(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
鏡像異性体、立体異性体、回転異性体および互変異性体、ならびに医薬上許容される塩または溶媒和物を包含し、下記に列挙した構造を有する化合物の群から選択される化合物：
【化１】
0004452441.tif 000210
【化２】
0004452441.tif 000211
【化３】
0004452441.tif 000212
【化４】
0004452441.tif 000213
【化５】
0004452441.tif 000214
【化６】
0004452441.tif 000215
Ｒ＝Ｍｅ
Ｒ＝ベンジル
【化７】
0004452441.tif 000216
Ｘ＝ＯｔＢｕ
Ｘ＝ＯＨ
Ｘ＝ＮＨ２
Ｘ＝ＮＭｅＯＭｅ
Ｘ＝ＮＭｅ２
【化８】
0004452441.tif 000217
Ｘ＝ＯｔＢｕ
Ｘ＝ＯＨ
【化９】
0004452441.tif 000218
【化１０】
0004452441.tif 000219
Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝ｔＢｕ；Ｘ＝ｔＢｕ、Ｙ＝Ｈ
【化１１】
0004452441.tif 000220
Ｒ＝プロパルギル；Ｒ＝アリル
【化１２】
0004452441.tif 000221
Ｘ＝ＯｔＢｕ；Ｘ＝ＯＨ
【化１３】
0004452441.tif 000222
【化１４】
0004452441.tif 000223
Ｘ＝Ｏｔブチル
Ｘ＝ＯＨ
【化１５】
0004452441.tif 000224
Ｘ＝Ｏｔブチル
Ｘ＝ＯＨ
Ｘ＝ＮＭｅ２
【化１６】
0004452441.tif 000225
Ｘ＝ＯｔＢｕ
Ｘ＝ＯＨ
【化１７】
0004452441.tif 000226
Ｒ＝ｔＢｕ
Ｒ＝Ｈ
Ｒ＝Ｍｅ
【化１８】
0004452441.tif 000227
Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝ＣＯＯＨ
Ｘ＝ＣＯＯＨ、Ｙ＝Ｈ
【化１９】
0004452441.tif 000228
【化２０】
0004452441.tif 000229
【化２１】
0004452441.tif 000230
【化２２】
0004452441.tif 000231
【請求項２】
以下からなる群より選択される化合物：
【化２３】
0004452441.tif 000232
【化２４】
0004452441.tif 000233
【化２５】
0004452441.tif 000234
【化２６】
0004452441.tif 000235
【化２７】
0004452441.tif 000236
【化２８】
0004452441.tif 000237
【化２９】
0004452441.tif 000238
【化３０】
0004452441.tif 000239
【化３１】
0004452441.tif 000240
【化３２】
0004452441.tif 000241
【化３３】
0004452441.tif 000242
【化３４】
0004452441.tif 000243
【化３５】
0004452441.tif 000244
【化３６】
0004452441.tif 000245
【化３７】
0004452441.tif 000246
および
【化３８】
0004452441.tif 000247
または、その鏡像異性体、立体異性体、回転異性体もしくは互変異性体、またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、新規Ｃ型肝炎ウイルス（「ＨＣＶ」）プロテアーゼ阻害剤、１種以上の該阻害剤を含有する医薬組成物、該阻害剤の製造方法ならびにＣ型肝炎および関連障害を処置するための該阻害剤の使用方法に関する。詳細には、本発明は、ＨＣＶ ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼの阻害剤としての新規ペプチド化合物を開示する。
【０００２】
（背景技術）
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、非Ａ非Ｂ型肝炎（ＮＡＮＢＨ）、特に血液関連ＮＡＮＢＨ（ＢＢ−ＮＡＮＢＨ）の主たる病原体として関連付けられている(＋)−センス一本鎖ＲＮＡウイルスである（国際公開第ＷＯ８９／０４６６９号および欧州特許出願公開第ＥＰ３８１２１６号参照）。ＮＡＮＢＨは、他の型のウイルス誘発性肝臓疾患、例えばＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、デルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン−バールウイルス（ＥＢＶ）に誘発されるもの、ならびに他の形態の肝臓疾患、例えばアルコール中毒および原発性胆汁性肝硬変とは区別される。
【０００３】
近年、ポリペプチドプロセシングおよびウイルス複製に必要なＨＣＶプロテアーゼが同定され、クローン化され、発現された（例、米国特許第５７１２１４５号参照）。この約３０００アミノ酸のポリタンパク質は、アミノ末端からカルボキシ末端へ、ヌクレオキャプシドタンパク質（Ｃ）、エンベロープタンパク質（Ｅ１およびＥ２）ならびにいくつかの非構造タンパク質（ＮＳ１、２、３、４ａ、５ａおよび５ｂ）を含む。ＮＳ３は、ＨＣＶゲノムの約１８９３ヌクレオチドによりコードされる、約６８ｋｄａのタンパク質であり、２つの異なるドメイン：（ａ）Ｎ末端アミノ酸の約２００個からなるセリンプロテアーゼドメイン；および（ｂ）タンパク質のＣ末端のＲＮＡ依存性ＡＴＰａｓｅドメインを有する。ＮＳ３プロテアーゼは、タンパク質配列、全体的三次元構造および触媒機構が類似していることから、キモトリプシンファミリーのメンバーであると考えられている。他のキモトリプシン様酵素は、エラスターゼ、第Ｘａ因子、トロンビン、トリプシン、プラスミン、ウロキナーゼ、ｔＰＡおよびＰＳＡである。ＨＣＶ ＮＳ３セリンプロテアーゼは、ＮＳ３／ＮＳ４ａ、ＮＳ４ａ／ＮＳ４ｂ、ＮＳ４ｂ／ＮＳ５ａおよびＮＳ５ａ／ＮＳ５ｂ連結部におけるポリペプチド（ポリタンパク質）のタンパク質分解を担っており、従ってウイルス複製中の４種のウイルスタンパク質の生成を担っている。このため、ＨＣＶ ＮＳ３セリンプロテアーゼは抗ウイルス化学療法にとって魅力的な標的となっている。
【０００４】
約６ｋｄａのポリペプチドであるＮＳ４ａタンパク質がＮＳ３のセリンプロテアーゼ活性の補因子であることが決定されている。ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼによるＮＳ３／ＮＳ４ａ連結部の自己切断は分子内（すなわち、シス）で生じ、他の切断部位は分子間（すなわち、トランス）でプロセシングされる。
【０００５】
ＨＣＶプロテアーゼの天然の切断部位の分析により、Ｐ１におけるシステインおよびＰ１’におけるセリンの存在ならびにこれらの残基がＮＳ４ａ／ＮＳ４ｂ、ＮＳ４ｂ／ＮＳ５ａおよびＮＳ５ａ／ＮＳ５ｂ連結部で厳密に保存されていることが明らかにされた。ＮＳ３／ＮＳ４ａ連結部は、Ｐ１においてスレオニンを、Ｐ１’においてセリンを含む。ＮＳ３／ＮＳ４ａでのＣｙｓ→Ｔｈｒの置換は、この連結部におけるトランスではなくシスのプロセシングの要件の説明となると想定されている。例えば、Pizzi et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci (USA)  91:888-892、 Failla  et al. (1996) Folding & Design 1:35-42参照。ＮＳ３／ＮＳ４ａ切断部位はまた、他の部位よりも突然変異誘発に寛容性である。例えばKollykhalov et al. (1994) J. Virol. 68:7525-7533参照。また、切断部位の上流領域における酸性残基が効率的な切断に必要とされることが見出されている。例えば、Komoda et al. (1994) J. Virol. 68:7351-7357参照。
【０００６】
報告されたＨＣＶプロテアーゼの阻害剤としては、抗酸化剤（国際公開第ＷＯ９８／１４１８１号参照）、特定のペプチドおよびペプチドアナログ（国際公開第ＷＯ９８／１７６７９号、Landro et al. (1997) Biochem. 36:9340-9348、Ingallinella et al. (1998) Biochem. 37:8906-8914、Llinas-Brunet et al. (1998) Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:1713-1718参照）、７０アミノ酸のポリペプチドであるエグリンｃに基いた阻害剤（Martin et al. (1998) Biochem. 37:11459-11468）、ヒト膵臓分泌性トリプシンインヒビター（ｈＰＳＴＩ−Ｃ３）およびミニボディーレパートリー（ＭＢｉｐ）から親和性選択された阻害剤（Dimasi et al. (1997) J.Virol. 71:7461-7469）、ＣＶＨＥ２（「ラクダ化（camelized）」可変領域抗体フラグメント）(Martin et al.(1997) Protein Eng. 10:607-614)およびα１−アンチキモトリプシン（ＡＣＴ）（Elzouki et al. (1997) J. Hepat. 27:42-28）が挙げられる。Ｃ型肝炎ウイルスＲＮＡを選択的に破壊するように設計されたリボザイムが近年開示された（BioWorld Today 9(217): 4（１９９８年１１月１０日）参照）。
【０００７】
また、ＰＣＴ公開、第ＷＯ９８／１７６７９号（１９９８年４月３０日公開、ヴァーテックス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド（Vertex Pharmaceuticals Incorporated））、第ＷＯ９８／２２４９６号（１９９８年５月２８日公開、エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチエンゲセルシャフト（F. Hoffmann-La Roche AG））、および第ＷＯ９９／０７７３４号（１９９９年２月１８日公開、ベーリンガー・インゲルハイム・カナダ・リミテッド（Boehringer Ingelheim Canada Ltd.））も参照のこと。
【０００８】
ＨＣＶは、肝硬変および肝細胞癌の誘発に関連付けられている。ＨＣＶ感染に罹患した患者の予後は、現時点では芳しくない。ＨＣＶ感染は、ＨＣＶ感染に伴う免疫または緩解の欠如のために、他の形態の肝炎よりも処置が困難である。最新データは、硬変診断後４年目での生存率が５０％未満であることを示している。切除可能な限局性肝細胞癌と診断された患者が１０〜３０％の５年生存率を有するのに対し、切除不能な限局性肝細胞癌の患者は５年生存率が１％未満である。
【０００９】
ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼの阻害剤の二環式アナログの合成を記載するA. Marchetti et al, Synlett, S1, 1000-1002 (1999)を参照のこと。そこに記載される化合物は以下の式を有する：
【化６１】
0004452441.tif 000002
【００１０】
特定のアリルおよびエチル官能基を含む特定のα−ケトアミド、α−ケトエステルおよびα−ジケトンの製造を記載するW. Han et al, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett, (2000) 10, 711-713も参照のこと。
【００１１】
また、式：
【化６２】
0004452441.tif 000003
で示されるペプチド誘導体を開示する第ＷＯ００／０９５５８号（譲受人：ベーリンガー・インゲルハイム・リミテッド（Boehringer Ingelheim Limited）、２０００年２月２４日公開）（上式における種々の要素はそこに定義されている）も参照のこと。下式はその系列の化合物の例示である：
【化６３】
0004452441.tif 000004
また、式：
【化６４】
0004452441.tif 000005
で示されるペプチド誘導体を開示する第ＷＯ００／０９５４３号（譲受人：ベーリンガー・インゲルハイム・リミテッド、２０００年２月２４日公開）（上式における種々の要素はそこに定義されている）も参照のこと。下式はその系列の化合物の例示である：
【化６５】
0004452441.tif 000006
【００１２】
Ｃ型肝炎の現行治療法としては、インターフェロン−α（ＩＮＦα）およびリバビリンとインターフェロンとの併用療法が挙げられる。例えば、Beremguer et al. (1998) Proc. Assoc. Am. Physicians 110(2):98-112参照。これらの治療法には、低い持続応答率および頻繁な副作用という問題点がある。例えば、Hoofnagle et al. (1997) N. Engl. J. Med. 336:347参照。現時点では、ＨＣＶ感染に利用可能なワクチンは無い。
【００１３】
継続および同時継続中の米国特許出願第０９／−−−号（−−−出願）、同第０９／−−−号（−−−出願）、同第０９／−−−号（−−−出願）、同第０９／−−−号（−−−出願）、同第０９／−−−号（−−−出願）および同第０９／−−−号（−−−出願）は、Ｃ型肝炎ウイルスのＮＳ−３セリンプロテアーゼの阻害剤としての種々の型のペプチドを開示している。
【００１４】
ＨＣＶ感染のための新たな処置および治療法が要望されている。従って、本発明の目的は、Ｃ型肝炎の１つ以上の症状を処置または予防または改善するのに有用な化合物を提供することである。
【００１５】
本発明のさらなる目的は、Ｃ型肝炎の１つ以上の症状を処置または予防または改善する方法を提供することである。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、本明細書に提供される化合物を用いて、セリンプロテアーゼ、特にＨＣＶ ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼの活性を調節する方法を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、本明細書に提供される化合物を用いてＨＣＶポリペプチドのプロセシングを調節する方法を提供することである。
【００１８】
（発明の概要）
本発明は、その多くの実施態様において、新規クラスのＨＣＶプロテアーゼの阻害剤、１種以上の該化合物を含有する医薬組成物、１種以上の該化合物を含有する医薬処方物の製造方法、およびＣ型肝炎の症状の１つ以上を処置、予防または改善する方法を提供する。また、ＨＣＶポリペプチドとＨＣＶプロテアーゼとの相互作用を調節する方法も提供する。本明細書中に提供される化合物の中で、ＨＣＶ ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼ活性を阻害する化合物が好ましい。本願はＰ３からＰ２’までのアミノ酸配列を含むペプチド化合物を開示する。
【００１９】
その第一の実施態様において、本発明は、式Ｉ：
【化６６】
0004452441.tif 000007
式Ｉ
［式中、
Ｇ、ＪおよびＹは独立してＨ、アルキル、アルキル−アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、アリール−ヘテロアリール、アルキル−ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキルオキシ、アルキル−アリールオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、シクロアルキルオキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルキル−アリールアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、シクロアルキルアミノまたはヘテロシクロアルキルアミノ部分から選択され、所望によりＹはＸ１１またはＸ１２で置換されてもよく；
Ｘ１１はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルキル−アルキル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、アルキルへテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり、所望によりＸ１１はさらにＸ１２で置換されてもよく；
Ｘ１２はヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、チオ、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルスルホンアミド、アリールスルホンアミド、カルボキシ、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、アルコキシカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルオキシ、アルキルウレイド、アリールウレイド、ハロゲン、シアノまたはニトロであり、アルキル、アルコキシおよびアリールは所望によりＸ１２から選択される部分でさらに置換されてもよく；
Ｒ１はＣＯＲ５またはＢ（ＯＲ）２であり、Ｒ５はＨ、ＯＨ、ＯＲ８、ＮＲ９Ｒ１０、ＣＦ３、Ｃ２Ｆ５、Ｃ３Ｆ７、ＣＦ２Ｒ６、Ｒ６またはＣＯＲ７であり、Ｒ７はＨ、ＯＨ、ＯＲ８、ＣＨＲ９Ｒ１０またはＮＲ９Ｒ１０であり、Ｒ６、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は独立してＨ、アルキル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、シクロアルキル、シクロアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＯＲ１１、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＯＲ１１、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）Ｒ’、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ３’）ＣＯＯＲ１１、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ３’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ３’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ４’）ＣＯＯＲ１１、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ３’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ４’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ３’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ４’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ５’）ＣＯＯＲ１１およびＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ３’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ４’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ５’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３からなる群より選択され、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｒ５’、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ’は独立してＨ、アルキル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、シクロアルキル、アルキル−アリール、アルキル−ヘテロアリール、アリール−アルキルおよびヘテロアラルキルからなる群より選択され;
Ｚは、Ｏ、ＮまたはＣＨから選択され；
Ｗは存在してもよくまたは存在しなくてもよく、Ｗが存在する場合、ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＳＯ２から選択され；
Ｒ、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立してＨ；Ｃ１−Ｃ１０アルキル；Ｃ２−Ｃ１０アルケニル；Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル；Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、アミド、エステル、カルボン酸、カルバメート、尿素、ケトン、アルデヒド、シアノ、ニトロ；酸素、窒素、硫黄およびリン原子（該酸素、窒素、硫黄またはリン原子の数は０〜６である）；（シクロアルキル）アルキルおよび（ヘテロシクロアルキル）アルキル（ここでシクロアルキルは３〜８個の炭素原子、および０〜６個の酸素、窒素、硫黄またはリン原子を含み、アルキルは１〜６個の炭素原子を含む）；アリール；ヘテロアリール；アルキル−アリールおよびアルキル−ヘテロアリールからなる群より選択され；
ここでアルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、ヘテロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキル部分は所望により置換され得、この「置換」の語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、複素環、ハロゲン、ヒドロキシ、チオ、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アミノ、アミド、エステル、カルボン酸、カルバメート、尿素、ケトン、アルデヒド、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、スルホキシド、スルホン、スルホニルウレア、ヒドラジドおよびヒドロキシメートからなる群より選択される１個以上の部分での所望による化学的に適切な置換をいう］
で示される化合物を提供する。
【００２０】
式Ｉの種々の部分についての上記の定義の中で種々の部分についての好ましい基は以下のとおりである：
Ｒ１についての好ましい定義はＣＯＲ５であり、Ｒ５がＨ、ＯＨ、ＣＯＯＲ８またはＣＯＮＲ９Ｒ１０であり、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０は上記で定義したとおりである。Ｒ１についての好ましい部分はＣＯＣＯＮＲ９Ｒ１０であり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＨ、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＯＲ１１、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＯＲ１１、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３またはＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）（Ｒ’）である。これらの中で、Ｒ１０についての好ましい部分はＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＯＲ１１、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３、ＣＨ（Ｒ１’）ＣＯＮＨＣＨ（Ｒ２’）（Ｒ’）であり、Ｒ１’はＨまたはアルキル、ヘテロアルキルであり、Ｒ２’は、フェニル、置換フェニル、ヘテロ原子置換フェニル、チオフェニル、シクロアルキル、ヘテロ原子置換シクロアルキル、ピペリジルおよびピリジルである。より好ましい部分は以下のとおりである：Ｒ１’がＨであり、Ｒ１１がＨまたはｔｅｒｔ−ブチルであり；Ｒ’がヒドロキシメチルであり；Ｒ２’が以下からなる群より選択され：
【化６７】
0004452441.tif 000008
式中、
Ｕ１およびＵ２は同じでもよくまたは異なってもよく、Ｈ、Ｆ、ＣＨ２ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＣＯＯＭｅ、ＣＨ２ＣＯＮＨ２、ＣＨ２ＣＯＮＨＭｅ、ＣＨ２ＣＯＮＭｅ２、アジド、アミノ、ヒドロキシル、置換アミノ、置換ヒドロキシルからなる群より選択され；
Ｕ３およびＵ４は同じでもよくまたは異なってもよく、ＯまたはＳであり；
Ｕ５はアルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアルキルスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアルキルカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニルまたはその組合せからなる部分より選択され；
ＮＲ１２Ｒ１３は以下からなる群より選択され：
【化６８】
0004452441.tif 000009
式中、Ｕ６はＨ、ＯＨまたはＣＨ２ＯＨである。
【００２１】
Ｒ２についての好ましい部分は以下のとおりである：
【化６９】
0004452441.tif 000010
【００２２】
Ｒ３についての好ましい部分は以下のとおりである：
【化７０】
0004452441.tif 000011
式中Ｒ３１＝ＯＨまたはＯ−アルキルである。
【００２３】
さらに、Ｒ３は以下によっても表され得る：
【化７１】
0004452441.tif 000012
Ｙ１９は以下の部分より選択される：
【化７２】
0004452441.tif 000013
さらに、Ｒ３は以下によって表され得る：
【化７３】
0004452441.tif 000014
Ｙ２０は以下の部分より選択される：
【化７４】
0004452441.tif 000015
【００２４】
さらに好ましいＲ３についての部分は以下のとおりである：
【化７５】
0004452441.tif 000016
【００２５】
さらに、Ｒ４が存在しない式Ｉ中の部分Ｚ−Ｃ−Ｒ３は以下の構造によって表され得る：
【化７６】
0004452441.tif 000017
および
【化７７】
0004452441.tif 000018
【００２６】
いくつかのその他の好ましい部分は以下のとおりである：ＺがＮであり、Ｒ４がＨであり、ＷがＣ＝ＯまたはＳＯ２である。Ｙについての好ましい部分は以下のとおりである：
【化７８】
0004452441.tif 000019
式中、Ｙ１１はＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＥｔ、ＯＭｅ、Ｐｈ、ＯＰｈ、ＮＨＭｅ、ＮＨＡｃ、ＮＨＰｈ、ＣＨ（Ｍｅ）２、１−トリアゾリル、１−イミダゾリルおよびＮＨＣＨ２ＣＯＯＨから選択され；
Ｙ１２はＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＯＭｅ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒから選択される。
【００２７】
Ｙはまた以下によって表され得：
【化７９】
0004452441.tif 000020
式中、Ｙ１３は以下の部分から選択され：
【化８０】
0004452441.tif 000021
Ｙ１４はＭｅＳＯ２、Ａｃ、Ｂｏｃ、ｉＢｏｃ、ＣｂｚまたはＡｌｌｏｃから選択される。
【００２８】
Ｙについてのさらなる好ましい構造は以下のとおりである：
【化８１】
0004452441.tif 000022
式中、Ｙ１５およびＹ１６は同じでもよくまたは異なってもよく、独立してアルキル、アリールもしくはヘテロアルキルまたはヘテロアリールから選択される。
【００２９】
Ｙについてのさらなる例は以下のとおりである：
【化８２】
0004452441.tif 000023
【化８３】
0004452441.tif 000024
【化８４】
0004452441.tif 000025
式中、Ｙ１７はＣＦ３、ＮＯ２、ＣＯＮＨ２、ＯＨ、ＣＯＯＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣ６Ｈ５、Ｃ６Ｈ５、ＣＯＣ６Ｈ５、ＮＨ２またはＣＯＯＨであり；
Ｙ１８はＣＯＯＣＨ３、ＮＯ２、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｆ、ＯＣＨ３、ＣＨ２ＣＯＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ２ＮＨ２またはＮＨＣＯＣＨ３である。
【００３０】
Ｊについての好ましい部分は以下のとおりである：
【化８５】
0004452441.tif 000026
【００３１】
Ｇについての好ましい部分は以下のとおりである：
【化８６】
0004452441.tif 000027
【化８７】
0004452441.tif 000028
【００３２】
特記しない場合、本明細書において用いる技術用語および科学用語は全て、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を有する。従って、例えば、用語アルキル（アルコキシのアルキル部分を含む）は、１〜８個、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する、単一原子の除去により直鎖または分枝鎖飽和炭化水素から誘導される１価の基をいう。
【００３３】
アリール  −  ６〜１４個の炭素原子を有し、少なくとも１個のベンゼノイド環を有する炭素環式基を表し、炭素環式基の全ての利用可能な置換可能芳香族炭素原子が可能な結合点として意図される。好ましいアリール基としては、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルおよびインダニル、特にフェニルおよび置換フェニルが挙げられる。
【００３４】
アラルキル  −  低級アルキルを介して結合したアリール基を含む部分を表す。
【００３５】
アルキルアリール  −  アリール基を介して結合した低級アルキルを含む部分を表す。
【００３６】
シクロアルキル  −  所望により置換されてもよい、３〜８個、好ましくは５または６個の炭素原子を有する飽和炭素環式環を表す。
【００３７】
複素環  −  下記で定義するヘテロアリール基に加えて、１個の環または２個の縮合した環からなる炭素環式環構造を中断する少なくとも１個のＯ、Ｓおよび／またはＮ原子を有する飽和および不飽和環式有機基であって、各環が５、６または７員環であり、非局在化パイ電子を欠く二重結合を有してもよく有しなくてもよく、環構造が２〜８個、好ましくは３〜６個の炭素原子を有する、例えば２−もしくは３−ピペリジニル、２−もしくは３−ピペラジニル、２−もしくは３−モルホリニル、または２−もしくは３−チオモルホリニルである基を表す。
【００３８】
ハロゲン  −  フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を表す。
【００３９】
ヘテロアリール  −  炭素環式環構造を中断する少なくとも１個のＯ、Ｓおよび／またはＮ原子を有し、芳香族特性を与えるのに十分な数の非局在化パイ電子を有する環式有機基であって、芳香族複素環式基が２〜１４個、好ましくは４または５個の炭素原子を有し、例えば２−、３−もしくは４−ピリジル、２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル、２−、４−もしくは５−チアゾリル、２−もしくは４−イミダゾリル、２−、４−もしくは５−ピリミジニル、２−ピラジニル、または３−もしくは４−ピリダジニル等である基を表す。好ましいヘテロアリール基は、２−、３−および４−ピリジルである。そのようなヘテロアリール基はまた所望により置換されてもよい。さらに、特記しない場合、用語「置換もしくは非置換」または「所望により置換」は、主題の部分が所望により、化学的に適切に、Ｒ１２またはＲ１３に属する部分で置換されることをいう。
【００４０】
また、式Ｉで示される化合物の互変異性体、回転異性体、鏡像異性体および他の光学異性体、ならびにその医薬上許容される塩、溶媒和物および誘導体も本発明に包含される。
【００４１】
本発明のさらなる特徴は、医薬上許容される担体または賦形剤と一緒に有効成分として式Ｉで示される化合物（またはその塩、溶媒和物もしくは異性体）を含有する医薬組成物である。
【００４２】
本発明はまた、式Ｉで示される化合物の製造方法、ならびに例えばＨＣＶおよび関連障害のような疾患の処置方法を提供する。これらの処置方法は、上記疾患（単数または複数）に罹患している患者に治療有効量の式Ｉで示される化合物、または式Ｉで示される化合物を含有する医薬組成物を投与する工程を包含する。
【００４３】
また、ＨＣＶおよび関連障害処置用医薬の製造における式Ｉで示される化合物の使用も開示する。
【００４４】
（好ましい実施態様の詳細な説明）
１つの実施態様において、本発明は、ＨＣＶプロテアーゼ、特にＨＣＶ  ＮＳ３／ＮＳ４ａセリンプロテアーゼの阻害剤としての式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される誘導体を開示する（式中、種々の部分は上記で定義したとおりである）。
【００４５】
優れたＨＣＶプロテアーゼ阻害活性を示す本発明の代表的な化合物を、その活性（ｎＭでのＫｉ＊値の範囲）とともに表１に列挙する。
【００４６】
表１：化合物およびＨＣＶプロテアーゼ連続アッセイ結果
【表１】
0004452441.tif 000029
【表２】
0004452441.tif 000030
【表３】
0004452441.tif 000031
【表４】
0004452441.tif 000032
【表５】
0004452441.tif 000033
【表６】
0004452441.tif 000034
【表７】
0004452441.tif 000035
ＨＣＶ連続アッセイＫｉ＊範囲：
カテゴリー  Ａ＝０〜１００；Ｂ＝１０１〜１０００；Ｃ＝＞１０００ｎＭ。
【００４７】
いくつかの型の本発明の化合物および式Ｉで示される種々の型の本発明の化合物の合成方法を以下に記載し、概説し、例示的な実施例を記載する。
【００４８】
【化８８】
0004452441.tif 000036
【化８９】
0004452441.tif 000037
【化９０】
0004452441.tif 000038
【化９１】
0004452441.tif 000039
【化９２】
0004452441.tif 000040
【化９３】
0004452441.tif 000041
Ｒ＝Ｍｅ
Ｒ＝ベンジル
【化９４】
0004452441.tif 000042
Ｘ＝ＯｔＢｕ
Ｘ＝ＯＨ
Ｘ＝ＮＨ２
Ｘ＝ＮＭｅＯＭｅ
Ｘ＝ＮＭｅ２
【化９５】
0004452441.tif 000043
Ｘ＝ＯｔＢｕ
Ｘ＝ＯＨ
【化９６】
0004452441.tif 000044
【化９７】
0004452441.tif 000045
Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝ｔＢｕ；Ｘ＝ｔＢｕ、Ｙ＝Ｈ
【化９８】
0004452441.tif 000046
Ｒ＝プロパルギル
Ｒ＝アリル
【化９９】
0004452441.tif 000047
Ｘ＝Ｏｔ−ブチル
Ｘ＝ＯＨ
【化１００】
0004452441.tif 000048
【化１０１】
0004452441.tif 000049
Ｘ＝Ｏｔブチル
Ｘ＝ＯＨ
【化１０２】
0004452441.tif 000050
Ｘ＝Ｏｔブチル
Ｘ＝ＯＨ
Ｘ＝ＮＭｅ２
【化１０３】
0004452441.tif 000051
Ｘ＝ＯｔＢｕ
Ｘ＝ＯＨ
【化１０４】
0004452441.tif 000052
Ｒ＝ｔＢｕ
Ｒ＝Ｈ
Ｒ＝Ｍｅ
【化１０５】
0004452441.tif 000053
Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝ＣＯＯＨ
Ｘ＝ＣＯＯＨ、Ｙ＝Ｈ
【化１０６】
0004452441.tif 000054
【化１０７】
0004452441.tif 000055
【化１０８】
0004452441.tif 000056
【化１０９】
0004452441.tif 000057
【化１１０】
0004452441.tif 000058
【化１１１】
0004452441.tif 000059
【化１１２】
0004452441.tif 000060
【化１１３】
0004452441.tif 000061
【００４９】
構造に依存して、本発明の化合物は、有機もしくは無機酸、または有機もしくは無機塩基と医薬上許容される塩を形成し得る。そのような塩の形成に適切な酸の例としては、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、マロン酸、サリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸ならびに当業者に周知の他の鉱酸およびカルボン酸が挙げられる。塩基との塩の形成については、適切な塩基は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、テトラアルキルアンモニウムヒドロキシドなどである。
【００５０】
別の実施態様において、本発明は、本発明のペプチドを有効成分として含有する医薬組成物を提供する。医薬組成物は、一般にさらに医薬上許容される担体希釈剤、賦形剤または担体（本明細書において担体物質と総称する）を含む。それらのＨＣＶ阻害活性のために、そのような医薬組成物は、Ｃ型肝炎および関連障害の処置において有用性を有する。
【００５１】
さらに別の実施態様において、本発明は、有効成分として本発明の化合物を含む医薬組成物の製造方法を開示する。本発明の医薬組成物および方法において、有効成分は、代表的には意図される投与形態、すなわち経口錠剤、カプセル（固体充填、半固体充填または液体充填）、構成用散剤、経口ゲル、エリキシル、分散性顆粒、シロップ、懸濁液などに関連して適切に選択され、通常の薬学の慣例に合致した適切な担体物質と混合して投与される。例えば、錠剤またはカプセル形態での経口投与については、活性薬物成分を、いずれかの経口用の非毒性の医薬上許容される不活性担体、例えばラクトース、デンプン、スクロース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、滑石、マンニトール、エチルアルコール（液体形態）などと組み合わせてもよい。さらに、所望または要求される場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤を混合物に組み入れてもよい。散剤および錠剤は、本発明の組成物を約５〜約９５％含み得る。適切な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、天然糖、コーン甘味料、天然および合成ゴム、例えばアカシア、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールおよびロウが挙げられる。滑沢剤の中で、これらの投与形態に用いられるものとしては、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどに言及し得る。崩壊剤としては、デンプン、メチルセルロース、グアーガムなどが挙げられる。
【００５２】
甘味料および着香料ならびに保存剤もまた、適切であれば含めてもよい。上記の用語のいくつか、すなわち崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、結合剤などについては以下でより詳細に記載する。
【００５３】
さらに、本発明の組成物を、いずれかの構成成分または有効成分の１種以上の速度制御放出を提供して、治療効果、すなわちＨＣＶ阻害活性などを最適化するように、持続放出形態で製剤化してもよい。持続放出に適切な投与形態としては、種々の崩壊速度の層または有効成分を含浸させた制御放出ポリマーマトリックスを含有し錠剤形態に成形された層状錠剤、またはそのような含浸または被包された多孔質ポリマーマトリックスを含有するカプセルが挙げられる。
【００５４】
液体形態調製物としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。例として、非経口注射用の、または経口溶液、懸濁液およびエマルジョンの甘味料および鎮静物の添加用の水または水−プロピレングリコール溶液に言及し得る。液体形態調製物はまた、鼻腔内投与用溶液を包含し得る。
【００５５】
吸入に適切なエーロゾル調製物は、溶液および粉末形態の固体を包含し得、これを不活性圧縮気体（例えば、窒素）のような医薬上許容される担体と組合せてもよい。
【００５６】
坐剤の製造については、まず低融点ロウ、例えば脂肪酸グリセリドの混合物（例えば、ココアバター）を溶解し、そして攪拌または同様な混合によりそこに有効成分を均一に分散させる。次いで、融解した均一の混合物を好適な大きさの鋳型中に注ぎ、放冷することにより固化させる。
【００５７】
また、使用直前に経口または非経口投与用液体形態調製物に変換することを意図した固体形態調製物も含まれる。そのような液体形態としては、溶液、懸濁液およびエマルジョンが挙げられる。
【００５８】
本発明の化合物はまた、経皮送達可能であり得る。経皮組成物は、クリーム、ローション、エーロゾルおよび／またはエマルジョンの形態を取り得、この目的で当該分野において慣習的であるように、マトリックスまたはレザーバー型の経皮パッチに含めることができる。
【００５９】
好ましくは、化合物は経口、静脈内または皮下投与される。
【００６０】
好ましくは、医薬調製物は単位投与形態をとる。そのような形態では、調製物は、適量、例えば所望の目的を達成するのに有効な量の有効成分を含有する適切なサイズの単位用量に小分けされる。
【００６１】
単位用量の調製物中の本発明の活性組成物の量は、特定の適用に従い、一般的には約１.０ミリグラムから約１０００ミリグラム、好ましくは約１.０から約９５０ミリグラム、より好ましくは約１.０〜約５００ミリグラム、そして代表的には約１〜約２５０ミリグラムの範囲で変動または調整し得る。用いられる実際の投与量は、患者の年齢、性別、体重および処置される病状の重篤さに依存して変動し得る。そのような技術は当業者に周知である。
【００６２】
一般的に、有効成分を含有するヒト経口投与形態を、１日当たり１または２回投与し得る。投与の量および頻度は、主治医の判断に従って調節される。経口投与用に一般的に推奨される一日投与養生法は、単回または分割用量で、一日当たり約１.０ミリグラムから約１０００ミリグラムの範囲であり得る。
【００６３】
いくつかの有用な用語を以下に記載する。
【００６４】
カプセル  −  有効成分を含む組成物を保持または含有させるためのメチルセルロース、ポリビニルアルコール、または変性ゼラチンもしくはデンプンで作製された特殊な容器または封入物をいう。代表的には、硬カプセルは比較的高いゲル強度の骨およびブタ皮膚ゼラチンの混合物から作製される。カプセルそれ自体は小量の色素、不透明化剤、可塑剤および保存剤を含んでもよい。
【００６５】
錠剤  −  適切な希釈剤と共に有効成分を含有する圧縮または成形された固体投与形態をいう。錠剤は、湿式造粒、乾式造粒または圧縮により得られた混合物または造粒物の圧縮により製造することができる。
【００６６】
経口ゲル  −  親水性半固体マトリックス中に分散または可溶化された有効成分をいう。
【００６７】
構成用散剤は、水またはジュース中に懸濁し得る有効成分および適切な希釈剤を含有する粉末混合物をいう。
【００６８】
希釈剤  −  組成物または投与形態の主な部分を通常構成する物質をいう。適切な希釈剤としては、糖類（例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールおよびソルビトール）；コムギ、トウモロコシ、イネおよびジャガイモ由来のデンプン；ならびにセルロース（例えば、微晶性セルロース）が挙げられる。組成物中の希釈剤の量は、全組成物重量に対し約１０〜約９０重量％、好ましくは約２５〜約７５重量％、より好ましくは約３０〜約６０重量％、よりさらに好ましくは約１２〜約６０重量％の範囲であり得る。
【００６９】
崩壊剤  −  組成物に添加して、その分解（崩壊）を補助し、医薬を放出させる物質をいう。適切な崩壊剤としては、デンプン；「冷水可溶性」修飾デンプン（例えば、カルボキシメチルデンプンナトリウム）；天然および合成ゴム（例えば、イナゴマメ、カラヤ、グアー、トラガカントおよび寒天）；セルロース誘導体（例えば、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウム）；微晶性セルロースおよび架橋微晶性セルロース（例えば、クロスカルメロースナトリウム（sodium croscarmellose））；アルギネート（例えば、アルギン酸およびアルギン酸ナトリウム）；粘土（例えば、ベントナイト）；ならびに発泡性混合物が挙げられる。組成物中の崩壊剤の量は、組成物重量に対し約２〜約１５重量％、より好ましくは約４〜約１０重量％の範囲であり得る。
【００７０】
結合剤  −  粉末を一緒に結合または「接着」させ、処方物中で顆粒を形成させ、従って「接着剤」として作用することによりそれらを粘着性にする物質をいう。結合剤は、既に希釈剤または増量剤において得られる粘着強度を追加する。適切な結合剤としては、糖類（例えば、スクロース）；コムギ、トウモロコシ、イネおよびジャガイモ由来のデンプン；天然ゴム（例えば、アカシア、ゼラチンおよびトラガカント）；海藻誘導体（例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウムおよびアルギン酸カルシウムアンモニウム）；セルロース物質（例えば、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース）；ポリビニルピロリドン；ならびに無機物（例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム）が挙げられる。組成物中の結合剤の量は、組成物重量に対して約２〜約２０重量％、より好ましくは約３〜約１０重量％、さらに好ましくは約３〜約６重量％の範囲であり得る。
【００７１】
滑沢剤  −  投与形態に添加して、圧縮後に、摩擦または摩損を低下させることにより、錠剤、顆粒などの鋳型またはダイからの放出を可能にする物質をいう。適切な滑沢剤としては、金属ステアレート（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸カリウム）；ステアリン酸；高融点ロウ；ならびに水溶性滑沢剤（例えば、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコールおよびｄ'ｌ−ロイシン）が挙げられる。滑沢剤は、顆粒の表面およびそれらの中間ならびにタブレット成形機のパーツに存在しなければならないので、通常は圧縮前の最終工程で加えられる。組成物中の滑沢剤の量は、組成物重量に対して約０.２〜約５重量％、好ましくは約０.５〜約２重量％、より好ましくは約０.３〜約１.５重量％の範囲であり得る。
【００７２】
滑剤  −  流れが円滑かつ一様になるように、ケーキングを防止し、造粒物の流動特性を改善する物質。適切な滑剤としては、二酸化珪素および滑石が挙げられる。組成物中の滑剤の量は、全組成物重量に対して約０.１〜約５重量％、好ましくは約０.５〜約２重量％の範囲であり得る。
【００７３】
着色剤  −  組成物または投与形態に彩色を施す賦形剤。そのような賦形剤は、食品用色素、および適切な吸着剤（例えば、粘土または酸化アルミニウム）に吸着させた食品用色素を包含し得る。着色剤の量は、組成物重量に対して約０.１〜約５重量％、好ましくは約０.１〜約１重量％の範囲で変動し得る。
【００７４】
生物学的利用能  −  標準または対照と比較した場合の、活性薬物成分または治療的部分が投与された投与形態から全身的循環に吸収される速度および程度をいう。
【００７５】
慣習的な錠剤の製造方法は公知である。そのような方法としては、乾式方法（例えば、直接圧縮および圧縮により生成された造粒物の圧縮）、または湿式方法もしくは他の特殊な手順が挙げられる。例えばカプセル、坐剤などの他の投与形態の慣習的な製造方法もまた周知である。
【００７６】
本発明の別の実施態様は、例えばＣ型肝炎などの疾患の処置のための、上記医薬組成物の使用を開示する。この方法は、そのような疾患を有するかまたはそのような処置を必要とする患者に治療有効量の本発明の医薬組成物を投与する工程を包含する。
【００７７】
さらに別の実施態様において、本発明の化合物をヒトにおけるＨＣＶの処置のために、単独療法様式または併用療法様式（例えば、リバビリンのような抗ウイルス剤および／またはα−インターフェロンのようなインターフェロンとの組合せなど）で使用し得る。
【００７８】
上記のように、本発明はまた、化合物の互変異性体、回転異性体、鏡像異性体および他の立体異性体を包含する。すなわち、当業者には理解されるように、本発明の化合物のいくつかは適切な異性体形態で存在し得る。そのような変形が本発明の範囲内にあることが意図される。
【００７９】
本発明の別の実施態様は、本明細書に開示される化合物の製造方法を開示する。これらの化合物は、当該分野において公知のいくつかの技術により製造され得る。代表的な例示的な手順を下記反応スキームで概説する。下記の例示的なスキームには、いくつかの代表的な本発明の化合物の製造が記載されているが、天然および非天然の両方のアミノ酸のいずれかの適切な置換により、そのような置換に基いた所望の化合物が形成されることを理解すべきである。そのような変形が本発明の範囲内にあることが意図される。
【００８０】
下記のスキーム、製造および実施例の記載で使用される略語は以下の通りである：
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＦ：Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＡｃＯＨ：酢酸
ＨＯＯＢｔ：３−ヒドロキシ−１,２,３−ベンゾトリアジン−４(３Ｈ)−オン
ＥＤＣｌ：１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド
ＤＥＣ：１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＡＤＤＰ：１,１'−(アゾジカルボニル)ジピペリジン
ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート
ＭｅＯＨ：メタノール
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＰｙＢｒＯＰ：ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
Ｂｎ：ベンジル
Ｂｚｌ：ベンジル
Ｅｔ：エチル
Ｐｈ：フェニル
ｉＢｏｃ：イソブトキシカルボニル
ｉＰｒ：イソプロピル
ｔＢｕまたはＢｕｔ：ｔｅｒｔ−ブチル
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｃｂｚ：ベンジルオキシカルボニル
Ｃｐ：シクロペンチルジエニル
Ｔｓ：ｐ−トルエンスルホニル
Ｍｅ：メチル
ＴＨＰ：テトラヒドロピラニル
ｉＢｏｃ：イソブチルオキシカルボニル
Ｃｈｇ：シクロヘキシルグリシン
【００８１】
一般的製造スキーム
以下のスキームは中間体ビルディングブロックの合成方法を記載する：
【化１１４】
0004452441.tif 000062
【化１１５】
0004452441.tif 000063
【化１１６】
0004452441.tif 000064
【００８２】
中間体の製造：
製造例１
工程Ａ：化合物（１．１）
【化１１７】
0004452441.tif 000065
【００８３】
−２０℃で撹拌中のＤＭＦ（１５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中の化合物（１．０８）（３．００ｇ、１２．０ｍｍｏｌ；Harbeson, S.L.; Albelleira, S.M.,; Akiyama, A.; Barrett, R.; Carroll, R.M.; et al.; J.Med.Chem.; 37 (18) 1994; 2918-2929;）の溶液に、ＨＯＯＢｔ（１．９７ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（４．０ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ（２．７９ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌し、次いでＨＣｌ・Ｈ２Ｎ−Ｇｌｙ−ＯＢｎ（２．５６ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で２時間撹拌し、一晩冷蔵し、次いで濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈した。次いで、このＥｔＯＡｃ溶液を２回飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、５％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（１．０９）（４．５ｇ、９４％）を得た。ＬＲＭＳ  ｍ／ｚ  ＭＨ＋＝３９５．１。
【００８４】
工程Ｂ：化合物（１．１）
【化１１８】
0004452441.tif 000066
【００８５】
無水エタノール（３００ｍＬ）中の化合物（１．０９）（７．００ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）の溶液を室温で、水素雰囲気下、Ｐｄ−Ｃ（３００ｍｇ、１０％）の存在下で撹拌した。反応の進行をｔｌｃによってモニターした。２時間後、混合物をｃｅｌｉｔｅパッドを通して濾過し、得られた溶液を真空下で濃縮して、化合物（１．１）（５．４０ｇ、定量的）を得た。ＬＲＭＳ  ｍ／ｚ  ＭＨ＋＝３０５．１。
【００８６】
製造例２
工程Ａ  化合物（１．３）
【化１１９】
0004452441.tif 000067
【００８７】
製造例１、工程Ｂからの化合物（１．１）（１当量）、化合物（１．２）（Novabiochem, No. 04-12-5147）（１．０３当量）、ＨＯＯＢｔ（１．０３当量）、Ｎ−メチルモルホリン（２．２当量）およびジメチルホルムアミド（７０ｍＬ／ｇ）の混合物を−２０℃で撹拌した。ＥＤＣｌ（１．０４当量）を添加し、反応物を４８時間撹拌した。反応混合物を５％ＫＨ２ＰＯ４水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した（２×）。合した有機物を冷５％Ｋ２ＣＯ３水溶液、次いで５％ＫＨ２ＰＯ４水溶液、次いでブラインで洗浄し、有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。混合物を濾過し、次いで蒸発させ、濾液を真空下で乾燥し、残渣をＥｔ２Ｏ−ヘキサンで粉砕し、濾過して、表題化合物（１．３）を得た（８６％、収率）Ｃ２５Ｈ３９Ｎ３Ｏ７（４９３．６０）、質量スペクトル（ＦＡＢ）Ｍ＋１＝４９４．３。
【００８８】
工程Ｂ  化合物（１．４）
【化１２０】
0004452441.tif 000068
【００８９】
製造例２、工程Ａからの化合物（１．３）（３．０ｇ）を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（３６ｍＬ）で処理し、室温で７分間撹拌した。混合物を１．５Ｌの冷（５℃）ヘキサン中に注ぎ、撹拌し、次いで０℃で０．５時間放置した。混合物を乾燥雰囲気中で吸引濾過し、採集した固体をさらに乾燥して、表題化合物（１．４）を得た（２．３ｇ、８８％収率）、Ｃ２０Ｈ３１Ｎ３Ｏ５・ＨＣｌ、Ｈ１  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／ＮａＯＤ）δ７．３８（ｍ，５Ｈ）、５．２５（ｍ，１Ｈ）、４．３−４．１（ｍ，１Ｈ）、３．８（ｍ，２Ｈ）、３．４−３．３（ｍ，ＨＤＯにより不明瞭）、１．７−１．１（ｍ，４Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）、０．８３（ｍ，３Ｈ）。
【００９０】
製造例３
化合物（１．５）
【化１２１】
0004452441.tif 000069
【００９１】
製造例２、工程Ａからの化合物（１．３）を下記製造例７、工程Ａと本質的に同様に処理して、化合物（１．５）を得た。
【００９２】
製造例４
化合物（１．６）
【化１２２】
0004452441.tif 000070
【００９３】
製造例３からの化合物（１．５）を製造例２、工程Ｂと本質的に同様に処理して、化合物（１．６）を得た。
【００９４】
製造例５
工程Ａ  化合物（２．０９）
【化１２３】
0004452441.tif 000071
(2.08)
(2.09)
【００９５】
−２０℃の無水ＤＭＦ（２００ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）中のジメチルアミンヒドロクロリド（１．６１ｇ、１９．７ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃ−フェニルグリシン、化合物２．０８（４．５０ｇ、１７．９ｍｍｏｌ、Bachem Co. # A-2225）、ＨＯＯＢｔ（３．０７ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ（４．１２ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＭＭ（５．９０ｍＬ、５３．７ｍｍｏｌ）を添加した。この温度で３０分間撹拌した後、反応混合物を冷凍庫中に一晩（１８時間）維持した。次いで、これを室温に加温し、ＥｔＯＡｃ（４５０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）および５％Ｈ３ＰＯ４（１００ｍＬ）を添加した。相を分離した後、有機相を５％Ｈ３ＰＯ４（１００ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２×１５０ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）およびブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、真空下で濃縮して、化合物（２．０９）（４．８６ｇ）を白色固体として得た。これをさらに精製せずに使用した。
【００９６】
工程Ｂ  化合物（２．１）
【化１２４】
0004452441.tif 000072
(2.09)
(2.1)
【００９７】
製造例５、工程Ａからの化合物（２．０９）（４．７０ｇ、粗）を４Ｎ  ＨＣｌ（６０ｍＬ、２４０ｍｍｏｌ）に溶解し、得られた溶液を室温で撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした。４時間後、溶液を真空下で濃縮して、化合物（２．１）を白色固体として得た。これを次の反応においてさらに精製せずに使用した。ＬＲＭＳ  ｍ／ｚ  ＭＨ＋＝１７９．０．
【００９８】
製造例６
工程Ａ  化合物（２．２）
【化１２５】
0004452441.tif 000073
【００９９】
製造例２、工程Ａと本質的に同様にし、フェニルグリシンｔ−ブチルエステルヒドロクロリドの代わりにフェニルグリシンＮ，Ｎ−ジメチルアミドヒドロクロリドを使用して、化合物（２．２）を製造した。質量スペクトル（ＦＡＢ）Ｍ＋１＝４６５．３。
【０１００】
工程Ｂ  化合物（２．３）
【化１２６】
0004452441.tif 000074
(2.2)
(2.3)
【０１０１】
工程Ａからの化合物（２．２）（１．８５ｇ）を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（５０ｍＬ）と室温で１時間反応させた。混合物を真空下、２０℃の水浴中で蒸発させ、イソプロピルエーテル下で粉砕し、濾過し、乾燥して、化合物（２．３）を得た（１．５７ｇ、９８％収率）、Ｃ１８Ｈ２８Ｎ４Ｏ４・ＨＣｌ、質量スペクトル（ＦＡＢ）Ｍ＋１＝３６５．３。
【０１０２】
製造例７
工程Ａ  化合物（２．４）
【化１２７】
0004452441.tif 000075
(2.2)
(2.4)
【０１０３】
ジクロロメタン（６０ｍＬ）中の製造例５、工程Ａからの化合物（２．２）（２．０ｇ）の溶液をジメチルスルホキシド（３．０ｍＬ）および２，２−ジクロロ酢酸（０．７０ｍＬ）で処理した。撹拌中の混合物を５℃に冷却し、次いで１Ｍジシクロヘキシルカルボジイミド／ジクロロメタン溶液（８．５ｍＬ）を添加した。冷浴をはずし、混合物を２２時間撹拌した。次いで、２−プロパノール（０．５ｍＬ）を添加し、さらに１時間撹拌した。混合物を濾過し、次いで氷冷０．１Ｎ  ＮａＯＨ（５０ｍＬ）、次いで氷冷０．１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）、次いで５％ＫＨ２ＰＯ４水溶液、次いで飽和ブラインで洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、次いで濾過した。濾液を蒸発させ、シリカゲルのクロマトグラフィーにかけ、酢酸エチルで溶出して、化合物（２．３）を得た（１．８７ｇ、９４％収率）、Ｃ２３Ｈ３４Ｎ４Ｏ６、質量スペクトル（ＦＡＢ）Ｍ＋１＝４６３．３。
【０１０４】
工程Ｂ  化合物（２．５）
【化１２８】
0004452441.tif 000076
【０１０５】
製造例２、工程Ｂと本質的に同様にして、化合物（２．５）を製造した。
【０１０６】
製造例８
工程Ａ  化合物（３．３）
工程Ａ−１  化合物３．０２
【化１２９】
0004452441.tif 000077
【０１０７】
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の化合物３．０１（４．６ｇ、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｓ−メチルシステイン（Bachem Biosciences Inc.）からBoger, J. Org. Chem., 1988, 53(3), 487の手順に従って製造）の溶液を、Ｃｓ２ＣＯ３（６．１ｇ）、次いでベンジルブロミド（２．３ｍＬ）で処理し、混合物を室温で４時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に懸濁した。次いで、この混合物を５％ＫＨ２ＰＯ４水溶液、次いでブラインで洗浄し、有機抽出物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。混合物を濾過し、濾液を蒸発させて、生成物３．０２を得た（６．２ｇ）；［α］Ｄ−３３．７（ｃ  １．３、ＣＨＣｌ３）。
【０１０８】
工程Ａ−２  化合物３．０３
【化１３０】
0004452441.tif 000078
【０１０９】
U.Larsson, et al., Acta Chem. Scan., 1994, 48(6), 517-525の手順に従って、水（９０ｍＬ）中のオキソン（oxone(R)）（１６．４ｇ、Aldrich Chemical Co.）の溶液を、ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中の化合物３．０２（６．１ｇ）の０℃溶液に徐々に添加した。混合物を室温で４時間撹拌し、次いでロータリーエバポレーターで１／２容量に濃縮し、冷水（１００ｍＬ）を添加し、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。混合物を濾過し、濾液を蒸発させて、生成物３．０３を得た（５．９ｇ）；［α］Ｄ−２６．３（ｃ  ０．９、ＣＨＣｌ３）。
【０１１０】
工程Ａ−３  化合物３．２
【化１３１】
0004452441.tif 000079
【０１１１】
上記工程の生成物３．０３を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサンで０．５時間処理して、生成物３．２を得た。Ｃ１２Ｈ１７ＮＯ４Ｓ・ＨＣｌ（３０７．７９）；質量スペクトル（ＦＡＢ）Ｍ＋１＝２７２．０。
【０１１２】
化合物３．３の製造
【化１３２】
0004452441.tif 000080
(3.1)
(3.2)
(3.3)
【０１１３】
化合物（３．２）（Ｓ−メチルシステインスルホンベンジルエステルヒドロクロリド）および化合物（３．１）（Ｎ−Ｂｏｃ−シクロヘキシルグリシン）を、本質的に製造例２、工程Ａと同様に反応させて、化合物（３．３）を得た。Ｃ２５Ｈ３８Ｎ２Ｏ７Ｓ（５１０．６４）。
【０１１４】
工程Ｂ  化合物（３．４）
【化１３３】
0004452441.tif 000081
【０１１５】
上記工程Ａからの化合物（３．３）（０．７ｇ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０５ｇ）およびＥｔＯＨ−ジオキサン（１００ｍＬ）の混合物を３気圧Ｈ２下で５時間撹拌した。混合物を濾過し、真空下で蒸発乾固して、化合物（３．４）を得た（０．５６ｇ、９７％収率）、Ｃ１８Ｈ３２Ｎ２Ｏ７Ｓ（４２０．５２）質量スペクトル（ＦＡＢ）Ｍ＋１＝４２１．２。
【０１１６】
工程Ｃ  化合物（３．５）
【化１３４】
0004452441.tif 000082
(3.4)
(1.4)
(3.5)
【０１１７】
上記工程Ｂからの化合物（３．４）を、製造例２、工程Ｂからの化合物（１．４）と、本質的に製造例２、工程Ａと同様に反応させて、化合物（３．５）を得た。Ｃ３８Ｈ６１Ｎ５Ｏ１１Ｓ（７９５．９８）、質量スペクトル（ＦＡＢ）Ｍ＋１＝７９６．３。
【０１１８】
製造例９
化合物４．１
【化１３５】
0004452441.tif 000083
【０１１９】
製造例８、工程Ｃからの化合物（３．５）を、本質的に製造例２、工程Ｂと同様に反応させて、化合物（４．１）を得る。Ｃ３３Ｈ５３Ｎ５Ｏ９Ｓ・ＨＣｌ（７３２．３３）。
【０１２０】
製造例１０
化合物（４．２）
【化１３６】
0004452441.tif 000084
(4.1)
(4.2)
【０１２１】
５℃の製造例９からの化合物（４．１）（０．７ｇ）、ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．３８ｍＬ）の溶液を、イソブチルクロロホルメート（０．１５ｍＬ）で処理する。冷浴をはずし、６時間撹拌する。反応混合物を５％ＫＨ２ＰＯ４水溶液（１００ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出する。合した有機物を冷５％Ｋ２ＣＯ３水溶液、次いで５％ＫＨ２ＰＯ４水溶液、次いでブラインで洗浄し、有機物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥する。混合物を濾過し、濾液を真空下で蒸発させ、残渣をＥｔ２Ｏ−ヘキサンで粉砕し、濾過して、化合物（４．２）を得る。
【０１２２】
製造例１１
化合物（４．３）
【化１３７】
0004452441.tif 000085
(4.2)
(4.3)
【０１２３】
化合物（４．２）を、本質的に下記製造例１４、工程Ｈと同様に反応させて、化合物（４．３）を得る。
【０１２４】
製造例１２
化合物（４．４）
【化１３８】
0004452441.tif 000086
(4.3)
(4.4)
【０１２５】
製造例１１からの化合物（４．３）（約０．１０ｇ）を、無水トリフルオロ酢酸−ジクロロメタンの溶液（１：１、約１０ｍＬ）で約２時間処理する。溶液をキシレン（約５０ｍＬ）で希釈し、真空下で蒸発させる。残渣をＥｔ２Ｏで粉砕し、濾過して、化合物（４．４）を得る。
【０１２６】
製造例１３
化合物（４．５）
【化１３９】
0004452441.tif 000087
【０１２７】
製造例１２からの化合物（４．４）を、ジメチルアミンと、本質的に製造例２、工程Ａと同様に反応させて、化合物（４．５）を得る。
【０１２８】
製造例１４
工程Ａ  化合物（５．２）
【化１４０】
0004452441.tif 000088
(5.01)
(5.1)
(5.2)
【０１２９】
０℃の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）および無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の化合物（５．０１）（１．１１ｇ、７．０ｍｍｏｌ）の撹拌、冷却中の溶液に、ＨＯＢＴ（１．１９ｇ、７．２５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（２．３ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）およびＤＥＣ（１．６ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を０℃で１５分間撹拌し、次いでＨ−Ｖａｌ−Ｏ−ｔＢｕ（１．５４ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を冷凍庫中で一晩維持した。多量の沈殿が観察され、溶液を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。次いで、合した有機相を５％Ｈ３ＰＯ４溶液、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、粗生成物５．１を得た（２．４ｇ、９８％収率）。
【０１３０】
４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン中の粗生成物（上記で得た）の溶液を室温で７時間撹拌し、濃縮乾固して、化合物（５．２）を得た。
【０１３１】
工程Ｂ  化合物（５．４）
【化１４１】
0004452441.tif 000089
(5.3)
(5.4)
【０１３２】
撹拌中の５０％ＭｅＯＨ／５０％Ｈ２Ｏ（３００ｍＬ）中の化合物（５．３）（F. L. Bach, Jr. et al, J. Amer. Chem. Soc., (1995) 77, 6049）（１７．５ｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃアンヒドリド（４７．０ｇ、０．２１５ｍｏｌ）を添加した。次いで、５０％濃ＮａＯＨ溶液を滴下することによって溶液をｐＨ＝９．５に調整した。得られた溶液を一晩室温で撹拌し、次いで濃ＨＣｌでｐＨ＝８に中和し、クエン酸でｐＨ＝２．９４まで酸性にし、次いでＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合した有機相をＭｇＳＯ４で乾燥して、化合物（５．４）を得た（２７．１６ｇ、９５％収率）。
【０１３３】
工程Ｃ  化合物（５．５）
【化１４２】
0004452441.tif 000090
(5.4)
(5.5)
【０１３４】
０℃のＤＭＦ（３．５９ｍＬ、０．０４６ｍｏｌ）中の塩化チオニル（３．３７ｍＬ、０．０４６ｍｍｏｌ）の溶液を室温に加温し、３５分間撹拌した。次いで、溶液を０℃に冷却し、次いでＣＨ３ＣＮ（１５０ｍＬ）およびピリジン（３．７３ｍＬ、０．０４６ｍｏｌ）中の上記工程Ｂからの化合物（５．４）（１５．０ｇ、０．０４５ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温に加温し、一晩撹拌した。次いで、溶液を氷水（７００ｍＬ）中に注ぎ、３回ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で抽出した。合した有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（５．５）（１０．８ｇ）を得た。
【０１３５】
工程Ｄ  化合物（１．０８）
【化１４３】
0004452441.tif 000091
(6.6)
(1.08)
【０１３６】
撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（１３０ｍＬ）中の下記製造例１４、工程Ｄからの化合物（６．６）（６．５ｇ、０．０４４ｍｏｌ）の溶液に、Ｂｏｃアンヒドリド（９．６５ｇ、０．０４４ｍｏｌ）およびＤＭＦ（５０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を室温で週末の間撹拌し、濃縮乾固し、次いでＨ２Ｏ（１２０ｍＬ）および５０％ＮａＯＨを添加して、ｐＨ＝１０〜１１に調整した。次いで、溶液を２時間撹拌し、さらにＢｏｃアンヒドリド（１．９３ｇ、８．８ｍｍｏｌ）を添加し、一晩室温で撹拌した。次いで、溶液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、水相を０℃で１Ｎ  ＨＣｌを用いてｐＨ＝４まで酸性にし、次いで３回ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。次いで、合した有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（１．０８）を得た（４．５０ｇ、４１％収率、Ｍ−ｔ−ブチル  ＋２＝１９２）。
【０１３７】
工程Ｅ  化合物（５．７）
【化１４４】
0004452441.tif 000092
(1.08)
(5.7)
【０１３８】
撹拌中のＤＭＦ（２２ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２２ｍＬ）中の上記からの化合物（１．０８）（４．５ｇ、０．０１８ｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（２．７ｇ、０．０２ｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（６ｍＬ、０．０５４ｍｏｌ）、ＤＥＣ（４．１７ｇ、０．０２２ｍｏｌ）およびアリルグリシン．ＴｓＯＨ（６．１ｇ、０．０２ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で週末の間撹拌し、次いで濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相を１０％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、粗生成物（５．７ｇ）を得た。４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（５０ｍＬ）中のこの粗生成物の溶液を室温で５０分間撹拌し、濃縮乾固して、化合物（５．７）を得た（４．７９ｇ、９４％収率、ＭＨ＋＝２４５．１）。
【０１３９】
工程Ｆ  化合物（５．８）
【化１４５】
0004452441.tif 000093
(5.7)
(5.8)
【０１４０】
撹拌中の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍＬ）中の上記工程Ｅからの化合物（５．７）（３．１ｇ、０．０１１ｍｏｌ）の溶液に、ＴＥＡ（１．６９ｍＬ、０．０１２ｍｏｌ）を１３分間にわたって滴下し、無水ＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍＬ）中の工程Ｃからの化合物（５．５）（２．８３ｇ、０．０１１ｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を室温で１．５時間撹拌した。次いで、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過して、化合物（５．８）（４．６７ｇ、ＭＨ＋＝４５７．２）を得た。
【０１４１】
工程Ｇ  化合物（５．９）
【化１４６】
0004452441.tif 000094
(5.8)
(5.9)
【０１４２】
０℃で撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中の工程Ａからの化合物（５．２）（０．３４ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．２１４ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．４３ｍＬ、３．９ｍｍｏｌ）およびＤＥＣ（０．５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１５分間撹拌し、次いで工程Ｆからの化合物（５．８）（０．５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を冷凍庫中に一晩維持し、次いで濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−Ｈ２Ｏで抽出した。合した有機相を２回飽和ＮａＨＣＯ３、５％Ｈ２ＰＯ４およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、次いで濾過し、濃縮乾固して、化合物（５．９）（０．６５ｇ、ＭＨ＋＝６９７．４）を得た。
【０１４３】
工程Ｈ  化合物（５．１０）
【化１４７】
0004452441.tif 000095
(5.9)
(5.10)
【０１４４】
撹拌中の無水ＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ）中の工程Ｇからの化合物（５．９）（０．６ｇ、０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ試薬（０．７３２ｇ、１．７２ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１時間撹拌し、次いでＨ２Ｏ（０．０３１ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）中のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ試薬（０．３７３ｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた溶液を室温で２．５時間撹拌し、次いで５０％飽和ＮａＨＣＯ３／５０％飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（２０ｍＬ）の溶液を添加し、迅速に１．５時間室温で撹拌した。次いで、溶液をＨ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固して、化合物（５．１０）（０．５８８ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝６９５．２）を得た。
【０１４５】
製造例１５
工程Ａ  化合物（６．２）
【化１４８】
0004452441.tif 000096
(6.1)
(6.2)
【０１４６】
−２０℃で撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）およびＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物（６．１）（５．０ｇ、１９．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（３．２５ｇ、１９．８９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（４．５８ｇ、２３．８７ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（６．５６ｍＬ、５９．６９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１０分間撹拌し、次いでＮＨ４Ｃｌ（１．３８ｇ）を添加し、０℃で一晩維持した。次いで、溶液を濃縮し、ＥｔＯＡｃ−Ｈ２Ｏで抽出した。合した有機相を２回ＮａＨＣＯ３、Ｈ３ＰＯ４およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し、２．５％ＭｅＯＨ／９７．５％ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して、化合物（６．２）（１．９５ｇ、ＭＨ＋＝２５１．１）を得た。
【０１４７】
工程Ｂ  化合物（６．３）
【化１４９】
0004452441.tif 000097
(6.2)
(6.3)
【０１４８】
４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（２７０ｍＬ、４３．０８ｍｍｏｌ）中の工程Ａからの化合物（６．２）（１２．３２ｇ、４９．２８ｍｍｏｌ）の溶液を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮乾固して、化合物（６．３）（８．４０ｇ、１００％収率）を得た。
【０１４９】
工程Ｃ  化合物（１．０８）（代替合成）
【化１５０】
0004452441.tif 000098
(6.4)
(6.5)
【０１５０】
０℃〜５℃で撹拌中のＭｅＯＨ（１２２ｍＬ）中の１−ニトロブタン（１６．５ｇ、０．１６ｍｏｌ）およびグリオキシル酸．Ｈ２Ｏ（２８．１ｇ、０．３０５ｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（９３ｍＬ、０．６６７ｍｏｌ）を２時間にわたって滴下した。溶液を室温に加温し、一晩撹拌し、次いで濃縮乾固して油状物を得た。次いで、この油状物をＨ２Ｏと混合し、１０％ＨＣｌでｐＨ−１まで酸性にし、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。合した有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（６．５）（２８．１ｇ、９９％収率）を得た。
【０１５１】
工程Ｄ  化合物（６．６）
【化１５１】
0004452441.tif 000099
(6.5)
(6.6)
攪拌中の酢酸（１.２５Ｌ）中の工程Ｃからの化合物（６．５）（２４０ｇ、１.３５ｍｏｌ）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（３７ｇ）を添加した。得られた溶液を、５９ｐｓｉで３時間次いで６０ｐｓｉで一晩水素化した。次いで、酢酸を蒸発させ、残渣をトルエンと３回共沸し、次いでＭｅＯＨおよびエーテルで粉砕した。次いで、溶液を濾過し、トルエンと２回共沸して、化合物（６．６）（１３１ｇ、６６％）を得た。
【０１５２】
工程Ｅ  化合物（１．０８）
【化１５２】
0004452441.tif 000100
(6.6)
(1.08)
【０１５３】
０℃で攪拌中のジオキサン（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５ｍＬ）中の工程Ｄからの化合物（６．６）（２.０ｇ、０．０１３６ｍｏｌ）の溶液に、１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（４.３ｍＬ、０．０１４ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を１０分間攪拌し、次いでＢｏｃアンヒドリド（０.１１ｇ、０．０１４ｍｏｌ）を添加し、０℃で１５分間攪拌した。この溶液を室温に加温し、４５分間攪拌し、一晩冷蔵庫で維持し、次いで、濃縮乾固して、粗物質を得た。ＥｔＯＡｃおよび氷中のこの粗物質の溶液に、ＫＨＳＯ４（３.３６ｇ）およびＨ２Ｏ（３２ｍＬ）を添加し、４〜６分間攪拌した。次いで、有機相を分離し、水相を２回ＥｔＯＡｃで抽出した。合した有機相をＨ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（１．０８）（３.０ｇ、８９．２％収率）を得た。
【０１５４】
工程Ｆ  化合物（１．０９）
【化１５３】
0004452441.tif 000101
(1.08)
(1.09)
【０１５５】
−２０℃で攪拌中のＤＭＦ（１５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中の工程Ｅからの化合物（１．０８）（３.０ｇ、０．０１２ｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（１.９７ｇ、０．０１２ｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（４.０ｍＬ、０．０３６ｍｏｌ）およびＥＤＣｌ（２.７９ｇ、０．０１４５ｍｏｌ）を添加した。反応物を１０分間攪拌し、次いでＨ−Ｇｌｙ−ＯＢＺ．ＨＣｌ（２.５６ｇ、０．０１３ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で２時間攪拌し、冷蔵庫に一晩維持し、濃縮乾固し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈した。次いで、このＥｔＯＡｃ溶液を２回飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、５％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（１．０９）（４.５ｇ、９４％収率、ＭＨ＋＝３９５.１）を得た。
【０１５６】
工程Ｇ  化合物（６．９）
【化１５４】
0004452441.tif 000102
(1.09)
(6.9)
【０１５７】
４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（４５ｍＬ）中の工程Ｆからの化合物（１．０９）（４．５ｇ、０．０１１４ｍｏｌ）の溶液を室温で４５分間撹拌し、次いで濃縮乾固して、化合物（６．９）（４．５ｇ、ＭＨ＋＝２９５．１）を得た。
【０１５８】
工程Ｈ  化合物（６．１１）
【化１５５】
0004452441.tif 000103
(6.1)
(6.11)
【０１５９】
−２０℃で撹拌中の１００ｍＬ丸底フラスコ中のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中Ｂｏｃ−フェニル−グリシン化合物（６．１）（０．３９８ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．２５８ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（０．３６４ｇ、１．９０３ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（０．５２３ｍＬ、４．７５９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５分間撹拌し、次いで工程Ｇからの化合物（６．９）（０．５ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで冷凍庫中で一晩維持した。反応物を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。次いで、合した有機相を２回５％Ｈ３ＰＯ４およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（６．１１）（０．７５ｇ、９４％収率、ＭＨ＋＝５２８．１）を得た。
【０１６０】
工程Ｊ  化合物（６．１２）
【化１５６】
0004452441.tif 000104
(6.11)
(6.12)
【０１６１】
４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（２１ｍＬ）中の工程Ｈからの化合物（６．１１）（０．７５ｇ、１．４２３ｍｍｏｌ）の溶液を室温で３時間撹拌し、次いで濃縮乾固して、化合物（６．１２）（０．６８ｇ、１００％収率）を得た。
【０１６２】
工程Ｋ  化合物（６．１４）
【化１５７】
0004452441.tif 000105
(6.13)
(6.14)
【０１６３】
−２０℃で撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物（６．１３）（０．４４ｇ、１．７２５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣｌ（０．３９ｇ、２．０７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．１８ｇ、１．７２５ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルホルホリン（０．５２３ｍＬ、４．７６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５分間撹拌し、次いでＣＨ２Ｃｌ２（７ｍＬ）中の工程Ｊからの化合物（６．１２）（０．６８、１．６４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、冷凍庫中で一晩維持し、次いで濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相を５％Ｈ３ＰＯ４、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（６．１４）（０．５９ｇ、５４％収率、ＭＨ＋＝６６７．３）を得た。
【０１６４】
工程Ｌ  化合物（６．１５）
【化１５８】
0004452441.tif 000106
(6.14)
(6.15)
【０１６５】
撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の工程Ｋからの化合物（６．１４）（０．５９３ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（periodinane）（０．７６ｇ、１．７８４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で２時間撹拌し、次いでＨ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２の混合物を添加した。混合物を４５分間撹拌し、次いで５０％飽和ＮａＨＣＯ３／５０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０ｍＬ）を添加し、さらに１．５時間撹拌した。さらなるＣＨ２Ｃｌ２を溶液に添加し、有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固し、カラムクロマトグラフィーにより精製し、２．５％ＭｅＯＨ／９７．５％ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して、化合物（６．１５）（０．４８ｇ、８２％収率）を得た。
【０１６６】
工程Ｍ  化合物（６．１６）
【化１５９】
0004452441.tif 000107
(6.15)
(6.16)
【０１６７】
撹拌中の無水ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の工程Ｌからの化合物（６．１５）（０．１６ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（４０．８ｍｇ）を添加した。得られた溶液を激しく撹拌し、次いで１滴のＡｃＯＨを添加した。次いで、溶液をＨ２ガス下で２時間撹拌し、次いでｃｅｌｉｔｅを通して濾過して、化合物（６．１６）（０．１３３ｇ、９５％収率、ＭＨ＋＝５７５．３）を得た。
【０１６８】
工程Ｎ  化合物（６．１８）
【化１６０】
0004452441.tif 000108
(6.17)
(6.18)
【０１６９】
−２０℃で撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物（６．１７）（０．５ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．２５９ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（０．４８ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ（０．３６６ｇ、１．９１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５分間撹拌し、工程Ｇからの化合物（６．９）（０．５ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、冷凍庫中で一晩維持し、濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。次いで、合した有機相を２回５％Ｈ３ＰＯ４およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（６．１８）（０．９５ｇ、ＭＨ＋＝５９２．１）を得た。
【０１７０】
工程Ｏ  化合物（６．１９）
【化１６１】
0004452441.tif 000109
(6.18)
(6.19)
【０１７１】
４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（２６ｍＬ）中の工程Ｎからの化合物（６．１８）（０．９３ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の溶液を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮乾固して、化合物（６．１９）（０．９６ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝４９２．１）を得た。
【０１７２】
工程Ｐ  化合物（６．２０）
【化１６２】
0004452441.tif 000110
(6.13)
(6.20)
【０１７３】
−２０℃で冷却、撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中の化合物（６．１３）（０．５１ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．３３ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．６１ｇ、６．０６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ（０．４６ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５分間撹拌し、次いで工程Ｏからの化合物（６．１９）（０．９４ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで一晩冷蔵し、濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相を５％Ｈ３ＰＯ３およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（６．２０）（１．２９ｇ、８７％収率）を得た。
【０１７４】
工程Ｑ  化合物（６．２１）
【化１６３】
0004452441.tif 000111
(6.20)
(6.21)
【０１７５】
撹拌中の無水ＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中の工程Ｐからの化合物（６．２０）（１．２７ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を添加した。得られた溶液を激しく撹拌し、次いで２滴のＡｃＯＨを添加した。次いで、溶液を２時間水素化し、ｃｅｌｉｔｅを通して濾過して、化合物（６．２１）（１．０７ｇ、９６％収率、ＭＨ＋＝６４１．１）を得た。
【０１７６】
工程Ｒ  化合物（６．２２）
【化１６４】
0004452441.tif 000112
(6.21)
(6.22)
【０１７７】
−２５℃で撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中の工程Ｑからの化合物（６．２１）（０．２５ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．０６ｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．１２ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（０．０８９ｇ、０．４６９ｍｍｏｌ）を添加し、１０分間撹拌し、次いで工程Ｂからの化合物（６．３）（０．０６９ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２５℃で１５分間撹拌し、一晩冷蔵し、次いで濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相を５％Ｈ２ＰＯ４、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（６．２２）を得た。
【０１７８】
工程Ｓ  化合物（６．２３）
【化１６５】
0004452441.tif 000113
(6.22)
(6.23)
【０１７９】
撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の工程Ｒからの化合物（６．２２）（０．２３ｇ、０．３０２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（０．２５６ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で２時間撹拌し、次いでＨ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２の混合物を添加し、さらに４５分間撹拌した。次いで、反応物に５０％飽和ＮａＨＣＯ３／５０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０ｍＬ）を添加し、これを１．５時間撹拌した。溶液にさらにＣＨ２Ｃｌ２を添加し、次いで有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、１％〜３％ＭｅＯＨ／９９％〜９７％ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して、化合物（６．２３）（０．０８ｇ、３４％収率、ＭＨ＋＝７７１．２）を得た。
【０１８０】
製造例１６
工程Ａ  化合物（７．２）
【化１６６】
0004452441.tif 000114
(7.1)
(7.2)
【０１８１】
−２０℃で撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）およびＤＭＦ（６０ｍＬ）中の化合物（７．１）（０．４７６ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．２４６ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（０．４５８ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ（０．３５１ｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５分間撹拌し、次いで製造例１５、工程Ｆからの化合物（６．８）（０．５ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で３時間撹拌し、次いで冷凍庫中で一晩維持し、濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相を２回５％Ｈ３ＰＯ４、Ｈ２Ｏ、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固して、化合物（７．２）（０．８２ｇ、９４％収率、ＭＨ＋＝５９２．１）を得た。
【０１８２】
工程Ｂ  化合物（７．３）
【化１６７】
0004452441.tif 000115
(7.2)
(7.3)
【０１８３】
４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（２０ｍＬ）中の工程Ａからの化合物（７．２）（０．８２ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）の溶液を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮乾固して、化合物（７．３）（０．８４ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝４９２．３）を得た。
【０１８４】
工程Ｃ  化合物（７．４）
【化１６８】
0004452441.tif 000116
(6.13)
(7.4)
【０１８５】
−２０℃で撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）およびＤＭＦ（６０ｍＬ）中の化合物（６．１３）（０．３６ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．２２８ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（０．４２５ｇ、４．２０ｍｍｏｌ）およびＥＤＣｌ（０．３２２ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を５分間撹拌し、次いで工程Ｂからの化合物（７．３）（０．８４ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で３時間撹拌し、次いで冷凍庫中に一晩維持し、濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相を５％Ｈ３ＰＯ４、Ｈ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（７．４）（０．５７ｇ、５７％収率、ＭＨ＋＝７３１．３）を得た。
【０１８６】
工程Ｄ  化合物（７．５）
【化１６９】
0004452441.tif 000117
(7.4)
(7.5)
【０１８７】
撹拌中のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の工程Ｃからの化合物（７．４）（０．５５ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（０．６４ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で２時間撹拌し、次いでＨ２Ｏ／ＣＨ２Ｃｌ２の混合物を添加した。混合物を４５分間撹拌し、次いで５０％飽和ＮａＨＣＯ３／５０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３を添加し、さらに１．５時間撹拌した。さらにＣＨ２Ｃｌ２を溶液に添加し、次いで有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固して、化合物（７．５）（０．２４ｇ、４４％収率、ＭＨ＋＝７２９．５）を得た。
【０１８８】
工程Ｅ  化合物（７．６）
【化１７０】
0004452441.tif 000118
(7.5)
(7.6)
【０１８９】
撹拌中の無水ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中の工程Ｄからの化合物（７．５）（０．１０ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ）を添加した。得られた溶液を１００ｍｌ丸底フラスコ中で激しく撹拌し、Ｈ２でパージし、Ｈ２雰囲気下で一晩撹拌した。次いで、溶液をｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、濃縮乾固して、化合物（７．６）（９３ｍｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝６３９．１）を得た。
【０１９０】
製造例１７
【化１７１】
0004452441.tif 000119
【０１９１】
工程Ａにおいて化合物（７．１）の代わりに化合物（８．１）を使用して、本質的に製造例１６、工程Ａ〜Ｅと同様にして、化合物（８．２）および（８．３）を製造した。
【０１９２】
製造例１８
工程Ａ  化合物（９．２）
【化１７２】
0004452441.tif 000120
(9.1)
(9.2)
【０１９３】
撹拌中のベンゼン（３５０ｍＬ）中の（Ｓ）（＋）−フェニルグリシン（９．１）（１５．０ｇ、０．０９９ｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸．Ｈ２Ｏ（２０．７６ｇ、０．１１６ｍｏｌ）およびベンジルアルコール（３０ｍＬ、０．２９ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を還流温度で一晩加熱し、溶液はスラリーになった。次いで、溶液を室温に冷却し、次いでエーテルを添加した。固体を焼結漏斗を通して濾過し、２回Ｅｔ２Ｏで洗浄し、次いで窒素雰囲気下で乾燥して、固体（３５．４ｇ）を得た。次いで、この固体をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。合した有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固して、遊離アミン（１８．１ｇ、７５．７％収率）を得た。次いで、この遊離アミンをエーテルに溶解し、１Ｎ  ＨＣｌを吹き込んで、白色沈殿を形成させた。沈殿を濾過し、エーテルで洗浄し、真空下で乾燥して、化合物（９．２）（１５．２ｇ）を得た。
【０１９４】
工程Ｂ  化合物（９．４）
【化１７３】
0004452441.tif 000121
(9.3)
(9.4)
【０１９５】
−２０℃で撹拌中の無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）および無水ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中のＢｏｃ−ｇｌｙ−ＯＨ（９．３）（１１．３５ｇ、０．０６４８ｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（１０．５ｇ、０．０６５ｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（１３．６ｇ、０．０７１２ｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（２１．３ｍＬ、０．１９４ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで工程Ａからの化合物（９．２）（１８．０ｇ、０．０６５ｍｏｌ）を添加した。反応物を４５分間−２０℃で撹拌し、次いで冷凍庫中で一晩維持した。次いで、溶液を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相をＨ２Ｏ、次いでブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮乾固して、化合物（９．４）（２６．４８ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝３９９．２）を得た。
【０１９６】
工程Ｃ  化合物（９．５）
【化１７４】
0004452441.tif 000122
(9.4)
(9.5)
【０１９７】
４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（１００ｍＬ）中の工程Ｂからの化合物（９．４）（２６．４ｇ、０．０６５ｍｏｌ）の溶液を室温で１時間撹拌し、次いで濃縮乾固して、化合物（９．５）（２２．６９ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝２９９．１）を得た。
【０１９８】
工程Ｄ  化合物（９．６）
【化１７５】
0004452441.tif 000123
(1.08)
(9.6)
【０１９９】
−２０℃で撹拌中のＤＭＦ（１５０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）中の製造例１５、工程Ｅからの化合物（１．０８）（１５．５ｇ、０．０６２７ｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（１０．２２ｇ、０．０６２６ｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（１３．２ｇ、０．０６９ｍｏｌ）およびＮＭＭ（２０．６７ｇ、０．１８８ｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで工程Ｃからの化合物（９．５）（２１．０ｇ、０．０６３ｍｏｌ）を添加した。反応物を１時間−２０℃で撹拌し、次いで冷凍庫中で一晩維持した。次いで、溶液を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相をＨ２Ｏ、５％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（９．６）（３０．３ｇ、９２％収率、ＭＨ＋＝５２８．１）を得た。
【０２００】
工程Ｅ  化合物（９．７）
【化１７６】
0004452441.tif 000124
(9.6)
(9.7)
【０２０１】
本質的に上記製造例１８、工程Ｃと同様にして、化合物（９．７）を製造した（３０．０ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝４２８．１）。
【０２０２】
工程Ｆ  化合物（９．９）
【化１７７】
0004452441.tif 000125
(9.8)
(9.9)
【０２０３】
−２０℃で撹拌中のＤＭＦ（５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｈｉｓ（Ｚ）−ＯＨ（９．８）（０．５ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．２０９ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（０．２７ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（０．４２ｍＬ、３．８５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで工程Ｅからの化合物（９．７）（０．６７３ｇ、１．２８ｍｍｏｌ）を添加し、−２０℃で２時間撹拌し、次いで冷凍庫中で一晩維持した。次いで、溶液を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相をＨ２Ｏ、５％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、化合物（９．９）（０．８５８ｇ、８４％収率、ＭＨ＋＝７９９）を得た。
【０２０４】
工程Ｇ  化合物（９．１１）
【化１７８】
0004452441.tif 000126
(9.9)
(9.11)
【０２０５】
本質的に製造例１８、工程Ｃと同様にして、化合物（９．１１）を製造した（０．７６ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝６９９．２）。
【０２０６】
工程Ｈ  化合物（９．１２）
【化１７９】
0004452441.tif 000127
(9.11)
(9.12)
【０２０７】
−２０℃で撹拌中のＤＭＦ（５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−シクロヘキシルグリシン（０．２６３ｇ、１．０２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．１６７ｇ、１．０２６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（０．２１６ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（０．３３８ｇ、３．０７８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで工程Ｇからの化合物（９．１１）（０．７５４ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を−２０℃で１時間撹拌し、次いで冷凍庫中で一晩維持した。次いで、溶液を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。次いで、合した有機相をＨ２Ｏ、５％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（９．１２）（０．７３５ｇ、ＭＨ＋＝９３８．４）を得た。
【０２０８】
工程Ｉ  化合物（９．１３）
【化１８０】
0004452441.tif 000128
(9.12)
(9.13)
【０２０９】
撹拌中の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の工程Ｈからの化合物（９．１２）（０．３６７ｇ、０．３７７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（０．３２ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２、飽和Ｎａ２ＳＯ４および飽和ＮａＨＣＯ３を溶液に添加し、溶液を室温で１時間撹拌した。次いで、有機相を分離し、Ｈ２Ｏおよびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、粗生成物（３４０ｍｇ）を得た。次いで、粗生成物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＣＨ２Ｃｌ２次いで４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して、化合物（９．１３）（１５０ｍｇ、ＭＨ＋＝９３６．３）を得た。
【０２１０】
工程Ｊ  化合物（９．１４）
【化１８１】
0004452441.tif 000129
(9.13)
(9.14)
【０２１１】
撹拌中の無水ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）中の工程Ｉからの化合物（９．１３）（０．１５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、５０％Ｈ２Ｏ（ｗ／ｗ）中１０％Ｐｄ／Ｃを添加した。溶液をＮ２でパージし、Ｈ２バルーン下で４５分間撹拌した。次いで、触媒をｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＥｔＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、次いで濃縮乾固して、化合物（９．１４）（０．１１６ｇ、ＭＨ＋＝７１２．２）を得た。
【０２１２】
製造例１９
工程Ａ  化合物（１０．２）
【化１８２】
0004452441.tif 000130
(10.1)
(10.2)
【０２１３】
無水ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）中のＬ−３−（１−ナフチル）アラニン（２．０ｇ、９．３４ｍｍｏｌ）の懸濁液を５００ｍｌフラスコに充填した。次いで、この溶液に無水濃ＨＣｌ（２ｍＬ）を吹き込み、全ての固体を溶解した。溶液を４５分間にわたって室温に冷却し、次いで濃縮乾固し、次いでＥｔＯＨ（５０ｍＬ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（３００ｍｇ）および５％Ｒｈ／Ｃ（３００ｍｇ）を添加した。得られた溶液をパーシェイカー（parr shaker）中に入れ、６０ｐｓｉで水素化した。次いで、反応物をｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、濃縮乾固して、粗物質（２．４ｇ、ＭＨ＋＝２５４．２）を得た。粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。合した有機相を濃縮乾固し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、５％〜２０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して、化合物（１０．２）（０．６５ｇ）を得た。
【０２１４】
工程Ｂ  化合物（１０．３）
【化１８３】
0004452441.tif 000131
(10.3)
【０２１５】
−２０℃で撹拌中のＤＭＦ（５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−シクロヘキシルグリシン（０．６４３ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．４０７ｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（０．５２７ｇ、２．７５ｍｏｌ）およびＮＭＭ（０．８２５ｍＬ、７．５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで工程Ａからの化合物（１０．２）およびＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）を添加し、冷凍庫中で一晩維持した。次いで、溶液を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相をＨ２Ｏ、５％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（１０．３）（１．１２ｇ、９２％収率）を得た。
【０２１６】
工程Ｃ  化合物（１０．４）
【化１８４】
0004452441.tif 000132
(10.3)
(10.4)
【０２１７】
撹拌中のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（７．５ｍＬ）中の工程Ｂからの化合物（１０．３）（１．１ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＯＨ（０．２８３ｇ、６．７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌し、次いで５％Ｈ３ＰＯ４を添加した。沈殿が形成され、溶液を蒸発させて大部分のＭｅＯＨを除去した。さらにＣＨ２Ｃｌ２を添加し、次いでＣＨ２Ｃｌ２相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（１０．４）（１．０６８ｇ、１００％収率、ＭＨ＋＝４５９．１）を得た。
【０２１８】
工程Ｄ  化合物（１０．５）
【化１８５】
0004452441.tif 000133
(10.4)
(10.5)
【０２１９】
撹拌中のＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中の工程Ｃからの化合物（１０．４）（１．０ｇ、２．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢＴ（０．３５３ｇ、２．１７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（０．４５７ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（０．７１５ｍＬ、６．５１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を−２０℃で１０分間撹拌し、次いで製造例１８、工程Ｅからの化合物（９．７）（１．１３ｇ、２．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を−２０℃で０．５時間撹拌し、次いで冷凍庫中で一晩維持した。次いで、溶液を濃縮乾固し、次いでＥｔＯＡｃ−飽和ＮａＨＣＯ３で抽出した。合した有機相をＨ２Ｏ、５％Ｈ３ＰＯ４、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮乾固して、化合物（１０．５）（１．８ｇ、Ｍ＋Ｎａ＝８９０．４）を得た。
【０２２０】
工程Ｅ  化合物（１０．６）
【化１８６】
0004452441.tif 000134
(10.5)
(10.6)
【０２２１】
撹拌中の無水ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中の工程Ｄからの化合物（１０．５）（１．８ｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の溶液にＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（１．７６ｇ、４．１５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で１時間撹拌し、次いで無水ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（０．０７４ｍＬ）を１．５時間にわたって滴下し、さらに２時間撹拌した。次いで、この溶液に４０ｍＬの５０％飽和ＮａＨＣＯ３／５０％飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ４を添加し、得られた溶液を半時間激しく撹拌した。次いで、有機相を分離し、Ｈ２Ｏで洗浄した。合した有機相を濃縮乾固し、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し、２％〜３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出して、化合物（１０．６）（０．９５ｇ、ＭＨ＋＝８６６．２）を得た。
【０２２２】
工程Ｆ  化合物（１０．７）
【化１８７】
0004452441.tif 000135
(10.6)
(10.7)
【０２２３】
本質的に製造例１８、工程Ｋと同様に、化合物（１０．７）を製造した。
【０２２４】
実施例
製造例１、工程Ａおよび製造例２、工程Ｆ（カップリング）；
製造例１、工程Ｂ、製造例１、工程Ｆ、製造例２、工程Ｄおよび製造例４、工程Ｊ（エステル脱保護）；
製造例２、工程Ｅおよび製造例４、工程Ｊ（アミン脱保護）；
ならびに製造例４、工程Ｈ（ヒドロキシアミドのケトアミドへの酸化）の手順を、上記実施例または市販または文献記載のα−アミノ酸とともに、必要な種々の組合せで使用して、添付の表２に列挙する化合物を製造した。
【０２２５】
固相合成
固相カップリング反応の一般的手順
合成を、底にポリプロピレンフリットを備えたポリプロピレンシリンジカートリッジから構築された反応容器中で実施した。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を、標準的な固相技術でカップリングした。各反応容器に１００ｍｇの出発Ｆｍｏｃ−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂（約０．０３５ｍｍｏｌ）を負荷した。樹脂を２ｍＬのＤＭＦで洗浄した（２回）。Ｆｍｏｃ保護基をＤＭＦ中２０％ｖ／ｖピペリジン溶液２ｍＬでの２０分間の処理によって除去した。樹脂を２ｍＬのＤＭＦで洗浄した（４回）。カップリングをＤＭＦ（２ｍＬ）中で、０．１２ｍｍｏｌのＦｍｏｃ−アミノ酸、０．１２ｍｍｏｌのＨＡＴＵ［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾル−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］および０．２４ｍｍｏｌのＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）を使用して実施した。２時間撹拌後、反応容器を排出し、樹脂を２ｍＬのＤＭＦで洗浄した（４回）。カップリングサイクルを次のＦｍｏｃ−アミノ酸またはキャッピング基を用いて反復した。
【０２２６】
固相Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化の一般的手順
合成を、底にポリプロピレンフリットを備えたポリプロピレンシリンジカートリッジから構築された反応容器中で実施した。樹脂結合ヒドロキシ化合物（約０．０３５ｍｍｏｌ）を、２ｍＬのＤＣＭ中の０．１４ｍｍｏｌのＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンおよび０．１４ｍｍｏｌのｔ−ＢｕＯＨの溶液で４時間処理した。樹脂を２ｍＬのＤＣＭ中２０％ｖ／ｖｉＰｒＯＨ溶液、ＴＨＦ、水中５０％ｖ／ｖＴＨＦ溶液（４回）、ＴＨＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。
【０２２７】
製造例２０
Ｎ−Ｆｍｏｃ−２’，３’−ジメトキシフェニルグリシン  化合物（９０１）
【化１８８】
0004452441.tif 000136
【０２２８】
水（１５ｍＬ）中のシアン化カリウム（１．４６５ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）および炭酸アンモニウム（５．０４５ｇ、５２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、エタノール（１５ｍＬ）中の２，３−ジメトキシベンズアルデヒド９０１Ａ（２．５ｇ、１５ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を４０℃で２４時間加熱した。溶液の容量を減圧下で蒸発させることにより１０ｍＬに減じた。濃塩酸（１５ｍＬ）を添加し、化合物９０１Ｂを白色沈殿として得た。化合物９０１Ｂを濾過によって単離した（２．２ｇ、９．３ｍｍｏｌ）。化合物９０１Ｂを１０％ｗ／ｗ水酸化ナトリウム水溶液（１５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を還流温度で２４時間加熱した。濃塩酸を添加し、ｐＨを中性（ｐＨ７）に調整した。化合物９０１Ｃを含有する得られた溶液を減圧下で蒸発させた。残渣を５％ｗ／ｗ重炭酸ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）に溶解した。溶液を氷浴中で０℃に冷却し、１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）および１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）中の９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート（２．７ｇ、８ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加した。反応混合物を室温に加温し、室温で２４時間撹拌した。１，４−ジオキサンを減圧下で蒸発させた。水溶液をジエチルエーテルで洗浄した。濃塩酸を添加し、ｐＨを酸性（ｐＨ１）に調整した。酢酸エチルを添加し、有機相を水およびブラインで洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて、所望の化合物９０１を白色泡沫状固体として得た（３．４４ｇ、７０９ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＬＣＭＳ−電子スプレイ）４３４．１  ＭＨ＋。
【０２２９】
製造例２１
化合物（８０１）
【化１８９】
0004452441.tif 000137
【０２３０】
ドライアイス−アセトン浴中で−３０℃に冷却した無水ＤＣＭ（２２ｍＬ）中のＮ−Ｆｍｏｃ−フェニルアラニン８０１Ａ（５ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−メチルピロリジン（１．９６ｍＬ、１６．１ｍｍｏｌ）およびメチルクロロホルメート（１．２ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を−３０℃で１時間撹拌し、無水ＤＣＭ（８ｍＬ）中のＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンヒドロクロリド（１．５１ｇ、１５．５ｍｏｌ）およびＮ−メチルピロリジン（１．９６ｍＬ、１６．１ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を室温に加温し、室温で一晩撹拌した。トルエンを添加し、有機相を希塩酸、重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて、化合物８０１Ｂ（４ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）を得た。
【０２３１】
ドライアイス−アセトン浴中で−２０℃に冷却した無水トルエン（８ｍＬ）中のＲｅｄ−Ａｌ（６．２８ｍＬ、２１．４ｍｍｏｌ）の溶液に、無水トルエン（１２ｍＬ）中の化合物８０１Ｂ（４ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を−２０℃で１．５時間撹拌した。有機相を希塩酸、重炭酸ナトリウム水溶液およびブラインで洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物８０１Ｃをさらに精製せずに次の反応において使用した。
【０２３２】
ヘキサン（１５ｍＬ）中の化合物８０１Ｃ（約９．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、水（４ｍＬ）中のシアン化カリウム（２４ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムヨージド（３４ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）の溶液ならびにアセトンシアノヒドリン（１．２７ｍＬ、１３．９ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。酢酸エチルを添加し、有機相を水およびブラインで洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて、化合物８０１Ｄ（２．４ｇ、６．０３ｍｍｏｌ）を得た。
【０２３３】
１，４−ジオキサン（１１ｍＬ）中の化合物８０１Ｄ（２．４ｇ、６．０３ｍｍｏｌ）の溶液に濃塩酸（１１ｍＬ）を添加した。反応混合物を８０℃で３時間加熱した。酢酸エチル（２５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）を添加した。有機相をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させて、所望の化合物８０１を白色泡沫状固体として得た（２ｇ、４．８ｍｍｏｌ）。ＭＳ（ＬＣＭＳ−電子スプレイ）４１８．１  ＭＨ＋。
【０２３４】
実施例１０１Ｊ  化合物（１０１Ｊ）：
【化１９０】
0004452441.tif 000138
101J
スキーム５
【化１９１】
0004452441.tif 000139
【０２３５】
樹脂結合化合物１０１Ｂ、１０１Ｃ、１０１Ｄ、１０１Ｅ、１０１Ｆおよび１０１Ｇを、１００ｍｇのＦｍｏｃ−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂（０．０３５ｍｍｏｌ）を用いて開始して固相カップリング反応の一般的手順に従って製造した。樹脂結合化合物１０１Ｇを、固相Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化の一般的手順に従って樹脂結合化合物１０１Ｈに酸化した。樹脂結合化合物１０１Ｈを、ＤＣＭ中２％ｖ／ｖＴＦＡ溶液４ｍＬで５分間処理した。濾液を１ｍＬのＡｃＯＨに添加し、溶液を真空遠心分離によって濃縮して、化合物Ｊ（０．０１１ｇ、４５％収率）を得た。ＭＳ（ＬＣＭＳ−電子スプレイ）７０３．２  ＭＨ＋。
【０２３６】
本明細書中上記した固相合成技術を使用して、以下の部分を製造し、以下の式に従って使用した：
【化１９２】
0004452441.tif 000140
【０２３７】
−Ｘ：
【化１９３】
0004452441.tif 000141
【化１９４】
0004452441.tif 000142
【化１９５】
0004452441.tif 000143
【化１９６】
0004452441.tif 000144
【化１９７】
0004452441.tif 000145
【０２３８】
−Ｐ３：
【化１９８】
0004452441.tif 000146
【化１９９】
0004452441.tif 000147
【０２３９】
−Ｘ１：
【化２００】
0004452441.tif 000148
【０２４０】
−Ｐ２：
【化２０１】
0004452441.tif 000149
【０２４１】
−Ｐ１ａおよびＰ１ｂの一方は−Ｈであり、他方は以下から選択される：
【化２０２】
0004452441.tif 000150
【０２４２】
−Ｐ１’：
【化２０３】
0004452441.tif 000151
【０２４３】
−Ｚ−：
【化２０４】
0004452441.tif 000152
【０２４４】
−Ｐ２’：
【化２０５】
0004452441.tif 000153
【化２０６】
0004452441.tif 000154
【化２０７】
0004452441.tif 000155
【０２４５】
上記の手順を使用して、その活性データとともに添付の表３に列挙する化合物を製造した。
【０２４６】
さらにその活性データとともに添付の表４に列挙する化合物を製造した。それらの製造を以下に記載する。
【０２４７】
固体支持体上での表４中の化合物の製造の一般的手順：
固相合成は本発明の特定の化合物の小量生産に有用である。従来のペプチドの固相合成に関して、ペプチジルケトアミドの固相合成用の反応器は、溶媒および溶解された試薬に対しては透過性であるが、選択したメッシュサイズの合成樹脂に対しては透過性ではない少なくとも１つの表面を有する反応容器から構成される。そのような反応器としては、焼結ガラスフリットを有するガラス固相反応容器、フリットを有するポリプロピレンチューブもしくはカラム、またはIrori Inc., San Diego CA製の反応器ＫａｎｓＴＭが挙げられる。選択する反応器の型は必要とされる固相樹脂の容量に依存し、合成の異なる段階において異なる型の反応器を使用し得る。以下の手順を下記実施例において参照する。
【０２４８】
手順Ａ：
カップリング反応：
Ｎ−メチルピロリジン（ＮＭＰ）１０〜１５ｍＬ／ｇ樹脂）中に懸濁した樹脂に、Ｎ−ＦｍｏｃまたはＮ−Ｂｏｃアミノ酸（２当量）、ＨＯＡｔ（２当量）、ＨＡＴＵ（２当量）およびジイソプロピルエチルアミン（４当量）を添加した。混合物を４〜４８時間反応した。反応物を排出し、樹脂を連続的にジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタンおよびジエチルエーテル（１０〜１５ｍＬ溶媒／ｇ樹脂使用）で洗浄した。次いで、樹脂を真空下で乾燥した。
【０２４９】
手順Ｂ：
Ｆｍｏｃ脱保護：
Ｆｍｏｃ保護樹脂をジメチルホルムアミド中２０％ピペリジン（１０ｍＬ試薬／ｇ樹脂）で３０分間処理した。試薬を排出し、樹脂を連続的にジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノール、ジクロロメタンおよびジエチルエーテル（１０ｍＬ溶媒／ｇ樹脂使用）で洗浄した。
【０２５０】
手順Ｃ：
Ｂｏｃ脱保護：
Ｂｏｃ保護樹脂をジクロロメタンおよびトリフルオロ酢酸の１：１混合物で２０〜６０分間処理した（１０ｍＬ溶媒／ｇ樹脂）。試薬を排出し、樹脂を連続的にジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジメチルホルムアミド中５％ジイソプロピルエチルアミン、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタンおよびジメチルホルムアミド（１０ｍＬ溶媒／ｇ樹脂）で洗浄した。
【０２５１】
手順Ｄ：
セミカルバゾン加水分解：樹脂をトリフルオロ酢酸：ピルビン酸：ジクロロメタン：水  ９：２：２：１からなる切断混合物（１０ｍＬ／ｇ樹脂）中に２時間懸濁した。反応物を排出し、手順をさらに３回反復した。樹脂を連続的にジクロロメタン、水およびジクロロメタンで洗浄し、真空下で乾燥した。
【０２５２】
手順Ｅ：
ＨＦ切断：
乾燥したペプチド−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇ−Ｏ−ＰＡＭ樹脂（５０ｍｇ）を、小さなスターバーを含むＨＦ容器中に入れた。アニソール（総容量の１０％）を捕捉剤として添加した。グルタミン酸およびシステインアミノ酸の存在下、チオアニソール（１０％）および１，２−エタンジチオール（０．２％）も添加した。次いで、ＨＦ容器をＨＦ装置（Immuno Dynamics）に取り付け、システムを窒素で５分間フラッシュした。次いで、これをドライアイス／イソプロパノール浴を用いて−７８℃に冷却した。２０分後、ＨＦを所望の容量まで蒸留した（１０ｍＬ  ＨＦ／ｇ樹脂）。反応を１．５時間０℃で進行させた。ワークアップ（work up）は窒素を使用する全てのＨＦの除去からなった。次いで、ジクロロメタンを樹脂に添加し、混合物を５分間撹拌した。次いで、水（４ｍＬ）中２０％酢酸を添加した。２０分間撹拌後、樹脂をガラス濾過器を使用して濾過し、ジクロロメタンを減圧下で除去した。残存する溶液をヘキサン（３×）で洗浄して捕捉剤を除去した。一方、樹脂を１ｍＬのメタノールに浸した。水相（２０％ＨＯＡｃ）を樹脂に添加し、混合物を５分間撹拌し、次いで濾過した。メタノールを減圧下で除去し、水相を凍結乾燥した。次いで、ペプチドを１０〜２５％メタノール（０．１％トリフルオロ酢酸含有）に溶解し、逆相ＨＰＬＣにより精製した。
【０２５３】
ＩＩ）中間体の合成：
実施例Ｉ  Ｂｏｃ−３−アルキルスルフィニルアラニンの合成：
【化２０８】
0004452441.tif 000156
【０２５４】
０℃のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（２００ｍｍｏｌ、８００ｍｇの油中６０％、ヘキサンで洗浄）の混合物に、アルキルチオール（２０ｍｍｏｌ、Ｒ＝Ｐｈ、Ｒ＝１−ナフチル、Ｒ＝２−ナフチル、Ｒ＝ＰｈＣＨ２ＣＨ２またはＲ＝Ｅｔ）を１０分間にわたって添加した。冷却浴をはずし、撹拌を１０分間継続し、その時点でＢｏｃ−２Ｓ−アミノプロピオニルラクトン（参考文献：Synthetic Communications, (1995) 25(16), 2475-2482）（３．７４ｇ、２０ｍｍｏｌ）を添加した。氷浴を使用して温度が３０℃を超えないようにした。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、濃縮し、次いで１Ｍ重硫酸カリウム水溶液（２００ｍＬ）および１Ｍ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）に溶解した。混合物をジクロロメタンで抽出した（２×２００ｍＬ）。合した有機相を乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、濃縮した。残渣を水（２００ｍＬ）、メタノール（３０ｍＬ）および炭酸カリウム（４０ｍｍｏｌ、５．５ｇ）に溶解した。冷却して室温に維持しながらオキソン（２１ｍｍｏｌ、１３．０ｇ）を小分けして添加した。混合物を１８時間撹拌し、次いで真空下で濃縮して、メタノールを除去した。溶液を２Ｍ重硫酸カリウムを用いて酸性にし（ｐＨ＝１）、次いで酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合した有機相を乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、濃縮した。精製を逆相ＨＰＬＣを使用して実施した。精製後、生成物を酸塩基抽出によってさらに精製して脱ｂｏｃ化（de-bocylated）物質を除去し、さらなる分解（Ｂｏｃ基の損失）を防止するためにジイソプロピルエチルアンモニウム塩として貯蔵した。
【０２５５】
実施例ＩＩ  ２−（１−メチルエチル）−７−メチル−オクト−４−エン酸の合成：
【化２０９】
0004452441.tif 000157
【０２５６】
上記の中間体を公開された手順（Wuts, P.G.M.; Ritter, A.R.; Pruitt, L.E. J. Org. Chem. (1992) 57, 6696-6700）に従って合成した。
【０２５７】
実施例ＩＩＩ  Ｆｍｏｃ−ｎＶ−（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−ＯＨの合成（下記工程１〜７）
【化２１０】
0004452441.tif 000158
【０２５８】
工程１  アリルイソシアノアセテートの合成（下記工程ａ〜ｂ）
ａ）イソシアノ酢酸カリウム塩の合成：
【化２１１】
0004452441.tif 000159
【０２５９】
エチルイソシアノアセテート（９６．６ｍｌ、０．８８ｍｏｌ）をエタノール（１．５Ｌ）および水酸化カリウム（５９．５２ｇ、１．０ｍｏｌ）の冷却した溶液に滴下した。反応物を徐々に室温に加温した。２時間後、沈殿した生成物を濾過によって採集し、冷エタノールで数回洗浄した。このようにして得られたイソシアノ酢酸のカリウム塩を真空下で乾燥して金褐色固体を得た（９９．９２ｇ、９１．８％）。
【０２６０】
ｂ）アリルイソシアノアセテートの合成：
【化２１２】
0004452441.tif 000160
【０２６１】
アセトニトリル（８１０ｍｌ）に溶解したａの生成物（９９．９２ｇ、０．８１ｍｏｌ）に、臭化アリル（９２ｍｌ、１．０５ｍｏｌ）を添加した。還流温度で４時間加熱した後、濃褐色溶液を得た。反応混合物を濃縮し、残渣をエーテル（１．５Ｌ）に溶解し、水で洗浄した（３×５００ｍｌ）。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮して、濃褐色シロップを得た。粗物質を７ｍｍＨｇ（９８℃）での真空蒸留によって精製して、透明油（７８．９２ｇ、７８％）を得た。ＮＭＲ  ｐｐｍ（ＣＤＣｌ３）：５．９（ｍ，１Ｈ）、５．３（ｍ，２Ｈ）、４．７（ｄ，２Ｈ）、４．２５（ｓ，２Ｈ）。
【０２６２】
工程２  ９−フルオレニルメトキシカルボニル−ノルバリナールの合成（下記工程ａ〜ｃ）
【化２１３】
0004452441.tif 000161
【０２６３】
ａ）９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｌ−ノルバリンメチルエステル（Ｆｍｏｃ−ｎＶａｌ−ＯＭｅ）の合成：
【化２１４】
0004452441.tif 000162
【０２６４】
冷却した無水メタノール（４６９ｍｌ）中の市販のＦｍｏｃ−Ｌ−ノルバリン（２５ｇ、７３．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化チオニル（５３．７６ｍｌ、７３７．５ｍｍｏｌ）を１時間にわたって添加した。１時間後にとった酢酸エチルでのＴＬＣによって反応の完了を確認した（Ｒｆ＝０．８５）。反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。有機相を飽和重炭酸ナトリウム（３×２００ｍｌ）、次いでブライン（２００ｍｌ）で洗浄した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮して、Ｆｍｏｃ−ｎｏｒＶａｌ−ＯＭｅを白色固体として（２６．０３ｇ）定量的収率で得た。ＮＭＲ  ｐｐｍ（ＣＤ３ＯＤ）：７．７（ｍ，２Ｈ）、７．６（ｍ，２Ｈ）、７．４（ｍ，２Ｈ）、７．３（ｍ，２Ｈ）、４．３（ｍ，２Ｈ）、４．１（ｍ，２Ｈ）、３．７（ｓ，３Ｈ）、１．７（ｍ，１Ｈ）、１．６（ｍ，１Ｈ）、１．４（ｍ，２Ｈ）、０．９５（ｔ，３Ｈ）。
【０２６５】
ｂ）９−フルオレニルメトキシカルボニル−ノルバリノール（Ｆｍｏｃ−ｎＶａｌｉｎｏｌ）の合成：
【化２１５】
0004452441.tif 000163
【０２６６】
テトラヒドロフラン（１２３ｍｌ）およびメタノール（２４６ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ｎＶａｌ−ＯＭｅ（２６．０３ｇ、７３．７５ｍｍｏｌ）に、塩化カルシウム（１６．３７ｇ、１４７．４９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、ホウ水素化ナトリウム（１１．１６ｇ、２９４．９８ｍｍｏｌ）を数バッチに分けて添加した。得られた濃ペーストに５００ｍｌのメタノールを添加し、反応物を室温で９０分間撹拌した。２：３  酢酸エチル：ヘキサンでのＴＬＣによって反応の完了を確認した。０℃の水１００ｍｌを徐々に添加して反応をクエンチングした。メタノールを減圧下で除去し、残存する水相を酢酸エチルで希釈した。有機相を水（３×５００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（３×５００ｍｌ）およびブライン（５００ｍｌ）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して、白色固体を得た（２１．７０ｇ、９０．５％）。ＮＭＲ  ｐｐｍ（ＣＤ３ＯＤ）：７．８（ｍ，２Ｈ）、７．７（ｍ，２Ｈ）、７．４（ｍ，２Ｈ）、７．３（ｍ，２Ｈ）、４．３−４．５（ｍ，２Ｈ）、４．２（ｍ，１Ｈ）、３．６（ｓ，１Ｈ）、３．５（ｓ，２Ｈ）、１．５（ｍ，１Ｈ）、１．３−１．４（ｍ，３Ｈ）、０．９９（ｍ，３Ｈ）。
【０２６７】
ｃ）９−フルオレニルメトキシカルボニル−ノルバリナール（Ｆｍｏｃ−ｎＶａｌ−ＣＨＯ）の合成：
【化２１６】
0004452441.tif 000164
【０２６８】
ジクロロメタン（６６８ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ノルバリノール（２１．７０ｇ、６６．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（３７．２３ｍｌ、２６７ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を０℃に冷却した。ジメチルスルホキシド（９６ｍｌ）中のピリジン三酸化イオウ錯体（４２．５１ｇ、２６７ｍｍｏｌ）の懸濁液を冷却した溶液に添加した。１時間後、２：３  酢酸エチル：ヘキサンでのＴＬＣによって反応の完了を確認した。ジクロロメタンを減圧下で除去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、水（２×５０ｍｌ）、１Ｎ飽和重硫酸ナトリウム（２×５０ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２×５０ｍｌ）およびブライン（５０ｍｌ）で洗浄した。有機相を濃縮して、白色固体を得た。理論収率（２１．５７ｇ）を仮定し、反応物をさらに精製せずに次の工程に使用した。
【０２６９】
工程３  ジフェニルメチルセミカルバジド（ｄｐｓｃ）トリフルオロ酢酸塩の合成（下記工程ａ〜ｂ）
ａ）Ｂｏｃ−セミカルバジド−４−イルジフェニルメタンの合成
【化２１７】
0004452441.tif 000165
【０２７０】
ジメチルホルムアミド（２２５ｍｌ）中のカルボニルジイミダゾール（１６．２ｇ、０．１０ｍｏｌｅ）の溶液に、ジメチルホルムアミド（２２５ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート（１３．２ｇ、０．１００ｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたって滴下した。次に、ジフェニルメチルアミン（１８．３ｇ、０．１０ｍｏｌ）を３０分間にわたって添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を添加し、混合物を減圧下で約１５０ｍＬに濃縮した。この溶液を水（５００ｍＬ）中に注ぎ、酢酸エチル（４００ｍＬ）で抽出した。酢酸エチル相を１Ｎ  ＨＣｌ（２×７５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２×７５ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２×７５ｍＬ）および塩化ナトリウム（２×７５ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。混合物を濾過し、溶液を濃縮して、２９．５ｇ（８５％収率）の白色泡沫体を得た。この物質は酢酸エチル／ヘキサンからの再結晶化によって精製することができたが、次の工程に直接使用するに十分な純度であった：ｍｐ  １４２−１４３℃。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）ｄ  １．４５（ｓ，９Ｈ）、６．１０（ｄｄ，２Ｈ）、６．４２（ｓ，１Ｈ）、６．６７（ｂｓ，１Ｈ）、７．２１−７．３１（ｍ，１０Ｈ）。Ｃ１９Ｈ２３Ｎ３Ｏ３についての計算分析値：Ｃ，６６．８４；Ｈ，６．７９；Ｎ，１２．３１。実測値：Ｃ，６６．４６；Ｈ，６．７５；Ｎ；１２．９０。
【０２７１】
ｂ）ジフェニルメチルセミカルバジド（ｄｐｓｃ）トリフルオロ酢酸塩の合成
【化２１８】
0004452441.tif 000166
ジクロロメタン（１２．５ｍｌ）中のＢｏｃ−セミカルバジド−４−イルジフェニルメタン（３．４３ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を、室温でトリフルオロ酢酸（１２．５ｍｌ）で処理し、３０分間撹拌した。溶液を７５ｍＬのエーテルに滴下し、生じた固体（２．７ｇ、８０％）を濾過によって採集した。ｍｐ  １８２−１８４℃。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）ｄ  ６．０５（ｓ，１Ｈ）、７．２１−７．３５（ｍ，１０Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）ｄ  ５７．６、１１８．３（ｑ，ＣＦ３）、１２６．７、１２７．９、１４１．６、１５６．９、１６０．９（ｑ，ＣＨ３ＣＯ２Ｈ）。
【０２７２】
工程４  Ｆｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ＣＨＯＨ）−Ｇｌｙ−Ｏアリルの合成
【化２１９】
0004452441.tif 000167
【０２７３】
ジクロロメタン（１７０ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ｎＶａｌ−ＣＨＯ（実施例ＩＩＩ、工程２ｃ）（５．４７ｇ、１６．９０ｍｍｏｌ）の溶液に、アリルイソシアノアセテート（実施例ＩＩＩ、工程１ｂ）（２．４６ｍｌ、２０．２８ｍｍｏｌ）およびピリジン（５．４７ｍｌ、６７．６１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（３．３８ｍｌ、３３．８０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物を０℃で１時間、次いで室温で４８時間撹拌した。酢酸エチルでのＴＬＣによって反応の完了を確認した。反応混合物を濃縮し、ヘキサン中２０％〜７０％酢酸エチルを使用するフラッシュクロマトグラフィーに供した。所望の生成物を含有する画分をプールし、濃縮して、白色泡沫体を得た（６．８８ｇ、８７．３％）。１：１  酢酸エチル／ヘキサンでのＴＬＣによって１つのスポットが示された（Ｒｆ＝０．３７）。ＮＭＲ  ｐｐｍ（ＣＤ３ＯＤ）：７．８（ｍ，２Ｈ）、７．６５（ｍ，２Ｈ）、７．４（ｍ，２Ｈ）、７．３（ｍ，２Ｈ）、５．９（ｍ，１Ｈ）、５．１−５．４（ｍ，２Ｈ）、４．５５−４．６５（ｍ，２Ｈ）、４．３−４．４（ｍ，２Ｈ）、４．１５−４．２５（ｍ，１Ｈ）、４．０１（ｓ，１Ｈ）、３．９−４．０（ｍ，３Ｈ）、１．５−１．６（ｍ，２Ｈ）、１．３５−１．４５（ｍ，３Ｈ）、０．９（ｍ，３Ｈ）。
【０２７４】
工程５  Ｆｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｏアリルの合成
【化２２０】
0004452441.tif 000168
【０２７５】
ジメチルスルホキシド（１００ｍｌ）およびトルエン（１００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ＣＨＯＨ）−Ｇｌｙ−Ｏアリル（工程４）（５．０１ｇ、１０．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣ（２０．６ｇ、１０７．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃に冷却し、ジクロロ酢酸（４．４４ｍｌ、５３．８３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物を１５分間０℃で、１時間室温で撹拌した。水（７０ｍｌ）を０℃で添加し、トルエンを減圧下で除去した。残渣を酢酸エチルで希釈し、数回飽和重炭酸ナトリウム溶液、次いで１Ｎ  重硫酸ナトリウムおよびブラインで洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。理論収率の４．９９ｇを仮定し、反応物をさらに精製せずに次の工程に使用した。１：１  酢酸エチル／ヘキサンでのＴＬＣによって１つのスポットが示された（Ｒｆ＝０．７３）。
【０２７６】
工程６  Ｆｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｏアリルの合成
【化２２１】
0004452441.tif 000169
【０２７７】
エタノール（１３０ｍｌ）および水（４２ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｏアリル（工程５）（４．９９ｇ、１０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ジフェニルメチルセミカルバジド（ｄｐｓｃ）トリフルオロ酢酸塩（実施例ＩＩＩ、工程３ｂ）（７．６ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム・３Ｈ２Ｏ（１．７６ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を還流温度で９０分間加熱した。反応の完了を１：１  酢酸エチル：ヘキサンでの薄層クロマトグラフィーによって確認した。エタノールを減圧下で除去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、１Ｎ  重硫酸ナトリウム（２×１０ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（２×１０ｍＬ）およびブライン（２×１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残渣をヘキサン中２０％〜５０％酢酸エチルでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、白色固体を得た（５．７６ｇ、７８％）。１：１  酢酸エチル／ヘキサンでのＴＬＣによってＲｆ＝０．４２および０．５０の２つのスポット（シスおよびトランス異性体）が示された。
【０２７８】
工程７  Ｆｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−ＯＨの合成
【化２２２】
0004452441.tif 000170
【０２７９】
テトラヒドロフラン（３００ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｏアリル（実施例ＩＩＩ、工程６）（４．５３ｇ、６．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ジメドン（４．６２ｇ、３２．９７ｍｍｏｌ）、次いでテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）触媒（０．７６ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加した。９０分後に、反応の完了をＴＬＣ（９：１  ジクロロメタン：メタノール）によって確認した。反応混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解し、０．１Ｍ  重リン酸カリウム（３×５０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機相を５０ｍｌ  重亜硫酸ナトリウムで処理し、２相系を１５分間撹拌した。相を分離し、手順をさらに２回反復した。有機相を乾燥し、濾過し、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％〜１００％酢酸エチル、次いで９：１  ジクロロメタン：メタノール）に供して、白色固体（３．９９ｇ、９４％）を得た。９：１  ジクロロメタン：メタノールでのＴＬＣによって２つのスポット（シスおよびトランス異性体）が示される。ＮＭＲδｐｐｍ（ＣＤ３ＯＤ）：７．７５（ｍ，２Ｈ）、７．６（ｍ，３Ｈ）、７．２−７．４（ｍ，１４Ｈ）、６．１−６．２（ｍ，１Ｈ）、４．２５−４．４（ｍ，２Ｈ）、４．１−４．２（ｍ，２Ｈ）、３．８５（ｓ，２Ｈ）、１．６−１．８（ｍ，２Ｈ）、１．３−１．５（ｍ，２Ｈ）、０．９５（ｔ，３Ｈ）。
【０２８０】
実施例ＩＶ  Ｈ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成（下記工程１〜２）
【化２２３】
0004452441.tif 000171
工程１  Ｈ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２２４】
0004452441.tif 000172
【０２８１】
市販のＭＢＨＡ樹脂（２．６ｇ、１．１２ｍｍｏｌ／ｇ、２．９１ｍｍｏｌ）を、窒素入口を備えた２５０ｍＬフリット化固相反応容器に移した。次いで、これを３０ｍｌのジクロロメタン、メタノール、ジメチルホルムアミドおよびジクロロメタンで十分に洗浄し、１８時間にわたって市販のＦｍｏｃ−Ｐｈｇ−ＯＨ（２．１７ｇ、５．８２ｍｍｏｌ）に手順Ａに従って９９．８２％の効率でカップリングした。次いで、樹脂を手順Ｂに従ってＦｍｏｃ脱保護に供した。少量のアリコートに対する定性的ニンヒドリンアッセイによって濃青色の樹脂および溶液が生じ、反応の成功が示された。
【０２８２】
工程２  Ｈ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２２５】
0004452441.tif 000173
【０２８３】
上記工程１において得られた樹脂（２．６ｇ、０．８ｍｍｏｌ／ｇ、２．９１ｍｍｏｌ）を、手順Ａに従ってＦｍｏｃ−ｎＶａｌ−（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−ＯＨ（実施例ＩＩＩ、工程７）（５．８２ｍｍｏｌ、３．７７ｇ）と反応させた。１８時間後に、定量的ニンヒドリン分析によって９９．９１％のカップリング効率が示された。樹脂を、手順Ｂに従ってＦｍｏｃ脱保護に供した。少量のアリコートに対する定性的ニンヒドリンアッセイによって濃青色の樹脂および溶液が生じ、反応の成功が示された。
【０２８４】
ＩＩＩ）代表的なＣ型肝炎標的の固相組立て：
実施例Ｖ  ２，５−ジフルオロ−６−ヒドロキシカルボニルフェニルカルボニル−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＮＨ２の固相合成（下記工程１〜５）
【化２２６】
0004452441.tif 000174
【０２８５】
工程１  Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２２７】
0004452441.tif 000175
【０２８６】
化合物Ｈ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂（実施例ＩＶ、工程２）（１．５ｇ、１．１２ｍｍｏｌ／ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を、フリット化ポリプロピレンチューブに移し、手順Ａに従ってＮ−Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（８９０ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）にカップリングした。１８時間後、定性的ニンヒドリン分析によって無色のビーズおよび溶液が示された。
【０２８７】
工程２  Ｆｍｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２２８】
0004452441.tif 000176
【０２８８】
実施例Ｖ、工程１において得られた樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂、１．６８ｍｍｏｌ）を、手順Ｂに従ったＦｍｏｃ脱保護手順に供した。次いで、市販のＦｍｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−ＯＨ（０．９５６ｇ、０．２．５２ｍｍｏｌ）を手順Ａに従ってカップリングした。１８時間後に、定量的ニンヒドリン分析によって９８％のカップリング効率が示された。
【０２８９】
工程３  ２，５−ジフルオロ−６−ヒドロキシカルボニルフェニルカルボニル−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２２９】
0004452441.tif 000177
【０２９０】
実施例Ｖ、工程２において得られた樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂）を、手順Ｂに従ってＦｍｏｃ脱保護に供した。少量のアリコートに対するニンヒドリンアッセイによって濃青色の樹脂および溶液が生じ、反応の成功が示された。１ｍｌのＮＭＰに懸濁した樹脂（１５０ｍｇ、０．１６８ｍｍｏｌ）に、３，６−ジフルオロフタル酸無水物（９１ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、次いでジイソプロピルエチルアミン（０．１４６ｍｌ、８４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１８時間室温で振盪した。定量的ニンヒドリン分析によって、９７．８％のカップリング効率が示された。
【０２９１】
工程４  ２，５−ジフルオロ−６−ヒドロキシカルボニルフェニルカルボニル−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２３０】
0004452441.tif 000178
【０２９２】
実施例Ｖ、工程３の化合物（２，５−ジフルオロ−６−ヒドロキシカルボニルフェニルカルボニル−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂）（２００ｍｇ）をセミカルバゾン加水分解手順Ｄに供した。
【０２９３】
工程５  ２，５−ジフルオロ−６−ヒドロキシカルボニルフェニルカルボニル−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＮＨ２の合成
【化２３１】
0004452441.tif 000179
【０２９４】
実施例Ｖ、工程４の樹脂（２，５−ジフルオロ−６−ヒドロキシカルボニルフェニルカルボニル−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｌｅｕ−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂）（１００ｍｇ）を、ＨＦ切断条件（手順Ｅ）に供して、所望の粗生成物を得た。この物質を、３００オングストロームのポアサイズの１０ミクロンサイズのゲル粒子から構成されるＣ−１８樹脂を含有する２．２×２５ｃｍ逆相カラムを使用し、水中２０〜５０％アセトニトリルを使用するグラジエントを用いて溶出するＨＰＬＣによって精製した。３００オングストロームのポアサイズの５ミクロンサイズのゲル粒子から構成されるＣ−１８樹脂を含有する４．６×２５０ｍｍ逆相カラムを使用し、水中１０〜６０％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸含有）を用いて溶出する分析用ＨＰＬＣによって、１７．２分における１つのピークが示された。低解像度質量スペクトルによって所望の質量（ＭＨ＋  ７７１．５）が確認された。
【０２９５】
実施例ＶＩ  ｉＢｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ−（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＮＨ２の固相合成（下記工程１〜５）
【化２３２】
0004452441.tif 000180
工程１  Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２３３】
0004452441.tif 000181
【０２９６】
化合物Ｈ−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂（実施例ＩＶ、工程２）（０．１７ｇ、０．８ｍｍｏｌ／ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、フリット化ポリプロピレンチューブに移し、手順Ａに従ってＢｏｃ−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ＯＨ（実施例Ｉ）（１６０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）にカップリングした。１８時間後、定量的ニンヒドリン分析によって、カップリングが９９．９８％完了したことが示された。
【０２９７】
工程２  Ｆｍｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２３４】
0004452441.tif 000182
【０２９８】
上記工程（実施例ＶＩ、工程１）において得られた樹脂（Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂、０．１９ｍｍｏｌ）を、手順Ｃに従うＢｏｃ脱保護手順に供した。次いで、Ｆｍｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−ＯＨ（０．１７０ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を手順Ａに従ってカップリングした。１８時間後に、定量的ニンヒドリン分析によって、９９．９２％のカップリング効率が示された。
【０２９９】
工程３  ｉＢｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２３５】
0004452441.tif 000183
【０３００】
上記工程（実施例ＶＩ、工程２）で得られた樹脂（Ｆｍｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂）を、手順Ｂに従ってＦｍｏｃ脱保護に供した。少量のアリコートに対するニンヒドリンアッセイによって濃青色の樹脂および溶液が生じ、反応の成功が示された。１ｍｌのＮＭＰに懸濁した樹脂（１７０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）に、イソブチルクロロホルメート（０．０６ｍＬ  ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、次いでジイソプロピルエチルアミン（０．１６ｍｌ、０．９０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１８時間室温で振盪した。定量的ニンヒドリン分析によって、９９．３５％のカップリング効率が示された。
【０３０１】
工程４  ｉＢｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂の合成
【化２３６】
0004452441.tif 000184
【０３０２】
上記工程（実施例ＶＩ、工程３）の化合物、ｉＢｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ｄｐｓｃ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂（１７０ｍｇ）を、セミカルバゾン加水分解手順Ｄに供した。
【０３０３】
工程５  ｉＢｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＮＨ２の合成
【化２３７】
0004452441.tif 000185
【０３０４】
上記工程（実施例ＶＩ、工程４）の樹脂（ｉＢｏｃ−Ｇ（Ｃｈｘ）−Ｃｙｓ（（Ｏ２）Ｅｔ）−ｎＶａｌ（ＣＯ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｇ−ＭＢＨＡ樹脂）（１７０ｍｇ）をＨＦ切断条件（手順Ｅ）に供して、所望の粗生成物を得た。この物質を、３００オングストロームのポアサイズの１０ミクロンサイズのゲル粒子から構成されるＣ−１８樹脂を含有する２．２×２５ｃｍ逆相カラムを使用し、水中２０〜５０％アセトニトリルを使用するグラジエントを用いて溶出するＨＰＬＣによって精製した。３００オングストロームのポアサイズの５ミクロンサイズのゲル粒子から構成されるＣ−１８樹脂を含有する４．６×２５０ｍｍ逆相カラムを使用し、水中１０〜６０％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸含有）を用いて溶出する分析用ＨＰＬＣによって、１６．９４分における１つのピークが示された。低解像度質量スペクトルによって所望の質量（ＭＨ＋  ７３７．５）が確認された。
【０３０５】
ＨＣＶプロテアーゼ阻害活性のアッセイ：
分光光度アッセイ：ＨＣＶセリンプロテアーゼの分光光度アッセイを、R. Zhang et al, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268-275（出典明示で援用する）に記載の手順に従うことにより本発明の化合物に対して実施した。この色素原性エステル基質のタンパク質分解に基いたアッセイは、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ活性の連続的モニターに適切である。基質をＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ連結配列（Ａｃ−ＤＴＥＤＶＶＸ（Ｎｖａ）、式中、Ｘ＝ＡまたはＰ）のＰ側から誘導し、そのＣ末端カルボキシル基を４種の異なる発色団アルコール（３−もしくは４−ニトロフェノール、７−ヒドロキシ−４−メチル−クマリンまたは４−フェニルアゾフェノール）のうちの１種によりエステル化した。これらの新規分光光度エステル基質の合成、特徴付けおよび高スループットスクリーニングへの適用ならびにＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の詳細な反応速度評価を以下に示す。
【０３０６】
材料および方法：
材料：アッセイ関連バッファー用化学試薬を、シグマ・ケミカル・カンパニー（Sigma Chemical Company）（セントルイス、ミズーリ）から入手した。ペプチド合成用試薬を、アドリッチ・ケミカルズ（Aldrich Chemicals）、ノヴァバイオケム（Novabiochem）（サンディエゴ、カリフォルニア）、アプライド・バイオシステムズ（Applied Biosystems）（フォスター・シティー、カリフォルニア）およびパーセプティブ・バイオシステムズ（Perseptive Biosystems）（フラミンガム、マサチューセッツ）から入手した。ペプチドを、手動でまたは自動ＡＢＩモデル４３１Ａ合成装置（アプライド・バイオシステムズ）で合成した。ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計モデルＬＡＭＢＤＡ１２を、パーキン・エルマー（Perkin Elmer）（ノーウォーク、コネティカット）から入手し、９６ウェルＵＶプレートを、コーニング（Corning）（コーニング、ニューヨーク）から入手した。予加温ブロックを、ＵＳＡサイエンティフィック（USA Scientific）（オカラ、フロリダ）から入手し、９６ウェルプレートボルテクサーを、ラブリン・インスツルメンツ（Labline Instruments）（メルローズ・パーク、イリノイ）から入手した。モノクロメータを備えたスペクトラマックスプラス（Spectramax Plus）マイクロタイタープレートリーダーを、モレキュラー・デヴァイス（Molecular Devices）（サニーヴェイル、カリフォルニア）から入手した。
【０３０７】
酵素の調製：組換えヘテロ二量体ＨＣＶ ＮＳ３／ＮＳ４Ａプロテアーゼ（１ａ株）を、以前に公開された手順（D. L. Sali et al, Biochemistry, 37 (1998) 3392-3401）を用いることにより調製した。タンパク質濃度を、アミノ酸分析により事前に定量された組換えＨＣＶプロテアーゼ標準品を用いてバイオラド（Biorad）色素法により測定した。アッセイ開始前に、酵素貯蔵バッファー（５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ８.０、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０.０５％ラウリルマルトシドおよび１０ｍＭ  ＤＴＴ）を、バイオラドバイオ−スピンＰ−６プレパックカラム（Biorad Bio-Spin P-6 prepacked column）を利用して、アッセイバッファー（２５ｍＭ  ＭＯＰＳ ｐＨ６.５、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０.０５％ラウリルマルトシド、５μＭ  ＥＤＴＡおよび５μＭ  ＤＴＴ）に交換した。
【０３０８】
基質の合成および精製：基質の合成を、R.Zhangら（前出）により報告されたように行い、標準プロトコル（K. Barlos et al, Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991), 513-520）を用いたＦｍｏｃ−Ｎｖａ−ＯＨの２−クロロトリチルクロリド樹脂への固定により開始した。次いで、ペプチドをＦｍｏｃ化学反応を用いて手動でまたは自動ＡＢＩモデル４３１ペプチド合成装置で組立てた。Ｎ−アセチル化し完全に保護したペプチドフラグメントを、３０分間ジクロロメタン（ＤＣＭ）中の１０％酢酸（ＨＯＡｃ）および１０％トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）により、または１０分間ＤＣＭ中の２％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）により樹脂から切断した。濾液およびＤＣＭ洗浄液を合し、共沸蒸発（またはＮａ２ＣＯ３水溶液により反復抽出）して、切断に使用した酸を除去した。ＤＣＭ相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。
【０３０９】
標準的な酸−アルコールカップリング手順（K. Holmber et al, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410-412）を用いてエステル基質を組立てた。ペプチドフラグメントを無水ピリジン（３０〜６０ｍｇ／ｍｌ）に溶解し、そこに１０モル当量の発色団および触媒量(０.１当量)のパラ−トルエンスルホン酸（ｐＴＳＡ）を添加した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、３当量）を添加して、カップリング反応を開始した。生成物の形成をＨＰＬＣによりモニターし、室温で１２〜７２時間反応した後に完了することが見出された。ピリジン溶媒を真空下で蒸発させ、さらにトルエンとの共沸蒸発により除去した。ペプチドエステルを２時間ＤＣＭ中の９５％ＴＦＡにより脱保護し、無水エチルエーテルで３回抽出して、過剰の発色団を除去した。３０％〜６０％のアセトニトリル勾配（６カラム容量を使用）を用いるＣ３またはＣ８カラムでの逆相ＨＰＬＣにより脱保護した基質を精製した。ＨＰＬＣ精製後の全体収率は約２０〜３０％であった。電子スプレイイオン化質量分光法により分子量を確認した。基質を乾燥下乾燥粉末形態で貯蔵した。
【０３１０】
基質および生成物のスペクトル：基質および対応する発色団生成物のスペクトルを、ｐＨ６.５アッセイバッファー中に得た。複数の希釈液を用いて１ｃｍキュベット中での最適オフピーク波長（３−ＮｐおよびＨＭＣについては３４０ｎｍ、ＰＡＰについては３７０ｎｍ、および４−Ｎｐについては４００ｎｍ）における吸光係数を決定した。最適オフピーク波長を、基質と生成物との間の吸光度差の分数の最大値（生成物ＯＤ−基質ＯＤ)／基質ＯＤ）を生じる波長として定義した。
【０３１１】
プロテアーゼアッセイ：ＨＣＶプロテアーゼアッセイを、９６ウェルマイクロタイタープレート中で２００μｌの反応混合物を用いて３０℃で実施した。アッセイバッファー条件（２５ｍＭ  ＭＯＰＳ ｐＨ６.５、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、０.０５％ラウリルマルトシド、５μＭ  ＥＤＴＡおよび５μＭ  ＤＴＴ）を、ＮＳ３／ＮＳ４Ａヘテロ二量体用に最適化した（D.L.Sali et al.、前出）。代表的には、バッファー、基質および阻害剤の混合物１５０μｌをウェルに入れ（ＤＭＳＯの終濃度 ４％（ｖ／ｖ））、約３分間３０℃でプレインキュベートした。次いで、予加温したアッセイバッファー中のプロテアーゼ（１２ｎＭ、３０℃）５０μｌを使用して、反応を開始した（最終容量２００μｌ）。モノクロメータを備えたスペクトロマックスプラスマイクロタイタープレートリーダーを用いて（カットオフフィルターを利用するプレートリーダーを用いて許容される結果を得ることができる）、適切な波長（３−ＮｐおよびＨＭＣについては３４０ｎｍ、ＰＡＰについては３７０ｎｍ、および４−Ｎｐについては４００ｎｍ）における吸光度の変化についてアッセイ期間（６０分間）にわたってプレートをモニターした。Ｎｖａと発色団との間のエステル結合のタンパク質分解切断を、非酵素的加水分解についてのコントロールとしての無酵素ブランクに対し適切な波長でモニターした。基質反応速度パラメーターの評価を、３０倍の基質濃度範囲（約６〜２００μＭ）にわたって実施した。線形回帰を用いて初速度を測定し、非線形回帰分析（Mac Curve Fit １.１、K.Raner）を用いてミカエリス−メンテンの式にデータを適合させることにより反応速度定数を得た。酵素が完全に活性であると想定して代謝回転数（ｋcat）を計算した。
【０３１２】
阻害剤および不活化剤の評価：競合阻害剤Ａｃ−Ｄ−(Ｄ−Ｇｌａ)−Ｌ−Ｉ−(Ｃｈａ)−Ｃ−ＯＨ(２７)、Ａｃ−ＤＴＥＤＶＶＡ(Ｎｖａ)−ＯＨおよびＡｃ−ＤＴＥＤＶＶＰ(Ｎｖａ)−ＯＨについての阻害定数（Ｋｉ）を、競合阻害反応速度用に再調整したミカエリス−メンテンの式：ｖ０／ｖｉ＝１＋［Ｉ］０／（Ｋｉ（１＋［Ｓ］０／Ｋｍ））（式中、ｖ０は非阻害初速度であり、ｖｉはいずれかの所定の阻害剤濃度（［Ｉ］０）における阻害剤の存在下における初速度であり、［Ｓ］０は使用した基質濃度である）に従ってｖ０／ｖｉ対阻害剤濃度（［Ｉ］０）をプロットすることにより、酵素および基質の固定濃度において実験的に決定した。得られたデータを線形回帰を用いて適合させ、得られた傾き、１／（Ｋｉ（１＋［Ｓ］０／Ｋｍ）を用いてＫｉ＊値を計算した。
【０３１３】
本発明の種々の化合物について得られたＫｉ＊値を上記の表に示す。表中、化合物はＫｉ＊値の範囲の順に配列されている。これらの試験結果から、当業者にとって、本発明の化合物がＮＳ３−セリンプロテアーゼ阻害剤として優れた有用性を有することは明らかである。
【０３１４】
本発明を上記の特定の実施態様に関して記載したが、その多くの改変、変形およびその他の変更は当業者にとって明白である。そのような全ての改変、変形および変更は、本発明の精神および範囲内に含まれるものとする。
【０３１５】
表２
【表８】
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表２
【表９】
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表２
【表１０】
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表２
【表１１】
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表２
【表１２】
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表２
【表１３】
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表２
【表１４】
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表２
【表１５】
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表２
【表１６】
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表２
【表１７】
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表２
【表１８】
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表２
【表１９】
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表２
【表２０】
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表２
【表２１】
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表２
【表２２】
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表２
【表２３】
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表２
【表２４】
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表２
【表２５】
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表２
【表２６】
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表３
【表２７】
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【表２８】
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表４
【表２９】
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表４
【表３０】
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表４
【表３１】
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