(57)【要約】食事等の影響を受けず、また採血後保存中に代謝されにくい糖尿病のバイオマーカーをを提供することを課題とする。また、糖尿病患者においてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法を提供することを課題とする。遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定し、ラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合、カッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値が基準値よりも低い場合に、糖尿病であると、及びイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する。
2017170847.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程（１）〜（４）、工程（１’）〜（４’）、工程（Ａ）〜（Ｄ）、又は工程（Ａ’）〜（Ｄ’）を含む、被験体について糖尿病の罹患を測定する方法：
（１）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２）上記（１）工程で得られたラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）を算出する工程、
（３）上記（２）工程で得られたカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を基準となるカッパ鎖／ラムダ鎖比（カッパ鎖／ラムダ鎖比基準値）と比較する工程、及び
（４）上記工程（３）において、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値がカッパ鎖／ラムダ鎖比基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程；
（１’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２’）上記（１’）工程で得られたカッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合（ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値）を算出する工程、
（３’）上記（２’）工程で得られたラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を基準となるラムダ鎖／カッパ鎖比（ラムダ鎖／カッパ鎖比比基準値）と比較する工程、及び
（４’）上記工程（３’）において、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値がラムダ鎖／カッパ鎖比基準値よりも高い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程； 
（Ａ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ）上記（Ａ）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）工程で得られたカッパ鎖−ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ）上記工程（Ｃ）において、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値がカッパ鎖−ラムダ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程；又は
（Ａ’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ’）上記（Ａ’）工程で得られたラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ’）上記（Ｂ’）工程で得られたラムダ鎖−カッパ鎖算出値を基準となるラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ’）上記工程（Ｃ’）において、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値がラムダ鎖−カッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【請求項２】
下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む、被験体について糖尿病の罹患を測定する方法：
（ｉ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（ｉｉ）上記（ｉ）工程で得られたラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖濃度）を基準となるラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ｉｉｉ）ラムダ鎖濃度がラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【請求項３】
下記工程（Ｉ）〜（ＩＩＩ）を含む、被験体について糖尿病の罹患を測定する方法：
（Ｉ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖の濃度を測定する工程、
（ＩＩ）上記（Ｉ）工程で得られたカッパ鎖の濃度（カッパ鎖濃度）を基準となるカッパ鎖の濃度（カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ＩＩＩ）カッパ鎖濃度がカッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【請求項４】
下記工程（１）〜（４）、工程（１’）〜（４’）、工程（Ａ）〜（Ｄ）、工程（Ａ’）〜（Ｄ’）、又は工程（１’’）〜（４’’）を含む、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法：
（１）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２）上記（１）工程で得られたラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）を算出する工程、
（３）上記（２）工程で得られたカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を基準となるカッパ鎖／ラムダ鎖比（カッパ鎖／ラムダ鎖比基準値）と比較する工程、及び
（４）上記工程（３）において、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値がカッパ鎖／ラムダ鎖比基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程； 
（１’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２’）上記（１’）工程で得られたカッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合（ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値）を算出する工程、
（３’）上記（２’）工程で得られたラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を基準となるラムダ鎖／カッパ鎖比（ラムダ鎖／カッパ鎖比比基準値）と比較する工程、及び
（４’）上記工程（３’）において、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値がラムダ鎖／カッパ鎖比基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程； 
（Ａ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ）上記（Ａ）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）工程で得られたカッパ鎖−ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ）上記工程（Ｃ）において、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値がカッパ鎖−ラムダ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程； 
（Ａ’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ’）上記（Ａ’）工程で得られたラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ’）上記（Ｂ’）工程で得られたラムダ鎖−カッパ鎖算出値を基準となるラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ’）上記工程（Ｃ’）において、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値がラムダ鎖−カッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程；又は
（１’’）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２’’）上記（１’’）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の和（カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値）を算出する工程、
（３’’）上記（２’’）工程で得られたカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖＋ラムダ鎖値（カッパ鎖＋ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（４’’）上記工程（３’’）において、カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値がカッパ鎖＋ラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。
【請求項５】
下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法：
（ｉ）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（ｉｉ）上記（ｉ）工程で得られたラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖濃度）を基準となるラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ｉｉｉ）ラムダ鎖濃度がラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。
【請求項６】
下記工程（Ｉ）〜（ＩＩＩ）を含む、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法：
（Ｉ）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖の濃度を測定する工程、
（ＩＩ）上記（Ｉ）工程で得られたカッパ鎖の濃度（カッパ鎖濃度）を基準となるカッパ鎖の濃度（カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ＩＩＩ）カッパ鎖濃度がカッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。
【請求項７】
請求項１、又は４に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖捕捉抗体、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖検出抗体、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖捕捉抗体及び遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖検出抗体を含む、検査キット。
【請求項８】
請求項１、２、４又は５に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖捕捉抗体、及び遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖検出抗体を含む、検査キット。
【請求項９】
請求項１、３、４又は６に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖捕捉抗体、及び遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖検出抗体を含む、検査キット。
【請求項１０】
請求項１、２、４又は５に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖抗体を含む、検査試薬。
【請求項１１】
請求項１、３、４又は６に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖抗体を含む、検査試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病の罹患を測定する方法、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法、並びにこれらの方法に使用される検査試薬及び検査キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、カッパ鎖及びラムダ鎖からなる遊離イムノグロブリン軽鎖（ＦＬＣ）は、骨髄腫、アミロイドーシスなどの血液疾患の診断に使用されてきた。骨髄腫では、腫瘍化する細胞の種類により、イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖を産生する腫瘍ではカッパ鎖が増加し、カッパ鎖／ラムダ鎖比が上昇するのに対して、イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖を産生する腫瘍では、ラムダ鎖が増加し、カッパ鎖／ラムダ鎖比が減少する。【０００３】
また、骨髄腫瘍以外の疾患においても、ＦＬＣが、有用な指標となることが報告されている。例えば、特許文献１では、ＦＬＣのカッパ鎖値、ラムダ鎖値、及びカッパ鎖／ラムダ鎖の比のいずれか１つ以上の値を指標として、心不全、心筋症、心筋炎及び急性心筋梗塞から選ばれる少なくとも一種の疾患を検出する方法が提唱されている。非特許文献１では、２型糖尿病患者における心血管疾患発症のリスクの指標として、ｃＦＬＣ（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｆｒｅｅ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ：ＦＬＣカッパ鎖含有量及びＦＬＣラムダ鎖含有量の合計値）を用いることが提唱されている。非特許文献２では慢性腎疾患（ＣＫＤ）のステージが進むにつれ、カッパ鎖／ラムダ鎖の比が上昇することが示されている。【０００４】
さらに、特許文献１及び非特許文献３では、ＦＬＣのカッパ鎖値、ラムダ鎖値をより高感度に検出する方法を報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第４９５０８７９号公報
【特許文献２】国際公開公報第２０１０／０４９６７２号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Diabetes care, 2014, 37, p2028-2030
【非特許文献２】Clin J Am Soc Nephrol. 2008 November; 3(6): 1684‐1690.
【非特許文献３】J Immunol Methods. 2013, May 31; 391(1-2):1-13
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
現在糖尿病の診断は、血糖値やヘモグロビンＡ１ｃの濃度等を指標にして行われる。しかしながら、血糖値は食事等の影響で増減するため、糖尿病の診断のためには空腹時の血糖値を測定する必要がある。また、採血後採血管内で赤血球が血中のグルコースを代謝するため、血糖値又はヘモグロビンＡ１ｃ等の測定のための採血には、解糖系阻害剤であるフッ化ナトリウムが入った採血管を使用する必要がある。【０００８】
そこで、本発明は、食事等の影響を受けず、また採血後保存中に代謝されにくい糖尿病のバイオマーカーをを提供することを課題とする。また、特にＩ型糖尿病は、自己免疫疾患の１つでもあるため、糖尿病患者においてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、鋭意研究を重ねたところ、糖尿病患者において血中のＦＬＣカッパ鎖の濃度が健常者と比較して減少しており、また血中のＦＬＣラムダ鎖の濃度が健常者と比較して増加することを見出した。さらに、この現象に伴い、糖尿病患者において血中のＦＬＣラムダ鎖の濃度に対するＦＬＣカッパ鎖の濃度の割合、及びＦＬＣカッパ鎖の濃度とＦＬＣラムダ鎖の濃度の差の絶対値が、健常者と比較して糖尿病患者において著しく減少することを見出した。【００１０】
本発明は、当該知見に基づいて完成されたものであり、以下の態様を含む。
項１．
下記工程（１）〜（４）、工程（１’）〜（４’）、工程（Ａ）〜（Ｄ）、又は工程（Ａ’）〜（Ｄ’）を含む、被験体について糖尿病の罹患を測定する方法：
（１）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２）上記（１）工程で得られたラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）を算出する工程、
（３）上記（２）工程で得られたカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を基準となるカッパ鎖／ラムダ鎖比（カッパ鎖／ラムダ鎖比基準値）と比較する工程、及び
（４）上記工程（３）において、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値がカッパ鎖／ラムダ鎖比基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程；
（１’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２’）上記（１’）工程で得られたカッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合（ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値）を算出する工程、
（３’）上記（２’）工程で得られたラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を基準となるラムダ鎖／カッパ鎖比（ラムダ鎖／カッパ鎖比比基準値）と比較する工程、及び
（４’）上記工程（３’）において、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値がラムダ鎖／カッパ鎖比基準値よりも高い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程； 
（Ａ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ）上記（Ａ）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）工程で得られたカッパ鎖−ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ）上記工程（Ｃ）において、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値がカッパ鎖−ラムダ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程；又は
（Ａ’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ’）上記（Ａ’）工程で得られたラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ’）上記（Ｂ’）工程で得られたラムダ鎖−カッパ鎖算出値を基準となるラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ’）上記工程（Ｃ’）において、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値がラムダ鎖−カッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。【００１１】
項２．
下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む、被験体について糖尿病の罹患を測定する方法：
（ｉ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（ｉｉ）上記（ｉ）工程で得られたラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖濃度）を基準となるラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ｉｉｉ）ラムダ鎖濃度がラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。【００１２】
項３．
下記工程（Ｉ）〜（ＩＩＩ）を含む、被験体について糖尿病の罹患を測定する方法：
（Ｉ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖の濃度を測定する工程、
（ＩＩ）上記（Ｉ）工程で得られたカッパ鎖の濃度（カッパ鎖濃度）を基準となるカッパ鎖の濃度（カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ＩＩＩ）カッパ鎖濃度がカッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。【００１３】
項４．
下記工程（１）〜（４）、工程（１’）〜（４’）、工程（Ａ）〜（Ｄ）、工程（Ａ’）〜（Ｄ’）、又は工程（１’’）〜（４’’）を含む、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法：
（１）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２）上記（１）工程で得られたラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）を算出する工程、
（３）上記（２）工程で得られたカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を基準となるカッパ鎖／ラムダ鎖比（カッパ鎖／ラムダ鎖比基準値）と比較する工程、及び
（４）上記工程（３）において、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値がカッパ鎖／ラムダ鎖比基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程； 
（１’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２’）上記（１’）工程で得られたカッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合（ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値）を算出する工程、
（３’）上記（２’）工程で得られたラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を基準となるラムダ鎖／カッパ鎖比（ラムダ鎖／カッパ鎖比比基準値）と比較する工程、及び
（４’）上記工程（３’）において、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値がラムダ鎖／カッパ鎖比基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程； 
（Ａ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ）上記（Ａ）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ）上記（Ｂ）工程で得られたカッパ鎖−ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ）上記工程（Ｃ）において、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値がカッパ鎖−ラムダ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程； 
（Ａ’）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（Ｂ’）上記（Ａ’）工程で得られたラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖算出値）を算出する工程、
（Ｃ’）上記（Ｂ’）工程で得られたラムダ鎖−カッパ鎖算出値を基準となるラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（Ｄ’）上記工程（Ｃ’）において、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値がラムダ鎖−カッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程；又は
（１’’）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（２’’）上記（１’’）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の和（カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値）を算出する工程、
（３’’）上記（２’’）工程で得られたカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖＋ラムダ鎖値（カッパ鎖＋ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（４’’）上記工程（３’’）において、カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値がカッパ鎖＋ラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。【００１４】
項５．
下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法：
（ｉ）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のラムダ鎖の濃度を測定する工程、
（ｉｉ）上記（ｉ）工程で得られたラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖濃度）を基準となるラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ｉｉｉ）ラムダ鎖濃度がラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。【００１５】
項６．
下記工程（Ｉ）〜（ＩＩＩ）を含む、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法：
（Ｉ）糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖の濃度を測定する工程、
（ＩＩ）上記（Ｉ）工程で得られたカッパ鎖の濃度（カッパ鎖濃度）を基準となるカッパ鎖の濃度（カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び
（ＩＩＩ）カッパ鎖濃度がカッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。【００１６】
項７．
項１、又は４に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖捕捉抗体、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖検出抗体、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖捕捉抗体及び遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖検出抗体を含む、検査キット。【００１７】
項８．
項１、２、４又は５に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖捕捉抗体、及び遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖検出抗体を含む、検査キット。【００１８】
項９．
項１、３、４又は６に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖捕捉抗体、及び遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖検出抗体を含む、検査キット。【００１９】
項１０．
項１、２、４又は５に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖抗体を含む、検査試薬。【００２０】
項１１．
項１、３、４又は６に記載の測定方法を実施するための、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖抗体を含む、検査試薬。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、他の生化学検査等に用いられる血清又は血漿を用いて糖尿病の罹患を測定することができる。また、測定にあたり空腹時に採血する必要がなく、特殊な抗凝固剤を用いた採血を行う必要がないため採血時の患者の負担を軽減することができる。また、本発明によれば、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化を検出することができる。これにより、糖尿病患者がイムノグロブリン産生細胞の活性化を伴っていると判断できるため、糖尿病患者について、イムノグロブリン産生細胞の活性化を押さえる治療を行う必要があるか否かを判断することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】糖尿病患者と健常者のＦＬＣのカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値の分布を示す図である。
【図２】糖尿病患者と健常者のＦＬＣのカッパ鎖−ラムダ鎖算出値の分布を示す図である。
【図３】糖尿病患者と健常者のＦＬＣのカッパ鎖濃度の分布を示す図である。
【図４】糖尿病患者と健常者のＦＬＣのラムダ鎖濃度の分布を示す図である。
【図５】糖尿病患者と健常者のＦＬＣのカッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値の分布を示す図である。
【図６】糖尿病患者のＦＬＣのカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値と健常者のＦＬＣのカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値のＲＯＣ曲線を示す。
【図７】糖尿病患者のＦＬＣのカッパ鎖−ラムダ鎖算出値と健常者のＦＬＣのカッパ鎖−ラムダ鎖算出値のＲＯＣ曲線を示す。
【図８】糖尿病患者のＦＬＣのカッパ鎖濃度と健常者のＦＬＣのカッパ鎖濃度のＲＯＣ曲線を示す。
【図９】糖尿病患者のＦＬＣのラムダ鎖濃度と健常者のＦＬＣのラムダ鎖濃度のＲＯＣ曲線を示す。
【図１０】糖尿病患者のＦＬＣのカッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値と健常者のＦＬＣのカッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値のＲＯＣ曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
１．用語の説明
はじめに、本発明に関し、本明細書、請求の範囲、要約で使用される用語について説明する。
【００２４】
本発明において「糖尿病」とは、ヒトの場合一般社団法人  日本糖尿病学会より発行の雑誌「糖尿病」に掲載された「糖尿病の分類と診断基準に関する委員会報告（国際標準化対応版）」（Ｖｏｌ．５５  （２０１２）  Ｎｏ．７  ｐ．４８５−５０４：以下、「委員会報告」という）に掲載された「糖尿病」を指す。具体的には、表１（前記委員会報告のＴａｂｌｅ  ４を引用）に記にしたがって糖尿病であるか否かを決定する。
[表１]
2017170847.tif 000003
【００２５】
本発明においては、「糖尿病患者」とは、糖尿病に罹患していると診断された患者であり、好ましくは糖尿病患者から糖尿病腎症を発症した患者を除くことができる。
【００２６】
本発明において、「被験体」とは、後述する本発明に係る測定方法の適用対象となる個体をいう。
【００２７】
本発明において、「個体」とは、特に制限されず、ヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ等の哺乳動物が挙げられる。好ましくはヒト、イヌ、又はネコ等であり、より好ましくはヒトである。また、個体には疾患を有する個体と有さない個体（健常な個体）の両方が含まれる。個体の年齢、性別（雄又は雌）は問わない。
【００２８】
本発明において、「検体」とは、上記被験体由来の細胞、組織、血液試料及び体液（汗、皮膚からの分泌液、涙液、唾液、髄液、腹水及び胸水）である、好ましくは尿、及び血液試料であり、さらに好ましくは血液試料である。「血液試料」には、被験体から採取した血液（全血）、又は当該血液から調製した血清、又は血漿等が含まれる。より好ましくは、血清又は血漿であり、さらに好ましくは血清である。血漿を採取する際に使用する抗凝固剤の種類は特に制限されない。測定に用いる被験体の血液試料と基準値を決定する血液試料は同種であっても異種であっても良いが、同種であることが好ましい。また、血液試料として血漿を用いる場合、基準値を決定するための血漿は、被験体の血漿と同じ抗凝固剤を用いて採血された血液から調製されることが好ましい。
【００２９】
さらに、検体は、新鮮なものであっても、保存されていたものであってもよい。検体を保存する場合には、室温環境、冷蔵環境又は冷凍環境において保存することができるが、好ましくは冷凍保存である。
【００３０】
本発明において、イムノグロブリン産生細胞とは、イムノグロブリンを産生することができる細胞であり、Ｂリンパ球、及び形質細胞等を含む。また、本発明においてイムノグロブリン産生細胞の活性化とは、イムノグロブリン細胞における抗体産生能が上昇する、又は上昇しうる状態をいう。
【００３１】
本発明において、遊離イムノグロブリン軽鎖（ＦＬＣ）は、イムノグロブリン遊離Ｌ鎖、又はＢｅｎｃｅ  Ｊｏｎｅｓ蛋白ともいう。遊離イムノグロブリン軽鎖は、イムノグロブリン重鎖と会合していないイムノブロブリン軽鎖の単量体、又は二量体等である。イムノグロブリンの軽鎖は、抗原性の違いからカッパ（κ）鎖及びラムダ（λ）鎖の２種に分類される。以下において、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖をＦＬＣカッパ鎖、又は単にカッパ鎖と呼ぶことがある。同様に、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖をＦＬＣラムダ鎖、又は単にラムダ鎖と呼ぶことがある。
【００３２】
「カッパ鎖の濃度」とは、検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖の濃度であり、モル濃度であっても検体の一定容量あたりの質量の割合（質量／容量）であってもよいが、好ましくは質量／容量である。「ラムダ鎖の濃度」とは、検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖の濃度であり、モル濃度であっても検体の一定容量あたりの質量の割合（質量／容量）であってもよいが、好ましくは質量／容量である。
【００３３】
「濃度」を反映する値としては、上記の他に、蛍光や発光などのシグナルの強度であってもよい。
【００３４】
本発明において、ラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合を「カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値」と、カッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合を「ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値」呼ぶことがある。また、カッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値を「カッパ鎖−ラムダ鎖算出値」とラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値を「ラムダ鎖−カッパ鎖算出値」呼ぶことがある。前記「−」は「マイナス」を意味する。さらに、カッパ鎖の濃度を「カッパ鎖濃度」と呼ぶことがあり、ラムダ鎖の濃度を「ラムダ鎖濃度」と呼ぶことがある。加えて、カッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の和を「カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値」と呼ぶことがある。前記「＋」は「プラス」を意味する。
【００３５】
本発明において、「基準値」とは、例えば、糖尿病に罹患していない個体の検体中のカッパ鎖及び／又はラムダ鎖の濃度から求められる所定の基準値をいい、好ましくは健常個体の検体中のカッパ鎖及び／又はラムダ鎖の濃度から求められる所定の基準値である。
【００３６】
例えば、「所定の基準値」は、後述する「３．糖尿病の罹患を測定する方法」及び「４．イムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法」において、被験体の検体中のラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）に対応する基準値（カッパ鎖／ラムダ鎖比基準値）は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合であり、カッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合（ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値）に対応する基準値（ラムダ鎖／カッパ鎖比基準値）は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のカッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合である。また、被験体の検体中のカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）に対応する基準値（カッパ鎖−ラムダ鎖基準値）は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値であり、ラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖算出値）に対応する基準値（ラムダ鎖−カッパ鎖基準値）は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値である。さらにまた被験体の検体中のカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の和（カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値）に対応する基準値（カッパ鎖＋ラムダ鎖基準値）は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の和である。さらに、被験体の検体中のカッパ鎖の濃度（カッパ鎖濃度）に対応する基準値（カッパ鎖基準値）は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のカッパ鎖の濃度である。またさらに、被験体の検体中のラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖濃度）に対応する基準値（ラムダ鎖基準値）は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のラムダ鎖の濃度である。
【００３７】
また「所定の基準値」の別の基準値の態様として、以下の様に基準値を求めることができる。例えば、糖尿病に罹患した複数の個体から採取された検体から算出したカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値又はカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値と、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体から算出したカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値又はカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値とを取得する。これらの複数の値に基づいて糖尿病陽性（以下、単に「陽性」という）と糖尿病陰性（以下、単に「陰性」という）とを最も精度よく分類できる値を「基準値」とすることができる。糖尿病に罹患した複数の個体から採取された検体からカッパ鎖の濃度、又はラムダ鎖の濃度と、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体からカッパ鎖の濃度、又はラムダ鎖の濃度とを測定する。これらの複数の値に基づいて「陽性」と「陰性」とを最も精度よく分類できる値を「基準値」とすることができる。ここで、「最も精度よく分類できる値」は、検査の目的によって感度、特異度、陽性的中率、陰性的中率などの指標に基づいて適宜設定することができる。
【００３８】
また「所定の基準値」の別の態様は以下の通りである。
【００３９】
一態様として、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を指標に糖尿病を診断する場合、糖尿病に罹患した複数の個体から得られたそれぞれの検体中のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値の中で、最も高い値を基準値としてもよい。例えば、スクリーニング検査のように、擬陰性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。逆に、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を指標に糖尿病を診断する場合において、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値の中から、最も低い値を基準値と決定することができる。例えば、擬陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。
【００４０】
一態様として、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を指標に糖尿病を診断する場合、糖尿病に罹患した複数の個体から得られたそれぞれの検体中のラムダ鎖／カッパ鎖比算出値の中で、最も低い値を基準値としてもよい。例えば、スクリーニング検査のように、擬陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。逆に、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を指標に糖尿病を診断する場合において、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のラムダ鎖／カッパ鎖比算出値の中から、最も高い値を基準値と決定することができる。例えば、擬陰性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。
【００４１】
他の「所定の基準値」の態様として、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値を指標に糖尿病を診断する場合、糖尿病に罹患した複数の個体から得られたそれぞれの検体中のカッパ鎖−ラムダ鎖算出値の中で、最も高い値を基準値としてもよい。例えば、スクリーニング検査のように、擬陰性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。逆に、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値を指標に糖尿病を診断する場合において、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のカッパ鎖−ラムダ鎖算出値の中から、最も低い値を基準値と決定することができる。例えば、擬陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。
【００４２】
他の「所定の基準値」の態様として、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値を指標に糖尿病を診断する場合、糖尿病に罹患した複数の個体から得られたそれぞれの検体中のラムダ鎖−カッパ鎖算出値の中で、最も高い値を基準値としてもよい。例えば、スクリーニング検査のように、擬陰性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。逆に、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値を指標に糖尿病を診断する場合において、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のラムダ鎖−カッパ鎖算出値の中から、最も低い値を基準値と決定することができる。例えば、擬陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。
【００４３】
他の「所定の基準値」の態様として、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値を指標に糖尿病を診断する場合、糖尿病に罹患した複数の個体から得られたそれぞれの検体中のカッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値の中で、最も低い値を基準値としてもよい。例えば、スクリーニング検査のように、擬陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。逆に、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値を指標に糖尿病を診断する場合において、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のカッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値の中から、最も高い値を基準値と決定することができる。例えば、陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。
【００４４】
他の「所定の基準値」の態様として、カッパ鎖濃度を指標に糖尿病を診断する場合、糖尿病に罹患した複数の個体から得られたそれぞれの検体中のカッパ鎖濃度の中で、最も高い値を基準値としてもよい。例えば、スクリーニング検査のように、擬陰性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。逆に、カッパ鎖濃度を指標に糖尿病を診断する場合において、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のカッパ鎖濃度の中から、最も低い値を基準値と決定することができる。例えば、擬陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。
【００４５】
他の「所定の基準値」の態様として、ラムダ鎖濃度を指標に糖尿病を診断する場合、糖尿病に罹患した複数の個体から得られたそれぞれの検体中のラムダ鎖濃度の中で、最も低い値を基準値としてもよい。例えば、スクリーニング検査のように、擬陽性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。逆に、ラムダ鎖濃度を指標に糖尿病を診断する場合において、糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のラムダ鎖濃度の中から、最も高い値を基準値と決定することができる。例えば、擬陰性をできるだけ低減させたい場合は、当該基準値を好適に用いることができる。
【００４６】
また別の態様として、基準値は、糖尿病に罹患していない個体の検体中のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、ラムダ鎖濃度そのもの、又は糖尿病に罹患していない複数の個体の検体中のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、ラムダ鎖濃度の平均値、中央値または最頻値とすることもできる。
【００４７】
またさらに、基準値として、同一被験体であって当該被験体が糖尿病に罹患する前のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、ラムダ鎖濃度（一つの値でもよいし、複数の値の平均値、中央値、最頻値などであってもよい）を使用することもできる。
【００４８】
さらなる他の態様として、上記基準値を決定する場合、糖尿病に罹患していない個体の検体中のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、ラムダ鎖濃度に代えて、健常個体の検体中のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、ラムダ鎖濃度を使用してもよい。
【００４９】
これらの基準値は、被験体の検体中のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、ラムダ鎖濃度を取得する際に決定してもよいが、あらかじめ決定しておいてもよい。
【００５０】
「健常個体」とは、特に制限されない。好ましくは「個体」の項に記載されたヒト又はヒト以外の哺乳動物であって、生化学的検査、血液検査、尿検査、血清検査、生理学的検査等において異常データを示さない個体をいう。健常個体の年齢、性別は特に制限されない。
【００５１】
「糖尿病に罹患していない個体」とは、糖尿病に罹患していないことを除き特に制限されない。好ましくは「個体」の項に記載されたヒト又はヒト以外の哺乳動物であって、公知の診断基準に従って、糖尿病と診断され得ない個体である。
【００５２】
「複数の検体」とは、２以上、好ましくは５以上、より好ましくは１０以上の生体試料である。これらは、異なる個体から採取された検体であってもよいし、採取時が異なる同一個体の複数の検体であってもよい。
【００５３】
「複数の値」とは、２以上、好ましくは５以上、より好ましくは１０以上のカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、又はラムダ鎖濃度である。
【００５４】
「複数の個体」とは、２以上、好ましくは５以上、より好ましくは１０以上の個体である。
【００５５】
基準値を決定するためにカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値、カッパ鎖＋ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖濃度、又はラムダ鎖濃度を取得する個体と、被験体の種、年齢、性別等を必ずしも同じくする必要はないが、好ましくは同種である。また、前記個体は被験体と同年代及び／又は同一性別であることが好ましい。
【００５６】
本発明において、「遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖抗体」は、「抗カッパ鎖抗体」とも記載される。遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖抗体は、カッパ鎖と特異的に結合する限り制限はなく、カッパ鎖又はその一部を抗原としてヒト以外の動物に免疫して得られたポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及びそれらの断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２等）のいずれも用いることができる。但し、抗原からは少なくとも超可変領域を除くことが好ましい。また、イムノグロブリンのクラス及びサブクラスは特に制限されない。また、キメラ抗体であってもよい。さらに、ｓｃＦｖ等であってもよい。また、抗カッパ鎖抗体として、例えば特許文献２、又は非特許文献３に記載の抗体や、Ａｎｔｉ−Ｋａｐｐａ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ抗体［ＲＭ１０３］（ａｂ１９０４８４）（アブカム社）等の市販品を使用することもできる。
【００５７】
本発明において、「遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖抗体」は、「抗ラムダ鎖抗体」とも記載される。遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖抗体は、ラムダ鎖と特異的に結合する限り制限はなく、カッパ鎖又はその一部を抗原としてヒト以外の動物に免疫して得られたポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及びそれらの断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２等）のいずれも用いることができる。但し、抗原からは少なくとも超可変領域を除くことが好ましい。また、イムノグロブリンのクラス及びサブクラスは特に制限されない。また、キメラ抗体であってもよい。さらに、ｓｃＦｖ等であってもよい。また、抗ラムダ鎖抗体として、例えば特許文献２、又は非特許文献３に記載の抗体や、Ａｎｔｉ−Ｌａｍｂｄａ  Ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ抗体［２Ｇ９］（ａｂ１９４３）（アブカム社）等の市販品を使用することもできる。
【００５８】
本発明において、「捕捉抗体」とは、ＥＬＩＳＡ法等において抗原を補足する目的で使用される抗体である。また「検出抗体」とは、抗原を検出する目的で使用される抗体であり、好ましくは後述するように標識物質で標識された抗体である。
【００５９】
２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法
本項では、後述する「３．糖尿病の罹患を測定する方法」及び「４．イムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法」において、ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度を測定する方法について説明する。
【００６０】
ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度を測定する場合、上記「１．用語の説明」で述べた抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体、を用いた測定方法を使用することができる。カッパ鎖の濃度、又はラムダ鎖の濃度を測定する方法としては、公知のＥＬＩＳＡ法等を使用して行うことができる。また、より感度の高い方法として競合ＥＬＩＳＡ法を使用して行うことができる。ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度の測定は、独立した２つ測定系で行ってもよく、１つの測定系で行ってもよい。
【００６１】
本態様では、あらかじめ抗原捕捉用の抗カッパ鎖抗体又は抗ラムダ鎖抗体をマイクロプレート、蛍光ビーズ、又は磁気ビーズ等の固相上に固定化し、固定化された抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体と検体中のカッパ鎖又はラムダ鎖の複合体を形成させることができる。固相上に固定化された当該複合体又は固相上で形成された複合体を、当該技術において公知の方法で検出することにより、検体に含まれるカッパ鎖の濃度、又はラムダ鎖の濃度を測定することができる。また、本方法では、先に抗原捕捉用の抗カッパ鎖抗体、又は抗原捕捉用の抗ラムダ鎖抗体と検体中のカッパ鎖又はラムダ鎖との複合体を形成させてから、当該複合体を固相に固定化してもよい。
【００６２】
抗原捕捉用の抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体の固相への固定の方法は、特に限定されない。公知の方法を使用して、直接的に、又は別の物質を介して間接的に行うことができる。直接の結合としては、例えば、物理的吸着などが挙げられる。具体的には、イムノプレート等を使用して、直接各補足抗体をマイクロプレートに物理的に結合させることができる。また、抗原捕捉用の抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体を間接的に固相に固定してもよい。蛍光ビーズ、磁気ビーズ等への間接的な捕捉抗体の固相は、例えば特許文献２、又は非特許文献３に記載の方法に従って行うことができる。
【００６３】
固相の形状は特に限定されず、例えば、マイクロプレート、マイクロチューブ、試験管、ビーズ等が挙げられる。固相の素材は特に限定されず、例えば、マイクロプレート、マイクロチューブ、試験管等には、ポリスチレン、ポリプロピレン等を使用することができる。また、ビーズの場合には、ポリスチレンＸｍａｐ（登録商標）ビーズ（Ｌｕｍｉｎｅｘ社）やＭａｇＰｌｅｘ（登録商標）ミクロスフェア（Ｌｕｍｉｎｅｘ社）等を使用することができる。
【００６４】
本方法においては、前記複合体の形成に続いて、固相を洗浄する操作を含んでもよい。洗浄する場合には、界面活性剤等を含むＰＢＳ等を使用することができる。
【００６５】
本方法において、前記複合体の検出は、通常のＥＬＩＳＡ法の場合には、標識物質で標識された検出用抗カッパ鎖抗体、又は標識物質で標識された検出用抗ラムダ鎖抗体を使用して行うか、未標識の抗カッパ鎖抗体、又は未標識の抗ラムダ鎖抗体と結合することができる標識物質で標識された抗イムノグロブリン抗体等を使用して行うことができるが、標識された検出用抗カッパ鎖抗体、又は標識された検出用抗ラムダ鎖抗体を使用することが好ましい。また、検出に用いられる抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体の抗原におけるエピトープと抗原捕捉に用いられる抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体の抗原におけるエピトープとは異なることが好ましい。
【００６６】
競合ＥＬＩＳＡ法によって、ＦＬＣカッパ鎖、又はＦＬＣラムダ鎖の濃度を測定する場合には、標識物質で標識されたコンペティターの存在下で、検体中のＦＬＣカッパ鎖、又はＦＬＣラムダ鎖を捕捉用の抗カッパ鎖抗体、若しくは抗ラムダ鎖抗と接触させることができる。コンペティターは、検体中のＦＬＣカッパ鎖、又はＦＬＣラムダ鎖と同じ捕捉抗体によって認識されるエピトープを有するペプチドやタンパク質である。コンペティターは個体から単離されたものであってもよく、遺伝子工学的に、又は化学的に合成されたものであってもよい。
【００６７】
検出に用いられる抗カッパ鎖抗体、若しくは抗ラムダ鎖抗体、標識抗イムノグロブリン抗体又はコンペティターに標識される標識物質は、検出可能なシグナルが生じる限り、特に限定されない。例えば、蛍光物質、放射性同位元素、及び酵素等が挙げられる。酵素としては、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ等が挙げられる。蛍光物質としては、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ローダミン、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）などの蛍光色素、ＧＦＰなどの蛍光タンパク質などが挙げられる。放射性同位元素としては、１２５Ｉ、１４Ｃ、３２Ｐなどが挙げられる。それらの中でも、標識物質として、アルカリホスファターゼ、又はペルオキシダーゼが好ましい。
【００６８】
検出に用いられる抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体は、当該技術において公知の標識方法により、各抗体を上記の標識物質で標識して得られる。また、市販のラベリングキットなどを用いて標識してもよい。また、標識イムノグロブリン抗体は、抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体の標識と同じ手法を用いてもよいし、市販のものを使用してもよい。
【００６９】
本方法では、複合体に含まれる検出抗体の標識物質により生じるシグナルを検出することにより、検体に含まれるＦＬＣカッパ鎖又はＦＬＣラムダ鎖の濃度を測定できる。ここで、「シグナルを検出する」とは、シグナルの有無を定性的に検出すること、シグナル強度を定量すること、及び、シグナルの強度を半定量的に検出することを含む。半定量的な検出とは、シグナルの強度を、「シグナル発生せず」、「弱」、「中」、「強」などのように段階的に示すことをいう。本方法では、シグナルの強度を定量的又は半定量的に検出することが好ましい。
【００７０】
シグナルを検出する方法は、公知の方法を使用することができる。本方法では、上記の標識物質に由来するシグナルの種類に応じた測定方法を適宜選択することができる。例えば、標識物質が酵素である場合、該酵素に対する基質を反応させることによって発生する光、色などのシグナルを、フルオロメーター、ルミノメーター、分光光度計などの公知の装置を用いて測定することにより行うことができる。
【００７１】
酵素の基質は、該酵素の種類に応じて公知の基質から適宜選択できる。例えば、酵素としてアルカリホスファターゼを用いる場合、基質としては、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）（４−クロロ−３−（メトキシスピロ［１，２−ジオキセタン−３，２’−（５’−クロロ）トリクシロ［３．３．１．１３，７］デカン］−４−イル）フェニルリン酸２ナトリウム）等の化学発光基質、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルリン酸（ＢＣＩＰ）、５−ブロモ−６−クロロ−インドリルリン酸２ナトリウム、ｐ−ニトロフェニルリン酸等の発色基質が挙げられる。標識物質がペルオキシダーゼである場合には、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）等が挙げられる。
【００７２】
標識物質が放射性同位体である場合は、シグナルとしての放射線を、シンチレーションカウンターなどの公知の装置を用いて測定できる。また、標識物質が蛍光物質である場合は、シグナルとしての蛍光を、蛍光マイクロプレートリーダー、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）システム（Ｌｕｍｉｎｅｘ社）等の公知の装置を用いて測定できる。なお、励起波長及び蛍光波長は、用いた蛍光物質の種類に応じて適宜決定できる。
【００７３】
シグナルの検出結果は、カッパ鎖の濃度の値、又はラムダ鎖の濃度の値として用いることができる。例えば、シグナルの強度を定量的に検出する場合は、シグナル強度の測定値自体又は該シグナル強度の測定値から算出される値を、カッパ鎖の濃度の値、又はラムダ鎖の濃度の値として用いることができる。
【００７４】
３．糖尿病の罹患を測定する方法
本発明は、被験体について糖尿病の罹患を測定する方法に関する。糖尿病の罹患を測定する方法には、以下の４つの態様が含まれる。
【００７５】
第１の態様は、下記工程（１）〜（４）を含む：
（１）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（２）上記（１）工程で得られたラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）を算出する工程、（３）上記（２）工程で得られたカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を基準となるカッパ鎖／ラムダ鎖比（カッパ鎖／ラムダ鎖比基準値）と比較する工程、及び（４）上記工程（３）において、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値がカッパ鎖／ラムダ鎖比基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００７６】
第２の態様は、下記工程（１’）〜（４’）を含む：
（１’）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（２’）上記（１’）工程で得られたカッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合（ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値）を算出する工程、（３’）上記（２’）工程で得られたラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を基準となるラムダ鎖／カッパ鎖比（ラムダ鎖／カッパ鎖比比基準値）と比較する工程、及び（４’）上記工程（３’）において、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値がラムダ鎖／カッパ鎖比基準値よりも高い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００７７】
第３の態様は、下記工程（Ａ）〜（Ｄ）を含む：
（Ａ）被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（Ｂ）上記（Ａ）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）を算出する工程、（Ｃ）上記（Ｂ）工程で得られたカッパ鎖−ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び（Ｄ）上記工程（Ｃ）において、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値がカッパ鎖−ラムダ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００７８】
第４の態様は、下記工程（Ａ’）〜（Ｄ’）を含む：
（Ａ’）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（Ｂ’）上記（Ａ’）工程で得られたラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖算出値）を算出する工程、（Ｃ’）上記（Ｂ’）工程で得られたラムダ鎖−カッパ鎖算出値を基準となるラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び（Ｄ’）上記工程（Ｃ’）において、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値がラムダ鎖−カッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００７９】
第５の態様は、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む：
（ｉ）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のラムダ鎖の濃度を測定する工程、（ｉｉ）上記（ｉ）工程で得られたラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖濃度）を基準となるラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び（ｉｉｉ）ラムダ鎖濃度がラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００８０】
第６の態様は、下記工程（Ｉ）〜（ＩＩＩ）を含む：
（Ｉ）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖の濃度を測定する工程、（ＩＩ）上記（Ｉ）工程で得られたカッパ鎖の濃度（カッパ鎖濃度）を基準となるカッパ鎖の濃度（カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び（ＩＩＩ）カッパ鎖濃度がカッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００８１】
上記第１〜第６の態様は、糖尿病患者において、検体中のＦＬＣカッパ鎖の濃度が健常者と比較して減少しており、また血中のＦＬＣラムダ鎖の濃度が健常者と比較して増加することに基づくものである。したがって、上記第１〜第６の態様は、それぞれ単独で実施されてもよいが、上記第１〜第６の態様からなる群から選択される２種以上を組み合わせて実施してもよい。また、上記態様の中で、糖尿病の罹患を測定する方法として好ましくは、第１の態様、第３の態様、第５の態様、又は第６の態様であり、さらに好ましくは、第１の態様、第３の態様、又は第５の態様である。これらの態様は、単独で実施されてもよいが、２種以上を組み合わせて実施してもよい。
【００８２】
４．イムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法
糖尿病患者において、血中のＦＬＣラムダ鎖の濃度が健常者と比較して上昇する。一方で、糖尿病患者においては、検体中のＦＬＣカッパ鎖の濃度が健常者と比較して減少するものの、血中のＦＬＣラムダ鎖の濃度とＦＬＣカッパ鎖の濃度との和が、健常者と比較して上昇する。このことから、糖尿病患者においては、イムノグロブリン産生細胞、特にラムダ鎖産生細胞が活性化されていると考えられる。
【００８３】
本発明は、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法に関する。糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法には、以下の５つの態様が含まれる。
【００８４】
第Ｉの態様は、下記工程（１）〜（４）を含む：
（１）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（２）上記（１）工程で得られたラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）を算出する工程、（３）上記（２）工程で得られたカッパ鎖／ラムダ鎖比算出値を基準となるカッパ鎖／ラムダ鎖比（カッパ鎖／ラムダ鎖比基準値）と比較する工程、及び（４）上記工程（３）において、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値がカッパ鎖／ラムダ鎖比基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。
【００８５】
第ＩＩの態様は、下記工程（１’）〜（４’）を含む：
（１’）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（２’）上記（１’）工程で得られたカッパ鎖の濃度に対するラムダ鎖の濃度の割合（ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値）を算出する工程、（３’）上記（２’）工程で得られたラムダ鎖／カッパ鎖比算出値を基準となるラムダ鎖／カッパ鎖比（ラムダ鎖／カッパ鎖比比基準値）と比較する工程、及び（４’）上記工程（３’）において、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値がラムダ鎖／カッパ鎖比基準値よりも高い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００８６】
第ＩＩＩの態様は、下記工程（Ａ）〜（Ｄ）を含む：
（Ａ）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（Ｂ）上記（Ａ）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）を算出する工程、（Ｃ）上記（Ｂ）工程で得られたカッパ鎖−ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び（Ｄ）上記工程（Ｃ）において、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値がカッパ鎖−ラムダ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００８７】
第ＩＶの態様は、下記工程（Ａ’）〜（Ｄ’）を含む：
（Ａ’）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（Ｂ’）上記（Ａ’）工程で得られたラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖算出値）を算出する工程、（Ｃ’）上記（Ｂ’）工程で得られたラムダ鎖−カッパ鎖算出値を基準となるラムダ鎖の濃度とカッパ鎖の濃度の差の絶対値（ラムダ鎖−カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び（Ｄ’）上記工程（Ｃ’）において、ラムダ鎖−カッパ鎖算出値がラムダ鎖−カッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体が糖尿病に罹患していると決定する工程。
【００８８】
第Ｖの態様は、下記工程（１’’）〜（４’’）を含む：
（１’’）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖及びラムダ鎖の濃度を測定する工程、（２’’）上記（１’’）工程で得られたカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の和（カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値）を算出する工程、（３’’）上記（２’’）工程で得られたカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値を基準となるカッパ鎖＋ラムダ鎖値（カッパ鎖＋ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び（４’’）上記工程（３’’）において、カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値がカッパ鎖＋ラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。
【００８９】
第ＶＩの態様は、下記工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む：
（ｉ）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のラムダ鎖の濃度を測定する工程、（ｉｉ）上記（ｉ）工程で得られたラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖濃度）を基準となるラムダ鎖の濃度（ラムダ鎖基準値）と比較する工程、及び（ｉｉｉ）ラムダ鎖濃度がラムダ鎖基準値よりも高い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。
【００９０】
第ＶＩＩの態様は、下記工程（Ｉ）〜（ＩＩＩ）を含む：
（Ｉ）上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」にしたがって、糖尿病に罹患した被験体から採取された検体中の遊離イムノグロブリン軽鎖のカッパ鎖の濃度を測定する工程、（ＩＩ）上記（Ｉ）工程で得られたカッパ鎖の濃度（カッパ鎖濃度）を基準となるカッパ鎖の濃度（カッパ鎖基準値）と比較する工程、及び（ＩＩＩ）カッパ鎖濃度がカッパ鎖基準値よりも低い場合に、前記被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定する工程。
【００９１】
上記第Ｉ〜第ＶＩＩの態様は、糖尿病患者において、検体中のＦＬＣカッパ鎖の濃度が健常者と比較して減少しており、また血中のＦＬＣラムダ鎖の濃度が健常者と比較して増加することに基づくものである。したがって、上記第Ｉ〜第ＶＩＩの態様は、それぞれ単独で実施されてもよいが、上記第Ｉ〜第ＶＩＩの態様からなる群から選択される２種以上を組み合わせて実施してもよい。また、上記態様の中で、糖尿病患者についてイムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法として好ましくは、上記第Ｉの態様、第ＩＩＩの態様、第Ｖの態様、又は第ＶＩの態様である。前記第Ｉの態様、第ＩＩＩの態様、第Ｖの態様、又は第ＶＩの態様は単独で実施されてもよいが、２種以上を組み合わせて実施してもよい。
【００９２】
５．糖尿病の治療方法
上記「３．糖尿病の罹患を測定する方法」は、さらに糖尿病を治療する工程を含んでいてもよい。具体的には、上記測定方法で、被験体が糖尿病であると決定された場合に、糖尿病を治療する工程を含む。
【００９３】
糖尿病の治療は、公知の方法にしたがって行うことができる。糖尿病の治療方法としては、食事療法、運動療法、薬物投与を挙げることができる。薬物は、チアゾリジン薬、ビグアナイド薬等のインスリン抵抗性改善系薬剤；グリニド薬、スルホニル尿素薬及びＤＰＰ−４阻害薬等のインスリン分泌促進系薬；ＳＧＬＴ２阻害薬、α−グルコシダーゼ阻害薬等の糖吸収・排泄調節系薬等を挙げることができる。
【００９４】
また、上記「４．イムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法」は、さらに、被験体においてイムノグロブリン産生細胞が活性化していると決定された場合に、イムノグロブリン産生細胞の活性化を抑制する工程を含む。イムノグロブリン産生細胞の活性化の抑制は、公知の方法にしたがって行うことができる。当該方法は、例えば免疫抑制療法である。
【００９５】
６．コンピュータプログラム
本発明は、別の態様として、プロセッサ及び前記プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータに上記「３．糖尿病の罹患を測定する方法」に記載する、工程（１）〜（４）；工程（１’）〜（４’）；工程（Ａ）〜（Ｄ）；又は工程（Ａ’）〜（Ｄ’）を実行させるコンピュータプログラムを含む。
【００９６】
また、別の態様として、プロセッサ及び前記プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータに上記「４．イムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法」に記載する、工程（１）〜（４）；工程（１’）〜（４’）；工程（Ａ）〜（Ｄ）；又は工程（Ａ’）〜（Ｄ’）を実行させるコンピュータプログラムを含む。
【００９７】
これらのコンピュータプログラムは、記録媒体に記録されていてもよい。
【００９８】
７．検査試薬
本発明は、「３．糖尿病の罹患を測定する方法」及び「４．イムノグロブリン産生細胞の活性化の有無を検出する方法」において使用される検査試薬に関する。
【００９９】
検査試薬は、以下の２つの態様を含む。
【０１００】
態様１の検査試薬は、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖抗体（抗カッパ鎖抗体）を含む。
【０１０１】
態様２の検査試薬は、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖抗体（抗ラムダ鎖抗体）を含む。
【０１０２】
遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖抗体及び遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖抗体は、上記「１．用語の説明」に記載したものを使用することができる。
【０１０３】
検査試薬には、少なくとも抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体が１種以上含まれていればよい。抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体がポリクローナル抗体である場合には、１種の抗原で免役して得られたポリクローナル抗体であってもよく、また２種以上の抗原で並行して同一個体に免役して得られたポリクローナル抗体であってもよい。また、２種以上の抗原をそれぞれ別の動物に接種して得られたそれぞれのポリクローナル抗体を混合してもよい。抗カッパ鎖抗体がモノクローナル抗体である場合には、１種のハイブリドーマから産生されるモノクローナル抗体であってもよいが、２種以上のハイブリドーマから産生されたモノクローナル抗体であって、それぞれのモノクローナル抗体が同一又は異なるエピトープを認識する複数のモノクローナル抗体が２種以上含まれていてもよい。また、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体を１種以上ずつ混合して含んでいてもよい。
【０１０４】
検査試薬に含まれる抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体の形態は、特に制限されず、それぞれの抗体を含む抗血清若しくは腹水等の乾燥状態又は液体状態であってもよい。またそれぞれの抗体の形態は、精製抗体、それぞれの抗体を含むイムノグロブリン画分若しくはそれぞれの抗体を含むＩｇＧ画分の乾燥状態又は水溶液であってもよい。
【０１０５】
前記形態が、それぞれの抗体を含む抗血清若しくは腹水の乾燥状態又は液体状態である場合、さらにβ−メルカプトエタノール、ＤＴＴ等の安定化剤；アルブミン等の保護剤；ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル等の界面活性剤、アジ化ナトリウム等の防腐剤等の少なくとも一つを含んでいてもよい。また、それぞれの抗体の形態が、精製抗体、それぞれの抗体を含むイムノグロブリン画分若しくはそれぞれの抗体を含むＩｇＧ画分の乾燥状態又は水溶液である場合、さらに、リン酸緩衝液等のバッファー成分；β−メルカプトエタノール、ＤＴＴ等の安定化剤；アルブミン等の保護剤；塩化ナトリウム等の塩；ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル等の界面活性剤等、アジ化ナトリウム等の防腐剤の少なくとも一つを含んでいてもよい。
【０１０６】
検査試薬に含まれる抗カッパ鎖抗体、又は抗ラムダ鎖抗体は未標識であっても、ビオチン又は上述の標識物質で標識されていてもよいが、ビオチン又は上述の標識物質で標識されていることが好ましい。標識物質は、上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」の項に例示されたものを使用することができるが、好ましくはアルカリホスファターゼである。また、本発明においては、それぞれの抗体が、固相表面等に固定化された状態で提供されるものであってもよい。固相及び固定化については、上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」の項で例示したとおりである。固相として好ましくは、蛍光ビーズ、又は磁気ビーズである。
【０１０７】
８．検査キット
本発明は、上記「７．検査試薬」に記載の検査試薬を含む検査キットに関する。
【０１０８】
検査キットは、以下の３つの態様を含む。
【０１０９】
態様１は、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖捕捉抗体、及び遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖検出抗体を含む検査キットである。
【０１１０】
態様２は、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖捕捉抗体、及び遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖検出抗体を含む検査キットである。
【０１１１】
態様３は、離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖捕捉抗体、遊離イムノグロブリン軽鎖カッパ鎖検出抗体、遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖捕捉抗体及び遊離イムノグロブリン軽鎖ラムダ鎖検出抗体を含む検査キットである。
【０１１２】
より具体的には、捕捉抗体として使用される、上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」の項で例示した標識物質（好ましくはビオチン）で標識された抗カッパ鎖抗体、及び／又は抗ラムダ鎖抗体を含む検査試薬、検出抗体として使用される、上記「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」の項で例示した標識物質（好ましくはアルカリホスファターゼ、及び蛍光物質）で標識された抗カッパ鎖抗体、及び／又は抗ラムダ鎖抗体を含む検査試薬を含む検査キットである。本実施形態は、固相、好ましくはアビジン類が結合した固相、より好ましくはアビジン類が結合した結合ビーズ、磁気ビーズをさらに含んでいてもよい。また、捕捉抗体が固相に固定化された状態で提供されてもよい。さらに、本実施形態は、基質を含んでいてもよい。基質として好ましくは、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ（登録商標）である。
【０１１３】
なお、標識物質、固相、基質の詳細は、「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」に記載したとおりであり、当該記載はここに援用することができる。
【０１１４】
捕捉抗体が予め固相に結合している場合は、本実施形態の検査キットは、捕捉抗体を固定化した固相と、検出抗体と、標識物質とを含み得る。検出抗体と、標識物質とは、別々の容器に収容されていてもよいし、同一の容器に収容されていてもよい。なお、標識物質が酵素であり、上記検査キットがさらに基質を含む場合、酵素と基質とは別々の容器に収容されている必要がある。ユーザに提供される際は、固相と、検出抗体と、標識物質とのうち少なくとも２種類が同梱されていてもよいし、別々に梱包されていてもよい。
【０１１５】
捕捉抗体が予め固相に結合していない場合は、本実施形態の検査キットは、固相と、捕捉抗体と、検出抗体と、標識物質とを含み得る。捕捉抗体と、検出抗体と、標識物質とのうち少なくとも２種類が同一の容器に収容されていてもよいし、別々の容器に収容されていてもよい。なお、標識物質が酵素であり、上記検査キットがさらに基質を含む場合、酵素と基質とは別々の容器に収容されている必要がある。ユーザに提供される際は、固相と、捕捉抗体と、検出抗体と、標識物質とのうち少なくとも２種類が同梱されていてもよいし、別々に梱包されていてもよい。
【０１１６】
また、競合ＥＬＩＳＡ法を行うためのキットである場合には、捕捉抗体と「２．ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖の濃度測定方法」に記載のコンペティターを含んでいてもよい。この場合、捕捉抗体は固相に結合していても結合していなくともよい。
【実施例】
【０１１７】
以下、実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例の態様に限定して解釈されるものではない。
実施例：血清中ＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖濃度の測定
１．方法
糖尿病患者９５例、及び健常者７５人を被験体として、血清中のＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖濃度を測定した。健常者は、糖尿病のみならず、他の疾患も含め疾患の疑いのない者である。被検体から採血後直ちに血清を分離し、分離した血清を直ちに−８０℃で凍結し、測定まで−８０℃で保存した。測定は、非特許文献３の著者等のグループに依頼し、非特許文献３に記載の方法により行われた。【０１１８】
測定により得られたＦＬＣカッパ鎖及びＦＬＣラムダ鎖濃度の値を用いて、各糖尿病患者及び健常者について、ラムダ鎖の濃度に対するカッパ鎖の濃度の割合（カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値）、カッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の差の絶対値（カッパ鎖−ラムダ鎖算出値）、及びカッパ鎖の濃度とラムダ鎖の濃度の和（カッパ鎖＋ラムダ鎖算出値）を算出した。【０１１９】
統計解析には、ＳｔａｔＦｌｅｘを用い、基本統計量（パラメトリック法）、独立多群２群間比較（２標本ｔ検定：ウェルチ法）を行った。また、感度、特異度の検定にはＲＯＣ解析を行い、ＲＯＣ曲線を作成すると共にＡＵＣ値を求めた。【０１２０】
２．結果
（１）基本統計量及び独立多群２群間比較
基本統計量及び独立多群２群間比較の結果を表２に示す。また、糖尿病患者及び健常者における各値の分布を図１〜５に示す。ＦＬＣカッパ鎖濃度、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、及びカッパ鎖−ラムダ鎖算出値は、健常者と比べて糖尿病患者で有意に減少していた。また、ＦＬＣラムダ鎖濃度、及びカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値は健常者と比べて糖尿病患者で有意に増加していた。
[表２]
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【０１２１】
（２）ＲＯＣ解析
糖尿病患者群と健常者群とのＲＯＣ解析により得られた、ＡＵＣ値を表３に示す。また、ＲＯＣ曲線を図６〜１０に示す。ＦＬＣラムダ鎖濃度、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、及びカッパ鎖−ラムダ鎖算出値のＡＵＣ値は、いずれも高精度に分類される0.98、0．97及び0.99を示した。ＦＬＣカッパ鎖濃度及びカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値は、低精度に分類される0.72及び0.76であった。
[表３]
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【０１２２】
また、ＲＯＣ曲線は、図６〜図１０に示すように、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値（図６）、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値（図７）、及びＦＬＣラムダ鎖濃度（図９）のグラフの形状は、グラフ左上隅に沿う形となり、糖尿病患者において感度及び特異度とも非常に高い結果となった。これに対して、ＦＬＣカッパ鎖濃度（図８）及びカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値（図１０）のＲＯＣ曲線は、グラフ左下から右上を結ぶ対角線に沿う形となり、糖尿病患者に対する感度及び特異度が低いことが示された。【０１２３】
３．まとめ
このことから、糖尿病患者では、血中のＦＬＣカッパ鎖濃度が低下し、血中のＦＬＣラムダ鎖濃度が上昇することが示された。結果として、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、カッパ鎖−ラムダ鎖算出値が低下することが明らかとなった。そしてＲＯＣ解析の結果、カッパ鎖／ラムダ鎖比算出値、ＦＬＣラムダ鎖濃度、及びカッパ鎖−ラムダ鎖算出値は、糖尿病の予測能及び診断能に優れていることが明らかとなった。また、これらの結果から、ラムダ鎖／カッパ鎖比算出値及びラムダ鎖−カッパ鎖算出値も同様に糖尿病の予測能及び診断能に優れていることは明らかである。【０１２４】
さらに、ＦＬＣラムダ鎖濃度、及びカッパ鎖＋ラムダ鎖算出値から、糖尿病患者においてイムノグロブリン産生細胞の活性化が起こっていることが明らかとなった。
【図１】
2017170847.tif 000006
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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