【手続補正書】
【提出日】平成18年6月20日(2006.6.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
下記に示す、ローヤルゼリー由来の蛋白質を１５重量％以上含有する画分と被覆剤とを含むマトリックスを含む顆粒。
１）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンである。
２）配列番号１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
一方、ローヤルゼリー由来の蛋白質であって、下記に示す特徴を有する蛋白がローヤルゼリーの有効成分であること、このものの安定性の善し悪し及びこのものの安定化方法についても全く知られていなかった。
１）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンである。
２）配列番号１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
【課題を解決するための手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、ローヤルゼリーの有効成分を求めて鋭意研究努力を重ねた結果、ローヤルゼリー中に含まれる蛋白であって、下記に示す特性を有するものが、有効成分であり、このものが経時的に劣化しやすいことを見出した。更に、検討を重ねた結果、かかる蛋白を被覆剤とともに顆粒とし、該顆粒をローヤルゼリーの残りの部分や他の任意成分とともに、錠剤などの製剤に加工することにより、前記蛋白の安定性を向上させ、以て、ローヤルゼリーの効果を安定化できることを見出し発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、下記に示す技術に関するものである。以下、本発明について、実施の形態を中心に詳細に説明を加える。
（１）下記に示す、ローヤルゼリー由来の蛋白質を１５重量％以上含有する画分と被覆剤とを含むマトリックスを含む顆粒。
１）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンである。
２）配列番号１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。
（２）顆粒が５０メッシュの篩を通過し、２００メッシュの篩にオンするものであることを特徴とする、（１）に記載の顆粒。
（３）被覆剤が腸溶性被覆剤である、（１）又は（２）に記載の顆粒。
（４）腸溶性被覆剤が、シェラック及び／又はゼインである、（３）に記載の顆粒。
（５）（１）〜（４）何れか１つに記載の顆粒と任意成分とを成形し、該成形物の表面を腸溶性皮膜でコートしてなることを特徴とする組成物。
（６）腸溶性皮膜が、ゼイン及び／又はシェラックであることを特徴とする、（５）に記載の組成物。
（７）（１）〜（４）何れか１つに記載の顆粒と任意成分とを成形し、該成形物の表面をシェラックのアルコール溶液の噴霧により、シェラック被覆層を形成させ、しかる後に、ゼインの含水アルコール溶液の噴霧によりゼイン被覆層を形成させてなる（５）又は（６）に記載の組成物。
（８）更に最外層が糖衣されていることを特徴とする、（５）〜（７）何れか１つに記載の組成物。
（９）食品であることを特徴とする、（５）〜（８）何れか１つに記載の組成物。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【発明の実施の形態】
（１）本発明の顆粒
本発明の顆粒は、下記に示す、ローヤルゼリー由来の蛋白質を１０重量％以上含有する画分と被覆剤とを含むマトリックスを含むことを特徴とし、製剤の構成要素である。即ち、その蛋白の特性とは、
１）還元条件下でのＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により測定される分子量が約５７キロダルトンである。
２）配列番号１のアミノ酸番号１〜８のアミノ酸配列を含む。
ことである。以下この蛋白のことを単に５７キロダルトンの蛋白と称する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
又、この蛋白を多く含む画分は、工業的には次の手順に従って、ローヤルゼリーより分画出来る。即ち、ローヤルゼリーを水可溶分と不溶分に分け、可溶分を分画する。分画した画分を分子量１０万程度の限外濾過膜を用い、透過画分と非透過画分に分け、透過画分を得る。更に、分子量１０万透過画分を、分子量１万の限外濾過膜を用い、透過画分と非透過画分とに分け、非透過画分を凍結乾燥する。この様な分画作業により、通常のフレッシュなローヤルゼリーに１０重量％程度含有されている、上記蛋白が、２０〜５０重量％程度に濃縮することが出来る。加えて、ローヤルゼリーそのものに含まれている、この蛋白の活性を低下させる成分を取り除くことが出来る。本発明の顆粒の製造にはこの様な精製画分を用いればよい。本発明の顆粒に用いることの出来る前記蛋白を含有する画分として
は、前記蛋白を１５重量％以上含むもの、更に好ましくは３０重量％以上を含むものが好適に例示できる。かかる、画分は顆粒全量に対して、１５〜７０重量％含有するのが好ましく、３０〜６０重量％含有することが、更に好ましい。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
更に、本発明の顆粒は、被覆剤を含有することを構成要件とする。被覆剤としては、食品や医薬品などで使用されている被覆剤であれば特段の限定無く使用することが出来、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどのセルロース系被覆剤、オイドラギットの登録商標名で樋口商会より市販されている、種々のアクリル系被覆剤、ラック貝殻虫より得られるシェラック、小麦やトウモロコシの水不溶性蛋白であるゼイン、動物の皮より得られるゼラチン、甲殻類の甲殻から得られるキチンやキトサンなどが例示でき、これらの中でも、腸溶性の被覆が特に好ましく、中でもシェラック及び／又はゼインが特に好ましく、ゼインが最も好ましい。かかる被覆剤の顆粒に於ける好ましい含有量は、顆粒全量に対して１０〜５０重量％であり、更に好ましくは２０〜４０重量％である。これは、少なすぎると前記５７キロダルトンの蛋白の安定化作用が損なわれることがあり、多すぎると該蛋白の腸での放出が妨げられることがあるからである。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明の顆粒には、上記の必須の成分である、５７キロダルトンの蛋白と被覆剤以外に顆粒を作る際に用いられる任意成分を含有することが出来る。かかる任意成分としては、クエン酸トリエチルやカプリル酸モノグリセライドなどの可塑剤、ステアリン酸亜鉛やステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、結晶セルロースやでんぷんなどの崩壊剤、抗酸化剤、ｐＨ安定剤、キレート剤等が例示できる。本発明の顆粒は、この様な必須の成分と任意の成分とを常法に従って処理することにより、即ち、流動層造粒或いは転動層造粒、押し出し造粒などにより製造することが出来る。この様に得られた顆粒であれば、特段の限定無く、本発明の顆粒として使用することが出来、その形態としては、例えば、被覆剤が他の成分を含む顆粒を被覆した形態、全ての成分がマトリックスを形成した形態、中核顆粒にそれ以外の成分がマトリックスとして被覆した形態などが例示できる。これらの内、特に好ましいものは、全ての成分がマトリックスを形成し、該マトリックスが顆粒を形成する形態のものである。これは、腸に移行して有効成分を放出しなければならないときに、速やかに有効成分を放出できるからである。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
（２）本発明の組成物
本発明の組成物は、上記顆粒を構成要素として含有するものであり、ローヤルゼリーの効果を得るための製剤であって、腸溶性被膜でコートしてなることを特徴とする。この様な組成物としては、食品や医薬品で通常使用されている製剤であれば、特段の限定無く使用
することが出来、例えば、カプセル剤、ゼラチン等のソフトカプセル剤、錠剤などが好ましく例示できる。これらの内、特に好ましいものは錠剤であり、錠剤中に前記本発明の顆粒が存在する形態が好ましい。これらをコートする腸溶性被膜剤としては、前述したもの、即ち、シェラック、ゼイン、オイドラギット、ゼラチン、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等が例示でき、これらの内ではシェラック及び／又はゼインが特に好ましい。最も好ましい形態は、シェラックをコートした後、ゼインをコートする形態であり、これは、シェラックの溶媒がアルコールであり、ゼインの溶媒が含水アルコールであるため、この順にコートすると、組成物に水分を含有させる可能性が少なく被膜できるからである。この時の被膜量は腸溶性コート全体に対して、被膜組成物が０．１〜２０重量％であることが好ましく、更に好ましくは０．５〜１０重量％である。これは、被膜量が多すぎると、有効成分の放出が阻害される場合があり、少なすぎると有効成分の保護が充分でなくなる場合があるからである。掛かる被膜の更に外側には、これらの被膜剤の味をカバーする目的と腸溶コートの破損を防ぐ目的で糖衣をかけ、つや出しコートをすることが更に好ましい。糖衣の量は、成形組成物に対して同量乃至は１．５倍量が好ましい。この様な、有効成分である５７キロダルトンの蛋白を被覆剤とともに顆粒とし、該顆粒を任意成分とともに錠剤或いはカプセルなどに成形し、該成形物を腸溶性の被膜剤でコートし、更に糖衣をかけることにより、有効成分である５７キロダルトンの蛋白の損失による効果の低下を防ぎ、安定した効果のある製剤とすることが出来る。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
＜実施例１＞採集したてのローヤルゼリー１Ｋｇに水５Ｌを加え、不溶物を濾過で除去したのち、濾液から分子量１０万の限外濾過膜を用いて透過液を得た。この透過液を分子量１万の限外濾過膜を透過させ、非透過分を膜より水で洗浄し集めて凍結乾燥して５７キロダルトンの蛋白を３７％含む画分１をアモルファスとして得た。５７キロダルトンの蛋白の定量は次に示す如く行った。この画分１の９６．５重量部と３．５重量部のゼインをフローコーターにより流動層造粒し、本発明の顆粒１を得た。
（５７キロダルトンの蛋白の定量法）東ソー株式会社製ＤＥＡＥ‐Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｍをカラムとして用いて、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を展開液Ａ、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）と１ＭＮａＣｌを展開液Ｂとしてグラジェントにより、流速を０．５ｍｌ／ｍｉｎ、２８０ｎｍの吸光度で検出し、分子量５７キロダルトンの蛋白の標準品をもとに作成した検量線を用いてピーク面積より算出する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> ポーラ化成工業株式会社
<120> ローヤルゼリーを含有する組成物
<130> Ｐ2000136
<140>
<141> 2000-10-25
<160> 1
<170> PatentIn Ver.2.0
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> Apis mellifera
<220>
<221> UNSURE
<222> (24)
<223> Xaa=unknown
<400> 1
Asn Ile Leu Arg Gly Glu Ser Leu Leu Lys Lys Leu Pro Ile Leu His
1               5                   10                  15
Glu Met Lys Phe Phe Asp Tyr Xaa Asp
20                   25
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】削除
【補正の内容】