(57)【要約】  本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬組成物を提供する。より具体的には、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する医薬組成物を提供する。また、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する医薬組成物は、膠原病などの、炎症性マクロファージが引き起こす他の疾患の治療にも有用となりうる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬組成物。
【請求項２】
アペリンが、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３、アペリン−１２、およびそれらの改変体から成る群より選択される、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
アペリンが［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３である、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
アペリン受容体アゴニストが、低分子化合物、植物抽出物、またはアゴニスト抗体である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項５】
アペリン受容体アゴニストが、ＴＯＤＤＬＥＲ／ＥＬＡＢＥＬＡ、Ｅ３３９−３Ｄ６、ＭＭ０７、（Ｓ）−Ｎ−（１−（ブチルアミノ）−５−メチル−１−オキソヘキサン−３−イル）−５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−イソブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チオフェン−２−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［２−フラン−２−イルメチル−１−（２−メチル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−メチル−３−｛［１−（（１Ｒ、２Ｒ）−２−メチル−シクロヘキシル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−シクロヘキシル−３−（５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）ペンタン酸、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、クロセチン、および下記式で表される化合物：
【化１】
2018101398.tif 000006
（式中、ＲはＬＲＢ（Lissamine Rhodamine B）またはＰＢ（Patent Blue）を表し、ｎは０または１である。）から成る群より選択される、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が潰瘍性大腸炎である、請求項１〜５のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項７】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病である、請求項１〜５のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項８】
炎症を抑制する、請求項１〜７のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項９】
炎症性マクロファージおよび／またはT細胞に作用する、請求項１〜８のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１０】
アペリン受容体アゴニストがＭＭ０７である、請求項１〜９のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１１】
アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを対象に投与する工程を含む、対象における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防方法。
【請求項１２】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療または予防するための医薬の製造における、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストの使用。
【請求項１３】
アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、腸内炎症抑制用の食品組成物。
【請求項１４】
アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療または予防に用いるための医薬組成物。
【請求項１５】
炎症性マクロファージが引き起こす疾患が、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、およびサルコイドーシスから成る群より選択される、請求項１４記載の医薬組成物。
【請求項１６】
アペリンまたはアペリン受容体アゴニストによって炎症性マクロファージおよび／またはT細胞の機能を制御する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、特願２０１６−２３４０６２号（出願日：２０１６年１２月１日）の優先権の利益を享受する出願であり、これは引用することによりその全体が本明細書に取り込まれる。【０００２】
本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療方法およびそれに用いるための医薬組成物に関する。より詳細には、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する医薬組成物を投与することを含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療方法に関する。また、本発明は、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療方法およびそれに用いるための医薬組成物にも関する。
【背景技術】
【０００３】
炎症性腸疾患（Inflammatory Bowel Disease、以下、単に「ＩＢＤ」という。）は、大腸および小腸など消化管の粘膜に難治性の炎症や潰瘍を引き起こし慢性の経過を辿る炎症性疾患であり、その病因の詳細は知られていない（たとえば、非特許文献１参照）。このＩＢＤは狭義的には、主に大腸粘膜においてびらんや潰瘍を形成する原因不明のびまん性非特異的炎症を呈する潰瘍性大腸炎、そして全消化管に非特異性の肉芽腫を伴う全層性の炎症を誘導し、潰瘍形成や膿瘍、繊維化、またこれらによって狭窄や瘻孔などを引き起こすクローン病の２疾患を指す。かつて欧米の疾患と考えられていたＩＢＤは本邦においても近年その患者が増加の一途を辿り、潰瘍性大腸炎、クローン病をあわせ現在１７万人におよぶ。とくに１０〜２０代の若年者に多く発症し、再燃と寛解を繰り返して発育、学業、就労、妊娠、出産などに大きな影響を与える。また根治療法がない現在、患者は生涯に亘る治療の継続を余儀なくされ、身体的、精神的、社会的、そして経済的負担に苛まれている難病である。【０００４】
ＩＢＤの発症機序や病態の全容は未だに解明されていないが、腫瘍壊死因子（以下、「ＴＮＦ」という。）やマクロファージ遊走阻止因子など、さまざまな炎症メディエータがその発症や再燃、遷延化、重症化に関与していることが明らかになっている（たとえば、非特許文献２ないし５を参照）。【０００５】
ＩＢＤに対する現時点での主な治療の選択肢としては、５−アミノサリチル酸（5-aminosalicylic acid、単に「５−ＡＳＡ」という。）製剤、ステロイド製剤、免疫調節剤などが挙げられる。しかしこれらの治療に対して抵抗性や離脱困難を呈する患者が多く存在し、また長期に亘る治療から重篤な副作用も問題となっている。最近、新規の治療法として抗ＴＮＦモノクローナル抗体製剤が開発された（たとえば、非特許文献６および７参照）。この治療はＴＮＦの活性を抑制し、クローン病や潰瘍性大腸炎を罹患した患者における炎症を急速に改善させる効果が期待されている。しかしこの治療法にも抵抗性あるいは二次無効となる症例や、結核などの感染症および悪性リンパ腫などの悪性腫瘍といった重篤な副作用が度々発症しており（たとえば、非特許文献８および９参照）、これらが抗ＴＮＦ抗体による治療の継続を困難にしている。したがってＩＢＤに対する新規治療法の開発は急務であるが、とくに全身の免疫応答を抑制してしまう現行の治療法とは異なり、その病態に特異的な治療標的を選択した戦略が今後不可欠と考えられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Podolsky DK.Inflammatory bowel disease.N Engl J Med 2002;347:417-29.
【非特許文献２】Sartor RB.Pathogenesis and immune mechanisms of chronic inflammatory bowel diseases. Am J Gastroenterol 1997;92(12 Suppl.):5S-11S.
【非特許文献３】Papadakis KA, Targan SR. Role of cytokines in the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Annu Rev Med 2000;51:289-98.
【非特許文献４】de Jong YP, Abadia-Molina AC, Satoskar AR, et al. Development of chronic colitis is dependent on the cytokine MIF.2001;2:1061-66.
【非特許文献５】Ohkawara T,Nishihira J,Takeda H,et al. Amelioration of dextran sulfate sodium-induced colitis by anti-macrophage migration inhibitory factor antibody in mice.Gastroenterology 2002;123:256-70.
【非特許文献６】van Dullemen HM, van Deventer SJ, Hommes DW, et al Treatment of Crohn's disease with anti-tumor necrosis factor chimeric monoclonal antibody(cA2).Gastroenterology 1995;109:129-35.
【非特許文献７】Targan SR, Hanauer SB, van Deventer SJ, et al. A short-term study of chimeric monoclonal antibody cA2 to tumor necrosis factor alpha for Crohn’s disease.Crohn’s Disease cA2 Study Group. N Eng J Med 1997;337:1029-35.
【非特許文献８】Bickston SJ, Lichtenstein GR, Arseneau KO, et al. The relationship between infliximab treatment and lymphoma in Crohn's disease. Gastroenterology 1999;117:1433-37.
【非特許文献９】Keane J, Gershon S, Wise RP, et al. Tuberculosis associated with infliximab, a tumor necrosis factor alpha-neutralizing agent.N Engl J Med 2001;345:1098-104.
【非特許文献１０】Michio Onizawa, Takashi Nagaishi et al. Signaling pathway via TNF-α/NF-κB in intestinal epithelial cells may be directly involved in colitis-associated carcinogenesis. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2009 Apr;296(4): G850-9.
【非特許文献１１】Suzana Brozovic, Takashi Nagaishi1 et al. CD1d function is regulated by microsomal triglyceride transfer protein. Nature Medicine 10, 535 - 539 (2004)
【非特許文献１２】Hideki Iijima, Markus F. Neurath, Takashi Nagaishi et al. Specific Regulation of T Helper Cell 1-mediated Murine Colitis by CEACAM1. J Exp Med. 2004 Feb 16;199(4):471-82.
【非特許文献１３】Osamu Yamaji, Takashi Nagaishi et al. The Development of Colitogenic CD4+ T Cells Is Regulated by IL-7 in Collaboration with NK Cell Function in a Murine Model of Colitis. J Immunol. 2012 Mar 15;188(6):2524-36.
【非特許文献１４】Watanabe, M., Y. Ueno, T. Yajima, S. Okamoto, T. Hayashi, M. Yamazaki, Y. Iwao, H. Ishii, S. Habu, M. Uehira, et al 1998. Interleukin 7 transgenic mice develop chronic colitis with decreased interleukin 7 protein accumulation in the colonic mucosa. J. Exp. Med. 187: 389-402.
【非特許文献１５】Berg DJ, Davidson N, Kuhn R, Muller W, Menon S, Holland G, Thompson-Snipes L, Leach MW, Rennick D. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine Production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest 1996; 98: 1010-20
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬組成物、およびそれを用いた炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防方法を提供することを目的の一つとする。また、本発明は、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療または予防に用いるための医薬組成物、およびそれを用いた炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療または予防方法を提供することを別の目的の一つとする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、アペリン−ＡＰＪ系の刺激により、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療が可能であることを見出した。本発明はこのような知見に基づくものであり、以下の態様を包含する：
［１］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬組成物。
［２］アペリンが、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３、アペリン−１２、およびそれらの改変体から成る群より選択される、［１］記載の医薬組成物。
［３］アペリンが［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３である、［２］記載の医薬組成物。
［４］アペリン受容体アゴニストが、低分子化合物、植物抽出物、またはアゴニスト抗体である、［１］記載の医薬組成物。
［５］アペリン受容体アゴニストが、ＴＯＤＤＬＥＲ／ＥＬＡＢＥＬＡ、Ｅ３３９−３Ｄ６、ＭＭ０７、（Ｓ）−Ｎ−（１−（ブチルアミノ）−５−メチル−１−オキソヘキサン−３−イル）−５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−イソブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チオフェン−２−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［２−フラン−２−イルメチル−１−（２−メチル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−メチル−３−｛［１−（（１Ｒ、２Ｒ）−２−メチル−シクロヘキシル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−シクロヘキシル−３−（５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）ペンタン酸、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、クロセチン、および下記式で表される化合物：
【化１】
2018101398.tif 000002
（式中、ＲはＬＲＢ（Lissamine Rhodamine B）またはＰＢ（Patent Blue）を表し、ｎは０または１である。）から成る群より選択される、［１］記載の医薬組成物。
［６］炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が潰瘍性大腸炎である、［１］〜［５］のいずれか一項記載の医薬組成物。
［７］炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病である、［１］〜［５］のいずれか一項記載の医薬組成物。【０００９】
［８］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを対象に投与する工程を含む、対象における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防方法。
［９］アペリンが、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３、アペリン−１２、およびそれらの改変体から成る群より選択される、［８］記載の治療または予防方法。
［１０］アペリンが［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３である、［９］記載の治療または予防方法。
［１１］アペリン受容体アゴニストが、低分子化合物、植物抽出物、またはアゴニスト抗体である、［８］記載の治療または予防方法。
［１２］アペリン受容体アゴニストが、ＴＯＤＤＬＥＲ／ＥＬＡＢＥＬＡ、Ｅ３３９−３Ｄ６、ＭＭ０７、（Ｓ）−Ｎ−（１−（ブチルアミノ）−５−メチル−１−オキソヘキサン−３−イル）−５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−イソブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チオフェン−２−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［２−フラン−２−イルメチル−１−（２−メチル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−メチル−３−｛［１−（（１Ｒ、２Ｒ）−２−メチル−シクロヘキシル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−シクロヘキシル−３−（５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）ペンタン酸、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、クロセチン、および下記式で表される化合物：
【化２】
2018101398.tif 000003
（式中、ＲはＬＲＢ（Lissamine Rhodamine B）またはＰＢ（Patent Blue）を表し、ｎは０または１である。）から成る群より選択される、［８］記載の治療または予防方法。
［１３］炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が潰瘍性大腸炎である、［８］〜［１２］のいずれか一項記載の治療または予防方法。
［１４］炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病である、［８］〜［１２］のいずれか一項記載の治療または予防方法。【００１０】
［１５］炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療または予防するための医薬の製造における、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストの使用。
［１６］アペリンが、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３、アペリン−１２、およびそれらの改変体から成る群より選択される、［１５］記載の使用。
［１７］アペリンが［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３である、［１６］記載の使用。
［１８］アペリン受容体アゴニストが、低分子化合物、植物抽出物、またはアゴニスト抗体である、［１５］記載の使用。
［１９］アペリン受容体アゴニストが、ＴＯＤＤＬＥＲ／ＥＬＡＢＥＬＡ、Ｅ３３９−３Ｄ６、ＭＭ０７、（Ｓ）−Ｎ−（１−（ブチルアミノ）−５−メチル−１−オキソヘキサン−３−イル）−５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−イソブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チオフェン−２−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［２−フラン−２−イルメチル−１−（２−メチル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−メチル−３−｛［１−（（１Ｒ、２Ｒ）−２−メチル−シクロヘキシル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−シクロヘキシル−３−（５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）ペンタン酸、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、クロセチン、および下記式で表される化合物：
【化３】
2018101398.tif 000004
（式中、ＲはＬＲＢ（Lissamine Rhodamine B）またはＰＢ（Patent Blue）を表し、ｎは０または１である。）から成る群より選択される、［１５］記載の使用。
［２０］炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が潰瘍性大腸炎である、［１５］〜［１９］のいずれか一項記載の使用。
［２１］炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病である、［１５］〜［１９］のいずれか一項記載の使用。【００１１】
［２２］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療または予防に用いるための医薬組成物。
［２３］炎症性マクロファージが引き起こす疾患が、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、およびサルコイドーシスから成る群より選択される、［２２］記載の医薬組成物。
［２４］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを対象に投与する工程を含む、対象における炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療または予防方法。
［２５］炎症性マクロファージが引き起こす疾患が、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、およびサルコイドーシスから成る群より選択される、［２４］記載の治療または予防方法。
［２６］炎症性マクロファージが引き起こす疾患を治療または予防するための医薬の製造における、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストの使用。
［２７］炎症性マクロファージが引き起こす疾患が、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、およびサルコイドーシスから成る群より選択される、［２６］記載の使用。【００１２】
［２８］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、症状改善または予防に用いるための食品組成物。
［２９］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、症状改善または予防に用いるためのサプリメント。
［３０］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、整腸用、腸内環境改善用、腸内炎症抑制用もしくは腸内炎症予防用の食品組成物。
［３１］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、整腸用、腸内環境改善用、腸内炎症抑制用もしくは腸内炎症予防用のサプリメント。
［３２］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療、症状改善または予防に用いるための食品組成物。
［３３］炎症性マクロファージが引き起こす疾患が、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、およびサルコイドーシスから成る群より選択される、［３２］記載の食品組成物。
［３４］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療、症状改善または予防に用いるためのサプリメント。
［３５］炎症性マクロファージが引き起こす疾患が、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、およびサルコイドーシスから成る群より選択される、［３４］記載のサプリメント。【００１３】
［３６］アペリンまたはアペリン受容体アゴニストによって炎症性マクロファージおよび／またはT細胞の機能を制御する方法。
［３７］Ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを炎症性マクロファージおよび／またはT細胞に接触させる工程を含む、［３６］記載の方法。
［３８］炎症性マクロファージおよび／またはT細胞の機能の制御が、炎症を誘発するサイトカインおよび／またはケモカインの産生の抑制である、［３６］または［３７］に記載の方法。
［３９］炎症性マクロファージおよび／またはT細胞の機能の制御が、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５および／またはＣＸＣＬ１０の産生の抑制である、［３６］または［３７］に記載の方法。【００１４】
［４０］炎症を抑制する、［１］〜［７］のいずれか一項記載の医薬組成物。
［４１］炎症性マクロファージおよび／またはT細胞に作用する、［１］〜［７］および［４０］のいずれか一項記載の医薬組成物。
［４２］アペリン受容体アゴニストがＭＭ０７である、［１］〜［７］および［４０］〜［４１］のいずれか一項記載の医薬組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】Ｒａｇ２−／−マウスの腸管の粘膜固有層における（Ａ）Ｆ４／８０＋，ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ集団の（Ｂ）Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）４発現と、（Ｃ）ＴＬＲ４ｈｉｇｈおよびＴＬＲ４ｌｏｗマクロファージ群の培養上清のＩＬ−１０およびＴＮＦの産生について示した図である。＊ｐ＜０．０５。
【図２】Ｔ細胞移入腸炎モデルの大腸粘膜固有層における（Ａ）マクロファージのＴＬＲ４の発現、および（Ｂ）ＴＬＲ４ｌｏｗおよびＴＬＲ４ｈｉｇｈのマクロファージにおけるアペリン受容体（ＡＰＪ）の発現について示した図である。（Ａ）においては腸炎を発症していないＲａｇ２−／−マウスのマクロファージのＴＬＲ４の発現を対照としており、この発現を元にＴＬＲ４ｌｏｗおよびＴＬＲ４ｈｉｇｈ集団を分画した。
【図３】Ｔ細胞移入腸炎モデルの大腸粘膜固有層から単離した炎症性マクロファージにおけるアペリン添加培養上清中のＩＬ−６、ＭＩＰ−２、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５およびＣＸＣＬ１０産生について示した図である。
【図４】Ｔ細胞移入腸炎モデルにおけるアペリン投与群と対照群の生存率について示した図である。
【図５】Ｔ細胞移入腸炎モデルにおけるアペリン投与群と対照群の代表的な大腸病理学的所見および病理スコアについて示した図である。＊ｐ＜０．０５。
【図６】Ｔ細胞移入腸炎モデルのアペリン欠損による体重減少率（Ａ）およびクリニカルスコア（Ｂ）への影響について示した図である。
【図７】Ｔ細胞移入腸炎モデルのアペリン欠損による生存率への影響について示した図である。
【図８】Ｔ細胞移入腸炎モデルのアペリン欠損による代表的な大腸病理学的所見および病理スコアへの影響について示した図である。＊ｐ＜０．０１。
【図９】ＤＳＳ腸炎モデルのアペリン欠損による体重曲線への影響について示した図である。
【図１０】ＤＳＳ腸炎モデルのアペリン欠損による大腸粘膜内マクロファージＴＬＲ４発現への影響について示した図である。
【図１１】Ｔ細胞移入腸炎モデルのアペリン欠損による大腸粘膜マクロファージ数（Ａ）と、マクロファージのＴＬＲ４（Ｂ）、ＣＣＬ２（Ｃ）発現への影響について示した図である。＊ｐ＜０．０５。
【図１２】Ｔ細胞移入腸炎モデルのアペリン欠損による大腸粘膜内マクロファージのＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０産生への影響について示した図である。＊ｐ＜０．０５。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
上述のとおり、本発明者らは、アペリン−ＡＰＪ系の刺激により、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）および他の炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療が可能であることを見出した。以下に、本発明を詳細に説明する。
【００１７】
アペリン（ＡＰＬ）
アペリン−３６は、オーファン受容体であったＡＰＪの内因性リガンドとして、１９９８年にウシの胃において同定された３６アミノ酸から成る生理活性ペプチドである（Biochem. Biophys. Res. Commun., 251, 471 (1998)）。アペリンの遺伝子は、ヒト、イヌ、ウシ、ラット、マウス、アカゲザル、ゼブラフィッシュなどの多様な種で同定されており、７７アミノ酸のアペリンプレプロタンパク質（アペリン（１−７７）とも呼ばれる）をコードしている。アペリンおよびＡＰＪは、脳、腎臓、心臓、肺、脂肪組織、胃腸管、乳腺などに存在が見られる。アペリンは、心収縮性、血圧、食欲、飲水行動、視床下部−下垂体−副腎系、胃酸分泌、インシュリンおよび胆嚢収縮物質（ＣＣＫ）の分泌に対する影響など、広範な活性を有している。アペリンの塩基配列およびアミノ酸配列は既知であり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋなどのデータベースから入手することができる：
【００１８】
APLN apelin [ Homo sapiens (human) ] 
Gene ID: 8862, NM_017413.4, NP_059109.3
【００１９】
アペリンプレプロタンパク質のプロセッシングにおいては、アペリンプレプロタンパク質の１位〜２２位の残基に対応するシグナルペプチドが切断され、その結果、５５アミノ酸（２３位〜７７位の残基）のアペリンプロタンパク質（アペリン（２３−７７）とも呼ばれる）が生じる。アペリン−３６（アペリン−３６（４２−７７）とも呼ばれる）は、５５アミノ酸長のアペリン（２３−７７）プロタンパク質から得られる３６アミノ酸長のペプチドであり（Tatemoto et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 251:471-476, 1998）、プレプロタンパク質の４２位〜７７位の残基に対応している。アペリン−１７とアペリン−１３は、アペリンのカルボキシル（Ｃ）端末側に由来している。アペリン−１７は、アペリンプロタンパク質の６１位〜７７位の残基に対応しており、アペリン−１７（６１−７７）とも呼ばれる。アペリン−１３は、アペリンプロタンパク質の６５位〜７７位の残基に対応しており、アペリン−１３（６５−７７）とも呼ばれる。さらに、アペリン−１３のＮ端のグルタミン（Ｇｌｎ）をピログルタミン酸（Ｐｙｒ）に置換した［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３はアペリン−１３と同等、アペリン−３６より約６０倍強い活性を持つことが判明している（Tatemoto, K. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 251:471-476, 1998およびZhang et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry, Vol.22, 1 June 2014, pp.2992-2997）。また、アペリン−１２も存在が知られている。本明細書においては、ＡＰＪ受容体のアゴニスト活性を有するアペリン様ペプチドを総称してアペリンと呼び、よって、アペリンには、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３、アペリン−１２、ならびにそれらの改変体が含まれる。アペリンの改変体（以下、修飾体と呼ぶ場合もある）は、例えば、野生型のアペリンペプチドに１から数個（例えば、全体の２５％以内）のアミノ酸の置換、欠失または挿入を導入することにより得ることができる。また、アペリンの改変体は、例えば、アペリンペプチドのＮ末端をアミド化もしくはアセチル化することにより、あるいはアペリンペプチドをＰＥＧ化することにより得ることができる。改変体の作製は、当業者に公知の任意の方法によって行うことができる。
【００２０】
アペリンおよびそのアペリンの改変体（修飾体）については、例えば、ＷＯ９９／３３９７６、ＷＯ００／１８７９３、ＷＯ０１／７０７６９、およびZhang et al, Bioorganic & Medicinal Chemistry, Vol.22, 1 June 2014, pp.2992-2997に開示がある。これらの文献に記載の内容は、引用によって本明細書中に明示的に取り込まれる。本発明において使用するアペリンとして、これらの文献に開示のアペリン修飾体を適当に選択して使用することができる。
【００２１】
アペリン受容体（ＡＰＪ）
アペリン受容体（ＡＰＪ）は、オーファンＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）として１９９３年にクローニングされた。アペリン受容体（ＡＰＪ）は、７膜貫通型Ｇタンパク質受容体ファミリーのメンバーであり、構造的にアンジオテンシンＩＩタイプＩ受容体（ＡＴＩＲ）と関連している。しかしながら、アンギオテンシン受容体に対する既知のペプチド作用性リガンドは、アンジオテンシンを含め、いずれもＡＰＪを活性化しない。ＡＰＪ受容体遺伝子はヒトの第１１番染色体に存在し、その膜貫通領域はアンジオテンシン（ＡＴ１）受容体と４０〜５０％のホモロジーを有する（Gene, 136, 355 (1993)）。そのｍＲＮＡは中枢神経系や血中の単核細胞、肺、心臓、胎盤などいくつかの組織において発現している。アペリン受容体（ＡＰＪ）の塩基配列およびアミノ酸配列は既知であり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋなどのデータベースから入手することができる：
【００２２】
APLNR apelin receptor [ Homo sapiens (human) ]
Gene ID: 187, NM_005161.4, NP_005152.1
【００２３】
アペリン−３６（４２−７７）、アペリン−１７（６１−７７）、およびアペリン−１３（６５−７７）はすべて、Ｃ末端にフェニルアラニン残基を有しており、ＡＰＪ受容体に結合することができる。アペリン−１３（６５−７７）のペプチドアンタゴニスト版である（Ａｌａ−１３）アペリン−１３では、Ｃ末端のフェニルアラニンがアラニンに置換されている（Lee et al., Endocrinology, 146:231-236, 2005）。（Ａｌａ−１３）−アペリン−１３はＡＰＪ受容体に結合するが、ＡＰＪ受容体の活性は刺激しない。
【００２４】
ＡＰＪはアンジオテンシンＩＩ受容体ＡＴ１とヘテロダイマーを形成することでアンジオテンシンＩＩの血圧上昇作用を阻害する内因性の拮抗システムとして機能していることが示されている。その他、アペリン−ＡＰＪシステムは，血管内皮細胞に対し強力な増殖作用を示し、様々な生理的な血管形成および，病態時の血管新生に関与している。
【００２５】
アペリン受容体アゴニスト
アペリン受容体（ＡＰＪ）のアゴニストは、典型的には、アペリンペプチドならびにその改変体であるが、アペリン受容体の活性を刺激できるものであれば、アゴニスト抗体や低分子などの他の物質であっても良い。
【００２６】
例えば、ＷＯ２０１５１８８０７３Ａ１やＷＯ２０１４０４４７３８Ａ１には、イミダゾール骨格を元にしたアペリン受容体（ＡＰＪ）のアゴニスト化合物（例えば、（Ｓ）−Ｎ−（１−（ブチルアミノ）−５−メチル−１−オキソヘキサン−３−イル）−５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−イソブチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チオフェン−２−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［２−フラン−２−イルメチル−１−（２−メチル−シクロヘキシル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸、（Ｓ）−５−メチル−３−｛［１−（（１Ｒ、２Ｒ）−２−メチル−シクロヘキシル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−ヘキサン酸、（Ｓ）−３−｛［１−（１−エチル−プロピル）−２−チアゾール−５−イルメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−アミノ｝−５−メチル−ヘキサン酸）が開示されている。また、Iturriozらは、多環式フルオロフォアを含む非ペプチド性ＡＰＪアゴニスト（Ｅ３３９−３Ｄ６）を開示している（Iturrioz et al, FASEB J. 2010; 24:1506-1517）。Margatheらは、Ｅ３３９−３Ｄ６から誘導体を合成し、レセプターのインターナライゼーション活性よりｃＡＭＰ産生阻害活性が強いバイアスドアゴニストを見出した（Margathe et al., J. Med. Chem. 2014:2908-2919）。このような化合物としては、例えば、下記のものが含まれる：
【化４】
2018101398.tif 000005
（式中、ＲはＬＲＢ（Lissamine Rhodamine B）またはＰＢ（Patent Blue）を表し、ｎは０または１である。）
アペリンを長期的に作用させるとデセンシタイゼーションが起こるが、バイアスドアゴニストはデセンシタイゼーションが起こらないため、医薬品として有用である。BrameらもアペリンのサイクリックペプチドＭＭ０７がバイアスドアゴニストであることも報告している（Brame et al. Hypertension 2015: 65, 834-840）。本明細書においては、アペリンバイアスドアゴニストもアペリンアゴニストに含まれる。ＷＯ２０１５１４７６４１は、アペリンのサイクリックペプチドとその使用について開示している。ＷＯ２０１２１２５４０８は、ＰＥＧ化したアペリンを開示している。ＥＰ１９０３０５２とＵＳ２０１４／００９４４５０もＡＰＪ受容体リガンドを開示している。アペリンアゴニストに関する総論としては、Narayanan et al, J Med Chem. 2015 Oct 22-58(20):791327があり、さまざまな化合物が記述されている。Narayanan et al, Bioorg. Med Chem. 2016 24; 3758-3770にもＡＰＪ受容体アゴニストが開示されている（例えば、（Ｓ）−５−シクロヘキシル−３−（５−（２，６−ジメトキシフェニル）−１−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド）ペンタン酸）また、アペリンとは異なる別の内因性リガンドとして、ＴＯＤＤＬＥＲ／ＥＬＡＢＥＬＡが同定されている（Wang et al, Sci. Rep. 2015, 5, 8170）。これらの公知の化合物を適宜選択し、必要に応じて改変を加えて、アペリン受容体アゴニストとして使用することができる。ＷＯ２０１４０９９９８４には、野生型アペリン−１３と比較して増加した安定性を有するＡＰＪアゴニストであって、アゴニストのＮ末端またはＣ末端で半減期を延長する基によって修飾され、かつ少なくとも１個のアミノ酸が、非標準アミノ酸によって置換されている、ＡＰＪアゴニストが開示されている。半減期を延長する基としては、ＰＥＧ、Ｆｃドメイン、ＩｇＧ、ＨＳＡ、ＰＥ、Ａｂ、ペプチド、脂質、ポリ（Ｏ−２−ヒドロキシエチル）デンプン（ＨＥＳ）、およびナノ構造体などが挙げられる。本発明においては、これらのアペリン受容体アゴニストも使用されうる。
【００２７】
さらに、ＷＯ２０１３／１４６８９１は、アペリンと同様の機能を有する薬剤として、マツエキス、サフランエキス、キナエキスおよびコンフリーエキス、ならびにサフランエキスの主成分であるクロセチンを教示している。これらの植物由来エキス（抽出物）は、当業者に公知の任意の方法により得ることができる。クロセチンは、クチナシの果実にも含まれていることが知られている。
【００２８】
アゴニスト抗体の取得は、当業者に公知の任意の方法により行うことができる。モノクローナル抗体の作製方法は、当業者に公知であり、抗ＡＰＪモノクローナル抗体の中からアゴニスト活性を有するものを選別することにより、アゴニスト抗体を得ることができる。抗体の由来する動物は、特に限定されず、ヒト抗体、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヒツジ抗体などを使用できる。ヒトに対して用いる場合、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体のいずれであっても使用することができるが、ヒト抗体であることが好ましい。ＡＰＪに対するアゴニスト活性を有する抗体であれば、全長である必要はなく、抗体の断片であっても使用することができる。よって、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ＶＨ、ＶＬ、Ｆａｂ−Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ミニボディ、ナノボディなどもアゴニスト抗体として用いられうる。また、抗体または抗体の断片は、ファージディスプレイ法等によるスクリーニングによって同定されたペプチド配列を含むものであってもよい。さらに、核酸により構成されるアプタマーも通常の抗体と同様に使用できる。抗体は、低分子との複合体を形成していてもよい。
【００２９】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、結腸と小腸に炎症をおこす慢性疾患の総称である。クローン病（ＣＤ）と潰瘍性大腸炎（ＵＣ）が、主要な型の炎症性腸疾患であるが、広義には腸結核やベーチェット病なども含まれる。クローン病は小腸と大腸に症状が見られるだけではなく、口、食道、胃、および肛門においても症状が見られるが、潰瘍性大腸炎は主として結腸と直腸において症状が見られる。
【００３０】
クローン病（ＣＤ）
クローン病は、口から肛門まで胃腸管のあらゆる部分で症状が見られ得る炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の一種である。その徴候および症状には、腹痛、下痢、発熱、および体重減少などが含まれる。貧血、発疹、関節炎、目の充血、疲労感などの他の合併症が、胃腸管外で生じることがある。また、腸閉塞症が起こることもまれでなく、この病気の患者は腸癌のリスクが高くなっている。クローン病の治療剤としては、５−アミノサリチル酸（メサラジン）、副腎皮質ステロイド、抗ＴＮＦ受容体拮抗薬などが使用されている。
【００３１】
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）
潰瘍性大腸炎（ＵＣ）は、結腸において炎症と潰瘍を引き起こす慢性の再発型の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。症状は軽度から重度まで様々であり、通常、若年成人において疾患発症が見られる。その経過は予測できないが、一生涯の病気となる可能性が高い。活動性の疾患の顕著な症状は、血液の混ざった下痢である。ＵＣには、別の方のＩＢＤであるクローン病と共通する部分が多くがあるが、クローン病とは異なり、ＵＣでは胃腸管全体ではなく、結腸と直腸だけで症状が見られる。ＵＣは間欠性の疾患であり、症状が悪化する時期と比較的症状のない時期とが交互に生じる。ＵＣの症状は時折、自然に消失することもあるが、通常は寛解に至るまでに治療を要する。潰瘍性大腸炎の治療剤としては、５−アミノサリチル酸（メサラジン）、副腎皮質ステロイド、免疫抑制剤、抗ＴＮＦ受容体拮抗薬などが使用されている。
【００３２】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の動物モデル
炎症性腸疾患の研究には化学的・免疫学的機序による大腸炎モデル、遺伝子改変等による自然発症大腸炎モデルに至るまで、多種多様なモデルが考案されている。化学物質によって誘導されるモデルとしては、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）をはじめ、４−エトキシメチレン−２−フェニルオキサゾール−５−オン（オキサゾロン、oxazolone）や２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘導腸炎モデルが利用されている（たとえば、非特許文献１０ないし１２参照）。またエフェクターＴ細胞が誘導する慢性腸炎モデルとして、ナイーブＴ細胞をＲａｇ欠損マウスやＳＣＩＤマウス等の免疫不全マウスに移入する方法（Ｔ細胞移入腸炎モデル）が知られてれている（非特許文献１３）。また慢性腸炎を自然発症するモデルとしてはＩＬ−７トランスジェニック（Ｔｇ）マウス（非特許文献１４）やＩＬ−１０欠損（ＫＯ）マウス（非特許文献１５）等様々なものが知られている。
【００３３】
炎症性マクロファージが引き起こす疾患
マクロファージは、組織常在性のマクロファージと単球由来のマクロファージに大別することができる。発明者らは、マウス炎症性腸疾患（ＩＢＤ）モデルの粘膜固有層において、単球由来の炎症性マクロファージが増加していること、また、炎症性マクロファージでは、ＡＰＪの発現量が常在性のマクロファージに比べて高いことを見出した。ＡＰＪ−アペリン刺激によって炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の動物モデルの症状が抑制される。これらのデータは、炎症性マクロファージを少なくとも原因の一つとする疾患をアペリンの投与によって治療しうることを示唆している。
【００３４】
よって、本発明の態様の一つは、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療に用いるための医薬組成物に関する。炎症性マクロファージが引き起こす疾患としては、例えば、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、サルコイドーシスが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００３５】
医薬組成物
本発明の一つの態様は、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬組成物に関する。アペリンは、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、アペリン−１２、または、それらの改変体でありうるが、好ましくは［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３である。アペリン受容体アゴニストは、低分子化合物、植物抽出物、またはアゴニスト抗体でありうる。また、アペリン受容体アゴニストとしては、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、またはクロセチンも使用されうる。医薬組成物１００重量％中のアペリンまたはアペリン受容体アゴニストの含有割合は０．００１〜９９．９９重量％の範囲において適宜設定することができる。
【００３６】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、潰瘍性大腸炎またはクローン病でありうる。また、本発明の別の態様は、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療に用いるための医薬組成物に関する。炎症性マクロファージが引き起こす疾患は、膠原病、より具体的には、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、またはサルコイドーシスでありうる。
【００３７】
本発明に係る医薬組成物中のその他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬的に許容され得る担体または添加剤などが挙げられる。担体または添加剤に特に制限はなく、例えば、剤形等に応じて適宜選択することができ、任意の担体、希釈剤、賦形剤、懸濁剤、潤滑剤、アジュバント、媒体、送達システム、乳化剤、錠剤分解物質、吸収剤、保存剤、界面活性剤、着色剤、香料、または甘味料を含みうる。本発明に係る医薬組成物における含有量についても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３８】
本発明に係る医薬組成物の剤形としては、特に制限はなく、所望の投与方法に応じて適宜選択することができ、例えば、注射剤（溶液、懸濁液、用事溶解用固形剤等）、固形剤（錠剤、カプセル剤、座剤、粉末等）などが挙げられる。注射剤としては、例えば、組成物中に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下用、筋肉内用、静脈内用等の注射剤を製造することができる。ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。局所麻酔剤としては、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。固形剤には、腸溶性コーティングが施されていてもよい。
【００３９】
本発明に係る医薬組成物の投与方法としては、特に制限はなく、例えば、医薬組成物の剤形、患者の状態等に応じて、局所投与、全身投与のいずれかを選択することができる。投与は、例えば、経静脈投与、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、経腸投与、注腸投与、経管栄養などにより行うことができる。なお、経腸投与とは、肛門を介した投与には限られず、例えば胃瘻等の様に個体外からチューブ等を消化管に挿入して、それを経由した投与も含まれる。挿入位置は腸に限らず、食道、胃、小腸、大腸等が挙げられる。
【００４０】
本発明に係る医薬組成物の投与対象としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウシ、ブタ、サル、イヌ、ネコなどが挙げられるが、好ましくはヒト、特にＩＢＤを発症しているヒトの患者である。また、本発明に係る医薬組成物は、ＩＢＤの発症の予防を目的として投与してもよく、特に再発の予防を目的とすることができる。
【００４１】
本発明に係る医薬組成物の投与量としては、特に制限はなく、投与形態や、投与対象の年齢、体重、所望の効果の程度等に応じて適宜選択することができる。アペリンの投与量は、例えば、１日あたり１００〜１００００００ｎｍｏｌ、好ましくは、１５０〜１０００００ｎｍｏｌとし、投与頻度は、例えば、１月あたり１〜１００回とすることができる。
【００４２】
本発明に係る医薬組成物の投与時期としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上記疾患に感受性の患者に対して予防的に投与されてもよいし、症状を呈する患者に治療的に投与されてもよい。また、投与回数としても、特に制限はなく、投与対象の年齢、体重、所望の効果の程度等に応じて、適宜選択することができる。
【００４３】
治療方法および医薬の製造における使用
本発明の一態様は、患者における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防方法に関する。このような方法は、対象に対してアペリンまたはアペリン受容体アゴニストを投与する工程を含む。アペリンは、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、アペリン−１２、または、それらの改変体でありうるが、好ましくは［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３である。アペリン受容体アゴニストは、低分子化合物、植物抽出物、またはアゴニスト抗体でありうる。また、アペリン受容体アゴニストとしては、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、またはクロセチンも使用されうる。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、潰瘍性大腸炎またはクローン病でありうる。また、本発明の別の態様は、患者における炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療または予防方法に関する。このような方法は、対象に対してアペリンまたはアペリン受容体アゴニストを投与する工程を含む。炎症性マクロファージが引き起こす疾患は、膠原病、より具体的には、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、またはサルコイドーシスでありうる。
【００４４】
本発明の一態様は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬の製造における、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストの使用に関する。アペリンは、アペリン−３６、アペリン−１７、アペリン−１３、アペリン−１２、または、それらの改変体でありうるが、好ましくは［Ｐｙｒ１］−アペリン−１３である。アペリン受容体アゴニストは、低分子化合物、植物抽出物、またはアゴニスト抗体でありうる。また、アペリン受容体アゴニストとしては、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、またはクロセチンも使用されうる。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、潰瘍性大腸炎またはクローン病でありうる。また、本発明の別の態様は、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療または予防に用いるための医薬の製造における、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストの使用に関する。炎症性マクロファージが引き起こす疾患は、膠原病、より具体的には、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、またはサルコイドーシスでありうる。
【００４５】
食品組成物およびサプリメント
本発明の一つの態様は、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、食品組成物またはサプリメントに関し、特に、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療、症状改善または予防に用いるための食品組成物またはサプリメント、あるいは整腸用、腸内環境改善用、腸内炎症抑制用もしくは腸内炎症予防用の食品組成物またはサプリメント（栄養補助食品、健康補助食品とも言う）に関する。また、本発明の一つの態様は、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを含有する、炎症性マクロファージが引き起こす疾患の治療、症状改善または予防に用いるための食品組成物またはサプリメントにも関する。炎症性マクロファージが引き起こす疾患は、膠原病、より具体的には、全身性エリテマトーデス、リウマチ熱、強皮症、皮膚筋炎および多発性筋炎、結節性多発性動脈周囲炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、側頭動脈炎、好酸球性筋膜炎、成人スティル病、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ベーチェット病、またはサルコイドーシスでありうる。アペリンは当初、ウシの胃から分離された。よって、動物の臓器（例えば、腎臓、心臓、肺、脂肪組織、胃腸管）の抽出物等をアペリンを含有する食品組成物またはサプリメントとして利用しうる。アペリン受容体アゴニストとしては、例えば、マツ抽出物、サフラン抽出物、キナ抽出物、コンフリー抽出物、クチナシ抽出物、クロセチンなどが使用されうるが、これらに限定はされない。
【００４６】
食品組成物としては、一般の食品の他、条件付き特定保健用食品を含む特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品等を挙げることができる。食品組成物の具体的な形態は特に限定はされないが、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料、乳飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；そば、うどん、はるさめ、中華麺、即席麺等の麺類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、ふりかけ、漬物、パン、シリアル等を例示できる。また、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品等の場合であれば、粉末、顆粒、カプセル、トローチ、タブレット、シロップ等の形態が挙げられる。本発明に係るサプリメントは、錠剤、粉末、液体などの任意の形態をとりうる。また、サプリメントは、例えば、１日１〜３回、食前、食中、食後に経口摂取するものとして調製されうる。
【００４７】
炎症性マクロファージの機能制御
本発明の一つの態様は、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストによって炎症性マクロファージの機能を制御する方法に関する。このような方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを炎症性マクロファージに接触させる工程を含むことができる。ここで、炎症性マクロファージの機能の制御は、例えば、炎症を誘発するサイトカインおよび／またはケモカインの産生の抑制であり、好ましくは、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５および／またはＣＸＣＬ１０の産生の抑制である。このような炎症性マクロファージの機能の制御は、炎症性マクロファージの関与する疾患の治療および／または予防において有用となりうる。
【００４８】
以下に、実施例を示して本発明を具体的に説明するが、これらにより本発明は何ら制限を受けるものではない。
【実施例】
【００４９】
＜例１：実験方法＞
（１）マウス
野生型（ＷＴ）マウスとしてＣ５７ＢＬ／６（日本クレア社）を、Ｒａｇ２欠損（Ｒａｇ２−／−）マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ社）、アペリン欠損（ＡＰＬ−／−）マウス（ウィーン、ＩＭＢＡより供与）を細胞の調製、およびＤＳＳ腸炎やＴ細胞移入腸炎モデルに用いた。また、Ｒａｇ２−／−およびＡＰＬ−／−マウスの交雑によりアペリン／Ｒａｇ２二重欠損（ＡＰＬ−／−Ｒａｇ２−／−）マウスを作成した。実施例における実験には８〜１２週齢の雌マウスを用いた。【００５０】
（２）抗体および細胞の解析
細胞の染色には抗Ｆ４／８０抗体（ＢＭ８：eBioscience）、抗ＣＤ１１ｂ抗体（Ｍ１／７０：BD BiosciencesまたはeBioscience）、抗ＣＤ１１ｃ抗体（ＨＬ３：BD Biosciences）、抗ＴＬＲ４抗体（ＭＴＳ５１０：ａｂｃａｍまたはBioLegend）、抗ＣＤ４抗体（ＲＭ４−５：BD Biosciences、eBioscience、またはBioLegend）、抗ＣＤ６２Ｌ抗体（ＭＥＬ−１４：BD Biosciences、eBioscienceまたはBioLegend）、抗ＣＤ４４抗体（ＩＭ７：BD BiosciencesまたはBioLegend）、抗アペリン受容体（ＡＰＪ）抗体（Ｈ−３００：Santa Cruz）、抗ＣＣＲ２抗体（４７５３０１：R&D Systems）を使用し、フローサイトメトリー解析（ＦＡＣＳ）にはＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（BD Biosciences）またはＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（BD Biosciences）、ＦＡＣＳ法による細胞の単離にはＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩ（BD Biosciences）を、解析ソフトウェアには必要に応じてＣｅｌｌ  Ｑｕｅｓｔ（BD Biosciences）、ＦＡＣＳ  Ｄｉｖａ（BD Biosciences）、ＦｌｏｗＪｏ（TreeStar）を用いた。【００５１】
（３）Ｔ細胞移入腸炎モデルの作製
Ｔ細胞移入腸炎モデルの作製はNagaishi et al（Takashi Nagaishi et al. SHP1 Phosphatase-Dependent T Cell Inhibition by CEACAM1 Adhesion Molecule Isoforms. Immunity. 2006 Nov; 25(5):769-81.）に記載の方法に従って行った。すなわち、ＷＴマウスから脾細胞を回収し、ＡＣＫバッファーを用いて溶血後、Ｐａｎ  Ｔ  ＣＥＬＬアイソレーションキットＩＩ（Miltenyi Biotec）およびＣＤ８ マイクロビーズビーズ（Miltenyi Biotec）を用いてＣＤ４陽性のＴ細胞を単離し、２％ＦＣＳ添加ＰＢＳ緩衝液中で抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ４４抗体および抗ＣＤ６２Ｌ抗体で染色した。これらの細胞浮遊液からＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩを用いて、ＣＤ４＋ＣＤ４４−ＣＤ６２Ｌ＋のナイーブＴ細胞分画を単離した。単離したナイーブＴ細胞２×１０５個をＰＢＳに浮遊させ、Ｒａｇ２−／−あるいはＡＰＬ−／−Ｒａｇ２−／−マウスの腹腔内に移入した。これらのマウスは移入後６週から８週で腸炎を発症することが知られている。【００５２】
（４）腸管粘膜固有層からのマクロファージの単離および解析
腸管粘膜固有層からの単離は、非特許文献１１に記載の方法に従って行った。すなわち、安楽死させたＲａｇ２欠損マウスより大腸を回収し、糞便を取り除いたのち、１ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ：シグマ）、５ｍＭ  ＥＤＴＡ（ナカライテスク）および１０％ＦＣＳを含むＨＢＳＳに浸漬して３７℃で処理した。上清以外の組織をペレットとして回収しＰＢＳで洗浄後、１０％ＦＣＳ、０．２ｍｇ／ｍｌ  collagenase type IV（シグマ）、および１０μｇ／ｍｌ  ＤＮａｓｅＩ（シグマ）を含むＨＢＳＳに浸漬し酵素処理後、上清を回収し４０μｍセルストレーナーで濾過後、再度遠心しペレットを回収した。これをＰｅｒｃｏｌｌ（ＧＥ）を用いて比重遠心法によって白血球分画を回収した。回収した細胞を抗Ｆ４／８０抗体、抗ＣＤ１１ｂ抗体、抗ＣＤ１１ｃ抗体で染色し、ＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩを用いてＦ４／８０＋  ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１１ｃ−のマクロファージ分画を単離して培養した。【００５３】
（５）サイトカイン・ケモカインの測定
マウス腸管の粘膜固有層より単離したマクロファージ及びＴ細胞は、１％非必須アミノ酸、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、必要に応じて０〜１０００ｎＭの合成アペリン−１３（ＡＰＬ−１３）を添加し３７℃で４８時間培養した。この培養上清を回収し、ＩＬ−６（BD Biosciences）、ＭＩＰ−２（ＢＤ）、ＴＮＦ（BD Biosciences）、ＣＣＬ２（BD Biosciences）、ＣＣＬ５（R&D Systems）、ＣＸＣＬ１０（R&D Systems）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２等、各種サイトカイン・ケモカイン濃度をＥＬＩＳＡ法で測定した。【００５４】
＜例２：粘膜固有層における炎症性マクロファージの表現系＞
Ｒａｇ２−／−マウスの大腸粘膜固有層から細胞を回収し、Ｆ４／８０＋  ＣＤ１１ｂ＋  ＣＤ１１ｃ−のマクロファージ集団を解析したところ（図１Ａ）、炎症性マクロファージのマーカーであるＴＬＲ４の発現が高い群（ＴＬＲ４ｈｉｇｈ）と低い群（ＴＬＲ４ｌｏｗ）が存在した（図１Ｂ）。ＴＬＲ４ｈｉｇｈマクロファージ群とＴＬＲ４ｌｏｗマクロファージ群をＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩを用いてそれぞれ単離し、４８時間培養した。この培養上清中のＩＬ−１０およびＴＮＦの産生をＥＬＩＳＡ法により測定した。その結果、ＴＬＲ４ｈｉｇｈマクロファージ分画の培養上清においては、ＴＬＲ４ｌｏｗマクロファージの培養上清に比べてＩＬ−１０の産生が有意に低く、ＴＮＦの産生が高かった（図１Ｃ）。したがってＴＬＲ４ｈｉｇｈ分画は炎症性（Ｍ１）、ＴＬＲ４ｌｏｗ分画は非炎症性（Ｍ２）マクロファージを反映していると示唆された。【００５５】
＜例３：ＩＢＤモデルの腸管粘膜マクロファージにおけるアペリン受容体の発現＞
ＷＴマウスの脾臓由来のナイーブＴ細胞をＦＡＣＳ法により単離し、Ｒａｇ２−／−マウスの腹腔内に移入した。これをＴ細胞移入群とし、Ｔ細胞を移入せずに溶媒（ＰＢＳ）のみを腹腔内に投与したものを対照群とした。対照群およびＴ細胞移入群のマウスにおいて、細胞移入後６週から８週後に大腸粘膜固有層の細胞を回収し、上記例２と同様にマクロファージ集団のＴＬＲ４発現を解析した。その結果、腸炎の発症していない対照群に比べて、腸炎を発症しているＴ細胞移入群のマクロファージではＴＬＲ４ｈｉｇｈ炎症性（Ｍ１）マクロファージの割合が上昇していることを確認した（図２Ａ）。【００５６】
さらに、対照群におけるＭ１／Ｍ２各マクロファージ分画のＴＬＲ４発現レベルを指標としてＴ細胞移入群のマクロファージ分画を同定し、各分画のアペリン受容体（ＡＰＪ）の発現をＦＡＣＳ法により解析した。その結果、Ｔ細胞移入群においてＭ２分画に比してＭ１分画ではＡＰＪの発現が相対的に亢進していることを確認した（図２Ｂ）。この結果より、ＩＢＤモデルの病変局所における炎症性マクロファージにはＡＰＪが高発現していることが示唆された。【００５７】
＜例４：炎症性マクロファージに対するアペリン受容体アゴニストの作用＞
上記例１（３）に記載の方法により誘導したＴ細胞移入腸炎モデルの大腸粘膜固有層マクロファージをＦＡＣＳＡｒｉａ  ＩＩを用いて単離し、０〜１０００ｎＭのＡＰＬ−１３存在下で４８時間培養し、その培養上清中のＩＬ−６、ＭＩＰ−２、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０などのサイトカイン・ケモカイン産生をＥＬＩＳＡ法により測定した。その結果、ＩＬ−６、ＭＩＰ−２などの産生には影響はないものの、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０の産生はＡＰＬ−１３の添加濃度依存的に抑制された（図３）。この結果から、炎症局所のマクロファージにＡＰＬ−１３などのアペリン受容体アゴニストを作用させることで、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０など炎症を誘発するケモカイン・サイトカインの産生を抑制できることが確認された。【００５８】
なお、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）は乾癬、関節リウマチおよびアテローム性動脈硬化などの単球の浸潤が発症に関わる疾患との関連が知られており、主に単球、メモリーＴ細胞、樹状細胞および好塩基球などの白血球に対して走化活性を持ち、炎症局所に白血球を誘引させる作用を持つ。ＣＣＬ２の機能に関する参考文献を以下に挙げる：
−  Xia M, Sui Z (Mar 2009). "Recent developments in CCR2 antagonists". Expert Opinion on Therapeutic Patents. 19 (3): 295-303. doi:10.1517/13543770902755129
−  Xu LL, Warren MK, Rose WL, Gong W, Wang JM (Sep 1996). "Human recombinant monocyte chemotactic protein and other C-C chemokines bind and induce directional migration of dendritic cells in vitro". Journal of Leukocyte Biology. 60 (3): 365-71. PMID 8830793.
−  Mehrabian M, Sparkes RS, Mohandas T, Fogelman AM, Lusis AJ (Jan 1991). "Localization of monocyte chemotactic protein-1 gene (SCYA2) to human chromosome 17q11.2-q21.1". Genomics. 9 (1): 200-3. doi:10.1016/0888-7543(91)90239-B. PMID 2004761.【００５９】
また、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）は関節リウマチなどの疾患との関連が知られており、Ｔ細胞、好酸球、および好塩基球などの白血球に対して走化活性を持ち、炎症局所に白血球を誘引させる作用を持つことが知られている。ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）は好中球の浸潤によって生じる乾癬において発見されたケモカインであり、Ｔ細胞の内皮細胞への接着を亢進する作用を持ち、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞の炎症局所への遊走に寄与する。ＣＸＣＬ１０は遅延型過敏反応においても重要であると考えられており、最近ではＴＬＲ４と結合し糖尿病における細胞障害にも関連していることが報告されている。【００６０】
＜例５：ＩＢＤモデル動物におけるアペリン受容体アゴニストの投与効果＞
上記例１（３）に記載の方法により誘導したＴ細胞移入腸炎モデルにおいて、Ｔ細胞移入の１週間前から移入後８週間までの９週間にわたって、マウス１匹あたり７．５μｇのＡＰＬ−１３または対照溶液（ＰＢＳ）を週３回腹腔内投与し、それぞれアペリン投与群、対照群とした。その結果、移入後８週における対照群のマウスの生存率が約６０％であったのに比べて、アペリン投与群においては約９０％と改善が認められた（図４）。【００６１】
さらに移入後８週のマウスの大腸を回収し、固定、薄切の後、ヘマトキシリンエオジン染色を行った。そして上皮傷害、腸管壁肥厚、リンパ球浸潤、顆粒球浸潤などの評価項目に関して病理組織学的解析を行った。その結果、アペリン投与群は対照群に比べて病理学的にも腸炎の改善傾向が認められた（図５）。この結果から、ＡＰＬ−１３などのアペリン受容体アゴニストはＩＢＤなどの炎症性疾患の治療に応用できる可能性が示された。【００６２】
上記例１（３）に記載の方法により誘導したＴ細胞移入腸炎モデルにおいて、Ｔ細胞移入の１週間前から移入後８週間までの９週間にわたって、マウス１匹あたり７．５μｇのＭＭ０７または対照溶液（ＰＢＳ）を週３回腹腔内投与し、それぞれＭＭ０７投与群、対照群とした。さらに移入後８週のマウスの大腸を回収し、Ｔ細胞を単離した後、上記例１（５）に記載の方法によりＴ細胞培養上清中の炎症性サイトカインであるＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＴＮＦ量をＥＬＩＳＡ法にて測定したところ、ＭＭ０７投与群から単離したＴ細胞の培養上清においては、対照群に比べてＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＴＮＦ産生が低かった。この結果からＭＭ０７投与によって腸炎モデルにおける炎症性サイトカインの抑制効果が示唆され、ＭＭ０７などのアペリン受容体アゴニストにおいてもＩＢＤなどの炎症性疾患の治療に応用できる可能性が示された。【００６３】
＜例６：アペリン欠損マウスにおけるＩＢＤの増悪効果＞
ＩＢＤモデルにおけるアペリンの効果をさらに調べるため、アペリン欠損（ＡＰＬ−／−）マウスを用いて解析を行った。ＡＰＬ−／−  Ｒａｇ２−／−あるいはＲａｇ２−／−マウスに、上記例１（３）に記載の方法によりＴ細胞移入腸炎モデルを誘導した。その結果、ＡＰＬ−／−ではＲａｇ２−／−に比べて細胞移入後５、６週での体重減少の増悪（図６Ａ）、下痢・血便・亀背・皮膚炎などの臨床症状の増悪（図６Ｂ）、生存率の減少（図７）、病理学的所見の悪化（図８）が確認された。【００６４】
また上記モデルとは別に、ＤＳＳ腸炎モデルによるＡＰＬ−／−マウスの評価も行った。実際には、ＷＴあるいはＡＰＬ−／−マウスに２％のＤＳＳ溶液を自由飲水で５日間投与することで大腸の炎症を誘導した後、通常の飲水に置換し、腸炎の評価を行った。その結果、ＡＰＬ−／−ではＷＴマウスに比べて有意に体重減少が悪化していた（図９）。さらに、通常飲水置換後８日のＷＴあるいはＡＰＬ−／−マウスから、上記例１（４）に記載の方法で腸管粘膜固有層に浸潤しているマクロファージを単離しＴＬＲ４の発現を比較した。その結果、ＷＴに比べてＡＰＬ−／−マウスの大腸マクロファージにおいてＴＬＲ４の発現が亢進していた（図１０）。【００６５】
＜例７：アペリン欠損マウスの腸管粘膜固有層における炎症性マクロファージの動態解析＞
ＡＰＬ−／−Ｒａｇ２−／−およびＲａｇ２−／−マウスに上記例１（３）に記載の方法によりＴ細胞移入腸炎を誘導した後、上記例１（４）に記載の方法で腸管粘膜固有層に浸潤しているマクロファージを単離し、その細胞数を比較したところ、Ｒａｇ２−／−と比べてＡＰＬ−／−Ｒａｇ２−／−マウスにおいて浸潤しているマクロファージの細胞数の有意な増加が認められた（図１１Ａ，Ｂ）。また、Ｒａｇ２−／−と比べてＡＰＬ−／−Ｒａｇ２−／−マウスの大腸粘膜マクロファージ上に発現するＴＬＲ４およびＣＣＬ２が亢進していた（図１１Ｃ，Ｄ）。【００６６】
さらに、Ｒａｇ２−／−とＡＰＬ−／−Ｒａｇ２−／−マウスの粘膜固有層よりマクロファージを単離し４８時間培養した上清において、ＴＮＦ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０の産生が有意に亢進していた（図１２）。これらの結果からも、アペリン受容体アゴニストは炎症性マクロファージに対し、その炎症誘発作用を抑制する働きがあることが明らかとなった。【００６７】
本明細書には、本発明の好ましい実施態様を示してあるが、そのような実施態様が単に例示の目的で提供されていることは、当業者には明らかであり、当業者であれば、本発明から逸脱することなく、様々な変形、変更、置換を加えることが可能であろう。本明細書に記載されている発明の様々な代替的実施形態が、本発明を実施する際に使用されうることが理解されるべきである。また、本明細書中において参照している特許および特許出願書類を含む、全ての刊行物に記載の内容は、その引用によって、本明細書中に明記された内容と同様に取り込まれていると解釈すべきである。
【産業上の利用可能性】
【００６８】
本発明者らは、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを用いて、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防が可能であることを明らかにした。また、アペリンまたはアペリン受容体アゴニストを用いて、炎症性マクロファージが引き起こす膠原病などの疾患も治療されうる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年5月18日(2018.5.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アペリン−１３またはＭＭ０７を含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬組成物。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
（削除）
【請求項６】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が潰瘍性大腸炎である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項８】
炎症を抑制する、請求項１、６、７のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項９】
炎症性マクロファージおよび／またはＴ細胞に作用する、請求項１、６〜８のいずれか一項記載の医薬組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月12日(2018.10.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アペリン−１３を含有する、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療または予防に用いるための医薬組成物。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
（削除）
【請求項６】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が潰瘍性大腸炎である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）がクローン病である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項８】
炎症を抑制する、請求項１、６、７のいずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項９】
炎症性マクロファージおよび／またはＴ細胞に作用する、請求項１、６〜８のいずれか一項記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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