(57)【要約】  キレート化ターゲティング剤を90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏまたは177Ｌｕで標識するときに使用する緩衝剤を含む組成物を提供する。  キレート化ターゲティング剤を含む組成物に安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤を含有させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）キレート基とターゲティング部との連結体であるキレート化ターゲティング剤、並びに
（ｂ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤
を含む組成物であって、90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕからなる群から選ばれる放射性金属と前記キレート化ターゲティング剤とで錯体を形成させるために使用する、組成物。
【請求項２】
前記放射性金属が、90Ｙおよび177Ｌｕからなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記キレート基が、ＤＯＴＡ構造、ＤＴＰＡ構造またはＮＥＴＡ構造を有するキレート基である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記キレート基が、次のキレート基から選ばれるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【化１】
2018034354.tif 000013
【請求項５】
前記ターゲティング部が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、抗体もしくはそのフラグメントおよび核酸から選ばれるものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記キレート化ターゲティング剤と前記緩衝剤とが同じ容器に収納されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記緩衝剤が凍結乾燥されている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属をさらに有し、前記放射性金属と前記キレート化ターゲティング剤とが互いに接触しない状態で収納されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属とキレート化ターゲティング剤とを、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤の存在下に混合し、
前記放射性金属と前記キレート化ターゲティング剤とで錯体を形成させる、
放射性金属標識キレート化ターゲティング剤の製造方法。
【請求項１０】
（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤とを組み合わせてなる、前記キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患の診断又は治療薬。
【請求項１１】
（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤とを組み合わせてなる、前記キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患の診断又は治療薬製造のための使用。
【請求項１２】
キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患を診断又は治療するための、（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤との組み合わせ。
【請求項１３】
（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤とを組み合わせて投与することを特徴とする、前記キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患の診断又は治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性金属標識キレート化ターゲティング剤を調製するための、緩衝剤を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
核医学において用いられる放射性医薬には、キットと呼ばれる形態と注射液と呼ばれる形態がある。キットは、医療現場において放射性金属とキレート化ターゲティング剤とを反応させてヒトへ投与する注射液を調製するための組成物で、少なくとも放射性金属とこれと別に収納されるキレート化ターゲティング剤から構成される。一方、注射液は、医療現場でそのまま投与可能に調製された組成物である。
キットを構成する放射性金属は一般にｐＨ１前後の塩酸溶液として供給される。例えば、ＲＩ標識抗体療法剤であるゼヴァリン（登録商標）のキットを構成する111Ｉｎまたは90Ｙには添加物として適量の塩酸が添加されている。その他多くの放射性金属が塩酸溶液として供給されている。【０００３】
キレート化ターゲティング剤はキレート基とターゲティング部との連結体であり、キレート基と放射性金属との錯体を形成させることによりキレート化ターゲティング剤を放射性金属で標識する。例えば、ゼヴァリン（登録商標）のイブリツモマブチウキセタンはキレート化ターゲティング剤であり、抗ＣＤ２０抗体であるイブリツモマブと呼ばれるターゲティング部とチウキセタンまたはＭＸ−ＤＴＰＡと呼ばれるキレート基との結合体である。そしてこれを111Ｉｎまたは90Ｙで標識して使用する。【０００４】
キレート基と放射性金属との反応は多くの場合弱酸性から中性の水溶液中で行われ、このような標識反応におけるｐＨを調整するため、キットには通常さらに緩衝剤を含む。この緩衝剤により放射性金属を溶解している塩酸を中和し、かつ反応に最適なｐＨに調整する設計となっている。ゼヴァリン（登録商標）には緩衝剤として酢酸ナトリウムが含まれている。
また酢酸緩衝剤を用いた例としては、出願人が抗カドヘリン抗体を酢酸緩衝剤（酢酸アンモニウム−ＨＣｌ）存在下に67Ｇａ、111Ｉｎ又は90Ｙで標識した、放射性金属標識抗カドヘリン抗体を開示している（特許文献１）。【０００５】
酢酸緩衝剤は、このように放射性金属標識において最も広く利用されている緩衝剤であるが、その酸解離定数（ｐＫａ）は４．７６とされ緩衝能はその前後のｐＨ範囲にしか及ばないという制限がある。【０００６】
このような背景から、特許文献２では、ガリウムでのキレート錯化方法について検討されており、乳酸、酒石酸、炭酸、リン酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸を緩衝剤として用いた場合にはキレートとガリウムは完全錯化するが、クエン酸を用いた場合には錯化しないことが開示されている。また、オクトレオスキャン（登録商標）は、神経内分泌腫瘍の診断に用いられるキットで、111Ｉｎとペンテトレオチドからなり、その他緩衝剤としてクエン酸とクエン酸ナトリウムを含有したキットである。このように、放射性金属によるキレート錯化において、クエン酸緩衝剤はガリウムでは適していないがインジウムには適しており、緩衝剤の中には放射性金属ごとに適するものと適さないものが混在することを示している。【０００７】
また、キットは凍結乾燥製剤の形態を採用することもあるが、広く使用されている酢酸緩衝剤は凍結乾燥過程で昇華することから緩衝剤としてこれを選択することはできない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】再公表２０１１−９９５２４号公報
【特許文献２】特表２０１２−５１７９７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
このように、90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏまたは177Ｌｕにおいては、どのような緩衝剤が使用可能か、また凍結乾燥製剤として使用可能かは明らかではない。
そこで本発明の課題は、キレート化ターゲティング剤を90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏまたは177Ｌｕで標識するときに使用する新規な緩衝剤を含む組成物を提供することにある。
また、本発明の別な課題は、キレート化ターゲティング剤を90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏまたは177Ｌｕで標識するときに使用する新規な緩衝剤を含む凍結乾燥された組成物を提供することにある。
また、本発明の別な課題は、新規な緩衝剤の存在下にキレート化ターゲティング剤を90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏまたは177Ｌｕで標識する、放射性金属標識キレート化ターゲティング剤の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
そこで本発明者は、90Ｙ標識反応において様々な緩衝剤を用いて検討した結果、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の化合物が緩衝剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。【００１１】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔１３〕を提供するものである。
〔１〕（ａ）キレート基とターゲティング部との連結体であるキレート化ターゲティング剤、並びに
（ｂ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤
を含む組成物であって、90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕからなる群から選ばれる放射性金属と前記キレート化ターゲティング剤とで錯体を形成させるために使用する、組成物。
〔２〕放射性金属が、90Ｙおよび177Ｌｕからなる群から選ばれる、〔１〕に記載の組成物。
〔３〕キレート基が、ＤＯＴＡ構造、ＤＴＰＡ構造またはＮＥＴＡ構造を有するキレート基である、〔１〕または〔２〕に記載の組成物。
〔４〕キレート基が、次のキレート基から選ばれるものである、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の組成物。【００１２】
【化１】
2018034354.tif 000002
【００１３】
〔５〕ターゲティング部が、低分子化合物、ペプチド、タンパク質、抗体もしくはそのフラグメントおよび核酸から選ばれるものである、〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の組成物。
〔６〕キレート化ターゲティング剤と前記緩衝剤とが同じ容器に収納されている、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の組成物。
〔７〕緩衝剤が凍結乾燥されている、〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の組成物。
〔８〕90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属をさらに有し、放射性金属と前記キレート化ターゲティング剤とが互いに接触しない状態で収納されている、〔１〕〜〔７〕のいずれか１項に記載の組成物。
〔９〕90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属とキレート化ターゲティング剤とを、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤の存在下に混合し、
放射性金属とキレート化ターゲティング剤とで錯体を形成させる、
放射性金属標識キレート化ターゲティング剤の製造方法。
〔10〕（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤とを組み合わせてなる、前記キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患の診断又は治療薬。
〔11〕（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤とを組み合わせてなる、前記キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患の診断又は治療薬製造のための使用。
〔12〕キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患を診断又は治療するための、（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤との組み合わせ。
〔13〕（Ａ）90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれる放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上の緩衝剤とを組み合わせて投与することを特徴とする、前記キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患の診断又は治療方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の組成物は、組成物中に含まれる緩衝剤がキレート化ターゲティング剤の放射性金属標識反応において、この反応を阻害することなくｐＨ緩衝作用を発揮することができるため、放射性金属キレート化ターゲッティング剤を調製するための組成物として有用である。
また、本発明の組成物は、組成物中に含まれる緩衝剤が凍結乾燥過程で昇華しないため、凍結乾燥製剤として有用である。
また、本発明の製造方法は、キレート化ターゲティング剤の放射性金属標識反応において、この反応を阻害することなくｐＨ緩衝作用を発揮する緩衝剤を使用するため、放射性金属標識キレート化ターゲティング剤の製造方法として有用である。
また、本発明の組成物は、キレート化ターゲティング剤が対象とする疾患の診断又は治療薬として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１６】
緩衝剤とは、酸または塩基を添加した場合のｐＨ変化を緩める作用、すなわち緩衝作用を有する化合物である。例えば、緩衝剤として、弱酸とその共役塩基、または弱塩基とその共役酸の混合物を挙げることができる。ただし、緩衝剤は、媒体に溶解した際に混合物になっていれば良く、例えば弱酸のみを水に溶解すれば酸解離による平衡により弱酸とその共役塩基の混合物となるため、本発明では、試薬として１種類である場合も緩衝剤に含める。
【００１７】
本発明の緩衝剤は、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上である。塩としては、例えば、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属との塩、カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩、アンモニウム塩が挙げられる。好ましい緩衝剤は、安息香酸、マレイン酸、コハク酸およびこれらの塩から選ばれる１種又は２種以上であり、特に好ましい緩衝剤は、安息香酸およびその塩から選ばれる１種又は２種以上である。
目的とするｐＨに調整するには、弱酸とその共役塩基の塩を混合しても良いし、弱酸またはその共役塩基の塩と後述するｐＨ調整剤を混合しても良い。目的の反応でのｐＨに近いｐＫａを有する緩衝剤を選択することが緩衝能の点から好ましい。本発明の組成物を放射性金属標識キレート化ターゲティング剤にした際に、その溶液のｐＨは２以上８以下が好ましく、３以上７以下がより好ましく、４以上６以下が特に好ましい。
【００１８】
キレート化ターゲティング剤のターゲティング部とは、ヒトの体内で標的とする箇所に選択的に取り込まれるかまたは局在する機能を有する化合物を意味する。多くの場合、疾患の診断または治療においてはその疾患に特徴的な分子や環境を標的とし、これらに特異性を有する化合物がターゲティング部として選択される。ターゲティング部は局在の機序には限定されず、例えば、抗原に結合する抗体または抗体フラグメント、受容体に結合するアゴニストまたはアンタゴニスト、タンパク質に結合するアプタマー、ＥＰＲ効果を利用するリポソーム、ミセル、カーボンナノチューブ等の高分子、低酸素に集積するニトロイミダゾール化合物等の低分子化合物などが挙げられる。
【００１９】
ターゲティング部は、合成したものでも天然のものでも良く、分子量にも限定されない。具体的には、低分子化合物、線状、環状またはその組み合わせのいずれでも良いペプチド、タンパク質、抗体または抗体フラグメント、成長因子、アフィボディ、ユニボディ、ナノボディ、単糖類、多糖類、ビタミン、核酸、ペプチド核酸、アプタマー、リポソーム、ミセル、カーボンナノチューブなどが挙げられる。
ターゲティング部が抗体またはそのフラグメントである場合、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはそれらのフラグメントを指す。抗体フラグメントはＦａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメントを指す。
【００２０】
好ましいターゲティング部は抗ＣＤＨ３抗体（抗Ｐ−カドヘリン抗体）であり、特に好ましいターゲティング部は特許文献１に記載の抗ＣＤＨ３抗体である。抗ＣＤＨ３抗体として、例えば、細胞株ＰＰＭＸ２０１６、ＰＰＭＸ２０２５、ＰＰＭＸ２０２９、ＰＰＡＴ−０５２−０２、ＰＰＡＴ−０５２−０３、ＰＰＡＴ−０５２−０９、ＰＰＡＴ−０５２−２４、ＰＰＡＴ−０５２−２５、ＰＰＡＴ−０５２−２６、ＰＰＡＴ−０５２−２８、ＰＰＡＴ−０５２−０２ｃ、ＰＰＡＴ−０５２−０３ｃ、ＰＰＡＴ０５２−０９ｃ、ＰＰＡＴ−０５２−２１ｃ、ＰＰＡＴ−０５２−２４ｃ、ＰＰＡＴ−０５２−２５ｃ、ＰＰＡＴ−０５２−２６ｃ、ＰＰＡＴ−０５２−２７ｃ、ＰＰＡＴ−０５２−２８ｃまたはＰＰＡＴ−０５２−２９ｃから産生される抗体が挙げられる。
【００２１】
放射性金属とは、金属元素かつ放射性核種である核種を意味する。
本発明の放射性金属は、90Ｙ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、165Ｅｒ、166Ｈｏおよび177Ｌｕから選ばれるものである。Ｓｍ、Ｄｙ、Ｅｒ、Ｈｏ、Ｌｕはランタノイドと呼ばれＹとともに希土類元素に属し、互いの物理的および化学的性質は共通する。いずれも３価の酸化状態を好み、ランタノイド収縮によりイオン半径も近い。従って、Ｙとランタノイドとは錯体化学において一様に扱われ類似する関係にある（Ｌｉｕら、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６０：１３４７−１３７０（２００８））。本発明の放射性金属としては、90Ｙまたは177Ｌｕが好ましく、90Ｙが特に好ましい。
【００２２】
キレート基とは、放射性金属に対しキレート結合し得る有機基を意味する。具体的には、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）構造、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）構造または［２−（４，７−ビスカルボキシメチル［１，４，７］トリアザシクロノナン−１−イル−エチル）カルボニルメチルアミノ）酢酸（ＮＥＴＡ）構造を基本骨格として有するキレート基が挙げられる。ＮＥＴＡはＤＯＴＡの高い錯体安定性とＤＴＰＡの高い錯化速度の二つの特徴をあわせもつ性能を期待して考案されたキレートで、ＤＯＴＡよりもＹへの錯化速度が速いことが知られている（Ｃｈｏｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４５：３４５８−３４６４（２００２））。これらの基本骨格において１つのカルボキシル基がターゲティング部とのアミド結合に使用されていても良く、ＤＯＴＡ構造、ＤＴＰＡ構造、ＮＥＴＡ構造は、アミノ基とカルボキシル基と任意のアミドのカルボニル基でＹまたはランタノイドに配位して安定な錯体を形成する。また、これらの基本骨格においてエチレン基のうちの１つは、シクロヘキシレン基またはイソプロピレン基でも良い。また、キレート基は、１つのカルボキシル基または基本骨格のエチレン基もしくはメチレン基に導入した側鎖を介してターゲティング部と連結する。このような側鎖としては、簡易にターゲティング部と連結できるものがよく、無水物基、ブロモアセトアミド基、ヨードアセトアミド基、イソチオシアナト基、イソチオシアナトベンジル基、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド基、または、マレイミド基などの活性基を有する基が知られている（Ｌｉｕら、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ６０：１３４７−１３７０（２００８））。
【００２３】
本発明のキレート基としては、ＤＯＴＡ構造、ＤＴＰＡ構造またはＮＥＴＡ構造を有するキレート基が好ましく、下式に示すいずれかのキレート基がより好ましく、
【００２４】
【化２】
2018034354.tif 000003
【００２５】
下式に示すいずれかのキレート基が最も好ましい。
【００２６】
【化３】
2018034354.tif 000004
【００２７】
キレート化ターゲティング剤とは、キレート基とターゲティング部とが共有結合を介して連結された連結体を意味する。連結には前述した活性基を有する基が慣用されている。連結の際には、キレート基とターゲティング部との間に任意にリンカーまたはスペーサーなどと呼ばれる基を挟んでも良く、例えば特許文献１に様々なタイプのリンカーが挙げられている。リンカーはターゲティング部の生体内分布を最適化するように電荷、親油性、親水性を制御するように使用され、また、生体内での標的への結合を嵩高い錯体が立体的に阻害しないようにするのにも役立つ。
【００２８】
凍結乾燥とは、凍結させた組成物から真空環境下に水を昇華することによって除去する技術を意味する。本発明の緩衝剤は凍結乾燥により昇華しないため、凍結乾燥製剤にも利用することができる。特にタンパク質を扱う分野において、その変性、凝集等の物理的不安定性と脱アミド化、酸化等の化学的不安定性に起因する問題を解決する手法として慣用されており、組成物の有効期間を長期化することができる。従って、本発明のキレート化ターゲティング剤がタンパク質である場合に、これと緩衝剤が同じ容器に収納された凍結乾燥製剤が特に好ましい。本発明の組成物は、凍結乾燥された状態であってもよい。すなわち、本発明の組成物に水を加えたものを凍結乾燥させることで、本発明の組成物を凍結乾燥された状態にすることができる。
【００２９】
緩衝剤の有効な含有量は、放射性金属含有溶液と混合したときにその溶液に含まれる酸を中和でき、かつ最適な反応ｐＨを維持できる量であることが好ましい。放射性金属はその半減期に従って刻々と減少することから、注射液調製時に必要な放射性金属の量はヒトへの予定投与時刻から遡って計算される。つまり注射液調製時に使用される放射性金属含有溶液の量は通常一定ではない。従って、緩衝剤の含有量は想定される最も多い放射性金属含有溶液の量に対応できる量が好ましく、注射液調製時にはその全量を使用するようにしても良いし、放射性金属含有溶液量に応じて可変としても良い。このような緩衝剤の含有量は反応におけるｐＨを希望するｐＨの範囲内に調整することができる限り特に限定されるものではないが、キレート化ターゲティング剤を放射性金属で標識するときの反応液のｐＨが、使用する緩衝剤のｐＫａ値プラスマイナス１．５の範囲内に調整される量であることが好ましく、使用する緩衝剤のｐＫａ値プラスマイナス１．０の範囲内に調整される量であることがさらに好ましく、使用する緩衝剤のｐＫａ値プラスマイナス０．５の範囲内に調整される量であることが特に好ましい。このような緩衝剤の含有量は、キレート化ターゲティング剤を放射性金属で標識するときの反応液中、２ｍｍｏｌ／Ｌ以上１０００ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度であればよく、１０ｍｍｏｌ／Ｌ以上５００ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度が好ましく、５０ｍｍｏｌ／Ｌ以上２５０ｍｍｏｌ／Ｌ以下の濃度がより好ましい。
当業者であればこのような緩衝剤の量は、製品設計に応じて使用する放射性金属の溶液の量を設定し、その量にあわせて適宜設定することができる。
【００３０】
本発明の組成物は、薬理学的に許容される追加の添加物を適宜混合しても良い。添加物としては、例えば、賦形剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、安定化剤をさらに含むことができる。
賦形剤としては、エリスリトール、マンニトール、キシリトール及びソルビトールなどの糖アルコール類；白糖、粉糖、乳糖、スクロース、トレハロース及びブドウ糖などの糖類；α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン及びスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリンナトリウムなどのシクロデキストリン類；結晶セルロース及び微結晶セルロースなどのセルロース類；並びにトウモロコシデンプン、バレイショデンプン及びアルファー化デンプンなどのでんぷん類などが挙げられる。
界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、ポリソルベート及びポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが挙げられる。
ｐＨ調整剤としては、塩酸、水酸化ナトリウムなどが挙げられる。ｐＨ調整剤は緩衝剤とともに使用してｐＨを調整することができる。
等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖、マンニトール、グリセリンなどが挙げられる。
安定化剤としては、アスコルビン酸、ベンジルアルコール、ゲンチジン酸、α−チオグリセロール、ポビドン、エタノールなどが挙げられる。
これらの添加物は、いずれか一種または二種以上を組み合わせても良い。配合量は特に限定されず、それぞれの目的に応じ、その効果が充分に発現されるよう適宜配合すれば良い。
【００３１】
本発明の組成物は、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤とが同じ容器に収納されていても良いし、別々の容器に収納されていても良いが、同じ容器に収納されるのが好ましい。同じ容器に収納されている組成物の場合、この組成物と放射性金属を混合させるだけで放射性金属標識キレート化ターゲティング剤を調製することができる。医療現場においてはなるべく操作が簡便であることが誤操作を予防する観点から好ましい。別々の容器に収納されている組成物の場合、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤を混合させ次いで放射性金属と混合させても良いし、キレート化ターゲティング剤と放射性金属を混合させ次いで緩衝剤と混合させても良いし、緩衝剤と放射性金属を混合させ次いでキレート化ターゲティング剤と混合させても良いが、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤を混合させ次いで放射性金属と混合させるのが好ましい。キレート化ターゲティング剤と放射性金属を先に混合すると、ｐＨが調整されずに両者が接触することから別反応が進行するおそれがある。また、緩衝剤と放射性金属を先に混合すると、媒体が中性側に調整され放射性金属が水酸化物として沈殿するおそれがある。
【００３２】
また、本発明の組成物は、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤とを含む組成物に加えて、放射性金属をさらに有する組成物であっても良い。これは放射性医薬の有効成分を調製するために必要な全ての材料が１セットになったキットであることを意味する。多くの場合、キレート化ターゲティング剤と放射性金属を提供する主体は別々であるが、これらをまとめて１セットとして提供すれば使用する者にとって便利である。ただし、放射性金属とキレート化ターゲティング剤とは互いに接触しない状態で収納されていなければならず、好ましくは別々の容器に収納されていれば良い。
【００３３】
（Ａ）前記放射性金属と、（Ｂ）キレート化ターゲティング剤と、（Ｃ）前記緩衝剤との組み合わせ（詳細には、放射性金属とキレート化ターゲティング剤とで形成された錯体および緩衝剤の混合物）は、前記キレート化ターゲティング剤が対象とする診断薬又は治療薬として有用である。ここで、診断薬及び治療薬の対象疾患は、ターゲティング部によって決定される。例えばターゲティング部が抗ＣＤＨ３抗体の場合は、咽頭癌、喉頭癌、舌癌、肺癌、乳癌、食道癌、胃癌、大腸癌、子宮癌、卵巣癌、肝臓癌、膵臓癌、胆嚢癌、腎臓癌、前立腺癌、悪性黒色腫、甲状腺癌などの上皮癌；骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、血管肉腫、繊維肉腫、白血病や悪性リンパ腫、骨髄腫などの非上皮癌である。
【００３４】
本発明の組成物を治療薬として用いる場合、投与経路は、通常非経口投与経路で、例えば、注射剤（皮下注、静注、筋注、腹腔内注など）、経皮、経粘膜、経鼻、経肺などで投与される。治療薬としての投与量は、患者の症状、投与経路、体重、年令等によっても異なるが、例えば、成人の１回の投与量は３７〜３７００ＭＢｑであるのが好ましい。
【００３５】
放射性金属標識キレート化ターゲティング剤の製造方法は、例えば、以下のように行うことができる。前記放射性金属とキレート化ターゲティング剤とを、前記緩衝剤の存在下に混合すれば、前記放射性金属と前記キレート化ターゲティング剤が錯体を形成し、放射性金属標識キレート化ターゲティング剤が製造できる。これらの成分の混合手段は、前記のように、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤との収納状態により相違する。すなわち、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤とは、同じ容器に収納されていても良いし、別々の容器に収納されていても良いが、同じ容器に収納されるのが好ましい。同じ容器に収納されている組成物の場合、この組成物と放射性金属を混合させるだけで放射性金属標識キレート化ターゲティング剤を調製することができる。別々の容器に収納されている組成物の場合、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤を混合させ次いで放射性金属と混合させても良いし、キレート化ターゲティング剤と放射性金属を混合させ次いで緩衝剤と混合させても良いし、緩衝剤と放射性金属を混合させ次いでキレート化ターゲティング剤と混合させても良いが、キレート化ターゲティング剤と緩衝剤を混合させ次いで放射性金属と混合させるのが好ましい。
【実施例】
【００３６】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００３７】
１．緩衝剤の評価
緩衝剤として酒石酸、マレイン酸、コハク酸、ヒスチジン、グルタミン酸、安息香酸、クエン酸、２−モルホリノエタンスルホン酸、乳酸を選択し、キレート化ターゲティング剤の90Ｙ標識反応における、緩衝能および標識率を調べた。対照として酢酸についても同時に調べた。【００３８】
緩衝液は、各緩衝剤を含む水溶液とその共役酸もしくは共役塩基を含む水溶液とを混合、または各緩衝剤を含む水溶液と塩酸もしくは水酸化ナトリウム水溶液とを混合してｐＨ５．５に調整した。
キレート化ターゲティング剤としては、特許文献１に記載のＤＯＴＡ−抗ＣＤＨ３抗体である、ＤＯＴＡ−ＰＰＡＴ−０５２−２８ｃを用い、これを緩衝液に溶解した２．５ｍｇ／ｍＬまたは５ｍｇ／ｍＬの抗体緩衝溶液として調整した。【００３９】
90Ｙ標識は、緩衝剤の存在下にＤＯＴＡ−ＰＰＡＴ−０５２−２８ｃと90ＹＣｌ3溶液（０．０４ｍｏｌ／Ｌ塩酸：Ｃｉｓｂｉｏ社製）を混合して行った。なお、標識率は標識反応液を90Ｙにキレート能のあるＤＴＰＡを含む水溶液で希釈し、その一部を薄層クロマトグラフィー（ＢＩＯＤＥＸ社製、Ｔｅｃ−Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  １５０−７７１）にスポットし、生理食塩液で展開した後にラジオクロマナイザー（ｒａｙｔｅｓｔ社製、ＲＩＴＡ）を用いて確認した。薄層クロマトグラフィー上、90Ｙで標識されたＤＯＴＡ−ＰＰＡＴ−０５２−２８ｃは原点にとどまり、未反応の90ＹはＤＴＰＡと錯化して溶媒先端に展開された。【００４０】
酒石酸、マレイン酸およびコハク酸の評価
表１記載の各濃度の抗体緩衝溶液１００μＬおよび90ＹＣｌ3溶液３８μＬを混合し、４０℃で１５分間反応させた。反応後、薄層クロマトグラフィーによる標識率の算出を行った。また、緩衝液１０００μＬおよび０．０４ｍｏｌ／Ｌ塩酸３８２μＬを混合してｐＨを測定した。【００４１】
【表１】
2018034354.tif 000005
【００４２】
結果を表２に示す。
いずれの緩衝液も１２５ｍｍｏｌ／Ｌの濃度であれば酢酸ナトリウム緩衝液と同等な緩衝能を発揮できることが分かった。しかし、酒石酸ナトリウム緩衝液については標識反応に適当なｐＨであるにもかかわらず、標識率が低かった。このことは、90Ｙ標識において酒石酸が反応を阻害していることを示唆する。マレイン酸ナトリウム緩衝液およびコハク酸ナトリウム緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝剤と同等の標識率を得ることができた。【００４３】
【表２】
2018034354.tif 000006
【００４４】
ヒスチジン、グルタミン酸、安息香酸およびマレイン酸の評価
表３記載の抗体緩衝溶液と90ＹＣｌ3溶液を５０：４１で混合し、４０℃で１５分間反応させた。反応後、薄層クロマトグラフィーによる標識率の算出を行った。ｐＨは、表３記載の抗体緩衝溶液と０．０５ｍｏｌ／Ｌ塩酸を５０：４１で混合し、測定した。【００４５】
【表３】
2018034354.tif 000007
【００４６】
結果を表４に示す。
グルタミン酸ナトリウム緩衝液、安息香酸ナトリウム緩衝液、マレイン酸緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝液と同等な緩衝能を発揮できることが分かった。しかし、グルタミン酸ナトリウム緩衝液については標識反応に適当なｐＨであるにもかかわらず、標識率が低かった。このことは、90Ｙ標識においてグルタミン酸が反応を阻害していることを示唆する。安息香酸ナトリウム緩衝液およびマレイン酸ナトリウム緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝剤と同等の標識率を得ることができた。
また、ヒスチジン緩衝液については試験例７の濃度では十分な緩衝能がないことが分かった。【００４７】
【表４】
2018034354.tif 000008
【００４８】
クエン酸、２−モルホリノエタンスルホン酸および乳酸の評価
表５記載の抗体緩衝溶液と90ＹＣｌ3溶液を５０：４１で混合し、４０℃で２０分間反応させた。反応後、薄層クロマトグラフィーによる標識率の算出を行った。ｐＨは、表５記載の抗体緩衝溶液と０．０５ｍｏｌ／Ｌ塩酸を５０：４１で混合し、測定した。【００４９】
【表５】
2018034354.tif 000009
【００５０】
結果を表６に示す。
いずれの緩衝液も酢酸ナトリウム緩衝液と同等な緩衝能を発揮できることが分かった。しかし、クエン酸ナトリウム緩衝液および乳酸緩衝液については標識反応に適当なｐＨであるにもかかわらず、標識率が低かった。このことは、90Ｙ標識においてクエン酸および乳酸が反応を阻害していることを示唆する。２−モルホリノエタンスルホン酸緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝剤と同等の標識率を得ることができた。【００５１】
【表６】
2018034354.tif 000010
【００５２】
２．凍結乾燥製剤の調製および90Ｙ標識
酢酸緩衝剤と同等な緩衝能および標識率を示した緩衝剤のうち、安息香酸を選択して凍結乾燥製剤を調製した。そして、これを用いて90Ｙ標識を行った。【００５３】
５ｍｇ／ｍＬのＤＯＴＡ−ＰＰＡＴ−０５２−２８ｃおよび１００ｍｇ／ｍＬのトレハロースを含む２５０ｍｍｏｌ／Ｌ安息香酸ナトリウム緩衝液１．４ｍＬを表７に示す条件で凍結乾燥して、白色ケーキ状の凍結乾燥製剤を得た。
次いで、この凍結乾燥製剤を用いて90Ｙ標識を行った。生成されたケーキに１．４ｍＬの注射用水を加えた（試験例１４）。また、対照として５ｍｇ／ｍＬのＤＯＴＡ−ＰＰＡＴ−０５２−２８ｃを含む２５０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸ナトリウム緩衝液を用いた（比較例４）。これらの抗体溶液と90ＹＣｌ3溶液をそれぞれ５０：４１で混合し、４０℃で１５分間反応させた。反応後、薄層クロマトグラフィーによる標識率の算出を行った。【００５４】
【表７】
2018034354.tif 000011
【００５５】
結果を表８に示す。
凍結乾燥を実施しても２５０ｍｍｏｌ／Ｌ安息香酸ナトリウム緩衝液は酢酸ナトリウム緩衝液と同等の標識率を得ることが可能であった。このことは、安息香酸緩衝剤は凍結乾燥工程を経ても昇華することなく使用時に十分な緩衝能を維持することができ、凍結乾燥製剤の緩衝剤として適することを示す。【００５６】
【表８】
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【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明の組成物は、組成物中に含まれる緩衝剤が放射性金属とキレート化ターゲティング剤との反応を阻害することなくｐＨ緩衝作用を発揮することができるため、放射性金属標識キレート化ターゲティング剤の製造に有用である。
【手続補正書】
【提出日】平成31年2月1日(2019.2.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
緩衝液は、各緩衝剤を含む水溶液とその共役酸もしくは共役塩基を含む水溶液とを混合、または各緩衝剤を含む水溶液と塩酸もしくは水酸化ナトリウム水溶液とを混合してｐＨ５．５に調整した。
キレート化ターゲティング剤としては、特許文献１に記載のＤＯＴＡ−抗ＣＤＨ３抗体である、ＤＯＴＡ−ＰＰＡＴ−０５２−２８ｃを用い、これを緩衝液に溶解した２．５ｍｇ／ｍＬまたは５ｍｇ／ｍＬの抗体緩衝溶液として調製した。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
結果を表２に示す。
いずれの緩衝液も１２５ｍｍｏｌ／Ｌの濃度であれば酢酸ナトリウム緩衝液と同等な緩衝能を発揮できることが分かった。しかし、酒石酸ナトリウム緩衝液については標識反応に適当なｐＨであるにもかかわらず、標識率が低かった。このことは、90Ｙ標識において酒石酸が反応を阻害していることを示唆する。マレイン酸ナトリウム緩衝液およびコハク酸ナトリウム緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝液と同等の標識率を得ることができた。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
結果を表４に示す。
グルタミン酸ナトリウム緩衝液、安息香酸ナトリウム緩衝液、マレイン酸ナトリウム緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝液と同等な緩衝能を発揮できることが分かった。しかし、グルタミン酸ナトリウム緩衝液については標識反応に適当なｐＨであるにもかかわらず、標識率が低かった。このことは、90Ｙ標識においてグルタミン酸が反応を阻害していることを示唆する。安息香酸ナトリウム緩衝液およびマレイン酸ナトリウム緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝液と同等の標識率を得ることができた。
また、ヒスチジン緩衝液については試験例７の濃度では十分な緩衝能がないことが分かった。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
結果を表６に示す。
いずれの緩衝液も酢酸ナトリウム緩衝液と同等な緩衝能を発揮できることが分かった。しかし、クエン酸ナトリウム緩衝液および乳酸緩衝液については標識反応に適当なｐＨであるにもかかわらず、標識率が低かった。このことは、90Ｙ標識においてクエン酸および乳酸が反応を阻害していることを示唆する。２−モルホリノエタンスルホン酸緩衝液については、酢酸ナトリウム緩衝液と同等の標識率を得ることができた。
【国際調査報告】
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