(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造を有する化合物Ｅｔ７５７：
0004443043.tif 000010
【請求項２】
以下の構造を有する化合物Ｉｓｏ−Ｅｔ７４３：
0004443043.tif 000011
【請求項３】
化合物Ｅｔ７５７と薬剤学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項４】
化合物Ｉｓｏ−Ｅｔ７４３と薬剤学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項５】
哺乳動物の白血病、哺乳動物の黒色腫および哺乳動物の肺癌よりなる群から選択される哺乳動物腫瘍を治療するための医薬組成物であって、有効成分としての化合物Ｅｔ７５７と、薬剤学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項６】
哺乳動物の白血病、哺乳動物の黒色腫および哺乳動物の肺癌よりなる群から選択される哺乳動物腫瘍を治療するための医薬組成物であって、有効成分としての化合物Ｉｓｏ−Ｅｔ７４３と、薬剤学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
エクテイナシジン（ecteinascidins）（本明細書ではＥｔまたはＥｔ’ｓと省略する）は、海洋性の被嚢類（marine tunicate）であるエクテイナシジア・タービナータ（Ecteinascidia turbinata）から単離された極めて強力な抗腫瘍物質である。特にＥｔ７２９、７４３、および７２２は、Ｐ３８８マウス白血病、Ｂ１６黒色腫、ルイス肺癌、およびマウスのいくつかのヒト腫瘍異種移植片モデルとを含む、インビボでの有望な効果を示した。Ｅｔ７２９とＥｔ７４３の抗腫瘍活性は、ＮＣＩにより評価されており、最近の実験では、Ｅｔ７２９は、Ｂ１６黒色腫の感染後６０日間、１０匹のうち８匹が生き延びたことを証明した。これらの驚くべき結果を考慮して、追加のエクテイナシジン化合物に対する探索が続いている。
【０００２】
（発明の要約）
本発明は、すでに発見されたエクテイナシジン化合物をその出発物質として使用して、半合成的に調製されたいくつかの新しいエクテイナシジン化合物に関する。本発明の新しいＥｔの構造を以下に示す：
【０００３】
0004443043.tif 000002
0004443043.tif 000003
0004443043.tif 000004
【０００４】
上記の新しい各化合物は、既知のecteinascidin化合物と同様の抗腫瘍活性プロフィールを有することがわかり、従ってこれらは、治療用化合物として、例えば黒色腫、肺癌などを含む哺乳動物の腫瘍の治療に有用であろう。投与量と投与経路は、患者のニーズと活性成分の具体的な活性に従って変化するであろう。これらのパラメータの測定は、担当医師の通常の技術範囲である。
【０００５】
（発明の詳細な説明）
前述のように、エクテイナシジア・タービナータ（Ecteinascidia turbinata）の試料から多くの生物活性エクテイナシジン化合物が単離されている。例えば米国特許第５，０８９，２７３号および５，２５６，６６３号（これらの開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されたエクテイナシジン７２９、７４３、７４５、７５９Ａ、７５９Ｂ、および７７０を参照されたい。また米国特許第５，１４９，８０４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されたエクテイナシジン７３６と７２２を参照されたい。また米国特許第５，４７８，９３２号と５，６５４，４２６号（これらは、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０００６】
本発明は、本発明の理解を助ける以下の例を参照して説明するが、これらは本発明を限定するものではない。本明細書で報告されるすべてのパーセントは、特に明記しない場合は、重量パーセントである。温度はすべて摂氏度で示す。
【０００７】
例１  −  Ｅｔ７５７の半合成
0004443043.tif 000005
【０００８】
Ｅｔ７２９（９．２mg、０．０１２mmol、１当量）、ジイソプロピルアミン（１２．９μl、０．０７４mmol、６当量）およびＣＨ3ＣＮ（３００μl）の溶液に、ＣＨ3Ｉ（１．５μl、０．０２４mmol、２当量）を加え、得られた溶液を、６０℃で２４時間攪拌した。反応混合物を窒素流下で濃縮乾固した。０．０２Ｍ  ＮａＣｌを含有する７５％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏを移動相として使用して、残渣を逆相ＨＰＬＣ（Phenomenex/Ultracarb-ODS、２ml／分）により精製して、Ｅｔ７５７（２．２mg、２４％）とＥｔ７４３（２．３mg、２５％）とパーメチル化生成物の複合混合物を得た。Ｅｔ７５７を、ＨＰＬＣ（Ultracarb-ODS）により、０．０２Ｍ  ＮａＣｌを有する６０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏを移動相として使用して、純粋なＥｔ７５７（１．４mg、１５％）を得た。ＨＲＦＡＢＭＳ、Ｃ40Ｈ44Ｎ3Ｏ10Ｓ［Ｍ＋Ｈ−Ｈ2Ｏ］-  の理論値  ｍ／ｚ  ７５８．２７４７、実測値７５８．２７６３、図１と２を参照；1ＨＮＭＲ、図３を参照。
【０００９】
例２  −  Ｉｓｏ−Ｅｔ７４３の半合成
0004443043.tif 000006
【００１０】
工程Ａ  −  Ｂｏｃ−Ｅｔ７２９
Ｅｔ７２９（１２．５mg、０．０１７mmol、１当量）、ジイソプロピルエチルアミン（１．５μl、０．０７mmol、４当量）、およびＣＨ3ＣＮ（３００μl）の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３．６mg、０．０１７mmol、１．０当量）を加え、得られた溶液を、室温で９時間攪拌した。反応混合物を窒素流下で濃縮乾固した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出：１００％ＣＨＣｌ3 ---→９０％ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ）により精製して、Ｂｏｃ−Ｅｔ７２９を得た（１１．６mg、９１％、９０％ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ中Ｒf  ０．５３）；ＨＲＦＡＢＭＳ、Ｃ43Ｈ48Ｎ3Ｏ12Ｓ［Ｍ＋Ｈ］-  の理論値  ｍ／ｚ  ８３０．２９５８、実測値８３０．２９４２、図４と５を参照。
【００１１】
工程Ｂ  −  Ｉｓｏ−Ｅｔ７４３
Ｂｏｃ−Ｅｔ７２９（１１．６mg、０．０１４mmol、１当量）、ジイソプロピルエチルアミン（７．１μl、０．０４１mmol、３当量）、５００μlのＣＨ3ＣＮおよび磁気攪拌棒を含有する反応フラスコに、ＣＨ3Ｉ（２．１mg、０．０１５mmol、１．１当量）を加え、得られた溶液を６０℃で２４時間攪拌した。反応混合物を窒素流下で濃縮乾固し、次に７００μlのＴＦＡ／ＣＨ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏ（４：１：１）を加えた。混合物を室温で３０分攪拌した後、窒素流下で濃縮乾固した。残渣を０．０２Ｍ  ＮａＣｌを含有する６０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏを移動相として使用して、逆相ＨＰＬＣ（Alltech-C18、２ml／分）により精製して、Ｉｓｏ−Ｅｔ７４３（１．９mg、２８％、回収されたＥｔ７２９に基づく）と未反応のＥｔ７２９（３．６mg）を得た。ＨＲＦＡＢＭＳ、Ｃ39Ｈ42Ｎ3Ｏ10Ｓ［Ｍ＋Ｈ−Ｈ2Ｏ］-  の理論値  ｍ／ｚ  ７４４．２５９、実測値７４４．２６１９、図６と７を参照；1ＨＮＭＲとＨＭＢＣ、それぞれ図８と９を参照。
【００１２】
例３  −  Ｅｔ８７５の半合成
0004443043.tif 000007
【００１３】
氷酢酸（２８％ＡｃＯＨ／ＣＨ3ＣＮ溶液５μl、４当量）を、Ｅｔ７４３（０．９mg、０．００１mmol、１当量）、ピペリジン（２％ピペリジン／ＣＨ3ＣＮ溶液５μl、０．００１mmol、１当量）、マロン酸ジメチル（３％マロン酸ジメチル／ＣＨ3ＣＮ溶液５μl、０．００１mmol、１当量）およびＣＨ3ＣＮ中の破砕活性化した４Åモレキュラーシーブ（〜０．５mg）の混合物に加え、得られた懸濁液を室温で２４時間攪拌した。反応物をろ過し、ろ液を濃縮乾固した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出：１００％ＣＨＣｌ3 ---→９０％ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ）により精製して、Ｅｔ８７５を得た（１８０μg、２０％、９０％ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ中Ｒf  ０．５３）；ＨＲＦＡＢＭＳ、Ｃ44Ｈ50Ｎ3Ｏ14Ｓ［Ｍ＋Ｈ］-  の理論値  ｍ／ｚ  ８７６．３０１３、実測値８７６．２９８６、図１０と１１を参照。
【００１４】
例４  −  Ｅｔ１５６０（Ｅｔ７２９ダイマー）の半合成
0004443043.tif 000008
【００１５】
Ｅｔ７２９（２．４mg、０．００３２mmol、２当量）、ジイソプロピルアミン（２μl）、ＣＨ3ＣＮ（７５μl）および磁気攪拌棒を含有する反応フラスコに、α、α’−ジブロモ−ｐ−キシレン（１２．５μg／μlのα、α’−ジブロモ−ｐ−キシレン／ＣＨ3ＣＮ溶液３４μl、０．００１６mmol、１当量）を加え、得られた溶液を６０℃で１時間攪拌した。反応混合物を窒素流下で濃縮乾固した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（勾配溶出：１００％ＣＨＣｌ3 ---→９０％ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ）により精製して、Ｅｔ１５６０を得た（３００μg、１２％、９０％ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ中Ｒf  ０．５３）；ＨＲＦＡＢＭＳ、Ｃ84Ｈ85Ｎ6Ｏ20Ｓ2［Ｍ＋Ｈ−２Ｈ2Ｏ］-  の理論値  ｍ／ｚ  １５６１．５２６０、実測値１５６１．５２２１、図１２を参照。
【００１６】
生物活性
前述のように、エクテイナシジンは、強力なインビボ抗腫瘍活性を示す、高度に官能基化されたビス−またはトリス−（テトラヒドロイソキノリン）アルカロイドである。これらの化合物は主に、カリブ海とメキシコ湾に生育するマングローブの外皮のあるエクテイナシジア・タービナータ（Ecteinascidia turbinata）から天然物として単離されている。多くの抽出物の主要な生成物であるＥｔ７４３は、現在ヒト固形腫瘍の治療のためのフェーズＩの臨床治験を受けている。例えばクフェル（Kufferl）ら、Proceedings of the American Association for Cancer Research, 38:596 (1997)；ムーア（Moore）ら、Proceedings of the American Association for Cancer Research, 38:314 (1997)；ミルサリス（Mirsalis）ら、Proceedings of the American Association for Cancer Research, 38:309 (1997)；レイド（Reid）ら、Cancer Chemotherapy and Pharmacology, 38:329-334 (1996)；フェアクロス（Faircloth）ら、European Journal of Cancer, 32A, Supp. 1, pp. 55 (1996)；ガルシア−ロッカ（Garcia-Rocha）ら、British Journal of Cancer, 73: 875-883 (1996)；エックハルト（Eckhards）ら、Proceedings of the American Association for Cancer Research, 37:409 (1996)；およびヘンドリクス（Hendriks）ら、Proceedings of the American Association for Cancer Research, 37:389 (1996)を参照されたい。
【００１７】
天然のエクテイナシジンのすぐれた抗腫瘍活性を考慮して、本発明は、本明細書で調製した半合成類似体の抗腫瘍活性を試験した。表Ｉは、新しいＥｔ化合物のインビトロの細胞障害性を、２つの天然物Ｅｔ７４３とＥｔ７２９の活性と比較して示す。
【００１８】
0004443043.tif 000009
【００１９】
表Ｉに示したインビトロデータから明らかなように、本発明の新しい化合物は、２つの天然のecteinascidin化合物より最大１０倍優れたレベルの細胞障害活性を有する。従って、これらの化合物は、哺乳動物、特にヒト腫瘍のインビボの治療のための医薬組成物として有用であると予測される。
【００２０】
参照文献
以下の刊行物は、追加のバックグランド情報として引用されている。本発明を完全に理解する必要に応じて、各刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる：
１．Rinehart, K.L.ら、J. Nat. Prod., 53: 771-791 (1990).
２．Wright, A.E.ら、J. Org. Chem., 55: 4508-4512 (1990).
３．Sakaiら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 11456-11460 (1992).
４． Rinehart, K.L.ら、J. Org. Chem., 55: 4512-4515 (1990).
【００２１】
本発明を、好適な実施態様を含めて詳細に説明した。しかし、本開示から本発明の修飾および／または改良が、当業者には可能であろうが、これらは本発明の範囲と精神内に含まれることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１Ａと１Ｂは、マジックブレット（Magic Bullet）（ＭＢ）中のＥｔ７５７のＬＲＦＡＢ質量スペクトルを示す。ラインハート（Rinehart）ら、Biochem. Biophys. Res. Commun., 1984, 124, 350を参照されたい。
【図２】  図２Ａと２Ｂは、ＭＢ中のＥｔ７５７のタンデムＦＡＢＭＳ／質量スペクトルを示す。
【図３】  図３は、ＣＤ3ＯＤ中のＥｔ７５７の 1ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）スペクトルを示す。
【図４】  図４Ａと４Ｂは、ＭＢ中のＥｔ７２９のＬＲＦＡＢ質量スペクトルを示す。
【図５】  図５Ａと５Ｂは、ＭＢ中のＢｏｃ−Ｅｔ７２９のタンデムＦＡＢＭＳ／質量スペクトルを示す。
【図６】  図６は、ＭＢ中のＩｓｏ−Ｅｔ７４３のＬＲＦＡＢ質量スペクトルを示す。
【図７】  図７Ａと７Ｂは、ＭＢ中のＩｓｏ−Ｅｔ７４３のタンデムＦＡＢＭＳ／質量スペクトルを示す。
【図８】  図８は、ＣＤ3ＯＤ中のＩｓｏ−Ｅｔ７４３の 1ＮＭＲ（５００ＭＨｚ）スペクトルを示す。
【図９】  図９は、ＣＤ3ＯＤ中のＩｓｏ−Ｅｔ７４３のＨＭＢＣ（７５０ＭＨｚ）スペクトルの拡大を示す。
【図１０】  図１０Ａと１０Ｂは、ＭＢ中のＥｔ８７５のＬＲＦＡＢ質量スペクトルを示す。
【図１１】  図１１Ａと１１Ｂは、ＭＢ中のＥｔ８７５のタンデムＦＡＢＭＳ／質量スペクトルを示す。
【図１２】  図１２は、ＭＢ中のＥｔ１５６０のＬＲＦＡＢ質量スペクトルを示す。
【図１】
0004443043.tif 000012
【図２】
0004443043.tif 000013
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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