(57)【要約】  動物プランクトンの成長を促進し、生残率を向上し、かつ、安全で環境への影響も少ない飼料組成物を提供することを課題とする。ＰＨＡを含む、動物プランクトン用飼料組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＨＡを含む、動物プランクトン用飼料組成物。
【請求項２】
前記ＰＨＡと藻類を含む、請求項１に記載の飼料組成物。
【請求項３】
前記藻類がクロレラ属、ナンノクロロプシス属、又はシゾキトリウム属に分類される藻類のうち少なくとも一種類を含む、請求項２に記載の飼料組成物。
【請求項４】
前記ＰＨＡがＰＨＢ、ＰＨＢＨ及びＰＨＢＶよりなる群から選択された少なくとも一種以上である、請求項１〜３いずれか１項に記載の飼料組成物。
【請求項５】
請求項１〜４いずれか１項に記載の飼料組成物を用いて動物プランクトンを飼育する、動物プランクトンの製造方法。
【請求項６】
請求項１〜４いずれか１項に記載の飼料組成物を給餌して飼育した動物プランクトン。
【請求項７】
ＰＨＡを有効成分とする、動物プランクトンの成長促進剤。
【請求項８】
ＰＨＡを有効成分とする、動物プランクトンの生残率向上剤。
【請求項９】
前記ＰＨＡがＰＨＢ、ＰＨＢＨ及びＰＨＢＶよりなる群から選択された少なくとも一種以上である、請求項７又は８に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、飼料組成物、動物プランクトンの製造方法、動物プランクトン、並びに動物プランクトンの成長促進剤及び生残率向上剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、人口増加による食料問題、中でも天然生物資源である魚類、甲殻類の乱獲による個体数の減少が問題となっている。そのため、水産資源の保護の観点から、養殖などの栽培漁業の重要性が高まってきている。多くの魚介類の種苗生産において、ワムシ、カイアシ（コペポーダ）やアルテミアなどの動物プランクトンは初期飼料として必須である。動物プランクトンは工業的に大量培養されており、その際に淡水クロレラ、海産クロレラ（ナンノクロロプシス）やシゾキトリウムなどの藻類が動物プランクトンの餌及び／又は栄養強化剤として用いられている。例えば、幼魚にとって必須脂肪酸であるエイコサペンタエンサン（ＥＰＡ）やドコサヘキサエンサン（ＤＨＡ）などの高度不飽和脂肪酸を与えることを目的として、これら脂肪酸を含有する藻類を動物プランクトンに給餌する場合がある。しかしながら、上記藻類を動物プランクトンに与える際の給餌量によって動物プランクトンの増殖や生残率に大きな影響を及ぼすことが知られており、生きた動物プランクトンを安定的に、安価に調製することには課題があった（特許文献１、２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際公開第２０１５／１５９７００号
【特許文献２】特開２００４−１４７６２０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、動物プランクトンの成長を促進し、生残率を向上し、かつ、安全で環境への影響も少ない飼料組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、動物プランクトンの成長を促進し、生残率を向上することができる飼料組成物に関して鋭意検討を行った。その結果、驚くべきことに、生分解性ポリエステルであるポリヒドロキシアルカノエート（以下、ＰＨＡと称する場合がある）を、動物プランクトンに単独で、あるいは公知の飼料成分と混合給餌させることによって、動物プランクトンの生残率を特に大きく向上させることができることを見出した。さらには、ＰＨＡと藻類とを両方給餌させることによって、動物プランクトンは、高い生残率を維持したまま、高い成長率（生育率）をも達成可能であることを見出し、本課題を解決した。【０００６】
すなわち、本発明の第一は、ＰＨＡを含む、動物プランクトン用飼料組成物に関する。【０００７】
前記飼料組成物は、前記ＰＨＡと藻類を含んでもよい。【０００８】
前記飼料組成物は、前記藻類がクロレラ属、ナンノクロロプシス属、又はシゾキトリウム属に分類される藻類のうち少なくとも一種類を含んでもよい。【０００９】
前記飼料組成物は、前記ＰＨＡがＰＨＢ、ＰＨＢＨ及びＰＨＢＶよりなる群から選択された少なくとも一種以上であってもよい。【００１０】
本発明の第二は、前記飼料組成物を用いて動物プランクトンを飼育する、動物プランクトンの製造方法に関する。【００１１】
本発明の第三は、前記飼料組成物を給餌して飼育した動物プランクトンに関する。【００１２】
本発明の第四は、ＰＨＡを有効成分とする、動物プランクトンの成長促進剤に関する。【００１３】
本発明の第五は、ＰＨＡを有効成分とする、動物プランクトンの生残率向上剤に関する。【００１４】
前記成長促進剤又は前記生残率向上剤は、前記ＰＨＡがＰＨＢ、ＰＨＢＨ及びＰＨＢＶよりなる群から選択された少なくとも一種以上であってもよい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明により、動物プランクトンの成長を促進し、生残率を向上し、かつ、安全で環境への影響も少ない飼料組成物を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】アルテミアの生残率を示す図である。
【図２】アルテミアの総乾燥重量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。
［飼料組成物］
本発明は、ＰＨＡを含む動物プランクトン用飼料組成物に関する。当該組成物には、ＰＨＡ単独も含まれる。
【００１８】
ＰＨＡとは、微生物がエネルギー源として細胞内に蓄積する脂肪族ポリエステルの総称であり、そのモノマー構成成分として多くの物質が報告されている。ＰＨＡは元来、自然環境中で様々な炭素源によって微生物によって合成される天然高分子であり、土壌、海洋、及び河川などに存在する。また、ＰＨＡを分解利用する微生物も種々発見されており、ＰＨＡは通常の食物連鎖の中に組み込まれている物質である。
【００１９】
本発明は、驚くべきことに、生分解性ポリエステルであるＰＨＡを用いるため、安全性に問題がないばかりか、ＰＨＡ単独でも飼料として与えることにより動物プランクトンを飼育可能であることを発見したことによるものである。これは、動物プランクトンがＰＨＡを消化、吸収可能であることを見出した初めての例である。
【００２０】
本開示の動物プランクトン用飼料組成物に用いられるＰＨＡは、特に限定されない。
【００２１】
本開示において、ＰＨＡは、微生物が生産するＰＨＡであることが好ましい。
【００２２】
また、本開示において、ＰＨＡは、式（１）：［−ＣＨＲ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｏ−］（式中、ＲはＣｎＨ２ｎ＋１で表されるアルキル基で、ｎは１以上１５以下の整数である。）で示される繰り返し単位を含む脂肪族ポリエステルであることが好ましい。
【００２３】
また、炭素数４〜１６の３−ヒドロキシアルカン酸から選択される構成成分を重合して得られるＰＨＡや炭素数４〜１６の３−ヒドロキシアルカン酸から選択される構成成分を含有する共重合ＰＨＡが好ましい。例えば、炭素数４の３−ヒドロキアルカン酸から成るポリヒドロキシブチレート（ＰＨＢ）、炭素数４と６の３−ヒドロキシアルカン酸から成るポリヒドロキシブチレートヘキサノエート（ＰＨＢＨ）、炭素数４と５の３−ヒドロキシアルカン酸から成るポリヒドロキシブチレートバレレート（ＰＨＢＶ）、及び炭素数４〜１４の３−ヒドロキシアルカン酸から成るポリヒドロキシアルカノエートなどが挙げられる。これらの中でも好ましくは、ＰＨＢ、ＰＨＢＨ及びＰＨＢＶよりなる群から選択された少なくとも一種以上であり、より好ましくは、ＰＨＢＨまたはＰＨＢＶである。
【００２４】
ＰＨＡの形態としては、ＰＨＡを生産する細胞（菌）を含む培養液や乾燥菌体でもよいし、細胞や細胞成分を取り除いたＰＨＡの乾燥体や懸濁液でもよく、その形態は実施例に限定されない。なお、与える動物プランクトンが補食可能な大きさのものを使用することが好ましい。
【００２５】
飼料組成物は、ＰＨＡと藻類を含むことが好ましい。藻類を含むことにより、動物プランクトンは高い生残率を有すると共に、その成長をさらに促進することができる。
【００２６】
藻類とは、光合成で酸素を発生させる生物で、水中に生息するものの総称をいう。藻類は、飼料として使用できるものであれば特に限定されないが、特に、大型藻類を除く、淡水及び海水に生息する１〜１，０００μｍサイズの浮遊性の藻類が好ましく、例えば、クロレラ属（Chlorella）、ドナリエラ属（Dunaliella）、パラクロレラ属（Parachlorella）等の緑藻植物門類；ナンノクロロプシス属（Nannochloropsis）等の不等毛植物門類；スピルリナ属（Spirulina）、アルスロスピラ属（Arthrospira）等の藍色植物門類；シゾキトリウム属（Shizochytrium）、オーランチキトリウム属（Aurantichytrium）等のラビリンチュラ綱類；ユーグレナ類（Euglena）等のユーグレナ植物門類などの藻類が挙げられる。これらの藻類の中でも特に動物プランクトンの成長を促進し、生残率を向上することができるため、高度不飽和脂肪酸（ＤＨＡ、ＥＰＡなど）などの栄養強化成分を含む藻類が好ましく、具体的には、例えばクロレラ属、ナンノクロロプシス属、又はシゾキトリウム属に分類される藻類のうち少なくとも一種である。
【００２７】
藻類は、藻類を培養した培養液、藻類を乾燥した乾燥藻体、それらを破砕処理したものや藻類の培養上清の状態などの形態で使用できる。
【００２８】
ＰＨＡと藻類を含む飼料組成物は、例えば、藻類とＰＨＡを混合することによって得られる。藻類とＰＨＡの混合の際、ＰＨＡ及び藻類は乾燥体や懸濁液であってもよく、その形態は特に限定されない。
【００２９】
さらに、上記飼料組成物には、ＰＨＡや藻類以外の飼料成分を含むことも出来る。そのような飼料成分としては特に限定されず、公知の飼料成分が利用できる。公知の飼料成分としては、例えば、高度不飽和脂肪酸（例えば、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）等）等が挙げられる。
【００３０】
本開示の飼料組成物を動物プランクトンに与えることにより、高い生残率を保持したまま動物プランクトンを早期に生育させることが可能である。生きた動物プランクトンはクロレラやナンノクロロプシス、シゾキトリウムなどの藻類が含有する高度不飽和脂肪酸を吸収可能なことから、高い生残率を保持した動物プランクトンは、このような藻類を給餌された場合、生残率が低い動物プランクトンと比較して高い飼料価値を有する。このように本開示の飼料組成物によれば、栄養価の高い動物プランクトンを効率的に、且つ、安定的に得ることが可能となる。
【００３１】
本開示の飼料組成物を動物プランクトンに飼料として与えることによって、生残率や成長速度を向上させる効果が認められる範囲では、その動物プランクトンの種を問わない。
【００３２】
動物プランクトンとは、光合成を行わず餌となる植物プランクトン等の有機物を摂食して、水中に浮遊して生活する微小生物の総称であるが、例えば、ワムシ類、アルテミア類、カイアシ類、及びミジンコ類など、一般的に種苗生産や養殖において生物飼料や魚介類の餌として利用されているものを特に指す。ワムシ類は、輪形動物門に属する生物であり、シオミズツボワムシ（Brachionus plicatilis）、及びS型ワムシ（B. rotundiformis）などが含まれる。アルテミア類は、節足動物門甲殻亜門に属する生物であり、アルテミアサリーナ（Artemia salina）などが含まれる。カイアシ類やミジンコ類は節足動物門に属する生物である。
【００３３】
なお、本開示の飼料組成物は、動物プランクトンの他、魚類、貝類及び甲殻類等の水生生物にも飼料として与えてもよい。前記魚類としては、メダカ（ジャワメダカ）、イワシ等の小魚の他、マダイ、クロダイ、ヒラメ、トラフグ、タコ、ブリ、タラ、サーモン等が、貝類としては、マガキ、ムール貝等が、甲殻類としてはエビ、カニ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
［動物プランクトンの製造］
本開示の動物プランクトンの製造方法は、上記飼料組成物を用いて動物プランクトンを飼育するものである。上記飼料組成物を用いることとしては、具体的には、例えば飼料組成物としてＰＨＡを単独で動物プランクトンに給餌すること、藻類とＰＨＡを含む飼料組成物を動物プランクトンに給餌すること、及びＰＨＡと藻類を個別に、同時あるいは時間差で動物プランクトンに給餌することなどが挙げられる。ＰＨＡ及び藻類は乾燥体や懸濁液であってもよく、その形態は特に限定されない。
【００３５】
藻類とＰＨＡの混合比あるいは使用割合（使用割合は、同時あるいは時間差で給餌する場合の藻類とＰＨＡの量の割合をいう）は、与える生物種によってその最適比は異なり、任意に設定可能であるが、例えば、藻類及びＰＨＡの合計重量に対して、ＰＨＡを好ましくは０．１〜５０重量％、より好ましくは１〜５０重量％、さらに好ましくは５〜５０重量％の割合で調製することが好ましい。
【００３６】
本開示の飼料組成物を水生生物に給餌する時期としては限定されず、孵化後すぐから必要な個体に成長するまでの期間を通じて給餌しても良いし、特定の時期に限定して給餌しても良い。具体的な給餌期間は、対象となる水生生物にもより異なるが、例えば２日間以上、好ましくは３日間以上、より好ましくは５日間以上である。上限も特に限定されず、数週間あるいは数ヶ月間給餌しても差し支えない。具体的には、例えば３日間から７日間程度でも本発明の効果を得ることができる。
【００３７】
市販の動物プランクトン用の餌／栄養強化剤である藻類と比較して、本開示のＰＨＡを含む飼料組成物を与えられた動物プランクトンは高い生残率を示す。そのため、本開示のＰＨＡを含む飼料組成物は、動物プランクトンなどの水生生物の生残率向上剤としても利用できる。
【００３８】
ＰＨＡには魚類稚魚の成育に必須な高度不飽和脂肪酸が含まれてないことから、栄養強化を目的として、動物プランクトンに藻類とＰＨＡの混合給餌を実施することにより、ＰＨＡ単独や藻類単独給餌と比較して高い生残率のみならず高生育速度も達成できる。すなわち、本開示のＰＨＡを含む飼料組成物、好ましくはＰＨＡと藻類を含む飼料組成物は、動物プランクトンなどの水生生物の成長促進剤としても利用できる。
【００３９】
高餌効率で安定的に生きた動物プランクトンを製造する技術は、該動物プランクトンを餌として使用する魚類、甲殻類、貝類等の養殖において意義深い。また、本開示のＰＨＡは生分解性を有し、特に他の生分解性プラスチック素材と比較して水中でも良好な生分解性を示すことから、安全で環境への影響が少ないという点でも優れている。
【００４０】
［動物プランクトン］
本開示の飼料組成物を給餌して得られる上記動物プランクトンなどの水生生物は、高育成速度であり高生残率であることから、魚介類等の養殖用の餌として安定的に、安価に供給することができる。また、高い栄養価を有し得るため、飼料価値としても高い。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。ただし、本発明は、これらに限定されるものではない。【００４２】
（実施例１）アルテミア  サリナ（Artemia salina）へのＰＨＢＨの単独給餌試験
試験には孵化処理より４８時間以上経過した開口後のアルテミア  サリナ（Artemia salina）を使用した。試験容器は１Ｌビーカー、生物密度を５０，０００個体／Ｌとした。試験水は天然濾過海水（塩分濃度３．２％）を使用し、試験容器の下に設置したプレートヒーターにて海水温を２５℃に調整した。また、飼料（給与飼料）は、試験開始０時間後、２０時間経過後、４０時間経過後の計３回給与した。給与量は５０，０００個体／Ｌあたり各回４０ｍｇとした。反復ロット数は３とした。尚、試験開始２０時間経過時、４０時間経過時における飼料の給与に先立ち、プランクトンネット（目開き１２５μｍ）にてアルテミア  サリナ（Artemia salina）を回収して残った飼育水を、前記試験水と同じ試験水で全換水した。【００４３】
試験に使用した飼料（給与飼料）は、ＰＨＢＨ粉末（製品名：カネカ  バイオポリマー  アオニレックス（登録商標）、（株）カネカ社製）であり、その平均粒子径（ＭＶ）は約２．９５μｍと、動物プランクトンが摂食するには十分小さいサイズのものを利用した。【００４４】
試験開始０時間後、６時間、２４時間、及び４８時間経過時にサンプリングを実施し、顕微鏡を用いて５００μＬあたりの総個体数、及び生残個体数を計測した。生残率（％）は、生残個体数／総個体数×１００として算出した。なお、生残個体であるか否かの判断は、個体の運動性を目視にて確認することにより行った。また、試験開始４８時間経過後（試験後）においてアルテミア  サリナ（Artemia salina）全量をプランクトンネット（目開き１２５μｍ）にて回収し、水で２回洗浄後に凍結乾燥して得られた乾燥個体の重量（アルテミア総乾燥重量）を計測した。アルテミアの生残率を表１及び図１に、また試験後のアルテミア総乾燥重量を図２に示す。【００４５】
その結果、ＰＨＢＨ単独給餌において、アルテミア  サリナ（Artemia salina）が問題なく生育することが確認され（表１及び図１）、試験終了後のアルテミア総乾燥重量は後述する比較例１のシゾキトリウム単独給餌と遜色なく、藻類と同程度かそれ以上の生育率を示すことがわかった（図２）。さらに、ＰＨＢＨを給餌しない試験区（比較例１、２）と比較して有意に高い生残率が認められた。【００４６】
（実施例２）アルテミア  サリナ（Artemia salina）へのＰＨＢＨ／シゾキトリウム混合飼料の給餌試験
給与飼料としてＰＨＢＨ粉末に代えて、ＰＨＢＨ（ＰＨＢＨ粉末（製品名：カネカ  バイオポリマー  アオニレックス（登録商標）、（株）カネカ社製））／シゾキトリウム混合飼料を用いた以外は実施例１と同じ方法にて試験を実施した。ＰＨＢＨ／シゾキトリウム混合比は１：１（重量比）とした。シゾキトリウムとしてはバイオクロミス（太平洋貿易社製）を使用した。アルテミアの生残率を表１及び図１に、また試験後のアルテミア総乾燥重量を図２に示す。【００４７】
その結果、実施例１のＰＨＢＨ単独給餌や後述の比較例１のシゾキトリウム単独給餌と比べて試験終了後のアルテミア総乾燥重量が重く、高い生育率が確認された（図２）。また、ＰＨＢＨを給餌しない試験区（比較例１、２）と比較しても有意に高い生残率が確認された。【００４８】
（比較例１）アルテミア  サリナ（Artemia salina）へのシゾキトリウムの単独給餌試験
給与飼料としてＰＨＢＨ粉末に代えて、シゾキトリウム（製品名：バイオクロミス）単独を用いた以外は実施例１と同じ方法にて試験を実施した。アルテミアの生残率を表１及び図１に、また試験後のアルテミア総乾燥重量を図２に示す。【００４９】
その結果、生育率（試験終了後のアルテミア総乾燥重量）としては、ＰＨＢＨ単独給餌である実施例１と同程度であったが、飼育中に生残率の低下が認められ、試験開始後４８時間後には約８０％と低い生残率となった。【００５０】
（比較例２）無給餌試験
給与飼料を全く与えない以外は実施例１と同じ方法にてアルテミアの生育、生残率試験を実施した。アルテミアの生残率を表１及び図１に、また試験後のアルテミア総乾燥重量を図２に示す。【００５１】
その結果、試験開始２４時間目以降に生残率の低下が認められ、４８時間後には約５割の個体が死んでいる結果となった。試験終了後のアルテミア総乾燥重量は他試験区と比較して有意に低い結果（低い生育率）となった。本比較例の試験区は試験期間中無給餌であったことから、試験開始時の総乾燥重量に近い値を示しているものと考えられる。【００５２】
【表１】
2017159461.tif 000002
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
2017159461.tif 000005
2017159461.tif 000006
2017159461.tif 000007
2017159461.tif 000008