(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造を有する（９Ｚ）または（全Ｅ）異性体であるレチノイド化合物。
【化１】
0004435418.tif 000034
（式中、Ｒ１は、フェニル、ベンジル、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８）、アリールおよびアリールアルキルより成る群から選択され、そしてＲ２は、Ｈ、エチル、メチル、ｎ−プロピルおよびｉ−プロピルより成る群から選択され、ｎは０から３である。）
【請求項２】
下記構造を有する（９Ｚ）異性体である請求項１記載のレチノイド化合物。
【化２】
0004435418.tif 000035
（式中、アリール環上に水素を有し；あるいはアリール環の５’位、６’位または７’位にメトキシ基を有し；あるいはシクロアルキル環の４’位にメチル基を有し；あるいはアリール環の５’位および７’位にメチル基を有する。）
【請求項３】
下記構造を有する（全Ｅ）異性体である請求項１記載のレチノイド化合物。
【化３】
0004435418.tif 000036
（式中、アリール環の７’位にメトキシ基を有する。）
【請求項４】
下記構造を有する（９Ｚ）異性体である請求項１記載のレチノイド化合物。
【化４】
0004435418.tif 000037
【請求項５】
請求項１から４いずれか１項記載の化合物を含有することを特徴とする、新生物形成症状を示す個体を処置するための組成物。
【請求項６】
請求項１から４いずれか１項記載の化合物を含有することを特徴とする、個体での新生物形成症状の発生を軽減または予防するための組成物。
【請求項７】
下記構造を有する（９Ｚ）異性体である化合物：
【化５】
0004435418.tif 000038
（式中、アリール環上に水素を有し；あるいはアリール環の５’位、６’位または７’位にメトキシ基を有し；あるいはシクロアルキル環の４’位にメチル基を有し；あるいはアリール環の５’位および７’位にメチル基を有する。）；および、
下記構造を有する（全Ｅ）異性体である化合物：
【化６】
0004435418.tif 000039
（式中、アリール環の７’位にメトキシ基を有する。）;
より成る群から選択される２または２以上のレチノイド化合物の組合せを含む、新生物形成症状を示す個体を処置するための組成物。
【請求項８】
前記化合物を、４−ヒドロキシフェニルレチナミドと組み合わせたことを特徴とする請求項５から７いずれか１項記載の組成物。
【請求項９】
前記新生物形成症状が、皮膚癌、胸部癌、膀胱癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌および白血病より成る群から選択されることを特徴とする請求項５から８いずれか１項記載の組成物。
【請求項１０】
前記化合物が、１０ｍｇ／ｋｇから３００ｍｇ／ｋｇまでの用量で投与されることを特徴とする請求項５から９いずれか１項記載の組成物。
【請求項１１】
個体における新生物形成症状を治療するための医薬の製造における請求項５から１０いずれか１項記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
関連出願の説明
本発明では、現在放棄されている１９９８年４月６日に提出された米国の仮特許出願番号６０／０８０，８６８号の特恵が主張される。
【０００２】
連邦基金交付
本発明は、アメリカ合衆国連邦政府により、交付番号ＰＯ１  ＣＡ３４９６８で、供給される基金を部分的に使用してなされた。したがって、アメリカ合衆国連邦政府は、本発明の明確な権利を有する。
【０００３】
発明の分野
本発明は、一般に、化学および癌治療の分野に関する。さらに詳細には、本発明は、新規レチノイド、および化学的予防および癌治療でのそれらの使用に関する。
【０００４】
関連技術の説明
続く化学的説明では、Ｅは、トランスと同義に相互交換でき、そしてＺは、シスと同義に相互交換できる。レチノイドレセプターおよび核内レセプターのこのスーパーファミリーの他の構成員（ステロイド、チロイドおよびビタミンＤホルモンレセプター、および既知リガントなしの他の「希少」レセプターを含む）は、医薬品開発のための新たな標的である（１）。レチノール酸（ＲＡ）および合成レチノイドは、細胞増殖、分化、発生および細胞死を引起す遺伝子転写を制御する様々な構成員の核内レチノイドレセプターを有する、リガンド依存性の転写因子として作用することが考えられる（２）。２つのクラスの核内レチノイドレセプター（ＲＡＲおよびＲＸＲ）は、これまでは同定されているし、各々は、数種の異なったサブタイプ（α、β、γ）を示す。（全Ｅ）−および（９Ｚ）−ＲＡの両方は、ＲＡＲに結合し、そしてＲＡＲ／ＲＸＲ異質二量体によって指示された転写を活性化させるが、（９Ｚ）−ＲＡは、同質二量体または異質二量体を形成することによって転写を指示するＲＸＲ用の唯一の既知の天然のリガンドである。
【０００５】
化学的予防での最近の進歩は、数種の固形臓器腫瘍でのレチノイドの使用における興味を高め、そして主要な治療的成功が、ある種の白血病でのレチノイドに示された（３）。急性前骨髄球白血病（ＡＰＬ）を有する患者の（全Ｅ）−ＲＡ治療は、好中球にＡＰＬ骨髄芽球の正常な成熟およびアポトーシスを誘導することによってこれらの患者で９０％完全な寛解速度に至るが、この分化療法は、一過性であり、そしておそらくレチノール酸に対する耐性の発生により、共通して３−１５ヶ月以内に病気をぶり返す（４）。（１３Ｚ）−ＲＡは、幼若骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）に罹った５０％までの子供で過剰な骨髄芽球増殖を有効に制御する（５）。しかし、この治療は、病気にきかず、そして最善には、疾病の長期化した安定化の時期に至るが、しかし結局、患者は、異質遺伝子型の骨髄移植を行う必要がある（４、６）。
【０００６】
全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）は、ＡＰＬに罹った患者の分化療法（標準内毒性癌化学療法よりむしろ）のために使用されるＦＤＡが認可した薬剤の最初の例である。ＡＰＬ治療に非常に有効であることが示されているが、臨床上の耐性が、ＡＴＲＡの薬学上の用量で頻繁に起こり、そしてＡＰＬ患者はしばしば再発する（Ｄｅｇｏｓら、Ｂｌｏｏｄ、８５巻、２６４３頁（１９９５年））。さらに有効な治療法を提供するために、新たに非常に活性のあるレチノイドが、これらの剤の低い容量が、ＡＴＲＡと同じくらい迅速に再発を誘導しないという予測と一致する必要がある。
【０００７】
ＡＴＲＡ療法にかけているＡＰＬ患者から単離されるＮＢ４セルラインは、ＡＰＬの優れた生体外モデルを供する。ＡＰＬの特徴であるｔ（１５：１７）転座は、ＮＢ４細胞で安定に行われ、そしてＰＭＬ／ＲＡＲ−ａ融合タンパク質は、この形質転換セルラインで発現される（Ｌａｎｏｔｔｅら、Ｂｌｏｏｄ、７７巻、１０８０頁（１９９１年））。ＮＢ４細胞のＡＴＲＡ治療が、分化に対するＰＭＬ／ＲＡＲ−ａ遮断を取除き、そして前骨髄球を正常に成熟させ、そして死滅させる。ＡＴＲＡが、分化遮断を取除く機構は、よく理解されていない。最近の証拠では、ＡＴＲＡが、ＰＭＬ／ＲＡＲ−ａの発現を下方制御し、そして正常なミレオイド（ｍｙｌｅｏｉｄ）分化を回復することが示唆される（Ｒａｅｌｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ、８８巻、２８２６頁（１９９６年））。
【０００８】
先行技術は、レチノール酸の有益な効果を示すが、副作用を減少された効果的な治療剤では不十分である。本発明は、当業界での長年の必要性および望みを果たす。
【０００９】
発明の概要
本発明は、ＵＡＢ８異性体が、天然のレチノール酸の異性体と比較して、等しいか、またはより大きな効力を示す。さらに、提供されるのは、その全Ｅ異性体が、（全Ｅ）−ＵＡＢ８より異なる核内レセプター選択性（ＲＡＲβおよびＲＡＲγサブタイプ選択性レチノイドおよびＲＡＲαアンタゴニスト）を示す、新たなレチノイドであるＵＡＢ３０である。
【００１０】
本発明は、ＮＢ４細胞分化アッセイで、ＵＡＢレチノイドと称される、新たに配座的に強制されたレチノイド、およびＡＴＲＡより大きな力価を示す同定された全トランスＵＡＢ８も評価する（Ｍｕｃｃｉｏら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４１巻、１６７９頁（１９９８年））。さらに、ＡＰＬ療法でその力価を評価するために、ＮＢ４細胞分化を誘導するその能力は、ＲＸＲ選択性レチノイドの存在下で研究され、ＡＴＲＡ有効性を増大させることが示された（Ｃｈｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３８２巻、８１９頁（１９９６年）。さらに、ＡＴＲＡのＲＡＲ−α交差作用および交差発現作用を分離するＵＡＢレチノイドを同定し、そしてＮＢ４細胞分化における全トランスＵＡＢ８のＲＡＲ依存性機構を理解するために使用した。
【００１１】
本発明の１つの具体例で、新たな構造クラスのレチノイドについて提供される化合物がある。これらの化合物は、一般構造ＩおよびIIによって示されるＵＡＢ８の類縁体である。代表的例は、（９Ｚ）−ＵＡＢ２０、（全Ｅ）−ＵＡＢ２０、（９Ｚ）−ＵＡＢ２１および（全Ｅ）−ＵＡＢ２１である。
【００１２】
本発明の別の具体例では、化合物がＵＡＢ３０および類縁体である別の新たな構造クラスのレチノイドについて提供される化合物がある。代表的例は、（９Ｚ）−ＵＡＢ３０、（９Ｚ）−ＵＡＢ３１、（９Ｚ）−ＵＡＢ３２、（９Ｚ）−ＵＡＢ３３、（全Ｅ）−ＵＡＢ３３、（９Ｚ）−ＵＡＢ３４、（９Ｚ）−ＵＡＢ３５、（９Ｚ）−ＵＡＢ６０、（９Ｚ）−ＵＡＢ６１、（９Ｚ）−ＵＡＢ６２、（９Ｚ）−ＵＡＢ４０および（９Ｚ）−ＵＡＢ７０である。
【００１３】
本発明のさらに別の具体例では、個体（個人）に、有効用量の新たなレチノイド化合物を投与することによって提供されるような治療の必要な個体を治療する、提供された方法がある。好ましくは、個体は、白血病のための治療が必要であるか、または癌化学的予防が必要である。レチノイド化合物は、その治療用に互いに作用して使用できる。
【００１４】
本発明の他のおよび別の態様および利点は、開示の目的のために示される本発明の現に好まれる具体例の以下の説明から明らかである。
【００１５】
（図面の簡単な説明）
明らかになる他のものと同様に、本発明の、上に引用される特性、利点および目的は、維持され、そして詳細に理解できることのため、上で簡単に要約された本発明のさらに特定の説明は、付随の図面に例示されるそれらの特定の具体例に参照してなされうる。これらの図面は、明細書の一部を形成する。しかし、付随の図面は、本発明の好ましい具体例を例示することに注目すべきであり、したがって、それらの範囲内に限定すると考えられるべきではない。
【００１６】
図１は、ＵＡＢ８および類縁体（ＵＡＢ８は、構造ＩでＲ１＝エチルおよびＲ２＝ｉ−プロピルと定義される）を記述する一般構造ＩおよびIIを示す。ここで、Ｒ１は、Ｈ、エチル、メチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、フェニル、ベンジル、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、アリール、およびアリールアルキルから構成される群から選択され、そしてＲ２は、２−メチルプロピル、ｎ−ブチル、シクロヘキシル、３−シクロヘキセニル、ベンジル、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、およびアリールアルキルから構成される群から選択される。そして、ここで、Ｒ１は、フェニル、ベンジル、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、アリール、およびアリールアルキルから構成される群から選択され、そしてＲ２は、Ｈ、エチル、メチル、ｎ−プロピルおよびｉ−プロピルから構成される群から選択される。
【００１７】
図２は、ＵＡＢ３０および類縁体を記述する一般構造IIIおよびIVを示す。ここで、Ｒ１は、アリール環上の１つまたは２つの置換基を表し、そしてＨ、エチル、メチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、フェニル、ベンジル、クロロ、フルオロ、メトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、環状アルキル（Ｃ１−Ｃ８から）、アリール、アリールアルキル、アルキルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシおよびハロゲンから構成される群から選択される。そしてＲ２は、Ｈ、エチル、メチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、２−メチルプロピル、ｎ−ブチル、シクロヘキシル、３−シクロヘキセニル、ベンジル、メトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、環状アルキル（Ｃ１−Ｃ８から）、アリール、アリールアルキル、アルキルオキシ、アリールオキシおよびアリールアルキルオキシから構成される群から選択され、そしてここでｎ＝０−３である。
【００１８】
図３から５は、ＵＡＢ３０を製造する略図を示す。
【００１９】
図６および７は、ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０レチノイドの全トランス−および９−シス異性体に比較した全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）の構造を示す。
【００２０】
図８は、ＲＡＲ−αアンタゴニスト、全トランス−ＵＡＢ３０およびＲｏ−４１−５２５３によってＣＶ−１細胞中で全トランス−レチノール酸を誘導したＲＡＲ−α転写活性の阻害を示す。全トランス−レチノール酸用量は、５０ｎＭであり、そして全トランスＵＡＢ３０およびＲｏ−４１−５２５３の用量は、１０−９から１０−６Ｍまで変化した。
【００２１】
図９は、２つの用量（１０−７から１０−６Ｍ）で全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）、およびＵＡＢ８およびＵＡＢ３０異性体によって、ＨｅＬａ細胞中のＴＰＡ誘導ＲＡＲ−α転写活性の阻害を示す。
【００２２】
図１０は、ＡＴＲＡ（塗りつぶした円形）、全トランス−ＵＡＢ８（塗りつぶした三角形）、９−シス−ＵＡＢ８（塗りつぶした四角形）、全トランス−ＵＡＢ３０（逆さまの塗りつぶした三角形）、および９−シスＵＡＢ３０（塗りつぶしたダイアモンド型）によってＮＢ４細胞分化を示す。細胞を、３日間、１０％ＦＢＳおよび指示濃度の各レチノイドで補足した培地で育成した。分化は、ＮＢＴ陽性細胞の含有率で評価された。
【００２３】
図１１は、ＮＢ４細菌（塗りつぶした円形）のみ、または９−シス−ＵＡＢ８（１：２．５）（塗りつぶした三角形）、９−シス−ＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶした四角形）、または全トランスＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶしたダイアモンド型）と組合わせて分化させる全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）の許容量を示す。図１２は、ＮＢ４細胞（塗りつぶした円形）のみ、または９−シス−ＵＡＢ８（１：２．５）（塗りつぶした三角形）、９−シス−ＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶした四角形）、または全トランス−ＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶしたダイアモンド型）と組合わせて分化させる全トランス−ＵＡＢ８の許容量を示す。
【００２４】
図１３は、ＮＢ４細胞（塗りつぶした円形）のみ、または１μＭ（塗りつぶした三角形）および４μＭ（塗りつぶされた四角形）で４−ヒトロキシフェニルレチナミドと組合わせて分化させる全トランス−ＵＡＢ８の許容量を示す。
【００２５】
図１４は、時間後期メチルニトロソウレア（ＭＮＵ）誘導の時期をかけた平均哺乳類腫瘍重量／ラット（グラム）を示す。グループ１７のラットを、ベヒクル（テクラド食餌）（円形）で処置した一方で、グループ２９を、ＵＡＢ−３０（２００ｍｇ／ｋｇ食餌）（塗りつぶされた四角形）で処置した。
【００２６】
図１５は、様々な日齢をかけた平均体重／ラット（グラム）を示す。グループ１７のラットを、ベヒクル（テクラド食餌）（円形）で処置した一方で、グループ２９を、ＵＡＢ−３０（２００ｍｇ／ｋｇ食餌）（塗りつぶされた四角形）で処置した。
【００２７】
（発明の詳細な説明）
本発明は、新たなレチノイド化合物およびそれらの使用に向けられる。全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）は、最終的に顆粒球に分化する急性前骨髄性白血病（ＡＰＬ）セルライン、ＮＢ４を誘導する。臨床的には、ＡＴＲＡは、正常な細胞毒性の化学療法に屈折性のあるＡＰＬ患者のための代替療法として使用される。しかし、ほとんどのＡＰＬ患者は、長期化したＡＴＲＡ療法を示す臨床的耐性を発生する。前トランスＵＡＢ８は、ＮＢ４細胞が分化するのを誘導する上でＡＴＲＡより有効な剤として確認される。本発明は、９−シス−ＵＡＢ８または９−シス−ＵＡＢ３０の２つのＲＸＲ選択性レチノイドと組合わせて使用される場合、ＮＢ４細胞分化での前トランス−ＵＡＢ８、ＲＡＲ選択性レチノイドの影響も調査する。前トランス−ＵＡＢ８および９−シス−ＵＡＢ３０の組合わせた使用は、ＮＢ４細胞分化で相互に作用した一方で、９−シス−ＵＡＢ３０は、単独でほとんど効果を示さなかった。さらに、全トランス−ＵＡＢ８および４−ヒドロキシフェニルレチナミドは、ＮＢ４細胞に分化を誘導させるのに相互に作用した。
【００２８】
このセルライン中でレチノイドで誘導される分化の作用の強力な核内レセプター基本の機構が、次に探られる。全トランス−ＵＡＢ８は、遺伝子のＲＡＲ依存性の相互作用およびＡＰ−１複合体のＲＡＲ依存性相互発現（ｃ−Ｊｕｎ／ｃ−Ｆｏｓ）の両方に非常に有効であることが示される。これらの２つのレセプター基本機構の間を区別するために、全トランス−ＵＡＢ３０を評価し、そして、ＡＰ−１複合体の相互発現について、しかしＲＡＲ−αアンタゴニストとして活性であった。単独で使用するとき、全トランス−ＵＡＢ３０は、ＮＢ４細胞の分化を誘導せず、そして混合使用するとき、それは、全トランスＵＡＢ８またはＡＴＲＡのいずれかの有効性を減少させる。これらのデータは、ＮＢ４細胞の全トランス−ＵＡＢ８誘導分化のＲＡＲ−α−基本機構を支持する。最終的に、全トランス−ＵＡＢ８は、ＡＴＲＡと同じ速度で代謝されるが、９−シスＵＡＢ３０は、５日間代謝的に安定であることが分かった。これらを一緒にすると、本発明では、全トランスＵＡＢ８の有効性が、代謝的に安定なＲＸＲ選択性リガンドと組合わせて使用される場合、さらに増大されうることが開示され、それによりＡＰＬの臨床的治療のための新たな混合療法が提供される。
【００２９】
本発明の１つの具体例では、構造Ｉおよび構造II：
【化９】
0004435418.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、エチル、メチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、フェニル、ベンジル、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、アリールおよびアリールアルキルから構成される群から選択され、そしてＲ２は、２−メチルプロピル、ｎ−ブチル、シクロヘキシル、３−シクロヘキセニル、ベンジル、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、およびアリールアルキルから構成される群から選択される。そしてここで、Ｒ１は、フェニル、ベンジル、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、アリールおよびアリールアルキルから構成される群から選択され、そしてＲ２は、Ｈ、エチル、メチル、ｎ−プロピルおよびｉ−プロピルから構成される群から選択される。）
から構成される群から選択される構造を示すＵＡＢ８（ＵＡＢ８は、構造Ｉ中でＲ１＝エチルおよびＲ１＝ｉ−イソプロピルとして定義される）の類縁体である提供のレチノイド化合物がある。
【００３０】
好ましくは、ＵＡＢ８の類縁体であるレチノイド化合物が、（９Ｚ）−ＵＡＢ２０、（全９Ｅ）−ＵＡＢ２０、（９Ｚ）−ＵＡＢ２１および（全９Ｅ）−ＵＡＢ２１から構成される群から選択され、ここで、（９Ｚ）−ＵＡＢ２０、（全９Ｅ）−ＵＡＢ２０、（９Ｚ）−ＵＡＢ２１および（全９Ｅ）−ＵＡＢ２１は、式：
【化１０】
0004435418.tif 000003
（式中、
（９Ｚ）−ＵＡＢ２０および（全９Ｅ）−ＵＡＢ２０は、Ｒ１としてＰｈ基を、Ｒ２としてｉ−プロピル基を有する。ここで、（９Ｚ）−ＵＡＢ２１および（全Ｅ）−ＵＡＢ２１は、Ｒ１としてＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２を、Ｒ２としてｉ−プロピル基を有する。）
を示す。
【００３１】
本発明の別の具体例では、構造IIIおよび構造IV：
【化１１】
0004435418.tif 000004
（式中、
Ｒ１が、アリール環に１つまたは２つの置換基を表し、そしてＨ、エチル、メチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、フェニル、ベンジル、クロロ、フルオロ、メトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、アリール、アリールアルキル、アルキルオキシ、アリールアルキルオキシおよびハロゲンから構成される群から選択される。Ｒ２は、Ｈ、エチル、メチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、２−メチルプロピル、ｎ−ブチル、シクロヘキシル、３−シクロヘキセニル、ベンジル、メトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、環状アルキル（Ｃ３−Ｃ８から）、アリール、アリールアルキル、アルキルオキシおよびアリールアルキルオキシから構成される群から選択される。そしてここで、ｎ＝０−３である。）
から構成される群から選択される構造を示す提供されたレチノイド化合物、すなわちＵＡＢ３０および類縁体がある。
【００３２】
好ましくは、レチノイド化合物ＵＡＢ３０および類縁体は、（９Ｚ）−ＵＡＢ３０、（９Ｚ）−ＵＡＢ３１、（９Ｚ）−ＵＡＢ３２、（９Ｚ）−ＵＡＢ３３、（全９Ｅ）−ＵＡＢ３３、（９Ｚ）−ＵＡＢ３４、（９Ｚ）−ＵＡＢ３５、（９Ｚ）−ＵＡＢ６０、（９Ｚ）−ＵＡＢ６１および（９Ｚ）−ＵＡＢ６２から構成される群から選択され、ここで、（９Ｚ）−ＵＡＢ３０、（９Ｚ）−ＵＡＢ３１、（９Ｚ）−ＵＡＢ３２、（９Ｚ）−ＵＡＢ３３、（全９Ｅ）−ＵＡＢ３３、（９Ｚ）−ＵＡＢ３４および（９Ｚ）−ＵＡＢ３５は、式：
【化１２】
0004435418.tif 000005
を示す。
【００３３】
ここで、（９Ｚ）−ＵＡＢ３０は、アリール環上に置換基Ｈを有し、（９Ｚ）−ＵＡＢ３１は、アリール環上に置換基５’−メトキシを有し、（９Ｚ）−ＵＡＢ３２は、アリール環上に置換基６’−メトキシを有し、（９Ｚ）−ＵＡＢ３３は、アリール環上に置換基７’−メトキシを有し、（全９Ｅ）−ＵＡＢ３３は、アリール環上に置換基７’−メトキシを有し、（９Ｚ）−ＵＡＢ３４は、シクロアルキル環上に置換基４’−メチルを有し、および（９Ｚ）−ＵＡＢ３５は、アリール環上に２つの置換基５’，７’−ジメチルを有する。
【００３４】
ここで、（９Ｚ）−ＵＡＢ６０、（９Ｚ）−ＵＡＢ６１および（９Ｚ）−ＵＡＢ６２は、構造：
【化１３】
0004435418.tif 000006
を示す。
【００３５】
ここで、（９Ｚ）−ＵＡＢ６０は、アリール環上に置換基Ｈを有し、（９Ｚ）−ＵＡＢ６１は、アリール環上に置換基５’−メトキシを有し、そして（９Ｚ）−ＵＡＢ６２は、アリール環上に置換基７’−メトキシを有する。
【００３６】
さらに好ましくは、式：
【化１４】
0004435418.tif 000007
を示す（９Ｚ）−ＵＡＢ４０、そして式：
【化１５】
0004435418.tif 000008
を示す（９Ｚ）−ＵＡＢ７０は、ＵＡＢ３０および類縁体の代表的例である。
【００３７】
さらに別の具体例では、本発明は、その個体に、ここに開示されるレチノイド化合物の有効用量を投与する段階により、新生物形成症状を示すか、または新生物形成または新生物形成様症状を示すことが疑われる個人（個体）を処置する方法に向けられる。好ましくは、レチノイド化合物は、さらに、治療のために４−ヒドロキシフェニルレチナミドと混合する。さらに好ましくは、個人は、白血病の治療の必要があるか、皮膚または胸部癌のような癌の化学的予防の必要がある。さらに好ましくは、その化合物を、約１０ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇまでの用量範囲で投与する。
【００３８】
本発明のさらに別の具体例では、個体に、ここに開示される２つまたはそれ以上のレチノイド化合物を組合わせて投与することによって、新生物形成症状を有する個体を治療する提供された方法がある。その混合は、さらに４−ヒドロキシフェニルレチナミドを含みうる。さらに好ましくは、個体は、白血病につての治療の必要があるか、または癌化学的予防の必要がある。
【００３９】
したがって、以下の請求項に示されるとおりここに開示されるＵＡＢ８および他の化合物の有効量を個体に投与する段階を含むことを特徴とする、前記新生物形成症状を示す個体を処置する提供された方法がある。さらに、この化合物は、４−ヒドロキシフェニルレチナミドを含みうる。そのように処置されうる代表的新生物形成症状としては、皮膚癌、胸部癌、膀胱癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌および白血病が挙げられる。好ましくは、化合物は、約１０ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇまでの用量で投与される。
【００４０】
本発明は、ＵＡＢ８／類縁体およびＵＡＢ３０／類縁体から構成される群から選択される２つまたは２つ以上のレチノイド化合物を混合してその個体に投与する段階を含むことを特徴とする、新生物形成症状を有する個体を処置する方法にも向けられる。その混合は、さらに４−ヒドロキシフェニルレチナミドを含みうる。さらに好ましくは、その個体は、白血病についての治療の必要があるか、または癌化学的予防の必要がある。そのように処置されうる代表的新生物形成症状としては、皮膚癌、胸部癌、膀胱癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌および白血病が挙げられる。好ましくは、化合物は、約１０ｍｇ／ｋｇから約３００ｍｇ／ｋｇまでの用量で投与される。
【００４１】
以下の実施例は、本発明の種々の具体例を例示する目的で示され、そしていかなる形態で本発明を制限することも意図されない。
【００４２】
（実施例１）
（レチノール酸類縁体の化学的性質）
１Ｈ  ＮＭＲを、ＣＤＣｌ３中で４００．１ＭＨｚ（ブルッカーＤＲＸ分光計）で得た。様々な混合時間（２５０および２０００ｍｓの間）で、２Ｄ相の感受性ＮＯＥＳＹ実験を使用する脱気サンプルでＮＯＥ実験を行った。特に、１秒の混合時間は、相サイクリングのために１６パルスおよび２回のダミースキャンで使用された。データは、各次元で０．３Ｈｚのライン拡張で処理され、そしてゼロ補充して、５１２×４０９６の２Ｄ計数計プロットを得た。陰性交差ピークの集約的強度は、標準ブルッカーＮＭＲソフトウエア特性を使用して測定された。
【００４３】
ＵＶ／ビス（可視光）・スペクトルは、シクロヘキサンまたはメタノール溶液（フィシャー（Ｆｉｓｈｅｒ）、光学グレード）中のＡＶＩＶ１４ＤＳ分光光度計で記録させた。ＩＲスペクトルは、薄層フィルム上のニコレットのＦＴ  ＩＲ分光光度計を用いて記録された。ＨＰＬＣ分離は、２５ｍｌのポンプヘッドおよびＩＳＣＯ  Ｖ４可変波長検出器を用いて、ギルソンＨＰＬＣ勾配システムで行われた。使用されたカラムは、５ｍｌ／分の流速で、そして３４０ｎｍでＵＶ／可視光検出によって監視するワットマンのパーティシル１０Ｍ２０／５０（５００−×２２ｍｍ直径（ｉ．ｄ．））であった。予め被覆した２５０μｍのシリカゲルＧＦガラス板（アナルテック・インク．（Ａｎａｌｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）；５×１０ｃｍ）上でＴＬＣクロマトグラフィーを行った。溶媒および液体出発材料は、使用前に蒸留された。脱酸素した溶媒、不活性ガス（Ｎ２）下、そして抑えた照明で、反応および精製を行った。図３に示される略図の中間体および生成物についての選択データは、表１に含まれる。
【００４４】
（２Ｚ，４Ｅ）−４−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３−メチル−２−ブテン酸（（９Ｚ）−２）
亜鉛粉（１．７５ｇ、２６．８ミリモル）を、２分間、室温で５％ＨＣｌ（５ｍｌ）と攪拌させた。混合液を静置させ、そしてその液体を、ピペットで注意深く除去した。類似の方法で、窒素下、水（３×５ｍｌ）、アセトン（３×５ｍｌ）、およびエーテル（２×８ｍｌ）でそのＺｎを洗浄した。残りのエーテルを窒素の蒸気下で除去させた後、そのＺｎ粉を含有するフラスコを、ブンゼンバーナーの炎で３０秒間強力に加熱した。冷却Ｚｎ粉を、無水ジオキサン（３ｍｌ）で懸濁させ、そして攪拌懸濁液を還流するまで加熱した。新たに蒸留したα−テトラロン（０．５２０ｇ、３．５６ミリモル）、エチル・ブロモセネシオエート（１．４７ｇ、７．１２ミリモル）、および無水ジオキサン（２．５ｍｌ）の溶液を、窒素下で製造し、そしてこの溶液の一部（０．５ｍｌ）を、加熱Ｚｎ懸濁液に加えた。これは、発熱反応を生じ、そしてその後、α−テトラロンを含有する溶液の残りを、１０分間、還流を制御するのに十分な速度で添加した。最終反応混合液を、８時間、還流で攪拌し、そしてその後、室温まで冷却させた。水（５ｍｌ）を添加し、混合液を２０分間攪拌し、そしてエーテル（２０ｍｌ）を添加した。懸濁液をセライトの床を通して濾過し、そして濾過物を、エーテル（４０ｍｌ）で十分に洗浄した。濾液を、１５％ＨＣｌ（４０ｍｌ）、水（４０ｍｌ）、１ＮのＮａＯＨ（４０ｍｌ）および追加量の水（３０ｍｌ）で抽出させた。塩基洗浄液および最終水洗浄液を合わせて、ｐＨ１−２に、１５％ＨＣｌで調整し、そしてエーテル（２×１００ｍｌ）で抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、そして真空下で濃縮させて（９Ｚ）−２を黄色結晶（０．７０ｇ、８６％収率）として得た。融点１５３−１５４℃（１：１ヘキサン−酢酸エチル）。
【００４５】
（２Ｚ，４Ｅ）−および（２Ｅ，４Ｅ）−４−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３−メチル−２−ブテン−１−オール（（９Ｚ）−および（全Ｅ）−３）
無水ＴＨＦ（１０ｍｌ）中に酸（９Ｚ）−２（０．１１ｇ、０．４８ミリモル）を含む溶液を、−７８℃まで冷却させ、そして１ＭのＬｉＡｌＨ４／エーテル（０．５０ｍｌ、０．５０ミリモル）を、窒素下、攪拌しながら滴加した。乾燥氷冷アセトン浴を取除き、そして反応混合液を、室温にさせ、そして３時間攪拌させた。反応混合液を、０℃に冷却し、そしてメタノール（０．２ｍｌ）、続いて１０％ＨＣｌ（１０ｍｌ）を滴加した。これを、室温まで加温させ、そして混合液を、エーテル（２×２０ｍｌ）で抽出させた。エーテル層を、ブライン（１×２０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、そして真空下で濃縮させて油状残渣（０．１１３ｇ）を得た。これを、フラッシュシリカゲルカラム（１×３０ｃｍ）に載せ、そして３０％のＥｔ２Ｏ−ヘキサンで溶出させて、１：１混合物の（９Ｅ）−および（全Ｅ）−３（０．０６８ｇ、６７％収率）を得た。アルコール混合液を、さらに精製することなしに、この形態で行った。
【００４６】
（２Ｚ，４Ｅ）−および（２Ｅ，４Ｅ）−４−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３−メチル−２−ブテナール（（９Ｚ）−および（全Ｅ）−４）
窒素下、０℃で、乾燥Ｃｈ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）で、アルコール３（０．０６５ｇ、０．３０ミリモル）の攪拌溶液に、４Ａモレキュラーシーブ（１．５ｇ）を加え、続いて活性化ＭｎＯ２（０．５３ｇ、６．１ミリモル）を加え、そして混合物を、３時間、０℃で攪拌した。反応混合液を、フラッシュシリカゲルの床を通して濾過し、そして濾過物を、冷５０％ＣＨ２Ｃｌ２／エーテル（１００ｍｌ）で洗浄した。濾液を、真空下で、乾固するまで濃縮して、残渣油状物を得た（０．０５）。これを、フラッシュシリカゲルカラム（１×１５ｃｍ）に載せ、そして１０％Ｅｔ２Ｏ−ヘキサンで溶出させて、（９Ｚ）−４（０．０１８ｇ）、（全Ｅ）−４（０．０１６ｇ）および出発アルコール３（０．００７ｇ）を得た。４の総収量は、０．０３４ｇであった（未回収の出発アルコールに基づいて５９％収率）。
【００４７】
アルデヒド４の個々の異性体のオレフィン化のための一般的手段
ＮａＨ（１．２当量）を、乾燥ＴＨＦで、三回洗浄させて、鉱物油を排出させた。Ｎ２下、０℃で、ＴＨＦ中の新たに蒸留したトリエチル・ホスホノセネシオエート（１．１当量）を添加した。混合液を、３０分間攪拌させた後、ＨＭＰＡ（０．２当量）、続いてエーテル（９Ｚ）−または（全Ｅ）−４（１当量、最終濃度０．８Ｍ）を添加した。混合液を、１２０分間、室温で反応させた後、水を添加し、そして反応混合液を、エーテルと水との間に分配した。エーテル層を、一回ブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、そして真空下で濃縮させて、主に２つの配座の異性体の混合物としてエステルを得た。この方法によって、以下のものを製造した。
【００４８】
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ，８Ｅ）−および（２Ｚ，４Ｅ，６Ｚ，８Ｅ）エチル・８−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエノエート（（９Ｚ）−および（９Ｚ，１３Ｚ）−５）
この製造には、乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中のＮａＨ（０．０６０ｇ、２．５ミリモル）の懸濁液、乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中のトリエチル・ホスホノセネシオエート（０．１４ｇ、０．５３ミリモル）の溶液、ＨＭＰＡ（０．０４１ｇ、０．２１ミリモル）、および乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中の（９Ｚ）−４（０．０８９ｇ、０４２ミリモル）の溶液が使用されて、エステル（９Ｚ）−および（９Ｚ，１３Ｚ）−５の２：１混合物（０．１２ｇ、７８％収率）を得た。この混合液を、０．５％Ｅｔ２Ｏ、ヘキサン中の．０１％ＴＨＦを用いたシリカゲル上のＨＰＬＣによって製造した。
【００４９】
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−および（２Ｚ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）エチル・８−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエノエート（（全Ｅ）−および（１３Ｚ）−５）
この製造には、乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中のＮａＨ（０．０５０ｇ、２．１ミリモル）の懸濁液、乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中のトリエチル・ホスホノセネシオエート（０．１１ｇ、０．４０ミリモル）の溶液、ＨＭＰＡ（０．０４８ｇ、０．２２ミリモル）、および乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中の（全Ｅ）−４（０．０６５ｇ、０．３１ミリモル）の溶液が使用されて、エステル（全Ｅ）−および（１３）−５の２：１混合物（０．１２ｇ、７８％収率）を得た。この混合液を、１％Ｅｔ２Ｏ、ヘキサン中の０．５％ＴＨＦを用いたシリカゲル上のＨＰＬＣによって分離させた。
【００５０】
エステル５の個々の異性体の加水分解のための手段
メタノール（最終濃度０．０６１Ｍ）中のエステル５（１当量）の溶液に、２ＭのＫＯＨ（１０当量）の水溶液を添加した。この溶液を、還流下で加熱し、そしてＴＬＣによって反応進行を監視した。９０分後、熱溶液を、氷（４０ｇ）のビーカーに注ぎ、そしてｐＨ２まで、１０％ＨＣｌで酸性化させた。その後、混合物を、Ｅｔ２Ｏで抽出させ、そしてそれをブラインで洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、そして減圧下で濃縮させて、生成物を得た。ＮＭＲは、加水分解が異性化なしに起こることを示した。以下の酸を、この方法によって合成した。
【００５１】
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−８−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエン酸（（全Ｅ）−ＵＡＢ３０）
この製造には、水（２ｍｌ）中のＫＯＨ（０．２５８ｇ、４．６１ミリモル）の溶液、およびメタノール（１０ｍｌ）中のエステル（全Ｅ）−５（０．１２２ｇ、０．３７８ミリモル）の温溶液が利用されて、黄色固形物として酸（全Ｅ）ＵＡＢ３０（０．１０４ｇ、９３％収率）を供した。融点１９２−１９７℃（シクロヘキサン）。
【００５２】
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−８−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエン酸（（９Ｚ）−ＵＡＢ３０）
この製造には、水（１ｍｌ）中のＫＯＨ（０．１５ｇ、２．８ミリモル）の溶液、およびメタノール（３ｍｌ）中のエステル（９Ｚ）−５（０．０７３ｇ、０．２３ミリモル）の温溶液が利用されて、黄色固形物として酸（９Ｚ）ＵＡＢ３０（０．０６５ｇ、９８％収率）を供した。融点１８２−１８５℃（シクロヘキサン）。
【００５３】
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）−８−（３’，４’−ジヒドロ−１’（２’Ｈ）−ナフタレン−１’−イリデン）−３，７−ジメチル−２，４，６−オクタトリエン酸（（１３Ｚ）−ＵＡＢ３０）
この製造には、水（１ｍｌ）中のＫＯＨ（０．０８５ｇ、１．５０ミリモル）の溶液、およびメタノール（４ｍｌ）中のエステル（１３Ｚ）−５（０．０４０ｇ、０．１２ミリモル）の温溶液が利用されて、黄色固形物として酸（１３Ｚ）ＵＡＢ３０（０．０３４ｇ、９３％収率）を供した。融点１８０−１８５℃（シクロヘキサン）。
【００５４】
（実施例２）
レチノール酸類縁体の生物学
若鶏の皮膚のＣＲＡＢＰ結合アッセイで、放射性標識競合アッセイ（８−１０）を用いてＣＲＡＢＰ−ＩＩに結合するレチノール酸についてのＩＣ５０値を測定した。ＲＡＲおよびＲＸＲを用いたレチノイドについてのＩＣ５０値を、放射性標識競合アッセイ（８−１０）で測定した。ＣＶ−１細胞を使用して、核内レセプター転写活性アッセイを行った。基本的にＡｌａｍ（９）らによって記述されるとおり、ＤＮＡプラスミドを用いたこれらの細胞の一過性形質移入を行った。マウスの皮膚の抗乳頭腫アッセイでは、マウスの腹部皮膚でのレチノイド腫瘍阻害についてのＥＤ５０値を測定した。先にＭｕｃｃｉｏら（８）によって報告されたとおり、ＶｅｒｍａおよびＢｏｕｔｗｅｌｌ（１４）によって開発された手段の修正法にしたがって、レチノイドによるマウスの皮膚乳頭腫の阻害を行った。
【００５５】
（実施例３）
細胞
Ｗａｘｍａｎ博士がＭ．Ｌａｎｏｔｔｅ博士からＮＢ４細胞を受取った後、それをＷａｘｍａｎ博士から得た。ＮＢ４細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ（胎仔ウシ血清）（ジブコ）および１０ｍＭ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタン・スルホン酸（ｐＨ７．３）で補足したＲＰＭＩ１６４０（ジブコ、ニューヨーク州グランド・アイランド）中の培地で維持させた。その細胞を、空気中の５％ＣＯ２の湿潤雰囲気下、３７℃で育成させた。細胞密度は、電気的粒子計測器（コールター・エレクトロニック（Ｃｏｕｌｔｅｒ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ）、フロリダ州ハイアリーア（Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＬ））で、そして細胞生存性を、トリパン青染料排除を用いて概算した。ＮＢ４細胞は、ホエスト３３２５８蛍光染料および寒天培養検出法（Ｄｅｌ  Ｇｉｕｄｉｃｅら、モノグラフ番号５（１９８４））を用いて、マイコプラズマの実験室、すなわち、ＰＲＩ／ＤｙｎＣｏｒｐ，ＮＣＩ−フレデリック癌研究および開発センター（メリーラント州フレデリック（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ））によって評価されるとおり、マイコプラズマなしであった。
【００５６】
（実施例４）
ＣＶ−１細胞中の（全Ｅ）−ＲＡ  誘導ＲＡＲα転写活性の阻害
ＲＡＲαの転写におけるＵＡＢ３０レチノイドのアンタゴニストとしての影響を、ＣＶ−１細胞で測定した。その方法は、転写アッセイを行うのに使用されるものとほぼ一致する。これらの研究では、Ｖａｅｚｉら（１１）によって記述されるとおりチミジンキナーゼプロモーターと一緒にＴＲＥｐａｌを含むＣＡＴレポーター遺伝子［（ＴＲＥｐａｌ）２−ｔｋ−ＣＡＴ］が利用された。形質移入の２４時間後、細胞を、（全Ｅ）−ＲＡ（１−１０００ｎＭ）のみで、または指示ＵＡＢレチノイド（１００または１０００ｎＭ）と一緒で処理した。２４時間後、細胞を収穫し、そして形質移入の有効性についてのβ―ｇａｌ活性で修正した後、転写の影響を、相対的ＣＡＴ活性を測定した。類似の研究を、既知ＲＡＲαアンタゴニストＲｏ−４１−５２５３で行った。全ての実験を三重に行い、そしてデータを平均化させた。アンタゴニストは、レチノイドを含まない陽性対照と比較するように、レチノイドの存在下で（全Ｅ）−ＲＡによって誘導される転写の相対的ＣＡＴ活性を低下させるとして定義された。（全Ｅ）−ＵＢＡ３０およびＲｏ−４１−５２５３の両方が、転写を誘導するのに使用される（全Ｅ）−ＲＡの各濃度でアンタゴニストを示したが、しかしその影響は、（全Ｅ）−ＲＡが５０ｎＭであるときに最も注目された。
【００５７】
（実施例５）
ＨＬ−６０およびＮＢ４細胞の分化のレチノイド誘導
ヒト白血病セルラインＨＬ−６０およびＮＢ４を、末端分化を誘導するレチノイドの能力を測定するのに使用した。両方のセルラインは、優先的に前骨髄球性であり、そして成熟顆粒球の多くの特徴を示す細胞に成熟させるレチノール酸によって誘導される。この分化の誘導は、レチノール酸類縁体の生物学的活性の内の１つを分析するため基本原理である。分化アッセイについては、ＨＬ−６０またはＮＢ４細胞を、Ｂｒｅｉｔｍａｎ（１５）によって詳説されるとおり胎仔ウシ血清を伴う栄養培地で育成させた。
【００５８】
全トランスレチノール酸およびニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）をシグマ・ケミカル・カンパニ−．（ミズーリー州セントルイス（Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））から購入した。ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０の全トランスおよび９−シス異性体を、先に記述された方法（Ａｌａｍら、１９９５年：Ｍｕｃｃｉｏら、１９９８年）によって合成した。ＡＴＲＡおよびＵＡＢレチノイドを、０．１から１０ｍＭまでの濃度で、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させ、そしてその後細胞処理のために１０００倍に希釈した。先に記述された方法（Ｂｒｅｉｔｍａｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１９０巻、１１８頁（１９９０年）；ＴａｉｍｉおよびＢｒｅｉｔｍａｎ、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２３０巻、６９頁（１９９７年））によって、ＮＢ４細胞育成および分化を行った。インキュベーションの３日後、細胞分化を、ＮＢＴを還元させることから生じる細胞結合ニトロブルージホルマザン沈殿を示す細胞の含有率としてＮＢＴを還元する能力によって評価した（Ｂｒｅｉｔｍａｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１９０巻、１１８頁（１９９０年））。このマーカを得る細胞の含有率を、顕微鏡で測定した。その後、陽性細胞の含有率を、イソボルの形成に使用されるＥＤ５０およびＥＤ３０値を決定するレチノイド濃度の係数としてプロットさせた。
【００５９】
（実施例６）
ＲＡＲアゴニストおよびアンタゴニストのための一過性形質移入アッセイ
ＲＡＲαまたはＲＸＲαのいずれかによって指向される転写のＡＴＲＡまたはＵＡＢレチノイド誘導についての一過性形質移入アッセイを、先に報告された方法（Ａｌａｍら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３８巻、２３０２頁（１９９５年））を用いて測定した。これらのアッセイを、ＲＡＲまたはＲＸＲ遺伝子、およびチミジンキナーゼプロモーターと共にＴＲＥｐａｌを含むクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）レポーター遺伝子［（ＴＲＥｐａｌ）２−ｔｋ−ＣＡＴ］を用いてＣＶ−１細胞で行った。形質移入の２４時間後、細胞を、レチノイドの単回投与で処理し、そして細胞抽出物を、ｂ−ガラクトシダーゼおよびＣＡＴ活性について分析した。ＲＡＲαの転写におけるＵＡＢ３０レチノイドのアンタゴニストの効果も、ＣＶ−１細胞で測定した。その方法は、転写アッセイを行うのに使用したものとほぼ一致する。これらの研究では、ＣＡＴレポーター遺伝子［（ＴＲＥｐａｌ）２−ｔｋ−ＣＡＴ］が利用された。形質移入の２４時間後、細胞を、ＡＴＲＡ（１から１０００ｎＭまで）のみで、または指示ＵＡＢレチノイド（１００または１０００ｎＭ）と一緒で処理した。２４時間後、細胞を収穫し、そして形質移入の有効性についてβ―ガラクトシダーゼ活性で修正した後、転写の影響を、相対的ＣＡＴ活性で測定した。類似の研究を、既知ＲＡＲαアンタゴニストＲｏ−４１−５２５３で行った。実験を三重に行い、そしてデータを平均化させた。アンタゴニストは、レチノイドを含まない陽性対照と比較するとおり、レチノイドの存在下でＡＴＲＡによって誘導される転写の相対的ＣＡＴ活性を低下させるとして定義された。
【００６０】
（実施例７）
抗−ＡＰ−１活性のための一過性形質移入アッセイ
ＡＰ−１結合部位を含むコラゲナーゼプロモーターが、指示レチノイドレセプター発現ベクターと一緒にＣＡＴ遺伝子と結合される−７３Ｃｏｌ−ＣＡＴで、ＨｅＬａ細胞を、形質移入させた。形質移入の２４時間後、細胞を、０．５％胎仔ウシ血清で維持させ、そして２４時間、ＴＰＡ（１００ｍｇ／ｍＬ）と共に、またはなしで指示レチノイド濃度で処理した。細胞を、収穫し、そしてＣＡＴ活性を測定し、そして形質移入の有効性について対応のβ−ガラクトシダーゼ活性で補正した。
【００６１】
（実施例８）
ＪＭＭＬ自発的ＣＦＵ−ＧＭコロニー形成の阻害
（全Ｅ）−および（９Ｚ）−ＲＡ、ＵＡＢ８、およびＵＡＢ３０レチノイドを、Ｅｍａｎｕｅｌら（５，１６）によって記述されるとおり３つのＪＭＭＬ患者サンプルでの自発的ＣＦＵ−ＧＭコロニー成長を阻害するそれらの能力について試験した。簡潔に、親の同意を得て、そして研究所の検討委員会の認可を得た後、ＪＭＭＬ末梢血および骨髄サンプルを、患者から採取し、そしてバーミンガムにあるアラバマ大学（ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｌａｂａｍａ）に一夜配送によって送られた。単核細胞を、密度勾配遠心分離によって分離し、洗浄し、そして適量にして凍結させた。適量のＪＭＭＬ患者サンプルを、後に融解させ、洗浄し、そして１５％胎仔ウシ血清と同様に、栄養を補足したマッコイの５Ａ培地での０．３％軟質寒天クローナルアッセイで設定した。その培養基には、なんら成長因子または他の内在性刺激物は加えられなかった。ＵＡＢレチノイドおよびレチノール酸異性体は、１００％エタノールまたはＤＭＳＯのいずれかに溶解させた。適切な希釈を行い、そして予測エタノールまたはＤＭＳＯ濃度を使用した対照を、平行して立ち上げた。軟質寒天アッセイの開始の２４時間後、軟質寒天の頂部にレチノイド溶液をピペットで取り、そしてその溶液を寒天に入れさせ、そして拡散により細胞と相互作用させることによって、可変用量のレチノイドを一回のみ添加した。５％ＣＯ２での湿潤雰囲気下、１４日間、３７℃で培養物をインキュベートした。ＣＦＵ−ＧＭコロニー（１コロニーは、＞４０細胞を示す）を、等級分けし、そして自発的ＣＦＵ−ＧＭコロニー成長の阻害の生成量を、（１３Ｚ）−ＲＡに比較した。
【００６２】
（実施例９）
ＭＮＵ−誘導した哺乳類癌でのＵＡＢ−３０の効力
ハーラン・スプラーグ−ダウレイ，インク．（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．）から、雌スプラーグ−ダウレイ・ラット（ウイルス不含コロニー番号２１８）を得た。ラットは、２８日齢で到着し、そして到着の日にテクラッド（４％）食餌にかけた。５０日齢で、ラットは、頚静脈を介してメチルニトロソウレア（ＭＮＵ）（５０ｍｇ／ｋｇ体重）の単回の静脈注射を受けた。ＭＮＵを、アッシュ−スティーブンス，インク（Ａｓｈ−Ｓｔｅｖｅｎｓ，Ｉｎｃ．）から購入した。５３日齢で始めて、ラットに、食餌（２００ｍｇ／ｋｇ供給）で（９Ｚ）−ＵＡＢ３０を投与した。ラットを、週に一度秤量し、週に二回哺乳類腫瘍について触診し、そして毒性の兆候について毎日調べた。ラットの体重を、（９Ｚ）−ＵＡＢ３０の投与開始後、５週、１０週および１５週で統計的に分析した。ＭＮＵ誘導の１４０日後に、研究を終了させた。全哺乳類腫瘍を、解剖で取除いたときに秤量し、そして組織学的に分類した。
【００６３】
（実施例１０）
分子モデル化
レチノイド構造は、シリコンのグラフィック・インディゴ２端末でシビル（Ｓｙｂｙｌ）版６．２（トリップス・インク．（Ｔｒｉｐｓ  Ｉｎｃ．）、ミズーリー州セントルイス）で作成された。（９Ｚ）−２の構造は、最近報告されているＸ線結晶構造（１７）を使用して構築させた。この構造は、８−ｓ−トランス−コンフォメーションで結晶化された。８−ｓ−シス−コンフォメーションを生じるために、この構造は、Ｃ８−Ｃ９結合の周囲を回転させ、続いて、アリンガーのＭＭ３（９４）場を用いたエネルギー最小化を行った。最終のＵＡＢ３０酸の構造は、２のこの８−ｓ−シス−および８−ｓ−トランス−構造から作成された。熱力学的パラメーターを、先に記述される方法（８）にしたがって計算した。
【００６４】
（実施例１１）
新たな化合物の生成
図３〜５では、ＵＡＢ３０を製造するのに使用される方法が要約される。そのアプローチ法は、α−テトラロンが、出発エノン（図１で１）として使用される以外は、アルキル置換ＵＡＢレチノイド（例えば、ＵＡＢ８）（９，１０）の合成について先に報告されたものと類似であった。適切なケトンで始めることによって、一般構造ＩおよびIIIに属する全レチノイドを作成するために類似の方法を使用した（図１および２）。一般構造IIおよびIV（図１および２）については、化合物２（図３〜５）に関連したカルボン酸中間体を、ヘキサクロロアセトンの存在下で、４−アミノ安息香酸メチルと反応させて、アミドを得、そしてメチルエステルを、続いて鹸化させて、構造IIおよびIVを示す最終産物を得た。
【００６５】
図３〜５にある原子の番号づけは、レチノール酸との十分な比較を可能にするために系統だっていない。前に記したとおり（９）、δ−ラクトン中間体は、これらの条件下では検出されなかったが、しかし（９Ｚ）−２の生成での中間体であると推定された。関連化合物についての初期の報告（８−１０）とは異なり、酸（９Ｚ）−２のアルコール３への還元は、異性化によって達成されて、全Ｅ−および９Ｚ−異性体の１：１混合物を得た。この混合物を、ＭｎＯ２で酸化させて、アルデヒド（４）の比較可能な混合物を得た。そしてそれを、シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーを用いて生産的に分離させた。４の各純粋な異性体を、示されるとおりオレフィン化させて、（９Ｚ）−および（９Ｚ，１３Ｚ）−５または（全Ｅ）−および（１３Ｚ）−５のいずれかの混合物を得た。記述されたもの（８−１１）に類似の方法を用いて、各混合物を、シリカゲル（前者については０．５％Ｅｔ２Ｏ、ヘキサン中の０．１％ＴＨＦ、そして後者については１％Ｅｔ２Ｏ、ヘキサン中の０．５％ＴＨＦ）上でＨＰＬＣによって生産的に分離させた。その後、エステル５の個々の異性体を、Ｅ／Ｚ−異性化（１２）なしにＫＯＨ中の対応の酸に加水分解させた。最終酸についての異性純度（＞９７％）は、ＮＭＲおよび逆相ＨＰＬＣ（８−１１）によって確認された。図１中の中間体および生成物についての実験の収量および選択データは、表１に要約される。精製異性体のＵＶ／可視光スペクトルのデータは、表１に示され、そして完全な１Ｈ  ＮＭＲレポートは、表２に含まれる。
【００６６】
【表１】
0004435418.tif 000009
ａ値は、溶出剤としてエーテル／ヘキサンを用いたシリカゲル上である：３０％Ｅｔ２Ｏ、３および４；２０％Ｅｔ２Ｏ、２；１０％Ｅｔ２Ｏ、５およびＵＡＢ３０。ｂ最大波長（ｎｍ）および吸光係数（Ｍ−１ｃｍ−１）を、室温で、シクロヘキサン（５）またはメタノール（ＵＡＢ３０、４）中で得た。ＮＤ：測定されず。ｃＩＲ収縮頻度（ｃｍ−１）を、ＮａＣｌディスク上の薄層フィルムとして得た。化合物３ＯＨ収縮頻度は、括弧に入れて報告される。ｄＥ／Ｚ異性体の混合物についての収率。ｅエステル５は、５ｍｌ／分の流速（９）で、１．０％Ｅｔ２Ｏおよびヘキサン中の０．５％ＴＨＦを用いて、ワットマンのパーチシル１０Ｍ２０／５０正常相カラム上で生産的に分離させた。滞留時間は、１３８．６分（１３Ｚ）、１４０．２分（９Ｚ）、および１４２．６分（全Ｅ）であった。再注入画分は、３００または３４０ｎｍのいずれかで監視するとき１つの異性体を示した。ｆＵＡＢ３０異性体を、アセトニトリル（３：７）中の１％酢酸を用い、１．０ｍｌ／分の流速で、セフェリソーブＯＤＳ  Ｃ−１８カラムを用いた逆相クロマトグラフィーによって異性純度について分析した。３４０ｎｍ検出（ここで、各異性体は、非常に類似の吸光係数を示した）を用いて、異性比は、統合ピーク領域から測定した。異性比は、各異性体について９５％より大きかった。
【００６７】
【表２】
0004435418.tif 000010
（実施例１２）
構造研究
（９Ｚ）−２のＸ線結晶構造は、最近報告され（１７）、そしてそれは、８−ｓ−トランス−立体配座で結晶化した。分子機関によって作成されるものと、（９Ｚ）−２のＸ線構造を比較するために、アリンガーのＭＭ３（９４）計算を、ＵＡＢ１−ＵＡＢ８レチノイド（８）の構造を計算するために記述されたとおり行った。この中間体の計算した構造は、固形状態の構造に非常に類似した。Ψ５，６，７，８捩り角は、アルキル置換基（８）を有する他のＵＡＢレチノイドのように、各構造でほぼ平面状（−１６０°）であった。Ψ７，８、９，１０捩り角は、分子機構の構造については、−１３３°であり、そして結晶構造では１３４．３°であった。この角度は、Ｃ２’メチレンおよびＣ１９メチル基の間の立体の相互作用のため、平面でない。（９Ｚ）−および（全Ｅ）−ＵＡＢ３０レチノイドの分子機構の構造も作成された。ＵＡＢ８異性体（８）のものと比較すると、予測される低エネルギーのコンフォーマーは、非常に類似する。ＵＡＢ３０レチノイドの芳香族環は、ＵＡＢ８のアルキル基（Ｒ１＝Ｅｔ、Ｒ２＝Ｐｒ）のものと非常に類似する空間を占める。
【００６８】
８−ｓ−シス−コンフォーマーが、様々なＵＡＢレチノイド（８）についての８−ｓ−トランス−コンフォーマーと同じくらい安定であったことが先に注目された。ＵＡＢ３０異性体の８−ｓ−シス−コンフォーマーの低エネルギー構造も計算された。Ψ５，６，７，８捩り角は、８−ｓ−トランス−コンフォーマーのものとほぼ一致し、そしてΨ７，８、９，１０捩り角は、−７０°であった。さらに、８−ｓ−シス−コンフォーマーは、対応の８−ｓ−トランス−コンフォーマーよりわずかにいっそう安定であった（ΔＧ＝１ｋｃａｌ／モル）。
【００６９】
核内オーバーハウザー実験（ＮＯＥＳＹ）（２Ｄ）は、ＣＤＣｌ３中で（９Ｚ）−２で行われた。明らかなＮＯＥは、Ｈ−１９とＨ−２’の間（８−ｓ−トランスーコンフォーマーと一致する）およびＨ−１９とＨ−８の間（８−ｓ−シスーコンフォーマーと一致する）で観察された。Ｈ−１９メチルプロトンとＨ−１０との間（９Ｚ−形状を示す）で見られる非常に強力な交差ピーク強度と比較して、Ｈ−１９／Ｈ−２’とＨ−１９／Ｈ−８の間で観察される負の交差ピークの強度は、この統合強度の約半分であった。類似の結果が、ＵＡＢ３０の全Ｅ−および９Ｚ−異性体でのＮＯＥＳＹ実験から得られた。ＮＯＥ結果は、これらのレチノイドのポリエン鎖のＣ８−Ｃ９結合の周りの２つの低エネルギーコンフォーマーを確認したＭＭ３計算の支持の状態にある。
【００７０】
（実施例１３）
ＣＲＡＢＰ結合アフィニティー
ＩＣ５０値は、放射性リガンドとして［３Ｈ］−（全Ｅ）−ＲＡを用いたヒナドリの皮膚のＣＲＡＢＰ放射性リガント結合アッセイ（１８）で評価された。１００倍過剰の未標識ＵＡＢレチノイドで、（全Ｅ）−ＵＡＢ３０が、わずか７５％まで［３Ｈ］ＲＡの結合を阻害した。（１３Ｚ）−ＵＡＢ３０（２８％阻害）および（９Ｚ）−ＵＡＢ３０（５％阻害）は、ＣＲＡＢＰについてアフィニティーが更に低いことを示した。ＲＡ（ＩＣ５０＝６００ｎＭ）の全Ｅ異性体と比べて低いアフィニティーのＵＡＢ３０異性体（ＩＣ５０＞２０００ｎＭ）は、ＵＡＢ７およびＵＡＢ８レチノイドが、ＲＡのものと比較できる結合アフィニティーを示したので、特に驚くべきである。明らかに、これらの基が、溶液内の空間の類似の領域に配置される場合でさえ、ＵＡＢ３０の芳香族環残渣は、ＣＲＡＢＰのＲＡ結合部位にあるＵＡＢ８の塊状のアルキル基と同様に相互作用しない。
【００７１】
（実施例１４）
核内レセプター結合アフィニティーおよび転写活性
ＵＡＢ３０の全Ｅ−、９Ｚ−および１３Ｚ−異性体を、ＲＡＲへの［３Ｈ］−（全Ｅ）−ＲＡの結合を阻害するそれらの能力について評価した。阻害工程を調査するために、核内レセプター（ＲＡＲα、ＲＡＲβ、ＲＡＲγおよびＲＸＲα）を、１０００ｍＭのＵＡＢレチノイドおよび５ｎＭ［３Ｈ］−（全Ｅ）−ＲＡに最初に露出させた。これは、１０００ｎＭ未標識（全Ｅ）ＲＡを使用する陽性対照と、レチノイドを使用しない対照とを比較した。活性レチノイドについては、ＩＣ５０値は、ＵＡＢレチノイドの可変濃度で滴定することによって測定した。
【００７２】
（全Ｅ）−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲに有効に結合する唯一のＵＡＢ３０異性体であった。ＲＡＲについてのＩＣ５０値（３０−５０ｎＭ）は、（全Ｅ）−ＲＡまたは（全Ｅ）−ＵＡＢ８（表３）についてのものよりわずか約５倍大きく、そして（９Ｚ）−ＲＡについてのものと比較できる。（９Ｚ）−ＵＡＢ３０についてのＩＣ５０値は、＞１０００ｎＭであり、それにより、それは、ＲＡＲレセプターに結合しないことが示された（表３）。そしてそれは、（９Ｚ）−ＵＡＢ８でのデータと一致する。ＲＡＲについての低いアフィニティーは、これらのレセプターに、（全Ｅ）−ＲＡとほぼ同様に結合する（９Ｚ）−ＲＡに共有されない。さらに、（１３Ｚ）−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲサブタイプに対する有効性のないバインダーであったが、それは、これらの核内レセプター（９）に対する（１３Ｚ）−ＵＡＢ８の結合特性と異なる。
【００７３】
【表３】
0004435418.tif 000011
ａＩＣ５０およびＥＣ５０値は、１および１０００ｎＭの間の濃度を用いて用量応答曲線のプロビット分析によって計算された。報告されたＩＣ５０値での標準誤差は、±２．０ｎＭまたはそれ未満であった。（９Ｚ）−ＲＡによるＲＡＲγの活性化について報告されるＥＣ５０値が±４ｎＭである以外は、報告されたＥＣ５０値での標準誤差は、±２．５ｎＭまたはそれ未満であった。ｂＩＣ５０値は、Ａｌａｍら（９）から取られた。
【００７４】
ＵＡＢ３０異性体を、ＲＡＲα−、ＲＡＲβ−およびＲＡＲγ依存性転写活性を誘導する細胞内のそれらの機能的活性を測定するアッセイで評価した。ＣＶ−１細胞は、適切なＲＡＲサブタイプおよび（ＴＲＥｐａｌ）２−ｔｋ−ＣＡＴ（９，１９）から得られるＤＮＡプラスミドで一過的に形質移入させた。用量応答曲線を使用して、ＵＡＢ３０異性体のレチノイド誘導転写についてのＥＤ５０値を測定し、そしてその後、（全Ｅ）−および（９Ｚ）−ＲＡについて、そして（全Ｅ）−および（９Ｚ）−ＵＡＢ８について見られるものと比較した（表３）。（全Ｅ）−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲβ依存性レセプターで活性化される転写を誘導した。しかし、５倍高い濃度は、（９Ｚ）−ＲＡまたは（全Ｅ）−ＵＡＢ８について観察されるものに類似の活性化を達成するのに必要とされる。（全Ｅ）−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲγ−依存性転写を誘導する上で中程度の活性を表し、そしてＲＡＲα転写を誘導する活性がなかった。そういうものだから、このＵＡＢ３０異性体が、ＲＡＲβおよびＲＡＲγサブタイプ選択性およびＲＡＲαアンタゴニスト特性を示し、それは、非常に十分なｐａｎ−ＲＡＲアゴニストである（全Ｅ）−ＵＡＢ８に対比する形態にある。（１３Ｚ）−ＵＡＢ３０は、そのＵＡＢ８類縁体よりいっそう異なる核内レセプター転写特性を示した。ＲＡＲ依存性遺伝子発現を誘導する上で活性がなかったのに対して、（１３Ｚ）−ＵＡＢ８は、ＲＡＲによって指向される遺伝子転写の十分なアクチベーターであった。（９Ｚ）−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲによって指向されるレセプター遺伝子のいっそう乏しいアクチベーターであった。（９Ｚ）−ＵＡＢ８よりこれらのアッセイでの活性がいっそう低かった。
【００７５】
ＲＸＲαへのＵＡＢ３０異性体の結合アフィニティーを次に試験した。唯一（９Ｚ）−ＵＡＢ３０が、ＲＸＲαへの２０ｎＭ［３Ｈ］−（９Ｚ）−ＲＡの結合を阻害した（表３）。１００倍過剰の未標識ＵＡＢレチノイドで、（９Ｚ）−ＵＡＢ３０は、（９Ｚ）−ＲＡに比べて活性の７０％を阻害した。この異性体についてのＩＣ５０値は、（９Ｚ）−ＵＡＢ８についてのものより良く、そして（９Ｚ）−ＲＡのものよりただ４倍高かった。他の異性体は、有効性がいっそう低かった（ＩＣ５０＞２０００ｎＭ）。（９Ｚ）−ＵＡＢ３０によるＲＸＲα同質二量体依存性転写活性における影響が、（９Ｚ）−ＲＡによるものより約４倍低かったが、（９Ｚ）−ＵＡＢ８によるものより２倍良かった。（９Ｚ）−ＵＡＢ異性体の内、ＵＡＢ３０は、ＲＸＲを活性化させるための最も強力で、そして選択性のあるリガンドである。
【００７６】
（全Ｅ）−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲα（ＩＣ５０＝３５ｎＭ）とよく結合したが、このレセプターを十分に活性化させなかった（ＥＣ５０＞１０００ｎＭ）ので、ＲＡＲαアンタゴニストとして作用するその可能性を、次に評価した。１と１０００ｎＭの間の範囲にある固定された（全Ｅ）−ＲＡ濃度を、２つの濃度の（全Ｅ）−ＵＡＢ３０（１０または１００ｎＭ）を用いてＲＡＲα同質二量体によって指向される転写アッセイで評価した。これらを、（全Ｅ）−ＲＡ単独の陰性対照およびＲｏ−４１−５２５３を使用する陽性対照である既知ＲＡＲαアンタゴニストと、１０および１００ｎＭで比較した。５０および１００ｎＭ（全Ｅ）−ＲＡ濃度については、１００ｎＭ（全Ｅ）−ＵＡＢ３０で処置した細胞の相対的ＣＡＴ活性は、唯一（全Ｅ）−ＲＡを含むものと比較して減少した。ＣＡＴ活性でのこの減少は、（全Ｅ）―ＵＡＢ３０によるレチノール酸拮抗作用で一定であが、これらの影響の規模は、Ｒｏ−４１−５２５３によって示されるものより２倍低かった。
【００７７】
（実施例１５）
マウスの皮膚乳頭腫の化学的予防
ＵＡＢ３０レチノイドを、次に、マウス皮膚（１４）上の乳頭腫の化学的誘導を予防する上でその活性について評価した。（全Ｅ）−ＲＡおよび（全Ｅ）−ＵＡＢ８の両方は、この化学的予防アッセイで非常に有効であった。４５．９ナノモルの用量で、それらは、腫瘍形成を完全に予防した（レチノール酸については９５％；ＵＡＢ８については９９％）。これらのレチノイドについてのＥＤ５０値は、３．０（ＲＡ）および２．５（ＵＡＢ８）ナノモルであった（８）。（全Ｅ）−ＵＡＢ３０は、皮膚抗乳頭腫アッセイでのこのレチノール酸またはＵＡＢ８異性体より有効性が低かった。それは、４５．９ナノモルで乳頭腫の５９％を減少させた。容量応答曲線を使用して、ＥＤ５０は、このレチノイドについて正確に測定できず、他の周縁で活性なＵＡＢレチノイド（８）の活性を定量する努力と密着している。先に、高い活性の（全Ｅ）−ＵＡＢ８（Ｒ１およびＲ２で大型のアルキル基を含む）を、ＲＡＲαのその十分な結合および／または活性化に対して修正（構造−活性の関係で）した。これらの流れを用いて、（全Ｅ）−ＵＡＢ３０の活性が減少されるのは、特に、優れたＲＡＲγ活性を示す（全Ｅ）−ＵＡＢ８との比較の上で、ＲＡＲγを活性化する能力が乏しいこと、および／またはＲＡＲαを活性化する能力の欠如（表３）のためである可能性がある。（９Ｚ）−ＵＡＢ８異性体は、このアッセイで（９Ｚ）−ＲＡより有効性が低かった。４５．９ナノモルで腫瘍形成のただ５４％を防止し、（９Ｚ）−ＲＡでの用量は、非常に活性であった（９５％）（８）。しかし、この低い活性は、このアッセイ（８）での（９Ｚ）−ＵＡＢ８のものと比較しうる。（９Ｚ）−ＵＡＢ８および（９Ｚ）−ＵＡＢ３０の両方は、ＲＸＲ選択性レチノイドであるので、それらは、ＲＡＲ依存性経路の、特に、ＲＡＲβおよびＲＡＲγ核内レセプターによって指向されるものの有効なアクチベーターではない。Ｃｈａｎｄｒａｒａｔｎａら（２０）は、ＲＡＲβおよびＲＡＲγ選択性レチノイドが、皮膚でのＴＰＡ誘導オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）活性の優れた阻害剤であること、そのアッセイが、皮膚抗乳頭腫アッセイ（１４）と十分に互いに関係づけることを示した。それらは、これらのＲＡＲβおよびＲＡＲγ選択性レチノイドが、ＲＡＲα結合を介してＡＰ−１依存性遺伝子発現を拮抗させることによって、生体内でのＯＤＣ活性の強力な阻害剤であることを示唆した。これがその場合であると、それにより（全Ｅ）−ＵＡＢ３０（弱いＲＡＲαアンタゴニスト）は、有効なＡＰ−１アンタゴニストでないが、しかし（全Ｅ）−ＵＡＢ８は、ＲＡＲ同質二量体（表３）のその例示の強力な転写活性を加える上でＡＰ−１遺伝子転写を抑制させる活性を示す。
【００７８】
（実施例１６）
核内レセプターの形質移入および形質抑制
先に、ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０レチノイドは、ＲＡＲおよびＲＸＲ核内レセプター結合および転写アッセイ（Ｍｕｃｃｉｏら、１９９８年）で評価した。全−トランス−ＵＡＢ８は、ＡＴＲＡと類似の特性を示す優れたｐａｎ−ＲＡＲアゴニストであることが分かった。９−シス−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲ転写を誘導する活性をほとんど示さない基本的にＲＸＲ選択性アゴニストであった。９−シス−ＵＡＢ８は、ＲＡＲ−αおよびＲＡＲγを弱く活性化することを除いて、９−シス−ＵＡＢ３０に類似した。全−トランス−ＵＡＢ３０は、各ＲＡＲレセプター（ＩＣ５０値３０−５５ｎＭ）によく結合したが、しかしＲＡＲ−βおよびＲＡＲ−γによって指向される転写のみを活性化させた。全−トランス−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲ−αアンタゴニストとして作用できるかどうかを理解するために、このレチノイドの影響を、ＡＴＲＡによって誘導されるＲＡＲ−α指向性転写について調べた。図８に示されるとおり、全−トランス−ＵＡＢ３０（１０から１０００ｎＭ）の用量が増加すると、固定用量でＡＴＲＡによって誘導されるＲＡＲ−α指向性転写を弱めた。既知ＲＡＲ−αアンタゴニスト（Ａｐｆｅｌら、ＰＮＡＳ、８９巻、７１２９頁（１９９２年））であるＲｏ−４１−５２５３は、全−トランス−ＵＡＢ３０によって観察されるものと類似の流れを生じるが、しかし、それは、２倍多く活性である。
【００７９】
ＡＴＲＡは、用量依存的手段でＡＰ−１（ｃ−Ｊｕｎ／ｃ−Ｆｏｓ）遺伝子転写を抑制する。ＵＡＢレチノイドを研究するために、ＣＡＴ遺伝子と結合されるＡＰ−１結合部位を含むコラゲナーゼプロモーターを使用した。ＲＡＲ−αレチノイドレセプター発現ベクターと一緒に、ＴＰＡ−誘導遺伝子発現の抑制を、ＡＴＲＡと比べて様々なＵＡＢレチノイドについて測定した。図９に示されるとおり、ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０の全−トランス−異性体は両方とも、ＴＰＡ誘導遺伝子発現を減少させる上でＡＴＲＡと同じくらい有効であった。ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０レチノイドの９−シス−異性体は、高い用量でのみ有効であった。したがって、全−トランス−ＵＡＢ８は、ＡＴＲＡの特性を共有する。それは、優れたｐａｎ−ＲＡＲアゴニストであり、そしてＡＰ−１形質抑制で非常に活性である。興味深くは、全−トランス−ＵＡＢ３０は、開示される他のレチノイド（Ｆａｎｊｕｌら、Ｎａｔｕｒｅ、３７２巻、１０７頁、１９９４年；Ｎａｇｐａｌら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７０巻、９２３頁、１９９５年）のようにＡＰ−１転写を抑制するのみである。
【００８０】
（実施例１７）
ＨＬ−６０およびＮＢ４細胞のレチノイド誘導分化
ＡＰＬの処置のためにＵＡＢレチノイドの可能性を探るために、ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０異性体を、２つのＡＰＬ白血病セルラインＨＬ−６０およびＮＢ４細胞の分化を誘導するそれらの能力を測定する生体外アッセイで評価した。ＨＬ−６０細胞を、ＡＰＬ患者から単離した場合でさえ、ＮＢ４セルラインのみが、ＲＡＲαに関与して、ＲＡＲα／ＰＭＬ融合タンパク質を形成するｔ（１５：１７）転位を含む。この特徴的な突然変異は、ＮＢ４細胞で安定に行われるので、それは、この疾病についてのレチノイドの効力を判定するのによいモデルである。ＡＴＲＡおよび他のＵＡＢレチノイドが、３日後ＮＢ４細胞の分化を誘導するという効率の比較は、図１０に表される。全−トランス−ＵＡＢ８は、用量の範囲のＡＴＲＡより約１０倍いっそう活性である（ＥＤ３０１１０対８１０ｎＭ）。９−シス−レチノール酸活性は、ＡＴＲＡのものと比較できる（データは示されず）。しかし、高度にＲＸＲ選択性のリガンドである９−シス−ＵＡＢ３０の活性は、１ｎＭより大きな用量でさえ低い活性を示す（ＥＤ３０＞１０ｍＭ）。全トランス−ＵＡＢ８と対照的に、全トランス−ＵＡＢ３０は、ＲＡＲ−α核内レセプターの拮抗作用と一致する４０ｎＭまで活性でない。９−シス−ＵＡＢ８の活性は、ＡＴＲＡと同様の活性のただ５０％である（ＥＤ３０＞３ｍＭ）。この活性は、高用量でＲＡＲ−α依存性転写を活性化するその能力のためでありうる（Ｍｕｃｃｉｏら、１９９８年）。
【００８１】
（実施例１８）
レチノイドを組合わせて使用するＮＢ４細胞分化
可能な相互作用的効果が、ＮＢ４細胞分化で、組み合わせてＲＡＲ−およびＲＸＲ−アゴニストを使用することが次に調べられた。図１１に表されるとおり、ＮＢ４細胞は、ＡＴＲＡ単独の用量を、そしてＵＡＢ８およびＵＡＢ３０異性体と組合わせて、用量を変化させて処置した。ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０レチノイドの用量は、ＡＴＲＡ（Ｂｅｒｅｎｂａｕｍ、Ｐａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４１巻、９３頁（１９８９年））に対して各レチノイドの活性にほぼ等しいことを可能にするために選択された。ＮＢ４細胞は、ＡＴＲＡおよび９−シス−ＵＡＢ３０で処置されたとき、ＮＢ４細胞の分化についてのＥＤ３０値（３日目）で１０倍の減少が起こった。９−シス−ＵＡＢ３０単独は、ＮＢ４細胞分化で効果を示さなかった（図１０）ので、これは、これら２つのレチノイドの間の相互作用の明確な兆候である。９−シス−ＵＡＢ３０は、ＡＴＲＡの効果を強化し、そしてＥＤ３０を８１０から５０ｎＭへ移行させた（ＡＴＲＡ：９−シス−ＵＡＢ３０＝１：１０）。全−トランス−ＵＡＢ８を、９−シス−ＵＡＢ８と組合わせて使用して、ＮＢ４細胞分化についての類似の効果も観察された（図１２）。ＥＤ３０での移行は、１１０から２５ｎＭであった。相互作用的効果は、見掛け上９−シス−ＵＡＢ８を使用することと同様ではない。しかし、イソボルが作成されるとき、相互作用も観察される（Ｂｒｅｉｔｍａｎ）。ＲＡＲ−およびＲＸＲ−選択性アゴニストの間の相互作用は、他のレチノイド類縁体を用いて、ＮＢ４細胞で観察された（Ｃｈｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３８２巻、８１９頁（１９９６年））。ここで観察される効果は、ＲＸＲ選択性リガンドＢＭＳ６４９（ＳＲ１１２３７）および他のＲＡＲ選択性アゴニストを用いて生成されるものと比較できる。
【００８２】
組合せの効果は、ＡＴＲＡおよび全トランス−ＵＡＢ３０の間で評価して、ＮＢ４細胞の分化でのＲＡＲ−ａアンタゴニストの効果を評価した。組合せの効果は、高いＡＴＲＡ用量で最も明らかであり（図１１）、８１０から２８００ｎＭまでＥＤ３０は増加した。全トランス−ＵＡＢ８と類似の研究（図１２）で、全トランス−ＵＡＢ３０は、約５倍（６６０から３０００ｎＭまで）までＥＤ３０を増大させた。全トランス−ＵＡＢ３０は、ＡＰ−１転写を制御する能力があるが、ＮＢ４細胞の分化で不活性であるので、作用のこの態様は、ＮＢ４細胞の分化において重要な役割を果たすようにない。その代わり、全トランス−ＵＡＢ３０によるＡＴＲＡ誘導または全トランス−ＵＡＢ８で誘導されたＮＢ４細胞の分化の両方の拮抗作用は、ＲＡＲ−αに関与する作用の機構と最も一致する。
【００８３】
先に、Ｂｒｅｉｔｍａｎおよび共同研究者は、４−ヒドロキシフェニルレチナミド（４−ＨＰＲ）単独は、ＮＢ４細胞に分化を誘導しないが、しかし全トランス−レチノール酸と組合わせて使用するとき、ＮＢ４細胞の分化は増強されることを示した。４−ＨＰＲと全トランス−ＵＡＢ８の組合せの使用は、ここで調査され、類似の効果が誘導されうるかどうかを決定した。ＮＢ４細胞分化（ｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）は、全トランス−ＵＡＢ８の濃度を変化させながら、細胞が、１および４ｕＭまでの４−ＨＰＲにさらされるときに明らかに増強された（図１３）。全トランス−ＵＡＢ８のＥＤ５０値を、４−ＨＰＲを添加しながら、１００倍低く（５０ｎＭ）移行させた。
【００８４】
（実施例１９）
ＮＢ４細胞でのレチノイド代謝
ＡＴＲＡ治療に対する医療的耐性を発生するＡＰＬ患者からＮＢ４細胞を単離した（Ｌａｎｏｔｔｅら、Ｂｌｏｏｄ、７７巻、１０８０頁（１９９１年））。これらの細胞は、誘導可能なシトクロムＰ４５０ヒドロキシラーゼに急速に関与するＡＴＲＡを代謝する（Ｗｈｉｔｅら、Ｊ  ＢＣ、２７１巻、２９９２２頁（１９９６年））。この代謝は、ＡＴＲＡの効力を急速に減少させ、そしてこの酵素の強力な阻害剤は、ＮＢ４細胞分化でのこのホルモンの効率を改善する。
【００８５】
（実施例２０）
ＪＭＭＬ・ＣＦＵ−ＧＭコロニー形成の阻害
１９９１年に、Ｅｍａｎｕｅｌら（２１）は、ＪＭＭＬで観察される自発的ＣＦＵ−ＧＭコロニー形成は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）に対するＪＭＭＬ造血性原種細胞の選択性過敏性に関連することを示した。この最初の報告から、他の者（２２）は、ＪＭＭＬでの病原性機構としてＧＭ−ＣＳＦ過敏性のこれらの観察を確認した。さらに、１９９１年には、Ｃａｓｔｌｅｂｅｒｒｙ、Ｅｍａｎｕｅｌおよび共同研究者も、ＪＭＭＬでのその可能な医療的効力についての証拠（２１）と同様に、生体外ＪＭＭＬの自発的ＣＦＵ−ＧＭ成長を阻害する（１３Ｚ）−ＲＡの能力の予備的証拠を示した。この先駆的臨床治験では、生体外でのスクリーンでの（１３Ｚ）−ＲＡの効果が、医療機関でのＪＭＭＬを示す患者を治療する上でのその効力と一致することが示唆された（５）。この調査では、（全Ｅ）−および（９Ｚ）−ＲＡは、この生体外アッセイで最初に評価され、そしてこれらのＲＡ異性体も、ＪＭＭＬを示す３名の患者から単離された細胞での自発的ＣＦＵ−ＧＭコロニー成長を阻害する優れた可能性を示すことが示された（表４）。
【００８６】
ヒトＪＭＭＬ細胞の増殖の阻害におけるＵＡＢ８およびＵＡＢ３０異性体の効果は、次に調査された。ＵＢＡ８異性体は、２名の患者から得た細胞を用いたこのアッセイで評価された（表４）。（全Ｅ）−ＵＡＢ８は、これらのＣＦＵ−ＧＭコロニーの自発的成長を制御する上で（全Ｅ）−ＲＡと同じ効力があった。しかし、（９Ｚ）−および（１３Ｚ）−ＵＡＢ８は、成長を制御する上で対応のＲＡ異性体より効力が低かった。特に、患者Ｊ８４細胞については、これらのレチノイドの活性に２倍の減少がある。ＵＡＢ３０異性体については、最も強力な異性体は、２名の患者で、ＲＡのものよりほんのわずかに低い活性を示す（１３Ｚ）−ＵＡＢ３０である。ＵＡＢ８異性体と対照的に、このレチノイドの全Ｅ異性体は、ＲＡおよび（全Ｅ）−ＵＡＢ８より活性が低い。さらに、（９Ｚ）−ＵＡＢ３０は、（９Ｚ）−ＵＡＢ８のものに類似して、このアッセイで低い活性を示す。
【００８７】
【表４】
0004435418.tif 000012
ａＥＤ５０値を、１０−２から１０μＭまでの範囲にあるレチノイドの４つの濃度を用いて用量応答曲線から測定した。ｂ正常化した阻害率を、（レチノイドの阻害率（％））／（１０−６Ｍでの（全Ｅ）−ＲＡの阻害率（％））によって計算した。１０−６Ｍでの（全Ｅ）−ＲＡの阻害率は、それぞれ、Ｊ４３、Ｊ８３およびＪ８４の患者の細胞について８５％、７８％および６１％であった。ｃＮＴは、試験されなかったことを意味する。
【００８８】
ＪＭＭＬでの固定していない染色体異常性があり、そしてレチノイドレセプターに関与するように見えるものはない。しかし、ＪＭＭＬでのＧＭ−ＣＳＦ過敏性におけるＲＡの見かけの調節効果（２３）は、転写因子ＡＰ−１（ｃ−ｊｕｎ／ｃ−ｆｏｓ）におけるＲＡＲαのＲＡ誘導の拮抗作用的効果であると考えられる。ＧＭ−ＣＳＦシグナル形質移入は、Ｒａｓを介して流れて、その主要な終了点の１つとして、ＡＰ−１応答要素の上昇制御または活性化を有するように見える。この応答要素は、ｃ−ｊｕｎ／ｃ−ｆｏｓによって活性化され、そして細胞外シグナル形成（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）によって刺激されたときに、ＡＰ−１の誘導は、他の方法の中でも、細胞増殖に至る。実際、ＪＭＭＬでの初期応答遺伝子発現を調べるノーザンブロット実験では、Ｅｍａｎｕｅｌ（２２）は、ｃ−ｊｕｎおよびｃ−ｆｏｓの両方の、しかしｃ−ｍｙｃではない見掛けの構成する上昇制御に注目した。Ｐｆａｈｌ（２４）は、上皮細胞（２５）では、ＲＡが、ＡＰ−１によって指向される遺伝子転写を抑制する機構が、セルライン特異的であり、そしてＲＡＲおよびＲＸＲのいずれかによって指向されうることを示した。
【００８９】
ＪＭＭＬ中のこれらの骨髄性原種細胞の増殖を阻害する上で高い活性の（１３Ｚ）−ＲＡについての厳密な機構は、調査の範囲を残す。レセプター基本の機構を推定すると、（１３Ｚ）−ＲＡ異性体は、（全Ｅ）−または（９Ｚ）−ＲＡのいずれかに異性化でき、そしてＲＡＲ／ＲＸＲレセプターと相互作用する。本発明では、これらの後者の２つの異性体は、ＪＭＭＬ細胞中の増殖を防止する上で（１３Ｚ）−ＲＡと同様に活性であることが示され、それによりこの仮定は支持される。ＲＡＲ／ＲＸＲ依存性経路を釣上げるために、ＪＭＭＬ細胞の増殖を防止するレセプター選択性レチノイドの能力を調べた。この生体外でのＪＭＭＬアッセイで（全Ｅ）−ＵＡＢ８の活性が高く、そして（９Ｚ）−ＵＡＢ８または（９Ｚ）−ＵＡＢ３０のいずれかの２つのＲＸＲ選択性レチノイドの活性が減少したことは、形質抑制のＲＡＲ依存性経路と一致する。（全Ｅ）−ＵＡＢ３０は、他の天然のＲＡ異性体および（全Ｅ）−ＵＡＢ８より活性が低い。それは、各ＲＡＲサブタイプに十分結合するが、しかしＲＡＲαアンタゴニストについての転写を活性化しないので、（全Ｅ）−ＵＡＢ８に比べて生体外ＪＭＭＬアッセイでのこの低い活性は、そのＲＡＲα拮抗作用の、または言換えると、ＡＰ−１拮抗作用を欠くためでありうる。リガンド結合は、ＡＰ−１拮抗作用のために必要であるが、しかし十分な条件でない。これは、レチノイドが、ＲＡＲαアンタゴニストであるが、ＡＰ−１依存性転写のＲＡＲ依存性形質抑制を誘導しないことが確認されたので、レチノイドのまれな特性ではない（２６）。
【００９０】
（実施例２１）
ＵＡＢレチノイドによる癌の予防
メチルニトロソウレア（ＭＮＵ）誘導哺乳類癌での（９Ｚ）−ＵＡＢ３０の効力を測定した。表５および図１４は、ＭＮＵ誘導後の時間じゅう平均腫瘍重量／ラットのラットの２つの群の間の比較を示す。表６および図１５は、様々な日数で測定された平均体重／ラットのラットの同じ２つの群の間の比較を示す。データは、ＵＡＢ−３０処置は、ＭＮＵ−誘導哺乳類癌の成長を阻害したことを示す一方で、全体の体の成長に対する明らかな効果は示さなかった。
【００９１】
【表５】
0004435418.tif 000013
【表６】
0004435418.tif 000014
（実施例２２）
ＵＡＢ８に関連した化合物の例
列記された以下のものは、分析的データを示す、ＵＡＢ８に関連する合成化合物の例である：
【化１６】
0004435418.tif 000015
【表７】
0004435418.tif 000016
【表８】
0004435418.tif 000017
【表９】
0004435418.tif 000018
【表１０】
0004435418.tif 000019
（実施例２３）
ＵＡＢ３０に関連した化合物の例
列記された以下のものは、分析的データを示す、ＵＡＢ３０に関連する合成化合物の例である：
【化１７】
0004435418.tif 000020
【表１１】
0004435418.tif 000021
【表１２】
0004435418.tif 000022
【表１３】
0004435418.tif 000023
【表１４】
0004435418.tif 000024
【表１５】
0004435418.tif 000025
【表１６】
0004435418.tif 000026
【表１７】
0004435418.tif 000027
【表１８】
0004435418.tif 000028
【表１９】
0004435418.tif 000029
【表２０】
0004435418.tif 000030
【表２１】
0004435418.tif 000031
結論として、本発明は、融合ベンジル環を、アルキル基に置換することは、Ｃ−８とＣ−１５との間のポリエン鎖上の配座でほとんど影響しないが、それは、立体配座で強制されるＵＡＢレチノイドの生物学上の特性を顕著に変化することを示す。特に、全Ｅ−異性体の核内レセプター転写プロフィールは、劇的に修正される。ＵＡＢ３０については、この異性体は、ＲＡＲβ−およびＲＡＲγ−依存性転写（ＲＡＲαアンタゴニスト）の活性化について選択的に示すのに対して、（全Ｅ）−ＵＡＢ８は、強力なｐａｎ−ＲＡＲアゴニストである。９Ｚ−異性体の形質移入のプロフィールは、非常に類似性がある。ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０の両方の９Ｚ−異性体は、後者が最大の力価および選択性を示しつつ、ＲＸＲα−選択性化合物である。これらのレチノイドも、数種の生物学的アッセイで非常に異なる効力を示し、そしてそれらの活性における変化は、それらの個々の転写特性と十分に互いに関係がある。例えば、皮膚乳頭腫の予防における、ＩＭＭＬ細胞の増殖の阻害における、（全Ｅ）−ＵＡＢ３０および（９Ｚ）−ＵＡＢ８／（９Ｚ）−ＵＡＢ３０を超える（全Ｅ）−ＵＡＢ８の高い活性は、各ＲＡＲサブタイプによって指向される遺伝子発現を活性化するその例示される強力な活性、および／またはＲＡＲサブタイプを介してＡＰ−１の遺伝子発現を抑制するその推定活性と一致する。本発明の刺激的な態様は、ＮＢ４細胞を分化させるそれらの能力で（全Ｅ）−ＲＡより（全Ｅ）−および（１３Ｚ）−ＵＡＢ８が高い効力である。ＵＡＢ８の全Ｅ−異性体は、ＲＡ９２９）、そしてその延長期間のその血漿のこの異性体より毒性が２倍低い。一緒にして、これら２つのＵＡＢ８異性体および類縁体は、ＡＰＬ患者の治療で臨床用途の改善された薬剤でありうる。
【００９２】
さらに、本発明では、ＲＸＲ選択性アゴニスト、９−シス−ＵＡＢ３０と組合わせた強力なＲＡＲα、全−トランス−ＵＡＢ８の使用は、ＮＢ４細胞の分化を明らかに増強することが示される。ＡＴＲＡ単独と比較した場合、この組合せは、ＮＢ４細胞分化で３０倍さらに有効である。全−トランス−ＵＡＢ８での生体内毒性データは、それが、ＡＴＲＡより毒性が低いことを示し（Ｌｉｎら、Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏ．１３９巻、３１０頁、１９９６年）、９−シス−ＵＡＢ３０での予備データは、それが、９−シス−レチノール酸よりいっそう毒性が少ないことを示す。ＵＡＢ３０レチノイドの増強された安定性と一緒にして、これらのデータは、これらの剤が組合わせて使用される場合に、改善されたＡＰＬ療法が得られることを示唆する。
【００９３】
以下の資料が、ここで引用された。
【００９４】
【表２２】
0004435418.tif 000032
【表２３】
0004435418.tif 000033
本明細書で記されたあらゆる特許および出版物は、本発明が関連する当業者のレベルを示す。これらの特許および出版物は、各々の個別の出版物が、特定に、そして個別に参照して組込まれることが示された場合と同じ範囲で参照してここに組込まれる。
【００９５】
当業者は、本発明が、目的を行い、そしてそこに本来備わっているものと同様に、記された結果および利点を得るのによく適合していることを容易に予測する。ここに記述される方法、手段、治療、分子、および特定の化合物に伴う本実施例は、現在、好ましい具体例の代表であり、そして実例であり、そして本発明の範囲における制限として意図されない。請求項の範囲によって規定されるとおり本発明の概念の範囲内に包含される、そこでの、および他の用途での変化は、当業者で起こる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、ＵＡＢ８および類縁体（ＵＡＢ８は、構造ＩでＲ１＝エチルおよびＲ２＝ｉ−プロピルと定義される）を記述する一般構造ＩおよびIIを示す。
【図２】  図２は、ＵＡＢ３０および類縁体を記述する一般構造IIIおよびIVを示す。
【図３】  図３は、ＵＡＢ３０を製造する略図を示す。
【図４】  図４は、図３の続きを示す。
【図５】  図５は、図４の続きを示す。
【図６】  図６は、ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０レチノイドの全トランス−および９−シス異性体に比較した全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）の構造を示す。
【図７】  図７は、ＵＡＢ８およびＵＡＢ３０レチノイドの全トランス−および９−シス異性体に比較した全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）の構造を示す。
【図８】  図８は、ＲＡＲ−αアンタゴニスト、全トランス−ＵＡＢ３０およびＲｏ−４１−５２５３によってＣＶ−１細胞中で全トランス−レチノール酸を誘導したＲＡＲ−α転写活性の阻害を示す。
【図９】  図９は、２つの用量（１０−７から１０−６Ｍ）で全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）、およびＵＡＢ８およびＵＡＢ３０異性体によって、ＨｅＬａ細胞中のＴＰＡ誘導ＲＡＲ−α転写活性の阻害を示す。
【図１０】  図１０は、ＡＴＲＡ（塗りつぶした円形）、全トランス−ＵＡＢ８（塗りつぶした三角形）、９−シス−ＵＡＢ８（塗りつぶした四角形）、全トランス−ＵＡＢ３０（逆さまの塗りつぶした三角形）、および９−シスＵＡＢ３０（塗りつぶしたダイアモンド型）によってＮＢ４細胞分化を示す。
【図１１】  図１１は、ＮＢ４細菌（塗りつぶした円形）のみ、または９−シス−ＵＡＢ８（１：２．５）（塗りつぶした三角形）、９−シス−ＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶした四角形）、または全トランスＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶしたダイアモンド型）と組合わせて分化させる全トランス−レチノール酸（ＡＴＲＡ）の許容量を示す。
【図１２】  図１２は、ＮＢ４細胞（塗りつぶした円形）のみ、または９−シス−ＵＡＢ８（１：２．５）（塗りつぶした三角形）、９−シス−ＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶした四角形）、または全トランス−ＵＡＢ３０（１：１０）（塗りつぶしたダイアモンド型）と組合わせて分化させる全トランス−ＵＡＢ８の許容量を示す。
【図１３】  図１３は、ＮＢ４細胞（塗りつぶした円形）のみ、または１μＭ（塗りつぶした三角形）および４μＭ（塗りつぶされた四角形）で４−ヒトロキシフェニルレチナミドと組合わせて分化させる全トランス−ＵＡＢ８の許容量を示す。
【図１４】  図１４は、時間後期メチルニトロソウレア（ＭＮＵ）誘導の時期をかけた平均哺乳類腫瘍重量／ラット（グラム）を示す。
【図１５】  図１５は、様々な日齢をかけた平均体重／ラット（グラム）を示す。
【図１】
0004435418.tif 000040
【図２】
0004435418.tif 000041
【図３】
0004435418.tif 000042
【図４】
0004435418.tif 000043
【図５】
0004435418.tif 000044
【図６】
0004435418.tif 000045
【図７】
0004435418.tif 000046
【図８】
0004435418.tif 000047
【図９】
0004435418.tif 000048
【図１０】
0004435418.tif 000049
【図１１】
0004435418.tif 000050
【図１２】
0004435418.tif 000051
【図１３】
0004435418.tif 000052
【図１４】
0004435418.tif 000053
【図１５】
0004435418.tif 000054