(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
検査対象物質に対する呈色標識第一抗体含浸部材と前記検査対象物質に対する第二抗体とクロマト展開用膜担体と血球捕捉膜部材とを少なくとも用意し、前記呈色標識第一抗体含浸部材を前記担体の一端部に配置するとともにこの呈色標識第一抗体含浸部材の上面に前記血球捕捉膜部材としてカルボキシメチルセルロース膜を積層し、前記担体の前記一端部から離隔した位置に前記第二抗体を固定して前記検査対象物質の捕捉部位を設け、血液を灌注して前記血球捕捉膜部材を通過させることにより、これを通過した血液成分と前記呈色標識第一抗体との混合物を前記担体上に展開させるとともに、前記血液成分中の検査対象物質と前記呈色標識第一抗体との複合体を前記第二抗体に捕捉させることにより前記血液中の検査対象物質を検出することを特徴とする血中抗原検出方法。
【請求項２】
前記呈色標識第一抗体含浸部材は含浸部材に前記検査対象物質に対する呈色標識第一抗体を含浸せしめてなり、この呈色標識第一抗体含浸部材は少なくともその一端部にて前記担体の前記一端部の上に配置されてなる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記血液には予め血液凝固阻止剤が添加される請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記血液は予め希釈されている請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
クロマト展開用膜担体と、検査対象物質に対する呈色標識第一抗体含浸部材と、前記検査対象物質に対する第二抗体と、血球捕捉膜部材とを少なくとも有してなる血中抗原検出装置において、前記呈色標識第一抗体含浸部材は前記担体の一端部に配置され、前記第二抗体は前記担体の前記一端部から離隔した位置に固定されて前記検査対象物質の捕捉部位を形成し、前記血球捕捉膜部材は前記呈色標識第一抗体含浸部材の上面に積層されたカルボキシメチルセルロース膜からなることを特徴とする血中抗原検出装置。
【請求項６】
前記呈色標識第一抗体含浸部材は含浸部材に前記検査対象物質に対する呈色標識第一抗体を含浸せしめてなり、この呈色標識第一抗体含浸部材は少なくともその一端部にて前記担体の前記一端部の上に配置されてなる請求項５に記載の装置。
【請求項７】
さらに、前記血球捕捉膜部材の上面に配置された試料添加用部材を有する請求項６に記載の装置。
【請求項８】
さらに、前記担体の下流側端部の領域に載置された吸収用部材を有する請求項５〜７の何れか１項に記載の装置。
【請求項９】
クロマト法テストストリップの形態にされた請求項７に記載の装置。
【請求項１０】
前記クロマト法テストストリップは、前記試料添加用部材及び前記捕捉部位のそれぞれの上方で開口するケース内に収容されている請求項９に記載の装置。
【請求項１１】
前記クロマト法テストストリップは、希釈用の生理食塩水及び／又は血液凝固阻止剤と組み合わされたキット形態である請求項９または１０に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、イムノクロマトグラフィー法による血中抗原検出方法及び装置に関し、予め血球を除去することなく、全血を灌注して展開するだけで血液中の検査対象物質の存否の検出及び半定量ができる方法及び装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
イムノクロマトグラフィー法は、検査対象物質に対する第一抗体及び第二抗体とクロマト展開用膜担体とを用意し、第一抗体を予め呈色標識させておくとともに第二抗体をクロマト展開用膜担体上の所定位置に予め固定しておき、該呈色標識第一抗体と被検体との混合物をクロマト展開用膜担体上でクロマト展開し、検査対象物質と第一抗体との複合体を第二抗体に捕捉させ、該第二抗体固定位置における呈色の有無及び強弱を判定することにより検査対象物質の検出を行なう免疫検出法である。この方法は、操作が簡単で反応時間も短く、かかる抗体とクロマト展開用膜担体とを備えたキットがあればどこでも簡単に検査が行えるという利点がある。
【０００３】
一般的なキットは、例えば、特開平１０−３３２７００号公報や特開平１１−１０８９３１号公報に開示されている。かかるキットは、図３に示されるような細長のクロマト法テストストリップの形態で提供され、粘着シート１と、呈色標識第一抗体含浸部材（以下「標識抗体含浸部材」ともいう）２と、クロマト展開用膜担体３と、吸収用部材４と、試料添加用部材５とを備えてなる。クロマト展開用膜担体３は粘着シート１の略中央部に貼着され、呈色標識第一抗体含浸部材２はこのクロマト展開用膜担体３のクロマト展開開始部位側（図３において左側を意味し、この側を以下「上流側」と記し、その反対側を以下「下流側」と記す）の端部の上にその下流側端部を載せた状態で粘着シート１に貼着され、吸収用部材４はその上流側領域をクロマト展開用膜担体３の上に載置させた状態で、その下流側領域にて粘着シート１に貼着される。また、試料添加用部材５は、その下流側領域を呈色標識第一抗体含浸部材２の上面に積層させた状態で、その上流側領域にて粘着シート１に貼着される。第二抗体は、呈色標識第一抗体含浸部材２の下流側端部と吸収用部材４の上流側端部との間で露出されたクロマト展開用膜担体３の部分に固定され、捕捉部位３１を形成する。
【０００４】
そして、被検体は、試料添加用部材５に灌注されると、呈色標識第一抗体含浸部材２の中に浸透してそこで検査対象物質は呈色標識第一抗体と抗原抗体反応し、クロマト展開用膜担体３の下流側に浸透していく。そして、検査対象物質と呈色標識第一抗体との複合体は、第二抗体が固定された捕捉部位３１を通過するときに抗原抗体反応により第二抗体により捕捉され、そこに集積して呈色する。したがって、この呈色の有無で陽性か陰性が判定できる。かかるテストストリップは、携帯に便利で、操作し易く、一般家庭でも使用することができ、例えば、婦人尿中絨毛ゴナドトロピン（ＨＣＧ）の検出による妊娠診断用のものが市販されている。
【０００５】
ところで、近年、水環境中における内分泌かくらん化学物質（環境ホルモン）の存在をスクリーニングするために、魚類の血中ビテロジェニンを調査することが提案されている。ビテロジェニンは、エストロジェン等の刺激により魚類などの肝臓中で生合成されて血中に分泌される雌特異タンパク質であり、正常の雄にはほとんど検出されない。しかし、内分泌かくらん化学物質、特に女性ホルモン様の作用物質に曝露された雄魚は、その血中にビテロジェニンが検出されるようになることが知られている。そして、かかる血中ビテロジェニンの検出を行なうために免疫検出法を用いることが提案されている（K. Arizono, Dojin News, No. 88 (1988)）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、血中ビテロジェニンを検出するために上述のようなクロマト法テストストリップを用いようとした場合、血液をそのままテストストトリップに灌注すると、クロマト展開用膜担体全体が血球の赤色に染められ、第二抗体固定位置である捕捉部位での呈色反応を判別するのが極めて困難になる。これを避けるためには、遠心分離等の前処理操作により、採取した血液から血球を分離して血漿又は血清を得た後、該血漿又は血清をテストストリップに灌注せざるを得ない。したがって、クロマト法テストストリップの携帯性、易操作性、迅速性にもかかわらず、その特質を十分に生かしきれない。
【０００７】
また、医療現場においても、ベッドサイドおよび診療室で臨床医が採取した血液を全血のままクロマト法テストストリップに灌注して血中抗原の検出を行なうことができれば便利である。
【０００８】
本発明は、イムノクロマトグラフィー法による血中抗原検出方法及び装置において、予め血球を除去することなく、全血を灌注して展開するだけで血液成分中の検査対象物質を検出することができるようにすることを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的の下に鋭意研究した結果、血液を全血のまま血球捕捉膜を介してクロマト展開用膜担体に浸透させることにより、該血球捕捉膜に血球を捕捉させて、血漿のみをクロマト展開用膜担体に展開させることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
したがって、本発明の第一の局面によれば、検査対象物質に対する呈色標識第一抗体含浸部材と前記検査対象物質に対する第二抗体とクロマト展開用膜担体と血球捕捉膜部材とを少なくとも用意し、前記呈色標識第一抗体含浸部材を前記担体の一端部に配置するとともにこの呈色標識第一抗体含浸部材の上面に前記血球捕捉膜部材としてカルボキシメチルセルロース膜を積層し、前記担体の前記一端部から離隔した位置に前記第二抗体を固定して前記検査対象物質の捕捉部位を設け、血液を灌注して前記血球捕捉膜部材を通過させることにより、これを通過した血液成分と前記呈色標識第一抗体との混合物を前記担体上に展開させるとともに、前記血液成分中の検査対象物質と前記呈色標識第一抗体との複合体を前記第二抗体に捕捉させることにより前記血液中の検査対象物質を検出することを特徴とする血中抗原検出方法が提供される。
【００１１】
また、本発明の第二の局面によれば、クロマト展開用膜担体と、検査対象物質に対する呈色標識第一抗体含浸部材と、前記検査対象物質に対する第二抗体と、血球捕捉膜部材とを少なくとも有してなる血中抗原検出装置において、前記呈色標識第一抗体含浸部材は前記担体の一端部に配置され、前記第二抗体は前記担体の前記一端部から離隔した位置に固定されて前記検査対象物質の捕捉部位を形成し、前記血球捕捉膜部材は前記呈色標識第一抗体含浸部材の上面に積層されたカルボキシメチルセルロース膜からなることを特徴とする血中抗原検出装置が提供される。
【００１２】
クロマト展開用膜担体は、固相化抗体を保持する性質と、血液成分の展開がそれ自体の毛細管現象で自動的に行なわれる性質とを併せ持つものであればよく、例えば、セルロース類膜（濾紙、ニトロセルロース膜等）、ナイロン膜、ガラス繊維膜などが挙げられ、なかでもニトロセルロース膜が好ましい。なお、クロマト展開用膜担体の下流側端部には、通常、クロマト展開開始部位からの毛細管現象による血液成分のクロマト展開を補助するとともに、クロマト展開において捕捉部位でトラップされなかったものを吸収、保持するために、吸収用部材が連接される。この吸収用部材は、その上流側領域をクロマト展開用膜担体の上面に載置させた状態で、その下流側領域において粘着シートに貼着するとよい。吸収用部材の材料としては、液体をすみやかに吸収、保持できる材質のものであればよく、綿布、濾紙、およびポリエチレン、ポリプロピレン等からなる多孔質プラスチック不織布等を挙げることができるが、特に濾紙が最適である。
【００１３】
第一抗体及び第二抗体は、検査対象物質を抗原として常法にしたがって得ることができ、単クローン抗体及び多クローン抗体のいずれであってもよい。但し、第一抗体及び第二抗体の両者が単クローン抗体である場合は、第一抗体と第二抗体とは抗原との免疫的結合部位を異にする必要がある。単クローン抗体は、たとえば、ケラー−ミルシュタインの方法によって得られる。また、多クローン抗体は、例えば、ウサギを免疫して得た抗血清から精製して得られる。
【００１４】
第一抗体を標識する呈色標識物質としては、コロイド金属および着色ラテックスなどが挙げられる。コロイド金属の代表例としては、金コロイドなどが挙げられる。コロイド金属の粒子の大きさは、通常は、直径３〜６０nm程度とされる。着色ラテックスの代表例としては、赤色および青色などのそれぞれの顔料で着色されたポリスチレンラテックスなどの合成ラテックスが挙げられる。ラテックスとして天然ゴムラテックスのような天然ラテックスも使用することができる。着色ラテックスの大きさは、直径数拾nm乃至数百nm程度から選択することができる。これらの呈色標識物質は、市販品をそのまま使用することができるが、場合によりさらに加工し、または、それ自体公知の方法で製造することもできる。また、呈色標識としては、蛍光標識なども使用することができる。
【００１５】
第一抗体の呈色標識は、各呈色標識物質に応じた常法に従って行なわれる。たとえば、呈色標識物質が金コロイド粒子の場合には、通常は、第一抗体と金ゾルとを室温乃至常温下で数分間、長くても１０分間、混合することによって両者を物理的に結合せしめることが可能である。
【００１６】
呈色標識第一抗体含浸部材は、クロマト展開用膜担体の一端部に配置され、クロマト法テストストリップの試料注入口などに相当する部位、すなわち、クロマト展開開始部位を形成する。例えば、含浸部材に呈色標識第一抗体を含浸させ、この呈色標識第一抗体含浸部材の少なくとも一端部をクロマト展開用膜担体の上流側端部に載置するなどによって該担体に連接させればよい。含浸部材の材料としては、あらかじめ含浸部材に呈色標識第一抗体液を含浸させる際に、それをすみやかに吸収・保持・乾燥し得るものであって、かつ、クロマト展開される血液中の水分により、含浸部材の呈色標識第一抗体が容易に再溶解され、それ以降のクロマト展開がスムーズに進行するものであればよく、特にその材質を選ばない。かかる含浸部材の材料として、例えば、ガラス繊維布、セルロース類布（濾紙、ニトロセルロース等）、ポリエチレン、ポリプロピレン等の多孔質プラスチック布類が挙げられるが、特にガラス繊維布が好ましい。第二抗体は、呈色標識第一抗体含浸部材から離隔したクロマト展開用膜担体の所定位置に固定され、前記検査対象物質の捕捉部位を形成する。第二抗体の固定は、公知の方法に従い、例えば、クロマト展開用膜担体の所定位置に抗体溶液をスポット状またはライン状に塗布し、これを室温で十分に乾燥させることにより行える。
【００１７】
血球捕捉膜部材としては、カルボキシメチルセルロース膜が用いられ、具体的には、アドバンテック東洋株式会社から販売されているイオン交換濾紙ＣＭ（商品名）や、ワットマンジャパン株式会社から販売されているイオン交換セルロースペーパーなどを用いることができる。
【００１８】
血球捕捉膜部材は、呈色標識第一抗体含浸部材の上面に積層される。さらに、該血球捕捉膜部材の上面に試料添加用部材を積層するとよい。試料添加用部材としては、たとえば、多孔質ポリエチレンおよび多孔質ポリプロピレンなどのような多孔質合成樹脂のシートまたはフィルム、ならびに、濾紙および綿布などのようなセルロース製の紙または織布もしくは不織布を用いることができる。
【００１９】
しかして、血液を全血のまま試料添加用部材に灌注して血球捕捉膜部材に浸透させることにより、血液中の血球は血球捕捉膜部材により捕捉され、血球捕捉膜部材を通過した血液成分中に存在する検査対象物質は標識抗体含浸部材を通過する間に呈色標識第一抗体と抗原抗体反応することにより複合体を生成し、さらに、クロマト展開用膜担体上にクロマト展開される間に、この生成した複合体は第二抗体によって捕捉され、当該捕捉部位に集積して呈色する。そして、この捕捉部位における呈色の度合いを判定することにより、血液中検査対象物質の存否の検出及び半定量ができる。
【００２０】
本発明の検出方法は、クロマト法テストストリップの形態にされた装置を用いて簡便に実施できる。クロマト法テストストリップとは、帯状の固相担体テストストリップからなり、クロマト法テストストリップ用ケースなどに設けられた試料注入口部位に配置された試料添加用部材に検査試料を灌注することによりクロマト展開が開始され、血液成分が浸透して該テストストリップの標識抗体含浸部材に到達し、該部材の呈色標識第一抗体と免疫反応して複合体が形成され、さらに、該複合体が捕捉部位まで浸透して捕捉部位の第二抗体との免疫反応により捕捉されて、捕捉部位が呈色せしめられる装置である。上記ケースは捕捉部位に判定孔を備えており、使用者は、該判定孔から捕捉部位の呈色の有無を観察できる。クロマト法テストストリップの作成には、たとえば、特公平７−１３４６０号公報記載の方法が好適に適用される。
【００２１】
次に、本発明のクロマト法テストストリップ形態の検出装置の代表例を図面を参照してさらに具体的に説明する。すなわち、図１はクロマト法テストストリップを示し、ａは平面図、ｂはａで示されたクロマト法テストストリップの縦断面図である。図２は図１で示されたクロマト法テストストリップを収納するためのケースを示し、ａは平面図、ｂはａで示されたケースの縦断面図である。なお、図面は原理を示すためのものであり、寸法などは正確には示されていない。
【００２２】
このクロマト法テストストリップは、粘着シート１の粘着面に、クロマト展開開始部位側（図３と同様に、図面の向かって左側を意味し、この側を以下「上流側」と記し、その反対側を以下「下流側」と記す）から順次、血球捕捉膜部材７、標識抗体含浸部材２、クロマト展開用膜担体３および吸収用部材４を貼着して作成される。すなわち、図１に示されるように、帯状の粘着シート１の長手方向略中央部に帯状のクロマト展開用膜担体３を貼着し、このクロマト展開用膜担体３の上流側端部の上面に標識抗体含浸部材２の下流側端部を載せた状態で、この標識抗体含浸部材２の残りの部分を粘着シート１に貼着せしめ、さらに、血球捕捉膜部材７をこの標識抗体含浸部材２の上面に両者の下流側端部を合わせた状態で重ね合わせるとともに、この血球捕捉膜部材７の上流側部分を粘着シートに貼着せしめる。次いで、吸収用部材４を粘着シート１の上に両者の下流側端部を合わせた状態で重ね合わせて貼着するとともに、この吸収用部材４の上流側領域をクロマト展開用膜担体３の下流側領域に載置する。これにより、呈色標識第一抗体含浸部材２の下流側端部と吸収用部材４の上流側端部との間に露出されたクロマト展開用膜担体３の領域に第二抗体が固定された捕捉部位３１が形成される。さらに、血球捕捉膜部材７の上に試料添加用部材５を積層して、クロマト法テストストリップが完成される。
【００２３】
これら粘着シート１、標識抗体含浸部材２、クロマト展開用膜担体３、吸収用部材４、試料添加用部材５及び血球捕捉膜部材７はいずれも細長い長方形で帯状とされている。クロマト展開用膜担体３の色は、捕捉部位３１の呈色が明確に目視できるものであることが好ましい。たとえば、呈色標識物質が金コロイドである場合には、捕捉部位３１が陽性時に赤紫色を呈するので、クロマト展開用膜担体３の色は淡色が好ましく、白が特に好ましい。
【００２４】
上記のクロマト法テストストリップは、ケース６に収納して提供されることが好ましい。ケース６は、通常は、合成樹脂製である。ケース６は、容器本体６１と蓋体６２とからなっている。蓋体６２は上記のクロマト法テストストリップの試料添加用部材５およびクロマト展開用膜担体３の捕捉部位３１のそれぞれに対応する位置にそれぞれ開口を備え、前者は試料注入口６２１を形成し、後者は判定孔６２２として供される。
【００２５】
採取した血液は、蓋体６２の試料注入口６２１から試料添加用部材５に灌注される。灌注された該血液は試料添加用部材５に浸透して下方の血球捕捉膜部材７に移行し、該血球捕捉部材７を通過する間に血球は捕捉され、血球以外の血液成分が標識抗体含浸部材２へ移行せしめられるとともに標識抗体含浸部材２の下流側端部方向に向かって展開せしめられる。該血液成分中に検査対象物質が含有されていた場合には、このクロマト展開の間に検査対象物質と呈色標識第一抗体との免疫反応によって両者からなる呈色複合体が形成される。
【００２６】
該血液成分はさらにクロマト展開用膜担体３を下流側端部方向に向かって展開せしめられる。この呈色複合体は展開の途上において該クロマト展開用膜担体３の捕捉部位３１で捕捉されて集積せしめられ呈色する。この呈色は判定孔６２２から肉眼で観察される。本発明の検出方法によれば、通常、血液中の検査対象物質と呈色標識第一抗体との間の免疫反応ならびにこの免疫反応で生成せしめられた呈色複合体と第二抗体との間の免疫反応はいずれも数分で完結せしめられるので、検査自体は長くても１５分程度で終了する。
【００２７】
本発明の検出方法を実施する際、血球の分離とその他の血液成分の展開を容易にするために、血液には灌注する前に予め血液凝固阻止剤を添加しておくことが好ましく、また、生理食塩水などで４倍程度以上の希釈を行なうことが好ましい。血液凝固阻止剤としては、ヘパリンナトリウム、クエン酸ナトリウム、EDTA等が使用できる。このために、クロマト法テストストリップと、希釈用の生理食塩水及び／又は血液凝固阻止剤とを組み合わせてキットとすることもできる。また、判定を容易にするために、予め作成された蛋白濃度と呈色度との関係表をクロマト法テストストリップに付属させることもできる。
【００２８】
【実施例】
以下、本発明を実施例によって、さらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２９】
実施例１（金コロイド標識抗ヒトＣＲＰマウス単クローン抗体溶液および青色ラテックス標識抗ヒトＣＲＰマウス単クローン抗体溶液の作成）
（１）金コロイド溶液の調製
加熱によって沸騰させた超純水９９ｍｌに、１％（ｖ/ｗ）塩化金酸水溶液１ｍｌを加え、さらに、その１分後に１％（ｖ/ｗ）クエン酸ナトリウム水溶液１．５ｍｌを加えて加熱し５分間沸騰させた後、室温に放置して冷却した。次いで、この溶液に２００ｍＭ炭酸カリウム水溶液を加えてｐＨ９．０に調製し、これに超純水を加えて全量を１００ｍｌとして金コロイド溶液を得た。
【００３０】
（２）金コロイド標識抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体溶液の調製
試料のヒトＣＲＰ（Ｃ  Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）に対して第一抗体として使用する抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体（株式会社日本バイオテスト研究所の商品）の蛋白換算重量１μｇ（以下、抗体の蛋白換算重量を示すとき、単に、その精製蛋白質の重量分析による重量数値で示す）と上記の金コロイド溶液１ｍｌとを混合し、室温で２分間静置してこの抗体のことごとくを金コロイド粒子表面に結合させた後、金コロイド溶液における最終濃度が１％となるように１０％ウシ血清アルブミン（以下、「ＢＳＡ」と記す）水溶液を加え、この金コロイド粒子の残余の表面をことごとくこのＢＳＡでブロックして、金コロイド標識抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体溶液（以下、「金コロイド標識第一抗体」と記す）溶液を調製した。この溶液を遠心分離（５６００×Ｇ、３０分間）して金コロイド標識第一抗体を沈殿せしめ、上清液を除いて金コロイド標識第一抗体を得た。この金コロイド標識第一抗体を１０％サッカロース・１％ＢＳＡ・０．５％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）−Ｘ１００を含有する５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）に懸濁して金コロイド標識第一抗体溶液を得た。
【００３１】
（３）青色ラテックス標識抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体溶液の調製
抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体０．２５ｍｇに、１０％青色ラテックス懸濁液（青色ラテックス粒径０．２μｍ、日本ペイント株式会社の商品）を精製水で希釈して得られた１％青色ラテックス溶液１ｍｌを加えて溶解し、室温で３０分間静置して抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体をこの青色ラテックスに結合させて青色ラテックス標識抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体（以下、「青色ラテックス標識第一抗体」という）溶液を調製した。この溶液を遠心分離（５０００×Ｇ、３０分間）し、沈殿物として粗青色ラテックス標識第一抗体を得た。この粗青色ラテックス標識第一抗体を１％ＢＳＡおよび０．８５％塩化ナトリウムを含有する10ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ7.4）１ｍｌに再分散し、その懸濁液を遠心分離（５０００×Ｇ、３０分間）するという操作を３回繰り返した。このように処理された青色ラテックス標識第一抗体を１％ＢＳＡおよび０．８５％塩化ナトリウムを含有する10ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ7.4）２０ｍｌに分散せしめて、固形物として約0.05％の青色ラテックス標識第一抗体溶液を得た。
【００３２】
実施例２（ヒトＣＲＰ測定用クロマト法テストストリップの作成）
（１）金コロイドまたは青色ラテックス標識第一抗体−ヒトＣＲＰ複合体の捕捉部位
幅5ｍｍ、長さ36ｍｍの細長い帯状のニトロセルロース膜をクロマトグラフ媒体のクロマト展開用膜担体として用意した。抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第一抗体とはヒトＣＲＰとの免疫的結合部位を異にする抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第二抗体を用意し、該第二抗体3.0ｍｇ/ｍｌが含有されてなる抗体溶液0.5μｌを、このクロマト展開用膜担体におけるクロマト展開開始点とは逆方向の末端から7.5ｍｍの位置にスポット状に塗布して、これを室温で乾燥し、金コロイドまたは青色ラテックス標識第一抗体−ヒトＣＲＰ複合体の捕捉部位とした。
【００３３】
（２）金コロイドまたは青色ラテックス標識第一抗体含浸部材
5ｍｍ×15ｍｍの帯状のガラス繊維不織布に、実施例１で得られた金コロイド標識第一抗体溶液37.5μｌを含浸せしめ、これを室温で乾燥させて金コロイド標識第一抗体含浸部材とした。また、同様の帯状のガラス繊維不織布に、実施例１で得られた青色ラテックス標識第一抗体溶液37.5μｌを含浸せしめ、これを室温で乾燥させて青色ラテックス標識第一抗体含浸部材とした。
【００３４】
（３）血球捕捉膜部材
イオン交換セルロースペーパー（品名GF／CM３0、ワットマンジャパン株式会社の商品）を、血球捕捉膜部材として用意した。このセルロースペーパーは、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）からなる薄手濾紙（厚さ0.4ｍｍ）であり、カルボキシルメチル官能基の弱酸性陽イオン交換能により抗凝固血液中の血球を完全に捕捉して、血漿成分のみを通過させると考えられる。
【００３５】
（４）クロマト法テストストリップの作成
上記クロマト展開用膜担体、上記標識第一抗体含浸部材及び上記血球捕捉膜部材の他に、試料添加用部材として綿布と、吸収用部材として濾紙を用意した。そして、これらの部材を用いて、図１を参照して上述したクロマト法テストストリップを作成した。
【００３６】
実施例３（被検体におけるヒトＣＲＰの半定量的検出）
（１）クロマト展開された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液および生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液のクロマトストリップ捕捉部位での呈色度合いの肉眼判定
(1-1)各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液の調製
既知濃度のｒ（リコンビナント）ヒトＣＲＰ（オリエンタル酵母工業株式会社の商品）を生理食塩水で希釈して、それぞれ500ng／ml、1000 ng／ml、2000 ng／ml、4000 ng／ml、8000 ng／ml、16000 ng／mlおよび32000 ng／mlとした。さらに、この各ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液を生理食塩水でそれぞれ4倍希釈して、125 ng／ml、250 ng／ml、500 ng／ml、1000 ng／ml、2000 ng／ml、4000 ng／mlおよび8000 ng／mlのｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液を得た。
【００３７】
(1-2)生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液の調製
血液1ｍｌ当たりヘパリンナトリウム（片山化学工業株式会社の商品）20Ｕが添加されたヘパリン添加正常ヒト血液（血液1ｍｌ中にＣＲＰ30ｎｇ含有）に上記のｒヒトＣＲＰを添加溶解し、ｒヒトＣＲＰの濃度がそれぞれ500 ng／ml、1000 ng／ml、2000 ng／ml、4000 ng／ml、8000 ng／ml、16000 ng／ml、および32000 ng／mlになるように調製した。さらに、この各ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液を生理食塩水でそれぞれ4倍希釈して、各生理食塩水で4倍希釈されたｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液を得た。
【００３８】
(1-3)ヒトＣＲＰ測定用クロマト法テストストリップによる各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液および生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液のクロマト展開
実施例２で得られた金コロイド標識第一抗体含浸部材を有するクロマト法テストストリップの試料添加用部材に、マイクロピペットで各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液および生理食塩水で4倍希釈された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液をそれぞれ150μｌずつ添加してクロマト展開する。クロマト展開がそれぞれ15分間行われた各クロマト法テストストリップのヒトＣＲＰ第二抗体が含浸せしめられている捕捉部位で捕捉された金コロイド標識第一抗体−ｒヒトＣＲＰ複合体の捕捉量に比例して増減する赤紫色の呈色度合いを肉眼で、−（着色なし）、±（微弱な着色）、＋（明確な着色）、＋＋（著明な着色）、＋＋＋（強力な着色）の５段階に区分して判定した。その結果を表１に示した。クロマト展開後の捕捉部位における各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液および生理食塩水で４倍希釈された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液の赤紫色呈色度合いは、ともにヒトＣＲＰ含有量の増減に比例し、かつ前者と後者におけるヒトＣＲＰ濃度が同じであれば両者の呈色度合いは全く同じであった。したがって、本発明はヘパリン添加血液を血漿とすることなく、そのままクロマト法テストストリップにチャージしてクロマト展開し、該血液のおおよそのＣＲＰ含量を知ることができるため、ベッドサイドおよび診療室における臨床医によるＣＲＰの半定量的検出に有用であることが示された。
【００３９】
【表１】
0004426122.tif 000002
【００４０】
また、実施例２で得られた青色ラテックス標識第一抗体含浸部材を有するクロマト法テストストリップを用いて、上記の各濃度ｒヒトＣＲＰ含有生理食塩水溶液および生理食塩水で４倍希釈された各濃度ｒヒトＣＲＰ含有ヘパリン添加正常ヒト血液について全く同様の操作を行ってクロマト展開したとき、捕捉部位における青色の呈色度合いの肉眼判定は、上記と全く同様の結果となった。
【００４１】
（２）病院患者ヒト血液のＣＲＰの半定量的検出
(2-1)生理食塩水４倍希釈患者血漿におけるヒトＣＲＰ濃度の定量
血液１ｍｌ当りヘパリンナトリウム20Ｕが添加された１０人の病院患者ヒト血液を生理食塩水でそれぞれ４倍希釈して生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液を調製した。この各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液の半量をそれぞれ遠心分離（１５００×Ｇ、３０分間）し、その上清液からそれぞれの生理食塩水４倍希釈患者血漿を得た。この各生理食塩水４倍希釈患者血漿１０μｌにヒトＣＲＰ測定試薬エルピアエースＣＲＰ−Ｈ（株式会社ヤトロンの商品名）の構成試薬の１つである抗ヒトＣＲＰ抗体標識ラテックス懸濁液４０μｌをそれぞれ添加した。このラテックス懸濁液と生理食塩水４倍希釈患者血漿のヒトＣＲＰとの結合反応によって生じたラテックス凝集塊の形成度合いを全自動免疫測定装置ＬＰＩＡ−１００（三菱化成工業株式会社の商品）により測定した。さらに、この測定値を用いて、予め作成したエルピアエースＣＲＰ−ＨのＣＲＰ標準品溶液による標準線からこれらの各生理食塩水４倍希釈患者血漿のヒトＣＲＰ濃度をそれぞれ求めた。
【００４２】
(2-2)ヒトＣＲＰ測定用クロマト法テストストリップによる生理食塩水４倍希釈のヘパリン添加患者血液のクロマト展開
実施例２で得られた金コロイド標識第一抗体含浸部材を有するクロマト法テストストリップの試料添加用部材にマイクロピペットで上記残りの各半量の生理食塩水４倍希釈のヘパリン添加患者血液をそれぞれ１５０μｌ添加してクロマト展開した。クロマト展開がそれぞれ１５分間行われた各クロマト法テストストリップの抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第二抗体が含浸せしめられている捕捉部位で捕捉された金コロイド標識第一抗体−ヒトＣＲＰ複合体の捕捉量に比例して増減する赤紫色の呈色度合いを肉眼で、−（着色なし）、±（微弱な着色）、＋（明確な着色）、＋＋（著明な着色）、＋＋＋（強力な着色）の５段階に区分して判定した。その結果を表２に示した。
【００４３】
【表２】
0004426122.tif 000003
【００４４】
また、実施例２で得られた青色ラテックス標識第一抗体含浸部材を有するクロマト法テストストリップを用いて、この生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液について、金コロイド標識第一抗体含浸部材を有するクロマト法テストストリップの場合と全く同様の操作を行ってクロマト展開したとき、捕捉部位における青色の呈色度合いの肉眼判定は、上記と全く同様の結果となった。
【００４５】
本発明による各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液のヒトＣＲＰ半定量的検出結果と、これらの各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加患者血液から得られたそれぞれの生理食塩水４倍希釈患者血漿のヒトＣＲＰの定量試薬であるエルピアエースＣＲＰ−ＨによるヒトＣＲＰ測定値とがよく相関するので、本発明は抗凝固剤添加血液から血球を分離することなく、直ちにヒトＣＲＰを測定することが可能であり、ベッドサイドなどでの即時診断に用いることができることが示された。
【００４６】
実施例４（金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体ＩｇＧ溶液の作成）
（１）ビテロジェニンの精製
卵黄形成期の雌コイ血液7ｍｌを４℃にて１時間静置後、遠心分離（５０００×Ｇ、１５分間）し、血清2.5ｍｌを得た。この血清2.5ｍｌを氷冷した蒸留脱イオン水25ｍｌに添加して混合し、０℃にて３０分間静置して沈殿を形成せしめた後、遠心分離（２５００×Ｇ、１５分間、４℃）した。得られた沈殿を25ｍｌの水に再懸濁して遠心分離して得たペレットを、0. 5ｍｌの２％塩化ナトリウム及び0.1％アジ化ナトリウムを含有する20ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0）に溶解した。この溶液0.5ｍｌを上記トリス塩酸緩衝液で平衡化したＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂカラム（ファルマシアバイオテク株式会社の商品、１.６×６０ｃｍ）にアプライした。
【００４７】
クロマトグラフィー展開流速を１５ｍｌ／ｈｒに調節し、各１．９ｍｌのクロマトグラフィー展開フラクションを集めた。各フラクションのタンパク濃度を280ｎｍで測定し、メインピーク画分を回収することにより、精製されたビテロジェニン液約１０ｍｌを得た。このビテロジェニン液約１０ｍｌをメンブレンフィルター（ポアサイズ100ＫＤａ）からなるＡｍｉｃｏｎ  ｃｅｌｌ（アミコン株式会社の商品名）で濃縮した後に生理食塩水で透析し、約５ｍｇ／ｍｌの精製ビテロジェニン液を得た。
【００４８】
（２）抗ビテロジェニンウサギ抗血清の作成
上記の精製ビテロジェニン液を生理食塩水で希釈して1ｍｇ／ｍｌ溶液とし、この溶液0.1ｍｌに等容量のフロイント完全アジュバンドもしくはフロイント不完全アジュバンドを丹念に混合してエマルジョンとなし、フロイント完全アジュバンドエマルジョンまたはフロイント不完全アジュバンドエマルジョンを調製した。この何れかのアジュバンドエマルジョンをウサギ（日本白色、雌）背部皮下に数箇所分散投与した。何れの場合も投与は２週間間隔で行い、初回及び２回目の投与はフロイント完全アジュバンドエマルジョン各0.2ｍｌ、３回目及び最後の４回目投与はフロイント不完全アジュバンドエマルジョン各0.2ｍｌを投与した。初回のフロイント完全アジュバンドエマルジョン投与から数えて7週間目に全採血を行い、血清約50ｍｌを得、これを抗ビテロジェニンウサギ抗血清とした。
【００４９】
（３）抗ビテロジェニンウサギ抗血清のＩｇＧ精製
上記の抗ビテロジェニンウサギ抗血清10ｍｌに硫安濃度が40％になるように飽和硫安溶液を加えて混合した後遠心分離（５０００×Ｇ、１５分間）し、グロブリン粗分画の沈殿を得た。この沈殿を0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ7.4）7ｍｌに溶解し、同じ緩衝液に対して透析（４℃、１晩）して透析液７ｍｌを得た。この透析液をＩｇＧ精製用遺伝子操作プロテインＡ吸着セファロースカラムであるｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ（ファルマシアバイオテク株式会社の商品名）にアプライし、ＩｇＧ精製を行った。すなわち、ｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  ＦｌｏｗへのＩｇＧの吸着には20ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ7.4）を用い、ｒＰｒｏｔｅｉｎ  Ａ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｆａｓｔ  ＦｌｏｗからのＩｇＧの溶出展開は0.1Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ3.0）を用い、その展開速度を30ｍｌ／ｈｒ、各フラクションを1ｍｌとした。溶出された各フラクション液には、直ちに1Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ8.0）を一滴添加し、ｐＨを中性域に調整した。各フラクション液の280ｎｍによる吸光度を測定し、吸光度0.1ＡＢＳ以上のフラクション液を回収し、0.1Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ7.4）に対して透析（１晩、４℃）を行い精製ＩｇＧ溶液を得、これを精製抗ビテロジェニンウサギ抗体ＩｇＧ溶液（18ｍｌ、蛋白濃度5ｍｇ／ｍｌ）とした。
【００５０】
（４）金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体ＩｇＧ溶液の調製
上記の精製抗ビテロジェニンウサギ抗体ＩｇＧ溶液0.2μｌと実施例１の金コロイド溶液1ｍｌとを混合して、室温で２分間静置して、この抗体ＩｇＧのことごとくを金コロイド粒子表面に結合させた後、金コロイド溶液における最終濃度が１％となるように10％ＢＳＡ水溶液を加えてこの金コロイド粒子の残余の表面をことごとくＢＳＡでブロックして、金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体ＩｇＧ溶液を調製した。この溶液を後遠心分離（５６００×Ｇ、３０分間）し、遠心分離の沈殿物として金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体ＩｇＧを得た。
【００５１】
この金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体ＩｇＧを10％サッカロース・1％ＢＳＡ・0.5％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）−Ｘ１００を含有する50ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ7.4）に懸濁して、金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体ＩｇＧ溶液を得た。
【００５２】
実施例５（ビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップの作成）
実施例２のヒトＣＲＰ測定用クロマト法テストストリップの作成法に準拠して、ビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップを作成した。すなわち、ヒトＣＲＰ測定用クロマト法テストストリップにおける金コロイドまたは青色ラテックス標識第一抗体及び抗ヒトＣＲＰマウス単クローン第二抗体の代わりに精製抗ビテロジェニンウサギ抗体ＩｇＧ溶液を使用する以外はヒトＣＲＰ測定用クロマト法テストストリップの作成と全く同様にしてビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップを作成した。
【００５３】
実施例６（魚類血液におけるビテロジェニンの半定量的検出）
（１）クロマト展開された各濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液及び生理食塩水で４倍希釈された各濃度ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液のクロマトストリップ捕捉部位での呈色度合いの肉眼判定
(1-1)各濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液の調製
実施例４の精製ビテロジェニン液を生理食塩水で希釈して、それぞれ200ng／ml、400ng／ml、800 ng／ml、1600 ng／ml、3200 ng／ml、6400 ng／mlおよび12800 ng／mlとした。さらに、この各ビテロジェニン含有生理食塩水溶液を生理食塩水でそれぞれ4倍希釈して、ビテロジェニンが50 ng／ml、100 ng／ml、200ng／ml、400ng／ml、800 ng／ml、1600ng／mlおよび3200 ng／mlである各濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液を得た。
【００５４】
(1-2)生理食塩水で４倍希釈された各濃度ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液の調製
血液1ｍｌ当たりヘパリンナトリウム20Ｕが添加されたヘパリン添加正常雄コイ血液（血液中にビテロジェニンは含有されていない）に精製ビテロジェニン液を添加混合し、ビテロジェニンの濃度がそれぞれ200 ng／ml、400 ng／ml、800 ng／ml、1600 ng／ml、3200 ng／ml、6400 ng／mlおよび12800 ng／mlになるように調製した。さらに、この各ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液を生理食塩水でそれぞれ4倍希釈して、ビテロジェニンが50 ng／ml、100 ng／ml、200ng／ml、400ng／ml、800 ng／ml、1600ng／mlおよび3200 ng／mlである各濃度ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液を得た。
【００５５】
(1-3)ビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップによる各濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液および生理食塩水で4倍希釈されたビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液のクロマト展開
実施例５で得られたビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップの試料添加用部材に、マイクロピペットで各濃度ビテロジェニン含有生理食塩水溶液または生理食塩水で4倍希釈された各濃度ビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液をそれぞれ150μｌずつ添加してクロマト展開した。クロマト展開がそれぞれ15分間行われた各クロマト法テストストリップの捕捉部位で捕捉された金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体−ビテロジェニン複合体の捕捉量に比例して増減する赤紫色の呈色度合いを肉眼で、−（着色なし）、±（微弱な着色）、＋（明確な着色）、＋＋（著明な着色）、＋＋＋（強力な着色）の５段階に区分して判定した。その結果を表3に示した。
【００５６】
クロマト展開後の捕捉部位における各濃度のビテロジェニン含有生理食塩水溶液および生理食塩水で４倍希釈された各濃度のビテロジェニン含有ヘパリン添加正常雄コイ血液の赤紫色呈色度合いは、ともにビテロジェニン含有量の増減に比例し、また前者と後者におけるビテロジェニン濃度が同じ場合に両者の呈色度合いは全く同じであった。したがって、本発明はヘパリン添加血液を血漿とすることなく、そのままクロマト法テストストリップにチャージしてクロマト展開し、該血液のおおよそのビテロジェニン含量を知ることができるため、水域環境ホルモンの魚類における影響を判断するフィールドスクリーニング用キットとして使用でき、ビテロジェニンの半定量的検出に有用である。
【００５７】
【表３】
0004426122.tif 000004
【００５８】
（２）異常雄コイ血液のビテロジェニンの半定量的検出
(2-1)コイビテロジェニンＥＬＩＳＡキットによる生理食塩水４倍希釈異常雄コイ血漿におけるビテロジェニン濃度の定量
血液１ｍｌ当たりヘパリンナトリウム20Ｕが添加された１０例の異常雄コイ血液（ビテロジェニン１００ｎｇ／ｍｌ以上）を生理食塩水でそれぞれ４倍希釈して、生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液を調整した。この各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液の半量をそれぞれ遠心分離（１５００×Ｇ、３０分間）し、その上清液からそれぞれの生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血漿を得た。
【００５９】
この各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血漿のそれぞれ１００μｌずつを、コイビテロジェニンＥＬＩＳＡキット（株式会社クマモト抗体研究所の商品）の抗コイビテロジェニン抗体固定化マイクロプレートの各ウェルに加え、室温で２時間インキュベート後、コイビテロジェニンＥＬＩＳＡキットの構成試薬の一つである洗浄液を用いて各ウェル洗浄した。次に、該キットの構成試薬の一つであるＨＲＰ（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）標識抗コイビテロジェニン抗体溶液を各ウェルに１００μｌずつ加え室温で１時間インキュベート後、上記の洗浄液を用いて洗浄した。さらに、発色用基質であるＯＰＤ（オルトフェニレンジアミン）溶液を各ウェルに１００μｌずつ加え室温で１５分間発色反応を行い、492ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダーによって測定した。
【００６０】
この操作により、ＨＲＰ標識抗コイビテロジェニン抗体と生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血漿のビテロジェニンとの免疫複合体とマイクロプレートに固定化された抗コイビテロジェニン抗体との結合反応により生じたサンドイッチ型免疫複合体の形成度合いを、ＨＲＰにより触媒される発色反応により測定した。さらに、この測定値を用いて予め作成したコイビテロジェニンＥＬＩＳＡキットの構成試薬の一つであるビテロジェニン標準品溶液による標準線からこれらの各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血漿のビテロジェニン濃度をそれぞれ求めた。
【００６１】
(2-2)ビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップによる生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液のクロマト展開
ビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップの試料添加用部材に、マイクロピペットで上記残りの各半量の生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液をそれぞれ150μｌ添加してクロマト展開した。クロマト展開がそれぞれ15分間行われた各クロマト法テストストリップの抗ビテロジェニン抗体が含浸せしめられている捕捉部位で捕捉された金コロイド標識抗ビテロジェニン抗体−ビテロジェニン複合体の捕捉量に比例して増減する赤紫色の呈色度合いを肉眼で上記の５段階に区分して判定した。その結果を表４に示した。
【００６２】
【表４】
0004426122.tif 000005
【００６３】
本発明のビテロジェニン測定用クロマト法テストストリップによる各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液におけるビテロジェニンの半定量的検出結果と、これらの各生理食塩水４倍希釈ヘパリン添加異常雄コイ血液から得られたそれぞれの生理食塩水４倍希釈異常雄コイ血漿のビテロジェニンの定量試薬であるコイビテロジェニンＥＬＩＳＡキットによるビテロジェニン測定値とがよく相関するので、本発明は抗凝固剤添加血液から血球を分離することなく、直ちにビテロジェニンを測定することが可能であり、フィールドでの即時測定に用いることができる。
【００６４】
【発明の効果】
本発明によれば、全血をチャージするだけで、血液中の生体高分子及びその他の抗原性を有する成分を検出できるので、簡便かつ短時間で、しかも、高い精度で検査対象物質の存否を判定でき、また、採取された血液中に存在する検査対象物質の量も半定量することが可能である。したがって、フィールド調査の現場やベッドサイドおよび診療室での使用に好適である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ａは本発明によるクロマト法テストストリップの平面図、ｂはａで示されたクロマト法テストストリップの縦断面図。
【図２】ａは図１で示されたクロマト法テストストリップを収納するためのケースを示す平面図、ｂはａで示されたケースの縦断面図。
【図３】ａは従来のクロマト法テストストリップの平面図、ｂはａで示されたクロマト法テストストリップの縦断面図。
【符号の説明】
１  粘着シート
２  標識抗体含浸部材
３  クロマト展開用膜担体
３１  捕捉部位
４  吸収用部材
５  試料添加用部材
６  ケース
６１  容器本体
６２  蓋体
６２１  試料注入口（クロマト展開開始部位）
６２２  判定孔
７  血球捕捉膜部材
【図１】
0004426122.tif 000006
【図２】
0004426122.tif 000007
【図３】
0004426122.tif 000008