(57)【要約】  下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）、及び下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）を有することを特徴とするポリマー（式中、ｍは１又は２を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す）。［化１］2018038165.tif 000028
2018038165.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）、及び
下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）
を有することを特徴とするポリマー。
【化１】
2018038165.tif 000024
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【請求項２】
ポリマーの製造方法であって、
下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ１）と下記一般式（１ａ）で表される化合物（１ａ）とを反応させて、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位及び前記繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ２）を得る工程（１）と、
前記ポリマー（Ｐ２）を中性条件下又は弱酸性条件下で加水分解して、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）及び下記一般式（ＩＩ−１）で表される繰り返し単位（ＩＩ−１）を有するポリマーを得る工程（２）と、
を含むことを特徴とするポリマーの製造方法。
【化２】
2018038165.tif 000025
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｒ２は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒａ１１及びＲａ１２はそれぞれ独立にメチル基若しくはエチル基を表す、又はＲａ１１及びＲａ１２は相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【請求項３】
下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ１）と下記一般式（１ａ）で表される化合物（１ａ）とを反応させて、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位及び前記繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ２）を得る工程（１）と、
前記ポリマー（Ｐ２）をアルカリ条件下の加水分解、エステル交換反応、アミノリシス、並びにアルカリ条件下の加水分解及びアミドカップリングからなる群より選ばれる少なくとも１種の処理に付し、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位（Ｉ’）及び下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ３）を得る工程（２ａ）と、
前記ポリマー（Ｐ３）を中性条件下又は弱酸性条件下で加水分解して、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）及び下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）を有するポリマーを得る工程（２ｂ）と、
を含むポリマーの製造方法。
【化３】
2018038165.tif 000026
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｒ２は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒａ１１及びＲａ１２はそれぞれ独立にメチル基若しくはエチル基を表す、又はＲａ１１及びＲａ１２は相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【請求項４】
請求項１に記載のポリマー、及び
前記ポリマーに結合した少なくとも１種の薬物
を含有する薬物複合体。
【請求項５】
下記一般式（Ｉａ）で表される繰り返し単位（Ｉａ）、及び
下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）
を有するポリマーを含有する請求項４に記載の薬物複合体。
【化４】
2018038165.tif 000027
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。ＢＭは活性分子を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【請求項６】
請求項５に記載の薬物複合体を含有するミセル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリマー、ポリマーの製造方法、及び薬物複合体に関する。
本願は、２０１６年８月２３日に日本に出願された、特願２０１６−１６３１３４号に基づき優先権主張し、その内容をここに援用する。
【背景技術】
【０００２】
アルデヒド基又はケトン基を含有するポリマー（以下、「アルデヒド／ケトン含有ポリマー」という場合がある。）は、アミノ基、イミノ基、ヒドラジド基等の官能基を有する生理活性分子を、ｐＨ感受性シッフ塩基形成により結合させるのに用いることが出来る。
また、アルデヒド基含有ポリマーは、カチオン性ポリペプチドのコア架橋にも用いることが出来る。このため、アルデヒド／ケトン含有ポリマーは、薬物送達のキャリアとして、特に医薬分野において注目されている。
アルデヒドをポリマーに導入する方法として、４−ビニルベンズアルデヒドのＲＡＦＴ重合によりアルデヒド導入ポリマーを得る方法が知られている（例えば、非特許文献１〜４参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Synthesis of Aldehyde functionalized and degradable block copolymer and their bioconjugation. Jian-bing Huang, Zhong-peng Xiao, Hui Liang, Jiang Lu, Acta Polymerica SInica, 2015, issue 4, 459-465
【非特許文献２】Synthesis of Functional Core, Star Polymers via RAFT Polymerization for Drug Delivery Applications. Jinna Liu, Hien Duong, Michael R. Whittaker, Thomas P. Davis, Cyrille Boyer, Macromolecular Rapid Communications, Volume 33, Issue 9 Pages, 760-766
【非特許文献３】A Well-Defined Novel Aldehyde-Functionalized Glycopolymer: Synthesis, Micelle Formation, and Its Protein Immobilization. Nai-Yu Xiao, An-Long Li, Hui Liang, and Jiang Lu, Macromolecules, 2008, 41, 2374-2380.
【非特許文献４】Well-defined polymers with activated ester and protected aldehyde side chains for bio-functionalization. Jungyeon Hwang, Ronald C. Li, Heather D. Maynard, Journal of Controlled Release 122 (2007) 279-286
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、非特許文献１〜４の方法では、芳香族アルデヒドしか導入出来ないため、脂肪族アルデヒド、芳香族アルデヒド、脂肪族ケトン及び芳香族ケトンを選択的に導入することが出来ないという問題があった。また、非特許文献１〜４の方法はＲＡＦＴ重合のため、ホモポリマーしか得られず、他の官能基を導入する場合、反応工程が煩雑になるという問題もあった。
非特許文献４では、アセタール基導入メタクリレートが用いられている。しかし、エステル結合を介してベースポリマーに結合しているため、生理的ｐＨ（ｐＨ７．４）では解離してしまい、薬物送達には不適切であった。
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、新規なポリマー、その製造方法、ならびに該ポリマーを含有する薬物複合体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題を解決するために、本発明は以下の構成を採用した。
（１）下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）、及び
下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）
を有することを特徴とするポリマー。【０００６】
【化１】
2018038165.tif 000003
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］【０００７】
（２）  ポリマーの製造方法であって、
下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ１）と下記一般式（１ａ）で表される化合物（１ａ）とを反応させて、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位及び前記繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ２）を得る工程（１）と、
前記ポリマー（Ｐ２）を中性条件下又は弱酸性条件下で加水分解して、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）及び下記一般式（ＩＩ−１）で表される繰り返し単位（ＩＩ−１）を有するポリマーを得る工程（２）と、
を含むことを特徴とするポリマーの製造方法。【０００８】
【化２】
2018038165.tif 000004
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｒ２は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒａ１１及びＲａ１２はそれぞれ独立にメチル基若しくはエチル基を表す、又はＲａ１１及びＲａ１２は相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］【０００９】
（３）  下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ１）と下記一般式（１ａ）で表される化合物（１ａ）とを反応させて、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位及び前記繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ２）を得る工程（１）と、
前記ポリマー（Ｐ２）をアルカリ条件下の加水分解、エステル交換反応、アミノリシス、並びにアルカリ条件下の加水分解及びアミドカップリングからなる群より選ばれる少なくとも１種の処理に付し、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位（Ｉ’）及び下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ３）を得る工程（２ａ）と、
前記ポリマー（Ｐ３）を中性条件下又は弱酸性条件下で加水分解して、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）及び下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）を有するポリマーを得る工程（２ｂ）と、
を含むポリマーの製造方法。【００１０】
【化３】
2018038165.tif 000005
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｒ２は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒａ１１及びＲａ１２はそれぞれ独立にメチル基若しくはエチル基を表す、又はＲａ１１及びＲａ１２は相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］【００１１】
（４）前記（１）に記載のポリマー、及び
前記ポリマーに結合した少なくとも１種の薬物
を含有する薬物複合体。【００１２】
（５）下記一般式（Ｉａ）で表される繰り返し単位（Ｉａ）、及び
下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）
を有するポリマーを含有する前記（４）に記載の薬物複合体。【００１３】
【化４】
2018038165.tif 000006
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。ＢＭは活性分子を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
（６）前記（５）の薬物複合体を含有するミセル。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、脂肪族アルデヒド及び芳香族アルデヒドが選択的に導入された新規なポリマー、その製造方法、ならびに該ポリマーに薬物を結合させた薬物複合体が提供出来る。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、本発明の１実施形態にかかる芳香族アルデヒド基含有ポリマー及び脂肪族アルデヒド基含有ポリマーの合成スキームである。
【図２】図２は、本発明の１実施形態にかかる芳香族アルデヒド基含有ポリマーの中間体であるアセタール基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図３】図３は、本発明の１実施形態にかかる芳香族アルデヒド基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図４】図４は、本発明の１実施形態にかかる脂肪族アルデヒド基含有ポリマーの中間体であるアセタール基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図５】図５は、本発明の１実施形態にかかる脂肪族アルデヒド基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図６Ａ】図６Ａは、合成したデスアセチルビンブラスチン・ヒドラジド（ＤｅｓａｃｅｔｈｙｌＶｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  Ｈｙｄｒａｚｉｄｅ：ＤＡＶＢＮＨ）のＨＰＬＣ分析結果である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ビンブラスチンのＨＰＬＣ分析結果である。
【図７】図７は、本発明の１実施形態にかかるポリマーに、デスアセチルビンブラスチン・ヒドラジド（ＤｅｓａｃｅｔｈｙｌＶｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  ｈｙｄｒａｚｉｄｅ：ＤＡＶＬＢＨ）を結合させる反応のスキーム図である。
【図８Ａ】図８Ａは、本発明の１実施形態にかかるポリマーにＤＡＶＢＮＨを結合させた薬物複合体（ＤＡＶＢＮＨ負荷量１４％）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図８Ｂ】図８Ｂは、本発明の１実施形態にかかるポリマーにＤＡＶＢＮＨを結合させた薬物複合体（ＤＡＶＢＮＨ負荷量２５％）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図８Ｃ】図８Ｃは、本発明の１実施形態にかかるポリマーにＤＡＶＢＮＨを結合させた薬物複合体（ＤＡＶＢＮＨ負荷量３３％）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図９Ａ】図９Ａは、８２．５μｇ／ｍＬのＤＡＶＢＮＨ標準溶液のＨＰＬＣ解析結果である。
【図９Ｂ】図９Ｂは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体を２０回希釈条件で酸処理して薬物複合体から放出されたＤＡＶＢＮＨのＨＰＬＣ解析結果である。
【図１０Ａ】図１０Ａは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（ＤＡＶＢＮＨ負荷量１４％）のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（ＤＡＶＢＮＨ負荷量２５％）のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（ＤＡＶＢＮＨ負荷量３３％）のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図１１】図１１は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の脳腫瘍細胞に対する細胞毒性試験の結果である。
【図１２】図１２は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の血中動態試験の結果である。血中濃度は、薬物複合体の標識に用いたＡｌｅｘａ−６４７の蛍光強度により求め、投与時の蛍光強度を１００としたときの相対蛍光強度で示した。
【図１３Ａ】図１３Ａは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍試験の結果（腫瘍サイズの経時変化を示すグラフ）である。投与時の値を１としたときの相対値で示した。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍試験の結果（体重の経時変化を示すグラフ）である。投与時の値を１としたときの相対値で示した。
【図１４】図１４は、本発明の１実施形態にかかる芳香族ケトン基含有ポリマー及び脂肪族ケトン基含有ポリマーの合成スキームである。
【図１５】図１５は、本発明の１実施形態にかかる脂肪族ケトン基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１６】図１６は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図１７】図１７は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体のｐＨ感受性薬剤リリースプロファイルを示すグラフである。
【図１８】図１８は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体のｐＨ感受性薬剤リリースプロファイルを示すグラフである。
【図１９】図１９は、ＤＡＶＢＮＨをマウスに投与した場合のマウスの体重の経時変化を示すグラフである。
【図２０】図２０は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体をマウスに投与した場合のマウスの体重の経時変化を示すグラフである。
【図２１Ａ】図２１Ａは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体をマウスに投与した場合の生存率の経時変化を示すグラフである。
【図２１Ｂ】図２１Ｂは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体をマウスに投与した場合の体重の経時変化を示すグラフである。
【図２２】図２２は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍試験の結果である。
【図２３】図２３は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍試験の結果である。
【図２４】図２４は、Ｋ２５２ａ及びＫ２５２ａヒドラジド（Ｋ２５２ａ−Ｈ）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２５】図２５は、Ｋ２５２ａ及びＫ２５２ａ−ＨのＨＰＬＣ分析結果である。
【図２６Ａ】図２６Ａは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル）のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図２６Ｂ】図２６Ｂは、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（Ｋ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセル）のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図２７】図２７は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の紫外吸収スペクトルである。
【図２８】図２８は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体をｐＨ１水性緩衝液処理後のサンプルのＨＰＬＣ分析結果である。
【図２９】図２９は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の肺癌細胞に対する細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図３０】図３０は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の肺癌細胞に対する細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図３１】図３１は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の膵癌細胞に対する細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図３２】図３２は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の頭頸部癌細胞に対する細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図３３】図３３は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の中皮腫細胞に対する細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図３４】図３４は、ＪＱ−１及びＪＱ−１ヒドラジド（ＪＱ−１−Ｈ）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図３５】図３５は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（ＪＱ−１−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル）の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図３６】図３６は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（ＪＱ−１−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル）のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図３７】図３７は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体（ＪＱ−１−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセル）のミセルサイズと、分散度（Ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ：ＰＤＩ）の解析結果である。
【図３８】図３８は、本発明の１実施形態にかかる薬物複合体の肺癌細胞に対する細胞毒性試験の結果を示すグラフである。
【図３９Ａ】図３９Ａは、第１〜第３世代ＴＫＩと、その耐性変異を示す図である。
【図３９Ｂ】図３９Ｂは、第１〜第３世代ＴＫＩと、その耐性変異を示す図である。
【図４０】図４０は、ＥＧＦＲ変異に対するＫ２５２ａ−Ｈのキナーゼアッセイ結果を示す図である。
【図４１Ａ】図４１Ａは、キナーゼプロファイリングの結果を示す図である。
【図４１Ｂ】図４１Ｂは、キナーゼプロファイリングの結果を示す図である。
【図４１Ｃ】図４１Ｃは、キナーゼプロファイリングの結果を示す図である。
【図４２】図４２は、Ｋ２５２ａ−Ｈによりキナーゼ活性が３０％以下に抑制された突然変異キナーゼの一覧を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
［第１の態様］
＜ポリマー＞
本実施形態のポリマーは、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）、及び
下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）
を有する。
【００１７】
【化５】
2018038165.tif 000007
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【００１８】
前記一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、ｍは１又は２であり、１が好ましい。
前記一般式（Ｉ）中、Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。
Ｌの２価の芳香族炭化水素基としては、フェニレン基、ベンジレン基等が挙げられる。
Ｌの２価の芳香族炭化水素基は、置換基を有していてもよい。該置換基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ニトロ基、ハロゲン化物等が挙げられる。
Ｌの２価の脂肪族炭化水素基としては、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基等が挙げられる。Ｌの２価の脂肪族炭化水素基は、置換基を有していてもよい。
該置換基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ハロゲン化物等が挙げられる。
中でも、Ｌとしては、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ベンジレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基又はベンジレン基がより好ましい。
【００１９】
前記一般式（Ｉ）中、Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。
Ｒ１の脂肪族炭化水素基としては、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基等が挙げられる。Ｒ１の脂肪族炭化水素基は、置換基を有していてもよい。該置換基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、シクロヘキシル基、トリハロメチル基等が挙げられる。
Ｒ１の芳香族炭化水素基としては、フェニル基、ベンジル基、ピリジル基、ナフチル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェニル基、エトキシフェニル基、キシリル基、メチルフェニル基、ニトロフェニル基、クロロフェニル基、フロオロフェニル基、ヨードフェニル基、ブロモフェニル基等が挙げられる。
なかでも、Ｒ１としては、水素原子又は脂肪族炭化水素基が好ましく、水素原子又はメチル基がより好ましい。
【００２０】
前記一般式（Ｉ）中、ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。
前記一般式（Ｉ）中、Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘの脂肪族炭化水素基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、シクロヘキシル基、トリフルオロメチル基等が挙げられる。
Ｒｘの芳香族炭化水素基としては、フェニル基、ベンジル基、ピリジル基、ナフチル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェニル基、エトキシフェニル基、キシリル基、メチルフェニル基、ニトロフェニル基、クロロフェニル基、フロオロフェニル基、ヨードフェニル基、ブロモフェニル基等が挙げられる。
Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。
Ｒｘ１及びＲｘ２の脂肪族炭化水素基としては、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、シクロヘキシル基、トリハロメチル基挙げられる。
Ｒｘ１及びＲｘ２の芳香族炭化水素基としては、フェニル基、ベンジル基、ピリジル基、ナフチル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェニル基、エトキシフェニル基、キシリル基、メチルフェニル基、ヒトロフェニル基、クロロフェニル基、フロオロフェニル基、ヨードフェニル基、ブロモフェニル基等が挙げられる。
中でも、ＸとしてはＯＲｘが好ましく、ＯＨ（ヒドロキシ基）がより好ましい。
【００２１】
本実施形態のポリマーは、前記繰り返し単位（Ｉ）及び（ＩＩ）以外の他の繰り返し単位（以下、「繰り返し単位（ＩＩＩ）」という場合がある）を有していてもよい。
繰り返し単位（ＩＩＩ）としては、親水性の繰り返し単位が好ましく、例えば、ポリエチレングリコールから誘導される繰り返し単位、ポリ（エチルエチレンホスフェート）から誘導される繰り返し単位、ポリビニルアルコールから誘導される繰り返し単位、ポリビニルピロリドンから誘導される繰り返し単位、ポリ（オキサゾリン）から誘導される繰り返し単位、ポリ（Ｎ−(２−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド）（ＰＨＰＭＡ）から誘導される繰り返し単位等が挙げられる。中でも、繰り返し単位（ＩＩＩ）としては、ポリエチレングリコールから誘導される繰り返し単位が好ましい。
【００２２】
本実施形態において、繰り返し単位（Ｉ）〜（ＩＩＩ）の含有量は特に限定されない。
繰り返し単位（Ｉ）の含有量は、ポリマーを構成する全繰り返し単位の合計（１００モル％）に対し、５〜１００モル％が好ましく、１０〜８０モル％がより好ましく、２０〜５０モル％が更に好ましい。
繰り返し単位（ＩＩ）の含有量は、ポリマーを構成する全繰り返し単位の合計（１００モル％）に対し、０〜８０モル％が好ましく、１０〜６０モル％がより好ましく、２０〜４０モル％が更に好ましい。
繰り返し単位（ＩＩＩ）の含有量は、ポリマーを構成する全繰り返し単位の合計（１００モル％）に対し、０〜９５モル％が好ましく、２０〜９０モル％がより好ましく、５０〜８０モル％が更に好ましい。
【００２３】
本実施形態のポリマーの分子量は、２０００〜１００００００Ｄが好ましく、５０００〜１０００００Ｄがより好ましく、１００００〜４００００Ｄがさらに好ましい。
【００２４】
＜ポリマーの製造方法（１）＞
本実施形態のポリマーの製造方法（以下、「製造方法（１）」という場合がある）は、下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ１）と下記一般式（１ａ）で表される化合物（１ａ）とを反応させて、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位及び前記繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ２）を得る工程（１）と、前記ポリマー（Ｐ２）を弱酸性条件下で加水分解して、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）及び下記一般式（ＩＩ−１）で表される繰り返し単位（ＩＩ−１）を有するポリマーを得る工程（２）と、を含む。
【００２５】
【化６】
2018038165.tif 000008
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｒ２は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒａ１１及びＲａ１２はそれぞれ独立にメチル基若しくはエチル基を表す、又はＲａ１１及びＲａ１２は相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【００２６】
前記式一般式（Ｉ’）、（ＩＩ’）、（Ｉ）及び（ＩＩ−１）中、ｍ、Ｌ、Ｒ１及びＲｘは前記一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）中のｍ、Ｌ、Ｒ１及びＲｘと同様である。
前記一般式（１ａ）及び（Ｉ’）中、Ｒａ１１及びＲａ１２はそれぞれ独立にメチル基若しくはエチル基を表す、又はＲａ１１及びＲａ１２は相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す。Ｒａ１１及びＲａ１２が相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す場合、化合物（１ａ）は環状アセタール又は環状ケタールとなる。
前記一般式（１ａ）中、ｎ１及びｎ２はそれぞれ独立に０又は１であり、１が好ましい。
【００２７】
（工程（１））
製造方法（１）の工程（１）は、ポリマー（Ｐ１）と化合物（１ａ）とのアミノリシス反応である。工程（１）により、ポリマー（Ｐ１）の側鎖に化合物（１ａ）のアセタール構造又はケタール構造が導入される。
工程（１）の反応温度は、ポリマー（Ｐ１）の側鎖に化合物（１ａ）のアセタール構造又はケタール構造が導入される条件であれば特に限定されないが、通常４℃〜１００℃であり、室温〜４０℃が好ましい。
工程（１）の反応時間は、ポリマー（Ｐ１）の側鎖に化合物（１ａ）のアセタール構造又はケタール構造が導入される条件であれば特に限定されず、反応時間、化合物（１ａ）の種類や量によって選択できるが、通常４時間〜５日間である。
【００２８】
（工程（２））
製造方法（１）の工程（２）において、ポリマー（Ｐ２）を中性条件下又は弱酸性条件下で加水分解し、ポリマー（Ｐ２）の繰り返し単位（Ｉ’）のアセタール構造をアルデヒド、又はケタール構造をケトンに変換する。
加水分解は、ポリマー（Ｐ２）の繰り返し単位（Ｉ’）のアセタール構造をアルデヒド、又はケタール構造をケトンに変換できる条件であれば特に限定されない。例えば、（ｉ）０．１Ｎ塩酸で３０分程度処理する方法、（ｉｉ）アセトン及びインジウム（ＩＩＩ）トリフルオロメタンスルホネート（触媒）の存在下で処理する方法、（ｉｉｉ）３０℃の水中で触媒量のテトラキス（３，５−トリフルオロメチルフェニル）ホウ酸ナトリウムを用いる方法、（ｉｖ）室温でウェットニトロメタン中、１〜５モル％のＥｒ（ＯＴｆ）３を用いる方法、（ｖ）ほぼ中性のｐＨ条件下、室温でウェットニトロメタン中、触媒量のセリウム（ＩＩＩ）トリフレートを用いる方法等、公知の方法が挙げられる。
【００２９】
＜ポリマーの製造方法（２）＞
本実施形態のポリマーの製造方法（以下、「製造方法（２）」という場合がある）は、下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ１）と下記一般式（１ａ）で表される化合物（１ａ）とを反応させて、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位及び前記繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ２）を得る工程（１）と、
前記ポリマー（Ｐ２）をアルカリ条件下の加水分解、エステル交換反応、アミノリシス、並びにアルカリ条件下の加水分解及びアミドカップリングからなる群より選ばれる少なくとも１種の処理に付し、下記一般式（Ｉ’）で表される繰り返し単位（Ｉ’）及び下記一般式（ＩＩ’）で表される繰り返し単位（ＩＩ’）を有するポリマー（Ｐ３）を得る工程（２ａ）と、
前記ポリマー（Ｐ３）を中性条件下又は弱酸性条件下で加水分解して、下記一般式（Ｉ）で表される繰り返し単位（Ｉ）及び下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）を有するポリマーを得る工程（２ｂ）と、
を含む。
【００３０】
【化７】
2018038165.tif 000009
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｒ２は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒａ１１及びＲａ１２はそれぞれ独立にメチル基若しくはエチル基を表す、又はＲａ１１及びＲａ１２は相互に結合してエチレン基若しくはプロピレン基を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【００３１】
前記一般式（Ｉ’）、（ＩＩ’）、（Ｉ）及び（ＩＩ）中、ｍ、Ｌ，Ｘ、Ｒｘ、Ｒｘ１及びＲｘ２は、前記一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）中のｍ、Ｌ，Ｘ、Ｒｘ、Ｒｘ１及びＲｘ２と同様である。
前記一般式（１ａ）及び（Ｉ’）中、Ｒ１、Ｒａ１１、Ｒａ１２は前記と同様である。
【００３２】
（工程（１））
製造方法（２）の工程（１）は、製造方法（１）の工程（１）と同様である。
【００３３】
（工程（２ａ））
製造方法（２）の工程（２ａ）では、ポリマー（Ｐ２）を所定の処理に付すことにより、繰り返し単位（Ｉ’）がアセタール構造で保護された状態で、繰り返し単位（ＩＩ’）の側鎖に所望の官能基を導入することができる。
アルカリ条件下の加水分解は、例えば、０．５ＮのＮａＯＨ溶液とＤＭＳＯとの混合物（体積比：５０／５０）中、室温で３０分処理する方法、ＤＭＳＯ中トリエチルアミンで室温にて１時間処理する方法、ＤＭＳＯ中ジイソプロピルエチルアミンで室温にて１時間処理する方法等が挙げられる。アルカリ条件下の加水分解により得られるカルボン酸残基は、後述するミセルのコア中のプロトンを引き寄せ、ヒドラゾン結合の加水分解を容易にし、低ｐＨ条件下において生体材料の放出を可能とする。
アミノリシスは、例えば、エチレンジアミン又はジアミノプロパンによりエステルを開裂してアミノ官能基を導入することができる。アミノ基導入により、蛍光色素と結合させることができる。また、他のカルボン酸基を有する画像診断剤と、公知のアミノカップリングに付すこともできる。アセタール構造及びケタール構造は、このようなアミノ基導入条件下では安定なので、ポリマーの多官能ナノキャリアデザインに供することができる。
アルカリ条件下の加水分解及びアミドカップリングは、例えば、アルカリ条件下の加水分解によりエステル残基を処理後、生成したカルボン酸をエステル交換反応もしくは公知のカップリング剤を用いたアミドカップリングに付すことができる。ヒドロキシ／アミン官能基による適切な構造モチーフにより、ポリマーの親水性／疎水性のバランスを所望のものとすることができ、極性又は非極性溶媒中での自己組織化に寄与する。
【００３４】
（工程（２ｂ））
製造方法（２）の工程（２ｂ）において、ポリマー（Ｐ３）を弱酸性条件下で加水分解し、ポリマー（Ｐ３）の繰り返し単位（Ｉ’）のアセタール構造をアルデヒドに変換する。加水分解の条件は、製造方法（１）の工程（２）と同様である。
【００３５】
＜薬物複合体＞
本実施形態の薬物複合体は、前記ポリマー、及び前記ポリマーに結合した少なくとも１種の薬物を含有する。
前記薬物は、特に限定されず、所望の活性を有する薬物を結合させることができる。なお、本明細書において、前記薬物は、「活性分子」と表記されることもある。ここで、活性分子とは、何らかの生理学的又は化学的活性を有する分子をいう。活性分子が有する生理学的活性又は化学的活性の種類は特に限定されず、医薬品の有効成分として公知の化合物が有する生理活性や、体内に投与されて使用される診断薬が有する化学的又は生理学的活性を含み得る。前記薬物（活性分子）の例としては、例えば、抗癌剤、シグナル伝達阻害剤、代謝拮抗剤、鎮痛剤、抗炎症剤、造影剤等が挙げられるが、これらに限定されない。抗癌剤としては、例えば、ビンブラスチンなどのビンカアルカロイド、ＯＳＵ−０３０１２などのＣＯＸ−２選択的非ステロイド性抗炎症剤、（＋）−ＪＱ１などのＢＥＴブロモドメイン阻害剤、Ｋ２５２Ａなどのスタウロスポリン類縁体、ヒドララジンなどの脱メチル化剤、ベンダムスチン及びクロラムブシルなどのアルキル化剤、ＡＺＤ３９などのファシネルトランスフェラーゼ阻害剤、フルルビプロフェンなどの非ステロイド系抗炎症剤等を挙げることができる。前記ポリマーとの薬物複合体とすることにより、副作用により用量が制限される抗癌剤のような薬物であっても、副作用の緩和が期待できる。そのため、そのような薬物は、前記ポリマーと結合させる薬物の好適な例である。そのような薬物の例としては、例えば、ビンブラスチンなどのビンカアルカロイド系化合物を挙げることができる。
なかでも、前記薬物としては、ビンブラスチンなどのビンカアルカロイド、Ｋ２５２Ａなどのスタウロスポリン類縁体、（＋）−ＪＱ１などのＢＥＴブロモドメイン阻害剤が好ましい。
【００３６】
前記ポリマーと前記薬物との結合は、前記薬物にアルデヒド基とシッフ塩基を形成し得る窒素原子含有基（以下、「シッフ塩基形成基」という場合がある）がある場合には、当該シッフ塩基形成基と、前記ポリマーの繰り返し単位（Ｉ）に含まれるアルデヒド基とを反応させることにより行うことができる。そのようなシッフ塩基としては、例えば、アミノ基、イミノ基、ヒドラジド基等が挙げられる。また。前記薬物がシッフ塩基形成基を有しない場合には、シッフ塩基形成基を当該薬物に導入すればよい。シッフ塩基形成基の導入は、公知の方法により行うことができる。
【００３７】
例えば、ビンブラスチンにはシッフ塩基形成基が存在しないため、ヒドラジド基を導入してデスアセチルビンブラスチン・ヒドラジド（ＤＡＶＢＮＨ）とすることにより、前記ポリマーに結合させることができる。また、Ｋ２５２Ａなどのスタウロスポリン類縁体、ＢＥＴブロモドメインインヒビター（＋）−ＪＱ１についても、同様の方法によりシッフ塩基形成基を導入することが出来る。
【００３８】
本実施形態の薬物複合体は、下記一般式（Ｉａ）で表される繰り返し単位（Ｉａ）、及び下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）を有するポリマーであることが好ましい。
【００３９】
【化８】
2018038165.tif 000010
［式中、ｍは１又は２を表す。Ｌは２価の芳香族炭化水素基又は２価の脂肪族炭化水素基を表す。Ｒ１は水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。ＢＭは活性分子を表す。ＸはＯＲｘ、ＳＲｘ又はＮＲｘ１Ｒｘ２を表す。Ｒｘは水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。Ｒｘ１及びＲｘ２はそれぞれ独立に水素原子、脂肪族炭化水素基又は芳香族炭化水素基を表す。］
【００４０】
前記一般式（Ｉａ）及び（ＩＩ）中、ｍ、Ｌ、Ｒ１、Ｘ、Ｒｘ、Ｒｘ１及びＲｘ２は、前記一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）中のｍ、Ｌ、Ｒ１、Ｘ、Ｒｘ、Ｒｘ１及びＲｘ２と同様である。
前記一般式（Ｉａ）中、ＢＭは活性分子を表す。活性分子としては、前記薬物において例示した化合物等が挙げられる。
【００４１】
本実施形態の薬物複合体によれば、種々の薬物をポリマーに担持して生体内に搬送できる。前記ポリマーでは、導入するアルデヒド基又はケトン基の量を制御することができ、アルデヒド基又はケトン基に結合させる薬物の量も制御することができる。そのため、薬剤投与量を適切に制御することができる。
また、前記ポリマーにおいては、導入するアルデヒド基又はケトン基を、芳香族アルデヒド基、脂肪族アルデヒド基、芳香族ケトン基、脂肪族ケトン基から選択することができる。
芳香族アルデヒド基又は芳香族ケトン基のシッフ塩基は、脂肪族アルデヒド基又は脂肪族ケトン基のシッフ塩基よりも安定であるため、芳香族アルデヒド基を導入した場合には、薬物がより安定に保持される。そのため、疾患の状態や薬物の種類により、導入するアルデヒド基又はケトン基の種類を選択することにより、薬物の徐放性を制御することができる。さらに、本実施形態の薬物複合体では、薬物が前記ポリマーに保持されている間、薬物は安定に維持され、毒性も緩和されるため、副作用を軽減して治療効果を高めることができる。
【００４２】
前記薬物複合体は、そのまま生体に投与することもできるが、公知の手法により、適宜他の成分と混合して製剤化されてもよい。したがって、本発明はまた、前記薬物複合体を含む医薬組成物も提供する。前記薬物複合体が製剤化される場合、剤型は特に限定されず、乳剤、エマルション剤、液剤、ゲル状剤、カプセル剤、軟膏剤、貼付剤、バップ剤、顆粒剤、錠剤、造影剤等とすることができる。また、前記薬物複合体は、ミセルの形態としてもよい。前記薬物複合体を含有するミセルは、公知の手法により調製することができる。例えば、前記薬物複合体を親油性又は親水性の溶媒に溶解又は懸濁し、当該溶解液又は懸濁液を親水性又は親油性の溶媒に滴下して撹拌することにより、前記薬物複合体を含有するミセルを調製することができる。
前記薬物複合体を含む医薬組成物は、任意に前記薬物複合体の他の成分を含んでもよい。他の成分は、医薬品分野において一般的に使用される成分を特に制限なく使用することができる。例えば、前記医薬組成物は、前記薬物複合体を薬学的に許容される担体に溶解又は懸濁したものであってもよい。薬学的に許容される担体としては、医薬分野において常用されるものを特に制限なく使用することができ、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、ＤＭＳＯ、ジメチルアセトアミド、エタノール、グリセロール、ミネラルオイル等を挙げることができる。また、他の成分としては、その他に、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、安定剤、抗酸化剤、浸透圧調整剤、防腐剤、着色剤、香料等が挙げられる。
【００４３】
前記医薬組成物の投与経路は、特に限定されず、経口又は非経口経路で投与することができる。なお、非経口経路は、経口以外の全ての投与経路、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、鼻腔内、皮内、点眼、脳内、直腸内、腟内及び腹腔内等への投与を包含する。また、投与は、局所投与であっても全身投与であってもよい。
前記医薬組成物は、単回投与又は複数回投与を行うことが可能であり、その投与期間及び間隔は、薬物の種類、疾患の種類及び状態等、投与経路、投与対象の年齢、体重及び性別等によって、適宜選択することができる。
前記医薬組成物の投与量は、その投与期間及び間隔は、薬物の種類、疾患の種類及び状態等、投与経路、投与対象の年齢、体重及び性別等によって、適宜選択することができる。前記医薬組成物の投与量は、治療的有効量とすることができ、例えば、１回につき体重１ｋｇあたり０．０１〜１０００ｍｇ程度とすることができる。
【００４４】
また、本実施形態の薬物複合体は、特にミセルの形態とした場合、ｐＨ感受性薬剤リリースの特性を示す。特に、生体内の環境を考えると、酸性化しているがんの周辺環境（ｐＨ６．６）および細胞質内に取り込まれた後エンドソーム（ｐＨ５）での薬剤リリースは、脂肪族アルデヒド基又は脂肪族ケトン基を導入した薬物複合体が優れている。
したがって、ビンブラスチン等の毒性の高い薬剤を用いる場合、ｐＨ５〜６．６での薬剤リリースが緩やかな芳香族アルデヒド基又は芳香族ケトン基を導入した薬物複合体が好ましい。一方、Ｋ２５２ａやＪＱ−１等の比較的毒性の低い薬剤を用いる場合、ｐＨ５〜６．６での薬剤リリースが速い脂肪族アルデヒド基又は脂肪族ケトン基を導入した薬物複合体が好ましい。
【００４５】
また、本実施形態の薬物複合体は、特にミセルの形態とした場合、薬物が前記ポリマーに保持されている間、薬物は安定に維持され、毒性も緩和されるため、副作用を軽減できる。そのため、本実施形態の薬物複合体のミセルは、薬剤単体よりも最大耐性用量（ＭＴＤ）が伸びる。
【００４６】
［第２の態様］
＜化合物＞
本発明の第２の態様にかかる化合物（以下、「化合物（Ｋ）」という場合がある。）は、下記一般式（ｋ１）で表される化合物である。
【００４７】
【化９】
2018038165.tif 000011
［式中、Ｒｋ１及びＲｋ２は同じまたは異なる残基であり、
（ａ）水素、ハロゲン、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキニル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、アシル、ニトロ、カルバモイル、低級アルキルアミノカルボニル、−ＮＲ５Ｒ６［ここで、Ｒ５およびＲ６は、水素、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリール、置換もしくは非置換のアラルキル、置換もしくは非置換の低級アルキルアミノカルボニル、置換もしくは非置換の低級アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、アシルからそれぞれ独立に選択されるか、またはR5およびR6は、ヘテロ環式基由来の窒素原子と結合している]、
（ｂ）−ＣＯ（ＣＨ２）ｊＲ４［ここで、ｊは１から６であり、Ｒ４は、
（ｉ）水素、ハロゲン、−Ｎ３、
（ｉｉ）−ＮＲ５Ｒ６（ここで、Ｒ５およびＲ６は上記に定義されたとおりである）、
（ｉｉｉ）−ＳＲ７（ここで、Ｒ７は、水素、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリール、置換もしくは非置換のアラルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｒ１０（ここで、ａは、１または２であり、Ｒ１０は、水素および置換もしくは非置換の低級アルキルからなる群から選択される）および−（ＣＨ２）ａＣＯ２ＮＲ５Ｒ６、
（ｉｖ）−ＯＲ８、−ＯＣＯＲ８（ここで、Ｒ８は、水素、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリールから選択される）
からなる群から選択される］、
（ｃ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ｊＲ４（ここで、ｊおよびＲ４は、上記に定義したとおりである）；
（ｄ）−（ＣＨ２）ｄＣＨＲ１１ＣＯ２Ｒ１２または−（ＣＨ２）ｄＣＨＲ１１ＣＯＮＲ５Ｒ６（ここで、ｄは、０から５であり、Ｒ１１は、水素、−ＣＯＮＲ５Ｒ６、または−ＣＯ２Ｒ１３であり、Ｒ１３は、水素または置換もしくは非置換の低級アルキルであり、Ｒ１２は、水素または置換もしくは非置換の低級アルキルである）；
（ｅ）−（ＣＨ２）ｋＲ１４［ここで、ｋは２から６であり、Ｒ１４は、ハロゲン、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＯＯＲ１５、−ＯＲ１５（ここで、Ｒ１５は、水素、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリールまたはアシルである）、−ＳＲ７（ここで、Ｒ７は、上記に定義したとおりである）、−ＣＯＮＲ５Ｒ６、−ＮＲ５Ｒ６（ここで、Ｒ５およびＲ６は、上記に定義したとおりである）または−Ｎ３である］；
（ｆ）−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｍ1Ｒ１６［ここで、ｍ１は、０から４であり、Ｒ１６は、水素、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換の低級アルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキニル、置換もしくは非置換のアリール、置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＯＯＲ１５、−ＯＲ１５（ここで、Ｒ１５は上記に定義したとおりである）、−ＣＯＮＲ５Ｒ６または−ＮＲ５Ｒ６（ここで、Ｒ５およびＲ６は上記に定義したとおりである）］；
（ｇ）−ＣＨ＝Ｃ（ＣＯ２Ｒ１２）２（ここで、Ｒ１２は、上記に定義したとおりである）；
（ｈ）−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）ｎＲ１６（ここで、ｎは０から４であり、Ｒ１６は、上記に定義したとおりである）；
（ｉ）−ＣＨ２ＯＲ２２（ここで、Ｒ２２は、３個の低級アルキル基が同じかもしくは異なっているトリ−低級アルキルシリルであるか、またはＲ２２は、Ｒ８と同じ意味を有する）；
（ｊ）−ＣＨ（ＳＲ２３）２および−ＣＨ２−ＳＲ７（ここで、Ｒ２３は、低級アルキル、低級アルケニルまたは低級アルキニルであり、Ｒ７は、上記に定義したとおりである）
からなる群から、それぞれ独立して、選択され；
Ｒｋ３は、水素、ハロゲン、アシル、カルバモイル、置換もしくは非置換の低級アルキル、置換もしくは非置換のアルケニル、置換もしくは非置換の低級アルキニルまたはアミノであり;
Ｗｋ１およびＷｋ２は、独立して、水素、ヒドロキシであるか、またはＷｋ１およびＷｋ２は一緒に酸素を表す。］
【００４８】
用語「低級アルキル」は、単独で用いられるかまたは他の基と合わせて用いられる場合、１〜６個の炭素原子、好ましくは１〜５個、より好ましくは１〜４個、特に好ましくは１〜３個または１〜２個の炭素原子を含む直鎖または分岐の低級アルキル基を意味する。これらの基には、特に、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、アミル、イソアミル、ネオペンチル、１−エチルプロピル、ヘキシルなどがある。「低級アルコキシ」、「低級アルコキシカルボニル」、「低級アルキルアミノカルボニル」、「低級ヒドロキシアルキル」および「トリ−低級アルキルシリル」の低級アルキル部分は、上記に定義した「低級アルキル」と同じ意味を有する。
【００４９】
「低級アルケニル」基は、直鎖または分岐であってもよく、Ｚ型またはＥ型であってもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル基として定義する。このような基には、ビニル、プロペニル、１−ブテニル、イソブテニル、２−ブテニル、１−ペンテニル、（Ｚ）−２−ペンテニル、（Ｅ）−２−ペンテニル、（Ｚ）−４−メチル−２−ペンテニル、（Ｅ）−４−メチル−２−ペンテニル、ペンタジエニル、例えば、１，３または２，４−ペンタジエニルなどがある。より好ましいＣ２〜Ｃ６−アルケニル基は、Ｃ２〜Ｃ５−、Ｃ２〜Ｃ４−アルケニル基、さらにより好ましくはＣ２〜Ｃ３−アルケニル基である。
【００５０】
用語「低級アルキニル」基は、直鎖または分岐であってもよいＣ２〜Ｃ６−アルキニル基を意味し、エチニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ペンチニル、３−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニルなどがある。より好ましいＣ２〜Ｃ６−アルキニル基は、Ｃ２〜Ｃ５−、Ｃ２〜Ｃ４−アルキニル基、さらにより好ましくはＣ２〜Ｃ３−アルキニル基である。
【００５１】
用語「アリール」基は、６から１４個までの環状炭素原子を含むＣ６〜Ｃ１４−アリール基を意味する。これらの基は、単環式、二環式、または三環式であってもよく、縮合環である。好ましいアリール基には、フェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナンスレニルなどがある。「アリールカルボニル」基および「アリールアミノカルボニル」基のアリール部分は、上記定義と同じ意味を有する。
【００５２】
用語「ヘテロアリール」基は、窒素、硫黄または酸素から独立して選択される１から３個のヘテロ原子を含み得、Ｃ３〜Ｃ１３−ヘテロアリール基をいう。これらの基は、単環式、二環式または三環式であってもよい。本発明のＣ３〜Ｃ１３ヘテロアリール基には、ヘテロ芳香族、ならびに飽和および部分飽和ヘテロ環基などがある。これらのヘテロ環は、単環式、二環式、三環式であってもよい。好ましい５または６員ヘテロ環基は、チエニル、フリル、ピロリル、ピリジル、ピラニル、モノホリニル、ピラジニル、メチルピロリル、およびピリダジニルである。Ｃ３〜Ｃ１３−ヘテロアリールは、二環式ヘテロ環基であってもよい。好ましい二環式ヘテロ環基は、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、インドリル、イミダゾリル、およびピリミジニルである。最も好ましいＣ３〜Ｃ１３−ヘテロアリールは、フリルおよびピリジルである。
【００５３】
用語「低級アルコキシ」には、１から６個の炭素原子、好ましくは１から５個、より好ましくは１から４個、特に好ましくは１から３個または１から２個の炭素原子を含むアルコキシ基が含まれ、直鎖または分岐であってもよい。これらの基には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、イソプロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどがある。
【００５４】
用語「アシル」には、１から６個の炭素原子、好ましくは１から５個、１から４個、１から３個または１から２個の炭素原子を含む低級アルカノイルが含まれ、直鎖または分岐であってもよい。これらの基には、好ましくは、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ｔｅｒｔ−ブチリル、ペンタノイルおよびヘキサノイルなどがある。「アシルオキシ」基のアシル部分は、上記定義と同じ意味を有する。
【００５５】
用語「ハロゲン」には、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨードなどがある。
【００５６】
用語「アラルキル」基は、アルキル基がアリールによって置換されているＣ７〜Ｃ１５−アラルキルをいう。該アルキル基およびアリールは、上記に定義したＣ１〜Ｃ６−アルキル基およびＣ６〜Ｃ１４−アリール基から選択することができ、ここで、炭素原子の総数は７から１５個である。好ましいＣ７〜Ｃ１５−アラルキル基は、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、フェニルイソプロピル、フェニルブチル、ジフェニルメチル、１，１−ジフェニルエチル、１，２−ジフェニルエチルである。「アラルキルオキシ」基のアラルキル部分は、上記定義と同じ意味を有する。
【００５７】
置換低級アルキル基、置換低級アルケニル基、および置換低級アルキニル基は、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、ニトロ、ハロゲン、アミノ、モノまたはジ低級アルキルアミノ、ジオキソラン、ジオキサン、ジチオラン、およびジチオンなどの独立して選択される１から３個の置換基を有する。置換低級アルキル基、置換低級アルケニル基および置換低級アルキニル基の低級アルキル置換部分、ならびに置換低級アルキル基、置換低級アルケニル基および置換低級アルキニル基の低級アルコキシ置換基、低級アルコキシカルボニル置換基、モノまたはジ低級アルキルアミノ置換基の低級アルキル部分は、上記に定義した「低級アルキル」と同じ意味を有する。
【００５８】
置換アリール基、置換ヘテロアリール基および置換アラルキル基はそれぞれ、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、ニトロ、アミノ、モノまたはジ低級アルキルアミノ、およびハロゲンなどの独立して選択される１から３個の置換基を有する。
【００５９】
窒素原子と結合したＲ５およびＲ６によって形成されるヘテロ環基には、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペリジノ、モルホリニル、モルホリノ、チオモルホリノ、Ｎ−メチルピペラジニル、インドリル、およびイソインドリルなどがある。
【００６０】
α−アミノ酸基には、グリシン、アラニン、プロリン、グルタミン酸およびリジンなどがあり、Ｌ−型、Ｄ−型またはラセミ体の型であってもよい。
【００６１】
好ましくは、Ｒｋ１およびＲｋ２は、水素、ハロゲン、ニトロ、−ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｋＲ１４、−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｍＲ１６、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）ｎＲ１５、−ＣＯ（ＣＨ２）ｊＲ４（ここで、Ｒ４は−ＳＲ７である）、ＣＨ２Ｏ−（置換または非置換の）低級アルキル（ここで、置換低級アルキルは、好ましくは、メトキシメチル、メトキシエチルまたはエトキシメチルである）、−ＮＲ５Ｒ６からなる群から独立して選択される。より好ましくは、Ｒｋ１およびＲｋ２は、水素である。
【００６２】
Ｒｋ１およびＲｋ２の上記好ましい意味において、残基Ｒ１４は、好ましくは、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、チアゾリル、テトラゾリル、−ＣＯＯＲ１５、−ＯＲ１５（ここで、Ｒ１５は、好ましくは、水素、メチル、エチル、フェニルまたはアシルから選択される）、−ＳＲ７（ここで、Ｒ７は、好ましくは、置換または非置換の低級アルキル、２−チアゾリンおよびピリジルから選択される）および−ＮＲ５Ｒ６（ここで、Ｒ５およびＲ６は、好ましくは、水素、メチル、エチル、フェニル、カルバモイルおよび低級アルキルアミノカルボニルから選択される）から選択される。さらに、残基Ｒ１６は、好ましくは、水素、メチル、エチル、フェニル、イミダゾール、チアゾール、テトラゾール、−ＣＯＯＲ１５、−ＯＲ１５および−ＮＲ５Ｒ６（ここで、残基Ｒ１５、Ｒ５およびＲ６は、上記した好ましい意味を有する）から選択される。Ｒｋ１およびＲｋ２の上記好ましい意味において、残基Ｒ７は、好ましくは、置換または非置換の低級アルキル、置換または非置換のフェニル、ピリジル、ピリミジニル、チアゾールおよびテトラゾールからなる群から選択される。さらに、ｋは、好ましくは２、３または４であり、ｊは、好ましくは１または２であり、ｍ１およびｎは、独立して、好ましくは０または１である。
【００６３】
好ましくは、Ｒｋ３は、水素またはアセチル、最も好ましくは水素である。
【００６４】
好ましくは、それぞれのＷｋ１およびＷｋ２は水素である。
【００６５】
前記化合物（Ｋ）は、下記式（ｋ１−１）で表されることが好ましい。
【００６６】
【化１０】
2018038165.tif 000012
【００６７】
＜化合物（Ｋ）の製造方法＞
化合物（Ｋ）は、例えば、下記一般式（ｋ０）で表される化合物を、無水ヒドラジン又はヒドラジン水和物の存在下、無溶媒で還流して製造することができる。また、例えば、下記一般式（ｋ０）で表される化合物をメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、アセトニトリル、トルエン等の溶媒に溶解し、無水ヒドラジンに添加して反応させることにより製造することができる。反応温度及び反応時間は特に限定されないが、例えば室温〜５０℃で３０分〜１５時間反応させることができる。
【００６８】
【化１１】
2018038165.tif 000013
【００６９】
＜薬物複合体＞
本発明の第二の態様は、下記一般式（ｋａ）で表される繰り返し単位（ｋａ）、及び下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）を有するポリマーを含有する薬物複合体（以下、「薬物複合体（Ｋ）」という場合がある。）である。
【００７０】
【化１２】
2018038165.tif 000014
［式（ｋａ）中、ｍ、Ｌ及びＲ１は、前記一般式（Ｉ）中のｍ、Ｌ及びＲ１と同様である。Ｒｋ１、Ｒｋ２、Ｒｋ３、Ｗｋ１及びＷｋ２は、前記一般式（ｋ１）中のＲｋ１、Ｒｋ２、Ｒｋ３、Ｗｋ１及びＷｋ２と同様である。式（ＩＩ）中、Ｘ及びｍは、前記一般式（ＩＩ）のＸ及びｍと同様である。］
【００７１】
前記一般式（ｋａ）中、ｍは１が好ましい。
前記一般式（ｋａ）中、Ｌはメチレン基、エチレン基、プロピレン基、ベンジレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基又はベンジレン基がより好ましい。
前記一般式（ｋａ）中、Ｒ１は水素原子又は脂肪族炭化水素基が好ましく、水素原子又はメチル基がより好ましい。
前記一般式（ｋａ）中、Ｒｋ１およびＲｋ２はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン、ニトロ、−ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｋＲ１４、−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｍＲ１６、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２）ｎＲ１５、−ＣＯ（ＣＨ２）ｊＲ４（ここで、Ｒ４は−ＳＲ７である）、ＣＨ２Ｏ−（置換または非置換の）低級アルキル（ここで、置換低級アルキルは、好ましくは、メトキシメチル、メトキシエチルまたはエトキシメチルである）又は−ＮＲ５Ｒ６であることが好ましく、水素であることがより好ましい。
前記一般式（ｋａ）中、Ｒｋ３は、水素またはアセチルであることが好ましく、水素であることがより好ましい。
前記一般式（ｋａ）中、Ｗｋ１およびＷｋ２は水素であることが好ましい。
前記一般式（ＩＩ）中、ｍは１が好ましい。
前記一般式（ＩＩ）中、ＸはＯＲｘが好ましく、ＯＨ（ヒドロキシ基）がより好ましい。
【００７２】
前記薬物複合体（Ｋ）は、下記一般式（ｋａ−１）で表される繰り返し単位（ｋａ−１）、及び下記一般式（ＩＩ）で表される繰り返し単位（ＩＩ）を有するポリマーを含有することが好ましい。
【００７３】
【化１３】
2018038165.tif 000015
［式（ｋａ−１）中、ｍ、Ｌ及びＲ１は、前記一般式（Ｉ）中のｍ、Ｌ及びＲ１と同様である。式（ＩＩ）中、Ｘ及びｍは、前記一般式（ＩＩ）のＸ及びｍと同様である。］
【００７４】
前記一般式（ｋａ−１）中、ｍは１が好ましい。
前記一般式（ｋａ−１）中、Ｌはメチレン基、エチレン基、プロピレン基、ベンジレン基が好ましく、メチレン基、エチレン基又はベンジレン基がより好ましい。
前記一般式（ｋａ−１）中、Ｒ１は水素原子又は脂肪族炭化水素基が好ましく、水素原子又はメチル基がより好ましい。
前記一般式（ＩＩ）中、ＸはＯＲｘが好ましく、ＯＨ（ヒドロキシ基）がより好ましい。
【００７５】
化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）は、既存の癌治療薬が有効性を示さない悪性癌や転移癌に対して、有効性を示す。そのため、化合物（Ｋ）及び薬物複合体（Ｋ）は、既存の癌治療薬に対して耐性である癌の治療薬として有用である。
【００７６】
化合物（Ｋ）は、薬物複合体（Ｋ）とすることにより、第１の態様の薬物複合体と同様に、化合物（Ｋ）の徐放性を制御することができる。化合物（Ｋ）がポリマーに保持されている間、化合物（Ｋ）は安定に維持され、毒性も緩和されるため、副作用を軽減して治療効果を高めることができる。
また、薬物複合体（Ｋ）を含有するミセルを調製することにより、第１の態様のミセルと同様に、生体内のｐＨ環境に依存して、薬物複合体（Ｋ）からの化合物（Ｋ）のリリースを制御することができる。薬物複合体（Ｋ）を含有するミセルの調製は、第１の態様の薬物複合体のミセルと同様に、公知の方法により調製することができる。例えば、薬物複合体（Ｋ）を親油性又は親水性の溶媒に溶解又は懸濁し、当該溶解液又は懸濁液を親水性又は親油性の溶媒に滴下して撹拌することにより、薬物複合体（Ｋ）を含有するミセルを調製することができる。
なお、薬物複合体（Ｋ）は、第１の態様の薬物複合体において、薬物が化合物（Ｋ）である態様であり、第１の態様の薬物複合体に包含される。また、薬物複合体（Ｋ）は、第１の態様における一般式（Ｉａ）において、ＢＭが化合物（Ｋ）である態様であるということもできる。
【００７７】
＜医薬組成物＞
化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）は、そのまま生体に投与することもできるが、公知の手法により、適宜他の成分と混合して製剤化されてもよい。したがって、本発明はまた、化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）を含む医薬組成物も提供する。化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）が製剤化される場合、剤型は特に限定されず、乳剤、エマルション剤、液剤、ゲル状剤、カプセル剤、軟膏剤、貼付剤、バップ剤、顆粒剤、錠剤、造影剤等とすることができる。また、薬物複合体（Ｋ）は、ミセルの形態としてもよい。
化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）を含む医薬組成物は、任意に化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）の他の成分を含んでもよい。他の成分は、医薬品分野において一般的に使用される成分を特に制限なく使用することができる。例えば、前記医薬組成物は、化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）を薬学的に許容される担体に溶解又は懸濁したものであってもよい。薬学的に許容される担体としては、医薬分野において常用されるものを特に制限なく使用することができ、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝液、ＤＭＳＯ、ジメチルアセトアミド、エタノール、グリセロール、ミネラルオイル等を挙げることができる。また、他の成分としては、その他に、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、賦形剤、安定剤、抗酸化剤、浸透圧調整剤、防腐剤、着色剤、香料等が挙げられる。
【００７８】
前記医薬組成物の投与経路は、特に限定されず、経口又は非経口経路で投与することができる。なお、非経口経路は、経口以外の全ての投与経路、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、鼻腔内、皮内、点眼、脳内、直腸内、腟内及び腹腔内等への投与を包含する。また、投与は、局所投与であっても全身投与であってもよい。
前記医薬組成物は、単回投与又は複数回投与を行うことが可能であり、その投与期間及び間隔は、薬物の種類、疾患の種類及び状態等、投与経路、投与対象の年齢、体重及び性別等によって、適宜選択することができる。
前記医薬組成物の投与量は、その投与期間及び間隔は、薬物の種類、疾患の種類及び状態等、投与経路、投与対象の年齢、体重及び性別等によって、適宜選択することができる。前記医薬組成物の投与量は、治療的有効量とすることができ、例えば、１回につき体重１ｋｇあたり０．０１〜１０００ｍｇ程度とすることができる。
【００７９】
前記医薬組成物は、Ｋ２５２ａ又はその類縁体が適用可能な疾患に対して、特に制限なく適用することができる。前記医薬組成物は、特に、腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物として、好適に用いることができる。前記医薬組成物が適用可能な腫瘍は、特に限定されないが、肺癌、膵癌、頭頸部癌、中皮腫等を好適に挙げることができる。
また、化合物（Ｋ）、薬物複合体（Ｋ）、又は薬物複合体（Ｋ）のミセルは、ＥＧＦＲのゲートキーパー変異（ｄ７４６−７５０／Ｔ７９０Ｍ、ｄ７４６−７５０／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ、Ｌ８５８Ｒ，Ｔ７９０Ｍなど）有する腫瘍細胞、及びｃ−Ｋｉｔ、ＦＬＴ３、若しくはＲＥＴに変異を有する腫瘍細胞に対して、高い細胞傷害活性を示す。そのため、前記医薬組成物は、これらの変異を有する腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物として、特に好適に用いることができる。例えば、前記医薬組成物は、図４２に示す変異を有する腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物として好適に用いることができる。これらの変異を有する癌は、既存の腫瘍治療薬に対して耐性であることが多いため、前記医薬組成物は極めて有用性が高い。そのため、本発明は、既存の腫瘍治療薬に対して耐性である腫瘍治療又は予防するための前記医薬組成物もまた提供する。既存の腫瘍治療薬としては、特に限定されないが、ゲフェチニブ、アファチニブ、オシメチニブ、ミドスタウリン、エルロチニブ、ＡＧ１４７８、ゲムシタビン、シスラプチン、ペメトレキセド等が挙げられる。また、前記医薬組成物の好適な使用態様として、既存の腫瘍治療薬との併用が挙げられる。そのため、本発明は、化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）と、少なくとも１種の他の腫瘍治療薬と、を含む、腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物もまた提供する。
【００８０】
また、他の態様において、本発明は、１）腫瘍を治療又は予防するための医薬組成物の製造における、化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）若しくはそのミセルの使用、２）化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）若しくはそのミセルを対象（例、図４２に示す変異を有する腫瘍に罹患した感謝）に投与することを含む、腫瘍を治療又は予防する方法、３）腫瘍の治療又は予防に使用するための化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）若しくはそのミセル、４）腫瘍を治療又は予防するための化合物（Ｋ）又は薬物複合体（Ｋ）若しくはそのミセルの使用、を提供する。
【実施例】
【００８１】
本発明を実施例に基づいて説明する。ただし、本発明の実施態様は、これら実施例の記載に限定されるものではない。【００８２】
［合成例１］メトキシ−ポリ（エチレングリコール）−ｂ−ポリ（β−ベンジル−アスパルタミド）の合成
α−メトキシ−ω−アミノ  ポリ（エチレングリコール）の末端第一級アミノ基によって開始される、β−ベンジルアスパラギン酸  Ｎ−カルボキシアルデヒドの開環重合により、メトキシ−ポリ（エチレングリコール）−ｂ−ポリ（β−ベンジル−アスパルタミド）（ＭｅＯ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡ；ＰＥＧ分子量＝１２ｋＤａ；ＰＢＬＡの重合度＝４０）コポリマーを合成した。ω−アミン基は、アセチル化によりブロックした。【００８３】
［合成例２］芳香族アセタール基導入ポリマーの合成
ＰＥＧ−ＰＢＬＡポリマー（２２０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）で溶解し、｛〔４−（ジメトキシメチル）フェニル〕メタンアミン｝（１００μＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を添加して、徐々に温度を上げて４０℃で４日間撹拌した。特性分析のために、反応混合物の一部をエーテル沈殿し、芳香族アセタール基導入ポリマーを回収した。
反応スキームを図１に示す。また、得られた芳香族アセタール基導入ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図２に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ解析により２５個のベンジルエステルユニットのアミドへの置換が、確認された。残りのベンジルエステル（４０−２５＝１５）は、おそらくエーテル沈殿操作中に、加水分解された。【００８４】
［合成例３］芳香族アルデヒド基含有ポリマーの合成
アミノリシス反応後、反応混合物を酸性化し（０．１Ｎ  ＨＣｌ、１００μＬ、３０分）、その後、水で透析し、ポリマーを凍結乾燥することにより、透析袋からアルデヒド基導入ポリマーを回収した。反応スキームを図１に示す。また、得られた芳香族アルデヒド基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図３に示す。２７個のアルデヒドユニットが１Ｈ−ＮＭＲスペクトラムで確認された。【００８５】
［合成例４］脂肪族アルデヒド基含有ポリマーの合成
脂肪族アルデヒド基含有ポリマーの合成は、｛〔４−（ジメトキシメチル）フェニル〕メタンアミン｝に替えて、１−アミノ−３，３−ジエトキシプロパンを使用した以外は、芳香族アルデヒド基含有ポリマーの合成と同様の方法で行った。反応スキームを図１に示す。また、中間体である脂肪族アセタール基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図４に示す。また、得られた芳香族アルデヒド基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図５に示す。２３個のアルデヒドユニットが１Ｈ−ＮＭＲスペクトラムで確認された。【００８６】
［実施例１］薬物複合体の調製（１）
＜ＤＡＶＢＮＨの合成＞
硫酸ビンブラスチンは、ＢＯＣ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳ）から購入した。硫酸ビンブラスチンはアルカリ処理によりビンブラスチンに変換した。硫酸ビンブラスチン（２００ｍｇ）を水（３ｍＬ）に溶解し、水酸化ナトリウム溶液（５Ｎ）を滴下しながら添加した。
これにより、白い懸濁液を得た。ジクロロメタン（ＤＣＭ）により、この懸濁液からフリーのビンブラスチンを抽出した。ＤＣＭ相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、エバポレートして約１５０ｍｇのフリーのビンブラスチンを得た。
ビンブラスチン（１５０ｍｇ）を無水メタノール（１ｍＬ）に溶解し、無水ヒドラジン（１ｍＬ）に添加した。反応混合物を５５℃で２２時間撹拌した。反応混合物をエバポレートして乾燥体を得た。エバポレーションでは、トルエンを共エバポレーション溶媒として用いた。得られた生成物を、さらなる精製を行うことなく、薬物複合体とミセルの調製に使用した。当該生成物をＨＰＬＣで分析した。分析結果を図６Ａ及び図６Ｂに示す。ＨＰＬＣ解析の条件は以下の通りである。
ＧＥ’ｓ  ＩｎｃｒｔＳｕｓｔａｉｎ  Ｃ１８カラム  ４．６×２５０ｍｍ
溶媒Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸  ｐＨ２．０
溶媒Ｂ：アセトニトリル
５％Ｂ〜８０Ｂ％の勾配
流速：１ｍＬ／分、３０分
ＵＶ検出：波長２２０ｎｍ
なお、ビンブラスチンからのＤＡＶＢＮＨの合成スキームを以下に示す。【００８７】
【化１４】
2018038165.tif 000016
【００８８】
＜薬物複合体の調製＞
上記のように得られた生成物（ＤＡＶＬＢＨ）と芳香族アルデヒド基含有ポリマーとの反応をＤＭＳＯ溶液中で３５〜４０℃で７２時間行い、その後、透析により溶媒をジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に交換した（４時間透析、透析溶媒は１度交換）。この溶媒交換により透明なＤＭＡｃ溶液が生成された。なお、芳香族アルデヒド基導入ポリマーとＤＡＶＢＮＨとの結合反応スキームを図７に示す【００８９】
＜ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルの調製＞
上記のように得られたＤＭＡｃ溶液をミセルの調製に使用した。薬物複合体のＤＭＡｃ溶液を、容量比で水１０に対して１の割合で、水に滴下してボルテックスし、ミセルを調製した。この溶液を、分画分子量（ＭＷＣＯ）３５００Ｄａの透析バッグで２４時間、水で透析した。透析媒体は、透析中に５回交換した。透析バッグ中の溶液をフィルター（０．２２μｍ）ろ過し、１００ｋＤａ  ＭＷＣＯのフィルターメンブランを用いた限外濾過により濃縮した。
上記方法に従って、ＤＡＶＢＮＨの負荷量（１４％、２５％、３３％）が異なる３種類のミセルを調製した。なお、薬物結合反応において、ポリマーに添加されたＤＡＶＬＢＨのポリマーに対する質量比を、ＤＡＶＢＮＨの負荷量とした。薬物結合反応の結果と薬物負荷量の違いを１Ｈ  ＮＭＲ解析により確認した。ミセル水溶液は、凍結乾燥し、ＮＭＲ解析のためにｄ６ＤＭＳＯに再溶解した。１Ｈ  ＮＭＲ解析の結果を図８Ａ、図８Ｂ及び図８Ｃに示す。図８Ａ、図８Ｂ及び図８Ｃは、ＤＡＶＢＮＨの負荷量がそれぞれ１４％、２５％、３３％であるミセルの解析結果である。
１Ｈ  ＮＭＲ解析により、薬物結合反応中のＤＡＶＢＮＨの負荷量を変えることにより、ポリマーに結合するＤＡＶＢＮＨの量を制御できることが確認された。【００９０】
次に、ミセル中のＤＡＶＢＮＨ濃度をＨＰＬＣにより測定した。ミセル溶液を０．１Ｎ  ＨＣｌ溶液中で２時間インキュベートし、その後、放出された薬物を波長２２０ｎｍのＵＶ検出器を用いてＨＰＬＣにより測定した。フリーのＤＡＶＢＮＨ溶液を標準溶液として使用した。ＨＰＬＣの分析結果を図９Ａ及び図９Ｂに示す。ＨＰＬＣ解析の条件は以下の通りである。
ＴＯＳＯＨ’ｓ  ＴＳＫｇｅｌ  ＯＤＳ−８０Ｔｍカラム  ４．６×１５０ｍｍ
２０ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ２．５）及びメタノール（１：１）均一濃度
流速：０．６ｍＬ／分
ＵＶ検出：波長２２０ｎｍ【００９１】
＜ミセルサイズとＰＤＩの測定＞
ミセルのサイズと多分散指数（ＰＤＩ）を、動的光散乱（ＤＬＳ）手法により求めた。
測定は、入射ビームとして緑色レーザー（５３２ｎｍ）を用い、１７３°の検出角度で、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を使用して、２５℃の温度条件で行った。結果を表１及び図１０に示す。なお、図１０中の各指標の説明を表２に記載した。また、表１中、％薬物コンジュゲーションの値は以下の式により算出した。【００９２】
【数１】
2018038165.tif 000017
【００９３】
【表１】
2018038165.tif 000018
【００９４】
【表２】
2018038165.tif 000019
【００９５】
［実施例２］薬物複合体の脳腫瘍細胞に対する細胞毒性試験（１）
硫酸ビンブラスチンと薬物複合体（実施例１のＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を、ｃｅｌｌ−ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８を用いて、神経膠芽腫細胞株であるＵ８７ＭＧに対して評価した。Ｕ８７ＭＧ細胞（３０００細胞／ウェル）を、９６ウェルプレートを用いて、１０％  ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地で培養した。その後、Ｕ８７ＭＧ細胞を異なる用量の硫酸ビンブラスチン又は薬物複合体に曝露した。曝露後４８時間と７２時間における細胞生存率を、４５０ｎｍでのホルマザン吸光度４５０ｎｍを測定することにより求めた。
細胞毒性試験の結果を図１１に示す。図１１中、「ＶＢＮ」は硫酸ビンブラスチンを示し、「Ｖ／ｍ」はＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルを示す。ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルでは、ＩＣ５０の値は、硫酸ビンブラスチンよりも高かったが、細胞傷害活性の用量依存性の特性は、硫酸ビンブラスチンと同様であった。この結果は、ＤＡＶＢＮＨがミセル中で活性を維持していることを示す。【００９６】
［実施例３］薬物複合体の血中動態試験
＜Ａｌｅｘａ−６４７標識ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルの調製＞
芳香族アルデヒド基含有ポリマー（２０ｍｇ）、ＤＡＶＢＮＨ（１０ｍｇ）及びＡｌｅｘａ−６４７ヒドラジド（０．５ｍｇ）をＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解し、３５℃で７２時間撹拌した。溶媒をＤＭＡｃに交換して、実施例１の＜ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルの調製＞で記載したようにミセルを調製した。【００９７】
＜血中動態試験＞
血中動態試験は、ｉｎ  ｖｉｖｏレーザー走査顕微鏡を用いて行った。直立ＥＣＬＩＰＡＳＥ  ＦＮ１（株式会社ニコン、東京、日本）に設置した、Ｐｌａｎ  Ａｐｏ  ＶＣ  ２０ｘ  ＤＩＣ  Ｎ２  Ｎｉｋｏｎレンズ（開口数：０．７５）を装着したＮｉｋｏｎ  Ａ１Ｒ共焦点レーザー走査顕微鏡システムを使用した。６４０ｎｍのレーザーをＡｌｅｘａ−６４７の励起に使用した。Ａｌｅｘａ−６４７標識ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（約３０ｍｇ／ｋｇ：ビンブラスチンの投与量として）を、尾静脈カテーテルを用いて、マウス（ＢＡＬＢ／ｃ  Ｎｕｄｅ、雌、６週齢）に投与した。Ａｌｅｘａ６４７標識ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルは、マウスの耳たぶ領域血管内の血流により観察し、投与後２０時間血中動態をモニタリングした。得られたデータは、Ｎｉｋｏｎ  ＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ（ｖｅｒ．４．００．０６）を用いて処理した。
血中動態試験の結果を図１２に示す。Ａｌｅｘａ−６４７標識ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルは、少なくとも２０時間、血液中を循環することが確認された。【００９８】
［実施例４］薬物複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍試験（ＩＣ５０）−（１）
ＤＭＥＭ培地中の５ｘ１０６個のＵ８７ＭＧ細胞を、マウス（ＢＡＬＢ／ｃ  Ｎｕｄｅ、雌、６週齢）の皮下に接種した。接種５日後に、薬剤による処理を開始した。薬物の静脈内注射を、４日後毎に４回行った。投与群は以下の通りとし、各群の個体数は５とした。
投与群１：ＰＢＳ投与（ＰＢＳ）
投与群２：硫酸ビンブラスチン  ２ｍｇ／ｋｇ（ＶＢＮ）
投与群３：ＤＡＶＢＮＨ  ２ｍｇ／ｋｇ（ＤＡＶＢＮＨ）
投与群４：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  ２ｍｇ／ｋｇ（Ｖ／ｍ  ２）
投与群５：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  ４ｍｇ／ｋｇ（Ｖ／ｍ  ４）
投与群６：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  ８ｍｇ／ｋｇ（Ｖ／ｍ  ８）
投与群７：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  １６ｍｇ／ｋｇ（Ｖ／ｍ  １６）
ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍試験の結果を図１２に示す。なお、上記投与群の括弧内は、図１３Ａ及び図１３Ｂに記載した各投与群の略語である。図１３Ａは腫瘍サイズの経時変化であり、図１３Ｂはマウスの体重の経時変化である。ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル投与群は、硫酸ビンブラスチン投与群及びＤＡＶＢＮＨ投与群と同様の抗腫瘍効果を示した。また、ＤＡＶＢＮ結合ポリマーミセル投与群は、いずれの投与量においても顕著な体重減少は観察されなかった。ビンブラスチンは、毒性が強く、マウスに対する最大耐性用量は２ｍｇ／ｋｇである。一方、本試験において、ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルは１６ｍｇ／ｋｇを投与しても顕著な毒性は確認されなかった。この結果は、ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルの形態とすることにより、抗腫瘍活性を維持しつつ、ビンブラスチンの毒性を緩和できることを示している。【００９９】
［合成例５］脂肪族ケトン基含有ポリマーの合成
ＰＥＧ−ＰＢＬＡポリマー（３１８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）で溶解し、得られた溶液に３，３−ジメトキシブタン（２００μＬ）を添加した。反応液を４０℃で７２時間撹拌し、ＨＣｌ溶液（１００μＬ、０．１Ｎ）添加して１時間撹拌した。水で透析し、ポリマーを凍結乾燥することにより、側鎖に脂肪族ケトンが導入されたポリマーを回収した。
反応スキームを図１４に示す。また、得られた脂肪族ケトン基含有ポリマーの１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図１５に示す。３５個の脂肪族ケトンユニットがポリマーに導入されていることが確認された。【０１００】
［実施例５］薬物複合体の調製（２）
実施例１で得られたＤＡＶＬＢＨと合成例５で得た脂肪族ケトン含有ポリマーとの反応をＤＭＳＯ溶液中で３５〜４０℃で７２時間行い、その後、透析により溶媒をジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に交換した（４時間透析、透析溶媒は１度交換）。この溶媒交換により透明なＤＭＡｃ溶液が生成された。【０１０１】
＜ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルの調製＞
上記のように得られたＤＭＡｃ溶液をミセルの調製に使用した。薬物複合体のＤＭＡｃ溶液を、容量比で水１０に対して１の割合で、水に滴下してボルテックスし、ミセルを調製した。この溶液を、分画分子量（ＭＷＣＯ）３５００Ｄａの透析バッグで２４時間、水で透析した。透析媒体は、透析中に５回交換した。透析バッグ中の溶液をフィルター（０．２２μｍ）ろ過し、１００ｋＤａ  ＭＷＣＯのフィルターメンブランを用いた限外濾過により濃縮した。ＤＡＶＢＮＨの負荷量は３３％であった。【０１０２】
＜ミセルサイズとＰＤＩの測定＞
実施例１と同様にして、ミセルのサイズと多分散指数（ＰＤＩ）を、動的光散乱（ＤＬＳ）手法により求めた。結果を図１６に示す。【０１０３】
＜ｐＨ感受性リリースの評価＞
実施例１及び５のポリマーミセルＤＭＡｃ溶液をそれぞれリン酸バッファー９７５μＬで異なるｐＨで希釈し、３７℃で４８時間培養した。逆相クロマトグラフィ−（ＲＰＬＣ）により、所定の時間におけるポリマーミセルＤＭＡｃ溶液からの薬剤リリースを測定した。ＨＰＬＣ解析の条件は以下の通りである。
ＨＰＬＣ  （東ソー製ＴＳＫｇｅｌ  ＯＤＳ−８０Ｔｍ  Ｃ１８  カラム  ４．６×１５０ｍｍ）
溶媒：２０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ２．５）とメタノールとの１：１混合均一溶媒
流速：０．６ｍＬ／分
ＵＶ検出：波長２２０ｎｍ【０１０４】
ｐＨ感受性リリースの評価の結果を図１７及び１８に示す。図１７は、実施例１のポリマーミセル溶液のｐＨ感受性薬剤リリースプロファイルを示すグラフである。図１８は、のポリマーミセル溶液のｐＨ感受性薬剤リリースプロファイルを示すグラフである。
図１７及び１８に示される結果から、本願発明を適用した実施例１及び５のポリマーミセル溶液は、ｐＨ感受性薬剤リリースが確認された。特に、生体内の環境を考えると、酸性化しているがんの周辺環境（ｐＨ６．６）および細胞質内に取り込まれた後エンドソーム（ｐＨ５）での薬剤リリースは、実施例５の脂肪族ケトン含有ポリマーの方が優れていることが確認された。【０１０５】
［実施例６］薬物複合体の脳腫瘍細胞に対する細胞毒性試験（２）
実施例５のＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を、実施例２と同様にｃｅｌｌ−ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８を用いて、神経膠芽腫細胞株であるＵ８７ＭＧに対して評価した。結果を表３に示す。なお、表３中、参考までに、図１１の結果も併記する。【０１０６】
【表３】
2018038165.tif 000020
【０１０７】
［参考例１］ＤＡＶＢＮＨの最大耐性用量（ＭＴＤ）の評価
ＤＡＶＢＮＨをマウス（ＢＡＬＢ／ｃ  Ｎｕｄｅ、雌、６週齢）に４日後毎に４回（０日、３日、６日、９日）投与し、最大耐性用量（ＭＴＤ）を評価した。投与群は以下の通りとし、各群の個体数は３とした。結果を図１９に示す。
投与群１：ＤＡＶＢＮＨ  ３ｍｇ／ｋｇ
投与群２：ＤＡＶＢＮＨ  ４ｍｇ／ｋｇ
投与群３：ＤＡＶＢＮＨ  ６ｍｇ／ｋｇ【０１０８】
図１９は、ＤＡＶＢＮＨを投与した場合のマウスの体重の経時変化を示すグラフである。図１９に示されるように、ＤＡＶＢＮＨは、投与量６ｍｇ／ｋｇが致死量であることが確認された。また、投与量３ｍｇ／ｋｇで、治療スケジュールのわずか２５％経過後に顕著な体重減少が観察された。【０１０９】
［実施例７］薬物複合体の最大耐性用量（ＭＴＤ）の評価
薬剤をマウス（ＢＡＬＢ／ｃ  Ｎｕｄｅ、雌、６週齢）に４日後毎に４回（０日、３日、６日、９日）投与し、最大耐性用量（ＭＴＤ）を評価した。投与群は以下の通りとし、各群の個体数は５とした。結果を図２０に示す。
投与群１：ＰＢＳ（対照）
投与群２：ＤＡＶＢＮＨ（ＶｉｎＨｙｄ）  ２ｍｇ／ｋｇ
投与群３：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  ２ｍｇ／ｋｇ
投与群４：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  ４ｍｇ／ｋｇ
投与群５：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  １６ｍｇ／ｋｇ【０１１０】
図２０は、実施例７におけるマウスの体重の経時変化を示すグラフである。図２０に示されるように、ＤＡＶＢＮＨは、投与量２ｍｇ／ｋｇであっても、体重減少が生じる。一方、ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルは、投与量１６ｍｇ／ｋｇでも体重減少が生じない。したがって、ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルは、ＤＡＶＢＮＨに比べて最大耐性用量（ＭＴＤ）が８倍以上伸びたことが確認された。【０１１１】
［実施例８］脳腫瘍同所モデル
Ｕ８７ＭＧ−Ｌｕｃ２（２μＬ中１．０×１０  ５個の細胞）をブレグマの１．０ｍｍ前部および２．０ｍｍに頭蓋内に移植し、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの脳表面に３．０ｍｍの深さに移植した。
腫瘍を５〜６日間増殖させ、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの３群（ｎ＝６）において抗腫瘍活性アッセイを開始した。
投与群は以下の通りとした。
投与群１：対照としてのＰＢＳ
投与群２：ＤＡＶＢＮＨ  ２ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤ）
投与群３：ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（実施例１）  １６ｍｇ／ｋｇ（安全耐性用量）
治療スケジュールは、以下の通りとした。
第１フェーズ：２日間隔（０日、３日、６日及び９日）で４回の注射に設定。
第２フェーズ：毎週７回の注射。合計治療期間約１．５ヶ月。
ＩＶＩＳスペクトル（Ｘｅｎｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いてインビボイメージングを行い、Ｄ−ルシフェリンカリウム塩溶液をルシフェラーゼの基質として使用した。【０１１２】
図２１Ａは実施例８における生存率の経時変化を示すグラフで、図２１Ｂは実施例８における体重の経時変化を示すグラフである。
図２２は実施例８の各投与群における２５日目の腫瘍増殖の対比グラフである。
図２３は、実施例８の各投与群における腫瘍増殖曲線を示すグラフである。
図２１Ａ、図２１Ｂ、図２２及び図２３に示される結果から、ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルは脳腫瘍同所移植モデルにおいて尾静脈注射で有意に脳腫瘍を縮小させ、有意に生存を延長させることが確認された。
また、実施例８においては、最大耐性用量（ＭＴＤ）のＤＡＶＢＮＨ（２ｍｇ／ｋｇ）と安全耐性用量のＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセル（１６ｍｇ／ｋｇ）を用いている。したがって、ＤＡＶＢＮＨによる治療については改善の余地はないが、ＤＡＶＢＮＨ結合ポリマーミセルによる治療は更なる改善の余地があることも確認された。【０１１３】
［実施例９］Ｋ２５２ａ−ヒドラジド（Ｋ２５２ａ−Ｈ）との薬物複合体の調製
＜Ｋ２５２ａ−Ｈの合成＞
Ｋ２５２ａは、ＢＯＣ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳ）から購入した。Ｋ２５２ａ（２０ｍｇ）を無水メタノール（２００μＬ）に溶解し、無水ヒドラジン（３００μＬ）に添加した。反応混合物を４０℃で１５時間撹拌した。反応混合物をエバポレートして乾燥体を得た。エバポレーションでは、トルエンを共エバポレーション溶媒として用いた。得られた生成物を、さらなる精製を行うことなく、薬物複合体とミセルの調製に使用した。得られた生成物の１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図２４に示す。得られた生成物では、Ｋ２５２ａのメチル基が消失し、ヒドラジド基プロトンのピークが確認されたことから、Ｋ２５２ａ−Ｈが得られたことが確認できた。また、Ｋ２５２ａ−ＨをＨＰＬＣで分析した。分析結果を図２５に示す。Ｋ２５２ａ−ＨとＫ２５２ａとは、リテンションタイムが異なっていることから、両者は異なる構造であることが確認された。なお、ＨＰＬＣ解析の条件は以下の通りである。
ＴＳＫ−ＧＥＬ  ＯＤＳ−１００Ｖカラム  ４．６×１５０ｍｍ、粒子径５μｍ（東ソー株式会社）
カラム圧：１０．７ＭＰａ
カラム温度：４０℃付近の一定の温度
移動相：メタノール／ギ酸緩衝液（ｐＨ３．０）混液（３：２）
流速：１．２ｍＬ／分、２０〜３０分
ＵＶ検出：波長２９０ｎｍ
Ｋ２５２ａからのＫ２５２ａ−Ｈの合成スキームを以下に示す。【０１１４】
【化１５】
2018038165.tif 000021
【０１１５】
＜薬物複合体の調製＞
上記のように得られた生成物（Ｋ２５２ａ−Ｈ）と芳香族アルデヒド基含有ポリマー又は脂肪族ケトン含有ポリマーとの反応をＤＭＳＯ溶液中で３５〜４０℃で７２時間行い、その後、透析により溶媒をジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に交換した（４時間透析、透析溶媒は１度交換）。この溶媒交換により透明なＤＭＡｃ溶液が生成された。【０１１６】
＜Ｋ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルの調製＞
上記のように得られたＤＭＡｃ溶液をミセルの調製に使用した。薬物複合体のＤＭＡｃ溶液を、容量比で水１０に対して１の割合で、水に滴下してボルテックスし、ミセルを調製した。この溶液を、分画分子量（ＭＷＣＯ）３５００Ｄａの透析バッグで２４時間、水で透析した。透析媒体は、透析中に５回交換した。透析バッグ中の溶液をフィルター（０．２２μｍ）ろ過し、１００ｋＤａ  ＭＷＣＯのフィルターメンブランを用いた限外濾過により濃縮した。【０１１７】
＜ミセルサイズとＰＤＩの測定＞
ミセルのサイズと多分散指数（ＰＤＩ）を、動的光散乱（ＤＬＳ）手法により求めた。測定は、入射ビームとして緑色レーザー（５３２ｎｍ）を用い、１７３°の検出角度で、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を使用して、２５℃の温度条件で行った。結果を図２６Ａ及び図２６Ｂに示す。図２６Ａは、芳香族アルデヒド基含有ポリマーとＫ２５２ａ−Ｈとの薬物複合体のミセル（以下、「Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル」という。）であり、図２６Ｂは、脂肪族ケトン基含有ポリマーとＫ２５２ａ−Ｈとの薬物複合体のミセル（以下、「Ｋ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセル」という。）である。【０１１８】
［実施例１０］Ｋ２５２ａ−Ｈと薬物複合体ミセルの水に対する可溶化試験
Ｋ２５２ａ−Ｈ粉末を、蒸留水又はメタノールに１ｍｇ／ｍＬで溶解し、よく混合した。その後、孔径２２μｍのフィルターでろ過した。前記のように調製したろ液について、分光光度計（ジャスコ  Ｖ６７０）を用いて紫外吸収スペクトルを測定した。結果を図２７に示す。図２７の結果から、Ｋ２５２ａ−Ｈは、水には１μｇ／ｍＬ以下でしか溶解しないことが確認された。
一方、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル及びＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルを、水に溶解し、ＨＰＬＣでＫ２５２ａ−Ｈの濃度測定を行ったところ、水に対して２ｍｇ／ｍＬ以上の溶解性を示すことが確認された（図示せず）。以上の結果より、Ｋ２５２ａ−Ｈのような水に難溶の化合物であっても、ミセル化することによって、水に対する溶解性を増大できることが示された。【０１１９】
［実施例１１］Ｋ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルからのＫ２５２ａ−Ｈの放出
Ｋ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルを、ｐＨ１の水性緩衝液（メタノール：ギ酸緩衝液（ｐＨ３）＝３：２）中で、３７℃で１時間インキュベートした。その後、ＨＰＬＣ解析を行った。ＨＰＬＣ条件は、実施例９と同様である。結果を図２８に示す。ｐＨ１水性緩衝液処理後のサンプルで、Ｋ２５２ａ−Ｈと同一のピークが確認されたことから、酸性条件下で、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルからＫ２５２ａ−Ｈが放出されることが示された。【０１２０】
［実施例１２］Ｋ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルの肺癌細胞に対する細胞毒性試験
表４に示す肺癌細胞株を用いて、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル及びＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルの細胞毒性試験を行った。
なお、以下の実施例において、使用した細胞株はアメリカン・タイプ・．  カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ．  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，  ＡＴＣＣ）もしくはＪＣＲＢ（医薬基盤研）の細胞バンクより購入した。ＰＣ１４  ＰＥ６は、法正先生（鳥取大学）より分与してもらった。培地は、特に記載していない限り、ＤＭＥＭ、ＲＰＭＩ又はＥ−ＭＥＭを使用した。Ｇｅｆｅｔｉｎｉｂ、Ａｆａｔｉｎｉｂ、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ、Ｇｅｍｉｃｉｔａｂｉｎｅは、フナコシ株式会社より購入した。Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ  は  Ｓｅｌｌｅｃｋ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社より購入した。【０１２１】
【表４】
2018038165.tif 000022
【０１２２】
２０００細胞／５０μＬの細胞溶液を適量調整し、９６ウェルプレートの列２から２まで５０μＬずつ播種した。列１に培地（１０％  ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地）のみを加えた。播種後、２４時間インキュベートした。
２４ウェルプレートの１０個の各ウェルに、３００μＬの培地を加えた。ミセル溶液１００μＬを２４ウェルプレートのウェル１Ａに加え、ピペッティング（１０回程度）で撹拌した後、そこから１００μＬをウェル２Ｂへ移し、同様に撹拌した。同様の操作を１０回繰り返し、１０種類の濃度のミセル溶液を調整した。
上記で調整したミセル溶液を、癌細胞を播種した９６ウェルプレートの列３から列１２までミセル濃度の高い順に５０μＬずつ加えた。列１と２には、培地のみを５０μＬ加えた。その後、３時間インキュベートした。インキュベート後、細胞を残してウェル内の溶液を除去し、２００μＬの培地で各ウェル内の細胞を洗浄した。最後に、１００μＬの培地を各ウェルに加えて４８時間インキュベートした。
４８時間後に、ｃｅｌｌ−ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８溶液（ＤＯＪＩＮＤＯ）を各ウェルに１０μＬずつ添加した。再びインキュベーターし、３０分後、１時間後、及び２時間後に、４５０ｎｍの吸光度を測定した。【０１２３】
結果を図２９に示す。Ｇｅｆｅｎｉｔｉｂ、Ａｆａｔｉｎｉｂ、及びＯｓｉｍｅｔｉｎｉｂは、現在ＦＤＡに認可されている肺癌の分子標的治療薬である。図２９の結果から、Ｋ２５２ａ−Ｈ、及びＫ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルは、既存の肺癌治療薬耐性の肺癌に対して、高い細胞傷害活性を示すことが示された。【０１２４】
図２９のＰＣ１４株とＰＣ１４・ＰＥ６株とを抽出したものを図３０に示す。ＰＣ１４・ＰＥ６株は、ＰＣ１４株をマウスの尾静脈に投与し、胸腔内に転移した癌細胞を樹立する作業を６回行った癌細胞株である（Yano et al., Oncology Research 9:573-579 (1997)）。そのため、ＰＣ１４・ＰＥ６株は、極めて転移能が高く、悪性化した癌細胞株である。図２９及び図３０に示すように、ＰＣ１４株に対しては、Ｇｅｆｅｎｉｔｉｂ、Ａｆａｔｉｎｉｂ、及びＯｓｉｍｅｔｉｎｉｂは高い細胞傷害活性を示した。しかし、悪性化したＰＣ１４・ＰＥ６株に対しては、これらの既存の分子標的薬は、細胞傷害活性が著しく低下した。一方、Ｋ２５２ａ−Ｈ及びＫ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルでは、ＰＣ１４・ＰＥ６株に対する細胞傷害活性の方が高くなった。これらの結果は、Ｋ２５２ａ−Ｈ及びＫ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルは、悪性化した転移癌に対して、より有効であることが示している。なお、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセルとＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルとでは、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルの方が癌細胞に対する細胞傷害活性が高い傾向にあった。【０１２５】
［実施例１３］Ｋ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルの膵癌細胞に対する細胞毒性試験
各種膵癌細胞株を用いて、上記と同様に、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル及びＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルの細胞毒性試験を行った。結果を図３１に示す。ＢＸＰＣ３−Ｆ３株は、マウスへの同所移植後、肝転移した癌細胞株を樹立することを３回繰り返して悪性化させた転移株である。また、ＫＰ−３Ｌは、ヒト肝転移膵臓癌をヌードマウスの脾臓に移植後、肝転移した癌細胞株を樹立した転移株である（国立研究開発法人 医薬基盤・健康・栄養研究所  ＪＣＲＢ細胞バンクより入手）。また、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ及びＥｒｌｏｔｉｎｉｂは、現在認可されている膵癌治療薬である。
図３１に示すように、Ｋ２５２ａ−Ｈ及びＫ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルは、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ及びＥｒｌｏｔｉｎｉｂの効果が低いＫ−ｒａｓ変異株及び悪性化転移株に対して、有効であることが確認された。なお、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセルとＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルとでは、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルの方が癌細胞に対する細胞傷害活性が高い傾向にあった。【０１２６】
［実施例１４］Ｋ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルの頭頸部癌細胞に対する細胞毒性試験
各種頭頚部癌細胞株を用いて、上記と同様に、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル及びＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルの細胞毒性試験を行った。結果を図３２に示す。なお、ＣＤＤＰは、頭頸部癌の標準治療薬であるシスラプチンを示す。
図３２に示すように、Ｋ２５２ａ−Ｈ及びＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルは、いずれの頭頸部癌細胞株に対しても、シスラプチンよりも高い細胞傷害活性を示した。特に、Ｆｒａｄｕ株では、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルの細胞傷害活性が高かった。【０１２７】
［実施例１５］Ｋ２５２ａ−Ｈ結合ポリマーミセルの中皮腫細胞に対する細胞毒性試験
中皮腫細胞株ＭＳＴＯ−２１１Ｈを用いて、上記と同様に、Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル及びＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルの細胞毒性試験を行った。結果を図３３に示す。なお、ＣＤＤＰはシスラプチンを示し、中皮腫の標準治療薬である。Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄも中皮腫の標準治療薬である。
図３３に示すように、Ｋ２５２ａ−Ｈ及びＫ２５２ａ−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセルは、シスラプチン及びＰｅｍｅｔｒｅｘｅｄよりも高い細胞傷害活性を示した。Ｋ２５２ａ−Ｈ結合芳香族ポリマーミセルは、シスラプチンと同程度の細胞傷害活性を示した。【０１２８】
［実施例１６］ＪＱ−１−ヒドラジド（ＪＱ−１−Ｈ）との薬物複合体の調製
＜ＪＱ−１−Ｈの合成＞
ＪＱ−１は、ＢＯＣ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳ）から購入した。ＪＱ−１（２０ｍｇ）を無水メタノール（５００μＬ）に溶解し、無水ヒドラジン（５００μＬ）に添加した。反応混合物を４０℃で一晩撹拌した。反応混合物をエバポレートして乾燥体を得た。エバポレーションでは、トルエンを共エバポレーション溶媒として用いた。得られた生成物を、さらなる精製を行うことなく、薬物複合体とミセルの調製に使用した。得られたＪＱ−１−Ｈの１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図３４に示す。
なお、ＪＱ−１からのＪＱ−１−Ｈの合成スキームを以下に示す。【０１２９】
【化１６】
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【０１３０】
＜薬物複合体の調製＞
上記のように得られた生成物（ＪＱ−１−Ｈ）と芳香族アルデヒド基含有ポリマーとの反応をＤＭＳＯ溶液中で３５〜４０℃で７２時間行い、その後、透析により溶媒をジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に交換した（４時間透析、透析溶媒は１度交換）。この溶媒交換により透明なＤＭＡｃ溶液が生成された。【０１３１】
＜ＪＱ−１−Ｈ結合ポリマーミセルの調製＞
上記のように得られたＤＭＡｃ溶液をミセルの調製に使用した。薬物複合体のＤＭＡｃ溶液を、容量比で水１０に対して１の割合で、水に滴下してボルテックスし、ミセルを調製した。この溶液を、分画分子量（ＭＷＣＯ）３５００Ｄａの透析バッグで２４時間、水で透析した。透析媒体は、透析中に５回交換した。透析バッグ中の溶液をフィルター（０．２２μｍ）ろ過し、１００ｋＤａ  ＭＷＣＯのフィルターメンブランを用いた限外濾過により濃縮した。得られたＪＱ−１−Ｈ結合ポリマーミセルの１Ｈ−ＮＭＲ解析結果を図３５に示す。【０１３２】
＜ミセルサイズとＰＤＩの測定＞
ミセルのサイズと多分散指数（ＰＤＩ）を、動的光散乱（ＤＬＳ）手法により求めた。測定は、入射ビームとして緑色レーザー（５３２ｎｍ）を用い、１７３°の検出角度で、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を使用して、２５℃の温度条件で行った。結果を図３６及び図３７に示す。図３６は、芳香族アルデヒド基含有ポリマーとＪＱ−１−Ｈとの薬物複合体のミセル（以下、「ＪＱ−１−Ｈ結合芳香族ポリマーミセル」という。）であり、図３７は、脂肪族アルデヒド基含有ポリマーとＪＱ−１−Ｈとの薬物複合体のミセル（以下、「ＪＱ−１−Ｈ結合脂肪族ポリマーミセル」という。）である。【０１３３】
［実施例１７］ＪＱ−１−Ｈ結合ポリマーミセルの肺癌細胞に対する細胞毒性試験
実施例１２と同様の方法で、肺癌細胞株Ｈ１９７５及び肺癌細胞Ａ５４９に対するＪＱ−１−Ｈ結合芳香族ポリマーミセルの細胞毒性試験を行った。なお、添加濃度は、Ｈ１９７５が５μｇ／ｍｌ、Ａ５４９が３０μｇ／ｍｌとし、７２時間インキュベート後の生存％を確認した。【０１３４】
結果を図３８に示す。図３８の結果から、ＪＱ−１−Ｈ結合芳香族ポリマーミセルは、５μｇ／ｍＬの濃度では、ＪＱ−１及びＪＱ１−Ｈと同等の細胞傷害活性を示すことが確認された。【０１３５】
［実施例１８］Ｋ２５２ａ−Ｈのホットスポットキナーゼプロファイリング
Ｒｅｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ社に委託して、Ｍｏｎｔｈｌｙ  ２０２  ｍｕｔａｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  ｐａｎｅｌを用いて、Ｋ２５２ａ−Ｈのキナーゼプロファイリングを行った。キナーゼアッセイの条件は、以下の通りである。Ｋ２５２ａは、ＤＭＳＯに溶解し、１００ｎＭでアッセイを行った。
バッファー条件：２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、（適用可能であれば、２ｍＭ  ＭｎＣｌ２）
ＡＴＰ濃度：１０μＭ
反応時間：２時間【０１３６】
参考として、第１世代、第２世代、及び第３世代のチロシンキナーゼ阻害剤（ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：ＴＫＩ）と、その耐性変異を図３９Ａ及び図３９Ｂに示す。図３９Ａ及び図３９Ｂに示されるように、第１〜第３世代ＴＫＩは、Ｃ７９７Ｓ変異に有効ではないため、Ｃ７９７Ｓ変異に有効なＴＫＩが求められている。【０１３７】
ＥＧＦＲ変異に対するＫ２５２ａ−Ｈのキナーゼアッセイ結果を図４０に示す。図４０に示すように、Ｋ２５２ａ−Ｈは、多くのＴＫＩが有効性を示さないゲートキーパー変異（ｄ７４６−７５０／Ｔ７９０Ｍ、ｄ７４６−７５０／Ｔ７９０Ｍ／Ｃ７９７Ｓ、Ｌ８５８Ｒ，Ｔ７９０Ｍなど）に対して、特異的に高い活性を示す。
図４１Ａ〜Ｃに、キナーゼプロファイリングの結果を示す。図４２に、Ｋ２５２ａ−Ｈに対するキナーゼプロファイリングの結果、キナーゼ活性が３０％以下に抑制された突然変異キナーゼの一覧を示す。Ｋ２５２ａ−Ｈは、癌遺伝子であるｃ−ｋｉｔ／Ｆｌｔ３／ＲＥＴの強力な阻害剤であることが確認された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図４０】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４１Ｃ】
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【図４２】
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【国際調査報告】
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