(57)【要約】  Ｘ線吸収性のある純金の微粒子を体内の任意の部位に、放射線治療の種類、および、治療標的部位に適した任意の量、非常に低い侵襲性で留置することが可能であり、かつ放射線治療装置で留置部位を長期間特定できる、放射線治療用の病変識別マーカーを提供する。リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子との混合物、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液との混合物を含み、リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子の体積平均径（ＭＶ）は、３〜１２μｍの範囲である、放射線治療用の病変識別マーカーである。
2018038223.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子との混合物、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液との混合物を含み、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子の体積平均径（ＭＶ）は、３〜１２μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項２】
請求項１に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物および前記練和液から得られる練和物は、練和開始約５分後の２０℃での粘度が１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項３】
請求項１または２に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、１６〜４０μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、２０〜３５μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子において、Ｄ１０は５μｍ以上であり、かつＤ９０は７０μｍ以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子において、Ｄ１０は１０μｍ以上であり、かつＤ９０は５５μｍ以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、１７〜４４μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、２０〜３８μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、３９μｍ未満であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、１０〜３０μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％未満（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約１．５％以下（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物において、粒子径が約３１μｍを超す粒子の存在比が約１５％以下（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記混合物が、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが可能であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物１ｇ当りの前記練和液の容量での配合比は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子と前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物との重量比が１：２以上で２：１以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子が、純度９９重量％以上の純金粒子であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子を５ｍｇ以上含むことを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、α型リン酸三カルシウム、リン酸四カルシウム、リン酸水素カルシウム（無水物または水和物）、およびβ型リン酸三カルシウムのうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記練和液は、コンドロイチン硫酸エステルナトリウム、コハク酸二ナトリウム無水物、亜硫酸水素ナトリウム、および水を含む練和液、ならびに、デキストラン硫酸エステルナトリウム  イオウ５、および水を含む練和液のうちの少なくとも１つであることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項２１】
純金粒子およびリン酸カルシウム系骨補強材含有物、または、純金粒子、リン酸カルシウム系骨補強材含有物および練和液を含み、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子の体積平均径（ＭＶ）は、３〜１２μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２２】
請求項２１に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物および前記練和液から得られる練和物は、練和開始約５分後の２０℃での粘度が１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓであることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２３】
請求項２１または２２に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、１６〜４０μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２４】
請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、２０〜３５μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２５】
請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子において、Ｄ１０は５μｍ以上であり、かつＤ９０は７０μｍ以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２６】
請求項２１〜２５のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子において、Ｄ１０は１０μｍ以上であり、かつＤ９０は５５μｍ以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２７】
請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、１７〜４４μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２８】
請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、２０〜３８μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２９】
請求項２１〜２８のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、３９μｍ未満であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３０】
請求項２１〜２９のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、１０〜３０μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３１】
請求項２１〜３０のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％未満（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３２】
請求項２１〜３１のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約１．５％以下（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３３】
請求項２１〜３２のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物において、粒子径が約３１μｍを超す粒子の存在比が約１５％以下（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３４】
請求項２１〜３３のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子および前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物から得られる練和物、または、前記純金粒子、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物および前記練和液から得られる練和物が、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが可能であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３５】
請求項２１〜３４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物１ｇ当りの前記練和液の容量での配合比は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３６】
請求項２１〜３５のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子と前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物との重量比が１：２以上で２：１以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３７】
請求項２１〜３６のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子が、純度９９重量％以上の純金粒子であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３８】
請求項２１〜３７のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子を５ｍｇ以上含むことを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３９】
請求項２１〜３８のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、α型リン酸三カルシウム、リン酸四カルシウム、リン酸水素カルシウム（無水物または水和物）、およびβ型リン酸三カルシウムのうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項４０】
請求項２１〜３９のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記練和液は、コンドロイチン硫酸エステルナトリウム、コハク酸二ナトリウム無水物、亜硫酸水素ナトリウム、および水を含む練和液、ならびに、デキストラン硫酸エステルナトリウム  イオウ５、および水を含む練和液のうちの少なくとも１つであることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細い穿刺針等を経由して体内の様々な部位に留置が可能な放射線治療用の病変識別マーカーであって、微細な純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物とを含有する、放射線治療用の病変識別マーカーおよび放射線治療用の病変識別マーカーキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
強度変調放射線治療（Intensity Modulated Radiation Therapy（ＩＭＲＴ））、画像誘導放射線治療（Image Guided Radiation Therapy（ＩＧＲＴ））、動体追跡放射線治療（Real-time Tumor-Tracking Radiation Therapy（ＲＴＲＴ））等の技術開発により、肺、前立腺、肝、副腎といった様々な臓器で高精度の放射線治療が可能になった（非特許文献１参照）。【０００３】
本治療では、Ｘ線透視で正確な標的病変の位置情報を得るため、臓器に病変識別のための金属マーカーを埋設する（非特許文献１，２参照）。金属マーカーはＸ線透視画像で腫瘍の位置を示す指標となり、正常組織を可能な限り避け、効率的に病変へ放射線を照射することが可能になる。これによって、治療効果を高めるとともに、周囲の正常組織への放射線照射量を低減し、有害事象の発生のリスクを軽減することができる。【０００４】
現在、本邦で承認されている放射線治療用マーカーとしては、ｉＧｏｌｄ（登録商標）（メディキット）、ＶＩＳＩＣＯＩＬ（セティメディカルラボ）、およびＧｏｌｄ  Ａｎｃｈｏｒ（安西メディカル）等がある。【０００５】
ｉＧｏｌｄは純金製の２ｍｍ径の球体で、Ｘ線透視での視認性が高く、あらゆる方向から同じ形状で認識可能で、正確な位置情報の把握に優れ、また気管内や消化管、膀胱粘膜への留置も可能である（非特許文献２，３，４，５および６参照）。しかし、経皮的留置の場合は２．５５ｍｍ径のシースイントロデューサー（筒）を穿刺する必要があり、部位や臓器によっては安全な穿刺経路の確保ができない場合がある。【０００６】
ＶＩＳＩＣＯＩＬは細径（０．３５〜１．１０ｍｍ）、長さ１０〜３０ｍｍのコイルで、１９Ｇ（１．１０ｍｍ）〜１７Ｇ（１．２５ｍｍ）の針で留置が可能であり、穿刺経路の選択は比較的容易である（非特許文献７参照）。しかし、細径のコイルであるため、方向によっては（特に正接方向）Ｘ線透視で認識できず、複数個のコイルを留置しなければ位置情報が得られない場合がある。複数回の穿刺は出血や臓器損傷などのリスクが高まるため、避けるべきである。【０００７】
Ｇｏｌｄ  Ａｎｃｈｏｒは、金の合金（鉄含有量：０．５重量％）からなる直径（０．２８ｍｍ）、長さ１０ｍｍまたは２０ｍｍの鋸歯状の切込み加工された金線で、２２Ｇ（外径０．７０ｍｍ）〜２５Ｇ（外径０．５０ｍｍ）の針で留置が可能であり、穿刺経路の選択は比較的容易である。しかし、細径であるため方向によっては（特に正接方向）Ｘ線透視で認識できず、複数個の留置をしなければ位置情報が得られない場合がある。折り畳んでボール状にして使用することも可能だが、留置中に臓器内で針の出し入れ操作が必要で、手技は煩雑である。また、出血や臓器損傷などのリスクも高まる。【０００８】
また、非特許文献８にも、金のナノ粒子を用いたＸ線マーカーの記載があるが、金粒子の量が少なく視認性が不十分であり、骨がある箇所での視認性も不十分である。【０００９】
一方、リン酸カルシウムと放射線不透過材料との混合物を用いた技術として、リン酸カルシウムに金粉を約２重量％混合した事例が開示されているが（特許文献１参照）、放射線治療用の病変識別マーカーとしての目的のためには視認性が不十分であり、使用に耐えない。金粒子等を高濃度含有させた場合、当該リン酸カルシウムと放射線不透過材料との混合物は高い粘度になり、細径針を通過できなくなる傾向があり、一方、粘度が低くなりすぎると比重の高い大きめの金粒子などの均一分散が難しくなるなど、複数の観点からの条件検討が必須であり、至適条件を見出すのは容易ではない。また、使用され得る放射線不透過性を向上するための金属および無機金属化合物として、非常に微細な金属を推奨しており、高純度の純金粒子の場合では特に粒子の凝集が発生しやすく、微細な金粒子を用いるのは、むしろ現実的ではない。【００１０】
特許文献２〜４、非特許文献９，１０には、各種のリン酸カルシウム系の組成物の記載がある。【００１１】
非特許文献１１では、粒子幅０．７±０．１ｍｍ、および０．４±０．１ｍｍの純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物（以下、ＣＰＣと称す場合がある。）および当該骨補強材の専用練和液のペースト状の混合物を１８Ｇの短い針（針長：約３〜４ｃｍ）で、解凍した摘出ブタ肝臓に０．１〜０．２ｍＬ注入、留置し、放射線治療用の病変識別マーカーとして十分な視認性が得られるかを確認している。純金粒子／ＣＰＣ混合物中の純金粒子の割合を種々変化させて調査し、重量比が１：４（純金濃度：２０質量％）以上である混合物、好ましくは重量比が１：２（純金濃度：３３質量％）以上である混合物が、放射線治療用の病変識別マーカーとして好ましいことが示唆された。ただし、上記条件の純金粒子／ＣＰＣペーストでは、１８Ｇより細く、かつ長い針を通過させるのは容易ではなく、特に、０．７±０．１ｍｍ径の金粒子では、１８Ｇの針も通過できない場合もあり、特に、内径の細い穿刺針（針長：約２０ｃｍ）や内視鏡等を使用するには不向きであった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特表２００６−５２４０５８号公報
【特許文献２】特開昭６４−０３７４４５号公報
【特許文献３】特開２００２−２５５６０３号公報
【特許文献４】特開２００２−２９１８６６号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Dawson LA, Sharpe MB. Image-guided radiotherapy: rationale, benefits, and limitations. The lancet oncology. 2006;7(10):848-58.
【非特許文献２】Shirato H, Shimizu S, Kunieda T, et al. Physical aspects of a real-time tumor-tracking system for gated radiotherapy. International journal of radiation oncology, biology, physics. 2000;48(4):1187-95.
【非特許文献３】Shimizu S, Shirato H, Ogura S, et al. Detection of lung tumor movement in real-time tumor-tracking radiotherapy. International journal of radiation oncology, biology, physics. 2001;51(2):304-10.
【非特許文献４】Kitamura K, Shirato H, Seppenwoolde Y, et al. Three-dimensional intrafractional movement of prostate measured during real-time tumor-tracking radiotherapy in supine and prone treatment positions. International journal of radiation oncology, biology, physics. 2002;53(5):1117-23.
【非特許文献５】Taguchi H, Sakuhara Y, Hige S, et al. Intercepting radiotherapy using a real-time tumor-tracking radiotherapy system for highly selected patients with hepatocellular carcinoma unresectable with other modalities. International journal of radiation oncology, biology, physics. 2007;69(2):376-80.
【非特許文献６】Katoh N, Onimaru R, Sakuhara Y, et al. Real-time tumor-tracking radiotherapy for adrenal tumors. Radiotherapy and oncology : journal of the European Society for Therapeutic Radiology and Oncology. 2008;87(3):418-24.
【非特許文献７】Kim JH, Hong SS, Kim JH, et al. Safety and efficacy of ultrasound-guided fiducial marker implantation for CyberKnife radiation therapy. Korean journal of radiology : official journal of the Korean Radiological Society. 2012;13(3):307-13.
【非特許文献８】Adv. Healthcare Mater., 2015, 4, p.856-863
【非特許文献９】窯業協会誌、Vol.84(4), 1976 , p.209-213
【非特許文献１０】J.Soc.Inorganic Mat.Jap., Vol.12, p.262-269 (2005)
【非特許文献１１】北海道血管造影・インターベンショナルラジオロジー研究会、2015.08.08
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
これからの放射線治療用の病変識別マーカーには、（１）生体適合性の高い基材であること、（２）患者負担の低減や、適用拡大（種々の臓器、組織への留置が可能）等の点から、細い穿刺針（２０Ｇ〜２２Ｇ（外径：約０．９〜０．７ｍｍ／内径：約０．７〜０．５ｍｍ））等で留置可能であること、（３）部位に適した任意の金粒子の留置量で視認性（画像内でのマーカーの見やすさ）、画像認識性能および追跡性能が確保できること、（４）短時間での固形化（医療時間の短縮）や、脱落、遊走の低減（長期に使用可）等の点から、形状保持性が高いこと等が求められている（図１参照）。
【００１５】
本発明の目的は、Ｘ線吸収性のある純金の微粒子を体内の任意の部位に、放射線治療の種類、および、治療標的部位に適した任意の量、非常に低い侵襲性で留置することが可能であり、かつ放射線治療装置で留置部位を長期間特定できる、放射線治療用の病変識別マーカーおよび放射線治療用の病変識別マーカーキットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子との混合物、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液との混合物を含み、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子の体積平均径（ＭＶ）は、３〜１２μｍの範囲である、放射線治療用の病変識別マーカーである。【００１７】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおける前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物および前記練和液から得られる練和物は、練和開始約５分後の２０℃での粘度が１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓの範囲であることが好ましい。【００１８】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、１６〜４０μｍの範囲であることが好ましい。【００１９】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、２０〜３５μｍの範囲であることがより好ましい。【００２０】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおける前記純金粒子において、Ｄ１０は５μｍ以上であり、かつＤ９０は７０μｍ以下であることが好ましい。【００２１】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおける前記純金粒子において、Ｄ１０は１０μｍ以上であり、かつＤ９０は５５μｍ以下であることがより好ましい。【００２２】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、１７〜４４μｍの範囲であることが好ましい。【００２３】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、２０〜３８μｍの範囲であることがより好ましい。【００２４】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、３９μｍ未満であることが好ましい。【００２５】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、１０〜３０μｍの範囲であることがより好ましい。【００２６】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおける前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％未満（体積比）であることが好ましい。【００２７】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおける前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約１．５％以下（体積比）であることがより好ましい。【００２８】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおける前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物において、粒子径が約３１μｍを超す粒子の存在比が約１５％以下（体積比）であることが好ましい。【００２９】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記混合物が、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが可能であることが好ましい。【００３０】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物１ｇ当りの前記練和液の容量での配合比は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることが好ましい。【００３１】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記純金粒子と前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物との重量比が１：２以上で２：１以下であることが好ましい。【００３２】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記純金粒子が、純度９９重量％以上の純金粒子であることが好ましい。【００３３】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記純金粒子を５ｍｇ以上含むことが好ましい。【００３４】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、α型リン酸三カルシウム、リン酸四カルシウム、リン酸水素カルシウム（無水物または水和物）、およびβ型リン酸三カルシウムのうちの少なくとも１つを含むことが好ましい。【００３５】
前記放射線治療用の病変識別マーカーにおいて、前記練和液は、コンドロイチン硫酸エステルナトリウム、コハク酸二ナトリウム無水物、亜硫酸水素ナトリウム、および水を含む練和液、ならびに、デキストラン硫酸エステルナトリウム  イオウ５、および水を含む練和液のうちの少なくとも１つであることが好ましい。【００３６】
また、本発明は、純金粒子およびリン酸カルシウム系骨補強材含有物、または、純金粒子、リン酸カルシウム系骨補強材含有物および練和液を含み、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子の体積平均径（ＭＶ）は、３〜１２μｍの範囲である、放射線治療用の病変識別マーカーキットである。【００３７】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおける前記純金粒子、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物および前記練和液から得られる練和物は、練和開始約５分後の２０℃での粘度が１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓであることが好ましい。【００３８】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、１６〜４０μｍの範囲であることが好ましい。【００３９】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、２０〜３５μｍの範囲であることがより好ましい。【００４０】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおける前記純金粒子において、Ｄ１０は５μｍ以上であり、かつＤ９０は７０μｍ以下であることが好ましい。【００４１】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおける前記純金粒子において、Ｄ１０は１０μｍ以上であり、かつＤ９０は５５μｍ以下であることがより好ましい。【００４２】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、１７〜４４μｍの範囲であることが好ましい。【００４３】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子の体積平均径（ＭＶ）は、２０〜３８μｍの範囲であることがより好ましい。【００４４】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子の体積平均径（ＭＶ）は、３〜１２μｍの範囲であることが好ましい。【００４５】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、３９μｍ未満であることが好ましい。【００４６】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０は、１０〜３０μｍの範囲であることがより好ましい。【００４７】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおける前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％未満（体積比）であることが好ましい。【００４８】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおける前記純金粒子において、粒子幅が約９６μｍを超す粒子の存在比が約１．５％以下（体積比）であることがより好ましい。【００４９】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおける前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物において、粒子幅が約３１μｍを超す粒子の存在比が約１５％以下（体積比）であることが好ましい。【００５０】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子および前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物から得られる練和物、または、前記純金粒子、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物および前記練和液から得られる練和物が、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが可能であることが好ましい。【００５１】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物１ｇ当りの前記練和液の容量での配合比は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることが好ましい。【００５２】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子と前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物との重量比が１：２以上で２：１以下であることが好ましい。【００５３】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子が、純度９９重量％以上の純金粒子であることが好ましい。【００５４】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記純金粒子を５ｍｇ以上含むが好ましい。【００５５】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、α型リン酸三カルシウム、リン酸四カルシウム、リン酸水素カルシウム（無水物または水和物）、およびβ型リン酸三カルシウムのうちの少なくとも１つを含むことが好ましい。【００５６】
前記放射線治療用の病変識別マーカーキットにおいて、前記練和液は、コンドロイチン硫酸エステルナトリウム、コハク酸二ナトリウム無水物、亜硫酸水素ナトリウム、および水を含む練和液、ならびに、デキストラン硫酸エステルナトリウム  イオウ５、および水を含む練和液のうちの少なくとも１つであることが好ましい。
【発明の効果】
【００５７】
本発明では、Ｘ線吸収性のある純金の微粒子を体内の任意の部位に、放射線治療の種類、および、治療標的部位に適した任意の量、非常に低い侵襲性で留置することが可能であり、かつ放射線治療装置で留置部位を長期間特定できる、放射線治療用の病変識別マーカーおよび放射線治療用の病変識別マーカーキットを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】本発明で開示する放射線治療用の病変識別マーカーのイメージ像である。
【図２】本発明のＧ／ＣＰＣマーカーの画像認識性能を評価する際に用いたＦｌａｔ  Ｐａｎｅｌ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒを示す図である。
【図３】実施例４における、Ｇ／ＣＰＣ混合物中の純金濃度（重量％）と画像認識性能との関係を調査するために、純金粒子の重量濃度が３３重量％、６６重量％および８０重量％であるＧ／ＣＰＣマーカー塊を種々の重量９６穴プレートに配置した場合のＸ線透視画像である（アクリル板の厚さ：１ｃｍ、管電流：５０ｍＡ、管電圧：１１０ｋＶ、曝射時間：３ｍｓｅｃ）。
【図４】実施例７における、粒子幅７５〜５４μｍの純金粒子の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）の写真（倍率：５００倍）である。
【図５】実施例７における、粒径１〜２μｍのニラコ製金粒子（乳鉢粉砕後）の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）の写真（倍率：１０，０００倍）である。
【図６】実施例１０における、各種純金粒子を粒子径分布測定装置で測定した粒度分布のグラフであり、横軸（Ｘ軸）は粒子径を、縦軸（Ｙ軸）は各粒子径の粒子の頻度（％）を表す。（ａ）は、粒子幅２０μｍ以下、（ｂ）は、粒子幅５３〜３３μｍ、（ｃ）は、粒子幅３２μｍ以下、（ｄ）は、粒子幅７５〜５４μｍの純金粒子での粒度分布のグラフである。
【図７】実施例１０における、ニラコ製金粒子を粒子径分布測定装置で測定した粒度分布のグラフであり、（ａ）は、ニラコ製金粒子（市販品）をメノー製乳鉢で粉砕後の金粒子粉末の粒度分布のグラフであり、（ｂ）は、その乳鉢粉砕品を目開き３２μｍの篩で篩過した画分の金粒子の粒度分布のグラフである。
【図８】実施例１１における、各種ＣＰＣ粉末を粒子径分布測定装置で測定した粒度分布のグラフであり、横軸（Ｘ軸）は粒子径を、縦軸（Ｙ軸）は各粒子径の粒子の頻度（％）を表す。（ａ）は、バイオペックス−Ｒエクセレントタイプの市販品、（ｂ）は、バイオペックス−Ｒロングタイプの市販品、（ｃ）は、バイオペックス−Ｒエクセレントタイプの市販品を、目開き３２μｍの篩で篩過した画分の粉末、（ｄ）は、バイオペックス−Ｒロングタイプの市販品を、目開き３２μｍの篩で篩過した画分の粉末の粒度分布のグラフである。
【図９】イヌの腹を一部開き、その肝臓部位にＧ／ＣＰＣペーストを注入している際の写真である。
【図１０】実施例１２における、Ｇ／ＣＰＣペースト注入後２８日のイヌから摘出した肝臓の、一部小葉のＸ線透視画像（アクリル板厚さ１ｃｍ）である。図中（１）〜（５）は、陽性対照として肝臓表面に留置したマーカーであり（（１）：直径１．５ｍｍの金球、（２）：直径２．０ｍｍの金球、（３）：０．２８×１０ｍｍ  Ｇｏｌｄ  Ａｎｃｈｏｒ  圧縮、（４）：０．２８×２０ｍｍ  Ｇｏｌｄ  Ａｎｃｈｏｒ  圧縮、（５）：０．２８×２０ｍｍ  Ｇｏｌｄ  Ａｎｃｈｏｒ  直鎖状（先端部を追跡））、図中（６）〜（１０）は、Ｇ／ＣＰＣマーカーである。
【図１１】実施例１２における、Ｇ／ＣＰＣペースト注入後２８日間経過観察したイヌにおける臨床検査値の推移を示す図である。
【図１２】バイオペックス−Ｒ  エクセレントとバイオペックス−Ｒ  スタンダードおよびロングの練和物の粘度推移を比較するグラフである。
【図１３】バイオペックス−Ｒ  エクセレントの市販品または篩過品の練和物の粘度推移を比較するグラフである。
【図１４】金粒子含量の違いによるバイオペックス−Ｒ  エクセレント篩過品（３２μｍ篩）の練和物の粘度推移を比較するグラフである。
【図１５】生犬の肝臓に留置した５個のＧ／ＣＰＣマーカーの２８日後のＸ線透視画像を示す写真である。
【図１６】生犬の膵臓に留置した６個のＧ／ＣＰＣマーカーの２８日後のＸ線透視画像を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本発明の実施の形態について以下説明する。本実施形態は本発明を実施する一例であって、本発明は本実施形態に限定されるものではない。
【００６０】
＜放射線治療用の病変識別マーカー＞
本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子との混合物、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液との混合物を含む。本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子との混合物を含む。本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物とメディアン径（Ｄ５０、体積基準）１６〜４０μｍの純金粒子との混合物を含むことが好ましく、もしくは体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物とメディアン径（Ｄ５０、体積基準）２０〜３５μｍの純金粒子との混合物を含むことがより好ましい。また、本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液との混合物を含む。本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物とメディアン径（Ｄ５０、体積基準）１６〜４０μｍの純金粒子と練和物の混合物を含むことが好ましく、もしくは体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物とメディアン径（Ｄ５０、体積基準）２０〜３５μｍの純金粒子と練和液との混合物を含むことがより好ましい。
【００６１】
本実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを混合したもの、またはリン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液とを混合したものを、穿刺針等によって体内の任意の部位に留置、埋設することができるものである。本実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、Ｘ線吸収性と生体適合性が高い金属である純金（純度：９９重量％以上）の微粒子を、体内の任意の部位に、放射線治療の種類、および、治療標的部位に適した任意の量で留置することが可能で、針長２０ｃｍの２０〜２２Ｇ（外径：約０．９〜０．７ｍｍ／内径：約０．７〜０．５ｍｍ）の穿刺針での留置も可能にすることで、現行のｉＧｏｌｄ（直径２．０ｍｍの場合、外径２．６ｍｍのイントロデューサーを用いて留置）に比較し、侵襲性を大幅に改善し、かつ放射線治療装置で長期に留置部位を特定できるものである。すなわち、本実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーにより、（１）生体適合性の高い基材である、（２）患者負担の低減や、適用拡大（種々の臓器、組織への留置が可能）等の点から、例えば針長５ｃｍ〜２０ｃｍの細い穿刺針（２０Ｇ〜２２Ｇ（外径：約０．９〜０．７ｍｍ／内径：約０．７〜０．５ｍｍ））等で留置可能である、（３）部位に適した視認性（画像内でのマーカーの見やすさ）、画像認識性能および追跡性能が確保できる、（４）短時間での固形化（医療時間の短縮）や、脱落、遊走の低減（長期に使用可）等の点から、形状保持性が高い等の顕著な効果が得られる。本明細書では、純金（純度：９９．９９重量％以上)の微粒子を用いて実証しているが、金の合金（例えば、金の含量が９９重量％以上の金属で生体適合性が高いもの）でも、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と練和液とを混合練和したものは、放射線治療用の病変識別マーカーとして使用可能である。なお、本明細書では、視認性、画像認識性能、追跡性能とは、以下のような意味で使用する。
１）視認性：画像内でのマーカーの見やすさを人の目で判断した定性的評価
２）画像認識性能：パターンマッチングを利用し、マーカーの画像認識性能を数値として定量的に評価
３）追跡性能：パターンマッチングを利用して動いているマーカーを追跡できるかどうかの可否を評価
【００６２】
本実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーにより、Ｘ線吸収性のある純金または金の合金（例えば、金９９重量％以上、その他金属１重量％未満）の微粒子を体内の任意の部位に、放射線治療の種類、および、治療標的部位に適した任意の量で留置することが可能であり、かつ放射線治療装置で留置部位を特定することができる。例えば、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが可能であり、従来は使用不可能だったデリバリーシステムによる留置が可能で、従来の２ｍｍ径の純金マーカーに匹敵するまたはそれ以上の視認性を有する。動物体内に留置した場合も十分な形状保持性、追跡性能（動いているマーカーを追跡できるかどうか）および安全性が示唆され、体内のあらゆる部位（種々の臓器、組織等）に安全に留置できる病変識別マーカーとして、高精度放射線治療の適応をさらに拡大し、新たな癌治療への道を開拓することができる。本実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーは、ペーストであることより、従来の金属マーカーと異なり、異なる条件下でも視認性、追跡性能を確保するために、留置対象部位や対象患者に応じて留置量を任意に選択可能である。例えば、小児では少量を、太った成人でＸ線透過性の低い部位には、多量のペーストを留置する等も可能であり、従来の金属マーカーと比較して大いに優位があると言える。本実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーにより、従来よりも非常に細い穿刺器具で留置できるため、留置のときの穿刺による出血のリスクが低く、臓器への障害等、患者への負担が極めて少ない。また、カテーテルのような細い管から留置することができるため、内視鏡を用いた消化管や気管、気管支内からの留置、尿道を経由した膀胱内への留置、膣を経由した子宮内への留置等も可能であり、侵襲性の面でも従来法より明らかに優れている。
【００６３】
本発明の実施形態に係る病変識別マーカーを体内の任意の部位に留置する方法としては、例えば、留置針の先端にコラーゲンスポンジ等の多孔質体を着装し、純金粒子をそこに充填したものを準備し、リン酸カルシウム系骨補強材含有物および練和液を混合した練和物（リン酸カルシウム系骨補強材練和物）を適量充填したシリンジを着装し、リン酸カルシウム系骨補強材練和物で純金粒子塊を臓器内に押し出す方法や、リン酸カルシウム系骨補強材含有物、純金粒子および練和液を混合して純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を作製し、それをシリンジに移し、針を着装して、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを含む病変識別マーカーを臓器内に注入する方法等が挙げられる。
【００６４】
リン酸カルシウム系骨補強材練和物等を用いて純金粒子塊を押し出す方法は、少量の純金粒子で高い視認性を示すこと、およびリン酸カルシウム系骨補強材練和物と純金粒子との混合操作が不要という利点がある。
【００６５】
純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を使用する方法は、注入のときにペースト状であるため、針だけではなくカテーテル等からも注入可能であり、カテーテルを経由して消化管粘膜、膵臓、膀胱等へリン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを含む病変識別マーカーを留置することも可能である。
【００６６】
純金粒子は、生体適合性が高く、視認性が良好である。純金粒子としては、純度９９重量％以上の純金粒子が好ましく、純度９９．９重量％以上の純金粒子がより好ましく、純度９９．９９重量％以上の純金粒子が特に好ましい。
【００６７】
純金粒子は、球形状または異形状等を有しており、その粒子幅は、一般的には小さければ小さいほどよいが、粒子径が小さすぎると純金粒子間での凝集が認められ、特に粒径１〜２μｍの製品（ニラコ製）では、数１００μｍ以上の粒子塊も含まれていた。以下に述べるアトマイザー法で調製後、篩で分画した金粒子においても同様な現象が認められ、少なくでも純金粒子においては、小さければ小さいほどよいという考えは、適切でないことが判り、最終的には臨床で使用する針長２０ｃｍの穿刺針での通過性で判断した。その結果、粒子幅（使用した篩の目開きでの定義）が５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下の純金粒子が好ましく、粒子幅３２μｍ以下の純金粒子がより好ましいことが示された。なお、ニラコ社製（品番：ＡＵ−１７４０１５）の純金粒子においても３２μｍの篩で篩過した金微粒子分画では、上記同様に２１〜２２Ｇの穿刺針を通過することが確認された。純金粒子の粒子幅は、下記（Ａ）に示すように、所定の目開き（ＪＩＳ  Ｚ  ８８０１）の篩の通過および不通過によって決定したものであるが、粒子径分布の測定結果を活用してメディアン径（Ｄ５０）や、Ｄ１０およびＤ９０等によってより適切に規定できる。
【００６８】
なお、粒子径分布を累積分布として表す場合、細かい粒子の側をゼロとして表示し、Ｄ５０、Ｄ１０、およびＤ９０等が分布を表すのに使用される。Ｄ５０値は、大きい側と小さい側が等量となる径のことでメジアン径（メディアン径）とも呼ばれており、Ｄ１０は、粒子径が小さい側から１０％の累積分布の粒子径であり、Ｄ９０は、粒子径が大きい側から１０％の累積分布の粒子径である。ＭＶは、体積平均径、ＭＮは、個数平均径、ＭＡは、面積平均径を表す。
【００６９】
長い細径針の通過性に適する等の観点から、純金粒子のＤ５０値は、好ましくは１６〜４０μｍの範囲であり、より好ましくは１８〜３６μｍの範囲であり、さらに好ましくは２０〜３５μｍの範囲であり、特に好ましくは２０〜３２μｍの範囲である。さらには、上記Ｄ５０値の範囲であって、好ましくはＤ１０値が５μｍ以上で、かつＤ９０値が７０μｍ以下であり、より好ましくはＤ１０値が７μｍ以上で、かつＤ９０値が６０μｍ以下であり、さらに好ましくはＤ１０値が１０μｍ以上で、かつＤ９０値が５５μｍ以下である。なお、純金粒子のＤ５０値が約４０μｍを超えると針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。
【００７０】
また、好ましい純金粒子を体積平均径（ＭＶ）で表示すると、好ましくは１７〜４４μｍの範囲であり、より好ましくは１７〜３８μｍの範囲であり、さらに好ましくは２０〜３８μｍの範囲である。なお、純金粒子のＭＶが約４５μｍを超えると針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。
【００７１】
また、純金粒子において、粒子径が約９６μｍ（例えば、９５．９６μｍ）を超す粒子の存在比（体積比）が約３％未満であることが好ましく、約２．５％以下であることがより好ましく、約１．５％以下であることが特に好ましい。純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％を超えると、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。粒子径が約４０μｍ（例えば、４０．３５μｍ）以下の粒子の累積頻度（体積分布）は５０％以上が好ましく、６５％以上がより好ましく、７０％以上がさらに好ましく、８５％以上が特に好ましく、粒子径約３１μｍ（例えば、３１．１１μｍ）までの累積頻度では３０％以上が好ましく、３５％以上がより好ましく、７０％以上がさらに好ましい。
【００７２】
なお、本明細書では、主として下記に記載の方法で製造した金粒子を使用し、それぞれ粒子幅１５０〜７６μｍ、７５〜５４μｍ、５３〜３３μｍ、３２μｍ以下、および２０μｍ以下の純金粒子と呼ぶこととした。
（Ａ）以下に上記純金粒子の製造法の概略を示す。
（１）カーボンノズルおよび石英ノズルのうち少なくとも１つを有するアトマイザーから純金（９９．９９重量％以上）の加熱溶融物を噴霧、急冷して純金粒子を作製する。
（２）目開き（ＪＩＳ  Ｚ  ８８０１）１５０μｍ、７５μｍ、５３μｍ、および３２μｍの篩を用いて順に篩い分け、それぞれ粒子幅が１５０〜７６μｍ、７５〜５４μｍ、５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下の純金粒子を得る。さらに、粒子幅３２μｍ以下の純金粒子を２０μｍの篩を用いて篩過、粒子幅２０μｍ以下の純金粒子を得た。なお、篩過は、鉄心入のポリウレタンボール等のタッピングボールを用いて手動で篩過する方法や、音波篩を用いる方法を用いて行ってもよい。
【００７３】
それぞれの純金粒子の粒度分布は、Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ製（ＭＴ３０００ＩＩ）粒子径分布測定装置を使用し、ＩＰＡ（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  Ａｌｃｏｈｏｌ）を分散媒とする湿式法で測定し、それらの粒子径分布のＤ５０（メディアン径）、Ｄ１０、Ｄ９０、ＭＶ（体積平均径）、ＭＮ（個数平均径）およびＭＡ（面積平均径）を求めるとともに、それら純金粒子の粒子径分布のグラフを表示した。なお、本機器の測定法では、原理上、体積分布を測定しており、粒子の存在比率の基準としては体積基準である。また、粒子径分布を累積分布として表す場合、細かい粒子の側をゼロとして表示している。
【００７４】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子との混合物、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液との混合物を病変識別マーカーとして体内の任意の部位に留置する場合、Ｘ線のマーカーとしては、約５ｍｇ以上の重量の純金粒子を含むことが好ましく、２０ｍｇ以上の重量の純金粒子を含むことがより好ましい。
【００７５】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、リン酸カルシウム系組成物であり、α型リン酸三カルシウム（例えば、特開２００２−２５５６０３号公報参照）、リン酸四カルシウム（例えば、特開２００２−２９１８６６号公報参照）、リン酸水素カルシウム（例えば、特開昭６４−０３７４４５号公報参照）、もしくはβ型リン酸三カルシウム（例えば、特開２０１０−０７５２４７号公報参照）を主要成分として含むもの等が知られており、これらリン酸カルシウム系骨補強材は、生体内ではハイドロキシアパタイトに変換すると言われており、その化学式は、Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２で示される。
【００７６】
リン酸カルシウム系骨補強材もＸ線透視下で視認可能だが、放射線治療の際に必要なＸ線透視下での視認性を確保することが困難であるため、生体適合性の高い純金粒子等の純金粒子の十分量をリン酸カルシウム系骨補強材含有物にできるだけ均等に混合した病変識別マーカーを用いることにより、Ｘ線透視下での視認性を十分に確保することができる。
【００７７】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、例えば、α型リン酸三カルシウム、リン酸四カルシウム、リン酸水素カルシウム（無水物または水和物）、およびβ型リン酸三カルシウムのうちの少なくとも１つを含み、その他に、ハイドロキシアパタイト、リン酸マグネシウム、非晶質リン酸カルシウム、およびリン酸カルシウム系ガラス等のリン酸化合物、さらには、多糖、コラーゲン、リン酸カルシウム／コラーゲン複合体、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、およびインシュリン様因子（ＩＧＦ）等のうちから選択される少なくとも１つを含んでもよい。
【００７８】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、例えば、粉末形態である。リン酸カルシウム系骨補強材含有物としては、例えば、α型リン酸三カルシウム（７５重量％）、リン酸四カルシウム（１８重量％）、リン酸水素カルシウム（５重量％）、水酸アパタイト（２重量％）、およびリン酸マグネシウムを含有するバイオペックス−Ｒ（スタンダードタイプ、ロングタイプ、エクセレントタイプ）（ＨＯＹＡ  Ｔｅｃｈｎｏｓｕｒｇｉｃａｌ社製）や、リン酸四カルシウム、および無水リン酸水素カルシウムの混合組成物であるセラペースト（日本特殊陶業社製）等を用いることができる。
【００７９】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物（ＣＰＣ）についても、目開き（ＪＩＳ  Ｚ  ８８０１）７５μｍ、５３μｍ、および３２μｍの篩を用いて順に篩い分け、それぞれを粒子幅が７５μｍ以上、７５〜５４μｍ、５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下のＣＰＣと呼ぶこととする。また、単に目開き１５０μｍ、１００μｍ、７５μｍ、５３μｍ、３２μｍ、２５μｍ、および２０μｍの篩それぞれ単独で分級したＣＰＣを調製する場合もある。したがって、例えば粒子幅５３μｍ以下と表示した場合は、目開き５３μｍの篩を通過した画分を意味する。
【００８０】
これらのＣＰＣの中で市販品および粒子幅７５μｍ、５３μｍ、３２μｍ、２５μｍおよび２０μｍ以下のものについて、それぞれの粒度分布を、粒子径分布測定装置Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ  ＭＴ３３００ＥＸ−ＩＩ（マイクロトラック・ベル株式会社）を使用し、水を分散媒とする湿式法で測定し、それらの粒子径分布のＤ５０（メディアン径）、Ｄ１０、Ｄ９０、ＭＶ（体積平均径）、ＭＮ（個数平均径）およびＭＡ（面積平均径）を求めるとともに、それらＣＰＣの粒子径分布のグラフを表示した。なお、この場合も測定原理上、体積分布を測定しており、粒子の存在比率の基準としては体積基準である。また、粒子径分布を累積分布として表す場合、細かい粒子の側をゼロとして表示している。
【００８１】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子幅は、７５μｍ以下、５３〜３３μｍ以下、５３μｍ以下、３２μｍ以下、および２５μｍ以下であることが好ましく、５３μｍ以下、３２μｍ以下、および２５μｍ以下であることがより好ましく、３２μｍ以下および２５μｍ以下であることがさらに好ましく、それらの粒子の体積平均径（ＭＶ）は、３〜１２μｍの範囲であることが好ましく、４〜１２μｍの範囲であることがより好ましく、５〜１１μｍの範囲がさらに好ましく、５〜１０μｍの範囲が特に好ましい。さらに、リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子のＤ９０値は、３９μｍ未満であることが好ましく、３４μｍ以下であることがより好ましく、３０μｍ以下であることがさらに好ましく、１０〜３０μｍの範囲であることが特に好ましい。一方、Ｄ９０値が５０μｍを超えると、針長２０ｃｍの１９Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。
【００８２】
また、リン酸カルシウム系骨補強材含有物において、細い穿刺針通過性に好ましいＣＰＣ粒子を、約３１μｍ（例えば、３１．１１μｍ）を超す粒子径分布で表現すると、好ましくは約３１μｍを超す粒径の分布（頻度）が約１５％以下であり、より好ましくは、約１０％以下である。リン酸カルシウム系骨補強材含有物の粒子径分布において約３１μｍを超す粒子の存在比率（体積比）が１５％を超すと、当該Ｇ／ＣＰＣペーストが針長２０ｃｍの１９Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。
【００８３】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物の練和物（リン酸カルシウム系骨補強材練和物）を作製するための練和液として、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを練和して純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を作製するための練和液として、リン酸カルシウム系の骨補強材の練和液として用いられるものであればよく、特に制限はないが、例えば、易水溶性のハロゲン化物、硫酸塩、有機酸塩の単独または２種以上の混合液に水と酸（例えば、塩酸、硫酸、リン酸、ギ酸、酢酸、コハク酸、乳酸等）を使用する練和液（特開昭５９−８８３５１号公報参照）、不飽和カルボン酸（例えば、アクリル酸、マレイン酸、フマル酸、イタコン酸）の単重合体または共重合体を含有する酸性溶液を用いる練和液（特開昭６０−２５３４５４号公報参照）、抗菌剤（例えば、プロピレングリコール、エチレングリコール等）および水溶性高分子（例えば、キチン、キトサン、溶性デンプン、コンドロイチン硫酸およびこれらの塩、カルボキシメチルセルロース等）を含有する練和液（特開平３−２６７０６７号公報参照）、コハク酸ナトリウム等の水溶性ナトリウム塩類を含有する練和液（特開平４−１２０４４号公報参照）等が挙げられる。好ましくは、上記を組み合わせたコンドロイチン硫酸エステルナトリウム（コンドロイチン硫酸ナトリウム）、コハク酸二ナトリウム無水物、亜硫酸水素ナトリウム、注射用水（日本薬局方）等の水等を含む練和液（特開２００２−２５５６０３号公報参照）、デキストラン硫酸エステルナトリウム  イオウ５（デキストラン硫酸ナトリウム  イオウ５）、注射用水等の水等を含む練和液（特開２００２−２９１８６６号公報参照）、注射用水等の水からなる練和液、リン酸ナトリウム等の水溶性ナトリウム塩類を含む練和液、クエン酸等の各種有機酸を含む練和液等を用いればよい。練和液としては、例えば、コハク酸二ナトリウム無水物（１２重量％）、コンドロイチン硫酸エステルナトリウム（５重量％）、亜硫酸水素ナトリウム、および、注射用水（８３重量％）を含有する、バイオペックス−Ｒの専用練和液（ＨＯＹＡ  Ｔｅｃｈｎｏｓｕｒｇｉｃａｌ社製）や、セラペーストの硬化液（組成：デキストラン硫酸エステルナトリウム  イオウ５、注射用水）等を用いることができる。また、これら市販の練和液を適当量の注射用水で希釈して使用することもできるが、注射用水のみを練和液として使用すると、練和物の注入の際にシリンジ等の閉塞が起こる場合や、練和物の固化に時間が掛かりすぎる場合もある。
【００８４】
純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物の練和物（リン酸カルシウム系骨補強材練和物）を作製するために使用する練和液の液量としては、穿刺針通過性および生体組織での固化性等を考慮すると、当該リン酸カルシウム系骨補強材含有物１ｇ当りの練和液の容量は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることが好ましく、約０．３５ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることがより好ましい。
【００８５】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを練和した純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を病変識別マーカーとして用いることにより、留置前はペースト状で、穿刺針で注入可能であり、体内注入後にリン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを含む病変識別マーカーを球状等の固体として組織内等の体内に留まらせることができる。
【００８６】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを練和した純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を病変識別マーカーとして使用する場合、純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物（粉末）との重量比は、約１：２（純金粒子濃度：約３０重量％）以上の高濃度で純金粒子が含まれる練和物が好ましく、純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物との重量比は、１：２（純金粒子濃度：３３重量％）から２：１（純金濃度：６６重量％）の範囲のいずれかの濃度で純金粒子が含まれる練和物がより好ましい。
【００８７】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを練和して得られる混合物である純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物の細い注射針からの排出性、および、臓器に留置した場合の留置部位からの当該ペーストの漏出は、当該ペーストの粘度に関連する可能性がある。リン酸カルシウム系骨補強材含有物および練和液から得られる練和物、または、純金粒子、リン酸カルシウム系骨補強材含有物および練和液から得られる練和物は、練和開始約５分後の２０℃での粘度が１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓであることが好ましい。
【００８８】
＜放射線治療用の病変識別マーカーキット＞
本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーキットは、上記純金粒子および上記リン酸カルシウム系骨補強材含有物を含む。本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーキットは、体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを含む。本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーキットは、体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物とメディアン径（Ｄ５０、体積基準）１６〜４０μｍの純金粒子とを含むことが好ましく、もしくは体積平均径（ＭＶ）が３〜１２μｍの範囲であるリン酸カルシウム系骨補強材含有物とメディアン径（Ｄ５０、体積基準）２０〜３５μｍの純金粒子とを含むことがより好ましい。本実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーキットは、必要に応じて、リン酸カルシウム系骨補強材含有物の練和物を作製するための、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子とを練和して純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を作製するための上記練和液をさらに含んでもよい。
【００８９】
体内の任意の部位への病変識別マーカーである純金粒子の留置に際して、キットに含まれるリン酸カルシウム系骨補強材含有物と練和液とを混合して、リン酸カルシウム系骨補強材練和物を作製すればよい。または、体内の任意の部位への病変識別マーカーである純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物との練和物（純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物）の留置に際して、キットに含まれる純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物と練和液とを混合して、純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を作製すればよい。または、キットに含まれる純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物との混合物とキットに含まれる練和液を、体内の任意の部位へ留置する直前に混合して純金粒子含有リン酸カルシウム系骨補強材練和物を作製してもよい。
【００９０】
本発明の実施形態に係る放射線治療用の病変識別マーカーキットは、さらに、練和用具、注入用シリンジ、穿刺針、カテーテル、ワイヤー、注入装置等を含んでもよい。
【実施例】
【００９１】
以下、実施例および比較例を挙げ、本発明をより具体的に詳細に説明するが、本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。【００９２】
なお、本実施例中では、リン酸カルシウム系骨補強材含有物をＣＰＣと、純金粒子をＧと、さらに、純金粒子とリン酸カルシウム系骨補強材含有物の混合物、練和物、もしくは、それらにより生成されるマーカー、およびマーカー塊を、それぞれＧ／ＣＰＣ混合物、Ｇ／ＣＰＣペースト、Ｇ／ＣＰＣマーカー、およびＧ／ＣＰＣマーカー塊と称する場合もある。【００９３】
＜実施例１＞
［Ｇ／ＣＰＣ混合物中の純金濃度（重量％）と画像認識性能（その１）］
純金の微粒子を用いたＧ／ＣＰＣ混合物のＸ線マーカーとしての画像認識性能を、Ｇ／ＣＰＣ混合物中の純金粒子の重量濃度が［１］０重量％、［２］２０重量％、［３］３３重量％、および［４］５０重量％に関して調べた。【００９４】
（１）実験方法
１）Ｇ／ＣＰＣ練和物の調製
バイオペックス−Ｒ（ロングタイプ）（ＨＯＹＡ  Ｔｅｃｈｎｏｓｕｒｇｉｃａｌ社；医療機器承認番号：２１３００ＢＺＺ００２７４０００）のリン酸カルシウム系骨補強材含有物（ＣＰＣ）約３ｇと、種々の重量の粉末純金粒子（ニラコ社、粒径：１〜２μｍ、純度：９９．９９重量％（品番：ＡＵ−１７４０１５））、およびバイオペックス−Ｒの専用練和液約１ｍＬとを付属のすり鉢にて混合することにより、ペースト状のリン酸カルシウム系骨補強材練和物を作製した。調製した練和物は、表１に示すように、用いた純金粒子重量（ｇ）とバイオペックス−Ｒの粉末重量（ｇ）との比率の異なる４種の練和物（純金粒子重量（ｇ）：［１］バイオペックス−Ｒ粉末重量（ｇ）＝０：１（純金粒子濃度：０重量％）、［２］１：４（純金粒子濃度：２０重量％）、［３］１：２（純金粒子濃度：３３重量％）、もしくは、［４］１：１（純金粒子濃度：５０重量％））である。それらをマイクロピペットで、ほぼ一定容量（約１０、３０、または１００μＬ）をｎ＝３〜４で９６穴マイクロプレート（丸底）に注入した。それらＧ／ＣＰＣ練和物の各注入サンプル当たりの純金粒子の重量を算出するために、金粒子を練和したペーストについては、全ての注入サンプル毎に注入重量（ｍｇ）を計測し、当該注入箇所の純金粒子重量（ｍｇ）を算出した（表２参照）。なお、上記練和物調製に使用した専用練和液の重量（ｇ）は、使用した液量（ｍＬ）に本実験時に求めた当該液の比重（１．１０８５）を乗じて算出した。上記のようにして調製したサンプルを、以下の画像認識性能試験に供した。【００９５】
【表１】
2018038223.tif 000003
【００９６】
【表２】
2018038223.tif 000004
【００９７】
なお、バイオペックス−Ｒの粉末組成は、α型リン酸三カルシウム（７５重量％）、リン酸四カルシウム（１８重量％）、リン酸水素カルシウム（５重量％）、水酸アパタイト（２重量％）、およびリン酸マグネシウムを含有すること、また、その専用練和液は、コハク酸二ナトリウム無水物（１２重量％）、コンドロイチン硫酸エステルナトリウム（５重量％）、亜硫酸水素ナトリウム、および、注射用水（８３重量％）を含有することが報告されている（J．Soc．Inorganic Mat．Jap．, Vol．12, p.262 (2005)）。【００９８】
２）視認性、画像認識性能の評価
上記の純金粒子／ＣＰＣ混合物を注入、固化させた９６穴プレートを、アクリルファントムに載せ、Ｘ線透視装置（Ｘ線発生装置：島津製作所社製、ＵＤ１５０Ｂ−４０、Ｘ線画像取得用フラットパネルディテクタ（図２参照）：バリアンメディカルシステムズ社製、ＰａｘＳｃａｎ３０３０）によりＸ線透視画像を取得した（なお、図２中のリニアックは、実験には使用していない。）。９６穴プレートの各穴に充填した試料の純金粒子の重量および濃度を表２に示した。陽性コントロールとして、現在臨床で用いられている直径１．５ｍｍおよび２．０ｍｍの純金球形マーカー（ｉＧｏｌｄ）を留置した。アクリル板の厚さを１ｃｍから２５ｃｍまで段階的に変化させ、Ｘ線発生装置の管電圧を１１０ｋＶ、曝射時間を３ｍｓｅｃで固定とし、管電流は状況に応じて５０ｍＡ，８０ｍＡ，１６０ｍＡから選択し、各条件においてＸ線透視画像を１００枚程度取得した。各条件で得られた純金粒子マーカーを含む９６穴プレートのＸ線透視画像から、マーカーの視認性（画像内でのマーカーの見やすさ）を客観的（定性的）に評価した。【００９９】
また、各条件において、複数の画像のうちの１枚から評価対象とする純金粒子マーカーの画像を切り出してテンプレート画像を作成し、その他の画像に対して、あらかじめ作成したテンプレート画像との正規化相互相関によるテンプレートパターンマッチングを実施し、画像認識性能を評価した。約１００枚の画像に対するテンプレートパターンマッチングから得られる相関係数の平均値が０．３を超えている場合は画像認識可（〇）、それ以下の場合には画像認識不可（×）と判定した。画像の階調処理とパターンマッチングには、画像処理ライブラリ（Ｍａｔｒｏｘ社製、Ｍａｔｒｏｘ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ９）を利用した。代表的な事例である純金粒子含量が３３重量％の場合についてのみ、その結果を表３に示す。【０１００】
（２）結果
純金粒子（粒径：１〜２μｍ）とＣＰＣの重量での混合比が１：２（純金濃度：３３重量％）以上で、ペースト注入量３０〜１００μＬの場合、陽性コントロールの直径２ｍｍまたは直径１．５ｍｍの純金球形マーカーと同等もしくはそれ以上の視認性が認められた。また、その他の評価条件（アクリル厚さ、Ｘ線管電流）においても、その傾向は同様であった。言い換えると、純金粒子量が約２０ｍｇ以上の場合は、陽性コントロールの直径２ｍｍまたは直径１．５ｍｍの純金球形マーカーと同等もしくはそれ以上の視認性が認められた。また、テンプレートパターンマッチングによる評価においても、純金粒子量が約２０ｍｇ以上の場合は、直径２ｍｍまたは直径１．５ｍｍの純金球形マーカーと同等もしくはそれ以上の画像認識性能を示した（表３参照）。【０１０１】
また、純金粒子含量を約５ｍｇ含む練和物（試験練和物の番号：Ｐ０３）においては、アクリル板の厚さが１５ｃｍ以下であれば、Ｘ線管電流が５０ｍＡおよび８０ｍＡのいずれの場合も画像認識性能を有することが示された。また、データの詳細を特に示さないが、試験練和物の番号がＰ０２やＰ０４の場合も同様に、純金粒子含量が約５ｍｇ以上で２０ｍｇ未満の場合は、アクリル板の厚さが１５ｃｍ以下であれば、Ｘ線画像認識性能を有することがわかった。【０１０２】
【表３】
2018038223.tif 000005
【０１０３】
＜実施例２＞
［Ｇ／ＣＰＣ混合物の画像認識による追跡性能検証］
（１）実験方法
実施例１にて調製したＧ／ＣＰＣ混合物を含む９６穴プレートを、１次元駆動制御が可能な可動テーブルの上に載せ、胸部ファントム（京都科学社製、ＬＵＮＧＭＡＮ）の上で呼吸運動を模擬して動作させ、Ｘ線透視装置（Ｘ線発生装置：島津製作所社製、ＵＤ１５０Ｂ−４０、Ｘ線画像取得用フラットパネルディテクタ：バリアンメディカルシステムズ社製、ＰａｘＳｃａｎ３０３０）によりＸ線透視画像を取得した。これにより、呼吸などにより肺の中で動く純金粒子マーカーの状況を再現した。Ｘ線発生装置の管電圧を１１０ｋＶ、曝射時間を３ｍｓｅｃ、撮像の繰り返し１５回／秒、管電流を８０ｍＡとし、Ｘ線透視画像を４００枚程度取得した。複数の画像のうちの１枚から評価対象とする純金粒子マーカーの画像を切り出してテンプレート画像を作成し、取得した約４００枚の一連の画像に対して、あらかじめ作成したテンプレート画像との正規化相互相関によるテンプレートパターンマッチングを実施し、画像内で動く純金粒子マーカーを画像認識により追跡できるかどうか（追跡性能）を確認した。画像の階調処理とパターンマッチングには、画像処理ライブラリ（Ｍａｔｒｏｘ社製、Ｍａｔｒｏｘ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ９）を利用した。【０１０４】
（２）結果
実際の人体のＸ線透視のように不均質な画像においても、純金粒子（粒径：１〜２μｍ）とＣＰＣの重量での混合比が１：２（純金濃度：３３重量％）以上で、ペースト注入量３０〜１００μＬの場合、陽性コントロールの直径２ｍｍまたは直径１．５ｍｍの純金球形マーカーと同等もしくはそれ以上の視認性が認められた。また、動的な追跡性能検証の結果、純金が約２０ｍｇ以上含まれる純金粒子マーカーは、陽性コントロールの直径２ｍｍまたは直径１．５ｍｍの球状純金マーカーと同様に、動きに追従して追跡できるだけの追跡性能を有することを示した。【０１０５】
＜実施例３＞
［Ｇ／ＣＰＣ混合物中の純金濃度（重量％）と画像認識性能（その２）］
純金粒子濃度が３０重量％、３３重量％、または４０重量％間で画像認識性能に有意な差があるか否かを調べた。また、純金粒子の粒子幅の差異により画像認識性能に有意な差が有るか否かを実施例１と同様の方法で調べた。【０１０６】
（１）実験方法
１）Ｇ／ＣＰＣ練和物の調製
純金粒子含有比率の異なる３種の練和物（純金粒子濃度：３０重量％、３３重量％、もしくは、４０重量％）を調製した。それらをマイクロピペットで、ほぼ一定容量（約３０μＬ、または、１００μＬ）をｎ＝３で９６穴マイクロプレート（丸底）に注入するとともに、実施例１と同様に当該注入箇所の純金粒子含量（ｍｇ）を算出した（表４参照）。なお、各Ｇ／ＣＰＣ練和物調製時には専用練和液をＣＰＣ  １ｇに対して、約０．４ｍＬ使用した。【０１０７】
【表４】
2018038223.tif 000006
【０１０８】
２）画像認識性能の評価
上記の純金粒子／ＣＰＣ混合物を含む９６穴プレートを、アクリルファントムに載せ、Ｘ線透視装置（Ｘ線発生装置：島津製作所社製、ＵＤ１５０Ｂ−４０、Ｘ線画像取得用フラットパネルディテクタ：バリアンメディカルシステムズ社製、ＰａｘＳｃａｎ３０３０）によりＸ線透視画像を取得した。陽性コントロールとして、現在臨床で用いられている直径１．５ｍｍおよび２．０ｍｍの純金球形マーカー（ｉＧｏｌｄ）を留置した。アクリル板の厚さを１ｃｍから２５ｃｍまで段階的に変化させ、Ｘ線発生装置の管電圧を１１０ｋＶ、曝射時間を３ｍｓｅｃで固定とし、管電流は状況に応じて５０ｍＡ，８０ｍＡ，１６０ｍＡから選択し、各条件においてＸ線透視画像を１００枚程度取得した。各条件において、複数の画像のうちの１枚から評価対象とする純金粒子マーカーの画像を切り出してテンプレート画像を作成し、その他の画像に対して、あらかじめ作成したテンプレート画像との正規化相互相関によるテンプレートパターンマッチングを実施し、約１００枚の画像に対するテンプレートパターンマッチングから得られる相関係数の平均値が０．３を超えている場合は画像認識可（〇）、それ以下の場合には画像認識不可（×）と判定した。画像の階調処理とパターンマッチングには、画像処理ライブラリ（Ｍａｔｒｏｘ社製、Ｍａｔｒｏｘ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ９）を利用した。【０１０９】
（２）結果
詳細データは記載しないが、ニラコ社製（粒径：１〜２μｍ）の純金粒子を使用した純金濃度３０重量％、３３重量％、４０重量％の混合物に対する画像認識の可／不可の評価の結果、いずれの場合もＧ／ＣＰＣマーカーの純金含量に相関した画像認識性能を示し、純金濃度３０〜４０重量％の間では、有意な差は認められず、純金含量が約２０ｍｇ以上のＧ／ＣＰＣマーカーでは、純金球形マーカーと同等の画像認識性能を示した。【０１１０】
＜実施例４＞
［Ｇ／ＣＰＣ混合物中の純金濃度（重量％）と画像認識性能（その３）］
Ｇ／ＣＰＣ混合物中の純金粒子の重量濃度が６６重量％、および８０重量％の場合の画像認識性能に関して実施例１と同様な方法で調べた。【０１１１】
（１）実験方法
１）Ｇ／ＣＰＣ練和物の調製
実施例１とほぼ同様に、バイオペックス−Ｒ（ロングタイプ）粉末に粒子幅３３〜５３μｍの純金粒子を、Ｇ／ＣＰＣ混合物中での重量濃度が３３重量％（純金粒子重量（ｇ）：ＣＰＣ重量（ｇ）＝１：２）、６６重量％（純金粒子重量（ｇ）：ＣＰＣ重量（ｇ）＝２：１）、および８０重量％（純金粒子重量（ｇ）：ＣＰＣ重量（ｇ）＝４：１）になるように混合し、それぞれに専用練和液をＣＰＣ  １ｇ当り０．４〜０．５ｍＬ加え、Ｇ／ＣＰＣペーストを調製した。種々の大きさのＧ／ＣＰＣマーカー塊を形成させるため、当該Ｇ／ＣＰＣペーストを蒟蒻畑（株式会社マンナンライフ製；こんにゃく粉やゲル化剤（増粘多糖類）等からなる食物繊維を多く含むゲル状食品）中に種々の容量注入し、それらを３７℃で１晩放置した。その後、固化した塊を取りだし、大量の精製水中に１〜３日間放置した。得られた湿潤状態の塊の重量を測定、当該Ｇ／ＣＰＣマーカー塊中に含まれる金の含量を算出した。６６重量％、および８０重量％の純金粒子を含む小型の塊は、大型の塊を粉砕して作製し、得られた小型の塊の重量を測定して、純金粒子の含量を算出した。これらをそれぞれ９６穴プレートに配置し（表５参照）、画像認識性能評価用のサンプルとした。【０１１２】
【表５】
2018038223.tif 000007
【０１１３】
２）視認性、画像認識性能の評価
実施例１と同様な方法で上記のＧ／ＣＰＣマーカー塊が配置された９６穴プレートをアクリルファントムに載せ、Ｘ線透視装置（Ｘ線発生装置：島津製作所社製、ＵＤ１５０Ｂ−４０、Ｘ線画像取得用フラットパネルディテクタ：バリアンメディカルシステムズ社製、ＰａｘＳｃａｎ３０３０）によりＸ線透視画像を取得、評価した。陽性コントロールとして、現在臨床で用いられている直径１．５ｍｍおよび２．０ｍｍの純金球形マーカー（ｉＧｏｌｄ）を留置した。アクリル板の厚さを１ｃｍから２５ｃｍまで段階的に変化させ、Ｘ線発生装置の管電圧を１１０ｋＶ、曝射時間を３ｍｓｅｃで固定とし、管電流は状況に応じて５０ｍＡ，８０ｍＡ，１６０ｍＡから選択し、各条件においてＸ線透視画像を１００枚程度取得した。各条件で得られた純金粒子マーカーを含む９６穴プレートのＸ線透視画像から、マーカーの視認性を客観的に評価した。【０１１４】
また、各条件において、複数の画像のうちの１枚から評価対象とする純金粒子マーカーの画像を切り出してテンプレート画像を作成し、その他の画像に対して、あらかじめ作成したテンプレート画像との正規化相互相関によるテンプレートパターンマッチングを実施し、約１００枚の画像に対するテンプレートパターンマッチングから得られる相関係数の平均値が０．３を超えている場合は画像認識可（〇）、それ以下の場合には画像認識不可（×）と判定した。画像の階調処理とパターンマッチングには、画像処理ライブラリ（Ｍａｔｒｏｘ社製、Ｍａｔｒｏｘ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ９）を利用した。図３に、アクリル板の厚さを１ｃｍ、管電流が５０ｍＡのときのＸ線透視画像を示す。【０１１５】
（２）結果
表６には、純金含量６６重量％と８０重量％のＧ／ＣＰＣマーカー塊の画像認識性に関するデータを示す。いずれの純金濃度のＧ／ＣＰＣマーカー塊においても、純金含量依存的に画像認識性能の向上が認められ、約２０ｍｇの純金が含まれているＧ／ＣＰＣマーカー塊は、直径１．５ｍｍの球金マーカーと同等の画像認識性能が認められた。【０１１６】
ただし、今回の練和条件では、８０重量％のＧ／ＣＰＣペーストでは、顕著な粘度上昇が認められ、１８〜２１Ｇの細径針も通過せず、練和水を含む配合比の再検討が必要であることが示唆された。【０１１７】
【表６】
2018038223.tif 000008
【０１１８】
［実施例１〜４のまとめ］
実施例１〜４の結果より、以下のことが判明した。
・純金粒子の濃度が３０重量％〜８０重量％のＧ／ＣＰＣマーカーにおいては、画像認識性能は、当該Ｇ／ＣＰＣマーカーに含まれる金含量（ｍｇ）に依存する。
・３０〜８０重量％の純金粒子を含む（Ｇの重量：ＣＰＣの重量の比が、約１：２以上で４：１以下である）Ｇ／ＣＰＣマーカーにおいては、純金含量にして約２０ｍｇ以上含む、好ましくは球形に近い塊とすれば、少なくとも現行のＸ線透視検出装置（Flat Panel Detector）において、Ｘ線マーカーとして現在市販されている直径１．５ｍｍもしくは２．０ｍｍの球形金マーカーと同等、もしくはそれ以上の画像認識性能を有すると考えられる。【０１１９】
＜実施例５＞
［純金粒子の粒子幅の異なるＧ／ＣＰＣ練和物の画像認識性能の評価］
純金粒子の粒子幅の差異により画像認識性能に有意な差が有るか否かを実施例１と同様な方法で調べた。【０１２０】
（１）実験方法
１）Ｇ／ＣＰＣ練和物の調製
バイオペックス−Ｒ（ロングタイプ）（ＨＯＹＡ  Ｔｅｃｈｎｏｓｕｒｇｉｃａｌ社）の粉末約２ｇと４種の粒子幅の異なる純金粒子（粒子幅３２μｍ以下、３３〜５３μｍ、５４〜７５μｍ、および７６〜１５０μｍ）各約１ｇおよびバイオペックス−Ｒの専用練和液０．８ｍＬとを付属のすり鉢にて混合することにより、表７に示したような４種のペースト状の練和物を調製した。それらをマイクロピペットで、ほぼ一定容量（約３０μＬ、または、１００μＬ）をｎ＝３で９６穴マイクロプレート（丸底）に注入するとともに、実施例４と同様に当該注入箇所の純金粒子含量を算出した（表８参照）。なお、９６穴マイクロプレートに注入したＧ／ＣＰＣペーストは、数時間後には固化しており、それらを以下の試験に供した。また、用いた粒子幅３２μｍ以下、３３〜５３μｍ、５４〜７５μｍ、および７６〜１５０μｍの純金粒子は、いずれも純度９９．９９重量％以上であり、加熱溶融させた純金をアトマイザーで噴霧させて得られた純金の微粒子を、篩を用いて分画したものである。【０１２１】
【表７】
2018038223.tif 000009
【０１２２】
【表８】
2018038223.tif 000010
【０１２３】
２）画像認識性能の評価
実施例３と同様に、上記のＧ／ＣＰＣ混合物を含む９６穴プレートをアクリルファントムに載せ、Ｘ線透視装置（Ｘ線発生装置：島津製作所社製、ＵＤ１５０Ｂ−４０、Ｘ線画像取得用フラットパネルディテクタ：バリアンメディカルシステムズ社製、ＰａｘＳｃａｎ３０３０）によりＸ線透視画像を取得、評価した。【０１２４】
（２）結果
粒子幅３２μｍ以下の純金粒子での画像認識評価の結果のみを表９に示すが、粒子幅３２μｍ以下、３３〜５３μｍ、５４〜７５μｍ、または７６〜１５０μｍのそれぞれの純金粒子の混合物に対する画像認識の可／不可の評価の結果、純金粒子の粒子幅（３２μｍ以下から１５０〜７５μｍの間）による有意差は見られなかった。また、ニラコ社製（粒径：１〜２μｍ）のいずれの純金粒子においても、陽性コントロールの直径２ｍｍまたは直径１．５ｍｍの純金球形マーカーと同等もしくはそれ以上の画像認識性能が認められており、これら純金粒子の粒子幅による画像認識性能の有意差はほとんどないと考えられる。【０１２５】
【表９】
2018038223.tif 000011
【０１２６】
＜実施例６＞
［ＰＢＳ還流ブタ肝臓によるＧ／ＣＰＣマーカー留置実験］
冷凍保存または冷蔵保存していたブタ肝臓を用いたＧ／ＣＰＣペースト留置試験では、当該肝臓から摘出したＧ／ＣＰＣマーカー塊は、大きな塊を形成せず、多くの場合粒状を呈していた。そこで、約３７℃の擬似体液を潅流したブタ肝臓でマーカー塊形成の有無を確認した。【０１２７】
（１）実験方法
Ｋ２ＨＰＯ４  ２ｇ、ＫＣｌ  ２ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４  １１．５ｇ、ＮａＣｌ  ８０ｇを撹拌しながら純水に溶解させ、１０００ｍＬの擬似体液（ダルベッコリン酸緩衝食塩水：Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline（−）、以下Ｄ−ＰＢＳ（−）と称す。）を調製した。このＤ−ＰＢＳ（−）を純水で１０倍に希釈し、恒温槽で３７℃以上に加温した。ブタの肝臓の幹肝静脈もしくは門脈にシリコンチューブと結紮した。この肝臓を網上に置き、シリコンチューブをペリスタポンプと接続し、加温した上記１０倍希釈ｂｕｆｆｅｒ（Ｄ−ＰＢＳ（−））を潅流した。ブタの肝臓の表面がほぼ３７℃になってから、表１０に示す組成のＧ／ＣＰＣペーストを１８Ｇ、針長２０ｃｍの穿刺針にて留置した。マーカー留置後、約１時間、加温した１０倍希釈Ｄ−ＰＢＳ（−）を流入し、肝臓内部の温度を約３７℃に保った。その肝臓に１．５ｍｍと２ｍｍの純金マーカーを留置し、Ｘ線透視撮影を実施し、その後に当該肝臓からマーカー塊を摘出した。【０１２８】
【表１０】
2018038223.tif 000012
【０１２９】
なお、Ｘ線透視は、当該ブタ肝臓をヒトＸ線ファントムに載せて、Ｘ線透視装置（シーメンス社製、Ａｒｔｉｓ  Ｚｅｅ  Ｃｅｌｌｉｎｇ）を用いてＸ線透視を行った。さらに、コンピュータ断層画像装置（シーメンス社製、ＳＯＭＡＴＯＭ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ＡＳ６４）を用いてコンピュータ断層画像を撮像し、Ｘ線吸収値（ＣＴ値）を測定し、視認性を評価した。【０１３０】
（２）結果
結果を表１１に示す。【０１３１】
【表１１】
2018038223.tif 000013
【０１３２】
Ｎｏ．１とＮｏ．６を除くと、いずれもφ２ｍｍのｉＧｏｌｄと比較しても十分な視認性があるマーカー形成が認められた。摘出したマーカー塊は、およそ１００ｍｇ前後あり、１ｋｇ以上の力を加えても砕けることはないほど、十分に硬いマーカー塊が形成されていた。ただし、Ｎｏ．６に関しては、血管に注入したと思われ、筒状の形をしており視認性も他の塊に比較して低下していた。また、Ｎｏ．２〜Ｎｏ．５の塊は、組織内に強く埋設していた。【０１３３】
データを特に示さないが、同じようなＰＢＳ還流ブタ肝臓によるＧ／ＣＰＣマーカー留置実験において、Ｇ／ＣＰＣペーストの留置部位やペーストの水分含量等の違いで、小さな粒状の塊が生成される場合も多々あり、塊の形状や視認性の高い塊形成には、留置部位の水分が影響することが示唆された。また、バイオペックスと同様なＣＰＣである、セラペースト（日本特殊陶業（株））を実施例７の試験練和物の番号Ｐ２２と同じ配合比で練和した場合、Ｐ２２より注射用水の使用量が０．１ｍＬ少ない配合比で練和した場合等も、本試験同様に硬いＧ／ＣＰＣマーカー塊を形成した。また、ブタ肝臓にＧ／ＣＰＣペーストを留置した場合においても、純金含量として約５ｍｇ以上の金粒子を含むＧ／ＣＰＣマーカーは、ヒト骨盤ファントム上でのＸ線透視で十分な視認性が認められた。【０１３４】
＜実施例７＞
［細い注射針での粒子幅の異なる純金粒子による通過性］
暫定的に、練和開始からの注射針から目的部位への注入時間を約５分以内と想定して、室温（約２０℃）で練和開始から約５分以内の各Ｇ／ＣＰＣペーストの細い注射針での通過性を粒子幅の異なる純金粒子を用いて調べた。【０１３５】
（１）試料の調製法
バイオペックス−Ｒ（ロングタイプ）の粉末約２ｇと純金粒子（粒子幅：３２μｍ以下、３３〜５３μｍ、５４〜７５μｍ、または７６〜１５０μｍ）各約１ｇを付属のすり鉢にて混合し、バイオペックスの専用練和液と混合することにより、もしくは、セラペーストの粉末約１ｇ、純金粒子（粒子幅：３２μｍ以下）約０．５ｇ、およびセラペーストの硬化液等を混合することにより、純金粒子／ＣＰＣ練和物を５種作製した（表１２参照）。なお、専用練和液としては、ＣＰＣ粉末としてバイオペックス−Ｒを使用した場合は、バイオペックス−Ｒの専用練和液を０．８ｍＬ、ＣＰＣ粉末としてセラペーストを使用した場合は、セラペーストの硬化液０．３ｍＬと粘度調整水（注射用水）０．２ｍＬを使用した。調製したこれら練和物を適量充填した１ｍＬ容シリンジ（ＭＥＤＡＬＬＩＯＮ社製）に２２Ｇ金属針（針長：約４ｃｍ、内径：約０．５ｍｍ）を着装し、室温（約２０℃）で練和後約５分以内での当該注射針からの排出の可否を調査した。【０１３６】
【表１２】
2018038223.tif 000014
【０１３７】
（２）結果
上記の５種のペースト状練和物は、いずれも問題なく２２Ｇ注射針を通過した。しかし、２５Ｇ注射針（針長：約４ｃｍ、内径：約０．２５ｍｍ）では通過不可能であった。バイオペックス−Ｒのロングタイプと３３重量％の比率で混合された１５０μｍ以下の粒子幅の純金粒子とを専用練和液でペースト状にした練和物は、２２Ｇの注射針で通過可能と言える。【０１３８】
データの詳細を特に示さないが、ニラコ製の金粒子（粒径：１〜２μｍ、純品番：ＡＵ−１７４０１５）を、上記と同様にバイオペックス−Ｒ（ロングタイプ）との練和物を調製した場合、２２Ｇ注射針から排出できなかった。ただし、当該金粒子をメノー製乳鉢で再粉砕後、同様に練和物を調製し、２２Ｇ注射針での通過性を調べると、問題なく通過した。本実施例で使用したニラコ社製品（品番：ＡＵ−１７４０１５；粒径１〜２μｍ）の乳鉢粉砕品の粒度分布をレーザー回折・散乱法を用いて測定したところ２つのピークが認められ、粒径約１μｍ前後の金粒子のみならず、約１０〜２００μｍの範囲にも約５０％もの金粒子が存在していた。これらのことはニラコ社製の微小な純金粒子の場合、凝集塊が発生し易いことを示唆している。図４および図５に、粒子幅７５〜５４μｍの純金粒子、および上記ニラコ社製の乳鉢粉砕品の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）の写真をそれぞれ示した。図４では、特に、微細な粒子間での凝集が良く認められ、さらに、図５では、ほとんどの微細な球形粒子がぶどう状に凝集した大きな塊が高頻度で観察され、これらは、微細な純金粒子では凝集塊が発生し易いことを示唆している。【０１３９】
＜実施例８＞
［Ｇ／ＣＰＣペーストの粒子幅の異なる金粒子による穿刺針（針長：２０ｃｍ）通過性］
上記実施例７では、Ｇ／ＣＰＣペーストの細い針の通過性を針長約４ｃｍの細径針で評価したが、医療用の穿刺針としては、長さ５ｃｍ〜２０ｃｍで１８Ｇ〜２２Ｇの製品が一般的であること、特に、内視鏡に装着して使用する製品では、先端部分が１９Ｇ〜２５Ｇで長さが約１ｍ程度の穿刺針（Ｍｅｄｉ−Ｇｌｏｂｅ社、ＳｏｎｏＴＩｐ  Ｐｒｏ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）もあること等を考慮し、臨床現場で最も代表的に使用されている針長２０ｃｍ穿刺針で２０Ｇ〜２２Ｇの細径針での通過性を目標に、Ｇ／ＣＰＣペーストの通過性を評価することとした。【０１４０】
ところでニラコ社製の金粒子（品番：ＡＵ−１７４０１５；粒径１〜２μｍ）を、特に粉砕処理または篩過処理せずに、バイオペックス２ｇ、純金粒子１ｇ、および練和液０．８ｍＬと練和した場合、１８Ｇ（内径：１．０７ｍｍ、断面積：０．８９９ｍｍ２）の穿刺針（クリエート・メディック製、針長：２０ｃｍ）を通過させるのが限界で、１９Ｇ（内径：０．７３ｍｍ、断面積：０．４１８ｍｍ２）の穿刺針（クリエート・メディック製、針長：２０ｃｍ）は通過しなかった。このニラコ社製純金粒子（未粉砕品）の粒度分布を調べると、本来の粒径１〜２μｍの粒子はほとんど認められず、むしろ約３００から６００μｍ近辺（Ｄ５０値を示す粒子径：約４４６μｍ）の金粒子が主流を占めていた。さらにまた、純金微粒子の調製過程で０．３ｍｍの目開きの篩で、粒子幅０．３ｍｍ以上の金粒子分画（Ｄ５０値：１８２μｍ、Ｄ９０値：２２６μｍ、粒子径約４００μｍまでの累積分布：１００％））を取得し、この純金粒子と市販のバイオペックス−Ｒおよびその専用練和液とを用いて３３重量％（金粒子とＣＰＣの重量比が１：２）のＧ／ＣＰＣペーストを調製し、穿刺針（針長：２０ｃｍ）での通過性を調べた。当該ペーストにおいても１８Ｇの穿刺針を通過するのが限界で、１９Ｇの穿刺針は通過できなかった。すなわち、先行技術（非特許文献１１）として報告した、直径０．７±０．１ｍｍまたは０．４±０．１ｍｍの純金粒子と市販のバイオペックスとを用いたＧ／ＣＰＣペーストでは、上記２種の純金粒子と同様に１８Ｇ（内径：１．０７ｍｍ、断面積：０．８９９ｍｍ２）の穿刺針（針長：２０ｃｍ）を通過させるのが限界であると考えられた。【０１４１】
そこで、純度９９．９９重量％以上の純金の加熱溶融物からアトマイザー法で調製した純金粒子で、目開き（ＪＩＳ  Ｚ  ８８０１）１５０μｍ、７５μｍ、５３μｍ、および３２μｍの篩を用い、順に篩い分けして得られた粒子幅１５０〜７６μｍ、７５〜５４μｍ、５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下の画分の純金粒子、および３２μｍ以下の画分を２０μｍの篩でさらに分画した２０μｍ以下の画分を用いてＧ／ＣＰＣペーストの針長２０ｃｍ穿刺針での通過性能を室温（２０〜２５℃）で調べることとした。【０１４２】
（１）実験方法および結果
表１３に示す条件で、粒子幅の異なる純金粒子と市販品のバイオペックス−Ｒ  スタンダードを用いてＧ／ＣＰＣペーストを調製し、内径の異なる２０Ｇ（内径：０．７０ｍｍ、断面積：０．３８５ｍｍ２）、２１Ｇ（内径：０．５９ｍｍ、断面積：０．２７３ｍｍ２）、２２Ｇ（内径：０．５３ｍｍ、断面積：０．２２１ｍｍ２）の針長２０ｃｍの穿刺針（東郷メディキット製）を用いて、それぞれのＧ／ＣＰＣペーストの穿刺針での通過性を調べた。【０１４３】
【表１３】
2018038223.tif 000015
【０１４４】
この試験により、粒子幅１５０〜７６μｍおよび２０μｍ以下の金粒子画分は明らかに通過性で見劣りがし、粒子幅５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下の金粒子画分が好ましいこと、特に粒子幅３２μｍ以下の画分の純金粒子を含む場合は、２１Ｇの針長２０ｃｍ穿刺針を通過することができ、より好ましいことが示された。すなわち、長い細径針通過性の観点から好ましい純金粒子は、粒子幅５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下であり、より好ましくは粒子幅３２μｍ以下であり、ただし、粒子幅２０μｍ以下の粒子を含まない純金粒子と言える。ところで、粒子幅２０μｍ以下の画分の粒度分布を調べると、むしろＤ５０値やＤ１０値の低下は見られずに、Ｄ９０値の増加が顕著で、特に約１００μｍを超す粒子径の部分に肩が認められ、これら凝集した純金粒子が通過性に影響したと思われる。【０１４５】
＜実施例９＞
［ＣＰＣ篩過画分を用いたＧ／ＣＰＣペーストの穿刺針（針長：２０ｃｍ）通過性］
（１）市販の各種ＣＰＣを篩分けし、穿刺針（針長：２０ｃｍ）通過性に対する効果をＣＰＣ単独のペーストにおいて、およびＧ／ＣＰＣペーストにおいて調べた。【０１４６】
（１−１）ＣＰＣペーストの調製
各種バイオペックス製品およびセラペースト（日本特殊陶業製）を目開き（ＪＩＳ  Ｚ  ８８０１）７５μｍ、５３μｍ、および３２μｍの篩を用いて順に篩い分け、それぞれ粒子幅７５〜５４μｍ、５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下のＣＰＣをそれぞれ得た。特に、３２μｍの篩を通過したＣＰＣ粉末について、それらを表１４に示す量の専用練和液または硬化液を加えてペーストを調製し、それぞれＣＰＣ単独での穿刺針通過性を市販品と比較した。穿刺針は、２０Ｇ（内径：０．７０ｍｍ、断面積：０．３８５ｍｍ２），２１Ｇ（内径：０．５９ｍｍ、断面積：０．２７３ｍｍ２），２２Ｇ（内径：０．５３ｍｍ、断面積：０．２２１ｍｍ２）の針長２０ｃｍの穿刺針（東郷メディキット製）を用いた。【０１４７】
【表１４】
2018038223.tif 000016
【０１４８】
（１−２）結果
市販品のＣＰＣの３２μｍの篩を通過させた画分は、明らかに穿刺針（針長：２０ｃｍ）通過性が改善しており、いずれもＣＰＣ単独ペーストで２２Ｇの穿刺針通過性を確認した。【０１４９】
（２）上記の実施例で、ＣＰＣ単独では３２μｍの篩で篩過した画分の粉末が特に穿刺針（針長：２０ｃｍ）の通過性が好ましかったことより、純金粒子およびＣＰＣの両者の粒子幅の異なる紛体を混合し、各種Ｇ／ＣＰＣペーストでの穿刺針（針長：２０ｃｍ）通過性を調べた。【０１５０】
（２−１）Ｇ／ＣＰＣペーストの調製
上記の実験で篩分けした各種ＣＰＣ画分を用い、純金粒子の粒子幅の異なるものと、実施例８と同じ配合比で純金粒子、ＣＰＣおよび練和液を練和し、ペーストを作製した。２０Ｇ（内径：０．７０ｍｍ、断面積：０．３８５ｍｍ２）、２１Ｇ（内径：０．５９ｍｍ、断面積：０．２７３ｍｍ２）、２２Ｇ（内径：０．５３ｍｍ、断面積：０．２２１ｍｍ２）の針長２０ｃｍの穿刺針（東郷メディキット製）、および、１８Ｇ（内径：１．０７ｍｍ、断面積：０．８９９ｍｍ２）、１９Ｇ（内径：０．７３ｍｍ、断面積：０．４１８ｍｍ２）、２１Ｇ（内径：０．５４ｍｍ、断面積：０．２２９ｍｍ２）、２２Ｇ（内径：０．５４ｍｍ、断面積：０．２２９ｍｍ２）の穿刺針（クリエート・メディック製、針長：２０ｃｍ）を用いた。【０１５１】
（２−２）結果
結果の一部を表１５に示すが、総じて、純金粒子の粒子幅が５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下の純金粒子で、ＣＰＣが５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下の粒子幅の場合が好ましく、特に純金粒子およびＣＰＣが共に粒子幅３２μｍ以下の場合は、２２Ｇの穿刺針も通過することがわかった。すなわち、上記実施例８で述べたように非特許文献１１で開示した先行技術（０．４±０．１ｍｍの純金粒子と市販のバイオペックスとを用いたＧ／ＣＰＣペースト）では１８Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）を通過するのが限界であったが、本発明のＧ／ＣＰＣペーストでは２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）を通過できた。１８Ｇと２２Ｇの穿刺針の断面積には、約４倍もの差異があり、純金粒子とＣＰＣの粒子径分布の調整により、顕著な効果が得られることがわかった。なお、３２μｍ篩で篩過したバイオペックスの粉末の中でも、エクセレントタイプ由来の粒子幅３２μｍ以下の粉末は、粒子幅３２μｍ以下の純金粒子と練和した場合においても、特に優れた細径針通過性を示した。【０１５２】
ところで、上記試験の大部分は、１ｇのＣＰＣに対して約０．４ｍＬ〜０．５ｍＬの練和液（または、硬化液＋注射用水）で実施したが、ＣＰＣの２０ｃｍ穿刺針通過性を調べると、０．３５ｍＬ／ｇの練和水配合の場合は、０．４ｍＬ／ｇの場合と同様であったが、０．３０ｍＬ／ｇ以下では通過性の低下傾向が認められた。一方、市販品のＣＰＣと混合する純金粒子の粒子幅を変化させた場合、Ｇ／ＣＰＣペーストの粘度（国際特許出願公開第２０１６／１３７０１３の実施例１１参照）、および穿刺針通過性に有意な差異はないこと、純金粒子とＣＰＣの配合比が極端に高い場合（８０重量％）を除くと同様な通過性であったこと、また、練和液が０．５ｍＬ／ｇの場合でも潅流ブタ肝臓内で十分固化したこと等を考慮すると、１ｇのＣＰＣに対する練和液の容量での配合比は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．６ｍＬ／ｇの範囲であることが好ましく、約０．３５ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることがより好ましいと言える。【０１５３】
【表１５】
2018038223.tif 000017
【０１５４】
ニラコ社製品（品番：ＡＵ−１７４０１５；粒径１〜２μｍ）においても、乳鉢粉砕後に３２μｍの篩で篩過した金粒子分画を、同様に３２μｍの篩で篩過したバイオペックス−Ｒ（エクセレント（ＥＸ））と練和したＧ／ＣＰＣペーストも、２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）を容易に通過した。【０１５５】
＜実施例１０＞
［金粒子の粒度分布の測定］
純度９９．９９重量％以上の純金の加熱溶融物からをアトマイザー法で調製した純金粒子を目開き（ＪＩＳ  Ｚ  ８８０１）１５０μｍ、７５μｍ、５３μｍ、および３２μｍの篩を用いて順に篩い分けし、得られた粒子幅１５０〜７６μｍ、７５〜５４μｍ、５３〜３３μｍ、および３２μｍ以下の画分の純金粒子、および３２μｍ以下の画分を２０μｍの篩でさらに分画した粒子幅２０μｍ以下の画分の純金粒子、さらには、ニラコ社製純金粒子のメノー乳鉢粉砕品ならびにその純金粒子を３２μｍの篩を用いてさらに篩い分けした粒子幅３２μｍ以下の画分の純金粒子について、それぞれの粒度分布を以下の方法で測定した。【０１５６】
（１）実験方法
純金粒子の粒度分布は、Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ製（ＭＴ３０００ＩＩ）粒子径分布測定装置を使用し、ＩＰＡ（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  Ａｌｃｏｈｏｌ）を分散媒とする湿式法で、いずれも測定回数はＡｖｇ／２、測定時間は３０秒で実施した。粒子径分布を累積分布として表す場合、細かい粒子の側をゼロとして表示し、Ｄ５０、Ｄ１０、およびＤ９０等が分布を表すのに使用される。なお、Ｄ５０値は、大きい側と小さい側が等量となる径のことでメジアン径（メディアン径）とも呼ばれており、Ｄ１０は、粒子径が小さい側から１０％の累積分布の粒子径であり、Ｄ９０は、粒子径が大きい側から１０％の累積分布の粒子径である。ＭＶは、体積平均径、ＭＮは、個数平均径、ＭＡは、面積平均径を表す。【０１５７】
（２）結果
結果を図６（ａ），（ｂ），（ｃ），（ｄ）、図７（ａ），（ｂ）、表１６に示す。【０１５８】
【表１６】
2018038223.tif 000018
【０１５９】
上記結果から、長い細径針の通過性に適した純金粒子は、Ｄ５０値では２０〜３５μｍの範囲であり、より好ましくは２０〜３０μｍの範囲であり、さらに好ましくは２２〜２７μｍの範囲である。さらに、上記Ｄ５０値の範囲であって、好ましくはＤ１０値が１０μｍ以上で、かつＤ９０値が５５μｍ以下である純金粒子、さらに好ましくは、Ｄ１０値が１２μｍ以上で、かつＤ９０値が、４８μｍ以下の純金粒子であり、特に好ましくは、上記Ｄ５０値の範囲であって、Ｄ１０値が１３μｍ以上で、かつＤ９０値が、４４μｍ以下の純金粒子であると考えられる。なお、Ｄ５０が約４０μｍを超えると針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。【０１６０】
また、好ましい純金粒子を体積平均径（ＭＶ）で表示すると、好ましくは２０〜３８μｍの範囲であり、より好ましくは２０〜３０μｍの範囲であり、さらに好ましくは２３〜２９μｍの範囲である。なお、純金粒子のＭＶが約４５μｍを超えると針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。【０１６１】
一方、表１６に示したように粒子幅３２μｍ以下の純金粒子（表１６−２））でのＤ９０値は４０．０６μｍであり、その近傍である粒子径４０．３５μｍまでの累積頻度を比較すると、上記表１６に記載の１）、２）、３）、４）、５）および７）の純金粒子では、それぞれ８７．８２％、９０．３０％、７３．４４％、４７．８６％、７．４７％、および、９３．１３％であった。また、粒子径３２μｍ近傍（３１．１１μｍ）までの累積頻度を比較すると、それぞれ７１．３３％、７５．０８％、４７．２０％、２８．５０％、６．１４％、および８６．８２％であった。さらに、粒子径約１００μｍ近傍（９５．９６μｍ）までの粒子径分布の累積頻度を比較すると、それぞれ９７．２０％、９９．９５％、９８．９１％、９７．０４％、３１．７９％および９９．０２％であった。したがって、粒子径分布の累積頻度で表示すると、粒子径約４０μｍ以下の粒子の累積頻度（体積比）は７０％以上が好ましく、８５％以上がより好ましく、粒子径約３１μｍまでの累積頻度（体積比）では４５％以上が好ましく、７０％以上がより好ましいと言える。さらには、粒子径約９６μｍ以上の粒子の累積頻度（体積比）では、好ましくは約１．５％以下であり、より好ましくは約１％以下であり、さらに好ましくは約０．２％以下であることが示唆された。なお、純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％を超えると、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。【０１６２】
＜実施例１１＞
［ＣＰＣ粉末の粒度分布の測定］
（１）実験方法
ＣＰＣ粉末の粒度分布は、レーザー回折・散乱式粒子径分布測定装置Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ  ＭＴ３３００ＥＸ−ＩＩ（マイクロトラック・ベル株式会社）を使用し、水を分散媒とする湿式法で、いずれも測定回数はＡｖｇ／３、測定時間は１０秒で実施した。【０１６３】
（２）結果
結果を図８（ａ），（ｂ），（ｃ），（ｄ）、および表１７に示す。【０１６４】
【表１７】
2018038223.tif 000019
【０１６５】
図８および表１７より、長い細径針の通過性に適したＣＰＣは、体積平均径（ＭＶ）の観点からは、３〜１２μｍの範囲であり、より好ましくは４〜８μｍの範囲である。また、Ｄ９０値では、好ましくは１０〜３０μｍの範囲であり、より好ましくは１０〜２０μｍの範囲である。ＣＰＣ粉末のＤ９０値が約６０μｍを超すと、Ｇ／ＣＰＣペーストの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）からの通過性が困難となる場合がある。【０１６６】
ところで、図８からわかるように目開き３２μｍの篩で篩過したＣＰＣ粉末では、市販品と比較していずれも粒子径約３０〜４０μｍを超す粒子の画分が大幅に減少していた。ちなみに、表１７の１）、２）、３）および４）のＣＰＣにおける、３１．１１μｍまでの粒径分布の累積頻度（体積比）は、それぞれ８３．１４％、７４．９６％、９７．６７％、および９５．１６％であった。すなわち、細い穿刺針通過性に好ましいＣＰＣ粉末は、粒径約３１μｍを超す粒子の分布（体積比）が約１０％以下であり、より好ましくは、約６％以下であり、さらに好ましくは、約３％以下あることが示された。なお、ＣＰＣ粉末の粒子径分布において約３１μｍを超す粒子の存在比率（体積比）が２０％を超すとＧ／ＣＰＣペーストの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）からの通過性が困難となる場合がある。【０１６７】
＜実施例１２＞
［イヌ肝臓への留置試験］
生体の肝臓に注入した場合に、本発明のＧ／ＣＰＣ練和物が画像認識性能を有する塊を速やかに形成するか否か、それらＧ／ＣＰＣマーカーは長期に安定に存在するか、および、生体に対する安全性上の問題が有るか否かを把握するために、イヌ生体への留置試験を実施した。【０１６８】
（１）試料の調製および注入法
バイオペックス−Ｒ（スタンダードタイプ）の粉末約３ｇと、純金粒子（粒子幅：３２μｍ以下）約１．５ｇを付属のすり鉢にて混合後、バイオペックス−Ｒの専用練和液１．２ｍＬと練和することにより、純金粒子／ＣＰＣ（以下、Ｇ／ＣＰＣと称す。）練和物を調製した。調製したこれら練和物を適量充填した１ｍＬ容シリンジを２０Ｇ金属針（針長：約２０ｃｍ）に着装し、室温（約２０℃）でイヌ生体肝臓に対して注入を施行した（図９参照）。【０１６９】
４頭のイヌ肝臓に大量の当該ペースト（約０．１ｍＬ×１０回）を注入し、２頭は当日に、残り２頭は２８日後に肝臓内に留置したＧ／ＣＰＣマーカーの画像認識性能を調べるとともに、２８日まで経過観察したイヌに関しては、臨床検査値の推移を追跡、当該マーカー埋設近傍の組織観察等、毒性学的な評価も行った。Ｇ／ＣＰＣペーストをイヌ肝臓に注入約１時間後に肝臓を取り出し、速やかに冷却後、その一部をマーカー塊形成の有無の評価に供した。【０１７０】
１頭目の注入は、開腹下に施行し、目視下にＧ／ＣＰＣペーストを注入した。２頭目は皮膚のみ剥離した状態で簡易な超音波画装置（ＵＳ）の画像を参考に、経皮的に肝臓への注入を試みたが、使用したＵＳ機器の性能などの問題により正確に注入することが困難であった。３頭目、４頭目の注入はいずれも開腹下に施行し、目視下に同Ｇ／ＣＰＣを注入した。【０１７１】
（２）評価方法および結果
２−１）イヌ肝臓留置Ｇ／ＣＰＣマーカーの塊形成
１頭目、および２頭目はＧ／ＣＰＣペースト注入約１時間後に屠殺し、肝臓を取り出した。目視下で注入した１頭目は問題なく肝臓に注入されていたが、簡易な超音波画装置を用いた２頭目は肝表面や腹腔内にＣＰＣが存在し、肝内に正確に注入されていたものはなかった。一部胃壁内に注入され明らかな塊を形成していたものがあり、これはＸ線透視でも十分確認できたことより、本発明のＧ／ＣＰＣマーカーは、消化管壁内への注入、利用が可能であることが強く示唆された。【０１７２】
これまでの摘出ブタ肝臓への留置試験では、肝臓の温度が低い場合、注入ペーストの水分が高い場合、その他の理由でＧ／ＣＰＣマーカー塊の形成が適切でない（小さな粒の形成）場合等が、高い頻度で見受けられたが、イヌ肝臓留置Ｇ／ＣＰＣマーカーにおいては、Ｇ／ＣＰＣペースト約０．１ｍＬの留置に対して多くの場合約１００ｍｇ前後の塊形成が認められた。ただし、一部では、Ｇ／ＣＰＣペーストの注入部位からの逆流等があり、形成塊が小さい場合もあったが、いずれも肝臓組織にしっかりと埋設されていた。なお、国際特許出願公開第２０１６／１３７０１３号で開示したように、同様のＧ／ＣＰＣペースト約０．１ｍＬを、グルコマンナンを含むゲル状組成物（商品名：蒟蒻畑、株式会社マンナンライフ製）に注入した場合や摘出後のブタ肝臓に注入した場合では、今回の生犬の肝臓に注入した場合のような、注入部位からの顕著なペーストの漏出は認められておらず、原因が不明であった。【０１７３】
２８日後のイヌにおいても、ほぼ１００ｍｇ前後のマーカー塊が肝臓から摘出され、形成されたマーカー塊が２８日間ほぼ形状保持されることが示唆された。【０１７４】
２−２）イヌ肝臓留置Ｇ／ＣＰＣマーカーの画像認識性能評価
（評価方法）
イヌの肝臓にＧ／ＣＰＣペーストを注入し、注入約１時間後および注入２８日経過後に摘出した肝臓に留置されたＧ／ＣＰＣマーカーの画像認識性能を評価した。摘出肝臓をアクリルファントムに載せ、Ｘ線透視装置（Ｘ線発生装置：島津製作所社製、ＵＤ１５０Ｂ−４０、Ｘ線画像取得用フラットパネルディテクタ（ＦＰＤ）：バリアンメディカルシステムズ社製、ＰａｘＳｃａｎ３０３０）によりＸ線透視画像を取得した。陽性コントロールとして、現在臨床で用いられている直径１．５ｍｍおよび２．０ｍｍの純金球形マーカー（ｉＧｏｌｄ）を、２８日後の摘出肝臓では、さらに直径０．２８ｍｍ、長さ１０ｍｍおよび２０ｍｍの９９．５重量％の金と０．５重量％の鉄の合金の線状マーカー（Ｇｏｌｄ  Ａｎｃｈｏｒ）を摘出肝臓に貼り付けた。アクリル板の厚さを１ｃｍから２５ｃｍまで段階的に変化させ、Ｘ線発生装置の管電圧を１１０ｋＶ、曝射時間を３ｍｓｅｃで固定とし、管電流は状況に応じて５０ｍＡ，８０ｍＡ，１６０ｍＡから選択し、各条件においてＸ線透視画像を１００枚程度取得した。各条件で得られたＸ線透視画像から、複数の画像のうちの１枚から評価対象とする純金粒子マーカーの画像を切り出してテンプレート画像を作成し、その他の画像に対して、あらかじめ作成したテンプレート画像との正規化相互相関によるテンプレートパターンマッチングを実施し、約１００枚の画像に対するテンプレートパターンマッチングから得られる相関係数の平均値が０．３を超えている場合は画像認識可、それ以下の場合には画像認識不可と判定した。画像の階調処理とパターンマッチングには、画像処理ライブラリ（Ｍａｔｒｏｘ社製、Ｍａｔｒｏｘ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ９）を利用した。【０１７５】
（結果）
アクリル板厚さ１ｃｍの場合のＸ線透視画像を図１０に示す。画像の目視確認による定性的な評価から、Ｇ／ＣＰＣマーカーは、各陽性コントロールのマーカーと同等もしくはそれ以上の視認性が認められた。また、テンプレートパターンマッチングによる評価において、各陽性コントロールのマーカーと同等もしくはそれ以上の画像認識性能を示した（表１８参照）。また、イヌ肝臓に注入し、約１時間後に取り出した肝臓においても同様に評価し、Ｇ／ＣＰＣマーカーが２８日後の摘出肝臓中のＧ／ＣＰＣマーカーと同様の画像認識性能を有していることを確認し、本発明のＧ／ＣＰＣマーカーがイヌ生体肝臓中でも約１ヶ月間安定して存在することを示唆した。【０１７６】
【表１８】
2018038223.tif 000020
【０１７７】
なお、上記実験に用いた２８日後の摘出肝臓からＧ／ＣＰＣマーカー塊を摘出し、当該Ｇ／ＣＰＣマーカー塊の画像認識性能を同様に評価したところ、摘出肝臓内に留置していた場合のデータとほぼ同じ結果が得られ、本発明のＧ／ＣＰＣマーカーは、肝臓内で生成したＧ／ＣＰＣマーカー塊に由来することが示唆された。【０１７８】
２−３）Ｇ／ＣＰＣを生体肝臓に留置したイヌでの安全性評価
２０Ｇの穿刺針においては、肝臓からの顕著な出血は認められなかった。術式の都合上、イヌ腹部を切開、肝臓が直接確認できる状態でのＧ／ＣＰＣペースト注入であったため、ＣＲＰや総白血球の一過性の増加等、炎症反応の惹起を示す血液・生化学的変化が認められたが、上記術式のためであると言える。【０１７９】
肝実質細胞への傷害を反映した検査値異常としては、（ＡＳＴ（ＧＯＴ）：Asparatate Aminotransferase）、（ＡＬＴ（ＧＰＴ）：Alanine aminotransferase）、（ＡＬＰ: Alkaline phosphatase）の一過性の上昇が挙げられるが（図１１参照）、いずれも一過性であること、および注入量が臨床での使用予定（約３０μＬ〜５０μＬ）より大幅に多いことを踏まえると、本発明品の肝臓への留置は、毒性学的に軽微であると言える。病理学的にも、肝臓内のＧ／ＣＰＣマーカー塊の周囲では被膜を形成しているだけで、壊死、炎症等の肝細胞に対する刺激性、毒性は認められなかった。【０１８０】
（まとめ）
これまでの摘出ブタ肝臓やＤ−ＰＢＳ（−）循環摘出ブタ肝臓では、十分確認できなかった以下の課題が確認され、放射線治療用の病変識別マーカーとして生体に留置可能であることが強く示唆された。【０１８１】
（１）イヌ肝臓に注入した本発明のＧ／ＣＰＣペーストは、速やかに塊形成が生じており、血流への流出、肺栓塞を生じさせる小塊の血管流出等は発生していない。
（２）得られたＧ／ＣＰＣマーカー塊は、既存の金マーカーと同等の画像認識性能を有しており、さらに、ペースト中の金粒子含量の増加やペースト留置量の増加を図れば、Ｘ線透視の困難な体幹の大きなヒトにも既存の金マーカー以上の画像認識性能、追跡性能を発揮することが十分期待できる。当然ながら、Ｘ線透視の容易な部位には注入量を減少させても対応可能である。
（３）約１か月後においても生成されたＧ／ＣＰＣマーカー塊は、追跡可能性を維持して存在している。
（４）臨床検査値の推移や病理組織解析から、注入直後には、一過性の肝実質組織へのダメージは認められるものの、それらは軽微であり、速やかに回復することより、臨床使用可能性が高い。【０１８２】
以上のように、Ｘ線吸収性のある純金の微粒子を体内の任意の部位に、放射線治療の種類、および、治療標的部位に適した任意の量、非常に低い侵襲性で留置することが可能であり、かつ放射線治療装置で留置部位を長期間特定できる、放射線治療用の病変識別マーカーおよび放射線治療用の病変識別マーカーキットが得られた。【０１８３】
＜実施例１３＞
［ＣＰＣの各種篩過品を用いたＣＰＣペーストまたはＧ／ＣＰＣペーストの細径針通過性（その２）］
（１）実施例７および実施例９の結果を参考に、再度、市販の各種ＣＰＣを篩分けした粉末を調製し、穿刺針（針長：２０ｃｍ）、および針長３−４ｃｍの細径針での通過性をＣＰＣ単独のペーストにおいて、およびＧ／ＣＰＣペーストにおいて調べた。穿刺針（針長：２０ｃｍ）としては実施例９で使用した東郷メディキット製穿刺針とクリエート・メディック穿刺針（医療機器承認番号２０１６００ＢＺＺ００５５５０００）を使用した。なお、クリエート・メディック製の２２Ｇ穿刺針の内径は０．５４ｍｍであり、東郷メディキット製の２２Ｇ穿刺針（内径：０．５３ｍｍ）とほぼ同等である。【０１８４】
（２）ＣＰＣ篩過品の調製
各種バイオペックス製品（ＨＯＹＡ  Ｔｅｃｈｎｏｓｕｒｇｉｃａｌ製）およびセラペースト（日本特殊陶業製）を目開き（ＪＩＳ  Ｚ  ８８０１）１５０μｍ、１００μｍ、７５μｍ、５３μｍ、３２μｍ、２５μｍ、または２０μｍのいずれかの篩を用いて篩過した粉末を調製し、それらの市販品（未篩過）も含めて代表的なものを表１９に表示した。篩過は、Ｔａｐボール（鉄心入のポリウレタンボール（Φ１５ｍｍ））を５〜１０個篩の上面に添加し、手動で篩過する方法、または、音波篩（セイシン企業製、ＧＡ−８型）を用いる方法にて行った。篩過施設として、Ａ（自大学内施設）、Ｂ（企業施設）、Ｃ（委託先施設）を用いた。【０１８５】
【表１９】
2018038223.tif 000021
【０１８６】
（３−１）ＣＰＣペーストの調製および細径針通過性
表１９に記載した各種ＣＰＣ粉末に対して、バイオペックス−Ｒの場合は各１ｇのＣＰＣに０．４ｍＬの専用練和液、セラペーストの場合は各１ｇのＣＰＣに対して０．４５ｍＬの硬化液を加え室温で練和し、練和開始後約５分以内に２２Ｇ〜２５Ｇの細径針（針長：３−４ｃｍ、内径：約０．５ｍｍ（２２Ｇ）、約０．３５ｍｍ（２３Ｇ）、約０．３ｍｍ（２４Ｇ）、約０．２５ｍｍ（２５Ｇ））における当該ペーストの通過性を調べた（表２０）。すなわち、セラペースト以外のＣＰＣ市販品では、２３Ｇ以下の細径針を通過できなかったが、特に３２μｍ以下の篩で篩過した粉末では、短い細径針（針長：３−４ｃｍ）であれば２５Ｇであっても通過する場合があった。【０１８７】
【表２０】
2018038223.tif 000022
【０１８８】
（３−２）Ｇ／ＣＰＣペーストの調製および穿刺針（針長：２０ｃｍ）通過性
実施例９の表１５では、３２μｍの篩で篩過した各種ＣＰＣと、同様に３２μｍの篩で篩過した金粒子をＣＰＣ（ｇ）：金粒子（ｇ）＝２：１（重量比）に対して、専用練和液をＣＰＣ（ｇ）：専用練和液（ｍＬ）＝１：０．４（重量：用量）の比率で添加・練和した練和物（ペースト状態）が、針長２０ｃｍの２２Ｇの穿刺針（外径約０．７ｍｍ、内径約０．５ｍｍ；市販のディスポーザブル穿刺針としては最も細い針）をも通過することを示した。そこで本実施例では、表１９に記載したように篩過条件が前述（表１５）とほぼ同じ、または異なる各種ＣＰＣ粉末を調製し、各１ｇのＣＰＣに対して０．５ｇの金粒子（３２μｍ篩過品）、さらにバイオペックス−Ｒの場合は０．４ｍＬの専用練和液を、またはセラペーストの場合は０．４５ｍＬの硬化液を加え、それぞれ室温（約２５℃）で練和し、練和開始後約５分以内に２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ；クリエート・メディック製または東郷メディキット製）における当該練和物（ペースト状）の通過性を再度調べた。表２１に、クリエート・メディック製穿刺針（針長：２０ｃｍ）を使用した場合の結果を示すが、２２Ｇの東郷メディキット製の穿刺針（針長：２０ｃｍ）の場合も同様な結果が得られた。なお、表２１にデータは特に示さないが、バイオペックス−Ｒ  エクセレントの市販品またはその１５０μｍ篩での篩過品を用いたＧ／ＣＰＣペーストは、いずれも１８Ｇ穿刺針（針長：２０ｃｍ；内径：１．０７ｍｍ）は通過したが、それ以上細い穿刺針は通過せず、同様に１００μｍ篩での篩過品を用いたＧ／ＣＰＣペーストは２１Ｇ穿刺針（針長：２０ｃｍ；内径０．５９ｍｍ）までは通過したが、２２Ｇ穿刺針は通過しなかった。また、ＣＰＣ単独練和物（金粒子を含まないＣＰＣのみのペースト）においても同様な穿刺針通過性を調べ、３２μｍの篩で篩過した金粒子を含む場合とほぼ同様な穿刺針通過性を示すことを確認した。【０１８９】
すなわち、バイオペックス−Ｒにおいては、７５μｍ〜２０μｍの目開きの篩で篩った篩過品を使用した場合、３２μｍの篩で篩過した金粒子の有無にかかわらず２２Ｇ穿刺針（針長：２０ｃｍ）を通過することが可能であり、さらに、３２μｍの篩でのバイオペックス−Ｒ  エクセレントの篩過品では、２５Ｇの細径針（針長：３−４ｃｍ）もほぼ通過可能であった。また、バイオペックス−Ｒの各成分を予め３２μｍの篩（表２３のＣ１０のケース）、もしくは２５μｍの篩でそれぞれ分級後、バイオペックス−Ｒの成分組成に混合した粉末も、上記同様に２２Ｇ穿刺針（針長：２０ｃｍ）を通過することが可能であった。また、セラペーストにおいても３２μｍの篩での篩過品は、同様に２２Ｇ穿刺針（針長：２０ｃｍ）を通過することが可能であった。データは示さないが、３２μｍの篩での篩過ＣＰＣを１ｇに対して３２μｍ篩過金粒子を１ｇ、もしくは粒子幅５３〜３３μｍ（５３μｍ篩を通過し３３μｍ篩で通過しなかった分画）の金粒子を１ｇとを上記同様な練和液比率で練和した場合も、２２Ｇ穿刺針（針長：２０ｃｍ）を通過することが可能であった。【０１９０】
【表２１】
2018038223.tif 000023
【０１９１】
＜実施例１４＞
［各種ＣＰＣ練和物の粘度］
（１）実験方法
各種ＣＰＣに表２２に記載の量の練和液を添加し、約３０秒間練和（約２４℃）後、練和物を約０．６ｍＬ分取し、練和開始から２分経過後に粘度の測定を開始した（図１２および図１３のグラフ中の０ｍｉｎは練和開始から２分経過後を示す）。測定中、レオメータの試料チャンバー温度は２０℃に保持しながら粘度の測定を行った。なお、粘度の測定には、Ｈａａｋｅ社製、ＲＳ−６００レオストレスを使用した。
（２）結果
下記の表２２には、練和開始約５分後の粘度（ｍＰａ・ｓ）を示す。【０１９２】
【表２２】
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【０１９３】
バイオペックス−Ｒのエクセレントタイプ（Ｂｉｏｐｅｘ−Ｒ  ＥＸ）とロングタイプおよびスタンダードタイプ（Ｂｉｏｐｅｘ−Ｒ  Ｓｔ．＆Ｌｏｎｇ）とを比較すると、粘度の立ち上がりが異なり、前者は粘度測定開始約３−５分後ごろから粘度の上昇がみられるが、ロングタイプおよびスタンダードタイプでは、粘度測定開始後６−１０分後頃までは約１０６ｍＰａ・ｓ以下であり、粘度が約１０８ｍＰａ・ｓに達するには、測定開始後約８分（練和開始後約１０分）以降であり、粘度の立ち上がりが遅い（図１２）。また、セラペーストにおいてもセラペースト用の練和液をＣＰＣ１ｇ当たり０．４５ｍＬ使用した練和物は、バイオペックス−Ｒのエクセレントタイプの市販品と類似した粘度の推移を示し、練和開始約５分後の２０℃での粘度は１０４−１０６ｍＰａ・ｓであった。一方、表２２のＰ４（バイオペックス−Ｒ  エクセレント、３２μｍ篩過品）やＰ５（バイオペックス−Ｒ  エクセレント、２５μｍ篩過品）等では、粘度測定開始時点で既に１０７−１０８ｍＰａ・ｓであり、練和開始約５分後の粘度は１０８−１０１０ｍＰａ・ｓと非常に高い粘度を示していた（図１３）。【０１９４】
このような高い粘度においても２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）は通過可能であり、また、生犬の肝臓のように組織圧が高い部所に注入した場合、粘度の低い練和物（バイオペックス−Ｒ  スタンダードと金粒子の練和物）を用いた場合ではその留置部位からの顕著な漏出が認められたが（実施例１２）、表２２のＰ４の条件に金粒子を混合した場合では、留置部位からのＧ／ＣＰＣ練和物の漏出はほとんど認められなかった（実施例１７参照）。なお、Ｐ４と同じ条件のＣＰＣを用いて、２ｇのＣＰＣに対して１ｇまたは２ｇの金粒子（３２μｍ篩過品）、および０．４ｍＬの練和液をそれぞれ添加した練和物は、いずれもその練和開始約５分後の粘度は１０８−１０１０ｍＰａ・ｓであり、金粒子を含まないＰ４の条件のＣＰＣ練和物とほとんど同じ粘度であった（図１４）。なお、ＣＰＣ１ｇ当たりの練和液量を０．４ｍＬから０．５ｍＬに増加させるとＰ６のように明らかに粘度が低下した。このＣＰＣペーストにおいて市販の高硬度ゲル（ヒト肌のゲル（硬度５）、（株）エクシールコーポレーション製）を活用して３７℃で漏出試験を行ったところ、Ｐ４（練和液を０．４ｍＬ用いた練和物）と比較してＰ６のペーストでは明らかに多くの漏出が認められた。なお、Ｐ７で示した７５μｍの篩で篩過したバイオペックス−Ｒでは、市販品とほぼ同じ粘度（１０４−１０６ｍＰａ・ｓ）を示し、かつその粒子径分布では約３１μｍや約５２μｍを超す粒子の分布が、市販品とほぼ同等であった。このことより、針長２０ｃｍでの穿刺針通過性の観点からは、粒子幅７５μｍ以下（７５μｍの篩で篩過した粉末）の篩過品が好ましいと考えられたが、ペーストの粘度も考慮すると粒子幅７５μｍより粒子径分布がより細かい粉末が好ましいと考えられた。なお、市販の高硬度ゲル（ヒト肌のゲル（硬度５）、（株）エクシールコーポレーション製）を活用した３７℃での漏出試験は、当該ゲルを直径約４ｃｍのプラスチック容器中で高さ３−４ｃｍになるように作製し、それを３７℃のインキュベーターで予め保温したものに、本発明のＣＰＣペースト、またはＧ／ＣＰＣペーストを約０．１ｍＬ注入し、注入後約５分後の漏出量を調べて判定した。市販品のバイオペックス−Ｒでは、大部分で約２０％以上の漏出が認められた。特に、バイオペックス−Ｒ  スタンダードタイプやバイオペックス−Ｒ  ロングタイプでは約３０％を超す漏出が認められ、ペーストの粘度推移とゲルからの漏出性に相関があることが示唆された。【０１９５】
これらの事象からも、バイオペックス−Ｒの場合は、練和開始約５分後での粘度が１０８−１０１０ｍＰａ・ｓとなるようなＰ４の条件での練和物をＧ／ＣＰＣマーカーの基材として使用するのが最も好ましいと考えられた。データは特に示さないが、表１９のＣ１０の条件で調製したＣＰＣや篩の目開きが２５μｍである以外はＣ１０と同じ条件で調製したＣＰＣ粉末においてもＰ４と同じ量の練和液で調製した練和物の粘度も、Ｐ４またはＰ５と同等であった。また、ペーストの粘度の観点からは、練和液の添加量は、ＣＰＣ１ｇに対して０．３ｍＬ以下では脱気困難になる傾向が認められること、０．５ｍＬ添加では練和開始約５分後の粘度が１０８ｍＰａ・ｓであったことより、ＣＰＣ１ｇに対して０．３ｍＬ〜０．５ｍＬが好ましいことが示された。【０１９６】
なお、バイオペックス−Ｒ  エクセレントの２０μｍの篩での篩過品は、３２μｍもしくは２５μｍの篩で分級する場合と比較すると分級収率に低下傾向が認められること、および練和物中からの脱気がスムーズに行かない場合も生じること等を考慮すると、目開き２０μｍ以上、好ましくは２５μｍ以上、より好ましくは３２μｍ以上の目開きでの篩過品が好ましいと考えられた。【０１９７】
＜実施例１５＞
［ＣＰＣの各種篩過品の粒度分布（その２）］
（１）実験方法
実施例１１と同様、各種ＣＰＣ粉末の粒度分布は、レーザー回折・散乱式粒子径分布測定装置Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ  ＭＴ３３００ＥＸ−ＩＩ（マイクロトラック・ベル株式会社）を使用し、水を分散媒とする湿式法で、いずれも測定回数はＡｖｇ／３、測定時間は１０秒で実施した。
（２）結果
これらの結果を表１７と合わせて下記の表２３に示す。【０１９８】
【表２３】
2018038223.tif 000025
【０１９９】
なお、上記表２３中、３２μｍの篩を用いて取得した篩過品（Ｃ４〜Ｃ１０）のＭＶ値の標準偏差は、約１μｍであった。したがって、ＭＶ値の好ましい範囲を設定する際には、実測値から標準偏差の２〜３倍程度をプラスまたはマイナスするのが望ましい。【０２００】
実施例９，１１，１３，１４および１５の結果より、本発明のＧ／ＣＰＣ練和物の長い穿刺針の通過性に適したＣＰＣは、体積平均径（ＭＶ）の観点からは、好ましくは３〜１２μｍの範囲であり、より好ましくは４〜１２μｍの範囲であり、さらに好ましくは５〜１１μｍの範囲であり、特に好ましくは５〜１０μｍの範囲である。また、Ｄ９０値では、好ましくは３９μｍ未満であり、より好ましくは３４μｍ以下であり、さらに好ましくは３０μｍ以下であり、特に好ましくは１０〜３０μｍの範囲である。ＣＰＣ粉末のＤ９０値が約５０μｍを超すと、Ｇ／ＣＰＣペーストの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）からの通過性が困難となる場合がある。【０２０１】
ところで、図８からわかるように目開き３２μｍの篩で篩過したＣＰＣ粉末では、市販品と比較していずれも粒子径約３０〜４０μｍを超す粒子の画分が大幅に減少していた。ちなみに、表１７の１）、２）、３）および４）のＣＰＣにおける、３１．１１μｍまでの粒径分布の累積頻度（体積比）は、それぞれ８３．１４％、７４．９６％、９７．６７％、および９５．１６％であった。すなわち、細い穿刺針通過性に好ましいＣＰＣ粉末は、粒径約３１μｍを超す粒子の分布（体積比）が約１５％以下であり、より好ましくは、約１０％以下であることが示された。なお、ＣＰＣ粉末の粒子径分布において約３１μｍを超す粒子の存在比率（体積比）が１５％を超すとＧ／ＣＰＣペーストの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針（針長：２０ｃｍ）からの通過性が困難となる場合がある。【０２０２】
＜実施例１６＞
［金粒子の各種篩過品を用いたＧ／ＣＰＣペーストの細径針の通過性（その２）および金粒子の粒度分布］
（１）実施例７，８および９の結果を参考に、再度、市販のバイオペックス−Ｒ  エクセレントを篩分けした粉末（３２μｍ篩過品）と、篩過条件の異なる各種金粒子とを練和し、得られたペーストの穿刺針（針長：２０ｃｍ）通過性、および短い細径針での通過性を調べた。穿刺針（針長：２０ｃｍ）としては実施例９で使用したクリエート・メディック穿刺針（医療機器承認番号２０１６００ＢＺＺ００５５５０００）を使用した。なお、クリエート・メディック製の２２Ｇ穿刺針の内径は０．５４ｍｍであり、東郷メディキット製の２２Ｇ穿刺針とほぼ同等である。【０２０３】
（２）練和液の調製
目開き１５０μｍ、７５μｍ、５３μｍ、３２μｍ、および２０μｍの篩を用いて順に篩い分け、それぞれ粒子幅７５〜５４μｍ、５３〜３３μｍ、３２〜２１μｍ、３２μｍ以下および２０μｍ以下の金粒子をそれぞれ調製した。それら各０．５ｇと３２μｍの篩を通過したバイオペックス−Ｒ  エクセレントの粉末１ｇ、およびバイオペックス−Ｒの専用練和液０．４ｍＬを加えてペーストを調製し、得られたＧ／ＣＰＣ練和物（ペースト状）の穿刺針通過性を再度と比較した。【０２０４】
（３）各種金粒子の粒度分布の測定
実施例１０に記載したように、各種金粒子の粒度分布は、Ｍｉｃｒｏｔｒａｃ製（ＭＴ３０００ＩＩ）粒子径分布測定装置を使用し、ＩＰＡ（Ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  Ａｌｃｏｈｏｌ）を分散媒とする湿式法で実施し、Ｄ５０、Ｄ１０、およびＤ９０等を求めた。【０２０５】
（４）結果
図４および図５に示したように、微細な金粒子は凝集塊を生じやすいこと、実施例８で示したように２０μｍの篩で篩過した金粒子ではＤ５０値の低下はほとんど認められず、むしろ１００μｍを超す粒子の明らかな増加が認められたこと、およびＣＰＣとしてバイオペックス−Ｒ  エクセレントの３２μｍ篩過品を用いた場合は、粒子幅２０μｍ以下および粒子幅７５〜５４μｍの金粒子においても２２Ｇの穿刺針を通過する場合もあったことより（表２４参照）、穿刺針（針長：２０ｃｍ）の通過性に適した金粒子は、Ｄ５０値では１６〜４０μｍの範囲であり、より好ましくは１８〜３６μｍの範囲であり、さらに好ましくは２０〜３５μｍの範囲である。さらに、上記Ｄ５０値の範囲であって、好ましくは、Ｄ１０値が５μｍ以上で、かつＤ９０値が７０μｍ以下、より好ましくはＤ１０値が７μｍ以上で、かつＤ９０値が６０μｍ以下、さらに好ましくはＤ１０値が１０μｍ以上で、かつＤ９０値が５５μｍ以下である純金粒子であると考えられる。なお、Ｄ５０が約４０μｍを超えると針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。【０２０６】
また、好ましい純金粒子を体積平均径（ＭＶ）で表示すると、好ましくは１７〜４４μｍの範囲であり、より好ましくは１７〜３８μｍの範囲であり、さらに好ましくは２０〜３８μｍの範囲である。なお、純金粒子のＭＶが約４５μｍを超えると針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。【０２０７】
一方、表１６に示したように粒子幅３２μｍ以下の純金粒子（表１６−２））でのＤ９０値は４０．０６μｍであり、その近傍である粒子径４０．３５μｍまでの累積頻度を比較すると、上記表１６に記載の１）、２）、３）、４）、５）および７）の純金粒子では、それぞれ８７．８２％、９０．３０％、７３．４４％、４７．８６％、７．４７％、および、９３．１３％であった。また、粒子径３２μｍ近傍（３１．１１μｍ）までの累積頻度を比較すると、それぞれ７１．３３％、７５．０８％、４７．２０％、２８．５０％、６．１４％、および８６．８２％であった。さらに、粒子径約１００μｍ近傍（９５．９６μｍ）までの粒子径分布の累積頻度を比較すると、それぞれ９７．２０％、９９．９５％、９８．９１％、９７．０４％、３１．７９％および９９．０２％であり、言い替えると粒子径約９６μｍを超す粒子径の分布は、それぞれ２．８％、０．０５％、１．０９％、２．９６％、６８．２１％および０．９８％であった。したがって、粒子径分布の累積頻度で表示すると、粒子径約４０μｍ以下の粒子の累積頻度（体積比）は、約５０％以上が好ましく、６５％以上がより好ましく、７０％以上がさらに好ましく、８５％以上が特に好ましく、粒子径約３１μｍまでの累積頻度（体積比）では３０％以上が好ましく、３５％以上がより好ましく、７０％以上がさらに好ましいと言える。なお、純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％を超えると、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが困難となる場合がある。【０２０８】
【表２４】
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【０２０９】
＜実施例１７＞
［イヌ肝臓等への留置試験（その２）］
生体の肝臓等に本発明のＧ／ＣＰＣ練和物を注入した場合に、注入量に応じた塊が速やかに形成するか否か、それらは画像認識性能を有するか、さらには、当該Ｇ／ＣＰＣマーカーは長期に安定に存在するか、および、生体に対する安全性上の問題が有るか否か等を把握するために、イヌ生体への留置試験を開腹下で再度実施した。今回の留置対象臓器としては、肝臓、膵臓および胃とした。【０２１０】
（１）試料の調製および注入法
バイオペックス−Ｒ  エクセレント（粒子幅：３２μｍ以下）の粉末約２ｇと、純金粒子（粒子幅：３２μｍ以下）約１．０ｇを付属のすり鉢にて混合後、バイオペックス−Ｒの専用練和液０．８ｍＬと練和することにより、純金粒子／ＣＰＣ（以下、Ｇ／ＣＰＣと称す。）練和物（Ｇ／ＣＰＣペーストとも呼ぶ。）を調製した。調製したこれら練和物を適量充填した１ｍＬ容シリンジに２２Ｇ金属針（針長：約２０ｃｍ）を着装し、室温（約２０〜２６℃）でイヌ生体肝臓・膵臓・胃に対して前記シリンジ目盛で約０．１ｍＬ相当を注入した。【０２１１】
８頭のイヌに対して、２頭はコントロール群として上記Ｇ／ＣＰＣペースト注入をせず開腹・閉腹のみを施行し終了した。その後、残りの６頭は、２頭は肝臓、２頭は膵臓、２頭は胃に対して、それぞれ各々５カ所前後（当該ペースト約０．１ｍＬ）の注入を施行した。この６頭はいずれも開腹下に施行し、目視下に当該Ｇ／ＣＰＣペーストを注入した。【０２１２】
これら６頭は、いずれも２８日後に肝臓・胃壁内・膵臓に留置したＧ／ＣＰＣマーカーの画像認識性能、摘出したマーカー塊の重量を調べるとともに、２８日まで臨床検査値の推移を追跡、当該マーカー埋設近傍の組織観察等、毒性学的な評価も行った。【０２１３】
（２）評価方法および結果
２−１）イヌ肝臓・胃壁内・膵臓留置Ｇ／ＣＰＣマーカーの塊形成
６頭は、それぞれＧ／ＣＰＣペースト注入直後にＸ線透視によりマーカー塊が形成されていることを確認した。さらに、留置２８日後に屠殺し、それぞれの肝臓・胃壁・膵臓を取り出した。肝臓への注入の際、実施例１２で認められたようなＧ／ＣＰＣペーストの顕著な漏出はなく、注入部位に形成された塊は肝臓組織内に固着するように塊形成が見られた。膵臓への留置でも注入物は綺麗な塊形成が見られ膵組織内にしっかりと固定され、本発明のＧ／ＣＰＣマーカーは、膵臓への注入、利用が可能であることが強く示唆された。胃壁内に注入したマーカー群はいずれも壁内で固定され塊形成しており、これはＸ線透視でも十分確認できたことより、本発明のＧ／ＣＰＣマーカーは、消化管壁内への注入、利用が可能であることが示唆された。代表例として、留置２８日後に屠殺したイヌから摘出した肝臓中の５個のＧ／ＣＰＣマーカーのＸ線透視画像（図１５）、および膵臓中の６個のＧ／ＣＰＣマーカーのＸ線透視画像を示す（図１６）。【０２１４】
前回のイヌ肝臓留置Ｇ／ＣＰＣマーカーにおいては、Ｇ／ＣＰＣペーストの注入部位からの逆流（漏出）等があり、多くの場合、当該肝臓から摘出したマーカー塊は、大部分が約１００ｍｇ前後の重量であり、時には形成塊が約５０ｍｇ以下で小さい場合もあった。しかし、今回はペースト基剤としてバイオペックス−Ｒ  エクセレント（粒子幅:３２μ以下）を用いて調製したため、ほとんどにおいて約２００ｍｇ〜３００ｍｇの塊形成が認められた（図１５）（図１５において（１）〜（５）の塊の内、（２）以外は全て約２００ｍｇ〜３００ｍｇの塊が形成されていた。）。Ｇ／ＣＰＣペーストが高粘度（１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓ）になるバイオペックス−Ｒ  エクセレントの篩過品を用いた場合は、市販品のバイオペックス−Ｒを用いた場合に比較し、留置部位からの逆流が少なく注入量に比例したマーカー作成が可能であることが示唆された。膵臓内、胃壁内に留置したＧ／ＣＰＣマーカーに関しても肝臓同様、留置２８日後に摘出・調査したところ、得られたマーカー塊は１５０〜２００ｍｇ前後の物が大部分であり、留置時の注入量のバラツキを考慮すると、当該マーカー塊は、２８日間安定して存在していたと考えられる。【０２１５】
２−２）イヌ肝臓・胃壁内・膵臓の留置Ｇ／ＣＰＣマーカーの画像認識性能評価
（評価方法）
イヌの肝臓にＧ／ＣＰＣペーストを注入し、注入２８日経過後に摘出した肝臓に留置されたＧ／ＣＰＣマーカーの画像認識性能を評価した。摘出肝臓をアクリルファントムに載せ、Ｘ線透視装置（Ｘ線発生装置：島津製作所社製、ＵＤ１５０Ｂ−４０、Ｘ線画像取得用フラットパネルディテクタ（ＦＰＤ）：バリアンメディカルシステムズ社製、ＰａｘＳｃａｎ３０３０）によりＸ線透視画像を取得した。陽性コントロールとして、肝臓・胃壁内では現在臨床で用いられている直径１．５ｍｍおよび２．０ｍｍの純金球形マーカー（ｉＧｏｌｄ）を摘出肝臓・胃に貼り付けた。アクリル板の厚さを１ｃｍから２５ｃｍまで段階的に変化させ、Ｘ線発生装置の管電圧を１１０ｋＶ、曝射時間を３ｍｓｅｃで固定とし、管電流は状況に応じて５０ｍＡ，８０ｍＡ，１６０ｍＡから選択し、各条件においてＸ線透視画像を１００枚程度取得した。各条件で得られたＸ線透視画像から、複数の画像のうちの１枚から評価対象とする純金粒子マーカーの画像を切り出してテンプレート画像を作成し、その他の画像に対して、あらかじめ作成したテンプレート画像との正規化相互相関によるテンプレートパターンマッチングを実施し、約１００枚の画像に対するテンプレートパターンマッチングから得られる相関係数の平均値が０．３を超えている場合は画像認識可、それ以下の場合には画像認識不可と判定した。画像の階調処理とパターンマッチングには、画像処理ライブラリ（Ｍａｔｒｏｘ社製、Ｍａｔｒｏｘ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ  ９）を利用した。【０２１６】
（結果）
画像の目視確認による定性的な評価から、Ｇ／ＣＰＣマーカーは、各陽性コントロールのマーカーと同等もしくはそれ以上の視認性が認められた。また、テンプレートパターンマッチングによる肝臓・胃壁内に留置したマーカーの画像認識性能の評価において、各陽性コントロールのマーカーと同等もしくはそれ以上の画像認識性能を示した（表２５および表２６）。また、膵臓においても各評価条件において肝臓・胃壁と同様の画像認識性能が得られていること（表２７）から、陽性コントロールのマーカーと同等もしくはそれ以上の画像認識性能が得られると考えられる。【０２１７】
２−３）Ｇ／ＣＰＣを生体肝臓・胃壁・膵臓に留置したイヌでの安全性評価
２２Ｇの穿刺針においては、肝臓・胃壁・膵臓からの顕著な出血は認められなかった。術式の都合上、イヌ腹部を切開、肝臓・胃壁・膵臓が直接確認できる状態でのＧ／ＣＰＣペースト注入であったため、ＣＲＰや総白血球の一過性の増加等、炎症反応の惹起を示す血液・生化学的変化が認められたが、上記術式のためであると言える。【０２１８】
肝実質細胞への傷害を反映した検査値異常としては、ＡＳＴ（ＧＯＴ）：Asparatate Aminotransferase、ＡＬＴ（ＧＰＴ）：Alanine aminotransferase、ＡＬＰ：Alkaline phosphataseの一過性の上昇が挙げられるが、いずれも一過性であること、および注入量が臨床での使用予定（約３０μＬ〜１００μＬ×２〜３箇所）より明らかに多いことを踏まえると、本発明品の肝臓への留置は、毒性学的に軽微であると言える。また、膵臓への留置を行ったが特に膵炎を示唆するリパーゼなどの膵酵素上昇を示唆する所見は認めなかった。【０２１９】
（まとめ）
これまでの摘出ブタ肝臓やＤ−ＰＢＳ（−）循環摘出ブタ肝臓では、十分確認できなかった以下の課題が確認され、放射線治療用の病変識別マーカーとして生体に留置可能であることが強く示唆された。今回の実験により、肝臓だけでなく、胃壁・膵臓でもマーカーとして使用可能であることが示唆された。【０２２０】
（１）イヌ肝臓・胃壁・膵臓に注入した本発明のＧ／ＣＰＣペーストは、速やかに塊形成が生じており、血流への流出、肺栓塞を生じさせる小塊の血管流出等は発生していない。
（２）得られたＧ／ＣＰＣマーカー塊は、既存の金マーカーと同等の画像認識性能を有しており、さらに、ペースト中の金粒子含量の増加やペースト留置量の増加を図れば、Ｘ線透視の困難な体幹の大きなヒトにも既存の金マーカー以上の画像認識性能、追跡性能を発揮することが十分期待できる。当然ながら、Ｘ線透視の容易な部位には注入量を減少させても対応可能である。
（３）約１か月後においても生成されたＧ／ＣＰＣマーカー塊は、十分な追跡可能性を維持して存在している。
（４）臨床検査値の推移や病理組織解析から、注入直後には、一過性の肝実質組織へのダメージは認められるものの、それらは軽微であり、速やかに回復することより、臨床使用可能性が高い。その他の胃壁・膵臓内でも同様であった。【０２２１】
以上のように、本発明において、Ｘ線吸収性のある純金の微粒子を体内の任意の部位に、放射線治療の種類、および、治療標的部位に適した任意の量を非常に低い侵襲性で留置することが可能であり、かつ放射線治療装置で留置部位を長期間特定できる、放射線治療用の病変識別マーカーおよび放射線治療用の病変識別マーカーキットが得られた。【０２２２】
【表２５】
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【０２２３】
【表２６】
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【０２２４】
【表２７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年3月9日(2018.3.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子との混合物、または、リン酸カルシウム系骨補強材含有物と純金粒子と練和液との混合物を含み、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、粒子の体積平均径（ＭＶ）が、３〜１２μｍの範囲であり、かつＤ９０は、３９μｍ未満であり、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物と練和液とを、それぞれ１．０ｇと０．４ｍＬの比率で混合、練和して得られる練和物は、練和開始約５分後の２０℃での粘度が１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓの範囲であり、
前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％未満（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
請求項１に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、１６〜４０μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項４】
請求項１，３のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、２０〜３５μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項５】
（削除）
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
（削除）
【請求項１２】
（削除）
【請求項１３】
（削除）
【請求項１４】
請求項１，３，４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記混合物が、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが可能であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１５】
請求項１，３，４，１４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物１ｇ当りの前記練和液の容量での配合比は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１６】
請求項１，３，４，１４，１５のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子と前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物との重量比が１：２以上で２：１以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１７】
（削除）
【請求項１８】
請求項１，３，４，１４，１５，１６のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーであって、
前記純金粒子を５ｍｇ以上含むことを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカー。
【請求項１９】
（削除）
【請求項２０】
（削除）
【請求項２１】
純金粒子およびリン酸カルシウム系骨補強材含有物、または、純金粒子、リン酸カルシウム系骨補強材含有物および練和液を含み、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物は、粒子の体積平均径（ＭＶ）が、３〜１２μｍの範囲であり、かつＤ９０は、３９μｍ未満であり、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物と練和液とを、それぞれ１．０ｇと０．４ｍＬの比率で混合、練和して得られる練和物は、練和開始約５分後の２０℃での粘度が１０８〜１０１０ｍＰａ・ｓの範囲であり、
前記純金粒子において、粒子径が約９６μｍを超す粒子の存在比が約３％未満（体積比）であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２２】
（削除）
【請求項２３】
請求項２１に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、１６〜４０μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２４】
請求項２１，２３のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子のメディアン径（Ｄ５０）は、２０〜３５μｍの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項２５】
（削除）
【請求項２６】
（削除）
【請求項２７】
（削除）
【請求項２８】
（削除）
【請求項２９】
（削除）
【請求項３０】
（削除）
【請求項３１】
（削除）
【請求項３２】
（削除）
【請求項３３】
（削除）
【請求項３４】
請求項２１，２３，２４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子および前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物から得られる練和物、または、前記純金粒子、前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物および前記練和液から得られる練和物が、針長２０ｃｍの２０Ｇ〜２２Ｇの穿刺針を通過することが可能であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３５】
請求項２１，２３，２４，３４のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物１ｇ当りの前記練和液の容量での配合比は、約０．３ｍＬ／ｇ〜０．５ｍＬ／ｇの範囲であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３６】
請求項２１，２３，２４，３４，３５のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子と前記リン酸カルシウム系骨補強材含有物との重量比が１：２以上で２：１以下であることを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【請求項３７】
（削除）
【請求項３８】
請求項２１，２３，２４，３４，３５，３６のいずれか１項に記載の放射線治療用の病変識別マーカーキットであって、
前記純金粒子を５ｍｇ以上含むことを特徴とする放射線治療用の病変識別マーカーキット。
【国際調査報告】
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