(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0004516430.tif 000033
｛式中、
ｍは０であり；
ｐは１であり；
Ｇは−ＣＨ２−であり；
Ａは−ＣＯ２Ｈ及び１Ｈ−テトラゾール−５−イルから構成される群から選択され；
各Ｒ４は水素であり；
各Ｒ５はハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−３アルコキシから構成される群から独立して選択され、前記Ｃ１−４アルキル及びＣ１−３アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロで置換されており；
−Ｘ−Ｚは、下記の群
【化２】
0004516430.tif 000034
から選択されるものであり；
−ＮＲ３Ｃ（Ｒ１）２Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｃ（Ｒ１）２）ｍ−が、アゼチジン、ピロリジン、又はエチルアミノから構成される群から選択される｝により表される化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項２】
式ＩＩ：
【化３】
0004516430.tif 000035
（式中、ｎは０又は１である）の請求項１に記載の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項３】
式ＩＩＩ：
【化４】
0004516430.tif 000036
（式中、各Ｒ４は水素であり、各Ｒ５はハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−３アルコキシから構成される群から独立して選択され、前記Ｃ１−４アルキル及びＣ１−３アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロで置換されており、ｎは０又は１であり、Ｙは酸素又は結合であり、Ｒ１０はＣ１−４アルキルであり、各Ｒ９は独立してハロ、Ｃ１−４アルキル又はＣ１−４アルコキシである）の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項４】
ｎが０であり、Ｒ５とＲ９がいずれも存在しない請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
下表：
【化５】
0004516430.tif 000037
0004516430.tif 000038
0004516430.tif 000039
0004516430.tif 000040
0004516430.tif 000041
0004516430.tif 000042
から選択される化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩。
【請求項６】
（１）（ＲＳ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸又はその医薬的に許容可能な塩、
（２）（Ｒ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸又はその医薬的に許容可能な塩、及び
（３）（Ｓ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸又はその医薬的に許容可能な塩から選択される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体アゴニストであり、従って白血球トラフィッキングの調節、リンパ球の二次リンパ組織移行、及び有効な免疫応答に必要な細胞間相互作用への介入により免疫抑制作用をもつ化合物に関する。本発明は前記化合物を含有する医薬組成物と治療又は予防方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫抑制剤は全身性紅斑性狼瘡、慢性リウマチ様関節炎、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症や、他の疾患としてクローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス病及び喘息等の多様な自己免疫性疾患及び慢性炎症性疾患で有用であることが示されている。免疫抑制剤は癌、リンパ腫及び白血病の治療用化学療法レジメンの一部としても有用であることが分かっている。
【０００３】
これらの疾患の各々の根本的病因は全く異なると思われるが、種々の自己抗体及び／又は自己反応性リンパ球の出現が共通している。このような自己反応性の一因は正常免疫系の機能を司る恒常性制御機構の低下であると思われる。同様に、骨髄又は臓器移植後にも宿主リンパ球は外来組織抗原を認識し、抗体、サイトカイン及び細胞毒性リンパ球等の細胞性及び体液性両者の反応を開始し、拒絶反応を生じる。
【０００４】
自己免疫又は拒絶プロセスの結末の１つは炎症細胞とそれによって放出されるメディエーターにより起因する組織破壊である。ＮＳＡＩＤ等の抗炎症剤は主にこれらのメディエーターの作用又は分泌を阻止することにより作用するが、疾患の免疫基盤を変化させるには全く無効である。他方、シクロホスファミド等の細胞毒性物質は正常反応と自己免疫反応の両者を阻止するような非特異的方法で作用する。実際に、このような非特異的免疫抑制剤を投与した患者が感染死する確率は自己免疫疾患で死亡する確率と同程度である。
【０００５】
シクロスポリンＡは移植臓器の拒絶反応を防止するために使用されている薬剤である。ＦＫ−５０６も移植臓器拒絶反応の防止、特に肝移植に認可されている薬剤である。シクロスポリンＡとＦＫ−５０６は生体免疫系がその莫大な天然保護物質を動員して移植臓器の外来蛋白質を拒絶しないようにすることにより作用する。シクロスポリンＡは重症乾癬の治療に認可されており、ヨーロッパ監督官庁からアトピー性皮膚炎の治療に認可されている。
【０００６】
シクロスポリンＡとＦＫ−５０６は移植拒絶反応の遅延又は抑制に有効であるが、尿毒性、神経毒性、及び胃腸の不快感等の重度副作用を起こすことが知られている。従って、これらの副作用のない免疫抑制剤はまだ開発されておらず、そのような免疫抑制剤が非常に望ましい。
【０００７】
免疫抑制化合物ＦＴＹ７２０は現在臨床試験中のリンパ球移行剤である。ＦＴＹ７２０は哺乳動物で代謝され、スフィンゴシン１−リン酸受容体の強力なアゴニストである化合物となる。スフィンゴシン１−リン酸受容体は白血病トラフィッキングを調節し、リンパ節とパイエル板へのリンパ球（Ｔ細胞及びＢ細胞）の移行を誘導し、脾臓構造を撹乱することにより、Ｔ細胞依存性及び非依存性抗体応答を妨害する。このような免疫抑制は臓器移植後の拒絶反応の防止と自己免疫疾患の治療に望ましい。
【０００８】
スフィンゴシン１−リン酸は造血細胞により分泌され、保存され、活性化血小板から放出される生体活性スフィンゴ脂質代謝産物である。Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ．，Ｔ．Ｏｈｍｏｒｉ，Ｇ．Ｒｉｌｅ，Ｆ．Ｋａｚａｍａ，Ｈ．Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｔ．Ｓａｎｏ，Ｋ．Ｓａｔｏｈ，Ｓ．Ｋｕｍｅ，Ｇ．Ｔｉｇｙｉ，Ｙ．Ｉｇａｒａｓｈｉ，ａｎｄ  Ｙ．Ｏｚａｋｉ．２０００．Ｂｌｏｏｄ．９６：３４３１−８。この物質はＧ蛋白質結合受容体ファミリーにアゴニストとして作用し、細胞増殖、分化、生存、及び運動を調節する。Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｎ．，Ｉ．Ｉｓｈｉｉ，Ｊ．Ｊ．Ａ．Ｃｏｎｔｏｓ，Ｊ．Ａ．Ｗｅｉｎｅｒ，ａｎｄ  Ｊ．Ｃｈｕｎ．２００１．Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．４１：５０７−３４；Ｈｌａ，Ｔ．，Ｍ．−Ｊ．Ｌｅｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｊ．Ｈ．Ｐａｉｋ，ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｋｌｕｋ．２００１．Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２９４：１８７５−１８７８；Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｓ．Ｍｉｌｓｔｉｅｎ．２０００．Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１４８４：１０７−１６；Ｐｙｎｅ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｎ．Ｐｙｎｅ．２０００．Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｐｈａｒｍ．＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．８８：１１５−１３１。広範な細胞及び組織分布をもち、ヒトと齧歯類で良好に保存された５種のスフィンゴシン１−リン酸受容体（Ｓ１Ｐ１，Ｓ１Ｐ２，Ｓ１Ｐ３，Ｓ１Ｐ４，及びＳ１Ｐ５，別称内皮細胞分化遺伝子Ｅｄｇ１，Ｅｄｇ５，Ｅｄｇ３，Ｅｄｇ６，Ｅｄｇ８）が同定されている（表参照）。Ｓ１Ｐ受容体と結合すると、Ｇｑ、Ｇｉ／ｏ、Ｇ１２、Ｇ１３、及びＲｈｏ依存性経路を介してシグナル伝達が誘発される。リガンドに誘導されたＳ１Ｐ１とＳ１Ｐ３の活性化はＲａｃ−及びＲｈｏ−を介して血管新生、走化性、及び接着結合会合を促進することが知られており（Ｌｅｅ，Ｍ．−Ｊ．，Ｓ．Ｔｈａｎｇａｄａ，Ｋ．Ｐ．Ｃｌａｆｆｅｙ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｃ．Ｈ．Ｌｉｕ，Ｍ．Ｋｌｕｋ，Ｍ．Ｖｏｌｐｉ，Ｒ．Ｉ．Ｓｈａ’ａｆｉ，ａｎｄ  Ｔ．Ｈｌａ．１９９９．Ｃｅｌｌ．９９：３０１−１２参照）、Ｓ１Ｐ２のアゴニストは神経突起退縮を促進し（Ｖａｎ  Ｂｒｏｃｋｌｙｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｚ．Ｔｕ，Ｌ．Ｃ．Ｅｄｓａｌｌ，Ｒ．Ｒ．Ｓｃｈｍｉｄｔ，ａｎｄ  Ｓ．Ｓｐｉｅｇｅｌ．１９９９．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：４６２６−４６３２参照）、Ｒａｃ活性化を阻止することにより走化性を阻害することが知られている（Ｏｋａｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｎ．Ｔａｋｕｗａ，Ｔ．Ｙｏｋｏｍｉｚｏ，Ｎ．Ｓｕｇｉｍｏｔｏ，Ｓ．Ｓａｋｕｒａｄａ，Ｈ．Ｓｈｉｇｅｍａｔｓｕ，ａｎｄ  Ｙ．Ｔａｋｕｗａ．２０００．Ｍｏｌ．Ｃｅ��ｌ．Ｂｉｏｌ．２０：９２４７−９２６１参照）。Ｓ１Ｐ４は造血細胞及び組織に局在しており（Ｇｒａｅｌｅｒ，Ｍ．Ｈ．，Ｇ．Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ，ａｎｄ  Ｍ．Ｌｉｐｐ．１９９９．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４６：１３１−６参照）、Ｓ１Ｐ５は主に神経受容体であり、リンパ組織でも多少発現される（Ｉｍ，Ｄ．Ｓ．，Ｃ．Ｅ．Ｈｅｉｓｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｂ．Ｆ．Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｇ．Ｊ．Ｓｈｅｉ，Ｒ．Ｐ．Ｈｅａｖｅｎｓ，Ｍ．Ｒ．Ｒｉｇｂｙ，Ｔ．Ｈｌａ，Ｓ．Ｍａｎｄａｌａ，Ｇ．ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ，Ｓ．Ｒ．Ｇｅｏｒｇｅ，ａｎｄ  Ｋ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ．２０００．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１４２８１−６参照）。
【０００９】
スフィンゴシン１−リン酸を動物に投与すると、二次リンパ器官への末梢血リンパ球の全身移行を誘導するので、治療上有用な免疫抑制が得られる（Ｍａｎｄａｌａ，Ｓ．，Ｒ．Ｈａｊｄｕ，Ｊ．Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ，Ｅ．Ｑｕａｃｋｅｎｂｕｓｈ，Ｊ．Ｘｉｅ，Ｊ．Ｍｉｌｌｉｇａｎ，Ｒ．Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｇ．−Ｊ．Ｓｈｅｉ，Ｄ．Ｃａｒｄ，Ｃ．Ｋｅｏｈａｎｅ，Ｍ．Ｒｏｓｅｎｂａｃｈ，Ｊ．Ｈａｌｅ，Ｃ．Ｌ．Ｌｙｎｃｈ，Ｋ．Ｒｕｐｐｒｅｃｈｔ，Ｗ．Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｈ．Ｒｏｓｅｎ．２００２．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２９６：３４６−３４９参照）。しかし、スフィンゴシン１−リン酸は心臓血管及び気管支収縮作用もあるので、治療剤としての用途が限られている。スフィンゴシン１−リン酸の静脈内投与はラットで心拍数、心室収縮及び血圧を低下させる（Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ａ．，Ｎ．Ｎ．Ａｙｅ，Ｙ．Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ．Ｏｚａｋｉ，ａｎｄ  Ｋ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ．２０００．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８２：３３８−３４２参照）。ヒト気道平滑筋細胞において、スフィンゴシン１−リン酸は収縮、細胞増殖及びサイトカイン産生を調節し、喘息で気管支収縮、気道炎症及びリモデリングを促進する（Ａｍｍｉｔ，Ａ．Ｊ．，Ａ．Ｔ．Ｈａｓｔｉｅ，Ｌ．Ｃ．Ｅｄｓａｌｌ，Ｒ．Ｋ．Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｙ．Ａｍｒａｎｉ，Ｖ．Ｐ．Ｋｒｙｍｓｋａｙａ，Ｓ．Ａ．Ｋａｎｅ，Ｓ．Ｐ．Ｐｅｔｅｒｓ，Ｒ．Ｂ．Ｐｅｎｎ，Ｓ．Ｓｐｉｅｇｅｌ，Ｒ．Ａ．Ｐａｎｅｔｔｉｅｒｉ．Ｊｒ．２００１，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１５：１２１２−１２１４参照）。スフィンゴシン１−リン酸の望ましくない作用は全Ｓ１Ｐ受容体に非選択的で強力なアゴニスト活性に関係がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明はＳ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体に比較して選択性をもつＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体のアゴニストである化合物に関する。Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体選択的アゴニストは現行治療にまさる利点があり、リンパ球移行剤の治療枠を広げ、より高用量で良好な寛容性が得られるため、単独療法としての効力が改善される。
【００１１】
免疫抑制剤は主に骨髄、臓器及び移植拒絶反応の治療に使用されるが、このような化合物は関節炎、特にリウマチ様関節炎、インスリン依存性及び非インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、乾癬、炎症性腸疾患、クローン病、紅斑性狼瘡等の治療にも使用される。  従って、本発明は従来の化合物よりも安全で有効な免疫抑制化合物を提供することを主目的とする。以上の目的及び他の目的は本明細書の記載から当業者に自明である。
【００１２】
【表１】
0004516430.tif 000002
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は式Ｉ：
【００１４】
【化１４】
0004516430.tif 000003
の化合物とその医薬的に許容可能な塩及び水和物に関する。前記化合物は骨髄、臓器及び組織移植拒絶反応等の自己免疫疾患及び障害の治療に有用である。医薬組成物と使用方法も含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明は式Ｉ：
【００１６】
【化１５】
0004516430.tif 000004
｛式中、
ｍは０又は１であり；
ｐは１、２又は３であり；
Ｇは−Ｃ（Ｒ４）２−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−（式中、ｋは０、１又は２である）、及び−Ｎ（Ｒ４）−から構成される群から選択され；
Ａは−ＣＯ２Ｈ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ（Ｃ１−３アルキル）ＯＨ及び１Ｈ−テトラゾール−５−イルから構成される群から選択され；
各Ｒ１は水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル及びＣ１−５アルコキシから構成される群から独立して選択され、各Ｃ１−６アルキル及びＣ１−５アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロ及びヒドロキシから構成される群から独立して選択される置換基で置換されており；
Ｒ２は水素、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル及びＣ１−５アルコキシから構成される群から選択され、前記Ｃ１−６アルキル及びＣ１−５アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロ及びヒドロキシから構成される群から独立して選択される置換基で置換されており；
Ｒ３は水素及びＣ１−４アルキルから構成される群から選択され、前記Ｃ１−４アルキルは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロ及びヒドロキシから独立して選択される置換基で置換されているか；
又はＲ３とＲ４は一緒になって下記４、５又は６員単環：
【００１７】
【化１６】
0004516430.tif 000005
を形成してもよく；
各Ｒ４は水素及びＣ１−４アルキルから構成される群から独立して選択され、前記Ｃ１−４アルキルは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロで置換されており；
各Ｒ５はハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−３アルコキシから構成される群から独立して選択され、前記Ｃ１−４アルキル及びＣ１−３アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロで置換されており；
Ｚは、
（１）Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキル又は−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキル［前記Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキル及び−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルは場合によりフェニル及びＣ３−６シクロアルキルで置換されている］、及び
（２）各々場合により
（ａ）ハロ、
（ｂ）場合によりハロ及びＣ１−４アルキル（前記Ｃ１−４アルキルは場合により１〜３個のハロ基で置換されている）から構成される群から独立して選択される１〜５個の基で置換されたフェニル、及び
（ｃ）Ｃ１−４アルキル又はＣ１−４アルコキシ（前記Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロ及びヒドロキシから独立して選択される置換基で置換されている）
から構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル又はＨＥＴ１から構成される群から選択されるか、
又はＺは存在せず；
Ｚが存在しない場合には、Ｘはフェニル、Ｃ５−１６アルキル、Ｃ５−１６アルケニル、Ｃ５−１６アルキニル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルキル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルケニル、−ＣＨＯＨ−Ｃ４−１５アルキニル、Ｃ４−１５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ４−１５アルケニル、−Ｏ−Ｃ４−１５アルキニル、Ｃ４−１５アルキルチオ、−Ｓ−Ｃ４−１５アルケニル、−Ｓ−Ｃ４−１５アルキニル、−ＣＨ２−Ｃ３−１４アルコキシ、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ３−１４アルケニル、−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ３−１４アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ４−１５アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ３−１４アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ３−１４アルキニル、−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ３−１４アルキル、−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ３−１４アルケニル及び−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ３−１４アルキニルから構成される群から選択され、
Ｚが場合により上記のように置換されたフェニル又はＨＥＴ１である場合には、Ｘは−Ｃ１−６アルキル−、−Ｏ−Ｃ１−５アルキル−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−５アルキル−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ１−４アルキル−、
【００１８】
【化１７】
0004516430.tif 000006
フェニル及びＨＥＴ２から構成される群から選択され、前記フェニル及びＨＥＴ２は各々場合によりハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されており、Ｘが−Ｃ１−６アルキル−、−Ｏ−Ｃ１−５アルキル−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−５アルキル−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ６）（Ｒ７）−Ｃ１−４アルキル−、又は
【００１９】
【化１８】
0004516430.tif 000007
である場合には、Ｚ基の結合点はアルキル上にあり、
Ｚが場合により上記のように置換されたＣ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキル又は−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルである場合には、Ｘはフェニルであり、前記フェニルは場合によりハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されており；
Ｒ６及びＲ７は水素、Ｃ１−９アルキル及び−（ＣＨ２）ｐ−フェニル（式中、ｐは１〜５であり、フェニルは場合により各々場合により１〜３個のハロ基で置換されたＣ１−３アルキル及びＣ１−３アルコキシから構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されている）から構成される群から独立して選択され；
ＨＥＴ１及びＨＥＴ２はベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、アゼチジニル、１，４−ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンズイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、及びテトラヒドロチエニルから構成される群から各々独立して選択される｝により表される化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩もしくは水和物に関する。
【００２０】
本発明の別の態様はｐが１である式Ｉの化合物に関する。
【００２１】
本発明の別の態様は、
Ｚが各々場合により
（ａ）ハロ、
（ｂ）場合によりハロ及びＣ１−４アルキル（前記Ｃ１−４アルキルは場合により１〜３個のハロ基で置換されている）から構成される群から独立して選択される１〜５個の基で置換されたフェニル、及び
（ｃ）Ｃ１−４アルキル又はＣ１−４アルコキシ（前記Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロ及びヒドロキシから独立して選択される置換基で置換されている）
から構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル又はＨＥＴ１であるか、
又はＺは存在せず；
Ｚが存在しない場合には、ＸはＣ７−１２アルキル、Ｃ７−１２アルケニル、Ｃ７−１２アルキニル、Ｃ６−１１アルコキシ、−Ｏ−Ｃ６−１１アルケニル、−Ｏ−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１９アルケニル、及び−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキニルから構成される群から選択され；
Ｚが場合により上記のように置換されたフェニル又はＨＥＴ１である場合には、Ｘは−Ｃ１−５アルキル−、−Ｃ１−４アルコキシ−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−４アルキル−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−３アルキル−、フェニル及びＨＥＴ２から構成される群から選択され、Ｘが−Ｃ１−４アルコキシ−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−５アルキル−、又は−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−４アルキル−である場合には、Ｚ基の結合点はアルキル上にある式Ｉの化合物に関する。
【００２２】
本発明の別の態様はＨＥＴ１及びＨＥＴ２が
【００２３】
【化１９】
0004516430.tif 000008
（式中、Ｒ８は水素、ヒドロキシ及びハロから選択される）から構成される群から独立して選択される式Ｉの化合物に関する。
【００２４】
本発明の別の態様はｍが０である式Ｉの化合物に関する。
【００２５】
本発明の別の態様はｍが１である式Ｉの化合物に関する。
【００２６】
本発明の別の態様はがＣ７−１２アルキル、Ｃ７−１２アルケニル、Ｃ７−１２アルキニル、Ｃ６−１１アルコキシ、−Ｏ−Ｃ６−１１アルケニル、−Ｏ−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルケニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ６−１１アルキニル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキル、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１９アルケニル、及び−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ５−１０アルキニルから構成される群から選択され、Ｚが存在しない式Ｉの化合物に関する。
【００２７】
本発明の別の態様はＸがメトキシであり、Ｚがフェニル及びＣ１−４アルキルで置換されたＨＥＴ１であり、前記Ｃ１−４アルキルが場合により１〜３個のハロ基で置換されており、前記フェニルが場合によりハロ及び場合により１〜３個のハロ基で置換されたＣ１−４アルキルから構成される群から独立して選択される１〜５個の置換基で置換されている式Ｉの化合物に関する。この態様にはＺが
【００２８】
【化２０】
0004516430.tif 000009
から構成される群から選択され、
Ｚがフェニル及びＣ１−４アルキルで置換されており、前記Ｃ１−４アルキルが場合により１〜３個のハロ基で置換されており、前記フェニルが場合によりハロ及び場合により１〜３個のハロ基で置換されたＣ１−４アルキルから構成される群から独立して選択される１〜５個の置換基で置換されている式Ｉの化合物が含まれる。
【００２９】
本発明の別の態様はＸが場合によりハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されたＨＥＴ２であり、
Ｚが各々場合により
（ａ）ハロ、
（ｂ）場合によりハロ及びＣ１−４アルキル（前記Ｃ１−４アルキルは場合により１〜３個のハロ基で置換されている）から構成される群から独立して選択される１〜５個の基で置換されたフェニル、及び
（ｃ）Ｃ１−４アルキル又はＣ１−４アルコキシ（前記Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシは場合により１から最大数までの置換可能な位置をハロ及びヒドロキシから独立して選択される置換基で置換されている）
から構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニル又はＨＥＴ１である式Ｉの化合物に関する。
【００３０】
本発明のこの態様には、Ｘが１，２，４−オキサジアゾールである式Ｉの化合物が含まれる。本発明のこの態様には、Ｘが１，２，４−オキサジアゾールであり、Ｚが場合によりハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されたフェニルである式Ｉの化合物も含まれる。
【００３１】
本発明の別の態様は、
ＺがＣ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキル又は−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルであり、前記Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−８アルコキシ、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｃ１−６アルキル及び−ＣＨＯＨ−Ｃ１−６アルキルが場合によりフェニル及びＣ３−６シクロアルキルで置換されており、
Ｘがフェニルであり、前記フェニルが場合によりハロ、Ｃ１−４アルキル及びＣ１−４アルコキシから構成される群から独立して選択される１〜３個の置換基で置換されている式Ｉの化合物に関する。
【００３２】
本発明の別の態様はＧが−ＣＨ２−である式Ｉの化合物に関する。本発明のこの態様には、ｍ＝０であり、Ａが−ＣＯ２Ｈである式Ｉの化合物が含まれる。
【００３３】
本発明の別の態様はＲ２とＲ３が結合して環を形成しない式Ｉの化合物に関する。
【００３４】
本発明の別の態様はＲ２とＲ３が結合して下記４員単環：
【００３５】
【化２１】
0004516430.tif 000010
を形成する式Ｉの化合物に関する。
【００３６】
本発明の別の態様はＲ２とＲ３が結合して下記５員単環：
【００３７】
【化２２】
0004516430.tif 000011
を形成する式Ｉの化合物に関する。
【００３８】
本発明の別の態様はＲ２とＲ３が結合して下記６員単環：
【００３９】
【化２３】
0004516430.tif 000012
を形成する式Ｉの化合物に関する。
【００４０】
本発明の別の態様は式ＩＩ：
【００４１】
【化２４】
0004516430.tif 000013
（式中、ｎは０又は１であり、他の全変数は上記に定義した通りである）の化合物又はその医薬的に許容可能な塩もしくは水和物に関する。
【００４２】
本発明の別の態様はｎが０であり、−Ｘ−Ｚが下記の群
【００４３】
【化２５】
0004516430.tif 000014
から選択される式ＩＩの化合物に関する。
【００４４】
本発明の別の態様は式ＩＩＩ：
【００４５】
【化２６】
0004516430.tif 000015
（式中、ｎは０又は１であり、Ｙは水素又は結合であり、Ｒ１０はＣ１−４アルキルであり、各Ｒ９は独立してハロ、Ｃ１−４アルキル又はＣ１−４アルコキシであり、他の全変数は上記に定義した通りである）の化合物又はその医薬的に許容可能な塩もしくは水和物に関する。
【００４６】
本発明の別の態様は
（１）（ＲＳ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸又はその医薬的に許容可能な塩、
（２）（Ｒ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸又はその医薬的に許容可能な塩、及び
（３）（Ｓ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸又はその医薬的に許容可能な塩から選択される式ＩＩＩの化合物に関する。
【００４７】
本発明は治療を必要とする哺乳動物患者における免疫調節異常の治療方法として、前記免疫調節異常を治療するために有効な量の式Ｉの化合物を前記患者に投与することを含む方法にも関する。
【００４８】
この態様には、免疫調節異常が全身性紅斑性狼瘡、慢性リウマチ様関節炎、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス病及び喘息から構成される群から選択される自己免疫性又は慢性炎症性疾患である上記方法が含まれる。
【００４９】
この態様には、免疫調節異常が骨髄もしくは臓器移植拒絶反応又は移植片対宿主疾患である上記方法も含まれる。
【００５０】
この態様には、免疫調節異常が臓器又は組織移植、移植により誘発される移植片対宿主疾患、自己免疫性疾患としてリウマチ様関節炎、全身性紅斑性狼瘡、橋本病、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱や感染後糸球体腎炎等の感染後自己免疫疾患、炎症性及び過剰増殖性皮膚疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、紅斑性狼瘡、座瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季カタル、ベーチェット病に関連するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮ジストロフィー、角膜白斑、眼類天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス病、フォークト・小柳・原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性又は難治喘息、遅発型喘息及び気道過剰反応、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患及び血栓症に起因する血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、熱傷に関連する腸傷害、腹腔疾患、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン・バレー症候群、メニエル病、多発性神経炎、単発性神経炎、神経炎根症、甲状腺機能亢進症、バセドー病、赤血球癆、再生不良性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、顆粒球減少症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗癬、光線アレルギー過敏症、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発性動脈炎、心筋症、強皮症、ウェグナー肉芽腫症、ショーグレン症候群、脂肪過多症、好酸球性筋膜炎、歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の傷害、糸球体腎炎、脱毛を防止又は発毛を育成及び／又は発毛及び毛髪成長を促進することにより男性型脱毛症又は老年性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症及びセザリー症候群、アジソン病、予防接種・移植又は虚血性疾患後に生じる臓器の虚血−再潅流傷害、内毒素性ショック、偽膜性大腸炎、薬物又は放射線に起因する大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺−酸素又は薬物に起因する中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、鉄沈着症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、硝子体瘢痕、角膜アルカリ外傷、多形紅斑性皮膚症、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症及びセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周病、敗血症、膵炎、環境汚染・加齢・発癌・癌転移及び高山病に起因する疾患、ヒスタミン又はロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素・ウイルス性肝炎・ショック又は無酸素症に起因する壊死、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ／非Ｂ型肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症肝不全、遅発性肝不全、「慢性型急性増悪（ａｃｕｔｅ−ｏｎ−ｃｈｒｏｎｉｃ）」肝不全、化学療法効果の増加、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性痴呆症、外傷、及び慢性細菌感染から構成される群から選択される上記方法も含まれる。
【００５１】
この態様には、免疫調節異常が多発性硬化症である上記方法も含まれる。
【００５２】
この態様には、免疫調節異常がリウマチ様関節炎である上記方法も含まれる。
【００５３】
この態様には、免疫調節異常が全身性紅斑性狼瘡である上記方法も含まれる。
【００５４】
この態様には、免疫調節異常が乾癬である上記方法も含まれる。
【００５５】
この態様には、免疫調節異常が移植臓器又は組織の拒絶反応である上記方法も含まれる。
【００５６】
この態様には、免疫調節異常が炎症性腸疾患である上記方法も含まれる。
【００５７】
この態様には、免疫調節異常が急性及び慢性リンパ性白血病及びリンパ腫等のリンパ系由来悪性腫瘍である上記方法も含まれる。
【００５８】
この態様には、免疫調節異常がインスリン依存性及び非インスリン依存性糖尿病である上記方法も含まれる。
【００５９】
本発明は免疫抑制を必要とする哺乳動物患者における免疫系の抑制方法として、免疫抑制に有効な量の式Ｉの化合物を前記患者に投与することを含む方法にも関する。
【００６０】
本発明は医薬的に式Ｉの化合物と許容可能なキャリヤーから構成される医薬組成物にも関する。
【００６１】
本発明は治療を必要とする哺乳動物患者における呼吸器疾患又は障害の治療方法として、前記呼吸器疾患又は障害を治療するために有効な量の式Ｉの化合物を前記患者に投与する方法にも関する。この態様には、呼吸器疾患又は障害が喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、乳児呼吸窮迫症候群、咳、好酸球性肉芽腫、呼吸器合胞体ウイルス性細気管支炎、気管支炎拡張症、特発性肺線維症、急性肺傷害及び器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎から構成される群から選択される上記方法が含まれる。
【００６２】
この態様には、患者が呼吸器疾患又は障害を併発している上記方法も含まれる。
【００６３】
この態様には、患者が心臓血管疾患又は障害を併発している上記方法も含まれる。本発明の例証は下記化合物である。
【００６４】
【表２】
0004516430.tif 000016
0004516430.tif 000017
0004516430.tif 000018
0004516430.tif 000019
0004516430.tif 000020
【００６５】
特に指定しない限り、本発明は以下の定義を使用して記載する。
【００６６】
本明細書中の式に窒素原子が存在する場合には、当然のことながら窒素原子の原子価を満足するために十分な水素原子又は置換基が存在する。
【００６７】
「ハロゲン」又は「ハロ」なる用語はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩを含む。
【００６８】
「アルキル」なる用語は指定炭素原子数の直鎖又は分枝鎖構造とその組み合わせを意味する。従って、例えばＣ１−６アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、１，１−ジメチルエチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
【００６９】
「アルコキシ」なる用語は指定炭素原子数の直鎖、分枝鎖又は環状構造のアルコキシ基を意味する。Ｃ１−６アルコキシとしては、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ等が挙げられる。
【００７０】
「アルキルチオ」なる用語は直鎖、分枝鎖又は環状構造の指定炭素原子数のアルキルチオ基を意味する。Ｃ１−６アルキルチオとしては、例えばメチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ等が挙げられる。
【００７１】
「アルケニル」なる用語は少なくとも１個の炭素−炭素二重結合をもち、水素が付加的な炭素−炭素二重結合で置換されていてもよい指定炭素原子数の直鎖又は分枝鎖構造とその組み合わせを意味する。Ｃ２−６アルケニルとしては、例えば、エテニル、プロペニル、１−メチルエテニル、ブテニル等が挙げられる。
【００７２】
「アルキニル」なる用語は少なくとも１個の炭素−炭素三重結合をもつ指定炭素原子数の直鎖又は分枝鎖構造とその組み合わせを意味する。Ｃ３−６アルキニルとしては、例えば、プロピニル、１−メチルエチニル、ブチニル等が挙げられる。
【００７３】
「シクロアルキル」なる用語は場合により直鎖又は分枝鎖構造と組み合わされた指定炭素原子数の単環、二環又は三環構造を意味する。シクロアルキル基の例としてはシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロドデシルメチル、２−エチル−１−ビシクロ［４．４．０］デシル等が挙げられる。
【００７４】
「アリール」なる用語は単環又は二環芳香族環系として定義され、フェニル、ナフチル等が挙げられる。
【００７５】
「アラルキル」なる用語はアルキルハロゲン原子の１個を上記に定義したアリール基で置換した炭素原子数１〜６の上記に定義したアルキル基（例えばベンジル等）を意味する。
【００７６】
「アリールオキシ」なる用語は酸素原子を介して分子と結合した上記に定義したアリール基（アリール−Ｏ）を意味し、例えば、フェノキシ、ナフトキシ等が挙げられる。
【００７７】
「アラルコキシ」なる用語は酸素原子を介して分子と結合した上記に定義したアラルキル基（アラルキル−Ｏ）を意味し、例えば、ベンジルオキシ等が挙げられる。
【００７８】
「アリールチオ」なる用語は硫黄原子を介して分子と結合した上記に定義したアリール基（アリール−Ｓ）を意味し、例えば、チオフェニルオキシ、チオナフトキシ等が挙げられる。
【００７９】
「アロイル」なる用語はカルボニル基を介して分子と結合した上記に定義したアリール基（アリール−Ｃ（Ｏ）−）を意味し、例えば、ベンゾイル、ナフトイル等が挙げられる。
【００８０】
「アロイルオキシ」なる用語は酸素原子を介して分子と結合した上記に定義したアロイル基（アロイル−Ｏ）を意味し、例えば、ベンゾイルオキシ又はベンゾキシ、ナフトイル等が挙げられる。
【００８１】
「治療」なる用語は疾患又は障害の徴候及び症状から患者を回復させるために患者を治療することだけでなく、疾患又は障害の発生又は進行を予防するために無症候患者を予防処置することも意味する。「治療に有効な量」とは研究者、獣医、医師又は他の臨床医により求められる組織、系、動物又はヒトの生物学的又は医学的応答を誘発する薬剤の量を意味する。この用語は研究者、獣医、医師又は他の臨床医により求められる組織、系、動物又はヒトにおける生物学的又は医学的イベントの発生の危険を防止又は低減する薬剤の量も意味する。
【００８２】
本明細書に記載する本発明は医薬的に許容可能な塩及び水和物を含む。医薬的に許容可能な塩は金属（無機）塩と有機塩の両者を含み、そのリストはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｇ．１４１８（１９８５）に記載されている。物理的及び化学的安定性、流動性、含水度並びに溶解度に基づいて適切な塩形態を選択することは当業者に周知である。当業者の自明の通り、医薬的に許容可能な塩としては限定されないが、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩及び硝酸塩等の無機酸塩又はリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、琥珀酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩ないしパモ酸塩、サリチル酸塩及びステアリン酸塩等の有機酸塩が挙げられる。同様に、医薬的に許容可能なカチオンとしては限定されないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウム及びアンモニウム（特に第二級アミンとのアンモニウム塩）が挙げられる。上記理由で好ましい本発明の塩としてはカリウム、ナトリウム、カルシウム及びアンモニウム塩が挙げられる。式Ｉの化合物の結晶形、水和物及び溶媒和物も本発明の範囲に含まれる。
【００８３】
本明細書の目的では、「医薬的に許容可能な水和物」とは水和形を形成するために１個以上の水分子で結晶化した本発明の化合物を意味する。
【００８４】
本発明は１種以上の立体異性体形態、実質的に純粋な形態又は立体異性体の混合物の形態の式Ｉの化合物を含む。このような全異性体が本発明に含まれる。
【００８５】
そのＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１アゴニスト活性により、本発明の化合物は自己免疫性又は慢性炎症性疾患の治療又は予防に有用な免疫調節剤である。本発明の化合物は骨髄、臓器又は移植拒絶反応のように免疫抑制が正常な場合と、全身性紅斑性狼瘡、慢性リウマチ様関節炎、Ｉ型糖尿病、炎症性腸疾患、胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、水疱性類天疱瘡、サルコイドーシス、乾癬、自己免疫性筋炎、ウェグナー肉芽腫症、魚鱗癬、グレーブス病及び喘息等の自己免疫性及び慢性炎症性疾患で免疫系を抑制するために有用である。
【００８６】
特に、本発明の化合物は臓器又は組織移植、移植により誘発される移植片対宿主疾患、リウマチ様関節炎、自己免疫性疾患として全身性紅斑性狼瘡、橋本病、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎、リウマチ熱や感染後糸球体腎炎等の感染後自己免疫疾患、炎症性及び過剰増殖性皮膚疾患、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、類天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、紅斑性狼瘡、座瘡、円形脱毛症、角結膜炎、春季カタル、ベーチェット病に関連するブドウ膜症、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮ジストロフィー、角膜白斑、眼類天疱瘡、モーレン潰瘍、強膜炎、グレーブス病、フォークト・小柳・原田症候群、サルコイドーシス、花粉アレルギー、可逆性閉塞性気道疾患、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息、塵埃喘息、慢性又は難治喘息、遅発型喘息及び気道過剰反応、気管支炎、胃潰瘍、虚血性疾患及び血栓症に起因する血管損傷、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎、熱傷に関連する腸傷害、腹腔疾患、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、偏頭痛、鼻炎、湿疹、間質性腎炎、グッドパスチャー症候群、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、多発性筋炎、ギラン・バレー症候群、メニエル病、多発性神経炎、単発性神経炎、神経炎根症、甲状腺機能亢進症、バセドー病、赤血球癆、再生不良性貧血、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、顆粒球減少症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血、赤血球形成不全、骨粗鬆症、サルコイドーシス、肺線維症、特発性間質性肺炎、皮膚筋炎、尋常性白斑、尋常性魚鱗癬、光線アレルギー過敏症、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発性動脈炎、心筋症、強皮症、ウェグナー肉芽腫症、ショーグレン症候群、脂肪過多症、好酸球性筋膜炎、歯肉、歯周組織、歯槽骨、歯のセメント質の傷害、糸球体腎炎、脱毛を防止又は発毛を育成及び／又は発毛及び毛髪成長を促進することにより男性型脱毛症又は老年性脱毛症、筋ジストロフィー、膿皮症及びセザリー症候群、アジソン病、予防接種・移植又は虚血性疾患後に生じる臓器の虚血−再潅流傷害、内毒素性ショック、偽膜性大腸炎、薬物又は放射線に起因する大腸炎、虚血性急性腎不全、慢性腎不全、肺−酸素又は薬物に起因する中毒症、肺癌、肺気腫、白内障、鉄沈着症、網膜色素変性症、加齢黄斑変性症、硝子体瘢痕、角膜アルカリ外傷、多形紅斑性皮膚症、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症及びセメント皮膚炎、歯肉炎、歯周病、敗血症、膵炎、環境汚染・加齢・発癌・癌転移及び高山病に起因する疾患、ヒスタミン又はロイコトリエン−Ｃ４放出に起因する疾患、ベーチェット病、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、部分肝切除、急性肝壊死、毒素・ウイルス性肝炎・ショック又は無酸素症に起因する壊死、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ／非Ｂ型肝炎、肝硬変、アルコール性肝硬変、肝不全、劇症肝不全、遅発性肝不全、「慢性型急性増悪（ａｃｕｔｅ−ｏｎ−ｃｈｒｏｎｉｃ）」肝不全、化学療法効果の増加、サイトメガロウイルス感染、ＨＣＭＶ感染、ＡＩＤＳ、癌、老人性痴呆症、外傷、及び慢性細菌感染から構成される群から選択される疾患又は障害を治療又は予防するために有用である。
【００８７】
本発明の化合物はアルツハイマー病を治療又は予防するためにも有用である。
【００８８】
予防又は治療を必要とする哺乳動物患者における臓器又は組織の移植抵抗性又は移植拒絶反応の予防又は治療方法として、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法も本発明に含まれる。
【００８９】
更に別の態様は免疫抑制を必要とする哺乳動物患者における免疫系の抑制方法として、免疫抑制量の式Ｉの化合物を前記患者に投与することを含む方法である。
【００９０】
特に、本明細書に記載する方法は骨髄又は臓器移植拒絶反応の治療又は予防方法として、治療又は予防を必要とする哺乳動物患者に骨髄又は臓器移植拒絶反応を治療又は予防するために有効な量の式Ｉの化合物又は医薬的に許容可能なその塩もしくは水和物を投与することを含む方法に関する。
【００９１】
本発明の化合物は喘息、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、乳児呼吸窮迫症候群、咳、好酸球性肉芽腫、呼吸器合胞体ウイルス性細気管支炎、気管支炎拡張症、特発性肺線維症、急性肺傷害及び器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎等の呼吸器疾患又は障害の治療にも有用である。
【００９２】
更に、本発明の化合物はＳ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体に比較して選択性をもつＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体の選択的アゴニストである。Ｅｄｇ１選択的アゴニストは現行治療にまさる利点があり、リンパ球移行剤の治療枠を広げ、より高用量で良好な寛容性が得られるため、単独療法としての効力が改善される。
【００９３】
本発明は医薬的に許容可能なキャリヤーと式Ｉの化合物又は医薬的に許容可能なその塩もしくは水和物を含有する医薬製剤にも関する。好ましい医薬製剤の１例は第２の免疫抑制剤も含有する製剤である。このような第２の免疫抑制剤の例としては限定されないが、アザチオプリン、ブレキナーナトリウム、デオキシスパーガリン、ミゾリビン、ミコフェノール酸モルホリノエステル、シクロスポリン．ＦＫ−５０６、ラパマイシン、ＦＴＹ７２０及びＩＳＡｔｘ２４７（Ｉｓｏｔｅｃｈｎｉｋａ）が挙げられる。式Ｉの化合物を上記の１種以上等の第２の免疫抑制剤と併用投与する方法も本発明に含まれる。
【００９４】
その塩と水和物を含めた本発明の化合物は骨髄移植、外来臓器移植拒絶反応及び／又は関連障害、疾患及び疾病の予防を含めた自己免疫疾患の治療に有用である。
【００９５】
本発明の化合物は活性成分化合物を温血動物の体内の作用部位と接触させる任意手段により投与することができる。例えば、経口、局所（経皮、眼内、口腔、鼻腔内、吸入、膣内、直腸、槽内等）及び非経口投与することができる。本明細書で使用する「非経口」なる用語は皮下、静脈内、筋肉内、関節内注射又は輸液、胸骨内及び腹腔内等の投与方式を意味する。
【００９６】
化合物は医薬と共に使用するのに利用可能な任意慣用手段により個々の治療剤として又は併用治療剤として投与することができる。化合物は単独で投与してもよいが、一般には選択した投与経路と標準医薬プラクティスに基づいて選択された医薬キャリヤーと共に投与する。
【００９７】
投与用量はレシピエントの年齢、健康状態及び体重、疾患の程度、同時投与する場合にはその種類、投与頻度並びに所望される効果の種類によって異なる。一般に、活性成分化合物の１日用量は約０．１〜２０００ｍｇ／日である。通常は、１〜１００ｍｇ／日を１回又は２回以上に分けて投与すると所望結果を得るために有効である。これらの用量は自己免疫疾患の治療、外来臓器移植片拒絶反応及び／又は関連障害、疾患及び疾病の予防に有効な量である。
【００９８】
活性成分はカプセル、錠剤、トローチ、ドラジェ、顆粒剤及び散剤等の固体剤形、又はエリキシル剤、シロップ、エマルション、分散液及び懸濁液等の液体剤形で経口投与することができる。活性成分は分散液、懸濁液又は溶液等の滅菌液体剤形で非経口投与することもできる。活性成分を投与するために使用可能な他の剤形としては局所投与用として軟膏、クリーム、滴剤、経皮パッチもしくは散剤、眼内投与用として眼科用溶液もしくは懸濁液（即ち点眼液）、吸入もしくは鼻腔内投与用としてエアゾールスプレーもしくは粉末組成物、又は直腸もしくは膣投与用としてクリーム、軟膏、スプレーもしくは座剤か挙げられる。
【００９９】
ゼラチンカプセルは活性成分と粉末キャリヤー（例えばラクトース、澱粉、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等）を含む。同様の希釈剤を使用して圧縮錠を製造することができる。錠剤とカプセルの両者は数時間にわたって医薬を連続放出するように持続放出製剤として製造することができる。圧縮錠は不快な味を隠し、錠剤を環境から保護するために糖衣又はフィルムコーティングしてもよいし、胃腸管で選択的に崩壊するように腸溶コーティングしてもよい。
【０１００】
経口投与用液体剤形には患者が受け入れ易いように着色剤とフレーバーを添加することができる。
【０１０１】
一般に、水、適当な油類、食塩水、水性デキストロース（グルコース）、及び関連糖溶液及びグリコール（例えばプロピレングリコール又はポリエチレングリコール）が非経口溶液に適したキャリヤーである。非経口投与用溶液は活性成分の水溶性塩と、適当な安定剤と、必要に応じて緩衝物質を含有することが好ましい。亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、又はアスコルビン酸等の酸化防止剤の単独使用又は併用も適切な安定剤である。クエン酸とその塩及びナトリウムＥＤＴＡも使用される。更に、非経口溶液は塩化ベンズアルコニウム、メチル又はプロピルパラベン、及びクロロブタノール等の防腐剤を添加することができる。
【０１０２】
適切な医薬キャリヤーは本分野の標準参考書であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａ．Ｏｓｏｌに記載されている。
【０１０３】
吸入投与では、本発明の化合物を加圧パック又はネブライザーからエアゾールスプレー形態で送達すると簡便である。製剤化可能な散剤として化合物を送達してもよいし、通気粉末吸入装置を使用して粉末組成物を吸入してもよい。吸入に好ましい送達システムは定量吸入（ＭＤＩ）エアゾールであり、弗化水素や炭化水素等の適当な噴射剤中の式Ｉの化合物の懸濁液又は溶液として製剤化することができる。
【０１０４】
眼内投与では、眼の角膜及び内部領域に化合物を浸透させるために十分な時間にわたって化合物を眼球表面と接触維持するように、適当な眼科用ビークル中の式Ｉの化合物の適当な重量百分率溶液又は懸濁液で眼科用製剤を製剤化する。
【０１０５】
本発明の化合物の投与に有用な医薬剤形の例を以下に挙げる。
【０１０６】
カプセル
標準２ピースハードゼラチンカプセルに各々粉末活性成分１００ｍｇ、ラクトース１５０ｍｇ、セルロース５０ｍｇ、及びステアリン酸マグネシウム６ｍｇを充填することにより多数の単位カプセルを製造する。
【０１０７】
ソフトゼラチンカプセル
大豆油、綿実油又はオリーブ油等の消化性油中の活性成分の混合物を製造し、容積型ポンプによりゼラチンに注入し、活性成分１００ｍｇを含有するソフトゼラチンカプセルを形成する。カプセルを洗浄し、乾燥する。
【０１０８】
錠剤
１錠当たり活性成分１００ｍｇ、コロイド状二酸化ケイ素０．２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇ、微結晶質セルロース２７５ｍｇ、澱粉１１ｍｇ及びラクトース９８．８ｍｇとなるように慣用方法により多数の錠剤を製造する。口当たりをよくするため又は吸収を遅らせるように適当なコーティングを付けてもよい。
【０１０９】
注射剤
活性成分１．５重量％をプロピレングリコール１０容量％中で撹拌することにより注射投与に適した非経口組成物を製造する。溶液を注射用水で希釈し、滅菌する。
【０１１０】
懸濁液
５ｍｌ当たり微粉状活性成分１００ｍｇ、ナトリウムカルボキシメチルセルロース１００ｍｇ、安息香酸ナトリウム５ｍｇ、ソルビトール溶液（Ｕ．Ｓ．Ｐ．）１．０ｇ、及びバニリン０．０２５ｍｌを含有するように経口投与用水性懸濁液を製造する。
【０１１１】
本発明の化合物を段階的又は別の治療剤と併用投与する場合には、一般に同一剤形を使用することができる。薬剤を物理的に併用投与する場合には、併用する薬剤の相溶性に応じて剤形と投与経路を選択すべきである。従って、併用投与なる用語は２種の薬剤を同時又は順次又は２種の活性成分の固定用量併用剤として投与する場合を含む。
【０１１２】
合成方法
本発明で化合物Ｉを製造するために使用することができる２種類の一般方法をスキーム１に示す。相溶性溶媒（例えばメタノール、エタノール、アセトニトリル、塩化メチレン）中で適当な還元剤（例えばシアノホウ水素化ナトリウム、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム、ホウ水素化ナトリウム）の存在下にＩＩをケトンＩＩＩと反応させると、構造Ｉの化合物が得られる。あるいは、室温以上にて相溶性溶媒（例えばメタノール、エタノール、アセトニトリル）中で適当な塩基例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）の存在下に中間体ＩＩをハロゲン化物又はスルホン酸エステルＩＶと反応させ、構造Ｉの化合物を得ることもできる。構造式ＩＩ中のＡがＩへの変換を妨げる場合には、Ａを遮蔽し、ＩＩＩ又はＩＶとのカップリング後にＡを遊離させる適当な保護基（Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｗｕｔｓ，ｅｄｓ．，”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）を利用することができる。Ｉの個々の立体異性体は当業者に公知の方法により得ることができ、（限定されないが）立体特異的合成、Ｉの塩又は純エナンチオマー酸もしくは塩基によるその合成で使用される中間体の任意のものの分解、Ｉ又は純エナンチオマー固定相を使用するＨＰＬＣによるその合成で使用される中間体の任意のものの分解が挙げられる。
【０１１３】
【化２７】
0004516430.tif 000021
中間体ＩＩは市販品（例えばＲ１＝Ｈであり、Ｒ２とＲ３が結合してアゼチジン環を形成し、ｍ＝０、Ａ＝カルボン酸であるアゼチジン−３−カルボン酸）でもよいし、公開方法に従って製造することもできる（例えばピロリジン−３−（Ｒ）−カルボン酸とピロリジン−３−（Ｓ）−カルボン酸の代表的合成はＧｍｅｉｎｅｒ，Ｏ．らによりＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９８，１４９１に記載されており、５−（３−アミノプロピル）−１Ｈ−テトラゾールの代表的合成はＲｉｖａｌ，Ｙ．らによりＳｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０００，１５８７に記載されている）。上記スキーム１で中間体ＩＩとして使用することができる化合物を製造するために使用可能な数種の方法をスキーム２に示す。Ｒ１＝Ｈであり、Ｒ２とＲ３が結合してピロリジン環を形成し、ｍ＝０、Ａ＝５−テトラゾリルである場合には、適当な溶媒（例えば塩化メチレン、アセトニトリル）中で触媒量の酸（例えばトリフルオロ酢酸、リン酸）の存在下にアクリロニトリル（ＩＶ）をＮ−メトキシメチル−Ｎ−トリシリルメチルベンジルアミンと反応させると、構造式Ｖの化合物が得られる。ＶのＮ−ベンジル基をカルバミン酸ベンジルに変換した後にテトラゾール形成（例えば高温にて塩化アンモニウム、ナトリウムアジド、ＤＭＦ；トリメチル錫アジド、トルエン、還流）し、次いで触媒水素化すると、ＶＩが得られる。Ｒ１＝Ｈであり、Ｒ２とＲ３が結合してアゼチジン環を形成し、ｍ＝０、Ａ＝５−テトラゾリルである場合には、適当な溶媒（例えばジオキサン、塩化メチレン）中で塩基（例えば水酸化ナトリウム水溶液、トリエチルアミン）の存在下にアゼチジン−３−カルボン酸（ＶＩＩ）をクロロギ酸ベンジルと反応させ、当業者に公知の方法（Ｌａｒｏｃｋ，”Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ”，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．参照）を使用してカルボン酸をニトリルに変換すると、構造式ＶＩＩＩの化合物が得られる。ニトリルをテトラゾールに変換（例えばトリメチルシリルアジド、ジブチル錫オキサイド、トルエン、還流）した後に触媒水素化すると、ＩＸが得られる。
【０１１４】
【化２８】
0004516430.tif 000022
【０１１５】
上記スキーム１で中間体ＩＩＩとして使用することができる化合物を製造するために使用可能な数種の方法をスキーム３に示す。Ｒ４＝Ｈ、Ｒ５＝アルキル又はハロ、Ｄ＝−ＣＨ２−、Ｙ＝−Ｏ−及びｐ＝１である場合には、高温にて適当な溶媒（例えば塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン）中で適当なルイス酸（例えば三塩化アルミニウム、三弗化ホウ素）の存在下に適当に置換されたアニソール（Ｘ）を塩化３−クロロプロピオニルと反応させた後に高温にてプロトン酸（例えば硫酸）で処理すると、構造式ＸＩの化合物が得られる。適当な溶媒（例えば塩化メチレン、アセトニトリル）中で適当なルイス酸（例えば三塩化アルミニウム、三臭化ホウ素、ヨウ化トリメチルシリル）を使用してメチルエーテルを分解すると、ＸＩＩが得られる。Ｚ＝アルキル又は置換アルキルである場合には、室温以上にて相溶性溶媒（例えばメタノール、エタノール、アセトニトリル）中で適当な塩基（例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）の存在下にＸＩＩＩをアルキルハロゲン化物又はスルホン酸エステルと反応させると、構造式ＸＩＶの化合物が得られる。あるいは、適当な溶媒（ＴＨＦ、トルエン、塩化メチレン）中でＸＩＩＩをアルコール又は置換アルコール、アゾジカルボン酸ジアルキル（例えばアゾジカルボン酸ジエチル、アゾジカルボン酸ジイソプロピル）及びトリフェニルホスフィンと反応させると、ＸＩＶが得られる。Ｙが１，２，４−オキサジアゾリルである場合には、適当な溶媒（例えばメタノール、エタノール）中でＸＶ（Ｒｅｉｃｈ，Ｓ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｙ，２０００，１６７０）を対応するアルコール（例えばホウ水素化ナトリウム）に還元した後に、室温以上にて適当な溶媒（例えばメタノール、エタノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）中で中和塩基（例えばトリエチルアミン、重炭酸ナトリウム）の存在下にヒドロキシルアミンＨＣｌと反応させると、Ｎ−ヒドロキシアミジンＸＶＩＩが得られる。Ｎ−ヒドロキシアミジンＸＶＩＩを適当な溶媒（キシレン、トルエン）中でアミン塩基（ピリジン、ＤＢＵ、トリエチルアミン）の存在下に加熱しながら酸塩化物で処理すると、中間体ＸＶＩＩＩが得られる。あるいは、ＸＶＩＩを適当な溶媒（キシレン、トルエン、ＤＭＦ、１，２−ジクロロエタン）中でカルボン酸、カルボジイミド（例えばＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾールで処理すると、ＸＶＩＩＩが得られる。いずれの方法で製造した場合にも、穏和な酸化（ジクロロメタン中−７８℃にて塩化オキサリルとＤＭＳＯで処理した後にトリアルキルアミン塩基で処理し、加温する（Ｓｗｅｒｎ酸化）か又はジクロロメタン中にてデス・マーチンペルヨージナンで処理する）によりＸＶＩＩＩのヒドロキシ基をケトンＸＩＸに変換することができる。
【０１１６】
【化２９】
0004516430.tif 000023
【０１１７】
上記スキーム１で中間体ＩＩＩとして使用することができる化合物を製造するために使用可能な他の数種の方法をスキーム４に示す。Ｚ＝置換フェニルであり、Ｙが単結合である場合には、室温以上にて適当な溶媒（例えば１，４−ジオキサン、ＴＨＦ）中でパラジウム触媒（例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム、２−ジシクロヘキシルホスフィノ）ビフェニル及び酢酸パラジウム）と適当な塩基（例えば炭酸カリウム、弗化カリウム）の存在下にＸＸを置換フェニルボロン酸（ＸＸＩ）と反応させると、ＸＸＩＩが得られる。Ｑが４−ベンジルオキシである場合には、ベンジル基を除去する（Ｐｄ／Ｃ，Ｈ２，メタノール）と、中間体ＸＸＩＩＩが得られ、中間体ＸＩＩＩからＸＩＶへの変換について記載した手順を使用して中間体ＸＸＩＶに変換することができる。
【０１１８】
【化３０】
0004516430.tif 000024
【０１１９】
本発明の化合物の製造方法を下記実施例に更に例証する。代替経路も当業者に自明である。
【０１２０】
概説
溶液の濃縮は減圧下にロータリーエバポレーターで実施した。シリカゲル（２３０〜４００メッシュ）で慣用フラッシュクロマトグラフィーを実施した。指定サイズのプレパックカートリッジにシリカゲル（３２〜６３ｍＭ，６０Å細孔径）を充填し、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ装置（Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．）を使用してもフラッシュクロマトグラフィーを実施した。特に指定しない限り、ＮＭＲスペクトルはＣＤＣｌ３溶液中で測定した。カップリング定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表す。略語はジエチルエーテル（エーテル）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、飽和水溶液（飽和）、室温（ｒｔ）、時間（ｈ）、分（ｍｉｎ）である。
【０１２１】
ＨＰＬＣ法
ＨＰＬＣ  Ａ：ＹＭＣ  ＯＤＳ  Ａ，５μ，４．６ｘ５０ｍｍカラム，１０：９０→９５：５ｖ／ｖＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ勾配４．５分間の後、９５：５ｖ／ｖＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡに１．５分間維持；２．５ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ。
【０１２２】
ＨＰＬＣ  Ｂ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＰｒｏＣ１８，５μ，２０ｍｍｘ１５０ｍｍカラム，１０：９０→８０：２０ｖ／ｖＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ勾配２３分間の後、１００：０ｖ／ｖＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡに７分間維持；２０ｍＬ／ｍｉｎ，２５４ｎｍ。
【０１２３】
インダノン中間体の製造
【０１２４】
インダノン１
５−オクチルオキシ−１−インダノン
５−ヒドロキシ−１−インダノン（１．００ｇ，６．７４ｍｍｏｌ）、１−ヨードオクタン（１．３４ｍＬ，７．４２ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．４０ｇ，１０．１２ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃のアセトニトリル中で一緒に撹拌した。３時間後に反応混合物を冷却し、シリカゲルに加え、１５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出させると、白色固体１．１４ｇが得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１  Ｈ），６．８８−６．９０（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．５５Ｈｚ，２Ｈ），３．０８（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４２−１．５０（ｍ，２Ｈ），１．２４−１．３８（ｍ，８Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ２６１．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１２５】
インダノン２
５−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）−１−インダノン
ステップＡ：（Ｅ／Ｚ）−２−フェニル−３−クロロ−４，４，４−トリフルオロ−２−ブタナール
オキシ塩化リン（７．５ｍＬ，８０ｍｍｏｌ）を０℃のＤＭＦ１５ｍＬに加えた。得られた混合物を室温まで加温し、１時間撹拌した。１，１，１−トリフルオロメチル−３−フェニル−２−プロパン５．０ｇ（２６．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を加え、得られた混合物を７０℃で２０時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、氷１５０ｇに注ぎ、周囲温度で１時間撹拌した。混合物をクエンチし、エーテル２００ｍＬで抽出した。抽出層を水２００ｍＬで洗浄し、乾燥し、濃縮した。ヘキサン（４Ｌ）を溶離液としてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでクロマトグラフィー精製すると、標記化合物５．１ｇ（８２％）が得られた。
【０１２６】
ステップＢ：（４−フェニル−５−トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸エチル
初期温度を２５℃に維持しながら水素化ナトリウム６００ｍｇ（２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４５ｍＬ）懸濁液にメルカプト酢酸エチル（２．７５ｍＬ，２５．０ｍｍｏｌ）を加えた。（Ｅ／Ｚ）−２−フェニル−３−クロロ−４，４，４−トリフルオロ−２−ブタナール（ステップＡから）５．１０ｇ（２１．７ｍｍｏｌ）の溶液を加え、得られた混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物に飽和ＮＨ４Ｃｌ５０ｍＬを加えてクエンチし、得られた混合物をエーテル２５０ｍＬと水１００ｍＬに分配した。有機層を分離し、乾燥し、濃縮した。ヘキサン（１Ｌ）、次いで４：１ｖ／ｖヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２（１Ｌ）を溶離液としてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでクロマトグラフィー精製すると、標記化合物５．１０ｇ（７８％）が得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）δ１．４０（ｔ，Ｊ＝７．２，３Ｈ），４．３９（ｑ，Ｊ＝７．２，２Ｈ），７．４２（ａｐｐ  ｓ，５Ｈ），７．７４（ｑ，Ｊ＝１．６，１Ｈ）。
【０１２７】
ステップＣ：（４−フェニル−５−トリフルオロメチル）チオフェン−２−カルボン酸
４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン−２−カルボン酸エチル（ステップＢから）５．１０ｇ（１７．０ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍＬ）溶液を５．０Ｎ  ＮａＯＨ１０ｍＬで処理し、室温で３０分間撹拌した。エタノールを減圧除去した。残留水性混合物を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ２まで酸性化した後、１：１ｖ／ｖ酢酸エチル／エーテル３００ｍＬで抽出した。抽出層を分離し、乾燥し、濃縮した。２０：１ｖ／ｖヘキサン／エーテル２００ｍＬから再結晶すると、標記化合物４．３０ｇ（９３％）が得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ７．４３（ａｐｐ  ｓ，５Ｈ），７．８４（ａｐｐ  ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）δ１２１．７（ｑ，Ｊ＝２６９），１２８．５，１２８．６，１２８．８，１３２．５（ｑ，Ｊ＝３６），１３３．３，１３３．８，１３７．５，１４４．８，１６７．０。
【０１２８】
ステップＤ：２−ヒドロキシメチル−４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン
４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン−２−カルボン酸（ステップＣから）２．１０ｇ（７．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液をＴＨＦ中２．０Ｍボランジメチルスルフィド錯体５．０ｍＬで処理した。得られた溶液を３時間加熱還流し、室温まで冷却し、ＭｅＯＨ１０ｍＬを加えてクエンチし、濃縮した。９：１ｖ／ｖヘキサン／酢酸エチルを溶離液としてＢｉｏｔａｇｅ  ４０Ｍカートリッジでクロマトグラフィー精製すると、標記化合物１．９５ｇ（９８％）が得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ２．０５（ａｐｐ  ｓ，１Ｈ），４．８７（ｓ，２Ｈ），６．９９（ｓ，１Ｈ），７．４１（ａｐｐ  ｓ，５Ｈ）。
【０１２９】
ステップＥ：５−（（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ）−１−インダノン
２−ヒドロキシメチル−４−フェニル−５−トリフルオロメチルチオフェン（ステップＤから）０．２５ｇ（０．９７ｍｍｏｌ）、５−ヒドロキシ−１−インダノン０．１７ｇ（１．１６ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン０．３１ｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の０℃ＴＨＦ（２．５ｍＬ）溶液をアゾジカルボン酸ジエチル０．１８ｍＬ（０．１６ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を室温まで加温し、２時間撹拌した。反応混合物をシリカゲルにロードし、３３％酢酸エチル／ヘキサンで溶出すると標記化合物０．３５ｇ（０．９０ｍｍｏｌ，７８％）が白色固体として得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）δ７．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４２−７．４７（ｍ，５Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．０１−７．０３（ｍ，２Ｈ），５．３４（ｓ，２Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），２．７２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ３８８．９（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３０】
インダノン３
５−［（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ］−６−メチル−１−インダノン
ステップＡ：５−ヒドロキシ−６−メチル−１−インダノン
塩化アルミニウム（３．０ｇ，２２．２ｍｍｏｌ）とｏ−クレゾール（２．０ｇ，１８．５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１０ｍＬ）懸濁液に撹拌下に塩化４−クロロブロピオニル（２．０ｍＬ，２０．４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で一晩撹拌後にメタノールを加えた後に２Ｎ塩酸を加えて反応混合物をクエンチした。生成物を塩化メチレン（３ｘ３０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮すると、無色油状物が得られた。この油状物を濃硫酸（１０ｍＬ）で９０℃にて１時間処理し、水（５０ｍＬ）で希釈し、生成物を塩化メチレン（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。３３％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、標記化合物０．４７ｇが得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．５６（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），５．３６（ｓ，１Ｈ，ＯＨ），３．０４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），２．６５（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ）。
【０１３１】
ステップＢ：５−［（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）メトキシ］−６−メチル−１−インダノン
５−ヒドロキシ−１−インダノンを５−ヒドロキシ−６−メチル−１−インダノン（ステップＢから）に変えた以外はインダノン３，ステップＥに記載した手順と同様の手順を使用して標記化合物を製造した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．５８（ｓ，１Ｈ），７．４０−７．４５（ｍ，５Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｓ，１Ｈ），３．０９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ）。
【０１３２】
インダノン４
３−（１−オキソ−５−インダニル）−５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール
ステップＡ：５−シアノ−１−ヒドロキシインダン
５−シアノ−１−インダノン（３．４０ｇ，２１．６３ｍｍｏｌ，Ｒｅｉｃｈ，Ｓ．Ｈ．ら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０００，４３，１６７０−１６８３に従って製造）のメタノール（５０ｍＬ）溶液をホウ水素化ナトリウム（０．２５ｇ，６．４８ｍｍｏｌ）で処理した。３時間撹拌後に反応混合物を塩化メチレン（５０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。水層を更に塩化メチレン（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。抽出層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。４０％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、標記化合物２．４５ｇ（１５．４０ｍｍｏｌ，７１％）が白色固体として得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４８−７．５４（ｍ，３Ｈ），５．２５−５．２９（ｍ，１Ｈ），３．０３−３．１０（ｍ，２Ｈ），２．８１−２．８９（ｍ，２Ｈ），２．５２−２．５９（ｍ，２Ｈ），１．９４−２．０１（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）δ１５０．１，１４４．２，１３０．９，１２８．６，１２５．０，１１９．１，１１１．８，７５．９，３５．８，２９．５。
【０１３３】
ステップＢ：Ｎ−ヒドロキシ（１−ヒドロキシ−５−インダニル）アミジン
５−シアノ−１−ヒドロキシインダン（２．４５ｇ，１５．４４ｍｍｏｌ，ステップＡから）、塩酸ヒドロキシルアミン（１．６０ｇ，２３．１７ｍｍｏｌ）及び重炭酸ナトリウム（６．５ｇ，７７．０４ｍｍｏｌ）のメタノール（４０ｍＬ）溶液を６０℃まで加熱し、一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、濃縮すると、白色フォームが得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．５４−７．６２（ｍ，３Ｈ），５．２５（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．０６−３．１４（ｍ，２Ｈ），２．８６−２．９４（ｍ，２Ｈ），２．４８−２．５８（ｍ，２Ｈ），１．９４−２．０２（ｍ，２Ｈ）。
【０１３４】
ステップＣ：３−（１−オキソ−５−インダニル）−５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール
４−（２−メチルプロピル）安息香酸（２．７４ｇ，１５．４４ｍｍｏｌ）、塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（２．９５ｇ，１５．４４ｍｍｏｌ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（２．０８ｇ，１５．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液を室温で３０分間撹拌した。Ｎ−ヒドロキシ（１−ヒドロキシ−５−インタニル）アミジン（ステップＢから）を加え、反応混合物をまず室温で１時間撹拌した後、８０℃まで１８時間加熱した。反応混合物を冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、生成物を塩化メチレン（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮すると、油状物が得られた。この油状物を塩化メチレン（３０ｍＬ）に溶かし、デス・マーチンペルヨージナン（５ｇ）を加えた。１時間撹拌後、２Ｎ  ＮａＯＨ（１００ｍＬ）を反応混合物に加え、生成物を塩化メチレン（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。１５％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、標記化合物１．６ｇ（４．４８ｍｍｏｌ）が黄色固体として得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．３１（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５８（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．９０−１．９８（ｍ，１Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ３３３．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３５】
インダノン５
３−（１−オキソ−５−インダニル）−５−（４−シクロヘキシルフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール
ステップＣの４−イソブチル安息香酸を４−シクロヘキシル安息香酸に変えた以外はインダノン４と同様の手順を使用して標記化合物を製造した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．３１（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５４−２．６４（ｍ，１Ｈ），１．２２−１．９８（ｍ，１０Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ３５９．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３６】
インダノン６
３−（１−オキソ−５−インダニル）−５−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−２−チエニル）−１，２，４−オキサジアゾール
ステップＣの４−イソブチル安息香酸を４−フェニル−５−トリフルオロメチル−チオフェン−２−カルボン酸（インダノン２，ステップＣから）に変えた以外はインダノン４と同様の手順を使用して標記化合物を製造した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．３０（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．５０（ｍ，５Ｈ），３．２９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１３７】
インダノン７
５−（４−（シクロヘキシルメトキシ）フェニル）−６−メチル−１−インダノン
ステップＡ：５−（トリフルオロメタンスルホニルオキシ）−６−メチル−１−インダノン
５−ヒドロキシ−６−メチル−１−インダノン（１．６９ｇ，１０．４３ｍｍｏｌ，インダノン３，ステップＡから）と２，６−ルチジン（１．８０ｍＬ，１１．４７ｍｍｏｌ）の０℃塩化メチレン溶液に無水トリフルオロメタンスルホン酸（１．９０ｍＬ，１１．４７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後に反応混合物を２Ｎ塩酸（５０ｍＬ）でクエンチし、生成物を塩化メチレン（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。１５％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、黄色固体（０．２５ｇ）が得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７０（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｓ，１Ｈ），３．１６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．７４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ２９５．０（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３８】
ステップＢ：５−（４−ベンジルオキシフェニル）−６−メチル−１−インダノン
５−（トリフルオロメタンスルホニルオキシ）−６−メチル−１−インダノン（０．１５ｇ，０．５１ｍｍｏｌ，ステップＡから）、４−ベンジルオキシフェニルボロン酸（０．１７ｇ，０．７７ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（５．７ｍｇ，０．０２５ｍｍｏｌ）、トリシクロシクロヘキシルホスフィン（８．６ｍｇ，０．０３０ｍｍｏｌ）及び弗化カリウム（０．０９８ｇ，１．６８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２．５ｍＬ）溶液を室温で撹拌した。５分後に反応混合物をシリカゲルにロードし、生成物を２５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出すると黄色固体（０．２０ｇ）が得られた：ＥＳＩ−ＭＳ  ３２９．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１３９】
ステップＣ：５−（４−（シクロヘキシルメトキシ）フェニル）−６−メチル−１−インダノン
１：１メタノール／酢酸エチル溶液（１０ｍＬ）中の５−（４−ベンジルオキシフェニル）−６−メチル−１−インダノン（０．２０ｇ，ステップＢから）と炭素担持パラジウム（０．１０ｇ，１０％）の溶液を１気圧Ｈ２下に室温で撹拌した。１時間後に反応混合物を濾過し、濃縮すると、黄色固体（０．０９４ｇ）が得られた。この固体とブロモメチルシクロヘキサン（０．０６７ｇ，０．７８ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（０．１７ｇ，１．１８ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃のアセトニトリル（５ｍＬ）中で撹拌した。２４時間後に反応混合物を冷却し、シリカゲルにロードし、生成物を２５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出すると、白色固体（０．０３５ｇ）が得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６５（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．７１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．３０（ｓ，３Ｈ），１．６８−１．９２（ｍ，６Ｈ），１．１８−１．３８（ｍ，３Ｈ），１．０４−１．１３（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ３３５．５（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４０】
インダノン８
５−（４−ベンジルオキシフェニル）−１−インダノン
４−ベンジルオキシフェニルボロン酸（０．１５ｇ，０．６６ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−１−インダノン（０．１０ｇ，０．４４ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（２．０ｍｇ，０．００９ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスフィン（７．０ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）及び弗化カリウム（０．０７７ｇ，１．３２ｍｍｏｌ）のジオキサン（２．５ｍＬ）溶液を７５℃で３時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過した。２５％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製すると、所望生成物０．０５ｇが得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｔ，３Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３８−７．４２（ｍ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．１８（ｓ，２Ｈ），３．２３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１４１】
インダノン９
５−（４−（シクロヘキシルメトキシ）フェニル）−１−インダノン
ステップＡ：５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−インダノン
インダノン８（０．１３ｇ，０．４１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍＬ）に溶かし、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０５ｇ）を加えた。反応混合物を１気圧Ｈ２下に１６時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、１５％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーで精製すると、所望生成物５２ｍｇが得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ），７．５５−７．６２（ｍ，３Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ−８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．７５（ｓ，２Ｈ），３．２２（ｓ，２Ｈ），２．７８（ｓ，２Ｈ）。
【０１４２】
ステップＢ：５−（４−（シクロヘキシルメトキシ）フェニル）−１−インダノン
５−（４−ヒドロキシフェニル）−１−インダノン（０．５２ｇ，０．２３ｍｍｏｌ，ステップＡから）、ブロモメチルシクロヘキサン（０．５３ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．５８ｇ，０．４２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２．５ｍＬ）溶液を８０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈し、水洗した。１０％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると、生成物０．２９ｇが得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，３Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ），３．２１（ｓ，２Ｈ），２．７８（ｓ，２Ｈ），２．０８（ｓ，１Ｈ），１．９０−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．８６（ｍ，２Ｈ），１．２０−１．４２（ｍ，４Ｈ），１．０７−１．１８（ｍ，２Ｈ）。
【０１４３】
実施例の製造
【０１４４】
（実施例１）
（＋／−）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸，トリフルオロ酢酸塩
インダノン４（０．０５０ｇ，０．１５１ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸（０．０２３ｇ，０．２２６ｍｍｏｌ）及びシアノホウ水素化ナトリウム（９．３ｍｇ，０．１５１ｍｍｏｌ）の懸濁液を６０℃のメタノール（１ｍＬ）中で加熱した。４時間後に溶液を冷却した。順相ＨＰＬＣ精製（ＨＰＬＣ  Ｂ）により標記化合物（０．５３ｇ）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．１９（ｓ，１Ｈ），８．１３−８．１５（ｍ，３Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．５，７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５２−４．６０（ｍ，２Ｈ），４．４１−４．４８（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｄｔ，Ｊ＝８．１５，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｄｄｄ，Ｊ＝３．７，９．２，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．５６−２．６６（ｍ，３Ｈ），２．２２−２．３０（ｍ，１Ｈ），１．９２−２．００（ｍ，１Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ４１８．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１４５】
（実施例３−５）
以下の実施例はインダノン４を適当なインダノンに変えた以外は実施例１に記載した手順と同様の手順を使用して製造した。
【０１４６】
【表３】
0004516430.tif 000025
0004516430.tif 000026
【０１４７】
（実施例６−１０）
以下の実施例はインダノン４をインダノン２に変え、アゼチジンカルボン酸を適当なアミノ酸に変えた以外は実施例１に記載した手順と同様の手順を使用して製造した。
【０１４８】
【表４】
0004516430.tif 000027
0004516430.tif 000028
【０１４９】
（実施例１１−１３）
以下の実施例はインダノン４を適当なインダノンに変えた以外は実施例１に記載した手順と同様の手順を使用して製造した。
【０１５０】
【表５】
0004516430.tif 000029
0004516430.tif 000030
【０１５１】
（実施例１４−１６）
以下の実施例はインダノン４を適当なインダノンに変え、アゼチジン−３−カルボン酸を適当なアミンに変えた以外は実施例１に記載した手順と同様の手順を使用して製造した。
【０１５２】
【表６】
0004516430.tif 000031
0004516430.tif 000032
【０１５３】
（実施例１７）
（Ｒ又はＳ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸，トリフルオロ酢酸塩
ステップＡ：（±）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸メチル
インダノン４（１．００ｇ，３．０１ｍｍｏｌ）、アゼチジン−３−カルボン酸メチル塩酸塩（０．５０ｇ，３．３１ｍｍｏｌ）及びシアノホウ水素化ナトリウム（０．０９３ｇ，１．５０ｍｍｏｌ）の懸濁液を６０℃のメタノール（１ｍＬ）中で加熱した。１８時間後に反応混合物を冷却し、得られた固体を濾取すると、生成物０．５１ｇが白色固体として得られた。有機層を合わせて濃縮し、６０％酢酸エチル／ヘキサンを溶離液としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製すると更に生成物０．６ｇが油状物として得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．１１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），８．４（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），３．９５（ｄｄ，Ｊ＝３．７，６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．６４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３５（ｑｕｉｎｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｄｔ，Ｊ＝７．９，１６．０Ｈｚ，１Ｈ），２．８９（ｄｄｄ，Ｊ＝４．６，８．７，１６．０，１Ｈ），２．５７（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．１２−２．２０（ｍ，１Ｈ），１．９４−２．０２（ｍ，１Ｈ），１．９３（ｍ，１Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ４３２．２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１５４】
分取ＨＰＬＣ（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ  ２ｘ２５ｃｍカラム，９８：２ｖ／ｖ  ｎ−ヘプタン／２−プロパノール，８ｍＬ／ｍｉｎ，λ＝２５４ｎｍ）を使用してエナンチオマーを分離した。エナンチオマー１，ｔ＝１９．２分。エナンチオマー２，ｔ＝２１．６分。
【０１５５】
ステップＢ：（Ｒ又はＳ）−１−｛５−［５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル｝アゼチジン−３−カルボン酸ＴＦＡ塩
１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸メチル，エナンチオマー１（ステップＡから，０．１０ｇ，０．２３ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（１Ｎ水溶液，０．６ｍＬ）をメタノール（１ｍＬ）中で６０℃に加熱した。２時間後に反応混合物を冷却し、トリフルオロ酢酸で酸性化した。ＨＰＬＣ精製（ＨＰＬＣ  Ｂ）により標記化合物が白色固体として得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．１９（ｓ，１Ｈ），８．１３−８．１５（ｍ，３Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．５，７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５２−４．６０（ｍ，２Ｈ），４．４１−４．４８（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｄｔ，Ｊ＝８．１５，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｄｄｄ，Ｊ＝３．７，９．２，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．５６−２．６６（ｍ，３Ｈ），２．２２−２．３０（ｍ，１Ｈ），１．９２−２．０（ｍ，１Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ４１８．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１５６】
（実施例１８）
（Ｓ又はＲ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸，トリフルオロ酢酸塩
標記化合物は実施例１７，ステップＢに記載した手順と同様の手順を使用して１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸メチル，エナンチオマー２（実施例１７，ステップＡ）から製造した：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．１９（ｓ，１Ｈ），８．１３−８．１５（ｍ，３Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ２Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．５，７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５２−４．６０（ｍ，２Ｈ），４．４１−４．４８（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｍ，１Ｈ），３．２７（ｄｔ，Ｊ＝８．１５，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｄｄｄ，Ｊ＝３．７，９．２，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．５６−２．６６（ｍ，３Ｈ），２．２２−２．３０（ｍ，１Ｈ），１．９２−２．００（ｍ，１Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ４１８．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１５７】
（実施例１９）
（Ｒ又はＳ）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸
（±）−１−（５−（５−（４−（２−メチルプロピル）フェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）アゼチジン−３−カルボン酸メチル，エナンチオマー１（実施例１７，ステップＡから）４．５ｇのＭｅＯＨ（２５ｍＬ）溶液を５．０Ｎ  ＮａＯＨ３．０ｍＬで処理し、得られた混合物を３時間加熱還流した。混合物を冷却し、４：１ｖ／ｖＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨで希釈し、濃ＨＣｌで中和した。固形分を濾過し、濾液を濃縮した。１７：３ｖ／ｖＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＋１％ＮＨ４ＯＨ４Ｌと次に３：１ｖ／ｖＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＋１％ＮＨ４ＯＨ４Ｌを使用してＢｉｏｔａｇｅ  ７５Ｓカートリッジでクロマトグラフィーにより精製すると、標記化合物２．６０ｇが得られた：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．０８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８５−３．８８（ｍ，１Ｈ），３．５０（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝７．５Ｈ，１Ｈ），３．３９（ａｐｐ  ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２６（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１３−３．１８（ｍ，１Ｈ），２．９７−３．３０（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．８７（ｍ，１Ｈ），２．５７（ａｐｐ  ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．４９（ｔ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０３−２．１１（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．８９（ｍ，１Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ４１８．１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１５８】
生物活性
本発明の化合物のＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６又はＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８活性は以下のアッセイを使用して評価することができる。
【０１５９】
Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体とのリガンド結合アッセイ
５０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、１ｍＭメルカプトエタノール、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２５ｍＭ  ＫＦ、２ｍＭセミカルバジド、１ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍＭスフィンゴシン、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１１４、及び１ｍＣｉγ３３Ｐ−ＡＴＰ（ＮＥＮ；比活性３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有する反応混合物中でスフィンゴシンキナーゼ活性をもつ粗酵母抽出物を使用してγ３３Ｐ−ＡＴＰとスフィンゴシンから３３Ｐ−スフィンゴシン１−リン酸を酵素合成した。反応生成物をブタノールで抽出し、３３Ｐ−スフィンゴシン１−リン酸をＨＰＬＣにより精製した。
【０１６０】
酵素無添加解離溶液（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｍｅｄｉａ，Ｌａｖａｌｌｅｔｔｅ，ＮＪ）を使用してＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞を回収した。細胞を冷ＰＢＳで１回洗浄し、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−Ｎａ，ｐＨ７．５，５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，１ｍＭ  ＣａＣｌ２，及び０．５％脂肪酸無添加ＢＳＡから構成される結合アッセイ緩衝液に懸濁した。３３Ｐ−スフィンゴシン１−リン酸を結合アッセイ緩衝液中０．１ｎＭスフィンゴシン１−リン酸の存在下に音波処理し、リガンド混合物１００μｌを９６ウェルマイクロタイタープレートの細胞１００μｌ（１ｘ１０６個／ｍｌ）に加えた。６０分間室温で静かに混合しながら結合を行った。次にＰａｃｋａｒｄ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを使用して細胞をＧＦ／Ｂフィルタープレートに回収した。フィルタープレートを３０分間乾燥後、４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ２０を各ウェルに加え、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒで結合を測定した。０．５μＭ冷スフィンゴシン１−リン酸の存在下に残存する放射能の量を非特異的結合とした。
【０１６１】
別法として、Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞から調製した膜でリガンド結合アッセイを実施した。酵素無添加解離溶液で細胞を回収し、冷ＰＢＳで１回洗浄した。Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａポリトロン（設定５，１０秒間）を使用して氷冷２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４，１０ｍＭ  ＥＤＴＡ中で均質化することにより細胞を破壊した。ホモジネートを４８，０００ｘｇで１５分間４℃にて遠心し、ペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４，０．１ｍＭ  ＥＤＴＡに懸濁した。２回目の遠心後、最終ペレットを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４，１００ｍＭ  ＮａＣｌ，１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２に懸濁した。膜蛋白質０．５〜２μｇを使用して上記のようにリガンド結合アッセイを実施した。
【０１６２】
３３Ｐ−スフィンゴシン１−リン酸結合アッセイでＥｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体のアゴニストとアンタゴニストを識別することができる。３３Ｐ−スフィンゴシン１−リン酸と結合アッセイ用緩衝液を含有するプローブとＤＭＳＯ、メタノール、又は他の溶媒で希釈した化合物をマイクロタイタープレートで混合した。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞から調製した膜を加え、上述のように３３Ｐ−スフィンゴシン１−リン酸との結合を実施した。各種濃度の化合物の存在下の結合量の測定とＭＲＬＣａｌｃ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）又はＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）等の非線形回帰ソフトウェアによるデータ分析を使用して受容体に対する化合物の親和性を測定した。各受容体（Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６、Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８）をトランスフェクトした細胞から調製した膜を使用して化合物の存在下に３３Ｐ−スフィンゴシン１−リン酸結合レベルを測定することによりＥｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体に対する化合物の選択性を測定した。
【０１６３】
３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイ
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体とＧ蛋白質の機能的カップリングを３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで測定した。９６ウェルマイクロタイタープレートにて２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５μＭ  ＧＤＰ、０．１％脂肪酸無添加ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ，ｃａｔａｌｏｇ  Ａ８８０６）、各種濃度のスフィンゴシン１−リン酸及び１２５μＭ  ３５Ｓ−ＧＴＰγＳ（ＮＥＮ；比活性１２５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を含有する２００μｌ容量中でＥｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体とのリガンド結合アッセイに記載したように調製した膜（膜蛋白質１〜１０μｇ）をインキュベートした。１時間室温で静かに混合しながら結合を行い、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを使用して膜をＧＦ／Ｂフィルタープレートに回収することにより終了した。フィルタープレートを３０分間乾燥後、４０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ２０を各ウェルに加え、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒで結合を測定した。
【０１６４】
３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイでＥｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体のアゴニストとアンタゴニストを識別することができる。ＤＭＳＯ、メタノール、又は他の溶媒で希釈した化合物を最終アッセイ濃度０．０１ｎＭ〜１０μＭとなるようにマイクロタイタープレートに加えた。Ｅｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体を発現する細胞から調製した膜を加え、上述のように３５Ｓ−ＧＴＰγＳとの結合を実施した。天然リガンド又は他の公知アゴニストの不在下でアッセイした場合に内因性レベルを越えて３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合を刺激する化合物をアゴニストとみなし、内因性レベルの３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合を阻害する化合物を逆アゴニストとみなした。化合物が３５Ｓ−ＧＴＰγＳレベルを低下させた場合には、３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで最大レベル以下の天然リガンド又は公知Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体アゴニストの存在下にアンタゴニストが検出された。各種濃度の化合物の存在下の結合量の測定を使用してＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体のアゴニスト、逆アゴニスト、又はアンタゴニストとしての化合物の力価を測定した。アゴニストを評価するために、化合物の存在下の結合をリガンドの不在下の結合で割って１００を掛けた値として基線を上回る刺激百分率を計算した。非線形回帰曲線フィッティングプログラムＭＲＬＣａｌｃ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して用量応答曲線をプロットし、それ自体の最大刺激の５０％を与えるために必要なアゴニストの濃度としてＥＣ５０を決定した。各受容体をトランスフェクトした細胞から調製した膜を使用して化合物の存在下に３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合レベルを測定することによりＥｄｇ／Ｓ１Ｐ受容体に対する化合物の選択性を測定した。
【０１６５】
細胞内カルシウムフラックスアッセイ
ＦＬＩＰＲ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用してＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体とＧ蛋白質の機能的カップリングに関連する細胞内カルシウム動員を測定した。Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞を回収し、アッセイ緩衝液（Ｈａｎｋｓ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＲＬ）に２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，０．１％ＢＳＡ及び７１０μｇ／ｍｌプロベニシド（Ｓｉｇｍａ）を添加）で１回洗浄した。５００ｎＭカルシウム感受性色素Ｆｌｕｏ−４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を添加した同一緩衝液で３７℃及び５％ＣＯ２下に細胞を１時間標識した。細胞を緩衝液で２回洗浄した後に、１．５ｘ１０５個／ウェル（９０μｌ）を９６ウェルポリリジンコート黒色マイクロタイタープレートにプレーティングした。最終試験濃度の２倍の濃度となるようにスフィンゴシン１−リン酸又は他のアゴニストをアッセイ緩衝液２００μｌで希釈することにより９６ウェルリガンドプレートを調製した。リガンドプレートと細胞プレートを分析のためにＦＬＩＰＲ機器にロードした。プレートを３７℃まで平衡化した。等容量のリガンドを細胞プレートに添加することによりアッセイを開始し、カルシウムフラックスを３分間隔で記録した。細胞応答を面積（合計）又は最大ピーク高（最大値）として定量した。化合物を適当な溶媒で希釈してＦｌｕｏ−４標識細胞に添加することにより天然リガンドの不在下でアゴニストを評価した。Ｆｌｕｏ−４標識細胞を各種濃度の化合物で１５分間前処理した後に天然リガンド又は他のＳ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体アゴニストの添加によりカルシウムフラックスを開始することによりアンタゴニストを評価した。
【０１６６】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体を発現する細胞の調製
各種方法の任意のものを使用してＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１、Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３、Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５、Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６又はＳ１Ｐ５／Ｅｄｇ８をクローニングすることができる。これらの方法としては限定されないが、以下の方法が挙げられる。（１）ＲＡＣＥ  ＰＣＲクローニング法（Ｆｒｏｈｍａｎら，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：８９９８−９００２）。５’及び／又は３’ＲＡＣＥを実施して全長ＤＮＡ配列を作製することができる；（２）適当な発現ベクターシステムでＳ１Ｐ／Ｅｄｇを含むｃＤＮＡライブラリーの構築後にＥｄｇ／Ｓ１Ｐ  ｃＤＮＡの直接機能的発現；（３）バクテリオファージ又はプラスミドシャトルベクターで構築したＳ１Ｐ／Ｅｄｇを含むｃＤＮＡライブラリーをＳ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質のアミノ酸配列から設計した標識縮重オリゴヌクレオチドプローブでスクリーニング；（４）バクテリオファージ又はプラスミドシャトルベクターで構築したＳ１Ｐ／Ｅｄｇを含むｃＤＮＡライブラリーをＳ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質をコードする部分ｃＤＮＡ蛋白質でスクリーニング。この部分ｃＤＮＡはＳ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質に関連する他の蛋白質について分かっているアミノ酸配列から縮重オリゴヌクレオチドプライマーを設計することによりＳ１Ｐ／Ｅｄｇ  ＤＮＡフラグメントの特異的ＰＣＲ増幅により得られる；（５）バクテリオファージ又はプラスミドシャトルベクターで構築したＳ１Ｐ／Ｅｄｇを含むｃＤＮＡライブラリーを、哺乳動物Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ蛋白質と相同性をもつ部分ｃＤＮＡ又はオリゴヌクレオチドでスクリーニング。このストラテジーではＳ１Ｐ／Ｅｄｇ  ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅に遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプライマーを使用してもよい；あるいは（６）Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇヌクレオチド配列を鋳型として５’及び３’遺伝子特異的オリゴヌクレオチドを設計し、公知ＲＡＣＥ法により全長ｃＤＮＡを作製できるようにするか、又はＳ１Ｐ／Ｅｄｇをコードするヌクレオチド配列の全長形を単離するためにコーディング領域の一部を作製及び単離して多種のｃＤＮＡ及び／又はゲノムライブラリーのうちの１個をスクリーニングするためのプローブとして使用するようにこれらの公知同一ＲＡＣＥ法によりコーディング領域の一部を作製できるようにする。
【０１６７】
当業者に自明の通り、他の型のライブラリーや、他の細胞型又は種型から構築したライブラリーもＳ１Ｐ／ＥｄｇをコードするＤＮＡ又はＳ１Ｐ／Ｅｄｇホモログを単離するのに有用である。他の型のライブラリーとしては限定されないが、他の細胞に由来するｃＤＮＡライブラリーが挙げられる。
【０１６８】
当業者に自明の通り、適切なｃＤＮＡライブラリーはＳ１Ｐ／Ｅｄｇ活性をもつ細胞又は細胞株から構築することができる。Ｓ１Ｐ／ＥｄｇをコードするｃＤＮＡを単離するためにｃＤＮＡライブラリーを構築するのに使用する細胞又は細胞株の選択はまずこのような目的に利用可能な任意公知アッセイを使用して細胞関連Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ活性を測定することにより実施できる。
【０１６９】
ｃＤＮＡライブラリーの構築は当業者に周知の標準技術により実施することができる。周知ｃＤＮＡライブラリー構築技術は例えばＳａｍｂｒｏｏｋら，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている。相補的ＤＮＡライブラリーは多数の商業ソースからも入手でき、限定されないが、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．やＳｔｒａｔａｇｅｎｅが挙げられる。
【０１７０】
Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ様蛋白質をコードするＤＮＡを含む発現ベクターを使用して組換え宿主細胞でＳ１Ｐ／Ｅｄｇを発現させることができる。このような組換え宿主細胞はＳ１Ｐ／Ｅｄｇ又は生物学的等価形態を生産するのに適した条件下で培養することができる。発現ベクターとしては限定されないが、クローニングベクター、改変クローニングベクター、特殊設計プラスミド又はウイルスが挙げられる。組換えＳ１Ｐ／Ｅｄｇ発現には市販哺乳動物発現ベクターが適している。
【０１７１】
組換え宿主細胞は原核細胞でも真核細胞でもよく、限定されないが、大腸菌等の細菌類、酵母等の真菌細胞、哺乳動物細胞（限定されないが、ウシ、ブタ、サル及び齧歯類由来細胞株）、及び昆虫細胞（限定されないが、ショウジョウバエ及びカイコ由来細胞株）が挙げられる。
【０１７２】
各種Ｓ１Ｐ／Ｅｄｇ受容体のヌクレオチド配列は当業者に公知である。例えば、以下の文献を参照されたい。
【０１７３】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１ヒト
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＨｌａ，Ｔ．ａｎｄ  Ｔ．Ｍａｃｉａｇ  １９９０  Ａｎ  ａｂｕｎｄａｎｔ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｅｎｃｏｄｅｓ  ａ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ｔｏ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２６５：９３０８−９３１３。
【０１７４】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込ＷＯ９１／１５５８３（公開日１９９１年１０月１７日）。
【０１７５】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ９９／４６２７７（公開日１９９９年９月１６日）。
【０１７６】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１マウス
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００５９５２９（公開日２０００年１０月１２日）。
【０１７７】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第６，３２３，３３３号（発行日２００１年１１月２７日）。
【０１７８】
Ｓ１Ｐ１／Ｅｄｇ１ラット
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＬａｄｏ，Ｄ．Ｃ．，Ｃ．Ｓ．Ｂｒｏｗｅ，Ａ．Ａ．Ｇａｓｋｉｎ，Ｊ．Ｍ．Ｂｏｒｄｅｎ，ａｎｄ  Ａ．Ｊ．ＭａｃＬｅｎｎａｎ．１９９４  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｅｄｇ−１  ｉｍｍｅｄｉａｔｅ−ｅａｒｌｙ  ｇｅｎｅ：ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｇｅｎｅ  １４９：３３１−３３６。
【０１７９】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第５，５８５，４７６号（発行日１９９６年１２月１７日）。
【０１８０】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第５８５６，４４３号（発行日１９９９年１月５日）。
【０１８１】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３ヒト
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＡｎ，Ｓ．，Ｔ．Ｂｌｅｕ，Ｗ．Ｈｕａｎｇ，Ｏ．Ｇ．Ｈａｌｌｍａｒｋ，Ｓ．Ｒ．Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，Ｅ．Ｊ．Ｇｏｅｔｚｌ  １９９７  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡｓ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｔｗｏ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｌｙｓｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４１７：２７９−２８２。
【０１８２】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ９９／６００１９（公開日１９９９年１１月２５日）。
【０１８３】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第６，１３０，０６７号（発行日２０００年１０月１０日）。
【０１８４】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３マウス
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ０１／１１０２２（公開日２００１年２月１５日）。
【０１８５】
Ｓ１Ｐ３／Ｅｄｇ３ラット
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ０１／２７１３７（公開日２００１年４月１９日）。
【０１８６】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５ヒト
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＡｎ，Ｓ．，Ｙ．Ｚｈｅｎｇ，Ｔ．Ｂｌｅｕ  ２０００  Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｓｕｒｖｉｖａｌ，ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｅｖｅｎｔｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  Ｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｅｄｇ３  ａｎｄ  Ｅｄｇ５．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７５：２８８−２９６。
【０１８７】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ９９／３５２５９（公開日１９９９年７月１５日）。
【０１８８】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ９９／５４３５１（公開日１９９９年１０月２８日）。
【０１８９】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００／５６１３５（公開日２０００年９月２８日）。
【０１９０】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５マウス
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００／６００５６（公開日２０００年１０月１２日）。
【０１９１】
Ｓ１Ｐ２／Ｅｄｇ５ラット
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＯｋａｚａｋｉ，Ｈ．，Ｎ．Ｉｓｈｉｚａｋａ，Ｔ．Ｓａｋｕｒａｉ，Ｋ．Ｋｕｒｏｋａｗａ，Ｋ．Ｇｏｔｏ，Ｍ．Ｋｕｍａｄａ，Ｙ．Ｔａｋｕｗａ  １９９３  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９０：１１０４−１１０９。
【０１９２】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＭａｃＬｅｎｎａｎ，Ａ．Ｊ．，Ｃ．Ｓ．Ｂｒｏｗｅ，Ａ．Ａ．Ｇａｓｋｉｎ，Ｄ．Ｃ．Ｌａｄｏ，Ｇ．Ｓｈａｗ  １９９４  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：２０１−２０９。
【０１９３】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第５，５８５，４７６号（発行日１９９６年１２月１７日）。
【０１９４】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第５８５６，４４３号（発行日１９９９年１月５日）。
【０１９５】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６ヒト
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＧｒａｌｅｒ，Ｍ．Ｈ．，Ｇ．Ｂｅｒｎｈａｒｄｔ，Ｍ．Ｌｉｐｐ  １９９８  ＥＤＧ６，ａ  ｎｏｖｅｌ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ，ｉｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｔｉｓｓｕｅ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５３：１６４−１６９。
【０１９６】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ９８／４８０１６（公開日１９９８年１０月２９日）。
【０１９７】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第５，９１２，１４４号（発行日１９９９年６月１５日）。
【０１９８】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ９８／５０５４９（公開日１９９８年１１月１２日）。
【０１９９】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込む米国特許第６，０６０，２７２号（発行日２０００年５月９日）。
【０２００】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ９９／３５１０６（公開日１９９９年７月１５日）。
【０２０１】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００／１５７８４（公開日２０００年３月２３日）。
【０２０２】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００／１４２３３（公開日２０００年３月１６日）。
【０２０３】
Ｓ１Ｐ４／Ｅｄｇ６マウス
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００／１５７８４（公開日２０００年３月２３日）。
【０２０４】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８ヒト
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＩｍ，Ｄ．−Ｓ．，Ｊ．Ｃｌｅｍｅｎｓ，Ｔ．Ｌ．Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｋ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ  ２００１  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｓ１Ｐ５（Ｅｄｇ−８）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４０：１４０５３−１４０６０。
【０２０５】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００／１１１６６（公開日２０００年３月２日）。
【０２０６】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ００／３１２５８（公開日２０００年６月２日）。
【０２０７】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ０１／０４１３９（公開日２００１年１月１８日）。
【０２０８】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＥＰ  １  ０９０  ９２５（公開日２００１年４月１１日）。
【０２０９】
Ｓ１Ｐ５／Ｅｄｇ８ラット
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＩｍ，Ｄ．−Ｓ．，Ｃ．Ｅ．Ｈｅｉｓｅ，Ｎ．Ａｎｃｅｌｌｉｎ，Ｂ．Ｆ．Ｏ’Ｄｏｗｄ，Ｇ．−Ｊ．Ｓｈｅｉ，Ｒ．Ｐ．Ｈｅａｖｅｎｓ，Ｍ．Ｒ．Ｒｉｇｂｙ，Ｔ．Ｈｌａ，Ｓ．Ｍａｎｄａｌａ，Ｇ．ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ，Ｓ．Ｒ．Ｇｅｏｒｇｅ，Ｋ．Ｒ．Ｌｙｎｃｈ  ２０００  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｅｄｇ−８．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１４２８１−１４２８６。
【０２１０】
参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＷＯ０１／０５８２９（公開日２００１年１月２５日）。
【０２１１】
心臓血管効果の測定
本発明の化合物が心臓血管パラメーターに及ぼす効果は以下の方法により評価することができる。
【０２１２】
成体雄ラット（体重約３５０ｇ）に夫々動脈圧と静脈内化合物投与量を測定するために大腿動脈及び静脈カテーテルを装着した。動物をネンブタール（５５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）で麻酔した。Ｇｏｕｌｄ  Ｐｏ−Ｎｅ−Ｍａｈデータ獲得システムで血圧と心拍数を記録した。心拍数は動脈波から求めた。順化期間後に基線値を読み取り（約２０分間）、データを平均化した。化合物を静脈内投与し（約５秒間ボーラス注射又は１５分間輸液）、化合物投与後６０分間１分おきにデータを記録した。心拍数又は平均動脈圧のピーク変化としてデータを計算するか、あるいは時間に対する心拍数又は動脈圧の変化の曲線の下の面積として計算した。平均±ＳＥＭとしてデータを表した。対応のあるスチューデントの片側検定を使用して基線値との統計的比較を行い、ｐ＜０．０５を有意とみなした。
【０２１３】
ラット心臓血管系に及ぼすＳ１Ｐ効果は参考資料としてその開示内容全体を本明細書に組込むＳｕｇｉｙａｍａ，Ａ．，Ｎ．Ｎ．Ａｙｅ，Ｙ．Ｙａｔｏｍｉ，Ｙ．Ｏｚａｋｉ，Ｋ．Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ２０００  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ  １−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ａ  ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ，ｏｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｊｐｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８２：３３８−３４２に記載されている。
【０２１４】
マウス急性毒性の測定
非毒性ビークルに溶かした試験化合物０．１ｍｌをマウス１匹に静脈内（尾静脈）投与し、毒性徴候を観察した。重度徴候としては死亡、発作、麻痺又は意識不明が挙げられる。軽度徴候も観察し、その徴候としては運動失調、呼吸困難、ラフリング又は正常に比較して活性低下が挙げられる。徴候が認められたら、投与溶液を同一ビークルで希釈した。希釈用量を同様に第２のマウスに投与し、同様に徴候を観察した。徴候を生じない用量に達するまでこのプロセスを繰返した。これを推定無効果レベルとみなした。別のマウスにこのレベルを投与し、徴候が生じないことを確認した。
【０２１５】
リンパ球減少試験
マウス急性毒性の測定に記載したように化合物を投与し、投与から３時間後にマウスのリンパ球減少を以下のように試験した。ＣＯ２によりマウスの意識を失わせた後に開胸し、直接心臓穿刺により血液０．５ｍｌを採血し、血液をすぐにＥＤＴＡで安定化し、マウス百分率測定を実施するように校正した臨床血液自動分析装置（Ｈ２０００，ＣＡＲＥＳＩＤＥ，Ｃｕｌｖｅｒ  Ｃｉｔｙ  ＣＡ）を使用して血液分析を行った。マウス３匹とビークル投与マウス３匹の血液パラメーターの比較により、試験処置によるリンパ球減少を調べた。この評価に使用した用量は上記希釈法の変形を使用して寛容性により決定した。この目的では、無効果が望ましく、軽度効果は許容可能であり、重度毒性用量は軽度効果しか生じないレベルまで順次希釈した。
【０２１６】
実施例のＩｎ  Ｖｉｔｒｏ活性
本明細書に開示する実施例は上記アッセイで測定した場合にＳ１ＰＲ３／Ｅｄｇ３受容体よりもＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体の強力で選択的なアゴニストであることがその活性から立証されたように、免疫調節剤として有用である。特に、本明細書に開示する実施例は上記３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで評価した場合にＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体のＥＣ５０とＳ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体のＥＣ５０の比から測定したＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体に対する選択性がＳ１Ｐ３／Ｅｄｇ３受容体の１００倍を上回り、上記３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合アッセイで評価した場合にＳ１Ｐ１／Ｅｄｇ１受容体との結合のＥＣ５０が５０ｎＭ未満である。