【手続補正書】
【提出日】平成31年3月14日(2019.3.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．少なくとも１つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）と、
ｂ．少なくとも１つの３’−非翻訳領域エレメント（３’−ＵＴＲエレメント）及び／又は少なくとも１つの５’−非翻訳領域エレメント（５’−ＵＴＲエレメント）であって、人工核酸分子からのタンパク質産生を延長及び／又は増加させ且つ安定なｍＲＮＡに由来する少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントと
を含むことを特徴とする人工核酸分子であって、
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、ＧＮＡＳ（グアニンヌクレオチド結合タンパク質、アルファ刺激複合座）の転写物の３’−ＵＴＲ及び／又は５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含むか又はからなる人工核酸分子。
【請求項２】
前記オープンリーディングフレームが、前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが由来する遺伝子とは異なる遺伝子に由来する請求項１に記載の人工核酸分子。
【請求項３】
前記少なくとも１つのオープンリーディングフレーム、前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント、及び前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントのそれぞれが、互いに異種である請求項２に記載の人工核酸分子。
【請求項４】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが由来する前記安定なｍＲＮＡが、第１の時点における前記ｍＲＮＡの量に対する第２の時点における前記ｍＲＮＡの量の比が少なくとも０．５（５０％）であるｍＲＮＡ分解を特徴とする請求項１から３のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項５】
前記人工核酸分子が、リボソームタンパク質Ｓ６、ＲＰＬ３６ＡＬ、ｒｐｓ１６、又はリボソームタンパク質Ｌ９の３’−ＵＴＲ及び／又は５’−ＵＴＲを含まず、前記人工核酸分子の前記オープンリーディングフレームが、レポータータンパク質をコードしていない請求項１から４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項６】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、それぞれ３’−ＵＴＲ及び／又は少なくとも１つの５’−ＵＴＲを有しないレファレンス核酸分子からのタンパク質産生と比べて、前記人工核酸分子からのタンパク質産生を少なくとも１．２倍延長する、及び／又は前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、それぞれ３’−ＵＴＲ及び／又は少なくとも１つの５’−ＵＴＲを有しないレファレンス核酸分子からのタンパク質産生と比べて、前記人工核酸分子からのタンパク質産生を少なくとも１．５倍増加させる請求項１から５のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項７】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、更に、ＮＤＵＦＡ１（ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１アルファサブ複合体）、ＭＯＲＮ２（ＭＯＲＮリピート含有２）、ＧＳＴＭ１（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、ｍｕ１）、ＣＢＲ２（カルボニルレダクターゼ２）、ＭＰ６８（ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２０１０１０７Ｅ０４遺伝子）、ＮＤＵＦＡ４（ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１アルファサブ複合体４）、ＬＴＡ４Ｈ、ＳＬＣ３８Ａ６、ＤＥＣＲ１、ＰＩＧＫ、ＦＡＭ１７５Ａ、ＰＨＹＨ、ＴＢＣ１Ｄ１９、ＰＩＧＢ、ＡＬＧ６、ＣＲＹＺ、ＢＲＰ４４Ｌ、ＡＣＡＤＳＢ、ＳＵＰＴ３Ｈ、ＴＭＥＭ１４Ａ、ＧＲＡＭＤ１Ｃ、Ｃ１１ｏｒｆ８０、Ｃ９ｏｒｆ４６、ＡＮＸＡ４、ＴＢＣＫ、ＩＦＩ６、Ｃ２ｏｒｆ３４、ＡＬＤＨ６Ａ１、ＡＧＴＰＢＰ１、ＣＣＤＣ５３、ＬＲＲＣ２８、ＣＣＤＣ１０９Ｂ、ＰＵＳ１０、ＣＣＤＣ１０４、ＣＡＳＰ１、ＳＮＸ１４、ＳＫＡＰ２、ＮＤＵＦＢ６、ＥＦＨＡ１、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＢＳ２、ＬＭＢＲＤ１、ＩＴＧＡ６、ＨＥＲＣ５、ＮＴ５ＤＣ１、ＲＡＢ７Ａ、ＡＧＡ、ＴＰＫ１、ＭＢＮＬ３、ＨＡＤＨＢ、ＭＣＣＣ２、ＣＡＴ、ＡＮＡＰＣ４、ＰＣＣＢ、ＰＨＫＢ、ＡＢＣＢ７、ＰＧＣＰ、ＧＰＤ２、ＴＭＥＭ３８Ｂ、ＮＦＵ１、ＯＭＡ１、ＬＯＣ１２８３２２／ＮＵＴＦ２、ＮＵＢＰＬ、ＬＡＮＣＬ１、ＨＨＬＡ３、ＰＩＲ、ＡＣＡＡ２、ＣＴＢＳ、ＧＳＴＭ４、ＡＬＧ８、Ａｔｐ５ｅ、Ｇｓｔｍ５、Ｕｑｃｒ１１、Ｉｆｉ２７Ｉ２ａ、Ａｎａｐｃ１３、Ａｔｐ５Ｉ、Ｔｍｓｂ１０、Ｎｅｎｆ、Ｎｄｕｆａ７、Ａｔｐ５ｋ、１１１０００８Ｐ１４Ｒｉｋ、Ｃｏｘ４ｉ１、Ｃｏｘ６ａ１、Ｎｄｕｆｓ６、Ｓｅｃ６１ｂ、Ｒｏｍｏ１、Ｓｎｒｐｄ２、Ｍｇｓｔ３、Ａｌｄｈ２、Ｓｓｒ４、Ｍｙｌ６、Ｐｒｄｘ４、Ｕｂｌ５、１１１０００１Ｊ０３Ｒｉｋ、Ｎｄｕｆａ１３、Ｎｄｕｆａ３、Ｇｓｔｐ２、Ｔｍｅｍ１６０、Ｅｒｇｉｃ３、Ｐｇｃｐ、Ｓｌｐｉ、Ｍｙｅｏｖ２、Ｎｄｕｆｓ５、１８１００２７Ｏ１０Ｒｉｋ、Ａｔｐ５ｏ、Ｓｈｆｍ１、Ｔｓｐｏ、Ｓ１００ａ６、Ｔａｌｄｏ１、Ｂｌｏｃ１ｓ１、Ｈｅｘａ、Ｎｄｕｆｂ１１、Ｍａｐ１ｌｃ３ａ、Ｇｐｘ４、Ｍｉｆ、Ｃｏｘ６ｂ１、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２９０００１０Ｊ２３（Ｓｗｉ５）、Ｓｅｃ６１ｇ、２９０００１０Ｍ２３Ｒｉｋ、Ａｎａｐｃ５、Ｍａｒｓ２、Ｐｈｐｔ１、Ｎｄｕｆｂ８（ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１ベータサブ複合体８）、Ｐｆｄｎ５、Ａｒｐｃ３、Ｎｄｕｆｂ７、Ａｔｐ５ｈ、Ｍｒｐｌ２３、Ｕｂａ５２、Ｔｏｍｍ６、Ｍｔｃｈ１、Ｐｃｂｄ２、Ｅｃｍ１、Ｈｒｓｐ１２、Ｍｅｃｒ、Ｕｑｃｒｑ、Ｇｓｔｍ３、Ｌｓｍ４、Ｐａｒｋ７、Ｕｓｍｇ５、Ｃｏｘ８ａ、Ｌｙ６ｃ１、Ｃｏｘ７ｂ、Ｐｐｉｂ、Ｂａｇ１、Ｓ１００ａ４、Ｂｃａｐ３１、Ｔｅｃｒ、Ｒａｂａｃ１、Ｒｏｂｌｄ３、Ｓｏｄ１、Ｎｅｄｄ８、Ｈｉｇｄ２ａ、Ｔｒａｐｐｃ６ａ、Ｌｄｈｂ、Ｎｍｅ２、Ｓｎｒｐｇ、Ｎｄｕｆａ２、Ｓｅｒｆ１、Ｏａｚ１、Ｒｐｓ４ｘ、Ｒｐｓ１３、Ｙｂｘ１（Ｙ−ボックス結合タンパク質１）、Ｓｅｐｐ１、Ｇａａ、ＡＣＴＲ１０、ＰＩＧＦ、ＭＧＳＴ３、ＳＣＰ２、ＨＰＲＴ１、ＡＣＳＦ２、ＶＰＳ１３Ａ、ＣＴＨ、ＮＸＴ２、ＭＧＳＴ２、Ｃ１１ｏｒｆ６７、ＰＣＣＡ、ＧＬＭＮ、ＤＨＲＳ１、ＰＯＮ２、ＮＭＥ７、ＥＴＦＤＨ、ＡＬＧ１３、ＤＤＸ６０、ＤＹＮＣ２ＬＩ１、ＶＰＳ８、ＩＴＦＧ１、ＣＤＫ５、Ｃ１ｏｒｆ１１２、ＩＦＴ５２、ＣＬＹＢＬ、ＦＡＭ１１４Ａ２、ＮＵＤＴ７、ＡＫＤ１、ＭＡＧＥＤ２、ＨＲＳＰ１２、ＳＴＸ８、ＡＣＡＴ１、ＩＦＴ７４、ＫＩＦＡＰ３、ＣＡＰＮ１、ＣＯＸ１１、ＧＬＴ８Ｄ４、ＨＡＣＬ１、ＩＦＴ８８、ＮＤＵＦＢ３、ＡＮＯ１０、ＡＲＬ６、ＬＰＣＡＴ３、ＡＢＣＤ３、ＣＯＰＧ２、ＭＩＰＥＰ、ＬＥＰＲ、Ｃ２ｏｒｆ７６、ＡＢＣＡ６、ＬＹ９６、ＣＲＯＴ、ＥＮＰＰ５、ＳＥＲＰＩＮＢ７、ＴＣＰ１１Ｌ２、ＩＲＡＫ１ＢＰ１、ＣＤＫＬ２、ＧＨＲ、ＫＩＡＡ１１０７、ＲＰＳ６ＫＡ６、ＣＬＧＮ、ＴＭＥＭ４５Ａ、ＴＢＣ１Ｄ８Ｂ、ＡＣＰ６、ＲＰ６−２１３Ｈ１９．１、ＳＮＲＰＮ、ＧＬＲＢ、ＨＥＲＣ６、ＣＦＨ、ＧＡＬＣ、ＰＤＥ１Ａ、ＧＳＴＭ５、ＣＡＤＰＳ２、ＡＡＳＳ、ＴＲＩＭ６−ＴＲＩＭ３４（リードスルー転写物）、ＳＥＰＰ１、ＰＤＥ５Ａ、ＳＡＴＢ１、ＣＣＰＧ１、ＣＮＴＮ１（コンタクチン１）、ＬＭＢＲＤ２、ＴＬＲ３、ＢＣＡＴ１、ＴＯＭ１Ｌ１、ＳＬＣ３５Ａ１、ＧＬＹＡＴＬ２、ＳＴＡＴ４、ＧＵＬＰ１、ＥＨＨＡＤＨ、ＮＢＥＡＬ１、ＫＩＡＡ１５９８、ＨＦＥ、ＫＩＡＡ１３２４Ｌ、及びＭＡＮＳＣ１からなる群から選択される遺伝子の転写物の３’−ＵＴＲ及び／又は５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含む請求項１から６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項８】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、更に、ＮＤＵＦＡ１（ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１アルファサブ複合体）、ＭＯＲＮ２（ＭＯＲＮリピート含有２）、ＧＳＴＭ１（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、ｍｕ１）、ＣＢＲ２（カルボニルレダクターゼ２）、ＭＰ６８（ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２０１０１０７Ｅ０４遺伝子）、ＮＤＵＦＡ４（ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１アルファサブ複合体４）、Ｙｂｘ１（Ｙ−ボックス結合タンパク質１）、Ｎｄｕｆｂ８（ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１ベータサブ複合体８）、及びＣＮＴＮ１（コンタクチン１）からなる群から選択される遺伝子の転写物の３’−ＵＴＲ及び／又は５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含む請求項１から６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項９】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、ヒト又はマウスのＧＮＡＳ（グアニンヌクレオチド結合タンパク質、アルファ刺激複合座）からなる群から選択される遺伝子の転写物の３’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含む請求項１から６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、更に、ＭＰ６８（ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２０１０１０７Ｅ０４遺伝子）、ＮＤＵＦＡ４（ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（ユビキノン）１アルファサブ複合体４）、ＬＴＡ４Ｈ、ＤＥＣＲ１、ＰＩＧＫ、ＴＢＣ１Ｄ１９、ＢＲＰ４４Ｌ、ＡＣＡＤＳＢ、ＳＵＰＴ３Ｈ、ＴＭＥＭ１４Ａ、Ｃ９ｏｒｆ４６、ＡＮＸＡ４、ＩＦＩ６、Ｃ２ｏｒｆ３４、ＡＬＤＨ６Ａ１、ＣＣＤＣ５３、ＣＣＤＣ１０４、ＣＡＳＰ１、ＮＤＵＦＢ６、ＢＣＫＤＨＢ、ＢＢＳ２、ＨＥＲＣ５、ＦＡＭ１７５Ａ、ＮＴ５ＤＣ１、ＲＡＢ７Ａ、ＡＧＡ、ＴＰＫ１、ＭＢＮＬ３、ＭＣＣＣ２、ＣＡＴ、ＡＮＡＰＣ４、ＰＨＫＢ、ＡＢＣＢ７、ＧＰＤ２、ＴＭＥＭ３８Ｂ、ＮＦＵ１、ＬＯＣ１２８３２２／ＮＵＴＦ２、ＮＵＢＰＬ、ＬＡＮＣＬ１、ＰＩＲ、ＣＴＢＳ、ＧＳＴＭ４、Ｎｄｕｆａ１、Ａｔｐ５ｅ、Ｇｓｔｍ５、Ｃｂｒ２、Ａｎａｐｃ１３、Ｎｄｕｆａ７、Ａｔｐ５ｋ、１１１０００８Ｐ１４Ｒｉｋ、Ｃｏｘ４ｉ１、Ｎｄｕｆｓ６、Ｓｅｃ６１ｂ、Ｓｎｒｐｄ２、Ｍｇｓｔ３、Ｐｒｄｘ４、Ｐｇｃｐ、Ｍｙｅｏｖ２、Ｎｄｕｆｓ５、Ｇｓｔｍ１、Ａｔｐ５ｏ、Ｔｓｐｏ、Ｔａｌｄｏ１、Ｂｌｏｃ１ｓ１、及びＨｅｘａからなる群から選択される遺伝子の転写物の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含む請求項７から８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、配列番号１〜２４及び配列番号４９〜３１８からなる群から選択される核酸配列に対して、少なくとも５０％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなる、或いは前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメントが、配列番号１〜２４及び配列番号４９〜３１８からなる群から選択される核酸配列の断片に対して、少なくとも４０％の同一性を有する核酸配列の断片を含むか又はからなる請求項１から９のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１２】
前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、配列番号２５〜３０及び配列番号３１９〜３８２からなる群から選択される核酸配列に対して、少なくとも５０％の同一性を有する核酸配列を含むか又はからなる、或いは前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントが、配列番号２５〜３０及び配列番号３１９〜３８２からなる群から選択される核酸配列に対して、少なくとも４０％の同一性を有する核酸配列の断片を含むか又はからなる請求項１から８及び１０のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１３】
ｃ．ポリ（Ａ）配列及び／又はポリアデニル化シグナル
を更に含む請求項１から１２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１４】
前記ポリ（Ａ）配列又はポリアデニル化シグナルが、前記３’−ＵＴＲエレメントの３’に位置する請求項１３に記載の人工核酸分子。
【請求項１５】
前記ポリアデニル化シグナルが、コンセンサス配列ＮＮ（Ｕ／Ｔ）ＡＮＡ（Ｎ＝Ａ又はＵ）を含む請求項１３から１４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１６】
前記ポリアデニル化シグナルが、ＡＡ（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡ又はＡ（Ｕ／Ｔ）（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡを含む請求項１３から１４のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１７】
前記ポリアデニル化シグナルが、前記３’−ＵＴＲエレメントの３’末端の５０ヌクレオチド未満下流に位置する請求項１３から１６のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１８】
前記ポリ（Ａ）配列が、２０アデニンヌクレオチド〜３００アデニンヌクレオチドの長さを有する請求項２３から１７のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項１９】
５’−キャップ構造、ポリ（Ｃ）配列、ヒストンステムループ、及び／又はＩＲＥＳモチーフを更に含む請求項１から１８のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２０】
前記核酸が、５’−ＴＯＰ  ＵＴＲを含み、及び／又は
前記核酸が、アルブミン遺伝子の３’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含むか又はからなる３’−ＵＴＲを含み、及び／又は
前記人工核酸分子が、少なくとも部分的にＧ／Ｃ改変されている請求項１から１９のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２１】
前記オープンリーディングフレームのＧ／Ｃ含量が、野生型オープンリーディングフレームに比べて増加している請求項１から２０のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２２】
前記オープンリーディングフレームのコドンが最適化されている請求項１から２１のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２３】
ｍＲＮＡ分子である請求項１から２２のいずれかに記載の人工核酸分子。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子を含むことを特徴とするベクター。
【請求項２５】
プラスミドベクター又はウイルスベクターである請求項２４に記載のベクター。
【請求項２６】
請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子又は請求項２４から２５のいずれかに記載のベクターを含むことを特徴とする細胞。
【請求項２７】
請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項２４から２５のいずれかに記載のベクター、又は請求項２６に記載の細胞を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２８】
医薬として使用するための請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項２４から２５のいずれかに記載のベクター、請求項２６に記載の細胞、又は請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ワクチンとして使用するための又は遺伝子治療において使用するための請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項２４から２５のいずれかに記載のベクター、請求項２６に記載の細胞、又は請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
人工核酸分子からのタンパク質産生を増加及び／又は延長させるｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法であって、オープンリーディングフレームを３’−ＵＴＲエレメント及び／又は５’−ＵＴＲエレメント（前記３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記５’−ＵＴＲエレメントは、得られる人工核酸分子からのタンパク質産生を延長及び／又は増加させ、前記少なくとも１つの３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記少なくとも１つの５’−ＵＴＲエレメントは、安定なｍＲＮＡに由来する）と連結させて、請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子又は請求項２４から２５のいずれかに記載のベクターを得る工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項３１】
人工核酸分子からのタンパク質産生を増加及び／又は延長させるための３’−ＵＴＲエレメント及び／又は５’−ＵＴＲエレメントの使用であって、前記３’−ＵＴＲエレメント及び／又は前記５’−ＵＴＲエレメントが、ＧＮＡＳ（グアニンヌクレオチド結合タンパク質、アルファ刺激複合座）の転写物の３’−ＵＴＲ及び／又は５’−ＵＴＲに由来する核酸配列を含むか又はからなることを特徴とする使用。
【請求項３２】
請求項１から２３のいずれかに記載の人工核酸分子、請求項２４から２５のいずれかに記載のベクター、請求項２６に記載の細胞、及び／又は請求項２７に記載の医薬組成物を含むことを特徴とするキット又はキットオブパーツ。
【請求項３３】
使用説明書と、トランスフェクション用の細胞と、アジュバントと、前記医薬組成物の投与手段と、前記人工核酸分子、前記ベクター、前記細胞、又は前記医薬組成物を溶解又は希釈するための薬学的に許容できる担体及び／又は薬学的に許容できる溶液とを更に含む請求項３２に記載のキット。