(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１７７９＋／−１Ｄａ，１８６５＋／−１Ｄａ及び２０２２＋／−１Ｄａの分子質量をそれぞれ有する特定のペプチドであって、以下のアミノ酸配列をそれぞれ有するペプチドの高濃度の存在に関して組織サンプル、体液サンプル及び／又は血漿サンプルを分析することによって得られたデータを、自閉症の指標として利用する方法。
ＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬ                  （配列番号１）
ＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬ                （配列番号２）及び／又は
ＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬＲ              （配列番号３）
【請求項２】
ペプチドの量が自閉症でない患者のサンプル中に存在する量の１０倍以上である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
それぞれのペプチドがＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳシステムを用いて決定される請求項１または２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は患者のサンプルに基づく簡単なテストによる自閉症の診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
自閉症は患者の複合的な徴候に対する用語であり、これは周囲の人々とのコミュニケーション能力が劣るために問題の患者がその全生涯の間、様々な方法で社会によって世話されなければならないことを意味する。
【０００３】
スウェーデンで出生する１０００人の人のうち１〜５人が自閉症に罹患している。診断は確立するのが困難であり、確実にするために数年を要することもあり得る。自閉症の人の家族及び社会がとらなければならない教育的及び社会的処置は生涯続き、極めて費用がかかる。罹患者及びその家族の苦しみは大きい。生化学的治療法（例えば医薬品の使用）は今のところ知られていない。
【０００４】
自閉症の病態生理学はニューロンの間の異常な伝達を含み、おそらく脳における異常なパターンのペプチド（例えばニューロペプチド）に関連する。異常なレベルのペプチドは脊髄液及び／又は血漿中の１０ｋＤａ以下のタンパク質／ペプチドのプロテオミック研究によって明らかにされることができるであろう。自閉症における異常なレベルのペプチドの検出はその病態生理学に関する新しい仮説の生成を可能とし、診断を容易にし、新しい治療の可能性を示唆するであろう。ほとんどのペプチドは大きい前駆体分子のタンパク質分解によって生成されるため、異常なレベルのペプチドは異常なタンパク質分解活性によって生じるのかもしれない。
【０００５】
自閉症に関しては生化学的研究はほとんどなされていないし利用可能でない。何故なら動物モデルが利用可能でなく、多くの患者材料を集める実際的な問題があるからである。
【０００６】
従来技術においてＥＰ−Ａ−０９７９８２８は生物学的体液中に存在する特定のペプチドを決定することにより自閉症を診断する方法を開示する。３〜４個のアミノ酸を含むペプチドはそれらが高い量で存在する場合に自閉症を示すとされている。
【０００７】
ＥＰ−Ａ−０９６９０１５は体液の組織中に存在するペプチドを同定することにより自閉症の如き病気を診断する方法に関する。３〜８個のアミノ酸長を有しかつ１０８１未満の分子量を有するペプチドが開示されている。
【０００８】
Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ａ．ら（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，５０：６０９−６１３（２００１））は自閉症の人の血漿中のオキシトシン濃度が健康な人のものとは異なるということを開示している。オキシトシン−派生物（ｏｘｙｔｏｃｉｎ−ｅｘｔｅｎｅｄ）（ＯＴ−Ｘ）の量は自閉症の患者では高いが、オキシトシン（９個のアミノ酸）の量は低い。
【０００９】
ＵＳ−Ａ−２００２／０００６６４０はとりわけ自閉症の診断のためのポリペプチド及び方法に関する。
【００１０】
これらの文献のいずれも本発明のペプチドを開示していない。
【発明の開示】
【００１１】
本発明は、自閉症の原因は脳及び／又は脳に浸透する又は脳を取り巻く体液（即ち血液及び脳脊髄液）における異常ペプチドパターンの存在であるという仮説、及びこれらのペプチドのいくつかは伝達のために脳によって用いられる信号（例えば担持されるニューロペプチド）を妨げるかもしれないという仮説に基づいている。
【００１２】
本発明は体サンプル中に存在する特定のアミノ酸配列を有する特定のタンパク質／ペプチドの存在または不在の決定を特徴としており、これらのタンパク質／ペプチドは１７７９＋／−１Ｄａ，１８６５＋／−１Ｄａ及び２０２２＋／−１Ｄａの分子質量をそれぞれ有する。
【００１３】
特に本発明は組織サンプル、体液サンプル及び／又は血漿サンプル中の、正常レベルより高い一つ以上の以下のペプチドの存在を決定することに関する。
ＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬ                  （配列番号１）
ＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬ                （配列番号２）
ＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬＲ              （配列番号３）
【００１４】
本発明の方法の好ましい実施態様では、ペプチドの量は健康な患者のサンプル中に存在する量の１０倍以上である。
【００１５】
さらに好ましい実施態様では、それぞれのペプチドはＥＬＩＳＡ技術を用いて決定される。
【００１６】
別の好ましい実施態様では、それぞれのペプチドはＲＩＡ技術を用いて決定される。
【００１７】
さらに他の好ましい実施態様では、それぞれのペプチドはＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳシステムを用いて決定される。
【００１８】
本発明のさらなる側面では、それは前記ペプチドを決定するためのキットに関し、このキットは１７７９，１８６５及び２０２２の分子質量をそれぞれ有する特定のペプチドのためのマーカーを含む。
【００１９】
その好ましい実施態様では、それはアミノ酸配列ＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬＲ，ＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬ及び／又はＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬによってコードされる一つ以上のペプチドのためのマーカーを含む。
【００２０】
体液はここでは血液、血清、血漿、脊髄液、脳脊髄液及びリンパの如きいかなる体液をも意味する。
【００２１】
上で特別に同定した本発明のペプチドは補体因子Ｃ３と称される血漿タンパク質の断片であるかもしれない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明は新規のプロテオミック技術であるいわゆるＳＥＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（Ｃｉｐｈｅｒｇｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ．ＵＳＡ）技術を用いたパイロット研究において確立されたものである。そこでは４人の自閉症の子供の血漿のペプチドパターンと４人の自閉症でない子供の血漿のペプチドパターンが分析され比較された。それにより、それぞれが１５〜２０個のアミノ酸を含む少なくとも三つのペプチドが１７００〜２２００Ｄａｌｔｏｎの分子バンドで全ての自閉症の子供で過剰に存在することが見出された。前記ペプチドの量は自閉症でない子供と比べて自閉症の子供の血漿では少なくとも１０倍高かった。
【００２３】
図１は８人の個体（そのうち４人は自閉症と診断されず、４人は自閉症の子供と診断されている）から得られた１７００〜２２００Ｄａｌｔｏｎのバンドにおける八つの異なる質量分析プロフィールを示す。上側の四つは自閉症と診断されていない個体からの質量分析バンドであり、下側の四つは自閉症の子供からの質量分析バンドである。
【００２４】
自閉症の子供のサンプルには少なくとも三つの異なるピークが出現しており、自閉症と診断されていない子供のサンプルとはかなり異なることが明らかである。好適な分子質量マーカーを用いる場合、約１７７９，１８６５及び２０２２Ｄａｌｔｏｎに有意なピークが存在することが決定される。異なるピーク面積は存在するそれぞれのペプチドの量を表し、これらの量は自閉症と診断されていない子供からのサンプル中より自閉症の子供からのサンプル中の方が１０倍以上高い。
【００２５】
ペプチドの構造はＭＳ／ＭＳ質量分析法を用いて決定され、それによりそれらのアミノ酸配列はそれぞれＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬＲ（配列番号３）、ＳＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬ（配列番号２）及びＳＫＩＴＨＲＩＨＷＥＳＡＳＬＬ（配列番号１）であると決定された。第一のペプチドは補体Ｃ３ｆ（ＮＣＢＩアセッション番号１４１３２０５Ａ）として知られており、第二のペプチドはＣ末端アルギニンを欠失しており、第三のペプチドはＮ末端セリンをさらに欠失している。
【００２６】
選択されたペプチドの例えば血漿又は脊髄液サンプル中の濃度はＥＬＩＳＡ又はＲＩＡの如き免疫化学技術によって容易に決定されることができる。抗体が用いられ、抗体及び／又は抗原ペプチドの標識は一般的なプロトコールに従って、例えば放射能標識のためのクロラミンＴ法を用いて行われることができる。
【００２７】
上で同定されたこれらのペプチドの体液／組織中での高レベルの存在は少なくとも自閉症の症状のマーカーであり、自閉症の診断のために直ちに用いられることができる。しかしながら、これらのペプチドの高レベルの存在の決定は、自閉症の考えられる病因メカニズムが発見されたということをも意味し、これは自閉症の治療（例えばこれらのペプチドの生成を抑制することによる）の新しい可能性に導くものであろうということをも意味する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】８人の個体（そのうち４人は自閉症と診断されず、４人は自閉症の子供と診断されている）から得られた１７００〜２２００Ｄａｌｔｏｎのバンドにおける八つの異なる質量分析プロフィールを示す。
【図１】
0004452715.tif 000002