ（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  ＢＧ）、ローダミン  ＷＴ（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  ＷＴ）、ローズベンガル（Ｒｏｓｅ  Ｂｅｎｇａｌ）、セロトニン（Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ）、セブロンブリリアントレッド  ２Ｂ（Ｓｅｖｒｏｎ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｒｅｄ  ２Ｂ）、セブロンブリリアントレッド  ４Ｇ（Ｓｅｖｒｏｎ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｒｅｄ    ４Ｇ）、セブロンブリリアントレッド  Ｂ（Ｓｅｖｒｏｎ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｒｅｄ  Ｂ）、セブロンオレンジ（Ｓｅｖｒｏｎ  Ｏｒａｎｇｅ）、セブロンイエロー  Ｌ（Ｓｅｖｒｏｎ  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｌ）、ＳＩＴＳ（プリムリン（Ｐｒｉｍｕｌｉｎｅ））、ＳＩＴＳ（スティルベンイソチオスルホン酸（Ｓｔｉｌｂｅｎｅ  Ｉｓｏｔｈｉｏｓｕｌｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ））、スチルベン（Ｓｔｉｌｂｅｎｅ）、Ｓｎａｒｆ  １、スルホローダミン  Ｂ  カン  Ｃ（Ｓｕｌｐｈｏ  Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ  Ｃａｎ  Ｃ）  、スルホローダミン  Ｇ  エクストラ（Ｓｕｌｐｈｏ  Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇ  Ｅｘｔｒａ）、テトラサイクリン（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、テキサスレッド（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）、チアジンレッド  Ｒ（Ｔｈｉａｚｉｎｅ  Ｒｅｄ  Ｒ）、チオフラビン  Ｓ（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  Ｓ）、チオフラビン  ＴＣＮ（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  ＴＣＮ）、チオフラビン  ５（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  ５）、チオライト（Ｔｈｉｏｌｙｔｅ）、チオゾールオレンジ（Ｔｈｉｏｚｏｌ  Ｏｒａｎｇｅ）、チノポール  ＣＢＳ（Ｔｉｎｏｐｏｌ  ＣＢＳ）、ＴＯＴＯ  １、ＴＯＴＯ  ３、トゥルーブルー（Ｔｒｕｅ  Ｂｌｕｅ）、ウルトラライト（Ｕｌｔｒａｌｉｔｅ）、ウラニン  Ｂ（Ｕｒａｎｉｎｅ  Ｂ）、ユービテックス  ＳＦＣ（Ｕｖｉｔｅｘ  ＳＦＣ）、キシレンオレンジ（Ｘｙｌｅｎｅ  Ｏｒａｎｇｅ）、ＸＲＩＴＣ、ＹＯ  ＰＲＯ  １、あるいはこれらの組合せである。さらにこれらの染料は、任意に生体分子あるいは活性化エステル、イソチオシアネート、アミン、ヒドラジン、ハロゲン化物、酸、アジド、マレイミド、アルコール、アクリルアミド、ハロアセタミド、フェノール、チオール、酸、アルデヒド、ケトンを含んでいるポリマーに典型的に見られる官能基を持つ安定蛍光産物を形成するのに適した官能基を含んでいるであろう。
　当業者は間違いなく、それらの疎水性特性と同様に放射と吸収特性が適切である限りは、これらの染料間でどれを選択するか知るであろう。蛍光染料のスペクトル特性は励起波長と強度において、同様のフローサイトメトリー装置での使用を許容するために、フルオレセインあるいはローダミン誘導体と十分に類似しているべきである。しかしながら染料は有機溶媒に高い溶解性を持ち、改善された光安定性と飛躍的な収率を持つことが好ましい。
　さらに好ましくは、染料は同一または重なっている励起スペクトルを持つが、識別できる放射波長を持つ。任意の検出系が、２つの染料間のスペクトルの特性の差異を検出するために使用でき、これには検出系を履行するために、固相状態検出器、フォトマルチプライヤーチューブ、写真フィルム、または視覚、スペクトロメーター、ルミノメーター顕微鏡、プレートリーダー、蛍光スキャナ、フローサイトメーター、あるいはこれらの組合せ等の追加的な機器とともに使用されうる任意のものが含まれる。好ましくは、染料は本質的に異なる放射スペクトルを持つように選択し、好ましくは１０ｎｍを超えて分離される最大放射を、より好ましくは２５ｎｍを超えて分離される最大放射を、さらに好ましくは５０ｎｍを超えて分離される最大放射を持つ。２つの染料の区別が視倹で行われる場合は、２つの染料は好ましくは視覚識別を高めるために、知覚できるほど異なった色の放射波長を持つ。機器方法を用いた２つの染料間の区別が望ましいときは、フィルターおよび回折格子の変更によりそれぞれの最大放射が独立して検出されるようになる。２つの染料が類似の最大放射を持つように選択した場合、機器による区別は両方の染料の放射スペクトルが同様の統合振幅、同様のバンド幅を持つことを保証することで、また機器の系の光学的処理量は２つの染料の放射範囲を通して同等であることで高めることができる。機器による区別はまた広いバンド幅よりも狭いバンド幅を持つ染料を選択することで高めることができ、しかしながらそのような染料は必ず高振幅放射を持つか、統合シグナル強度の欠失がシグナル検出にとって好ましくないことがないような十分な濃度で存在しなければならない。」（第１０ページ１２行−第１３ページ５行：対応する国内公表公報の段落【００４４】−【００４８】）
　
（１ｊ）ナノ粒子への染色について
「染色工程
　当技術は、当業者に対して独特の蛍光特性を持つ多色の蛍光粒子の系列を作ることを可能にし、このような粒子を多数の分析物の多パラメータ分析に使用することが開示される。本技術により、微小粒子とナノ粒子双方は異なる染料で染色している蛍光をもってよい。好ましい実施形態において、ナノ粒子は染色され、さらに好ましくは１つ以上のナノ粒子の集団が１つ以上の異なる蛍光染料を持つよう提供される。」（第１３ページ７−１４行：対応する国内公表公報の段落【００４９】）
　
（２）原査定の拒絶の理由に引用され、本願優先日前に頒布された国際公開第００／１７６４２号（以下、「刊行物２」という。）には、次の事項が記載されている。（以下の訳文は、国際公開第００／１７６４２号に対応する国内公表公報である特表２００３−５２４１４７号公報による。）
　
（２ａ）半導体ナノ結晶について
「本組成物は、半導体ナノ結晶の粒度、粒度分布及び組成の選択により所望のエネルギーに調節可能である(tunable)、特定のスペクトルの放射を有する蛍光半導体ナノ結晶（Quantum DotTM粒子としても知られている）から構成される。本組成物はさらに、生物学的ターゲットに対して親和性を有する半導体ナノ結晶と会合する(associated with)化合物からなる。本組成物は化合物のターゲットとの親和性により生物学的ターゲットと相互作用するまたは会合する。会合の位置及び性質は半導体ナノ結晶の放射をモニターすることによって検出できる。
　実際には、本組成物は生物学的ターゲットを含む環境中に導入されて、本組成物はターゲットと会合する。組成物：ターゲット複合体は、分光学的に目視するまたは例えば、複合体に励起光源を照射することによって検出される。半導体ナノ結晶は、例えば、分光学的に観察、測定できる特定の発光スペクトルを放射する。
　本発明の組成物の一つの利点としては、半導体ナノ結晶の集団の発光スペクトルが、サンプル集団の粒度分布の不均一性によっては、２５〜３０ｎｍという狭い線幅、およびテーリング領域のない対称的で、ガウス形またはほとんどガウス形である線幅を有することがある。調節可能性(tunability)、狭い線幅、テーリング領域を持たない対称的な発光スペクトルの組合わせにより、システムにおける、複数の異なる粒度分布を有する単分散性の半導体ナノ結晶の集団などの、様々な大きさのナノ結晶の高解像が提供され、これにより、研究者らはナノ結晶で標識される、ターゲット分析物等の、様々な生物学的部分を同時に試験できる。
　加えて、ナノ結晶の励起波長の幅は広く、すべての市販の半導体ナノ結晶の放射波長よりエネルギーが高くなりうる。その結果、これにより、一般的にはスペクトルの紫外線または青色領域において、単一の光源による異なる発光スペクトルを有するシステムで半導体ナノ結晶のすべての集団の同時励起が可能となる。半導体ナノ結晶はまた、公知の有機蛍光色素に比べて強く、有機色素に比べてフォトブリーチングに対する耐性が強い。ナノ結晶の強さはまた、試験されているシステムにおける有機色素の分解産物の混入の問題を緩和する。したがって、本発明は、生物学的分子及びこれらが受ける相互作用の検出を目的とする比類なく有用なタグを提供するものである。
・・・・・ 
　本発明のさらなる態様は、蛍光標識が蛍光の発光スペクトルがナノ結晶の大きさに依存する半導体ナノ結晶である、蛍光標識による生物学的分子または事象の標識方法を包含するものである。
・・・・・
　本発明のさらなる態様は、２以上の半導体ナノ結晶、好ましくは２０個までの大きさの異なるナノ結晶が使用される前記使用及び方法を包含するものである。」（第５ページ１０行−第７ページ３１行：対応する国内公表公報の段落【００１３】−【００２６】）
　
（２ｂ）ナノ結晶の励起光源と、複数のナノ結晶タグの使用について
「調節可能なナノ結晶は、蛍光免疫細胞化学に使用されるのに理想的である。ナノ結晶の吸収スペクトルは広い。その結果、単一の光源（ＵＶ−青色での、好ましくは青色領域での）を用いることによって、システム内のナノ結晶をすべて同時に励起することができる。これにより、研究者は細胞内のすべてのナノ結晶（ゆえに、ターゲットされた生物学的成分）の位置を視覚化できる。加えて、単一の励起光源により、蛍光の励起に係わる機械が簡単になる。さらに、狭い線幅、ナノ結晶の発光スペクトルにおけるテーリング領域のない対称的で、ほとんどガウス曲線形、ならびに発光波長の調節可能性の組み合わせによって、一システムに複数のナノ結晶タグを使用できる。その結果、それぞれ異なる発光スペクトルを有する、１０〜２０個という多くの大きさの異なるナノ結晶を、一システムで同時に使用できる、すなわち、マルチプレクシング(multiplexing)が可能であり、例えば、逆重畳積分ソフトウェアを用いてあるいは用いずに光学的に、当該分野において既知の技術を用いて容易に解像される。
　イムノアッセイ
　異種のイムノアッセイ（過剰の抗体が別の段階で除去されなければならないアッセイ）における半導体ナノ結晶を用いる一つのプロトコルを図１に示す。抗原に対する抗体は固相に吸着または共有結合される・・・・・。次に、抗原を加えて、固相抗体に結合させる。過剰の抗原を除去した後、マトリックスをナノ結晶標識抗体と反応させる。２回洗浄した後、蛍光が定量できる。
　このプロトコルは、複数の、平行したイムノアッセイスキーム、即ち、マルチプレクシングにも修正可能である（図２）。一連の異なる抗体は基材に共有結合される。次に、異種の抗体特異的抗原をこのアレイに結合できる。最後に、特定の粒度、粒度分布または組成を有するナノ結晶で標識される異なる抗体を抗原に結合させる。繰り返すが、それぞれの粒度、粒度分布または組成の異なるナノ結晶からの蛍光が定量でき、各抗原の相対量が決定できる。このような拡張は、異なる粒度、粒度分布または組成を有するナノ結晶が同様の可溶性、狭い線幅及び独特な大きさ依存性、粒度分布依存性または組成依存性の蛍光周波数を有するのみならず放射の同じ源（スペクトルのＵＶ−青色の、及び好ましくは青色領域の）によって励起できるので、可能であるはずである。」（第３３ページ８行−第３４ページ８行：対応する国内公表公報の段落【０１４１】−【０１４３】）
　
（２ｃ）励起光源について
「好ましい実施態様においては、蛍光マーカーの励起を目的として、装置はナノ結晶の励起用の青色または紫外線光源から構成される。好ましくは、光源の波長はすべてのナノ結晶の放射の波長に比べて短い。本発明の概念を制限するものではない一実施例としては、別の方法を用いても同様の結果が得られるので、好ましくは光源がフィルター付の重水素ランプ等の広帯域のＵＶ−青色光源である。他のアプローチとしては、キセノンランプまたは重水素ランプ等の白色光源のアウトプットからの光源を得て、光をモノクロメーターに通して所望の波長を引き出すことがある。または、フィルターを用いて所望の波長を引き出してもよい。
　蛍光マーカーの励起に関する他の好ましい実施態様においては、ある数の連続波ガスレーザーが使用できる。これらとしては、以下に制限されるものではないが、アルゴンイオンレーザーライン（例えば、４５７、４８８、５１４ｎｍなど）またはＨｅＣｄレーザーなどが挙げられる。さらに、２重のアウトプットを有するＧａＮ系レーザーまたはＧａＡｓ系レーザー等のスペクトルの青色領域にアウトプットを有する固体状態のダイオードレーザーを使用してもよい。加えて、２重または３重のアウトプットを有するＹＡＧ若しくはＹＬＦ系レーザー、または青色領域に１つのアウトプットを有するパルスレーザーを使用してもよい。」（第３９ページ２７行−第４０ページ１２行：対応する国内公表公報の段落【０１６２】、【０１６３】）
　
（３）原査定の拒絶の理由に引用され、本願優先日前に頒布された国際公開第００／６８６９２号（以下、「刊行物３」という。）には、次の事項が記載されている。（以下の訳文は、国際公開第００／６８６９２号に対応する国内公表公報である特表２００２−５４４４８８号公報による。）
　
（３ａ）半導体ナノクリスタルについて
「（発明の要旨）
　本発明は、半導体ナノクリスタルが信頼でき、かつ感受性の検出可能な標識として、種々の生物学的フォーマットおよび化学的フォーマットに使用され得るというの発見に基づく。半導体ナノクルスタル（量子点おおびＱｄｏｔTMナノクリスタルとしても知られる）は、特徴的なスペクトル発光を有するように生産され得る。これらのスペクトル発光は、異なる粒子サイズ、サイズ分配、および／または粒子の組成物によって所望のエネルギーに調整され得る。１以上の選択された生物学的または化学的標的への親和性を有する標的化合物は、半導体ナノクリスタルと結合される。従って、半導体ナノクリスタルは、標的への標的化合物の親和性に起因して、標的と相互作用するか、または結合する。結合の位置および／または特性は、例えば、エネルギー源（例えば、励起光源）を有するサンプルの発光によって、決定され得る。半導体ナノクリスタルは、特徴的な発光スペクトルを発光する。このスペクトルは、例えば、分光学的に観察され得るか、または測定され得る。
　都合よく、半導体ナノクリスタルの集団の発光スペクトルは、操作され得、２５〜３０ｎｍの細さの線の幅（ｌｉｎｅｗｉｄｔｈｓ）を有し、その幅は、サンプル集団の異種遺伝子型のサイズ分布、および対称性、テーリング領域のないガウスまたはほぼガウスである線形に依存する。従って、上記の技術は、単一の反応における、１つまたはいくつかの異なる生物学的部分または化学的部分の検出さえを可能にする。調整能、狭い線の幅、およびテーリング領域のない対称発光スペクトルの組み合わせは、高分解能の複数のサイズのナノクリスタル（例えば、システム内に複数の異なるサイズ分布を有する単分散の半導体ナノクリスタルの集団）、および種々の生物学的部分の同時の検出を提供する。
　さらに、このようなナノクルスタルの励起波長の範囲は、広く、そしてすべての利用可能な半導体ナノクリスタルの発光波長よりもエネルギーが高くあり得る。結果的に、これは、単一のエネルギー源（例えば、光、通常は、スペクトルの紫外領域または青色領域）の使用を可能にし、別の発光スペクトルを有するシステムにおける半導体ナノクリスタルのすべての集団の同時の励起に影響する。半導体ナノクリスタルはまた、従来の有機蛍光色素より強く、そして光脱色に対して有機色素より、より耐性である。ナノクリスタルのロバストネスはまた、試験されるシステムにおける有機色素の分解産物の混入の問題を軽減する。従って、本発明は、生物学的分子および化学的分子の検出に役立つタグを独自に提供する。」（第６ページ９行−第７ページ１１行：対応する国内公表公報の段落【００１９】−【００２１】）
　
（３ｂ）ナノクリスタルの励起と、複数のナノクリスタルの標識としての使用について
「半導体ナノクリスタル結合体（生体分子に結合体化された単一の半導体ナノクリスタルまたは複数の半導体ナノクリスタルのいずれか）は、染色手順において、特異的な、感度のよい、光安定性の、抗原の検出を可能にする。これは、現在利用可能な染色を超えて明確な利点を提供する。さらに、半導体ナノクリスタルの固有の特性（すなわち、単一の励起源、狭いガウススペクトル、および調整可能な発光波長）は、従来の蛍光色素よりもよりいっそう多くの色が分解されることを意味する。
　より詳細には、複数の分析染色が、組織サンプル、血液サンプル、または細胞もしくは細胞外マーカーの多重化分析を必要とする任意のサンプル上で実行され得る。この手順は、２段階の反応で実行され得、それによって一次抗体に半導体ナノクリスタル結合体化抗体が付随するか、または抗体（もしくは他の生体分子）半導体ナノクリスタル結合体を使用することによりサンプルに直接的に標識する。例えば、４０ｎｍ間隔で間隔をあけられた発光スペクトル（例えば、４９０〜６５０ｎｍ）を有する５つの（またはそれ以上の増加したスペクトル的用途または減少したスペクトル的分離を有する）異なる半導体ナノクリスタルの集団が合成され得る。各々半導体ナノクリスタルのスペクトル的に別個の集団は、目的の生体分子（これは、分析されるサンプル中に存在していてもよいし、または存在していなくともよい）を特異的に認識する異なる分子に結合体化される。標準的な染色プロトコルに従って、サンプルは、半導体ナノクリスタルで標識され、そして標的分子の位置および量について分析される。この分析は、従来の蛍光顕微鏡技術によって実行され得るか、または上記のようなスペクトルスキャニングデバイスの使用によって実行され得る。
　スペクトル的に区別できる多くの半導体ナノクリスタルが生成され得るので、異なる項目（例えば、次いで、（上記のような）細胞の化合物の位置および量を測定するために使用され得る抗体もしくはｃＤＮＡ）を標識することが可能である。しかし、作製され得るスペクトル的に区別できる色の数によって、付随され得る化合物の数は限られている。ＣｄＳｅ、半導体ナノクリスタルおよび現在の合成技術を用いると、これは、およそ６〜７のスペクトル的に区別できる色である。しかし、異なる化合物が細胞中で共存しない場合、よりいっそうの多くの半導体ナノクリスタルの色が、分析される標的の既知の空間的分離の利点を利用することによって使用され得る。例えば、核局在化標的と膜局在化標的との間には重複が存在しない。従って、半導体ナノクリスタルのオルガネラ特異的グループを使用して、識別可能な標的の数を劇的に増大し得る（以下の実施例１８を参照のこと）。」（第４０ページ２９行−第４１ページ３１行：対応する国内公表公報の段落【０１２５】−【０１２７】）
　
（３ｃ）半導体ナノクリスタルの励起光源について
「半導体ナノクリスタルの特定のサイズ、サイズ分布および／または組成により生成される光の色は、当業者に明らかである方法によって容易に計算または測定され得る。これらの測定技術の例として、２０Å〜１１５Åの範囲のサイズのＣｄＳｅのナノクリスタルのバンドギャップは、Ｍｕｒｒａｙら、（１９９３）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：８７０６に示される。これらの技術により、半導体ナノクリスタルの適切なサイズ、サイズ分布および／または組成の容易な計算、ならびに任意の所望の波長の光デバイスを発光し得るナノクリスタルを生成するための励起光源の選択が可能になる。
　本発明の方法と共に使用するための自動検出のための特定のシステムの例には、励起源を含む画像化スキーム、モノクロメーター（または画像をスペクトル分解し得る任意のデバイス、もしくは狭いバンドフィルターのセット）、および検出器アレイが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、この装置は、検出される発光の波長より短い波長の青色またはＵＶ光源を備える。これは、いくつか名前を挙げると、広帯域ＵＶ光源（例えば、前にフィルターを有するジュウテリウムランプ）；白色光源の出力（例えば、モノクロメーターを通過した後所望の波長を抽出する、キセノンランプまたはジュウテリウムランプ）；または任意の多数の持続波（ｃｗ）ガスレーザー（アルゴンイオンレーザー線（４５７、４８８、５１４ｃｍなど）が挙げられるが、これらに限定されない）；ＨｅＣｄレーザー；ＧａＮおよびＧａＡｓ（二重）ベースのレーザー、またはＹＡＧまたはＹＬＦベースのレーザーの二重もしくは三重の出力のような、青色の固体状態ダイオードレーザー；あるいは、青色の出力を有する任意のパルスレーザーであり得る。」（第３０ページ５−２５行：対応する国内公表公報の段落【００９０】、【００９１】）
　
　
３−２．本願補正発明と刊行物１記載の発明との対比
３−２−１．刊行物１記載の発明
　上記（１ａ）ないし（１ｊ）の記載より、刊行物１には、
「担体微小粒子表面にナノ粒子の集団を結合させて蛍光ビーズを得、前記蛍光ビーズ上に対象の核酸セグメントであるＤＮＡを共有結合し、対象のＰＣＲ生成物と蛍光ビーズ上の核酸セグメントと相補的蛍光ＤＮＡプローブとを接触させ、相補的蛍光ＤＮＡプローブを蛍光ビーズ上に結合させ、フローサイトメータを用い、蛍光物質によって吸収される光を照射して、蛍光ビーズが属している集団の同定及び相補的蛍光ＤＮＡプローブの蛍光を検出し、対象であるＤＮＡを検出する方法であって、前記蛍光ビーズは、ナノ粒子の２種のセットの各々を異なる蛍光染料を使って染色し、前記セットを望みの割合で混合して担体微小粒子に結合させることで得られ、複数の蛍光ビーズは、異なる割合で混合された蛍光ナノ粒子が結合することにより、それぞれのセットが独特の蛍光シグナルを有し識別可能である構成を有するものであり、ナノ粒子の粒径は、１ｎｍから１００，０００ｎｍの範囲である、フローサイトメータを用いて対象であるＤＮＡを検出する方法。」（以下、「刊行物１記載の発明」という。）が記載されているものと認められる。
　
３−２−２．対比
　本願補正発明と刊行物１記載の発明とを対比する。
（ア）刊行物１記載の発明の「対象であるＤＮＡ」は、本願補正発明の「生体高分子」に相当する。
（イ）刊行物１記載の発明の「ナノ粒子」は、粒径が１ｎｍから１００，０００ｎｍの範囲であるので、本願補正発明の「半導体ナノ微粒子」とは、粒径１〜１０ｎｍのナノ微粒子である点で共通する。また、刊行物１記載の発明の「担体微小粒子」は、本願補正発明の「ビーズ」に相当する。
（ウ）刊行物１記載の発明の「担体微小粒子表面にナノ粒子の集団が結合して蛍光ビーズを得」るステップは、前記ナノ粒子の集団は、ナノ粒子の２種のセットの各々を異なる染料を使って染色し、前記セットを望みの割合で混合したものであるから、本願補正発明の「少なくとも２種類の粒径１〜１０ｎｍの半導体ナノ微粒子によりビーズ表面を染色するステップ」とは、共に、少なくとも２種類の粒径１〜１０ｎｍのナノ微粒子によりビーズ表面を染色するステップである点で共通する。
（エ）刊行物１記載の発明の「前記蛍光ビーズ上に対象の核酸セグメントであるＤＮＡを共有結合し」に関して、前記蛍光ビーズは担体微小粒子表面にナノ粒子が結合しているものなので、蛍光ビーズ上にＤＮＡを結合するということは、担体微小粒子表面上のナノ粒子にＤＮＡを結合させることになり、そうすると、刊行物１記載の発明の「前記蛍光ビーズ上に対象の核酸セグメントであるＤＮＡを共有結合し」と本願補正発明の「前記染色したビーズ上の半導体ナノ微粒子にＤＮＡを共有結合するステップ」とは、共に、前記染色したビーズ上のナノ微粒子にＤＮＡを共有結合するステップである点で共通する。
（オ）刊行物１記載の発明の「蛍光ＤＮＡプローブ」は本願補正発明の「生体高分子のレポーター」に相当し、刊行物１記載の発明の「対象のＰＣＲ生成物と蛍光ビーズ上の核酸セグメントと相補的蛍光ＤＮＡプローブとを接触させ、相補的蛍光ＤＮＡプローブを蛍光ビーズ上に結合させ」と本願補正発明の「所望のｍＲＮＡを鋳型とし、前記ＤＮＡをプライマーとし、少なくとも１種類の塩基に標識を施した塩基を材料として逆転写反応を行うことにより、少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識するステップ」とは、共に、少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識するステップである点で共通する。
（カ）刊行物１記載の発明の「フローサイトメータを用い、蛍光物質によって吸収される光を照射して、蛍光ビーズが属している集団の同定及び相補的蛍光DNAプローブの蛍光を検出し」に関して、フローサイトメータを用いた測定とは、測定する物質をフローサイトメータに注入し、光を照射して測定を行うものであり、また、「蛍光ビーズが属している集団の同定」は、赤色蛍光及びオレンジ蛍光という２種の蛍光波長を測定することで行うものであるので（上記（１ｆ）参照）、刊行物１記載の発明の「フローサイトメータを用い、蛍光物質によって吸収される光を照射して、蛍光ビーズが属している集団の同定及び相補的蛍光DNAプローブの蛍光を検出し」と、本願補正発明の「前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、前記注入されたビーズにＵＶレーザーを照射するステップと、励起された前記ビーズから発光される所定の蛍光波長の組を選択的に検出することにより、前記ビーズを識別し、前記レポーターを測定して生体高分子を検出するステップ」とは、共に、前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、前記注入されたビーズに光を照射するステップと、励起された前記ビーズから発光される所定の蛍光波長の組を選択的に検出することにより、前記ビーズを識別し、前記レポーターを測定して生体高分子を検出するステップである点で共通する。
（キ）刊行物１記載の発明の「複数の蛍光ビーズは、異なる割合で混合された蛍光ナノ粒子が結合することにより、それぞれのセットが独特の蛍光シグナルを有し識別可能である」と、本願補正発明の「複数のビーズそれぞれに対して、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別する」とは、共に、複数のビーズそれぞれに対して、２種類のナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別する点で共通する。
　
　すると、本願補正発明と刊行物１記載の発明は、次の点で一致する。
＜一致点＞
「フローサイトメータを用いて生体高分子を検出する方法であって、
　少なくとも２種類の粒径１〜１０nmのナノ微粒子によりビーズ表面を染色するステップと、
　前記染色したビーズ上のナノ微粒子にＤＮＡを共有結合するステップと、
　少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識するステップと、
　前記ビーズをフローサイトメータに注入するステップと、
　前記注入されたビーズに光を照射するステップと、
　励起された前記ビーズから発光される所定の蛍光波長の組を選択的に検出することにより、前記ビーズを識別し、前記レポーターを測定して生体高分子を検出するステップとを含み、
　複数のビーズそれぞれに対して、２種類のナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする方法。」
　
　一方で、両者は、以下の点で相違する。
＜相違点１＞
　本願補正発明は、ビーズを染色するナノ微粒子として「半導体ナノ微粒子」を使用し、「２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別する」構成であるのに対して、刊行物１記載の発明においては、担体微小粒子表面に結合させるナノ粒子は「半導体」ナノ微粒子ではなく、また、蛍光ビーズの識別は、蛍光染料により行うものであり、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合することで行う構成ではない点。
　
＜相違点２＞
　本願補正発明は、「所望のｍＲＮＡを鋳型とし、前記ＤＮＡをプライマーとし、少なくとも１種類の塩基に標識を施した塩基を材料として逆転写反応を行うことにより、少なくとも１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識する」のに対して、刊行物１記載の発明は「所望のｍＲＮＡを鋳型とし、前記ＤＮＡをプライマーとし、少なくとも１種類の塩基に標識を施した塩基を材料として逆転写反応を行う」構成を有していない点。
　
＜相違点３＞
　本願補正発明は、照射する光として「ＵＶレーザー」を使用するのに対して、刊行物１記載の発明では、照射する光がＵＶレーザーであるかどうかは明らかではない点。
　
３−３．相違点についての検討
　上記相違点１について検討する。
　刊行物１には、使用される染料として多数の蛍光染料が例示されており（前記（１ｉ）参照）、前記染料を用いてナノ粒子を染色すること（前記（１ｊ）参照）、２つの染料の使用として、同一又は重なっている励起スペクトルを持つが、識別できる放射波長を持つ染料を選択することが好ましいことが記載されている（上記（１ｉ）参照）。本記載は、刊行物１記載の発明において、ナノ粒子の２種のセットの各々を染色する異なる染料として、公知のものから適宜選択できること、好ましくは同一又は重なっている励起スペクトルを持つが、識別できる放射波長を持つ蛍光物質の組合せがよいことを示しているといえる。
　そして、単一の光源を用いて励起ができ、識別できる放射波長を持つ蛍光標識として、複数のサイズを有する半導体ナノ結晶の組合せを使用することは、例えば、刊行物２（上記（２ａ）、（２ｂ）を参照）、刊行物３（上記（３ａ）、（３ｂ）を参照）に記載されているように、従来周知であるので、刊行物１記載の発明において、異なる蛍光染料で染色されたナノ粒子の２種のセットのかわりに、２種の違うサイズの半導体ナノ結晶を組合わせて使用し、半導体ナノ結晶を担体微小粒子表面に結合する構成とすることは、当業者が容易になし得る事項である。
　　
　上記相違点２について検討する。
　ｍＲＮＡを鋳型、固相に結合したＤＮＡをプライマーとして用い、逆転写反応を行うことでｃＤＮＡを固相上に製造する方法、及び、ｃＤＮＡの製造の際に、標識化塩基を材料とすることで固相上に製造されたｃＤＮＡを標識化することは、例えば、特表平４−５０１９５８号公報（請求の範囲、第３ページ左上欄１−１０行、第３ページ右下欄４−１１行、実施例６−８を参照）や、特表平８−５００７２２号公報（特許請求の範囲の記載、第２１ページ下から３行−第２２ページ３行、第２７ページ２５行−第２８ページ８行を参照）に記載されているように、固相ＲＴ−ＰＣＲ法として従来周知であり、刊行物１記載の発明において、蛍光ビーズ上に結合したＤＮＡをプライマーとして使用し、周知の固相ＲＴ−ＰＣＲを行うことで、１種類の生体高分子のレポーターを前記ビーズに標識する構成とすることは、当業者が適宜なし得る事項である。
　
　上記相違点３について検討する。
　刊行物２及び３には、半導体ナノ結晶を励起する光としてＵＶを使用することが記載されている（上記（２ｂ）、（２ｃ）、及び、（３ｃ）を参照）。照射光として、測定に使用する試薬に対して適切な光を使用することは、分析の分野において通常行われることであり、刊行物１記載の発明において、異なる染料で染色されたナノ粒子の２種のセットのかわりに、２種の違うサイズの半導体ナノ結晶をを組合わせて使用し、半導体ナノ結晶を担体微小粒子表面に結合する構成を採用した際に、励起光としてＵＶを使用することは当業者が当然行うことである。また、紫外レーザーを照射する装置は従来周知のものであるので、励起光としてＵＶレーザーを用いることは、単なる設計事項にすぎない。
　　
　そして、本願補正発明の作用効果も、刊行物１記載の発明及び周知の技術的事項から当業者が予測できた範囲のものである。 
　 
　したがって、本願補正発明は、刊行物１記載の発明及び周知の技術的事項に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許出願の際独立して特許を受けることができないものである。 
　 
４．本件補正についてのむすび 
　以上のとおり、本件補正は、平成１８年改正前特許法第１７条の２第５項で準用する同法第１２６条第５項の規定に違反するものであり、特許法第１５９条第１項において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下すべきものである。 
　 
　
III．本願発明について 
１．本願発明 
　平成１８年８月３１日付けの手続補正は上記のとおり却下されることとなったので、本願の請求項１ないし５に係る発明は、平成１８年３月９日付け手続補正書により補正された明細書の特許請求の範囲請求項１ないし５に記載されたとおりのものであるところ、請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、上記II．の１の（ａ）本件補正前の特許請求の範囲の請求項１に記載されたとおりのものである。 
　 
２．引用刊行物 
　原査定の拒絶の理由に引用された刊行物及びその記載事項は、前記II．３−１に記載したとおりである。 
　 
３．対比・判断 
　本願発明は、前記II．で検討した本願補正発明から、（ｉ）本件補正後のビーズに関して「複数のビーズそれぞれに対して、２種類の粒径が異なる半導体ナノ微粒子を異なる比率で混合したものによって染色し、前記混合比率の違いによって各ビーズを識別することを特徴とする」の限定を省いたものである。 
　そうすると、本願発明の構成要件をすべて含み、さらに他の構成要件を付加したものに相当する本願補正発明が、前記II．３−２．、３−３．に記載したとおり、刊行物１記載の発明及び周知の技術的事項に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本願発明も、同様の理由により、刊行物１記載の発明及び周知の技術的事項に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。 
　 
４．むすび 
　以上のとおり、本願発明は、刊行物１記載の発明及び周知の技術的事項に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。 
　したがって、その余の請求項について論及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。 
　よって、結論のとおり審決する。