(57)【要約】  本発明は、  ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、  Ｆを含むジペプチドからなる群、および  ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する、筋萎縮抑制組成物を提供する。
2018105550.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する、筋萎縮抑制組成物。
【請求項２】
１種類以上のペプチドが、Ｆを含むジペプチドからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
１種類以上のペプチドが、
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＦＹ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
１種類以上のペプチドがＦＮを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
筋萎縮を伴う疾患を予防または治療するための、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
疾患が、サルコペニア、廃用性筋萎縮、筋ジストロフィー、糖尿病性筋萎縮症、悪液質、ステロイドミオパチー、薬剤性ミオパチー、横紋筋融解症、重症筋無力症、筋萎縮性側索硬化症、シャルコ・マリー・ツース病、または腹圧性尿失禁である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
医薬品である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する、筋肉量低下改善用組成物。
【請求項９】
１種類以上のペプチドが、Ｆを含むジペプチドからなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
１種類以上のペプチドが、
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＦＹ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
１種類以上のペプチドがＦＮを含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
腹圧性尿失禁改善用である、請求項８〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
尿漏れ改善用である、請求項８〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
飲食品である、請求項８〜１３のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、日本国特許出願第２０１６−２３６０９９号について優先権を主張するものであり、ここに参照することによって、その全体が本明細書中へ組み込まれるものとする。
本発明は、ジペプチドまたはトリペプチドを有効成分として含有する筋萎縮抑制組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトでは、３０歳を過ぎると１０年毎に約５％前後の割合で筋量が減少し、６０歳を超えるとその減少率は加速することが報告されている。骨格筋の萎縮は、加齢性のサルコペニアの他に、不活動（廃用、ベッドレスト、ギプス固定）や無重力（宇宙空間）、除神経、疾病（癌、エイズ、糖尿病等）、低栄養によっても認められる。全ての筋萎縮に共通して認められる現象は、筋蛋白質の合成と分解のアンバランスによる筋蛋白質の減少によって引き起こされる筋線維の萎縮（筋断面積の減少）である。【０００３】
筋萎縮により、ＡＤＬ（日常生活動作）やＱＯＬ（生活の質）の低下が生じ、さらに転倒による怪我の危険性が増加し、場合によっては身体的自立が妨げられ、寝たきりとなることがある。また、筋肉量の減少によって基礎代謝量が低下するためメタボリックシンドロームが生じる可能性が高く、その抑制は国民全体の大きな課題である。【０００４】
サルコペニアなどの筋疾患の予防や改善には、運動面における高強度のレジスタンストレーニングが有効であることが確認されている。しかしながら、高齢者や病後の療養生活において、高強度の運動を積極的に実施することは身体的な負担が大きく、また実施の際にも専門家による適切な指導が必要となる。このため、サルコペニアの予防や改善には、基礎体力や運動機能が低下した人でも手軽に実施できる栄養面からのアプローチが望まれている。【０００５】
サルコペニアなどの筋疾患の予防や改善に有効であることが期待される、筋肉機能改善効果を有する成分として、プロアントシアニジンを有効成分として含有する筋肉萎縮抑制剤（特許文献１）、果実由来ポリフェノールを有効成分とする廃用性筋萎縮時の筋繊維タイプの移行を抑制する筋繊維タイプ移行抑制剤（特許文献２）、カテキン類を有効成分とする筋機能低下抑制剤（特許文献３）などが報告されている。また、タンパク質やアミノ酸の摂取による骨格筋萎縮の予防や早期回復に関する検討も行なわれている。しかしながら、特定のジペプチドやトリペプチドに関する筋萎縮抑制効果はいまだ報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開第２００２−３３８４６４号
【特許文献２】特開第２００６−３２８０３１号
【特許文献３】特開第２００８−１３４７３号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、筋萎縮を抑制しうる組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する、筋萎縮抑制組成物を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の組成物は、筋萎縮、ひいては筋肉量低下を抑制し、サルコペニアや廃用性筋萎縮などの筋萎縮を伴う疾患の予防または治療、および筋肉量低下または筋力低下の改善や尿漏れ改善に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、マウス骨格筋細胞株におけるジペプチドおよびトリペプチドの筋萎縮抑制作用を示す。Ａは１７種類のペプチドの結果、ＢはＦＮおよびＮＰの追加実験の結果である。Ｃｏｎｔ：コントロール、Ｄｅｘ：デキサメタゾン。＊ｐ＜０．０５（ｖｓデキサメタゾン）。
【図２】図２は、マウス骨格筋細胞株における筋萎縮に対するＦＮおよびＬＲ（添加濃度１００ｎＭ）の効果を示す。Ｃｏｎｔ：コントロール、Ｄｅｘ：デキサメタゾン。＊ｐ＜０．０５（ｖｓデキサメタゾン）。
【図３】図３は、モデル動物におけるジペプチドの筋萎縮抑制作用を示す。Ｃｏｎｔ：コントロール、Ｄｅｘ：デキサメタゾン。＊ｐ＜０．０５（ｖｓデキサメタゾン）。
【図４】図４は、モデル動物におけるＡｔｒｏｇｉｎ−１の発現に対するジペプチドの効果を示す。ＣＯＮＴ：コントロール、Ｄｅｘ：デキサメタゾン。＊ｐ＜０．０５（ｖｓデキサメタゾン）。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本明細書において、アミノ酸残基を略号で表示する場合、次の略号で記述する。
Ａｌａ又はＡ：アラニン残基
Ａｒｇ又はＲ：アルギニン残基
Ａｓｎ又はＮ：アスパラギン残基
Ａｓｐ又はＤ：アスパラギン酸残基
Ｃｙｓ又はＣ：システイン残基
Ｇｌｎ又はＱ：グルタミン残基
Ｇｌｕ又はＥ：グルタミン酸残基
Ｇｌｙ又はＧ：グリシン残基
Ｈｉｓ又はＨ：ヒスチジン残基
Ｉｌｅ又はＩ：イソロイシン残基
Ｌｅｕ又はＬ：ロイシン残基
Ｌｙｓ又はＫ：リジン残基
Ｍｅｔ又はＭ：メチオニン残基
Ｐｈｅ又はＦ：フェニルアラニン残基
Ｐｒｏ又はＰ：プロリン残基
Ｓｅｒ又はＳ：セリン残基
Ｔｈｒ又はＴ：トレオニン残基
Ｔｒｐ又はＷ：トリプトファン残基
Ｔｙｒ又はＹ：チロシン残基
Ｖａｌ又はＶ：バリン残基
【００１２】
本明細書における「ペプチド」なる用語は、ジペプチド、トリペプチド、およびこれより長い（４以上のアミノ酸残基を有する）ペプチドを包含する総称として用いられ、文脈によりこれらのいずれをも意味しうる。
【００１３】
本発明の筋萎縮抑制組成物は、
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する。
【００１４】
ある実施形態において、前記１種類以上のペプチドは、Ｆを含むジペプチドからなる群から選択される。すなわち、当該実施形態において、本発明の筋萎縮抑制組成物は、Ｆを含むジペプチドからなる群から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する。ここで、「Ｆを含むジペプチド」とは、ジペプチドを構成するアミノ酸残基の一つがフェニルアラニン（Ｆ）であるジペプチドであり、具体的には、ＦＡ、ＦＲ、ＦＮ、ＦＤ、ＦＣ、ＦＱ、ＦＥ、ＦＧ、ＦＨ、ＦＩ、ＦＬ、ＦＫ、ＦＭ、ＦＦ、ＦＰ、ＦＳ、ＦＴ、ＦＷ、ＦＹ、ＦＶ、ＡＦ、ＲＦ、ＮＦ、ＤＦ、ＣＦ、ＱＦ、ＥＦ、ＧＦ、ＨＦ、ＩＦ、ＬＦ、ＫＦ、ＭＦ、ＰＦ、ＳＦ、ＴＦ、ＷＦ、ＹＦ、およびＶＦが挙げられる。中でも、ＦＮが好ましい。
【００１５】
ある実施形態において、前記１種類以上のペプチドは、
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＦＹ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される。すなわち、当該実施形態において、本発明の筋萎縮抑制組成物は
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＦＹ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する。
【００１６】
本発明の組成物は、前記トリペプチドおよび／またはジペプチドの群から選択される１種類のペプチドを含んでも、２種類以上のペプチドを含んでも良い。本発明の組成物が２種類以上のペプチドを含む場合、それらは単一の製剤中に含まれていても、別の製剤に含まれていてもよい。別の製剤に含まれる場合、各製剤の剤型および投与経路は同じであっても、異なっていてもよい。
【００１７】
ある実施形態において、本発明の組成物は、前記トリペプチドおよび／またはジペプチドの群から選択される１種類以上のペプチドのみを有効成分として含む（すわなち、これ以外の有効成分を含まない）。さらなる実施形態において、本発明の組成物は、前記トリペプチドおよび／またはジペプチドの群から選択される１種類のペプチド（例えば、ＦＮまたはＤＦ）のみを有効成分として含む（すなわち、これ以外の有効成分を含まない）。
【００１８】
ジペプチドおよびトリペプチドは、発酵法、酵素処理、化学合成など、当該技術分野において通常用いられる方法によって製造することができる。例えば、目的とするペプチドのアミノ酸配列を含むタンパク質またはペプチドを適当なプロテアーゼによって加水分解し、カラムクロマトグラフィー等を用いて分離精製することにより、得ることができる。あるいは、Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966 ; The Proteins, Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976；ペプチド合成、丸善（株）、１９７５；ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株）１９８５；医薬品の開発  続  第１４巻・ペプチド合成、広川書店、１９９１などに記載されているペプチド合成方法によって合成することができる。
【００１９】
筋萎縮とは、筋肉が痩せることをいい、その結果として筋肉量が低下する。それゆえ、本発明の組成物は、筋肉量低下抑制組成物または筋力低下抑制組成物ということもできる。本発明の組成物は、筋萎縮または筋肉量低下の予防または治療または改善に有用であり、筋萎縮または筋肉量低下の予防または治療または改善を必要とする、あるいは筋萎縮または筋肉量低下の予防または治療または改善が望ましい、あらゆる対象者に用いることができる。
【００２０】
ある実施形態において、本発明の組成物は、筋萎縮を伴う疾患の予防または治療に用いられる。疾患としては、例えば、サルコペニア、廃用性筋萎縮、筋ジストロフィー、糖尿病性筋萎縮症、悪液質、ステロイドミオパチー、薬剤性ミオパチー、横紋筋融解症、重症筋無力症、筋萎縮性側索硬化症、シャルコ・マリー・ツース病、腹圧性尿失禁などが挙げられる。
【００２１】
さらなる実施形態において、本発明の組成物は、筋萎縮の改善、ひいては筋肉量低下の改善または筋力低下の改善に用いられる。例えば、加齢などによって衰える筋肉の維持、尿漏れ改善などが挙げられる。
【００２２】
ある実施形態において、本発明の組成物は、ヒトまたは動物用の医薬品または医薬部外品として利用される。医薬品または医薬部外品は、有効成分である前記ペプチドに加え、医薬上許容される担体および／または添加物（例えば、安定化剤、防腐剤、可溶化剤、ｐＨ調整剤、増粘剤、酸化防止剤、着色料、香料、人口甘味料等）を含むことができる。
【００２３】
医薬品または医薬部外品は、経腸経路によっても、非経腸経路によっても投与することができる。経腸経路としては、経口および経管栄養などが例示される。非経腸経路としては、経鼻、経肺、静脈内、経皮、筋肉内などが例示される。
【００２４】
医薬品または医薬部外品は、経口投与や非経口投与などの投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。その剤形は特に限定されないが、経口投与の場合、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、トローチ剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。非経口投与の場合、例えば、座剤、噴霧剤、吸入剤、軟膏剤、貼付剤、注射剤（輸液剤を含む）等に製剤化することができる。本発明の組成物は、使用時に滅菌水等を加えて溶解する凍結乾燥製剤であってもよい。なお、製剤化は、剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。
【００２５】
さらなる実施形態において、本発明の組成物は、筋肉萎縮抑制作用による筋萎縮改善効果または筋肉量低下改善効果を利用して、飲食品として、例えば、ヒトまたは動物用の一般の飲食品、健康食品、機能性食品、病者用食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、機能性表示食品、栄養機能食品として利用される。飲食品は、前記ペプチドが公知の飲食品に添加されたものであってもよく、前記ペプチドを原料中に混合して新たに製造された飲食品であってもよい。飲食品は、別の飲食品に添加して利用されるものであってもよい。
【００２６】
飲食品は、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、チュアブル剤、シロップ剤、経口液剤（懸濁剤、乳剤等）などのサプリメント、流動食等のほか、例えば、菓子類（クッキー、ビスケット、チョコレート菓子、チップス、ケーキ、ガム、キャンディー、グミ、饅頭、羊羹、プリン、ゼリー、ヨーグルト、アイスクリーム、シャーベットなど）、パン、麺類、ご飯類、シリアル食品、飲料（液剤、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料など）、スープ（粉末、フリーズドライ）、味噌汁（粉末、フリーズドライ）等の、通常の飲食品の形態であってよい。
【００２７】
飲食品は、特定の用途（特に保健の用途）や機能が表示された飲食品として提供または販売されてもよい。「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起または類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物または媒体等の如何に拘わらず、全て本開示の「表示」行為に該当する。
【００２８】
「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。
【００２９】
表示内容は、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。
【００３０】
本明細書において、「筋肉量低下改善用」の飲食品には、「加齢によって衰える筋肉の維持」、「筋肉を作る力をサポート」など、「筋肉量低下改善」を想起させるような表示がなされている飲食品が含まれる。
【００３１】
本明細書において、「腹圧性尿失禁改善用」または「尿漏れ改善用」の飲食品には、「スッキリしない方」、「そわそわする方」、「夜間や長時間の外出が不安な方」、「力んだり咳やくしゃみの時等に気になる方」など、「腹圧性尿失禁」または「尿漏れ」を想起させるような表示がなされている飲食品が含まれる。
【００３２】
本発明の組成物に含有されるジペプチドまたはトリペプチドの１日当たりの投与量または摂取量は、対象者の年齢、体重、症状、投与経路等により適宜変更されるが、例えば、各ペプチドにつき５０ｍｇ〜２０ｇであり、好ましくは７０ｍｇ〜５ｇ、更に好ましくは１００ｍｇ〜３ｇである。ペプチドの１日量は、１回で投与または摂取してもよく、数回にわけて投与または摂取してもよい。本発明の組成物は、連日または数日おきに投与または摂取してもよく、その期間も特に限定されない。
【００３３】
本発明は、例えば、以下を提供する。
１．ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する、筋萎縮抑制組成物。
２．  １種類以上のペプチドが、Ｆを含むジペプチドからなる群から選択される、前記１に記載の組成物。
３．１種類以上のペプチドが、
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＦＹ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される、前記１に記載の組成物。
４．１種類以上のペプチドがＦＮを含む、前記１〜３のいずれかに記載の組成物。
５．１種類以上のペプチドがＤＦを含む、前記１〜４のいずれかに記載の組成物。
６．筋萎縮を伴う疾患を予防または治療するための、前記１〜５のいずれかに記載の組成物。
７．疾患が、サルコペニア、廃用性筋萎縮、筋ジストロフィー、糖尿病性筋萎縮症、悪液質、ステロイドミオパチー、薬剤性ミオパチー、横紋筋融解症、重症筋無力症、筋萎縮性側索硬化症、シャルコ・マリー・ツース病、または腹圧性尿失禁である、前記６に記載の組成物。
８．医薬品である、前記１〜７のいずれかに記載の組成物。
９．ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを有効成分として含有する、筋肉量低下改善用組成物。
１０．１種類以上のペプチドが、Ｆを含むジペプチドからなる群から選択される、前記９に記載の組成物。
１１．１種類以上のペプチドが、
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＦＹ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される、前記９に記載の組成物。
１２．１種類以上のペプチドがＦＮを含む、前記９〜１１のいずれかに記載の組成物。
１３．１種類以上のペプチドがＤＦを含む、前記９〜１１のいずれかに記載の組成物。
１４．腹圧性尿失禁改善用である、前記９〜１３のいずれかに記載の組成物。
１５．尿漏れ改善用である、前記９〜１３のいずれかに記載の組成物。
１６．飲食品である、前記９〜１５のいずれかに記載の組成物。
１７．筋萎縮を抑制または筋肉量の低下を改善する治療的または非治療的方法であって、それを必要とする対象者に
ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および  ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドを投与することを含む、方法。
１８．ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドの、筋萎縮抑制組成物または筋肉量低下改善用組成物の製造のための使用。
１９．ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、およびＮＰＫのトリペプチドからなる群、
Ｆを含むジペプチドからなる群、および
ＤＩ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰのジペプチドからなる群
から選択される１種類以上のペプチドの、筋萎縮を抑制または筋肉量の低下を改善するための治療的または非治療的使用。
【００３４】
本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、本発明は如何なる意味においてもこれら実施例により限定されるものではない。
【実施例１】
【００３５】
マウス骨格筋細胞株における筋萎縮抑制作用
マウス骨格筋細胞株（Ｃ２Ｃ１２）は、１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭにて、３７℃、５％ＣＯ２条件下で継代し、維持した。通常培地は、ＤＭＥＭ  ５００ｍＬ（sigma-aldrich）にＨＥＰＥＳ（gibco）  １２．５ｍＬ、ペニシリン‐ストレプトマイシン（gibco）５．５ｍＬおよびウシ胎児血清（ＦＢＳ、sigma-aldrich）  ５５ｍＬ添加したものを用いた。また、分化培地は、ＤＭＥＭに、ＨＥＰＥＳ  １２．５ｍＬ、ペニシリン‐ストレプトマイシン  ５．５ｍＬおよびウマ血清（ＨＳ、SAFC Bioscience）  １２．５ｍＬ添加したものを使用した。【００３６】
Ｃ２Ｃ１２を５ｘ１０５細胞／ディッシュにて６ｃｍディッシュ（旭テクノグラス）に播種し、通常培地にて２日間培養した。その後、分化培地にて分化誘導をかけた。誘導開始から５日後、各ペプチド（１７種類：ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、ＮＰＫ、ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＦＹ、ＩＹ、ＹＮ：株式会社医学生物学研究所）をそれぞれ６２５ｎＭ添加した分化培地に培地交換し、１時間処理した。その後、各ペプチドを６２５ｎＭおよびデキサメタゾン（Ｄｅｘ）（和光純薬工業）を１０μＭを含む分化培地に培地交換し、３日後まで２４時間ごとに培地交換を行った。筋径は、BZ-9000（KEYENCE）を用いて、各群の筋管細胞を撮影し、BZ-II像解析アプリケーション（KEYENCE）にて数値化することで求めた。なお筋径は、コントロール群（デキサメタゾン非添加）のｄａｙ３の筋径を１００％とし、百分率で示した。同様にして、ＦＮおよびＮＰについて、追加実験を行った。さらに、ＦＮおよびＬＲ（ランダムなジペプチド）に関して、添加濃度１００ｎＭにて、筋径の測定を行った。【００３７】
１７種類のトリまたはジペプチド（ＤＩＹ、ＩＹＮ、ＹＮＰ、ＮＰＱ、ＤＦＹ、ＤＩＦ、ＦＹＮ、ＩＦＮ、ＦＮＰ、ＮＰＫ、ＤＩ、ＤＦ、ＩＦ、ＦＮ、ＩＹ、ＹＮ、およびＮＰ）において、デキサメタゾン添加群と比べて筋径が有意に高値を示し、１種のＦＹにおいては傾向差を示した（図１，ＡおよびＢ）。添加濃度１００ｎＭにて検討したところ、ＦＮにおいてはデキサメタゾン添加群と比べて筋径が有意に高値を示したが、ＬＲにおいては有意な差が見られなかった（図２）。
【実施例２】
【００３８】
モデル動物における筋萎縮抑制作用
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄、７週齢）を体重が均等になるように、４群（コントロール群、萎縮群、萎縮＋ＦＮ群、萎縮＋ＤＦ群）に群分けした。コントロール群および萎縮群は除菌水、萎縮＋ＦＮ群および萎縮＋ＤＦ群は各ペプチドを含有する水溶液（１．４ｍｇ／ｍｌ）を、給水瓶にて１４日間自由摂取させた。萎縮群、萎縮＋ＦＮ群および萎縮＋ＤＦ群について、自由飲水８日目より、デキサメタゾン（sigma-aldrich）を、１日１回１０ｍｇ／ｋｇにて腹腔内投与し、筋萎縮を誘導した。デキサメタゾンを７日間投与したのち、１２時間の絶食後、解剖に供した。イソフルラン麻酔下で両脚の前脛骨筋を摘出し、前脛骨筋における筋線維横断面積（ＣＳＡ）および筋萎縮に関するマーカータンパク質であるＡｔｒｏｇｉｎ−１の発現を測定した。【００３９】
前脛骨筋のＣＳＡにおいて、萎縮＋ＦＮ群および萎縮＋ＤＦ群は萎縮群に比べて有意に高値を示した（図３）。また、前脛骨筋におけるＡｔｒｏｇｉｎ−１のタンパク発現は、萎縮＋ＦＮ群は萎縮群に比べて低い傾向を、萎縮＋ＤＦ群は萎縮群に比べて有意に低値を示した（図４）。【００４０】
実施例１および実施例２のいずれにおいても効果が確認されたことから、フェニルアラニン（Ｆ）を含むジペプチドが筋萎縮抑制に有効であることが示唆された。特に、筋径およびＣＳＡに対する効果は筋萎縮抑制作用を直接的に示すものであるところ、ＦＮはいずれも有意な改善を示し、顕著な効果を有することが示された。
【図１】
2018105550.tif 000003
【図２】
2018105550.tif 000004
【図３】
2018105550.tif 000005
【図４】
2018105550.tif 000006
【国際調査報告】
2018105550.tif 000007
2018105550.tif 000008
2018105550.tif 000009
2018105550.tif 000010
2018105550.tif 000011
2018105550.tif 000012