(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の構造：
【化１】
0004579351.tif 000080
（ここで、
Ｒ、Ｒ0及びＲ’は、個々独立に、Ｈ、または、任意にヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、直鎖状または分枝状アルキルまたは環状アセタール、フッ素、ＮＲ1Ｒ2、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノで置換されていてもよい直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ1及びＲ2は、個々独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；
Ｚは、Ｏ、Ｎ（ＯＲ3）またはＮ-ＮＲ4Ｒ5であり、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、個々独立に、Ｈまたは直鎖状または分枝状アルキルである）を有する化合物。
【請求項２】
下記の構造：
【化２】
0004579351.tif 000081
（ここで、
Ｒは、Ｈ、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、
【化３】
0004579351.tif 000082
または（ＣＨ2）3−ＯＨである）を有する請求項１記載の化合物。
【請求項３】
下記の構造：
【化４】
0004579351.tif 000083
（ここで、
Ｒ、Ｒ0及びＲ’は、個々独立に、Ｈ、または、任意にヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、カルボキシアルデヒド、直鎖状または分枝状アルキルまたは環状アセタール、フッ素、ＮＲ1Ｒ2、Ｎ−ヒドロキシイミノ、またはＮ−アルコキシイミノで置換されていてもよい直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、Ｒ1及びＲ2は、個々独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；
Ｚは、Ｏ、Ｎ（ＯＲ3）またはＮ-ＮＲ4Ｒ5であり、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、個々独立に、Ｈまたは直鎖状または分枝状アルキルである）を有する化合物。
【請求項４】
下記の構造：
【化５】
0004579351.tif 000084
（ここで、
Ｒは、Ｈ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシルまたはヒドロキシプロピルである）を有する請求項３記載の化合物。
【請求項５】
下記構造：
【化６】
0004579351.tif 000085
（ここで、
Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；
Ｘは、酸素、（ＯＲ）2、（ＳＲ）2、−（Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｏ）−、−（Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｓ）−、または−（Ｓ−（ＣＨ2）n−Ｓ）−であり；
ｎは、２、３または４である）を有する化合物。
【請求項６】
Ｒ’がＴＢＳであり、Ｒ”がＴＰＳであり、Ｘが（ＯＭｅ）2である請求項５記載の化合物。
【請求項７】
下記の構造：
【化７】
0004579351.tif 000086
（ここで、
Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換アリールオキシアルキル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；
Ｘは、ハロゲンであり；
Ｒ”は、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２−メチル−１，３−チアゾリニル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、２−メチル−１，３−オキサゾリニル、３−インドリルまたは６−インドリルであり；
Ｒ’は、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、ヒドロキシメチル、ヒドロキシプロピル、アルキルカルボキシアルデヒド、直鎖状または環状アセタールである）を有する化合物。
【請求項８】
Ｒが、アセチルであり、Ｘが、ヨウ化物である請求項７記載の化合物。
【請求項９】
下記の構造：
【化８】
0004579351.tif 000087
（ここで、
Ｒは、水素、直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、直鎖状または分枝状のアシル、置換又は非置換のアロイルまたはベンゾイルであり；
Ｘは、ハロゲンであり；
Ｒ’は、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、アルキルカルボキシアルデヒド、直鎖状または環状アセタールであり；
Ｒ”は、Ｈ、直鎖状又は分枝鎖状アルキル、フェニル、２−メチル−１，３−チアゾリニル、２−フラニル、３−フラニル、４−フラニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾリル、２−メチル−１，３−オキサゾリニル、３−インドリルまたは６−インドリルである）を有する化合物。
【請求項１０】
下記の構造：
【化９】
0004579351.tif 000088
（ここで、
Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換アリールオキシアルキル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；
Ｒ’は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ヘキシル、ＣＯ2Ｅｔ、
【化１０】
0004579351.tif 000089
、ＣＨ2ＯＨまたは（ＣＨ2）3−ＯＨであり；Ｘはハロゲンである）を有するＺ−ハロアルケンエステルの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化１１】
0004579351.tif 000090
を有する化合物を適当な条件下で酸化的に開裂してアルデヒド中間体を生成し、そして、
（ｂ）アルデヒド中間体を、適当な条件下で、ハロメチレン転移剤で縮合させてＺ−ハロアルケンエステルを生成することを含んでなる方法。
【請求項１１】
Ｘが、ヨウ素である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
ハロメチレン転移剤が、Ｐｈ3Ｐ＝ＣＲ’Ｉまたは（Ｐｈ3Ｐ+ＣＨＲ’Ｉ）Ｉ-である請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
下記構造：
【化１２】
0004579351.tif 000091
（ここで、
Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、直鎖状又は分枝状アシル、置換又は非置換のアロイルまたはベンゾイルである）を有する光学的に純粋な化合物の製造方法において、当該方法が、
（ａ）アリル有機金属試薬と、下記構造：
【化１３】
0004579351.tif 000092
を有する不飽和アルデヒドとを、適当な条件下で縮合させてアルコールを生成し、任意にそれと並行して、当該アルコールを光学的に分割して下記構造：
【化１４】
0004579351.tif 000093
を有する光学的に純粋なアルコールを生成し、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した光学的に純粋なアルコールを、適当な条件下でアルキル化またはアシル化して光学的に純粋な化合物を形成することを含んでなる方法。
【請求項１４】
アリル有機金属試薬が、アリル（トリアルキル）スタンナンである請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記縮合工程が、チタンテトラアルコキシド及び光学活性触媒を含む試薬を用いて行われる請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
光学活性触媒が、（Ｓ）−（−）−１，１’−ビナフタレン−２，２’−ジオール（（S）-（-）-1,1’-Binaphthalene-2,2’-diol:S（-）BINOL）である請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
下記構造：
【化１５】
0004579351.tif 000094
（ここで、
Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルである）を有する開環アルデヒドの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化１６】
0004579351.tif 000095
（ここで、
Ｒは、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、トリアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；
Ｘは、ハロゲンである）を有するハロオレフィンを、下記構造：
【化１７】
0004579351.tif 000096
（ここで、
（ＯＲ”’）2は、（ＯＲ0）2、（ＳＲ0）2、−（Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｏ）−、−（Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｓ）−、または−（Ｓ−（ＣＨ2）n−Ｓ）−であり；
Ｒ0は、直鎖状または分枝状アルキル、置換または非置換のアリールまたはベンジルであり；
ｎは、２、３または４である）を有する末端オレフィンと、適当な条件下で交差カップリングして、下記構造：
【化１８】
0004579351.tif 000097
（ここで、
Ｙは、ＣＨ（ＯＲ*）2であり、Ｒ*は、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換または非置換アリールオキシアルキルである）を有する交差カップリング化合物を生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した交差カップリング化合物を、適当な条件下で脱保護して開環化合物を形成することを含んでなる方法。
【請求項１８】
下記構造：
【化１９】
0004579351.tif 000098
を有するエポチロンの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化２０】
0004579351.tif 000099
（ここで、
Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルである）を有する環化化合物を、適当な条件下で脱保護し、脱保護環化化合物を生成し、当該脱保護環化化合物を適当な条件下で酸化して、下記構造：
【化２１】
0004579351.tif 000100
を有するデスオキシエポチロンを生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成したデスオキシエポチロンを、適当な条件下でエポキシ化してエポチロンを形成することを含んでなる方法。
【請求項１９】
下記構造：
【化２２】
0004579351.tif 000101
（ここで、
Ｒ1は、水素、またはメチルであり；
Ｘは、Ｏ、または各々炭素原子に単結合した水素及びＯＲ”であり；
Ｒ0、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルである）を有するエポチロン前駆体の製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化２３】
0004579351.tif 000102
（ここで、Ｒは、アセチルである）を有する化合物を、下記構造：
【化２４】
0004579351.tif 000103
（ここで、Ｙは、酸素である）を有するアルデヒドと、適当な条件下でカップリングさせてアルドール中間体を生成し、当該アルドール中間体は、任意に、適当な条件下で保護して下記構造：
【化２５】
0004579351.tif 000104
を有する非環式エポチロン前駆体を生成してもよく、
（ｂ）前記非環式エポチロン前駆体を、分子内オレフィン転移を導く条件下で処理してエポチロン前駆体を形成することを含んでなる方法。
【請求項２０】
前記分子内オレフィン転移を導く条件が、有機金属触媒の存在を必要とする請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
触媒が、ＲｕまたはＭｏ錯体である請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
請求項１または３に記載の化合物と、製薬に適したキャリアとを含んでなるガン治療のための製薬組成物。
【請求項２３】
請求項１または３に記載の化合物からなる抗ガン剤。
【請求項２４】
ガンが、充実性ガンまたは乳ガンである請求項２３記載の抗ガン剤。
【請求項２５】
下記構造：
【化２６】
0004579351.tif 000105
（ここで、Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、直鎖状または分枝状アシル、置換または非置換のアロイルまたはベンゾイルである）を有するＺ−ヨードアルケンエステルの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造
【化２７】
0004579351.tif 000106
を有する化合物を、下記構造：
【化２８】
0004579351.tif 000107
（ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換または非置換のアリールまたはベンジルである）を有するメチルケトンと、適当な条件下でカップリングさせて、下記構造：
【化２９】
0004579351.tif 000108
を有する化合物を生成し、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した化合物を、適当な条件下で処理して、下記構造：
【化３０】
0004579351.tif 000109
を有するＺ−ヨードアルケンを生成し、次いで、
（ｃ）前記工程（ｂ）で生成したＺ−ヨードアルケンを、適当な条件下で脱保護及びアシル化してＺ−ヨードアルケンエステルを形成することを含んでなる方法。
【請求項２６】
下記構造：
【化３１】
0004579351.tif 000110
（ここで、
Ｒは、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、トリアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルであり；
Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである）を有する開環アルデヒドの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化３２】
0004579351.tif 000111
（ここで、Ｘは、ハロゲンである）を有するハロオレフインを、下記構造：
【化３３】
0004579351.tif 000112
（ここで、
Ｒ*2Ｂは、直鎖状、分枝状または環状アルキル、あるいは置換又は非置換のアリールまたはベンジルボラニル部分であり；
Ｙは、（ＯＲ0）2、（ＳＲ0）2、−（Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｏ）−、−（Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｓ）−、または−（Ｓ−（ＣＨ2）n−Ｓ）−であり、Ｒ0は、直鎖状または分枝状アルキル、置換または非置換のアリールまたはベンジルであり；
ｎは、２、３または４である）を有する末端ハイドロボランと、適当な条件下で交差カップリングさせて、下記構造：
【化３４】
0004579351.tif 000113
を有する交差カップリング化合物を生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した交差カップリング化合物を、適当な条件下で脱保護して開環アルデヒドを形成することを含んでなる方法。
【請求項２７】
前記Ｒがアセチルであり；Ｒ’がＴＢＳであり；Ｒ”がＴＰＳであり、Ｒ*2Ｂが９−ＢＢＮから誘導され、Ｙが（ＯＭｅ）2である請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
下記構造：
【化３５】
0004579351.tif 000114
（ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである）を有する保護されたエポチロンの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化３６】
0004579351.tif 000115
を有する環状ジオールを、適当な条件下で単保護して、下記構造：
【化３７】
0004579351.tif 000116
を有する環状アルコールを生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した環状アルコールを、適当な条件下で酸化して、保護されたエポチロンを形成することを含んでなる方法。
【請求項２９】
Ｒ’及びＲ”がＴＢＳである請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
下記構造：
【化３８】
0004579351.tif 000117
を有するエポチロンの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化３９】
0004579351.tif 000118
（ここで、
Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである）を有する保護された環状ケトンを、適当な条件下で脱保護して、下記構造：
【化４０】
0004579351.tif 000119
を有するデスオキシエポチロンを生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成したデスオキシエポチロンを、適当な条件下でエポキシ化してエポチロンを形成することを含んでなる方法。
【請求項３１】
Ｒ’及びＲ”がＴＢＳである請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
下記構造：
【化４１】
0004579351.tif 000120
（ここで、
Ｒ’は、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである）を有する環状ジオールの製造方法において、当該方法が、
（ａ）下記構造：
【化４２】
0004579351.tif 000121
（ここで、
Ｒは、アセチルであり；
Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである）を有する開環アルデヒドを、適当な条件下で環化して、下記構造：
【化４３】
0004579351.tif 000122
を有し、α-及びβ-アルコール成分を含有する保護された環状アルコールのエナンチオマー混合物を形成し、
（ｂ）任意に、前記工程（ａ）で生成されたα-アルコールを、適当な条件下で単離及び酸化してケトンを生成し、その後、当該ケトンを適当な条件下で還元して、実質的にβ-アルコールからなる保護された環状アルコールのエナンチオマー混合物を形成し、次いで、
（ｃ）前記工程（ａ）及び（ｂ）で生成された保護された環状アルコールを、適当な条件下で脱保護剤で処理して環状ジオールを形成することを含んでなる方法。
【請求項３３】
Ｒ’がＴＢＳであり、Ｒ”がＴＰＳである請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
下記構造：
【化４４】
0004579351.tif 000123
（ここで、
Ｒ1は、水素、メチル、エチル、プロピル、ヘキシル、ヒドロキシメチルまたはヒドロキシプロピルであり；
Ｘは、Ｏであり；
Ｒ0及びＲ’は、個々独立に、水素またはアセチルである）を有する精製された化合物。
【請求項３５】
請求項１から４及び３４のいずれかに記載の化合物の多剤耐性細胞の成長を阻害するための有効量と、製薬に許容されるキャリアとを含有してなる多剤耐性細胞成長抑制用組成物。
【請求項３６】
所定量の細胞毒性薬をさらに含有する請求項３５記載の組成物。
【請求項３７】
細胞毒性薬が、抗ガン剤である請求項３６記載の組成物。
【請求項３８】
抗ガン剤が、アドリアマイシン、ビンブラスチンまたはパクリタキセルである請求項３７記載の組成物。
【請求項３９】
前記化合物の有効量が、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから約２５ｍｇである請求項３５記載の組成物。
【請求項４０】
請求項１から４及び３４のいずれかに記載の化合物の多剤耐性細胞の成長を阻害するための有効量と、製薬に許容されるキャリアとの混合物を、インビトロで多剤耐性細胞に接触させることを含んでなる、多剤耐性細胞の成長のインビトロ阻害方法。
【請求項４１】
所定量の細胞毒性薬を投与することをさらに含む請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
細胞毒性薬が、抗ガン剤である請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
抗ガン剤が、アドリアマイシン、ビンブラスチンまたはパクリタキセルである請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
ガン治療薬の製造のための、請求項１または３に記載の化合物の使用。
【請求項４５】
前記ガンが、充実性ガンまたは乳ガンである請求項４４記載の使用。
【請求項４６】
多剤耐性細胞の成長阻害剤の製造のための、請求項１から４及び３４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項４７】
前記成長阻害剤が所定量の細胞毒性薬を含む、請求項４６記載の使用。
【請求項４８】
前記細胞毒性薬が抗ガン剤である、請求項４７記載の使用。
【請求項４９】
前記抗ガン剤が、アドリアマイシン、ビンブラスチンまたはパクリタキセルである、請求項４８記載の使用。
【請求項５０】
前記化合物が体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから約２５ｍｇの投与量で使用される、請求項４６記載の使用。
【発明の詳細な説明】
この出願は、各々、1996年12月3日、1997年1月14日、1997年5月22日、1997年5月29日、及び1997年8月13日に出願した出願番号60/032,282、60/033,767、60/047,566、60/047,941、及び60/055,533の米国仮出願を基礎とするものであり、これらの出願の内容は、ここに、本出願に取りこむものとする。本発明は、国立衛生機関から、CA-28824、CA-39821、CA-GM72231、CA-62948、及びA10-9355で認可され、及び国立科学財団からCHE-9504805で認可され、政府の保護によってなされたものである。
発明の属する分野
本発明は、エポチロン（epothilone）マクロライド系抗生物質の分野に属する。特に本発明は、高い特異性を持ち、非毒性の抗腫瘍治療薬であるエポチロンＡ及びＢ、デスオキシエポチロン（desoxyepothilone）Ａ及びＢ、及びそれらの類似物の製造方法に関する。さらに、本発明は、多剤耐性細胞の阻害方法も提供する。また、本発明は、エポチロン製造の中間体として提供される新規な組成物も提供する。
この出願を通じて種々の文献が参照されるが、それら各々は、その全て参考として本出願に取り入れ、本発明がなされたときの技術水準をより十分に記載したものとする。
発明の背景
エポチロンＡ及びＢは、高活性の抗腫瘍薬であり、Sorangium属のミクソバクテリアから単離された。これらの化合物の全体構造は、Ｘ−線結晶構造解析から、Hofleによって決定された、G.Hofle等,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1996,35,1水の浄化7。エポチロンの全合成は幾つかの理由によって極めて重要な目標である。タキソールは、既に、卵巣及び乳ガンの化学治療における有用な供給源であり、その臨床応用の範囲は拡大している。G.I.Georg等,Taxane Anticancer Agents;American Cancer Society:SanDiego,1995。タキソールの細胞毒性のメカニズムは、少なくともin vitroレベルでは、微小管アセンブリの安定化を含んでいる。P.B.Schiff等,Nature（London）,1979,277,665。エポチロンでのin vitro実験での一連の相補形は、それらが、おそらくタンパク質標的との結合部位の下流側においてタキソールの機械的主題を共有していることを示した。D.M.Bollag等,Cancer Res.,1995,55,2325。さらに、エポチロンは、細胞毒性の点でタキソールを凌ぎ、薬物耐性細胞に抗するin vitro効率の点でさらに凌いでいる。多剤耐性（ＭＤＲ）は、タキソールの一連の制限の一つであるので（L.M.Landino及びT.L.MacDonald,The Chemistry and Pharmacology of Taxol and its Derivatives,V.Farin,Ed。,Elsevier:New York,1995,ch.7,p.301）、この問題を解決することを約束するあらゆる試薬が一連の注目の的であった。さらに、エポチロンの臨床用製剤は、タキソールより直接的である。
従って、本発明者らは、エポチロンの全合成に着手し、その結果、エポチロンＡ及びＢ、対応するデスオキシエポチロン、並びにそれらの類似物を合成する有効な方法を開発した。また本発明は、エポチロンＡ及びＢ及びそれらの類似物の合成に有用な新規な中間体、そのようなエポチロン及び類似物から誘導される組成物、エポチロンＡ及びＢ、及びデスオキシエポチロンＡ及びＢの精製された化合物、さらには、エポチロン類似物のガン治療における使用方法を提供する。予想しないことに、エポチロンは、癌細胞における多剤耐性を逆転させことが判明しただけではなく、in vitro及びin vivoの両方で、正常細胞よりＭＤＲ細胞に対して細胞毒性である副行感受性薬として、さらに、ビンブラスチン等の他の細胞毒性薬と組み合わせた場合に、個々の薬物を同じ濃度で単独使用した場合より活性が高い相乗薬として活性であることが解った。特に、本発明のデスオキシエポチロンは、in vivoでの腫瘍細胞毒性薬として極めて優れた特異性を有し、タキソール、ビンブラスチン、アドリアマイシン及びカンプトセシン（camptothecin）を含む現在用いられている主要な化学治療薬より有効であるとともに正常細胞に対する毒性が低い。
発明の概要
本発明の一の目的は、エポチロンＡ及びＢ、及びデスオキシエポチロンＡ及びＢ、及び抗腫瘍薬治療として有用な関連化合物の製造方法を提供することである。本発明の他の目的は、エポチロンＡ及びＢ並びにそれらの類似物の製造における中間体として有用な種々の化合物を提供することである。
本発明のさらなる目的は、それらの中間体の調製のための合成方法を提供することである。さらに本発明の目的は、本発明の製造方法を通して得られるエポチロンの任意の類似物と、任意に製薬的キャリアとの組み合わせを含み、ガン罹患患者の治療に有用な組成物を提供することである。
本発明のさらなる目的は、本発明の製造方法を通して得られるエポチロンの任意の類似物と、任意に製薬的キャリアとの組み合わせを用いて、ガン罹患患者を治療する方法を提供することである。
【図面の簡単な説明】
図１（Ａ）は、エポチロンＡ及びＢの逆行合成分析を示す。
図１（Ｂ）は、化合物１１の合成を提示する。（a）t-BuMe2OTf,2,6-ルチジン,CH2Cl2,98%;（b）（1）DDQ,CH2Cl2/H2O,89%;（2）（COCl）2,DMSO,CH2Cl2,-78℃→rt（室温）,90%;（c）MeOCH2PPh3Cl,t-BuOK,THF,0℃→rt,86%;（d）（1）p-TsOH,ジオキサン/H2O,50℃,99%;（2）CH3PPh3Br,NaHMDS,PhCH3,0℃→rt,76%;（e）Phl（OCOCF3）2,MeOH/THF,rt,0.25h,92%。
図２は、12,13-E-及び-Z-デオキシエポチロンの調製において鍵となる中間体を提示する。
図３（Ａ）は、ヒドロキシメチレン-及びヒドロキシプロピレン-置換エポチロン誘導体の調製に用いられる鍵となるヨウ素化中間体の合成を提示する。
図３（Ｂ）は、ヒドロキシメチレン-及びヒドロキシプロピレン-置換エポチロン誘導体の調製方法を提示し、当該方法は一般的に、12,13-E-エポチロンであって、Ｒがメチル、エチル、n-プロピル、及びn-ヘキシルであるものを、対応するE-ビニルヨウ化物から調製するのに有用である。
図３（Ｂ）は、ベンゾイル化ヒドロキシメチレン-置換デスオキシエポチロン及びヒドロキシメチレン-置換エポチロン（エポキシド）に導く反応を示す。
図４（Ａ）は、化合物１９の合成を提示する。（a）DHP,PPTS,CH2Cl2,rt:（b）（1）Me3SiCCLi,BF3・OEt2,THF,-78℃,（2）MOMCl,I-Pr2NEt,Cl（CH2）Cl,55℃;（3）PPTS,MeOH,rt;（c）（1）（COCl）2,DMSO,CH2Cl2,-78℃;次いでEt3N,-78℃→rt;（2）MeMgBr,Et2O,0℃→rt,（3）TPAP,NMO,4A molシーブス,CH2Cl2,0℃→rt;（d）１６,n-BuLi,THF,-78℃;次いで１５,THf,-78℃→rt;（e）（1）N-ヨードスクシンイミド,AgNO3,（CH3）2CO;（2）Cy2BH,Et2O,AcOH;（f）（1）PhSH,BF3・OEt2,CH2Cl2,rt;（2）Ac20,ピリジン,4-DMAP,CH2Cl2,rt。
図４（Ｂ）化合物１の合成を提示する。（a）１１,p-BBN,THF,rt;次いでPdCl2（dppf）2,Cs2CO3,Ph3As,H2O,DMF,１９,rt,71%;（b）p-TsOH,ジオキサン/H2O,50℃;（c）KHMDS,THF,-78℃,51%;（d）（1）HF-ピリジン,ピリジン,THF,rt,97%;（2）t-BuMe2 SiOTf,2,6-ルチジン,CH2Cl2,-25℃,93%;（3）デス-マーチン ペリオジナン（periodinane）,CH2Cl2,87%;（4）HF・ピリジン,THF,rt,99%;（e）ジメチルジオキシラン;,CH2Cl2,0.5h,-50℃,45%（≧20:1）。
図５は、エポチロンＡの”左翼（left wing）”の合成の機構を示す。
図６は、エポチロンＡ及び他の類似物へのオレフィン置換経路の機構を示す。
図７は、エポチロンＡ（１）の全合成のための収束方法、及び、ゲミナル（geminal）メチル基を導入するためのグリカールシクロプロパンのソルボリシス方法を例示する。
図８は、化合物１５Ｂの鏡像（エナンチオ）選択的合成を提示する。
図９は、閉環オレフィン置換による、モデル系２０Ｂ、２１Ｂ及び２２Ｂの構造を示す。
図１０は、天然、合成及びデスオキシエポチロンＡの沈降試験を例示する。
図１１は、４℃で天然、合成及びデスオキシエポチロンＡの沈降試験を例示する。
図１２は、（Ａ）エポチロンＡ（１）及び（Ｂ）タキソール（登録商標）（１Ａ）の構造を示す。
図１３は、ジヒドロピロン（dihydropyrone）マトリクスに基づく非環式立体化学的関係の立案方法を示す。
図１４は、中間体４Ａの調製を示す。
図１５は、化合物１７Ａの代替的鏡像選択的合成を示す。
図１６は、中間体１３Ｃの合成経路を提示する。（a）1.トリブチル アリルチン,（S）-（-）-BINOL,Ti（Oi-Pr）4,CH2Cl2,-20℃,60%,>95% e.e.;2.Ac2O,Et3N,DMAP,CH2Cl2,95%;（b）1.0sO4,NMO,アセトン/H2O,0℃;2.NalO4,THF/H2O;（c）１２,THF,-20℃,Z異性体のみ,１０から25%;（d）Pd（dppf）2,Cs2CO3,Ph3As,H2O,DMF,rt.77%。
図１７は、中間体エポチロンＢ（２）への合成経路を提示する。（a）p-TsOH,ヂオキサン/H2O,55℃,71%;（b）KHMDS,THF,-78℃,67%,α/β:1.5:1;（c）デス-マーチンペリオジナン,CH2Cl2;（d）NaBH4,MeOH,2工程につき67%;（e）1.HF・ピリジン,ピリジン,THF,rt,93%;2.TBSOTf,2,6-ルチジン,CH2Cl2,-30℃,89%;3.デス-マーチン ペリオジナン,CH2Cl2,67%;（f）HF・ピリジン,THF,rt,80%;（g）ジメチルジオキシラン,CH2Cl2,-50℃,70%。
図１８は、８-デスメチルデオキシエポチロンＡのための保護された中間体への合成経路を提示する。
図１９は、８-デスメチルデオキシエポチロンＡへの合成経路、及び、トランス-８-デスメチル-デオキシエポチロンＡ及びそれへのトランス-ヨードオレフィン中間体の構造を提示する。
図２０は、（上部）エポチロンＡ及びＢ及び８-デスメチルエポチロン、並びに（下部）デスメチルエポチロンＡの調製に用いられる中間体ＴＢＳエステル１０への合成経路を示す。（a）（Z）-クロチル-B［（-）-lpc］2,-78℃,Et2O,次いで3N NaOH,30% H2O2;（b）TBSOTf,2,6-ルチジン,CH2Cl2（2工程につき74%,87% ee）;（c）03,CH2Cl2/MeOH,-78℃,次いでDMS,（82%）;（d）t-ブチル イソブチリルアセテート,NaH,BuLi,0℃,次いで,６（60%,10:1）;（e）Me4NBH（OAc）3,-10℃（50%,10:1 α/β）;（f）TBSOTf,2,6-ルチジン,-40℃,（88%）;（g）デス-マーチン ペリオジナン,（90%）;（h）Pd（OH）2,H2,EtOH（96%）;（i）DMSO,オキサリル クロリド,CH2Cl2,-78℃（78%）;（j）メチル トリフェニルホスホニウムブロミド,NaHMDS,THF,0℃（85%）;（k）TBSOTf,2,6-ルチジン,CH2Cl2,rt（87%）。
図２１は、８-デスメチルエポチロンＡの合成経路を示す。（a）Pd（dppf）2Cl2,Ph3As,Cs2CO3,H2O,DMF,rt（62%）;（b）K2CO3,MeOH,H2O（78%）;（c）DCC,4-DMAP,4-DMAP・HCl,CHCl3（78%）;（d）HF・pyr,THF,rt（82%）,（e）3,3-ジメチルジオキシラン,CH2Cl2,-35℃（72%,1.5:1）。
図２２は、エポチロン類似物２７Ｄへの合成経路を示す。
図２３は、エポチロン類似物２４Ｄへの合成経路を示す。
図２４は、エポチロン類似物１９Ｄへの合成経路を示す。
図２５は、エポチロン類似物２０Ｄへの合成経路を示す。
図２６は、エポチロン類似物２２Ｄへの合成経路を示す。
図２７は、エポチロン類似物１２-ヒドロキシエチルエポチロンへの合成経路を示す。
図２８は、ＤＭＳＯ、エポチロンＡ及び／又はＢと比較した沈降試験におけるエポチロン類似物の活性を示す。構造１７−２０、２２、及び２４−２７は、図２９−３７に各々示す。化合物は、チューブリン（1mg/ml）に、10μMの濃度まで添加した。エポチロンで形成された微小細管の量は、100%と測定された。
図２９は、エポチロン類似物＃１７の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３０は、エポチロン類似物＃１８の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３１は、エポチロン類似物＃１９の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３２は、エポチロン類似物＃２０の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３３は、エポチロン類似物＃２２の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３４は、エポチロン類似物＃２４の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３５は、エポチロン類似物＃２５の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３６は、エポチロン類似物＃２６の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３７は、エポチロン類似物＃２７の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図３８は、細胞毒性薬の分別混合の効果の図式的説明を提示する。
図３９は、エポチロンＡ及びエポチロン類似物＃１−７を示す。ヒト白血病ＣＣＲＦ-ＣＥＭ（感受性）及びＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬ ＭＤＲ（耐性）サブラインに対する効力は、各々、丸型及び角形ブラケットで示した。
図４０は、エポチロンＢ及びエポチロン類似物＃８−１６を示す。ヒト白血病ＣＣＲＦ-ＣＥＭ（感受性）及びＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬ ＭＤＲ（耐性）サブラインに対する効力は、各々、丸型及び角形ブラケットで示した。
図４１は、エポチロン類似物＃１７−２５を示す。ヒト白血病ＣＣＲＦ-ＣＥＭ（感受性）及びＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬ ＭＤＲ（耐性）サブラインに対する効力は、各々、丸型及び角形ブラケットで示した。
図４２（Ａ）は、エポチロン類似物＃２６−３４を示す。ヒト白血病ＣＣＲＦ-ＣＥＭ（感受性）及びＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬ ＭＤＲ（耐性）サブラインに対する効力は、各々、丸型及び角形ブラケットで示した。
図４２（Ｂ）は、エポチロン類似物＃３５−４６を示す。ヒト白血病ＣＣＲＦ-ＣＥＭ（感受性）及びＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬ ＭＤＲ（耐性）サブラインに対する効力は、各々、丸型及び角形ブラケットで示した。
図４２（Ｃ）は、エポチロン類似物＃４７−４９を示す。
図４３（Ａ）は、タキソールとの比較における、ＭＤＲ ＭＣＦ-７／Ａｄｒ異種移植に対するデスオキシエポチロンＢの抗腫瘍活性を示す。コントロール（◆）;デスオキシエポチロンＢ（■;35mg/kg）;タキソール（▲;6mg/kg）;アドリアマイシン（×;1.8mg/kg）;i.p.Q2Dx5;8日目に開始。
図４３（Ｂ）は、タキソールとの比較における、ＭＤＲ ＭＣＦ-７／Ａｄｒ異種移植に対するエポチロンＢの抗腫瘍活性を示す。コントロール（◆）;エポチロンＢ（■;25mg/kg;非毒性投与量）;タキソール（▲;6mg/kg;ＬＤ50半分）;アドリアマイシン（×;1.8mg/kg）;i.p.Q2Dx5;8日目に開始。
図４４（Ａ）は、Ｂ１６黒色腫を持つＢ６Ｄ２Ｆ1マウスにおけるデスオキシエポチロンＢの毒性を示す。体重は、０、２、４、６、８、１０及び１２日目に測定した。コントロール（▲）;デスオキシエポチロンＢ（○;10mg/kg;QDx8;8中0が死亡）;デスオキシエポチロンＢ（●;20mg/kg;QDx6;8中0が死亡）。注射は１日目に開始。
図４４（Ｂ）は、Ｂ１６黒色腫を持つＢ６Ｄ２Ｆ1マウスにおけるエポチロンＢの毒性を示す。体重は、０、２、４、６、８、１０及び１２日目に測定した。コントロール（▲）;エポチロンＢ（○;0.4mg/kg;QDx6;8中1が死亡する毒性）;エポチロンＢ（●;0.8mg/kg;QDx5;8中5が死亡）。注射は１日目に開始。
図４５（Ａ）は、ＭＸ-１異種移植を持つヌードマウスでの、デスオキシエポチロンＢ及びタキソールの比較治療効果を示す。腫瘍,s.c.;薬剤はi.p.で投与した,Q2Dx5,7日目に開始。コントロール（◆）;タキソール（□;5mg/kg;ＬＤ50の半分）;デスオキシエポチロンＢ（△;25mg/kg;非毒性投与量）。
図４５（Ｂ）は、ＭＸ-１異種移植を持つヌードマウスでの、デスオキシエポチロンＢ及びタキソールの比較治療効果を示す。腫瘍,s.c.;薬剤はi.p.で投与した,Q2Dx5,7日目に開始。コントロール（◆）;タキソール（□;5mg/kg;ＬＤ50の半分;7,9,11,13,15日に投与;次いで、6mg/kg,17,19,23,24,25日に投与）;デスオキシエポチロンＢ（n=3;△,×,＊;25mg/kg;非毒性投与量;3匹のマウスに、7,9,11,13,15日に投与;次いで、35mg/kg,17,19,23,24,25日に投与）。
図４６は、ヒトＭＸ-１異種移植を持つヌードマウスの、デスオキシエポチロンＢ（35mg/kg）、タキソール（5mg/kg）及びアドリアマイシン（2mg/kg）での治療効果を、移植８から１８日後の間の腫瘍サイズについて示す。デスオキシエポチロンＢ（□）、タキソール（△）、アドリアマイシン（×）、コントロール（◆）;i.p.処理は、8,10,12,14及び16日目に行った。
図４７は、正常ヌードマウスにおける、コントロールに対するエポチロンＢ（□;0.6mg/kg QDx4;i.p.）及びデスエポチロンＢ（△;25mg/kg QDx4;i.p.）の相対的毒性を示す。体重は、注射後毎日測定した。エポチロンＢについて、８匹中８匹が、5,6,6,7,7,7,7,及び7日目に死亡する毒性を有するが、デスオキシエポチロンでは、全て６匹のマウスが生き残った。
図４８は、エポチロン類似物＃４３の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図４９は、エポチロン類似物＃４５の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図５０は、エポチロン類似物＃４６の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図５１は、エポチロン類似物＃４７の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
図５２は、エポチロン類似物＃４８の高分解能1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
発明の詳細な説明
ここで用いられる用語「直鎖状または分枝鎖状アルキル」は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、t-ブチル、sec-ブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルを含むが、これらに限定されない。アルキル基は、１つの炭素原子から１４炭素原子まで含むが、好ましくは、１つの炭素原子から９酸素原子までを含み、アシル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、カルボキシアミド、及び／またはＮ-アシルアミノ部分を含むがこれらに限定されない種々の基で置換されていてもよい。
ここで用いられる用語「アルコキシカルボニル」、「アシル」及び「アルコキシ」は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、n-ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ヒドロキシプロピルカルボニル、アミノエトキシカルボニル、sec-ブトキシカルボニル及びシクロペンチルカルボニルを含むが、これらに限定されない。アシル基の例は、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル及びペナノイルを含むが、これらに限定されない。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、n-ブトキシ、sec-ブトキシ及びシクロペンチルオキシを含むが、これらに限定されない。
ここで用いられる用語「アリール」は、フェニル、ピリジル、ピリル、インドリル、ナフチル、チオフェニルまたはフリル基を含むがこれらに限定されず、各々は、アシル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、カルボキシ、ヒドロキシ、カルボキシアミド、またはＮ-アシルアミノ部分を含むがこれらに限定されない種々の基で置換されていてもよい。アリールオキシ基の例は、フェノキシ、２-メチルフェノキシ、３-メチルフェノキシ及び２-ナフトキシを含むが、これらに限定されない。アシルオキシ基の例は、アセトキシ、プロパノイルオキシ、ブチリルオキシ、ペンタノイルオキシ及びヘキサノイルオキシを含むが、これらに限定されない。
本発明は、下記の構造を有する化合物を含むエポチロンＡ及びＢの化学治療的類似物を提供する。
0004579351.tif 000002
ここで、Ｒ、Ｒ0及びＲ’は、個々独立に、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、任意にヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、フッ素、ＮＲ1Ｒ2、Ｎ-ヒドロキシイミノ、またはＮ-アルコキシイミノで置換されていてもよく；Ｒ1及びＲ2は、個々独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｒ”は、ＣＨＹ＝ＣＨＸ、またはＨ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｘは、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｙは、Ｈまたは直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｚは、Ｏ、Ｎ（ＯＲ3）またはＮ-ＮＲ4Ｒ5であり、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、個々独立に、Ｈまたは直鎖状または分枝状アルキルであり；ｎは、０、１、２または３である。一実施態様では、本発明は、下記の構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000003
ここで、Ｒは、Ｈ、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ-ブチル、ｎ-ヘキシルまたはＣＨ2ＯＨ、（ＣＨ2）3-ＯＨである。
また、本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000004
ここで、Ｒ、Ｒ0及びＲ’は、個々独立に、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、任意にヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、フッ素、ＮＲ1Ｒ2、Ｎ-ヒドロキシイミノ、またはＮ-アルコキシイミノで置換されていてもよく；Ｒ1及びＲ2は、個々独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｒ”は、ＣＨＹ＝ＣＨＸ、またはＨ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｘは、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｙは、Ｈまたは直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｚは、Ｏ、Ｎ（ＯＲ3）またはＮ-ＮＲ4Ｒ5であり、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、個々独立に、Ｈまたは直鎖状または分枝状アルキルであり；ｎは、０、１、２または３である。ある種の実施態様では、本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000005
ここで、Ｒは、Ｈ、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ-ブチル、ｎ-ヘキシルまたはＣＨ2ＯＨである。
さらに、本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000006
ここで、Ｒ、Ｒ0及びＲ’は、個々独立に、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、任意にヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、フッ素、ＮＲ1Ｒ2、Ｎ-ヒドロキシイミノ、またはＮ-アルコキシイミノで置換されていてもよく；Ｒ1及びＲ2は、個々独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｒ”は、ＣＨＹ＝ＣＨＸ、またはＨ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｘは、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｙは、Ｈまたは直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｚは、Ｏ、Ｎ（ＯＲ3）またはＮ-ＮＲ4Ｒ5であり、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、個々独立に、Ｈまたは直鎖状または分枝状アルキルであり；ｎは、０、１、２または３である。特に、本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000007
ここで、Ｒは、Ｈ、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ-ブチル、ｎ-ヘキシルまたはＣＨ2ＯＨ、（ＣＨ2）3-ＯＨである。
さらに本発明は、下記の構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000008
ここで、Ｒ、Ｒ0及びＲ’は、個々独立に、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり、任意にヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシ、フッ素、ＮＲ1Ｒ2、Ｎ-ヒドロキシイミノ、またはＮ-アルコキシイミノで置換されていてもよく；Ｒ1及びＲ2は、個々独立に、Ｈ、フェニル、ベンジル、直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｒ”は、ＣＨＹ＝ＣＨＸ、またはＨ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｘは、Ｈ、直鎖状または分枝鎖状アルキル、フェニル、２-メチル-１,３-チアゾリニル、２-フラニル、３-フラニル、４-フラニル、２-ピリジル、３-ピリジル、４-ピリジル、イミダゾリル、２-メチル-１,３-オキサゾリニル、３-インドリルまたは６-インドリルであり；Ｙは、Ｈまたは直鎖状または分枝鎖状アルキルであり；Ｚは、Ｏ、Ｎ（ＯＲ3）またはＮ-ＮＲ4Ｒ5であり、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、個々独立に、Ｈまたは直鎖状または分枝状アルキルであり；ｎは、０、１、２または３である。
また、本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000009
また、本発明は、化学治療的化合物エポチロンＡ及びＢ、並びにそれらの類似物を調製するために有用な種々の中間体を提供する。従って、本発明は、下記構造を有し、エポチロンＡ及びその類似物への鍵となる中間体を提供する。
0004579351.tif 000010
ここで、Ｒは、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；Ｒ’は、Ｈ、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ-ヘキシル、
0004579351.tif 000011
ＣＨ2ＯＴＢＳまたは（ＣＨ2）3-ＯＴＢＤＰＳであり；Ｘはハロゲン化物である。一実施態様では、本発明は、上記構造においてＲがアセチルでありＸがヨードである化合物を提供する。
また本発明は、下記構造を有する中間体を提供する。
0004579351.tif 000012
ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアリキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；Ｘは、酸素、（ＯＲ）2、（ＳＲ）2、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｏ）-、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-、または-（Ｓ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-であり；ｎは、２、３または４である。
0004579351.tif 000013
ここで、ＲはＨまたはメチルである。
本発明による他の類似物は以下の構造を有する。
0004579351.tif 000014
ここで、Ｒは、Ｈ、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ-ブチル、ｎ-ヘキシル、ＣＨ2ＯＨまたは（ＣＨ2）3-ＯＨである。
さらに、本発明は、下記構造を有する類似物を提供する。
0004579351.tif 000015
こおで、ＲはＨまたはメチルである。本発明の範囲は、そのＣ3炭素がＲまたはＳ絶対配置の何れかを有するもの、並びにそれらの混合物を包含する。
さらに本発明は、下記構造を有するエポチロンＡの類似物を提供する。
0004579351.tif 000016
また、本発明は、エポチロン調製のための中間体の調製経路も提供する。従って、本発明は、下記構造を有するＺ-ヨードアルケンの製造方法を提供する。
0004579351.tif 000017
ここで、Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルである。この方法は、（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000018
を有する化合物を、下記構造：
0004579351.tif 000019
（ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換アリールまたはベンジルである）を有するメチルケトンと、適当な条件下でカップリングさせて、下記構造：
0004579351.tif 000020
を有する化合物を生成し、
（ｂ）工程（ａ）で生成した化合物を適当な条件下で処理して下記構造：
0004579351.tif 000021
を有するｚ-ヨードアルケンを生成し、次いで、（ｃ）工程（ｂ）で生成したＺ-ヨードアルケンを適当な条件下で脱保護及びアセチル化して、Ｚ-ヨードアルケンエステルを生成することを含む。工程（ａ）のカップリングは、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の不活性溶媒中のn-ＢｕＬｉ等の強酸を用いて、低温、典型的には-50℃以下、好ましくは-78℃以下で行うことができる。工程（ｂ）の処理は、アセトン等の極性有機溶媒中で、硝酸銀等のＡｇ（I）の存在下でのＮ-ヨードスクシンイミドでの逐次反応を含み、典型的には水素化ホウ素試薬、好ましくはＣｙ２ＢＨを用いた還元条件に続く。脱保護工程（ｃ）は、ジクロロメタン等の不活性有機溶媒中で、三フッ化ホウ素エーテレート等のルイス酸触媒の存在下、チオフェノール等のチオールと接触させることを含み、ジクロロメタン等の不活性有機溶媒中で、ピリジン及び／または４-ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下、塩化アセチル等のハロゲン化アシル、または無水酢酸等の無水アシルでのアシル化に続く。
また本発明は、下記式を有するＺ-ハロアルケンエステルの製造方法も提供する。
0004579351.tif 000022
上記式中、Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換アリールアルキル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；Ｘはハロゲンである。この方法は（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000023
を有する化合物を適当な条件下で酸化的に開裂してアルデヒド中間体を生成し、そして、（ｂ）当該アルデヒド中間体を、適当な条件下で、ハロメチレン転移剤で縮合させてＺ−ハロアルケンエステルを生成することを含んでなる。一実施態様において、Ｘはヨウ素である。他の実施態様において、この方法は、ハロメチレン転移剤が、Ｐｈ3Ｐ＝ＣＨＩまたは（Ｐｈ3Ｐ+ＣＨ2Ｉ）Ｉ-として実施される。ハロアルキリデン転移剤Ｐｈ３Ｐ＝ＣＲ’Ｉ、（但し、Ｒ’は、水素、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ-ヘキシル、
0004579351.tif 000024
ＣＯ2Ｅｔ、または（ＣＨ2）3-ＯＴＢＤＰＳである）を用いて、２置換オレフィンを調製することもできる。酸化工程（ａ）は、弱い酸化剤、例えば四酸化オスミウムを用いて、約０℃で行うことができ、続いて、過ヨウ素酸ナトリウムまたは四酢酸鉛／炭酸ナトリウムで処理して末端オレフィンを完全に開裂し、末端アルデヒドを提供する。縮合工程（ｂ）は、Wittig試薬などの種々のハロメチレン化剤で有効に行われる。
さらに本発明は、下記構造を有する光学的に純粋な化合物の製造方法を提供する。
0004579351.tif 000025
ここで、Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、直鎖状又は分枝状アシル、置換又は非置換のアロイルまたはベンゾイルである。この方法は、（ａ）アリル有機金属試薬と、下記構造：
0004579351.tif 000026
を有する不飽和アルデヒドとを、適当な条件下で縮合させてアルコールを生成し、任意にそれと並行して、当該アルコールを光学的に分解して下記構造：
0004579351.tif 000027
を有する光学的に純粋なアルコールを生成し、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した光学的に純粋なアルコールを、適当な条件下でアルキル化またはアシル化して光学的に純粋な化合物を形成することを含んでなる。この方法の一実施態様では、アリル有機金属試薬が、アリル（トリアルキル）スズ酸塩である。他の実施態様では、前記縮合工程が、チタンテトラアルコキシド及び任意の活性触媒を含む試薬を用いて行われる。工程（ａ）において、不飽和アルデヒドへの１,２-付加は、種々のアリル有機金属試薬を用いて行われるが、典型的には、アリルトリアルキルスズ酸塩、好ましくはアリルスズ-n-ブチルスズ酸塩を用い、キラル触媒及びモレキュラーシーブの存在下、ジクロロメタン等の不活性有機溶媒中で行われる。好ましくは、この方法は、チタンテトラアルコキシド、例えば、チタンテトラ-ｎ-プロポキシド、及び任意の活性触媒としてＳ-（-）ＢＩＮＯＬを用いて行われる。アルキル化またはアシル化工程（ｂ）は、典型的なアルキル化剤、例えばアルキルハライドまたはアルキルトシレート、アルキルトリフレート、またはアルキルメシレート、並びに、典型的なアシル化剤、例えば塩化アセチル、無水酢酸、塩化ベンゾイル、または無水ベンゾイルを用い、マイルドな塩基触媒の存在下、ジクロロメタン等の不活性有機溶媒中で行われる。
また本発明は、下記式の構造を有する開環アルデヒドの製造方法も提供する。
0004579351.tif 000028
ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルである。この方法は、（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000029
（ここで、Ｒは、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、トリアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；Ｘは、ハロゲンである）を有するハロオレフィンを、下記構造：
0004579351.tif 000030
（ここで、（ＯＲ”’）2は、酸素、（ＯＲ0）2、（ＳＲ0）2、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｏ）-、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-、または-（Ｓ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-であり；Ｒ0は、直鎖状または分枝状アルキル、置換または非置換のアリールまたはベンジルであり；ｎは、２、３または４である）を有する末端オレフィンと、適当な条件下で交差カップリングして、下記構造：
0004579351.tif 000031
（ここで、Ｙは、ＣＨ（ＯＲ*）2であり、Ｒ＊は、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換または非置換アリールオキシアルキルである）を有する交差カップリング化合物を生成し、次いで、（ｂ）前記工程（ａ）で生成した交差カップリング化合物を、適当な条件下で脱保護して開環化合物を形成することを含んでなる。交差-カップリング工程（ａ）は、この目的に適しているとこの分野で知られた試薬を用いて行われる。例えば、この工程は、プレ-アシル成分を9-ＢＢＮでハイドロボレートすることによって実施できる。得られた混合ボランは、次いでＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）2等の有機金属触媒または周知の等価物と、炭酸セシウム及びトリフェニルアルシンのような補助試薬の存在下、交差-カップリングされる。脱保護工程（ｂ）は、ｐ-トシック酸（tosic acid）等のマイルドな酸で、典型的にはジオキサン−水といった混合水性有機溶媒系中で行うことができる。
また本発明は、下記構造を有するエポチロンの製造方法も提供する。
0004579351.tif 000032
この方法は、（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000033
（ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルである）を有する環化化合物を、適当な条件下で脱保護して脱保護環化化合物を生成し、当該脱保護環化化合物を適当な条件下で酸化して、下記構造：
0004579351.tif 000034
を有するデスオキシエポチロンを生成し、次いで、（ｂ）前記工程（ａ）で生成したデスオキシエポチロンを、適当な条件下でエポキシ化してエポチロンを形成することを含んでなる。脱保護工程（ａ）は、ＨＦ-ピリジン等の触媒、次いで、ルチジン等の塩基の存在下でのt-ブチルジメチルシリルトリフレートでの連続的な処理を用いて行われる。デス-マーチン酸化、及びＨＦ-ピリジン等の触媒でのさらなる脱保護は、デスオキシエポチロンを提供する。後者の化合物は、次いで、工程（ｂ）において、過酢酸、過酸化水素、過安息香酸、ｍ-クロロ過安息香酸等の種々のエポキシ化剤を用いて、ジクロロメタン等の不活性有機溶媒中でエポキシ化することができるが、ジメチルジオキシランが好ましい。
さらに本発明は、下記構造を有するエポチロン前駆体の製造方法を提供する。
0004579351.tif 000035
ここで、Ｒ1は、水素、またはメチルであり；ＸはＯ、または各々炭素原子に単結合した水素及びＯＲ”であり；Ｒ0、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルである。この方法は、（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000036
（ここで、Ｒは、アセチルである）を有する化合物を、下記構造：
0004579351.tif 000037
（ここで、Ｙは、酸素である）を有するアルデヒドと、適当な条件下でカップリングさせてアルドール中間体を生成し、当該アルドール中間体は、任意に、適当な条件下で保護して下記構造：
0004579351.tif 000038
を有する非環式エポチロン前駆体を生成してもよく、
（ｂ）前記非環式エポチロン前駆体に、分子内オレフィン置換を導く条件下で処理してエポチロン前駆体を形成することを含んでなる。この方法の一実施態様では、分子内オレフィン置換を導く条件が、有機金属触媒の存在を必要とする。この方法の特別な実施態様では、触媒が、ＲｕまたはＭｏを含む。カップリング工程（ａ）は、非求核塩基、例えばリチウムジエチルアミドまたはリチウムジイソプロピルアミドを用いて準室温で行われるが、好ましくは約−７８℃である。工程（ｂ）のオレフィン置換は、この目的に適したこの分野で周知の触媒を用いて行われるが、Grubbの触媒を用いるのが好ましい。
さらに、本発明は、下記構造を有し、エポチロンの製造のための中間体として有用な化合物を提供する。
0004579351.tif 000039
ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアリキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；Ｘは、酸素、（ＯＲ*）2、（ＳＲ*）2、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｏ）-、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-、または-（Ｓ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-であり；Ｒ*は、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換アリール又はベンジルであり；Ｒ2Ｂは、直鎖状、分枝状または環状アルキルあるいは置換又は非置換アリール又はベンジルボラニル部分であり；ｎは、２、３または４である。一実施態様では、本発明は、Ｒ’がＴＢＳであり、Ｒ”がＴＰＳであり、Ｘが（ＯＭｅ）2である化合物を提供する。Ｒ2Ｂの好ましい例は、９-ＢＢＮから誘導される。
また本発明は、下記構造を有する化合物も提供する。
0004579351.tif 000040
ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリール又はベンジル、トリアルキルシリル、ジアリキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイルまたはベンゾイルであり；Ｘは、酸素、（ＯＲ）2、（ＳＲ）2、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｏ）-、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-、または-（Ｓ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-であり；ｎは、２、３または４である。一実施態様では、本発明は、Ｒ’がＴＢＳであり、Ｒ”がＴＰＳであり、Ｘが（ＯＭｅ）2である化合物を提供する。
さらに本発明は、下記構造を有するデスメチルエポチロン類似物も提供する。
0004579351.tif 000041
但し、Ｒは、Ｈまたはメチルである。
本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000042
但し、Ｒは、Ｈまたはメチルである。
また本発明は、下記構造を有するtrans-デスメチルデオキシエポチロン類似物も提供する。
0004579351.tif 000043
但し、Ｒは、Ｈまたはメチルである。
また本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000044
但し、Ｒは、Ｈまたはメチルである。
また本発明は、下記構造を有する化合物を提供する。
0004579351.tif 000045
但し、Ｒは、水素、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、直鎖状または分枝状アシル、置換または非置換のアロイルまたはベンゾイルであり；Ｒ’は、水素、メチル、エチル、ｎ-プロピル、ｎ-ヘキシル、
0004579351.tif 000046
ＣＯ2Ｅｔ、または、（ＣＨ2）3ＯＴＢＤＰＳであり；
そしてＸはハロゲンである。一実施態様では、本発明は、ＲがアセチルでありＸがヨウ化物である化合物を提供する。
さらに本発明は、下記構造を有する環状アルデヒドの製造方法を提供する。
0004579351.tif 000047
ここで、Ｒは、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、トリアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルであり；Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである。この方法は、
（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000048
（ここで、Ｘは、ハロゲンである）を有するハロオレフィンを、下記構造：
0004579351.tif 000049
（ここで、Ｒ*2Ｂは、直鎖状または環状アルキル、あるいは置換又は非置換のアリールまたはベンジルボラニル部分であり；Ｙは、（ＯＲ0）2、（ＳＲ0）2、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｏ）-、-（Ｏ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-、または-（Ｓ-（ＣＨ2）n-Ｓ）-であり；Ｒ0は、直鎖状または分枝状アルキル、置換または非置換のアリールまたはベンジルであり；ｎは、２、３または４である）と、適当な条件下で交差カップリングさせて、下記構造：
0004579351.tif 000050
を有する交差カップリング化合物を生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した交差カップリング化合物を、適当な条件下で脱保護して開環アルデヒドを形成することを含んでなる。一実施態様では、本発明は、Ｒがアセチルであり；Ｒ’がＴＢＳであり；Ｒ”がＴＰＳであり、Ｒ*2Ｂが９−ＢＢＮから誘導され、かつＹが（ＯＭｅ）2である方法を提供する。交差-カップリング工程（ａ）は、この目的のために適しているとこの分野で知られている試薬を用いて行われる。例えば、混合ボランは、ＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）2等の有機金属触媒またはその周知の等価物と、炭酸セシウム及びトリフェニルアルシンの存在下で交差-カップリングできる。脱保護工程（ｂ）は、ｐ-トシック酸等のマイルド名酸触媒を用い、典型的にはジオキサン−水等の混合水性有機溶媒中で行うことができる。
また本発明は、下記構造を有する保護されたエポチロンの製造方法も提供する。
0004579351.tif 000051
ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである。この方法は、
（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000052
を有する環状ジオールを、適当な条件下でモノプロテクションして、下記構造：
0004579351.tif 000053
を有する環状アルコールを生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成した環状アルコールを、適当な条件下で酸化して、保護されたエポチロンを形成することを含んでなる。一実施態様では、本発明は、Ｒ’及びＲ”がＴＢＳである方法を提供する。モノプロテクション（monoprotection）工程（ａ）は、ＴＢＳＯＴｆを含む種々の適当な試薬を用いて、塩基の存在下、不活性有機溶媒中で行われる。塩基は、２,６-ルチジン等の非求核塩基でよく、溶媒はジクロロメタンでよい。反応は、準室温で行われるが、好ましくは−３０℃の範囲である。酸化工程（ｂ）は、デス-マーチンペリオジナン（Dess-Martin periodinane）等の選択的酸化剤を使用し、ジクロロメタン等の不活性有機溶媒中で行われる。酸化は、室温、好ましくは２０−２５℃で行われる。
さらに本発明は、下記構造を有するエポチロンの製造方法を提供する。
0004579351.tif 000054
この方法は、
（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000055
（ここで、Ｒ’及びＲ”は、個々独立に、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである）を有する保護された環状ケトンを、適当な条件下で脱保護して、下記構造：
0004579351.tif 000056
を有するデスオキシエポチロンを生成し、次いで、
（ｂ）前記工程（ａ）で生成したデスオキシエポチロンを、適当な条件下でエポキシ化してエポチロンを形成することを含んでなる。一実施態様では、本発明は、Ｒ’及びＲ”がＴＢＳである方法を提供する。脱保護工程（ａ）は、ＨＦ・ピリジン等の試薬を含む処理によって行われる。脱保護された化合物は、工程（ｂ）において、過酢酸、過酸化水素、過安息香酸、ｍ-クロロ過安息香酸等のエポキシ化剤を用い、ジクロロメタン等の不活性有機溶媒中でエポキシ化されるが、好ましくはジメチルジオキシランである。
また本発明は、下記構造を有する環状ジオールの製造方法も提供する。
0004579351.tif 000057
ここで、Ｒ’は、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである。この方法は、
（ａ）下記構造：
0004579351.tif 000058
（ここで、Ｒは、直鎖状または分枝状アルキル、アルコキシアルキル、置換又は非置換のアリールオキシアルキル、トリアルキルシリル、アリールジアルキルシリル、ジアリールアルキルシリル、トリアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルであり；Ｒ’は、水素、直鎖状または分枝状アルキル、置換又は非置換のアリールまたはベンジル、トリアルキルシリル、ジアルキルアリールシリル、アルキルジアリールシリル、直鎖状または分枝状アシル、置換又は非置換アロイル又はベンゾイルである）を有する開環アルデヒドを、適当な条件下で環化して、下記構造：
0004579351.tif 000059
を有し、α-及びβ-アルコール成分を含有する保護された環状アルコールのエナンチオマー混合物を形成し、
（ｂ）任意に、前記工程（ａ）で生成されたα-アルコールを、適当な条件下で単離及び酸化してケトンを生成し、その後、当該ケトンを適当な条件下で還元して、実質的にβ-アルコールからなる保護された環状アルコールのエナンチオマー混合物を形成し、次いで、
（ｃ）前記工程（ａ）及び（ｂ）で生成された保護された環状アルコールを、適当な条件下で脱保護剤で処理して環状ジオールを形成することを含んでなる。一実施態様では、本発明は、Ｒ’がＴＢＳであり、Ｒ”がＴＰＳである方法を提供する。環化工程（ａ）は、ＫＨＭＤＳ等の種々のマイルドな非求核塩基を用い、ＴＨＦ等の不活性溶媒中で行われる。反応は、準室温、好ましくは−９０℃〜−５０℃の間、より好ましくは−７８℃で行われる。非天然α−ＯＨジアステレオマーの単離は、適当なタイプのクロマトグラフィまたは結晶化を含む任意の精製方法によって行われる。この目的に適したクロマトグラフィ技術は、高圧液体クロマトグラフィ、向流クロマトグラフィ、またはフラッシュクロマトグラフィを含む。種々のカラム媒体が適しており、中でも、シリカまたは逆送支持体を含む。β−ＯＨ誘導体は、次いで、デス-マーチンペリオジナン等の選択的酸化剤を用いて酸化される。得られたケトンは、選択的還元剤を用いて還元される。種々の水素化ホウ素及び水素化アルミニウム試薬は夕子上ある。好ましい還元剤は、水素化ホウ素ナトリウムである。処理工程（ｃ）は、ＨＦ-ピリジンを含む様々な脱保護剤を用いて行うことができる。
さらに、本発明は、ガン患者におけるガンの治療方法も提供し、その方法は、当該患者に、ここに開示したエポチロンＢに関連する任意の類似物の治療のための有効量を、任意に製薬に適したキャリアと組み合わせて投与することを含む。この方法は、ガンが充実性腫瘍または白血病である場合に適用できる。特に、この方法は、ガンが乳ガンまたは黒色腫である場合に適用できる。
また本発明は、ガンの治療用製薬組成物も提供し、この組成物は、上記のエポチロン類似物の任意のものを活性成分として含み、任意だが典型的には製薬に適したキャリアも含む。本発明の製薬組成物は、他の治療用活性成分をさらに含んでいてもよい。
さらに本発明は、ガン患者におけるガンの治療方法を提供し、その方法は、当該患者に、上記エポチロン類似物の治療のための有効量と、製薬に適したキャリアとを含む。この方法は、ガンが充実性腫瘍または白血病である場合に適用できる。
エポチロンＡ及びＢに関連する上記の化合物は、ガンの治療、特に多剤耐性が存在する場合において、in vivoでもin vitroでも有用である。これらの化合物の細胞中のＭＤＲの非−基質としての能力を、下表において測定したが、それによると、これらの化合物は、ガン患者におけるガンの治療、予防または改善に有用であることが示された。
本発明の化合物の治療的投与量は、治療すべき状況の性質及び重さ、並びに化合物の種類及びその投与経路によって変化する。一般的に、抗ガン剤活性のための１日の投与量は、哺乳類の体重1kg当たり、0.001から25mg、好ましくは0.001から10mg、最も好ましくは0.001から1.0mgの範囲であり、これらは１回又は複数回投与である。通常の場合、約25mg/kgの投与量が必要とされる。
ここに開示した化合物の有効投与量を、哺乳類、特にヒトに供給するために、任意の適した投与経路が用いられる。例えば、経口、直腸、局所、腸管外、眼、肺、鼻等の経路が用いられる。投与形態は、錠剤、トローチ、分散液、懸濁液、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾル等を含む。
これらの組成物は、経口、直腸、局所（経皮装置、エアロゾル、クリーム、軟膏、ローション及び粉剤を含む）、腸管外（皮下、筋肉内、静脈内を含む）、眼（眼動脈）、肺（鼻または口腔吸入）又は鼻投与に適した組成物を含む。任意の与えられた場合における最も好適な経路は、治療すべき状況の性質及び重さ、並びに、活性成分の性質に大きく依存する。これらは、単位投与形態で便利に提供され、製薬の分野で良く知られた任意の方法によって調製される。
経口投与形態の調製において、異例の製薬媒体を用いることもでき、それは、経口液体製剤（例えば、懸濁液、エリキシル、及び溶液）の場合、水、グリコール、オイル、アルコール、香料、防腐剤、着色剤等であり、経口固体製剤の場合、デンプン、糖、微結晶セルロース等のキャリア、希釈剤、顆粒化剤、潤滑剤、バインダー、崩壊剤等であり、粉末、カプセル及び錠剤などの固体製剤は、経口液体製剤より好ましい。必要ならば、標準的な水性または非水性技術によって被覆してもよい。上記の投与形態に加えて、本発明の化合物は、徐放手段及び装置によって投与してもよい。
経口投与に適した本発明の製薬組成物は、カプセル、カシェ剤又は錠剤といった別個の単位として調製してもよく、それら各々は、粉末または顆粒、あるいは水性又は非水性液体中の溶液または懸濁液、あるいは水中油型または油中水型エマルションの形態の所定量の活性成分を被覆している。これらの組成物は、薬学の分野で知られた任意の方法によって調製される。一般に、組成物は、活性成分と液体キャリア、微粉砕した固体キャリア、またはその両方とを均一かつ強力に混合することによって調製され、次いで、必要ならば、製品を所望の形状に成形する。例えば、錠剤は、任意に１つ又はそれ以上の副成分とともに、圧縮又は成型することによって調製される。圧縮錠剤は、適当な機械の中で、粉末又は顆粒といった自由に流動する形態の活性成分を、任意にバインダー、潤滑剤、不活性希釈剤または界面活性剤または分散剤と混合して圧縮することにより調製される。成型錠剤は、適当な機械の中で、不活性液体希釈剤で加湿された粉末状化合物の混合物を成型することにより調製される。
本発明は、以下の詳細な実験から、さらに良く理解されるであろう。しかし、当業者は、議論される特定の方法及び結果が、後述される請求の範囲に記載された本発明を単に例示するのみであることを容易に理解するであろう。本発明に係るエポチロンＡ及びＢ、それらの類似物、及びそれらの中間体の製造方法は、この分野で周知の種々の代替的保護基を包含すると理解されるであろう。下記の実施例を含むこの開示において用いられる保護基は、単なる例示に過ぎない。
実施例１
ＴＨＰグリコール；１３：CH2Cl2（900ml）中の（R）-（+）-グリシドール１２（20g;270mmol）及び新たに蒸留した3,4-ジヒドロ-2H-ピラン（68.1g;810mmol）を、ピリジニウム p-トルエンスルホン酸塩（2.1g;8.36mmol）で、室温’（rt）において処理し、得られた溶液を16時間攪拌した。溶液の約50%を、次いで、真空下で除去し、残った溶液をエーテル（1L）で希釈した。次に、有機層を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（500ml）で２回に分けて洗浄し、乾燥させ（Na2SO4）、濾過し、濃縮した。残留物をフレッシュクロマトグラフィ（シリカ、25→50% エーテル:ヘキサン）で精製し、THPグリシドール１３（31.2g;73%）を無色液体として得た。IR（フィルム）：2941,1122,1034cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）d 4.66（1,j=3.5Hz,1H）,4.64（t,j=3.5Hz,1H）,3.93（dd,J=11.7,3.1Hz,1H）,3.86（m,2H）,3.73（dd,J=11.8,5.03Hz,1H）,3.67（dd,j=11.8,3.4Hz,1H）,3.51（m,2H）,3.40（dd,J=11.7,6.4）,3.18（M,2H）,2.80（m,2H）,2.67（dd,J=5.2,2.7Hz,1H）,2.58（dd,J=5.0,2.7Hz,1H）,1.82（m,2H）,1.73（m,2H）,1.52（m,4H）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 98.9,98.8,68.5,67.3,62.4,62.2,50.9,50.6,44.6,44.5,30.5,30.4,25.4,19.3,19.2;［a］D=+4.98（c=2.15,CHCl3）.
実施例２
アルコール１３ａ：トリメチルシリルアセチレン（32.3g;329mmol）を、シリンジを介してTHF（290ml）に添加し、得られた溶液を-78℃に冷却し、n-ブチルリチウム（ヘキサン中1.6M溶液の154ml;246.4mmol）で処理した。15分後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテレート（34.9g;246mmol）を添加し、得られた混合物を10分間攪拌した。次いで、THF（130ml）中のエポキシド１３（26g;164.3mmol）を、カニューレを通して添加し、得られた溶液を、-78℃で5.5時間攪拌した。反応は、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（250ml）の添加によってクエンチし、溶液を室温に戻した。次いで、混合物をエーテル（600ml）で希釈し、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（250ml）、水（250ml）、及びブライン（250ml）で連続的に洗浄した。次いで、有機層を乾燥させ（Na2SO4）、濾過し、真空下で濃縮した。残留物をフレッシュクロマトグラフィ（シリカ、20% エーテル:ヘキサン）で精製し、アルコール１３ａ（34g;76%）を得た。
実施例３
ＭＯＭエーテル１３ｂ：無水1,2-ジクロロエタン（600ml）中のアルコール１３ａ（24g;88.9mmol）及びN,N-ジイソプロピルエチレンアミン（108ml;662mmol）溶液を、クロロメチルメチルエーテル（17ml;196mmol）で処理し、得られた混合物を55℃に28時間加熱した。次いで、暗色混合物を室温に冷却し、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（300ml）で処理した。層が分離した後、有機層を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（200ml）及びブライン（200ml）で連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ（Na2SO4）、シリカゲルパッド（エーレツリンス）を通して濾過した。残留物をフレッシュクロマトグラフィ（シリカ、20→30% エーテル:ヘキサン）で精製し、MOMエーテル１３ｂ（23.7g;85%）を得た。
実施例４
アルコール１４：メタノール（90ml）中のTHPエーテル１３ｂを、ピリジニウム p-トルエンスルホン酸塩（4.0g;15.9mmol）で処理し、得られた混合物を室温で16時間攪拌した。次いで、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（100ml）の添加で反応をクエンチし、過剰のメタノールを真空下で除去した。残留物をエーテル（300ml）で希釈し、有機層を重炭酸ナトリウム飽和水溶液（200ml）及びブライン（200ml）で連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ（Na2SO4）、濾過し、濃縮した。残留物をフレッシュクロマトグラフィ（シリカ、40→50% エーテル:ヘキサン）で精製し、アルコール１４（13.1g;95%）を無色オイルとして得た。
実施例５
アルコール１４ａ：CH2Cl2（165ml）中の塩化オキサリル（2MのCH2Cl2溶液の24.04ml;48.08mmol）の冷却溶液（-78℃）に、無水DMSO（4.6ml;64.1mmol）を滴下した。30分後、CH2Cl2（65ml+10mlリンス）中のアルコール１４（6.93g;32.05mmol）溶液を添加し、得られた溶液を-78℃で40分間攪拌した。次いで、新たに蒸留したトリエチルアミン（13.4ml;96.15mmol）を添加し、冷却バスを取り除き、混合物を0℃まで暖めた。次いで、反応混合物をエーテル（500ml）で希釈し、水（250ml）で２回及びブライン（250ml）で１回連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ（Na2SO4）、濾過し、濃縮した。
上記の反応で調製した原料アルデヒド（6.9g）を、エーテル（160ml）に溶解し、0℃に暖めた。次いで、メチルマグネシウムブロマイド（3.0Mブチルエーテル溶液の32.1ml;96.15mmol）を添加し、溶液を徐々に室温まで暖めた。10時間後、反応混合物を0℃に冷却し、塩化アンモニウム飽和水溶液の添加により反応をクエンチした。混合物をエーテル（200ml）で希釈し、水（150ml）及びブライン（150ml）で連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ（Na2SO4）、濾過し、濃縮した。残留物をフレッシュクロマトグラフィ（シリカ、40→50% エーテル:ヘキサン）で精製し、アルコール１４ａ（6.3g;１４から85%）を得た。
実施例６
ケトン１５：室温のCH2Cl2（20ml）中の、アルコール１４（1.0g;4.35mmol）、4Åmol.シーブス、及びN-メチルモルホリン-N-オキシド（1.0g;8.7mmol）を、触媒量のテトラ-n-プロピルアンモニウム過ルテニウム酸塩で処理し、得られた黒色懸濁液を3時間攪拌した。次いで、反応混合物をシリカゲルパッド（エーテルリンス）を通して濾過し、濾過物を真空下で濃縮した。残留物をフレッシュクロマトグラフィ（シリカ、10% エーテル:ヘキサン）で精製し、ケトン１５（924mg;93%）を明黄色オイルとして得た。
実施例７
アルケン１７：THF（15.2ml）中の酸化ホスフィン１６（1.53g;4.88mmol）の冷却溶液（-78℃）を、n-ブチルリチウム（2.45Mヘキサン溶液の1.79ml）で処理した。15分後、オレンジ色溶液を、THF（4.6ml）中のケトン１５（557mg;2.44mmol）溶液で処理した。10分後、冷却バスを取り除き、溶液を室温まで暖めた。溶液が暖まると、析出物の生成が観察された。塩化アンモニウム飽和水溶液（20ml）の添加により反応をクエンチした。混合物をエーテル（150ml）に投入し、水（50ml）及びブライン（50ml）で連続的に洗浄した。有機層を乾燥させ（Na2SO4）、濾過し、濃縮した。残留物をフレッシュクロマトグラフィ（シリカ、10% エーテル:ヘキサン）で精製し、アルケン１７（767mg;97%）を無色オイルとして得た。IR（フィルム）:2956,2177,1506,1249,1149,1032,842cm-1;1H NMR（CDCl3,500MHz）d 6.95（s,1H）,6.53（s,1H）,4.67（d,j=6.7Hz,1H）,4.57（d,j=6.8Hz,1H）,4.29（dd,J=8.1 5.4Hz,1H）,3.43（s,3H）,2.70（s,3H）,2.62（dd,J=16.9,8.2Hz,1H）,2.51（dd,j=17.0,5.4Hz,1H）,2.02（s,3H）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 164.4,152.5,137.1,121.8,116.2,103.7,93.6,86.1,79.6,55.4,25.9,19.1,13.5;［a］D=-27.3（c=2.2,CHCl3）.
実施例８
ヨウ化アルキル形成：アセトン（100ml）中のアルキン１７（3.00g;9.29mmol）の溶液に、0℃でNIS（2.51g;11.2mmol）及びAgNO3（0.160g;0.929mmol）を添加した。次いで、混合物を徐々に室温まで暖めた。1.5時間後、反応物をEt2O（250mL）に投入し、飽和重亜硫酸（40mL）で１回、飽和NaHCO3（40mL）で１回、ブライン（40mL）で１回洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。ヘキサン/酢酸エチル（10:1-7:1）での勾配溶離を用いたシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィによる精製で、2.22g（64%）のヨウ化物１７ａを琥珀色オイルとして得た。
実施例９
ヨウ化アルキニルの還元：Et2O（60mL）中のシクロヘキセン（1.47mL、17.9mmol）溶液に、BH3・DMS（0.846mL,8.92mmol）を0℃で添加した。次いで、反応物を室温まで暖めた。1時間後、ヨウ化物ｘ（2.22g;5.95mmol）をEt2Oに添加した。3時間後、AcOH（1.0mL）を添加した。さらに30分後、溶液を飽和NaHCO3に投入し、Et2O（3×100mL）で抽出した。混合した有機物を、次いで、ブライン（50mL）で洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。ヘキサン/酢酸エチル（6:1）で溶離させるシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィによる精製で、1.45g（65%）のヨウ化ビニル１８を黄色オイルとして得た。
実施例１０
ＭＯＭ除去：CH2Cl2（40mL）中のヨウ化物１８（1.45g;3.86mmol）溶液に、チオフェノール（1.98mL;19.3mmol）及びBF3・Et2O（1.90mL;15.43mmol）を室温で添加した。22時間後、反応物をEtOAc（150mL）に投入し、1N NaOH（2×50mL）で洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。ヘキサン/酢酸エチル（4:1-2:1-1:1）での勾配溶離を用いたシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィによる精製で、1.075g（86%）のアルコール１８ａを薄黄色オイルとして得た。
実施例１１
アセテート形成：CH2Cl2（30mL）中のアルコール１８ａ（1.04g;3.15mmol）溶液に、ピリジン（2.52mL,25.4mmol）、無水酢酸（1.19mL,12.61mmol）及びDMAP（0.005g）を添加した。1時間後、揮発物を真空下で除去した。得られた残留物を、ヘキサン/酢酸エチル（7:1）で溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、1.16g（99%）のアセテート１９を薄黄色オイルとして得た。IR（フィルム）：1737,1368,1232,1018cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）d 6.97（s,1H）,6.53（s,1H）,6.34（dd,j=17.5,1.0Hz,1H）,6.18（dd,j=13.7,6.9Hz,1H）,5.40（t,J=6.4Hz,1H）,2.70（s,3H）,2.61（m,2H）,2.08（2s,6H）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 169.8,164.4,152.2,136.4,136.1,120.6,116.4,85.1,38.3,21.0,19.1,14.7;［a］D=-28.8（c=14.7,CHCl3）.
実施例１２
CH2Cl2（23mL）中のアルコール4（2.34g,3.62mmol）及び2,6-ルチジン（1.26mL,10.86mmol）溶液を、0℃においてTBSOTf（1.0mL,4.34mmol）で処理した。0℃で1.5時間攪拌した後、反応混合物をMeOH（200μL）でクエンチし、混合物をさらに5分間攪拌した。反応混合物をEt2O（100mL）で希釈し、1N HCl（25mL）、水（25mL）及びブライン（25mL）で続けて洗浄した。溶液をMgSO4上で乾燥させ、濾過して濃縮した。ヘキサン中5% Et2Oで溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、化合物７（2.70g,98%）を無色フォームとして得た。
実施例１３
CH2Cl2/H2O（20:1,80mL）中の化合物７（2.93g,3.85mmol）の溶液を、DDQ（5.23g,23.07mmol）で処理し、得られた懸濁液を室温で24時間攪拌した。反応混合物をEt2O（200ml）で希釈し、水性NaHCO3（2×40mL）で洗浄した。水層をEt2O（3×40mL）で抽出し、まとめた有機分画をブライン（50mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過して濃縮した。原料オイルを、ヘキサン中30%エーテルで溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、アルコール７Ａ（2.30g,89%）を無色オイルとして得た。IR（フィルム）：3488,1471,1428,1115,1054cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）d 7.70（6H,dd,j=8.0,1.5Hz）,7.44（9H,s）,4.57（1H,d,J=3.5Hz）,4.19（1H,s）,3.67（1H,d,J=8.5Hz）,3.06（1H,dd,J=11.5,5.0Hz）,2.89（1H,dd,j=11.5,5.0Hz）,2.68（1H,d,J=13.5Hz）,2.59（1H,d,J=13.5Hz）,2.34（1H,dt,J=12.0,2.5Hz）,2.11（1H,m）,1.84（1H,dt,J=12.0,2.5Jz）,1.76（2H,m）,1.59（2H,m）,1.34（3H,s）,1.13（3H,d,J=7.5Hz）,1.10（3H,s）,0.87（9H,s）,0.84（3H,d,J=12.0Hz）,0.02（3H,s）,0.01（3H,s）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 136.18,134.66,130.16,127.84,78.41,75.91,63.65,59.69,45.43,45.09,37.72,30.84,30.50,26.23,25.89,22.42,21.05,18.40,15.60,14.41,-3.23,-3.51;［α］D=-0.95（c=0.173,CHCl3）.
実施例１４
CH2Cl2（40mL）中の塩化オキサリル（414μL,4.74mmol）の溶液に、DMSO（448μL,6.32mmol）を-78℃で滴下し、得られた溶液を-78℃で30分間攪拌した。CH2Cl2（20mL）中のアルコール７ａ（2.12g,3.16mmol）を添加し、得られた白色懸濁液を-78℃で45分間攪拌した。反応混合物をEt3N（2.2mL,15.8mmol）でクエンチし、溶液を0℃まで暖め、この温度で30分間攪拌した。反応混合物をEt2O（100mL）で希釈し、水性NH4Cl（20mL）、水（20mL）及びブライン（20mL）で続けて洗浄した。原料アルデヒドを、ヘキサン中5% Et2Oで溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、アルデヒド８（1.90g,90%）を無色オイルとして得た。
実施例１５
（メトキシメチル）トリフェニルホスホニウムクロライド（2.97g,8.55mmol）のTHF（25mL）溶液を、0℃においてKOtBu（THF中1Mの8.21mL,8.1mmol）で処理した。混合物を0℃で30分間攪拌した。THF（10mL）中のアルデヒド８（3.1g,4.07mmol）を添加し、得られた溶液を室温まで暖め、この温度で2時間攪拌した。反応混合物は、水性NH4Cl（40mL）でクエンチし、得られた溶液をEt2O（3×30mL）で抽出した。まとめたEt2O分画を、ブライン（20ml）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮した。残留物を、ヘキサン中5% Et2Oで溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、化合物９（2.83g,86%）を無色フォームとして得た。
実施例１６
ジオキサン/H2O（9:1,28mL）中の化合物９（2.83g,3.50mmol）の溶液に、pTSA・H2O（1.0g,5.30mmol）を添加し、得られた混合物を50℃に2時間加熱した。室温まで冷却した後、Et2O（50mL）で希釈し、水性NaHCO3（15mL）、ブライン（20mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、濃縮して、アルデヒド９ａ（2.75g,99%）を無色フォームとして得た。
実施例１７
メチルトリフェニルホスホニウムブロマイド（1.98g,5.54mmol）のTHF（50mL）溶液を、0℃においてリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（THF中1Mの5.04mL,5.04mmol）で処理し、得られた溶液を0℃で30分間攪拌した。THF（5.0mL）中のアルデヒド９ａ（2.0g,2.52mmol）を添加し、得られた溶液を室温まで暖め、この温度で1時間攪拌した。反応混合物は、水性NH4Cl（15mL）でクエンチし、Et2O（3×20mL）で抽出した。まとめたEt2O分画を、ブライン（15mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、濃縮した。残留物を、ヘキサン中5% Et2Oで溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、化合物１０（1.42g,76%）を無色フォームとして得た。
実施例１８
MeOH/THF（2:1,13mL）中の化合物１０（1.0g,1.34mmol）の溶液を、室温において［ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨードベンゼン］（865mg,2.01mmol）で処理した。15分後、反応混合物を水性NaHCO3（25mL）でクエンチした。混合物を、Et2O（3×25mL）で注出し、まとめたEt2O分画をブラインで洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、濃縮した。残留物を、ヘキサン中5% Et2Oで溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、化合物１１（865mg,92%）を無色フォームとして得た。IR（フィルム）：1428,1252,1114,1075,1046cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）d 7.61（6H,dd,j=7.9,1.4Hz）,7.38（9H,s）,5.47（1H,m）,4.87（1H,d,J=10.0Hz）,4.76（1H,d,J=15.9Hz）,4.30（1H,d,j=3.7Hz）,3.95（1H,s）,3.56（1H,dd,J=7.5,1.4Hz）,3.39（3H,s）,2.84（3H,s）,2.02（1H,m）,1.64（2H,m）,1.34（1H,m）,1.11（3H,s）,1.02（3H,d,J=7.4Hz）,0.90（3H,s）,0.85（9H,s）,0.62（3H,d,J=6.8Hz）,-0.04（3H,s）,-0.05（3H,s）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 138.29,135.79,135.04,129.86,127.78,114.98,110.49,60.11,55.57,46.47,43.91,36.82,34.21,26.26,19.60,18.60,17.08,16.16,13.92,-2.96,-3.84;［α］D=+1.74（c=0.77,CHCl3）.
実施例１９
スズキ・カップリング：THF（8.0mL）中のオレフィン１１（0.680,1.07mmol）の溶液に、9-BBN（0.5M THF溶液,2.99mL,1.50mmol）を添加した。別のフラスコで、ヨウ化物１９（0.478g,1.284mmol）をDMF（10.0mL）中に溶解した。次いで、CsCO3（0.696g,2.14mmol）を強く攪拌しながら添加し、さらに、Ph3As（0.034g,0.111mmol）、PdCl2（dppf）2（0.091g,0.111mmol）及びH2O（0.693mL,38.5mmol）を添加した。4時間後、ボラン溶液を、DMF中のヨウ化物混合物に添加した。反応物は即座に暗褐色となり、2時間後には徐々に薄黄色となった。次いで、反応物をH2O（100mL）中に投入し、Et2O（3×50mL）で抽出した。まとめた有機物を、水（2×50mL）及びブラインで１回洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。ヘキサン/酢酸エチル（7:1）で溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、0.630g（75%）のカップリング化合物２０を薄黄色オイルとして得た。
実施例２０
ジメチルアセタール２１の加水分解：アセテート２０（0.610g,0.770mmol）を、ジオキサン/H2O（9:1,15m）に溶解し、p-TSA・H2O（0.442g,2.32mmol）を添加した。次いで、混合物を55℃に加熱した。3時間後、混合物を室温に冷却し、Et2O中に投入した。この溶液を、飽和NaHCO3（30mL）で１回、ブライン（30mL）で１回洗浄し、無水MgSO4上で乾燥させた。ヘキサン/酢酸エチル（7:1）で溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィにより精製して、0.486g（85%）のアルデヒド２１を薄黄色オイルとして得た。IR（フィルム）：1737,1429,1237,1115,1053cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）d 9.74（1H,s）,7.61（6H,dd,j=7.8,1.2Hz）,7.38（9H,m）,6.94（1H,s）,6.53（1H,s）,5.39（1H,m）,5.31（1H,m）,5.29（1H,t,J=6.9Hz）,4.61（1H,d,j=4.3Hz）,3.50（1H,dd,J=5.2,2.6Hz）,2.70（3H,s）,2.84（2H,m）,2.14（1H,m）,2.09（3H,s）,2.07（3H,s）,1.83（2H,m）,1.41（1H,m）,1.18（1H,m）,1.01（3H,s）,0.99（3H,s）,0.91（3H,d,J=7.4Hz）,0.85（9H,s）,0.69（1H,m）,0.58（3H,d,J=6.8Hz）,-0.05（3H,s）,-0.06（3H,s）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 205.46,170.01,164.49,152.46,137.10,135.60,134.22,132.55,130.65,127.84,123.82,120.66,116.19,81.09,78.47,76.73,51.66,43.14,38.98,30.99,30.42,27.63,26.10,21.15,20.92,20.05,19.15,18.49,15.12,14.70,12.75,-3.25,-4.08;［α］D=-18.7（c=0.53,CHCl3）.
実施例２１
アルドール：アセテートアルデヒド２１（84mg,0.099mmol）のTHF溶液に、-78℃においてKHMDS（0.5Mのトルエン溶液,1.0ml,0.5mmol）を滴下した。得られた溶液を、-78℃で30分間攪拌した。次いで、反応混合物をシリカゲルの短パッドにカニューレ挿入し、エーテルで洗浄した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ,ヘキサン中12%EtOAc）により精製して、ラクトン２２（37mgの３-Ｓ及び6mgの３-Ｒ,51%）を白色フォームとして得た。
実施例２２
モノ脱保護：ラクトン２２（32mg,0.0376mmol）を、1mlのピリジン緩衝HF・ピリジン-THF溶液で、室温において2時間処理した。反応混合物を、飽和NHCO3水に投入し、エーテルで抽出した。有機層を、飽和CuSO4（10ml×3）及び飽和NaHCO3（10ml）で続けて洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、真空下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ,ヘキサン中25%EtOAc）により精製して、ジオール２２ａ（22mg,99%）を白色フォームとして得た。
実施例２３
無水CH2Cl2中のジオール２２ａ（29mg,0.0489mmol）及び2,6-ルチジン（0.017ml,0.147mmol）の冷却（-30℃）溶液に、TBSOTf（0.015ml,0.0646mmol）を添加した。次いで、得られた溶液を-30℃で30分間攪拌した。反応は、0.5M HCl（10ml）でクエンチし、エーテル（15ml）で抽出した。エーテル層を、飽和NaHCO3で洗浄し、乾燥（Na2SO4）させ、真空下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ,ヘキサン中8%EtOAc）により精製して、TBSエーテル２２Ｂ（32mg,93%）を白色フォームとして得た。
実施例２４
ケトン形成：CH2Cl2（2mL）中のアルコール２２Ｂ（30mg,0.0424mmol）溶液に、25℃において、デス−マーチンペリオジナン（36mg,0.0848mmol）を一度に添加した。次いで、得られた溶液を25℃で1.5時間攪拌した。反応は、1:1の飽和重炭酸ナトリウム：チオ硫酸ナトリウム水溶液（10ml）を添加してクエンチし、5分間攪拌した。次いで、混合物をエーテル（3×15ml）で抽出した。有機層を乾燥（Na2SO4）し、濾過し、真空下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ,ヘキサン中8%EtOAc）により精製して、ケトン２２Ｃ（25mg,84%）を白色フォームとして得た。IR（フィルム）：2928,1745,1692,1254,1175,836cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）d 6.97（s,1H）,6.57（s,1H）,5.53（dt,j=3.4,11.1Hz,1H）,5.37（dd,j=16.4,9.9Hz,1H）,5.00（d,J=10.3Hz,1H）,4.02（d,J=9.7Hz,1H）,3.89（d,J=8.7Hz,1H）,3.00（m,1H）,2.82（d,J=6.5Hz,1H）,2.71（m,5H）,2.36（q,J=10.7Hz,1H）,2.12（,3H）,2.07（dd,j-8.2,1H）,1.87（bs,1H）,1.49（m,3H）,1.19（m,5H）1.14（s,3H）,1.08（d,J=6.8Hz,3H）,0.94（m,12H）,0.84（s,9H）,0.12（s,3H）,0.10（s,3H）,0.07（s,3H）,-0.098（s,3H）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 218.7,170.1,164.5,152.6,137.9,133.9,124.8,119.6,115.9,72.7,53.2,43.9,41.0,40.3,32.9,32.3,28.4,27.1,26.3,26.1,26.0,19.2,19.1,18.3,18.2,17.1,16.0,15.2,14.3,-4.2,-4.4,-4.6,-4.8;［α］D=-21.93（c=1.4,CHCl3）.
実施例２５
デスオキシ化合物：THF（1ml）中のTBSエーテル２２Ｃ（27mg,0.038mmol）溶液に、25℃において、プラスチック容器で、HF・ピリジン（0.5ml）を添加した。得られた溶液を25℃で2時間攪拌した。反応混合物を、クロロホルム（2ml）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム（20ml）に極めてゆっくり添加した。混合物をCHCl3（20ml×3）で抽出した。有機層を乾燥（Na2SO4）し、濾過し、真空下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ,ヘキサン中30%EtOAc）により精製して、ジオール２３（18mg,99%）を白色フォームとして得た。IR（フィルム）：3493,2925,1728,1689,1249cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）d 6.96（s,1H）,6.59（s,1H）,5.44（dt,j=4.3,10.4Hz,1H）,5.36（dt,j=5.1,10.2Hz,1H）,5.28（dd,J=1.7,9.8Hz,1H）,4.11（d,J=7.2Hz,1H）,3.74（s,1H）,3.20（d,J=4.5Hz,1H）,3.14（dd,J-2.5,15.1Hz,1H）,2.27（m,1H）,2.05（m,1H）,2.04（s,3H）,2.01（m,1H）,1.75（m,1H）,1.67（m,1H）,1.33（m,4H）,1.21（s,1H）,1.19（m,2H）,1.08（d,J=7.0Hz,3H）,1.00（s,3H）,0.93（d,J=7.1Hz,3H）;13C NMR（CDCl3,125MHz）d 226.5,176.5,171.1,158.2,144.7,139.6,131.1,125.7,122.0,84.6,80.2,78.6,59.4,47.9,45.4,44.6,38.5,37.9,33.7,33.6,28.7,25.1,21.9,21.7,19.6;［α］D=-84.7（c=0.85,CHCl3）.
実施例２６
エポチロン：乾燥CH2Cl2（1ml）中のデスオキシエポチロン（9mg,0.0189mmol）の冷却（-50℃）溶液に、新たに調製したジメチルジオキシラン（0.95ml,アセトン中の0.1M）を添加した。得られた溶液を、-30℃まで2時間暖めた。次いで、窒素気流を溶液に吹き込み、過剰のDMDOを除去した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィ（シリカ,ヘキサン中40%EtOAc）により精製して、エポチロンA（4.6mg,49%）を無色固体として、そして0.1mgのcis-エポチロン ジアステレオマー得た。この物質は、全ての点において天然エポチロンAと一致した。
実施例２７
閉環オレフィン置換のための方法：
乾燥ベンゼン（1.5mL）中のジエン２４（5mg,0.0068mmol）の攪拌された溶液に、グラッブス（grubbs）の触媒（2.8mg,0.0034mmol）を添加した。12時間後、触媒（2.8mg）をさらに添加した。さらに5時間後、反応物を濃縮した。ヘキサン/酢酸エチル（1:1）で溶離するフラッシュクロマトグラフィにより精製して、ラクトン２３（3.5mg,94%,2:1 E/Z）を得た。
実施例２８
化合物１９の調製
アルコール２Ａ：CH2Cl2（16mL）中の、（S）-（-）-1,11-ビ-2-ナフトール（259mg,0.91mmol）、Ti（O-i-Pr）4（261μL;0.90mmol）、及び4Åシーブス（3.23g）の混合物を、1時間環流加熱した。この混合物を室温に冷却し、アルデヒド１を添加した。10分後、懸濁液を-78℃に冷却し、アリルトリブチルスズ（3.6mL;11.60mmol）を添加した。反応混合物を-78℃で10分間攪拌し、次いで、-20℃のフリーザーに70時間置いた。飽和NaHCO3（2mL）を添加し、混合物を1時間攪拌し、Na2SO4を投入し、次いで、MgSO4及びセライトのパッドを通して濾過した。粗原料をフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,1:1）により精製して、アルコール２Ａを黄色オイルとして得た（1.11g,60%）。
実施例２９
アセテート３Ａ：CH2Cl2（12mL）中の、アルコール２Ａ（264mg,1.26mmol）溶液に、DMAP（15mg;0.098mmol）、Et3N（0.45mL,3.22mmol）及びAc2O（0.18mL;1.90mmol）を添加した。2時間後、反応混合物を20mLのH2Oでクエンチし、EtOAc（4×20mL）で抽出した。まとめた有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（EtOAc/ヘキサン,1:3）により精製して、アセテート３Ａを黄色オイルとして得た（302mg,96%）。
実施例３０
ヨウ化ビニル：アセトン中のアセテート（99mg,0.39mmol）の溶液に、0℃において、H2O（4滴）、OsO4（ブチルアルコール中2.5重量%;175μL;0.018mmol）、及びN-メチル-モルホリン-N-オキシド（69mg;0.59mmol）を添加した。混合物を、0℃で2時間45分攪拌し、次いで、Na2SO4でクエンチした。溶液を10mLのH2Oに投入し、EtOAc（5×10mL）で抽出した。まとめた有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。
THF/H2O（4mL,3:1）中の原料生成物溶液に、NaLO4（260mg;1.22mmol）を添加した。1.25時間後、反応混合物を10mLのH2Oでクエンチして濃縮した。残留物をEtOAc（5×10mL）で抽出した。有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（EtOAc/ヘキサン,1:1）により、黄色オイル（80mg）を得たが、これは未同定の複生成物を含んでいた。この混合物を、さらに精製すること無しに用いた。
0.25mLのTHF中の（Ph3P+CH2I）I-（100mg;0.19mmol）溶液に、室温において、NAHMDS（THF中1M）の0.15mL（0.15mmol）を添加した。得られた溶液に、-78℃において、THF（0.25mL）中のHMPA（22μL;0.13mmol）と前工程の生成物（16mg）を加えた。次いで、反応混合物を、30分間攪拌した。ヘキサン（10mL）を添加した後、溶液をEtOAc（4×10mL）で抽出した。まとめたEtOAc層を乾燥（MgSO4）し、濾過紙、そして濃縮した。調製ＴＬＣ（EtOAc/ヘキサン,2:3）により、ヨウ化ビニルを黄色オイルとして得た（14mg;3段階で50%）。
実施例３１
ヨードオレフィンアセテート８Ｃ：ヨウ化エチルトリフェニルホスホニウム（1.125g,2.69mmol）のTHF（10mL）中の懸濁液に、nBuLi（ヘキサン中2.5M溶液,1.05mL,2.62mmol）を室温で添加した。固体物質が消失した後、溶液を、-78℃においてTHF（20mL）中のヨウ化物（0.613g,2.41mmol）の混合物に添加した。得られた懸濁液を、-78℃で5分間強く攪拌し、次いで-20℃まで暖め、ヘキサメチルジシラザンナトリウム（1MのTHF溶液,2.4mL,2.4mmol）で処理した。得られた赤色溶液を、5分間攪拌し、アルデヒド９Ｃ（0.339g,1.34mmol）を徐々に添加した。混合物を-20℃で40分間攪拌し、ペンタン（50mL）で希釈し、セライトのパッドを通して濾過し、濃縮した。残留物のカラムクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,85:15）による精製で、0.202g（酢酸ビニル１０Ｃから全体で25%）のヨウ化ビニル８Ｃを黄色オイルとして得た。IR（フィルム）：2920,1738,1234cm-1；1H NMR（CDCl3,500MHz）δ 6.98（s,1H）,6.56（s,1H）,5.42（dd,j=5.43,6.57Hz,1H）,5.35（t,j=6.6Hz,1H）,2.71（s,3H）,2.54（q,J=6.33Hz,2H）,2.50（s,3H）,2.09（s,6H）;13C NMR（CDCl3）δ 170.1,164.6,152.4,136.9,130.2,120.6,116.4,103.6,40.3,33.7,21.2,19.2,14.9;［α］D=-20.7°（c=2.45,CHCl3）.
実施例３２
アセタール１３Ｃ：THF（0.5mL）中のオレフィン”７Ｃ”（0.082g,0.13mmol）溶液に、9-BBN（0.5MのTHF溶液,0.4mL,0.2mmol）を添加した。室温で3.5時間攪拌した後、さらに9-BBN（0.5MのTHF溶液,0.26mL,0.13mmol）を添加した。別のフラスコにおいて、ヨウ化物８Ｃ（0.063g,0.16mmol）をDMF（0.5mL）に溶解した。次いで、Cs2CO3（0.097g,0.30mmol）を強く攪拌しながら添加し、PdCl2（dppf）2（0.018,0.022mmol）、Ph3As（0.0059g,0.019mmol）、及びH2O（0.035mL,1.94mmol）を続けて添加した。6時間後、ボラン溶液をDMF中のヨウ化物混合物に添加した。反応物は即座に暗褐色となり、3時間後に徐々に薄黄色となった。次いで、反応物を、H2O（10mL）に投入し、Et2O（3×15mL）で抽出した。まとめた有機層を、H2O（3×15mL）、ブライン（1×20mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,9:1）により、0.089g（77%）のカップリング生成物１３Ｃを黄色オイルとして得た。
実施例３３
アルデヒド１４Ｃ：アセタール１３Ｃ（0.069g,0.077mmol）をジオキサン/H2O（9:1,1mL）に溶解し、pTSA・H2O（0.045g,0.237mmol）を添加した。次いで、混合物を55℃に加熱した。3時間後、混合物を室温に冷却し、Et2Oに投入し、Et2O（4×15mL）で抽出した。まとめたエーテル溶液を、飽和NaHCO3（1×30mL）、ブライン（1×30mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,3:1）により、0.046g（71%）のアルデヒド１４Ｃを薄黄色オイルとして得た。
実施例３４
マクロサイクル１５Ｃ-（ＳＲ）：THF（5mL）中のアルデヒド１４Ｃ（0.021g,0.024mmol）溶液に、-78℃において、KHMDS（0.5Mのトルエン溶液,0.145mL,0.073mmol）を添加した。溶液を-78℃で1時間攪拌し、飽和NH4Clでクエンチし、エーテル（3×15mL）で抽出した。まとめた有機層を、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,7:1）により、0.008gの所望のα-アルコール１５Ｃ-（Ｓ）及び0.006gのβ-アルコール１５Ｃ-（Ｒ）を薄黄色オイルとして得た。
実施例３５
マクロサイクル１５Ｃ-（Ｓ）：β-アルコール１５-（Ｒ）（0.006g,0.0070mmol）の0.5mLのCH2Cl2溶液に、室温でデス-マーチンペリオジネート（0.028g,0.066mmol）を添加した。0.5時間後、デス-マーチンペリオジネート（0.025g,0.059mmol）をさらに添加した。得られた溶液を、室温でさらに1時間攪拌し、次いで、エーテル（2mL）及びNa2S2O3/飽和NaHCO3（3mL,1:1）で処理し、H2O（20mL）に投入し、エーテル（4×10mL）で抽出した。まとめたエーテル溶液を、H2O（1×30mL）、ブライン（1×30mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。MeOH/THF（2mL,1:1）中の原料ケトン１５Ｃ’溶液に、-78℃でNaBH4（0.015g,0.395mmol）を添加した。得られた溶液を室温で1時間攪拌し、飽和NH4Clでクエンチし、エーテル（3×15mL）で抽出した。有機層を、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,9:1）により、0.0040g（67%）のα-アルコール１５Ｃ-（Ｓ）及び0.006gを黄色オイルとして、そして0.0006gのβ-アルコール１５Ｃ-（Ｒ）を得た。
実施例３６
ジオール１５Ｃ”’：シリルエーテル１５Ｃ-（Ｓ）（0.010g,0.012mmol）を、HF・ピリジン/ピリジン/THF（1mL）に溶解した。この溶液を室温で2時間攪拌し、次いで、Et2O（1mL）で希釈し、Et2O/飽和NaHCO3（20mL,1:1）に投入し、Et2O（4×10mL）で抽出した。Et2O溶液を、CuSO4（3×30mL）、飽和NaHCO3（1×30mL）、ブライン（l×30mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,9:1）により、0.0066g（93%）のジオール１５Ｃ”を薄黄色オイルとして得た。
実施例３７
アルコール１５Ｃ”’：ジオール１５Ｃ”（0.0066g,0.011mmol）の0.5mLのCH2Cl2溶液に、2,6-ルチジン（7μL,0.060mmol）及びTBSOTf（5μL,0.022mmol）を添加した。得られた溶液を-30℃で0.5時間攪拌し、H2O（5mL）でクエンチして、Et2O（4×10mL）で抽出した。エーテル溶液を、0.5MのHCl（1×10mL）、飽和NaHCO3（1×10mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,93:7）により、0.0070g（89%）のアルコール１５Ｃ”’を薄黄色オイルとして得た。
実施例３８
ケトン１６Ｃ：アルコール１５Ｃ”’（0.006g,0.0083mmol）の0.5mLのCH2Cl2溶液に、室温でデス-マーチンペリオジナン（0.030g,0.071mmol）を添加した。1.25時間後、デス-マーチンペリオジナン（0.025g,0.059mmol）をさらに添加した。得られた溶液を室温でさらに0.75時間攪拌し、エーテル（1mL）及びNa2S2O3/飽和NaHCO3（2mL,1:1）で処理し、H2O（20mL）に投入し、エーテル（4×10ML）で抽出した。エーテル溶液を、飽和NaHCO3（1×20mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,9:1）により、0.0040g（67%）のケトン１６Ｃを薄黄色オイルとして得た。
実施例３９
デスオキシエポチロンＢ（２Ｃ）：THF（0.35mL）中のケトン１６Ｃ（0.004g,0.0056mmol）の溶液に、HF・ピリジン（0.25mL）を20分間滴下した。この溶液を室温で1.5時間攪拌し、CHCl3（2mL）で希釈し、飽和NaHCO3/CHCl3（20mL,1:1）に徐々に投入し、CHCl3（4×10mL）で抽出した。まとめたCHCl3層を、MgSO4で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,3:1）により、0.0022g（80%）のデスオキシエポチロンB２Ｃを薄黄色オイルとして得た。
実施例４０
エポチロンＢ（２）：CH2Cl2（0.25mL）中のデスオキシエポチロンB（0.0022g,0.0041mmol）の溶液に、-50℃において、ジメチルジオキシラン（0.1mL,0.0095mmol）を滴下した。得られた溶液を-50℃で1時間攪拌した。ジメチルオキシラン及び溶媒をN2気流で除去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン/酢酸エチル,1:1）で精製することにより、0.0015g（70%）のエポチロンB（２）を薄黄色オイルとして得たが、これは、1H NMR、マススペクトル、及び［α］Dにおいて基準試料と一致した。
実施例４１
８-デスオキシエポチロンＡ
クロチル化（crotylation）生成物：カリウムtert-ブトキシド（1.0M THF溶液,50.4mL,50.4mmol）、THF（14mL）、及びcis-2-ブテン（9.0mL,101mmol）の攪拌された混合物に、-78℃において、n-BuLi（ヘキサン中1.6M,31.5mL,50.4mmol）を添加した。n-BuLiを完全に添加した後、混合物を-45℃で10分間攪拌し、-78℃に冷却した。次いで、（+）-B-メトキシジイソピノカンフェニルボラン（methoxydiisopinocamphenylborane）（19.21g,60.74mmol）をEt2O（10mL）に滴下した。30分後、BF3・Et2O（7.47mL,60.74mmol）、次いで、THF（15mL）中のアルデヒド４Ｄ（9.84g,60.74mmol）を添加し、攪拌不能な粘性溶液を生成した。この混合物を10分ごとに強く振り動かしで均質にした。-78℃で3時間後、反応物を3N NaOH（36.6g,110mmol）及び30%H2O2（15mL）で処理し、溶液を1時間環流させた。反応物をEt2O（300mL）に投入し、H2O（100mL）、ブライン（30mL）で洗浄し、無水MgSO4で乾燥させた。原材料をバルブ−バルブ蒸留装置に配し、所望の生成物からリガンドを除去した。2mmHg、80℃で加熱して低沸点リガンドを取り除いた。アルコール４Ｄのさらなる精製は、CH2Cl2中のEt2O（2%→4%）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって行い、純粋なアルコール４Ｄを透明オイルとして得た。エリスロ選択性は、1H NMRスペクトルで測定したところ、>50:1であった。生成物は、モシャエスチル（Mosher ester）の形成により、87%eeと決定された。IR（フィルム）：3435,2861,1454,1363,1099cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 7.34（5H,m）,5.80（1H,m）,5.09（1H,dd,j=1.6,8.3Hz）,5.04（1H,d,J=1.6Hz）,4.52（2H,s）,3.51（2H,t,J=5.8Hz）,3.47（1H,m）,2.27（2H,m）,1.73（3H,m）,1.42（1H,m）,1.04（3H,d,J=6.9Hz）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 141.1,138.2,128.3,127.6,127.5,115.0,74.5,72.9,70.4,43.7,31.3,26.5,14.6.
実施例４２
ＴＢＳエーテル５Ｄ：アルコール４Ｄ（5.00g,21.4mmol）をCH2Cl2（150mL）に溶解し、2,6-ルチジン（9.97mL,85.6mmol）を添加した。混合物を0℃に冷却し、TBSOTf（9.83mL,42.8mmol）を徐々に添加した。反応物を室温に暖めた。1時間後、反応物をEt2O（300mL）に投入し、1N HCl（50mL）で１回、飽和NaHCO3（50mL）で１回、ブライン（50mL）で１回洗浄し、無水MgSO4で乾燥させた。ヘキサン/ジエチルエーテル（97:3）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、純粋なオレフィン５Ｄを透明オイルとして得た。IR（フィルム）：1472,1361,1255,1097,1068cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 7.30（5H,m）,5.81（1H,m）,4.97（1H,dd,J=1.4,4.8Hz）,4.94（1H,d,J=1.1Hz）,3.51（1H,q,J=5.1Hz）,3.41（2H,td,J=2.1,6.65.8Hz）,2.27（1H,q,J=5.5HZ）,1.68（1H,m）,1.55（1H,m）,1.41（2H,m）,0.93（3H,d,J=6.9Hz）,0.85（9H,s）,-0.01（6H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 141.2,138.6,128.3,127.6,127.4,113.9,75.6,72.7,70.6,42.7,30.1,25.9,25.4,18.1,15.1,-4.3,-4.4.
実施例４３
アルデヒド６Ｄ：オレフィン５Ｄ（4.00g,11.49mmol）を、1:1 MeOH/CH2Cl2（100mL）に溶解した。次いで、ピリジン（4.0mL）を添加し、混合物を-78℃に冷却した。次に、オゾンを反応物に10分間通気した後、色が明るい青色に変化した。次いで、酸素を反応物に10分間通気した。ジメチルスルフィド（4.0mL）を添加し、反応物を室温まで徐々に暖めた。反応物を終夜攪拌し、次いで、揮発成分を真空下で除去した。ヘキサン/酢酸エチル（9:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、3.31g（82%）のアルデヒド６Ｄを透明オイルとして得た。IR（フィルム）：2856,1727,1475,1361,1253,1102cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 9.76（1H,s）,7.33（5H,m）,4.50（2H,s）,4.11（1H,m）,3.47（2H,m）,2.46（1H,m）,1.50-1.70（4H,バンド）,1.05（3H,d,J=7.0Hz）,0.86（9H,s）,0.06（3H,s）,0.03（3H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 204.8,138.3,128.2,127.4,127.3,72.7,71.7,69.9,51.1,31.1,25.9,25.6,17.8,7.5,-4.4,-4.8.
実施例４４
ジアニオン付加生成物７Ｄ：tert-ブチリルアセテート（0.635g,3.51mmol）を、THF（50mL）中のNaH（鉱油中60%,0.188g,4.69mmol）に室温で加えた。10分後、混合物を0℃に冷却した。さらに10分後、n-BuLi（ヘキサン中1.6M,2.20mL,3.52mmol）を徐々に添加した。30分後、アルデヒド６Ｄ（1.03g,2.93mmol）を巧妙に加えた。10分後、反応をH2O（10mL）でクエンチし、Et2O（2×75mL）で抽出した。まとめた有機物をブライン（30mL）で１回洗浄し、無水MgSO4で乾燥した。原料反応混合物は、15:1の比率でC5におけるジアステレオマーを含んでいた。ヘキサン/酢酸エチル（9:1→7:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、0.723g（47%）の所望のアルコール７Ｄを透明オイルとして得た。IR（フィルム）：3531,2953,1739,1367,1255,1153cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 7.33（5H,m）,4.49（2H,s）,3.75（1H,d,J=2.6Hz）,3.71（1H,m）,3.62（1H,d,J=16.0Hz）,3.53（1H,d,J=16.0Hz）,3.44（2H,t,J=5.1Hz）,2.70（1H,d,J=2.6Hz）,1.83（1H,m）,1.55（4H,m）,1.46（9H,s）,1.17（3H,s）,1.11（3H,s）,0.89（9H,s）,0.82（3H,d,J=7.0Hz）,0.09（6H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 208.9,167.3,138.4,128.3,127.6,127.5,81.3,79.5,78.7,72.8,70.1,52.4,47.6,35.8,30.6,28.2,25.9,25.8,22.6,20.5,17.9,7.05,-4.0,-4.5.
実施例４５
直接還元：アセトニトリル（4.0mL）中のテトラメチルアンモニウムトリアセトキシボロハイドライド（1.54g,5.88mmol）に、無水AcOH（4.0mL）を加えた。混合物を室温で30分間攪拌した後-10℃に冷却した。エステル７Ｄ（0.200g,0.39mmol）のアセトニトリル（1.0mL溶液）を反応物に加え、-10℃で20時間攪拌した。反応を、1Nの酒石酸ナトリウム-カリウム（10mL）でクエンチし、室温で10分間攪拌した。次いで、溶液を飽和NaHCO3（25mL）に投入し、固体Na2CO3を添加して中和した。次いで、混合物をEtOAc（3×30mL）で抽出し、有機物をブライン（20mL）で１回洗浄し、無水MgSO4で乾燥した。ヘキサン/酢酸エチル（4:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、0.100g（50%）のジオールを10:1の比率のジアステレオマーアルコールとして得た。
実施例４６
ジオールのモノプロテクション：ジオール（1.76g,3.31mmol）をCH2Cl2（100mL）に溶解し0℃に冷却した。2,6-ルチジン（12.2mL,9.92mmol）、続いてTBSOTf（1.14mL,4.96mmol）を添加し、反応物を室温に徐々に暖めた。1時間後、反応物をEt2O（300mL）に投入し、1N HCl（50mL）で１回、飽和NaHCO3（50mL）で１回、ブライン（30mL）で１回洗浄し、無水MgSO4で乾燥した。ヘキサン/酢酸エチル（20:1→15:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、2.03g（95%）のアルコール８Ｄを透明オイルとして得たが、これをジアステレオマーの混合物として使用した。
実施例４７
Ｃ５ケトン形成：アルコール８Ｄ（2.03g,3.14mmol）をCH2Cl2（50mL）に溶解し、デス-マーチンペリオジナン（2.66g,6.28mmol）を添加した。2時間後、飽和NaHCO3/飽和Na2S2O3の1:1混合物を添加した。10分後、混合物をEt2O（300mL）中に投入し、有機層をブライン（30mL）で洗浄して無水MgSO4で乾燥した。ヘキサン/酢酸エチル（15:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、1.85g（91%）のケトン（ベンジルエーテル）を透明オイルとして得たが、これをジアステレオマーの混合物として使用した。
実施例４８
脱ベンジル化：ケトン（ベンジルエーテル）（1.85g,2.87mmol）をEtOH（50mL）に溶解し、Pd（OH）2（0.5g）を添加した。次いで、混合物をH2雰囲気下で攪拌した。3時間後、反応物をN2でパージし、次いでCHCl3（100mL）で洗浄するセライトのパッドを通して濾過した。ヘキサン中酢酸エチル（12%→15%）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィによって精製し、1.43g（90%）のジアステレオマーアルコールを透明オイルとして得た。Ｃ３ジアステレオマーは、ヘキサン中酢酸エチル（15%）で溶離するTLC-グレードSiO2でのフラッシュクロマトグラフィで分離した。
α異性体：IR（フィルム）：3447,1732,1695,1254,1156cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 4.24（1H,dd,J=3.6,5.8Hz）,3.83（1H,m）,3.53（1H,m）,3.06（1H,t,J=7.1Hz）,2.36（1H,dd,J=3.6,17.2Hz）,2.12（1H,dd,J=3.9,17.2Hz）,1.68（1H,t,J=5.4Hz）,1.54（2H,m）,1.41（1H,m）,1.37（9H,s）,1.31（1H,m）,1.16（3H,s）,1.02（3H,s）,0.99（3H,d,J=6.8Hz）,0.84（9H,s）,0.81（9H,s）,0.05（3H,s）,0.01（6H,s）,-0.01（3H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 217.7,171.3,80.57,73.5,73.1,63.0,53.4,26.8,41.2,32.1,28.1,28.0,26.0,25.9,23.1,19.8,18.1（オーバーラップ）,15.3,-4.0,-4.3（オーバーラップ）,-4.8.
β異性体：IR（フィルム）：3442,2857,1732,1700,1472,1368,1255cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 4.45（1H,t,J=5.3Hz）,3.86（1H,m）,3.52（2H,q,J=5.9Hz）,3.01（1H,m）,2.28（1H,dd,J=4.3,17.1Hz）,2.16（1H,dd,J=5.5,17.1Hz）,1.67（1H,t,J=5.6Hz）,1.56（2H,m）,1.44（1H,m）,1.37（9H,s）,1.34（1H,m）,1.13（3H,s）,0.97（3H,d,J=7.4Hz）,0.96（3H,s）,0.83（9H,s）,0.79（9H,s）,0.01（3H,s）,0.00（6H,s）,-0.07（3H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 217.1,171.2,80.6,73.5,72.1,62.9,63.9,46.4,41.2,32.0,28.1,28.0,26.0,25.9,21.5,19.5,18.2,18.1,15.8,-4.0,-4.3,-4.4,-4.7.
実施例４９
アルデヒド形成：DMSO（0.177mL,2.50mmol）を、CH2C12（15mL）のオキサリルクロライド（0.11mL,1.25mmol）の混合物に-78℃で添加した。１０分後、アルコール（0.531g,0.96mmol）をCH2Cl2（14L）に添加した。20分後、TEA（0.697mL,5.00mmol）を反応物に加え、次いで室温まで暖めた。反応物をH2O（50mL）に投入し、Et2O（3×50mL）で抽出した。有機物をH2O（30mL）で１回、ブライン（30mL）で１回洗浄して無水MgSO4で乾燥した。アルデヒドは、原料形態で使用した。
実施例５０
９Ｄを与えるためのWittigオレフィン化：NaHMDS（THF中1.0M溶液,1.54mL,1.54mmol）を、THF（20mL）中のメチルトリフェニルホスホニウムブロマイド（0.690g,1.92mmo1）の懸濁液に0℃で添加した。1時間後、原料アルデヒド（0.96mmol）をTHF（5mL）に添加した。0℃で15分後、H2O（0.1mL）を添加し、反応物をヘキサン（50mL）に投入した。これを、ヘキサン/Et2O（9:1,150mL）で溶離するシリカゲルプラグを通して濾過した。原料オレフィン９Ｄを、ヘキサン中酢酸エチル（5%）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィでさらに精製し、0.437g（2段階について83%）のオレフィン９Ｄを透明オイルとして得た。IR（フィルム）：2857,1732,1695,1472,1368,1255 1156cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 5.72（1H,m）,4.91（2H,m）,4.25（1H,dd,J=3.9,5.4Hz）,3.81（1H,m）,3.05（1H,m）,2.38（1H,dd,J=7.9,17.2Hz）,2.12（1H,dd,J=6.6,17.2Hz）,2.04（2H,q,J=7.5Hz）,1.47（1H,m）,1.39（9H,s）,1.34（1H,m）,1.20（3H,s）,1.00（3H,s）,3.00（3H,d,J=6.7Hz）,0.85（9H,s）,0.83（9H,s）,0.07（3H,s）,0.00（6H,s）,-0.05（3H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 217.5,172.1,137.9,114.0,80.4,74.0,73.0,53.0,46.9,41.3,35.1,29.0,28.1,26.0,25.9,22.8,20.2,18.2（オーバーラップ）,14.90,-4.1,-4.2,-4.3,-4.8.
実施例５１
ＴＢＳエステル１０Ｄ：オレフィン９Ｄ（0.420g,0.76mmol）を、CH2Cl2（15mL）に溶解し、2,6-ルチジン（1.33mL,11.4mmol）及びTBSOTf（1.32mL,5.73mmol）で続けて処理した。7時間後、反応物をEt2O（100mL）に投入し、0.2N HCL（25mL）、ブライン（20mL）で続けて洗浄し、無水MgSO4で乾燥させた。残留物を、ヘキサン/酢酸エチル（20:1）で迅速に溶離するシリカゲルの短いパッドでのフラッシュクロマトグラフィで精製し、TBSエステル１０Ｄを透明オイルとして得た。精製は迅速に行い、シリルエステルの加水分解を防止する必要があった。IR（フィルム）：2930,1721,1695,1472,1368,1254 1091cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 5.73（1H,m）,4.91（2H,m）,4.25（1H,dd,J=3.8,5.4Hz）,3.80（1H,q,J=6.8Hz）,3.06（1H,m）,2.50（1H,dd,J=3.7,17.3Hz）,2.19（1H,dd,J=5.7,17.3Hz）,2.04（2H,dd,J=7.6,15.3Hz）,1.49（1H,m）,1.36（1H,m）,1.21（3H,s）,1.00（3H,d,J=6.8Hz）,0.88（9H,s）,0.85（9H,s）,0.83（9H,s）,0.22（3H,s）,0.22（3H,s）,0.22（3H,s）,0.21（3H,s）,0.06（3H,s）,0.01（6H,s）,-0.05（3H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 217.3,172.3,138.5,114.4,74.5,73.0,53.2,46.9,41.8,35.1,29.0,26.0,25.7,25.5,22.8,20.4,18.2,18.1,17.5,14.9,-2.9,-4.0,-4.2,-4.3,-4.8,-4.9.
実施例５２
スズキ・カップリング：アセテート酸１３Ｄを、ヘキサン/酢酸エチル（7:1→4:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィで精製した。これを、ヘキサン/酢酸エチル（2:1）で溶離する調製TLCでさらに精製して、アセテート酸１３Ｄからヨウ化ビニル１２Ｄを除去した。酸の単離した収量は、0.297g（ボラン残基での90%精製に基づくと62%）であった。
実施例５３
アセテート酸１３Ｄの加水分解：アセテート１３Ｄ（0.220g,0.297mmol）を、MeOH/H2O（2:1,15mL）に溶解し、K2CO3（0.300g）を添加した。3時間後、反応物を飽和NH4Cl（）で希釈し、CHCl3（5×20mL）で抽出した。ヒドロキシ酸１４Ｄを、ヘキサン/酢酸エチル（4:1→2:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィで精製し、0.146g（70%）の精製したヒドロキシ酸１４Ｄを得た。IR（フィルム）：3510-2400,1712,1694,1471,1254 1093cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 6.96（1H,s）,6.66（1H,s）,5.55（1H,m）,5.38（1H,m）,4.38（1H,dd,J=3.4,6.1Hz）,4.19（1H,t,J=7.5Hz）,3.84（1H,m）,3.05（1H,t,J=7.0Hz）,2.72（3H,s）,2.49（1H,dd,J=3.2,16.4Hz）,2.42（2H,m）,2.33（1H,dd,J=6.2,16.4Hz）,2.07（2H,m）,2.02（3H,s）,1.33（4H,m）,1.19（3H,s）,1.14（3H,s）,1.06（3H,d,J=6.7Hz）,0.89（9H,s）,0.88（9H,s）,0.11（3H,s）,0.07（3H,s）,0.04（6H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 217.8,176.6,164.9,152.5,141.7,132.9,125.0,119.0,115.3,73.5,73.3,53.4,47.0,40.1,35.8,33.2,29.8,27.4,26.0,25.9,24.5,19.0,18.1,15.2,14.3,-4.0,-4.2,-4.2,-4.7.
実施例５４
マクロラクトニゼーション（macrolactonization）：DCC（0.150g,0.725mmol）、4-DMAP（0.078g,0.64mmol）及び4-DMAP・HCl（0.110g,0.696mmol）を、CHCl3O（80mL）に80℃で溶解した。この環流溶液に、シリンジポンプで、CHCl3中のヒドロキシ酸１４Ｄ（0.020g,0.029mmol）及びDMAP（0.010g）を20時間で添加した。シリンジ針を、コンデンサの基部に配置して適切な添加を維持した。20時間後、反応物を50℃に冷却し、AcOH（0.046mL,0.812mmol）を添加した。2時間後、反応物を室温まで冷却し、飽和NaHCO3（30mL）、ブライン（30mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥させた。ラクトン１５Ｄは、ヘキサン/酢酸エチル（20:1→15:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグで精製し、0.014g（75%）を得た。IR（フィルム）：2929,1741,1696,1254,1097cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 6.95（1H,s）,6.55（1H,s）,5.48（1H,m）,5.37（1H,m）,5.16（1H,d,J=9.8Hz）,4.17（1H,d,J=8.3Hz）,4.07（1H,t,J=7.2Hz）,3.02（1H,t,J=7.2Hz）,2.77（1H,m）,2.70（3H,s）,2.64（2H,m）,2.29（1H,m）,2.15（1H,m）,2.12（3H,s）,1.92（1H,m）,1.71（1H,m）,1.44（2H,m）,1.26（1H,m）,1.17（3H,s）,1.12（3H,s）,1.11（3H,d,J=7.0Hz）,0.91（9H,s）,0.85（9H,s）,0.09（3H,s）,0.06（6H,s）,-0.04（3H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 215.2,171.9,164.5,152.5,138.0,133.5,123.8,120.0,116.7,79.4,76.2,72.5,53.5,39.9,34.5,31.9,31.5,30.2,26.1,25.9,24.1,23.8,23.1,22.6,19.2,18.5,18.2,16.3,14.9,14.1,-3.7,-4.2,-4.7,-5.2.
実施例５５
デスメチルデスオキシエポチロンＡ（１６Ｄ）：THF（2.0mL）中のラクトン１５Ｄ（0.038g,0.056mmol）に、HF・ピリジン（1.0mL）を添加した。2時間後、反応物を飽和NaHCO3（30mL）中に投入し、CHCl3（5×20mL）で抽出した。有機物をNa2SO4で乾燥させた。原料ジオール１６Ｄを、ヘキサン/酢酸エチル（3:1→2:1）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグで精製し、0.023g（89%）を得た。IR（フィルム）：3501,2933,1734,1684,1290,1248,1045cm-1；1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 6.95（1H,s）,6.59（1H,s）,5.40（2H,m）,5.23（1H,dd,J=1.4,9.5Hz）,4.38（1H,bd,J=11.1Hz）,3.78（1H,t,J=6.9Hz）,3.59（1H,bs）,3.47（1H,s）,2.99（1H,q,J=7.0Hz）,2.68（3H,s）,2.66（1H,m）,2.46（1H,dd,J=11.4,14.4Hz）,2.26（1H,dd,J=2.2,14.4Hz）,2.22（1H,m）,2.06（3H,s）,1.96（1H,m）,1.49（3H,m）,1.35（3H,m）,1.30（3H,s）,1.15（3H,d,J=6.9Hz）,1.06（3H,s）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 221.5,170.3,165.1,151.8,139.1,132.8,125.2,119.1,115.5,78.4,72.5,7.08,53.8,42.7,39.6,32.3,31.8,28.3,26.8,24.8,23.1,19.0,17.2,16.0,11.1.
実施例５６
エポキシド形成：ジオール１６Ｄ（0.008g,0.017mmol）を、CH2Cl2（1.0mL）に溶解し、-60℃に冷却した。次いで、ジメチルジオキシラン（0.06M,0.570mL,0.0034mmol）を徐々に添加した。反応温度を、徐々に-25℃とした。-25℃で2時間後、揮発成分を反応物から-25℃において真空下で除去した。得られた残留物を、CH2C12中MeOH（1%→2%）で溶離するシリカゲルでのフラッシュクロマトグで精製し、cis-エポキシド３Ｄ及びジアステレオマーcis-エポキシドの1.6:1の混合物を得た（0.0058g,74%）。このジアステレオマーエポキシドを、ヘキサン/酢酸エチル（1:1）で溶離する調製TLCで分離し、溶離後、純粋なジアステレオマーを得た。
βエポキシド：IR（フィルム）：3458,2928,1737,1685,1456,1261,1150,1043,1014cm-1；1H NMR（CD2Cl2,500MHz）δ 7.01（1H,s）,6.56（1H,s）,5.35（1H,dd,J=2.3,9.6Hz）,4.30（1H,dd,J=3.0,5.7Hz）,3.85（1H,m）,3.81（1H,d,J=5.7Hz）,3.42（1H,d,J=2.0Hz）,3.03（1H,q,J=6.8Hz）,2.97（1H,m）,2.88（1H,m）,2.67（3H,s）,2.46（1H,dd,J=9.0,14.5Hz）,2.33（1H,dd,J=2.6,14.5Hz）,2.13（1H,dt,J=3.0,15.0Hz）,2.08（3H,s）,1.82（1H,m）,1.52（6H,m）,1.41（1H,m）,1.33（3H,s）,1.21（4H,m）,1.12（3H,d,J=7.0Hz）,1.06（3H,s）；13C NMR（CD2Cl2,125MHz）δ 221.9,170.6,165.6,152.2,138.3,120.2,116.6,77.3,73.4,69.9,57.7,55.3,43.7,39.7,32.6,32.0,29.8,27.2,25.7,24.7,22.5,19.2,19.0,15.6,15.6,11.5.
αエポキシド：IR（フィルム）：3439,2918,1735,1684,1455,1262,1148,1014cm-1；1H NMR（CD2Cl2,500MHz）δ 7.02（1H,s）,6.56（1H,s）,5.62（1H,d,J=8.1Hz）,4.33（1H,dd,J=2.7,11.0Hz）,3.85（1H,t,J=5.9Hz）,3.27（1H,d,J=5.3Hz）,3.11（1H,m）,3.07（1H,d,J=7.0Hz）,3.04（1H,m）,2.87（1H,m）,2.68（3H,s）,2.46（1H,dd,J=11.1,14.1Hz）,2.35（1H,dd,J=2.3,14.1Hz）,2.11（3H,s）,2.06（1H,ddd,J=1.9,4.5,15.1Hz）,1.87（1H,m）,1.52（6H,m）,1.38（2H,m）,1.29（3H,s）,1.08（3H,d,J=6.9Hz）,1.03（3H,s）;13C NMR（CD2Cl2,125MHz）δ 222.1,170.2,165.3,152.5,137.6,119.7,116.7,76.7,72.9,70.6,57.1,55.1,44.7,40.0,32.1,31.4,30.0,26.6,25.5,24.7,21.3,19.3,18.7,15.7,11.5.
実施例５７
Ｃ-１２ヒドロキシエポチロン類似物の実験データ
プロピルヒドロキシ化合物４３：1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 6.96（1H,s）,6.59（1H,s）,5.16-5.23（2H,バンド）,4.28（1H,m）,3.72（1H,m）,3.63（2H,t,J=6.3Hz）,3.17（1H,dq,J=2.2,0.5Hz）,3.02（1H,s）,2.70（3H,s）,2.65（2H,m）,2.46（1H,dd,J=10.9,14.6Hz）,2.29（2H,m）,1.98-2.09（6H,バンド）,1.60-1.91（6H,バンド）,1.35（3H,s）,1.33（3H,s）,1.18（3H,d,J=6.8Hz）,1.07（3H,s）,1.01（3H,d,J=7.1Hz）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 220.69,170.29,165.00,151.81,141.63,138.93,120.64,118.81,115.52,78.53,77.23,73.93,71.85,62.26,53.63,41.57,39.54,37.98,32.33,32.14,31.54,30.75,29.67,25.27,22.89,18.92,17.67,15.98,15.74,13.28;MS.e/m 536.2,計算535.29.
ヒドロキシメチル化合物４６：1H NMR（CDCl3,400MHz）δ 6.97（1H,s）,6.63（1H,s）,5.43（1H,dd,J=5.7,9.1Hz）,5.24（1H,d,J=7.4Hz）,4.31（1H,d,J=9.7Hz）,4.05（2H,dd,J=7.3,31.0Hz）,3.87（1H,bs）,3.69（1H,bs）,3.17（1H,dd,J=2.0,6.9Hz）,3.03（1H,s）,2.69（3H,s）,2.63（1H,m）,2.45（1H,dd,J=11.2,14.6Hz）,2.37（1H,m）,2.25（2H,m）,2.11（1H,m）,2.05（3H,s）,1.78（1H,m）,1.70（1H,m）,1.35（3H,s）,1.34（2H,m）,1.29（1H,m）,1.18（3H,d,J=6.8Hz）,1.06（3H,s）,1.00（3H,d,J=7.0Hz）;13C NMR（CDCl3,100MHz）δ 220.70,170.16,165.02,151.63,141.56,138.41,121.33,118.65,115.33,77.74,77.25,74.11,71.37,65.75,53.86,41.52,39.52,37.98,31.46,27.70,25.10,22.86,18.74,17.20,16.17,15.63,13.41.
議論
（-）-エポチロンＡの全合成
本発明により、エポチロンＡ（１）の調製方法が初めて知られるところとなった。炭素９から１１は、マクロールアクトンのアシル側鎖上の炭素３から８、及びアルキル側鎖上の炭素１２から１５のキラリティ包含領域を遮蔽する。立体化学情報の一つのセグメントから他への転送は起こりがたい。したがって、採用したアプローチでは、各セグメントの立体化学を個別に扱う。アシルセグメントにおいては、このストラテジーには“ポリプロピオネート様”網目構造の、相対的及び絶対的な両方の構造についての知識が要求される。アルキルセグメントにおいては、二つの可能性がある。一点としては、Ｃ１２−Ｃ１３エポキシドが、アシル関連構造との合併を経る構築に関与することが考えられる。その場合、炭素１５，１３及び１２の相対的な立体化学関係を保護する必要がある。エポキシドが、カップリングを経てアルキル側鎖部分から消去される可能性について考慮することが必要であった。このアプローチは、許容される立体制御により、マクロ閉環後エポキシドを導入可能な場合にのみ実行可能である。アシルフラグメントに必要な必須の立体化学情報のほとんどを有する化合物４の合成は、上記の通りである。この中間体を、新規な酸化的に誘発されるシクロプロパノピラン３のソルボリシス開裂によって調製する。さらに、上記には、炭素１５，１３及び１２における絶対的及び相対的な立体化学を表すアルキル側鎖カップリングパートナーを含む構造もまた記載されており、これは下記の代替方法とは異なる。
アルキル及びアシル領域の連結について考慮すると、幾つか可能な結合部位がある。ある箇所では、エステル（またはラクトン）結合の形成にアシル化の必要がある（実線矢印２参照）。さらにまた、Ｃ２−Ｃ３結合の形成には、アルドール構造が要求される。このアルドール段階の正確なタイミングを決定するには、検討を要する。Ｃ３−Ｃ９構造を延長する際、Ｃ−１５ヒドロキシルのアシル化が検討される。予期せぬことに、マクロリドは、新たなマクロアルドール化によって閉環されうることが判った（ケトアルデヒドマクロアルドール化の既知の点については、C.M.Hayward,et al.,J.Am.Chem.Soc.,1993,115,9345参照）。この選択肢は、図１（Ａ）において実線矢印３によって示される。
アシル及びアルキルフラグメントの併合の第一段階（矢印１参照）には、困難な合成上の障害が存在する。当業者には、炭素９と１０、または炭素１０と１１との間の結合形成を達成する試みにおいて、エポキシドがアルキルカップリングパートナーに包含される場合に著しい反力が働くことが認められている。これらの問題は、アシル及びアルキル反応物質で、これらの結合の両方に渡る併合のための適切な相補性を有するものを形成する際の予期せぬ困難性による。炭素１１及び１２間の最初の併合を試験した。このアプローチは、Ｏ-アルキルカップリングパートナーからのオキシラン結合の消失を必要とする。幾つかの置換をテストした後、カップリング反応第一段階に入るために一般化システム５及び６を試験した。前者の列は中間体４から誘導されたものである。一般化システム５に相当する有用な置換体のde novo合成が必要とされる（図１（Ｂ））。
４から１１へと進む段階をスキーム２に示す。後のＣ−７アルコール（化合物７参照）の保護に続き、ベンジルエーテルの開裂及びアルデヒド８の酸化を行った。末端アリール含有フラグメント１０へのアルデヒドの延長を、末端エーテル９（幾何異性体ＥとＺとの混合物）を経て行った。最後に、ソルボリシス・トラップ条件（solcolytic trapping conditions）下でジチアン結合を酸化的に開裂させ、特定のカップリング成分１１を生成した（G.Stork;K.Zhao,Tetrahedron Lett.1989,30,287）。
市販の（Ｒ）-グリシドール１２で、そのＴＨＰ誘導体１３を経てアルコール１４に転化されたものから出発するアルキルフラグメントの合成。テトラヒドロピランブロック基の開裂の後、示した通り、生成するアルコールはメチルケトン１５に円滑に転化する。後者に、ホスフィンオキシド１６を用いてエモンスタイプの同族化を行った。D.Meng et al.,J.Org.Chem.,1996,61,7998.このエモンスカップリングにより、オレフィン立体異性体のca.８：１混合物よりもトランス体１７が得られた。生成したアルキン１７を転化し、化合物１８を経てＺ-ヨードアルケン１９とした（図４（Ａ）参照）。E.J.Corey et al.,J.Am.Chem.Soc.,1985,107,713.
二つのフラグメントの重要な第一段階カップリングは、Ｂ-アルキルスズキ炭素−炭素結合構築によって達成される。N.Miyaura et al.,J.Am.Chem.Soc.,1989,111,314;N.Miyaura and A.Suzuki,Chem.Rev.,1995,95,2457.このように、前アシルフラグメント１１のヒドロホウ素化は、その９-ＢＢＮとの反応によって達成される。提示の条件下で、ヨードオレフィン１９に交差カップリングした混合ボランが、７１％の収率で２０を生成した。（図４（Ｂ））アセタールの開裂に際し、アルデヒド２１が得られた。
２１が得られることにより、Ｃ−１結合アセトキシ官能基のメチル基がマクロアルドール化において求核成分として作用するストラテジーを探求することができる。C.M.Hayward et al.,supra参照。脱プロトンは、ＴＨＦ中−７８℃にてカリウムヘキサメチルジシラジドを用いて達成される。予期せぬことに、これらの条件により高度に立体選択的なマクロアルドール化が起こり、結果として示した通りＣ−３（Ｓ）-アルコール２２が生成する。前駆体カリウムアルドラートをca.０℃でクエンチした際、２２が重量にしてより多いことが望ましい。アルドラートを低温でプロトン化すると、より多量のＣ−３（Ｒ）化合物が検出された。実際、幾つかの処理の下では、Ｃ−３（Ｒ）エピマーが支配的である。したがって、分析スケールのクエンチでは、非常に好ましいＣ−３（Ｒ）：Ｃ−３（Ｓ）比で生成させることが可能である。調製スケールの実験では、２２対Ｃ−３エピマーの比は６：１である。
化合物２２の供給が整ったことにより、デソキシエポチロン（２３）を得るという準目標が可能となった。この目的は、２２におけるトリフェニルシリル（ＴＰＳ）基の選択的除去、続いてＣ−３アルコールの選択的シリル化、Ｃ−５アルコールの酸化、及び最後に二つのシリルエーテルのフッ化物誘発開裂により達成される。
エポチロンの公知の結晶構造（Hofle et al.,supra）によりモデルの実験が可能となり、これはオキシランがマクロリドの凸周辺部にオキシランが配置されることを示唆している。提示の条件下で、ジメチルジオキシランを用いて２３の酸化を行った。この反応の主要生成物は、（-）エポチロンＡ（１）であり、その同定はｎｍｒ、赤外線、マススペクトル、旋光及び実際の目的物質とのクロマトグラフィー比較によって行われた。Hofle et al., supra.エポチロンＡ（１）に加え、少量のジエポキシド混合物並びに微量のジアステレオマーcisＣ１２−Ｃ１３モノエポキシド（≧２０：１）が検出された。
ここに開示した合成方法は、採集可能で実用的な量のエポチロンＡを供する。更に重要なのは、この方法は天然物それ自体からは不可能な同族体、類似体及び誘導体への経路を供する。
エポチロンＡの合成についての研究：アクリル立体化学関係の管理のためのヒドロピランテンプレートの使用
アルコキシセグメント（炭素９−１５）の鏡像異性的に純粋な等価体の合成をモデル実験として行った。鍵となる原理には、立体化学傾向を（Ｓ）−ラクトアルデヒド誘導体から新たなジヒドロピランに転写することが含まれる。後者は、チアゾール部分の添加及び分解により、所望のアクリルフラグメントを鏡像異性的に純粋な形態で与える。
エポチロンの様々な新規な構造特性によりその合成は困難である。チアゾール部分並びにcisエポキシド、及びジェミナルジメチル配置（geminal dimethyl grouping）の存在が、解決すべき鍵となる問題である。興味深い特徴は、分子の二つの官能ドメインを隔離するはたらきをする三つの連続したメチレン基の列である。このようなアキラルな“スペーサーエレメント”を包囲する必要が、連続的なキラリティ転写のための展望を実際に複雑化し、二つの立体化学的に寄与する構造を併合（merge）させるストラテジーを必要としているようである。本発明は、化合物４Ａ（図１４）の合成を提供するが、原則として、こうした構造がエポチロンそのもの及び関連の遮蔽物候補に転化可能であることを想定している。
合成中間体としての化合物４Ａの同定により、アクリル中間体の立体化学の制御に付随する問題の処理におけるヒドロピランマトリックスの力が示された。ジヒドロピロンの合成は、適当に活性なジエンとアルデヒド性ヘテロジエノフィルの全縮合環化（overall cyclocondensation）に要する量によって既に開示されている。Danishefsky,S.J.Aldrichimica Acta,1986,19,59.このようなマトリックス（図１３）の構成（参考：５Ａ＋６Ａ→７Ａ）においては、立体選択性に大きな誤差範囲のあることが認識される。さらにまた、ヒドロフランプラットフォームは、様々な立体特異的反応に有用である（図式７Ａ→８Ａ参照）。さらにまた、これらの反応の生成物は、開環スキームに従い、結果として定義した立体化学関係を有する非環式フラグメントを生成する（図式７Ａ→８Ａ参照）。Danishefsky,S.J.Chemtracts,1989,2,273.
本発明は、化合物４Ａの合成のためにこのような二つのルートの応用を提供する。ルート１は、絶対配置の問題の制御それ自体は含まず、既知のアルデヒド１０Ａから開始する。Shafiee,A.,et al.,J.Heterocyclic Chem.,1979,16,1563;Shafiee,A.;Shahocini,S.J.Heterocyclic Chem.,1989,26,1627.提示の通り、同族化はエナール１２Ａを供する。１２Ａと既知のジエンとの縮合環化（Danishefsky,S.J.;Hitahara,T.J.Am.Chem.Soc.,1974,96,7807）で、ＢＦ3触媒を用い、ジヒドロピロン１３Ａのラセミ体を生じる。Luche条件下での１３Ａの還元により化合物１４Ａが与えられる。Luche,J.-L.Am.Chem.Soc.,1978,100,2226.この時点で、酵素媒介反応速度分析によるグリカル誘導体の分析のため、既に紹介したリパーゼ方法論が利用可能であった。Berkowitz,D.B.及びDanishefsky,S.J.Tetrahedron Lett.,1991,32,5497;Berkowitz,D.B.;Danishefsky,S.J.;Schulte,G.K.J.Am.Chem.Soc.,1992,114,4518.このように、イソプロピルアセタートの存在下でカルビノール１４Ａにリパーゼ３０を作用させ、下記のWong（Hsu,S.-H.,et al.,Tetrahedron Lett.,1990,31,6403）の処方に従って、アセタート１５Ａを伴う鏡像異性的に関連した遊離のグリカール１６Ａを生成させた。化合物１５ＡをさらにＰＭＢ保護システム１７Ａに進めた。この箇所では、本出願人による既に示されている他の反応タイプを使用可能であった。したがって、ジメチルジオキシランとの１７Ａの反応（Danishefsky,S.J.;Bilodeau,M.T.Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1996,35,1381）により中間体（対応するグリカールエポキシドと思われる）を生成し、これは金属ペリオダートナトリウムでの処理によりギ酸アルデヒド１８Ａを生成した。１８Ａのアリル化によりカルビノール１９Ａが生成し、ギ酸エステルは見事に存続している（アリル化の確認のためには、Yamamoto,Y.;Asao,N.Chemy.Rev.1993,93,2207参照）。しかしながら、１９Ａはそのanti立体異性体（ここには示していない）に伴われている［４：１］。第二級アルコールのメシル化に続き、提示のように脱保護（１９Ａ→２０Ａ参照）及び環化を行い、化合物４Ａを得た。
この合成において、ジヒドロピロンの約半分のみが反応速度解析によって保証された。一方、理論上は、検討した合成戦略には、エポチロンそのものを得るために１５Ａの各鏡像異性体の使用を予定しているものあり、全鏡像異性体を統合できるように別のルートが求められていた。このルートの論理は、“ダミー”の不斉中心のキラリティを、既に確立された縮合環化反応における可変のジアステレオ選択の原則に従って、併合ピランに伝達することである（Danishefsky,supra）。提示のジエンとラクトアルデヒド誘導体２１Ａの縮合環化（Heathcock,C.H.,et al.,J.Org.Chem.,1980,45,3846）を、表見的なキレート化制御の下で行い、２２Ａを得た。側鎖のエーテルが、提示のように（２２Ａ→２３Ａ→２４Ａ→２５Ａ）メチルケトンに転化可能であった。最後に、ホスフィンオキシド２６Ａとの２５Ａのエモンス縮合物（例えばLythgoe,B.,et al.,.Tetrahedron Lett.,1975,3863;Toh,H.T.;Okamura,W.H.J.Org.Chem.,1983,48,1414;Baggiolini,E.G.,et al.,J.Org.Chem.,1986,51,3098参照）を、図１５に示したようにホスフィンオキシド２６Ａに変形（Toh,supraに記載の操作に従う）し、２７Ａを生成させた（既知の２-メチル-４-クロロメチルチアゾール（Marzoni,G.J.Heterocyclic Chem.,1986,23,577参照））。直線状の保護基調整を既出の１７Ａに行った。このルートは、続いて誘導される立体中心に鏡像選択を与えた後、平面形態で徐々に併合される炭素中心による立体化学インプリンティングの概念を示している。エポチロンの立体化学要素を保証するためのジヒドロピロンに基づく論理の使用並びに、マクロ環化のため可能な戦略の証明は、以下の項で述べる。
エポチロンＡの合成：アシル領域の立体制御配置及びマクロ環化のモデル
環形成オレフィン置換を、エポチロンＡに関連する１６員環の同類体の構築に用いた。アシルフラグメントのＣ３−Ｃ９セクターの立体特異的合成を、新規なシクロプロパナート化グリカールの酸化的開環を利用して達成した。
前項に開示したのは、炭素１０から２１を含むエポチロン（１）の“アルコキシ”セグメントの合成（図７，化合物２Ｂ参照）である。このセクションは、アシルセクション炭素３から９の立体化学情報をコード化する他のフラグメントの合成である。正式な標的３Ｂのアルデヒド中心（Ｃ3）が、分子間または分子内のいずれかの手段により化合物２Ｂから誘導される求核構造（図７に示した通り、２炭素挿入物の配置を要する）との結合部位として作用することが想定された。こうした状況では、次第にＣ3で必要とされる第二級アルコール中心の立体化学は、個別に扱う必要がある。システム３Ｂの興味深い特徴の一つに、炭素４（エポチロンナンバリング）における双性メチル基の存在がある。適切な構成分解（diassembly）の後、再度、システム３Ｂの存立可能な等価物に相当する環状マトリックスの構成にジヒドロピランストラテジーを使用する。ｇｅｍ-ジメチル含有の環式または非環式フラグメントの合成を含むジヒドロピランパラダイムが詳説されることを期待した。この目的のための特定の反応タイプを、４Ｂ→５Ｂの変換（図７参照）の表題の下に一般化する。求電子体Ｅの性質についての言及は避ける。したがって、還元が構造タイプ５Ｂから意図する一般化した標的３Ｂに進行するか否かという疑問は提示されていない。
開始段階は、ジエン-アルデヒド縮合環化反応（図８；Danishefsky,S.J.,Aldrichmica Acta,1986,19,59）の立体化学的に調整可能バージョンからなり、この例は、容易に入手可能な鏡像異性的に同族のアルデヒド６Ｂと既に得たジエン７Ｂとの併合におけるキレート化制御を利用している。Danishefsky,S.J.et al;J.Am.Chem.Soc.,1979,101,7001.実際、先例の通り、四塩化チタンの作用の下では化合物８Ｂとして示した単一の異性体が生成した。通常の立体化学的に確かな方法（Danishefsky,S.J.;Chemtracts Org.Chem.1989,2,273.）では、ジヒドロピロンが対応のグリカール９Ｂに還元される。この時点で、グリカール９Ｂをシクロプロパン１０Ｂに転化するために、直接シモンズ−スミス反応を利用可能であった。Weinstein,S.;Sonnenberg,J.J.Am.Chem.Soc.,1961,83,3235;Dauben,W.G.;Berezin,G.H.J.AmChem.Soc.,1963,85,468;Furukawa,J.,et al.,Tetrahedron,1968,24,53;選択的例については、Soekman,R.K.Jr.:Charette,A.B.;Asberom,T.;Johnston,B.H.J.Am.Chem.Soc.,1991,113,5337;Timmers,C.M.;Leeuwenurgh,M.A.;Verheijen,J.C.;Van der Marel,G.A.;Van Boom,J.H.Tetrajedron:Asymmetry,1996,7,49参照。この化合物は、実際、ある意味ではＣ-グリコシドのシクロプロパノバージョンに相当する点で興味深い構造である。同時に、シクロプロパンは、シクロプロピルカルビニルアルコールシステムの一部であり、再編成の可能性が付随している。Wenkert,E.,et al.,J.Amer.Chem.Soc.,1970,92,7428.双性メチル基を生成させる方法により、シクロプロパンのＣ-グリコシド結合の開裂を目的とし、結果としてＣ−３に所望のアルデヒド酸化状態を有する溶媒誘導グリコシドを生成した（図７、仮定した変換４Ｂ→５Ｂ参照）。初期の研究では、計画した反応（すなわちＥ+＝Ｈ+）の非酸化バージョンは実用に応用不可能であった。その代わり、環拡張システム１１に寄与可能なことが明白な生成物が確認された。例えば、１０Ｂに酸性メタノールを作用させると、おそらくはオキソカルベニウムイオン１１Ｂへのメタノールの付加により、七員環混合アセタールのエピマー混合物が生成した。
しかしながら、シクロプロパン開環の所望の意図は、環状酸素の影響下で、化合物１０ＢをＮ-イソスクシンイミドを用いた酸化的開環に処すことにより達成される（１０Ｂから１２Ｂへの変換と概念的に類似であるシクロプロパンのＨｇ（II）誘発加溶媒分解の参考のためには、Collum,D.B.;Still,W.C.;Mohamadi,F.J.Amer.Chem.Soc.,1986,108,2094;Collum,D.B.;Mohamadi,F.;hallock,J.S.;J.Amer.Chem.Soc.,1983,105,6882.参照）。この先例に従い、この変換は図８に示したものよりも効率が悪いことが判明しているが、シクロプロパン１０ＢのＨｇ（II）誘発加溶媒分解を行った。メチルグリコシド１２Ｂとして得られた中間体ヨードメチル化合物に、トリ-ｎ-ブチルチンヒドリドを作用させると双性メチル基を有するピラン１３Ｂを生成した。このアルコールの保護（１３Ｂ→１４Ｂ参照）、これに続くグリコシド結合の開裂により、仮想アルデヒド３Ｂの官能基バージョンとして作用しうるアクリルジチアン誘導体を生成した。エポチロン及び同族体に到達する２Ｂ及び３Ｂに関連のフラグメントの混合に可能な方法を試験した。Schrock（Schrock,R.R.et al.,J.Amer.Chem.Soc.,1990,112,3875）及びGrubbs（Schwab,P.et al.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1995,34,2039;Grubbs,R.H.;Miller,S.J.Fu,G.C.Acc.Chem.Res.,1995,28,446;Schmalz,H.-G.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1995,34,1833）の研究及びHoveydaの開示（Houri,A.F.,et al.,J.Am.Chem.Soc.,1995,117,2943）では、複合ラクタムが、置換反応におけるモリブデン媒介分子間オレフィンによる鍵となる分子内オレフィンマクロ環化段階において構築されている（Schrock,supra;Schwab,supra）が、これらを考慮してこのようなアプローチを現実化する可能性が検討されている（閉環置換の他の例としては、Martin,S.F.;Chen,H.-J.;Coutney,A.K.;Lia,Y.;Patzel,M.;Ramser,M N.;Wagman,A.S.Tetrahedron,1996,52,7251;Furstner,A.;Langemann,K.J.Org.Chem.,1996,61,3942参照）。
この問題は、まず、二つのモデルω不飽和酸１６Ｂ及び１７Ｂで、アクリラートアルコール２Ｂに使用してそれぞれエステル１８Ｂ及び１９Ｂを生成させたものを用いて試験した（図９参照）。これらの化合物に、実際に、提示条件で所望の方法によりオレフィン置換マクロ環化を行った。置換体１８Ｂの場合は化合物群２０ＢがＥ-及びＺ-立体異性体の混合物［ca.１：１］として得られた。２０Ｂのジイミド還元を行い、同族体２Ｂを得た。オレフィン置換反応はまた、エポチロンＡのＣ４に該当する配置の双性メチル基を有する化合物１９Ｂに拡張された。オレフィン置換が起き、この場合は奇妙なことにオレフィン２１Ｂを単一の実体として７０％の収量（立体化学試験ではＺ体を示した）で生成した。ほぼ同様の結果がSchrockのモリブデンアルキリデン置換触媒の使用によって得られた。
したがって、上記のように、オレフィン置換は、標的システムの要求されるエポキシとチアゾリル官能基の両方を含む１６員環を構築する試みに処すことができる。エポチロンに到達するために必要とされる官能性を完全に有するセコシステムから実現可能なオレフィン置換反応で、これまでに成功したものはない。マクロ環化に適切な、適当な官能基制約パターンを見定める際に、これらの否定的な結果が失敗として反映されることはほぼ無いであろう。
エポチロンＢの全合成：スズキカップリング法の拡張
本発明は、エポチロンＡ（１）の全合成を初めて与える。D.Meng et al.,J.Org.Chem,1996,61,7998 P.Bertinato,et al.,J.Org.Chem,1996,61,8000.A.Balog,et al.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1996,35,2801.D.Meng,et al.,J.Amer.Chem.Soc.,1997,119,10073.（続くエポチロンＡの全合成については、Z.Yang,et al.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1997,36,166参照）この合成は、２，２-ジメチルジオキシランを用いた非常に立体選択的なエポキシ化を施したＺ-デソキシ化合物（２３）を経て、注意深く決定された条件下で行われ、所望のβ-エポキシドを生成する。２３を生成するSorangium属の同様のミクソバクテリアが、エポチロンＢ（２）をも生成する。後者は、抗真菌スクリーン及び細胞毒性／細胞核壊変アッセイのいずれにおいても２３よりも強力な剤である。G.Hofle,et al.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1996,35,1567;D.M.Bollag,et al.,Cancer Res.1995,55,2325.
最初の目的構造はデソキシエポチロンＢ（２）またはその適当な誘導体であった。このような化合物の利用により、Ｃ１２−Ｃ１３二重結合のエポキシ化に伴うレギオ選択性及び立体選択性の研究が可能となるであろう。鍵となる点は、立体選択性に大きな誤差範囲のある２ＣのＺ-トリ-置換オレフィン前駆体の合成の問題であった。ジ置換システムへの合成ルート（A.Balog,et al.,Agnew.Chem.Int.Ed.Engl.,1996,35,2801）では、９-ＢＢＮ（図４（Ｂ））を用いた化合物１１（図１（Ａ））のヒドロホウ素化により誘導されるボラン７Ｃを用いたＺ-ビニルヨーダイド１９（図４（Ａ））のパラジウム媒介Ｂ-アルキルスズキカップリング（N.Miyaura,et al.,J.Am.Chem.Soc.1989,111,314.（確認のためには、N.Miyaura,A.Suzuki,Chem.Rev.1995,95,2457参照）を利用した。
予備的なアプローチは、２Ｃと同様の考え方を適用してＺ-トリ-置換オレフィン（図１７）を目指した。二つの重要な点を提示しなければならない。第一に、ヨウ化ビニル８Ｃ、１９のトリ置換同族体を調製する方法を考案する必要があるであろうこと。この目的が達成可能であれば、問うべきは、Ｚ-トリ-置換オレフィンを目指して必要とされるＢ-アルキルスズキカップリング反応を実行するの可能性である。分子間レベルで、ヨウ化ビニルがβ-ヨードエノエート（またはβ-ヨードエノン）形式では無い場合の“Ｂ-アルキル”（“Ｂ-アルケニル”システムに対抗して）を用いたこのような変換の実現は優位性が認められていない。（ここに示した研究とは、細部に重大な相違点がある幾つかのよく似た類似体については、N.Miyaura,et al.,Bull.Chem.Soc.Jpn.1982,55,2221;M.Ohba,et al.,Tetrahedron Lett.,1995,36,6101;C.R.Johnson,M.P.Braun,J.Am.Chem.Soc.1993,115,11014.参照）
化合物８Ｃの合成を図１６に示す。該ルートは、９Ｃの触媒非対称アリル化（G.E.Keck,et al.,J.Am.Chem.Soc.,1993,115,8467）により調製されたオレフィン１０Ｃから出発し、続いてアセチル化を行った。１０Ｃの部位選択的ジヒドロキシル化に次ぐグリコールの開環により、不安定なアルデヒド１１Ｃを生成した。驚くべきことに、後者はホスホラン１２Ｃと反応し（J.Chen,et al.,Tetrahedron Lett.,1994,35,2827）、全体でも少量ではあるがＺ-ヨウ化物８Ｃを生成した。ボラン７Ｃが、記載したとおり１１から生成した。化合物７Ｃとヨウ化物８Ｃ（図１６）のカップリングの実行により、純粋なＺ-オレフィン１３Ｃを調製することができた。
化合物１３Ｃを得たところで、２３の合成に関連して利用したものと同様のプロトコルが使用可能であった。（Balog,et al.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1996,35,2801）したがって、アセタール結合の開裂からアルデヒド１４Ｃが生じ、これがマクロアルドール化に処されているのである（図１７）。最も高い収率は、Ｃ３ヒドロキシル基を一見平衡させる条件下で反応を行うことにより得られた。３Ｒ異性体を、その誘導されたＣ３-ケトンの還元（化合物１５Ｃ参照）を経て必要とされる３Ｓエピマーに転化させた。エポチロンＡについて記載されたような天然の３Ｓ配座を導く反応速度論的に制御したアルドール縮合を達成した。しかしながら、３Ｓエピマーに到達した全収量では、このプロトコルを用いた方が優れている。Ｃ−５トリフェニルシリルエーテルの開裂に次いで、連続的なＣ３ヒドロキシルのモノ保護（ｔ-ブチルジメチルシリル）、Ｃ５での酸化（化合物１６Ｃ参照）、及び最後にシリル保護基の開裂によりＣ３及びＣ７アルコールを生じた（化合物２Ｃ参照）。
Ｚ-デソキシエポチロンＢ（２Ｃ）が、提示の条件下で非常に速い、実質的にレギオ選択的及び立体選択的なエポキシ化を経ており（正確な比較は行っていないが、２Ｃのエポキシ化は２３の場合よりもより迅速でレギオ選択的のようである）、本物の試料と同様のエポチロンＢ（２）（1Ｈ ＮＭＲ、マススペクトル、ＩＲ、［α］D）を与えることが判明した（A.Balog,et al.,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,1996,35,2801）。このように、本発明は、エポチロンＢの全合成を初めて開示する。本方法の重要な特徴には、トリ置換ビニルビニルヨーダイド８Ｃのエナンチオ選択的合成、化学式７Ｃ及び８Ｃのパラジウム媒介立体特異的カップリングからの化合物１３の生成（この形態では事実上前例のない反応）、及びＺ-デソキシエポチロンＢ（２Ｃ）が適当な条件下でレギオ選択的及び立体選択的なエポキシ化に従うことが含まれる。
デスメチルエポチロンＡ
エポチロンＡ及びＢの全合成は既に開示されている。Balog,A.,等,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1996,35,2801;Nicolaou,K.C.,等,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1997,36,166;Nicolaou,K.C.,等,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1997,36,525;Schinzer,D.,等,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1997,36,523;Su,D.-S.,等,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.1997,36,757。エポチロンの抗腫瘍作用は、タキソール（Taxol（商標））に極めて類似している。Hofle,G.,等,H.Angew.Chem.,Int.Rd.Engl.1996,35,1567。タキソール（パクリタキセル）は、臨床的に承認された薬であるが、その製剤は未だに困難である。さらに、タキソールは多剤耐性（ＭＤＲ）表現型を含んでいる。従って、タキソールと同様の作用機構を有し、より優れた治療仮性が予想される新規な薬剤が真剣に研究されている。Bollag,D.M.,等,Cancer Res.1995,55,2325。
本発明は、エポチロンＡ及びＢより有効であり、なおかつ合成が容易なエポチロン類似物を提供する。天然物の合成は、予備的な生物学的評価のためには十分な材料を提供するが、全ての開発に十分な量は生成しない。構造変化が合成の複雑さのかなり緩和をもたらす特定の領域は、ポリプロピレンドメインからのＣ８メチル基の削除であろう（標的系３Ｄ参照）。このＣ８キラル中心を取り扱う必要性は、これまで開示されたエポチロンの合成の全てを複雑化している。Ｃ８メチル基の削除は、初期のジエン−アルデヒド環化縮合経路に関する合成手法において大きな変化を要求する。Danishefsky,S.J.Chemtracts 1989,2,273;Meng,D.,等,J.Org.Chem.1996,61,7998;Bertinato,P.,等,J.Org.Chem.1996,61,8000。
図２０に示すように、４Ｄの非対称的クロチル化（87% ee）（Brown,H.C.;Bhat,K.S>J.Am.Chem.Soc.1986,108,5919）、それに続く保護がＴＢＳエーテル５Ｄを導く。二重結合は、容易に切断してアルデヒド６Ｄを与える。アルデヒドはt-ブチルイソブチリルアセテートから誘導されたジアニオンとカップリングして７Ｄを与える。Ｃ5S（７Ｄ）：Ｃ5R（７Ｄ）化合物の比率（図示せず）は約１０：１である。Weiler-タイプのβ-ケトエステルジアニオン化学（Weiler,L.J.Am.Chem.Soc.1970,92,6702;Weiler,L.;Huckin,S.N.J.Am.Chem.Soc.1974,96,1082）が、イソブチリル基内で行えることは、より簡便な合成のための代替的方法を示唆している。先の文献に従う７ＤのＣ3ケトンの直接還元（Evans,D.A.,等,J.Org.Chem.1991,56,741）、それに続くＣ3ヒドロキシルの選択的シリル化は、５０％の収率で、Ｃ3R異性体（図示せず）に対する所望のＣ3S（化合物８Ｄ参照）の比率を１０：１で与える。水素化ホウ素ナトリウムでの還元では、Ｃ3エピマーの約１：１混合物を与える。脱ベンジル化で生成されるカルビノールは、酸化されてアルデヒドとなり、次いで、単純なWitting反応を通してメチレン化されて、オレフィン９Ｄを与える。この化合物のＴＢＳＯＴｆでの処理はエステル１０Ｄを与え、これは、ヨウ化ビニル１２Ｄとのスズキ・カップリングに直接用いられる。
１０Ｄの９-ＢＢＮでのハイドロボレーションは、中間体１１Ｄを生成し、これは、ヨウ化ビニル１２Ｄとのカップリング、及びその場でのＴＢＳエステルの開裂に際して、１３Ｄ（図２１）を導く。脱アセチル化の後、ヒドロキシ酸１４Ｄが入手できる。この化合物のマクロラクトニゼーション（Boden,E.P.;Keck,G.E.J.Org.Chem.1985,50,2394）は、１５Ｄを生成し、これは、脱シリル化の後、Ｃ8-デスメチルデスオキシエポチロン（１６Ｄ）を与える。最後に、この化合物のジメチルジオキシランによるエポキシ化により、目的構造３Ｄが生成される。エポキシ化の立体選択性は、デスオキシエポチロンＡのエポキシ化が＞２０：１の立体選択性であることからは、驚くほど低い（１．５：１）。Ｃ8メチル基の削除は、１６Ｄの立体配座的寄与を変化させ、ジメチルジオキシランによるエポキシ化のβ-選択性を低下させることを示している。ジメチルジオキシランによるエポキシ化の立体選択性に対するＣ8メチルの効果と生物学的活性の劇的な低下とが関係しているか否かは不明である。
化合物３Ｄ及び１６Ｄが、ＧＴＰの不存在下での細胞培地及びチューブリンのアセンブリにおける細胞毒性について試験された。微小管タンパク質（ＭＴＰ）は、ウシ脳から２サイクルの温度依存性アセンブリ及びディスアセンブリによって精製した。Weisenberg,R.C.Science 1972,177,1104。コントロールアセンブリ実験では、ＭＴＰ（1mg/mL）を、0.1M MES（2-（N-モルホリノ）エタンスルホン酸）、1mM EGTA、0.5mM MgCl2、1mM GTP、及び3Mグリセロールを含みｐＨ６．６のアセンブリバッファで希釈した。アセンブリは、３５℃で４０分間３５０ｎｍにおいて分光学的に監視し、濁り度の変化をポリマー量として測定した。Gaskin,F.;Cantor,C.R.;Shelanksi,M.L.J.Mol.Biol.1974,89,737。薬剤は、ＧＴＰ無しで、１０μＭの濃度で試験した。微小管形成は、電子顕微鏡で確認した。ＧＴＰまたは薬剤の存在下での微小管の安定性を測定するため、反応温度を４℃に変えた後、４０分間濁り度を測定した。
細胞毒性実験により、８−デスメチル類における極端な活性低下が示された。化合物３Ｄ及び１６Ｄは、それらに対応するエポチロンＡより活性が約２００倍低くなっていた（表１参照）。以前のＣ3及びＣ5両方でのＳＡＲ発見を、ここに開示する発見と結びつけて再考すると、エポチロンのポリプロピレンセクターは、生物学的機能の特に感受性の部分と考えられる。Su,D.-S.,等,Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1997,36,757;Meng,D.,等,J.Am.Cehm.Soc.1997,119。
0004579351.tif 000060
生物学的結果
以下の表では、モデル系１は、デスオキシエポチロンである。モデル系２は、下記の構造を有する。
0004579351.tif 000061
但し、Ｒ’及びＲ”はＨである。
モデル系３は、下記の構造を有する。
0004579351.tif 000062
0004579351.tif 000063
0004579351.tif 000064
表２に示したように、ＣＣＲＦ-ＣＥＭは親細胞系である。ＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬ（ＭＤＲ細胞系）は、タキソールに１１４３倍の耐性である。ＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＭ（トポＩＩ突然変異細胞系）は、タキソールに１．３倍の耐性でしかない。
相対的能力の点では、合成エポチロンは天然エポチロンＡとほぼ同様である。ＣＣＲＦ-ＣＥＭ細胞について、その順序は以下の通り：
タキソール≒エポチロンＡ＞デスオキシエポチロンＡ＞＞試験類似物＞＞モデル系１。
ＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬについて、相対的能力の順序は以下の通り：
デスオキシエポチロンＡ≧エポチロンＡ＞＞タキソール＞試験類似物＞モデル系１。
ＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＭについて、相対的能力の順序は：
タキソール≒エポチロンＡ＞デスオキシエポチロンＡ＞＞モデル系１＞試験類似物。
ＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＭ細胞は、ある種のエポチロン化合物に側副的感受性であると結論される。
0004579351.tif 000065
表３に関して、実験はＤＣ-３Ｆ（親ハムスター肺細胞）、ＤＣ-３Ｆ／ＡＤＩＩ（中程度の多剤耐性（ＭＤＲ）細胞）及びＤＣ-３Ｆ／ＡＤＸ（非常に強いＭＤＲ細胞）の細胞系を用いて行った。
化合物の相対的能力は以下の通り：
ＤＣ-３Ｆ：アクチノマイシンＤ＞ビンブラスチン≧エポチロンＡ（0.0036μM）＞デスオキシエポチロン＞ＶＰ-１６＞タキソール（0.09μM）＞モデル系１及び試験類似物
ＤＣ-３Ｆ／ＡＤＸ：デスオキシエポチロン≧エポチロンＡ（0.06μM）＞アクチノマイシンＤ＞モデル系１＞ビンブラスチン＞試験類似物＞ビアブラスチン＞タキソール（32.0μM）
ＤＣ-３Ｆ／ＡＤＸ細胞（アクチノマイシンＤに８３７９倍の耐性）は、タキソール、ＶＰ-１６、ビンブラスチン及びアクチノマイシンＤに＞３３８倍（約８３７９倍）耐性だが、エポチロン化合物には＜２０倍耐性である。
全体的に、これらの毛かはっＣＲＦ-ＣＥＭ細胞の結果と類似している。
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要するに、エポチロン及びタキソールは、微小管の重合を安定化させることによる類似の作用方法を有している。しかし、エポチロン及びタキソールは異なる新規な化学構造を有している。
ＭＤＲ細胞は、タキソール（CCRF-CEM/VBL細胞）に１５００倍の耐性であるが、エポチロンＡは、わずか８倍の耐性しか示さず、エポチロンＢは５倍の耐性しか示さない。ＣＣＲＥ-ＣＥＭ細胞について、ＥｐｏＢはＥｐｏＡより６倍の能力、タキソールより１０倍の能力を有する。デスオキシエポチロンＢ及び化合物＃２４は、タキソールより３−４倍低い能力しか持たないが、化合物＃２７はタキソールより＞２倍の能力を有する。結局、タキソール及びビンブラスチンは、ＣＣＲＦ-ＣＥＭ腫瘍細胞に拮抗作用を示すが、ＥｐｏＢ＋ビンブラスチンの組み合わせは相乗作用を示す。
ヒト白血病細胞に対するin vitroでの相対的細胞毒性は、次のような順序である：
ＣＣＲＦ-ＣＥＭ白血病細胞
ＥｐｏＢ（IC50=0.00035μM;相対値=1）＞ＶＢＬ（0.00063;1/1.8）＞＃２７（0.0010;1/2.9）＞タキソール（0.0021;1/6）＞ＥｐｏＡ（0.0027;1/7.7）＞＃２４（0.0078;1/22.3）＞＃１０（0.0095;1/27.1）＞＃２５（0.021;1/60）＞＃１（0.022;1/62.8）＞＃２０（0.030;1/85.7）＞＃６（0.052;1/149）＞＃２６（0.055;1/157）＞＃１７（0.090;1/257）＞ＶＰ-１６（0.29;1/8.29）＞＃１５（0.44;1/1257）＞＃１９（0.96;1/2943）。
ＣＣＲＦ-ＣＥＭ／ＶＢＬ ＭＤＲ白血病細胞
ＥｐｏＢ（IC50=0.0021;1/6*［1］**）＞＃２７（0.0072;1/20.6）＞＃１（0.012;1/34.3）＞＃１０（0.017;1/48.6）＞ＥｐｏＡ（0.020;1/57.1［1/9.5］）＞＃６（0.035）＞＃２０（0.049）＞＃２４（0.053）＞＃２５（0.077）＞＃２２（0.146）＞＃２６（0.197）＞＃１７（0.254）＞＃１１（0.262）＞ＶＢＬ（0.332;1/948.6［1/158.1］）＞タキソール（4.14;1/11828［1/1971.4］）＞ＶＰ-１６（10.33;1/29514［1/4919］）。
*括弧内の能力は、CCRF-CEM細胞におけるEpo Bに対するもの。
**角括弧内の能力は、CCRF-CEM/VBL MDR細胞におけるEpo Bに対するもの。
表９に示すように、ＭＸ-１異種移植片を有するヌードマウスを、デスオキシエポチロンＢ（35mg/kg、死亡率0/10）、タキソール（5mg/kg、死亡率2/10；10mg/kg、死亡率2/6）及びアドリアマイシン（2mg/kg、死亡率1/10；3mg/kg、死亡率4/6）で、８日から開始して１日おきに５投与するi.p.処理することは、極めて良好な治療効果をもたらし、35mg/kgのデスオキシエポチロンＢ、5mg/kgのタキソール及び2mg/kgのアドリアマイシンについて、腫瘍容積の縮小は、各々９８％、５３％及び２８％であった。デスオキシエポチロン処理群について、１０匹中３匹のマウスに、１８日目（day 18）において腫瘍が検出不能となった（図４８参照）。
１８日目に開始するデスオキシエポチロンＢ（40mg/kg;i.p.）での延長された処理で、１日おきに５投与以上すると、１０匹中５匹のマウスで、２８日目（又は３１日目）に腫瘍の消失をもたらした。表１０参照。これに対して、５投与より多くの5mg/kgでのタキソールの延長された処理では、腫瘍は引き続き中程度の速度で成長を続け、１０匹中２匹のマウスが毒性で死亡した。
６匹のマウスに対して４日に渡り毎日デスオキシエポチロンＢのｉ．ｐ．投与（25mg/kg、以前の実験で示したように、治療に極めて有効な量）をする毒性試験は、平均体重の低下をもたらさなかった。（表１３；図４７）。それに対して、８匹のマウスに対する４日間のエポチロンＢ（0.6mg/kg、i.p.）では、平均体重の３３％の低下を引き起こし、８匹全てのマウスが、５から７日目の間に毒性のため死亡した。
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表１５から明らかなように、デスオキシエポチロンＢは、ＭＤＲ腫瘍異種移植片（ヒト哺乳類アデノガンMCF-7/Adr異種移植片）に対して、タキソール、ビンブラスチン、アドリアマイシン及びカンプトテシンより有意に優れた作用をする。この薬物耐性腫瘍は非常に攻撃的に成長し、タキソール及びアドリアマイシンの半致死量に耐性を持つ。タキソールの6mg/kg i.p. Q2D×5は、腫瘍サイズを１０％しか縮小させず、アドリアマイシンは、17日目に２２％縮小させるだけである。一方、デスオキシエポチロンＢは、35mg/kgで、17日目に腫瘍サイズを６６％縮小させるが、体重減少や明らかな毒性は示さない。タキソール（12mg/kg）またはアドリアマイシン（3mg/kg）というＬＤ50量に比較しても、デスオキシエポチロンＢの方が有効である。それに比較して、カンプトテシンは、1.5及び3.0mg/kgで、腫瘍サイズを各々２８％及び５７％縮小した。結局、現在使用されている４つの重要な抗腫瘍薬、即ち、タキソール、アドリアマイシン、ビンブラスチン及びカンプトテシンに比較して、デスオキシエポチロンＢは、ＭＤＲ異種移植片に対する優れた化学治療効果を示した。
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【図１】
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【図２】
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【図３（Ａ）】
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【図３（Ｂ）】
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【図３（Ｃ）】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２（Ａ）】
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【図４２（Ｂ）】
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【図４２（Ｃ）】
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【図４３（Ａ）】
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【図４３（Ｂ）】
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【図４４（Ａ）】
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【図４４（Ｂ）】
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【図４５（Ａ）】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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