(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
0004469133.tif 000006
［式中、
Ｑは−（ＣＨ２）ｎ−基（ｎは４から１２の整数）、−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（Ｒ’）−（ＣＨ２）ｂ−（ａおよびｂは独立に０からｎの整数であり、ｎは４から１２の整数）、シクロヘキシルまたはフェニルから選択される基である、
但し、
Ｑが−（ＣＨ２）ｎ−基（ｎは４から１２の整数）である場合は、Ｒ’は存在せず、
Ｑが−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（Ｒ’）−（ＣＨ２）ｂ−（式中、ａおよびｂは独立に０からｎの整数である）である場合は、Ｒ’は水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル、−（ＣＨ２）ｑ−Ｔ（ＴはＳ−ＣＨ３、−ＯＨまたは−ＣＯＯＨからなる群から選択される、ｑは１または２の整数）からなる群から選択される基であり、
Ｑがシクロヘキシルまたはフェニルである場合は、Ｒ’はシクロヘキシルまたはフェニル環上の置換基である；
Ｒは水素、−Λまたは−（ＣＨ２）ｒ−Λ（ｒは４から１２の整数）であり
ここで、Λは式（ＩＩ）の巨大環である：
【化２】
0004469133.tif 000007
（式中、
各Ｙは同一であっても異なっていてもよく、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨ（ｍは１から３の整数である）からなる群から選択される；
ｍは１から３の整数である；
Ｘは水素または−ＣＨ２−Ｕ基（Ｕはメチル、エチル、ｐ−アミノフェニルからなる群から選択される）、あるいはＸは−（ＣＨＷ）Ｏ−Ｚ基であって、式中ｏは１から５の整数であり、Ｗは水素、メチルまたはエチルであり、ＺはＯ、Ｎ−Ｒ１およびＳから選択される１または複数のヘテロ原子を含む五員環または六員環の複素環基であり、ここでＲ１は水素原子または直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル基である；あるいは、Ｚは−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２または−Ｓ−Ｒ２（Ｒ２は直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル基）から選択される）；
ｐは２または３の整数である；
Ｒ’は、存在しないか、または水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル、−（ＣＨ２）ｑ−Ｔ（ＴはＳ−ＣＨ３、−ＯＨまたは−ＣＯＯＨからなる群から選択され、ｑは１または２の整数）からなる群から選択される；
Ｒ’’は以下の条件にしたがってＲと同じ意味である：
Ｒが−Λの場合、Ｒ’’は水素であり；Ｒが水素の場合、Ｒ’’は−Λであり；Ｒが−（ＣＨ２）ｒ−Λ（ｒは４から１２の整数）である場合、Ｒ’’は−Λであり；またはＲ’’が−（ＣＨ２）ｒ−Λ（ｒは４から１２の整数）である場合、Ｒは−Λである］。
【請求項２】
治療および／または診断目的に有用な放射性同位元素と式（Ｉ）の化合物との錯体。
【請求項３】
放射性同位元素がＦｅ−５２、Ｍｎ−５２ｍ、Ｃｏ−５５、Ｃｕ−６４、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｐ−３２、Ｓｃ−４７、Ｃｕ−６７、Ｙ−９０、Ｐｄ−１０９、Ａｇ−１１１、Ｉ−１３１、Ｐｍ−１４９、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｒｈ−１０５、Ｓｍ−１５３、Ｌｕ−１７７およびＡｕ−１９８からなる群から選択される請求項２に記載の錯体。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物において、Ｑが−（ＣＨ２）ｎ−であり、ｎが４から８の整数であり、Ｙが−ＣＨ２ＣＯＯＨであり、放射性同位元素がＹ−９０である、請求項２または３に記載の錯体。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物または２に記載の錯体を好適な媒体および／または賦形剤との混合物中に含有する、医薬および／または診断組成物。
【請求項６】
腫瘍の治療に有用な薬剤の調製のための請求項１に記載の化合物または２に記載の錯体の使用。
【請求項７】
請求項２、３または４のいずれかに記載の錯体を好適な媒体および／または賦形剤との混合物中に含有する、医薬および／または診断組成物。
【請求項８】
抗癌放射性医薬品である、請求項７記載の組成物。
【請求項９】
キットの少なくとも１つの成分が請求項１に記載の化合物または２に記載の錯体を含有することを特徴とする、腫瘍の放射線治療または診断用のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書において記載する本発明は、ヒトおよび動物の診断および治療、特に腫瘍などの病状の診断および治療に使用される放射性核種との複合体の調製に有用な修飾ビオチンに関する。
【０００２】
本明細書において記載する本発明は医薬の調製の技術分野に関する。
【０００３】
本明細書において記載する本発明は医薬分野における工業的適用に好適な、化合物、その調製方法、その使用方法、およびそれを含む組成物を提供する。
【０００４】
本明細書において記載する本発明は診断薬および治療薬、そして器官および組織の病的障害の治療において有用な物質の送達および放出のために好適な化合物、組成物および方法を提供する。
【０００５】
特にそれに限定されるものではないが、本明細書において記載する本発明は抗癌放射性医薬品の分野に関し、これは診断用に有用な物質であって、かつ、癌の予防および治療に有用な物質である。
【背景技術】
【０００６】
腫瘍療法は主に癌細胞の破壊を目的とする物質の使用によって行われている。これは、その効果を完全に発揮するために腫瘍細胞に侵入しなければならない細胞毒性物質、または細胞を殺傷するのに十分なエネルギーの照射による腫瘍細胞の処理の手段によって達成される。両方の場合において周囲の健康な細胞を損傷させてしまわないように、できるだけ標的細胞に対して選択的な方法で物質を送達するという問題がある。放射性医薬品、即ち放射性部分を有する物質の場合、体内での放射性核種の拡散または腫瘍の周囲の健康な細胞との相互作用を出来る限り避けるため、活性部分（即ち放射性部分）の腫瘍標的への選択的な送達の問題が特に重要であると考えられる。
【０００７】
今日までのこれに関係する問題および提案されている解決を議論するために、Neorexに譲渡された、１９９２年６月９日出願の特許出願に基く米国特許第５２８３３４２号、５６０８０６０号および５９５５６０５号を参照されたい。これらの特許は引用のために特に本明細書に含まれる。
【０００８】
これらの記述においては特に放射性核種を担持する分子の身体の代謝的攻撃に対する耐性の問題が論じられている。具体的にはビオチン分子が最も注目されており、これは周知のアビジンとの相互作用のために腫瘍細胞への放射性核種の送達のためにまず選択されるものの１つである。ビオチンは慣行から知られているように、放射性核種-キレート化部分、例えばＤＯＴＡ分子に、リンカーを介して結合する。実際、Neorexの特許はリンカーを介して放射性核種と結合したビオチン分子からなる複合体の、ビオチニダーゼに対する耐性の問題を提起している。ビオチニダーゼは該複合体に存在するペプチド結合を切断する酵素である。この結合はキレート化剤とビオチンとの結合に由来する。
【０００９】
特に望ましい特性として、分子は迅速かつ効率的に体外へと除去されなければならず、また、それが腫瘍に結合する細胞外体液に容易に分布するように十分に小さく（分子量＜１０００）なければならない。さらにそれは非腫瘍細胞による取りこみが最小となるようなインビボでの安定性および迅速な（腎）クリアランスが立証されていなければならず、また代謝されてはならない。
【００１０】
こういった特性を付与するために分子のビオチン部分とキレート化部分との間の一定の安定性が必要とされる。
【００１１】
実際、身体にとって危険である可能性のある分子の遊離部分であるキレート化部分はインビボで放出されてはならない。当業者であれば、様々なタイプの放射能および高エネルギー照射をもたらし、それゆえ高度に障害性の、身体にとって完全に異物である金属イオンを含む、キレート化部分による放射性核種の放出の問題に精通しているであろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
発明の概要
このたび、下記に示す式（Ｉ）の化合物が、このタイプの化合物により検出および治療できる腫瘍またはその他の疾患の治療および診断における化合物に要求される条件を満たすだけでなく、分子の錯化部分を放出し得る代謝反応を経ることがないという利点を有するということが見出された。このように該分子は変化を受けない形態で身体から完全に除去され、内部に金属イオンを含むキレート化部分の放出可能性の問題を避けることが出来る。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本明細書において記載する本発明の目的の１つはそれゆえ式（Ｉ）の化合物である：
【化１】
0004469133.tif 000002
［式中、Ｒ’が存在しない場合、Ｑは−（ＣＨ２）−ｎ基（ｎは４から１２の整数）、またはＱは以下の群から選択される：−（ＣＨ２）ａ−ＣＨ（Ｒ’）−（ＣＨ２）ｂ−（ａおよびｂは独立に０からｎの整数であり、Ｒ’は以下に定義される基である）、もしくはＱはシクロヘキシル、フェニルであり、この場合Ｒ’はシクロヘキシルまたはフェニル環上の置換基である；
Ｒは水素または−Λであり、ここでΛは式（ＩＩ）の巨大環である：
【化２】
0004469133.tif 000003
（式中、各Ｙは同一であっても異なっていてもよく、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル、−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＯＨ（ｍは１から３の整数である）からなる群から選択される；
ｍは１から３の整数である；
Ｘは水素または−ＣＨ２−Ｕ基（Ｕはメチル、エチル、ｐ−アミノフェニルからなる群から選択される）、あるいはＸは−（ＣＨＷ）Ｏ−Ｚ基（ｏは１から５の整数であり、Ｗは水素、メチルまたはエチルであり、ＺはＯ、Ｎ−Ｒ１およびＳから選択される１または複数のヘテロ原子を含む五員環または六員環の複素環基であり、ここでＲ１は水素原子または直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル基である；あるいは、Ｚは−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２または−Ｓ−Ｒ２（Ｒ２は直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル基）から選択される）；
ｐは２または３の整数である）、
Ｒ’は水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル、−（ＣＨ２）ｑ−Ｔ（ＴはＳ−ＣＨ３、−ＯＨまたは−ＣＯＯＨからなる群から選択される、ｑは１または２の整数）からなる群から選択される；
Ｒ’’は以下の条件にしたがってＲと同じ意味である：
Ｒが−Λの場合、Ｒ’’は水素であり；Ｒが水素の場合、Ｒ’’は−Λであり、あるいはＲおよびＲ’’はそれぞれＲが−（ＣＨ２）ｒ−Λ（ｒは４から１２の整数）およびＲ’’が−Λである、Ｑは−（ＣＨ２）ｎ−基（ｎは４から１２の整数）である］。
【００１４】
「直鎖または分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキル基」とは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチルまたはｔｅｒ−ブチルの意である。
【００１５】
「五員環または六員環の複素環」とは、例えば、２−，３−または４−ピリジルまたは２−，４−，または５−イミダゾリルなどの、環においてＯ、Ｎ−Ｒ１、またはＳから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を有する芳香族または非芳香族複素環の意である。
【００１６】
本発明による好適な化合物の第１のグループは式（Ｉ）の化合物であって、Ｒが水素、Ｑが-（ＣＨ２）ｎ−のものであり、ここでｎは４から８の整数、好ましくは６であり、Ｒ’’は−Λであり、Ｙは常に−ＣＨ２−ＣＯＯＨであり、Ｘは水素であり、そしてｐは２である。
【００１７】
本明細書において記載する本発明のさらなる目的は診断および／または治療用の放射性同位元素を含む式（Ｉ）の化合物である。これら同位元素の例としては以下のものが挙げられる： Ｆｅ−５２、Ｍｎ−５２ｍ、Ｃｏ−５５、Ｃｕ−６４、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｔｃ−９９ｍ、Ｉｎ−１１１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｐ−３２、Ｓｃ−４７、Ｃｕ−６７、Ｙ−９０、Ｐｄ−１０９、Ａｇ−１１１、Ｐｍ−１４９、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｂｉ−２１３、Ｒｈ−１０５、Ｓｍ−１５３、Ｌｕ−１７７、およびＡｕ−１９８。
【００１８】
本発明による好適な錯体の第１のグループは、式（Ｉ）の化合物において、Ｒが水素、Ｑが−（ＣＨ２）ｎ−のものであり、ここでｎは４から８の整数、好ましくは６であり、Ｒ’’は−Λであり、Ｙは常に−ＣＨ２−ＣＯＯＨであり、Ｘは水素であり、ｐは２であり、そして放射性同位元素がＹ−９０のものである。
【００１９】
本明細書において記載する本発明のさらなる目的は式（Ｉ）の化合物およびその放射性医薬品との錯体の調製方法である。
【００２０】
本明細書において記載する本発明のさらなる目的は式（Ｉ）の化合物および上記のその錯体を含む医薬および／または診断組成物である。
【００２１】
本明細書において記載する本発明の別の目的は式（Ｉ）の化合物およびその放射性同位元素との錯体の、医薬または診断手段、特に腫瘍の治療または診断に有用な医薬の調製のための使用である。
【００２２】
これらおよびその他の本明細書に記載する本発明に関する目的を以下の部分および実施例において詳細に記載する。
【００２３】
発明の詳細な記載
本明細書において記載する本発明の化合物は以下のスキームによって調製され、これは以下の工程を含む： 
ａ）ビオチンのカルボキシル基とＨ２Ｎ−Ｑ−ＮＨ２ジアミンの一級アミン基の間にアミド結合を形成し、もう一方の一級アミン基は所望により好適に例えばＢｏｃ基により保護する；
ｂ）一級アミン基の脱保護；
ｃ）アミド基からアミン基への還元；
ｄ）所望の式（ＩＩ）のキレート化剤−Λとの結合。
【００２４】
ビオチンは市販の製品である。Ｈ２Ｎ−Ｑ−ＮＨ２ジアミンは市販されているし、少なくとも公知の方法により調製できる。
【００２５】
一級アミン基の保護は、例えばＢｏｃなどの公知の保護基を用いて簡単に達成でき、保護基は少なくとも製品カタログおよび一般的文献において見られる。
【００２６】
あるいは、本発明による式（Ｉ）の化合物はＲが水素であってＲ’’が巨大環キレート化剤−Λの場合以下のスキームにしたがって調製できる：
ａ）ビオチンのカルボキシル基とＨ２Ｎ−Ｑ−ＮＨ２ジアミンの一級アミン基の間にアミド結合を形成し、もう一方の一級アミン基は所望により好適に例えばＢｏｃ基により保護する；
ｂ）保護基が例えばＢｏｃ基などのＢＨ３・ＴＨＦによる処理に感受性のアルキルウレタン型の場合、一級アミン基の脱保護；
ｃ）その後の還元に対して耐性であってビオチン環を損傷することなく脱離可能であると文献に報告されているものの中から選択される保護基での該一級アミン基の選択的保護（T. W. Greene, P. G. M. Wuts,"Protective groups in organic synthesis", 3rd Ed., J. Wiley & Sons, Inc., New York, 1999; Handbook of Reagents for Organic Synthesis,"Oxidizing and Reducing Agents", Edited by S. D. Burke and R. L. Danheiser, J. Wiley & Sons, Inc., New York, 1999)；
ｄ）ＢＨ３・ＴＨＦによるアミド基からアミン基への還元；
ｅ）先の保護基に直交する(orthogonal)保護基による二級アミン基の保護；
ｆ）一級アミン基の脱保護；
ｇ）上記の所望のキレート化剤との結合；
ｈ）二級アミン基の脱保護；
ｉ）あるいはＲが巨大環キレート化剤−ΛであってＲ’’が水素の場合、工程ｄ）の後に：
ｊ）所望のキレート化剤−Λとの結合；
ｋ）一級アミン基の脱保護。
【００２７】
工程ａ）における一級アミン基の保護は先に述べた。工程ｃ）におけるアミン基の保護および二級アミン基の保護については、当業者であればその知識に基いて適当な保護基を選択することが可能である。
【００２８】
Ｒが−（ＣＨ２）ｒ−ΛであってＲ’’が−Λの場合、式（Ｉ）の化合物は以下のスキームにしたがって調製できる：
ａ）ペプチド合成の公知の方法に従った（P. Lloyd-Williams, F. Albericio, E. Giralt,"Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins", CRC Press, Boca Raton, New York, 1997）ビオチンの−ＣＯＯＨ基の活性化；
ｂ）以下の一般式のアミンとの活性化ビオチンの結合：ＢｏｃＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＨ（ＣＨ２）ｑＮＨＢｏｃ（ここでｎおよびｑは独立に４から１２の間である）
ｃ）保護基Ｂｏｃの脱離；
ｄ）所望により上記のようにして行うことが出来るアミドの還元；
ｅ）所望のキレート化剤−Λとの結合。
【００２９】
工程ｂ）に示される二級アミンの多くが市販されている；また、従来からの方法を好適に改変することによって調製も出来る（例えば、J. B. Hansen,, M. C. Nielsen, U. Ehrbar, O. Buchardt, Synthesis, 1982,404を参照されたい）。
【００３０】
本明細書において記載される本発明によって構想される錯体を生成するための本発明による化合物と放射性同位元素との結合は当該技術分野で公知の従来法を用いて行うことが出来る。例えば、Paganelli, Chinol et al. European Journal of Nuclear Medicine Vol. 26, No 4; April 1999; 348-357に記載されている。
【００３１】
本発明の好適な態様の記載
式（Ｉ）の好適な化合物、即ち、Ｒが水素、Ｑが−（ＣＨ２）ｎ−（ここでｎは好ましくは６）、Ｒ’’が−Λ、Ｙが常に−ＣＨ２−ＣＯＯＨ；Ｘが水素、ｐが２であるものの調製について以下に詳細に記載する。
【００３２】
該方法は以下の工程を含む：
ａ）ビオチンのカルボキシル基と、所望により例えばＢｏｃ基で好適に保護されたヘキサメチレンジアミンの一級アミン基の間のアミド結合の形成；
ｂ）ヘキサメチレンジアミンのアミン基の脱保護；
ｃ）アミド基からアミン基への還元；
ｄ）所望のキレート化剤との結合。
【００３３】
本明細書において記載する本発明による方法において、工程ａ）は、ビオチンカルボキシル基とヘキサメチレンジアミン−Ｂｏｃの一級アミン基との間のアミド結合の形成である。ビオチンをＨＡＴＵで処理して系内で非常に活性なエステルを形成し、これをヘキサメチレンジアミン−Ｂｏｃのアミン基と反応させて対応するアミドを形成する。固相でのペプチド合成にとりわけ用いられるこの活性化機構は塩基性媒体を必要とする。塩基が活性のエステルと反応することを防ぐためにジ−イソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）またはＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）などの三級有機塩基を用いる。ヘキサメチレンジアミンの２つのアミン基のうち１つのＢｏｃ（ｔｅｒ−ブチルオキシカルボニル）による保護はジアミン鎖の両末端に対するビオチンの結合を防ぐために必要である。最終生成物は溶媒（ＤＭＦ）の蒸発および水による沈殿の後に反応媒体から単離される。生成物をプロパノールにより再結晶させて１Ｈ−ＮＭＲ、元素分析およびＥＳＩ−ＭＳによって特徴付けた。反応収率はおよそ８８％である。
【００３４】
工程ｂ）において、ビオチニル−ヘキサメチレンジアミン−ＢｏｃをＡｃＯＥｔ／ＨＣｌの混合物におよそ３Ｍになるように可溶化し、Ｂｏｃ基を脱離させる。溶媒混合物の除去後に生成物を凍結乾燥して完全にＨＣｌを除去した。試料を塩基性ｐＨの水性溶液による再結晶化によって精製し、１Ｈ−ＮＭＲおよびＴＬＣによって特徴付けた。
【００３５】
工程ｃ）においてＢＨ３・ＴＨＦによってアミド基の還元を行った。還元剤は非常に反応性であるので工程は無水条件で行わなければならない。開始物質を反応前に真空下に保ち、（ナトリウムおよびベンゾフォンで希釈した）無水ＴＨＦに溶解した。反応混合物を（１Ｈ−ＮＭＲスペクトルによってモニターして）アミド基の完全な還元が起こるまで窒素雰囲気下で還流した。減圧下で溶媒を蒸発させた後、反応混合物をＨＣｌ水溶液で処理した。酸性溶液の凍結乾燥後、生成物を塩基性ｐＨの水溶液からの再結晶により、次いで逆相カラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物の分析を分析ＴＬＣによって行ったところ純粋であった。反応収率はおよそ５５％である。
【００３６】
工程ｄ）は還元したビオチニル−ヘキサメチレンジアミンとＤＯＴＡとの結合反応であり、これは水性媒体でのアミド結合形成の特異的試薬：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびスルホ−ＮＨＳによって行った。ＤＯＴＡを水に溶解して４つのカルボキシル基のうち１つを主に活性化するためにｐＨをｐＫａ３およびｐＫａ４値の間に調整した。このようにして副生成物の生成可能性を減らすことが出来る。この塩基性溶液にスルホ−ＮＨＳおよび最後にＥＤＣを添加した。系内での活性エステルの形成後、還元したビオチニル−ヘキサメチレンジアミンを添加し、溶液のｐＨがおよそ８．６に保たれているか確認した。粗生成物の精製を半分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８；ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＴＦＡ  ０．１％；ＣＨ３ＣＮ  ５％から２５％  ２０分間）で行った。
【００３７】
本明細書において記載する本発明の目的は活性成分として少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物を含有する医薬または診断組成物である。これは放射性同位元素との錯体の形態であってもよく、本明細書において記載する本発明に示される疾患の治療に有用なその他の活性成分、例えば、抗癌活性を有するその他の物質と組み合わさった式（Ｉ）の化合物の場合、別々の用量形態であっても併用療法に好適な形態であってもよい。本発明による活性成分は医薬分野で通常用いられる好適な媒体および／または賦形剤、例えば、"Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook"最新版に記載のものなどとの混合物の形態であってもよい。本発明による組成物は治療的に有効な量の活性成分を含むものである。用量は当業者、例えば臨床医または一次診療医であれば、治療すべき疾患の型および患者の病状、あるいは同時にその他の活性成分の投与に応じて決定することが出来る。
【００３８】
医薬組成物の例は非経口または局所投与できるものである。この目的に好適な医薬組成物は、溶液、懸濁液または使用前に再構成される凍結乾燥形態である。
【００３９】
本発明の工業的適用に好適な形態は、例えば欧州特許第０４９６０７４号、Paganelli, Chinol et alによる論文. the European Journal of Nuclear Medicine Vol. 26, No 4; April 1999; 348-357, 米国特許第５９６８４０５号および関連文献に記載のような癌の放射線治療用のキットである。
【００４０】
本明細書において記載する本発明のさらなる目的は放射能による腫瘍の治療または診断用キットである。これは該キットの構成成分の少なくとも１つが式（Ｉ）の化合物または好適な放射性同位元素とのその錯体の１つを含むことを特徴とする。
【００４１】
本発明による化合物は腫瘍の治療および診断のための治療薬および／または診断薬の調製に有用である。
【００４２】
これらは例えば欧州特許第０４９６０７４号、Paganelli, Chinol et al.による論文 the European Journal of Nuclear Medicine Vol. 26, No 4; April 1999; 348-357、米国特許第５９６８４０５号および関連文献に記載のものなどの抗癌放射性医薬品による腫瘍治療方法に利用できる。
【００４３】
以下の実施例において本発明をさらに詳細に記載する。
【実施例】
【００４４】
ＮＭＲスペクトルはＤＭＳＯ−ｄ６溶液中で記録した。
【００４５】
無水ＤＭＦ中のビオチン（１ｇ、４．１ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（０．４５１ｍｌ、１ｅｑ）の溶液に、無水ＤＭＦ中のＮ−Ｂｏｃ−ヘキサメチレン−ジアミンＨＣｌ（１．０３ｇ、１ｅｑ）およびＮＭＭ（０．４５１ｍｌ、１ｅｑ）の溶液を添加した。数分後、ＤＭＦ中のＨＡＴＵ（１．５６ｇ、１ｅｑ）の溶液を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、減圧下で蒸発させた。こうして得られた油を水の添加によって結晶化させ、そしてｎ−プロパノールで再結晶させて１．６ｇ（３．６ｍｍｏｌ；８８％収率）の化合物１を得た。
【００４６】
ＴＬＣ検査によると生成物は純粋であった（溶出：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５：１；フルオレサミンまたはＣ１２／ｏ−トリジンによる検出）。
Ｍｐ：１７４−１７６℃；１Ｈ−ＮＭＲ，δＨ：１．１−１．６５［１４Ｈ，ＣＨ（ＣＨ２）３およびＮＨＣＨ２（ＣＨ２）４］，１．３４（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ），２．０５（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＯ），２．５４（ｄ，１Ｈ，ＨＣＨＳ），２．７４−３．１５（６Ｈ，２ｘＣＨ２Ｎ、ＨＣＨＳおよびＣＨＳ），４．１２（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨＮＨ），４．２８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＣＨＮＨ），６．３６および６．４２（２つのｓ，２ｘビオチン  ＮＨ），６．７４（ｔ，１Ｈ，Ｂｏｃ  ＮＨ），７．７４（ｔ，１Ｈ，アミド  ＮＨ）；ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ計算値．［Ｍ＋Ｈ］＋４４３．１，実測値４４３．１．
元素分析：計算値．Ｃ２１Ｈ３８Ｎ４Ｏ４Ｓ・Ｏ，５Ｈ２Ｏ：Ｃ５５．８５；Ｈ８．７；Ｎ１２．４．実測値：Ｃ５６．２；Ｈ８．８；Ｎ１２．４．
【００４７】
ＡｃＯＥｔ中のビオチニル−ヘキサメチレンジアミン−Ｂｏｃ（１）（１．６ｇ）の懸濁液に３７％ＨＣｌ水溶液をおよそ３ＭのＨＣｌ溶液が得られるまで添加した。溶液を３０分間マグネティックスターラーで攪拌して減圧下で蒸発させた。油性の生成物を水で凍結乾燥し、ＮａＯＨ  ２ＭでｐＨ１２に調整し、氷冷してそこで溶液を再び凍結乾燥させた。得られた固体（化合物２）をＭｅＯＨで数回処理して存在する塩を除き、メタノール溶液にエチルエーテルを添加することによって沈殿させて精製し、１．１ｇ（９０％収率）の化合物２を得た。
【００４８】
アセトン中のフルオレサミンの溶液で３６６ｎｍ、およびＣｌ２／ｏ−トリジンで評価した、シリカゲルでのＴＬＣ（溶出：ｎ−プロパノール／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ、１：１：１）によると化合物は純粋であった。
Ｍ．ｐ：１７９−１８２℃；化合物１による１Ｈ−ＮＭＲ、ｔＢｕシグナルはなかった。
【００４９】
窒素雰囲気下に０℃に維持したＴＨＦ中の８．８ｍｌのＢＨ３  １Ｍの溶液に、細かく粉砕して１５ｍｌの無水ＴＨＦに懸濁したアミン２（１．５ｇ，４．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をマグネティックスターラーで０℃でおよそ３０分間攪拌し、反応が完了するまで還流した（反応の進行はＨＣｌ  ３Ｍで激しく処理し、減圧下で蒸発させた反応混合物のアリコットの１Ｈ−ＮＭＲによって確認した）。反応の最後にＨＣｌ  ３Ｍを添加した；反応混合物を３時間還流し減圧下で蒸発させた。粗反応生成物（化合物３）をｐＨおよそ１２の水で沈殿させてＰＲ−ＣＣ（ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ−８，４０−６３μｍ；溶出：Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ／ＴＦＡ−９２：８：０．１）によって精製し、１．３ｇ（２．３ｍｍｏｌ，５５％収率）の化合物３を得、これはＴＬＣ検査によると純粋であった（化合物２について用いたのと同じ工程）。
【００５０】
１Ｈ−ＮＭＲ，δＨ：１．３０−１．５８［１６Ｈ，ＣＨ［（ＣＨ２）４およびＮＨＣＨ２（ＣＨ２）４］、２．５３（ｄ，１Ｈ，ＨＣＨＳ），２．８２（７Ｈ，ＨＣＨＳおよび３ｘＣＨ２Ｎ），３．０５（ｍ，１Ｈ，ＣＨＳ），４．１２（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨＮＨ），４．２８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＣＨＮＨ），６．３８（ｂｒ，２ｘビオチンＮＨ），８．０３（ｂｒ，ＮＨ３＋），８．９（ｂｒ，ＮＨ２＋）．ＥＳＩ−ＭＳ：ｍ／ｅ計算値．［Ｍ＋Ｈ］＋３２８．２３；実測値３２８．２
【００５１】
ｐＨ９．２に調整した水中のＤＯＴＡ・３Ｈ２Ｏ（１００ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）の溶液にスルホ−ＮＨＳ（８６．８ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）の１ｍｌの水溶液を添加した。数分後、ＥＤＣ（７６．７ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）の０．５ｍｌの水溶液を滴下し、氷冷した。反応混合物をおよそ２０分間攪拌後、ｐＨ８．６の水１ｍｌに溶解したアミン３（１１１ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。およそ３時間後、反応溶液を凍結乾燥し、粗生成物４を逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８，Ａ：ＣＨ３ＣＮ中０．１％ＴＦＡ；Ｂ：水中０．１％ＴＦＡ；１０から１５％のＢで２０分間；Ｒｔ：１２．６分）で精製したところ、５３ｍｇ（２０％）の生成物が得られ、これはＴＬＣ（化合物２において用いたのと同じ工程）によると純粋であった。アセトン中のフルオレサミンによる試験で一級アミン基の存在については陰性結果であったことを確認した。
【００５２】
１Ｈ  ＮＭＲ，δＨ：１．３−１．６［１６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ２）４およびＮＨＣＨ２（ＣＨ２）４］，２．６０（ｄ，１Ｈ，ＨＣＨＳ），２．８−２．９（７Ｈ，ＨＣＨＳおよび３ｘＣＨ２Ｎ），３．０４（ｂｒ  ｓ，１６Ｈ，８ｘＤＯＴＡ−環  ＣＨ２），３．１１（ｍ，１Ｈ，ＣＨＳ），３．６１（ｂｒ  ｓ，８Ｈ，４ｘＤＯＴＡ  ＣＨ２ＣＯ），４．１５（ｍ，１Ｈ，ＣＨＣＨＮＨ），４．３３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＣＨＮＨ），６．４０および６．４４（２つのｓ，２ｘビオチンＮＨ），８．２７（ｂｒ，アミドＮＨ），８．５４（ｂｒ，ＮＨ２＋）．
ＦＡＢ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値．７１５．９；実測値７１５．６．；ＥＳＩ−ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋  実測値７１５，４．
元素分析．計算値．Ｃ３２Ｈ５８Ｎ８Ｏ８Ｓ・４ＴＦＡ・Ｈ２Ｏについて：Ｃ，４０．４１；Ｈ，５．４３；Ｎ，９．４２．実測値：Ｃ，４０．４８；Ｈ，５．４５；Ｎ，９．０９．
【００５３】
標識試験、アビジン結合試験、血清安定性試験を上記実施例に示した化合物について行った。
【００５４】
結合研究
アビジンを標識化ビオチンの量を変動させて９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチンと反応させた。アビジン−ビオチン複合体以外の放射性ピークの存在を上記の定組成条件を用いてＦＰＬＣによって確認した。９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチン／アビジン複合体に対応する放射性ピークは保持時間９分を示し、非結合９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチンのピークは１５分に溶出した。
【００５５】
自然の１：４モル比とアビジンがモル過剰（１：２）でのアビジンと実施例１の９０Ｙ−標識ビオチン誘導体との間の親和性研究の結果を表１に要約する。
【００５６】
【表１】
0004469133.tif 000004
【００５７】
モル過剰のアビジンから開始した放射性クロマトグラムにおいて、アビジン−ビオチン複合体に対応する１つのピークのみが観察された。２倍量の９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチンによっても同じＦＰＬＣプロフィールが得られ、これは系の天然の親和性が維持されていることを示す。
【００５８】
親和性研究
天然のビオチン（ビタミンＨ）の作用によるアビジンからの９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチンの置換を、アビジン：ビオチン比１：４から開始して研究した。１：４アビジン：ビオチンモル比における完全な結合を最初に上記の条件を用いてサイズ排除ＦＰＬＣによって確認した。この溶液からのアリコットに様々なモル量のビタミンＨを添加し、室温での１５分のインキュベーション後、これらのそれぞれをＦＰＬＣによって分析した。置換の程度を、置換された９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチン放射性ピークの上昇に対するアビジン−ビオチン放射性ピークの減少によって計算した。結果を表２に要約する。
【００５９】
【表２】
0004469133.tif 000005
【００６０】
１％未満の結果は実験誤差の範囲内であるとみなした。
【００６１】
モル大過剰量のビタミンＨであってもすでにアビジンに結合している９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチンを置換することは出来ないということが理解される。
【００６２】
安定性研究
１．８５ＭＢｑの９０Ｙに対応する、５０μｌの標識混合物を食塩水またはヒト血清で２０倍に希釈して３７℃でインキュベートした。溶液を標識後１４４時間までの様々な時点で分析した。分析を行うために、インキュベーション混合物のアリコットをモル過剰のアビジンに添加した。遊離の９０Ｙに対する９０Ｙ−ＤＯＴＡ−ビオチン／アビジン複合体の比を上述のようにＦＰＬＣによって測定した。
【００６３】
安定性研究により、食塩水中において放射標識は１４４時間後までアビジン−ビオチン複合体に完全に結合していることが示された。
【００６４】
血清においては、４８時間までインキュベートされた試料のクロマトグラムにおいては１つの放射性ピークのみが最初に検出されたが、その後、ＤＯＴＡ−ビオチンからの９０Ｙの定常的な解離が観察され、１４４時間後には最大５５％に達した。
【００６５】
７２時間インキュベートした試料から開始して、放射性クロマトグラムにおいて第二の短い保持時間（８．２分）のピークが観察され、これは９０Ｙ活性が高分子量種、おそらく血清トランスフェリンに付随していることを示すものである。