(57)【要約】  経口摂取することにより、筋肉の柔軟性を高める組成物を提供する。ｎ−３系高度不飽和脂肪酸を有効成分として含有する経口摂取により筋肉を柔軟化させるための組成物である。ｎ−３系高度不飽和脂肪酸は、遊離脂肪酸、低級アルコールエステル、又はｎ−３系高度不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリド又はリン脂質の形態が好ましく、具体的には、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、又はドコサヘキサエン酸、精製魚油、精製オキアミ油、精製微生物油が例示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｎ−３系高度不飽和脂肪酸を有効成分として含有する経口摂取により筋肉を柔軟化させるための組成物。
【請求項２】
ｎ−３系高度不飽和脂肪酸が、遊離脂肪酸、低級アルコールエステル、又はｎ−３系高度不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリド又はリン脂質である請求項１の組成物。
【請求項３】
ｎ−３系高度不飽和脂肪酸がエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、又はドコサヘキサエン酸である請求項１又は２の組成物。
【請求項４】
ｎ−３系高度不飽和脂肪酸を精製魚油、精製オキアミ油、精製微生物油として含有する請求項１の組成物。
【請求項５】
筋肉が骨格筋である請求項１ないし４いずれかの組成物。
【請求項６】
１日量として、ｎ−３系高度不飽和脂肪酸を合計で５〜１５０ｍｇ／ｋｇ摂取させるための請求項１ないし５いずれかの組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、筋肉を柔軟にするための組成物に関する。特に、運動機能に影響を及ぼすとされる骨格筋の柔軟性を高めるために経口摂取するための組成物である。
【背景技術】
【０００２】
筋柔軟性は、健康づくりや傷害予防の重要な要因であり、筋柔軟性の維持・改善によりスポーツ傷害を予防・軽減することができると考えられている（非特許文献１）。また、筋柔軟性とスポーツパフォーマンスにも関連性があり、筋柔軟性をストレッチングで改善することで走行経済性が高まることがわかっている（非特許文献１）。従って、筋柔軟性を改善することは、傷害の予防・改善ならびに運動パフォーマンスの向上につながると考えられる（非特許文献１）。【０００３】
魚油にはエイコサペンタエン酸（以下、EPAとも記す）やドコサヘキサエン酸（以下、DHAとも記す）などの高度不飽和脂肪酸（以下、PUFAとも記す）が豊富に含まれているが、それらをヒトが摂取することで血液粘度が低下し、心筋梗塞や脳梗塞等の循環器系疾患の発症が予防できると考えられている（非特許文献２）。非特許文献３には、EPAが筋肉の蛋白合成を刺激する可能性について報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ohshita T, Mitsuzono R, “Influence of different stretching on range of motion and running economy in long distance runners”, Jpn. J. Phys. Fitness Sports Med. 58, p395-404, 2009.
【非特許文献２】Mahinda Y. Abeywardena, Richard J. Head, “Longchain n-3 polyunsaturated fatty acids and blood vessel function”, Cardiovascular Research 52, p361-371, 2001.
【非特許文献３】Kamolrat T, Gray SR, “The effect of eicosapentaenoic acid docosahexaenoic acid on protein synthesis and breakdown in murine C2C12 myotubes”, Biochem. Biophys. Res. Commun. 432 (4), p593-598, 2013.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、スポーツ分野や老年医学の分野で注目される、筋肉の柔軟性に着目し、運動やマッサージなどにより柔軟性を高める方法をサポートするものとして、経口摂取することにより、筋肉の柔軟性を高める組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
PUFAの心血管系に対する機能のメカニズムの一つとして、粘度の低いPUFAが赤血球膜に取込まれることで赤血球が柔軟になり、狭い血管でも血流がスムーズになることが知られている。このPUFAの作用に着想を得て、PUFAを摂取することでPUFAが骨格筋に取込まれ、骨格筋の柔軟性が改善するとの仮説を立てた。魚油を数週間食べさせたラットの骨格筋の柔軟性を筋硬度計及びレオメーターを用いて計測したところ、比較対照であるラードを食べさせたラットよりも骨格筋の柔軟性が高くなることを確認し、本発明を完成させた。【０００７】
本発明は、下記（１）〜（８）の経口摂取により筋肉を柔軟化させるための組成物を要旨とする。
（１）ｎ−３系高度不飽和脂肪酸を有効成分として含有する経口摂取により筋肉を柔軟化させるための組成物。
（２）ｎ−３系高度不飽和脂肪酸が、遊離脂肪酸、低級アルコールエステル、又はｎ−３系高度不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリド又はリン脂質である（１）の組成物。
（３）ｎ−３系高度不飽和脂肪酸がエイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、又はドコサヘキサエン酸である（１）又は（２）の組成物。
（４）ｎ−３系高度不飽和脂肪酸を精製魚油、精製オキアミ油、精製微生物油として含有する（１）の組成物。
（５）筋肉が骨格筋である（１）ないし（４）いずれかの組成物。
（６）１日量として、ｎ−３系高度不飽和脂肪酸を合計で５〜１５０ｍｇ／ｋｇ摂取させるための（１）ないし（５）いずれかの組成物。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の組成物を経口摂取することにより、筋肉、特に骨格筋の柔軟性を高めることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】実施例１で採取したラットの前脛骨筋の剪断力価を示す図である。
【図２】実施例２におけるラット大腿部の筋硬度変化率を示す図である。
【図３】実施例２で採取したラットにおける大腿直筋の剪断力価と腎周囲脂肪重量との相関関係を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明において、PUFAとは、炭素数１８以上、二重結合数３以上の脂肪酸であり、好ましくは炭素数２０以上、二重結合数３以上の脂肪酸、さらに好ましくは炭素数２０以上、二重結合数４以上の脂肪酸である。n-3系PUFAとしては、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、又はドコサヘキサエン酸が例示される。
本発明で用いるPUFAは、遊離脂肪酸、低級アルコールエステル、又はｎ−３系高度不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として含有するグリセリド又はリン脂質などの形態で用いることができる。好ましくは、グリセリンとのエステル、すなわち、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、あるいはリン脂質、すなわち、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ホスファチジン酸（いずれにもリゾ体を含む）、あるいは、低級アルコール（炭素数１〜３）とのエステル、すなわち、メチルエステル、エチルエステルなどである。EPA、DHAなどn-3系の脂肪酸を主成分とし、実質的にn-6系の脂肪酸を含まないものが好ましい。具体的にはn-6系の脂肪酸の合計が１０重量％以下、好ましくは５重量％以下が好ましい。
具体的には、トリグリセリドとしては精製魚油、精製微生物油、あるいはそれらに含まれるn-3系PUFAの濃度を高めた濃縮油（酵素反応、化学反応により精製魚油のn-3系PUFAの濃度を濃縮したもの）などが使用できる。また、リン脂質としては、精製オキアミ油、精製微生物油などを使用できる。EPA、DHAを含むn-3系PUFA源としては、魚介類抽出物、動物抽出物、卵黄抽出物、植物抽出物、菌類抽出物等、好ましくはオキアミ油、魚油、イカ抽出物、カツオ卵巣抽出物、遺伝子組み換えをした植物の抽出物等、ラビリンチュラ類の抽出物等が挙げられる。リン脂質を多く含む素材として、オキアミ油、イカ抽出物、が挙げられる。当該技術分野において一般的に知られている濃縮、抽出、及び／又は精製、配合等の技術を用いることによって、これらの素材中のリン脂質濃度や純度を任意に調節することができる。
【００１１】
EPA及び／又はDHAは、高脂血症やアレルギー症状などに有効であることが知られており、すでに医薬品や各種サプリメントが多く市販されている。本発明の目的にはそれらと同様のカプセル製剤を用いることができる。具体的には、精製魚油に抗酸化剤を添加した油脂をゼラチンカプセルに加工したものが多く利用されている。製剤の剤形としては経口投与可能な剤形であれば特に限定されず、錠剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセル）、マイクロカプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液体製剤（エマルジョン、懸濁液など）、シロップ剤、ゼリー剤などの形にすることができる。例えば、カプセル、特に、ソフトカプセルやマイクロカプセルに封入した剤形とすることが好ましい。各製剤は、当該技術分野において公知の方法により、通常使用される賦形剤、希釈剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、吸収促進剤、滑沢剤、溶解補助剤、緩衝剤、乳化剤、懸濁剤などを使用して調製される。また添加剤としては、剤形に応じて通常使用される安定化剤、保存剤、緩衝剤、等張化剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、着色剤、香料、風味剤、甘味剤などを使用することができる。製剤中に含まれるn-3系PUFA量は、n-3系PUFAの合計量として、例えば２０重量％以上、好ましくは４０重量％以上、あるいは５０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上である。
【００１２】
精製魚油としては、EPA及びDHAを含有する魚油であれば、どの魚類の魚油であってもかまわない。EPAが多く含まれる魚油としてはイワシ油、タラ肝油など、DHAが多く含まれる魚油としてはマグロ油、カツオ油などが例示される。
PUFAの濃縮油とは、位置選択性、脂肪酸選択性のあるリパーゼなどを用いて、精製魚油のトリグリセリド中のEPA/DHAの濃度を高めた油脂である。
【００１３】
本発明の組成物は、EPA、DHAなどのn-3系PUFAを合計で1日あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口摂取するのが好ましい。さらに好ましくは１５〜１５０ｍｇ／ｋｇ、特に好ましくは１５〜７５ｍｇ／ｋｇである。一度に摂取しても分割して摂取してもよい。継続的に摂取することが好ましく、少なくとも２週間連続して投与することにより効果が認められる。
n-3系PUFA は食品由来成分であり、また、すでに他の用途で長い使用経験がある成分なので、安全性の点でも安心して摂取できる。
【００１４】
本発明の組成物は、有効成分の安全性が極めて高いことから、使用対象は特に限定されず、若年者から高齢者まで、筋肉の柔軟化を望む対象者に使用することができる。特にスポーツを行う者、高齢により筋肉の硬化が気になる者などに用いるのが好ましい。また、使用対象として哺乳類の動物にも適用できる。特に馬や犬等の競技用動物に用いるのが好ましい。
本発明の組成物は、有効成分の安全性が極めて高いことから、食品として、あるいは、食品の成分と共に摂取することができる。
以下に本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１５】
＜実験方法＞
1. 実験動物
動物は7 週齢Wistar 系雄ラットを用いた。実験は1 週間の予備飼育後に行った。ラットをEPA・DHA高含有魚油添加飼料摂取群（魚油群）とラード添加飼料摂取群（ラード群）の2群に分けた（1群6匹）。飼料はpair-feeding を行い、摂食量を揃えた。水は自由摂取させた。動物はステンレス製の個別ケージで、室温22±2℃、50±10%湿度、12 時間照明の空調動物室内にて飼育した。
2. 飼料と給餌期間
魚油（日本化学飼料株式会社製）、ラード（オリエンタル酵母工業株式会社製）がそれぞれ15%含まれる、ペレット状に固形化したAIN-93G 改変飼料をオリエンタル酵母工業（株）より入手した。用いた魚油及びラードの脂肪酸組成を表１に、AIN-93G 改変飼料の組成を表２に示した。給餌期間は4 週間とし、飼育期間終了後、前脛骨筋（TA）を採取し、分析まで−80℃で凍結保存した。【００１６】
【表１】
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【００１７】
【表２】
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【００１８】
3. 剪断力価測定
−80℃保存下のサンプルを液体窒素で冷やしながら、前脛骨筋の重量を測定した。重量測定後、チューブに入れた状態で低温室にて24時間解凍した。解凍した筋組織からしみ出た水分をペーパータオルで拭って重量測定し、剪断力価をレオメーター（RE-3305S、YAMADEN社製、剪断速度 1 mm/秒）により測定した。【００１９】
＜結果＞
４週間の飼料の総摂取量は魚油群708.9±31.4 g、ラード群695.1±27.6 gであった。魚油群の一日あたりのEPAおよびDHAの摂取量は、それぞれ約765.8mgと約307.8mgであった。また、魚油群及びラード群の前脛骨筋の重量はそれぞれ1.42±0.05 g及び1.42±0.02 gであった。
魚油群及びラード群の剪断力価を測定したところ、魚油群の剪断力価が、ラード群の剪断力価と比較して小さい傾向が観察された（図１）。魚油の摂取は骨格筋の柔軟性を高めることが示された。
【実施例２】
【００２０】
＜実験方法＞
1. 実験動物
動物は4 週齢Wistar 系雄ラットを用いた。実験は1 週間の予備飼育後に行った。ラットを魚油群又はラード群に分け（1群6匹）、4週間自由摂食させた。水は自由摂取させた。動物はプラスチック製の個別ケージで、室温22±2℃、50±10%湿度、12 時間照明の空調動物室内にて飼育した。
2. 飼料と給餌期間
AIN-93G中に含まれる7%の大豆油を魚油（日本水産株式会社製のEPA・DHA高含有魚油、EPA・DHAを総脂肪酸中40%以上含有）、又はラード（オリエンタル酵母工業株式会社製）に置換した粉末のAIN-93G 改変飼料を作成した。AIN-93Gから大豆油を抜いた粉末飼料はオリエンタル酵母工業（株）より入手した。用いた魚油の脂肪酸組成を表３に、用いた飼料の成分組成を表４に示した。ラードは表１と同じものを用いた。給餌期間は4 週間とし、飼育期間終了後、解剖し、各臓器重量の測定、並びに骨格筋の剪断力価測定を行った。また、予備飼育中、試験飼料摂取開始後2週、摂取開始後4週の時点で大腿部の筋硬度を測定した。【００２１】
【表３】
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【００２２】
【表４】
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【００２３】
3. 筋硬度測定
ラットを保定し、右後足の大腿部の筋硬度を筋硬度計（NEUTONE TDN-N1、TRY-ALL社製）を用いて測定した。測定は1匹につき連続して3回行い、3回の平均値を測定値とした。予備飼育中の筋硬度の値を基準にして100%とし、その後の筋硬度変化を変化率で表した。
4. 剪断力価測定
解剖時に前脛骨筋、大腿直筋を採取し、2本のピンで筋肉の両端を固定した状態でカッターにより筋肉を切断し、その際の剪断力価をレオメーター（RE-3305S、YAMADEN社製、剪断速度 1 mm/秒）で測定した。【００２４】
＜結果＞
1匹当りの4週間の総摂取量は魚油群が約544gであり、ラード群は約585gであった。魚油群の一日あたりのEPAおよびDHAの摂取量は、それぞれ約345.0mgと約153.5mgであった。【００２５】
筋硬度変化率の結果を図２に示した。魚油群では試験飼料摂取開始後2週及び4週において大腿部の筋硬度が経時的に柔らかくなっていた。一方でラード群では摂取後2週の時点では摂取前と変化が見られず、摂取後4週で10%程度柔らかくなっていた。2群間で比較すると、摂取開始後2週の時点で魚油群の筋硬度が有意に低くなった。これらの結果より、ラード食と比較して魚油食では筋肉の柔軟性が向上することが示された。
試験飼料摂取後4週時点の前脛骨筋及び大腿直筋の剪断力価を表５に示した。前脛骨筋及び大腿直筋において魚油群の剪断力価はラード群と比較して低値を示した。これらの結果も、ラード食と比較して魚油食では筋肉の柔軟性が向上することを示すものであった。【００２６】
【表５】
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【００２７】
試験飼料摂取開始後4週時点の大腿直筋の剪断力価と腎周囲脂肪重量の相関関係を図３に示した。ラード群においては両者に相関関係は見られなかったが、魚油群においては有意な正の相関関係が見られた。これらの結果は、魚油摂取により腎周囲脂肪重量が減った個体ほど大腿直筋が柔らかくなったことを示しており、魚油に対する感受性が高い個体ほど筋肉の柔軟性も高まることを示唆している。この結果もラード食と比較して魚油食では筋肉柔軟性が高まることを支持する結果であった。以上の結果より、PUFAの摂取は骨格筋の柔軟性を高めると考えられた。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
スポーツ分野や老年医学の分野では骨格筋の硬直化は好ましいものではないと考えられており、トレーニングやマッサージにより柔軟にすることが行われている。本発明の組成物は、経口投与により、筋肉を柔軟にする作用を有するので、医薬品やサプリメントとして摂取することにより、スポーツ分野や老年医学分野で利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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