【手続補正書】
【提出日】平成18年6月8日(2006.6.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】  明細書
【発明の名称】  免疫能改善用組成物、及び該組成物を含有する食品並びに医薬品
【特許請求の範囲】
【請求項１】  唾液中のイムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）含量の低下による免疫能の低下を改善する組成物であって、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を有効成分として含有することを特徴とする免疫能改善用組成物。
【請求項２】  前記免疫能の低下が、唾液中のクロモグラニンＡ（ＣｇＡ）値の上昇を伴う精神的なストレスを原因とするものである請求項１記載の免疫能改善用組成物。
【請求項３】  精神的なストレスによる免疫能の低下の改善に用いられる食品であって、請求項１又は２に記載の免疫能改善組成物を含有することを特徴とする食品。
【請求項４】  精神的なストレスによる免疫能の低下の改善に用いられる医薬品であって、請求項１又は２に記載の免疫能改善組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を有効成分として含有する免疫能改善用組成物に関し、更に詳しくは、精神的なストレスによる免疫機能の低下を改善する組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現代は、ストレス社会とも言われストレスに起因する様々な疾患が増加している。ストレスに起因すると考えられている健康障害は、ストレスによって生体の恒常性の保持が崩された状態と考えられている。
【０００３】
更に近年、ストレス負荷時にＮＫ細胞の活性が低下すること、サイトカイン産生能の低下等が報告されておりストレスと免疫との関連性が明らかになってきている（J. Immunol：p834−837，vol.135,1985）。
【０００４】
しかしながら、このようなストレスによる免疫機能の低下により起こる健康障害の改善及び治療にはそれぞれの症状に応じた対症療法が主に行われている。また、ストレスに効果があるとされている食品も多数上市されているが、それらはストレスにより消費されるビタミンやミネラル類を補給するに過ぎず、ストレス負荷により引き起こされる免疫機能の低下にまで効果を発揮する素材は多くは知られていない。
【０００５】
このような背景からストレスによる免疫機能の低下を抑制する種々の食品成分が検討されており、例えば、特開平９−１２４４７０号公報では、カロテノイドの１種であるアスタキサンチンにストレスによる免疫能の低下を予防、改善する効果があると報告されている。しかし、アスタキサンチンはストレス負荷時のＮＫ細胞活性低下抑制作用は報告されているものの、生体防御の中心を担う抗体量の変動に与える影響などは検討されていない。また、ラットを使用した拘束ストレスによる効果のみが報告されているが、ストレスには様々なケースがあり、肉体的なストレスと精神的なストレスとでは免疫機能への影響も異なることが推察される。そのため、ストレスによる免疫機能への影響を検討するには種々のストレスのケースを想定して試験を行うことが重要であると考えられる。従って、ラットに対する試験のみの評価ではヒトに利用した場合の効果は充分ではないと考えられる。
【０００６】
特開２００１−３３３７３１号公報では、乳ペプチドによる免疫能低下抑制効果が報告されているが、アスタキサンチンと同様に動物によるストレス負荷試験におけるＮＫ細胞活性の低下抑制効果のみである。人間のストレスには肉体疲労によるものの他に家庭生活、社会生活におけるストレスなど精神的な疲労感によるストレスも多くあると考えられ、種々のストレスのケースを考慮して試験を行う必要があると考えられる。
【０００７】
近年では、仕事上のストレスが大きくなると風邪をひきやすくなるといった精神的なストレスによる免疫機能への影響も注目されていることよりヒトに対する精神的なストレスを負荷した場合の試験が重要である。
【０００８】
特開平１０−２１８７７０号公報では、脳血管障害に伴う情緒障害の改善に使用されている薬剤が免疫能改善作用を有することを報告している。しかし、頭痛、頭重、幻覚、眩暈等の副作用が確認されており安全性の点で問題がある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明はこのような背景を鑑み、精神的なストレスによって低下する免疫能、具体的には、唾液中のイムノグロブリンＡ（以下、「ＩｇＡ」ともいう）含量の低下を改善し、更には副作用がなく安全な組成物を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記課題について鋭意検討を行った結果、脳内に存在する抑制系の神経伝達物質として知られているγ−アミノ酪酸（以下、「ＧＡＢＡ」ともいう）を摂取することにより、精神的なストレスを負荷した際のクロモグラニンＡ（ＣｇＡ）値の上昇を抑制するとともに、免疫能の低下、すなわち唾液中のＩｇＡ値の低下が抑制されることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１１】
すなわち本発明の免疫能改善用組成物は、唾液中のイムノグロブリンＡ（ＩｇＡ）含量の低下による免疫能の低下を改善する組成物であって、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明の免疫能改善用組成物においては、前記免疫能の低下が、唾液中のクロモグラニンＡ（ＣｇＡ）値の上昇を伴う精神的なストレスを原因とするものであることが好ましい。
【００１３】
一方、本発明の食品及び医薬品は、精神的なストレスによる免疫能の低下の改善に用いられ、前記免疫能改善組成物を含有することを特徴とするものである。
【００１４】
本発明の免疫能改善用組成物は、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を有効成分として含有することにより、精神的なストレスによる免疫能の低下を安全に改善することができる。
【００１５】
【発明の実施形態】
本発明で用いられるＧＡＢＡは、食品の成分として茶、野菜類、穀類等に微量含まれているアミノ酸の一種である。ＧＡＢＡの製造方法は、特に限定されず、化学合成法、グルタミン酸脱炭酸酵素やその酵素を含有する動植物を用いる生産法、グルタミン酸脱炭酸酵素を生産する微生物を用いた発酵法など、いずれの方法を用いてもよい。本発明においては、大量且つ安価にＧＡＢＡを得ることができる乳酸菌による発酵法が好ましく、例えば、グルタミン酸ソーダ、ブドウ糖、酵母エキス、酢酸ナトリウム、硫酸マグネシウム等を含む培養液に、乳酸菌（ラクトバチルス  ブレビス（ＩＦＯ１２００５株）、ラクトバチルス  ヒルガルディーＫ−３株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８４２２）等）の培養液を添加し、２０〜３０℃で、１〜３日間培養し、この培養液を、加熱殺菌後、濾過して濾液を得ればよい。なお、乳酸菌としてラクトバチルス  ヒルガルディーＫ−３株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８４２２）を用いた場合、培養液中のＧＡＢＡ含量は約５質量％、固形分当りに換算するとＧＡＢＡは約５０％を占める。
【００１６】
この濾液は、適宜濃縮してそのまま、又は更に乾燥して粉末として、本発明の免疫能改善用組成物として用いることができる。また、上記濾液をカラムクロマトグラフィー等の処理に供することにより、ＧＡＢＡを更に精製することもできる。例えば、イオン交換樹脂ＤＳＲ−０１（商品名、三菱化学株式会社製）を用いたカラムクロマトグラフィーを行なうことにより、よりＧＡＢＡ含量の高い（８０質量％以上）組成物を得ることができる。
【００１７】
本発明における精神的なストレスとは、仕事のストレス、恐怖心によるストレス等の精神的疲労を意味する。
【００１８】
本発明において、免疫能の指標とされる唾液中のＩｇＡは、抗体タンパク質のひとつである。特に唾液中のＩｇＡは、外からの異物（ウイルス、細菌等）を無毒化する際、最初に対応する免疫物質であり、粘膜の保護など、生体の防御システムにおいて重要な役割を担っている事が知られており、唾液中のＩｇＡ量の低下は、生体の防御システムに直接的で大きな影響を与えると考えられる。
【００１９】
例えば、仕事上のストレスを抱えている時には、風邪を引きやすい等の現象が知られているが、そのような場合においては、肉体的なストレスよりも精神的なストレスが大きいと考えられ、精神的ストレスにより、唾液中の生体防御物質であるＩｇＡが減少することが関与しているのではと推察される。
【００２０】
また、本発明において、精神的なストレスの指標とされるＣｇＡ（クロモグラニンＡ）は、内分泌・神経系に広く分布し、特に副腎髄質と下垂体に高濃度検出される酸性の糖タンパク質であり、ヒトＣｇＡは４３９アミノ酸残基からなることが知られている。また、ＣｇＡは顎下腺導管部に存在し、自律神経刺激により唾液中に放出されることが明らかになり、唾液中のＣｇＡは精神的なストレスの新しい指標として注目されている。
【００２１】
本発明において唾液中のＩｇＡやＣｇＡの測定方法は特に限定されないが、安定で簡便なエンザイムイムノアッセイ法（ＥＬＩＳＡ法）が好ましい。
【００２２】
本発明におけるヒトに対するＧＡＢＡの摂取量は、対象者の年齢、体重などにより異なるため、特に限定されないが、通常ＧＡＢＡとして一日あたり１００ｍｇ〜３０００ｍｇが望ましい。
【００２３】
本発明における免疫能改善組成物を含有する食品とは、特に限定するものではないが例えば飲料、乳飲料、乳酸菌飲料、調味料、プリン、ヨーグルト、焼き菓子等が挙げられる。
【００２４】
本発明における免疫能改善組成物を含有する医薬品の形態としては、特に限定するものではないが、カプセル、錠剤、顆粒状等の形態が挙げられる。
【００２５】
以下に試験例、実施例を示し、本発明をより詳細に説明するが、その内容に制限されるものではない。
【００２６】
【実施例】
試験例  拘束水浸ストレス負荷による血液中ＩｇＧ量の変動
４週齢のWister系雄ラットを以下に示す５群に分け、ＧＡＢＡ投与群にはＧＡＢＡを２０％含有する食品素材（乳酸菌発酵エキス）ファーマギャバ２０（商品名、株式会社ファーマフーズ研究所製）の水溶液をＧＡＢＡとして２００ｍｇ／ｋｇ体重／日となるよう、１０日間ゾンデにより毎日経口投与した。アスタキサンチン投与群にはアスタキサンチン（astaxanthinロッシュ製）の水溶液を２００ｍｇ／ｋｇ体重／日となるよう、乳ペプチド投与群には乳ペプチド（特開２００１−３３３７３１号公報に記載の方法にて調製）の水溶液を２００ｍｇ／ｋｇ体重／日となるよう、Control（水投与）群には同量の水を、同様に毎日経口投与した。
【００２７】
＜試験群＞
１．Control（水投与、ストレスなし）
２．ストレス＋水（水投与、ストレス負荷）
３．ストレス＋ＧＡＢＡ（ＧＡＢＡ投与、ストレス負荷）
４．ストレス＋アスタキサンチン（アスタキサンチン投与、ストレス負荷）
５．ストレス＋乳ペプチド（乳ペプチド投与、ストレス負荷）
【００２８】
１０日間の経口投与後、拘束水浸ストレス法によるストレス負荷を４時間行い、その後断頭により屠殺し、血液を採取し、血清を分離した。
【００２９】
採取した血清中のＩｇＧ含量の測定を、以下に示す抗ＩｇＧ−ＥＬＩＳＡ法にて行った。
【００３０】
１．抗ラットＩｇＧウサギＩｇＧのコーティング
抗ラットＩｇＧウサギＩｇＧ（シグマ社製）をコーティングバッファーにて５μｇ／ｍｌになるように希釈し、１００μｌ／Wellで９６穴ＥＬＩＳＡプレートに添加し、３７℃にて１時間静置した。
【００３１】
２．試験サンプル及びラットＩｇＧスタンダードの添加
コーティングが終了したプレートをTBS−Tweenバッファーにて３回洗浄し、試験サンプルとスタンダード（ラットＩｇＧ：５００ｎｇ／ｍｌ〜７．８ｎｇ／ｍｌ）をそれぞれ１００μｌ／Wellで添加した。３７℃、１時間静置により抗原−抗体反応を行った。
【００３２】
３．２次抗体の添加
反応が終了したプレートをTBS−Tweenバッファーにて３回洗浄し、HRP（西洋ワサビペルオキシダーゼ）−抗ラットＩｇＧウサギＩｇＧを１００μｌ／Wellで添加した。３７℃、１時間静置し、２次抗体の反応を行った。
【００３３】
４．基質の添加
プレートをTBS−Tweenバッファーにて３回洗浄し、各WellにTMB−基質溶液を添加し、３７℃、２０分間で酵素反応を行った。
【００３４】
５．酵素反応の停止
２Ｎ Ｈ２ＳＯ４を各Wellに添加し酵素反応を終了させた。その後４５０ｎｍにて吸光度を測定し、スタンダードの検量線から各サンプルのＩｇＧ濃度を算出した。Control群のＩｇＧ量を１００％とし、各試験群の変動率を示した。結果を表１に示す。
【００３５】
【表１】
2003327528.tif 000001
【００３６】
表１より、Control群と比較して、ストレス負荷群では、血清中のＩｇＧ含量が減少し、ストレスによって免疫能が低下しているが、ＧＡＢＡ投与群では、血清中のＩｇＧ含量の減少が小さく、ストレスによる免疫能の低下が抑制されていることが分かる。一方、比較群であるアスタキサンチン投与群及び乳ペプチド投与群では、ＧＡＢＡ投与群に比べて、ＩｇＧ含量の減少が大きいことが分かる。
【００３７】
【実施例１】  ヒトによるストレス負荷試験（その１）
２０代から４０代の健康な男女からなるヒトボランティア１５名で、精神的疲労によるストレスを想定し、１時間の単純なワープロ作業（英語）を実施してもらい、作業開始前、２０分後、４０分後、６０分後に唾液を採取した。評価は唾液中のＩｇＡ量の変動をＥＬＩＳＡ法にて測定した。
【００３８】
試験サンプルを何も摂取しない状態で作業を実施した場合をControlとし、その後以下に示す４グループに分け、試験サンプル（４種類）の水溶液をＧＡＢＡとして、あるいは各成分として２００ｍｇ／日となるよう毎日、１週間摂取した。１週間後に同様の作業を実施し、唾液中のＩｇＡ含量の変動をControlと比較した。
【００３９】
＜ヒトボランティア試験＞
１．ＧＡＢＡ摂取群
２．アスタキサンチン摂取群
３．乳ペプチド摂取群
４．水摂取群
【００４０】
採取した唾液中のＩｇＡ含量を、上記試験例と同様の方法（ラットＩｇＧの代わりにヒトＩｇＡを用いた）で測定した。その結果を表２に示す。
【００４１】
【表２】
2003327528.tif 000002
【００４２】
表２から、Controlでは、作業開始後にＩｇＡ含量が低下しており、精神的なストレスにより、免疫能が低下していることが、ＧＡＢＡ摂取群では、作業開始後もＩｇＡ含量の変動はほとんど認められず、精神的なストレスによる免疫能の低下が抑制されていることが分かる。一方、水摂取群、アスタキサンチン摂取群、及び乳ペプチド摂取群では、Controlと同様の傾向を示し、精神的なストレスにより、免疫能が低下していることが分かる。
【００４３】
上記の結果から、ＧＡＢＡを摂取することにより、ワープロ作業という精神的なストレスによる免疫能の低下を抑制できるが、従来からストレス負荷時の免疫能低下抑制効果が報告されているアスタキサンチンや乳ペプチドを摂取しても、精神的なストレスによる免疫能の低下をほとんど抑制できないことが分かる。
【００４４】
実施例２  ヒトによるストレス負荷試験（その２）
２０代から５０代の健康な男女からなる高所恐怖症のヒトボランティア２２名が高さ５４ｍ、長さ３００ｍの吊橋を渡り、恐怖心によるストレス負荷の試験を行った。橋を渡る前、吊橋の中間付近、終了時の計３回唾液を採取し、ＩｇＡ量の変動で評価した。
【００４５】
試験サンプルを摂取しない状態での試験をControlとし、その後以下の４グループに分け試験サンプルの水溶液をＧＡＢＡとして、あるいは各成分として５００ｍｇとなるよう摂取後、再度試験を行った。
【００４６】
＜試験群＞
１．ＧＡＢＡ摂取群
２．アスタキサンチン摂取群
３．乳ペプチド摂取群
４．水摂取群
【００４７】
採取した唾液中のＩｇＡ含量の測定を、実施例１と同様に抗ＩｇＡ−ＥＬＩＳＡ法にて行った。その結果を表３に示す。
【００４８】
【表３】
2003327528.tif 000003
【００４９】
表３から、Control及び水摂取群では、試験開始前（平常時）に比べて、吊橋の真ん中、終了時において唾液中のＩｇＡ含量が大幅に減少していることが分かる。また、従来からストレス負荷時の免疫能低下抑制効果が報告されているアスタキサンチンや乳ペプチドを摂取しても、ＩｇＡ含量が減少しており、恐怖心によるストレスによる免疫能の低下をあまり抑制できないことが分かる。一方、ＧＡＢＡ摂取群においては、ＩｇＡ含量の変動がほとんどなく、恐怖心によるストレスによる免疫能の低下が抑制されていることが分かる。
【００５０】
また、採取した唾液中のＣｇＡ含量の測定を、商品名「ＹＫ０７０
ヒトＣｇＡ−ＥＩＡキット」（株式会社矢内原研究所製）を用いた抗ＣｇＡ−ＥＬＩＳＡ法にて行った。その結果を表４に示す。
【００５１】
【表４】
2003327528.tif 000004
【００５２】
表４から、Control及び水摂取群では、試験開始前（平常時）に比べて吊橋の真ん中、終了時における唾液中のＣｇＡ量が大幅に上昇しており、大きな精神的なストレスを受けていることが分かる。また、従来からストレス負荷時の免疫能低下抑制効果が報告されているアスタキサンチンや乳ペプチドを摂取しても、ＣｇＡ量の上昇が認められ、精神的なストレスが低減されていないことが分かる。一方、ＧＡＢＡ摂取群においては、ＣｇＡ含量の上昇がほとんどなく、精神的なストレスが低減されていることが分かる。
【００５３】
実施例３ 免疫能改善用食品の調製
ＧＡＢＡを配合した免疫能改善用食品を以下の処方により調製した。尚、本処方は食品形態の１例であり特に本特許を限定するものではない。
【００５４】
＜免疫能改善用ヨーグルト＞
牛乳                      ９６０ｇ
脱脂粉乳                      ５ｇ
ファーマギャバ２０            ５ｇ
水                          １０ｇ
乳酸菌                        適宜
【００５５】
＜免疫能改善用乳飲料＞
全卵                          １個
牛乳                      ２００ｃｃ
砂糖                        １０ｇ
ファーマギャバ２０        １．５ｇ
バニラエッセンス              少々
全ての原料を混合し、ミキサーにて均質化する。
【００５６】
実施例４ 免疫能改善用医薬品の調製
乳糖                  ２５０ｍｇ
デキストリン          ２００ｍｇ
ＧＡＢＡ                ５０ｍｇ
全ての原料を混合し、打錠する。
【００５７】
【発明の効果】
本発明によれば、安全で副作用がなく、精神的なストレス負荷時における免疫能の低下を抑制することができる免疫能改善用組成物を提供することができる。