(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
0004431638.tif 000052
［式中、Ｒ2はＣ1−Ｃ6アルキルであり；Ｒ6はＣ1−Ｃ6アルキル、ハロゲン、ニトロ、フリルまたはチエニルでさらに置換されていてもよいフェニルであり；Ｒ3はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルおよびＣ1−Ｃ6アルケニルオキシカルボニルからなる群より選択されるか、またはＲ3はＲ2と共に２〜４個のメチレン基を有する環を形成する；Ｒ4はスチリル以外のアリールＣ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルシリルＣ1−Ｃ6アルキルオキシ、アリールＣ1−Ｃ6アルキル、フェニルアセチレニル（該フェニルアセチレニルのフェニル環はニトロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、カルボキシ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキルまたはＣ1−Ｃ6アルキルアミノでさらに置換されていてもよい）、およびフェニル環がハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニル、ヒドロキシＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、カルボキシ、アミノカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、アミノＣ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6ジアルキルアミノからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基でさらに置換されていてもよいスチリルからなる群より選択され；Ｒ5はＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、シリルＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、ヒドロキシおよびＣ1−Ｃ6アルキルアミノからなる群より選択され、ここで前記Ｒ5のアリール部分はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、ハロゲン、ニトロ、Ｃ1−Ｃ6アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ6アミノアルキルアミノまたはＣ1−Ｃ6アミノアルキルアミノカルボニルでさらに置換されていてもよく；前記Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6のアリール部分は独立してフェニルまたはナフチルである。］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ6がフェニルである請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ3がエトキシカルボニルであり、Ｒ4がフェニルアセチレニルもしくはｔｒａｎｓ−スチリル、またはメトキシもしくはニトロで置換されたフェニルアセチレニルもしくはｔｒａｎｓ−スチリルであり、Ｒ5がエトキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルであり、Ｒ6がニトロ、ハロゲンまたはメチルでさらに置換されていてもよいフェニルである請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ3がエトキシカルボニルであり、Ｒ4がフェニルアセチレニルであり、Ｒ5がベンジルオキシカルボニルであり、Ｒ6がフェニルである請求項１〜３のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
該化合物が４位にＲまたはＳ配置を有するジアステレオマーの混合物である請求項１〜４のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項６】
該化合物が（＋）もしくは（−）−２，２−ジアルキル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールまたは（＋）もしくは（−）−アルキレングリコールメタノールのエステルに改変されている請求項４または請求項５に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
式
0004431638.tif 000053
［式中、Ｒ2はメチルであり、
Ｒ3はエトキシカルボニルであり、
Ｒ4はフェニルアセチレニル、２−フリルまたは２−ベンゾフリルであり、
Ｒ5はエトキシカルボニルであり、
Ｒ6はフェニルである。］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
式
0004431638.tif 000054
［式中、Ｒ2はメチルであり、
Ｒ3はエトキシカルボニルであり、
Ｒ4は４−アミノ−３−ヨード−スチリルであり、
Ｒ5はベンジルオキシカルボニルであり、
Ｒ6はフェニルである。］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項９】
式
0004431638.tif 000055
［式中、Ｒ2はメチルであり、
Ｒ3はベンジルオキシカルボニルであり、
Ｒ4は４−ニトロ−ｔｒａｎｓ−スチリルであり、
Ｒ5はエトキシカルボニルであり、
Ｒ6はフェニルである。］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１０】
式
0004431638.tif 000056
［式中、Ｒ2はメチルであり、
Ｒ3はアリルオキシカルボニルであり、
Ｒ4は４−ニトロ−ｔｒａｎｓ−スチリルであり、
Ｒ5はエチルオキシカルボニルであり、
Ｒ6はフェニルである。］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１１】
式
0004431638.tif 000057
［式中、Ｒ2はメチルであり、
Ｒ3はエチルオキシカルボニルであり、
Ｒ4はフェニルアセチレニルであり、
Ｒ5はエチルチオカルボニルまたはエチルアミノカルボニルであり、
Ｒ6はフェニルである。］の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１２】
医薬的に許容される担体および請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含有する医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含有する、哺乳類のＡ3アデノシン受容体を選択的にブロックするための医薬。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物またはその医薬的に許容される塩を含有する、哺乳類の脳を保護するための医薬。
【発明の詳細な説明】
関連出願の相互参照
本出願は米国仮特許出願第６０／０１０，７３７号（１９９６年１月２９日出願）および同第６０／０２１，１９１号（１９９６年７月３日出願）の一部継続出願であり、それらの開示は、言及したことでその全体が本明細書に組み入れられるものである。
発明の技術分野
本発明は、アデノシン受容体アンタゴニスト、医薬組成物、および哺乳類においてアデノシン受容体を選択的にブロックする方法に関する。本発明はまた、アデノシン受容体アンタゴニストを用いる種々の医学的疾患の処置方法に関する。
発明の背景技術
カフェインおよびその他のアルキルキサンチンの生理的刺激薬としての用途はよく知られている。カフェインおよびその他のアルキルキサンチンが生理的刺激薬として作用する主要メカニズムは、遍在する神経調節物質アデノシンの効果を遮断することによる。Daly, ”Mechanism of action of caffeine”, Caffeine, Coffee and Health,（S. Garattini, ed）, Chapter 4, pp. 97-150（1993）。アデノシンは活動の増加または系へのストレスに応答して局所的に産生される。このフィードバック機構により、器官は、エネルギー需要を減少させ（抑制活性）酸素供給を増加させて（例えば、血管拡張による）ストレスを相殺することができる。Bruns, Nucleosides & Nucleotides, 10, 931-944（1991）。
アデノシンは幾つかの重要な生理的役割を果たす。中間代謝におけるその役割に加えて、アデノシンは受容体が介在する多くの生理的作用（冠血管の拡張、血小板凝集の阻害、および脂肪分解の阻害を含む）を示す。Bruns et al., Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 77, 5547-5551（1980）。Ｇ蛋白質共役受容体のスーパーファミリーに属するアデノシン受容体は、多くのアデノシン受容体アゴニストおよびアデノシン受容体アンタゴニストに対する異なるアフィニティー、それらの一次構造、およびそれらが共役する二次メッセンジャーシステムに基づいて、一般に２つの主なサブクラスＡ1およびＡ2に分けられる。従って、Ａ2受容体（これはさらにＡ2aおよびＡ2bに分けることができる）はアデニル酸シクラーゼを刺激するが、一方Ａ1受容体は、アデニル酸シクラーゼの阻害、ホスホイノシトール代謝回転の阻害または刺激、グアニル酸シクラーゼの活性化、カリウム流入の活性化、およびカルシウム流入の阻害に関与する二次メッセンジャーシステムを含めた種々の二次メッセンジャーシステムに共役し得る（van Galen et al., Med. Res. Rev., 12, 423-471（1992）；Jacobson et al., J. Med. Chem., 35, 407-422（1992））。
最近、新規なアデノシン受容体がその一次構造に基づいて同定され、ラット脳（Zhou et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 89, 7432-7436（1992））およびラット精巣（Meyerhof et al., FEBS Lett., 284, 155-160（1991））からクローニングされた。この新規なアデノシン受容体（Ａ3受容体と命名されている）の推定上の膜貫通ドメインはイヌＡ1受容体と５８％の相同性を示し、イヌＡ2a受容体と５７％の相同性を示す。Ａ1受容体と同様に、Ａ3受容体はアデニル酸シクラーゼと共役しない（Zhou et al.）。
Ａ3受容体の分布は主として中枢神経系（ＣＮＳ）（Zhou et al.）、脳、精巣（Meyerhof et al.）、および免疫系に見い出され、そこでＡ3受容体は即時型過敏症反応のメディエーターのマスト細胞からの放出の調節に関与していると考えられる（Ramkumar et al., J. Biol. Chem., 268, 16887-16890（1993））。Ａ3−選択的化合物は心疾患、不妊症、腎疾患、およびＣＮＳ障害の治療的および／または予防的処置における有用性を有すると考えられる。
さらに、選択的Ａ3−アデノシン受容体アンタゴニストは脳保護剤（cerebroprotective）、抗喘息剤、または抗炎症剤として有用であると考えられる。Beaven et al．, Trends Pharmacol. Sci., 15, 13-4（1994）;Jacobson et al., Drugs of the Future, 20, 689-699（1995）；von Lubitz et al., Eur. J. Pharmacol., 275, 23-29（1995）。
幾つかの文献が本発明の関連背景技術を提供している。それらを以下に説明する。
ＤＥ−Ａ−２００５１１６、ＤＥ−Ａ−２１１７５７１、およびＥＰ−Ａ−０２３９１８６、ＥＰ−Ａ−００４２０８９、およびＥＰ−Ａ−０５９５１６６はジヒドロピリジン部分の２位および６位の置換基が共にアルキルである特定のジヒドロピリジン誘導体を開示する。これらの化合物は心血管疾患の治療に有用であるといわれている。
Synthesis, 8, 689-690（1990）は、１，４−ジヒドロピリジンを硝酸アンモニウムセリウムで酸化する方法を開示する。Tetrahedron, 51, 6511-6516（1995）は、二酸化マンガンと２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンとによる１，４−ジヒドロピリジンの芳香族化を開示する。
ＤＥ−Ａ−２２２８３７７は心血管薬剤として有効な特定のジェネリックなジヒドロピリジン誘導体を開示する。該誘導体において、ジヒドロピリジンの２位および６位の置換基は水素、アルキルおよびアリールからなる群より選択される。しかしながら、この文献は、２位の置換基がアルキルであり、６位の置換基がアリールであるサブジェネリックなまたは特定の化合物を開示していない。
ＥＰ−Ａ−００７１８１９は、Ｃａ2+の細胞への流入を増加させるのに有用な特定のジェネリックなジヒドロピリジン誘導体を開示する。該誘導体において、ジヒドロピリジンの２位および６位の置換基はアルキルまたはアリールであってよい。しかしながら、この文献は、２位の置換基がアルキルであり、６位の置換基がアリールであるサブジェネリックなまたは特定の化合物を開示していない。
ＥＰ−Ａ−０１９７４８８は、心臓障害の治療および予防に有用であり、抗高血圧作用および冠血管拡張作用を有する特定のジヒドロピリジン誘導体を開示する。該誘導体において、ジヒドロピリジンの２位の置換基はメチルであり、６位の置換基はメチルまたは４−（ｐ−フルオロベンジル）−１−ピペリジルメチルである。ＥＰ−Ａ−０２１２３４０は、抗高血圧作用を有する特定のジヒドロピリジン誘導体を開示する。該誘導体において、２位の置換基はアルキルであり、６位の置換基はハロゲン、アンモニウムまたはホスホニウムで置換されたメチルである。
ＥＰ−Ａ−０２１７５３０は、徐脈作用を有する末梢および脳血管拡張薬といわれている特定のジヒドロピリジン誘導体を開示する。ジヒドロピリジンの２位および６位の置換基は水素、メチルおよびアミノからなる群より選択される。
Chemical Abstracts, 99（23）, 187500x（1983）は、カルシウムチャンネルアンタゴニストであるニフェジピンが、［3Ｈ］シクロヘキシルアデノシンおよび［3Ｈ］１，３−ジエチル−８−フェニルキサンチンに特異的なアデノシン受容体の結合を強力に減少させたことを開示する。この文献はまた、その他のカルシウムアンタゴニストであるジルチアゼムおよびベラパミルがアデノシン受容体結合に対してわずかな効果しかないことも開示する。
Chemical Abstracts, 105（15）, 127265g（1986）は、ジヒドロピリジンＣａ2+アンタゴニストがインビトロで脳アデノシン受容体およびイヌ脳の取り込み部位と相互作用したことを開示する。Arzneimittel Forsch./Drug Res., 45（II）（8）, 865-868（1995）は、カルシウムチャンネルアンタゴニストであるニフェジピンおよびベラパミルが、膵臓のランゲルハンス島からのインスリン分泌に対するアデノシンの阻害効果を媒介するアデノシン受容体と相互作用しないかもしれないことを開示する。
J. Med. Chem., 31, 1014-1020（1988）は、特定のトリアゾロキナゾリン誘導体をＡ1およびＡ2アデノシン受容体アンタゴニストとして開示する。ＥＰ−Ａ−０３８７０７０は、再灌流傷害の減少効果、および低下した心臓代謝に対する改善または増加効果のような心臓保護効果を有するといわれている特定の置換ピリジン誘導体を開示する。
J. Med. Chem., 39, 2980-2989（1996）（”van Rhee et al.”）およびJ. Med. Chem., 39, 4667-4675（1996）（”Jiang et al.”）は、共著者として本願に記載する発明の発明者の何人かを含み、本願で述べる研究の幾つかを報告する。従って、van Rhee et al.は、特定の１，４−ジヒドロピリジンおよびピリジン誘導体のＡ3アデノシン受容体部位との選択性および相互作用を報告する。Jiang et al.は、６−フェニル−１，４−ジヒドロピリジン誘導体が強力で選択的なＡ3アデノシン受容体アンタゴニストであることを開示する。
同時係属の米国特許出願第０８／２７４，６２８号（１９９４年７月１３日出願）、および同第０８／３９６，１１１号（１９９５年２月２８日出願）（現在、米国特許第５，６８８，７７４号）は、特定のＡ3選択的アゴニスト、特にＮ6−ベンジルアデノシン−５’−ウロンアミドおよび関連の置換化合物、キサンチンリボシド誘導体、かかる化合物を含有する医薬組成物、およびかかる化合物の使用方法を開示する。
前記のことは、アデノシン受容体に対するアンタゴニストが必要とされていることを示す。本発明はそのような化合物、哺乳類においてアデノシン受容体を選択的にブロックするためにこれらの化合物を使用する方法、およびそのような化合物を含有する医薬組成物を提供することを目的とする。本発明のこれらの目的およびその他の目的、および有利な点、ならびに付加的な発明的特徴は本明細書に記載する発明の説明から明らかとなるであろう。
発明の要旨
本発明は式Ｉ
0004431638.tif 000002
［式中、Ｒ1およびＲ3は水素、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシおよびＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシからなる群より選択され；Ｒ2は水素、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシおよびＣ2−Ｃ6アルケニルオキシからなる群より選択され、該アルケニルオキシはフェニル環の炭素原子と共に酸素含有複素環を形成する；Ｒ4はフェニル、スチリル、フェニルブタジエニル、フェニルアセチレニルおよび−ＣＨ＝Ｎ−フェニル、ならびにフェニル環が１〜５個のＣ1−Ｃ6アルキルオキシ基で置換された置換フェニル、置換スチリル、置換フェニルアセチレニルおよび置換フェニルブタジエニルからなる群より選択される。但し、Ｒ3が水素のとき、Ｒ1およびＲ2はヒドロキシでもなくアルキルオキシでもなく；Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が水素のとき、Ｒ4はフェニルでもなくアルキルオキシフェニルでもなく；Ｒ3が水素であり、Ｒ4がフェニルのとき、Ｒ1およびＲ2のいずれもアルキルカルボニルオキシではなく；且つＲ3がヒドロキシまたはアルキルオキシのとき、Ｒ1およびＲ2はジヒドロキシではない。］の化合物を提供する。
本発明はさらに式II
0004431638.tif 000003
［式中、Ｒ1はヒドロキシルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より選択され、Ｍは−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ2）−および−Ｃ（ＯＨ）＝Ｃ（Ｒ2）−からなる群より選択される２価の基であり、ここでＲ2はスチリルおよびフェニルアセチレニルからなる群より選択される］の化合物を提供する。
本発明はさらに式III
0004431638.tif 000004
［式中、Ｒ2はＣ1−Ｃ6アルキルであり；Ｒ6はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、およびＣ1−Ｃ6アルキル、ハロゲン、ニトロ、フリルまたはチエニルでさらに置換されていてもよいフェニルからなる群より選択され；Ｒ3はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノカルボニルおよびＣ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルからなる群より選択されるか、またはＲ3はＲ2と共に２〜４個のメチレン基を有する環を形成する、およびＣ1−Ｃ6アルケニルオキシカルボニル；Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキル、アリールＣ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルシリルＣ1−Ｃ6アルキルオキシ、アリール、複素環、アリールＣ1−Ｃ6アルキル、フェニルアセチレニル（該基はニトロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、カルボキシ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキルまたはＣ1−Ｃ6アルキルアミノでさらに置換されていてもよい）、およびフェニル環がハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニル、ヒドロキシＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、カルボキシ、アミノカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、アミノＣ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6ジアルキルアミノからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基でさらに置換されていてもよいスチリルからなる群より選択され；Ｒ5はＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、シリルＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、ヒドロキシおよびＣ1−Ｃ6アルキルアミノからなる群より選択され、ここで前記アリールはＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、トリフルオロメチル、ハロゲン、ニトロ、Ｃ1−Ｃ6アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ6アミノアルキルアミノまたはＣ1−Ｃ6アミノアルキルアミノカルボニルでさらに置換されていてもよく；前記アリールはフェニルまたはナフチルである］の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
本発明はさらに式IV
0004431638.tif 000005
［式中、Ｒ2は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群より選択され；Ｒ3は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルからなる群より選択され；Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキル、フェニルＣ2−Ｃ6アルケニル、フェニルＣ2−Ｃ6アルキニル、アリール、およびニトロおよびＣ1−Ｃ6アルキルオキシからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で置換されたアリールからなる群より選択され；Ｒ5は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルおよびアリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルからなる群より選択され；Ｒ6は水素、アリールおよびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群より選択される。但し、Ｒ2＝Ｒ3＝Ｒ5＝Ｒ6＝水素のとき、Ｒ4はアルキルではない。］の化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
本発明はさらに式Ｖ
0004431638.tif 000006
［式中、Ｒ1はＣ1−Ｃ6アルキルカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アミノＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルおよびアリールカルボニルからなる群より選択され、ここで該アリールはハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、アミノまたはシアノでさらに置換されていてもよい；Ｒ2は水素またはハロゲンである］の化合物を提供する。
本発明はさらに前記化合物のいずれかを含有する医薬組成物、および哺乳類に式Ｉ〜Ｖの化合物の少なくとも１つを投与することにより該哺乳類の１またはそれ以上のアデノシン受容体を選択的にブロックすることを含む哺乳類の処置方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
図１は、ガランギン（galangin）およびモリン（morin）のアルキル化誘導体の合成方法を表す。２、３ａ、３ｂ、４および６の調製用のアルキル化剤としてヨウ化アルキルを使用した。７の調製用のアルキル化剤として臭化エチルを使用し、８の調製用のアルキル化剤として硫酸アルキルを使用した。
図２は、４−メトキシフラノクロモンから出発する、２−フェニルアセチレニルおよび２−シンナミル誘導体１０、１５および１６の合成方法を表す。
図３は、ビスナギン（visnagin）から出発する、特定の２−置換フラボノイド誘導体１９−２４の合成方法を表す。
図４は、フラボノイド誘導体４１−４４の構造を表す。
図５は、フラボノイド誘導体４５−５１の構造を表す。
図６は、特定の１，４−ジヒドロピリジン誘導体の合成方法を表す。
図７は、特定の１，４−ジヒドロピリジン誘導体の酸化方法を表す。
図８は、ヒトＨＥＫ−２９３細胞で発現したヒト脳Ａ3受容体における、２５℃での化合物１２（▲）、１４（●）および１８（◆）による［125Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡの結合阻害の競合曲線の代表的な一組を表す。
図９Ａは、５−エステル置換１，４−ジヒドロピリジンのジアステレオマー対の合成のための反応スキームの一部を表す。
図９Ｂは、５−エステル置換１，４−ジヒドロピリジンのジアステレオマー対の合成のための反応スキームのその他の部分を表す。
図１０Ａは、蛍光性の細胞の選別（フローサイトメトリーＤＮＡ分析）により測定された、Ａ3アデノシン受容体アゴニストＩＢ−ＭＥＣＡ（○）およびＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（●）の濃度（横軸）の関数としての、ＨＬ−６０アポトーシス細胞の割合（縦軸）を表す。
図１０Ｂは、蛍光性の細胞の選別（フローサイトメトリーＤＮＡ分析）により測定された、Ａ3アデノシン受容体アゴニストＩＢ−ＭＥＣＡ（○）およびＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（●）の濃度（横軸）の関数としての、Ｕ−９３７アポトーシス細胞の割合（縦軸）を表す。
図１１Ａは、Ａ3アデノシン受容体アンタゴニストの濃度（横軸）および低濃度のＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡの関数としての、生存するＨＬ−６０細胞数（縦軸）を表す。アンタゴニストは化合物１０１であった。図１１Ａ−Ｄのそれぞれの曲線の組について、コントロール（−−）、アンタゴニスト単独（△）、あるいは１０ｎＭ（○）または１μＭ（●）Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ存在下のアンタゴニストを示す。
図１１Ｂは、Ａ3アデノシン受容体アンタゴニストの濃度（横軸）および低濃度のＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡの関数としての、生存するＨＬ−６０細胞数（縦軸）を表す。アンタゴニストは化合物Ｌ−２４９３１３（６−カルボキシメチル−５，９−ジヒドロ−９−メチル−２−フェニル−［１，２，４］トリアゾロ［５，１−ａ］［２，７］−ナフチリジン）であった。
図１１Ｃは、Ａ3アデノシン受容体アンタゴニストの濃度（横軸）および低濃度のＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡの関数としての、生存するＵ−９３７細胞数（縦軸）を表す。アンタゴニストは化合物１０１であった。
図１１Ｄは、Ａ3アデノシン受容体アンタゴニストの濃度（横軸）および低濃度のＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡの関数としての、生存するＵ−９３７細胞数（縦軸）を表す。アンタゴニストは化合物Ｌ−２４９３１３であった。
図１２は、Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（○）、ＡＰＮＥＡ（  ）またはＩＢ−ＭＥＣＡ（△）を用いた、アデノシンアゴニスト濃度の関数としての、兎の肺における動的コンプライアンスの変化割合（Ｃdyn、縦軸）を表す。（●）は化合物１０１＋Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡにさらした結果としてのＣdynの変化割合を表し、（▲）は化合物１０１＋ＩＢ−ＭＥＣＡにさらした結果としてのＣdynの変化割合を表す。
好適な実施態様の詳細な説明
添付の図面と以下の好適な実施態様の詳細な説明を参照して、本発明を最もよく理解できるだろう。
本発明は、以下に詳細に示すように、ヒトのような哺乳類の１またはそれ以上のアデノシン受容体をブロックするのに好適な、フラボノイド類、ジヒドロピリジン類、ピリジン類およびトリアゾロキナゾリン類の特定の誘導体を提供する。
本発明は、式Ｉの化合物を提供する。
0004431638.tif 000007
［式中、Ｒ1およびＲ3は水素、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシおよびＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシからなる群より選択され；Ｒ2は水素、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシおよびＣ2−Ｃ6アルケニルオキシからなる群より選択され、該アルケニルオキシはフェニル環の炭素原子と共に酸素含有複素環を形成する；Ｒ4はフェニル、スチリル、フェニルブタジエニル、フェニルアセチレニルおよび−ＣＨ＝Ｎ−フェニル、ならびにフェニル環が１〜５個のＣ1−Ｃ6アルキルオキシ基で置換された置換フェニル、置換スチリル、置換フェニルアセチレニルおよび置換フェニルブタジエニルからなる群より選択される。但し、Ｒ3が水素のとき、Ｒ1およびＲ2はヒドロキシでもなくアルコキシでもなく；Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が水素のとき、Ｒ4はフェニルでもなくアルキルオキシフェニルでもなく；Ｒ3が水素であり、Ｒ4がフェニルのとき、Ｒ1およびＲ2のいずれもアルキルカルボニルオキシではなく；且つＲ3がヒドロキシまたはアルキルオキシのとき、Ｒ1およびＲ2はジヒドロキシではない。］
特別な実施態様として、（ａ）Ｒ4がフェニルである、（ｂ）Ｒ4がフェニルであり、Ｒ3がＣ1−Ｃ3アルキルオキシである、（ｃ）Ｒ4がフェニルであり、Ｒ3がＣ1−Ｃ3アルキルオキシであり、Ｒ1およびＲ2が５，７−ジ（Ｃ1−Ｃ3アルキルオキシ）である、（ｄ）Ｒ4が２，４−ジ（Ｃ1−Ｃ3アルキルオキシ）フェニルである、（ｅ）Ｒ3がＣ1−Ｃ3アルキルオキシであり、Ｒ4が２，４−ジ（Ｃ1−Ｃ3アルキルオキシ）フェニルである、（ｆ）Ｒ3がＣ1−Ｃ3アルキルオキシであり、Ｒ4が２，４−ジ（Ｃ1−Ｃ3アルキルオキシ）フェニルであり、Ｒ1およびＲ2が同一であり、メトキシおよびエトキシからなる群より選択される、（ｇ）Ｒ1が５−ヒドロキシであり、Ｒ2がメトキシおよびエトキシのうちの１つである、（ｈ）Ｒ4がフェニルアセチレニルである、（ｉ）Ｒ4がフェニルアセチレニルであり、Ｒ3がヒドロキシである、および（ｊ）Ｒ4がフェニルアセチレニルであり、Ｒ3がヒドロキシであり、Ｒ1およびＲ2のうちの１つがメトキシである、式Ｉの化合物が含まれる。
本発明は、さらに、４−（Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシ）−７−スチリルビスナギンである式Ｉの化合物を提供する。そのような化合物の例として、４−メトキシ−７−ｔｒａｎｓ−スチリルビスナギン、４−エトキシ−７−ｔｒａｎｓ−スチリルビスナギンおよび４−プロポキシ−７−ｔｒａｎｓ−スチリルビスナギンが含まれる。
他の特別な実施態様として、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシ−７−フェニルブタジエニルビスナギンである式Ｉの化合物が含まれる。そのような化合物の例として、４−メトキシ−７−フェニルブタジエニルビスナギンおよび４−エトキシ−７−フェニルブタジエニルビスナギンが含まれる。
本発明は、さらに、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシ−７−（ＣＨ＝Ｎ−フェニル）ビスナギンである式Ｉの化合物を提供する。そのような化合物の例としては、４−メトキシ−７−（ＣＨ＝Ｎ−フェニル）ビスナギンが含まれる。
本発明は、さらに、３，５，７−トリアセトキシフラボン、３，５，７−トリメトキシフラボン、３，５，７−トリエトキシフラボン、３，７−ジエトキシ−５−ヒドロキシフラボン、３，５，７−トリプロポキシフラボン、３，４’，５，７−テトラメトキシフラボン、２’，３，４’，７−テトラエトキシ−５−ヒドロキシフラボン、２’，３，４’，５，７−ペンタメトキシフラボン、２’，３，４’，５，７−ペンタエトキシフラボン、ヘキサメチルミリセチンおよび３−ヒドロキシ−４’−フェニルアセチレニル−６−メトキシフラボンからなる群より選択される式Ｉの化合物を提供する。
本発明は、さらに、式IIの化合物を提供する。
0004431638.tif 000008
［式中、Ｒ1はヒドロキシルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より選択され、Ｍは−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ2）−および−Ｃ（ＯＨ）＝Ｃ（Ｒ2）−からなる群より選択される２価の基であり、ここでＲ2はスチリルおよびフェニルアセチレニルからなる群より選択される］
式IIの化合物の例として、２−フェニルアセチレニル−３−ヒドロキシ−６−メトキシフラボン、ｔｒａｎｓ−２−スチリル−３−ヒドロキシ−６−メトキシフラボンおよびｔｒａｎｓ−２−フェニルアセチレニル−３−ヒドロキシ−６−メトキシフラボンが含まれる。
本発明は、さらに、式IIIの化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
0004431638.tif 000009
［式中、Ｒ2はＣ1−Ｃ6アルキルであり；Ｒ6はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、およびＣ1−Ｃ6アルキル、ハロゲン、ニトロ、フリルまたはチエニルでさらに置換されていてもよいフェニルからなる群より選択され；Ｒ3はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノカルボニルおよびＣ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルからなる群より選択されるか、またはＲ3はＲ2と共に２〜４個のメチレン基を有する環を形成する、およびＣ1−Ｃ6アルケニルオキシカルボニル；Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキル、アリールＣ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルシリルＣ1−Ｃ6アルキルオキシ、アリール、複素環、アリールＣ1−Ｃ6アルキル、フェニルアセチレニル（該基はニトロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ、カルボキシ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキルまたはＣ1−Ｃ6アルキルアミノでさらに置換されていてもよい）、およびフェニル環がハロゲン、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、シアノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルカルボニル、ヒドロキシＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、カルボキシ、アミノカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、アミノＣ1−Ｃ6アルキルおよびＣ1−Ｃ6ジアルキルアミノからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基でさらに置換されていてもよいスチリルからなる群より選択され；Ｒ5はＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、シリルＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、ヒドロキシおよびＣ1−Ｃ6アルキルアミノからなる群より選択され、ここで前記Ｒ5のアリール部分はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、トリフルオロメチル、ハロゲン、ニトロ、Ｃ1−Ｃ6アミノアルキル、Ｃ1−Ｃ6アミノアルキルアミノまたはＣ1−Ｃ6アミノアルキルアミノカルボニルでさらに置換されていてもよく；前記Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6のアリール部分は独立してフェニルまたはナフチルである］
特別な実施態様として、（ａ）Ｒ2がメチルである、（ｂ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択される、（ｃ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択され、Ｒ6がＣ1−Ｃ4アルキルおよびフェニルからなる群より選択される、（ｄ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択され、Ｒ6がＣ1−Ｃ4アルキルおよびフェニルからなる群より選択され、Ｒ4がＣ1−Ｃ3アルキルからなる群より選択される、（ｅ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択され、Ｒ6がＣ1−Ｃ4アルキルおよびフェニルからなる群より選択され、Ｒ4がＣ1−Ｃ3アルキルからなる群より選択され、Ｒ5がメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシエトキシカルボニルおよびベンジルオキシカルボニルからなる群より選択される、（ｆ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択され、Ｒ4がニトロ、トリフロオロメチル、メトキシ、ヒドロキシおよびメチレンジオキシからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で置換されたフェニルである、（ｇ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がメトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択され、Ｒ4がニトロ、トリフロオロメチル、メトキシ、ヒドロキシおよびメチレンジオキシからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で置換されたフェニルであり、Ｒ5がメトキシカルボニル、エトキシカルボニルおよびメトキシエトキシカルボニルからなる群より選択される、（ｈ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がエトキシカルボニルであり、Ｒ4がフェニルアセチレニルであり、Ｒ5がメチル、トリフルオロメチル、ハロゲン、ヨードまたはニトロでさらに置換されてもよいベンジルオキシカルボニルであり、Ｒ6がフェニルである、（ｉ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3およびＲ5がエトキシカルボニルであり、Ｒ4が２−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フリルまたは２−ベンゾフリルであり、Ｒ6がフェニルである、（ｊ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がエトキシカルボニルであり、Ｒ4がフェニルアセチレニルであり、Ｒ5がフェニルエトキシまたはフェニルプロポキシであり、Ｒ6がフェニルである、および（ｋ）Ｒ2がメチルであり、Ｒ3がエトキシカルボニルであり、Ｒ4がフェニルアセチレニルであり、Ｒ5がチオエトキシであり、Ｒ6がフェニルである、式IIIの化合物が含まれる。
本発明は、さらに、式IVの化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
0004431638.tif 000010
［式中、Ｒ2は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群より選択され；Ｒ3は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルからなる群より選択され；Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキル、フェニルＣ2−Ｃ6アルケニル、フェニルＣ2−Ｃ6アルキニル、アリール、およびニトロおよびＣ1−Ｃ6アルキルオキシからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で置換されたアリールからなる群より選択され；Ｒ5は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルおよびアリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルからなる群より選択され；Ｒ6は水素、アリールおよびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群より選択される。但し、Ｒ2＝Ｒ3＝Ｒ5＝Ｒ6＝水素のとき、Ｒ4はアルキルではない。］
特別な実施態様として、（ａ）Ｒ2が水素およびメチルからなる群より選択され、（ｂ）Ｒ2が水素およびメチルからなる群より選択され、Ｒ3およびＲ5が同一または相異なって水素、メトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択される、（ｃ）Ｒ2が水素およびメチルからなる群より選択され、Ｒ3およびＲ5が同一または相異なって水素、メトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択され、Ｒ4がメチル、ｏ−ニトロフェニルおよびｐ−メトキシフェニルからなる群より選択される、および（ｄ）Ｒ2が水素およびメチルからなる群より選択され、Ｒ3およびＲ5が同一または相異なって水素、メトキシカルボニルおよびエトキシカルボニルからなる群より選択され、Ｒ4がメチル、ｏ−ニトロフェニルおよびｐ−メトキシフェニルからなる群より選択され、Ｒ6が水素、メチルおよびフェニルからなる群より選択される、式IVの化合物が含まれる。
本発明は、さらに、式Ｖの化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
0004431638.tif 000011
［式中、Ｒ1はＣ1−Ｃ6アルキルカルボニル、アリールＣ1−Ｃ6アルキルカルボニル、アリールＣ2−Ｃ6アルケニルカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニル、アミノＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルおよびアリールカルボニルからなる群より選択され、ここで該アリールはハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、アミノまたはシアノでさらに置換されていてもよい；Ｒ2は水素またはハロゲンである］アリールとして、フェニル、ナフチルおよび３環または４環を有する芳香族基が含まれる。
特別な実施態様として、Ｒ2が水素であり、Ｒ1がエチルカルボニル、ベンゾイルフェニルエチルカルボニル、スチリルカルボニル、４−ニトロベンジルカルボニル、４−アミノベンジルカルボニルまたは３−ヨード−４−アミノベンジルカルボニルである式Ｖの化合物が含まれる。
本発明における「アリール」とは、フェニル、ナフチルおよび３環以上の芳香族基をいい、記載されなければ好ましくはフェニルをいう。
上述の本発明化合物の全ては、そのままで、あるいは医薬的に許容される担体および治療有効量の化合物を含有する医薬組成物の形態で使用できる。
本発明は、さらに、少なくとも１つの式Ｉ−Ｖの化合物を哺乳類に投与することにより、該哺乳類の１またはそれ以上のアデノシン受容体を選択的にブロックすることを含む哺乳類の処置方法をさらに提供する。
本発明は、少なくとも１つの式Ｉの化合物を哺乳類に投与することにより、該哺乳類のアデノシン受容体を選択的にブロックすることを含む哺乳類の処置方法を提供する。
0004431638.tif 000012
［式中、Ｒ1およびＲ3は水素、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシおよびＣ1−Ｃ6アルキルカルボニルオキシからなる群より選択され；Ｒ2はヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシおよびＣ2−Ｃ6アルケノキシからなる群より選択され、該アルケノキシはフェニル環の炭素原子と共に酸素含有複素環を形成する；Ｒ4はフェニル、スチリル、フェニルブタジエニル、フェニルアセチレニルおよび−ＣＨ＝Ｎ−フェニル、ならびにフェニル環が１〜５個のＣ1−Ｃ6アルコキシ基で置換された置換フェニル、置換スチリル、置換フェニルアセチレニルおよび置換フェニルブタジエニルからなる群より選択される。但し、Ｒ3が水素のとき、Ｒ1およびＲ2はヒドロキシでもなくアルコキシでもなく；Ｒ1、Ｒ2およびＲ3が水素のとき、Ｒ4はフェニルでもなくアルキルオキシフェニルでもなく；且つＲ3が水素であり、Ｒ4がフェニルのとき、Ｒ1およびＲ2のいずれもアルキルカルボニルオキシではない。］
式Ｉの選ばれた化合物を表３−５に示す。これらの化合物は、一般にアデノシン受容体に対してアフィニティーを有する。これらの化合物の中でも、特定の化合物は、１つのタイプのアデノシン受容体、例えば、Ａ3に対して、他のタイプのアデノシン受容体よりも大きいアフィニティーを有する。よって、これらの化合物は、より大きいアフィニティーを有するそのタイプのアデノシン受容体を選択的にブロックするために使用できる。従って、例えば、化合物３ｂ、４、６、７、８、１０、１１ｂ、１１ｃ、１１ｄ、１６、２０、２１および２４は、哺乳類のＡ3アデノシン受容体を選択的にブロックするのに使用できる。
本発明は、さらに、ゲニステイン（genistein）、（±）ジヒドロゲニステイン、サクラネチン（sakuranetin）、α−ナフトフラボン、β−ナフトフラボン、アマリリダセエ（amaryllidaceae）、オキソガランチンラクタム（oxogalanthine lactam）、アセチルヘマンチンメチオダイド（acetylhaemanthine methiodide）、２，３−メチレンジオキシ−フルオレン−９−オン、ヘマトキシリン（hematoxylin）およびアルボリニン（arborinie）からなる群より選択される少なくとも１つの化合物を哺乳類に投与することにより、該哺乳類のアデノシン受容体を選択的にブロックすることを含む哺乳類の処置方法を提供する。
本発明は、さらに、少なくとも１つの式IIの化合物を哺乳類に投与することにより、該哺乳類の１またはそれ以上のアデノシン受容体を選択的にブロックすることを含む哺乳類の処置方法を提供する。
0004431638.tif 000013
［式中、Ｒ1はヒドロキシルおよびＣ1−Ｃ6アルコキシからなる群より選択され、Ｍは−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（Ｒ2）−および−Ｃ（ＯＨ）＝Ｃ（Ｒ2）−からなる群より選択される２価の基であり、ここでＲ2はスチリルおよびフェニルアセチレニルからなる群より選択される］。
式IIの選ばれた化合物を表６−７に示す。これらの化合物は、一般にアデノシン受容体に対してアフィニティーを有する。これらの化合物の中でも、特定の化合物は、１つのタイプのアデノシン受容体、例えば、Ａ3に対して、他のタイプのアデノシン受容体よりも大きいアフィニティーを有する。よって、これらの化合物は、より大きいアフィニティーを有するそのタイプのアデノシン受容体を選択的にブロックするのに使用できる。従って、例えば、化合物３８は、哺乳類のＡ3アデノシン受容体を選択的にブロックするのに使用できる。
式IIIの選ばれた化合物を表１０および１８に示す。これらの化合物は、一般にアデノシン受容体に対してアフィニティーを有する。これらの化合物の中でも、特定の化合物は、１つのタイプのアデノシン受容体、例えば、Ａ1に対して、他のタイプのアデノシン受容体よりも大きいアフィニティーを有する。よって、これらの化合物は、より大きいアフィニティーを有するそのタイプのアデノシン受容体を選択的にブロックするのに使用できる。従って、例えば、化合物５２、５８、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６８、６９、７０、７１、７５、７６および７７は、Ａ2a受容体よりもＡ1アデノシン受容体に対して大きなアフィニティーを有し、Ａ1アデノシン受容体を選択的にブロックするのに使用できる。さらに、化合物６３、６４、６５、７４、７５、７６、７９、８７、９０、９３−９５、９８−１０１、１０５−１０７、１０９、１１５−１２６、１２９−１３０ｂ、１３３および１３６は、Ａ1またはＡ2aアデノシン受容体よりもＡ3アデノシン受容体に対して大きなアフィニティーを有し、Ａ3アデノシン受容体を選択的にブロックするのに使用できる。
さらに本発明は、少なくとも１つの式IV
0004431638.tif 000014
［式中、Ｒ2は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群より選択され；Ｒ3は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルからなる群より選択され；Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキル、フェニルＣ2−Ｃ6アルケニル、フェニルＣ2−Ｃ6アルキニル、アリール、およびニトロおよびＣ1−Ｃ6アルキルオキシからなる群より選択される１またはそれ以上の置換基で置換されたアリールからなる群より選択され；Ｒ5は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルおよびアリールＣ1−Ｃ6アルキルオキシカルボニルからなる群より選択され；Ｒ6は水素、アリールおよびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群より選択される］の化合物またはその医薬的に許容される塩を哺乳類に投与することにより該哺乳類の１またはそれ以上のアデノシン受容体を選択的にブロックすることを含む哺乳類の処置方法を提供する。
本明細書で記載する医薬的に許容される担体、たとえば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤あるいは希釈剤は、当業者によく知られており、容易に入手可能である。医薬的に許容される担体は、活性化合物に対して化学的に不活性で、かつ使用条件下で有害な副作用や毒性のないものが好ましい。
担体の選択は、部分的には、その特定の活性薬剤によって、また該組成物の特定の投与方法によって決定される。したがって、本発明の医薬組成物の好ましい製剤形態は非常に多様である。下記する経口、エアロゾル、非経口、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、鞘内、直腸内および膣内投与用の製剤は、単なる例示であって、製剤はこれらに限定されるものではない。
経口投与に適切な製剤は、（ａ）有効量の本化合物が水、食塩水あるいはオレンジジュースなどの希釈剤に溶解したような液剤、（ｂ）それぞれ所定量の活性成分を固体あるいは顆粒として含むカプセル、薬袋、錠剤、ロゼンジおよびトローチ、（ｃ）散剤、（ｄ）適当な液体中の懸濁剤、および（ｅ）適切な乳剤で構成され得る。液状製剤は、医薬的に許容される界面活性剤、懸濁化剤または乳化剤を添加するかあるいは添加せずに、水やアルコール（エタノール、ベンジルアルコールおよびポリエチレンアルコールなど）のような希釈剤を含んでもよい。カプセルの形態は、普通の硬カプセルあるいは軟カプセルのゼラチンタイプのいずれでもよく、たとえば、界面活性剤、潤滑剤、不活性フィラー（ラクトース、スクロース、リン酸カルシウムおよびコーンスターチなど）を含む。錠剤の形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、微結晶セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、グアガム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、およびその他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、湿潤剤、保存剤、香料および薬理学的に適合性のある担体を１またはそれ以上含むことができる。ロゼンジの形態は、活性成分を通常、スクロースとアラビアゴムあるいはトラガカントとからなるフレーバー中に含有することができる。また、サブロー錠剤は活性成分をゼラチンとグリセリン、あるいはスクロースおよびアラビアゴムのような不活性基剤中に含有することができる。乳剤、ゲル剤などは活性成分に加えて当分野で公知の担体を含む。
本発明の化合物は単独であるいは他の適切な成分と組み合わせて、吸入によって投与されるエアロゾル製剤としてもよい。これらのエアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの許容しうる加圧した噴射剤中に含ませることもできる。これらはまた、ネブライザーやアトマイザーのような加圧していない製剤に医薬として製剤化することもできる。
非経口投与に適切な製剤として、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬および製剤を投与対象者の血液と等張にする溶質を含むことができる水性および非水性の等張無菌性注射溶液、および懸濁化剤、溶解補助剤、増粘剤、安定化剤および保存剤を含むことができる水性および非水性の等張無菌性懸濁液が挙げられる。該化合物は、薬理学的に許容される希釈剤中、水、食塩水、デキストロースおよび関連糖の水溶液、エタノール、イソプロパノールあるいはヘキサデシルアルコールのようなアルコール、プロピレングリコールあるいはポリエチレングリコールのようなグリコール、２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールのようなグリセロールケタール、ポリ（エチレングリコール）４００のようなエーテル、油、脂肪酸、脂肪酸エステルあるいはグリセリドのような無菌性液体またはそれらの混合物、あるいは石鹸や洗浄薬のような医薬的に許容される界面活性剤、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースあるいはカルボキシメチルセルロースのような懸濁化剤あるいは乳化剤を添加したあるいは添加していないアセチル化脂肪酸グリセリドのような医薬担体、および他の医薬アジュバント中で投与することができる。
非経口製剤で使用される油は、鉱油、動物油、植物油および合成油が挙げられる。油の具体例として、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ油、ワセリンおよび鉱油が挙げられる。非経口製剤に使用される適切な脂肪酸として、オレイン酸、ステアリン酸およびイソステアリン酸が挙げられる。適切な脂肪酸エステルとして、オレイン酸エチル、およびミリスチン酸イソプロピルが挙げられる。非経口製剤に使用される適切な石鹸として、脂肪族アルカリ金属塩、アンモニウム塩およびトリエタノールアミン塩が挙げられる。適切な洗浄剤として、（ａ）たとえばジメチルジアルキルアンモニウムハライドおよびアルキルピリジニウムハライドなどのカチオン性洗浄剤、（ｂ）たとえばアルキル、アリールおよびオレフィンスルホン酸塩、アルキル、オレフィン、エーテルおよびモノグリセリン硫酸塩およびスルホコハク酸のようなアニオン性洗浄剤、（ｃ）たとえば脂肪族アミンオキサイド、脂肪酸アルカノールアミドおよびポリオキシエチレンポリプロピレン共重合体のような非イオン性洗浄剤、（ｄ）たとえばアルキル−β−アミノプロピオン酸エステルおよび２−アルキル−イミダゾリン第四級アンモニウム塩などの両性洗浄剤、および（ｅ）これらの混合物が挙げられる。
非経口製剤は、代表的には溶液中に活性成分を約０．５〜約２５重量パーセント含む。適切な保存剤および緩衝剤がそのような製剤において使用可能である。そのような組成物は、注射部位での刺激を最小に、あるいはなくすために、親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）が約１２〜約１７の非イオン性界面活性剤を１またはそれ以上含んでもよい。そのような製剤における界面活性剤の量は、約５〜約１５重量パーセントの範囲にある。適正な界面活性剤として、モノオレイン酸ソルビタンのようなポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびプロピレンオキサイドとプロピレングリコールの縮合によって形成されるエチレンオキサイドの疎水性ベースとの高分子付加物が挙げられる。非経口製剤は、単位投与量あるいは多回投与量を封入したアンプルやバイアルのような容器として提供することができ、使用直前に、たとえば注射用水のような無菌性液体担体の添加だけを必要とする凍結乾燥条件下で保存することができる。用時調合注射溶液および懸濁液は、前述した種類の無菌性の散剤、顆粒剤、錠剤から製造することができる。
本発明の化合物は注射用製剤としてもよい。注射用組成物用の有効な医薬担体として要求されることは、当業者によく知られている。Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J.B.Lippincott Co., Philadelphia, PA, Banker and Chalmers, eds., pp 238-250（1982）and ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel 4th ed., pp 622-630（1986）を参照。
さらに本発明の化合物は、乳化基剤や水溶性基剤のような種々の基剤と混合して座剤とすることもできる。膣内投与に適切な製剤は、活性成分に加えて、当分野で適当であると知られている担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレーの剤形としてもよい。
本発明の化合物はイノシトール−１，４，５−トリホスフェート（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）およびフリーラジカルの放出とそれに続くアラキドン酸カスケードを含むいかなる病的状態または症状の治療にも用いることができる。したがって、高血圧、運動性活動過剰（locomoter hyperactivity）、高血圧症、急性低酸素症、うつ病および不妊症を、上記した化合物の１つを、たとえば微候の発症または自覚から約数分〜約１時間以内というように早急に投与するという本発明の方法に従って治療することができる。また該方法は、慢性の病的状態または症状、特に上記化合物の慢性の予防あるいは治療投与が兆候の発症を予防したり回復時間を縮めたりする状態および症状の治療に有用である。本発明の方法にしたがって治療されうる病的状態および症状としては、血管炎症や関節炎のような炎症性障害、アレルギー、クローン病、喘息、創傷治癒、発作、心不全、急性脊髄損傷、急性頭部損傷あるいは外傷、急発作、新生児低酸素症（脳性麻痺、予防的処置は胎盤循環を通した慢性的暴露を含む）、動静脈先天異常および閉塞大脳動脈疾患から起こる慢性低酸素症、毒性刺激に関連する重症神経障害、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、および中枢神経系（ＣＮＳ）、心疾患、腎疾患および避妊に関するその他の疾患が挙げられる。
これらの化合物は脳保護剤として重要でありうる。このように、上記化合物は、たとえば、急発作、一過性虚血性ショック、発作、血栓や脳出血から起こる限局性虚血、心拍停止、外傷、新生児麻痺、循環血液量減少性ショックおよび高血糖症から起こる全虚血、および関連ニューロパシー（associated neuropathies）を始めとする種々の障害に対する治療および／または予防に使用することができる。上記方法は、たとえば、哺乳類がイノシトール−１，４，５−トリホスフェートやジアシルグリセロールの細胞性放出と関連する症状、障害あるいは病的状態にあるかまたはそうなる危険がある場合に適用できる。該方法は、また、該哺乳類が活動過剰であるかまたはそうなる危険があり、該化合物が該Ａ3アデノシン受容体と結合して運動抑制剤として作用する場合にも適用できる。
本発明の方法は、また、該哺乳類が高血圧であるかまたはそうなる危険があり、該化合物が該Ａ3アデノシン受容体と結合して降圧剤として作用する場合にも適用できる。該方法は、また、該哺乳類が不安をもちまたはそうなる危険があり、該化合物が該Ａ3アデノシン受容体と結合して抗不安薬として作用する場合にも適用できる。さらに該方法は、該哺乳類が脳虚血をもちまたはそうなる危険があり、該化合物が該Ａ3アデノシン受容体と結合して脳保護薬（cerebroprotectant）として作用する場合にも適用できる。該方法は該哺乳類が急発作をもちまたはそうなる危険があり、該化合物が該Ａ3アデノシン受容体と結合して抗発作薬として作用する場合にも適用できる。
本発明方法では、長期にわたって投与しても短期投与でも可能である。
本発明方法として、所望するアデノシン受容体−依存性応答を必要とする哺乳類（特にヒト）のような動物に、１またはそれ以上の上記した本発明化合物または医薬的に許容される塩、あるいはそれらの誘導体の有効量（例えば、治療有効量）を単独であるいは１またはそれ以上の医薬的に活性な他の化合物と組み合わせて投与することが挙げられる。
適切な医薬的に許容される塩はいかなるものでも使用可能である。適切な塩の例として、炭酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、ハライド、リン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、クエン酸塩、およびアミノ酸塩が挙げられる。
本発明の化合物のいくつかは、アミンやペプチドのような他の分子にカップリングするために官能基化された同族体として利用することもできる。このような同族体の使用は、効力が増し、作用の持続時間が延びることになり、作用の特異性およびプロドラッグをもたらす。また、水溶解性を高めると、完全になくすことはないが、望ましくない血漿蛋白との結合および脂質への分配を減らすことができる。したがって、薬物速度論的な改良が実現できる。
当業者には、本発明の化合物を動物に投与する適切な方法が利用でき、特定の化合物を投与するのに二以上の経路を用いてもよいが、ある特定の経路が他の経路よりも迅速かつ効果的な反応を与えることが理解されるであろう。したがって、上記方法は単なる例示であって、本発明はこれに限定されるものではない。
本発明において、動物（特にヒト）に投与する投与量は、妥当な時間枠にわたって、その動物に予防的または他の治療的反応を生じさせるのに十分な量であることが必要である。当業者には、投与量が、使用される特定の化合物の強さ、動物の年齢、種、状態および体重を始めとする種々の要素、および疾患の重篤度／段階あるいは症状により決定されることが理解されるであろう。投与量のサイズはまた、投与の経路、タイミングおよび頻度、および特定の化合物の投与に伴うかもしれない悪い副作用の存在、性質および程度、および所望の生理的効果によっても決定される。当業者には、種々の症状あるいは病状、特に慢性の症状や病状には複数回の投与を含む長期の治療が必要となるかもしれないことが理解されるであろう。
適切な投与量および投与プログラムは、当業者に知られている慣用の投与量範囲決定手法によって決定することができる。一般に化合物の最適投与量より少ない、少量の投与量で治療を開始する。その後、その状況下で最適の効果に達するまで投与量を少しずつ増加する。便宜上、もし望むなら、１日の総投与量を分割し、１日のうちの何回かにわけて投与してもよい。ある特定の化合物の適切な投与量および適当な投与により、本発明は広い範囲の選択的アデノシン受容体−依存性応答を提供する。たとえば、約０．０１〜約１００ｍｇ／治療する動物の体重ｋｇ／日の投与量が例示される。好ましい投与量は、約０．１〜約１０ｍｇ／体重ｋｇ／日である。
本願で使用する略語は以下の意味をもつ。
［125Ｉ］AB-MECA  ［125Ｉ］N6-（4-アミノ-3-ヨードベンジル）アデノシン-5’-N-メチルウロンアミド
CHO               チャイニーズハムスター卵巣
DMF               N,N-ジメチルホルムアミド
DMSO              ジメチルスルホキサイド
Ki                平衡阻害定数
R-PIA             R-N6-フェニルイソプロピルアデノシン
Bay K 8422        1,4-ジヒドロ-2,6-ジメチル-5-ニトロ-4-［2-（トリフルオロメチル）フェニル］-3-ピリジンカルボン酸メチルエステル
本発明を以下の実施例によってさらに詳しく説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
実施例１
この実施例は、本発明の化合物の特性解析に用いられた様々な分析法について説明する。
プロトン核磁気共鳴分光分析はＶａｒｉａｎ  ＧＥＭＩＮＩ−３００スペクトロメーターで測定し、スペクトルはd6-DMSO中で測定した。電子衝撃質量分光分析はＶＧ７０７０Ｆマススペクトロメーターを用い、６ｋＶで行った。元素分析は、Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．（Ｎｏｒｃｒｏｓｓ，ＧＡ）によって行った。
実施例２
この実施例は本発明化合物のアデノシン受容体に対するアフィニティーの測定方法を説明する。
Ａ1およびＡ2a受容体のＫi値はそれぞれ、脳膜における［3H］PIAまたは［3H］CGS 21680）に対する放射性リガンド結合アッセイで決定した。Schwabe et al., Naunyn-Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol., 313, 179-187（1980）；Jarvis et al., J. Pharmacol. Exp. Therap., 251, 888-893（1989）。ＨＥＫ−２９３細胞で発現されたヒト脳Ａ3受容体（Salvatore et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 90, pp. 10365-10369（1993））でのアフィニティーは［125Ｉ］AB-MECAを用いて測定した。Olah et al., Mol. Pharmacol., 45, 978-982（1994）。化合物はヒトＡ3受容体で試験し、Ａ1およびＡ2aのデータとの比較に好ましいと考えられ、選択された化合物は、また、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で安定に発現されたラットＡ3受容体でのアデニリルシクラーゼ阻害試験に供した。Kim, H.O., J. Med. Chem., 37, 3614-3621（1994）。
最もよく知られているアデノシンアデノシンリガンドのアフィニティーがラットＡ3受容体で最小であるという理由を含む幾つかの理由により、ヒトＡ3受容体が選ばれた。それに加え、ヒトＡ3受容体はより感度が高く、化合物間の比較をよりよく行えた。Salvatore et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 90, 10365-10369（1993）。
実施例３
この実施例は、本発明の特定のフラボン誘導体の一般的合成方法を説明する。
フラボン誘導体の合成は、文献の教示および本明細書に示す方法により行うことができる。Wollenweber et al., J.B. Harborne.（Chapman and Hall, eds.）, London, 259-335（1993）；Cushman et al., J. Med. Chem., 37, 3373-3382（1994）；Cunningham et al., Anti-Cancer Drug Design, 7, 365-384（1992）；Lee et al., Tetrahedron, 51, 4909-4922（1995）。図２に示すように、フラボン環系は２−ヒドロキシアセトフェノン誘導体（Lee et al., Tetrahedron. 51, 4909-4922（1995）と適当なアルデヒド（Williams, Spectroscopic Methods in Organic Chemistry, 4th ed., McGraw Hill, London, 1989））との縮合を経由して形成することができ、この縮合により２位置換基が生じる。シンナムアルデヒド誘導体は第二の成分として用いられ、従って２位のシンナミル置換を導いた。縮合の結果、まずｔｒａｎｓ−オレフィンが生成し（Duarte et al., Eur. J. Pharmacol., 286, 115-122（1995））、これを塩基性酸化条件下で環化させて、２，３−飽和ジヒドロフラボノール類似体（Kim et al., J. Med. Chem., 37, 3373-3382（1994）, and Siddiqi et al., Nucleosides Nucleotides（1995,印刷中）またはより高温で、対応するデヒドロ誘導体であるフラボノール（Palmer et al., J. Biol. Chem., 270, 16895-16902（1995））を与えた。得られた３−ヒドロキシフラバノン類がｔｒａｎｓ立体配置である証拠はＮＭＲからである。化合物１５−１６の２位および３位のプロトンのカップリング定数は−１２Ｈｚであり、これはｔｒａｎｓビシナルカップリングの特徴である。Williams et al.,Spectroscopic Methods in Organic Chemistry, 4th ed., McGraw Hill, London（1989））。
２位のオレフィン置換（図２）を与える代替アプローチは、２−メチルクロモン（例えば、天然物ビスナギン１７）２７とアルデヒド（Hafez, Czech. Chem. Commun., 59,（1994））との塩基性条件下での縮合であった。この方法は、２−シンナミル誘導体を調製するのに用いられた（Ji et al., J. Med. Chem. （1996,印刷中））。Ji et al., J. Med. Chem.（1996,印刷中）のｔｒａｎｓ−スチリル基の証拠は、ＮＭＲスペクトルの１５Ｈｚのオレフィンのカップリング定数に見られた。エトキシドイオンの存在下、５−メトキシ基はエトキシに容易に変換され、化合物２０になった。対応する５−プロポキシ誘導体２１（Markham et al., J. B. Harborne,（Chapman and Hall eds., London, 441-497（1993））は、ビスナギンを脱メチル化してSchwabe et al., Naunyn-Schmiedeberg’s Arch. Pharmacol., 313, 179-187（1980）の化合物を得て、次いでベンズアルデヒドと縮合する代替アプローチを用いて得られた。ビスナギンの２−メチル基も１８のように、酸化されてアルデヒド基になり得る（Hafez M. E1-Shaaer, Collect, Czech. Chem, Commun., 59（1994））。
実施例４
この実施例は、ガランギン１およびモリン５ａのアルキル化を説明する。
ガランギンのアルキル化は、適当なヨウ化アルキルと炭酸カリウムを用いて還流アセトン中で行われ（図１）、完全にアルキル化された生成物３ａまたは４を生じさせた。３ｂを得るための５位の水酸基が未反応の部分的アルキル化は、より緩和な条件下、例えば室温下での臭化アルキルによって行われた。モリン５ａ（２’，３，４’，５，７−ペンタヒドロキシフラボン）のＯ−アルキル化は、ガランギンの場合よりも低い５位水酸基の反応性により複雑になり、ペンタ置換ではなくテトラ置換を生じさせた（図１）。従って、硫酸エチルを用いた時は、完全にアルキル化されたモリン誘導体８が得られるが、ヨウ化エチルとの反応ではテトラエチル誘導体７のみが得られた。３ｂと７のアルキル化されていない水酸基の位置はＮＭＲを用いて決定された。５−ＯＨのプロトンの共鳴は１２ｐｐｍ付近に現れる（Kim et al., J. Med. Chem., 37, 3614-3621（1994））。低磁場シフトは明らかに、それが水素結合して６員環を形成し得る隣接カルボニル基によって生じる。このプロトンのシグナルは３ｂ、５ａおよび７のスペクトルには存在するが、８のスペクトルには存在しない。
この実施例および以下の実施例で述べるフラボノイド誘導体の物理的特性データを表１および２に示す。
３，５，７−トリメトキシフラボン（２）
ガランギン（２７ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を乾燥アセトン（２０ｍＬ）に溶解し、固体炭酸カリウム（０．５ｇ）と硫酸ジメチル（１ｍＬ）を加え、混合物を４時間還流してから、室温まで冷却した。この溶液を濾過し、溶媒を留去し、水（２０ｍＬ）と濃水酸化アンモニウム（２ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチルで抽出した（１５ｍＬ×２）。溶媒を留去し、残渣をメタノール／水から再結晶して２１ｍｇの生成物を得た（６７％）。
1HNMR（DMSO-d6）：d 3.73（s, 3H, 3-OCH3）, 3.86（s, 3H, 7-OCH3）, 3.86（s, 3H, 5-OCH3）, 6.48（s, 1H, 8-H）, 6.79（s, 1H, 6-H）, 7.99（m, 3H）, 8.02（m, 2H）. MS（CI/NH3）：m/z 313（MH+, base）.
３，５，７−トリエトキシフラボン（３ａ）
ガランギン（３０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌｅ）を乾燥アセトン（４５ｍＬ）に溶解し、固体炭酸カリウム（０．５ｇ）とヨードエタンを加え、この混合物を一晩還流した。この溶液を濾過し、溶媒を留去し、水（２０ｍＬ）と濃アンモニア（１ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを留去し、粗生成物を分取シリカＴＬＣプレート上で精製し、１２ｍｇの３，５，７−トリエトキシフラボンを得た。
mp 111-114℃
mass（FAB）m/z 355（M++1, base）1H NMR（CDCl3）1.33（t, 3H, CH3）, 1.55（t, 3H, CH3）, 1.62（t, 3H, CH3）, 4.1-4.25（m, 6H, CH2）, 6.4（s, 1H）, 6.55（s, 1H）, 7.5-7.6（m, 3H）, 8.1-8.2.
３，７−ジエトキシ−５−ヒドロキシフラボン（３ｂ）
ガランギン（２７ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を乾燥アセトン（２０ｍＬ）に溶解し、固体炭酸カリウム（０．５ｇ）とブロモエタン（１ｍＬ）を加え、この混合物を室温で一晩攪拌した。この溶液を濾過し、溶媒を留去し、水（２０ｍＬ）と濃水酸化アンモニウム（２ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチルで抽出した（２０ｍＬ×２）。この溶液を乾燥し、溶媒を留去した。残渣を分取ＴＬＣプレート（シリカ、酢酸エチル／石油エーテル２：８）で精製し２１ｍｇの生成物を得た（６４％）。1HNMR（CDCl3）：d 1.34（t, 3H, J = 7.3Hz, 3-CH3）, 1.48（t, 3H, J = 7.1Hz, 7-CH3）, 4.14（m, 4H, 2 x OCH2）, 6.38（s, 1H, 6-H）, 6.47（s, 1H, 8-H）, 12.64（s, 1H, 5-OH）.MS（CI/NH3）：m/z 327（MH+, base）.
３，５，７−トリプロピルオキシフラボン（４）
ガランギン（３０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌｅ）を乾燥アセトン（４５ｍＬ）に溶解し、固体炭酸カリウム（０．５ｇ）と１−ヨードプロパンを加え、この混合物を一晩還流した。この溶液を濾過し、溶媒を留去し、水（２０ｍＬ）と濃アンモニア（１ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチルを留去し、粗精製物を分取ＴＬＣプレート（シリカ）上で精製し、２５ｍｇ（６３％）の３，５，７−トリプロピルオキシフラボンを得た。
mp 90-93℃
質量スペクトル（CI-NH3）m/z 397（M++1）, base）1H NMR（CDCl3）0.85-1.2（m, 9H）, 1.6-2.1（m, 6H）, 3.9-4.1（m, 6H）, 6.32（s, 1H）, 6.5（s, 1H）, 7.4-7.5（m, 3H）, 8.04-8.12（m, 2H）.
２’，３，４’，５，７−ペンタメチルオキシフラボン（６）
モリン（１２０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）を乾燥アセトン（８０ｍＬ）に溶解した。固体炭酸カリウム（２ｇ）とヨードメタン（２ｍＬ）を加え、この混合物を一晩還流してから、室温まで冷却した。この溶液を濾過し、溶媒を留去し、残渣を分取ＴＬＣプレート（シリカ、酢酸エチル）で分離し、８０ｍｇの生成物を得た（５５％）。
1HNMR（CDCl3）：d 3.86, 3.88, 3.91, 3.93, 4.02（5s, 15H, 5 ｘ OCH3）, 6.39, 6.49, 6.62（s, 1H, 8-H）, 6.79（3m, 3H, フェニル）, 6.65（m, 1H, 8-H）, 7.42（m, 1H, 6-H））.MS（EI）：m/z 372（M+）, 371（M-H）+, 341（M-OCH3）+．
２’，４’，３，７−テオラエトキシ−５−ヒドロキシモリン（７）
化合物７は、ヨードメタンの代わりにヨードエタンを用いた以外は上記の６のの方法に従って合成した。生成物７は、石油エーテル／酢酸エチルを用いて分取ＴＬＣ上で分離し、mass（FAB）m/z 415（M++1, base）を示した。
1H NMR（CDCl3）1.15（t, 3H, CH3）, 1.35（t, 3H, CH3）, 1.45（dt, 6H, CH3）, 3.9-4.2（m, 8H, CH2）, 6.33（d, 1H）, 6.6（m, 3H）, 7.4（d, 1H）.
２’，３，４’，５，７−ペンタエトキシフラボン（８）
モリン（３０２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を乾燥アセトン（８０ｍＬ）に溶解し、固体炭酸カリウム（５ｇ）と硫酸ジエチル（５ｍＬ）を加え、混合物を一晩還流してから、室温まで冷却した。この溶液を濾過し、溶媒を留去し、水（５０ｍＬ）と濃水酸化アンモニウム（１０ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチルで抽出した（４０ｍＬ×２）。この溶液を乾燥し、溶媒を留去した。残渣を酢酸エチルと石油エーテル（１：９）から結晶化させて３３５ｍｇの生成物を得た（７６％）。
1HNMR（CDCl3）：d 1.12（t, 3H, J = 7.1Hz, CH3）, 1.32（t, 3H, J = 7.1Hz, CH3）, 1.45（2t, overlap, 6H, 2 ｘ CH3）, 1.56（t, 3H, J = 7.1Hz, CH3）, 4.10（m, 10H, 5 ｘ OCH2）, 6.32（d, 1H, J = 1.2Hz, 2−フェニル）, 6.39（s, 1H, 2-フェニル）, 6.53（s, 1H, 2-フェニル）, 6.58（s, 1H, 6-H）, 7.37（d, 1H, 8-H）. MS（CI/NH3）：m/z 443（MH+, base）.
実施例５
この実施例は２−フェニルアセチレニル−３−ヒドロキシ−６−メトキシフラボン（１０）の合成を説明する。
１−（２−ヒドロキシ−５−メトキシ）−５−フェニルペンタ−２−エン−４−イン−１−オン（化合物１５ａ，６０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌｅ）をエタノール（１．５ｍＬ）に溶解した。水酸化ナトリウム１Ｎ（０．４ｍＬ）と過酸化水素（０．５ｇ）を加え、この混合物を９０℃で３５分間加熱した。冷却した混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、１Ｎ塩酸で酸性にした。沈殿物を集めてメタノールから再結晶した。
Mass（CI NH3）m/z 293（M++1, base）, 1H NMR（CDCl3）3.95（s, 3H, CH3）, 6.92（s, 1H）, 7.25-8.0（m, 7H）.
実施例６
この実施例はｔｒａｎｓ−２−スチリル−３−ヒドロキシ−６−メトキシフラバノン（１５）の合成を説明する。
２’−ヒドロキシ−５’−メトキシアセトフェノン（４．１ｇ，２２ｍｍｏｌｅ）とシンナムアルデヒド（３．３５ｇ，２５ｍｍｏｌｅ）を最小量のメタノール（２．５ｍＬ）に溶解した。濃水酸化ナトリウム（１２．５ｍＬ，５０％）を加え、混合物を氷冷下８時間放置した。生成した固体を水に懸濁し、塩酸（４Ｎ）で酸性にした。分離したオイルをエタノールに溶解し、エタノール／水から結晶化させ、１−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−５−フェニルペンタ−２，４−ジエン−１−オン（１．２ｇ）を赤褐色粉末として得た。
Mass（CI NH3）m/z 281（M++1, base）. 1H NMR（CDCl3）3.9（s, 3H, CH3）, 6.95-7.8（m, 12H）.
上記化合物（１７０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌｅ）をエタノール（３．５ｍＬ）とアセトン（４ｍＬ）の混合溶液に溶解した。水酸化ナトリウム１Ｎ（１ｍＬ）と過酸化水素（１ｍＬ，３５％）を加え、この溶液を室温で６時間攪拌した。水と塩酸を加えて混合物を沈殿させ、分取ＴＬＣ（石油エーテル−酢酸エチル）上で精製し、化合物１５を得た。
mp 160-163℃
mass（CI NH3）m/z 297（M++1,base）. 1H NMR（CDCl3）3.9（s, 3H, CH3）, 4.45（d, J=12Hz, 1H）, 4.8（m, 1H）, 6.55（dd, 1H）, 6.9-7.6（m, 9H）.
実施例７
この実施例はｔｒａｎｓ−２−フェニルアセチレニル−３−ヒドロキシ−６−メトキシフラバノン（１６）の合成を説明する。
２’−ヒドロキシ−５’−メトキシアセトフェノンとフェニルフェニルアセチレニルアルデヒドを化合物１５の調製法に従って縮合し、１−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−５−フェニルペンタ−２−エン−４−イン−１−オンを得た。
Mass（CI-NH3）m/z 279（M++1, base）. 1H NMR（CDCl3）3.9（s, 3H, CH3）, 7.0（d, 1H）, 7.1-7.6（m, 9H）.
上記化合物を過酸化水素と反応させ、化合物１６を白色粉末として得た。
mp 135-138℃
Mass（EI）m/z 295（M+1）150（base）.1H NMR（CDCl3）d 3.85（s, 3H, OCH3）, 4.6（d, J=12Hz, 1H）, 5.09（d, J=12Hz, 1H）, 7.0-7.6（m, 8H）.
４−メトキシ−７−ホルミル−５Ｈ−フロ［３，２−ｇ］［１］−ベンゾピラノ−５−オン（１８）はビスナギン（４−メトキシ−７−メチル−５Ｈ−フロ［３，２−ｇ］［１］−ベンゾピラノ−５−オン）からDuarte et al., Eur. J. Pharmacol., 286, 115-122（1995）に従って合成した。
実施例８
この実施例は４−メチルオキシ−７−ｔｒａｎｓ−スチリル−ビスナギン（１９）および４−エチルオキシ−７−ｔｒａｎｓ−スチリル−ビスナギン（２０）の合成を説明する。
ビスナギン（１７，１６０ｍｇ，０．７ｍｍｏｌｅ）とベンズアルデヒド（１２０ｍｇ，１．１ｍｍｏｌｅ）をエタノール（４ｍＬ）に溶解した。ナトリウムエトキシド（２０％エタノール中，０．５ｍｌ）を加え、この混合物を８０℃で１０分間攪拌した。出発物質は、２つの生成物（酢酸エチルでのＲｆ値０．７と０．８）の形成にともない消失した。両生成物は分取ＴＬＣプレート（酢酸エチル）上で分離し、化合物１９を得た。
mp 175-178℃
Mass（CI NH3）m/z 319（M++1, base）1H NMR（CDCl3）d 4.2（s, 3H, OCH3）, 6.23（s, 1H）, 6.75（d, J=15Hz, 1H）, 7.05（s, 1H）, 7.3-7.8（m, 8H）.
化合物２０，mp 148-151℃．Mass（CI NH3）m/z 333（M++1, base）. 1H NMR（CDCl3）1.55（t, 3H, CH3）, 4.4（q, 2H, OCH2）, 6.23（s, 1H）, 6.78（d, J=15Hz, 1H）, 7.0（s, 1H）, 7.35-7.7（m, 8H）.
実施例９
この実施例は４−プロピルオキシ−７−ｔｒａｎｓ−スチリル−ビスナギン（２１）の合成を説明する。
ビスナギン（２ｇ，８．７ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１０ｇ）および酢酸（５０ｍＬ）の混合物を７時間還流した。冷却後、沈殿物を濾過により除去し、濾液を減圧留去し、トルエンと共沸させた（１０ｍＬ×２）。残渣をエタノールから結晶化し１．６２ｇ（８１％）のビスナギンの脱メチル化物１７ａを得た。
1HNMR（CDCl3）：d 2.40（s, 3H, 7-CH3）, 6.12（s, 1H, 6-H）, 7.00 and 7.62（2d, 2H, J = 2.9Hz 3-H and 2H）, 7.05（s, 1H, 9-H）, 13.6（s, 1H, 4-OH）.
脱メチル化したビスナギン（４３０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、ヨードプロパン（３ｍＬ）および炭酸カリウム（５ｇ）の乾燥アセトン（８０ｍＬ）中の混合物を一晩還流した。固体を濾過により除去し、溶媒を留去し、水（５０ｍＬ）と濃水酸化アンモニウム（１５ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチルで抽出した（４０ｍＬ×２）。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。残渣を分取ＴＬＣプレート（シリカ、酢酸エチル／石油エーテル，４：６）で精製し、４６５ｍｇ（９０％）の４−プロピルオキシ−ビスナギン１７ｂを得た。
1HNMR（CDCl3）：d 1.10（t, 3H, J = 7.5Hz）, 1.94（m, 2H）, 2.33（s, 3H, 7-CH3）, 4.23（t, 2H, J = 6.7Hz, 4-OCH2）, 6.03（s, 1H, 6-H）, 6.97 and 7.60（2d, 2H, J = 2.7Hz, 3-H and 2H）, 7.27（s, 1H, 9-H）.
４−プロピルオキシ−ビスナギン（８６ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）とべンズアルデヒド（５０ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）をエタノール（２ｍＬ）に溶解した。攪拌しながら、ナトリウムエトキシド（２０％エタノール中、０．３ｍＬ）を加え、混合物を８０℃で１５分間攪拌した。溶媒を留去し、残渣を氷水（２０ｍＬ）と酢酸エチル（２０ｍＬ）間で分配し、水層を酢酸エチル（２０ｍＬ）で抽出し、あわせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣を分取ＴＬＣプレート（シリカ、酢酸エチル／石油エーテル，４：６）で分離し、２６ｍｇの所望の生成物２１を得た（収率２５％）。
1HNMR（CDCl3）：d 1.07（t, 3H, J = 7.5Hz）, 1.97（m, 2H）, 4.25（t, 2H, J = 6.7Hz, 4-OCH2）, 6.21（s, 1H, 6-H）, 6.78（d, 2H, J = 14Hz, 3-H）, 7.00（s, 1H, 9-H）, 7.33（m, 8H）. MS（CI/NH3）：m/z 347（MH+, base）.
実施例１０
この実施例は４−メトキシ−７−フェニルブタジエニルビスナギン（２２）および４−エトキシ−７−フェニルブタジエニルビスナギン（２３）の合成を説明する。
化合物２２は、上記の化合物１９および２０の調製方法に従って、ビスナギンとシンナムアルデヒドをナトリウムエトキシドの存在下、エタノールに溶解することにより調製し、化合物２２を得た。
mp 162-165℃
Mass（EI）m/z 344（M+, base）.1H NMR（CDCl3）d 4.2（s, 3H, OCH3）, 6.15（s, 1H）, 6.33（d, J=15Hz, 1H）, 6.95（s, 1H）, 7.0-7.6（m, 10H）.
化合物２３も上記反応から分離された。
Mass（EI）m/z 358（M+）, 343（M-15, base）. 1H NMR（CDCl3）1.55（t, 3H, CH3）, 4.4（q, 2H, OCH2）, 6.15（s, 1H）, 6.35（d, J=15Hz, 1H）, 7.4（d, J=15Hz, 1H）, 6.9-7.6（m, 10H）.
実施例１１
この実施例は化合物２４（化合物１８のシッフ塩基）の合成を説明する。
化合物１８（４００ｍｇ）およびアニリン（０．５ｍＬ）をトルエンに溶解し、２５℃で一晩攪拌した。分析用ＴＬＣ（シリカ、クロロホルム／メタノール，２０：１）を用いて反応の経過をたどった。溶媒を留去し、過剰のアニリンを高真空下に除去した。生成物（Ｒｆ〜０．７）を分取ＴＬＣ（シリカ、酢酸エチル）を用いて精製した。
Mass（CI NH3）m/z 320（M++1, base）.
実施例１２
この実施例は、３，５，７−トリアセトキシフラボン（３４）の合成を説明する。
ガランギン（９．０ｍｇ，３３μｍｏｌ）を１ｍＬのＤＭＦに溶解し、無水酢酸（０．２ｍＬ）および４，４−ジメチルアミノピリジン（３ｍｇ）で処理した。１０分間攪拌後、１ＮのＮａＨ2ＰＯ4を２ｍＬ加えた。白色沈殿物を濾過により除去し、メタノール／水から再結晶して１１．４ｍｇの固体（８７％）を得た。これはＴＬＣにより単一物であった（Ｒｆ  ０．５６，シリカ，クロロホルム：メタノール：酢酸，９５：４：１）。
Mass spec：414（m+1+NH3）, 397（m+1）, 355（m+1+NH3-OAc）. Mp 128-129℃. NMR d 7.6（3H, Ar）, 7.9（m, 2H, Ar）, 7.65 and 7.17（each, d, 1H, J = 2Hz, Ar, o- to AcO）, 2.34（s, 6H, Ac）, 2.30（s, 3H, Ac）. CHN分析．
実施例１３
この実施例は、２’，３，４’，５，７−ペンタメチルオキシフラボン（３８、実施例４では化合物６としても示されている）のもう一つの合成法を説明する。
モリン水和物（２５ｍｇ，８２μｍｏｌ，Ａｌｄｒｉｃｈ）を、炭酸カリウム（１．０ｇ）が懸濁した乾燥アセトン（２０ｍＬ）に溶解した。硫酸ジメチル（１．０ｍＬ，１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素下４時間還流した。氷浴で冷却した後、２ｍＬの濃水酸化アンモニウムを少量ずつ加え、その後２０ｍＬの水を加えた。この溶液を酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥し、溶媒を留去し、白色固体残渣をメタノール／水から再結晶し、２０を１１ｍｇ（３６％）得た。得られたものは薄層クロマトグラフィーにより単一物であった（Ｒｆ  ０．３２，シリカ，クロロホルム：メタノール：酢酸，９５：４：１）。
Mass spec：373（m+1）, 359（m+1-CH2）, 343. Mp. 153-156℃. NMR d 7.35（d, 1H, J = 8Hz, Ar, 6-Ph）, 6.66（dd, 1H, J = 2, 8Hz, Ar, 5-Ph）, 6.70 and 6.62 and 6.48（each, d, 1H, J = 2Hz, Ar）, 3.84（s, 9H, Me）, 3.80（s, 3H, Me）, 3.61（s, 3H, Me）. CHN分析．
実施例１４
この実施例は化合物４５の合成を説明する。
化合物４５は文献の方法を改変して合成した（Fales et al., J. Amer. Chem. Soc., 77, 5885-5890（1995））。６−ブロモ−３，４−ジメトキシ安息香酸（６−ブロモベラトルム酸、２．０ｇ，７．７ｍｍｏｌ，Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏｒｐ．，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ）を５０％エタノール／水（１００ｍＬ）に溶解し、レゾルシノール（０．８５ｇ，７．７ｍｍｏｌ）、５０ｍｇ銅粉末、５０ｍｇの酢酸第二銅および水酸化ナトリウム（０．３１ｇ，７．７ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を一晩加熱還流した。反応混合物をエーテルで１回抽出し、不溶性の固体を濾過により除去した。水層を１Ｎ塩酸で酸性にしてラクトンを形成させた。沈殿物を濾取により除去し、乾燥させた。生成物を含有するこの固体から未反応の６−ブロモベラトラム酸を除去するために、冷飽和ＮａＨＣＯ3水溶液に懸濁させ、部分的に溶解させた。残っている不溶性固体を濾取し、洗浄液は廃棄した。乾燥した残渣をエタノールから再結晶して０．７４ｇの純生成物（収率３５％）を得た。
NMR：CDCl3 d ppm 8.68 and 7.65（each s, 1H, Ar）, 4.06 and 3.99（each s, 3H, Me）, 2.95 and 2.67（each t, 2H, CH2）, 2.18（m, 2H, CH2）. Mp. 236-237℃. CHN分析．
実施例１５
この実施例は２，３−メチレンジオキシ−フルオレン−９−オン（４９）の合成を説明する。
フッ化水素ガスをドライアイス／アセトン浴につけたテフロンバイアルに集めて凝縮した。６−フェニルピペロニル酸（１００ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）をフッ化水素（２ｍＬ）に加え、溶液を一晩放置した。フッ化水素を留去すると純粋なフルオレノン誘導体が定量的収率（９２ｍｇ）で得られた。
mp 156-157℃
ＣＨＮ分析は行わなかった。
0004431638.tif 000015
0004431638.tif 000016
0004431638.tif 000017
実施例１６
この実施例は、本発明のフラボノイド誘導体の幾つかについてアデノシン受容体のブロックにおける薬効を示す。フラボノイド誘導体１〜１１ｄのアフィニティーは放射性リガンド結合アッセイを用いて測定した。その結果を表３に示す。
0004431638.tif 000018
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0004431638.tif 000020
実施例１７
この実施例は、さらに、本発明の化合物のアデノシン受容体のブロックにおける薬効を示す。フラボノイド誘導体１２〜１６のアフィニティーは放射性リガンド結合アッセイを用いて測定した。その結果を表４に示す。
0004431638.tif 000021
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実施例１８
この実施例は、さらに、本発明の化合物のアデノシン受容体のブロックにおける薬効を示す。フラボノイド誘導体１７〜２４のアフィニティーは放射性リガンド結合アッセイを用いて測定した。その結果を表５に示す。
0004431638.tif 000023
0004431638.tif 000024
実施例１９
この実施例は、さらに、本発明の化合物のアデノシン受容体のブロックにおける薬効を示す。フラボノイド誘導体２５〜３９のアフィニティーは放射性リガンド結合アッセイを用いて測定した。その結果を表６に示す。
0004431638.tif 000025
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0004431638.tif 000027
実施例２０
この実施例は、さらに、本発明の化合物のアデノシン受容体のブロックにおける薬効を示す。フラボノイド誘導体４０〜５１のアフィニティーは放射性リガンド結合アッセイを用いて測定した。その結果を表７に示す。
0004431638.tif 000028
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実施例２１
この実施例は、さらに、本発明の化合物のアデノシン受容体のブロックにおける薬効を示す。Ａ3アゴニストに誘導されたアデニリルシクラーゼの阻害に対するフラボノイド誘導体３ａ、１５および２０の効果を測定した。その結果を表８に示す。
0004431638.tif 000030
実施例２２
この実施例では、本発明の幾つかのフラボノイド類およびジヒドロピリジン類の原料について述べる。
化合物１、１１ａ、１２および１７は、Fluka, Ronkonoma, NYまたはAldrich, St. Louis, MOから入手した。化合物１３および１４は、Apin Chemicals, Ltd., Oxon, UKから入手した。化合物５ａは、K+K Laboratories, Jamaica, NYから入手した。化合物５ｂ（NSC #241010-z）、化合物９（NSC #78634-f）、化合物１１ｂ（NSC #74876-t）、化合物１１ｃ（NSC #74899-t）および化合物１１ｄ（NSC #74931-f）はNCI（Bethesda, MD）から入手した。
化合物４、２７−３４、４３および４４は、Fluka, Ronkonoma, NYまたはAldrich, St. Louis, MOから入手した。化合物３６は、Apin Chemicals, Ltd., Oxon, UKから入手した。化合物２５、２６、２７および４２は、K+K Laboratories, Jamaica, NYから入手した。化合物４０は、Sigma, Milwaukee WIから入手した。化合物４７は、Fisher, New York, NYから入手した。化合物４６、４８および５１（１−ヒドロキシ−２，３−ジメトキシ−１０−メチル−９（１０Ｈ）−アクリジノン）は、以下の文献に報告されている様に合成した。Fales et al., J. Amer. Chem. Soc., 77, 5885-5890（1995）；Fales et al., Chem. & Ind., （London）, 561-562（1958）；Craig et al., J. Org. Chem., 30, 1573-1576（1965）；Johne et al., Pharmazie, 25, 777-779（1970）；Banerjee et al,. Bull. Calcutta Sch. Trop. Med., 13, 60（1965）。
Ｒ（＋）−およびＳ（−）−ＢＡＹ  Ｋ  ８６４４、Ｒ（−）−およびＳ（＋）−ニグルジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピンおよび酸化ニフェジピンは、Research Biochemicals International（Natick, MA）から購入した。
実施例２３
この実施例では、１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸エステルの酸化（図７参照）の方法について説明する。
等モル量（０．２５ｍｍｏｌ）の１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸エステルとテトラクロロ−１，４−ベンゾキノンをテトラヒドロフラン（２ｍＬ）中で混合し、４時間になるまで攪拌した。溶媒を留去し、生成物を分取ＴＬＣ（シリカ６０；１０００ｍｍ；Ａｎａｌｔｅｃｈ，ＤＥ；２０％酢酸エチル−８０％石油エーテル３５−６０）によって精製した。
実施例２４
この実施例では、１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸エステルの調製（図６参照）の方法について説明する。
等モル量（０．５ｍｍｏｌ）の適当な３−アミノ−２−ブテノエートエステル、アルデヒドおよび３−ケトプロピオネートエステル誘導体を無水エタノール５ｍＬに溶解した。その溶液をガラス管に封管し、少なくとも２４時間、多くとも７２時間１００℃まで加熱した。溶媒を留去し、生成物を結晶化または分取ＴＬＣ（シリカ６０；１０００ｍｍ；Ａｎａｌｔｅｃｈ，ＤＥ；２０％酢酸エチル−８０％石油エーテル３５−６０）のどちらかで精製した。生成物の酸化を妨げるために、反応物をガラス管に封管するのと同時に、全工程を窒素雰囲気下および少光条件下（low-light condition）で行った。生成物は、ＴＬＣにより純粋であることが示された。
上記の方法に従って、幾つかの１，４−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボン酸エステルを調製した。このようにして調製した化合物およびそれらの物理的特性データを以下に示す。追加の特性データを表９に示す。
３−メチル−５−エチル  ２，４，６−トリメチル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（５２）
収率：９８．２％（メタノールから再結晶）1H NMR（d-CHCl3）
d 0.98（d, 3H, 4-CH3, J=6.7Hz）；1.31（t, 3H, 5- メチル, J=7.2Hz）；
2.28（s, 6H, 2- & 6-CH3）；3.73（s, 3H, 3- メチル）；
3.83（q, 1H, H-4, J=6.4Hz）；4.13-4.26（m, 2H, 5-メチレン）；
5.51（wide signal, 1H, H-1）.分子質量分析  計算値：253.131
測定値：m/z=271（M + NH4+, base）, 254（M + H+）, CI
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−エチル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（５６）
収率：５０．５％（メタノールから再結晶）1H NMR（d6-DMSO）
d 0.63（t, 3H, 4-メチル, J=7.4Hz）；1.18（t, 3H, 5-メチル, J=7.1Hz）；
2.19（s, 6H, 2- & 6-CH3）；3.58（s, 3H, 3- メチル）；
3.73（t, 1H, H-4, J=5.4Hz）；4.00-4.13（m, 4H, 4- & 5- メチレン）．
分子質量分析  計算値：267.147 測定値：m/z=285（M + NH4+, base）,
268（M + H+）, CI
３−メチル，５−エチル  ２，６−ジメチル−４−プロピル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（５７）
収率：７３．３％（メタノールから再結晶）1H NRM（d6-DMSO）
d 0.77（t, 3H, 4-メチル, J=6.7Hz）；
1.12（wide signal, 4H, 4a- & 4b- メチレン）；
1.19（t, 3H, 5-メチル, J=7.2Hz）；2.19（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.59（s, 3H, 3-メチル）；3.76（t, 1H, H-4, J=5.2Hz）；
4.07（q, 2H, 5-メチレン, J=6.6Hz）. 分子質量分析  計算値：281.163
測定値：m/z=299（M + NH4+, base）, 282（M + H+）、CI.
元素分析：（C15H23N104）C,H,N.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−（２（Ｒ，Ｓ），６−ジメチル−ヘキセン−５−イル）−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（５８）
収率：３３．４％（分取ＴＬＣ）1H NMR（d-CHCl3）
d 0.91（double d, 3H, 4-（2-CH3）, J1 = 5.8Hz, J2 = 24.0Hz）；
1.30（m, 7H）；1.63（d, 6H, 4-（6- & 7-CH3）, J = 25.4Hz）；
2.28（d, 6H, 2- & 6- CH3, J = 7.8Hz）；3.71（s, 3H, 3-メチル）；
3.97（t, 1H, H-4, J = 7.2Hz）；4.11-4.24（m, 2H, 5-メチレン）；
5.07（t, 1H, 4-（2-メチン）, J = 6.5Hz）；5.71（wide signal, 1H, H-1）.
分子質量分析  計算値：363.241  測定値：m/z = 381（M + NH4+, base）, 364（M + H+）, CI.
３−メチル，５−エチル−２，６−ジメチル−４−フェニル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（５９）
収率：７８．６％（メタノールから再結晶）1H NMR（d6-DMSO）
d 1.11（t, 3H, 5- メチル；J = 6.4Hz）；2.23（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.51（s, 3H, 3- メチル）；3.97（m, 2H, 5-メチレン）；4.84（s, 1H, H-4）；
7.08-7.20（m, 5H, 4-フェニル）．分子質量分析  計算値：315.147
測定値：m/z = 333（M + NH4+, base）, 316（M +H+）, CI.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（ニトレンジピン）（６１）
収率：８８．３％（分取ＴＬＣ）1H NMR（d-CHCl3）
d 1.25（t, 3H, 5- メチル, J = 5.4Hz）；2.39（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.66（s, 3H, 3- メチル）；4.13（m, 2H, 5-メチレン）；5.11（s, 1H, H-4）；
5.71（wide signal, 1H, H-1）；7.39（t, 1H, H-5’, J = 8.0Hz）；
7.65（d, 1H, H-6’, J = 7.7Hz）；8.02（d, 1H, H-4’, J = 7.8Hz）；
8.13（s, 1H, H-2’）．分子質量分析  計算値：360.132
測定値：m/z = 378（M + NH4+, base）, 361（M + H+）, CI.
元素分析：（C18H20N2O6）C,H,N.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−（４−ニトロフェニル）−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（６７）
収率：６８．１％（メタノールから再結晶）1H NMR（d6-DMSO）
d 1.11（t, 3H, 5- メチル, J = 7.2Hz）；2.26（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.52（s, 3H, 3- メチル）, 4.00（m, 2H, 5-メチレン）；4.96（s, 1H, H-1）；
7.39（d, 2H, H-2’ & H-6’, J = 8.7Hz）；
8.09（d, 2H, H-3’ & H-5’, J = 8.7Hz）．分子質量分析  計算値：360.132  測定値：m/z = 378（M + NH4+）, base, 361（M + H+）, CI.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−（２−α，α，α−トリフルオロメチルフェニル）−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（６８）
収率：４５．６％（分取ＴＬＣ）1H NMR（d6-DMSO）
d 1.05（m, 3H, 5- メチル）；2.21（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.44（s, 3H, 3- メチル）；3.84-4.10（m, 2H, 5- メチレン）；
5.38（s, 1H, H-4）；7.31（t, 1H, J = 7.3Hz）；7.51（m, 3H, 4-フェニル）．分子質量分析  計算値：383.134  測定値：m/z = 401（M + NH4+, base）, 384（M + H+）, CI.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−（４−メトキシフェニル）−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（７１）
収率：６１．８％（分取ＴＬＣ）1H NMR（d-CHCl3）
d 1.23（t, 3H, 5- メチル, J = 7.8Hz）；2.34（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.65（s, 3H, 4’-OCH3）；3.76（s, 3H, 3-メチル）；
4.07-4.14（m, 2H, 5-メチレン）；4.94（s, 1H, H-4）；
5.57（wide signal, 1H, H-1）；6.76（d, 2H, H-2’ & H-6’, J = 8.5Hz）；
7.20（d, 2H, H-3’ & H-5’, J = 8.6Hz）．分子質量分析  計算値：345.158
測定値：m/z = 363（M + NH4+, base）, 346（M + H+）, CI.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−（４−ヒドロキシ，３−メトキシフェニル）−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（７２）
収率：７９．６％（メタノールから再結晶）1H NMR（d6-DMSO）
d 1.13（t, 3H, 5- メチル, J = 7.4Hz）；2.21（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.52（s, 3H, 3’-OCH3）；3.66（s, 3H, 3-メチル）；
3.96-4.01（m, 2H, 5-メチレン）；4.74（s, 1H, H-4）；
6.49（t, 1H, H-6’, J = 3.9Hz）；6.58（d, 1H, H-5’, J = 7.9Hz）；
6.66（s, 1H, H-2’）．分子質量分析  計算値：361.153
測定値：m/z = 379（M + NH4+, base）, 362（M + H+）, CI.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−［３，４−（メチレンジオキシ）フェニル］−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（７３）
収率：６３．０％（分取ＴＬＣ）1H NMR（d-CHCl3）
d 1.24（t, 3H, 5- メチル, J = 7.3Hz）；2.33（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.66（s, 3H, 3- メチル）；3.73（s, 1H, H-4）；
4.09-4.22（m, 2H, 5-メチレン）；4.92（s, 2H, 3’,4’-メチレンジオキシ）；
5.57（wide signal, 1H, H-1）；5.89（s, 1H, H-2’）；
6.66（d, 1H, H-5’, J = 8.1Hz）；6.75（d, 1H, H-6’, J = 7.9Hz）.
分子質量分析  計算値：359.137  測定値：m/z = 377（M + NH4+, base）, 360（M + H+）, CI.
３−メチル−５−エチル−２，６−ジメチル−４−［２−フェニル−（ｔｒａｎｓ）−ビニル］−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（７５）
収率：８７．９％（メタノールから再結晶）1H NMR（d-CHCl3）
d 1.31（t, 3H, 5- メチル, J = 7.1Hz）；2.34（s, 6H, 2- & 6-CH3）；
3.74（s, 3H, 3- メチル）；4.14-4.28（m, 2H, 5- メチレン）；
4.63（d, 1H, H-4, J = 5.4Hz）；5.60（wide signal, 1H, H-1）；
6.19（t, 1H, 4-（H-1 ビニリデン）, J = 6.0Hz）；
7.18（d, 1H, 4-（H-2 ビニリデン）, J = 6.6Hz）；
7.24-7.34（m, 5H, 4-フェニル））．分子質量分析  計算値：341.163
測定値：m/z = 359（M + NH4+, base）, 342（M + H+）, CI.
３，５−ジエチル−２，４−ジメチル−６−フェニル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（７８）
収率：５３％（石油エーテル（３５−６０）から再結晶）1H NMR（d-CHCl3）：
d 0.89（t, 3H, 3- メチル, J = 7.4Hz）；
1.14（d, 3H, 5- メチル, J = 7.4Hz）；1.31（t, 3H, J = 7.0Hz）；
2.3（s, 3H, CH3）；3.94（m, 3H）；4.23（m, 2H）；7.28-7.41（m, 5H, C6H5）.分子質量分析  計算値：329.163  測定値：m/z = 347（M + NH4+, base）, 330（M+ H+）, CI.
３，５−ジエチル−２，４−ジメチル−６−ブチル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（７７）
構造は、ＨＮＭＲと質量分光分析により確認した。
３−メチル，５−（２−メトキシ）エチル  ２，４，６−トリメチル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（５３）
収率：５３．０％；1H NMR（d-CHCl3）d 0.99（d, 3H, 4-CH3, J = 6.7Hz）；
2.28（s, 6H, 2- & 6-CH3）；3.41（s, 3H, 5- メトキシ）；
3.66（t, 2H, 5-（2-メチレン）, J = 4.9Hz）；3.73（s, 3H, 3- メチル）；
3.85（q, 1H, H-4, J = 6.5Hz）；4.22-4.38（m, 2H, 5-（1-メチレン））；
5.54（wide signal, 1H, H-1）．分子質量分析  計算値：283.142
測定値：m/z = 301（M + NH4+, base）, 284（M + H+）, CI.
３−メチル，５−ベンジル  ２，４，６−トリメチル−１，４（Ｒ，Ｓ）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（５４）
収率：７０．５％；1H NMR（d-CHCl3）d 0.98（d, 3H, 4-CH3, J = 5.0Hz）；
2.28（s, 6H, 2- & 6-CH3）；3.72（s, 3H, 3- メチル）；
3.89（q, 1H, H-4, J = 6.5Hz）；5.21（q, 2H, 5-メチレン, J = 14.8Hz）；
5.54（wide signal, 1H, H-1）；7.30-7.41（m, 5H, 5- フェニル）.
分子質量分析  計算値：315.147  測定値：m/z = 333（M + NH4+, base）, 316（M +H+）, CI.
３，５−ジエチル  ２，６−ジメチル−４−（２−チエニル）−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１１４）
1H NMR（CDCl3）：δ1.27（t, 6H, J=7.75Hz, 3 and 5-CH2CH3）,
2.3（s, 6H, 2 and 6-CH3）, 4.17（m, 4H, 3 and 5-OCH2）5.35（s, 1H, 4-H）,
5.92（br, 1H, NH）, 6.8（d, 1H, J=3.9Hz, 3’-H）, 6.85（m, 1H, 4’-H）, 7.06（d, 1H, j+4.89Hz, 5’-H）.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−トリフルオロメチル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート
1H NMR（CDCl3）：δ1.32（m, 6H, 3 & 5-CH2CH3）；2.35（S, 3H, 7-CH3）, 4.20-4.38（m, 4H, 3 & 5-OCH2）4.84（s, 1H, 4-H）；6.29（br, 1H, NH）；
7.25-7.35（m, 5H, C6H5）. MS（EI：m/z 415（M）-；386（M-C2H5）+；
342（M-CO2C2H5）+, base.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４，６−ジフェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１１０）
1H NMR（CDCl3）：δ0.84（t, 3H, J=6.83Hz, 5-CH2CH3）,
1.24（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2 CH3）, 2.36（s, 3H, 2-CH3）,
3.84（m, 2H, 5-OCH2）, 4.12（q. 2H, J= 6.83Hz, 3-OCH2）,
5.12（s, 1H, 4-H）, 5.76（br, 1H, NH）, 7.18-7.44（m, 10H, 4 and 6C6H5）.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−（２−ピリジル）−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１１１）
1H NMR（CDCl3）：δ0.81（t, 3H, J=6.84Hz, 5-CH2CH3）,
1.22（t, 3H, J=6.83HZ, 3-CH2CH3）, 3.82（m, 2H, -5-OCH2）,
4.11（q, 2H, J=6.84Hz, 3-OCH2）, 5.25（s, 1H, 4-H）, 5.88（br, 1H, NH）, 7.08-7.56（m, 3H, ピリジル3’,4’, and 5’-H）, 7.37（m, 5H, 6-C6H5）,
8.55（d, 1H, J=4.89, ピリジル6’-H）.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−（３−ピリジル）一６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１１２）
1H NMR（CDCl3）：δ0.84（t, 3H, J=6.83Hz, 5-CH2CH3）,
1.24（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2 CH3）, 2.38（s, 3H, 2-CH3）,.
3.83（m, 2H, 5-OCH2）, 4.11（q, 2H, J=6.84Hz, 3-OCH2）,
5.09（S, 1H, 4-H）, 6.43（BR, 1H, NH）,
7.2-7.7（m, 2H, ピリジル4’ and5’ -H）, 7.3-7.4（m, 5H, 6-C6H5）,
8.33（d, 1H, ピリジル6’-H）, 8.64（s, 1H, ピリジル2”-H）.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−（４−ピリジル）−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１１３）
1H NMR（CDCl3）：δ0.83（t, 3H, J=6.84Hz, 5-CH2CH3）,
1.24（t, 3H, J=6.84HZ, 3-CH2 CH3）, 2.4.（s, 3H, -2-CH3）,
3.84（m, 2H, 5-OCH2）, 4.12（q, 2H, J=7.81Hz, 3-OCH2）,
5.12（s, 1H, 4-H）, 6.35（br, 1H, NH）,
7.3-7.4（m, 7H, 6-C6H5 andピリジル3’ and 5’-H）,
8.42（d, 2H, J=5.86Hz, ピリジル2’ and 6’-H）.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−（２−ベンゾフリル）−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１１６）
1H NMR（CDCl3）：δ0.89（t, 3H, J=6.84Hz, 5-CH2CH3）,
1.31（t, 3H, J=6.84HZ, 3-CH2 CH3）, 2.39（s, 3H,, 2-CH3）,
4.21（m, 2H, 3-OCH2）, 5.48（s, 1H, 4-H）, 5.96（br, 1H, NH）,
648（s, 1H, ベンゾフリル3’-H）,
7.1-7.5（m, 9H, 6-C6H5 andベンゾフリル4’, 5’, 6’ and 7’-H）．
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−（３−メチル  フェニルエチニル）−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２０）
1H NMR（CDCl3）：δ0.95（t, 3H, J=6.84Hz, 5-CH2CH3）,
1.35（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2 CH3）, 2.29（s, 3H, -3’CH3）,
2.36（s, 3H, 2-CH3）, 4.0（m 2H, 5-OCH2）, 4.3（m, 2H, 3-OCH2）,
5.11（s, 1H, 4-H）, 5.92（br, 1H, NH）,
7.0-7.43（m, 9H, 4-C6H4 and 6-C6H5）.
３−エチル  ５−ベンジル  ２−エチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート
1H NMR（CDCl3）：δ1.22（t, J=6.9Hz, 3H, 2-CH2CH3）；
1.34（t, J=6.9Hz, 3H, 3-CH3CH2）；2.55, 3.01（2m2H, 2-CH2CH3）；
4.25（m, 2H, 3-OCH2）；5.06（AB, J=12.7Hz, 2H, 5-OCH2）；
5.18（s, 1H, 4-H）；5.95（br, 1H, NH）；7.05- 7.39（m, 15H, 3 x C6H5）.
MS（EI）：m/z 491（M）+；462（M-C2H5）+；418（M-CO2C2H5）+；
356（M-CO2CH2C6H5）+, base.
化合物１２２ａ−ｑ、１２５および１２６の調製のための一般的方法
化合物１３９（０．２ｍｍｏｌ）を乾燥アセトン（１０ｍＬ）に溶解し、無水炭酸カリウム（０．５ｇ）およびフェニルエチルブロマイドまたはフェニルプロピルブロマイド（５等量）を添加し、混合物を２時間還流した。溶液を濾過後、溶媒を留去し、残留物を分取ＴＬＣプレートで分離して生成物を得、これを脱保護して１２５および１２６をそれぞれ得た。
３−エチル  ５−（２−メチルベンジル）−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２２ａ）
1H NMR（CDCl3）：δ1.34（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2CH3）,
2.16（s, 3H, 2’-CH3）, 2.37（s, 3H, 2-CH3）, 4.26（m, 2H, 3-OCH2）,
5.04（AB, 2H, J=12.7Hz, 5-OCH2）, 5.17（s, 1H, 4-H）, 5.92（br, 1H, NH）,
7.06-7.36（m, 14H, 4-C6H5, 5-C6H4, and 6-C6H5）.
３−エチル  ５−（３−メチルベンジル）−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２２ｂ）
1H NMR（CDCl3）：δ1.34（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2CH3）,
2.25（s, 3H, 2’-CH3）, 2.36（s, 3H, 2-CH3）, 4.3（m, 2H, 3-OCH2）,
4.99（AB, 2H, J=12.7Hz, 5-OCH2）, 5.18（s, 1H, 4-H）, 5.91（br, 1H, NH）,
6.88-7.39（m, 14H, 4-C6H5, 5-C6H4, and 6-C6H5）.
３−エチル  ５−（４−メチルベンジル）−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２２ｃ）
1H NMR（CDCl3）：δ1.34（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2CH3）,
2.37（s, 3H, 2-CH3）, 4.3（m, 2H, 3-OCH2）,
4.99（AB, 2H, J=12.7Hz, 5-OCH2）, 5.17（s, 1H, 4-H）, 5.86（br, 1H, NH）,
7.0-7.4（m, 14H, 4-C6H5, 5-C6H4, and 6-C6H5）.
３−エチル  ５−（４−トリフルオロメチルベンジル）−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２２ｄ）
1H NMR（CDCl3）：δ1.35（t, 3H, J = 6.84Hz, 3-CH2CH3）,
2.37（s, 3H, 2-CH3）, 4.3（m, 2H, 3-OCH2）,
5.15（AB, 2H, J=13.7Hz, 5-OCH2）, 5.18（s, 1H, 4-H）, 5.94（br, 1H, NH）,
7.13-7.45（m, 14H, 4-C6H5, 5-C6H4, and 6-C6H5）.
３−エチル  ５−（３−ニトロベンジル）−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２２ｆ）
1 NMR（CDCl3）：δ1.35（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2CH3）,
2.38（s, 3H, 2-CH3）, 4.3（m, 2H, 3-OCH2）,
5.15（AB, 2H, J=13.7Hz, 5-OCH2）, 5.17（s, 1H, 4-H）, 5.94（br, 1H, NH）,
7.3-8.1（m, 14H, 4-C6H5, 5-C6H4, and 6-C6H5）.
３−エチル  ５−（４−ニトロベンジル）−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２２ｇ）
1H NMR（CDCl3）：δ1.36（t, 3H, J=6.84Hz, 3-CH2CH3）,
2.38（s, 3H, 2-CH3）, 4.3（M, 2H, 3-OCH2）,
5.12（AB, 2H, J=12.7Hz, 5-OCH2）, 5.20（s, 1H, 4-H）, 5.94（br, 1H, NH）,
7.1-8.0（m, 14H, 4-C6H5, 5-C6H4, and 6-C6H5）.
３−プロピル  ５−ベンジル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２４）
1H NMR（CDCl3）：δ1.01（t, J=6.9Hz, 3H, 3-CH2CH3）,
1.73（M, 2H, 3-CH3 CH2）；2.37（s, 3H, 2-CH3）；4.15（m, 2H, 3-OCH2）；
5.06（AB, J=12.7Hz, 2H, 5-OCH2）；5.20（s, 1H, 4-H）；5.88（br, 1H, NH）；
7.07-7.37（m, 15H, 3 x C6H5）MS（EI：m/z 491（M）+’448（M-C3H7）+；
404（M-CO2C2H7）+；356（M-CO2CH2C6H5）+, base.
３−エチル  ５−フェニルエチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２５）
1H NMR（CDCl3）：δ1.36（t, J=6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）；
2.37（s, 3H, 2-CH3）；2.69（t, J=6.8Hz, 2H, 5- CH2C6H5）；
4.15（m, 2H, 3-OCH2）；4：30（m, 2H, 5-OCH2）；5.11（s, 1H, 4-H）；
5.87（br, 1H, NH）；7.10-7.41（m, 15H, 3 x C6H5）MS（EI）：m/z 491（M）+；
462（M-C2H5）+；418（M-CO2C2H5）+；342（M-CO2（CH2）2（C6H5）+.
３−エチル  ５−フェニルプロピル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２６）
1H NMR（CDCl3）：δ1.30（t, J=6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）；
1.65（m, 2H, 5-CH2 CH2CH2）；2.35（S, 3H, 2-CH3）；
2.40（m, 2H, 5-CH2C6H5）；398（m, 2H, 3-OCH2）；4.26（m, 2H, 5-OCH2）；
5.14（S, 1H, 4-H）；5.85（BR, 1Hh, NH）；7.20-7.41（M, 15H, 3 x C6H5）.
MS（EI）：m/z 505（M）+；476（M-C2H5）+；432（M-CO2C2H5）+；
342（M-CO2（CH2）3C6H5）+.
３−エチル  ５−ｔ−ブチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２７）
1H NMR（CDCl3）：δ1.25（t,J=7.1Hz, 3H, 3-CH2CH3）；
1.31（s,9H,C（CH3）3）；2.31（s, 3H, 2-CH3）；4.22（m, 2H, 3-OCH2）；
4.94（s, 1H, 4-H）；5.56（br, 1H, NH）；7.21-7.34（m, 10H, 2 x C6H5）.
MS（EI：m/z 505（M）+；476（M-C2H5）+；432（M-CO2C2H5）+；
342（M-CO2（CH2）3C6H5）+.
３−（２−メトキシ−２−フェニル）−エチル  ５−エチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２８）
1H NMR（CDCl3）：δ0.91&1.00（2t,J=6.8Hz, 3H, 5-CH2CH3）；
2.35（s, 3H, 2-CH3）；4.00（m, 2H, 5-OCH2）；4.35（m, 1H, 3-CH）；
4.50（m, 2H, 3-OCH2）；5.05（s, 1H, 4-H）；5.82（br, 1H, NH）；
7.21-7.41（m, 10H, 2x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z 539（M=NH4）+.
３−エチル  ５−（２−トリメチルシリル）−エチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２９）
1H NMR（CDCl3）：δ0.03（s, 9H, Si（CH3）3）；0.79（t, J=8.8Hz, 2H, CH2Si））；
1.41（t, J = 6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）；240（s, 3H, 2-CH3）；
4.10（t, J=8.8Hz, 2H, 5-OCH2）；4.31（m, 2H, 3-OCH2）；5.15（s 1H, 4-H）；
5.87（br, 1H, NH）；7.28-7.46（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z
３−エチル  ５−チオエチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１３０ａ）
化合物１３５（９０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）、ジフェニルホスホリルアジド（５６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびエタンチオール（２０ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）混合物に、氷冷下、攪拌しながらトリエチルアミン（２０ｍｇ）を加えた。混合物を室温で３時間攪拌し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残留物を１ＮのＨＣｌで脱保護して１５ｍｇの生成物を得た。
1HMR（CDCl3）：1.15（t, J=6.9Hz, 3H, 5-CH2CH3）；
1.28（t, J=6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）：2.37（s, 3H, 2-CH3）；
2.82（m, 2H, 5-SCH2）；4.31（m, 2H, 3-OCH2）：5.23（s, 1H, 4-H）：
5.95（br, 1H, NH）；7.24-746（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）；m/z
３−エトキシカルボニル−２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−５−カルボン酸（１３５）
1H NMR（CDCl3）：1.32（t, J=6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）；2.38（s, 3H, 2-CH3）；
4.29（m, 2H, 3-OCH2）；5.08（s, 1H, 4-H）；5.95（br, 1H, NH）；7.24-7.44（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z 405（M+NH4）；388（MH）+.
３−エトキシカルボニル−２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４（±）−ジヒドロピリジン−５−カルボン酸エチルアミド（１３２）
化合物１３９（７５ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２２ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）およびＤＡＥＣ（３４ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）混合物を室温で４時間攪拌した。エチルアミン（２．０ＭのＴＨＦ溶液、０．４ｍＬ）を加え、反応物を一晩攪拌した。溶媒を除去し、残留物をジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ×２）、食塩水（５ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去後、残留物を分取ＴＬＣプレートで精製して３８ｍｇの化合物１４０を得た。これを１ＮのＨＣｌで脱保護して１８ｍｇの生成物１３２を得た。
１４０：1H NMR（CDCl3）：0.72（t, J=6.8Hz, 3H, 1-CH2CH3）；0.96（t, J=6.8Hz, 3H, 5-CH2CH3）；1.33（t, J=6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）；2.60（s, 3H, 2-CH3）；3.08（m, 2H, 5-NCH2）；3.62（m, 2H, 1-OCH2）；4.23（m, 2H, 3-OCH2）；4.45, 4.85（AV, J=11.7Hz, N-CH2-O）；4.92（s, 1H, 4-H）；4.97（br, 1H, CONH）；7.22-7.44（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z 473（MH）+.
１３２：1H NMR（CDCl3）：0.85（t, J=6.8Hz, 3H 5-CH2CH3）；1.31（t, J=6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）；2.37（s, 3H, 2-CH3）；3.16（m, 2H, 5-NCH2）；4.25（m, 2H, 3-OCH2）；5.09（s, 1H, 4-H）；5.37（br, 1H, CONH）；5.64（br, 1H, NH）；7.25-7.44（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z３−ｔ−ブチル  ５−エチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（＋）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１３３）
1H NMR（CDCl3）：δ0.91（t, J=6.9Hz, 3H, 5-CH2CH3）；1.52（s, 9H, C（CH3）3）；2.29（s, 3H, 2-CH3）；3.98（m, 2H, 5-OCH2）；5.05（s, 1H, 4-H）；5.71（br, 1H, NH）；7.21-7.40（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z 461（M + HN4）+；443（MH）+.
５−エトキシカルボニル−２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３−カルボン酸エチルアミド（１３４）
1H NMR（CDCI3）：0.85（t, J=6.8Hz, 3H, 3-CH2CH3）；1.18（t, J=6.8Hz, 3H, 5-CH2CH3）；2.24（s, 3H, 2-CH3）；3.38（m, 2H, 3-NCH2）；3.94（m, 2H, 5-OCH2）；4.80（s, 1H, 4-H）；5.65（br, 1H, NH）；6.32（br, 1H, CONH）；7.23-7.38（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（EI）：m/z 414（M）+；385（M-C2H5）+, base；342
（M-CONHC2H5）+.
３−エチルカルボニル  ５−エトキシカルボニル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−±−ジヒドロピリジン（１３５）
1H NMR（CDCl3）；δ0.93（t, J=7.0Hz, 3H, 5-CH2CH3）；2.33（s, 3H, 2-CH3）；2.48（s, 3H, 3-COCH3）；4.00（q, 2H, J=7.0Hz, 5-OCH2）；5.04（s, 1H, 4-H）；5.88（br, 1H, NH）；7.26-7.43（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（EI：m/z 385（M）+；443（M-CH3CO）+, base.
エチル  ３−オキソ−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロキノリン−２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−±−ジヒドロピリジン−５−カルボキシレート（１３６）
1H NMR（CDCl3）；δ1.02（t, J=6.8Hz, 3H, 5-CH2CH3）；2.04（t, J=4.9Hz, 2H, 7-CH2）；2.46（m, 4H, 8&9-CH2）；4.00（m, 2H, 5-OCH2）；5.13（s, 1H, 4-H）；6.14（br, 1H, NH）；7.20-7.41（m, 10H, 2 x C6H5）. Ms（EI：m/z 397（M）+；368（M-C2H5）+, base.
化合物（１２９）中のＮ−Ｈ基保護の一般的手法：
水素化ナトリウム（６０％、鉱物油中，１．５当量）を化合物１２９のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液に加えた。該混合物を５分間攪拌し、アルゴン下、室温でクロロメチルメチル（エチル）エーテル（１．５当量）を該溶液にゆっくりと加えて２時間攪拌した。冷水（１０ｍＬ）を加えて反応を止め、酢酸エチル（１０ｍＬ×２）で抽出、有機層を水（１０ｍＬ×２）、食塩水（１０ｍＬ×２）で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を留去し、残渣を分取ＴＬＣで精製して対応するＮ保護生成物１３７および１３８を得た。
１−メトキシメチル  ３−エチル  ５−（２−トリメチルシリル）−エチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１３７）
1H NMR（CDCl3）；δ-0.04（s,9H, Si（CH3）3）；0.63（m, 2H, CH2Si）；1.33（t, J=7.0Hz, 3H, 3-CH2CH3）；2.54（s, 3H, 2-CH3）；3.18（s, 3H, OCH3）；3.97（t, J=7.8Hz, 2H, 5-OCH2）；4.27（m, 2H, 3-OCH2）；4.37, 4.85（AB, J=11.7Hz, N-CH2-O）；5.07（s, 1H, 4-H）；7.21-7.40（M, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z 549（M+ NH4）+；532（MH）+.
１−エトキシメチル  ３−エチル  ５−（２−トリメチルシリル）−エチル  ２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１３８）
1H NMR（CDCl3）；δ-0.08（s, 9H, Si（CH3）3）；0.61（m, 2H, CH2Si）；0.91（t, J=6.9Hz, 3H, OCH2CH3）；1.41（t, J=6.9Hz, 3H, 3-CH2CH3）；2.57（s, 3H, 2-CH3）；3.13（m, 2H, OCH2CH3）；3.95（t, J=7.9Hz, 2H, 5-OCH2）；4.12（m, 2H, 3-OCH2）；4.41, 4.81（AB, J=10.8Hz, 2H, N-CH2-O）；5.02（s, 1H, 4-H）；7.20-7.39（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z 563（M+NH4）+；546（MH）+.
１−エトキシメチル−３−エトキシカルボニル−２−メチル−４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−（±）−ジヒドロピリジン−５−カルボン酸（１３９）
ＴＢＡＦ（水和物，２０８ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を１３８（１１５ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に加えた。該混合物をアルゴン下室温で２時間攪拌し、酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈、１ＮのＨＣｌ（５ｍＬ），Ｈ2Ｏ（２０ｍ  ｍＬ×２）および食塩水（２０ｍＬ×２）で洗浄して硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を留去し、分取ＴＬＣプレートで残渣を分離して８０ｍｇの生成物を得た。
1H NMR（CDCl3）；δ0.93（t, J=6.8Hz, 3H OCH2CH3）；1.31（t, J=6.9Hz, 3H, 3-CH2CH3）；2.59（s, 3H, 2-CH3）；3.09, 3.65（2m, 2H, OCH2CH3）；4.27（m, J=7.9Hz, 2H, 3-OCH2）；4.39, 4.85（2d, J=10.7Hz, 2H, 3-OCH2）；4.41, 4.81（AB, J=10.8Hz, 2H, N-CH2-O）；5.02（s, 1H, 4-H）；7.12（br, 1H, COOH）；7.20-7.39（m, 10H, 2 x C6H5）. MS（CI/NH3）：m/z 463（M+NH4）+；446（MH）+.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−（２−［４−ニトロ−フェニル］エチニル）−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１１９）
1H NMR（d-CHCl3）δ：1.25-1.34（m, 6H, 3-&5-CH3）；2.49（s, 3H, 2-CH3）；3.47-3.59（m, 2H, 3-CH2）；4.23（q, 2H, 5-CH2, J=7.8Hz）；5.42（s, 1H, H-4）；56.29（d, 1H, H-1, J=2.9Hz）；7.55（d, 2H, H-2’ & H-6”, J=8.8Hz）；8.21（d, 2H, H-3’ & H-5’, J=8.8Hz）；8.26, （wide, 1H, H-6）.
３，５−ジエチル  ２−メチル−４−（２−［３−トルイル］エチニル）−１，４（±）−ジヒドロピリジン−３，５−ジカルボキシレート（１２０）
1H NMR（d-CHCl3）δ：1.25-1.34（m, 6H, 3-&5-CH3）；2.49（s, 3H, 2-CH3）；3.47-3.59（m, 2H, 3-CH2）；4.23（q, 2H, 5-CH2, J=7.8Hz）；5.42（s, 1H, H-4）；56.29（d, 1H, H-1, J=2.9Hz）；7.55（d, 2H, H-2’ & H-6”, J=8.8Hz）；8.21（d, 2H, H-3’ & H-5’, J=8.8Hz）；8.26, （wide, 1H, H-6）.
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実施例２５
この実施例は特定のジヒドロピリジン誘導体のアフィニティーについて説明する。アフィニティーは放射性リガンド結合アッセイにより測定した。その結果を表９に示す。
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実施例２６
この実施例は特定のピリジン誘導体のアフィニティーについて説明する。アフィニティーは放射性リガンド結合アッセイにより測定した。その結果を表１０に示す。
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実施例２７
この実施例は特定のジヒドロピリジンおよびピリジン誘導体のアフィニティーについて説明する。アフィニティーは放射性リガンド結合アッセイにより測定した。その結果を表１１−１２に示す。
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実施例２８
この実施例は、特定の１，４−ジヒドロピリジンのジアステレオマーの合成および分割方法について説明する。化学合成および分割の概略を図９Ａ−９Ｂに示す。１，４−ジヒドロピリジン誘導体の特性を表１３に示す。
分割用のジアステレオマー対を合成するために、保護されたグリセロール部分から誘導されたキラルなβ−ケトエステル（２０５，図９Ａ）を用いてHantzsch反応を行った。この中間体は（Ｓ）−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールのアセト酢酸エステルから構成されていた。そのうちのＳ−エナンチオマーである２０５ａを図９Ａに示す。このβ−ケトエステルと反応の他の構成要素が４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−ジヒドロピリジン誘導体を形成する。従って、２０５ａ、プロピオールアルデヒド２０６およびベンゾイルアセト酢酸エステル２０７をエタノール中に溶解し、一晩還流した。重水素化クロロホルム中のプロトンＮＭＲにより、単離されたゴム状生成物２０８ａがＳ，ＳおよびＲ，Ｓ−ジアステレオマーの１：１混合物であることがわかった。２つのエステルのα−メチレン基のそれぞれからのシグナルは、スペクトル中でよく分離されており、０．１ｐｐｍ離れていた。ジアステレオマーの４−Ｈからのシグナルは０．０３ｐｐｍ離れていた。その後のエナンチオマーの分割（下記）およびキラルシフト試薬の添加により、これらのピークが純粋なジアステレオマーに対応することが確認された。
メタノールからのラセミ混合物２０８ａの結晶化により、この４−フェニルエチニル−６−フェニル−１，４−ジヒドロピリジン誘導体の１つの純粋なジアステレオマーが得られた。この異性体はＸ線結晶学によりＳ，Ｓ立体配置であることがわかった。残りの異性体は母液からオイルとして得られ、1Ｈ−ＮＭＲにより純粋であることが示された。ランタニドシフト試薬Ｅｕ（ＦＯＤ）の存在下および非存在下での２つの分離された異性体の1Ｈ−ＮＭＲ共鳴［JACS, 1980, 102, 5903］はカタログに掲載され、表１３に示されている。単離された異性体のそれぞれは純粋であり、そのスペクトル中にもう一方の異性体のピークが見えないことが示された。ＥｕＦＯＤがなければ、４−Ｈおよびメチレンの共鳴は、Ｓ，Ｓ異性体よりもＲ，Ｓ異性体においてより低磁場であった。ＥｕＦＯＤ（４ｍｇ／ｍＬ）により、すべての共鳴が低磁場にシフトした。それぞれの場合において、Ｓ，Ｓ異性体の共鳴はＮＭＲシフト試薬の存在下でより大きく低磁場にシフトした。例えば、４−Ｈからのシグナルは、Ｓ，Ｓ異性体ではＥｕＦＯＤによって＞０．７ｐｐｍシフトしたが、Ｒ，Ｓ異性体では０．３ｐｐｍしかシフトしなかった。したがって、ＥｕＦＯＤの存在下では、この重要な共鳴は２つのジアステレオマーの間で０．４ｐｐｍ離れた。エステルの２つのα−メチレン基の共鳴は、ＥｕＦＯＤの非存在下で測定されたスペクトル中では最もよく分解されたが、ＥｕＦＯＤの存在下では〜０．３ｐｐｍ離れた。
化合物２１０ａのＣ４位での絶対的立体配置を確定するために、Ｘ線結晶構造を決定した。２１０ａの小さな針状晶はメタノール／水溶液からの蒸気拡散により成長した。Ｘ線回折研究をジーメンスＰ４自動回折計（ＭｏＫα照射）を用いて行った。２１０ａの結晶は、格子パラメーターａ＝１１．０５９（２）Å、ｂ＝８．２１２（２）Å、ｃ＝１５．６２９（３）Å、β＝１０４．４６（１）°およびＺ＝２を有する単斜晶（Ｐ２1）である。
カルボニル基はｃｉｓ／ｃｉｓに配向しており、これは他の１，４−ジヒドロピリジンに関する知見と一致し、４位の置換基はそれほど立体障害がない。
２，２−ジメチル−１，３−ジオキリラン部分はまた、ＨＣｌ／ＴＨＦ中での脱保護（図９Ｂ）の後得られるジオール２１１ａの保護体として用いられる。このジオールは塩基性エステル交換反応において５−エチルエステルに対して選択的反応性を示した。９５％エタノール中の水酸化ナトリウムを用いて、この手法により３−エチルエステル２１４を得た。分割されたジアステレオマー２０９ａおよび２１０ａも別々に脱保護し、２１２ａおよび２１３ａを得た。次いで、これらのジオールの生物学的活性について試験した。その結果を表１４に示す。
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実施例２９
この実施例は、トリアゾロキナゾリンの５−Ｎ−アシル誘導体を調製するのに適用された合成の方法論について説明する。ＣＧＳ１５９４３は化合物１４４においてＲ1およびＲ2が水素のものをいう。
ＣＧＳ１５９４３の５−Ｎ−アシル誘導体の調製のための一般的手順
方法Ａ（対称の無水物）
攪拌しているＣＧＳ１５９４３（１０ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌｅ）、無水物（０．１０５ｍｍｏｌｅ）およびジメチルアミノピリジン（０．５ｍｇ，０．００４ｍｍｏｌｅ）の無水ＤＭＦ１．５ｍｌ溶液に、トリエチルアミン（７３μｌ，０．５２５ｍｍｏｌｅ）を室温で加えた。該混合物を４８時間攪拌してから減圧下で蒸発乾固させた。分取シリカゲルＴＬＣ（ＣＨ2Ｃｌ2−ＭｅＯＨ，５０：１〜７５：１）により残渣を精製して所望の化合物１４５−１４８および１５０，１５１を得た。
方法Ｂ（酸塩化物）
攪拌しているＣＧＳ１５９４３（１０ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌｅ）、無水ピリジン（４０μｌ，０．５ｍｍｏｌｅ）の無水ＣＨ2Ｃｌ2１．５ｍｌ溶液に、０℃で塩化アシル（０．１０５ｍｍｏｌｅ）を加えた。該混合物を室温で２４−４８時間攪拌し、次いで、所望の化合物（１４９，１５３および１６０−１６２）を精製するために方法Ａと同じ手順で処理した。
方法Ｃ（カルボジイミド）
ＣＧＳ１５９４３（１０ｍｇ，０．０３５ｍｍｏｌｅ）、酸（０．２１０ｍｍｏｌｅ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（４１ｍｇ，０．２０１ｍｍｏｌｅ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２８ｍｇ，０．２１０ｍｍｏｌｅ）ジメチルアミノピリジン（０．５ｍｇ，０．００４ｍｍｏｌｅ）およびトリエチルアミン（７４μｌ，０．５３０ｍｍｏｌｅ）の無水ＤＭＦ／ＣＨ2Ｃｌ2（１：１  ｖ／ｖ）２ｍｌ溶液を室温で４８時間攪拌した。所望の化合物（１５２，１５４）を精製するために、該混合物を方法Ａと同じ手順で処理した。
５−アセチルアミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１４５）．
2.78（3H, s）, 6.63-6.65（1H, m）, 7.30（1H, d, J=2.9）, 7.68（1H, broad s）,7.73（1H, dd, J=1.9, 8.8）, 7.86（1H, d, J=8.8）, 8.48（1H, d, J=2.9）, 8.99（NH, broads）
９−クロロ−２−（２−フリル）−５−プロピオニルアミノ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１４６）．
1.34（3H, t, J=7.81, 7.82）, 3.10（2H, q, J=7.81, 6.8, 7.82）, 6.63-6.65（1H, m）, 7.31（1H, d, J=3.91）, 7.68（1H, d, J=1.96）, 7.73（1H, dd, J=1.96, 8.79）, 7.88（1H, d, J=8.79）, 8.48（1H, d, J=1.96）, 9.01（NH, broad s）
５−ブチリルアミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１４７）
1.10（3H, t, J=7.42, 7.28）, 1.84-1.91（2H, m）, 3.03（2H, t, J=7.42, 7.27）, 6.63-6.65（1H, m）, 7.31（1H, d, J=3.43）, 7.68（1H, d, J=1.78）, 7.73（1H, dd, J=2.34, 8.8）, 7.88（1H, d, J=8.8）, 8.48（1H, d, J=2.33）, 8.97（NH, broad s）
９−クロロ−２−（２−フリル）−５−ペンタノイルアミノ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１４８）
1.01（3H,t, J=6.84, 7.82）, 1.48-155（2H, m）, 1.77-1.85（2H, m）, 3.05（2H, t, J=7.82, 6.83）, 6.63-6.65（1H, m）, 7.31（1H, d, J=2.93）, 7.68（1H, broad s）, 7.73（1H, dd, J=1.95, 8.79）, 7.88（1H, d, J=8.80）, 8.48（1H, d, J=2.93）, 8.98（NH, broad s）
９−クロロ−２−（２−フリル）−５−トリメチルアセチルアミノ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１４９）．
1.47（9H, s）, 6.63-6.65（1H, m）, 7.31（1H, d, J=3.44）, 7.68-7.69（1H, m）, 7.74（1H, dd, J=2.47, 8.93）, 8.01（1H, d, J=8.93）, 8.49（1H, d, J=2.48）, 9.39（NH, broad s）
５−［（ｔｅｒｔ．−ブトキシカルボニル）アミノ］−９−クロロ−２−（２−フリル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１５０）．
1.63（9H, s）, 6.65-6.66（1H, m）, 7.35（1H, d, J=3.47）, 7.69（1H, broad s）, 7.74（1H, dd, J=2.60, 8.90）, 8.01（1H, d, J=8.90）, 8.49（1H, d, J=2.59）, 8.56（NH, broad s）
５−ベンゾイルアミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１５１）．
6.64-6.66（1H, m）, 7.35（1H, d, J=2.93）, 7.61-7.68（3H, m）, 7.68-7.70（1H, m）, 7.77（1H, dd, J=1.96, 8.79）, 8.04-8.10（3H, m）, 8.52（1H, d, J=1.95）, 9.75（NH, broad s）
９−クロロ−２−（２−フリル）−５−（４’−ヨードベンゾイル）アミノ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１５２）．
6.64-6.66（1H, m）, 7.30-7.36（3H, m）, 7.70（1H, broad s）, 7.77（1H, dd, J=1.95, 10.74）, 7.92-8.10（2H, broad m）, 8.39（1H, m）, 8.52（1H, d, J=1.96）, 9.62（NH, broad s）
９−クロロ−２−（２−フリル）−５−フェニルアセチルアミノ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１５３）
4.38（2H, s）, 6.62-6.65（1H, m）, 7.24-7.26（1H, m）, 7.35-7.44（5H, m）, 7.67-7.68（1H, m）, 7.74（1H, dd, J=2.20, 9.04）, 7.93（1H, d, J=8.79）, 8.49（1H, m）, 9.10（NH, broad s）
５−［［４−ｔｅｒｔ．−ブトキシカルボニル）アミノ］ブチリル］アミノ−９−クロロ−２−（２−フリル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１５４）．
1.44（9H, s）, 2.03（2H, pen, J=6.83）, 3.13（2H, t, J=6.83, 7.33）, 3.32（（2H, q, J=6.35）, 4.81（NH, broad s）, 6.63-6.65（1H, m）, 7.27-7.32（1H, m）, 7.67-7.68（1H, m）, 7.71-7.75（1H, m）, 7.91（1H, d, J=8.79）, 8.48（1H, d, J=1.96）, 9.15（NH, broad s）
５−アミノ−２−［２−５−ブロモフリル）］−９−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（１５７）．
２６６（０．０１ｇ，０．０２６ｍｍｏｌｅ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（０．００５ｇ，０．０２８ｍｍｏｌｅ）のＡｃＯＨ／ＣＨＣｌ3（１：１）２ｍｌ溶液を室温で１時間攪拌した。該混合物を１０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ3溶液中に注ぎ込み、生成物を１０ｍｌのＣＨＣｌ3で３回抽出した。合わせたＣＨＣｌ3溶液を食塩水で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、減圧下で蒸発乾固させた。分取シリカゲルＴＬＣ（ＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ，８０：１）により残渣を精製して２−［２−５−ブロモフリル）］−５−［（ｔｅｒｔ．−ブトキシカルボニル）アミノ］−９−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン（０．０１２ｇ，９９％）を白色固体として得た：MS（CI, NH3）466（M++1）；1H NMR（CDCl3）6.58（1H, d, J=3.58）, 7.29（1H, d, J=3.59）, 7.73（1H, dd, J=2.28, 8.79）, 7.98（1H, d, J=9.01）, 8.46（1H, d, J=2.28）, 8.53（NH, broad s）．この化合物のＣＨ2Ｃｌ2２ｍｌ溶液にＴＦＡ（０．０５ｍｌ，０．６７ｍｍｏｌｅ）を加えて室温で２時間攪拌した。該反応混合物を上記と同じ後処理の手順で処理した。粗生成物の分取シリカゲルＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘ．−ＣｈＣｌ3−ＭｅＯＨ，１：１：０．１）により、２７３（４．５ｍｇ，４８％）が白色固体として得られた：MS（CI, NH3）366（M++1）, 383（M++18）；1H-NMR（CDCl3）5.94（NH2, broad s）, 6.56（1H, d, J=3.80）, 7.25（1H, d, J=3.80）, 7.63-7.65（2H, m）, 8.41（1H, d, J=2.07）.
９−クロロ−２−（２−フリル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン−５−（６Ｈ）−オン（１５８）．
密封したチューブ中の、ＣＧＳ１５９４３（０．０７５ｇ，０．２６３ｍｍｏｌｅ）のＡｃＯＨ８．０ｍｌおよびＨ2Ｏ２．０ｍｌ溶液を１００℃で７２時間加熱した。該溶液をトルエンと共に減圧下で溶媒留去し、分取シリカゲルＴＬＣ（ＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ，１５：１）により残渣を精製して２７４（０．０６５ｇ，８６％）を白色固体として得た：mp>310℃；MS（CI NH3）287（M++1）, 304（M++18）；1H NMR（DMSO-d6）6.73-6.74（1H, m）, 7.26（1H, d, J=3.47）, 7.46（1H, d, J=8.79）, 7.77（1H, dd, J=2.49, 8.90）, 7.97（1H, s）, 8.16（1H, d, J=2.48）, 12.47（NH, S）
９−クロロ−２−（２−フリル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］キナゾリン−６−プロピル−５−オン（１５９）．
１５８（０．０２１ｇ，０．０７３ｍｍｏｌｅ）の無水ＴＨＦ２ｍｌ懸濁液に、Ｎ2雰囲気下、室温でＮａＨ（６ｍｇ，６０％鉱物油中，ｎ−ヘキサンで予備洗浄，０．１５ｍｍｏｌｅ）の無水ＴＨＦ２ｍｌ懸濁液、次いでＨＭＰＡ（０．３２ｍｌ，１２ｍｍｏｌｅ）を加えた。該混合物を３０分間強く攪拌した。Ｈ2ガスが発生した。１−ブロモプロパン（２８μｌ，０．３ｍｍｏｌｅ）を加え、反応混合物を６時間還流した。冷却後、少量のシリカゲルベッドに通して沈澱を濾去し、濾液を溶媒留去した。分取シリカゲルＴＬＣ（ｎ−Ｈｅｘ．−ＥｔＯＡｃ，２：１）により残渣を精製して１５９（０．０１２ｇ，５０％）を白色固体として得た：1H-NMR（CDCl3）1.11（3H, t, J=7.49, 7.48）, 1.85-1.93（2H, m）, 4.35（2H, t, J=8.03, 7.49）, 6.60-6.61（1H, m）, 7.32（1H, d, J-3.36）, 7.37（1H, d, J=9.34）, 7.66（1H, broad s）, 7.68（1H, dd, J=2.39, 9.01）, 8.52（1H, d, J=2.50）
実施例３０
この実施例は特定のトリアゾロキナゾリンのアフィニティーについて説明する。アフィニティーは放射性リガンド結合アッセイにより測定した。結果を表１５−１６に示す。
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実施例３１
この実施例では、癌細胞の致死における本発明のアデノシン受容体アンタゴニストの有用性について述べる。
試薬：
ＨＬ−６０およびＵ−９３７細胞はＡＴＣＣ（Bethesda, MD）から入手した。ＲＰＭＩ１６４０培地とウシ胎児血清はGibco BRL（Gaithersburg, MD）から入手した。ＩＢ−ＭＥＣＡ（２−［４−［９２−カルボキシエチル）フェニル］エチルアミノ］−５’−Ｎ−エチルカルボキサミドアデノシン）およびＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（Ｎ6−（３−ヨードベンジル）−２−クロロ−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド）はＲＢＩ（Natick, MA）からＮＩＭＨ合成プログラム（NIMH Synthesis Program）を通じて入手した。Ａ3選択的アデノシンアンタゴニストである１０１と１５３は先に記載された方法を用いて合成した。Ｌ−２４９３１３（６−カルボキシメチル−５，９−ジヒドロ−９−メチル−２−フェニル［１，２，４］トリアゾロ［５，１−ａ］［２，７］−ナフチリジン）はメシレート塩としてMerck（West Point, PA）のMarlene Jacobson博士から供与された。アポトーシス検出システムはPromega（Madison, WI）から、抗ｂａｋ抗体はCalbiochem（La Jolla, CA）から入手した。ローダミン（ＴＲＩＴＣ）を結合したアフィニティ精製した（AffiniPure）ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）はJackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. から入手した。クロモナイシンＡ3はSigma Chemical（St. Louis, MO）から購入した。
細胞の培養および調製：
ＨＬ−６０細胞を１０％ウシ胎児血清、１００単位／ｍｌペニシリン、１００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを補ったＲＰＭＩ１６４０で維持した。該細胞を３日目毎に分配し、各実験の２日前に培養物を２×１０5細胞／ｍｌに希釈した。ＤＮＡ含有量の解析には、２ｍｌのアリコートを、２〜６μｌの所定濃度の被検化合物溶液あるいは６μｌのＤＭＳＯ（希釈媒体）の入った１２穴の平底プレート（Costar, Cambridge, MA, USA）に入れた。生細胞を０．１％トリパンブルーを用いて計数した。
フローサイトメトリーによるＤＮＡ含有量解析：
１ｍｌのＰＢＳに懸濁した〜１０7細胞に１ｍｌの８０％エタノールを−２０℃で加えて細胞を固定し、４８〜１２０時間保存した。該細胞をＰＢＳで２回洗浄した後、やわらかな光のもとでインキュベートする（３０分；４℃）ことによって、２ｍＭ  ＭｇＣｌ2を含有するＰＢＳに溶解した２０ｍｇ／ｍｌのクロモマイシンＡ3で該細胞を染色した。ついで該細胞をＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Becton Dickinson, Mountain View, CA）を用いて解析した。
in situハイブリッド形成：
ｐＨ７．４、４℃で２５分間、ホルムアルデヒドを含まない４％メタノール（ＰＢＳ中）中にスライドを浸すことによって細胞を固定した。固定した細胞を、０．２％Triton▲Ｒ▼X-100（ＰＢＳ中）中で４℃、５分間で透過性とした。１００μＭのPromega平衡緩衝液と共に室温で１０分間、プレインキュベーションした後、該細胞を５０μｌのＴｄＴインキュベーション緩衝液とカバースリップで被覆し、乾燥と直接光から保護するために暗く湿ったチャンバー内で３７℃で６０分間保存した。反応を止めるために、該カバースリップを除去し、室温で１５分間、該スライドを２×ＳＳＣに浸した。該細胞を１μｇ／ｍｌヨウ化プロピジウム（ＰＢＳ中）で１５分間再び染色した。各工程毎に該細胞を５分間ずつ新しいＰＢＳで２〜３回すすいだ。最後に、ガラススライドをマニキュア液で封じた。該スライドを暗所で４℃で保存した。
免疫蛍光染色：
細胞を以下の工程のようにして固定した。すなわち、１％ホルマリン（ＰＢＳ中）で１０分間、１０℃メタノールで５分間および氷冷アセトンで２分間、次いで０．１％Nonidet P-40を用いて２０分間で透過性とした。調製後、該標本を１０％ヤギ血清（ＰＢＳ中）で２０分間、マウスモノクローナル抗ｂａｋ抗体（５μｇ／ｍｌ  ＰＢＳ−ＢＳＡ）で６０分間、ローダミン（ＴＲＩＴＣ）を結合したアフィニティ精製したヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（ＰＢＳ−ＢＳＡ中）で６０分間と段階をおってインキュベートした。各工程の後に、該標本をＰＢＳで３〜５回洗浄した。該ガラススライドを暗所で４℃で保存した。
得られたフローサイトメトリーのデータを図１０Ａおよび１０Ｂに示す。該データは高濃度（≧μＭ）の、Ａ3受容体アゴニストであるＩＢ−ＭＥＣＡおよびＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡがＨＬ−６０前骨髄球白血病細胞においてアポトーシスを引き起こしたことを示している。同様の応答がＵ−９３７組織球リンパ細胞においても観察された。図１０では、アポトーシス細胞の割合を、ＤＮＡ頻度ヒストグラムにおいて低二倍体ＤＮＡ含有量を示す細胞の割合から概算した。ＨＬ−６０（図１０Ａ）およびＵ−９３７細胞（図１０Ｂ）において、４８時間該アゴニストとインキュベートすると、いずれのアゴニストでもアポトーシス細胞の割合が全細胞の３０〜５０％の範囲内でおよそ１０μＭで始まるプラトーが観察された。
Ａ3受容体のより高い選択的アゴニストであるＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡは低濃度（≦１μＭ）では、フローサイトメトリーを用いて測定されるアポトーシス（図１０Ａ−Ｂ）、あるいはトリパンブルー染色を用いて測定される一般的な細胞死（図１１Ａ−Ｄ）を顕著には促進しなかった。後者のアッセイでは、細胞死はＨＬ−６０細胞（図１１Ａ−Ｂ）およびＵ−９３７細胞（図１１Ｃ−Ｄ）について９日間の時間経過にわたって測定した。薬物処理を受けていない培養では、細胞は実験の終了近くまで幾何級数的に増加した。０．０１あるいは１．０μＭのＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ単独の存在下では、この増殖曲線からの逸脱は見られなかった。
２０または４０μＭの濃度でのＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡは、培養４日後で９０％を越えるＨＬ−６０細胞の死を引き起こし、続いて極めて遅い細胞数の増加をもたらした。Ｕ−９３７細胞はこのアゴニストに対してわずかに感受性が低く、同様の効果を得るためには４０μＭのＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡを必要とした。選択的Ａ3受容体アンタゴニストである１０１あるいはＬ−２４９３１３のいずれも０．５μＭの濃度で、単独でこの期間、細胞の増殖阻害を概して引き起こした。初めの４〜５日間で細胞数がまず減少したのに続いて、高い増殖阻害が起こった。しかしながら、Ａ3アンタゴニストと０．０１あるいは１．０μＭのＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡとの両方の存在下では、増殖曲線は対照の曲線にほぼ一致していた。すなわち、このＡ3アゴニストは、１０ｎＭという極めて低い濃度を含む致死量に近い濃度で、ＨＬ−６０細胞（図１１Ａ−Ｂ）およびＵ−９３７細胞（図１１Ｃ−Ｄ）の両方において、どちらの選択的アンタゴニストによっても引き起こされる細胞増殖の減少を元の状態に復帰させた。
アポトーシスの特徴であるＤＮＡ鎖切断がＡ3アンタゴニストによって引き起こされるという証拠は、断片化された核ＤＮＡのin situでの、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼによる、３’末端で蛍光標識を取り込むというin situ末端標識（TUNEL method, Cooke, H., Trends in Biotech., 10, 23（1992））を用いて得られた。ＨＬ−６０およびＵ−９３７細胞（表１５）においては、５０ｎＭの１０１あるいは５０ｎＭのＬ−２４９３１３のどちらかで２４時間インキュベーションすると広範な（存在する細胞のおよそ３０〜４０％）アポトーシス細胞の蛍光標識が生じた。対照の培養物および１０ｎＭのＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ単独で処理した培養物においては、自然発生的なアポトーシスが５〜７％の細胞にのみ起こった（表１７）。１０ｎＭのＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡとどちらか一方のアンタゴニストとを共に投与すると、アポトーシス細胞の増加が抑制された。アゴニストによる、アンタゴニスト誘発性のアポトーシスの逆転は、アゴニストとアンタゴニストが共に低濃度で投与されたということを除いては増殖曲線で観察されたものと同様である。高濃度のＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（３０μＭ）はまた、TUNEL methodによっておよそ５０％の標識化で示されるように、ＨＬ−６０およびＵ−９３７細胞の両方で広範囲のＤＮＡ断片化を引き起こした。
どちらのＡ3アゴニストにも応答して観察されるアポトーシスの機構を調べた。アデノシン受容体リガンドに応答するアポトーシス誘導性のタンパク質ｂａｋの発現を免疫蛍光法（Towbin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 4350-4354（1979））を用いて調べた。ｂａｋの標識は、対照のＨＬ−６０細胞あるいはＵ−９３７細胞においてはみられなかったが、Ｌ−２４９３１３あるいは１０１のどちらかで２４時間処理した細胞においてはみられた。ＨＬ−６０細胞およびＵ−９３７細胞の両方で、ｂａｋタンパク質の発現はトリアゾロキナゾリンＡ3アンタゴニスト１５３（１０ｎＭ）を用いることによってもまた誘導された。ＨＬ−６０細胞およびＵ−９３７細胞の両方において、Ｃｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡは、３０μＭで顕著なレベルのｂａｋ発現を引き起こしたが、≦１μＭの濃度では引き起こさなかった。
Ａ3アゴニストに応答したｂａｋの発現について種々の他の細胞株を調べた。１０μＭのＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡは、ＭＣＦ７胸部アデノカルシノーマ細胞および１３２１Ｎ星状細胞腫細胞でｂａｋの発現を誘導するが、Ｕ３７３星状細胞腫細胞では誘導しないことがわかった。それゆえ、Ａ3アゴニストによるｂａｋ発現の増加制御は、広範囲ではあるが普遍的な現象ではないと考えられる。
これらの結果は、Ａ3アゴニストおよびアンタゴニストの両方が、プログラムされた細胞死を制御する働きにより、神経変性のような細胞障害が望ましくない疾患あるいは癌や炎症のような細胞障害が望ましい疾患のいずれの疾患の治療においても有用性を有しているかもしれないことを示している。アゴニストあるいはアンタゴニストのレベルは、細胞に望ましい効果、例えば致死や保護を生じさせるために注意深くバランスをとるべきである。
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実施例３２
この実施例では、動物における脳卒中でのニューロンの保護における本発明化合物の有用性について述べる。
雌性のスナネズミに１０分間の両方の頸動脈の閉塞を与え、次いで１５分後に１００μｇ／ｋｇのエマルファー（emulpher）／生理食塩水（１：４）の媒体でＡ3アデノシン受容体アンタゴニストである化合物１０１の注射を施した。対照のスナネズミには生理食塩水を注射した。虚血後の時間の関数として動物の生存を追跡した。該アンタゴニストを注射した動物では高い生存率：７日後に９０％、９０日後に８０％を示した。対照群の生存率は、７日後に５０％、９０日後に２０％を示した。
無傷のニューロンの数もまた計数した。虚血して７日後、アンタゴニストを注射した動物は、無傷のニューロンを７５％有し、９０日後には無傷のニューロンの数は９０％であった。それにより、障害をうけたニューロンがアンタゴニストの影響下で回復できることを示している。対照群の率は７日後および９０日後で３５％であった。
これらのデータはＡ3アデノシン受容体アンタゴニストが、障害を受け、そして薬物を作用させなければ最終的には死ぬであろうニューロンを保護し、またニューロンが生き残る機会を増加させることを示している。
実施例３３
この実施例では、Ａ3アデノシン受容体アゴニストの気管支収縮効果およびＡ3アデノシン受容体アゴニストの気管支収縮効果への対抗におけるＡ3アデノシン受容体アンタゴニストの有用性について述べる。
アデノシン受容体は、アレルギー性喘息における気管支収縮（ＢＣ）に関係している。アレルギー性ウサギにおいて、ジフェニルシクロペンチルキサンチンによる選択的なＡ1受容体のブロッキングの後、Ａ3アゴニストであるＩＢ−ＭＥＣＡが濃度依存的にＢＣを誘導することがわかった。また、Ａ1およびＡ2の両方の特異的結合部位をキサンチンアミノ同族体でブロッキングした後、Ａ3特異的結合はＡ3アゴニストであるＡＰＮＥＡによって置き変えられることもわかった。これらの結果は、Ａ3アデノシン受容体アゴニストがＢＣを引き起こすことを立証した。
さらにＡ3アデノシン受容体アンタゴニストがＡ3アゴニストによって誘導されるＢＣに対抗できることがさらにわかった。
ニュージーランド白色パスツレラ非感染ウサギの同産仔を、Ａ3アデノシンアゴニストであるＡＰＮＥＡ、ＩＢ−ＭＥＣＡあるいはＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡにさらし、そして、動的コンプライアンス（Ｃdyn）における変化割合を公知の方法を用いてアデノシン投与量の関数として測定した。Ali. et al., J. Pharmacol. & Exper. Therap., 268, 1328-1334（1993）。ウサギにおいてアレルギーは、ほこりダニを用いて誘導した。
得られた結果を図１２に示す（白抜き記号）。当該結果は、アデノシンアゴニストが、気管支収縮の示度であるＣｄｙｎの低下を引き起こすことを示している。しかしながら、アデノシンアンタゴニストである化合物１０１をアゴニストと一緒に投与した場合、動的コンプライアンスにおける変化割合はより減じられた（塗りつぶされた記号）。２分間のエアロゾル化により、１０-5Ｍの一定の投与量でアンタゴニストを投与し、続いて１５分間待ち、動的コンプライアンスを測定した。結果はＡ3アデノシン受容体アンタゴニストが喘息のような炎症性障害に対抗するのに効果的であることを裏付ける。
本明細書で引用した全ての参考文献（特許、特許出願および刊行物を含む）は、言及したことで、その全体が本明細書に組み入れられるものである。
好適な実施態様を強調して本発明を説明したが、当業者には好適な実施態様を変更し得ること、および本発明は本明細書で特に説明した以外でも実施できることを意図していることは自明であろう。従って、以下に示す請求の範囲の精神および範囲内に包含される全ての変形を本発明は含む。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２】
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