(57)【要約】  本発明は、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する食品（特にサプリメント、健康補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、または機能性表示食品）および外用剤（特に医薬品(医療用医薬品、OTC)、医薬部外品、化粧品、およびスキンケア用品）を提供する。また本発明は、老眼、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のための使用（ただし医療行為を除く）。
【請求項２】
NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを添加した食品。
【請求項３】
飲料、サプリメント、健康補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、または機能性表示食品である請求項２に記載の食品。
【請求項４】
錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状(ドリンク)、トローチ、またはペーストの形態である請求項３に記載の食品。
【請求項５】
NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mgである請求項２〜４のいずれかに記載の食品。
【請求項６】
NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のために用いられる食品組成物。
【請求項７】
眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のために用いられる食品を調製するためのNAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの使用。
【請求項８】
NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する外用剤。
【請求項９】
医薬部外品または化粧品である請求項８に記載の外用剤。
【請求項１０】
軟膏、クリーム、ミルク、ジェル、ローション、エッセンス、フェイスパック、ファンデーション、口紅、プラスター剤、パップ剤、粉末、石鹸、シャンプー、洗浄剤、または浴用剤の形態である請求項８または９に記載の外用剤。
【請求項１１】
NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、老眼、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項１２】
NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、角膜疾患、網膜疾患、および視神経疾患から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項１３】
NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mgである請求項１１または１２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、カプセル剤、チュアブル剤、またはシロップ剤である請求項１１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
点眼薬、洗眼薬、眼軟膏、コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズ保存液、コンタクトレンズ消毒液、コンタクトレンズ洗浄液、コンタクトレンズ用多目的液剤、角膜保存液、または手術時の灌流液の形態である１１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、NAD関連代謝産物の利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＯＡ機器、ゲーム機、大画面ディスプレイ、スマートフォン等の普及、夜間活動または夜間行動の増加(不眠化)、建築物等の構造物による強い光反射など、近年の生活都市型化に伴い、眼に対する負担または負荷は増加する一方であり、眼は常にストレスに曝されている。【０００３】
このような状況において、眼の健康を保つには上記のような負担または負荷を減らし、睡眠等により眼を休めることが最も好ましいが、これを実際に行うことは困難でもあり、眼の健康維持もしくは健康増進のために何らかの対策が必要とされている。【０００４】
ブルーライト・カットメガネ等の物理的な対応策も提案されているが、毎日簡便かつ継続的に行える対応策としては、眼の健康維持もしくは健康増進作用、または眼の老化予防作用を有する化合物をサプリメントや食品、飲料等として摂取するか、化粧品、クリーム等の外用剤などとして摂取することが望ましい。【０００５】
眼の健康に良いサプリメントとしては、ポリフェノールを多く含有するブルーベリーやブドウ等の抽出物または乾燥物、ルテイン(緑黄色野菜に含まれるカロテノイド)を含有する抽出物等が広く知られ利用されているが、余分な成分は含まない単一成分からなる方が摂取量が少なくてすみ、また効果が高いサプリメントはまだほとんど存在しないのが現状である。【０００６】
また、ヒトの情報の8割は眼から得られるといわれ、視覚の維持は重要課題である。日本では超高齢化社会を目前とし、眼科疾患の増加が見込まれている。現在日常生活に困難を呈する視覚障害者は150万人ほど見込まれ、社会ケアに要するコストに8兆円を要すると推定されている。【０００７】
加齢と共に視神経は神経線維が減少し、網膜神経線維層が薄くなり、神経節細胞も脱落し、視細胞数の減少をきたす。これらの一度損なわれた視神経機能は回復することがなく、治療も困難である。【０００８】
失明原因は緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮と報告され、全てが加齢と共に悪化する疾患群となっている。さらに白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症なども加齢に関連する失明疾患である。【０００９】
緑内障は、日本緑内障学会の緑内障診療ガイドによると、視神経と視野に特徴的変化を有し、通常眼圧を十分に下降させることにより視神経障害を改善あるいは抑制しうる眼の機能的構造的異常を特徴とする疾患である。急性あるいは慢性に進行する緑内障あるいは視神経症は、視神経の加齢性変化が関与すると示唆されている。日本の中途失明原因の第一位は緑内障であるが、まだ全病態の解明はなされていない。緑内障の罹患率は加齢に伴い上昇し、80歳以上では男性12.7%,女性8.9%である。唯一エビデンスのある治療法は眼圧下降薬であり、すでに用いられている緑内障治療薬としては、プロスタグランジン製剤、β受容体遮断薬、あるいは炭酸脱水素酵素阻害薬などの主要薬並びにその合剤が挙げられる。さらに最近ではＲｏｃｋ阻害剤による新規緑内障治療薬の開発も報告されている。【００１０】
角膜内皮は眼の透明性に寄与する重要な細胞であるが、ヒトでは生後増殖能がない。また、加齢、白内障手術などの侵襲あるいはFuchs角膜内皮変性症により角膜内皮細胞数が著明に減少する。細胞数が一定の閾値をこえて減少すると角膜が白濁し、水疱性角膜症を呈する。現在角膜内皮細胞減少に象徴される加齢現象に奏功する予防薬または治療薬はなく、角膜移植が唯一の治療となっている。【００１１】
近年、長寿遺伝子Sirtuinの活性化にニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD）が基質として必要であることが報告され（非特許文献１）、老化と代謝を結ぶ接点として重要性が脚光を浴びている。NADは加齢で減少する為、減少する臓器内のNADを増強させることで抗老化あるいは糖尿病やAlzheimer病などの疾患への制御に挑む試みが報告されている。特許文献１には体重増加やインスリン感受性等の種々の加齢性疾患とNADおよびNAD関連代謝産物との関連性が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】WO2014/146044
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Nature. 2000 Feb 17;403(6771):795-800
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
しかしながら、眼科領域における健康補助食品、保健機能食品または予防薬としてのNADおよびNAD関連代謝産物の科学的実証を伴う報告はなかった。例えば特許文献１はマウスにおける涙液量増加を示したに過ぎない。【００１５】
本発明の目的は、NAD関連代謝産物の眼の健康維持もしくは健康増進、または眼の老化予防のための利用にある。【００１６】
本発明の別の目的は、NAD関連代謝産物を含有する各種眼疾患の予防もしくは治療薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
NAD関連代謝産物の眼の健康維持・増進、または眼の老化予防のための利用として、食品（飲料、特定保健用食品、特定健康食品、サプリメントを含む）、一般用医薬品(大衆薬、OTC)、医薬部外品、化粧品などを挙げることができる。【００１８】
また高齢化社会に対応する、NAD関連代謝産物を含有する眼疾患の予防または治療薬、健康補助食品、保健機能食品、サプリメントが必須である。【００１９】
本発明者らは、眼内のうち前房水におけるNAD関連代謝産物のプロファイルに着目して、解析した結果、前房水に血漿中よりも高濃度のNAD関連代謝産物を検出した。さらにそれらのNAD関連代謝産物の眼内における生理学的重要性および眼疾患の治療標的としての有用性を見出し、本発明を完成するに至った。なお前房水は、角膜に加え毛様体、シュレム管、網膜、水晶体に接しており、NAD関連代謝産物はこれらの組織の疾患、たとえば老眼、白内障などにも効果が想定される。【００２０】
本発明は、以下の項に記載の主題を包含する。【００２１】
項１．NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のための使用（ただし医療行為を除く）。【００２２】
項２．NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを添加した食品。【００２３】
項３．飲料、サプリメント、健康補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、または機能性表示食品である項２に記載の食品。【００２４】
項４．錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状(ドリンク)、トローチ、またはペーストの形態である項３に記載の食品。【００２５】
項５．NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mgである項２〜４のいずれかに記載の食品。【００２６】
項６．NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のために用いられる食品組成物。【００２７】
項７．眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のために用いられる食品を調製するためのNAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの使用。【００２８】
項８．NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する外用剤。【００２９】
項９．医薬部外品または化粧品である項８に記載の外用剤。【００３０】
項１０．軟膏、クリーム、ミルク、ジェル、ローション、エッセンス、フェイスパック、ファンデーション、口紅、プラスター剤、パップ剤、粉末、石鹸、シャンプー、洗浄剤、または浴用剤の形態である項８または９に記載の外用剤。【００３１】
項１１．NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、老眼、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物。【００３２】
項１２．NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、角膜疾患、網膜疾患、および視神経疾患から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物。【００３３】
項１３．NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mgである項１１または１２のいずれかに記載の医薬組成物。【００３４】
項１４．散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、カプセル剤、チュアブル剤、またはシロップ剤である項１１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。【００３５】
項１５．点眼薬、洗眼薬、眼軟膏、コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズ保存液、コンタクトレンズ消毒液、コンタクトレンズ洗浄液、コンタクトレンズ用多目的液剤、角膜保存液、または手術時の灌流液の形態である１１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の効果】
【００３６】
NAD関連代謝産物は角膜内皮、網膜、および視神経における症状または状態を改善することができるため、NAD関連代謝産物を含有する本発明の医薬組成物および食品組成物は、種々の眼疾患の予防または治療、若しくは眼の保護を目的として使用することができる。また、NAD関連代謝産物は生体内に存在する成分であるため、安全性の点でも優れている。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD）合成経路およびNAD関連代謝産物を示す略図。
【図２】ウサギ水疱性角膜症モデルにおける角膜厚みに対するNMN投与の効果を示すグラフ。（Ａ）は対照、（Ｂ）はNMN投与群。縦軸は角膜厚み、横軸は飼育日数を示す。各値は平均値±標準偏差を示す。各群Ｎ＝１。
【図３】老年マウスおよび若年マウスの前房水におけるNADの測定量を示すグラフ。図中縦軸はNAD濃度、横軸はマウスの週齢または月齢を示す。各値は平均値±標準偏差を示す。各群Ｎ＝３。
【図４】ラット急性眼虚血モデルにおける細胞生存率を示すグラフ。Sham:  疑似手術眼の網膜組織、培地（１）：処置眼の網膜組織をNMNを含まない培地で培養したもの、培地＋NMN（１）:前日および当日にNMNを皮下投与したラットの処置眼の網膜組織をNMNを含まない培地で培養したもの、培地（２）：処置眼の網膜組織をNMNを含む培地で培養したもの、培地＋NMN（２）: 前日および当日にNMNを皮下投与したラットの処置眼の網膜組織をNMNを含む培地で培養したもの。
【図５】ヒト角膜内皮細胞株における細胞内NADに対するNAMPT特異的阻害剤およびNMNの効果を示すグラフ。
【図６】不死化ヒト角膜内皮細胞株におけるNAD関連代謝産物の酸化ストレス防御効果を示すグラフ。縦軸はミトコンドリア膜電位を示す。
【図７】ミトコンドリアストレスアッセイにおける各段階とオリゴマイシン、カルボニルシアニド-p-トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン、添加物質、およびロテノンとアンチマイシンAの添加について説明する模式図。Basal Respiration：基礎呼吸、ATP Production：ATP産生、Proton Leak：プロトンリーク、Maximal Respiration：最大呼吸、Spare Capacity：予備呼吸能、Non-mitochondrial Respitration：非ミトコンドリア呼吸。
【図８】（Ａ）ミトコンドリアストレスアッセイにおける経時的な酸素消費速度を示すグラフ。（１）対照（ＮＭＮ添加なし）、（２）500μＭ  ＮＭＮを添加。（Ｂ）基礎呼吸および予備呼吸能における酸素消費速度を示すグラフ。各フェーズにおいて、左側が対照、右側が500μＭ  ＮＭＮの添加である。（Ｃ）プロトンリークおよびＡＴＰ産生における酸素消費速度を示すグラフ。各フェーズにおいて、左側が対照、右側が500μＭ  ＮＭＮの添加である。
【図９】NMNを添加しない角膜保存液に保存した角膜細胞（Ctrl）を含む懸濁液と、NMNを添加した角膜保存液に保存した角膜細胞（NMN）を含む懸濁液の450nmにおける吸光度。Welch Two Sample t-test。
【図１０】NMNを添加しない眼球保存液に保存した角膜細胞（Ctrl）を含む懸濁液と、NMNを添加した眼球保存液に保存した角膜細胞（NMN）を含む懸濁液の450nmにおける吸光度。Welch Two Sample t-test。
【図１１】NMN不添加群（NMN-）とNMN添加群（NMN＋）における角膜厚(μｍ)の比較、Pre:術前、Post：術後。各群Ｎ＝３。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本発明は、眼科領域におけるNAD関連代謝産物の新規用途である。NAD関連代謝産物は、眼の健康維持もしくは健康増進、または眼の老化予防のために利用することができる。また、NAD関連代謝産物は、特定の眼科疾患を予防または治療するための医薬用途にも使用することができる。
【００３９】
本発明の食品、外用剤、および医薬組成物を適用する対象にはヒト若しくは非ヒト動物である哺乳動物が含まれる。非ヒト動物には、ラット、マウス、モルモット、サル、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ウシ等が含まれる。好ましくは、対象はヒトである。
【００４０】
本明細書において「食品」とは、経口摂取し得るものを広く包含する概念であり、飲料も含まれる。食品には、健康食品を含む一般食品の他、経腸栄養食品、特別用途食品、特定保健用食品を含む保健機能食品、栄養機能食品、機能性表示食品等が包含される。
【００４１】
本明細書において「食品組成物」とは、食品として供される組成物を指す。食品が組成物である場合、「食品」と「食品組成物」は互換的に使用することができる。
【００４２】
本明細書において「NAD関連代謝産物」は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NAD）合成経路におけるニコチンアミドを構成要素として備えた一連の化合物を指し、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）が含まれる。
【００４３】
本明細書において「薬学的に許容される塩」は、薬学的に許容される非毒性の塩を指し、塩には無機酸の塩および有機酸の塩が含まれる。
【００４４】
本明細書において「プロドラッグ」は哺乳動物である対象に投与した場合に生体内における生理条件下で目的の化合物に変換する化合物をいう。NAD関連代謝産物のプロドラッグの例には、NAD関連代謝産物のアルコールおよびアミン基の酢酸エステル、ギ酸エステル、安息香酸エステルの誘導体が包含される。
【００４５】
本発明は、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグ（以下、「NAD関連代謝産物等と称する」）の眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のための使用（ただし医療行為を除く）に関する。
【００４６】
眼の健康維持とは、眼の状態を正常な状態に維持することであり、前房水、毛様体、シュレム管、網膜、水晶体、視神経、角膜（特に角膜上皮）、網膜、視覚機能、またはこれらの組み合わせを維持することが含まれる。
【００４７】
一実施形態では、NAD関連代謝産物等を、対象における眼の保護のために使用することができる。眼の保護とは、例えば、対象における視神経、角膜（特に角膜上皮）、網膜、またはこれらの組み合わせを損傷等から保護することを指す。別の実施形態では、NAD関連代謝産物等を、眼のストレスの軽減のために使用することができる。ストレスとしては化学物質、紫外線等、目に外力として作用するものが挙げられる。
【００４８】
本発明によれば、NAD関連代謝産物等を、眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防の目的で、一般の食品のみならず、健康補助食品、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、および機能性表示食品）、およびサプリメント等に添加することができる。なお、食品には飲料が含まれる。食品の形でNAD関連代謝産物等を摂取すれば、眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防の効果を手軽に享受し得る。
【００４９】
本発明の食品におけるNAD関連代謝産物は、好ましくはニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される。
【００５０】
一実施形態では、食品は保健機能食品である。別の実施形態では、食品はサプリメントである。NAD関連代謝産物等を有効成分として含有する本発明の食品には、該食品の包装、容器または説明書に有効成分の種類、眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防に関する効能効果、および／または摂取方法を表示することができる。
【００５１】
食品においては、NAD関連代謝産物等の粉末あるいは水溶液、油分散液、懸濁液、乳化液などを添加して製造することが一般的である。
【００５２】
本発明のNAD関連代謝産物等を含有する食品または食品組成物（以下、「本発明の食品」と総称する）は、いかなる形態であってもよく、例えば、ジュース、牛乳、コーヒー飲料、茶飲料等の飲料、スープ等の液状食品、ヨーグルト等のペースト状食品、ゼリー、グミ等の半固形状食品、クッキー、ガム等の固形状食品、ド レッシング、マヨネーズ等の油脂含有食品等の形態でもよい。
【００５３】
また、本発明の食品は、錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状(ドリンク)、トローチ、またはペーストの形態であることができるが、これらに限定されない。
【００５４】
本発明の食品中のNAD関連代謝産物の成人１人（体重６０ｋｇ）当たりの１日摂取量は特に限定されないが、一実施形態では0.1pg 〜2000mg、1pg 〜2000mg、10pg 〜2000mg、100pg(0.1ng) 〜2000mg、1ng 〜2000mg、10ng 〜2000mg、または0.1mg〜2000mgである。別の実施形態では、下限値が0.1pg 以上、1pg以上、10pg以上、100pg（0.1ng）以上、1ng 以上、10ng以上、0.1mg以上、0.5mg以上、1mg以上、5mg以上、10mg以上、20mg以上、30mg以上、40mg以上、50mg以上、100mg以上、150mg以上、200mg以上、250mg以上、300mg以上、400mg以上、500mg以上、600mg以上、700mg以上、800mg以上、900mg以上、または1000mg以上である。別の実施形態では、上限値が5000mg以下、4500mg以下、4000mg以下、3500mg以下、3000mg以下、2500mg以下、または2000mg以下である。さらに別の実施形態では、NAD関連代謝産物の１日摂取量は、上記の0.1pg 以上、1pg以上、10pg以上、100pg（0.1ng）以上、1ng 以上、10ng以上、0.1mg以上、0.5mg以上、1mg以上、5mg以上、10mg以上、20mg以上、30mg以上、40mg以上、50mg以上、100mg以上、150mg以上、200mg以上、250mg以上、300mg以上、400mg以上、500mg以上、600mg以上、700mg以上、800mg以上、900mg以上、または1000mg以上までの下限値のいずれかから、上記の5000mg以下、4500mg以下、4000mg以下、3500mg以下、3000mg以下、2500mg以下、または2000mg以下までの上限値のいずれかまでの範囲である。
【００５５】
本発明の食品は、食品として許容される担体と共に、サプリメント等として一般的な方法により製剤化することができる。担体の例としては、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等の液体担体、グルコース、スクロース、デキストリン、シクロデキストリン、アラビアガム等の固体担体を挙げることができる。
【００５６】
さらに、本発明の食品には、NAD関連代謝産物の効果を損なわない、すなわち、NAD関連代謝産物等との配合により好ましくない相互作用を生じない限り、必要に応じて、糖類；タンパク質；脂肪；ミネラル；ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＢ、ビタミンＡ等のビタミン類；レスベラトロールなどの別経路のNAD活性化剤；抗NADase抗体等のNAD分解酵素の阻害剤；香料；色素などの他の添加物を配合することができる。これらの添加物はいずれも食品に一般的に用いられるものを使用することができる。
【００５７】
本発明の食品の投与形態は、対象、眼の状態、その他の条件によって適宜選択すればよい。例えば、上記の摂取量を、１日１回〜数回（例えば３回程度）に分けて経口的に摂取するとよい。
【００５８】
また、本発明によれば、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを、眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防の目的で、一般用医薬品（大衆薬、OTC）、医薬部外品、または化粧品；特には外用剤である一般用医薬品、医薬部外品、または化粧品に添加することもできる。
【００５９】
本発明の外用剤におけるNAD関連代謝産物は、好ましくはニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される。
【００６０】
利用する際の製法や形態は限定されず、公知の方法により製品化することができるが、たとえば以下を挙げることができる。
【００６１】
一般用医薬品としては、錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状(ドリンク)、トローチ、舌下錠、ペーストなどの形態であることができるが、これらに限定されない。
【００６２】
医薬部外品および化粧品等の外用剤とする場合は、軟膏；クリーム、ミルク、ジェル、ローション、エッセンス、フェイスパック、洗浄剤等のスキンケア用品；ファンデーション；口紅；プラスター剤；パップ剤；石鹸；シャンプー；浴用剤の形態であることができるが、これらに限定されない。
【００６３】
本発明の外用剤中のNAD関連代謝産物の成人１人当たりの１日摂取量は特に限定されないが、一実施形態では0.1pg 〜2000mg、1pg 〜2000mg、10pg 〜2000mg、100pg(0.1ng) 〜2000mg、1ng 〜2000mg、10ng 〜2000mg、または0.1mg〜2000mgである。別の実施形態では、下限値が0.1pg 以上、1pg以上、10pg以上、100pg（0.1ng）以上、1ng 以上、10ng以上、0.1mg以上、0.5mg以上、1mg以上、5mg以上、10mg以上、20mg以上、30mg以上、40mg以上、50mg以上、100mg以上、150mg以上、200mg以上、250mg以上、300mg以上、400mg以上、500mg以上、600mg以上、700mg以上、800mg以上、900mg以上、または1000mg以上である。別の実施形態では、上限値が5000mg以下、4500mg以下、4000mg以下、3500mg以下、3000mg以下、2500mg以下、または2000mg以下である。さらに別の実施形態では、NAD関連代謝産物の１日摂取量は、上記の0.1pg 以上、1pg以上、10pg以上、100pg（0.1ng）以上、1ng 以上、10ng以上、0.1mg以上、0.5mg以上、1mg以上、5mg以上、10mg以上、20mg以上、30mg以上、40mg以上、50mg以上、100mg以上、150mg以上、200mg以上、250mg以上、300mg以上、400mg以上、500mg以上、600mg以上、700mg以上、800mg以上、900mg以上、または1000mg以上までの下限値のいずれかから、上記の5000mg以下、4500mg以下、4000mg以下、3500mg以下、3000mg以下、2500mg以下、または2000mg以下までの上限値のいずれかまでの範囲である。
【００６４】
本発明の外用剤は、薬理学的に許容される担体と共に、一般的な方法により目的に応じて製剤化することができる。担体は希釈剤または賦形剤とも称される。担体の例としては、 水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等の液体担体、グルコース、スクロース、デキストリン、シクロデキストリン、アラビアガム等の固体担体を挙げることができる。
【００６５】
本発明の外用剤には、NAD関連代謝産物の効果を損なわない、すなわち、NAD関連代謝産物との配合により好ましくない相互作用を生じない限り、必要に応じて、ミネラル；ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＢ、ビタミンＡ等のビタミン類；レスベラトロールなどの別経路のNAD活性化剤；抗NADase抗体等のNAD分解酵素の阻害剤；栄養成分；香料；色素などの他の添加物を配合することができる。これらの添加物はいずれも外用剤に一般的に用いられるものを使用することができる。
【００６６】
本発明によれば、眼疾患を予防または治療するための、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを有効成分と含有する医薬組成物を提供することができる。
【００６７】
本発明の医薬組成物におけるNAD関連代謝産物は、好ましくはニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される。
【００６８】
本発明の医薬組成物中のNAD関連代謝産物の成人１人（体重６０ｋｇ）当たりの１日当たりの投与量は特に限定されないが、一実施形態では、0.1pg 〜2000mg、1pg 〜2000mg、10pg 〜2000mg、100pg(0.1ng) 〜2000mg、1ng 〜2000mg、10ng 〜2000mg、または0.1mg〜2000mgである。別の実施形態では、下限値が0.1pg 以上、1pg以上、10pg以上、100pg（0.1ng）以上、1ng 以上、10ng以上、0.1mg以上、0.5mg以上、1mg以上、5mg以上、10mg以上、20mg以上、30mg以上、40mg以上、50mg以上、100mg以上、150mg以上、200mg以上、250mg以上、300mg以上、400mg以上、500mg以上、600mg以上、700mg以上、800mg以上、900mg以上、または1000mg以上である。別の実施形態では、上限値が5000mg以下、4500mg以下、4000mg以下、3500mg以下、3000mg以下、2500mg以下、または2000mg以下である。さらに別の実施形態では、NAD関連代謝産物の１日摂取量は、上記の0.1pg 以上、1pg以上、10pg以上、100pg（0.1ng）以上、1ng 以上、10ng以上、0.1mg以上、0.5mg以上、1mg以上、5mg以上、10mg以上、20mg以上、30mg以上、40mg以上、50mg以上、100mg以上、150mg以上、200mg以上、250mg以上、300mg以上、400mg以上、500mg以上、600mg以上、700mg以上、800mg以上、900mg以上、または1000mg以上までの下限値のいずれかから、上記の5000mg以下、4500mg以下、4000mg以下、3500mg以下、3000mg以下、2500mg以下、または2000mg以下までの上限値のいずれかまでの範囲である。
【００６９】
本発明の医薬組成物は、薬理学的に許容される担体と共に、一般的な方法により目的に応じて製剤化することができる。担体は希釈剤または賦形剤とも称される。担体の例としては、 水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等の液体担体、グルコース、スクロース、デキストリン、シクロデキストリン、アラビアガム等の固体担体を挙げることができる。
【００７０】
本発明の医薬組成物はさらに、製剤化において一般的に使用される乳化剤、等張化剤、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤等を適宜配合することもできる。
【００７１】
本発明の医薬組成物には、NAD関連代謝産物の効果を損なわない、すなわち、NAD関連代謝産物との配合により好ましくない相互作用を生じない限り、必要に応じて、ミネラル；ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＢ、ビタミンＡ等のビタミン類；レスベラトロールなどの別経路のNAD活性化剤；抗NADase抗体等のNAD分解酵素の阻害剤；栄養成分；香料；色素などの他の添加物を配合することができる。これらの添加物はいずれも医薬品に一般的に用いられるものを使用することができる。
【００７２】
本発明の医薬組成物の形態は特に限定されず、例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状などの固体状；溶液状、乳液状、分散液状等の液状；またはペースト状等の半固体状等の、任意の形態に調製することができる。
【００７３】
本発明の医薬組成物の具体的な剤形は、投与方法および投与経路に応じて散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤を含む）、チュアブル剤、シロップ剤などにすることができる。眼科用局所適用製剤とする場合は、点眼薬、洗眼薬、眼軟膏、コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズ保存液、コンタクトレンズ消毒液、コンタクトレンズ洗浄液、コンタクトレンズ用多目的液剤等の形にすることができる。また、本発明の医薬組成物は角膜保存液および手術用の灌流液に使用してもよい。
【００７４】
本発明の医薬組成物の投与形態は、対象、病態およびその進行状況、その他の条件によって適宜選択すればよい。例えば、上記の１日当たりの投与量になるように、１回〜数回（例えば３回程度）に分けて投与するとよい。
【００７５】
本発明の医薬組成物の投与経路は特に限定されず、例えば経口投与、点眼、結膜注射、テノン嚢注射、前房内注射、硝子体注射、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、直腸投与、皮下注射、経皮投与等により投与することができる。
【００７６】
例えば、本発明の医薬組成物は、老視（老眼とも言う）、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のために使用することができる。これらの疾患は加齢と共に悪化する加齢性眼疾患でもある。
【００７７】
また、本発明の医薬組成物は、角膜疾患、網膜疾患、および視神経疾患から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のために使用することができる。
【００７８】
角膜疾患には角膜内皮変性症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症等が含まれる。網膜疾患には糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、網膜動・静脈閉塞症等が含まれる。視神経疾患には緑内障、視神経症、Leber病等が含まれる。
【００７９】
なお本発明の医薬組成物が適用される疾患は、眼疾患がドライアイである場合は除かれる。
【００８０】
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、対象における前房水中のNAD関連代謝産物の量を増大させる。特には、本発明の医薬組成物は、対象における前房水中のNADの量を増大させる。理論に束縛されるわけではないが、前房水中のNADの量の増大が細胞または組織、特には前房水に接触する角膜、毛様体、シュレム管、網膜、水晶体の修復に作用し、眼疾患の予防または治療に寄与すると考えられる。
【００８１】
本発明は、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを食品に配合する工程を含むことを特徴とする、眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のための食品または食品組成物の製造方法を包含する。
【００８２】
本発明はまた、眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防の作用を有する食品または食品組成物の製造における、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの使用も包含する。
【００８３】
NAD関連代謝産物の詳細、食品への配合量、食品または食品組成物の組成については、本発明の食品に関して上述した通りである。
【００８４】
本発明はまた、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの有効量を対象に投与することを含む、眼疾患の予防および／または治療方法を包含する。
【００８５】
本発明はまた、対象における眼疾患の予防および／または治療のためのNAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの使用を包含する。
【００８６】
NAD関連代謝産物の詳細、対象への投与量については、本発明の医薬組成物に関して上述した通りである。
【００８７】
本発明はまた、以下を包含する。
［１］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のための使用（ただし医療行為を除く）。
［２］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを添加した食品。
［３］飲料、サプリメント、健康補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、または機能性表示食品である［２］に記載の食品。
［４］錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状(ドリンク)、トローチ、またはペーストの形態である［２］または［３］に記載の食品。
［５］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mg、好ましくは0.1ng〜2000mgである［２］〜［４］のいずれかに記載の食品。
［６］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1mg〜2000mgである［２］〜［４］のいずれかに記載の食品。
［７］前記NAD関連代謝産物が、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される少なくとも１種である［１］〜［６］のいずれかに記載の食品。
［８］前房水中のNAD関連代謝産物の量を増大させるか、または網膜の細胞死を抑制させる［１］〜［７］のいずれかに記載の食品。
［９］眼のストレスの軽減のための［１］〜［８］のいずれかに記載の食品。
［１０］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のために用いられる食品組成物。
［１１］飲料、サプリメント、健康補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、または機能性表示食品である［１０］に記載の食品組成物。
［１２］錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状(ドリンク)、トローチ、またはペーストの形態である［１０］または［１１］に記載の食品組成物。
［１３］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mg、好ましくは0.1ng〜2000mgである［１０］〜［１２］のいずれかに記載の食品組成物。
［１４］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1mg〜2000mgである［１０］〜［１２］のいずれかに記載の食品組成物。
［１５］前記NAD関連代謝産物が、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される少なくとも１種である［１０］〜［１４］のいずれかに記載の食品組成物。
［１６］前房水中のNAD関連代謝産物の量を増大させるか、または網膜の細胞死を抑制させる［１０］〜［１５］のいずれかに記載の食品組成物。
［１７］眼のストレスの軽減のための［１０］〜［１６］のいずれかに記載の食品組成物。
［１８］眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防のために用いられる食品を調製するためのNAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの使用。
［１９］飲料、サプリメント、健康補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、または機能性表示食品である［１８］に記載の使用。
［２０］錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状(ドリンク)、トローチ、またはペーストの形態である［１８］または［１９］に記載の使用。
［２１］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mg、好ましくは0.1ng 〜2000mgである［１８］〜［２０］のいずれかに記載の使用。
［２２］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1mg 〜2000mgである［１８］〜［２０］のいずれかに記載の使用。
［２３］前記NAD関連代謝産物が、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される少なくとも１種である［１］、［１８］〜［２２］のいずれかに記載の使用。
［２４］眼のストレスの軽減のための［１］、［１８］〜［２３］のいずれかに記載の使用。
［２５］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する外用剤。
［２６］医薬部外品または化粧品である［２５］に記載の外用剤。
［２７］軟膏、クリーム、ミルク、ジェル、ローション、エッセンス、フェイスパック、ファンデーション、口紅、プラスター剤、パップ剤、粉末、石鹸、シャンプー、洗浄剤、または浴用剤の形態である［２５］または［２６］に記載の外用剤。
［２８］前房水中のNAD関連代謝産物の量を増大させるか、または網膜の細胞死を抑制させる［２５］〜［２７］のいずれかに記載の外用剤。
［２９］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、眼疾患の予防または治療のための医薬組成物（ただし眼疾患はドライアイを除く）。
［３０］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、老眼、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための［２９］に記載の医薬組成物。
［３１］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、老眼、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物。
［３２］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する、角膜疾患、網膜疾患、および視神経疾患から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための［２７］に記載の医薬組成物。
［３３］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する、角膜疾患、網膜疾患、および視神経疾患から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物。
［３４］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mg、好ましくは0.1ng 〜2000mgである［２９］〜［３３］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３５］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1mg〜2000mgである［２９］〜［３３］のいずれかにに記載の医薬組成物。
［３６］前記NAD関連代謝産物が、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される少なくとも１種である［２９］〜［３５］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３７］散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、カプセル剤、チュアブル剤、またはシロップ剤である［２９］〜［３６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３８］点眼薬、洗眼薬、眼軟膏、コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズ保存液、コンタクトレンズ消毒液、コンタクトレンズ洗浄液、コンタクトレンズ用多目的液剤、角膜保存液、または手術時の灌流液の形態である［２９］〜［３７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３９］前房水中のNAD関連代謝産物の量を増大させるか、または網膜の細胞死を抑制させる［２９］〜［３８］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４０］眼のストレスの軽減のための［２９］〜［３８］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４１］眼細胞又は眼組織の生存率の向上のための［２９］〜［３８］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４２］NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの有効量を対象に投与することを含む、眼疾患の予防および／または治療方法。
［４３］前記眼疾患が、老眼、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される［４２］に記載の方法。
［４４］前記眼疾患が、角膜疾患、網膜疾患、および視神経疾患から成る群より選択される［４２］に記載の方法。
［４５］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mg、好ましくは0.1ng 〜2000mgである［４２］〜［４４］のいずれかに記載の方法。
［４６］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1mg〜2000mgである［４２］〜［４４］のいずれかに記載の方法。
［４７］前記NAD関連代謝産物が、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される少なくとも１種である［４２］〜［４４］のいずれかに記載の方法。
［４８］対象における眼疾患の予防および／または治療のためのNAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの使用。
［４９］前記眼疾患が、老眼、緑内障、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、白内障、網膜動・静脈閉塞症、Fuchs角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびLeber病から成る群より選択される［４８］に記載の使用。
［５０］前記眼疾患が、角膜疾患、網膜疾患、および視神経疾患から成る群より選択される［４８］に記載の使用。
［５１］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1pg〜2000mg、好ましくは0.1ng 〜2000mgである［４８］に記載の使用。
［５２］NAD関連代謝産物の１日摂取量が0.1mg〜2000mgである［４８］に記載の使用。
［５３］前記NAD関連代謝産物が、ニコチンアミドモノヌクレオチド（NMN）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)、ニコチンアミドリボシド（NR）、およびニコチンアミド（NAM）から成る群より選択される少なくとも１種である［４８］〜［５２］のいずれかに記載の使用。
【００８８】
本明細書中に引用されているすべての特許出願および文献の開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【００８９】
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【実施例】
【００９０】
実施例１．ウサギ水疱性角膜症モデルにおける角膜厚みに対するNAD関連代謝産物の効果
ウサギ水疱性角膜症モデル（New Zealand White rabbit:12週齢）を、各3匹ずつ2群（コントロールと水疱性角膜症モデル）に分け、実験開始日（最初の角膜厚み測定）からNMNを点眼投与し（500uM, 生理食塩水に溶解）、NMN投与の当日および7日後に角膜厚み測定を測定した。NMNを投与しない生理食塩水のみの群を対照群とした。【００９１】
その結果、図２に示すようにNMN投与群では角膜厚みの増大が抑制された。【００９２】
実施例２．前房水におけるNAD関連代謝産物の解析
C57BL6J /Jclマウス（若年個体12週齢，高齢個体18月齢）を用いた。混合麻酔（ソムノペンチル・キシララジンにて全身麻酔後、29Gシリンジを用いて速やかに前房水を採取し、HPLCを用いて前房水中のNAD関連代謝産物のうちNADを測定した。【００９３】
結果を図３に示す。前房水中のNAD+の濃度は、若い個体と高齢個体を比較すると高齢個体では若年個体より60%程度前房水中のNAD濃度が減少する傾向を有することが分かった。【００９４】
実施例３．ラット眼虚血および視神経症モデルにおけるNAD関連代謝産物の有効性
ウィスターラット(7週齢、雄)を用いた。処置の前日(約16時間前)にNMN(100mg/kg, 生理食塩水に溶解)を皮下投与し、さらに処置の30分前に再度同様の濃度でNMNを投与した。ラットをペントバルビタール(64.8 mg/kg)で麻酔後、ベノキシール（参天製薬）にて点眼麻酔を行った。その後、背側の結膜を切開し眼窩内の視神経および網膜中心動静脈を切断した。擬似手術は結膜切開のみとした。切断4時間後、ペントバルビタール過麻酔下で頸動脈を切開後、放血し屠殺した。その後網膜を単離し、100μLのNeurobasal培地またはニコチンアミド不含有培地(これらいずれかの培地にさらにNMN添加の場合は終濃度0.5mMとなるよう添加した)、を入れた96穴プレートのウェルに浸漬後、WST-8(同仁化学）を10μL添加した。37℃、5%CO2下にて1時間インキュベーション後、培養上清の吸光度(450nm)をマイクロプレートリーダーにて測定し、擬似手術眼に対する処置眼の割合を算出した。【００９５】
結果を図４に示す。疾患群では視神経および網膜動静脈の切断後４時間で著明な細胞死が誘導される。切断し、網膜を単離した後に生細胞率をコントロール群と比較すると生細胞率は20%である（培地（１））。しかし、前日および当日の二回のNMNの皮下投与を行うことで生細胞率が著明に上昇し、およそ2倍の41%になった（培地＋NMN（１））。同効果は組織単離後のインキュベートしたのちにNMNを添加の有無を検証することでも再現ができており（培地（２），培地＋NMN（２））、NMNの投与が組織内のNAD代謝関連産物の濃度の上昇に寄与し、細胞死を抑制したものと推察される。【００９６】
実施例４．ヒト角膜内皮細胞株を用いた検討【００９７】
ヒト角膜内皮細胞株（B4G12, DSMZ, ドイツ）を用いた検討において、ニコチナミド不含有培地をベースに一定量のNAD合成律速酵素NAMPTの特異的阻害剤およびNMNを添加し、48hr後に細胞を回収し、細胞内のNAD量をHPLCにより解析した。【００９８】
その結果、図５に示すように、NAMPT特異的阻害剤の添加で細胞内NADが著明に減少し、NMNの添加で劇的に細胞内のNAD濃度の上昇に寄与していた。すなわちNAMPT依存的な代謝経路の存在が見出された。【００９９】
実施例５．ミトコンドリア膜電位の計測 
不死化ヒト角膜内皮細胞株(B4G12，DSMZ, ドイツ）を96穴 プレー ト(Corning, NY,USA)に播種し、コンフルエントになるまで培養した。培地を様々なNMN濃度を添加した過酸化水素（Wako) 100uMを含むHESFM基礎培地に交換してさらに12時間培養した後、Cell Meter（登録商標） JC-10 ミトコンドリア膜電位アッセイキット（ＡＡＴ Bioquest,Inc) を用いてミトコンドリア膜電位を測定した。【０１００】
その結果、図６に示すように、NMNを添加していない過酸化水素ストレス群ではNMNも過酸化水素も含まない培地で培養した対照群に比べてミトコンドリア膜電位の低下を認めたが、NMNを添加していない過酸化水素ストレス群に比べて5uM以上のNMN添加群では有意にミトコンドリア膜電位を改善する効果を見出した。統計処理はone way ANOVA, Boferroniを用いた。 【０１０１】
実施例６．水晶体上皮細胞株の代謝解析
１．水晶体上皮細胞株の代謝解析
酸素は電子伝達系・酸化的リン酸化に使用されるため、酸素消費速度(OCR)指標を利用することにより、ミトコンドリア活性の解析を行うことができる。【０１０２】
２．方法
水晶体上皮細胞株は理化学研究所にて樹立された細胞株を使用した。ミトコンドリアの呼吸の測定をXF Cell Mito Stress Test Kit用いて製造業者推奨のプロトコールに従って細胞外Fux analyzer (XFe24; Seahorse Bioscience)で37℃にて行った。【０１０３】
ミトコンドリアストレスアッセイは、水晶体上皮細胞株を培養したグルコースを補給した培地における３つの基本記録のセットから始まり、その後、0.5 uM オリゴマイシン(ATP合成酵素阻害剤)、 1uM カルボニルシアニド-p-トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン (FCCP, ETC共役体)、及び1uM ロテノン(Rot, ETC阻害剤)を1uM アンチマイシンA (AA, ETC阻害剤)と共に追加した後で各々3つの記録を続けて行う合計12の酸素濃度測定から成る。【０１０４】
ミトコンドリアの呼吸を、細胞外培地における酸素濃度の変化を測定することにより定量し、酸素消費速度(OCR; pmole/分)として記し、ミトコンドリア機能を評価した。ミトコンドリアストレスアッセイの各段階と化合物の添加のタイミングについては図７を参照されたい。【０１０５】
３．結果
図８（Ａ）〜（Ｃ）に示されるように、NMN 500μMをミトコンドリアに対するストレス負荷前に添加した場合、添加なしと比較してミトコンドリア呼吸の活性が有意に上昇しATP産生の上昇にも寄与した。本検討により、NMNによるNAD代謝活性化が水晶体上皮細胞のミコトンドリアの活性を上昇、ＡＴＰ産生を賦活させることがわかった。【０１０６】
実施例７．角膜細胞の生存率に対するNAD関連代謝産物の効果
本実験では、NAD関連代謝産物を添加することで角膜細胞の生存率が向上するか否かを検証した。霊長類マーモセット（5歳令、オス）から角膜を切除し、NMNを添加した角膜保存液（Optisol GS（登録商標）、ボシュロム製）で保存した。一か月間後、角膜細胞の生存率をCell Counting Kit-8キット(株式会社  同仁化学研究所)を用いて算出した。具体的には、角膜細胞を5000cells/wellとなるように調製した細胞懸濁液をマイクロプレートのウェルに100ulずつ播種した。次に、37℃のCO2インキュベータで前培養し、薬剤を各ウェルに加えた。37℃のCO2インキュベータでさらに一定時間培養し、CCK-8溶液を加えた。37℃のCO2インキュベータで呈色反応を行い、マイクロプレートリーダで細胞の450nmにおける吸光度を測定し、当該測定値から角膜細胞の生存率を算出した。【０１０７】
図９に示すように、NMNを添加した角膜保存液で保存した細胞の群（NMN）では、NMNを添加しない従来の角膜保存液で保存した細胞の群（Ctrl）と比較して細胞の生存率が26%も向上した。このことはNMNの角膜保存液の添加剤としての有用性を示唆している。 【０１０８】
実施例８：眼組織の生存率に対するNAD関連代謝産物の効果
本実験では、NAD関連代謝産物を添加することで眼組織の生存率が向上するか否かを検証した。【０１０９】
マウス（８歳令、オス 日本クレア）の眼球を採取し、NMNを添加した全眼球保存液（EP・II、科研製薬株式会社)で保存した。二週間後、細胞の生存率をCell Counting Kit-8キット(Dojindo)を用いて算出し、コントロールと比較した。Cell Counting Kit-8キット(株式会社  同仁化学研究所)用いた細胞の生存率の算出方法については実施例６に記載した通りである。【０１１０】
図１０に示すように、NMNを添加した眼球保存液で保存した細胞の群(NMN)では、NMNを添加しない従来の眼球保存液で保存した細胞の群(Ctrl)と比較して細胞の生存率が28%も向上した。このことはNMNの全眼球保存液の添加剤としての有用性を示唆している。【０１１１】
実施例９．眼手術灌流液としての有用性の検証 
家兎（New Zealand White rabbit:12週齢）の前房内を生理食塩水灌流液(NMN不添加群）またはNMNを添加した灌流液(NMN添加群）で術中に15分前房内灌流を行う白内障手術模擬モデルを用いた。手術翌日の角膜厚(μｍ)を術前の角膜厚に対して比較した。データの統計解析にはStudent's t検定およびpaired t検定を用い、p<0.05を有意差ありと判定した。【０１１２】
図１１に示すように、NMN不添加群では有意差はないものの角膜厚が増大する傾向にあったが、NMN添加群では角膜厚の減少が認められ角膜の透明性が保たれていた。 
【産業上の利用可能性】
【０１１３】
NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する本発明の食品または外用剤は、眼の健康維持、眼の健康増進、または眼の老化予防に有効に使用することができる。また、NAD関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを有効成分として含有する本発明の医薬組成物は、眼疾患を効果的に予防または治療することができる。 
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年1月29日(2018.1.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、およびニコチンアミド（ＮＡＭ）から成る群より選択される少なくとも１種であるＮＡＤ関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの前房水中のＮＡＤ関連代謝産物の量の増大、網膜の細胞死の抑制、角膜細胞の生存率の向上、角膜内皮細胞のミトコンドリアの膜電位の上昇、または水晶体上皮細胞のミトコンドリアの活性の上昇のための使用（ただし医療行為を除く）。
【請求項２】
ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、およびニコチンアミド（ＮＡＭ）から成る群より選択される少なくとも１種であるＮＡＤ関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを添加した、前房水中のＮＡＤ関連代謝産物の量の増大、網膜の細胞死の抑制、角膜細胞の生存率の向上、角膜内皮細胞のミトコンドリアの膜電位の上昇、または水晶体上皮細胞のミトコンドリアの活性の上昇のための食品。
【請求項３】
飲料、サプリメント、健康補助食品、特定保健用食品、栄養機能食品、または機能性表示食品である請求項２に記載の食品。
【請求項４】
錠剤、ハードカプセル、ソフトカプセル、シームレスカプセル、粉末、細粒、顆粒、チュアブル、グミ、ゼリー、液状（ドリンク）、トローチ、またはペーストの形態である請求項３に記載の食品。
【請求項５】
ＮＡＤ関連代謝産物の１日摂取量が０．１ｐｇ〜２０００ｍｇである請求項２〜４のいずれかに記載の食品。
【請求項６】
前記ＮＡＤ関連代謝産物がニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）である請求項２〜５のいずれかに記載の食品。
【請求項７】
前房水中のＮＡＤ関連代謝産物の量の増大、網膜の細胞死の抑制、角膜細胞の生存率の向上、角膜内皮細胞のミトコンドリアの膜電位の上昇、または水晶体上皮細胞のミトコンドリアの活性の上昇のために用いられる食品を調製するための、ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、およびニコチンアミド（ＮＡＭ）から成る群より選択される少なくとも１種であるＮＡＤ関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグの使用。
【請求項８】
ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、およびニコチンアミド（ＮＡＭ）から成る群より選択される少なくとも１種であるＮＡＤ関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグを含有する、前房水中のＮＡＤ関連代謝産物の量の増大、網膜の細胞死の抑制、角膜細胞の生存率の向上、角膜内皮細胞のミトコンドリアの膜電位の上昇、または水晶体上皮細胞のミトコンドリアの活性の上昇のための外用剤。
【請求項９】
医薬部外品または化粧品である請求項８に記載の外用剤。
【請求項１０】
軟膏、クリーム、ミルク、ジェル、ローション、エッセンス、フェイスパック、ファンデーション、口紅、プラスター剤、パップ剤、粉末、石鹸、シャンプー、洗浄剤、または浴用剤の形態である請求項８または９に記載の外用剤。
【請求項１１】
前記ＮＡＤ関連代謝産物がニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）である請求項８〜１０のいずれかに記載の外用剤。
【請求項１２】
ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、およびニコチンアミド（ＮＡＭ）から成る群より選択される少なくとも１種であるＮＡＤ関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、糖尿病網膜症、網膜色素変性症、強度近視に伴う網脈絡膜萎縮、角膜内皮変性症、水疱性角膜症、網膜動・静脈閉塞症、Ｆｕｃｈｓ角膜変性症、水疱性角膜症、視神経症、およびＬｅｂｅｒ病から成る群より選択される眼疾患の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項１３】
ニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）、およびニコチンアミド（ＮＡＭ）から成る群より選択される少なくとも１種であるＮＡＤ関連代謝産物、その薬学的に許容される塩、またはそのプロドラッグと、薬理学的に許容される担体とを含有する、前房水中のＮＡＤ関連代謝産物の量の増大、網膜の細胞死の抑制、角膜細胞の生存率の向上、角膜内皮細胞のミトコンドリアの膜電位の上昇、または水晶体上皮細胞のミトコンドリアの活性の上昇のための医薬組成物。
【請求項１４】
ＮＡＤ関連代謝産物の１日摂取量が０．１ｐｇ〜２０００ｍｇである請求項１２または１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、トローチ剤、カプセル剤、チュアブル剤、またはシロップ剤である請求項１２〜１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】
点眼薬、洗眼薬、眼軟膏、コンタクトレンズ装着液、コンタクトレンズ保存液、コンタクトレンズ消毒液、コンタクトレンズ洗浄液、コンタクトレンズ用多目的液剤、角膜保存液、または手術時の濯流液の形態である１２〜１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ＮＡＤ関連代謝産物がニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ）である請求項１２〜１６のいずれかに記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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