【手続補正書】
【提出日】平成18年3月1日(2006.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】明細書【発明の名称】グルコマンナンの修飾誘導体からなる生検試料の定着支持剤とその製造方法。【特許請求の範囲】     【請求項１】 こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収することを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナン酸化物(グルコマンナンカルボン酸)からなる生検試料の定着支持剤。     【請求項２】 こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収して、水酸化ナトリウム水溶液を代表とするアルカリ金属イオン又はアンモニウムイオンの水酸化物溶液の中で中和溶解し、それを濾過して得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナンカルボン酸ナトリウム(アルカリ金属イオンまたはアンモニウムイオンＭ＋での中和物)からなる生検試料の定着支持剤。     【請求項３】 こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナン酸化物を濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈殿させて回収してグルコマンナン酸化物を精製誘導し、乾燥後このグルコマンナン酸化物の中の酸化されずに残ったアルコール基（特にグリコール基:−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−)を無水酢酸(氷酢酸含む)系とのエステル反応させて水中で回収・洗浄・精製作製して得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体である酸化グルコマンナンアセチル化物からなる生検試料の定着支持剤。     【請求項４】  こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物からなる生検試料の定着支持剤。      【請求項５】 こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収することを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナン酸化物(グルコマンナンカルボン酸)からなる生検試料の定着支持剤の製造方法。      【請求項６】 こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収して、水酸化ナトリウム水溶液を代表とするアルカリ金属イオン又はアンモニウムイオンの水酸化物溶液の中で中和溶解し、それを濾過して得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナンカルボン酸ナトリウム(アルカリ金属イオンまたはアンモニウムイオンＭ＋での中和物)からなる生検試料の定着支持剤の製造方法。      【請求項７】 こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈殿させて回収してグルコマンナン酸化物を精製誘導し、乾燥後このグルコマンナン酸化物の中の酸化されずに残ったアルコール基(特にグリコール基:−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−)を無水酢酸(氷酢酸含む)系とのエステル反応させて水中で回収・洗浄・精製作製し��得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体である酸化グルコマンナンアセチル化物からなる生検試料の定着支持剤の製造方法。      【請求項８】  こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物からなる生検試料の定着支持剤の製造方法。【発明の詳細な説明】      【０００１】      【発明の属する技術分野】  この発明は、臨床医が患者の病気の診断を行うとき、及びその病気の治療法を決める際に必要な、患者から採取した生検試料を、病理検査室等に移送して、そこで顕微鏡検査をすることのできる薄切り標本にするまでのいくつかの処理過程の内、上記患者から採取した生検試料を薄切り標本にするまでの間に腐敗等の変質を起こさないように、採取した時の当初の状態で定着すると共に、異なる患者の複数の生検試料の相互混入、または生検採取部位の相互入れ換わりや、生検試料の紛失が生じないように支持するための生検試料の定着支持剤の改良に関する。      【０００２】      【従来の技術】  従来の生検試料の定着支持剤は、黒皮部分を厚く剥いだこんにゃく芋の荒粉を搗いてそれを風選して得られる精製マンナン８．４ｇをホルマリン原液１００ｍｌ、第１リン酸ナトリウム(ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ)４．０ｇ、無水第２リン酸ナトリウム(Ｎａ２ＨＰＯ４)６．５ｇ、蒸留水９００ｍｌからなる１０％中性緩衝ホルマリン１０００ｍｌの溶媒に溶解して得るものである。(特願平７−１６９０３号参照)      【０００３】  この定着支持剤は、上述のようにカセット内に収容した生検試料を定着支持剤で包埋した際、定着支持剤を介してその外側から埋設した生検試料を見えるようにするために、定着支持剤をより透明にすることが必要であると共に、これを臨床医室から病理室に移送する際、生検試料をカセット内で変位させないようにするため、定着支持剤をゲル化し易く、凝集力を強くし、ゲル化時の収縮率は小さくしておくことが望ましい。また、なるべく多くの染色色素、特に日常検査で使用するＨＥ染色、ＰＡＳ染色、アルシアン青染色、ムチカルミン染色や、ギムザ染色や、多くの繊維染色等には染まらない方が望ましい。      【０００４】      【発明が解決しようとする課題】  この発明の目的は、生検試料を定着支持剤中に埋設した状態でミクロトームの刃で薄切りする際、その刃を傷めないようにするために、定着支持剤中にマンナンの殻や灰分等の不純物が混入する可能性をできる限り除去することである。      【０００５】  他の目的は、定着支持剤中に埋設した生検試料を定着支持剤の外側から、前記従来の定着支持剤の場合より、より見え易くするために、定着支持剤の透明度を一層高めて、生検試料のカセット内における姿勢を確認し易くすることである。      【０００６】  また他の目的は、生検試料を埋設した定着支持剤を従来のものよりゲル化しく、凝集��を強化し、ゲル化時の収縮率を小さくして、カセットに収容した状態で生検試料を移送する際、その生検試料の姿勢や位置がカセット内で変化しないようにし、且つゲル化時に試料が定着支持剤によって圧縮されないようにすることである。      【０００７】  生検試料と定着支持した周囲の定着支持剤(包埋支持剤)が薄切りされ標本スライド上の生検試料の周囲に残った場合、前記従来の定着支持剤より、より多くの染色色素、特にＨＥ染色、ギムザ染色等以外の例えばＰＡＳ染色やアルシアン青染色等にも染まらないようにする事である。      【０００８】      【課題を解決するための手段】この発明の生検試料の定着支持剤は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収することを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナン酸化物(グルコマンナンカルボン酸)からなるものである。      【０００９】  また、この発明の生検試料の定着支持剤は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収し、水酸化ナトリウム水溶液を代表とするアルカリ金属イオン又はアンモニウムイオンの水酸化物溶液の中で中和溶解し、それを濾過して得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナンカルボン酸ナトリウム(アルカリ金属イオンまたはアンモニウムイオンＭ＋での中和物)からなるものである。      【００１０】  さらに、この発明の生検試料の定着支待剤は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈殿させて回収してグルコマンナン酸化物を精製誘導し、乾燥後このグルコマンナン酸化物の中の酸化されずに残ったアルコール基(特にグリコール基:−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−)をピリジン(pyridine)(Ｃ５Ｈ５Ｎ)と無水酢酸(氷酢酸含む)系のアセチル・エステル反応させて水中で回収・洗浄・精製作製して得られることを特徴とするグルコマンナンの修飾誘導体である酸化グルコマンナンアセチル化物からなるものである。      【００１１】  さらにまた、この発明の生検試料の定着剤は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物からなるものである。      【００１２】  この発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈澱させてグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナン酸化物(グルコマンナンカルボン酸)からなる生検試料の定着支持剤を回収することである。      【００１３】  また、この発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを、アルコール中で析出凝集及び沈澱させて回収して、水酸化ナトリウム水溶液を代表とするアルカリ金属イオン又はアンモニウムイオンの水酸化物溶液の中で中和溶解し、それを濾過してグルコマンナンの修飾誘導体であるグルコマンナンカルボン酸ナトリウム(アルカリ金属イオンまたはアンモニウムイオンＭ＋での中和物)からなる生検試料の定着支持剤を得ることである。      【００１４】  さらに、この発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を希硝酸等酸化剤で酸化溶解したグルコマンナンを濾過し、アルコール中で析出凝集及び沈殿させて回収してグルコマンナン酸化物を精製誘導し、乾燥後このグルコマンナン酸化物の中の酸化されずに残ったアルコール基(特にグリコール基:−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−)をピリジン(pyridine)(Ｃ５Ｈ５Ｎ)と無水酢酸(氷酢酸含む)系のアセチル・エステル反応させて水中で回収・洗浄・精製作製してグルコマンナンの修飾誘導体である酸化グルコマンナンアセチル化物からなる生検試料の定着支持剤を得ることである。      【００１５】  また、さらにこの発明の生検試料の定着支持剤の製造方法は、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物からなる生検試料の定着支持剤を得ることである。      【００１６】【発明の実施の形態】  黒皮部分を厚く剥いだこんにゃく芋の荒粉を搗いて、それを風選して得られるこんにゃく芋の精粉１０ｇを、１００〜２００ｍｌの水に溶解して５０〜８０℃に加熱し、これをメチルアルコールの中に入れて凝集・沈澱させて回収し、これを乾燥して精粉の主成分であるグルコマンナン以外の水溶性不純物をある程度除く。この際、凝集・沈澱せず水に溶出した例えば水溶性の蛋白、炭水化物等の不純物を除去する。      【００１７】  さらに乾燥して得られたグルコマンナン１０ｇを、１０〜４倍に釈希した酸化剤例えば、硝酸を水で希釈して１０〜２５％の硝酸を含む希硝酸約１０００ｍｌ〜１５００ｍｌの中で酸化溶解した後、濾布又は濾紙やガラス繊維の濾紙等で濾過して、グルコマンナン酸化物以外の不溶物を除去し、マンナン酸化物をメチルアルコールで析出・凝集・沈澱させて回収し、それを蒸留水または精製水やメチルアルコール水等で洗浄し、さらに乾燥して、精製グルコマンナンカルボン酸を回収し、この精製グルコマンナンカルボン酸を例えば１０％ホルマリン水に溶解して生検試料の定着支持剤を得る。このときのホルマリン濃度は適時目的に合わせて選択し、１０％以下または以上でも差し支えない。      【００１８】  他の実施形態は、同こんにゃく芋の精粉１０ｇを、上記１０〜４倍に釈希した酸化剤例えば、１０〜２５％の希硝酸で溶解・酸化し、メチルアルコール中に濾過し析出・凝集・沈殿して蒸留水(精製水)とメチルアルコール水で洗浄・回収して、乾燥した精製グルコマンナン力ルボン酸を例えば、ピリジン(pyridine)(Ｃ５Ｈ��Ｎ)２４ｍｌに対して無水酢酸(氷酢酸含む)１６ｍｌのアセチル・エステル化反応処理液のグルコマンナン酸化物が充分漬かる量の中に入れて、アセチル・エステル反応(室温で10数時間〜数日)させて目的に合わせて調整して、蒸留水または精製水中で回収・洗浄・精製・乾燥作製して酸化グルコマンナンアセチル化物を誘導作製して、これを例えば、乾燥酸化グルコマンナンアセチル化物１ｇを２０％ホルマリン水１０ｍｌ〜３０ｍｌに溶かしてゾル状溶液の定着支持剤を得る。この時のホルマリン濃度や定着支持剤の粘度及び濃度は適時目的に合わせて選択できる。      【００１９】  また他の実施形態は、同こんにやく芋の精粉１０ｇを、上記１０％〜２５％に釈希した酸化剤に加えて酸化溶解濾過し、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応させアルコール水中で沈殿・洗浄・濾過回収し精製作製したグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンエステル化物、即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物を誘導作製して、これを洗浄・乾燥後例えば１０％ホルマリン水に溶解してなる生検試料の定着支持剤を得る。このときのホルマリン濃度は適時目的に合わせて選択できる。また上記２回の濾過のいずれか１回を省略しても差し支えない。      【００２０】  また他の実施形態は、同こんにやく芋の精粉１０ｇを、上記１０〜４倍に釈希した酸化剤を、例えば硝酸を水で希釈して１０〜２５％の硝酸を含む希硝酸に加えて酸化した後、メチルアルコール中に濾過し入れて凝集、沈澱させて、回収し、これをメチルアルコールと蒸留水(精製水)で洗浄し乾燥して、１０％〜３０％水酸化ナトリウム水に入れて中和、溶解し、その後濾紙等で濾過してグルコマンナンカルボン酸ナトリウム以外の不溶物を除去して再度メチルアルコール中で析出・凝集・沈殿させて取り出し、洗浄・乾燥後グルコマンナンの誘導体を例えば１０％ホルマリン水に溶解してなる生検試料の定着支持剤を得る。このときのホルマリン濃度は適時目的に合わせて選択できる。また上記２回の濾過のいずれか１回を省略しても差し支えない。      【００２１】  上記グルコマンナンの修飾誘導体からなる生検試料の各種定着支持剤を用いて、患者から採取した生検試料をカセット内に収容してそれを定着支持する際は、添付図面の図1に示す如く、包埋カセット１をシャーレ２の上に載置した状態で、この包埋カセット１の中に生検試料３を収容し、その上から定着支持剤容器４の中の定着支持剤５を矢印Ａ５の如く流し込んで、包埋カセット１内における生検試料３を定着支持剤５で包埋する。      【００２２】  この状態の包埋カセット１をシャーレ２から外に取り出して図２に示す如く包埋カセット１に蓋６を嵌め、それとゲル化剤７をカプセル８内に収容して、該カプセル８にカプセルの蓋９を嵌めるものであり、その状態で病理検査室等に移送する。      【００２３】  また、上記包埋カセット１とは別の、例えば本願の発明者の出願に係わる特願平９−３７９３４号の明細書と図面に示した皿状容器に生検試料を収容して、それ��定着支持する際は、図３〜５、８、９に示す如く、皿状容器１０の中に、ゾル状の定着支持剤５を入れ、その上に生検試料３を載せてから、ゲル化(固定)剤７を注入して、ゲル状定着支持剤５で生検試料３をひとまとめにして、且つ生検試料３を生物学的に固定する。この際、定着支持剤５は、ゲル化した定着支持剤５ａになり、その後、皿状容器１０は、蓋１１で閉じられ、挟持用支持板１２にはめ込み、押え板１３で挟持して病理検査室等に移送される。なお、挟持用支持板１２と押え板１３とで、包埋カセット２１を形成する。また、図面符号１６は、通液孔を示す。      【００２４】  この場合、挟持用支持板１２の外側から生検試料３の状態や数量が観察でき、例えば透明なビニール袋に、生検試料３の収まった皿状容器１０の収まった(扁平容器)包埋カセット２１を収容して、患者氏名や属性データを記載し、同患者の病理検査依頼書とビニール袋に同一バーコードを貼ると、検査の受付が確実となり、受付・エントリーや検査の自動化が可能になる。      【００２５】  この時、布・紙・セロファン紙:[Ｃ６Ｈ７Ｏ２（ＯＨ）３]ｎを裏打ち用紙１４に使用した場合は、分極している定着支持剤５の親水基(主に−ＣＯＯＨ)と裏打ち用紙１４の(−ＯＨ)基とが、ゾル状定着支持剤５のゲル化時に水素結合の分子問力が強く働き、生検試料３を裏打ち用紙１４に確実に定着・支持、即ち接着する。セロファン紙を裏打ち用紙１４に使用した場合は、生検試料３は裏打ち用紙１４の側からも観察可能である。この時、図４に示す如く、薄いスポンジ板１５でゲル状定着支持剤５ａを軽く押さえて移送すると、より観察しやすい。      【００２６】  また図示されていないが、裏打ち用紙１４として、薄いスポンジ板や、メッシュを用いた場合も接着理論の釘打ち(錨)理論の作用により、生検試料を裏打ち用紙１４に確実に定着・支持する。      【００２７】  上記の裏打ち用紙１４への生検試料３の確実な定着・支持は、生検試料３の包埋作業時にも良く働き、図示していない包埋皿に生検試料３を包埋して、裏打ち用紙１４をその包埋皿から剥がし取る時、生検試料以外の周囲の多くの定着支持剤５は、裏打ち用紙１４側に付着して剥がれて、生検試料３が包埋皿側に残って包埋される。      【００２８】  また、裏打ち用紙１４を使用しないで、図５、８、９に示す如く合成樹脂、例えばＰ．Ｐ．(ポリプロピレン)［−ＣＨ２・ＣＨ・ＣＨ３−］ｎの皿状容器１０や、図７の多孔皿１０ａの底部で、定着支持剤５をゲル化(固定)剤７でゲル化して生検試料３をひとまとめに定着支持した場合は、ポリプロピレン(polypropylene)と分極している定着支持剤５とは、臨界表面張力(critical surface tension)のγc値や、溶解度因子(solubility parameter)のＳＰ値が離れていて、両者は接着性が弱く解離性が強い。      【００２９】  故に、定着支持剤５のゲル化・凝固が進むにつれて皿状容器１０や、図示していない多孔皿の底部より、定着支持剤５は生検試料と一緒に自然剥離しやすい。なお、図１〜９中、同一図面符号で示す部分は、その部分の名称及び機能についても同一である。      【００３０】  この定着支持剤(包埋支持剤)５は、グルコマンナンの修飾誘導体であり、そのホルマリン溶解液の粘度は、その溶解濃度と修飾誘導法によりいろい��と変化させることが出来る。例えば、生検試料組繊をより小型にしていくと細胞になるが、この細胞試料を遠心分離や濾過法により図９に示す如く皿状容器１０の底部や濾紙上に集め採集して、この集細胞試料３ａの周囲や上部からこの定着支持剤５を流し込み、アルコールやアルコールホルマリンやアセトンやアセトンアルコール等のゲル化(固定)剤７で一纏めに固め保持して、ゲル化した定着支持剤５ａで一纏めになった集細胞試料３ａを、包埋カセット２１の皿状容器１０を多孔皿に交換した包埋カセット２１に入れて処理後、薄切標本を作製すると、いわゆるセル・ブロック法が簡単に実施できる。この時、細胞試料は事前に固定を済ませておいても良く、定着支持剤７での処理工程の中で固定を実行しても良い。      【００３１】  また、酸化グルコマンナンアセチル化物は、各種濃度のホルマリン水に溶解し、その分子構造の中には、カルボキシル基(Ｒ・ＣＯＯＨ)とアセチル基(Ｒ−Ｏ・ＣＯＣＨ３)は存在するが、ホルマリンの細胞組織の固定反応に主として働く組織内官能基であるアミノ基(例えば、Ｒ−ＮＨ２）や水酸基(例えば、Ｒ−ＯＨまたはＲＣ６Ｈ４−ＯＨ)やメルカプト基(例えば、Ｒ−ＳＨ)は存在しない。故に、ホルマリンの生体細胞組織の固定反応を大きく阻害する反応基は存在せず、固定液(ホルマリン)の活発な分子間運動を緩やかにする働きが主な役割になる。      【００３２】  そこで、ホルマリンにこの酸化グルコマンナンアセチル化物や酸化グルコマンナンのカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物を溶解して適度の粘性を持たせると、粘性のある細胞組織のコーティング固定保護剤が出来上がる。これは、固定能力が有り細胞組織の固定速度を緩やかに進め維持して、生検試料３の乾燥や崩れを防止する。これは例えば本願の発明者の出願に係わる特願平８−３１６０７１号の支持剤や特願平９−３７９３４号のゾル状の保存液として使用するとよりその成果が上がり威力を発揮するものである。また、特願平９−３７９３４号の図６、７に示す如く、ゾル状保存液として用いる場合、事前にホルマリン水やホルマリンアルコール等の既存の固定液によって前固定処理をして置くと、その固定結果はより良くなる。      【００３３】  また、さらにグルコマンナンのアセチル化の方法には、無水酢酸(氷酢酸)と適当な触媒(硫酸・塩化亜鉛)とともに作用させる方法や、ホルムアミド中でピリジンと無水酢酸系の穏やかな条件下で反応させる方法や、酸ハロゲン化物と酢酸を反応させてから後に、グルコマンナンと反応させてエステル化させる方法も可能である。      【００３４】  さらにまた、遺伝子研究の技法の一つであるin situ hybridization(ISH法)等のホルマリン固定をあまり好まない標本作製時には、酸化グルコマンナンアセチル化物を例えば５％以下の低ホルマリン水に溶解調整して作製した定着支持剤５(包埋支持剤)で細胞組織試料を一纏めに支持保待して、ホルマリンの含まれていない例えばアルコール、アセトンや、アセトンアルコール等を定着支持剤５のゲル化剤７として用いることもできる。しかし、このような研究検査の目的のためには、グルコマンナンをアセチル化したアセチルグルコマンナンは、アセトンやクロロホルムの有機溶媒に溶解する。      【００３５】  この性格を利用すると、水中で沈殿回収したアセチルグルコマンナンをアセトン等に溶解して、(アセトンは水と溶け合うがアセチルグルコマンナンは水には溶解しないので、)水中に濾過析出精製回収したアセチルグルコマンナンを再度適度の濃度でアセトンに溶解して、この溶解液を生検試料３の定着支持剤５(包埋支持剤)として用いて、ゲル化剤７として水(生理食塩水や緩衝液)、アルコ-ルやアセトンアルコールを使用すると全くホルマリンの含まれない固定と定着支持(包埋支持)が可能となる。      【００３６】  また、アセチルグルコマンナンはアセトンやクロロホルムに溶解するとともに、アセチルグルコマンナンは、例えば水酸化ナトリウム水溶液等のアルカリ加水分解(ケン化)または、希塩酸、希硫酸等で加熱し加水分解して洗浄・精製すると、完全に不純物の含まれない精製グルコマンナンを作製・回収することができる。      【００３７】  酸化グルコマンナンアセチル化物は結果的には、グルコマンナンの分子式として［Ｃ６Ｈ７Ｏ２（ＯＨ）３］ｎまたは［Ｃ３Ｈ３Ｏ２（ＣＨＯＨ）２（ＣＨ２ＯＨ）］ｎとも表記できるが、その最小分子単位中の３つのアルコール基（＝ＣＨＯＨ）のうち特にグリコール基（−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−）内の少なくとも１つ以上のアルコール基をアセチル化して、残りのアルコール基は希硝酸等の酸化剤で酸化してアルコール基をカルボキシル基に誘導作製している。      【００３８】  このアルコール基の特にグリコール基のアセチル化（−ＣＨＯ・ＣＯＣＨ３−ＣＨＯＨ−または−ＣＨＯ・ＣＯＣＨ３−ＣＨＯ・ＣＯＣＨ３−）は、ＰＡＳ染色の Schiff  aldehyde 反応に反応するグルコマンナンの官能基グリコール基を過よう素酸の酸化作用によりアルデヒド基に変化誘導されないように、予めアセチル基に変換誘導しておき、その他のアルコール基をゲル化力が強く、安定で親水性の付属基であるカルボキシル基(−ＣＯＯＨ)に変換誘導し濾過精製したものであり、この２つの付属基の変換誘導により、多くの色素に染まらないホルマリン水等に溶解するアセチルグルコマンナン酸化物や酸化グルコマンナンアセチル化物を修飾誘導した。故に、アセチルグルコマンナンはこのアセチルグルコマンナン酸化物を修飾誘導精製回収する工程の中問産物であり、この中問産物であるアセチルグルコマンナンを用いてホルマリンの含まれない定着支持剤５(包埋支持剤)を作製することは可能である。      【００３９】  また、こんにゃく芋の精粉を酸化剤で酸化溶解濾過して、アルコール中で析出凝集沈殿洗浄回収した精製グルコマンナン酸化物(酸化グルコマンナン:グルコマンナンカルボン酸)を精製誘導し、乾燥後このカルボキシル基の部分とアルコ-ル系とのエステル反応、例えばメタノール１００ｍｌに対して濃塩酸０．８ｍｌのエステル化反応処理液のグルコマンナンカルボン酸が充分漬かる量の中に入れて６０℃程度の反応温度で２〜２４時問の中で反応させ水中で沈殿・洗浄・回収し精製作製するとグルコマンナンの修飾誘導体である精製酸化グルコマンナンメチル化物即ちグルコマンナンカルボン酸のカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物が修飾誘導される。このメチル化を代表とするカルボキシル基部分のアルコール系のエステル化反応はアルシアン���を代表とする酸性粘液多糖類の染色反応の封鎖法としては有用であるが、アセチル化よりも化学反応が速くそれを定着支持剤として固定液に溶かし込んだ場合その溶液は白濁が強くゲル化時に白色不透明になり、ＰＡＳ反応のグリコール基の染色反応の封鎖には効力を発揮できない場合がある。      【００４０】【発明の効果】  この発明の生検試料の定着支持剤は、上述の通りであるからグルコマンナンの修飾誘導体以外の不純物を除去することができるので、その中に包埋した状態の生検試料を顕微鏡検査のためにミクロトームで薄切りする際、その定着支持剤に含まれるマンナンの殻や灰分等の不純物によって、薄切りする刃物を傷めることがないため、その後、その傷んだ刃で該生検試料の切断面の組織を破壊して、検査の結果に支障を与えるおそれがない。      【００４１】  またこの発明の生検試料の定着支持剤は、グルコマンナンの修飾誘導体からなっていて、前記従来のグルコマンナンからなる定着支持剤より、より透明度が優れているので、その中に包埋されている生検試料３の外観及び包埋カセット１または２１内における生検試料３の姿勢や位置及び数量を定着支持剤５の外側から見て確認することができるので、病理医や臨床医の望む薄切り面を薄切りすることができ、生検試料の検査の受付から標本作製工程での一貫した検査面(薄切平面)の提示を可能にして作業工程の自動化を前進させることができる。      【００４２】  さらにこの発明の生検試料の定着支持剤は、カプセル８に収容して病理検査室等に移送する際、前記従来の定着支持剤より、ゲル化剤によってゲル化し易く、凝集力が強いので移送の途中でカプセル全体が振動しても包埋カセット１内における生検試料３の姿勢が変化しにくいため上記薄切り面を当初の状態に維持することができる。また、前記グルコマンナンの修飾誘導体からなる生検試料の定着支持剤として、特に酸化グルコマンナンアセチル化物や、酸化グルコマンナンのカルボキシル基の部分とアルコール系とのエステル化物、或いはグルコマンナンカルボン酸（酸化グルコマンナン）の中和物を用いる場合は、それらが透明感を有し、かつ、染色色素によって最も染まりにくい点において、前記従来の定着支持剤より、最も優れている。      【図面の簡単な説明】      【図１】  この発明の定着支持剤を用いて生検試料を定着支持する状態を示す縦断面図である。      【図２】  図１の状態の次の作業状態を示す縦断面図である。      【図３】  この発明の定着支持剤を用いて、図１と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。      【図４】  図１〜３と異なる実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。      【図５】  図１〜４と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。      【図６】  図１〜５と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。      【図７】  図１〜６と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。      【図８】  図１〜７と別の実施形態で生検試料を定着支持する際の縦断面図である。      【図９】  図１〜８と別の実施形態で別の生検試料(集細胞試料)を定着支持する際の縦断面図である。      【符号の説明】１            包埋カセット３            生検試料５            定着支持剤７            ゲル化剤