(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィルター要素を収納する凹部とフランジ部と開口部とリング部設置のための溝とを有するフィルター要素収納部材と、フィルター要素収納部材の凹部に嵌合する凸部とフランジ部と開口部とリング部設置のための溝とを有する蓋部材と、少なくともリング部と、不織布を含むフィルター要素とを有する生体成分分離用フィルターユニットであって、
蓋部材の凸部はフランジ部の圧接面から収納部材の凹部側へ突出し、
前記凸部と凹部で形成された空間内に、リング部とフィルター要素が収納され、
前記フィルター要素は前記リング部に挟み付けられ、フィルター要素収納部材のフランジ部と、蓋部材のフランジ部を圧接し固定することで、前記フィルター要素が、フィルター要素収納部材と蓋部材に固定されている
ことを特徴とする生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項２】
リング部端面が平面を有することにより、リング部とフィルター要素とが平面で接触することを特徴とする請求項１記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項３】
リング部とフィルター要素との接触平面の幅が０．１〜１０ｍｍであることを特徴とする請求項２記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項４】
フィルター要素収納部材及び蓋部材がプラスチックからなることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項５】
リング部がプラスチックからなることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項６】
リング部の内径が２５ｍｍ以下であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項７】
フィルターユニットのフランジ部がクランプで圧締めされていることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項８】
フィルター要素が不織布であることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項９】
挟み付け固定されたときのフィルター要素の厚みが、０．０５ｍｍ以上 ２ｍｍ以下であることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の生体成分分離用フィルターユニット。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の生体成分分離用フィルターユニットを用いることでユニット内に装着したフィルター要素の血液濾過性能を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、細胞分離や白血球除去などの血液濾過に用いられる生体成分分離用のフィルターホルダー、フィルターユニット、及びそのフィルターユニットを用いた血液濾過フィルターの性能評価方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、輸血分野においては、輸血後副作用防止のために、不織布や多孔質体を内蔵してなる血球分離フィルターを用いて血液製剤中から白血球を除去することが一般的になってきている。そして、その血球分離フィルターにおいては、白血球除去性能や血液の流れ性が高く安定していることが強く望まれている。
【０００３】
このような望ましい血球分離フィルターの性能設計を検討するにあたって、通常は、試作品や実製品に２００〜５００ｍｌの全血や血液製剤を通液し、基本性能である白血球除去性能を中心とした性能評価を行っている。例えば、特開平２−１３５８７号公報や特開平２−１３５８８号公報には、ＣＰＤ添加の全血４００ｍｌまたは５００ｍｌを用いて評価したことが記載されており、特開平１０−３２８２９５号公報や特開平１１−２０８７６号公報には、血液４００ｍｌを用いて評価していることが記載されている。何れにおいても、性能評価をするためには実製品や同一サイズの試作品を用いており、そのフィルターサイズゆえ、医療に不可欠な血液や血液製剤を大量に必要とするものであった。
【０００４】
また、上記の評価においては、貴重な血液製剤を一度に大量に入手することが困難なため、十分な評価点数を確保して精度の高い評価結果を得るにはかなりの時間を要し、さらには、固体差の大きい生体由来試料において望ましい同一条件での比較検討も満足いくまでできるものではなかった。
【０００５】
そこで、少量の血液を用いた評価方法が試みられており、特開２０００−５１６２３号公報や特開２０００−１９７８１４号公報には、直径２５ｍｍの円形に打ち抜いたフィルター要素を専用のフィルターホルダーに詰めたカラムに５ｍｌの血液を通過させる評価方法が記載されている。本来、実際の血液フィルターと同等の性能を引き出すためには、フィルターの濾過方向の厚みは変えずに、断面積に応じて血液量を少なくする必要があると考えられるが、上記の公報に記載されたフィルターホルダーの仕様や評価条件は、何れも性能評価の忠実なスケールダウンを考慮したものではなかった。従って、これらの発明は、素材間における血小板などの吸着性の傾向をある程度見極めるための初期スクリーニングなどに利用することは有用だと思われるが、実際の血液フィルター性能と完全に一致させる必要がある性能設計においては利用できないことが明らかである。
【０００６】
上記の問題点に対しては、少量の血液や血液製剤に正確に対応するように白血球除去フィルター自身も小型仕様として、忠実にスケールダウンした性能評価ができるようにする必要があった。しかも、その際、血液がフィルター内を通過する時に、実質的に血液が通過する有効断面積外への血液漏れがあっては正確な評価ができない。従って、有効断面積外への血液漏れのない小型フィルターユニットが求められ、そのために適切なフィルターホルダーが必要であった。
【０００７】
有効断面積外への液漏れをなくするため、フィルター外周囲を接着、溶着成形したプラスチックフィルタおよびフィルタユニットは既に周知であり、種々の産業において広く使用されている。しかしながら、フィルター外周囲を接着、溶着したフィルターユニットは、作製の手間やコストがかかるうえ、フィルター内の血液流れ性等の解析のために使用後のフィルターを取り出す際に、ハウジングとフィルターの接着、溶着部分を分解する操作が煩雑であるという欠点があった。また、分解時に誤ってフィルターを破損するおそれもあって、フィルターの性能設計を効率よく進めるために利用するには適さないものであった。
【０００８】
一方、フィルターとハウジング部を接着、溶着しないフィルターユニットとしては、ネジ式や圧締めタイプのフィルターホルダーにフィルターをセットして用いるタイプが知られており、例えば、直径１３ｍｍのネジ式のフィルターホルダー（日本国、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）や直径２５ｍｍのネジ式のフィルターホルダー（日本国、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製や米国、ＣＯＲＮＩＮＧ社製）、または直径２５ｍｍの圧締め式のフィルターホルダー（日本国、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）等が市販されている。これらのフィルターホルダーを利用して血液フィルターをセットし、少量の血液を通過させることによって、血液性能評価が可能になると考えられる。そして、少量の血液で実際に使用される白血球除去フィルターの血液濾過性能を評価するためには、実際の白血球除去フィルターに使用されている白血球捕捉のための不織布量（厚みや枚数）と血液濾過線速を変えずに、血液濾過断面積を小さくすることが考えられる。
【０００９】
しかしながら、本発明者らが検討したところ、これらの市販のフィルターホルダーに、実製品の白血球除去フィルターと同様に不織布数十枚以上を積層したフィルター要素をホルダーにセットすると、フィルター外周囲からの横漏れや溶血等を起こし、問題なく血液を濾過できるものを作製できなかった。市販のフィルターホルダーは、一般に濾紙をセットするためのものであり、数十枚積層した分厚い不織布を確実にセットできなかったのはむしろ当然だといえる。
【００１０】
そこで、実際の血液除去フィルターと同等の性能を出すためには、血液を通過させても横漏れしない数枚程度の不織布をフィルターホルダーにセットし、実際の白血球除去フィルターに挿入されている不織布枚数になるように、フィルターホルダーを複数個連結させて使用する方法がある。この場合、連結されたホルダーの数が増えるにつれて、当然のことながらデッドボリュームが増加し、性能評価に必要な血液量が増加したり、血液の流れ性が変化して正確な血液濾過性能評価が行えないといった問題が生じる。フィルターホルダー１個あたりにセットできる不織布枚数が多ければ、連結するフィルターユニットの数を減らすことができるので、デッドボリュームの問題はかなり解消できるが、これまでそのようなフィルターホルダーは知られていなかった。
【００１１】
すなわち、白血球除去フィルターのようなフィルター要素十数枚以上を外周部を溶着、接着しないでセットでき、しかも、フィルター要素の周囲への血液などの生体成分含有液体の漏れを起こさないフィルターホルダー、及びフィルター要素を挿入したフィルターユニットはこれまで全く知られていなかった。また、少量の血液をフィルターユニットに通液することによって得た血液濾過性能から、実際に市販されている血液濾過フィルターの性能の評価を行うことができる方法についても、全く知られていなかった。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、従来の血液評価の問題点を解決することであり、（１）大量の血液や血液製剤を使用しないで、（２）使用後フィルター解体時の手間やフィルター破損等の問題を解決し、（３）フィルター要素周辺への血液漏れを起こさず、しかも、（４）取り扱い性に優れるフィルターホルダー、及びフィルターユニットを提供することである。また、少量の血液を前記フィルターユニットに通液することにより、市販されている血液濾過フィルターの性能評価をする方法を提供することである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために、鋭意検討を行った。その結果、フィルター要素を収納する凹部とフランジ部と開口部とを有するフィルター要素収納部材と、フィルター要素収納部材の凹部に嵌合する凸部とフランジ部と開口部とを有する蓋部材とを互いのフランジ部で圧接してなるフィルターホルダーにおいて、収納部材の凹部と蓋部材の凸部のそれぞれには、フィルター要素を挟み付け固定するためのリング部を設け、かつ、蓋部材の凸部はフランジの圧接面から収納部材の凹部側へ突出させることによって、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。
また、本発明は、このようなフィルターホルダーにフィルター要素を挟み込み固定した生体成分分離用フィルターユニットに関する。
この構造を有するフィルターホルダー及びフィルターユニットであれば、分厚いフィルター要素、特に積層タイプのフィルター要素を液漏れなく確実にセットできる。
【００１４】
さらに、このフィルターホルダーにフィルター要素をセットし、市販の血液濾過フィルターと同じ濾過厚みに合わせたフィルターユニットに、断面積当たりの血液量と血液濾過線速が実製品と同一になるように少量の血液を通液すると、血液漏れを起こさずに、再現良く市販の血液濾過フィルターと同一の性能を示すことが確認できた。
本発明は、上記の知見の基づき、前記生体成分分離用フィルターユニットを用いて血液濾過性能を評価方法にも関する。
本発明のフィルターホルダー及びフィルターユニットは、リング部でフィルター要素を確実に挟み付け固定することができ、リング部の内径を選択することによって、液体が流れるフィルター断面積を適宜調整できるので、血液濾過フィルターの性能評価に特に適するものである。
【００１５】
【発明の実施の形態】
以下、図面を参照しながら本発明を詳細に説明する。
図１には、本発明のフィルターホルダーの非圧接状態での正面図を示す。
本発明のフィルターホルダーは、一対の蓋部材１とフィルター要素収納部材２とを組み合わせてなるものである。蓋部材１とフィルター要素収納部材２とは、何れも外周部にテーパーが形成されたフランジ部６，６を有している。
【００１６】
蓋部材１は、他方のフィルター要素収納部２のフィルター収納部である凹部５に嵌合する凸部４を有している。蓋部材１は、フィルター要素の中心部に血液などの生体成分を導入できるように、開口７を有しており、その同心円上にリング部３が設けられる構造になっている。
他方のフィルター要素収納部材２は、フィルター要素の中心部から血液などの生体成分を導出できるように、開口８が形成され、その同心円上にリング部３が設けられる構造になっている。
【００１７】
蓋部材１と収納部材２に設置されるリング部３は、フィルター要素に接する端面９，１０に平面構造を有し、蓋部材１と収納部材２を嵌め合わせた際に、互いのリング部のフィルター要素に接する端面９，１０が完全に一致するように設計されている。
蓋部材１とフィルター要素を凹部５に収納したフィルター要素収納部材２とはフランジ５，６を互いに向き合わせて組み合わせることによってフィルターホルダーを構成する。
従って、フィルター要素が収納される際は、フィルター要素は、蓋部材１と収納部材２に設置されたリング部３，３の端面９，１０間に挟まれ、固定されることになる。
【００１８】
図２には、図１で示されるフィルターホルダーの断面図の一例を示した。図２に示す例においては、蓋部材１の凸部４及び収納部材２の凹部５には、リング３を設置固定するためのリング状溝１１，１２を設けている。
【００１９】
そして、図３に示すように、フィルターホルダーの有するフランジ部６，６を利用して、クランプ１３によって圧締めすることにより、フィルター要素を内蔵した１つのフィルターユニットを作ることができる。
【００２０】
なお、一つのフィルターユニットの血液等生体成分導出のための開口８を別のフィルターユニットの血液等生体成分導入のために開口７に挿入することによって、複数のフィルターユニットを直列に連結させることも可能である。
【００２１】
本発明の生体成分とは、血液、白血球、血小板、赤血球、組織、細胞、蛋白質、血漿、核酸、菌体のことをいう。本発明の生体成分分離用フィルターユニットは、上記のものを含有した溶液であれば、いずれのものでも適用可能である。細胞などの比較的大きなサイズのものを濾過するためのフィルター要素を使用することを考慮すると、血液、白血球、血小板、細胞、組織含有溶液により好適に用いることができる。さらに、白血球除去用のフィルター要素を使用することを考慮に入れると、血液、白血球、血小板、赤血球含有溶液に対して好適に用いることができる。
【００２２】
本発明の生体成分分離用フィルターホルダーは、一対の蓋部材と収納部材とをフランジ部で互いに組み合わせ圧接して内部にフィルター要素を収納する。そして、内部にフィルター要素を収納するに際して、フィルター要素からの液漏れを防止して固定するために、蓋部材の凸部と収納部材の凹部にはリング部が設置されることが必要であり、さらに凸部はフランジ圧接面から突出していることが必要である。
【００２３】
例えば、白血球除去フィルターのフィルター要素のように十数枚積層した分厚い不織布の場合、フィルター要素収納部材の凹部にフィルター要素をセットし、その窪みに嵌合する凸部を有する蓋部材でフィルター要素がズレないように押え付けて挟み込む必要がある。この時、実質的にフィルター要素を圧着し、かつ、生体成分を含んだ液体が流れる部分を所定の断面積に限るように調整する目的から、本発明のフィルターホルダーにおいては、蓋部材凸部と収納部材凹部の双方にリング部が設置されている。フィルター要素をホルダーに隙間なく圧着、固定させるためには、前記凹部に嵌合する凸部はフランジ圧接面より突出していることが必要である。
【００２４】
前記フィルターホルダーに設置されるリング部は、該フィルターホルダーの凹部及び凸部に一体成形されていても良く、着脱可能になっていても良い。少量の血液を用いて濾過実験を行う場合は、より小さい断面積のものが必要になるので、種々のフィルター要素の断面積に応じて血液濾過性能評価を行えるように、該リング部は、着脱可能で交換できるようになっているとより好ましい。
【００２５】
より具体的には、リング部を一体に形成する蓋部材成形体としては、フィルター要素を収納する凹部の外周に一致する円板状の成形体の中心部に液体が流れるようにし、且つ該円板状成形体面より凸状に突出したリング部を作製しても良い。あるいは、リング部がフィルターホルダー本体に固定できる溝を一つ以上有している該フィルターホルダーにリング部を設置固定しても良い。
また、リング部の設置確認や紛失防止のために、リング部はフィルターホルダー本体と区別できるように着色されていることが好ましい。
【００２６】
リング部作製の容易さや、フィルターホルダーへのリング部とフィルター要素をセットする際の取り扱い性を考慮すると、該リング部が該フィルターホルダー本体に固定できる溝を少なくとも１つ以上有していることがより好ましく、その溝にリング部を着脱自在に固定することが望ましい。
【００２７】
前記リング部の内径、外径などのサイズには特に限定はないが、少量の血液濾過評価を行うことを考慮すると、内径は２５ｍｍ以下が好ましく、さらに好ましくは１３ｍｍ以下が好ましい。また、実質的にフィルター要素を該リング部によって圧締めすることになるので、該リング部がフィルター要素と面する面積は、フィルター要素を破損しない程度に小さい方が好ましい。一方、フィルターホルダーの蓋部材と収納部材を合わせた際に、蓋部材に設置されたリング部と収納部材に設置されたリング部は、丁度一致することが望まれるが、実際上、成形加工や収納部材と蓋部材とを合わせる際のずれのために、微小な位置のずれが発生することを考慮すると、リング部の外径と内径の差は、ある程度の幅を有している方が望ましい。以上のことを勘案すると、該リング部の外径と内径の差は０．1ｍｍ〜１０ｍｍの範囲が好ましく、０．５ｍｍ〜５ｍｍの範囲がさらに好ましく、１〜２ｍｍの範囲が最も好ましい。
【００２８】
さらに、蓋部材に設置されたリング部と収納部材に設置されたリング部は、その端面がお互いに突き合わされることにより、フィルター要素を挟み込み固定することになるが、そのためには、リング部端面（９，１０）は、フィルター要素と平面で接することが必要になる。そのフィルター要素とリング部端面とが接する幅は、ほぼ、上記のリング部の外径と内径との差に一致することになり、０．1ｍｍ〜１０ｍｍの範囲が好ましく、０．５ｍｍ〜５ｍｍの範囲がさらに好ましく、１〜２ｍｍの範囲が最も好ましい。
【００２９】
前記フィルターホルダーを形成する成形体およびリング部の素材は、プラスチック、金属、ガラス、セラミック、木材など成形加工できるものであれば、いずれの素材でも用いることができる。成形加工の容易さやコスト面を考慮するとプラスチックが好ましい。さらに、血液などの生体成分を含んだ液体の流れ性を外から観察できるようにすることを考慮すると、比較的透明性のある素材が良く、ポリメチルメタクリレート、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン等がより好ましい。
【００３０】
本発明の生体成分分離用フィルターユニットは、該フィルターホルダーのフランジを利用して圧締めして用いることができる。圧締めの方法としては、フランジ部外周の数カ所ににボルトとナットで絞める方法やサニタリー配管接続用のクランプなどを用いる方法等が挙げられるが、フィルターホルダー全体を均一かつ、簡便に圧締めできる点から、クランプを用いて圧締めする方法がより好ましい。
【００３１】
本発明のフィルターユニットに挿入されるフィルター要素の形態や素材の種類については、特に限定はないが、血液や細胞等の生体成分を含んだ溶液の濾過に用いられる多孔質体であれば、いずれの形態でも素材でも良い。
【００３２】
多孔質体の例としては、不織布、平膜、中空糸、織布、編布、発泡体もしくはこれらの複合体が挙げられる。白血球除去フィルターには、不織布や発泡体が一般的に用いられており、血液細胞の濾過など濾過性能評価を行うことを考慮すると不織布や発泡体がより好ましい。さらにフィルター要素の枚数制御のしやすさを考慮すると不織布がより好ましい。
【００３３】
多孔質体の素材としては、特に限定はないが、木綿、麻、絹などの天然高分子、ナイロン、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、ポリオレフィン、ハロゲン化ポリオレフィン、ポリウレタン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリ（メタアクリレート）、エチレンーポリビニルアルコール共重合体、ブタジエン−アクリロニトリルの共重合体等の合成高分子、あるいは、これらの混合物が考えられる。
【００３４】
本発明の生体成分分離用フィルターホルダーに挿入できるフィルター要素の厚みについては、特に限定はないが、フィルター要素をフィルターホルダー凹部にセットし、もう一方の蓋部材を圧接した際に圧締めできる厚みであればよい。さらに、圧締めした上で血液等の溶液を流した際に、フィルター要素の周辺部に漏れがあってはならない。本発明者らは、圧締めした際のフィルター厚みと血液漏れとの関係を調べた結果、本発明の生体成分処理用フィルターユニットに挿入したフィルター要素の圧締めした際の厚みは、０．０５〜２ｍｍの範囲が好ましいことを見出した。さらに好ましくは、０．５ｍｍ〜１．５ｍｍの範囲である。
【００３５】
本発明のフィルターユニットに血液を流入する方法として、落差による方法及び定流量による方法がある。ここで言う落差とは、血液バッグと回収バッグとの間に血液回路等で血球分離フィルターを接続した濾過システムの中の、血液バッグと回収バッグの距離である。このような濾過方法は血液試験では一般的であり、本発明のフィルターユニットに於いても好ましい方法であるが、落差が血球分離フィルターへ流入する速度に変化を与え、さらには血球分離フィルターへの影響を及ぼす傾向があるため、一定の落差条件にすることが好ましい。
【００３６】
定流量による方法としては、血球分離フィルターの導入口側に例えばポンプなどの装置を組み込んで血球分離フィルターへ流入させる方法がある。この場合、血液を血球分離フィルターへ低流量で流入するため処理時間の変化が無く、このため血球分離フィルターの圧力損失を測定することが好ましい。例えば、血球分離フィルターの導入口と導出口に圧力モニターを設け血液を一定流量で流し、血球分離フィルターの導入口の圧力が安定した時の圧力損失を測定する濾過方法等が挙げられるが、上記例示に限定されるものではない。上記両者の方法の濾過線速については、１０ｃｍ／ｍｉｎ以下が好ましく、さらに好ましくは１ｃｍ／ｍｉｎ以下である。
【００３７】
本発明のフィルターホルダーを用いて血液を濾過する場合、凸部を有する蓋部材側の開口から血液を流入させてフィルター要素収納部材側の開口から血液を回収しても良いし、逆にフィルター要素収納部材側を上流にして蓋部材側を下流にして血液を流しても良い。
【００３８】
【実施例】
以下、実施例に従って本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は、何らこれに限定されるものではない。
【実施例１】
（フィルターホルダー及びフィルターユニットの作製）
図１に従って、ポリメチルメタクリレート製のフィルターホルダーを作成した。蓋部材１及びフィルター要素収納部材２は、外径を５０ｍｍ、凹部と凸部の径を２０ｍｍとした。
前記フィルターホルダーに設置されるリング部３，３は、ポリメチルメタクリレート素材の内径７ｍｍ、１０ｍｍ、１３ｍｍ、外径がそれぞれ１１ｍｍ、１４ｍｍ、１７ｍｍのものを作製した。
【００３９】
【実施例２及び比較例１】
（不織布挿入試験）
実施例１で作製したリング部の内径が１３ｍｍのフィルターホルダーに、裁断機「ＳＤＬ−１００」（日本国、ダンベル社製）を用い、直径２０ｍｍの円状に打ち抜いた旭メディカル社製の白血球除去フィルター「セパセルTMＲＺ−２０００」に用いられている主要構成不織布を１６、２０、３０枚重ねてクランプで圧締めし、セット可能かどうかを試験した。比較例として、クランプで圧締めするタイプの市販のフィルターホルダー「ＫＳ−２５Ｆ」（日本国、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）についても同様の試験を行った。
その結果を表１に示した。実施例１のフィルターホルダーには、前記不織布を３０枚まで重ねてセット可能であったが、比較例として市販のフィルターホルダー「ＫＳ−２５Ｆ」（日本国、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）では、２０枚までしかセットできなかった。
【００４０】
【表１】
不織布挿入試験
0004531310.tif 000002
【００４１】
また、実施例１で作製してフィルターホルダーに不織布を重ねて挿入し、クランプで圧締めした際のフィルター要素の厚みを計測した。
その結果を表２に示した。最大３０枚の際の厚みは１．６５ｍｍであった。
【表２】
実施例１で作製したフィルターホルダーにフィルターを挿入し、
クランプで圧締めした際のフィルター要素の厚み
0004531310.tif 000003
【００４２】
【実施例３及び比較例２】
（血液漏れ試験）
健常人ボランティアから１９Ｇ翼状針を用いて１５０ｍｌの採血を行い、直ちに抗凝固剤ＣＰＤ液２１ｍｌの入った血液バッグに移し、よく混合した。血液バッグはＣＯＯＬ ＩＮＣＵＢＡＴＯＲ「ＰＣｌ−３００」（日本国、井内盛栄堂社製）に２０℃で静置保存した。
実施例１のフィルターホルダーに裁断機「ＳＤＬ−１００」（日本国、ダンベル社製）を用い、直径２０ｍｍの円状に打ち抜いた旭メディカル社製の白血球除去フィルター「セパセルTMＲＺ−２０００」に用いられている主要構成不織布を１６枚重ねてセットした。また、比較例として、市販のフィルターホルダー「ＫＳ−２５Ｆ」（日本国、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）に直径２０ｍｍの円板状に打ち抜いた不織布１６枚を同様に重ねてセットした。
【００４３】
３時間後、血液が２０℃であることを確認し、１試験区ごとに２０ｍｌのシリンジに１５．５ｍｌの血液を採取した。２連結したフィルターユニットを、出口を上に向け、シリンジポンプ「５５−２２１９」（米国、 ＨＡＲＶＡＲＤ社製）にセットし、血液の入ったシリンジを接続した。濾過線速が０．５６ｃｍ／ｍｉｎになるように流速を０．７３９ｍｌ／ｍｉｎに設定し、ポンプで押し出し、フィルターユニットに血液を流し込み、血液が流れたものについては１３．３ｍｌ回収した時点で運転を停止した。
【００４４】
その結果を表３に示した。 実施例１のフィルターホルダーに不織布をセットしたフィルターユニットは、血液が十分流れ、血液漏れがないことが確認された。一方、市販のフィルターホルダー「ＫＳ−２５Ｆ」（日本国、ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）に１６枚の不織布を挿入したものは、血液漏れがあり、また溶血を起こした。また、２０枚の不織布を挿入したものは、血液を流し始めて７，８分で血液が流れなくなり、溶血もおこしていることが確認された。
【００４５】
【表３】
血液漏れ試験
0004531310.tif 000004
【００４６】
【実施例４及び比較例３及び参考例１】
（血液濾過性能の評価試験）
１６枚では血液漏れの起きないことを確認したフィルターユニットを２連結させ、主要構成不織布が３２枚の全血製剤２単位（４５０ｍｌ）を処理できる白血球除去フィルター製品「セパセルTMＲＺ−２０００」に対応した血液濾過性能評価が可能かどうかの検討を行った。製品「セパセルTMＲＺ−２０００」の有効断面積は４５ｃｍ2であり、この実施例のフィルターユニット内での有効断面積は１．３３ｃｍ2である為、回収血液量は３３．８分の１縮小で実施した。
健常人ボランティアから１９Ｇ翼状針を用いて１５０ｍｌの採血を行い、直ちに抗凝固剤ＣＰＤ液２１ｍｌの入った血液バッグに移し、よく混合した。血液バッグはＣＯＯＬ ＩＮＣＵＢＡＴＯＲ「ＰＣｌ−３００」（日本国、井内盛栄堂社製）に２０℃で静置保存した。
【００４７】
実施例１のフィルターユニットに裁断機「ＳＤＬ−１００」（日本国、ダンベル社製）を用い、直径２０ｍｍの円板状に打ち抜いた旭メディカル社製の白血球除去フィルター「セパセルTMＲＺ−２０００」に用いられている主要構成不織布を１６枚重ねてセットし、このフィルターユニットを２連結させ、主要構成不織布が製品「セパセルTMＲＺ−２０００」と同じ３２枚の構成のフィルターユニットを準備した。
２４時間後、血液が２０℃であることを確認し、２０ｍｌのシリンジに１５．５ｍｌの血液を採取した。２連結したフィルターユニットを、出口を上に向け、シリンジポンプ「５５−２２１９」（米国、 ＨＡＲＶＡＲＤ社製）にセットし、血液の入ったシリンジを接続した。濾過線速が０．５６ｃｍ／ｍｉｎになるように流速を０．７３９ｍｌ／ｍｌに設定し、ポンプで押し出し、フィルターユニットに血液を流し込み、１３．３ｍｌ回収した時点で運転を停止した。本実施例のフィルターユニットを用いて血液濾過を行い、回収された濾過血液１３．３ｍｌは、２単位（全血４５０ｍｌ）を用いて実際の製品レベルの白血球除去フィルターでの血液実験を行った場合の回収量に相当する。
【００４８】
フィルター濾過後の血液は、一部をエッペンドルフチューブに移し、血球測定装置「ＭＡＸＭ Ａ／ＬＲｅｔｉｃ」（米国、ベックマンコールター社製）にて測定した。また、微量な白血球数に関しては、測定装置の検出限界以下であるため、「ＬｅｕｃｏＣＯＵＮＴTM」キット（米国、ベクトン・ディッキンソン社製）を用い、同社のフローサイトメーター「ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ」で、内部標準蛍光ビーズを３００００個カウントした際の、核酸染色した白血球数をカウントした。又、白血球除去能及び血小板回収率は次の式１及び式２により算出した。
【００４９】
【数１】
0004531310.tif 000005
【００５０】
【数２】
0004531310.tif 000006
【００５１】
２４時間後に処理したフィルター濾過後の白血球除去能並びに赤血球回収率及び血小板回収率の結果を表４に示した。
参考例として、本実施例とは別の１日保存血４５０ｍｌを用いて、白血球除去フィルターの製品「セパセルTMＲＺ−２０００」を用いて、落差９０ｃｍでろ過した時の白血球除去能並びに赤血球回収率及び血小板回収率の結果も表４に示した。
また、比較例として、市販のネジ式の直径２５ｍｍのフィルターホルダー（米国、ＣＯＲＮＩＮＧ社製）に実施例で使用された不織布４枚をセットし、血液を線速０．５６ｃｍ／ｍｉｎで流し、回収血液量が６ｍｌの場合の白血球除去能並びに赤血球回数率及び血小板回収率の結果も併せて表４に示した。
【００５２】
【表４】
血液濾過評価試験
0004531310.tif 000007
表４の結果から、実施例のフィルターユニットで血液ろ過評価した白血球除去能と血小板回収率は、実際の製品を用いて得られた結果と非常に良く一致することが確認できた。一方、市販のフィルターホルダーに４枚の不織布をセットしたものの、白血球除去能並びに血小板回収率の値は、全く一致しなかった。
【００５３】
【実施例５及び参考例２】
（血液濾過試験）
健常人ボランティア２名から１８Ｇ翼状針を用いて１５０ｍｌの採血を行い、直ちに抗凝固剤ＣＰＤ液２１ｍｌの入った血液バッグに移し、よく混合した。さらに、無菌下で４００ｍｌ採取用の血液バッグに２名分の血液を移し良く混合し、ＣＯＯＬ ＩＮＣＵＢＡＴＯＲ「ＰＣｌ−３００」（日本国、井内盛栄堂社製）に２０℃で静置保存した。
【００５４】
参考例として、血液１単位処理用の主要構成不織布が２６枚である製品「セパセルTMＲＺ−１０００」を使用した。３時間後、血液が２０℃であることを確認し、１単位分である２２８ｍｌを上側の供給側のバッグに移し、回収バッグとの落差が９０ｃｍで濾過を開始した。１３分１秒で濾過は終了し、平均処理速度は１６．１ｍｌ／ｍｉｎであった。
【００５５】
これに対応する実施例として、同じ製品である「セパセルTMＲＺ−１０００」の容器を解体し、不織布を取り出し、裁断機「ＳＤＬ−１００」（日本国、ダンベル社製）で、直径２０ｍｍの円状に打ち抜いた。この不織布計２６枚から１３枚ずつを２つのフィルターユニットに分けてセットし２連結させて、主要構成不織布の枚数が製品「セパセルTMＲＺ−１０００」と同じ構成とした。
製品「セパセルTMＲＺ−１０００」による血液濾過終了後、直ちに１試験区ごとに２０ｍｌのシリンジに１１ｍｌ血液を採取し、２連結したフィルターユニットを、出口を下に向けシリンジポンプ「５５−２２１９」（米国、 ＨＡＲＶＡＲＤ社製）にセットし、血液の入ったシリンジを接続した。製品「セパセルTMＲＺ−１０００」による血液濾過線速と合わせるために流速を０．６３ｍｌ／ｍｌに設定し、ポンプで押し出し、フィルターユニットに血液を流し込み、８．６ｍｌ回収した時点で運転を停止した。８．６ｍｌという回収量は、製品「セパセルTMＲＺ−１０００」の有効断面積とフィルターユニット内での有効断面積の比から算出し、２４．４分の１に縮小した値である。
フィルター濾過後の血液の解析は、実施例４と同様にして行い、白血球除去能、血小板回収率、赤血球回収率を求めた。
【００５６】
それらの結果を表５に示す。その結果、製品「セパセルTMＲＺ−１０００」を用いて血液濾過評価を行って得られた値とこれに対応して作成したフィルターホルダーを用いて得られた値は、非常に良く一致した。
【表５】
本発明のフィルターユニット及びＲＺ−１０００を用いた
血液濾過試験
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【００５７】
【発明の効果】
本発明の生体成分分離用フィルターユニットは、フィルター要素周りへの血液漏れを起こさず、かつ、フィルターを傷つけずに容易に解体できるフィルターユニットであり、実際の製品である血液分離フィルターの性能を少量の血液で正確に評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  フィルターホルダーの正面図
【図２】  フィルターホルダーの断面図
【図３】  フィルターユニット外観図。
【符号の説明】
１          蓋部材
２          フィルター要素収納部材
３          リング部
４          凸部
５          凹部
７，８      開口部
９，１０    リング部端面
１１、１２  リング部設置のための溝
１３        クランプ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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