(57)【要約】神経新生を活性化するための組成物、それらの使用、又は、それらを用いた中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患等の予防、改善、進行抑制及び／又は治療方法の提供。タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経新生を活性化するための組成物、並びにタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経新生を活性化するための組成物。
【請求項２】
タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための組成物。
【請求項３】
前記化合物は、神経新生を活性化する、請求項２記載の組成物。
【請求項４】
前記タンパク質リン酸化酵素は、ＤＹＲＫ及びサイクリンＤ１のリン酸化酵素の少なくとも一方である、請求項１から３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記疾患又は機能障害は、脳梗塞、脊髄梗塞、脳出血、脊髄出血、顔面神経マヒ、四肢神経マヒ、神経変性疾患、アルツハイマー病、ダウン症、うつ病、パーキンソン病及びハンチントン病からなる群から選択される、請求項２から４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記化合物は、下記一般式（Ｉ）で表される化合物である、請求項１から５のいずれかに記載の組成物。
【化１】
2018043674.tif 000028
［ここで、一般式（Ｉ）において、
Ｘ1は、
【化２】
2018043674.tif 000029
であって、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｘ2は、−（結合手）又は−ＮＨ−であり、
Ｒ1は、
【化３】
2018043674.tif 000030
であって、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。］
【請求項７】
一般式（Ｉ）で表される化合物が、
【化４】
2018043674.tif 000031
である、請求項６記載の組成物。
【請求項８】
一般式（Ｉ）で表される化合物が、
【化５】
2018043674.tif 000032
である、請求項６記載の組成物。
【請求項９】
一般式（Ｉ）で表される化合物が、
【化６】
2018043674.tif 000033
である、請求項６記載の組成物。
【請求項１０】
医薬組成物である、請求項１から９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療の方法であって、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物を対象に投与することを含む、方法。
【請求項１２】
中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物を製造するための下記一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
【化７】
2018043674.tif 000034
［ここで、一般式（Ｉ）において、
Ｘ1は、
【化８】
2018043674.tif 000035
であって、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｘ2は、−（結合手）又は−ＮＨ−であり、
Ｒ1は、
【化９】
2018043674.tif 000036
であって、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。］
【請求項１３】
神経新生を活性化するための下記一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
【化１０】
2018043674.tif 000037
［ここで、一般式（Ｉ）において、
Ｘ1は、
【化１１】
2018043674.tif 000038
であって、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｘ2は、−（結合手）又は−ＮＨ−であり、
Ｒ1は、
【化１２】
2018043674.tif 000039
であって、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。］
【請求項１４】
神経細胞又は神経幹細胞を調製するための請求項１から１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
神経新生を活性化する方法であって、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物を対象に投与することを含む、活性化方法。
【請求項１６】
神経細胞増殖を活性化する方法であって、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物を含有する培地で神経細胞を培養することを含む、方法。
【請求項１７】
神経細胞又は神経幹細胞を調製する方法であって、請求項１から１０のいずれかに記載の組成物を含有する培地で神経細胞を培養することを含む、調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、神経新生を活性化するための組成物、並びに中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患又は機能障害の治療等のための組成物に関する。また、本開示は、それらの使用、それらを用いた疾患の予防、改善、進行抑制及び／又は治療方法、神経新生を活性化する方法、及び神経細胞の増殖を活性化する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、中枢神経系で神経を新生又は再生させることの可能性があることが明らかとされつつある。それにともない、神経新生を制御できる薬剤の開発がすすめられている。特許文献１は、哺乳動物の脳の海馬において神経新生を促進しうるペプチドを含有する神経新生促進剤を開示する。また、特許文献２は、神経新生作用を有する低分子化合物を開示する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１０−１０５９９６号公報
【特許文献２】特開２００９−２９２７８２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本開示は、一態様において、神経新生を活性化するための組成物、それらの使用、それらを用いた疾患の予防、改善、進行抑制及び／又は治療方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、一態様において、タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経新生を活性化するための組成物に関する。【０００６】
本開示は、その他の態様において、タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための組成物に関する。【０００７】
本開示は、その他の態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経新生を活性化するための組成物に関する。
【化１】
2018043674.tif 000002
［ここで、一般式（Ｉ）において、
Ｘ1は、
【化２】
2018043674.tif 000003
であって、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｘ2は、−（結合手）又は−ＮＨ−であり、
Ｒ1は、
【化３】
2018043674.tif 000004
であって、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基であり、
Ｒ2は、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。］【０００８】
本開示は、その他の態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための組成物に関する。【０００９】
本開示は、その他の態様において、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療の方法であって、本開示の組成物を対象に投与することを含む方法に関する。【００１０】
本開示は、その他の態様において、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物を製造するための一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用に関する。【００１１】
本開示は、その他の態様において、神経新生を活性化するための一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、化合物４又は１０によるDual-specificity tyrosine phosphorylation-regulated kinase 1A（ＤＹＲＫ１Ａ）阻害活性を、試験管内リン酸化酵素アッセイ（in vitroキナーゼ解析）で確認した結果のグラフの一例である。
【図２】図２は、化合物４及び１０の細胞内でのリン酸化酵素に対する阻害活性をウエスタンブロッティングにより検出した結果の一例である。
【図３】図３は、化合物４又は１０で処理したマウス神経幹細胞のＢｒｄＵ陽性細胞の割合をアレイスキャンにより解析した結果の一例を、コントロールを１とする相対値で表したグラフである。
【図４】図４Ａはウエスタンブロッティングの結果の一例であり、図４ＢはサイクリンＤ１の発現量を、コントロールを１とする相対値として表したグラフである。
【図５】図５Ａは、海馬歯状回切片の顕微鏡写真の一例であって、上から順にＤａｐｉ染色した画像、初期のニューロンマーカーであるダブルコルチン（ＤＣＸ）で染色した画像、及びＢｒｄＵ染色した画像をそれぞれ示す。図５Ｂは、海馬歯状回におけるＢｒｄＵ陽性細胞の数を示すグラフである。図５Ｃは、海馬歯状回における幼若神経細胞の数を、溶媒を１とする相対値として表したグラフである。
【図６】図６は、化合物４を投与した野生型及びダウン症モデルマウス由来の神経幹細胞のＢｒｄＵ陽性細胞の割合を示すグラフである。
【図７】図７Ａは海馬歯状回における増殖細胞数の一例を示すグラフであり、図７Ｂは大脳皮質の厚さの一例を示すグラフである。
【図８】図８は、化合物４又は溶媒を投与した野生型又はダウン症モデルマウスにおいて、学習・記憶行動を解析するために行った３種類のテストの結果の一例を示すグラフであって、図８ＡはＹ迷路による自発的交替行動テストの結果の一例であり、図８Ｂはバーンズ迷路による空間学習テストの結果の一例であり、図８Ｃは恐怖学習テストの結果の一例である。
【図９】図９Ａは、評価に用いた麻痺スコアであり、図９Ｂ及びＣは投与日数経時的麻痺スコアである。
【図１０】図１０は、脊椎損傷を受けたゼブラフィッシュの泳動距離を行動解析により測定した結果の一例を示すグラフである。
【図１１】図１１Ａは、化合物４又は１０で経時的に処理したＨＥＫ２９３細胞におけるサイクリンＤ１の発現量をウエスタンブロッティングにより確認した結果の一例を示し、図１１Ｂは、溶媒又は化合物４で４８時間処理したヒト皮膚由来繊維芽細胞における細胞周期をフローサイトメトリーにより解析した結果の一例を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
ダウン症患者及びダウン症モデルマウスの脳内ではタンパク質リン酸化酵素の発現が上昇することが報告されている。また、ダウン症モデルマウスでは、神経新生の低下がみられることが報告されている。これらのことから、本発明者らは、タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性を制御する阻害剤によって、神経新生の低下を改善し、かつダウン症候群等の中枢／末梢神経系の疾患又は機能障害に対する薬剤を提供できるかについての検討を行った。その過程で、タンパク質リン酸化酵素のリン酸化阻害活性を有する化合物が、タウタンパク質のリン酸化を抑制すること、神経幹細胞における増殖を促進すること、さらにはサイクリンＤ１を安定化して細胞周期をＧ１期から次のＳ期、Ｇ２／Ｍ期へ促進することが見出された。
【００１４】
本開示は、一態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物が、Dual-specificity tyrosine phosphorylation-regulated kinase（ＤＹＲＫ）ファミリーに属するタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害活性を有するという知見に基づく。
本開示は、一態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物が、タウタンパク質のリン酸化を抑制する機能を有するという知見に基づく。
本開示は、一態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物が、神経幹細胞における増殖を促進するという知見に基づく。
本開示は、一態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物が、サイクリンＤ１の発現量を増加させ、さらには細胞周期をＧ１から次の細胞周期であるＳ期、Ｇ２／Ｍ期へ促進するという知見に基づく。
本開示は、一態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物によれば、ダウン症等の神経新生が低下することにより引き起こされる中枢神経疾患の予防、改善、進行抑制及び／又は治療が可能になるという知見に基づく。
本開示は、一態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物によれば、顔面神経麻痺等の末梢神経疾患の予防、改善、進行抑制及び／又は治療が可能になるという知見に基づく。
本開示は、一態様において、一般式（Ｉ）で表される化合物によれば、脊髄損傷等の中枢／末梢神経の機能障害の改善、進行抑制及び／又は治療が可能になるという知見に基づく。
【００１５】
［神経新生の活性化］
本開示は、一態様において、タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経新生を活性化するための組成物に関する。
【００１６】
本開示において「神経新生」は、一又は複数の実施形態において、生体又は成体における神経幹細胞の分裂・増殖、神経前駆細胞の産生、産生された神経前駆細胞の神経細胞への分化・成熟又はこれらの組み合わせをいう。生体又は成体としては、哺乳類、ヒト、又は、ヒト以外の哺乳類等が挙げられる。本開示において「神経幹細胞」は、脳及び脊髄中に存在し、神経細胞やグリア細胞への分化能力をもつ前駆細胞を産生する細胞をいう。本開示において「神経新生の活性化」は、一又は複数の実施形態において、生体又は成体における神経幹細胞の分裂・増殖、神経前駆細胞の産生、産生された神経前駆細胞の神経細胞への分化・成熟又はこれらの組み合わせの亢進をいう。「神経新生の活性化」は、一又は複数の実施形態において、低下した神経新生を緩和又は改善することを含みうる。
【００１７】
タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物としては、一又は複数の実施形態において、ＤＹＲＫファミリーに属するタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性の阻害能を有する化合物、ＣＬＫファミリーの属するタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性の阻害能を有する化合物、サイクリンＤ１をリン酸化するリン酸化酵素のリン酸化活性の阻害能を有する化合物、タウタンパク質の異常リン酸化の抑制能を有する化合物、及びこれらの双方を有する化合物等が挙げられる。ＤＹＲＫファミリーに属するタンパク質リン酸化酵素としては、一又は複数の実施形態において、ＤＹＲＫ１Ａ、ＤＹＲＫ２、ＤＹＲＫ１Ｂ、及びＤＹＲＫ３等が挙げられる。ＣＬＫファミリーの属するタンパク質リン酸化酵素としては、一又は複数の実施形態において、ＣＬＫ１及びＣＬＫ２等が挙げられる。サイクリンＤ１をリン酸化するリン酸化酵素としては、一又は複数の実施形態において、ＤＹＲＫファミリーに属するタンパク質リン酸化酵素、glycogen synthase kinase 3β（ＧＳＫ３β）等が挙げられる。
【００１８】
上記のタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性の阻害能を有する化合物の特に限定されない一又は複数の実施形態において、一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩（本開示に係る化合物）が挙げられる。
【００１９】
本開示に係る組成物は、一又は複数の実施形態において、神経新生を活性化するための医薬組成物として使用できる。このため、本開示に係る組成物は、一又は複数の実施形態において、対象に投与することによって、中枢神経系又は末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制又は治療に用いることができる。本開示に係る組成物は、一又は複数の実施形態において、対象に投与することによって、中枢神経系又は末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療に用いることができる。
【００２０】
［中枢／末梢神経系の疾患又は機能障害の治療等］
本開示は、その他の態様において、タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための組成物及び医薬組成物に関する。
【００２１】
中枢神経系疾患としては、一又は複数の実施形態において、神経細胞が多数集まる脳又は脊髄の機能に関連した症状を示す疾患が挙げられる。中枢又は末梢神経系の疾患又は機能障害は、一又は複数の実施形態において、海馬の萎縮に起因する疾患又は機能障害であって、知的障害、学習能力障害、気分障害、ＰＴＳＤ及び不安障害、症状性を含む器質性精神障害、物質関連障害（特にアルコール関連障害、覚醒剤）などが挙げられる。中枢神経系疾患としては、一又は複数の実施形態において、ダウン症等の精神疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、及びダウン症候群において発症しうるアルツハイマー病等が挙げられる。末梢神経疾患としては、一又は複数の実施形態において、顔面神経麻痺、突発性麻痺等の舌咽神経障害及び三叉神経障害等が挙げられる。神経機能障害としては、一又は複数の実施形態において、脳卒中及び脳脊髄外傷を伴う神経機能障害等が挙げられる。本開示に係る組成物及び医薬組成物において対象となる疾患又は機能障害としては、一又は複数の実施形態において、脳梗塞、脊髄梗塞、脳出血、脊髄出血、顔面神経マヒ、四肢神経マヒ、神経変性疾患、アルツハイマー病、ダウン症、うつ病、パーキンソン病及びハンチントン病等が挙げられる。
【００２２】
すなわち、本開示は、一又は複数の実施形態に関しうる；
〔Ａ１〕  タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経新生を活性化するための組成物。
〔Ａ２〕  タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための組成物。
〔Ａ３〕  前記化合物は、神経新生を活性化する、〔Ａ２〕記載の組成物。
〔Ａ４〕  前記タンパク質リン酸化酵素は、ＣＬＫ、ＤＹＲＫ及びサイクリンＤ１のリン酸化酵素からなる群から選択される、〔Ａ１〕から〔Ａ３〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ａ５〕  前記化合物は、ＤＹＲＫファミリーに属するタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性の阻害能を有する化合物、ＣＬＫファミリーの属するタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性の阻害能を有する化合物、サイクリンＤ１をリン酸化するリン酸化酵素のリン酸化活性の阻害能を有する化合物、タウタンパク質の異常リン酸化の抑制能を有する化合物、及びこれらの双方を有する化合物からなる群から選択される、〔Ａ１〕から〔Ａ４〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ａ６〕  前記疾患は、脳梗塞、脊髄梗塞、脳出血、脊髄出血、顔面神経マヒ、四肢神経マヒ、神経変性疾患、アルツハイマー病、ダウン症、うつ病、パーキンソン病及びハンチントン病からなる群から選択される、〔Ａ２〕から〔Ａ５〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ａ７〕  医薬組成物である、〔Ａ１〕から〔Ａ６〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ａ８〕  中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための、〔Ａ７〕に記載の医薬組成物。
【００２３】
［一般式（Ｉ）で表される化合物を有効成分とする組成物］
一般式（Ｉ）で表される化合物は、一又は複数の実施形態において、ＤＹＲＫ１Ａのリン酸化活性の阻害活性を有する。一般式（Ｉ）で表される化合物は、一又は複数の実施形態において、さらに、タウタンパク質の異常リン酸化を抑制する。一般式（Ｉ）で表される化合物は、一又は複数の実施形態において、さらに、神経幹細胞におけるサイクリンＤ１の発現量の増加又はサイクリンＤ１の安定化を行う。
よって、本開示は、一態様において、有効成分として、一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する、ＤＹＲＫ阻害剤、タウタンパク質の異常リン酸化抑制剤、又は神経幹細胞におけるサイクリンＤ１安定化剤に関する。
【００２４】
一般式（Ｉ）で表される化合物は、一又は複数の実施形態において、神経幹細胞における増殖の促進、海馬歯状回における神経新生の促進、及び神経幹細胞において低下した増殖の相補の少なくとも一つを行うことができる。また、一般式（Ｉ）で表される化合物は、一又は複数の実施形態において、脳内移行性及び経口吸収性を発揮する。このため、一般式（Ｉ）で表される化合物は、一又は複数の実施形態において、中枢神経系及び末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び治療等に用いることができる。一般式（Ｉ）で表される化合物を有効成分とする本開示に係る組成物は、一又は複数の実施形態において、中枢神経系及び末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び治療等に用いることができる。中枢神経系又は末梢神経系の疾患又は機能障害としては、上記のとおりである。
【００２５】
［一般式（Ｉ）で表される化合物］
【化４】
2018043674.tif 000005
【００２６】
Ｘ1は、
【化５】
2018043674.tif 000006
であって、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。
Ｘ2は、−（結合手）又は−ＮＨ−である。
Ｒ1は、
【化６】
2018043674.tif 000007
であって、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。
Ｒ2は、水素、ハロゲン原子、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。
なお、本開示において波線を付した結合手は、式（Ｉ）との結合部分を示す。
【００２７】
一般式（Ｉ）において、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、一又は複数の実施形態において、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である。
【００２８】
本開示において、Ｃ1-4アルキル基は、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、及びｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。本開示において、ハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基は、１又は２以上の水素原子がハロゲン原子によって置換されているＣ1-4アルキル基である。本開示において、ハロゲン原子は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子が挙げられる。
【００２９】
本開示の一又は複数の実施形態において、一般式（Ｉ）で表される化合物は、
【化７】
2018043674.tif 000008
であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は上述と同様である。
【００３０】
本開示の一又は複数の実施形態において、一般式（Ｉ）で表される化合物は、
【化８】
2018043674.tif 000009
であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6及びＲ7は上述と同様である。
【００３１】
本開示の一又は複数の実施形態において、一般式（Ｉ）で表される化合物は、
【化９】
2018043674.tif 000010
であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は上述と同様である。
【００３２】
本開示の一又は複数の実施形態において、一般式（Ｉ）で表される化合物は、
【化１０】
2018043674.tif 000011
であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は上述と同様である。
【００３３】
本開示における「製薬上許容される塩」とは、薬理上及び／又は医薬上許容される塩を含有し、例えば、無機酸塩、有機酸塩、無機塩基塩、有機塩基塩、酸性又は塩基性アミノ酸塩などが挙げられる。
【００３４】
無機酸塩の好ましい例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などが挙げられる。有機酸塩の好ましい例としては、酢酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ステアリン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩などが挙げられる。
【００３５】
無機塩基塩の好ましい例としては、ナトリウム塩及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、又はアンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基塩の好ましい例としては、ジエチルアミン塩、ジエタノールアミン塩、メグルミン塩、又はＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩などが挙げられる。
【００３６】
酸性アミノ酸塩の好ましい例としては、アスパラギン酸塩、又はグルタミン酸塩などが挙げられる。塩基性アミノ酸塩の好ましい例としては、アルギニン塩、リジン塩、又はオルニチン塩などが挙げられる。
【００３７】
本開示において「化合物の塩」には、化合物が大気中に放置されることにより、水分を吸収して形成されうる水和物が包含され得る。また、本開示において「化合物の塩」には、化合物が他のある種の溶媒を吸収して形成されうる溶媒和物も包含され得る。
【００３８】
本開示において「プロドラッグ」は、一又は複数の実施形態において、生体内で一般式（Ｉ）で表される化合物に変換される化合物である。カルボキシル基を有する化合物であれば、そのカルボキシル基がアルコキシカルボニル基となった化合物、アルキルチオカルボニル基となった化合物、又はアルキルアミノカルボニル基となった化合物が挙げられる。アミノ基を有する化合物であれば、そのアミノ基がアルカノイル基で置換されアルカノイルアミノ基となった化合物、アルコキシカルボニル基により置換されアルコキシカルボニルアミノ基となった化合物、アシロキシメチルアミノ基となった化合物、又はヒドロキシルアミンとなった化合物が挙げられる。水酸基を有する化合物であれば、その水酸基が前記アシル基により置換されてアシロキシ基となった化合物、リン酸エステルとなった化合物、又はアシロキシメチルオキシ基となった化合物が挙げられる。これらのプロドラッグ化に用いる基のアルキル部分としては後述するアルキル基が挙げられ、そのアルキル基は置換（例えば炭素原子数１〜６のアルコキシ基等により）されていてもよい。一又は複数の実施形態において、例えばカルボキシル基がアルコキシカルボニル基となった化合物を例にとれば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルなどの低級（例えば炭素数１〜６）アルコキシカルボニル、メトキシメトキシカルボニル、エトキシメトキシカルボニル、２−メトキシエトキシカルボニル、２−メトキシエトキシメトキシカルボニル、又はピバロイロキシメトキシカルボニルなどのアルコキシ基により置換された低級（例えば炭素数１〜６）アルコキシカルボニルが挙げられる。
【００３９】
すなわち、本開示は以下の一又は複数の実施形態に関しうる；
〔Ｂ１〕  一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有するＤＹＲＫ阻害剤。
〔Ｂ２〕  一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有するタウタンパク質の異常リン酸化抑制剤。
〔Ｂ３〕  一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経幹細胞におけるサイクリンＤ１安定化剤。
〔Ｂ４〕  一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を有効成分として含有する、神経新生を活性化するための組成物。
〔Ｂ５〕  一般式（Ｉ）において、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン原子、Ｃ1-4アルキル基、又はハロゲン原子で置換されたＣ1-4アルキル基である、〔Ｂ１〕から〔Ｂ４〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ｂ６〕  一般式（Ｉ）で表される化合物が、
【化１１】
2018043674.tif 000012
である、〔Ｂ１〕から〔Ｂ５〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ｂ６〕  一般式（Ｉ）で表される化合物が、
【化１２】
2018043674.tif 000013
である、〔Ｂ１〕から〔Ｂ５〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ｂ７〕一般式（Ｉ）で表される化合物が、
【化１３】
2018043674.tif 000014
である、〔Ｂ１〕から〔Ｂ５〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ｂ８〕  一般式（Ｉ）で表される化合物が、
【化１４】
2018043674.tif 000015
である、〔Ｂ１〕から〔Ｂ５〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ｂ９〕  医薬組成物である、〔Ｂ１〕から〔Ｂ８〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ｂ１０〕  中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための、〔Ｂ９〕記載の医薬組成物。
〔Ｂ１１〕  中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療の方法であって、〔Ｂ１〕から〔Ｂ８〕のいずれかに記載の組成物又は〔Ｂ９〕若しくは〔Ｂ１０〕に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
〔Ｂ１２〕  前記対象が、ヒト、又はヒト以外の動物である、〔Ｂ１１〕に記載の方法。
〔Ｂ１３〕  中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
〔Ｂ１４〕  中枢及び／若しくは末梢神経系の疾患の予防、改善、進行抑制及び／若しくは治療、又は中枢及び／若しくは末梢神経系の機能障害の改善、進行抑制及び／若しくは治療のための医薬組成物を製造するための一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
〔Ｂ１５〕  神経新生の誘導方法であって、〔Ｂ１〕から〔Ｂ８〕のいずれかに記載の組成物又は〔Ｂ９〕若しくは〔Ｂ１０〕に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
〔Ｂ１６〕  前記対象が、細胞、組織、器官、個体、ヒト、又はヒト以外の動物である、〔Ｂ１５〕に記載の方法。
〔Ｂ１７〕  神経新生を活性化するための一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
〔Ｂ１８〕  神経新生を活性化するための医薬組成物を製造するための一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
【００４０】
［神経細胞増殖の活性化］
タンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩は、一又は複数の実施形態において、神経細胞増殖の活性化という効果を奏する。よって、本開示は、一態様において、神経細胞増殖を活性化するための組成物であって、有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する組成物に関する。なお、本態様の組成物は、医薬組成物であってもよい。
【００４１】
本開示において「神経細胞」は、一又は複数の実施形態において、神経幹細胞を含む。本開示において「神経幹細胞」は、上述のとおり、脳及び脊髄中に存在し、神経細胞やグリア細胞への分化能力をもつ前駆細胞を産生する細胞をいう。本開示において「神経細胞増殖」は、一又は複数の実施形態において、神経細胞又は神経幹細胞（以下、「神経（幹）細胞」ともいう）の増殖をいう。本開示において「神経（幹）細胞の増殖」は、一又は複数の実施形態において、in vitro、in vivo又はex vivoでの神経（幹）細胞の増殖であり、又は、一又は複数の実施形態において、培養神経幹細胞の増殖である。本開示において「培養神経幹細胞」は、一又は複数の実施形態において、生体より単離、培養した神経幹細胞塊をいう。本開示において「神経細胞増殖の活性化」は、一又は複数の実施形態において、神経（幹）細胞の増殖が活性化されることをいい、その他の一又は複数の実施形態において、さらに、神経前駆細胞の産生が促進されることをいう。「神経細胞増殖の活性化」は、一又は複数の実施形態において、in vitro、in vivo又はex vivoでの神経（幹）細胞の増殖の活性化であり、その他の一又は複数の実施形態において、培養神経幹細胞の増殖の活性化である。
【００４２】
本態様の組成物によれば、一又は複数の実施形態において、培養神経幹細胞の増殖を亢進することが可能であることから、生体においても脳及び脊髄に存在する神経幹細胞の増殖を促進することが期待される。したがって、本開示は、一又は複数の実施形態において、培養神経幹細胞を活性化するための組成物であって、有効成分として一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する組成物に関する。
【００４３】
本開示は、一又は複数の実施形態において、本開示に係る組成物を含有する培地で神経（幹）細胞を培養することを含む、神経（幹）細胞の増殖方法に関する。本開示は、一又は複数の実施形態において、本開示に係る組成物を含有する培地で神経（幹）細胞を培養することを含む、神経（幹）細胞の調製方法に関する。また、本開示は、一又は複数の実施形態において、本開示に係る神経（幹）細胞の増殖方法における本開示に係る組成物の使用に関する。本開示は、一又は複数の実施形態において、本開示に係る神経（幹）細胞の調製方法における本開示に係る組成物の使用に関する。
【００４４】
すなわち、本開示は以下の一又は複数の実施形態に関しうる；
〔Ｃ１〕  神経細胞増殖を活性化するための組成物であって、有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する、組成物。
〔Ｃ２〕  神経（幹）細胞の増殖を活性化するための組成物であって、有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する組成物。
〔Ｃ３〕  前記化合物が、一般式（Ｉ）で表される化合物である、〔Ｃ１〕又は〔Ｃ２〕に記載の組成物。
〔Ｃ４〕  医薬組成物である、〔Ｃ１〕から〔Ｃ３〕のいずれかに記載の組成物。
〔Ｃ５〕  有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する組成物を含む培地で神経（幹）細胞を培養することを含む、神経細胞増殖を活性化する方法。
〔Ｃ６〕  有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する組成物を含む培地で神経（幹）細胞を培養することを含む、神経（幹）細胞の調製方法。
〔Ｃ７〕  神経細胞増殖の活性化における、有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する組成物の使用。
〔Ｃ８〕  神経（幹）細胞の調製における、有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩を含有する組成物の使用。
〔Ｃ９〕  神経細胞増殖を活性化する組成物の製造における、有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
〔Ｃ１０〕  神経（幹）細胞の調製のための組成物の製造における、有効成分としてタンパク質リン酸化酵素のリン酸化活性に対する阻害能を有する化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩の使用。
【００４５】
上記の本開示に係る組成物は、医薬組成物として使用できる。本開示において「医薬組成物」は、一又は複数の実施形態において、周知の製剤技術を適用し、投与形態に適した剤形とすることができる。その投与形態としては、これらに限定されないが、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、トローチ剤、シロップ剤、液剤等の剤形による経口投与が挙げられる。或いは、注射剤、液剤、エアゾール剤、座剤、貼布剤、パップ剤、ローション剤、リニメント剤、軟膏剤、点眼剤等の剤形による非経口投与を挙げることができる。これらの製剤は、これらに限定されないが、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、矯味矯臭剤、希釈剤などの添加剤を用いて周知の方法で製造されうる。本開示に係る組成物及び医薬組成物は、一又は複数の実施形態において、有効成分である一般式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのプロドラッグ又はその製薬上許容される塩に加えて、薬学的に許容される担体を含んでいてもよい。薬学的に許容される担体としては、一又は複数の実施形態において、薬剤の活性物質のすべての溶媒、分散媒、被膜剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤、及び吸収遅延剤等が挙げられる。本開示に係る組成物及び医薬組成物は、一又は複数の実施形態において、さらに、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、矯味矯臭剤及び希釈剤の少なくとも一つを含んでもよい。
【００４６】
賦形剤としては、これらに限定されないがデンプン、バレイショデンプン、トウモロコシデンプン等のデンプン、乳糖、結晶セルロース、リン酸水素カルシウム等を挙げることができる。前記コーティング剤としては、これらに限定されないが、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、セラック、タルク、カルナウバロウ、パラフィン等を挙げることができる。前記結合剤としては、これらに限定されないが、ポリビニルピロリドン、マクロゴール及び前記賦形剤と同様の化合物を挙げることができる。前記崩壊剤としては、これらに限定されないが、前記賦形剤と同様の化合物及びクロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・セルロース類を挙げることができる。前記安定化剤としては、これらに限定されないが、メチルパラベン、プロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；及びソルビン酸を挙げることができる。前記矯味矯臭剤としては、これらに限定されないが、通常使用される、甘味料、酸味料、香料等を挙げることができる。
【００４７】
また、液剤の製造には、溶媒として、これらに限定されないが、エタノール、フェノール、クロロクレゾール、精製水、又は蒸留水等を使用することができ、必要に応じて界面活性剤又は乳化剤等も使用できる。前記界面活性剤又は乳化剤としては、これらに限定されないが、ポリソルベート８０、ステアリン酸ポリオキシル４０、又はラウロマクロゴール等を挙げることができる。
【００４８】
本開示に係る組成物及び医薬組成物の使用方法は、症状、年齢、投与方法等により異なりうる。使用方法は、これらに限定されないが、有効成分である一般式（Ｉ）で表される化合物の体内濃度が１００ｎＭ〜１ｍＭの間のいずれかになるように、間欠的若しくは持続的に、経口、経皮、粘膜下、皮下、筋肉内、血管内、脳内、又は腹腔内に投与することができる。限定されない実施形態として、経口投与の場合、対象（ヒトであれば成人）に対して１日あたり、一般式（Ｉ）で表される化合物に換算して、下限として０．０１ｍｇ（好ましくは０．１ｍｇ）、上限として、２０００ｍｇ（好ましくは５００ｍｇ、より好ましくは１００ｍｇ）を１回又は数回に分けて、症状に応じて投与することが挙げられる。限定されない実施形態として、静脈内投与の場合には、対象（ヒトであれば成人）に対して１日当たり、下限として０．００１ｍｇ（好ましくは０．０１ｍｇ）、上限として、５００ｍｇ（好ましくは５０ｍｇ）を１回又は数回に分けて、症状に応じて投与することが挙げられる。
【実施例】
【００４９】
以下、実験例により本開示をさらに詳細に説明するが、これらは例示的なものであって、本開示はこれら実験例に制限されるものではない。なお、本開示中に引用された文献は、すべて本開示の一部として組み入れられる。【００５０】
下記化合物１〜１５を準備した。【００５１】
【化１５】
2018043674.tif 000016
【００５２】
【化１６】
2018043674.tif 000017
【００５３】
【化１７】
2018043674.tif 000018
【００５４】
【化１８】
2018043674.tif 000019
【００５５】
上記化合物１〜６のうち、化合物１、２、４及び６の合成方法を代表して以下に示す。
化合物１の合成方法：
【化１９】
2018043674.tif 000020
【００５６】
アルゴン雰囲気下、5-ブロモインダゾール（197 mg, 1.00 mmol, 商用品）、5-キノリンボロン酸（259 mg, 1.50 mmol, 商用品）、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2dba3）（9.20 mg, 10.0 μmol, 商用品）、2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2’,4’,6’-トリイソプロピルビフェニル（Xphos）（19.1 mg, 40.1 μmol, 商用品）、リン酸三カリウム・n水和物（425 mg, 2.00 mmol, 商用品）の1-ブタノール（10 mL, 商用品）溶液を18時間、100℃で加熱撹拌した。室温まで放冷後、水（5 mL）を加え、酢酸エチル（5 mL × 3）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（Yamazen, AI-580 and ParallelFrac FR-360）（Yamazen Universal Columns Premium cartridge [silica] 40 g, クロロホルム/メタノール = 20/1）により精製した後、得られた固体をジクロロメタンで洗浄することにより、5-(5-キノリル)インダゾール（化合物１）（202 mg, 824 μmol, 82.4%）を肌色の固体として得た。
TLC Rf = 0.20 (ジクロロメタン/メタノール = 20/1); Mp 255℃ (decomp); 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.51-7.56 (m, 2H), 7.67 (dd, J = 0.8, 6.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86-7.92 (m, 2H), 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.90 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 112.1, 123.4, 123.9, 125.5,129.3, 129.4, 130.0, 131.1, 131.5, 134.0, 136.2, 137.5, 142.0, 143.4, 150.0, 151.9; IR (cm-1) 746, 772, 802, 887, 918, 937, 1061, 1101, 1238, 1290, 1337, 1395, 1510, 1574, 1738, 2849, 2901, 2928, 3030, 3094.【００５７】
化合物２の合成方法：
【化２０】
2018043674.tif 000021
【００５８】
アルゴン雰囲気下、5-ブロモインダゾール（197 mg, 1.00 mmol, 商用品）、5-イソキノリンボロン酸（259 mg, 1.50 mmol, 商用品）、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2dba3）（9.20 mg, 10.0 μmol, 商用品）、2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2’,4’,6’-トリイソプロピルビフェニル（Xphos）（19.1 mg, 40.1 μmol, 商用品）、リン酸三カリウム・n水和物（425 mg, 2.00 mmol, 商用品）の1-ブタノール（10 mL, 商用品）溶液を5.5時間、100℃で加熱撹拌した。室温まで放冷後、水（5 mL）を加え、酢酸エチル（5 mL × 3）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（Yamazen, AI-580 and Parallel Frac FR-360）（Yamazen Universal Columns Premium cartridge [silica] 40 g, クロロホルム/メタノール = 20/1）により精製し、5-(5-イソキノリル)インダゾール（化合物２）（182 mg, 742 μmol, 74.2%）を無色の固体として得た。
TLC Rf = 0.20 (ジクロロメタン/メタノール = 20/1); Mp 250℃ (decomp.);1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.57 (dd, J = 1.6, 8.8 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.79-7.88 (m, 3H), 7.94 (dd, J = 0.8, 1.6 Hz, 1H), 8.17-8.20 (m, 2H), 8.44 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 9.35 (d, J = 0.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 112.2, 121.3, 123.8, 125.5, 129.3, 129.5,131.0, 131.5, 133.7, 134.1, 136.2, 136.9, 141.8, 142.0, 144.0, 154.5; IR (cm-1) 650, 712, 754, 768, 779, 812, 835, 895, 943, 986, 1034, 1161, 1292, 1342, 1379, 1489, 1585, 1614, 2770, 2851, 2901, 3030, 3117.【００５９】
化合物４の合成方法：
【化２１】
2018043674.tif 000022
【００６０】
アルゴン雰囲気下、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2(dba)3）（56.7 mg、61.9 μmol、Aldrich, 328774）、2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2′,4′,6′-トリイソプロピルビフェニル（XPhos）（118 mg、0.247 mmol、Aldrich, 638064）、リン酸カリウム・n水和物（2.63 g、<12.4 mmol、nacalai, 28730-35）、5-ブロモインダゾール（1.22 g、6.19 mmol、TCI, B3785）、3-ピリジンボロン酸（1.14 g、9.27 mmol、WAKO, 328-59843）にn-ブタノール（50 mL、nacalai, 06015-95）を加え、この懸濁液を100 ℃（油浴温度）で17時間加熱撹拌した。室温まで放冷した後、混合物を少量のシリカゲルを充填したグーチロートによって濾過し、減圧濃縮した。得られた薄黄色の固体を、桐山ロートを用いて濾取した。ロート上で固体を、蒸留水、酢酸エチルを用いて洗浄した後、減圧下で乾燥することで、化合物４（272 mg、1.39 mmol、22.5%）を乳白色の固体として得た。さらに濾液を酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、濾過後、減圧濃縮した。得られた乳白色の固体を、桐山ロートを用いて濾取した。ロート上で固体を洗浄（ヘキサン/酢酸エチル = 5/1）した後、再結晶による精製（酢酸エチル/メタノール = 10/1）を行うことで、化合物４（211 mg、1.08 mmol、17.5%）を乳白色の固体として得た（計40％）。
TLC Rf = 0.25 (CH2Cl2/MeOH = 20/1);1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 8.88 (dd, J = 2.4,0.8 Hz, 1H), 8.53 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.19-8.16 (m, 2H), 8.11 (dd, J = 2.4, 1.6 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 5.2, 1.6 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.56 (ddd, J = 8.0, 4.8, 0.8 Hz, 1H) (The signal for NH of indazole was not observed); 13C NMR (CD3OD, 400 MHz) δ149.4, 149.1, 142.2, 140.0, 137.5, 136.4, 132.4, 128.3, 126.3, 125.9, 121.3, 112.9.【００６１】
化合物６の合成方法：
【化２２】
2018043674.tif 000023
【００６２】
アルゴン雰囲気下、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2(dba)3）（39.8 mg、43.5 μmol、Aldrich, 328774）、2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2′,4′,6′-トリイソプロピルビフェニル（XPhos）（83.0 mg、0.174 mmol、Aldrich, 638064）、リン酸カリウム・n水和物（1.85 g、<8.70 mmol、nacalai, 28730-35）、5-ブロモインダゾール（857 mg、4.35 mmol、TCI, B3785）、4-イソキノリンボロン酸（1.13 g、6.53 mmol、Aldrich, 707929）にn-ブタノール（40 mL、nacalai, 06015-95）を加え、この懸濁液を100 ℃（油浴温度）で18時間加熱撹拌した。室温まで放冷した後、蒸留水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を少量のシリカゲルによって濾過し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥、濾過後、減圧濃縮した。残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（YAMAZEN, Smart Flash Al-580S, クロロホルム/メタノール = 20/1）により精製し、化合物６（972 mg、3.96 mmol、91.1%）を乳白色の固体として得た。
TLC Rf = 0.20 (CH2Cl2/MeOH = 20/1);1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 10.46 (br s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.92 (d, J =6.8 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.68-7.64 (m, 3H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (CDCl3, 400 MHz) δ152.3, 143.5, 140.1, 135.7, 134.9, 133.7, 131.0, 130.3, 129.7, 128.8, 128.3, 127.6, 125.2, 124.0, 122.6, 110.1.【００６３】
上記化合物７〜９のうち、化合物８の合成方法を代表して以下に示す。
化合物８の合成方法：
【化２３】
2018043674.tif 000024
【００６４】
アルゴン雰囲気下、5-アミノキノリン（144 mg, 999 μmol, 商用品）、3-ブロモピリジン（150 μL, 1.54 mmol, 商用品）、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム（Pd2dba3）（45.8 mg, 50.0 μmol, 商用品）、4,5-ビス(ジフェニルホスフィノ)-9,9-ジメチルキサンテン（xantphos）（57.9 mg, 100 μmol, 商用品）、tert-ブトキシナトリウム（192 mg, 2.00 mmol, 商用品）の1,4-ジオキサン（10 mL, 商用品）溶液を14時間、110℃で加熱撹拌した。室温まで放冷後、水（5 mL）を加え、酢酸エチル（5 mL × 3）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（Yamazen, W-Prep 2XY A-type）（Biotage ZIP（商標）sphere cartridge [silica] 30 g, ジクロロメタン/メタノール = 20/1 → 5/1）により粗精製した後、得られた固体をヘキサン/ジクロロメタン = 30/1で洗浄することにより、5-(3-ピリジルアミノ)キノリン（化合物８）（120 mg, 542 μmol, 54.3%）を薄黄色の固体として得た。
TLC Rf = 0.30 (ジクロロメタン/メタノール = 20/1); Mp 180℃ (decomp.); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.08 (br s, 1H), 7.13-7.22 (m, 2H), 7.38-7.42 (m, 2H), 7.66 (dd, J = 8.8, 8.8 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.18 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H), 8.33-8.37 (m, 2H), 8.95 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ117.5, 120.8, 123.1, 123.3, 123.8, 125.6, 129.6, 130.6, 137.7, 139.6, 141.2, 142.0, 149.3, 150.7; IR (cm-1) 652, 710, 762, 783, 814, 966, 1018, 1063, 1240, 1294, 1317, 1395, 1470, 1485, 1537, 1570, 3005, 3044, 3109, 3175.【００６５】
上記化合物１０〜１３のうち、化合物１０及び１２の合成方法を代表して以下に示す。
化合物１０の合成方法：
【化２４】
2018043674.tif 000025
【００６６】
アルゴン雰囲気下、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（Pd(PPh3)4）（57.8 mg、50.0 μmol、Aldrich, 216666）、炭酸ナトリウム・一水和物（248 mg、2.00 mmol、WAKO, 193-04925）、6-ブロモキノリン（208 mg、1.00 mmol、WAKO, 325-53253）、4-ピリジンボロン酸（184 mg、1.50 mmol、WAKO, 325-59853）の蒸留トルエン（3 mL）、エタノール（3 mL, nacalai, 14719-35）、蒸留水（3 mL）の混合溶液を90 ℃（油浴温度）で20時間加熱撹拌した。室温まで放冷した後、蒸留水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、濾過後、減圧濃縮した。残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（YAMAZEN, SmartFlash Al-580S, クロロホルム/メタノール = 99/1）により精製することで化合物１０（168 mg、0.813 mmol、81.3%）を乳白色の固体として得た。
TLC Rf = 0.20 (酢酸エチルのみ), Rf = 0.25 (CH2Cl2/MeOH = 20/1);1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.98 (dd, J = 4.4, 1.6 Hz, 1H), 8.73 (dd, J = 4.4, 2.0 Hz, 2H), 8.27-8.22 (m, 2H), 8.09 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.64 (dd,J = 4.4, 2.0 Hz, 2H), 7.48 (dd, J = 8.0, 4.0 Hz, 1H); 13C NMR (CDCl3, 400 MHz) δ151.6, 150.8 (2C), 148.7, 147.8, 136.8, 136.6, 130.9,128.7, 128.6, 126.6, 122.2 (3C).【００６７】
化合物１２の合成方法：
【化２５】
2018043674.tif 000026
【００６８】
アルゴン雰囲気下、5-ブロモキノリン（84.2 mg, 405 μmol, 商用品）、4-ピリジルボロン酸（73.8mg, 600 μmol, 商用品）、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（Pd(PPh3)4）（23.1 mg,20.0 μmol, 商用品）、炭酸ナトリウム・一水和物（99.2 mg, 800 μmol, 商用品）のトルエン（1.3 mL, 商用品）、エタノール（1.3 mL, 商用品）、精製水（1.3 mL）の混合溶液を25時間、90℃で加熱撹拌した。室温まで放冷後、水（2 mL）を加え、酢酸エチル（2 mL × 3）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（Yamazen, W-Prep 2XY A-type）（Biotage ZIP（商標）sphere cartridge [silica] 30 g, 酢酸エチル100% → ジクロロメタン/メタノール = 95/5）により精製し、5-(4-ピリジル)キノリン（化合物１２）（77.7 mg, 377 μmol, 93.0%）を黄色の固体として得た。
TLC Rf = 0.35 (ジクロロメタン/メタノール = 20/1); Mp 113℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39-7.43 (m, 3H), 7.52 (dd, J = 1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 7.2, 8.8Hz, 1H), 8.17-8.22 (m, 2H), 8.75-8.78 (AA’BB’, 2H), 8.98 (dd, J = 1.6, 4.0 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 121.6, 124.9 (2C), 125.9, 127.3, 128.9, 130.3, 133.4, 137.5, 147.2, 148.5, 150.0 (2C), 150.7; IR (cm-1) 650, 696, 743, 750, 797, 839, 962, 989, 1111, 1229, 1304, 1391, 1418, 1495, 1543, 1570, 1589, 3026.【００６９】
上記化合物１４〜１５のうち、化合物１４の合成方法を代表して以下に示す。
化合物１４の合成方法：
【化２６】
2018043674.tif 000027
【００７０】
アルゴン雰囲気下、5-ブロモベンゾフラン（79.6 mg, 404 μmol, 商用品）、4-ピリジルボロン酸（73.8 mg, 600 μmol, 商用品）、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（Pd(PPh3)4）（23.1 mg, 20.0 μmol, 商用品）、炭酸ナトリウム・一水和物（99.2 mg, 800 μmol, 商用品）のトルエン（1.3 mL, 商用品）、エタノール（1.3 mL, 商用品）、精製水（1.3 mL）の混合溶液を8時間、90℃で加熱撹拌した。室温まで放冷後、水（2 mL）を加え、酢酸エチル（2 mL × 3）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過後、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（Yamazen, W-Prep 2XY A-type）（Biotage ZIP（商標）sphere cartridge [silica] 45 g, ジクロロメタン/メタノール = 10/1）により精製した後、ヘキサン/ジクロロメタンを用いて再結晶することにより、5-(4-ピリジル)ベンゾフラン（化合物１４）（56.8 mg, 289 μmol, 71.6%）を無色の固体として得た。
TLC Rf = 0.50 (ジクロロメタン/メタノール = 10/1); Mp 96℃; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.84 (dd, J = 0.8, 2.0 Hz, 1H), 7.52-7.54 (AA'BB', 2H), 7.54-7.62 (m, 2H), 7.68 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 0.4, 1.6 Hz, 1H), 8.64-8.66 (AA’BB’, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 106.8, 112.0, 119.9, 121.9 (2C), 123.6, 128.2, 133.3, 146.1, 148.8, 150.2 (2C), 155.4; IR(cm-1) 746, 775, 806, 874, 1018, 1109, 1219, 1265, 1414, 1460, 1537, 1595, 1728, 2853, 2924,3036, 3094.【００７１】
［実験例１：化合物４及び１０によるＤＹＲＫ１Ａリン酸化酵素阻害活性の評価］
化合物４及び１０のＤＹＲＫ１Ａ阻害活性を試験管内リン酸化酵素アッセイ（in vitroキナーゼ解析）により確認した。
ＤＹＲＫペプチドを基質とし、ＤＹＲＫ１Ａタンパク質存在下、ＡＴＰ１０μＭの条件下で化合物４及び１０のＤＹＲＫ１Ａに対する阻害活性を検討した。その結果を図１に示す。【００７２】
図１に示す通り、ＤＹＲＫ１Ａに対するin vitroキナーゼ解析において、化合物４及び１０のＩＣ50は、それぞれ５５．６５ｎＭ及び５９．７２ｎＭであり、強いＤＹＲＫ１Ａ阻害活性を示した。
また、化合物６についても同様の実験を行ったところ、化合物４及び１０と比較するとＤＹＲＫ１Ａ阻害活性のレベルは低いもののＤＹＲＫ１Ａ阻害活性を有することが確認できた。【００７３】
［実験例２：化合物４及び１０の細胞内でのリン酸化酵素に対する阻害活性の評価］
細胞内において、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ又は１０μＭの化合物４又は１０存在下で標的リン酸化酵素の基質であるタウタンパク質を過剰発現させ、タウタンパク質のリン酸化を指標として化合物４及び１０の阻害活性を確認した。その結果を図２に示す。【００７４】
図２は、０．３μＭ、１μＭ、３μＭ又は１０μＭの化合物４又は１０存在下で、タウタンパク質及びＤＹＲＫ１Ａタンパク質の双方を発現誘導した培養細胞について、タウタンパク質の２１２番目のトレオニン残基のリン酸化を特異的に認識する抗体を用いたウエスタンブロッティングを行った結果の一例である。
図２に示す通り、化合物４及び１０は、強力なタウタンパク質リン酸化抑制効果を示した。また、化合物６についても同様の評価を行ったところ、化合物４及び１０と同様の傾向を示すことが確認できた。【００７５】
［実験例３：化合物４及び１０による培養神経幹細胞における増殖促進効果］
マウス神経幹細胞を化合物４又は１０で処理し、増殖の指標となるヌクレオシド類縁体である５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（5-bromo-2'-deoxyuridine;BrdU）の取り込みを指標として、神経幹細胞における増殖活性を確認した。
具体的には、単離した神経幹細胞を、１．２５μＭ、２．５μＭ、又は５μＭの化合物４又は１０とＢｒｄＵ存在下で培養し、増殖細胞を標識した。細胞を固定後、抗ＢｒｄＵ抗体による検出を行い、Arrayscan (Thermo Scientific)によりＢｒｄＵを取り込んだ増殖細胞の割合を定量的に解析した。その結果を図３に示す。図３において「コントロール」は、化合物を添加しない場合の結果を示し、「溶媒」は、ジメチルスルホキシド (dimethyl sulfoxide, DMSO)を示す。【００７６】
図３は、ＢｒｄＵ陽性細胞の割合を、コントロールを１とする相対値で表したグラフである。図３に示す通り、化合物４及び１０を添加することによって、神経幹細胞において、増殖の指標であるＢｒｄＵの取り込み量が増大した。したがって、化合物４及び１０は培養神経幹細胞の増殖を活性化するといえる。
また、化合物6についても同様の評価を行ったところ、２．５μＭ及び５μＭの場合において化合物４及び１０と同様に、培養神経幹細胞の増殖を促進することが確認できた。【００７７】
［実験例４：化合物４、６及び１０による培養神経幹細胞におけるサイクリンＤ１発現］
マウス神経幹細胞を化合物４、６又は１０で処理し、細胞増殖を正に制御するタンパク質であるサイクリンＤ１の発現量をウエスタンブロッティングにより確認した。その結果を図４Ａ及びに示す。図４Ａ及びＢにおいて「コントロール」は、化合物を添加しない場合の結果を示し、「溶媒」は、ジメチルスルホキシド(dimethyl sulfoxide, DMSO)を示す。【００７８】
図４Ａは、ウエスタンブロッティングの結果の一例であり、図４ＢはサイクリンＤ１の発現量を、コントロールを１とする相対値として表したグラフである。
図４Ａ及びＢに示すように、化合物４、６及び１０は、サイクリンＤ１の発現量がいずれも有意に高いことが確認できた。したがって、化合物４、６及び１０は培養神経幹細胞の増殖を活性化するといえる。【００７９】
［実験例５：化合物４による海馬歯状回における神経新生促進効果］
化合物４を齧歯類に１０日間投与した後、ＢｒｄＵを投与して増殖細胞数を定量的に評価した。その結果を図５に示す。図５において「溶媒」は化合物を添加しない場合の結果を示す。【００８０】
図５Ａは海馬歯状回切片の顕微鏡写真の一例であって、上から順にＤａｐｉ染色(核染色)した画像、初期のニューロンマーカーであるダブルコルチン（ＤＣＸ）で染色した画像、及びＢｒｄＵ染色した画像をそれぞれ示す。図５Ｂは、海馬歯状回におけるＢｒｄＵ陽性細胞の数を示すグラフの一例である。図５Ｃは、海馬歯状回における幼若神経細胞の数を、溶媒を１とする相対値として表したグラフの一例である。
図５Ｂ〜Ｃに示すように、化合物の投与群は、溶媒投与群と比較して、増殖細胞数及び幼若神経細胞数が優位に高いことが確認された。よって、化合物４は、動物個体（げっ歯類）において海馬歯状回に存在する神経幹細胞に作用し、神経新生を有意に促進しているといえる。【００８１】
［実験例６：化合物４によるダウン症モデルマウス由来神経幹細胞に対する効果］
野生型及びダウン症モデルマウス（Ｔｓ１Ｃｊｅ、以下同じ）から神経幹細胞を調製し、化合物４のダウン症モデルマウス由来神経幹細胞の増殖に対する効果を確認した。その結果を図６に示す。図６において「溶媒」は化合物を添加しない場合の結果を示す。【００８２】
図６は、化合物４を投与した野生型及びダウン症モデルマウスから神経幹細胞のＢｒｄＵ陽性細胞の割合を示すグラフの一例である。図６に示すように、化合物４の処理によって、ダウン症モデルマウス由来神経幹細胞で低下していた増殖が相補されることが確認された。【００８３】
［実験例７：化合物４によるダウン症モデルマウスにおける神経新生に対する効果］
まず、８週齢の野生型及びダウン症モデルマウスに溶媒又は化合物４を１０日間投与し、海馬歯状回における神経新生に対する効果を確認した。その結果を図７Ａに示す。
また、化合物４をダウン症モデルマウスを宿す妊娠マウスに胎生１０日目から１５日目にかけて経口投与し、胎生１５日目の大脳の皮質の厚みを測定した。その結果を図７Ｂに示す。図７Ａ及びＢにおいて「溶媒」は化合物を添加しない場合の結果を示す。【００８４】
図７Ａは、海馬歯状回における増殖細胞数の一例を示すグラフであり、図７Ｂは大脳皮質の厚さの一例を示すグラフの一例である。図７Ａに示すように、化合物４を投与することによって、ダウン症モデルマウスで低下していた神経新生が相補されることが確認された。また、図７Ｂに示すように、胎内にいる状態で化合物４を妊娠マウスに投与することによって、ダウン症モデルマウス（胎児）において薄層化していた大脳皮質層が相補されることが確認された。【００８５】
［実験例８：化合物４のダウン症モデル胎生投与における効果］
ダウン症モデルマウスを宿す妊娠マウスに、胎生１０日目から出生前まで化合物４（１０ｍｇ／ｋｇ）又は溶媒を一日一回経口投与した。出生後、８週齢になった時点で、３種類のテスト（Ａ．Ｙ迷路による自発的交替行動テスト、Ｂ．バーンズ迷路による空間学習テスト、及びＣ．恐怖学習テスト）を順次行った。その結果を図８Ａ〜Ｃに示す。図８Ａ〜Ｃにおいて「溶媒」は化合物を添加しない場合の結果を示す。
図８は上記３種類のテストの結果の一例を示すグラフであって、図８ＡはＹ迷路による自発的交替行動テストの結果の一例であり、図８Ｂはバーンズ迷路による空間学習テストの結果の一例であり、図８Ｃは恐怖学習テストの結果の一例である。図８Ａ〜Ｃにおいて、白のグラフが溶媒を投与した野生型マウスであり、黒のグラフが溶媒を投与したダウン症モデルマウスであり、グレーのグラフが化合物４を投与したダウン症モデルマウスである。図８Ａ〜Ｃに示すように、溶媒を投与したダウン症モデルマウス（黒）は、野生型マウス（白）に比べて認知機能が低下しているが、ダウン症モデルマウスが胎内にいる状態で化合物４を妊娠マウスに投与（胎生投与）することによって、出生したダウン症モデルマウス（グレー）の認知機能が改善していることが確認された。【００８６】
［実験例９：化合物４による顔面神経麻痺モデルマウスに対する効果］
齧歯類（ICRマウス、６−８週齢）の顔面神経本幹（3mm）を剖出、幅１ｍｍのMosquito鉗子で３０秒圧迫し、顔面神経麻痺モデルマウスを作出した。手術１時間前（day0）より毎日、化合物４（１０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、麻痺スコアを瞬目（開眼付加〜治癒）、鼻（伸展〜治癒）、口髭（動きなし〜治癒）の各項目において４段階で評価した。その結果を図９に示す。図９Ａにおいて「溶媒」は化合物を添加しない場合の結果を示す。【００８７】
図９Ａは、評価に用いた麻痺スコアを示す。図９Ｂ及びＣは投与日数経時的に麻痺スコアを示す。図Ｂ及びＣに示すように、化合物４の投与により回復が促進される傾向が認められた。【００８８】
［実験例１０：化合物４による脊椎損傷モデルに対する効果］
受精後５日目のゼブラフィッシュの脊髄を眼科用メスで損傷し、化合物４を含む飼育水内で受精後８日目まで飼育した。受精後６日目から８日目まで行動解析により移動距離を測定した結果を図１０に示す。【００８９】
図１０は、脊椎損傷を受けたゼブラフィッシュの泳動距離を行動解析により測定したグラフである。化合物４を飼育水に添加することにより、泳動距離の回復が観察された。この結果から、化合物４はゼブラフィッシュの脊椎損傷モデルにおいて効果があることが示された。【００９０】
［実験例１１：化合物４及び１０によるサイクリンＤ１安定化に対する効果］
ＨＥＫ２９３細胞を、化合物４又は１０で経時的に処理し、サイクリンＤ１の発現量をウエスタンブロッティングにより確認した。その結果を図１１Ａに示す。図１１Ａに示すように、処理時間依存的にサイクリンＤ１タンパク質量の増大（安定化）が認められた。
次に、ヒト皮膚由来繊維芽細胞を溶媒又は化合物４で４８時間処理し、細胞周期をフローサイトメトリーにより解析した。その結果を図１１Ｂに示す。図１１Ｂに示すように、化合物４により細胞周期Ｇ１の細胞割合の減少と、細胞周期Ｇ２／Ｍの細胞割合の増加が認められた。これは、化合物４によりサイクリンＤ１が安定化された結果、細胞周期がＧ１から次の細胞周期Ｓ期，Ｇ２／Ｍ期へ促進されたと考えられる。
上記のようにサイクリンＤ１の発現量の増加（サイクリンＤ１の安定化）及び細胞周期の促進についてのメカニズムの詳細は明らかではないが以下のように推測される。サイクリンＤ１は、細胞周期Ｇ１に発現し、細胞周期開始の鍵分子である。通常の細胞内では、サイクリンＤ１の発現量は、ＤＹＲＫ１Ａによるリン酸化とその後のプロテアソームによる分解とによって低く制御されている。一方、化合物４又は１０によってサイクリンＤ１のリン酸化が阻害されることによってサイクリンＤ１の分解が抑制されてサイクリンＤ１の発現量が増加（サイクリンＤ１が安定化）し、その結果、細胞周期が促進されたと考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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