(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
犬のパルボウイルスに対するＩｇＭモノクローナル抗体を使用する免疫測定法からなるパルボウイルス抗原の検出法。
【請求項２】
犬または猫のパルボウイルス抗原の検出に用いられる請求項１に記載の検出法。
【請求項３】
犬のパルボウイルスに対するに対する第一の抗体と第二の抗体とを用いたサンドイッチ式免疫測定法であって、前記第一の抗体および前記第二の抗体の少なくとも何れか一方がＩｇＭモノクローナル抗体であることを特徴とするパルボウイルス抗原の検出法。
【請求項４】
前記第一の抗体および第二の抗体の何れか一方を担体に固定しておく請求項３に記載の検出法。
【請求項５】
犬または猫のパルボウイルス抗原の検出に用いられる請求項３または４に記載の検出法。
【請求項６】
犬のパルボウイルスに対する第一の抗体を予め所定位置に固定せしめて形成された捕捉部位を備える膜担体を用意し、犬のパルボウイルスに対する第二の抗体と所定量の被験試料との混合液を、前記捕捉部位に向けて前記膜担体にてクロマト展開せしめ、前記被験試料中に含まれるパルボウイルスと前記第二の抗体との複合体を前記捕捉部位に捕捉させることを特徴とするイムノクロマトグラフィー測定法において、前記第一の抗体および前記第二の抗体の少なくとも何れか一方がＩｇＭモノクローナル抗体であることを特徴とするイムノクロマトグラフィー測定法。
【請求項７】
前記第二の抗体は金属コロイドまたはラテックスで標識されている請求項６に記載の測定法。
【請求項８】
前記膜担体がニトロセルロース膜である請求項６または７に記載の測定法。
【請求項９】
犬または猫のパルボウイルス抗原の検出に用いられる請求項６乃至８の何れか１項に記載の測定法。
【請求項１０】
犬のパルボウイルスに対する第一の抗体と第二の抗体と膜担体とを少なくとも備え、前記第一の抗体は前記膜担体の所定位置に予め固定されて捕捉部位を形成し、前記第二の抗体は適当な標識物質で標識され、かつ、前記捕捉部位から離隔した位置で前記膜担体にてクロマト展開可能なように配置されてなるパルボウイルス検出用イムノクロマト法テストストリップであって、前記第一の抗体および前記第二の抗体の少なくとも何れか一方が、ＩｇＭモノクローナル抗体であることを特徴とするパルボウイルス検出用イムノクロマト法テストストリップ。
【請求項１１】
前記第二の抗体は金属コロイドまたはラテックスで標識されている請求項１０に記載のイムノクロマト法テストストリップ。
【請求項１２】
前記膜担体がニトロセルロース膜である請求項１０または１１に記載のイムノクロマト法テストストリップ。
【請求項１３】
犬または猫のパルボウイルス抗原の検出に用いられる請求項１０乃至１２の何れか１項に記載の検出法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、犬や猫などの動物の感染症の原因ウイルスであるパルボウイルスの抗原を高感度かつ特異的に検出するための免疫検出法、詳しくは、サンドイッチ式免疫測定法、特に、イムノクロマトグラフィー測定法およびイムノクロマト法テストストリップに関するものであり、パルボウイルスによる感染を迅速かつ簡便に診断するために有用な検出法に関する。
【背景技術】
【０００２】
1970年代末、激しい嘔吐や下痢などの脱水症状を伴う原因不明の感染症が世界各地の犬を襲った。これが、犬パルボウイルス（以下、「CPV」（Canine Parvovirusの略）と記載することがある）による感染症の蔓延の始まりだった。
【０００３】
その後、原因ウイルスが特定され、ワクチン接種の普及とともに犬パルボウイルス感染症の症例も減少した。しかし、ワクチン未接種で、体力や免疫力の弱い子犬や老犬などは、犬パルボウイルスに感染して死亡することも少なくない。
【０００４】
また、猫のパルボウイルス感染症（猫汎白血球減少症）も知られており、この感染症は、猫汎白血球減少症ウイルス（以下、「FPLV」（Feline panleukopenia virusの略）と記載することがある）によるものであることが特定されている。この感染症は、臨床症状から「猫伝染性腸炎」あるいは「猫ジステンバー」などと呼称されたこともあるが、いずれも本病を意味している。症状は犬パルボウイルスと同様に妊娠猫が感染すると死産、生後2〜3ヶ月齢以上の猫の感染では、骨髄や腸管粘膜などの細胞分裂の盛んな臓器が標的となり白血球減少や下痢が起き、発熱、食欲、元気喪失、脱水、嘔吐、血便などが特徴的である。
【０００５】
犬パルボウイルスと猫パルボウイルスは抗原的に近縁性があり、最近、CPV-2のうち、2aまたは2bの抗原型のウイルスが猫に感染していることが指摘されている。
【０００６】
犬パルボウイルス感染症の診断は、従来、動物病院で行われる犬パルボウイルス抗原検査または獣医のもとで犬の血液を採取し専門の研究所に検査を委託することで行われていたが、いずれも検査に時間を要し、高額な治療費も発生していた。
【０００７】
近年、イムノクロマト法を採用した犬パルボウイルス検査キットが市販されるようになったが、ポリクローナル抗体やＩｇGモノクローナル抗体を使用しているものに限られており、検出感度について更なる改善が望まれている。
【０００８】
【非特許文献１】Takeshi Sanekata, Tatsuya Sugimoto, Shinobu Ueda,Misao, Tsubokura, Yoshihisa Yamane及びMegumi Senda 、「Latex agglutination test for canine parvovirus」、Australian Veterinary Journal, Vol. 73, No. 6, June 1996.
【非特許文献２】Rimmelzwaan GF, Groen J, Juntti N, Teppema JS, UytdeHaag FG, Osterhaus AD.、「Purification of infectious canine parvovirus from cell culture by affinity chromatography with monoclonal antibodies」、J. Virol. Methods, 1987, Mar; 15(4): 313-22.
【非特許文献３】A Paul Reed, Elaine V. Jones及びTimothy J. Miller、「Nucleotide Sequence and Genome Organization of Canine Parvovirus」、Journal of Virology, Jan. 1988, 266-276.
【特許文献１】特開2004-219346号公報
【特許文献２】特開平11-311625号公報
【特許文献３】特開平8-136545号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
近年のペットブームの潮流により多くの人が動物を飼うようになったが、飼い主にとって高額な治療費は負担となり、ウイルス感染症は発見が遅れると広い範囲にわたって急速に蔓延する可能性があるため、かかるウイルス感染症の早期発見や予防措置を講じるために迅速かつ簡便で精度の高い検出法が望まれている。
【００１０】
本発明の目的は、犬や猫などの動物に感染するパルボウイルスを高感度かつ特異的に、しかも迅速かつ簡便に検出できる方法および測定器具を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者等は、犬のパルボウイルスに対するＩｇＭモノクローナル抗体を取得することに成功し、これを免疫測定法、特にサンドイッチ式免疫測定法、とりわけイムノクロマトグラフィー測定法で使用することにより、パルボウイルスを高感度かつ特異的に、しかも迅速かつ簡便に検出できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち、本発明の一局面によれば、犬のパルボウイルスに対するＩｇＭモノクローナル抗体を使用する免疫測定法からなるパルボウイルス抗原の検出法が提供される。
【００１３】
この検出法における免疫測定法としては、特に限定されるものではないが、サンドイッチ式免疫測定法、とりわけＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）法、イムノクロマトグラフィー測定法などが好ましい。また、検出されるパルボウイルス抗原としては、パルボウイルス自体、パルボウイルスの表面蛋白やこれらの断片が挙げられる。
【００１４】
したがって、本発明の他の局面によれば、犬のパルボウイルスに対するに対する第一の抗体と第二の抗体とを用いたサンドイッチ式免疫測定法であって、前記第一の抗体および前記第二の抗体の少なくとも何れか一方がＩｇＭモノクローナル抗体であることを特徴とするパルボウイルス抗原の検出法が提供される。
【００１５】
また、本発明の好ましい実施形態によれば、犬のパルボウイルスに対する第一の抗体を予め所定位置に固定せしめて形成された捕捉部位を備える膜担体を用意し、犬のパルボウイルスに対する第二の抗体と所定量の被験試料との混合液を、前記捕捉部位に向けて前記膜担体にてクロマト展開せしめ、前記被験試料中に含まれるパルボウイルスと前記第二の抗体との複合体を前記捕捉部位に捕捉させることを特徴とするイムノクロマトグラフィー測定法において、前記第一の抗体および前記第二の抗体の少なくとも何れか一方がＩｇＭモノクローナル抗体であることを特徴とするイムノクロマトグラフィー測定法が提供される。
【００１６】
また、本発明の好ましい実施形態によれば、犬のパルボウイルスに対する第一の抗体と第二の抗体と膜担体とを少なくとも備え、前記第一の抗体は前記膜担体の所定位置に予め固定されて捕捉部位を形成し、前記第二の抗体は適当な標識物質で標識され、かつ、前記捕捉部位から離隔した位置で前記膜担体にてクロマト展開可能なように配置されてなるパルボウイルス検出用イムノクロマト法テストストリップであって、前記第一の抗体および前記第二の抗体の少なくとも何れか一方が、ＩｇＭモノクローナル抗体であることを特徴とするパルボウイルス検出用イムノクロマト法テストストリップが提供される。
【００１７】
イムノクロマトグラフィー測定法などのサンドイッチ式免疫測定法の場合、そこで使用する第一の抗体及び第二の抗体は、少なくとも一方が犬のパルボウイルスに対するＩｇＭモノクローナル抗体であればよく、他方の抗体はポリクローナル抗体やＩｇＧ等の他のアイソタイプのモノクローナル抗体であってもよいが、反応特異性の観点から、一般に、両方の抗体をＩｇＭモノクローナル抗体とすることが特に好ましい。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、犬のパルボウイルス抗原を検出する免疫測定法において、ＩｇＭモノクローナル抗体を使用することとしたため、従来のポリクローナル抗体やＩｇＧモノクローナル抗体を用いた免疫測定法よりも高感度かつ特異的にウイルス抗原を検出することができる。ＩｇＭモノクローナル抗体は１０個の抗原結合部位を持っており、ＩｇＧモノクローナル抗体などよりも多くの抗原と結合することができるので、感度が向上し、また、非特異反応も防止できると考えられる。また、犬パルボウイルスと猫パルボウイルスは何れもParvoviridae、Parvovirinae科、parvovirus属に属し、抗原的に近縁性があり、実際に、犬パルボウイルスが猫にも感染することが報告されている。したがって、本発明は、犬パルボウイルス抗原のほかに、猫やその他の動物に感染するパルボウイルス抗原の検出にも使用できる。
また、本発明のイムノクロマトグラフィー測定法およびイムノクロマト法テストストリップによれば、特殊な技術、装置及び施設を必要とせず、糞便等の検体採取現場において簡便かつ迅速にパルボウイルス抗原を高精度で検出し、当該ウイルスによる感染症を診断することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明において、抗体の製造および該抗体を使用する検出法および測定法における各ステップは、それぞれ、それ自体、公知の免疫学的手法に準拠して行なわれる。
本発明において、ＩｇＭモノクローナル抗体は、例えば、抽出精製した犬パルボウイルスを抗原としてマウスのような動物を免疫したのち、この免疫された動物の脾臓細胞とミエローマ細胞とを細胞融合して得られた融合細胞をＨＡＴ含有培地でセレクトした後に増殖せしめる。増殖せしめた株を前記で使用した犬パルボウイルスを使用して、たとえば、酵素標識免疫法などにより抗犬パルボウイルス抗体産生株を選別する。ＩｇＭ抗体を産生する株は、免疫後の初期に得られる力価の高い脾臓細胞を採取して細胞融合することにより容易に得ることができる。
【００２０】
被験試料中のパルボウイルスを検出するための本発明のイムノクロマトグラフィー測定法は、公知のイムノクロマト法テストストリップの構成に準拠して容易に実施できる。
一般に、かかるイムノクロマト法テストストリップは、抗原の第一の抗原決定基にて抗体抗原反応可能な第一の抗体と、前記抗原の第二の抗原決定基にて抗体抗原反応可能で且つ標識された第二の抗体と、膜担体とを少なくとも備え、前記第一の抗体は前記膜担体の所定位置に予め固定されて捕捉部位を形成し、前記第二の抗体は前記捕捉部位から離隔した位置で前記膜担体にてクロマト展開可能なように配置されて構成される。第一の抗体および第二の抗体は、少なくとも何れか一方がＩｇＭモノクローナル抗体であればよい。通常は、第一の抗体及び第二の抗体は「ヘテロ」の組み合わせで用いられ、すなわち、抗原上の位置および構造の何れもが異なる各抗原決定基をそれぞれ認識する第一の抗体及び第二の抗体が組み合わせて用いられる。しかしながら、第一の抗原決定基と第二の抗原決定基は抗原上の位置が異なっていれば構造的に同一であってもよく、その場合、第一の抗体および第二の抗体は上記「ホモ」の組み合わせのモノクローナル抗体であってよく、すなわち、第一の抗体および第二の抗体の両方に同一のＩｇＭモノクローナル抗体が使用できる。
【００２１】
イムノクロマト法テストストリップの具体例としては、例えば、図１に示されるテストストリップが挙げられる。図１において、数字１は粘着シート、２は含浸部材、３は膜担体、３１は捕捉部位、４は吸収用部材、５は試料添加用部材を示している。
図示の例では、膜担体３は、幅５ｍｍ、長さ３６ｍｍの細長い帯状のニトロセルロース製メンブレンフィルターで作成されている。
該膜担体３には、そのクロマト展開始点側の末端から７．５ｍｍの位置に、第一の抗体が固定され、検体の捕捉部位３１が形成される。
図示の例では、膜担体３は、ニトロセルロース製メンブレンフィルターを用いているが、被験試料に含まれる検体をクロマト展開可能で、かつ、上記捕捉部位３１を形成する抗体を固定可能なものであれば、いかなるものであってもよく、他のセルロース類膜、ナイロン膜、ガラス繊維膜なども使用できる。
【００２２】
含浸部材２は、前記第一の抗体が結合する第一の抗原決定基と異なる部位に位置する第二の抗原決定基にて前記抗原と抗体抗原反応する第二の抗体を含浸せしめた部材からなる。当該第二の抗体は、適当な標識物質で予め標識される。
図示の例では、含浸部材２として、５ｍｍ×１５ｍｍの帯状のガラス繊維不織布を用いているが、これに限定されるものではなく、例えば、セルロース類布（濾紙、ニトロセルロース膜等）、ポリエチレン、ポリプロピレン等の多孔質プラスチック布類なども使用できる。
【００２３】
第二の抗体の標識物質としては、使用可能なものであればいかなる物質であってもよく、呈色標識物質、酵素標識物質、放射線標識物質などが挙げられる。
このうち、捕捉部位３１での色の変化を肉眼で観察することにより迅速かつ簡便に判定できる点から、呈色標識物質を用いることが好ましい。
呈色標識物質としては、金コロイド、白金コロイド等の金属コロイドの他、赤色および青色などのそれぞれの顔料で着色されたポリスチレンラテックスなどの合成ラテックスや、天然ゴムラテックスなどのラテックスが挙げられ、このうち、金コロイドなどの金属コロイドが特に好ましい。
当該含浸部材２は、標識された第二の抗体の懸濁液を前記ガラス繊維不織布等の部材に含浸せしめ、これを乾燥させることなどによって作製できる。
【００２４】
図１に示されるように、膜担体３を粘着シート１の中程に貼着し、該膜担体３のクロマト展開の開始点側（すなわち図１の左側、以下「上流側」と記す、また、その逆の側、すなわち図１の右側を、以下「下流側」と記す）の末端の上に、含浸部材２の下流側末端を重ね合わせて連接するとともに、この含浸部材２の上流側部分を粘着シート１に貼着して本発明のイムノクロマト法テストストリップを作成できる。
さらに、必要に応じて、含浸部材２の上面に試料添加用部材５の下流側部分を載置するとともに、該試料添加用部材５の上流側部分を粘着シート１に貼着してもよく、また、膜担体３の下流側部分の上面に吸収用部材４の上流側部分を載置するとともに、該吸収用部材４の下流側部分を粘着シート１に貼着せしめることもできる。
【００２５】
試料添加用部材５としては、例えば、多孔質ポリエチレンおよび多孔質ポリプロピレンなどのような多孔質合成樹脂のシートまたはフィルム、ならびに、濾紙および綿布などのようなセルロース製の紙または織布もしくは不織布を用いることができる。
吸収用部材４は、液体をすみやかに吸収、保持できる材質のものであればよく、綿布、濾紙、およびポリエチレン、ポリプロピレン等からなる多孔質プラスチック不織布等を挙げることができるが、特に濾紙が最適である。
【００２６】
さらに、市販品の場合、図１のイムノクロマト法テストストリップは、試料添加用部材５と捕捉部位３１の上方にそれぞれ被験試料注入部と判定部が開口された適当なプラスチック製ケース内に収容されて提供される。
【００２７】
かくして、生体試料などからなる被験試料を必要に応じて適当な展開溶媒と混合してクロマト展開可能な混合液を得た後、当該混合液を図１に示されるイムノクロマト法テストストリップの試料添加用部材５上に注入すると、該混合液は、該試料添加用部材５を通過して含浸部材２において、標識された第二の抗体と混合する。
その際、該混合液中に検体が存在すれば、抗原抗体反応により検体と第二の抗体との複合体が形成される。
この複合体は、膜担体３中をクロマト展開されて捕捉部位３１に到達し、そこに固定された第一の抗体と抗原抗体反応して捕捉される。
このとき、標識物質として金コロイドなどの呈色標識物質が使用されていれば、当該呈色標識物質の集積により捕捉部位３１が発色するので、直ちに、検体を定性的または定量的に測定することができる。
【００２８】
被験試料としては、特に制限はないが、例えば、糞便、吐瀉物、血液（全血でも、血清でも、血漿でもよい）、唾液、尿、臓器乳剤等が挙げられる。被験試料は、展開溶媒などの適当な希釈液で希釈して膜担体に注入してもよい。
なお、全血を被験試料として用いるときで、特に標識抗体の標識物質として金コロイドなどの呈色標識物質が用いられる場合、前記試料添加用部材に血球捕捉膜部材を配置しておくことが好ましい。血球捕捉膜部材は、前記含浸部材と前記試料添加用部材との間に積層することが好ましい。これにより、赤血球が膜担体に展開されるのが阻止されるので、膜担体の捕捉部位における呈色標識の集積の確認が容易になる。血球捕捉膜部材としては、カルボキシメチルセルロース膜が用いられ、具体的には、アドバンテック東洋株式会社から販売されているイオン交換濾紙ＣＭ（商品名）や、ワットマンジャパン株式会社から販売されているイオン交換セルロースペーパーなどを用いることができる。
【実施例】
【００２９】
下記の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
【００３０】
実施例１（抗CPVモノクローナルIgM抗体の調製）
免疫原であるCPVは以下のように調製した。CPV分離株感染CPFK細胞の培養上清から遠心分離により粗組成物CPVを得て、さらにこれからメトリザマイド密度勾配遠心法により精製CPV分画を調製した。
マウス一匹あたり調製した100μgの精製CPVをFreundの完全アジュバンドとともに皮下に追加接種し、更に3週間間隔で2回、Freundの不完全アジュバンドとともに追加接種した。その後、３週間以上の間隔をあけてマウス腹腔内に精製CPVを接種し、３日後に脾臓を摘出した。その脾細胞をマウスミエローマ細胞と融合させ、スクリーニング及びクローニングにより抗CPV抗体産生ハイブリドーマを得た。得られたハイブリドーマ上清をImmunoPure（商品名） Monoclonal Antibody Isotyping Kit 1（ピアス社製）に供した。その結果、ハイブリドーマが産生する抗CPV抗体のアイソタイプはIgMと決定された。この抗CPV抗体産生ハイブリドーマをプリシタン（シグマ社製）投与後、10日目のBALB／ｃマウスの腹腔内に移入し、約10日後に腹水を採取した。得られた免疫腹水2mlを4℃、10000rpmで15分間遠心分離した。得られた上清を0.45μlのフィルターを用いて濾過した。その後Sephacryl S-200カラムを使用しゲル濾過に供し、1mlずつ分取した。オクテロニー反応により反応の見られた画分を集め、抗CPVモノクローナルIgM抗体を得た。
【００３１】
実施例２（抗CPVモノクローナルIgM抗体を用いたイムノクロマトキット）
（１）抗CPVモノクローナルIgM抗体の調製
実施例１で得られた抗CPVモノクローナルIgM抗体を用いた。
【００３２】
（２）金コロイド溶液の調製
加熱によって沸騰させた超純水99mlに、1%（v/w）塩化金酸水溶液1mlを加え、さらに、その１分後に1%（v/w）クエン酸ナトリウム水溶液1.5mlを加えて加熱し5分間沸騰させた後、室温に放置して冷却した。次いで、この溶液に200mM炭酸カリウム水溶液を加えてpH9.0に調製し、これに超純水を加えて全量を100mlとして金コロイド溶液を得た。
【００３３】
（３）金コロイド標識抗CPVモノクローナルIgM抗体溶液の調製
金コロイド標識する抗CPVモノクローナルIgM抗体として、上記（１）で得られた抗体を用いた。
上記抗体の蛋白換算重量1μg（以下、抗体の蛋白換算重量を示すとき、単に、その精製蛋白質の重量分析による重量数値で示す）と上記（２）の金コロイド溶液1mlとを混合し、室温で2分間静置してこの抗体のことごとくを金コロイド粒子表面に結合させた後、金コロイド溶液における最終濃度が1%となるように10%ウシ血清アルブミン（以下、「BSA」と記す）水溶液を加え、この金コロイド粒子の残余の表面をことごとくこのBSAでブロックして、金コロイド標識抗CPVモノクローナルIgM抗体（以下、「金コロイド標識抗体」と記す）溶液を調製した。この溶液を遠心分離（5600×G、30分間）して金コロイド標識抗体を沈殿せしめ、上清液を除いて金コロイド標識抗体を得た。この金コロイド標識抗体を10%サッカロース・1%BSA・0.5%トリトン（Triton）-X100を含有する50mMトリス塩酸緩衝液（pH7.4）に懸濁して金コロイド標識抗体溶液を得た。
【００３４】
（４）パルボウイルス抗原測定用イムノクロマト法テストストリップの作成
図１に示されるイムノクロマト法テストストリップを下記の手順で作成した。
（４−１）パルボウイルス抗原と金コロイド標識抗体との複合体の捕捉部位
幅5mm、長さ36mmの細長い帯状のニトロセルロース膜をクロマトグラフ媒体のクロマト展開用膜担体３として用意した。
抗CPVモノクローナルIgM抗体1.0mg/mlが含有されてなる溶液0.5μlを、このクロマト展開用膜担体３におけるクロマト展開開始点側の末端から7.5mmの位置にライン状に塗布して、これを室温で乾燥し、パルボウイルス抗原と金コロイド標識抗体との複合体の捕捉部位３１とした。この抗CPVモノクローナルIgM抗体として、上記（１）で得られた抗体を用いた。
【００３５】
（４−２）金コロイド標識抗体含浸部材
5mm×15mmの帯状のガラス繊維不織布に、金コロイド標識抗体溶液37.5μlを含浸せしめ、これを室温で乾燥させて金コロイド標識抗体含浸部材２とした。
（４−３）イムノクロマト法テストストリップの作成
上記クロマト展開用膜担体３、上記標識抗体含浸部材２の他に、試料添加用部材５として綿布と、吸収用部材４として濾紙を用意した。そして、これらの部材を用いて、図１と同様のクロマト法テストストリップを作成した。
【００３６】
（５）試験
イヌパルボウイルス培養液を検体希釈液で希釈して、各濃度（１６、３２、６４、１２８、２５６、５１２、１０２４倍希釈）に調整し、被験試料とした。そして、被験試料100μlを上記（４）で得られたテストストリップの試料添加用部材５にマイクロピペットで滴下してクロマト展開し、室温で15分放置後、上記捕捉部位３１で捕捉されたパルボウイルスと金コロイド標識抗体との複合体の捕捉量を肉眼で観察した。捕捉量は、その量に比例して増減する赤紫色の呈色度合いを肉眼で、６段階に区分して判定した。その結果を表１に示した。
【００３７】
比較例１
市販の犬パルボウイルス検査用試薬であるチェックマンCPV（商品名；販売元アドテック株式会社）を用いて、実施例２の（５）と同様の試験を行った。なお、この市販検査用試薬は、図１の捕捉部位に相当する箇所に固定される抗体としてポリクローナル抗体を用いたものである。その結果を表１に示した。
【００３８】
【表１】
0004554472.tif 000002
【００３９】
表１中、−は着色なしを示し、±、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋＋の順で着色の度合いが強いことを意味し、上向きの矢印は強めを示し、下向きの矢印は弱めを示し、〜は双方の中間を意味する。
【００４０】
表１から、本発明によれば、市販の検査用試薬よりも１０倍以上の感度が得られることがわかる。
【００４１】
実施例３（抗CPVモノクローナルIgM抗体を用いたイムノクロマトキットの反応特異性）
正常な犬の糞便検体10検体を反応に供した。糞便80mgを採取し緩衝液3.2mlに溶解させ（最終糞便濃度：2.5%）被験試料を調製した。本被験試料を試料添加用部材に3滴滴下した以外、実施例２の（５）と同様の試験を行った。その結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
0004554472.tif 000003
【００４３】
表２に示されるように、１０検体の全てにおいて陰性が確認され、非特異反応は確認されなかった。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明は、犬のパルボウイルスに対するＩｇＭモノクローナル抗体を用いた免疫測定法、とりわけ、サンドイッチ式免疫測定法、特に、イムノクロマトグラフィー測定法およびイムノクロマト法テストストリップを提供するものであり、犬や猫などの動物のパルボウイルス抗原を簡単な方法で迅速にかつ高精度で特異的に検出できるので、当該ウイルスに起因する疾病を迅速かつ簡便に診断するために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】ａはイムノクロマト法テストストリップの平面図、ｂはａで示されたイムノクロマト法テストストリップの縦断面図。
【符号の説明】
【００４６】
１  粘着シート
２  含浸部材
３  膜担体
３１  捕捉部位
４  吸収用部材
５  試料添加用部材
【図１】
0004554472.tif 000004