(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
0004414652.tif 000019
｛式（Ｉ）の化合物は、Ｒ1に関してラセミ化合物並びにそれぞれＬ−またはＤ−立体配置化合物として、Ｅ／Ｚ混合物並びにそれぞれＥ−またはＺ−異性体として存在し、式中、
Ｒ1は、
（ａ）ＯＨもしくは（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ（これは、場合によりアリールによって置換されている）または（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキルオキシ；あるいは
（ｂ）式−Ｎ（Ｒ4Ｒ5）〔式中、Ｒ4およびＲ5は、互いに独立に、水素、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル（これは、場合によりハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換されたアリールによって置換されている）、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、ＮＨ2、ＮＨＲ6またはＮＲ6Ｒ7を表し、ここで、Ｒ6およびＲ7は、互いに独立に、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、場合によりハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換されたアリール、場合によりハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換されたヘテロアリールを表すか、またはＲ6およびＲ7は、これらが結合している窒素原子と一緒になってチアゾリン、チアゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジンもしくはモルホリン環を表す〕
で示される基；あるいは
（ｃ）式（Ａ）：
【化２】
0004414652.tif 000020
〔式中、ｍは整数１または２を表し、ここで、メチレン基の１個は、ヒドロキシル、カルボキシルもしくは（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル残基または（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル残基（これは、場合によりハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換されたアリールによって置換されている）によって置換されることができ、Ｒ8は、前記の（ａ）および（ｂ）で述べたＲ1の意味の１つを有していて、ここでさらなる環状脂肪族環１個が窒素原子に関して２，３または３，４位において縮合することができる〕
で示される基；あるいは
（ｄ）式（Ｂ）：
【化３】
0004414652.tif 000021
〔式中、ｐおよびｒは、互いに独立に１または２であることができ、ここで、メチレン基の１個は、ヒドロキシル、カルボキシル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルまたは（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル残基（これは、場合によりハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換されたアリールによって置換されている）によって置換されることができ、Ｒ8は、前記の（ａ）および（ｂ）で述べたＲ1の意味の１つを有していて、ここでさらなる環状脂肪族環１個が窒素原子に関して２，３または３，４位において縮合することができる〕
で示される基；あるいは
（ｅ）ピペリジル基（これは、場合により（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルカルボニル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシカルボニル、（Ｃ1〜Ｃ4）アルキルまたはヒドロキシル残基により、２、３および４位の１つにおいて置換されていて、ここでさらなる芳香族または環状脂肪族環１個が窒素原子に関して２，３または３，４位において縮合することができる）；あるいは（ｆ）式（Ｃ）：
【化４】
0004414652.tif 000022
〔式中、Ｒ9は、Ｈ、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル、ホルミル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルカルボニル、シアノ、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルオキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルオキシカルボニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキルカルボニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキルオキシカルボニル；（Ｃ3〜Ｃ8）ヘテロシクリル、（Ｃ3〜Ｃ8）ヘテロシクリルカルボニル、（Ｃ3〜Ｃ8）ヘテロシクリルオキシカルボニルであって、それぞれヘテロ原子１〜３個を有するもの；アリール、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル；ヘテロアリール、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニルであって、それぞれヘテロ原子１〜３個を有するもの；式−ＣＯＮ（Ｒ4Ｒ5）で示されるカルボキサミド残基または式−ＣＳＮ（Ｒ4Ｒ5）で示されるチオカルボキサミド残基（ここで、Ｒ4およびＲ5は、互いに独立に、水素、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリールを表すか、またはＲ4およびＲ5は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、５〜７員環を形成するが、この環はさらなるヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ）を１〜２個含むことができ、場合によりハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換ができる）、または−ＳＯ2Ｙ残基（ここで、Ｙは（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはＮ（Ｒ4Ｒ5）を表す）を表す〕
で示される基
を表し；
Ｒ2は、フェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、２，４，６−トリイソプロピルフェニル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル、２，２−ジメチル−６−メトキシクロマニル、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマニル、アントラキノニル、１−ナフチル、５−（ジメチルアミノ）ナフチル、キノリル、イソキノリルまたはカンファー残基を表し；そして
Ｒ3は、水素、アミノまたはヒドロキシを表す。｝
で示される化合物、ここで、これらの化合物は、遊離塩基として、ならびに無機酸との塩としてまたは有機酸との塩として存在することができる。
【請求項２】
Ｒ1が、ＯＨ、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ（これは、場合によりアリールによって置換されている）、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキルオキシ、または式−ＮＲ4Ｒ5、（Ｂ）もしくは（Ｃ）で示される基を意味する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1が、式（Ｃ）で示される基を表し、ここで、Ｒ9が、ホルミル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルカルボニル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルオキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルオキシカルボニル、または式−ＣＯＮ（Ｒ4Ｒ5）で示されるカルボキサミド残基（ここで、Ｒ4およびＲ5は、それぞれ水素、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルまたは（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルを表す）を意味する、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ9が、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ジメチルアミノカルボニルまたはアセチルを表す、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2が、２，４，６−トリイソプロピルフェニルを意味する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3が水素を意味する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
化合物が生理的に適合性のある酸性塩の形態で存在することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその塩、および場合により薬剤用として適切な添加剤の少なくとも１種を含有している薬剤。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物またはその塩、および場合により診断薬として適切な添加剤の少なくとも１種を含有している診断薬。
【請求項１０】
腫瘍の診断、治療および予防用の薬剤の製造のための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
乳がん、すい臓がん、および転移形成に対する薬剤の製造のための、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物の１〜数種を、さらなる薬理学的活性物質の少なくとも１種と組み合わせて使用することを特徴とする、請求項８または９に記載の薬剤。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物の１〜数種を、放射性標識物質の少なくとも１種および／または細胞毒性物質の少なくとも１種と組み合わせて使用することを特徴とする、請求項１２に記載の薬剤。
【請求項１４】
薬剤が、経口的、局所的、経直腸的または非経口的に投与されるべきものであることを特徴とする、請求項８、１２および１３のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項１５】
薬剤が、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、ペレット剤、坐剤、液剤、貼付剤または他の経皮システムの形態であり得ることを特徴とする、請求項１４に記載の薬剤。
【請求項１６】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物の１〜数種を、さらなる薬理学的活性物質の少なくとも１種と組み合わせて使用することを特徴とする、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１７】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物の１〜数種を、放射性標識物質の少なくとも１種および／または細胞毒性物質の少なくとも１種と組み合わせて使用することを特徴とする、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
薬剤が、経口的、局所的、経直腸的または非経口的に投与されるべきものであることを特徴とする、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１９】
薬剤が、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、ペレット剤、坐剤、液剤、貼付剤または他の経皮システムの形態であり得ることを特徴とする、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
請求項１で定義した式（Ｉ）の化合物およびその酸付加塩の製造方法であって、
（ａ）Ｒ3が、水素またはアミノを意味する式（Ｉ）の化合物の合成には、式１０：
【化５】
0004414652.tif 000023
（式中、Ｒ1およびＲ2は請求項１で与えた意味を有する）で示されるシアノ化合物を、シアノ基へのＨ2Ｓ付加によって、対応するチオアミドへと変換し、このチオアミドをＳ−アルキル化してチオイミドエステルを得て、このチオイミドエステルを、アンモニアまたはヒドラジンまたはそれらの塩で処理することによって、それぞれアミジノ化合物またはアミドラゾン化合物へと最終的に変換されることを含むか；あるいは
（ｂ）Ｒ3が、水素またはアミノを意味する式（Ｉ）の化合物の合成には、式１０のシアノ化合物を、酸性アルコーリシスによって、対応するイミドエステルの酸付加塩へと変換し、これをアンモニアまたはヒドラジンを用いて変換して、それぞれアミジノ化合物またはアミドラゾン化合物を得ることを含むか；あるいは
（ｄ）Ｒ3が、ＯＨまたはＮＨ2を意味する式（Ｉ）の化合物の合成には、式１０のシアノ化合物を、ヒドロキシルアミンまたはヒドラジンを用いて、それぞれ対応するヒドロキシアミジン化合物またはアミドラゾン化合物へと変換することを含むか；あるいは
（ｅ）所望ならば、得られた式（Ｉ）の化合物を酸付加塩へと変換すること、および／または得られた酸付加塩を対応する式（Ｉ）の化合物へと、もしくは他の酸付加塩へと変換することを含む
方法。
【請求項２１】
請求項２０において定義された式１０の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
タンパク質分解の過程は、固形腫瘍の増殖および転移に重要な役割を演じている。それらが接する周囲組織における構造の組立ておよび分解のために、腫瘍は単に凝固活性物質を意のままにしているだけでなく、フィブリン溶解体系の酵素をも有している。（病理）生体化学的関連はいまだ明確には説明されていないが、中心的な重要性は、明らかにプラスミノーゲン活性化因子であるウロキナーゼ、およびウロキナーゼ受容体に帰せられる。したがって、ウロキナーゼ阻害剤の開発は、第一に種々の疾病、特に腫瘍の増殖および転移におけるウロキナーゼおよびウロキナーゼ受容体の役割をさらに解明するためにも、きわめて有用でありうる。そのうえ、ウロキナーゼ阻害剤は、腫瘍の浸潤に影響を与えるための有望な潜在的薬剤である。
【０００２】
ウロキナーゼはタンパク質分解酵素であり、トリプシン様酵素の群に属していて、タンパク質およびペプチドにおいて、塩基性のアミノ酸であるアルギニンおよびリジンの結合を切断する。したがって、現在までに知られているほとんどの阻害剤は、強い塩基性の基、たとえばアミジノ官能基を有している。マイクロモル量領域において有効な最初のウロキナーゼ阻害剤は、ビス−ベンズアミジンおよびナフトアミジンから誘導された化合物のなかから見出された（J. Stuerzebecherおよび F. Markwardt: Pharmazie 33, 599-602, 1978）。同様にマイクロモルのＫｉ値でウロキナーゼを阻害し、そしてグアニジノ官能基を有している化合物、例えば、アミロリド（J.-D. Vassalliおよび D. Belin: FEBS Lett. 214, 187-191, 1987）およびフェニルグアニジン（H. Yangほか, J. Med. Chem. 33, 2956-2961, 1990）については後述した。ベンゾチオフェン−２−カルボキシアミジンは、きわめて有効な阻害剤として記述された（Ｋｉが０．２μmol/L）（M. J. Towleほか, Cancer Res. 53, 2553-2559, 1993）。
【０００３】
３−アミジノフェニルアラニンのＮα−アリールスルホニル化およびＮα−アリールスルホニル−アミノアシル化誘導体は、それぞれトロンビンの（F. Markwardtほか, Thromb. Res. 17, 425-431, 1980）、凝血因子Ｘａの（J. Stuerzebecherほか, Thromb. Res. 54, 245-252, 1989）、およびウロキナーゼの（P. Wikstroemほか, ＷＯ ００／１７１５８、および J. Stuerzebecherほか, ＷＯ ００／０４９５４）選択的阻害剤として知られている。フェニルアラニン基の変種において、フェニルアラニンのＣＨ官能基を窒素原子で置き換える一方、同時にスルホニル部分に（ヘテロ）アリール残基を導入すると、ウロキナーゼに対する親和性がきわめて決定的に増大することが見いだされた。したがって、α−（３−アミジノベンジル）−β−（ヘテロ）アリールスルホニルヒドラジド、およびアミジノ官能基をアミドキシム残基で置き換えることにより得られるプロドラッグ（D. Bauckeほか, ＷＯ ００／６１５７７を参照のこと）は、ウロキナーゼ阻害剤の新規な群を意味する。
【０００４】
本発明は、一般式（Ｉ）：
【０００５】
【化６】
0004414652.tif 000002
【０００６】
｛このものは、Ｒ1に関してラセミ化合物、およびそれぞれＬ−またはＤ−立体配置化合物として、Ｅ／Ｚ−混合物並びにそれぞれＥ−またはＺ−異性体として存在し、式中、
Ｒ1は、
（ａ）ＯＨ、または（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ（これは、場合によりアリールによって置換されている）または（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキルオキシ；あるいは
（ｂ）式−Ｎ（Ｒ4Ｒ5）〔式中、Ｒ4およびＲ5は、互いに独立に、水素、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル（これは、場合により１〜３回同じにまたは異なって置換されたアリールによって置換されている）、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル（Ｃ1〜Ｃ4）アルキル、ＮＨ2、ＮＨＲ6またはＮＲ6Ｒ7を表し、ここで、Ｒ6およびＲ7は、互いに独立に、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、場合により１〜３回同じにもしくは異なって置換されたアリール、場合により１〜３回同じにもしくは異なって置換されたヘテロアリールを表すか、またはＲ6およびＲ7は、これらが結合している窒素原子と一緒になってチアゾリン、チアゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジンもしくはモルホリン環を表し、これらは、１〜３回同じにもしくは異なって置換されることができる〕
で示される基；あるいは
（ｃ）式：
【０００７】
【化７】
0004414652.tif 000003
【０００８】
〔式中、ｍは整数１または２を表し、ここで、メチレン基の１個は、ヒドロキシ、カルボキシもしくは（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル残基または（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル残基（これは、場合により１〜３回同じにまたは異なって置換されたアリールによって置換されている）によって置換されることができ、Ｒ8は、前記の（ａ）および（ｂ）で述べたＲ1の意味の１つを有していて、ここでさらなる芳香族または環状脂肪族環１個が窒素原子に関して２，３または３，４位において縮合することができる〕
で示される基；あるいは
（ｄ）式：
【０００９】
【化８】
0004414652.tif 000004
【００１０】
〔式中、ｐおよびｒは、互いに独立に１または２であることができ、ここで、メチレン基の１個は、ヒドロキシ、カルボキシ、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、または（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル残基（これは、場合により１〜３回同じにまたは異なって置換されたアリールによって置換されている）によって置換されることができ、Ｒ8は、前記の（ａ）および（ｂ）で述べたＲ1の意味の１つを有していて、ここでさらなる芳香族または環状脂肪族環１個が窒素原子に関して２，３または３，４位において縮合することができる〕
で示される基；あるいは
（ｅ）ピペリジル基（これは、場合により（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルカルボニル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシカルボニル、（Ｃ1〜Ｃ4）アルキルまたはヒドロキシ残基により、２、３および４位の１つにおいて置換されていて、ここで、さらなる芳香族または環状脂肪族環１個が窒素原子に関して２，３または３，４位において縮合することができる）；あるいは
（ｆ）式：
【００１１】
【化９】
0004414652.tif 000005
【００１２】
〔式中、Ｒ9は、Ｈ、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル、ホルミル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルカルボニル、シアノ、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルオキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルオキシカルボニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキルカルボニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキルオキシカルボニル；（Ｃ3〜Ｃ8）ヘテロシクリル、（Ｃ3〜Ｃ8）ヘテロシクリルカルボニル、（Ｃ3〜Ｃ8）ヘテロシクリルオキシカルボニルであって、それぞれヘテロ原子１〜３個を有するもの；アリール、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル；ヘテロアリール、ヘテロアリールカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニルであって、それぞれヘテロ原子１〜３個を有するもの；式−ＣＯＮ（Ｒ4Ｒ5）で示されるカルボキサミド残基または式−ＣＳＮ（Ｒ4Ｒ5）で示されるチオカルボキサミド残基（ここで、Ｒ4およびＲ5は、互いに独立に、水素、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリールを表すか、またはＲ4およびＲ5は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、５〜７員環を形成するが、この環はさらなるヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、Ｓ）を１〜２個含むことができ、場合により１〜３回同じにもしくは異なって置換されることができる）、または−ＳＯ2Ｙ残基（ここで、Ｙは（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニル、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシまたはＮ（Ｒ4Ｒ5）を表す）を表し；ここで、上記のアルキル−、アルケニル−およびアルキニル−をそれぞれ含有している基のアルキル、アルケニルおよびアルキニル残基は、すべて１〜３回同じにまたは異なって置換されることができ、そしてシクロアルキル−、ヘテロシクリル−、アリール−およびヘテロアリール−をそれぞれ含有する基のシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール残基は、すべて１〜３回同じにまたは異なって置換されることができる〕
で示される基；
を表し；
Ｒ2は、アリールもしくはヘテロアリール残基（これらは、場合により１〜３回同じにまたは異なって置換されている）、またはカンファー残基を表し；そして
Ｒ3は、水素、アミノまたはヒドロキシを表し；
ここで、これらの化合物は、遊離塩基として、および無機酸との塩としてまたは有機酸との塩として存在することができる｝
で示される新規なウロキナーゼ阻害剤に関するものである。
【００１３】
一般に、式（Ｉ）の化合物は、無機酸との塩として、好ましくは塩酸塩として、または有機酸との塩として存在する。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物およびそれの塩は、以下の本発明の方法によって製造することができる：
（ａ）Ｒ3が水素またはアミノを意味する式（Ｉ）の化合物の製造には、式：
【００１５】
【化１０】
0004414652.tif 000006
【００１６】
（式中、Ｒ1およびＲ2は前述の意味を有する）で示されるシアノ化合物を、シアノ基へのＨ2Ｓ付加によって、対応するチオアミドへと変換し、このチオアミドから、Ｓ−アルキル化によってチオイミドエステルを得る。このチオイミドエステルは、アンモニアまたはヒドラジンまたはそれらの塩で処理することによって、それぞれアミジン化合物またはアミドラゾン化合物へと最終的に変換される；あるいは
（ｂ）Ｒ3が水素またはアミノを意味する式（Ｉ）の化合物の製造には、式１０で示されるシアノ化合物を、酸性アルコーリシスによって、対応するイミドエステルの酸付加塩へと変換し、これをアンモニアまたはヒドラジンを用いて変換して、それぞれアミジノ化合物またはアミドラゾン化合物を得る；あるいは
（ｃ）Ｒ3が水素を意味する式（Ｉ）の化合物の製造には、Ｒ3がＯＨ、または対応するアルカノイルオキシ化合物を意味する式（Ｉ）の化合物を還元する；あるいは
（ｄ）Ｒ3がＯＨまたはＮＨ2を意味する式（Ｉ）の化合物の製造には、式１０で示されるシアノ化合物を、ヒドロキシルアミンまたはヒドラジンを用いて、それぞれ対応するヒドロキシアミジン化合物またはアミドラゾン化合物へと変換する；あるいは
（ｅ）所望ならば、得られた式（Ｉ）の化合物を酸付加塩へと変換すること、および／または得られた酸付加塩を対応する式（Ｉ）の化合物へと、もしくは他の酸付加塩へと変換する。
【００１７】
上記で定義した式１０で示される初期生成物も、同じく本発明の目的である。
【００１８】
用語“アルキル”とは、それ自身単独でいえば、またはアルキルを含有する基の構造要素として、直鎖状または分枝状であり得る飽和炭化水素残基をいう。用語“シクロアルキル”もまた、それ自身単独でいえば、またはシクロアルキルを含有する基の構造要素として、環状の飽和炭化水素残基をいう。また、用語“アルケニル”または“アルキニル”とは、それら自身単独でいえば、またはアルケニルもしくはアルキニルを含有する基の構造要素として、それぞれ少なくとも１個のＣ−Ｃ二重または三重結合を有する直鎖状または分枝状炭化水素残基をそれぞれいう。用語“アルコキシ”および“シクロアルキルオキシ”とは、それぞれ“アルキル”または“シクロアルキル”の上記定義の意味における、酸素基と結合しているアルキルまたはシクロアルキル基をいう。
【００１９】
基としての、およびアルキルを含有する基の構造要素としてのアルキルの例は、非分枝状残基として、メチル、エチル、プロピル，ｎ−ブチル，ｎ−ペンチル，ｎ−ヘキシルおよびｎ−オクチル、分枝状残基として、イソプロピル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチルおよびイソアミルである。好ましいのは、メチルおよびエチルである。基としての、およびシクロアルキルを含有する基の構造要素としてのシクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。基としての、およびアルケニルを含有する基の構造要素としてのアルケニルの例は、非分枝状残基として、特にビニル、１−メチルビニル、アリル、１−ブテニルおよび２−ヘキセニル、分枝状残基として、イソプロペニルである。基としての、およびアルキニルを含有する基の構造要素としてのアルキニルの例は、非分枝状残基として、プロパルギル、２−ブチニルまたは５−ヘキシニル、分枝状残基として、２−エチニルプロピルまたは２−プロパルギルイソプロピルである。
【００２０】
用語“アリール”とは、モノ、ジまたは多核式芳香族炭化水素残基、たとえばフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルをいう。
【００２１】
用語“ヘテロアリール”とは、それ自身単独で、またはヘテロアリールを含有する基の構造要素として、１個または２個の環からなる５〜１１員環の芳香族系であって、このうち１〜３員が、酸素、硫黄および窒素のなかから選ばれるヘテロ原子であるものをいう。ベンゼン環１〜２個が、そのヘテロ環に縮合することができる。これの例は、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、１，３，５−トリアジニル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、キナゾリニル、フタラジニル、ピロリル、ピラゾリニル、イミダゾリニル、１，２，４−トリアゾリニル、テトラゾリニル、フリル、チエニル、オキサゾリニル、チアゾリニル、イソチアゾリニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチエニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリルおよびベンゾチアゾリルである。連結は、ヘテロ部分またはベンゾ部分のいずれにおいても、およびπ−過剰ヘテロ芳香族体では、窒素またはいずれの炭素においても起こり得る。
【００２２】
用語“ヘテロシクリル”とは、それ自身単独で、およびヘテロシクリルを含有する基の構造要素として、ヘテロ原子（Ｏ、ＳおよびＮのなかから選択される）１〜３個を含有する３〜８員の非芳香族環であって、これにベンゼン環が縮合できるものをいう。それの例は、オキシラニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、アゼピニル、オキサゾリジニル、オキサゾリニル、チアゾリジニル、チアゾリニルおよび１，２，３，４−テトラヒドロキノリニルである。
【００２３】
場合により置換されたアリールおよびヘテロアリール基の置換基は、たとえばハロゲン、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニルオキシ、Ｃ2〜Ｃ6アルキニル、Ｃ3〜Ｃ6アルキニルオキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシカルボニル、ＣＮ、ＯＣＮ、ニトロ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノカルボニル、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノカルボニル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルスルホキシル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルスルホニル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、場合により置換されたベンジル、場合により置換されたフェニル、場合により置換されたフェノキシ、または場合により置換されたフェニルカルボニルである。上述の芳香族環は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換されることができる。
【００２４】
ＮＲ4Ｒ5およびＮＲ6Ｒ7により形成される、場合により置換された５〜７員環の、およびヘテロシクリル基の置換基は、たとえばハロゲン、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ＣＮ、ＯＣＮ、ニトロ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルスルホキシル、Ｃ1〜Ｃ6アルキルスルホニル、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキル、場合により置換されたベンジル、場合により置換されたフェニル、または場合により置換されたフェノキシである。上述の芳香族環は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6ハロアルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジＣ1〜Ｃ6アルキルアミノおよびＣ1〜Ｃ6アルコキシカルボニルよりなる群から選ばれる同一または異なる置換基１〜３個により置換されることができる。
【００２５】
場合により置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニル残基の、ならびにこれらの残基を含有する基の置換基は、たとえば、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ハロＣ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシカルボニル、場合により置換されたフェニル、およびシアノである。
【００２６】
式（Ａ）もしくは（Ｂ）で示されるヘテロ環残基において、またはピペラジン残基において、場合により縮合されるさらなる環は、好ましくはベンゼンまたはシクロヘキサン環である。
【００２７】
ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素、好ましくはフッ素および塩素である。１個を超えるハロゲン原子により置換されているハロアルキルおよびハロアルコキシ残基は、同一または異なるハロゲン原子を担持することができる。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物のなかでは、そのＲ1がＯＨ、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシ（これは、場合によりアリールで置換されている）、（Ｃ3〜Ｃ8）シクロアルコキシ、または式−ＮＲ4Ｒ5、（Ｂ）もしくは（Ｃ）で示される基であるものが好ましい。特に好ましいのは、Ｒ1が式（Ｃ）で示される基を意味し、ここでＲ9がホルミル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルカルボニル、（Ｃ1〜Ｃ8）アルコキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルオキシカルボニル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルオキシカルボニル、または式−ＣＯＮ（Ｒ4Ｒ5）で示されるカルボキサミド残基（ここでＲ4およびＲ5は、水素、（Ｃ1〜Ｃ8）アルキル、（Ｃ2〜Ｃ8）アルケニルまたは（Ｃ2〜Ｃ8）アルキニルを表す）を意味する式（Ｉ）の化合物、特にＲ9がメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ジメチルアミノカルボニルまたはアセチルを意味する式（Ｉ）の化合物である。
【００２９】
Ｒ2は、たとえばフェニル、４−トリル、２，４，６−トリメチルフェニル、２，４，６−トリイソプロピルフェニル、４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニル、２，２−ジメチル−６−メトキシクロマニル、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマニル、アントラキノニル、１−ナフチル、２−ナフチル、５−（ジメチルアミノ）ナフチル、キノリル、イソキノリル、またはカンファー残基、好ましくは２，４，６−トリイソプロピルフェニルを意味する。
【００３０】
Ｒ3は、好ましくは水素を意味する。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物、およびそれに必要な式１０の一次生成物の製造は、以下の図１でさらに説明する。
【００３２】
図１：式（Ｉ）の化合物の製造
【００３３】
【化１１】
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【００３４】
アミジン構造（Ｒ3＝Ｈ）を有する一般式（Ｉ）の化合物は、シアノ化合物１０から既知の方法で得ることができる。一般に、シアノ基へのＨ2Ｓの付加は、まず対応するチオアミドを与え、それをＳ−アルキル化、たとえばヨウ化メチルを用いるＳ−メチル化によって対応するチオイミドエステルへと、そして最終的にアンモニアまたはその塩、たとえば酢酸アンモニウムのアルコール溶液を用いる処理によって、対応するアミジノ化合物へと変換される（たとえば、ＷＯ  ９４／１８１８５、ｐ．２３ｆ；ＷＯ  ００／１７１５８、ｐ．５ｆｆを参照されたい）。さらに、対応するイミドエステル塩、たとえばイミドエステル塩酸塩（これは、式１０で示されるシアノ化合物から、たとえばＨＣｌガス、そして場合により不活性溶媒の存在下においてメタノールまたはエタノールを用いる酸性アルコーリシスによっても製造することができる）を、アンモニアたとえばそのアルコール溶液を用いて変換して対応するアミジノ化合物へと導く。さらにまた、これらのアミジノ化合物は、対応するヒドロキシアミジン化合物（式（Ｉ）、Ｒ3＝ＯＨ）またはそれのアシル化誘導体、たとえば対応するアセチルオキシアミジン化合物の還元によって、たとえばパラジウム触媒を用いる水素化によって得ることができる。
【００３５】
ヒドロキシアミジン構造（Ｒ3＝ＯＨ）を有する一般式（Ｉ）の化合物は、式１０で示されるシアノ化合物から、ヒドロキシルアミンを用いて、たとえばヒドロキシルアミンアルコール溶液による変換によって得ることができる（たとえば、ＷＯ  ００／６１５７７、ｐ．３６を参照されたい）。
【００３６】
アミドラゾン構造（Ｒ3＝ＮＨ2）を有する一般式（Ｉ）の化合物は、シアノ化合物から、前述したようにチオイミドエステルもしくはイミドエステルを介して得るか、またはヒドラジンのアルコール溶液を用いる反応によって直接得ることができる（たとえば、Pavlov,P.A.; Kul'nevich,V.G.; Khim. Geterotsikl. Soedin.(1986),(2),181-186を参照されたい）。
【００３７】
式１０で示されるシアノ化合物は、以下により製造することができる：
（ａａ）式７で示されるヒドラジドを、一般式Ｒ2ＳＯ2Ｃｌで示されるスルホクロリドまたは一般式（Ｒ2ＳＯ2）2Ｏのスルホン酸無水物（ここで、Ｒ2は前述の意味を有する）と反応させるか；あるいは
（ｂｂ）式８で示されるスルホニルヒドラジドを、一般式Ｒ1ＣＯＣｌで示される酸塩化物、または一般式（Ｒ1ＣＯ）2Ｏで示される酸無水物（ここで、Ｒ1は前述の意味を有する）を用いて変換するか；あるいは
（ｃｃ）式９で示されるスルホニルクロロカルボニルヒドラジドを、一般式Ｒ1Ｈの求核試薬（ここで、Ｒ1は前述の意味を有する）を用いて変換する。
上述の反応の型（ａａ）〜（ｃｃ）は既知のものであり、そしてシアノ化合物１０は、同様にして製造することができる。
【００３８】
式９で示されるスルホニルクロロカルボニルヒドラジドは、式８で示されるスルホニルヒドラジドを、たとえばJ. Org. Chem. 41, 3763 (1976)に記載の方法と同様に、ホスゲン、ジホスゲンまたはトリホスゲンと反応させることによって製造することができる。
【００３９】
一般式７および８の化合物は、図１に示したような既知の経路および方法によって合成することができる。
【００４０】
本発明のウロキナーゼ阻害剤は、治療薬としての、または診断目的のための使用に適切なものである。この阻害剤は、それぞれ、式（Ｉ）の化合物もしくはその塩と、可能性として薬剤に適した少なくとも１種の添加剤とを含有する薬剤、または式（Ｉ）の化合物もしくはその塩と、可能性として診断用製品に適した少なくとも１種の添加剤とを含有する診断用製品のいずれにも製剤化することができる。それぞれ上記と同じものを含有する式（Ｉ）の化合物もしくはその塩は、ウロキナーゼまたはウロキナーゼ受容体関連疾病の診断、治療および予防のために、たとえば腫瘍の処置のために使用することができるが、これら化合物もしくはその塩が悪性腫瘍の成長および／または転移、例としてすい臓がんの腫瘍増殖、乳がんの腫瘍成長および腫瘍の転移を阻害するのにきわめて有効であることによる。これら化合物もしくはその塩は、乳房がん腫、すい臓がん腫および転移形成に対して、並びに尋常性天疱瘡に対して特に適切である。
【００４１】
言及した製品類は、式（Ｉ）の化合物またはその塩の１〜数種を、さらなる薬理学的活性物質の少なくとも１種、たとえば放射性標識物質の少なくとも１種および／または細胞毒性物質の少なくとも１種と組み合わせて含有することができる。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物またはその塩を含有する薬剤は、経口的、局所的、経直腸的または非経口的に、たとえば皮下にまたは静脈内に投与することができる。これらの薬剤は、錠剤、糖衣剤、カプセル剤、ペレット剤、坐剤、液剤、貼付剤または他の経皮システムの形態で利用される。
【００４３】
本発明の化合物および塩は、他の抗腫瘍物質、または他の型の処置、たとえば放射線治療もしくは外科手術と併せて適用することができる。
【００４４】
本発明の化合物および塩は、トロンビンおよびＸａ因子を有効に阻害するには高すぎるＫｉ値を有しているため、血液凝固に対する影響がほんのわずかであることは特筆に価する。
【００４５】
以下の例により本発明をさらに具体的に説明するが、これは決してその範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００４６】
製造例
図２：
【００４７】
【化１２】
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【００４８】
図２に記載の化合物は、以下のようにして製造した：
３−シアノベンズアルデヒド（１，１−ジメチル）エトキシカルボニルヒドラゾンXII:
３−シアノベンズアルデヒド１mmolおよびｔ−ブチルカルバザート１mmolを、酢酸エーテル２．５mL中で還流させた。得られた懸濁液を０℃に冷却し、固体をろ過した。母液を濃縮し、得られた結晶を再びろ過した。収率：７４％。
【００４９】
【表１】
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【００５０】
１−（３−シアノベンジル）−２−［（１，１−ジメチル）エトキシカルボニル］ヒドラジンXIV：XIIの１gを、Ｐｄ／Ｃが０．１mol％含まれているエタノール１０mL中で室温において水素化した。反応混合物を吸引漏斗上においてセライトでろ過し、得られたケーキをエタノールで洗浄した。ろ液を濃縮し、残留物を乾燥した。収率：９８％。
【００５１】
【表２】
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【００５２】
１−エトキシカルボニル−４−［１−（３−シアノベンジル）−２−（（１，１−ジメチル）エトキシカルボニル）−１−ヒドラジノカルボニル］ピペラジンXVII：ＣＨ2Ｃｌ2４mL中の、XIV２mmolおよびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）３mmolの 溶液を、ＣＨ2Ｃｌ2２mL中のトリホスゲン１mmol溶液に室温で滴下して加えた。１５分後、ＣＨ2Ｃｌ2４mL中の、ピペラジン−１−エチルカルボキシラート２mmolおよびＤＩＰＥＡ３mmolの溶液を滴下して加えた。混合物を１時間撹拌して、１０％クエン酸および飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、最終的に濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エーテル／ヘキサン２：３）によって精製した。
【００５３】
【表３】
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【００５４】
１−エトキシカルボニル−４−［１−（３−シアノベンジル）−１−ヒドラジノ］カルボニルピペラジンXVI：XVIIの１gをＣＨ2Ｃｌ2の１０mLに溶解し、０℃でトリフルオロ酢酸３mLに加えた。反応混合物を室温で３．５時間撹拌し、その後１０％クエン酸で抽出した。水相を飽和Ｎａ2ＣＯ3溶液の添加によって塩基性にし、そしてＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。有機相を濃縮し、そして残留物を高減圧下で乾燥した。収率：８２％。
【００５５】
【表４】
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【００５６】
１−エトキシカルボニル−４−［１−（３−シアノベンジル）−２−（２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル）−１−ヒドラジノカルボニル］ピペラジンＶ：XVIの１mmolをＣＨ2Ｃｌ2の４mLに溶解し、そしてトリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド１．５mmolに加えた。反応混合物を還流させ、ＤＩＰＥＡの３．５mmolに加え、そして還流下で４８時間撹拌した。反応混合物を１０％クエン酸で洗浄し、濃縮した。残留物をクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エーテル／ヘキサン１：３）によって精製した。
【００５７】
【表５】
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【００５８】
１−エトキシカルボニル−４−［１−（３−（アミノイミノメチル）ベンジル）−２−（２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル）−１−ヒドラジノカルボニル］ピペラジンXXI：エタノール３０mL中のＶの１mmolの冷却した溶液に、ガス状塩酸を３０分間通気した。溶液を室温で１時間撹拌し、最終的に蒸発させた。収率：１００％。
ＭＳ（ＥＳＩ）：６４４．６［Ｍ＋＋Ｈ］、４８１，３４８，１６３。
【００５９】
１−エトキシカルボニル−４−［１−（３−（アミノイミノメチル）ベンジル）−２−（２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル）−１−ヒドラジノカルボニル］ピペラジンヒドロクロリドVII：XXIをエタノール１５mLに溶解して、ＮＨ4ＯＡｃの３mmolに加え、６０℃で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（Ｈ2Ｏ、アセトニトリル）により精製した。収率：４７％。
【００６０】
【表６】
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【００６１】
１−エトキシカルボニル−４−［１−（３−（アミノヒドロキシイミノメチル）ベンジル）−２−（２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル）−１−ヒドラジノカルボニル］ピペラジンヒドロクロリドVI：Ｖの１mmolをエタノール３０mLに溶解し、ヒドロキシルアミン塩酸塩５mmolおよび１０％ＮａＣＯ3の２mLに加え、還流下で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させた。残留物をＥｔＯＡｃの７０mLに溶解し、水６０mLおよび１ＮのＨＣｌの５０mLで洗浄した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（Ｈ2Ｏ、アセトニトリル）により精製した。収率：６０％。
【００６２】
【表７】
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【００６３】
表１に記載した化合物は、前述の方法により合成することができた。
【００６４】
【表８】
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【００６５】
ウロキナーゼ阻害活性の測定
阻害活性を測定するため、トリス緩衝液（０．０５mol/L、阻害剤、ＮａＣｌ  ０．１５４mol/L、５％エタノールを含有、ｐＨ８．０）２００μL、基質（水中のPefachrome UK またはBz-βAla-Gly-Arg-pNA、Pentapham Ltd.、バーゼル、スイス）２５μL、およびｓｃ−ウロキナーゼ（Ribosepharm GmbH、Haan、ドイツ）５０μLを、２５℃でインキュベートした。３分後、酢酸（５０％）２５μLを加えて反応を止め、そしてマイクロプレートリーダー（ＭＲ  ５０００１ Dynatech、Denkendorf、ドイツ）を用いて４０５nmにおける吸光度を測定した。Ｋｉ値は、Dixonに従い、コンピュータープログラムを用いて直線回帰分析によって決定した。Ｋｉ値は、最少３個の測定値の平均を表している。
【００６６】
表２に記載のＫｉ値は、前述の方法によって決定することができた。
【００６７】
【表９】
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