【手続補正書】
【提出日】平成18年2月10日(2006.2.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  以下の（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）の性質を有し、且つ（ｄ）に記載の一般式（１）で表される構造を、ヘキソサミンとヘキスロン酸の繰り返し単位構造で形成される基本骨格１分子あたりに１以上有することを特徴とするグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
（ａ）グリコサミノグリカン分解酵素による分解と高速液体クロマトグラフィーによる分析を組み合わせた二糖分析により得られる二糖体組成において2-デオキシ-2-スルファミノ-4-O-(4-デオキシ-2-O-スルホ-α-L-threo-hex-4-エノピラノシルウロン酸)-6-O-スルホ-D-グルコースのモル％が0〜10％、2-デオキシ-2-スルファミノ-4-O-(4-デオキシ-α-L-threo-hex-4-エノピラノシルウロン酸)-6-O-スルホ-D-グルコースのモル％が95〜70％であり、2-デオキシ-2-スルファミノ-4-O-(4-デオキシ-α-L-threo-hex-4-エノピラノシルウロン酸)-D-グルコースのモル％が5〜20％であること。
（ｂ）標準血漿に最終濃度3μg/mlで添加して測定した際の活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT）が50秒以下であること。
（ｃ）重量平均分子量が9,000〜13,000 Da（ダルトン）であること。
（ｄ）一般式（１）
【化１】
1999310602.tif 000001
（但し、R1はH又はSO3Hであり、R2はCOCH3又はSO3Hを示す。）
【請求項２】  下記一般式（２）の構造を有するグリコサミノグリカン誘導体であって、標準血漿に最終濃度3μg/mlで添加して測定した際の活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT）が50秒以下であることを特徴とするグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
【化２】
HO−[（Ａ）−（Ｂ）]n-H               （２）
ただし、（Ａ）は下記一般式（３）で示されるグルクロン酸残基、下記一般式（４）で示されるイズロン酸残基又は下記一般式（５）で示される開裂されたヘキスロン酸残基のいずれかであり、
【化３】
1999310602.tif 000002
（Ｂ）は下記一般式（６）で示されるヘキソサミン残基をそれぞれ示す。
【化４】
1999310602.tif 000003
ただし、一般式（３）〜（６）においてR1及びR3はそれぞれ独立にH又はSO3H
であり、R2はCOCH3又はSO3Hを示す。
また、一般式（２）において、nは15≦n≦40を充たす整数であり、（Ａ）の少なくとも一つは一般式（５）の残基である。
【請求項３】  下記の工程(i)及び(ii)を含む方法により得られ、少なくとも前記一般式（５）で示される開裂されたヘキスロン酸残基を有するグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
(i)  ヘキソサミンとヘキスロン酸の繰り返し単位構造を基本骨格とする硫酸化グリコサミノグリカンを開裂処理して、その骨格中に存在する２位に硫酸基を有しないヘキスロン酸の少なくとも一部の２位と３位の炭素原子間のみを開裂する工程、
(ii)  ヘキスロン酸の２位の硫酸基を特異的に除去しうる脱硫酸化手段により工程(i)の生成物を脱硫酸化処理し、２位に硫酸基を有する全ヘキスロン酸の90％以上の当該硫酸基を脱硫酸化する工程。
【請求項４】  ヘキソサミンとヘキスロン酸の繰り返し単位構造を基本骨格とする硫酸化グリコサミノグリカンがヘパリンであることを特徴とする請求項３記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
【請求項５】  工程(i)の開裂処理が、過ヨウ素酸塩を使用する酸化的開裂反応を含むことを特徴とする請求項３又は４記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
【請求項６】  工程(i)において、更に酸化的開裂反応生成物を還元することを特徴とする請求項５記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
【請求項７】  請求項３の工程(ii)におけるヘキスロン酸の２位の硫酸基の脱硫酸化手段が、アルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物を使用する加水分解反応であることを特徴とする請求項３〜６のいずれか一項記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
【請求項８】  培地中の最終濃度1μg/ml〜10μg/mlのグリコサミノグリカン誘導体をWistar系ラット大脳皮質の初代培養細胞に接触させた際の該細胞の神経突起伸張活性が、同濃度範囲内の標準ヘパリンと比して1.5倍以上であることを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその塩。
【請求項９】  請求項１〜８のいずれか一項に記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその薬理学的に許容し得る塩を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】  医薬組成物が神経疾患治療剤であることを特徴とする請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１１】  神経疾患治療剤が中枢神経疾患治療剤であることを特徴とする請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】  神経疾患治療剤が末梢神経疾患治療剤であることを特徴とする請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１３】  請求項１〜８のいずれか一項に記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその薬理学的に許容し得る塩を有効成分として含有することを特徴とするシアリダーゼ阻害剤。
【請求項１４】  インフルエンザウイルスのシアリダーゼを阻害する阻害剤であることを特徴とする請求項１３記載のシアリダーゼ阻害剤。
【請求項１５】  インフルエンザ治療剤であることを特徴とする請求項１３又は１４記載のシアリダーゼ阻害剤。
【請求項１６】  下記の工程(i)及び(ii)を含む、ヘキソサミンとヘキスロン酸の繰り返し単位構造を基本骨格とし、該ヘキスロン酸はその一部が２位と３位の炭素原子間で開裂されているグリコサミノグリカン誘導体の製造法。
(i)  ヘキソサミンとヘキスロン酸の繰り返し単位構造を基本骨格とする硫酸化グリコサミノグリカンを開裂処理して、その骨格中に存在する２位に硫酸基を有しないヘキスロン酸の少なくともその一部を２位と３位の炭素原子間において選択的に開裂する工程、
(ii)  ヘキスロン酸の２位の硫酸基を特異的に除去しうる脱硫酸化手段により工程(i)の生成物を脱硫酸化処理して、２位に硫酸基を有する全ヘキスロン酸の90％以上の当該硫酸基を脱硫酸化する工程。
【請求項１７】  ヘキソサミンとヘキスロン酸の繰り返し単位構造を基本骨格とする硫酸化グリコサミノグリカンがヘパリンであることを特徴とする請求項１６記載のグリコサミノグリカン誘導体の製造法。
【請求項１８】  工程(i)の開裂処理が、過ヨウ素酸塩を使用する酸化的開裂反応を含むことを特徴とする請求項１６又は１７記載のグリコサミノグリカン誘導体の製造法。
【請求項１９】  工程(i)において、更に酸化的開裂反応生成物を還元することを特徴とする請求項１８記載のグリコサミノグリカン誘導体の製造法。
【請求項２０】  工程(ii)の脱硫酸化反応が、アルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物を使用する加水分解反応であることを特徴とする請求項１６〜１９のいずれか一項記載のグリコサミノグリカン誘導体の製造法。
【請求項２１】  請求項１〜８のいずれか一項に記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその薬理学的に許容し得る塩を有効成分として含有することを特徴とする神経突起伸張剤。
【請求項２２】  請求項１〜８のいずれか一項に記載のグリコサミノグリカン誘導体又はその薬理学的に許容し得る塩を有効成分として含有することを特徴とする神経細胞死抑制剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
（１）標準ヘパリン及び本発明物質の分解酵素による消化
新生化学実験講座３、糖質II  p.53−59に記載の方法により消化酵素で分解した。標準ヘパリン及び本発明物質各1.0mgを2mM酢酸カルシウムを含む20mM酢酸ナトリウム（pH7.0）220μlに溶解して、20mUのヘパリナーゼ、20mUのヘパリチナーゼI及びIIを加えて、37℃で2時間反応させた。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
4.神経細胞救済活性の測定
本発明物質の運動神経細胞に対する細胞救済活性を測定した。
すなわち、予め0.1%ポリエチレンイミンで処理した96穴マルチプレートにNSC-34細胞（Cashman氏(トロント大学)より恵与：マウスの運動神経由来培養細胞株）1×105個/mlを含む無血清のDMEM培地0.09mlを添加して培養を行う。2時間の培養後、本発明物質の100、1000、10000μg/mlの水溶液10μlを添加した（それぞれの培地中の最終濃度は10、100、1000μg/ml ）。その後、46時間培養を継続し、MTT法を用いて生存細胞数を血球計数板を用いて測定した。2時間の培養後の生存細胞数と比較して、本発明物質を添加しなかった対照の48時間培養後の死細胞数を100%として、本発明物質を添加した際の死細胞数との差（細胞死から救済された細胞数）の割合を百分率として算出した（図６）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
（５）軟膏剤
前記の本発明物質の凍結乾燥物100mg、鉱油4g、石油ゼリー8g、混合メチル／プロピルパラベン60mg、非イオン性界面活性剤1g及び精製水30gを均一に混合し、この混合物を容器に充填して軟膏剤を製造した。