(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）有効成分としてグルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩のみと、
（ｂ）薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療のための、医薬組成物。
【請求項２】
一種以上の酸化防止剤をさらに含んでなる、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記酸化防止剤が、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅（酸化第二銅として）、亜鉛（酸化亜鉛として）、鉄（第一鉄塩として）、セレン（セレン酸ナトリウムとして）、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択されるものであるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の組成物を含んでなる飲用液。
【請求項５】
（ａ）有効成分としてグルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される一種以上の化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩のみと、
（ｂ）薬学的に許容される鼻溶液用担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療のための、鼻溶液組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
インフルエンザウイルスは、可溶性核タンパク質抗原を含有するらせん対称のコアを有する大きなＲＮＡウイルスである。ビリオンは、一つは血球凝集活性(ＨＡ)を有し一つはノイラミニダーゼ活性(ＮＡ)を有する２つのウイルス糖タンパク質を含有するスパイクを有する膜エンベロープを備えている。インフルエンザウイルスは、細胞表面で血球凝集素のための特異的糖タンパク質レセプターに結合する。ウイルスは、感染サイクルごとに改造されるＲＮＡセグメントの独特なゲノム構造を有している。インフルエンザウィルスは、気道のウイルスであり、急性気管支炎、肺炎、クループ及びインフルエンザの病因である。これまでに最もひどい流行の一つが、２０世紀初期のウイルスインフルエンザ流行であった。現在の療法には、種々の望ましくない副作用を示すアマンタジンの使用などがある。
出願人は、種々の公知の化合物が、インフルエンザ感染の予防及び治療に効果的であることを見いだした。酸化防止剤の存在下又は不存在下でグルタチオン(ＧＳ−Ｈ)、グルタチオンジスルフィド(ＧＳＳＧ)、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はアスコルベート−２−ホスフェート、又はそれらのいずれかの組み合わせにより治療するのが、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に適当である。
グルタチオンは、以下の構造を有するトリペプチドγ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙである：
0004578578.tif 000002
ＧＳＨは、天然の機能の中でも、チオール依存反応における生物学的還元剤として作用する。ＧＳＨは、外因供給薬剤として、種々の抗腫瘍剤の効力を、おそらく求核チオエーテル形成又は酸化−還元反応を介して強化及び高めている。例えば、Ａｒｒｉｃｋ，Ｂ．Ａ．等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４４：４２２４(１９８４)参照。
グルタチオン(ＧＳＨ)は、γ−グルタミルサイクルにおける必須化合物であり、それは恐らくアミノ酸を細胞膜を介して輸送する機能を果たす。また、グルタチオンは、グリオキシラーゼ反応、マレイルアセトアセテートのフマリルアセトアセテートへのシス−トランス異性化及びホルムアルデヒドデヒドロゲナーゼ反応を含む種々の酵素反応におけるコファクターとして作用することも知られている。
典型的には電離放射線により発生する反応性酸素種により細胞が損傷するのを減少するのにＧＳＨが果たす役割について実質的に示す確証がある。この作用の正確な機構は、分かっていない。一定の癌の治療に利用できる可能性を示唆する興味ある証拠がある。例えば、化学的発癌性物質の根本的な発癌形態は、典型的には求電子体であり、それはＧＳＨ−Ｓ−トランスフェラーゼにより触媒される反応により解毒できる。肝癌のラットにＧＳＨを多量に経口投与すると、肝腫瘍が実質的に退縮する。上記したように、ＧＳＨは、種々の抗腫瘍剤の効力を強化する。ＧＳＨとカルシウムホメオスタシスとの間に顕著な結合があることを示す確証がいくつかある。ＧＳＨ代謝の概要については、Ｍｅｉｓｔｅｒ，Ａ．等、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５２：７１１(１９８３)を参照されたい。
グルタチオンジスルフィド(ＧＳＳＧ)は、グルタチオン(ＧＳＨ)の酸化二量体である。ＧＳＳＧが酸化−還元サイクルで自然に生じてチオエーテルが形成する。
Ｎ−アセチル−Ｌ−システインは、一般的に粘液溶解薬として知られている。また、Ｎ−アセチル−Ｌ−システインは、一定のタンパク質精製における還元性イオウ化合物、すなわち、子供における低気道感染だけでなく、慢性気管支炎、ＨＩＶ感染、慢性呼吸循環疾患及び激症肝不全の治療用薬剤としても機能する。また、それは、Ｂ型肝炎ウイルス用殺菌薬、及び慢性Ｃ型肝炎におけるインターフェロン−アルファに対する応答を高める薬剤としても知られている。
アスコルベート−２−ホスフェートは、アスコルビン酸(ビタミンＣ)の安定な誘導体である。アスコルベート−２−ホスフェートは、以下の構造を有する：
0004578578.tif 000003
ビタミンＣは、スキンクリーム及びローション等の化粧品組成物の成分としてだけでなく、一般的な食品補助剤としても広く使用されている。また、肉及びシーフードのピックリング及び保存、パン製造用の向上したパン生地、発酵大豆用醤油調味料、甘味料、神経成長因子増強剤、有核植物用化学浄化剤、冷凍野菜にテクスチャー及びカラー安定性を付与するための組成物の成分、電子部品のメッキに適当な電気メッキ浴用成分及び微細パラジウム粒子製造用プロセスの一部分に関連した用途を含む、上記とは無関係の多種多様の用途も知られている。
本発明の実施においては、抗ウイルス剤を、細胞に直接供給して感染及びウイルス粒子産生を減少する。インフルエンザ感染を防止するための現在の方法は、完全には効果的でない免疫化を含み、コストが高く且つ付随する危険がある。グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、アスコルベート−２−ホスフェート又はそれらのいずれかの組み合わせは、インフルエンザウイルス感染の治療に安全な天然産物であり、また新規な予防方法である。これらの組成物は、ロゼンジ、飲用液、うがい、鼻内噴霧により、感染の可能性のある部位である上皮細胞に直接供給できる。
発明の簡単な説明
出願人は、ある非毒性化合物がインフルエンザウイルスによる感染の予防や治療に適当であり、それらの化合物には、トリペプチド類似体グルタチオン(ＧＳＨ)、その酸化二量体グルタチオンジスルフィド(ＧＳＳＧ)、アスコルベート−２−ホスフェート、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はそれらの組み合わせなどがあることを見いだした。投与は、患者の鼻通路及び粘膜を被覆するために、ロゼンジ、飲用液、うがい又は鼻内噴霧の形態で実施するのが好ましい。
発明の詳細な説明
本発明は、
(ａ)グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、アスコルベート−２−ホスフェート及びＮ−アセチル−Ｌ−システインからなる群から選択される一種以上の化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の一実施態様は、
(ａ)グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、アスコルベート−２−ホスフェート及びＮ−アセチル−Ｌ−システインからなる群から選択される一種以上の化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、アスコルベート−２−ホスフェート及びＮ−アセチル−Ｌ−システインからなる群から選択される一種以上の化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、アスコルベート−２−ホスフェート及びＮ−アセチル−Ｌ−システインからなる群から選択される一種以上の化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、アスコルベート−２−ホスフェート及びＮ−アセチル−Ｌ−システインからなる群から選択される一種以上の化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)グルタチオン、グルタチオンジスルフィド、アスコルベート−２−ホスフェート及びＮ−アセチル−Ｌ−システインからなる群から選択される一種以上の化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)グルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)グルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)グルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)グルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)グルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)グルタチオン及びグルタチオンジスルフィドからなる群から選択される化合物又はこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)アスコルベート−２−ホスフェート又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)アスコルベート−２−ホスフェート又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)アスコルベート−２−ホスフェート又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)アスコルベート−２−ホスフェート又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)アスコルベート−２−ホスフェート又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)アスコルベート−２−ホスフェート又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
(ａ)Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなり、インフルエンザウイルス感染の予防又は治療に有用な、医薬組成物に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)一種以上の酸化防止剤又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様は、
インフルエンザウイルス感染の治療又はインフルエンザウイルスによる感染の予防方法であって、このような治療の必要な患者に、
(ａ)Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン又はその薬学的に許容される塩と、
(ｂ)ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、銅(酸化第二銅として)、亜鉛(酸化亜鉛として)、鉄(第一鉄塩として)、セレン(セレン酸ナトリウムとして)、β−カロチン、ポリフェノール、カテキン、ケルセチン、エリオジクチオール、カルノシン酸、カルノゾル、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸、ケイ皮酸、コエンザイムＱ１０、プロブコール、アスタキサンチン、リコピン、α−リポエート及び尿酸塩からなる群から選択される一種以上の酸化防止剤であるか、又はいずれかのこのような酸化防止剤の薬学的に許容される塩と、
(ｃ)薬学的に許容される担体と、
を含んでなる医薬組成物を投与する、方法に関する。
本発明の別の実施態様においては、前記医薬組成物を、飲用液として投与する。
生体外で検討したところ、本発明の組成物は、１０〜３０ｍＭで外与添加したとき、Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓(ＭＤＣＫ)細胞及び正常ヒト小気道上皮細胞において感染性及び感染の低い多重度(multiplicity)で活性インフルエンザウイルス粒子産生を減少させた。本発明の組成物は、ウイルス付着後に添加したときに防御能を示したが、ウイルス付着前のみ又はウイルス付着中のみに添加したときには防御能を示さなかった。本発明の組成物は、感染細胞におけるウイルスタンパク質の合成又はアポプトシス(apoptosis)を阻害せず、且つ感染細胞における本発明の組成物の損失の防止はなされなかった。したがって、本発明の組成物を添加することによるインフルエンザ感染の防止は、恐らく粒子が放出された後にウイルスＨＡタンパク質のタンパク質分解酵素開裂を中断させることにより生じたものであった。この阻害がないと、新たに産生したウイルス粒子が活性化し、他の細胞に感染が広がる。生体内では、インフルエンザウイルス粒子が上皮細胞の先端表面から放出され、したがって、これらの組成物を鼻、経口及び上気道上皮の先端表面に関連濃度で供給すると、インフルエンザウイルスのタンパク質分解酵素活性を阻害することにより同じ効果が得られる。
本発明の組成物を上皮細胞に直接添加すると、インフルエンザウイルスによる感染を減少する。一態様によれば、本発明は、生体内での一次感染部位であるヒト気道上皮を含む種々の細胞型における感染性ウイルス粒子の感染の減少及び産生の減少のための、これらの組成物の直接使用に関する。すなわち、ロゼンジ、口のうがい又は鼻内噴霧等の口、鼻及び気道上皮に直接投与するためのこれらの組成物の製剤は、インフルエンザ感染の防止に使用できる。他のチオール及び酸化防止剤もこの効果を示すことができ、これらの組成物と他のチオール又は酸化防止剤とを組み合わせると、効果が増加する。このような製剤は、ヒト及び獣又は家畜における感染の恐れを減少させるのに有用であると期待される。これらの組成物を口、鼻及び気道上皮に直接供給する製剤は、他のウイルス感染(例えば、一般的なかぜ)も防止できる。原則として、本発明の組成物を上皮表面に直接供給する膣又は直腸座剤、軟膏又は他の製剤は、他の部位でのウイルス感染を減少することができるであろう。
グルタチオン(略称「ＧＳＨ」)は、一般的にペプチド類似体γ−Ｌ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙとも称される。
化合物の薬学的に許容される塩(水溶性、油溶性又は分散性生成物の形態)には、例えば、無機酸、有機酸又は塩基から形成される通常の非毒性塩又は四級アンモニウム塩などがある。このような酸付加塩としては、例えば、アセテート、アジペート、アルギネート、アスパーテート、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、ビスルフェート、ブチレート、シトレート、カンファレート、カンファスルホネート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、エタンスルホネート、フマレート、グルコヘプタノエート、グリセロホスフェート、ヘミスルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ヒドロクロリド、ヒドロブロミド、ヒドロヨーダイド、２−ヒドロキシエタンスルホネート、ラクテート、マレエート、メタンスルホネート、２−ナフタレンスルホネート、ニコチネート、オキサレート、パモエート、ペクチネート、ペルスルフェート、３−フェニルプロピオネート、ピクレート、ピバレート、プロピオネート、スクシネート、タートレート、チオシアネート、トシレート及びウンデカノエートなどがある。塩基性塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩及びマグネシウム塩、有機塩基との塩、例えば、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、並びにアルギニン、リシン等のアミノ酸との塩などがある。また、塩基性窒素含有基は、低級ハロゲン化アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル及びブチルの塩化物、臭化物及びヨウ化物；ジアルキルスルフェート、例えば、ジメチルスルフェート、ジエチルスルフェート及びジブチルスルフェート；並びにジアミルスルフェート、長鎖ハロゲン化物、例えば、デシル、ラウリル、ミリスチル及びステアリルの塩化物、臭化物及びヨウ化物、アラルキルハライド、例えば、臭化ベンジル及び臭化フェネチル等のような薬剤で四級化してよい。他の薬学的に許容される塩としては、スルフェート塩エタノーレート及びスルフェート塩などがある。
グルタチオンは、Ｏｚａｗａ，Ｙ等、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．５３：２５９２(１９８０)の方法により合成される。別法では、グルタチオンは、Ｂｌｏｃｈ，Ｋ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ３、６０３(１９５７)の方法により酵母から単離される。
グルタチオンジスルフィド(ＧＳＳＧ)は、Ｂｉｔｎｙ−Ｓｚｌａｃｈｔｏ等、Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｐｏｌ．１７、１７５(１９７０)の方法により合成される。
アスコルベート−２−ホスフェートは、米国特許第５，２５０，４２５号及び第５，２１２，０７９号の方法により合成される。これらは、上記目的について、引用することにより本明細書の開示の一部とされる。また、Ｓｅｋｉｎ，Ｍ等、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４７、３４５３(１９８２)も参照されたい。
Ｎ−アセチル−Ｌ−システインは、Ｓｍｉｔｈ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２６、８２０(１９６１)及び米国特許第３，１８４，５０５号(上記目的について、引用することにより本明細書の開示の一部とされる)の方法により合成される。
これらの目的のために、本発明の組成物は、通常の非毒性薬学的に許容される担体、アジュバント及びビヒクルを含有する投与量単位製剤において、経口投与、吸入噴霧投与又は直腸投与できる。
したがって、本発明によれば、さらにインフルエンザウイルス感染の治療方法及びインフルエンザウイルス感染の治療及びインフルエンザウイルス感染の予防用医薬組成物が提供される。治療は、このような治療を必要とする患者に、医薬担体及び本発明のいずれかの組成物又はその薬学的に許容される塩の治療に有効な量を投与することを含む。
これらの医薬組成物は、経口投与可能懸濁剤、飲用液又は錠剤；鼻内噴霧剤；又は油性懸濁剤若しくは坐剤の形態でよい。
懸濁剤として経口的に投与するとき、本発明の組成物は、医薬製剤の分野で周知の手法により調製され、かさを付与するための微結晶セルロース、懸濁剤としてアルギン酸又はアルギン酸ナトリウム、粘度上昇剤としてメチルセルロース及び当該技術分野において公知の甘味料／矯味矯臭剤を含有できる。即時放出型錠剤としては、これらの組成物は、微結晶セルロース、ジカルシウムホスフェート、デンプン、マグネシウムステアレート及びラクトース並びに／又は当該技術分野において公知の他の附形剤、バインダー、増量剤、崩壊剤、希釈剤及び滑剤を含有できる。口洗浄又はうがい製剤中の成分には、抗菌剤、界面活性剤、共界面活性剤、油、水及び他の添加剤、例えば、当該技術分野において公知の甘味料／矯味矯臭剤などがある。
飲用液により投与するとき、組成物は、本発明の化合物の一種以上を水に溶解させて(適当にｐＨ調整)、担体とともに含んでなる。存在する化合物の濃度は、約１０ｍＭと約２００ｍＭ、好ましくは約５０ｍＭ、との間の範囲でよい。化合物は、蒸留水、水道水、わき水等に溶解してよい。ｐＨは、典型的には、約４．０と６．５、好ましくは約６．０、との間に調整される。甘味料、例えば、１％(ｗ／ｖ)スクロースを添加できる。
鼻エアロゾル剤又は吸入剤により投与するときには、これらの組成物は、医薬製剤の技術分野において周知の手法により調製され、ベンジルアルコール又は他の適当な保存剤、バイオアベイラビリティを高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン及び／又は当該技術分野において公知の他の溶解剤若しくは分散剤を用いて、生理食塩水溶液として調製できる。例えば、Ａｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．等、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ(医薬投与剤形及び薬剤投与系)、第６版(１９９５)を参照のこと。
好ましくは、これらの組成物及び製剤は、適当な非毒性の薬学的に許容される成分を用いて調製される。これらの成分は、鼻内投与剤形の調製における当業者に公知であり、これらの一部は、当該技術分野において標準的な文献であるＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１７版、１９８５に記載されている。適当な担体の選択は、所望の鼻内投与剤形、例えば、溶液、懸濁剤、軟膏又はゲル、の正確な性質に大きく依存する。鼻内投与剤形は、一般的に、活性成分の他に多量の水を含有する。少量の他の成分、例えば、ｐＨ調整剤、乳化剤若しくは分散剤、保存剤、界面活性剤、ゼリー化剤又は緩衝剤及び他の安定化剤並びに可溶化剤も存在してよい。好ましくは、鼻内投与剤形は、鼻内分泌物と等張でなければならない。飲用液の場合、スクロース等の甘味料が好ましい。
本発明の製剤は、以下のような成分を含んで異なることができる：(１)ｐＨを調整するための他の酸及び塩基；(２)他の張度付与剤、例えば、ソルビトール、グリセリン及びデキストロース；(３)他の抗菌性保存剤、例えば、他のパラヒドロキシ安息香酸エステル、ソルベート、ベンゾエート、プロピオネート、クロルブタノール、フェニルエチルアルコール、ベンズアルコニウムクロリド及び水銀剤；(４)他の粘性付与剤、例えば、ソジウムカルボキシメチルセルロース、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール及び他のガム類；(５)適当な吸収増強剤；(６)安定化剤、例えば、酸化防止剤、例えば、ビスルファイト及びアスコルベート、金属キレート化剤、例えば、ソジウムエデテート及び薬剤溶解性向上剤、例えば、ポリエチレングリコール。
上記鼻製剤は、ドロップ、噴霧剤、エアロゾルとしてか、他の鼻腔内投与剤形により投与できる。必要に応じて、投与系は、単位投与量投与系であることができる。単位投与量当たり投与される溶液又は懸濁剤の容積は、５〜４００マイクロリットル、好ましくは５０〜１５０マイクロリットルであることができる。これらの種々の投与剤形の投与系は、ドロッパーボトル、プラスチック製スクィーズ装置、アトマイザー、ネブライザー又は医薬エアロゾル(単位投与量又は複数投与量パッケージ)であることができる。
ロゼンジは、米国特許第３，４３９，０８９号(これらの目的について、引用することにより本明細書の開示の一部とされる)に準じて調製できる。
坐剤の形態で直腸投与するとき、これらの組成物は、薬剤を、常温で固体であるが、直腸腔中で液化及び／又は溶解して薬剤を放出する、適当な非刺激性附形剤、例えば、ココアバター、合成グリセリドエステル又はポリエチレングリコール、と混合することにより調製できる。
２５ｍｇ／日〜１０ｍｇ／日のオーダーの投与量レベルが、上記で示した条件の治療又は予防に有用である。一つの好ましいプログラムでは、このような投与量を、各患者に、鼻内噴霧によるか経口ロゼンジにより投与する。しかしながら、個々の患者についての特定の投与量レベル及び投与の頻度は異なってよく、用いられる特定の塩又は他の形態の活性、化合物の代謝安定性及び作用の長さ、年齢、体重、総合的健康、性別、食事、投与の様式及び時間、排泄速度、薬剤の組み合わせ、個々の状態の発病度及び宿主介在療法を含む種々の因子に依存する。
また、本発明は、一種以上の酸化防止剤を含有する組成物に関する。例えば、グルタチオン及びグルタチオンジスルフィド又は本発明のいずれか他の組成物を、予備暴露期間、後暴露期間又はこれらの両方の期間であるかどうかは無関係に、以下に示す酸化防止剤の一種以上の効果的な量と組み合わせて効果的に投与できる。
ビタミンＡ、
ビタミンＥ、
ビタミンＫ、
銅(酸化第二銅)、
亜鉛(酸化亜鉛)、
鉄(第一鉄塩)、
セレン(セレン酸ナトリウム)、
β−カロチン、
ポリフェノール類、
フラビノイド類、例えば、カテキン又はケルセチン等のフラバノール類及びエリオジクチオール等のフラバノン類、
ジテルペノイド類、例えば、カルノシン酸、又はカルノゾル、
フェノール酸、例えば、ロスマリン酸、カフェー酸、クマリン酸又はケイ皮酸、
コエンザイムＱ１０、
プロブコール、
カロテノイド類、例えば、アスタキサンチン又はリコピン、
α−リポエート及び
尿酸塩。
実施例１
グルタチオンの有機合成
グルタチオンを、Ｏｚａｗａ，Ｙ等、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．５３：２５９２(１９８０)(これらの目的について引用することにより、本明細書の開示の一部とされる)の方法により合成した。この合成において、Ｎ−ホルミル−Ｌ−２−アミノ−４−シアノ酪酸エチルエステルを、エチルＬ−システイニルグリシネートと縮合して、(４Ｒ)−２−[(３Ｓ)−３−エトキシカルボニル−３−(ホルミルアミノ)プロピル]−４−(エトキシカルボニルメチルカルバモイル)−２−チアゾリンを得る。続いてアセトン水溶液中約−１５℃でケン化した後、希薄Ｈ2ＳＯ4(ｐＨ４)で処理することにより、ホルミルグルタチオンを得る。ホルミル基の除去を、０．５Ｍ  Ｈ2ＳＯ4で加水分解することにより行い、遊離ＧＳＨを得る。必要に応じて、さらに精製する。このさらなる精製では、遊離ＧＳＨをその銅チオレートに転化した後、Ｈ2Ｓで処理することにより、純粋なＧＳＨを得る。
実施例２
グルタチオンの酵母からの単離
Ｂｌｏｃｈ，Ｋ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ３、６０３(１９５７)(これらの目的について引用することにより、本明細書の開示の一部とされる)の方法により、塩化カドミウムにより酵母エキスからＧＳＨを沈殿させる。酵母エキスのアリコットに、等重量の１０％ＴＣＡを添加する。遠心分離により得られた残留物を、ＴＣＡの最初の容積の半分でさらに二回抽出する。抽出物を合わせて、そこに、抽出物の容積の４分の１に等しい量のＣｄＣｌ2溶液を添加する。１０Ｍ  ＮａＯＨを添加することにより溶液のｐＨを５にした後、重炭酸塩でｐＨ６．５に調整する。沈殿したＣｄ錯体を、０℃で１時間保持した後、氷冷蒸留水で２回洗浄する。沈殿を最小量の２Ｎ  Ｈ2ＳＯ4に溶解した後、予想ＧＳＨ各１０ｍｇ当たり３ｍｌの０．５Ｎ  Ｈ2ＳＯ4を添加する。必要に応じて、溶液を濾過し、ＧＳＨの存在量を、アリコット単位で求める。溶液を４０℃に暖め、ＧＳＨ各１０ｍｇ当たり２．５ｍｇのＣｕ2Ｏを含有するＣｕ2Ｏ懸濁液を、穏やかに振とうしながら滴下する。得られた沈殿を、０℃で数時間放置し、遠心分離し、０．５Ｎ  Ｈ2ＳＯ4で２回、蒸留水で３回及びメタノールで２回順次洗浄する。キュプラスメルカプチドが脱色した場合には、Ｃｕ2Ｏを０．５Ｎ  Ｈ2ＳＯ4に添加して調製した過剰の懸濁液を添加することにより再溶解してもよい。濾過後、溶液に通気すると、メルカプチドが再沈殿する。遊離トリペプチドを単離するために、ＧＳＨのキュプラスメルカプチドを水性懸濁液中水素により分解し、亜硫酸銅を除去した後の溶液を凍結乾燥により乾燥させる。
実施例３
ＧＳＨ濃度の増加により、Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓(ＭＤＣＫ)細胞におけるウイルス産生が阻害された
ＭＤＣＫ細胞を、１００ｍｍ皿中で、密集度が８０％となるまで培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、無血清ＤＭＥＭ培地中０．０５〜０．１プラーク形成単位／細胞の感染の多重度でインフルエンザＡ／ＷＳＮ株を２時間接種した。細胞を、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳを、ＧＳＨ(０．１〜３０ｍＭ)の存在下又は不存在下で添加した。感染後４８時間で、各皿から上清１００μｌを採取し、ウイルスＨＡ力価を評価した。結果から、ＧＳＨ０．１ｍＭ〜３０ｍＭの範囲にわたってウイルス産生の増加が防止されることが分かった。ウイルス産生の減少は、１ｍＭＧＳＨで３０％、５ｍＭＧＳＨで６０％及び３０ｍＭＧＳＨで９０％であった。これらの濃度のＧＳＨは、細胞には有毒ではなかった。
実施例４
ＧＳＨは、正常ヒト小気道上皮細胞(ＳＡＥＣ)におけるウイルス感染を防止した
ＳＡＥＣを、密集度が７０％となるまで培養した。細胞を、洗浄し、インフルエンザＡ／ＷＳＮ株を２時間接種した。洗浄して非付着ウイルスを除去した後、細胞をＧＳＨ含有又は非含有培地中で７２時間以下培養し、ＨＡ力価によりウイルス産生を評価した。結果から、３０ｍＭ  ＧＳＨにより、正常ヒトＳＡＥＣ中でウイルス産生が９０％超減少したことが分かった。これらの結果は、感染性粒子の数についてのプラーク形成アッセイにより確認された。このように、ＧＳＨは、感染性ウイルス粒子の産生を減少させることにより、ヒト細胞中でのインフルエンザ感染を防止することが分かった。
実施例５
ＧＳＨは、初期ウイルス暴露後のウイルス産生を防止した
個体がインフルエンザで感染状態となるには、一つ以上の細胞が最初に感染状態となり、ウイルス粒子を産生し、これらのウイルス粒子が感染を他の細胞に広げなければならない。ウイルスをＧＳＨとともにインキュベーションすると、ウイルスが不活性化するかどうか、ＧＳＨをウイルスと同時添加すると細胞へのウイルスの付着が阻害されるかどうか、又はウイルス付着後にＧＳＨを添加するとウイルスの産生が阻害されるかどうかを調査するための実験をおこなった。ウイルスを３０ｍＭ以下のＧＳＨとともに１時間インキュベーションした後、ＭＤＣＫ細胞とともにインキュベーションしたところ、４８時間後のウイルス産生には何ら影響がなかった。したがって、ＧＳＨは、ウイルスを直接には不活性化しない。１０〜３０ｍＭＧＳＨとウイルスを、ＭＤＣＫ細胞といっしょに２時間インキュベーションした後、洗浄し、続いて４８時間インキュベーションしたところ、ウイルスの産生が減少しなかった。したがって、ＧＳＨは、ウイルスの付着又は細胞への取り込みを妨害しない。しかしながら、細胞をウイルスとともにインキュベーション後、ＧＳＨを添加したところ、ＨＡ力価が４８時間で８５％減少した。このように、ＧＳＨは、細胞によるウイルスの産生を阻害して、他の細胞に感染が広がる危険を減少する。従って、ＧＳＨは、個体がインフルエンザを発現するのを防止するのに適当である。
実施例６
ＧＳＨは、ウイルス感染細胞を排除しながらウイルス産生を阻害した
ＧＳＨは、ＭＤＣＫ細胞のインフルエンザ感染後のアポプトシスによる感染細胞の排除には影響しないことが判明した。ウイルス感染細胞のほとんど１００％が、４８時間でアポプトシスの徴候を示し、これは、３０ｍＭ以下のＧＳＨには影響されなかった。ＧＳＨ単独では、アポプトシスを生じなかった。したがって、ＧＳＨはアポプトシスを妨害することなくウイルス産生をブロックするので、アポプトシスの正常なプロセスにより、感染細胞を排除し、ウイルスが広がる機会を減少できる。
実施例７
添加ＧＳＨがウイルス感染を防止するのに、細胞のＧＳＨの増加は必要なかった
１０ｍＭ  ＧＳＨ不存在下又は存在下で、インフルエンザウイルスを感染後に、ＧＳＨをＭＤＣＫ細胞中で測定した。得られた結果から、ＧＳＨによる処理によっては、ウイルスの不存在下で細胞のＧＳＨを増加せず、且つウイルス感染細胞におけるＧＳＨの損失を防止しないことが分かった。ウイルスの存在は、培地からのＧＳＨの損失に対して明らかな影響を及ぼさなかった。したがって、ウイルス感染に対するＧＳＨの影響は、おそらく細胞内ＧＳＨプールへの影響によるものではなく、新規な防止機構であることを示唆している。
実施例８
ウイルスタンパク質産生に対するＧＳＨの影響
ＧＳＨがウイルスタンパク質合成及び処理を変えたかどうかを調査するために、ＧＳＨの添加又は添加なしでのウイルス感染後に、細胞を35Ｓ−メチオニンとともにインキュベーションして、新規に合成したタンパク質を標識した。細胞を洗浄し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ緩衝液に溶解した。続いてＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析した後に、オートラジオグラフィーをおこなったところ、ウイルスタンパク質に特徴的な標識が示された。標識タンパク質のパターン又は量には検出できる差はなかった。上記の実施例の結果とともにこれらの結果により、ＧＳＨの作用機構は、ウイルスの細胞外活性を防止することであること、すなわち、口部洗浄、ロゼンジ、鼻内噴霧又はエアロゾル適用器による経口、鼻内及び上気道上皮へのＧＳＨの供給により達成できるプロセスを示している。
実施例９
グルタチオンジスルフィド(ＧＳＳＧ)の合成
Ａ．生理食塩水に添加した１当量のグルタチオンを過剰のヨウ素と反応させて、約２分の１当量のＧＳＳＧを得る。
Ｂ．ＧＳＳＧを、Ｂｉｔｎｙ−Ｓｚｌａｃｈｔｏ等、Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｐｏｌ．１７、１７５(１９７０)の方法により合成する。この方法において、触媒量のＦｅＳＯ4の存在下で緩衝液中ｐＨ８でＧＳＨを、ニトロプロシドとの陰性反応が生じるまで通気することにより、ＧＳＳＧを調製する。次に、溶液を木炭で処理し、ｐＨ６に調整し、減圧下で濃縮し、ＧＳＳＧをエタノールで沈殿させる。
実施例１０
グルタチオンジスルフィド(ＧＳＳＧ)がウイルス産生を阻害することによりインフルエンザ感染を防止した
ＭＤＣＫ細胞を、１００ｍｍ皿中で、密集度が８０％となるまで培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、無血清ＤＭＥＭ培地中０．０５〜０．１プラーク形成単位／細胞の感染の多重度でインフルエンザＡ／ＷＳＮ株を２時間接種した。細胞を、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳを、ＧＳＳＧの存在下又は非存在下で添加した。感染後４８時間で、各皿から上清１００μｌを採取し、ウイルスＨＡ力価を評価した。結果から、１０ｍＭ  ＧＳＳＧでは、ウイルス産生阻害率が、４８時間及び７２時間で、それぞれ３３％及び５０％であった。３０ｍＭ  ＧＳＳＧでは、ウイルス産生阻害率が、４８時間及び７２時間で、それぞれ３３％及び７５％であった。ＧＳＳＧは、これらの濃度では細胞に対しては有毒ではなかった。したがって、ＧＳＳＧは、ウイルス産生阻害することにより、ウイルス感染を防止する。
実施例１１
アスコルベート−２−ホスフェートの合成
0004578578.tif 000004
Ｓｅｋｉｎｅ，Ｍ等、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４７、３４５３(１９８２)の方法により、アスコルベート−２’−ホスフェートとしても知られているアスコルベート−２−ホスフェート(１)は化学合成される。
(Ａ)２，３，５，６−テトラキス−ｏ−(トリメチルシリル)アスコルベート(４)の調製。Ｌ−アスコルビン酸(１０１ｇ、０．５７３ｍｏｌ)を、乾燥ピリジン７００ｍＬに溶解する。ヘキサメチルジシラザン(１０ｍＬ)を溶液に添加すると、直ちに白色沈殿が生じる。得られた混合物を徐々に１００℃に加熱して、アンモニアガスを発生させる。混合物に、さらに１００℃でヘキサメチルジシラザン２４６ｍＬを、激しく攪拌し続けることができるように非常にゆっくり添加する。添加完了後、得られた溶液を１００℃でさらに２時間加熱する。溶液を室温に冷却後、溶媒及び過剰の試薬を真空除去し、残留物を蒸留して化合物４を得る。
(Ｂ)二環式ラクトン８の調製。０℃の乾燥ＣＨ2ＣＬ2５０ｍＬに化合物４(２３．９ｇ、５１．４ｍＬ、５１．４ｍｍｏｌ)を添加して調製した溶液に、乾燥ＣＨ2ＣＬ2８ｍＬに臭素(２．６３ｍＬ、５１．４ｍｍｏｌ)を添加したものを滴下する。得られた混合物を室温で１時間攪拌した後、ジメチルホスフォネート５．６ｍＬ(５１．４ｍｍｏｌ)を０℃で添加し、混合物を室温で一晩保持する。溶液の色が、橙色から赤色に変化する。溶媒を真空除去し、残留物を蒸留して化合物８を得る。
(Ｃ)二環式α−ケトラクトン８とＴＭＳＰとの反応。０℃の乾燥ＣＨ2ＣＬ2４ｍＬに化合物８(５１４ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ)を添加して調製した溶液に、ＴＭＳＰ０．５３４ｍＬ(１．６１ｍｍｏｌ)をシリンジにより添加する。溶液は、直ちに黄色から無色に変化する。溶媒を真空除去した後、残留物をＣＤＣＬ3に溶解し、1ＨＮＭＲ、31ＰＮＭＲで測定する。
(Ｄ)化合物１０の調製。６０℃で溶融させた二環式α−ケトラクトン８(３．４８ｇ、１０．９ｍｍｏｌ)に、ＴＭＳＰ３．６ｍＬ(１０．９ｍｍｏｌ)を添加する。混合物が、淡黄色になる。混合物を、１０５℃で加熱する。５時間後、化合物８が消失し、化合物１０と化合物１３との混合物が、比８８：１２(1ＨＮＭＲ)で形成する。次に、蒸留を実施する。
(Ｅ)Ｌ−アスコルビン酸２−０−ホスフェートのトリシクロヘキシルアンモニウム塩。化合物１０と化合物１３と(８８：１２)を含有する上記反応混合物(１．４５６ｇ)を、エーテル５０ｍＬ及びメタノール８ｍＬに溶解する。得られた溶液を室温で１時間保持した後、シクロヘキシルアミン２ｍＬ(１７ｍｍｏｌ)を添加する。溶液を、０℃に冷却する。得られた沈殿を濾取し、エーテル１０ｍＬづつで３回洗浄し、真空中Ｐ4Ｏ10で乾燥して、目的化合物(１)を得る。
実施例１２
アスコルベート−２−ホスフェートが感染性インフルエンザウイルス産生を防止した
ＧＳＨの代わりにアスコルベート−２−ホスフェートを用いた実験により、１０又は３０ｍＭアスコルベート−２−ホスフェートが、ウイルス力価及び感染性粒子産生を防止することが分かった。ＭＤＣＫ細胞を、１００ｍｍ皿中で、密集度が８０％となるまで培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、無血清ＤＭＥＭ培地中０．０５〜０．１プラーク形成単位／細胞の感染の多重度でインフルエンザＡ／ＷＳＮ株を２時間接種した。細胞を、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳを、アスコルベート−２−ホスフェートの存在下または非存在下で添加した。４８時間の後感染後、各皿から上清１００μｌを採取し、ウイルスＨＡ力価又はプラーク形成単位を評価した。その結果、１０ｍＭアスコルベート−２−ホスフェートは、４８時間で、ウイルス力価の３７％を阻害し、プラーク形成単位の５０％を阻害した。アスコルベート−２−ホスフェートは、この濃度で細胞には有害でなかった。
実施例１３
アスコルベート−２−ホスフェート＋ＧＳＨにより、どちらか一方よりも防止能が大きかった
ＭＤＣＫ細胞及び０．０５〜０．１プラーク形成単位／細胞の感染の多重度でインフルエンザＡ／ＷＳＮ株を用いた実験により、４８時間でのインフルエンザウイルス産生防止能は、アスコルベート−２−ホスフェートとＧＳＨをそれぞれ１０ｍＭいっしょに用いた場合の防止能(阻害率７５％)のほうが、１０ｍＭアスコルベート−２−ホスフェート単独の防止能(阻害率３７％)又は１０ｍＭＧＳＨ単独の防止能(阻害率５６％)よりも大きかった。
実施例１４
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン(ＮＡＣ)の合成
Ｓｍｉｔｈ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２６、８２０(１９６１)の方法により、Ｎ−アセチル−Ｌ−システインを合成する。システイン２０ｇを、水酸化ナトリウム１２ｇを含有した水２００ｍＬに溶解し、無水酢酸４０ｍＬを、氷溶中で攪拌及び冷却しながら３０分かけて滴下する。この溶液を室温で１時間放置後、５５℃に加熱し、亜鉛粉末を添加する。溶液を、１５分間攪拌し、冷却し、遠心分離して、未変化亜鉛を除去する。遠心分離物の一部分に、１Ｍ酢酸鉛を添加する。メルカプチドを、遠心分離し、洗浄し、硫化水素で分解する。硫化鉛を濾去し、濾液を凍結乾燥する。イソプロピルアルコールに溶解後乾燥エーテルで析出させる操作を３回まで反復することにより、さらに精製する。米国特許第３，１８４，５０５号(これらの目的について引用することにより、本明細書の開示の一部とされる)も参照のこと。
実施例１５
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン(ＮＡＣ)がウイルス産生を阻害することによりインフルエンザ感染を防止した
ＭＤＣＫ細胞を、１００ｍｍ皿中で、密集度が８０％となるまで培養した。細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、無血清ＤＭＥＭ培地中０．０５〜０．１プラーク形成単位／細胞の感染の多重度でインフルエンザＡ／ＷＳＮ株を２時間接種した。細胞を、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ＤＭＥＭ＋２％ＦＢＳを、ＮＡＣの存在下または非存在下で添加した。感染後４８時間で、各皿から上清１００μｌを採取し、ウイルスＨＡ力価を評価した。結果から、１０ｍＭ  ＮＡＣでは、ウイルス産生阻害率が、２４時間及び４８時間で、それぞれ５０％及び６２％であった。３０ｍＭＮＡＣでは、ウイルス産生阻害率が、２４時間及び４８時間で、それぞれ７５％及び９５％であった。ＮＡＣは、これらの濃度では細胞に対しては有毒ではなかった。このように、ＮＡＣは、ウイルス産生阻害することにより、ウイルス感染を防止する。
実施例１６
グルタチオン又はＧＳＳＧ治療用鼻内噴霧剤の調製
グルタチオン又はＧＳＳＧを含有する鼻内噴霧剤を、生理食塩水(０．９％(ｗ／ｖ)ＮａＣｌ水溶液)１ｍｌ当たりグルタチオン又はＧＳＳＧ３ｍｇを添加することにより調製した。
実施例１７
ＧＳＨ治療用鼻溶液組成物の調製
以下の成分を含有する鼻内噴霧剤を調製する。
グルタチオン                １．０ｇ
酢酸ナトリウム              ０．３ｇ
メチルパラベン              ０．１ｇ
プロピルパラベン            ０．０２ｇ
塩化ナトリウム              張性に必要な量
ＨＣｌ又はＮａＯＨ          ｐＨ調整
純水                        総容量１００ｍｌにする量
実施例１８
ＧＳＳＧ治療用鼻溶液組成物の調製
以下の成分を含有する鼻内噴霧剤を調製する。
ＧＳＳＧ                                        １．０ｇ
酢酸ナトリウム                                  ０．３ｇ
メチルパラベン                                  ０．１ｇ
プロピルパラベン                                ０．０２ｇ
塩化ナトリウム                                  張性に必要な量
ＨＣｌ又はＮａＯＨ                              ｐＨ調整
純水                                            総容量１００ｍｌにする量
実施例１９
グルタチオン含有咳止めドロップの調製
あめ基剤：
糖(中粒度)                                    ３５．０ｋｇ
コーンシロップ  ４３°ボーメ                  ２１．０ｋｇ
薬剤混合物：
ポリエチレングリコール(分子量６，０００)      ２．７５ｋｇ
グルタチオン                                  ５．０ｋｇ
クエン酸                                      ６０ｋｇ
ワイルドチェリー模倣フレーバ                  ６０．０ｇ
あめ基剤を調製する際、糖を水５．５リットルに溶解し、グルコース含有コーンシロップを添加し、十分に混合する。この時点で、いずれかの所望の色素を添加して、所要の色を付与してもよい。色素は、十分に溶解するものでなければならない。
上記混合物を、１２５℃に加熱した蒸気ジャケットケトルに入れる。そこから、混合物を、ポンプで貯蔵容器に入れて、連続クッカーに供給する。シロップがクッカーにおけるコイルを通過するうちに、１２５〜１５０℃の温度に到達し、その後、スチーム真空エジェクタにより、真空２８〜２９インチに維持した受け入れケトルに約６〜７分間供給する。この間に、水含量が約１％以下に減少するまで水が除去され、適当な溶融あめ基剤が形成する。次に、あめ基剤を、ゆっくりと冷却する。
薬剤、クエン酸及び模倣フレーバ(粉末状)を、ポリエチレングリコールに添加する。次に、混合物を、約９０℃で加熱することにより流動化する。得られた熱流体混合物を、溶融あめ基剤(温度を約１００℃又はそれよりもわずかに低い温度に低下させたもの)に、適当に混合しながら迅速に添加する。次に、全塊を、十分に混練した後、スピニングマシーンに移し、それをロゼンジ形成ダイに押し出す。別法として、薬剤添加溶融あめ塊を、冷却テーブルに流す。冷却テーブル上で半固体塊に固化した後、薬剤の単位投与量を投薬するためのいずれか所望の形状に成形してもよい。
実施例２０
ＧＳＳＧ含有咳止めドロップの調製
あめ基剤：
糖(中粒度)                                    ３５．０ｋｇ
コーンシロップ  ４３°ボーメ                  ２１．０ｋｇ
薬剤混合物：
ポリエチレングリコール(分子量６，０００)      ２．７５ｋｇ
ＧＳＳＧ                                      ５．０ｋｇ
クエン酸                                      ６０ｋｇ
ワイルドチェリー模倣フレーバ                  ６０．０ｇ
あめ基剤を調製する際、糖を水５．５リットルに溶解し、グルコース含有コーンシロップを添加し、十分に混合する。この時点で、いずれかの所望の色素を添加して、所要の色を付与してもよい。色素は、十分に溶解するものでなければならない。
上記混合物を、１２５℃に加熱した蒸気ジャケットケトルに入れる。そこから、混合物を、ポンプで貯蔵容器に入れて、連続クッカーに供給する。シロップがクッカーにおけるコイルを通過するうちに、１２５〜１５０℃の温度に到達し、その後、スチーム真空エジェクタにより、真空２８〜２９インチに維持した受け入れケトルに約６〜７分間供給する。この間に、水含量が約１％以下に減少するまで水が除去され、適当な溶融あめ基剤が形成する。次に、あめ基剤を、ゆっくりと冷却する。
薬剤、クエン酸及び模倣フレーバ(粉末状)を、ポリエチレングリコールに添加する。次に、混合物を、約９０℃で加熱することにより流動化する。得られた熱流体混合物を、溶融あめ基剤(温度を約１００℃又はそれよりもわずかに低い温度に低下させたもの)に、適当に混合しながら迅速に添加する。次に、全塊を、十分に混練した後、スピニングマシーンに移し、それをロゼンジ形成ダイに押し出す。別法として、薬剤添加溶融あめ塊を、冷却テーブルに流す。冷却テーブル上で半固体塊に固化した後、薬剤の単位投与量を投薬するためのいずれか所望の形状に成形してもよい。
実施例２１
アスコルベート−２−ホスフェート治療用鼻内噴霧剤の調製
アスコルベート−２−ホスフェートを含有する鼻内噴霧剤を、生理食塩水(０．９％(ｗ／ｖ)ＮａＣｌ水溶液)１ｍｌ当たりグルタチオン３ｍｇを添加することにより調製した。
実施例２２
アスコルベート−２−ホスフェート治療用鼻溶液組成物の調製
以下の成分を含有する鼻内噴霧剤を調製する。
アスコルベート−２−ホスフェート    １．０ｇ
酢酸ナトリウム                      ０．３ｇ
メチルパラベン                      ０．１ｇ
プロピルパラベン                    ０．０２ｇ
塩化ナトリウム                      張性に必要な量
ＨＣｌ又はＮａＯＨ                  ｐＨ調整
純水                                総容量１００ｍｌにする量
実施例２３
アスコルベート−２−ホスフェート含有咳止めドロップの調製
あめ基剤：
糖(中粒度)                                    ３５．０ｋｇ
コーンシロップ  ４３°ボーメ                  ２１．０ｋｇ
薬剤混合物：
ポリエチレングリコール(分子量６，０００)      ２．７５ｋｇ
アスコルベート−２−ホスフェート              ５．０ｋｇ
クエン酸                                      ６０ｋｇ
ワイルドチェリー模倣フレーバ                  ６０．０ｇ
あめ基剤を調製する際、糖を水５．５リットルに溶解し、グルコース含有コーンシロップを添加し、十分に混合する。この時点で、いずれかの所望の色素を添加して、所要の色を付与してもよい。色素は、十分に溶解するものでなければならない。
上記混合物を、１２５℃に加熱した蒸気ジャケットケトルに入れる。そこから、混合物を、ポンプで貯蔵容器に入れて、連続クッカーに供給する。シロップがクッカーにおけるコイルを通過するうちに、１２５〜１５０℃の温度に到達し、その後、スチーム真空エジェクタにより、真空２８〜２９インチに維持した受け入れケトルに約６〜７分間供給する。この間に、水含量が約１％以下に減少するまで水が除去され、適当な溶融あめ基剤が形成する。次に、あめ基剤を、ゆっくりと冷却する。
薬剤、クエン酸及び模倣フレーバ(粉末状)を、ポリエチレングリコールに添加する。次に、混合物を、約９０℃で加熱することにより流動化する。得られた熱流体混合物を、溶融あめ基剤(温度を約１００℃又はそれよりもわずかに低い温度に低下させたもの)に、適当に混合しながら迅速に添加する。次に、全塊を、十分に混練した後、スピニングマシーンに移し、それをロゼンジ形成ダイに押し出す。別法として、薬剤添加溶融あめ塊を、冷却テーブルに流す。冷却テーブル上で半固体塊に固化した後、薬剤の単位投与量を投薬するためのいずれか所望の形状に成形してもよい。
実施例２４
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン治療用鼻内噴霧剤の調製
Ｎ−アセチル−Ｌ−システインを含有する鼻内噴霧剤を、生理食塩水(０．９％(ｗ／ｖ)ＮａＣｌ水溶液)１ｍｌ当たりＮ−アセチル−Ｌ−システイン３ｍｇを添加することにより調製した。
実施例２５
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン治療用鼻溶液組成物の調製
以下の成分を含有する鼻内噴霧剤を調製する。
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン        １．０ｇ
酢酸ナトリウム                      ０．３ｇ
メチルパラベン                      ０．１ｇ
プロピルパラベン                    ０．０２ｇ
塩化ナトリウム                      張性に必要な量
ＨＣｌ又はＮａＯＨ                  ｐＨ調整
純水                                総容量１００ｍｌにする量
実施例２６
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン含有咳止めドロップの調製
あめ基剤：
糖(中粒度)                                    ３５．０ｋｇ
コーンシロップ  ４３°ボーメ                  ２１．０ｋｇ
薬剤混合物：
ポリエチレングリコール(分子量６，０００)      ２．７５ｋｇ
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン                  ５．０ｋｇ
クエン酸                                      ６０ｋｇ
ワイルドチェリー模倣フレーバ                  ６０．０ｇ
あめ基剤を調製する際、糖を水５．５リットルに溶解し、グルコース含有コーンシロップを添加し、十分に混合する。この時点で、いずれかの所望の色素を添加して、所要の色を付与してもよい。色素は、十分に溶解するものでなければならない。
上記混合物を、１２５℃に加熱した蒸気ジャケットケトルに入れる。そこから、混合物を、ポンプで貯蔵容器に入れて、連続クッカーに供給する。シロップがクッカーにおけるコイルを通過するうちに、１２５〜１５０℃の温度に到達し、その後、スチーム真空エジェクタにより、真空２８〜２９インチに維持した受け入れケトルに約６〜７分間供給する。この間に、水含量が約１％以下に減少するまで水が除去され、適当な溶融あめ基剤が形成する。次に、あめ基剤を、ゆっくりと冷却する。
薬剤、クエン酸及び模倣フレーバ(粉末状)を、ポリエチレングリコールに添加する。次に、混合物を、約９０℃で加熱することにより流動化する。得られた熱流体混合物を、溶融あめ基剤(温度を約１００℃又はそれよりもわずかに低い温度に低下させたもの)に、適当に混合しながら迅速に添加する。次に、全塊を、十分に混練した後、スピニングマシーンに移し、それをロゼンジ形成ダイに押し出す。別法として、薬剤添加溶融あめ塊を、冷却テーブルに流す。冷却テーブル上で半固体塊に固化した後、薬剤の単位投与量を投薬するためのいずれか所望の形状に成形してもよい。
実施例２７
複合治療用鼻内噴霧剤の調製
グルタチオンとＮ−アセチル−Ｌ−システインとを含有する鼻内噴霧剤を、生理食塩水(０．９％(ｗ／ｖ)ＮａＣｌ水溶液)１ｍｌ当たりグルタチオン１．０ｍｇとＮ−アセチル−Ｌ−システイン２．０ｍｇとを添加することにより調製した。
実施例２８
ＧＳＳＧとアスコルベート−２−ホスフェートとの複合治療用鼻溶液組成物の調製
以下の成分を含有する鼻内噴霧剤を調製する。
アスコルベート−２−ホスフェート    ０．５ｇ
ＧＳＳＧ                            ０．５ｇ
酢酸ナトリウム                      ０．３ｇ
メチルパラベン                      ０．１ｇ
プロピルパラベン                    ０．０２０ｇ
塩化ナトリウム                      張性に必要な量
ＨＣｌ又はＮａＯＨ                  ｐＨ調整
純水                                総容量１００ｍｌにする量
実施例２９
ＧＳＨとＧＳＳＧとの複合治療用鼻溶液組成物の調製
以下の成分を含有する鼻内噴霧剤を調製する。
ＧＳＳＧ                            ０．５ｇ
ＧＳＨ                              ０．５ｇ
酢酸ナトリウム                      ０．３ｇ
メチルパラベン                      ０．１ｇ
プロピルパラベン                    ０．０２０ｇ
塩化ナトリウム                      張性に必要な量
ＨＣｌ又はＮａＯＨ                  ｐＨ調整
純水                                総容量１００ｍｌにする量
実施例３０
アスコルベート−２−ホスフェートとＮ−アセチル−Ｌ−システインとを含有する咳止めドロップの調製
あめ基剤：
糖(中粒度)                                    ３５．０ｋｇ
コーンシロップ  ４３°ボーメ                  ２１．０ｋｇ
薬剤混合物：
ポリエチレングリコール(分子量６，０００)      ２．７５ｋｇ
アスコルベート−２−ホスフェート              ２．５ｋｇ
Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン                  ２．５ｋｇ
クエン酸                                      ６．０ｋｇ
ワイルドチェリー模倣フレーバ                  ６０．０ｇ
あめ基剤を調製する際、糖を水５．５リットルに溶解し、グルコース含有コーンシロップを添加し、十分に混合する。この時点で、いずれかの所望の色素を添加して、所要の色を付与してもよい。色素は、十分に溶解するものでなければならない。
上記混合物を、１２５℃に加熱した蒸気ジャケットケトルに入れる。そこから、混合物を、ポンプで貯蔵容器に入れて、連続クッカーに供給する。シロップがクッカーにおけるコイルを通過するうちに、１２５〜１５０℃の温度に到達し、その後、スチーム真空エジェクタにより、真空２８〜２９インチに維持した受け入れケトルに約６〜７分間供給する。この間に、水含量が約１％以下に減少するまで水が除去され、適当な溶融あめ基剤が形成する。次に、あめ基剤を、ゆっくりと冷却する。
薬剤、クエン酸及び模倣フレーバ(粉末状)を、ポリエチレングリコールに添加する。次に、混合物を、約９０℃で加熱することにより流動化する。得られた熱流体混合物を、溶融あめ基剤(温度を約１００℃又はそれよりもわずかに低い温度に低下させたもの)に、適当に混合しながら迅速に添加する。次に、全塊を、十分に混練した後、スピニングマシーンに移し、それをロゼンジ形成ダイに押し出す。別法として、薬剤添加溶融あめ塊を、冷却テーブルに流す。冷却テーブル上で半固体塊に固化した後、薬剤の単位投与量を投薬するためのいずれか所望の形状に成形してもよい。
実施例３１
ＧＳＨとアスコルベート−２−ホスフェートとを含有する咳止めドロップの調製
あめ基剤：
糖(中粒度)                                    ３５．０ｋｇ
コーンシロップ  ４３°ボーメ                  ２１．０ｋｇ
薬剤混合物：
ポリエチレングリコール(分子量６，０００)      ２．７５ｋｇ
ＧＳＨ                                        ２．５ｋｇ
アスコルベート−２−ホスフェート              ２．５ｋｇ
クエン酸                                      ６．０ｋｇ
ワイルドチェリー模倣フレーバ                  ６０．０ｇ
あめ基剤を調製する際、糖を水５．５リットルに溶解し、グルコース含有コーンシロップを添加し、十分に混合する。この時点で、いずれかの所望の色素を添加して、所要の色を付与してもよい。色素は、十分に溶解するものでなければならない。
上記混合物を、１２５℃に加熱した蒸気ジャケットケトルに入れる。そこから、混合物を、ポンプで貯蔵容器に入れて、連続クッカーに供給する。シロップがクッカーにおけるコイルを通過するうちに、１２５〜１５０℃の温度に到達し、その後、スチーム真空エジェクタにより、真空２８〜２９インチに維持した受け入れケトルに約６〜７分間供給する。この間に、水含量が約１％以下に減少するまで水が除去され、適当な溶融あめ基剤が形成する。次に、あめ基剤を、ゆっくりと冷却する。
薬剤、クエン酸及び模倣フレーバ(粉末状)を、ポリエチレングリコールに添加する。次に、混合物を、約９０℃で加熱することにより流動化する。得られた熱流体混合物を、溶融あめ基剤(温度を約１００℃又はそれよりもわずかに低い温度に低下させたもの)に、適当に混合しながら迅速に添加する。次に、全塊を、十分に混練した後、スピニングマシーンに移し、それをロゼンジ形成ダイに押し出す。別法として、薬剤添加溶融あめ塊を、冷却テーブルに流す。冷却テーブル上で半固体塊に固化した後、薬剤の単位投与量を投薬するためのいずれか所望の形状に成形してもよい。
上記詳細な説明は、説明のために記載した実施例とともに本発明の原理を教示するが、本発明の実施は、以下の請求の範囲及びその等価物の範囲内にある、通常の変更、適合、修正又は削除の全てを包含することは理解されるところであろう。