(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗エラスターゼ活性又は抗炎症活性と関連する、紅斑と歯肉炎との疾患の治療用の医薬組成物を調製するためのテルペン類を実質的に含有していないイチョウ葉のフラボノイド抽出物の使用において、前記抽出物がフラボノイドグリコシドを28〜35％及びテルペン類を最大で1％含有し且つ前記抽出物をセラミド類と組み合わせることを特徴とする、フラボノイド抽出物の使用。
【請求項２】
エラスターゼを阻害するための組成物を調製するための請求項１記載の使用。
【請求項３】
炎症を抑制するための組成物を調製するための請求項１記載の使用。
【請求項４】
前記抽出物がフラボノイドグリコシドを28〜32％含有するものであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記抽出物がテルペン類を最大で0.5％含有するものであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
抗エラスターゼ活性又は抗炎症活性と関連する、紅斑と歯肉炎との疾患の治療を目的とし且つ有効成分としてテルペン類を実質的に含有していないイチョウ葉のフラボノイド抽出物と賦形剤とを含有する医薬組成物において、前記抽出物がフラボノイドグリコシドを28〜35％及びテルペン類を最大で1％含有し且つ前記抽出物をセラミド類と組み合わせることを特徴とする医薬組成物。
【請求項７】
前記抽出物がフラボノイドグリコシドを28〜32％含有するものであることを特徴とする請求項６記載の組成物。
【請求項８】
前記抽出物がテルペン類を最大で0.5％含有するものであることを特徴とする請求項６又は７記載の組成物。
【請求項９】
前記抽出物を0.05〜0.6％含有することを特徴とする請求項６〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
セラミド類を0.05〜0.3％含有することを特徴とする請求項６〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
ゲル又はチューインガムの形態の請求項１０記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、口腔歯科分野(dentibuccal field)におけるイチョウ(ginkgo biloba)のフラボノイド抽出物、さらに詳しくはテルペン類を実質的に含有していないフラボノイド抽出物の使用に関する。また、本発明はかかる抽出物を含有する口腔歯科用組成物に関する。
本発明のテルペン類を実質的に含有していないイチョウ葉のフラボノイド抽出物は、フラボノイドグリコシド類を含有し、しかもテルペン類をほとんど又は全く含有していない。前記抽出物がテルペン類を含有している場合には、テルペン含有量は最大で１％、好ましくは最大で0.5％である。この抽出物は、フラボノイドグリコシド類を28〜35％、好ましくは28〜32％含有する。かかる抽出物は刈り込んだ(pruned)若いイチョウの木の葉から得ることが好ましい。
本発明の要旨は、かかる抽出物の製造方法であって、イチョウ葉を溶媒で抽出する数工程の抽出工程からなり且つ前記の抽出工程のうちの一つが脱テルペン工程であり、使用する溶媒が式RC(O)OR′(式中、Ｒ及びＲ′はそれぞれ独立して低級アルキル基を表す)で示される化合物が単独であるか又は該化合物と炭素原子を少なくとも５個有する飽和脂肪族炭化水素との混合物であることを特徴とする前記抽出物の製造方法である。抽出工程は前記方法の任意の段階で実施することができる。脱テルペン工程で使用する溶媒は、飽和脂肪族炭化水素を０〜20％含有するものであるのが好ましい。
脱テルペン工程以外の抽出工程は、文献、特に欧州特許第431535号、欧州特許第431536号、欧州特許第360556号及び欧州特許第324197号各明細書において知られている。これらの特許明細書は本出願において参考文献として参照される。
前記の定義において、低級アルキルという用語は、炭素原子を１〜６個有する直鎖又は分岐鎖アルキル基、特に炭素原子を１〜４個有するアルキル基、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基及びtert-ブチル基を表す。前記の式RC(O)OR′で示され、式中のＲ及びＲ′がメチル基、エチル基又はプロピル基を表す場合の溶媒が使用することが好ましく、特に酢酸エチルを使用することが好ましい。前記の飽和脂肪族炭化水素はヘキサン、ヘプタン及びオクタンの中から選択することができる。ヘプタンを使用するのが好ましい。
前記のイチョウ葉のフラボノイド抽出物は、人の歯ぐきに対して抗エラスターゼ活性及び抗炎症活性を有する。これらの特性は以下の実験の部において例証される。
前記のイチョウ抽出物はこれらの特性により医薬用途に適している。従って、本出願の要旨は、医薬、特に口腔歯科分野向け医薬としての前記のイチョウ葉のフラボノイド抽出物である。
また、本発明の要旨は、特に口腔歯科分野の治療用の医薬組成物であって、有効成分として前記のイチョウ葉のフラボノイド抽出物を場合によっては製薬学的に許容し得る支持体(support)と組み合せて含有する医薬組成物である。
本発明のさらに具体的な要旨は、少なくとも有効量の前記のイチョウ葉の抽出物を抗エラスターゼ剤(anti-elastasic agent)として含有する抗エラスターゼ医薬組成物である。また、本発明のさらに具体的な要旨は、少なくとも有効量の前記のイチョウ葉抽出物を抗炎症剤として含有する抗炎症医薬組成物である。
本発明の医薬組成物は、前記のイチョウ葉抽出物を0.05〜0.6％、好ましくは0.1〜0.5％含有することが好ましい。また、かかる組成物は、同様の活性又は補足の活性を有する別の薬剤の少なくとも１種を含有し得る。本発明の医薬組成物は、前記イチョウ抽出物をセラミド類と組み合わせて含有することが好ましい。かかる組成物は、イチョウ抽出物を0.1〜0.5％、セラミド類を0.05〜0.3％含有するものであるのが好ましい。
本発明の医薬組成物は、選択された投与方法に従って適当な形態で提供し得る。該医薬組成物は、溶液、縣濁液又は乳濁液のような液体の形状で提供し得る。また、前記の医薬組成物は、ゲル、スプレー、練り歯磨き又はチューインガムの形態で提供し得る。該医薬組成物はゲル又はチューインガムの形態で提供されるのが好ましい。また、該医薬組成物は、前記イチョウ葉抽出物単独又は該抽出物と適当な支持体との組み合わせの他に、かかる組成物を製造するのに常用される成分又は補助剤を含有し得る。
また、本発明の要旨は、口腔歯科分野における治療用の医薬組成物を製造するための前記イチョウのフラボノイド抽出物の使用である。
本発明のさらに詳しい要旨は、エラスターゼ阻害用の医薬組成物を製造するための前記のイチョウのフラボノイド抽出物の使用である。また、本発明のさらに詳しい要旨は、口腔歯科分野において炎症を抑制することを目的とした医薬組成物を製造するための前記のイチョウのフラボノイド抽出物の使用である。かかるフラボノイド抽出物は、単独で又は得ようとする結果に従って同様の特性又は補足の特性をもつ別の薬剤と組み合わせて、場合によっては適当な支持体の存在下で使用できる。前記の抽出物は、セラミド類と組み合わせて使用するのが好ましい。
セラミド類は全ての細胞構造に存在するスフィンゴ脂質である。また、セラミド類は植物界、特に小麦、米、大豆、キビ及びホウレン草に顕著に存在する。セラミド類は合成することもできる。セラミド類は、その構造により、セラミド類が運搬しつつある活性剤の生体有効性を相当に高めるベクターとして都合よく使用できる。本出願明細書で使用するセラミドという用語は、当業者に知られている標準的意味をもつものである。従って、セラミドという用語は、例えばモノ-又はポリグルコシルセラミドのような糖で置換されていてもよい合成又は天然起源(植物、動物又は人間)のセラミド類全てを包含する。
フラボノイドグリコシド含量が高いことから、当該技術の状態は、前記の抽出物が酸化防止活性及び抗ラジカル活性を有することを示唆している。さらにまた、一方ではその抗炎症性、抗エラスターゼ特性ばかりではなく血管調節特性及びコラーゲン活性化特性があり、他方ではその組成物中にテルペン類がほぼ全く存在しないと仮定すれば、かかる抽出物は化粧料又は皮膚科において都合よく使用できる。
また、本発明の要旨は、血管調節及び／又はコラーゲン活性化用の医薬を調製するための前記のイチョウ葉のフラボノイド抽出物の使用である。また、本発明は、血管調節剤及び／又はコラーゲン活性化剤として前記フラボノイド抽出物を含有する化粧料組成物の使用に関する。さらにまた、本発明の要旨は、前記のフラボノイド抽出物を血管調節剤及び／又はコラーゲン活性化剤として使用することを特徴とする化粧処理方法である。
また、本発明の要旨は、特に口腔歯科分野用の化粧料組成物であって前記のイチョウ葉のフラボノイド抽出物を含有する化粧料組成物である。この抽出物は、それ自体で使用できるし又は同様の活性又は補足の活性をもつ他の薬剤の少なくとも１種と組み合わせて、場合によっては適当な支持体と共に使用できる。前記のイチョウの抽出物はセラミド類と組み合わせて使用するのが好ましい。本発明の化粧料組成物は、前記のイチョウの抽出物を0.05〜0.6％と、セラミド類を0.05〜0.3％とを含有し得る。かかる組成物は、この種の用途に適した形態、例えばクリーム、乳濁液、乳液、ゲル、油剤、メークアップ製品、棒状口紅及びローションとして提供し得る。かかる組成物は、イチョウ抽出物単独又はその組み合わせ及び適当な支持体のほかに、かかる組成物を調製するのに慣用される成分又は補助剤を含有することができる。
また、本発明の要旨は、口腔歯科分野の疾患、特に歯肉炎の化粧処理用の前記のイチョウのフラボノイド抽出物である。
本発明を以下の実施例により例証する。実施例は本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではない。
実験の部
フラボノイド抽出物の製造方法
イチョウの葉を、アセトンを60％含有する水６〜12部(好ましくは８部)を用いて50〜60℃で抽出し、得られた抽出溶液を濃縮して溶液中のアセトンの量を３％未満まで減らした。この溶液を冷却し、デカントすることによって脂質を除去した。この水溶液を、ヘプタンを０〜20％含有する酢酸エチル２〜５部を用いて抽出した。得られた抽出溶液を、硫酸アンモニウムの存在下でアセトン／ブタノール混合物(アセトンの割合０〜15％)を最小限の量で用いて抽出した。得られた有機相を濃縮し、エタノールを加えて希釈した後に、得られた溶液を再度濃縮した。エタノールでさらに希釈した後に、希釈溶液を冷却し、次いで不溶性沈殿物を濾過した。得られた濾液を濃縮し、乾燥し、最後に微粉砕して、フラボノイド抽出物を均質な粉末の形態で得た。
テルペンを実質的に含有していないイチョウのフラボノイド抽出物の抗エラスターゼ活性及び抗炎症活性についての研究
１．生体外抗エラスターゼ活性についての研究
この研究の目的は、前記の抽出物だけの抗エラスターゼ活性又はセラミドと組み合わせた前記の抽出物の抗エラスターゼ活性を調べることにある。この活性は人の歯ぐきの切片について評価を行った。
使用したセラミドは、植物起源のものであり、参考文献として参照されるフランス国特許第2676936号明細書に記載の方法に従って得たものである。この方法は、極性抽出溶媒を使用して小麦から抽出し、次いで有機溶媒から再結晶することからなる。セラミド類は本質的にグルコシルセラミド類とセラミド類とからなる。
この研究のために、弾力線維網(elastic fibre network)を、抗エラスターゼ性化合物すなわち前記のイチョウ葉の抽出物を用いて又は用いずに人白血球エラスターゼ(HLE)に暴露させた。前記酵素を作用させた後に残る弾力線維網を(+)-カテキンで染色した。
抜歯中に採取した正常な口腔粘膜の生検から得られた５種類の試料から８μｍの凍結切片を得た。
プロトコール：
最初の段階では、弾力線維を破壊するのに必要な人白血球エラスターゼの濃度を測定した。白血球エラスターゼを前記の皮膚(skin)切片に周囲温度及び湿潤雰囲気中で２時間施用した。アセトン中で固定化し、エタノール中で75℃で脱水した後に、残った弾力線維を(+)-カテキンで染色した。弾力線維の完全な破壊は、人白血球エラスターゼ10μｍ／mlの存在下で得られた。
前記酵素に対する前記化合物すなわち前記のイチョウ葉の抽出物の固定を実証するために、乳濁液の形態の前記のイチョウ葉の抽出物と、10μｍ／mlの人白血球エラスターゼとを同様の量で同時に前記切片に周囲温度で２時間施用した。前記のイチョウ葉の抽出物の抗エラスターゼ活性を、(PMSF)すなわち強力エラスターゼ阻害剤の活性と比較した。
画像解析による形態学的分析により、下記の表１に示す結果が得られた。
0004598900.tif 000002
２．抗炎症活性の研究
この研究で試験した組成物は、ゲルの形態で提供され、前記のイチョウ抽出物0.5％と、前記の抗エラストラーゼ活性の研究において定義した植物性セラミド0.1％とを含有する。
この研究は軽度で並の(moderate)酒石酸性歯肉炎に罹った患者20人について行った。患者にその歯肉粘膜のレベルで前記ゲルを１日当たり２回、１ヶ月間投与した。歯肉の状態の臨床評価は、評価システムを使用して投与日(Ｄ0)及び投与28日目(Ｄ28)に行った。主な評価基準は、紅斑と歯肉炎の評価である。治療剤の抗炎症作用は紅斑の減少と歯肉炎の軽減とにより実証されねばならない。
臨床上、紅斑は、歯ぐきの紅斑の外観(赤色)と高度の歯肉炎とにより実証される。歯ぐきの正常状態への回復、紅斑の減少、歯肉炎の状態及び症状の程度が抗炎症活性の臨床的な証明となる。
第二の基準は、自然発生する痛みと噛んだ際の痛みの評価と、出血〔強さ及び様相(topography)〕の評価である。
基準の取り扱い
炎症活性の程度を示す主な３つの基準、“歯肉炎”、“歯ぐきの色”及び“疾患の様相”には、表された結果について係数２を割り当てた。
“自然発生する痛み”、“噛んだ際の痛み”及び“乳頭(papillary)出血”(強さと様相)には、表された結果について係数１を割り当てた。
−  歯肉炎の評価について、評点は下記の通りである：
(０)  歯肉炎の程度が０である場合：歯ぐきが正常であり、炎症がなく、色の変化がなく、出血がない；
(２)  歯肉炎の程度が１である場合：歯肉炎が僅かにあり、炎症がわずかにあり、歯ぐきの表面にわずかに変化があり、出血がない；
(４)  歯肉炎の程度が２である場合：歯肉炎が中程度であり、炎症が中程度であり、紅斑、浮腫、押すか圧を加えると出血する；
(６)  歯肉炎の程度が３である場合：歯肉炎が極めて広範囲にわたり、炎症がひどく、明白な紅斑、浮腫、自然出血する傾向、潰瘍がある；
−  歯ぐきの色の評価については、評点は次の通りである：
(０)  正常である
(２)  紅斑がわずかである
(４)  紅斑が中程度である
(６)  紅斑がひどい
−  歯ぐきの色の全体的な様相の評価：
次の６つの部分が定義される：RiUp、FrUp、LeUp、RiLo、FrLo及びLeLo(Fr、Up、Lo、Ri及びLeはそれぞれ前部、上部、下部、右側及び左側を表す)
(０)  冒された部分がない
(２)  冒された部分が１個所
(４)  冒された部分が２個所
(６)  冒された部分が３個所
(８)  冒された部分が４個所以上
−  乳頭性(papillary)出血(Engelberger et Coll.,1993)の評価については、評点は次の通りである：
(０)  出血の程度が０である場合：精査した(probing)後に10〜30秒間出血がない；
(２)  出血の程度が１である場合：僅かな出血(血液の微細なしたたりがある)；
(４)  出血の程度が２である場合：中程度の出血；
(６)  出血の程度が３である場合：強度の出血；
−  乳頭性(papillary)出血の様相の評価：
(０)  冒された部分がない
(１)  冒された部分が１個所
(２)  冒された部分が２個所
(３)  冒された部分が３個所
(４)  冒された部分が４個所以上
−  評価基準“自然発生する痛みと噛んだときの痛み”の変化は、投与日(Ｄ0)及び投与28日目(Ｄ28)に肉眼による尺度を使用して評価する。
(０)  痛みが全くないか又は痛みが僅かである場合(肉眼による尺度で０〜2.5cmの測定値)
(１)  中程度の痛みである場合(肉眼による尺度で2.5〜５cmの測定値)
(２)  著しい痛みである場合(肉眼による尺度で５〜7.5cmの測定値)
(３)  強度の痛みである場合(肉眼による尺度で7.5〜10cmの測定値)：
−  次いで、個々の評点を一緒に加えることによって全体の尺度を計算する。
正常状態への回復は評点０に相当する。
最大の病状の重さは評点33に相当する。
得られた結果を以下の表２に示す。
0004598900.tif 000003
この酒石酸性歯肉炎に罹っている患者20人についての研究により、植物性セラミドと組み合わせた前記のイチョウ葉の抽出物の抗炎症活性が実証された。
この抗炎症活性は、20例のうちの11例においては歯肉炎と歯ぐきの紅斑が消失し、他の８例においては歯肉炎と歯ぐきの紅斑が改善されるという顕著な臨床形態をとる。
乳頭性出血に関する評点では顕著な改善が認められ、また全ての場合の歯ぐきの痛み(自発発生する痛みと噛んだ際の痛み)については全ての場合において完全な消失が認められた。