【手続補正書】
【提出日】平成31年1月31日(2019.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋抗原とカップリングした一次抗体；および
検出可能な二次抗体
を含む免疫試薬組成物であって、該検出可能な二次抗体が該架橋抗原に対して高親和性で特異的である、免疫試薬組成物。
【請求項２】
前記架橋抗原がペプチドである、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項３】
前記架橋抗原が複数の抗原決定基を含む、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項４】
前記複数の抗原決定基における各抗原決定基が同じである、請求項３に記載の免疫試薬組成物。
【請求項５】
前記複数の抗原決定基が線状反復構造を含む、請求項３に記載の免疫試薬組成物。
【請求項６】
前記線状反復構造が線状反復ペプチド構造である、請求項５に記載の免疫試薬組成物。
【請求項７】
前記複数の抗原決定基が少なくとも３個の抗原決定基を含む、請求項３に記載の免疫試薬組成物。
【請求項８】
前記架橋抗原が分岐型構造を含む、請求項３に記載の免疫試薬組成物。
【請求項９】
前記架橋抗原が、非天然残基を含むペプチドである、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１０】
前記非天然残基が非天然立体異性体である、請求項９に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１１】
前記非天然残基がβ−アミノ酸である、請求項９に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１２】
前記一次抗体および前記架橋抗原が、コンジュゲーション部分を介して化学的カップリング反応によりカップリングしている、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１３】
前記一次抗体および前記架橋抗原が高効率コンジュゲーション部分を介してカップリングしている、請求項１２に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１４】
前記高効率コンジュゲーション部分がシッフ塩基である、請求項１３に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１５】
前記シッフ塩基がヒドラゾンまたはオキシムである、請求項１４に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１６】
前記高効率コンジュゲーション部分がクリック反応によって形成される、請求項１３に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１７】
前記コンジュゲーション部分が切断可能なリンカーを含む、請求項１２に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１８】
前記一次抗体が細胞マーカーに特異的である、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項１９】
前記細胞マーカーが、４−１ＢＢ、ＡＦＰ、ＡＬＫ１、アミロイドＡ、アミロイドＰ、アンドロゲン受容体、アネキシンＡ１、ＡＳＭＡ、ＢＣＡ２２５、ＢＣＬ−１、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−６、ＢｅｒＥＰ４、ベータ−カテニン、ベータ−ＨＣＧ、ＢＧ−８、ＢＯＢ−１、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、カルシトニン、カルデスモン、カルポニン−１、カルレチニン、ＣＡＭ５．２、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４３、ＣＤ４５  ＬＣＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ６１、ＣＤ６８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３８、ＣＤ１６３、ＣＤＸ２、ＣＥＡ、クロモグラニンＡ、ＣＭＶ、ｃ−ｋｉｔ、ｃ−ＭＥＴ、ｃ−ＭＹＣ、ＩＶ型コラーゲン、補体３ｃ（Ｃ３ｃ）、ＣＯＸ−２、ＣＸＣＲ５、ＣＫ１、ＣＫ５、ＣＫ６、ＣＫ７、ＣＫ８、ＣＫ１４、ＣＫ１８、ＣＫ１７、ＣＫ１９、ＣＫ２０、ＣＫ９０３、ＣＫ  ＡＥ１、ＣＫ  ＡＥ１／ＡＥ３、Ｄ２−４０、デスミン、ＤＯＧ−１、Ｅ−カドヘリン、ＥＧＦＲ、ＥＭＡ、ＥＲ、ＥＲＣＣ１、第ＶＩＩＩ因子関連抗原、活性化第ＸＩＩＩ因子、ファスシン、ＦｏｘＰ１、ＦｏｘＰ３、ガレクチン−３、ＧＡＴＡ−３、ＧＣＤＦＰ−１５、ＧＣＥＴ１、ＧＦＡＰ、グリコホリンＡ、グリピカン３、グランザイムＢ、ＨＢＭＥ−１、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  Ｐｙｌｏｒｉ、ヘモグロビンＡ、Ｈｅｐ  Ｐａｒ１、ＨＥＲ２、ＨＨＶ−８、ＨＭＢ−４５、ＨＳＶ  ｌ／ｌｌ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮガンマ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩＬ１７、ＩＬ４、インヒビン、ｉＮＯＳ、カッパＩｇ軽鎖、Ｋｉ６７、ＬＡＧ−３、ラムダＩｇ軽鎖、リゾチーム、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メランＡ、マスト細胞トリプターゼ、ＭＬＨ１、ＭＯＣ−３１、ＭＰＯ、ＭＳＡ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭｙｏＤ１、ミオゲニン、ミオグロビン、ナプシンＡ、ネスチン、ＮＳＥ、Ｏｃｔ−２、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ｐ１６、ｐ２１、ｐ２７、ｐ４０、ｐ５３、ｐ６３、ｐ５０４ｓ、ＰＡＸ−５、ＰＡＸ−８、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＨＨ３、ＰＩＮ−４、ＰＬＡＰ、ＰＭＳ２、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ（ｃａｒｉｎｉｉ）、ＰＲ、ＰＳＡ、ＰＳＡＰ、ＲＣＣ、Ｓ−１００、ＳＭＡ、ＳＭＭ、スムーセリン、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サーファクタントアポプロテインＡ、シナプトフィジン、ＴＡＧ７２、ＴｄＴ、トロンボモジュリン、チログロブリン、ＴＩＡ−１、ＴＩＭ３、ＴＲＡｃＰ、ＴＴＦ−１、チロシナーゼ、ウロプラキン、ＶＥＧＦＲ−２、ビリン、ビメンチン、およびＷＴ−１からなる群から選択される、請求項１８に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２０】
前記一次抗体が、異なる種由来の免疫グロブリンに特異的である、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２１】
前記検出可能な二次抗体が検出可能な標識を含む、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２２】
前記検出可能な標識が、フルオロフォア、酵素、アップコンバージョンナノ粒子、量子ドット、または検出可能なハプテンである、請求項２１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２３】
前記検出可能な標識がフルオロフォアである、請求項２２に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２４】
前記酵素が、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはグルコースオキシダーゼである、請求項２２に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２５】
前記ペルオキシダーゼが西洋ワサビペルオキシダーゼまたはダイズペルオキシダーゼである、請求項２４に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２６】
前記架橋抗原が検出可能な標識を含む、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２７】
前記架橋抗原の前記検出可能な標識がフルオロフォアである、請求項２６に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２８】
前記検出可能な二次抗体が検出可能な標識を含む、請求項２６に記載の免疫試薬組成物。
【請求項２９】
前記架橋抗原の前記検出可能な標識および前記二次抗体の前記検出可能な標識がどちらも、同じ波長の蛍光によって検出可能である、請求項２８に記載の免疫試薬組成物。
【請求項３０】
前記検出可能な二次抗体が、前記架橋抗原に対して特異的であり、最大で１００ｎＭ、最大で３０ｎＭ、最大で１０ｎＭ、最大で３ｎＭ、最大で１ｎＭ、最大で０．３ｎＭ、最大で０．１ｎＭ、最大で０．０３ｎＭ、最大で０．０１ｎＭ、または最大で０．００３ｎＭの解離定数を有する、請求項１に記載の免疫試薬組成物。
【請求項３１】
複数の、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の免疫試薬組成物を含む、多重化免疫試薬組成物。
【請求項３２】
少なくとも３個の免疫試薬組成物を含む、請求項３１に記載の多重化免疫試薬組成物。
【請求項３３】
少なくとも５個の免疫試薬組成物を含む、請求項３１に記載の多重化免疫試薬組成物。
【請求項３４】
少なくとも１０個の免疫試薬組成物を含む、請求項３１に記載の多重化免疫試薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
別の態様によれば、本開示は、免疫学的アッセイのためのキットを提供する。実施形態では、キットは、上記の免疫試薬のいずれか、免疫試薬の架橋抗原に対して高親和性で特異的である検出可能な二次抗体、およびキットを使用するための指示（ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）を含む。具体的な実施形態では、キットは、上記の免疫試薬のいずれかの少なくとも３個、少なくとも５個、またはさらに、少なくとも１０個；免疫試薬の架橋抗原に対して高親和性で特異的である、少なくとも３個、少なくとも５個、またはさらに、少なくとも１０個の検出可能な二次抗体；およびキットを使用するための指示を含む。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
架橋抗原とカップリングした一次抗体；および
検出可能な二次抗体
を含む免疫試薬組成物であって、該検出可能な二次抗体が該架橋抗原に対して高親和性で特異的である、免疫試薬組成物。
（項目２）
前記架橋抗原がペプチドである、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目３）
前記架橋抗原が複数の抗原決定基を含む、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目４）
前記複数の抗原決定基における各抗原決定基が同じである、項目３に記載の免疫試薬組成物。
（項目５）
前記複数の抗原決定基が線状反復構造を含む、項目３に記載の免疫試薬組成物。
（項目６）
前記線状反復構造が線状反復ペプチド構造である、項目５に記載の免疫試薬組成物。
（項目７）
前記複数の抗原決定基が少なくとも３個の抗原決定基を含む、項目３に記載の免疫試薬組成物。
（項目８）
前記架橋抗原が分岐型構造を含む、項目３に記載の免疫試薬組成物。
（項目９）
前記架橋抗原が、非天然残基を含むペプチドである、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目１０）
前記非天然残基が非天然立体異性体である、項目９に記載の免疫試薬組成物。
（項目１１）
前記非天然残基がβ−アミノ酸である、項目９に記載の免疫試薬組成物。
（項目１２）
前記一次抗体および前記架橋抗原が、コンジュゲーション部分を介して化学的カップリング反応によりカップリングしている、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目１３）
前記一次抗体および前記架橋抗原が高効率コンジュゲーション部分を介してカップリングしている、項目１２に記載の免疫試薬組成物。
（項目１４）
前記高効率コンジュゲーション部分がシッフ塩基である、項目１３に記載の免疫試薬組成物。
（項目１５）
前記シッフ塩基がヒドラゾンまたはオキシムである、項目１４に記載の免疫試薬組成物。
（項目１６）
前記高効率コンジュゲーション部分がクリック反応によって形成される、項目１３に記載の免疫試薬組成物。
（項目１７）
前記コンジュゲーション部分が切断可能なリンカーを含む、項目１２に記載の免疫試薬組成物。
（項目１８）
前記一次抗体が細胞マーカーに特異的である、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目１９）
前記細胞マーカーが、４−１ＢＢ、ＡＦＰ、ＡＬＫ１、アミロイドＡ、アミロイドＰ、アンドロゲン受容体、アネキシンＡ１、ＡＳＭＡ、ＢＣＡ２２５、ＢＣＬ−１、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−６、ＢｅｒＥＰ４、ベータ−カテニン、ベータ−ＨＣＧ、ＢＧ−８、ＢＯＢ−１、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、カルシトニン、カルデスモン、カルポニン−１、カルレチニン、ＣＡＭ５．２、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４３、ＣＤ４５  ＬＣＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ６１、ＣＤ６８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３８、ＣＤ１６３、ＣＤＸ２、ＣＥＡ、クロモグラニンＡ、ＣＭＶ、ｃ−ｋｉｔ、ｃ−ＭＥＴ、ｃ−ＭＹＣ、ＩＶ型コラーゲン、補体３ｃ（Ｃ３ｃ）、ＣＯＸ−２、ＣＸＣＲ５、ＣＫ１、ＣＫ５、ＣＫ６、ＣＫ７、ＣＫ８、ＣＫ１４、ＣＫ１８、ＣＫ１７、ＣＫ１９、ＣＫ２０、ＣＫ９０３、ＣＫ  ＡＥ１、ＣＫ  ＡＥ１／ＡＥ３、Ｄ２−４０、デスミン、ＤＯＧ−１、Ｅ−カドヘリン、ＥＧＦＲ、ＥＭＡ、ＥＲ、ＥＲＣＣ１、第ＶＩＩＩ因子関連抗原、活性化第ＸＩＩＩ因子、ファスシン、ＦｏｘＰ１、ＦｏｘＰ３、ガレクチン−３、ＧＡＴＡ−３、ＧＣＤＦＰ−１５、ＧＣＥＴ１、ＧＦＡＰ、グリコホリンＡ、グリピカン３、グランザイムＢ、ＨＢＭＥ−１、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  Ｐｙｌｏｒｉ、ヘモグロビンＡ、Ｈｅｐ  Ｐａｒ１、ＨＥＲ２、ＨＨＶ−８、ＨＭＢ−４５、ＨＳＶ  ｌ／ｌｌ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮガンマ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩＬ１７、ＩＬ４、インヒビン、ｉＮＯＳ、カッパＩｇ軽鎖、Ｋｉ６７、ＬＡＧ−３、ラムダＩｇ軽鎖、リゾチーム、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メランＡ、マスト細胞トリプターゼ、ＭＬＨ１、ＭＯＣ−３１、ＭＰＯ、ＭＳＡ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭｙｏＤ１、ミオゲニン、ミオグロビン、ナプシンＡ、ネスチン、ＮＳＥ、Ｏｃｔ−２、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ｐ１６、ｐ２１、ｐ２７、ｐ４０、ｐ５３、ｐ６３、ｐ５０４ｓ、ＰＡＸ−５、ＰＡＸ−８、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＨＨ３、ＰＩＮ−４、ＰＬＡＰ、ＰＭＳ２、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ（ｃａｒｉｎｉｉ）、ＰＲ、ＰＳＡ、ＰＳＡＰ、ＲＣＣ、Ｓ−１００、ＳＭＡ、ＳＭＭ、スムーセリン、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サーファクタントアポプロテインＡ、シナプトフィジン、ＴＡＧ７２、ＴｄＴ、トロンボモジュリン、チログロブリン、ＴＩＡ−１、ＴＩＭ３、ＴＲＡｃＰ、ＴＴＦ−１、チロシナーゼ、ウロプラキン、ＶＥＧＦＲ−２、ビリン、ビメンチン、およびＷＴ−１からなる群から選択される、項目１８に記載の免疫試薬組成物。
（項目２０）
前記一次抗体が、異なる種由来の免疫グロブリンに特異的である、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目２１）
前記検出可能な二次抗体が検出可能な標識を含む、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目２２）
前記検出可能な標識が、フルオロフォア、酵素、アップコンバージョンナノ粒子、量子ドット、または検出可能なハプテンである、項目２１に記載の免疫試薬組成物。
（項目２３）
前記検出可能な標識がフルオロフォアである、項目２２に記載の免疫試薬組成物。
（項目２４）
前記酵素が、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはグルコースオキシダーゼである、項目２２に記載の免疫試薬組成物。
（項目２５）
前記ペルオキシダーゼが西洋ワサビペルオキシダーゼまたはダイズペルオキシダーゼである、項目２４に記載の免疫試薬組成物。
（項目２６）
前記架橋抗原が検出可能な標識を含む、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目２７）
前記架橋抗原の前記検出可能な標識がフルオロフォアである、項目２６に記載の免疫試薬組成物。
（項目２８）
前記検出可能な二次抗体が検出可能な標識を含む、項目２６に記載の免疫試薬組成物。
（項目２９）
前記架橋抗原の前記検出可能な標識および前記二次抗体の前記検出可能な標識がどちらも、同じ波長の蛍光によって検出可能である、項目２８に記載の免疫試薬組成物。
（項目３０）
前記検出可能な二次抗体が、前記架橋抗原に対して特異的であり、最大で１００ｎＭ、最大で３０ｎＭ、最大で１０ｎＭ、最大で３ｎＭ、最大で１ｎＭ、最大で０．３ｎＭ、最大で０．１ｎＭ、最大で０．０３ｎＭ、最大で０．０１ｎＭ、または最大で０．００３ｎＭの解離定数を有する、項目１に記載の免疫試薬組成物。
（項目３１）
複数の、項目１〜３０のいずれか一項に記載の免疫試薬組成物を含む、多重化免疫試薬組成物。
（項目３２）
少なくとも３個の免疫試薬組成物を含む、項目３１に記載の多重化免疫試薬組成物。
（項目３３）
少なくとも５個の免疫試薬組成物を含む、項目３１に記載の多重化免疫試薬組成物。
（項目３４）
少なくとも１０個の免疫試薬組成物を含む、項目３１に記載の多重化免疫試薬組成物。
（項目３５）
架橋抗原とカップリングした一次抗体を含む免疫試薬。
（項目３６）
前記架橋抗原がペプチドである、項目３５に記載の免疫試薬。
（項目３７）
前記架橋抗原が複数の抗原決定基を含む、項目３５に記載の免疫試薬。
（項目３８）
前記複数の抗原決定基における各抗原決定基が同じである、項目３７に記載の免疫試薬。
（項目３９）
前記複数の抗原決定基が線状反復構造を含む、項目３７に記載の免疫試薬。
（項目４０）
前記線状反復構造が線状反復ペプチド構造である、項目３９に記載の免疫試薬。
（項目４１）
前記複数の抗原決定基が少なくとも３個の抗原決定基を含む、項目３７に記載の免疫試薬。
（項目４２）
前記架橋抗原が分岐型構造を含む、項目３７に記載の免疫試薬。
（項目４３）
前記架橋抗原が、非天然残基を含むペプチドである、項目３５に記載の免疫試薬。
（項目４４）
前記非天然残基が非天然立体異性体である、項目４３に記載の免疫試薬。
（項目４５）
前記非天然残基がβ−アミノ酸である、項目４３に記載の免疫試薬。
（項目４６）
前記一次抗体および前記架橋抗原が、コンジュゲーション部分を介して化学的カップリング反応によりカップリングしている、項目３５に記載の免疫試薬。
（項目４７）
前記一次抗体および前記架橋抗原が高効率コンジュゲーション部分を介してカップリングしている、項目４６に記載の免疫試薬。
（項目４８）
前記高効率コンジュゲーション部分がシッフ塩基である、項目４７に記載の免疫試薬。
（項目４９）
前記シッフ塩基がヒドラゾンまたはオキシムである、項目４８に記載の免疫試薬。
（項目５０）
前記高効率コンジュゲーション部分がクリック反応によって形成される、項目４７に記載の免疫試薬。
（項目５１）
前記コンジュゲーション部分が切断可能なリンカーを含む、項目４６に記載の免疫試薬。
（項目５２）
前記一次抗体が細胞マーカーに特異的である、項目３５に記載の免疫試薬。
（項目５３）
前記細胞マーカーが、４−１ＢＢ、ＡＦＰ、ＡＬＫ１、アミロイドＡ、アミロイドＰ、アンドロゲン受容体、アネキシンＡ１、ＡＳＭＡ、ＢＣＡ２２５、ＢＣＬ−１、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−６、ＢｅｒＥＰ４、ベータ−カテニン、ベータ−ＨＣＧ、ＢＧ−８、ＢＯＢ−１、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、カルシトニン、カルデスモン、カルポニン−１、カルレチニン、ＣＡＭ５．２、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４３、ＣＤ４５  ＬＣＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ６１、ＣＤ６８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３８、ＣＤ１６３、ＣＤＸ２、ＣＥＡ、クロモグラニンＡ、ＣＭＶ、ｃ−ｋｉｔ、ｃ−ＭＥＴ、ｃ−ＭＹＣ、ＩＶ型コラーゲン、補体３ｃ（Ｃ３ｃ）、ＣＯＸ−２、ＣＸＣＲ５、ＣＫ１、ＣＫ５、ＣＫ６、ＣＫ７、ＣＫ８、ＣＫ１４、ＣＫ１８、ＣＫ１７、ＣＫ１９、ＣＫ２０、ＣＫ９０３、ＣＫ  ＡＥ１、ＣＫ  ＡＥ１／ＡＥ３、Ｄ２−４０、デスミン、ＤＯＧ−１、Ｅ−カドヘリン、ＥＧＦＲ、ＥＭＡ、ＥＲ、ＥＲＣＣ１、第ＶＩＩＩ因子関連抗原、活性化第ＸＩＩＩ因子、ファスシン、ＦｏｘＰ１、ＦｏｘＰ３、ガレクチン−３、ＧＡＴＡ−３、ＧＣＤＦＰ−１５、ＧＣＥＴ１、ＧＦＡＰ、グリコホリンＡ、グリピカン３、グランザイムＢ、ＨＢＭＥ−１、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  Ｐｙｌｏｒｉ、ヘモグロビンＡ、Ｈｅｐ  Ｐａｒ１、ＨＥＲ２、ＨＨＶ−８、ＨＭＢ−４５、ＨＳＶ  ｌ／ｌｌ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮガンマ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩＬ１７、ＩＬ４、インヒビン、ｉＮＯＳ、カッパＩｇ軽鎖、Ｋｉ６７、ＬＡＧ−３、ラムダＩｇ軽鎖、リゾチーム、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メランＡ、マスト細胞トリプターゼ、ＭＬＨ１、ＭＯＣ−３１、ＭＰＯ、ＭＳＡ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭｙｏＤ１、ミオゲニン、ミオグロビン、ナプシンＡ、ネスチン、ＮＳＥ、Ｏｃｔ−２、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ｐ１６、ｐ２１、ｐ２７、ｐ４０、ｐ５３、ｐ６３、ｐ５０４ｓ、ＰＡＸ−５、ＰＡＸ−８、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＨＨ３、ＰＩＮ−４、ＰＬＡＰ、ＰＭＳ２、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ（ｃａｒｉｎｉｉ）、ＰＲ、ＰＳＡ、ＰＳＡＰ、ＲＣＣ、Ｓ−１００、ＳＭＡ、ＳＭＭ、スムーセリン、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サーファクタントアポプロテインＡ、シナプトフィジン、ＴＡＧ７２、ＴｄＴ、トロンボモジュリン、チログロブリン、ＴＩＡ−１、ＴＩＭ３、ＴＲＡｃＰ、ＴＴＦ−１、チロシナーゼ、ウロプラキン、ＶＥＧＦＲ−２、ビリン、ビメンチン、およびＷＴ−１からなる群から選択される、項目５２に記載の免疫試薬。
（項目５４）
前記一次抗体が、異なる種由来の免疫グロブリンに特異的である、項目３５に記載の免疫試薬。
（項目５５）
前記検出可能な二次抗体が検出可能な標識を含む、項目３５に記載の免疫試薬。
（項目５６）
前記検出可能な標識が、フルオロフォアである、項目５５に記載の免疫試薬。
（項目５７）
複数の、項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬を含む、多重化免疫試薬組成物。
（項目５８）
少なくとも３個の免疫試薬を含む、項目５７に記載の多重化免疫試薬組成物。
（項目５９）
少なくとも５個の免疫試薬を含む、項目５７に記載の多重化免疫試薬組成物。
（項目６０）
少なくとも１０個の免疫試薬を含む、項目５７に記載の多重化免疫試薬組成物。
（項目６１）
第１の標的抗原を含む第１の試料を供給するステップ；
該第１の標的抗原を第１の免疫試薬と反応させるステップであって、該第１の免疫試薬が、該第１の標的抗原に特異的な、項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬である、ステップ；
該第１の免疫試薬を第１の検出可能な二次抗体と反応させるステップであって、該第１の検出可能な二次抗体が、該第１の免疫試薬の架橋抗原に対して、高親和性で特異的である、ステップ；および
該第１の免疫試薬の該架橋抗原と会合している該第１の検出可能な二次抗体を検出するステップ
を含む、免疫学的アッセイのための方法。
（項目６２）
前記第１の標的抗原が細胞マーカーである、項目６１に記載の免疫試薬組成物。
（項目６３）
前記細胞マーカーが、４−１ＢＢ、ＡＦＰ、ＡＬＫ１、アミロイドＡ、アミロイドＰ、アンドロゲン受容体、アネキシンＡ１、ＡＳＭＡ、ＢＣＡ２２５、ＢＣＬ−１、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−６、ＢｅｒＥＰ４、ベータ−カテニン、ベータ−ＨＣＧ、ＢＧ−８、ＢＯＢ−１、ＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、カルシトニン、カルデスモン、カルポニン−１、カルレチニン、ＣＡＭ５．２、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１０、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４３、ＣＤ４５  ＬＣＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ６１、ＣＤ６８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３８、ＣＤ１６３、ＣＤＸ２、ＣＥＡ、クロモグラニンＡ、ＣＭＶ、ｃ−ｋｉｔ、ｃ−ＭＥＴ、ｃ−ＭＹＣ、ＩＶ型コラーゲン、補体３ｃ（Ｃ３ｃ）、ＣＯＸ−２、ＣＸＣＲ５、ＣＫ１、ＣＫ５、ＣＫ６、ＣＫ７、ＣＫ８、ＣＫ１４、ＣＫ１８、ＣＫ１７、ＣＫ１９、ＣＫ２０、ＣＫ９０３、ＣＫ  ＡＥ１、ＣＫ  ＡＥ１／ＡＥ３、Ｄ２−４０、デスミン、ＤＯＧ−１、Ｅ−カドヘリン、ＥＧＦＲ、ＥＭＡ、ＥＲ、ＥＲＣＣ１、第ＶＩＩＩ因子関連抗原、活性化第ＸＩＩＩ因子、ファスシン、ＦｏｘＰ１、ＦｏｘＰ３、ガレクチン−３、ＧＡＴＡ−３、ＧＣＤＦＰ−１５、ＧＣＥＴ１、ＧＦＡＰ、グリコホリンＡ、グリピカン３、グランザイムＢ、ＨＢＭＥ−１、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  Ｐｙｌｏｒｉ、ヘモグロビンＡ、Ｈｅｐ  Ｐａｒ１、ＨＥＲ２、ＨＨＶ−８、ＨＭＢ−４５、ＨＳＶ  ｌ／ｌｌ、ＩＣＯＳ、ＩＦＮガンマ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩＬ１７、ＩＬ４、インヒビン、ｉＮＯＳ、カッパＩｇ軽鎖、Ｋｉ６７、ＬＡＧ−３、ラムダＩｇ軽鎖、リゾチーム、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メランＡ、マスト細胞トリプターゼ、ＭＬＨ１、ＭＯＣ−３１、ＭＰＯ、ＭＳＡ、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＭ１、ＭｙｏＤ１、ミオゲニン、ミオグロビン、ナプシンＡ、ネスチン、ＮＳＥ、Ｏｃｔ−２、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ｐ１６、ｐ２１、ｐ２７、ｐ４０、ｐ５３、ｐ６３、ｐ５０４ｓ、ＰＡＸ−５、ＰＡＸ−８、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＨＨ３、ＰＩＮ−４、ＰＬＡＰ、ＰＭＳ２、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｊｉｒｏｖｅｃｉ（ｃａｒｉｎｉｉ）、ＰＲ、ＰＳＡ、ＰＳＡＰ、ＲＣＣ、Ｓ−１００、ＳＭＡ、ＳＭＭ、スムーセリン、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、サーファクタントアポプロテインＡ、シナプトフィジン、ＴＡＧ７２、ＴｄＴ、トロンボモジュリン、チログロブリン、ＴＩＡ−１、ＴＩＭ３、ＴＲＡｃＰ、ＴＴＦ−１、チロシナーゼ、ウロプラキン、ＶＥＧＦＲ−２、ビリン、ビメンチン、およびＷＴ−１からなる群から選択される、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記第１の標的抗原が、異なる種由来の免疫グロブリンである、項目６１に記載の方法。
（項目６５）
前記第１の検出可能な二次抗体が検出可能な標識を含む、項目６１に記載の方法。
（項目６６）
前記検出可能な標識が、フルオロフォア、酵素、アップコンバージョンナノ粒子、量子ドット、または検出可能なハプテンである、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記検出可能な標識がフルオロフォアである、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
前記酵素が、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはグルコースオキシダーゼである、項目６６に記載の方法。
（項目６９）
前記ペルオキシダーゼが西洋ワサビペルオキシダーゼまたはダイズペルオキシダーゼである、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記第１の検出可能な二次抗体が、前記第１の免疫試薬の前記架橋抗原に対して特異的であり、最大で１００ｎＭ、最大で３０ｎＭ、最大で１０ｎＭ、最大で３ｎＭ、最大で１ｎＭ、最大で０．３ｎＭ、最大で０．１ｎＭ、最大で０．０３ｎＭ、最大で０．０１ｎＭ、または最大で０．００３ｎＭの解離定数を有する、項目６１に記載の方法。
（項目７１）
前記第１の標的抗原が組織切片内にある、項目６１に記載の方法。
（項目７２）
前記検出するステップが蛍光検出ステップである、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記検出するステップが酵素的検出ステップである、項目７１に記載の方法。
（項目７４）
前記第１の標的抗原が細胞内または細胞上にある、項目６１に記載の方法。
（項目７５）
前記第１の標的抗原が前記細胞の表面上にある、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記第１の標的抗原が前記細胞の細胞質内にある、項目７４に記載の方法。
（項目７７）
前記第１の標的抗原が前記細胞の核内にある、項目７４に記載の方法。
（項目７８）
前記検出するステップが蛍光検出ステップである、項目７４に記載の方法。
（項目７９）
前記第１の検出可能な二次抗体に結合している細胞を選別するステップをさらに含む、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記第１の試料における第２の標的抗原を第２の免疫試薬と反応させるステップであって、該第２の免疫試薬が、該第２の標的抗原に特異的な、項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬である、ステップ；
該第２の免疫試薬を第２の検出可能な二次抗体と反応させるステップであって、該第２の検出可能な二次抗体が、該第２の免疫試薬の架橋抗原に対して、高親和性で特異的である、ステップ；および
該第２の免疫試薬の該架橋抗原と会合している該第２の検出可能な二次抗体を検出するステップ
をさらに含む、項目６１に記載の方法。
（項目８１）
前記試料において少なくとも３個の標的抗原を検出するステップをさらに含む、項目８０に記載の方法。
（項目８２）
前記試料において少なくとも５個の標的抗原を検出するステップをさらに含む、項目８０に記載の方法。
（項目８３）
前記試料において少なくとも１０個の標的抗原を検出するステップをさらに含む、項目８０に記載の方法。
（項目８４）
第２の試料における第２の標的抗原を第２の免疫試薬と反応させるステップであって、該第２の免疫試薬が、該第２の標的抗原に特異的な、項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬である、ステップ；
該第２の免疫試薬を第２の検出可能な二次抗体と反応させるステップであって、該第２の検出可能な二次抗体が、該第２の免疫試薬の架橋抗原に対して、高親和性で特異的である、ステップ；および
該第２の免疫試薬の該架橋抗原と会合している該第２の検出可能な二次抗体を検出するステップ
をさらに含み、前記第１の試料および該第２の試料が、組織試料の連続切片である、項目６１に記載の方法。
（項目８５）
前記第１の試料において複数の標的抗原が検出され、前記第２の試料において複数の標的抗原が検出される、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記第１の試料において少なくとも３個の標的抗原が検出され、前記第２の試料において少なくとも３個の標的抗原が検出される、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
少なくとも３個の試料において、少なくとも３個の標的抗原が検出され、該少なくとも３個の試料が組織試料の連続切片である、項目８４に記載の方法。
（項目８８）
前記少なくとも３個の試料のそれぞれにおいて、複数の標的抗原が検出される、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記少なくとも３個の試料のそれぞれにおいて、少なくとも３個の標的抗原が検出される、項目８８に記載の方法。
（項目９０）
第１の標的抗原を含む試料を供給するステップ；
該第１の標的抗原を第１の免疫試薬と反応させるステップであって、該第１の免疫試薬が、該第１の標的抗原に特異的な、項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬である、ステップ；
該第１の免疫試薬を第１の反応性二次抗体と反応させるステップであって、該第１の反応性二次抗体が、該第１の免疫試薬の架橋抗原と高親和性で結合する、ステップ；および
該第１の反応性二次抗体を第１の検出可能な試薬と反応させるステップであって、該第１の検出可能な試薬が、該第１の標的抗原の近くで該試料と結合している、ステップ
を含む、免疫学的アッセイのための方法。
（項目９１）
前記第１の反応性二次抗体が酵素活性を含む、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記酵素活性がペルオキシダーゼ活性である、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記ペルオキシダーゼ活性が西洋ワサビペルオキシダーゼ活性である、項目９２に記載の方法。
（項目９４）
前記第１の検出可能な試薬がチラミドを含む、項目９０に記載の方法。
（項目９５）
前記第１の検出可能な試薬がフルオロフォアまたは発色団を含む、項目９０に記載の方法。
（項目９６）
前記第１の反応性二次抗体を前記試料から解離させるステップをさらに含む、項目９０に記載の方法。
（項目９７）
前記第１の反応性二次抗体が選択的処理により前記試料から解離する、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記選択的処理が可溶性架橋抗原での処理を含む、項目９７に記載の方法。
（項目９９）
前記選択的処理が切断可能なリンカーの切断を含む、項目９７に記載の方法。
（項目１００）
前記第１の反応性二次抗体が熱処理により前記試料から解離する、項目９６に記載の方法。
（項目１０１）
前記試料における第２の標的抗原を第２の免疫試薬と反応させるステップであって、該第２の免疫試薬が、該第２の標的抗原に特異的な、項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬である、ステップ；
該第２の免疫試薬を第２の反応性二次抗体と反応させるステップであって、該第２の反応性二次抗体が、該第２の免疫試薬の架橋抗原と高親和性で結合する、ステップ；および
該第２の反応性二次抗体を第２の検出可能な試薬と反応させるステップであって、該第２の検出可能な試薬が、該第２の標的抗原の近くで該試料に結合している、ステップ
をさらに含む、項目９６に記載の方法。
（項目１０２）
前記第２の反応性二次抗体が酵素活性を含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
前記酵素活性がペルオキシダーゼ活性である、項目１０２に記載の方法。
（項目１０４）
前記ペルオキシダーゼ活性が西洋ワサビペルオキシダーゼ活性である、項目１０３に記載の方法。
（項目１０５）
前記第２の検出可能な試薬がチラミドを含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０６）
前記第２の検出可能な試薬がフルオロフォアまたは発色団を含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０７）
前記第１の反応性二次抗体が選択的処理により前記試料から解離する、項目１０１に記載の方法。
（項目１０８）
前記選択的処理が可溶性架橋抗原での処理を含む、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
前記選択的処理が切断可能なリンカーの切断を含む、項目１０７に記載の方法。
（項目１１０）
前記第１の反応性二次抗体が熱処理により前記試料から解離する、項目１０１に記載の方法。
（項目１１１）
前記試料において前記第１の検出可能な試薬および前記第２の検出可能な試薬を検出するステップをさらに含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１１２）
第１の標的抗原を含む試料を供給するステップ；
該第１の標的抗原を第１の一次抗体と反応させるステップであって、該第１の一次抗体が該第１の標的抗原に特異的である、ステップ；
該第１の一次抗体を第１の免疫試薬と反応させるステップであって、該第１の免疫試薬が、該第１の一次抗体に特異的な、項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬である、ステップ；
該第１の免疫試薬を第１の検出可能な二次抗体と反応させるステップであって、該第１の検出可能な二次抗体が、該第１の免疫試薬の架橋抗原に対して、高親和性で特異的である、ステップ；および
該第１の免疫試薬の該架橋抗原と会合している該第１の検出可能な二次抗体を検出するステップ
を含む、免疫学的アッセイのための方法。
（項目１１３）
項目３５〜５６のいずれか一項に記載の免疫試薬、
前記架橋抗原に対して、高親和性で特異的な検出可能な二次抗体、および
キットを使用するための指示
を含む、免疫学的アッセイのためのキット。
（項目１１４）
前記検出可能な二次抗体が検出可能な標識を含む、項目１１３に記載のキット。
（項目１１５）
前記検出可能な標識が、フルオロフォア、酵素、アップコンバージョンナノ粒子、量子ドット、または検出可能なハプテンである、項目１１４に記載のキット。
（項目１１６）
前記検出可能な標識がフルオロフォアである、項目１１５に記載のキット。
（項目１１７）
前記酵素が、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはグルコースオキシダーゼである、項目１１６に記載のキット。
（項目１１８）
前記ペルオキシダーゼが西洋ワサビペルオキシダーゼまたはダイズペルオキシダーゼである、項目１１７に記載のキット。
（項目１１９）
前記検出可能な二次抗体が、前記架橋抗原に対して特異的であり、最大で１００ｎＭ、最大で３０ｎＭ、最大で１０ｎＭ、最大で３ｎＭ、最大で１ｎＭ、最大で０．３ｎＭ、最大で０．１ｎＭ、最大で０．０３ｎＭ、最大で０．０１ｎＭ、または最大で０．００３ｎＭの解離定数を有する、項目１１３に記載のキット。
（項目１２０）
項目１１３に記載のキットであって、
項目３５〜５６のいずれか一項に記載の少なくとも３個の免疫試薬、
前記架橋抗原に対して、高親和性で特異的な、少なくとも３個の検出可能な二次抗体、および
該キットを使用するための指示
を含む、キット。
（項目１２１）
項目１１３に記載のキットであって、
項目３５〜５６のいずれか一項に記載の少なくとも５個の免疫試薬、
前記架橋抗原に対して、高親和性で特異的な、少なくとも５個の検出可能な二次抗体、および
該キットを使用するための指示
を含む、キット。
（項目１２２）
項目１１３に記載のキットであって、
項目３５〜５６のいずれか一項に記載の少なくとも１０個の免疫試薬、
前記架橋抗原に対して、高親和性で特異的な、少なくとも１０個の検出可能な二次抗体、および
該キットを使用するための指示
を含む、キット。