(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
紫米、赤米および紅米からなる群から選択される有色素米もしくはその糠の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤。
【請求項２】
紫米、赤米および紅米からなる群から選択される有色素米もしくはその糠の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー・抗炎症剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、過剰な体脂肪を減少させるのに有用なサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、および、ヒスタミン遊離抑制作用とヒアルロニダーゼ阻害作用に基づきアレルギー症状と炎症を抑える抗アレルギー・抗炎症剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
有色素米と総称されている一群の米は、果皮の部分にアントシアニンその他の赤色系色素を含むため玄米の状態では淡赤色ないし紫黒色に着色している。現代日本人が主食とする白米（しろごめ）の玄米は褐色であるから、外観だけで容易に識別可能な、特殊な米である。
【０００３】
有色素米は白米とはかなり違った食感のものであって米飯として利用されることはほとんどないが、近年、その特徴的な色や風味が注目されて、新しい食材としての利用が検討され実施されている。しかしながら、有色素米の薬理作用もしくは生理活性については、白米と同様のものがあるであろうことは予想されていても、具体的に調べられた例はほとんどなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、珍しい食材としての利用にとどまっていた有色素米について生理活性成分を探索し、新規な用途を提供することにある。
【０００５】
本発明の他の目的は、新規なサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤および抗アレルギー・抗炎症剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明の第一は、本発明者らによりサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有することが確認された有色素米もしくはその糠の抽出物を有効成分とするサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を提供するものである。
【０００７】
サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼは脂肪の代謝に関与しているサイクリックＡＭＰを分解する酵素である。サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤を用いてこの酵素の作用を抑制すると、細胞内サイクリックＡＭＰの濃度を上昇させて過剰な体脂肪の代謝を活発にし、肥満を解消させることができる。
【０００８】
上記有色素米抽出物については、ヒスタミン遊離抑制作用およびヒアルロニダーゼ阻害作用を有することも確認された。
【０００９】
ヒスタミンはＩ型アレルギー反応に伴って肥満細胞から遊離され、アレルギー症状の起炎物質となる。したがって、このヒスタミンの遊離を抑制することにより、アレルギー症状の一部を抑制することができる。また、ヒアルロニダーゼは生体内のさまざまな組織中に存在し、通常は不活性な状態にあるが、活性化すると様々な炎症に関与し、また、ある種のアレルギーの発症にも関与することがわかっている酵素である。したがって、この酵素の作用を阻害することも、アレルギー症状の抑制につながる。
【００１０】
本発明の第二は、上記知見に基づき、ヒスタミン遊離抑制作用およびヒアルロニダーゼ阻害作用を有する有色素米もしくはその糠の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー・抗炎症剤を提供するものである。
【００１１】
なお、通常の白米には、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有する成分もアレルギー抑制に有効な成分も全く含まれていないか、あってもごく微量である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用、ヒスタミン遊離抑制作用およびヒアルロニダーゼ阻害作用を示す成分は、単一の成分なのか複数の成分なのかは確認されていないが、有色素米の果皮の部分に含まれているものと思われる。活性成分が得られるのは有色素米の玄米またはそれを精米したとき得られる糠を抽出処理した場合に限られ、精白米からは活性成分はほとんど得られない。
【００１３】
有色素米としては様々な品種が栽培されており、品種によって、また栽培地によっても、上記活性成分の含有量は異なるが、例えば紫米（華南紫、朝紫等）、黒米（黒優占等）、赤米、紅米などと呼ばれている品種は強い活性を有する抽出物を与えるので、原料として好ましい。
【００１４】
抽出溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプパノール、ブタノール等、炭素数１〜４の低級脂肪族アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；アセトン等の低級脂肪族ケトン；水；またはこれらの混合物が適当である。抽出は容易で、常温または加温状態の溶媒に抽出原料を浸漬するだけでも効率よく抽出されて来る。
【００１５】
抽出液から濾過または遠心分離により固形物を除去したのち溶媒を留去し、必要ならばさらに乾燥する。得られる抽出液濃縮物およびその乾燥物は、そのままでもサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤または抗アレルギー・抗炎症剤として使用可能なほど強い活性を示すが、適宜の精製を施して活性を向上させてから利用に供してもよい。未精製の抽出物は、抽出原料の種類によっても異なるが、通常暗紫色ないし赤紫色の着色と、使用に差し支えない程度の弱いにおいを有する。
【００１６】
本発明によるサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤および抗アレルギー・抗炎症剤には、上記有色素米またはその糠の抽出物のほかにも、任意の助剤、賦形剤、溶液として利用に供するための水または有機溶剤等を含有させることができる。
【００１７】
本発明によるサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤は、化粧料や飲食品に添加してその作用を痩身美容のために利用することができる。また、本発明による抗アレルギー・抗炎症剤も、化粧料、入浴剤、飲食品等に添加して、アレルギーや炎症の予防と治療に利用することができる。
【００１８】
各製剤の添加対象として適当な化粧料の例としては、クリーム、乳液、ローション、パック等があるが、これらに限定されるわけではない。また、添加対象として適当な飲食品の例には、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等およびこれらの飲料を調製するための濃縮原液または粉末状原料混合物；そば、うどん、はるさめ、中華麺、ぎょうざの皮等の穀物加工品；飴、キャンディー、錠菓、ガム、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；カマボコ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工品；加工乳、発酵乳等の乳製品；ソース、焼き肉のたれ等の調味料；カレー、スープ、シチューのもと、サラダ、各種総菜、漬物類；その他各種形態の健康食品および栄養補助食品等がある。
【００１９】
化粧料に対する本発明製剤の好適添加率は添加対象物の種類や付与しようとする活性の強さ等によっても異なるが、標準的な有色素米抽出物をそのまま添加する場合で約０．００１〜５．０重量％が適量である。飲食品に添加する場合は、成人一日当たりの摂取量が１０〜１，０００ｍｇ程度になるようにすればよい。
【００２０】
本発明で用いる有色素米またはその糠の抽出物は実用濃度では容易に水に溶けるものであるから、化粧料や飲食品に均一に混合するのは容易である。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明を説明する。
製造実施例１
有色素米の玄米３００ｇを６０℃の抽出溶媒９００ｍｌに１時間浸漬して可溶性成分を抽出する。この処理を２回行い、得られた抽出液を濃縮乾固して、抽出物を得る。
有色素米として紫米２種類（中国広東産の華南紫および秋田産の朝紫）、黒米（長野産の黒優占）、赤米（九州産）、紅米（中国雲南産）を選び、抽出溶媒として水、７０％エタノールまたはエタノールを用いて上記抽出処理を行なった。
参考例として、“白米”（コシヒカリ）の玄米についても同様の抽出処理を行なった。抽出物の収率は表１のとおりであった。
【００２２】
【表１】
0004585070.tif 000002
【００２３】
製造実施例２
製造実施例１で用いた玄米から得られた糠を原料にして、製造実施例１の場合と同様の抽出を行なった。なお、抽出は糠１００ｇに対して抽出溶媒５００ｍｌを用いて行なった。抽出物の収率は表２のとおりであった。
【００２４】
【表２】
0004585070.tif 000003
【００２５】
実施例１
製造実施例１で得られた玄米７０％エタノール抽出物および製造実施例２で得られた糠の７０％エタノール抽出物について、下記の試験法によりサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を確認した。
【００２６】
試験法：５ｍＭの塩化マグネシウムを含有するトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍｌに胎児血清アルブミン溶液０．１ｍｌおよびサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍｌを加え、さらに試料溶液０．０５ｍｌを加え、３７℃で５分間前培養する。次いでサイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍｌを加え、３７℃で３０分間反応させる。沸騰水上で３分間煮沸して反応を停止させ、４℃で遠心分離し、上清中の反応生成物・５′−ＡＭＰを高速液体クロマトグラフィーにより定量する。試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応生成物の分析を行い、試料無添加時の反応生成物量に対する試料添加時の反応生成物量の比率より、試料のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率を求める。
【００２７】
試料溶液の試料濃度を段階的に変更して上記の測定を繰り返し、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０を内挿法により求めた。その結果を表３に示す。
【００２８】
【表３】
0004585070.tif 000004
【００２９】
【表４】
0004585070.tif 000005
【００３０】
実施例２
製造実施例１で得られた玄米７０％エタノール抽出物および製造実施例２で得られた糠の７０％エタノール抽出物について、下記の試験法によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を確認した（細胞内のヒスタミンが遊離されるとき、同時にヘキソサミニダーゼも遊離される。このため、測定困難なヒスタミン遊離量に代えてヘキソサミニダーゼの遊離量を測定しても、ヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。）。
【００３１】
試験法：２５ｍｌのフラスコに入れた１５％ＦＢＳ添加ＭＥＭ培地にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１０６個を播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で４日間培養する。その後トリプシン処理および遠心処理（１０００ｒｐｍ，２分間）を行なって細胞を沈殿物として得る。これを上記培地と同じ培地に４．０×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌ懸濁させ、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＥ）を５μｌ添加し、濃度を０．５μｇ／ｍｌとする。得られた細胞浮遊液を９６穴プレートに８０μｌ播種し、５％ＣＯ２下３７℃で２４時間培養する。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で洗浄する。次に上記緩衝液３０μｌおよび試料溶液１０μｌを加え、３７℃で１０分間インキュベートする。次にジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μｌを加え、さらに３７℃で１５分間インキュベートする。その後、氷冷下で上清液１０μｌを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍＭｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μｌを加え、３７℃で１時間インキュベートする。反応終了後、０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３・ＮａＨＣＯ３溶液２５０μｌを加え、マイクロプレートリーダーにて４１５ｎｍにおける吸光度Ａを測定する。試料溶液を添加しない細胞浮遊液についても同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度をＢとする）。また、細胞浮遊液のかわりに上記緩衝液を用いて同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度をＣとする）。そして、次式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出する。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝〔１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）〕×１００
【００３２】
試料溶液の濃度を段階的に変更して上記方法により抑制率を測定し、抑制率が５０％になる試料溶液の濃度ＩＣ５０を内挿法により求める。
結果を表５および表６に示す。
【００３３】
【表５】
0004585070.tif 000006
0004585070.tif 000007
【００３４】
【表６】
0004585070.tif 000008
【００３５】
実施例３
製造実施例１で得られた玄米７０％エタノール抽出物および製造実施例２で得られた糠の７０％エタノール抽出物について、下記の試験法によりヒアルロニダーゼ阻害作用を確認した。
【００３６】
試験法：ヒアルロニダーゼ溶液（４００単位／ｍｌ，ｐＨ９．１ホウ酸緩衝液）０．１ｍｌと試料溶液０．２ｍｌをよく混合し、３７℃に２０分間加温してから活性化剤溶液（０．０１％Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０，２．５ｍＭ−ＣａＣｌ２，０．１５Ｍ−ＮａＣｌ）０．２ｍｌを加え、３７℃に２０分間加温して酵素を活性化する。ヒアルロン酸カリウム緩衝液０．５ｍｌを加え、３７℃で４０分間反応させた後、０．４Ｎ水酸化ナトリウム０．２ｍｌを加えると共に氷冷して反応を停止させる。次いで０．８Ｍホウ酸溶液（ｐＨ９．１）０．２ｍｌを加え、沸騰湯浴中で３分間加熱した後、直ちに１０分間氷冷する。ＤＭＡＢ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸１２．５ｍｌと酢酸８７．５ｍｌの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍｌを加えて３７℃に２０分間保つことにより上記酵素反応で遊離したＮ−アセチルグルコサミンを発色させ、波長５８５ｎｍの吸光度を測定する。コントロールとして、試料溶液の代わりに水を加えた場合について、同様の操作と吸光度測定を行う。
【００３７】
以上の測定結果から、下記の計算式によりヒアルロニダーゼ活性の阻害率を算出する。
阻害率（％）＝〔１−（Ａ１−Ａ０）／（Ａ３−Ａ２）〕×１００
但し、Ａ０：試料溶液を添加した場合の吸光度；酵素反応開始前
Ａ１：試料溶液を添加した場合の吸光度；酵素反応終了後
Ａ２：コントロール；酵素反応開始前
Ａ３：コントロール；酵素反応終了後
試料溶液の濃度を段階的に変更して上記阻害率を測定し、阻害率が５０％になる試料濃度・ＩＣ５０を内挿法により求める。
結果を表７および表８に示す。
【００３８】
【表７】
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【００３９】
【表８】
0004585070.tif 000010
【００４０】
使用例１
下記組成のローションを常法により製造した。
グリセリン                                            ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                            ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）  ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                              ０．１５ｇ
クエン酸                                              ０．１ｇ
クエン酸ソーダ                                        １ｇ
香料                                                  ０．０５ｇ
黒優占玄米エタノール抽出物（製造実施例１）            ０．２ｇ
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【００４１】
使用例２
下記の組成の乳液を常法により製造した。
赤米糠エタノール抽出物（製造実施例２）                １ｇ
セチルアルコール                                      ０．５ｇ
ミツロウ                                              ２ｇ
ＰＯＥ（１０）モノオレイン酸ソルビタン                １ｇ
グリセリンモノステアリン酸エステル                    １ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム                                ０．１ｇ
プロピレングリコール        ５ｇ
エタノール                                            ３ｇ
エチルパラベン                                        ０．３ｇ
香料                                                  ０．０３ｇ
精製水                              残部（全量を１００ｍｌとする）
【００４２】
使用例３
下記の組成の清涼飲料を常法により製造した。
砂糖                          １２ｇ
レモン果汁                      １．０ｇ
サイクロデキストリン            ０．０１ｇ
レモンフレーバー                ０．０５ｇ
朝紫糠水抽出物（製造実施例２）  ０．１ｇ
精製水                        残部（全量を１００ｇとする）
【００４３】
使用例４
下記の混合物を打錠機で打錠して、健康補助食品を製造した。
華南紫玄米エタノール抽出物（製造実施例１）    １２０ｇ
ラフィノース                                  １７２ｇ
グリセリン脂肪酸エステル                          ８ｇ
【００４４】
使用例５
流動層造粒機を用いて下記混合物を顆粒状に成形し、ダイエット食品を得た。
赤米玄米エタノール抽出物（製造実施例１）      ３００ｇ
ラフィノース                                  ２９０ｇ
微結晶セルロース                              １００ｇ
難消化性デキストリン                          ８１０ｇ
【００４５】
使用例６
異性化糖３３０ｇ、砂糖１４０ｇ、水２７０ｇを混合して加熱し、そこに製造実施例２による紅米糠水抽出物１０ｇおよびゼラチン８０ｇを水１５０ｇに溶かした溶液ならびに濃縮レモン果汁８ｇを加えて混合し、型に流し込んで冷却することにより、アレルギー予防グミキャンディーを製造した。
【００４６】
【発明の効果】
本発明によるサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤および抗アレルギー・抗炎症剤は、いずれも食材である有色素米から得られる成分よりなるものであるから安全性に優れ、肥満体質の人やアレルギー体質の人が長期使用するのに不安がない。
【００４７】
本発明によれば、有色素米、特にその精米過程で出る廃物の糠の新規な用途が提供され、有色素米の高度利用が可能になる。