(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の（Ｉ）式の、全ての可能な立体異性体形態若しくはそれらの混合物での化合物、又はそれらの酸付加塩：
【化１】
0004588140.tif 000014
式中、Ｘは−ＣＨ＝ラジカルを表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それらを保持する環上の任意の位置において同一であり又は異なり、水素原子又はハロゲン原子を表す。
【請求項２】
下記の（ＩＡ）式：
【化２】
0004588140.tif 000015
（式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、それらの前の意味を有する）
に一致する請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ１及びＲ２が、各々ハロゲン原子を表す請求項１又は２に記載の（Ｉ）式及び（ＩＡ）式の化合物。
【請求項４】
Ｒ４がハロゲン原子を表す請求項１〜３のいずれか一に記載の（Ｉ）式及び（ＩＡ）式の化合物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４が塩素原子を表す請求項１〜３のいずれか一に記載の（Ｉ）式及び（ＩＡ）式の化合物。
【請求項６】
下記の（Ｉ）式の化合物：シス−（±）−２−［３−（４−クロロフェニル）−２−（Ｅ）−プロペニル］−６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イルメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン。
【請求項７】
請求項６の生成物のシス−（＋）鏡像異性体。
【請求項８】
（Ｉ）式の対応する化合物を得るために、下記の（ＩＩ）式の化合物：
【化３】
0004588140.tif 000016
（式中、Ｙは、メシル又はトシルラジカルを表し、その他の置換基はそれらの前の意味を有する）
に、下記の（ＩＩＩ）式の化合物：
【化４】
0004588140.tif 000017
（式中、異なる置換基はそれらの前の意味を有する）
を反応させることを特徴とする請求項１〜６のいずれか一に記載の（Ｉ）式の化合物の製造方法。
【請求項９】
新規な化学生成物としての請求項８に記載の（ＩＩＩ）式の化合物。
【請求項１０】
（Ｉ）式の対応する化合物を得るために、下記の（ＩＶ）式の化合物：
【化５】
0004588140.tif 000018
（式中、ａｌｃ1、ａｌｃ2及びａｌｃ3は、炭素原子８までを含有するアルキルを表し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸはそれらの前の意味を有する）
に、下記の（Ｖ）式の化合物：
【化６】
0004588140.tif 000019
（式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれらの前の意味を有し、Ｈａｌはハロゲン原子を表す）
を反応させることを特徴とする請求項１に記載の（Ｉ）式の化合物の製造方法。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか一に記載の少なくとも一種の化合物を有効成分として含有する抗真菌性組成物。
【請求項１２】
薬剤としての請求項１〜６のいずれか一に記載の（Ｉ）式の化合物又はそれらの製薬上許容し得る酸との付加塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、２−［３−フェニル−２−プロピニル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリンの新規な誘導体、それらの製造方法及びそれらの殺カビ剤としての使用に関する。
【０００２】
【課題を解決するための手段】
発明の主題は、下記の（Ｉ）式の、それらの全ての可能な立体異性体形態若しくはそれらの混合物での化合物、又はそれらの酸付加塩にある：
【化８】
0004588140.tif 000002
式中、Ｘは−ＣＨ＝ラジカルを表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６は、それらを保持する環上の任意の位置において同一であり又は異なり、水素原子又はハロゲン原子を表す。
【０００３】
【発明の実施の形態】
好適な生成物は、ジオキソラン環のレベルにおいてシス構造の生成物である。
【０００４】
酸との付加塩の中で、下記を挙げることができる：塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸又はリン酸のような鉱酸によって形成されるもの、或は蟻酸、酢酸、トルフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、こはく酸、酒石酸、メタン又はエタンスルホン酸のようなアルカンスルホン酸、ベンゼン又はパラトルエンスルホン酸のようなアリールスルホン酸のような有機酸によって形成されるもの。
【０００５】
置換基の定義では、
−アルキル、アルケニル又はアルキニルラジカルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、デシル又はドデシル、ビニル、アリル、エチニル、プロピニル、シクロブチル、シクロペンチル又はシクロヘキシルラジカルが好ましく、
−ハロゲンは、フッ素又は塩素、又は臭素が好ましい。
【０００６】
発明の一層特別な主題は、下記の（ＩＡ）式の化合物である。
【化１０】
0004588140.tif 000003
式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４は、それらの前の意味を有する。
【０００７】
発明の極めて特別な主題は、（Ｉ）式及び（ＩＡ）式において、Ｘが−ＣＨ＝ラジカルを表す化合物、Ｒ１及びＲ２が、各々ハロゲン原子を表す化合物並びにＲ４がハロゲン原子を表す化合物である。
【０００８】
発明の極めて特別な主題は、（Ｉ）式において、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ４が塩素原子を表す化合物である。
【０００９】
発明の好適な化合物の中で、例１の化合物、特に例２に記載するそのシス−（＋）ジアステレオ異性体を挙げることができる。
【００１０】
（Ｉ）式の化合物は、有用な抗真菌性を有する；それらは、特にがこうそうカンジダ並びにカンジダグラブラタ（ｇｌａｂｒａｔａ）、クルセイ（ｋｒｕｓｅｉ）、トロピカリス（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、シュードトロピカリス（ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）及びパラプシロシス（ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）のようなその他のカンジダ、アスペルギルスフミガタス（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、黄色アスペルギルス、黒色アスペルギルス、クリプトコッカスネオフォルマンス、イヌ小胞子菌、紅色白せん菌、毛そう白せん菌に対して活性である。
【００１１】
（Ｉ）式の化合物は、特に消化の、泌尿器の、膣の又は皮膚のカンジダ症、クリプトコックス症、例えば神経髄膜の、肺の又は皮膚のクリプトコックス症、気管支肺の及び肺のアスペルギルス症及び免疫抑制系の侵入性アスペルギルス症と戦うためのヒト又は動物用医薬として使用することができる。
【００１２】
発明の化合物は、また、先天性又は後天性免疫抑制において真菌性の疾患を予防するのにも使用することができる。
【００１３】
発明の化合物は、１つの医薬用途に限定されず、それらは、また、医薬品と異なる分野において殺カビ剤のようなものとして使用することもできる。
【００１４】
発明の主題は、従って抗真菌性化合物としての（Ｉ）式の化合物である。
【００１５】
発明の主題は、また、医薬品としての（Ｉ）式の化合物である。
【００１６】
発明の極めて特別な主題は、（Ｉ）式の少なくとも一種の化合物又はその塩の内の一種を有効成分として含有する製薬組成物である。
【００１７】
これらの組成物は、バッカル（口腔）、直腸の、非経口のルートにより、又は皮膚及び粘膜上への局所適用としての局所ルートによって投与することができるが、好適なルートは、バッカルルートである。
【００１８】
それらは、固体又は液体にすることができ、例えばプレーンの又は糖被覆した錠剤、ゼラチン、カプセル、グラニュール、座薬、注入可能な製剤、軟膏、クリーム、ゲルのようなヒト医薬において通常用いられるすべての製薬形態で提供することができる；それらは、通常の方法に従って調製する。有効成分は、タルク、アラビアゴム、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、カカオ脂、水性又は非水性ビヒクル、動物又は植物起源の脂肪物質、パラフィン誘導体、グリコール、種々の湿潤、分散又は乳化剤、防腐剤のようなこれらの医薬組成物において通常採用される賦形剤と共に加入することができる。
【００１９】
これらの組成物は、また、適したビヒクル、例えば非発熱性の（ａｐｙｒｏｇｅｎｉｃ）無菌水中に即座に溶解させる意図の粉末の形態で提供することもできる。
【００２０】
投与する量は、治療する疾患、当該患者、投与ルート及び考慮する生成物に従って可変である。投与する量は、例えば例１の生成物について成人について経口ルートにより５０〜１００ｍｇ／日に含まれることができる。
【００２１】
発明の主題は、また、（Ｉ）式の対応する化合物を得るために、下記の（ＩＩ）式の化合物：
【化１１】
0004588140.tif 000004
（式中、Ｙは、メシル又はトシルラジカルを表し、その他の置換基はそれらの前の意味を有する）
に、下記の（ＩＩＩ）式の化合物：
【化１２】
0004588140.tif 000005
（式中、異なる置換基はそれらの前の意味を有する）
の作用を施すことを特徴とする調製方法である。
【００２２】
出発生成物として用いる（ＩＩ）式の生成物は、一般的に知られかつＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  １９７９、２２（８）、１００３に示されているプロセスに従って調製することができる生成物である。
【００２３】
（ＩＩＩ）式の生成物は新規な生成物であり、それら自体で本発明の主題である。
【００２４】
発明の極めて特別な主題は、（ＩＩＩ）式の化合物であり、それの製法は、本明細書以降の実験部分において挙げ、それの製法は、下記の通りにまとめることができる：
【化１３】
0004588140.tif 000006
【００２５】
このようにして調製した（Ｉ）式の生成物は、通常の手順を用いて分解することができる。
【００２６】
発明の主題は、また、（Ｉ）式の対応する化合物を得るために、下記の（ＩＶ）式の化合物：
【化１４】
0004588140.tif 000007
（式中、ａｌｃ1、ａｌｃ2及びａｌｃ3は、炭素原子８までを含有するアルキルを表し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＸはそれらの前の意味を有する）
に、下記の（Ｖ）式の化合物：
【化１５】
0004588140.tif 000008
（式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれらの前の意味を有し、Ｈａｌはハロゲン原子、特に臭素又はヨウ素を表す）
の作用を施すことを特徴とする調製方法でもある。
【００２７】
出発生成物として用いる（ＩＶ）式の生成物は新規な生成物であり、それら自体で発明の主題である。
【００２８】
下記の例は、発明を例示するものであり、発明を制限するものではない。
【００２９】
【実施例】
調製１：（Ｅ）−２−［３−（４−クロロフェニル）−２−プロペニル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノロール。
１，２，３，４−テトラヒドロ−６−イソキノロール２ｇ、（Ｅ）−１−クロロ−４−［３−クロロ−１−プロペニル）−ベンゼン２．５ｇ、炭酸カリウム２ｇ及びＤＭＦ５０ｍｌの混合物を２５℃で３６時間撹拌する。ＤＭＦを減圧下で駆逐する。残分を塩化メチレンと水との混合物に吸収（ｔａｋｅ  ｕｐ）させる。ろ過を行い、求める生成物２．５ｇが得られる。融点＝２３３°〜２３４℃。
【００３０】
例１：シス−（±）−２−［３−（４−クロロフェニル）−２−（Ｅ）−プロペニル］−６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イルメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン。
調製１の生成物２ｇ、シス−（＋−）−２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イルメチル）−１，３−ジオキソラン−４−メタノールメタンスルホネート３．１ｇ、トルエン５０ｍｌ、水酸化ナトリウムの５０％溶液４ｍｌ、塩化トリベンジルアンモニウム（Ｃ6Ｈ5ＣＨ2  Ｅｔ3Ｎ+Ｃｌ-）３００ｍｌの混合物を３．５時間還流に至らせた後に、冷却する。トルエン層が分離され、水性相をトルエンで抽出し、２つのトルエン層を一緒にし、乾燥させ、蒸発させる。得られた生成物をエチルエーテルとエチルアセテートとの混合物から再晶出させ、１２７°〜１２９℃で融解する求める生成物３．２ｇが得られる。
分析  Ｃ６２．９１％
Ｈ＝４．９５％
Ｎ＝６．８８％
Ｃｌ＝１７．４１％
Ｏ3＝７．８６％
【００３１】
例２：シス−（＋）−２−［３−（４−クロロフェニル）−２−（Ｅ）−プロペニル］−６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イルメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン。
シス−（＋）−２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イルメチル）−１，３−ジオキソラン−４−メタノール４−メチルフェニルスルホネート４８０ｍｇ、調製１の生成物３００ｍｇ、炭酸カリウム２７６ｍｇ及びＤＭＦ１０ｃｍ3の混合物を３時間３０分間９０℃に加熱する。反応媒体を周囲温度において撹拌下に一晩保った後に、ろ過し、ＤＭＦですすぎ、ろ液を４０℃において減圧下で乾燥させる。残分を塩化メチレンと水（５０／５０）とに吸収させ、撹拌し、デカントする。水性相を塩化メチレンで抽出し、有機層を一緒にし、乾燥させ、ろ過し、３５℃で乾燥状態にもたらす。得られた生成物をシリカ上エチルアセテート、メタノール９３／７混合物で溶離するクロマトグラフィーによって精製する。粗製生成物が得られ、これをエチルエーテル、エチルアセテート９／１混合物４ｃｍ3中で粉砕し、乾燥させ、エチルエーテルで洗浄した後に、乾燥させ、生成物３３８ｍｇが得られ、これをシリカ上エチルアセテート、メタノール混合物（９３／７）で溶離するクロマトグラフィーによって精製する。生成物３３２ｍｇが得られる。融点＝１１０℃。
αD＝＋１２°（ｃ＝メタノール１％）
【００３２】
例３：シス−（−）−２−［３−（４−クロロフェニル）−２−（Ｅ）−プロペニル］−６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イル）メチル］−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン。
シス−（−）−２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−［（１Ｈ−イミダゾル−１−イル）−メチル］−１，３−ジオキソラン−４−メタノールメチルフェニル及び調製１の生成物で出発して例２の通りに作業して、求める生成物を得る。融点：およそ１２０℃に等しい。
αD：−１０°（ｃ＝メタノール１％）
【００３３】
調製２：
例２及び３の出発生成物、すなわちシス−（＋）−２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イルメチル）−１，３−ジオキソラン−４−メタノールメチルトルエンスルホネート、及び対応するシス（−）化合物を、対応するシス±（Ｉ）生成物で出発してキナル（ｃｈｉｎａｌ）相クロマトグラフィーによって調製する。
シス異性体（＋）αD＝＋７°
シス異性体（−）αD＝−７°
【００３４】
例４：
ＡｒＸ誘導体０．３ｍモル、調製３の生成物１．５ｍｌ（０．２ｍモル）及びＤＭＦ中のＰｄＣｌ2（Ｐφ３）２の（０．０２ｍモル）溶液１．５ｍｌの混合物を６５℃において４時間３０分間加熱する。
【００３５】
水、フッ化カリウム、酸性炭酸ナトリウム（８０−１０−７０）を含有する溶液を加えた後に、塩化メチレンで抽出し、乾燥させる。
このようにして、下記の生成物を得た：
【００３６】
【表１】
0004588140.tif 000009
【００３７】
【表２】
0004588140.tif 000010
【００３８】
【表３】
0004588140.tif 000011
【００３９】
前の通りに作業して、下記の生成物も調製した：
【化１６】
0004588140.tif 000012
Ｒｆ：０．３０エチルアセテート−トリエチルアミン９５−５
【化１７】
0004588140.tif 000013
【００４０】
調製３：シス−（±）６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イルメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−［３−トリブチルスタンニル）−２（Ｅ）−プロペニル］−イソキノリン。
段階Ａ：３−（トリブチルスタニル）−２（Ｅ）−プロペン−１−オール
メチル３−（トリブチルスタンニル）−２（Ｅ）−プロペノエート１２ｇをＴＨＦ１００ｍｌ中に溶解する。反応媒体を冷却して−７８℃にし、水素化ジブチルアルミニウム６７ｍｌを加える。温度を０℃に至らせた後に、メタノール中に注ぎ、水を加え、撹拌を一晩実施する。アルミニウム塩をろ別し、エチルアセテートで洗浄し、有機層をデカントし、乾燥させ、かつ濃縮する。生成物９ｇが得られ、これをヘキサンエチルアセテート８／２混合物で溶離するクロマトグラフィーによって精製する。求める生成物７．２５ｇが得られる。
【００４１】
段階Ｂ：（３−ブロモ−１−（Ｅ）−プロペニル）トリブチル−スタナン
塩化メチレン１０ｍｌ中トリフェニルホスフィン５．５ｇの溶液を、塩化メチレン５０ｍｌ中段階Ａで得た生成物５．２ｇ及び四臭化炭素６ｇを含有する溶液中に０℃で３０分かけて滴下して注ぐ。反応媒体を０℃において１時間保った後に、水中に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、乾燥させた後に、シリカ上ヘプタンで溶離するクロマトグラフィーにかけ、求める生成物５．０６ｇが得られる。
【００４２】
段階Ｃ：シス−（±）６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イル−メチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−［３−トリブチルスタニル）−２（Ｅ）−プロペニル］−イソキノリン。
前で得た生成物５．０６ｇ及びアセトン２０ｍｌの溶液を、調製４において調製したシス−（±）６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イル−メチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン５．６８ｇ、Ａｇ2Ｏ  １．５ｇ、アセトン１００ｍｌ及びＤＭＦ５０ｍｌを含む混合物中に撹拌及び窒素雰囲気下で滴下して注ぐ。反応媒体を周囲温度に一晩保った後に、ろ過し、水に吸収させ、エチルアセテートで抽出し、シリカ上のクロマトグラフィー（溶離剤：塩化メチレン、メタノール（９５−５））によって精製する。求める生成物６．６６ｇを得る。
【００４３】
調製４：シス−（±）６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル−メチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン
段階Ａ：
１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン６−ＯＨ５．８ｇ及びＴＨＦ５０ｍｌを含有する懸濁液を周囲温度において１５時間撹拌する。ＴＨＦ２５ｍｌ中ジｔブチルジカーボネート１１．１３ｇを２０℃で加えた後に氷冷却する酸性炭酸カリウムの溶液中に注ぎ、エチルアセテートで抽出し、乾燥させ、ろ過しかつ濃縮する。得られた生成物をペンタンに吸収させ、開始し、得られた結晶をペンタンで洗浄する。求める生成物９．２６ｇを得る。融点＝１１４℃。
【００４４】
段階Ｂ：
水素化ナトリウム５．４ｇを油中に５５〜６０％で分散させて、段階Ａで調製した生成物２４．６３ｇ及びＤＭＦ２５０ｍｌの溶液中に周囲温度において２０分かけて導入する。反応媒体を２時間５５℃にもたらし、周囲温度に戻させる。シス−（＋）−２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イル−メチル）−１，３−ジオキソラン−４−メタノールメタンスルホネート５４．６ｇを導入する。反応媒体を２０時間８０℃にもたらした後に、周囲温度において７２時間撹拌し、氷に注ぎ、１時間撹拌し、デカントし、乾燥させ、ろ過しかつ濃縮する。生成物９５．８ｇを得、これをシリカ上ヘプタンアセトン（６／４）混合物で溶離するクロマトグラフィーにかける。このようにして、求める生成物４５ｇを得、これをそのまま下記の段階において使用する。
【００４５】
段階Ｃ：シス−（±）６−［［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（１Ｈ−イミダゾル−１−イル−メチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン。
エチルアセテート２００ｃｍ3中に溶解する前の段階において調節した生成物４５ｇを、冷却して１０℃にする。氷５０ｇ及び１２Ｎの塩酸溶液５０ｃｍ3を含有する溶液１００ｃｍ3を加える。反応混合物を４時間撹拌した後に、減圧下で濃縮し、エチルアセテートに吸収させる。生成物を得、これをエチルエーテルに吸収させる。得られた生成物を粉砕し、分離し、すすぎかつ乾燥させる。生成物６０．８ｇを得、これを水２５０ｃｍ3中に注いだ後に、冷却し、２８％水酸化アンモニウム溶液５０ｃｍ3を注入する。撹拌を３０分間実施し、塩化メチレン１５０ｃｍ3を加える。反応混合物を３０分間撹拌下に保ち、塩化メチレンで抽出し、洗浄し、乾燥させ、ろ過し、濃縮する。求める生成物３５．６８ｇを得る。
【００４６】
製薬組成物
例１の生成物を含有する化合物を調製した              ．５０ｍｇ
賦形剤ｑ．ｓ．ｐ．（足りるだけ）                    １ｇ
賦形剤詳細：デンプン、タルク、ステアリン酸マグネシウム
【００４７】
生物活性
例１の生成物（即ち生成物Ｐ）の抗真菌活性
重さが１８〜２２ｇの雌のマウスを使用する。多量の鵞口瘡カンジダ（カンジダ・アルビカンス）４４８５８を尾の静脈中に１０6ＣＦＵ／マウス（ＣＦＵ：コロニー形成単位）のレートで投与する。マウスを５匹のマウスの５つのバッチに分離し、それらを下記のようにして治療する：
−グループ１：マウスを生成物Ｐ２５ｍｇ／ｋｇで経口ルートによって治療する。
−グループ２：マウスを生成物Ｐで腹腔内ルートによって２５ｍｇ／ｋｇでのレートで治療する。
−グループ３：マウスをフルコナゾールによって治療する（経口ルートにより２５ｍｇ／ｋｇ）。
−グループ４：マウスをフルコナゾールによって治療する（腹腔内ルートにより２５ｍｇ／ｋｇ）。
−グループ５：マウスは、抗真菌性治療を受けない。
死んだマウスを２２日の期間にわたってカウントする。
【００４８】
結論
生成物は、２つの投与方法において用いた投与量で優れた活性を提示する。
その上、テストを、フルコナゾールによって得られたもののオーダーを投与することによって実施した。
同じ治療は、また、皮膚真菌、例えばトリコフィートンにより「局所モデル」において、及び亜致死モデルにおいても有効であった。
【００４９】
最小抑制濃度（ＭＩＣ）
がこうそうカンジダ細胞を、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂａｌｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ３８、５７９〜５８７に示される通りにして調製し、０．１Ｍホスフェート溶液で３度洗浄し、直ぐに使用して最小抑制濃度（ＭＩＣ）を求める。ＭＩＣは、Ｃｏｍｉｔｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌの実験室臨床基準の標準方法に従いマイクロタイタプレートの改良法によって求める。
【００５０】
ＲＰＭＩ−１６４０（登録商標）、及びＬ−グルタミンをＭＯＰＳ（３−［Ｎ−モルホリノ］プロパンスルホン酸）の０．１５Ｍ溶液によってｐＨ７で緩衝した。がこうそうカンジダ細胞（１．５×１０3細胞／ｍｌ）を、ＲＰＭＩ−１６４０、及び抗真菌剤の希釈溶液を収容する９６−ウエルプレートに加える。３５℃においてインキュベートして４８時間した後に結果を読み、がこうそうカンジダ細胞の増殖を抑制するＭＩＣ又は最小抑制濃度を求める。
【００５１】
最小殺真菌濃度
ＭＩＣを４８時間で読んだ後に、プレートを振盪し、デキストロース糖を収容する矩形のディスク上に置いたウエルからウエルアリコート１０μｌを取り出す。プレートを３５℃において４８時間インキュベートする；最小の殺真菌濃度及びコロニー形成単位の数がゼロになる抗真菌剤の濃度を求める。