(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の構造式で表される化合物またはその製薬学的に許容されうる塩。
【化１】
0004570777.tif 000016
上式中、
（ａ）Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は（ｉ）水素、（ii）Ｃ1-5アルキル、（iii）Ｃ1-5アルキルアミノ、（iv）ジＣ1-5アルキルアミノ、（ｖ）１個またはそれ以上の水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルで置換されたフェニル並びに（vi）１個またはそれ以上の水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルで置換されたフェニルＣ1-5アルキルよりなる群から独立して選択され；
（ｂ）環１及び２は、水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルよりなる群から選択される１個またはそれ以上の置換基で各々独立して置換され；
（ｃ）Ａ及びＢは独立して窒素または炭素であり、Ａ及びＢの少なくとも一方は窒素であり；
（ｄ）Ｄ及びＥは窒素であり、ただし、（ｉ）二重結合が非アリール炭素とＤまたはＥのいずれかの間に存在し、（ii）二重結合が非アリール炭素とＤの間に存在する場合にはＲ2がなく、そして（iii）二重結合が非アリール炭素とＥの間に存在する場合にはＲ3がなく；そして
（ｅ）化合物は１，６−ジヒドロ−７−（４−ピリジル）−８−（４−フルオロフェニル）−２−フェニルメチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールでも３，６−ジヒドロ−８−（４−フルオロフェニル）−３−（３−フェニルプロピル）−７−（４−ピリジル）−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールでもない。
【請求項２】
Ａが窒素であり、そしてＢが炭素である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
化合物が１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−フェニル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
化合物が１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−ブチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールである、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
化合物が１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−（２−フェニルエチル）−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールである、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
化合物が１，６−ジヒドロ−７−（４−ピリジル）−８−（４−フルオロフェニル）−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールである、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
化合物が１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）
−８−（４−ピリジル）−２−フェニルメチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイ
ミダゾールである、請求項１の化合物。
【請求項８】
請求項１記載の化合物及び製薬学的に許容しうる担体を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物を有効成分として含んでなる、炎症性疾患にかかっている患者の処置用製剤。
【請求項１０】
疾患が慢性関節リウマチ、インシュリン依存型糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、クローン病、自己免疫性腎炎、原発性胆汁性肝硬変及び乾癬、急性膵炎、同種移植片拒絶、アレルギー性炎症、炎症性腸疾患、敗血症性ショック、骨粗鬆症、変形性関節症、及び神経炎症により誘導される認識欠陥よりなる群から選択される、請求項９記載の製剤。
【請求項１１】
疾患が慢性関節リウマチである、請求項１０記載の製剤。
【請求項１２】
構造式
【化２】
0004570777.tif 000017
で表される第一の化合物を構造式
【化３】
0004570777.tif 000018
で表される第二の化合物と、第一及び第二の化合物間でフィッシャーインドール化を可能にする条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項１記載の化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本願の全体にわたって様々な公開が引用される。本願中のこれらの刊行物の開示は、本発明が関連する技術水準をより完全に記述するためである。
発明の分野
本発明は、炎症性疾患を処置するための置換されたピロロベンゾイミダゾール及び関連する製薬学的組成物及び方法に関する。本発明の化合物は、炎症反応をもたらすサイトカイン、特にＴＮＦ−α及びＩＬ−１の生産を阻害する。
発明の背景
炎症性サイトカインＩＬ−１及びＴＮＦ−αは、多数の炎症性疾患において重要な役割を果たす（Ｃ．Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ等、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ：Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ａｎｄ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  ａｓ  Ｅｆｆｅｃｔｏｒ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１、３、９４１−４８）。慢性関節リウマチはそのような炎症性疾患の主要な例であり、従って、本節において最も焦点を当てる炎症性疾患である。
【０００２】
慢性関節リウマチは、何百万人もの人々がかかり、人体のあらゆる関節を冒すことができる炎症性疾患である。その症状は、冒された関節における軽い痛み及び炎症から重く且つ衰弱させる痛み及び炎症まで多岐にわたる。この疾患は主に老人と関係しているが、成人に限定されない。
【０００３】
最も一般的な慢性関節リウマチ治療は、症状を緩和するための非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）の使用を含む。しかしながら、ＮＳＡＩＤが広く使用されているにもかかわらず、多くの個体は長期間にわたって疾患を処置するために必要な投与量を許容できない。さらに、ＮＳＡＩＤは、根底にある原因に作用せずに疾患の症状を単に処置するだけである。患者がＮＳＡＩＤによく反応しない場合、メトトレキセート、金塩、Ｄ−ペニシラミン及びプレドニゾンのような他の薬剤がしばしば用いられる。これらの薬剤も著しい毒性があり、それらの作用機構は未知のままである。
【０００４】
ＩＬ−１に対する受容体アンタゴニスト及びＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体は、小規模のヒト臨床試験において慢性関節リウマチの症状を弱めることが示されている（Ｍ．Ｊ．Ｅｌｌｉｏｔ等、Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  α、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．１９９３  ３６、１６８１−９０）。
【０００５】
タンパク質に基づく治療に加えて、これらのサイトカインの産生を阻害し、動物慢性関節リウマチモデルにおいて活性を示している小分子薬剤がある（Ｊ．Ｃ．Ｂｏｅｈｍ等、１−Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ４−Ａｒｙｌ−５−ｐｙｒｉｄｉｎｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｅｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌａｓｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｄｒｕｇｓ  ｗｉｔｈ  Ｌｏｗ  ５−Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ａｎｄ  Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｐｏｔｅｎｃｙ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９６、３９、３９２９−３７）。これらの小分子薬剤のうちＳＢ ２０３５８０は、ＬＰＳにより刺激されたヒト単球細胞系において５０〜１００ｎＭのＩＣ50値でＴＮＦ−α及びＩＬ−１の産生の減少に有効であることが分かっている（Ｊ．Ａｄａｍｓ等、Ｉｍｉｄａｚｏｌｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ  ａｓ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、国際特許出願ＷＯ ９３／１４０８１、１９９３）。
【０００６】
【化４】
0004570777.tif 000002
【０００７】
このインビトロ作用に加えて、ＳＢ ２０３５８０は、１５〜２５ｍｇ／ｋｇのＩＣ50値でラット及びマウスにおいて炎症性サイトカインの産生を阻害することが示されている（Ａ．Ｍ．Ｂａｄｇｅｒ等、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  ＳＢ ２０３５８０，Ａ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ／ｐ３８  Ｋｉｎａｓｅ，ｉｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｂｏｎｅ  Ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ，Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｓｈｏｃｋ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、１９９６、２７９、１４５３−６1）。
【０００８】
ＳＢ ２０３５８０の経口活性及び動物モデルにおける効能のために、研究者等は、この特徴を有する化合物が慢性関節リウマチの実用的処置として可能性を有することを示唆している(Ａ．Ｍ．Ｂａｄｇｅｒ等、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  ＳＢ ２０３５８０，Ａ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ／ｐ３８  Ｋｉｎａｓｅ，ｉｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｂｏｎｅ  Ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ，Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｓｈｏｃｋ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、１９９６、２７９、１４５３−６1）。
【０００９】
ＳＢ ２０３５８０及び他の小分子は、２００ｎＭのＩＣ50で、セリン／トレオニンキナーゼ、ｐ３８（当該技術分野において「ＣＳＢＰ」とも呼ばれる）の活性を阻害することにより炎症性サイトカインの産生を減らす（Ｄ．Ｇｒｉｓｗｏｌｄ等、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＳＰＢ），Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｔｒｅｓｓ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｋｉｎａｓｅ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ、１９９６、７、３２３−２９）。このキナーゼの正確な機構は未知であるが、それはＴＮＦ−αの産生及びＴＮＦ−α受容体と関連したシグナリング応答の両方に関与している。
【００１０】
慢性関節リウマチ及び宿主の他の炎症性疾患は、悩まされている人々に対して重い打撃を与える。従って、小分子抗炎症薬に対する非常に大きな必要性がある。しかしながら、現在まで、ＳＢ ２０３５８０を初めとするそのようないずれの薬剤もヒト臨床試験において抗炎症性であることが示されていない。
発明の要約
本発明は、構造
【００１１】
【化５】
0004570777.tif 000003
【００１２】
を有する化合物またはその製薬学的に許容しうる塩を提供し、
ここで：
（ａ）Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は（ｉ）水素、（ii）Ｃ1-5アルキル、（iii）Ｃ1-5アルキルアミノ、（iv）ジＣ1-5アルキルアミノ、（ｖ）１個またはそれ以上の水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルで置換されたフェニル並びに（vi）１個またはそれ以上の水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルで置換されたフェニルＣ1-5アルキルよりなる群から独立して選択され；
（ｂ）環１及び２は、水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルよりなる群から選択される１個またはそれ以上の置換基で各々独立して置換され；
（ｃ）Ａ及びＢは独立して窒素または炭素であり、Ａ及びＢの少なくとも一方は窒素であり；
（ｄ）Ｄ及びＥは窒素であり、ただし、（ｉ）二重結合が非アリール炭素とＤまたはＥのいずれかの間に存在し、（ii）二重結合が非アリール炭素とＤの間に存在する場合にはＲ2がなく、そして（iii）二重結合が非アリール炭素とＥの間に存在する場合にはＲ3がなく；そして
（ｅ）化合物は１，６−ジヒドロ−７−（４−ピリジル）−８−（４−フルオロフェニル）−２−フェニルメチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールでも３，６−ジヒドロ−８−（４−フルオロフェニル）−３−（３−フェニルプロピル）−７−（４−ピリジル）−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールでもない。
【００１３】
また、本発明は本化合物及び製薬学的に許容しうる担体を含んでなる製薬学的組成物も提供する。本発明はさらに本製薬学的組成物の治療的に有効な投与量を患者に投与することを含んでなる、炎症性疾患にかかっている患者の処置方法を提供する。
【００１４】
最後に、本発明は、構造
【００１５】
【化６】
0004570777.tif 000004
【００１６】
を有する第一の化合物を構造
【００１７】
【化７】
0004570777.tif 000005
【００１８】
を有する第二の化合物と、第一及び第二の化合物間でフィッシャーインドール化を可能にする条件下で接触させる工程を含んでなる、本化合物の製造方法を提供する。
発明の詳細な説明
本発明は、炎症性疾患の処置において有用な化合物及び関連する製薬学的組成物及び方法を提供する。本発明の化合物は炎症性サイトカインＴＮＦ−α及びＩＬ−１βの生産を阻害し、それらの過剰生産は炎症性疾患に特徴的である。
【００１９】
具体的には、本発明は構造
【００２０】
【化８】
0004570777.tif 000006
【００２１】
を有する化合物またはその製薬学的に許容しうる塩を提供し、
ここで：
（ａ）Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は（ｉ）水素、（ii）Ｃ1-5アルキル、（iii）Ｃ1-5アルキルアミノ、（iv）ジＣ1-5アルキルアミノ、（ｖ）１個またはそれ以上の水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルで置換されたフェニル並びに（vi）１個またはそれ以上の水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルで置換されたフェニルＣ1-5アルキルよりなる群から独立して選択され；
（ｂ）環１及び２は、水素、ハロゲン、Ｃ1-5アルキル及びトリハロＣ1-5アルキルよりなる群から選択される１個またはそれ以上の置換基で各々独立して置換され；
（ｃ）Ａ及びＢは独立して窒素または炭素であり、Ａ及びＢの少なくとも一方は窒素であり；
（ｄ）Ｄ及びＥは窒素であり、ただし、（ｉ）二重結合が非アリール炭素とＤまたはＥのいずれかの間に存在し、（ii）二重結合が非アリール炭素とＤの間に存在する場合にはＲ2がなく、そして（iii）二重結合が非アリール炭素とＥの間に存在する場合にはＲ3がなく；そして
（ｅ）化合物は１，６−ジヒドロ−７−（４−ピリジル）−８−（４−フルオロフェニル）−２−フェニルメチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールでも３，６−ジヒドロ−８−（４−フルオロフェニル）−３−（３−フェニルプロピル）−７−（４−ピリジル）−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールでもない。
【００２２】
本化合物の一つの態様として、Ｄ及びＥが両方とも窒素である。別の態様として、Ａが窒素であり、そしてＢが炭素である。さらに別の態様として、Ｄ、Ｅ及びＡが窒素であり、そしてＢが炭素である。本化合物の好ましい態様として、化合物が（ｉ）１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−フェニル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾール；（ii）１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−ブチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾール；（iii）１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−（２−フェニルエチル）−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾール；（iv）１，６−ジヒドロ−７−（４−ピリジル）−８−（４−フルオロフェニル）−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾール；及び（v）１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−フェニルメチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾールよりなる群から選択される。
【００２３】
本明細書において用いられる場合、以下の用語は本化合物に関して以下の意味を有する：化学置換基に関する場合、「独立して」は、１個より多くの置換基が存在する場合にそれらの置換基が同じまたは異なってもよいことを意味し；「アルキル」は直鎖状、環式及び分枝鎖状アルキルを意味し；「アルコキシ」はＯ−アルキルを意味し；「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味し；そして「Ｐｈ」はフェニルを意味する。
【００２４】
典型的に、本化合物は遊離塩基として単離され、使用される。しかしながら、その様々な態様を製薬学的に許容しうる塩として単離し、使用してもよい。そのような塩の例は、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、塩酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ヒドロエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモン酸塩（ｐａｌｍｏｉｃ）、２−ナフタレンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキサンスルファミン酸塩及びサッカリン酸塩を含む。
【００２５】
また、本発明は本化合物及び製薬学的に許容しうる担体を含んでなる製薬学的組成物も提供する。
【００２６】
製薬学的に許容しうる担体は当業者に周知であり、０．０１−０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍリン酸バッファーまたは０．８％生理的食塩水を含むが、それらに限定されない。さらに、そのような製薬学的に許容しうる担体は、水性または非水性の溶液、懸濁液及び乳濁液であってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油及びオレイン酸エチルのような注入可能な有機エステルである。水性担体は、生理的食塩水及び緩衝媒質を初めとする、水、エタノール、アルコール性／水性溶液、グリセロール、乳濁液または懸濁液を含む。経口担体はエリキシル剤、シロップ剤、カプセル剤、錠剤等であってもよい。典型的な固形担体は、ラクトース、澱粉、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、マンニトール等のような不活性物質である。非経口担体は、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンガー並びに不揮発性油を含む。静脈内担体は、液体及び栄養補給剤、リンガーデキストロースに基づくもののような電解質補給剤等を含む。また、例えば、抗微生物剤、酸化防止剤、キレート化剤、不活性ガス等のような防腐剤及び他の添加剤が存在してもよい。当該技術分野において既知の通常の技術を用いて全ての担体を崩壊剤、希釈剤、顆粒化剤、滑剤、結合剤等と必要とされるように混合することができる。
【００２７】
本発明はさらに本製薬学的組成物の治療的に有効な投与量を患者に投与することを含んでなる、炎症性疾患にかかっている患者の処置方法を提供する。
【００２８】
本明細書において用いられる場合、「患者」は、炎症性疾患にかかっているあらゆる動物または人工的に改変された動物を意味する。好ましい態様として、患者はヒトである。
【００２９】
炎症性疾患は非常に多く、当該技術分野において周知である。炎症性疾患の例は、慢性関節リウマチ、インシュリン依存型糖尿病、多発性硬化症、重症筋無力症、クローン病、自己免疫性腎炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、急性膵炎、同種移植片拒絶、アレルギー性炎症、炎症性腸疾患、敗血症性ショック、骨粗鬆症、変形性関節症及び神経炎症により誘導される認識欠陥を含むが、それらに決して限定されない。好ましい態様として、自己免疫疾患が慢性関節リウマチである。
【００３０】
製薬学的組成物の投与を当業者に既知の様々な方法のいずかを用いてもたらすかまたは実施することができる。投与を例えば静脈内に、筋肉内に、経口的に、そして皮下に実施することができる。好ましい態様として、本製薬学的組成物を経口的に投与する。さらに、投与は、慣例的方法に従って決定することができる適当な期間にわたって複数の投薬量を患者に与えることを含んでなることができる。
【００３１】
製薬学的組成物の「治療的に有効な投与量」は、処置されている炎症性疾患の進行を止めるか、逆にするかまたは減らすために十分な量を意味する。患者において本製薬学的組成物を投与するために治療的に有効な投与量を決定するために用いることができる方法は当該技術分野において既知である。ヒトに製薬学的組成物を投与するために有効な投与量は、例えば、動物研究の結果から数学的に決定される。一つの態様として、治療的に有効な投与量は、毎日体重１キログラム当たり約０．０５ｍｇから約２００ｍｇまでの本製薬学的組成物を送達するために十分な投与量である。別の態様として、治療的に有効な投与量は、約０．５ｍｇから約５０ｍｇまでを送達するために十分な投与量である。
【００３２】
最後に、本発明は、構造
【００３３】
【化９】
0004570777.tif 000007
【００３４】
を有する第一の化合物を構造
【００３５】
【化１０】
0004570777.tif 000008
【００３６】
を有する第二の化合物と、第一及び第二の化合物間でフィッシャーインドール化を可能にする条件下で接触させる工程を含んでなる、本化合物の製造方法を提供する。第一及び第二の化合物において、環及び環置換基の名称（すなわち、環１及び２、原子Ａ、Ｂ、Ｄ及びＥ並びに置換基Ｒ1、Ｒ2及びＲ3）並びにそれらの定義は、上に記述した本化合物に関連して用いられたものと同じものである。フィッシャーインドール化を可能にする条件は当該技術分野において周知であり、以下の実験の詳細中に例示される。
【００３７】
本発明は以下の実験の詳細を参照することによりさらによく理解されるが、当業者は、詳述される特定の実験がその後に続く請求項においてより完全に記述される本発明の実例にすぎないことを容易に認識する。
実験の詳細
Ａ．定義
本明細書において用いられる場合、以下の用語は本実験方法に関して以下の意味を有する：「ＦＣＳ」はウシ胎仔血清を意味し；「ＴＣＡ」はトリクロロ酢酸を意味し；「ＲＰＭＩ」はＳｉｇｍａカタログ番号Ｒ０８３３を有するＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅからの培地を意味し：そして「式Ｉ」は以下に記述し、上に定義した構造を意味する。
【００３８】
【化１１】
0004570777.tif 000009
【００３９】
Ｂ．合成
本発明の化合物を以下のスキームにより製造することができ、それによりいくつかのスキームは１種より多くの本化合物を製造する。それらの場合、スキームの選択は当業者の能力の十分に範囲内である判断の問題である。
【００４０】
１．ピロロベンゾイミダゾール環系
スキーム１により示されるように、１，２−置換されたエタノン１ｂを適切に置換された５−ヒドラジノベンゾイミダゾール１ａと約９０℃でエチレングリコールのような適当な溶媒中で約１−３時間カップリングさせて式１の化合物のピロロベンゾイミダゾール環系を生成せしめ、示した化合物を得る。
【００４１】
示した生成物以外に、出発原料１ａ及び１ｂを変えることにより式Ｉの多数の他の化合物を製造することができる。既知のベンズアミド誘導体を４−ピコリルアニオンで処理することにより様々な置換されたエタノンを製造することができる（Ｇａｌｌａｇｈｅｒ、Ｔ．Ｆ．等、Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｓｓ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｐｙｒｉｄｉｎｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｅｓ；Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＳＢＰ  Ｋｉｎａｓｅ、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９７、５、４９−６４）。５−アミノベンゾイミダゾールを亜硝酸及び塩化第一スズで処理することにより様々な置換されたヒドラジニル−ベンゾイミダゾールを製造することができる（Ｃｈｅｔｖｅｒｉｋｏｖ、Ｖ．Ｐ．等、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ２−ｉｍｉｄａｚｏ［４，５−ｅ］ｉｎｄｏｌｅｓ  ｆｒｏｍ  ５−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅｓ、Ｚｈｉｍ．Ｇｅｔｅｒｏｔｓｉｋｉ．Ｓｏｅｄｉｎ、１９８０、１、７４−８）。従って、Ａが窒素であり、Ｂが炭素であり、環２が４−フルオロ置換基を有し、そしてＲ1がメチルフェニルである式Ｉの化合物を製造するために、示した１ａを２−メチル−５−ヒドラジノベンゾイミダゾールで、そして１ｂを１−［４−フルオロフェニル］−２−［４−ピリジニル］エタノンで置き換える。
【００４２】
【化１２】
0004570777.tif 000010
【００４３】
２．式Ｉの第一の態様
Ａが窒素であり、Ｂが炭素であり、Ｒ3がエチルであり、そしてＲ1が水素である式Ｉの化合物を製造するためにスキーム２を用いることができる。出発する置換されたエタノン２ｂを適当な６−ヒドラジノベンゾイミダゾール２ａで約９０℃でエチレングリコールのような適当な溶媒中で約１−３時間処理して所望する化合物を得る。示した化合物以外に、式Ｉの他の化合物をこのようにして製造することができる。５−ヒドラジノベンゾイミダゾールの製造において記述したものと類似した方法を用いて６−ヒドラジノベンゾイミダゾールを６−アミノ化合物から製造することができる。
【００４４】
【化１３】
0004570777.tif 000011
【００４５】
３．式Ｉの第二の態様
Ａが炭素であり、環１が４−クロロ置換基を有し、そしてＢが窒素である式Ｉの化合物を製造するためにスキーム３を用いることができる。ヒドラジノベンゾイミダゾール３ａを２−フェニル−１−ピリジル置換されたエタノン３ｂと約９０℃でエチレングリコールのような適当な溶媒中で約１−３時間連結して示した化合物を得る。エタノン及びベンゾイミダゾール出発原料を変えることにより式Ｉの類似した化合物を製造することができる。エタノン出発原料３ｂをフェニルアセトニトリル誘導体及びメチルイソニコチネートの付加、加水分解及び続く脱炭酸反応から製造する（Ｌａｎｔｏｓ、Ｉ．等、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｙｒｉｄｙｌ−Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｉｍｉｄａｚｏｔｈｉａｚｏｌｅｓ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９８８、５３、４２２３−２７）。
【００４６】
【化１４】
0004570777.tif 000012
【００４７】
４．１，６−ジヒドロ−７−（４−フルオロフェニル）−８−（４−ピリジル）−２−フェニルメチル−ピロロ［３，２−ｅ］ベンゾイミダゾール
【００４８】
【化１５】
0004570777.tif 000013
【００４９】
２−ベンジル−５−ヒドラジノベンゾイミダゾール２塩酸塩（７．６２ｇ）及び１−（４−フルオロ−フェニル）−２−（４−ピリジニル）エタノン（５．２７ｇ）をエチレングリコール（７０ｍＬ）中に溶解した。混合物を加熱し、９０℃で１時間、そして１６０℃で３時間撹拌した。得られた混合物を室温まで冷却し、水（５００ｍｌ）中に注ぎ、固体のＫ2ＣＯ3で中和した。水相を酢酸エチルで抽出した（２ ｘ ６００ｍｌ）。有機層を分離し、合わせ、水（２ ｘ ３００ｍｌ）、ブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、真空中で濃縮した。濃縮された溶液をシリカゲルの８ ｘ ２インチプラグを通して溶離剤として１００％酢酸エチル（２Ｌ）を用いて濾過した。真空中での濃縮により黄色がかった白色の固体（２．６５ｇ）が得られた。エタノールからの再結晶化により白色固体が得られた：ｍｐ １６７−６９℃：1Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｄ １２．２０（１Ｈ、ｓ）、１１．８４（１Ｈ、ｓ）、８．４８（２Ｈ、ｂｒ、ｓ）、７．６２（２Ｈ、ｂｒ、ｓ）、７．４５（２Ｈ、ｂｒ、ｔ）、７．３６−７．２０（９Ｈ、ｍ）、４．２０（２Ｈ、ｓ）；ＭＳ ｍ／ｓ ＭＨ+ ４１９；Ｃ27Ｈ19ＦＮ4．３８Ｈ2Ｏの分析計算値 Ｃ ７６．３５、Ｈ ４．６８、Ｎ １３．１９。実測値 Ｃ ７６．２９、Ｈ ４．６９、Ｎ １３．１５。Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｈｅｒによる実測値 １．３８ ｗｔ ％ Ｈ2Ｏ。
Ｃ．アッセイ
１．インビトロ酵素アッセイ
本発明の化合物の生物学的活性をインビトロアッセイにより示した。先に説明したように、酵素ｐ３８の活性を阻害する薬剤は炎症性サイトカインＴＮＦ−α及びＩＬ−１の生産を阻害する。以下のインビトロアッセイによりｐ３８の活性を阻害する能力に関して本発明の化合物を測定した。
【００５０】
精製した組換えｐ３８（アッセイの直線範囲及びノイズに対して許容できるシグナルの比率を考慮して酵素の量を実験的に決定した；エシェリキア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）において発現された６ｘＨｉｓ−ｐ３８）、ミエリン塩基性タンパク質基質（同様に実験的に決定した）及びｐＨ ７．５のバッファー（Ｈｅｐｅｓ：２５ｍＭ、ＭｇＣｌ2：１０ｍＭ、ＭｎＣｌ2；１０ｍＭ）の溶液（３８μＬ）を９６穴丸底ポリプロピレンプレートの９２ウェルに加えた。残りのウェルをコントロール（「ＣＴＲＬ」）及びバックグラウンド（「ＢＫＧ」）のために用いた。
【００５１】
酵素、基質バッファー及び２％ ＤＭＳＯでＣＴＲＬを調製し、そして基質バッファー及び２％ ＤＭＳＯでＢＫＧを調製した。ＤＭＳＯ中の試験化合物の溶液（１２μＬ）（化合物を１０％ ＤＭＳＯ／Ｈ2Ｏ中に１２５μＭに希釈し、２５μＭでアッセイし、その場合、最終ＤＭＳＯ濃度は２％であった）を試験ウェルに加えた。ＡＴＰ／33Ｐ−ＡＴＰ溶液（１０μＬ：５０μＭの標識されていないＡＴＰ及び１μＣｉの33Ｐ−ＡＴＰを含有する）を全てのウェルに加え、完成したプレートを混合し、３０℃で３０分間インキュベートした。よく冷えた５０％ ＴＣＡ／１０ｍＭリン酸ナトリウム（６０μＬ）を各ウェルに加え、プレートを氷上で１５分間保った。
【００５２】
各ウェルの中身を９６穴フィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ−ＤＰ）のウェルに移し、廃棄物収集皿を備えた真空マニホールド上にフィルタープレートを置いた。ウェルを真空下で１０％ ＴＣＡ／１０ｍＭリン酸ナトリウム（２００μＬ）で５回洗浄した。ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０シンチレーション液を加え、Ｔｏｐｓｅａｌ−Ｓシートを用いてプレートを密封し、色クエンチ修正して33Ｐ液体プログラムを用いてＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターで計数し、その場合、出力は色クエンチを修正したｃｐｍ単位である。
【００５３】
試験化合物の％阻害を以下の式：％阻害＝［１−（サンプル−ＢＫＧ）／（ＣＴＲＬ−ＢＫＧ）］ｘ１００により計算した。化合物１は、２０μＭでｐ３８の活性の４４％を阻害した。
【００５４】
２．インビトロ細胞アッセイ
酵素アッセイに加えて、以下のようにヒト血液から得た末梢血単核細胞（「ＰＢＭＣ」）を用いるインビトロ全細胞アッセイにおいて本発明の化合物の多くを試験した。新しく得た静脈血をヘパリンで凝固を防止し、等容量のリン酸緩衝食塩水（「ＰＢＳ」）で希釈し、滅菌した管または他の容器中に置いた。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（１５ｍｌ）を下に置いた遠心管にこの混合物のアリコート（３０ｍＬ）を移した。調製した管を室温でブレーキをかけずに４００ ｘ ｇで３０分間遠心分離した。単核細胞バンドの上の血小板層の約１／２〜２／３をピペットで除いた。単核細胞層の大部分をピペットを用いて注意深く取り出し、これらのＰＢＭＣをＰＢＳで希釈し、６００ ｘ ｇで１５分間回転させた。得られたＰＢＭＣをＰＢＳでもう一度洗浄し、室温で４００ ｘ ｇで１０分間回転させた。回収されたペレットを低内毒素ＲＰＭＩ／１％ ＦＣＳ培地で希釈し、０．５−２．０ ｘ １０6ＰＢＭＣ／ｍＬの細胞濃度を得た。血球計算器で計数するために懸濁液の小容量を取り除き、残りの調製物を室温で２００ ｘ ｇで１５分間遠心分離した。回収されたペレットのＰＢＭＣを１．６７ ｘ １０6／ｍＬの濃度にＲＰＭＩ／１％ ＦＣＳ中に再懸濁した。
【００５５】
アッセイを実施するために、ＰＢＭＣ懸濁液（１８０μＬ）を９６穴平底マイクロタイタープレートの二重ウェルに移し、３７℃で１時間インキュベートした。試験化合物の溶液（１０μＬ：２０ ｘ 所望する最終濃度で調製した）を各ウェルに加え、プレートを３７℃で１時間インキュベートした。ＲＰＭＩ／１％ ＦＣＳ中のＬＰＳ（２００ｎｇ／ｍＬ）の溶液（１０μＬ）を加え、ウェルを３７℃で一晩インキュベートした。上清（１００μＬ）を各ウェルから取り出し、ＲＰＭＩ／１％ ＦＣＳ（４００μＬ）で希釈した。市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ）を用いてサンプルをＴＮＦ−αに関して分析した。
【００５６】
本発明のある種の化合物の抗ＩＬ−１β活性を以下のインビトロアッセイにより決定した。プラスチック付着細胞をＰＢＭＣについて調製した。簡潔に言えば、ＰＢＭＣを上記のように９６穴プレートのウェルに加え、３７℃で１時間インキュベートし、ピペッターで非付着細胞を穏やかに再懸濁し、上清を取り出して捨て、そして２００μＬの培地で３回ウェルを穏やかに洗浄することにより付着細胞を調製した。最後の洗浄後にさらなる培地（１８０μＬ）をウェルに加えた。化合物の添加、ＬＰＳ刺激、インキュベーション及び上清採取はＴＮＦ−αのとおりであった。市販のＥＬＩＳＡ（Ｇｅｎｚｙｍｅ）を用いて上清をインターロイキンー１βに関してアッセイし、ＩＣ50値を決定した。化合物１（以下に記述する）は４００、１２４及び８７ｎＭのＩＣ50値でＩＬ−１βの産生を阻害した。
【００５７】
３．インビボアッセイ
ＬＰＳにより誘導されるＴＮＦ−α産生を阻害する式Ｉの化合物の能力を以下のインビボ齧歯類アッセイにおいて示した。マウス（ＢＡＬＢ／ｃＪメス、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）またはラット（Ｌｅｗｉｓオス、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を３０分間断食させ、その後、５−５０ｍｇ／ｋｇで５−１０ｍＬ／ｋｇの試験化合物を経口投与した。投与の３０分後、動物にＬＰＳを１ｍｇ／ｋｇで腹腔内に注入し、檻に１時間戻した。動物をＣＯ2で麻酔し、心臓穿刺により採血し、全血（０．１−０．７ｍＬ）を集めた。血液を凝固させ、血清を遠心管に移した。このサンプルを遠心分離し、血清を集め、分取し、−８０℃で冷凍した。市販のＴＮＦ−αのＥＬＩＳＡ（マウスＴＮＦ−αにはＥｎｄｏｇｅｎ、そしてラットＴＮＦ−αにはＢｉｏｓｏｕｒｃｅ）によりサンプルを試験した。マウスでは、化合物１はＴＮＦ−αを２５ｍｇ／ｋｇで９１％、そして１０ｍｇ／ｋｇで７４％阻害した。
【００５８】
本発明のある種の化合物を表Ａ及びＢに挙げる。それらの化合物をインビトロでＴＮＦ−αを阻害する能力に関して試験した。ＩＣ50または示した濃度での％阻害としてデータを記載する。
【００５９】
【表１】
0004570777.tif 000014
【００６０】
【表２】
0004570777.tif 000015