【手続補正書】
【提出日】平成31年4月15日(2019.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）第１ポリヌクレオチド組成物を多価カチオン塩と接触させて、少なくとも１つの多価カチオン対イオンを含む第１ポリヌクレオチド塩を沈殿させること；ならびに
ｂ）前記第１ポリヌクレオチド塩を前記接触済み第１ポリヌクレオチド組成物から分離して、前記第１ポリヌクレオチド塩を含む第２ポリヌクレオチド組成物を生成すること；
を含むポリヌクレオチドの調製方法であって、
前記ポリヌクレオチド組成物は、
ｉ）７以上のヌクレオシドサブユニットの配列を有し、前記ヌクレオシドサブユニットの少なくとも２つがＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結しているポリヌクレオチド；および
ｉｉ）可溶性の非目標合成生成物及び試薬；
を含む、方法。
【請求項２】
ｃ）ステップｂ）の前記第１ポリヌクレオチド塩を含む第２ポリヌクレオチド組成物を逆相クロマトグラフィー担体と接触させること；及び
ｄ）逆相クロマトグラフィー担体から第２可溶性ポリヌクレオチド塩を含む第３ポリヌクレオチド組成物を溶出すること；
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリヌクレオチドが式（Ｉ）
【化３】
2018513127.tif 000001
によって記述され、
式中、
各Ｂは独立してプリン、保護プリン、ピリミジンもしくは保護ピリミジン、またはこれらのアナログであり；
各Ｘは独立して酸素または硫黄であり；
各Ｒ３は独立して水素、フルオロ、ヒドロキシル、アルコキシ、置換アルコキシまたは保護ヒドロキシルであり；
Ｒ６はアミノ、ヒドロキシル、保護アミノ、保護ヒドロキシ、−Ｏ−Ｔ−Ｚまたは−ＮＨ−Ｔ−Ｚであり；
各Ｔは独立して任意選択のリンカーであり；
各Ｚは独立してＨ、脂質、担体、オリゴヌクレオチド、ポリマー、ポリペプチド、検出可能な標識、またはタグであり；
ｎは７〜１００の整数である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１３以上のヌクレオシドサブユニットを含む配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１０〜５０の連続したヌクレオシドサブユニットを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ヌクレオシドサブユニットがすべてＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結している、請求項４〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ポリヌクレオチドがＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号４）、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）及びＣＡＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号５）からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ポリヌクレオチドが任意選択のリンカーを介して脂質部分と結合している、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記第２ポリヌクレオチド塩が以下の構造を有し、
【化１６】
2018513127.tif 000002
式中、各Ｍｘ＋が独立して水素またはカチオン対イオンであり、各ｘが独立して１、２または３であり、ｎが５〜１３の整数である、請求項２〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記溶出ステップｄ）の後に前記第２ポリヌクレオチド塩が前記ポリヌクレオチドの医薬品として許容可能な塩である、請求項２〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記溶出ステップｄ）の後に前記第２ポリヌクレオチド塩が前記ポリヌクレオチドの一価カチオン塩である、請求項２〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記溶出ステップｄ）の後に前記第２ポリヌクレオチド塩が前記ポリヌクレオチドのナトリウム塩である、請求項２〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記接触ステップａ）の前に前記ポリヌクレオチドを固相合成担体から切断して前記第１ポリヌクレオチド組成物を前記ポリヌクレオチドの粗合成調製物として生成することをさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記接触ステップａ）の前に前記第１ポリヌクレオチド組成物が前記ポリヌクレオチドの一価カチオン塩を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記接触ステップａ）がカチオン交換担体から前記第１ポリヌクレオチド組成物を添加することおよび溶出することを含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記分離ステップｂ）が前記接触済み第１ポリヌクレオチド組成物を遠心分離して前記第１ポリヌクレオチド塩の沈殿物をスピンダウンすることを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記分離ステップｂ）が前記接触済み第１ポリヌクレオチド組成物から前記第１ポリヌクレオチド塩を濾過することを含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
ステップｂ）の前記第２ポリヌクレオチド組成物を前記逆相クロマトグラフィー担体上に直接添加する、請求項２〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記接触ステップｃ）の前に前記第２ポリヌクレオチド組成物を溶媒中に溶解させることをさらに含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが二価である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがマグネシウム、亜鉛及びカルシウムからなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが三価である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがアルミニウムである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１ポリヌクレオチド塩が一価カチオン対イオンをさらに含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
少なくとも１つの多価カチオン対イオンを含むポリヌクレオチドの塩
を含み、前記ポリヌクレオチドが７以上のヌクレオシドサブユニットの配列を有し、前記ヌクレオシドサブユニットの少なくとも２つがＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結している、組成物。
【請求項２６】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが二価である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがマグネシウム、亜鉛及びカルシウムからなる群から選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがマグネシウムである、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが三価である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項３０】
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがアルミニウムである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ポリヌクレオチド塩が３ｍｏｌ％以上の前記多価カチオン対イオンを含む、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ポリヌクレオチド塩が１．０重量％以上の前記多価カチオン対イオンを含む、請求項２５〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記組成物が、沈殿物である、請求項２５〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ポリヌクレオチドが式（Ｉ）
【化３】
2018513127.tif 000003
によって記述され、
式中、
各Ｂは独立してプリン、保護プリン、ピリミジンもしくは保護ピリミジン、またはこれらのアナログであり；
各Ｘは独立して酸素または硫黄であり；
各Ｒ３は独立して水素、フルオロ、ヒドロキシル、アルコキシ、置換アルコキシまたは保護ヒドロキシルであり；
Ｒ６はアミノ、ヒドロキシル、保護アミノ、保護ヒドロキシ、−Ｏ−Ｔ−Ｚまたは−ＮＨ−Ｔ−Ｚであり；
各Ｔは独立して任意選択のリンカーであり；
各Ｚは独立してＨ、脂質、担体、オリゴヌクレオチド、ポリマー、ポリペプチド、検出可能な標識、またはタグであり；
ｎは７〜１００の整数である、請求項２５〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１３以上のヌクレオシドサブユニットを含む配列を含む、請求項２５〜３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１０〜５０の連続したヌクレオシドサブユニットを含む、請求項２５〜３５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３７】
前記ヌクレオシドサブユニットがすべてＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結している、請求項２５〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記ポリヌクレオチドがＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号４）、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）及びＣＡＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号５）からなる群から選択される配列を含む、請求項２５〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
前記ポリヌクレオチドの３’または５’末端が任意選択のリンカーを介して脂質部分と結合している、請求項２５〜３８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記ポリヌクレオチドが以下の構造を有し、
【化１７】
2018513127.tif 000004
式中、各Ｍｘ＋が独立してカチオン対イオンであり、各ｘが１、２または３であり、ｎが５〜１２である、請求項２５〜３９のいずれか１項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
当業者は、下記の図面が例示目的のみのものであることを理解するであろう。本図面は、決して本教示の範囲を限定することを目的としていない。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
７以上のヌクレオシドサブユニットの配列を有し、前記ヌクレオシドサブユニットの少なくとも２つがＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結しているポリヌクレオチド；ならびに
非目標合成生成物及び試薬；
を含む第１ポリヌクレオチド組成物を多価カチオン塩と接触させて、少なくとも１つの多価カチオン対イオンを含む第１ポリヌクレオチド塩を沈殿させること；ならびに
前記第１ポリヌクレオチド塩を前記接触済み第１ポリヌクレオチド組成物から分離して、前記第１ポリヌクレオチド塩を含む第２ポリヌクレオチド組成物を生成すること；
を含むポリヌクレオチドの調製方法。
（項目２）
前記第１ポリヌクレオチド塩を逆相クロマトグラフィー担体と接触させること；及び
クロマトグラフィー担体から第２ポリヌクレオチド塩を含む第３ポリヌクレオチド組成物を溶出すること；
をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１３以上のヌクレオシドサブユニットを含む配列を含む、項目１〜２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４）
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１０〜５０の連続したヌクレオシドサブユニットを含む、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
ヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な前記ヌクレオシドサブユニットがすべてＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結している、項目３〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記ポリヌクレオチドがＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号４）、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）及びＣＡＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号５）からなる群から選択される配列を含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記ポリヌクレオチドが任意選択のリンカーを介して脂質部分と結合している、項目１〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記第２ポリヌクレオチド塩が以下の構造を有し、
【化１６】
2018513127.tif 000005
式中、各Ｍｘ＋が独立して水素またはカチオン対イオンであり、各ｘが独立して１、２または３であり、ｎが５〜１３の整数である、項目２〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記第２ポリヌクレオチド塩が前記ポリヌクレオチドの医薬品として許容可能な塩である、項目２〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記第２ポリヌクレオチド塩が前記ポリヌクレオチドの一価カチオン塩である、項目２〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記第２ポリヌクレオチド塩が前記ポリヌクレオチドのナトリウム塩である、項目２〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記ポリヌクレオチドを担体から切断して前記第１ポリヌクレオチド組成物を生成することをさらに含む、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記第１組成物が前記ポリヌクレオチドの一価カチオン塩を含む、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記接触ステップがカチオン交換担体から前記第１ポリヌクレオチド組成物を溶出することを含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記分離ステップが前記接触済み第１ポリヌクレオチド組成物を遠心分離して前記ポリヌクレオチド塩の沈殿物をスピンダウンすることを含む、項目１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記分離ステップが前記接触済み第１ポリヌクレオチド組成物から前記ポリヌクレオチド塩を濾過することを含む、項目１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記第２ポリヌクレオチド組成物を前記逆相クロマトグラフィー担体上に直接添加する、項目２に記載の方法。
（項目１８）
前記第２ポリヌクレオチド組成物を溶媒中に溶解させることをさらに含む、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが二価である、項目１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがマグネシウム、亜鉛及びカルシウムからなる群から選択される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが三価である、項目１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがアルミニウムである、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ポリヌクレオチド塩が一価カチオン対イオンをさらに含む、項目１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
少なくとも１つの多価カチオン対イオンを含むポリヌクレオチドの塩
を含み、前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な７以上のヌクレオシドサブユニットの配列を有し、前記ヌクレオシドサブユニットの少なくとも２つがＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結している、組成物。
（項目２５）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが二価である、項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがマグネシウム、亜鉛及びカルシウムからなる群から選択される、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがマグネシウムである、項目２４〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２８）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンが三価である、項目２４に記載の組成物。
（項目２９）
前記少なくとも１つの多価カチオン対イオンがアルミニウムである、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記ポリヌクレオチドが前記ポリヌクレオチドのポリアニオン主鎖に対して３ｍｏｌ％以上の前記多価カチオン対イオンを含む、項目２４〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３１）
前記ポリヌクレオチドが前記ポリヌクレオチドに対して１．０重量％以上の前記多価カチオン対イオンを含む、項目２４〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３２）
前記組成物が、沈殿物である、項目２４〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３３）
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１３以上のヌクレオシドサブユニットを含む配列を含む、項目２４〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３４）
前記ポリヌクレオチドがヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な１０〜５０の連続したヌクレオシドサブユニットを含む、項目２４〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３５）
ヒトテロメラーゼのＲＮＡコンポーネントに相補的な前記ヌクレオシドサブユニットがすべてＮ３’→Ｐ５’チオホスホルアミデートサブユニット間結合によって連結している、項目２４〜３４のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３６）
前記ポリヌクレオチドがＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号４）、ＴＡＧＧＧＴＴＡＧＡＣＡＡ（配列番号３）及びＣＡＧＴＴＡＧＧＧＴＴＡＧ（配列番号５）からなる群から選択される配列を含む、項目２４〜３５のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３７）
前記ポリヌクレオチドが任意選択のリンカーを介して脂質部分と結合している、項目２４〜３６のいずれか１項に記載の組成物。
（項目３８）
前記ポリヌクレオチドが以下の構造を有し、
【化１７】
2018513127.tif 000006
式中、各Ｍｘ＋が独立してカチオン対イオンであり、各ｘが１、２または３であり、ｎが５〜１２である、項目２４〜３７のいずれか１項に記載の組成物。