(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
椎茸菌糸体エキスとして、バカスを基材とする固体培地上に、椎茸菌を接種し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体培地を解束し、この解束された固体培地に、水およびセルラーゼ、β―グルカナーゼまたはプロテアーゼから選ばれる酵素の１種またはそれ以上を、前記固体培地を３０〜５０℃に保ちながら添加し、そして前記固体培地を酵素の存在下に粉砕および擂潰して椎茸菌糸体エキスを抽出し、次いで９５℃までの温度に加熱することにより酵素を失活させかつ滅菌してなる椎茸菌糸体エキスを含むことを特徴とする、制癌剤であるシスプラチンの副作用による死亡率の軽減用組成物。
【請求項２】
制癌剤であるシスプラチンと、
椎茸菌糸体エキスとの組合わせたものであって、
該菌糸体エキスとして、バカスを基材とする固体培地上に、椎茸菌を接種し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体培地を解束し、この解束された固体培地に、水およびセルラーゼ、β―グルカナーゼまたはプロテアーゼから選ばれる酵素の１種またはそれ以上を、前記固体培地を３０〜５０℃に保ちながら添加し、そして前記固体培地を酵素の存在下に粉砕および擂潰して椎茸菌糸体エキスを抽出し、次いで９５℃までの温度に加熱することにより酵素を失活させかつ滅菌してなる椎茸菌糸体エキスを含むことを特徴とする、シスプラチンの副作用による死亡率の軽減された制癌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】
本発明は、制癌剤の副作用軽減組成物（制癌剤の副作用軽減剤）に関し、さらに詳しくは椎茸菌糸体エキス等の担子菌類菌糸体エキスを含有する制癌剤の副作用軽減組成物に関する。
【０００２】
【従来技術】
古来より、椎茸、松茸、エノキ茸などの担子菌類の茸は食用されており、中には、担子菌類サルノコシカケ科に属する茸のように漢方薬として重用されているものもある。
一方で、このような担子菌類から有効成分を抽出する種々の方法が提案されている。例えば、（１）特開昭５４-４６８５９号公報には、担子菌類を主としてバガス からなる培地に接種し、菌糸を繁殖させた後、この菌糸体繁殖培地を圧搾して、有効成分を採取する、保健食品の製造方法が開示されている。
【０００３】
本願出願人は、（２）特願昭６２-３４１２３号にて、「バガスを基材とする固体培地上に、エノキ茸菌を接種し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体培地を、１２メッシュ通過分が３０重量％以下となるように解束し、この解束された固体培地に、水およびセルラーゼ、プロテアーゼまたはグルコシターゼから選ばれる酵素の１種またはそれ以上を添加し、そして前記固体培地を酵素の存在下で粉砕および擂潰してバガス繊維の少なくとも７０重量％以上が１２メッシュ通過分であるようにし、次いで９５℃までの温度に加熱することにより酵素を失活させかつ滅菌することを特徴とする、エノキ茸菌糸体およびバガス培地からの有用成分の抽出方法。」を提案している。
【０００４】
また（３）特公昭６０-２３８２６号公報において、本願出願人らは、接種菌として椎茸菌を用いた以外は上記特願昭６２−３４１２３号記載の方法と同様の方法にて保健飲料を製造する方法を提案している。この公報では、得られる保健飲料には、血圧降下作用、利尿作用、疲労回復作用などがあると記載されている。
【０００５】
（４）特開昭５７−１７０１７３号公報には、砂糖きびあるいは砂糖大根等の原糖及び植物繊維を多量に含有する素材を用いて培養基とし、これに椎茸等の食用茸の種菌を接種して、菌糸体を培養させた後、子実体発生寸前または直後の培養基を粉砕、加水、加温して前記菌糸体に自己消化を生じさせて該菌糸体に含有されている有効成分を培養基に溶脱させ、しかる後乾燥させて微細に粉砕した、食用菌糸体の有効成分及び食物繊維を含有した粉末食品の製造方法が開示されている。該公報には、この方法で得られる粉末食品は、大腸癌、動脈硬化症、糖尿病等に有効であると記載されている。
【０００６】
また、本願出願人等は、（５）特許第２５１９７８５号（特開平２−１０７１７１号公報）にて、トウモロコシ随、フスマ及び米糠からなる植物繊維と水とを含む固体培地に、エノキタケ菌糸を接種して培養し、培養終了後この培地を破砕し、乾燥することによる、食物繊維含有食品の製造方法を提案しており、該公報には、この方法により得られる食品を摂取すると、便秘予防、肥満、糖尿病、動脈硬化の予防、食品中の毒性物質の排除促進、自己防御能の向上などが期待できる旨記載されている。
【０００７】
また、（６）特開平２−１３４３２５号公報には、担子菌の１種である椎茸菌の菌糸体培養物から抽出された成分からなるエイズ治療剤が記載されている。
また、（７）「キノコの化学・生化学」（水野、河合編、学会出版センター刊）には、キノコの食物繊維には、薬理作用、結腸癌、直腸癌の予防効果が期待でき、エノキタケ抽出物ではその発癌予防効果が動物実験でも証明されていると記載されている。
【０００８】
（８）「きのこ抗腫瘍研究２０年」（池川等、社団法人  長野県農村工業研究所発行、平成元年３月１日刊）には、エノキタケ菌糸体から分離されたプロフラミンは、制癌剤として機能し、経口投与しても毒性がなく、その他の副作用も認められないと記載されている。
さらに、本発明者らは、（９）特公昭６０-２３８２６号公報に記載の方法と同様の方法にて得られる椎茸菌糸体エキスが、ＨＩＶ型ウイルス活性阻害効果を有することを見出し、特開平７−１７３０７０号公報（特許第３０１７６３０号）において該方法で得られるＨＩＶ型ウイルス活性阻害剤を提案している。
【０００９】
このように、従来より、椎茸菌糸体エキス、エノキタケ菌糸体あるいはその抽出物等には、制癌作用、便秘予防、肥満、糖尿病、動脈硬化の予防、食品中の毒性物質の排除促進、自己防御能の向上など、健康維持、増進に有効な種々の作用があると報告されている。
しかしながら、担子菌類の椎茸（菌糸体培養物）などから抽出される椎茸菌糸体エキスなどの担子菌類菌糸体エキスには、上記のような効果に加えて、他にどのような効果があるかという点については、未だ、知られていないことが多い。
【００１０】
そこで、本発明者は、椎茸菌糸体エキス等の、従来より食用され漢方に利用されている担子菌類の菌糸体エキスの薬理作用について鋭意研究を重ねたところ、椎茸菌糸体エキスなどの担子菌類菌糸体エキスには、驚くべきことに、シスプラチンに代表される制癌剤の副作用を著しく軽減でき、これら制癌剤を投与されたヒトその他の動物の生存率を著しく高めうることなどを見出して、本発明を完成するに至った。
【００１１】
なお、（１０）特開平６−３２１７９２号公報には、和漢生薬（当帰、甘草、紫胡または軟紫根）、またはその原植物、若しくはその他同属植物を粉砕し、１０倍量程度の水性溶剤にて抽出し、抽出液を濾過して得た濾液をエタノール沈殿及び透析等の操作を行うことにより得られる多糖成分を有効成分として含む医薬品による副作用軽減剤が開示されている。また該公報には、副作用が白金の投与により引き起こされるものであり、白金錯体がシスプラチンであり、副作用の種類が腎毒性または血液毒性である態様も示されている。
【００１２】
しかしながら、上記担子菌類菌糸体エキスにどのような薬効があるかという点については何ら教示されていない。
【００１３】
【発明の目的】
本発明は、上記のような従来技術に伴う問題点を解決しようとするものであって、制癌剤の副作用を軽減でき、しかもそれ自体にも副作用の恐れがなく安全性に優れ、制癌剤を投与されたヒトや動物の生存率の顕著な向上が期待できるような、制癌剤の副作用軽減組成物を提供することを目的としている。
【００１４】
【発明の概要】
本発明に係る制癌剤の副作用軽減組成物（制癌剤の副作用軽減剤）は、担子菌類の菌糸体培養物から抽出された担子菌類菌糸体エキスを含むことを特徴としている。
上記制癌剤としては、シスプラチンなどが挙げられる。
【００１５】
上記担子菌類としては、椎茸菌、山伏茸菌、エノキタケ菌等が挙げられ、特に好ましくは椎茸菌が用いられる。
本発明においては、上記担子菌類の菌糸体エキスとしては、
バカスを基材とする固体培地上に、椎茸菌などの担子菌類を接種し、次いで菌糸体を増殖して得られる菌糸体を含む固体培地を解束し、
この解束された固体培地に、水およびセルラーゼ、β―グルカナーゼまたはプロテアーゼから選ばれる酵素の１種またはそれ以上を、前記固体培地を３０〜５０℃に保ちながら添加し、そして前記固体培地を酵素の存在下に粉砕および擂潰して椎茸菌糸体エキス等の担子菌類菌糸体エキスを抽出し、次いで９５℃までの温度に加熱することにより酵素を失活させかつ滅菌してなるものであることが望ましい。
【００１６】
このような制癌剤の副作用軽減組成物を、例えば、経口摂取すれば、制癌剤、特にシスプラチンの副作用を著しく改善でき、制癌剤投与患者の生存率の顕著な向上が期待でき、しかもそれ自体副作用の恐れが全くなく安全性に優れている。
【００１７】
【発明の具体的説明】
以下、本発明に係る制癌剤の副作用軽減組成物について具体的に説明する。
［制癌剤の副作用軽減組成物の製造］
本発明に係る制癌剤の副作用軽減組成物（制癌剤の副作用軽減剤）には、担子菌類の菌糸体エキスが含まれている。
【００１８】
担子菌類（Basidiomycota）としては、古来より我が国で食用菌類として食用され、あるいは漢方で使用されている。
松茸目あるいはハラタケ目(Agaricales）の茸としては、
松茸(Tricholoma Matsutake Ito et Imai.)、
椎茸(Lentinula edodes (Berk.) Sing.)、
エノキ茸(Flammulina Velutipes (Fr.)Sing.)、
平茸（Pleurotus ostreatus (Jacq.Ex Fr)Kummer）、
なめこ（Pholiota nameko(I.Ito)S.Ito et IMAI）、
イグチ属(Boletus Dill.ex Fr.)、
シメジ（Lyophyllum shimeji (Kawam.)Hongo）、
チチタケ(Lactarius volemus(Fr.)Fr.）、
エリンギ（pleurotus eryngii）等が挙げられる。
【００１９】
また、サルノコシカケ目あるいはヒダナシタケ目（Aphyllophorales）の茸としては、
コフキサルノコシカケ(Elfvingia applanatus(Pers.)Karst.)、
ツガサルノコシカケ(Fomitopsis pinicola (Fr.)Karst.)、
カワラ茸（Coriolus versicolor(Fr.)Quel.）、
マンネン茸すなわち霊芝(Ganoderma lucidum(W.Curt.ex Fr.)Karst.)、
舞茸(Grifola frondosa(Fr.)S.F.Gray)、
メシマコブ(P.yucatensis(Murr.)Imaz.,)等が挙げられる。
【００２０】
キクラゲ目(Auriculariales）またはシロキクラゲ目(Tremellales)の茸としては、
キクラゲ(Auricularia auricula(Hook.)Underw.)、
シロキクラゲ(Tremellinea fuciformis Berk.)等が挙げられる。
アンズタケ目（cantharellales）の茸としては、
ハリタケ科（Hydnaceae）の山伏茸すなわちハリタケ（hydnum）等が挙げられる。
【００２１】
本発明では、これら担子菌類のうちでも、椎茸(Lentinula edodes (Berk.) Sing.)、エノキ茸(Flammulina Velutipes (Fr.)Sing.）、山伏茸すなわちハリタケ（hydnum）が好ましく、特に椎茸が好ましく用いられる。
本発明では、これらの担子菌類を、１種または２種以上組み合わせて用いることができる。なお、これらの担子菌類の多くは、「キノコの事典」（中村克哉編、朝倉書店、１９８９年）、「キノコ類の培養法」（岩出亥之助著、地球社、昭和６０年再訂５版）あるいは「原色日本菌類図鑑」（今関等共著、保育社、昭和５８年、２７刷）などに詳説されている。
【００２２】
椎茸菌糸体エキス等の担子菌類菌糸体エキスの製法には特に制限はなく、例えば、椎茸菌糸体エキスでは、特開平２−１３４３２５号公報に記載されているように、椎茸菌糸体培養物を必要により自己消化させた後、熱水抽出し、その熱水抽出物をアルコールに沈殿させて得られるものでもよく、また、必要により、この沈殿物をさらにクロマトカラムにて分画し、エチレングリコール等にて溶出画分を分取して用いてもよい。
【００２３】
本発明では、制癌剤の副作用軽減効果の点で特に好ましくは、該椎茸菌糸体エキスでは、特公昭６０-２３８２６号公報に記載された方法を利用して調製したものが望ましい。また、椎茸菌糸体エキス以外の上記したような他の担子菌類菌糸体エキスの場合も、椎茸菌糸体エキスと同様の方法にて調製したものが好ましい。
【００２４】
以下、椎茸菌糸体エキスの調製法の例を挙げて、以下に詳説する。
椎茸菌糸体エキスを調製するには、具体的には、まずバカスからなる固体培地に水、好ましくは純水を適度に混ぜた後、椎茸菌を接種する。なお、このバカス培地に、米糠の他、必要によりリン、鉄、ゲルマニウム等のミネラル類、落花生表皮、玄米などを添加してもよい。
【００２５】
次いで、このように椎茸菌が接種された培地を、温度および湿度が調節されさらには照度も調節された培養室内に入れて、菌糸体を増殖させる。
菌糸体が固体培地に蔓延し、子実体の発生直前・直後の時期に、バカス基材の繊維素を解束し、１２メッシュ通過分が３０重量％以下となるようにすることが望ましい。なお、バカス基材培地の解束は、上記のように子実体の発生直前・直後の時期に行うことが好ましいが、子実体がかなり成長した後の時期に行ってもよい。
【００２６】
このように解束された固体培地に、水およびセルラーゼ、β−グルカナーゼ、プロテアーゼまたはグルコシダーゼから選ばれる酵素、とくにセルラーゼ、β−グルカナーゼまたはプロテアーゼから選ばれる酵素の１種またはそれ以上を、固体培地を３０〜５０℃に保ちながら添加する。添加される酵素としては、セルラーゼが好ましい。
酵素の添加量は、固体培地１ｋｇに対して０．５〜５ｇ好ましくは１〜３ｇであることが好ましい。また水は、金属イオン等のイオン類を含まない純水が好ましく、この解束された培地１ｋｇに対して、純水１〜１０ｋｇ好ましくは２〜６ｋｇを加えてバカス含有混合物とする。
【００２７】
次いでこのバカス含有混合物から椎茸菌糸体エキスを抽出するが、このように椎茸菌糸体エキスを抽出するには、培地含有混合物を、例えば変速機付ギヤーポンプ等を用いて循環させながら、固体培地に粉砕および擂潰作用を加えてバカス繊維の約７０重量％以上が１２メッシュ通過分となるようにすることが望ましい。
【００２８】
バカス含有混合物の粉砕および擂潰は、該混合物の温度を３０〜５０℃に保ちながら行ってもよく、温度を上記温度より徐々に上昇させながら行ってもよいが、温度を上昇させながら行うことが好ましい。水温が６０℃以上好ましくは７０℃以上となったときに、バカス含有混合物中に室温の空気を噴入させると、空気泡は急激に加熱されて破裂し、バカス繊維に衝撃を与え有効成分の抽出をより効率的に行うことができる。
【００２９】
次いで、このようにして処理されたバカス含有混合物をさらに加熱して９５℃までの温度、好ましくは７５〜９０℃程度の温度に加熱し、この温度で数十分間保持して該混合物中の酵素を失活させるとともに、該混合物を殺菌すると、椎茸菌糸体エキスが得られる。
なお、得られた椎茸菌糸体エキスを必要に応じて、５０〜１２０メッシュ好ましくは６０〜１００メッシュ程度の濾布を用いて濾過してもよい。
【００３０】
このようにして得られる椎茸菌糸体エキスは、濃縮して用いることもでき、また凍結乾燥して粉末状として用いることもできる。
以上、椎茸菌糸体エキスの好ましい調製法の例を詳説したが、本発明で用いられる前記したその他の担子菌類菌糸体エキスも、上記椎茸菌に代えて、霊芝、エノキ茸、メシマコブ、山伏茸、マイタケ、エリンギなどの担子菌類を用いる点以外は、上記と同様にして、調製することができる。
【００３１】
本発明の制癌剤の副作用軽減組成物には、上記椎茸菌糸体エキス等の担子菌類菌糸体エキスは、どのような量で含まれていてもよい。
対象となる制癌剤としては、シスプラチン、アドリアマイシン、マイトマイシン、6-メルカプトプリン、5-フルオロウラシル等が挙げられ、これらのうちでは、シスプラチンが好ましい。
【００３２】
このような制癌剤の副作用軽減組成物は、顆粒状、液状、錠剤、カプセル状など各種剤形にて経口投与してもよく、また制癌剤投与患者に使用する注射液としての開発も可能である。また、上記の菌糸体エキス原液が含まれた制癌剤の副作用軽減組成物は、制癌剤副作用の改善効果とともにそれ自体制癌効果もあり、希釈せずにそのまま制癌剤投与患者に投与することもできるが、例えば精製水、アルコール等で適宜希釈して投与することもできる。
【００３３】
このような制癌剤の副作用軽減組成物は、上記担子菌類菌糸体エキス固形分換算で、体重１ｋｇ当たり、通常、６〜６０ｍｇ、好ましくは２０〜６０ｍｇの量で投与されることが望ましい。上記投与量が６ｍｇ未満では、充分な投与効果が期待できないことがある。
上記のように、本発明に係る制癌剤の副作用軽減組成物を制癌剤を投与されている患者などに投与すると、制癌剤の副作用による死亡を減少させて、その生存率を著しく向上させることができる。
【００３４】
このように本発明に係る制癌剤の副作用軽減組成物が、制癌剤の副作用を改善でき、その患者の生存率を著しく向上させることができるのは、次のような理由によるのであろうと思われる。
すなわち、この椎茸菌糸体エキス等の担子菌類菌糸体エキスからなる制癌剤用の副作用軽減組成物には、本発明者らの研究によれば、椎茸菌糸体等の担子菌類菌糸体から抽出される有効成分と、椎茸菌糸体などの担子菌類菌糸体が培養された固体培地とから抽出される有効成分とが多数混在し、これらの成分（未同定である）が総合的に作用し、制癌剤の副作用を軽減あるいは改善でき、制癌剤、特にシスプラチンを投与された患者の生存率を高めることができるのであろうと考えられる。
【００３５】
【発明の効果】
本発明によれば、制癌剤、特にシスプラチンの副作用による死亡率を改善してその生存率を著しく向上させることができ、しかも、それ自体に副作用の虞がなく安全性に優れた保健食品あるいは医薬である、制癌剤用の副作用軽減組成物が提供される。
【００３６】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づきさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何等制限されるものではない。
【００３７】
【調製例１】
［椎茸菌糸体エキスからなる制癌剤の副作用軽減組成物の調製］
バカス９０重量部、米糠１０重量部からなる固体培地に純水を適度に含ませた後に、椎茸種菌を接種し、温度および湿度を調節した培養室内に置き、菌糸体を増殖させた。菌糸体が固体培地に蔓延した後、バカス基材の繊維素を解束し、１２メッシュ通過分が２４重量％以下になるようにした。この解束された培地１．０ｋｇに、純水３．５リットルおよび精製セルラーゼ２．０ｇを固体培地を４０℃に保ちながら加えてバカス含有混合物とした。
【００３８】
次いで培地含有混合物を変速機付ギヤーポンプにより循環させながら、固体培地に該ポンプのギヤー部分において粉砕および擂潰作用を２００分間程度加え、バカス繊維の約８０重量％が１２メッシュ通過分となるようにした。バカス含有混合物の粉砕および擂潰は、該混合物の温度を徐々に上昇させながら行った。
その後、バカス含有混合物をさらに加熱して、９０℃として３０分間放置した。
【００３９】
９０℃への加熱により酵素を失活させ、かつ殺菌を施した。
得られた培地含有混合物を６０メッシュ濾布を用いて濾過し、微小浮遊物を含有する椎茸菌糸体エキスを得た。
この椎茸菌糸体エキスをフリーズドライ法にて粉末化した。
【００４０】
【調製例２〜３】
上記調製例１において、椎茸種菌に代えて、エノキ茸種菌（調製例２）、山伏茸種菌（調製例３）を用いた以外は、調製例１と同様にして、エノキ茸菌糸体エキス粉末、山伏茸菌糸体エキス粉末を得た。
【００４１】
【試験例１】
上記調製例１で得られた椎茸菌糸体エキス（粉末）からなる、制癌剤の副作用軽減組成物を用いて、マウスに対する制癌剤の副作用である患者死亡率、腎炎の改善効果を調べた。
＜試験方法＞
体重３６〜４０ｇの健康なｄｄＹ系雄マウス一群（：１６匹）×４群を用意した。
【００４２】
これらマウスを、飼料として、通常飼育飼料末９９．０ｇ当たり椎茸菌糸体エキス（粉末）１．０ｇ添加したものを与える（Ａ）群：１６匹と、通常飼育飼料末９７．０ｇ当たり椎茸菌糸体エキス（粉末）３．０ｇ添加したものを与える（Ｂ）群：１６匹と、通常飼育飼料のみを与える（Ｃ）群：１６匹、および（Ｃ）群と同様の飼料を与える（Ｄ）群：１６匹とに分けた。
【００４３】
これら（Ａ）〜（Ｄ）群のマウスについて、下記の試験を行った。
（Ａ）群
すなわち、（Ａ）群のマウスには、飼料として、椎茸菌糸体エキス添加飼料末（椎茸菌糸体エキス／通常飼育飼料末＝１．０ｇ／９９．０ｇ）を与えながら、制癌剤のシスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）を、体重１ｋｇ当たり３ｍｇの量で、１日一回ずつ、７日間に亘って注射した。注射終了後も、当該飼料を７日間継続して投与した。
【００４４】
次いで、マウスを２０時間絶食させた後、採血し、血中尿素窒素値(Blood Urea Nitrogen、ＢＵＮ)を測定した。また、このマウスの生存率も求めた。
（Ｂ）群
（Ｂ）群では、上記（Ａ）群において、飼料として、椎茸菌糸体エキス含量の異なる椎茸菌糸体エキス添加飼料末（椎茸菌糸体エキス／通常飼育飼料末＝３．０ｇ／９７．０ｇ）を与えた以外は、上記（Ａ）群と同様にして、注射、飼育、絶食を行った後、上記と同様に、マウスの生存率、血中尿素窒素値（ＢＵＮ）を測定した。
【００４５】
（Ｃ）群
（Ｃ）群では、上記（Ａ）群において、飼料として、椎茸菌糸体エキスを含まない通常飼育飼料のみを与えた以外は、上記（Ａ）群と同様にして、シスプラチン注射、飼育、絶食を行った後、上記と同様に、マウスの生存率、血中尿素窒素値(ＢＵＮ)を測定した。
【００４６】
（Ｄ）群
（Ｄ）群では、上記（Ａ）群において、椎茸菌糸体エキスを含まない通常飼育飼料のみを与え、またシスプラチン注射をしなかった以外は、上記（Ａ）群と同様に飼育し絶食させた後、マウスの生存率、血中尿素窒素値(ＢＵＮ)を測定した。
【００４７】
結果を表１に示す。
【００４８】
【表１】
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【００４９】
上記表１によれば、制癌剤のシスプラチンを投与する際に、通常の飼育飼料のみを与えた（Ｃ）群では、マウスの生存率は４３．７５％であるが、椎茸菌糸体エキスを添加した飼料を与えた（Ａ）群、（Ｂ）群では、マウスの生存率が９０％前後と著しく向上していることが分かる。なお、シスプラチン投与による腎障害由来のＢＵＮ値は、何れの飼料を与えた群においても変化が見られなかった。
【００５０】
椎茸菌糸体エキスに代えて、山伏茸菌糸体エキス、エノキタケ菌糸体エキスを用いた場合にも、上記と同様な効果が得られる。