(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0004598953.tif 000042
［式中、ＧＳは式
【化２】
0004598953.tif 000043
の胆汁酸基であり、
Ｒ1はＸとの結合、ＯＨであり；
Ｒ2はＸとの結合、ＯＨ、Ｏ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル、ＮＨ−(Ｃ2〜Ｃ6)−アルキル−ＳＯ3Ｈ、Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−ＣＨ2−ＳＯ3Ｈ、ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨ；Ｎ(ＣＨ3)−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨであるが、但し、
Ｒ1およびＲ2は同時に、Ｒ1がＸとの結合でありそしてＲ2がＸとの結合であることはない；
Ｒ3、Ｒ4は互いに独立してＨ、ＯＨであり；
Ｘは
【化３】
0004598953.tif 000044
または結合であり；
ｌ、ｍ、ｎは互いに独立して０または１であり；
Ｌは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルであり；
ＡＡ1、ＡＡ2は互いに独立してアミノ酸基、あるいはアミノ酸保護基により単または多置換されたアミノ酸基である］
の化合物、その医薬上許容される塩。
【請求項２】
ＧＳは式
【化４】
0004598953.tif 000045
の胆汁酸基であり；
Ｒ1はＸとの結合、ＯＨであり；
Ｒ2はＸとの結合、ＯＨ、Ｏ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル、ＮＨ−(Ｃ2〜Ｃ6)−アルキル−ＳＯ3Ｈ、Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−ＣＨ2−ＳＯ3Ｈ、ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨ；Ｎ(ＣＨ3)−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨであるが、但し、
Ｒ1およびＲ2は同時に、Ｒ1がＸとの結合でありそしてＲ2がＸとの結合であることはない；
Ｘは
【化５】
0004598953.tif 000046
または結合であり；
ｌ、ｍ、ｎは互いに独立して０または１であり；
Ｌは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルであり；
ＡＡ1、ＡＡ2は互いに独立してアミノ酸基、あるいはアミノ酸保護基により単または多置換されたアミノ酸基である請求項１記載の式Ｉの化合物、その医薬上許容される塩。
【請求項３】
ＧＳは式
【化６】
0004598953.tif 000047
の胆汁酸基であり；
Ｒ1はＸとの結合、ＯＨであり；
Ｒ2はＸとの結合、ＯＨ、Ｏ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル、ＮＨ−(Ｃ2〜Ｃ6)−アルキル−ＳＯ3Ｈ、ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨであるが、但し、
Ｒ1およびＲ2は同時に、Ｒ1がＸとの結合でありそしてＲ2がＸとの結合であることはない；
Ｘは
【化７】
0004598953.tif 000048
または結合であり；
ｌ、ｍ、ｎは互いに独立して０または１であり；
Ｌは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり；
ＡＡ1、ＡＡ2は互いに独立してアミノ酸基、あるいはアミノ酸保護基により単または多置換されたアミノ酸基である請求項１または２記載の式Ｉの化合物、およびその医薬上許容される塩。
【請求項４】
請求項１〜３の何れかの項記載の１種以上の化合物を含有する薬剤。
【請求項５】
請求項１〜３の何れかの項記載の化合物を含有する、高脂血症を治療するための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は置換されたプロパノールアミン誘導体、その医薬上許容される塩および生理的に作用する誘導体に関する。
【０００２】
脂質代謝における脂肪過多および障害の治療に関して数種の活性化合物がすでに記載されている：
・  ポリマー吸着剤、例えばコレスチラミン
・  ベンゾチアゼピン（ＷＯ ９３／１６０５５）
・  胆汁酸の二重体および複合体（ＥＰ ０ ４８９ ４２３）
・  ４−アミノ−２−ウレイド−ピリミジン−５−カルボキサミド（ＥＰ ０ ５５７ ８７９）
【０００３】
本発明は治療的に有用な脂質低下作用を示すさらなる化合物を提供することを目的とする。
従って、本発明は式Ｉ
【化８】
0004598953.tif 000002
［式中、ＧＳは式
【化９】
0004598953.tif 000003
の胆汁酸基であり、
Ｒ1はＸとの結合、ＯＨであり；
Ｒ2はＸとの結合、ＯＨ、Ｏ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル、ＮＨ−(Ｃ2〜Ｃ6)−アルキル−ＳＯ3Ｈ、Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−ＣＨ2−ＳＯ3Ｈ、ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨ；Ｎ(ＣＨ3)−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨであるが、但し、
Ｒ1およびＲ2は同時に、Ｒ1がＸとの結合でありそしてＲ2がＸとの結合であることはない；
Ｒ3、Ｒ4は互いに独立してＨ、ＯＨであり；
Ｘは
【化１０】
0004598953.tif 000004
または結合であり；
ｌ、ｍ、ｎは互いに独立して０または１であり；
Ｌは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルであり；
ＡＡ1、ＡＡ2は互いに独立してアミノ酸基、あるいはアミノ酸保護基により単または多置換されたアミノ酸基である］の化合物、その医薬上許容される塩および生理的に作用する誘導体に関する。
【０００４】
好ましい式Ｉの化合物は１種以上の基が次の意味を有する：
ＧＳは式
【化１１】
0004598953.tif 000005
の胆汁酸基であり；
Ｒ1はＸとの結合、ＯＨであり；
Ｒ2はＸとの結合、ＯＨ、Ｏ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル、ＮＨ−(Ｃ2〜Ｃ6)−アルキル−ＳＯ3Ｈ、Ｎ(ＣＨ3)−ＣＨ2−ＣＨ2−ＳＯ3Ｈ、ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨ；Ｎ(ＣＨ3)−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨであるが、但し、
Ｒ1およびＲ2は同時に、Ｒ1がＸとの結合でありそしてＲ2がＸとの結合であることはない；
Ｘは
【化１２】
0004598953.tif 000006
または結合であり；
ｌ、ｍ、ｎは互いに独立して０または１であり；
Ｌは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルであり；
ＡＡ1、ＡＡ2は互いに独立してアミノ酸基、あるいはアミノ酸保護基により単または多置換されたアミノ酸基である化合物、その医薬上許容される塩および生理的に作用する誘導体である。
【０００５】
特に好ましい式Ｉの化合物は１種以上の基が次の意味を有する：
ＧＳは式
【化１３】
0004598953.tif 000007
の胆汁酸基であり；
Ｒ1はＸとの結合、ＯＨであり；
Ｒ2はＸとの結合、ＯＨ、Ｏ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル、ＮＨ−(Ｃ2〜Ｃ6)−アルキル−ＳＯ3Ｈ、ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル−ＣＯＯＨであるが、但し、
Ｒ1およびＲ2は同時に、Ｒ1がＸとの結合でありそしてＲ2がＸとの結合であることはない;
Ｘは
【化１４】
0004598953.tif 000008
または結合であり；
ｌ、ｍ、ｎは互いに独立して０または１であり；
Ｌは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり；
ＡＡ1、ＡＡ2は互いに独立してアミノ酸基、あるいはアミノ酸保護基により単または多置換されたアミノ酸基である化合物およびその医薬上許容される塩である。
【０００６】
「アルキル」なる用語は直鎖状または分枝鎖状の炭化水素鎖を意味する。
「アミノ酸」または「アミノ酸基」なる用語は下記化合物の立体異性体、すなわちＤ−またはＬ−体を意味する；アラニン、グリシン、プロリン、システイン、ヒスチジン、グルタミン、アスパラギン酸、イソロイシン、アルギニン、グルタミン酸、リシン、セリン、フェニルアラニン、ロイシン、トレオニン、トリプトファン、メチオニン、バリン、チロシン、アスパラギン、２−アミノアジピン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノアジピン酸、３−アミノイソ酪酸、β−アラニン、２−アミノピメリン酸、２−アミノ酪酸、２,４−ジアミノ酪酸、４−アミノ酪酸、デスモシン、ピペリジン酸、２,２−ジアミノピメリン酸、６−アミノカプロン酸、２,３−ジアミノプロピオン酸、２−アミノヘプタン酸、Ｎ−エチルグリシン、２−（２−チエニル）−グリシン、３−（２−チエニル）−アラニン、ペニシラミン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、Ｎ−メチルイソロイシン、ヒドロキシリシン、６−Ｎ−メチルリシン、アロ−ヒドロキシリシン、Ｎ−メチルバリン、３−ヒドロキシプロリン、ノルバリン、４−ヒドロキシプロリン、ノルロイシン、イソデスモシン、オルニチン、アロ−イソロイシン、１１−アミノウンデカン酸。
【０００７】
アミノ酸は一般に慣用名で省略される（Schroeder、 Luebkeの「ペプチド」、第１巻、XXII〜XXIII頁（１９６５年）；Houben-Weylの「有機化学の方法」、XV／１および２巻（１９７４年）を参照）。アミノ酸Ｄ−Ａｓｐはアスパラギン酸のＤ−体である。ペプチドはそれらの化学的性質から酸アミドであり、加水分解によりアミノ酸に解離する。
【０００８】
「アミノ酸保護基」なる用語はアミノ酸基の側鎖の官能基を保護するのに適した基を意味する（例えばT. W. Greene, P. G. M. Wutsの「有機合成の保護基」、第２版、John Wiley＆Sons（1991年）を参照）。
【０００９】
好ましいアミノ酸保護基はｔ−ブチルオキシ−カルボニル（ＢＯＣ）、９−フルオレニルメトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシ−カルボニル（Ｚ）、２−（３,５−ジメトキシフェニル）プロパ−２−イルオキシカルボニル（Ｄｄｚ）、メチル、ｔ−ブチル、トリチルおよびＳ−ｔ−ブチル、ｔ−ブチルアミノ−カルボニルである。
【００１０】
さらに、本発明は次の反応式（式１〜４）に従って進行する式Ｉの化合物の製造法に関する。
【００１１】
方法Ａ
反応式１
【化１５】
0004598953.tif 000009
【００１２】
IV型の化合物はII型のｏ−、ｍ−またはｐ−置換イミンをケトンIIIと反応させることにより得られる。反応は例えば２種の化合物をそのまま溶媒なしで、あるいはエタノール、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トルエン、ジグリムまたはテトラデカンのような適当な溶媒中で混合し、次に２０℃〜１５０℃の温度で加熱することにより行うことができる。
【００１３】
IV型のケト化合物は−３０℃〜＋４０℃の温度において例えばメタノール、ＴＨＦまたはＴＨＦ／水のような適当な溶媒中ＮａＢＨ4または他の適当な還元剤でＶ型のヒドロキシ化合物に還元される。一般に、２種の異性体混合物（ラセミ体）が還元の主生成物として得られる。種々のラセミ体は分別結晶またはシリカゲルクロマトグラフィーにより互いに分離することができる。Ｖ型の化合物のニトロ基は既知法により、例えばＰｄまたは木炭上のＰｄおよびＨ2をメタノール中で用いる接触水素添加により還元することがでまる。
【００１４】
このようにして得られるVI型のラセミ化合物はさらにそれらのエナンチオマーに分割することができる。キラルなカラム材料を使用してクロマトグラフィーにより、または光学的に活性な補助試薬を使用して文献から知られている方法によりVIのラセミ化合物をVII型のエナンチオマーに分割することができる（J. Org.Chem. 44, 4891 (1979年）を参照）。
【００１５】
反応式２
【化１６】
0004598953.tif 000010
【００１６】
反応式２に従って、VIまたはVII型の芳香族アミン（ラセミ体または純粋なエナンチオマー）を知られている標準ペプチドカップリング法によりアミノ酸と反応させて誘導体VIIIを得ることができる。適当な方法は例えばＤＭＦ中でＴＯＴＵおよびトリエチルアミンとカップリングさせるものである（文献についてはG. Breipohl, W. KoenigのEP 0460446; W. Koenig, G. Breipohl, P. Pokorny, M. Birknerの「ペプチド1990」、E. GiraltおよびD. Andreu編、1991、143〜145を参照）。ＡＡ1およびＡＡ2基は式Ｉで定義された意味を有する。アミノ酸のアミノ官能基は保護基、例えばFmocを有し、またカルボン酸は保護されていない。
【００１７】
側鎖に官能基のあるアミノ酸の場合、これらは合成の間一時的に、または本発明の化合物に残留するように保護される。
誘導体VIIIを得るために、アミノ官能基の保護基は例えばＦｍｏｃの場合ＤＭＦおよびピペリジンの混合物で除去される。VIII型の化合物から出発して反応工程（ａ）アミノ酸の結合および（ｂ）脱保護を繰り返すとジペプチド抱合体IXが得られる。
【００１８】
反応式３
【化１７】
0004598953.tif 000011
【００１９】
Ｘ型の胆汁酸誘導体は既知方法（例えばEP 0614908、EP 0489423）により例えば無水コハク酸のようなアルキル−またはアリールジカルボン酸またはその誘導体と結合させることにより３−アミノ胆汁酸エステルから製造することができる。化合物（Ｘ）を標準ペプチド結合法によりVI、VII、VIIIまたはIX型のアミノ化合物と反応させる。結合反応後、胆汁酸部分のアルキルエステル官能基の加水分解によりXI型の化合物が得られる。
【００２０】
反応式４
【化１８】
0004598953.tif 000012
【００２１】
VI、VII、VIIIまたはXIのアミノ化合物を胆汁酸のカルボン酸官能基と反応させることができる。例えばＴＯＴＵおよびトリエチルアミンが存在するか、またはＴＨＦ中でジシクロヘキシルカルボジイミド、ヒドロキシベンゾトリアゾールおよびトリエチルアミンを用いた結合反応のような知られているペプチド結合反応もまた、ここで使用される。XII型の化合物はこの工程により得られる。
【００２２】
最初の化合物または塩基化合物と比べて水に対する溶解度が高いため、医薬上許容される塩は特に医療分野で使用するのに好適である。これらの塩は医薬上許容されるアニオンまたはカオチンを持たなければならない。本発明の化合物の好適な医薬上許容される酸付加塩は塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、スルホン酸および硫酸のような無機酸、並びに例えば酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イソチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、コハク酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸およびトリフルオロ酢酸のような有機酸の塩である。塩酸塩は特に好ましく医療分野で使用される。好適な医薬上許容される塩基性塩はアンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えばナトリウムおよびカリウム塩）およびアルカリ土類金属塩（例えばマグネシウムおよびカルシウム塩）である。
【００２３】
医薬上許容されないアニオンとの塩もまた、医薬上許容される塩の製造または精製のための、および／または非治療的、例えば試験管内での応用に使用される有益な中間体生成物として本発明の範囲に含まれる。
【００２４】
本明細書で使用される「生理学的に作用する誘導体」なる用語は例えばヒトのような哺乳動物に投与されると式Ｉの化合物またはその活性代謝物質を（直接的または間接的に）生成することができる本発明の式Ｉの化合物の生理的に許容される誘導体、例えばエステルを意味する。
【００２５】
生理学的に作用する誘導体はまた、本発明の化合物のプロドラックを含む。このようなプロドラックは生体内で代謝して本発明の化合物になる。これらのプロドラックはそれら自体活性であってもなくてもよい。
【００２６】
本発明の化合物はまた、様々な多形、例えば非晶質および結晶質の多形として存在することができる。本発明の化合物の多形はすべて本発明の範囲に含まれ、本発明の別の態様である。
【００２７】
下記の「式（Ｉ）の化合物」なる表現はすべて上記で定義されたような式（Ｉ）の化合物、および本明細書中で記載されたそれらの塩、溶媒和物および生理的に作用する誘導体に関する。
【００２８】
所望の生物学的作用を達成するのに必要な式（Ｉ）の化合物の量は幾つかの要因、例えば選択された特定の化合物、使用目的、投与方法および患者の臨床状態に依存する。一般に、１日の投与量は１日あたり体重１kgにつき０.３mg〜１００mg(典型的には３mg〜５０mg）の範囲であり、例えば３〜１０mg／kg／日である。静脈内投与量は例えば０.３mg〜１.０mg／kgの範囲であり、好適には１分あたり１kgにつき１０ng〜１００ngを注入して投与することができる。このために適した注入液は例えば１mlあたり０.１ng〜１０mg、典型的には１ng〜１０mgを含有する。個別投与形態は例えば１mg〜１０ｇの活性化合物を含有する。このように、注射用アンプルは例えば１mg〜１００mgを含有し、また経口投与用個別投与製剤、例えば錠剤またはカプセル剤は例えば１.０〜１０００mg、典型的には１０〜６００mgを含有する。薬学的に許容される塩の場合、上記の重量データはその塩から誘導されるベンゾチアゼピンイオンの重量と関係がある。上記症状の予防または治療において、式（Ｉ）の化合物そのものを活性化合物として使用することができるが、好ましくはそれらは許容される賦形剤を用いた医薬組成物の形態である。もちろん賦形剤はそれが他の組成物成分と適合し、患者の健康にとって有害でないという意味で許容されなければならない。賦形剤は固体または液体または両方であり、好ましくは０.０５〜９５重量％の活性化合物を含有する個別投与形態、例えば錠剤として化合物と一緒に製剤化される。式（Ｉ）の化合物の他に、別の薬学的に活性な物質もまた存在することができる。本発明の医薬組成物は本質的に各成分を薬理学的に許容される賦形剤および／または補助剤と混合することからなる既知の製薬方法の何れかにより製造することができる。
【００２９】
本発明の医薬組成物は経口、経腸、局所、経口（例えば舌下）および非経口（例えば皮下、筋肉内、皮内または静脈内）投与に適したものであるが、それぞれの場合において最も好適な投与方法は治療する症状の性質および程度、並びに使用される式（Ｉ）の特定化合物の性質に依存する。コーティングを施した製剤およびコーティングを施した徐放性製剤もまた本発明の範囲に含まれる。酸および胃液に耐性のある製剤が好ましい。胃液に耐性のある適当なコーティングにはセルロースアセテートフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、並びにメタクリル酸およびメタクリル酸メチルのアニオンポリマーがある。
【００３０】
経口投与に適した薬用化合物はそれぞれ所定量の式（Ｉ）の化合物を含有する個別単位形態、例えばカプセル剤、カシェ剤、吸引錠剤または錠剤であるか；散剤または顆粒剤として；水性または非水性液体中における液剤または懸濁剤として；あるいは水中油形または油中水形乳剤として存在する。すでに述べたように、これらの組成物は活性化合物および賦形剤（１種以上の追加成分からなる）を接触させる工程からなる適当な製薬方法により製剤化することができる。組成物は一般に活性化合物を液状および／または微粉固体状賦形剤と均一かつ均質に混合し、その後必要に応じて生成物を造形することにより製造される。したがって、例えば錠剤は化合物の粉末または顆粒を場合により１種以上の追加成分と一緒に加圧または振とうすることにより製造することができる。加圧錠剤は例えば粉末または顆粒のようなさらさらした形態の化合物を適当な機械で場合により結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤および／または１種以上の界面活性剤／分散剤と混合して錠剤化することができる。付形錠剤は不活性液状希釈剤で湿らせた粉末状の化合物を適当な機械で造形することにより製造することができる。
【００３１】
経口（舌下）投与に適した医薬組成物には式（Ｉ）の化合物を芳香物質、通常はスクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴムと一緒に含有する吸引錠剤、並びに化合物を不活性塩基、例えばゼラチンおよびグリセロール、またはスクロースおよびアラビアゴムと一緒に含有するトローチがある。
【００３２】
非経口投与に適した医薬組成物には好ましくは予定されたレシピエントの血液と等張である、式（Ｉ）の化合物の好ましくは無菌の水性製剤がある。これらの製剤は好ましくは静脈内的に投与されるが、投与はまた注射により皮下的、筋肉内的または皮内的に行うこともできる。これらの製剤は例えば化合物を水と混合し、得られた溶液を滅菌し、血液と等張にすることにより製造することができる。本発明の注射剤は一般に０.１〜５重量％の活性化合物を含有する。
【００３３】
経腸投与に適した医薬組成物は好ましくは１回投与の坐剤形態である。これらは式（Ｉ）の化合物を１種以上の慣用の固体状賦形剤、例えばカカオ脂と混合し、生成した混合物を型の中に入れることにより製造することができる。
【００３４】
皮膚に局所投与するのに適した医薬組成物は好ましくは軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、パスタ剤、噴霧剤、エアゾル剤または油剤の形態である。使用できる賦形剤はワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコールおよび２種以上のこれらの物質の組み合わせである。活性化合物は一般に組成物の０.１〜１５重量％、例えば０.５〜２重量％の濃度で存在する。
【００３５】
経皮投与もまた可能である。経皮投与に適した医薬組成物は患者の表皮と長時間ぴったり接触させるのに適した単一パッチの形態である。好適には、このようなパッチは接着促進剤中で溶解および／または分散させた、あるいはポリマー中で分散させた、場合により緩衝剤で処理した溶液中の活性化合物からなる。好適な活性化合物濃度は約１％〜３５％、好ましくは約３％〜１５％である。１つの可能性として、例えば「製薬リサーチ」、２（６）、３１８（１９８６年）に記載のようにして活性化合物を電気輸送またはイオン泳動により放出することができる。
【００３６】
本発明はラセミ体、ラセミ混合物および純粋なエナンチオマーの形態の式Ｉの化合物、並びにそれらのジアステレオマーおよびその混合物に関する。
式Ｉの化合物、その医薬上許容される塩および生理的に作用する誘導体は脂質代謝において好ましい作用を示す。本化合物は単独で、または他の脂質を減らす活性化合物と組み合わせて使用することができる。本化合物は脂質代謝障害、特に高脂血症の予防、特に治療に適している。式Ｉの化合物はまた、血清中のコレステロール濃度に影響を与えるのに、さらに動脈硬化性の症状を予防および治療するのに適している。
次の試験結果は本発明の化合物の薬理活性を明らかにしている。
【００３７】
本発明の化合物の生物学的試験はウサギ回腸の刷子縁の膜胞において［3Ｈ］−タウロコール酸塩の吸引阻害を測定することにより行った。阻害試験は次のようにして行った。
【００３８】
１．ウサギ回腸からの刷子縁膜胞の標本作製
小腸の腸細胞からの刷子縁膜胞の標本作製はいわゆるＭｇ2+沈殿法により行った。雄のニュージーランド産ウサギ（２〜２.５kgの体重）を０.５mlのＴ６１（登録商標）、すなわち２.５mgのテトラカインＨＣｌ、１００mgのエムブトラミドおよび２５mgの沃化メベゾニウムの水溶液の静脈内注射により致死させた。小腸を取り出し、氷冷生理的食塩水ですすいだ。小腸の末端７／１０（ロ−腸方向で測定した；活性Ｎａ+−依存型胆汁酸輸送系を含む末端回腸）を使用して刷子縁膜胞の標本を作成した。その腸を窒素下、プラスチック袋にいれて−８０℃で冷凍した。膜胞の標本を作製するために、冷凍した腸を水浴中、３０℃で溶かした。粘膜をこすり取って、６０mlの氷冷１２mMのトリス／ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７.１）／３００mMのマンニトール、５mMのＥＧＴＡ／１０mg／Ｌのフッ化フェニルメチルスルホニル／１mg／Ｌのダイズトリプシンインヒビター（３２Ｕ／mg）／０.５mg／Ｌウシ肺トリプシンインヒビター（１９３Ｕ／mg）／５mg／Ｌのバトラシン中で懸濁した。氷冷蒸留水で３００mlまで希釈した後、混合物を氷で冷却しながらUltraturrax（１８−ロッド、IKA Werk Sataufen、 ドイツ）を最大値の７５％で３分間使用して均質化した。３mlの１Ｍ ＭｇＣｌ2溶液（最終濃度１０mM）を加えた後、混合物を正確に１分間０℃で放置した。Ｍｇ2+を加えることにより細胞膜は凝集し、刷子縁膜を除いて沈殿する。３０００×ｇ（５０００rpm、 ＳＳ−３４ローター）で１５分間遠心した後、沈殿物を捨て、刷子縁膜を含有する上澄みを４８,０００×ｇ（２０,０００rpm、ＳＳ−３４ローター）で３０分間遠心した。上澄みを捨て、沈殿物をPotter Elvejhemホモジナイザー(Ｂｒａｕｎ社製、 ９００ｒｐｍ、 １０ストローク）を使用して６０mlの１２mMのトリス／ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７.１）／６０mMのマンニトール、５mMのＥＧＴＡ中で再び均質化した。０.１mlの１Ｍ ＭｇＣｌ2溶液を加え、０℃で１５分間インキュベートした後、混合物を再び３０００×ｇで１５分間遠心した。次に上澄みを再び４８,０００×ｇ（２０,０００rpm、ＳＳ−３４ローター）で３０分間遠心した。沈殿物を３０mlの１０mMのトリス／ヘペス緩衝液（ｐＨ７.４）／３００mMのマ ンニトールに取り、Potter Elvejhemホモジナイザー（１０００rpm、２０ストローク）で再び均質に懸濁した。４８,０００×ｇ（２０,０００rpm、ＳＳ−３４ローター）で３０分間遠心した後、沈殿物を０.５〜２mlのトリス／ヘペス緩衝液（ｐＨ７.４）／２８０mMのマンニトール（最終濃度２０mg／ml）に取り、２７ゲージ針のツベルクリンシリンジを使用して再び懸濁した。膜胞は標本作製後に輸送試験で直接使用するか、または液体窒素中で４mgずつ−１９６℃で保存した。
【００３９】
２．回腸の刷子縁膜胞におけるＮａ+−依存型［3Ｈ］タウロコール酸塩の吸収阻害
上記の刷子縁膜胞における基質の吸収量をいわゆる膜ろ過法により定量した。相当するリガンド（９０μl）と一緒にインキュベーション培地を含有するポリスチレン製インキュベーション管（１１×７０mm）の壁に１０μlの膜胞懸濁液（１００μgのタンパク質）をピペットで液滴として移した。インキュベーション培地は０.７５μl＝０.７５μCi［3Ｈ（Ｇ）］−タウロコール酸塩（比活性：２.１ Ｃｉ／ミリモル）／０.５μlの１０mMのタウロコール酸塩／８.７５μlのナトリウム輸送緩衝液（１０mMのトリス／ヘペス（ｐＨ７.４）／１００mMのマンニトール／１００mMのＮａＣｌ）（Ｎａ−Ｔ−Ｂ）または８.７５μlのカリウム輸送緩衝液（１０mMのトリス／ヘペス（ｐＨ７.４）／１００mMのマンニトール／１００mMのＫＣｌ）（Ｋ−Ｔ−Ｂ）および実験に応じてＮａ−Ｔ緩衝液またはＫ−Ｔ緩衝液に溶解した８０μlの当該阻害物質溶液からなる。インキュベーション培地をフッ化ポリビニリデン膜フィルター（ＳＹＨＶＬＯ ４ＮＳ、０.４５μm、４mmφ、ミリポア社製、ドイツ）を通してろ過した。膜胞をインキュベーション培地と混合することにより輸送測定を開始した。インキュベーションバッチ中のタウロコール酸塩濃度は５０μMである。望ましいインキュベーション時間（通常は１分間）後、１ml氷冷停止剤溶液（１０mMのトリス／ヘペス（ｐＨ７.４）／１５０mMのＫＣｌ）を加えて輸送を停止した。生成した混合物を直ちに硝酸セルロースの膜フィルター（ＭＥ ２５、０.４５μm、２５mmの直径、シュライヒャー＆シューエル社製、ドイツ）を通して２５〜３５ミリバールの真空下で吸引ろ過した。フィルターを５mlの氷冷停止剤溶液ですすいだ。
【００４０】
放射性標識したタウロコール酸塩の吸引量を測定するために、膜フィルターを４mlのシンチレーターQuickszint 361 (Zinsser Analytik GmbH、 ドイツ）で溶解し、放射能をTriCarb 2500測定装置（キャンベラパッカードＧｍｂＨ、ドイツ）において液体シンチレーション測定法により測定した。標準サンプルを使用して装置を較正し、存在する化学発光を補正した後、ｄｐｍ（１分あたりの分解）として測定値を得た。対照値をそれぞれＮａ−Ｔ−ＢおよびＫ−Ｔ−Ｂ中で測定した。Ｎａ−Ｔ−ＢおよびＫ−Ｔ−Ｂにおける吸引量の差からＮａ+−依存型輸送含量を得た。Ｎａ+−依存型輸送含量を対照に基づいて５０％阻害する阻害物質濃度をＩＣ50Ｎａ+と表示した。
【００４１】
薬理データは末端の小腸における本発明の化合物と腸の胆汁酸輸送系の相互作用を調べた試験の結果である。その結果を表１に示す。
ウサギ回腸の刷子縁膜胞における［3Ｈ］−タウロコール酸塩の吸引阻害の測定値を表１に示す。タウロケンデオキシコール酸塩（ＴＣＤＣ）のような参照物質のＩＣ50Na値と特定の試験物質のＩＣ50Na値の商を示す。
【００４２】
【表１】
0004598953.tif 000013
【００４３】
次の実施例により本発明をより詳しく説明するが、それらは本発明を実施例で記載した生成物および態様に制限するものではない。
【００４４】
【実施例】
実施例１
ａ．
【化１９】
0004598953.tif 000014
ｎ−ヘキサン中の１５％濃度ｎ−ブチルリチウム（３６６ml）を−５５℃で７７０mlのテトラヒドロフラン中の５０ｇ（０.５４モル）のピコリンに滴加した。混合物を室温まで加温し、再び−５５℃まで冷却した。５７０mlのテトラヒドロフラン中の７７ｇのＮ,Ｎ−ジメチルベンズアミド（０.５２モル）をゆっくりと滴加し、次に混合物を室温まで加温し、さらに１時間攪拌した。５５０mlの１Ｎ塩酸を加えた後、混合物を酢酸エチル（３×）で抽出し、有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。残留物を蒸留して４７.５ｇ（４７％）の生成物を得た。沸点１３４〜１３６℃／０.２８ミリバール。
【００４５】
ｂ．
【化２０】
0004598953.tif 000015
２０.０ｇ（０.１３モル）のｏ−ニトロベンズアルデヒド、１２.５ｇ（０.１３モル）の２−アミノピリジンおよび０.３ｇのｐ−トルエンスルホン酸を水分離器を使用して１５０mlのトルエン中で２.５時間加熱還流した。溶液を冷却し、生成した沈殿物を吸引ろ過し、乾燥した。
収量：１８.１ｇ（６０％）の生成物
融点：９３〜９５℃
Ｃ12Ｈ9Ｎ3Ｏ2（227）    ＭＳ(ＦＡＢ) ２２８    Ｍ＋Ｈ+
【００４６】
ｃ．
【化２１】
0004598953.tif 000016
実施例１ａからの１２.０ｇ（６１ミリモル）のケトンおよび実施例１ｂからの１５.０ｇ（６６ミリモル）のイミンを蒸気浴で４５分間加熱した。反応混合物を加熱しながらエタノールに溶解した。冷却した後、沈殿物を吸引ろ過し、エタノールから再結晶した。
収量：１１.８ｇ（４６％）の生成物
Ｃ25Ｈ20Ｎ4Ｏ3（424.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ４２５    Ｍ＋Ｈ+
【００４７】
ｄ．
【化２２】
0004598953.tif 000017
実施例１ｃからの８.０ｇ（１８.８ミリモル）のケト化合物を３００mlのテトラヒドロフラン／水（１０：１）に溶解し、４.６７ｇのホウ水素化ナトリウムを加え、混合物を室温で２時間攪拌した。次に、溶液を蒸発させ、１００mlの２Ｎ塩酸を残留物に加え、混合物を蒸気浴で加熱して、すべてを溶解した。冷却した後、溶液を４Ｎ ＮａＯＨ溶液で塩基性にし、酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル＝１：１）により処理した。２種のラセミ化合物を生成物として得た。
第１フラクション：３.９ｇ(４８％)の非極性ラセミ化合物(実施例１ｄ／１)
Ｃ25Ｈ22Ｎ4Ｏ3（426.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ４２７  Ｍ＋Ｈ+
第２フラクション：２.５ｇ(３１％)の極性ラセミ化合物(実施例１ｄ／２)
Ｃ25Ｈ22Ｎ4Ｏ3（426.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ４２７    Ｍ＋Ｈ+
【００４８】
ｅ．
【化２３】
0004598953.tif 000018
実施例１ｄ／１からの２.５ｇ（５.８６ミリモル）の非極性ラセミ化合物を３００mlのメタノールに溶解し、約２０mgの１０％Ｐｄ／Ｃを加え、水素化をＨ2雰囲気下、室温で行なった。触媒をろ去し、溶液を蒸発させた。残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ｎ−ヘプタン／酢酸エチル＝７:１３）により処理した。
収量：１.９ｇ（８２％）の生成物
Ｃ25Ｈ24Ｎ4Ｏ（396.22）    ＭＳ(ＦＡＢ) ３９７    Ｍ＋Ｈ+
【００４９】
ｆ．
【化２４】
0004598953.tif 000019
実施例１ｅからの１００mgのラセミ化合物を分取用ＨＰＬＣによりエナンチオマーに分離した。ｎ−ヘキサン／エタノール（４：１）を使用してＣＳＯ−キラルパックカラム（ダイセル社製）上で分離を行なった。４０mgの（−）−エナンチオマー（実施例１ｆ／１）を第１フラクションとして得、そして４０mgの（＋）−エナンチオマー（実施例１ｆ／２）を第２フラクションとして得た。
【００５０】
ｇ．
【化２５】
0004598953.tif 000020
実施例１ｅからの４.０ｇ（１０.１ミリモル）のアミノ化合物（非極性ラセミ化合物）、４.８５ｇ（１０.３ミリモル）のＮ−Fmoc−Ｄ−Lys(ＢＯＣ)ＯＨ、４.０ｇ（１２.２ミリモル）のＴＯＴＵおよび２.７mlのトリエチルアミンを３００mlのジメチルホルムアミドに溶解し、溶液を室温で２時間攪拌した。反応混合物を水に注ぎ、酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させた。残留物を１５０mlのジメチルホルムアミド／ピペリジン（２：１）に溶解してＦｍｏｃ基を除去し、溶液を室温で１時間攪拌した。それを水に注ぎ、酢酸エチル（３×）で抽出した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させた。シリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝９：１）により処理して４.０ｇ（６３.５％）の生成物を得た。
Ｃ36Ｈ44Ｎ6Ｏ4（624.3）    ＭＳ(ＦＡＢ) ６２５    Ｍ＋Ｈ+
【００５１】
ｈ．
【化２６】
0004598953.tif 000021
５.０ｇ（１１.８６ミリモル）の３β−アミノコール酸メチルエステル（欧州特許出願ＥＰ ０６１４９０８）、１.３ｇ（１３ミリモル）の無水コハク酸および１６.５mlのトリエチルアミンを７５mlのテトラヒドロフランに溶解し、溶液を室温で１時間攪拌した。溶液を蒸発させた。残留物を水に溶解し、溶液を塩酸で酸性にし、酢酸エチル（３×）で抽出した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させた。
収量：５.８ｇ（９４％）
Ｃ29Ｈ47ＮＯ7（521.3）    ＭＳ(ＦＡＢ) ５２８    Ｍ＋Ｌｉ+
【００５２】
ｉ．
【化２７】
0004598953.tif 000022
実施例１ｇからの４.０ｇ（６.４ミリモル）の化合物、実施例１ｈからの３.４５ｇ（６.６ミリモル）の胆汁酸誘導体、１.２mlのトリエチルアミン、２.１６ｇ（１６ミリモル）のヒドロキシベンゾトリアゾールおよび２.５６ｇのジシクロヘキシルカルボジイミド（１２.４ミリモル）を２５０mlのテトラヒドロフランに溶解し、溶液を室温で５時間攪拌した。混合物を蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、溶液をＮａＨＣＯ3溶液で洗浄した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させた。シリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝１９：１、次に９：１）により処理して３.１ｇ（４３％）の生成物を得た。
Ｃ65Ｈ89Ｎ7Ｏ10（1127.7）    ＭＳ(ＦＡＢ) １１３４.７    Ｍ＋Ｌｉ+
【００５３】
ｊ．
【化２８】
0004598953.tif 000023
実施例１ｉからの３.１ｇ（２.７５ミリモル）のメチルエステルを２００mlのエタノールに溶解し、３１mlの１Ｎ ＮａＯＨ溶液を加え、混合物を室温で５時間攪拌した。混合物を蒸発させ、残留物を水に溶解し、飽和ＮａＨ2ＰＯ4溶液を加えた。混合物を酢酸エチル（２×）で抽出し、有機相をＭｇＳＯ4上で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝４：１）により処理した。
収量：２.２５ｇ（７３％）
Ｃ64Ｈ87Ｎ7Ｏ10（1113.7）    ＭＳ(ＦＡＢ) １１２０.７    Ｍ＋Ｌｉ+
【００５４】
ｋ.
【化２９】
0004598953.tif 000024
０.４８mlのエチルクロロホルメートを０℃で実施例１ｊからの１.５ｇ（１.３５ミリモル）の化合物および０.８１mlのトリエチルアミンに加え、混合物を１０分間攪拌した。その後、３０mlの０.１Ｎ ＮａＯＨ溶液に溶解した０.６ｇのタウリンを加え、混合物を室温で２４時間攪拌した。混合物を蒸発させ、残留物を少量の水に溶解し、溶液を飽和ＮａＨ２ＰＯ４溶液に注いだ。混合物を酢酸エチル（３×）で抽出し、有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、蒸発させた。シリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝４：１、次にメタノール）により処理した後、０.９８ｇ（６０％）のタウリン抱合体を得た。
Ｃ66Ｈ92Ｎ8Ｏ12Ｓ（1270.7）    ＭＳ(ＦＡＢ) １２４３.６  Ｍ＋Ｎａ+
【００５５】
実施例２
ａ．
【化３０】
0004598953.tif 000025
実施例１ｅからの２.５ｇ（６.３１ミリモル）のアミノ化合物（非極性ラセミ化合物）、２.２ｇ（６.５２ミリモル）のFmoc−Ｌ−プロリン、２.５ｇ（７.６２ミリモル）のＴＯＴＵおよび１.７mlのトリエチルアミンを１００mlのジメチルホルムアミドに溶解し、溶液を室温で３時間攪拌した。反応混合物を半分まで蒸発させ、水を加え、混合物を酢酸エチル（３×）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ4上で乾燥し、蒸発させた。シリカゲル上のクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘプタン＝７：３）により処理した後、３.８５ｇ（８５％）の生成物を得た。このＦｍｏｃで保護された中間体生成物（３.６ｇ）を１１０mlのピペリジン／ＤＭＦ（１：１０）に溶解し、溶液を室温で１時間攪拌した。混合物を蒸発させ、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝１９：１、次に９：１）により処理した。
収量：１.８ｇ（７２.５％）
Ｃ30Ｈ31Ｎ5Ｏ2（493.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ４９４    Ｍ＋Ｈ+
【００５６】
ｂ．
【化３１】
0004598953.tif 000026
実施例２ａからの１.７ｇ（３.４４ミリモル）の化合物を１５０mlのＤＭＦ中において１.４ｇ（３.６１ミリモル）のFmoc−Ｌ−フェニルアラニン、１.９ｇ（５.８０ミリモル）のＴＯＴＵおよび１.０mlのトリエチルアミンと一緒に室温で４時間攪拌した。反応混合物を蒸発させ、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘプタン＝４：１）により処理した。２つのフラクションを得た：
第１フラクション：１.２８ｇ（４３％）の非極性ジアステレオマー（実施例２ｂ／１）
Ｃ54Ｈ50Ｎ6Ｏ5（862.4）    ＭＳ(ＦＡＢ) ８６３.４  Ｍ＋Ｈ+
第２フラクション：０.８２ｇ（２８％）の極性ジアステレオマー（実施例２ｂ／１）
Ｃ54Ｈ50Ｎ6Ｏ5（862.4）    ＭＳ(ＦＡＢ) ８６３.４    Ｍ＋Ｈ+
【００５７】
ｃ．
【化３２】
0004598953.tif 000027
実施例２ｂ／２からの０.８ｇ（０.９３ミリモル）の化合物を３３mlのＤＭＦ／ピペリジン（１０：１）に溶解し、混合物を室温で１時間攪拌した。蒸発させた後、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝１９：１、次に９：１）により処理した。
収量：０.３５ｇ（５９％）
Ｃ39Ｈ40Ｎ6Ｏ3（640.3）    ＭＳ(ＦＡＢ) ６４１.３    Ｍ＋Ｈ+
【００５８】
ｄ．
【化３３】
0004598953.tif 000028
実施例２ｃからの０.５ｇ（０.７８ミリモル）の化合物および実施例１ｈからの０.４５ｇ（０.８６ミリモル）の胆汁酸誘導体を実施例１ｉに記載の工程に従って反応させた。０.３８ｇ（４３％）の生成物を得た。
Ｃ68Ｈ85Ｎ7Ｏ9（1143.6）    ＭＳ(ＦＡＢ) １１４４.６    Ｍ＋Ｈ+
【００５９】
ｅ．
【化３４】
0004598953.tif 000029
実施例１ｄからの０.３１ｇ（０.２７ミリモル）のメチルエステルを３０mlのエタノールに溶解し、３.０mlの１Ｎ ＮａＯＨ溶液を加え、混合物を室温で１２時間攪拌した。反応混合物を蒸発させ、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝４：１）により処理した。
収量：２２０mg（７２％）
Ｃ67Ｈ83Ｎ7Ｏ9（1129.6）    ＭＳ(ＦＡＢ) １１３０.６    Ｍ＋Ｈ+
【００６０】
実施例３
【化３５】
0004598953.tif 000030
０.３ｇ（０.７８ミリモル）の３−（４−アミノフェニル）−１−フェニル−２−ピリジン−２−イル−３−（ピリジン−２−イルアミノ）−プロパン−１−オール（実施例１ｅと同様にして製造した）、０.３４ｇ（０.８３ミリモル）のウルソコール酸、０.３４ｇ（２.５２ミリモル）のヒドロキシベンゾトリアゾール、０.４１ｇ（２ミリモル）のジシクロヘキシルカルボジイミドおよび０.１５mlのトリエチルアミンを５０mlのテトラヒドロフラン中、室温で２日間攪拌した。反応終了後、固体をろ去した。溶液を蒸発させ、残留物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（塩化メチレン／メタノール＝９：１、次に１７：３）により処理した。０.３３ｇ（５５％）の生成物を得た。
Ｃ49Ｈ62Ｎ4Ｏ5（786.5）    ＭＳ(ＦＡＢ) ７８７.５    Ｍ＋Ｈ+
【００６１】
相当する出発化合物から出発して実施例１〜３と同様にして実施例４〜１４の化合物を得た。
実施例４
【化３６】
0004598953.tif 000031
Ｃ49Ｈ62Ｎ4Ｏ5（787.1）    ＭＳ(ＦＡＢ) ７８８.１    Ｍ＋Ｈ+
【００６２】
実施例５（非極性ジアステレオマー）
【化３７】
0004598953.tif 000032
Ｃ53Ｈ67Ｎ5Ｏ7（886.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ８８７.２    Ｍ＋Ｈ+
【００６３】
実施例６
【化３８】
0004598953.tif 000033
Ｃ54Ｈ69Ｎ5Ｏ7（900.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ９０１.２    Ｍ＋Ｈ+
【００６４】
実施例７（極性ジアステレオマー）
【化３９】
0004598953.tif 000034
Ｃ53Ｈ67Ｎ5Ｏ7（886.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ８８７.２    Ｍ＋Ｈ+
【００６５】
実施例８
【化４０】
0004598953.tif 000035
Ｃ53Ｈ67Ｎ5Ｏ7（886.2）    ＭＳ(ＦＡＢ) ８８７.２    Ｍ＋Ｈ+
【００６６】
実施例９
【化４１】
0004598953.tif 000036
Ｃ60Ｈ81Ｎ7Ｏ8（1028.4）    ＭＳ(ＦＡＢ) １０２９.４    Ｍ＋Ｈ+
【００６７】
実施例１０
【化４２】
0004598953.tif 000037
Ｃ59Ｈ79Ｎ7Ｏ8（1014.3）    ＭＳ(ＦＡＢ) １０１５.３    Ｍ＋Ｈ+
【００６８】
実施例１１
【化４３】
0004598953.tif 000038
Ｃ67Ｈ83Ｎ7Ｏ9（1130.5）    ＭＳ(ＦＡＢ) １０３１.５    Ｍ＋Ｈ+
【００６９】
実施例１２
【化４４】
0004598953.tif 000039
Ｃ64Ｈ87Ｎ7Ｏ10（1114.4）    ＭＳ(ＦＡＢ) １１１５.４    Ｍ＋Ｈ+
【００７０】
実施例１３
【化４５】
0004598953.tif 000040
Ｃ68Ｈ85Ｎ7Ｏ9（1144.5）    ＭＳ(ＦＡＢ) １１４５.５    Ｍ＋Ｈ+
【００７１】
実施例１４
【化４６】
0004598953.tif 000041
Ｃ66Ｈ90Ｎ8Ｏ11（1171.5）    ＭＳ(ＦＡＢ) １１７２.５    Ｍ＋Ｈ+