(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
黄皮の葉の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
【請求項２】
テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及びアンドロゲン受容体結合阻害作用を有する黄皮の葉の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載の抗男性ホルモン剤を含有することを特徴とする養毛化粧料。
【請求項４】
請求項１又は請求項２に記載の抗男性ホルモン剤を含有することを特徴とする前立腺肥大抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、黄皮の葉の抽出物が示すテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及びアンドロゲン受容体結合阻害作用を利用する抗男性ホルモン剤、養毛化粧料、前立腺肥大抑制剤、外用剤及び飲食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−リダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。
【０００３】
アンドロゲンは重要なホルモンではあるが、それが過度に作用すると、男性型禿頭、多毛症、脂漏症、座瘡、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等、さまざまな好ましくない症状を誘発する。
そこで、過剰のアンドロゲンの作用を抑制することによりこれら好ましくない症状を改善する手段、具体的には、テストステロンを活性型の５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−リダクターゼの作用を阻害することにより活性な５α−ＤＨＴを生じるのを抑制する方法と、テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法とが検討された。
【０００４】
その結果、シプロテンアセテート、オキセンドロン、酢酸クロルマジノン等の有効性が確認されたが、これらはステロイドホルモン誘導体であるためホルモン様作用等の好ましくない副作用を有するという欠点がある。
【０００５】
また、幾つかの生薬や植物体からの抽出物について、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用（特開昭６０−１４６６８２９号公報）、５α−ＤＨＴとその受容体との結合を阻害する作用（特開昭６４−３１２６号公報）等が知られている。しかしながら、これらの植物体抽出物の活性は弱く、抗男性ホルモン剤として広く利用されるには至っていない。
【０００６】
後述する本発明で活性成分抽出原料となった黄皮の葉については、文献（世界有用植物事典，平凡社，１９８９年発行）によれば咳、マラリア等の薬となるとされているが、抗男性ホルモン作用を有することは知られていなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用とアンドロゲン受容体結合阻害作用の両方を有する物質を植物体より見いだし、強力で安全な抗男性ホルモン剤として提供することにある。
【０００８】
本発明の他の目的は、男性ホルモン過剰による頭皮疾患の改善に有効で安全性にも優れた養毛化粧料を提供することにある。
【０００９】
本発明の更に別の目的は、安全性に優れた植物体抽出物を有効成分としてなる前立腺肥大抑制剤を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明により提供された抗男性ホルモン剤は、テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用及びアンドロゲン受容体結合阻害作用を有する黄皮の葉の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１１】
また、本発明により提供された養毛化粧料及び前立腺肥大抑制剤は、いずれも上記本発明による抗男性ホルモン剤を含有させてなるものである。
【００１２】
なお、「黄皮」（学名：Ｃｌａｕｓｅｎａ ｌａｎｓｉｕｍ（Ｌｏｕｒ．）Ｓｋｅｅｌｓ）はワンピ属ミカン科に属する常緑小高木であって、果実が食用又は生薬として利用されるため、インドから中国南部にかけて広く栽培されているものである。
【００１３】
【発明の実施の形態】
黄皮の葉にはテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用とアンドロゲン受容体結合阻害作用の両方を有する物質が含まれており、それは、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル等を抽出溶媒にして、容易に抽出することができる。
【００１４】
黄皮の葉から得られる上記活性物質は内服によっても外用によっても利用することができ、アンドロゲン過剰による各種疾患の治療と予防に優れた効果を期待することができる。
【００１５】
黄皮の葉から上記活性物質を得るには、黄皮の葉（生のものでも乾燥葉でもよい）を前記抽出溶媒、好ましくはエタノールを用いて任意の装置により抽出すればよい。簡単には、常温又は加熱した５〜１０倍量の抽出溶媒に黄皮の葉を数時間浸漬して可溶性成分を溶出させる。得られた抽出液を濃縮して乾燥すれば、好ましい芳香と酸味を有する黄皮葉抽出物が得られる。
【００１６】
この抽出物はそのままでも本発明の抗男性ホルモン剤の主剤とすることができるが、必要ならば、その活性向上に有効な任意の精製処理を施してから製剤化してもよい。
【００１７】
外用剤として利用する場合は、黄皮葉抽出物又はその精製物をそのままヘアトニック、シャンプー、リンス、ローション、クリーム、乳液、パック、軟膏、浴用剤等に配合することができる。好ましい配合率は、黄皮葉エタノール抽出物の量で約０．００５〜１０質量％である。
【００１８】
内服剤として利用する場合は、黄皮葉抽出物を賦形剤等の助剤と共に錠剤、カプセル剤、散剤等にするか、精製水等に溶解又は懸濁させて液剤又は注射剤にするなど、任意の剤形に製剤化すればよい。
【００１９】
本発明による抗男性ホルモン剤は、任意の飲食品に添加して前立腺肥大抑制作用を有する飲食品とすることができる。添加対象飲食品として適当なものの具体例としては、和菓子、洋菓子、氷菓子、スプレッド、ペースト、漬物、ビン缶詰、畜肉加工品、魚肉、水産加工品、乳・卵加工品、野菜加工品、果実加工品、穀物加工品、各種調味料等がある。好ましい添加量は、標準的な黄皮エタノール抽出物として０．００５〜１０質量％、好ましくは０．０１〜５質量％である。
【００２０】
本発明による抗男性ホルモン剤はまた、脱毛の予防と治療等の目的で、ドッグフードなど愛玩動物や家畜のための食品に添加することができる。
【００２１】
【実施例】
〔実施例１〕
黄皮の葉の乾燥物を細切りしたもの１００ｇを還流抽出器に入れ、エタノール１０００ｍｌを用いて２時間加熱抽出した。抽出残渣を更に２回、同様に抽出処理し、得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、抽出物１１．１ｇを得た。
【００２２】
この黄皮葉エタノール抽出物についてテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用、蛋白変性作用、及びアンドロゲン受容体結合阻害作用を試験した結果は下記のとおりであった（蛋白変性率が極めて低いことにより、活性成分の酵素阻害作用は酵素を失活させる作用によるものではないことがわかる）。
【００２３】
テストステロン５α−レダクターゼ５０％阻害濃度          ５８２ｐｐｍ
蛋白変性率（５０ｐｐｍ添加時）                              １．４％
アンドロゲン受容体結合５０％阻害濃度                  １８．７ｐｐｍ
なお、試験法は次のとおりである。
【００２４】
＜テストステロン５α−レダクターゼ阻害作用＞
テストステロン（東京化成）４．２ｍｇをプロピレングリコール１ｍｌに溶解し、その２０μｌに、ＮＡＤＰＨ（オリエンタル酵母社製）を濃度が１ｍｇ／ｍｌになるように溶解した５ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．２）８２５μｌを加えて混合する。更に、試料のエタノール溶液８０μｌ及びＳ−９（ラット肝ホモジネート；オリエンタル酵母社製）７５μｌを混合し、３７℃で３０分間インキュベートする。
【００２５】
その後、塩化メチレン１ｍｌを加えて反応を停止させ、塩化メチレン層を分取して、反応生成物であるジヒドロキシテストステロン、アンドロスタンジオール等をガスクロマトグラフィーにより定量する。
【００２６】
別にコントロールとして、試料溶液の代わりにその溶媒だけを同量添加した場合について同様に処理し分析する。試料無添加時の反応生成物量に対する試料添加時の反応生成物量の比率を求め、テストステロン５α−レダクターゼ阻害率とする。
【００２７】
上記方法において、反応液中の試料濃度を種々変更して各濃度におけるテストステロン５α−レダクターゼ阻害率を求め、その結果から内挿法により、酵素活性を５０％阻害する試料濃度を求める。
【００２８】
＜蛋白変性作用＞
胎児血清アルブミン（Ｆｒ．Ｖ：ＳＩＧＭＡ）を０．０２％溶解したリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）９ｍｌに試料溶液１ｍｌを加え、１０分間撹拌した後、メンブランフィルターで濾過し、液体クロマトグラフィーにより残存アルブミンを定量する。
【００２９】
＜アンドロゲン受容体結合阻害作用＞
アンドロゲン依存性マウス乳癌細胞ＳＣ−３細胞を、２％ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ−２）培地を用いて１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ／１００μｌの細胞密度にて９６穴マイクロプレートに播種、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で培養する。２４時間後、試料及び１０−９モルのＤＨＴを添加したＨＭＢ培地（０．５％ＢＳＡ含有Ｈａｍ Ｆ１２＋ＭＥＭ培地）に培地を交換して４８時間培養する。
【００３０】
その後、培地を０．９７ｍＭのＭＴＴを含むＭＥＭ−２培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出する。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定する。
【００３１】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とする（下記結合阻害率の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
【００３２】
上記と並行して、試料単独でＳＣ−３細胞に及ぼす影響をみるため、ＨＭＢ培地にＤＨＴを添加せず試料のみを添加して、同様の培養と測定を行う。更に、コントロールとして、試料及びＤＨＴを添加しないＨＭＢ培地で培養した場合、及び試料を添加せずＤＨＴのみを添加したＨＭＢ培地で培養した場合についても同様の測定を行う。
測定結果より、抗アンドロゲン作用を示す結合阻害率を次式により算出する。
【００３３】
結合阻害率（％）＝〔｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｄ）｝／（Ａ−Ｂ）〕×１００
但し、Ａ：ＤＨＴ添加、試料無添加の場合の吸光度
Ｂ：ＤＨＴ無添加、試料無添加の場合の吸光度
Ｃ：ＤＨＴ添加、試料添加の場合の吸光度
Ｄ：ＤＨＴ無添加、試料添加の場合の吸光度
試料溶液の濃度を段階的に変更して上記阻害率の測定を行い、アンドロゲンの結合を５０％阻害する試料溶液濃度（ｐｐｍ）を内挿法により求める。
【００３４】
〔実施例２〕
男性型脱毛症及び頭部脂漏性皮膚炎の症状を有する２９歳から５１歳までの男性１０名を２分して使用群と不使用群に分け、使用群には実施例１による黄皮葉エタノール抽出物を０．２質量％含有する５０％エタノール水溶液を３週間、一日２回朝と夜に、通常使用しているヘアトニックにかえて使用させた。
【００３５】
不使用群には、通常使用しているヘアトニックにかえて５０％エタノール水溶液を、同じ条件で使用させた。試験開始日と試験終了日に同一条件で全員に洗髪させて、そのときの脱毛本数を数えさせた。
なお、条件を揃えるため、これら脱毛本数計数のための洗髪の２４時間前にも同一条件で洗髪させた。試験結果は表１のとおりであった。
【００３６】
【表１】
脱毛本数
0004585073.tif 000002
【００３７】
〔実施例３〕
下記の原料をヘアトニック製造の常法により処理して、養毛ヘアトニックを製造した。
精製水                                                  ７０．０質量部
黄皮葉エタノール抽出物（実施例１）                        ０．２
塩酸ピリドキシン                                          ０．１
レゾルシン                                                ０．０１
Ｄ−パントテニルアルコール                                ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１
１−メントール                                            ０．０５
１，３−ブチレングリコール                                ４．０
ニンジンエキス                                            ０．５
エタノール                                              ２５．０
香料                                                      適量
【００３８】
〔実施例４〕
下記の原料をローション製造の常法により処理して、皮脂分泌抑制作用を有するローションを製造した。
精製水                                                  ７０．０質量部
黄皮葉エタノール抽出物（実施例１）                        ０．２
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．２
１，３−ブチレングリコール                                ４．０
オレイルアルコール                                        ４．０
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０ＥＯ）    １．５
ポリオキシエチレンラウリルエーテル（２０ＥＯ）            ０．５
エタノール                                              １５．０
防腐剤                                                      適量
香料                                                        適量
【００３９】
〔実施例５〕
下記の原料をクリーム製造の常法により処理して、皮脂分泌抑制作用を有するクリームを製造した。
ステアリルグリチルレチネート                              ０．１質量部
黄皮葉エタノール抽出物（実施例１）                        ０．２
ビーズワックス                                          １０．０
セタノール                                                ５．０
親水ラノリン                                              ８．０
スクワラン                                              ３５．５
グリセリルモノステアレート                                ２．０
γ−オリザノール                                          ０．０５
精製水                                                  ４０．０
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０ＥＯ）    ２．０
ポリエチレングリコール                                    ０．５
防腐剤                                                      適量
香料                                                        適量
【００４０】
〔実施例６〕
下記の原料を飴製造の常法により処理して、前立腺肥大抑制作用を有する飴を製造した。
ショ糖                                                      ７０質量部
水飴                                                        ３０
クエン酸                                                      １
香料                                                          ０．１
黄皮葉エタノール抽出物（実施例１）                            ０．０１
【００４１】
〔実施例７〕
下記の原料をチューインガム製造の常法により処理して、前立腺肥大抑制作用を有するチューインガムを製造した。
チューインガムベース                                        ７０質量部
ショ糖                                                      ５４
水飴                                                        ２０
軟化剤                                                        ４
香料（ハッカ油）                                              １
黄皮葉エタノール抽出物（実施例１）                            １
【００４２】
〔実施例８〕
下記の原料をチョコレート製造の常法により処理して、前立腺肥大抑制作用を有するチョコレートを製造した。
チョコレート                                                ４５質量部
ショ糖                                                      １５
カカオバター                                                ２０
全脂粉乳                                                    ２５
黄皮葉エタノール抽出物（実施例１）                            ０．１
【００４３】
【発明の効果】
上述のように、本発明による抗男性ホルモン剤はテストステロン５α−レダクターゼ阻害作用とアンドロゲン受容体結合阻害作用を併せ持つことにより異なる作用点で男性ホルモン作用の発現を抑制する高活性のものであり、しかも果実が食品や生薬として利用されている黄皮を原料とするものであることにより安全性にも優れている。