【手続補正書】
【提出日】平成18年9月22日(2006.9.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
１）ソフォラフラバノンＧ（Sophoraflavanone G）及び／又はその塩０．０１〜１質量％と、２）クマリン及び／又は次に示す一般式（１）に表されるクマリン類似物質０．００１〜０．１質量％とを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
【化１】
2005306816.tif 000001
ソフォラフラバノンＧ
【化２】
2005306816.tif 000002
一般式（１）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立に水素原子、炭素数１〜４のアルキ
ル基乃至は糖残基でエーテル化されていても良い水酸基又は炭素数１〜４のアルキル基を表すが、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４の少なくとも１個は炭素数１〜４のアルキル基乃至は糖残基でエーテル化されていても良い水酸基であり、Ｒ５は水素原子又は水酸基である。）
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項３】
前記クマリン及び／又は一般式（１）に表されるクマリン類似物質が、クマリン（Coumarin）、４−ヒドロキシクマリン（4-Hydroxycoumarin）、ダフネチン（Daphnetin）、スコポレチン（Scopoletin）、ウンベリフェロン（Umbelliferone）、４−メチルウンベリフェロン（4-Methylumbelliferone）、エスクレチン（Esculetin）又はエスクリン（Esculin）であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の皮膚外用剤。
【化３】
2005306816.tif 000003
クマリン
【化４】
2005306816.tif 000004
４−ヒドロキシクマリン
【化５】
2005306816.tif 000005
ダフネチン
【化６】
2005306816.tif 000006
スコポレチン
【化７】
2005306816.tif 000007
ウンベリフェロン
【化８】
2005306816.tif 000008
４−メチルウンベリフェロン
【化９】
2005306816.tif 000009
エスクレチン
【化１０】
2005306816.tif 000010
エスクリン
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項６】
１）マメ科クジン（Sophora flavescens）のアルコール抽出物を、酢酸エチルと水で液液抽出し、酢酸エチル相を濃縮した後、シリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーで分画精製したソフォラフラバノンＧ含有画分と、２）クマリン及び／又は一般式（１）に表されるクマリン類似物質０．００１〜０．１質量％と、３）アスコルビン酸及び／又はその誘導体とを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
ソフォラフラバノンについては、マメ科クジンに含有されていることが既に知られている。又、チロシナーゼ阻害作用を有していることも知られている（例えば、非特許文献１を参照）。ソフォラフラバノンＧについては、抗菌作用、α−ＭＳＨ抑制作用等が存することが知られている（例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４を参照）。後記一般式（１）に表されるクマリン類似物質については、ＩｇＥ産生抑制作用、エラスターゼ阻害作用、メラニン産生抑制作用等が存することが知られている（例えば、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９を参照）。又、アシル化アスコルビン酸グルコシドと、エスクリンを含有するトチノキのエキス及び／又はソフォラフラバノンＧを含むマメ科クジンのエキスを組み合わせる技術も知られている（例えば、特許文献１０を参照）。しかしながら、１）ソフォラフラバノンＧ（Sophoraflavanone G）及び／又はその塩０．０１〜１質量％と、２）後記に示す一般式（１）に表されるクマリン及び／又はクマリン類似物質０．００１〜０．１質量％とを含有する皮膚外用剤は全く知られていないし、この様な皮膚外用剤が、紫外線によって誘起される炎症を速やかに鎮める作用を有することも全く知られていない。これは、通常の抽出条件では、この様な量比を満足するほどのソフォラフラバノンＧが抽出されてこないためである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、紫外線による炎症のケアとして、速やかに炎症を鎮静させ、炎症因子の暴走などによる生体損傷を未然に防ぎ、皮膚状態を健やかに保つ手段を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、１）ソフォラフラバノンＧ（Sophoraflavanone G）及び／又はその塩０．０１〜１質量％と、２）クマリン及び／又は後記に示す一般式（１）に表されるクマリン類似物質０．００１〜０．１質量％とを含有する皮膚外用剤が、その様な作用を有していることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、以下に示すとおりである。
（１）１）ソフォラフラバノンＧ（Sophoraflavanone G）及び／又はその塩０．０１〜１質量％と、２）クマリン及び／又は次に示す一般式（１）に表されるクマリン類似物質０．００１〜０．１質量％とを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
【化２】
2005306816.tif 000011
ソフォラフラバノンＧ
一般式（１）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立に水素原子、炭素数１〜４のアルキル基乃至は糖残基でエーテル化されていても良い水酸基又は炭素数１〜４のアルキル基を表すが、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４の少なくとも１個は炭素数１〜４のアルキル基乃至は糖
残基でエーテル化されていても良い水酸基であり、Ｒ５は水素原子又は水酸基である。）
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
（２）前記ソフォラフラバノンＧが、マメ科クジン（Sophora flavescens）のアルコール抽出物を、酢酸エチルと水で液液抽出し、酢酸エチル相を濃縮した後、シリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーで分画精製したものに由来するものであることを特徴とする、（１）に記載の皮膚外用剤。
（３）前記一般式（１）に表されるクマリン及び／又はクマリン類似物質が、クマリン（Coumarin）、４−ヒドロキシクマリン（4-Hydroxycoumarin）、ダフネチン（Daphnetin）、スコポレチン（Scopoletin）、ウンベリフェロン（Umbelliferone）、４−メチルウンベリフェロン（4-Methylumbelliferone）、エスクレチン（Esculetin）又はエスクリン（Esculin）であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の皮膚外用剤。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
（４）更に、アスコルビン酸及び／又はその誘導体を含有することを特徴とする、（１）〜（３）何れか１項に記載の皮膚外用剤。
（５）前記アスコルビン酸及び／又はその塩が、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸−２−グルコシド及びその塩から選択される、１種乃至は２種以上であることを特徴とする、（１）〜（４）何れか１項に記載の皮膚外用剤。
（６）１）マメ科クジン（Sophora flavescens）のアルコール抽出物を、酢酸エチルと水で液液抽出し、酢酸エチル相を濃縮した後、シリカゲルを担体とするカラムクロマトグラフィーで分画精製したソフォラフラバノンＧ含有画分と、２）クマリン及び／又は一般式（１）に表されるクマリン類似物質０．００１〜０．１質量％と、３）アスコルビン酸及び／又はその誘導体とを含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
（７）更に、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸アルキル及びそれらの塩から選択される１種乃至は２種以上を含有することを特徴とする、（１）〜（６）何れか１項に記載の皮膚外用剤。
（８）前記グリチルリチン酸、グリチルレチン酸アルキル及びそれらの塩から選択される１種乃至は２種以上の含有量が、０．０５〜０．５質量％であることを特徴とする、（７）に記載の皮膚外用剤。
（９）メラニン産生抑制作用又は抗炎症作用を訴求した医薬部外品であることを特徴とする、（７）又は（８）に記載の皮膚外用剤。
（１０）表示に於いて、メラニン産生を抑制する作用及び／又は炎症を鎮める作用を訴求した医薬部外品である旨の表示と、その使用方法に於いて、適量を取り、シミや色素沈着の気になる部位、或いは、軽い炎症のある部位にカット綿などに含ませ、それを軽く擦過、押し当て動作により、塗布して使用される旨と、前記塗布により、シミや色素沈着を改善する旨、或いは、炎症を鎮める旨の表示と、前記操作により、ひりひり感や火照り感を感じた場合には直ちに使用を止める旨の表示を構成としていることを特徴とする、（９）に記載の皮膚外用剤。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
（１）本発明の皮膚外用剤の必須成分であるソフォラフラバノンＧ
本発明の皮膚外用剤は、必須成分として、ソフォラフラバノンＧ及び／又はその塩を０．０１〜１質量％、より好ましくは０．０５〜０．５質量％含有することを特徴とする。ソフォラフラバノンＧは、クジンの植物体の乾燥物１ｋｇ中に、１０〜５０ｍｇが含有されており、水などを抽出溶媒に使用するとこの成分は溶出しにくく、通常エタノールなどで抽出を行い、溶媒を除去すると０．０１〜０．０５質量％のソフォラフラバノンＧを含有するアモルファスが得られる。かかる抽出物を酢酸エチルと水で液液抽出し、酢酸エチル相を濃縮することにより、０．１〜１質量％のソフォラフラバノンＧを含むアモルファスが得られる。更に、このものをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒クロロホルム、クロロホルム・メタノール混液）で分画精製することにより、ソフォラフラバノンＧを３０〜５０質量％含有する分画を得ることが出来る。クジンより、エタノールで抽出を行うにあたり、使用する植物体の部位としては、根茎が特に好ましく例示できる。抽出は、植物体を細切等して、細かくし、これに１〜１０質量倍の溶媒を加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間、適宜攪拌を加えて浸漬すればよい。その後、室温まで冷却し、しかる後、所望により濾過で不溶物を除去した後、減圧濃縮することにより、アモルファスが得られる。このものの分画精製にあたっては、その状況を薄層クロマトグラフィー等でチェックしながら行うことが好ましく、このものは展開溶媒をクロロホルム（９５容量部）とメタノール（５容量部）の混液とした場合、Ｒｆ０．１程度のところにスポットして現れる。この様なマメ科クジンのエキスの分画・精製物の形態でソフォラフラバノンＧを、前記の量比になるように、含有させることが本発明では好ましい。本発明の皮膚外用剤において、ソフォラフラバノンＧは、後記クマリン及び／又はクマリン類似物質とともに働いて、暴走している炎症因子を鎮静させ、炎症の悪循環を絶ち、生体の傷害累積を予防する作用を発揮する。この様な作用はソフォラフラバノンＧの皮膚外用剤に於ける含有量が０．０１質量％未満では、明確に現れない場合が存し好ましくなく、１質量％を越えて含有させても効果が頭打ちになる場合が存し、好ましくない。以下に、この様な量比のソフォラフラバノンＧを含有させるのに好適な抽出精製物の製造例を示す。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
＜製造例１＞
マメ科クジンの根茎の乾燥物１ｋｇを細切し、これに１０ｌのエタノールを加え、３時間、攪拌下、加熱還流し、室温まで冷却後、減圧濃縮した。このものに２ｌの水と２ｌの酢酸エチルとを加え、可溶化し、液液抽出を行った。酢酸エチル相を取り、濃縮し、１０５ｇのアモルファスを得た。このものの中に含まれるソフォラフラバノンＧを定量したところ、０．９質量％であった。（ＯＤＳカラム４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、カラム温度４０℃、溶出溶媒３０％アセトニトリル水溶液、流速１ｍｌ／分、検知紫外部２２０ｎｍ、標準物質を用いた絶対検量線による定量）シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム、クロロホルム・メタノール混液を溶出溶媒）で精製したところ、３８質量％のソフォラフラバノンＧを含有するアモルファスが１．２ｇ得られた。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
（２）本発明のクマリン及び／又はクマリン類似物質
本発明の皮膚外用剤は、前記クマリン及び／又は一般式（１）に表されるクマリン類似物質を必須成分として、０．００１〜０．１質量％、より好ましくは０．００２〜０．８質量％含有することを特徴とする。一般式（１）に於いて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ独立に水素原子、炭素数１〜４のアルキル基乃至は糖残基でエーテル化されていても良い水酸基又は炭素数１〜４のアルキル基を表し、前記Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４の少なくとも１個が炭素数１〜４のアルキル基乃至は糖残基でエーテル化されていても良い水酸基である。前記炭素数１〜４のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基などが好ましく例示できる。又、糖残基としては、例えば、グルコース残基、ラムノース残基、ガラクトース残基、アラビノース残基等が好ましく例示できる。かかるクマリン及び／又はクマリン類似物質としては、具体的には、例えば、クマリン（Coumarin）、４−ヒドロキシクマリン（4-Hydroxycoumarin）、ダフネチン（Daphnetin）、スコポレチン（Scopoletin）、ウンベリフェロン（Umbelliferone）、４−メチルウンベリフェロン（4-Methylumbelliferone）、エスクレチン（Esculetin）又はエスクリン（Esculin）が好ましく例示できる。これらは唯一種を含有させることも出来るし、二種以上を組み合わせて含有させることも出来る。又、適当なアルカリとともに塩を生成させて、塩として含有させることも出来る。塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、トリエタノールアミン塩、トリエチルアミン塩等の有機アミン塩類、リジン塩、アルギニン塩等の塩基性アミノ酸塩等が好ましく例示できる。これらのクマリン及び／又はクマリン類似物質は、既に市販されているものが存し、かかる市販品を購入して使用することが好ましい。市販品としては、シグマ社より販売されている、クマリン（Coumarin；商品コードＣ４２６１）、４−ヒドロキシクマリン（4-Hydroxycoumarin；商品コードＨ２２５３）、ダフネチン（Daphnetin；商品コードＤ５５６４）、スコポレチン（Scopoletin；商品コードＳ２５００）、ウンベリフェロン（Umbelliferone；商品コードU７６２６）、４−メチルウンベリフェロン（4-Methylumbelliferone；商品コードＭ１３８１）、エスクレチン（Esculetin；商品コード２４６５７−３）又はエスクリン（Esculin；商品コードＥ８２５０）が好ましく例示できる。又、これらの成分は、生薬植物の植物体にも含有されているので、植物体を抽出し、溶媒を除去して、所望により分画、精製してこれを含有させることも出来、この様な形態も本発明の技術的範囲に属する。例えば、クマリン（Coumarin）、４−ヒドロキシクマリン（4-Hydroxycoumarin）、ダフネチン（Daphnetin）、は、ミカン科ミカン（Citrus unshiu）に含有されているし、スコポレチン（Scopoletin）、は、アブラナ科のアリキシア・シネンシス（Alyxia sinensis）に含有されている。ウンベリフェロン（Umbelliferone）、４−メチルウンベリフェロン（4-Methylumbelliferone）は、セリ科のピュースダナム・ウォロンゲンゼ（Peucedanum wulongense）に含有されている。エスクレチン（Esculetin）、エスクリン（Esculin）は���イヨウトチノキ（Alsculus hippocastanum）に含有されている。これらを含水エタノールなどで抽出し、溶媒を除去することにより、クマリン及び／又はクマリン類似物質を高濃度に含有する抽出物が得られ、かかる抽出物を本発明の皮膚外用剤に含有させることが出来る。この製造例を以下に示す。これらのクマリン及び／又はクマリン類似物質は、前記ソフォラフラバノンＧとともに働いて、暴走している炎症因子を鎮静させ、炎症の悪循環を絶ち、生体の傷害累積を予防する作用を発揮する。クマリン及び／又はクマリン類似物質の含有量が、０．００１未満の場合にはこの様な作用が発揮されない場合が存し、０．１質量％を越えると効果が頭打ちになる場合が存する。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
＜試験例１＞
乳液１について、５名のパネラーを用い、その効果を調べた。即ち、パネラーの背部に６つの２ｃｍ×３ｃｍの大きさの部位を作成し、その内の１カ所は無処置対照とし、１カ所は照射対照とした。のこる４カ所をサンプル投与部位とし、サンプルとしては、乳液１、乳液１の製造例１のアモルファスを水に置換したもの（比較例１）、乳液１の製造例２のエキス液１を水に置換したもの（比較例２）及び乳液１の製造例１のアモルファスと製造例２のエキス液１を水に置換したもの（比較例３）とを調整して用いた。無処置対照を除く５部位は、予め測定しておいた最少紅斑容量（ＭＥＤ）の３倍の紫外線（光源：ＳＥランプ）を照射し、照射後３０分にサンプル０．０５ｍｌを投与した。照射対照部位はサンプルの投与は行わなかった。以後、１日１回サンプルを１４日間投与し、照射後１５日目に測色し、角層細胞を粘着テープで採取し、ゲンチアナバイオレットで染色し角層面積を計測した。色差は無処置部位に対する色差（ΔＥ）として求めた。結果を表１に示す。これより、本発明の皮膚外用剤では、炎症が速やかに鎮静し、肌状態も正常に戻っていることが判る。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
実施例１と同様に、下記に示す処方に従って、本発明の皮膚外用剤である乳液４〜（医薬部外品：抗炎症作用とメラニン産生抑制作用を訴求）を作成した。試験例１と同様に、パネラー１名で、評価したところ、表４に示す結果が得られた。クマリン及び／又は一般式（１）のクマリン類似物質には同様の作用があることが判る。又、その由来を問わないことも判る。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
イ）
ベヘニルアルコール                              ０．５質量％
セチルイソオクタネート                          ２ 質量％
スクワラン ８ 質量％
ジメチコン ２ 質量％
ソルビタンセスキステアレート                    １．５質量％
ＰＯＥ（４５）ステアリン酸                      １ 質量％
セチルステアレート                              ０．５質量％
ベヘン酸                                        ０．５質量％
グリチルレチン酸ステアリル                      ０．１質量％
ロ）
１，３−ブタンジオール                          ５ 質量％
グリセリン ５ 質量％
１，２−ペンタンジオール                        ５ 質量％
水 ５０ 質量％
アスコルビン酸−２−グルコシド                  ２ 質量％
カルボキシビニルポリマー                        ０．３質量％
製造例１のアモルファス                          ０．５質量％
（ソフォラフラバノンＧ０．１９質量％）
表４記載のクマリン及び／又はクマリン類似物質    ０．０３質量％
セイヨウノコギリソウエキス                      ０．５質量％
アルニカエキス                                  ０．４質量％
ハ）
水                                              １６．５７質量％
水酸化カリウム                                  ０．６質量％
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
【表４】
2005306816.tif 000012