(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）に表される化合物から選ばれる１種乃至は２種以上を含有する美白用の皮膚外用剤。
【化１】
0004422329.tif 000016
（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｒは水素原子、アシル基又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表す。）
【請求項２】
式（Ｉ）に表される化合物が、下記式（II）に表される化合物である請求項１に記載の美白用の皮膚外用剤。
【化２】
0004422329.tif 000017
（式中Ｒは、水素原子、Ｒ6-ＣＯ-で表されるアシル基、又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表し、前記Ｒ6は炭素数１〜１７のアルキル基又は、二重結合を１もしくは２個有する炭素数３〜１７のアルケニル基を表す。）
【請求項３】
イヌラボシン、アセチルイヌラボシン、及びイヌラボシンのグルコシドから選ばれる１種乃至は２種以上を含有する請求項２に記載の美白用の皮膚外用剤。
【請求項４】
式（Ｉ）に表される化合物から選ばれる１種乃至は２種以上の含有量が、外用剤全体に対し０．０００５〜１０重量％である請求項１〜３の何れか一項に記載の美白用の皮膚外用剤。
【請求項５】
下記式（III）に表される化合物（但し、アセチルイヌラボシンを除く）。
【化３】
0004422329.tif 000018
（但し、Ｒ1はメチル基を表し、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｒ7はアシル基又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表す。）
【請求項６】
下記式（IV）で表される請求項５記載の化合物（但し、アセチルイヌラボシンを除く）。
【化４】
0004422329.tif 000019
（式中Ｒ7は、Ｒ8-ＣＯ-で表されるアシル基、又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表し、前記Ｒ8は炭素数１〜１７のアルキル基又は、二重結合を１もしくは２個有する炭素数３〜１７のアルケニル基を表す。）
【請求項７】
イヌラボシンのグルコシドである請求項６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
本発明は、皮膚外用剤およびこれに適用可能な新規化合物に関し、詳しくは、メラニン生成を抑制する作用を有する化合物を含有し、皮膚における色素沈着の予防、改善効果に優れる、美白用の化粧料等に好適な皮膚外用剤およびこれに好適に用いられるメラニン生成抑制作用を有する新規化合物に関する。
【０００２】
［背景技術］
シミ、ソバカスや日焼け後の皮膚の色黒化等をもたらす皮膚における色素沈着は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）の活性化によりメラニン生成が著しく亢進したものであり、中高年齢層の肌の悩みの一つになっている。そこで、従来より、これら皮膚の色素沈着に関するトラブルを防止、改善する目的でアスコルビン酸類、過酸化水素水、グルタチオン、コロイド硫黄、ハイドロキノン、カテコール等を配合した皮膚外用剤が知られていた。
【０００３】
しかしながら、上記の様な皮膚における色素沈着の予防、改善に関し、アスコルビン酸類は、含水化粧料の如き水分を多く含む系においては酸化され易く不安定であり、変色の原因となる。また、過酸化水素水は保存上の安定性ならびに安全性上の問題があり、グルタチオンやコロイド硫黄は著しい異臭を放つため製品に使用することは制約されている。更には、ハイドロキノン、カテコールのようなものは皮膚刺激、アレルギー性等の安全性に問題のある場合があり、皮膚の色素沈着を予防、改善するための皮膚外用剤において、いまだ充分に満足すべきものが得られていないのが現状である。即ち、安全性に優れた美白作用を有する新規皮膚外用剤の登場が待たれていた。
【０００４】
一方、本発明の皮膚外用剤に用いる式（Ｉ）で表される化合物の内、Ｒが水素原子である化合物は、アメリカ特許、Ｕ．Ｓ．Ｐ．2,418,458-9/1947等に記載されている公知の化合物であり、さらにこれらの化合物の内、イヌラボシンは魚毒活性や抗菌活性（例えば、黄色ブドウ球菌、緑膿菌等に対する抗菌活性）を有することが知られている（Heterocycles,Vol.41,No.9,1923-1926(1995)）。しかしながら、これらを含めて式（Ｉ）で表される化合物が、皮膚におけるメラニン生成の抑制作用を有することは知られておらず、また、これまでに、皮膚における色素沈着を予防、改善する目的でこれらを皮膚外用剤に用いたという報告もない。
【０００５】
［発明の開示］
本発明は、懸かる実状に鑑みてなされたものであり、皮膚における色素沈着の予防、改善に対してすぐれた効果を発揮するばかりでなく、皮膚に対して悪影響を与える懸念がなく、安全に使用することのできる皮膚外用剤を提供することを課題とする。
【０００６】
尚、本明細書において皮膚外用剤とは、皮膚に投与される剤型の組成物であって、連続的に皮膚上に貯留する化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬品等を包含した概念を示すものである。
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、下記式（Ｉ）で表される化合物が生きた色素細胞のメラニン生成に対して強力な抑制作用を有すること、更には、これを皮膚外用剤基剤中に含有せしめた時に皮膚に対する優れた色素沈着の予防及び改善効果を発現することを見いだし、また、前記作用を有する化合物を新たに製造し、これに基づき本発明を完成した。
【０００８】
すなわち本発明は、下記式（Ｉ）に表される化合物から選ばれる１種乃至は２種以上を含有する美白用の皮膚外用剤である。
【０００９】
【化５】
0004422329.tif 000002
（但し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｒは水素原子、アシル基又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表す。）
【００１０】
本発明の美白用の皮膚外用剤の好ましい態様としては、前記式（Ｉ）に表される化合物から選ばれる１種乃至は２種以上の含有量が、外用剤全体に対し０．０００５〜１０重量％である美白用の皮膚外用剤が挙げられる。
【００１１】
また、本発明は下記式（III）に表される化合物（但し、アセチルイヌラボシンを除く）を提供するものである。
【００１２】
【化６】
0004422329.tif 000003
（但し、Ｒ1はメチル基を表し、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｒ7はアシル基又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表す。）
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１３】
（１）本発明の美白用の皮膚外用剤の必須成分である式（Ｉ）に表される化合物
本発明の美白用の皮膚外用剤は、上記式（Ｉ）に表される化合物を必須の成分として含有する。式（Ｉ）においてＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5は、それぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表す。前記炭素数１〜４のアルキル基は、直鎖、分岐鎖のどちらでもよく、具体的には、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、セカンダリーブチル基、ターシャリブチル基等が例示できる。これらの内ではメチル基が特に好ましい。
【００１４】
また、式（Ｉ）においてＲは、水酸基の水素原子または水酸基の水素原子の置換基、具体的には、アシル基、糖残基を示す。前記アシル基として、具体的には、Ｒ6-ＣＯ-（Ｒ6は、炭素数１〜１７のアルキル基又は、二重結合を１もしくは２個有する炭素数３〜１７のアルケニル基を示す）で表されるアシル基が挙げられ、より具体的には、アセチル基、ペンタノイル基、イソオクタノイル基、ステアロイル基、イソステアロイル基、オレオイル基、オクタデカジエノイル基等が例示できる。上記糖残基としては、グルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を特段の限定なく挙げることができるが、具体的には、グルコース残基、キシロース残基、フルクトース残基、アラビノース残基、ラムノース残基、ガラクトース残基、シュークロース残基、マルトース残基等が例示できる。
【００１５】
さらに、上記式（Ｉ）に表される化合物の内、本発明の美白用の皮膚外用剤に好ましく用いられる化合物として、下記式（II）に表される化合物が挙げられる。
【００１６】
【化７】
0004422329.tif 000004
（式中Ｒは、水素原子、Ｒ6-ＣＯ-で表されるアシル基、又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表し、前記Ｒ6は炭素数１〜１７のアルキル基又は、二重結合を１もしくは２個有する炭素数３〜１７のアルケニル基を表す。）
【００１７】
上記式（II）で表される化合物は、式（Ｉ）においてＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5が全てメチル基である化合物である。また、式（II）においてＲで示されるアシル基または糖残基としては、上記式（Ｉ）で表される化合物のアシル基または糖残基とそれぞれ同様のものが例示できる。
【００１８】
なお、本発明に適用される上記式（Ｉ）で表される化合物の内、Ｒが水素原子である化合物は公知の化合物である。また、その合成法についてはアメリカ特許、Ｕ．Ｓ．Ｐ．2,418,458-9/1947等に記載されているので、この様な方法に従って製造した前記化合物を本発明に用いることができる。
【００１９】
さらに、本発明に好適に用いられる式（II）で表される化合物の内、Ｒが水素原子である化合物はイヌラボシンとして知られる化合物であり、この化合物が魚毒活性や抗菌活性（例えば、黄色ブドウ球菌、緑膿菌等に対する抗菌活性）を有することも知られている（Heterocycles,Vol.41,No.9,1923-1926(1995)）。イヌラボシンについても、上記同様の方法により製造することができる。
【００２０】
しかしながら、イヌラボシンも含めて、上記式（Ｉ）で表される化合物のうちＲが水素原子である化合物が、皮膚でのメラニン生成の抑制作用を有することは知られていなかった。さらに、これを皮膚に直接塗布することにより、前記作用に基づいて、シミ、ソバカスや日焼け後の皮膚の色黒化、あるいは黒皮症等の色素沈着症等をもたらす皮膚における色素沈着に対して優れた予防及び改善等のいわゆる色白効果が得られることについては全く知られておらず、本発明者らによって初めて知見されたものである。
【００２１】
更に、上記式（Ｉ）に表される化合物のうち、下記式（III）に表される化合物（但し、アセチルイヌラボシンを除く）は、文献未記載の新規化合物である。なお、式（III）に表される化合物は、上記式（Ｉ）で表わされる化合物のうちＲが水素原子である化合物のアシル化合物または配糖体である。
【００２２】
【化８】
0004422329.tif 000005
（但し、Ｒ1はメチル基を表し、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｒ7はアシル基又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表す。）
【００２３】
上記式（III）においてＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5は、上記式（Ｉ）で表される化合物のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5とそれぞれ同様のものが例示できる。さらに、Ｒ7で示されるアシル基または糖残基としては、上記式（Ｉ）で表される化合物のアシル基または糖残基とそれぞれ同様のものが例示できる。
【００２４】
また、上記式（III）に表される新規化合物の内、下記式（IV）に表される化合物（但し、アセチルイヌラボシンを除く）は、本発明の皮膚外用剤に好適に用いられる化合物である。なお、式（IV）に表される化合物は、上記イヌラボシンのアシル化合物または配糖体である。
【００２５】
【化９】
0004422329.tif 000006
（式中Ｒ7は、Ｒ8-ＣＯ-で表されるアシル基、又はグルコシド結合が可能な単糖乃至は二糖のグルコシド結合による残基を表し、前記Ｒ8は炭素数１〜１７のアルキル基又は、二重結合を１もしくは２個有する炭素数３〜１７のアルケニル基を表す。）
【００２６】
上記式（IV）で表される化合物は、式（III）においてＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5が全てメチル基である化合物である。また、式（IV）においてＲ7で示されるアシル基または糖残基としては、上記式（III）で表される化合物のアシル基または糖残基とそれぞれ同様のものが例示できる。
【００２７】
さらに、これらの新規化合物の内、本発明の皮膚外用剤に適用するのに特に好ましい化合物として、アセチルイヌラボシンおよびイヌラボシンのグルコシドが挙げられる。
【００２８】
これらの新規化合物は、イヌラボシンなどの上記式（Ｉ）で表される化合物のうちのＲが水素原子である既知化合物を常法に従って、例えば、アシル化合物を得る場合には、アシルクロライド等のアシル化剤と、配糖体を得る場合には、硝酸銀や酸化銀を触媒とした糖のハロゲン化物と、それぞれ縮合反応を行わせる等によって製造することができる。
【００２９】
（２）本発明の皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は上記式（Ｉ）に表される化合物から選ばれる１種乃至は２種以上を含有することを特徴とする。式（Ｉ）に表される化合物の内、本発明の皮膚外用剤に好ましいものは、上記式（II）で表されるイヌラボシン、アシルイヌラボシン、イヌラボシン配糖体であり、これらの中でもイヌラボシン、アセチルイヌラボシン、イヌラボシングルコシドが特に好ましい。
【００３０】
本発明では、皮膚外用基剤中に式（Ｉ）で表される化合物を含有せしめることによりメラニン生成抑制作用に基づく優れた色白効果を発揮させることが出来る。その際の上記化合物の含有量としては、皮膚外用剤全体に対し０．０００５〜１０重量％が好ましく選択される。勿論上記の通り本発明の皮膚外用剤において、式（Ｉ）に表される化合物は、唯一種を含有させることもできるし、二種以上を組み合わせて含有させることもできる。また、二種以上を組み合わせて用いる場合には、上記含有量の好ましい範囲は、式（Ｉ）に表される化合物の合計含有量についての範囲と考えてよい。
【００３１】
すなわち、シミ、ソバカスや日焼け後の皮膚の色黒化、あるいは黒皮症等の色素沈着症等をもたらす皮膚における色素沈着の予防の目的で、皮膚外用剤を用いる場合には、上記含有量は０．０００５重量％以上が効果の点で望ましい。また、皮膚における色素沈着の改善を目的に皮膚外用剤を用いる場合は、上記含有量は好ましくは０．１重量％以上が、より好ましくは１重量％以上が効果の点で望ましい。つまり、上記化合物の含有量が０．０００５重量％より少なくなると、後記実験結果に見られる如く、メラニン生成抑制作用がかなり低下する傾向が見られ、一方、１０重量％を越える量を用いても効果が頭打ちになるので、上記範囲で含有することが望ましい。
【００３２】
又、本発明の皮膚外用剤が必須成分として含有する式（Ｉ）に表される化合物の作用の特性上、前記皮膚外用剤は皮膚に連続して貯留する形態で使用されるような使用形態の皮膚外用剤であることが望ましい。この点で通常に用いられる皮膚外用剤の大部分は、本発明の皮膚外用剤として望ましい使用形態を採るものであると言える。なお、洗浄剤は本発明の皮膚外用剤の実施の形態の一つではあるが、使用形態としては一過性の処理となるので、上記の点から本発明の皮膚外用剤の実施の形態としては好ましいとは言えない。また、パック料等は連続する作用時間が短いが、閉塞による効果があるので、本発明の皮膚外用剤の好ましい実施形態の一つである。
【００３３】
本発明の皮膚外用剤は、上述の式（Ｉ）の化合物から選ばれる１種または２種以上を、皮膚外用医薬品、化粧料等の皮膚外用剤に通常用いられる皮膚外用剤基剤に、一般的な方法で配合することにより得られるものであり、上述の式（Ｉ）の化合物から選ばれる１種または２種以上を配合する以外は、通常の皮膚外用剤と全く同様にして製造することができる。
【００３４】
上記皮膚外用剤の基剤の成分としては、水性成分、油性成分、粉末成分、界面活性剤、増粘剤、色剤、香料、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐剤等が挙げられる。また、本発明の皮膚外用剤には、式（Ｉ）で表される化合物以外に、保湿剤や、紫外線防御剤、抗炎症剤等の薬剤成分を配合することができる。さらに、本発明の皮膚外用剤には、式（Ｉ）の化合物以外の美白成分、美白剤、例えば、パンテテイン−Ｓ−スルホン酸、イソフェルラ酸、アスコルビン酸燐酸マグネシウム塩、アルブチン、コージ酸、リノール酸、リノール酸メチル等を配合しても良い。
【００３５】
更に、本発明の皮膚外用剤の剤型は任意であり、従来この種の皮膚外用剤に用いる剤型であればいずれでも良く、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック等の剤型が挙げられる。
【００３６】
本発明の皮膚外用剤の用途としては、化粧料、医薬部外品、皮膚外用医薬品等が挙げられる。さらに、これらの皮膚外用剤は美白用として好適に用いられる。
【００３７】
［発明を実施するための最良の形態］
以下に実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がこれらの実施例にのみ限定を受けないことは言うまでもない。
【００３８】
［製造例１  イヌラボシン（2'-hydoxy-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）の合成］
m-クレゾール 12.0g を乾燥アセトン 100ml に溶解した後、氷冷下、塩化水素ガスを通気して飽和させ、密栓をして２４時間室温放置した。その後、再度氷冷し、少量のエーテルを加えた後、 20％水酸化ナトリウム水溶液を加えて、強アルカリ性とし、一晩激しく撹拌した。次いで、得られた反応液を１Ｎ塩酸にて中和し、エーテルにて抽出した後、エーテル層を取り出した。このエーテル層を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて、精製し、必要画分を濃縮後、少量のエーテルにより再結晶化した。ここで得られた結晶はエーテル抱合体であるので真空ポンプで十分に乾燥した結果、白色粉末としてイヌラボシン３．０ｇを得た。得られたイヌラボシンについてＮＭＲ測定を行ったところ、以下に示す結果が得られた。
（ＮＭＲ測定結果）
1Ｈ-ＮＭＲ(in CDCl3)； 1.18(3H,s), 1.42(3H,s), 1.69(3H,s), 2.06(1H,d), 2.26(3H,s), 2.30(3H,s), 2.54(1H,d), 6.65(1H,d), 6.67(1H,s), 6.75(1H,s), 6.81(1H,d), 7.03(1H,d), 7.17(1H,d)
【００３９】
［実施例１  アセチルイヌラボシン（2'-acetoxy-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）の合成］
上記製造例１で得られたイヌラボシン（2'-hydoxy-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）5gをピリジン 60mlと無水酢酸  40mlの混合液に溶解し、一晩放置後、反応液を水中に注いだ。得られた沈殿をエタノールから再結晶化し、アセチルイヌラボシン（2'-acetoxy-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）4.8gを得た。得られたアセチルイヌラボシンについてＮＭＲ測定を行ったところ、以下に示す結果が得られた。
（ＮＭＲ測定結果）
1Ｈ-ＮＭＲ(in CDCl3)； 1.18 (3H,s), 1.42(3H,s), 1.69(3H,s), 2.06(1H,d), 2.23(3H,s), 2.26(3H,s), 2.31(3H,s), 2.54(1H,d), 6.65(1H,d), 6.67(1H,s), 6.77(1H,s), 6.81(1H,d), 7.04(1H,d), 7.18(1H,d)
【００４０】
［実施例２  グルコシル−イヌラボシン（2'-O-glucosyl-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）の合成］
上記製造例１で得られたイヌラボシン（2'-hydoxy-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）5.0gとテトラ-O-アセチル-グルコシル-ブロミド（tetra-O-acetyl-glucosyl-bromide）7.0gをジクロロメタン 100mlに溶解し、酸化銀 4.0gを加え、遮光下撹拌した。銀を濾別し、濾液を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、(2'-テトラ-O-アセチル-グルコシル)-2,4,4,7,4'-ペンタメチルフラバン（(2'-tetra-O-acetyl-glucosyl)-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）を得た。これを、メタノールに溶解して、１Ｎ ＭｅＯＮａを加えて、室温下撹拌することによって、前記化合物からアセチル基をはずした。反応液を濃縮後、エタノールにより再結晶化し、グルコシル−イヌラボシン（2'-O-glucosyl-2,4,4,7,4'-pentamethylflavan）６．３ｇを得た。
【００４１】
上記(2'-テトラ-O-アセチル-グルコシル)-2,4,4,7,4'-ペンタメチルフラバンについてＮＭＲ測定を行ったところ、以下に示す結果が得られた。
（ＮＭＲ測定結果）
1Ｈ-ＮＭＲ(in CDCl3)； 1.18 (3H,s), 1.42(3H,s),1.69(3H,s), 2.02(3H,s), 2.03(3H,s), 2.04(3H,s), 2.06(1H,d), 2.11(3H,s), 2.26(3H,s), 2.30(3H,s), 2.54(1H,d), 3.72(2H,m), 4.20(1H,m), 4.61(1H,d), 5.08-5.32(3H,m), 6.65(1H,d),6.67(1H,s), 6.74(1H,s), 6.81(1H,d), 7.03(1H,d), 7.17(1H,d)
【００４２】
［実施例３  メラニン生成抑制作用］
ここで、本発明に係る式（Ｉ）で示される化合物が、如何に色素細胞に対するメラニン生成抑制作用に関して有効であるかを評価するために、下記の実験を行った。
【００４３】
（方法）
プラスチック培養フラスコ（７５ｃｍ3）に３×１０4個のマウスメラノーマ由来細胞Ｂ−１６を播種し、１０％牛胎児血清を含むイーグルＭＥＭ培地で、５％二酸化炭素、３７℃条件下にて培養した。培養開始から２日後、上記製造例１で得られたイヌラボシン、実施例１で得られたアセチルイヌラボシンまたは実施例２で得られたグルコシル−イヌラボシンを培地中の濃度で、下記表１〜３に示す５×１０-5〜１×１０-3（Ｗ／Ｖ％）となるように、上記培養フラスコにそれぞれ添加し、さらに４日間培養した。培養終了後、培養フラスコから培地を除去し、これを平衡リン酸緩衝塩溶液（以下「ＰＢＳ」という）で洗浄した後、トリプシン及びＥＤＴＡ含有溶液を使用して培養フラスコに付着している細胞を剥離させ、遠心分離機にかけて細胞を回収した。
【００４４】
回収した細胞をＰＢＳで洗浄した後、沈渣に１Ｎ水酸化ナトリウムを加え加熱溶解した。冷却後クロロホルムを加えて撹拌し、再び遠心分離した。これによって得られた上清を４００ｎｍの吸光度で測定し、予め合成メラニンを用いて作成した検量線よりメラニン量を求めた。メラニン量は細胞１０6個当りの重量（μｇ）として求めた。また、試験は上記各試料濃度においてフラスコ数５本で行った。
【００４５】
結果をフラスコ５本の平均値として、標準偏差とともに表１〜３に示す。なお、表１はイヌラボシンについての、表２はアセチルイヌラボシンについての、表３はグルコシル−イヌラボシンについての結果をそれぞれ示す。
【００４６】
また、コントロールとして、上記試験において式（Ｉ）で示される化合物を添加しない以外は上記同様に実験を行い、メラニン量を求めた。この無添加時のメラニン量と試料添加時のメラニン量を用いて次式よりメラニン生成抑制率（Ｒ（％））を求めた。なお、式中のメラニン量としてはフラスコ５本の平均値を用いた。
【００４７】
【数１】
Ｒ（％）＝（Ａ−Ｂ）× １００ ／ Ａ
Ｒ ； メラニン生成抑制率
Ａ ； 無添加時のメラニン量
Ｂ ； 試料添加時のメラニン量
得られた結果をそれぞれ表１〜３の最右欄に示す。
【００４８】
【表１】
0004422329.tif 000007
【００４９】
【表２】
0004422329.tif 000008
【００５０】
【表３】
0004422329.tif 000009
【００５１】
表１〜３の結果から明らかなように、イヌラボシン、アセチルイヌラボシン及びグルコシル−イヌラボシンは色素細胞に対するメラニン生成抑制作用を示し、特に０．０００５Ｗ／Ｖ％以上ではこの作用が顕著なものであることが立証された。尚、上記試験時に、色素細胞に対する式（Ｉ）に表される化合物の毒性は全く認められなかった。これより、式（Ｉ）に表される化合物の安全性が高いことがわかる。
【００５２】
［実施例４  水中油クリームの調製］
下記表４に示す処方に従って以下の製法により水中油クリームを作成した。
（製法）
（Ａ）の各成分を合わせ、８０℃に加熱する。（Ｂ）の各成分を合わせ８０℃に加熱する。（Ａ）の成分に（Ｂ）の成分を加えて撹拌乳化し、その後３５℃まで冷却する。
【００５３】
【表４】
0004422329.tif 000010
【００５４】
［実施例５  実使用テスト］
次に、上記メラニン生成抑制作用の試験結果を踏まえ、本発明の皮膚外用剤が如何に皮膚における色素沈着の予防及び改善効果の点で優れているかを実証するため、上記実施例４で得られた水中油型クリームを用いて、長期連続使用による実使用テストを行いその効力を確認した。比較品としては、上記実施例４におけるイヌラボシンを、精製水に置き換えて調製した水中油型クリームを用いた。
【００５５】
即ち、色黒、シミ、ソバカスに悩む女性ボランティア４０名を、統計的に同等な２群に分け、Ａ群の顔面には、本発明品である実施例４の水中油型クリームを、Ｂ群の顔面には比較品の水中油型クリームをそれぞれ３ヶ月間使用してもらった。３ケ月後の色素沈着に対する改善効果を肉眼観察により評価し、群間比較を行った。評価は、著しく改善、かなり改善、やや改善、不変、増悪の５段階で行われた。その結果を表５に示す。尚、有効率は、やや改善以上の評価が与えられた人を有効として各群毎に有効の人数を求め、有効の人数の群構成総数すなわち２０名に対する百分率として算出された値である。
【００５６】
【表５】
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【００５７】
表５の結果に示されるように、本発明の皮膚外用剤は比較品の皮膚外用剤に比し、格段に有効な皮膚における色素沈着の予防及び改善効果を有することが証明された。尚、本発明品塗布部位において、皮膚に好ましくない反応は観察されず、本発明の皮膚外用剤は、安全性の高いことも併せて確認された。
【００５８】
［実施例６  乳液の調製］
下記表６に示す処方に従って以下の製法により乳液を作成した。
（製法）
（Ａ）成分及び（Ｂ）成分を７０℃で各々撹拌しながら溶解する。（Ｂ）成分に（Ａ）の成分を加え予備乳化を行いホモミキサーで均一に乳化し、乳化後かき混ぜながら３０℃まで冷却する。
【００５９】
【表６】
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【００６０】
［実施例７  化粧水の調製］
下記表７に示す処方に従って以下の製法により化粧水を作成した。
（製法）
（Ａ）の各成分を合わせ、室温下で溶解する。一方、（Ｂ）の各成分も室
温下に溶解し、これを（Ａ）成分に加えて可溶化する。
【００６１】
【表７】
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【００６２】
［実施例８  パック料の調製］
下記表８に示す処方に従って以下の製法によりパック料を作成した。
（製法）
（Ａ）の各成分を合わせ、室温にて分散溶解する。一方、（Ｂ）の各成分も室温下に溶解する。（Ａ）成分に（Ｂ）成分を加えて均一に溶解する。
【００６３】
【表８】
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【００６４】
［実施例９  水中油クリームの調製］
下記表９に示す処方に従って以下の製法により水中油クリームを作成した。
（製法）
（Ａ）の各成分を合わせ、８０℃に加熱する。（Ｂ）の各成分を合わせ８０℃に加熱する。（Ａ）の成分に（Ｂ）の成分を加えて撹拌乳化し、その後３５℃まで冷却する。
【００６５】
【表９】
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【００６６】
［産業上の利用性］
本発明の皮膚外用剤は、含有する式（Ｉ）で表される化合物が優れたメラニン生成抑制作用を有することから、皮膚における色素沈着の予防、改善に対して優れた効果を発揮するものである。さらに、前記化合物は安全性に懸念がないため、本発明の皮膚外用剤の使用について安全上の問題はないと言える。