(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化合物：
Ｐ1−（チミジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4Ｔ）、
Ｐ1−（イノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4Ｉ）、
Ｐ1−（４−チオウリジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4（４−ＳＨ−Ｕ））、
Ｐ1−（シトシンβ−Ｄ−アラビノフラノシド５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4araＣ）、
Ｐ1−（ウリジン５′−）Ｐ4−（キサントシン５′−）四リン酸（ＵＰ4Ｘ）、
Ｐ1−（２′−デオキシウリジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4dＵ）、
Ｐ1−（３′−アジド−３′−デオキシチミジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4（ＡＺＴ））、
Ｐ1−（２′−デオキシグアノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4dＧ）、
Ｐ1−（２′−デオキシイノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4dＩ）および
Ｐ1−（２′−デオキシシチジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4dＣ）
から成る群より選ばれた化合物又はそれらの医薬上に許容される塩。
【請求項２】
前記化合物がＵＰ4dＣである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
哺乳類における慢性閉塞性肺疾患の治療用の医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩の慢性閉塞性肺疾患治療有効量を含んで成る医薬組成物。
【請求項４】
哺乳類における静脈洞炎、中耳炎または鼻涙管閉塞症の治療用の医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩の粘膜分泌液清浄化有効量を含んで成る医薬組成物。
【請求項５】
哺乳類におけるドライアイの治療用の医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩のドライアイ治療有効量を含んで成る医薬組成物。
【請求項６】
哺乳類における網膜剥離の治療用の医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩の網膜剥離治療有効量を含んで成る医薬組成物。
【請求項７】
哺乳類における痰の誘導を促進するための医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩の痰誘導促進有効量を含んで成る医薬組成物。
【請求項８】
哺乳類における喀出を促進するための医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩の喀出促進有効量を含んで成る医薬組成物。
【請求項９】
哺乳類における嚢胞性繊維症を治療するための医薬組成物であって、医薬上許容される担体と共に、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容される塩の嚢胞性繊維症治療有効量を含んで成る医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物がＵＰ4dＣである、請求項６又は９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
本願は、1997年２月10日出願の米国特許出願第08/798,508号の一部係属出願である。
序論
技術分野
本発明は、保有された粘膜分泌液の水和を増加させ、ムチンの生成を刺激し、そして繊毛運動頻度（ciliary beat frequency）を増加させて保有された分泌液のクリアランス（浄化）を増加させる、一定のジヌクレオチドに関する。
発明の背景
米国で慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）にかかっている患者は15,000,000人おり、それが６番目の主な死因である。それは肺における粘膜分泌液の停留により特徴づけられる。ＣＯＰＤと診断された多くの患者は慢性気管支炎（ＣＢ）と呼ばれる障害を持ち、600,000人の患者がＣＢの急性再燃のために毎年入院する。ＣＯＰＤに似た臨床的プロフィールを呈する肺障害の別例は、嚢胞性繊維症と原発性繊毛運動不全（ＰＣＤ）である。原発性にせよ二次性であるにせよ、嚢胞性繊維症は咳によって単に浄化され得る保有分泌液を生じる。
保有粘膜分泌液の蓄積によって特徴づけられる他の病的状態は静脈洞炎である。静脈洞炎は、典型的には上部呼吸器感染に関連づけられる副鼻腔洞の炎症である。それは推定３千百万人を冒す我が国で最も一般的な健康管理上の病訴である〔A．Moss & V．Parsons，National Center for Health Statistics，1986: 66-67，DHHS Publication No．（PHS）86-1588（1985）〕。
中耳炎（ＯＭ）は、主に三才以下の子供を苦しめる中耳のウイルス感染症または細菌感染症である。それは一般に鼻腔や耳管を通って中耳内に広がる上部呼吸器感染によって早められる。およそ25,000〜5000万人の来院者が毎年ＯＭの診断と治療に訪れる。３才までに、約75％の子供が少なくとも１回は急性ＯＭを経験しただろう〔J．Klein，Clin．Infect．Dis．19，823-833（1994）〕。抗生物質での適切な処置の後も中耳に溜まった液体が残り、聴覚障害並びに潜在的な言語および認識の発達の遅れを引き起こす。中耳内の分泌液を浄化する能力の向上は、中耳炎の有意な後遺症を減少させるかまたは無くすだろう。
保有された分泌液に起因する追加の障害は肺炎である。様々な理由のために不動化される患者は肺炎を発病する高い危険度がある。過剰の警戒や無数の介入にもかかわらず、毎年400,000人以上の患者が肺炎を起こし、かなりの罹病率と死亡率を伴う。
涙液系の排膿を増加させることが治療上望ましい状態もある。涙液排膿系が正しく機能していないと、結果として過剰な流涙（流涙症）、粘膜化膿性流出、および再発性涙嚢炎を生じ得る。鼻涙管閉鎖症の現行治療法は、大部分が侵害的な外科手術法であり、研究者らは非侵害的な薬剤療法を発見しようと努めている。
涙液分泌は、気道上皮を水和するのと同様なＰ２Ｙ2および／またはＰ２Ｙ4プリン作用性レセプター媒介機構を介して涙液分泌付属組織から刺激することができる。ドライアイ病は、その結果生じる眼球表面病と共に、涙液生成の減少または涙液膜蒸発の増加により特徴づけられる前角の涙液膜の異常によって生じる指示のための一般用語である。現在のところ、ドライアイ病の薬剤療法は眼を一時的に再水和するための人工涙（塩類溶液）の投与に大部分限定されている。しかしながら、免荷は短命であるので、頻繁な投与が必要である。
通常、粘膜分泌液は粘膜繊毛クリアランス（ＭＣＣ）系によって排出される。ＭＭＣは次の３つの成分の統合作用を当てにする：1）杯細胞と粘膜下腺による粘液分泌；2）管腔表面を通過する粘液を進ませる上皮細胞上の繊毛の運動；および3）付随して粘液中への水分の流れを調節する管腔上皮細胞中および外へのイオン輸送。
ウリジン５′−三リン酸（ＵＴＰ）のようなヌクレオシドリン酸がＭＣＣ系の全成分を活性調節することは知られている。第一に、ＵＴＰは試験管内で杯細胞によるムチン分泌の速度と総量の両方を増加させることが示されている〔M．Lethem他，Am．J．Respir．Cell Mol．Biol．9，315-322（1993）〕。第二に、ＵＴＰは試験管内でヒト気道上皮細胞中の繊毛運動頻度を増加させることが証明されている〔D．Drutz他，Drug Dev．Res．37（3），185（1996）〕。そして第三に、ＵＴＰは試験管内で気道上皮細胞からのCl-分泌を増加させ、よって水分泌を増加させることが示されている〔S．Mason他，Br．J．Pharmacol．103，1649-1656（1991）〕。更に、ＵＴＰに応答したタイプII肺胞細胞からの界面活性剤の放出〔Gobran，Am．J．Physiol．267，L625-L633（1994）〕は、肺の最適機能発揮に貢献すると考えられ、そしてＭＣＣを最大にするのを助けるのかもしれないと考えられている〔M．Knowles他，N．Engl．J．Med．325，533-538（1991）〕。ＵＴＰはＰ２Ｙ2レセプターによるホスホリパーゼＣの刺激のために細胞内Ca++を増加させることも証明されている〔H．Brown他，Mol．Pharmacol．40，648-655（1991）〕。
ＵＴＰによる粘膜繊毛促進系の全成分の活性調節は、何ら有意な副作用なしに正常志願者における肺粘膜繊毛クリアランスの2.5倍の改善をもたらした〔K．Olivier他，Am．J．Respir．Crit．Care Med．154，217-223（1996）〕。その上、ＵＴＰはＰＣＤ患者において咳クリアランス（咳をすることによる保有分泌液のクリアランス）をかなり増強した〔P．Noone他，Am．J．Respir．Crit．Care Med．153，A530（1996）〕。
1996年12月19日に公開されたＰＣＴ国際公開第96／40059号パンフレットは、気道疾患の治療に有用なジヌクレオチド化合物を記載していることに注目すべきである。
保有粘膜分泌液のクリアランスを増加すると証明されたＵＴＰの能力のために、他のヌクレオシドリン酸が、より多くないにしても同等に治療上有効であるかどうかを研究する動機を本出願人らに与えた。本発明はこの研究に基づく。
今までに記載されたジヌクレオチドをそれらの対応する参考文献記号と一緒に表Ｉに列挙する。
0004531867.tif 000002
0004531867.tif 000003
0004531867.tif 000004
発明の要約
本発明は、式Ｉの新規化合物およびそれの医薬組成物を提供する。本発明は、保有された粘膜分泌液のクリアランスおよび繊毛運動頻度の向上に有用な化合物も提供する。従って、本発明の広範な態様は一般式Ｉの化合物またはそれの医薬上許容されるエステルもしくは塩に向けられる。
0004531867.tif 000005
上式中、
Ｘは酸素、メチレン、ジフルオロメチレンまたはイミドであり；
ｎは０，１または２であり；
ｍは０，１または２であり；
ｎ＋ｍは０，１，２，３または４であり；
ＢおよびＢ′は各々独立に、それぞれ９位または１位を経由して連結したプリン残基またはピリミジン残基であり；
ＺはＯＨまたはＮ3であり；
Ｚ′はＯＨまたはＮ3であり；
ＹはＨまたはＯＨであり；
Ｙ′はＨまたはＯＨであり；
ただし、ＺがＮ3である時ＹはＨであり、Ｚ′がＮ3である時Ｙ′はＨであり；更に表Ｉの化合物を除く。
本発明の化合物はＰ２Ｙ2および／またはＰ２Ｙ4プリン作用性レセプターの高選択的アゴニストであり、よってそれらは慢性気管支炎、ＰＣＤおよび嚢胞性繊維症のような慢性閉塞性肺疾患の治療に有用であり、そして肺炎を起こす危険性のある不動化された患者の治療にも有用であるだろう。更に、それらが一般に保有された粘膜分泌液を浄化しそして繊毛運動頻度を増強できることから、本発明の化合物は静脈洞炎、中耳炎、鼻涙管閉塞症の治療にも有用であり得る。それらはドライアイ、網膜剥離および創傷治癒の治療にも有用であるかもしれない。加えて、それらの化合物の薬理作用のために、それらは痰誘発過程を促進するにも有用である。その上、本発明の化合物は肺からの粘膜分泌液のクリアランスを増加させることにより運動選手の成績を高めることができると仮定される。
発明の詳細な説明
本発明は式Ｉの新規化合物およびそれの医薬組成物を提供する。本発明はまた、保持された粘膜分泌液のクリアランスおよび繊毛運動頻度の増強に有用である化合物を提供する。従って、本発明の広範な態様は、下記の一般式Ｉ：
0004531867.tif 000006
（上式中、
Ｘは酸素、メチレン、ジフルオロメチレンまたはイミドであり；
ｎは０，１または２であり；
ｍは０，１または２であり；
ｎ＋ｍは０，１，２，３または４であり；
ＢおよびＢ′は各々独立に、それぞれ９位または１位を経由して連結したプリン残基またはピリミジン残基であり；
ＺはＯＨまたはＮ3であり；
Ｚ′はＯＨまたはＮ3であり；
ＹはＨまたはＯＨであり；
Ｙ′はＨまたはＯＨであり；
ただし、ＺがＮ3である時ＹはＨであり、Ｚ′がＮ3である時Ｙ′はＨである）
により表され、そして更に表Ｉの化合物を除く新規化合物またはそれの医薬上許容されるエステルもしくは塩に向けられる。
フラノース糖は好ましくはβ−配置にある。
フラノース糖は最も好ましくはβ−Ｄ−配置にある。
好ましい式Ｉの化合物は式ＩＡ：
0004531867.tif 000007
上式中、
ＸはＯであり；
ｎ＋ｍは１または２であり；
Ｚ，Ｚ′，ＹおよびＹ′はＯＨであり；
ＢおよびＢ′はウラシル、チミン、シトシン、グアニン、アデニン、キサンチン、ヒポキサンチンまたは式IIおよびIIIにおいて定義される通りであり；あるいは
ＸはＯであり；
ｎ＋ｍは３または４であり；
Ｚ，Ｚ′，ＹおよびＹ′はＯＨであり；
Ｂはウラシルであり；
Ｂ′はウラシル、チミン、シトシン、グアニン、アデニン、キサンチン、ヒポキサンチンまたは式IIおよびIIIにおいて定義される通りであり；あるいは
ＸはＯであり；
ｎ＋ｍは１または２であり；
Ｚ，ＹおよびＺ′はＯＨであり；
Ｙ′はＨであり；
Ｂはウラシルであり；
Ｂ′はウラシル、チミン、シトシン、グアニン、アデニン、キサンチン、ヒポキサンチンまたは式IIおよびIIIにおいて定義される通りであり；あるいは
ＸはＯであり；
ｎ＋ｍは０，１または２であり；
ＺおよびＹはＯＨであり；
Ｚ′はＮ3であり；
Ｙ′はＨであり；
Ｂはウラシルであり；
Ｂ′はチミンであり；あるいは
ＸはＯであり；
ｎ＋ｍは０，１または２であり；
ＺおよびＺ′はＮ3であり；
ＹおよびＹ′はＨであり；
ＢおよびＢ′はチミンであり；あるいは
ＸはＣＨ2，ＣＦ2またはＮＨであり；
ｎおよびｍは１であり；
Ｚ，Ｚ′，ＹおよびＹ′はＯＨであり；
ＢおよびＢ′はウラシル、チミン、シトシン、グアニン、アデニン、キサンチン、ヒポキサンチンまたは式IIおよびIIIにおいて定義される通りである）
により表され、ただし表Ｉの化合物を除く化合物；またはそれの医薬上許容される塩。
式Ｉの化合物の別の好ましい群は、式ＩＢの化合物またはそれの医薬上許容される塩である：
0004531867.tif 000008
（上式中：
Ｘは酸素、メチレン、ジフルオロメチレンまたはイミドであり；
ｎは０または１であり；
ｍは０または１であり；
ｎ＋ｍは０，１または２であり；そして
ＢおよびＢ′は各々独立に、それぞれ９位または１位を経由して連結した、式IIに定義されるようなプリン残基、または式IIIに定義されるようなピリミジン残基である）。
ＢとＢ′がＮ−１においてリボシル成分に結合したウラシルである場合、Ｘが酸素である時ｍ＋ｎの合計は３または４である（実施例５参照）。リボシル成分は、示される通りＤ−配置であるが、Ｌ−またはＤＬ−であってもよい。Ｄ−配置が好ましい。
0004531867.tif 000009
〔上式中、
Ｒ1は下記に定義するような水素アルキルもしくはアリール成分であるかまたはω−Ａ（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＮＨ（Ｃ1-6アルキル）−であり、ここでＡはアミノ、メルカプト、ヒドロキシまたはカルボキシルであり；
Ｒ2はＯ（アデニン１−オキシド誘導体）または存在せず（アデニン誘導体）；あるいは
Ｒ1とＲ2が一緒になって、場合によりエテノ成分の４位または５位において下記に定義するようなアルキル、アリールもしくはアラルキル成分により置換されることがある、５員の縮合イミダゾール環（１，Ｎ6−エテノアデニン誘導体）を形成し；
Ｒ3は下記に定義するようなアルキル、アリールまたはアラルキル；アルキルアミノ、アリールアミノまたはアラルキルアミノ（ＮＨＲ′）；アルコキシ、アリールオキシまたはアラルキルオキシ（ＯＲ′）；アルキルチオ、アリールチオまたはアラルキルチオ（ＳＲ′）であるか；あるいはω−Ａ（Ｃ1-6アルキル）ＣＯＮＨ（Ｃ1-6アルキル）Ｂ−であり、ここでＡおよびＢは独立にアミノ、メルカプト、ヒドロキシまたはカルボキシルである〕またはそれの医薬上許容されるエステル、アミドもしくは塩。
アデニンの置換誘導体としては、アデニン１−オキシド；１，Ｎ6−（４−または５−置換エテノ）アデニン；６−置換アデニン；または８−置換アミノアデニンが挙げられる。ここで６−または８−ＨＮＲ′基中のＲ′は、下記に記載のように官能化されることがあるアリール成分を有するアリールアルキル（Ｃ1-6）基；アルキル基；および官能基を有するアルキル基から選択され、前記官能基を有するアルキル基は、例えば〔（６−アミノヘキシル）カルバモイルメチル〕−、ω−アセチル化アミノ（ヒドロキシ、チオールおよびカルボキシ）アルキル（Ｃ2-10）−、およびそれらのω−アシル化アミノ（ヒドロキシ、チオールおよびカルボキシ）誘導体であり、ここでアシル基は非限定的にアセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル、置換ベンゾイル等から選択され、またはカルボン酸成分がそれのエステルもしくはアミド誘導体として、例えばエチルもしくはメチルエステルとしてまたはそれのメチル、エチルもしくはベンズアミド誘導体として存在する。ω−アミノ（ヒドロキシ、チオール）成分はＣ1-4アルキル基によりアルキル化されてもよい。
同様に、ＢもしくはＢ′または両者は、１位を経由して連結した、一般式IIIのピリミジンであってもよい：
0004531867.tif 000010
〔上式中、
Ｒ4は水素、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、シアノ、アラルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6アルコキシ、Ｃ1-6アルキルアミノまたはジアルキルアミノであり、ここでアルキル基は連結して複素環を形成することがあり；
Ｒ5は水素、アシル（例えばアセチルまたはベンゾイル）、下記に定義するように官能化されることがあるＣ1-6アルキル、アロイル、Ｃ1-5アルカノイル、ベンゾイルまたはスルホネートであり；
Ｒ6はヒドロキシ、メルカプト、アルコキシ、アラルコキシ、Ｃ1-6アルキルチオ、アミノ、Ｃ1-5二置換アミノ、トリアゾリル、アルキルアミノまたはジアルキルアミノであり、ここでアルキル基は連結して複素環を形成してもよくまたはＮ3に連結して置換されることがある環を形成してもよく；あるいは
Ｒ5とＲ6が一緒になって、場合によりエテノ成分の４位もしくは５位において下記に定義するようなアルキル、アリールもしくはアラルキル成分により置換されることがある、ピリミジン環の３位と４位の間で縮合した５員縮合イミダゾール環（３，Ｎ4−エテノシトシン誘導体）であり；
Ｒ7は水素、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルケニルであってアルケニル成分が酸素経由で連結して酸素に隣接した炭素原子上で環を形成することがあり、前記環はアルキルまたはアリール基により置換されることがあるアルケニル、置換アルキニル、ハロゲン、置換アルキル・ペルハロメチル（例えばCF3）、Ｃ2-6アルキル、Ｃ2-3アルケニル、置換エテニル（例えばアリルアミノ、ブロモビニル、エチルプロペノエート、またはプロペン酸）、Ｃ2-3アルキニルまたは置換アルキニルであり；あるいは
Ｒ6−Ｒ7は一緒になって、Ｒ6のＮもしくはＯを経由して結合した５員もしくは６員の飽和もしくは不飽和環を形成してもよく、そのような環は、それ自体が官能基を含む置換基を有してもよく；ただし、Ｒ8がアミノまたは置換アミノである時、Ｒ7は水素であり；そして
Ｒ8は水素、アミノ、置換アミノ、アルコキシ、アリールアルコキシ、アルキルチオ、アリールアルキルチオ、カルボキサミドメチル、カルボキシメチル、メトキシ、メチルチオ、フェノキシまたはフェニルチオである〕
またはそれの医薬上許容されるエステル、アミドもしくは塩。
上記式IIおよびIIIの一般構造では、アシル基がアルカノイル基またはアロイル基を含んで成るのが有利である。直鎖または分枝鎖アルキル基は有利には、後述するように１もしくは複数の適当な置換基により置換されることがある、１〜８個の炭素原子、特に１〜４個の炭素原子を含む。アリールオキシのような基のアリール成分を包含するアリール基は、好ましくは後述するように１もしくは複数の適当な置換基により置換されることがあるフェニル基である。上述のアルケニルおよびアルキニル基は、有利には２〜８個の炭素原子、特に２〜６個の炭素原子を含み、後述するような１もしくは複数の適当な置換基により置換されることがあり、例えばエテニルまたはエチニルである。
上記アルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリール基上の適当な置換基は、有利にはハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ6-10アリール、Ｃ7-12アリールアルキル、Ｃ7-12アリールアルコキシ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、スルホネート、ホスフェート、スルホン酸、アミノおよび置換アミノであり、ここで置換アミノ中のアミノはＣ1-4アルキルにより１回もしくは２回置換されており、そして２回置換されている時、前記アルキル基が場合により連結して複素環を形成することがある。
本発明の化合物はそれらの医薬上許容されるエステル、例えば非限定的にアセチルエステルおよびベンゾイルエステルを包含する。これらのエステルは、所望のヒドロキシ化合物と、カルボニルジイミダゾール、ジシクロヘキシルカルボジイミドもしくは他の適当な縮合剤で活性化された適当な酸との反応、または第三級アミン、第四級アンモニウム塩もしくは無機塩基のような塩基性触媒の存在下もしくは非存在下で酸無水物もしくは酸塩化物との反応により、製造することができる。
本発明の化合物は、それらの非毒性の医薬上許容される塩も包含する。そのような塩としては非限定的に、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩もしくはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばマンガン塩、マグネシウム塩もしくはカルシウム塩；またはアンモニウム塩もしくはテトラアルキルアンモニウム塩、即ちＮＸ4+（ここでＸはＣ1-4である）が挙げられる。医薬上許容される塩は、元の化合物の所望の生物活性を維持し且つ望ましくない毒性作用を加えない塩である。本発明は、本明細書中に開示される化合物のアシル化プロドラッグ（例えばエステル）も包含する。当業者は、式Ｉ，ＩＡおよびＩＢに含まれる非毒性の医薬上許容される塩およびアシル化プロドラッグを調製するために使用できる様々な合成方法論を知っているだろう。
本発明の化合物はＰ２Ｙ2および／またはＰ２Ｙ4プリン作用性レセプターの高選択性アゴニストであり、よってそれらは慢性気管支炎、ＰＣＤおよび嚢胞性繊維症のような慢性閉塞性肺疾患をわずらっている哺乳類（ヒトを含む）の治療において、並びに不動性のため肺炎の予防において有用である。更に、それらが一般に保有された粘膜分泌液を浄化しそして繊毛運動頻度を促進することができるため、本発明の化合物は、哺乳類（ヒトを含む）の静脈洞炎、中耳炎および鼻涙管閉塞症の治療にも有用である。更に、本発明の化合物はドライアイや網膜剥離を有する哺乳類（ヒトを含む）の治療にも有用である。
本発明の化合物は主にヒト被検者の処置に関するけれども、それらは獣医学目的で他の哺乳類被検体、例えばイヌやネコの処置にも使用できる。
本発明の化合物の医薬効用は、Ｐ２Ｙ2および他のＰ２Ｙレセプター活性についてのイノシトールリン酸アッセイにより示される。E．Lazarowski他，Brit．J．Pharm．116，1619-1627（1995）に記載されたこの汎用アッセイは、Ｇタンパク質を介してホスホリパーゼＣに結合した化合物活性化レセプターの活性の測度としてのイノシトールリン酸形成の測定を頼みにしている。
一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの化合物は、常用の非毒性の医薬上許容される担体、佐剤および賦形剤を含有する投与単位製剤において経口的に、局所的に、非経口的に、吸入もしくは噴霧により、手術中に、直腸内に、または膣内に投与することができる。本明細書中で使用する局所的という語は、パッチ剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤または点鼻剤、点耳剤もしくは点眼剤を包含する。本明細書中で使用する非経口という語は、皮下注射、静注、筋肉内注射、胸骨筋内注射または点滴注入技術を包含する。加えて、一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの化合物と医薬上許容される担体とを含有する医薬製剤が提供される。１もしくは複数の一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの化合物が、１もしくは複数の非毒性の医薬上許容される担体もしくは希釈剤もしくは佐剤と共に、および所望により他の活性成分と共に、存在してもよい。そのような担体の一例は糖であり、この場合、化合物は肺または気道送達用の担体（例えば乳糖、ショ糖、トレハロース、マンニトール）または他の許容される賦形剤と共に単純に混合してまたはグラシフィケーションを通して母材中に均質混合してもよい。
一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの１または複数の化合物を別個にもしくは一緒に、またはＤＮアーゼやアセチルシステインのような粘液溶解剤と別個にもしくは一緒に投与することができる。
一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの化合物を含有する医薬組成物は、経口投与用に適当な剤形、例えば錠剤、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁液剤、分散性粉剤もしくは粒剤、乳剤、硬質もしくは軟質カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤の形であることができる。経口投与用の組成物は医薬組成物の製造のための当該技術分野で既知の任意方法に従って調製することができ、そしてそのような組成物は、医薬として外見が良く且つ口に合った製剤を提供するために甘味剤、矯味矯臭剤、着色剤および保存剤から成る群より選ばれた１もしくは複数の剤を含むことができる。錠剤は活性成分と混合して、錠剤の製造に安定である非毒性の医薬上許容される賦形剤を含有する。それらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；顆粒化剤および崩壊剤、例えばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；並びに滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであることができる。錠剤は未コーティングであってもよく、または胃腸管中での崩壊および吸収を遅らせ、それによって長期間に渡り持続された作用を提供するために既知の技術によりコーティングを施してもよい。例えば、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような遅延材料を使用してもよい。
経口用製剤は、活性成分が不活性固形希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合された硬質ゼラチンカプセル剤として提供してもよく、または活性成分が水または油性媒質、例えば落花生油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合された軟質ゼラチンカプセルとして提供してもよい。
水性懸濁液剤は、水性懸濁液剤の製造に適する賦形剤と共に活性成分を含有する。そのような賦形剤は懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロースおよびアルギン酸ナトリウムである。分散剤または湿潤剤は、天然のホスファチド、脂肪酸とアリレンオキシドとの縮合生成物、脂肪酸とヘキシトールからの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、または脂肪酸とヘキシトールアニリドから誘導された部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物であることができる。当業者は、上記の一般記載中に含まれる多数の特定の賦形剤および湿潤剤を知っているだろう。水性懸濁液剤は１または複数の保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル−もしくはｎ−プロピルエステル、１または複数の着色剤、１または複数の矯味矯臭剤、および１または複数の甘味剤、例えばショ糖もしくはサッカリンを含んでもよい。
水の添加による水性懸濁液の調製に適当である分散性粉剤および粒剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１もしくは複数の保存剤と混合した状態で活性成分を提供する。適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は既に上述したものにより例示される。追加の賦形剤、例えば甘味剤、矯味矯臭剤および着色剤も存在してよい。
一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの化合物は無菌媒質中で非経口投与することができる。使用する賦形剤および濃度に依存して、薬剤は賦形剤中に懸濁または溶解することができる。有利には、局所麻酔薬のような佐剤、保存剤および緩衝剤を賦形剤中に溶解することができる。無菌注射剤は、非毒性の非経口投与に適当な希釈剤または溶剤中の無菌注射溶液または懸濁液であることができる。使用できる適当な賦形剤および溶剤としては、無菌水、食塩溶液またはリンガー液が挙げられる。
一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの化合物は薬剤の経耳、直腸内または膣内投与用の坐剤の形で投与することもできる。それらの組成物は、常温では固体であるが体温では液体であり従って融解して薬剤を放出するであろう適当な非刺激性賦形剤と薬剤を混合することにより調製することができる。適当な材料はカカオ脂およびポリエチレングリコールである。
一般式Ｉ，ＩＡまたはＩＢの化合物の溶液は、手術中点滴注入法により投与することができる。
上記状態の治療では、約10-7Ｍ〜約10-1Ｍ、好ましくは10-5Ｍ〜約10-1Ｍのオーダーの投与量レベルが有用である。担体材料と混合して１回量を作ることができる活性成分の量は、治療する宿主および投与の特定方法によって異なるだろう。しかしながら、ある特定の患者に対する特定の用量レベルは、使用する特定化合物の活性、患者の年齢、体重、健康状態、性別、食事、投与期間、投与経路、排出速度、薬剤の組合せおよび治療を受ける特定の病気の重症度といった様々な要因に依存することは理解されるだろう。
本発明の化合物は、非限定的にカルボニルジイミダゾールまたはジシクロヘキシルカルボジイミドのような縮合剤で活性化されたヌクレオシド一リン酸、二リン酸または三リン酸を、同一のもしくは異なるヌクレオシド一リン酸、二リン酸または三リン酸と縮合せしめて所望のジヌクレオチドポリリン酸を形成させることにより；あるいは上記のように活性化されたヌクレオシドリン酸を非ヌクレオシド一リン酸、二リン酸またはポリリン酸成分（例えば非限定的にモノリン酸アニオンまたはピロリン酸アニオン）と連続的に縮合せしめて所望のジヌクレオチドポリリン酸を生成せしめることにより（この場合には、単離されない中間体はモノヌクレオチドポリリン酸である）；あるいは上記のように活性化されたまたは求核置換に対して反応性である酸ハロゲン化物もしくは他の誘導体の形の一リン酸、二リン酸または三リン酸成分を、ヌクレオシドリン酸またはポリリン酸と連続的に縮合せしめて所望のジヌクレオチドポリリン酸を形成させ；あるいは予め形成されたジヌクレオチドポリリン酸を、プリン、ピリミジンまたは糖環上の１もしくは複数の成分の置換または誘導体化によって所望のジヌクレオチドポリリン酸を形成させることにより、調製することができる。出発物質として使用するヌクレオシドリン酸は市販されているか、または当業者に周知の方法により対応するヌクレオシドから調製することができる。同様に、ヌクレオシドが市販されていない場合、それらは他の容易に入手可能なヌクレオシドの修飾により、または当業者に周知の方法による複素環式化合物と糖前駆体からの合成により、調製することができる。
下記の実施例において記載される登録商標の一覧を下記に示す。
DEAEセルロースTM
PEIカラムTM（Aldrich）
AG-MP50強陽イオン交換樹脂TM（BioRad）
Dowex 50（Ｈ+）樹脂TM
DEAE SephadexTM
PRPX-100カラムTM（Hamilton）
Sephadex DEAE A25カラムTM
当業者は、下記の実施例により証明されるように、出発物質を変更しそして追加の段階を使って本発明の化合物を製造できることを理解するだろう。ある場合には、上記変換を達成するために特定の反応性官能基の保護が必要であるかもしれない。一般に、そのような保護基の必要性並びにそのような基を結合および除去するのに必要な条件は有機合成技術の熟練者に明白であろう。
本発明を下記の実施例により更に例証するが、この実施例は発明の範囲または精神においてこの中に記載される特定の手順に限定するものとして解釈してはならない。
実施例１
Ｐ1，Ｐ4−ジ（ウリジン５′−）Ｐ2，Ｐ3−メチレン四リン酸の調製
メチレンジホスホン酸（Aldrich，0.0088g，0.05ミリモル）を、トリブチルアミン（24μｌ，0.1ミリモル）を添加した無水ＤＭＦ（0.5ml）中に溶かした。この溶液を無水ＤＭＦ（２×１ml）と共に２回蒸発乾固せしめ、乾燥した残渣を無水ＤＭＦ（0.5ml）中に溶かし、そしてそこに無水ＤＭＦ（0.5ml）中の同様に乾燥したウリジン５′−モノホスホモルホリデート４−モルホリン−Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボキサミジン塩（Sigma，0.137g，0.2ミリモル）を加えた。反応混合物を80〜90℃で７時間加熱し、次いで減圧下での蒸発により溶媒を留去した。残渣を水（２ml）に溶かし、それを炭酸水素塩形のDEAEセルロースカラム（2.5×50cmベット容積）に適用した。水での溶離に続いて炭酸水素アンモニウム勾配（900mlで０→0.33Ｍ）を用いてカラムを溶離した。溶出液の254nmでの吸光度をモニタリングすることにより、溶離の経過をたどった。0.23Ｍ〜0.26Ｍで溶出する画分を集め、蒸発乾固せしめ、そして脱イオン水と共に繰り返し蒸発せしめるにより脱塩した。残渣を水（300μｌ）に溶かし、そして半調製用HPLC（Alltech PEI 5μ，10×250mm，０→0.66Ｍ炭酸水素アンモニウム勾配，流速5.0ml／分，20分）により50μｌアリコートとして精製した。各回の精製操作からの8.7〜9.0分に溶出するピークを合わせ、凍結乾燥すると所望の化合物を与えた（0.007ミリモル、収率14％、λmax263でのその化合物の吸光度をウリジン一リン酸の標準溶液のものと比較することにより定量）。Alltech PEIカラム上での０→0.66Ｍ炭酸水素アンモニウム勾配、流速1.0ml／分，20分，保持時間13.03分のクロマトグラフィー純度は96.5％であった。D2O中での1H-NMR（テトラメチルシランからのδppm）：2.39（t,J=21.5Hz,2H）;4.12（m,6H）;4.243（m,4H）;5.841（d,J=7.9Hz,2H）;5.847（d,J=4.5Hz,2H）;7.77（d,J=8.1Hz,2H）。D2O中での31P-NMR（H3PO4からのδppm）：−10.2〜−10.7（複合ｍ，2P）;7.8〜8.4（複合ｍ，2P）。
実施例２
Ｐ1，Ｐ4−ジ（ウリジン５′−Ｐ2，Ｐ3−ジフルオロメチレン四リン酸）の調製
メチレンホスホン酸について記載されたように塩に変換したジフルオロメチレンジホスホン酸のトリブチルアンモニウム塩〔C．Mc-Kenna他，J．Org．Chem．46，4574-76（1981）およびD．Burton他，J．Fluorine Chem．15，263-266（1980）に記載〕（0.014g，0.025ミリモル）を、水性ジメチルスルホキシド（0.7ml）中のウリジン５′−モノホスホモルホリデート酸４−モルホリン−Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボキサミジン塩（Sigma，0.034g，0.05ミリモル）の溶液に溶かし、50℃で９日間加熱した。冷ました反応混合物を水で希釈し、炭酸水素塩形のDEAEセルロースカラム（2.5×50cmベット容積）に適用した。水での溶離に続いて炭酸水素アンモニウム勾配（総量900mlで０→0.33Ｍ）を用いてカラムを溶離した。溶出液の254nmでの吸光度をモニタリングすることにより、溶離の経過をたどった。0.29Ｍ〜0.30Ｍで溶出する画分を蒸発乾固せしめ、そして脱イオン水との繰り返し蒸発により脱塩し、所望の化合物を与えた（0.0011ミリモル、収率4.4％、λmax263nmでのその化合物の吸光度をウリジン一リン酸の標準溶液のものと比較することにより定量）。Alltech PEIカラム上での０→0.66Ｍ炭酸水素アンモニウム勾配、流速1.0ml／分，20分，保持時間12.03分でのクロマトグラフィー純度は88.5％であった。D2O中での1H-NMR（テトラメチルシランからのδppm）：4.05-4.085（m,6H）;4.18-4.20（m,4H）;5.80（d,J=8.0Hz,2H）;5.81（d,J=4.5Hz,2H）;7.77（d,J=7.9Hz,2H）。D2O中での31P-NMR（H3PO4からのδppm）：−10.63（dd,J=18.3,11.3Hz,2P）;−5.83（tdd,J=75,18.3,11.3Hz,2P）。D2O中での19F-NMR：73.406（t,J=75.5Hz）。
実施例３
Ｐ1，Ｐ4−ジ（ウリジン５′−Ｐ2，Ｐ3−イミド四リン酸）の調製
イミド二リン酸テトラゾリウム（Sigma，0.05ミリモル）を水（0.5ml）に溶かし、それをトリブチルアミン形のBiorad AG-MP50強陽イオン交換樹脂（２mlベット容積，３meq）のカラムに適用した。カラムを水（約10ml）で溶離せしめ、溶出液を乾燥ＤＭＦと共に蒸発せしめることにより乾燥した。無水ＤＭＦ中（1.0ml）中のイミド二リン酸テトラブチルアンモニウム（0.05ミリモル）の溶液によりウリジン５′−モノホスホモルホリデート４−モルホリン−Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボキサミジン塩（Sigma，0.068g，0.1ミリモル）を室温で20日間処理しそして本質的に上述したのと同様に単離すると、アンモニウム塩として目的化合物が得られた（1.6％）。D2O中での1H-NMR（テトラメチルシランからのδppm）：4.07-4.09（m,6H）;4.17-4.22（m,4H）;5.79（d,J=8.1Hz,2H）;5.80（d,J=4.8Hz,2H）;7.78（d,J=8.2Hz,2H）。D2O中での31P-NMR（H3PO4からのδppm）：−10.82（m,4P）;Ｐ−Ｐカップリングパターンは同一条件下で行ったＰ1，Ｐ4−ジ（アデノシン５′−四リン酸）（Sigma）のものと同様であった。
実施例４
Ｐ1，Ｐ4−ジ（４−チオウリジン５′−四リン酸）の調製
４−チオウリジン一リン酸ナトリウム塩（Sigma，25mg，0.057ミリモル）を水（0.5ml）に溶かし、トリブチルアミン形のBiorad AG-MP50強陽イオン交換樹脂（２mlベット容積，３meq）のカラムに適用し、カラムを水（約10ml）で溶離せしめ、溶出液を凍結乾燥した。得られたトリブチルアンモニウム塩を無水ＤＭＦ（0.5ml）中に溶かし、そこにカルボニルジイミダゾール（4.86mg，0.03ミリモル）を加えた。反応混合物を窒素雰囲気下で室温で12日間放置しておいた。反応混合物を室温で真空下で蒸発乾固せしめ、残渣を水（２ml）に溶かし、それを炭酸水素塩形のDEAEセルロースカラム（2.5×50cmベッド容積）に適用した。カラムを水（約250ml）で溶離せしめ、次いで炭酸水素アンモニウム勾配（０→0.33Ｍ，総量900ml）を適用した。この後、400mlに渡り0.33→0.5Ｍ炭酸水素アンモニウム勾配を適用した。280nmでの溶出液の吸光度をモニタリングすることにより、溶離の経過をたどった。0.336Ｍ〜0.339Ｍで溶出する画分を蒸発乾固せしめ、そして脱イオン水との繰り返し蒸発により脱塩し、所望の化合物を与えた（0.0045ミリモル、収率18％、λmax332nmでのその化合物の吸光度を４−チオウリジン二リン酸の標準溶液のものと比較することにより定量）。D2O中での1H-NMR（テトラメチルシランからのδppm）：4.09-4.11（m,6H）;4.18-4.24（m,4H）;5.76（d,J=4.5Hz,2H）;6.47（d,J=7.7Hz,2H）;7.67（d,J=8.2Hz,2H）。D2O中での31P-NMR（H3PO4からのδppm）：−22.57〜−22.73（m,2P）;−10.76〜−10.91（m,2P）;Ｐ−Ｐカップリングパターンは同一条件下で行ったＰ1，Ｐ4−ジ（アデノシン５′−四リン酸）（Sigma）のものと同様であった。
実施例５
Ｐ1，Ｐ5−ジ（ウリジン５′−五リン酸）の調製
100mlの丸底フラスコに、ウリジン５′−二リン酸トリブチルアンモニウム塩（1.81ミリモル，10ml）およびカルボニルジイミダゾール（469mg，2.90ミリモル）のＤＭＦ溶液を装填し、その溶液をＮ2下で２時間攪拌した。これにウリジン５′−三リン酸トリブチルアンモニウム塩のＤＭＦ溶液（1.81ミリモル，10ml）を添加し、混合物を60℃で24時間攪拌した。その溶液を真空蒸発せしめ、そしてカラムクロマトグラフィー（DEAE-Sephadex；0.5Ｍ→０Ｍ NH4HCO3／H2O勾配）により２回精製した。純粋な画分を35℃で真空中で濃縮し、水を加えて、10回再蒸発せしめて、白色固体（200mg）を得た。D2O中での1H-NMR（テトラメチルシランからのδppm）：4.0（m,br,6H）;4.1（m,4H）;5.7（m,4H）;7.7（d,J=8.1Hz,2H）。D2O中での31P-NMR（H3PO4からのδppm）：−22.3（m,3P）;−10.6（d,J=42.9,2P）。
実施例６
Ｐ1，Ｐ4−ジ（３，Ｎ4−エテノシチジン５′−）四リン酸の調製
Ｐ1，Ｐ4−ジ（シチジン５′−）四リン酸の溶液（参考文献３，表Ｉ；アンモニウム塩，0.66mlの水中６μモル）に炭酸水素ナトリウム（0.005g，60μモル）を加え、溶液を凍結乾燥してアンモニアを除去した。残渣を水（0.20ml）とクロロアセトアルデヒド溶液（水中50％，0.30ml）の混合物に溶かし、そして反応混合物を室温で６日間放置しておいた。反応混合物を凍結乾燥し、ガム状残渣を酸化ジュウテリウム（重水）（0.7ml）と塩化メチレン（1.5ml）の間に分配させた。水性溶液の1H-NMRスペクトルは、エテニル化が約50％進行したことを示し、−方で31P-NMRスペクトルは四リン酸鎖がそのまま残っていることを示した。NMR溶液に追加のクロロアセトアルデヒド溶液（0.25ml）を加え、混合物を更に10日間置いておいた。その溶液を凍結乾燥し、そして残渣を酸化ジュウテリウムと一緒に再び凍結乾燥して、交換可能なプロトンを除去した。残渣を前と同じに酸化ジュウテリウムと塩化メチエンの間に分配させ、エテニル誘導体への完全な変換をNMR分光法によって確かめた。酸化ジュウテリウム溶液を炭酸水素塩形のDEAE−セルロースカラム（2.5×30cmベッド容積）に適用した。カラムを水（約250ml）で溶離せしめ、次いで1000mlに渡り０→0.5Ｍの炭酸水素アンモニウム勾配を適用した。280nmでの溶出液の吸光度をモニタリングすることにより、溶離の経過をたどった。0.29Ｍ〜0.32Ｍで溶出する画分を蒸発乾固せしめ、そして脱イオン水との繰り返し蒸発により脱塩し、所望の化合物を与えた（1.584μモル、収率26.4％、λmax273nmでのその化合物の吸光度を３，Ｎ4−エテノシチジン５′−一リン酸の標準溶液のものと比較することにより定量）。D2O中での1H-NMR（テトラメチルシランからのδppm）：4.123（m,6H）;4.258（m,4H）;5.986（s,2H）;6.92（d,J=8.1Hz,2H）;7.461（s,2H）;7.772（s,2H）;8.00（d,J=7.6Hz,2H）。D2O中での31P-NMR（H3PO4からのδppm）：−22.474（m,2P）;−10.650（m,2P）；Ｐ−Ｐカップリングパターンは同一条件下で行ったＰ1，Ｐ4−ジ（アデノシン四リン酸［Sigma］）のものとほとんど同じであった。
実施例６（a）
Ｐ1，Ｐ4−ジ（イミダゾ〔１，２−ｃ〕ピリミジン−５（６Ｈ）−オン−２−（３−ニトロ）フェニル−６−β−Ｄ−リボフラノシド５′−）四リン酸、テトラアンモニウム塩
Ｐ1，Ｐ4−ジ（シチジン−５′−）四リン酸テトラアンモニウム塩（100mg，0.117ミリモル）（参考文献３，表Ｉ）を水（10ml）に溶かし、そしてDowex 50H+樹脂（３ｇ，メタノールと水で予備洗浄済）のカラムを通してフラッシュし、次いで50mlの水で洗浄した。トリブチルアミン（１ml）とジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（５ml）を加え、溶液を油状物にまで蒸発せしめた。この油状物を乾燥ＤＭＦ（10ml）に溶かし、蒸発操作を２回繰り返した。最後の油状物を乾燥ＤＭＦ（10ml）とトリブチルアミン（1.5ml）に溶かし、その溶液にα−ブロモ−３′−ニトロアセトフェノン（86mg，0.351ミリモル）を加えた。反応混合物を窒素ガス雰囲気下で70℃で20時間加熱し、その時に追加のα−ブロモ−３′−ニトロアセトフェノン（50mg，0.205ミリモル）を加えた。更に18時間加熱した後、真空中で溶媒を留去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（DEAE-Sephadex，0＞1.0M NH4HCO3）により精製して、黄色固体（13.5mg）を得た。1H-NMR（D2O，TMS）：δ4.0-4.2（m,br,10H）;6.0（d,J=5.7Hz,2H）;6.4（d,J=8.1Hz,2H）;7.5（t,J=7.8Hz,2H）;7.5（d,J=8.1Hz,2H）;7.80（m,3H）;8.03（s,2H）。31P-NMR（D2O,H3PO4 std）：δ−10.67（m,2P）;−22.26（m,2P）。
実施例７
Ｐ1−（チミジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4Ｔ）
水（５ml）中のウリジン５′−三リン酸（ＵＴＰ）三ナトリウム塩（ProBioSint，5.86g，0.01モル）の溶液をトリブチルアミン形のBioRad AG-MP 50強陽イオン交換樹脂（50mlベッド容積）に適用し、そして蒸留水（約300ml）を用いて溶離せしめた。この溶液にトリブチルアミン（５ml）を加え、そして水性画分のｐＨが８にまで上昇するまで懸濁液を振盪した。層を分離し、水性溶液を少量にまで蒸発せしめ、次いで一晩凍結乾燥した。残渣を乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，20ml）に溶かした後、溶媒を0.1mmHgで蒸発せしめた。得られた乾燥トリブチルアミン塩を無水アセトンで100mlになるように調整して原液（ＵＴＰ0.1Ｍ）を作製した。前記ＵＴＰ溶液のアリコート（1.0ml，0.1ミリモル）にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（Baker，0.1g，0.5ミリモル）を加え、そして溶液を室温で30分間攪拌した。沈澱したジシクロヘキシル尿素を濾過により取り除き、反応混合物をエーテル（10ml）で抽出し、そして残渣を乾燥重水素化ジメチルスルホキシド（DMSO-d6，0.3ml）中に溶かした。このウリジン５′−環状メタリン酸（ＵｃＴＰ）溶液をDMSO-d6（0.3ml）中のチミジン５′−一リン酸（ＴＭＰ，0.064g，0.2ミリモル）とトリブチルアミン（0.2ml）の溶液に加え、混合物を50℃で24時間置いておいた。反応混合物を高真空下で一晩蒸発させた後、残渣を水（1.0ml）に溶かし、濾過して少量の残留ジシクロヘキシル尿素を除去し、そして半調製用イオン交換クロマトグラフィー（Hamilton PRP X-100カラム，同一組成の1.0Ｍ炭酸水素アンモニウムを用いて流速５ml／分で30分間に渡り溶出，100μｌの複数回注入）により分離した。ジヌクレオチド四リン酸は21〜23分に溶出した；生成物（ＵＴＰに基づいて収率11.1％）をλmax263nmでのそれの紫外吸収をＵＭＰおよびＴＭＰの標準溶液のものと比較することにより定量した。1H-NMR（D2O中，テトラメチルシランからのδppm）：1.78（s,3H）;2.19-2.22（m,2H）;4.04-4.13（m,6H）;4.22-4.27（m,2H）;4.52（m,D2Oにより一部遮蔽）;4.74（m,D2Oにより一部遮蔽）;5.83（d,J=8.1Hz,1H）;5.84（d,J=5.0Hz,1H）;6.195（t,J=6.9Hz,1H）;7.61（s,1H）;7.82（d,J=8.1Hz,1H）。31P-NMR（D2O，H3PO4からのδppm）：−22.71（m,2P）;−10.97（m,2P）。
実施例８
Ｐ1−（イノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4Ｉ）
ウリジン５′−環状トリメタリン酸（ＵｃＴＰ）とイノシン５′−一リン酸との縮合は本質的に上述した通りに行ったが、ただし反応混合物を25℃で５週間保存した後で溶媒の蒸発を行った。残渣を水（1.0ml）に溶かし、濾過し、そして150μｌアリコートにおいてHamilton PRP X-100カラム上での同一組成1.0Ｍ炭酸水素アンモニウムを用いて流速５ml／分で30分間に渡り溶出せしめるイオン交換クロマトグラフィーにより分離した。６〜９分に溶出する画分を蒸発させ、一晩凍結乾燥して緩衝液を除去した。ジヌクレオチド四リン酸（収率８％、HPLC（AUC）によると純度96％）を、260nmでのそれの紫外吸収と同波長でのＵＭＰおよびＩＭＰのものとの比較により定量した。1H-NMR（D2O中，テトラメチルシランからのδppm）：4.13（m,6H）;4.24-4.27（m,2H）;4.47（m,D2Oにより一部遮蔽）;5.78（d,J=7.9Hz,1H）;5.83（d,J=4.7Hz,1H）;6.003（d,J=5.7Hz,1H）;7.79（d,J=7.9Hz,1H）;8.10（s,1H）;8.37（s,1H）。31P-NMR（D2O，H3PO4からのδppm）：−22.43（m,2P）;−10.72（m,2P）。
実施例９
Ｐ1−（４−チオウリジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸〔ＵＰ4（４−ＳＨ−Ｕ）〕
４−チオウリジン一リン酸ナトリウム塩（25mg，0.057ミリモル）を水（0.5ml）に溶かし、トリブチルアミン形のBioRad AG-MP50強陽イオン交換樹脂（２mlベッド容積、３meq）のカラムに適用し、カラムを水（約10ml）を用いて溶出させ、そして溶出液を凍結乾燥した。得られた４−チオ−ＵＭＰのトリブチルアミン塩を、本質的に実施例７に記載した通りにジシクロヘキシルカルボジイミド（206mg）を用いたＵＴＰの活性化により調製したウリジン５′−環状トリメタリン酸（0.1ミリモル）と縮合せしめた（反応時間72時間）。反応混合物からDMSOを蒸発させた後、残渣を水（〜１ml）に溶かし、そして200μｌアリコートにおいてHamilton PRP X-100カラム上での同一組成1.0Ｍ炭酸水素アンモニウムを用いて流速５ml／分で328nmで溶出をモニタリングしながら溶出せしめるイオン交換クロマトグラフィーにより分離した。15分〜25分に溶出する画分を凍結乾燥して目的化合物を得た（収率9.7％、HPLC（AUC）によると純度99.7％）を、332nmでのそれの紫外吸収を同波長での４−チオ−ＵＭＰのものと比較することにより定量した。1H-NMR（D2O中，テトラメチルシランからのδppm）：4.04（m,HODにより一部遮蔽）;4.14（m,HODにより一部重複）;5.72（m,3H）;6.42（d,J=7.4Hz）;7.55（d,J=7.6Hz）;7.70（d,J=8.1Hz）。31P-NMR（D2O，H3PO4からのδppm）：−20.88（m,2P）;−9.27（m,2P）。
下記実施例10〜12の化合物は、ウリジン５′−環状トリメタリン酸（0.1ミリモル）と対応するヌクレオシド５′−一リン酸（0.2ミリモル）から本質的に実施例７に記載の通りに調製したが、ただし反応混合物からの過剰のＤＣＣを抽出するために用いたエーテルの代わりにヘキサンを使った。
実施例10
Ｐ1−（シトシンβ−Ｄ−アラビノフラノシド５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4araＣ）（20mg）：1H-NMR（D2O）:δ4.30-3.95（m,10H）;5.99（d,J=6.7Hz,1H）;6.08（d,J=5.2Hz,1H）;7.82-7.77（m,2H）。31P-NMR（D2O）：δ−10.79（m,2P）；−22.52（m,2P）。
実施例11
Ｐ1−（ウリジン５′−）Ｐ4−（キサントシン５′−）四リン酸（ＵＰ4Ｘ）（27.7mg）：1H-NMR（D2O）：δ4.50-4.40（m,10H）;5.80-5.70（m,3H）;7.70（d,J=8.0Hz,1H）;7.88（s,1H）。31P-NMR（D2O）:δ−10.73（m,2P）;−22.41（m,2P）。
実施例12
Ｐ1−（２′−デオキシウリジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＵ）（40.6mg）：1H-NMR（D2O）：δ2.20-2.15（m,2H）;4.45-3.95（m,9H）;5.80-5.74（m,3H）;6.12（t,J=6.7Hz,1H）;7.80-7.74（m,2H）。31P-NMR（D2O）：δ2.9（m,2P）;−8.9（m,2P）。
実施例13
Ｐ1−（３′−アジド−３′−デオキシチミジン５′−）−Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸〔ＵＰ4（ＡＺＴ）〕およびＰ1，Ｐ4−ジ（３′−アジド−３′−デオキシチミジン５′−）四リン酸〔（ＡＺＴ）2Ｐ4〕
３′−アジド−３′−デオキシチミジン５′−一リン酸（ＡＺＴＭＰ）ナトリウム塩（50mg，0.135ミリモル）を水（１ml）に溶かし、それをトリブチルアミン形のBioRad AG-MP50強陽イオン交換樹脂のカラムに適用した。水（〜10ml）を用いてカラムを溶離せしめ、そして溶出液を凍結乾燥した。得られたトリブチルアミン塩を、本質的に実施例７に記載された通りにジシクロヘキシルカルボジイミド（206mg）によるＵＴＰの活性化により調製したウリジン５′−環状トリメタリン酸（0.1ミリモル）と縮合せしめた。反応混合物の蒸発後に得られた残渣を水（1.0ml）に溶かし、0.45μmシリンジフィルターを通して濾過して少量の固体を除去し、そして濾液を1.0Ｍ炭酸水素ナトリウム（75％）とメタノール（25％）の同一組成混合物を用いて溶出させる（流速４ml／分）Hamilton PRP X-100カラム上での調製用HPLCにかけた。５〜８分に溶出する画分を凍結乾燥してＵＰ4（ＡＺＴ）を得（7.9％）、それの264nmでの紫外吸収を同一波長でのＵＭＰおよびＴＭＰのものと比較することにより定量した。1H-NMR（D2O中，テトラメチルシランからのδppm）：1.78（s,3H）;2.30-2.34（m,2H）;4.07-4.14（m,6H）;4.22-4.29（m,2H）;4.52（m,1H）;5.82（d,J=4.4Hz,1H）;5.84（d,J=8.1Hz,1H）;6.12（t,J=7Hz,1H）;7.62（s,1H）;7.81（d,J=8.1Hz,1H）。31P-NMR（D2O，H3PO4からのδppm）：−22.51（m,2P）;−11.06（m,1P）;−10.81（m,1P）。
同じ反応混合物からの25〜40分に溶出する画分の収集と凍結乾燥は、それの266nmでの紫外スペクトルをＴＭＰのものと比較することにより定量された、Ｐ1，Ｐ4−ジ（３′−アジド−３′−デオキシチミジン５′−）四リン酸（３％）を与えた。1H-NMR（D2O中，テトラメチルシランからのδppm）：1.80（s,6H）;2.31-2.35（m,4H）;4.09-4.11（m,6H）;4.46-4.47（m,2H）;6.12（t,J=7Hz,2H）;7.63（s,6H）。31P-NMR（D2O，H3PO4からのδppm）：−22.47（m,2P）;−11.35（m,2P）。
実施例14
Ｐ1，Ｐ6−ジ（ウリジン５′−）六リン酸（Ｕ2Ｐ6）
上記ジヌクレオチド六リン酸（6.97％）は、同様な条件下でのウリジン環状トリメタリン酸とウリジン５′−三リン酸との反応により得られた。1H-NMR（D2O,テトラメチルシランからのδppm）：4.06-4.19（m,6H）;4,21-4.26（m,4H）;5.78（d,J=8.2Hz,2H）;5.81（d,J=5.4Hz,2H）;7.78（d,J=8.1Hz,1H）。31P-NMR（D2O，H3PO4からのδppm）:−22.41（m,4P）;−10.89（m,2P）。
実施例15および16
２′（３′）−ベンゾイル−Ｐ1，Ｐ4−ジ（ウリジン５′−）四リン酸（実施例15）およびＰ1，Ｐ4−ジ（２′（３′）−ベンゾイルウリジン５′−）四リン酸（実施例16）
安息香酸（61.7mg，0.505ミリモル）と１，１−カルボニルジイミダゾール（81.8mg，0.505ミリモル）を無水ＤＭＦ（１ml）中で混合し、そして周囲温度で１時間攪拌した。そこに無水ＤＭＦ（２ml）中のＰ1，Ｐ4−ジ（ウリジン５′−）四リン酸（97mg，0.102ミリモル）の溶液を加え、混合物を周囲温度で４時間攪拌した。温度を35℃に上げ、そして６日間攪拌を続けた。反応混合物を蒸発乾固せしめ、残渣を水に溶かし、それをSephadex DEAE A25カラム（2.5×20cm）に適用し、そして炭酸水素アンモニウム勾配（０→0.3Ｍ，総量400ml）に続いて同一組成の炭酸水素アンモニウム（0.5Ｍ，500ml）を用いて溶出させた。２つの画分を集め、蒸発乾固せしめ、次いで水と一緒に繰り返し共沸蒸発してアンモニウム塩を除去した。先に溶出する物質はモノベンゾイルエステルであると同定された：1H-NMR（D2O）：δ4.0-4.23（m,9H）;5.35-5.45（m,1H）;5.65-5.85（m,3H）;5.98-6.02（m,1H）;7.32-7.95（m,7H）;31P-NMR（D2O）：δ−10.70（m,2P）;−22.28（m,2P）。後に溶出する物質はジベンゾイルエステルであると同定された：1H-NMR（D2O）：δ4.05-4.40（m,8H）;5.30-6.05（m,6H）;7.2-7.95（m,12H）;31P-NMR（D2O）：δ−10.70（m,2P）;−22.45（m,2P）。
実施例17，18，19および20
Ｐ1−（２′−デオキシグアノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＧ）（実施例17）；
Ｐ1−（２′−デオキシアデノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＡ）（実施例18）；
Ｐ1−（２′−デオキシイノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＩ）（実施例19）；および
Ｐ1−（２′−デオキシシチジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＧ）（実施例20）
水（18ml）中に溶かしたウリジン５′−三リン酸（5.0g）をDowex 50 H+カラムに通し、溶出液にトリブチルアミン（3.0g）を添加した。この混合物を油状物にまで濃縮し、乾燥ＤＭＦと一緒の蒸発により乾燥し、そして乾燥ＤＭＦ（18ml）中に再溶解した。その溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，3.5g）を加え、溶液を室温で30分間攪拌し、そして濾過により沈澱物を除去した。濾液にヘキサン（70ml）を加え、下層を分離し、ヘキサン（70ml）で再び洗浄してＤＣＣを完全に除去した。得られたウリジン５′−環状メタリン酸（ＵｃＴＰ）溶液を次の実験に使った。
実施例17
Ｐ1−（２′−デオキシグアノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＧ）
２′−デオキシグアノシン５′−一リン酸（ｄ−ＧＭＰ，Sigma，500mg）をＤＭＦ（4.5ml）に溶かし、そこにトリブチルアミン（1.0ml）を加え、生じた溶液を油状物にまで真空濃縮した。ウリジン５′−環状メタリン酸（ＵｃＴＰ，上記）溶液の１／３を加え、溶液を40℃で24時間加熱した。その溶液を油状物にまで蒸発させ、水（10ml）に溶かし、そして予め0.25Ｍ炭酸水素アンモニウムで平衡化された炭酸水素塩形のSephadex DEAEカラム（350ml，4.5×22cmカラム）に適用した。0.25，0.30，0.35，0.40および0.50Ｍ炭酸水素アンモニウムを用いて連続してカラムを溶離させた。溶離をHPLC（SynchroPak AX-300，75％0.50M KH2PO4，25％MeCN，流速1.0ml／分，UV 254nm）によりモニタリングし、そしてＵＰ4dＧを含む画分を濃縮して固体にし、次いで水と共に６〜７回蒸発せしめて、橙黄色固体として上記ジヌクレオチドのアンモニウム塩を得た（収量140mg，HPLC（AUC）による推定純度94％）。
実施例18
Ｐ1−（２′−デオキシアデノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＡ）
本質的に上述した通りの２′−デオキシアデノシン５′−一リン酸（ｄ−ＡＭＰ，Sigma，500mg）とウリジン５′−環状メタリン酸との反応は、白色固体のアンモニウム塩としてＵＰ4ｄＡを与えた（収量140mg，上記と同様なHPLC純度99％）。
実施例19
Ｐ1−（２′−デオキシイノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＩ）
ＵＴＰについて上述した通りに２′−デオキシイノシン５′−一リン酸（ｄ−ＩＭＰ，Sigma，ナトリウム塩，1.0g）をDowex 50（Ｈ+型）を使って遊離酸に変換した。トリブチルアミン（2.0ml）を使って溶出液を中和し、混合物を真空下で濃縮して油状物にした。生じたトリブチルアミン塩をＤＭＦと共に蒸発させることにより乾燥し、残渣をＤＭＦ（4.5ml）に溶かし、そして本質的に上述した通りにウリジン５′−環状トリメタリン酸で処理してＰ1−（２′−デオキシイノシン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸を得た。
実施例20
Ｐ1−（２′−デオキシシチジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸（ＵＰ4ｄＣ）
本質的に上述した通りに２′−デオキシシチジン５′−一リン酸（ｄ−ＣＭＰ，Sigma，500mg）を処理するとHPLC純度82％と評価されたＰ1−（２′−デオキシシチジン５′−）Ｐ4−（ウリジン５′−）四リン酸を得た。
実施例21
イノシトールリン酸アッセイにより測定した薬理活性
実施例１〜20の化合物をE．Lazarowski他，Bri．J．Pharm．116,1619-1627（1995）に記載されたイノシトールリン酸アッセイを使って、Ｐ２Ｙ1，Ｐ２Ｙ2，Ｐ２Ｙ4およびＰ２Ｙ6レセプター活性を惹起せしめる能力について試験した。結果を下記の表IIに要約する。
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本発明に属する技術分野の当業者が本発明を実施しそして使用できるような十分、明確、簡明かつ正確な用語で本発明、並びにそれの実施方法および使用方法を記載してきた。上記記載は本発明の好ましい態様を説明し、そして請求の範囲内に記載された本発明の精神または範囲から逸脱することなく本発明に変更を行い得ることを理解すべきである。発明と見なされる内容を具体的に指摘し且つ弁別的に権利請求するために、下記の請求の範囲が本明細書を締め括る。