(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式(1)で表される物質又はその誘導体を検出する体臭のポテンシャルの判定方法。
【化１】
0004496213.tif 000013
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基、Ｒ2は炭素数１乃至５のアルキル基、Ｒ3は水素原子又はメチル基である。）
【請求項２】
式(1)中のＲ1がメチル基、Ｒ2がｎ-プロピル基、Ｒ3が水素原子である請求項１に記載の体臭のポテンシャルの判定方法。
【請求項３】
下記式(1)で表される物質又はその誘導体を定量することによるデオドラント剤の有効性評価方法。
【化２】
0004496213.tif 000014
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基、Ｒ2は炭素数１乃至５のアルキル基、Ｒ3は水素原子又はメチル基である。）
【請求項４】
式(1)中のＲ1がメチル基、Ｒ2がｎ-プロピル基、Ｒ3が水素原子である請求項３に記載のデオドラント剤の有効性評価方法。
【請求項５】
下記式(1a)で表される物質。
【化３】
0004496213.tif 000015
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体臭、特にアポクリン臭が発生する可能性の判定方法及びデオドラント剤の有効性の評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、清潔志向の高まりに伴い、体臭を気にする人が増えている。体臭は全身の各部から発生する臭いの総称であり、主要な発生部位としては頭部、口腔、腋窩部（わきの下）、鼠径部、足の裏等がある。その中でも、腋臭（腋窩部の臭い）の有無、強さ、質的な相違等の諸要素は全身的な体臭へ与える影響が大きく、本人又はそばに居る人に感知されやすい。そのため、本人又はそばに居る人にとって、体臭というよりは腋臭そのものが気になる場合が多い。【０００３】
腋臭は、酸っぱくて蒸れた臭いと、腋窩部に特有の臭いとからなる。酸っぱくて蒸れた臭いは、エクリン汗腺から分泌されたエクリン汗や垢などが皮膚常在菌によって分解されて発生する。この臭いは、主に炭素数２〜５の低級カルボン酸に起因するものであり、低級脂肪酸臭、又は単に酸臭と呼ばれる。腋窩部特有の臭いは、アポクリン汗腺から分泌された、たんぱく質やコレステロールを豊富に含むアポクリン汗が皮膚常在菌によって分解されて発生し、アポクリン臭、又は「わきが」などと呼ばれている（以下、アポクリン臭と呼ぶ）。【０００４】
従って、体臭、特に腋臭を気にする人にとっては、自己の腋窩部にアポクリン臭が元々どの程度あるのか、或いはデオドラント製品の使用やアポクリン汗腺の除去手術等の体臭を軽減する努力が現状において功を奏しているのかということが重要な関心事である。【０００５】
従来、自己の腋窩部におけるアポクリン臭の程度（有無又はその強さ）を知る方法としては、(1)第三者が腋窩部の臭いを嗅いで判定する官能評価試験、(2)家族内にわきが体質の人が居る、耳垢が湿っている等のアポクリン臭と相関性があると言われている関連情報をもとに類推する方法がある。【０００６】
しかし(1)の方法は、評価パネラーの主観的判断が入る余地が大きく、また嗅覚の疲労による評価誤差もあり、定量的な評価が難しい。また(2)の方法は、腋窩部のアポクリン臭を直接評価しているわけではないので、例えば、デオドラント製品の使用による腋臭の改善状況や、アポクリン汗腺の除去手術の効果等を客観的かつ定量的に判定することができない。【０００７】
また、従来、アポクリン臭の発生を抑制する効果が期待されるデオドラント剤の有効性を評価する方法としては、(1)被験者を集め、候補薬剤を腋窩部に適用し、その後に発生する臭いを嗅いで評価する方法、(2)被験者の腋窩部から汗を採取し、汗に候補薬剤を混ぜ、培養後の臭いを嗅いで評価する方法などがある。【０００８】
しかしどちらの方法も被験者への負担が大きいため、数多くの候補薬剤の有効性を同一条件下で評価するのが難しい。また評価パネラーの主観的判断が入る余地が大きく、嗅覚の疲労による評価誤差もあり、定量的な評価が難しい。さらに、候補薬剤によってアポクリン臭の発生が抑制されたのか、それともすでに発生したアポクリン臭が消臭されたのか、あるいは他の臭いによってアポクリン臭が感じられにくくなったのか区別することが難しい。従って、「アポクリンの発生を抑制する効果」を正確、効率的かつ客観的、定量的に評価することが困難である。【０００９】
本発明者らは、ヒトの腋窩部に存在する臭い成分に関する研究により、アポクリン臭の主要原因成分が、3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール、3-メルカプトヘキサン-1-オール、3-メルカプトペンタン-1-オール、3-メルカプト-2-メチルブタン-1-オール、3-メルカプト-2-メチルペンタン-1-オールに代表される、３位にチオール基を有するアルコール化合物（以下、これらの化合物を3-メルカプトアルコール化合物ともいう）であることを発見した（非特許文献１）。【００１０】
また本発明者らは、3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールは、前記の他の3-メルカプトアルコール化合物の10倍以上の質量比で存在し、アポクリン臭のある人の腋窩部からもっとも検出されやすい3-メルカプトアルコール化合物であることも発見した（非特許文献１）。【００１１】
さらに本発明者らは、前記の3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールは(S)-3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール72質量％と(R)-3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール28質量％とからなる光学活性物質であることも発見した（非特許文献１）。【００１２】
特許文献１には、フレーバーリング成分として、3-メルカプト-2-メチルブタン-1-オールは草様、リーキ様及びガス様の特徴を有し、3-メルカプトヘキサン-1-オールは、Ｓ体が草様、田舎風の匂い、Ｒ体がグレープフルーツ／パッションフルーツ、スグリ、玉葱様の匂いを有することが記載されている。【００１３】
【非特許文献１】日本味と匂学会誌, 10巻, ３号, 807-810頁（2003年12月）
【特許文献１】特開2001-2634号公報
【発明の開示】
【００１４】
本発明は、後記式(1)で表される物質を検出することで、体臭、特に腋窩部において潜在するアポクリン臭、すなわち、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を客観的かつ定量的に判定できるようにしたものである。さらに、前記3-メルカプトアルコール化合物を指標とすることで、腋窩部におけるアポクリン臭の程度（有無又はその強さ）を客観的かつ定量的に判定することができる。
【００１５】
また本発明は、後記式(1)で表される物質を定量することで、体臭、特に腋窩部におけるアポクリン臭の発生を抑制する効果が期待されるデオドラント剤の有効性を正確で効率的かつ客観的、定量的に評価できるようにしたものである。
【００１６】
すなわち本発明は、下記式(1)で表される物質を検出する体臭のポテンシャルの判定方法である。
【００１７】
【化１】
0004496213.tif 000002
【００１８】
（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基、Ｒ2は炭素数１乃至５のアルキル基、Ｒ3は水素原子又はメチル基である。）
【００１９】
また、本発明は、前記式(1)で表される物質を定量することによりデオドラント剤の有効性を評価する方法でもある。
【００２０】
前記式(1)で表される物質は、アミノ基及びカルボキシ基を有している。式(1)で表される物質は、生体の内外において、アミノ基及び／又はカルボキシ基が塩を形成している状態、又はアミノ基及び／又はカルボキシ基が、各種アミノ酸、各種アミノ酸からなるペプチド、或いは各種アミノ酸からなるタンパク質とペプチド結合を形成し、より高分子量の状態で存在していると推定される。
【００２１】
本発明は、前記式(1)で表される物質の誘導体、すなわち、当該物質のアミノ基及び／又はカルボキシ基が塩を形成した誘導体（例えば、塩酸塩や金属塩など）、又は前記のアミノ基及び／又はカルボキシ基に各種アミノ酸がペプチド結合した誘導体（例えば、ジペプチドなど）、又は前記のアミノ基及び／又はカルボキシ基に各種アミノ酸から選ばれる少なくとも１種類を２分子以上脱水縮合してなる原子団がペプチド結合した誘導体（例えば、トリペプチドやオリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質など）を検出する体臭のポテンシャルの判定方法、及びこれら誘導体を定量することによりデオドラント剤の有効性を評価する方法でもある。
【００２２】
また本発明は、前記の式(1)で表される物質及び／又はその誘導体に対して、特に官能基の部分に化学修飾を施し、化学修飾された前記の式(1)で表される物質及び／又はその誘導体を検出することで、式(1)で表される物質又はその誘導体を高感度で検出することができるようにし、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）の判定、及びデオドラント剤の有効性評価を、より客観的かつ定量的に行うことができるようにしたものである。
【００２３】
本発明は、前記の式(1)で表される物質のアミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基から選ばれる少なくとも一つに可視及び紫外線吸収を持つ発色団、又は蛍光を発する性質を有する発色団が導入されたものを検出する体臭のポテンシャルの判定方法、及びデオドラント剤の有効性評価方法でもある。また本発明は、前記の式(1)で表される物質の誘導体の少なくとも一つの官能基に可視及び紫外線吸収を持つ発色団、又は蛍光を発する性質を有する発色団が導入されたものを検出する体臭のポテンシャルの判定方法、及びデオドラント剤の有効性評価方法でもある。
【００２４】
さらに本発明は、下記式(1a)で表される物質を提供する。
【００２５】
【化２】
0004496213.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】1a：アポクリン臭がある人の汗のノーマルイオンスキャン（Q3スキャン）の結果である。1b：アポクリン臭がある人の汗のプロダクトイオンスキャン（m/z＝236）の結果である。1c：保持時間4.25分のピークのMS/MSスペクトルである。
【図２】2a：2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（合成品）のノーマルイオンスキャン（Q3スキャン）の結果である。2b：2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（合成品）のプロダクトイオンスキャン（m/z＝236）の結果である。2c：保持時間4.25分のピークのMS/MSスペクトルである。
【図３】3a：アポクリン臭がない人の汗のノーマルイオンスキャン（Q3スキャン）の結果である。3b：アポクリン臭がない人の汗のプロダクトイオンスキャン（m/z＝236）の結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明者らは、アポクリン臭が発生する可能性があるにもかかわらず、外部環境（季節、気温、湿度）などの影響によって、実際にはアポクリン臭が発生していない状態、すなわち、アポクリン臭が潜在化している（顕在化していない）状態において、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を客観的かつ定量的に判定する方法に関して研究を行った。
【００２８】
そして本発明者らは、アポクリン臭がある人の腋窩部から、アポクリン臭の主要原因物質である前記の3-メルカプトアルコール化合物に変化する前段階の物質（以下、前駆体ともいう）として、式(1)で表される物質を発見した。前記前駆体自身は臭いのないものであり、この点で、硫黄様の生臭く動物的な臭いを有する3-メルカプトアルコール化合物とは大きく異なる。
【００２９】
さらに本発明者らは、式(1)で表される物質は皮膚上の微生物の作用などによりアポクリン臭の主要原因物質である3-メルカプトアルコール化合物に変化することを確認した。また、アポクリン臭がある人の腋窩部には前記3-メルカプトアルコール化合物が存在し、その含有量はアポクリン臭の強さと正比例することを発見した。
【００３０】
本発明は、式(1)で表される物質を検出することで、腋臭、特にアポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を客観的且つ定量的に判定する方法、及び腋臭、特にアポクリン臭の発生を抑制する効果が期待されるデオドラント剤の有効性を正確で効率的かつ客観的、定量的に評価する方法、並びに、式(1a)で表される新規な物質に関するものである。
【００３１】
本発明によると、アポクリン臭の主要原因物質に変化する前段階の物質である式(1)で表される物質又はその誘導体を検出することで、体臭、特に腋窩部において潜在するアポクリン臭、すなわち、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を客観的かつ定量的に判定することができる。また、アポクリン臭の発生を抑制する効果が期待されるデオドラント剤の有効性を正確で効率的かつ客観的、定量的に評価することができる。
【００３２】
式(1)で表される物質とヒトの腋窩部におけるアポクリン臭とは以下のような関係がある。
【００３３】
ｉ） 式(1)で表される物質は、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）のある人の腋窩部に存在する無臭の物質である。
【００３４】
ii） 式(1)で表される物質は、皮膚上の微生物の作用などによって、アポクリン臭の主要原因成分であり、硫黄様の生臭く動物的な臭いを有する3-メルカプトアルコール化合物に変化する。
【００３５】
前記の3-メルカプトアルコール化合物とは、3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール、3-メルカプトヘキサン-1-オール、3-メルカプトペンタン-1-オール、3-メルカプト-2-メチルブタン-1-オール、3-メルカプト-2-メチルペンタン-1-オールに代表される、３位にチオール基を有するアルコール化合物であり、下記式(2a)〜(2e)で表される。これらはアポクリン臭によく似た臭いを有している。
【００３６】
【化３】
0004496213.tif 000004
【００３７】
アポクリン臭がある人の腋窩部から検出される前記の3-メルカプトアルコール化合物は、式(1)で表される物質が皮膚上の微生物の作用などにより分解されて生成したものである。
【００３８】
アポクリン臭がある人の腋窩部には、前記式(2a)〜(2e)で表される物質だけでなく、これらに化学構造の類似した物質も存在していると推定される。
【００３９】
またアポクリン臭がある人の腋窩部における前記の3-メルカプトアルコール化合物の存在量はアポクリン臭の強さと正比例する。すなわち、前記3-メルカプトアルコール化合物は、ヒトの腋窩部におけるアポクリン臭の主要原因物質である。
【００４０】
さらに、アポクリン臭がある人の腋窩部においては、前記式(2a)で表される3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールは、前記式(2b)〜(2e)で表される物質の10倍以上の質量比で存在し、アポクリン臭がある人の腋窩部からもっとも検出されやすいものである。すなわち、前記3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールは、人間の腋窩部におけるもっとも主要なアポクリン臭原因物質である。
【００４１】
そして、アポクリン臭が発生する可能性がある人の腋窩部から本発明者らが発見した、下記式(1a)で表される新たな物質：2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸は、前記のもっとも主要なアポクリン臭原因物質：3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールに変化する前段階の物質（前駆体ともいう）である。
【００４２】
【化４】
0004496213.tif 000005
【００４３】
上記式(1a)で表される前駆体自身は臭いのないものであり、この点で、硫黄様の生臭く動物的な臭いを有する3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールとは大きく異なる。この前駆体は、アポクリン臭がある人の腋窩部においてもっとも存在量の多い3-メルカプトアルコール化合物である3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール(2a)の骨格とα-アミノ酸の骨格とを有している。
【００４４】
前記前駆体は、前記の3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールのチオール基と、セリン（又はシステイン）のヒドロキシ基（又はチオール基）とから水（又はＨ2Ｓ）が取れて生成した、臭い物質とα-アミノ酸との縮合体であると推定される。
【００４５】
そして、前記式(1a)で表される物質はアポクリン臭がある人の腋窩部において、皮膚上の微生物の作用などにより、もっとも主要なアポクリン臭原因物質である3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール(2a)に変化する。
【００４６】
従って、式(1)で表される物質の中でも、前記式(1a)で表される２-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸は、アポクリン臭のある人の腋窩部に比較的多く存在し、検出しやすいという点と、皮膚上の微生物の作用などによりもっとも主要なアポクリン臭原因物質である3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールに変化するという点から、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を判定するための物質として特に適している。この物質については報告例、単離例がなく、かつ体臭のポテンシャルを判定するための指標物質として特に有用である。また、同様の理由から、腋臭、特にアポクリン臭に対するデオドラント効果が期待される物質の有効性を評価するための指標物質としても特に有用である。
【００４７】
本発明者らがアポクリン臭のある人の腋窩部から発見した、前記式(2b)〜(2e)で表される物質も、臭い物質に変化する前段階では、下記式(1b)〜(1e)で表される物質として存在していると推定される。またこれらの前駆体が皮膚上の微生物の作用などにより前記式(2b)〜(2e)で表される物質に変化すると推定される。
【００４８】
【化５】
0004496213.tif 000006
【００４９】
アポクリン臭がある人の腋窩部には、上記式(1a)〜(1e)で表される物質だけでなく、これらに化学構造の類似した物質も存在していると推定される。
【００５０】
腋窩部において、式(1)で表される物質が存在しているにも拘わらず、アポクリン臭の主要原因物質である前記式(2)で表される物質に変化していない状態においては、アポクリン臭が潜在している（顕在化していない）ことになる。したがって、本発明では、式(1)で表される物質を検出することで、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を客観的かつ定量的に判定することができる。また、式(1)で表される物質を定量することで、デオドラント剤の有効性を客観的かつ定量的に評価することができる。
【００５１】
アポクリン臭がある人の腋窩部から本発明者らが発見した前記式(1a)で表される物質：2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸は、アミノ基及びカルボキシ基を有している。
【００５２】
なお、式(1)で表される物質はアミノ酸の誘導体であるので、pH条件によって、アミノ基は-ＮＨ2又は-ＮＨ3+、カルボキシ基は-ＣＯＯＨ又は-ＣＯＯ-の形で存在し得る。
【００５３】
式(1)中のアミノ基は、生体の内外において、塩（例えば、塩酸塩）の状態、又はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、アルギニンから選ばれるα-アミノ酸がペプチド結合した状態、又は前記アミノ酸から選ばれる少なくとも１種類を２分子以上脱水縮合してなる原子団がペプチド結合した状態等で存在していると推定される。
【００５４】
また、式(1)中のカルボキシ基は、生体の内外において、塩（例えば、金属塩）の状態、又は前記アミノ酸がペプチド結合した状態、又は前記アミノ酸から選ばれる少なくとも１種類を２分子以上脱水縮合してなる原子団がペプチド結合した状態で存在していると推定される。
【００５５】
すなわち、式(1)で表される物質は、その構造に含まれるアミノ基及びカルボキシ基の部分において、塩を形成している状態、又は、他のペプチドあるいはタンパク質と結合した状態で存在していると推定される。
【００５６】
したがって、本発明においては、式(1)で表される物質のアミノ基における誘導体、すなわち、塩（例えば、塩酸塩など）、又はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、アルギニンから選ばれるα-アミノ酸がペプチド結合した物質（例えば、ジペプチドなど）、又は前記アミノ酸から選ばれる少なくとも１種類を２分子以上脱水縮合してなる原子団がペプチド結合した物質（例えば、トリペプチドやオリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質など）を検出することで、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を判定することもできる。また、式(1)で表される物質のアミノ基における誘導体を定量することで、デオドラント剤の有効性を客観的かつ定量的に評価することができる。
【００５７】
また本発明においては、式(1)で表される物質のカルボキシ基における誘導体、すなわち、塩（例えば、金属塩など）、又は前記アミノ酸がペプチド結合した物質（例えば、ジペプチドなど）、又は前記アミノ酸から選ばれる少なくとも１種類を２分子以上脱水縮合してなる原子団がペプチド結合した物質（例えば、トリペプチドやオリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質など）を検出することで、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を判定することもできる。また、式(1)で表される物質のカルボキシ基における誘導体を定量することで、デオドラント剤の有効性を客観的かつ定量的に評価することができる。
【００５８】
このように、本発明で検出・定量の対象とする式(1)で表される物質の誘導体には、上記の誘導体を含むこともできる。
【００５９】
本発明は、式(1)で表される物質又はその誘導体に加えて、下記式(2)で表される物質をさらに検出することで、体臭を判定することもできる。
【００６０】
【化６】
0004496213.tif 000007
【００６１】
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ意味を示す。）
【００６２】
式(2)で表される物質は、前記式(2a)〜(2e)で表される物質に代表され、前記式(1)で表される物質が皮膚上の微生物の作用などにより分解されて生成したものであり、アポクリン臭の主要原因物質である。
【００６３】
従って、前記式(1)で表される物質に加えて、アポクリン臭の主要原因物質である式(2)で表される物質をさらに検出することで、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）とすでに発生したアポクリン臭の程度（有無及び強さ等）とをより総合的に客観的かつ定量的に判定することもできる。
【００６４】
本発明は、下記式(3)〜(6)で表される物質をさらに検出することで体臭を判定することもできる。
【００６５】
【化７】
0004496213.tif 000008
【００６６】
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ意味を示す。）
【００６７】
式(5)及び(6)で表される物質は、それぞれ、式(3)及び(4)で表される物質が皮膚上の微生物の作用などにより分解されて生成したものであり、アポクリン臭の原因物質である。
【００６８】
従って、前記式(5)及び(6)で表されるアポクリン臭の原因物質に変化する前段階の物質である式(3)及び(4)で表される物質をさらに検出することで、潜在するアポクリン臭、すなわち、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）をさらに客観的かつ定量的に判定することもできる。
【００６９】
また、アポクリン臭の原因物質である前記式(5)及び(6)で表される物質をさらに検出することで、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）とすでに発生したアポクリン臭の程度（有無及び強さ等）とをさらに総合的に客観的かつ定量的に判定することもできる。
【００７０】
以下、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体を検出することにより、体臭を判定する具体的な方法について説明する。
【００７１】
本発明に係る体臭の判定方法は、特に限定されないが、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が腋窩部に存在するかどうかを様々な化学的、物理的、生物学的等の分析手法によって解析し、その解析結果に基づいて体臭を判定することもできる。
【００７２】
例えば、(1)腋窩部に存在する物質を採取し、(2)それらの中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれているかどうかを定性的に解析し、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれている場合には、それらの存在量を定量的に解析し、それらの総合的な解析結果に基づいて体臭を判定することもできる。
【００７３】
腋窩部に存在する物質を採取する方法としては、脱脂綿等の布帛により腋窩部をこする方法、腋窩部に生理食塩水等を吹き付けた後、脱脂綿等の布帛により拭き取る方法、腋窩部に綿パッドを一定時間挟んでおく方法、腋窩部に当たる部分に綿パッドが縫い付けられた肌着やＴシャツを一定時間着用する方法などが挙げられ、これらの方法は、１つ又は２つ以上を組み合わせて適用することもできる。
【００７４】
また、腋窩部における発汗を促進させる方法として、ランニングや筋力トレーニング等の運動負荷を与える方法、サウナ等の高温環境室に入り、温度負荷を与える方法、暗算をさせる、恐怖映画を鑑賞させる等の精神的負荷（ストレス）を与える方法、腋窩部の皮膚内外にトウガラシエキス等の血行促進剤やエピネフリン等の汗腺刺激剤を塗布又は注射する方法等が挙げられ、これらの方法は、１つ又は２つ以上を組み合わせて適用することもできる。
前記の腋窩部に存在する物質を採取する方法と前記の腋窩部における発汗を促進させる方法とを組み合わせて適用することもできる。
【００７５】
本発明は、式(1)で表される物質を検出しやすくするために、式(1)で表される物質とそれ以外の物質との化学的諸性質の違い等を利用して、前記の方法によって腋窩部から採取した分析試料に対して様々な精製・濃縮手段を講じることもできる。
【００７６】
例えば、式(1)で表される物質は、水に溶けやすく油に溶けにくい性質を有している。従って、水又は油への溶解度の差を利用して、油溶成分と分離し、分析試料中の式(1)で表される物質の濃度を高めることもできる。
【００７７】
詳しくは、前記の腋窩部に存在する物質を採取する方法によって採取した試料から皮脂由来のトリグリセリド、高級脂肪酸エステル等の油溶性物質を取り除くためには、採取した試料に対して、例えば、水に溶けにくく、油を溶かし易い、ヘキサン、ペンタン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル等の有機溶媒を加えて良く混合して、試料中に含まれる油溶性物質を前記有機溶媒に溶解させた後、遠心分離等の手段を利用して水層と有機層とに分層し、分析試料から溶媒と共に油溶成分を取り除くことにより、式(1)で表される物質を検出しやすくすることもできる。
【００７８】
本発明は、式(1)〜(6)で表される物質を化学的、或いはその他の手法によって合成し、合成品を標準物質（スタンダード）として利用することもできる。
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はその誘導体は、以下に例示するように、化学合成が可能な物質であり、一定品質の合成品を安定供給することができる。
【００７９】
例えば、式(1)及び式(2)で表される物質は下記反応式(7)に従って合成可能である。すなわち、不飽和構造を有する脂肪酸エステル誘導体(a)を原料とし、ベンジルメルカプタン等を付加導入して３位にチオエーテル構造を有する脂肪酸エステル誘導体(b)とし、これを水素化リチウムアルミニウム等の還元剤を用いて還元し、３位にチオエーテル構造を有するアルコール誘導体(c)とする。
【００８０】
引き続き、バーチ還元によりベンジル基を脱離させることで、式(2)で表される3-メルカプトアルコール化合物を合成することができる。そして、この3-メルカプトアルコール化合物とアミノ基がtert-ブトキシカルボニル基（Boc基）で保護された3-クロロアラニンとを縮合させることで、チオエーテル構造を有するα-アミノ酸誘導体(d)とした後、酸（トリフルオロ酢酸など）で処理して保護基を取り除くことによって、式(1)で表される物質を合成することができる。
【００８１】
【化８】
0004496213.tif 000009
【００８２】
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、前記と同じであり、Ｒ4はアルキル基、Ｒ5はベンジル基である。）
【００８３】
式(1)で表される物質は、α-アミノ酸の骨格を有している。本物質はヒトの腋窩部から発見された成分であり、そのα炭素の立体配置はＬ-配置であるが、式(1)で表される物質を化学合成して、体臭の評価に用いる場合には、立体配座は特に限定されず、Ｌ-配置のアミノ酸だけでなく、Ｄ-配置のアミノ酸、或いはそれらが任意の割合で混合されたアミノ酸を原料として用いることもできる。例えば、前記の例示した合成法における、3-クロロアラニンとしては、L-3-クロロアラニン、D-3-クロロアラニン、DL-3-クロロアラニン、或いは、それらが任意の割合で混合された3-クロロアラニンを使用することもできる。
【００８４】
また式(1)で表される物質は、アポクリン臭の主要原因物質である3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールの骨格を有している。
【００８５】
アポクリン臭の主要原因物質である3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールは、(S)-3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール72質量％と(R)-3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール28質量％とからなる光学活性物質であるが、式(2)で表される物質を化学合成し、体臭の評価に用いる場合には、特に限定されず、遷移金属等の不斉触媒を利用した不斉合成技術により(S)体或いは(R)体のみを選択的に合成し、どちらかのみを利用することもできるし、それらを任意の割合で混合したものを利用することもできる。
【００８６】
また(S)体50質量％と(R)体50質量％とからなるラセミ体として合成し、そのまま利用することもできるし、結晶化法やクロマトグラフィー法に代表される物理的、化学的、或いは生物学的な光学分割技術により(S)体と(R)体とを分離し、どちらか一方のみを使用することもできるし、(S)体と(R)とを任意の割合で混合したものを利用することもできる。
【００８７】
同様に、式(1)で表される物質を化学合成する際には、原料として用いる式(2)で表される物質：3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールの立体配座は特に限定されず(S)体と(R)体のどちらか一方のみを使用することもできるし、(S)体と(R)とが任意の割合で混合されたものを使用することもできる。
【００８８】
式(1)で表される物質は、２つの不斉炭素原子を有しているので、それらに由来する最大４種類の異性体が存在し得るが、式(1)で表される物質は、これらの立体配座について特に限定されず、任意の割合で混合された合成品をそのまま利用することもできる。また、様々な分離精製手段を用いて各異性体を分離した後、それらのうちのいずれか一つを利用することもできるし、それらのうちの二つ以上が任意の割合で混合されたものを利用することもできる。
【００８９】
式(1)〜(6)で表される物質を検出する体臭の判定方法としては、これらの物質そのものを検出することによって実施可能であるほか、これらの物質の誘導体を検出することによっても実施できる。また、前記物質そのものと誘導体の両方を検出することによっても実施可能である。
【００９０】
本発明における、腋窩部から採取した物質の中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれているかどうかを定性的及び／又は定量的に解析する方法は、特に限定されないが、例えば、クロマトグラフィー法による分離分析法、モノクロナール抗体等を利用する免疫化学的測定法（イムノアッセイとも呼ばれる）、さらに検出段階においての増幅や超高感度化を目的として、化学発光法、化学増幅法、電気化学的計測方法等を適用することもできる。
【００９１】
本発明において利用することができるクロマトグラフィー法としては、特に限定されないが、具体的には、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、電気泳動等を挙げることもできる。
【００９２】
液体クロマトグラフィー法は、固定相と移動相への親和性の差により溶質を分離する方法であり、本発明においては、様々な分離機構（溶質と固定相との相互作用）を適用することもできる。例えば、吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー（ゲルろ過クロマトグラフィー、又はゲル浸透クロマトグラフィー）等を利用することもできる。
【００９３】
より詳しくは、例えば、吸着カラムクロマトグラフィーでは、溶質が固定相に物理的或いは化学的に吸着する際の吸着係数の違いによって分離を行うことができ、各成分がカラム内で分離されて各成分に固有の時間だけカラム内に保持された（保持時間という）後、カラム外に溶出されて検出器を通過する。また、サイズ排除クロマトグラフィーでは、立体網目構造の多孔性固定相中に溶質分子がその大小に応じて排除又は浸透される程度の差によって分離を行うことができる。
【００９４】
そして、合成品及びヒト由来の試料から得られるクロマトグラムの保持時間及び検出器から得られる各クロマトピークのスペクトル情報を参考にして、腋窩部から採取した物質の中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれているかどうかを定性的に解析することもできる。
【００９５】
例えば、クロマトグラフィー法における検出器として質量分析計（MS）が単独又は２つ以上連結されたものを用いる場合には、カラム上で分離された各成分について、各成分の分子量及び分子構造に由来するマススペクトル情報（フラグメンテーションパターン、開裂パターンともいう）を得ることができる。マススペクトル情報は、各物質に固有のものであることから、それらを参考にして、腋窩部から採取した物質の中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれているかどうかを定性的に解析することができる。
【００９６】
また、クロマトグラフィー法における検出器として可視・紫外吸収分光計（Vis/UV）、赤外分光計（IR）、ラマン分光計、核磁気共鳴分光計（NMR）から選ばれる検出器が単独又は２つ以上連結されたものを用いる場合には、カラム上で分離された各成分について、各成分の分子構造に由来する可視・紫外吸収（Vis/UV）スペクトル、赤外（IR）スペクトル、ラマンスペクトル、核磁気共鳴分光計（NMR）スペクトルを得ることができる。前記のスペクトル情報は、各物質に固有のものであることから、それを参考にして、腋窩部から採取した物質の中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれているかどうかを定性的に解析することができる。
【００９７】
クロマトグラフィー法による分離分析装置においては、クロマトグラムにおけるピークの大きさ（面積）はそのピークに由来する物質の濃度と比例する。従って、腋窩部から採取した物質の中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれている場合には、それらに由来するクロマトピークの面積を参考にして、前記の式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の含有量を定量的に解析することもできる。
【００９８】
式(1)で表される物質の合成品を標準物質（スタンダード）として用いる場合には、前記標準物質を用いて様々な濃度領域における検量線を作製してもよく、この検量線を使用して、採取した試料中に含まれる式(1)で表される物質の量を換算することもできる。
【００９９】
すなわち、クロマトグラフィー法による分離分析装置においては、検出器から得られるスペクトル情報を参考にして腋窩部から採取した物質の中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれているかどうかを定性的に解析することができるだけでなく、クロマトグラムにおけるピークの大きさ（面積）を参考にして、それらの存在量を定量的に解析することもできる。そして、それらの総合的な解析結果に基づいて体臭を判定することもできる。
【０１００】
クロマトグラフィー法による分離分析装置を利用して、腋窩部から採取した物質の中に式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体が含まれているかどうかを定性的に解析する場合及び／又はそれらの存在量を定量的に解析する場合には、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の分析における選択性及び検出感度の向上を目的として、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体に対して化学修飾を施し、化学修飾された式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体を検出することで体臭を判定することもできる。また、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体と化学修飾された式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の両方を検出することで体臭を判定することもできる。
【０１０１】
クロマトグラフィー法において、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体に対して、特に官能基の部分において化学修飾を施し、化学修飾された式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体を検出する方法としては、特に限定されないが、例えば、腋窩部から採取した物質と化学修飾を施すための試薬（以下、化学修飾試薬ともいう）とを反応させ、化学修飾を施した後、化学修飾された式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体をクロマトグラフィー法により分離し、検出することもできる（以下、「プレカラム修飾法」ともいう）。また、腋窩部から採取した物質に含まれる式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体をクロマトグラフィー法により分離した後、化学修飾を施すための試薬を添加し、化学修飾された式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体を検出することもできる（以下、ポストカラム修飾法ともいう）。さらに、プレカラム修飾法とポストカラム修飾法とを組み合わせて適用することもできる。
【０１０２】
クロマトグラフィー法において、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体を高感度で検出するために、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体に対して化学修飾を施す方法としては、特に限定されないが、例えば、液体クロマトグラフィー法においては、前記の式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の分子構造に含まれる官能基（具体的には、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、カルボニル基、チオール基、アミド基など）の少なくとも一つに対して、検出感度を向上させる発色団（可視・紫外吸収領域に吸収を持つ化合物や蛍光を発する形質を有する化合物など）を導入する方法、化学発光、電気化学活性などを利用する方法等を挙げることもできる。ガスクロマトグラフィー法においては、与えられた温度内で気化可能な化合物への誘導する方法等を挙げることもできる。
【０１０３】
前記の式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の分子構造に含まれる官能基（具体的には、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、カルボニル基、チオール基、アミド基など）の少なくとも一つに対して、検出感度を向上させる原子団を導入する方法としては、特に限定されないが、例えば、各種化学反応を利用して、検出感度を向上させる発色団を導入することもできる。
【０１０４】
より具体的には、例えば、式(1)で表される物質のアミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基に可視及び紫外線吸収を持つ発色団、又は蛍光を発する性質を有する発色団が導入された代表的な例としては、下記式(8)で表される物質を挙げることもできる。
【０１０５】
【化９】
0004496213.tif 000010
【０１０６】
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ意味を示し、Ｘ1は、式(1)で表される物質のアミノ基に発色団が導入された代表例であり、Ｘ2は、式(1)で表される物質のカルボキシ基に発色団が導入された代表例であり、Ｘ3は、式(1)で表される物質のヒドロキシ基に発色団が導入された代表例である。）
【０１０７】
例えば、式(1)で表される物質のアミノ基は、スルホンアミド、カルボアミド、チオ尿素、アミン、或いは、その他の形に変換することもできる。同様に、式(1)で表される物質のカルボキシ基は、エステル、イソ尿素、尿素、或いは、その他の形に変換することもできる。ヒドロキシ基は、エーテル、ウレタン、エステル、或いは、その他の形に変換することもできる。
【０１０８】
すなわち、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の分子構造に含まれる官能基（具体的には、アミノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基、カルボニル基、チオール基、アミド基など）の少なくとも一つに対して、検出感度を向上させるために、可視及び紫外線吸収を持つ発色団、又は蛍光を発する性質を有する発色団を導入する際には、特に限定されないが、例えば、ニトロフェノール、ジニトロフェノール、アゾベンゼン、クマリン、2,1,3-ベンゾオキサジアゾール、ナフタレン、アクリジン、フルオレセイン及びその類似体、或いは、その他の発色団を利用することもでき、また、前記の官能基は、前記式(8)中に例示した、Ｘ1〜Ｘ3の置換基と同じ又はそれらに類似した形に変換することもできる。
【０１０９】
各種化学反応を利用して、前記の式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の分子構造に含まれる官能基の少なくとも一つに対して、検出感度を向上させる発色団を導入する方法としては、特に限定されないが、市販の化学修飾試薬（誘導体化試薬とも呼ばれる）を利用することもできるし、必要に応じて、前記の式(1)〜(6)で表される物質に適用できる化学修飾試薬を適宜新たに合成し、利用することもできる。
【０１１０】
以下、本発明において利用可能であり、代表的な市販の化学修飾試薬（誘導体化試薬とも呼ばれる）について例示する。
【０１１１】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のアミノ基に発色団（可視及び／又は紫外吸収）を導入するために利用可能な試薬としては、例えば、(a)塩化アシル、(b)アリルスルホニルクロリド、(c)ニトロベンゼン、(d)イソシアナート或いはイソチオシアナート等を挙げることができる。
【０１１２】
具体的には、(a)塩化アシルとしては、p-メトキシベンゾイルクロリド、m-トルオイルクロリド、p-ニトロベンゾイルクロリド、塩化ベンゾイル等を挙げることもできる。(b)アリルスルホニルクロリドとしては、トルエンスルホニルクロライド（TSCl）、ベンゼンスルホニルクロリド（BSCl）、ジメチルアミノアゾベンゼンスルホニルクロリド（DABSCl）等を挙げることができる。
【０１１３】
(c)ニトロベンゼンとしては、1-フルオロ-2,4-ジニトロベンゼン（FDNB）、トリニトロベンゼンスルホン酸（TNBS）、4-フルオロ-3-ニトロベンゾトリフルオリド（FNBT）等を挙げることもできる。(d)イソシアナート、或いはイソチオシアナートとしては、フェニルイソシアナート（PIC）、ナフチルイソシアナート（NIC）、フェニルイソチオシアナート（PITC）、ナフチルイソチオシアナート（NITC）、4-N,N′-ジメチルアミノアゾベンゼン-4′-イソチオシアナート、p-フェニルベンゾイルイソチオシアナート等を挙げることができる。
【０１１４】
さらに、p-ニトロベンジルブロミド（p-NBBr）、ダンシルクロリド（Dns-Cl）、o-フタルジアルデヒド（OPA）、ニンヒドリン、1,2,3-ペリナフチンダントリオン（Peri）等を挙げることができる。
【０１１５】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のアミノ基に発色団（蛍光）を導入するために利用可能な試薬としては、例えば、(a)塩化スルホニル、(b)塩化カルボニル、(c)ハロゲノニトロベンゾフラン、(d)イソシアナート或いはイソチオシアナート、(e)シッフ塩基生成試薬及びその関連試薬等を挙げることができる。
【０１１６】
具体的には、(a)塩化スルホニルとしては、5-ジメチルアミノナフタレン-1-スルホニルクロリド（Dns-Cl）、5-ジ-n-ブチルアミノナフタレン-1-スルホニルクロリド（BNS-Cl）、6-N-メチルアニリノナフタレン-2-スルホニルクロリド（Mns-Cl）、2-ｐ-クロロスルホフェニル-3-フェニリンドン（Dis-Cl）、1,2-ナフタレンベンズイミダゾール-6-スルホニルクロリド、8-メトキシキノリン-5-スルホニルクロリドを挙げることができる。
【０１１７】
(b)塩化カルボニルとしては、9-フルオレニルクロロギ酸メチル（FMOC）、2-ナフチルクロロギ酸（NCF）、2-ダンシルクロロギ酸エチル、(R,S)-2-(p-クロロフェニル）-α-メチル-5-ベンゾキサゾールアセチルクロリド等が挙げられる。(c)ハロゲノニトロベンゾフランとしては、4-クロロ-7-ニトロ-2,1,3-ベンゾオキサジアゾール（4-クロロ-7-ニトロベンゾフラザン；NBD-Cl）、4-フルオロ-7-ニトロベンゾフラザン（NBD-F）を挙げることができる。
【０１１８】
(d)イソシアナート、或いはイソチオシアナートとしては、9-イソチオシアナートアクリジン、フルオレセインイソチオシアナート、4-ジメチルアミノ-1-ナフチルイソチオシアナート、4-(ベンジルオキシカルボニルアミノメチル)フェニルイソチオシアナート、4-(ジメチルアミノナフタレン-1-スルホニルアミノ)フェニルイソチオシアナートを挙げることができる。
【０１１９】
(e)シッフ塩基生成試薬及びその関連試薬としては、ピリドキサールとピリドキサールリン酸、２-フルオレンカルボキシアルデヒド、1-ピレンカルボキシアルデヒド、o-フタルジアルデヒド／アルキルチオール（OPA/R-SH）試薬、2-アセチルベンズアルデヒド／エタンチオール（OAB）、ω-ホルミル-o-ヒドロキシアセトフェノン、ベンゾ-γ-ピロン、ベンゾイン（2-ヒドロキシ-2-フェニルアセトフェノン）を挙げることができる。
【０１２０】
さらに、4-フェニルスピロ[フラン-2(3H),1′-フタラン]-3,3′-ジオン（フルオレサミン）、2-メトキシ-2,4-ジフェニル-3(2H)-フラノン（MDPF）、N-スクシニミジル-2-ナフトキシアセテート、N-スクシニミジル-1-ナフチルカルバメート、5-(4,6-ジクロロ-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノフルオレセイン（DTAF）等を挙げることができる。
【０１２１】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のカルボキシ基に発色団（可視及び／又は紫外吸収）を導入するために利用可能な試薬としては、例えば、(a)フェナシルブロミド、ナフタシルブロミド、及びそれらの類縁化合物、(b)N-メチルフタルイミド誘導体等を挙げることができる。
【０１２２】
具体的には、(a)フェナシルブロミド、ナフタシルブロミド及び類縁化合物としては、p-ブロモフェナシルブロミド、フェナシルブロミド、ナフタシルブロミド、p-ニトロフェナシルブロミド、1-(4-ヒドロキシフェニル)-2-ブロモエタノン（4-HBE）等が挙げられる。(b)N-メチルフタルイミド誘導体としては、N-クロロメチルフタルイミド（CIMPI）、N-クロロメチル-4-ニトロフタルイミド（CIMNPI）、N-クロロメチルイサチン（CIMIS）等を挙げることができる。
【０１２３】
また、O-ｐ-ニトロベンジル-N,N′-ジイソプロピルイソ尿素（p-NBDI）、2-ニトロフェニルヒドラジン、o-フェニレンジアミン、二クロム酸ピリジニウム、2-メチルキノキサノール誘導体、イミダゾール等を挙げることができる。
【０１２４】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のカルボキシ基に発色団（蛍光）を導入するために利用可能な試薬としては、例えば、蛍光性クマリン誘導体等を挙げることができる。
【０１２５】
具体的には、蛍光性クマリン誘導体としては、4-ブロモメチル-7-メトキシクマリン（Br-Mmc）、4-ブロモメチル-6,7-ジメトキシクマリン（Br-Mdmｃ）、4-ブロモメチル-7-アセトキシクマリン（Br-Mac）、4-ジアゾメチル-7-メトキシクマリン、N,N′-ジシクロヘキシル-O-(7-メトキシクマリン-4-イル)メチルイソ尿素、N,N′-ジイソプロピル-O-(7-メトキシクマリン-4-イル)メチルイソ尿素、9-ブロモメチルアクリジン、3-ブロモメチル-6,7-ジメトキシ-1-メチル-2(1H)-キノキサリン、ナフタシルブロミド(2-ブロモアセトナフトン)、p-(アントロイルオキシ)フェナシルブロミド（パナシルブロミド）、1-ブロモアセチルピレン、9-クロロメチルアントラセン、9-アントリルジアゾメタン（ADAM）等を挙げることができる。
【０１２６】
また、式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のカルボキシ基を塩化オキサリル、N-エチル-N′-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド、N,N′-カルボニルジイミダゾール、2-ブロモ-1-メチルピリジニウムヨージドなどの試薬によって活性化した後、アルコールやアミンとの反応を行う方法等を挙げることができる。
【０１２７】
例えば、式(1)、(3)、(4)で表される物質及び／又はそれらの誘導体に塩化オキサリルを作用して酸クロリドとし、これにトリエチルアミンの存在下、9-アミノフェナントレン、又は１-ナフチルアミンと反応させると、強い蛍光を発するアミド化合物に誘導することができる。
【０１２８】
また、活性化したカルボン酸の蛍光ラベル化に適当なアルコールとしては、例えば、9-ヒドロキシメチルアントラセン、2-ダンシルアミノエタノール、4-ヒドロキシメチル-7-メトキシクマリン（HO-Mmc）が挙げられ、蛍光性のエステル化合物に誘導することができる。
【０１２９】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のヒドロキシ基に発色団（可視及び／又は紫外吸収）又は発色団を含む原子団を導入するために利用可能な試薬としては、例えば、塩化アシル、フェニルイソシアナート（PIC）、フェニルジメチルシリルクロリド等を挙げることができる。
【０１３０】
具体的には、塩化アシルとしては、塩化ベンゾイル、p-メトキシベンゾイルクロリド、p-ニトロベンゾイルクロリド、3,5-ジニトロベンゾイルクロリド、アントラセン-9-カルボニルクロリド等を挙げることができる。
【０１３１】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のヒドロキシ基に発色団（蛍光）を導入するために利用可能な試薬としては、例えば、7-メトキシクマリン-3-カルボニルアジド（3-MCCA）、7-メトキシクマリン-4-カルボニルアジド（4-MCCA）、7-(クロロカルボニルメトキシ)-4-メチルクマリン、4-ジメチルアミノ-1-ナフトイルニトリル、1-アントロイルニトリル、9-アントロイルニトリル、2-メチル-1,1′-ビナフタレン-2′-カルボニルニトリル、ナフタレンホウ酸、フェナントレンホウ酸等を挙げることができる。
【０１３２】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のチオール基に発色団（可視及び／又は紫外吸収、蛍光）を導入するために利用可能な試薬としては、例えば、N-(9-アクリディニィル)マレイミド（NAM）、4-クロロ-7-スルフォベンゾフラザン アンモニウム塩（SBDCl）、4-フロロ-7-スルフォベンゾフラザン アンモニウム塩（SBD-F）、4-フロロ-7-スルファモイルベンゾフラザン（ABD-F）、N-[4-(5,6-メチレンジオキシ-2-ベンゾフラニィル)フェニル]マレイミド（MBPM）、N-[4-(6-ジメチルアミノ-2-ベンゾフラニィル)フェニル]マレイミド（DBPM）、N-[p-(2-ベンズイミダゾリル)フェニル]マレイミド、モノブロモビマン、5,5-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸）、フェナンジンメトサルフェート、o-フタルアルデヒド／2-アミノエタノール等を挙げることができる。
【０１３３】
式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体のアミド基に発色団（可視及び／又は紫外吸収、蛍光）を導入するために利用可能な化学的修飾方法としては、特に限定されないが、例えば、ヒドロキサム酸-鉄キレートによる呈色やアゾ色素生成によるN-アリールアミドの呈色等を挙げることができる。
【０１３４】
液体クロマトグラフィー法は、固定相と移動相への親和性の差により溶質を分離する方法であり、本発明においては、様々な分離機構（溶質と固定相との相互作用）を適用することもできる。例えば、吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー（ゲルろ過クロマトグラフィー、又はゲル浸透クロマトグラフィー）等を利用することができる。
【０１３５】
式(1)〜(6)で表される物質をガスクロマトグラフィー及び／又はガスクロマトグラフィー-質量分析計において検出する際には、主に揮発性の付与、検出感度の向上、分解能の向上等を目的として、官能基に前記の式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体の分子構造に含まれる官能基の少なくとも一つに対して、様々な化学反応を基づく化学修飾を施すこともできる。前記の目的に適用可能な試薬は、特に限定されず、化学修飾された式(1)〜(6)で表される物質及び／又はそれらの誘導体を検出することができる。
【０１３６】
具体的には、例えば、式(1)で表される物質のカルボキシ基をエステル化した後、式(1)で表される物質のアミノ基をアシル化し、揮発性の誘導体であるN-アシルアルキルエステルにすることで、前記の式(1)で表される物質に揮発性を付与することができる。
【０１３７】
より具体的には、例えば、前記のN-アシルアルキルエステルにおけるアルキルエステルとしては、メチル基、エチル基、プロピル基、n-及びイソブチル基、n-及びイソアミル基等を挙げることができる。また、メチルエステルを合成する方法としては、例えば、ジアゾメタン又は三フッ化ホウ素とメタノールを用いる方法、トリメチルシリルジアゾメタンを利用する方法等を挙げることができる。また、前記のN-アシルアルキルエステルにおけるN-アシル基としては、アセチル基、トリフルオロアセチル基、ペンタフルオロプロピオニル基、ヘプタフルオロブチリル基等を挙げることができる。N-アシル基を導入する方法としては、例えば、無水トリフロロ酢酸、トリフロロ酢酸イミダゾール等を利用する方法等を挙げることができる。
【０１３８】
また、例えば、式(1)で表される物質のカルボキシ基及び／又はアミノ基をトリメチルシリル化し、揮発性の誘導体であるN-トリメチルシリル体にすることで、前記の式(1)で表される物質に揮発性を付与することができる。
【０１３９】
より具体的には、トリメチルシリル化するための試薬としては、例えば、N-トリメチルシリルイミダゾール（TMSI）、N,O-ビス(トリメチルシリル)トリフルオロアセトアミド（BSTFA）、N,O-ビス(トリメチルシリル)アセトアミド（BSA）、N-メチル-Ｎ-トリメチルシリル-トリフルオロアセトアミド（MSTFA）、N-トリメチルシリルジメチルアミン（TMSDMA）、N-メチル-N-トリメチルシリルアセトアミド（MTMSA）、ヘキサメチルジシラザン（HMDS）等を利用することができる。
【０１４０】
さらに、例えば、メタノール、エタノール、或いはブタノールと塩酸とを利用して、式(1)で表される物質のカルボキシ基をエステル化した後、前記式(1)で表される物質のアミノ基をトリメチルシリル化し、揮発性の誘導体である、Ｎ-トリメチルシリルアミノ酸エステルにすることで、前記の式(1)で表される物質に揮発性を付与することができる。
【０１４１】
本発明は、前記の式(1)〜(6)で表される物質に加えて、公知の体臭原因物質、例えば、アンドロステノン（5α-16-アンドロステン-3-オン）、アンドロステノール（5α-16-アンドロステン-3α-オール、又は5α-16-アンドロステン-3β-オール）、アンドロスタジエノン（4,16-アンドロスタジエン-3-オン）等のアンドロステノン及び／又はその誘導体、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、4-エチルヘプタン酸、7-オクテン酸等の脂肪族低級カルボン酸、1-オクテン-3-オン、シス-1,5-オクタジエン-3-オン等のアルデヒド・ケトン類等をさらに検出することで、体臭を判定することもできる。
【０１４２】
免疫化学的測定法（イムノアッセイとも呼ばれる）とは、動物などの生体系で行われている分子認識の一つである免疫反応、すなわち、「抗体」によって、抗原と呼ばれる特定の物質を高感度高選択的に捕捉し、抗原の働きを抑制する機能（抗原-抗体反応）を利用して、抗原の量を化学的に測定する方法である。本発明は、式(1)〜(6)及び／又はその誘導体で表される物質を高感度高選択的に検出するために上記の免疫化学的測定法を適用することもできる。
【０１４３】
式(1)〜(6)で表される物質の抗体を作製する際には、前記の式(1)〜(6)で表される物質に対してスペーサー分子等を導入し、より高分子量の状態にしてから抗体を作成することもできる。
【０１４４】
前記の免疫化学的測定法を利用して、腋窩部から採取した試料中の物質(1)〜(6)及び／又はその誘導体の存在量を検出する方法は、特に限定されないが、より高感度で検出するために、前記物質を標識化したものを用いることもできる。この標識化には、放射性同位元素を用いることもできるし（ラジオイムノアッセイ）、酵素を用いることもできるし（エンザイムイムノアッセイ）、蛍光色素や化学発光試薬などを用いることもできる。
【０１４５】
本発明は、以上の例示したような様々な方法によって式(1)〜(6)で表される物質を検出することができ、発色団として可視領域に吸収のある原子団を有する試薬（以下、呈色試薬ともいう）を利用する場合には、発現された色を可視・紫外分光光度計で検出しても良いし、或いは肉眼で検出することもできる。
【０１４６】
式(1)〜(6)で表される物質を肉眼で検出する場合には、標識化合物の濃度-発色標準サンプルを調製し、腋窩部から採取した試料を同じ試薬で発色させたものと比較して、目視でアポクリン臭の程度を判断することも可能である。例えば、呈色試薬等と反応させた当該物質を含有するものを用いて、水溶液を充填した比色管や或いは標準物質（スタンダード）を含浸させたろ紙の形で様々な濃度の呈色比較サンプルを作成しても良く、腋窩部から採取した物質を呈色試薬と反応させて得られる色の変化を呈色比較サンプルと比べることによって、体臭を判定することもできる。また、水溶液の色を肉眼で直接判定する評価、試験紙に含浸させたものを肉眼で直接判定する評価を行ってもよい。
【０１４７】
以上、例示したような方法によれば、腋窩部における式(1)〜(6)で表される物質の存在量を定性的及び／又は定量的に解析することもでき、それらの解析結果を基にして腋臭、特にアポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を客観的かつ定量的に判定することができる。
【０１４８】
式(1)〜(6)で表される物質の生成量が多いにもかかわらず、アポクリン臭が発生していない状態である場合には、アポクリン臭が潜在化していることになる。通常、このような状況においては、アポクリン臭原因成分を直接指標にした解析を行っても客観的かつ定量的に体臭を判定することはできない。
【０１４９】
これに対して、本発明は、アポクリン臭の主要原因物質に変化する前の前駆体を検出することで、被験者がアポクリン臭を発生させる可能性のある体質か否か、すなわち、アポクリン臭が発生する可能性（ポテンシャル）を客観的かつ定量的に判定することができる。
【０１５０】
本発明は、式(1)〜(6)で表される物質を指標にすることで、客観性の高い判定を行うことができ、また解析データを前記物質の存在量として数値化することで、定量的な判定を行うこともできる。本発明は、式(1)〜(6)で表される物質を検出することで、アポクリン臭の発生に対して予防効果が期待されるデオドラント剤の有効性を判定することもできる。
【０１５１】
例えば、アポクリン臭の主要原因物質である式(2)で表される物質は、式(1)で表される物質が皮膚上の微生物の作用などにより変化したものであるから、式(1)で表される物質及び／又は式(2)で表される物質を検出することで、アポクリン臭の発生に対して予防効果が期待されるデオドラント剤サンプルの有効性を客観的かつ定量的に判定することができる。
【０１５２】
詳しくは、アポクリン臭の発生に対して予防効果が期待される被検体を添加する前後において、前記式(1)で表される物質及び／又は前記式(2)で表される物質を検出することによって、式(1)で表される物質及び／又は前記式(2)で表される物質の変化量を比較することができる。従って、式(1)で表される物質の式(2)で表される物質への変化を予防する効果、すなわち、アポクリン臭の発生を予防する被検体の効果について客観的かつ定量的に判定することができる。
【０１５３】
また、アポクリン臭の主要原因物質である式(5)、式(6)で表される物質は、それぞれ、式(3)、式(4)で表される物質が皮膚上の微生物の作用などにより変化したものであるから、式(3)、式(4)で表される物質及び／又は式(5)、式(6)で表される物質をさらに検出することで、アポクリン臭の発生に対して予防効果が期待されるデオドラント剤サンプルの有効性をより客観的かつ定量的に判定することもできる。
【０１５４】
詳しくは、アポクリン臭の発生に対して予防効果が期待される被検体を添加する前後において、前記式(3)、式(4)で表される物質及び／又は前記式(5)、式(6)で表される物質を検出することによって、式(3)、式(4)で表される物質及び／又は前記式(5)、式(6)で表される物質の変化量を比較することができる。従って、式(3)、式(4)で表される物質の式(5)、式(6)で表される物質への変化を予防する効果、すなわち、アポクリン臭の発生を予防する被検体の効果についてより客観的かつ定量的に判定することもできる。
【０１５５】
より具体的な方法としては、例えば、前記の被検体をヒトの腋窩部に実際に適用し、適用の前後において腋窩部から各々採取した試料に対して、式(1)〜(6)で表される物質を検出することで、アポクリン臭の発生に対して予防効果が期待されるデオドラント剤サンプルの有効性を判定することができる。
【０１５６】
そして、アポクリン臭の発生に対して予防効果が期待されるデオドラント剤サンプルの有効性を判定する場合には、式(1)〜(6)で表される物質を単独で又は２つ以上を使用することができ、さらに、通例、制汗デオドラント剤で配合され得る、他の成分、たとえば、溶剤、安定剤、制汗剤、殺菌剤、抗菌剤、界面活性剤、酸化防止剤、香料、植物抽出物等の添加剤が配合されたものを用いることもできる。
【実施例】
【０１５７】
１．2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（式(9)）の合成【０１５８】
【化１０】
0004496213.tif 000011
【０１５９】
(S)-3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール206mg（1.39mmol）と等モル量のN-α-t-ブトキシカルボニル-3-クロロ-L-アラニン（渡辺化学工業(株)製）とをN,N-ジメチルホルムアミド ４mLに溶解し、発熱と発泡に注意しながら2.6当量のNaH（水素化ナトリウム）を数回に分けて添加した。反応終了後、ジエチルエーテルと氷水を添加して分液した。水層に酢酸エチルを加えた後、希塩酸で酸析し、分液した。水層よりもう一度酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を併せて、水、次いで飽和食塩水で洗浄した。乾燥、濃縮してオイルを得た。【０１６０】
次いで、MeCN／水／0.1％トリフルオロ酢酸を溶離液として、ODSカラムによるHPLCで分取精製した。目的物の溶出成分を集めて中和後、MeCNを留去した。希塩酸を加えて酢酸エチルで抽出後、水、次いで飽和食塩水で洗浄した。乾燥、濃縮することで得られたオイルに4N-HCl／ジオキサン400μLを加えた。濃縮物を、再び、MeCN／水／0.1％トリフルオロ酢酸を溶離液として、ODSカラムによるHPLCで分取精製した。目的物の溶出部分を凍結乾燥し、38mgの粘性オイルを得た。【０１６１】
合成品のNMRスペクトルデータを Mercury 400Vx（Varian社）により記録した。ケミカルシフトδを基準物質としてのTMSに対するppmとして下記に示す。また、LC-MS 2690（Waters社）により記録したMSスペクトルデータを下記に示す。得られたNMRスペクトル、MSスペクトルは目的物の構造を支持していた。【０１６２】
1H-NMR(DMSO)：
0.894(t,CH3), 1.250(s,CH3), 1.358(m,CH2), 1.447(m,CH2), 1.671(t,CH2), 2.881(m,(S-)CH2), 3.519(t,CH2-OH), 4.067(t,CH-NH2)【０１６３】
MS:m/z＝226（M+1，相対強度100％），m/z＝122（相対強度33％）【０１６４】
２．ヒトの腋窩部におけるアポクリン臭とその前駆体の解析
(1)アポクリン臭の解析
健康な日本人男性65名を無作為に被験者として選び、新品の綿製白色Ｔシャツを24時間連続して着用してもらった。Ｔシャツを回収した後、腋窩部に当たる部分について５人の専門パネラー（男性３名、女性２名）によって腋臭の質とそれらの臭いの強さを官能評価した。【０１６５】
＜腋臭の質の評価項目＞
アポクリン臭：生臭く、しょうゆ、グレープフルーツ様の臭い
酸臭（低級脂肪酸臭）：酸っぱくて、腐敗したような臭い【０１６６】
＜腋臭の強さの評価基準＞
０：匂わない
１：かすかに匂う
２：弱く匂う
３：匂う
４：やや強く匂う
５：かなり強く匂う【０１６７】
その結果、腋臭がほとんど認められない（腋臭の強さのスコアがいずれも１以下）人が28人（Ａ群）、弱い腋臭が認められた（腋臭の強さの最大スコアが２又は３）人が21人（Ｂ群）、強い腋臭が認められた（腋臭の強さの最大スコアが４又は５）人が16人であった（Ｃ群）。【０１６８】
(2)アポクリン臭前駆体の解析
Ｃ群の中でアポクリン臭が強かった３人、Ｃ群の中でアポクリン臭が全く認められなかった３人を被験者とした。温度40℃、湿度80％に調節された部屋で、被験者の両腋窩部から流れ出る汗約２ｍＬを試験管に集めた。採取した全ての汗（６試料）は、それぞれ、綿ろ過、次いで滅菌フィルター（0.22μm）によるろ過の後、0.05N-HCl水溶液を加えて、pHを3.3に調整した。次に、蒸留エーテル（0.4mL×５回）、ヘキサン（0.4mL×５回）で洗浄し、油溶性物質を取り除いた。ロータリーエバポレーターを用い、残留溶媒を常温で数時間かけて留去した。再度、滅菌フィルター（0.22μm）ろ過を行った後、限外ろ過を行った。分子量5000以下の画分を凍結乾燥したところ、無臭で透明〜やや白色の粘性のある固体が得られた。全ての試料は、分析までの間、-40℃で保存した。【０１６９】
前記の試料をHPLC-MS/MS分析装置に供した。
＜測定条件＞
HPLCシステム：Agilent 1100 型（アジレント・テクノロジー）
分析カラム：Inertsil ODS-3（2.1mmID×250mm）
移動相：50％（１％酢酸水溶液）／50％（１％酢酸メタノール溶液）
質量分析装置（MS/MS）：API 4000（Applied Biosystems/MDS Sciex）【０１７０】
解析の結果、図１の1a〜1c、図２の2a〜2cに示すように、アポクリン臭のある人の汗中には2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（式(9)）が含まれていることが明らかとなった。【０１７１】
また、解析の結果、図３の3a及び3bに示すように、アポクリン臭のない人の汗中には2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（式(9)）が含まれていないことが明らかとなった。【０１７２】
(3)アポクリン臭の発生機構の解析
Ｃ群の中で、アポクリン臭がやや強い（腋臭の強さのスコアが４）と評価された３人を被験者とした。2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（合成品，式(9)）0.1mgを蒸留水0.1mLに溶解し、この水溶液を被験者の片側の腋窩部に噴霧した。他方の腋窩部には蒸留水0.1mLを噴霧した。８時間経過後、専門パネラー５名（男性３名、女性２名）が腋窩部の臭いを官能評価した。その結果、いずれの専門パネラーも、蒸留水のみを噴霧した側の腋窩部よりも、2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（合成品，式(9)）を含む水溶液を噴霧した側の腋窩部の方が、3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オール由来の硫黄様で生臭く動物的な臭いが顕著に強くなっていると答えた。すなわち、2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸は、ヒトの腋窩部の皮膚上で3-メルカプト-3-メチルヘキサン-1-オールに分解されることが明らかとなった。【０１７３】
３．アポクリン臭に対するデオドラント剤の有効性の評価
健常な米国人女性（30代）１名を被験者とした。被験者には試験日の10日前から制汗デオドラント剤などの腋窩部への適用を禁止した。試験日の朝に被験者の両腋窩部の匂いが同レベルであることを確認した後、片方のわきの下にだけデオドラント剤（スティック型）を0.3ｇ塗布した。10時間経過後、両方のわきの下の汗を綿ガーゼ（５cm×８cm）で拭き取った。綿ガーゼを８等分し、蒸留水６mLで十分に湿らせた後、ガーゼにしみ込んだ液をシリンジで搾り採取した。さらに蒸留水６mLを加えて湿らせた後、再びガーゼにしみ込んだ液をシリンジで搾り採取した。遠心分離機に供した後、抽出液を１つにしてヘキサン（10mL）で２度洗浄した。溶媒を留去し、凍結乾燥した後、HPLC移動相で溶解、限外ろ過し、分子量5,000以下の画分を分析サンプルとした。また、別途合成した2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸を使って、各種濃度の標準溶液を調製した。はじめに前記標準溶液をLC-MS/MSに供して、2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸（合成品）の検量線を描いた。次に前記分析サンプルをLC-MS/MSに供して、分析サンプル中に含まれる2-アミノ-7-ヒドロキシ-5-メチル-5-プロピル-4-チアヘプタン酸、すなわち、本発明に係る前駆物の量を定量した。そしてデオドラント率を算出した。【０１７４】
＜測定条件＞
HPLCシステム：LC-10ADvp（島津製作所）
分析カラム：Inertsil ODS-3（2.1mmID×250mm）
移動相：50％（１％酢酸水溶液）／50％（１％酢酸メタノール溶液）
質量分析装置（MS/MS）：API 2000（Applied Biosystems/MDS Sciex）Q1/Q3 masses=236.10/122.00 amu【０１７５】
＜デオドラント剤処方＞
（原料）                                                  （重量％）
ステアリルアルコール                                       16
ベヘニルアルコール                                          0.5
硬化ヒマシ油                                                3.5
デカメチルシクロペンタシロキサン                            43
アルミニウムジルコニウムテトラクロロハイドレックス・
グリシンコンプレックス                                    24
タルク                                                       7
香料                                                         1
その他                                                       5
合計                                                       100【０１７６】
解析の結果、表１に示すように、アポクリン臭の発生を抑制する効果が期待されるデオドラント剤（スティック型）の有効性を評価することができた。【０１７７】
【表１】
0004496213.tif 000012
【図１】
0004496213.tif 000016
【図２】
0004496213.tif 000017
【図３】
0004496213.tif 000018