(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記のいずれかの化合物又はその塩。
【化１】
0004563797.tif 000008
0004563797.tif 000009
【請求項２】
マイコバクテリア感染症を治療するために使用される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
マイコバクテリアがＭ．ツベルクロシス、Ｍ．アビウム−イントラセルラエ、Ｍ．カンサシ、Ｍ．フォーチュイタム、Ｍ．ケロナエ、Ｍ．レプラエ、Ｍ．アフリカナム、Ｍ．ボビス、Ｍ．ミクロチ、Ｍ．アビウムパラツベルクロシス、Ｍ．イントラセルラエ、Ｍ．スクロフラセウム、Ｍ．ゼノピ、Ｍ．マリナムまたはＭ．ウルセランスである、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
請求項２又は３記載の化合物と薬理学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項５】
外用投与、経口投与、皮下投与、筋肉内投与、眼内投与、静脈内投与、動脈内投与、又は埋め込み可能な用量ユニットで局所投与される、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
固体、液体またはエアロゾルの形態である、請求項４又は５記載の医薬組成物。
【請求項７】
錠剤、クリーム、ソープ、又は埋め込み可能な用量ユニットである、請求項４又は５記載の医薬組成物。
【請求項８】
請求項２又は３記載の化合物を１〜１０００ｍｇ含む、請求項４〜７のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項９】
下記工程：
アミノアルコールプレ装填樹脂を用意する工程であって、該アミノアルコールはエーテル結合により樹脂に結合されており、該アミノアルコールのアミノ基が保護基によって保護されている、工程；
該保護基を除去し、アミノ基をアミノ酸によりアシル化する工程であって、該アミノ酸のアミノ基は保護基によって保護されている、工程；
該アミノ酸のアミノ基の保護基を除去し、該アミノ基にカルボニル化合物を反応ささせる工程；
前記アシル化により生成されたカルボニル基及び前記カルボニル化合物由来のカルボニル基がある場合には該カルボニル基を還元する工程；
前記エーテル結合を切断して化合物を得る工程；
を含む、請求項１〜３のいずれか１項記載の化合物を調製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、微生物によって引き起こされる疾患、とりわけ結核を治療するための方法および組成物に関する。本発明はまた、改善された抗マイコバクテリア活性を持つ方法および組成物、すなわち、新規の置換エチレンジアミン化合物を含む組成物に関する。
【０００２】
発明の背景
マイコバクテリア感染は、しばしば、結核のような疾患として現れる。マイコバクテリアによって引き起こされるヒト感染は、古くから広まっており、結核は、今日も、死亡の主要な原因のままである。１９世紀中頃より、生活水準が上昇するのと平行して、疾患の発生率は下降しているが、マイコバクテリア疾患はまだ、医療物資が限られている国々で、疾病率および死亡率の主な原因であり続けている。さらに、マイコバクテリア疾患は、免疫無防備の患者における、重篤な播種性疾患を引き起こしうる。世界中の多くの保健機関の努力にも拘わらず、マイコバクテリア疾患の根絶は、達成されておらず、近々根絶されるとも考えられない。世界人工のほぼ三分の一がヒト型結核菌（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）複合体、通常結核（ＴＢ）として呼ばれるものに感染しており、一年間に、およそ８００万人が新しく感染し、２００〜３００万人がＴＢによって死亡している。結核（ＴＢ）は、単一の病原物によるヒトの死亡の一番大きな原因である（Ｄｙｅら，Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２８２，６７７−６８６，（１９９９）、および２０００  ＷＨＯ／ＯＭＳ  Ｐｒｅｓｓ  Ｒｅｌｅａｓｅを参照のこと）。
【０００３】
減少して数十年後、現在ＴＢは増加している。米国で、最大１０００万人が感染していると信じられている。ほぼ２８，０００の新規患者が、１９９０年に報告され、１９８９年に比べて９．４パーセントの増加である。ＴＢ件数において、１６パーセントの増加が、１９８５年〜１９９０年で観察された。過密な生活条件および共有空間が、ＴＢの広がりにとりわけ関与し、これが、刑務所受刑者の間、およびより大きな米国都市におけるホームレスの間で観察された事例の増加に関与する。「後天性免疫不全症候群（Ａｃｑｕｉｒｅｄ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＡＩＤＳ）」の全ての患者のうちのおよそ半分が、マイコバクテリア感染を獲得し、ＴＢがとりわけ打撃を与える合併症である。ＡＩＤＳ患者は、臨床ＴＢを発症するより高いリスクにあり、抗−ＴＢ治療は、非ＡＩＤＳ患者におけるのと比べて効果が小さいように見える。したがって、感染がしばしば、致命的な播種性疾患へ進展する。
【０００４】
結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）以外のマイコバクテリアが、ＡＩＤＳ患者を悩ます日和見感染にてますます見られる。Ｍ．アヴィウム−イントラセルラ（Ｍ．ａｖｉｕｍ−ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）複合体（ＭＡＣ）からの有機体、とりわけ第四および第八血細型（セロタイプ）が、マイコバクテリアの６８％の量で、ＡＩＤＳ患者より単離される。多数のＭＡＣがみられ（組織グラムあたり最大１０１０抗酸菌）、したがって、感染ＡＩＤＳ患者に関する予後は悪い。
【０００５】
世界保険機構（Ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ：ＷＨＯ）は、ＴＢに対する戦いを奨励し続けており、「免役化における拡張プログラム（Ｅｘｐａｎｄｅｄ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ：ＥＰＩ）」のような予防イニシアチブ、および「直接観察治療短期コース（Ｄｉｒｅｃｔｌｙ  Ｏｂｓｅｒｖｅｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｓｈｏｒｔ−Ｃｏｕｒｓｅ：ＤＯＴＳ）」のような治療コンプライアンスイニシアチブを推奨している。ＴＢの撲滅のために、診断、治療および予防が等しく重要である。活性ＴＢ患者の迅速な検出により、約９０％の治癒が予測される早期治療を導かれうる。したがって、早期診断が、ＴＢに対する戦いで重要である。さらに、治療コンプライアンスにより、感染の撲滅だけでなく、薬剤耐性株の出現の減少が確保されうる。
【０００６】
薬物耐性結核菌の出現は、非常に心配な現象である。少なくとも１つの標準薬剤に耐性だと証明された新規ＴＢ患者の率は、１９８０年代初期の１０パーセントから、１９９１年の２３パーセントまで増加した。したがって、治療方法のコンプライアンスもまた、ＴＢを撲滅させ、薬剤耐性株の出現を予防するための努力において、重大な要素である。マイコバクテリアの薬剤耐性株によって引き起こされる疾患のための、ワクチンとして、および治療として効果的な新規の治療薬剤の開発が等しく重要である。
【０００７】
３７以上のマイコバクテリア種が同定されているが、すべてのヒト感染の９５％以上が、６つのマイコバクテリア種、すなわち結核菌、Ｍ．アヴィウム−イントラセルラ、Ｍ．カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．ホルチュイタム（Ｍ．ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ）、Ｍ．ケロナエ（Ｍ．ｃｈｅｌｏｎａｅ）、およびＭ．レプラエ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）によって引き起こされる。ヒトで最も流行しているマイコバクテリア疾患は、結核菌、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）またはＭ．アフリカナン（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）を含むマイコバクテリア種によって主に引き起こされる結核（ＴＢ）である（Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  １９９２）。感染は、典型的には、肺における末端経路に達することが可能な、感染性粒子の吸引によって開始される。肺胞マクロファージによる貪食ののち、ファゴサイトーシス細胞の最終的な破壊を伴って、桿菌が自由に複製可能である。ファゴサイトーシス細胞の破壊が、さらなるマクロファージ、およびリンパ球の、感染部位への移動を引き起こし、そこで、これらも最終的に除去される、カスケード効果が、結果として起こる。局所リンパ管、ならびに血流および、骨髄、脾臓、腎臓、骨および中枢神経系のような他の組織に移動する感染マクロファージによって初期ステージの間に、疾患がさらに広まる（Ｍｕｒｒａｙら，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ  Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｂｙ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ２１９−２３０（１９９０）を参照のこと）。
【０００８】
マイコバクテリアの毒性に関与する因子のはっきりした理解はまだ存在しない。多くの治験責任者が、多くの細胞壁および細菌表面の脂質が、コロニー形態学および毒性への関与物として、関与していると見なした。証拠により、特定のマイコバクテリア細胞の表面上でのＣ−マイコシドが、マクロファージ内での有機体の生存を促進するために重要であることが示唆されている。トレハロース６，６’ジミクロラート、コード因子が、他のマイコバクテリアに関して関与している。
【０００９】
コロニー形態および毒性の相互関係が、Ｍ．アヴィウムでとりわけ言明されている。Ｍ．アヴィウム桿菌は、種々の異なるコロニー形態でおこる。従来の研究室培地上で透明な、または荒いコロニーとして増殖する桿菌は、組織培地中のマクロファージ内で繁殖可能であり、感受性マウスに注入したときに、毒性であり、抗生物質に耐性である。研究室培養培地上で維持された荒いまたは透明桿菌はしばしば自発的に不透明なＲコロニー形態を呈し、この時点ではマクロファージ内で増殖可能でなく、マウスで無毒性であり、抗生物質に非常に感受性である。Ｍ．アヴィウムの透明で荒い株と不透明株のコロニー形態における差は、ほとんどあきらかに、保護カプセルとして作用する、透明で荒い有機体の表面上をコートしている糖脂質の存在による。このカプセルまたはコーティングは、主にリソゾーマル酵素および抗生物質から、有害なＭ．ａｖｉｕｍ有機体を明らかに保護する、Ｃ−マイコシドからなる。一方、非毒性の不透明形態のＭ．アヴィウムは、その表面にほとんどＣ−マイコシドを持たない。抗生物質への抵抗性と、マクロファージによる殺傷への抵抗性両方が、Ｍ．アヴィウムの表面上の糖脂質バリアによって寄与されてきた。
【００１０】
マイコバクテリア感染の診断は、従来の診断が、唾液塗布標本、胸部Ｘ線検査（ＣＸＲ）および臨床症状に基づいているが、病原体の単離および同定によって確認される。培地上でのマイコバクテリアの単離は、４〜８週間かかる。種同定は、さらに２週間かかる。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、結核菌直接検査、または増幅結核菌直接検査（ＭＴＤ）、および放射活性ラベルを用いた検出方法のような、マイコバクテリアを検出するための種々の他の手法が存在する。
【００１１】
結核菌によって引き起こされる感染を検出するために広く使用されている１つの診断試験が、ツベルクリン皮膚試験である。多くの皮膚試験のバージョンが利用可能であるが、典型的には、古ツベルクリン（ＯＴ）または精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）のツベルクリン抗原の２つの調製のうちの１つが使用される。抗原調製は、皮膚に皮膚内注射するか、または局所的に塗布し、その後、多面性イノキュレーター（Ｔｉｎｅ試験）を使用することで、皮膚内に浸潤性に運搬するかいずれかである。皮膚試験診断法に、いくつかの問題が存在する。たとえば、Ｔｉｎｅ試験は、内皮層に注入される抗原の量が、正確には制御出来ないので、一般的には勧められない（Ｍｕｒｒａｙら，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅ  Ｃ．Ｖ．Ｍｏｓｂｙ  Ｃｏｍｐａｎｙ  ２１９−２３０（１９９０）を参照のこと）。
【００１２】
ツベルクリン皮膚試験が広く使用されてはいるが、これは、典型的には、結果を得るまでに２〜３日間必要であり、マイコバクテリアに暴露されても健康である被験者に偽陽性が時にみられるので、多くの場合、結果は不正確である。さらに、陽性の結果が、活性ＴＢ患者だけではなく、バシル  カルメット−グレリン（Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ：ＢＣＧ）でワクチン化したひと、およびマイコバクテリアに感染したが、疾患を発症していないひとでも観察されるので、間違った診断の頻度が高い。したがって、ツベルクリン皮膚試験によって、家庭ＴＢ接触のような、他の患者から、活性ＴＢ患者を区別することが難しい。さらに、ツベルクリン試験はしばしば、結核菌以外のマイコバクテリア（ＭＯＴＴ）で感染した個体で交差反応を生み出す。したがって、現在利用可能な皮膚試験を使用した診断は、よく誤りおよび間違いを起こす。
【００１３】
薬物感受性有機体によって引き起こされる結核に対する標準治療は、４つの薬剤を２ヶ月間投与、続いて４ヶ月間２つの薬剤を投与、からなる６ヶ月計画である。６ヶ月の治療経過中にわたって投与される２つのもっとも重要な薬剤は、イソニアジドとリファンピンである。投与計画が比較的シンプルであるが、その投与は非常に複雑である。８〜９錠剤の日々の摂取が、治療の第一相の間にしばしば必要となり、見通しが困難で、わかりにくい。重度の疾患患者でさえ、しばしば数週間症状がなく、ほぼ全てが、数ヶ月内に治癒するように見える。しかしながら、治療を完了するまで続けない場合、患者は再発を経験する可能性があり、完了まで治療を続けない患者の再発率は高い。種々の形の患者中心ケアが、治療の遵守を促進するために使用される。患者が薬剤を服用することを確証することの最も効果的な方法は、直接観察治療を使用することであり、健康管理チームのメンバーが、患者がそれぞれの薬剤のそれぞれの用量を服用するかを観察することが含まれる。直接観察治療は、病院、患者住居または任意の相互に了解した場所で実施可能である。薬剤感受性有機体によって引き起こされた結核を有する患者、および治療を完了する患者のほぼすべては治癒し、再発のリスクが非常に低い（「Ｅｎｄｉｎｇ  Ｎｅｇｌｅｔ：Ｔｈｅ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ」Ｌ．Ｇｅｉｔｅｒ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ編．未発表）。
【００１４】
必要なことは、予防接種および治療プロトコールの改善を含めた、効果的な治療投与計画である。現在可能な治療は、治療コンプライアンスの問題の結果として、もはや常に効果的ではなく、これらのコンプライアンスの問題が、薬剤耐性細菌株の発生に寄与している。
【００１５】
エタンブトール（ＥＭＢ）が、１９８８年に結核治療のために３億用量以上供給された、ＴＢの治療のための広く使用されている抗生物質である。
【００１６】
【化１】
0004563797.tif 000002
１９５０年代にレデルレ  ラボラトリーズ（Ｌｅｄｅｒｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によって開発されたエタンブトールは、非常に低毒性であり、よい薬物動態を持つ。しかしながら、エタンブトールは、約５μｇ／ｍｌの比較的高い最小阻害濃度（ＭＩＣ）を持ち、視神経炎を引き起こしうる。したがって、新規の、そしてより効果的な治療組成物の必要性が増加している（たとえば、米国特許第３，１７６，０４０号、米国特許第４，２６２，１２２号、米国特許第４，００６，２３４号、米国特許第３，９３１，１５７号、米国特許第３，９３１，１５２号、米国再発行特許第２９，３５８号、およびＨａｕｓｌｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １１（２００１）１６７９−１６８１を参照のこと）。エタンブトールの有用な効果の発見から数十年、ＴＢ治療における薬理学的進展はほとんどなかった。さらに、薬剤耐性株の複合発現、およびマイコバクテリア疾患のより流行拡散によって、新規治療組成物が、結核に対する戦いにおいて必須であることが、深刻に明らかになってきている。
【００１７】
予防接種および治療プロトコールの改善を含む、明らかに効果的な治療処方計画が必要である。結核の発生を予防し、したがって、治療の必要性をなくす治療ワクチンが望ましい。エタンブトールのような現在可能な治療法が効果的ではあるが、薬剤耐性株の発現により、エタンブトールよりもより多目的である、新規の処方および組成物の必要性を生じている。現在可能な治療は、治療コンプライアンスを伴う問題の結果として、もはや常に効果的であるとはいえず、薬剤耐性マイコバクテリア菌株の発生につながる。必要なのは、高く効果的な治療を提供し、結核化学療法を短くするか、または簡便にする、新規の抗結核薬剤である。
【００１８】
発明の概要
本発明は、感染疾患の治療のために効果的なエチレンジアミン化合物を含む方法および組成物を含む。本発明はまた、改善抗結核活性を持つ置換エチレンジアミンを含む、改善抗マイコバクテリア活性を持つ置換エチレンジアミンを含む方法および組成物も提供する。
【００１９】
本発明は、種々のアミン化合物から誘導可能な、置換エチレンジアミン類を熟考する。本発明において、前記置換エチレンジアミン類は、以下の構造を基本とする。
【００２０】
【化２】
0004563797.tif 000003
本明細書で記述する置換エチレンジアミン化合物は、以下のように合成され、活性に関して選別される。置換エチレンジアミンの化学ライブラリーを、スプリットおよびプール技術を用いて、固体ポリスチレン支持体上で調製する。この技術により、異なる組の置換エチレンジアミンの合成が可能になる。これらのジアミンを、結核菌の最近完了したゲノム配列に基づく、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）アッセイ、および最小阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイを含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ生物学的アッセイを用いて、抗−ＴＢ活性に関して選別する。
【００２１】
本明細書で記述した方法および組成物は、細菌およびウイルスに限定はしないがこれを含む、感染性有機体によって引き起こされる疾患に対して効果的である、置換エチレンジアミンを含む。
【００２２】
本発明の１つの実施態様は、マイコバクテリア疾患に対して効果的な、置換エチレンンジアミンを含む方法および組成物を提供する。
【００２３】
本発明の他の実施態様は、マイコバクテリア疾患に対して、５０μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンンジアミンを含む、方法および組成物を提供する。
【００２４】
本発明の他の実施態様は、マイコバクテリア疾患に対して、２５μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンンジアミンを含む。本発明のまた他の実施態様は、マイコバクテリア疾患に対して、１２．５μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンンジアミンを含む。本発明のまた他の実施態様は、マイコバクテリア疾患に対して、５μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンンジアミンを含む。本発明の他の実施態様において、方法および組成物には、１０％またはそれより大のＨＴＳ  Ｌｕｃ活性を持つ、置換エチレンンジアミンが含まれる。
【００２５】
本発明のまた他の実施態様において、方法および組成物には、１つのアミノ基が、一級アミンから誘導され、他のアミン基が、一級および二級アミンから誘導される、置換エチレンンジアミン類が含まれる。
【００２６】
本発明は、置換エチレンジアミンの種々の塩複合体および他の置換誘導体を熟考する。本発明はまた、置換エチレンンジアミンのエナンチオマーおよび他の立体異性体、およびその置換誘導体も熟考する。本発明はさらに、ヒトに限定はしないがこれを含む動物に対する治療を熟考する。
【００２７】
したがって、感染性物質によって引き起こされる疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することが、本発明の１つの目的である。
【００２８】
したがって、感染性疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することが、本発明の１つの目的である。
【００２９】
本発明の他の目的は、結核に限定はしないがこれを含む、マイコバクテリア疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３０】
本発明のまた他の目的は、置換エチレンンジアミン類を含む組成物を用いる、感染疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３１】
本発明の他の目的は、置換エチレンンジアミン類を含む組成物を用いる、マイコバクテリア疾患の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３２】
本発明のまた他の目的は、置換エチレンンジアミン類を含む組成物を用いる、結核の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３３】
本発明の他の目的は、ジアミンが、５０μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンジアミンを含む組成物を用いる、結核の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３４】
本発明の他の目的は、ジアミンが、２５μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンジアミンを含む組成物を用いる、結核の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３５】
本発明の他の目的は、ジアミンが、１２．５μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンジアミンを含む組成物を用いる、結核の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３６】
本発明のまた他の目的は、ジアミンが、５μＭまたはそれより低いＭＩＣを持つ、置換エチレンジアミンを含む組成物を用いる、結核の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３７】
本発明のまた他の目的は、ジアミンが、１０％またはそれより大のＨＴＳ／Ｌｕｃ活性を持つ、置換エチレンジアミンを含む組成物を用いる、結核の治療および予防のための方法および組成物を提供することである。
【００３８】
本発明のまた他の目的は、マイコバクテリア疾患の治療および予防のための、治療的処方のための組成物を提供することである。
【００３９】
本発明の他の目的は、結核菌複合体、Ｍ．アヴィウム−イントラセルラ、Ｍ．カンサリ、Ｍ．ホルチュイタム、Ｍ．ケロナエ、Ｍ．レプラエ、Ｍ．アフリカナン、Ｍ．ミクロチ（Ｍ．ｍｉｃｒｏｔｉ）、Ｍ．アビウム  パラツベルクロシス（Ｍ．ａｖｉｕｍ  ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）またはＭ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）を含むマイコバクテリア種によって引き起こされるマイコバクテリア疾患の治療および予防のための治療的処方に関する組成物を提供することである。
【００４０】
本発明のこれらの、そして他の目的、特徴および利点は、以下の開示実施態様の詳細な記述および付随する請求項の概説によって明らかになるであろう。
【００４１】
詳細な記述
本発明は、本明細書に含まれる特定の実施態様の以下の詳細な記述に関連して、より簡単に理解されるであろう。しかしながら、本発明が、その特定の実施態様の特定の詳細に関連して記述されているが、そのような詳細が、本発明の目的における制限として認識されるべきであるとは意図していない。本明細書で言及した参考文献の全ての文章は、２００２年５月１７日に申請された米国特許仮出願明細書番号第６０／３８１，２４４号、および２００２年５月１７日に申請された米国特許明細書第１０／１４７，５８７号を含む参考文献によって、そのすべてが本明細書に組み込まれている。
【００４２】
結核を引き起こすもののようなマイコバクテリア感染は、発生がいったん減少したと考えられても、リバウンドし、再び重篤な健康を脅かすものとなる。結核（ＴＢ）は、単一の病原物によって引き起こされる、多数のヒトの死亡の原因であり、毎年、結核に感染した２００〜３００万人が死亡している。ヒトが互いに密集している場所、または標準の住居で住んでいる場所で、マイコバクテリアによって感染したヒトが増加して見られる。免疫無防備状態の個体は、マイコバクテリアへの感染およびそのような感染からの死亡の大きなリスクを持つ。さらに、マイコバクテリアの薬剤耐性株の出現は、そのような感染個体の治療の問題を引き起こす。
【００４３】
マイコバクテリアに感染している多くのヒトは貧しく、または、不適切な医療設備の場所で住んでいる。様々な障害（経済的、教育レベルなど）の結果として、これらの個体の多くが、処方治療計画を完了することが不可能である。結局、これらのおよび他の個体による持続した非コンプライアンスにより、疾患が流行する。この非コンプライアンスは、マイコバクテリア菌の薬剤耐性株の出現によって、しばしば、いっそう大きくなる。種々のマイコバクテリア菌株を標的にする、効果的な組成物およびワクチンが、増加する多くの結核患者を制御下におくために必要である。
【００４４】
化学療法が、結核に対する標準の治療である。いくつかの現在の化学療法治療が、２ヶ月毎日投与、または４〜１２ヶ月隔週投与で、３〜４薬剤の併用使用を必要とする。表１に、標準の結核薬剤投与計画に関する、いくつかの治療スケジュールを列記している。
【００４５】
【表１】
0004563797.tif 000004
数十年にわたり現存する抗生物質の誤使用、および長期および複雑な治療投与計画をともなう乏しいコンプライアンスよって、マイコバクテリア結核の突然変異が導かれ、世界中で、結核の制御を脅かす、薬剤耐性の蔓延がつくりだされた。イソニアジド、リファンピン、ピラジンアミド、エタンブトールおよびストレプトマイシンのような、第一線の（フロントライン）薬剤を含む、大多数の現在処方されている薬剤は、１９５０年代から１９７０年代に開発された。したがって、結核化学療法のこの初期の開発は、その処理において、結核菌のゲノム配列の関わり、ここ１０年間の薬理学的薬剤発見の革新、および国家的薬剤試験および併用化学の使用を有していなかった。
【００４６】
したがって、薬剤耐性結核菌株の治療、および潜在的結核感染の治療には、非常に効果的な治療を提供する新規抗結核薬剤、および短縮、簡便化結核化学治法が必要である。さらに、疾患の人口統計が、コストが有意な因子であることを示しているので、これらの薬剤が、低コスト合成によって調製されることが望ましい。
【００４７】
本発明は、細菌を含むがこれに限定されない微生物によって引き起こされる疾患の治療および予防において効果的である、置換エチレンンジアミン化合物類のクラスを含む方法および組成物を提供する。とりわけ、本発明の方法および組成物は、微生物である結核菌の増殖を阻害することにおいて、効果的である。本発明の方法および組成物は、ヒトならびに他の動物におけるマイコバクテリウム感染の治療を意図している。たとえば、本発明は、Ｍ．ボビスに感染したウシの治療のためにとりわけ有用であり得る。
【００４８】
本明細書で使用するところの語句「結核」は、結核菌複合体を含むマイコバクテリウム種によって引き起こされる感染に通常関連した疾病状態を含む。語句「結核」はまた、結核菌以外のマイコバクテリウム（ＭＯＴＴ）によって引き起こされるマイコバクテリウム感染にも関連している。他のマイコバクテリウム種には、Ｍ．アヴィウム−イントラセルラ、Ｍ．カンサリ、Ｍ．ホルチュイタム、Ｍ．ケロナエ、Ｍ．レプラエ、Ｍ．アフリカナン、およびＭ．ミクロチ、Ｍ．アビウム  パラツベルクロシス、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．スクロフラセウム（Ｍ．ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ）、Ｍ．キセノピ（Ｍ．ｘｅｎｏｐｉ）、Ｍ．マリナム（Ｍ．ｍａｒｉｎｕｍ）、Ｍ．ウルセランス（Ｍ．ｕｌｃｅｒａｎｓ）が含まれる。
【００４９】
本発明はさらに、細菌、菌群、寄生、およびウイルス因子によって引き起こされるものを、限定はしないが含む、感染性疾患の治療に効果的な方法および組成物を含む。そのような感染性因子の例には、以下の、ブドウ球菌属、連鎖球菌科、ナイセリア科、コックシ、腸内細菌科、シュードモナス科、ビブリオ科、カンピロバクター、パスツレラ科、ボルデテラ属、フランシセラ属、ブルセラ属、レジオネラ科、バクテロイデス科、グラム陰性桿菌、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、プロピオン好酸菌属、グラム陽性桿菌、炭疸（ａｎｔｈｒａｘ）、アクチノミセス属、ノカルジア属、マイコバクテリウム属、トレポネーマ属、ボレリア属、レプトスピラ属、マイコプラスマ属、ウレアプラスマ属、リケッチア属、クラミジア属、全身性真菌（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｍｙｃｏｓｅｓ）、日和見性真菌（ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ  ｍｙｃｏｓｅｓ）、原生動物門、線虫（ｎｅｍａｔｏｄｅｓ）、吸虫綱（ｔｒｅｍａｔｏｄｅｓ）、多節条虫亜綱（ｃｅｓｔｏｄｅｓ）、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、パポバウイルス、肝炎ウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイスル、コロナウイルス、ピコルナウイルス、レオウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、ブンヤウイルス科、ラプドウイルス、ヒト免疫欠損ウイルスおよびレトロウイルスが含まれる。
【００５０】
本発明はさらに、結核、らい病、クローン病、獲得性免疫欠損症候群、ライム病、ネコ引っ掻き病、ロッキー山紅斑熱およびインフルエンザに限定はしないがこれを含む、感染性疾患の治療に有用な方法および組成物を提供する。
【００５１】
エタンブトール由来の第二世代抗生物質
本発明はとりわけ、市販されているアミノアルコールを先に装填した樹脂から開始した、改変エチレンンリンカーを含む、エタンブトールファミリーのジアミン化合物類の新規ライブラリーを指向する。
【００５２】
【化３】
0004563797.tif 000005
エタンブトール類似体の本発明者らのライブラリーの構造多様性を増強させる、および結核菌に対する構造的に多様なジアミン類の活性における、改変リンカーの影響を査定するための努力において、アミノ酸を、２つのアミン部分間の結合リンカー内へ挿入する合成スキームが改変された。アミノ酸の使用は、（Ｒ４のように）リンカー内への他の多様性要素の導入を可能にし、同様にキラリティーを導入可能なので、特に興味深い。
【００５３】
分子内にアミノアルコール部位をもつことによって、エタンブトールに緊密に関連するジアミン類のサブ−ライブラリを合成することは、本プロジェクトにとって、重要であるが、２つのアミン原子間の精巧なリンカーが存在することにより、また非常に異なる（代表的な例に関して、図１を参照のこと）。また、先にアミノアルコール類を装填した２−クロロトリチル樹脂は市販されており（図２）、提案された化学によく適用するという事実は非常に魅力的である。
【００５４】
ライブラリー内の化合物を、ウェルあたり１０化合物のプール中で、９６ウェルフォーマットにて、ｍｍｏｌのスケールで調製した（プレートの大部分）。表１（図３）は、合成したプレートに関するデータをまとめている。
【００５５】
アミノアルコールプレ装填樹脂を用いた固相合成．  ２０枚の９６ウェルプレートを調製した。本発明者らの第一１００，０００化合物ライブラリーを作製するため（スキーム１、図４）に使用したのと同様に、市販されているアミノアルコールプレ装填樹脂から開始する４および５段階合成経路を適用して、標的ジアミン類を作製した（それぞれスキーム２および３、図５および６）。合成において、いくつかの違いがある。（１）スキーム１の２つの第一段階は、スキーム２および３では放棄される。（２）スキーム１において、リンカーのＣ１官能基の求核性置換を介して、全体のシントンとして、第二アミンを分子内に導入し、一方で、スキーム２および３では、カルボニル化合物による存在するアミノ部位の改変を介して進む。
【００５６】
スキーム２．  購入した、アミノアルコールプレ装填２−クロロトリチル樹脂のアシル化を、室温にて、ＤＣＭ／ＤＭＦ混合液中のＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）と、ＥｔＮ（ｉｓｏ−Ｐｒ）２の存在下で、ＦＭＯＣ保護アミノ酸とのペプチド結合を介して実施した。反応を２回実施して、産物収率を改善した。このライブラリーを作製するために使用したアミノ酸のリストを、表２（図７）で示している。
【００５７】
脱保護（ＦＭＯＣ基の除去）を、室温でのピペリジンとの反応によって実施した。アミノ基の誘導体化を、７２〜９６時間、室温にて、ＮａＢＣＮＨ３の存在下、アルデヒド類、ケトン類およびカルボン酸類のような９６の種々のカルボニル化合物との還元アルキル化によって実施した。カルボニル化合物の選別は、最終ジアミン産物が、エタンブトール類似体の先のライブラリーから合成されたヒット化合物にて見られた置換基と同様または類似の型を持ち、ならびに、構造多様性を持つように、実施した（図８）。使用したカルボニル化合物の完全リストを、表３にて示している（図８）。
【００５８】
アミノエチレンンアミド類の相当するジアミン類への還元を、室温にて、可溶性還元剤６５＋ｗ％  Ｒｅｄ−Ａｌを用いて実施した。産物の樹脂からの開裂を、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸１０％溶液で実施して、結果として、ジアミン類のＴＦＡ塩を形成した。
【００５９】
ライブラリー産出のために、合成スキームのアクリル化段階を、チューブあたり、０．１〜０．１５ｇの樹脂のスケールで、Ｑｕｅｓｔ  ２１０  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて実施した。この反応に続き、形成した樹脂を、入念に洗浄し、乾燥させ、ついで１０樹脂のグループを一緒にプールした。再合成および活性物のデコンボルーション（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎ）を容易にするために、少量の各樹脂（〜０．０５ｇ）をプールする前に保管した。
【００６０】
ＦＭＯＣ基の脱保護、カルボニル要素の添加、還元および開裂を、ワットマン  ポリフィルトロニクス（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｐｏｌｙｆｉｌｔｒｏｎｉｃｓ）によるＣｏｍｂｉｃｌａｍｐｓ系、またはロビンス  サイエンティフィック（Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によるＦｌｅｘＣｈｅｍ系を用いて、９６−ウェル反応ブロック中で実施した。ＤＣＭ／ＴＨＦの２：１混合液中にプールした樹脂の懸濁液を、１つの反応プレート中で均一に希釈し、ウェルあたりおよそ１０ｍｇの樹脂を得た。９６の多様なカルボニル化合物を、ウェルあたり１つのカルボニル化合物、各個々の１０樹脂プールに、１枚の９６ウェルプレート鋳型中に並べて加え、予想されるプレートあたり９６０ジアミン類を産出した。還元を、同様の様式で実施し、開裂および保存プレートへの充填を実施し、続いて生物学的アッセイの前にＴＦＡを蒸発させた。
【００６１】
調製したジアミン類のライブラリーの特性評価を、プレートあたり２つの無作為に選択した列（１６試料）、総数の１７％を用いて、エレクトロスプレーイオン化質量分析によって実施した。化合物の好結果の産出が、計算した質量の分子イオンの出現に基づいた。合成のために使用したアミノ酸に依存して、予想したイオンのパーセンテージが観察され、したがって、予測した化合物が形成され、３１〜９６％の範囲であった（表１、図３）。ＭＳ解析に基づき、標的１５，３６０化合物の中から、７，５００ジアミン類が実際に形成された。アミノメチルシクロヘキシルカルボン酸、チエニルアラニン、またはフェニルアラニンのようなアミノ酸が、よい収率（８８〜９６％）で、所望の化合物を産出した。同時に、アルギニン、テトラヒドロイソキノリンカルボン酸およびチアゾリジンカルボン酸のようないくつかのアミノ酸は、相当する産物を生み出さなかった。
【００６２】
スキーム３．  改変リンカーでの、エタンブトール類似体の調製が成功したことで、本発明者らは、市販のアミノ−アルコールプレ装填樹脂を用いた、ジアミンの他のサブライブラリーの合成を試みることを勇気づけられた（スキーム３、図６）。この経路により、（スキーム２、図５）によって産出されたものと同様であるが、第一窒素元素に所望の置換基を持つジアミン化合物が産出された。
【００６３】
本発明者らは、市販されている１，４−アミノブタノールプレ装填樹脂から開始することで、この方法を例示した。本発明者らは、スクリーニングアッセイにて、もっとも良い予備結果を与えた、５つのアミノ酸Ｐｈｅ、Ａｍｃ、Ｃｈａ、ＴｒｐおよびＩｎｐ（表１）を用いて、５つのプレートを調製した（表１中のヒットの数を参照のこと）。非常に初期の段階は、室温にて、ＮａＢＣＮＨ３の存在下での、１０カルボニル化合物（シクロオクタノン、４−ベンジルオキシベンズアルデヒド、（Ｓ）−シトロネラル、ミルテナル、テトラヒドロ−４Ｈ−ピラン−４−オン、ノルカンファー、４−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ブタノン、ゼラニルラクトン、２−デカロン、２−アダマンタノン）による、還元アルキル化を介した、アミノ基の誘導体化であった。以下の段階は、スキーム２に関して本発明者らが先に報告したのと同様の様式で実施した。
【００６４】
結核菌に対するライブラリーのスクリーニングと活性混合物のデコンヴォルーション．  Ｒｖ０３４１ならびにＭＩＣｓへのルシフェラーゼのプロモーター融合を含む、組換え体マイコバクテリアを用いたハイスループットアッセイを使用して、このエタンブトール類似体の新規化合物ライブラリーを選別した、図９。
【００６５】
１９８個の化合物混合物が、抗ＴＢ活性を持つことが示され（ＨＴＳ  Ｌｕｃアッセイ中、＜１２．５μＭの活性、および／または＜１２．５μＭのＭＩＣ）、表１、デコンヴォルーションのために選択した。全ての１９８個の化合物混合物のデコンヴォルーションを、（一緒にプールする前の）保管所に保存した樹脂を用いて、９６ウェルフォーマットで、ジアミン化合物の不連続再合成、および同様の合成スキーム２および３によって実施した。同様のスクリーニング試験を、各デコンヴォルーションプレートに関して使用した。ほとんどのカルボニル化合物が、抗ＴＢ活性に関与する強力なシントンとしては同定されなかった（図５）。実施したデコンヴォルーションによって、新規の構造の１１８ヒットが、強力な抗ＴＢ化合物として明らかになり（表４）、これらの化合物のうち３８個が、両方のアッセイで活性であることが証明された。図１１は、ヒット化合物とそれらの構造のリストを提供している。
【００６６】
処方
本発明の置換エチレンンジアミン化合物を含む組成物を含む、治療剤を、公知の技術を用いて、薬理学的に許容可能な担体中でのような、生理学的に許容可能な処方中で調製可能である。たとえば、置換エチレンンジアミン化合物を、薬理学的に許容可能な賦形剤と混合して、治療組成物を形成する。
【００６７】
本発明の組成物は、固体、液体またはエアゾルの形態で投与しうる。固体組成物の例には、錠剤、クリーム、ソープおよび埋め込み可能用量ユニットが含まれる。錠剤は経口で投与しうる。治療クリームおよび抗マイコバクテリアソープは、局所で投与しうる。埋め込み可能用量ユニットは、局所、たとえば肺中に投与するか、または治療組成物の全身放出のために、たとえば皮下に埋め込みうる。液体組成物の例には、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内注射に適合する処方、および、局所、眼球内投与のための処方が含まれる。エアゾル処方の例には、肺への投与のための吸入処方が含まれる。
【００６８】
本明細書で使用するところの、持続放出マトリックスは、酵素的または酸／塩基加水分解によって、または溶解によって分解可能である、物質、通常はポリマーからできたマトリックスである。いったん体内に挿入されたならば、マトリックスは、酵素および体液によって作用する。持続放出マトリックスは、望ましくは、リポソーム、ポリラクチド、ポリグリコリド（グルコール酸のポリマー）、ポリアクチドコ−グリコリド（乳酸とグルコール酸のコポリマー）、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリペプチド、ヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、カルボン酸、脂肪酸、リン脂質、多糖類、核酸、ポリアミノ酸、フェニルアラニン、チロシン、イソロイシンのようなアミノ酸、ポリヌクレオチド、ポリビニルプロピレン、ポリビニルピロリドンおよびシリコーンを限定はしないが含む、生物適合性物質から選択される。好ましい生物分解性マトリックスは、ポリラクチド、ポリグリコリドまたはポリラクチド  コ−グリコリドいずれかのうちの１つのマトリックスである。
【００６９】
組成物の用量は、治療する状態、使用する特定の組成物、および患者の体重や状態のような他の臨床因子、および投与経路に依存しうる。好適な用量は、１００〜０．１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。より好ましい用量は、５０〜０．２ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。より好ましい用量は、２５〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。錠剤または他の溶媒形態には、置換エチレンンジアミン１〜１０００ｍｇが含まれうる。エタンブトールまたは他の抗結核薬剤と同様の用量範囲および投与スケジュールを使用しうる。
【００７０】
組成物は、マイコバクテリア疾患と組み合わせで起こる他の疾患の治療として、他の組成物および手順との組み合わせで投与しうる。たとえば、結核はしばしば、後天性免疫欠損症候群（ＡＩＤＳ）に関連した第二合併症として起こる。手術、放射線照射または化学療法のようなＡＩＤＳ治療を受けている患者は、本明細書で記述した、治療方法および組成物から利益を得うる。
【００７１】
以下の特定の実施例は、置換エチレンンジアミン化合物の特定の合成、および結核菌のコロニーの増殖のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ抑制への適用として、本発明を例示している。さらに、Ｒ．Ｌｅｅら、Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ  ２００３，５，１７２−１８７の教えが、そのすべてが参考文献にて本明細書に組み込まれている。化学的な手順での小さな変更を含む他の例が、当業者に明らかであり、本発明が、これらの特定の例示実施例に限定されないことが理解されるであろう。
【００７２】
実施例Ｉ
１．市販アミノアルコールプレ装填樹脂からのジアミンライブラリーの作製
一般手順：  全ての試薬は、シグマ−アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）から購入した。アミノアルコールプレ装填樹脂は、ノババイオケム（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ）から購入した。溶媒、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、エチレンジクロライド、メタノールおよびテトラヒドロフランは、アルドリッチより購入し、受領したまま使用した。固相合成を、Ｑｕｅｓｔ  ２１０  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（アルゴノート  テクノロジーズ（Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））および結合化学器具（ワットマン  ポリフィルトロニックス（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｐｏｌｙｆｉｌｔｒｏｎｉｃｓ）およびロビンス  サイエンティフィック（Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））上で実施した。溶媒の蒸発は、ＳｐｅｅｄＶａｃ  ＡＥＳ（サバント（Ｓａｖａｎｔ））を用いて実施した。マススペクトルデータを、オートサンプラーを備えたパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）／サイエックス（Ｓｃｉｅｘ）、ＡＰＩ−３００、ＴＱＭＳ上の、エレクトロスプレーイオン化技術によって得た。
【００７３】
スキーム２．工程の記述．
アシル化段階を、Ｑｕｅｓｔ  ２１０  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて、５ｍｌのチューブ内で実施した。ＦＭＯＣ基の除去、カルボニル化合物での還元アルキル化反応、Ｒｅｄ−Ａｌでの還元、固体支持体からの開裂を、９６深（２ｍｌ）ウェル、化学的耐性なプレート中で実施した。
【００７４】
段階１．アミノ酸での、アミノアルコールプレ装填樹脂のアシル化．
各チューブに、０．１５０ｇの相当する樹脂（０．３〜１．０ｍｍｏｌ／ｇ  範囲）を装填し、全ての樹脂を、１．５時間ＤＣＭ中で先に膨張させ、濾過した。Ｆｍｏｃ保護樹脂を使用する場合、樹脂を２．５ｍｌの、ＤＭＦ中ピペリジン２０％溶液とともに１０分間撹拌し、濾過し、２．５ｍｌのＤＭＦで洗浄した。この手順を、撹拌時間を２０分にして、繰り返した。全ての樹脂を濾過した後、ＤＭＦ（１×２．５ｍｌ）およびＤＣＭ（２×３ｍｌ）で洗浄した。各チューブに、１ｍｌのジクロロメタンをチャージした。アミノ酸、１ｍｌのＤＭＦ中０．３８ｍｍｏｌ（装填樹脂に対して２．５ｍｍｏｌ過剰）を、ＨＡＴＵ、０．３ｍｍｏｌ、０．５ｍｌのＤＭＦ中０．１１ｇ（装填樹脂に対して２ｍｏｌ過剰）と混合し、１５〜２０分間放置した。ついで１．５ｍｌの混合酸−ＨＡＴＵを各チューブに加えて、ついで、０．５ｍｌのジクロロメタン中、１．５ｍｍｏｌ、０．２６ｍｌのＥｔＮｉＰｒ２の溶液（装填樹脂に対して１０ｍｏｌ過剰）を加えた。反応を、４５℃にて８時間、室温にて６〜８時間実施した。反応が完了した後、樹脂を濾過し、ＤＭＦおよびジクロロメタンの１：１混合液（１×３ｍｌ）、ジクロロメタン（１×３ｍｌ）で洗浄し、アシル化を、同量の薬剤で繰り返した。最後に、樹脂を濾過し、ＤＭＦとジクロロメタンの１：１混合液（１×３ｍｌ）、メタノール（３×３ｍｌ）で洗浄し、３０分間（Ｑｕｅｓｔ上で）吸引し、バイアルに移し（バイアルあたり１つの樹脂）、１時間吸引下デシケータ内で乾燥させた。この段階の後、全ての樹脂を、ＭＳスペクトルを用いた、品質管理に供した。
【００７５】
段階２．アミノ基のアルキル化．
脱保護．  最初の３段階で調製した１０個の樹脂を、一緒にプールし、全ての必要なデコンヴォルーションのためにおよそ各０．０３ｇを個々のバイアルに残した。１００ｍｌのジクロロメタンとＴＨＦの２：１混合液中の樹脂混合物（０．０８〜１．０ｇ）の懸濁液を、２枚の９６ウェルフィルタープレート中に分配し、濾過多岐管（ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｍａｎｉｆｏｌｄ）を用いて濾過した。反応プレートをコンビクランプ内に移し、０．２ｍｌの、ＤＭＦ中のピペリジン２０％溶液を加えて、Ｆｍｏｃ保護基を除去し、１０分間放置した。１０分後、プレートを濾過し、０．２ｍｌのＤＭＦで洗浄し、脱保護を、ＤＭＦ中のピペリジン２０％溶液、０．２ｍｌで繰り返し、２０分間静置した。その後、プレートを濾過し、ＤＭＦ（ウェルあたり０．２ｍｌ）およびジクロロメタン（ウェルあたり２×０．５ｍｌ）で洗浄した。
【００７６】
カルボニル化合物との反応．  反応プレート上の列Ａの各ウェルに、０．１ｍｌのジクロロメタン、０．０８ｍｌのマスタープレートからの、ＤＭＦ中の適切な酸の〜１．０Ｍ溶液、０．０５ｍｌのＰｙＢｒｏｐのＤＭＦ溶液（０．０１２ｇ、０．０２５ｍｍｏｌ、装填樹脂に対して２．５ｍｏｌ過剰）および０．０５ｍｌのジクロロメタン中ＥｔＮｉＰｒ２（０．０１７ｍｌ、０．１０ｍｍｏｌ、装填樹脂に対して１０ｍｏｌ過剰）をチャージした。列Ｂ〜Ｈの各ウェルに、０．１ｍｌのＴＨＦ、０．１６０ｍｌのマスタープレートからのＤＭＦ中の適切なアルデヒドまたはケトンの〜１．０Ｍ溶液をチャージし、３０分間反応させた。３０分後に、ＴＨＦ中のＮａＢＣＮＨ３の１．０Ｍ溶液、０．０７５ｍｌ（０．０７５ｍｍｏｌ）を加えた。反応プレートを密封し、室温で７２時間保存した。最後に、樹脂を濾過し、ＴＨＦ、ＤＣＭ（１×１ｍｌ）、メタノール（２×１ｍｌ）で洗浄し、減圧下、デシケータ内で３時間乾燥させた。
【００７７】
段階３．Ｒｅｄ−Ａｌとの反応．
反応プレートを、コンビクランプ内においた。Ｒｅｄ−Ａｌ（トルエン中６５＋ｗ％）とＴＨＦの１：６混合液、ウェルあたり０．６ｍｌ（ウェルあたり０．２８ｍｍｏｌのＲｅｄ−Ａｌ）を加え、４時間反応させた。反応の完了後、樹脂を濾過し、ＴＨＦ（２×１ｍｌ）、メタノール（３×１ｍｌ）で洗浄し、濾過分岐管中で乾燥させた。
【００７８】
段階４．開裂．
この段階は、開裂分岐管を用いて実施した。（本分岐管内の、回収プレートの上部に配置した）反応プレートに、ＴＦＡ、ジクロロメタンおよびトリイソプロピルシランの１０：８８：２混合液、ウェルあたり０．５ｍｌをチャージした。１５分後、溶液を濾過し、回収プレートの適当なウェルに回収した。この手順を繰り返した。溶媒をシードバック上で蒸発させ、残余試料が試験のために準備された。
【００７９】
スキーム３．処理の記述．
４−アミノブタン−１オール樹脂の還元アルキル化段階、およびアシル化段階を、Ｑｕｅｓｔ  ２１０  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて、５ｍｌチューブ中で実施した。ＦＭＯＣ基の除去、カルボニル化合物との還元アルキル化反応、Ｒｅｄ−Ａｌでの還元、および固体支持体からの開裂を、９６−深（２ｍｌ）ウェル、化学的耐性プレート内で実施した。
【００８０】
段階１．４−アミノブタン−１−オール樹脂の還元アルキル化．
ジクロロメタンとＴＨＦの２：１混合液３０ｍｌ中の、１．０ｇ（１．０ｍｍｏｌまで）樹脂（０．３〜１．０ｍｍｏｌ／ｇの範囲）の懸濁液を、１０チューブ、チューブあたり３ｍｌ中に分配し、濾過し、ついで各チューブに、０．１０ｇの樹脂をチャージした。樹脂は、ＤＣＭ中で先に１．５時間膨張させ、濾過した。各チューブに、１．５ｍｌの１，２−ジクロロエタン、０．３ｍｍｏｌ（３ｍｏｌ過剰）の相当するアルデヒドまたはケトン（アルキル化剤）を装填し、３０分間反応させた。０．３ｍｍｏｌ（０．３ｍｌ）の、ＴＨＦ中ＮａＢＣＮＨ３の１Ｍ溶液を加えた後、反応を、４８時間室温にて実施した。反応が完了したら、すべてのチューブを濾過し、ＴＨＦ（２×３ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×３ｍｌ）で洗浄し、（〜３０分間、Ｑｕｅｓｔ上で）吸引乾燥させた。
【００８１】
段階２．アミノ酸でのアシル化．
全てのチューブを、ＤＣＭにて２回先洗浄した。各チューブに、１ｍｌのジクロロメタンをチャージした。アミノ酸、１ｍｌのＤＭＦ中０．２５ｍｍｏｌ（装填樹脂に対して２．５ｍｏｌ過剰）を、ＨＡＴＵ、０．５ｍｌのＤＭＦ中０．２ｍｍｏｌ、０．０７６ｇ（装填樹脂中２ｍｏｌ過剰）と混合し、１５〜２０分間そのままにした。ついで、１．５ｍｌの酸−ＨＡＴＵ混合物を各チューブに加え、ついで、０．５ｍｌのジクロロメタン中の１．０ｍｍｏｌ、０．１７ｍｌ（装填樹脂に対して１０ｍｏｌ過剰）のＥｔＮｉＰｒ２の溶液を加えた。反応を４５℃にて８時間、室温にて６〜８時間実施した。１６時間後に、樹脂を濾過し、ＤＭＦとジクロロメタンの１：１混合液（１×３ｍｌ）、ジクロロメタン（１×３ｍｌ）で洗浄し、アシル化を、同量の薬剤で繰り返した。最後に、樹脂を濾過し、ＤＭＦとジクロロメタンの１：１混合液（１×３ｍｌ）、メタノール（３×３ｍｌ）で洗浄し、３０分間（Ｑｕｅｓｔ上で）吸引乾燥させ、バイアル（バイアルあたり１樹脂）に移し、吸引下、デシケータ内で１時間乾燥させた。この段階の後、全ての樹脂を品質管理ＭＳスペクトルにかけた。
【００８２】
全ての続く反応段階−アミノ基のアルキル化（段階３）、Ｒｅｄ−Ａｌでの還元（段階４）および開裂（段階５）−は、本明細書のスキーム２に関して記述したのと同様に実施した。
【００８３】
実施例２
デコンヴォルーション
活性ウェルのデコンヴォルーションを、プールする前に、アシル化段階の最後に分離して保存した、保管ＦＭＯＣ−保護化□−アミノアセトアミド樹脂（１０樹脂、各０．０５〜０．１０ｇ）からの、分離した化合物の再合成によって実施した。各樹脂を、９６ウェルフィルタープレート中で分離したカラム（１または２または３など）に割り当て、Ｘ列（Ａ、Ｂ、Ｃなど）の間で配分した。Ｘは、もとのスクリーニングプレート中で発見されたヒットの数である。列中の各ウェルに、選択したカルボニル化合物（ヒット中に存在する）を、他の必要な試薬と共に加え、最初に選択したカルボニル化合物を、列「Ａ」の樹脂に加え、第二のカルボニル化合物を、列「Ｂ」の樹脂に加え、第三のカルボニル化合物を列「Ｃ」の樹脂に加えた、など。代表的な９６ウェルデコンヴォルーションプレートのレイアウトを表３、図１２に示している。
【００８４】
反応プレートを密封し、室温にて７２時間保持した。最後に、樹脂を濾過し、ＴＨＦ、ＤＣＭ（１×１ｍｌ）、メタノール（２×１ｍｌ）で洗浄し、吸引下、デシケータ内で２時間乾燥させた。還元および開裂を、合成プロトコールの段階５および６にしたがって実施した。開裂からの産物ウェルを、ＥＳＩ−ＭＳ（エレクトロスプレーイオン化質量分析）によって解析し、活性の同定を保証し、ＭＩＣアッセイで試験した。
【００８５】
Ｑｕｅｓｔ  ２１０  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いた、選択置換エチレンジアミンの固相合成
ジアミン化合物のライブラリーの合成のために上述した固相プロトコールを、選択した置換エチレンンジアミン化合物のスケールアップ合成に適用した。ここで、市販されているアミノアルコールプレ装填樹脂のアシル化から、最終産物の開裂までの全ての反応段階は、Ｑｕｅｓｔ器具のみを使用して実施し、これは２０の平行した反応を可能にする。全ての未精製産物の精製は、ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（イスコ社（Ｉｓｃｏ，Ｉｎｃ，）上のフラッシュクロマトグラフィーにより実施し、９０％より高い純度で、所望の産物を産出した。ここで、活性化合物の１つ、１−（２−｛［３−（４−クロロフェノキシ）ベンジル］アミノ｝−３−フェニルプロピル）ピペラジン−４−オールの合成を、例として以下で記述する。
【００８６】
１−（２−｛［３−（４−クロロフェノキシ）ベンジル］アミノ｝−３−フェニルプロピル）ピペラジン−４−オール、化合物５８８の調製．
【００８７】
【化４】
0004563797.tif 000006
【００８８】
【化５】
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【００８９】
活性化合物の代表的な合成．
ＦＭＯＣ保護基の除去．  市販されている樹脂（Ｎ−ＦＭＯＣ−ピペリジニル−４−オキシ）−（４−メトキシフェニル）メチルポリスチレン、範囲（リンカー）０．８８ｍｍｏｌ／ｇ（０．４ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を、Ｑｕｅｓｔ  ２１０  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒの１０ｍｌチューブの１つに配置した。ＤＭＦ（６ｍｌ）中のピペリジン（１．５ｍｌ）の溶液を加え、３０分間撹拌し、濾過し、ＤＭＦ（１×６ｍｌ）にて洗浄し、ピペリジンの添加を繰り返した。樹脂をＤＭＦ（１×８ｍｌ）およびＤＣＭ（２×８ｍｌ）で洗浄した。
【００９０】
ＦＭＯＣ保護化Ｌ−フェニルアラニンでのアシル化．  樹脂を、２０分間、５ｍｌのＤＣＭで先に洗浄した。１ｍｌのＤＭＦ中のＦＭＯＣ  Ｌ−フェニルアラニン（０．０３４１ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）（装填樹脂に対して２．５ｍｏｌ過剰）を、３ｍｌのＤＭＦ中のＨＡＴＵ（０．３３ｇ、０．８８ｍｍｏｌ）と混合し、チューブに加え、続いて、０．６ｍｌのＥｔＮｉＰｒ２の溶液を加えた。反応を室温で２０時間実施した。反応が完了した後、樹脂を濾過し、ＤＭＦとジクロロメタンの１：１混合液（１×６ｍｌ）、ジクロロメタン（１×６ｍｌ）で洗浄し、同量の試薬で、アシル化を繰り返した。最後に、樹脂を濾過し、ＤＭＦとジクロロメタンの１：１混合液（２×６ｍｌ）で洗浄した。
【００９１】
ＦＭＯＣ保護基の除去．  ＤＭＦ（６ｍｌ）中のピペリジンの溶液（１．５ｍｌ）を樹脂に加え、形成された懸濁液を３０分間撹拌し、濾過し、ＤＭＦ（１×６ｍｌ）で洗浄し、ピペリジンの添加を繰り返した。樹脂をＤＭＦ（１×８ｍｌ）およびメタノール（２×８ｍｌ）で洗浄し、Ａｒ下２０分間、吸引乾燥させた。
【００９２】
カルボニル化合物との反応．  樹脂を、３０分間、ＴＨＦで先に洗浄し、濾過し、６ｍｌのＴＨＦをチャージした。３−（４−クロロフェノキシ）−ベンズアルデヒド（０．２８０ｍｌ、１．００ｍｍｏｌ）を加え、ついで、３０分後にＴＨＦ中（１ｍｌ，１ｍｍｏｌ）のＮａＢＣＮＨ３の１．０Ｍ溶液を加えた。反応を、室温にて７２時間続けた。最後に、樹脂を濾過し、ＴＨＦ（１×６ｍｌ）およびＭｅＯＨ（２×６ｍｌ）で洗浄し、Ａｒ下で３０分間乾燥させた。
【００９３】
Ｒｅｄ−Ａｌとの還元．  チューブ内で得られた樹脂を、無水ＴＨＦ（２×６ｍｌ）で先に洗浄し、濾過した。チューブに、無水ＴＨＦ５ｍｌをチャージし、続いて市販のＲｅｄ−Ａｌを攪拌しながら、トルエン中６５＋ｗ％（１ｍｌ、３．２ｍｍｏｌ）として加えた。４時間後、樹脂を濾過し、ＴＨＦ（２×１ｍｌ）およびＭｅＯＨ（３×１ｍｌ）で洗浄し（ＭｅＯＨの添加は、注意して進めるべきである）、Ａｒ下で１０分間乾燥させた。
【００９４】
開裂．  合成のこの最後の段階のために、樹脂を含むチューブに、ＤＣＭ（８ｍｌ）およびＴＦＡ（１ｍｌ）をチャージし、形成された明赤色懸濁液を、３０分間撹拌した。樹脂を濾過し、濾液を回収チューブに回収した。この手順を繰り返した。ＤＣＭおよび過剰なＴＦＡをシードバック上で蒸発させた。未精製１−（２−｛［３−（４−クロロフェノキシ）ベンジル］アミノ｝−３−フェニルプロピル）ピペリジン−４−オール（トリフルオロ酢酸塩の形態）を、以下の条件、プレ装填シリカゲルカラム、１２ｇ、流速１５ｍｌ／分、２５分間ラン、ＤＣＭで開始し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（６００／４００／１０）で終了する勾配、を用いてＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（イスコ）上のＦｌａｓｈ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙによって精製した。０．１２８ｍｇの１−（２−｛［３−（４−クロロフェノキシ）ベンジル］アミノ｝−３−フェニルプロピル）ピペリジン−４−オール  ジトリフルオロアセテート５３％収率、少なくとも９５％純度を得た。マススペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ（ＭＨ）＋４５１．２、４５３．２。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】図１は、アミノアルコールプレ装填樹脂から合成した、ジアミン産物の代表的な例を提供している。
【図２】図２は、市販されている、アミノアルコールプレ装填樹脂を提供している。
【図３】図３は、標的２１，１２０個のエタンブトール類似体の調製したライブラリーを示している、表１を提供している。
【図４】図４は、エタンブトール類似体のもとの１００，０００化合物ライブラリーの合成を概略的に示している、スキーム１を提供している。
【図５】図５は、リンカーとしてアミノアルコールプレ装填樹脂とアミノ酸を使用することを概略的に示している、スキーム２を提供している。
【図６】図６は、アミノアルコールプレ装填樹脂で実施した、リンカーのさらなる改変を略図的に示している、スキーム３を提供している。
【図７】図７は、ライブラリー調製にて使用したアミノ酸を列記している、表２を提供している。
【図８】図８は、合成における試薬として使用した、代表的なカルボニル化合物を提供している。
【図９】図９は、ＭＩＣおよびＬｕｘデータの代表的な例を提供している。
【図１０】図１０は、活性分子中でのアルキル化モノマーの発生を示している。
【図１１】図１１は、ヒット化合物およびその構造のリストを提供している。
【図１２】図１２は、デコンヴォルーションのためのレイアウトを示している表３を提供している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１１（ａ）】
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【図１１（ｂ）】
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【図１１（ｃ）】
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【図１１（ｄ）】
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【図１１（ｅ）】
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【図１１（ｆ）】
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【図１１（ｇ）】
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【図１１（ｈ）】
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【図１１（ｉ）】
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【図１１（ｊ）】
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【図１１（ｋ）】
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【図１１（ｌ）】
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【図１１（ｍ）】
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【図１１（ｎ）】
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【図１１（ｏ）】
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【図１２】
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