(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
全ての粒子の直径が20μm以下であり、85％の粒子の直径が10μm以下である粒子からなる1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩酸塩の微粒子形態。
【請求項２】
粒子が微小球であることを特徴とする請求項１に記載の微粒子形態。
【請求項３】
粒子が非結晶質形態の1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩酸塩からなることを特徴とする請求項２に記載の微粒子形態。
【請求項４】
粒子が微粒子化された結晶であることを特徴とする請求項１に記載の微粒子形態。
【請求項５】
活性成分として、請求項１〜４の何れか１項に記載の微粒子形態を含有する薬学的組成物。
【請求項６】
投薬単位の形態であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
各投薬単位が0.1〜5mg（遊離の塩基として計算）の活性成分を含有することを特徴とする請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
各投薬単位が0.5〜3mg（遊離の塩基として計算）の活性成分を含有することを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
各投薬単位が2mg（遊離の塩基として計算）の活性成分を含有することを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩酸塩の微粒子形態に関する。
1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン（以下コード番号SR57746で表す）とその薬学的許容される塩は、EP第0,101,381号で食欲不振誘発剤として最初に記載され、続いて、抗不安うつ剤（US第5,026,716号）、抗便秘剤（US第5,109,005号）、神経栄養剤（US第5,270,320号）、フリーラジカルスカベンジャー（US第5,292,745号）、及び心臓保護剤（US第5,378,709号）として記載された。
EP第0,101,381号は、塩酸塩の形態のSR57746を記載しており（以下SR57746Aと称する）、前臨床試験及び健康なボランティアに対する臨床試験（第Ｉ相）では、該塩が用いられた。前記文献によれば、SR57746は、エタノール、特に無水エタノールから結晶化によって単離される。
前臨床試験、特に動物の薬理学及び毒性学試験において、SR57746は、一定した活性及び動態を示した。同様に、動物に対する薬物動態学的研究は、一定の再現性ある結果を与えた。
対照的に、健康なボランティアに対して実施された臨床試験では、経口投与されたSR57746Aは、有効成分の血漿濃度及び薬力学的効果に大きなばらつきを示すことが明らかとなった。
極めて重篤な疾病、特に筋萎縮性側索硬化症に罹患した患者に対する初めての臨床試験では、SR57746Aの用量を極めて低量、すなわち2mg/日（この用量で、該産物は有望であることが証明されていた（W.G. Bradley，“New drugs for amyotrophic lateral sclerosis”と題する論文、American Academy of Neurology meeting，3月23-30日，1996；240-23/240-28頁））に保った。
さらに、EP第0,101,381号に記載されている単離方法によって、より大量のSR57746Aを調製しても、第Ｉ相臨床試験で顕れた欠点を克服し得る一定した特性を有する産物は、上手く得られない。
より具体的にはEP第0,101,381号に記載されている単離法によって得られるSR57746Aは、サイズが一様でない結晶、具体的には150μmを超える結晶；さらに具体的には、少なくとも約75％の結晶が150〜600μmであることが明らかとなった。
我々は、攪拌しながら再結晶によって無水エタノールからSR57746Aを単離すると、得られたSR57746Aは、集団の少なくとも55％が50μm未満のサイズを有する結晶から形成されており、生じた産物は、ヒトの臨床試験で経口投与したときに、より高い活性を有することを見出した。
必要に応じて水を含有するエタノール中で、SR57746Aの溶液を微粉化することによって、ヒトで一定の吸収レベルを有し、且つ極めて高い活性を有する実質的に非結晶質形態で、有効成分が得られ、極低量で該有効成分を投与することが可能となることも分かった。
前記微粉化によって、一定した再現性のある態様で、15μm以下の直径を有する小球粒子が与えられ、EP第0,101,381号に記載されているように単離したSR57746Aの特性にばらつきがあることによる欠点を克服し得ることも明らかとなっている。
最後に、無水エタノールから結晶化することによって得られたSR57746Aの微粒子化により、50μm以下のサイズを有する結晶が与えられ、EP第0,101,381号に記載されているのと同様の結果が得られることも明らかとなっている。
その側面の一つによれば、本発明は、集団の少なくとも55％が50μm以下の直径を有する微粒子からなる1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩酸塩の微粒子形態に関する。
本発明の微粒子は、微粉化（atomization）によって取得し得る微小球、又はスクリーニング若しくは微粒子化によって得られた微結晶であり得る。
「50μm以下の直径」という表現は、微小球及び微結晶の両者を指し、後者は微小球と同一視することができる。
本発明の微粒子のサイズは、有利には25μm以下、好ましくは15μm以下の直径に相当する。大部分（80-85％）が10μm以下の直径を有する微粒子が特に好ましい。
微粒子サイズのSR57746A、すなわち少なくとも55％が50μm以下のサイズを有する結晶の集団から形成された産物は、EP0,101,381号に従って得られた産物を再結晶することによって調製することができ、EP0,101,381号では、攪拌しながら前記産物を無水エタノール中で加熱し、溶解が完了したら加熱を止め、温度が約40℃に達した時点で攪拌を停止し、混合物を室温で16〜60時間放置した後、10〜18℃で激しく攪拌し、産物をろ過して乾燥する。
あるいは、トリエチルアミンの存在下で4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジンと2-(2-クロロエチル)ナフタレンを反応させることによって、又は水素化アルミニウムリチウムを用いて1-(2-ナフチルアセチル)-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジンを還元することにより、しかし、続いて、還流下で無水エタノール中の塩酸によって直接1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩基からなる残留物を回収した後、上述の操作に従うというEP第0,101,381号に記載されている操作によって、同一の微粒子サイズのSR57746Aを得ることができる。
本発明の微粒子は、注入部の温度が150〜190℃、排出部の温度が50〜120℃、30〜70mbarの準真空となるように、ポンプ容量、吸引、加熱、及び流速を調整した従来のアトマイザー、例えばBuchiミニスプレードライヤーの中で、必要に応じて水の存在下で、有利にはSR57746Aの(C1〜C3)アルカノール、(C3〜C6)アルカノン、又は酢酸エチル溶液、好ましくは0〜40％の水を含有するエタノール中のSR57746A溶液を微粉化することによって、調製することもできる。
これらの溶液の微粉化は、50μm以下のサイズを有し、特に80〜85％は、10μm以下の直径を有し得る微小球状粒子を与え、インジウムとシクロヘキサンに対してキャリブレートしたパーキンエルマーのDSC7装置を用いて行った示差走査熱量計(DSC)で、最高点が146±3℃の130〜160℃にわたる単一の幅広いピークを示す。
本発明の微粒子は、有利には、EP第0,101,381号の記載に従って得られたSR57746Aの微粒子化によって調製される。該微粒子化は、50μm以下のサイズを有する微結晶を得るための従来の装置、例えばALPINE 200 ASミクロナイザーで行うことができ、15〜50kg／時間の速度、及び作業圧力1〜6.5バールで、微粒子化チャンバー（直径200mm）の中にSR57746Aを導入し、フィルターバッグの中に産物を回収する。
得られる微結晶が、25μm、又は好ましくは15μm以下の平均サイズを有する粒子集団であるような操作条件であることが、とりわけ有利である。好ましくは、操作条件は、得られた微結晶集団の80〜85％が10μm以下のサイズであるようにすることが好ましい。
該操作によって得られた微粒子が凝集する傾向を有していれば、薬学的組成物を調製する前に、該凝集物をスクリーニングしてもよい。しかし、以下に示したCACO-2細胞テストで実証されたところによれば、微結晶の凝集は何ら活性成分の吸収を変化させない。
このような凝集を避けるために、必要に応じて、マンニトール、例えば、好ましくはD-マンニトールの存在下で、SR57746Aを微粒子化してもよい。
上述のように、本発明の微粒子は、それらを含有する薬学的組成物を調製する上で、それらを特に有利なものとする特性を備えている。
より具体的には、微粒子形態は、薬学的組成物中に存在する投薬量を減少させ得るのみならず、特に、経口吸収を均一にし、このため、全ての患者で一様な治療応答を与えることが可能となることが実証された。さらに、前記吸収は、食物条件にかかわらない。
本発明の微粒子のインビトロ吸収の決定に関する研究は、CACO-2単層モデルを用いて行った。該テストは、薬物吸収のための予測用腸上皮モデルとして広く用いられており（P. Artusson, Crit. Rev. Ther. Drug, 1991, 8:305-330）、微粒子化されたSR57746Aと微粒子化も微粉化もされていないSR57746Aとの溶解及び透過率の点で有意な差を示すことが可能である。
得られた結果は、使用した培地中で（10％ウシ胎児血清及びタウロコール酸を補充したハンクスの溶液）、微粒子化又は微粉化されたSR57746Aと微粒子化も微粉化もされていないSR57746Aの溶解速度及び透過率に有意な差があることを示している。より具体的には、溶解及び透過率が正常化される、すなわち微粒子化又は微粉化後には均一になることが実証された。
インビトロで得られた結果は、健康なボランティアに対する二つの臨床試験（第一の試験では、EP第0,101,381号に従って得られたSR57746Aの経口吸収に対する食物の影響を評価し、第二の試験では、下記の例５のSR57746Aの経口吸収に対する食物の影響を評価した）で観察を比較することによって、インビボで確認された。両試験では、吸収評価の基準は、血漿SR57746濃度を時間の関数としたAUCであった。
分析結果は、
−食物とともに産物を投与したときには、同じ吸収を得るために、EP第0,101,381号に従って調製されたSR57746Aの必要量は、下記例５の産物の必要量に比べて、3〜4倍多い；
−産物を空の胃に投与したときには、同じ吸収を得るために、EP第0,101,381号に従って調製されたSR57746Aの必要量は、下記例５の産物の必要量に比べて約９倍多い
ことを示した。
EP第0,101,381号に従って調製したSR57746Aを投与した場合には、驚くべきことに、食物とともに該産物を摂取したときには吸収が2〜3倍であるのに対して、例５の産物を投与した場合には、産物を空の胃に投与するか、食物が存在している胃に投与するかにかかわらず、吸収は同一であることが、これらの試験で明らかとなった。
これらの結果は、食物の摂取によって影響されない良好な吸収を有する産物を与え得るという本発明の価値を実証するものである。
このように、別の側面によれば、本発明は、少なくとも集団の55％が50μm以下、有利には25μm以下のサイズを有し、好ましくは80〜85％の粒子が10μm以下のサイズを有する微粒子からなる1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩酸塩の微粒子形態を活性成分として含有する薬学的組成物に関する。
投与すべき有効成分の量は、治療すべき疾病の性質及び重篤さ、並びに患者の体重に依存する。しかしながら、投薬単位に存在する有効成分の量は、0.1〜5mg、有利には0.5〜3mg、好ましくは2mgであり得る（遊離の塩基として計算）。好ましい単位用量は、通常0.5、1、1.5、2、2.5又は3mgの微粒子化された産物を具備する（遊離の塩基として計算）。
これらの単位用量は、通常一日に一回以上、例えば一日一回又は二回投与され、ヒトでの総用量は、0.2〜10mg/日、有利には1〜6mg/日の間である（遊離の塩基として計算）。
本発明の薬学的組成物では、有効成分は、従来の薬学的担体と混合して、米国特許第5,026,716号、5,109,005号、5,270,320号、5,292,745号、及び5,378,709号に示されている疾病、特に神経の変性を治療するために、ユニット形態の投与で動物及びヒトに投与することができる。適切なユニット形態の投与には、錠剤（分割可能であってもよい）、ゼラチンカプセル、粉末、及び、顆粒が含まれる。
錠剤形態の固形状組成物を調製するときには、有効成分をゼラチン、デンプン、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアゴム等の薬学的ビークルと混合する。錠剤は、ショ糖又は他の適切な物質でコートしてもよく、あるいは活性を延長又は遅延させるための処置、及び所定の量の有効成分を継続的に放出するための処置を施してもよい。
ゼラチンカプセルの形態での調製は、活性成分を希釈剤と混合し、得られた混合物を柔らかい又は硬いゼラチンカプセル中に注ぎ込むことによって得られる。
活性成分は、必要に応じて一以上の担体又は添加物を加えたミクロカプセルとして処方してもよい。
本発明の薬学的組成物では、活性成分は、シクロデキストリン、それらのエーテル又はそれらのエステル中に封入された複合体の形態でもあり得る。
本発明の組成物は、押出し−楕円体形成法（extrusion-spheroidization）によって調製することもでき、該方法によれば所望のサイズの楕円体を得ることが可能となる。本方法では、微粒子状SR57746A、好ましくは微粉化又は微粒子化されたSR57746Aを賦形剤及び脱鉱物水と混合し、生じた塊を顆粒化して押出し形成すると、所望の直径の孔を自由に通過する押出し塊が得られ、押出し形成物を楕円化すると、孔と同じ直径の楕円体が得られ、得られた楕円体を乾燥させ、好ましくはゼラチンカプセルに入れる。このように、SR57746Aと賦形剤を混合するとそのまま使用可能な薬学的組成物が得られる。
以下の例によって、本発明を説明する。
例１
EP第0,101,381号の例１に記載されている条件下で操作し、還流下、トリエチルアミンの存在下で、4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジンをエタノール中の2-(2-クロロエチル)ナフタレンと24時間反応させる。乾燥するまで該混合物を濃縮し、残留物をエチルエーテルで回収し、該エーテル溶液をろ過して水で洗浄し、乾燥して、蒸発させる。
続いて、以下のように、1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩酸塩を単離する：100エタノール中の塩酸を用いて残留物を回収し、攪拌しながら、該混合物を還流する。溶解が完了したら、加熱を止めて、攪拌しながら溶液を冷却させる。約10分後、攪拌を止めて、該混合物を室温で48時間放置する。沈殿をろ過し、無水エタノールで洗浄し、塊を再度無水エタノール中でペースト状にして、空気で攪拌しながら、ろ過して、真空下40℃で乾燥させる。
これによって、全収率10％でSR57746Aが得られ、その粒子サイズの分布が表１に示されている。
0004422214.tif 000002
得られた微粒子形態のSR57746Aは、50μm以下のサイズを有する粒子を59.2
％含有する。
例２
EP第0,101,381号の記載に従って得られ、77％が150〜600μmのサイズを有する結晶を形成している636gのSR57746Aと5倍量の無水エタノールを、産物が完全に溶解するまで、攪拌しながら還流した後、加熱を中止し、温度が40℃に達したときに、攪拌を止めて、混合物を室温で16時間放置する。激しく攪拌しながら、これを16℃にして、この条件下で10〜20分後に、産物をろ過し、40℃で24時間真空下で乾燥させる。これによって、60.3％が50μm以下のサイズを有する微粒子の集団からなる415gのSR57746Aが得られる。
例３
パラレルフローノズル微粉化の原理に従って、注入部の温度が172℃、排出部の温度が107℃、40mbarの準真空になるようにポンプ容量、吸引、加熱、及び流速を調整したBuchiミニスプレードライヤー装置でエタノール300mL中の3gのSR57746A溶液を微粉化する。これらの条件下において、DSCで最大値145℃の単一の幅広いピークを有する産物が得られる。得られた粒子は球状であり、極めて均一な集団の平均サイズは5μmを超えない。
例４
パラレルフローノズル微粉化の原理に従って、注入部の温度が172℃、排出部の温度が63℃、60mbarの準真空になるようにポンプ容量、吸引、加熱、及び流速を調整した例３に記載の装置で、エタノール210mL及び水90mL中の3gのSR57746A溶液を微粉化する。これらの条件下において、DSCサーモグラムで最大値147.6℃の単一の幅広いピークを示す実質的に非結晶質の微粉化されたSR57746Aが得られる。得られた粒子は球状であり、極めて均一な集団の平均サイズは5μmを超えない。
例５
25kg/時の速度、6.5バールの作業圧力で、ALPINE200ASの微粒子化チャンバー（直径200mm）に24kgのSR57746Aを入れ、それによって微粒子化された産物をフィルターバッグに回収する。全ての粒子が20μm以下のサイズを有し、85％の粒子が10μm以下のサイズを有するような粒子サイズ分布の微粒子化されたSR57746Aが得られる。
例６
活性成分として、上記例５に従って微粒子化したSR57746Aを含有する薬学的組成物：
活性成分                  2.192mg
コーンスターチ            141.218mg
無水コロイドシリカ        0.200mg
ステアリン酸マグネシウム  0.400mg
0.2mmで活性成分をスクリーニングした後、賦形剤と前混合する。0.315mmで該混合物を再混合した後、再度0.315mmでスクリーニングする。最後の混合の後、1-[2-(2-ナフチル)エチル]-4-(3-トリフルオロメチルフェニル)-1,2,3,6-テトラヒドロピリジン塩基2mgに相当する量の微粒子化されたSR57746Aを含有する組成物を170mgの速度で、no.3ゼラチンカプセル中に導入する。