(57)【要約】  早期ステージであっても被検者が肺がんに罹患しているのか検査ができる肺がん検査用の情報を提供することを課題とする。  ｍｉＲＮＡの存在量を測定することによる肺がん検査用の情報を提供する方法であって、被検者の血液中の、少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定する工程、を含む肺がん検査用の情報を提供する方法により、課題を解決できる。
2017221744.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍｉＲＮＡの存在量を測定することによる肺がん検査用の情報を提供する方法であって、
被検者の血液中の、少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定する工程、
を含む、肺がん検査用の情報を提供する方法。
【請求項２】
前記存在量を測定する工程が、請求項１に記載のｍｉＲＮＡに加え、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４４９５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１４１３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４６７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４５５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４５０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７４ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩ０００６４１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４３３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２８−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４８０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４７６２）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４５（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３１５）及びｈｓａ−ｍｉＲ−２４−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００８０）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定する、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記存在量を測定する工程が、請求項１及び請求項２に記載の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定する、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づいて、被検者の肺がんの検査を行う検査工程、
を含む、肺がんの検査方法。
【請求項５】
前記被検者の肺がんの検査を行う検査工程が、
肺がん患者の血液中で発現している請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づき予め構築した検査モデルに、請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量を当てはめる工程、
前記検査モデルに当てはめたｍｉＲＮＡの存在量からスコアを算出する工程、
を含む請求項４に記載の検査方法。
【請求項６】
肺がん患者の血液中で発現している請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づき予め構築した検査モデルを少なくとも格納した記憶手段、
被検者の血液に含まれる、請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量を、前記記憶手段に記憶された検査モデルに当てはめスコアを算出することで被検者の肺がんの検査を行う検査手段、
を含む肺がんの検査装置。
【請求項７】
コンピュータを、請求項６に記載の肺がんの検査装置として機能させるためのプログラム。
【請求項８】
請求項７に記載のプログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【請求項９】
被検者の血液中で発現している少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定するプローブを含む、
肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【請求項１０】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４４９５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１４１３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４６７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４５５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４５０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７４ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩ０００６４１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４３３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２８−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４８０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４７６２）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４５（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３１５）及びｈｓａ−ｍｉＲ−２４−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００８０）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを更に含む、
請求項９に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【請求項１１】
請求項９及び請求項１０に記載の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを含む、
請求項１０に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【請求項１２】
ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２８０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００７５３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００５１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００６８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４５）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを更に含む、
請求項９〜１１の何れか一項に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肺がん検査用の情報を提供する方法、肺がんの検査方法、肺がんの検査装置、肺がんの検査装置のプログラム及び記録媒体、並びに肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
日本を含む殆どの先進諸国において、がんによる部位別死亡者数の中で、肺がんによる死亡は第１位を占めている。肺がんに対しては、様々な治療法の改良及び早期発見用の検査方法の改良が行われているが、日本においては毎年約７０，０００人の肺がん患者（以下、単に「患者」と記載することがある。）が死亡している。【０００３】
肺がんの検査についてはいくつかの方法があり、目的に応じて検査内容が異なる。例えば、健康診断などで行われるＸ線検査（レントゲン）、喀痰細胞診、血液検査（腫瘍マーカー）が知られている。また、健康診断などで異常が認められた場合に、がんの疑いがあるかどうか、又は他の病気ではないかどうかについてより詳しく調べるための検査として、ＣＴ検査が知られている。そして、がんの疑いがある場合に病変を直接観察して確かめるための検査として、気管支鏡検査、胸腔鏡検査、経皮肺生検等が知られている。【０００４】
上記検査方法の中で、血液検査（腫瘍マーカー）とは、がんが作り出す特殊な物質のうち、主として血液中で測定できるもので、がんの性質や広がりの目安を示すものとして使われている。具体的には、最も一般的なマーカーで、腺がんで高値を示すＣＥＡ；扁平上皮がんの有無を推測する腫瘍マーカーであるＳＣＣ；小細胞肺がんの検査で用いられるマーカーであるＮＳＥ；扁平上皮がんで高値を示すマーカーであるＣＹＦＲＡ２１−１；小細胞肺がんのマーカーであって、再発・進行時に良く反応する有用なマーカーであるＰｒｏＧＲＰ；腺がんの進行判定に有効なマーカーであるＳＬＸ等が知られている。【０００５】
また、上記に挙げたマーカー以外に、近年、ｍｉＲＮＡとがんとの関係が注目され、ｍｉＲＮＡの発現パターンをがんの検査に利用する研究が進められている。例えば、小細胞肺がん患者における予後を判定するための検査方法として、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１９６ａ、ｍｉＲ−２０３、ｍｉＲ−２１６ａ又はそれらの前駆体からなる群より選択される少なくとも一種の存在量を測定する、小細胞肺がん患者における予後を判定するための検査方法が知られている（特許文献１参照）。【０００６】
また、肺腺がんや肺扁平上皮がんでは、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６、ｈａｓ−ｍｉＲ−２０５及びｈａｓ−ｍｉＲ−２１の存在量が増加又は減少しており、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５の発現が高い又はｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−２の発現が低い肺腺がん患者は、ｈｓａ−ｍｉＲ−１５５の発現が低い又はｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−２の発現が高い患者よりも予後が悪いことが知られている（特許文献２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１１／１２５２４５号
【特許文献２】国際公開第２００７／０８１７２０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、特許文献１及び２に記載されている発明は、肺がんの予後を予測するためのｍｉＲＮＡマーカーに関する発明である。したがって、特許文献１及び２に記載されている方法は、既に肺がんに罹患した患者が対象となる。健康診断等の際に採取した血液を用いて、早期ステージであっても被検者が肺がんに罹患しているのか検査ができるｍｉＲＮＡマーカーを用いた検査方法の開発が望まれているが、現在のところ、肺がん検査用のｍｉＲＮＡマーカーは知られていない。【０００９】
本発明は、上記従来の問題を解決するためになされた発明であり、鋭意研究を行ったところ、被検者の血液中の、少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定することで、肺がんの検査をするための情報を提供できることを新たに見出し、本発明を完成した。【００１０】
すなわち、本発明の目的は、肺がん検査用の情報を提供する方法、肺がんの検査方法、肺がんの検査装置、肺がんの検査装置のプログラム及び記録媒体、並びに肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キットを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、以下に示す、肺がん検査用の情報を提供する方法、肺がんの検査方法、肺がんの検査装置、肺がんの検査装置のプログラム及び記録媒体、並びに肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キットに関する。【００１２】
（１）ｍｉＲＮＡの存在量を測定することによる肺がん検査用の情報を提供する方法であって、
被検者の血液中の、少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定する工程、
を含む、肺がん検査用の情報を提供する方法。
（２）前記存在量を測定する工程が、請求項１に記載のｍｉＲＮＡに加え、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４４９５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１４１３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４６７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４５５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４５０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７４ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩ０００６４１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４３３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２８−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４８０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４７６２）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４５（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３１５）及びｈｓａ−ｍｉＲ−２４−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００８０）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定する、
上記（１）に記載の方法。
（３）前記存在量を測定する工程が、請求項１及び請求項２に記載の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定する、
上記（２）に記載の方法。
（４）上記（１）〜（３）の何れか一に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づいて、被検者の肺がんの検査を行う検査工程、
を含む、肺がんの検査方法。
（５）前記被検者の肺がんの検査を行う検査工程が、
肺がん患者の血液中で発現している上記（１）〜（３）の何れか一に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づき予め構築した検査モデルに、上記（１）〜（３）の何れか一に記載のｍｉＲＮＡの存在量を当てはめる工程、
前記検査モデルに当てはめたｍｉＲＮＡの存在量からスコアを算出する工程、
を含む上記（４）に記載の検査方法。
（６）肺がん患者の血液中で発現している上記（１）〜（３）の何れか一に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づき予め構築した検査モデルを少なくとも格納した記憶手段、
被検者の血液に含まれる、上記（１）〜（３）の何れか一に記載のｍｉＲＮＡの存在量を、前記記憶手段に記憶された検査モデルに当てはめスコアを算出することで被検者の肺がんの検査を行う検査手段、
を含む肺がんの検査装置。
（７）コンピュータを、上記（６）に記載の肺がんの検査装置として機能させるためのプログラム。
（８）上記（７）に記載のプログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
（９）被検者の血液中で発現している少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定するプローブを含む、
肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
（１０）ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４４９５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１４１３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４６７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４５５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４５０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７４ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩ０００６４１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４３３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２８−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４８０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４７６２）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４５（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３１５）及びｈｓａ−ｍｉＲ−２４−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００８０）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを更に含む、
上記（９）に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
（１１）上記（９）及び（１０）に記載の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを含む、
上記（１０）に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
（１２）ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２８０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００７５３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００５１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００６８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４５）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを更に含む、
上記（９）〜（１１）の何れか一に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。【００１３】
なお、上記のｍｉＲＮＡのＡｃｃｅｓｓｉｏｎは、全てｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ）の番号である。以下、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎは省略することがある。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、被検者の血液中の、少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６の存在量を測定することで、肺がんの検査用の情報を提供できる。したがって、健康診断等の際に採取した血液に基づき、肺がんの検査をすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、検査モデルの作成手順、及び作成した検査モデルの検証手順の概略を示す図である。
【図２】図２は、肺がんの検査装置の概略を示す図である。
【図３】図３は、本発明の検査装置を用いて、被検者を検査するための工程を示す図である。
【図４Ａ】図４Ａは、内部標準の候補の探索及び決定手順を示す図である。
【図４Ｂ】図４Ｂは、内部標準の各候補ｍｉＲＮＡの安定値（ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅ）を示すグラフである。
【図４Ｃ】図４Ｃ（ａ）は、肺腺がん患者（ＡＤ）及び健常者（ＨＳ）のｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐのＲａｗ  Ｃｔ値を示しグラフで、（ｂ）は、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ及びｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐのＲａｗ  Ｃｔ値の平均を示すグラフである。
【図５Ａ】図５Ａは、肺がん検査用のｍｉＲＮＡの探索・決定の手順を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、ｍｉＲＮＡを１個〜１７８個まで選択した時のＥｒｒｏｒ  ｒａｔｅを示すグラフである。
【図５Ｃ】図５Ｃ（ａ）は、作成した検査モデルを用いて教師群の検査を行った結果を示すグラフ、図５Ｃ（ｂ）は、ＡＤ患者ｖｓ健常者（ＨＳ）のＲＯＣ曲線を示すグラフである。
【図６Ａ】図６Ａは、作成した検査モデルを用いて検証群を検査した結果を示すグラフである。
【図６Ｂ】図６Ｂ（ａ）は、検証群のＡＤ患者ｖｓ健常者（ＨＳ）のＲＯＣ解析を示すグラフで、図６Ｂ（ｂ）は、検証群のＡＤ患者ｖｓ非ＡＤ患者（ＨＳ＋ＢＰＤ）のＲＯＣ解析を示すグラフである。
【図６Ｃ】図６Ｃは、表１に示す検証群のＡＤ患者を作成した検査モデルに当てはめて検査した結果を示すグラフである。
【図６Ｄ】図６Ｄは、ＡＤ患者以外のがん患者を作成した検査モデルに当てはめて検査した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に、本発明の肺がん検査用の情報を提供する方法（以下、単に「方法」と記載することがある。）、肺がんの検査方法（以下、単に「検査方法」と記載することがある。）、肺がんの検査装置（以下、単に「検査装置」と記載することがある。）、肺がんの検査装置のプログラム（以下、単に「プログラム」と記載することがある。）及び記録媒体、並びに肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット（以下、単に「キット」と記載することがある。）について詳しく説明する。
【００１７】
先ず、本発明における「肺がん」の種類は、腺がん、扁平上皮がん、腺扁平上皮がん、大細胞がん等の非小細胞肺がん、小細胞がん等の小細胞肺がん、が挙げられる。本発明の方法に用いられるサンプルは、血液である。
【００１８】
図１は、検査モデルの作成手順、及び作成した検査モデルの検証手順の概略を示す図である。先ず、各種がん患者及び健常者（ＨＳ）の血液サンプルを集める。左側の“Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ”に示すように、教師群（ｔｒａｉｎｉｇ  ｃｏｈｏｒｔ）に分類された肺腺がん（ＡＤ）患者及び健常者（ＨＳ）の採取血液から血清（サンプル）を分離し、ＴａｑＭａｎ  Ｈｕｍａｎ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  Ａｒｒａｙｓ（ｃａｒｄｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ；７６８種のｍｉＲＮＡの検出が可能）を用いて、サンプル中で発現している各種ｍｉＲＮＡの存在量を測定する。次に、各サンプル間のｍｉＲＮＡの存在量を標準化するための内部標準（ノーマライザー）となるｍｉＲＮＡを探索・決定し、決定したノーマライザーで各サンプルのｍｉＲＮＡの存在量を補正することで、各サンプル間の存在量の誤差を補正する。そして、肺がん検査用のｍｉＲＮＡの候補を選択し、その中から、肺がん患者を検査するのに好ましいｍｉＲＮＡを特定する。
【００１９】
次いで、右側の“Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ”において、“Ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ”で肺がん検査用として特定したｍｉＲＮＡの存在量を測定するキットを作製する。次に、検証群（ｔｅｓｔ  ｃｏｈｏｒｔ）に分類された各種がん患者《肺腺がん（ｌｕｎｇ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＡＤ）１１０人；肺扁平上皮がん（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＳＱ）２７人；肺大細胞がん（ｌａｒｇｅ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ＬＣ）１０人；胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ：ＧＣ）１８人；大腸がん（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：ＣＲＣ）２０人；膵がん（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ：Ｐａｎ）１８人；卵巣がん（ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ：Ｏｖａ）２０人；乳がん（ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ：Ｂｒ）２０人》、肺の良性新生物（ｂｅｎｉｇｎ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ：ＢＰＤ）４７人、及び健常者（ＨＳ）１１０人の採取血液から血清（サンプル）を分離し、作製したキットを用いてサンプル中のｍｉＲＮＡの存在量を測定する。そして、肺がん検査用として特定したｍｉＲＮＡから作成した検査モデルに測定したｍｉＲＮＡの存在量を当てはめ、作成した検査モデルの優位性の検証を行う。
【００２０】
後述する実施例で示すように、健常者と比較して肺がん患者に特有なｍｉＲＮＡとして、少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６の組み合わせ（以下、この組み合わせを「組み合わせ（１）」と記載することがある。）が挙げられる。
【００２１】
本発明の方法を実施する際には、少なくとも組み合わせ（１）の存在量を測定すればよいが、検査方法の精度を向上するためには、組み合わせ（１）の存在量に加え、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４ｂ−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７４ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２８−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４５及びｈｓａ−ｍｉＲ−２４−３ｐ（以下、この組み合わせを「組み合わせ（２）」と記載することがある。）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量も併せて測定してもよい。
【００２２】
また、組み合わせ（１）及び組み合わせ（２）に記載の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定してもよい。
【００２３】
図１に示すように、サンプル中のｍｉＲＮＡの存在量を測定する際には、ノーマライザー用のｍｉＲＮＡの存在量に基づき、サンプル中のｍｉＲＮＡの存在量を補正してもよい。ノーマライザーを用いて存在量を補正することで、サンプルの量や濃度が変わっても、サンプル中のｍｉＲＮＡの存在量を補正することができる。ノーマライザー用のｍｉＲＮＡは、健常者と肺がん患者の何れの血液中でも発現し、且つ存在量の差が小さいｍｉＲＮＡであれば特に制限はない。例えば、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ａ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ及びｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−３ｐ（以下、この組み合わせを「組み合わせ（３）」と記載することがある。）等が挙げられる。前記ノーマライザー用のｍｉＲＮＡは、健常者と肺がん患者の血液中で最も存在量の差が小さいｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐを単独で用いてもよいし、複数組み合わせてもよい。
【００２４】
後述する実施例に示すとおり、組み合わせ（１）に示すｍｉＲＮＡは、健常者と肺がん患者の存在量が異なっている。したがって、少なくとも組み合わせ（１）のｍｉＲＮＡの存在量を測定することで、肺がん検査用の情報を提供することができる。更に必要に応じて組み合わせ（２）から選択される１種以上のｍｉＲＮＡの存在量、または組み合わせ（２）の全てのｍｉＲＮＡの存在量も併せて測定することで、より精度の高い肺がん検査用の情報を提供することができる。
【００２５】
本発明の検査方法は、被検者から採取した血液中で発現している少なくとも組み合わせ（１）に示すｍｉＲＮＡの存在量に基づいて、被検者が肺がんに罹患しているか否か検査することを特徴としている。検査は、測定した組み合わせ（１）に示すｍｉＲＮＡの存在量に基づいて、検査できるものであれば特に制限はない。後述する実施例に示すとおり、肺がん患者及び健常者の血液中のｍｉＲＮＡの存在量の比較定量結果から、統計的手段を用いて検査モデル（判別式）、更に必要に応じて閾値を作成し、測定したｍｉＲＮＡの存在量を検査モデルに当てはめスコアを算出、必要に応じて閾値と比較することで肺がんに罹患しているか否か検査をすればよい。
【００２６】
また、作成した検査モデルや閾値をコンピュータの記憶手段に記憶しておくことで、コンピュータを検査装置として用いることもできる。
【００２７】
図２は、検査装置の概略を示す図である。検査装置１は、入力手段２、検査モデル、更に必要に応じて閾値を記憶する記憶手段３、検査手段４、制御部５及びプログラムメモリ６を少なくとも含んでいる。
【００２８】
入力手段２は、被検者の血液から測定したｍｉＲＮＡの存在量の情報を検査装置１に入力できれば特に制限はなく、キーボード、ＵＳＢ等が挙げられる。また、入力手段２はインターネット回線を使用しても良い。例えば、インターネット回線を用いて遠隔地の病院で測定した被検者の血液から測定したｍｉＲＮＡの存在量の情報を検査装置１に送信・入力し、インターネット回線を通じて検査結果を送付することで、遠隔地の病院の被検者に対しても適切な検査をすることもできる。
【００２９】
記憶手段３には、検査モデル、必要に応じて閾値が記憶されている。検査手段４は、入力手段２により入力された被検者のｍｉＲＮＡの存在量の情報を記憶手段３に記憶されている検査モデルに当てはめスコアを算出、更に必要に応じて閾値と比較することで、被検者が肺がんに罹患しているか否か検査することができる。プログラムメモリ６には、例えば、図２に示すコンピュータを検査装置１として機能させるためのプログラムが格納されている。このプログラムが制御部５により読み出され実行されることで、入力手段２、記憶手段３及び検査手段４の動作制御が行われる。プログラムは、予めコンピュータに記憶しておいても良いし、記録媒体に検査モデル又は閾値と共に記録され、インストール手段を用いてプログラムメモリ６に格納されるようにしてもよい。
【００３０】
図３は、本発明の検査装置１を用いて、被検者を検査するための工程を示す図である。プログラムメモリ６に格納されたプログラムが制御部５に読み出されて実行し、先ず、入力手段２により、被検者の血液中の少なくとも組み合わせ（１）に示すｍｉＲＮＡの存在量を入力する（Ｓ１００）。なお、血液中のｍｉＲＮＡの存在量は、検査装置１と接続しているｍｉＲＮＡの存在量の測定装置の測定結果を直接入力してもよいし、別途測定した測定値を入力してもよい。次に、入力手段２により入力された存在量の情報を、記憶手段３に記憶されている検査モデルに当てはめスコアを算出、必要に応じて閾値と比較する（Ｓ１１０）。そして、得られた検査結果を表示する（Ｓ１２０）。表示方法は、コンピュータの表示手段に表示してもよいし、紙等にプリントアウトしてもよい。
【００３１】
血液中で発現しているｍｉＲＮＡは、市販されているｍｉＲＮＡマイクロアレイなどを用いて網羅的に測定できるが、肺がん検査用ではないことから、１つのマイクロアレイなどで測定できるサンプル数に限りがある。本発明では、肺がん患者に特有なｍｉＲＮＡを新たに見出した。そのため、新たに見出したｍｉＲＮＡの組み合わせを測定できるプローブのみを用いて、新たなキットを作製することができる。キットの形態は最終的にプローブに対応するｍｉＲＮＡの存在量が測定できれば特に制限はない。例えば、市販のｍｉＲＮＡマイクロアレイと同様にプローブをプレートに貼り付けたアレイ状、定量ＰＣＲ用にプローブを液体に分散した液体状、プローブを貼り付けたビーズ状等が挙げられる。キットを作製することで、多数の被検者の血液サンプルを効率よく測定することができる。
【００３２】
キットに用いるプローブは、組み合わせ（１）に示すｍｉＲＮＡを測定できるプローブが挙げられる。また、組み合わせ（１）に示すｍｉＲＮＡを測定できるプローブに加え、組み合わせ（２）から選択される１種以上のｍｉＲＮＡを測定できるプローブ、または組み合わせ（２）の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定できるプローブを加えてもよい。組み合わせ（１）及び（２）に示すｍｉＲＮＡは、市販のｍｉＲＮＡマイクロアレイで測定できるものであることから、プローブは公知のプローブを用いればよい。または、新たに設計したものでもよい。
【００３３】
また、キットには、ノーマライザー用のｍｉＲＮＡを測定できるプローブを配置してもよい。ノーマライザー用のプローブとしては、組み合わせ（３）から選択される１種以上のｍｉＲＮＡを測定できるプローブが挙げられる。ノーマライザー用のプローブも、公知のプローブまたは新たに設計したプローブを用いればよい。
【００３４】
以下に実施例を掲げ、本発明を具体的に説明するが、この実施例は単に本発明の説明のため、その具体的な態様の参考のために提供されているものである。これらの例示は本発明の特定の具体的な態様を説明するためのものであるが、本願で開示する発明の範囲を限定したり、あるいは制限することを表すものではない。
【実施例】
【００３５】
以下の手順により、肺がんの検査に必要なｍｉＲＮＡの同定、測定したｍｉＲＮＡの存在量の補正に必要な内部標準（ノーマライザー）となるｍｉＲＮＡの同定、及び検査モデルの構築を行った。
＜実施例１＞【００３６】
〔血液サンプルからの全ＲＮＡの分離〕
先ず、対象者の血液から、定法により血清（サンプル）を分離した。分離した血清から４００μｌを採取し、ｍｉＲＶａｎａ  ＰＡＲＩＳキット（Ａｍｂｉｏｎ社製）を用い、プロトコルにしたがって血清中の全ＲＮＡを分離した。なお、分離した全ＲＮＡには、エクソソーム中のｍｉＲＮＡも含まれる。また、全ＲＮＡの分離の際には、ＲＮＡ抽出を評価するためのスパイクコントロールとして、合成されたＲＮＡであるａｔｈ−ｍｉＲ１５９ａ（ＭＩ００００１８９）を各々のサンプルに添加した。全ＲＮＡ濃度は、ナノドロップ２０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて定量化した。【００３７】
〔ｍｉＲＮＡプロファイルの作成〕
各々のサンプル中のヒトｍｉＲＮＡは、ａｔｈ−ｍｉＲ１５９ａ、ＴａｑＭａｎ  Ｈｕｍａｎ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ａｒｒａｙ  Ｃａｒｄ（Ａ，ｖ２．０，１１  ａｎｄ  Ｂ，ｖ３．０，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用い、プロトコルにしたがってプロファイルされた。具体的には、ＴａｑＭａｎ  ｍｉＲＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用い、６μｇの全ＲＮＡが、ｓｔｅｍ−ｌｏｏｐ  Ｍｅｇａｐｌｅｘ  ｐｒｉｍｅｒｓ  ｐｏｏｌ  ｓｅｔ  Ａ又はＢと一緒に逆転写された。逆転写産物は、ＴａｑＭａｎ  ＰｒｅＡｍｐ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  ａｎｄ  Ｍｅｇａｐｌｅｘ  ＰｒｅＡｍｐ  ｐｒｉｍｅｒｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて、予備増幅され、ＴａｑＭａｎ  Ｈｕｍａｎ  ＭｉｃｒｏＲＮＡ  ａｒｒａｙｓ  ａｎｄ  ａｎ  ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７９００ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用い、リアルタイムＰＣＲ解析を行った。Ｃｔ値（Ｒａｗ  Ｃｔ  Ｖａｌｕｅ）は、ＲＱ  ｍａｎａｇｅｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ１．２．１（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を用いて計算した。【００３８】
〔解析対象者〕
ａｔｈ−ｍｉＲ１５９ａの発現が検出されない等、不適切なサンプルを解析対象者から排除し、残りのサンプルを解析した。実施例１で解析対象とした対象者を表１に示す。肺腺がん患者（ＡＤ）は２５３人で、教師群用に１４３人、検証群用に１１０人を区分した。また、健常者（ＨＳ）は１０１人で、教師群用に４９人、検証群用に５２人を区別した。区別した対象者の平均年齢、男性人数、女性人数、肺腺がん患者（ＡＤ）のがんのステージＩ〜ＩＶ別人数は、表１に示すとおりである。【００３９】
【表１】
2017221744.tif 000003
【００４０】
〔内部標準の探索・決定〕
図４Ａ〜図４Ｃは、内部標準の候補の探索及び決定手順を示す図である。図４Ａに示すように、先ず、教師群に区分されたＡＤ患者（１４３人）及び健常者（ＨＳ：４９人）の中で、Ｃｔ値が３２未満のｍｉＲＮＡの中から、３５個のｍｉＲＮＡを候補として選択した。次に真のｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅを推定する手段として、ブートストラップリサンプリングによる推定を行った。具体的手順は以下のとおりである。
（１）元々のデータ（ＨＳ：４９人、ＡＤ患者：１４３人）から、１９２例のデータをランダムに選択するという作業を１万回実施した。この時、同じ症例を重複しても良いものとした。その結果、元々のデータと同じ分布を持つが異なったデータを１万セット用意した。それぞれのデータセットにＳｅｔ  １〜Ｓｅｔ  １０，０００と名前を付けた。
（２）１万セットそれぞれに対して、ｍｉＲＮＡの安定値（ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅ）を計算した。なお、安定値（ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅ）とは、ＮｏｒｍＦｉｎｄｅｒにより定義された遺伝子発現量の安定度を示す指標で、異なる検体間でｍｉＲＮＡの発現量が一定である程度を示した指標として開発されたものである。計算の具体的手順は、（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｃ．Ｌ．，Ｊｅｎｓｅｎ，Ｊ．Ｌ．＆Ｏｒｎｔｏｆｔ，Ｔ．Ｆ．Ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ＰＣＲ  ｄａｔａ：ａ  ｍｏｄｅｌ−ｂａｓｅｄ  ｖａｒｉａｎｃｅ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｄｅｎｔｉｆｙ  ｇｅｎｅｓ  ｓｕｉｔｅｄ  ｆｏｒ  ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｐｐｌｉｅｄ  ｔｏ  ｂｌａｄｄｅｒ  ａｎｄ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｄａｔａ  ｓｅｔｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４，５２４５−５２５０（２００４））に記載されている。
（３）ｍｉＲＮＡ毎に得られた１万個のｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅの値から中央値を計算した。【００４１】
次に、候補のｍｉＲＮＡを、安定値（ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅ）の中間値で順に並べた。上から順に、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ａ、ｈｓａ−
ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−３ｐ・・・、が選択された。【００４２】
図４Ｂは、各候補ｍｉＲＮＡの安定値（ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅ）を示しており、各グラフの横線が中央値を示している。【００４３】
図４Ｃの（ａ）は、肺腺がん患者（ＡＤ）及び健常者（ＨＳ）のｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐのＲａｗ  Ｃｔ値はＡＤとＨＳでほぼ同じであったことから、ＡＤとＨＳの血液中の各ｍｉＲＮＡの存在量がほぼ同じであったことを示している。また、（ｂ）は、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐのＲａｗ  Ｃｔ値の平均を示している。以上の結果より、安定値の低いｍｉＲＮＡはＨＳ及びＡＤの血液中の存在量の差が低いことから、それぞれ単独でノーマライザーとして用いることもできるが、安定値（ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｖａｌｕｅ）の低いｍｉＲＮＡを組み合わせて用いることで、精度をより高くできることが明らかとなった。以下の実施例では、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐの３種を組み合わせてノーマライザーとして用いた。【００４４】
〔肺がん検査用のｍｉＲＮＡの決定〕
図５Ａは肺がん検査用のｍｉＲＮＡの探索・決定の手順を示す。なお、上記〔ｍｉＲＮＡプロファイルの作成〕で作成したプロファイルは、ＴａｑＭａｎ  Ｍｉｃｒｏ  ＲＮＡアレイで測定したＣｔ値である。そのため、肺がん検査用のｍｉＲＮＡを決定するため、まず、ノーマライザーを用いて、Ｃｔ値より各ｍｉＲＮＡの存在量に変換した。変換手順は以下のとおりである。
（１）各ｍｉＲＮＡのＣｔ値から、ノーマライザーの平均Ｃｔ値を引いた（この値を「△Ｃｔ値」と記載する。）。
（２）△Ｃｔ値を、Ｚスコアに変換（平均値＝０，ＳＤ＝１となるように変換）した。【００４５】
肺がん検査用のｍｉＲＮＡの探索は、得られた各ｍｉＲＮＡの存在量を統計処理により行った。具体的手順は次のとおりである。
（１）サンプルを教師群(ｔｒａｉｎｉｎｇ  ｃｏｈｏｒｔ)と検証群(ｔｅｓｔ  ｃｏｈｏｒｔ)に分け、教師群を更にランダムにｔｒａｉｎｉｎｇ  ｄａｔａとｔｅｓｔ  ｄａｔａに分けた。ｔｒａｉｎｉｎｇ  ｄａｔａを用いて、複数の変数を用いて分類モデルを構築できる重み付け得票分類（Ｗｅｉｇｈｔｅｄ  Ｖｏｔｉｎｇ）による分類モデルの作成を行った。作成した分類モデルは、ｔｅｓｔ  ｄａｔａを利用してＥｒｒｏｒ  ｒａｔｅに基づいた予測性能の評価を行った。
（２）候補ｍｉＲＮＡを一つずつ増やしながら、上記分類モデルの構築を繰り返すことで、候補ｍｉＲＮＡの数（ｍ）が異なるセットを作成した。
（３）更に、これらの工程をｎ回繰り返すことで、候補ｍｉＲＮＡの数がｍであるセットをｎ個作成した。作成した候補ｍｉＲＮＡの数が異なる判別モデルの精度をＥｒｒｏｒ  ｒａｔｅを指標に評価を行い、最終分類デル作成に適切な候補ｍｉＲＮＡ数Ｍを決定した。候補ｍｉＲＮＡの数がＭであるセットをｎ個作成することで、Ｍ×ｎ個のｍｉＲＮＡ(重複を含む)が得られ、ｎ個のモデルの中で最も高い頻度で選択されたｍｉＲＮＡからＭ番目までのｍｉＲＮＡをＭ個選択し、当該選択したｍｉＲＮＡを用いて重み付け得票分類に基づく最終分類モデルを構築した。
（４）なお、最終分類モデルとは、Ｍ×ｎ個の候補ｍｉＲＮＡ（重複を含む）の中から選択したｍｉＲＮＡ  Ｍ個に基づいて、教師群の全症例を予測できるように重み付け得票分類を用いて作成したモデルを意味する。本解析ではｎ＝１０，０００で実施した。
（５）構築した最終分類モデル（検査モデル）は、作成に用いた教師群とは別の検証群のデータを用いて検証を行うことで、作成した最終分類モデル（検査モデル）の信頼性の評価をすることができる。
（６）そして、ＡＤとＨＳを分類するためには、サンプル中のｍｉＲＮＡの存在量を測定し、測定した存在量を最終分類モデル（検査モデル）にあてはめ、リスクスコアを算出することで分類すればよい。【００４６】
以下に、ｍｉＲＮＡを１個〜２０個に絞り込んだ際に、選択された回数の多いｍｉＲＮＡを順に示す。【００４７】
【表２】
2017221744.tif 000004
【００４８】
【表３】
2017221744.tif 000005
【００４９】
【表４】
2017221744.tif 000006
【００５０】
【表５】
2017221744.tif 000007
【００５１】
【表６】
2017221744.tif 000008
【００５２】
【表７】
2017221744.tif 000009
【００５３】
【表８】
2017221744.tif 000010
【００５４】
【表９】
2017221744.tif 000011
【００５５】
【表１０】
2017221744.tif 000012
【００５６】
【表１１】
2017221744.tif 000013
【００５７】
【表１２】
2017221744.tif 000014
【００５８】
【表１３】
2017221744.tif 000015
【００５９】
【表１４】
2017221744.tif 000016
【００６０】
【表１５】
2017221744.tif 000017
【００６１】
【表１６】
2017221744.tif 000018
【００６２】
【表１７】
2017221744.tif 000019
【００６３】
【表１８】
2017221744.tif 000020
【００６４】
【表１９】
2017221744.tif 000021
【００６５】
【表２０】
2017221744.tif 000022
【００６６】
【表２１】
2017221744.tif 000023
【００６７】
上記表２〜表２１に示すように、ｍｉＲＮＡを１個まで絞り込んだ時の「ｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ」は、表３〜２１においても全て選択されていた。また、ｍｉＲＮＡを２個まで絞り込んだ時の「ｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ」及び「ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０」も表４〜表２１の全てで選択され、３個まで絞り込んだ時の「ｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ」、「ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０」及び「ｈｓａ−ｍｉＲ−６３６」も表５〜表２１の全てで選択され、４個まで絞り込んだ時の「ｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ」、「ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０」、「ｈｓａ−ｍｉＲ−６３６」及び「ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ」も表６〜表２１の全てで選択された。以下同様に、５、６、７・・・２０まで絞り込んだ時のｍｉＲＮＡの組合せは、当該組合せより多くのｍｉＲＮＡを組み合わせた時に選択されていた。以上の結果より、選択回数の順位は異なるものの、ｍｉＲＮＡの組合せを絞り込んだ際に、選択回数が上位のｍｉＲＮＡには共通性が見られた。【００６８】
図５Ｂは、ｍｉＲＮＡを１個〜１７８個まで選択した時のＥｒｒｏｒ  ｒａｔｅを示すグラフである。なお、Ｅｒｒｏｒ  ｒａｔｅとは、（不正解だった評価サンプル数の例数）／（評価サンプルの全例数）を意味し、Ｅｒｒｏｒ  ｒａｔｅが低いほど好ましい。また、図５Ｂに示すＥｒｒｏｒ  ｒａｔｅは、Ｍ（例えば、Ｍ＝１、Ｍ＝２、Ｍ＝３、・・・Ｍ＝２０）毎に作成したｎ＝１０，０００個のモデルの平均値である。【００６９】
〔検査モデルの作成〕
上記表２〜２１に示すように、本発明の方法では、選択回数が上位のｍｉＲＮＡに共通性が見られた。したがって、少なくとも「ｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ」、更に必要に応じて他のｍｉＲＮＡを組み合わせて（例えば、表３〜表２１に示す組み合わせ。）存在量を測定すればよい。なお、検査の精度を挙げるとの観点からは、例えば、Ｅｒｒｏｒ  ｒａｔｅ（不正解だった評価サンプル数の例数／評価サンプルの全例数）が小さい方が好ましい。図５Ｂに示すグラフでは、表２に示すｍｉＲＮＡ１種の場合のＥｒｒｏｒ  ｒａｔｅは約１９．４％、以下、表３に示す組み合わせの場合は約１４．７％、表４に示す組み合わせの場合は約１２．７％、表５に示す組み合わせの場合は約１２．０％、表６に示す組み合わせの場合は約１０．４％、表７に示す組み合わせの場合は約８．０％であった。したがって、例えば、Ｅｒｒｏｒ  ｒａｔｅが約１２．７％（正答率が約８７．３％）となる表４に示すｍｉＲＮＡ３種を少なくとも組み合わせて存在量を測定し、必要に応じてｍｉＲＮＡの組み合わせ数を多くしてもよい。Ｅｒｒｏｒ  ｒａｔｅは、表２１に示す２０個のｍｉＲＮＡの場合に最も小さな値（約４．９８％）を示したので、以下の実施例では、表２１に示す組み合わせのｍｉＲＮＡを用いて検査モデルを作成した。作成した検査モデル（判別式）を以下に示す。【００７０】
ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ１×（ｍｉＲＮＡ１のｚスコア−ｍｅａｎ１）＋ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ２×（ｍｉＲＮＡ２のｚスコア−ｍｅａｎ２）＋・・・ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ１９×（ｍｉＲＮＡ１１９のｚスコア−ｍｅａｎ１９）＋ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ２０×（ｍｉＲＮＡ２０のｚスコア−ｍｅａｎ２０）【００７１】
なお、上記検査モデル（判別式）の、“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ１”及び“ｍｅａｎ１”とは、下記表２２に示す選択回数の順位が１位のｍｉＲＮＡであるｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０の“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ”及び“ｍｅａｎ”の値である“−０．８００９７３４０７１５０７７２”、“−０．２５８４０２９００９４６０３２”である。“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ２”及び“ｍｅａｎ２”・・・は、順位が２位・・・のｍｉＲＮＡの“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ”及び“ｍｅａｎ”の値を示す。また、“ｍｉＲＮＡ１”、“ｍｉＲＮＡ２”・・・とは、１９２サンプル中の個々のサンプル中で発現している“順位１位のｍｉＲＮＡの存在量”、“順位２位のｍｉＲＮＡの存在量”・・・を表している。
上記の検査モデル（判別式）に１９２サンプルを当てはめることで、各々のサンプルのリスクスコアを算出した。ｍｉＲＮＡが２０個以外の検査モデル（判別式）の場合も、同様に計算をすることでリスクスコアを算出できる。閾値は計算したリスクスコに基づき、適宜設定すればよい。例えば、後述する図５Ｃ、図６Ａ及び図６Ｃに示す例では閾値を０としているが、他の値であってもよい。【００７２】
なお、上記検査モデルは、Ｃｔ値に基づき作成した検査モデルである。例えば、ｍｉＲＮＡの存在量を蛍光強度により求めた場合は、蛍光強度値に基づき、上記と同様の統計学処理に基づき検査モデルを作成すればよい。また、表２２に示す“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ”及び“ｍｅａｎ”の値は、Ｃｔ値に基づき作成した検査モデルにおける“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ”及び“ｍｅａｎ”である。したがって、蛍光強度値により検査モデルを作成した場合の“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ”及び“ｍｅａｎ”は表２２とは異なる値となる。また、“ｃｏｅｆｆｉｃｅｎｔ”はリスクスコアを算出する際の重み係数であって、適宜変更が可能な値である。【００７３】
【表２２】
2017221744.tif 000024
【００７４】
図５Ｃは、作成した検査モデルを用いて教師群のＡＤ患者１４３人及び健常者（ＨＳ）４９人の検査を行った結果を示している。（ａ）に示すとおり、検査の結果、Ｐｏｓｉｔｉｖｅとの検査は、ＨＳが２．０％で、ＡＤが９４．４％であったことから、感度（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）は９４．４％、特異性（ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）は９８％で、全体の分類精度（ｏｖｅｒａｌｌ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｃｃｕｒａｃｙ）は９５．３％であった。また、（ｂ）は、ＡＤ患者ｖｓ健常者（ＨＳ）のＲＯＣ曲線を示しており、ＡＵＣ（ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｕｒｖｅ:濃度曲線下面積）は０．９９１と非常に高い値であった。【００７５】
＜実施例２＞
上記のとおり、表２１に示す２０個のｍｉＲＮＡで作成した検査モデルの感度及び特異性が高かったことから、表２１に示すｍｉＲＮＡ及びノーマライザー（ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ及びｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ）の存在量を測定できるプローブを形成したキットを、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社に作製依頼した。実施例２では、カスタムメイドのＴａｑＭａｎ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ａｒｒａｙを用いて以下の検証を行った。【００７６】
次に、検証群（ｔｅｓｔ  ｃｏｈｏｒｔ）に分類された各種がん患者《ＡＤ１１０人；ＳＱ２７人；ＬＣ１０人；ＧＣ１８人；ＣＲＣ２０人；Ｐａｎ１８人；Ｏｖａ２０人；Ｂｒ２０人》、肺の良性新生物（ＢＰＤ）４７人、及び健常者（ＨＳ）１１０人の血清から、カスタムメイドのアレイを用いた以外は、実施例１の〔ｍｉＲＮＡプロファイルの作成〕と同様の手順でＣｔ値を求め、次いで、実施例１の〔肺がん検査用のｍｉＲＮＡの決定〕と同様の手順でｍｉＲＮＡの存在量を求めた。【００７７】
次に、測定した各種対象者の内、健常者（ＨＳ）、肺の良性新生物患者（ＢＰＤ）、肺腺がん患者（ＡＤ）のｍｉＲＮＡの存在量を実施例１で作成した検査モデルに当てはめ、検査を行った。図６Ａは検査結果を示しており、ＡＤ患者で肺がん陽性と検査された者は８９．１％、また、健常者（ＨＳ）で肺がん陽性と検査された者は０％で、何れも非常に高い正答率であった。なお、肺の良性新生物患者（ＢＰＤ）で肺がん陽性と検査された者は１０．６％であった。【００７８】
図６Ｂ（ａ）は、検証群のＡＤ患者ｖｓ健常者（ＨＳ）のＲＯＣ解析を示しており、ＡＵＣ値は０．９７５と非常に高い値であった。また、図６Ｂ（ｂ）は、検証群のＡＤ患者ｖｓ非ＡＤ患者（ＨＳ＋ＢＰＤ）のＲＯＣ解析を示しておりＡＵＣ値は０．９５８と非常に高い値であった。以上の結果より、本発明で作成した検査モデルを用いることで、被検者が肺がんに罹患しているか否かを高い精度で検査できる。【００７９】
図６Ｃは、表１に示す検証群のＡＤ患者（ＳｔａｇｅＩ：６５人、ＳｔａｇｅＩＩ：１５人、ＳｔａｇｅＩＩＩ：３０人）のｍｉＲＮＡの存在量を、作成した検査モデルに当てはめて検査した結果を示している。図６Ｃに示すように、ＳｔａｇｅＩでは９０．８％、ＳｔａｇｅＩＩでは１００％、ＳｔａｇｅＩＩＩでは８０％の正答率であった。以上の結果より、本発明の検査モデルを用いて被検者の検査を行うと、早期ステージの肺がんを非常に高精度に検査できることが明らかとなった。ヘリカルＣＴで肺がんの検査を行う際には、偽陽性が問題となっている。そのため、Ｃｔ値と本発明の検査を併用することで、検査精度の向上が期待される。【００８０】
図６Ｄは、ＡＤ患者以外のがん患者のｍｉＲＮＡの存在量を、作成した検査モデルに当てはめて検査した結果を示している。肺扁平上皮がん（ＳＱ）では陽性と判断された正答率は７０．４％、肺大細胞がん（ＬＣ）では陽性と判断された正答率は７０．０％であった。一方、肺がん以外のがんで陽性と判断された正答率は、胃がん（ＧＣ）では２２．２％、大腸がん（ＣＲＣ）では２５．０％、膵がん（Ｐａｎ）では３８．９％、卵巣がん（Ｏｖａ）では３５．０％、乳がん（Ｂｒ）では０．０％であった。以上の結果より、作成した検査モデルは、肺腺がん（ＡＤ）以外の非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である肺扁平上皮がん（ＳＱ）及び肺大細胞がん（ＬＣ）の検査、つまり、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の特異的な検査に有用であることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明に係る肺がんの検査をするための情報を提供する方法、肺がんの検査方法、肺がんの検査装置、肺がんの検査装置のプログラム及び記録媒体、並びにｍｉＲＮＡの存在量測定用キットを用いることで、被検者が肺がんに罹患しているか否かを、早期ステージの段階で正確に検査することができる。そのため、医療機関や大学医学部などの研究機関等における肺がん患者の検査及び研究に有用である。
【図１】
2017221744.tif 000025
【図２】
2017221744.tif 000026
【図３】
2017221744.tif 000027
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
2017221744.tif 000030
【図５Ａ】
2017221744.tif 000031
【図５Ｂ】
2017221744.tif 000032
【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
2017221744.tif 000034
【図６Ｂ】
2017221744.tif 000035
【図６Ｃ】
2017221744.tif 000036
【図６Ｄ】
2017221744.tif 000037
【手続補正書】
【提出日】平成29年11月2日(2017.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍｉＲＮＡの存在量を測定することによる肺がん検査用の情報を提供する方法であって、
被検者の血液中の、少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定する工程、
を含む、肺がん検査用の情報を提供する方法。
【請求項２】
前記存在量を測定する工程が、請求項１に記載のｍｉＲＮＡに加え、ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４４９５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１４１３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４６７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４５５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４５０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７４ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩ０００６４１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４３３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２８−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４８０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４７６２）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４５（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３１５）及びｈｓａ−ｍｉＲ−２４−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００８０）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定する、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記存在量を測定する工程が、請求項１及び請求項２に記載の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定する、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項１に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づいて、被検者の肺がんの検査を行う検査工程、
を含む、肺がんの検査方法。
【請求項５】
請求項２に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づいて、被検者の肺がんの検査を行う検査工程、
を含む、肺がんの検査方法。
【請求項６】
請求項３に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づいて、被検者の肺がんの検査を行う検査工程、
を含む、肺がんの検査方法。
【請求項７】
内部標準として、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２８０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００７５３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００５１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００６８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４５）から選択される少なくとも１種以上の内部標準用ｍｉＲＮＡの存在量も測定し、
前記検査工程では、前記測定する工程で測定した前記ｍｉＲＮＡの存在量を、前記内部標準用ｍｉＲＮＡの存在量に基づいて変換した値を用いる、
請求項４〜６の何れか一項に記載の肺がんの検査方法。
【請求項８】
前記被検者の肺がんの検査を行う検査工程が、
肺がん患者の血液中で発現している請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づき予め構築した検査モデルに、請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量を当てはめる工程、
前記検査モデルに当てはめたｍｉＲＮＡの存在量からスコアを算出する工程、
を含む請求項４〜７の何れか一項に記載の検査方法。
【請求項９】
肺がん患者の血液中で発現している請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量に基づき予め構築した検査モデルを少なくとも格納した記憶手段、
被検者の血液に含まれる、請求項１〜３の何れか一項に記載のｍｉＲＮＡの存在量を、前記記憶手段に記憶された検査モデルに当てはめスコアを算出することで被検者の肺がんの検査を行う検査手段、
を含む肺がんの検査装置。
【請求項１０】
コンピュータを、請求項９に記載の肺がんの検査装置として機能させるためのプログラム。
【請求項１１】
請求項１０に記載のプログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【請求項１２】
被検者の血液中で発現している少なくともｈｓａ−ｍｉＲ−４５１ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１６３１）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２９０（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００５８８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−６３６（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３０６）の存在量を測定するプローブを含む、
肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【請求項１３】
ｈｓａ−ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４４９５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００２１７７）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２０ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００１４１３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４ｂ−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４６７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１８５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４５５）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４４）、ｈｓａ−ｍｉＲ−９３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４５０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２７４ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩ０００６４１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４３３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６２８−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４８０９）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４８６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００４７６２）、ｈｓａ−ｍｉＲ−４２５−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３９３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−６４５（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００３３１５）及びｈｓａ−ｍｉＲ−２４−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００８０）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを更に含む、
請求項１２に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【請求項１４】
請求項１２及び請求項１３に記載の全てのｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを含む、
請求項１３に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【請求項１５】
内部標準として、ｈｓａ−ｍｉＲ−２２３−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００２８０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３４２−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００７５３）、ｈｓａ−ｍｉＲ−２１−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ０００００７６）、ｈｓａ−ｍｉＲ−３２０ａ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００５１０）、ｈｓａ−ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００６８０）及びｈｓａ−ｍｉＲ−１２６−３ｐ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ：ＭＩＭＡＴ００００４４５）から選択される少なくとも１種以上のｍｉＲＮＡの存在量を測定するプローブを更に含む、
請求項１２〜１４の何れか一項に記載の肺がん検査用のｍｉＲＮＡ測定用キット。
【国際調査報告】
2017221744.tif 000038
2017221744.tif 000039
2017221744.tif 000040
2017221744.tif 000041