(57)【要約】【課題】手間をかけずに細胞を操作できる細胞操作用器具を提供する。【解決手段】細胞を操作する際に使用する細胞操作用器具１であって、第一の溶液が充填される第一ウェル８を有する本体部２と、本体部２の上面に剥離可能な状態で設けられたシール材３とを備え、第一ウェル８に第一の溶液が充填された状態で、シール材３が第一ウェル８の開口部２０の周縁部２０Ａに密着され、シール材３によって第一ウェル８が密閉されている構成をとる。【選択図】図１
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【実用新案登録請求の範囲】
【請求項１】
細胞を操作する際に使用する細胞操作用器具であって、
第一の溶液が充填される第一ウェルを有する本体部と、前記本体部の上面に剥離可能な状態で設けられたシール材と、を備え、
前記第一ウェルに前記第一の溶液が充填された状態で、前記シール材が前記第一ウェルの開口部の周縁部に密着され、前記シール材によって前記第一ウェルが密閉されている、
ことを特徴とする細胞操作用器具。
【請求項２】
前記第一ウェルは、底部と、前記底部に連なって形成された、湾曲状の内周壁とを有し、
前記底部及び前記内周壁を複数に仕切るための凸部が、前記第一ウェルの中心から前記底部及び前記内周壁に沿って、複数設けられ、
前記凸部から前記底部にかけて隆起部が形成されることで、前記底部に、前記底部の中心を囲うように凹部が形成され、前記凹部に細胞が沈降される、
ことを特徴とする請求項１に記載の細胞操作用器具。
【請求項３】
前記凸部が、前記第一ウェルにのみ形成され、
前記本体部は、前記第一ウェルに隣り合って形成され、第二の溶液が充填される第二ウェルを有し、
前記第二ウェルに前記第二の溶液が充填された状態で、前記シール材が前記第二ウェルの開口部の周縁部に密着され、前記シール材によって前記第二ウェルが密閉されている、
ことを特徴とする請求項２に記載の細胞操作用器具。
【請求項４】
前記第一ウェルが密閉された前記シール材と前記第二ウェルが密閉された前記シール材との間に切込みが形成されている、
ことを特徴とする請求項３に記載の細胞操作用器具。
【請求項５】
前記凸部は、前記内周壁に沿って、かつ湾曲状に形成され、
前記凸部の高さが、１００μｍから１０００μｍであり、かつ前記内周壁から前記底部の中心にかけて、次第に高くなる、
ことを特徴とする請求項２から請求項４の何れか一項に記載の細胞操作用器具。
【考案の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本考案は、手間をかけずに細胞を操作することができる細胞操作用器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ヒトの不妊治療において、卵子や胚の凍結保存が注目されている。
従来、哺乳動物の卵子等の凍結保存方法として、バイアルやストロー等の凍結保存用容器の内面に、卵や胚等をガラス化液で包被して貼り付け、凍結保存用容器を密封した後、液体窒素に接触させて急速に冷却する方法が知られている（例えば、特許文献１）。
これまでに、損傷をほとんど与えずに受精卵を保存できるガラス化保存技術や保存されていた受精卵を融解する技術が桑山らによって報告されている。このガラス化保存技術には細胞凍結前処理用プレートが利用され、受精卵の融解技術には、細胞融解処理用プレートが利用されている。
【０００３】
この細胞凍結前処理用プレート（細胞凍結前処理器具）は、平衡液やガラス化液が分注される複数のウェルを有する本体と、本体の上側から被せる蓋体とを有している。細胞凍結前処理プレートの使用者は、本体から蓋体を取り外した後、ウェルに平衡液やガラス化液を充填し、受精卵の前処理を行う。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０００−１８９１５５号公報
【考案の概要】
【考案が解決しようとする課題】
【０００５】
受精卵を凍結させる場合、１つの受精卵を取り出し、1つの細胞凍結前処理用プレートを使用して凍結操作を行っていた。しかし、複数の受精卵を凍結する際には、その都度、細胞凍結前処理用プレートや平衡液、ガラス化液を交換する必要があったため、操作に煩わしさがあった。
【０００６】
また、上記の細胞凍結用プレートは、使用する際、使用者が１つのウェルに平衡液を充填し、さらに他のウェルにガラス化液を充填した後、受精卵を凍結させるための前処理を行う。そのため、使用者は、各ウェルに平衡液やガラス化液を分注する作業を行わなければならず、手間が生じていた。さらに、平衡液やガラス化液を分注するウェルを間違えてしまった場合、新しい細胞凍結前処理用プレートを使用しなければならず、手間が生じていた。
【０００７】
そこで、本考案は、手間をかけずに細胞を操作できる細胞操作用器具を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本考案に係る細胞操作用器具は、細胞を操作する際に使用するものであって、第一の溶液が充填される第一ウェルを有する本体部と、本体部の上面に剥離可能な状態で設けられたシール材と、を備え、第一ウェルに第一の溶液が充填された状態で、シール材が第一ウェルの開口部の周縁部に密着され、シール材によって第一ウェルが密閉されていることを特徴とする。
【０００９】
本考案に係る細胞操作用器具は、第一ウェルが底部と、底部に連なって形成された湾曲状の内周壁とを有し、底部及び内周壁を複数に仕切るための凸部が第一ウェルの中心から底部及び内周壁に沿って、複数設けられ、凸部から底部にかけて隆起部が形成されることで、底部に、底部の中心を囲うように凹部が形成され、凹部に細胞が沈降されることを特徴とする。
【００１０】
本考案に係る細胞操作用器具は、凸部が第一ウェルにのみ形成され、本体部が第一ウェルに隣り合って形成され、第二の溶液が充填される第二ウェルを有し、第二ウェルに第二の溶液が充填された状態で、シール材が第二ウェルの開口部の周縁部に密着され、シール材によって第二ウェルが密閉されていることを特徴とする。
【００１１】
本考案に係る細胞操作用器具は、第一ウェルが密閉されたシール材と第二ウェルが密閉されたシール材との間に切込みが形成されていることを特徴とする。
【００１２】
本考案に係る細胞操作用器具は、凸部が内周壁に沿って、かつ湾曲状に形成され、凸部の高さが１００μｍから１０００μｍであり、かつ内周壁から底部の中心にかけて、次第に高くなることを特徴とする。
【考案の効果】
【００１３】
本考案に係る細胞操作用器具は、第一ウェルに第一の溶液が充填された状態でシール材によって密閉されているため、使用者は、第一ウェルに第一の溶液を充填する手間が省ける。また、本考案に係る細胞操作用器具は、本体部の上面にシール材を設けることで、従来使用していた蓋体が不要となり、さらに第一の溶液を第一ウェルに注入する際に使用していた器具も不要となるため、経済的にコストを低く抑えることができる。
【００１４】
本考案に係る細胞操作用器具は、凸部によって仕切られた底部と、仕切られた内周壁が連通し、この内周壁が湾曲状に形成されているため、どの位置から細胞を投入しても、内周壁を伝わらせ、底部の凹部に確実に誘導することができる。さらに、この細胞操作用器具は、隆起部を形成することで、凸部から離れた位置に凹部を形成することができ、第一ウェルに投入された細胞は、この凹部に確実に沈降させることができ、良好な視界で細胞を観察及び操作することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本考案の第一実施形態に係る細胞操作用器具の斜視図である。
【図２】本考案の第一実施形態に係る細胞操作用器具の本体部（プレート本体）の平面図である。
【図３】本考案の第一実施形態に係る細胞操作用器具の図２におけるＡ−Ａ断面図である。
【図４】本考案の第一実施形態に係る細胞操作用器具の図２におけるＢ−Ｂ断面図である。
【図５】本考案の第一実施形態に係る細胞操作用器具の第一ウェルの変形例を示す拡大断面図である。
【図６】本考案の第一実施形態に係る細胞操作用器具の第一ウェルの変形例を示す拡大断面図である。
【図７】本考案の第一実施形態に係る細胞操作用器具の凸部の断面図である。（ａ）半楕円状の断面を有する凸部の断面図、（ｂ）半円状の断面を有する凸部の断面図、（ｃ）三角形状の断面を有する凸部の断面図
【図８】本考案の第一実施形態のその他の例に係る細胞操作用器具の斜視図である。
【図９】本考案の第一実施形態のその他の例に係る細胞操作用器具の本体部（プレート本体）の平面図である。
【図１０】本考案の第一実施形態のその他の例に係る細胞操作用器具の本体部（プレート本体）の平面図である。
【図１１】本考案の第一実施形態のその他の例に係る細胞操作用器具の図１０におけるＣ−Ｃ断面図である。
【図１２】本考案の第二実施形態に係る細胞操作用器具の本体部（プレート本体）の平面図である。
【図１３】本考案の第二実施形態に係る細胞操作用器具の図１２におけるＤ−Ｄ断面図である。
【考案を実施するための形態】
【００１６】
［第一実施形態］
本実施形態に係る細胞操作用器具を、図１から図１１を参照し説明する。この細胞操作用器具は、種々の細胞を操作する際に使用することができる。本実施形態では、未受精卵や受精卵（胚盤胞など）の細胞を凍結する前段階で操作する細胞操作用器具を例に、説明する。
【００１７】
本実施形態に係る細胞操作用器具１は、図１に示すように、ウェルを有するプレート本体（本体部）２と、このプレート本体２の上面に設けられた１枚のシール材３とを備えている。
以下、図１を基準として、プレート本体２の長手方向を左右方向Ｘ、プレート本体２の短手方向を前後方向Ｙ、プレート本体２の高さ方向を上下方向Ｚと記す。
【００１８】
プレート本体２は、図２に示したように、横長の形状を有し、前壁４、前壁４と対向する後壁５、前壁４と後壁５と連なって形成される左側壁６及び右側壁７を有している。
プレート本体２は、透明な素材で構成され、例えば、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、アクリル、ガラスで構成される。プレート本体２のサイズは、左右方向Ｘの長さＬ１が５．５ｃｍから７．５ｃｍ、前後方向Ｙの長さＬ２が２ｃｍから３．５ｃｍに設計されている。
【００１９】
プレート本体２は、図３に示したように、左右方向Ｘに向けて、略半円球状の第一ウェル８、第二ウェル９、第三ウェル１０が形成されている。第二ウェル９は、第一ウェル８に隣り合って形成され、第三ウェル１０は、第二ウェル９に隣り合って形成されている。第一ウェル８の直径は１．５ｍｍ、深さは５ｍｍであり、第二ウェル９及び第三ウェル１０の直径及び深さは、第一ウェル８とほぼ同じに設計されている。
第一ウェル８には、平衡液ＥＳ（Ｅｑｕｉｌｉｂｒａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）が充填され、第二ウェル９及び第三ウェル１０には、ガラス化液ＶＳ（Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）が充填される。
なお、プレート本体２のサイズは、第一ウェル８から第三ウェル１０のサイズや個数、配列によって適宜変更される。また、第一ウェル８から第三ウェル１０の直径や深さもプレート本体２のサイズ等によって、適宜変更される。また、第一ウェル８に充填される溶液を第一の溶液、第二ウェル９に充填される溶液を第二の溶液、第三ウェル１０に充填される溶液を第三の溶液とする。
【００２０】
プレート本体２において、左側壁６と第一ウェル８との間、第一ウェル８と第二ウェル９との間、第二ウェル９と第三ウェル１０との間、第三ウェル１０と右側壁７との間には、それぞれ凹状の廃液部１１形成されている（図２）。この廃液部１１は、不要となった平衡液ＥＳやガラス化液ＶＳを廃棄するために使用される。なお、平衡液ＥＳ及びガラス化液ＶＳは、後述する。
プレート本体２の後方には、左右方向Ｘに向けて１つの溝部１２が形成されている（図２）。この溝部１２には、受精卵を凍結する際に使用する細胞凍結具が載置される。この溝部１２は、１つに限定されず、複数形成することもできる。
【００２１】
第一ウェル８は、図４に示すように、湾曲状の底部８Ａと、この底部８Ａと連なって形成される側壁部（内周壁）８Ｂとを有している。この第一ウェル８には、底部８Ａには、２つの凸部１３が形成され、この凸部１３は平面視したときに、底部８Ａの中心において、９０度で交差するように設けられている（図２）。そのため、これらの凸部１３は、底部８Ａの中心から側壁部８Ｂに沿って形成されている。
凸部１３の先端は、湾曲状に形成され、凸部１３の高さＨは４００μｍ、凸部１３の幅は１００μｍに設計されている。この凸部１３の高さＨは、操作性や受精卵が凸部１３を飛び越えてしまうことを回避するために、１００μｍから１０００μｍであることが好ましい。また、凸部１３の高さＨは、側壁部８Ｂから底部８Ａにかけて、次第に高くなっていることが好ましい（図５）。なお、この凸部１３の高さＨや幅は、適宜変更することができる。
【００２２】
さらに、第一ウェル８の周囲には、目印である数字（１から４）が施されている（図２）。目印を施すことで、仕切られた底部８Ａの区別が容易にできる。
【００２３】
第一ウェル８の底部８Ａには、凸部１３にかけて隆起部１３Ａが形成されている。隆起部１３Ａが形成されていることで、凸部１３によって仕切られた各底部８Ａには、凸部１３から少し離れた位置に凹部１３Ｂが形成される。そのため、底部８Ａに、底部８Ａの中心を囲うように凹部１３Ｂが形成される。
第一ウェル８には交差する２つの凸部１３が設けられているため、底部８Ａは、４つに分割される。この底部８Ａに設ける凸部１３の数、つまり、分割された底部８Ａの数によって、静置できる受精卵の数が決定される。
本実施形態では、２つの凸部１３によって仕切られることで、底部８Ａが４つに分割されているが、凸部１３の数は、２つに限定されず、１つ以上設けられていればよい。なお、凸部１３の数を多くすると、１つ当たりの仕切られた底部８Ａの面積が小さくなり、操作性を損なうおそれたがあるため、４つに分割することが最もよい。
【００２４】
第一ウェル８には平衡液ＥＳ（第一の溶液）、第二ウェル９及び第三ウェル１０にはガラス化液ＶＳ（第二の溶液、第三の溶液）がそれぞれ３００μＬ分注される。
ここで、ガラス化液ＶＳとは、細胞をガラス化するために必要な凍結保護物質を含む溶液であり、平衡液ＥＳとは、ガラス化液ＶＳよりも低濃度の凍結保護物質を含む溶液である。ガラス化液ＶＳ及び平衡液ＥＳは、受精卵への損傷が軽減される組成で調整されている。
【００２５】
シール材３は、各ウェルの内側と外側を遮断するために設けられ、第一ウェル８に平衡液ＥＳ、第二ウェル９及び第三ウェル１０にガラス化液ＶＳがそれぞれ充填された後に、プレート本体２に剥離可能な状態で貼り付けられる。具体的には、シール材３は、プレート本体２の上面の縁部と、第一ウェル８の開口部２０の周縁部２０Ａ、第二ウェル９の開口部２１の周縁部２１Ａ、第三ウェル１０の開口部２２の周縁部２２Ａに密着するように、貼り付けられる（図３）。そうすると、第一ウェル８の開口部２０、第二ウェル９の開口部２１及び第三ウェル１０の開口部２２は、シール材３によって塞がれ、各ウェル８から１０は密閉される。
このシール材３には、例えば、ポリエチレンテレフタラート、ポリ塩化ビニル、ポリスチレンを使用する。
【００２６】
次に、本実施形態に係る細胞操作用器具１の使用方法について、４つの受精卵を凍結する場合について、説明する。
【００２７】
初めに、細胞操作用器具１の上面からシール材３を剥がし、第一ウェル８から第三ウェル１０を全開する。
次に、受精卵を平衡液ＥＳが充填されている第一ウェル８に投入し、凸部１３で仕切られた４つの底部８Ａのうちの１つに沈降させる。そして、２つ目の受精卵を同様に、第一ウェル８に投入し、１つ目とは異なる底部８Ａに沈降させる。残り２つの受精卵も同様な操作により、仕切られた底部８Ａにそれぞれ沈降させる。
各受精卵は、凸部１３によって仕切られた各底部８Ａに沈降するため、第一ウェル８の内部では、受精卵同士は接触しない。
【００２８】
各受精卵を、約１５分間、第一ウェル８内で静置させ、このときに、平板状の細胞凍結具を溝部１２に載置する。
次に、受精卵と平衡液ＥＳをキャピラリーで吸引し、第二ウェル９に投入する。この際、キャピラリーの内部に残留した平衡液ＥＳは、廃液部１１に捨てる。その後、キャピラリーを第二ウェル９及び第三ウェル１０の内部のガラス化液ＶＳで共洗いし、受精卵とガラス化液ＶＳを吸引する。吸引した受精卵は、第三ウェル１０に投入される。
【００２９】
第三ウェル１０の内部のガラス化液ＶＳを、キャピラリーで攪拌し、受精卵の状態を確認した後、キャピラリーを第三ウェル１０の内部のガラス化液ＶＳで共洗いする。そして、キャピラリーで吸引した受精卵を、細胞凍結具の先端にドロップさせ、液体窒素で凍結させる。
以上の操作を、第一ウェル８に沈降させた各受精卵について行い、１つの細胞操作用器具１を使用して、４つの受精卵が凍結される。
【００３０】
次に、本実施形態に係る細胞操作用器具１の作用効果について説明する。
【００３１】
本実施形態に係る細胞操作用器具１では、各ウェル８から１０に各溶液（平衡液ＥＳ、ガラス化液ＶＳ）が充填された状態で、シール材３によって密閉されている。そのため、使用者は、各ウェル８から１０に所望の溶液を充填する手間が省ける。また、各溶液を各ウェルに注入する際に使用していた器具（例えば、ピペット）も不要となるため、経済的にコストを低く抑えることができる。
また、初めから各ウェル８から１０に各溶液が充填されていることで、使用者の液体の入れ間違えを防止できる。
【００３２】
また、この細胞操作用器具１では、プレート本体２の上面にシール材３を設けることで、従来使用していた蓋体が不要となる。蓋体が不要となれば、経済的にもコストも低く抑えることができ、受精卵の凍結をより安価で行うことができる。
【００３３】
本実施形態に係る細胞操作用器具１は、第一ウェル８の少なくとも底部８Ａに２つの凸部１３を設けることで、底部８Ａが凸部１３で仕切られる。そうすると、底部８Ａは、４つの底部８Ａに分割され、各底部８Ａに各受精卵を沈降させることができる。
このように、本実施形態に係る細胞操作用器具１を使用することで、４つの受精卵の凍結操作に対し、１つの細胞操作用器具１で足りるため、１つの受精卵の凍結のために、１つの器具（プレート本体）を使用する場合と比べ、迅速に受精卵を取り扱うことができる。さらに、使用する器具の個数や平衡液ＥＳ、ガラス化液ＶＳの量を少なくすることができ、受精卵の凍結をより安価で行うことができる。
【００３４】
また、底部８Ａは、隆起部１３Ａが形成されているため、各底部８Ａには、凸部１３から少し離れた位置に凹部１３Ｂが形成される。そうすると、第一ウェル８に投入された受精卵は、この凹部１３Ｂに沈降するため、凸部１３が観察の妨げにならず、良好な視界で受精卵を観察できる。さらに、受精卵は凹部１３Ｂに沈降するため、この凹部１３Ｂの位置に顕微鏡のレンズを合わせることで、迅速に受精卵を確認できる。
【００３５】
本実施形態に係る細胞操作用器具１は、凸部１３が底部８Ａから側壁部８Ｂにかけて設けられている。そうすると、凸部１３が誘導部となり、第一ウェル８に投入された受精卵が平衡液ＥＳ内で目的の底部８Ａまで誘導される。そのため、受精卵を目的の底部８Ａまで誘導しやすくなり、操作性が高くなる。
【００３６】
本実施形態に係る細胞操作用器具１は、プレート本体２に廃液部１１が複数形成されている。受精卵の凍結操作の際に、共洗い等で生じる廃液を、これらの廃液部１１に捨てることができる。廃液部１１は、第一ウェル８から第三ウェル１０に近接した位置に形成されているため、廃液操作を円滑に行うことができる。
【００３７】
次に、第一ウェル８の底部８Ａの形状、及び凸部１３の形状の変形例について説明する。
第一ウェル８の底部８Ａには、図５に示すように、隆起部１３Ａを設けず、湾曲状の底部８Ａに凸部１３のみを設けることもできる。この際、底部８Ａと側壁部８Ｂは、同じ曲率で形成されている。また、図６に示すように、底部８Ａを扁平状に形成することもできる。どちらの形状にした場合でも、１つの第一ウェル８で、複数の受精卵を凍結操作することができる。
【００３８】
凸部１３は、図７に示したように、短手方向における断面が半楕円状（図７（ａ））、半円状（図７（ｂ））、三角形状（図７（ｃ））とし、凸部１３の上端から下端に向けて傾斜する傾斜面１５を有する形状とすることができる。傾斜面１５を備えることで、例えば、受精卵が凸部１３の上端に沈降した場合でも、傾斜面１５を伝わらせて、底部８Ａに沈降させることができる。
また、傾斜面１５の上端を湾曲した半楕円球状や円球状とした場合、受精卵が傾斜面１５の先端に接触した際に、損傷させることなく、底部８Ａに沈降させることができる。
【００３９】
以上のように、本実施形態に係る細胞操作用器具１は、平衡液ＥＳが注入される第一ウェル８を有するプレート本体２を備え、細胞を凍結する前段階で使用することができ、第一ウェル８は、湾曲状に形成された底部８Ａと、底部８Ａに連なって形成された、湾曲状の内周壁８Ｂとを備えている。そして、底部８Ａ及び内周壁８Ｂを複数に仕切るための凸部１３が、第一ウェル８の中心から底部８Ａ及び内周壁８Ｂに沿って、複数設けられ、凸部１３によって仕切られた底部８Ａと、仕切られた内周壁８Ｂが連通し、かつ凸部１３から底部８Ａにかけて隆起部１３Ａが形成されることで、仕切られた底部８Ａに、凹部１３Ｂが形成され、この凹部１３Ｂに細胞が沈降される。
【００４０】
また、細胞操作用器具１において、図８及び図９に示すように、プレート本体２に設けられたシール材３に、切込み３Ａを形成することもできる。具体的には、切込み３Ａは、第一ウェル８を密閉するシール材３と第二ウェル９を密閉するシール材３との間、第二ウェル９を密閉するシール材３と第三ウェル１０を密閉するシール材３との間の前後方向Ｙに向けて、それぞれ形成されている。
【００４１】
シール材３に切込み３Ａを形成することで、ウェルごとに全開とすることができる。そうすると、例えば、第一ウェル８を密閉しているシール材３のみを剥がし、第一ウェル８の内部で細胞を操作している際は、第二ウェル９及び第三ウェル１０は、密閉されているため、第一ウェル８の平衡液ＥＳが、隣接する第二ウェル９のガラス化液ＶＳに混じることを防止できる。
【００４２】
さらに、本実施形態に係る細胞操作用器具１では、図１０及び図１１に示すように、溝部１２を覆うように、シール材３をプレート本体２の上面の全体に貼り付けることもできる。この際、シール材３の一端は、後壁５に貼り付けられ、溝部１２の先端及び後端とシール材３との間に隙間（空間）が生じる。
【００４３】
溝部１２の先端及び後端に隙間が形成されることで、この隙間に指を入れ、シール材３を剥がすことができる。そのため、上面の全体にシール材３が設けられていない場合と比較し、シール材３を容易に剥がすことができ、操作性が高くなる。
なお、シール材３が全面に設けられた細胞操作用器具１においても、上述した切込み３Ａを設けることができる。
【００４４】
［第二実施形態］
本実施形態では、凍結された未受精卵や受精卵（胚盤胞など）を融解する操作に使用する細胞操作用器具１Ａについて、図１２及び図１３を参照して説明する。
【００４５】
本実施形態に係る細胞操作用器具１Ａは、図１２に示すように、プレート本体（本体部）２と、このプレート本体２の上面に設けられた１枚のシール材３とを備え、前壁４、前壁４と対向する後壁５、前壁４と後壁５と連なって形成される左側壁６及び右側壁７を有している。プレート本体２は、左右方向Ｘに向けて、略半円球状の第一ウェル８、第二ウェル９、第三ウェル１０が形成されている。また、第一ウェル８の左右方向Ｘの左方には、略四角形の第四ウェル３０が形成されている。この第四ウェル３０は、図１３に示すように、左右方向Ｘにおいて、左方から右方に向けて傾斜する傾斜面３１を有している。細胞操作用器具１Ａを使用する際、第四ウェル３０には、融解液ＴＳ（Ｔｈａｗｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（第四の溶液）が分注される。
【００４６】
シール材３は、第一ウェル８に希釈液ＤＳ（Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（第一の溶液）、第二ウェル９に洗浄液ＷＳ１（Ｗａｓｈｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  １）（第二の溶液）及び第三ウェル１０に洗浄液ＷＳ２（Ｗａｓｈｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ２）（第三の溶液）がそれぞれ充填された後に、プレート本体２に剥離可能な状態で貼り付けられる。
具体的には、シール材３は、第一ウェル８の開口部２０の周縁部２０Ａ、第二ウェル９の開口部２１の周縁部２１Ａ及び第三ウェル１０の開口部２２の周縁部２２Ａに密着するように、プレート本体２の上面に貼り付けられている。このシール材３によって、第一ウェル８から第三ウェル１０は密閉される。この際、第四ウェル３０は、シール材３によって、密閉されていない。
【００４７】
なお、細胞操作用器具１Ａは、第四ウェル３０を備える点、第一ウェル８に凸部１３が形成されていない点及び溝部１２が形成されていない点で、第一実施形態に係る細胞操作用器具１と主として相違している。また、素材や、第一ウェル８から第三ウェル１０のサイズは、ほぼ同じに設計されている。
【００４８】
次に、本実施形態に係る細胞操作用器具１Ａの使用方法をについて、説明する。
【００４９】
まず、３７度にプレインキュベートした融解液ＴＳを第四ウェル３０に注入し、直ちにこの融解液ＴＳに凍結された受精卵を１分間浸漬させる。浸漬後、シール材３をプレート本体２から剥がし、第一ウェル８、第二ウェル９及び第三ウェル１０を全開にする。
その後、受精卵を第一ウェル８の希釈液ＤＳに投入し、３分間希釈化する。次に、希釈化された受精卵を第二ウェル９の洗浄液ＷＳ１に投入し、５分間洗浄する。最後に、第三ウェル１０の洗浄液ＷＳ２に投入し、洗浄を完了する。洗浄後、受精卵は、胚移植などに使用される。
【００５０】
本実施形態に係る細胞操作用器具１Ａでは、第一ウェル８から第三ウェル１０に所望の溶液（希釈液ＤＳ、洗浄液ＷＳ１，ＷＳ２）が充填された状態でシール材３によって密閉されているため、使用者は、各ウェル８から１０に所望の溶液を充填する手間が省ける。また、各ウェル８から１０に所望の溶液が充填されていることで、使用者の溶液の入れ間違えも防止することができる。さらに、この細胞操作用器具１Ａでは、蓋体が不要となるため、コストも低く抑えることができ、受精卵の凍結をより安価で行うことができる。
【００５１】
以上、本実施形態について説明したが、これ以外にも、本考案の主旨を逸脱しない限り、上記実施の形態で挙げた構成を取捨選択したり、他の構成に適宜変更することが可能である。例えば、本実施形態では、凸部１３を設ける例について説明したが、第一ウェル８の内部に仕切り板を設けることでも、複数の受精卵を接触させずに、取り扱うことができる。
また、本実施形態では、凸部１３を底部８Ａから側壁部８Ｂにかけて設けた例について説明したが、凸部１３は、底部８Ａを複数に仕切ることができればよいため、底部８Ａにのみ設けてもよい。
【００５２】
第一ウェル８から第三ウェル１０の内周壁は、湾曲状以外にも、テーパ状にすることもできる。また、受精卵や未受精卵を凍結する前段階で使用する場合、ウェルの個数は３つに限定されず、平衡液ＥＳの分注用、ガラス化液ＶＳの分注用のウェルを備えていればよい。なお、操作する細胞に応じて、プレート本体２は、第一ウェル８のみ備えていてもよい。
【００５３】
また、凸部１３の短手方向における断面の形状は、実施形態に示したものに限定されず、例えば、四角形状や台形状、上端部が両側にそり返された形状でもよい。さらに、プレート本体２の溝部１２は、載置する細胞凍結具の把持部の形状に対応させた形状とすることができ、例えば、細胞凍結具の把持部が六角形状の場合、溝部１２の形状を六角形状にすることができる。
【００５４】
本実施形態では、１枚のシール材３を使用した例について説明したが、例えば、ウェルごとにシール材３で密閉することもできる。また、第一実施形態に係る細胞操作賞器具１同様、第二実施形態に係る細胞操作用器具１Ａのシール材３に、切込み３Ａを形成することもできる。また、細胞操作用器具１Ａにおいて、第四ウェル３０をシール材３で密封することもできる。
【符号の説明】
【００５５】
１，１Ａ  細胞操作用器具（器具）
２      プレート本体（本体部）
３      シール材
３Ａ    切込み
４      前壁
５      後壁
６      左側壁
７      右側壁
８      第一ウェル
８Ａ    底部
８Ｂ    側壁部（内周壁）
９      第二ウェル
１０    第三ウェル
１１    廃液部（廃液用凹部）
１２    溝部
１３    凸部
１３Ａ  隆起部
１３Ｂ  凹部
１５    傾斜面
２０，２１，２２  開口部
２０Ａ，２１Ａ，２２Ａ  周縁部
３０    第四ウェル
３１    傾斜面
ＥＳ    平衡液（第一の溶液）
ＶＳ    ガラス化液（第二の溶液、第三の溶液）
ＤＳ    希釈液（第一の溶液）
ＷＳ１  洗浄液（第二の溶液）
ＷＳ２  洗浄液（第三の溶液）
ＴＳ    融解液（第四の溶液）
Ｈ      高さ
Ｌ１、Ｌ２  長さ
Ｘ      左右方向
Ｙ      前後方向
Ｚ      上下方向
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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