【手続補正書】
【提出日】令和1年5月27日(2019.5.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞成長足場粒子を調製するための方法であって、
少なくとも１つのパンチを、少なくとも１枚の細胞成長足場材料のシートを貫いて押し進めて前記シートからシート状足場粒子を切り離す段階と、
前記押し進める段階で前記シートから切り離された前記シート状足場粒子を収集する段階と、
を備えている方法。
【請求項２】
前記押し進める段階中に前記少なくとも１枚のシートへ張力を印加する段階、を更に備えている請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記張力を印加する段階は、弾性部材を前記少なくとも１枚のシートに押し当てる段階を含んでいる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記押し当てる段階は、前記押し進める段階中に起こり、前記パンチを前記少なくとも１枚のシートから退かせる当該パンチの運動中には解放される、請求項２又は請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記弾性部材は、外周を画定する先導端を有する弾性管状壁を備え、前記押し当てる段階は前記管状壁の前記先導端を前記少なくとも１つの層に押し当てる段階を含んでいる、請求項３又は請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記押し当てる段階中、前記外周は前記パンチを取り囲んでいる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
細胞成長足場粒子が前記１枚又はそれ以上のシートの少なくとも４０重量％、より好適には少なくとも５０重量％、なおいっそう好適な５０−６０重量％を構成するように行われる請求項１乃至６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記押し進める段階を複数回実施して、前記１枚又はそれ以上のシートに互いに離間されている複数孔を形成し前記細胞成長足場粒子が除去されているようにする、請求項１乃至７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記孔の隣り合う孔同士は互いから少なくとも約０．１ｍｍだけ離間されている、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記収集する段階は、前記パンチ内の通路の中に前記シート状支持体を集める段階を含んでいる、請求項１乃至９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記パンチは前記少なくとも１枚のシートへ当該シートの第１面から進入し、前記収集する段階は、前記細胞成長足場粒子を前記少なくとも１枚のシートの第２面を貫き通して排出する段階を含んでいる、請求項１から請求項８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１枚のシートは少なくとも２枚のシートを積重された構成とされており、好適には２枚乃至１０枚のシートを積重された構成とされており、請求項１乃至１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのパンチは少なくとも２つのパンチを含んでおり、好適には２つ乃至２０のパンチを含んでいる、請求項１乃至１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記押し進める段階は、前記少なくとも２つのパンチを、好適には前記２つ乃至２０のパンチを、少なくとも１枚の細胞成長足場材料のシートを貫いて同時に押し進めてシート状足場粒子を前記シートから切り離す段階を含んでいる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１枚の足場材料は細胞外基質組織材料を備え、好適には該組織材料はその源組織にネイティブの１つ又はそれ以上の生理活性作用物質を保持しており、より好適には該１つ又はそれ以上の生理活性作用物質は、塩基性線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−２）、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ−ベータ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、軟骨由来成長因子（ＣＤＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、グリコプロテイン、プロテオグリカン、及び／又はグリコサミノグリカン、を含んでいる、請求項１乃至１４の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記少なくとも１枚の足場材料のシートは、組織源から単離された際にシート構造を有する膜質組織である細胞外基質組織材料を備えている、請求項１乃至１５の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１乃至１６の何れか一項により調製されたシート状細胞成長足場粒子。
【請求項１８】
微粒子状細胞成長足場組成物であって、
シート状細胞成長足場粒子の集団を備え、前記粒子は切断縁によって画定される外周を有している、組成物。
【請求項１９】
前記切断縁は機械的に切断された縁である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記切断縁は熱変性コラーゲン不含有であり、コラーゲン繊維の露出した切断縁を呈している、請求項１８又は請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記粒子は、円形、卵形、又は多角形の形状を有している、請求項１８から請求項２０の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記足場粒子は細胞外基質組織材料を備え、好適には該組織材料はその源組織にネイティブの１つ又はそれ以上の生理活性作用物質を保持しており、より好適には前記１つ又はそれ以上の生理活性作用物質は、塩基性線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ−２）、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ−ベータ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、軟骨由来成長因子（ＣＤＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、グリコプロテイン、プロテオグリカン、及び／又はグリコサミノグリカン、を含んでいる、請求項１８から請求項２１の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記足場粒子は膜質細胞外基質組織材料を備えている、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記足場粒子は、細胞培地、血液、又は血液分画、を組み入れている、請求項１８から請求項２３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記足場粒子は乾燥状態にある、請求項１８から請求項２３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記足場粒子は凍結乾燥状態にある、請求項１８から請求項２３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物は更に細胞を備え、好適には以上に前記識別されている細胞のうちの何れか１つ又は何れかの組合せである、請求項１８から請求項２４の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物は更に前記足場粒子へ付着させた細胞を備え、好適には以上に前記識別されている細胞のうちの何れか１つ又は何れかの組合せである、請求項１８から請求項２７の何れか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
シート状足場粒子は、約２０ミクロンから約２０００ミクロン、より好適には約１００ミクロンから約１０００ミクロン、なおいっそう好適には約１００ミクロンから５００ミクロン、の最大断面寸法を有しており、好適には更に前記シート状足場粒子は前記最大断面寸法より小さいシート厚さを有している、請求項１８から請求項２８の何れか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
組成物を調製するための方法であって、
細胞を懸濁液の中で請求項１８乃至２９の何れか一項に記載の組成物の存在下にインキュベートして前記シート状足場粒子へ付着させる段階、
を備えている方法。
【請求項３１】
前記細胞が当該細胞に内在性の細胞外基質タンパク質を前記シート状足場粒子の中及び／又は上に堆積させた細胞化体、が形成されるよう十分に前記細胞を培養する段階を更に備えている請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記培養する段階は、前記細胞化体中のコラーゲンの少なくとも１％、好適には少なくとも２％、より好適には少なくとも１０％、が当該細胞に内在するよう十分に実施される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記細胞を前記シート状足場粒子から又は前記細胞化体から離脱させる段階を更に備えている請求項３０から請求項３２の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記離脱させる段階に際し又は後に、前記細胞から単独型細胞懸濁液を形成する段階を更に備えている、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記離脱させる段階は、前記シート状足場粒子又は前記細胞化体を酵素と接触させる段階を備え、好適には前記酵素はトリプシン及び／又はコラゲナーゼである、請求項３３又は請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記離脱させる段階の後、前記シート状足場粒子のレムナントを前記細胞から分離させる段階を更に備えている、請求項３３から請求項３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記インキュベートする段階中及び／又は前記培養する段階中に馴化された液体培地を収集する段階を更に備えている、請求項３０から請求項３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記液体培地を滅菌する段階を更に備えている、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
患者を治療するための方法であって、請求項１乃至１６の何れか一項により調製された細胞成長足場粒子、又は請求項１８乃至２９の何れか一項に記載の微粒子状細胞成長足場組成物、又は請求項３０乃至３８の何れか一項により調製された組成物、を前記患者へ投与する段階を備えている方法。
【請求項４０】
前記投与する段階は注入による、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
以上に識別されているものの何れかを含む、損傷組織、病変組織、又は不足組織の治療のための請求項３９に記載の方法。