(57)【要約】  血中ＩｇＡ産生抑制剤、血中ＩｇＡ産生促進剤又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤のスクリーニングに好適なスクリーニング方法及び血中ＩｇＡ産生抑制剤、血中ＩｇＡ産生促進剤の提供、血中ＩｇＡ量の制御に好適な方法並びに血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法及び血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法を提供する。  腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進、前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進又は上記抗菌タンパク質の反応増加を指標として、血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングする方法。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進、前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進、上記抗菌タンパク質の反応増加、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌の増加を指標として、血中の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）の産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングする方法。
【請求項２】
前記疾患が、血中の過剰ＩｇＡに起因する糸球体腎炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記糸球体腎炎が、ＩｇＡ腎症、メサンギウム増殖性腎炎、又は紫班病性腎炎である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌又は抗生物質を含む、血中ＩｇＡ産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤。
【請求項５】
前記反応基質が、Ｄ−アミノ酸又はＤ−アミノ酸誘導体である、請求項４に記載の血中ＩｇＡ産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤。
【請求項６】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現を促進する工程、前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性を促進する工程、又は前記抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌若しくは抗生物質を投与する工程を含む、個体（ヒトは除く。）の血中のＩｇＡの産生を抑制する方法。
【請求項７】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の抑制、前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の減少を指標として、血中のＩｇＡの産生促進剤をスクリーニングする方法。
【請求項８】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現を抑制する工程、前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性を抑制する工程、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌を投与する工程を含む、個体（ヒトは除く。）の血中のＩｇＡの産生を促進する方法。
【請求項９】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現が低下した個体、又は前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性が低下した個体の腸内細菌叢における前記抗菌タンパク質の反応基質を産生する腸内細菌の存在頻度に基づき、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法。
【請求項１０】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現が低下した個体、又は前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性が低下した個体の腸内細菌叢における前記抗菌タンパク質の反応基質を産生する腸内細菌の存在頻度に基づき、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法。
【請求項１１】
前記自然免疫系の抗菌タンパク質がＤ−アミノ酸酸化酵素（ＤＡＯ）である、請求項１〜３及び６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記腸内細菌が、感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌である、請求項９又は１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血中の免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）の産生抑制剤又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングする方法、血中のＩｇＡの産生抑制剤又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤、個体の血中のＩｇＡの産生を抑制する方法、血中のＩｇＡの産生促進剤をスクリーニングする方法、個体の血中のＩｇＡの産生を促進する方法、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法及び血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腸上皮の粘膜は常に微生物にさらされており、粘膜面を防御する粘膜免疫防御系の存在が知られている。粘膜免疫防御系には、生体の初期防御である「自然免疫系」と特定の抗原を排除するための「獲得免疫系」が存在する。小腸に発現するＤ−アミノ酸酸化酵素（Ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ；以下、単に「ＤＡＯ」ともいう。）は、腸内で細菌由来のＤ−アミノ酸を分解して過酸化水素を発生させて病原体を排除することで自然免疫系の一つとして機能する（非特許文献１）。
ここで、Ｄ−アミノ酸は、Ｌ−アミノ酸の光学異性体である。Ｌ−アミノ酸がリボソームを介したタンパク質合成に普遍的に生命で利用されるのに対し、Ｄ−アミノ酸はＬ−アミノ酸とは異なる生理機能がある。哺乳類では、Ｄ−アミノ酸のうち２種（Ｄ−セリン、Ｄ−アスパラギン酸）は主に脳に分布し、神経伝達や神経内分泌に関連すると考えられている。
また、哺乳類のＤ−アミノ酸とは異なる１３種を超えるＤ−アミノ酸の合成が細菌で報告されており、細菌細胞壁の構築や再構築に利用されている。腸内細菌叢は特に、Ｄ−アラニン、Ｄ−プロリン、Ｄ−グルタミン酸、Ｄ−アスパラギン酸を合成することが知られている。【０００３】
一方、粘膜免疫防御系で中心的な役割を持つ獲得免疫系はＩｇＡであるものの、その制御機構の全貌は明らかになっていない（非特許文献２）。
ここで、ＩｇＡは、獲得免疫を司る抗体の一種であり、主に粘膜上皮に存在する形質細胞により分泌され、腸管、気道、鼻腔の恒常性維持を担う。また、初乳に多く含まれ、まだ自身で抗体を多く産生できない新生児の腸管を細菌やウイルスから守る働きもあることが知られている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓａｓａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ,１：１６１２５（２０１６）
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ  １２，１４７−１５６（２０１６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記従来技術に鑑み、血中ＩｇＡ産生抑制剤、血中ＩｇＡ産生促進剤又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤のスクリーニングに好適なスクリーニング方法、及び血中のＩｇＡの産生抑制剤又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤の提供、血中ＩｇＡ量の制御に好適な方法の提供、並びに血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法及び血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、粘膜における自然免疫系の１つであるＤＡＯが、獲得免疫系に属するＩｇＡの産生を制御しうることを見出し、上記知見に基づき、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下の通りである。【０００７】
本発明の第１の態様は、
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進又は上記抗菌タンパク質の反応増加、又は感作性細菌群から選択される少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加を指標として、血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングする方法である。【０００８】
本発明の第２の態様は、
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌又は抗生物質を含む、血中ＩｇＡ産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤である。【０００９】
本発明の第３の態様は、
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現を促進する工程、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性を促進する工程、前記抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌若しくは抗生物質を投与する工程を含む、個体（ヒトは除く。）の血中のＩｇＡの産生を抑制する方法である。【００１０】
本発明の第４の態様は、
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の抑制、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の減少を指標として、血中のＩｇＡの産生促進剤をスクリーニングする方法である。【００１１】
本発明の第５の態様は、
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現を抑制する工程、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性を抑制する工程、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌を投与する工程を含む、個体（ヒトは除く。）の血中のＩｇＡの産生を促進する方法である。【００１２】
本発明の第６の態様は、
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現が低下した個体、又は前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性が低下した個体の腸内細菌叢における上記抗菌タンパク質の反応基質を産生する腸内細菌の存在頻度に基づき、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法である。【００１３】
本発明の第７の態様は、
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現が低下した個体、又は前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性が低下した個体の腸内細菌叢における上記抗菌タンパク質の反応基質を産生する腸内細菌の存在頻度に基づき、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、血中ＩｇＡ産生抑制剤、血中ＩｇＡ産生促進剤又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患（例えば、血中の過剰ＩｇＡに起因する糸球体腎炎等）の予防又は治療剤を好適にスクリーニングすることができる。
また、本発明によれば、血中のＩｇＡの産生抑制剤又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤を提供することができる。
また、本発明によれば、血中ＩｇＡ量を好適に制御することができる。
また、本発明によれば、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法及び血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】腸内細菌叢が誘導する血漿ＩｇＡが、ＤＡＯによって量的に制御されていることを示す図である。（ａ）は、抗生剤投与の有無の条件下で、野生型マウス及びＤＡＯ活性欠損マウスにおける血漿中ＩｇＡ濃度を示す図である。（ｂ）は、抗生剤投与による腸内細菌量の変化を示す図である。
【図２】腸内細菌叢が血漿ＩｇＡ濃度をＤＡＯ活性依存的に上昇させる時間経過を示す図である。
【図３】（ａ）は、腸内細菌叢の感作性がＤＡＯ活性依存的な血漿ＩｇＡ濃度の変化に影響を与えることを示す図である。（ｂ）は、高感作性腸内細菌叢及び低感作性腸内細菌叢の組成（綱レベル）を示す図である。
【図４】骨髄移植による血球中ＤＡＯ発現のＩｇＡ産生への関与を示す図である。
【図５】野生型マウスと自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスとのＤＡＯ活性の比較を示す図である。
【図６】自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスにおいて、ＤＡＯ活性の有無が血漿ＩｇＡ濃度に与える影響を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明の実施態様について詳細に説明するが、本発明は、以下の実施態様に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。
本明細書及び特許請求の範囲において、「感作性細菌群」とは、血中のＩｇＡ増加に寄与し得る細菌群を意味し、血中のＩｇＡ増加に寄与し得る限り特に制限はないが、Ａｌｌｏｂａｃｕｌｕｍ属、Ｔｕｒｉｃｉｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４−７科、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｈａｌｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ科、Ｓｔｒｅｐｔｏｐｈｙｔａ目、Ｃｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科に属する細菌群が挙げられる。
【００１７】
＜血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングする方法＞
第１の態様に係るスクリーニング方法は、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進、上記抗菌タンパク質の反応増加、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加を指標とすることにより、血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングすることができる。
第１の態様においてスクリーニングとは、生物（例えば、動物）又は小腸上皮細胞に被験物質を投与して、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進又は上記抗菌タンパク質の反応増加を指標として、被験物質の母集団を少なくとも絞ることを意味し、血中のＩｇＡの産生抑制剤候補、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤候補を選定することが好ましい。
第１の態様に係るスクリーニング方法は、投与した上記被験物質の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進効果、記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進効果又は上記抗菌タンパク質の反応増加効果を評価して、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加を評価して、血中のＩｇＡの産生抑制剤候補、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤候補を選定する工程を含むことが好ましい。
【００１８】
スクリーニング方法としては、上記を指標とする限り、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）、インシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）等の任意のスクリーニング方法であってもよい。
第１の態様に係るスクリーニング方法の好ましい例としては、
（１）生物（例えば、動物）に被験物質を投与（経口、静脈注射等）して、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質（例えば、ＤＡＯ）遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現の促進、上記抗菌タンパク質の活性の促進、上記抗菌タンパク質の反応増加、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加を指標として、上記被験物質の投与下の結果と、上記被験物質の非投与下又は陰性対照（上記抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現又は活性に影響しない物質を投与した対照）の結果とを比較して、上記被験物質の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進効果、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進効果又は上記抗菌タンパク質の反応増加効果を評価して、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加を評価して、血中のＩｇＡの産生抑制剤候補、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤候補を選定する工程を含むスクリーニング方法、
（２）小腸上皮細胞を被験物質の存在下及び非存在下において培養し、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質（例えば、ＤＡＯ）遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現の促進、又は上記抗菌タンパク質の活性の促進、上記抗菌タンパク質の反応増加、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加を指標として、上記被験物質の存在下の結果と、上記被験物質の非存在下又は陰性対照の結果とを比較して、上記被験物質の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進効果、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進効果又は上記抗菌タンパク質の反応増加効果を評価して、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加を評価して、血中のＩｇＡの産生抑制剤候補、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤候補を選定する工程を含むスクリーニング方法等が挙げられる。
上記促進又は上記反応増加の程度としては統計的に有意な促進であれば特に制限はないが、被験物質の非存在下（例えば、被験物質の投与前（例えば、野生型）又は陰性対照の系）における上記抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現又は活性、又は反応量に対して、１．５倍以上であることが好ましく、２倍以上であることがより好ましい。
【００１９】
感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の減少の程度としては統計的に有意な減少であれば特に制限はないが、被験物質の非存在下における腸内細菌叢（例えば、後述の高感作性腸内細菌叢）における上記細菌の割合に対して、１／２以下であることが好ましく、１／４以下であることがより好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、存在しなくなることが特に好ましい。
上記少なくとも１種の細菌が減少された場合、腸内細菌叢に占める感作性細菌群の合計の存在頻度が１５％以下であることが好ましく、１０％以下がより好ましく、８％以下が更に好ましい。
【００２０】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の増加の程度としては統計的に有意な増加であれば特に制限はないが、被験物質の非存在下における腸内細菌叢（例えば、後述の高感作性腸内細菌叢）における上記細菌の割合に対して、１．５倍以上であることが好ましく、２倍以上であることがより好ましく、３倍以上であることが更に好ましい。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌が増加された場合、腸内細菌叢に占めるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌の存在頻度が６０％以上であることが好ましく、７０％以上がより好ましく、８０％以上が更に好ましい。
【００２１】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の塩基配列情報を基にすれば、インシリコでも各種のヒト腸内における上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進を測定することができる。また、インビボ、インビトロでも、例えば該遺伝子の一部又は全部の塩基配列を有するプローブまたはプライマーを利用することにより、各種のヒト腸内における上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進を測定することができる。上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の促進の測定は、ＲＴ−ＰＣＲ、ノザンブロット、サザンブロット等の常法により行うことができる。
また、上記抗菌タンパク質遺伝子のｍＲＮＡレベルでの発現量の促進の測定も、ＲＴ−ＰＣＲ、ノザンブロット、サザンブロット等の常法により行うことができる。
【００２２】
ＰＣＲを行なう場合、プライマーは、上記抗菌タンパク質遺伝子のみを特異的に増幅できるものであれば特に限定されず、上記抗菌タンパク質遺伝子の配列情報に基づき適宜設定することができる。例えば、上記抗菌タンパク質遺伝子又は上記遺伝子の発現制御領域の塩基配列中の連続する少なくとも１０ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド、並びに該オリゴヌクレオチドに相補的な配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドをプローブまたはプライマーとして使用することができる。より具体的には、上記抗菌タンパク質遺伝子又は上記遺伝子の発現制御領域の塩基配列中の連続した１０〜６０残基、好ましくは１０〜４０残基の塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、並びに該オリゴヌクレオチドに相補的な配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用することができる。
【００２３】
上記したオリゴヌクレオチド及びアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ合成機を用いて常法により製造することができる。該オリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドとして、例えば、検出したいｍＲＮＡの一部の塩基配列において、５’末端側の塩基配列に相当するセンスプライマー、３’末端側の塩基配列に相当するアンチセンスプライマー等を挙げることができる。センスプライマー及びアンチセンスプライマーとしては、それぞれの融解温度（Ｔｍ）および塩基数が極端に変わることのないオリゴヌクレオチドであって、１０〜６０塩基程度のものが挙げられる、１０〜４０塩基程度のものが好ましい。
【００２４】
また上記抗菌タンパク質の発現量の促進の測定は、抗体を用いたウェスタンブロット又はＥＬＩＳＡ等の通常の免疫分析により行なうことができる。具体的には、モレキュラークローニング第２版又はカレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー等に記載された当業者に公知の常法により行うことができる。
また、上記抗菌タンパク質の活性促進又は反応増加の測定は、ＤＡＯ活性測定、反応生成物の定量等任意の分析で行うことができる。例えば、ＤＡＯ活性測定方法としては、Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｔ，Ｍｏｔｏｍｕｒａ  Ｙ，Ｓｕｇａ  Ｔ（１９７８）  Ａ  ｎｅｗ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｎｄ  ｕｒａｔｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ８６：３１０ｅ３１５．に記載の方法により行うことができる。
上記細菌の量（例えば、腸内細菌叢に占める存在頻度）の測定は、細菌ゲノムＤＮＡの抽出後、１６ｓリボソームＤＮＡを標的とした定量的ＰＣＲ法を用いて行うことができる。
【００２５】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質としては、腸管の自然免疫として腸管上皮から放出され、腸内細菌の制御を担うタンパク質又はペプチドが挙げられ、ＤＡＯ、ディフェンシン（α-ディフェンシン、β-ディフェンシン等）、カテリシジン、ホスホリパーゼＤ、ＲＥＧ３Ｇ（Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ  ｉｓｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｇａｍｍａ）又はリゾチームであることが好ましく、ＤＡＯ又はディフェンシンであることがより好ましく、ＤＡＯ又はα-ディフェンシンであることが更に好ましく、ＤＡＯであることが特に好ましい。
例えば、ヒトＤＡＯのアミノ酸配列、マウスＤＡＯのアミノ酸配列はそれぞれ、配列番号１、２で表される。
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質の取得方法としては特に制限はなく、化学合成により合成したタンパク質でもよいし、生体試料又は培養細胞などから単離した天然由来のタンパク質でもよいし、遺伝子組み換え技術による作製した組み換えタンパク質でもよい。
【００２６】
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質（例えば、配列番号１又は２で表されるアミノ酸配列を有するＤＡＯ）をコードする遺伝子は全て上記抗菌タンパク質遺伝子に属する。
例えば、ヒトＤＡＯ遺伝子の塩基配列、マウスＤＡＯ遺伝子の塩基配列はそれぞれ、配列番号３、４で表される。
腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の取得方法は特に限定されない。本明細書の配列表の配列番号１又は２に記載したアミノ酸配列、配列番号３又は４に記載した塩基配列の情報に基づいて適当なブローブやプライマーを調製し、それらを用いて、ヒト又はマウスｃＤＮＡライブラリー（腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子が発現される適当な細胞より常法に従い調製したもの）から所望クローンを選択することにより、上記抗菌タンパク質遺伝子を単離することができる。
ＰＣＲ法により上記抗菌タンパク質遺伝子を取得することもできる。例えば、ヒト又はマウス培養細胞由来の染色体ＤＮＡまたはｃＤＮＡライブラリーを鋳型として使用してＰＣＲを行う。
ＰＣＲの反応条件は適宜設定することができ、例えば、９４℃で３０秒間（変性）、５５℃で３０秒〜１分間（アニーリング）、７２℃で２分間（伸長）からなる反応工程を１サイクルとして、例えば３０サイクル行った後、７２℃で７分間反応させる条件などを挙げることができる。次いで、増幅されたＤＮＡ断片を、大腸菌等の宿主で増幅可能な適切なベクター中にクローニングすることができる。
上記したブローブ又はプライマーの調製、ｃＤＮＡライブラリーの構築、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、並びに目的遺伝子のクローニングなどの操作は当業者に既知であり、例えば、モレキュラークローニング第２版、カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー等に記載された方法に準じて行うことができる。
【００２７】
第１の態様に係るスクリーニング方法に供される被験物質としては任意の物質を使用することができる。被験物質の種類は特に限定されず、微生物又は微生物由来成分でもよいし、核酸分子でもよいし、抗体でもよく、個々の低分子合成化合物でもよいし、天然物抽出物中に存在する化合物でもよく、合成ペプチドでもよい。あるいは、被験化合物はまた、微生物ライブラリー、化合物ライブラリー、ファージディスプレーライブラリーもしくはコンビナトリアルライブラリーでもよい。微生物ライブラリー又は化合物ライブラリーの構築は当業者に公知であり、また市販の微生物ライブラリー又は化合物ライブラリーを使用することもできる。
被験物質は、好ましくは、微生物若しくは微生物由来成分（例えば、微生物ライブラリー）、低分子化合物（例えば、化合物ライブラリー）、核酸分子又は抗体であり、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子又は抗菌タンパク質に対して特異性が高い観点から、微生物若しくは微生物由来成分（例えば、腸内細菌若しくは腸内細菌由来成分）、核酸分子又は抗体がより好ましい。
第１の態様に係るスクリーニング方法において、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患としては、血中の過剰ＩｇＡに起因する糸球体腎炎、血中の過剰ＩｇＡに起因するＩｇＡ血管炎、血中の過剰ＩｇＡに起因する皮膚疾患（例えば、アナフィラクトイド紫斑病）等が挙げられる。
上記糸球体腎炎としては、ＩｇＡ腎症、メサンギウム増殖性腎炎、又は紫班病性腎炎であることが好ましい。
例えば、ＩｇＡ腎症について、腎糸球体に沈着したＩｇＡが補体系および炎症性サイトカインを誘導することで糸球体腎炎を発症すること等が知られている。これにより血尿および蛋白尿を呈し、慢性経過により透析導入へと移行することが多いこと等が知られている。
【００２８】
＜血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤＞
第２の態様に係る血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤は、上記抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌（例えば、上記細菌を含む腸内細菌叢）又は抗生物質を含む。
上記抗菌タンパク質（例えば、ＤＡＯ）の反応基質としては、アミノ酸、アミノ酸誘導体が挙げられる。
ここで、アミノ酸誘導体としては、アミノ酸を構成する任意の炭素原子、酸素原子、窒素原子又はイオウ原子が化学修飾されたアミノ酸が挙げられ、例えば、上記化学修飾としては、炭素数１〜３の直鎖状又は分岐状アルキル基（例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基等）によるアルキル化修飾等が挙げられる。
アミノ酸又はアミノ酸誘導体としては、Ｄ−アミノ酸（例えば、Ｄ−アラニン、Ｄ−プロリン、Ｄ−メチオニン、Ｄ−セリンなどの中性又は塩基性Ｄ−アミノ酸）又はＤ−アミノ酸誘導体であることが好ましい。
細菌は多様なＤ−アミノ酸を産生するため（Ｌａｍ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ；３２５：１５５２−１５５５．２００９）、腸内細菌叢の全て又は多くの細菌群は上記反応基質を産生することができる。プロバイオティクスとして用いられる乳酸菌も上記反応基質を産生することができる。
第２の態様に係る血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤が上記反応基質を含む場合、血中のＩｇＡの産生抑制の観点から、上記抗菌タンパク質遺伝子ないし上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性（上記抗菌タンパク質遺伝子ないし上記抗菌タンパク質が複数種存在する場合には、各々の発現若しくは活性）が、野生型ないし健常人の上記発現若しくは活性の１／２以上である患者に投与することが好ましく、野生型ないし健常人の上記発現若しくは活性と同等以上である患者に投与することがより好ましい。
特に、ＤＡＯ遺伝子ないしＤＡＯの発現若しくは活性が野生型ないし健常人の上記発現若しくは活性の１／２以上である患者に投与することが好ましく、野生型ないし健常人の上記発現若しくは活性と同等以上である患者に投与することがより好ましい。
【００２９】
抗生物質としては、本発明の効果を達成し得る限り特に制限はなく、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、バンコマイシン等任意の抗生物質が挙げられる。上記抗生物質としては、腸内細菌に対する抗生物質が好ましく、感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌に対する抗生物質であることがより好ましい。
第２の態様に係る血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤の形態としては、上記抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌又は抗生物質を含む限り特に制限はないが、医薬品若しくは医薬品組成物、食品若しくは食品組成物（例えば、サプリメント、飲料等）等が挙げられる。
第２の態様に係る血中のＩｇＡの産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤の投与形態としては特に制限はなく、患者の年齢、症状により適宜投与方法を選択することができるが経口的に投与することが好ましい。その投与量は、年齢、投与経路、投与回数により異なり、当業者であれば適宜選択できる。
経口投与した場合の投与量としては特に制限はないが、一般的には一回につき体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１０ｍｇ程度の範囲である。
【００３０】
＜個体の血中のＩｇＡの産生を抑制する方法＞
第３の態様に係る個体（ヒトは除く。）の血中のＩｇＡの産生を抑制する方法は、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現を促進する工程、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性を促進する工程、上記抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌若しくは抗生物質を投与する工程を含む。
個体としては、生物個体が挙げられ、動物であることが好ましく、哺乳類であることがより好ましい。哺乳類としては、げっ歯動物（例えば、マウス、ラット）等が挙げられる。なお、本態様は、ヒト個体に対しても適用可能である。
上記抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現を促進する方法としては、（＋）−５−メチル−１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］シクロヘプテン−５，１０−イミン（ＭＫ−８０１）、ケタミン、モルヒネ、ＭＡＰＫ／Ｅｒｋシグナル阻害剤（ＰＤ９８０５９など）、又はｐｏｌｙ（ＩＣ）を投与する方法等が挙げられる（下記文献１）〜５）参照）。
１）Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ａ，  Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，  Ａｎｄｏｈ  Ｈ，  Ｙａｎｏ  Ｈ，  Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ  Ｈ，  Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  Ｍ，  Ｏｋａ  Ｔ，  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｈ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＭＫ−８０１  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｉｎｅ  ｒａｃｅｍａｓｅ  ａｎｄ  ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｍＲＮＡｓ  ａｎｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｄ−ｓｅｒｉｎｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００７  Ｊａｎ  １９；５５５（１）：１７−２２．  Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｏｃｔ  １０．  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：１７１０９８４１．
２）Ｔａｋｅｙａｍａ  Ｋ，  Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，  Ｏｋａ  Ｔ，  Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  Ｍ，  Ｓｕｚｕｋｉ  Ｔ，  Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ａ．  Ｋｅｔａｍｉｎｅ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｅｒｉｎｅ  ｒａｃｅｍａｓｅ  ａｎｄ  Ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｍＲＮＡｓ  ｉｎ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２００６  Ｊｕｌ  １；５４０（１−３）：８２−６．  Ｅｐｕｂ  ２００６  Ａｐｒ  ２８．  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：    １６７１６２９３．
３）Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ，  Ｓｈｉｎｏｍｉｙａ  Ｔ，  Ｔａｋａｙａｓｕ  Ｎ，  Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ  Ｈ，  Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  Ｍ，  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｈ，  Ｏｋａ  Ｔ，  Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ａ．  Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｍｏｒｐｈｉｎｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｔｈｅ  Ｄ−ｓｅｒｉｎｅ  ｃｏｎｔｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ  ｂｙ  ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍＲＮＡ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｓｅｒｉｎｅ  ｒａｃｅｍａｓｅ  ａｎｄ  Ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ．  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．  ２００８  Ｊｕｌ；１０７（３）：２７０−６．  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｊｕｌ  ５．  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  １８６０３８３２．
４）Ｎａｇａｉ  Ｔ，  Ｙｕ  Ｊ，  Ｋｉｔａｈａｒａ  Ｙ，  Ｎａｂｅｓｈｉｍａ  Ｔ，  Ｙａｍａｄａ  Ｋ．  Ｄ−Ｓｅｒｉｎｅ  ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ＰｏｌｙＩ：Ｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｍｏｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｍｉｃｅ．  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ．  ２０１２；１２０（３）：２１３−２７．  Ｅｐｕｂ  ２０１２  Ｏｃｔ  ２６．  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２３０９９３２０．
５）Ｓａｓａｂｅ  Ｊ，  Ｍｉｙｏｓｈｉ  Ｙ，  Ｓｕｚｕｋｉ  Ｍ，  Ｍｉｔａ  Ｍ，  Ｋｏｎｎｏ  Ｒ，  Ｍａｔｓｕｏｋａ  Ｍ，  Ｈａｍａｓｅ  Ｋ，  Ａｉｓｏ  Ｓ．  Ｄ−Ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｄ−ｓｅｒｉｎｅ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ２０１２；１０９（２）：６２７−３２．  Ｅｐｕｂ  ２０１１  Ｄｅｃ  ２７．  ＰｕｂＭｅｄ  ＰＭＩＤ：  ２２２０３９８６．
【００３１】
上記抗菌タンパク質の活性を促進する方法としては、フラビン、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、ＤＡＯ活性化因子（ＤＡＯアクチベーター:別名Ｇ７２タンパク質）を作用させる方法等が挙げられる。
第３の態様における上記促進の程度としては第１の態様における上記促進の程度と同様である。
第３の態様における上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の検出、上記抗菌タンパク質遺伝子のｍＲＮＡレベルでの発現量の測定、上記抗菌タンパク質の発現量の測定、上記抗菌タンパク質の活性促進の測定は、第１の態様における方法と同様である。
【００３２】
上記抗菌タンパク質の反応基質、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌若しくは抗生物質を投与する方法としては、
（ａ）反応基質（例えば、Ｄ−アミノ酸又はＤ−アミノ酸誘導体）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌若しくは抗生物質を医薬品若しくは医薬品組成物又は食品若しくは食品組成物として経口投与する方法、
（ｂ）ＤＡＯの基質となるＤ−アミノ酸、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌又は抗生物質を投与（例えば、経口投与）する方法等が挙げられる。
抗生物質の具体例及び好ましい例としては上述の通りである。
【００３３】
上記抗菌タンパク質の反応基質を投与する場合、血中のＩｇＡの産生抑制の観点から、上記抗菌タンパク質遺伝子ないし上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性（上記抗菌タンパク質遺伝子ないし上記抗菌タンパク質が複数種存在する場合には、各々の発現若しくは活性）が、健常個体（例えば、野生型）の上記発現若しくは活性の１／２以上である個体に投与することが好ましく、健常個体（例えば、野生型）の上記発現若しくは活性と同等以上である個体に投与することがより好ましい。
特に、ＤＡＯ遺伝子ないしＤＡＯの発現若しくは活性が健常個体（例えば、野生型）の上記発現若しくは活性の１／２以上である個体に投与することが好ましく、健常個体（例えば、野生型）の上記発現若しくは活性と同等以上である個体に投与することがより好ましい。
また、例えば、Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｔ，Ｍｏｔｏｍｕｒａ  Ｙ，Ｓｕｇａ  Ｔ（１９７８）  Ａ  ｎｅｗ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｎｄ  ｕｒａｔｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ８６：３１０ｅ３１５．に記載の比色法による５５０ｎｍの吸光度で示した組織破砕液（例えば、腎組織破砕液）におけるＤＡＯ活性が１０以上である個体に投与することが好ましく、２０以上である個体に投与することがより好ましい。
【００３４】
反応基質、腸内細菌又は抗生物質の投与形態としては特に制限はなく、個体の年齢、症状により適宜投与方法を選択することができるが経口的に投与することが好ましい。その投与量は、年齢、投与経路、投与回数により異なり、当業者であれば適宜選択できる。
経口投与した場合の投与量としては特に制限はないが、一般的には一回につき体重１ｋｇあたり０．１μｇ〜１０ｍｇ程度の範囲である。
【００３５】
＜血中のＩｇＡの産生促進剤をスクリーニングする方法＞
第４の態様に係る血中のＩｇＡの産生促進剤をスクリーニングする方法は、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の抑制、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌の減少を指標とする。
第４の態様においてスクリーニングとは、生物（例えば、動物）又は小腸上皮細胞に被験物質を投与して、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現の抑制、又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制を指標として、験物質の母集団を少なくとも絞ることを意味し、血中のＩｇＡの産生促進剤候補を選定することが好ましい。
第４の態様に係るスクリーニング方法は、投与した上記被験物質の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の抑制効果又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制効果を評価して、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌の減少を評価して、血中のＩｇＡの産生促進剤候補を選定する工程を含むことが好ましい。
スクリーニング方法としては、上記を指標とする限り、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）、インシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）等の任意のスクリーニング方法であってもよい。
第４の態様に係るスクリーニング方法の好ましい例としては、
（１）生物（例えば、動物）に被験物質を投与して、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現の抑制、上記抗菌タンパク質の活性の抑制又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の減少を指標として上記被験物質の投与下の結果と、上記被験物質の非投与下又は陰性対照の結果とを比較して、上記被験物質の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の抑制効果又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制効果を評価して、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の減少を評価して、血中のＩｇＡの産生促進剤候補を選定する工程を含むスクリーニング方法、
（２）小腸上皮細胞を被験物質の存在下及び非存在下において培養し、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現の抑制、上記抗菌タンパク質の活性の抑制、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の減少を指標として、上記被験物質の存在下の結果と、上記被験物質の非存在下又は陰性対照の結果とを比較して、上記被験物質の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の抑制効果又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制効果、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加若しくはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の減少を評価して、血中のＩｇＡの産生促進剤候補を選定する工程を含むスクリーニング方法等が挙げられる。
また、上記抑制の程度としては統計的に有意な抑制であれば特に制限はないが、被験物質の非存在下（例えば、被験物質の投与前の系又は陰性対照の系）における上記抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現又は活性に対して、１／２以下であることが好ましく、１／４以下であることがより好ましく、１／１０以下であることがさらに好ましく、発現又は活性がなくなることが特に好ましい。
【００３６】
感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加の程度としては統計的に有意な増加であれば特に制限はないが、被験物質の非存在下における腸内細菌叢（例えば、後述の低感作性腸内細菌叢）における上記細菌の割合に対して、２倍以上であることが好ましく、３倍以上であることがより好ましい。
上記少なくとも１種の細菌が増加された場合、腸内細菌叢に占める感作性細菌群の合計の存在頻度が３０％以上であることが好ましく、４０％以上がより好ましく、４５％以上が更に好ましい。
【００３７】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌の減少の程度としては統計的に有意な増加であれば特に制限はないが、被験物質の非存在下における腸内細菌叢（例えば、後述の低感作性腸内細菌叢）における上記細菌の割合に対して、１／２以下であることが好ましく、１／３以下であることがより好ましい。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌が減少された場合、腸内細菌叢に占めるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌の存在頻度が５０％以下であることが好ましく、４５％以下がより好ましく、４０％以下が更に好ましい。
【００３８】
第４の態様における上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の検出、上記抗菌タンパク質遺伝子のｍＲＮＡレベルでの発現量の測定、上記抗菌タンパク質の発現量の測定、上記抗菌タンパク質の活性抑制、上記細菌の測定は、第１の態様における方法と同様である。
第４の態様に係るスクリーニング方法に供される被験物質としては、第１の態様に係るスクリーニング方法に供される被験物質として挙げられた被験物質と同様の被験物質が挙げられるとともに、微生物に対して抗菌作用を有する物質（例えば、抗生物質）等も挙げられる。
【００３９】
＜個体の血中のＩｇＡの産生を促進する方法＞
第５の態様に係る個体（ヒトは除く。）の血中のＩｇＡの産生を促進する方法は、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現を抑制する工程、上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性を抑制する工程、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌を投与する工程を含む。
第５の態様における個体としては、第３の態様において前述した個体が挙げられる。また、本態様はヒト個体に対しても適用可能である。
第５の態様における上記抑制の程度、上記細菌の増加若しくは減少の程度としては第４の態様における上記抑制の程度、上記細菌の増加若しくは減少の程度と同様である。
第５の態様に係る方法において、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子又は上記抗菌タンパク質の発現を抑制する手法としては、例えば、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質をコードする塩基配列の一部若しくは全てを破壊又は変異させる方法（ノックアウト）等が挙げられる。
上記抗菌タンパク質をコードする塩基配列の一部若しくは全てを破壊又は変異させる方法は、化学合成、遺伝子工学的手法又は突然変異誘発などの当業者に既知の任意の方法が挙げられる。
具体的には、上記抗菌タンパク質をコードするＤＮＡに対し、変異原となる薬剤と接触作用させる方法、紫外線を照射する方法、遺伝子工学的手法等を用いて行うことができる。遺伝子工学的手法の一つである部位特異的変異誘発法は特定の位置に特定の変異を導入できる手法であることから有用であり、モレキュラークローニング第２版、カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー等に記載の方法に準じて行うことができる。
例えば、ＤＡＯをコードするアミノ酸配列のうち、１８１番目のグリシンをアルギニンに変異することによりＤＡＯの活性を消失させることができ、常染色体劣性遺伝し得る。劣性ホモ接合体の個体を、以下、「ＤＡＯ活性欠損マウス」という（Ｋｏｎｎｏ  Ｒ．  ａｎｄ  Ｙａｓｕｍｕｒａ  Ｙ．、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１０３：２７７−２８５（１９８３）、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ａ．，Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｍ．，Ｎｉｗａ  Ａ．  ａｎｄ  Ｋｏｎｎｏ  Ｒ．、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１０３３：２１０−２１５（２００５））。
また、上記タンパク質の発現を抑制するには、ＮＦ−ｋＢ阻害剤（カフェイン酸フェネチルエステル（ＣＡＰＥ）など）を投与する方法などが挙げられる。
また、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質の活性を抑制する手法としては、上記抗菌タンパク質の基質に対して競争的な阻害剤（６−クロロ−３−ヒドロキシ−１,２−ベンズイソオキサゾール（ＣＢＩＯ）等）を投与する方法等が挙げられる。
【００４０】
＜血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法＞
第６の態様に係る血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する方法は、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現が低下した個体、又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性が低下した個体の腸内細菌叢における上記抗菌タンパク質の反応基質を産生する腸内細菌の存在頻度に基づき、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスク、程度ないし状態を評価する。
第６の態様における個体の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の低下又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の低下の程度としては統計的に有意な低下であれば特に制限はないが、健常個体（例えば、野生型）における上記抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質の発現、活性、又は反応量（上記抗菌タンパク質遺伝子若しくは上記抗菌タンパク質が複数種存在する場合には、各々の発現、活性、又は反応量）に対して、１／２以下であることが好ましく、１／３以下であることがより好ましく、１／４以下であることが更に好ましい。
特に、健常個体（例えば、野生型）におけるＤＡＯ遺伝子若しくはＤＡＯの発現、活性、又は反応量に対して、１／２以下であることが好ましく、１／３以下であることがより好ましく、１／４以下であることが更に好ましい。
第６の態様における個体の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の検出、上記抗菌タンパク質遺伝子のｍＲＮＡレベルでの発現量の測定、上記抗菌タンパク質の発現量の測定、上記抗菌タンパク質の活性促進の測定は、第１の態様における方法と同様である。
【００４１】
上記腸内細菌の存在頻度の測定方法としては、腸内細菌叢における細菌ゲノムＤＮＡの抽出後、１６ｓリボソームＤＮＡを標的としてＰＣＲ増幅し、次世代シーケンサ解析で各種細菌の量（例えば、腸内細菌叢に占める存在頻度）を解析する方法等が挙げられる。
感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の存在頻度が５％以上である場合、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスクが高いと評価することができ、上記疾患の程度ないし状態が進行していると評価することができ、存在頻度が１０％以上である場合、上記リスクがより高いと評価することができ、上記疾患の程度ないし状態がより進行していると評価することができ、存在頻度が１５％以上である場合、上記リスクが更に高いと評価することができ、上記疾患の程度ないし状態が更に進行していると評価することができる。
一方、感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の存在頻度が５％未満である場合、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患のリスクが低いと評価することができ、上記疾患の程度ないし状態は進行していないと評価することができ、存在頻度が３％以下である場合、上記リスクがより低いと評価することができ、上記疾患の程度ないし状態が特に進行していないと評価することができ、存在頻度が１％以下である場合、上記リスクが最も低いと評価することができ、上記疾患の程度ないし状態が最も進行していないと評価することができる。
【００４２】
＜血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法＞
第７の態様に係る血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する方法は、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質遺伝子の発現が低下した個体、又は前記抗菌タンパク質の発現若しくは活性が低下した個体の腸内細菌叢における上記抗菌タンパク質の反応基質を産生する腸内細菌の存在頻度に基づき、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患を予防又は治療するために除去すべき腸内細菌及び投与すべき腸内細菌よりなる群から選択される少なくとも１種を提示する。
第７の態様における個体の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の低下又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の低下の程度としては第６の態様における方法と同様である。
第７の態様における個体の上記抗菌タンパク質遺伝子の発現の検出、上記抗菌タンパク質遺伝子のｍＲＮＡレベルでの発現量の測定、上記抗菌タンパク質の発現量の測定、上記抗菌タンパク質の活性促進の測定は、第１の態様における方法と同様である。
【実施例】
【００４３】
以下、実施例を示して本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例に限定されるものではない。【００４４】
＜野生型マウス及びＤＡＯ活性欠損マウスにおける血漿中ＩｇＡ濃度の比較＞
以下、ＤＡＯ活性欠損マウスとして、自然発生のＤＡＯ活性欠損（ＤＡＯＧ１８１Ｒ／Ｇ１８１Ｒマウス）をマウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）と交配を重ねて遺伝的に純化して用いた。
野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）及びＤＡＯ活性欠損マウス、各々の尾から血液５０μｌを採取し、ＥＬＩＳＡ（Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ  Ｒｅａｄｙ  Ｓｅｔ  Ｇｏ！：アフィメトリクス社製）法を用いて血漿中ＩｇＡ濃度を測定した。
抗生剤投与は、アンピシリン１ｇ／Ｌ、ネオマイシン１ｇ／Ｌ及びバンコマイシン０．５ｇ／Ｌの３剤を飲水に混ぜて３週間自由摂取させた。対照群は水を自由摂取させた。
抗生剤投与前後の腸内細菌量の定量は、糞中の細菌ゲノムＤＮＡを抽出し、１６ｓリボソームＤＮＡを標的とした定量的ＰＣＲ法を用いておこなった。【００４５】
図１（ａ）は、抗生剤投与有無の条件下で、野生型マウス及びＤＡＯ活性欠損マウスにおける血漿中ＩｇＡ濃度を示す図である。（ｂ）は、抗生剤投与前後の糞中の細菌量を定量的ＰＣＲ法で比較した結果を示す図である。図１中、＊は有意水準ｐ＜０．０５、＊＊は有意水準ｐ＜０．０１、＊＊＊は有意水準ｐ＜０．００１を示す。
図１から明らかなように、野生型マウスの血漿とＤＡＯ活性欠損マウスの血漿とを比較すると、ＤＡＯ活性欠損マウスにおいてＩｇＡが有意に高いことが分かる。
さらに、抗生剤投与により腸内細菌叢が著明に減少した条件下では、野生型マウスとＤＡＯ活性欠損マウスの間でＩｇＡ量の変化が消失することから、ＤＡＯは腸内細菌叢によるＩｇＡ誘導に関与していることが分かる。【００４６】
上記抗生剤投与後に下記表１に示した組成を有する免疫感作性が比較的高い腸内細菌叢（以下、単に「高感作性腸内細菌叢」という。）を野生型マウス及びＤＡＯ活性欠損マウスに移植した。高感作性腸内細菌叢は慶應義塾大学保有の野生型マウスから取得した。
【表１】
2018070524.tif 000003
上記表中、ｐは門レベル、ｃは綱レベル、ｏは目レベル、ｆは科レベル、ｇは属レベルにおける細菌分類名を示す。【００４７】
結果を図２に示す。
図２は、抗生剤投与後に高感作性腸内細菌叢を移植し、移植後０週後、２週後及び３週後に野生型マウス及びＤＡＯ活性欠損マウスにおける血漿中ＩｇＡ濃度を示す図である。図２中、＊＊は有意水準ｐ＜０．０１、＊＊＊は有意水準ｐ＜０．００１を示す。
図２から明らかなように、高感作性腸内細菌叢がＤＡＯ活性欠損マウスにおいて血漿ＩｇＡを誘導するのに３週間を要することがわかる。
すなわち、自然免疫系の抗菌タンパク質（例えば、ＤＡＯ）遺伝子の発現の抑制、又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の抑制、又は感作性細菌群に属する少なくとも１種の細菌の増加により、血中のＩｇＡの産生を促進することができることがわかる。
また、上記結果から、ＤＡＯの遺伝子欠損により、粘膜面で細菌由来のＤ−アミノ酸とＤＡＯの反応が減弱すると、粘膜及び血中のＩｇＡが増加するものと考えられる。【００４８】
＜腸内細菌叢の種類の相違によるＤＡＯ活性依存的な血漿中ＩｇＡ誘導性の相違＞
野生型マウスとＤＡＯ活性欠損マウスを、下記表２に示した組成を有する免疫感作性が比較的低い腸内細菌叢（以下、単に「低感作性腸内細菌叢」という。）及び上記高感作性細菌叢の２種類の腸内細菌環境で８週間飼育した。低感作性腸内細菌叢は日本クレア社製マウスから取得した。
また、小腸内容物から細菌ゲノムＤＮＡを抽出し、１６ｓリボソームＤＮＡを標的にＰＣＲ増幅し、次世代シーケンサで配列分析して小腸内容物に存在する細菌叢の組成を解析した。
【表２】
2018070524.tif 000004
上記表中、ｐは門レベル、ｃは綱レベル、ｏは目レベル、ｆは科レベル、ｇは属レベルにおける細菌分類名を示す。【００４９】
結果を図３に示す。
図３（ａ）は、これらマウスの血漿中ＩｇＡ濃度の結果を示す図である。図中、＊＊＊は有意水準ｐ＜０．００１を示す。図３（ｂ）は、上記解析結果を示す図であり、低感作性腸内細菌叢を有する野生型マウスの小腸内細菌叢の組成と高感作性腸内細菌叢を有する野生型マウスの小腸内細菌叢の組成を門及び綱レベルで示す図である。図３（ｂ）中、ｐは門レベル、ｃは綱レベルでの細菌分類名を示す。
図３に示した結果から、特定の腸内細菌叢（高感作性腸内細菌叢）によって、ＤＡＯ活性依存的にＩｇＡが誘導されることが分かる。
さらに、低感作性腸内細菌叢と比べて、高感作性腸内細菌叢において有意（有意水準ｐ＜０．０５）に多い細菌属を下記表３に列記した。
【表３】
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このように上記表３に記載の細菌属を含む腸内細菌叢（特に、感作性細菌群として定義したＡｌｌｏｂａｃｕｌｕｍ属、Ｔｕｒｉｃｉｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｌｅｓ目Ｓ２４−７科、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ目、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｈａｌｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ科、Ｓｔｒｅｐｔｏｐｈｙｔａ目、及びＣｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科に属する細菌よりなる群から選択される少なくとも１種の細菌）に由来するＤ-アミノ酸とＤＡＯとの反応が減弱すると、粘膜及び血中のＩｇＡが増加するものと考えられる。【００５０】
一方、腸内細菌叢におけるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌の割合を増加させることにより、粘膜及び血中のＩｇＡの産生を抑制し得ると考えられる。
すなわち、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属する細菌は血中ＩｇＡ産生抑制剤、又は血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤の成分として機能し得ると考えられる。【００５１】
＜骨髄移植による血球中ＤＡＯ発現のＩｇＡ産生への関与＞
野生型マウスに野生型マウス由来の骨髄またはＤＡＯ活性欠損マウス由来の骨髄を移植した。
野生型マウス由来の骨髄を移植した野生型マウス及びＤＡＯ活性欠損マウス由来の骨髄を移植した野生型マウス、各々の尻尾から血液５０μｌを採取し、ＥＬＩＳＡ（Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＡ  Ｒｅａｄｙ  Ｓｅｔ  Ｇｏ！：アフィメトリクス社製）法を用いて血漿中ＩｇＡ濃度を測定した。
結果を図４に示す。
図４に示した結果から明らかなように、野生型マウス由来の骨髄を移植した野生型マウスと、ＤＡＯ活性欠損マウス由来の骨髄を移植した野生型マウスとの間で、血漿中ＩｇＡ濃度に有意な差は認められなかった。
ＤＡＯの発現は、小脳、腎臓、小腸、白血球にあることが知られているが、体内のＩｇＡ産生の主要な組織は細菌との接触環境下にある腸管の粘膜上皮であることが知られている。実際、ＤＡＯ活性欠損マウスでは小腸におけるＩｇＡ産生細胞が増加し、腸管管腔に放出されるＩｇＡの増加が確認されている（例えば、非特許文献１）。
一方で、腎臓は感染性腎盂腎炎などの要因を除いて無菌的環境であるため、腎臓のＤＡＯはＩｇＡの産生と直接的な因果関係に乏しいと考えられる。
したがって、腸管（特にＤＡＯの発現を認める小腸）におけるＤＡＯの活性欠損がＩｇＡ産生増加の主因と考えられる。
以上から、骨髄組織の発現するＤＡＯとＩｇＡの誘導とは無関係であり、ＩｇＡ産生への小腸ＤＡＯによる関与が強く示唆される。【００５２】
＜自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスにおけるＤＡＯ活性＞
野生型マウスと自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウス（日本エスエルシー社製）とでＤＡＯ活性を比較した。ＤＡＯ活性は以下の比色法によって測定した。
腎組織を７ｍＭクエン酸（ｐＨ８．３）中で破砕し、５，５００×ｇで１０分間遠心分離後、５０μＬの上清を１５０μＬの１００ｍＭ  Ｄ−アラニン水溶液、１００μＬの０．１ｍＭフラビンアデニンジヌクレオチド水溶液、１５０μＬの７００Ｕ／ｍＬのカタラーゼ含有１３３ｍＭピロリン酸ナトリウム水溶液及び５０μＬのメタノールと混合し、３７℃で１時間震とう混和した。５００μＬの１０％トリクロロ酢酸を加えて反応を停止させ、１２，０００×ｇで５分間遠心分離した。２５０μＬの上清を２５０μＬの５Ｍ水酸化ナトリウム及び２５０μＬの０．５％４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト−１，２，４−トリアゾールを含む０．５Ｍ塩酸を混合し１５分、常温で静置したのち、０．７５％過ヨウ素酸カリウム含有０．２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加えて直ちに転倒混和し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。
本方法はＷａｔａｎａｂｅらの方法を使用している（Ｗａｔａｎａｂｅ  Ｔ，Ｍｏｔｏｍｕｒａ  Ｙ，Ｓｕｇａ  Ｔ（１９７８）  Ａ  ｎｅｗ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｎｄ  ｕｒａｔｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ８６：３１０ｅ３１５．）。
図５は野生型マウスと自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスとのＤＡＯ活性の比較を示す図である。図５中、＊＊＊は有意水準ｐ＜０．００１を示す。
図５に示した結果から明らかなように、ＩｇＡ腎症モデルマウスではＤＡＯ活性が有意に９０％以上低下していることがわかる。【００５３】
図６は、野生型マウスと自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスを交配して生まれた仔マウス群と、ＤＡＯ活性欠損マウスと自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスを交配して生まれた仔マウス群における血漿中ＩｇＡ濃度を示した図である。
図６に示した結果から、自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスの遺伝的要因を野生型マウスとの交配でヘテロに希釈すると血漿中ＩｇＡ濃度が顕著に低下するのに対して、ＤＡＯ活性を有さない自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスとＤＡＯ活性欠損マウスとの交配では血漿中ＩｇＡ濃度の低下が抑制されることがわかる。このことから、自然発症ＩｇＡ腎症モデルマウスの血漿中ＩｇＡ上昇にＤＡＯ活性が寄与していることが強く示唆される。
したがって、腸内の自然免疫系の抗菌タンパク質（例えば、ＤＡＯ）遺伝子の発現の促進、又は上記抗菌タンパク質の発現若しくは活性の促進を指標として、血中の過剰ＩｇＡに起因する疾患の予防又は治療剤をスクリーニングすることができることが示唆される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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