【手続補正書】
【提出日】平成18年10月18日(2006.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  外来物質を封入するための不活性化ウイルスエンベロープ。
【請求項２】  前記不活性化ウイルスエンベロープを調製するために使用されるウイルスが、野生型ウイルスまたは組換え型ウイルス由来である、請求項１に記載の不活性化エンベロープ。
【請求項３】  前記不活性化ウイルスエンベロープを調製するために使用されるウイルスが、レトロウイルス科、トガウイルス科、コロナウイルス科、フラビウイルス科、パラミクソウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、ラブドウイルス科、ポックスウイルス科、ヘルペスウイルス科、バキュロウイルス科、およびヘパドナウイルス科からなる群より選択される科に属するウイルス由来である、請求項１または２に記載の不活性化ウイルスエンベロープ。
【請求項４】  前記ウイルスがセンダイウイルス（ＨＶＪ）である、請求項３に記載の不活性化ウイルスエンベロープ。
【請求項５】  前記ウイルスがヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である、請求項３に記載の不活性化ウイルスエンベロープ。
【請求項６】  ウイルスエンベロープを含む、遺伝子導入ベクター。
【請求項７】  前記ウイルスエンベロープを調製するために使用されるウイルスが、野生型ウイルスまたは組換え型ウイルス由来である、請求項６に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項８】  前記ウイルスエンベロープを調製するために使用されるウイルスが、レトロウイルス科、トガウイルス科、コロナウイルス科、フラビウイルス科、パラミクソウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、ラブドウイルス科、ポックスウイルス科、ヘルペスウイルス科、バキュロウイルス科、およびヘパドナウイルス科からなる群から選択される科に属するウイルス由来である、請求項６または７に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項９】  前記ウイルスがセンダイウイルス（ＨＶＪ）である、請求項８に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項１０】  前記ウイルスがヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である、請求項８に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項１１】  請求項６〜１０のいずれか１項に記載のベクターであって、
前記ウイルスエンベロープを外来遺伝子と混合する工程、および
該混合液を２回以上凍結融解する工程、
を包含する方法によって調製される、遺伝子導入ベクター。
【請求項１２】  請求項６〜１０のいずれか１項に記載のベクターであって、前記ウイルスエンベロープを界面活性剤の存在下で外来遺伝子と混合する工程を包含する方法によって調製される、遺伝子導入ベクター。
【請求項１３】  前記方法が、ウイルスを不活性化する工程をさらに包含する、請求項１１または１２に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項１４】  前記界面活性剤が、オクチルグルコシド、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、ＣＨＡＰＳおよびＮＰ−４０からなる群から選択される、請求項１３に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項１５】  前記界面活性剤が、オクチルグルコシドである、請求項１４に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項１６】  動物生体内の組織に遺伝子導入するための、請求項６〜１５のいずれか１項に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項１７】  前記組織が、肝臓、骨格筋、子宮、脳、眼部、頚動脈、皮膚、血管、肺、心臓、腎臓、脾臓、癌組織、神経、Ｂリンパ球、および呼吸器官の組織からなる群から選択される、請求項１６に記載の遺伝子導入ベクター。
【請求項１８】  遺伝子治療のための、請求項６〜１７に記載の遺伝子導入ベクターを含有する薬学的組成物。
【請求項１９】  請求項６〜１７に記載の遺伝子導入ベクターを含有する、遺伝子ライブラリーのスクリーニングのためのキット。
【請求項２０】  遺伝子導入のためのウイルスエンベロープを含む遺伝子導入ベクターの調製方法であって、以下；
該ウイルスエンベロープを外来遺伝子と混合する工程、および
該混合液を２回以上凍結融解する工程、
を包含する、方法。
【請求項２１】  遺伝子導入のためのウイルスエンベロープを含む遺伝子導入ベクターの調製方法であって、該ウイルスエンベロープを界面活性剤の存在下で外来遺伝子と混合する工程、を包含する、方法。
【請求項２２】  ウイルスを不活性化する工程をさらに包含する、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】  単離された動物組織に遺伝子を導入する方法であって、以下；
所望の外来遺伝子を含有する請求項６〜１７のいずれか１項に記載の遺伝子導入ベクターを調製する工程、
該遺伝子導入ベクターによって、該単離された動物組織に遺伝子を導入する工程、
を包含する、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
ＨＶＪについて、ウイルス融合タンパク質を遠心やカラム操作で精製して脂質膜に再構成する方法で作成された粒子は、再構成させることによってウイルスの持つ他のタンパク質（主としてＭタンパク質）が失われることにより、融合活性に必要なＦｌとＨＮタンパク質の比率が野生型のウイルスと同様には保たれないために、融合活性が低くなるという欠点もある。また再構成したときに融合タンパク質が脂質膜に挿入される方向性が野生型ウイルスと同様であるとは限らないために未知の抗原提示がなされる可能性もある。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
（実施例７：ＧＦＰ遺伝子の導入効率）
ＧＦＰ（グリーン蛍光タンパク質）遺伝子と不活性化ＨＶＪウイルスの混合溶液を２０回凍結融解した後、２ｎｇ／５μ１をラット大脳に注入した。その結果、注入部位に蛍光シグナルが観察された。また、ＧＦＰ遺伝子によるＨＶＪエンベロープベクターを凍結して３ヶ月保存した後、ラット大脳に注入したが、同じく注入部位にＧＦＰ遺伝子発現による蛍光シグナルが観察された。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
ＨＶＪ−ＡＶＥ（Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｖｉｒａｌ  Ｅｎｖｅｌｏｐ）リポソームを、２００μｇのｐｃＬｕｃｉを用いて、ボルテックス／排出（ｖｏｒｔｅｘｉｎｇ／ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）、その後のスクロース勾配遠心分離（６２，０００ｇ、９０分間）によって調製した。次に、この調製物を、遠心分離（２７，０００ｇ、３０分間）によってペレットとし、そして５００μｌのＰＢＳ中に懸濁した。このサンプルの１００μｌをマウス（Ｃ５７ＢＬ／６）肝臓の葉（ｌｏｂｅ）の１つに注入した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
４００μｇまたは８００μｇいずれかのｐＣＭＶ−ＮＫ４を用いて、１０，０００ＨＡＵの不活性化ＨＶＪを用いた以外は、上記に記載のｐｃＬｕｃｉを含有するＨＶＪエンベロープベクターを調製したのと同様の方法によって、ＨＶＪエンベロープベクターを調製した。ｐＣＭＶ−ＮＫ４は、ＨＧＦ機能を阻害する変異型ＨＧＦを発現するプラスミドである。５０μｌのベクター（調製物の１／６）を、新血管形成を誘導するために組換えＶＥＧＦのペレットで処理した、ウサギの角膜組織中に注入した。処置の７日後、ウサギを、屠殺し、目の中の新血管形成を観察した。結果を図１６Ｅに示す。ｐＣＭＶ−ＮＫ４が容量依存的にＶＥＧＦによって誘導された血管新生を抑制した。