(57)【要約】本発明は、Ｃ末端に複合体の形成に利用可能な官能基を有し、細胞毒性を有する化合物を提供することを目的としている。本発明は、下式に代表されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩を提供する。2017170637.tif 000069
2017170637.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【化１】
2017170637.tif 000068
［式中、Ｘは、酸素原子又はＮＲを表し、Ｙは、ＮＨ２、Ｎ（Ｍｅ）Ｈ、ＳＨ、ＯＨ又は任意の一つの水素原子がＮＨ２若しくはＯＨで置換されたフェニル基を表し、Ｒは、水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を表す。但し、Ｘが、ＮＨであり、Ｙが、ＮＨ２である誘導体、及び、Ｘが、ＮＨであり、Ｙが、Ｎ（Ｍｅ）Ｈである誘導体を除く。］
【請求項２】
Ｘは、酸素原子である、請求項１記載のペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｙは、ＮＨ２、Ｎ（Ｍｅ）Ｈ、ＳＨ又はＯＨである、請求項２記載のペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項４】
Ｘは、ＮＲである、請求項１記載のペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項５】
Ｒは、炭素数１〜３のアルキル基である、請求項４記載のペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項６】
Ｒは、メチル基である、請求項５記載のペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項記載のペプチド誘導体と、ターゲッティングリガンド又はポリマーと、を含む複合体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項記載のペプチド誘導体若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、請求項７記載の複合体若しくはその薬理学的に許容される塩、を有効成分として含有する、細胞毒性剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチド誘導体及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
海洋に存在するタツナミガイからは、細胞毒性を有する複数種類のペプチド誘導体が単離されている。それらペプチド誘導体の一種であり、極めて強力な細胞毒性を有する化合物として、ドラスタチン１０が知られている（特許文献１及び非特許文献１）。【０００３】
ドラスタチン１０の細胞毒性は、チューブリン重合阻害作用によって発揮されることが明らかになっており、これまでにその構造活性相関について報告されている（特許文献２及び３並びに非特許文献２）。また、同様のチューブリン重合阻害作用を有するペプチド誘導体として、他にモノメチルアウリスタチン（特許文献４及び５）があり、この化合物はリンカーと呼ばれる特定の構造を介して抗体の特定のアミノ酸と結合した抗体医薬複合体として利用されていることが知られている。【０００４】
抗体医薬複合体に利用できる医薬品としては、リンカー又は抗体との結合が可能な特定の置換基（例えば、アミノ基、スルフヒドリル基又はヒドロキシ基）を有していることが必要である。また、複合体の薬効に、その結合方法が大きな影響を与えるために、これまで複数種類の置換基の利用が報告されている（非特許文献３〜５）。【０００５】
これまでに、チューブリン阻害薬で複合体に利用可能な官能基を有する誘導体としては、Ｎ末端にアミノ基を有する、上記のモノメチルアウリスタチン若しくはＰＦ−０６３８０１０１０（非特許文献６）又はＣ末端にアミノ基、ヒドロキシ基、カルボン酸、ヒドロキシルアミン若しくはアルキンを有するアウリスタチンＦ誘導体（特許文献６及び非特許文献７〜９）が報告されている。【０００６】
一方、ドラスタチン１０のＣ末端からの展開として、エチルエステル、エチルアミド若しくはチアゾールアミドを有する誘導体が報告されている（非特許文献１０）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平２−１６７２７８号公報
【特許文献２】国際公開第１９９３／００３０５４号
【特許文献３】国際公開第１９９５／００９８６４号
【特許文献４】国際公開第２００２／０８８１７２号
【特許文献５】国際公開第２００４／０１０９５７号
【特許文献６】国際公開第２０１２／１７１０２０号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｐｅｔｔｉｔら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９８７年、第１０９巻、ｐ．６８８３−６８８５
【非特許文献２】Ｍｉｙａｚａｋｉら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｎｔｉｎ、１９９５年、第４３巻、ｐ．１７０６−１７１８
【非特許文献３】Ｊａｉｎら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１５年、第３２巻、ｐ．３５２６−３５４０
【非特許文献４】Ｔｒａｉｓら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、２０１３年、第２巻、ｐ．１１３−１２９
【非特許文献５】Ｋｅｒｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２０１６年、第１３８巻、ｐ．１４３０−１４４５
【非特許文献６】Ｍａｅｒｎａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２０１４年、第５７巻、ｐ．１０５２７−４３
【非特許文献７】Ｄｏｒｏｎｉａら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００８年、第１９巻、ｐ．１９６０−１９６３
【非特許文献８】Ａｘｕｐら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃｅｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０１２年、第１０９巻、ｐ．１６１０１−１６１０６
【非特許文献９】ＶａｎＢｒｕｎｔら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１５年、第２６巻、ｐ．２２４９−２２６０
【非特許文献１０】Ｍｉｙａｚａｋｉら、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９３年、ｐ．８５−８８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、これまでにＣ末端に複合体の形成に利用可能な官能基を有するドラスタチン１０誘導体は報告されていない。【００１０】
また、同一の骨格に基づいて異なる種類の置換基を有する誘導体は、新たな複合体の創出や複合体の構成が細胞毒性に与える影響の検証に有用であると考えられるが、これまでにその様な誘導体は報告されていない。【００１１】
そこで、本発明は、Ｃ末端に複合体の形成に利用可能な官能基を有するドラスタチン１０誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、Ｃ末端に特定の官能基を有する新規なペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩が、複数のがん細胞に対して高い細胞毒性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。【００１３】
すなわち、本発明は以下の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩を提供する。
【化１】
2017170637.tif 000003
［式中、Ｘは、酸素原子又はＮＲを表し、Ｙは、ＮＨ２、Ｎ（Ｍｅ）Ｈ、ＳＨ、ＯＨ又は任意の一つの水素原子がＮＨ２若しくはＯＨで置換されたフェニル基を表し、Ｒは、水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を表す。但し、Ｘが、ＮＨであり、Ｙが、ＮＨ２である誘導体、及び、Ｘが、ＮＨであり、Ｙが、Ｎ（Ｍｅ）Ｈである誘導体を除く。］【００１４】
上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩において、Ｘは、酸素原子であることが好ましい。【００１５】
この場合、高い細胞毒性が期待できる。【００１６】
上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩において、Ｘは、酸素原子であり、Ｙは、ＮＨ２、Ｎ（Ｍｅ）Ｈ、ＳＨ又はＯＨであることがより好ましい。【００１７】
この場合、より高い細胞毒性が期待できる。【００１８】
上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩において、Ｘは、ＮＲであることが好ましい。【００１９】
この場合、高い細胞毒性が期待できる。【００２０】
上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩において、Ｘは、ＮＲであり、Ｒは、炭素数１〜３のアルキル基であることがより好ましい。【００２１】
この場合、より高い細胞毒性が期待できる。【００２２】
上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩において、Ｘは、ＮＲであり、Ｒは、メチル基であることがさらに好ましい。【００２３】
この場合、さらに高い細胞毒性が期待できる。【００２４】
また、本発明は、上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体と、ターゲッティングリガンド又はポリマーと、を含む複合体又はその薬理学的に許容される塩を提供する。【００２５】
また、本発明は、上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、上記の複合体若しくはその薬理学的に許容される塩、を有効成分として含有する、細胞毒性剤を提供する。
【発明の効果】
【００２６】
本発明のペプチド誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、高い細胞毒性を有するため、細胞毒性剤として使用できる。【００２７】
また、本発明のペプチド誘導体は、Ｃ末端に種々の官能基を有するため、ペプチド誘導体又はそのプロドラッグと、ターゲッティングリガンド又はポリマーと、を複合化することができ、当該複合体又はその薬理学的に許容される塩は、細胞毒性剤として使用できる。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明のペプチド誘導体は、以下の一般式（Ｉ）で示されることを特徴としている。
【化２】
2017170637.tif 000004
［式中、Ｘは、酸素原子又はＮＲを表し、Ｙは、ＮＨ２、Ｎ（Ｍｅ）Ｈ、ＳＨ、ＯＨ又は任意の一つの水素原子がＮＨ２若しくはＯＨで置換されたフェニル基を表し、Ｒは、水素原子又は炭素数１〜３のアルキル基を表す。但し、Ｘが、ＮＨであり、Ｙが、ＮＨ２である誘導体、及び、Ｘが、ＮＨであり、Ｙが、Ｎ（Ｍｅ）Ｈである誘導体を除く。］
【００２９】
本明細書で使用する次の用語は、特に断りがない限り、下記の定義のとおりである。
【００３０】
「任意の一つの水素原子がＮＨ２若しくはＯＨで置換されたフェニル基」とは、２−−アミノフェニル基、３−アミノフェニル基、４−アミノフェニル基、２−ヒドロキシフェニル基、３−ヒドロキシフェニル基又は４−ヒドロキシフェニル基を意味する。
【００３１】
「炭素数１〜３のアルキル基」とは、メチル基、エチル基、プロピル基又はイソプロピル基を意味する。
【００３２】
上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体の好ましい化合物の具体例を表１に示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３３】
【表１】
2017170637.tif 000005
【００３４】
表１に記載される化合物は、その薬理学的に許容される塩も包含する。
【００３５】
上記の一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体（以下、ペプチド誘導体（Ｉ））が、配座異性体、回転異性体、互変異性体、光学異性体、ジアステレオマー又はエピマー等を含有する場合には、いずれか一方の異性体も混合物もペプチド誘導体（Ｉ）に包含される。さらに、ペプチド誘導体（Ｉ）に光学異性体が存在する場合には、ラセミ体から分割された光学異性体もペプチド誘導体（Ｉ）に包含される。
【００３６】
ペプチド誘導体（Ｉ）の立体配置は、以下の式（ＩＩ）であることが好ましい。
【化３】
2017170637.tif 000006
【００３７】
また、本発明は、ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグ又はその薬理学的に許容される塩が含まれる。ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグとは、生体内で酵素的又は化学的に、ペプチド誘導体（Ｉ）に変換される化合物である。ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグの活性本体は、ペプチド誘導体（Ｉ）であるが、ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグそのものが活性を有していてもよい。
【００３８】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグとしては、例えば、ペプチド誘導体（Ｉ）のヒドロキシ基が、エステル化、カルボネート化、カルバメート化、アルキル化、リン酸化又はホウ酸化された化合物が挙げられる。これらの化合物は、公知の方法に従って、ペプチド誘導体（Ｉ）又はその合成中間体から合成することができる。
【００３９】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグとしては、例えば、ペプチド誘導体（Ｉ）のアミノ基が、カルバメート化又はアミド化された化合物が挙げられる。これらの化合物は、公知の方法に従って、ペプチド誘導体（Ｉ）又はその合成中間体から合成することができる。
【００４０】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグとしては、例えば、ペプチド誘導体（Ｉ）のスルフヒドリル基が、ジスルフィド結合を形成した化合物が挙げられる。これらの化合物は、公知の方法に従って、ペプチド誘導体（Ｉ）又はその合成中間体から合成することができる。
【００４１】
上記のペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグの具体例を表２に示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４２】
【表２】
2017170637.tif 000007
【００４３】
表２に記載される化合物は、その塩も包含する。
【００４４】
表２中、Ｑは、公知の方法（例えば、Ｅｌｌｅｎ  Ｍ．  Ｓｌｅｔｔｅｎら、Ａｎｇｅｗａｎｔｅ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、２００９年、第４８巻、ｐ．６９７４―６９９８、Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ．，「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ社、Ｘｉ  Ｃｈｅｍら、Ｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１６年、第１４巻、ｐ．５４１７―５４３９）又はそれに準ずる方法で複合化可能な官能基（例えば、マレイミド基、カルボキシル基、活性化されたカルボキシル基、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、ジアゾ基、アルキン基又はヒドロキシ基）を表し、Ｊは、存在しない又はスペーサーを表し、Ａ１、Ａ２及びＡ３はアミノ酸を表し、Ｚは、水素原子又はメチル基を表し、それ以外の記号は上記定義に同じである。
【００４５】
「スペーサー」とは、ペプチド誘導体（Ｉ）又はペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグとＱを繋ぐ構造を表し、例えば、直鎖若しくは分岐した炭素数１〜１２のアルキル基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｚ）−若しくは−Ｎ（Ｚ）Ｃ（＝Ｏ）−、ＰＥＧ、ジスルフィド結合又はこれらの組み合わせで構成された構造が挙げられ、これらの組み合わせで構成された構造が好ましい。
【００４６】
「直鎖若しくは分岐した炭素数１〜１２のアルキル基」とは、例えば、−（ＣＨ２）ｎ−、−ＣＨ（Ｍｅ）−、−Ｃ（Ｍｅ）２−、−（ＣＨ２）ｏＣＨ（Ｍｅ）−、−ＣＨ（Ｍｅ）（ＣＨ２）ｏ−、−（ＣＨ２）ｐＣ（Ｍｅ）２−又は−Ｃ（Ｍｅ）２（ＣＨ２）ｐ−が挙げられる。ｎは、１〜１２の整数を表し、ｏは、１〜１０の整数を表し、ｐは、１〜９の整数を表す。
【００４７】
「ＰＥＧ」は、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−の繰返し構造で表される数平均分子量２００〜２，０００の直鎖のポリエチレングリコールを表し、ｍは、５〜４５の整数を表す。
【００４８】
本明細書において、アミノ酸等を略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｃｏｍｍｉｓｉｏｎ  ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  による略号若しくは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特記しない限り、明示しなければＬ体を示すものとする（例えば、「Ｌｙｓ」はＬ体のＬｙｓ）。また、「Ｄ−」と示される場合はＤ体を示し（例えば、「Ｄ−Ｌｙｓ」はＤ体のＬｙｓ）、「ＤＬ−」と示される場合はＤ体及びＬ体のラセミ体を示すものとする（例えば、「ＤＬ−Ｌｙｓ」はＤ体のＬｙｓ及びＬ体のＬｙｓのラセミ体）。
【００４９】
「アミノ酸」は、ＤＬ−Ａｌａ、ＤＬ−Ａｒｇ、ＤＬ−Ａｓｎ、ＤＬ−Ａｓｐ、ＤＬ−Ｃｉｔ、ＤＬ−Ｃｙｓ、ＤＬ−Ｇｌｎ、ＤＬ−Ｇｌｕ、ＤＬ−Ｇｌｙ、ＤＬ−Ｈｉｓ、ＤＬ−Ｉｌｅ、ＤＬ−Ｌｅｕ、ＤＬ−Ｌｙｓ、ＤＬ−Ｍｅｔ、ＤＬ−Ｐｈｅ、ＤＬ−Ｐｒｏ、ＤＬ−Ｓｅｒ、ＤＬ−Ｔｈｒ、ＤＬ−Ｔｒｐ、ＤＬ−Ｔｙｒ又はＤＬ−Ｖａｌからいずれか一つが選ばれるが、Ａ１が、Ｌｙｓであり、Ａ２及びＡ３は、存在しない、Ａ１が、Ｃｉｔ若しくはＬｙｓであり、Ａ２が、Ｖａｌ若しくはＰｈｅであり、Ａ３は、存在しない、又は、Ａ１が、Ａｓｐであり、Ａ２及びＡ３が、Ａｌａであることが好ましい。
【００５０】
表２中記載のＡ１は、フェニル基のＮＨとカルボニル末端で結合しており、Ａ１、Ａ２及びＡ３は、それぞれアミド結合を介して主鎖で結合している。
【００５１】
表２中の番号６に記載のペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグの好ましい構造を、表３に示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５２】
【表３】
2017170637.tif 000008
【００５３】
表３に記載される化合物は、その塩も包含する。
【００５４】
表３中、Ａｌｋ１及びＡｌｋ２は、それぞれ独立して、直鎖又は分岐した炭素数１〜１２のアルキル基を表し、Ｅは、存在しない又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｚ）−若しくは−Ｎ（Ｚ）Ｃ（＝Ｏ）−を表し、それ以外の記号は上記定義に同じである。
【００５５】
表３に記載のペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグは、Ａｌｋ１が、−（ＣＨ２）２−であることがより好ましく、Ｘが、ＮＲであり、Ａｌｋ１が、−（ＣＨ２）２−であり、Ｅが、−Ｎ（Ｚ）Ｃ（＝Ｏ）−であり、ＰＥＧが、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−であり、Ｑが、マレイミド基であることがさらに好ましいが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５６】
表２中の番号８に記載のペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグは、Ｊが、−Ａｌｋ１−Ｅ−Ａｌｋ２−又は−Ａｌｋ１−Ｅ−ＰＥＧ−（ＣＨ２）２−Ｅ−Ａｌｋ２−であることが好ましく、Ｊが、−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｚ）Ｃ（＝Ｏ）−Ａｌｋ２−又は−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｚ）Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｚ）Ｃ（＝Ｏ）−Ａｌｋ２−であり、Ｑがマレイミド基であることがさらに好ましいが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５７】
表２中の番号９〜１１に記載のペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグは、Ｊが、−Ｃ（＝Ｏ）−Ａｌｋ１−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＰＥＧ−（ＣＨ２）２−Ｅ−Ａｌｋ１−又は−Ｃ（＝Ｏ）−Ａｌｋ１−Ｅ−ＰＥＧ−（ＣＨ２）２−Ｅ−Ａｌｋ１−であることが好ましく、Ｊが、−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＰＥＧ−（ＣＨ２）２−Ｅ−（ＣＨ２）ｎ−又は−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｅ−ＰＥＧ−（ＣＨ２）２−Ｅ−（ＣＨ２）ｎ−であり、Ａ１が、Ｃｉｔ又はＬｙｓであり、Ａ２が、Ｖａｌ又はＰｈｅであり、Ａ３は、存在せず、Ｑがマレイミド基又はアミノオキシ基であることがより好ましいが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５８】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグは、公知文献（「医薬品の開発」、広川書店、１９９０年、第７巻、ｐ．１６３〜１９８及びＰｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第５巻、１９８５年、ｐ．２１５７〜２１６１）に記載の生理的条件で、ペプチド誘導体（Ｉ）に変化するものであってもよい。
【００５９】
ペプチド誘導体（Ｉ）は、同位元素で標識されていてもよく、標識される同位元素としては、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ及び／又は１２５Ｉが挙げられる。
【００６０】
ペプチド誘導体（Ｉ）の「薬理学的に許容される塩」としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩若しくはリン酸塩等の無機酸塩又はシュウ酸塩、マロン酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、グルタル酸塩、マンデル酸塩、フタル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩若しくはケイ皮酸塩等の有機酸塩が挙げられるが、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩又はメタンスルホン酸塩が好ましい。
【００６１】
ペプチド誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩は、無水物であってもよいし、水和物等の溶媒和物を形成していても構わない。ここで溶媒和物としては、薬理学的に許容される溶媒和物が好ましい。薬理学的に許容される溶媒和物は、水和物又は非水和物のいずれであっても構わないが、水和物が好ましい。溶媒和物を構成する溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール若しくはｎ−プロパノール等のアルコール系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド又は水が挙げられる。
【００６２】
ペプチド誘導体（Ｉ）は、その基本骨格や置換基の種類に由来する特徴に基づいた適切な方法で製造することができる。なお、これらの化合物の製造に使用する出発物質と試薬は一般に購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法で製造することができる。
【００６３】
ペプチド誘導体（Ｉ）並びにその製造に使用する中間体及び出発物質は、公知の手段によって単離精製することができる。単離精製のための公知の手段としては、例えば、溶媒抽出、再結晶又はクロマトグラフィーが挙げられる。
【００６４】
ペプチド誘導体（Ｉ）が、光学異性体又は立体異性体を含有する場合には、公知の方法により、それぞれの異性体を単一化合物として得ることができる。公知の方法としては、例えば、結晶化、酵素分割又はキラルクロマトグラフィーが挙げられる。
【００６５】
以下に記載する製造方法の各反応において、原料化合物がヒドロキシ基、アミノ基、スルフヒドリル基又はカルボキシル基を有する場合、これらの基に保護基が導入されていてもよく、反応後に必要に応じて保護基を脱保護することにより目的化合物を得ることができる。
【００６６】
ヒドロキシ基の保護基としては、例えば、トリチル基、テトラヒドロピラニル基、炭素数７〜１０のアラルキル基（例えば、ベンジル基）又は置換シリル基（例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基又はｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基）が挙げられる。
【００６７】
アミノ基の保護基としては、例えば、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基（例えば、アセチル基）、ベンゾイル基、炭素数２〜８のアルキルオキシカルボニル基（例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル基）、炭素数７〜１０のアラルキル基（例えば、ベンジル基）又はフタロイル基が挙げられる。
【００６８】
スルフヒドリル基の保護基としては、例えば、トリチル基、２−メルカプトピリジル基又は２−メルカプト−５−ニトロピリジル基が挙げられる。
【００６９】
カルボキシル基の保護基としては、例えば、炭素数１〜６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基又はｔｅｒｔ−ブチル基）又は炭素数７〜１０アラルキル基（例えば、ベンジル基）が挙げられる。
【００７０】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【００７１】
ペプチド誘導体（Ｉ）は、例えば、スキーム１に示すように、保護されたペプチド誘導体（ＩＩＩ）の脱保護反応により得ることができる。
【化４】
2017170637.tif 000009
［式中、ＰＧは、保護基を表し、ＸがＮＲの場合、Ｙは、ＮＨ２又はＳＨを表し、Ｙ’はＮＨ又はＳを表す。Ｘが酸素原子の場合、Ｙは、ＮＨ２、ＳＨ、ＯＨ又は任意の一つの水素原子がＮＨ２若しくはＯＨで置換されたフェニル基を表し、Ｙ’はＮＨ、Ｓ、Ｏ又は任意の一つの水素原子がＮＨ又はＯで置換されたフェニル基を表す。］
【００７２】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【００７３】
保護されたペプチド誘導体（ＩＩＩ）は、例えば、スキーム２に示すように、カルボン酸誘導体（ＩＶ）と求核剤（Ｖ）との縮合反応により得ることができる。
【化５】
2017170637.tif 000010
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【００７４】
縮合反応に用いる求核剤（Ｖ）の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましい。
【００７５】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、クロロギ酸エチル、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が好ましい。
【００７６】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【００７７】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【００７８】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【００７９】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【００８０】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【００８１】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【００８２】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【００８３】
求核剤（Ｖ）は、購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法により合成することができる。
【００８４】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）は、例えば、スキーム３に示すように、カルボン酸誘導体（ＩＶ）と求核剤（ＶＩ）との縮合反応により得ることもできる。
【化６】
2017170637.tif 000011
［式中、Ｘは、ＮＲを表し、Ｙは、ＯＨ又は任意の一つの水素原子がＮＨ２若しくはＯＨで置換されたフェニル基を表し、その他の記号は、上記定義に同じである。］
【００８５】
縮合反応に用いる求核剤（ＶＩ）の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましい。
【００８６】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート又は１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファートが挙げられるが、クロロギ酸エチル又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【００８７】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【００８８】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【００８９】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【００９０】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【００９１】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【００９２】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【００９３】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【００９４】
求核剤（ＶＩ）は、購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法により合成することができる。
【００９５】
カルボン酸誘導体（ＩＶ）は、例えば、スキーム４に示すように、エステル誘導体（ＶＩＩ）の脱保護反応により得ることができる。
【化７】
2017170637.tif 000012
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【００９６】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【００９７】
エステル誘導体（ＶＩＩ）は、公知の方法又はそれに準ずる方法で合成することができる。
【００９８】
保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）は、例えば、スキーム５に示すように、フェノール誘導体（Ｉ−ａ）と求電子剤（ＶＩＩＩ−ａ）又は（ＶＩＩＩ−ｂ）との縮合反応により得ることができる。
【化８】
2017170637.tif 000013
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【００９９】
縮合反応に用いる求電子剤（ＶＩＩＩ−ａ）又は（ＶＩＩＩ−ｂ）の量は、フェノール誘導体（Ｉ−ａ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましい。
【０１００】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ピリジン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ピリジン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０１０１】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン若しくはピリジン等の有機塩基が好ましい。
【０１０２】
縮合反応に用いる塩基の量は、フェノール誘導体（Ｉ−ａ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０１０３】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１０４】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１０５】
縮合反応に用いるフェノール誘導体（Ｉ−ａ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１０６】
求電子剤（ＶＩＩＩ−ａ）又は（ＶＩＩＩ−ｂ）は、公知のアミン誘導体又はカルボン酸誘導体から公知の方法又はそれに準ずる方法により合成又は反応系中で発生させることができる。
【０１０７】
保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＩ）は、例えば、スキーム６に示すように、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（Ｘ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化９】
2017170637.tif 000014
［式中、Ｇは、水素原子、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基を表し、それ以外の各記号は、上記定義に同じである。］
【０１０８】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０１０９】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（Ｘ）の量は、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０１１０】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０１１１】
カップリング反応に用いる塩基の量は、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０１１２】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０１１３】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１１４】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０１１５】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１１６】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１１７】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（Ｘ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１１８】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０１１９】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（Ｘ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０１２０】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０１２１】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０１２２】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（Ｘ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０１２３】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１２４】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１２５】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（Ｘ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１２６】
カルボン酸誘導体（Ｘ）は、購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法により合成することができる。
【０１２７】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグ（ＸＩＩＩ）は、例えば、スキーム７に示すように、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（ＸＩＩ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化１０】
2017170637.tif 000015
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【０１２８】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０１２９】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＩ）の量は、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０１３０】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０１３１】
カップリング反応に用いる塩基の量は、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０１３２】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０１３３】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１３４】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０１３５】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１３６】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１３７】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＩ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１３８】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０１３９】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＩ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０１４０】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０１４１】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０１４２】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＩ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０１４３】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１４４】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１４５】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＩ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１４６】
カルボン酸誘導体（ＸＩＩ）は、購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法により合成することができる。
【０１４７】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグ（ＸＩＩＩ）は、例えば、スキーム８に示すように、保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＩ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化１１】
2017170637.tif 000016
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【０１４８】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０１４９】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の量は、保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＩ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０１５０】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０１５１】
カップリング反応に用いる塩基の量は、保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＩ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０１５２】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０１５３】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１５４】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０１５５】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１５６】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１５７】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１５８】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０１５９】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０１６０】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０１６１】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０１６２】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０１６３】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１６４】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１６５】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１６６】
カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）は、購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法により合成することができる。
【０１６７】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグ（ＸＶ）は、例えば、スキーム９に示すように、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化１２】
2017170637.tif 000017
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【０１６８】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０１６９】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の量は、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０１７０】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０１７１】
カップリング反応に用いる塩基の量は、保護されたフェノキシカルバメート誘導体（ＩＸ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０１７２】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０１７３】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１７４】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０１７５】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１７６】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１７７】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１７８】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０１７９】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０１８０】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０１８１】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０１８２】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０１８３】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１８４】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１８５】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１８６】
ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ）は、例えば、スキーム１０に示すように、カルボン酸誘導体（ＩＶ）と求核剤（ＸＶＩ）との縮合反応により得ることができる。
【化１３】
2017170637.tif 000018
［式中、Ｗは、２−メルカプトピリジル基、２−メルカプト−５−ニトロピリジル基又は‐Ａｌｋ１−Ｎ（Ｚ）（ＰＧ）を表し、その他の記号は、上記定義に同じである。］
【０１８７】
縮合反応に用いる求核剤（ＸＶＩ）の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましい。
【０１８８】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、クロロギ酸エチル、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が好ましい。
【０１８９】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０１９０】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０１９１】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０１９２】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＩＶ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０１９３】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０１９４】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０１９５】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０１９６】
求核剤（ＸＶＩ）は、購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法により合成することができる。
【０１９７】
保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＶＩＩＩ）は、例えば、スキーム１１に示すように、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（Ｘ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化１４】
2017170637.tif 000019
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【０１９８】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０１９９】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（Ｘ）の量は、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０２００】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０２０１】
カップリング反応に用いる塩基の量は、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０２０２】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０２０３】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２０４】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０２０５】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２０６】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２０７】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（Ｘ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２０８】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０２０９】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（Ｘ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０２１０】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０２１１】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０２１２】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（Ｘ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０２１３】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２１４】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２１５】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（Ｘ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２１６】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグ（ＸＩＸ）は、例えば、スキーム１２に示すように、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（ＸＩＩ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化１５】
2017170637.tif 000020
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【０２１７】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０２１８】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＩ）の量は、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０２１９】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０２２０】
カップリング反応に用いる塩基の量は、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０２２１】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０２２２】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２２３】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０２２４】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２２５】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２２６】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＩ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２２７】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０２２８】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＩ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０２２９】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０２３０】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０２３１】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＩ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０２３２】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２３３】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２３４】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＩ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２３５】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグ（ＸＩＸ）は、例えば、スキーム１３に示すように、保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＶＩＩＩ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化１６】
2017170637.tif 000021
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【０２３６】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０２３７】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の量は、保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＶＩＩＩ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０２３８】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０２３９】
カップリング反応に用いる塩基の量は、保護されたポリエチレングリコール誘導体（ＸＶＩＩ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０２４０】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０２４１】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２４２】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０２４３】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２４４】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２４５】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２４６】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０２４７】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０２４８】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０２４９】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０２５０】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０２５１】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２５２】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２５３】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２５４】
ペプチド誘導体（Ｉ）のプロドラッグ（ＸＸ）は、例えば、スキーム１４に示すように、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）の脱保護反応とそれに続く、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）との、塩基性から中性条件下でのカップリング反応（Ｇが、スクシンイミジル基又はｐ−ニトロフェニル基の場合）又は縮合反応（Ｇが、水素原子の場合）により得ることができる。
【化１７】
2017170637.tif 000022
［式中、各記号は、上記定義に同じである。］
【０２５５】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０２５６】
カップリング反応又は縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の量は、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）に対して０．５〜１０当量が好ましく、０．５〜４当量がより好ましい。
【０２５７】
カップリング反応のｐＨは、塩基によって調整できる。用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、水素化ナトリウム、水素化カリウム若しくは水素化カルシウム等の水素化金属化合物、メチルリチウム若しくはブチルリチウム等のアルキルリチウム、リチウムヘキサメチルジシラジド若しくはリチウムジイソプロピルアミド等のリチウムアミド又はそれらの混合物が挙げられるが、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基又はトリエチルアミン若しくはジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基が好ましい。
【０２５８】
カップリング反応に用いる塩基の量は、ジスルフィド誘導体（ＸＶＩＩ−ａ）に対して０．００１〜１０当量が好ましく、０．００１〜４当量がより好ましい。
【０２５９】
カップリング反応のｐＨは、緩衝液によっても調整できる。用いる緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、クエン酸リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液又はトリス緩衝液が挙げられるが、ｐＨ７．０〜８．０の緩衝液が好ましい。
【０２６０】
カップリング反応に用いる緩衝液の濃度は、１０ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２６１】
カップリング反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒、水又はそれらの混合溶媒が好ましい。
【０２６２】
カップリング反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２６３】
カップリング反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２６４】
カップリング反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２６５】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド、クロロギ酸エチル、オキサリルクロライド、ヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート又は２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物が挙げられるが、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド若しくは塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド等のカルボジイミド又はヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムが好ましい。
【０２６６】
縮合反応に用いる縮合剤の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．３〜３０当量がより好ましい。
【０２６７】
縮合反応に用いる反応溶媒としては、用いる試薬の種類に応じて適宜選択されるが、反応を阻害しないものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン若しくは１，４−ジオキサン等のエーテル系溶媒、酢酸エチル若しくは酢酸プロピル等のエステル系溶媒、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒、アセトニトリル若しくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒又はそれらの混合溶媒が挙げられるが、ジクロロメタン、クロロホルム若しくは１，２−ジクロロエタン等の塩素系溶媒又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒が好ましい。
【０２６８】
縮合反応は、所望により塩基を用いてもよい。用いる塩基としては、例えば、水素化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム若しくは炭酸カリウム等の無機塩基、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が挙げられるが、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−ジメチルアミノピリジン若しくはピリジン等の有機塩基又はそれらの混合物が好ましい。
【０２６９】
縮合反応に用いる塩基の量は、カルボン酸誘導体（ＸＩＶ）に対して０．５〜２０当量が好ましく、１〜５当量がより好ましい。
【０２７０】
縮合反応の反応温度は、−４０℃〜２００℃が好ましく、−２０℃〜１５０℃がより好ましい。
【０２７１】
縮合反応の反応時間は、反応温度等の条件に応じて適宜選択されるが、３０分間〜３０時間が好ましい。
【０２７２】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＸＩＶ）の反応開始時の濃度は、１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１ｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【０２７３】
また、本発明の複合体は、ペプチド誘導体（Ｉ）と、ターゲッティングリガンド又はポリマーと、を含有することを特徴としている。
【０２７４】
「ターゲッティングリガンド」とは、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む生理活性化合物を特定の細胞へと輸送するための物質のことであり、例えば、抗原結合性タンパク質、サイトカイン又は低分子リガンドが挙げられる。
【０２７５】
「抗原結合性タンパク質」とは、細胞表面に存在する特定のタンパク質に結合する性質を有するタンパク質のことであり、例えば、免疫グロブリン分子、単鎖抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｄｉａｂｏｄｙ、Ｔｒｉｂｏｄｙ、Ａｆｆｉｂｏｄｙ、Ａｆｆｉｌｉｎ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ、Ａｔｒｉｍｅｒ、Ａｖｉｍｅｒ、Ｂｉｃｙｃｌｉｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ、Ｃｙｓ−ｋｎｏｔ、ＤＡＲＰｉｎ、ＦＮ３、Ｆｙｎｏｍｅｒ、Ｋｕｎｉｔｚ  ｄｏｍａｉｎ又はＯＢｏｄｙが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２７６】
「サイトカイン」とは、インターロイキン、ケモカイン、インターフェロン、細胞増殖因子、細胞傷害因子又はそれらの改変タンパク質等のことであり、例えば、インターロイキン−２、インターロイキン−２融合タンパク質、インターロイキン−３、インターロイキン−４，インターロイキン−６、インターロイキン−８，インターロイキン−１２、インターロイキン−１７、ＣＣＬ１から２８、ＣＸＣＬ１から１７、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＸ３ＣＬ１インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターフェロンω、インターフェロンτ、コンセンサスインターフェロン、顆粒求コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、ＣＤ−４０リガンド、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板誘導成長因子、組織成長因子、形質転換成長因子−１、血管内皮細胞増殖因子、白血病阻害因子、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、グリア成長因子（ＧＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、単球化学誘引タンパク質−１又は内皮細胞増殖因子が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２７７】
「低分子リガンド」とは、細胞表面に存在する特定のタンパク質に結合する性質を有する分子量が１０００未満の有機化合物又はペプチド誘導体のことであり、例えば、ビオチン、葉酸、インテグリン阻害薬、ｃＲＧＤ、ＲＧＤ、ＰＳＭＡ阻害剤又はＶＥＧＦ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２７８】
「ポリマー」とは、一定の繰返し構造で構成された数平均分子量が１０００〜１００００００の高分子有機化合物のことであり、例えば、ポリエチレングリコール、ポリグルタミン酸、ポリアミノ酸又は多糖類が挙げられ、ポリエチレングリコール又はポリグルタミン酸であることが好ましく、数平均分子量が２００００〜１０００００であるポリエチレングリコール又は数平均分子量が２００００〜１０００００であるポリグルタミン酸がより好ましい。
【０２７９】
上記の抗原結合性タンパク質、サイトカイン及びペプチド誘導体は、例えば、それらの化学合成体、それらの組換え体、それらの天然物、それらのグリコシル化された又は非グリコシル化された形態、それらに非天然アミノ酸が導入された形態、それらに酸化若しくは還元等の化学反応又は酵素反応により官能基（例えば、アルデヒド基又はスルフヒドリル基）が導入された形態及びそれらの生物活性断片も包含する。
【０２８０】
「非天然アミノ酸」とは、天然に存在し、タンパク質を構成するアミノ酸（天然アミノ酸）には含まれないアミノ酸であって、天然に存在するか又は化学合成によって製造されたアミノ酸、すなわち、天然に存在し、タンパク質を構成しないアミノ酸、天然アミノ酸を化学修飾したアミノ酸又は天然アミノ酸には含まれないアミノ酸であって、化学合成によって製造されたアミノ酸等を意味する。具体例としては、Ｄ−アミノ酸、シトルリン、オルニチン、（Ｓ）−２−アミノ−３−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）プロパン酸（（Ｓ）−２−ａｍｉｎｏ−３−（３−ｍｅｔｈｙｌ−３Ｈ−ｄｉａｚｉｒｉｎ−３−ｙｌ）ｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、フォト−Ｌ−ロイシンとも言う）、（Ｓ）−２−アミノ−４−（３−メチル−３Ｈ−ジアジリン−３−イル）ブタン酸（（Ｓ）−２−ａｍｉｎｏ−４−（３−ｍｅｔｈｙｌ−３Ｈ−ｄｉａｚｉｒｉｎ−３−ｙｌ）ｂｕｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、フォト−Ｌ−メチオニンとも言う）、（Ｓ）−３−（４−アセチルフェニル）−２−アミノプロパン酸（（Ｓ）−３−（４−ａｃｅｔｙｌｐｈｅｎｙｌ）−２−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、４−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンとも言う）又は（Ｓ）−２−アミノ−３−（４−アジドフェニル）プロパン酸（（Ｓ）−２−ａｍｉｎｏ−３−（４−ａｚｉｄｏｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ、４−アジド−Ｌ−フェニルアラニンとも言う）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２８１】
上記の低分子リガンドは、適宜、その類似物、その誘導体、そのアゴニスト、そのアンタゴニスト、その阻害物質、その異性体等も包含する。
【０２８２】
「複合体」とは、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと、上記ターゲッティングリガンドと、を含む物質、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと、上記ポリマーと、を含む物質、又は、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと、上記ターゲッティングリガンド及び上記ポリマーと、を含む物質（以下、総称してペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体）のことであり、それぞれが直接結合しているか又は他の物質（以下、リンカー）を介して間接的に結合している。
【０２８３】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体としては、例えば、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと免疫グロブリン分子とが直接結合しているか又はリンカーを介して間接的に結合している抗体医薬複合体が挙げられる。
【０２８４】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体としては、例えば、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと低分子リガンドとが直接結合しているか又はリンカーを介して間接的に結合している低分子医薬複合体が挙げられる。
【０２８５】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体としては、例えば、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと上記ポリマーとが直接結合しているか又はリンカーを介して間接的に結合しているポリマー医薬複合体が挙げられる。
【０２８６】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体としては、例えば、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグに、それぞれが独立して、上記ポリマーと上記ターゲッティングリガンドとが直接結合しているか又はリンカーを介して間接的に結合している物質が挙げられる。
【０２８７】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体としては、例えば、上記ポリマーに、それぞれが独立して、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと上記ターゲッティングリガンドとが直接結合しているか又はリンカーを介して間接的に結合している物質が挙げられる。
【０２８８】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体としては、例えば、上記ターゲッティングリガンドに、それぞれが独立して、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグと上記ポリマーとが直接結合しているか又はリンカーを介して間接的に結合している物質が挙げられる。
【０２８９】
「ペプチド誘導体（Ｉ）を含む」とは、ペプチド誘導体（Ｉ）又はそのプロドラッグが、公知の方法（例えば、Ｅｌｌｅｎ  Ｍ．  Ｓｌｅｔｔｅｎら、Ａｎｇｅｗａｎｔｅ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、２００９年、第４８巻、ｐ．６９７４―６９９８、Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ．，「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ社、Ｘｉ  Ｃｈｅｍら、Ｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１６年、第１４巻、ｐ．５４１７―５４３９）又はそれに準ずる方法によって、上記ターゲッティングリガンド及び／又は上記ポリマーと共有結合によって直接結合しているか又はリンカーを介して間接的に結合していることを意味する。当該共有結合の具体例としては、例えば、マレイミド基へのスルフヒドリル基の付加による結合、ジスルフィド結合、アミノ基若しくはヒドロキシ基とカルボキシル基との縮合による結合、アルキン基とアジド基のクリック反応による結合、アミノオキシ基とカルボニル基の縮合による結合又はジアゾ基とフェノール基のエン型反応による結合が挙げられ、マレイミド基へのスルフヒドリル基の付加による結合、ジスルフィド結合、アミノ基若しくはヒドロキシ基とカルボキシル基との縮合による結合又はアミノオキシ基とカルボニル基の縮合による結合が好ましいが、これらに限定されるものではない。
【０２９０】
「リンカー」とは、ペプチド誘導体（Ｉ）又はそのプロドラッグ、上記ターゲッティングリガンド及び上記ポリマーと官能基（例えば、マレイミド基、カルボキシル基、活性化されたカルボキシル基、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、ジアゾ基、アルキン基又はヒドロキシ基）を有する化合物との反応によって得られた構造のことを意味する。それらの官能基を有する化合物としては、例えば、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホスクシイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−（ｐ−マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ−スクシンイミジル４（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−イオド−アセチル）アミノ安息香酸エステル（ＳＩＡＢ）、６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボンイル（ＰＡＢ）及びＮ−スクシンイミジル４（２−ピリジルチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、上記に挙げたリンカーをそれぞれ適時組み合わせて使用してもよい。
【０２９１】
「細胞表面に存在する特定のタンパク質」とは、がん、自己免疫疾患又は感染症において、細胞表面での発現が増加するタンパク質のことであり、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＤＬＬ−３、ＰＳＭＡ、ＧＰＮＭＢ、Ｈｅｒ２、ＣＡ６、ＣＡ９、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、Ｎｅｃｔｉｎ−４、ＳＬＣ４４Ａ４、Ｃｒｉｐｔｏ、葉酸受容体、ＳＴＥＡＰ−１、ＭＵＣ１６、ＮａＰｉ２ｂ、ＧＣＣ、ＥＧＦＲｖｉｉｉ、５Ｔ４、ＴＲＯＰ−２、ＬＩＶ−１、ＳＬＩＴＲＫ６、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｆａｃｔｏｒ、Ｇｕａｎｙｌｙｌ  Ｃｙｃｌａｓｅ  Ｃ、ＣＥＡＣＡＭ５、インテグリン受容体、インターロイキン受容体、ＰＳＭＡ、ケモカイン受容体、インターフェロン受容体、細胞増殖因子受容体又は細胞傷害因子受容体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【０２９２】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体の薬理学的に許容される塩としては、例えば、上記のペプチド誘導体（Ｉ）の薬理学的に許容される塩と同様の塩が挙げられる。
【０２９３】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体又はその薬理学的に許容される塩は、無水物であってもよいし、水和物等の溶媒和物を形成していても構わない。ここで溶媒和物としては、薬理学的に許容される溶媒和物が好ましい。薬理学的に許容される溶媒和物は、水和物又は非水和物のいずれであっても構わないが、水和物が好ましい。溶媒和物を構成する溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール若しくはｎ−プロパノール等のアルコール系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド又は水が挙げられる。
【０２９４】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体の具体例を表４に示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０２９５】
【表４】
2017170637.tif 000023
【０２９６】
表４に記載される化合物は、その薬理学的に許容される塩も包含する。
【０２９７】
表４中、ｒは、１〜５０の整数を表し、Ｌは、ターゲッティングリガンド、ポリマー、又は、ポリマー及びターゲッティングリガンドを表し、それ以外の記号は上記定義に同じである。
【０２９８】
表４中の番号６に記載の複合体の好ましい例を以下の一般式（ＸＸＩ）で示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【化１８】
2017170637.tif 000024
［式中、Ａ４はアミノ酸を表し、それ以外の記号は上記定義に同じである。］
【０２９９】
Ａ４は、左側（アミノ基と結合する側）がカルボニル末端であり、右側（カルボニル基と結合する側）がアミノ末端である。また、Ａ４がＬｙｓ，Ｇｌｕ及びＡｓｐである場合は、側鎖のアミノ基やカルボキシル基から結合していてもよい。
【０３００】
上記の一般式（ＸＸＩ）で示される複合体は、Ｘが、ＮＲであり、Ａｌｋ１が、−（ＣＨ２）２−であり、ＰＥＧが、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−であり、Ａ４が、主鎖で結合したＧｌｕであることがより好ましく、Ｘが、ＮＲであり、Ｒ及びＺが、メチル基であり、Ａｌｋ１及びＡｌｋ２が、−（ＣＨ２）２−であり、ＰＥＧが、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−であり、Ａ４が、主鎖で結合したＧｌｕであることがさらに好ましい。
【０３０１】
表４中の番号８に記載の複合体の好ましい例を以下の一般式（ＸＸＩＩ）で示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【化１９】
2017170637.tif 000025
［式中、各記号は上記定義に同じである。］
【０３０２】
上記の一般式（ＸＸＩＩ）で示される複合体は、Ｘが、Ｎ（Ｍｅ）であり、Ａｌｋ１が、−（ＣＨ２）２−であり、ＰＥＧが、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−であり、Ａ４が、主鎖で結合したＧｌｕであることがより好ましく、Ｘが、Ｎ（Ｍｅ）であり、Ｚが、メチル基であり、Ａｌｋ１及びＡｌｋ２が、−（ＣＨ２）２−であり、ＰＥＧが、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）１２−であり、Ａ４が、主鎖で結合したＧｌｕであることがより好ましい。
【０３０３】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体は、その基本骨格や置換基の種類に由来する特徴に基づいた適切な方法で製造することができる。なお、これらの化合物の製造に使用する出発物質と試薬は一般に購入することができるか又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法で製造することができる。
【０３０４】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体並びにその製造に使用する中間体及び出発物質は、公知の手段によって単離精製することができる。単離精製のための公知の手段としては、例えば、溶媒抽出、再結晶又はクロマトグラフィーが挙げられる。
【０３０５】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体が、光学異性体又は立体異性体を含有する場合には、公知の方法により、それぞれの異性体を単一化合物として得ることができる。公知の方法としては、例えば、結晶化、酵素分割又はキラルクロマトグラフィーが挙げられる。
【０３０６】
上記の一般式（ＸＸＩ）で示される複合体の立体配置は、以下の式（ＸＸＩＩＩ）であることが好ましい。
【化２０】
2017170637.tif 000026
【０３０７】
上記の一般式（ＸＸＩＩ）で示される複合体の立体配置は、以下の式（ＸＸＩＶ）であることが好ましい。
【化２１】
2017170637.tif 000027
【０３０８】
以下に記載する製造方法において、原料化合物がヒドロキシ基、アミノ基、スルフヒドリル基又はカルボキシル基を有する場合、これらの基に保護基が導入されていてもよく、反応後に必要に応じて保護基を脱保護することにより目的化合物を得ることができる。
【０３０９】
ヒドロキシ基の保護基としては、例えば、トリチル基、テトラヒドロピラニル基、炭素数７〜１０のアラルキル基（例えば、ベンジル基）又は置換シリル基（例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基又はｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基）が挙げられる。
【０３１０】
アミノ基の保護基としては、例えば、炭素数２〜６のアルキルカルボニル基（例えば、アセチル基）、ベンゾイル基、炭素数２〜８のアルキルオキシカルボニル基（例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル基）、炭素数７〜１０のアラルキル基（例えば、ベンジル基）又はフタロイル基が挙げられる。
【０３１１】
スルフヒドリル基の保護基としては、例えば、トリチル基、２−メルカプトピリジル基又は２−メルカプト−５−ニトロピリジル基が挙げられる。
【０３１２】
カルボキシル基の保護基としては、例えば、炭素数１〜６のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基又はｔｅｒｔ−ブチル基）又は炭素数７〜１０アラルキル基（例えば、ベンジル基）が挙げられる。
【０３１３】
保護基の脱保護は、保護基の種類によって異なるが、公知の方法（例えば、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ社）又はそれに準ずる方法に従って行うことができる。
【０３１４】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体は、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグ又はそれらの塩と、上記のターゲッティングリガンド及び／若しくは上記のポリマー又はそれらの塩と、を公知の方法（例えば、Ｅｌｌｅｎ  Ｍ．  Ｓｌｅｔｔｅｎら、Ａｎｇｅｗａｎｔｅ  Ｃｈｉｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、２００９年、第４８巻、ｐ．６９７４―６９９８、Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ．，「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ社、Ｘｉ  Ｃｈｅｍら、Ｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１６年、第１４巻、ｐ．５４１７―５４３９）又はそれに準ずる方法で、直接的に又はリンカーを介して間接的に複合化することにより得ることができる。
【０３１５】
ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体は、同位元素で標識されていてもよく、標識される同位元素としては、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ及び／又は１２５Ｉが挙げられる。
【０３１６】
上記の複合化に用いる、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグ、上記ターゲッティングリガンド又は上記ポリマーの塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩若しくはリン酸塩等の無機酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、グルタル酸塩、マンデル酸塩、フタル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩若しくはケイ皮酸塩等の有機酸塩、トリエチルアミン塩、ジイソプロピルエチルアミン塩、エタノールアミン塩、モルホリン塩、ピペリジン塩若しくはジシクロヘキシルアミン塩等の有機塩基との塩、アルギニン若しくはリジン等の塩基性アミノ酸との塩又はリチウム塩、カルシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、アンモニウム塩、アルミニウム塩若しくは亜鉛塩等の無機塩基との塩が挙げられる。
【０３１７】
ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはそのプロドラッグ、上記ターゲッティングリガンド又は上記ポリマーの塩は、無水物であってもよいし、水和物等の溶媒和物を形成していても構わない。溶媒和物を構成する溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール若しくはｎ−プロパノール等のアルコール系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド又は水等が挙げられる。
【０３１８】
また、本発明の細胞毒性剤は、ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体若しくはその薬理学的に許容される塩、を有効成分として含有することを特徴としている。
【０３１９】
「細胞毒性剤」とは、細胞機能を障害する若しくは細胞増殖を阻害することによって細胞死を引き起こす化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する組成物を意味する。
【０３２０】
また、「細胞毒性剤」には、細胞機能を障害する若しくは細胞増殖を阻害することによって細胞死を引き起こす化合物又はそのプロドラッグと、上記のターゲッティングリガンド又は上記のポリマーと、を含む複合体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する組成物も含まれる。
【０３２１】
ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体若しくはその薬理学的に許容される塩は、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ヒツジ又はヒト）、特にヒトに対して投与した場合に、有用な細胞毒性剤として用いることができる。
【０３２２】
ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体若しくはその薬理学的に許容される塩は、そのままあるいは薬理学的に許容される担体を配合し、細胞毒性剤として上記の哺乳動物に経口的又は非経口的に投与することができる。
【０３２３】
「非経口的な投与」としては、例えば、注射投与、経鼻投与、経肺投与、経皮投与、舌下投与又は直腸投与が挙げられ、注射投与が好ましい。
【０３２４】
「注射投与」とは、注射又は点滴によって細胞毒性剤を全身又は局部的に投与することであり、投与する部位としては、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下が挙げられる。
【０３２５】
ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体若しくはその薬理学的に許容される塩、を有効成分とする細胞毒性剤は、製剤技術分野で一般的に用いられている公知の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ｌａｔｅｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｍａｒｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｕ．Ｓ．Ａ）により製造することができる。また、本発明の細胞毒性剤は、必要に応じて、製剤分野において通常用いられている賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、界面活性剤、懸濁化剤、乳化剤、着色剤、保存剤、芳香剤、矯味剤、安定剤、粘稠剤、緩衝剤、等張化剤、流動性促進剤等の添加剤を適宜、適量含有させることができる。薬理学的に許容される担体としては、これらの添加剤が挙げられる。
【０３２６】
ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体若しくはその薬理学的に許容される塩、を有効成分とする細胞毒性剤は、当該作用メカニズムに基づき病態の改善又は症状の寛解が期待できる疾患、例えば、がん、自己免疫疾患又は感染症に対する治療薬として利用できる。
【０３２７】
「がん」とは、制御されない異常な増殖を行なう細胞集団によって引き起こされる疾患であり、例えば、咽頭癌、喉頭癌、舌癌、非小細胞肺癌、乳癌、食道癌、胃癌、大腸癌、子宮癌、子宮内膜癌、卵巣癌、肝臓癌、膵臓癌、胆嚢癌、胆管癌、腎臓癌、腎盂尿管癌、膀胱癌、前立腺癌、悪性黒色腫、甲状腺癌、神経骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、血管肉腫、繊維肉腫、神経膠腫、白血病や悪性リンパ腫、神経芽細胞種、骨髄腫又は脳腫瘍が挙げられる。
【０３２８】
「自己免疫疾患」とは、生体内の物質又は細胞に対する異常な免疫応答によって引き起こされる疾患であり、例えば、活動性慢性肝炎、アディソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、関節炎、アトピー性アレルギー、ベーチェット病、心筋症、セリアック病、コーガン症候群、寒冷凝血素症、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、円板状エリテマトーデス、紅斑、線維筋痛、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン-バレー症候群、橋本病、特発性副腎萎縮、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ筋無力症候群、扁平苔癬、ルポイド肝炎、狼瘡、リンパ球減少症、メニエール病、混合結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、多内分泌腺機能低下症候群、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、シュミット症候群、強皮症、シェーグレン症候群、スティフマン症候群、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、甲状腺亢進、Ｂ型インスリン抵抗性、Ｉ型糖尿病、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑又はウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【０３２９】
「感染症」とは、細菌、真菌、病原性原虫、酵母又はウィルス等による感染によって引き起こされる疾患であり、その原因としては、例えば、ブドウ球菌、レンサ球菌、腸球菌、コリネバクテリウム、バシラス、リステリア、ペプトコッカス、ペプトストレプトコッカス、クロストリジウム、ユーバクテリウム、プロピオニバクテリウム、乳酸桿菌、ナイセリア、ブランハメラ、ヘモフィルス、ボルデテラ、大腸菌、シトロバクター、サルモネラ、赤痢菌、クレブシエラ菌、エンテロバクター、セラチア、ハフニア、プロテウス、モルガネラ、プロビデンシア、エルシニア、キャンピロバクター、ビブリオ、エロモナス、シュードモナス、キサントモナス、アシネトバクター、フラボバクテリウム、ブルセラ、レジオネラ、ベイロネラ、バクテロイデス、フゾバクテリウム、マイコプラズマ、リケッチア、クラミジア、アスペルギルス、ワリプトコッカス、カンジダ、ムコール、スポロトリクム、皮膚糸状菌、マラリア原虫、赤痢アメーバ、膣トリコモナス、ニューモチスカリニ、エキノコックス、肺炎双球菌、インフルエンザ菌、結核菌、破傷風菌、アデノウィルス、ヘルペスウィルス、パピローマウィルス、エイズウィルス、フィロウィルス、日本脳炎ウィルス、狂犬病ウィルス、ポリオウィルス、ライノウィルス、インフルエンザウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス又はＣ型肝炎ウィルスが挙げられる。
【０３３０】
ペプチド誘導体（Ｉ）若しくはその薬理学的に許容される塩、又は、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体若しくはその薬理学的に許容される塩が細胞毒性を有することは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を用いて評価することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験としては、例えば、化合物処置後の死細胞数又は生存細胞数を測定する、トリパンブルー色素排除法、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性法、［３Ｈ］チミジン取り込み法、プロピジウムイオダイド核染色法、ＭＴＴ，ＭＴＳ及びＷＳＴ等の色素を用いる方法（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｉｎ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，  ２０００年，２．６．１−２．６．２７）又はＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏｗ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製品）等を用いてＡＴＰ量を測定する方法等が挙げられるが、化合物処置後の生細胞数をＭＴＳ法を用いて測定し、その時の細胞毒性の値を５０％作用濃度（ＥＣ５０）によって求める方法が好ましい。また、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体又はその薬理学的に許容される塩の細胞毒性の評価においては、一定時間化合物を含んだ培地で細胞を処置した後に、化合物を含まない培地へと変更し、更に一定時間培養を行なった後の生細胞数を測定する方法が好ましい（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．  ２０１４年，  第２５巻，  ｐ．５６０?５６８）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験には、ヒト卵巣がん細胞ＳＫＯＶ−３細胞、ヒト肺胞基底上皮腺がん細胞Ａ５４９細胞、マウスリンパ球性白血球Ｌ１２１０細胞等が用いられる。
【０３３１】
ペプチド誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の細胞膜の透過性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞膜透過性評価方法を用いて測定することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞膜透過性評価方法としては、例えば、Ｃａｃｏ−２やＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ  ｃａｎｉｎｅ  ｋｉｄｎｅｙ（ＭＤＣＫ）等の単層細胞膜系を用いる方法やフィルターに脂質等を保持した人工脂質膜を用いるＰａｒａｌｌｅｌ  Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（ＰＡＭＰＡ）（特開２００７−１１８００３）等が挙げられる。より具体的には、ペプチド誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の細胞膜の透過性を評価する方法としては、例えば、Ｐｒｅ−ｃｏａｔｅｄ  ＰＡＭＰＡ  ＰｌａｔｅＳｙｓｔｅｍ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のＤｏｎｏｒ側からＡｃｃｅｐｔｏｒ側に透過した化合物量を定量し、計算により求める方法が挙げられる。透過した化合物量は、例えば、液体クロマトグラフ質量分析計（以下、ＬＣ／ＭＳ）、吸光度又は蛍光標識により定量する事ができる。
【実施例】
【０３３２】
以下、実施例及び参考例を用いて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【０３３３】
なお、実施例化合物の合成に使用される化合物で合成法の記載のないものについては、市販又は公知の方法若しくはそれに準ずる方法で合成した化合物を使用した。ＮＭＲデータ中に示される溶媒名は、測定に使用した溶媒を示す。また、４００ＭＨｚＮＭＲスペクトルは、ＪＮＭ−ＡＬ４００型核磁気共鳴装置（日本電子社製）又はＪＮＭ−ＥＣＳ４００型核磁気共鳴装置（日本電子社製）を用いて測定した。ケミカルシフトは、テトラメチルシランを基準として、δ（単位：ｐｐｍ）で表し、シグナルはそれぞれｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｍ（多重線）、ｂｒ（幅広）、ｄｄ（二重二重線）、ｄｔ（二重三重線）、ｄｄｄ（二重二重二重線）、ｄｑ（二重四重線）又はｔｔ（三重三重線）で表した。プロトンＮＭＲスペクトルで、ＯＨやＮＨプロトン等ブロードで確認できないものについてはデータに記載していない。分子量は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２００  Ｓｅｒｉｅｓ、６１３０Ａ（アジレント・テクノロジー社製）（以下、ＬＣ／ＭＳ−１）又はＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  ＩＩ  Ｓｅｒｉｅｓ、６１３０Ｂ（アジレント・テクノロジー社製）（以下、ＬＣ／ＭＳ−２）を用いて、エレクトロスプレーイオン化（以下、ＥＳＩ）法により測定した。精密質量分析（ＨＲＭＳ）は、ＮｅｘｅｒａＸ２、ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ質量分析計（島津製作所製）を用いて、ＥＳＩにより行なった。保持時間（以下、ｔＲ）は、高速液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣ）により測定した。溶媒は全て市販のものを用いた。精製は、ＹＦＬＣ  Ｗ−ｐｒｅｐ２ＸＹ（山善社製）を用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィーには、ハイフラッシュカラム  シリカゲル（山善社製）を用い、アミンシリカゲルカラムクロマトグラフィーには、ハイフラッシュカラム  アミノ（山善社製）を用い、ＯＤＳカラムには、ハイフラッシュカラム  オクタデシルＣ１８スタンダード（山善社製）を用いた。ＬＣ／ＭＳ−１、ＬＣ／ＭＳ−２及びＨＰＬＣの分析条件並びにＯＤＳカラムによる精製条件は後段に記す。以下の実施例及び参考例の記載中、以下の略号を用いる。
Ｔｒｔ：トリフェニルメチル基；  Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基；  ＴＨＰ：テトラヒドロピラニル基。【０３３４】
（参考例１）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸の合成：
【化２２】
2017170637.tif 000028
２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸エチル（１５ｍｇ，０．０１７ｍｍｏｌ）のエタノール（１．０ｍＬ）溶液に、１．０Ｎ水酸化ナトリウム（１９μＬ、０．０１９ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。得られた反応液に１．０Ｎ塩酸（１９μＬ）を加えた後、水で希釈してクロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮し、表題化合物（以下、参考例１の化合物）を白色固体（１４ｍｇ，収率９９％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９７（１Ｈ，ｓ），７．７０−７．４２（１Ｈ，ｍ），７．３０−７．１５（５Ｈ，ｍ），７．１３−７．０９（１Ｈ，ｍ），５．６２−５．５５（１Ｈ，ｍ），４．８７−４．６７（２Ｈ，ｍ），４．１１−３．１０（７Ｈ，ｍ），３．３２（３Ｈ×２，ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），２．７０−２．２８（４Ｈ，ｍ），２．５３（６Ｈ，ｓ），２．１９−２．０６（２Ｈ，ｍ），１．９８−１．５５（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．２０（１Ｈ，ｍ），１．１８−０．６９（２３Ｈ，ｍ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８２９．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３３５】
（参考例２）２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−（トリチルチオ）エチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化２３】
2017170637.tif 000029
参考例１の化合物（２５ｍｇ，０．０３０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦ）溶液（０．５ｍＬ）にヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム（以下、ＨＡＴＵ）（１７ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）と２−（トリチルチオ）エタンアミン（１５ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５０ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（１３μＬ，０．０７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。得られた反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／１９）にて精製し、表題化合物（以下、参考例２の化合物）を白色固体（２３ｍｇ，収率８８％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９２（１Ｈ，ｓ），７．４５−７．１３（２０Ｈ，ｍ），６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５４−５．４７（１Ｈ，ｍ），４．８７−４．７３（２Ｈ，ｍ），４．１６−４．０９（１Ｈ，ｍ），４．０８−４．０３（１Ｈ，ｍ），３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），３．４６−３．１８（６Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．５１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．４５−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．２５（６Ｈ，ｓ），２．１０−１．９０（２Ｈ，ｍ），１．８１−１．５５（４Ｈ，ｍ），１．２７−１．１９（１Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．０７−０．８９（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：１１３０．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３３６】
（実施例１）２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成： 
【化２４】
2017170637.tif 000030
参考例２の化合物（２５ｍｇ，０．０２２ｍｍｏｌ）に０．０２Ｍトリエチルシラン含有トリフルオロ酢酸（以下、ＴＦＡ）／ジクロロメタン（体積比１：１）溶液（４．５ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。得られた反応液の溶媒を減圧下留去し、飽和炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／９）にて精製し、表題化合物（以下、実施例１の化合物）を白色固体（１８ｍｇ，収率９２％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９７（１Ｈ，ｓ），７．７０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），７．４９（１Ｈ，ｂｒｓ），７．２９−７．１２（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），５．５４−５．４８（１Ｈ，ｍ），４．８２−４．７４（２Ｈ，ｍ），４．１４−４．０３（２Ｈ，ｍ），３．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），３．６３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），３．５１−３．１６（４Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），２．８１−２．７４（２Ｈ，ｍ），２．４８−２．３３（４Ｈ，ｍ），２．２５（６Ｈ，ｓ），２．１１−１．９２（２Ｈ，ｍ），１．８５−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），１．４０−１．２２（１Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．０５−０．９０（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８８８．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３３７】
（参考例３）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸  ２−（トリチルチオ）エチルの合成：
【化２５】
2017170637.tif 000031
参考例１の化合物（３９ｍｇ，０．０４７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．０ｍＬ）溶液に、４−ジメチルアミノピリジン（以下、ＤＭＡＰ）（１．２ｍｇ，９．４μｍｏｌ）、トリエチルアミン（１４μＬ，０．１０ｍｍｏｌ）と２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物（１９ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１０分間撹拌した後、２−（トリチルチオ）エタノール（１８ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０時間撹拌した。得られた反応液に水を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→２／２５）にて精製し、表題化合物（以下、参考例３の化合物）を白色固体（４９ｍｇ，収率９２％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．００（１Ｈ，ｓ），７．４４−７．４０（６Ｈ，ｍ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．３０−７．１０（１４Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．５５−５．４６（１Ｈ，ｍ），４．７９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４８．０Ｈｚ），４．１５−４．０７（１Ｈ，ｍ），４．１１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．０５−４．００（１Ｈ，ｍ），３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），３．８０−３．１５（４Ｈ，ｍ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．０２（３Ｈ，ｓ），２．６１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．４５−２．２８（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１２−１．９６（２Ｈ，ｍ），１．９０−１．５０（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．０９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．０３−０．８９（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：１１３１．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３３８】
（実施例２）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸  ２−メルカプトエチルの合成：
【化２６】
2017170637.tif 000032
参考例２の化合物の代わりに参考例３の化合物を用いて、それ以外は実施例１と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例２の化合物）を白色固体（３２ｍｇ，収率８３％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．０７（１Ｈ，ｓ），７．４１（１Ｈ，ｂｒｓ），７．３０−７．１１（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５５−５．４９（１Ｈ，ｍ），４．８３−４．７４（２Ｈ，ｍ），４．４７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．１３−３．１１（７Ｈ，ｍ），３．３２（６Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．８８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．４７−２．２８（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１１−１．９８（２Ｈ，ｍ），１．９８−１．５５（４Ｈ，ｍ），１．４１−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．０５−０．９１（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８８９．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３３９】
（参考例４）メチル（２−（トリチルチオ）エチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化２７】
2017170637.tif 000033
（２−（トリチルチオ）エチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチル（５５０ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１０ｍｌ）を氷冷し、水素化ナトリウム（５５重量％鉱油分散物）（６３ｍｇ，１．４ｍｍｏｌ）を複数回に分けて加えた。１５分間攪拌した後に、ヨウ素化メチル（０．０８７ｍｌ，１．４ｍｍｏｌ）を加えて、室温に戻しながら一晩攪拌した。過剰量の酢酸エチルを加えた後に、飽和塩化アンモニウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／０→４／１）にて精製し、表題化合物（以下、参考例４の化合物）を白色固体（４２０ｍｇ，収率９６％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．４２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，６Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），３．０３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．６０（ｂｒｓ，３Ｈ），２．３３（ｂｒｓ，２Ｈ），１．４０（ｓ，９Ｈ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｎａ］＋：４５６．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４０】
（参考例５）Ｎ−メチル−２−（トリチルチオ）エタン−１−アミンの合成：
【化２８】
2017170637.tif 000034
参考例４（１５０ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４．０ｍｌ）に４Ｎの塩化水素−ジオキサン（３．０ｍｌ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応溶液に過剰量の５体積％メタノール含有ジクロロメタンを加え、飽和炭酸水素ナトリウムを加えて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。表題化合物（以下、参考例５の化合物）を油状物質（１５ｍｇ，収率４０％）として得た。得られた油状物質を精製することなく次反応に用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．４４（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，４．８Ｈｚ，６Ｈ），７．３２−７．２６（ｍ，６Ｈ），７．２４−７．１９（ｍ，３Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．３６（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．２９（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，３Ｈ），１．５０（ｓ，２Ｈ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｔｒｔ］＋：２４３．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４１】
（参考例６）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（２−（トリチルチオ）エチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化２９】
2017170637.tif 000035
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに参考例５の化合物を用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例６の化合物）を白色アモルファス（４５ｍｇ，収率８５％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．８４（１Ｈ，ｓ），７．８２−７．７６（１Ｈ，ｍ），７．３０−７．００（５Ｈ，ｍ），６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５６−５．４８（１Ｈ，ｍ），５．０７（１Ｈ，ｂｒｓ），４．８７−４．７０（２Ｈ，ｍ），４．１８−３．２０（１７Ｈ，ｍ），３．１０（３Ｈ，ｓ），３．０２（３Ｈ，ｓ），２．４５−２．２０（４Ｈ，ｍ），２．２３（６Ｈ，ｓ），２．１１−１．８９（２Ｈ，ｍ），１．８７−１．４７（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．０９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．０５−０．８６（１７Ｈ，ｍ），０．８０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：１１４４．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４２】
（実施例３）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）−Ｎ−メチルチアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化３０】
2017170637.tif 000036
参考例２の化合物の代わりに参考例６の化合物を用いて、それ以外は実施例１と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例３の化合物）を白色アモルファス（２７ｍｇ，収率７７％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９０（１Ｈ，ｓ），７．６０−７．４５（１Ｈ，ｍ），７．２８−７．０２（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５８−５．５１（１Ｈ，ｍ），４．８２−４．７４（２Ｈ，ｍ），４．２０−３．２０（９Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．１１（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．９１−２．７７（２Ｈ，ｍ），２．４５−２．３１（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１０−１．８９（２Ｈ，ｍ），１．８６−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．４３−１．２０（１Ｈ，ｍ），１．１１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．０５−０．９０（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９０２．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４３】
（参考例７）２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸  ２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エチルの合成：
【化３１】
2017170637.tif 000037
参考例１の化合物（３８ｍｇ，０．０４６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５０ｍＬ）にＨＡＴＵ（２１ｍｇ，０．０５５ｍｍｏｌ）と（２−ヒドロキシエチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチル（８．９ｍｇ，０．０５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５０ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（７．５μＬ，０．０６９ｍｍｏｌ）を室温で加え、同温度で２６時間撹拌した。得られた反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→７／９３）にて精製し、表題化合物（以下、参考例７の化合物）を白色固体（１４ｍｇ，収率３２％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．０７（１Ｈ，ｓ），７．４４（１Ｈ，ｂｒｓ），７．３０−７．１２（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５５−５．４９（１Ｈ，ｍ），５．０２（１Ｈ，ｂｒｓ），４．８２−４．７０（２Ｈ，ｍ），４．４１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），４．１８−４．０８（１Ｈ，ｍ），４．０５−４．００（１Ｈ，ｍ），３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．７０−３．１４（６Ｈ，ｍ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．４８−２．３３（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１３−１．８７（２Ｈ，ｍ），１．８０−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．４３（９Ｈ，ｓ），１．３５−１．１６（１Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．０５−０．８７（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９７２．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４４】
（実施例４）２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸  ２−アミノエチルの合成：
【化３２】
2017170637.tif 000038
参考例７の化合物（１４ｍｇ，０．０１４ｍｍｏｌ）のメタノール（１．０ｍＬ）溶液に、４Ｎの塩化水素−ジオキサン溶液（５４μＬ，０．２２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。得られた反応液の溶媒を減圧下留去し、酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。残渣をアミンシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／１９）にて精製し、表題化合物（以下、実施例４の化合物）を白色固体（６．８ｍｇ，収率５０％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９８（１Ｈ，ｓ），７．７８（２Ｈ，ｂｒｓ），７．５４（１Ｈ，ｂｒｓ），７．３２−７．００（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５１−５．４５（１Ｈ，ｍ），４．８０−４．７０（２Ｈ，ｍ），４．１８−４．００（２Ｈ，ｍ），３．８２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），３．８０−３．１０（７Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．０５（３Ｈ，ｓ），２．５２−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１４−１．９２（２Ｈ，ｍ），１．８６−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．１９（１Ｈ，ｍ），１．１５−０．９１（２０Ｈ，ｍ），０．８２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８７２．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４５】
（参考例８）（２−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチルチアゾール−４−カルボキサミド）エチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化３３】
2017170637.tif 000039
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに（２−（メチルアミノ）エチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例８の化合物）を白色固体（３３ｍｇ，収率９６％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．８８−７．７５（１Ｈ，ｍ），７．７０−７．６０（１Ｈ，ｍ），７．３４−７．００（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），６．４２−６．３５（１Ｈ，ｍ），５．６３−５．４８（１Ｈ，ｍ），４．８６−４．７０（２Ｈ，ｍ），４．１８−４．００（２Ｈ，ｍ），３．９０−３．１７（９Ｈ，ｍ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．０９（３Ｈ，ｓ），３．０２（３Ｈ，ｓ），２．４５−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．２３（６Ｈ，ｓ），２．１７−１．８５（２Ｈ，ｍ），１．８０−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．３５（９Ｈ，ｓ），１．３０−１．１５（１Ｈ，ｍ），１．１０−０．８６（２０Ｈ，ｍ），０．８０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）． 
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９８５．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４６】
（実施例５）Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチルチアゾール−４−カルボキサミド  二塩酸塩の合成：
【化３４】
2017170637.tif 000040
参考例８の化合物（３３ｍｇ，０．０３３ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１．０ｍＬ）に、４Ｎの塩化水素−ジオキサン溶液（１２６μＬ，０．５０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５時間撹拌した。得られた反応液の溶媒を減圧下留去して、表題化合物（以下、実施例５の化合物）を白色固体（２９ｍｇ，収率９０％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．９８−８．６０（１Ｈ，ｍ），８．１４−７．９２（１Ｈ，ｍ），７．３７−７．１８（５Ｈ，ｍ），５．６６−５．５７（１Ｈ，ｍ），４．８５−４．６３（２Ｈ，ｍ），４．２０−３．０７（２０Ｈ，ｍ），３．１６（３Ｈ，ｓ），２．９２（３Ｈ，ｓ），２．９１（３Ｈ，ｓ），２．４８−１．３９（１０Ｈ，ｍ），１．３０−０．９８（２１Ｈ，ｍ），０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｎａ］＋：９０７．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４７】
（参考例９）（２−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチルチアゾール−４−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化３５】
2017170637.tif 000041
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりにメチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例９の化合物）を白色アモルファス（３８ｍｇ，収率９０％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．７８（１Ｈ，ｓ），７．７０−７．４０（１Ｈ，ｂｒｍ），７．３０−７．１１（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），５．５７−５．４８（１Ｈ，ｍ），４．８５−４．７３（２Ｈ，ｍ），４．１８−４．００（２Ｈ，ｍ），３．９０−２．６２（１２Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．１３（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．４５−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１３−１．９０（２Ｈ，ｍ），１．８０−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．４５（９Ｈ，ｓ），１．３８−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．１６−０．９１（２０Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９９９．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４８】
（実施例６）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（２−（メチルアミノ）エチル）チアゾール−４−カルボキサミド  二塩酸塩の合成：
【化３６】
2017170637.tif 000042
参考例８の化合物の代わりに参考例９の化合物を用いて、それ以外は実施例５と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例６の化合物）を白色固体（３４ｍｇ，収率９２％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．１５−８．０２（１Ｈ，ｍ），７．３７−７．１８（５Ｈ，ｍ），５．６６−５．５７（１Ｈ，ｍ），４．８５−４．６３（２Ｈ，ｍ），４．２０−３．０７（２０Ｈ，ｍ），３．２７（３Ｈ，ｓ），３．１５（３Ｈ，ｓ），２．９１（３Ｈ，ｓ），２．８９（３Ｈ，ｓ），２．５１−１．３９（１０Ｈ，ｍ），１．３０−０．８７（２１Ｈ，ｍ），０．８６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８９９．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３４９】
（実施例７）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化３７】
2017170637.tif 000043
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに２−アミノエタノールを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例７の化合物）を白色固体（２６ｍｇ，収率，定量的）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９６（１Ｈ，ｓ），７．８５−７．７５（１Ｈ，ｍ），７．６０（１Ｈ，ｂｒｓ），７．３０−７．０７（５Ｈ，ｍ），６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），５．５０−５．４３（１Ｈ，ｍ），４．８３−４．７２（２Ｈ，ｍ），４．１６−４．０９（１Ｈ，ｍ），４．０５−４．０１（１Ｈ，ｍ），３．８４−３．７８（３Ｈ，ｍ），３．６５−３．２０（６Ｈ，ｍ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），２．４８−２．３２（４Ｈ，ｍ），２．２３（６Ｈ，ｓ），２．１６−１．６３（６Ｈ，ｍ），１．４０−１．２５（１Ｈ，ｍ），１．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．０４−０．８８（１７Ｈ，ｍ），０．８０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）． 
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８７２．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５０】
（参考例１０）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸  ２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エチルの合成：
【化３８】
2017170637.tif 000044
２−（トリチルチオ）エタノールの代わりに２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）エタノールを用いて、それ以外は参考例３と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例１０の化合物）を白色固体（３６ｍｇ，収率７３％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．０５（１Ｈ，ｓ），７．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．３０−７．１１（５Ｈ，ｍ），６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．５５−５．４８（１Ｈ，ｍ），４．８３−４．７５（２Ｈ，ｍ），４．６９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），４．６０−４．４６（２Ｈ，ｍ），４．１８−４．０８（１Ｈ，ｍ），４．０７−４．００（２Ｈ，ｍ），３．９１−３．８４（２Ｈ，ｍ），３．８２−３．７５（１Ｈ，ｍ），３．５５−３．２５（５Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．０２（３Ｈ，ｓ），２．４６−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１３−１．９７（２Ｈ，ｍ），１．９３−１．５１（１０Ｈ，ｍ），１．４２−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．０５−０．８７（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）． 
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９５７．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５１】
（実施例８）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボン酸  ２−ヒドロキシエチルの合成：
【化３９】
2017170637.tif 000045
参考例１０の化合物（３６ｍｇ，０．０３８ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（１．０ｍＬ）にｐ−トルエンスルホン酸一水和物（７．２ｍｇ）を加え、室温で１８時間撹拌した。得られた反応液の溶媒を減圧下留去し、ジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸カリウム水溶液を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／９）にて精製し、表題化合物（以下、実施例８の化合物）を白色固体（３１ｍｇ，収率９５％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．１０（１Ｈ，ｓ），７．４９−７．４４（１Ｈ，ｍ），７．３０−７．１３（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５５−５．４８（１Ｈ，ｍ），４．８２−４．７４（２Ｈ，ｍ），４．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），４．２０−３．２６（９Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．０２（３Ｈ，ｓ），２．４６−２．３４（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１１−１．９０（２Ｈ，ｍ），１．８４−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．４３−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．０９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．０３−０．８９（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）． 
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８７３．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５２】
（実施例９）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチルチアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化４０】
2017170637.tif 000046
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに２−（メチルアミノ）エタン−１−オールを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例９の化合物）を白色アモルファス（３１ｍｇ，収率８５％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．８４（１Ｈ，ｓ），７．８２−７．７６（１Ｈ，ｍ），７．３０−７．００（５Ｈ，ｍ），６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５６−５．４８（１Ｈ，ｍ），５．０７（１Ｈ，ｂｒｓ），４．８７−４．７０（２Ｈ，ｍ），４．１８−３．２０（１７Ｈ，ｍ），３．１０（３Ｈ，ｓ），３．０２（３Ｈ，ｓ），２．４５−２．２０（４Ｈ，ｍ），２．２３（６Ｈ，ｓ），２．１１−１．８９（２Ｈ，ｍ），１．８７−１．４７（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．３０（１Ｈ，ｍ），１．０９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．０５−０．８６（１７Ｈ，ｍ），０．８０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）． 
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８８６．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５３】
（実施例１０）Ｎ−（４−アミノフェネチル）−２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化４１】
2017170637.tif 000047
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに４−（２−アミノエチル）アニリンを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例１０の化合物）を白色固体（３７ｍｇ，収率７４％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９５（１Ｈ，ｓ），７．４３−７．３６（２Ｈ，ｍ），７．３０−７．１７（５Ｈ，ｍ），７．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），６．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），５．５３−５．４６（１Ｈ，ｍ），４．８３−４．７２（２Ｈ，ｍ），４．１５−４．０９（１Ｈ，ｍ），４．０８−４．０３（１Ｈ，ｍ），３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），３．７０−３．１８（６Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．８２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．４５−２．３５（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１８−１．８９（２Ｈ，ｍ），１．８４−１．６４（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．２０（１Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．０３−０．９０（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９４７．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５４】
（実施例１１）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（４−ヒドロキシフェネチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化４２】
2017170637.tif 000048
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに４−（２−アミノエチル）フェノールを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例１１の化合物）を白色固体（３３ｍｇ，収率，定量的）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９３（１Ｈ，ｓ），７．４１−７．３０（２Ｈ，ｍ），７．２７−７．１０（５Ｈ，ｍ），７．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．９５−６．８５（１Ｈ，ｍ），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），５．４９−５．４４（１Ｈ，ｍ），４．８５−４．７２（２Ｈ，ｍ），４．１４−３．１５（９Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．２６（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．８２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．５１−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．２３（６Ｈ，ｓ），２．１７−１．９４（２Ｈ，ｍ），１．９０−１．６０（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．２０（１Ｈ，ｍ），１．１５−０．８８（２０Ｈ，ｍ），０．８０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）． 
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９４９．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５５】
（参考例１１）ｔｅｒｔ−ブチル  （２−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメイルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボキサミド）エチル）カーバメートの合成：
【化４３】
2017170637.tif 000049
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに（２−アミノエチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例１１の化合物）を白色固体（５５ｍｇ，収率９８％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：７．９６（１Ｈ，ｓ），７．６９（１Ｈ，ｂｒｓ），７．５０（１Ｈ，ｂｒｓ），７．３４−７．０９（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５５−５．４４（１Ｈ，ｍ），５．０３（１Ｈ，ｂｒｓ），４．８９−４．６７（２Ｈ，ｍ），４．２０−３．２０（１１Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），２．５０−２．３３（４Ｈ，ｍ），２．２５（６Ｈ，ｓ），２．１０−１．９２（２Ｈ，ｍ），１．８５−１．６６（４Ｈ，ｍ），１．４２（９Ｈ，ｓ），１．４０−１．２０（１Ｈ，ｍ），１．１５−０．７９（２３Ｈ，ｍ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９７１．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５６】
（参考例１２）Ｎ−（２−アミノエチル）−２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボキサミド  二塩酸塩の合成：
【化４４】
2017170637.tif 000050
参考例８の化合物の代わりに参考例１１の化合物を用いて、それ以外は実施例５と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例１２の化合物）を白色固体（４１ｍｇ，収率９６％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．６５（１Ｈ，ｂｒｓ），［８．１９（０．５Ｈ，ｓ），８．１６（０．５Ｈ，ｓ）］，７．３２−７．１６（５Ｈ，ｍ），５．６９−５．５６（１Ｈ，ｍ），４．８０−４．６３（２Ｈ，ｍ），４．１５−３．０５（１４Ｈ，ｍ），３．３３（６Ｈ，ｓ），２．９１（６Ｈ，ｓ），２．５１−１．３８（１０Ｈ，ｍ），１．３０−０．９１（２１Ｈ，ｍ），０．８５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８７１．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５７】
（参考例１３）（２−（２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボキサミド）エチル）（メチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化４５】
2017170637.tif 000051
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりに（２−アミノエチル）（メチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例１３の化合物）を白色固体（３２ｍｇ，収率４０％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９４（１Ｈ，ｓ），７．７９（１Ｈ，ｂｒｓ），７．４７（１Ｈ，ｂｒｓ），７．２６−７．０９（５Ｈ，ｍ），６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），５．５３−５．４６（１Ｈ，ｍ），４．８２−４．７４（２Ｈ，ｍ），４．１５−３．１１（１１Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．９２（３Ｈ，ｓ），２．４７−２．３４（４Ｈ，ｍ），２．２４（６Ｈ，ｓ），２．１２−１．９４（２Ｈ，ｍ），１．７７−１．６５（４Ｈ，ｍ），１．４３（９Ｈ，ｓ），１．４０−１．２０（１Ｈ，ｍ），１．１２−０．７８（２３Ｈ，ｍ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９８５．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５８】
（参考例１４）２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−（メチルアミノ）エチル）チアゾール−４−カルボキサミド  二塩酸塩の合成：
【化４６】
2017170637.tif 000052
参考例８の化合物の代わりに参考例１３の化合物を用いて、それ以外は実施例５と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例１４の化合物）を白色固体（２５ｍｇ，収率８８％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．６３（１Ｈ，ｂｒｓ），８．２２−８．１４（１Ｈ，ｍ），７．３５−７．１５（５Ｈ，ｍ），５．７０−５．５２（１Ｈ，ｍ），４．８３−４．６３（２Ｈ，ｍ），４．１７−３．０４（２０Ｈ，ｍ），２．９１（３Ｈ，ｓ），２．９０（３Ｈ，ｓ），２．７４（３Ｈ，ｓ），２．５１−１．９８（６Ｈ，ｍ），１．９１−１．５０（４Ｈ，ｍ），１．４２−０．８０（２４Ｈ，ｍ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：８８５．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３５９】
（参考例１５）２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−（３−（トリチルチオ）プロパンアミド）エチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化４７】
2017170637.tif 000053
３−（トリチルチオ）プロパン酸（１２ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５０ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（１２ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）、参考例１２の化合物（２０ｍｇ，０．０２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５０ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（１３μＬ，０．０７４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。得られた反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水及び飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／９）にて精製し、表題化合物（以下、参考例１５の化合物）を白色固体（２０ｍｇ，収率７７％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９１（１Ｈ，ｓ），７．６９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），７．４６（１Ｈ，ｂｒｓ），７．４２−７．１０（２０Ｈ，ｍ），６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），６．１６（１Ｈ，ｂｒｓ），５．５１−５．４５（１Ｈ，ｍ），４．８８−４．７４（２Ｈ，ｍ），４．１３−４．０９（１Ｈ，ｍ），４．０７−４．０２（１Ｈ，ｍ），３．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），３．６０−３．１８（８Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），２．５０−２．３２（６Ｈ，ｍ），２．２５（６Ｈ，ｓ），２．０９−１．９６（４Ｈ，ｍ），１．９０−１．６３（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．２０（１Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．０５−０．８８（１７Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：１２０１．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３６０】
（参考例１６）２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（２−（３−メルカプトプロパンアミド）エチル）チアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化４８】
2017170637.tif 000054
参考例２の化合物の代わりに参考例１５の化合物を用いて、それ以外は実施例１と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例１６の化合物）を白色固体（７．３ｍｇ，収率８９％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９７（１Ｈ，ｓ），７．７８（１Ｈ，ｂｒｓ），７．５１（１Ｈ，ｂｒｓ），７．３２−７．１０（５Ｈ，ｍ），７．００−６．８５（１Ｈ，ｍ），６．５８（１Ｈ，ｂｒｓ），５．５３−５．４５（１Ｈ，ｍ），４．８２−４．７４（２Ｈ，ｍ），４．１５−４．０８（１Ｈ，ｍ），４．０６−４．００（１Ｈ，ｍ），３．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），３．６４−３．１８（８Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），２．８２−２．７５（２Ｈ，ｍ），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．４８−２．３７（４Ｈ，ｍ），２．２６（６Ｈ，ｓ），２．１２−１．９２（２Ｈ，ｍ），１．８３−１．５７（４Ｈ，ｍ），１．２７−１．１９（１Ｈ，ｍ），１．１１−０．８６（２０Ｈ，ｍ），０．８１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：９５９．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３６１】
（参考例１７）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）−Ｎ５−（（Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，５−ジオキソ−１−（（２−（トリチルチオ）エチル）アミノ）ペンタン−２−イル）−Ｌ−グルタミナートの合成：
【化４９】
2017170637.tif 000055
（Ｓ）−４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−オキソ−５−（（２−（トリチルチオ）エチル）アミノ）ペンタン酸  ｔｅｒｔ−ブチル（１．５ｇ，２．１ｍｍｏｌ）を２０体積％ジエチルアミン−テトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦ）溶液（２０ｍｌ）に溶かし、室温で一晩攪拌した後に、反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた残渣、ＨＡＴＵ（９４２ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）とＮ−α−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−Ｌ−グルタミン酸  α−ｔ−ブチル  エステル（８７８ｍｇ，２．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３０ｍｌ）に、ジイソプロピルエチルアミン（３２０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩攪拌した。過剰量の酢酸エチルを加えた後に、飽和塩化アンモニウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１→２／１）にて精製し、表題化合物（以下、参考例１７の化合物）を白色アモルファス（１．８１ｇ，収率９６％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．７６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｔｄ，Ｊ＝４．９，２．９Ｈｚ，７Ｈ），７．３０（ｄｄｔ，Ｊ＝１９．７，８．５，３．３Ｈｚ，９Ｈ），７．２２−７．１８（ｍ，２Ｈ），６．６５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），５．５９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｄｔ，Ｊ＝１６．６，６．１Ｈｚ，２Ｈ），４．２１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．０４（ｄｄ，Ｊ＝９．８，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３９（ｄｔ，Ｊ＝１８．８，６．６Ｈｚ，３Ｈ），２．２５（ｄｔ，Ｊ＝２３．０，６．６Ｈｚ，３Ｈ），２．０１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），１．８７（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），１．１３（ｄｔ，Ｊ＝１３．３，５．７Ｈｚ，２Ｈ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｎａ］＋：９３４．（ＬＣ／ＭＳ−２）【０３６２】
（参考例１８）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ５−（（Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，５−ジオキソ−１−（（２−（トリチルチオ）エチル）アミノ）ペンタン−２−イル）−Ｌ−グルタミナートの合成：
【化５０】
2017170637.tif 000056
参考例１７（４８０ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）を２０体積％ジエチルアミン−ＴＨＦ溶液（５．０ｍｌ）に溶かし、室温で一晩攪拌した後に、反応溶液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／９）にて精製し、表題化合物（以下、参考例１８の化合物）を白色アモルファス（２８４ｍｇ，収率７８％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．４１（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，６Ｈ），７．２９（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，５．０Ｈｚ，７Ｈ），７．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．４，６．１Ｈｚ，３Ｈ），６．９１（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３６−４．３１（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．２６（ｍ，１Ｈ），３．１２−３．０６（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，６．３Ｈｚ，１Ｈ），２．４５−２．２２（ｍ，７Ｈ），２．１０−２．０１（ｍ，３Ｈ），１．９５−１．８７（ｍ，７Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１２Ｈ），１．３０−１．２４（ｍ，２Ｈ），１．１６（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），１．１１（ｔ，Ｊ＝７．２  Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：６９０．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３６３】
（参考例１９）ｔｅｒｔ−ブチル  Ｎ２−（４−（Ｎ−（（２−アミノ−４−オキソ−４，８−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル）−２，２，２−トリフルオロアセトアミド）ベンゾイル）−Ｎ５−（（Ｓ）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１，５−ジオキソ−１−（（２−（トリチルチオ）エチル）アミノ）ペンタン−２−イル）−Ｌ−グルタミナートの合成：
【化５１】
2017170637.tif 000057
４−（Ｎ−（（２−アミノ−４−オキソ−４，８−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル）−２，２，２−トリフルオロアセトアミド）安息香酸（１７７ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１８８ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ／ジメチルスルホキシド（以下、ＤＭＳＯ）溶液（１０ｍｌ／１．０ｍｌ）にジイソプロピルエチルアミン（７５ｍｇ，０．５８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で５分攪拌した。得られた反応溶液に参考例１８（２８５ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５．０ｍｌ）を加えて、室温で一晩攪拌した。過剰量の１体積％メタノール−クロロホルムを加えた後に、飽和塩化アンモニウム水溶液と飽和食塩水で２回洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／５）にて精製し、表題化合物（以下、参考例１９の化合物）を黄色固体（２７０ｍｇ，収率６１％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．６７（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，３Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝５．２，３．４Ｈｚ，６Ｈ），７．２７−７．２３（ｍ，６Ｈ），７．１８（ｔｄ，Ｊ＝５．７，２．９Ｈｚ，３Ｈ），４．４０（ｄｄ，Ｊ＝９．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，５．７Ｈｚ，１Ｈ），３．０８（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，６．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，４．５Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｄｔ，Ｊ＝１７．２，５．０Ｈｚ，４Ｈ），２．０５−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．２８（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ−Ｈ］−：１０７９．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３６４】
（参考例２０）Ｎ２−（４−（（（２−アミノ−４−オキソ−４，８−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル）アミノ）ベンゾイル）−Ｎ５−（（Ｓ）−４−カルボキシ−１−（（２−メルカプトエチル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）−Ｌ−グルタミンの合成：
【化５２】
2017170637.tif 000058
参考例１９（１２０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン懸濁溶液（５．０ｍｌ）に７Ｎのアンモニア−メタノール溶液（５．０ｍｌ）を加えて均一な溶液として、室温で一晩攪拌した。減圧下で溶媒を留去して得られた固体に過剰量のジエチルエーテルを加えて洗浄し、沈殿した固体をろ過によって回収した（中間体１、１０５ｍｇ）。中間体１（１０５ｍｇ）に、ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン／Ｈ２Ｏ／エタンジチオール（９２．５／２．５／２．５／２．５体積％）（１０ｍｌ）を加えて、室温で一晩攪拌した。減圧下で溶媒を留去して得られた残渣に過剰量のジエチルエーテルを加えて攪拌し、生じた沈殿をろ過によって回収、得られた固体をジクロロメタンで洗浄し、表題化合物（以下、参考例２０の化合物）を緑黄色固体（６５ｍｇ，収率９２％，純度８０％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．６６（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｑ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），４．２８（ｔ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２３−３．１３（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．２２（ｄｄ，Ｊ＝１６．５，７．５Ｈｚ，５Ｈ），２．０４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．９０（ｄｄ，Ｊ＝２４．７，１０．２Ｈｚ，３Ｈ），１．７０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），１．２５（ｓ，１Ｈ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：６３０．（ＬＣ／ＭＳ−２）
ｔＲ＝１２．２１  ｍｉｎ．（ＨＰＬＣ）【０３６５】
（参考例２１）（２−（（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）エチル）ジスルファネイル）エチル）（メチル）カルバミン酸  ４−（２−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボキサミド）エチル）フェニルの合成：
【化５３】
2017170637.tif 000059
トリホスゲン（１７ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．０ｍｌ）を氷冷し、脱水ピリジン（２５ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）を添加後、２０分攪拌した。その溶液に、メチル（２−（（２−（メチルアミノ）エチル）ジスルファネイル）エチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチル（１５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（２．０ｍｌ）をゆっくりと滴下して、室温に戻して１時間攪拌した。過剰量のジクロロメタンを加えて、水で３回洗浄した後に、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。得られた残渣（７．５ｍｇ）を脱水ピリジン（１．０ｍｌ）に溶解させ氷冷した後に、実施例１１の化合物（２５ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）の脱水ピリジン溶液（３．０ｍｌ）を加えて、室温に戻しながら一晩攪拌した。過剰量の酢酸エチルを加えた後に、水で３回、飽和塩化アンモニウム水溶液と飽和食塩水で一回洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水後に、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミンシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／２０）にて精製し、表題化合物（以下、参考例２１の化合物）を白色アモルファス（２５ｍｇ，収率７６％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９６（１Ｈ，ｓ），７．４１−７．３０（２Ｈ，ｍ），７．２７−７．１０（５Ｈ，ｍ），７．０６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），５．４９−５．４４（１Ｈ，ｍ），４．８５−４．７７（２Ｈ，ｍ），４．１３−３．６４（９Ｈ，ｍ），３．６０−３．２９（１５Ｈ，ｍ），３．１３（３Ｈ，ｓ），３．０３（３Ｈ，ｓ），２．５１−２．３０（４Ｈ，ｍ），２．２５（６Ｈ，ｓ），２．１７−１．９８（２Ｈ，ｍ），１．７８（１２Ｈ，ｓ），１．１１−０．８８（２４Ｈ，ｍ），０．８２（５Ｈ，ｍ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ−Ｂｏｃ］２＋：５７７．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３６６】
（参考例２２）（５０−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−７−メチル−８，４８−ジオキソ−１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４−ドデカオキサ−３，４−ジチア−７，４７−ジアザペンタコンチル）（メチル）カルバミン酸  ４−（２−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボキサミド）エチル）フェニルの合成：
【化５４】
2017170637.tif 000060
参考例２１（２０ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．０ｍｌ）に、４Ｎの塩化水素−ジオキサン溶液（０．５ｍｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧下濃縮した後に、減圧乾燥した。得られた残渣に、ＨＡＴＵ（７．３ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（０．５ｍｌ）を加え、その反応溶液に１−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−３−オキソ−７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０−ドデカオキサ−４−アザトリテトラコンタン−４３−酸（１２ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１．０ｍｌ）とジイソプロピルエチルアミン（１０μｌ）を添加し、室温で一晩攪拌した。反応溶液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝０／１→１／５）にて精製し、表題化合物（以下、参考例２２の化合物）を油状物質（１５ｍｇ，収率４０％）として得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］３＋：６３５．（ＬＣ／ＭＳ−１）
ｔＲ＝１７．１１  ｍｉｎ．（ＨＰＬＣ）【０３６７】
（実施例１２）Ｎ２−（４−（（（２−アミノ−４−オキソ−４，８−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル）アミノ）ベンゾイル）−Ｎ５−（（２Ｓ）−４−カルボキシ−１−（（２−（（１−（１−（４−（２−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−カルボキサミド）エチル）フェノキシ）−２，９−ジメチル−１，１０，５０−トリオキソ−１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６−ドデカオキサ−５，６−ジチア−２，９，４９−トリアザドペンタコンタン−５２−イル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）エチル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）−Ｌ−グルタミンの合成：
【化５５】
2017170637.tif 000061
参考例２２（６．８ｍｇ，０．００３ｍｍｏｌ）のアセトニトリル／メタノール溶液（１．０ｍｌ／０．５ｍｌ）に、参考例２０（３．０ｍｇ，０．００５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液（１．０ｍｌ）とｐＨ７．２のリン酸バッファー（以下、ＰＢＳ）（５０ｍＭ，１．０ｍｌ）を加えて、室温で一晩攪拌した。得られた反応混合物をＯＤＳカラムによる逆相精製を行ない、表題化合物（以下、実施例１２の化合物）を油状物質（６．０ｍｇ，収率６７％）として得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ−Ｈ］２−：１２６６．（ＬＣ／ＭＳ−１）
ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ−Ｈ］−：２５３２．１７５４．
Ｃ１１８Ｈ１８０Ｎ２０Ｏ３３Ｓ４の計算精密質量：２５３２．１８３２．
ｔＲ＝１６．４０  ｍｉｎ．（ＨＰＬＣ）【０３６８】
（参考例２３）（２−（（２−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−メチルチアゾール−４−カルボキサミド）エチル）ジスルファネイル）エチル）（メチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルの合成：
【化５６】
2017170637.tif 000062
２−（トリチルチオ）エタンアミンの代わりにメチル（２−（（２−（メチルアミノ）エチル）ジスルファネイル）エチル）カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルを用いて、それ以外は参考例２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例２３の化合物）を白色固体（２６ｍｇ，収率９２％）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．０１（１Ｈ，ｓ），７．８７（１Ｈ，ｂｒｓ），７．４６（１Ｈ，ｂｒｓ），７．２６−７．１５（５Ｈ，ｍ），６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），５．５６（１Ｈ，ｂｒｓ），４．８１−４．７７（２Ｈ，ｍ），４．１２（１Ｈ，ｂｒｓ），４．０５（１Ｈ，ｂｒｓ），３．９７（１Ｈ，ｂｒｓ），３．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），３．８０（２Ｈ，ｍ），３．５１−３．１６（４Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．１３（３Ｈ，ｓ），３．０４（３Ｈ，ｓ），２．９６（３Ｈ，ｓ），２．８１−２．７４（２Ｈ，ｍ），２．８９（３Ｈ，ｓ），２．４６−２．３４（３Ｈ，ｍ），２．２５（６Ｈ，ｓ），２．１２−１．９７（２Ｈ，ｍ），１．６６（１５Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），１．４５（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），１．１０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．０５−０．９０（１２Ｈ，ｍ），０．８２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）．
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋：１０９２．（ＬＣ／ＭＳ−１）【０３６９】
（参考例２４）２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−（５０−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−７−メチル−８，４８−ジオキソ−１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４−ドデカオキサ−３，４−ジチア−７，４７−ジアザペンタコンチル）−Ｎ−メチルチアゾール−４−カルボキサミドの合成：
【化５７】
2017170637.tif 000063
参考例２１の代わりに参考例２３を用いて、それ以外は参考例２２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、参考例２４の化合物）を油状物質（１７ｍｇ，収率３１％）として得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］２＋：８７１．（ＬＣ／ＭＳ−１）
ｔＲ＝１６．６６  ｍｉｎ．（ＨＰＬＣ）【０３７０】
（実施例１３）Ｎ２−（４−（（（２−アミノ−４−オキソ−４，８−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチル）アミノ）ベンゾイル）−Ｎ５−（（２Ｓ）−４−カルボキシ−１−（（２−（（１−（１−（２−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）チアゾール−４−イル）−２，９−ジメチル−１，１０，５０−トリオキソ−１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７，４０，４３，４６−ドデカオキサ−５，６−ジチア−２，９，４９−トリアザドペンタコンタン−５２−イル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）エチル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）−Ｌ−グルタミンの合成：
【化５８】
2017170637.tif 000064
参考例２２の代わりに参考例２４を用いて、それ以外は実施例１２と同様の方法にて合成を行い、表題化合物（以下、実施例１３の化合物）を油状物質（８．４ｍｇ，収率７１％）として得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ−Ｈ］２−：１１８４．（ＬＣ／ＭＳ−１）
ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）［Ｍ−Ｈ］−：２３６９．１１６２．
Ｃ１０９Ｈ１７１Ｎ１９Ｏ３１Ｓ４の計算精密質量：２３６９．１１９８．
ｔＲ＝１５．８５  ｍｉｎ．（ＨＰＬＣ）【０３７１】
ＬＣ／ＭＳ−１の分析条件は以下の通りである。
（ＬＣ／ＭＳ−１）
液体クロマトグラフシステム：ＬＣ１２００（アジレント・テクノロジー社製）
質量分析計：６１３０Ａ（アジレント・テクノロジー社製）
分析条件
カラム：ラピッドレゾリューションＨＴカートリッジ
移動相Ａ：０．１体積％ギ酸−蒸留水、ＨＰＬＣ用
移動相Ｂ：０．１体積％ギ酸−アセトニトリル、ＨＰＬＣ用
グラジエント条件：移動層Ｂ体積％
０−１．５  ｍｉｎ：２０％−９５％
１．５−３．０  ｍｉｎ：９５％
流速：０．５  ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２．０μＬ
カラム温度：４０℃【０３７２】
ＬＣ／ＭＳ−２の分析条件は以下の通りである。
（ＬＣ／ＭＳ−２）
液体クロマトグラフシステム：ＬＣ１２６０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  ＩＩ（アジレント・テクノロジー社製）
質量分析計：６１３０Ｂ（アジレント・テクノロジー社製）
分析条件
カラム：ラピッドレゾリューションＨＴカートリッジ
移動相Ａ：０．１体積％ギ酸−蒸留水、ＨＰＬＣ用
移動相Ｂ：０．１体積％ギ酸−アセトニトリル、ＨＰＬＣ用
グラジエント条件：移動層Ｂ体積％
０−１．５  ｍｉｎ：２０％−９５％
１．５−３．０  ｍｉｎ：９５％
流速：０．５  ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２．０μＬ
カラム温度：４０℃【０３７３】
ＨＲＭＳの分析条件は以下の通りである。
液体クロマトグラフシステム：ＮｅｘｅｒａＸ２（島津製作所製）
質量分析計：ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ質量分析計（島津製作所製）
分析条件
移動相：メタノール
流速：０．１  ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２．０μＬ【０３７４】
ＯＤＳカラムでの精製条件は以下の通りである。
ＯＤＳカラム精製条件
カラム：山善ハイフラッシュカラム  ＯＤＳ  サイズＭ
流速：１０  ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：室温
検出波長：２５４  ｎｍ
移動層Ａ：０．０５体積％ＴＦＡ  ｉｎ  Ｈ２Ｏ
移動層Ｂ：０．０５体積％ＴＦＡ  ｉｎ  ＣＨ３ＣＮ
グラジエント：移動層Ｂ体積％
０−５  ｍｉｎ：５．０％
５−２０  ｍｉｎ：５％から９５％まで上昇
２０−２５  ｍｉｎ：９５％【０３７５】
ＨＰＬＣでの分析条件は以下の通りである。
（ＨＰＬＣ）
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ  ５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩｌ，  ４．６ｍｍＩ．Ｄ．  ｘ  １５０ｍｍ
流速：１．０  ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：２５４  ｎｍ
移動層Ａ：０．０５体積％ＴＦＡ  ｉｎ  Ｈ２Ｏ
移動層Ｂ：０．０５体積％ＴＦＡ  ｉｎ  ＣＨ３ＣＮ
グラジエント：移動層Ｂ体積％
０−５ｍｉｎ：５．０％
５−２０ｍｉｎ：５％から９５％まで上昇
２０−２５ｍｉｎ：９５％【０３７６】
（実施例１４）ペプチド誘導体（Ｉ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性評価：
実施例１〜１１の化合物、参考例１の化合物、参考例１２の化合物、参考例１４の化合物、参考例１６の化合物及び２−（（Ｓ）−１−（（（２Ｓ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ジメチルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−２−フェニルエチル）−Ｎ−エチルチアゾール−４−カルボキサミド（以下、比較例化合物）のＳＫＯＶ−３細胞、Ａ５４９細胞及びＬ１２１０細胞に対する細胞毒性をＭＴＳ法を用いて測定した。【０３７７】
各被験物質の細胞毒性を表５に示す。表５中、ＥＣ５０は、５０％効果濃度を意味し、薬物が示す薬理作用の最低値からの最大反応の５０％を示す濃度を表し、ＳＫＯＶ−３は、ＳＫＯＶ−３細胞を表し、Ａ５４９は、Ａ５４９細胞を表し、Ｌ１２１０は、Ｌ１２１０細胞を表す。【０３７８】
【表５】
2017170637.tif 000065
【０３７９】
表５の結果から明らかな通り、ペプチド誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩は、複数のがん細胞に対して高い細胞毒性を有することが示された。【０３８０】
（実施例１５）ペプチド誘導体（Ｉ）の人工膜透過性試験（ＰＡＭＰＡ）：
実施例１〜１１の化合物、参考例１の化合物、参考例１２の化合物、参考例１４の化合物、参考例１６の化合物及び比較例化合物の人工膜透過性をＰｒｅ−ｃｏａｔｅｄ  ＰＡＭＰＡ  ＰｌａｔｅＳｙｓｔｅｍ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を使用し、評価した。【０３８１】
被験物質は１０ｍｍｏｌ／ＬになるようＤＭＳＯに溶解した後、２０％メタノールを含むＰＢＳで２００μｍｏｌ／Ｌになるよう希釈したものを標準溶液とした。冷凍保存したＰｒｅ−ｃｏａｔｅｄ  ＰＡＭＰＡ  Ｐｌａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍを３０分間以上室温に放置した。次いで、Ｐｒｅ−ｃｏａｔｅｄ  ＰＡＭＰＡ  Ｐｌａｔｅ  ＳｙｓｔｅｍのＤｏｎｏｒ側のプレートに標準溶液３２０μＬを添加し、Ａｃｃｅｐｔｏｒ側のプレートに２０％メタノール含むＰＢＳ２００μＬを添加して、両プレートをセットし、室温で５時間静置した。Ｄｏｎｏｒ側及びＡｃｃｅｐｔｏｒ側のプレートの各ウェルの反応液を、ＬＣ／ＭＳ分析（以下、ＬＣ／ＭＳ−３）に供し、各ウェルの化合物濃度を算出した。【０３８２】
ＬＣ／ＭＳ−３の分析条件は以下の通りである。
液体クロマトグラフシステム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ社製）
質量分析計：Ｗａｔｅｒｓ  ＳＱＤ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ｗａｔｅｒｓ社製）
カラム：Ａｓｃｅｎｔｉｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８，２．７ μｍ，２．１ ｍｍ ＩＤ×２０ｍｍ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）
移動相Ａ：０．１体積％ ギ酸水溶液
移動相Ｂ：アセトニトリル
流速：０．６ ｍＬ／ｍｉｎ
グラジエント：移動層Ｂ体積％
０．０〜２．０  ｍｉｎ：３．０→１００％
２．０〜２．４  ｍｉｎ：１００％
２．４〜２．５  ｍｉｎ：１００→３．０％【０３８３】
得られた各ウェルの反応液の化合物濃度を用いて、膜透過係数（Ｐｅ）（ｃｍ／ｓ）を以下の式より算出した 。
Ｃｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ＝（ＣＤ×ＶＤ−ＣＡ×ＶＡ）／（ＶＤ−ＶＡ）
Ｐｅ＝［−ｌｎ（１−ＣＡ／Ｃｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ）］／Ｓ×（１／ＶＤ＋１／ＶＡ）×ｔ
Ｃｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ：Ｄｏｎｏｒ側及びＡｃｃｅｐｔｏｒ側プレートウェルの平衡濃度
ＣＤ：Ｄｏｎｏｒ側プレートウェルの５時間後の濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）
ＶＤ：Ｄｏｎｏｒ側プレートウェルに添加した標準溶液の容積（０．３２ ｍＬ）
ＣＡ：Ａｃｃｅｐｔｏｒ側プレートウェルの５時間後の濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）
ＶＡ：Ａｃｃｅｐｔｏｒ側プレートウェルに添加した２０％メタノール含むＰＢＳの容積（０．２ ｍＬ）
Ｓ：膜表面積（０．３ ｃｍ２）
ｔ：静置時間１８，０００ ｓ（＝５ ｈｒ）【０３８４】
各被験物質の人工膜透過性を表６に示す。【０３８５】
【表６】
2017170637.tif 000066
【０３８６】
表６中、Ｎ．Ｄ．は、Ａｃｃｅｐｔｏｒ側のプレートウェルの濃度が定量下限未満であったため、膜透過係数を算出できなかったことを意味する。【０３８７】
（実施例１６）ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性評価：
実施例１２の化合物及び実施例１３の化合物のＳＫＯＶ−３細胞、Ａ５４９細胞及びＬ１２１０細胞に対する細胞毒性をＭＴＳ法を用いて測定した。【０３８８】
実施例１２の化合物は、葉酸をターゲッティングリガンドとして実施例１１の化合物のプロドラッグと適切な方法で複合化する事で得られた複合体である。【０３８９】
実施例１２の化合物の評価方法は、次の通りである。葉酸を含有しない培地で培養している各細胞に、実施例１２の化合物を２時間処置した後に、化合物を含まない新しい培地へと変更し、そのまま継続して４８時間培養した。４８時間後の生細胞数をＭＴＳ法を用いて測定した。【０３９０】
実施例１３の化合物は、葉酸をターゲッティングリガンドとして実施例３の化合物のプロドラッグと適切な方法で複合化する事で得られた複合体である。【０３９１】
実施例１３の化合物の評価方法は、次の通りである。葉酸を含有しない培地で培養している各細胞に、実施例１３の化合物を６時間処置した後に、化合物を含まない新しい培地へと変更し、そのまま継続して４８時間培養した。４８時間後の生細胞数をＭＴＳ法を用いて測定した。【０３９２】
ＳＫＯＶ−３細胞とＬ１２１０細胞は細胞表面に葉酸受容体が中〜高発現していることが報告されている。Ａ５４９細胞は細胞表面に葉酸受容体が低発現若しくは検出されない程度に発現していることが報告されている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第３３８巻、ｐ．２８４-２９３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２０１５年、第１４巻、ｐ．１６０５-１３）。【０３９３】
各被験物質の細胞毒性を表７に示す。表７中、ＥＣ５０は、５０％効果濃度を意味し、薬物が示す薬理作用の最低値からの最大反応の５０％を示す濃度を表し、ＳＫＯＶ−３は、ＳＫＯＶ−３細胞を表し、Ａ５４９は、Ａ５４９細胞を表し、Ｌ１２１０は、Ｌ１２１０細胞を表す。【０３９４】
【表７】
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【０３９５】
表７の結果から明らかな通り、ペプチド誘導体（Ｉ）を含む複合体又はその薬理学的に許容される塩は、葉酸受容体が細胞表面に発現しているがん細胞に対して選択的に高い細胞毒性を有することが示された。【０３９６】
ペプチド誘導体（Ｉ）は、Ｃ末端に種々の官能基を有するため、ペプチド誘導体（Ｉ）又はそのプロドラッグと、ターゲッティングリガンド又はポリマーと、を適切な方法で複合化することで複合体へと変換できることが示された。【０３９７】
また、ペプチド誘導体（Ｉ）又はそのプロドラッグと、ターゲッティングリガンドと、を適切な方法で複合化することで得られた複合体は、ターゲッティングリガンドによる作用で特定の細胞に対して選択的に高い細胞毒性を有することが示された。
【産業上の利用可能性】
【０３９８】
本発明のペプチド誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩は、高い細胞毒性を有するため、細胞毒性剤として利用できる。また、本発明のペプチド誘導体（Ｉ）は、Ｃ末端に種々の官能基を有するため、ペプチド誘導体（Ｉ）又はそのプロドラッグと、ターゲッティングリガンド又はポリマーと、を複合化する事ができ、当該複合体又はその薬理学的に許容される塩は、細胞毒性剤として利用できる。
【国際調査報告】
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