(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸Ｎ−モルホリノエチルエステル化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物を担体または希釈剤とともに含む医薬製剤。
【請求項３】
ｓＰＬＡ２の過剰生産によって誘導および／または維持される症状の治療用の、請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の属する分野
本発明は、高い生物学的利用能を有するｓＰＬＡ2阻害剤化合物に関する。
【０００２】
発明の背景
ヒト非膵臓性の分泌性ホスホリパーゼＡ2（以後、「ｓＰＬＡ2」と称する）の構造および物理的性質は、二本の論文、すなわち「慢性関節リウマチ滑液に存在するホスホリパーゼＡ2のクローニングおよび組換え発現（"Cloning and Recombinant Expression of Phospholipase A2 Present in Rheumatoid Arthritic Synovial Fluid"）」by Seilhamer, Jeffrey J.; Pruzanski, Waldemar; Vadas Peter; Plant, Shelley; Miller, Judy A.; Kloss, Jean; and Johnson, Lorin K.; The Journal of Biological Chemistry, Vol. 264, No. 10, Issue of April 5, pp. 5335-5338, 1989; and「ヒト非膵臓性ホスホリパーゼＡ2の構造および性質（"Structure and Properties of a Human Non-pancreatic Phospholipase A2"）」by Kramer, Ruth M.; Hession, Catherine; Johansen, Berit; Hayes, Gretchen; McGray, Paula; Chow, E. Pingchang; Tizard, Richard; and Pepinsky, R. Blake; The Journal of Biological Chemistry, Vol. 264, No. 10, Issue of April 5, pp. 5768-5775, 1989（これらは引用によりその開示内容が本明細書中に包含される）に詳細に記載されている。
【０００３】
ｓＰＬＡ2は、膜リン脂質を加水分解する、アラキドン酸カスケードの律速酵素であると考えられている。したがって、ｓＰＬＡ2が媒介する脂肪酸放出（例えばアラキドン酸）を阻害し、哺乳類、特にヒトにおいて高い生物学的利用能を有する化合物の開発は重要である。このような化合物は、ｓＰＬＡ2の過剰生産によって誘導および／または維持される症状；例えば敗血性ショック、成人呼吸障害症候群、膵炎、外傷、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、慢性関節リウマチなどの全般的処置において価値を有する。
【０００４】
一般に経口投与することができる治療物質はその本質的な利用しやすさのために、非常に好ましく、高い商業的可能性を有する。
【０００５】
米国特許第５，６５４，３２６号は特定のインドール型ｓＰＬＡ2阻害剤および関連するエステルプロドラッグを記載している。具体的には、この特許は（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸のメチルエステルを例示している。
【０００６】
より高度に利用可能なｓＰＬＡ2阻害剤、特に経口投与に適当なものを開発することが望ましい。
【０００７】
発明の要旨
本発明は、経口投与によって高い生物学的利用能を有する新規化合物、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸Ｎ−モルホリノエチルエステルに関する。
【０００８】
本発明は、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチルー１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸、Ｎ−モルホリノエチルエステルを、担体または希釈剤とともに含む医薬製剤に関する。
【０００９】
発明の詳細な記述
本発明の１Ｈ−インドール−３−グリオキシルアミド化合物：
本発明の化合物、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ)酢酸、Ｎ−モルホリノエチルエステルは、構造式（Ｉ）：
【化１】
0004459441.tif 000002
によって示されるものである。
【００１０】
Ｎ−モルホリノエチルエステル化合物（Ｉ）は既知のｓＰＬＡ2阻害剤、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸のエステル形態であり、以下の構造式（ＩＩ）によって示されるものである。
【化２】
0004459441.tif 000003
式（ＩＩ）で示される化合物は、米国特許第５，６５４，３２６号（これは引用によりその開示内容が本明細書中に包含される）の実施例１および欧州特許出願第９５３０２１６６．４号、公開第０ ６７５ １１０号（１９９５年１０月４日公開）に記載されている。
【００１１】
本発明の発見は、式（Ｉ）で示される化合物を経口投与した場合、この化合物が他のｓＰＬＡ2阻害剤と比べて高い生物学的利用能を示すことである。
【００１２】
本発明化合物の合成
（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸、Ｎ−モルホリノエチルエステル（上記の式Ｉの化合物）の合成では、出発物質として、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸またはその塩（上記の式ＩＩの化合物）を用いる。この出発物質は米国特許第５，６５４，３２６号（これは引用によりその開示内容が本明細書中に包含される）の実施例１の反応式または方法によって製造することができる。同様の方法は欧州特許出願第９５３０２１６６．４号、公開第０ ６７５ １１０号（１９９５年１０月４日公開）に示されている。出発物質の製造に他の慣用の方法を用いてもよい。本発明化合物の合成に有用な手法は以下に記載の実施例１において特定されるものである。
【００１３】
実施例１
以下の式で示される化合物（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸、Ｎ−モルホリノエチルエステルの製造：
【化３】
0004459441.tif 000004
パートＡ．  Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−３−メトキシ−２−メチルアニリンの製造
ＴＨＦ４００ｍＬ中の３−メトキシ−２−メチルアニリン４４．４ｇ（３４４mmol）およびジ−tert−ブチル ジカルボナート７５ｇ（３４４mmol）の溶液を加熱し、還流温度で４時間維持した。減圧下で濃縮後、残留物を酢酸エチルにとり、１Ｎ クエン酸、水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）した。減圧下で溶媒を除去した後、残留物をヘキサンから結晶化し、Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−３−メトキシ−２−メチルアニリン６４．５ｇ（収率８４％）を得た。ｍｐ、５６〜５７℃。
元素分析（Ｃ13Ｈ19ＮＯ3として)：
計算値：Ｃ，６５．８０；Ｈ，８．０７；Ｎ，５．９０
実測値：Ｃ，６３．３２；Ｈ，７．８３；Ｎ，５．５６。
【００１４】
パートＢ．  ４−メトキシ−２−メチル−１Ｈ−インドールの製造
シクロヘキサン中の１．３Ｍ sec−ブチルリチウム２８０ｍＬ（０．３６mol）の溶液を、ＴＨＦ３００ｍＬ中のＮ−tert−ブトキシカルボニル−３−メトキシ−２−メチルアニリン（４３ｇ、０．１８mol）に、乾燥氷−エタノール浴で温度を−４０℃以下に保ちながらゆっくり加えた。この浴を除去し、温度を−２０℃にまで上げ、次いで浴を戻した。温度を−６０℃にまで冷却した後、等容量のＴＨＦ中のＮ−メトキシ−Ｎ−メチルグリオキシルアミド１８．５ｇ（０．１８mol）を滴加した。この反応混合物を１時間攪拌し、冷却浴を除去し、さらに１時間攪拌した。次いでこれをエーテル６００ｍＬおよび１Ｎ ＨＣｌ６００ｍＬの混液に注いだ。有機相を分離し、水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧下で濃縮して１−（２−（tert−ブトキシカルボニルアミノ）−６−メトキシフェニル）−２−プロパノンおよび出発アニリド化合物の混合物３９．５ｇを得た。この混合物をメチレンクロライド１００ｍＬおよびトリフルオロ酢酸４０ｍＬに溶解し、総計２６時間攪拌した。この混合物を水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、２０％ＥｔＯＡｃ／へキサンで溶出させ、ＣＨ2Ｃｌ2／へキサンから結晶化させて、４−メトキシ−２−メチル−１Ｈ−インドール１３．９ｇを得た。ｍｐ、８０〜８６℃。
元素分析（Ｃ10Ｈ11ＮＯとして)：
計算値：Ｃ，７４．５１；Ｈ，６．８８；Ｎ，８．６９
実測値：Ｃ，７４．４１；Ｈ，７．０８；Ｎ，８．４７。
【００１５】
パートＣ．  ４−メトキシ−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドールの製造
４−メトキシ−２−メチル−１Ｈ−インドール（１ｇ、６．２mmol）をＤＭＦ１５ｍＬ中の（ＤＭＦを加える前にヘキサンで洗浄した）６０％水素化ナトリウム／鉱油２４８ｍｇ（６．２mmol）に加え、０．５時間攪拌した後、ベンジルブロミド０．７４ｍＬ（６．２mmol）を加えた。この混合物を室温で１８時間攪拌し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶液をブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、２０％ＥｔＯＡｃ／へキサンで溶出させ、４−メトキシ−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール１．３ｇ（収率８４％）を得た。融点９６〜１１６℃。
元素分析（Ｃ17Ｈ17ＮＯとして)：
計算値：Ｃ，８１．２４；Ｈ，６．８２；Ｎ，５．５７
実測値：Ｃ，８１．３３；Ｈ，６．７４；Ｎ，５．２９。
【００１６】
パートＤ．  ４−ヒドロキシ−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドールの製造
メチレンクロライド５０ｍＬ中の４−メトキシ−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール１．２５ｇ（５mmol）および１Ｍ ＢＢｒ3／ＣＨ2Ｃｌ2 ２０ｍＬの溶液を室温で５時間攪拌し、減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチルに溶解し、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）した。減圧下で濃縮した後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、２０％ＥｔＯＡｃ／へキサンで溶出させ、４−ヒドロキシ−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール５７７ｍｇ（収率４９％）を得た。１２５〜１２７℃。
元素分析（Ｃ16Ｈ15ＮＯとして)：
計算値：Ｃ，８０．９８；Ｈ，６．３７；Ｎ，５．９０
実測値：Ｃ，８０．７６；Ｈ，６．２６；Ｎ，５．８０。
【００１７】
パートＥ．  （（２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸メチルエステルの製造
４−ヒドロキシ−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール（５３０ｍｇ、２．２mmol）を、ＤＭＦ２０ｍＬ中の６０％ ＮａＨ／鉱油８８ｍｇ（２．２mmol）に加え、混合物を０．６７時間攪拌した。次いで、メチルブロモアセテート０．２１ｍＬ（２．２mmol）を加え、攪拌を１７時間維持した。この混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶液をブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、２０％ＥｔＯＡｃ／へキサンで溶出させ、（（２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸メチルエステル５９７ｍｇ（収率８８％）を得た。１４０〜１４３℃。
元素分析（Ｃ19Ｈ19ＮＯ3として)：
計算値：Ｃ，７３．７７；Ｈ，６．１９；Ｎ，４．５３
実測値：Ｃ，７４．０１；Ｈ，６．２３；Ｎ，４．３２。
【００１８】
パートＦ．  （（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸メチルエステルの製造
メチレンクロライド１０ｍＬ中の（（２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸メチルエステル５８２ｍｇ（１．９mmol）にオキサリルクロライド（０．１６ｍＬ、１．９mmol）を加え、混合物を１．５時間攪拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、残留物をメチレンクロライド１０ｍＬにとった。無水のアンモニアを０．２５時間吹き込み、混合物を１．５時間攪拌し、減圧下で蒸発させた。残留物を酢酸エチル２０ｍＬで攪拌し、混合物をろ過した。ろ液を濃縮し、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸、メチルエステルおよびアンモニウムクロライドの混合物６７２ｍｇを得た。ｍｐ、２０２〜２１５℃。
【００１９】
パートＧ．  （（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸の製造
メタノール３０ｍＬ中の（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸メチルエステル６６０ｍｇ（１．７mmol）および１Ｎ ＮａＯＨ １０ｍＬの混合物を加熱し、還流温度で１時間維持し、室温にまで冷却し、０．５時間攪拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ／水にとった。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ２〜３に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。このＥｔＯＡｃ溶液を濃縮すると、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸４３１ｍｇ（収率６９％）が結晶化した。融点２１８〜２２０℃。
元素分析（Ｃ20Ｈ18Ｎ2Ｏ5として)：
計算値：Ｃ，６５．５７；Ｈ，４．９５；Ｎ，７．６５
実測値：Ｃ，６３．３１；Ｈ，４．７９；Ｎ，６．９１。
【００２０】
パートＨ．  （（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸Ｎ−モルホリノエチルエステルの製造
適当な溶媒、好ましくはジメチルホルムアミド中、４−（２−クロロエチル）モルホリン塩酸塩（Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin USA から入手可能, Item No. C4,220-3）および適当な塩基、好ましくはＣｓ2ＣＯ3；および（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸、ナトリウム塩を反応させることによって本発明の化合物を形成させることができる。このスラリーを６０℃または他の適当な温度にまで加熱して溶液を形成させる。加熱を継続して反応を完了させる。この反応混合物を処理し、慣用の有機実験技術を用いて生成物を単離する。
【００２１】
アッセイ１
単一適用量の薬物動力学実験においてカニクイザルを用いた。このサル（処置当たり３匹）に、本発明の化合物を含む６種類のインドールプロドラッグ化合物うちの１つの単一経口適用量１０ｍｇ／ｋｇを投与した。
【００２２】
適用量投与後２４時間までの連続血液サンプルを得た。ＬＣ／ＭＳ法を用い、血漿を対応する遊離の酸に関して分析した。また８および２４時間の時点の曲線下領域（ａｕｃ）値を計算した。
【００２３】
本アッセイの目的は、選択されたｓＰＬＡ2阻害剤についての経口デリバリーを評価し、比較することであった。
【００２４】
試験対象：
種：サル
株：カニクイザル
適用量調製：
ｓＰＬＡ2阻害剤の量を遊離の酸当価物に関して補正した。
ビヒクル：
１０％アカシア中のｓＰＬＡ2阻害剤の懸濁液を適用量投与直前に調製。
適用量投与：
経路：      経口
頻度：      一回
適用量：    １０ｍｇ／ｋｇ（親酸に関して）
投与容量：  ５ｍＬ／ｋｇ
【００２５】
結果
サル薬物動力学実験
表１
【表１】
0004459441.tif 000005
１＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−メチル−１−(フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ−モルホリノエチルエステル
２＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−メチル−１−(フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸メチルエステル
３＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−１−((１，１’−ビフェニル)−２−イルメチル)−２−メチル−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ，Ｎ−ジエチルグリコールアミドエステル
４＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−エチル−１−(フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸エチルエステル
５＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−エチル−１−(フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ−モルホリノエチルエステル
６＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−エチル−１−(フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸メチルエステル
【００２６】
アッセイＩＩ
またラット血漿単一適用量の経口薬物動力学実験を用いて、本発明の化合物、（（３−（２−アミノ−１，２−ジオキソエチル）−２−メチル−１−（フェニルメチル）−１Ｈ−インドール−４−イル）オキシ）酢酸−Ｎ−モルホリノエチルエステルの生物学的利用能を測定した。
本アッセイの目的は、選択されたｓＰＬＡ2阻害剤についての経口デリバリーを評価し、比較することであった。
【００２７】
試験対象：
種：ラット
株：Fischer 344
適用量調製：
ｓＰＬＡ2阻害剤の量を遊離の酸当価物に関して補正した。
ビヒクル：
１０％アカシア中のｓＰＬＡ2阻害剤の懸濁液を適用量投与直前に調製。
適用量投与：
経路：      経口
頻度：      一回
適用量：    １０ｍｇ／ｋｇ（親酸に関して）
投与容量    ５ｍＬ／ｋｇ
ラットを一晩絶食させた。
【００２８】
試料収集：
以下の時点で血液サンプル（０．８ｍＬ）を得た：
０．５、１、２、４、６および８時間（２ラット／時点）
【００２９】
データ分析：
血漿をＨＰＬＣによって分析し、種々のｓＰＬＡ2阻害剤の（遊離の酸としての）濃度を測定した。
平均血漿濃度−時間プロファイルからＣｍａｘ（最大血漿濃度）、およびＡＵＣ値を測定した。
表２
【表２】
0004459441.tif 000006
１１＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−メチル−１−(フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ−モルホリノエチルエステル（本発明の化合物）
１２＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−メチル−１−(フェニルメチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ，Ｎ−ジエチルアセトアミドエステル
１３＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−メチル−１−((１−ナフタレニル)メチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ，Ｎ−ジエチルアセトアミドエステル
１４＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−メチル−１−((１−ナフタレニル)メチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸モルホリノＮ−エチルエステル
１５＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−エチル−１−((３−クロロフェニル)メチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ−モルホリノエチルエステル
１６＝((３−(２−アミノ−１，２−ジオキソエチル)−２−エチル−１−((３−クロロフェニル)メチル)−１Ｈ−インドール−４−イル)オキシ)酢酸Ｎ，Ｎ−ジエチルアセトアミドエステル
【００３０】
これまで本発明を特定の具体的態様によって説明してきたが、これらの具体例は請求の範囲に記載の発明の範囲を限定するためのものではない。