【手続補正書】
【提出日】平成17年11月10日(2005.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：）：１の塩基４０５−７１９のヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号：２のＡＡ１−ＡＡ１０５に対して少なくとも９０％の同一性を有するニューブラスチンポリペプチドを発現時にコードするオープンリーディングフレームを含む核酸配列；
（ｃ）配列番号：１の塩基４０５−７１９のヌクレオチド配列を含む核酸に高ストリンジェンシー溶液ハイブリダイゼーション条件で特異的にハイブリダイズする核酸、又はその相補ストランド；
（ｄ）配列番号：１の塩基４０５−７１９として存在するポリヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％同一である核酸
より成る群から選ばれた配列を含む、単離されたニューブラスチン核酸。
【請求項２】
前記コード化されたポリペプチドが、配列番号：２のＡＡ１−ＡＡ１０５、及び配列番号：５，６及び７より成る群から選ばれる、請求項１記載の核酸。
【請求項３】
配列番号：３の配列を含む、請求項１記載の核酸。
【請求項４】
配列番号：１の塩基４０５−７１９として存在するポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％同一である，請求項１記載の核酸。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１つに記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項６】
前記核酸によってコード化されるポリペプチドを、インビトロで該核酸から発現させる工程を含む、請求項５記載のベクターを使用する方法。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか１つに記載の核酸及び（又は）請求項５記載の発現ベクターを用いてインビトロで形質転換させた細胞。
【請求項８】
前記細胞が真核細胞である、請求項７記載の細胞。
【請求項９】
前記細胞が哺乳類細胞、真菌細胞及び酵母細胞より成る群から選ばれる、請求項８記載の細胞。
【請求項１０】
前記哺乳類細胞が、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ＨＥＫ２９３、ＣＯＳ、ＰＣ１２、ＨｉＢ５、ＲＮ３３ｂ及びヒト神経幹細胞より成る群から選ばれる、請求項９記載の細胞。
【請求項１１】
配列番号：２のアミノ酸１〜１０５に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、ニューブラスチン神経栄養因子ポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号：２，５，６及び７に記載の前記アミノ酸配列のいずれか１つを含むニューブラスチン神経栄養因子ポリペプチド。
【請求項１３】
前記ポリペプチドがグリコシル化されている、請求項１１又は１２のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記ポリペプチドが請求項１〜５のいずれか１つに記載の核酸によってコードされる、請求項１１記載のポリペプチド。
【請求項１５】
請求項１１〜１４のいずれか１つに記載のポリペプチドを製造する方法であって、該方法が前記ポリペプチドをニューブラスチン神経栄養因子核酸から発現させる工程を含む、方法。
【請求項１６】
前記ニューブラスチン神経栄養因子核酸を含む細胞を、前記ポリペプチドの産生が可能な培養培地で培養する工程を含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記ポリペプチドを、前記培養培地から回収する工程をさらに含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法によって得られる精製されたポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１１〜１４又は１８のいずれか１つに記載のポリペプチドおよび薬学的に許容し得る担体を含む、医薬調合物。
【請求項２０】
請求項１１〜１４又は１８のいずれか１つに記載のポリペプチドを医薬の製造に使用する方法。
【請求項２１】
損傷性及び外傷性ニューロンに係わる神経変性疾患を処置するための医薬を製造するための、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記疾患が末梢神経系、延髄及び（又は）脊髄の外傷性障害、脳虚血ニューロン損傷、神経障害、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症又はその他のあらゆる神経変性障害、及び痴呆に関連する記憶障害に係わる疾患からなる群より選択される、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記神経障害が末梢神経障害である、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
配列番号：１７、１８、１９、２０、２３、２４、２５、２６または２８に記載の配列のいずれか１つからなる、ＰＣＲプライマー核酸。
【請求項２５】
配列番号：２、４、５、６又は７に記載のポリペプチドのいずれか１つを製造する方法であって、配列番号：１又は３に記載の核酸配列のいずれか１つを含む細胞を、該ポリペプチドの産生が可能な条件で培養し、その培養培地から該ポリペプチドを回収することを含む、方法。
【請求項２６】
（ａ）ニューブラスチンポリペプチドを発現時にコードするポリヌクレオチドを細胞に導入するか、または調節配列を該調節配列が内因性ニューブラスチン遺伝子の発現を調節するように相同組換えによって細胞に導入して、ニューブラスチン産生細胞を作成し、（ｂ）そのニューブラスチン産生細胞をニューブラスチンポリペプチドの発現をもたらす培養条件で培養すること、を含む、請求項１１〜１４のいずれか１つに記載のニューブラスチンポリペプチドを製造する方法。
【請求項２７】
ニューブラスチンポリペプチドをコード化する合成遺伝子であって、配列番号：２９または３０に記載の配列を含む、合成遺伝子。
【請求項２８】
次の配列：
【化１】
2005341968.tif 000001
のいずれかからなるニューブラスチンペプチド。
【請求項２９】
請求項２８に記載のペプチドのいずれかに対して産生される抗体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
発明の要約
本発明は、本明細書で「ニューブラスチン（ｎｅｕｂｌａｓｔｉｎ）」または「ＮＢＮ」と呼ぶ、新規神経栄養因子に関する。ニューブラスチンは他のＧＤＮＦリガンドと相同（＝同一）な領域を有し（下記表３および表４参照）、ＲＥＴと相互作用する能力を持つ（例えばＡｉｒａｋｓｉｎｅｎら，  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，１３，３１３−３２５）ので、ニューブラスチンはＧＤＮＦサブファミリーに分類され、ニューブラスチンは新規かつユニークな神経栄養因子である。他のＧＤＮＦリガンドとは異なり、ニューブラスチンはＧＦＲα３−ＲＥＴ受容体複合体に対する高い親和性を示し、またそのアミノ酸配列中にユニークな亜領域を示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本明細書で使用されるとき「ニューブラスチンポリペプチド」は、（例えば実施例６、７、８および９に記載するように）神経栄養活性活性を有するポリペプチドであり、配列番号２のＡＡ−９５〜ＡＡ１０５、配列番号２のＡＡ１〜ＡＡ１０５、配列番号４のＡＡ−９７〜ＡＡ１４０、配列番号４のＡＡ−４１〜ＡＡ１４０（「プロ」）、配列番号４のＡＡ１〜ＡＡ１４０、配列番号９のＡＡ−８０〜ＡＡ１４０（「野生型」プレプロ）、配列番号９のＡＡ−４１〜ＡＡ１４０（プロ）、配列番号５のＡＡ１〜ＡＡ１４０（成熟１４０ＡＡ）、配列番号６のＡＡ１〜ＡＡ１１６（成熟１１６ＡＡ）、配列番号７のＡＡ１〜ＡＡ１１３（成熟１１３ＡＡ）、配列番号１０のＡＡ１〜ＡＡ１４０（成熟１４０ＡＡ）、配列番号１１のＡＡ１〜ＡＡ１１６（成熟１１６ＡＡ）、配列番号１２のＡＡ１〜ＡＡ１１３（成熟１１３ＡＡ）に記載のヒト「ニューブラスチン」ポリペプチドに対して少なくとも７０％の相同性（＝同一性）を有するアミノ酸配列を持つポリペプチドおよびそれらの変異体および誘導体を包含する。また本発明では、配列番号１６のＡＡ１〜ＡＡ２２４に記載のネズミ「ニューブラスチン」ポリペプチドに対して少なくとも７０％の相同性を有するアミノ酸配列を持つポリペプチドも考えられる。