(57)【要約】【課題】血糖値が正常な状態、又は糖尿病予備軍の段階から血糖値のコントロールをすることのできる、副作用の少ない、安全な食物由来の血糖上昇抑制剤を提供することである。さらに当該組成物を含む飲食品、健康食品、機能性食品、健康補助食品等の食品類、飲料類を提供することを課題とする。【解決手段】酵母の抽出物を有効成分とする。酵母抽出物としては、酵母を熱水処理、酸またはアルカリ処理、及び酵素処理するという簡単な操作により得られる酵母エキスが、より優れた血糖上昇抑制作用を有することを見出した。【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルタチオン含量が１５質量％以上、アデニン含量が０．０５質量％以上、アデノシン含量が０．０５質量％以上、葉酸含量が０．０１０質量％以上、リボフラビン含量が０．０１０質量％以上である、血糖値上昇抑制用酵母エキス。
【請求項２】
前記酵母エキスの酵母がキャンディダ・ユティリス（Candida utilis）又はサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である、請求項１記載の血糖値上昇抑制用酵母エキス。
【請求項３】
グルタチオン含量が１５質量％以上、アデニン含量が０．０５質量％以上、アデノシン含量が０．０５質量％以上、葉酸含量が０．０１０質量％以上、リボフラビン含量が０．０１０質量％以上である酵母エキスを有効成分として含有する血糖値上昇抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はトルラ酵母由来の水性溶媒抽出物を有効成分として含有した食品組成物および医薬組成物を提供するものである。具体的には、糖尿病予防効果に優れた食品組成物および医薬組成物を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病人口は世界的に増加を続けており、世界の糖尿病有病者数は２０１５年現在で４億１５００万人に上る。さらに、糖尿病とは診断されないが、血糖値が正常値よりも高い糖尿病前症の人も急増している。これに伴い、糖尿病関連の医療費は現在、世界で約８１兆円（約22兆台湾ドル）に上り、今後も増加する予測が為されている。【０００３】
糖尿病はインスリン依存性であるＩ型糖尿病と、インスリン非依存性であるＩＩ型糖尿病に分類されている。特に、生活習慣などの環境要因により後天的に発症するＩＩ型糖尿病を患う人が増加しており、糖尿病患者の９割ほどを占める。糖尿病は、高血糖状態が持続することによる代謝異常であるため、慢性化することで眼、腎臓、神経系、血管系、皮膚等、全身の臓器で重篤な合併症を起こしやすくなることが深刻な問題となる。【０００４】
糖尿病の治療薬剤としては、インスリン製剤や、インスリンの分泌を促進するスルホニルウレア製剤、糖質の消化、吸収を遅延させるα−グルコシダーゼ阻害剤、インスリン抵抗性を改善するチアゾリジン系製剤などが知られている。しかしながら、これら合成薬剤は医師の処方箋が必要であるために入手が容易ではなく、そのうえ、効果が十分でない場合がある。さらには、厳密に服用しなければ、低血糖状態に陥るなど様々な副作用を伴い、安全性にも課題が存在した。【０００５】
従って、血糖値が正常な状態、又は糖尿病予備軍の段階から血糖値のコントロールをすることが重要であり、様々な食品由来の組成物が報告されている。例えば、β−ラクトグロブリン加水分解物由来のペプチド（特許文献１）、ユーグレナ由来のパラミロン（特許文献２）、難消化性デキストリン（特許文献３）、枇杷種子抽出物（特許文献４）などがあり、微生物由来のものとしては納豆菌によるマコンブ発酵物（特許文献５）が報告されている。【０００６】
一方、酵母から抽出される酵母エキスは、培養等した酵母から熱水抽出、酵素処理、自己消化などを経て得られる抽出物である。酵母エキスは、旨味成分である、グルタミン酸などのアミノ酸、核酸を含むため、食品素材として使用されている。また、酵母エキスは、食品素材だけでなく、生体調節機能を有していることも知られている。例えば、特定の条件で培養した酵母から得られる酵母エキスが、血糖値をコントロールすることが知られている（特許文献６）。
このようななか、さらに効果が高く、安全で、また安価に入手可能である、血糖値をコントロールする組成物が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１１−１４４１６７号公報
【特許文献２】特開２０１４−１１８３７４号公報
【特許文献３】特開２００５−２８９８４７号公報
【特許文献４】特開２００５−３２５０２９号公報
【特許文献５】特開２０１５−２１０００号公報
【特許文献６】特開２００９‐２９１０７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
糖尿病患者、糖尿病予備軍、さらには健常者に対して有効であり、かつ副作用が少なく安全な、血糖値上昇抑制剤を提供することを課題とする。さらに、本血糖値上昇抑制剤は、食物由来で、安価であり、食品や医薬品等として利用できるものであることが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明では、ラット筋芽細胞（Ｌ６細胞）におけるグルコース取り込み能を確認したところ、酵母を熱水処理、酸もしくはアルカリ処理、または酵素処理するという簡単な操作により得られる酵母エキスが、グルコース取り込み促進作用を有することを見出した。【００１０】
さらに、糖尿病モデルラット（ＧＫラット）にその酵母エキスを長期的に経口投与することで、空腹時血糖値の上昇が抑制されることを見出した。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の血糖値上昇抑制剤である酵母エキスは、食品として知られている酵母から抽出されるエキスである。そのため、比較的容易かつ安価に生産できる上、糖尿病患者の改善、糖尿病予備軍の糖尿病予防及び改善、さらには健常者が糖尿病の予防のために、食品として安全に長期継続的に摂取することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試験１の実施例１、比較例１、比較例２、比較例３のグルコース取り込み活性（％）。実施例１および比較例２，３の1mg／mL及び5mg／mLは、サンプル溶液の濃度を示す。比較例１の100nMは、インスリンの終濃度を示す。＊は、5％危険率での有意差があることを示し、＊＊は1％危険率での有意差があることを示す。
【図２】試験２の空腹時血糖値（BGL：blood glucose level）。Weekは、GKラットの週齢を示す。＊は、5％危険率での有意差があることを示し、＊＊は1％危険率での有意差があることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の酵母エキスの製造に用いられる酵母は、一般的に用いられている酵母であれば使用することができる。具体的には、パン酵母、ビール酵母、トルラ酵母などを挙げることができる。この中でも、特にトルラ酵母（Ｃａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ）が望ましい。
本発明に用いた酵母エキスは、グルタチオン含量１５質量％以上、アデニン含量０．０５質量％以上、アデノシン含量０．０５質量％以上、葉酸含量０．０１０質量％以上、リボフラビン含量０．０１０質量％以上の酵母エキスである。グルタチオン含量１５質量％以上、アデニン含量０．１質量％以上、アデノシン含量０．１質量％以上、葉酸含量０．０１０質量％以上、リボフラビン含量０．０１０質量％以上の酵母エキスがより望ましい。
【００１４】
グルタチオンを含有する酵母菌体から酵母エキスを抽出することで、グルタチオンを１５質量％以上含有する酵母エキスが得られる。酵母の培養形式に特に制限はないが、一般にバッチ培養（batch culture）、あるいは連続培養（continuous culture）のいずれかが用いられる。培地も一般に使用されているものが使用できる。例えば、炭素源としてブドウ糖、酢酸、エタノール、グリセロール、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液等が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸塩等が使用される。リン酸、カリウム、マグネシウム源としては例えば過リン酸石灰、リン酸アンモニウム、塩化カリウム、水酸化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等が使用でき、その他亜鉛イオン、銅イオン、マンガンイオン、鉄イオン等の無機塩を添加する。その他、ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等を添加したり、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、ペプトンなどの有機物を添加したりしてもよい。培養温度は２１〜３７℃、好ましくは２５〜３４℃で、ｐＨは３．０〜８．０、特に３．５〜７．０が好ましい。
【００１５】
酵母菌体培養後に本発明の酵母エキスの抽出を行う。酵母エキスの抽出法は、特に制限がないが、一般的に、自己消化法、熱水抽出法、酵素抽出法、酸若しくはアルカリ抽出法、又はこれらの組み合わせにより行うことが可能である。
【００１６】
自己消化により酵母エキスを抽出する場合は、例えば酵母培養液等を、５５℃で４時間撹拌する。酵素抽出法であれば、酵母培養液等に、細胞壁溶解酵素又はプロテアーゼ等を添加し、反応させて抽出する。酸抽出法であれば、酵母培養液等を硫酸等で酸性に調整後、抽出する。アルカリ抽出法であれば、酵母培養液等を、アルカリに調整後、抽出する。又は、自己消化後に、酵素抽出を行うなどの組み合わせも可能である。
【００１７】
酵母エキス抽出後は、遠心分離等で酵母残渣を分離し、濃縮後、凍結乾燥又は熱風乾燥することでグルタチオン含有酵母エキスを得ることができる。本発明の酵母エキス中に含まれるグルタチオンは、還元型グルタチオンのことを指す。
【００１８】
本発明の酵母エキスは、グルタチオンを１５質量％以上含有するものである。酵母エキス中のグルタチオン含量が１５質量％以上になるようにするには、培養酵母中のグルタチオン含量ができるだけ高いものを用いることが望ましい。そのような酵母菌体から、前述の抽出法により酵母エキスを抽出することで、効率良く本発明品を製造することができる。酵母中のグルタチオン含量を高める方法としては、公知の方法でよい。例えば、培地中に亜鉛イオンを添加する方法（特開２０００−２７９１６４号公報）、カドミウム耐性、マクロライド系抗生物質耐性を指標としたグルタチオン高含有酵母株の取得方法（特開２００６−４２６３７号公報、特開２００６−４２６３８号公報）等がある。特開２０１１−１０３７８９号公報のように変異酵母菌体から抽出することでも得ることができる。また、一般に販売されている酵母エキスであれば、例えば、興人ライフサイエンス株式会社製の「ハイチオンエキスＹＨ−１５」などがある。
【００１９】
本願発明において、グルタチオン濃度の測定は、ＤＴＮＢ−ＨＰＬＣ法（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１９４（１９８０）４２４−４２８）で行った。なお、本願のグルタチオン含量は、還元型グルタチオン含量のことをいう。
【００２０】
アデニン、アデノシン濃度は、下記の測定方法・条件によって定量を行うことが出来る。すなわち、試料２０ ｍｇを０．１ｗ／ｗ％ギ酸（formic acid）溶液で１００ ｍＬにメスアップし、液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）により分析する。アデニン、アデノシン（いずれもフリー）の各試薬を標品として同じ条件でＬＣ−ＭＳ／ＭＳにかけ、そのピーク面積により検量線を作成し、試料中のアデニン、アデノシンの含量を算出する。
分析条件は以下のように設定することが出来る。
＜ＬＣ条件＞
・カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−３（２．１ ｍｍ×１５０ ｍｍ）
・移動相：Ａ；０．１ｗ／ｗ％ギ酸、Ｂ；０．１ｗ／ｗ％ギ酸／アセトニトリル、Ａ→Ｂ；２０ ｍｉｎリニアグラジエント
・流量：０．２ ｍＬ／ｍｉｎ
・カラム温度：４５℃
＜ＭＳ／ＭＳ条件＞
・測定機器：ａｍａｚｏｎ（Ｂｒｕｋｅｒ ｄａｌｔｏｎｉｃｓ社）
・イオン化法：ＥＳＩ−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ
・モニターイオン：アデニン；ｍ／ｚ１３６→１３６、アデノシン；ｍ／ｚ２６８→１３６
【００２１】
リボフラビンと葉酸の濃度は、日本食品標準表で定められた分析方法に従って測定した。ＮＡＤ（nicotinamide adenine dinucleotide）濃度の測定は、当業者によって知られた情報を使用することが出来るが、例えば下記の測定方法、条件によって定量を行うことが出来る。すなわち、試料０．１ ｇを蒸留水で１００ ｍＬにメスアップした後、０．４５μｍのフィルターでろ過し、濾液を液体クロマトグラフィー分析により分析する。試薬を標品として同じ条件で分析し、そのピーク面積により検量線を作成し、試料中のＮＡＤ濃度を算出する。分析条件は以下のように設定することが出来る。
＜液体クロマトグラフィー条件＞
・カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ ５Ｃ１８ＲＳ（４．６ ｍｍ×１５０ ｍｍ）
・移動相：０．５％ リン酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ３．２）
・流量：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ
・カラム温度：４０℃
・ＵＶ検出波長：２１０ ｎｍ
【００２２】
本発明において、酵母エキスは、グルタチオン１５質量％以上の他に、アデニンを０．０５質量％以上、アデノシンを０．０５質量％以上、葉酸を０．０１０質量％以上、リボフラビンを０．０１０質量％以上含有する物を使用する。この含量であれば、使用する酵母エキスに制限はなく、例えば二種以上の酵母エキスを混合して、グルタチオン含量１５質量％以上、アデニン含量０．０５質量％以上、アデノシン含量０．０５質量％以上、葉酸含量０．０１０質量％以上、リボフラビン含量０．０１０質量％以上の酵母エキスとしたものでもよい。より望ましくは、酵母エキスは、グルタチオンを１５質量％以上、アデニンを０．１質量％以上、アデノシンを０．１質量％以上、葉酸を０．０１０質量％以上、リボフラビンを０．０１０質量％以上含有する酵母エキスである。
【００２３】
本発明の糖尿病予防効果の有効成分は、酵母エキスであるため、酵母エキスをそのまま糖尿病予防剤として、又は血糖値上昇抑制剤として摂取することもでき、また他の素材との混合物にして摂取してもよい。
【００２４】
本発明の血糖値上昇抑制剤は、上記の酵母エキスを有効成分として含むものであり、食品材料としても、医薬品組成物としても使用することができる。具体的には、食料品、飲料品、嗜好品、サプリメント、医薬品等として、経口摂取するものを指す。その形態は特に限定されるものではなく、通常の飲食品の形態のほか、錠剤、カプセル、ソフトカプセル、栄養ドリンク状の形態をとることもできる。
【００２５】
飲食品における上記組成物の配合量は血糖値上昇抑制効果を有する限り、特に限定されない。例えば本発明の酵母エキスが飲食品の重量１００ｇに対して１０μｇ〜２０ｇ含まれていればよい。中でも１００μｇ〜２ｇが好適であり、１ｍｇ〜１ｇはさらに好適である。
【００２６】
医薬品における組成物の配合量は特に限定されない。例えば本発明の酵母エキスが医薬品組成物の重量１００ｇに対し１０μｇ〜２０ｇ含まれていればよい。中でも１００μｇ〜２ｇが好適であり、１ｍｇ〜１ｇは更に好適である。
【実施例】
【００２７】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されない。【００２８】
試験１：ラット筋芽細胞（Ｌ６細胞）におけるグルコース取り込み活性測定
Ｌ６細胞を、１０％牛胎児血清を含むＤ‐ＭＥＭ培地（Dulbecco／Vogt modified Eagle's minimal essential medium）で９６ウェルプレートに播種（１×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）し、４８時間前培養した（５％ ＣＯ２、３７℃）後、２％馬血清を含むＤ‐ＭＥＭ培地に交換して９６時間培養（５％ＣＯ２、３７℃）して分化を誘導させた。続いて、無血清のＤ‐ＭＥＭ培地に交換して４時間同調培養（５％ＣＯ２、３７℃）した。その後、ＫＲＰＨバッファー(Krebs Ringer Phosphate Hepes buffer)でウェルを洗浄し、１００μＭの２−ＮＢＤＧ（2-deoxy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-D-glucose）を含むＫＲＰＨバッファーに溶解したサンプル溶液（終濃度１ ｍｇ／ｍＬ又は５ ｍｇ／ｍＬ）を１００μＬ加え、２０分間インキュベート（５％ＣＯ２、３７℃）した。酵母エキスを含まない溶液をコントロールとした。その後、溶液を氷冷したＫＲＰＨバッファー１００μＬと交換して反応を停止させ、マイクロプレートリーダーを用いて細胞内に取り込まれた蛍光性グルコース類似体である２−ＮＢＤＧの蛍光強度を、励起波長４７０ ｎｍ、検出波長５５０ ｎｍで測定した。グルコース取り込み活性は、コントロールの蛍光強度（ＦＣ）を１００としたときの、サンプル溶液を反応させた場合の蛍光強度（ＦＳ）の割合として、以下の式により求めた。
グルコース取り込み活性（％）＝（ＦＳ／ＦＣ）×１００【００２９】
（実施例１）
試験１のサンプルとして、酵母エキスである「ハイチオンエキスＹＨ−１５」のグルコース取り込み活性を測定したところ、濃度依存的にグルコース取り込み活性が上昇した。用いた「ハイチオンエキスＹＨ−１５」は、グルタチオン含量が１９．０質量％、アデニン含量が０．２質量％、アデノシン含量が０．１質量％、葉酸が０．０１４質量％、リボフラビンが０．０２７質量％であった。【００３０】
（比較例１）
試験１のサンプルとしてポジティブコントロールであるインスリン（終濃度１００ ｎＭ）のグルコース取り込み活性を測定したところ、有意にグルコース取り込み活性が上昇した。【００３１】
（比較例２）
試験１のサンプルとして、酵母エキスである「ヌクレアミン」（興人ライフサイエンス社製）のグルコース取り込み促進活性を測定したところ、グルコース取り込み活性の上昇は認められなかった。用いた「ヌクレアミン」はグルタチオン含量が０．８質量％、アデニン含量が０．１質量％、アデノシンが０．６質量％、葉酸が０．００１質量％、リボフラビンが０．０１０質量％であった。【００３２】
（比較例３）
試験１のサンプルとして、酵母エキスである「アロマイルドＧ」（興人ライフサイエンス社製）のグルコース取り込み促進活性を測定したところ、グルコース取り込み活性の上昇は認められなかった。用いた「アロマイルドＧ」はグルタチオン含量が０．１質量％、アデニン含量が０．１質量％、アデノシン含量が０．２質量％、葉酸が０．００２質量％、リボフラビンが０．００９質量％であった。【００３３】
試験２：２型糖尿病モデル（ＧＫ）ラット血液中のグルコース濃度測定
ＧＫラットに対し４〜２０週齢の間、実施例１と同様の組成の「ハイチオンエキスＹＨ−１５」を１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ又は５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ経口投与した。５、１０、１５、１９週齢目にラット尾静脈より採血した。採血した血液を遠心分離し、血漿と血漿以外に分離した。分離した血漿中のグルコース濃度を、グルコースＣＩＩ−テストワコー（和光純薬社）により、測定し、空腹時血糖値の値とした。その結果、１５週齢目で酵母エキス投与群の空腹時血糖値がコントロール群と比較して低下傾向にあり、１９週齢目で有意に低下することが確認された。【００３４】
試験例１の結果を図１、試験例２の結果を図２に示す。コントロールと比較し、本発明の酵母エキスは、有意に効果を有していた。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の酵母エキスは、ラット筋芽細胞においてグルコースの取り込みを促進し、ＧＫラットにおいて空腹時血糖値の上昇を抑制する事がわかった。筋肉組織は体内で最も糖の消費量が多い組織であり、筋肉組織へのグルコース取り込み能とＩＩ型糖尿病との関係は良く知られている。さらに、高血糖状態が続くことはインスリン抵抗性の悪化を招く。また、糖尿病は重篤化すると全身に様々な合併症を発症する。従って、本発明の酵母エキスは糖尿病、さらには糖尿病に起因する様々な合併症の予防に対して有効であると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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2017199951.tif 000006
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