【手続補正書】
【提出日】平成17年12月20日(2005.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（１）：
【化１】
2000191624.tif 000001
で表される構造を有する化合物。
【請求項２】
以下の式（２）：
【化２】
2000191624.tif 000002
［式（２）中、ｎは１ないし１０の整数である］
で表される構造を有する化合物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載された化合物と高分子化合物又は標識物質との結合体。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の化合物と高分子化合物を結合させることにより抗原を作製し、当該抗原を用いることにより、以下の式（３）：
【化３】
2000191624.tif 000003
で表される構造を有する化合物に反応性を示す抗体を製造することを特徴とする、式（３）で表される構造を有する化合物に反応性を示す抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメントの製造方法。
【請求項５】
請求項３に記載の結合体を抗原として用いることにより製造された、式（３）の化合物に反応性を示す抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメント。
【請求項６】
モノクローナル抗体である、請求項５に記載の抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメント。
【請求項７】
モノクローナル抗体２９Ｂ１−１−１である、請求項５又は６に記載の抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメント。
【請求項８】
請求項５ないし７のいずれか１項に記載の抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項９】
寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１７０９３で寄託されている、請求項８に記載のハイブリドーマ。
【請求項１０】
請求項５ないし７のいずれか１項に記載の抗体又は抗原と結合可能なそのフラグメントを用いることを特徴とする、式（３）で表される化合物の免疫学的測定方法。
【請求項１１】
さらに、請求項１若しくは２に記載の化合物、又は請求項３に記載の結合体を用いることを含む、請求項１０に記載の免疫学的測定方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、１−ナフチル−Ｎ−メチルカーバメート（以下、本明細書中「カルバリル」と言う）のハプテン化合物、抗原、抗体及び抗原と結合可能なそのフラグメントに関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
本発明はさらに、前記抗原、抗体及び抗原と結合可能なそのフラグメントを用いた免疫学的測定方法に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、カルバリルに反応する新規な抗体もしくは抗原と結合可能なそのフラグメント、及びその作製方法を提供することを目的とする。尚、本明細書において抗体の「フラグメント」とは、抗原と結合可能な抗体の一部分、例えばＦａｂ断片等を意味する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明は、さらにまた、前記抗体を産生するハイブリドーマを提供することを目的とする。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明は、さらに、前記抗体もしくは抗原と結合可能なそのフラグメント及び／又は前記カルバリルハプテンと高分子化合物との結合体を使用することを含む、カルバリルの免疫学的測定方法を提供することを目的とする。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
一方、混合酸無水物法において用いられる混合酸無水物は、カルボン酸とハロゲン蟻酸エステルとの反応により得られ、これを高分子化合物と反応させることにより目的とするハプテン−高分子化合物結合体が製造される。この反応は塩基性化合物の存在下に行われる。塩基性化合物としては、例えば、トリブチルアミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、ＤＢＮ、ＤＢＵ、ＤＡＢＣＯ等の有機塩基、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基等が挙げられる。該反応は、通常マイナス２０℃から１００℃、好ましくは０℃から５０℃において行われ、反応時間は５分から１０時間、好ましくは５分から２時間である。得られた混合酸無水物と高分子化合物との反応は、通常マイナス２０℃から１５０℃、好ましくは０℃から１００℃において行われ、反応時間は５分から１０時間、好ましくは５分から５時間である。混合酸無水物法は一般に溶媒中で行われる。溶媒としては、混合酸無水物法に慣用されているいずれの溶媒も使用可能であり、具体的にはジオキサン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチルリン酸トリアミド等の非プロトン性極性溶媒等が挙げられる。混合酸無水物法において使用されるハロ蟻酸エステルとしては、例えばクロロ蟻酸メチル、ブロモ蟻酸メチル、クロロ蟻酸エチル、ブロモ蟻酸エチル、クロロ蟻酸イソブチル等が挙げられる。当該方法におけるハプテンとハロ蟻酸エステルと高分子化合物の使用割合は、広い範囲から適宜選択され得る。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
なお、担体に固相化させる抗原としては、抗体を作製したカルバリルハプテンと高分子化合物との結合体自体のみならず、式（１）又は式（２）に含まれない他のカルバリル類似化合物も、固相化抗原として使用することも可能である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０９】
なお、酵素等の標識物質に結合させるハプテンとしては、間接競合阻害ＥＬＩＳＡ法における固相化抗原の場合と同様に、抗体作製に使用したカルバリルハプテン自体のみならず、式（１）又は式（２）に含まれない他のカルバリル類似化合物も、酵素に結合させるハプテンとして使用可能である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１８】
（２）の合成
水素化ナトリウム（油性、６０％）０．８ｇ（２０ｍｍｏｌ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）３０ｍｌに懸濁し、３．２ｇ（２０ｍｍｏｌ）の１，５−ジヒドロキシナフタレン（１）のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液２０ｍｌを室温で滴下した。室温で２０分撹拌後、４−クロロ酪酸ｔｅｒｔ−ブチル３．６ｇ（２０ｍｌ）のＤＭＦ溶液５ｍｌを滴下した。室温で５時間加熱撹拌後、反応液をジエチルエーテル−水で分配抽出した。集めたジエチルエーテル層を水洗、脱水（無水硫酸マグネシウム）、ろ過、濃縮後、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１→２：１）で精製し、褐色固体として０．６１ｇ（収率１０％）の（２）を得た。
（３）の合成
ジヒドロキシナフタレン誘導体（２）０．６１ｇ（２ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、イソシアン酸メチル０．１４ｇ（２．５ｍｍｏｌ）を加えて室温で４時間撹拌した。反応液を濃縮後、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１→１：１）で精製し、白色結晶として０．６７ｇ（収率９２％）の（３）を得た。
（４）の合成
ハプテンエステル（３）０．６７ｇ（１．９ｍｍｏｌ）を６０ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）５ｍｌを加えて室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、白色結晶として０．５３ｇ（収率９４％）の（４）を得た。