(57)【要約】Ｌｉｎ２８ａ活性化剤は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有する。単球の脱分化誘導剤は、マクロファージコロニー刺激因子と、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類と、を有効成分として含有する。細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療剤は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有する。細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の予防又は軽減用飲食品は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する。化粧品は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有するＬｉｎ２８ａ活性化剤。
【請求項２】
前記多糖類は、更に、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラムノース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む請求項１に記載のＬｉｎ２８ａ活性化剤。
【請求項３】
前記多糖類の分子量が３５００以上である請求項１又は２に記載のＬｉｎ２８ａ活性化剤。
【請求項４】
前記多糖類は、微生物に由来する請求項１〜３のいずれか一項に記載のＬｉｎ２８ａ活性化剤。
【請求項５】
前記微生物が、酵母、微細藻類、乳酸菌又は麹菌である請求項４に記載のＬｉｎ２８ａ活性化剤。
【請求項６】
前記酵母がサッカロミセス・ブラウディである請求項５に記載のＬｉｎ２８ａ活性化剤。
【請求項７】
マクロファージコロニー刺激因子と、
リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類と、を有効成分として含有する単球の脱分化誘導剤。
【請求項８】
前記多糖類は、更に、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラムノース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む請求項７に記載の単球の脱分化誘導剤。
【請求項９】
前記多糖類の分子量が３５００以上である請求項７又は８に記載の単球の脱分化誘導剤。
【請求項１０】
リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有する細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療剤。
【請求項１１】
前記疾患が外傷、膵炎、放射線損傷、皮膚筋炎、多発性筋炎、壊死性筋膜炎、慢性気管支炎、骨折、骨粗鬆症、骨軟骨骨折、骨軟骨炎、拡張型心筋症、心筋梗塞、虚血性心筋症、心不全、心筋肥大、うっ血性心不全、再狭窄、不整脈、アテローム性動脈硬化症、血管炎、末梢ニューロパシー、ニューロパシー痛、脳卒中、脳炎、髄膜炎、糖尿病性ニューロパシー、注意欠陥障害、自閉症、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、脳外傷、脊髄外傷、脳虚血、肝硬変、慢性肝炎、慢性腎不全、糸球体腎炎、腎虚血、糖尿病、アトピー性皮膚炎、又は、移植片対宿主病である請求項１０に記載の治療剤。
【請求項１２】
リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の予防又は軽減用飲食品。
【請求項１３】
前記疾患が外傷、膵炎、放射線損傷、皮膚筋炎、多発性筋炎、壊死性筋膜炎、慢性気管支炎、骨折、骨粗鬆症、骨軟骨骨折、骨軟骨炎、拡張型心筋症、心筋梗塞、虚血性心筋症、心不全、心筋肥大、うっ血性心不全、再狭窄、不整脈、アテローム性動脈硬化症、血管炎、末梢ニューロパシー、ニューロパシー痛、脳卒中、脳炎、髄膜炎、糖尿病性ニューロパシー、注意欠陥障害、自閉症、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、脳外傷、脊髄外傷、脳虚血、肝硬変、慢性肝炎、慢性腎不全、糸球体腎炎、腎虚血、糖尿病、アトピー性皮膚炎、又は、移植片対宿主病である請求項１２に記載の飲食品。
【請求項１４】
リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｌｉｎ２８ａ活性化剤及びその使用に関する。具体的には、本発明は、多糖類を有効成分として含有するＬｉｎ２８ａ活性化剤、単球の脱分化誘導剤、治療剤、飲食品及び化粧品に関する。
本願は、２０１６年９月１４日に、日本に出願された特願２０１６−１７９５９８号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
疾患に対する根本的な治療方法として、細胞、組織又は器官が欠損した場合に幹細胞等を用いて修復することによりその機能を回復させる方法、すなわち再生医療が挙げられる。近年、再生医療では、幹細胞から目的とする組織や器官を形成させてから移植する方法だけでなく、幹細胞又は組織細胞の前駆細胞を疾患部位に注入し、疾患部位にて再生及び修復を行う方法、すなわち細胞医薬の活用が検討されている。【０００３】
しかしながら、幹細胞又は組織細胞の前駆細胞を疾患患部に注入するためには、大量の細胞を要する。
細胞医療に使用される幹細胞の生産方法として、例えば、末梢血由来単球をマクロファージコロニー刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ；Ｍ−ＣＳＦ）等の特定のサイトカイン存在下で培養することで幹細胞に脱分化させる方法等が挙げられる（例えば、非特許文献１、２参照）。【０００４】
さらに効率的な幹細胞の生産方法としては、例えば、末梢血由来単球をＭ−ＣＳＦ、並びにガングリオシド（糖脂質）及び水溶性植物抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種の存在下で培養し、脱分化させる方法等が挙げられる（例えば、特許文献１参照）。【０００５】
一方、Ｌｉｎ２８ａは、胎児期に一過的に発現するＲＮＡ結合タンパク質であり、ＥＳ細胞にも発現が認められるが、その分化の進展に伴い発現は低下することが知られている。２００７年に山中らによってヒトの細胞に４つの遺伝子（Ｏｃｔ３／４，ＳＯＸ２，Ｃ−ｍｙｃ，Ｋｌｆ４）を導入することでｉＰＳ細胞が樹立できることが発表された（例えば、非特許文献３参照）。また、同日にジャームズ・トムソンらによってもヒト細胞に４つの遺伝子（Ｏｃｔ３／４，ＳＯＸ２，Ｎａｎｏｇ，Ｌｉｎ２８ａ）を導入することでＥＳ細胞様の多分化能を有する細胞が樹立できることが示された（例えば、非特許文献４参照）。このことから、Ｌｉｎ２８ａが未分化状態の維持又は誘導に必要であることが判る。【０００６】
山中４因子によるｉＰＳ細胞の樹立は、高齢者由来の体細胞では困難であるとされてきた。しかしながら、山中４因子に加え、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８ａを導入することで１０１歳という高齢者由来の体細胞からでもｉＰＳ細胞が誘導されることが発表された（例えば、非特許文献５参照。）。これにより、老化した細胞の初期化に寄与するＬｉｎ２８ａの持つ潜在的なポテンシャルに強い関心が注がれた。さらに２０１３年には、Ｌｉｎ２８ａの発現を、胎児期に止まらず、成体になってからも維持した場合における影響について興味深い論文が発表された（例えば、非特許文献６参照。）。これにより、Ｌｉｎ２８ａは組織修復因子として決定的に認知されるに至った。すなわち、Ｌｉｎ２８ａの発現を成体になっても維持することで、発毛が促進され、耳組織では、個体識別のために開けられた穴を開けても修復されて塞がり、仔マウスのときに個体識別のために切断した指先は再生されることが報告された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】再公表ＷＯ２０１０／０６１７８１号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ruhnke M, et al., “Differentiation of in vitro-modified human peripheral blood monocytes into hepatocyte-like and pancreatic islet-like cells”, Gastroenterology, vol.128, no.7, p1774-1786, 2005.
【非特許文献２】Zhao Y, et al., “A human peripheral blood monocyte-derived subset acts as pluripotent stem cells”, PNAS, vol.100, no.5, p2426-2431, 2003.
【非特許文献３】Yamanaka S, et al., “Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors”, Cell, vol.131, issue 5, p861-872, 2007.
【非特許文献４】Thomson J A, et al., “Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells”, Science, vol.318, issue 5858, p1917-1920, 2007.
【非特許文献５】Lapasset L, et al., “Rejuvenating senescent and centenarian human cells by reprogramming through the pluripotent state”, Genes Dev., vol.25, p2248-2253, 2011.
【非特許文献６】Ng Shyh-Chang, et al., “Lin28 Enhances Tissue Repair by Reprogramming Cellular Metabolism”, Cell, vol.155, issue 4, p778-792, 2013.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
特許文献１に記載の幹細胞の生産方法では、Ｍ−ＣＳＦとともに、ガングリオシド及び水溶性植物抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種を含むことにより、効率的に単球を幹細胞に脱分化させることができる。しかしながら、より効率的に脱分化を誘導できる物質が求められていた。【００１０】
また、ＲＮＡ結合タンパク質であるＬｉｎ２８ａが、成長因子のように振る舞う理由については、その機能の全容解明も含めて判明しておらず、現在までに、細胞の代謝を早めることが解明されているに過ぎなかった。また、Ｌｉｎ２８ａの発現を誘導し、Ｌｉｎ２８ａを活性化する物質は知られていなかった。【００１１】
従って、本発明は上記事情を鑑みてなされたものであり、新規のＬｉｎ２８ａ活性化剤及び効率的な脱分化誘導剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、特定の酵母の培養物に含まれる多糖類がＬｉｎ２８ａを活性化し、さらに単球を効率的に幹細胞に脱分化させることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１３】
すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
本発明の第１態様に係るＬｉｎ２８ａ活性化剤は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有する。【００１４】
上記第１態様に係るＬｉｎ２８ａ活性化剤において、前記多糖類は、更に、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラムノース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含んでもよい。【００１５】
上記第１態様に係るＬｉｎ２８ａ活性化剤において、前記多糖類の分子量が３５００以上であってもよい。【００１６】
上記第１態様に係るＬｉｎ２８ａ活性化剤において、前記多糖類は、微生物に由来してもよい。【００１７】
上記第１態様に係るＬｉｎ２８ａ活性化剤において、前記微生物が、酵母、微細藻類、乳酸菌又は麹菌であってもよい。【００１８】
上記第１態様に係るＬｉｎ２８ａ活性化剤において、前記酵母がサッカロミセス・ブラウディであってもよい。【００１９】
本発明の第２態様に係る単球の脱分化誘導剤は、マクロファージコロニー刺激因子と、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類と、を有効成分として含有する。【００２０】
上記第２態様に係る単球の脱分化誘導剤において、前記多糖類は、更に、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラムノース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含んでもよい。【００２１】
上記第２態様に係る単球の脱分化誘導剤において、前記多糖類の分子量が３５００以上であってもよい。【００２２】
本発明の第３態様に係る細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療剤は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有する。【００２３】
上記第３態様に係る細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療剤において、前記疾患が外傷、膵炎、放射線損傷、皮膚筋炎、多発性筋炎、壊死性筋膜炎、慢性気管支炎、骨折、骨粗鬆症、骨軟骨骨折、骨軟骨炎、拡張型心筋症、心筋梗塞、虚血性心筋症、心不全、心筋肥大、うっ血性心不全、再狭窄、不整脈、アテローム性動脈硬化症、血管炎、末梢ニューロパシー、ニューロパシー痛、脳卒中、脳炎、髄膜炎、糖尿病性ニューロパシー、注意欠陥障害、自閉症、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、脳外傷、脊髄外傷、脳虚血、肝硬変、慢性肝炎、慢性腎不全、糸球体腎炎、腎虚血、糖尿病、アトピー性皮膚炎、又は、移植片対宿主病であってもよい。【００２４】
本発明の第４態様に係る細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の予防又は軽減用飲食品は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する。【００２５】
上記第４態様に係る細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の予防又は軽減用飲食品において、前記疾患が外傷、膵炎、放射線損傷、皮膚筋炎、多発性筋炎、壊死性筋膜炎、慢性気管支炎、骨折、骨粗鬆症、骨軟骨骨折、骨軟骨炎、拡張型心筋症、心筋梗塞、虚血性心筋症、心不全、心筋肥大、うっ血性心不全、再狭窄、不整脈、アテローム性動脈硬化症、血管炎、末梢ニューロパシー、ニューロパシー痛、脳卒中、脳炎、髄膜炎、糖尿病性ニューロパシー、注意欠陥障害、自閉症、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、脳外傷、脊髄外傷、脳虚血、肝硬変、慢性肝炎、慢性腎不全、糸球体腎炎、腎虚血、糖尿病、アトピー性皮膚炎、又は、移植片対宿主病であってもよい。【００２６】
本発明の第５態様に係る化粧品は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する。
【発明の効果】
【００２７】
上記態様のＬｉｎ２８ａ活性化剤によれば、効果的にＬｉｎ２８ａを活性化できる。上記態様の脱分化誘導剤によれば、効率的に分化した細胞の脱分化を誘導できる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】実施例１における各種物質を培地に添加したマウス血管内皮細胞株ＴＫＤ２細胞でのＬｉｎ２８ａの発現誘導能を比較した結果を示す画像である。
【図２】実施例２におけるサッカロミセス・ブラウディの培養方法が異なる培養物を培地に添加したマウス血管内皮細胞株ＴＫＤ２細胞でのＬｉｎ２８ａの発現誘導能を比較した結果を示す画像である。
【図３】実施例３における各種物質を培地に添加したヒト単核球の増殖の様子を示す画像である。
【図４】実施例４における各微生物の培養物を培地に添加したヒト線維芽細胞でのＬｉｎ２８ａの発現誘導能を比較した結果を示す画像である。
【図５】実施例５における透析外液中の物質及びサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（透析内液中の物質）を培地に添加したヒト線維芽細胞でのＬｉｎ２８ａの発現誘導能を比較した結果を示す画像である。
【図６】実施例６における各溶出物質を培地に添加したヒト線維芽細胞でのＬｉｎ２８ａの発現誘導能を比較した結果を示す画像である。
【図７Ａ】実施例６におけるサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製前）の単糖組成分析結果を示すグラフである。
【図７Ｂ】実施例６におけるサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を用いた陰イオン交換クロマトグラフィーで３００ｍＭのＮａＣｌで溶出された物質（陰イオン交換クロマトグラフィーによる精製後）の単糖組成分析結果を示すグラフである。
【図８】実施例７におけるサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を培地に添加したヒト線維芽細胞でのＬｉｎ２８ａ、Ｓｉｒｔ１及びＴＥＲＴの発現誘導能を比較した結果を示す画像である。
【図９】実施例８における異なる濃度のサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を培地に添加して培養したラット骨髄細胞の細胞数を比較したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
≪Ｌｉｎ２８ａ活性化剤≫
一実施形態において、本発明は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有するＬｉｎ２８ａ活性化剤を提供する。
【００３０】
本実施形態のＬｉｎ２８ａ活性化剤によれば、効果的にＬｉｎ２８ａの発現を誘導し、Ｌｉｎ２８ａを活性化させることができる。
【００３１】
＜Ｌｉｎ２８ａ＞
一般に、Ｌｉｎ２８ａとは、胎児期に一過的に発現するＲＮＡ結合タンパク質であり、ＥＳ細胞においても発現が認められるが、その分化の進展に伴い発現が低下するものである。また、Ｌｉｎ２８ａの発現を成体になっても維持することで、発毛が促進され、耳組織では、個体識別のために開けられた穴を開けても修復されて塞がり、仔マウスのときに個体識別のために切断した指先は再生されることが報告されている。そのため、Ｌｉｎ２８ａは組織修復因子として認知されている。よって、Ｌｉｎ２８ａの発現を誘導し、Ｌｉｎ２８ａを活性化させることにより、細胞、組織又は器官の損傷を修復することができる。
【００３２】
本発明者らは、Ｌｉｎ２８ａの発現を誘導し、Ｌｉｎ２８ａを活性化させる物質として、後述の実施例に示すように、サッカロミセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）の培養物に含まれる多糖類を見出した。
【００３３】
＜多糖類＞
本実施形態のＬｉｎ２８ａ活性化剤に含まれる多糖類は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む。
【００３４】
また、前記リボース及びキシロースの誘導体としては、これら単糖が有するヒドロキシ基（−ＯＨ）がアミノ基（−ＮＨ２）に置換されたアミノ糖や、主鎖の末端のヒドロキシメチル基 （−ＣＨ２ＯＨ） がカルボキシ基（−ＣＯＯＨ）に置換されたウロン酸等が挙げられる。
【００３５】
中でも、前記多糖類は、リボース及びキシロースを含むことが好ましい。後述の実施例に示すように、リボース及びキシロースを含む多糖類は、顕著なＬｉｎ２８ａの活性化効果を有する。
【００３６】
前記多糖類に含まれるキシロースのモル量に対するリボースのモル量の比率（Ｒ／Ｘ）は、１／１以上１０／１以下であることが好ましく、３／１以上９／１以下であることより好ましく、５／１以上８／１以下であることがさらに好ましい。
【００３７】
また、前記多糖類は、更に、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラムノース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含んでもよい。
【００３８】
また、上述の６種の単糖の誘導体としては、上述のリボース及びキシロースの誘導体として例示されたものと同様のものが挙げられる。
【００３９】
前記多糖類が、更に、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラムノース、Ｎ−アセチルガラクトサミン及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む場合、前記多糖類に含まれるこれら６種の単糖及びそれらの誘導体の合計モル量（Ｂ）に対するリボース、キシロース及びそれらの誘導体の合計モル量（Ａ）の比率（Ａ／Ｂ）は、例えば１／２以上１００／１以下とすることができ、例えば１／１以上５０／１以下とすることができる。前記多糖類に含まれる、上述の６種の単糖及びそれらの誘導体の合計モル量（Ｂ）に対するリボース、キシロース及びそれらの誘導体の合計モル量（Ａ）の比率が高いほど、より効果的にＬｉｎ２８ａを活性化することができる。
【００４０】
前記多糖類の分子量は、後述の実施例に示すように、３５００以上であることが好ましく、３５００以上１５０００以下であることがより好ましい。前記多糖類の分子量が上記下限値以上であることにより、より効果的なＬｉｎ２８ａ活性を発揮することができる。
【００４１】
［微生物］
本実施形態に含まれる上述の多糖類は、化学的に合成されたものであってもよく、微生物から得られたものであってもよい。
【００４２】
上述の多糖類の由来となる微生物としては、例えば、酵母、微細藻類、乳酸菌、麹菌等が挙げられ、これらに限定されない。中でも、微生物としては酵母であることが好ましい。
【００４３】
前記酵母としては、例えば、サッカロミセス・ブラウディ等が挙げられる。
【００４４】
一般に、サッカロミセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）とは、フランス人微生物学者であるＢｏｕｌａｒｄ博士がベトナムにて現地の人々がライチから作られた飲み物を飲むことでコレラの下痢が緩和されることを発見し、この飲み物から単離されたフルーツ酵母である。
【００４５】
前記サッカロミセス・ブラウディとしては、特別な限定はなく、具体的には、例えば、ＡＴＣＣ  ＭＹＡ−７９６株又はＡＴＣＣ  ＭＹＡ−７９７株等が挙げられる。
【００４６】
前記微細藻類としては、原核生物と真核生物とに分けられる。前記原核生物としては、例えば、藍藻、原緑藻等が挙げられる。前記真核生物としては、例えば、金藻、ハプト藻、黄緑藻、真眼点藻、珪藻、渦鞭毛藻、ラフィド藻、クリプト藻、緑虫藻、プラシノ藻等の真核生物等が挙げられる。中でも、微細藻類としては、藍藻が好ましい。
【００４７】
前記藍藻としては、例えば、ハロテース属、ダクチロコッコプシス属、シアノテース属、オルソスピラ属、スピルリナ属、ハロスピルリナ属、ゲイトラリネマ属、プロクロロコッカス属、シネココッカス属、リングビア属、モオレア属、トリコデスミウム属、オシラトリア等に属する藻類が挙げられる。
【００４８】
前記乳酸菌としては、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属菌、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属菌、Ｌａｃｔｏｏｃｃｕｓ属菌、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属菌、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属菌、Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ属菌等が挙げられる。
【００４９】
前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属菌としては、例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｃｈｎｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ等が挙げられる。
【００５０】
前記Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属菌としては、例えば、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｃｉｔｒｅｕｍ、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ  ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ等が挙げられる。
【００５１】
前記Ｌａｃｔｏｏｃｃｕｓ属菌としては、例えば、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ等が挙げられる。
【００５２】
前記Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属菌としては、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｃｉａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ等が挙げられる。
【００５３】
前記Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属菌としては、例えば、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ等が挙げられる。
【００５４】
前記Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ属菌としては、例えば、Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ  ｃｏｎｆｕｓｅ、Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ  ｏｒｙｚｅ等が挙げられる。
【００５５】
前記麹菌としては、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔａｍａｒｉｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｋａｗａｃｈｉｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓａｉｔｏｉ等が挙げられる。
【００５６】
本実施形態のＬｉｎ２８ａ活性化剤において、前記多糖類を含有する組成物として、微生物の培養物を用いてもよい。又は、微生物の培養物から前記多糖類のみを分離及び精製して用いてもよい。前記微生物の培養物には、微生物の破砕液（例えば、酵母エキス）、懸濁液及び培養上清が含まれる。また、微生物の培養物は液体であってもよく、乾燥体（例えば、乾燥菌体、培養上清を乾燥させたもの等）であってもよい。また、本実施形態のＬｉｎ２８ａ活性化剤において、前記多糖類を含有する組成物として、微生物の菌体を含んだ状態のものを用いてもよい。
【００５７】
用途によって異なるが、医療又は外用化粧品等の用途で用いる場合においては、被検体の体内に直接投与又は注入（例えば、経口的、経皮的、静脈内、腹腔内等）するため少量で高い効果が得られ、高純度で安全性が高いことが求められる。このことから、医療又は外用化粧品等の用途で用いる場合においては、微生物の培養物に含まれる多糖類のみを分離及び精製したものを用いることが好ましい。
【００５８】
一方、健康食品等の飲食品、内服用化粧品又は単球の脱分化のための培養等の用途で用いる場合においては、微生物の菌体にはミネラル及びアミノ酸類等の栄養が豊富に含まれている。このことから、健康食品等の飲食品、内服用化粧品又は単球の脱分化のための培養等の用途で用いる場合においては、微生物の菌体を含んだ状態のものを用いることが好ましい。
【００５９】
本実施形態において、微生物の培養物に含まれる多糖類の構造は同定されていないが、分子量が約３５００以上約１５０００以下であることが好ましい。また、培養物の液体状態におけるｐＨは例えば、４以上９以下であればよい。
【００６０】
本実施形態における微生物の培養物は、微生物の培養に用いられる一般的な培地を用いて、当該微生物を培養することで得ることができる。
【００６１】
前記培地としては、微生物が酵母及び微細藻類である場合、例えば、ＹＰＤ培地（２％ペプトン、１％酵母エキス、２％グルコース含有）、グルコースの一部をラムノースに代替したＹＰＤ培地、グルコースの一部をリボースに代替したＹＰＤ培地等が挙げられ、これに限定されない。中でも、培地としては、グルコースの一部をラムノースに代替したＹＰＤ培地、又は、グルコースの一部をリボースに代替したＹＰＤ培地であることが好ましく、グルコースの一部をリボースに代替したＹＰＤ培地であることがより好ましい。
【００６２】
前記培地としては、微生物が乳酸菌及び麹菌である場合、例えば、Ｎｏ．８０４培地等が挙げられ、これらに限定されない。なお、ここでいう「Ｎｏ．８０４培地」とは、ハイポリペプトン５g、酵母エキス５g、グルコース５g、及び、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ１ｇを１Ｌの水に溶解し滅菌した培地である。
【００６３】
培養して増殖した微生物の培養物をそのまま用いてもよい。
【００６４】
又は、微生物の培養物からそのエキスを調製してもよい。エキスの調製方法としては、例えば、菌体内に本来あるタンパク質分解酵素等を利用して菌体を可溶化する自己消化法、微生物や植物由来の酵素製剤を添加して菌体を可溶化する酵素分解法、熱水中に一定時間浸漬することにより菌体を可溶化する熱水抽出法、種々の酸あるいはアルカリを添加して菌体を可溶化する酸又はアルカリ分解法、凍結及び融解を１回以上行うことにより菌体を破砕する凍結融解法、物理的な刺激により菌体を破砕する物理的破砕法等が挙げられる。前記物理的破砕法において用いられる物理的刺激としては、例えば、超音波処理、高圧下におけるホモジェナイズ、グラスビーズ等の固形物との混合による磨砕等が挙げられる。
【００６５】
又は、微生物の培養物を乾燥処理して、乾燥菌体を調製してもよい。乾燥処理方法としては、例えば、凍結乾燥法、スプレードライ法、ドラムドライ法等が挙げられる。さらに、得られた乾燥菌体を粉末状に加工することにより、取り扱い性に優れた乾燥菌末を得ることができる。
【００６６】
又は、微生物の培養物から多糖類を含有する分画物を調製してもよい。培養物から多糖類を含有する分画物を分画する方法としては、例えば、熱水抽出、菌体破砕（例えば、上述のエキスの調整方法と同様の方法等）による抽出等により得られた抽出物を、遠心分離、透析、多糖類と親和性の高い物質を担持したアフィニティカラム等を用いて分画することにより、多糖類を高濃度に含む画分に濃縮精製することが可能となる。
【００６７】
≪単球の脱分化誘導剤≫
一実施形態において、本発明は、マクロファージコロニー刺激因子と、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類と、を有効成分として含有する単球の脱分化誘導剤を提供する。
【００６８】
本実施形態の脱分化誘導剤によれば、単球を脱分化させることができ、増殖効率が高いことから、少量の単球から大量の幹細胞を得ることができる。
【００６９】
＜Ｍ−ＣＳＦ＞
一般に、マクロファージコロニー刺激因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ；Ｍ−ＣＳＦ）は、分子量約２２０００の膜結合型及び分子量約４２０００の分泌型が存在する。これらはジスルフィド結合により、分子量約４５０００（２２０００の二量体）の膜結合型、分子量約８５０００（４２０００の二量体）の分泌型及び分子量約８５０００の分泌型（４２０００の二量体）にさらにプロテオグリカンが結合した高分子量型が存在する。本実施形態の脱分化誘導剤においては、これらのいずれを使用してもよい。中でも、本実施形態の脱分化誘導剤に用いられるＭ−ＣＳＦとしては、分子量約４２０００の分泌型、分子量約８５０００（４２０００の二量体) の分泌型、又は、分子量約８５０００の分泌型（４２０００の二量体）にさらにプロテオグリカンが結合した高分子量型であることが好ましい。
【００７０】
また、Ｍ−ＣＳＦの由来は、使用する単球と同じ動物由来のものであればよく、哺乳動物であることが好ましい。前記哺乳動物としては、例えば、ヒト、ウマ、ウシ、サル、チンパンジー、ブタ、ヒツジ、ウサギ、マウス、ラット、イヌ、ネコ等が挙げられ、これらに限定されない。中でも、哺乳動物としては、ヒト、サル、チンパンジー等の霊長類が好ましく、ヒトが特に好ましい。
【００７１】
Ｍ−ＣＳＦは、天然物を精製して使用してもよく、遺伝子組換えにより製造したものを使用してもよい。遺伝子組換えにより製造したものとしては、例えばＭ−ＣＳＦは少なくともＮ末端から１５３番目辺りまでのアミノ酸があれば、天然型と同程度の比活性を有することが判明しており、このような糖鎖を持たない大腸菌発現の組換え体等が挙げられる。
【００７２】
＜多糖類＞
本実施形態の脱分化誘導剤に用いられる多糖類としては、上述の「Ｌｉｎ２８ａ活性化剤」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
【００７３】
＜単球＞
本明細書において、「単球」とは、Ｍ−ＣＳＦ受容体（Ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ｃ−ｆｍｓ）を有する単球系細胞（単球、単核球及び単芽球を含む）を意味する。単核球を用いた場合、その中に含まれる単球のみが増殖するため、単核球を脱分化の対象細胞として用いてもよい。
【００７４】
本実施形態における単球は、哺乳動物由来のものであることが好ましい。前記哺乳動物としては、例えば、ヒト、ウマ、ウシ、サル、チンパンジー、ブタ、ヒツジ、ウサギ、マウス、ラット、イヌ、ネコ等が挙げられ、これらに限定されない。中でも、哺乳動物としては、ヒト、サル、チンパンジー等の霊長類が好ましく、ヒトが特に好ましい。
【００７５】
また、単球は、例えば、骨髄、血液等から得ることができ、低侵襲で得ることから、好ましくは血液、特に好ましくは末梢血から得られた単球を用いることができる。
【００７６】
血液等の生体試料から単球を分離及び精製する方法としては公知の方法を用いればよく、例えば血球分離溶液Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（登録商標）（リンホプレップ、コスモ・バイオ社製）を用いて血液から単核球を分離する方法、さらにＣＤ１４の表面抗原を認識する抗体磁気ビーズ（ミルテニー・バイオテク社製）を用いて、前記分離された単核球から単球を分離及び精製する方法等が挙げられる。
また、ヒト単球である場合、市販品を用いてもよく、市販品としては、例えばＰＴ０３８（ＬＯＮＺＡ社製）等が挙げられる。
【００７７】
＜単球の脱分化方法＞
本実施形態の脱分化誘導剤を含む培地を用いて、単球を培養することにより、単球を脱分化し、幹細胞を高い増殖効率にて増殖させて、得ることができる。
【００７８】
培地に含まれるＭ−ＣＳＦの濃度としては、５ｎｇ／ｍＬ以上１００ｎｇ以下であることが好ましく、２５ｎｇ／ｍＬであることがより好ましい。
【００７９】
また、培地に含まれる多糖類の濃度としては、１μｇ／ｍＬ以上３００μｇ／ｍＬ以下であることが好ましい。
【００８０】
単球の培養に用いられる培地としては、単球の生存増殖に必要な成分（無機塩、炭水化物、ホルモン、必須アミノ酸、非必須アミノ酸、ビタミン）等を含む基本培地であればよく、単球の由来により適宜選択することができる。前記培地としては、例えば、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）、Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ−１６４０、Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｅａｇｌｅ（ＢＭＥ）、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ：Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  Ｆ−１２（ＤＭＥＭ／Ｆ−１２）、Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｇｌａｓｇｏｗ ＭＥＭ）等が挙げられる。さらに、血清成分として、例えば、ＦＢＳ／ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ／Ｃａｌｆ  Ｓｅｒｕｍ）、ＮＣＳ（Ｎｅｗｂｏｒｎ  Ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ）、ＣＳ（Ｃａｌｆ  Ｓｅｒｕｍ）、ＨＳ（Ｈｏｒｓｅ  Ｓｅｒｕｍ）等を１〜２０％程度加えてもよい。
【００８１】
単球の培養条件としては、例えば、５％二酸化炭素存在下で、３７℃にて７日以上１４日以下培養すればよい。得られた細胞が脱分化された幹細胞であるかについては、後述の「幹細胞」に示す未分化マーカーの発現量をＲＴ−ＰＣＲ等を用いて確認すればよい。
【００８２】
＜幹細胞＞
また、本明細書において、「幹細胞」とは、未分化マーカーを発現し自己複製能を有するものである。本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞は、単球から大量に調製することができる。また、幹細胞は、分化誘導することができ、好ましくは多能性分化能を有する。本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞は、ＣＤ１４及びＣＤ４５が陽性である。
【００８３】
本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞の特徴としては、ＣＸＣＲ４遺伝子の有意に強い発現等が挙げられる。また、Ｎａｎｏｇ、Ｎｅｓｔｉｎ、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ９及びＯｃｔ３／４の少なくとも１種、好ましくは少なくとも２種、より好ましくは少なくとも３種、さらに好ましくは少なくとも４種、特に好ましくはＮａｎｏｇ、Ｎｅｓｔｉｎ、ｃ−Ｋｉｔ、ＣＤ９及びＯｃｔ３／４遺伝子全てが発現されていること等が挙げられる。
【００８４】
本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞と、他の脱分化幹細胞との大きな違いは、細胞のホーミング作用に関係するＣＸＣＲ４遺伝子の強い発現である。本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞は、単球をＭ−ＣＳＦ単独存在下で培養して得られた幹細胞と比較した場合、ＣＸＣＲ４遺伝子が有意に強く発現している。
【００８５】
より具体的には、例えば、本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞では、ＲＴ−ＰＣＲで解析した場合に、ＣＸＣＲ４遺伝子の発現量は、単球をＭ−ＣＳＦ単独、Ｍ−ＣＳＦ＋ＩＬ−３、Ｍ−ＣＳＦ＋ＩＬ−６＋ＬＩＦ等存在下で培養して得られた幹細胞での発現量に対して３倍以上、特に４倍以上である。
【００８６】
また、本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞では、骨髄由来の間葉系幹細胞と比較してもＣＸＣＲ４遺伝子が有意に強く発現している。具体的にはＲＴ−ＰＣＲで解析した場合に、ＣＸＣＲ４遺伝子の発現量は、骨髄由来の間葉系幹細胞での発現量に対して２倍以上、好ましくは３倍以上である。
【００８７】
ＣＸＣＲ４受容体に対するリガンドＳＤＦ１は、骨折時の損傷組織、循環系統の疾患、又は、神経組織の損傷部位等に発現していることが判明している。そのため、ＳＤＦ１のより強い発現は、細胞医薬の観点から、本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞の損傷部位へのホーミング効果をより強く持たせる上で、効果的である。
【００８８】
本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞は、患部に直接投与又は注入することにより、疾患の治療に用いることができる。患部に直接投与又は注入する前に、幹細胞を適切な培地で培養し、増殖させてから患部に直接投与又は注入することが好ましい。幹細胞の培養培地としては、一般的な細胞培養用の培地を使用してもよく、脱分化誘導培地を使用してもよい。
【００８９】
前記培地としては、上述の「単球の脱分化方法」において例示されたものと同様のものが挙げられる。また、脱分化誘導培地としては、分化の維持に必要な細胞外マトリックス、増殖因子、サイトカイン等を含まない培地であればよく、すなわち未知の成分を含有する血清を含まない無血清培地であることが好ましい。無血清培地としては、例えば、ＵｌｔｒａＣＵＬＴＵＲＥ（登録商標）無血清培地（ＬＯＮＺＡ社製）等が挙げられ、これに限定されない。
【００９０】
本実施形態の脱分化誘導剤により得られる幹細胞を用いて治療することができる疾患としては、例えば、外傷、炎症性疾患、骨又は軟骨の損傷、循環器疾患、神経疾患、肝疾患、腎疾患、糖尿病、アトピー性皮膚炎、移植片対宿主病（ｇｒａｆｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ；ＧＶＨＤ）等が挙げられる。
【００９１】
前記炎症性疾患としては、例えば、膵炎、放射線損傷、皮膚筋炎、多発性筋炎、壊死性筋膜炎、慢性気管支炎等が挙げられる。
【００９２】
前記骨又は軟骨の損傷としては、例えば、骨折、骨粗鬆症、骨軟骨骨折、骨軟骨炎等が挙げられる。
【００９３】
前記循環器疾患としては、例えば、拡張型心筋症、心筋梗塞、虚血性心筋症、心不全、心筋肥大、うっ血性心不全、再狭窄、不整脈、アテローム性動脈硬化症、血管炎等が挙げられる。
【００９４】
前記神経疾患としては、例えば、末梢ニューロパシー、ニューロパシー痛、脳卒中、脳炎、髄膜炎、糖尿病性ニューロパシー、注意欠陥障害、自閉症、アルツハイマー病、パーキンソン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、脳外傷、脊髄外傷、脳虚血等が挙げられる。
【００９５】
前記肝疾患としては、例えば、肝硬変、慢性肝炎等が挙げられる。
【００９６】
前記腎疾患としては、例えば、慢性腎不全、糸球体腎炎、腎虚血等が挙げられる。
【００９７】
≪治療剤≫
一実施形態において、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を有効成分として含有する細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療剤を提供する。
【００９８】
本実施形態の治療剤によれば、移植又は細胞医療を含む外科手術よりも低侵襲で効果的に細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患を治療することができる。
【００９９】
本実施形態の治療剤を生体内に投与することにより、治療剤に含まれる多糖類が疾患部に到達することで、疾患部でのＬｉｎ２８ａの発現を誘導し、Ｌｉｎ２８ａを活性化させる。これにより、細胞、組織又は器官の損傷を修復することができる。また、前記多糖類は、生体内に既存するＭ−ＣＳＦと協同して単球を幹細胞に脱分化させて、この幹細胞が疾患部に到達することで、各種の疾患を治療することができる。
【０１００】
また、本実施形態の治療剤をインビトロ系において損傷を受けた細胞、組織又は器官に投与することにより、治療剤に含まれる多糖類が損傷を受けた細胞でのＬｉｎ２８ａの発現を誘導し、Ｌｉｎ２８ａを活性化させる。これにより、インビトロ系において細胞、組織又は器官の損傷を修復することができる。
【０１０１】
本明細書において、「細胞」としては、例えば、生殖細胞（精子、卵子等）、生体を構成する体細胞、幹細胞、前駆細胞、生体から分離され不死化能を獲得して体外で安定して維持される細胞（細胞株）、生体から分離され人為的に遺伝子改変された細胞、生体から分離され人為的に核が交換された細胞等が挙げられ、これらに限定されない。
【０１０２】
生体を構成する体細胞としては、例えば、皮膚、腎臓、脾臓、副腎、肝臓、肺、卵巣、膵臓、子宮、胃、結腸、小腸、大腸、膀胱、前立腺、精巣、胸腺、筋肉、結合組織、骨、軟骨、血管組織、血液、心臓、眼、脳、神経組織等の任意の組織から採取される細胞等が挙げられ、これらに限定されない。体細胞として、より具体的には、例えば、線維芽細胞、骨髄細胞、免疫細胞、赤血球、血小板、骨細胞、骨髄細胞、周皮細胞、樹状細胞、表皮角化細胞（ケラチノサイト）、脂肪細胞、間葉細胞、上皮細胞、表皮細胞、内皮細胞、血管内皮細胞、リンパ管内皮細胞、肝細胞、膵島細胞、軟骨細胞、卵丘細胞、グリア細胞、神経細胞（ニューロン）、オリゴデンドロサイト、マイクログリア、星状膠細胞、心筋細胞、食道細胞、筋肉細胞、メラニン細胞、単核細胞等が挙げられ、これらに限定されない。
【０１０３】
前記免疫細胞としては、例えば、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、好中球、マクロファージ、単球等が挙げられる。
【０１０４】
前記膵島細胞としては、例えば、α細胞、β細胞、δ細胞、ε細胞、ＰＰ細胞等が挙げられる。
【０１０５】
前記筋肉細胞としては、例えば、例えば、平滑筋細胞、骨格筋細胞等が挙げられる。
【０１０６】
幹細胞としては、例えば、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）、胚性腫瘍細胞、胚性生殖幹細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、神経幹細胞、造血幹細胞、間葉系幹細胞、肝幹細胞、膵幹細胞、筋幹細胞、生殖幹細胞、腸幹細胞、がん幹細胞、毛包幹細胞等が挙げられ、これらに限定されない。
【０１０７】
前駆細胞とは、前記幹細胞から特定の体細胞又は生殖細胞に分化する途中の段階にある細胞である。
【０１０８】
細胞株とは、生体外での人為的な操作により無限の増殖能を獲得した細胞である。細胞株としては、例えば、ＨＣＴ１１６、Ｈｕｈ７、ＨＥＫ２９３（ヒト胎児腎細胞）、ＨｅＬａ（ヒト子宮頸がん細胞株）、ＨｅｐＧ２（ヒト肝がん細胞株）、ＵＴ７／ＴＰＯ（ヒト白血病細胞株）、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞株）、ＭＤＣＫ、ＭＤＢＫ、ＢＨＫ、Ｃ−３３Ａ、ＨＴ−２９、ＡＥ−１、３Ｄ９、Ｎｓ０／１、Ｊｕｒｋａｔ、ＮＩＨ３Ｔ３、ＰＣ１２、Ｓ２、Ｓｆ９、Ｓｆ２１、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ、Ｖｅｒｏ等が挙げられ、これらに限定されない。
【０１０９】
本明細書において、「組織」とは、１種類の幹細胞が分化していく一定の系譜に基づいたパターンで集合した構造の単位を示し、全体として一つの役割を有する。例えば、表皮角化細胞は、表皮の基底層に存在する幹細胞が有棘層を経て顆粒層を構成する細胞へと分化し、終末分化して角質層を形成することで、表皮としてのバリア機能を発揮している。よって、本実施形態の治療剤を用いることで、１つの細胞系譜に由来する１種類の細胞を含み多細胞構造体を構築し、例えば、上皮組織、結合組織、筋組織、神経組織等を再生することができる。
【０１１０】
本明細書において、「器官」とは、２種類以上の組織から構成され、全体として一つの機能を担う。よって、本実施形態の治療剤を用いることで、細胞系譜の異なる少なくとも２種類の細胞を含み多細胞構造体を構築し、例えば、胃、腸、肝臓、腎臓等を再生することができる。
【０１１１】
本実施形態の治療剤が適用可能な細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患としては、上述の「脱分化誘導剤」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
【０１１２】
＜投与量及び投与経路＞
本実施形態の治療剤の投与量は、被験動物（好ましくは哺乳動物、より好ましくは霊長類、特に好ましくはヒト）の年齢、性別、体重、症状、投与方法、処理時間等を勘案して適宜調節される。
本実施形態の治療剤に含まれる多糖類の有効量は、ヒト成人の体重１ｋｇあたり１００ｎｇ以上１００ｍｇ以下、好ましくは１μｇ以上１０ｍｇ以下、より好ましくは１０μｇ以上５ｍｇ以下であると考えられる。
【０１１３】
本実施形態の治療剤は１日に１〜４回に分けて投与することができる。
投与形態としては、例えば、動脈内注射、静脈内注射、皮下注射、鼻腔内的、経気管支的、筋内的、経皮的、又は経口的に当業者に公知の方法が挙げられる。
【０１１４】
＜組成成分＞
本実施形態の治療剤は、治療的に有効量の上述の多糖類の他に、薬学的に許容されうる担体又は希釈剤を含んでいてもよい。薬学的に許容されうる担体又は希釈剤は、賦形剤、稀釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味料、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤、添加剤等が挙げられる。これら担体の１種以上を用いることにより、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）、軟膏剤等の形態の治療剤を調製することができる。
【０１１５】
また、担体としてコロイド分散系を用いることもできる。コロイド分散系は、上述の多糖類の生体内安定性を高める効果や、特定の臓器、組織、又は細胞へ、上述の多糖類の移行性を高める効果が期待される。コロイド分散系としては、例えば、ポリエチレングリコール、高分子複合体、高分子凝集体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、水中油系の乳化剤、ミセル、混合ミセル、リポソームを包含する脂質を挙げることができ、特定の臓器、組織、又は細胞へ、上述の多糖類を効率的に輸送する効果のある、リポソームや人工膜の小胞が好ましい。
【０１１６】
本実施形態の治療剤における製剤化の例としては、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤として経口的に使用されるものが挙げられる。
【０１１７】
又は、本実施形態の治療剤における製剤化の例としては、水若しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用されるものが挙げられる。更には、薬理学上許容される担体又は希釈剤、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化されたものが挙げられる。
【０１１８】
調剤単位形態が錠剤、カプセル剤である場合に、混和することができる添加剤としては、例えば、結合剤、賦形剤、膨化剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤等が挙げられる。
【０１１９】
前記結合剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴム等が挙げられる。
【０１２０】
前記賦形剤としては、例えば、結晶性セルロース等が挙げられる。
【０１２１】
前記膨化剤としては、例えば、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸等が挙げられる。
【０１２２】
前記湿潤剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム等が挙げられる。
【０１２３】
前記甘味剤としては、例えば、ショ糖、乳糖、サッカリン等が挙げられる。
【０１２４】
前記香味剤としては、例えば、ペパーミント油、アカモノ等が挙げられる。
【０１２５】
また、調剤単位形態がカプセル剤である場合に、上記の材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。
【０１２６】
調剤単位形態が注射剤である場合に、例えば、注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。また、注射用の水溶液としては、例えば、等張液と、適当な溶解補助剤又は非イオン性界面活性剤とを併用してもよい。
【０１２７】
前記等張液は、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含むことができる。前記補助薬としては、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム等が挙げられる。
【０１２８】
前記溶解補助剤としては、例えば、アルコール、ポリアルコール等が挙げられる。前記アルコールとして具体的には、例えば、エタノール等が挙げられる。前記ポリアルコールとして具体的には、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
【０１２９】
前記非イオン界面活性剤としては、例えば、ポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０等が挙げられる。
【０１３０】
また、調剤単位形態が注射剤である場合に、上記の材料にさらに油性液を含有することができる。
【０１３１】
前記油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油、オリーブ油等の植物油が挙げられる。
【０１３２】
また、さらに、溶解補助剤を併用してもよい。前記溶解補助剤としては、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等が挙げられる。
【０１３３】
また、さらに、緩衝剤、無痛化剤、安定剤、又は、酸化防止剤を配合してもよい。
【０１３４】
前記緩衝剤としては、例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液等が挙げられる。
【０１３５】
前記無痛化剤としては、例えば、塩酸プロカイン等が挙げられる。
【０１３６】
前記安定剤としては、例えば、ベンジルアルコール、フェノール等が挙げられる。
【０１３７】
また、調剤単位形態が注射剤である場合に、懸濁剤、又は、乳濁剤として調製することもできる。
【０１３８】
このように調製された注射剤は通常、適当なアンプルに充填させる。
【０１３９】
また、このような注射剤の無菌化は、フィルターによる濾過滅菌、殺菌剤等の配合により行うことができる。又は、注射剤は、用事調製の形態として製造することができる。即ち、多糖類を凍結乾燥法等によって、無菌の固体組成物とし、使用前に注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解して使用することができる。
【０１４０】
＜治療方法＞
本発明の一側面は、細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療のための上述の多糖類を含む治療剤を提供する。
また、本発明の一側面は、治療的に有効量の上述の多糖類、並びに、薬学的に許容されうる担体又は希釈剤を含む治療剤を提供する。
また、本発明の一側面は、細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療剤を製造するための上述の多糖類の使用を提供する。
また、本発明の一側面は、上述の多糖類の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の治療方法を提供する。
【０１４１】
≪飲食品≫
一実施形態において、本発明は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患の予防又は軽減用飲食品を提供する。
【０１４２】
本実施形態の飲食品によれば、効果的に細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患を予防又は軽減することができる。また、上記多糖類を摂取することは安全性の面からもこれまでの食経験があり、毎日摂取することにも問題が少ないと考えられる。よって、安全でかつ有効な飲食品を提供することができる。
【０１４３】
本明細書において、「飲食品」とは、食品と飲料とを合わせたものであり、主に加工食品を意味する。また、本実施形態の飲食品は、健康食品（特定保健用食品を含む）、機能性食品、健康飲料、機能性飲料を含む。
【０１４４】
本実施形態の飲食品により予防又は軽減可能な細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患としては、上述の「脱分化誘導剤」において例示されたものと同様のものが挙げられる。
【０１４５】
本実施形態の飲食品の形態は、固形状であっても液状であってもよく、上述の多糖類は広く食品一般に食品添加物として添加して用いることができる。飲食品の種類としては、具体的には、例えば、飲料（飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）、麺類、菓子類、水産又は畜産加工食品、乳製品、油脂及び油脂加工食品、調味料、スープ、シチュー、カレー、パン、ジャム、サラダ、惣菜、漬物等が挙げられ、これらに限定はされない。
【０１４６】
前記飲料としてより具体的には、清涼飲料、アルコール飲料等が挙げられる。
【０１４７】
前記清涼飲料としては、例えば、ミネラルウォーター、炭酸飲料、栄養飲料、スポーツドリンク、ココア飲料、果実飲料、乳飲料、コーヒー飲料、茶系飲料、豆乳飲料、野菜飲料、アルコールテイスト飲料等が挙げられる。
【０１４８】
前記アルコールテイスト飲料としては、例えば、ノンアルコールビール、ノンアルコールワイン等が挙げられる。
【０１４９】
前記アルコールとしては、例えば、ビール、発泡酒、カクテル、チューハイ、焼酎、日本酒、ウィスキー、ブランデー、ワイン等が挙げられる。
【０１５０】
前記麺類としては、例えば、そば、うどん、スパゲッティ、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等が挙げられる。
【０１５１】
前記菓子類としては、例えば、飴、チューインガム、キャンディー、グミ、ガム、キャラメル、チョコレート、錠菓、スナック菓子、焼き菓子、ゼリー、プリン、冷菓等が挙げられる。
【０１５２】
前記焼き菓子としては、例えば、ビスケット、クッキー、マドレーヌ等が挙げられる。
【０１５３】
前記冷菓としては、例えば、アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等が挙げられる。
【０１５４】
前記水産又は畜産加工食品としては、例えば、かまぼこ、ハンバーグ、ハム、ソーセージ等が挙げられる。
【０１５５】
前記乳製品としては、例えば、加工乳、発酵乳、ヨーグルト、バター、チーズ、生クリーム等が挙げられる。
【０１５６】
前記油脂又は油脂加工食品としては、例えば、サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等が挙げられる。
【０１５７】
前記調味料としては、例えば、ソース、たれ等が挙げられる。
【０１５８】
また、本実施形態の飲食品において、上述の多糖類をソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、打錠剤、粉末等に加工することにより、サプリメント等として摂食することができる。
【０１５９】
本実施形態の飲食品は、その種類に応じて通常使用される添加剤を適宜配合してもよい。添加剤としては、例えば、甘味料、酸味料、賦形剤、結合剤、希釈剤、香料、緩衝剤、増粘剤、ゲル化剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、防腐剤等が挙げられる。
【０１６０】
前記甘味料としては、例えば、砂糖、果糖、異性化液糖、ブドウ糖、アスパルテーム、ステビア等が挙げられる。
【０１６１】
前記酸味料としては、例えば、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸等が挙げられる。
【０１６２】
前記賦形剤としては、例えば、デキストリン、澱粉等が挙げられる。
【０１６３】
本実施形態の飲食品における多糖類の配合量は、その生理作用や薬理作用が発揮できる量であればよく、上述の「治療剤」における投与量及び対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して、通常、ヒト成人の体重１ｋｇあたり１００ｎｇ以上１００ｍｇ以下、好ましくは１μｇ以上１０ｍｇ以下、より好ましくは１０μｇ以上５ｍｇ以下となる量とすればよい。例えば、固形状食品の場合には１０〜５０重量％、飲料等の液状食品の場合には０．１〜１０重量％であればよい。
【０１６４】
≪化粧品≫
一実施形態において、本発明は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含有する化粧品を提供する。
【０１６５】
本実施形態の化粧品は、優れた抗炎症効果、美白効果、抗老化効果を有する。また、上記多糖類は無害であることから、毎日経皮的に摂取することにも問題が少ないと考えられる。よって、安全でかつ有効な化粧品を提供することができる。
【０１６６】
本明細書において、「炎症」とは、異物の生体内への侵入、又は、組織障害等を引き金として免疫系により引き起こされる局所的な防御反応を意味する。炎症反応では、生体によっての非自己の排除を助ける一方で、自己である生体そのものにも一定の損傷を引き起こす場合がある。本実施形態の化粧品を適用することで、化粧品に含まれる多糖類がＬｉｎ２８ａを活性化することで、炎症により引き起こされた細胞等の損傷を修復し、炎症を鎮静化することができる。
【０１６７】
本明細書において、「美白」とは、皮膚の色素沈着、しみ、そばかす、肝斑等の予防又は改善することを意味する。本実施形態の化粧品を適用することで、化粧品に含まれる多糖類がＬｉｎ２８ａを活性化し、皮膚における細胞の代謝を早めることで、皮膚の色素沈着、しみ、そばかす、肝斑等を予防又は改善することができる。
【０１６８】
本明細書において、「老化」とは、加齢に伴う皮膚変化であり、具体的には「皮膚のしわが増える」、「皮膚がたるむ」、「皮膚のはりが低下する」等のような美容上好ましくない様々な変化のことを意味する。
【０１６９】
また、「しわ」とは、皮丘及び皮溝で構成されるきめに比べ、はっきり筋目として現れる皮膚の形態変化であり、皮膚老化が外観に現れるもっとも顕著な変化の一つを意味する。しわは、顔面や首、その他の身体各部に現れ、増加し、深くなると加齢したように見える。これらは乾燥等による角質層上の一部剥離や皮溝の部分的消失を伴う肌荒れやニキビ面皰等を伴うとは形態的な点で本質的に区別される。
【０１７０】
本実施形態の化粧品を適用することで、「しわの防止」、すなわち乾燥環境等、しわの形成されやすい環境に曝される肌のしわ形成を未然に抑制することができる。また、本実施形態の化粧品を適用することで、「形成したしわの改善」、すなわち、乾燥環境等、しわの形成されやすい環境に曝されことで形成された肌上のしわの長さ、深さ、数等を有意に減少させることができる。
【０１７１】
このような「しわの防止」、「形成したしわの改善」の有無は、定量的又は定性的手段により判定することが可能であり、精度を高めるために例えば二重遮蔽対比較法（ＩＣＨガイドラインＥ９）により判定することが可能である。
【０１７２】
本実施形態の化粧品における多糖類の配合量は、その生理作用や薬理作用が発揮できる量であればよく、上述の「治療剤」における投与量を考慮して、通常、ヒト成人の体重１ｋｇあたり１００ｎｇ以上１００ｍｇ以下、好ましくは１μｇ以上１０ｍｇ以下、より好ましくは１０μｇ以上５ｍｇ以下となる量とすればよい。
【０１７３】
本実施形態の化粧品は、外皮に塗布して使用するのが好ましい。塗布方法は特に限定されず、例えば表皮に１日１回以上、例えば、１日１回以上３回以下、塗布する皮膚面積に応じて適量、１回あたり例えば１ｍＬ以上５ｍＬ以下塗布すればよい。
【０１７４】
本実施形態の化粧品としては、形態には特に制限はなく、溶液状、ペースト状、ゲル状、固体状、粉末状等の任意の形態をとることができる。化粧品として具体的には、例えば、スキンケア化粧品、メーキャップ化粧品、ボディ化粧品、芳香化粧品、歯磨、石鹸、エアゾル、浴用剤、養毛剤、日焼け防止剤等が挙げられる。
【０１７５】
前記スキンケア化粧品としては、例えば、クレンジングフォーム、クレンジングオイル、クレンジングジェル、化粧水、ローション、クリーム、乳液、美容液、ジェル、パック等が挙げられる。
【０１７６】
前記メーキャップ化粧品としては、例えば、ファンデーション、アイライナー、アイブロウペンシル、マスカラ、リップスティック、おしろい、パウダー等が挙げられる。
【０１７７】
前記ボディ化粧品としては、例えば、シャンプー、ヘアリンス、ヘアコンディショナー、エナメル等が挙げられる。
【０１７８】
前記芳香化粧品としては、例えば、香水、オーデコロン等が挙げられる。
【０１７９】
本実施形態の化粧品は、多糖類の他に通常化粧品に使用している各種成分を本実施形態の効果を阻害しない範囲で配合してもよい。
【０１８０】
通常化粧品に使用している各種成分としては、例えば、油性成分、界面活性剤、アミノ酸類、アミノ酸誘導体類、低級アルコール、多価アルコール、糖アルコール及びそのアルキレンオキシド付加物、水溶性高分子、殺菌剤、抗菌剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗真菌剤、角質軟化剥離剤、皮膚着色剤、ホルモン剤、紫外線吸収剤、育毛剤、美白用薬剤、発汗防止剤、収斂活性成分、汗防臭剤、ビタミン剤、血管拡張剤、生薬、ｐＨ調整剤、粘度調整剤、パール化剤、天然香料、合成香料、色素、酸化防止剤、防腐剤、乳化剤、脂肪、ワックス、シリコーン化合物、香油等が挙げられる。
【０１８１】
油性成分としては、飽和又は不飽和脂肪酸、及び、これらから得られる高級アルコール類が挙げられる。油性成分として具体的には、例えば、直鎖又は分岐鎖の脂肪アルコールのエステル、スクワラン、スクワレン、ヒマシ油、水添ひまし油及びその誘導体、グリセリド類、ミツロウ、ラノリン類（液状ラノリン、精製ラノリンを含む）及びその誘導体、動植物由来の油性原料、石油及び鉱物由来の油性原料、シリコン類、樹脂酸、脂肪酸エステル、ケトン類等を挙げることができる。
【０１８２】
前記直鎖又は分岐鎖の脂肪アルコールのエステルとしては、例えば、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸ミリスチル、ステアリン酸ミリスチル、イソステアリン酸ミリスチル、オレイン酸ミリスチル、ベヘン酸ミリスチル、エルカ酸ミリスチル、ミリスチン酸セチル、パルミチン酸セチル、ステアリン酸セチル、イソステアリン酸セチル、オレイン酸セチル、ベヘン酸セチル、エルカ酸セチル、ミリスチン酸ステアリル、パルミチン酸ステアリル、ステアリン酸ステアリル、イソステアリン酸ステアリル、オレイン酸ステアリル、ベヘン酸ステアリル、エルカ酸ステアリル、ミリスチン酸イソステアリル、パルミチン酸イソステアリル、ステアリン酸イソステアリル、イソステアリン酸イソステアリル、オレイン酸イソステアリル、ベヘン酸イソステアリル、エルカ酸イソステアリル、ミリスチン酸ベヘニル、パルミチン酸ベヘニル、ステアリン酸ベヘニル、イソステアリン酸ベヘニル、オレイン酸ベヘニル、ベヘン酸ベヘニル、エルカ酸ベヘニル、ミリスチン酸エルシル、パルミチン酸エルシル、ステアリン酸エルシル、イソステアリン酸エルシル、オレイン酸エルシル、ベヘン酸エルシル、エルカ酸エルシル等が挙げられる。
【０１８３】
前記グリセリド類としては、ヒドロキシステアリン酸モノグリセリド、ヒドロキシステアリン酸ジグリセリド、イソステアリン酸モノグリセリド、イソステアリン酸ジグリセリド、オレイン酸モノグリセリド、オレイン酸ジグリセリド、リシノール酸モノグリセリド、リシノール酸ジグリセリド、リノール酸モノグリセリド、リノール酸ジグリセリド、リノレン酸モノグリセリド、リノレン酸ジグリセリド、酒石酸モノグリセリド、酒石酸ジグリセリド、クエン酸モノグリセリド、クエン酸ジグリセリド、リンゴ酸モノグリセリド、リンゴ酸ジグリセリド、及び、これらのグリセリドのエチレンオキシド１〜３０モル付加物等が挙げられる。
【０１８４】
前記動植物由来の油性原料としては、例えば、アーモンド油、アボカド油、オリーブ油、菜種油、ココナッツ油、マカデミアナッツ油、ホホバ油、カルナバロウ、ゴマ油、カカオ油、パーム油、ミンク油、木ロウ、キャンデリラロウ、鯨ロウ等が挙げられる。
【０１８５】
前記石油及び鉱油由来の油性原料としては、例えば、パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、流動パラフィン、ワセリン、セレシン等が挙げられる。
【０１８６】
前記シリコン類としては、例えば、メチルポリシロキサン、ポリオキシエチレン−メチルポリシロキサン、ポリオキシプロピレン−メチルポリオキシシロキサン、ポリ（オキシエチレン、オキシプロピレン）−メチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、脂肪酸変性ポリシロキサン、脂肪族アルコール変性ポリシロキサン、アミノ酸変性ポリシロキサン等が挙げられる。
【０１８７】
界面活性剤としては、例えば、アニオン界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤等が挙げられる。
【０１８８】
前記アニオン界面活性剤としては、例えば、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸塩、Ｎ−長鎖脂肪酸アシル−Ｎ−メチルタウリン塩、アルキルサルフェート及びそのアルキレンオキシド付加物、脂肪酸アミドエーテルサルフェート、脂肪酸の金属塩及び弱塩基塩、スルホコハク酸系界面活性剤、アルキルフォスフェート及びそのアルキレンオキシド付加物、並びに、アルキルエーテルカルボン酸等が挙げられる。
【０１８９】
前記Ｎ−長鎖アシルアミノ酸塩としては、例えば、Ｎ−長鎖アシル酸性アミノ酸塩、Ｎ−長鎖アシル中性アミノ酸塩等が挙げられる。
【０１９０】
前記Ｎ−長鎖アシル酸性アミノ酸塩としては、例えば、Ｎ−長鎖アシルグルタミン酸塩、Ｎ−長鎖アシルアスパラギン酸塩等が挙げられる。
【０１９１】
前記Ｎ−長鎖アシル中性アミノ酸塩としては、例えば、Ｎ−長鎖アシルグリシン塩、Ｎ−長鎖アシルアラニン塩、Ｎ−長鎖アシルスレオニン塩等が挙げられる。
【０１９２】
前記非イオン性界面活性剤としては、例えば、エーテル型界面活性剤、エステル型界面活性剤、エーテルエステル型界面活性剤、アルキルグルコシド類、硬化ヒマシ油ピログルタミン酸ジエステル及びそのエチレンオキシド付加物、並びに、含窒素型非イオン性界面活性剤等が挙げられる。
【０１９３】
前記エーテル型界面活性剤としては、例えば、グリセリンエーテル及びそのアルキレンオキシド付加物等が挙げられる。
【０１９４】
前記エステル型界面活性剤としては、例えば、グリセリンエステル及びそのアルキレンオキシド付加物、ポリオキシアルキレン脂肪酸エステル、グリセリンエステル、脂肪酸ポリグリセリンエステル、アシルアミノ酸ポリグリセリンエステル、ソルビタンエステル、並びに、ショ糖脂肪酸エステル等が挙げられる。
【０１９５】
前記エーテルエステル型界面活性剤としては、例えば、ソルビタンエステル及びそのアルキレンオキシド付加物等が挙げられる。
【０１９６】
前記含窒素型非イオン性界面活性剤としては、例えば、脂肪酸アルカノールアミド等が挙げられる。
【０１９７】
前記カチオン界面活性剤としては、例えば、脂肪族アミン塩及びそれらの４級アンモニウム塩、芳香族４級アンモニウム塩、脂肪酸アシルアルギニンエステル、並びに、アルキルオキシヒドロキシプロピルアルギニン塩等が挙げられる。
【０１９８】
前記脂肪族アミン塩としては、例えば、アルキルアンモニウムクロライド、ジアルキルアンモニウムクロライド等が挙げられる。
【０１９９】
前記芳香族４級アンモニウム塩としては、例えば、ベンザルコニウム塩等が挙げられる。
【０２００】
前記両性界面活性剤としては、例えば、ベタイン型界面活性剤、アミノカルボン酸型界面活性剤、イミダゾリン型界面活性剤等が挙げられる。
【０２０１】
前記ベタイン型界面活性剤としては、アルキルベタイン、アルキルアミドベタイン、アミノプロピオネート、カルボキシベタイン等が挙げられる。
【０２０２】
アミノ酸類としては、例えば、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、アルギニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、ロイシン、バリン等が挙げられる。
【０２０３】
アミノ酸誘導体類としては、例えば、ピロリドンカルボン酸及びその塩、トリメチルグリシン、ラウロイルリジン等が挙げられる。
【０２０４】
低級アルコールとしては、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等が挙げられる。
【０２０５】
多価アルコールとしては、例えば、グリセリン、ジグリセリン、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプレングリコール等が挙げられる。
【０２０６】
糖アルコール及びそのアルキレンオキシド付加物としては、例えば、マンニトール、エリスリトール等が挙げられる。
【０２０７】
水溶性高分子としては、例えば、ポリアミノ酸及びその塩、ポリエチレングリコール、アラビアゴム類、アルギン酸塩、キサンタンガム、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、キチン、キトサン、水溶性キチン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライド、ポリ塩化ジメチルメチレンピペリジウム、ポリビニルピロリドン誘導体四級アンモニウム、カチオン化プロテイン、コラーゲン分解物及びその誘導体、アシル化タンパク、並びに、ポリグリセリン等が挙げられる。
【０２０８】
前記ポリアミノ酸としては、例えば、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸等が挙げられる。
【０２０９】
殺菌剤及び抗菌剤としては、例えば、４−ヒドロキシ安息香酸、並びに、その塩及びエステル、トリクロサン、クロルヘキシジン、フェノキシエタノール、メントール、ミント油、カプリン酸グリセリル、カプリル酸グリセリル、サリチル酸−Ｎ−アルキルアミド等が挙げられる。
【０２１０】
抗炎症剤、鎮痛剤、抗真菌剤、角質軟化剥離剤、皮膚着色剤、ホルモン剤としては、例えば、ヒノキチオール、ヒドロコルチゾン（Ｖ）、ε−アミノカルボン酸、アズレン、アラントイン、グリチルリチン酸誘導体、β−グリチルレチン酸等が挙げられる。
【０２１１】
紫外線吸収剤は、例えば、室温で液状又は結晶であり、紫外線を吸収して、その吸収したエネルギーをより長波長の放射線（例えば熱）として放出することのできる有機物質（光保護フィルター）であって、ＵＶ−ＢフィルターとＵＶ−Ａフィルターとが挙げられる。
【０２１２】
ＵＶ−Ｂフィルターは、油溶性及び水溶性のいずれであってもよい。
【０２１３】
ＵＶ−Ｂフィルターのうち油溶性物質としては、例えば、以下の１）〜９）に示すものが挙げられる。
【０２１４】
１）３−ベンジリデンカンファー又は３−ベンジリデンノルカンファー及びそれらの誘導体（例えば、３−（４−メチルベンジリデン）−カンファー）
【０２１５】
２）４−アミノ安息香酸誘導体（好ましくは、４−（ジメチルアミノ）−安息香酸−２−エチルヘキシルエステル、４−（ジメチルアミノ）−安息香酸−２−オクチルエステル、又は、４−（ジメチルアミノ）−安息香酸ペンチルエステル）
【０２１６】
３）桂皮酸エステル（好ましくは、４−メトキシ桂皮酸−２−エチルヘキシルエステル、４−メトキシ桂皮酸プロピルエステル、４−メトキシ桂皮酸イソペンチルエステル、又は、２−シアノ−３，３−フェニル桂皮酸−２−エチルヘキシルエステル［オクトクリレン（Ｏｃｔｏｃｒｙｌｅｎｅ）］）
【０２１７】
４）サリチル酸エステル（好ましくは、サリチル酸−２−エチルヘキシルエステル、サリチル酸−４−イソプロピルベンジルエステル、又は、サリチル酸ホモメンチルエステル）
【０２１８】
５）ベンゾフェノン誘導体（好ましくは、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチルベンゾフェノン、又は、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン）
【０２１９】
６）ベンザルマロン酸エステル（好ましくは、４−メトキシベンザルマロン酸ジ−２−エチルヘキシルエステル）
【０２２０】
７）トリアジン誘導体（例えば、２，４，６−トリアニリノ−（ｐ−カルボ−２’−エチル−１’−ヘキシルオキシ）−１，３，５−トリアジン、オクチル−トリアゾン、又は、ジオクチル−ブタミド−トリアゾン［Ｕｖａｓｏｒｂ（登録商標）ＨＥＢ］）
【０２２１】
８）プロパン−１，３−ジオン（例えば、１−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）−プロパン−１，３−ジオン）
【０２２２】
９）ケトトリシクロ（５．２．１．０）デカン誘導体
【０２２３】
ＵＶ−Ｂフィルターのうち水溶性物質としては、例えば、以下の１０）〜１２）に示すものが挙げられる。
【０２２４】
１０）２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸、並びに、そのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩、アルカノールアンモニウム塩及びグルカンモニウム塩
【０２２５】
１１）ベンゾフェノンのスルホン酸誘導体及びその塩（好ましくは、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸及びその塩）
【０２２６】
１２）３−ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体及びその塩（例えば、４−（２−オキソ−３−ボルニリデンメチル）−ベンゼンスルホン酸及び２−メチル−５−（２−オキソ−３−ボルニリデン）−スルホン酸）
【０２２７】
ＵＶ−Ａフィルターとしては、とりわけ、ベンゾイルメタン誘導体が用いられる。前記ベンゾイルメタン誘導体としては、例えば、１−（４’−ｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）−プロパン−１，３−ジオン、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン（Ｐａｒｓｏｌ（登録商標）１７８９）、１−フェニル−３−（４’−イソプロピルフェニル）−プロパン−１，３−ジオン、エナミン化合物等が挙げられる。
【０２２８】
育毛剤としては、例えば、パントテン酸及びその誘導体、プラセンタエキス、アラントイン等が挙げられる。
【０２２９】
美白用薬剤としては、例えば、抗酸化剤、チロシナーゼ活性阻害剤、α−ＭＳＨ（α−メラノサイト刺激ホルモン）アンタゴニスト等が挙げられる。
【０２３０】
前記抗酸化剤としては、例えば、アスコルビン酸等が挙げられる。
【０２３１】
前記チロシナーゼ活性阻害剤としては、例えば、コウジ酸、アルブチン、エラグ酸、ルシノール等が挙げられる。
【０２３２】
前記α−ＭＳＨアンタゴニストとしては、例えば、ｄ−２−Ｎａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−ＮＨ２等が挙げられる。
【０２３３】
発汗防止剤、収斂活性成分及び汗防臭剤としては、例えば、アルミニウム、ジルコニウム又は亜鉛の塩が挙げられる。前記アルミニウム、ジルコニウム又は亜鉛の塩としては、例えば、アルミニウムクロリド、アルミニウムクロロヒドレート、アルミニウムジルコニウムトリクロロヒドレート、アルミニウムジルコニウムテトラクロロヒドレート、ピロリドンカルボン酸亜鉛等が挙げられる。
【０２３４】
ビタミン剤としては、例えば、ビタミンＡ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｅ及びそれらの誘導体等が挙げられる。
【０２３５】
血管拡張剤としては、例えば、センブリエキス、セファランチン等が挙げられる。
【０２３６】
生薬としては、例えば、アプリコットエキス、アボカドエキス、アロエエキス、ウコンエキス、オレンジエキス、カモミラエキス、キウイエキス、ギンコエキス、紅茶エキス、セージエキス、センブリエキス、トウニンエキス、バラエキス、ヒマワリエキス、ブドウエキス、ヘチマエキス、モモ葉エキス、ユーカリエキス、ラベンダーエキス、緑茶エキス、リンゴエキス、レモンエキス、ローズマリーエキス等が挙げられる。
【０２３７】
ｐＨ調整剤としては、例えば、クエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、リン酸、グルタミン酸、乳酸、硫酸、塩酸、アンモニウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アルギニン、ハイドロキノン及びその誘導体、γ−オリザノール等が挙げられる。
【０２３８】
粘度調整剤としては、例えば、寒天、有機変性粘土鉱物等が挙げられる。
【０２３９】
パール化剤としては、例えば、アルキレングリコールエステル、脂肪酸アルカノールアミド、脂肪酸モノグリセリド、脂肪エーテル等が挙げられる。
【０２４０】
天然香料としては、例えば、花、茎及び葉、果実、果皮、根、木、針葉及び枝、樹脂及びバルサム等の植物性原料、並びに、シベット、ビーバー等の動物性原料が挙げられる。
【０２４１】
前記花としては、例えば、例えば、ユリ、ラベンダー、バラ、ジャスミン、ネロリ、イラン−イラン等が挙げられる。
【０２４２】
前記茎及び葉としては、例えば、ゼラニウム、パチョリ、プチグレン、タラゴン、レモングラス、セージ、タイム等が挙げられる。
【０２４３】
前記果実としては、例えば、アニス、コリアンダー、キャラウェー、ビャクシン等が挙げられる。
【０２４４】
前記果皮としては、例えば、ベルガモット、レモン、オレンジ等が挙げられる。
【０２４５】
前記根としては、例えば、ナツメグ、アンゼリカ、セロリ、カルダモン、コスタス、アヤメ、ショウブ等が挙げられる。
【０２４６】
前記木としては、例えば、マツ、ビャクダン、グアヤク、シーダー、シタン等が挙げられる。
【０２４７】
前記針葉及び枝としては、例えば、トウヒ、モミ、マツ、低木マツ等が挙げられる。
【０２４８】
前記樹脂及びバルサムとしては、例えば、ガルバヌム、エレミ、ベンゾイン、ミルラ、乳香、オポパナクス等が挙げられる。
【０２４９】
さらに、芳香成分として用いられることの多い比較的揮発性の低い精油として、例えば、セージ油、カモミール油、丁子油、メリッサ油、ミント油、シナモン葉油、ライム花油、ジュニパーベリー油、ベチベル油、乳香油、ガルバヌム油、ラブダヌム油、ラバンジン油、ベルガモット油、ジヒドロミルセノール、リリアール、ライラール、シトロネロール、フェニルエチルアルコール、α−ヘキシルシンナムアルデヒド、ゲラニオール、ベンジルアセトン、シクラメンアルデヒド、リナロール、Ｂｏｉｓａｍｂｒｅｎｅ  Ｆｏｒｔｅ、Ａｍｂｒｏｘａｎ、インドール、ヘジオン（Ｈｅｄｉｏｎｅ）、サンデリス（Ｓａｎｄｅｌｉｃｅ）、シトラス油、マンダリン油、オレンジ油、アリルペンチルグリコレート、シクロバータル（Ｃｙｃｌｏｖｅｒｔａｌ）、ラバンジン油、クラリー油、β−ダマスコン、ゼラニウム油バーボン、シクロヘキシルサリチレート、Ｖｅｒｔｏｆｉｘ  Ｃｏｅｕｒ、Ｉｓｏ−Ｅ−Ｓｕｐｅｒ、Ｆｉｘｏｌｉｄｅ  ＮＰ、エバニル、イラルデイン（Ｉｒａｌｄｅｉｎ）ガンマ、フェニル酢酸、ゲラニルアセテート、ベンジルアセテート、ローズオキシド、ロミラート（Ｒｏｍｉｌａｔ）、イロチル（Ｉｒｏｔｙｌ）及びフロラマート（Ｆｌｏｒａｍａｔ）、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ダイウイキョウ油、キャラウェー油、ユーカリ油、ウイキョウ油、シトラス油、ウィンターグリーン油、丁子油、メントール等が挙げられる。
【０２５０】
合成香料としては、例えば、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコール及び炭化水素型の香料等が挙げられる。
【０２５１】
色素としては、例えば、コチニールレッドＡ（Ｃ．Ｉ．１６２５５）、パテントブルー（Ｃ．Ｉ．４２０５１）、クロロフィリン（Ｃ．Ｉ．７５８１０）等が挙げられる。
【０２５２】
酸化防止剤としては、例えば、トコフェロール、亜硫酸ナトリウム等が挙げられる。
【０２５３】
防腐剤としては、例えば、フェノキシエタノール、パラベン、ペンタンジオール等が挙げられる。
【０２５４】
乳化剤としては、例えば、ノニオン性界面活性剤が挙げられる。
【０２５５】
脂肪及びワックスとしては、例えば、１２−ヒドロキシステアリン酸、ラノリン、蜜蝋、キャンデリラロウ、カルナウバロウ等が挙げられる。
【０２５６】
シリコーン化合物としては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、環状シリコーン、修飾シリコーン化合物（室温で液状又は樹脂様であり得るもの）、ジメチルシロキサン単位数２００〜３００の平均鎖長を有するジメチコンと水素化シリケートとの混合物であるシメチコン等が挙げられる。前記修飾シリコーン化合物における修飾の種類としては、例えば、アミノ−、脂肪酸−、アルコール−、ポリエーテル−、エポキシ−、フッ素−、グリコシド−及びアルキル−からなる群から選択される１種以上が挙げられる。
【０２５７】
香油としては、天然及び合成香料の混合物が挙げられる。天然及び合成香料としては、上述したものと同様のものが挙げられる。
【０２５８】
上記の各種成分はそれぞれ単独で配合しても、２種以上を混合して配合してもよい。
【実施例】
【０２５９】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【０２６０】
［実施例１］
（１）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）の調製
まず、サッカロミセス・ブラウディを、１００ｍＬのＹＰＤ培地（２％ペプトン、１％酵母エキス、２％グルコース含有）を用いて、一晩、室温で振盪培養した。次いで、対数増殖期に、遠心分離（室温で１０００ｇ、１５分）を行い、培養上清を回収した。次いで、培養上清に、７５％飽和硫安（試料１Ｌ対して５１６ｇ）になるように粉末の硫酸アンモニウムを添加し、氷水中にて一時間以上冷却し、沈殿物を遠心分離（４℃で１０００ｇ、１５分）にて回収した。次いで、回収した沈殿物を少量の蒸留水に溶解し、限界分子量３５００の透析膜を用い、十分量の水に対して透析を行い、残存する硫酸アンモニウムを除去した。透析後、凍結乾燥によりサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を回収し、重量測定を行った。これにより、約２０ｍｇの外分泌物が得られた。【０２６１】
（２）マウス血管内皮細胞株ＴＫＤ２細胞の準備
予め、マウス血管内皮細胞株ＴＫＤ２細胞（国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所、ＪＣＲＢ細胞バンクより分譲、細胞番号：ＩＦＯ５０３７４）を６ウェルプレートに４×１０４細胞／ウェルとなるように播種し、３３℃、５％ＣＯ２環境下で一晩培養しておいた。【０２６２】
（３）Ｌｉｎ２８ａの発現誘導
次いで、マウス血管内皮細胞株ＴＫＤ２細胞の播種した翌日に、（１）で調製したサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を最終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように培地に添加し、添加から５日間培養した。添加後、一度も培地は交換しなかった。また、コントロールとして、外分泌物を添加していないもの、ポジティブコントロールとして外分泌物の代わりに、ｉＰＳ細胞誘導可能な低分子６化合物の混合物である６ＣｉＰＳｓ（参考文献：Hou P., et al, “Pluripotent stem cells induced from mouse somatic cells by small-molecule compounds”, Science, vol.341, Issue 6146, p651-654, 2013.）を添加したものを準備した。また、対照群として、外分泌物の代わりに、ガングリオシド（テクノケミカル株式会社製、１０６０）、又はサツマイモ由来の多糖類を最終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように培地に添加したものも準備した。【０２６３】
培養後、細胞は、０．２５％  Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社製、２５２０００５６）を用いて剥離し回収した。次いで、回収した細胞から、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  ７４００４）を用い、トータルＲＮＡを回収した。トータルＲＮＡから、ＩｍＰｒｏｍ−ＩＩ（登録商標）  ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ａ３８０１）を用いてｃＤＮＡを作製し、下記表１に示すプライマーを用いてＬｉｎ２８ａの発現をＰＣＲにてモニターした。【０２６４】
【表１】
2018052082.tif 000003
【０２６５】
また、ＰＣＲ後の反応液をアガロースゲル電気泳動し、結果を図１に示した。【０２６６】
図１から、レーン２であるポジティブコントロールの６ＣｉＰＳｓを添加したＴＫＤ２細胞、及びレーン５であるサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を添加したＴＫＤ２細胞において、Ｌｉｎ２８ａの発現が誘導されたことが確かめられた。
一方、ガングリオシド及びサツマイモ由来の多糖類を添加したＴＫＤ２細胞では、Ｌｉｎ２８ａの発現は誘導されなかった。【０２６７】
［実施例２］
（１）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）の調製
まず、サッカロミセス・ブラウディを、ＹＰＤ培地（２％ペプトン、１％酵母エキス、２％グルコース含有）（以下、「通常培養」と称する場合がある。）、グルコースの一部をラムノースに代替したＹＰＤ培地（２％ペプトン、１％酵母エキス、０．２％グルコース、１．８％ラムノース含有）（以下、「培養方法−Ｉ」と称する場合がある。）、又はグルコースの一部をリボースに代替したＹＰＤ培地（２％ペプトン、１％酵母エキス、０．２％グルコース、１．８％リボース含有）（以下、「培養方法−ＩＩ」と称する場合がある。）を用いて、一晩、室温で振盪培養した。次いで、実施例１の（１）と同様の方法を用いて、それぞれの培養方法におけるサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を回収した。【０２６８】
（２）マウス血管内皮細胞株ＴＫＤ２細胞の準備
次いで、実施例１の（２）と同様の方法を用いて、ＴＫＤ２細胞を播種し、一晩培養した。【０２６９】
（３）Ｌｉｎ２８ａの発現誘導
次いで、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（通常培養）、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（培養方法−Ｉ）、又は、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（培養方法−ＩＩ）をそれぞれ最終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように培地に添加したこと以外は実施例１の（３）と同様の方法を用いて、ＴＫＤ２細胞を培養した。次いで、各ＴＫＤ２細胞を回収し、実施例１の（３）と同様の方法を用いて、Ｌｉｎ２８ａの発現を比較した。結果を図２に示す。【０２７０】
図２から、通常培養から、培養方法−Ｉ、培養方法−ＩＩになるにつれて、Ｌｉｎ２８ａの発現が上昇することが明らかになった。これにより、グルコースの一部をラムノース、又は、リボースに代替することで、Ｌｉｎ２８ａの発現誘導効果が著しく上昇することがわかった。【０２７１】
［実施例３］
（１）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）の調製
まず、実施例２の（１）と同様の方法を用いて、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（通常培養）、及び、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（培養方法−Ｉ）を調製した。【０２７２】
（２）ヒトＣＤ１４陽性単球の準備
次いで、予め、ヒトＣＤ１４陽性単球（ＬＯＮＺＡ社、２Ｗ−４００Ｃ）を１０ｃｍディッシュに１．５×１０６細胞／ディッシュとなるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２環境下で一晩培養しておいた。【０２７３】
（３）ヒトＣＤ１４陽性単球に対する増殖活性
次いで、ヒトＣＤ１４陽性単球を播種した翌日に、ヒト組換えＭ−ＣＳＦ（ｒＭ−ＣＳＦ）が最終濃度２５ｎｇ／ｍＬ、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（通常培養）、又は、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（培養方法−Ｉ）が最終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように培地に添加し、添加から２週間培養した。また、コントロールとして、ｒＭ−ＣＳＦのみを添加したもの、対照群として、サツマイモ由来の多糖類を最終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように培地に添加したものを準備し、添加から２週間培養した。図３に、各種物質の培地への添加から２週間後のヒト単核球の増殖の様子を示す。【０２７４】
図３から、ｒＭ−ＣＳＦのみを添加したもの、及び、サツマイモ由来の多糖類を最終濃度１００μｇ／ｍＬとなるように培地に添加したものよりも、ｒＭ−ＣＳＦとサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（通常培養）、又は、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（培養方法−Ｉ）とを培地に添加したものの方が、単球の増殖活性が高かった。【０２７５】
また、ｒＭ−ＣＳＦとサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（通常培養）とを培地に添加したものよりも、ｒＭ−ＣＳＦとサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（培養方法−Ｉ）とを培地に添加したものの方が、単球の増殖活性がより高かった。【０２７６】
これにより、Ｌｉｎ２８ａの発現誘導効果に比例して、単球の増殖活性効果が高くなることがわかった。【０２７７】
［実施例４］
サッカロミセス・ブラウディ以外の微生物の培養物についても、同様にＬｉｎ２８ａ活性化効果を有するかについて検討を行った。具体的には、微細藻類としてスピルリナ属藻類、２種の乳酸菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ  ＡＴＣＣ４３０７６、及び、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＡＴＣＣ７４６９）及び麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ  ＡＴＣＣ１６４０４）を用いた。【０２７８】
（１）微生物の培養物の調製
（１−１）乳酸菌及び麹菌の培養物（外分泌物）の調製
乳酸菌及び麹菌の培養は、独立行政法人  製品評価技術基盤機構のホームページ（http://www.nite.go.jp/nbrc/cultures/cultures/culture-list.html）を参考にＮｏ．８０４培地を用いて、一晩、室温で振盪培養した。なお、Ｎｏ．８０４培地は、ハイポリペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ、グルコース５ｇ、及び、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  １  ｇを１Ｌの水に溶解し滅菌することで調製した。次いで、対数増殖期に、遠心分離（室温で１０００ｇ、１５分）を行い、培養上清を回収した。次いで、各培養上清に、７５％飽和硫安（試料１Ｌ対して５１６ｇ）になるように粉末の硫酸アンモニウムを添加し、氷水中にて一時間以上冷却し、沈殿物を遠心分離（４℃で１０００ｇ、１５分）にて回収した。次いで、回収した沈殿物を少量の蒸留水に溶解し、限界分子量３５００の透析膜を用い、十分量の水に対して透析を行い、残存する硫酸アンモニウムを除去した。透析後、凍結乾燥により、乳酸菌及び麹菌の外分泌物をそれぞれ得た。
また、対照としてサッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）も実施例１の（１）と同様の方法を用いて、準備した。【０２７９】
（１−２）スピルリナ属藻類の培養物の調製
スピルリナ属藻類は、Ｚａｒｒｏｕｋ培地を用いて、一晩、室温で振盪培養した。次いで、対数増殖期に、遠心分離（室温で１０００ｇ、１５分）を行い、菌体を回収し、凍結乾燥した。次いで、得られた凍結乾燥体（粉末）に蒸留水（粉末１ｇあたり２５ｍＬ）を添加し、よく懸濁した。次いで、懸濁液を１０分間超音波処理して、細胞破砕液を調製した。次いで、細胞破砕液に等量のクロロホルム及びメタノールの混合有機溶媒（クロロホルム：メタノール＝２：１）を添加し、２分間激しく振盪した。次いで、遠心分離（室温で２０００ｒｐｍ、１５分）を行い、分離し、水相画分を得た。次いで、得られた水相画分を限界分子量３５００の透析膜を用い、十分量の水に対して透析を行った。透析後、凍結乾燥により、スピルリナ属藻類の培養物（エキス）を得た。【０２８０】
（２）ヒト線維芽細胞の準備
予め、ヒト歯肉由来線維芽細胞を６ウェルプレートに４×１０４細胞／ウェルとなるように播種し、ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて、３７℃、５％ＣＯ２環境下で一晩培養しておいた。【０２８１】
（３）Ｌｉｎ２８ａの発現誘導
次いで、ヒト線維芽細胞の播種した翌日に、（１）で調製した各微生物の培養物を最終濃度３０μｇ／ｍＬとなるように培地に添加し、添加から１〜２週間培養した。添加後、一度も培地は交換しなかった。【０２８２】
培養後、細胞は、０．２５％  Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社製、２５２０００５６）を用いて剥離し回収した。次いで、回収した細胞から、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ  ７４００４）を用い、トータルＲＮＡを回収した。トータルＲＮＡから、ＩｍＰｒｏｍ−ＩＩ（登録商標）  ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ａ３８０１）を用いてｃＤＮＡを作製し、下記表２に示すプライマーを用いてＬｉｎ２８ａの発現をＰＣＲにてモニターした。また、ＰＣＲの条件は、以下に示すとおりである。
１）  ９５℃  ３分間
２）  ９５℃  ３０秒間
３）  ５５℃  ３０秒間
４）  ７２℃  ４５秒間
５）  ７２℃  ５分間
※  ２）〜４）を３０サイクル【０２８３】
【表２】
2018052082.tif 000004
【０２８４】
また、ＰＣＲ後の反応液をアガロースゲル電気泳動し、結果を図４に示した。図４において、レーン１はスピルリナ属藻類の培養物を添加した線維芽細胞をロードしている。レーン２はサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を添加した線維芽細胞をロードしている。レーン３は乳酸菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ  ＡＴＣＣ４３０７６）の外分泌物を添加した繊維芽細胞をロードしている。レーン４は麹菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ  ＡＴＣＣ１６４０４）の外分泌物を添加した線維芽細胞をロードしている。一方、レーン５はネガティブコントロールとしてサッカロミセス・ブラウディの培養に用いたＹＰＤ培地のみをロードしている。レーン６についても、ネガティブコントロールとして乳酸菌及び麹菌の培養に用いたＮｏ．８０４培地のみをロードしている。【０２８５】
図４から、各微生物の培養物を添加した線維芽細胞をロードしたレーン１〜４において、Ｌｉｎ２８ａの発現が誘導されたことが確かめられた。また、図示していないが、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＡＴＣＣ７４６９）をを添加した線維芽細胞においても同様に、Ｌｉｎ２８ａの発現が誘導されていた。
一方、培地のみをロードしたレーン５及び６では、Ｌｉｎ２８ａの発現は誘導されなかった。【０２８６】
［実施例５］
（１）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）の調製
実施例１の（１）と同様の方法を用いて、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物（透析内液中の物質）を得た。また、透析外液も回収し、凍結乾燥して、透析外液中の物質を得た。【０２８７】
（２）ヒト線維芽細胞の準備
実施例４の（２）と同様の方法を用いて、ヒト線維芽細胞を予め培養した。【０２８８】
（３）Ｌｉｎ２８ａの発現誘導
（１）で得られたサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（透析内液中の物質）及び透析外液中の物質をそれぞれ３０μｇ／ｍＬずつヒト線維芽細胞に添加した以外は、実施例４の（３）と同様の方法を用いて、各物質によるＬｉｎ２８ａの発現誘導活性を評価した。結果を図５に示す。【０２８９】
図５から、透析外液中の物質には、Ｌｉｎ２８ａ発現誘導活性は見られなかった。一方、（１）において、分子量３５００が排除限界である透析膜を用いて精製していることから、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物に含まれる分子量が３５００よりも大きな分子が活性本体であることが示唆された。【０２９０】
［実施例６］
微生物の培養物からＬｉｎ２８ａ誘導活性を有する分子を精製し、その組成を解析した。【０２９１】
（１）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）の調製
実施例１の（１）と同様の方法を用いて、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物を得た。【０２９２】
（２）陰イオン交換クロマトグラフィーを用いた精製
次いで、得られたサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を、ＤＥＡＥ−６５０M（ＴＯＳＯＨ  ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ社製、０００７４７３）を用いた陰イオン交換クロマグラフィーによって、分画した。溶出は、５０ｍＭ、１００ｍＭ、２００ｍＭ、３００ｍＭ、５００ｍＭ、及び、２０００ｍＭのＮａＣｌによってステップワイズ法により行った。得られた各溶出画分は、限界分子量３５００の透析膜を用い、十分量の水に対して透析を行った。透析後、凍結乾燥により、各溶出物質を得た。また、得られた各溶出物質の重量を測定した。【０２９３】
（３）ヒト線維芽細胞の準備
実施例４の（２）と同様の方法を用いて、ヒト線維芽細胞を予め培養した。【０２９４】
（４）Ｌｉｎ２８ａの発現誘導
（１）で得られた各溶出物質を３０μｇ／ｍＬずつヒト線維芽細胞に添加した以外は、実施例４の（３）と同様の方法を用いて、各溶出物質によるＬｉｎ２８ａの発現誘導活性を評価した。結果を図６に示す。なお、図６において、レーン１〜６はそれぞれ５０ｍＭ、１００ｍＭ、２００ｍＭ、３００ｍＭ、５００ｍＭ、及び、２０００ｍＭのＮａＣｌによる溶出物質を添加した線維芽細胞をロードしている。【０２９５】
図６から、３００ｍＭのＮａＣｌによる溶出物質が線維芽細胞でのＬｉｎ２８ａの発現誘導活性が最も高いことが明らかとなった。【０２９６】
また、これらの溶出物質は、アルシャンブルー、トルイジンブルーで染色され、さららにフェノール硫酸によって赤褐色を呈した。このことから、溶出物質が多糖類であることが示唆された。【０２９７】
（５）単糖組成分析
次いで、（１）で得られたサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（サンプルＮｏ．１）の透析後、凍結乾燥前の溶液２０μＬ（糖含有量として、１ｍｇ／ｍＬ）に超純水３０μＬを加えて、５０μＬの試料を調製した。また、（２）で得られた３００ｍＭのＮａＣｌによる溶出物質（サンプルＮｏ．２）の透析後、凍結乾燥前の溶液５μＬ（糖含有量として、４ｍｇ／ｍＬ）に超純水４５μＬを加えて、５０μＬの試料を調製した。各５０μＬの試料に８Ｍ  Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄを添加し、１００℃で３時間加熱して加水分解した。次いで、得られた各加水分解物を乾固させて、超純水１００μＬに溶解した。溶液を遠心分離（４℃で１０，０００×ｇ、１０分間）し、上清を回収した。得られた上清のうち５０μＬを、無水酢酸を用いて、Ｎ−アセチル化した。次いで、ＡＢＥＥ化試薬を用いて蛍光標識した。次いで、蛍光標識後の溶液について、水／クロロホルム抽出を行い、水相から蛍光標識化単糖を回収し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。ＨＰＬＣの条件は以下に示すとおりである。
装置：ＢｉｏＡｓｓｉｓｔ  ｅＺ（Ｔｏｓｏｈ社製）
カラム：ＰＮ−ＰＡＫ  Ｃ１８（３．０×７５ｍｍ）
溶媒：ホウ酸バッファー／アセトニトリル
流速：０．５ｍＬ／分
検出：蛍光（Ｅｘ：３０５ｎｍ、Ｅｍ：３６０ｎｍ）【０２９８】
（１）で得られたサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（サンプルＮｏ．１）の分析結果を表３及び図７Ａに示す。また、（２）で得られた３００ｍＭのＮａＣｌによる溶出物質（サンプルＮｏ．２）の分析結果を表４及び図７Ｂに示す。【０２９９】
【表３】
2018052082.tif 000005
【０３００】
【表４】
2018052082.tif 000006
【０３０１】
表３、表４、図７Ａ及び図７Ｂから、Ｌｉｎ２８ａ発現誘導活性の高い３００ｍＭのＮａＣｌによる溶出物質に含まれる多糖類は、リボース及びキシロースを含むことが明らかとなった。また、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物に含まれる多糖類は、リボース及びキシロースに加えて、ガラクトース、マンノース、グルコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラムノース及びＮ−アセチルガラクトサミンを含むことが明らかとなった。【０３０２】
これらのことから、Ｌｉｎ２８ａ発現誘導活性を有する多糖類は、少なくともリボース及びキシロースを含むことが明らかとなった。【０３０３】
以上のことから、本実施形態のＬｉｎ２８ａ活性化剤に含まれる多糖類は、細胞におけるＬｉｎ２８ａの発現誘導活性を有し、さらに顕著な単球の増殖活性を有することが確かめられた。【０３０４】
［実施例７］
サッカロミセス・ブラウディの外分泌物を添加して培養したヒト線維芽細胞において、Ｌｉｎ２８ａ以外の遺伝子の発現を解析した。【０３０５】
（１）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）の調製
実施例１の（１）と同様の方法を用いて、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物を得た。【０３０６】
（２）ヒト線維芽細胞の準備
実施例４の（２）と同様の方法を用いて、ヒト線維芽細胞を予め培養した。【０３０７】
（３）Ｓｉｒｔ１遺伝子及びＴＥＲＴ遺伝子の発現解析
次いで、ヒト線維芽細胞の播種した翌日に、（１）で調製したサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を最終濃度１０μｇ／ｍＬ又は３０μｇ／ｍＬとなるように培地に添加し、添加から１週間培養した。添加後、一度も培地は交換しなかった。【０３０８】
次いで、実施例４の（４）に記載の方法と同様の方法を用いて、各条件で培養した細胞からトータルＲＮＡを回収し、ｃＤＮＡを作製した。次いで、上記表２に示すプライマー及び下記表５に示すプライマーを用いた以外は、実施例４の（４）に記載の方法と同様の方法を用いて、Ｓｉｒｔ１遺伝子及びＴＥＲＴ遺伝子の発現をＰＣＲにてモニターした。なお、Ｓｉｒｔ１遺伝子は、若返り遺伝子として知られているサーチュイン１の遺伝子である。また、ＴＥＲＴ遺伝子は、テロメレースのサブユニットの遺伝子である。【０３０９】
【表５】
2018052082.tif 000007
【０３１０】
また、ＰＣＲ後の反応液をアガロースゲル電気泳動し、結果を図８に示した。図８において、レーン１はサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を添加していない線維芽細胞をロードしている。レーン２はサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（１０μｇ／ｍＬ）を添加した線維芽細胞をロードしている。レーン３はサッカロミセス・ブラウディの外分泌物（３０μｇ／ｍＬ）を添加した繊維芽細胞をロードしている。【０３１１】
図８から、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物の添加量に依存して、若返り遺伝子として知られるＳｉｒｔ１遺伝子の発現誘導が増加することが明らかとなった。このことから、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物に含まれる多糖類に若返りの効果が期待できることが示唆された。【０３１２】
一方、テロメレースのサブユニットであるＴＥＲＴ遺伝子の発現には影響が見られなった。このことから、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物の添加による発癌の懸念は大きく減少したと推察された。【０３１３】
［実施例８］
データは示さないが、微生物由来の多糖類を培養液中に添加してもヒトファイブロブラストの増殖には全く影響がなかった。これに対し、微生物由来の多糖類の未分化細胞の増殖への影響について検証した。【０３１４】
（１）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）の調製
実施例１の（１）と同様の方法を用いて、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物を得た。【０３１５】
（２）ラット骨髄細胞の準備
Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅが全身に発現するように作られたトランスジェニックラットから骨髄細胞を得て、培養した。次いで、接着してきた細胞をトリプシン（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ、２５２０００５６）ではがして回収し、さらに培養を続けた。培養は、終濃度２０％のＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、２１０６３）を用いた。【０３１６】
（３）サッカロミセス・ブラウディの培養物（外分泌物）を用いた培養
次いで、（２）で予め培養した骨髄細胞に、（１）で得られたサッカロミセス・ブラウディの外分泌物を最終濃度０、３、１０、３０及び１００μｇ／ｍＬとなるように培地に添加し、添加から４日間培養した。添加後、一度も培地は交換しなかった。次いで、培養後の細胞数を定量した。なお、細胞数の定量は、ルシフェリンの発光を指標にした。結果を図９に示す。図９において、縦軸は、ルシフェリンの発光のｃｐｓ（ｃｏｕｎｔ  ｐｅｒ  ｓｅｃｏｎｄ）である。横軸は、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物の添加濃度である。【０３１７】
図９から、サッカロミセス・ブラウディの外分泌物の添加濃度依存的に、骨髄細胞の細胞数が増加することが明らかとなった。このことから、上述の微生物由来の多糖類を用いることで、細胞治療のソースとして注目される骨髄等の未分化な細胞をヒト体内から採取する際に最低限の侵襲にとどめられることが示唆された。また、上述の微生物由来の多糖類を用いることで、治療に有効な未分化な細胞を体内で増殖させる、言わば、体外での細胞培養を必要としない再生医療の実現にも有効であることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【０３１８】
本実施形態によれば、効果的なＬｉｎ２８ａ活性化剤及び効率的な脱分化誘導剤を提供することができる。
また、本実施形態の治療剤は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含み、Ｌｉｎ２８ａを活性化することができる。これにより、移植又は細胞医療を含む外科手術よりも低侵襲で効果的に細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患を治療することができる。
また、本実施形態の飲食品は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含み、Ｌｉｎ２８ａを活性化することができる。これにより、効果的に細胞、組織又は器官の損傷に関係する疾患を予防又は軽減することができる。さらに、上記多糖類を摂取することは安全性の面からもこれまでの食経験があり、毎日摂取することにも問題が少ないと考えられる。よって、安全でかつ有効な飲食品を提供することができる。
また、本実施形態の化粧品は、リボース、キシロース及びそれらの誘導体からなる群から選択される１種以上を含む多糖類を含み、Ｌｉｎ２８ａを活性化することができる。これにより、優れた抗炎症効果、美白効果、抗老化効果を有する。さらに、上記多糖類は無害であることから、毎日経皮的に摂取することにも問題が少ないと考えられる。よって、安全でかつ有効な化粧品を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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