【手続補正書】
【提出日】平成18年9月5日(2006.9.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚から採取された角層細胞の形状値を測定し、測定された形状値及び／又はその分布より、経皮的散逸水分量（ＴＥＷＬ）を推定し、これを指標とすることを特徴とする、皮膚のバリア機能の鑑別法。
【請求項２】
角層細胞の形状値が、角層細胞の面積であることを特徴とする、請求項１に記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
【請求項３】
角層細胞の面積の分布が、角層細胞の面積の分散乃至は偏差で表されることを特徴とする、請求項２に記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
【請求項４】
経皮的散逸水分量（ＴＥＷＬ）が、
【数１】
2005189011.tif 000001
により推定されることを特徴とする、請求項１〜３何れか一項に記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
【請求項５】
推定されたＴＥＷＬ値を０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜の５段階に分類し、それぞれをバリアスコア１、バリアスコア２、バリアスコア３、バリアスコア４、バリアスコア５として、皮膚のバリア機能を鑑別することを特徴とする、請求項１〜４何れか一項に記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
【請求項６】
次に示すステップに従って行われることを特徴とする、皮膚のバリア機能の鑑別法。
（ステップ１）被験者より採取された角層細胞を観察場所まで移送するステップ。
（ステップ２）移送された角層細胞を顕微鏡下観察し、面積及び／又は面積のバラツキを計測するステップ。
（ステップ３）角層細胞の面積及び／又は面積のバラツキより、次式に従って経皮的散逸水分量（ＴＥＷＬ）を算出するステップ。
【数２】
2005189011.tif 000002
（ステップ４）算出されたＴＥＷＬ値を０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜の５段階に分類し、それぞれをバリアスコア１、バリアスコア２、バリアスコア３、バリアスコア４、バリアスコア５として、皮膚のバリア機能を鑑別するステップ。
【請求項７】
次に示すステップに従って行われることを特徴とする、皮膚のバリア機能の鑑別法。
（ステップ１）被験者より採取された角層細胞の情報を判定機器へ送付するステップ。
（ステップ２）送付された角層細胞の情報より、面積及び／又は面積のバラツキを算出するステップ。
（ステップ３）算出された角層細胞の面積及び／又は面積のバラツキより、次式に従ってＴＥＷＬを推定するステップ。
【数３】
2005189011.tif 000003
（ステップ４）算出されたＴＥＷＬ値を０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜の５段階に分類し、それぞれをバリアスコア１、バリアスコア２、バリアスコア３、バリアスコア４、バリアスコア５として、皮膚のバリア機能を鑑別するステップ。
【請求項８】
請求項１〜７何れか一項に記載の皮膚のバリア機能の鑑別法により、皮膚のバリア機能が低いと鑑別された人用に、皮膚にバリア機能を付与する効果の高い化粧料を選択することを特徴とする、化粧料の選択法。
【請求項９】
前記皮膚にバリア機能を付与する効果の高い化粧料が、疎水基を有するアクリル酸誘導体より誘導された構造を有する、水溶性ポリマー乃至はコポリマーを含有するものであることを特徴とする、請求項８に記載の化粧料の選択法。
【請求項１０】
前記疎水基を有するアクリル酸誘導体より誘導された構造を有する、水溶性ポリマー乃至はコポリマーが、次のＡ群に示すものから選択されるものであることを特徴とする、請求項９に記載の化粧料の選択法。
（Ａ）メタクリロイルオキシエトキシホスホリルコリン、ポリクオタニウム５１、ポリクオタニウム６１、（アクリレーツ／メタクリル酸メトキシＰＥＧ−２３／アクリル酸パーフルオロオクチルエチル）コポリマー
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
皮膚に於ける水分の存在意義は非常に大きく、その意味に於いて化粧料では、「保湿剤」が重要な役目を担っていると言える（例えば、特許文献１、特許文献２を参照）。皮膚に於ける、水分の存在量が多ければ、皮膚にはりがあり、外部からの刺激物質の侵入を防ぐ力も大きく、好ましいとされていた。皮膚に於ける水分の存在量は、通常はスキコンII（アイ・ビー・エスコーポレーション社製）等による経皮的水分散逸量（ＴＥＷＬ）の少なさ、コルネオメータなどによる、皮膚のコンダクタンスの小ささ等がその代替値として使用されている（例えば、特許文献３を参照）。又、この様な方法以外に皮膚の水分量を測定する方法としては、例えば、光学的に測定する方法（例えば、特許文献４を参照）、
近赤外分光スペクトルを用いる方法（例えば、特許文献５、特許文献６を参照）等が存する。しかしながら、これらの方法は何れも、高価で、大がかりな計測機器を使用しなければならないし、測定機器の存する場所でしか、皮膚水分量の測定が出来ない問題が存した。即ち、被験者から容易に採取できるサンプル、データを、測定機器がある遠隔地に送り、かかる経皮的水分散逸量やコンダクタンスなどで代替される生体の特性値を測定或いは推定できる、皮膚水分量の測定手段の開発が望まれていた。取り分け、ＴＥＷＬ値は外部からの刺激物質の侵入を防ぐ、皮膚のバリア機能と特に関連した値であり、これを細胞の形状値などより推定する手段の開発は非常に望まれることであった。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
一方、角層細胞と皮膚の関係については、角層細胞の形態が、皮膚障害と密接な関連のあることは既に知られているが（例えば、特許文献７、特許文献８を参照）、前記角層細胞の形状値から、皮膚水分量、言い換えれば、皮膚のバリア機能を推定する方法は全く知られていなかった。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、ＴＥＷＬ値乃至は皮膚のバリア機能を角層細胞の形状値などより推定する手段を提供し、これによってその個人に適した化粧料を選択する技術を提供することを課題とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、ＴＥＷＬ値乃至は皮膚のバリア機能を角層細胞の形状値などより推定する手段を提供し、これによってその個人に適した化粧料を選択する技術を提供することを目的に、鋭意研究努力を重ねた結果、皮膚から採取された角層細胞の形状値及び／又はその分布より、経皮的散逸水分量（ＴＥＷＬ）を推定し、これを指標とし、皮膚のバリア機能を推定し、これをもとに化粧料を選択することにより、この様な鑑別、選択が可能であることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示す技術に関するものである。
（１）皮膚から採取された角層細胞の形状値を測定し、測定された形状値及び／又はその分布より、経皮的散逸水分量（ＴＥＷＬ）を推定し、これを指標とすることを特徴とする、皮膚のバリア機能の鑑別法。
（２）角層細胞の形状値が、角層細胞の面積であることを特徴とする、（１）に記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
（３）角層細胞の面積の分布が、角層細胞の面積の分散乃至は偏差で表されることを特徴とする、（２）に記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
（４）経皮的散逸水分量（ＴＥＷＬ）が、
【数１】
2005189011.tif 000004
により推定されることを特徴とする、（１）〜（３）の何れかに記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
（５）推定されたＴＥＷＬ値を０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜の５段階に分類し、それぞれをバリアスコア１、バリアスコア２、バリアスコア３、バリアスコア４、バリアスコア５として、皮膚のバリア機能を鑑別することを特徴とする、（１）〜（４）の何れかに記載の皮膚のバリア機能の鑑別法。
（６）次に示すステップに従って行われることを特徴とする、皮膚のバリア機能の鑑別法。
（ステップ１）被験者より採取された角層細胞を観察場所まで移送するステップ。
（ステップ２）移送された角層細胞を顕微鏡下観察し、面積及び／又は面積のバラツキを計測するステップ。
（ステップ３）角層細胞の面積及び／又は面積のバラツキより、次式に従って経皮的散逸水分量（ＴＥＷＬ）を算出するステップ。
【数２】
2005189011.tif 000005
（ステップ４）算出されたＴＥＷＬ値を０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜の５段階に分類し、それぞれをバリアスコア１、バリアスコア２、バリアスコア３、バリアスコア４、バリアスコア５として、皮膚のバリア機能を鑑別するステップ。
（７）次に示すステップに従って行われることを特徴とする、皮膚のバリア機能の鑑別法。
（ステップ１）被験者より採取された角層細胞の情報を判定機器へ送付するステップ。
（ステップ２）送付された角層細胞の情報より、面積及び／又は面積のバラツキを算出するステップ。
（ステップ３）算出された角層細胞の面積及び／又は面積のバラツキより、次式に従ってＴＥＷＬを推定するステップ。
【数３】
2005189011.tif 000006
（ステップ４）算出されたＴＥＷＬ値を０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、３０〜の５段階に分類し、それぞれをバリアスコア１、バリアスコア２、バリアスコア３、バリアスコア４、バリアスコア５として、皮膚のバリア機能を鑑別するステップ。
（８）（１）〜（７）の何れかに記載の皮膚のバリア機能の鑑別法により、皮膚のバリア機能が低いと鑑別された人用に、皮膚にバリア機能を付与する効果の高い化粧料を選択することを特徴とする、化粧料の選択法。
（９）前記皮膚にバリア機能を付与する効果の高い化粧料が、疎水基を有するアクリル酸誘導体より誘導された構造を有する、水溶性ポリマー乃至はコポリマーを含有するものであることを特徴とする、（８）に記載の化粧料の選択法。
（１０）前記疎水基を有するアクリル酸誘導体より誘導された構造を有する、水溶性ポリマー乃至はコポリマーが、次のＡ群に示すものから選択されるものであることを特徴とする、（９）に記載の化粧料の選択法。
（Ａ）メタクリロイルオキシエトキシホスホリルコリン、ポリクオタニウム５１、ポリクオタニウム６１、（アクリレーツ／メタクリル酸メトキシＰＥＧ−２３／アクリル酸パーフルオロオクチルエチル）コポリマー
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明によれば、ＴＥＷＬ値乃至は皮膚のバリア機能を角層細胞の形状値などより推定する手段を提供し、これによってその個人に適した化粧料を選択する技術を提供することができる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明の皮膚のバリア機能、言い換えれば、角層構造の強固さに由来する、皮膚への異物の侵入をくい止め、皮膚より水分等の生体が必要とする物質が散逸をするのを防ぐ能力の鑑別法は、被験者より採取された角層細胞の形状値とその分布を指標とすることを特徴とする。かかる形状値は、恒常状態における、物質隔離のポテンシャルと密接に関連する値であり、かかる恒常状態における、経皮的水分散逸量の代替値として使用することが出来る。それに加えて、異物侵入抑制などの好ましからざる成分が生体に侵入するのを防ぐ能力の代替値ともなりうる。化粧料などの選択にあたって、「スキコンーＩＩ」などで測定した経皮的水分散逸量（ＴＥＷＬ）を、皮膚のバリア機能の指標として用いる場合が存するが、この様な数値測定には、測定専用の機器を必要とする。又、かかるＴＥＷＬが表すものは、水分の散逸をどの程度皮膚が防いでいるかの数値であって、異物侵入防御とは直接には結びつきにくい。本発明の方法で鑑別されるバリア機能は、前記ＴＥＷＬとコンダクタンスを軸とする座標平面上で、それぞれの軸と正の値で切片を有する直線の周囲に集約された形の分布で表される。これは、ＴＥＷＬとコンダクタンスは独立性は存するものの、関連性を有し、ＴＥＷＬ、コンダクタンスともに大きい状態も、ともに小さい状態も存しないためである。この２つの変数の内、ＴＥＷＬについて、角層細胞の面積とそのバラツキを説明変数として重回帰分析を行うと、良好な相関係数で重回帰させることが出来るが、この様な重回帰分析によって得られた重回帰式を用いて、ＴＥＷＬを求めると、実際のものより僅かにずれるが、このずれにより、異物侵入抑制作用まで含んだ皮膚のバリア機能の値にはより近いものとなる。これは、異物の侵入抑制などには角層細胞の形状特性がより重要に係わっているためであると考えられる。この様に角層細胞の形状値より推定された仮のＴＥＷＬ値を指標に、肌を分類することにより、皮膚のバリア機能をランク付けで鑑別することが出来る。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の皮膚のバリア機能の鑑別法で、指標として用いる、採取された角層細胞の形状値とその分布の計測法としては、被験者より、例えば、粘着テープを使用したテープストリッピング法により、角層細胞を採取し、ゲンチアナバイオレットなどの色素で染色し、細胞の境界を明確にすることにより、画像処理を行ってその面積を計測することが挙げられる。この様な方法は、既に化粧料の分野では常法として知られている方法に従えばよい。この様な常法としては、例えば、特許文献９に記載された方法が好ましく例示できる。計測は、顕微鏡下、既に面積が知られている標準的な比較サンプルとの比較によって行っ
ても良いし、顕微鏡下、形状を計測して行っても良いし、顕微鏡画像をイメージデータとしてコンピューターに取り込んで、画像処理ソフトを用いて計測しても良い。更に、モリテック株式会社製の「ビデオマイクロスコープ」等の拡大ビデオ装置を用いて、前記テープストリッピングで得られた角層細胞を拡大、可視化して、面積計測に使用することも出来る。かかる方法も本発明の鑑別法に属する。かくして測定された複数の角層細胞の面積を、統計学的に処理することにより、平均の面積と、面積のバラツキを算出することが出来る。バラツキは、ランク分けできる程度の粗いもので使用可能であるので、分散を用いることも出来るし、偏差を用いることも出来る。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
かくして得られた、角層細胞の面積、角層細胞の面積のバラツキはともに、前述の如く、或いは、後記実施例に示す如くに、「ＴＥＷＬ」或いは「コンダクタンス」と極めて相関性の高い値であり、皮膚から水分が散逸するのを防ぐ能力と、皮膚への異物の侵入を抑制する特性との関連の深い値である。これは言い換えれば、水分等の生体有用成分を生体内部に保持し、侵入好ましからざる成分の侵入を抑制する生体境界能力の指標と言える。本発明の皮膚のバリア機能の鑑別法では、角層細胞の面積とそのバラツキの２つの数字を説明変数として用いて、次式より算出する値を推定ＴＥＷＬ値として指標とすることが好ましい。
【数４】
2005189011.tif 000007
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
本発明の皮膚のバリア機能の鑑別法を実際の業に応用するには、バリア機能を鑑別し、該バリア機能が低かった場合に、上記化粧料の使用を勧める、商品アドバイスのツールとして用いることが好ましく例示できる。即ち、この様なアドバイスは以下に示す手順で為される。
１）顧客より角層細胞を採取し、角層細胞面積及び／又はそのバラツキを計測する。前記計測は、計測装置を備えた計測センターなどに、角層細胞標本を送付し、行うことも出来るし、その場で簡易的に、標準面積細胞などの比較により行うことも出来るし、又、角層細胞の拡大ビデオ画像を画像解析装置を備えた施設に送付し、該画像を解析して計測することも出来る。かくして得られた、複数個の角層細胞の面積を、統計処理し、その平均値とバラツキを算出する。
２）算出した、角層細胞の平均面積と角層細胞の面積のバラツキを用いて、皮膚のバリア機能を式より算出する。
３）算出された皮膚のバリア機能を基礎データと比較し、相対的に皮膚のバリア機能が高いか、低いかを判別する。
４−１）皮膚のバリア機能が低いと判別された場合には、前記の角層バリア機能を補って、異物侵入を防ぎ水分散逸を防ぐ被膜成分を含揺する化粧料による処置を勧めるアドバイスを行う。
４−２）皮膚のバリア機能が高い乃至は平均的と判別された場合には、化粧料の選択に於
いて、角層バリア機能を補って、異物侵入を防ぎ水分散逸を防ぐ被膜成分の因子を加えなくてもよい。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
＜実施例１＞
ボランティア１６０名を用いて、これらの人の皮膚のコンダクタンス（コルネオメーター；Courage+Khazaka社製 Corneometer CM825）、ＴＥＷＬ（アイ・ビー・エスコーポレーション社製スキコンーＩＩ）、角層細胞の種々の計測値を計測した。角層細胞の計測値の中で、コンダクタンス、ＴＥＷＬ値と関連の深いものを他の説明変数との０．００１以下の危険率で有意差のあるものを選択したところ、角層細胞の平均面積と、角層細胞の面積のバラツキであった。重相関係数はそれぞれ、−０．３２と−０．４６の組合せと、−０．５と０．２６であり、それぞれが単独でこの二項目について説明できると同時に、この二つの説明変数を組み合わせることにより、かなりの確度でこの両者を推定できることが明らかになった。このことを確認した後、これらのデータを元に、ＴＥＷＬ値を目的変数、角層細胞の平均面積と角層細胞の面積のバラツキを説明変数とし、重回帰分析により、回帰式を求めた。式は次に示すとおりになった。
【数５】
2005189011.tif 000008
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
＜実施例２＞
以下に示す、スコア１〜５に対応した化粧料（化粧水）を作成した。パネラー４０名をバラツキの無いように２群に分け、角層細胞を採取し、ゲンチアナバイオレットで染色し、顕微鏡下観察し、角層細胞の面積とそのバラツキを求めた。１群は測定結果より、実施例１の式で推定ＴＥＷＬ値を算出し、それを用いて下記に示す基準に従って皮膚のバリア機能をスコア分類で５分類に分けた。それに従って化粧料１〜５を選択して渡した。（本発明群）残りの１群は、１〜５の乱数を発生させて、それに従って化粧料を割り付けた。（比較群）渡した化粧料を３週間使用してもらい、その後再び角層細胞を採取し、角層細胞の面積を測定した。尚、乳液、クリームなどの化粧料は通常使用しているものを使用してもらった。本発明群の角層細胞の面積の平均値は５８４±１５μｍ2であり、比較群のそれは５１１±１２μｍ2であり、本発明群の方が肌状態が良くなっていることが判った。