(57)【要約】      （修正有）【課題】胚、細胞等に対する、遺伝子、薬品の導入、或いは、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡの取り出し等の作業の自動化及び高効率化のため開発されている、自動マイクロインジェクション装置に於いて電荷を有する微小球体の保持器具を提供する。【解決手段】ホルダープレート４、フィルム５、網状電極６ａ、スライドホルダー９、及び網状電極６ｂを含む電荷を有する微小球体の保持器具において、交流電流により電極板間に生じる電場を用いて、ゼブラフィッシュの初期胚のように、電荷を有し、概球形をなす複数の物体を、ホルダープレート４に配設された複数の穴に落とし込む。さらに、スライドホルダー９をスライドさせ、該穴を塞ぐことにより余分なゼブラフィッシュ初期胚を回収し、該初期胚を大量且つ１個ずつ保持する。【選択図】図１
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【実用新案登録請求の範囲】
【請求項１】
電荷を有し、概球形をなす複数の物体を、電極に交流電圧を掛けることによって発生する電場を用いて、複数の窪み部に当該球形の物体を１個ずつ落とし込み、保持する方法であって、該電極６ａ、６ｂが網状になっていることを特徴とする電荷を有する物体の保持器具。
【請求項２】
該電極６ａ、６ｂの間に、ホルダープレート４、フィルム５、及びスライドホルダー９を配設してなること、及び／又は、スライド機構を有する該スライドホルダー９により、該ホルダープレート４に配設された穴を塞ぐことを特徴とする請求項１に記載の電荷を有する物体の保持器具。
【考案の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本考案は、自動マイクロインジェクション装置等における、大量の胚、細胞等の保持器具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  医学、薬学、生化学、及び遺伝子工学等の分野において、胚、細胞等に対して、遺伝子、薬品、プラスミド、ＤＮＡ、ＲＮＡの導入、或いは、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡの取り出し等の作業は必要不可欠である。当該作業の自動化及び高効率化のため、自動マイクロインジェクション装置が開発され、様々な改良もされつつある。しかし、対象となる胚、細胞等を大量且つ１個ずつ正確に保持するという根本的な技術に関しては知られていない。【０００３】  単一の胚を保持する技術としては、ゼブラフィッシュの初期胚の有する電荷に着目し、２本の針状電極及び交流電流により生じる電場内において、該初期胚を回転させ保持する方法が公知である（特許文献１）。【０００４】
【特許文献１】特開２００４−３３７０９７
【考案の開示】
【考案が解決しようとする課題】
【０００５】  しかし、上記の方法では、針状電極を用いているため、胚、細胞等を大量に保持することはできなかった。そこで、本考案の電荷を有する微小球体の保持器具は、そのような従来の器具が有する問題点を解決するために考えられたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】  本考案の電荷を有する微小球体の保持器具は、電極が網状になっていることを特徴とする。且つ、該電極に電圧を掛けることによって発生する電場を用いて、複数の窪み部に該球形の物体を１個ずつ落とし込み、保持することを特徴とする。
【考案の効果】
【０００７】  この考案の器具によれば、大量の胚、細胞等に対して、遺伝子、薬品、プラスミド、ＤＮＡ、ＲＮＡの導入、或いは、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡの取り出し等任意の操作を、迅速、簡便、且つ正確に、当該胚、細胞等に力学的なストレスを加えずに行うことができる。
【考案を実施するための最良の形態】
【０００８】  図１に示すように、ホルダープレート４、フィルム５、網状電極６ａ、スライドホルダー９、及び網状電極６ｂを含む電荷を有する微小球体の保持器具において、交流電圧をかけることにより極板間に生じる電場を用いて、ゼブラフィッシュの初期胚のように、電荷を有し、概球形をなす複数の物体を、ホルダープレート４に配設された複数の穴に落とし込む。該穴に収納されたゼブラフィッシュ初期胚以外の余分な初期胚については、スライドホルダー９をスライドさせ、穴を塞ぐことにより回収する。再度、スライドホルダー９をスライドさせて初期の位置に戻し、該穴に保持されているゼブラフィッシュ初期胚に対して、遺伝子、薬品、プラスミド、ＤＮＡ、ＲＮＡの導入、或いは、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡの取り出し等の操作を行う。
【実施例】
【０００９】  本考案の保持器具は、図１に示すように、プレート部１及びスライド部２からなる。プレート部１は、プレート台３、網状電極支持台７ａ、網状電極６ａ、フィルム５、ホルダープレート４、及びスライドホルダー用ガイド８からなる。プレート台３、網状電極支持台７ａ、網状電極６ａ、フィルム５、及びホルダープレート４は、スライドホルダー用ガイド８によりネジで固定される。又、スライド部２は、スライドホルダー９、網状電極支持台７ｂ、及び網状電極６ｂからなる。網状電極支持台７ｂは、該先端部分に加工を施されたネジによりスライドホルダー９に固定される。網状電極６ｂは、網状電極支持台７ｂに保持され、容易に着脱が可能である。【００１０】  プレート台３は縦８５ｍｍ、横１２８ｍｍ、厚さ１９ｍｍ、スライドホルダー９は縦７４．５ｍｍ、横９６ｍｍ、厚さ１１．３ｍｍであり、材質はアクリルである。該プレート台は、該スライドホルダーをはめ込むことが出来るよう、その内部が矩形状に削り取られている。特に、削り取られた矩形の長手方向（以下、横方向）の寸法については、該スライドホルダーの横方向の寸法よりも約１．５ｍｍ大きくなっている。【００１１】  スライドホルダー９の横方向には、スライドホルダー用ガイド８のガイド部分の直径４ｍｍに相当する幅の２本の溝が、約５．５ｍｍにわたって平行に貫通している。したがって、スライド部２は、該ガイドにより、横方向の直角方向（以下、縦方向）の移動、及びプレート部１から外れることを防止されるとともに、横方向に約１．５ｍｍの範囲で移動可能である。【００１２】  図１に示すように、網状電極６ａには、直径２ｍｍの円状の穴が貫通しており、当該穴は縦方向に１６個、横方向に２４個、１ｍｍ間隔で正方状に配設されている。網状電極６ｂには、直径５ｍｍの円状の穴が貫通しており、当該穴は縦方向に８個、横方向に１２個、１ｍｍ間隔で正方状に配設されている。両電極は真鍮製であり、何れも、交流電流を流すための伝導線を、任意の部分に取り付けることができる。又、網状電極６ｂと網状電極６ａとの間隔は、ホルダープレート４、スライドホルダー９の底部、及び網状電極支持台７ｂの厚みにより、９．５ｍｍ〜１０ｍｍに保たれる。【００１３】  フィルム５はプラスチック製であり、直径０．０１ｍｍ〜０．０５ｍｍの円状の穴が貫通しており、当該穴は縦方向に１６個、横方向に２４個、等間隔で正方状に配設されている。該フィルムの直径は、精製水、培養液等の液体が下部に漏れることを防ぐ大きさがあればよい。又、ホルダープレート４、及びスライドホルダー９の底面には、直径１ｍｍ〜１．５ｍｍの円状の穴が貫通しており、当該穴は縦方向に１６個、横方向に２４個、等間隔で正方状に配設されている。該ホルダープレート及び該スライドホルダーを貫通する穴の深さ方向の長さは、何れも１．５ｍｍである（該ホルダープレート及び該スライドホルダーの厚みに相当）。したがって、該ホルダープレート及び該スライドホルダーが重なることにより、直径１ｍｍ〜１．５ｍｍの円状の底面積を有する深さ３ｍｍの概円筒部１０が、縦方向に１６個、横方向に２４個、等間隔で正方状に配設される（図２）。【００１４】  図１に示すように、スライドホルダー９の外壁面が、プレート台３内部の削り取られた矩形部分の内壁に接する状態では、例えば網状電極６ｂの１つの穴の中心と、それに対応する網状電極６ａ、フィルム５、ホルダープレート４の底面、及びスライドホルダー９の底面における４つの穴の中心で構成される各々の概正方形の中心とが、穴の中心軸方向のほぼ同一線上に位置する。これは、他の何れにおいても同様であり、各概円筒部において、交流電圧１００Ｖ（周波数５０Ｈｚ又は６０Ｈｚ）による電場が発生する。なお、当該電場は、前述の網状電極６ｂ及び６ａに配設された各穴の直径、配設の間隔、及び網状電極６ｂと網状電極６ａとの間隔に依存する。【００１５】  ゼブラフィッシュの初期胚のように、電荷を有する概球形の物質は、この発生した電場により、２〜３秒以内に当該円筒部へ誘導され、落とし込まれる。さらに、交流電圧をかけることを止め、電場を解消することにより、該初期胚は、ホルダープレート４に配設された穴に落とし込まれ、保持される。即ち、ホルダープレートに配設された各々の穴に、ゼブラフィッシュの初期胚が１個ずつ保持される。【００１６】  次に、スライド部を当該横方向へスライドさせることにより、該スライドホルダーによってホルダープレートに配設された穴を塞ぐことが可能となる。したがって、各々の穴において、ゼブラフィッシュ初期胚１個を保持した状態で、網状電極６ｂを取り外し、スライドホルダー上に存在する余分なゼブラフィッシュ初期胚を回収する。【００１７】  再度、網状電極６ｂを取り外した後のスライド部を反対方向へスライドさせることにより、スライドホルダー上には余分なゼブラフィッシュの初期胚が存在せず、且つ、ホルダープレートに配設された各々の穴に、ゼブラフィッシュ初期胚が１個ずつ保持されているため、大量の該初期胚に対して、遺伝子、試薬、プラスミド、ＤＮＡ、ＲＮＡの導入、或いは、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡの取り出し等、任意の操作を迅速、簡便、且つ正確に、当該初期胚に力学的ストレスを加えずに行うことができる行うことができる。【００１８】（その他の実施の形態）
本考案の実施例では、網状電極６ｂ、及び網状電極６ａは、概円形の穴の貫通した真鍮製の板としたが、電気伝導線をメッシュ状に配したもの、穴を規則的に配したもの等、網状構造を有していれば如何なる形状であってもよく、当該材質は、所定の電場を発生させることが可能であれば、如何なる材質であってもよい。プレート台、網状電極支持台７ａ、ホルダープレート、スライドホルダー、及び網状電極支持台７ｂの材質はアクリルとしたが、所定の電場を阻害せず、且つ器具の構造を維持させることが可能であれば、如何なる材質であってもよい。又、器具の寸法、穴の数、形状、及び配列は、用途に応じて変化させることが可能である。さらに、本考案の保持器具は、例えば電極板、保持部分の穴の径、及び／又は電極板間距離を変えることにより、ゼブラフィッシュの初期胚だけでなく、例えばコロイド粒子のように、電荷を有する概球形の任意の物質に対して用いることが可能である。以上の器具を多層にすることで、物質を分類し、それぞれ、又は任意の物質のみを回収する用途にも応用可能である。
【産業上の利用可能性】
【００１９】  本考案の器具を用いると、大量の胚、細胞等に対して、遺伝子、薬品、プラスミド、ＤＮＡ、ＲＮＡの導入、或いは、遺伝子、ＤＮＡ、ＲＮＡの取り出し等、任意の操作を迅速、簡便、且つ正確に、当該胚、細胞等に力学的ストレスを加えずに行うことができる。したがって、自動マイクロインジェクション装置を有効に活用することができ、ひいては、医学、薬学、生化学、及び遺伝子工学等の発展に資すること大である。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】この考案の実施の一形態を示した図である。
【図２】ゼブラフィッシュの初期胚の保持部分を拡大した図である。
【符号の説明】
【００２１】１  プレート部
２  スライド部
３  プレート台
４  ホルダープレート
５  フィルム
６ａ、６ｂ  網状電極
７ａ，７ｂ  網状電極支持台
８  スライドホルダー用ガイド
９  スライドホルダー
１０  円筒部
【図１】
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【図２】
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