(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
0004467888.tif 000004
で示される化合物であって、
式（１）において、前記Ｒが、
− 飽和もしくは不飽和Ｃ２−Ｃ６の、線状のもしくは分枝状の、かつ、シュウ酸、リンゴ酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、マレイン酸、ジグリコール酸およびクエン酸から構成される群から選択される、脂肪族鎖上にて置換された、鎖状脂肪族ポリカルボン酸；
− フタル酸および１，２，４−ベンゼントリカルボン酸から構成される群から選択される、芳香族環上にて置換されたアリールポリカルボン酸；
−α−位または他の部位にアミノ基を具備するアミノ酸である、アラニン、イソロイシン、チロシン、トリプトファンおよび４−アミノブタン酸から構成される群から選択されるアミノ酸；
− アミノ糖ダウノサミンのアセタール；または
−燐酸から構成される無機酸
のいずれかの遊離基である前記化合物。
【請求項２】
該遊離カルボキシル基が医薬として受け入れ可能な対イオンで塩化される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
該対イオンがナトリウムまたはカリウムである請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
該遊離アミノ基が医薬として受け入れ可能な陰イオン基で塩化される請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
該陰イオン基が、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、硝酸塩、塩化物塩、臭化物塩および硫酸塩から構成される群から選択される請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
腫瘍性病理学の治療に備えた医薬組成物を調製するための、
式（１）
【化２】
0004467888.tif 000005
で示される化合物であり、
式（１）において、前記Ｒが、
− 飽和もしくは不飽和Ｃ２−Ｃ６の、線状のもしくは分枝状の、かつ、シュウ酸、リンゴ酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、マレイン酸、ジグリコール酸およびクエン酸から構成される群から選択される、脂肪族鎖上にて置換された、鎖状脂肪族ポリカルボン酸；
− フタル酸および１，２，４−ベンゼントリカルボン酸から構成される群から選択される、芳香族環上にて置換されたアリールポリカルボン酸；
−α−位または他の部位にアミノ基を具備するアミノ酸である、アラニン、イソロイシン、チロシン、トリプトファンおよび４−アミノブタン酸から構成される群から選択されるアミノ酸；
− アミノ糖ダウノサミンのアセタール；
−燐酸から構成される無機酸
のいずれかの遊離基である前記化合物および
これらの塩の使用方法。
【請求項７】
医薬として受け入れ可能な、治療用賦形剤及び／又は治療用希釈剤と結合し、かつ、制御された速度で活性成分を導出および放出するのに適しており、
該活性成分として、請求項１〜５のいずれか１項に記載の少なくとも一種の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項８】
非経口的経路、静脈内経路、皮下経路または筋肉内経路による投薬に適した請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
顆粒、錠剤、丸薬またはカプセルの形態をとり、口腔投薬に適した請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
局所投薬および経皮投薬に適した請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
自己骨髄移植に際して浄化作用に適した請求項７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アロエ−エモジン（ＡＥ）誘導体と腫瘍性病理学の治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
周知のごとく、腫瘍の治療に採用される治療戦略は、本質的に第一部位と転移部位の双方において悪性細胞をことごとく殺すことを目的としている。この目的のために、手術から、十分に限定された領域または臓器にとどめられた腫瘍のための放射線療法、局所腫瘍または系統的腫瘍のための化学療法、ホルモン依存性腫瘍のための内分泌療法、免疫療法および温熱療法まで、種々の治療法が用いられる。腫瘍細胞根絶のための有効な療法を得るために、上記の方法のすべてを、腫瘍細胞の型および病気の段階に応じて、単独でまたは組み合わせて用いる。
【０００３】
最もありふれた治療アプローチは、おそらく、化学療法であり、単独でまたは上記の治療法と組み合わせて用いられる。理想的な化学療法剤は腫瘍細胞に合せて選択すべきものであり、系統的な毒性効果と同様に、正常細胞に深刻な不利な効果を生むものであってはならない。しかしながら、選択的な抗癌剤を確認するために数年越しで形成されたおびただしい研究結果にもかかわらず、いかなる化合物も、単独でまたは他の化合物と組み合わせて使用されていなし、満足すべき治療指数、すなわち、腫瘍細胞に対する効果と非悪性細胞に対する細胞毒性効果の不存在との比を所有することが証明されていない。既知でありかつ臨床使用がなされている抗癌剤は数多く、多くが腫瘍細胞に対する細胞毒を根拠とした機構である。ニトロジェンマスタードのような、アルキル化薬物は、最初に使用すべきものであり、引き続いて代謝拮抗薬物、メトトレキセートのような葉酸塩−拮抗薬、または６−メルカプトプリンのようなプリン−拮抗薬、５−フルオロウラシルのようなピリミジン−拮抗薬、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびポドフィロトキシンのような、野菜由来の細胞有核分裂遮断薬、マイトマイシン、アントラサイクリンおよびブレオマイシンのような抗生物質、ニトロソ尿素(nitrosourea)、白金配位化合物、および最近では、α−インターフェロンのような、いわゆる生体応答修飾物質およびアスパラギナーゼのような酵素が用いられる。上記の薬物はすべて、広範に、単独でまたは組み合わせて、限定された臓器に位置する腫瘍から系統的な腫瘍にいたるまでの広範囲の腫瘍において用いられる。例えば、神経芽細胞腫、末梢原始神経外胚葉腫瘍（ＰＮＥＴ）、ユーイング肉腫、黒色腫、ミクロサイトーマ(microcytoma)などのような神経外胚葉由来の腫瘍の場合、通常使用される化学療法剤は限定されるものではないが、例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン、白金配位化合物およびこの目的に適した他の化合物でもよい。
【０００４】
前記した多数の化合物の、広く認められた効果にも関わらず、いずれのものも上記の理想的なプロフィールを有することが証明されていない。事実、前記薬剤に対する腫瘍細胞の多重の抵抗はしばしば見受けられ、他方、他の細胞に対する毒性効果が生み出されている。
【０００５】
他の増殖細胞に対する深刻な細胞毒性効果または一般的な毒性効果を誘発することなく、腫瘍細胞に選択的に作用できる化合物を確認するという見方から、本出願人は、天然の化合物、アロエ−エモジンに注意を向けなおして、そのものは神経外胚葉由来の腫瘍細胞に対して特定の細胞毒性を有するものの、深刻な毒性効果を誘発しないことを見出した（イタリア国特許出願Ｎｏ．ＭＩ２０００Ａ００１２１６（国際公開第０１／９１７３５号パンフレット））。
【０００６】
アロエ−エモジン（ＡＥ）は水中や生理溶液中ではほとんど溶解しないという欠点に悩まされ、一方、加熱したアルコール、エーテル、ベンゼンおよびアンモニアでアルカリ化された水中でまたは硫酸で酸性化された水中でのみ溶解できる。
【０００７】
従って、医薬実践の立場から、前記した特徴が災いして、治療に有効な医薬生成物を調製することが困難になっている。
【０００８】
アブラハムソン(Abrahamson)、H.N.ら（J. Med. Chem. 1986, 29, 1709-1714）はアロエ−エモジンとグルコサミンとの誘導体を記述し、水溶性モデル化合物の抗腫瘍活性を開示することなくそのものを得ている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
それゆえに、本発明の目的は、改善された溶解性を示しながら、一方、ＡＥと同様に生体活性を持続し、かつ、潜在的にＡＥプロドラッグである、アロエ−エモジン（ＡＥ）誘導体を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
驚くべきことに、（正または負の電荷を帯びた）３−位のアロエ−エモジン誘導体は改善された溶解性を示し、同時に、生体外で、神経外胚葉由来の腫瘍細胞に対しても細胞毒性を見せることが判明した。
【００１１】
故に、本発明の目的は、式（１）
【００１２】
【化１】
0004467888.tif 000002
【００１３】
のアロエ−エモジン誘導体であり、
式（１）において、Ｒが、飽和もしくは不飽和Ｃ２−Ｃ６の、線状のもしくは分枝状の、鎖状脂肪族ポリカルボン酸、またはアリールポリカルボン酸またはアミノ酸またはアミノ糖のアセタールまたは無機酸の基から構成される遊離基であってよい。
【００１４】
本発明の他の目的は、腫瘍性病理学の治療のための、かつ、神経外胚葉由来の、医薬組成物における、前記アロエ−エモジン誘導体の使用である。
【００１５】
さらに本発明の目的は、活性成分として、腫瘍性病理学の治療に適した前記誘導体を含有する医薬組成物を提供することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の特徴および利点は以下の詳細な記述からさらによく理解できよう。
【００１７】
式（１）のアロエ−エモジン誘導体では、３−位の水酸基上の遊離基Ｒは：
線状のもしくは分枝状の、炭素原子数が２〜６である鎖を有し、適当な親水性基でその脂肪族鎖上にて置換された、飽和もしくは不飽和脂肪族ポリカルボン酸；Ｒが基ａ）の脂肪酸であるとき、その酸は、好ましくは、（ｉ）例えば、シュウ酸、リンゴ酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、ジグリコール酸のような、線状の飽和脂肪族二カルボン酸；（ｉｉ）または分枝状の酸；（ｉｉｉ）または例えば、マレイン酸のような、不飽和酸；（ｉｖ）または例えば、クエン酸のような、三カルボン酸であること；
例えば、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨおよび等価物のような、小さい親水性残基で芳香族環上にて置換されたアリールポリカルボン酸；Ｒが基ｂ）の芳香族酸であるとき、その酸は、好ましくは、例えばフタル酸および１，２，４−ベンゼントリカルボン酸のような、少なくとも１つの環、もしあれば親水性置換基、および少なくとも２つのカルボキシル基を含有する芳香族系から構成される群から選択されること；
例えば、アラニン、イソロイシン、チロシン、トリプトファンおよびＧＡＢＡのような、（α−位または他の部位に、アミノ基を有する）アミノ酸；
グルコサミンを除いた、ダウノサミンおよび等価物のような、アミノ糖を有するアセタール；
例えば、燐酸および等価物のような、無機酸の残基である。
【００１８】
さらに言えば、本発明の目的を形成する誘導体において、Ｒが基ａ）およびｂ）に属する場合、非エステル化カルボキシル基は遊離した形態または塩化された形態をとり；後者の場合、医薬として受け入れ可能なかつ既知の対イオンが用いられ、特にナトリウムまたはカリウムが好まれる。
【００１９】
本発明の目的を形成する誘導体において、Ｒが基ｃ）およびｄ）に属する場合、アミノ基は遊離した形態または塩化された形態をとり；後者の場合、医薬として受け入れ可能なかつ既知の陰イオン基が用いられ、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、硝酸塩、塩化物、臭化物および硫酸塩が特に好まれる。
【００２０】
以下の実施例および本発明に従って合成された化合物の生物学的特徴は、本発明の療法により、限定なく、伝達される。
【実施例１】
【００２１】
（ＡＥと無水マレイン酸とのエステル）
−２−エン−ジオイック酸以外の、モノ−（４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−イルメチル）エステル
ＡＥ（５１．７  ｍｇ；  ２７０．２  ｇ／ｍｏｌ；  ０．１９  ｍｍｏｌ）、無水マレイン酸（６０．０  ｍｇ；  ９８．１  ｇ／ｍｏｌ；  ０．６１  ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２．７  ｍｇ；  １２２．２  ｇ；  ０．０２２  ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（５  ｍｌ）に溶解した。その反応は窒素気流下に行なわれ、還流温度で４８時間攪拌した。次に真空下に室温でその溶媒を蒸発させた。
【００２２】
その反応残渣をクロマトグラフィーで精製した（溶出液：５５％石油エーテル、４５％酢酸エチル）。
【００２３】
７  ｍｇの純粋な化合物が得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  ５．３５  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２）；  ６．４５  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  （Ｊ＝１４．８），  ＝ＣＨ）；  ６．５５  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ  （Ｊ＝１４．８）  ＝ＣＨ）；  ７．４３  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｍ）；  ７．８１  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｍ，  Ｈ４，  Ｈ５，  Ｈ６）；  １１．９９と１２．０５  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ２ｓ，  ２ＯＨ）。  ３６８（Ｍ＋）。
【実施例２】
【００２４】
（ＡＥと無水コハク酸とのエステル）
コハク酸モノ−（４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−イルメチル）エステル
ＡＥ（５１．７  ｍｇ；  ０．１９  ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（６１．０  ｍｇ；  ０．６１  ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２．７  ｍｇ；  ０．０２２  ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５  ｍｌ）に溶解した。その反応は窒素気流下に行なわれ、還流温度で４８時間攪拌した。真空下に室温でその溶媒を蒸発させた。その残渣をエチルエーテルで３回洗浄した。８．８  ｍｇの純粋な化合物が得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  ５．３５  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２）；  ２．５５  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ２１）；  ２．６８  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ２１）；  ７．３５  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｍ，  Ｈ２，  Ｈ７）；  ７．７７  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｍ，  Ｈ４，  Ｈ５，  Ｈ６）。  ３７０（Ｍ＋）。
【実施例３】
【００２５】
（ＡＥと無水ジグリコール酸とのエステル）
酢酸（４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−イルメトキシカルボニルメトキシ）エステル
ＡＥ（５０．０  ｍｇ；  ０．１８５  ｍｍｏｌ）、無水ジグリコール酸（２５．８  ｍｇ；  ０．２２  ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２．３  ｍｇ；  ０．１８  ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５  ｍｌ）に溶解した。その反応は窒素気流下に行なわれ、還流温度で１２時間攪拌した。真空下に室温でその溶媒を蒸発させた。
【００２６】
その固体状残渣を酢酸エチルに溶解した。その有機溶液を重炭酸カリウム水溶液で抽出した。その水溶液を酢酸でわずかに酸性化し、酢酸エチルで再び抽出した。その有機溶液を硫酸ナトリウムで脱水した。その溶媒を真空下に蒸発させた。３２  ｍｇの純粋なエステルが得られた。
【００２７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  ５．３  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２）；  ４．３  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２１）；  ４．１６  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２２）；  ７．４３  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｍ，  Ｈ２，  Ｈ７）；  ７．８１  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｍ，  Ｈ４，  Ｈ５，  Ｈ６）；  １１．９９  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｓ（広い）  ＯＨ１，  ＯＨ８）。  ３８６（Ｍ＋）。
【実施例４】
【００２８】
（ＡＥと無水フタル酸とのエステル）
フタル酸モノ−（４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−イルメチル）エステル
ＡＥ（５０．０  ｍｇ；  ０．１８５  ｍｍｏｌ）、無水フタル酸（３２．９  ｍｇ；  ０．２２  ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２．３  ｍｇ；  ０．０２  ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５  ｍｌ）に溶解した。その反応は窒素気流下に行なわれ、還流温度で１２時間攪拌した。真空下に室温でその溶媒を蒸発させた。その反応残渣をクロマトグラフィーで精製した（溶出液：４０％石油エーテル、６０％酢酸エチル）。９．３  ｍｇの純粋な化合物が得られた。
【００２９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  ５．４  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２）；  ７．１−８．０  ｐｐｍ  （９  Ｈ，  ｍ，  Ｈ２，  Ｈ７；  Ｈ４，  Ｈ５，  Ｈ６；  Ｈ２，  Ｈ３，  Ｈ４，  Ｈ５）。  ４１８（Ｍ＋）。
【実施例５】
【００３０】
（ＡＥと無水１，２，４−ベンゼントリカルボン酸とのエステル）
１，２，４−ベンゼントリカルボン酸１−（４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−９，１０−ジヒドロアントラセン−２−イルメチル）エステル
ＡＥ（５０．０  ｍｇ；  ０．１８５  ｍｍｏｌ）、無水ベンゼントリカルボン酸（４２．７  ｍｇ；  ０．２２  ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２．３  ｍｇ；  ０．０２  ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５  ｍｌ）に溶解した。その反応は窒素気流下に行なわれ、還流温度で１２時間攪拌した。真空下に室温でその溶媒を蒸発させた。
【００３１】
その固体状残渣を酢酸エチルに溶解した。その有機溶液を重炭酸カリウム水溶液で抽出した。その水溶液を酢酸でわずかに酸性化し、酢酸エチルで再び抽出した。その有機溶液を硫酸ナトリウムで脱水した。その溶媒を真空下に蒸発させた。２３  ｍｇの純粋なエステルが得られた。
【００３２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  ５．４７  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２）；  ７．３９−８．４  ｐｐｍ  （８  Ｈ，  ｍ，  Ｈ２，  Ｈ７；  Ｈ４，  Ｈ５，  Ｈ６；  Ｈ３，  Ｈ５，  Ｈ６）；  １１．９５  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｓ（広い）  ＯＨ１，  ＯＨ８）。  ４６２（Ｍ＋）。
【実施例６】
【００３３】
（ＡＥとトリプトファンとのエステル）
ＡＥ（５０．０  ｍｇ；  ０．１８５  ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｌ−トリプトファン−ＯＰｆｐ  （１３１．５  ｍｇ；  ０．２２  ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２２．６  ｍｇ；  ０．０２  ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦに溶解し、窒素気流下に一昼夜還流した。その溶媒を室温で真空下に蒸発させた。保護アミノ酸のエステルが得られた。
【００３４】
その残渣をＣＨ２Ｃｌ２  （５  ｍｌ）で回収し、室温で１時間かけてピペリジン（１５７．５  ｍｇ；  ０．１９  ｍｍｏｌ）で処理した。
【００３５】
その溶媒とピペリジンを真空下に除去した。その残渣をＣＨ２Ｃｌ２  （１  ｍｌ）で回収し、ヘキサンで沈殿させた。その固体をヘキサン（２  ｍｌ）で２回洗浄し、酢酸エチルに溶解させた。その有機溶液を重炭酸カリウム水溶液で抽出した。その水溶液をわずかに酸性化し、酢酸エチルで再度抽出した。その有機溶液を硫酸マグネシウムで脱水した。その溶媒を真空下に蒸発させて８．５  ｍｇの純粋な生成物を得た。
【００３６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  ５．１５  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２）；  ３．２７  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ１）；  ４．０  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｔ，  ＣＨ２２）；  ７．０５−７．９１  ｐｐｍ  （９  Ｈ，  ｍ，  Ｈ２，  Ｈ７；  Ｈ４，  Ｈ５，  Ｈ６）；  ４５６（Ｍ＋）。
【実施例７】
【００３７】
（ＡＥとアラニンとのエステル）
ＡＥ（１００  ｍｇ；  ０．３７  ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（１０  ｍｌ）に、トリエチルアミン（０．１  ｍｌ；  ０．７４  ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．５  ｍｇ；  ０．０３７  ｍｏｌ）  および  Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＯＳｕ  （２１２  ｍｇ；  ０．７４  ｍｍｏｌ）を添加した。６０℃で１６時間経過後、水を添加し、沈殿物を得た。その混合物を濾過した。その沈殿物は最初に水で洗浄し、次に冷ジエチルエーテルで洗浄した。６７  ｍｇ  （４１％）のＢｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−アロエ−エモジンが得られた。
【００３８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  １１．９３  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール）；  １１．９１  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール）；  ７．８２  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｔ，  Ｈ６）；  ７．７０  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ５）；  ７．６９  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ４）；  ７．３９  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ７）；  ７．３５  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ２）；  ５．２８  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−Ｏ）；  ５．２４  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−Ｏ）；  ４．１３  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ−Ｎ）；  １．３７  ｐｐｍ（９  Ｈ，  ｓ，  Ｃ（ＣＨ３）３）；  １．２９  ｐｐｍ（３  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ３）。
【００３９】
ＴＦＡ（２．０  ｍｌ）の９０％水溶液を入れた２０  ｍｌ遠心管内で、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｌａ−ＡＥ  （２０  ｍｇ）を溶解し、約１時間攪拌した。
【００４０】
冷エーテル（５  ｍｌ）を添加して生成物を沈殿させ、遠心分離により上澄みから分離し、冷エーテルで２回洗浄した。
【００４１】
得られた粉末を乾燥し、１８  ｍｇ（８７％）のＬ−Ａｌａ−ＡＥを得た。
【００４２】
１Ｈ−ＮＭＲ：Ｄ２Ｏ中：７．５３  ｐｐｍ  （１，  ｔ，  Ｈ７）；  ７．３９  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ５）；  ７．３３  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ４）；  ７．１１  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ７）；  ７．０３  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ２）；  ５．１６  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２−Ｏ）；  ４．１９  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ−Ｎ）；  １．５３  ｐｐｍ（３  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ３）。  ３４２（Ｍ＋）。
【実施例８】
【００４３】
（ＡＥとイソロイシンとのエステル）
ＡＥ（５０  ｍｇ；  ０．１８５  ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５  ｍｌ）に、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＰｆｐ  （２１１  ｍｇ；  ０．４０７  ｍｍｏｌ）を添加した。その溶液を４８時間還流し、その溶媒を蒸発させた。また、その溶媒をクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で精製した。４２  ｍｇ（３７％）のＦｍｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−アロエ−エモジンを橙色粉末として分離した。
【００４４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  １１．８８  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール）；  １１．８６  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール）；  ７．８９−７．６０  ｐｐｍ  （７  Ｈ，  ｍ，  Ｈ６，  Ｈ５，  Ｈ４，  Ｈα  Ｆｍｏｃ  芳香族プロトン）；  ７．３９  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ７）；  ７．３５  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ２）；  ７．３４−７．２５  ｐｐｍ  （４  Ｈ，  ｍ，  Ｈβ  Ｆｍｏｃ  芳香族プロトン）；  ５．３２  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−Ｏ）；  ５．２２  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−Ｏ）；  ４．３５  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ−Ｎ）；  ４．１６−４．０５  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ，  ＦｍｏｃのＣＨ２）；  １．８９  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ−ＣＨ３）；  １．４３  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ２−ＣＨ３のＨ）；  １．２６  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ２−ＣＨ３のＨ）；  ０．９０  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−ＣＨ３）；  ０．８５  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｔ，  ＣＨ２−ＣＨ３）。
【００４５】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＡＥ  （１９  ｍｇ；  ０．０３１４  ｍｍｏｌ）を、１時間かけて、ジクロロメタン（２  ｍｌ）中のピペリジン（０．０５  ｍｌ；  ０．５０２  ｍｍｏｌ）で処理した。その溶媒とピペリジンを真空下に除去した。その残渣をｎ−ヘキサン中で懸濁させ、遠心分離した。上澄み溶媒を除去した後で、得られた固体をエタノール（２  ｍｌ）中のＨＣｌで処理した。溶媒蒸発によりＬ−Ｉｌｅ−ＡＥ×ＨＣｌ（１０  ｍｇ；  ７７％）が得られた。
【００４６】
１Ｈ−ＮＭＲ（メタノールｄ４）：  １１．８８  ｐｐｍ（２  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール）；  ７．８３  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｔ，  Ｈ６）；  ７．７５  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ４）；  ７．７３  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ５）；  ７．４５  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ２）；  ７．４１  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ７）；  ５．４０  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２−Ｏ）；  ４．２０  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−Ｎ）；  ２．１９  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ−ＣＨ３）；  １．５９  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ２ＣＨのＨ）；  １．４２  ｐｐｍ  （１，  ｍ，  ＣＨ２ＣＨ３のＨ）；  １．０９  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−ＣＨ３）；  １．０５  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｔ，  ＣＨ２−ＣＨ３）。  ３８３（Ｍ＋）。
【実施例９】
【００４７】
（ＡＥとチロシンとのエステル）
ＡＥ（１００  ｍｇ；  ０．３７  ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（１０  ｍｌ）に、トリエチルアミン（０．１  ｍｌ；  ０．７４  ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．５  ｍｇ；  ０．０３７  ｍｏｌ）  および  Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ−ＯＳｕ  （２８０  ｍｇ；  ０．７４  ｍｍｏｌ）を添加した。６０℃で１４時間経過後、水を添加し、沈殿物を得た。その混合物を濾過した。その沈殿物は最初に水で洗浄し、次に冷ジエチルエーテルで洗浄した。７７  ｍｇ  （１９％）のＢｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ−アロエ−エモジンが得られた。
【００４８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  １１．８１  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール）；  １１．７６  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール）；  ９．０１  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｓ，  ＯＨ  フェノール性Ｔｙｒ）；  ７．８３  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｔ，  Ｈ６）；  ７．７４  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ５）；  ７．６４  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ４）；  ７．４１  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ７）；  ７．３５  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ２）；  ７．０１  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．１  Ｈｚ，  Ｈａｒｏｍ  Ｔｙｒ）；  ６．０１  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．１  Ｈｚ，  Ｈａｒｏｍ  Ｔｙｒ）；  ５．２８  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−Ｏ）；  ５．２４  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  ＣＨ−Ｏ）；  ４．１３  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ−Ｎ）；  １．３７  ｐｐｍ  （９  Ｈ，  ｓ，  Ｃ（ＣＨ３）３）。
【００４９】
ＴＦＡ（２．０  ｍｌ）の９０％水溶液を入れた２０  ｍｌ遠心管内で、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ−ＡＥ  （２０  ｍｇ）を溶解し、約１時間攪拌した。
【００５０】
冷エーテル（５  ｍｌ）を添加してその生成物を沈殿させ、遠心分離により上澄みを分離し、冷エーテルで２回洗浄した。
【００５１】
得られた粉末を乾燥し、１８  ｍｇ（８７％）のＬ−Ｔｙｒ−ＡＥを得た。
【００５２】
１Ｈ−ＮＭＲ：Ｄ２Ｏ中：  ７．５０  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｔ，  Ｈ７）；  ７．４１  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ５）；  ７．３２  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ４）；  ７．１０  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｄ，  Ｈ７）；  ７．０２  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｓ，  Ｈ２）；  ７．０５  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．１  Ｈｚ，  Ｈａｒｏｍ  Ｔｙｒ）；  ６．０１  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝８．１  Ｈｚ，  Ｈａｒｏｍ  Ｔｙｒ）；  ５．１６  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２−Ｏ）；  ４．１９  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｍ，  ＣＨ−Ｎ）。  ４３３（Ｍ＋）。
【実施例１０】
【００５３】
（ＡＥとアラニンとのエステルで、トリフルオ酢酸で塩化されているもの）
実施例７の化合物（５  ｍｇ）を濃縮トリフルオロ酢酸（２００  μｌ）で処理し、アセトンで希釈した。ａｌａ−アロエ−エモジン・トリフルオロ酢酸塩を分離し、濾過し、乾燥した。
【実施例１１】
【００５４】
（ＡＥとアラニンとのエステルで、塩酸で塩化されているもの）
実施例７の化合物（５  ｍｇ）を濃縮塩酸（３００  μｌ）で処理し、アセトンで希釈した。ａｌａ−アロエ−エモジン塩酸塩を分離し、濾過し、乾燥した。
【実施例１２】
【００５５】
（ＡＥと燐酸とのエステル）
ＡＥ（５０  ｍｇ；  ０．１８５  ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５  ｍｌ）溶液に、ジベンジロキシホスホリルクロライド（３９６．６９  ｇ／ｍｏｌ、公知の方法で調製したもの、１６１  ｍｇ；  ０．４０７  ｍｍｏｌ）を添加した。その溶液を６時間かけて還流した後で、その溶媒を蒸発させた。また、その残渣をクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル  ３：１）で精製した。希水酸化ナトリウム中で、大気圧で、Ｐｄ／Ｃ上で、触媒接触水素化でそのベンジル基を除いた。４２  ｍｇ（６４％）のＰＯ３２――アロエ−エモジンを橙色の粉末として得た。
【実施例１３】
【００５６】
（ダウノサミンを有するＡＥアセタール）
Ｎ，Ｏ−ジ（トリフルオロアセチル）ダウノサミニル−２−ブロマイド（４０２．０９  ｇ／ｍｏｌ、公知の方法で調製されたもの、  １６０  ｍｇ；  ０．４  ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３  ｍｌ）溶液を、酸化水銀、二臭化水銀およびモレキュラーシーブの存在下に、無水ＴＨＦ（３  ｍｌ）中で、ＡＥ溶液（５０  ｍｇ；  ０．１８５  ｍｍｏｌ）と反応させた。その反応が（クロマトグラフ基準で）平衡状態になったとき、その塩とモレキュラーシーブを濾過し、その溶媒を減圧下に蒸発させた。糖のＯＨ基やＮＨ２基の保護基（トリフルオロアセテート）はメタノリシスで除いた。その生成物を中性アルミナ上でクロマトグラフにより精製した。８  ｍｇ（０．０２  ｍｍｏｌ；  １０％）の、クロマトグラフで精製した、純粋な生成物が得られた。
【００５７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６）：  １．１５  ｐｐｍ（３  Ｈ，  ｄ，  ６．５  Ｈｚ，  ＣＨ３  ダウノ）；  １．７７  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  Ｈ２  ダウノ）；  ３．３１  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  Ｈ３  ダウノ）；  ３．６２  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  Ｈ４  ダウノ）；  ４．１４  ｐｐｍ（１  Ｈ，  ｍ，  Ｈ５  ダウノ）；  ５．２５  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  広い一重項、Ｈ１  ダウノ）；  ５．３５  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｓ，  ＣＨ２）；  ６．４５  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  （Ｊ＝１４．８），  ＝ＣＨ）；  ６．５５  ｐｐｍ  （１  Ｈ，  ｄ，  （Ｊ＝１４．８），  ＝ＣＨ）；７．４３  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ｍ）；  ７．８１  ｐｐｍ  （３  Ｈ，  ｍ，  Ｈ４，  Ｈ５，  Ｈ６）；  １１．９９  ｐｐｍと１２．０５  ｐｐｍ  （２  Ｈ，  ２  ｓ，  ２  ＯＨ）。  ３９９（Ｍ＋）。
【００５８】
生体外生物定量
神経外胚葉由来の、種々の腫瘍細胞系上で、生体外細胞毒性定量を実施した。この定量の目的は化合物細胞毒性作用とその特殊性を調査することでもあった。使用した細胞系は人間のものであり、特に
神経外胚葉由来の腫瘍：神経芽細胞腫（ＩＭＲ−５，ＳＪ−Ｎ−ＫＰ）
他に由来する腫瘍：コロン・アデノカルチノーマ（Ｌｏｖｏ  １０９）およびグリア芽細胞腫（Ａ１７２）であった。
【００５９】
上記の細胞は以下の化合物で定量した：
ＡＭ：ＤＭＳＯに溶解したマレイン酸エステル（ｅｘ．１）
ＡＳ：ＤＭＳＯに溶解したコハク酸エステル（ｅｘ．２）
ＡＤＧ：ＤＭＳＯに溶解したジグリコール酸エステル（ｅｘ．３）
ＡＦ：ＤＭＳＯに溶解したフタル酸エステル（ｅｘ．４）
ＡＢＴ：ＡＥとＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ−２スルホン硫酸）に溶解した１，２，４−ベンゼントリカルボン酸とのエステル
ＴＲＩＰ：ＤＭＳＯに溶解したトリプトファンエステル（ｅｘ．６）
ＡＬＡ−ＮＨ２：非塩化アラニンとＤＭＳＯに溶解した遊離アミノ基とのエステル（ｅｘ．７）
ＰＪ８：ＤＭＳＯに溶解したイソロイシン塩酸塩のエステル（ｅｘ．８）
ＴＩＲ−ＮＨ２：ＤＭＳＯに溶解したチロシン非塩化エステル（ｅｘ．９）
ＥＭ９：ＤＭＳＯに溶解したトリフルオロ酢酸で塩化されたアラニンエステル（ｅｘ．１０）
ＡＬＡ：水溶液（ＨＥＰＥＳ  １Ｍ）に溶解した、塩酸の形態をとるアラニンエステル（ｅｘ．１１）
ＡＬＡ−ＨＣｌ：ＤＭＳＯに溶解した、塩酸の形態をとるアラニンエステル（ｅｘ．１１）
ＡＥＰ：ＨＥＰＥＳに溶解したＡＥ燐酸エステル（ｅｘ．１２）
ＡＥＤ：ＡＥとＨＥＰＥＳに溶解したダウノサミンとのアセタール（ｅｘ．１３）。
【００６０】
１０００細胞／１００  μｌの濃度の、種々の誘導体で処理する２４時間前に、公知の方法により培養した細胞を播種した。ジメチルスルホキシド、ＤＭＳＯ、に溶解する分子として、初期株の濃度は２００  ｍＭであり、ＨＥＰＥＳ緩衝液と生理溶液に溶解する分子として、その濃度は１  ｍＭであった。種々のアロエ−エモジン誘導体のスカラー濃度は、指数増殖期にある細胞が７２時間かけて晒されるものであって、１００  μＭ、１０  μＭ、１  μＭ、  ０．１  μＭ、  ０．０１  μＭであった。
【００６１】
定量毎に、培地のみで対照を実施した（１０％の不活化胎仔ウシ血清、ＦＢＳと１％のペニシリン／ストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ）。
【００６２】
各化合物の効果は、未処理対照と比べて、ＥＣ５０として、すなわち、５０％生存細胞の存在を許容する有効濃度として表した。細胞の生存度はＭＴＴ色素定量で評価した。
【００６３】
結果
以下の表は得られた結果を示す。化合物と細胞系毎にＥＣ５０値（μＭ）が提供されている。星印でマークした化合物は、ＡＥ分子上のエステル結合を分割する多量のエステラーゼを得るために、不活化ＦＢＳを有する培地中において、細胞が得たデータを示す。
【００６４】
【表１】
0004467888.tif 000003
【００６５】
上記の結果から明瞭に示されることは、問題の化合物であって神経外胚葉由来のものは、細胞毒性細胞ないし腫瘍細胞であることであり、特に、本発明に係る化合物はアデノカルチノーマ  Ｌｏｖｏ  １０９の腫瘍細胞に対して著しく活性が高いことである。
【００６６】
逆に、グリア芽細胞腫  Ａ１７２の細胞系（データは報告されていない）に対して、本発明の化合物は活性が低い。
【００６７】
さらに言えば、上記の実験データが示すものは、問題の誘導体はアロエ−エモジン・プロドラッグであることである。非不活化ＦＢＳを想定した実験条件下の試験では、また、それ故に、エステル結合を分割するエステラーゼの存在下において、問題の化合物は、最大限６倍の増強作用を示す。
【００６８】
続いて、それらの化合物は、神経外胚葉由来の腫瘍の治療に際し、化学療法剤として、有利に使用される。その理由は、短期間内にまた不活化血清と非不活化血清の存在下にアロエ−エモジンを利用することにある（後者の条件は生理状態をまねている）。事実、アロエ−エモジンは、一般的な毒性効果を引き起こすことなく、前記細胞に対して特有の、顕著な、生体外でのおよび生体内での医薬効果を発揮することが突きとめられた。
【００６９】
従って、アロエ−エモジン誘導体は、（例えば、神経芽細胞腫、末梢原始神経外胚葉腫瘍（ｐＰＮＥＴ）、ユーイング肉腫、黒色腫、ミクロサイトーマなどのような）神経外胚葉由来のものと同様に、汎用の腫瘍の治療に適した、好ましい化合物となる。神経外胚葉由来の腫瘍、すなわち、神経芽細胞腫が最もありふれた小児の固体状腫瘍の１つであり、小児癌の１０％に達し、８５％の症例では好ましからざる予後を伴い、黒色腫１００万につき１０の新規症例が毎年オーストラリアで毎年診断され、欧州や米国では１０〜１５の新規症例が毎年診断されていることを考慮すれば、そのことは極めて重要である。
【００７０】
この目的のために、本発明の誘導体は医薬組成物の調製に用いることができ、局所投薬用の製剤と同様に、おそらくは腫瘍の第一部位及び／又は第二部位において、非経口経路および経口経路により、薬物投薬に普通に用いられる、医薬製剤の形態で投薬できるものである。さらに、アロエ−エモジン誘導体は自己骨髄移植において浄化作用に適した医薬組成物の調製に用いることができる。
【００７１】
本発明の組成物を調製するために、制御放出する局所投薬用のビヒクルまたはデバイスを含めた、医薬として受け入れ可能な賦形剤をすべて用いることができる。
【００７２】
腫瘍治療用の組成物は、特に、活性成分としてアロエ−エモジン誘導体を含み、本発明の目的に従って治療効果を得るのに適した活性成分内容物を有する製剤である。特に投薬量は、例えば、単位投薬のために５〜５００  ｍｇおよび浄化作用のために２〜５００  ｍｇの範囲内にある。
【００７３】
前記した製剤は、医薬として受け入れ可能な賦形剤、希釈剤、乳化剤、水性または油性高分子ビヒクルなどを用いて、業界公知の方法によりまたは新規な医薬技術により、調製することができる。その製剤は、制御された速度で、例えば、速い、または持続性のまたは遅延性放出速度でも活性成分を放出することができる。
【００７４】
非経口方法によって投薬可能になる製剤は、水性ビヒクルもしくは油性ビヒクル中の、または緩衝溶液中の、適当な懸濁剤を含有する、または投薬の直前に再構成する、凍結乾燥される生成物の形態をとる、アンプルのような、古典的な医薬形態のうちすべての形態で製造することができる。
【００７５】
経口投薬のための製剤は、錠剤、軟質または硬質ゼラチンカプセルで油性または有蓋のもの、丸薬、再構成のための粉末、懸濁液および乳剤である。
【００７６】
本発明の組成物はまた第一腫瘍部位または第二腫瘍部位に対して活性成分を適用するのにふさわしく、ビヒクルまたはデバイス中で局所的にまたは経皮的に使用するのに適した製剤から構成される。
【００７７】
賦形剤、結合剤、減摩剤、固化防止剤などは、医薬目的にふさわしくかつ本発明の目的に適した、いかなる型ものでもいかなる方法のものでもよい。例えば、これらのものは、医薬の分野で既知でありかつ使用されている高分子賦形剤、すなわち、シリカ、タルク、酸化マグネシウム、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコール、アラビアゴム、ポリビニルピロリドンおよびポリビニルアルコールのみならず、糖(例えば、マンニトール、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、果糖)、セルロースおよびその誘導体のような天然多糖類、例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、でんぷんおよびアルギン酸塩であってよい。