(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＩＶ感染に関連する消耗性症候群（wasting syndrome）に罹患している患者の治療を目的とする、治療用組成物を経皮投与するための薬剤供給装置であって、
該装置は、
裏あてと、
動物の処置部位の皮膚に設けるのに適した透過性メンブランと、
前記裏あてと透過性メンブランの間に配置された吸収材とを有し、
前記治療用組成物は、ＨＩＶ感染に関連する消耗性症候群（wasting syndrome）の治療を目的とする治療用薬剤として、有効量のＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を含有しており、
前記吸収材は、該治療用組成物を、その表面に吸着しており、
該薬剤供給装置は、ＨＩＶ感染に関連する消耗性症候群（wasting syndrome）の治療を目的として、前記患者の皮膚に密着して設置する用途に適合している
ことを特徴とする薬剤供給装置。
【請求項２】
前記治療用組成物は、ＨＩＶ感染に関連する消耗性症候群（wasting syndrome）の治療を目的とする治療用薬剤として、少なくとも、１ｇのＤＭＦを含有している
ことを特徴とする請求項１に記載の薬剤供給装置。
【請求項３】
前記治療用組成物は、ＨＩＶ感染に関連する消耗性症候群（wasting syndrome）の治療を目的とする治療用薬剤として、少なくとも、５ｇのＤＭＦを含有している
ことを特徴とする請求項１に記載の薬剤供給装置。
【請求項４】
前記治療用組成物は、ＨＩＶ感染に関連する消耗性症候群（wasting syndrome）の治療を目的とする治療用薬剤として、５ｇ〜１５ｇのＤＭＦを含有している
ことを特徴とする請求項１に記載の薬剤供給装置。
【請求項５】
前記治療用組成物は、さらに、ＨＩＶ感染の治療に有効な、１種類またはそれ以上の他の薬剤を含有している
ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬剤供給装置。
【請求項６】
ＤＭＦ以外に、ＨＩＶ感染の治療に有効な、他の薬剤は存在していない
ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬剤供給装置。
【請求項７】
ＤＭＦ以外に、皮膚を介した全身吸収が可能であって、ＨＩＶ感染の治療に有効な、他の薬剤は存在していない
ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬剤供給装置。
【請求項８】
前記吸収材は、コロイド性二酸化シリコンであり、
前記透過性メンブランは、孔径約０．１μｍ〜約０．５μｍの細孔を有している、テフロンTMメンブランである
ことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の薬剤供給装置。
【発明の詳細な説明】
１．発明の分野
本発明は、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の極性の高い化合物を投与することによって、ウイルス性または微生物性感染、特にＨＩＶ等のレトロウイルスに感染した動物、または消耗性症候群、特にＨＩＶ感染または悪性疾患に関連した消耗性症候群に罹った動物の治療法に関する。また、本発明は、ウイルス性またはその他の微生物性感染または消耗性症候群に罹った動物の治療に用いる、DMFまたはＤＭＳＯ等の極性の高い化合物からなる医薬調製物および薬剤供給装置を提供する。
２．発明の背景
２．１  ヒト免疫不全ウイルス
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、持続性および進行性の感染を誘導し、ほとんどの場合、後天性免疫不全症候群（エイズ）に進展する（Barre-Sinoussiら、1983、Science 220:868-870;Galloら、1984、Science 224:500-503）。少なくとも２種類のＨＩＶ、すなわちＨＩＶ−１（Barre-Sinoussiら、1983、Science 220:868-870:Galloら、1984、Science 224:500-503）およびＨＩＶ−２（Clavelら、1986、Science 223:343-346;Guyaderら、1987、Nature 326:662-669）が存在する。ヒトにおけるＨＩＶの複製は主としてＣＤ４+Ｔリンパ球で起こり、ＨＩＶに感染するとこの細胞種が枯渇し、結果的に免疫機能不全、日和見感染症、神経機能障害、腫瘍増殖が起こり、最終的に死に至る。
ＨＩＶは、レトロウイルスのレンチウイルス亜科に属す（Teichら、1984、RNA Tumor Viruses,Weissら編、CSH-press、pp.949-956）。レトロウイルスはエンヴェロープを有する小型のウイルスで、一本鎖ＲＮＡゲノムを有し、ウイルスにコードされた逆転写酵素、すなわちＲＮＡ−依存ＤＮＡポリメラーゼによって作られるＤＮＡ中間体を経由して複製される（Varmus H.,1988,Science 240:1427-1439）。レトロウイルスには、その他に例えばヒトＴ−細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−Ｉ、−II、−III）およびネコ白血病ウイルス等の発癌性ウイルスが含まれる。
ＨＩＶウイルス粒子は、ｐ２４およびｐ１８と命名されたカプシド蛋白の一部を構成するウイルスコアと、ウイルスＲＮＡゲノムおよび早期複製を要求する酵素とから成っている。ミリスチン化ｇａｇ蛋白がウイルスコアを取り巻く外側のウイルスシェルを構成し、一方ウイルスシェルは感染細胞膜に由来する脂質膜エンヴェロープによって取り囲まれている。ＨＩＶエンヴェロープ表面の糖蛋白は、１６０ＫＤの単一プレカーサー蛋白として合成され、ついでウイルスが２種類の糖蛋白ｇｐ４１およびｇｐ１２０中に発芽する過程で細胞内プロテアーゼによって解裂される。ｇｐ４１は膜内外糖蛋白であり、ｇｐ１２０はｇｐ４１と非共有結合により、多分三量体または多量体として存在している細胞外糖蛋白である（Hammerskjold,M.and Rekosh,D.,1989,Biochem.Biophys.Acta 989:269-280）。
ＨＩＶは、その他のエンヴェロープを有するウイルスと同様に、ウイルス膜と標的膜のウイルスエンヴェロープ仲介融合を介して宿主細胞中にウイルスの遺伝物質を導入する。ＣＤ４細胞表面蛋白（ＣＤ４）がＨＩＶ−１ウイルスの細胞内レセプターとして働くので、ＨＩＶはＣＤ４+細胞を標的とする（Dalgleishら，1984,Nature 312:763-767;Klatzmannら，1984,Nature 312:767―768;Maddonら，1986,Cell 47:333-348）。細胞内へのウイルスの侵入は細胞内ＣＤ４レセプター分子と結合するｇｐ１２０に依存する（Palら，1993,Virology 194:833-837;McDougalら，1986,Science 231:382-385,Maddonら、1986,Cell 47:333-348）ことから、ＨＩＶのＣＤ４細胞への趨性を説明している。一方、ｇｐ４１はウイルス膜内のエンヴェロープ糖蛋白複合体に定着する。ｇｐ１２０のＣＤ４への結合はウイルス糖蛋白に配座的変化を誘導するが、この結合のみでは感染に至るには不十分である（Sattentau and Mooreの総説，1993,Philos.Trans.R.Soc.London（Biol.）342:59-66）。
単離したＨＩＶの研究で、各種ヒト細胞に対する感染能に非相同性が認められている（Miedemaらの総説，1994,Immunol.Rev.140:35-72）。広範に植継ぎを行ったＨＩＶ−１実験株のほとんどは累代培養Ｔ細胞株および初代培養Ｔリンパ球を容易に感染させたが、初代培養またはマクロファージでは感染が認められなかった。これらの株は、Ｔ−トロピックといわれている。Ｔ−トロピックＨＩＶ−１株は、エイズ後期段階のＨＩＶ−１感染者から検出される確率が高いと考えられている（Weissら，1996,Science 272:1885-1886）。ＨＩＶ−１の初代単離株（すなわち、広範な植継ぎが行われていないウイルス）は初代培養リンパ球、単球およびマクロファージで効果的に複製するが、累代培養Ｔ細胞株では生育が劣る。これらの単離株は、Ｍ−トロピックと呼ばれている。ウイルスのＴ−およびＭ−趨性決定因子はｇｐ１２０の第３変動領域（Ｖ３ループ）を変化されるようにマップされている（Choeら，1996,Cell 85:1135-1148;Cheng-Mayerら，1991,J.Virol.65:6931-6941;Hwangら，1991,Science 253:71-74;Kimら，1995,J.Virol.,69:1755-1761;O’Brienら，1990,Nature 348:69-73）。明瞭な趨性を有するというＨＩＶ単離株の特性ならびにＣＤ４細胞表面蛋白のみに結合するという所見のみでは感染に至るには不十分であり、ＨＩＶ−１が宿主細胞に侵入するためにはＣＤ４の他に細胞型に特異的なｃｏ−ファクターが必要であることを示唆している。
２．２  ＨＩＶ感染の治療
ＨＩＶ感染は世界的流行病であり、ＨＩＶ関連疾病は主要な世界的健康問題の一つである。有効な治療法を設計するために大きな努力が払われているにもかかわらず、現在のところエイズに対する抗レトロウイルス剤は存在していない。そのような薬剤を開発する試みの中で、ＨＩＶライフサイクルのいくつかの段階が治療的介入の標的として考えられている（Mitsuya,H.ら，1991,FASEB J.5:2369-2381）。宿主細胞蛋白の妨害は有害な副作用があると広く考えられていることから、ＨＩＶのライフサイクルに介入するための多くのウイルス標的が提案されている。例えば、ウイルスにコードされた逆転写酵素が薬剤開発の焦点と考えられている。ＡＺＴ、ｄｄＩおよびｄ４Ｔ等の２’，３’−ジデオキシニュクレオシド類似物を含む多くの逆転写酵素標的薬剤が開発され、ＨＩＶに対して活性を有することが認められている（Mitsuya,H.ら，1991,Science 249:1533-1544）。
新しいＨＩＶ−１治療法で、逆転写酵素（ＲＴ）を標的としたアジドチミジン（ＡＺＴ）、ラミブジン（３ＴＣ）、ジデオキシイノシン（ｄｄＩ）、ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）等の抗−ＨＩＶ化合物とＨＩＶ−１プロテアーゼ阻害剤を併用すると、ＡＺＴ単独（対数で約１の減少）と比較してウイルス負荷に対してはるかに有効であることが認められている（対数で２〜３の減少）。例えば、最近ＡＺＴ、ｄｄＩ、３ＴＣおよびリトナビアーの併用で印象的な結果が得られている（Perelson,A.S.ら，1996,Science 15:1582-1586）。しかし、これらの化合物を長期にわたって併用すると、毒性、特に骨髄に対する毒性が現れる恐れがある。また、細胞毒性のある治療法を長期にわたって行うと、キラー細胞の活性（Blazevic,V.,ら，1995,エイズ Res.Hum.Retroviruses 11:1335-1342）および抑制因子、特にケモキン類のランテス、ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１βの供給（Cocchi,P.,ら，1995,Science 270:1811-1815）によってＨＩＶの制御に必須なＣＤ８+Ｔ細胞の抑制が起こる。その他長期化学抗レトロウイルス療法の大きな問題は、部分的または完全な耐性を有するＨＩＶ突然変異の発達である（Lange,J.M.,1995,エイズ Res.Hum.Retroviruses 10:S77-82）。抗ウイルス療法では、このような突然変異が不可避であると考えられる。治療に伴う野生型ウイルスの消失および突然変異ウイルスの出現、それに伴うＣＤ４+Ｔ細胞数の減少パターンは、少なくともある種の化合物では、ウイルス変異株の出現がエイズ治療の失敗の主要な原因である。
また、ＨＩＶ感染の最も初期に細胞へのウイルスの侵入を阻害する薬剤を開発する試みが行われている。この場合、焦点は細胞表面のＨＩＶレセプターであるＣＤ４に置かれている。例えば、遺伝子組み換え可溶性ＣＤ４がある種のＨＩＶ−１株によるＣＤ４+Ｔ細胞の感染を阻害することが認められている（Smith,D.H.,ら，1987,Science 238:1704-1707）。しかし、ある種の初代ＨＩＶ−１単離株は、遺伝子組み換えＣＤ４による阻害に対して比較的感受性が低い（Daar,E.,ら，1990,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:6574-6579）。さらに、遺伝子組み換え可溶性ＣＤ４を用いた臨床試験で、明確な結果が得られなかった（Schooley,R.,ら，1990,Ann.Int.Med.112:247-253;Kann,J.O.,ら，1990,Ann.Int.Med.112:254-261;Yarchoan,R.,ら，1989,Proc.Vth Int.Conf.Onエイズ，p.564,MCP 137）。
また、抗ＨＩＶ薬剤の潜在的標的として、ある種のウイルスコード蛋白の決定的なウイルスに特異的な合成が行われるＨＩＶ複製の後期段階が提案されている。後期段階の合成はウイルスプロテアーゼの活性に依存し、このプロテアーゼを阻害する薬剤の開発が行われている（Erickson,J.,1990,Science 249:527-533）。
最近、ＣＤ８+Ｔ細胞によって産生されるケモキン類がＨＩＶ感染を抑制することが認められている（Paul,W.E.,1994,Cell 82:177;Bolognesi,D.P.,1993,Semin.Immunol.5:203）。
ＣＤ８+Ｔ細胞によって分泌されるケモキン類のランテス、ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１βがin vitroでＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２単離株を感染させた細胞におけるＨＩＶ−１ ｐ２４抗原産生を抑制することが認められている（Cocchi,F.ら，1995,Science 270:1811-1815）。
したがって、これらおよびその他のケモキン類は、ＨＩＶ感染の治療に有用であることが実証されたと思われるが、これら全ておよびその他候補薬剤の臨床試験の結果は依然として疑問である。
また、ＨＩＶ感染の治療に用いるワクチンを開発する試みが行われている。エイズ患者に存在する抗−ＨＩＶ抗体の主要な抗原は、ＨＩＶ−１エンヴェロープ蛋白（ｇｐ１６０、ｇｐ１２０、ｇｐ４１）であることが認められている（Batinら，1985,Science 228:1094-1096）。したがって、これら蛋白は抗−ＨＩＶワクチン開発の抗原として最も優れた候補であると思われる。宿主免疫系の免疫原性標的としてｇｐ１６０、ｇｐ１２０および／またはｇｐ４１の各種蛋白が、いくつかの研究グループによって使用され始めている。例えば、Ivanoff,L.,ら，米国特許第5,141,867号、Saith,G.,ら，WO92/22,654;Shafferman,A.,WO91/09,872;Formoso,C.,ら，WO90/07,119参照。しかし、ウイルスは急速に突然変異を起こし、これらワクチンの多くが効果を失うことから、ＨＩＶ蛋白を標的にしたワクチンにも問題がある。しかし、これら候補ワクチンの臨床結果が得られるのは、はるか将来のことである。
このように抗レトロウイルス剤の設計および試験に多大の努力が払われているにもかかわらず、有効で、毒性のない処置法が依然として望まれている。
２．３  消耗性症候群
消耗性症候群は、もとの体重から１０％以上の体重の減少および体脂肪に比例しない体重の減少を特長とする臨床上深刻な問題である（Weinrothら，1995,Infactious Agents and Disease 4:76-94;Kotler and Grunfeld,1995,エイズ Clin.Rev.96:229-275）。したがって、消耗は、体細胞質量よりも体脂肪の減少が顕著である飢餓とは区別することができる（Kotlerら，1985,Am.J.Clin.Nutr.42:1255-1265;Cahill,1970,N.Engl.J.Med.282:668-675）。消耗は、ＨＩＶ感染、その他の感染性疾患、敗血症、癌、慢性心血管系疾患、および下痢等多くの条件と関連がある（Kotlerら，1989,Am.J.Clin.Nutr.50:444-447;Heymsfieldら，1982,Am.J.Clin.Nutr.36:680-690）。重要なことは、感染または癌患者の顕著な死亡要因が消耗であることである。事実、エイズ患者では体細胞質量の減少と生存期間の間に直線的相関がある（Kotlerら，1989,Am.J.Clin.Nutr.50:444-447）。
エイズおよびその他の状態における消耗性症候群の原因は明らかではないが、単一の要因ではないと思われる。消耗性症候群では、代謝異常、ホルモン濃度の不規則、サイトキンおよび吸収不良等全てが認められている。エイズ患者の全てが消耗を患うとは限らないことから、消耗の原因はＨＩＶ自体ではないと考えられる。ＨＩＶに関連した消耗性症候群のほとんどは、明らかに二次感染および消化管疾患等エイズ併合症によるものである（Kotler and Grunfeld,1995,エイズ Clin.Rev.96:229-275）。
現在行われているものを含め、消耗性症候群の治療法としては栄養補給、ドロナビノールおよび酢酸モゲストール等の食欲増進剤、成長ホルモン等の同化療法、およびサイトキン阻害剤が考えられる。しかし、栄養補給および食欲増進剤では種々雑多な結果が得られ、その患者では脂肪のみが増加する傾向にあり、全体的な体細胞質量の増加は認められなかった。成長ホルモンおよびサイトキン阻害剤の投与は現在試験が行われているが、副作用の恐れがある（Kotler and Grunfeld,1995,エイズ Clin.Rev.96:229-275;Weinrothら，1995,Infectious Agents and Disease 4:76-94）
したがって、消耗の治療は癌およびエイズ等の深刻な疾病を患った患者の生存および安寧に必須であり、癌、エイズおよびその他の感染性疾患に関連した消耗性症候群の安全で、有効な治療法が要望されている。
２．４  ジメチルホルムアミドおよびその他の極性化合物の性質
Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（分子式Ｃ3Ｈ7ＯＮ）は、極性が高く、無色の吸湿性液体であり、低揮発性で、沸点は１５２．５〜１５３．５℃である。水、アルコール類およびある種の炭化水素系溶媒に可溶である。ＤＭＦは極性溶媒として広く使用され、経皮、吸入および経口摂取によって容易に吸収される。ＤＭＦは特に肝臓で急速に代謝され、主として尿中に排泄される。ラット、マウス、ハムスターおよびヒトにおけるＤＭＦの主要な代謝物は、Ｎ−ヒドロキシメチル−Ｎ−メチルホルムアミド（ＨＭＭＦ）、Ｎ−メチルホルムアミド（ＮＭＦ）、Ｎ−アセチル−Ｓ−（Ｎ−メチルカルバモイル）システイン（ＡＭＣＣ）、ならびにジヒドロキシメチルホルムアミド（ＤＨＭＦ）およびＮ−ヒドロキシメチルホルムアミド（ＨＭＦ）である。投与したＤＭＦの一部が、未変化のＤＭＦとして尿中に排泄される。
ＤＭＦの急性経皮、経口および吸入毒性は弱い。軽度から中等度の皮膚および眼刺激性を有し、容易に皮膚を透過する。ＤＭＦおよびその代謝物の毒性の標的臓器は肝臓であり、典型的な臨床病訴、古典的な血液の生化学的変化および肝臓のバイオプシーで認められる肝細胞壊死をともなう可逆的肝障害を起こすことが知られている。ＤＭＦは催奇形性を有するが、変異原性または発癌性は有さないと考えられている。
Ｖｉｚａらは、ＤＭＦおよびＤＭＳＯがｉｎ ｖｉｔｒｏである種の培養細胞株中のＨＩＶおよびヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）の複製を阻害すると報告している（Vizaら，1990,エイズ Res.Hum.Retroviruses 6:131-132;Vizaら，1989,AIDS-FORSCHUNG 4:349-352;Vizaら，1992,Antiviral Res.18:27-38および19:179の誤植訂正参照）。
ＤＭＦは、培養細胞中のある種の形質変換細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分別剤として知られている（Koeffler,1983,Blood 62:709-721;Calabresiら，1979,Biochem.Pharmacol.28:1933-1941参照）。ある種の悪性細胞にｉｎ  ｖｉｔｒｏでＤＭＦを添加すると、その後ヌードマウスに接種してもその催腫瘍性が低下すると報告されている（Dexter,1977,Cancer Res.37:3136-3140;Dexterら，1979,Cancer Res.39:1020-1025）。ＤＭＦおよびＮＭＦをヌードマウスの腹腔内に注射すると、ある種のヒト癌腫異種移植片の増殖が低下すると報告されている（Van Dongenら，1989,Int.J.Cancer 43:285-292;Braakhuisら，1989,Head & Neck 11:511-515;Van Dongenら，1988,Acta Otolaryngolo.105:488-493;Dexterら，1982,Cancer Res.42:5018-5022参照）。しかし、マウス肉腫同種異系移植片モデルでホルムアルデヒドおよびそのＮ−メチル誘導体の有毒副作用が認められたことから、研究者らはこれら薬剤の治療上の有用性を実証することはできないと判断している（Clarkeら，1953,Proc.Sec.Exp.Biol.Med.84:203-207）。
ＤＭＳＯによるヒト癌患者の処置が試みられ、他覚的反応は認められなかったと報告されている（Spremulli & Dexter,1984,J.Clin.Oncol.2:227-241参照）。頭部および頸部に癌を有するヒト患者にＮＭＦを経口投与しても肝毒性が認められ、有益な反応は認められない（Vogelら，1987,Invest.New Drugs 5:203-206参照）か、わずかな活性が認められたに過ぎないと報告されている（Plantingら，1987,Cancer Treat Rep.71:1293-1294参照）。
米国特許第３，５５１，１５４号では、局所処理した薬剤の経皮吸収を促進するための透過促進剤としてのＤＭＦの利用が開示されている。米国特許第４，８５５，２９４号では、局所処理した薬剤の経皮吸収を促進するための透過促進剤として用いたＤＭＳＯおよびＤＭＦによる皮膚刺激を軽減するためのグリセリンの利用が開示されている。Woodford & Barry（1986）は、抗ウイルス剤の経皮吸収を促進するための透過促進剤としてのＤＭＳＯの利用を報告している（J.Toxicol.Cut.& Ocular Toxicol.5:167-177）。
本明細書のセクション２（またはその他のセクション）で行った参考文献の引用または記載は、これらの引用例が本発明の先行技術として存在していることを認めるものではない。
３．  発明の要約
本発明は、ウイルスまたはその他の微生物の感染、特にＨＩＶ等のレトロウイルスの感染によって影響を受けた動物の治療に用いる方法、組成物および薬剤供給装置に関する。また、本発明は、ＨＩＶ感染または悪性疾患に関連した消耗等の消耗性症候群を示す動物の治療に用いる方法、組成物および薬剤供給装置を提供する。
本発明によると、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ジメチルホルムアミド、ＤＭＦ）、Ｎ−ヒドロキシメチル−Ｎ−メチルホルムアミド（ＨＭＭＦ）、Ｎ−ヒドロキシメチルホルムアミド（ＨＭＦ）、ジヒドロキシメチルホルムアミド（ＤＨＭＦ）、Ｎ−アセチル−Ｓ−（Ｎ−メチルカルバモイル）システイン（ＡＭＣＣ）、Ｎ−メチルホルムアミド（ＮＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ホルムアミド、アセトアミド、メチルアセトアミド、ジメチルアセトアミド、ジエチルアセトアミド、イソプロピルアセトアミド、ジイソプロピルアセトアミド、Ｎ−アセチルピペリジン、Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）アセトアミド、Ｎ，Ｎ’−ジ−（β−ヒドロキシエチル）アセトアミド、Ｎ−アセチルモルホリン、アクリルアミド、プロピオンアミド、Ｎ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミド、ピリジン−Ｎ−オキシド、または一般式Ｒ3−ＣＯ−ＮＲ1Ｒ2（ここで、Ｒ1およびＲ2はそれぞれ独立に、Ｈ、メチル、ハロメチル、飽和または不飽和Ｃ2−Ｃ3アルキル基、およびヒドロキシル化アルキル基からなる群より選ばれるか、またはＲ1およびＲ2は、一緒になって（ＣＨ2）4、（ＣＨ2）5、および（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2からなる群より選ばれ、そしてＲ3は、Ｈ、メチル、ハロメチル、および飽和または不飽和Ｃ2−Ｃ3アルキル基からなる群より選ばれる。）で表されるアミド類からなる群より選ばれる化合物を含む組成物を、治療が必要な動物に投与する。本治療用組成物は、上記化合物の２種類またはそれ以上の混合物であってもよい。
ＨＩＶ患者に用いる治療用組成物は、必要に応じて本発明の組成物と、次のものに限定はされないが、ニュクレオシド類縁逆転写酵素阻害剤、非ニュクレオシド類縁逆転写酵素阻害剤、およびプロテアーゼ阻害剤からなる群より選ばれるＨＩＶ治療に有効な別の薬剤１種類またはそれ以上と混用してもよい。
また本発明は、本発明のウイルス感染処置用組成物を処理した動物の体内から得た抗体から調製したワクチンも含む。
４．図の簡単な説明
本発明は、以下の詳細な説明、実施例および添付図面を引用して完全に理解することができる。ここで、
図１は、ＤＭＦを８時間、２カ所皮膚にパッチ処理した４名の患者における血漿ＤＭＦ濃度の経時的推移を示す。
図２は、ＤＭＦを６時間、２カ所皮膚にパッチ処理した３名の患者における血漿ＤＭＦ濃度の経時的推移を示す。
図３は、ＤＭＦを経皮処理した３名の患者について、定量的ＰＣＲで測定したＨＩＶ−１ウイルス負荷を示す。ＤＭＦパッチは、試験０、８および１３日（矢印で示す）に前腕に１２時間、２カ所行った。
図４は、ＤＭＦの経皮処置前後にＫａｒｎｏｆｓｋｙの性能評価評点にしたがって評価したＨＩＶ感染患者の一般状態を示す。詳細は、セクション７を参照。
５．発明の詳細な説明
本発明は、ウイルスおよび微生物性感染の治療に用いる方法、組成物および薬剤供給装置を提供する。実施例によれば、治療すべき感染は無症候性感染、潜在性感染、エイズ関連併合症の１種またはそれ以上の症状をともなう感染、および臨床的エイズをともなう感染を含むＨＩＶ等のレトロウイルスによる感染である。さもなくば、治療すべき感染は、風疹、ヒトヘルペスウイルス６等のヘルペスウイルス、ＥＢウイルスまたはサイトメガロウイルスによる感染、カプシド保護膜を有するあらゆるウイルスによる感染、ＨＩＶ感染患者における後天性感染等免疫系疾患をともなうあらゆる後天性感染を含むその他のウイルスまたは微生物性感染である。
また、本発明は体質量の減少を特徴とするあらゆる疾患または障害を治療または予防するための方法、組成物および薬剤供給装置を提供する。本発明の方法および組成物で治療することのできる特定の条件はウイルス（例えば、ＨＩＶ）、細菌、またはその他の種類の感染または敗血症、悪性疾患に関連した悪液質、化学療法または放射線療法に関連した消耗、慢性心血管系疾患に関連した消耗、有毒物質または放射性物質に暴露したことによる消耗、および下痢およびその他の消化器系障害を含むが、これらに限るものではない。
治療の対象はあらゆる動物であり、サル、乳牛、羊、去勢雄牛、豚、馬、ネコ、イヌ、鶏等を含み、好ましくは哺乳類、さらに好ましくはヒトの成人または幼児、例えば体重が少なくとも３ｋｇの幼児であるが、これらに限定するものではない。ここで用いる「患者」とは本発明にかかわる方法または組成物で治療を要する全ての動物を意味する。
本発明によれば、ＤＭＦ、ＨＭＭＦ、ＨＭＦ、ＤＨＭＦ、ＡＭＣＣ、ＮＭＦ、ＤＭＳＯ、ホルムアミド、アセトアミド、メチルアセトアミド、ジメチルアセトアミド、ジエチルアセトアミド、イソプロピルアセトアミド、ジイソプロピルアセトアミド、Ｎ−アセチルピペリジン、Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）アセトアミド、Ｎ，Ｎ’−ジ−（β−ヒドロキシエチル）アセトアミド、Ｎ−アセチルモルホリン、アクリルアミド、プロピオンアミド、Ｎ−フルオロメチル−Ｎ−メチル−ホルムアミド、ピリジン−Ｎ−オキシド、一般式Ｒ3−ＣＯ−ＮＲ1Ｒ2（ここで、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立にＨ、メチル、ハロメチル、飽和または不飽和Ｃ2−Ｃ3アルキル基、およびヒドロキシル化アルキル基からなる群より選ばれ、Ｒ3はＨ、メチル、および飽和または不飽和Ｃ2−Ｃ3アルキル基からなる群より選ばれる。）で表されるアミド類からなる群より選ばれる化合物、または一般式Ｒ3−ＣＯ−ＮＲ1Ｒ2（ここでＲ1およびＲ2は、それぞれ独立にＨ、メチル、ハロメチル、飽和または不飽和Ｃ2−Ｃ3アルキル基、およびヒドロキシル化アルキル基からなる群より選ばれるか、あるいはＲ1およびＲ2は、一緒になって（ＣＨ2）4、（ＣＨ2）5、および（ＣＨ2）2Ｏ（ＣＨ2）2からなる群より選ばれ、Ｒ3はＨ、メチル、ハロメチル、および飽和または不飽和Ｃ2−Ｃ3アルキル基からなる群より選ばれる。）で表されるアミド類からなる群より選ばれる化合物を含む治療組成物を投与する。
本発明の１実施例によれば、Ｒ1およびＲ2の少なくとも一方はメチル基である。別の実施例によれば、Ｒ1およびＲ2の少なくとも一方はフッ素化Ｃ1−Ｃ3アルキル基である。治療用組成物は、上記化合物の２種類またはそれ以上の混合物であってもよい。特に好ましい組成物は、ＤＭＦを含む組成物である。
ＨＩＶ感染動物の治療に用いる組成物は、必要に応じて本発明の組成物と、ＨＩＶ感染の治療に有効な１種類またはそれ以上の薬剤、例えばアジドブジン（ＡＺＴ、ＺＤＶ）、ザルシタビン（ｄｄＣ）、ジダノシン（ｄｄＩ）、ラミブジン（３ＴＣ）、スタブジン（ｄ４Ｔ）、等1種類またはそれ以上のニュクレオシド類縁逆転写酵素阻害剤、ネビラピン、デラビルジン、ロビリド、アテビルジン、ピリジノン等１種類またはそれ以上の非ニュクレオシド類縁逆転写酵素阻害剤、サクイナビル、インジナルビル、リトナルビル、ネルフィナルビル等１種類またはそれ以上のプロテアーゼ阻害剤または前記またはその他の抗−ＨＩＶ治療薬のあらゆる混合物から選んだ薬剤と併用してもよい。本発明の組成物とその他の抗−ＨＩＶ治療薬またはその混合物は、望ましい治療プロトコルにしたがって同時に、順次にまたはサイクルで投与することができる。
本発明の組成物は腸内または非経口等望ましいあらゆる経路、例えば経皮、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、硬膜外、リンパ節内および経口経路で投与することができるが、これらに限定するものではない。当該組成物は、例えば注入または大量注射、上皮または粘膜皮膚内層（例えば、口腔内粘膜、胃粘膜、腸粘膜または直腸粘膜等）からの吸収等従来の方法によって投与してもよいし、その他の生理活性物質と一緒に投与してもよい。
投与は、全身的であってもよいし、局所的であってもよい。さらに、本発明の医薬組成物を、心室内および気管内注射等適切な経路で中枢神経系に供給することが望ましい場合もある。心室内注射は、例えばＯｍｍａｙａレザバー等のレザバーに接続した心室カテーテルによって行うことができる。また、例えば吸入器または噴霧器を用い、製剤をエアロゾル剤と混合して肺動脈に投与してもよい。必要であれば、２種類以上の投与経路を用い、治療プロトコルにしたがって同時投与、順次投与またはサイクル投与を行ってもよい。
別の実施例では、本発明の組成物を処置の必要がある局部に投与するのが望ましい場合がある。これは例えば局所処理、注射、カテーテル、坐薬、インプラントによって行ってもよいが、これらに限定するものではない。前記のインプラントは、シアラスティックメンブラン等のメンブランまたはファイバーを含む多孔性、非多孔性またはゼラチン性の材料からなっている。
別の実施例によれば、本発明の組成物は小胞、特にリポソームに供給することができる（Langer,1990,Science 249:1527-1533;Treatら，Therapy of Infectious Disease and Cancer,Lopez-Berestein & Fidler編、Liss,1989,New York,pp.353-365のリポソーム；Lopez-Berestein,ibid.,pp.317-327参照。一般的なことは上記参照）。
さらに別の実施例によれば、本発明の組成物は徐放システムを用いて供給することができる。
ある実施例では、ポンプを用いることができる（Langer,上記；Sefton,1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201;Buchwaldら，1980,Surgery 88:507;Saudekら，1989,N.Engl.J.Med.321:547参照）。別の実施例によれば、高分子の材料を用いることもできる（Medical Applications of Controlled Release,Langer & Wise編、CRC Pres.,Boca Raton,Florida（1974）;Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance,Smolen & Ball編，Wiley,New York（1984）;Ranger & Peppas,1983,J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61;Levyら，1985,Science 228:190;Duringら，1989,Ann.Neurol.25:351;Howardら，1989,J.Neurosurg.71:105参照）。また別の実施例によれば、徐放システムを治療部位の近くに植入し、全身用量の一部を使用することもできる（Goodson,上記Medical Applications of Controlled Release,vol.2,pp.115-138,1984参照）。
Langerの総説（Science 249:1527-1533,1990）では、別の徐放システムについて考察が行われている。
さらに、本発明は医薬調製物を提供する。当該調製物は、治療的に有効量の本発明組成物と薬理学的に許容される担体とから成っている。本発明の実施例によると、「薬理学的に許容される」という用語は、動物、特にヒトに使用することが連邦または州の取締機関によって承認されているか、米国薬局方またはその他一般に認知された薬局方に記載されていることを意味する。「担体」とは、本発明の組成物の投与に用いる稀釈剤、アジュバント、補助剤または溶媒を指す。当該医薬品の担体は、水およびオイル等の滅菌した液体、落花生油、大豆油、鉱物油、ごま油等の石油、動物、植物または合成に由来するものを含む。医薬調製物を静脈内投与する場合は、担体として水が好ましい。生理食塩水、デキストローズ水溶液およびグリセロール溶液も液体担体として、特に注射液の担体として用いることができる。医薬品として適切な補助剤は、澱粉、グルコース、乳糖、果糖、ゼラチン、モルツ、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール  モノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、ポリエチレングリコール、水、エタノール等である。医薬調製物は、必要に応じて、少量の湿展剤、乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含んでいてもよい。これらの調製物は、溶液、懸濁液、乳化液、錠剤、丸剤、カプセル、粉剤、徐放性製剤等の形態であってもよい。調製物は、トリグリセロール等従来から使用されている固着剤および担体を用いて、坐薬に製剤してもよい。経口製剤は、医薬級のマンニトール、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的担体を含んでいてもよい。適切な担体は、E.W.Martinによって、“Reminton’s Pharmaceutical Sciences”中に記載されている。当該調製物は適当量の担体とともに、治療的に有効量の治療剤を、望ましくは精製された形態で含み、患者に投与するに適切な形態としてもよい。製剤は、投与モードに適したものとする。
本発明の組成物は、経皮的に投与してもよい。本発明の実施例によると、本発明の組成物を皮膚に直接投与する。別の実施例によると、本発明の組成物はレザバー（例えば、綿パッド、テフロンTM等の合成ポリマー、またはその他適当な吸収材）に処理し、それを皮膚、好ましくは閉塞包帯下に貼付する。別の実施例によると、本発明の組成物は皮膚パッチを用いて皮膚に処理する。皮膚に処理する場合、レザバー中またはレザバーに吸収させた場合、または皮膚パッチに添加する場合の組成物中の有効成分濃度は、約１０〜１００％、望ましくは少なくとも５０％、さらに望ましくは少なくとも９０％である。
好ましい実施例においては、ＤＭＦ等の極性化合物は適切な薬剤供給装置を用い、例えば１カ所または数カ所に皮膚パッチを行い、経皮的に投与する。必要であれば、皮膚パッチは裏あて、本発明の極性化合物を含浸させた吸収材等のレザバーおよび皮膚に密着させる透過性メンブランで構成してもよい。裏うちとしては、極性化合物によって化学的変化を受けないものであれば、天然または合成ポリマー等あらゆる材料を使用することができる。特に好ましいのは、高密度ポリエチレンの裏うちである。吸収材は、コロイド性の物質、例えばケイ藻土またはコロイド性二酸化シリコンであってもよい。透過性メンブランは、極性化合物に対して化学的に安定なものであればいかなる材料でもよく、必要であれば多孔性であってもよい。好ましい実施例によれば、透過性メンブランは孔径約０．１μｍまたは約０．５μｍ、または約０．１〜約０．５μｍの範囲にあるテフロンTMメンブランである。パッチは粘着性でもよく、または伸縮性の包帯または粘着性の包帯等（これらに限定しない）を含むラッピング材また包帯等のアプリケーターで皮膚に密着させてもよい。好ましくは、パッチは、被験患者の皮膚から供給したい量より多い極性化合物を含む。例えば、パッチは、供給したい量よりも約５０％多い極性化合物を含む。パッチの大きさおよび形は望ましいものであればよく、例えば直径約９ｃｍのディスクであってもよい。
本発明の１実施例によれば、パッチはＤＭＦ等の極性化合物と、少なくとも１種類の別の薬理学的に活性な成分、例えばグリセリン等の抗局所刺激剤とを含む。別の実施例によれば、パッチはＤＭＦ等の極性化合物を含み、その他の薬理学的に活性な成分を含まない。さらに別の実施例によれば、パッチはＤＭＦ等の極性化合物を含むが、皮膚から全身に吸収されるような薬理学的に活性な成分や経皮吸収後に全身に影響を及ぼすほどの量の薬理学的活性成分を含まない。また別の実施例によれば、パッチはＤＭＦ等の極性化合物を含むが、その他の抗ウイルス剤、例えばアシクロビルまたはアリルドンを含まない。
したがって、本発明はヒトの成人または幼児におけるウイルスまたは微生物性感染（例えば、ＨＩＶ感染）の処置に有効な量のＤＭＦ等の極性化合物を含む皮膚パッチを提供する。さらに、本発明はヒトの成人または幼児における消耗性症候群の処置に有効な量のＤＭＦ等の極性化合物を含む皮膚パッチを提供する。本発明の実施例によると、パッチは少なくとも０．２５ｇ、望ましくは少なくとも０．５ｇ、さらに望ましくは少なくとも１ｇ、さらに望ましくは少なくとも５ｇ、例えば５〜１５ｇのＤＭＦ等の極性化合物を含む。
極性化合物の揮散による損失を防ぐため、密封したポリマーの袋等の密封容器にパッチを入れて保存してもよい。必要であれば、用時に便利なように各パッチを別々に密封してもよい。必要であれば、使用前にパッチを例えば約４℃で冷蔵保存し、極性化合物の揮散による損失を防いでもよい。望ましくは、使用２４時間前にパッチを調製し、密封容器に入れて４℃で保存してもよい。しかし、パッチは密封容器に入れて４℃で保存した場合、１週間以上安定である。パッチ貼付前に、貼付部位の皮膚を弱性石鹸と水で洗い、濯いで石鹸の残りを洗い流し、よく乾燥させ、ＫＹTMジェリー等の適当な皮膚潤滑剤および湿潤剤で加湿するのが望ましい。ついで、包装からパッチを取りだし、準備した皮膚表面に透過性メンブランが密着するように貼付する。アプリケーターで、パッチを固定してもよい。所定処置時間後、パッチを除去する。パッチを除去した後、弱性石鹸と水で処置部位をよく洗い、残った極性化合物を洗い流す。
本発明の組成物は、必要に応じた間隔、例えば２〜３週間に１回、週１回、２回または３回、２日に１回または毎日投与してもよい。望ましくは、本発明の組成物は組成物中のＤＭＦ等有効成分の血漿最高濃度が約２〜２００ｍｇ／Ｌ、さらに望ましくは約１００〜２００ｍｇ／Ｌ、さらに望ましくは１５０ｍｇ／Ｌになるように投与する。ＤＭＦの血漿最高濃度１００〜１５０ｍｇ／Ｌまたは１５０〜２００ｍｇ／Ｌが特に望ましい。ここで用いた“ｐｐｍ”は重量で百万分の１を意味し、実質的にｍｇ／Ｌに等しい。
極性化合物の経皮投与にあたっては、被験者の皮膚からの吸収速度を測定する。ヒトの皮膚に処理した液体ＤＭＦは約９．４ｍｇ／ｃｍ2／時間の一定した速度で吸収される（Mraz & Nohova,1992,Occup.Env.Health 64:85-92参照）。したがって、各パッチの面積および皮膚に貼付するパッチの数等によって薬剤を処理する皮膚の表面積を制御することによって、目的とする吸収速度を得ることができる。例えば、極性化合物を含浸させた直径９ｃｍのパッチ２枚を総面積１２７ｃｍ2の皮膚に貼付した場合、ＤＭＦでは約１．２ｇ／時間の吸収速度が得られる。ＤＭＦの初期投与量は約１５ｍｇ／ｋｇとすることが特に望ましい。
本発明の１実施例においては、体重約７２ｋｇの患者に直径９ｃｍのパッチ２枚を１時間貼付することによってＤＭＦを処置すると、ＤＭＦの初期吸収量は約１．２ｇとなり、約１６．７ｍｇ／ｋｇに相当する。被処置患者の体重によって、パッチ数を増減させたり、貼付時間を増減させる。この初期処置薬量を上記のように所定の間隔、望ましくは週１回の間隔で反復投与する。望ましくは、ＤＭＦ投与後少なくとも７２時間にわたって例えば血清または血漿のアスパラギン酸トランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、γ−グルタミルトランスフェラーゼ（γＧＴ）およびアルキルホスファターゼ等の酵素濃度、アルブミン等の蛋白濃度、または共役または非共役ビリルビン等の物質濃度の測定によって患者の肝毒性等の毒性症状を監視する。血清または血漿中のＡＳＴおよびＡＬＴ濃度は、研究室または該当集団の正常範囲の上限値の５倍以内であることが望ましく、さらに望ましくは正常値の上限の３倍以内であり、特に正常を超えないか、処置前の濃度を超えないことが望ましい。ＤＭＦの薬量は、パッチの貼付時間を順次長くすることによってエスカレートさせてもよい。本発明の実施例によると、パッチの貼付時間を２時間、４時間、６時間等と長くする。別の実施例によると、パッチの貼付時間を順次２倍にする。貼付時間をエスカレートする場合は、毒性症状を検出するため、あらかじめ患者を診察することが望ましい。必要であれば、貼付時間を週間隔でエスカレートさせる。このようにして、算出薬量が約１５０ｍｇ／ｋｇ／回に達するまで、または目的とする血漿最高濃度、例えば１００〜１５０または１５０〜２００ｍｇ／Ｌが得られるまで、または貼付時間が約６時間または約８時間になるまで、薬量をエスカレートさせる。薬量を２４０ｍｇ／ｋｇ／回以上にあげる場合は、注意を要する。
６．  実施例：Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の経皮投与によるＨＩＶ感染の治療
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）ゲルを含浸させた皮膚パッチを患者の体に貼付することによって、ＨＩＶ−１感染患者にジメチルホルムアミドを処置した。肝ブースターとして、Ｎ−アセチル−システイン−グルタチオンおよび／または必須リン脂質を２５０〜３００ｍｇ／日の用量で患者に投与した（経口投与または静脈内注射）。これらの代わりに、または追加として、グルタミンを肝ブースターとして患者に投与してもよい。
患者の体、例えば前腕の異なった部位に、皮膚パッチ２枚を貼付した。各皮膚パッチは、ＤＭＦ（９２．５％ｍ／ｍ）とコロイド性二酸化シリコン（７．５％ｍ／ｍ）を含むゲル約７．０６ｇを含む。ゲルは、パッチからの液体ＤＭＦの漏出を防止するための働きをする。ＤＭＦは急速に揮散するため、パッチは使用約１２時間前に調製した。患者血中ＤＭＦ濃度の目標値を、１００ｐｐｍとした。体重約６０ｋｇの患者で１００ｐｐｍの血中濃度を得るためには、約１４ｇを１２時間貼付する必要がある。Marz & Nohovaの試験に基づいて算出したこの量を吸収するに要する表面積は、約１２７．２ｃｍ2である。１００ｐｐｍの血中濃度を得るためには、１時間たり約１．２７２ｇのＤＭＦが吸収される必要がある。したがって、所定量を供給するために、各スティッカーには約７．０６４ｇのＤＭＦを添加し、６．３６ｃｍ2の表面積が必要であった（各スティッカー）。ＤＭＦの吸収速度は、９．４ｍｇ／ｃｍ2／時間であった。この処理によって理論的には１２５〜１３５ｐｐｍが供給されるはずであるが、ＤＭＦの揮散により、１００ｐｐｍが得られた。吸収能は、皮膚の種類および皮膚の厚さ等の要因に依存し、患者によって変動する。所定のＤＭＦ濃度を得るため、各患者について血漿ＤＭＦ濃度を測定し、各患者のＤＭＦ濃度に応じて処理を調整した。ＤＭＦパッチ２枚を８時間貼付した患者４名の血漿ＤＭＦ濃度を図１に示す。ＤＭＦパッチ２枚を６時間貼付した患者３名の血漿ＤＭＦ濃度を図２に示す。
各スティッカーには、このようにＤＭＦと二酸化シリコンを含むゲル約７．０６４ｇが充填されていた。各パッチは、週１回で１２週間または週２回で６週間にわたって毎回１２時間貼付した。
一部の患者の血液検査で、わずか３回処理後の３週間以内にＣＤ４ Ｔ−細胞の３５０から１０００への増加およびＰＣＲ（ポリメラーゼチェイン反応）（ウイルス負荷）の１２０，０００から５００／ｍｌへの急激な減少が認められた。処置前およびＤＭＦ皮膚パッチ２枚１２時間貼付で３回処置後の患者におけるＨＩＶ−１ウイルス負荷のＰＣＲによる一連の定量値を図３に示す。ＰＣＲ試験は、Ｒｏｃｈｅ Ａｍｐｌｉｃｏｒ ＨＩＶモニターを用いて行った。ウイルス負荷の検出限界は、５００／ｍｌとした。
処置を行う患者の一部で、処置前に重度の座瘡または風疹の症状が認められた。患者の血中ＤＭＦ濃度が５０〜１００ｐｐｍになるようにＤＭＦを処置すると、７日以内に風疹症状および重度の座瘡が消失した。
ジメチルホルムアミドで処置する前に、患者について広範な臨床的および心理学的ベースライン評価を行った。患者の生化学的および血液学的評価を行い、ベースラインデータを得た。詳細なウイルス血清学的（ＨＩＶ−１）試験も行い、患者の総体内ウイルス数を数えた。これらの試験は、週１回または各処置時に行った。
患者の血中ＤＭＦ濃度は、処置期間中１時間ごとに行った。血液試料を採取するために毎朝静脈カテーテルを挿入し、生理食塩水を２０ｍｌ／時間の速度で注入し、目詰まりを防ぎながら、挿入したままにした。ＤＭＦに由来する活性代謝物ＡＭＣＣを毎日測定した（例えば、４時間尿試料を採取し）。その後のＤＭＦ処理量を吸収変量の変化に基づいて調整し、毎日完全な血液学的および生化学的プロファイルを測定し、肝機能の変化を検出した。また、完全な臨床的および心理学的評価も行った。
総体内ウイルス数を求め、患者の免疫状態（ＣＤ４ Ｔ−ヘルパー細胞）の改善および予後ファクターを追跡するため、毎日ウイルス血清学的検査を行った。血清学的検査は、ｐ２４抗原および定量的ＰＣＲ、または場合によっては別の方法に基づいて行った。特に患者の免疫状態および予後の改善を追跡するため、ＣＤ４数およびβ−２−マクログロブリンの測定も毎週行った。有害な変化に迅速に対応し、臨床的効果が最高となり、副作用を最小限とするために貼付時間を調整できるように、全ての臨床および検査データを集中データシステムに入力した。
この試験は以下の項目を含む。
ａ）血清：Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、ＣＯ2、尿素、クレアチニン、Ｃａ、Ｍｇ、無機リン、総および共役ビリルビン
ｂ）血液学的検査：ヘモグロビン、赤血球数、ヘマトクリット、ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ、ＲＤＷ
ｃ）血清蛋白電気泳動：総蛋白、アルブミン、総グロブリン、α−グロブリン、α２−グロブリン、β−グロブリン、γ−グロブリン
ｄ）白血球分析：白血球百分比、絶対好中球、リンパ球、単球、好酸球、および好塩基球数
ｅ）肝酵素：アルカリホスファターゼ、γ−ＧＴ、ＡＬＴ（ＳＧＰＴ）、ＡＳＴ（ＳＧＯＴ）、ＬＤＨ
ｆ）その他：細胞マーカー、ＰＣＲ、β２−マクログロブリン、ｐ２４抗原、Ｃ−反応性蛋白、ＣＫ−ＭＲ濃度
ｇ）血中ＤＭＦ濃度の分析
ｈ）尿中のＡＭＣＣ濃度の分析
ＤＭＦは上記のように逆転写酵素およびプロテアーゼの少なくとも１つの阻害剤として作用する。Ｉｎ ｖｉｔｒｏの試験で、ＤＭＦは溶媒としての特性によりウイルス粒子、例えばカプシドを溶かすものと思われる。
７．  実施例：Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の経皮投与によるＨＩＶ感染の処置
ＨＩＶ感染患者に経皮投与したＤＭＦの効果を評価するため、パイロット試験を行った。各患者からインフォームドコンセントを得た。ｐ２４抗体検出用の市販のキット（Ａｂｂｏｔｔ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いたウエスターンブロット分析で血清陽性状態を確認し、市販キット（Ｒｏｃｈｅ Ａｍｐｌｉｃｏｒ）を用いた定量的ＰＣＲでＨＩＶ−１の有無を記録した。
購入したＤＭＦ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）および血漿試料中のＤＭＦは、Ｖａｒｉａｎ ９６００ガスクロマトグラフ、ＯＶ ３５１カラム、ｃａｒｂｏｗａｘ−ＰＥＧキャピラリーカラム、Ｆｉｎｎｅｇａｎ Ｍａｔ ＩＴＳ４０イオントラップ検出器を用いたマススペクトロメーター／ガスクロマトグラフィー（ＧＣ／ＭＳ）で分析した。操作パラメーターは以下のように設定した。ＧＣ昇温プログラム：６０℃で１分、ついで９．４℃／分で２０分間の温度グラジエント。
ＭＳのイオン化法：ＥＩ法。マスレンジ：４０〜８０質量単位、１スキャン／秒。ピーク閾値：３カウント／秒。バックグラウンドマス：６９質量単位。内標として、ジメチルアセトアミドの原液を用いた。内標を含む有機溶媒で全ての試料を抽出し、冷蔵庫中で３０分間放置し、沈殿させた。ついで、３０００ｇで５分間遠心分離し、注入用のＧＣバイアルに移した。内標に対するＤＭＦピークの保持時間は３．２６分であり、検量線の相関係数は０．９８であった。ＤＭＦの定量は１００ｍｇ／Ｌの濃度まで直線的であり、検出限界はシグナル対バックグラウンド比３：１で０．５ｍｇ／Ｌであった。
直径９ｃｍの皮膚パッチを、調製後１２時間以内に用いた。各パッチは、高密度ポリエチレンの裏あて（０．２４５ｇ）および皮膚に接するためのテフロンTM透過性メンブラン（孔径０．２μｍ、０．２６８ｇ）を有し、裏あてと透過性メンブランの間に７．０６７ｇのＤＭＦを含浸させた二酸化シリコン０．５７３ｇを含んでいた。パッチは肉眼検査で漏れのないことを確認し、分析用天秤で総重量８．１５３ｇとの差が１０％以内にあることを確認した。パッチを前腕の皮膚に貼付し、ＥｌａｓｔｏｐｌａｓｔTM包帯で固定した。初回の処理には、予測した皮膚移行速度９．４ｍｇ／ｃｍ2／時間および患者の体重から１枚または２枚のパッチを用いた。
ＤＭＦの段階的用量を用い、２時間ごとに血液および尿を採取して血漿ＤＭＦ濃度のピークを求めた。血漿ＤＭＦ濃度が１００〜１２０ｐｐｍのピークに達するまで用量を上げる過程で、患者は有害副作用の有無を臨床的に追跡し、広範な生化学的検査の下に置いた。正しい用量が確立された後は、週１回ＤＭＦを経皮投与した。初期の評価として、以下の項目を毎日測定した。
ａ）  生存徴候および体重
ｂ）  臨床的チェックリストおよびＫａｒｎｏｆｓｋｙ評点
ｃ）  完全な血球数および血沈
ｄ）  血清尿素、クレアチニン、グルコース、Ｎａ、Ｋ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、アルカリホスファターゼ、および総ビリルビン
ｅ）  ＣＤ４+およびＣＤ８+数およびＣＤ４／ＣＤ８比のコールターカウンター分析
ｆ）  ＰＣＲ（Ｒｏｃｈｅ Ａｍｐｌｉｃｏｒ）によるＨＩＶ−１の量の評価およびｐ２４抗体（Ａｂｂｏｔｔ）の分析
ｇ）  尿検査（Ｄｉｐｓｔｉｘ）
週１回の外来時に、患者の悪影響を評価し、これらの検査のほとんど全てを繰り返し、ＤＭＦおよびその代謝物を分析するための血液および尿を採取した。
患者１（ＡＤＦ）は、試験を開始したとき健康状態が比較的良好で、主として手足の疼痛および不眠を訴えた。２枚のＤＭＦパッチを週１回、平均貼付時間８時間で投与した。週平均ＤＭＦ投与量は６．１１ｇで、得られた血漿ＤＭＦ濃度のピークは平均で７５ｍｇ／Ｌであった。９週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は１４０から６４０細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は２５０，０００から５０，０００コピー／ｍＬに減少した。１０週間後には、体重が８１．９から９６．０ｋｇに増加し、患者の臨床状態は良好であり、もはや四肢の疼痛を訴えなくなった。
患者２（ＡＭ）は、試験を開始したとき力の消失、不眠、手足の疼痛を訴え、口腔内に疱疹が認められた。ＤＭＦパッチ１枚を週１回、平均貼付時間８時間で投与した。週平均ＤＭＦ投与量は７．１２ｇで、得られた血漿ＤＭＦ濃度のピークは平均で１２５ｍｇ／Ｌであった。９週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は４６０から７２０細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は２９，０００から１３，０００コピー／ｍＬに減少した。患者の体重は５８．４から６３．０ｋｇに増加した。患者の疱疹は消失し、四肢の疼痛も消失し、臨床的に良好であると思われた。
患者３（ＳＭ）は、試験を開始したとき臨床的に明らかにエイズに罹り、呼吸困難を訴えた。ＤＭＦパッチ２枚を週１回、平均貼付時間８時間で投与した。週平均ＤＭＦ投与量は８．９７ｇで、得られた血漿ＤＭＦ濃度のピークは平均で１２１ｍｇ／Ｌであった。７週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は３９から１３８細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は２２２，０００から１６０，０００コピー／ｍＬに減少し、患者の体重は７４．２から１００ｋｇに増加した。患者の食欲を取り戻し、呼吸困難も消失し、患者は臨床的に良好で、再び運動を開始した。
患者４（ＥＭ）は、試験を開始したとき二次感染（風疹）、貧血、下痢および座瘡が認められた。ＤＭＦパッチ２枚を週１回、平均貼付時間８時間で投与した。週平均週間ＤＭＦ投与量は７．３３ｇで、得られた血漿ＤＭＦ濃度のピークは平均で９０ｍｇ／Ｌであった。１８週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は２４９から４５０細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は１３，０００から４，０００コピー／ｍＬに減少し、患者の体重は８１．５から９０．４ｋｇに増加した。患者は臨床的に良好で、医学的な訴えはなくなった。
患者５（ＳＶ）は、試験を開始したとき食欲不振、健忘症、腹部の苦痛、重度の疲労のため事業資産を売却することを考えていた。ＤＭＦパッチ２枚を週１回、平均貼付時間６時間で投与した。週平均週間ＤＭＦ投与量は３．７５ｇで、得られた血漿ＤＭＦ濃度のピークは平均で６７ｍｇ／Ｌであった。５週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は３５４から３９６細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は１５６，０００から１３，０００コピー／ｍＬに減少し、患者の体重は５６．０から５８．０ｋｇに増加した。患者は臨床的に良好で、共同経営者の株を買収し、自分で事業を行うようになった。
患者６（ＶＶ）は、試験を開始したとき二次感染（風疹）、運動失調、左腕および左顔面のしびれを訴えていた。ＤＭＦパッチ２枚を週１回、平均貼付時間８時間で投与した。週平均週間ＤＭＦ投与量は８．２５ｇで、得られた血漿ＤＭ濃度のピークは平均で１１０ｍｇ／Ｌであった。１９週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は２６０から４５０細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は１２０，０００から２４，０００コピー／ｍＬに減少し、患者の体重は７５．４から８４．６ｋｇに増加した。二次感染は消失し、患者は臨床的に良好であった。
患者７（ＡＪＦ）は、試験を開始したとき健康状態がきわめて悪化していた。患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は２９細胞／μＬで、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は１，１５６，０００コピー／ｍＬであった。ＤＭＦパッチ１枚を平均貼付時間４時間で投与した。週平均週間ＤＭＦ投与量は４．６０ｇで、得られた血漿ＤＭ濃度のピークは平均で１００ｍｇ／Ｌであった。１回目処置後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は１４細胞／μＬに減少した。毎日５日間にわたって処置を続け、その後は週１回の割合で処置を続けた。９週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は３５細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は９，０００コピー／ｍＬに減少し、患者の体重は４６．５ｋｇ（ＤＭＦ治療開始時）から４９．０ｋｇに増加した。患者は気分的に良好で、正規の業務に戻った。
患者８（ＭＳ）は、試験を開始したとき腰部および会陰部に重度の疱疹が認められた。ＤＭＦパッチ２枚を週１回、平均貼付時間８時間で投与した。平均週間ＤＭＦ投与量は６．２４ｇで、得られた血漿ＤＭＦ濃度のピークは平均で１３０ｍｇ／Ｌであった。８週間後に、患者のＣＤ４+Ｔ細胞数は２００から２４０細胞／μＬに増加し、ＰＣＲで測定したウイルス負荷量は１，２００、０００から２５０，０００コピー／ｍＬに減少した。患者の体重は４８．１から５２．２ｋｇに増加し、風疹の病変は完全に消失した。
２名の患者を試験から除外した。１名はアルコール乱用であり、１名はＢ型肝炎ウイルスに感染していたからである。
ほとんどの患者がパッチ除去後に適用部位に軽度な局所的皮膚刺激を経験した。適用部位の皮膚に斑丘疹が認められ、パッチ下で過度の保湿状態にあったためと思われる。１例では軽度の水疱形成が認められたが、２４時間以内に消失し、患者に顕著な不快感を与えなかった。ほとんどの患者は通常処置後３日目に軽度で、一過性の悪心を経験し、試験が進行するにつれて徐々に減少したが、１名の患者は中等度の一過性悪心を訴えた。４名の患者では肝酵素の一過性の上昇が認められたが、正常値の上限の３倍を超えることはなく、ほとんどの場合次にＤＭＦを投与するまでに処置前の値に回復した。ほとんどの場合、肝酵素の上昇は投与に関係のない少なくとも１つの要因（飲酒、肝炎、その他の薬剤を用いた抗−ＨＩＶ治療経歴）と関連があった。
結果的に、ほとんどの患者で２〜３週間処置後に臨床的改善が認められた。図４に示すように、Ｋａｒｎｏｆｓｋｙの性能評点にしたがって評価した場合、いずれの患者でも一般状態の改善が認められた。この方法では、患者の一般状態を以下のように点数で評価した。１００＝正常（症状の訴えなし）、９０＝正常な活動を行うことができる（疾病の症状はきわめて軽微）、８０＝努力すれば正常な活動が可能、７０＝自分の世話は自分でできる（正常な活動または体を動かす仕事は困難）、６０＝ときどき補助が必要であるが、ほとんどの場合自分で自分の世話ができる、５０＝かなりの補助が必要で、頻繁な医療が必要、４０＝無能、特別な医療が必要、３０＝重度の無能、入院の必要があるが死期は迫っていない、２０＝重度の病人、入院および頻繁に介護が必要、１０＝瀕死状態、急激に死期が迫っている、０＝死（Kanofskyら，1984,Cancer 1:634-656参照）。神経学的症状およびヘルペスウイルス感染の改善は、顕著であった。別の抗微生物治療法による二次感染の治療は、ほとんど必要なかった。ＤＭＦ処置後１４日以内に、一般的な疲労および食欲の顕著な改善が認められた。全ての患者で体重の増加が認められた。ウイルス負荷およびＣＤ４+Ｔ細胞数で評価したとき、臨床的改善と疾病状態の間に良好な相関が認められた。患者８名中５名でＰＣＲで測定したときの相対ウイルス負荷はＧｏｍｐｅｒｔｚの曲線に適合し、この分析でＤＭＦ処置４２日後にＰＣＲで測定したウイルス負荷に８８．８％の減少が認められた。患者８名中７名では相対ＣＤ４+Ｔ細胞数がＧｏｍｐｅｒｔｚの曲線に適合し、この分析でＤＭＦ処置４２日後にＣＤ４+Ｔ細胞数に７３．４％の増加が認められた。
例示した実施例は本発明の範囲を限定するものではなく、あくまでも本発明のある側面を説明するためのものである。事実、当該技術分野の専門家にとっては、上記の説明および添付した図面から、ここに示し、記載したものの他に各種の修飾が可能であることはいうまでもない。このような修飾は、本発明の請求範囲に含まれるものと考えられる。
ここで引用した刊行物は、全体を参照することにより含まれるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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