(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの化合物。
【化１】
0004511726.tif 000004
但しこの式においてＲはトリメトキシベンゾイル基である。
【請求項２】
活性成分として、請求項１に記載の化合物を含む、薬剤組成物。
【請求項３】
抗うつ薬を調製するための、請求項１に記載の式Ｉの化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は新規なハイパーフォリン誘導体、それらをうつ病及び不安の処置に使用する方法及びそれらを含む調剤に関する。
【０００２】
（背景技術）
ヒペリクム草の花芽形成頂は中枢神経系に直接的又は間接的に作用する多くのクラスの構造的に異なった物質を含んでいる。
【０００３】
より詳細には、上記化合物はハイパーリシン（ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ）、ハイパーフォリン（ｈｙｐｅｒｆｏｒｉｎ）及び２量体化フラボン類を含み、これらは動物及び人に対して抗うつ病的及び抗不安的な活性をもたらす。
【０００４】
これらの化合物の作用機構は異なっており、抗ＭＡＯ作用、セロトニン放出に対する作用及びベンゾジアゼピン類似の活性である。
【０００５】
ヒペリクム草花成頂の親油性部分の主要な成分の１つであるハイパーフォリンは最近、その抗うつ病薬としての重要な役割の確証を可能にした多くの研究の対象となっている。本出願人によって実施された研究はこの分子がセロトニン類似の活性を有することを証明した。
【０００６】
ハイパーフォリンは通常の抽出及び保存の条件において非常に安定であると言うものではなく、ＷＯ  ９７／１３４８９（Ｓｃｈｗａｂｅ）によれば、おとぎり草（Ｓｔ．−Ｊｏｈｎ’ｓ−ｗｏｒｔ）の水／アルコール性抽出物の中のハイパーフォリン含有量は数週間の後ですでに殆どゼロにまで低下する。
【０００７】
また、ＷＯ  ９７／１３４８９によれば、ハイパーフォリンの一定含有量を含む安定な抽出物を得るために、抽出、精製及び保存をビタミンＣ及びそのエステル類、硫酸化アミノ酸類等のような酸化防止剤の存在のもとに実施しなければならない。
【０００８】
それゆえハイパーフォリンの高い不安定性はその種々の調剤の調製をかなり困難にしている。
【０００９】
（発明の開示）
安定であって特定の各薬学的試験において抗うつ薬としてより活性の高いハイパーフォリンのいくつかの誘導体が見出された。本発明のそれら誘導体は下記式Ｉを有する：
【００１０】
【化２】
0004511726.tif 000002
【００１１】
但しこの式においてＲは
○飽和又は不飽和の、直鎖状又は分岐鎖状の、場合により、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、Ｃ1 −Ｃ6 −アルキルアミノ基、ジ−Ｃ1 −Ｃ6 −アルキルアミノ基、Ｃ1 −Ｃ6 −アシルアミノ基から選ばれる同一であっても異なっていてもよい１個以上の置換基を有するＣ1 ないしＣ22のアシル基であるか、
○環状脂肪族の、又は芳香族部分に場合によりハロゲン原子、ヒドロキシル基、メトキシ基、アミノ基から選ばれる、同一であっても異なっていてもよい１個以上の置換基を有する芳香族のアシル基であるか、又は
○１個以上のヒドロキシル基が場合によりアルキル化又はアシル化されているグリシド基である。
【００１２】
「芳香族アシル基」は好ましくは１つ以上のアミノ基またはアルコキシ基を有するベンゾイル残基またはシンナモイル残基を意味する。
【００１３】
「グリシド基」は、ピラノシル環又はフラノシル環の１位置におけるヒドロキシル基にエーテル結合により結合された１個の糖の残基を意味し、その際この糖の他のヒドロキシル基は場合によってはメチル化されているか又はアセチル化されている。
【００１４】
好ましいＲの基はアセチル、モノクロロアセチル、ブチリル、γ−アミノブチリル、ｐ−アミノベンゾイル、トリメトキシベンゾイル、トリメトキシシンナモイル、β−グリコシル及びβ−ガラクトシルである。
【００１５】
本発明のハイパーフォリン誘導体はヒドロキシル基のアセチル化又はグリコシル化のための慣用的な方法により調製することができる。
【００１６】
例えば、実質的に純粋なハイパーフォリン又はハイパーフォリンに富んだ抽出物をピリジンのような適当な溶媒の中でＲＣＯＯＨの酸（但しＲは上に定義した通りである）の酸塩化物又は無水物と反応させることができる。
【００１７】
他方において、グリコシル化は、例えばα−Ｄ−グルコピラノシルブロミド４酢酸のような所望の糖（ＲＯＨ）の適当に保護された反応性誘導体を用いて実施することができる。
【００１８】
本発明の特に好都合なアスペクトの１つによれば、化合物Ｉはヒペリクム草（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  Ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ）の花成頂を超臨界条件において２酸化炭素で抽出し、引き続いて種々の溶剤とその得られた抽出物の中の誘導体化されたハイパーフォリンとの間で分配させることにより作られる。
【００１９】
おとぎり草の葉及び花成頂は別個に、又は主として天然混合物としての混合物の形で１８０バールから２６０バールまでの範囲、好ましくは２４０バールの圧力のもとで、３５℃から５０℃までの範囲、好ましくは４０℃の温度において超臨界的条件において２酸化炭素により抽出される。約５０％のハイパーフォリンを含む親油性の抽出物が得られる。この抽出物はかなりの量のキサントン類、ワックス類、脂肪酸類及びトリグリセリド類を含む。本発明のもう一つのアスペクトによれば、このハイパーフォリンの％割合は実質的に高められる、その際その得られた抽出物をメタノール又は部分的に水性のアセトニトリルの中に可溶化させ、そして次にこの溶液をｎヘキサン又は脂肪族炭化水素類で抽出するのである。その炭化水素相は望ましくない種々の物質を含むが、これらを分離し、その親水性相をほぼ等しい容積の水及び脂肪族炭化水素類で稀釈する。その親油性相を濃縮することにより得られるおとぎり草の抽出物は、上に記述した種々の誘導体を調製するために使用することができる。
【００２０】
本発明の各誘導体は試験管内では種々の受容体になんらの活性をも発揮しないけれども、生体内では特に活性であり、投与量に関係する強い抗うつ病活性を発揮する。
【００２１】
マウス及びラットにおける生体内試験において本発明の化合物はハイパーフォリン及びおとぎり草のエタノール性又はエタノール性抽出物よりも高い活性を示した。
【００２２】
抗うつ病効果を証明するための生体内試験として、文献において公知のモデルに従って、エスケープ  デフィシット  デベロップメント  テスト（ｅｓｃａｐｅ  ｄｅｆｉｃｉｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｔｅｓｔ）及びアルコール嗜好性サルジニアラットにおけるエタノール消費の阻害が選ばれた。
【００２３】
エスケープ  デフィシット  デベロップメント  テストにおいては、本発明の各化合物は公知の抽出物よりも高い活性と、イミプラミンのような公知の薬剤のそれに匹敵する活性とを示した。この試験においては各ラットを縛りつけて５０分間にわたり温和な短い不可能な逃避電気ショックを受けさせる（予備試験）。２４時間後に各動物を逃避が不可能な条件においてそれらの尾の上に同じ刺激を与えて避ける能力について試験する。３０回の刺激のうち、平均して１匹のラットは２６回の逃避行動を行なう（ナイーブ対照動物）が、一方、予備試験された動物は僅かに１ないし３回の逃避行動しか行なわない（ＥＤ対照動物）。イミプラミン又はフルオキセチンのような抗うつ病薬で１ないし３週間予備処理されたラットにおいてはその予備試験により誘起される減退反応性は生じない。この不可避逃避的ストレスにさらされる１時間前に各ラットに投与された本発明の化合物はこの逃避試験に対する反応性の上昇をもたらすが、これは予備処理を１ないし２週間行なった場合に高められる。
【００２４】
例えば、Ｒがアセチルである化合物Ｉにより各ラットを処理することは下記の表にあげる結果をもたらす：
表（２週間の予備試験を含むラットの逃避試験におけるハイパーフォリンアセテートのラットにおける抗うつ効果）
0004511726.tif 000003
文献において公知の操作に従うサルジニアラットにおけるアルコール消費の減少（これはうつ病及び不安の指標である）の試験において、本発明の各生成物は、２日間の投与の後で対照動物に比して水を用いてのアルコール消費の６０ないし７０％の低下をもたらす。
【００２５】
式Ｉの各化合物は、軟質ゼラチンカプセル、硬質ゼラチンカプセル、錠剤、坐薬に調剤することができる。本発明の化合物は好ましくは軟質ゼラチンカプセル又は制御された放出性の調剤に調剤される。各調剤でのそれら化合物の投与量は通常の調剤における１回の投薬当り５ｍｇから５０ｍｇまでの範囲であり、そして制御された放出性の調剤においては２００ｍｇまでであり、この場合は好ましい投与は１日の投薬当り２００ｍｇである。
【００２６】
以下に報告する諸例は本発明をより詳細に説明するものである。
【００２７】
例１（ハイパーフォリン富化抽出物の調製）
１０ｋｇのヒペリクム  ペルフォラタム（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ）のバイオマスを下に記述する操作に従って２個の分離器を備えた超臨界ガス用の２５Ｌの抽出装置の中で抽出する。
【００２８】
採取の後で６０℃を超えない温度において機械的に乾燥させたヒペリクム草の花成頂１０ｋｇを各立方形に押し出して細胞を破壊し、そして下記の実験条件のもとで超臨界条件でＣＯ2 により抽出する：
○温度：抽出器の中で４５℃、第１分離器の中で３０℃、そして第２分離器の中        で２０℃、
○圧力：抽出器の中で２４０バール、第１分離器の中で１００バール、そして第        ２分離器の中で５０バール。
【００２９】
ＣＯ2 の流れは４５分間にわたり１分間当り１０Ｌであった。その抽出物を第２分離器の中で濃縮したが、その植物性母材の中に存在する大部分の水は第１分離器の中で濃縮された。第２分離器の中に存在する抽出物を３．２Ｌのメタノールの中に可溶化させ、そしてこの溶液を３×１．５Ｌのｎヘキサンで抽出する。
【００３０】
そのヘキサン相を、メタノール相の中に残留するべきハイパーフォリンを標識剤として用いて、９８％メタノールで逆洗浄する。そのヘキサン相は除去し、一方、その合一したメタノール性相を０．６Ｌの水で稀釈し、そして２×０．６Ｌのｎヘキサンで再抽出する。
【００３１】
その合一したヘキサン相を０．３％の木炭で脱色し、Ｎａ2 ＳＯ4 の上で乾燥させ、次に真空のもとに４０℃を超えない温度において濃縮して油状物とする。０．２２ｋｇのワックス状抽出物が得られるが、約７０％のハイパーフォリン含有量を有する。
【００３２】
例２（ハイパーフォリンアセテートの合成）
例１において得られた植物抽出物１２ｇの４８ｍｌのピリジンの中の溶液に、Ａｃ2 Ｏ（９．８ｍｌ）を加え、そして室温において攪拌する。その反応をＴＬＣ（９５：５のヘキサン−ＥｔＯＡｃ、ハイパーフォリンＲｆ：０．２４、アセテートＲｆ：０．４９）により検査する。２４時間の後にその反応混合物を水で稀釈し、そしてヘキサン−エーテル混合物（３：１）で抽出する。その有機相を希塩酸、飽和ＮａＨＣＯ3 及び塩水の各溶液で洗浄する。乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）及び蒸発の後でその残渣をシリカゲルカラム（約３０ｇ）の上で、まず最初石油エーテルで溶出して脂肪類を除去し、次いで表記の化合物が溶出し始めたならば直ちに９５：５のヘキサン−ＥｔＯＡｃを用いるクロマトグラフィーによって精製し、３．３４ｇ（０．２８％）のハイパーフォリンアセテートが無色のペーストとして得られる。
Ｃ37Ｈ54Ｏ5 、ＭＷ５７８
ＣＩ−ＭＳ：５７９（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＲ（液膜）： 1779 、1732、1660、1634、1447、1377、1339、1146 cm-1
1H-NMR (200 MHz, CDCl3) ：5.03(br s, 2H)、5.00(br s, 2H)、3.05(dd, J=
15, 7 Hz, 1H) 、2.86(dd, J=15, 7 Hz, 1H)、2.22(s, OAc)、1.66-1.53 (br
s, 8 x 3H)、1.08(d, J=6.5 Hz, 3H) 、0.98(s, 3H) 、0.85(d, J=6.5 Hz, 3H)
【００３３】
例３（ハイパーフォリン３，４，５−トリメトキシベンゾエートの合成）
例１の植物抽出物（１ｇ）のピリジン（４ｍＬ）の中の溶液に３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリド（３２３ｍｇ）を加え、そしてこの溶液を室温において２４時間攪拌する。その出発物質と生成物とが種々の異なった溶媒の中で非常に接近したＲｆ値を有するので、この反応はＴＬＣによっては検査することができない。その反応混合物を水で稀釈し、そしてエーテル−ヘキサンの混合物（３：１）で抽出する。その有機相を希塩酸、飽和ＮａＨＣＯ3 で洗浄する（塩水溶液での洗浄はエマルジョンの形成をもたらす）。乾燥（Ｎａ2 ＳＯ4 ）及び蒸発の後で、その残渣をシリカゲルカラム（約５ｇ）の上で、まず最初石油エーテルで溶離して脂肪類を除去し、次いで９５：５のヘキサン−ＥｔＯＡｃで溶離させるクロマトグラフィーによって精製してハイパーフォリントリメトキシベンゾエート（３１７ｍｇ）を無色の油状物として得る。
Ｃ45Ｈ62Ｏ8 、ＭＷ７３０
ＣＩ−ＭＳ：７３１（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＲ（液膜）： 1732 、1660、1634、1589、1465、1331、1153、1130、914cm-1 1H-NMR (200 MHz, CDCl3) ：7.27(s, 2H) 、5.04(br S, 2H)、5.02(br s, 2H)、3.86(s, OMe)、3.82(s, 2 x OMe)、3.10(dd, J=15, 7 Hz, 1H)、2.92(dd, J=
15, 7 Hz, 1H) 、1.66-1.53(br s, 8 x 3H) 、1.13(d, J=6.5 Hz, 3H) 、1.04
(s, 3H) 、0.99(d, J=6.5 Hz, 3H)
【００３４】
例４（例２の生成物を含む被覆錠剤）
ハイパーフォリンアセテート                  100    mg
大豆多糖類                                   18.25 mg
架橋化ナトリウムカルボキシメチルセルローズ   13.50 mg
シリカ                                        6.50 mg
ポリビニルピロリドン                          5.00 mg
ステアリン酸マグネシウム                      0.50 mg
被覆材：
ヒドロキシプロピルメチルセルローズ            3.75 mg
タルク                                        2.75 mg
２酸化チタン                                  1.25 mg
トリアセチン                                  0.75 mg
ポリソルベート８０                            0.25 mg
赤色酸化鉄                                    1.00 mg