(57)【要約】本発明は、ＥＰＲ効果による優れたがん集積性、及びナノ粒子化しないことによる腫瘍組織内での高い浸透性を示し、がん細胞内に効率的に取り込まれる新規含ホウ素化合物を提供することを目的とする。本発明は、ホウ素クラスター及びポリエーテルを有し、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるアミノ酸を構成アミノ酸とするペプチド化合物又はその塩に関する。2017164334.tif 000094
2017164334.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホウ素クラスター及びポリエーテルを有し、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるアミノ酸を構成アミノ酸とするペプチド化合物又はその塩。
【請求項２】
ホウ素クラスターが側鎖に結合したアミノ酸残基を少なくとも１個有する請求項１に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項３】
ホウ素クラスターが側鎖に結合したアミノ酸残基が、式（１）：
【化１】
2017164334.tif 000089
［式中、Ｒ１は、それぞれ独立して、ホウ素クラスターからなる１価の基又はそれがリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖を示し、当該α−アミノ酸の側鎖は、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって、環を形成していてもよく、環を形成する場合は該窒素原子に結合するＨは存在しない。］
で表される、請求項２に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項４】
Ｒ１が、それぞれ独立して、式（Ｂ１）：
【化２】
2017164334.tif 000090
［式中、Ｍ２＋は、カチオンを示し、●は、ＢＨを示し、＊は、リンカー構造との結合部位を示す。］
で表される基がリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖である、請求項３に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項５】
Ｒ１が、それぞれ独立して、式（Ｒ１ａ）：
【化３】
2017164334.tif 000091
［式中、Ｒａは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルボキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいメルカプト基、炭素数が６〜１４のアリール基、又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し；Ｑ２は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−、−ＳＳ−、−Ｐｈ−、−ＯＰｈＯ−、−ＯＰｈ−、−ＰｈＯ−、−ＳＰｈＳ−、−ＳＰｈ−、−ＰｈＳ−、−ＮＨＰｈＮＨ−、−ＮＨＰｈ−、−ＰｈＮＨ−、−複素環−、−Ｏ−複素環−Ｏ−、−Ｏ−複素環−、−複素環−Ｏ−、−Ｓ−複素環−Ｓ−、−Ｓ−複素環−、−複素環−Ｓ−、−ＮＨ−複素環−ＮＨ−、−ＮＨ−複素環−又は−複素環−ＮＨ−（ここで、Ｐｈは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン又は１，４−フェニレンを示す。）を示し；Ｐ３は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−を示し；Ｍ２＋は、カチオンを示し；●は、ＢＨを示し；ｄは、１又は２を示し；ｆは、それぞれ独立して、１〜２０の整数を示し；ｇは、０〜２０の整数を示し；＊＊は、α−アミノ酸のα−炭素との結合部位を示す。］
で表される基である、請求項４に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項６】
Ｒ１のα−アミノ酸が、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ノルロイシン、ノルバリン、チロニン、シトルリン、α-アミノ酪酸、ホモシステイン及びペニシラミンからなる群から
選ばれる、請求項３〜５の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項７】
Ｒ１のα−アミノ酸が、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる群から選ばれる、請求項３〜５の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項８】
ペプチド化合物のＣ末端のカルボキシ基及び／又はペプチド化合物のＮ末端のアミノ基がポリエーテルからなる１価の基で置換されている、請求項１〜７の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項９】
ペプチド化合物のＣ末端のカルボキシ基及び／又はペプチド化合物のＮ末端のアミノ基が、式（Ｐ１）：
【化４】
2017164334.tif 000092
［式中、Ｚは、置換対象がカルボキシ基の場合−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−を、置換対象がアミノ基の場合−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−又は−ＣＯＯ−を示し、Ｒｄ及びＲｅは、それぞれ独立して水素原子又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し、ｓは、それぞれ独立して１〜１０の整数であり、ｔは、それぞれ独立して２〜１０の整数であり、ｕは、それぞれ独立して１以上の整数であり、＊＊＊は、結合部位を示す。］
で表される基で置換されている、請求項１〜８の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１０】
ペプチドがポリアミノ酸である請求項１〜９の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１１】
ペプチドのアミノ酸残基数に対するホウ素クラスターの結合数の比が０．１以上である、請求項１〜１０の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１２】
ペプチドのアミノ酸残基数が２００以下である、請求項１〜１１の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１３】
ポリエーテルの数平均分子量が、５０，０００未満である、請求項１〜１２の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１４】
分子量が、１００，０００未満である、請求項１〜１３の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１５】
式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）：
【化５】
2017164334.tif 000093
［式中、
Ｒ１は、それぞれ独立して、ホウ素クラスターからなる１価の基又はそれがリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖を示し、
Ｒ２は、それぞれ独立して、置換基を有していてもよい、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖を示し、
Ｒ１及びＲ２のα−アミノ酸の側鎖は、それぞれ、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって、環を形成していてもよく、環を形成する場合は該窒素原子に結合するＨは存在せず、
ｂが１以上の場合、Ｒ１を有するα−アミノ酸残基とＲ２を有するα−アミノ酸残基とは、任意に共重合しており、
Ｘ１、及びｃが１の場合のＹ２は、それぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）炭素数が１〜６のアルキル基、
（３）炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基、又は
（４）ポリエーテルからなる１価の基を示し、
Ｘ２、及びｃが１の場合のＹ１は、それぞれ独立して、
（１）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、
（２）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいアミノ基、又は
（３）ポリエーテルからなる１価の基を示し、
ｃが２以上の場合のＹ１及びＹ２は、それぞれ、ポリエーテルからなるｃ価の基を示し、
式（Ｉａ）においては、Ｒ２のα−アミノ酸の側鎖の置換基、並びにＸ１及びＹ１のうち少なくともいずれか１つが、式（Ｉｂ）においては、Ｒ２のα−アミノ酸の側鎖の置換基、並びにＸ２及びＹ２のうち少なくともいずれか１つが、ポリエーテルからなる１価の基又はポリエーテルからなるｃ価の基であり、
ａ及びｃは、それぞれ独立して、１以上の整数を示し、
ｂは、０以上の整数を示し、
ａとｂの合計は、２以上である。］
で表される、請求項１〜１４の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１６】
ｃが１である、請求項１４又は１５に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１７】
腫瘍疾患のホウ素中性子捕捉療法に用いるための請求項１〜１６の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩。
【請求項１８】
請求項１〜１６の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１９】
腫瘍疾患のホウ素中性子捕捉療法に用いるための医薬を製造するための請求項１〜１６の何れか１項に記載のペプチド化合物又はその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ホウ素中性子捕捉療法に有用な新規含ホウ素化合物に関し、特に、ホウ素クラスターを導入したペプチド化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
中性子捕捉療法（ＮＣＴ）は、外科手術が困難な固形がんに対して優れた治療効果を示し、且つ患者に負担の少ない低侵襲治療法として注目されている。ＮＣＴは、１０Ｂ、１５７Ｇｄ等のような、中性子との反応断面積が大きい元素を含有する分子を体内に投与した後に、患部に対して低エネルギーの熱中性子線或いは熱外中性子線を照射し、核反応によって発生する細胞障害性の放射線（α線等）により、がん細胞を死滅させる治療法である。中でも、ホウ素化合物を用いるホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）において、臨床応用されている化合物としては、例えばホウ素クラスターのＢＳＨ（メルカプトウンデカハイドロドデカボレート）が知られている。【０００３】
しかしながら、ＢＳＨは速やかに排泄され、血中滞留性や腫瘍滞留性に乏しく、現状では非常に高濃度の化合物を体内に投与しながら、患部に熱中性子線或いは熱外中性子線を照射する方法が取られており、この方法では、１０Ｂの腫瘍内濃度が十分ではないためにがん細胞を根治できない場合があること、正常組織への傷害が起こりうること、さらには熱中性子線或いは熱外中性子線のピンポイント照射が必要なために適用できる疾患が限定される等の問題があった。【０００４】
これに対し、これまで、腫瘍内の１０Ｂ濃度を高めることを目的として、抗体／ホウ素化合物コンジュゲート、カチオン性ポリマー／ホウ素化合物コンジュゲート、Ｃｅｌｌ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  （ＣＰＰ）／ホウ素化合物コンジュゲート、ホウ素化合物封入リポソーム、高分子ミセル等の高濃度のホウ素化合物をがん組織に送達できるさまざまなドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）が開発されてきた［Ｍ．Ｊ．Ｌｕｄｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，３２：２８２４−２８３６（２０１５）］。【０００５】
特に、リポソーム、高分子ミセルのようなナノ粒子の場合には、血中滞留性を上げ、Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  （ＥＰＲ）効果（がん組織では腫瘍血管の透過性の亢進と未発達なリンパ系の構築によって高分子物質が集積しやすい環境が形成されている効果）によって、がん組織に選択的に集積し、さらに腫瘍における長期滞留性によって、低分子量のＢＳＨと比較して高いがん組織／血中１０Ｂ濃度比が達成された後に、熱中性子線或いは熱外中性子線の照射を行うことができるため、広く研究されてきた。【０００６】
しかしながら、ナノ粒子型ＤＤＳを用いた場合には完全に均一な腫瘍内分布を達成することが困難であり［Ｓ．Ｓｔａｐｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，８：ｅ８１１５７（２０１３）］、繰り返し投与を行う抗がん剤治療では問題とならないが、ホウ素中性子捕捉療法においては、不均一なホウ素化合物の分布は一部のがん細胞の生存へと繋がり、治療効果の低下やがんの再発の原因となる。【０００７】
このため、ホウ素中性子捕捉療法のためのＤＤＳには、ホウ素化合物を腫瘍組織内の深部のがん細胞まで送達できる、優れた組織浸透性が必要であると考えられる。【０００８】
一方、ホウ素化合物の細胞内移行を重視したＤＤＳ設計としては、カチオン性ポリマー／ホウ素化合物コンジュゲート［Ａ．Ｋ．Ａｚａｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，１０６：１４−２５（２００５）；Ｍ．Ｕｍａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ，６９：１７６５−１７６７（２０１１）］やＣＰＰ／ホウ素化合物コンジュゲート［Ｈ．Ｍｉｃｈｉｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，３５：３３９６−３４０５（２０１４）］が開発されているが、一般的にこれらのＣＰＰやカチオン性ポリマーは生体分子と非特異的な相互作用を示すために、ＥＰＲ効果によるがん選択的な集積効果が得られにくいと考えられる。【０００９】
また、ＰＥＧを有するカチオン性デンドリマーも開発されているが［Ｂ．Ｑｕａｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．，  ３５，  ９０９−９１１（１９９６）］、多く存在するアミノ基のカチオン性により膜透過性が高く、生体分子に非特異的に吸着し、がん選択的に送達することは困難である。また、腫瘍に均一に分布することは期待できない。さらに、その強い正電荷により、生体内で異物として認識されてしまうことも考えられる。また、ＢＮＣＴで用いる場合、通常の医薬と異なり、多量投与が必要となるが、塩基性アミノ酸のポリマーは、細胞毒性が知られており、多量投与には向いていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｍ．Ｊ．Ｌｕｄｅｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，３２：２８２４−２８３６（２０１５）
【非特許文献２】Ｓ．Ｓｔａｐｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，８：ｅ８１１５７（２０１３）
【非特許文献３】Ａ．Ｋ．Ａｚａｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，１０６：１４−２５（２００５）
【非特許文献４】Ｍ．Ｕｍａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ，６９：１７６５−１７６７（２０１１）
【非特許文献５】Ｈ．Ｍｉｃｈｉｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，３５：３３９６−３４０５（２０１４）
【非特許文献６】Ｂ．Ｑｕａｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．Ｅｎｇｌ，  ３５，  ９０９−９１１（１９９６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、ＥＰＲ効果による優れたがん集積性、及びナノ粒子化しないことによる腫瘍組織内での高い浸透性を示し、がん細胞内に効率的に取り込まれる新規含ホウ素化合物を提供し、それにより、ホウ素中性子捕捉療法において、効果的な腫瘍疾患の治療を実現することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、ポリエーテル、及びＢＳＨのようなホウ素クラスターを有し、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるアミノ酸を構成アミノ酸とするペプチド化合物が、ＥＰＲ効果による優れたがん集積性、及びナノ粒子化しないことによる腫瘍組織内での高い浸透性を示し、さらには、がん細胞内に効率的に取り込まれることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、以下［１］〜［３６］の通りである。【００１３】
［１］  ホウ素クラスター及びポリエーテルを有し、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるアミノ酸を構成アミノ酸とするペプチド化合物又はその塩。【００１４】
［２］  アミノ酸が構成するペプチドが、直鎖ペプチドである上記［１］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００１５】
［３］  ホウ素クラスターが側鎖に結合したアミノ酸残基を少なくとも１個有する上記［１］または［２］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００１６】
［４］  ホウ素クラスターが側鎖に結合したアミノ酸残基が、式（１）：【００１７】
【化１】
2017164334.tif 000003
【００１８】
［式中、Ｒ１は、それぞれ独立して、ホウ素クラスターからなる１価の基又はそれがリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖を示し、当該α−アミノ酸の側鎖は、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって、環を形成していてもよく、環を形成する場合は該窒素原子に結合するＨは存在しない。］
で表される、上記［３］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００１９】
［５］  Ｒ１が、それぞれ独立して、式（Ｂ１）：【００２０】
【化２】
2017164334.tif 000004
【００２１】
［式中、Ｍ２＋は、カチオンを示し、●は、ＢＨを示し、＊は、リンカー構造との結合部位を示す。］
で表される基がリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖である、上記［４］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００２２】
［６］  Ｒ１が、それぞれ独立して、式（Ｒ１ａ）：【００２３】
【化３】
2017164334.tif 000005
【００２４】
［式中、Ｒａは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルボキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいメルカプト基、炭素数が６〜１４のアリール基、又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し；Ｑ２は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−、−ＳＳ−、−Ｐｈ−、−ＯＰｈＯ−、−ＯＰｈ−、−ＰｈＯ−、−ＳＰｈＳ−、−ＳＰｈ−、−ＰｈＳ−、−ＮＨＰｈＮＨ−、−ＮＨＰｈ−、−ＰｈＮＨ−、−複素環−、−Ｏ−複素環−Ｏ−、−Ｏ−複素環−、−複素環−Ｏ−、−Ｓ−複素環−Ｓ−、−Ｓ−複素環−、−複素環−Ｓ−、−ＮＨ−複素環−ＮＨ−、−ＮＨ−複素環−又は−複素環−ＮＨ−（ここで、Ｐｈは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン又は１，４−フェニレンを示す。）を示し；Ｐ３は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−を示し；Ｍ２＋は、カチオンを示し；●は、ＢＨを示し；ｄは、１又は２を示し；ｆは、それぞれ独立して、１〜２０の整数を示し；ｇは、０〜２０の整数を示し；＊＊は、α−アミノ酸のα−炭素との結合部位を示す。］
で表される基である、上記［５］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００２５】
［７］  Ｒ１のα−アミノ酸が、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ノルロイシン、ノルバリン、チロニン、シトルリン、α-アミノ酪酸、ホモシステイン及びペニシラミンからなる群から選ばれる、上記［４］〜［６］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００２６】
［８］  Ｒ１のα−アミノ酸が、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる群から選ばれる、上記［４］〜［６］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００２７】
［９］  ホウ素クラスターが、ペプチドの構成アミノ酸に、直接又はリンカー構造を介して結合する、上記［１］〜［３］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００２８】
［１０］  リンカー構造が、炭素原子、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から選ばれる１〜２００個の主鎖構成原子からなる２価の基である、上記［４］〜［９］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００２９】
［１１］  リンカー構造が、式（Ｌ’）：【００３０】
【化４】
2017164334.tif 000006
【００３１】
［式中、Ｒａは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルボキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいメルカプト基、炭素数が６〜１４のアリール基、又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し；Ｐ２及びＱ２は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−、−ＳＳ−、−Ｐｈ−、−ＯＰｈＯ−、−ＯＰｈ−、−ＰｈＯ−、−ＳＰｈＳ−、−ＳＰｈ−、−ＰｈＳ−、−ＮＨＰｈＮＨ−、−ＮＨＰｈ−、−ＰｈＮＨ−、−複素環−、−Ｏ−複素環−Ｏ−、−Ｏ−複素環−、−複素環−Ｏ−、−Ｓ−複素環−Ｓ−、−Ｓ−複素環−、−複素環−Ｓ−、−ＮＨ−複素環−ＮＨ−、−ＮＨ−複素環−又は−複素環−ＮＨ−（ここで、Ｐｈは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン又は１，４−フェニレンを示す。）を示し；ｆは、それぞれ独立して、１〜２０の整数を示し；ｇは、０〜２０の整数を示し、＊１はアミノ酸の側鎖との結合部位であり、＊２はホウ素クラスターとの結合部位である。］
で表される２価の基である、上記［４］〜［１０］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００３２】
［１２］  ペプチド化合物のＣ末端のカルボキシ基及び／又はペプチド化合物のＮ末端のアミノ基がポリエーテルからなる１価の基で置換されている、上記［１］〜［１１］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００３３】
［１３］  ペプチド化合物のＣ末端のカルボキシ基及び／又はペプチド化合物のＮ末端のアミノ基が、式（Ｐ１）：【００３４】
【化５】
2017164334.tif 000007
【００３５】
［式中、Ｚは、置換対象がカルボキシ基の場合−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−を、置換対象がアミノ基の場合−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−又は−ＣＯＯ−を示し、Ｒｄ及びＲｅは、それぞれ独立して水素原子又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し、ｓは、それぞれ独立して１〜１０の整数であり、ｔは、それぞれ独立して２〜１０の整数であり、ｕは、それぞれ独立して１以上の整数であり、＊＊＊は、結合部位を示す。］
で表される基で置換されている、上記［１］〜［１２］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００３６】
［１４］  ホウ素クラスターが、３〜２０個のホウ素原子を有するホウ素クラスターである、上記［１］〜［１３］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００３７】
［１５］  ホウ素クラスターが、水素化ホウ素化合物、及びその１個以上のホウ素原子がそれぞれ独立して炭素原子又は窒素原子で置換された化合物、並びにそれらの金属錯体からなる群から選ばれる、上記［１］〜［１４］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００３８】
［１６］  ホウ素クラスターの１０Ｂの同位体比が、５０%以上である、上記［１］〜［１５］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００３９】
［１７］  ペプチドがポリアミノ酸である上記［１］〜［１６］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４０】
［１８］  ペプチドのアミノ酸残基数に対するホウ素クラスターの結合数の比が０．１以上である、上記［１］〜［１７］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４１】
［１９］  ペプチドのアミノ酸残基数が２００以下である、上記［１］〜［１８］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４２】
［２０］  ポリエーテルが、ポリアルキレングリコール単位を含む直鎖又は分枝鎖の水溶性重合体である、上記［１］〜［１９］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４３】
［２１］  ポリアルキレングリコール単位が、ポリエチレングリコール単位である、上記［２０］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００４４】
［２２］  ポリエーテルの数平均分子量が、５０，０００未満である、上記［１］〜［２１］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４５】
［２３］  ペプチドの構成アミノ酸が、側鎖にカルボキシ基、ヒドロキシ基及びメルカプト基から選ばれる活性基を有するアミノ酸である、上記［１］〜［２２］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４６】
［２４］  ペプチドの構成アミノ酸が、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれる、上記［１］〜［２３］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４７】
［２５］  分子量が、１００，０００未満である、上記［１］〜［２４］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００４８】
［２６］  式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）：【００４９】
【化６】
2017164334.tif 000008
【００５０】
［式中、
Ｒ１は、それぞれ独立して、ホウ素クラスターからなる１価の基又はそれがリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖を示し、
Ｒ２は、それぞれ独立して、置換基を有していてもよい、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖を示し、
Ｒ１及びＲ２のα−アミノ酸の側鎖は、それぞれ、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって、環を形成していてもよく、環を形成する場合は該窒素原子に結合するＨは存在せず、
ｂが１以上の場合、Ｒ１を有するα−アミノ酸残基とＲ２を有するα−アミノ酸残基とは、任意に共重合しており、
Ｘ１、及びｃが１の場合のＹ２は、それぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）炭素数が１〜６のアルキル基、
（３）炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基、又は
（４）ポリエーテルからなる１価の基を示し、
Ｘ２、及びｃが１の場合のＹ１は、それぞれ独立して、
（１）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、
（２）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいアミノ基、又は
（３）ポリエーテルからなる１価の基を示し、
ｃが２以上の場合のＹ１及びＹ２は、それぞれ、ポリエーテルからなるｃ価の基を示し、
式（Ｉａ）においては、Ｒ２のα−アミノ酸の側鎖の置換基、並びにＸ１及びＹ１のうち少なくともいずれか１つが、式（Ｉｂ）においては、Ｒ２のα−アミノ酸の側鎖の置換基、並びにＸ２及びＹ２のうち少なくともいずれか１つが、ポリエーテルからなる１価の基又はポリエーテルからなるｃ価の基であり、
ａ及びｃは、それぞれ独立して、１以上の整数を示し、
ｂは、０以上の整数を示し、
ａとｂの合計は、２以上である。］
で表される、上記［１］〜［２５］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００５１】
［２７］  ｃが１である、上記［２６］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００５２】
［２８］  Ｙ１及びＹ２が、ポリエーテルからなる１価の基である、上記［２７］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００５３】
［２９］  Ｙ１及びＹ２が、式（Ｐ１）：【００５４】
【化７】
2017164334.tif 000009
【００５５】
［式中、Ｚは、式（Ｉａ）においては−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−を、式（Ｉｂ）においては−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−又は−ＣＯＯ−を示し、Ｒｄ及びＲｅは、それぞれ独立して水素原子又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し、ｓは、それぞれ独立して１〜１０の整数であり、ｔは、それぞれ独立して２〜１０の整数であり、ｕは、それぞれ独立して１以上の整数であり、＊＊＊は、結合部位を示す。］
で表される基で置換されている、上記［２７］に記載のペプチド化合物又はその塩。【００５６】
［３０］  Ｘ１が、水素原子であり、Ｘ２が、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、又は炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいアミノ基である、上記［２６］〜［２９］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００５７】
［３１］  ａとｂの合計が、２００以下の整数である、上記［２６］〜［３０］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００５８】
［３２］  ａとｂの合計に対するａの比が、０．１以上である、上記［２６］〜［３１］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００５９】
［３３］  腫瘍疾患のホウ素中性子捕捉療法に用いるための上記［１］〜［３２］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩。【００６０】
［３４］  上記［１］〜［３２］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。【００６１】
［３５］  腫瘍疾患のホウ素中性子捕捉療法に用いるための医薬を製造するための上記［１］〜［３２］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩の使用。【００６２】
［３６］  上記［１］〜［３２］の何れかに記載のペプチド化合物又はその塩の必要量を哺乳動物に投与することを特徴とするホウ素中性子捕捉療法による腫瘍疾患の治療方法。
【発明の効果】
【００６３】
本発明の化合物は、ＥＰＲ効果による優れたがん集積性、及びナノ粒子化しないことによる腫瘍組織内での高い浸透性を示し、がん細胞内に効率的に取り込まれるため、これを用いるホウ素中性子捕捉療法ではより効果的に腫瘍疾患を治療できる。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】ＨＵＶＥＣに対する細胞毒性試験における実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物並びに１０Ｂ−ＢＳＨの濃度別の細胞生存率に関するグラフを示す。
【図２】Ｃ２６がん細胞に対する細胞毒性試験における実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物並びに１０Ｂ−ＢＳＨの濃度別の細胞生存率に関するグラフを示す。
【図３】実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物並びに１０Ｂ−ＢＳＨのＣ２６がん細胞内取込量に関するグラフを示す。グラフの縦軸は、１０Ｂ−ＢＳＨをＣ２６がん細胞に添加後１時間の細胞内取込量を１とした時の、各化合物の相対的な細胞内取込量を示す。
【図４】実施例１の化合物をＡｌｅｘａ４８８（登録商標）で蛍光標識した化合物を添加したＣ２６がん細胞の共焦点レーザー顕微鏡（ＣＬＳＭ）による画像を示す。
【図５】実施例７の化合物、及び合成例２１の化合物の対カチオンが２セシウムカチオンである化合物のＣＴ２６がん細胞内取込量に関するグラフを示す。
【図６】実施例１〜３若しくは比較例１若しくは２の化合物又は１０Ｂ−ＢＳＨを、Ｃ２６がん細胞を皮下移植したマウスに投与した後の血漿中濃度推移に関するグラフを示す。グラフの縦軸は、１  ｍｌの血漿当り、投与量（ＩＤ：ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｄｏｓｅ）の何％が送達されたかを示す。
【図７】実施例１〜３若しくは比較例１若しくは２の化合物又は１０Ｂ−ＢＳＨを、Ｃ２６がん細胞を皮下移植したマウスに投与した後の腫瘍細胞中の集積量推移に関するグラフを示す。グラフの縦軸は、１  ｇの腫瘍当り、投与量（ＩＤ：ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｄｏｓｅ）の何％が送達されたかを示す。
【図８】実施例７の化合物又は天然型Ｂ−ＢＳＨを、ＣＴ２６がん細胞を皮下移植したマウスに投与した後の腫瘍細胞中の集積量推移に関するグラフを示す。グラフの縦軸は、１  ｇの腫瘍当り、投与量（ＩＤ：ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｄｏｓｅ）の何％が送達されたかを示す。
【図９】実施例１の化合物又は１０Ｂ−ＢＳＨを、Ｃ２６がん細胞を皮下移植したマウスに投与及び熱中性子線を１時間照射後又は照射なしの場合の相対腫瘍体積推移に関するグラフを示す。
【図１０】実施例１の化合物又は１０Ｂ−ＢＳＨを、Ｃ２６がん細胞を皮下移植したマウスに投与及び熱中性子線を１時間照射後又は照射なしの場合のマウスの体重推移に関するグラフを示す。
【図１１】実施例１の化合物と、リポソーム製剤について、担がんマウスを用いた腫瘍浸透性の比較に関する、共焦点レーザー顕微鏡（ＣＬＳＭ）による画像を示す。左上図は、Ｃ２６腫瘍組織のヘマトキシリン−エオシン染色を示す。左下図は、実施例１の化合物をＡｌｅｘａ６４７（登録商標）で蛍光標識した化合物とＤｏｘｉｌ（登録商標）のＣ２６腫瘍組織分布を示す。中央図は、ＢｘＰＣ３腫瘍組織のヘマトキシリン−エオシン染色を示す。右図は、実施例１の化合物をＡｌｅｘａ６４７（登録商標）で蛍光標識した化合物とＤｏｘｉｌ（登録商標）のＢｘＰＣ３腫瘍組織分布を示す。実施例１の化合物をＡｌｅｘａ６４７（登録商標）で蛍光標識した化合物は緑色、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）は赤色、両化合物が共在する部分は黄色として示される。
【発明を実施するための形態】
【００６５】
本発明は、ホウ素クラスター及びポリエーテルを有し、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるアミノ酸を構成アミノ酸とするペプチド化合物（以下、「本発明のペプチド化合物」という）又はその塩を提供する。
【００６６】
本明細書において「ペプチド」とは、２個以上のアミノ酸がペプチド結合によって結合したものを意味する。ペプチドのアミノ酸残基数は、好ましくは、３以上であり、より好ましくは、５以上であり、さらに好ましくは、１０以上である。ペプチドのアミノ酸残基数は、好ましくは、２００以下であり、より好ましくは、１５０以下であり、さらに好ましくは、１００以下である。
【００６７】
本明細書において「ペプチド化合物」とは、任意の置換基を有していてもよいペプチドを意味する。ペプチド化合物のペプチドは、多くのホウ素クラスターを結合させるという観点から、ペプチドデンドリマーや分岐ペプチドではなく、直鎖ペプチドであることが好ましい。
【００６８】
本明細書において「アミノ酸」とは、天然型又は非天然型の公知のアミノ酸を意味する。
【００６９】
本明細書において「中性アミノ酸」とは、天然型又は非天然型の公知の中性アミノ酸を意味する。例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、ホモセリン、ノルロイシン、ノルバリン、チロニン、シトルリン、α-アミノ酪酸、ホモシステイン、ペニシラミン、プロリン、ヒドロキシプロリン、β−アラニン、γ-アミノ酪酸等である。
【００７０】
本明細書において「酸性アミノ酸」とは、天然型又は非天然型の公知の酸性アミノ酸を意味する。例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸等である。
【００７１】
ペプチドの構成アミノ酸は、好ましくは、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ホモシステイン、ペニシラミン、ヒドロキシプロリン等の側鎖にカルボキシ基、ヒドロキシ基、メルカプト基等の活性基を有するアミノ酸であり；なかでも、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれることがより好ましく；グルタミン酸であることが特に好ましい。
【００７２】
これらのアミノ酸は、Ｄ型、Ｌ型又はそれらの混合物であってもよい。
【００７３】
ある実施形態では、ペプチドがポリアミノ酸である。即ち、ペプチドの構成アミノ酸がすべて同一のアミノ酸である。
【００７４】
ある実施形態では、ペプチド化合物は、ホウ素クラスターが側鎖に結合したアミノ酸残基を少なくとも１個有する。ペプチドのアミノ酸残基数に対する、ホウ素クラスターが側鎖に結合したアミノ酸残基数の比は、好ましくは、０．１以上であり、より好ましくは、０．２以上であり、さらに好ましくは、０．３以上である。
【００７５】
本明細書において「アミノ酸残基」とは、ペプチドの構成アミノ酸の１単位であって、アミノ酸のＣ末端のＯＨ及び／又はＮ末端のＨを除いた基を意味する。本明細書においてアミノ酸の「側鎖」とは、ペプチドを構成する場合に、その主鎖を構成しない分岐鎖を意味する。
【００７６】
本明細書において「ホウ素クラスター」とは、主にホウ素原子が複数集合して一つに結合して得られる構造を有するイオン性又は非イオン性の公知物質を意味し、３〜２０個のホウ素原子を有するホウ素クラスターであることが好ましく、８〜２０個のホウ素原子を有するホウ素クラスターであることがより好ましく、１０〜１２個のホウ素原子を有するホウ素クラスターであることが特に好ましい。
【００７７】
ホウ素クラスターは、それを構成する骨格原子として、ホウ素原子以外に、炭素原子、窒素原子、酸素原子、硫黄原子等を含んでいてもよい。ホウ素クラスターにおいて、炭素原子、窒素原子、酸素原子、硫黄原子等のその他の原子の数は、好ましくは、０〜５であり、より好ましくは０〜２である。
【００７８】
また、ホウ素クラスターは、ニッケルやコバルト等の遷移金属との金属錯体であってもよい。
【００７９】
ホウ素クラスターは、イオン性であることが好ましく、また、水溶性であることが好ましい。
【００８０】
ホウ素クラスターとしては、例えば、［Ｂ３Ｈ８］−Ｍ＋、［Ｂ６Ｈ６］２−Ｍ２＋、［Ｂ７Ｈ７］２−Ｍ２＋、［Ｂ８Ｈ８］２−Ｍ２＋、［Ｂ９Ｈ９］２−Ｍ２＋、［Ｂ１０Ｈ１０］２−Ｍ２＋、［Ｂ１０Ｈ１３］−Ｍ＋、［Ｂ１１Ｈ１１］２−Ｍ２＋、［Ｂ１１Ｈ１４］−Ｍ＋、［Ｂ１２Ｈ１２］２−Ｍ２＋、［Ｂ２０Ｈ１８］４−Ｍ４＋（式中、Ｍ＋、Ｍ２＋及びＭ４＋はそれぞれカチオンを示す。）のような水素化ホウ素化合物、及びそれらの１個以上（好ましくは１〜５個、より好ましくは１又は２個）のホウ素原子がそれぞれ独立して炭素原子又は窒素原子で置換された化合物（例えば、［Ｃ２Ｂ９Ｈ１１］−Ｍ＋、［ＣＢ１１Ｈ１２］−Ｍ＋、Ｃ２Ｂ１０Ｈ１２、ＮＢ８Ｈ９）、並びにそれらの金属錯体（例えばニッケル錯体、コバルト錯体）（例えば、［（Ｃ２Ｂ９Ｈ１１）２Ｃｏ］−Ｍ＋、［（Ｃ２Ｂ９Ｈ１１）２Ｎｉ］−Ｍ＋）が挙げられる。
【００８１】
具体例としては、下記式で表されるホウ素クラスターが挙げられる。
【００８２】
【化８】
2017164334.tif 000010
【００８３】
［式中、●はＢＨを示し、その他の記号は上記定義の通りである。］
【００８４】
中でも好ましくは、下記式で表されるホウ素クラスターである。
【００８５】
【化９】
2017164334.tif 000011
【００８６】
［式中、各記号は上記定義の通りである。］
【００８７】
Ｍ＋、Ｍ２＋又はＭ４＋で表されるカチオンは、医薬上許容されるカチオンであればよく、特に限定されるものではない。Ｍ＋、Ｍ２＋及びＭ４＋は、単一成分であってもよいし、２種以上の成分の組み合わせであってもよく、それぞれのカチオンは１価であっても多価であってもよい。好ましくは、水素イオン、アルカリ金属イオン（例えば、ナトリウムイオン、カリウムイオン、セシウムイオン等）、アルカリ土類金属イオン（例えば、マグネシウムイオン、カルシウムイオン等）、アミン系イオン（例えば、テトラメチルアンモニウムイオン、テトラブチルアンモニウムイオン等）、ポリアミン（例えば、１，４−ジアミノブタン、スペルミン、スペルミジン）の１価又は多価のアンモニウムイオン等から選ばれるカチオンであり、より好ましくは、アルカリ金属イオンであり、特に好ましくは、ナトリウムイオンである。
【００８８】
ホウ素クラスターの１０Ｂの同位体比は、好ましくは、１９％以上であり、より好ましくは、５０%以上であり、さらに好ましくは、８０%以上である。
【００８９】
本発明のペプチド化合物において、ホウ素クラスターは、例えば、ペプチドの構成アミノ酸に、直接又はリンカー構造を介して結合する。ホウ素クラスターは、ペプチドの構成アミノ酸の側鎖に１個以上結合していることが好ましく、１〜３個がより好ましく、１個が特に好ましい。
【００９０】
ある好ましい実施形態では、ホウ素クラスターは、アミノ酸の側鎖に、１価の基（ホウ素クラスターの１個の任意のＨを除いてなる基を意味し、以下「ホウ素クラスターからなる１価の基」という）として、直接、或いはリンカー構造を介して、共有結合していることがより好ましい。
【００９１】
ある実施形態では、ホウ素クラスター（又はリンカー構造）は、例えば、アミノ酸の側鎖の炭素原子、窒素原子又は硫黄原子上の任意のＨ又はＯＨと置換して結合しており、アミノ酸の活性基のＨ及びＯＨ（例えば、カルボキシ基のＯＨ並びにヒドロキシ基及びメルカプト基のＨ）のから選ばれる基と置換して結合していることがより好ましく、カルボキシ基のＯＨと置換して結合していることがさらに好ましい。
【００９２】
ホウ素クラスター（又はリンカー構造）が、カルボキシ基との間で形成し得る結合としては、例えば、アミド結合（−ＣＯＮＨ−）、エステル結合（−ＣＯＯ−）、チオエステル結合（−ＣＯＳ−）等が挙げられ、好ましくは、アミド結合である。ヒドロキシ基との間で形成し得る結合としては、エステル結合（−ＯＣＯ−）、ウレタン結合（−ＯＣＯＮＨ−）等が挙げられる。メルカプト基との間で形成し得る結合としては、チオエステル結合（−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、ジスルフィド結合（−ＳＳ−）等が挙げられる。
【００９３】
ペプチドのアミノ酸残基数に対する、ホウ素クラスターの結合数の比は、好ましくは、０．１以上であり、より好ましくは、０．２以上であり、さらに好ましくは、０．３以上である。
【００９４】
ホウ素クラスターからなる１価の基は、好ましくは、式（Ｂ１）〜式（Ｂ１５）：
【００９５】
【化１０】
2017164334.tif 000012
【００９６】
［式中、＊は、アミノ酸の側鎖又はリンカー構造との結合部位を示し、その他の記号は上記定義の通りである。］
の何れかで表される基であり、特に好ましくは、式（Ｂ１）で表される基である。
【００９７】
本明細書における「リンカー構造」は、ホウ素クラスターとアミノ酸の側鎖とを連結させることができる薬学的に許容される構造であれば特に限定されるものではない。例えば、炭素原子、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から選ばれる主鎖構成原子（好ましくは、１〜２００個、より好ましくは、１〜３０個）からなる２価の基が挙げられる。
【００９８】
ある実施形態では、「リンカー構造」は、好ましくは、下記式（Ｌ）で表される２価の基である：
【００９９】
【化１１】
2017164334.tif 000013
【０１００】
［式中、＊１はアミノ酸の側鎖との結合部位であり、＊２はホウ素クラスターとの結合部位であり、Ｐ１及びＱ１は、それぞれ独立して 、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−、−ＳＳ−、−ＮＨＣＯＳ−、−ＳＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＨ２ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＣＨ２ＮＨ−、−ＮＨＣＨ２ＣＯＯ−、−ＯＣＯＣＨ２ＮＨ−、−ＯＣＨ２ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２ＣＯＯ−、−ＯＣＯＣＨ２Ｏ−、−ＳＣＨ２ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＣＨ２Ｓ−、−ＳＣＨ２ＣＯＯ−、−ＯＣＯＣＨ２Ｓ−、−Ｎ（−ＣＯＣＨ２−）（−ＣＯ−）ＣＨＳ−、−ＳＣＨ（−ＣＨ２ＣＯ−）（−ＣＯ−）Ｎ−、−Ｎ（−Ｎ＝Ｎ−）（−ＣＨ＝）Ｃ−、−Ｃ（−Ｎ＝Ｎ−）（＝ＣＨ−）Ｎ −、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−、−Ｐｈ−、−ＯＰｈＯ−、−ＯＰｈ−、−ＰｈＯ−、−ＳＰｈＳ−、−ＳＰｈ−、−ＰｈＳ−、−ＮＨＰｈＮＨ−、−ＮＨＰｈ−、−ＰｈＮＨ−、−複素環−、−Ｏ−複素環−Ｏ−、−Ｏ−複素環−、−複素環−Ｏ−、−Ｓ−複素環−Ｓ−、−Ｓ−複素環−、−複素環−Ｓ−、−ＮＨ−複素環−ＮＨ−、−ＮＨ−複素環−、−複素環−ＮＨ−等（ここで、Ｐｈは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン又は１，４−フェニレン等を示す。）を示し、Ｌは、エチレングリコール、オリゴエチレングリコール、ポリエチレングリコール、オリゴエーテル、ポリエーテル等の２価の鎖状基、鎖状アルキレン基、環状アルキレン基等のアルキレン基等を示す。］。Ｌで表される２価の鎖状基及びアルキレン基は、それぞれ、その鎖状又は環状構造内に複素環やフェニレン（１，２−フェニレン、１，３−フェニレン又は１，４−フェニレン等）を含んでいてもよい。
【０１０１】
このようなリンカー構造は、ホウ素クラスターとアミノ酸の側鎖を連結させるために、種々の公知反応、公知のリンカー構造を選択して導入することができる。このようなリンカー構造は、広く知られており、例えば、Ｓ．Ｍａｎａｂｅ ａｎｄ  Ｍ．Ｙｏｋｏｙａｍａ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，３０−３：２４７−２５０（２０１５）、Ｎ．Ｊａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ，３２：３２５６−３５４０（２０１５）、Ｊ．Ｒ．ＭｃＣｏｍｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ＡＡＰＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ，１７（２）:３３９−３５１（Ｍａｒｃｈ  ２０１５）、Ｊ．Ｋｈａｎｄａｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，３１:３５９-３９７（２００６）等の文献に記載されている。
【０１０２】
別の実施形態では、「リンカー構造」は、好ましくは、下記式（Ｌ’）で表される２価の基である：
【０１０３】
【化１２】
2017164334.tif 000014
【０１０４】
［式中、
Ｒａは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルボキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいメルカプト基、炭素数が６〜１４のアリール基、又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し；
Ｐ２及びＱ２は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−、−ＳＳ−、−Ｐｈ−、−ＯＰｈＯ−、−ＯＰｈ−、−ＰｈＯ−、−ＳＰｈＳ−、−ＳＰｈ−、−ＰｈＳ−、−ＮＨＰｈＮＨ−、−ＮＨＰｈ−、−ＰｈＮＨ−、−複素環−、−Ｏ−複素環−Ｏ−、−Ｏ−複素環−、−複素環−Ｏ−、−Ｓ−複素環−Ｓ−、−Ｓ−複素環−、−複素環−Ｓ−、−ＮＨ−複素環−ＮＨ−、−ＮＨ−複素環−、−複素環−ＮＨ−等（ここで、Ｐｈは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン又は１，４−フェニレンを示す。）を示し；
ｆは、それぞれ独立して、１〜２０の整数を示し；
ｇは、０〜２０（好ましくは０〜１０、より好ましくは０〜６）の整数を示し、その他の記号は上記定義の通りである。］。
【０１０５】
このようなリンカー構造は、ホウ素クラスターとアミノ酸の側鎖を連結させるために、種々の公知反応、公知のリンカー構造を選択して導入することができる。
【０１０６】
本明細書における「複素環」としては、環構成原子として炭素原子以外に酸素原子、硫黄原子及び窒素原子からなる群から選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含有する環であって、１以上のオキソ基で置換されていてもよい複素環が挙げられ、具体的には、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、ピペラジン、オキサゾリジン、チアゾリジン、ジヒドロチオピラン、イミダゾリジン、オキサゾリン、チアゾリン、イミダゾリン、ジオキソール、ジオキソラン、ジヒドロオキサジアゾール、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、チオピラン、ジヒドロチオピラン、テトラヒドロチオピラン、テトラヒドロフラン、オキセタン、ピラゾリジン、ピラゾリン、テトラヒドロピリミジン、ジヒドロトリアゾール、アゼパン、ジヒドロピリジン、テトラヒドロピリジン、ジオキソピロリジン等の３〜８員の非芳香族複素環；フラン、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピラジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、テトラゾール、トリアジン等の５又は６員の芳香族複素環等が挙げられる。
【０１０７】
本明細書における「炭素数が１〜６のアルキル基」とは、炭素数が１〜６の直鎖、分枝鎖又は環状の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられる。
【０１０８】
本明細書における「炭素数が６〜１４のアリール基」とは、炭素数が６〜１４の環状の芳香族炭化水素基を意味し、例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル等が挙げられる。
【０１０９】
Ｒａは、それぞれ、好ましくは、水素原子である。
【０１１０】
Ｐ１及びＰ２は、それぞれ、アミノ酸の側鎖における結合対象がＯ又はＳ（例えば、ヒドロキシ基又はメルカプト基）の場合は、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−又は−ＣＯＯ−であることが好ましく、アミノ酸の側鎖における結合対象がＣＯ（例えば、カルボキシ基）の場合は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−であることが好ましい。
【０１１１】
Ｑ２は、好ましくは、それぞれ独立して、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＳ−又は−複素環−である。
【０１１２】
本明細書において「ポリエーテル」とは、主鎖にエーテル結合を有する直鎖又は分枝鎖の重合体を意味し、好ましくは、主にポリアルキレングリコール単位（好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位）を含む直鎖又は分枝鎖の水溶性重合体である。ポリアルキレングリコール単位は、ポリエーテル中に６０重量％以上含まれていることが好ましく、８０重量％以上含まれていることがより好ましく、９０重量％以上含まれていることがさらに好ましい。ポリエーテルの主鎖の末端部分又は鎖状部分の原子は、酸素原子及び炭素原子以外の原子（例えば、硫黄原子、窒素原子等）であってもよい。
【０１１３】
本明細書における「ポリエーテル」の数平均分子量（Ｍｎ）は、好ましくは、５０，０００未満であり、より好ましくは、３０，０００未満である。また、「ポリエーテル」の数平均分子量（Ｍｎ）は、好ましくは、１，０００以上であり、より好ましくは、１０，０００以上である。「ポリエーテル」の分子量分布（重量平均分子量（Ｍｗ）／数平均分子量（Ｍｎ））は、好ましくは、３以下であり、より好ましくは、２以下である。
【０１１４】
本発明のペプチド化合物において、ポリエーテルは、ペプチドの構成アミノ酸の活性基（例えば、ペプチド化合物の構成アミノ酸の側鎖のカルボキシ基、ヒドロキシ基及びメルカプト基、並びにペプチド化合物のＮ末端のアミノ基及びＣ末端のカルボキシ基）から選ばれる１個以上の基に結合していることが好ましく、特にペプチド化合物のＮ末端のアミノ基若しくはＣ末端のカルボキシ基のいずれかに結合していることが好ましい。
【０１１５】
また、ポリエーテルは、ペプチドに１価の基（ポリエーテルの任意の１個のＨ又はＯＨを除いてなる基を意味し、以下において「ポリエーテルからなる１価の基」という。）として結合していてもよく、或いは多価の基（ポリエーテルの任意のＨ及びＯＨから選ばれる２個以上の基を除いてなる基を意味し、以下において「ポリエーテルからなるｃ価の基」（ｃは２以上の整数）という。）として複数のペプチドに結合している形態であってもよい。ポリエーテルからなる１価の基及びポリエーテルからなるｃ価の基は、それぞれ、好ましくは、ポリエーテル鎖の末端におけるカルボキシ基のＯＨ、並びにアミノ基、ヒドロキシ基及びメルカプト基のＨのうち１個又はｃ個を除いてなる基である。
【０１１６】
ポリエーテルが、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基及びメルカプト基との間で形成し得る結合としては、それぞれ、ホウ素クラスター（又はリンカー構造）が形成し得る結合として上記で挙げたものと同様のものが挙げられる。
【０１１７】
上記「ポリエーテルからなる１価の基」の具体例としては、下記式（Ｐ１）〜（Ｐ３）： 
【０１１８】
【化１３】
2017164334.tif 000015
【０１１９】
［式中、
Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＯＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−又は−ＳＳ−を示し、
Ｒｄ及びＲｅは、それぞれ独立して水素原子又は炭素数が１〜６のアルキル基を示し、
ｓは、それぞれ独立して１〜１０（好ましくは１〜４）の整数であり、
ｔは、それぞれ独立して２〜１０（好ましくは２〜４）の整数であり、
ｕは、それぞれ独立して１以上の整数であり、
＊＊＊は、結合部位を示す。］
で表される基が挙げられる。中でも好ましくは、上記式（Ｐ１）で表される基である。
【０１２０】
ｃが２の場合における上記「ポリエーテルからなるｃ価の基」の具体例は、式（Ｐ４）又は（Ｐ５）：
【０１２１】
【化１４】
2017164334.tif 000016
【０１２２】
［式中、各記号は上記定義の通りである。］
で表される基が挙げられる。
【０１２３】
Ｒｄは、好ましくは、水素原子である。Ｒｅは、好ましくは、炭素数が１〜６のアルキル基であり、より好ましくはメチルである。
【０１２４】
ｕの合計は、好ましくは、１，０００以下の整数であり、より好ましくは、６００以下の整数である。
【０１２５】
Ｚは、結合対象がＯ、Ｎ、ＮＨ又はＳ（例えばヒドロキシ基、アミノ基又はメルカプト基）の場合、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−又は−ＣＯＯ−であることが好ましく、結合対象がＣＯ（例えばカルボキシ基）の場合、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−であることが好ましい。
【０１２６】
ある実施形態において、好ましくは、ペプチドの構成アミノ酸の活性基の少なくとも１個が、ポリエーテルからなる１価の基で置換されている。より好ましくは、ペプチド化合物のＣ末端のカルボキシ基及び／又はペプチド化合物のＮ末端のアミノ基が、ポリエーテルからなる１価の基で置換されている。さらに好ましくは、ペプチド化合物のＣ末端のカルボキシ基及び／又はペプチド化合物のＮ末端のアミノ基が、式（Ｐ１）（式中、式中、Ｚは、置換対象がカルボキシ基の場合−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−を、置換対象がアミノ基の場合−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−又は−ＣＯＯ−を示し、その他の記号は上記定義の通りである。）で表される基で置換されている。
【０１２７】
ある実施形態では、ホウ素クラスター（又はリンカー構造）が、側鎖に結合したアミノ酸残基は、下記式（１）で表される。
【０１２８】
【化１５】
2017164334.tif 000017
【０１２９】
［式中、各記号は上記の定義の通りである。］
【０１３０】
本明細書において「α−アミノ酸」とは、１個の炭素原子（α−炭素とよばれる）に１個のカルボキシル基と１個のアミノ基の両方が結合しているアミノ酸を意味する。α−アミノ酸はＤ型、Ｌ型又はそれらの混合物であってもよい。
【０１３１】
本明細書において「α−アミノ酸の側鎖」とは、α−アミノ酸をＲ３ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯＯＨで表したときに、Ｒ３に相当する基をいう。具体的には、例えば、α−アミノ酸がグリシンの場合は水素原子、アラニンの場合はメチル、バリンの場合はイソプロピル、ロイシンの場合はイソブチル、イソロイシンの場合はｓｅｃ−ブチル、セリンの場合はヒドロキシメチル、トレオニンの場合は１−ヒドロキシエチル、システインの場合はメルカプトメチル、メチオニンの場合は２−（メチルチオ）エチル、アスパラギンの場合はカルバモイルメチル、グルタミンの場合は２−カルバモイルエチル、フェニルアラニンの場合はベンジル、チロシンの場合はｐ−ヒドロキシベンジル、アスパラギン酸の場合はカルボキシメチル、グルタミン酸の場合は２−カルボキシエチル、ホモセリンの場合は２−ヒドロキシエチル、ノルロイシンの場合はブチル、ノルバリンの場合はプロピル、チロニンの場合は４−｛（４−ヒドロキシフェニル）オキシ｝フェニルメチル、シトルリンの場合は３−（カルバモイルアミノ）プロパン、α-アミノ酪酸の場合はエチル、ホモシステインの場合は２−メルカプトエチル、ペニシラミンの場合は１−メルカプト−１−メチルエチルである。
【０１３２】
Ｒ１のα−アミノ酸の側鎖は、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって、環を形成していてもよい。ここにおける環状部分としては、例えば、プロリンの環状部分（即ち、ピロリジン環）が挙げられる。ある実施形態では、Ｒ１のα−アミノ酸の側鎖は、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって環を形成しない。
【０１３３】
Ｒ１の「α−アミノ酸」は、好ましくは、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ホモシステイン、ペニシラミン等の側鎖にカルボキシ基、ヒドロキシ基、メルカプト基等の活性基を有するα−アミノ酸であり；なかでも、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれることがより好ましく；グルタミン酸であることが特に好ましい。
【０１３４】
Ｒ１における、ホウ素クラスターからなる１価の基又はそれがリンカー構造を介して結合する１価の基の置換数は、１〜３であることが好ましく、１であることがより好ましい。
【０１３５】
Ｒ１は、好ましくは、それぞれ独立して、ホウ素クラスターからなる１価の基（中でも好ましくは、式（Ｂ１）〜式（Ｂ１５）の何れかで表される基）がリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖である。
【０１３６】
Ｒ１は、より好ましくは、それぞれ独立して、式（Ｂ１）で表される基がリンカー構造を介して結合する１価の基で置換された、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖である。
【０１３７】
Ｒ１は、さらに好ましくは、Ｒ１の「α−アミノ酸」が、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる群から選ばれる場合であって、それぞれ独立して、式（Ｒ１ａ）：
【０１３８】
【化１６】
2017164334.tif 000018
【０１３９】
［式中、Ｐ３は、−Ｏ−、−ＮＨ−又は−Ｓ−を示し、ｄは、１又は２を示し、＊＊は、α−アミノ酸のα−炭素との結合部位を示し、その他の記号は上記の定義の通りである。］
で表される基である。
【０１４０】
ある実施形態では、ペプチド化合物は、上記のホウ素クラスター（リンカー構造を含む）の結合、及びポリエーテル（例えば「ポリエーテルからなる１価の基」、「ポリエーテルからなるｃ価の基」）の結合に加えて、さらに、その他の置換基を有していてもよい。置換基を有する場合、１個以上の置換基が、アミノ酸の側鎖で置換していてもよく、中でも、アミノ酸の側鎖の活性基（例えば、カルボキシ基、ヒドロキシ基及びメルカプト基）のＨ又はＯＨと置換していることが好ましい。
【０１４１】
ホウ素クラスターをリンカー構造を介して導入する際の反応において、未反応によりホウ素クラスターが導入されず、リンカー構造又はその断片構造が残存する場合があるが、上記その他の置換基には、そのような残存した未反応の構造が含まれ得る。さらに、上記その他の置換基には、未反応の構造を当業者に公知の方法により不活性化した構造や、副反応により生成した構造、脱保護反応で脱離しなかった未脱保護基を含む構造等も含まれ得る。このように未反応により残存したリンカー構造又はその断片構造の末端は、多種多様な構造を取り得るため、特定の置換基に限定されるものではない。また、上記その他の置換基には、ペプチド化学で用いられる当業者に公知の修飾基等も含まれ得る。
【０１４２】
ある実施形態において、上記その他の置換基としては、例えば、導入するリンカー構造が上記式（Ｌ’）である場合、式（Ｌ’’）：
【０１４３】
【化１７】
2017164334.tif 000019
【０１４４】
［式中、Ａ１’は、公知のカップリング反応における未反応の官能基、それを公知の方法により不活性化した基、それらの副反応により生成した基、又は未脱保護基を含む基であり、ｇ’は０〜１９の整数を示し、その他の記号は上記の定義の通りである。］
で表される基が挙げられる。上記未反応の官能基としては、メルカプト基、ピリジン−２−イルジスルファニル基、カルボキシ基又はその活性基（例えば、４-ニトロフェノールエステル、ペンタフルオロフェノールエステルのような活性エステルや、酸クロリドのような酸ハライド等）、アミノ基、クリックケミストリーによる環化反応のためのアジド（Ｎ３）基、シクロオクチン基、エチニル（ＨＣ≡Ｃ）基等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４５】
別の実施形態において、上記その他の置換基としては、例えば、下記（１）〜（５）からなる置換基Ａ群から選ばれる置換基を挙げることができるが、これらに限定されない；置換基Ａ群：
（１）下記置換基（ａ）〜（ｌ）から選ばれる１〜５個の置換基で、それぞれ、アルキル、アルケニル、アルキニル又はアリール上が置換されていてもよい下記置換基（Ａ）〜（ＡＡ）：
（Ａ）炭素数が１〜６のアルキル基、（Ｂ）炭素数が２〜６のアルケニル基、（Ｃ）炭素数が２〜６のアルキニル基、（Ｄ）炭素数が６〜１４のアリール基、（Ｅ）炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基、（Ｆ）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルボキシ基、（Ｇ）炭素数が２〜６のアルケニル基で置換されていてもよいカルボキシ基、（Ｈ）炭素数が２〜６のアルキニル基で置換されていてもよいカルボキシ基、（Ｉ）炭素数が６〜１４のアリール基で置換されていてもよいカルボキシ基、（Ｊ）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルバモイル基、（Ｋ）炭素数が２〜６のアルケニル基で置換されていてもよいカルバモイル基、（Ｌ）炭素数が２〜６のアルキニル基で置換されていてもよいカルバモイル基、（Ｍ）炭素数が６〜１４のアリール基で置換されていてもよいカルバモイル基、（Ｎ）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（Ｏ）炭素数が２〜６のアルケニル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（Ｐ）炭素数が２〜６のアルキニル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（Ｑ）炭素数が６〜１４のアリール基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（Ｒ）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいアミノ基、（Ｓ）炭素数が２〜６のアルケニル基で置換されていてもよいアミノ基、（Ｔ）炭素数が２〜６のアルキニル基で置換されていてもよいアミノ基、（Ｕ）炭素数が６〜１４のアリール基で置換されていてもよいアミノ基、（Ｖ）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいメルカプト基、（Ｗ）炭素数が２〜６のアルケニル基で置換されていてもよいメルカプト基、（Ｘ）炭素数が２〜６のアルキニル基で置換されていてもよいメルカプト基、（Ｙ）炭素数が６〜１４のアリール基で置換されていてもよいメルカプト基、（Ｚ）炭素数が１〜６のアルキルスルホニル基、及び（ＡＡ）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいスルホ基；
（ａ）置換されていてもよい炭素数が６〜１４のアリール基、（ｂ）ホルミル基、（ｃ）置換されていてもよい炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基、（ｄ）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルケニル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルキニル基、及び置換されていてもよい炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいカルボキシ基、（ｅ）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルケニル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルキニル基、及び置換されていてもよい炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいカルバモイル基、（ｆ）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルケニル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルキニル基、及び置換されていてもよい炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（ｇ）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルケニル基、置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルキニル基、及び置換されていてもよい炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいメルカプト基、（ｈ）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキルスルホニル基、（ｉ）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいスルホ基、（ｊ）ハロゲン原子、（ｋ）シアノ基、（ｌ）ニトロ基；
（２）ホルミル基
（３）ハロゲン原子、
（４）シアノ基、及び
（５）ニトロ基。
【０１４６】
置換基Ａ群は、好ましくは、上記置換基（ａ）〜（ｌ）から選ばれる１〜５個の置換基で、それぞれ、アルキル上が置換されていてもよい上記置換基（Ａ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｊ）、（Ｚ）、（Ｒ）、（Ｖ）、（Ｚ）及び（ＡＡ）である。
【０１４７】
置換基Ａ群は、より好ましくは、下記置換基（ｃ’）〜（ｌ’）から選ばれる１〜５個の置換基で、それぞれ、アルキル上が置換されていてもよい上記置換基（Ａ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｊ）、（Ｚ）、（Ｒ）、（Ｖ）、（Ｚ）及び（ＡＡ）である；
（ｃ’）置換されていてもよい炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基、（ｄ’）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルボキシ基、（ｅ’）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいカルバモイル基、（ｆ’）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（ｇ’）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいメルカプト基、（ｈ’）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキルスルホニル基、（ｉ’）置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいスルホ基、（ｊ’）ハロゲン原子、（ｋ’）シアノ基、（ｌ’）ニトロ基。
【０１４８】
置換基Ａ群は、さらに好ましくは、上記置換基（ｃ’）〜（ｌ’）から選ばれる１〜５個の置換基でアルキル上が置換されていてもよい上記置換基（Ｒ）である。
【０１４９】
上記における「置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキル基」、「置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルケニル基」、「置換されていてもよい炭素数が２〜６のアルキニル基」、「置換されていてもよい炭素数が６〜１４のアリール基」、「置換されていてもよい炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基」及び「置換されていてもよい炭素数が１〜６のアルキルスルホニル基」の置換基としては、例えば、下記（１）〜（１５）からなる置換基Ｂ群が挙げられる；
置換基群Ｂ：
（１）炭素数が１〜６のアルキル基、（２）炭素数が２〜６のアルケニル基、（３）炭素数が２〜６のアルキニル基、（４）炭素数が６〜１４のアリール基、（５）ホルミル基、（６）炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基、（７）炭素数が１〜６のアルキル基、炭素数が２〜６のアルケニル基、炭素数が２〜６のアルキニル基、及び炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいカルボキシ基、（８）炭素数が１〜６のアルキル基、炭素数が２〜６のアルケニル基、炭素数が２〜６のアルキニル基、及び炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいカルバモイル基、（９）炭素数が１〜６のアルキル基、炭素数が２〜６のアルケニル基、炭素数が２〜６のアルキニル基、及び炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（１０）炭素数が１〜６のアルキル基、炭素数が２〜６のアルケニル基、炭素数が２〜６のアルキニル基、及び炭素数が６〜１４のアリール基から選ばれる置換基で置換されていてもよいメルカプト基、（１１）炭素数が１〜６のアルキルスルホニル基、（１２）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいスルホ基、（１３）ハロゲン原子、（１４）シアノ基、（１５）ニトロ基等が挙げられる。
置換基数は特に限定されるものではないが、１〜５であることが好ましい。
【０１５０】
本明細書における「炭素数が２〜６のアルケニル基」とは、少なくとも１個以上の二重結合を有する、炭素数が２〜６の直鎖、分枝鎖又は環状の部分不飽和炭化水素基を意味し、例えば、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、３−ヘキセニル、５−ヘキセニル、４−メチル−２−ペンチニル等が挙げられる。
【０１５１】
本明細書における「炭素数が２〜６のアルキニル基」とは、少なくとも１個以上の三重結合を有する、炭素数が２〜６の直鎖、分枝鎖又は環状の部分不飽和炭化水素基を意味し、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシニル、４−メチル−２−ペンチニル等が挙げられる。
【０１５２】
本明細書における「炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基」とは、上記「炭素数が１〜６のアルキル基」がカルボニルを介して結合する基を意味し、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ｓｅｃ−ブチルカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル、ペンタノイル、ヘキサノイル等が挙げられる。
【０１５３】
本明細書における「炭素数が１〜６のアルキルスルホニル基」とは、上記「炭素数が１〜６のアルキル基」がスルホニルを介して結合する基を意味し、例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ブチルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｓｅｃ−ブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル、ペンチルスルホニル等が挙げられる。
【０１５４】
本発明のペプチド化合物又はその塩の分子量は、１００，０００未満であることが好ましく、８０，０００未満であることがより好ましく、７０，０００未満であることがさらに好ましく、６０，０００未満であることがなお一層好ましい。
【０１５５】
ある好ましい実施形態では、本発明のペプチド化合物又はその塩は、式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）で表される化合物である。
【０１５６】
【化１８】
2017164334.tif 000020
【０１５７】
［式中、各記号は上記の定義の通りである。］
【０１５８】
Ｒ１は、前記と同義であり、それぞれ独立して、ホウ素クラスターからなる１価の基又はそれがリンカー構造を介して結合する１価の基で置換されたα−アミノ酸の側鎖を示す。「ホウ素クラスターからなる１価の基」、「リンカー構造」及び「α−アミノ酸の側鎖」についても前記と同義である。
【０１５９】
Ｒ２は、それぞれ独立して、置換基を有していてもよい、中性アミノ酸及び酸性アミノ酸から選ばれるα−アミノ酸の側鎖を示す。
【０１６０】
ある実施形態では、Ｒ２の「α−アミノ酸」は、好ましくは、置換されている場合は、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ホモシステイン、ペニシラミン等の側鎖にカルボキシ基、ヒドロキシ基、メルカプト基等の活性基を有するα−アミノ酸であり、無置換の場合は、任意のα−アミノ酸である。
【０１６１】
上記の実施形態において、Ｒ２の「α−アミノ酸」は、より好ましくは、置換されている場合は、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ホモシステイン、ペニシラミン等の側鎖にカルボキシ基、ヒドロキシ基、メルカプト基等の活性基を有するα−アミノ酸であり、無置換の場合は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ノルロイシン、ノルバリン、チロニン、シトルリン、α-アミノ酪酸、ホモシステイン、ペニシラミン等のα−アミノ酸である。
【０１６２】
別の実施形態では、Ｒ２の「α−アミノ酸」は、好ましくは、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ホモセリン、ホモシステイン、ペニシラミン等の側鎖にカルボキシ基、ヒドロキシ基、メルカプト基等の活性基を有するα−アミノ酸であり；なかでも、グルタミン酸及びアスパラギン酸から選ばれることがより好ましく；グルタミン酸であることが特に好ましい。
【０１６３】
Ｒ２のα−アミノ酸の側鎖は、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって、環を形成していてもよい。ここにおける環状部分としては、例えば、プロリンの環状部分（即ち、ピロリジン環）が挙げられる。ある実施形態では、Ｒ２のα−アミノ酸の側鎖は、それが結合する炭素原子及び該炭素原子に隣接する窒素原子と一緒になって環を形成しない。
【０１６４】
Ｒ２のα−アミノ酸の側鎖の置換基としては、ポリエーテルからなる１価の基に加えて、上記その他の置換基と同様のものが挙げられる。ある実施形態では、Ｒ２において置換基は存在しない。
【０１６５】
Ｒ２においてα−アミノ酸の側鎖は、置換基により、例えば、炭素原子、窒素原子又は硫黄原子上の任意のＨ又はＯＨが置換されていてもよく、好ましくは、アミノ酸の活性基のＨ及びＯＨ（例えば、カルボキシ基のＯＨ並びにヒドロキシ基及びメルカプト基のＨ）から選ばれる基が置換されていてもよく、より好ましくは、カルボキシ基のＯＨが置換されていてもよい。
【０１６６】
Ｒ２において置換基が、カルボキシ基、ヒドロキシ基及びメルカプト基との間で形成し得る結合としては、それぞれ、ホウ素クラスター（又はリンカー構造）が形成し得る結合として上記で挙げたものと同様のものが挙げられる。
【０１６７】
Ｒ２における「ポリエーテルからなる１価の基」の具体例としては、上記式（Ｐ１）〜（Ｐ３）の何れかで表される基が挙げられる。中でも好ましくは、上記式（Ｐ１）で表される基である。
【０１６８】
ｂが１以上の場合、Ｒ１を有するα−アミノ酸残基とＲ２を有するα−アミノ酸残基とは、任意に共重合しており、ランダム共重合していても、ブロック共重合していても、交互共重合していてもよい。
【０１６９】
ある実施形態では、Ｒ１の「α−アミノ酸」及びＲ２の「α−アミノ酸」の全てが同一のα−アミノ酸である。
【０１７０】
Ｘ１、及びｃが１の場合のＹ２は、それぞれ独立して、（１）水素原子、（２）炭素数が１〜６のアルキル基、（３）炭素数が２〜７のアルキルカルボニル基、又は（４）ポリエーテルからなる１価の基を示す。
【０１７１】
Ｘ１は、好ましくは、水素原子、又はポリエーテルからなる１価の基であり、さらに好ましくは、水素原子である。ｃが１の場合のＹ２は、好ましくは、水素原子、又はポリエーテルからなる１価の基であり、さらに好ましくは、ポリエーテルからなる１価の基である。
【０１７２】
Ｘ２、及びｃが１の場合のＹ１は、それぞれ独立して、（１）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、（２）炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいアミノ基、又は（３）ポリエーテルからなる１価の基を示す。
【０１７３】
Ｘ２は、好ましくは、炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいヒドロキシ基、又は炭素数が１〜６のアルキル基で置換されていてもよいアミノ基である。ｃが１の場合のＹ１は、好ましくは、ポリエーテルからなる１価の基である。
【０１７４】
ｃが２以上の場合のＹ１及びＹ２は、それぞれ、ポリエーテルからなるｃ価の基を示す。
【０１７５】
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１又はＹ２がポリエーテルからなる１価の基又はポリエーテルからなるｃ価の基の場合、それらが、アミノ基（アミノ酸残基のＮＨ）及びカルボキシ基（アミノ酸残基のＣＯ）との間で形成し得る結合としては、それぞれ、ホウ素クラスター（又はリンカー構造）が形成し得る結合として上記で挙げたものと同様のものが挙げられる。
【０１７６】
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１及びＹ２における「ポリエーテルからなる１価の基」の具体例としては、上記式（Ｐ１）〜（Ｐ３）の何れかで表される基が挙げられる。中でも好ましくは、上記式（Ｐ１）で表される基である。Ｙ１及びＹ２における「ポリエーテルからなるｃ価の基」の具体例としては、ｃが２の場合、上記式（Ｐ４）又は（Ｐ５）で表される基が挙げられる。
【０１７７】
式（Ｉａ）においては、Ｒ２のα−アミノ酸の置換基、Ｘ１及びＹ１のうち少なくともいずれか１つが、式（Ｉｂ）においては、Ｒ２のα−アミノ酸の置換基、Ｘ２及びＹ２のうち少なくともいずれか１つが、ポリエーテルからなる１価の基又はポリエーテルからなるｃ価の基である。
【０１７８】
ａとｂの合計は、２以上の整数であり、好ましくは、３以上の整数であり、より好ましくは、５以上の整数であり、さらに好ましくは、１０以上の整数である。ａとｂの合計は、好ましくは、２００以下の整数であり、より好ましくは、１５０以下の整数であり、さらに好ましくは、１００以下の整数である。
【０１７９】
ａとｂの合計に対するａの比は、好ましくは、０．１以上であり、より好ましくは、０．２以上であり、さらに好ましくは、０．３以上である。
【０１８０】
ｃは、１以上の整数であり、好ましくは、１〜１０の整数であり、より好ましくは、１〜５の整数であり、さらに好ましくは、１又は２であり、特に好ましくは、１である（即ち、式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）が、それぞれ、式（ＩＡ）及び式（ＩＢ）：
【０１８１】
【化１９】
2017164334.tif 000021
【０１８２】
［式中、各記号は上記定義の通りである。］
で表される。）。
【０１８３】
本発明のペプチド化合物は塩であってもよい。塩としては、例えば、金属塩、アンモニウム塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性アミノ酸又は酸性アミノ酸との塩等が挙げられる。金属塩の好適な例としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩等が挙げられる。アンモニウム塩の好適な例としては、例えば、テトラメチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩、ポリアミン（例えば、１，４−ジアミノブタン、スペルミン、スペルミジン）の１価又は多価のアンモニウム塩等が挙げられる。有機塩基との塩の好適な例としては、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ポリアミン（例えば、１，４−ジアミノブタン、スペルミン、スペルミジン）等のアミン類との塩が挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等との塩が挙げられる。塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えば、アルギニン、リジン、オルニチン等との塩が挙げられ、酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸等との塩が挙げられる。本発明のペプチド化合物の塩は、中でも、好ましくは、薬学的に許容される塩であることが好ましい。
【０１８４】
本発明のペプチド化合物又はその塩（以下、本発明の化合物という）は、腫瘍疾患のホウ素中性子捕捉療法に用いることができる。
【０１８５】
本明細書における「腫瘍疾患」としては、悪性黒色腫（メラノーマ）、腎癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、膵癌、大腸癌、肝細胞癌、胆道癌、胃癌、卵巣癌、食道癌、尿路上皮癌、結腸癌、骨癌、皮膚癌（例えば悪性皮膚癌）、頭頚部癌、子宮癌、直腸癌、肛門部癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頚部癌、膣癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、柔組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形癌、膀胱癌、悪性胸膜中皮腫、脳腫瘍（例えば悪性脳腫瘍）、中枢神経系腫瘍等が挙げられる。
【０１８６】
本発明の化合物を用いるホウ素中性子捕捉療法は、例えば、腫瘍疾患を患う哺乳動物（例えばヒト）に、化合物が標的部位に蓄積するような任意の適当な投与経路により本発明の化合物を含む薬剤を投与することによって行われる。本発明の化合物は、腫瘍に選択的に蓄積されていることが好ましい。化合物を含む製剤は一度に投与してもよいし、或いは順次投与してもよい。製剤の投与を必要に応じて繰り返してもよい。
【０１８７】
腫瘍内に本発明の化合物が到達した後、その部位に有効量の、熱中性子線或いは熱外中性子線のような低エネルギー中性子線を照射する。皮膚を通してその部位を照射してもよいし、或いはその部位を照射前に完全に或いは部分的に暴露して照射してもよい。また、同時に複数の方向から照射してもよい。本発明の化合物の投与とそれに続く熱中性子線或いは熱外中性子線の照射を必要に応じて繰り返してもよい。例えば数か月程度の間隔で、複数回照射してもよい。照射回数の総数は、好ましくは、１〜１０回、より好ましくは１〜５回である。
【０１８８】
本発明の化合物の投与経路は、好ましくは、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、脊髄内投与、腹腔内投与である。
【０１８９】
本発明の化合物は、熱中性子線或いは熱外中性子線の照射前の７２時間以内（好ましくは、５分〜４８時間前、より好ましくは、３０分〜３０時間前）に、腫瘍疾患を患う哺乳動物に投与され得る。また、必要に応じて、熱中性子線或いは熱外中性子線の照射中に投与してもよい。本発明の化合物の代表的な用量は、好ましくは、１回の熱中性子線或いは熱外中性子線の照射につき０．０１  ｍｇ〜５０  ｇ／体重ｋｇの範囲内である。ホウ素クラスター換算では、好ましくは、１回の熱中性子線或いは熱外中性子線の照射につき０．００５  ｍｇ〜２５  ｇ／体重ｋｇの範囲内である。１回の熱中性子線或いは熱外中性子線の照射時間は、好ましくは、１分〜５時間、より好ましくは、１０分〜２時間である。熱中性子線或いは熱外中性子線の照射量は、特に限定されるものではなく、中性子補捉療法で用いられる一般的な照射量であればよい。
【０１９０】
本発明の化合物を用いるホウ素中性子捕捉療法は、単独の治療として適用してもよいし、或いは従来の手術又は化学療法と共に適用してもよい。所望であれば、腫瘍を外科的に可能な程度に除去した後、本発明の化合物を用いるホウ素中性子捕捉療法により残りの腫瘍を破壊することも可能である。
【０１９１】
ホウ素中性子捕捉療法において、本発明の化合物は、ＢＰＡ（ｐ−ボロノフェニルアラニン）やＢＳＨ（メルカプトウンデカハイドロドデカボレート）のような他のホウ素化合物（以下、併用薬物という）と共に用いることもできる。併用薬物を用いる場合、本発明の化合物と併用薬物の投与時期は限定されず、本発明の化合物及び併用薬物を、腫瘍疾患を患う哺乳動物に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。時間差をおいて投与する場合、本発明の化合物、併用薬物の順で投与してもよいし、或いはその逆の順で投与してもよい。
【０１９２】
本発明の化合物は、薬学的に許容される溶媒、賦形剤、結合剤、安定化剤、分散剤等の薬学的に許容される担体とともに、注射用溶液、懸濁液、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、吸入剤、坐剤等の非経口剤形に製剤化してもよい。本発明の化合物は、注射用溶液に製剤化することが好ましい。
【０１９３】
注射用溶液は、薬学的に受容可能な溶媒中で、本発明の化合物の溶液として製造され得る。それらの溶液はまた、安定化成分及び／又は緩衝化成分を含んでいてもよい。また、注射用溶液は、使用前に適切な溶媒を加えて用いる乾燥製剤であってもよい。
【０１９４】
次に、本発明の化合物の製造法について説明する。
【０１９５】
本発明のペプチド化合物の中でも、式（Ｉａ’）及び（Ｉｂ’）で表される化合物（以下、化合物（Ｉａ’）、化合物（Ｉｂ’）という）は、式（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩａ）又は化合物（ＩＩｂ）という）のα−アミノ酸の側鎖と、式（Ｂ）で表される化合物（以下、化合物（Ｂ）という）とを、Ａ２及びＡ１の部分で、公知の縮合反応、付加反応及び置換反応によりカップリングさせてＡを形成し、それにより、直接或いはリンカー構造を介して結合させることにより得ることができる。その際、反応基質にカルボキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、メルカプト基のような活性基が存在する場合は、これらの官能基を、予め公知の保護基で保護しておいてもよい。
【０１９６】
【化２０】
2017164334.tif 000022
【０１９７】
［式中、波線部分は、結合手であるか、或いはリンカー構造又はその断片構造を示し、Ａ１は、α−アミノ酸の側鎖、それに結合するリンカー構造又はその断片構造における官能基であり、Ａ２は、ホウ素クラスター、それに結合するリンカー構造又はその断片構造における官能基である。］
【０１９８】
リンカー構造が、例えば式（Ｌ’）で表される基である場合は、Ａは、Ｐ２とα−アミノ酸の側鎖の一部、或いはＱ２に相当する構造である。例えば、Ａとしては、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＳＣＯ−、−ＣＯＳ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＳＮＨ−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯＯ−、−ＳＳ−、−Ｐｈ−、−ＯＰｈＯ−、−ＯＰｈ−、−ＰｈＯ−、−ＳＰｈＳ−、−ＳＰｈ−、−ＰｈＳ−、−ＮＨＰｈＮＨ−、−ＮＨＰｈ−、−ＰｈＮＨ−、−複素環−、−Ｏ−複素環−Ｏ−、−Ｏ−複素環−、−複素環−Ｏ−、−Ｓ−複素環−Ｓ−、−Ｓ−複素環−、−複素環−Ｓ−、−ＮＨ−複素環−ＮＨ−、−ＮＨ−複素環−、−複素環−ＮＨ−等（ここで、Ｐｈは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン又は１，４−フェニレンを示す。）が挙げられる。以下にＡを形成するための方法の一例を挙げる。
【０１９９】
Ａが、−ＳＳ−の場合は、例えば、Ａ１及びＡ２の一方が、メルカプト基であり、他方が、ピリジン−２−イルジスルファニル基であればよい。化合物（ＩＩａ）又は化合物（ＩＩｂ）と、化合物（Ｂ）を溶媒（例えば、メタノール、エタノールのようなアルコール類、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のようなスルホキシド類、又はそれらの混合物）中で反応させることにより、化合物（Ｉａ’）又は化合物（Ｉｂ’）を得ることができる。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２００】
Ａが、−ＮＨＣＯ−及び−ＣＯＮＨ−の場合は、例えば、Ａ１及びＡ２の一方が、カルボキシ基又はその活性基（例えば、４-ニトロフェノールエステル、ペンタフルオロフェノールエステルのような活性エステルや、酸クロリドのような酸ハライド等）であり、他方が、アミノ基であればよい。化合物（ＩＩａ）又は化合物（ＩＩｂ）と、化合物（Ｂ）を、溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のようなスルホキシド類、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のようなアミド類、又はそれらの混合物）中、必要に応じて、縮合剤（例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド又はその塩のようなカルボジイミド系縮合剤；４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドのようなトリアジン系縮合剤等）、活性剤（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等）、塩基（例えば、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、トリエチルアミンのような有機塩基等）の存在下で反応させることにより、化合物（Ｉａ’）又は化合物（Ｉｂ’）を得ることができる。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２０１】
Ａが、−ＳＣＯ−及び−ＣＯＳ−の場合は、例えば、Ａ１及びＡ２の一方が、カルボキシ基又はその活性基地（例えば、４-ニトロフェノールエステル、ペンタフルオロフェノールエステルのような活性エステルや、酸クロリドのような酸ハライド等）であり、他方が、メルカプト基であればよい。化合物（ＩＩａ）又は化合物（ＩＩｂ）と、化合物（Ｂ）を、溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のようなスルホキシド類、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のようなアミド類、又はそれらの混合物）中、必要に応じて、縮合剤（例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド又はその塩のようなカルボジイミド系縮合剤；４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリドのようなトリアジン系縮合剤等）、活性剤（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等）、塩基（例えば、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、トリエチルアミンのような有機塩基等）の存在下で反応させることにより、化合物（Ｉａ’）又は化合物（Ｉｂ’）を得ることができる。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２０２】
Ａが、−複素環（１，２，３−トリアゾール）−の場合は、例えば、Ａ１及びＡ２の一方が、アジド（Ｎ３）基であり、他方が、エチニル（ＨＣ≡Ｃ）基であればよい。化合物（ＩＩａ）又は化合物（ＩＩｂ）と、化合物（Ｂ）を、溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のようなアミド類；アセトンのようなケトン類；メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールのようなアルコール類；水（緩衝液を含む）；又はそれらの混合物）中、銅触媒（例えば、硫酸銅（Ｉ）、臭化銅（Ｉ）、ヨウ化銅（Ｉ）、トリフルオロメタンスルホン酸銅（Ｉ）等）、必要に応じて、添加剤（例えば、アスコルビン酸ナトリウム、トリス(２−カルボキシエチル)ホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤等）、配位子（例えば、トリス（ベンジルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＢＴＡ）、トリス(ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル)アミン（ＴＨＰＴＡ）、バソフェナントロリンジスルホネート（ＢＰＤＳ）等）、塩基（例えば、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ペンタメチルジエチレントリアミン（ＰＭＤＥＴＡ）、トリエチルアミンのような有機塩基等）の存在下で反応させることにより、化合物（Ｉａ’）又は化合物（Ｉｂ’）を得ることができる。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２０３】
また、Ａ１がリンカー構造又はその断片構造に結合している場合、当該リンカー構造又はその断片構造は、上記のＡの構築方法と同様に、或いは公知の方法でα−アミノ酸の側鎖に導入することができる。その際、反応基質にカルボキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、メルカプト基のような活性基が存在する場合は、これらの官能基を、予め公知の保護基で保護しておいてもよい。
【０２０４】
また、Ａ２がリンカー構造又はその断片構造に結合している場合、当該リンカー構造又はその断片構造は、上記のＡの構築方法と同様に、或いは公知の方法でホウ素クラスターに導入することができる。その際、反応基質にカルボキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、メルカプト基のような活性基が存在する場合は、これらの官能基を、予め公知の保護基で保護しておいてもよい。
【０２０５】
例えば、市販されている（ＢＳＨ等として）、或いは公知の方法で容易に調製できる（下記合成例２８参照）、メルカプト基やアミノ基のような活性基を有するホウ素クラスターを用いるのであれば、その活性基に上記のＡの構築方法と同様にリンカー構造又はその断片構造を導入できる。また、活性基を有さないホウ素クラスターにリンカー構造又はその断片構造を直接導入する方法も知られており、例えば、下記スキームで表される方法が挙げられる。
【０２０６】
【化２１】
2017164334.tif 000023
【０２０７】
［式中、Ｎｕは、求核付加反応により導入される基を示し、その他の記号は、上記定義の通りである。］
【０２０８】
式（２）で表される化合物は、ホウ素クラスター（１）を、式（３）で表される化合物、酸（例えば、塩酸（塩化水素）等）、添加剤（例えば、テトラフルオロホウ酸ナトリウムのようなテトラフルオロホウ酸塩等）、必要に応じて溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のようなスルホキシド類、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のようなアミド類、又はそれらの混合物）の存在下で反応させることにより得ることができる。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２０９】
式（４）で表される化合物は、式（２）で表される化合物を、対応する求核試薬、必要に応じて塩基（例えば、トリエチルアミンのような有機塩基、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、フッ化セシウムのような無機塩基）の存在下で求核付加反応させることにより得ることができる。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。その際、反応基質にカルボキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、メルカプト基のような活性基が存在する場合は、これらの官能基を、予め公知の保護基で保護しておいてもよい。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２１０】
導入基に対応する求核試薬としては、アジド（−Ｎ３）基やアミノ（−ＮＨ２）基を導入する場合は、例えば、テトラブチルアンモニウムアジドが用いられ、中でもアミノ基を導入する場合は、反応後さらに、水素ガスのような還元剤及びパラジウム炭素のような触媒を用いる公知の還元反応に付す。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。また、例えば、２−アミノエチルチオ（−Ｓ−（ＣＨ２）２−ＮＨ２）基を導入する場合は、ＨＳ−（ＣＨ２）２−ＮＨＢｏｃが用いられ、反応後に、Ｂｏｃ基を酸（例えば、塩酸、トリフルオロ酢酸等）で脱保護する。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２１１】
式（５）で表される化合物は、式（２）で表される化合物を、チオ尿素、及び溶媒（例えば、メタノール、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールのようなアルコール類）の存在下で反応させ、その後、塩基（例えば、ナトリウムメトキシド等）で処理することにより得ることができる。反応温度は、通常−８０から１５０℃である。
【０２１２】
化合物（ＩＩａ）、化合物（ＩＩｂ）のうち、リンカー構造又はその断片構造を導入する前の式（ＩＩａ’）及び（ＩＩｂ’）で表される化合物（以下、化合物（ＩＩａ’）、化合物（ＩＩｂ’）という）は、市販のものをそのまま用いてもよいし、公知のペプチド伸長法を用いて合成することもできる。
【０２１３】
【化２２】
2017164334.tif 000024
【０２１４】
例えば、Ｙ１又はＸ２がヒドロキシ基の場合は、Ｃ末端を固定するか或いは保護して、Ｙ１又はＸ２がヒドロキシ基以外の場合は、（Ｈ−）ｃＹ１又はＨ−Ｘ２で表される化合物等を出発原料として、公知のペプチド伸長法により、Ｃ末端からＮ末端にペプチド伸長反応を行う。ペプチド伸長の際、α−アミノ酸の側鎖や反応基質にカルボキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基、メルカプト基のような活性基が存在する場合は、これらの官能基を、予め公知の保護基で保護しておいてもよい。伸長後、Ｘ１又はＹ２が水素原子以外の場合は、Ｘ１−Ｌ又はＹ２（−Ｌ）ｃ（式中、Ｌは脱離基又はＯＨ）で表される化合物と公知の縮合反応又は置換反応に付す。最後に、脱保護反応或いは必要に応じて各ペプチド伸長法で知られる後処理操作を行い、式（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）で表される化合物を得る。また、同様にＮ末端からＣ末端にペプチド伸長反応も行うこともできる。
【０２１５】
ペプチド伸長法としては、例えば、活性化エステル法、混合酸無水物法、アジド法等のＣ末端活性化法、カルボジイミド等のカップリング法、Ｎ−カルボン酸無水物（ＮＣＡ）法、酸化還元法、酵素法、固相合成法等が挙げられる。
【実施例】
【０２１６】
以下に、合成例、比較例、実施例及び試験例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではなく、また本発明の範囲を逸脱しない範囲で変化させてもよい。【０２１７】
以下、化学構造式や標題、文章中における重合度は、おおよその平均重合度を示す。また、化学構造式内のポリエーテルの重合度ｎは各合成例及び実施例ごとに独立した値を有する。本明細書中「１０Ｂ−」は、１０Ｂの同位体比が９８％以上である化合物を示し、「天然型Ｂ−」は、天然の同位体比（８０．１％の１１Ｂと１９．９％の１０Ｂ）である化合物を示す。【０２１８】
合成例１
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２１９】
【化２３】
2017164334.tif 000025
【０２２０】
アルゴン雰囲気下、γ−ベンジル Ｌ−グルタメート Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＧ−ＮＣＡ，５２６  ｍｇ，２．０  ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２６  ｍｌ）に溶解した後、ＤＭＦ（３０  ｍｌ）に溶解させたα−メトキシ−ω−アミノ−ポリエチレングルコール（ＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ２，Ｍｎ＝１２，０００，６００  ｍｇ，０．０５  ｍｍｏｌ）を加え、３５℃にて２日間撹拌することで開環重合を行った。ジエチルエーテル中で沈殿を生成させ、その沈殿をろ取し、真空乾燥することで、ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ）のベンジル保護体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ））を得た。ポリアミノ酸の重合度（４０ｍｅｒ）は、１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）において、ＰＥＧ部分のプロトンの積分値（−ＯＣＨ２ＣＨ２−，δ＝３．６  ｐｐｍ）とポリグルタミン酸ベンジルエステルの芳香環部分の積分値（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２−，δ＝７．３  ｐｐｍ）を比較することで、算出した。分子量分布は、ゲルろ過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）分析（カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ  Ｇ３０００ＨＨＲ，Ｇ４０００ＨＨＲ，東ソー株式会社，溶離液：１０  ｍＭ  ＬｉＣｌのＤＭＦ溶液，流速：０．８  ｍｌ/ｍｉｎ，検出：示差屈折率（ＲＩ）検出器；温度：２５°Ｃ）から、１．０３と算出した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）： ８．２（ｓ，４０Ｈ），７．３（ｍ，２００Ｈ），５．１（ｍ，８０Ｈ），４．０（ｓ，４０Ｈ），３．６（ｍ，１０９０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，１６０Ｈ）．
こうして得られたＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ））を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で処理してベンジル基を脱保護後、透析、凍結乾燥を行って標題化合物を得た。【０２２１】
合成例２
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−チオレート化ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｔｈｉｏｌａｔｅ））の合成【０２２２】
【化２４】
2017164334.tif 000026
【０２２３】
合成例１で得られた化合物（３００  ｍｇ）に対して、０．０１Ｎ塩酸中で透析を行うことで、ポリグルタミン酸の対カチオンをナトリウムカチオンからプロトンへとイオン交換した後、凍結乾燥を行った。得られた化合物、ＥＤＣ（１４７．４  ｍｇ，１．１  ｅｑ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（８８．５  ｍｇ，１．１  ｅｑ）をＤＭＳＯ（１０  ｍｌ）中で３０分撹拌した後、２−（ピリジニルジスルファニル）エタンアミン塩酸塩（１５６．５  ｍｇ，１．０  ｅｑ）を加え、さらに２４時間撹拌した。反応終了後、この混合物を水中で透析し、凍結乾燥を行って、標題化合物を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）： ８．２（ｓ，４０Ｈ），７．７（ｍ，８０Ｈ），４．０（ｓ，４０Ｈ），３．６（ｍ，１０９０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，１６０Ｈ）．【０２２４】
実施例１
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−ＢＳＨ結合ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−ＢＳＨ））の合成【０２２５】
【化２５】
2017164334.tif 000027
【０２２６】
合成例２で得られた化合物（１０  ｍｇ）をＤＭＳＯ（１０  ｍｌ）に溶解し、それをメタノール（２  ｍｌ）に溶解した１０Ｂ−ＢＳＨ（４．２  ｍｇ，ブロック共重合体中のチオレート化された官能基に対して２  ｅｑ）と混合して、室温で終夜反応させた後、反応液を薄い水酸化ナトリウム水溶液中で透析し、凍結乾燥することで、標題化合物を得た。標題化合物（１  ｍｇ）を９０％硝酸（１  ｍｌ）に溶解後、１％硝酸で希釈した溶液に対してＩＣＰ−ＭＳ分析を行い、１０Ｂ量を定量することによって、ポリマー１分子に対して約２０個の１０Ｂ−ＢＳＨが導入されたこと、ポリマー１分子当りの１０Ｂ−ＢＳＨ導入量は１８．７％（ｗ／ｗ）であることを決定した。【０２２７】
合成例３
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２２８】
【化２６】
2017164334.tif 000028
【０２２９】
合成例１と同様の方法で、α−メトキシ−ω−アミノ−ポリエチレングルコール（ＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ２，Ｍｎ＝１２，０００，１２０  ｍｇ，０．０１  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（２３７  ｍｇ，０．９  ｍｍｏｌ）による開環重合を行い、ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ））を得た。ポリアミノ酸の重合度（９０ｍｅｒ）は、合成例１と同様の方法で算出した。分子量分布は、合成例１と同様の方法で、１．１５と算出した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，９０Ｈ），７．３（ｍ，４５０Ｈ），５．１（ｍ，１８０Ｈ），４．０（ｓ，９０Ｈ），３．６（ｍ，１０９０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，３６０Ｈ）．
得られた化合物に対して、合成例１と同様の方法で脱保護を行い、ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）−ブロック共重合体を得た。【０２３０】
合成例４
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−チオレート化ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｔｈｉｏｌａｔｅ））の合成【０２３１】
【化２７】
2017164334.tif 000029
【０２３２】
合成例３で得られた化合物から、合成例２と同様の方法で、ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−チオレート化ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）−ブロック共重合体を合成した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，９０Ｈ），７．７（ｍ，１９２Ｈ），４．０（ｓ，９０Ｈ），３．６（ｍ，１０９０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，３６０Ｈ）．【０２３３】
実施例２
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１２，０００）−ＢＳＨ結合ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−ＢＳＨ））の合成【０２３４】
【化２８】
2017164334.tif 000030
【０２３５】
合成例４で得られた化合物に対して、実施例１と同様の方法で、１０Ｂ−ＢＳＨと縮合して、標題化合物を合成した。実施例１と同様の方法で、ポリマー１分子に対して約４８個の１０Ｂ−ＢＳＨが導入されたこと、ポリマー１分子当りの１０Ｂ−ＢＳＨ導入量は２７．６％（ｗ／ｗ）であることを決定した。【０２３６】
合成例５
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝２０，０００）−ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２３７】
【化２９】
2017164334.tif 000031
【０２３８】
合成例１と同様の方法で、ＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ２（Ｍｎ＝１２，０００）の代わりにＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ２（Ｍｎ＝２０，０００，２００  ｍｇ，０．０１  ｍｍｏｌ）を用い、ＢＬＧ−ＮＣＡ（１０６  ｍｇ，０．４  ｍｍｏｌ）による開環重合を行い、ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ））を得た。ポリアミノ酸の重合度（４０ｍｅｒ）は、合成例１と同様の方法で算出した。分子量分布は、合成例１と同様の方法で、１．０５と算出した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，４０Ｈ），７．３（ｍ，２００Ｈ），５．１（ｍ，８０Ｈ），４．０（ｓ，４０Ｈ），３．６（ｍ，１８１８Ｈ），２．１−２．５（ｍ，１６０Ｈ）．
得られた化合物に対して、合成例１と同様の方法で脱保護を行い、ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝２０，０００）−ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体を合成した。【０２３９】
合成例６
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝２０，０００）−チオレート化ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｔｈｉｏｌａｔｅ））の合成【０２４０】
【化３０】
2017164334.tif 000032
【０２４１】
合成例５で得られた化合物から、合成例２と同様の方法で、ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝２０，０００）−チオレート化ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体を合成した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，４０Ｈ），７．７（ｍ，８０Ｈ），４．０（ｓ，４０Ｈ），３．６（ｍ，１８１８Ｈ），２．１−２．５（ｍ，１６０Ｈ）．【０２４２】
実施例３
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝２０，０００）−ＢＳＨ結合ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−ＢＳＨ））の合成【０２４３】
【化３１】
2017164334.tif 000033
【０２４４】
合成例６で得られた化合物に対して、実施例１と同様の方法で、１０Ｂ−ＢＳＨと縮合して、標題化合物を合成した。実施例１と同様の方法で、ポリマー１分子に対して約２０個の１０Ｂ−ＢＳＨが導入されたこと、ポリマー１分子当りの１０Ｂ−ＢＳＨ導入量は１３．８％（ｗ／ｗ）であることを決定した。【０２４５】
合成例７
ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）（Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２４６】
【化３２】
2017164334.tif 000034
【０２４７】
合成例１と同様の方法で、ＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ２の代わりにｎ−ブチルアミン（２  ｍｇ，０．０２７  ｍｍｏｌ）を用い、ＢＬＧ−ＮＣＡ（２８９  ｍｇ，１．０８  ｍｍｏｌ）による開環重合を行い、ポリグルタミン酸のベンジル保護体Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ））（４０ｍｅｒ）を得た。ポリアミノ酸の重合度（４０ｍｅｒ）は、１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）において、ｎ−ブチル基末端のメチル基部分のプロトンの積分値（−ＣＨ3，δ＝１．４  ｐｐｍ，１．６  ｐｐｍ）とポリグルタミン酸ベンジルエステルの芳香環部分の積分値（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２−，δ＝７．３  ｐｐｍ）を比較することで、算出した。分子量分布は、合成例１と同様の方法で、１．１５と算出した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，４０Ｈ），７．３（ｍ，２００Ｈ），５．１（ｍ，８０Ｈ），４．０（ｓ，４０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，１６０Ｈ），０．８（ｔ，３Ｈ）．
得られた化合物に対して、合成例１と同様の方法で脱保護を行い、ホモポリマーのポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）を合成した。【０２４８】
合成例８
チオレート化ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）（Ｐ（Ｇｌｕ−Ｔｈｉｏｌａｔｅ））の合成【０２４９】
【化３３】
2017164334.tif 000035
【０２５０】
合成例７で得られた化合物を用いて、合成例２と同様の方法で、チオレート化反応を行った。反応終了後、この混合物をメタノール中で透析し、最後にベンゼン／メタノール（９／１（ｖ／ｖ））溶液として凍結乾燥を行って、チオレート化ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）を合成した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，４０Ｈ），７．７（ｍ，７６Ｈ），４．０（ｓ，４０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，１６０Ｈ），０．８（ｔ，３Ｈ）．【０２５１】
比較例１
ＢＳＨ結合ポリグルタミン酸（４０ｍｅｒ）（Ｐ（Ｇｌｕ−ＢＳＨ））の合成【０２５２】
【化３４】
2017164334.tif 000036
【０２５３】
合成例８で得られた化合物に対して、実施例１と同様の方法で、１０Ｂ−ＢＳＨと縮合して、標題化合物を合成した。実施例１と同様の方法で、ポリマー１分子に対して約１９個の１０Ｂ−ＢＳＨが導入されたこと、ポリマー１分子当りの１０Ｂ−ＢＳＨ導入量は３８．６％（ｗ／ｗ）であることを決定した。【０２５４】
合成例９
ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）（Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２５５】
【化３５】
2017164334.tif 000037
【０２５６】
合成例１と同様の方法で、ＣＨ３Ｏ−ＰＥＧ−ＮＨ２の代わりにｎ−ブチルアミン（２  ｍｇ，０．０２７  ｍｍｏｌ）を用い、ＢＬＧ−ＮＣＡ（６５０  ｍｇ，２．４３  ｍｍｏｌ）による開環重合を行い、ポリグルタミン酸のベンジル保護体Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ））（９０ｍｅｒ）を得た。ポリアミノ酸の重合度（９０ｍｅｒ）は、１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）において、ｎ−ブチル基末端のメチル基部分のプロトンの積分値（−ＣＨ３，δ＝０．８  ｐｐｍ）とポリグルタミン酸ベンジルエステルの芳香環部分の積分値（Ｃ６Ｈ５ＣＨ２−，δ＝７．３  ｐｐｍ）を比較することで、算出した。分子量分布は、合成例１と同様の方法で、１．１５と算出した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，９０Ｈ），７．３（ｍ，４５０Ｈ），５．１（ｍ，１８０Ｈ），４．０（ｓ，９０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，３６０Ｈ），０．８（ｔ，３Ｈ）．
得られた化合物に対して、合成例１と同様の方法で脱保護を行い、ホモポリマーのポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）を合成した。【０２５７】
合成例１０
チオレート化ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）（Ｐ（Ｇｌｕ−Ｔｈｉｏｌａｔｅ））の合成【０２５８】
【化３６】
2017164334.tif 000038
【０２５９】
合成例９で得られた化合物を用いて、合成例２と同様の方法で、チオレート化反応を行った。反応終了後、この混合物をメタノール中で透析し、最後にベンゼン／メタノール（９／１（ｖ／ｖ））溶液として凍結乾燥を行って、チオレート化ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）を合成した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，８０℃）δ（ｐｐｍ）：８．２（ｓ，９０Ｈ），７．７（ｍ，１６４Ｈ），４．０（ｓ，９０Ｈ），２．１−２．５（ｍ，７２０Ｈ），０．８（ｔ，３Ｈ）．【０２６０】
比較例２
ＢＳＨ結合ポリグルタミン酸（９０ｍｅｒ）（Ｐ（Ｇｌｕ−ＢＳＨ））の合成【０２６１】
【化３７】
2017164334.tif 000039
【０２６２】
合成例１０で得られた化合物に対して、実施例１と同様の方法で、１０Ｂ−ＢＳＨと縮合して、標題化合物を合成した。実施例１と同様の方法で、ポリマー１分子に対して約４１個の１０Ｂ−ＢＳＨが導入されたこと、ポリマー１分子当りの１０Ｂ−ＢＳＨ導入量は３８．０％（ｗ／ｗ）であることを決定した。【０２６３】
合成例１１
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ベンジル保護ポリアスパラギン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ａｓｐ（Ｂｎ）））の合成【０２６４】
【化３８】
2017164334.tif 000040
【０２６５】
アルゴン雰囲気下にて、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝１０，０００，３２３  ｍｇ，０．０３２３  ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１２．５  ｍｌ）に溶解させ、ＤＭＦ（３．０  ｍｌ）に溶解させたβ−ベンジル Ｌ−アスパルテート Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ）（２００  ｍｇ，０．８０３  ｍｍｏｌ）を滴下し、４０℃で１６時間攪拌した。室温にて、反応液をヘキサン／酢酸エチル（３／２（ｖ／ｖ），５０  ｍｌ）中に滴下して再沈殿させ、標題化合物（３９２ｍｇ，０．０２９５  ｍｍｏｌ，収率９１％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．２９、１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）により、得られた化合物の重合度が２３であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：２．５４−２．７１（ｍ，２３Ｈ），２．７６−２．９０（ｍ，２３Ｈ），３．３８−３．６１（ｍ，９０９Ｈ），４．５３−４．６９（ｍ，２１Ｈ），４．９６−５．１０（ｍ，４６Ｈ），７．１８−７．４１（ｍ，１１７Ｈ）．【０２６６】
合成例１２
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ポリアスパラギン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ａｓｐ））の合成【０２６７】
【化３９】
2017164334.tif 000041
【０２６８】
合成例１１で得られた化合物（３０９  ｍｇ，０．０２３３  ｍｍｏｌ）をＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）／Ｈ２Ｏ（１／１（ｖ／ｖ），１２．０  ｍｌ）に溶解させ、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２．０  ｍｌ）を氷冷下で滴下し、室温にて２時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（２０７  ｍｇ，０．０１６６  ｍｍｏｌ，収率７３％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０６であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：２．４１−２．８７（ｍ，４４Ｈ），３．５２−３，７８（ｍ，９０９Ｈ），４．３０−４．５３（ｍ，１６Ｈ）．【０２６９】
合成例１３
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（２５ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０２７０】
【化４０】
2017164334.tif 000042
【０２７１】
アルゴン雰囲気下にて、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝１０，０００，３０４  ｍｇ，０．０３０４  ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１２．５  ｍｌ）に溶解させ、ＤＭＦ（３．０  ｍｌ）に溶解させたＢＬＧ−ＮＣＡ（２００  ｍｇ，０．７６０  ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１６時間攪拌した。氷冷下で反応液をヘキサン／酢酸エチル（３／２（ｖ／ｖ），５０  ｍｌ）中に滴下して再沈殿させ、標題化合物（３８４  ｍｇ，０．０２４８  ｍｍｏｌ，収率８２％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．３９、１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）により、得られた化合物の重合度が２５であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．８７−２．６８（ｍ，１６０Ｈ），３．４０−３．６２（ｍ，９０９Ｈ），３．７８−４．０７（ｍ，１８Ｈ），４．８７−５．１４（ｍ，４９Ｈ），７．１０−７．４６（ｍ，１２７Ｈ）．【０２７２】
合成例１４
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ポリグルタミン酸（２５ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２７３】
【化４１】
2017164334.tif 000043
【０２７４】
合成例１３で得られた化合物（２４８  ｍｇ，０．０１６０  ｍｍｏｌ）をＮＭＰ／Ｈ２Ｏ（１／１（ｖ／ｖ），１０  ｍｌ）に溶解させ、水酸化リチウム１水和物（６８．０  ｍｇ，１．６２  ｍｍｏｌ）を氷冷下で添加し、室温にて１．５時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（１８５  ｍｇ，０．０１３９  ｍｍｏｌ，収率８７％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．２７であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７９−２．０９（ｍ，４７Ｈ），２．１１−２．３４（ｍ，４７Ｈ），３．４９−３．７３（ｍ，９０９Ｈ），４．１９−４．３２（ｍ，２１Ｈ）．【０２７５】
合成例１５
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（５０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０２７６】
【化４２】
2017164334.tif 000044
【０２７７】
アルゴン雰囲気下にて、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝１０，０００，１．２９  ｇ，０．１２９  ｍｍｏｌ）、及びＢＬＧ−ＮＣＡ（１．６９  ｇ，６．４５  ｍｍｏｌ）より、合成例１３の方法と同様の方法で、標題化合物（９８８  ｍｇ，０．０４６９  ｍｍｏｌ，収率３７％）を得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．４７、１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）により、得られた化合物の重合度が５０であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．７６−２．７７（ｍ，２００Ｈ），３．４０−３．６０（ｍ，９０９Ｈ），３．７５−４．１４（ｍ，４３Ｈ），４．８７−５．１４（ｍ，９８Ｈ），７．１０−７．４６（ｍ，２５０Ｈ）．【０２７８】
合成例１６
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ポリグルタミン酸（５０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２７９】
【化４３】
2017164334.tif 000045
【０２８０】
合成例１５で得られた化合物（５００  ｍｇ，０．０２３７  ｍｍｏｌ）をＮＭＰ／Ｈ２Ｏ（１／１（ｖ／ｖ），１３．０  ｍｌ）に溶解させ、２Ｎ水酸化リチウム水溶液（２．６０  ｍｌ）を氷冷下で滴下し、室温にて２時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（１９１  ｍｇ，０．０１１４  ｍｍｏｌ，収率４８％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．３５であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７５−２．０７（ｍ，１０２Ｈ），２．０９−２．３０（ｍ，９９Ｈ），３．４９−３．７３（ｍ，９０９Ｈ），４．１５−４．３４（ｍ，４５Ｈ）．【０２８１】
合成例１７
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０２８２】
【化４４】
2017164334.tif 000046
【０２８３】
アルゴン雰囲気下にて、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝１０，０００，２．６０  ｇ，０．２６０  ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１２０  ｍｌ）に溶解させ、ＤＭＦ（３０  ｍｌ）に溶解させたＢＬＧ−ＮＣＡ（１．７０  ｇ，６．４６  ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１６時間攪拌した。氷冷下にて、反応液をヘキサン／酢酸エチル（３／２（ｖ／ｖ），７５０  ｍｌ）中に滴下して再沈殿させ、標題化合物（３．７０  ｇ，０．２４４  ｍｍｏｌ，収率９５％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．３９、１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）により、得られた化合物の重合度が２３であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１．５８−２．６４（ｍ，９２Ｈ），３．４３−３．６２（ｍ，９０９Ｈ），３．７７−４．１１（ｍ，１５Ｈ），４．８８−５．１４（ｍ，４５Ｈ），７．１２−７．４０（ｍ，１１５Ｈ）．【０２８４】
合成例１８
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−ポリグルタミン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０２８５】
【化４５】
2017164334.tif 000047
【０２８６】
合成例１７で得られた化合物（１．７０  ｇ，０．１１２  ｍｍｏｌ）をＮＭＰ／Ｈ２Ｏ（１／１（ｖ／ｖ），１９．５  ｍｌ）に溶解させ、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（６．５０  ｍｌ）を氷冷下で滴下し、室温にて２時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（７８９  ｍｇ，０．０５８１  ｍｍｏｌ，収率５２％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１３であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７９−２．０１（ｍ，４３Ｈ），２．１１−２．５４（ｍ，４２Ｈ），３．４９−３．７３（ｍ，９０９Ｈ），４．１９−４．３２（ｍ，２１Ｈ）．【０２８７】
合成例１９
［Ｂ１２Ｈ１１−Ｃ４Ｈ８Ｏ２］テトラブチルアンモニウム塩の合成【０２８８】
【化４６】
2017164334.tif 000048
【０２８９】
天然型Ｂ−ドデカハイドロドデカボレート・２テトラブチルアンモニウム塩（７．５０  ｇ，１２．０  ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（４００  ｍｌ）に溶解し、ＮａＢＦ４（６．５７  ｇ，５９．８  ｍｍｏｌ）、４Ｎ塩化水素の１，４−ジオキサン溶液（５．９９  ｍｌ，２３．９  ｍｍｏｌ）を加えた後、５時間加熱還流を行った。反応液を減圧濃縮後、イソプロパノールによってスラリー洗浄し、標題化合物（４．１７  ｇ，８．８５  ｍｍｏｌ，収率７４％）を白色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：０．６３−１．９９（ｂｒ，１１Ｈ），１．０２（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝７．３  Ｈｚ），１．３９−１．４６（ｍ，８Ｈ），１．６２−１．７０（ｍ，８Ｈ），３．２１−３．２５（ｍ，８Ｈ），３．８６（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝４．５  Ｈｚ），４．５４（ｔ，４Ｈ，Ｊ＝４．５  Ｈｚ）．【０２９０】
合成例２０
［Ｂ１２Ｈ１１−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ３］２セシウム塩の合成【０２９１】
【化４７】
2017164334.tif 000049
【０２９２】
合成例１９で得られた化合物（４．１７  ｇ，８．８５  ｍｍｏｌ）を脱水ジクロロメタン（３０  ｍｌ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムアジド（３．７７  ｇ，１３．３  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温にて２時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、メタノール（５０  ｍｌ）に溶解させ、フッ化セシウム（２．６９  ｇ，１７．７  ｍｍｏｌ）を加えて１時間攪拌後、沈殿物をろ取した。ジクロロメタンによってスラリー洗浄し、標題化合物（４．４４  ｇ，８．２７  ｍｍｏｌ，収率９３％）を白色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．２５−１．５４（ｂｒ，１１Ｈ），３．１９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．９  Ｈｚ），３．３３（ｍ，４Ｈ），３．３７−３．３９（ｍ，２Ｈ）．【０２９３】
合成例２１
［Ｂ１２Ｈ１１−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２ＮＨ２］２テトラブチルアンモニウム塩の合成【０２９４】
【化４８】
2017164334.tif 000050
【０２９５】
合成例２０で得られた化合物（２．２７  ｇ，４．２３  ｍｍｏｌ）を水（１００  ｍｌ）に溶解させ、テトラブチルアンモニウムブロミド（２．７３  ｇ，８．４６  ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌後、沈殿物をろ取し、［Ｂ１２Ｈ１１−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ3］２テトラブチルアンモニウム塩（２．１７  ｇ，２．８７  ｍｍｏｌ，収率６８％）を得た。続いて、得られた化合物をメタノール（５７．５  ｍｌ）に溶解させ、アルゴン置換後、５％Ｐｄ／Ｃ（２．８７  ｇ，うち水分５２．５％）を加え、水素雰囲気下にて、５時間攪拌した。セライト（登録商標）濾過後、ろ液を減圧濃縮し、標題化合物（１．９１  ｇ，２．６３  ｍｍｏｌ，収率９１％）を白色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：０．５８−１．８６（ｂｒ，１１Ｈ），１．０２（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ），１．３７−１．４７（ｍ，８Ｈ），１．６２−１．７０（ｍ，８Ｈ），２．８３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．２  Ｈｚ），３．２１−３．２６（ｍ，８Ｈ），３．５５−３．６１（ｍ，４Ｈ），３．６９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．３  Ｈｚ）．【０２９６】
実施例４
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリアスパラギン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ａｓｐ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０２９７】
【化４９】
2017164334.tif 000051
【０２９８】
合成例１２で得られた化合物（５０．０  ｍｇ，３．８０  μｍｏｌ，Ａｓｐ残基：０．０８７４  ｍｏｌ）をＤＭＦ（２５．０  ｍｌ）に溶解し、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ）（６４．０  ｍｇ，０．２３１  ｍｍｏｌ）、及びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（２５．０  μｌ，０．２６９  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、合成例２１で得られた化合物（１６８  ｍｇ，０．２３０  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で２０時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（４８．０  ｍｇ，３．５７  μｍｏｌ，収率８８％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．４２であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリアスパラギン酸（ＰＡｓｐ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、２２％であった。これは、１ポリマーに対して、約５個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．０７−１．０９（ｍ，８６Ｈ），２．５０−３．０１（ｍ，３２Ｈ），３．１８−３．３５（ｍ，７Ｈ），３．３９−３．９５（ｍ，９０９Ｈ），４．４６−４．６０（ｍ，３Ｈ）．【０２９９】
実施例５
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（２５ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３００】
【化５０】
2017164334.tif 000052
【０３０１】
合成例１４で得られた化合物（２１．８  ｍｇ，１．６２  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．０４０７  ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（４．０  ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１９．５  ｍｇ，０．１６９  ｍｍｏｌ）、及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ・ＨＣｌ）（３２．３  ｍｇ，０．１６９  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、合成例２１で得られた化合物（１２３  ｍｇ，０．１６９  ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（４５．０  μｌ，０．３３９  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で２０時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（２２．０  ｍｇ，１．３１  μｍｏｌ，収率７９％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．５２であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、５２％であった。これは、１ポリマーに対して、約１３個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．２１８−２．４８（ｍ，２８７Ｈ），２．２３−２．４８（ｍ，４７Ｈ），３．１８−３．４３（ｍ，４９Ｈ），３．６４−３．８７（ｍ，１２４９Ｈ），４．１６−４．４６（ｍ，１９Ｈ）．【０３０２】
実施例６
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（５０ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３０３】
【化５１】
2017164334.tif 000053
【０３０４】
合成例１６で得られた化合物（２０．０  ｍｇ，１．１９  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．０５９７  ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（４．０  ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（３０．３  ｍｇ，０．２６３  ｍｍｏｌ）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ（５０．４  ｍｇ，０．２６３  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、合成例２１で得られた化合物（１９３  ｍｇ，０．２６３  ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（７０．０  μｌ，０．５２６  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で２０時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（１８．３  ｍｇ，０．７７６  μｍｏｌ，収率６５％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．３３であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ＰＧｌｕの側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、４８％であった。これは、１ポリマーに対して、約２４個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．１９−２．１９（ｍ，６３１Ｈ），２．２１−２．５３（ｍ，１００Ｈ），３．２５−３．３８（ｍ，１０３Ｈ），３．４０−３．８７（ｍ，１４７０Ｈ），４．１９−３．４２（ｍ，４５Ｈ）．【０３０５】
実施例７
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３０６】
【化５２】
2017164334.tif 000054
【０３０７】
合成例１８で得られた化合物（６００  ｍｇ，０．０４４５  ｍｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：１．０２  ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（１５  ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（５８４  ｍｇ，５．１２  ｍｍｏｌ）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ（９８２  ｍｇ，５．１２  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、合成例２１で得られた化合物（２．２４  ｇ，４．１０  ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３６  ｍｌ，１０．２  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で２０時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（７８０  ｍｇ，０．０４５９  ｍｍｏｌ，収率ｑｕａｎｔ．）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．２７であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ＰＧｌｕの側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、６１％であった。これは、１ポリマーに対して、約１４個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．０４−２．１５（ｍ，２１７Ｈ），２．１６−２．４３（ｍ，３８Ｈ），３．２１−３．４３（ｍ，４４Ｈ），３．５０−３．７０（ｍ，１０１４Ｈ），４．１９−４．４０（ｍ，２０Ｈ）．【０３０８】
合成例２２
［Ｂ１２Ｈ１１−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ２）２ＮＨＢｏｃ］２−２ナトリウム塩の合成【０３０９】
【化５３】
2017164334.tif 000055
【０３１０】
システアミン塩酸塩（５３０  ｍｇ，４．６７  ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０  ｍｌ）に溶解させた後、ジクロロメタン（５．０  ｍｌ）に溶解させたＢｏｃ２Ｏ（１．４３  ｇ，６．５７  ｍｍｏｌ）を滴下した。続いてトリエチルアミン（７５４  μｌ，５．５９  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。飽和重層水、水、１５％食塩水にて順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過を行い、ろ液を減圧濃縮することで、保護システアミンの粗生成物（１．０３  ｇ）を得た。【０３１１】
続いて得られた保護システアミンの粗生成物のうち、一部（２１０  ｍｇ）をアセトニトリル（５．０  ｍｌ）に溶解し、合成例１９で得られた化合物（２９７  ｍｇ，０．６３０  ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（２９９  ｍｇ，２．１６  ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で２時間攪拌した。１Ｈ−ＮＭＲにて合成例１９で得られた化合物の残存が確認されたため、保護システアミンの粗生成物（２６８  ｍｇ）を加え、さらに１６時間攪拌した。反応液を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物（２９５  ｍｇ，０．４３０  ｍｍｏｌ，収率６８％）を淡黄色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：０．５８−１．８６（ｂｒ，１１Ｈ），１．０５（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ），１．４０−１．４９（ｍ，８Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．６５−１．７３（ｍ，８Ｈ），２．６７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１  Ｈｚ），２．７３（ｔ，  ２Ｈ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ），３．２３−３．２９（ｍ，８Ｈ），３．３２−３．３４（ｍ，２Ｈ），３．６１−３．７３（ｍ，６Ｈ）．【０３１２】
合成例２３
［Ｂ１２Ｈ１１−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｓ（ＣＨ２）２ＮＨ２ＨＣｌ］２−の塩の合成【０３１３】
【化５４】
2017164334.tif 000056
【０３１４】
合成例２２で得られた化合物（２９５  ｍｇ，０．４３９  ｍｍｏｌ）をメタノール（１０  ｍｌ）に溶解し、４Ｎ塩酸の１，４−ジオキサン溶液（０．５０  ｍｌ，２．０  ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応液を減圧濃縮することで、標題化合物（３０１  ｍｇ，０．４９６  ｍｍｏｌ，収率ｑｕａｎｔ．）を淡黄色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：０．６３−１．８５（ｂｒ，１１Ｈ），１．０５（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝７．３  Ｈｚ），１．４０−１．４９（ｍ，８Ｈ），１．６５−１．７３（ｍ，８Ｈ），２．７８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．２  Ｈｚ），２．９７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４  Ｈｚ），３．２２−３．２８（ｍ，８Ｈ），３．６１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．３  Ｈｚ），３．６８−３．７２（ｍ，４Ｈ），３．８２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝４．３  Ｈｚ）．【０３１５】
実施例８
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（２５ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３１６】
【化５５】
2017164334.tif 000057
【０３１７】
合成例１４で得られた化合物（２０．０  ｍｇ，１．４９  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．０３７３  ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（４．０  ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１３．２  ｍｇ，０．１５５  ｍｍｏｌ）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ（２９．７  ｍｇ，０．１５５  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、合成例２３で得られた化合物（９４．２  ｍｇ，０．１５５  ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３０．０  μｌ，０．２３０  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で２０時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（１８．０  ｍｇ，１．１３  μｍｏｌ，収率７３％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．３３であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ＰＧｌｕの側鎖カルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、３６％であった。これは、１ポリマーに対して、約９個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．１１９−２．１９（ｍ，３４１Ｈ），２．２０−２．４８（ｍ，５０Ｈ），２．５７−２．７９（ｍ，９３Ｈ），３．２６−３．４０（ｍ，７１Ｈ），３．４６−３．７６（ｍ，１７４４Ｈ），４．１１−３．４２（ｍ，２６Ｈ）．【０３１８】
合成例２４
［Ｂ１２Ｈ１１−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣ（ＮＨ２）２］−テトラブチルアンモニウム塩の合成【０３１９】
【化５６】
2017164334.tif 000058
【０３２０】
合成例１９で得られた化合物（６００  ｍｇ，１．２７  ｍｍｏｌ）をエタノール（３０  ｍｌ）に溶解させ、チオ尿素（１９４  ｍｇ，２．５６  ｍｍｏｌ）を加え、８５℃で１６時間攪拌した。室温に戻し、生じた沈殿をろ取して、標題化合物（３５０  ｍｇ，０．６３９  ｍｍｏｌ，収率５０％）を白色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．２５−１．７６（ｂｒ，１１Ｈ），０．９２（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝７．３  Ｈｚ），１．２７−１．３６（ｍ，８Ｈ），１．５３−１．６１（ｍ，８Ｈ），３．３０−３．３８（ｍ，２Ｈ），３．４３−３．４６（ｍ，２Ｈ），３．４９−３．５２（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．５  Ｈｚ）．【０３２１】
合成例２５
［Ｂ１２Ｈ１１−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２ＳＨ］２−２テトラブチルアンモニウム塩の合成【０３２２】
【化５７】
2017164334.tif 000059
【０３２３】
合成例２４で得られた化合物（３５０  ｍｇ，０．６３９  ｍｍｏｌ）をメタノール（３０  ｍｌ）に溶解させ、５Ｍナトリウムメトキシド／メタノール（０．５１０  ｍｌ，２．５６  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間半攪拌した。その後、反応液を減圧濃縮し、水（１０  ｍｌ）に再度溶解させ、酢酸を添加してｐＨを４．０に合わせた。続いて、水（５．０  ｍｌ）に溶解させたテトラブチルアンモニウムブロミド（４１２  ｍｇ，１．２８  ｍｍｏｌ）を加え、生じた沈殿物をろ取し、標題化合物（３８９  ｍｇ，０．５２４  ｍｍｏｌ，収率８２％）を白色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：０．４９−１．７６（ｂｒ，１１Ｈ），０．９２（ｔ，１２Ｈ，Ｊ＝７．３  Ｈｚ），１．２９−１．３８（ｍ，８Ｈ），１．５４−１．６２（ｍ，８Ｈ），２．５３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６  Ｈｚ），３．１６−３．１８（ｍ，８Ｈ），３．４９−３．５３（ｍ，４Ｈ），３．５９−３．６４（ｍ，２Ｈ）．【０３２４】
実施例９
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−チオエステル結合）ポリグルタミン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３２５】
【化５８】
2017164334.tif 000060
【０３２６】
合成例１８で得られた化合物（１０．０  ｍｇ，０．７４２  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．０１６９  μｍｏｌ）をＮ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）（５．０  ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（９．７０  ｍｇ，０．０８４７  μｍｏｌ）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ（１６．２  ｍｇ，０．０８４７  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、合成例２５で得られた化合物（６３．３  ｍｇ，０．８４７  ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）（２．１  ｍｇ，０．０１６９  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で１６時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（９．８０  ｍｇ，０．０５６０  ｍｍｏｌ，収率７５％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１２であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ＰＧｌｕの側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、６５％であった。これは、１ポリマーに対して、約１５個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．３２−２．２１（ｍ，１２２Ｈ），２．１９−２．７０（ｍ，４２Ｈ），３．５１−３．８４（ｍ，９９９Ｈ），４．１１−４．４２（ｍ，６Ｈ）．【０３２７】
合成例２６
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−末端アルキン結合ポリグルタミン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３２８】
【化５９】
2017164334.tif 000061
【０３２９】
合成例１８で得られた化合物（１５０  ｍｇ，１１．１  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．２５４  ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１０  ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１４６  ｍｇ，１．２７  ｍｍｏｌ）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ（２４３  ｍｇ，１．２７  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、２−［２−（２−プロピニルオキシ）エトキシ］エチルアミン（１８２  ｍｇ，１．２７  ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（３５４  μｌ，２．５４  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で１６時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（１５４  ｍｇ，１０．２  μｍｏｌ，収率９２％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０７であった。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）測定結果より、ＰＧｌｕの側鎖のカルボン酸に対する２−［２−（２−プロピニルオキシ）エトキシ］エチルアミンの導入率は７０％であった。これは、１ポリマーに対して、約１６個の２−［２−（２−プロピニルオキシ）エトキシ］エチルアミンが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７８−２．１３（ｍ，４１Ｈ），２．１６−２．４０（ｍ，４１Ｈ），２．７７−２．８３（ｍ，１４Ｈ），３．２２−３．３８（ｍ，３２Ｈ），３．５６−３．７３（ｍ，１１７２Ｈ），４．１０−４．３１（ｍ，１７Ｈ）．【０３３０】
実施例１０
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−トリアゾール結合）ポリグルタミン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３３１】
【化６０】
2017164334.tif 000062
【０３３２】
合成例２６で得られた化合物（１０．０  ｍｇ，０．６６１  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：１５．２  μｍｏｌ）を１００  ｍＭリン酸緩衝液（１０  ｍｌ）に溶解させ、合成例２０で得られた化合物（１６．３  ｍｇ，３０．４  μｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−ペンタメチルジエチレントリアミン（ＰＭＤＥＴＡ）（５．０  μｌ，２８．９  μｍｏｌ）、及びトリス（３−ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）（１９．８  ｍｇ，４５．５  μｍｏｌ）を加え、アルゴンガスで５分間バブリングした。続いて、臭化銅（Ｉ）（１．３０  ｍｇ，９．０６  μｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下で室温にて９６時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物を（１３．８  ｍｇ，０．６９８  μｍｏｌ，収率ｑｕａｎｔ．）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．２４であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ＰＧｌｕの側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、３９％であった。これは、１ポリマーに対して、約９個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．１９９−２．１５（ｍ，１８７Ｈ），２．１５−２．５６（ｍ，４６Ｈ），３．１４−３．３９（ｍ，１８Ｈ），３．３９−３．７１（ｍ，１３９８Ｈ），４．０６−４．３６（ｍ，２７Ｈ）．【０３３３】
合成例２７
Ｎ−保護アミノヘキサン酸活性エステルの合成【０３３４】
【化６１】
2017164334.tif 000063
【０３３５】
６-アミノヘキサン酸（８４８  ｍｇ，６．４８  ｍｍｏｌ）を水（１０  ｍｌ）に溶解させた後、ＮａＨＣＯ３（８１２  ｍｇ，９．６７  ｍｍｏｌ）を添加した。続いてＣｂｚ−Ｃｌ（１．１  ｍｌ，７．７８  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間攪拌した。水層を、濃塩酸を用いてｐＨ１．０にし、ジクロロメタンで抽出後、１５％食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過を行い、ろ液を減圧濃縮することで、Ｎ−保護アミノヘキサン酸（１．２  ｇ，４．５４  ｍｍｏｌ，収率７０％）を白色紛体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：１．３１−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．５６（ｍ，２Ｈ），１．５９−１．６８（ｍ，２Ｈ），２．３０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ），３．１４（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ，１３．２  Ｈｚ），５．０８（ｓ，２Ｈ），７．２４−７．３６（ｍ，５Ｈ）．【０３３６】
得られたＮ−保護アミノヘキサン酸（１．２  ｇ，４．５４  ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０  ｍｌ）に溶解し、クロロぎ酸４-ニトロフェニル（１．４７  ｍｌ，７．２９  ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．９４４  ｍｌ，７．０９  ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（８２．０  ｍｇ，０．６６８  ｍｍｏｌ）を加え、４℃で４５分攪拌した。反応液を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物（６３２  ｍｇ，１．６４  ｍｍｏｌ，収率３６％）を淡黄色油状物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：１．４４−１．５１（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．７５−１．８２（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４  Ｈｚ），３．１７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．８  Ｈｚ），５．０８（ｓ，２Ｈ），７．２９−７．３８（ｍ，７Ｈ），８．３０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．２  Ｈｚ）．【０３３７】
合成例２８
アミノドデカボレートの合成【０３３８】
【化６２】
2017164334.tif 000064
【０３３９】
天然型Ｂ−ドデカハイドロドデカボレート・２ナトリウム塩（３．０  ｇ，１５．９  ｍｍｏｌ）を水（５０  ｍｌ）に溶解させた後、ヒドロキシルアミン-Ｏ-スルホン酸（３．６  ｇ，３１．８  ｍｍｏｌ）を加え、１１０℃で２８時間攪拌した。続いて氷浴中でテトラメチルアンモニウムクロリド（５．２  ｇ,  ４７．９  ｍｍｏｌ）を添加し攪拌した。析出物をろ取した。この析出物を水に溶解後、４℃に冷却して晶析させ、ろ取し、真空乾燥することで標題化合物（１．２  ｇ，収率２０％）を白色粉体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．１５６−１．９４（ｍ，１１Ｈ），３．０９（ｓ，１２Ｈ），５．３５−５．７６（ｂｒ，３Ｈ）.【０３４０】
合成例２９
アミノヘキサン酸―ドデカボレートアミドの合成【０３４１】
【化６３】
2017164334.tif 000065
【０３４２】
合成例２８で得られた化合物（２３０  ｍｇ，０．６４５  μｍｏｌ）をＤＭＦ（５．０  ｍｌ）に溶解し、ＮａＨ（６３．０  ｍｇ，２．５８  ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１時間攪拌した。続いて、合成例２７で得られた化合物（２９９  ｍｇ，０．７７４  ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１６時間攪拌した。反応液を濃縮後、ジクロロメタン（５  ｍｌ）を加え、不溶物をろ去した。続いてろ液にヘキサン（２５  ｍｌ）を加えて沈殿を生じさせ、上清をデカンテーションにより除去し、Ｎ−保護アミノヘキサン酸―ドデカボレートアミド（１５８  ｍｇ，０．３２９  μｍｏｌ，収率４３％）を淡黄色粘性物質として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）：０．４５−２．１７（ｍ，１１Ｈ）,１．３３−１．４６（ｍ，２Ｈ）,１．４７−１．７４（ｍ，４Ｈ）,２．
５９−２．７５（ｍ，２Ｈ）,３．０９−３．１７（ｍ，２Ｈ）,５．０４−５．１０（ｓ，２Ｈ）,７．２５−７．４２（ｍ，５Ｈ）.【０３４３】
得られた化合物の一部（５６．０  ｍｇ，０．１１７  ｍｍｏｌ）をメタノール（８．０  ｍｌ）に溶解させ、アルゴン雰囲気下で、５％Ｐｄ／Ｃ（６０．０  ｍｇ，うち水分５２．５％）を加えた。続いて水素置換し、水素雰囲気下で５時間攪拌した。ろ過を行い、ろ液を減圧濃縮して標題化合物（３１．０  ｍｇ，０．０９７４  ｍｍｏｌ，収率８３％）を褐色固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ−ｄ４）δ（ｐｐｍ）：０．５８−２．０３（ｂｒ，１１Ｈ），１．３５−１．４４（ｍ，２Ｈ），１．４７−１．５６（ｍ，２Ｈ），１．５８−１．６６（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．９  Ｈｚ），３．１４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９  Ｈｚ），５．０８（ｓ，２Ｈ），７．２９−７．３９（ｍ，５Ｈ）．【０３４４】
実施例１１
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝１０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（２３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−ＨＮ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３４５】
【化６４】
2017164334.tif 000066
【０３４６】
合成例１８で得られた化合物（１０  ｍｇ，０．７３４  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．０１６９  ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５．０  ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（９．７  ｍｇ，０．０８４５  ｍｍｏｌ）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ（１６．０  ｍｇ，０．０８４５  ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。続いて、合成例２９で得られた化合物（２９  ｍｇ，０．８４７  ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２３．６  μｌ，０．１６９  ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で２０時間攪拌した。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（１２．０  ｍｇ，０．６９９  μｍｏｌ，収率ｑｕａｎｔ．）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．５２であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ＰＧｌｕの側鎖カルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、５６％であった。これは、１ポリマーに対して、約１３個の天然型Ｂ−アミノドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．４０７−２．６３（ｍ，３５６Ｈ），３．０３−３．２６（ｍ，３５Ｈ），３．５４−３．７８（ｍ，９０９Ｈ），４．０６−４．４５（ｍ，２２Ｈ）．【０３４７】
合成例３０
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（２２ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０３４８】
【化６５】
2017164334.tif 000067
【０３４９】
合成例１３と同様にして、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝２０，０００，３．０  ｇ，０．１４２  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（９３４  ｍｇ，３．５５  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（３．２４  ｇ，０．１３３  ｍｍｏｌ，収率９４％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）により、得られた化合物の重合度が２２であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９７−２．７５（ｍ，８５Ｈ），３．５２−３．８２（ｍ，１８１８Ｈ），３．８９−４．０５（ｍ，２２Ｈ），４．９７−５．１９（ｍ，４４Ｈ），７．１０−７．４６（ｍ，１１０Ｈ）．【０３５０】
合成例３１
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−ポリグルタミン酸（２２ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０３５１】
【化６６】
2017164334.tif 000068
【０３５２】
合成例３０で得られた化合物（３．２  ｇ，０．１３３  ｍｍｏｌ）を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２７  ｍｌ）中で１６時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（２．１５  ｇ，０．０９２  ｍｍｏｌ，収率６５％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０６であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７５−２．０９（ｍ，４３Ｈ），２．１１−２．３０（ｍ，４０Ｈ），３．５０−３．７５（ｍ，１８１８Ｈ），４．１５−４．３２（ｍ，１９Ｈ）．【０３５３】
実施例１２
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（２２ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３５４】
【化６７】
2017164334.tif 000069
【０３５５】
実施例５と同様にして、合成例３１で得られた化合物（２００  ｍｇ，０．５６７  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．１８８  ｍｍｏｌ）と合成例２１で得られた化合物（３３１  ｍｇ，０．４７１  ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ中で縮合させた。この溶液について、１５０  ｍＭ食塩水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、脱イオン水に対する３回の透析（計２０時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）、及び１００  ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）に対する２回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（２１９  ｍｇ，８．３１  μｍｏｌ，収率９７％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１２であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、５５％であった。これは、１ポリマーに対して、約１２個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．２０−２．４８（ｍ，１７０Ｈ），２．１９−２．４８（ｍ，３１Ｈ），３．１８−３．４０（ｍ，３３Ｈ），３．５０−３．８０（ｍ，１９１０Ｈ），４．１５−４．４５（ｍ，１７Ｈ）．【０３５６】
合成例３２
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（４３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０３５７】
【化６８】
2017164334.tif 000070
【０３５８】
合成例１３と同様にして、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝２０，０００，３．２  ｇ，０．１５５  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（２．０  ｇ，５．３５  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（４．６  ｇ，０．１５６  ｍｍｏｌ，収率ｑｕａｎｔ．）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）により、得られた化合物の重合度が４３であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９８−２．８１（ｍ，１６５Ｈ），３．５５−３．８０（ｍ，１８１８Ｈ），３．８９−４．１９（ｍ，２６Ｈ），４．９０−５．１１（ｍ，８９Ｈ），７．１５−７．４６（ｍ，２２０Ｈ）．【０３５９】
合成例３３
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−ポリグルタミン酸（４３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０３６０】
【化６９】
2017164334.tif 000071
【０３６１】
合成例３２で得られた化合物（４．６  ｇ，０．１５５  ｍｍｏｌ）を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（６７  ｍｌ）中で１６時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（２．７７  ｇ，０．０１０４  ｍｍｏｌ，収率６７％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０６であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７９−２．１０（ｍ，８０Ｈ），２．１０−２．３１（ｍ，７７Ｈ），３．５２−３．７９（ｍ，１８１８Ｈ），４．１５−４．３５（ｍ，４１Ｈ）．【０３６２】
実施例１３
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（４３ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３６３】
【化７０】
2017164334.tif 000072
【０３６４】
実施例１２と同様にして、合成例３３で得られた化合物（２００  ｍｇ，７．５４  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．３２４  ｍｍｏｌ）と合成例２１で得られた化合物（５６９  ｍｇ，０．８１０  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（２４８  ｍｇ，７．２４  μｍｏｌ，収率９６％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１７であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、７２％であった。これは、１ポリマーに対して、約３１個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．３５−２．１８（ｍ，３７３Ｈ），２．２０−２．４７（ｍ，６３Ｈ），３．２０−３．４２（ｍ，７３Ｈ），３．５０−３．６５（ｍ，２０２９Ｈ），４．１５−４．４０（ｍ，２８Ｈ）．【０３６５】
合成例３４
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（９７ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０３６６】
【化７１】
2017164334.tif 000073
【０３６７】
合成例１３と同様にして、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝２０，０００，５００  ｍｇ，０．０２５  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（７２４  ｍｇ，２．７５  ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１Ｍチオウレア含有）中にて重合させ、標題化合物を白色粉体として得た。【０３６８】
合成例３５
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−ポリグルタミン酸（９７ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０３６９】
【化７２】
2017164334.tif 000074
【０３７０】
合成例３４で得られた化合物を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１９  ｍｌ）中で１６時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（３９５  ｍｇ，０．０１１２  ｍｍｏｌ，２段階収率４５％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護の完了、及び重合度が９７であることを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１２であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７９−２．０９（ｍ，２０４Ｈ），２．１０−２．３２（ｍ，１９５Ｈ），３．５１−３．７９（ｍ，１８１８Ｈ），４．１８−４．３９（ｍ，９４Ｈ）．【０３７１】
実施例１４
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝２０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（９７ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３７２】
【化７３】
2017164334.tif 000075
【０３７３】
実施例１２と同様にして、合成例３５で得られた化合物（１２０  ｍｇ，３．５２  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．３４２  ｍｍｏｌ）と合成例２１で得られた化合物（６２４  ｍｇ，０．８５５  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（１４１  ｍｇ，７．２４  μｍｏｌ，収率８１％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１０であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、６１％であった。これは、１ポリマーに対して、約５９個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．２２−２．２３（ｍ，９９９Ｈ），２．２３−２．４８（ｍ，１８５Ｈ），３．１８−３．４３（ｍ，２２７Ｈ），３．６４−３．８７（ｍ，２３３２Ｈ），４．１６−４．４６（ｍ，８１Ｈ）．【０３７４】
合成例３６
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝３０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（２２ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０３７５】
【化７４】
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【０３７６】
合成例１３と同様にして、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝３０，０００，５００  ｍｇ，０．０１６７  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（１１０  ｍｇ，０．４１７  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（５４７  ｍｇ，０．０１５７ｍｍｏｌ，収率９４％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）により、得られた化合物の重合度が２２であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９８−２．７０（ｍ，８０Ｈ），３．５５−３．８０（ｍ，２７２７Ｈ），３．８９−４．０５（ｍ，１６Ｈ），４．９２−５．２２（ｍ，４３Ｈ），７．１２−７．４０（ｍ，１０８Ｈ）．【０３７７】
合成例３７
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝３０，０００）−ポリグルタミン酸（２２ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０３７８】
【化７５】
2017164334.tif 000077
【０３７９】
合成例３６で得られた化合物（５４７  ｍｇ,  ０．０１５７  ｍｍｏｌ）を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４  ｍｌ）中で１６時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（５０８  ｍｇ，０．０１５３  ｍｍｏｌ，収率９７％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０８であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．８０−２．０９（ｍ，４０Ｈ），２．０１−２．３２（ｍ，３９Ｈ），３．４９−３．７４（ｍ，２７２７Ｈ），４．１９−４．３９（ｍ，１５Ｈ）．【０３８０】
実施例１５
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝３０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（２２ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３８１】
【化７６】
2017164334.tif 000078
【０３８２】
実施例１２と同様にして、合成例３７で得られた化合物（２５０  ｍｇ，７．５０  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．１６５  ｍｍｏｌ）と合成例２１で得られた化合物（３０１  ｍｇ，０．４１２  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（２３３  ｍｇ，６．４１  μｍｏｌ，収率８５％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１６であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、５５％であった。これは、１ポリマーに対して、約１２個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．３１−２．１８（ｍ，１５５Ｈ），２．１８−２．４２（ｍ，２８Ｈ），３．２０−３．３９（ｍ，３３Ｈ），３．４８−３．７７（ｍ，２８２２Ｈ），４．１７−４．４２（ｍ，１１Ｈ）．【０３８３】
合成例３８
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝３０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（３９ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０３８４】
【化７７】
2017164334.tif 000079
【０３８５】
合成例１３と同様にして、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝３０，０００，５００  ｍｇ，０．０１６７  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（２２０  ｍｇ，０．８３５  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（６１０  ｍｇ，０．０１５８ｍｍｏｌ，収率９５％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）により、得られた化合物の重合度が３９であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９８−２．８９（ｍ，１４８Ｈ），３．５１−３．８０（ｍ，２７２７Ｈ），３．８０−４．２０（ｍ，３５Ｈ），４．９０−５．２５（ｍ，７７Ｈ），７．１２−７．４０（ｍ，１９３Ｈ）．【０３８６】
合成例３９
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝３０，０００）−ポリグルタミン酸（３９ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０３８７】
【化７８】
2017164334.tif 000080
【０３８８】
合成例３８で得られた化合物を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（６  ｍｌ）中で１６時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（４５２  ｍｇ，０．０１２６  ｍｍｏｌ，収率７５％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０５であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７５−２．０９（ｍ，７１Ｈ），２．０９−２．３１（ｍ，７０Ｈ），３．５０−３．７８（ｍ，２７２７Ｈ），４．１０−４．３８（ｍ，３５Ｈ）．【０３８９】
実施例１６
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝３０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（３９ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３９０】
【化７９】
2017164334.tif 000081
【０３９１】
実施例１２と同様にして、合成例３９で得られた化合物（１５０  ｍｇ，４．１８  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．１６３  ｍｍｏｌ）と合成例２１で得られた化合物（２９７  ｍｇ，０．４０７  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（１４０  ｍｇ，３．３６  μｍｏｌ，収率８０％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．２４であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、５９％であった。これは、１ポリマーに対して、約２３個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．１０−２．１５（ｍ，４２２Ｈ），２．１５−２．４７（ｍ，７１Ｈ），３．２０−３．４０（ｍ，６６Ｈ），３．４９−３．７８（ｍ，２９１５Ｈ），４．１５−４．４５（ｍ，３７Ｈ）．【０３９２】
合成例４０
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝４０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（２５ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０３９３】
【化８０】
2017164334.tif 000082
【０３９４】
合成例１３と同様にして、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝３０，０００，１．０  ｇ，０．０２５  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（１６５  ｍｇ，０．６２５  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（１．２  ｇ,０．０２６４ｍｍｏｌ，収率ｑｕａｎｔ．）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）により、得られた化合物の重合度が２５であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９８−２．８９（ｍ，１００Ｈ），３．５１−３．８０（ｍ，３６３６Ｈ），３．８９−４．１１（ｍ，１９Ｈ），４．８９−５．１８（ｍ，５１Ｈ），７．１５−７．４０（ｍ，１３０Ｈ）．【０３９５】
合成例４１
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝４０，０００）−ポリグルタミン酸（２５ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０３９６】
【化８１】
2017164334.tif 000083
【０３９７】
合成例４０で得られた化合物を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（７  ｍｌ）中で１６時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（９５８  ｍｇ，０．０２１８  ｍｍｏｌ，収率８６％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．１１であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７４−２．０９（ｍ，４９Ｈ），２．０９−２．２９（ｍ，４８Ｈ），３．５２−３．７５（ｍ，３６３６Ｈ），４．１５−４．３３（ｍ，２５Ｈ）．【０３９８】
実施例１７
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝４０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（２５ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０３９９】
【化８２】
2017164334.tif 000084
【０４００】
実施例１２と同様にして、合成例４１で得られた化合物（３００  ｍｇ，７．０８  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．１７７  ｍｍｏｌ）と合成例２１で得られた化合物（３２４  ｍｇ，０．４４４  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（２７６  ｍｇ，５．７７  μｍｏｌ，収率８１％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０９であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、６２％であった。これは、１ポリマーに対して、約１６個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．１０−２．２８（ｍ，１９３Ｈ），２．２８−２．５２（ｍ，３５Ｈ），３．２３−３．４３（ｍ，３７Ｈ），３．５０−３．８１（ｍ，３７４８Ｈ），４．２０−４．４９（ｍ，１６Ｈ）．【０４０１】
合成例４２
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝４０，０００）−ベンジル保護ポリグルタミン酸（３７ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ（Ｂｎ）））の合成【０４０２】
【化８３】
2017164334.tif 000085
【０４０３】
合成例１３と同様にして、Ｈ２Ｎ−ＰＥＧ−ＯＭｅ（Ｍｗ＝４０，０００，５００  ｍｇ，０．０１２５  ｍｍｏｌ）とＢＬＧ−ＮＣＡ（１６５  ｍｇ，０．６２５  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（５５２  ｍｇ，０．０１１５ｍｍｏｌ，収率９２％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）により、得られた化合物の重合度が３７であることを確認した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．９８−２．８９（ｍ，１４２Ｈ），３．５１−３．８０（ｍ，３６３６Ｈ），３．８９−４．１１（ｍ，３８Ｈ），４．８９−５．１８（ｍ，７５Ｈ），７．１５−７．４０（ｍ，１８５Ｈ）．【０４０４】
合成例４３
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝４０，０００）−ポリグルタミン酸（３７ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ））の合成【０４０５】
【化８４】
2017164334.tif 000086
【０４０６】
合成例４２で得られた化合物を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（７  ｍｌ）中で１６時間攪拌した。この溶液を、脱イオン水に対する３回の透析（計６時間、分画分子量６０００〜８０００  Ｄａ）により精製し、凍結乾燥を行い、標題化合物（５１１  ｍｇ，０．０１１２  ｍｍｏｌ，収率９７％）を白色粉体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）により、脱保護が完了したことを確認した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０６であった。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：１．７５−２．０９（ｍ，７１Ｈ），２．０９−２．３２（ｍ，７１Ｈ），３．５３−３．７７（ｍ，３６３６Ｈ），４．１６−４．３６（ｍ，３６Ｈ）．【０４０７】
実施例１８
ポリエチレングリコール（Ｍｗ＝４０，０００）−（ドデカボレート−アミド結合）ポリグルタミン酸（３７ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−Ｂ１２Ｈ１１））の合成【０４０８】
【化８５】
2017164334.tif 000087
【０４０９】
実施例１２と同様にして、合成例４３で得られた化合物（１８０  ｍｇ，３．９４  μｍｏｌ，Ｇｌｕ残基：０．１４６  ｍｍｏｌ）と合成例２１で得られた化合物（２６６  ｍｇ，０．３６５  ｍｍｏｌ）より、標題化合物（１８６  ｍｇ，３．６４  μｍｏｌ，収率９２％）を白色粉体として得た。サイズ排除クロマトグラフィーにより、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）は１．０９であった。ＩＣＰ−ＡＥＳ測定結果より、ポリグルタミン酸（ＰＧｌｕ）の側鎖のカルボン酸に対する天然型Ｂ−ドデカボレートの導入率は、５９％であった。これは、１ポリマーに対して、約２２個の天然型Ｂ−ドデカボレートが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．１６−２．１７（ｍ，２５７Ｈ），２．１７−２．４２（ｍ，４５Ｈ），３．２３−３．４０（ｍ，４５Ｈ），３．４８−３．７８（ｍ,  ３７７６Ｈ），４．１７−４．４２（ｍ，２６Ｈ）．【０４１０】
実施例１９
ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１０，０００）−ＢＳＨ結合ポリグルタミン酸（４１ｍｅｒ）−ブロック共重合体（ＰＥＧ−ｂ−Ｐ（Ｇｌｕ−ＢＳＨ））の合成【０４１１】
【化８６】
2017164334.tif 000088
【０４１２】
合成例２と同様の方法で合成した、ポリエチレングリコール（Ｍｎ＝１０，０００）−チオレート化ポリグルタミン酸（４１ｍｅｒ）−ブロック共重合体（２５０  ｍｇ，０．０１４  ｍｍｏｌ）と１０Ｂ−ＢＳＨ（１５０  ｍｇ，ブロック共重合体中のチオレート化された官能基に対して２  ｅｑ）を、１０  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）（ｐＨ  ８．０）／５００  ｍＭ食塩水（１５  ｍｌ）に溶解し、室温で３日間撹拌した。反応液を１５０  ｍＭ食塩水中で３回透析後、脱イオン水中で３回透析し（分画分子量３５００  Ｄａ）、凍結乾燥することで、標題化合物（２６６  ｍｇ，収率９６％）を得た。１０Ｂ−ＢＳＨの導入率は、１Ｈ−ＮＭＲ分析（Ｄ２Ｏ）により、ホウ素クラスターのプロトン（−ＢＨ；δ（ｐｐｍ）：０．５-２．０）とポリアミノ酸の重合度から、５１％と算出し、ＩＣＰ−ＭＳ分析による１０Ｂ量の定量により、４９％と算出した。ポリマー１分子に対して約２０個の１０Ｂ−ＢＳＨが導入されたことに相当する。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）：０．５−２．０（ｍ，８２Ｈ），２．０−２．３（ｍ，８２Ｈ），２．８−３．０（ｍ，８２Ｈ），３．７（ｍ，９０９Ｈ），４．２−４．３（ｍ，４１Ｈ）.【０４１３】
試験例１
ＨＵＶＥＣに対する細胞毒性試験
実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物、並びに１０Ｂ−ＢＳＨについて、ＣＣＫ−８アッセイによって、ＨＵＶＥＣ（ヒト臍帯静脈内皮細胞）に対する細胞毒性を調べた。ＨＵＶＥＣを内皮細胞増殖培地キット中に懸濁させ、９６ウェルプレート中に、各ウェルで５０００個の細胞となるように播種し、５％の二酸化炭素存在下、３７℃で２４時間培養した。続いて実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物、並びに１０Ｂ−ＢＳＨのうち何れかを添加し、各種濃度でさらに７２時間培養した。その後、各ウェルに１０  μＬのｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８溶液を添加し、５％の二酸化炭素存在下、３７℃で２．５時間培養した。最後に、各ウェルについて、マイクロプレートリーダーで４５０  ｎｍの波長吸収を測定した。その結果、図１に示すように、実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物、並びに１０Ｂ−ＢＳＨについて、ＨＵＶＥＣに対する細胞毒性は認められなかった。【０４１４】
試験例２
Ｃ２６がん細胞に対する細胞毒性試験
実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物、並びに１０Ｂ−ＢＳＨについて、試験例１の方法と同様にして、Ｃ２６がん細胞に対する細胞毒性を調べた。図２に示すように、実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物、並びに１０Ｂ−ＢＳＨについて、Ｃ２６がん細胞に対する細胞毒性は認められなかった。【０４１５】
試験例３
Ｃ２６がん細胞を用いた細胞内取込試験
実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物、並びに１０Ｂ−ＢＳＨについて、細胞内取込量を調べた。６ウェルプレートの各ウェルに、１０６個のＣ２６がん細胞を、２  ｍＬのダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ培地）と共に播種し、２４時間培養した。続いて、実施例１の化合物、実施例２の化合物、実施例３の化合物、比較例１の化合物、比較例２の化合物、１０Ｂ−ＢＳＨを各々、１０Ｂ−ＢＳＨとして１００  μｇ／ｍＬになるように添加した。１、６、２４時間培養後、各細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝液）で３回洗浄し、トリプシン処理を行って細胞を回収した。回収した細胞数を数え、９０％硝酸で灰化処理し、最後に１％硝酸で希釈し、ＩＣＰ−ＭＳ分析にてホウ素量を定量した。【０４１６】
図３に示すように、１０Ｂ−ＢＳＨ単体よりも、実施例１〜３及び比較例１及び２の１０Ｂ−ＢＳＨを備えるペプチド化合物の方が、大幅に高い細胞内取込量であった。さらに、ＰＥＧを有さない比較例１及び２の化合物よりも、ＰＥＧを有する実施例１〜３の化合物の方が、大幅に高い細胞内取込量であった。【０４１７】
試験例４
Ｃ２６がん細胞を用いた細胞内取込試験
実施例１の化合物が細胞内に入ることを確かめた。まず、実施例１の化合物を、Ａｌｅｘａ４８８−ＮＨＳエステルとの縮合によって蛍光標識した。続いて、得られた化合物を、１０Ｂ−ＢＳＨとして２０  μｇ／ｍＬになるようにＣ２６がん細胞に添加した後、継時的に共焦点レーザー顕微鏡（ＣＬＳＭ）にて観察した。図４に示すように、添加後１時間からがん細胞内に入ることを確認した。【０４１８】
試験例５
ＣＴ２６がん細胞を用いた細胞内取込試験
ホウ素クラスターを、ＰＥＧを有するペプチドに導入することで、がん細胞内により多く取り込まれることを確かめた。ＲＰＭＩ１６４０培地を用いて培養したＣＴ２６がん細胞（マウス大腸がん細胞、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３８）を、２４ウェルプレートの各ウェルに、１０６個ずつ播種した。ホウ素クラスター化合物をペプチド体に導入した実施例７の化合物、或いは合成例２１のホウ素クラスター化合物の対カチオンが２セシウムカチオンである化合物を、３  ｍＭとなるように各ウェルに添加した後、２４時間培養した。培地を除去後、ＰＢＳ（０．５  ｍｌ）で２回洗浄し、トリプシンを用いてプレートからはがした細胞を１４  ｍｌラウンドチューブに回収した。１０％硝酸（０．９  ｍｌ）、６０％硝酸（０．４  ｍｌ）を添加して３０分静置した後、５０℃で３０分、さらに９０℃で２時間加熱して灰化を行った。この溶液をろ過後、脱イオン水で７倍希釈し、ＩＣＰ−ＭＳにて、がん細胞内のホウ素量を定量した。図５に示すように、実施例７の化合物は、合成例２１の化合物の対カチオンが２セシウムカチオンである化合物に対して２倍以上多く、がん細胞内に入ることを確認した。【０４１９】
試験例６
血中滞留性と腫瘍蓄積性
１０Ｂ−ＢＳＨと、実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物について、血中滞留性と腫瘍蓄積性を調べた。Ｃ２６がん細胞を皮下移植したＢＡＬＢ／ｃマウスに対し、実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物及び１０Ｂ−ＢＳＨを、１０Ｂ−ＢＳＨ換算で５０  ｍｇ／ｋｇ量となるよう、各化合物の生理食塩水溶液０．２  ｍＬ量を静脈内投与し、血液と腫瘍を経時的に採取した。血液はヘパリン処理し、遠心分離で血漿を取得した。血漿、腫瘍のサンプルは塩酸／６０％硝酸（３／１）混合液、或いは９０％硝酸水溶液で処理して組織を分解し、１％硝酸で希釈し、ろ過を行った後、ＩＣＰ−ＭＳにて１０Ｂ量を測定した。【０４２０】
図６に示すように、実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物は、１０Ｂ−ＢＳＨ単体よりも、長い血中滞留性を示し、さらに、ＰＥＧを有する実施例１〜３の化合物は、ＰＥＧを有さない比較例１及び２の化合物よりも、長い血中滞留性を示した。また、図７に示すように、実施例１〜３及び比較例１及び２の化合物は、１０Ｂ−ＢＳＨ単体よりも、６〜１０倍多く１０Ｂ−ＢＳＨを腫瘍に集積させ、さらに、ＰＥＧを有する実施例１〜３の化合物は、ＰＥＧを有さない比較例１及び２の化合物よりも、多く１０Ｂ−ＢＳＨを腫瘍に集積させ、高い集積量を保持する時間も長いことがわかった。【０４２１】
試験例７
腫瘍蓄積性
天然型Ｂ−ＢＳＨと、実施例７の化合物について、各化合物の生理食塩水溶液をマウスに静脈内投与し、腫瘍蓄積性を調べた。ＣＴ２６がん細胞を皮下移植したＢＡＬＢ／ｃマウスに対し、実施例７の化合物を天然型Ｂ−ＢＳＨ換算で１０  ｍｇ／ｋｇ及び３０  ｍｇ／ｋｇ量となるように、また天然型Ｂ−ＢＳＨを１００  ｍｇ／ｋｇ量となるように、各々０．２  ｍＬ量を静脈内投与し、腫瘍を経時的に採取した。採取した腫瘍のサンプルを６０％硝酸水溶液中、５０℃で１時間、続いて９０℃で２時間加熱し、組織を分解した。ろ過を行った後、純水で２０倍希釈し、ＩＣＰ−ＭＳにて天然型Ｂ量を測定した。【０４２２】
図８に示すように、実施例７の化合物は、天然型Ｂ−ＢＳＨ単体よりも、３〜５倍、さらには時間経過と共にそれ以上多くホウ素クラスターを腫瘍に集積させ、高い集積量を保持する時間も長いことがわかった。【０４２３】
試験例８
抗がん効果
Ｃ２６がん細胞を皮下移植したＢＡＬＢ／ｃマウスに対して、実施例１の化合物、或いは１０Ｂ−ＢＳＨを、１０Ｂ−ＢＳＨ換算で１００  ｍｇ／ｋｇとなるよう、各化合物の生理食塩水溶液０．２  ｍＬ量を静脈内投与した。２４時間後、このマウスに対して、１．６−２．２ｘ１０１２  ｎｅｕｔｒｏｎ／ｃｍ２の量の熱中性子線を１時間局所照射し、抗がん効果について調べた。熱中性子線照射前後の腫瘍の大きさ（Ｖ）は、Ｖ＝（ａｘｂ２）／２の式にて算出した（ａ、ｂは、各々腫瘍をキャリパーで測定した時の長径、短径）。コントロールとして、Ｃ２６がん細胞を皮下移植したＢＡＬＢ／ｃマウスに対して、実施例１の化合物、或いは１０Ｂ−ＢＳＨを、１０Ｂ−ＢＳＨ換算で１００  ｍｇ／ｋｇとなるよう、０．２  ｍＬ量を静脈内投与し、熱中性子線を照射せずに、同様に腫瘍の大きさを算出した。また、もう一つのコントロールとして、Ｃ２６がん細胞を皮下移植したＢＡＬＢ／ｃマウスに対して、ＰＢＳ（リン酸緩衝液）を投与して、熱中性子線を照射、或いは照射せずに、同様に腫瘍の大きさを算出した。【０４２４】
図９に示すように、実施例１の化合物を投与後、熱中性子線を照射した場合、腫瘍増殖は大きく抑制され、腫瘍はほとんど大きくならなかった。一方、１０Ｂ−ＢＳＨ単体或いはリン酸緩衝液を投与後、熱中性子線を照射した場合、実施例１の化合物、１０Ｂ−ＢＳＨ単体、或いはリン酸緩衝液を投与後、熱中性子線を照射しない場合のコントロール群と同様に、速い速度で腫瘍が増殖した。このことから、本発明の化合物は、ホウ素中性子捕捉療法によって、高い抗腫瘍効果を有することがわかった。【０４２５】
さらに、マウスの全身毒性の指標として、本実験で用いたマウスの体重を測定したところ、図１０に示すように、実施例１の化合物、或いは１０Ｂ−ＢＳＨ単体を静脈内投与したマウス、熱中性子線を照射したマウス、照射しなかったマウス、全てにおいて、明らかな体重抑制は見られず、本発明の化合物、及び本発明の化合物を用いたホウ素中性子捕捉療法は高い安全性を有することがわかった。【０４２６】
試験例９
腫瘍浸透性
実施例１の化合物と、がん治療薬として認可されている抗がん剤ドキソルビシンを担持したリポソーム製剤Ｄｏｘｉｌ（登録商標）について、担がんマウスを用いた腫瘍浸透性の比較を調べた。ヒト膵臓腺がんＢｘＰＣ３細胞、或いはＣ２６がん細胞を皮下移植したＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに対して、１０Ｂ換算で１０  ｍｇ／ｋｇ量の、実施例１の化合物をＡｌｅｘａ６４７（登録商標）で蛍光標識した化合物と、ドキソルビシン換算で１０  ｍｇ／ｋｇ量のＤｏｘｉｌ（登録商標）の両方を、静脈内投与した。投与して２４時間後、腫瘍を切除し、サンプリングして、ミクロトームにて１０  μｍの薄さに切った。腫瘍切片について、共焦点走査型顕微鏡ＬＳＭ７８０で画像観察し、画像はバックグラウンドの蛍光強度と同じように標準化した。腫瘍は、ヘマトキシリン−エオシン染色のため、同様に５  μｍの薄さに切り、一体型蛍光顕微鏡ＢＺ−Ｘ７００で画像観察した。【０４２７】
図１１に示すように、実施例１の化合物をＡｌｅｘａ６４７（登録商標）で蛍光標識した化合物とＤｏｘｉｌ（登録商標）は、共に多血性のＣ２６腫瘍に同様に分布した。一方、乏血性のＢｘＰＣ３腫瘍モデルには、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）はほとんど分布していないのに対し、実施例１の化合物をＡｌｅｘａ６４７（登録商標）で蛍光標識した化合物は、腫瘍内に均一に分布した。この結果から、本発明の化合物は、ナノ粒子より腫瘍への浸透性が高く、がん細胞全体にホウ素を送達できることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【０４２８】
本発明の化合物は、ＥＰＲ効果による優れたがん集積性、及びナノ粒子化しないことによる腫瘍組織内での高い浸透性を示し、がん細胞内に効率的に取り込まれるため、ホウ素中性子捕捉療法における医薬として有用である。【０４２９】
本出願は、日本国で２０１６年３月２３日に出願された特願２０１６−０５９２２５号を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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