【手続補正書】
【提出日】令和1年11月1日(2019.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
基準ポリペプチドに由来し、マンナナーゼ活性を有する、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片であって、
前記基準ポリペプチドと比較して、
（ａ）（ｉ）Ｘ１Ｖ、Ｘ１Ｌ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ４Ｓ、Ｘ６Ｓ、Ｘ６Ｅ、Ｘ１０Ｔ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１９Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２８Ｓ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｄ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６１Ｗ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６６Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７０Ｒ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ７５Ｌ、Ｘ７８Ｄ、Ｘ７８Ｈ、Ｘ８０Ｔ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ９３Ｒ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１１１Ｄ、Ｘ１１１Ｓ、Ｘ１２４Ｖ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１３１Ａ、Ｘ１３５Ｌ、Ｘ１３６Ｌ、Ｘ１３９Ｍ、Ｘ１４３Ｑ、Ｘ１４３Ｒ、Ｘ１５０Ｔ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｉ、Ｘ２１７Ｐ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２５９Ｐ、Ｘ２６１Ｑ、Ｘ２６１Ｒ、Ｘ２８３Ｓ、Ｘ２８４Ａ、及びＸ２８４Ｅから選択される１つ若しくは複数の位置での１つ若しくは複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）；又は
（ｂ）Ｘ１９Ｅ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２６１Ｑ、及びＸ２６１Ｒから選択される１つ若しくは複数の位置での２つ以上の置換（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）；
から選択される２つ以上の改変を含み、
前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられ、
前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％であり、
前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、前記基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており；特性の前記向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、及び洗浄性能の向上から選択される、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項２】
前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は：
（ａ）（ｉ）Ｍ１Ｖ、Ｍ１Ｌ、Ａ２Ｓ、Ｔ３Ｒ、Ｇ４Ｓ、Ｙ６Ｓ、Ｙ６Ｅ、Ｎ１０Ｔ、Ｎ１０Ｓ、Ｐ１９Ｅ、Ｇ２８Ａ、Ｇ２８Ｓ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｙ６１Ｗ、Ｔ６２Ｅ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｌ６６Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｋ７０Ｒ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｖ７５Ｌ、Ｑ７８Ｄ、Ｑ７８Ｈ、Ｋ８０Ｔ、Ｉ８２Ｍ、Ｋ９３Ｒ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｖ１０３Ｉ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｓ、Ｉ１２４Ｖ、Ｙ１２９Ｍ、Ｔ１３１Ａ、Ｔ１３５Ｌ、Ａ１３６Ｌ、Ｄ１３９Ｍ、Ｋ１４３Ｑ、Ｋ１４３Ｒ、Ｎ１５０Ｔ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｎ２１３Ａ、Ｋ２１４Ｉ、Ａ２１７Ｐ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｇ２５９Ｐ、Ｎ２６１Ｑ、Ｎ２６１Ｒ、Ｄ２８３Ｓ、Ｔ２８４Ａ、及びＴ２８４Ｅから選択される１つ若しくは複数の位置での１つ若しくは複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；又は
（ｂ）Ｐ１９Ｅ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｙ１２９Ｍ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｎ２６１Ｑ、及びＮ２６１Ｒから選択される１つ若しくは複数の位置での２つ以上の置換；
から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含み、
前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている、請求項１に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項３】
前記２つ以上の改変は：
（ｉ）１２９−２４４、１２９−１４３−２４４、３８−２５８、３８−１４３−２５８、１９−１８４、１９−１４３−１８４、９７−２２５、９７−１４３−２２５、６０−６１、６７−１６８、６７−１４３−１６８、６３−７１、６３−７１−１４３、２２８−２３５、及び１４３−２２８−２３５から選択される１つ又は複数の組み合わせられた位置での２つ以上の置換；
（ｉｉ）Ｙ１２９Ｘ−Ｋ２４４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ−Ｋ１４３Ｘ−Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ−Ｓ２５８Ｘ、Ｔ３８Ｘ−Ｋ１４３Ｘ−Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ−Ｑ１８４Ｘ、Ｐ１９Ｘ−Ｋ１４３Ｘ−Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ−Ｇ２２５Ｘ、Ｎ９７Ｘ−Ｋ１４３Ｘ−Ｇ２２５Ｘ、Ｌ６０Ｘ−Ｙ６１Ｘ、Ｎ６７Ｘ−Ｐ１６８Ｘ、Ｎ６７Ｘ−Ｋ１４３Ｘ−Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ−Ｎ７１Ｘ、Ｋ６３Ｘ−Ｎ７１Ｘ−Ｋ１４３Ｘ、Ｔ２２８Ｘ−Ｙ２３５Ｘ、及びＫ１４３Ｘ−Ｔ２２８Ｘ−Ｙ２３５Ｘから選択される１つ又は複数の組み合わせられた位置での２つ以上の置換（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）；
（ｉｉｉ）Ｘ１２９Ｍ−Ｘ２４４Ｌ、Ｘ１２９Ｍ−Ｘ１４３Ｑ−Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ−Ｘ２５８Ｄ、Ｘ３８Ｅ−Ｘ１４３Ｑ−Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ−Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ−Ｘ１４３Ｑ−Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ−Ｘ１８４Ｌ、Ｘ１９Ｅ−Ｘ１４３Ｑ−Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ−Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ−Ｘ１４３Ｑ−Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ−Ｘ２２５Ｐ、Ｘ９７Ｄ−Ｘ１４３Ｑ−Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６０Ｑ−Ｘ６１Ｗ、Ｘ６７Ｄ−Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６７Ｄ−Ｘ１４３Ｑ−Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ−Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｌ−Ｘ７１Ｄ−Ｘ１４３Ｑ、Ｘ６３Ｒ−Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｒ−Ｘ７１Ｄ−Ｘ１４３Ｑ、Ｘ２２８Ｖ−Ｘ２３５Ｌ、及びＸ１４３Ｑ−Ｘ２２８Ｖ−Ｘ２３５Ｌから選択される１つ又は複数の組み合わせられた位置での２つ以上の置換（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）；及び
（ｉｖ）Ｙ１２９Ｍ−Ｋ２４４Ｌ、Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｋ２４４Ｌ、Ｔ３８Ｅ−Ｓ２５８Ｄ、Ｔ３８Ｅ−Ｋ１４３Ｑ−Ｓ２５８Ｄ、Ｐ１９Ｅ−Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ−Ｋ１４３Ｑ−Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ−Ｑ１８４Ｌ、Ｐ１９Ｅ−Ｋ１４３Ｑ−Ｑ１８４Ｌ、Ｎ９７Ｄ−Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ−Ｋ１４３Ｑ−Ｇ２２５Ｃ、Ｌ６０Ｑ−Ｙ６１Ｗ、Ｎ９７Ｄ−Ｇ２２５Ｐ、Ｎ９７Ｄ−Ｋ１４３Ｑ−Ｇ２２５Ｐ、Ｎ６７Ｄ−Ｐ１６８Ｓ、Ｎ６７Ｄ−Ｋ１４３Ｑ−Ｐ１６８Ｓ、Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｋ１４３Ｑ、Ｋ６３Ｒ−Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｒ−Ｎ７１Ｄ−Ｋ１４３Ｑ、Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ、及びＫ１４３Ｑ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ；
から選択され、
前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている、請求項１又は２に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項４】
前記２つ以上の改変は、Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｎ６７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ６７Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｇ２２５Ｃ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｑ２４２Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｇ２５９Ｐ；Ｎ１０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｌ６６Ｖ−Ａ６８Ｓ−Ｎ７４Ｓ−Ｖ７５Ｌ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ａ２１７Ｐ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ａ２１７Ｐ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ６７Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｑ１８４Ｌ−Ａ２１７Ｐ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｇ２８Ｓ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｌ−Ｋ７０Ｒ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｅ１１１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；
Ｎ１０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｑ１８４Ｌ−Ａ２１７Ｐ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｉ１２４Ｖ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ−Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ６７Ｄ−Ｑ７８Ｈ−Ｋ８０Ｔ−Ｉ８２Ｍ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ−Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｌ−Ｋ７０Ｒ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｔ１３１Ａ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｌ−Ｋ７０Ｒ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｅ１１１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２１４Ｉ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｐ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ−Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｔ６２Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｒ−Ｆ１６７Ｙ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｔ２８４Ａ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ−Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｇ２８Ｓ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｅ１１１Ｓ−Ｙ１２９Ｍ−Ｓ１３５Ｌ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｑ−Ｄ２８３Ｓ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｐ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ−Ｐ１９Ｅ−Ｇ２８Ｓ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｎ７４Ｅ−Ｋ９３Ｒ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｎ１５０Ｔ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｎ２１３Ａ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｑ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ−Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｇ２８Ａ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ａ１３６Ｌ−Ｐ１６８Ａ−Ｑ１８４Ｌ−Ｎ２１３Ａ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−
Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｇ２８Ａ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ−Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｇ２８Ａ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｔ６２Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｋ９３Ｒ−Ｎ９７Ｌ−Ｅ１１１Ｓ−Ｙ１２９Ｍ−Ｄ１３９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｑ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ−Ｐ１９Ｅ−Ｇ２８Ａ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｄ−Ｎ６７Ｄ−Ａ６８Ｓ−Ｎ７１Ｄ−Ｋ９３Ｒ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｑ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｄ−Ｇ２２５Ｃ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｔ２８４Ｅ−Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ７１Ｄ−Ｑ７８Ｄ−Ｋ８０Ｔ−Ｎ９７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｔ２２８Ｖ−Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｎ６７Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｇ２５９Ｐ；Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｋ１４３Ｒ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ−Ｔ３８Ｅ−Ｋ６３Ｌ−Ｎ７１Ｄ−Ｙ１２９Ｍ−Ｐ１６８Ｓ−Ｑ１８４Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒから選択され、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている、請求項１〜３のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項５】
前記２つ以上の改変は、Ｐ１９Ｅ−Ｓ３０Ｔ−Ｔ３８Ｅ−Ｓ５９Ｖ−Ｌ６０Ｑ−Ｋ６３Ｒ−Ｎ６７Ｄ−Ｎ９７Ｄ−Ｖ１０３Ｉ−Ｙ１２９Ｍ−Ｆ１６７Ｙ−Ｑ１８４Ｌ−Ｇ２２５Ｃ−Ｔ２２８Ｖ−Ｙ２３５Ｌ−Ｋ２４４Ｌ−Ｓ２５８Ｄ−Ｎ２６１Ｒ−Ｚ２９８．０１Ｑであり；
前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている、請求項１〜４のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項６】
前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに：
（ｉ）位置３１〜４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフ（式中、Ｘａは、Ｆ又はＹであり、Ｘは、任意のアミノ酸である）；
（ｉｉ）位置２６３〜２７４にてＬＤＸＸＸＧＰＸＧＸＬＴ（配列番号１６）のモチーフ（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）；
（ｉｉｉ）位置２６３〜２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）のモチーフ（式中、Ｘ１は、Ｍ又はＬであり、Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）；及び
（ｉｖ）位置２６３〜２７４にてＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフ
から選択される１つ又は複数のモチーフを含み、
前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている、請求項１〜５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項７】
配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％であるアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項８】
前記基準ポリペプチドは、ＧＨ５マンナナーゼであり、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、場合によっては、ＧＨ５マンナナーゼ又はエンド−β−マンナナーゼである、請求項１〜７のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項９】
前記基準ポリペプチドは、配列番号１４、配列番号３０、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号１６０、及び配列番号１６２から選択され、そして、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、前記基準ポリペプチドのアミノ酸配列とのアミノ酸配列同一性が、少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である、請求項８に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項１０】
特性の前記向上は、
（ｉ）洗剤中での安定性の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４０℃〜約７０℃、約４５℃〜約６５℃、約５０℃〜約６０℃、約６０℃〜約７０℃、又は約５６℃の温度にて、少なくとも５分間、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％の残留マンナナーゼ活性を保持する、向上；
（ｉｉ）プロテアーゼの存在下での安定性の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、プロテアーゼ及び／又は界面活性剤の存在下で、少なくとも１５日間、又は約１５〜約４０日間、マンナナーゼ活性を少なくとも５０％保持する、向上；
（ｉｉｉ）洗浄性能の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ローカストビーンガムの染みの洗浄ＰＩが＞１である、向上；並びに
（ｉｖ）年数を経た洗浄性能の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、７時間後に洗浄活性が少なくとも１５％残留しており、又は９時間後に洗浄活性が少なくとも１１％残留している、向上
である、請求項１〜９のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項１１】
前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、炭水化物−結合モジュールを含まない、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含む洗浄組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの界面活性剤；カルシウム及び亜鉛から選択される少なくとも１つのイオン；少なくとも１つの補助剤成分；少なくとも１つの安定化剤；約０．００１重量％〜
約１．０重量％の、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片；少なくとも１つの漂白剤；並びに／あるいはアシルトランスフェラーゼ、アミラーゼ、アルファ−アミラーゼ、ベータ−アミラーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼ、アラビナーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ベータ−グルカナーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド−ベータ−１，４−グルカナーゼ、エンド−ベータ−マンナナーゼ、エキソ−ベータ−マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ−マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、脂肪分解酵素、リポキシゲナーゼ、マンナナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、リダクターゼ、ラムノガラクツロナーゼ、ベータ−グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチルエステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、キシロシダーゼ、メタロプロテアーゼ、及びそれら組合せから選択される少なくとも１つの酵素又は酵素誘導体：をさらに含む、請求項１２に記載の洗浄組成物。
【請求項１４】
前記洗浄組成物は、（ｉ）洗濯洗剤、布地柔軟仕上げ洗剤、食器洗い洗剤、及び硬質表面洗浄洗剤から選択される洗剤組成物、及び／又は、（ｉｉ）液体、粉末、顆粒状の固体、タブレット、シート、及び単位用量から選択される形態の組成物、及び／又は、（ｉｉ）ホスフェートを含有し、若しくはホスフェートを含有せず、且つ／又はホウ素を含有し、若しくはホウ素を含有しない、組成物である、請求項１２又は１３に記載の洗浄組成物。
【請求項１５】
マンナンを含む汚れ又は染みを含む表面又はアイテムを、（ｉ）請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、あるいは（ｉｉ）請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の洗浄組成物と接触させることを含み、前記汚れ又は前記染みに含有される前記マンナンは加水分解される、洗浄方法。
【請求項１６】
前記アイテムは、皿類又は布地である、請求項１５に記載の洗浄方法。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１７に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１９】
請求項１８に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２０】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を生産する方法であって：
（ａ）請求項１８に記載の発現ベクターで請求項１９に記載の宿主細胞を安定して形質転換することと、
（ｂ）形質転換された前記宿主細胞を、前記宿主細胞が前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を産生するのに適した条件下で培養することと；
（ｃ）前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を回収することと、
を含む方法。
【請求項２１】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含む、食品組成物若しくは飼料組成物及び／又は食品添加物。
【請求項２２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の、食品組成物若しくは飼料組成物、並びに／又は食品添加物若しくは飼料添加物、並びに／又は食品若しくは飼料及び／若しくはペットフードの調製における使用。