(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋ポリビニルアルコールを含み、直径が10μm〜2,000μmの範囲であり、実質的に球状であり、かつ無菌である、塞栓形成用の微小球。
【請求項２】
大きさおよび形状が実質的に均一である、請求項１に記載の微小球。
【請求項３】
微小球の直径が50μm〜1,000μmの範囲である、請求項１または２に記載の微小球。
【請求項４】
微小球が細胞接着促進因子をさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の微小球。
【請求項５】
細胞接着促進因子がCMデキストラン、コラーゲン、DEAEデキストラン、ゼラチン、グルコサミノグリカン、フィブロネクチン、レクチン、ポリカチオン、天然の生物学的細胞接着因子および合成の生物学的細胞接着因子からなる群より選択される、請求項４に記載の微小球。
【請求項６】
細胞接着促進因子がCMデキストラン、コラーゲンおよびDEAEデキストランからなる群より選択される、請求項５に記載の微小球。
【請求項７】
微小球がマーキング剤をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の微小球。
【請求項８】
マーキング剤が染料、イメージング剤およびコントラスト剤からなる群より選択される、請求項７に記載の微小球。
【請求項９】
抗血管形成剤をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の微小球。
【請求項１０】
微小球の表面が1000倍未満の倍率では滑らかに見える、請求項１〜９のいずれか１項に記載の微小球。
【請求項１１】
微小球上の過剰なアルデヒドがアミノ含有試薬で中和されている、請求項１〜10のいずれか１項に記載の微小球。
【請求項１２】
アミノ含有試薬がアミノアルコールである、請求項11に記載の微小球。
【請求項１３】
実質的に球状であり、直径が10μm〜2,000μmの範囲の架橋ポリビニルアルコール微小球、および適当な液状担体を含有する、塞栓形成用の注入可能な無菌懸濁液。
【請求項１４】
微小球の大きさおよび形状が実質的に均一である、請求項13に記載の懸濁液。
【請求項１５】
微小球の直径が50μm〜1,000μmの範囲である、請求項13または14に記載の懸濁液。
【請求項１６】
微小球が0.5〜20重量％の架橋ポリビニルアルコールをヒドロゲル形態で含む、請求項13〜15のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項１７】
微小球が細胞接着促進因子をさらに含む、請求項13〜16のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項１８】
細胞接着促進因子がCMデキストラン、コラーゲン、DEAEデキストラン、ゼラチン、グルコサミノグリカン、フィブロネクチン、レクチン、ポリカチオン、天然の生物学的細胞接着因子および合成の生物学的細胞接着因子からなる群より選択される、請求項17に記載の懸濁液。
【請求項１９】
微小球がマーキング剤をさらに含む、請求項13〜18のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項２０】
マーキング剤が染料、イメージング剤およびコントラスト剤からなる群より選択される、請求項19に記載の懸濁液。
【請求項２１】
抗血管形成剤をさらに含む、請求項13〜20のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項２２】
微小球の表面が1000倍未満の倍率では滑らかに見える、請求項13〜21のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項２３】
微小球上の過剰なアルデヒドがアミノ含有試薬で中和されている、請求項13〜22のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項２４】
アミノ含有試薬がアミノアルコールである、請求項23に記載の懸濁液。
【請求項２５】
哺乳動物における予防上の塞栓形成のための、請求項13〜24のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項２６】
塞栓形成が腫瘍の予防用である、請求項25に記載の懸濁液。
【請求項２７】
哺乳動物における治療上の塞栓形成のための、請求項13〜24のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項２８】
塞栓形成が腫瘍の治療用である、請求項27に記載の懸濁液。
【請求項２９】
哺乳動物がヒトである、請求項25〜28のいずれか１項に記載の懸濁液。
【請求項３０】
直径が10μm〜2,000μmの範囲の架橋ポリビニルアルコール微小球を製造する方法であって、
a) 酸性溶液中にポリビニルアルコールを溶解し、
b) 該ポリビニルアルコール含有溶液にアルデヒドを加えるか、またはアルデヒドに該ポリビニルアルコール含有溶液を加えて、混合物を形成し、
c) 該混合物を、攪拌しながら、HLBが５未満の乳化剤を0.1〜10％含有するオイルに加えるか、またはHLBが５未満の乳化剤を0.1〜10％含有するオイルを、攪拌しながら、該混合物に加えて、ポリビニルアルコールの液滴がオイル中に懸濁しているエマルジョンを形成し、
d) 該エマルジョンを加熱してポリビニルアルコール鎖上の該アルデヒドを縮合させ、それにより架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成し、
e) 該架橋ポリビニルアルコールの球状粒子からオイルを除去し、
f) 該架橋ポリビニルアルコールの球状粒子上の活性アルデヒドを中和し、
g) 中和した架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を生理的水性緩衝液で洗浄し、そして
h) 洗浄した架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を滅菌する
ことを含んでなる上記方法。
【請求項３１】
ステップ(b)におけるアルデヒドがホルムアルデヒド、グリオキサール、グルタルアルデヒドおよびテレフタルアルデヒドからなる群より選択される、請求項30に記載の方法。
【請求項３２】
アルデヒドがグルタルアルデヒドである、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
ステップ(c)におけるオイルが植物油、鉱油および無極性溶媒からなる群より選択される、請求項30〜32のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
オイルがパラフィン油である、請求項30〜32のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
ステップ(c)におけるHLBが５未満の乳化剤がソルビタンセスキオレエート、ソルビタントリオレエート、ソルビタントリステアレート、ポリエチレンソルビタンモノステアレート、酢酸酪酸セルロースおよびテトラデカノールからなる群より選択される、請求項30〜34のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
ステップ(c)における乳化剤が0.05〜５％の濃度で存在する、請求項30〜35のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
ステップ(d)における加熱を80℃で６時間行なう、請求項30〜36のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
ステップ(e)において、軽質の無極性溶媒または塩素化溶媒で抽出することによって架橋ポリビニルアルコールの球状粒子からオイルを除去する、請求項30〜37のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
軽質の無極性溶媒または塩素化溶媒が塩化メチレンである、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
ステップ(f)において、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子上の活性アルデヒドをアミノアルコールで中和する、請求項30〜39のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
アミノアルコールがTris、2-アミノエタノール、アミノソルビトールおよびグルコサミンからなる群より選択される、請求項40に記載の方法。
【請求項４２】
アルデヒドを添加する前に酸性ポリビニルアルコール溶液に細胞接着促進因子を添加することをさらに含む、請求項30〜41のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
細胞接着促進因子がCMデキストラン、コラーゲン、DEAEデキストラン、ゼラチン、グルコサミノグリカン、フィブロネクチン、レクチン、ポリカチオン、天然の生物学的細胞接着因子および合成の生物学的細胞接着因子からなる群より選択される、請求項42に記載の方法。
【請求項４４】
架橋ポリビニルアルコールを含む球状粒子にマーキング剤を吸収させることをさらに含む、請求項30〜43のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
マーキング剤が染料、イメージング剤およびコントラスト剤からなる群より選択される、請求項44に記載の方法。
【請求項４６】
架橋ポリビニルアルコール球状粒子に抗血管形成剤を吸収させることをさらに含む、請求項30〜45のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
請求項１〜12のいずれか１項に記載の微小球を含むキット。
【請求項４８】
請求項13〜29のいずれか１項に記載の懸濁液を含むキット。
【請求項４９】
癌または腫瘍の治療用の医薬品の製造における請求項１〜12のいずれか１項に記載の微小球の使用。
【請求項５０】
癌または腫瘍の治療用の医薬品の製造における請求項13〜29のいずれか１項に記載の懸濁液の使用。
【請求項５１】
癌または腫瘍が子宮の腫瘍またはは繊維症である、請求項49または50に記載の使用。
【請求項５２】
癌または腫瘍が肝細胞癌または肝臓転移である、請求項51に記載の使用。
【請求項５３】
癌または腫瘍が、原発性の大腸癌、骨転移、メラノーマ、頭部もしくは頸部の癌、頭蓋内髄膜腫、またはそれらの組み合わせである、請求項51に記載の使用。
【請求項５４】
血管奇形の治療用の医薬品の製造における請求項１〜12のいずれか１項に記載の微小球の使用。
【請求項５５】
血管奇形の治療用の医薬品の製造における請求項13〜29のいずれか１項に記載の懸濁液の使用。
【請求項５６】
血管奇形が肝動静脈奇形である、請求項54または55に記載の使用。
【請求項５７】
出血性の事象または過程の治療用の医薬品の製造における請求項１〜12のいずれか１項に記載の微小球の使用。
【請求項５８】
出血性の事象または過程の治療用の医薬品の製造における請求項13〜29のいずれか１項に記載の懸濁液の使用。
【請求項５９】
出血性の事象または過程が、小腸の出血、ストレス性潰瘍、外科的ドレーン、吻合、潰瘍、またはそれらの組み合わせである、請求項57または58に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
１．発明の分野
本発明は、塞栓形成法に有用な物質、塞栓形成のためのそれらの使用方法、またそのような物質の製造方法に関するものである。
【０００２】
２．発明の背景
治療上の血管閉塞（塞栓形成法）は特定の病態をその場で予防または治療するために用いられる。一般的に、これらは、循環系中に微粒子状閉塞物質（塞栓）を正しい位置に配置するため画像制御下においてカテーテルを用いて実施される。塞栓形成法は、健康状態にあれ、病気の状態にあれ、様々な血管および器官で用いられる。しかし、より一般的に使用される症状としては、例えば癌、血管奇形、出血性症状などである。特に癌の場合においては、塞栓形成法は、痛みを抑え、塞栓形成法に続く外科手術における出血を抑えるか、または、腫瘍の壊死すらもたらし、外科手術の必然性も回避しうる。血管奇形の場合、塞栓形成法は、「正常」組織への血流を常態にもどし、外科手術を補助し、出血の危険性を制限する。出血事象またはその過程においては、塞栓形成法は、血流量を減少させ、それにより動脈開口の治癒が促進される。
【０００３】
さらに、治療される病態によって、塞栓形成法は永久的な目的ばかりでなく一時的な目的にも用いることができる。
【０００４】
塞栓形成法は、硬膜の小片、不規則なポリビニルアルコール粒子、不規則なゼラチン粒子などの様々な固形物質を用いて実施され、より最近ではポリアクリルアミド誘導体から作製された球形の架橋ヒドロゲル、および架橋ゼラチンを用いて実施されている。
【０００５】
米国特許第5,635,215号では、細胞接着促進因子およびマーキング剤で被覆された親水性のアクリルコポリマーを含む塞栓形成法に有用な微小球を開示している。米国特許第5,648,100号では、細胞接着促進因子およびマーキング剤で被覆された親水性アクリルコポリマー微小球を含む治療的塞栓形成法用の注入可能な溶液を開示している。また米国特許第5,648,100号では、上記の注入可能な溶液を哺乳動物に投与することを含む、治療的塞栓形成法が開示されている。
【０００６】
今日まで様々な塞栓形成法の用途においてもっとも一般的に使われた物質は、不規則なポリビニルアルコール粒子である。しかしながら、これらの不規則ポリビニルアルコール粒子はたくさんの欠点があり、ある条件下では死に至ることさえある。例えば、Repaら、Radiology,1987,170:395-399には、症候的な肝動静脈奇形（AVM)を患う幼児が2名、市販のポリビニルアルコール（IVALON  粒子懸濁液、Laboratory  Ingenor  (Paris)  製）を用いてカテーテル塞栓形成法によって治療されたことが開示されている。幼児2名ともAVM塞栓形成法施行後まもなく死亡した。さらなる調査によって、粒子の大きさの著しい不均一性が非常に高い確率でこの幼児達の死亡に関係していることが示された。実際に、これらまた他の問題が不規則なポリビニルアルコール粒子に関係し、とりわけ粒子の形状に起因するものである。これらの問題が、塞栓形成法において不規則なポリビニルアルコール粒子を使用することを困難にしており、いくつかの場合おいては危険なものとさえしている。
【０００７】
ポリビニルアルコール製品は、Target Therapeutics / Boston Scientific社 (CONTOUR)、Nycomed社 (IVALON,ULTRA-DRIVALON,およびULTRA-IVALON)、Cordis社 (TRUFILL)、ならびにCook社 (PVA)から市販されている。これらのポリビニルアルコール粒子は形状がふぞろいの粒子であると知られている。一般的にこれらのポリビニルアルコール粒子は、ドライパウダー状または生理食塩水の懸濁液の形で販売されている。ダメージを与える恐れがあるにもかかわらず、不規則なポリビニルアルコール粒子は広く用いられている。不規則なポリビニルアルコール粒子の使用例を以下に記載する。
【０００８】
Kusanoら、Invest. Radiol.,1987, 22:388-392に、動物実験と臨床試験において低用量の粒子状ポリビニルアルコール塞栓形成法が開示されている。Kusanoらが使用したポリビニルアルコール粒子は放射線不透過性の形態のIVALONで、Unipoint Laboratory、High Point、NCから入手した。Kusanoらは、低用量の大きなポリビニルアルコール粒子（直径590-1000  μｍ）が、ストレス性潰瘍、外科手術ドレーン、吻合術、結核性潰瘍ならびに一般的な潰瘍といったいくつかの疾患の患者における小腸出血の経カテーテル閉塞療法のための塞栓物質として適していることを開示している。
【０００９】
Rumpら、Gen. Pharmac.,1996, 27(4) : 669-671には、肝臓への癌の転移に対する化学的塞栓形成療法における動脈内マイトマイシンC（MMC)の薬物動態学が開示されている。Rumpらの文献においては、原発性大腸癌に罹患し肝臓に転移している患者の肝臓枝にはMMCを適用する前に不均一なポリビニルアルコール粒子（150−250  μｍ）を使って塞栓が形成された。
【００１０】
Bartonら、JVIR, 1996, 7:81-88には、骨に転移している患者の手術中の大出血を防ぎ、骨転移そのものおよび痛みを低減し、そして重篤な出血を制御するための塞栓形成法が開示されている。ポリビニルアルコール粒子(VALON ; DRIVALON 300-600 μM；Nycomed-Ingenor,  Paris)がBartonらの文献では8症例において使用された。
【００１１】
Wakhlooら、AJNR, 1993, 14:571-582には、頭蓋内髄膜腫における50〜150μｍおよび150〜300μｍのポリビニルアルコール粒子を用いた広範囲な術前の微小塞栓形成法が開示されている。Wakhlooらは彼らの研究から、50〜150μｍの不規則なポリビニルアルコール粒子が、頭蓋内髄膜腫に対し高い確率で腫瘍の脈管遮断および腫瘍の壊死を導くと結論づけた。
【００１２】
塞栓形成のためにポリビニルアルコール粒子があるものの、その適用に関し安全かつ有効な方法が非常に必要とされている。本発明は当技術分野におけるこれらのおよび他のニーズに取り組むものである。
【００１３】
３．発明の概要
塞栓形成(embolization)においてポリビニルアルコール粒子を使用することに伴う危険性および困難性にもかかわらず、本発明者らは、驚いたことに、架橋されたポリビニルアルコールから作られた微小球は生体適合性で、無毒性で、しかも塞栓形成法において安全であることを見いだした。したがって、本発明は、架橋ポリビニルアルコール微小球を含む塞栓形成用の微小球、架橋ポリビニルアルコール微小球および適当な液状担体を含有する塞栓形成用の注入可能な懸濁液、そのような注入可能懸濁液を用いた予防上または治療上の塞栓形成法、ならびに架橋ポリビニルアルコール微小球の製造方法を包含する。
【００１４】
本明細書に記載の発明は、架橋ポリビニルアルコールを含み、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲である、塞栓形成に有用な微小球を包含する。本発明の微小球は乾燥粉末またはヒドロゲルの形態でありうる。一つの実施形態において、本発明は、架橋かつヒドロゲルの形態で、約0.5〜20重量％のポリビニルアルコールを含む微小球を包含する。別の実施形態において、本発明は、細胞接着促進因子、マーキング剤、またはその両方をさらに含む架橋ポリビニルアルコール微小球を包含する。さらに別の実施形態において、本発明は、抗血管形成剤をさらに含むポリビニルアルコール微小球を包含する。
【００１５】
本発明はまた、架橋ポリビニルアルコールを含む、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の微小球、および適当な液状担体を含有する、予防上または治療上の塞栓形成に適した注入可能な懸濁液を包含する。好ましい実施形態において、本発明は、微小球が架橋かつヒドロゲルの形態で約0.5〜20重量％のポリビニルアルコールを含む、注入可能な懸濁液を包含する。一つの実施形態において、注入可能な懸濁液中の微小球は大きさが均一であるかまたは狭いサイズ範囲内にあり、微小球同士の直径の差は約０〜150μm、好ましくは約０〜100μmである。別の実施形態において、本発明は、架橋ポリビニルアルコール微小球が細胞接着促進因子、マーキング剤、またはその両方をさらに含む注入可能な懸濁液を包含する。さらに別の実施形態において、本発明は、架橋ポリビニルアルコール微小球が抗血管形成剤をさらに含む注入可能な懸濁液を包含する。
【００１６】
本発明はさらに、予防上または治療上の塞栓形成が必要な哺乳動物に、有効量の、架橋ポリビニルアルコールを含む直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の微小球を含有する注入可能な懸濁液を投与することを含む、哺乳動物における予防上または治療上の塞栓形成法を包含する。微小球の有効量とは、一般的に対象の血管を閉塞させるのに十分な量である。通常、この量は数ダースから数百個の微小球に相当する。好ましい実施形態において、本発明は、注入可能な懸濁液で投与される架橋ポリビニルアルコール微小球がヒドロゲルの形態で約0.5〜20重量％の架橋ポリビニルアルコールを含む塞栓形成法を包含する。別の実施形態において、本発明は、投与される架橋ポリビニルアルコール微小球が細胞接着促進因子、マーキング剤、またはその両方をさらに含む塞栓形成法を包含する。さらに別の実施形態において、本発明は、投与される架橋ポリビニルアルコール微小球が抗血管形成剤をさらに含む塞栓形成法を包含する。
【００１７】
本発明はさらに、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の架橋ポリビニルアルコール微小球を製造する方法を包含する。この方法は、a) 酸性溶液中にポリビニルアルコールを溶解し、b) 該ポリビニルアルコール含有溶液にアルデヒドを加えるか、またはアルデヒドに該ポリビニルアルコール含有溶液を加えて、混合物を形成し、c) 該混合物を、攪拌しながら、HLB（親水性親油性バランス）が５未満の乳化剤を約0.1〜10％含有するオイルに加えるか、またはHLBが５未満の乳化剤を約0.1〜10％含有するオイルを、攪拌しながら、該混合物に加えて、ポリビニルアルコールの液滴がオイル中に懸濁しているエマルジョンを形成し、d) 該エマルジョンを加熱してポリビニルアルコール鎖上の該アルデヒドを縮合させ、それにより架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成し、e) 該架橋ポリビニルアルコールの球状粒子からオイルを除去し、f) 該架橋ポリビニルアルコールの球状粒子上の活性アルデヒドを中和し、g) 中和した架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を生理的水性緩衝液で洗浄し、そしてh) 洗浄した架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を滅菌する、各ステップを含んでなる。この方法で用いるポリビニルアルコール含有溶液は、好ましくは約0.5〜20％(w/v)のポリビニルアルコール濃度を有する。
【００１８】
４．詳細な説明
ポリビニルアルコールを含む塞栓形成用の微小球、ポリビニルアルコール微小球を含む塞栓形成に適した注入可能な懸濁液、そのような注入可能懸濁液を用いた予防上または治療上の塞栓形成法、ならびにポリビニルアルコール微小球の製造方法を以下に記載する。
【００１９】
本明細書で用いる「微小球」とは、生物学的液体または生物学的に適合性の液体中に懸濁することができ、かつ顕微鏡検査のもとで実質的に球または回転楕円形（楕円）を有する不溶性固体粒子を意味する。球は最小の外部表面積を提示する容積として定義される。微小球の表面は1000倍未満の倍率では滑らかに見える。
【００２０】
本明細書で用いる「異形粒子」とは、顕微鏡検査のもとで実質的に球または回転楕円形（楕円）ではない形状を有する不溶性固体粒子をさす。異形粒子の形状はより大きな固体粒子が破砕された結果であることが多い。それぞれの異形粒子は微小球に比して形状が不均一に見える。また、微小球に対して、異形粒子は表面がざらついている。異形粒子の長さ、厚みおよび深さは均一でない。すなわち、それらは表面上に突出部や突起を示す。こうした粒子はまた、個々の位置での粒子の厚みに左右されて、顕微鏡検査のもとでは光を透過させる能力にむらがあるように見える。
【００２１】
塞栓形成における異形粒子の使用には、いくつかの欠点が伴う。第一に、球はその直径によって規定されるが、異形粒子はその全容積によることを除けば幾何学的に規定することができず、真の寸法というものをもたない。それゆえに、異形粒子は、そのサイズ分布が均一となるようにまたは狭い範囲となるようにさえ、正確にふるい分けすることができない。その結果、異形粒子は円筒形の動脈の表面全体との完全接触を確立できないため、異形粒子を用いて動脈管腔を適切にかつ完全に閉塞させることは難しい。さらに、異形粒子は、カテーテルの管腔の内側でのそれらの空間的配向によっては、カテーテル管腔をブロックすることがある。その上、異形粒子の表面が粗いため、またそのような粒子が摩滅現象の結果として砕ける可能性があるため、サイズの非常に小さい粒子が異形粒子から生成されることがある。そのようなサイズの非常に小さい粒子が体内での取扱い中または投与中に生成されると、おそらく致命的な合併症となる偶発的肺塞栓症が起こりうる。さらに、異形粒子はその容積に対して表面積が大きいため、塊状物や凝集物を形成しやすく、それらはカテーテルの詰まりや望ましくない近位塞栓形成の原因となる。
【００２２】
これに対して、本明細書に記載の微小球の塞栓形成における使用はいくつかの利点を有する。例えば、微小球は球形または実質的に球形であるため、動脈管腔を適切にかつ完全に塞ぐことができる。というのは、それらが円筒形の動脈の表面全体との完全接触をもたらしうるからである。さらに、本発明の微小球は容易にキャリブレートすることができ、またこれらの微小球を含むサンプルまたは懸濁液はカテーテルをブロックしたり詰まらせたりしないだろう。なぜならば、微小球がカテーテル内でのそれらの空間的配向に関係なく同じ寸法をもつからである。さらに、微小球の表面が滑らかなため摩滅が起こらず、サイズの小さい粒子が微小球から生成されることはない。かくして、肺塞栓症のような、もしかすると命を脅かす合併症が回避されるだろう。さらに、微小球は一箇所で互いと相互作用するにすぎず、かかる接触は表面相互作用による凝集を引き起こすほどのものではない。
【００２３】
ここに記載の本発明は、架橋ポリビニルアルコールを含む、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の、塞栓形成に有用な微小球を包含する。本発明にとって好適な直径は塞栓形成のタイプにより決まり、当業者が簡単に決定することができる。本発明の微小球は乾燥粉末またはヒドロゲルの形態でありうる。好ましい実施形態では、本発明は、架橋かつヒドロゲルの形態で、約0.5〜20重量％のポリビニルアルコールを含む微小球を包含する。他の実施形態では、架橋ポリビニルアルコール微小球が細胞接着促進因子、マーキング剤、または抗血管形成剤のうちの１種以上をさらに含んでいてもよい。
【００２４】
本発明はまた、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の架橋ポリビニルアルコール微小球、および適当な液状担体を含有する、塞栓形成に適した注入可能な懸濁液を包含する。好ましい実施形態において、注入可能な懸濁液中の架橋ポリビニルアルコール微小球は均一のまたは狭いサイズ範囲を有し、微小球間の直径の差は約０〜150μm、好ましくは約０〜100μmである。他の実施形態において、本発明は、微小球が約0.5〜20重量％の架橋ポリビニルアルコールをヒドロゲル形態で含む注入可能な懸濁液；架橋ポリビニルアルコール微小球が細胞接着促進因子、マーキング剤、またはその両方をさらに含む注入可能な懸濁液；および架橋ポリビニルアルコール微小球が抗血管形成剤をさらに含む注入可能な懸濁液を包含する。
【００２５】
本発明はさらに、予防上または治療上の塞栓形成が必要な哺乳動物に、有効量の、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の架橋ポリビニルアルコール微小球、および適当な液状担体を含有する注入可能な懸濁液を投与することを含む、哺乳動物における予防上または治療上の塞栓形成法を包含する。好ましい実施形態において、本発明は、投与される注入可能な懸濁液中の架橋ポリビニルアルコール微小球が約0.5〜20重量％の架橋ポリビニルアルコールをヒドロゲル形態で含む治療上の塞栓形成法を包含する。他の実施形態において、予防上または治療上の塞栓形成法で投与される架橋ポリビニルアルコール微小球は細胞接着促進因子、マーキング剤、または抗血管形成剤のうちの１種以上をさらに含んでいてもよい。
【００２６】
本発明はさらに、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の架橋ポリビニルアルコール微小球を製造する方法を包含する。この方法では、以下に記載するように、さまざまな酸性溶液、アルデヒド、オイル、乳化剤、攪拌速度、加熱条件、およびオイル除去方法を採用することができる。他の実施形態では、本発明は、アルデヒドを添加する前に酸性ポリビニルアルコール溶液に細胞接着促進因子を添加することをさらに含む、架橋ポリビニルアルコール微小球の製造方法；架橋ポリビニルアルコール微小球にマーキング剤を吸収させることをさらに含む方法；および架橋ポリビニルアルコール微小球に抗血管形成剤を吸収させることをさらに含む方法を包含する。
【００２７】
開示内容を明確にすることを目的として（制限する目的ではない）、本発明の詳細な説明を以下の小節に分けて記載する。
【００２８】
4.1. ポリビニルアルコール微小球
ポリビニルアルコールは、ポリ酢酸ビニルから、アセテート基をヒドロキシル基で置き換えることにより製造されるポリマーである。ポリビニルアルコールの他の名称としては、例えば、Akwa Tears、Elvanol、Gelvatol、Lipuifilm、Mowiol、Polyviol、Sno Tears、VinarolおよびVinolなどがあるが、これらに限らない(The Merk Index, 12th Ed., Merk & Co., Inc., 1996, p.1308)。本発明はそのような別名を含むものとする。ポリビニルアルコールは以下の文献に記載される方法に従って合成することができる：Hermann, Haehnel, Ber. 60:1658 (1927); Schildknecht, Vinyl and Related Polymers (Wiley, New York, 1952); Staudingerら, Ber. 60:1782 (1927); Prakt, Chem., 155:261 (1940); Marvel, J. Am. Soc., 60:1045 (1938); McDowell, J. Am. Soc., 62:415 (1940); Marvel, J. Am. Soc., 65:1710 (1943); Leeds, Encyclopedia of Chemical Technology (KirkOthmer編), 21:353-368 (Wiley-Interscience, New York, 2nd. ed., 1970); Polyvinyl Alcohol (Finch編), p.640 (Wiley, New York, 1973); およびDunn, Chem & Ind. (London), pp.801-806 (1980)。また、ポリビニルアルコールはAldrich社、Fluka社、Sigma社どの化学会社から購入することもできる。
【００２９】
本発明は、以下の特徴の１以上を有するポリビニルアルコール微小球を提供する。すなわち、1) 実質的に球形である；2) サイズおよび形状が実質的に均一である；3) 表面相互作用によって凝集しない；および4) 微小球の直径を容易にキャリブレートしうる。
【００３０】
本発明においては、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲であるポリビニルアルコール微小球も提供される。本発明の微小球は乾燥粉末またはヒドロゲルの形でありうる。一つの実施形態において、本発明の架橋されたヒドロゲル微小球は約0.5〜20重量％の架橋ポリビニルアルコールを含む。
【００３１】
本発明はまた、細胞接着促進因子、マーキング剤、またはその両方をさらに含む架橋ポリビニルアルコール微小球を提供する。細胞接着促進因子としては、限定するものではないが、CMデキストラン、コラーゲン、DEAEデキストラン、ゼラチン、グルコサミノグリカン、フィブロネクチン、レクチン、ポリカチオン、天然の生物学的細胞接着因子および合成の生物学的細胞接着因子が挙げられる。好ましい実施形態では、細胞接着促進因子がCMデキストラン、コラーゲン、およびDEAEデキストランからなる群より選択される。
【００３２】
本発明において有用なマーキング剤としては、染料、イメージング剤およびコントラスト剤が挙げられるが、これらに限らない。微小球の直接的視覚化を可能とする、本発明で使用できる化学染料の例は、限定するものではないが、シバクロンブルー(Cibacron Blue)、プロシオンレッド(Procion Red) HE-3Bがある。本発明で使用できるイメージング剤の例は、限定するものではないが、エルビウム、ガドリニウムおよびマグネタイトなどの磁気共鳴イメージング剤がある。好ましい実施形態では、強磁性流体(ferrofluid)のようなマグネタイトイメージング剤が使用される。本発明で使用できるコントラスト剤の例は、限定するものではないが、バリウムまたはヨウ素の塩、およびアミノ-3-トリヨード-2,4,6-安息香酸がある。上記染料、イメージング剤およびコントラスト剤の使用ならびに調製は、米国特許第5,635,215号；同第5,648,100号；Boschetti, Biochem-Biophys. Meth. 19: 21-36 (1989)；およびBoschettiら, Bull. Sec. Chim. France. 1986 No.4に記載されており、それらの内容を参照により本明細書中に含めるものとする。
【００３３】
バリウムまたはマグネタイトの塩の場合には、本発明によるポリビニルアルコール微小球を製造する過程で、それらを粉末形態で初期のポリビニルアルコール溶液中に直接導入することができる。また、微小球の合成後にそれらにマーキング剤を組み込むことも可能である。それは、例えば、エリスロシン、フルオレセインまたはそれらの誘導体（FITC、EITCなど）のような蛍光マーカーをグラフトすることにより行なわれる。
【００３４】
別の実施形態において、本発明は、抗血管形成剤をさらに含む架橋ポリビニルアルコール微小球を提供する。
【００３５】
本発明において有用な抗血管形成剤としては、限定するものではないが、以下のものが含まれる。すなわち、AGM-1470(TNP-470)、血管静止ステロイド、アンギオスタチン、avβ3に対する抗体、bFGFに対する抗体、IL-1に対する抗体、TNF-αに対する抗体、VEGFに対する抗体、オーラノフィン(auranofin)、アザチオプリン、BB-94およびBB-2516、塩基性FGF-可溶性受容体、カルボキシアミド-トリゾール(CAI)、軟骨由来インヒビター(CDI)、キチン、キオロキン(chioroquine)、CM 101、コルチゾン／ヘパリン、コルチゾン／ヒアルロフラン、コルテキソロン／ヘパリン、CT-2584、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、デキサメタゾン、ジクロフェナック(diclofenac)／ヒアルロナン(hyaluronan)、好酸球性主要塩基性タンパク質、フィブロネクチンペプチド、神経膠腫由来の血管形成阻害因子(GD-AIF)、GM 1474、塩化金、金チオマレート、ヘパリナーゼ、ヒアルロナン（高分子量種および低分子量種）、ヒドロコルチゾン1β-シクロデキストラン、イブプロフェン、インドメタシン、インターフェロン-α、インターフェロンγ-誘導性プロテイン10、インターフェロン-γ、IL-1、IL-2、IL-4、IL-12、ラミニン、レバミゾール、リノミド(linomide)、LM609、マートマスタット(martmastat)(BB-2516)、メドロキシプロゲステロン、メトトレキセート、ミノサイクリン、酸化窒素、オクトレオタイド(octreotide)(ソマトスタチン類似体)、D-ペニシラミン、ペントサンポリ硫酸、胎盤プロリフェリン関連タンパク質、胎盤RNアーゼ阻害剤、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤(PAI)、血小板因子-4(PF4)、プレドニゾロン、プロラクチン(16-kDa 断片)、プロリフェリン関連タンパク質、プロスタグランジンシンターゼ阻害剤、プロタミン、レチノイド、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、スラミン、SU101、テコガランナトリウム(05-4152)、テトラヒドロコルチゾール-トロンボスポンジン(TSP)、メタロプロテイナーゼの組織阻害剤(TIMP 1、2、3)、サリドマイド、3-アミノサリドマイド、または3-ヒドロキシサリドマイド、サリドマイド、3-アミノサリドマイド、または3-ヒドロキシサリドマイドの代謝産物または加水分解産物、ビタミンＡおよび硝子体液である。別の好ましい実施形態において、抗血管形成剤はサリドマイド、3-アミノサリドマイド、3-ヒドロキシサリドマイド、およびサリドマイド、3-アミノサリドマイド、3-ヒドロキシサリドマイドの代謝産物または加水分解産物からなる群より選択される。好適な実施形態では、抗血管形成剤がサリドマイドである。上記の抗血管形成剤は米国特許第5,593,990号、同第5,629,327号、および同第5,712,291号；Norrby, APMIS, 1997, 105:417-437；O'Reilly, Investigational New Drugs, 1997, 15:5-13；およびJ. Nat'l Cancer Insti., 1996, 88(12):786-788に記載されており、それらの内容を参照により本明細書に含めるものとする。
【００３６】
本発明の架橋ポリビニルアルコール微小球は乾燥粉末の形態で、または適当な液状担体中に懸濁させたヒドロゲルとして貯蔵し、保存することができる。
【００３７】
4.2. ポリビニルアルコール微小球を含む注入可能な懸濁液
本発明は、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の塞栓形成用の微小球、および適当な担体を含有する、塞栓形成に適した注入可能な懸濁液を提供する。好ましくは、注入可能な懸濁液は無菌のものである。
【００３８】
注入可能な懸濁液においては、第4.1.節に記載した各種の特定的かつ好適なポリビニルアルコール微小球を使用することができる。
【００３９】
既製の注入可能な懸濁液、または上記第4.1.節に記載した粉末形態のポリビニルアルコール微小球とポリビニルアルコール微小球粉末を可溶化しうる１種以上の生理的に許容される液状担体または溶液を含有するキットも本発明の範囲に含まれる。本発明の注入可能な懸濁液において使用するのに適した液状担体としては、生物学的液体または溶液および生物学的に適合性または生理学的に許容可能な液体または溶液が挙げられる。そのような液体または溶液の例は、水溶液、生理食塩水、糖などを含む生理学的溶液があるが、これらに限らない。前記キットはさらに細胞接着促進因子、マーキング剤、抗血管形成剤、またはこれらの混合物を含んでいてもよい。また、前記キットは針、カテーテル、誘導装置、コントラスト剤、およびメチレンブルーのような生理学的染料をさらに含んでいてもよい。
【００４０】
4.3. ポリビニルアルコール微小球を含む注入可能な懸濁液を用いた塞栓形成法
本発明は、哺乳動物における予防上または治療上の一時的または永続的な塞栓形成法を提供する。この方法は、そのような塞栓形成を必要とする哺乳動物に、有効量の、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲である、塞栓形成用の架橋ポリビニルアルコール微小球を含有する注入可能な懸濁液を投与することを含む。好ましい実施形態において、塞栓形成される哺乳動物はヒトである。
【００４１】
本発明の塞栓形成法においては、第4.1.節および第4.2.節に記載されるポリビニルアルコール微小球を含む各種の特定的かつ好適な注入可能懸濁液を使用することができる。
【００４２】
本発明の塞栓形成法で予防または治療しうる症状および疾病状態には、限定するものではないが、固形腫瘍、血管の奇形、および出血性の事象または過程が含まれる。腫瘍に関して本発明の塞栓形成法を用いるのは、痛みを抑えたり、塞栓形成後の外科的介入の間に起こる出血を制限したり、また、腫瘍の壊死を促して外科的介入の必要性を回避または最小限にするためである。血管の奇形に関しては、血液の流れを「正常な」組織へと常態化し、外科手術を助け、かつ出血のリスクを少なくするために本発明の塞栓形成法を用いる。出血性の事象または過程については、血流を減少させ、動脈の開口部の瘢痕形成を促進するために本発明の塞栓形成法を用いる。さらに、本発明の塞栓形成法は、外科的介入に先立って、血液に富む臓器（例えば、肝臓）の血流を減らすために手術前の処置として使用することができる。本発明の塞栓形成法により予防または治療できる具体的な症状としては、例えば、子宮の腫瘍または繊維症；小腸の出血、例えばストレス性潰瘍に関係したもの；外科的ドレーン；吻合；結核性潰瘍および非特定的な潰瘍；症候性肝動静脈の奇形(AVM)；原発性の大腸癌；肝細胞癌；肝臓転移；骨転移；メラノーマ；頭部または頸部の癌；および頭蓋内髄膜腫があるが、これらに限らない。
【００４３】
本発明のポリビニルアルコール微小球の予防または治療上の投与量は、当然、処置すべき症状のタイプ、位置および重症度、ならびに投与経路により変化する。また、投与量は個々の患者の年齢、体重および応答によっても変わるだろう。本発明の塞栓形成法で用いるポリビニルアルコール微小球の有効量は、さまざまな症状、疾病または障害について当業者には公知の、推奨された用量に基づいて決定される。
【００４４】
有効量とは、症状の軽減または患者の生存の長期化をもたらすのに十分なポリビニルアルコール微小球の量をさす。そのようなポリビニルアルコール微小球の毒性および治療効力は、実験動物に標準的な塞栓形成法を施すことにより決定することができ、つまり、それは問題の血管内腔を永続的にまたは一時的に閉塞するのに十分なものである。
【００４５】
有効量の本発明のポリビニルアルコール微小球を所望の標的または位置で患者に供給するために、どのような適当な投与経路を使用してもよい。例えば、非経口、皮下、筋肉内などの経路を用いることができる。好ましい投与様式はカテーテルを介した標的動脈の内部への送達である。
【００４６】
4.4. ポリビニルアルコール微小球の製造方法
本発明は、直径が約10μm〜約2,000μmの範囲の架橋ポリビニルアルコール微小球を製造する方法を提供する。この方法は、a) 酸性溶液中にポリビニルアルコールを溶解し、b) 該ポリビニルアルコール含有溶液にアルデヒドを加えるか、またはアルデヒドに該ポリビニルアルコール含有溶液を加えて、混合物を形成し、c) 該混合物を、攪拌しながら、HLBが５未満の乳化剤を約0.1〜10％含有するオイルに加えるか、またはHLBが５未満の乳化剤を約0.1〜10％含有するオイルを、攪拌しながら、該混合物に加えて、ポリビニルアルコールの液滴がオイル中に懸濁しているエマルジョンを形成し、d) 該エマルジョンを加熱してポリビニルアルコール鎖上の該アルデヒドを縮合させ、それにより架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成し、e) 該架橋ポリビニルアルコールの球状粒子からオイルを除去し、f) 該架橋ポリビニルアルコールの球状粒子上の活性アルデヒドを中和し、g) 中和した架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を生理的水性緩衝液で洗浄し、そして場合によりh) 洗浄した架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を滅菌する、各ステップを含んでなる。この方法では、さまざまな酸性溶液、アルデヒド、アミノ含有物質、オイル、乳化剤、攪拌速度、加熱条件、およびオイル除去方法を採用することができる。
【００４７】
当業者には明らかなように、架橋ポリビニルアルコール微小球の製造方法においては、種々の好適な試薬および反応条件を使用することができる。例えば、ステップ(a)の好適な酸性溶液は、0.5M H2SO4-NaClおよび1M HClである。ステップ(b)の好適なアルデヒドは、ホルムアルデヒド、グリオキサール、グルタルアルデヒドおよびテレフタルアルデヒドからなる群より選択される。より好ましくは、アルデヒドはグルタルアルデヒドである。ステップ(c)では、1) 好適なオイルが植物油（例えば、オリーブ油、コーン油、ヒマワリ油）、鉱油（例えば、パラフィン油、シリコーン油）および無極性溶媒からなる群より選択され、より好ましくは、パラフィン油などの鉱油である。HLBが５未満の好適な乳化剤は、好ましくは約0.05〜５％の濃度で使用し、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタントリオレエート、ソルビタントリステアレート、ポリエチレンソルビタンモノステアレート、酢酸酪酸セルロースおよびテトラデカノールからなる群より選択される。本発明の方法で用いる攪拌速度は、使用する攪拌装置のタイプおよび製造しようとする微小球の所望のサイズに左右されるだろう。ステップ(d)における加熱は約80℃で約６時間行なうことが好ましい。ステップ(e)では、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子からオイルを除去するにあたって、軽質の無極性溶媒、塩素化溶媒、エチルエーテル、超臨界二酸化炭素のような抽出剤を使用する。好ましくは軽質の無極性溶媒や塩素化溶媒で抽出し、より好ましくは塩化メチレンで抽出する。ステップ(f)では、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子上の活性アルデヒドを、好ましくはアミノ含有試薬、例えばTris、2-アミノエタノール、アミノソルビトール、グルコサミンなどのアミノアルコールで、より好ましくは0.5M Tris-HCl緩衝液(pH9)で中和する。
【００４８】
さらに別の実施形態において、本発明は、アルデヒドを添加する前に酸性ポリビニルアルコール溶液に細胞接着促進因子を添加することをさらに含む、架橋ポリビニルアルコール微小球の製造方法を提供する。好ましい実施形態では、細胞接着促進因子がCMデキストラン、コラーゲン、DEAEデキストラン、ゼラチン、グルコサミノグリカン、フィブロネクチン、レクチン、ポリカチオン、天然の生物学的細胞接着因子および合成の生物学的細胞接着因子からなる群より選択される。より好ましい実施形態では、細胞接着促進因子がCMデキストラン、コラーゲンおよびDEAEデキストランからなる群より選択される。
【００４９】
別の実施形態において、本発明は、架橋ポリビニルアルコール微小球にマーキング剤を吸収させることをさらに含む、架橋ポリビニルアルコール微小球の製造方法を提供する。好ましくは、マーキング剤は染料、イメージング剤およびコントラスト剤からなる群より選択され、より好ましくは、マーキング剤は強磁性流体のようなイメージング剤である。
【００５０】
さらに別の実施形態において、本発明は、架橋ポリビニルアルコール微小球に抗血管形成剤を吸収させることをさらに含む、架橋ポリビニルアルコール微小球の製造方法を提供する。より好ましくは、上記の第4.1.節に記載した抗血管形成剤を使用する。
【００５１】
以下、実施例を用いて本発明をより完全に説明するつもりであるが、実施例は例示であって限定するものではない。
【００５２】
５．実施例
材料：
ポリビニルアルコールを含めて、すべての化学薬品類はAldrich社（ヨーロッパ）からのものである。すべての生物学的試薬類、例えば、デキストラン誘導体、細胞接着因子などはSigma社（米国）からのものである。攪拌システムおよび篩別機はProlabo社（フランス）からのものである。
【００５３】
実施例１：5%ポリビニルアルコールを含む架橋微小球の製造
5gのポリビニルアルコールを、75mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌した後、この溶液に25mlのホルムアルデヒドを加える。得られた混合物を、2%のソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中のポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のホルムアルデヒドを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００５４】
粒子の大きさは乳濁液の撹拌速度によって調節する。たとえば、直径約300μm（平均寸法）の微小球を得るためには、撹拌速度を約250rpmに保つ。
【００５５】
次いで、ポリビニルアルコールのヒドロゲル微小球を濾過により収集する。あるいは、ポリビニルアルコールのヒドロゲル微小球を、遠心分離または単にデカンテーションにより収集してもよい。残留オイルを無極性溶媒または塩化メチレンのような塩素化溶媒によって抽出する。そのようにして得られた、オイルを含まない微小球を、0.5M Tris-HCl緩衝液（pH9）により室温で１晩処理して過剰なアルデヒドを中和する。
【００５６】
最後に、ポリビニルアルコール微小球を水性生理緩衝液で洗浄し、所望の直径にふるい分け、滅菌して液体懸濁液として貯蔵する。この材料を塞栓形成法に使用することができる。
【００５７】
実施例２：20%ポリビニルアルコールを含む架橋微小球の製造
20gのポリビニルアルコールを75mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌した後、この溶液に25mlのホルムアルデヒドを加える。得られた混合物を、2%ソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中ポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のホルムアルデヒドを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００５８】
粒子の大きさの制御、微小球の収集、オイルの抽出、アルデヒドの中和、微小球の洗浄、ふるい分けおよび滅菌は実施例１に記載したとおりにおこなった。
【００５９】
実施例３：10%ポリビニルアルコールを含む架橋微小球の製造
10gのポリビニルアルコールを75mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌した後、この溶液に25mlの25%グルタルアルデヒド水溶液を加える。得られた混合物を、2%ソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中ポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のグルタルアルデヒドを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００６０】
粒子の大きさの制御、微小球の収集、オイルの抽出、アルデヒドの中和、微小球の洗浄、ふるい分けおよび滅菌は実施例１に記載したとおりにおこなった。
【００６１】
実施例4：10%ポリビニルアルコールを含む架橋微小球の製造
10gのポリビニルアルコールを85mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌した後、この溶液に15mlの25%グリオキサール水溶液を加える。得られた混合物を、2%ソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中ポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のグリオキサールを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００６２】
粒子の大きさの制御、微小球の収集、オイルの抽出、アルデヒドの中和、微小球の洗浄、ふるい分けおよび滅菌は実施例１に記載したとおりにおこなった。
【００６３】
実施例５：コラーゲンを含むポリビニルアルコール微小球の製造
10gのポリビニルアルコールを75mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌する。この溶液に10mlの2%コラーゲン水溶液を撹拌しながら加えた後、15mlの50%グルタルアルデヒド水溶液を加える。得られた混合物を、2%ソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中ポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のグルタルアルデヒドを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００６４】
粒子の大きさの制御、微小球の収集、オイルの抽出、アルデヒドの中和、微小球の洗浄、ふるい分けおよび滅菌は実施例１に記載したとおりにおこなった。
【００６５】
実施例６：DEAEデキストランを含むポリビニルアルコール微小球の製造
10gのポリビニルアルコールを75mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌する。この溶液に10mlの1% DEAEデキストラン水溶液を撹拌しながら加えた後、15mlの50%グルタルアルデヒド水溶液を加える。得られた混合物を、2%ソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中ポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のグルタルアルデヒドを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００６６】
粒子の大きさの制御、微小球の収集、オイルの抽出、アルデヒドの中和、微小球の洗浄、ふるい分けおよび滅菌は実施例１に記載したとおりにおこなった。
【００６７】
実施例７：CMデキストランを含むポリビニルアルコール微小球の製造
10gのポリビニルアルコールを75mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌する。この溶液に10mlの1% CMデキストラン水溶液を撹拌しながら加えた後、15mlの50%グルタルアルデヒド水溶液を加える。得られた混合物を、2%ソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中ポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のグルタルアルデヒドを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００６８】
粒子の大きさの制御、微小球の収集、オイルの抽出、アルデヒドの中和、微小球の洗浄、ふるい分けおよび滅菌は実施例１に記載したとおりにおこなった。
【００６９】
実施例８：コラーゲンおよびDEAEデキストランを含むポリビニルアルコール微小球の製造
10gのポリビニルアルコールを65mlの0.5M H2SO4 - 0.1M NaCl溶液に撹拌しながら溶解する。懸濁液を透明な溶液が形成されるまで撹拌する。この溶液に10mlの1% DEAEデキストラン水溶液および10mlの2%コラーゲン水溶液を激しく撹拌しながら加えた後、15mlの50%グルタルアルデヒド水溶液を加える。得られた混合物を、2%ソルビタンセスキオレエートを含むパラフィン油500mlに撹拌しながら迅速に注ぐ。これらの条件下で、懸濁液オイル中ポリビニルアルコールの液滴で乳濁液が形成される。この乳濁液を約80℃で６時間以上加熱してポリビニルアルコール鎖上のグルタルアルデヒドを縮合させることにより、架橋ポリビニルアルコールの球状粒子を形成する。
【００７０】
粒子の大きさの制御、微小球の収集、オイルの抽出、アルデヒドの中和、微小球の洗浄、ふるい分けおよび滅菌は実施例１に記載したとおりにおこなった。
【００７１】
実施例９：マグネタイトを含むポリビニルアルコール微小球の製造
実施例１〜８に記載された方法で得られたポリビニルアルコール微小球50mlを、それぞれ直径16mmのクロマトグラフィー用カラムに充填し、生理緩衝液で洗浄する。次いで、このカラムに強磁性流体（マグネタイトの非常に小さい粒子）のコロイド懸濁液を、10ml/時間の流速で載せる。マグネタイトの粒子は、ポリビニルアルコールヒドロゲルの網目に吸着されて永久的にトラップされる。得られた微小球は通常の塞栓形成法に用いられ、MRIによってモニターすることができる。
【００７２】
実施例10：血管新生阻害剤を含浸したポリビニルアルコール微小球
実施例１〜８に記載された方法で得られたポリビニルアルコール微小球を、エタノールで連続的に洗浄して水を除去することにより脱水する。エタノールをアセトンで洗浄することにより除去し、ポリビニルアルコール微小球を最終的に乾燥窒素気流下で脱水する。10mg/mlのサリドマイド水溶液を調製し、1gの乾燥ポリビニルアルコール微小球を12mlの薬剤溶液と混合する。懸濁液を２時間穏やかに撹拌する。乾燥微小球は溶液中の薬剤を吸着して膨潤する。
【００７３】
得られた薬剤を含浸した微小球を通常の塞栓形成法に用いる。
【００７４】
実施例11：ポリビニルアルコール微小球上でのイオン交換による薬剤の吸収
実施例６〜８に記載された方法で得られた約80μmolのカチオン基を含むポリビニルアルコール微小球は、イオン交換によりアニオン性分子を吸着することができる。微小球を、問題の分子、たとえば抗血管新生阻害剤または抗炎症剤をあらかじめ溶解した10mM Tris-HCl緩衝液（pH7.5）によって平衡化する。問題の分子はこれらの条件下でイオン交換作用によって吸着され、得られた微小球は通常の塞栓形成法に用いることができる。
【００７５】
本発明は、ここに記載された特定の実施形態によってその範囲を限定されるべきではない。実際に、本明細書に記載されたものに加えて、本発明のさまざまな変更が上述の説明より当業者に明らかとなろう。それらの変更も添付した特許請求の範囲に含まれるものである。