(57)【要約】  本発明は、公知のブロック共重合体、及び該ブロック共重合体を用いたイメージングプローブよりも腫瘍内部のイメージング効果が向上したブロック共重合体、及び該ブロック共重合体を用いたイメージングプローブを提供すること。具体的には、公知のブロック共重合体、及び該ブロック共重合体を用いたイメージングプローブと比較して、疾病標的組織への浸透性を向上させて効率的にイメージング効果を向上させることを目的とし、ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、シグナル基及び任意の疎水性置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体であって、該ポリエチレングリコール鎖と該ポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が２ｋＤａ以上で１０ｋＤａ以下であり、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であるブロック共重合体、及びそれらを含む組成物である。
2018025657.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、側鎖にシグナル基及び任意の疎水性置換基を有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体であって、該ポリエチレングリコール鎖と該ポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が２ｋＤａ以上１０ｋＤａ以下であり、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であるブロック共重合体。
【請求項２】
ポリアミノ酸鎖が、ポリアスパラギン酸鎖、ポリグルタミン酸鎖又はポリ（アスパラギン酸−グルタミン酸）鎖である請求項１に記載のブロック共重合体。
【請求項３】
シグナル基が蛍光基である、請求項１又は請求項２に記載のブロック共重合体。
【請求項４】
ポリエチレングリコール鎖の平均分子量が１ｋＤａ以上で６ｋＤａ以下である請求項１乃至請求項３の何れか一項に記載のブロック共重合体。
【請求項５】
ブロック共重合体が、一般式（１）
【化１】
2018025657.tif 000005
（１）
［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい直鎖状、分岐状または環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、ｔは２０〜１４０の整数を示し、Ａは置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基及び炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル基からなる群から選択される置換基を示し、Ｒ３はシグナル基を示し、Ｒ４は、疎水性置換基であり、ｎは１又は２を示し、ｘ１、ｘ２、ｙ１、ｙ２及びｚは、それぞれ独立して０〜２０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２）は１〜１０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２＋ｙ１＋ｙ２＋ｚ）は３〜２０の整数を示し、前記Ｒ３及びＲ４が結合している各構成ユニット並びに側鎖カルボニル基が分子内環化した構成ユニットは、それぞれ独立してランダムに配列した構造である。］で示される請求項１乃至４の何れか一項に記載のブロック共重合体。
【請求項６】
粒子径が２０ｎｍ未満である請求項１乃至５の何れか一項に記載のブロック共重合体。
【請求項７】
請求項１乃至６の何れか一項に記載のブロック共重合体を含む組成物から形成されるナノ粒子。
【請求項８】
粒子径が２０ｎｍ未満である請求項７に記載のナノ粒子。
【請求項９】
請求項１乃至６の何れか一項に記載のブロック共重合体及び／又は請求項７又は８に記載のナノ粒子を含むイメージングプローブ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な高分子誘導体、及びそれらを用いた新規な高分子誘導体イメージングプローブに関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬品において、有効成分である生理活性物質の薬物動態を制御して、生体内の特異的な作用部位に望ましい薬物濃度−作用時間で送達させるドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）が開発されている。非特許文献１は、ポリエチレングリコールセグメントとポリアミノ酸セグメントとが連結したブロック共重合体を薬剤運搬担体とするＤＤＳ化製剤を開示している。このブロック共重合体はポリエチレングリコールの外殻と疎水性内核を有する粒径が２０〜１００ｎｍの高分子ミセル形状を形成し、様々な種類の薬剤を化学結合又は物理的取込みにより安定に内核に包含している。【０００３】
この高分子ミセル型ＤＤＳ製剤は、ＥＰＲ（正常の血管に比べて透過性が高い腫瘍部位や炎症部位近傍の血管において、１００ｎｍ以下の粒子が特異的に集まるという現象）効果を持つこと、生体内に投与すると排泄が抑制されて体内滞留性が向上すること、受動的に腫瘍等の組織へ移行して集積して行くことが特徴である。これらの性質に基づき、高分子ミセル型ＤＤＳ製剤は生理活性物質を生体内に長時間留め、有効成分の利用率を高めることができる。すなわち、高分子ミセル型ＤＤＳ製剤は搭載薬と比較して、より強力な生理活性効果をもたらす。【０００４】
特許文献１及び特許文献２はパクリタキセルを物理的に取り込んだ高分子ミセル型ＤＤＳ製剤を開示している。特許文献３にはカンプトテシン誘導体が化学結合した高分子ミセル型ＤＤＳ製剤、特許文献４にはレゾルシノール誘導体が化学結合した高分子ミセル型ＤＤＳ製剤、特許文献５にはタキサン誘導体が化学結合した高分子ミセル型ＤＤＳ製剤、特許文献６にはステロイド誘導体が化学結合した高分子ミセル型ＤＤＳ製剤が記載されている。様々な薬剤が高分子ミセル型ＤＤＳ製剤に適用可能であり、様々なブロック共重合体及び高分子ミセル型ＤＤＳ製剤が知られている。【０００５】
また、特許文献７はリポソームのナノサイズ特有の性質を活かした、生体試料中の物質の検出や、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングのための新規機能性材料を開示している。特許文献８乃至特許文献９は、ポリサルコシンからなる親水性ブロックと、ポリ乳酸からなる疎水性ブロックから構成される両親媒性ブロックコポリマーのナノ粒子を開示しており、ＥＰＲ効果により、がん組織を蛍光イメージングできることが記載されている。【０００６】
一方、非特許文献２は、癌種および動物種によりＥＰＲ効果が異なり、それが高分子ミセル型ＤＤＳ製剤の生体内挙動に影響しているのではないかと考察している。非特許文献３は、３０ｎｍと７０ｎｍの高分子ミセル型ＤＤＳ製剤を用い、ＥＰＲ効果を示しやすい動物モデルと示しにくい動物モデルがあること、３０ｎｍの高分子ミセル型ＤＤＳ製剤の方がＥＰＲ効果が低い動物モデルでも効果を示すことを報告している。
ＥＰＲ効果の違いに影響を受けないがん組織でも利用できるｉｎ  ｖｉｖｏイメージングが可能なプローブが求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００４／０８２７１８号
【特許文献２】国際公開第２００６／０３３２９６号
【特許文献３】国際公開第２００４／０３９８６９号
【特許文献４】国際公開第２００８／０４１６１０号
【特許文献５】国際公開第２００７／１１１２１１号
【特許文献６】国際公開第２００９／０４１５７０号
【特許文献７】特許第４５２８９９０号公報
【特許文献８】特許第４９３６３１２号公報
【特許文献９】特許第５７１４０１６号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００８年、６０巻、８９９〜９１４頁
【非特許文献２】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１３年、７３巻、２４１２〜２４１７頁
【非特許文献３】ＡＣＳ  Ｎａｎｏ、２０１５年、９（５）、４９５７〜４９６７頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、公知のブロック共重合体、及び該ブロック共重合体を用いたイメージングプローブよりも腫瘍内部のイメージング効果が向上したブロック共重合体、及び該ブロック共重合体を用いたイメージングプローブを提供することを課題とする。具体的には、公知のブロック共重合体、及び該ブロック共重合体を用いたイメージングプローブと比較して、疾病標的組織への浸透性を向上させてイメージング効果を改善することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らはポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、シグナル基及び任意の疎水性置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体であって、該ポリエチレングリコール鎖と該ポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が２ｋＤａ以上で１０ｋＤａ以下であり、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であるブロック共重合体、及びそれらを含む組成物が、会合性に基づくナノ粒子を形成し、腫瘍への浸透性を向上させることができる動態を持つことを見出し、本発明を完成させた。【００１１】
即ち、本発明は次の［１］〜［９］に関する。
［１］ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、側鎖にシグナル基及び任意の疎水性置換基を有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体であって、該ポリエチレングリコール鎖と該ポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が２ｋＤａ以上１０ｋＤａ以下であり、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であるブロック共重合体。
［２］ポリアミノ酸鎖が、ポリアスパラギン酸鎖、ポリグルタミン酸鎖又はポリ（アスパラギン酸−グルタミン酸）鎖である前記［１］に記載のブロック共重合体。
［３］疎水性置換基が側鎖カルボキシ基にエステル結合及び／又はアミド結合している前記［１］又は［２］に記載のブロック共重合体。
［４］シグナル基が蛍光基である、［１］乃至［３］の何れか一項に記載のブロック共重合体。
［５］ポリエチレングリコール鎖の平均分子量が１ｋＤａ以上で６ｋＤａ以下である前記［１］乃至［４］の何れか一項に記載のブロック共重合体。
［６］ブロック共重合体が、一般式（１）【００１２】
【化１】
2018025657.tif 000003
（１）
［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい直鎖状、分岐状または環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、ｔは２０〜１４０の整数を示し、Ａは置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基及び炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル基からなる群から選択される置換基を示し、Ｒ３はシグナル基を示し、Ｒ４は、疎水性置換基であり、ｎは１又は２を示し、ｘ１、ｘ２、ｙ１、ｙ２及びｚは、それぞれ独立して０〜２０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２）は１〜１０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２＋ｙ１＋ｙ２＋ｚ）は３〜２０の整数を示し、前記Ｒ３及びＲ４が結合している各構成ユニット並びに側鎖カルボニル基が分子内環化した構成ユニットは、それぞれ独立してランダムに配列した構造である。］で示される前記［１］乃至［５］の何れか一項に記載のブロック共重合体。
［７］粒子径が２０ｎｍ未満である前記［１］乃至［６］の何れか一項に記載のブロック共重合体。
［８］前記［１］乃至［７］の何れか一項に記載のブロック共重合体を含む組成物から形成されるナノ粒子。
［９］粒子径が２０ｎｍ未満である前記［８］に記載のナノ粒子。
［１０］前記［１］乃至［７］の何れか一項に記載のブロック共重合体及び／又は前記［８］又は［９］に記載のナノ粒子を含むイメージングプローブ。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、シグナル基及び任意の疎水性置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体であって、該ポリエチレングリコール鎖と該ポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が２ｋＤａ以上で１０ｋＤａ以下であり、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であるブロック共重合体、及びそれらを含む組成物である。【００１４】
本発明のブロック共重合体、及びそれらを含む組成物から形成されるナノ粒子は、公知の高分子ミセル型ＤＤＳ製剤より小さい体積平均粒径を有し、生体内に投与された後、標的組織に移行・浸透する。このため本発明のブロック共重合体、及びそれらを含む組成物は、公知のブロック共重合体と比較して標的組織への高い移行性と浸透性を有しシグナル基を疾病標的組織へ広範囲に亘り分布させ、効率的にイメージング効果を発揮させる。また、本発明のブロック共重合体、及びそれらを含む組成物は腎臓等における排泄性が向上して血中滞留性が抑えられることにより、標的組織以外への分布が低い。このため、本発明のブロック共重合体、及びそれらを含む組成物の正常組織のイメージング効果が抑えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明のブロック共重合体のヒト膵臓がんＢｘＰＣ−３腫瘍内および腎臓内分布を示す組織切片画像である（試験例１）。
【図２】試験例１の腫瘍組織切片画像の輝度を算出したグラフである。
【図３】試験例１の腎臓組織切片画像の輝度を算出したグラフである。
【図４】本発明のブロック共重合体のヒト腎がんＲＣＣ−０１−ＪＣＫ腫瘍内および腎臓内分布を示す組織切片画像である（試験例２）。
【図５】試験例２の腫瘍組織切片画像の輝度を算出したグラフである。
【図６】試験例２の腎臓組織切片画像の輝度を算出したグラフである。
【図７】本発明のブロック共重合体のヒトグリオーマＵ８７ＭＧ腫瘍内および腎臓内分布を示す組織切片画像である（試験例３）。
【図８】試験例３の腫瘍組織切片画像の輝度を算出したグラフである。
【図９】試験例３の腎臓組織切片画像の輝度を算出したグラフである。
【図１０】本発明のブロック共重合体のヒト膵臓がんＢｘＰＣ３腫瘍内および腎臓内分布を示す組織切片画像である（試験例４）。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、シグナル基及び任意の疎水性置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体であって、該ポリエチレングリコール鎖と該ポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が２ｋＤａ以上で１０ｋＤａ以下であり、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であるブロック共重合体、及びそれらを含む組成物である。
【００１７】
本発明は、ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体に関する。本発明のブロック共重合体はシグナル基や生理活性物質などのキャリアーとして用いることができる。本発明のブロック共重合体は該ブロック共重合体に化学結合又は物理的取込みにより安定に内核に包含することができれば、シグナル基のイメージング機能や化学構造及び物性、生理活性物質の薬理活性機能や化学構造及び物性に影響されないため、あらゆる物質のキャリアーとして利用できる。
【００１８】
本発明のブロック共重合体、及びそれらを含む組成物はイメージングプローブとして用いられる。以下に、その詳細について説明する。
【００１９】
本発明におけるポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメント部分、並びにシグナル基及び任意の疎水性置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントからなる共重合体には、グラフト型ポリマーやブロック型ポリマーが含まれ、好ましくはブロック型ポリマーが挙げられる。
【００２０】
本発明のブロック共重合体におけるポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメント（以下、「ポリエチレングリコールセグメント」）は、エチレンオキシ基：（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）単位の繰り返し構造を有するセグメントである。好ましくはエチレンオキシ基単位の繰り返し数が１０〜１８０ユニット、好ましくは２０〜１４０ユニット、より好ましくは２２〜１３０ユニット、さらに好ましくは３０〜１２０ユニットである。エチレンオキシ基単位繰り返し数が２０ユニット以下の場合、得られるブロック共重合体が十分な水溶性を具備しない可能性が高くなるほか、所望の体内動態を発揮しない可能性がある。さらに、１４０ユニット以上の場合、疎水性ポリマーセグメントの相対的含有量が低くなるため、所望の自己会合性物性が得られず、これに伴う体内動態を発揮できない可能性がある。なお、エチレンオキシ基単位重合数は後述する一般式（１）ではｔと表される。
【００２１】
エチレンオキシ基単位繰り返し数が１０〜１８０ユニットの場合、ポリエチレングリコールセグメントの分子量は０．４ｋＤａ〜８ｋＤａであり、２０〜１４０ユニットの場合、分子量は０．８ｋＤａ〜６ｋＤａ、２２〜１３０ユニットの場合、分子量は１ｋＤａ〜６ｋＤａ、３０〜１２０ユニットの場合、分子量は１ｋＤａ〜５ｋＤａである。
【００２２】
なお、本発明で用いるポリエチレングリコールセグメントの分子量とは、本発明のブロック共重合体を調製する際において、用いるポリエチレングリコールセグメント構造化合物の、ポリエチレングリコール標準品を基準としたＧＰＣ法により測定されるピークトップ分子量より求められる平均分子量を採用し、計算値としては１００の位を四捨五入した値を使用する。
【００２３】
該ポリエチレングリコールセグメントの一方の末端基（後述する一般式（１）において、該連結基はＲ１に該当する。）は、特に限定されるものではなく、水素原子、置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ２〜Ｃ６）のアルキニル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）アラルキル基等を挙げることができる。該アルキル基、アルキニル基、アラルキル基における置換基としては、水酸基、アミノ基、ホルミル基、カルボキシル基等が挙げられる。
【００２４】
ポリエチレングリコールセグメントの末端基において、置換基を有してもよい直鎖状アルキル基とは、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−へキシル基等を挙げることができる。置換基を有してもよい分岐鎖状アルキル基としては、例えばイソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、イソペンチル基、２−メチルブチル基、ネオペンチル基、１−エチルプロピル基、４−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、１−メチルペンチル基、３，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基等が挙げられる。置換基を有してもよい環状アルキル基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
【００２５】
ポリエチレングリコールセグメントの末端基において、直鎖状アルキル基が有しても良い置換基とは、チオール基、水酸基、ハロゲノ基、ニトロ基、シアノ基、アルキルチオ基、炭素環若しくは複素環アリール基、アリールチオ基、アルキルスルフィニル基、アリールスルフィニル基、アルキルスルホニル基、スルファモイル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、カルバモイルオキシ基、置換又は無置換アミノ基、アシルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、ウレイド基、スルホニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、ホルミル基、アシル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基又はシリル基等を挙げることができる。
【００２６】
ポリエチレングリコールセグメントの末端基において、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル基とは、例えば、２−プロピニル、３−ブチニル基、４−ヘプチニル基、５−ヘキシニル基等が挙げられる。
【００２７】
ポリエチレングリコールセグメントの末端基において、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）アラルキル基とは、いずれか１カ所の水素原子がアリール基で置換されている直鎖または分岐鎖アルキル基である。例えば、ベンジル基、２−フェニルエチル基、４−フェニルブチル基、３−フェニルブチル基、５−フェニルペンチル基、６−フェニルへキシル基、８−フェニルオクチル基等が挙げられる。好ましくはベンジル基、４−フェニルブチル基、８−フェニルオクチル基である。
【００２８】
該ポリエチレングリコールセグメントのもう一方の末端基は、後述するポリアミノ酸誘導体セグメントと結合するための連結基である。後述する一般式（１）において、該連結基はＡに該当する。
【００２９】
連結基は、２つのポリマーセグメントを化学結合により連結する基であれば、特に限定されるものではなく、ポリエチレングリコール末端基及びポリアミノ酸誘導体の末端基と、それぞれ結合できる官能基を具備した連結基であれば良い。例えば、末端基に結合官能基を有する（Ｃ１〜６）アルキレン基である。ポリエチレングリコールセグメントとの結合様式は、ポリオキシエチレン基；（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）の末端酸素原子によるエーテル結合が好ましく、ポリアミノ酸誘導体セグメントとの結合様式はアミド結合またはエステル結合が好ましい。すなわち、連結基としては−（ＣＨ２）ｓ−ＮＨ−基又は−（ＣＨ２）ｓ−ＣＯ−基（ｓはいずれも１〜６の整数）である。
【００３０】
−（ＣＨ２）ｓ−は置換基を有していてもよく、例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、ブチレン基、ヘキサメチレン基等が挙げられ、特にエチレン基、トリメチレン基、ｎ−プロピレン基が好ましい。なお、−（ＣＨ２）ｓ−の置換基としては、水酸基、ハロゲノ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、アリール基等が挙げられる。
【００３１】
該ポリアミノ酸は、２分子以上が重合している。該ポリアミノ酸鎖のユニット数は、１Ｈ−ＮＭＲによる測定や、後述する疎水性置換基やシグナル基を結合させる前の、ポリエチレングリコール−ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）ブロック共重合体を中和滴定することにより求めることができる。アミノ酸のユニット数は２〜２０であり、３〜２０が好ましく、５〜２０であることがより好ましく、５〜１８であることがさらに好ましい。なお、後述する一般式（１）において、（ｘ１＋ｘ２＋ｙ１＋ｙ２＋ｚ）がポリアミノ酸のアミノ酸総ユニット数を表す。
【００３２】
アミノ酸総ユニット数が３〜２０ユニットであれば、得られるブロック共重合体が自己会合性を有し、かつ、主鎖ポリマーの平均分子量が１０ｋＤａに収まり、イメージング効果の向上が達成される。ポリアミノ酸鎖のユニット数は、当該ブロック共重合体の分子量を勘案して適宜設定することが好ましい。
【００３３】
該ポリアミノ酸鎖を構成するアミノ酸は、シグナル基を付与できるアミノ酸を１ユニット以上含んでいれば良く、他の構成成分は特に限定されるものではなく、天然型アミノ酸、合成アミノ酸及びその側鎖修飾体の何れを用いても良い。また、Ｌ体、Ｄ体及びラセミ体の何れを用いても良い。例えばグリシン、アラニン、β−アラニン、ロイシン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、システイン等を挙げることができる。また、側鎖が修飾されたアミノ酸としては、アスパラギン酸又はグルタミン酸のアルキルエステル、アスパラギン酸又はグルタミン酸のアラルキルエステル、アスパラギン酸又はグルタミン酸のアルキルアミド、アスパラギン酸又はグルタミン酸のアラルキルアミド、Ｂｏｃリシン等のアルキルオキシカルボニルリシン等が挙げられる。該ポリアミノ酸鎖は、これらのアミノ酸の何れか１種であっても良く、複数種類が混在してセグメントを構築していても良い。
シグナル基を付与できるアミノ酸としては、カルボキシ基、アミノ基、水酸基、スルフヒドリル基等の結合性官能基を側鎖に有するアミノ酸を用いることが好ましい。すなわち、これらの結合性官能基にシグナル基を化学結合により付与させることで、当該疎水性ポリマーセグメントを構築することになる。例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン等を挙げることができる。
【００３４】
本発明のブロック共重合体における置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントのポリアミノ酸鎖とは、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリリシン、ポリオルニチン、ポリチロシン、ポリセリン、ポリトレオニン等のアミノ酸鎖であり、好ましくは側鎖に置換基を導入可能な反応性置換基としてカルボキシ基を有するポリアスパラギン酸またはポリグルタミン酸が挙げられる。これらの側鎖カルボキシ基を有するポリアミノ酸は、α−アミド結合型重合体であっても、側鎖カルボキシ基とのアミド結合型重合体であっても、β−アミド結合型重合体であっても、その混合物であってもよい。また、該ポリアミノ酸セグメントは、直鎖状ポリアミノ酸セグメントであっても良く、側鎖を介した分岐型構造のセグメントであっても良い。
【００３５】
該ポリアミノ酸鎖は、置換基を側鎖カルボキシ基に結合したアスパラギン酸誘導体及び／又はポリグルタミン酸誘導体を含むことから、アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸で構築されたポリアミノ酸鎖が好ましい。より好ましくは、アスパラギン酸のみで構築されたポリアスパラギン酸鎖、若しくはグルタミン酸のみで構築されたポリグルタミン酸鎖が好ましい。すなわち、置換基を側鎖カルボキシ基に結合したアスパラギン酸鎖を含む場合は、ポリアスパラギン酸鎖を採用することが好ましく、置換基を側鎖カルボキシ基に結合したグルタミン酸鎖を含む場合は、ポリグルタミン酸鎖を採用することが好ましい。ポリアスパラギン酸又はポリグルタミン酸の重合様式はペプチド結合であり、α結合体であってもβ結合体又はγ結合体であっても良く、その混合物であってもよい。
【００３６】
該ポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントの一方の末端は、前述のポリエチレングリコールセグメントと結合している。そして、もう一方の末端基は、Ｎ末端基及びＣ末端基であっても良く、無保護の遊離アミノ基及び遊離カルボン酸、並びにそれらの塩であっても良く、Ｎ末端基及びＣ末端基の適当な修飾体であっても良い。好ましくは、Ｎ末端基又はＣ末端基の修飾体である。
【００３７】
Ｎ末端基の修飾体としては、アシルアミド型修飾体、アルコキシカルボニルアミド型修飾体（ウレタン型修飾体）、アルキルアミノカルボニルアミド型修飾体（ウレア型修飾体）等を挙げることができる。一方、該Ｃ末端基の修飾体としては、エステル型修飾体、アミド型修飾体、チオエステル型修飾体が挙げられる。
【００３８】
該Ｎ末端基及び該Ｃ末端基の修飾基は、任意の修飾基であって良く、好ましくは、Ｎ末端基及びＣ末端基に結合する適当な結合基を介して、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ６〜Ｃ１８）の芳香族基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）のアラルキル基等である末端修飾基を挙げることができる。
【００３９】
すなわち、Ｎ末端基は、適当なアシルアミド型修飾体又はアルコキシカルボニルアミド型修飾体（ウレタン型修飾体）が好ましく、カルボニル基又はカルボニルオキシ基を介した、前記置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ６〜Ｃ１８）の芳香族基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）のアラルキル基が好ましい。
【００４０】
アシルアミド型修飾体であるＮ末端基（後述する一般式（１）において、Ｒ２に該当する。）としては、置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基であり、置換基を有していてもよい直鎖状、分岐状または環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基が挙げられる。置換基としては、水酸基、ハロゲノ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、アリール基等を具備していても良い。該炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基としては、例えば、ホルミル基、アセチル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロアセチル基、プロピオニル基、ピバロイル基、ベンジルカルボニル基、フェネチルカルボニル基等が挙げられる。置換基を有していてもよい直鎖状、分岐状または環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基がより好ましく、アセチル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロアセチル基がより好ましい。
【００４１】
アルコキシカルボニルアミド型修飾体であるＮ末端基（後述する一般式（１）において、Ｒ２に該当する。）としては、置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル基であり、置換基を有していてもよい直鎖状、分岐状または環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル基が挙げられる。置換基としては、水酸基、ハロゲノ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、アリール基等を具備していても良い。該炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００４２】
一方、Ｃ末端基としては、適当なアミド型置換基又はエステル型置換基が好ましく、アミド基又はエステル基を介した、前記置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ６〜Ｃ１８）の芳香族基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）のアラルキル基が好ましい。
【００４３】
該末端基における置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔ−ブチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。
【００４４】
該末端基における置換基を有していても良い炭素数（Ｃ６〜Ｃ１８）芳香族基としては、フェニル基、ピリジル基、ナフチル基等が挙げられる。
【００４５】
該末端基における置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）のアラルキル基としては、いずれか１カ所の水素原子がアリール基で置換されている直鎖または分岐鎖アルキル基である。例えば、ベンジル基、２−フェニルエチル基、４−フェニルブチル基、８−フェニルオクチル基等が挙げられる。
【００４６】
該疎水性ポリマーセグメントはポリアミノ酸鎖の側鎖に前記置換基が結合していないポリアミノ酸ユニットを含んでいても良い。側鎖がカルボキシ基の場合は、遊離酸の態様であっても良く、医薬品として許容されるカルボン酸塩の態様であっても良い。前記カルボン酸塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等を挙げることができる。
【００４７】
本発明において該疎水性ポリマーセグメントにおけるポリアミノ酸鎖の側鎖に結合する置換基としては、該ブロック共重合体が水溶液中において自己会合性を示すナノ粒子形成能を阻害しない、又は促進するもの、ブロック共重合体の物性を制御するもの、であれば特段限定はされない。例えば、前記置換基として疎水性基を導入することは、当該ブロック共重合体のポリアミノ酸誘導体セグメントの疎水性を高めることができる。一方、前記置換基としてアミノ基やカルボキシ基、水酸基等の塩形成可能なイオン性官能基を具備する親水性の置換基を導入することで、当該ブロック共重合体の親水性を高めることができる。
【００４８】
本発明において、シグナル基とは、検出によりイメージングを可能にする特性を有する基であり、蛍光基、放射性元素含有基、磁性基などを含む物質である。なお、後述する一般式（１）におけるＲ３はシグナル基である。
【００４９】
蛍光基としては、特に限定されないが、フロオレセイン系色素、インドシアニン系色素、ローダミン系色素、ＢＯＤＩＰＹ系色素、キサンテン系色素、ナイルレッド系色素、量子ドットなどに由来する基が挙げられる。中でもアミノ基を有する蛍光基が好ましく、例えば、２−（２−アミノエトキシ）−９−（ジエチルアミノ）−５Ｈ−ベンゾ［ａ］フェノキサジン−５−オン、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＴＲ  Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）ＦＬ  Ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｄｉａｍｉｎｅ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４  Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ（登録商標）Ｃａｄａｖｅｒｉｎｅ、ＡＴＴＯ  ５９４  ａｍｉｎｅ等が挙げられる。
【００５０】
放射性元素含有基としては、特に限定されないが、１８Ｆなどの放射性同位体でラベルした、糖、アミノ酸、核酸などに由来される基が挙げられる。
【００５１】
磁性基としては、特に限定されないが、フェリクロームなどの磁性体を有する物や、フェライトナノ粒子、ナノ磁性粒子などが挙げられる。
【００５２】
本発明において疎水性置換基とは、該ブロック共重合体が水溶液中において自己会合性を示すナノ粒子形成能を向上させ、後述するシグナル基のイメージング効果や医薬品の有効成分に支障をきたさないものである。特に、前記シグナル基の結合のみでは前記ポリアミノ酸鎖が、前記ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントに対して十分な疎水性を有さない場合、シグナル基と共に疎水性置換基を該ポリアミノ酸鎖に導入して疎水性ポリマーセグメントの疎水性の程度を調整するために用いられる任意の置換基が、この疎水性置換基である。このような疎水性置換基であれば、特に限定することなく用いることができ、複数種類の疎水性置換基が１分子のブロック共重合体中に存在してもよい。疎水性置換基として好ましくは、適当な置換基を有するエステル誘導体及び／又はアミド誘導体である。なお、後述する一般式（１）におけるＲ４は疎水性置換基及び／又は水酸基である。
【００５３】
疎水性置換基は具体的には、置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）の直鎖状、分岐鎖状または環状のアルコキシ基、置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）の直鎖状、分岐鎖状または環状のアルキルアミノ基、置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）の直鎖状、分岐鎖状または環状のジアルキルアミノ基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルアミノカルボニル（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルアミノ基、水酸基及び／又はアミノ基を有する生理活性物質及び水酸基からなる群から選択される１種以上の置換基を示す。疎水性置換基は全てが同一であっても複数の種類であっても良い。
【００５４】
疎水性置換基における置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）の直鎖状、分岐鎖状または環状のアルコキシ基は、前記ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）セグメントの側鎖カルボキシ基にエステル型修飾基が結合したものである。置換基としては、水酸基、ハロゲノ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、アリール基等を具備していても良い。前記Ｒ４における該炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、シクロヘキシルオキシ基、ベンジルオキシ基、４−フェニルブチルオキシ基、ｎ−オクチルオキシ基、デシルオキシ基、ドデシルオキシ基、テトラデシルオキシ基、ヘキサデシルオキシ基、オクタデシルオキシ基、イコシルオキシ基、ドコシルオキシ基、テトラコシルオキシ基、ヘキサコシルオキシ基、オクタコシルオキシ基、トリアコンチルオキシ基等が挙げられる。
【００５５】
疎水性置換基における置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）の直鎖状、分岐鎖状または環状のアルキルアミノ基は、前記ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）セグメントの側鎖カルボキシ基に、アルキルアミド型修飾基が結合したものである。置換基としては、水酸基、ハロゲノ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、アリール基等を具備していても良い。前記Ｒ４における該炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、ｔ−ブチルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ベンジルアミノ基、４−フェニルブチルアミノ基、オクチルアミノ基、デシルアミノ基、ドデシルアミノ基、テトラデシルアミノ基、ヘキサデシルアミノ基、オクタデシルアミノ基、イコシルアミノ基、ドコシルアミノ基、テトラコシルアミノ基、ヘキサコシルアミノ基、オクタコシルアミノ基、トリアコンチルアミノ基等が挙げられる。
【００５６】
また、カルボキシ基を保護したアミノ酸も、該置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基に包含される。該カルボキシ基を保護したアミノ酸としては、例えば、グリシンメチルエステル、グリシンベンジルエステル、β−アラニンメチルエステル、β−アラニンベンジルエステル、アラニンメチルエステル、ロイシンメチルエステル、バリンベンジルエステル、フェニルアラニンメチルエステル、フェニルアラニンベンジルエステル等を用いても良い。
【００５７】
疎水性置換基における置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）の直鎖状、分岐鎖状または環状のジアルキルアミノ基は、前記ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）セグメントの側鎖カルボキシ基に、ジアルキルアミド型修飾基が結合したものである。置換基としては、水酸基、ハロゲノ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、アリール基等を具備していても良い。前記Ｒ４における該ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基としては、例えば、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基、ピロリジノ基、ピペリジノ基、ジベンジルアミノ基、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノ基、ジオクチルアミノ基、ジノニルアミノ基、ジデシルアミノ基、ジドデシルアミノ基、ジテトラデシルアミノ基、ジヘキサデシルアミノ基、ジオクタデシルアミノ基、ジイコシルアミノ基等が挙げられる。
【００５８】
疎水性置換基における置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜８）アルキルアミノカルボニル（Ｃ１〜８）アルキルアミノ基は、前記ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）セグメントの側鎖カルボキシ基に、ウレア型修飾基が結合したものである。該アルキル基は同一種類であっても異なる種類であっても良い。置換基としては、水酸基、ハロゲノ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルコキシ基、アリール基等を具備していても良い。置換基を有する場合ジアルキルアミノ基が好ましい。置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルアミノカルボニル（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノカルボニルメチルアミノ基、エチルアミノカルボニルエチルアミノ基、イソプロピルアミノカルボニルイソプロピルアミノ基、シクロヘキシルアミノカルボニルシクロヘキシルアミノ基、エチルアミノカルボニル（３−ジメチルアミノプロピル）アミノ基、（３−ジメチルアミノプロピル）アミノカルボニルエチルアミノ基等である。
【００５９】
本発明は医薬品として用いることも目的としていることから、疎水性置換基として、医薬品の有効成分を用いても良い。医薬品の有効成分としては、水酸基及び／又はアミノ基を有する公知の医薬有効成分若しくは医薬有効成分候補化合物を用いることが好ましい。また、当該水酸基及び／又はアミノ基を有する生理活性物質として、公知の医薬有効成分又は医薬有効成分候補化合物を含む物質であれば特に限定されるものではなく適用することができる。すなわち、該医薬有効成分又はその候補化合物を誘導体化又はプロドラッグ化して水酸基及び／又はアミノ基を導入することで、該水酸基及び／又はアミノ基を有する生理活性物質として適用することができる。
【００６０】
本発明における生理活性物質としては悪性腫瘍疾患、炎症性疾患、感染症疾患等の疾患の治療に用いられる公知の医薬品の有効成分又は医薬有効成分候補化合物、若しくはそれらを誘導体化又はプロドラッグ化した有効成分を意味する。
【００６１】
悪性腫瘍疾患に供せられる生理活性物質としては、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン、イリノテカン、ノギテカン、９−アミノカンプトテシン等のカンプトテシン誘導体、パクリタキセル、ドセタキセル、カバジタキセル等のタキサン誘導体、ガネテスピブ、ルミネスピブ等のＨＳＰ９０阻害活性を有するレゾルシノール誘導体、ドキソルビシン、エピルビシン、アムルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、ピラルビシン等のアントラサイクリン誘導体、シロリムス、エベロリムス、テムシロリムス等のラマパイシン誘導体、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、エノシタビン、シタラビンオクホスファート、エチニルシチジン、アザシチジン、デシタビン等のシチジン系代謝拮抗剤、メソトレキサート、ペメトレキセド、レボホリナート、ホリナート等の葉酸代謝拮抗剤、フルダラビン、ネララビン、ペントスタチン、クラドリビン等のプリン系代謝拮抗剤、ドキシフルリジン、カペシタビン、テフガール、フルオロウラシル、カルモフール等のフッ化ピリミジン系代謝拮抗剤、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン等の白金含有化合物、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン誘導体、ブレオマイシン、リブロマイシン等のブレオマイシン誘導体、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン等のビンカアルカロイド誘導体、エトポシド、テニポシド等のポドフィロトキシン誘導体、エリブリン等のハリコンドリン誘導体、レベカマイシン、ＵＣＮ−０１等のスタウロスポリン誘導体、レナリドミド、ポマリドミド等のサリドマイド誘導体、トレチノイン、タミバロテン等のビタミンＡ誘導体、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ等のプロテアソーム阻害剤、コンブレタスタチンＡ４等のコンブレタスタチン誘導体、ビニメチニブ、コビメチニブ、トラメチニブ等のＭＥＫ阻害剤、ディナシクリブ、フラボピリドール、パルボシクリブ等のＣＤＫ阻害剤、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、ベムラフェニブ等のＲａｆキナーゼ阻害剤、ボリノスタット、ベリノスタット、パナビノスタット、ロミデプシン等のＨＤＡＣ阻害剤、サイトカラシン、ラトランクリン、ファロイジン等のアクチン重合阻害剤、ベリパリブ、ラキャパリブ、オラパリブ等のＰＡＲＰ阻害剤、クリゾチニブ、イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ダサチニブ、ボスチニブ、バンデタニブ、スニチニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、レンバチニブ、ラパチニブ、ニンテダニブ、ニロチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ルキソリチニブ、クリゾチニブ、イブルチニブ等のチロシンキナーゼ阻害剤、ベンダムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、ブルスファン、メルファラン等のナイトロジェンマスタード系アルキル化剤、ニムスチン、ラニムスチン、ロムスチン等のニトロソウレア系アルキル化剤、ダカルバジン、テモゾロミド、プロカルバジン、チオテパ等のアルキル化剤、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ファドロゾール等のアロマターゼ阻害剤、ヒドロキシフルタミド、フルタミド、ビカルタミド、エンザルタミド等の抗アンドロゲン剤、アビラテロン等のＣＹＰ１７（リアーゼ）阻害剤、タモキシフェン、トレミフェン等の抗エストロゲン剤、エストラムスチン、プロゲステロン、ミトタン、メドロキシプロゲステロン等のホルモン剤が挙げられる。
【００６２】
炎症性疾患に供せされる生理活性物質としては、タクロリムス等のタクロリムス誘導体、デキサメタゾン、プレドニゾロン等のステロイド誘導体、シロリムス、エベロリムス、テムシロリムス等のラマパイシン誘導体、シクロスポリン、フィンゴリモド、アザチオプリン、ミゾリビン、ミルコフェノール酸モフェチル、グスペリムス等の免疫抑制剤、ジフルニサル、チアラミド等のＮＳＡＩＤｓ等が挙げられる。
【００６３】
感染症疾患に供せられる生理活性物質としては、アムホテリシンＢ、ナイスタチン等のポリエン系抗生物質、フルコナゾール、ボリコナゾール等のアゾール系誘導体、ミカファンギン等のキャンディン系誘導体、フルシトシン等のピリミジン誘導体等の抗真菌剤、アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル等の抗ウイルス剤、ザナミビル、オセルタミビル、ラニナミビル等の抗ウイルス剤等が挙げられる。
【００６４】
本発明のブロック共重合体は、標的組織に対する移行性、浸透性が向上し、腎臓等からの排泄性が向上した性能を備える。このため、疾病標的組織でのシグナル基の分布や生理活性物質の感作を促進して、イメージング能や薬理効果を増強し、正常組織へのシグナル基の分布や生理活性物質の感作を抑制して副作用を軽減する効果を奏する。したがって、正常組織への副作用軽減が求められる疾病に適用することが好ましく、悪性腫瘍疾患や、炎症性疾患に用いることが好ましい。当該ブロック共重合体は、腫瘍や炎症部位といった組織への移行性、組織内部への浸透性が高く、腫瘍や炎症部位におけるイメージング能や薬理効果が増強する。また、腎臓等からの排出性も具備することから、高分子化ＤＤＳ製剤に見られる体内滞留性が制御され、正常組織への望まない移行を抑制することができ、副作用の軽減を達成できる。
【００６５】
本発明のポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は、２ｋＤａ以上で１０ｋＤａ以下であることを特徴とする。この平均分子量は、その構成部分の各構成分子量を合算した計算値を採用する。すなわち、（１）ポリエチレングリコール鎖の平均分子量、（２）ポリアミノ酸鎖のシグナル基及び任意の疎水性置換基を除いたポリマー主鎖部分の平均分子量を合算した計算値を当該平均分子量とする。
【００６６】
なお、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は、ｋＤａ単位での精度でよい。以下に、各構成部分における好ましい分析方法を挙げるが、特に限定されるものではなく、当該ポリアミノ酸誘導体のｋＤａ単位での分子量測定において十分な精度の分析方法であれば特に限定されるものではない。
【００６７】
前記（１）ポリエチレングリコール鎖の平均分子量は、ポリエチレングリコールセグメントを構築するポリエチレングリコール化合物の分子量測定値であり、ポリエチレングリコール標準品を基準としたＧＰＣ法により測定されるピークトップ分子量より求められる平均分子量を採用し、計算値としては１００の位を四捨五入した値を使用する。
【００６８】
前記（２）ポリアミノ酸鎖の主鎖部分の平均分子量は、該ポリアミノ酸鎖の重合モノマー単位の平均分子量にその平均ユニット数を乗じた計算値である。該ユニット数はポリアミノ酸の側鎖カルボキシ基を中和滴定により定量する方法や、１Ｈ−ＮＭＲの積分値から算出されたユニット数を用いることができる。中和滴定法を用いることが好ましい。
【００６９】
本発明のブロック共重合体は、ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が１０質量％以上で８０質量％以下であることが好ましい。すなわち、当該ブロック共重合体の分子量中のポリエチレングリコールセグメント相当の分子量が占める割合が１０質量％以上で８０質量％以下であることが好ましい。ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が１０質量％より少ない場合、水溶性が著しく低下してしまい水溶液中で自己会合によるナノ粒子を形成できない懸念がある。一方、ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が８０質量％より多い場合、自己会合性を担うポリアミノ酸誘導体セグメントの構成が少なくなるため疎水性相互作用に基づくナノ粒子形成性が低下してしまう懸念がある。十分なイメージング機能を発揮すると共に、任意に薬効と副作用の軽減を達成して治療効果を得るために、本発明のブロック共重合体はポリエチレングリコールセグメントの質量含有率を設定することが好ましい。
【００７０】
前記ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率は、２０質量％以上７０質量％以下であることがより好ましい。３０質量％以上６５質量％以下であることが殊更好ましい。
【００７１】
本発明のブロック共重合体は、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であることが好ましい。本発明のブロック共重合体における適切な会合性を具備させるため、前記疎水性ポリマーセグメントにおけるシグナル基と任意の疎水性置換基とを合算した置換基の総質量が、重要なパラメーターである。すなわち、シグナル基及び任意の疎水性置換基が５質量％より低い場合、水溶性が著しく低下してしまい水溶液中で自己会合によるナノ粒子を形成できない懸念がある。一方、シグナル基及び任意の疎水性置換基の含有率が５０質量％より多い場合、該ブロック共重合体の自己会合性のバランスが著しく低下してしまい、所望のナノ粒子形成性を奏しない懸念がある。
【００７２】
シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率は、好ましくは７質量％以上で５０質量％以下であり。さらに好ましくは８質量％以上で５０質量％以下である。
【００７３】
本発明のブロック共重合体、及びブロック共重合体を含有する組成物から形成されるナノ粒子は、水溶液中において自己会合性を示す。
本発明のナノ粒子の粒径（平均粒径）は１ｎｍ〜３０ｎｍである。好ましくは粒子径が２０ｎｍ未満であって、１ｎｍ〜２０ｎｍ未満である。
【００７４】
本発明においてナノ粒子の粒径（平均粒径）の測定は、例えば、誘導回折格子法により測定される。誘導回折格子法は（１）本発明のブロック共重合体、及びブロック共重合体を含有する組成物の１または２ｍｇ／ｍＬ水溶液にレーザー光を照射し、誘電泳動により回折格子を形成させる、（２）誘電泳動させていた外力を停止し、拡散による回折格子の消滅速度を計測する、（３）消滅速度をストークス−アインシュタインの関係式に当てはめ、粒子径を求める、という方法である。例えば株式会社島津製作所製シングルナノ粒子径測定装置ＩＧ−１０００で測定することができる。
【００７５】
本発明のブロック共重合体、及びブロック共重合体を含有する組成物は、親水性のポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、シグナル基及び任意の疎水性置換基を側鎖に有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体であるため、水溶液中では複数のブロック共重合体同士の疎水性ポリマーセグメントが疎水性相互作用に基づき会合すると考えられる。結果として、疎水性ポリマーセグメントを内核（コア部）とし、その周りを親水性のポリエチレングリコールセグメントが覆い外殻層（シェル部）を形成したコア−シェル構造のミセル様会合体を形成し、これが前記のナノ粒子として観測されるものと推測される。
【００７６】
本発明のブロック共重合体の一態様は、下記一般式（１）で表される。
【００７７】
【化２】
2018025657.tif 000004
（１）
［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい直鎖状、分岐状または環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、ｔは２０〜１４０の整数を示し、Ａは置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基及び炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル基からなる群から選択される置換基を示し、Ｒ３は前記シグナル基を示し、Ｒ４は前記疎水性置換基であり、ｎは１又は２を示し、ｘ１、ｘ２、ｙ１、ｙ２及びｚは、それぞれ独立して０〜２０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２）は１〜１０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２＋ｙ１＋ｙ２＋ｚ）は３〜２０の整数を示し、前記Ｒ３及びＲ４が結合している各構成ユニット並びに側鎖カルボニル基が分子内環化した構成ユニットは、それぞれ独立してランダムに配列した構造である。］
【００７８】
該Ｒ１として、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基、２、２−ジメトキシエチル基、２、２−ジエトキシエチル基、２−ホルミルエチル基が挙げられる。特にメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基等が好ましい。
【００７９】
一般式（１）において、ｘ１、ｘ２、ｙ１、ｙ２及びｚは、それぞれ当該ブロック共重合体のポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）セグメントにおけるアスパラギン酸誘導体ユニット及び／又はグルタミン酸誘導体ユニットの構成単位のユニット数を示し、それぞれ０〜２０の整数である。
【００８０】
一般式（１）において、（ｘ１＋ｘ２）はＲ３が結合したアスパラギン酸ユニット及び／又はグルタミン酸ユニットの総数を示す。（ｘ１＋ｘ２）は１〜１０の整数である。好ましくは、（ｘ１＋ｘ２）は１〜９の整数であり、より好ましくは１〜８の整数である。ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）誘導体セグメントのユニット数である（ｘ１＋ｘ２＋ｙ１＋ｙ２＋ｚ）に対する（ｘ１＋ｘ２）の割合は１〜８０％である。好ましくは１〜７０％であり、１〜６０％がより好ましい。
【００８１】
Ｒ３が結合したアスパラギン酸単位及び／又はグルタミン酸単位のユニット数は、Ｒ３の結合量とポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）鎖のユニット数から算出される。Ｒ３の結合量は、Ｒ３が結合したブロック共重合体からＲ３を開裂させて、遊離するＲ３を定量分析する方法により求めることができる。また、Ｒ３が結合したブロック共重合体を製造する際のＲ３の反応率から算出する方法を用いても良い。
【００８２】
一般式（１）において、（ｙ１＋ｙ２）は、Ｒ４が結合したアスパラギン酸ユニット及び／又はグルタミン酸ユニットの総数を示す。また、ｚは側鎖カルボキシ基が分子内環化した構造のアスパラギン酸ユニット及び／又はグルタミン酸ユニットの総数を示す。（ｙ１＋ｙ２）及びｚはそれぞれ０〜１９の整数である。好ましくは、該（ｙ１＋ｙ２）及びｚはそれぞれ１〜１８の整数である。ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）誘導体セグメントのユニット数である前記（ｘ１＋ｘ２＋ｙ１＋ｙ２＋ｚ）に対する（ｙ１＋ｙ２＋ｚ）の割合は２０〜９９％であり、好ましくは３０〜９９％である。
【００８３】
Ｒ４が結合したアスパラギン酸単位及び／又はグルタミン酸単位のユニット数は、Ｒ４の結合量とポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）セグメントのユニット数から算出される。Ｒ４の結合量は、当該ブロック共重合体からＲ４を開裂させて、遊離するＲ４を定量分析する方法により求めることができる。また、当該ブロック共重合体を製造する際のＲ４の反応率から算出する方法を用いても良い。また、１Ｈ−ＮＭＲの積分値から算出することもできる。
【００８４】
本発明に係る一般式（１）で示されるＲ３とＲ４とが結合したブロック共重合体において、前記ポリ（アスパラギン酸及び／又はグルタミン酸）セグメントは、Ｒ３とＲ４とが結合するアスパラギン酸ユニット及び／又はグルタミン酸ユニット、並びに側鎖カルボキシ基が分子内環化した構造のアスパラギン酸ユニット及び／又はグルタミン酸ユニットが混在した重合体セグメントである。それぞれの構成ユニットは２ユニット以上であり、その配列は特に制御されておらず不規則に配列したランダムに配列したセグメント構造である。
【００８５】
一般式（１）で示されるブロック共重合体は、Ｒ３及び任意のＲ４で表される置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であることが好ましい。Ｒ３及び任意のＲ４で表される置換基の含量が５質量％より低い場合、Ｒ３及び任意のＲ４の含量が５０質量％より多い場合のいずれも、Ｒ３及び任意のＲ４が結合したブロック共重合体の親水性−疎水性のバランスが大きく変化して適当な自己会合性を具備せず、所望の薬物動態を発揮しない懸念がある。Ｒ３及び任意のＲ４で表される置換基の質量含有率は、好ましくは７質量％以上で５０質量％以下であり。さらに好ましくは８質量％以上で５０質量％以下である。
【００８６】
一般式（１）で示されるブロック共重合体の製造方法を説明する。本ブロック共重合体のポリエチレングリコールセグメントとアスパラギン酸及び／又はグルタミン酸を含むポリアミノ酸セグメントとが連結したブロック共重合体を調製し、これにＲ３及び任意のＲ４に相当する置換基成分化合物を縮合反応により製造する方法や、ポリエチレングリコールセグメントを含むポリマー成分とシグナル基や疎水性置換基が結合したポリアミノ酸誘導体を結合させる方法、等を挙げることができる。前者のポリエチレングリコールセグメントとポリアミノ酸セグメントとが連結したブロック共重合体を予め調製し、これにＲ３及び任意のＲ４に相当する置換基成分化合物を縮合反応することにより製造する方法が好ましい。
【００８７】
該ポリエチレングリコールセグメントとポリアミノ酸セグメントとが連結したブロック共重合体の製造方法としては、ポリエチレングリコールセグメントを含む化合物に対して、用いるアミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物を用いて逐次重合させることによりポリアミノ酸セグメントを構築する方法や、ポリエチレングリコールセグメントとポリアミノ酸セグメントを結合させる方法等が挙げられる。アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物の反応性が高いこと、ポリアミノ酸ユニット数を制御しやすいことから、前者の方法を用いることが好ましい。
【００８８】
ポリエチレングリコールセグメントとポリアミノ酸誘導体セグメントとが連結したブロック共重合体を予め調製し、これに、Ｒ３及びＲ４を結合させて本発明に係るブロック共重合体を得る製造方法の一態様を説明する。
【００８９】
始めに、一方の末端がアミノ基であるポリエチレングリコール誘導体（例えば、メトキシポリエチレングリコール−１−プロピルアミン）に、アミノ酸の側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物を順次反応させて、逐次重合によりポリエチレングリコールセグメントとポリアミノ酸セグメントとが連結したブロック型コポリマー骨格を構築する。この場合、該アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物として、適当な側鎖カルボキシ基保護したアスパラギン酸−Ｎ−カルボキシ無水物及び／又はグルタミン酸−Ｎ−カルボキシ無水物を含むことにより、ポリアミノ酸セグメントにアスパラギン酸及び／又はグルタミン酸を含めることができる。その後、適当な脱保護反応を施し、側鎖カルボキシ基が脱保護されたアスパラギン酸及び／又はグルタミン酸を含む当該ブロック共重合体を調製することができる。側鎖カルボキシ基がベンジルエステルである場合、アルカリ条件下での加水分解や、加水素分解反応により脱保護基反応をすることができる。
【００９０】
このポリエチレングリコール−ポリアミノ酸ブロック共重合体に対し、Ｒ３及びＲ４を、適当な反応溶媒中で縮合条件にて反応させればよい。
【００９１】
該ポリエチレングリコール−ポリアミノ酸ブロック共重合体とＲ３及びＲ４の縮合反応において、用いることができる溶媒は両化合物が溶解する溶媒であれば特に限定されることなく用いることができる。例えば、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、１、３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）等の水溶性有機溶媒を挙げることができる。これらの溶媒は、単独で用いても、これらの混合溶媒として用いても良い。また、前記溶媒と他の有機溶媒による混合溶媒であっても良い。
【００９２】
また、用いる縮合剤は、カルボン酸と水酸基を脱水縮合反応によりエステル反応及び／又はカルボン酸とアミノ基を脱水縮合反応によりアミド反応させる通常の脱水縮合剤であれば、特に問題なく用いることができる。該縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）、等のカルボジイミド系の縮合剤、４−（４、６−ジメトキシ−１、３、５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルフォリウム  クロライド  ｎ−ハイドレート（ＤＭＴ−ＭＭ）等のトリアジン系縮合剤、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１、２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、二炭酸ジ−ｔ−ブチル（Ｂｏｃ２Ｏ）等を用いることができる。該縮合反応の際に、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）や、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）等の反応補助剤を用いてもよい。カルボジイミド系縮合剤を用いると、一般式（１）のＲ４において、置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルアミノカルボニル（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルアミノ基をＲ３及びＲ４と同時に導入することができる。
反応は、通常０〜１８０℃、好ましくは５〜１００℃の温度で行えばよい。
【００９３】
ポリアミノ酸セグメントに、前記炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）アルコキシ基、前記炭素数（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基又は前記ジ（Ｃ１〜Ｃ３０）アルキルアミノ基といった他のＲ４は、本発明のブロック共重合体の自己会合性を調整する目的で導入することもできる。その方法としては、ポリエチレングリコール−ポリアミノ酸共重合体のカルボキシ基を縮合剤の添加により活性化してから、導入したいＲ４に相当するアルコール化合物やアミノ化合物を所望の当量で反応させる方法、若しくは該アルコール化合物や該アミノ化合物を活性化させてから該共重合体のポリアミノ酸セグメントに反応させる方法等が挙げられる。
【００９４】
この場合、該アルコール化合物や該アミノ化合物によりＲ４を導入してから、シグナル基を導入しても良く、その逆であっても良く、Ｒ３及びＲ４を同時に導入しても良い。
【００９５】
Ｒ４は、単一種類の置換基であっても、複数種類の置換基であっても良い。複数種類の置換基を導入する場合は、別のアルコール化合物やアミノ化合物を繰り返し反応させれば、種々のＲ４の混成体を合成することができる。
【００９６】
ポリエチレングリコール−ポリアミノ酸ブロック共重合体に、シグナル基であるＲ３、並びに任意の疎水性置換基Ｒ４として生理活性物質又は疎水性置換基を導入した後、任意に通常の分離操作や精製操作を行うことにより、本発明のブロック共重合体を製造することができる。
【００９７】
本発明のブロック共重合体を含む組成物は、例えばブロック共重合体と生理活性物質のような疎水性物質とを、または複数のブロック共重合体と生理活性物質のような疎水性物質とを水性溶液中で混合し、ミセル状に自己組織化させることによっても形成できる。また例えば、ブロック共重合体や疎水性物質を有機溶媒に溶解し、透析することによっても形成できる。さらに例えば、これらのブロック共重合体や疎水性物質を有機溶媒に溶解し、混合して均一化された溶液を減圧留去して得られるポリマーのフィルムに水を加えて混合し、ミセル状に自己組織化させることによっても形成できる。
【００９８】
上記有機溶媒としては、例えば、メタノール、アセトン、アセトニトリル、及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどが挙げられる。
【００９９】
上記水性溶液は、例えば、エタノールおよびジメチルスルホキシドといった水混和性有機溶媒と、公知の緩衝剤とを精製水に添加することによって形成できる。
【０１００】
本発明のシグナル基を有するブロック共重合体、及び該ブロック共重合体を含む組成物は、分子イメージング用分子プローブとして用いることができる。シグナル基としては、上記で述べたとおりである。シグナル基は、単独で又は複数種を組み合わせて用いることができる。この分子イメージング用分子プローブは、腫瘍や炎症部位といった組織への移行性、組織内部への浸透性が高く、腫瘍や炎症部位におけるイメージングを行うことを可能とする。また、腎臓等からの排出性も具備することから、高分子化ＤＤＳ製剤に見られる体内滞留性が制御され、正常組織への望まない移行を抑制することができる特徴も持つ。
【０１０１】
本発明のシグナル基を有するブロック共重合体、及びブロック共重合体を含む組成物を分子イメージング用分子プローブとして用いる場合、経口的、非経口的の何れの投与経路で用いても良い。非経口的な注射による投与経路により処方されることが好ましい。注射による投与は静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、腫瘍部内投与、等によって行われる。
【０１０２】
本発明のブロック共重合体、及びブロック共重合体を含む組成物は、その疎水性置換基や疎水性物質として生理活性物質を含んでいる場合、生体内に投与された後、徐々に生理活性物質を遊離する物性を持たせることができる。遊離した生理活性物質は薬理効果を発揮させることができる。このため、生理活性物質を内包したブロック共重合体、及びブロック共重合体を含む組成物は、該生理活性物質を有効成分とする医薬品としても使用することができる。
【０１０３】
生理活性物質を内包したブロック共重合体、及びブロック共重合体を含む組成物を医薬品として用いる場合、経口的、非経口的の何れの投与経路で用いても良い。非経口的な注射による投与経路により処方されることが好ましい。注射による投与は静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、腫瘍部内投与、等によって行われる。
【０１０４】
本発明のブロック共重合体、及びブロック共重合体を含む組成物の製剤化に当たっては、通常使用されている薬学的に許容される担体、例えば賦形剤、増量剤、充填剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、潤滑剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化、溶剤、可溶化剤、懸濁化剤、色素、香料剤及び等張化剤等が使用できる。
【０１０５】
注射液剤の場合は、通常溶剤を使用する。溶剤としては、例えば水、生理食塩水、５％ブドウ糖又はマンニトール液、水溶性有機溶剤、例えばグリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クロモフォア等、及びそれらの混合液、並びに水と該水溶性有機溶媒の混合液等が挙げられる。これらの製剤用添加剤を用いて、投与可能な製剤に調製して用いることが好ましい。
【０１０６】
本発明のブロック共重合体、及びブロック共重合体を含む組成物の投与量は、含まれるシグナル基及び／又は生理活性物質の種類、患者の性別、年齢、生理的状態、病態等により当然変更されうるが、非経口的に、通常、成人１日当たり、活性成分として０．０１〜５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは０．１〜２５０ｍｇ／ｍ２を投与することが好ましい。
【実施例】
【０１０７】
以下、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
合成例、及び実施例のブロック共重合体及びそれらを含む組成物の平均粒径の測定は、株式会社島津製作所製シングルナノ粒子径測定装置ＩＧ−１０００（測定温度：２５℃、ｔ＝０における光強度：１００〜２００）にて行った。平均粒径測定サンプルは、超純水を用い、ブロック共重合体濃度として１ｍｇ／ｍＬもしくは２ｍｇ／ｍＬとなるように調製し、０．４５μｍメンブレンフィルターで濾過した溶液を用いた。
実施例中、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体は２−（２−アミノエトキシ）−９−（ジエチルアミノ）−５Ｈ−ベンゾ［ａ］フェノキサジン−５−オンを指す。【０１０８】
［合成例１］ポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体（ポリエチレングリコール分子量２ｋＤａ、ポリグルタミン酸ユニット数７．９）の合成
片末端メトキシ基、片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  Ｍ８９５０６、日油社製、平均分子量２ｋＤａ、１４ｇ）をＤＭＳＯ（２８０ｍＬ）に溶解後、γ−ベンジル  Ｌ−グルタミン酸−Ｎ−カルボキシ無水物（１６．８ｇ）を加え、３０℃で２２．５時間撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（５０４０ｍＬ）及びエタノール（５６０ｍＬ）混合液中に２．０時間かけて滴下し、室温にて４．０時間撹拌した。その後、上澄み除去し、ジイソプロピルエーテル（１８００ｍＬ）及びエタノール（２００ｍＬ）混合溶液を加え、撹拌した後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥し、重合物（３１．９ｇ）を得た。
得られた重合物（３０．０ｇ）をＤＭＦ（３３６ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（６．０ｍＬ）を加えて２０℃にて１８時間撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（３０２４ｍＬ）及び酢酸エチル（３３６ｍＬ）混合液中に２．５時間かけて滴下し、室温にて６．０時間撹拌した。その後、上澄み除去し、ジイソプロピルエーテル（１８００ｍＬ）及びエタノール（２００ｍＬ）混合溶液を加え、１．５時間撹拌した後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥することによりアセチル化ポリマー（２３．７ｇ）を得た。
得られたアセチル化ポリマー（２２．０ｇ）をＤＭＦ（５１５ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム−炭素（４．４ｇ）を加えた。その後、反応雰囲気を水素置換し、３０℃、１気圧下にて６５時間加水素分解を行った。１０％パラジウム−炭素触媒を濾別後（洗い込みに酢酸エチル２００ｍＬ使用）、濾液をヘプタン（３０００ｍＬ）及び酢酸エチル（１２００ｍＬ）混合液中に１．５時間かけて滴下し、室温にて５．０晩撹拌した。その後、上澄み除去し、ヘプタン（１３３３ｍＬ）及び酢酸エチル（６６７ｍＬ）混合液を加え、０．５時間撹拌した後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥した。この析出物（１５．０ｇ）を５％食塩水（１５００ｍＬ）に溶解し、２．２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にて溶解液のｐＨを約１１に調整後、分配吸着樹脂カラムクロマトグラフィー（ＨＰ−２０）、続いてイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィー（Ｄｏｗｅｘ  ５０）を用いて精製した。溶出した溶液を減圧濃縮した後、凍結乾燥することでポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体（合成例１  １２．３ｇ）を得た。
合成例１は、０．１Ｎ水酸化カリウムを用いた滴定法により、グルタミン酸のユニット数は７．９と算出した。これより、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は、ポリエチレングリコール鎖の分子量（２，０００）、グルタミン酸７．９ユニット分子量（１２９．１１×７．９＝１０２０）、ポリアミノ酸末端のアセチル基（４２）の合計より３，０６２≒３ｋＤａと算出された。【０１０９】
［合成例２］ポリエチレングリコール−α、β−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（ポリエチレングリコール分子量１２ｋＤａ、ポリアスパラギン酸ユニット数２３．８）の合成
片末端メトキシ基、片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＰＡ−１２Ｋ、日油社製、平均分子量１２ｋＤａ、７５．０ｇ）をＤＭＳＯ（１４３０ｍＬ）に溶解後、γ−ベンジル  Ｌ−アスパラギン酸−Ｎ−カルボキシ無水物（４５．０ｇ、２９当量）を加えて３２．０℃で一夜撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（１２Ｌ）及びエタノール（３Ｌ）混合液中に１時間かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した。その後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥し、重合物（１０６．０ｇ）を得た。
得られた重合物（１０５．０ｇ）をＤＭＦ（１０５０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（３．３ｍＬ）を加えて３５℃にて３時間撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（２、９４５０ｍＬ）及びエタノール（１０５０ｍＬ）混合液中に１時間かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した。その後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥することによりアセチル化ポリマー（１０３．０ｇ）を得た。
得られたアセチル化ポリマー（１００．０ｇ）をアセトニトリル（２Ｌ）に溶解後、０．２規定の水酸化ナトリウム（２Ｌ）を加えて、２３℃にて３時間加水分解を行った。反応液に２規定の塩酸を加えて中和したのち、減圧濃縮にてアセトニトリルを除去後、酢酸エチル（２Ｌ）を用い濃縮液を３回洗浄した。水層を減圧濃縮後、１規定の水酸化ナトリウム水溶液にて溶解液のｐＨを１１．０に調製し、食塩（１００ｇ）を添加後、分配吸着樹脂カラムクロマトグラフィー、続いてイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーを用いて精製し、溶出した溶液を減圧濃縮したのち、凍結乾燥し、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（合成例２  ７５．４ｇ）を得た。
合成例２は、０．１Ｎ水酸化カリウムを用いた滴定法により、アスパラギン酸のユニット数は２３．８と算出した。これより、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は、ポリエチレングリコール鎖の分子量（１２，０００）、アスパラギン酸２３．８ユニット分子量（１１５．０９×２３．８＝２７３９）、ポリアミノ酸末端のアセチル基（４２）の合計より１４，７８１≒１５ｋＤａと算出された。【０１１０】
［合成例３］ポリエチレングリコール−α、β−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（ポリエチレングリコール分子量２ｋＤａ、ポリアスパラギン酸ユニット数１２．５）の合成
片末端メトキシ基、片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＰＡ−２０Ｈ、日油社製、平均分子量２ｋＤａ、２０．０ｇ）をＤＭＳＯ（４００ｍＬ）に溶解後、γ−ベンジル  Ｌ−アスパラギン酸−Ｎ−カルボキシ無水物（２９．８ｇ、１２当量）を加えて３２．５℃で２０時間撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（３、２００ｍＬ）及びエタノール（８００ｍＬ）混合液中に１時間かけて滴下し、室温にて３時間撹拌した。その後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥し、重合物（３１．２ｇ）を得た。
得られた重合物（３０．０ｇ）をＤＭＦ（３００ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（７．３ｍＬ）を加えて３５℃にて３時間撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（２、７００ｍＬ）及びエタノール（３００ｍＬ）混合液中に１時間かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した。その後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥することによりアセチル化ポリマー（２６．６ｇ）を得た。
得られたアセチル化ポリマー（２５．０ｇ）をＭｅＣＮ（５００ｍＬ）に溶解後、０．２規定の水酸化ナトリウム（５００ｍＬ）を加えて、２３℃にて３時間加水分解を行った。反応液に２規定の塩酸を加えて中和したのち、減圧濃縮にてアセトニトリルを除去後、酢酸エチル（５００ｍＬ）を用い濃縮液を３回洗浄した。水層を減圧濃縮後、１規定の水酸化ナトリウム水溶液にて溶解液のｐＨを１１．０に調製し、食塩（５０ｇ）を添加後、分配吸着樹脂カラムクロマトグラフィー、続いてイオン交換樹脂カラムクロマトグラフィーを用いて精製し、溶出した溶液を減圧濃縮したのち、凍結乾燥し、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（合成例３  １３．０ｇ）を得た。
合成例３は、０．１Ｎ水酸化カリウムを用いた滴定法により、アスパラギン酸のユニット数は１２．５と算出した。これより、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は３，４８１≒３ｋＤａと算出された。【０１１１】
［実施例１］ポリエチレングリコール（２ｋＤａ）−ポリグルタミン酸（７．９重合体）ブロック共重合体の４−フェニル−１−ブタノール及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合体の合成
合成例１（１０００ｍｇ）、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体（東京化成工業社製、４６．９ｍｇ）及び４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ  ３１５ｍｇ）をＤＭＦ（２１ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ  ３８μＬ）を加え、２５℃にて５時間撹拌した。その後、４−フェニル−１−ブタノール（２６６μＬ）及び  ７９４μＬを加え１５時間撹拌後、さらにＤＩＰＣＩ  ３９７μＬを加え、５．５時間撹拌した。反応液をＭＷＣＯ１０００の透析膜に移液し、外液を水として透析を行った。内液を凍結乾燥することで、生成物を得た。得られた生成物をアセトニトリル／水（５０／５０（ｖ／ｖ）、５０ｍＬ）に溶解後、溶液をＭＷＣＯ１０００の透析膜に移液し、外液をアセトニトリル／水（５０／５０（ｖ／ｖ）として透析を行った。その後、外液をアセトニトリルとして透析を行った。透析終了後、内液がアセトニトリル／水（５０／５０（ｖ／ｖ）、）になるように水を加え、イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ  ５０）を加えて室温にて０．５時間撹拌した。イオン交換樹脂を濾別後にアセトニトリルを減圧留去し、凍結乾燥することにより標記の４−フェニル−１−ブタノール結合ブロック共重合体（実施例１  １０１２ｍｇ）を得た。
実施例１を１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を用いて加水分解処理を行い、遊離した４−フェニル−１−ブタノールを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量して４−フェニル−１−ブタノール含有量を求めた。その結果、実施例１における４−フェニル−１−ブタノール含有量は１５．９質量％であった。Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の消費率から０．３７分子であった。したがって、実施例１の総Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体分子量は１３８≒０．１ｋＤａと算出された。
これらの値より、実施例１の総分子量は４，１６９≒４ｋＤａと算出された。また、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は３，０６２≒３ｋＤａと算出された。
これより、実施例１におけるＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の含有量は３．３２質量％、４−フェニル−１−ブタノールの含有量は１５．９質量％、ポリエチレングリコールセグメントの含有量は４８．０質量％である。
ＩＧ−１０００により粒径測定したところ、平均粒径は１８ｎｍ（２ｍｇ／ｍＬ）であった。【０１１２】
［実施例２］ポリエチレングリコール（２ｋＤａ）−α、β−ポリアスパラギン酸（１２．５重合体）ブロック共重合体のカバジタキセル（ＣＢＺ）及びｎ−ブチルアミン及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合体の合成。
合成例３（２０５．６ｍｇ）及びカバジタキセル（ＣＢＺ  １６６．３ｍｇ）及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体（５．１ｍｇ）をＮＭＰ（５．７ｍＬ）に溶解し、ｎ−ブチルアミン（３６μＬ）、ＤＭＡＰ（４５．０ｍｇ）、ＤＩＰＣＩ（２６５μＬ）を加え、２０℃にて１７．５時間撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩ（６６μＬ）を追加し、さらに４．５時間撹拌した。反応液に酢酸エチル（５．５ｍＬ）を加えた後、ジイソプロピルエーテル（４４０ｍＬ）中に１０分間かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥することで生成物（３００ｍｇ）を得た。得られた生成物をアセトニトリル／水（５０／５０（ｖ／ｖ）、２０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂を加えて５℃にて３０分間撹拌した。イオン交換樹脂を濾別後にアセトニトリルを減圧留去し、凍結乾燥することにより標記のタキサン類結合高分子誘導体（実施例２  ２７０．９ｍｇ）を得た。
実施例２のＣＢＺ結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中のＣＢＺの消費率から１．７分子であった。したがって、実施例２の総ＣＢＺ分子量は１，４２１≒１ｋＤａと算出された。
実施例２のｎ−ブチルアミン結合量は、ｎ−ブチルアミンの仕込量が全て反応したと仮定すると、６．２分子であった。したがって、実施例２の総ｎ−ブチルアミン分子量は４５３≒０．４ｋＤａと算出された。
実施例２のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の消費率から０．２３分子であった。したがって、実施例２の総Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体ＮＲ分子量は８７≒０．１ｋＤａと算出された。
これらの値より、実施例２の総分子量は５，８４６≒６ｋＤａと算出された。また、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は３，４８１≒３ｋＤａと算出された。
これより、実施例２におけるＣＢＺの含有量は２４．３質量％、ｎ−ブチルアミンの含有量は７．８質量％、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の含有量は１．５質量％、ポリエチレングリコールセグメントの含有量は３４．２質量％である。
ＩＧ−１０００により粒径測定したところ、平均粒径は１４ｎｍ（１ｍｇ／ｍＬ）であった。【０１１３】
［実施例３］
ポリエチレングリコール（２ｋＤａ）−ポリグルタミン酸（８．３重合体）ブロック共重合体の７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４  ｃａｄａｖｅｒｉｎ（Ａｌｅｘａ）結合体の合成
合成例１と同様な方法で合成したポリエチレングリコール（２キロダルトン）−ポリグルタミン酸（８．３重合体）ブロック共重合体（４０．０ｍｇ）、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４  ｃａｄａｖｅｒｉｎ（Ａｌｅｘａ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製、２．００ｍｇ）及び７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ、ＳｃｉｎｏＰｈａｒｍ  Ｔａｉｗａｎ社製、２０．０ｍｇ）をＤＭＦ（３．２０ｍＬ）に溶解し、３５℃にて２０分間撹拌した。その後、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ  １．９８ｍｇ）を加え、２５℃にて４５分間撹拌した後、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ  ３３．１μＬ）を加え、２５℃にて２１時間撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（４３．２ｍＬ）、酢酸エチル（４．８ｍＬ）混合液中に滴下し、室温にて撹拌した後、上澄み液を３８．０ｍＬ除去し、ジイソプロピルエーテル（２１．６ｍＬ）、酢酸エチル（２．４ｍＬ）混合液を加えた。その後、室温にて撹拌した後、析出物を濾取し、減圧化で乾燥することで生成物を得た（４９．７ｍｇ）。得られた生成物をアセトニトリル／水（９８．７／１．３（ｖ／ｖ）、１．５ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ  ５０）を加えて０℃にて３０分間撹拌した。イオン交換樹脂を濾別後にアセトニトリルを減圧留去し、凍結乾燥することにより標記のポリエチレングリコール（２キロダルトン）−ポリグルタミン酸（８．３重合体）ブロック共重合体の７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５９４  ｃａｄａｖｅｒｉｎ結合体（実施例３  ４８．８ｍｇ）を得た。
実施例３のＥＨＣ結合量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定した反応溶液中のＥＨＣの消費率から３．９分子であった。したがって、実施例３の総ＥＨＣ分子量は１，５３０≒２ｋＤａと算出された。
実施例３のＡｌｅｘａ結合量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定した反応溶液中のＡｌｅｘａの消費率から０．１９分子であった。したがって、実施例３のＡｌｅｘａ分子量は１５３≒０．２ｋＤａと算出された。
これらの値より、実施例３の総分子量は４，６９０≒５ｋＤａと算出された。また、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は３，１１４≒３ｋＤａと算出された。
これより、実施例３におけるＥＨＣの含有量は３２．５質量％、Ａｌｅｘａの含有量は３．２９質量％、ポリエチレングリコールセグメントの含有量は４２．６質量％である。
ＩＧ−１０００により粒径測定したところ、平均粒径は１０ｎｍ（１ｍｇ／ｍＬ）であった。【０１１４】
[比較例１］ポリエチレングリコール（１２ｋＤａ）−ポリグルタミン酸（２２．０重合体）ブロック共重合体の４−フェニル−１−ブタノール及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合体の合成
合成例１と同様な方法で合成したポリエチレングリコール（１２ｋＤａ）−ポリグルタミン酸（２２．０重合体）ブロック共重合体（６７６ｍｇ）、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体（東京化成工業社製、１７．０ｍｇ）及びＤＭＡＰ（１２２ｍｇ）をＤＭＦ（８．０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＣＩ（１４μＬ）を加え、２５℃にて１．５時間撹拌した。その後、４−フェニル−１−ブタノール（１０２ｍｇ）及びＤＩＰＣＩ（３０８μＬ）を加え２５時間撹拌後、反応液をジイソプロピルエーテル（１２０ｍＬ）、エタノール（１５ｍＬ）及び酢酸エチル（１５ｍＬ）混合液中に滴下し、室温にて撹拌した後、析出物を濾取し、減圧化で乾燥することで生成物を得た（７７０ｍｇ）。得られた生成物をアセトニトリル／水（５０／５０（ｖ／ｖ）、２０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ  ５０）を加えて０℃にて２．０時間撹拌した。イオン交換樹脂を濾別後にアセトニトリルを減圧留去し、凍結乾燥することにより標記のポリエチレングリコール（１２ｋＤａ）−ポリグルタミン酸（２２．０重合体）ブロック共重合体の４−フェニル−１−ブタノール及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合体（比較例１  ７２０ｍｇ）を得た。
比較例１の４−フェニル−１−ブタノール結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中の４−フェニル−１−ブタノールの消費率から１５分子であった。したがって、比較例１の総４−フェニル−１−ブタノール分子量は２，２２４≒２ｋＤａと算出された。
また、比較例１のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の消費率から１分子であった。したがって、比較例１の総Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体分子量は３７６≒０．４ｋＤａと算出された。
これらの値より、比較例１の総分子量は１８，０９１≒１８ｋＤａ、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は１４，８８２≒１５ｋＤａと算出された。
これより、比較例１における４−フェニル−１−ブタノールの含有量は１２質量％、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の含有量は２．１質量％、ポリエチレングリコールセグメントの含有量は６７質量％である。
ＩＧ−１０００により粒径測定したところ、平均粒径は３６ｎｍ（２ｍｇ／ｍＬ）であった。【０１１５】
［比較例２］ポリエチレングリコール（１２ｋＤａ）−α、β−ポリアスパラギン酸（２３．８重合体）ブロック共重合体のカバジタキセル（ＣＢＺ）及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合体の合成。
合成例２（２００ｍｇ）及びカバジタキセル（ＣＢＺ  ９９．７ｍｇ）及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体（５．２ｍｇ）をＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ  ２．５ｍＬ）に溶解し、ＤＭＡＰ  （４．４ｍｇ）、ＤＩＰＣＩ（１１８μＬ）を加え、２０℃にて２１時間撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩ（２９μＬ）を追加し、さらに５時間撹拌した。反応液をジイソプロピルエーテル（１８ｍＬ）及びエタノール（４．５ｍＬ）混合液中に１０分間かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した後、析出物を濾取し、減圧下で乾燥することで生成物（２３５．０ｍｇ）を得た。得られた生成物をアセトニトリル／水（５０／５０（ｖ／ｖ）、１０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂を加えて５℃にて３０分間撹拌した。イオン交換樹脂を濾別後にアセトニトリルを減圧留去し、凍結乾燥することにより標記のタキサン類結合高分子誘導体（比較例２  ２０５．６ｍｇ）を得た。
比較例２のＣＢＺ結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中のＣＢＺの消費率から４．３分子であった。したがって、比較例Ｃ−２の総ＣＢＺ分子量は３，５９４≒４ｋＤａと算出された。
比較例２のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の消費率から１．０分子であった。したがって、比較例２の総Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体分子量は３７７≒０．４ｋＤａと算出された。
これらの値より、比較例２の総分子量は２０，９８８≒２１ｋＤａと算出された。また、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は１４，７８１≒１５ｋＤａと算出された。
これより、比較例２におけるＣＢＺの含有量は１７．１質量％、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の含有量は１．８質量％、ポリエチレングリコールセグメントの含有量は５７．２質量％である。
ＩＧ−１０００により粒径測定したところ、平均粒径は２９ｎｍ（１ｍｇ／ｍＬ）であった。【０１１６】
［比較例３］ポリエチレングリコール（２ｋＤａ）−α、β−ポリアスパラギン酸（１２．５重合体）ブロック共重合体のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合体の合成。
合成例３（２０５．７ｍｇ）及びＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体（５．１ｍｇ）をＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ  ５．７ｍＬ）に溶解し、ＤＭＡＰ（４５．０ｍｇ）、ＤＩＰＣＩ（２６５μＬ）を加え、２０℃にて１８．５時間撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩ（６６μＬ）を追加し、さらに２．５時間撹拌した。反応液をＭＷＣＯ１０、０００の透析膜に移し、水中で透析後、凍結乾燥することにより標記のタキサン類結合高分子誘導体（比較例３  ２４７．７ｍｇ）を得た。
比較例３のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体結合量は、ＨＰＬＣにより測定した反応溶液中のＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の消費率から０．３分子であった。したがって、比較例３の総Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体分子量は１１３≒０．１ｋＤａと算出された。
これらの値より、比較例３の総分子量は５，１２６≒５ｋＤａと算出された。また、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量は３，４８１≒３ｋＤａと算出された。
これより、比較例３におけるＮｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体の含有量は２．２質量％、ポリエチレングリコールセグメントの含有量は３９．０質量％である。
比較例３は合成例３の蛍光標識体として後記の分布試験に用いた。【０１１７】
［試験例１］  腫瘍内および腎臓内分布試験
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植で継代したヒト膵臓がんＢｘＰＣ−３の腫瘍塊を約３ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いてヌードマウスの背側部皮下に移植した。比較例１及び実施例１をそれぞれ５％ブドウ糖注射液で溶解し、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体換算量５ｍｇ／ｋｇで、それぞれ静脈内に単回投与した。投与１時間後にマウスを、イソフルラン麻酔下で脱血し、取り出した腫瘍及び腎臓の凍結包埋切片を作製し、蛍光を観察した。結果を図１に示す。
また、それらの画像を元にＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を用いて輝度を算出し、腫瘍内の輝度の値を図２に、腎臓内の輝度の値を図３に示した。【０１１８】
試験例１の結果、実施例１は比較例１比較して、腫瘍全体に浸透してより広域で蛍光のシグナルが観察された。また腎臓において、実施例１は血管内及び尿細管に蛍光が観察された一方で、比較例１は血管内以外では蛍光が認められなかった。以上のことから、実施例１は比較例１と比較して、腫瘍組織の深部にまで浸透することができること、速やかに腎排泄を受けることができる物性であることが示された。【０１１９】
［試験例２］  腫瘍内および腎臓内分布試験
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植で継代したヒト腎がんＲＣＣ−０１−ＪＣＫの腫瘍塊を、約３ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いてヌードマウスの背側部皮下に移植した。比較例１及び実施例１をそれぞれ５％ブドウ糖注射液で溶解し、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体換算量５ｍｇ／ｋｇで、それぞれ静脈内に単回投与した。投与１時間後にマウスを、イソフルラン麻酔下で脱血し、取り出した腫瘍及び腎臓の凍結包埋切片を作製し、蛍光を観察した。結果を図４に示す。
また、それらの画像を元にＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を用いて輝度を算出し、腫瘍内の輝度の値を図５に、腎臓内の輝度の値を図６に示した。【０１２０】
試験例２の結果、実施例１は比較例１と比較して、腫瘍全体に浸透してより広域で蛍光のシグナルが観察された。また腎臓において、実施例１は血管内及び尿細管に蛍光が観察された一方で、比較例１は血管内以外では蛍光が認められなかった。以上のことから、実施例１は比較例１と比較して、腫瘍組織の深部にまで浸透することができること、速やかに腎排泄を受けることができる物性であることが示された【０１２１】
［試験例３］  腫瘍内および腎臓内分布試験
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植で継代したヒトグリオーマＵ８７ＭＧの腫瘍塊を、約３ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いてヌードマウスの背側部皮下に移植した。比較例１及び実施例１をそれぞれ５％ブドウ糖注射液で溶解し、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体換算量５ｍｇ／ｋｇで、それぞれ静脈内に単回投与した。投与１時間後にマウスを、イソフルラン麻酔下で脱血し、取り出した腫瘍及び腎臓の凍結包埋切片を作製し、蛍光を観察した。結果を図７に示す。
また、それらの画像を元にＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｒｅｍｉｅｒ（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を用いて輝度を算出し、腫瘍内の輝度の値を図８に、腎臓内の輝度の値を図９に示した。【０１２２】
試験例３の結果、実施例１は比較例１と比較して、腫瘍全体に浸透してより広域で蛍光のシグナルが観察された。また腎臓において、実施例１は血管内及び尿細管に蛍光が観察された一方で、比較例１は血管内以外では蛍光が認められなかった。以上のことから、実施例１は比較例１と比較して、腫瘍組織の深部にまで浸透することができること、速やかに腎排泄を受けることができる物性であることが示された。【０１２３】
［試験例４］  腫瘍内および腎臓内分布試験
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下移植で継代したヒト膵臓がんＢｘＰＣ３の腫瘍塊を約３ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いてヌードマウスの背側部皮下に移植した。実施例２、比較例２及び比較例３をそれぞれ５％ブドウ糖注射液で溶解し、Ｎｉｌｅ  ｒｅｄ誘導体換算量５ｍｇ／ｋｇで、それぞれ静脈内に単回投与した。投与１時間後にマウスをイソフルラン麻酔下で脱血し、取り出した腫瘍及び腎臓の凍結包埋切片を作製し、蛍光を観察した。結果を図１０に示す。【０１２４】
試験例４の結果、実施例２は腫瘍切片の広域で蛍光のシグナルが観察された。このことから、実施例２のブロック共重合体は、腫瘍組織へ移行して集積するとともに、腫瘍組織の深部にまで浸透することができることが示された。これに対し、比較例２及び３は、腫瘍外縁部において蛍光シグナルが観察されたものの、腫瘍組織浸透性も確認されず、腫瘍組織移行性及び集積性は低い結果であった。
また、腎臓において、実施例２及び比較例３は尿細管に蛍光が観察された。一方で、比較例２は血管内以外では蛍光が認められなかった。このことから、実施例２は比較例２に比較して、速やかに腎排泄を受けることができる物性であることが示された。
ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せたを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が３４８１≒３ｋＤａであり、シグナル基の質量含有率が２．２％であり疎水性置換基の質量含有率が０％である比較例３のブロック共重合体は、速やかに腎排泄を受けるが腫瘍への集積性が低い結果であった。また、ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合わせた主鎖ポリマーの平均分子量が１４７８１≒１５ｋＤａである比較例２のブロック共重合体は、腎排泄を受けないが腫瘍への集積性が実施例２より低い結果であった。
ポリエチレングリコール鎖とポリアミノ酸鎖とを合せたを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が３４８１≒３ｋＤａであり、シグナル基の質量含有率が１．５％であり疎水性置換基の質量含有率が３２％である実施例２は速やかに腎排泄を受け、速やかに腫瘍集積性を示すことが明らかとなった。
【図１】
2018025657.tif 000006
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年11月24日(2017.11.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリエチレングリコール鎖を含有する親水性ポリマーセグメントと、側鎖にシグナル基及び任意の疎水性置換基を有するポリアミノ酸鎖を含有する疎水性ポリマーセグメントとが連結したブロック共重合体を含むイメージングプローブであって、該ポリエチレングリコール鎖と該ポリアミノ酸鎖とを合せた主鎖ポリマーの平均分子量が２ｋＤａ以上１０ｋＤａ以下であり、シグナル基及び任意の疎水性置換基の質量含有率が５質量％以上で５０質量％以下であり、粒子径が２０ｎｍ未満であるブロック共重合体を含む、イメージングプローブ。
【請求項２】
ポリアミノ酸鎖が、ポリアスパラギン酸鎖、ポリグルタミン酸鎖又はポリ（アスパラギン酸−グルタミン酸）鎖である請求項１に記載のイメージングプローブ。
【請求項３】
シグナル基が蛍光基である、請求項１又は請求項２に記載のイメージングプローブ。
【請求項４】
ポリエチレングリコール鎖の平均分子量が１ｋＤａ以上で６ｋＤａ以下である請求項１乃至請求項３の何れか一項に記載のイメージングプローブ。
【請求項５】
ブロック共重合体が、一般式（１）
【化１】
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［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい直鎖状、分岐状または環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル基を示し、ｔは２０〜４６１４０の整数を示し、Ａは置換基を有していてもよい炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基を示し、Ｒ２は水素原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アシル基及び炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシカルボニル基からなる群から選択される置換基を示し、Ｒ３はシグナル基を示し、Ｒ４は、疎水性置換基であり、ｎは１又は２を示し、ｘ１、ｘ２、ｙ１、ｙ２及びｚは、それぞれ独立して０〜２０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２）は１〜１０の整数を示し、（ｘ１＋ｘ２＋ｙ１＋ｙ２＋ｚ）は３〜２０の整数を示し、前記Ｒ３及びＲ４が結合している各構成ユニット並びに側鎖カルボニル基が分子内環化した構成ユニットは、それぞれ独立してランダムに配列した構造である。］で示される請求項１乃至４の何れか一項に記載のイメージングプローブ。
【国際調査報告】
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