(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料が新鮮であった場合の血液試料のＭＣＶ値の決定方法であって、
（ａ）前記試料の少なくともＭＣＶ、ＭＣＨ及びＭＣＨＣの血液パラメーターを測定する段階；
（ｂ）前記試料が新鮮であった場合に期待されたであろうＭＣＨＣの理論値をＭＣＨの前記測定値から算出する段階；
（ｃ）ＭＣＨＣの前記理論値に対する前記血液試料のＭＣＨＣの測定値の比を求める段階；及び
（ｄ）ＭＣＶの前記測定値に段階（ｃ）の比を乗じて、前記試料が新鮮であった場合の前記血液試料のＭＣＶ値を決定する段階
を含む、前記方法。
【請求項２】
前記血液パラメーターが自動血液分析装置を用いて測定される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＭＣＨＣの前期理論値が、多数の被験者において決定されたＭＣＨの測定値とＭＣＨＣの測定値の間の相関関係によって算出される請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記血液試料が少なくとも１６時間保存されることによって経時している請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、データを分析する方法、さらに詳しくは血液の経時試料の血液検査結果に関するデータを分析する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
自動血液分析装置は、血液試料の分析を完全に自動化するために設計されている装置である。典型的には、自動血液分析装置は、前記試料中の個々の血液細胞を識別し、該試料中の個々の血液細胞の個数を算定し、ある場合には該試料中の個々の血液細胞の大きさを測定するのに使用される。平均赤血球容量（また、以下、「ＭＣＶ」という）は、血液疾患の選別及び分類で使用される主な決定因子の一つである。自動血液分析装置は、血球算定の一部としてＭＣＶ値を正確に測定する能力を有する。ＭＣＶ値は、赤血球細胞の種々の疾患の一次分類に有用である。
【０００３】
血液試料の保存中に、平均赤血球容量が時間及び温度の関数として増大することが広く認められる。ＭＣＶ値の著しい変化は、室温（約７０℃）で約２４時間保存した後に認めることができる。これらの増大は、血液学結果の不適切な分類をもたらすのに十分な大きさであり、これによって経時血液試料を処理することを必要とする実験室にとって問題をもたらし得る。経時血液試料の不適切な分類は、ＭＣＶ値が過大評価されており、従って正常であると報告されている小赤血球患者において追跡調査を行うことができないというような問題を招き得る。ＭＣＶ値が実際には正常である場合には、患者のＭＣＶ値が過大評価され、これによって不適当であり、場合によっては費用がかかる不必要な確認の追跡試験を生じることもあり得る。
【０００４】
平均赤血球容量に対して、平均赤血球ヘモグロビン（また、以下、「ＭＣＨ」という）は、ヘモグロビンが赤血球内に、細胞が破壊する、すなわち溶血を招くまで捕捉されることから、短期間（例えば、数日間にわたって）では変化することがない。ほとんどの血液試料において、この溶血のプロセスは、試料の採取後数日までかなりの程度まで生じない。
【０００５】
ＭＣＶ値とＭＣＨ値の間の関係は、一般に一定であり、平均赤血球ヘモグロビン濃度（また、以下、「ＭＣＨＣ」という）により好ましく定義される。平均赤血球ヘモグロビン濃度は、平均赤血球ヘモグロビンを平均赤血球容量で割ることによって決定される（ＭＣＨＣ＝ＭＣＨ／ＭＣＶ）。ＭＣＶ値は時間の関数として増大することから、ＭＣＨＣ値は時間の関数として減少する。新鮮な血液試料のＭＣＨＣ値は、例えば典型的には約３２から約３６ｇ／ｄｌの範囲に厳重に限定される。しかし、ＭＣＨ値とＭＣＨＣ値の間には直接的な関係がある。従って、血液試料が保存されており、もはや新鮮ではない場合には、新鮮であった際の血液試料についてＭＣＶ値を評価することが望ましい。従って、血液試料が新鮮であった際（すなわち、試料が保存される前）の血液試料のＭＣＶ値を算出するために、保存血液試料のＭＣＨ及びＭＣＨＣ値を使用する方法を開発することが望まれる。
【０００６】
血液学における慣用の方法において、血液試料は、典型的には保存中にＭＣＶ値が増大する速度を低下させるために冷凍保存される。このアプローチは有用であるが、要求される条件を、特に遠隔施設から輸送するような活動中に、維持することは難しい。
【発明の開示】
【０００７】
（発明の要約）
一つの側面において、本発明は、血液試料のＭＣＶ値はわかるが、血液試料が保存されている期間がわからない場合の新鮮な血液試料のＭＣＶ値の決定方法を提供する。この方法は、
（ａ）血液試料を準備する段階；
（ｂ）前記試料の少なくとも次の血液パラメーター：ＭＣＶ、ＭＣＨ及びＭＣＨＣを測定する段階；
（ｃ）前記血液試料のＭＣＨＣの理論値を算出する段階（但し、前記のＭＣＨＣの理論値は、前記試料が新鮮であった際の前記試料について期待されるべきであったＭＣＨＣ値であり、前記理論値はＭＣＨ値から誘導される）；
（ｄ）前記のＭＣＨＣの理論値を前記血液試料について決定されたＭＣＨＣ値と比較する段階；及び
（ｅ）前記の決定されたＭＣＶ値を補正して、前記試料が新鮮であった場合の前記試料のＭＣＶ値を決定する段階
を含む。
【０００８】
本発明の方法は、自動血液分析装置が血液試料のＭＣＶの初期値、すなわち試料が新鮮であった際の血液試料について期待されていたＭＣＶ値のより信頼できる指標を提供することを可能にする。本発明の方法は、血液試料のＭＣＶの初期値、すなわち試料が新鮮であった際の血液試料、場合によっては試料の保存緒期間及び試料を保存する条件が実験室にはわからない場合の血液試料について期待されていたＭＣＶ値の信頼できる評価を行うことを可能にする。また、本発明の方法は、血液算定データの一部として容易に入手できるデータを使用する。
【０００９】
（図面の簡単な説明）
図１は、所定の時間で決定された血液試料のＭＣＶ値が室温で時間の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。図１において、ＡからＫのプロットのそれぞれは、１１人の異なる被験者から採取した血液試料から決定された。
図２は、所定の時間で決定された血液試料のＭＣＨ値が室温で時間の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。図２において、ＡからＫのプロットのそれぞれは、１１人の異なる被験者から採取した血液試料から測定された。
図３は、本発明の方法で算出された所定の時間での血液試料のＭＣＶ値が室温で時間の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。図３において、ＡからＫのプロットのそれぞれは、１１人の異なる被験者から採取した血液試料から測定された。
図４は、血液試料のＭＣＨＣ値がＭＣＨ値の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。
図５は、血液試料のＭＣＨ値がＭＣＶ値の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。
図６Ａは、試料を採取した２４時間後に決定された血液試料のＭＣＶ値が、最初に決定されたＭＣＶ値にどのように比較されたかを表すグラフである。
図６Ｂは、本発明の方法で算出された血液試料のＭＣＶの初期値が最初に決定されたＭＣＶ値にどのように比較されたかを表すグラフである。
図６Ｃは、（ａ）最初に決定された血液試料のＭＣＶ値と、（ｂ）試料を２４時間経時した後のＭＣＶ値との間の相違を最初に決定されたＭＣＶ値の関数として表すプロットである。
図６Ｄは、（ａ）最初に決定された血液試料のＭＣＶ値と（ｂ）試料を２４時間経時した後に本発明の方法によって算出されたＭＣＶ値との間の相違を最初に決定されたＭＣＶ値の関数として表すプロットである。
【００１０】
（詳細な説明）
本明細書で使用するように、「ＭＣＶ」は平均赤血球容量を意味し；「ＭＣＨ」は平均赤血球ヘモグロビンを意味し；「ＭＣＨＣ」は平均赤血球ヘモグロビン濃度を意味する。前記パラメーターＭＣＶ、ＭＣＨ及びＭＣＨＣは、赤血球（ＲＢＣ）算定指標である。これらのＲＢＣ指標は、ヘモグロビンの容量及び性格（形質）を示し、従って患者に存在する貧血の種類の鑑別診断に役立つ。これらの指数は、ヘマトクリット、ヘモグロビン、及び赤血球算定の測定値から誘導される。「理論値」という表現は、正常な患者から採取した新鮮な血液試料おいて決定されることが期待される血液試料のパラメーターの値を意味する。「初期値」などの表現は、一連の時間的順序のこのパラメーターの決定で決定された血液試料のパラメーターの最初の値を意味する。「決定された値」などの表現は、分析装置で測定され、報告される血液試料のパラメーターの値を意味する。「測定された値」などの表現は、分析装置で測定され、報告される血液試料のパラメーターの値を意味する。「算出された値」という表現は、血液試料の少なくとも一つの別のパラメーター及び少なくとも一つの定数を使用する数学的関係によって決定されている血液試料のパラメーターの値を意味する。「期待される値」という表現は、パラメーターが試料が新鮮であった際の試料から決定されている場合に期待される血液試料のパラメーターの値を意味する。「経時（ａｇｅｄ）」という用語は、１６時間以上の期間保存されることを意味する。「新鮮な」という用語は、血液試料のパラメーターの測定に関して、静脈穿刺がパラメーターの測定前の４時間以内に生じたことを意味する。
【００１１】
本発明の方法に従って、血液試料のＭＣＶ値は、分析装置によって決定又は測定される試料のＭＣＨ値及びＭＣＨＣ値を参照することにより算出することができる。測定又は決定されたＭＣＶ値が保存中の経時（ａｇｉｎｇ）により増大している血液試料の場合には、本発明の方法は、試料のＭＣＶの初期値のより正確な決定を可能にする。
【００１２】
図１は、４８時間までの期間、室温で保存された血液試料に対する保存の影響を表す。
ＭＣＶの値は、アボット・ラボラトリーズ社から市販されている「ＣＥＬＬ−ＤＹＮ」４０００血液分析装置を用いて測定された。相当な期間保存されると、所定の血液試料が、測定されるＭＣＶ値の増大を示すことは明らかである。図２は、所定の血液試料のＭＣＨの初期値が、これらの試料が４８時間までの期間保存されている場合のこれらの試料のＭＣＨ値に近いことを示す。図５は、血液試料のＭＣＨ値及びＭＣＶ値が実質的に直線関係を有することを示す。従って、図５のグラフの傾きは、試料の平均赤血球ヘモグロビン濃度、すなわちＭＣＨＣを示す。
【００１３】
ヒト集団のＭＣＨＣ値は、典型的には約３３．３ｇ／ｄｌである。従って、ＭＣＶの計算値は、３３．３で割ったＭＣＨの測定値に相当する。この簡単な数学的関係は、それ自体、経時血液試料のＭＣＶの初期値を算出するのに使用でき、この数学的関係単独の使用は、ＭＣＨＣ値がＭＣＨ値に比べてある一定の時間にわたって一定でないことから、欠点がある。この知見を図に示す。図４は、ＭＣＨとＭＣＨＣの間の関係を表す。従って、ＭＣＨ値が低下するにつれて、ＭＣＨＣ値もまた幾分低下することが期待される。さらなる補正がない場合には、ＭＣＨ値を単独で用いた血液試料のＭＣＶの初期値の評価は、測定範囲の両極端でのＭＣＶ値、すなわち測定範囲の下端で２７ｐｇ未満のＭＣＨ及び測定範囲の上端で３５ｐｇを超えるＭＣＨを過大評価するか又は過小評価する傾向がある。
【００１４】
新鮮な血液試料のＭＣＨ値とＭＣＨＣ値の間の典型的な関係についての知見は、新鮮な血液試料のＭＣＨＣの理論値を決定することを可能にする。言い換えると、血液試料のＭＣＨＣの理論値は、この場合、血液試料について決定されたＭＣＨＣ値と比較することができ及びこの場合新鮮な血液試料のＭＣＶの理論値を算出するのに使用できる。
【００１５】
血液試料のＭＣＨの測定値に基づいて、血液試料のＭＣＨＣの計算値を、下記の組の関係により誘導することができる：
（１）ＭＣＨＣの計算値＝ａ×（ＭＣＨの測定値）＋ｂ
（式中、「ａ」は定数を表し、「ｂ」は定数を表し及び「ａ」及び「ｂ」はＭＣＨＣの関数としてＭＣＨの回帰関係から誘導される）。
【００１６】
「ａ」及び「ｂ」の値は、ウエル特性決定及びウエル較正分析装置を用いて処理された多数の新鮮な試料（例えば、約１００人の患者から採取した新鮮な試料）のＭＣＨＣの計算値とＭＣＨの計算値の間の関係を決定することによって誘導される。「ａ」及び「ｂ」の誘導に必要な新鮮な試料の個数は、統計学的観点から信頼できると思われる結果を提供するのに十分であるべきである。典型的な自動血液分析装置について、定数「ａ」及び「ｂ」の決定に必要な新鮮な試料の個数は、好ましくは少なくとも５０個、さらに好ましくは少なくとも約１００個であり、最も好ましくは約２００個を越える。
【００１７】
（２）新鮮な試料のＭＣＶの理論値＝（ＭＣＨＣの計算値で割ったＭＣＨＣの測定値）×（ＭＣＶの測定値）
ＭＣＨ値及びＭＣＨＣ値は数学的に決定されることから、多数のＭＣＶ値の算出方法があることが認められるべきである。前記に示した誘導は、単なる一つの例である。
【００１８】
典型的な計算の結果を図３に示す。例示したデータの組は、定数「ａ」の値が０．２９２９であり、定数「ｂ」の値が２４．５１４である。図３は、室温で最大４８時間保存した試料について、ＭＣＶの計算値が実質的に一定の状態であることを表す。一方、図１は、上記と同じ試料のＭＣＶの測定値が、ＭＣＶの測定値が時間の関数として増大することを表す。
【００１９】
多数の試料について本発明の方法の有効性の確認を、図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、及び６Ｄに示す。前記の組の試料の個数は１００個であった。これらの図は、試料のＭＣＶの初期値を、（１）２４時間後に実測された試料のＭＣＶ値及び（２）本発明の方法により算出される２４時間後の試料のＭＣＶ値と比較する。図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、及び６Ｄは、本発明の方法が保存により経時している試料のＭＣＶの初期値をより正確に決定するのに使用できることを表す。さらに詳しくは、図６Ｂ及び６Ｄのデータは、本発明の方法が血液試料のＭＣＶの初期値の決定において経時試料の使用によって誘導されるバイアスを実質的に除くことを表す。
【００２０】
ＭＣＨの値とＭＣＨＣの値の間の関係は、所定の血液学装置により確認することができる。この関係は、適切に較正された装置を用いて処理された新鮮な試料から採取されたデータを用いて誘導することができる。
【実施例】
【００２１】
以下の非限定的実施例により本発明の方法をさらに例証する。
【００２２】
（実施例１）
以下の実施例において、アボット・ラボラトリーズ社から市販されている「ＣＥＬＬ−ＤＹＮ」４０００血液分析装置を、データの作成に使用した。１００個の血液試料を使用してＭＣＨ値とＭＣＨＣ値の間の回帰関係を実証した。慣用の最小二乗線形回帰を使用して傾き（定数「ａ」）及びｙ−切片（定数「ｂ」）を誘導した。これらの定数は、装置モデルから装置モデルまで変化するであろう。図４に示す線形回帰分析において、定数「ａ」は０．２９２９であり、定数「ｂ」は２４．５１４である。従って、血液試料のＭＣＨ値が３０ｐｇであった場合には、測定されたＭＣＶ値は、１００ｆｌであり、測定されたＭＣＨＣ値は３０ｇ／ｄｌであり、この場合：
ＭＣＨＣの計算値＝３０×０．２９２９＋２４．５１４＝３３．３ｇ／ｄｌ
ＭＣＶの理論値＝（３０／３３．３）×１００＝９０．１ｆｌ
ＭＣＶの理論値＝（３０×１００）／（３０×０．２９２９）＋２４．５２４＝９０．１ｆｌ
であった。
【００２３】
この実施例において、１００ｆｌのＭＣＶ値は、本発明の方法によって９０．１ｆｌのＭＣＶ値に補正されるであろう。
【００２４】
（実施例２から５）
これらの実施例において、試料を室温で２４時間保存した後に測定したＭＣＶ値及び試料を室温で２４時間保存した後に本発明の方法により計算したＭＣＶの初期値を、試料を保存する前に測定したＭＣＶ値と比較した。表１は、アボット・ラボラトリーズ社から市販されている４種類の装置で行った測定について比較した結果を表す。
【００２５】
【表１】
0004485515.tif 000002
【００２６】
種々の「ＣＥＬＬ−ＤＹＮ」自動分析装置について、本発明の方法により算出されたＭＣＶ値は、室温で２４時間保存された試料について決定されたＭＣＶ値よりも最初に決定されたＭＣＶ値を正確に反映した。
【００２７】
本発明について種々の変更及び改変は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく当業者には明らかになるであろう。また、本発明は本明細書に挙げた実施形態に不当に限定されるべきでないことが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】所定の時間で決定された血液試料のＭＣＶ値が室温で時間の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。図１において、ＡからＫのプロットのそれぞれは、１１人の異なる被験者から採取した血液試料から決定された。
【図２】所定の時間で決定された血液試料のＭＣＨ値が室温で時間の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。図２において、ＡからＫのプロットのそれぞれは、１１人の異なる被験者から採取した血液試料から測定された。
【図３】本発明の方法で算出された所定の時間での血液試料のＭＣＶ値が室温で時間の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。図３において、ＡからＫのプロットのそれぞれは、１１人の異なる被験者から採取した血液試料から測定された。
【図４】血液試料のＭＣＨＣ値がＭＣＨ値の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。
【図５】血液試料のＭＣＨ値がＭＣＶ値の関数としてどのように変化するかを表すグラフである。
【図６Ａ】試料を採取した２４時間後に決定された血液試料のＭＣＶ値が、最初に決定されたＭＣＶ値にどのように比較されたかを表すグラフである。
【図６Ｂ】本発明の方法で算出された血液試料のＭＣＶの初期値が最初に決定されたＭＣＶ値にどのように比較されたかを表すグラフである。
【図６Ｃ】（ａ）最初に決定された血液試料のＭＣＶ値と、（ｂ）試料を２４時間経時した後のＭＣＶ値との間の相違を最初に決定されたＭＣＶ値の関数として表すプロットである。
【図６Ｄ】（ａ）最初に決定された血液試料のＭＣＶ値と（ｂ）試料を２４時間経時した後に本発明の方法によって算出されたＭＣＶ値との間の相違を最初に決定されたＭＣＶ値の関数として表すプロットである。
【図１】
0004485515.tif 000003
【図２】
0004485515.tif 000004
【図３】
0004485515.tif 000005
【図４】
0004485515.tif 000006
【図５】
0004485515.tif 000007
【図６Ａ】
0004485515.tif 000008
【図６Ｂ】
0004485515.tif 000009
【図６Ｃ】
0004485515.tif 000010
【図６Ｄ】
0004485515.tif 000011