【手続補正書】
【提出日】平成18年4月13日(2006.4.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項７】  溶液が、水溶液である請求項６記載の結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド又はこれを含有する糖質の製造方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
また、得られる反応液中のα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド含量を高めるための微生物、酵素等を用いるＤ−グルコース分解除去法や、生成したα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドの純度を高めるための酵母発酵法、また、アルカリ処理法、膜濾過法、カラムクロマトグラフィー法などによって、α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドの純度を高めることができる。更に、必要に応じて、常法により、濾過、脱色、脱塩などの精製工程を経た後、濃縮し、乾燥して、シラップ状又は粉末状α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド含有糖質とすることもできる。斯くして得られたα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド含有糖質は、通常、α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを固形物当たり５〜９９．９％（ｗ／ｗ）含有している。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
また、本発明の結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドの他の製造方法は、非晶質α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドから結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを製造する方法である。この方法は、水分の存在下で、温度約２０乃至約６０℃にコントロールした環境下に、非晶質α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを含有する粉末を約０．１乃至約７日間、静置又は攪拌しながら非結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドに変換させ、これをそのまま、又は、粉砕又は切削などして再粉末化して乾燥することにより、低吸湿性の結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末又はこれを含有する糖質を容易に製造できる。なお、この方法における、水分の存在下とは、非晶質α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドに変換するために必要な水分が供給される環境であれば、特に制限はなく、通常は、相対湿度を約５０乃至約７０％にコントロールした環境をいう。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
また、本発明の結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド及びこれを含有する糖質は、優れた保湿性を有することから、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水−油二層系、水−粉体二層系、水−油−粉末三層系などのどのような剤型の化粧品や医薬部外品の原料としても有利に利用できる。また、これらの化粧品や医薬部外品の用途も任意であり、例えば、化粧水、ローション、乳液、クリーム、軟膏、練り剤、懸濁剤、乳剤、ペースト、チック、固型、半固型、粉末、固型粉末、ゼリー、ジェル、エアゾール、トローチ、パック、フェイスマスクなどの形態で、基礎化粧品、洗浄用化粧品、化粧水、クリーム、乳液、パック、ファンデーション、白粉打粉、口紅、眉目頬化粧品、香水、浴用化粧品、浴用剤、口腔化粧品、日焼け・日焼け止め化粧品、メークアップ化粧品、フェーシャル化粧品、化粧油、芳香化粧品、ボディー用化粧品、頭髪用化粧品、洗髪用化粧品、石けん、薬用石けん、洗剤、歯みがき、口中清涼剤、腋臭防止剤、てんか粉、育毛・養毛剤、ひげそり用剤、さらには、炎症、感染症、アレルギー、アトピー、潰瘍、腫瘍などの各種疾患の予防、治療剤などとして用いることができる。具体的には、洗顔クリーム、洗顔フォーム、クレンジングクリーム、クレンジングミルク、クレンジングローション、クレンジングオイル、マッサージクリーム、コールドクリーム、モイスチャークリーム、モイスチャーローション、乳液、化粧水、リキッドファンデーション、パウダーファンデーション、リップスティック、リップクリーム、パック、アフターシェービングクリーム、ローション、アフターシェービングローション、日焼け止めクリーム、日焼け用オイル、ボディシャンプー、ヘアシャンプー、ヘアリンス、ヘアートリートメント、養毛料、育毛料、チック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、セットローション、ヘアスプレー、ヘアムース、ヘアダイ、ヘアブリーチ、カラーリンス、カラースプレー、パーマネントウェーブ液、プレスパウダー、ルースパウダー、アイシャドー、ハンドクリーム、脱毛クリーム、オーデコロン、デオドラント浴用剤、バスオイル、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤、マウスウオッシュ、練歯磨、外傷治療用軟膏、抗菌クリーム、ステロイド軟膏、台所用洗剤などとして使用できる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
また、本発明の結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド及びこれを含有する糖質は、安定な糖質であることから、通常、化粧品や医薬部外品に使用される、糖質、血行促進作用を有する物質、抗炎症作用を有する物質、抗菌作用を有する物質、保湿作用を有する物質、美白作用を有する物質、抗酸化作用を有する物質、感光素、紫外線吸収作用を有する物質、紫外線散乱作用を有する物質、乳化作用を有する物質から選ばれる何れか１種又は２種以上の物質との、任意の組合せ及び／又は配合割合で使用することが出来る。さらに、必要に応じて、例えば、化粧品原料基準、化粧品原料基準外成分規格、化粧品種別配合成分規格、医薬部外品原料規格、日本薬局方、日本薬局方外医薬品規格、医薬品添加物規格、日本薬局方外生薬規格、食品添加物公定書などに収載された成分や『最新化粧品科学  改訂増補ＩＩ』、株式会社薬事日報社発行（平成４年７月１０日発行）や『新化粧品学』、株式会社南山堂発行（平成１４年１月１８日発行）などに記載されている、上記作用を有する成分、及び／又は、上記作用を有する成分以外の通常医薬品、医薬部外品、化粧品などに用いられる物質やその配合処方に準じて、例えば、医薬品、賦形剤、基剤、エモリエント剤、冷感剤、収斂剤、分散剤、可溶化剤、溶剤、アルカリ剤、粘度調節剤、増粘剤、起泡剤、消泡剤、着香剤、着色剤、安定剤、防腐剤、殺菌剤、退色防止剤、酸化防止剤、毛髪処理剤、湿潤剤、毛髪保護剤、帯電防止剤、助剤、溶解剤、溶解補助剤、流動化剤、懸濁剤、緩衝剤、甘味剤、清涼化剤、矯味剤、結合剤、吸着剤、噴射剤、コーティング剤、咀嚼剤、充填剤、軟化剤、調整剤、金属封鎖剤、褪色防止剤、油脂、油溶性高分子、無機及び有機顔料、シリコーン又はフッ素化合物で処理された無機及び有機顔料、有機染料などの色剤、ルミンなどの感光色素、ロウ、制汗剤、消臭剤、抗シワ剤、皮脂抑制剤、抗脂漏剤、角質剥離剤、鎮痛剤、抗プラスミン剤などの成分から選ばれる１種又は２種以上を適宜使用することも随意である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
その他、本発明の結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド及びこれを含有する糖質は、家畜、家禽、魚などの飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上させる目的で使用することもできる。その他、固状、ペースト状、液状などの形態で、タバコ、練歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トローチ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤などの嗜好物、医薬品などへの甘味剤として、又は呈味改良剤、矯味剤として、更には、品質改良剤として有利に利用できる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
トレハロースホスホリラーゼをＤＥＡＥ−トヨパール  ６５０ゲルに吸着させ、食塩濃度が０Ｍから０．５Ｍまで上昇するリニアグラジエントにより、カラムから溶出させた。食塩濃度約０．１Ｍで溶出される酵素活性画分を回収した後、この画分を以下の方法で更に精製した。１．５Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、次に、『ブチルトヨパール  ６５０ゲル』（東ソー株式会社製）を用いる疎水カラムクロマトグラフィー（ゲル量１００ｍｌ）を行った。吸着したトレハロースホスホリラーゼを硫安濃度１．５Ｍから０．５Ｍまで低下するリニアグラジエントにより、カラムから溶出させ、酵素活性画分を回収した。次いで、『ウルトロゲル  ＡｃＡ４４』（フランス、セプラコル社製）を用いてゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル量３００ｍｌ）を行い、カラムから溶出した酵素活性画分を回収した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
【実験３】
＜α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドの調製＞
トレハロースを４．５％（ｗ／ｗ）、Ｄ−ガラクトースを２．５％（ｗ／ｗ）及び５ｍＭのリン酸二水素ナトリウムを含む水溶液をｐＨ５．０に調整し、これに実験２の方法で調製した精製トレハロースホスホリラーゼをトレハロース１ｇ当たり１７単位となるように加えて、６０℃で９６時間反応させた。この反応液を９０℃で３０分間加熱し、酵素を失活させた後、冷却した。この反応液中のα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド純度を調べるために、反応液の一部を乾固し、ピリジンに溶解した後、トリメチルシリル化し、ガスクロマトグラフィー（以下、『ＧＣ』と略称する。）に供した。ＧＣカラムは、２％シリコンＯＶ−１７／クロモゾルブＷ（ジー・エル・サイエンス株式会社製）を充填したステンレスカラム（３ｍｍφ×２ｍ）、キャリアーガスは、窒素ガスを流量４０ｍｌ／分、カラムオーブン温度は、１６０℃から３２０℃まで７．５℃／分の昇温速度とし、検出は、水素炎イオン化検出器を用いて分析したところ、当該反応液は、固形分当りα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを約３０％（ｗ／ｗ）含有していた。この反応液に市販パン酵母を固形物重量当たり湿重量で３０％になるように加えて、濃度１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を用いて反応液をｐＨ５乃至６に制御しながら、２７℃で６時間保持し、反応液中のＤ−グルコースを資化させた。その後、パン酵母を遠心分離により除き、得られる上清を、濃度１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ７．５に調整した後、『応用糖質科学』、第４２巻、２３１乃至２３６頁（１９９５年）に記載の方法により調製したバチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）Ｔ３由来のトレハラーゼを、固形物１グラム当り１０単位加え、４５℃で２４時間反応させて、溶液中のトレハロースをＤ−グルコースに加水分解した。次いで、得られた反応液を約１００℃に加熱し、粒状の水酸化ナトリウムを少量、小分けして添加し、ｐＨを１０乃至１１に保ちながら、約１００℃で１時間保持し、Ｄ−グルコースなどの還元糖を分解した。得られる溶液を塩酸で中和した後、常法に従って活性炭で脱色し、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して固形物濃度約８０％（ｗ／ｗ）のシラップを原料固形物当たり収率約２５％で得た。ＧＣ法で分析したところ、本シラップ中には、固形分当りα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを８８．１％（ｗ／ｗ）、グリセロールを７．５％（ｗ／ｗ）、トレハロースを１．０％（ｗ／ｗ）及びその他の糖質を３．４％（ｗ／ｗ）含有していた。本シラップをガラス板上に広げ、それを恒温器内に入れ、常圧下、４０℃で２日間放置したところ、図２の写真に示すような柱状の結晶状物質が生成した。この結晶状物質を含む試料の全量をガラス製乳鉢にとり、更に、１００ｍｌの８５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を加え、結晶状物質を砕きながら洗浄した。これをガラス製フィルター上に移し、吸引濾過し、フィルター上に残った結晶状物質を、更に、１００ｍｌの８５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液で洗浄し、吸引濾過した。フィルター上の結晶状物質を回収し、４０℃で１６時間真空乾燥して、粉末状の結晶状物質を原料固形分当り収率約１７％で得た。得られた結晶状粉末をＧＣ法で分析したところ、固形分当りα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを９８．４％（ｗ／ｗ）含有していた。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
表２の結果から明らかなように、非晶質α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末は、結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末とは違って、相対湿度４３〜９０％の保存条件下で著しく吸湿し、固結、湿潤、固化又は潮解して、粉末の性状が経時的に大きく変化することが判明した。詳細には、相対湿度６０％及び５３％の保存条件下では、保存１日目において粉末表面が湿潤し、保存７日目では粉末全体が固化していた。固化した試料を分析したところ、非晶質α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドが、α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド１含水結晶に変化していることが判明した。この結晶の融点を測定したところ、１１９℃乃至１２３℃であった。また、相対湿度４３％では、非晶質α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末は、吸湿し粉末全体が固結していたが、非晶質の状態は保たれていた。なお、本実験において認められたα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドの結晶は、水分を吸収して結晶に変換したこと、及び、そのＸ線回折のパターンが、実験４で測定したα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド１含水結晶のそれと一致したことから、１含水結晶であると結論された。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
【実施例Ａ−２】
＜結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末＞
トレハロース及びＤ−ガラクトースをそれぞれ５％（ｗ／ｗ）及び５ｍＭのリン酸二水素ナトリウムを含む水溶液をｐＨ５．０に調整し、これに実験１の方法で調製したトレハロースホスホリラーゼをトレハロース１ｇ当たり１５単位となるように加え、６０℃で７２時間反応させた。得られた反応液を９５℃で３０分間加熱し、酵素を失活させた後、４５℃に冷却し、ｐＨを７．５に調整し、これにバチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）Ｔ３由来のトレハラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製造）を固形物１グラム当り１０単位加え、４５℃で２４時間反応させた。その反応液に水酸化ナトリウムを加えてｐＨ１０以上のアルカリ性に保ちながら１００℃で加熱した後、冷却し、常法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して、固形物濃度約４５％（ｗ／ｗ）の糖液を得た。本糖液のα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド含有率を高めるため、実施例Ａ−１に記載のアルカリ金属型強酸性カチオン交換樹脂によるカラム分画を行い、α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド高含有画分を採取し、これを、濃度約８５％（ｗ／ｗ）に濃縮して助晶機にとり、種晶としてのα−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド１含水結晶粉末約２％（ｗ／ｗ）を加えて徐冷し、晶出率約１０％のマスキットを得た。本マスキットを乾燥塔上のノズルより１５０ｋｇ／ｃｍ２の高圧にて噴霧した。これと同時に、８０℃の熱風を乾燥塔の上部より送風して底部に設けた移送網コンベア上に捕集し、コンベアの下より４０℃の温風を送りつつ、金網コンベア上に捕集した結晶粉末を乾燥塔外に徐々に移動させ取り出した。この取り出した結晶粉末を、熟成塔に充填して温風を送りつつ１０時間熟成させ、結晶化と乾燥を完了し、結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末を原料固形物当たり収率約１２％で得た。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
【実施例Ｂ−９】
＜石けん＞
重量比４対１の牛脂及びヤシ油を通常のけん化・塩析法に供して得られるニートソープ９６．５重量部に、実施例Ａ−３の方法で得た結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド含有糖質１．５重量部、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド０．５重量部、白糖０．５重量部、糖転移ルチン（東洋精糖株式会社販売、商品名「αＧルチン」）０．５重量部、マルチトール１重量部、感光素２０１号０．０００１重量部と、適量の香料を加え、均一に混合した後、型に流し込み、冷却・固化させて石鹸を製造した。本品は、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドによる美白効果に優れ、さらに、α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド含有糖質を含有しているので、使用後も肌がかさつくこともなく、使用感に優れた石けんである。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
【実施例Ｂ−１２】
＜日焼け止め用ジェル＞
約５５℃に加温した適量の精製水に、ポリアクリル酸系高分子（住友精化株式会社販売、商品名「アクペックＨＶ５０５」）１．０重量部を分散させ、４０℃以下に冷却後、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド２．０重量部を適量の水に溶解したものを添加し、水酸化カリウム０．９重量部を加えて、ｐＨ６．３とした。これに、実施例Ａ−２の方法で得た結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末1.０重量部、濃グリセリン６．０重量部、１，３−ブチレングリコール２．０重量部、ジプロピレングリコール３．０重量部、ソルビトール１．３重量部、ポリエチレングリコール（４００）１．５重量部、１，２−ペンタンジオール３．１重量部を加えて溶解し、精製水を加えて総量を１００重量部として、日焼け止め用ゲルを調製した。本品は美白効果に優れたゲル化粧品である。また、本品は、α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを含有していることから保湿性に優れている。さらに、ジプロピレングリコールとポリエチレングリコールを配合し、ｐＨが５．９〜７．０の間に保持することにより、Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシドを配合したジェルで見られる塗布後のヨレや垢の発生もなく、透明で塗り心地もよく、塗布後もベタ付き感がなく、使用感に優れている。また、本品は、長期間保存しても、ｐＨ変化、粘度低下、着色の認められない安定なジェルである。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
【実施例Ｂ−１６】
＜練歯磨＞
実施例Ａ−２の方法で得た結晶α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシド粉末１２重量部に対し、第二リン酸カルシウム４５重量部、ラウリル硫酸ナトリウム１．５重量部、グリセリン２５重量部、ポリオキシエチレンソルビタンラウレート０．５重量部、サッカリン０．０２重量部、防腐剤０．０５重量部、及び水１６重量部を混合して練歯磨を得た。本品は、α−Ｄ−グルコシルα−Ｄ−ガラクトシドを含有しているので、適度の粘度を有し、使用感に優れ、しかも、光沢、洗浄力も良好な練歯磨である。