【手続補正書】
【提出日】平成18年8月18日(2006.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１）  被検獣毛繊維製品からＤＮＡを抽出する工程、
２）  １）で抽出したＤＮＡを鋳型として、被検獣毛繊維製品に含まれる獣毛が由来する各動物種に特異的なプライマーと、該プライマーにより増幅される配列を特異的に検出するプローブを用いてリアルタイムＰＣＲを行い、各動物種由来のＤＮＡ量の相対値の比率を得る工程、
３）  予め用意された、実質的に１００％純粋な獣毛繊維を複数の比率で混合した標準混合獣毛繊維を用いて得た各動物種由来の獣毛の混用率と各動物種由来のＤＮＡ量の相対値の比率との対応表に基づいて、２）で得た各種動物種由来のＤＮＡ量の相対値の比率を補正して、被検獣毛繊維製品の混用率を得る工程
を含む、獣毛繊維製品に含まれる獣毛の混用率を調べる方法。
【請求項２】
被検獣毛繊維製品に含まれる獣毛が由来する動物種を判別する工程をさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
被検獣毛繊維製品に含まれる獣毛が由来する動物種を判別する工程が、定性ポリメラーゼ連鎖反応により獣毛繊維中に含まれる動物種を判別する工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
獣毛繊維が、ヤク種、ヒツジ種及びヤギ種からなる群から選択される２以上の動物種に由来する繊維を含んでいる、請求項１〜３いずれかに記載の方法。
【請求項５】
プローブとして、TaqManプローブを用いる、請求項１〜４いずれかに記載の方法。
【請求項６】
以下の塩基配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヒツジ種に特異的なプライマーペア：
5'-AACCAGGAGAACTGCGTTTACT-3'  （配列番号１）
5'-TTTGATCCGCAAATTTCTGA-3'  （配列番号２）。
【請求項７】
以下の塩基配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヒツジ種遺伝子を特異的に検出し得るプローブ：
5'-ACAACCCTTATGTCAACTCGTCCAGGCC-3'（配列番号３）。
【請求項８】
以下の塩基配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヒツジ種に特異的なプライマーペア：
5'-AATCCCTTAGAAGTCCCACTACTCAA-3'  (配列番号１０）
5'-TACACGCCTAGTGCGATGGTAA-3'  (配列番号１１）。
【請求項９】
以下の塩基配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヒツジ種遺伝子を特異的に検出し得るプローブ：
5'-AGCTCACCATAGCCTCATAGAAGGGAACCG-3'(配列番号１２）。
【請求項１０】
（ａ）請求項６記載のプライマーペアおよび請求項７記載のプローブ、または
（ｂ）請求項８記載のプライマーペアおよび請求項９記載のプローブ
を含有する、ヒツジ種遺伝子検出または定量用キット。
【請求項１１】
以下の配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヤギ種に特異的なプライマーペア：
5'-TTAGTTGAATTAGGCCATGAAGCA-3'（配列番号４）、および
5'-TTAATAGGCTTGAGTGCATTGTATTTACT-3'（配列番号５）。
【請求項１２】
以下の塩基配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヤギ種遺伝子を特異的に検出するプローブ：
5'-ACACACCGCCCGTCACCCTCC-3'（配列番号６）。
【請求項１３】
請求項１１記載のプライマーペアおよび請求項１２記載のプローブを含有する、ヤギ種遺伝子検出または定量用キット。
【請求項１４】
以下の配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヤク種に特異的なプライマーペア：
5'-GCTTTCTCTATCCTAATCCTTGCTCTTA-3'（配列番号１３）、および
5'-GGCTGAGTGGTCGGAAGATTAT-3'（配列番号１４）。
【請求項１５】
以下の塩基配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヤク種遺伝子を特異的に検出するプローブ：
5'-CCCCTACTGCACACTTCCAAACAACGAA-3'（配列番号１５）。
【請求項１６】
請求項１４記載のプライマーペアおよび請求項１５記載のプローブを含有する、ヤク種遺伝子検出または定量用キット。
【請求項１７】
以下の塩基配列を有し、請求項１〜５いずれかに記載の方法に用いられるヤク種、ヒツジ種、ヤギ種に共通する配列に特異的なプライマーペア：
5'-TACAGAAACAAAATTATTCGCCAGAGT-3'（配列番号７）および
5'-GGGTATAAAGCACCGCCAAGT-3'（配列番号８）。
【請求項１８】
以下の塩基配列を有し、請求項１７記載のプライマーペアによる増幅産物を特異的に検出し得るプローブ：
5'-TACCGGCAACAGCCCGAAACTCAAA-3'（配列番号９）。
【請求項１９】
請求項１７記載のプライマーペアおよび請求項１８記載のプローブを含有する、ヤク種、ヒツジ種およびヤギ種遺伝子検出または定量用キット。
【請求項２０】
５’末端にレポーター蛍光色素を、３’末端にクエンチャー蛍光色素を結合したTaqMan プローブである、請求項７、９、１２、１５および１８いずれかに記載のプローブ。
【請求項２１】
プローブが５’末端にレポーター蛍光色素を、３’末端にクエンチャー蛍光色素を結合したTaqMan プローブである、請求項１０、１３、１６および１９いずれかに記載のキット。
【請求項２２】
ヒツジ種由来繊維およびヤギ種由来繊維が混用されている獣毛繊維中の、各繊維の混用率を調べるための方法であって、
１）獣毛繊維からＤＮＡを抽出する工程、
２）抽出したＤＮＡを鋳型として、5'-AACCAGGAGAACTGCGTTTACT-3'  （配列番号１）および5'-TTTGATCCGCAAATTTCTGA-3'  （配列番号２）からなるプライマーペアと5'-ACAACCCTTATGTCAACTCGTCCAGGCC-3'（配列番号３）を含むプローブ、もしくは5'-AATCCCTTAGAAGTCCCACTACTCAA-3'  (配列番号１０）および5'-TACACGCCTAGTGCGATGGTAA-3'  (配列番号１１）からなるプライマーペアと5'-AGCTCACCATAGCCTCATAGAAGGGAACCG-3'(配列番号１２）を含むプローブを用いてリアルタイムＰＣＲを行い、抽出したＤＮＡ試料中のヒツジ種由来ＤＮＡ量の相対値を得る工程、
３）抽出したＤＮＡを鋳型として、5'-TTAGTTGAATTAGGCCATGAAGCA-3'（配列番号４）および5'-TTAATAGGCTTGAGTGCATTGTATTTACT-3'（配列番号５）からなるプライマーペアと5'-ACACACCGCCCGTCACCCTCC-3'（配列番号６）を含むプローブを用いてリアルタイムＰＣＲを行い、抽出したＤＮＡ試料中のヤギ種由来ＤＮＡ量の相対値を得る工程、
４）予め用意された、ヒツジ種１００％原毛、ヤギ種１００％原毛、および両者を複数比率で混合した標準混合獣毛繊維からＤＮＡを抽出し、抽出したＤＮＡを鋳型として２）および３）と同一条件下でヒツジ種由来ＤＮＡ量の相対値、およびヤギ種由来ＤＮＡ量の相対値をそれぞれ得、両者の割合を原毛の混合比率と対応付けた表に基づいて相対値の比を補正して、ヤギ種およびヒツジ種由来繊維の混用率を得る工程
を含む、獣毛繊維製品の混用率の鑑定方法。
【請求項２３】
ヤク種、ヒツジ種およびヤギ種が由来の繊維が混用されている獣毛繊維中、各繊維の混用率を調べるための方法であって、
１）獣毛繊維からＤＮＡを抽出する工程、
２）抽出したＤＮＡを鋳型として、5'-AACCAGGAGAACTGCGTTTACT-3'  （配列番号１）および5'-TTTGATCCGCAAATTTCTGA-3'  （配列番号２）からなるプライマーペアと5'-ACAACCCTTATGTCAACTCGTCCAGGCC-3'（配列番号３）を含むプローブ、もしくは5'-AATCCCTTAGAAGTCCCACTACTCAA-3'  (配列番号１０）および5'-TACACGCCTAGTGCGATGGTAA-3'  (配列番号１１）からなるプライマーペアと5'-AGCTCACCATAGCCTCATAGAAGGGAACCG-3'(配列番号１２）を含むプローブを用いてリアルタイムＰＣＲを行い、抽出したＤＮＡ試料中のヒツジ種由来ＤＮＡ量の相対値を得る工程、
３）抽出したＤＮＡを鋳型として、5'-TTAGTTGAATTAGGCCATGAAGCA-3'（配列番号４）および5'-TTAATAGGCTTGAGTGCATTGTATTTACT-3'（配列番号５）からなるプライマーペアと5'-ACACACCGCCCGTCACCCTCC-3'（配列番号６）を含むプローブを用いてリアルタイムＰＣＲを行い、抽出したＤＮＡ試料中のヤギ種由来ＤＮＡ量の相対値を得る工程、
４）抽出したＤＮＡを鋳型として、5'-GCTTTCTCTATCCTAATCCTTGCTCTTA-3'（配列番号１３）および5'-GGCTGAGTGGTCGGAAGATTAT-3'(配列番号１４）からなるプライマーペアと5'-CCCCTACTGCACACTTCCAAACAACGAA-3'(配列番号１５）を含むプローブを用いてリアルタイムＰＣＲを行い、抽出したＤＮＡ試料中のヤク種由来ＤＮＡ量の相対値を得る工程、
５）予め用意された、ヤク種１００％原毛、ヒツジ種１００％原毛およびヤギ種１００％原毛、およびこれらを複数比率で混合した標準混合獣毛繊維からＤＮＡを抽出し、抽出されたＤＮＡを鋳型として２）〜４）と同一条件下でそれぞれの動物種由来のＤＮＡ量の相対値を得、ヤク種とヒツジ種、ヒツジ種とヤギ種、およびヤク種とヤギ種それぞれの組合せにおける２種の相対値の比と２種の原毛の混合比率を対応付けた表に基づいて相対値の比を補正して、ヤク種、ヤギ種およびヒツジ種由来繊維の混用率を得る工程
を含む、獣毛繊維製品の混用率の鑑定方法。
【請求項２４】
リアルタイムＰＣＲにおいて、ＤＮＡ量の相対値を得るための検量線が、5'-TACAGAAACAAAATTATTCGCCAGAGT-3'（配列番号７）および5'-GGGTATAAAGCACCGCCAAGT-3'（配列番号８）をプライマーとし、5'-TACCGGCAACAGCCCGAAACTCAAA-3'（配列番号９）をプローブとして作成されたものである、請求項２２または２３記載の方法。
【請求項２５】
プローブがＴａｑＭａｎプローブである、請求項２２〜２４いずれかに記載の方法。