(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレスにより誘発された免疫抑制を処置するのに有用な組成物であって、
（a）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも下記量で存在する下記抗酸化剤：
（i）２５０ｍｇのビタミンＣ；
（ii）２００ＩＵのビタミンＥ；
（iii）５０μｇのセレン；
（iv）７.５ｍｇのβ−カロテン、および
（b）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも１ｇの量で存在し、幾つかのトリグリセリド種を含み、該トリグリセリド種の少なくとも４０％が
（i） ３３〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基；
（ii） ３０〜６７重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基；および
（iii）３０を超え４８未満の等価炭素数
を有することを特徴とする構造化グリセリド成分
を含む組成物。
【請求項２】
投与量当たり少なくとも １２.５ｍｇの亜鉛の濃度の亜鉛をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
投与量当たり少なくとも ０.８ｍｇの銅をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
投与量当たり少なくとも １００μｇの葉酸をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
該構造化グリセリド成分が主としてトリグリセリドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
該トリグリセリドが、４５〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
該トリグリセリドが、３０〜５５重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
該トリグリセリドが、５０〜６５重量％の炭素数４〜１２のアシル残基および３５〜５０重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項９】
該トリグリセリドが ３２〜 ４２の等価炭素数を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
医薬製剤または栄養製品である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
アミノ酸、タンパク質、炭水化物、脂質、ミネラル、およびＦＯＳ、食物繊維、およびビタミン類よりなる群から選ばれた少なくとも一つの成分をさらに含む栄養製品である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
該栄養製品がインスタントの液体製品である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
該抗酸化剤および該構造化グリセリド成分が下記の量：
（a）投与量当たり２００〜１０００ＩＵのビタミンＥ；
（b）投与量当たり５０〜４００μｇのセレン；
（c）投与量当たり５００ｍｇ〜５ｇのビタミンＣ；
（d）投与量当たり７.５〜５０ｍｇのβ−カロテン；および
（e）投与量当たり１〜１００ ｇの該構造化グリセリド成分
で存在する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ストレスにより引き起こされた免疫抑制 低減用医薬製剤または栄養製品の製造における、
（a）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも下記量で存在する下記抗酸化剤：
（i）２５０ｍｇのビタミンＣ；
（ii）２００ＩＵのビタミンＥ；
（iii）５０μｇのセレン；
（iv）７.５ｍｇのβ−カロテン、および
（b）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも１ｇの量で存在し、幾つかのトリグリセリド種を含み、該トリグリセリド種の少なくとも４０％が
（i）３３〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基；
（ii）３０〜６７重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基；および
（iii）３０を超え４８未満の等価炭素数
を有することを特徴とする構造化グリセリド成分
の組み合わせの使用。
【請求項１５】
感染の頻度 低減用医薬製剤または栄養製品の製造における、
（a）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも下記量で存在する下記抗酸化剤：
（i）２５０ｍｇのビタミンＣ；
（ii）２００ＩＵのビタミンＥ；
（iii）５０μｇのセレン；
（iv）７.５ｍｇのβ−カロテン、および
（b）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも１ｇの量で存在し、幾つかのトリグリセリド種を含み、該トリグリセリド種の少なくとも４０％が
（i）３３〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基；
（ii）３０〜６７重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基；および
（iii）３０を超え４８未満の等価炭素数
を有することを特徴とする構造化グリセリド成分
の組み合わせの使用。
【請求項１６】
免疫状態 維持用医薬製剤または栄養製品の製造における、
（a）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも下記量で存在する下記抗酸化剤：
（i）２５０ｍｇのビタミンＣ；
（ii）２００ＩＵのビタミンＥ；
（iii）５０μｇのセレン；
（iv）７.５ｍｇのβ−カロテン、および
（b）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも１ｇの量で存在し、幾つかのトリグリセリド種を含み、該トリグリセリド種の少なくとも４０％が
（i）３３〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基；
（ii）３０〜６７重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基；および
（iii）３０を超え４８未満の等価炭素数
を有することを特徴とする構造化グリセリド成分
の組み合わせの使用。
【請求項１７】
ストレスにより誘発された免疫の制御異常の低減用医薬製剤または栄養製品の製造における、
（a）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも下記量で存在する下記抗酸化剤：
（i）２５０ｍｇのビタミンＣ；
（ii）２００ＩＵのビタミンＥ；
（iii）５０μｇのセレン；
（iv）７.５ｍｇのβ−カロテン、および
（b）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも１ｇの量で存在し、幾つかのトリグリセリド種を含み、該トリグリセリド種の少なくとも４０％が
（i）３３〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基；
（ii）３０〜６７重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基；および
（iii）３０を超え４８未満の等価炭素数
を有することを特徴とする構造化グリセリド成分
の組み合わせの使用。
【請求項１８】
ストレスを受けた個体への栄養支持 付与用医薬製剤または栄養製品の製造における、
（a）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも下記量で存在する下記抗酸化剤：
（i）２５０ｍｇのビタミンＣ；
（ii）２００ＩＵのビタミンＥ；
（iii）５０μｇのセレン；
（iv）７.５ｍｇのβ−カロテン、および
（b）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも１ｇの量で存在し、幾つかのトリグリセリド種を含み、該トリグリセリド種の少なくとも４０％が
（i）３３〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基；
（ii）３０〜６７重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基；および
（iii）３０を超え４８未満の等価炭素数
を有することを特徴とする構造化グリセリド成分
の組み合わせの使用。
【請求項１９】
（a）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも下記量で存在する下記抗酸化剤：
（i）２５０ｍｇのビタミンＣ；
（ii）２００ＩＵのビタミンＥ；
（iii）５０μｇのセレン；
（iv）７.５ｍｇのβ−カロテン；
（b）ストレスにより誘発された免疫抑制を緩和するのに充分な量であって、投与量当たり少なくとも１ｇの量で存在し、幾つかのトリグリセリド種を含み、該トリグリセリド種の少なくとも４０％が
（i） ３３〜７０重量％の炭素数４〜１２のアシル残基；
（ii） ３０〜６７重量％の炭素数が１２を超えるアシル残基；および
（iii）３０を超え４８未満の等価炭素数
を有することを特徴とする構造化グリセリド成分；および
（c）組成物の全カロリーの １０〜 ５０％を提供するタンパク質成分
を含む固形栄養製品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、ストレスにより誘発された動物の免疫系の抑制を低減する方法に関する。本発明の方法は、ストレス事象の前、ストレス事象中および／またはストレス事象後に、構造化（structured）グリセリド成分および抗酸化剤系を含む栄養製品を動物に投与することを含む。本発明はまた、抗酸化剤系および構造化グリセリド成分を含む栄養製品にも関する。
【０００２】
（背景技術）
ストレスは、身体上または精神上の緊張を引き起こす物理的、化学的または感情的な因子であり、疾患を引き起こす因子でもある。過剰なストレスが宿主の防御能を変化させ、病気への罹りやすさを増すことがあるという概念は新しいものではない。Pedersenらによる刊行物は、ストレスおよび疾患の領域で行われた研究の概説を提供している。Pedersenら、"The immune system during exposure to extreme physiological conditions", Inter J. Sports Med. 1994 15: 5116-5121を参照。
【０００３】
近年、免疫学の分野での急速な進歩は、心理社会的、栄養学的および身体的ファクターと免疫系との相互作用に対する強烈な関心を呼び起こしている。この研究の主たる前提は、ストレスが免疫抑制作用を奏することによって疾患への罹りやすさ（vulnerability）を増長するということである。このことは、とりわけ、感染や悪性腫瘍や自己免疫疾患などの免疫機構と密接に関連する疾患に当てはまる。
【０００４】
ヒトのストレスにおける免疫の変化を示す研究は多くのモデルを含んでおり、その場合、実験的なおよび天然に認められるストレスの大抵のタイプが免疫系成分の変化と関係付けられている。初期の研究の幾つかはアメリカ航空宇宙局（ＮＡＳＡ）によりなされた。ＮＡＳＡの研究は、宇宙飛行の着水フェーズの間に白血球およびＴリンパ球が上昇することを示した。しかしながら、地上に帰還してから最初の３日間にマイトジェン刺激に対するリンパ増殖応答に傷害がみられた。打ち上げ前におそらく予期（anticipation）のためにリンパ球の刺激応答のわずかな上昇もまた観察された。ストレスと免疫機能に関する好適な概観が"Stress, Immunity and Illness - A Review", DorianおよびGarfinkel著、Psychological Medicine,17:393-407(1987)に記載されている。
【０００５】
身体的な活動および運動が免疫系に様々な変化をもたらすこともまた知られている。激しい運動の効果は免疫機能を抑圧するように思われ、上気道感染に対する宿主の防御を損なう。疫学的研究は、一般に活発なレベルの運動で上気道感染のリスクが大きくなることを示している。Heathら、"Exercise and Upper Respiratory Tract Infections", Sports Medicine,14(6)353-365(1992)参照。
【０００６】
ヒトは年をとるにつれ、多くの細胞媒体免疫応答および液性免疫応答の衰えを経験する。老年者はしばしば、様々な感染症、死別、癌および栄養不足からストレスを受ける。老年者はまた、不適切な住居などの環境因子や精神的な不足感（mental deficiencies）からもしばしばストレスを受ける。適度の生理学的量の微量栄養素を補充することは、栄養不足を減らし、免疫の様々な手段を改善し、感染に関連した疾患の頻度を低減することが９６人の老年被験者（平均年齢７５歳）において示されている。Chandra R.K., "Effect of Nutrients and Trace Element Supplementation on Immune Responses and Infection in Elderly Subjects", Lancet 1992,Vol.340,pp.1124-1127参照。年齢、運動、栄養不良およびストレスのファクターはまた、Hoffman-Goetz L.ら、"Exercise and Immune Function", CRC Press, Boca Raton(1996)により研究されている。
【０００７】
感染は、組織の脂質、タンパク質および微量栄養素の損失を特徴とする。これは一部には、免疫系の活性を支持すべく、また宿主を保護すべくデザインされたサイトカイン媒体応答の結果である。Grimbleは、"Malnutrition and the Immune Response", Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene(1994)88,615-619で、サイトカイン生物学に及ぼすタンパク質およびアミノ酸摂取の影響を報告している。著者らはまた、脂質および微量栄養素の摂取によるサイトカイン生物学の変調をも検討している。
【０００８】
血液中の白血球は生体中の白血球全数のごく一部であるにすぎないが、それでも免疫系の活性状態を表す重要な指標を提供する。急性のストレスは、末梢血白血球の亜集団の分布に大きく速やかで可逆的な変化を誘発することが知られている。栄養の補充がストレスに対する免疫系の応答を変えることができるか否かを決定するため、本願の発明者らは白血球およびリンパ球の他の亜集団を調べた。以下に報告するデータは、本発明の組成物がストレスにより誘発された免疫系の抑制を防止または低減するうえで有用であるという結論を支持している。
【０００９】
ある種の栄養素、とりわけビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロテンおよびカルシウムが冠状心疾患、高血圧、ある種の癌および骨粗鬆症の防止および管理に有用であることを示す確固たる証拠が蓄積しつつある。さらに、ビタミンＣ、ビタミンＥおよびβ−カロテン（抗酸化剤栄養素）は、運動により媒体されたフリーラジカル損傷に対して保護すると思われる。それゆえ、抗酸化剤栄養素の食事療法は、慢性疾患の予防／管理および健康増進に向けられた運動プログラムに絶対必要な一部を構成する。抗酸化剤および身体運動についての優れた議論は、（１）Keuchsによる"Antioxidants in Infection",J.Nutr.Sci.Vitaminol.,S23-33(1993);（２）Aruoma, "Free Radicals and Antioxidant Strategies in Sports",J.Nutr.Biochem.,1994,vol.5,pp.370-380;および（３）Clarkson, "Antioxidants and Physical Performance", Critical Reviews of Food Science and Nutrition,35(1&2):131-145(1995)に見出すことができる。
【００１０】
身体的および精神的ストレスの良い例が現代の世界中の軍隊により利用されている軍事トレーニング実習に認めることができる。軍事訓練者は、自然災害や戦時難民状態などによりストレスを受けた人類の集団が経験するように、感染疾患の頻度の増大を経験している。Berntonらによる論文、"Adaptation to Chronic Stress in Military Trainees, Ann NY Acad.Sci.,Vol.774(217-231),1995は、米国軍隊レンジャースクールに入隊した兵士が８週間にわたる極度のストレス状態のトレーニングの間に受けた代謝的、認知的、内分泌的および免疫学的な適応が関与する研究の知見を報告している。ストレスは身体的かつ感情的なものであった。
【００１１】
兵士は野外訓練の間、野外での携帯口糧（rations）のみを与えられた。この携帯口糧には、野外での運動の間に消費されるカロリーよりも少ないカロリーしか提供されなかった。携帯口糧には運動の間に消費されるカロリーよりも少ないカロリーしか提供されなかったので、兵士は常に空腹の状態にあり、運動の間に漸進的な体重減少が生じた。免疫系の抑制は、７つの抗原に対する皮膚表皮（epicutaneous skin）試験による遅延型過敏症により評価した。陽性の皮膚試験の平均数および皮膚試験の硬結部の全ミリメートルの両者で有意の抑制が認められた。さらに、入院患者において、遅延型皮膚過敏症により評価されるアネルギーが感染リスクおよび死亡率の増大を示すことがわかっている。Christou NVら、"Two techniques of measurement of the delayed hypersensitivity skin test response for the assessment of bacterial host resistance", World J.Surg.,1985;5:798-806およびChristou NVら、"The delayed hypersensitivity response and host resistance in surgical patients 20 years later", Ann Surg.1995;222:534-461参照。これら論文は、ストレスを受けた免疫系を崩壊から首尾よく防御する栄養製品については何ら示唆していない。
【００１２】
Alexanderらの米国特許第４,９８１,８４４号は、患者の体重１ｋｇ当たり２０〜６０キロカロリーを与え、該カロリーの２０〜８０％がリノール酸からのものである食事を摂取することを含む、患者における免疫応答を改善する方法を開示している。Alexanderらの特許はまた、１日当たり１００〜１０００ＩＵのビタミンＥを消費することを教示している。
【００１３】
Chandraの米国特許第５,５５６,６４４号は、老年者において免疫を増大させ感染の事例および重篤度を低減させるのに有効となるようにデザインした多栄養素（multi-nutrient）栄養補助剤を開示している。この特許はとりわけ、引用したレベルの種々のビタミンおよびミネラルを有する栄養補助剤の消費を教示している。この特許は、さらに詳しくは、老年者の免疫状態を改善するための老年者による栄養補助剤の消費を教示している。
【００１４】
Garlebらの米国特許第５,４４４,０５４号は、潰瘍性大腸炎または結腸の炎症を患う患者のための栄養製品を開示している。この栄養製品は、特定の脂肪酸および消化できない炭水化物源を含む油ブレンドを利用している。消化できない炭水化物は、ヒト結腸に存在する微生物により短鎖脂肪酸に代謝されるものとして開示されている。
【００１５】
DeMicheleらの米国特許第５,２２３,２８５号は、肺疾患患者のための特別の脂質ブレンドを含む液体栄養製品を開示している。この特許は、脂質がｎ−３脂肪酸に対するｎ−６脂肪酸の特定の比率を有していなければならないことを開示している。さらに、この文献は、インビボで抗酸化剤特性を有する所定量の栄養素を含む栄養製品を記載している。そのような抗酸化剤栄養素の例としては、β−カロテン、ビタミンＥ、ビタミンＣ、セレンおよびタウリンが挙げられる。
【００１６】
Bistrianらの米国特許第４,８７１,７６８号には、ｎ−３脂肪酸および中鎖脂肪酸を含む構造化（structured）グリセリドを含有する食事補助剤が記載されている。この特許は、高エネルギー脂肪源を提供する合成トリグリセリドまたは構造化脂質および感染に対する闘争を支援する脂肪酸を記載している。この特許はまた、グリセロール、脂肪酸およびその組み合わせを含む油状画分を１０〜８０重量％含み、該脂肪酸の５０〜９０％がカプリル酸、カプリン酸またはその混合物であり、１０〜５０重量％がｎ−３脂肪酸である食事を投与することによる、感染の影響を最小限にし、その後の感染の影響を最小限にする方法をも記載している。この文献は、該食事補助剤が感染の開始を防止することはないが、感染した患者の生存を促進するであろうことを教示している。この特許はまた、ストレスにより誘発された免疫系のダウンレギュレーションが、（１）構造化グリセリド；および（２）少なくともビタミンＥ、ビタミンＣ、セレンおよびβ−カロテンを含む抗酸化剤系を含む栄養組成物によって減少されうることは示唆していない。
【００１７】
HorrobinらのＷＯ９６／３１４５７（ＰＣＴ ＧＢ９６／００８２８）は、１２の必須脂肪酸、オレイン酸および８〜２６の炭素数を有する他の脂肪酸から選ばれた２または３の異なる脂肪酸を含む構造化脂質を記載している。Horrobinの構造化脂質は、必須脂肪酸代謝の異常が確認された疾患の治療または予防のための医薬として示唆されている。
【００１８】
Mendyらの米国特許第４,６０７,０５２号は、特定の多不飽和アシル断片がグリセロール分子のｓｎ−２位に存在するトリグリセリドを記載している。Mendyらの構造化脂質は、脂質消化の問題、代謝疾患、栄養不足、高血圧および免疫変調が望まれる状態を治療するのに有用であるとして記載されている。Mendyらの特許には、構造化グリセリドを特定の抗酸化剤系と組み合わせたときに、ストレスに曝された動物において典型的にみられる免疫抑制を低減するうえで有効であることについて教示も示唆もなされていない。
SchmitzらのＷＯ９６／３９８６９は、固体食事製品の別個の部分に種々の成分を有する健康食製品を開示している。一つの部分は抗酸化剤を含んでおり、第二の部分は脂質、タンパク質、および炭水化物を含んでいることが教示されている。
【００１９】
従来技術は、ストレスにより誘発された免疫系の制御異常（dysregulation）または抑制を低減もしくは最小限にするのに有効な、構造化グリセリドおよび独特の抗酸化剤系を含む栄養組成物を示唆も開示もしていない。本発明の栄養組成物は、本明細書においてしばしば免疫栄養剤（immunonutritional）として言及されるであろう。従来技術はまた、ストレスにより誘発された免疫系の抑制を低減または防止する方法であって、構造化グリセリド成分および抗酸化剤系を含む栄養製品を個体に投与することを含む方法を示唆も開示もしていない。
【００２０】
（発明の要約）
本発明に従い、免疫系の抑制（典型的にストレスに付随する）は、構造化グリセリド成分とともに抗酸化剤を摂取することにより防止または低減しうることがわかった。ストレスを受けている個体は、ストレス下にない個体に比べて応答性のリンパ球が少ないことがわかっている。構造化グリセリド成分と抗酸化剤との組み合わせが、このリンパ球の応答性の低減を防止または有意に低減することが示された。さらに臨床試験において、抗酸化剤とともに構造化グリセリド成分を消費したストレスを受けた個体は、この組み合わせを摂取しなかった対照群よりも低い感染率であることが示された。
【００２１】
本発明の他の側面は、抗酸化剤とともに構造化グリセリド成分を含む医薬組成物および栄養組成物に関する。本発明の他の側面は、上記組成物の一つを用いてストレスにより誘発された免疫系の抑制を処置する方法に関する。本発明の他の側面および態様は当業者には明らかであろう。
【００２２】
本発明の組成物または方法の第一の成分は抗酸化剤である。免疫系に対してこの有利な効果を奏する特定の抗酸化剤は、ビタミンＥ、セレン、ビタミンＣおよびβ−カロテンである。ストレスに関連した免疫抑制を防止または低減させるために個体により摂取しなければならない各抗酸化剤の特定の量は、個体の年齢、体重、性別、または他の疾患状態の存在に依存して大きく変わり得る。しかしながら、下記表１にストレスを受けた個体に投与量当たりに投与することのできる各抗酸化剤の量のガイドラインを列記してある。以下に列記した量は、本発明をさらに説明し、例示するために示したものにすぎない。これらはいかなる意味においても本発明を限定するものと解釈してはならない。さらに、これらは読者の便宜のために表の形式で示してあり、この記載は、ある抗酸化剤が示唆した最小のレベルで存在し、一方、他のものは最も好ましいレベルで存在する、あるいはその組み合わせを包含するものと考えなければならない。
【００２３】
抗酸化剤の投与量ガイドライン
【表１】
0004555471.tif 000002
【００２４】
本発明の組成物または方法の第二の成分は構造化グリセリド成分である。本発明において利用する構造化グリセリド成分は、典型的にトリグリセリドである。本発明において有用な構造化トリグリセリド成分は、中鎖長（すなわち、４〜１２炭素原子）のアシル残基を３３〜７０重量％含む。さらに好ましくは、中鎖アシルは４５〜７０重量％、最も好ましくは５０〜６５重量％含まれる。すべての重量％において、中鎖アシルの長さは、好ましくは４〜１２炭素原子、さらに好ましくは６〜１２、最も好ましくは８〜１０炭素原子である。構造化トリグリセリドの残りの３０〜６７重量％は、典型的に長鎖（１３〜２２炭素原子）アシル残基である。さらに好ましくは、長鎖アシルは３０〜５５重量％、最も好ましくは３５〜５０重量％含まれる。好ましくは、該長鎖アシル残基は、すべての重量％において長鎖の多不飽和脂肪酸残基を含む。構造化グリセリド成分は、好ましくは、３０を超え４８未満の等価炭素数（equivalent carbon number）（ＥＣＮ）、さらに好ましくは約３２〜約４２のＥＣＮを有する種を少なくとも４０％（Ｗ／Ｗ）含むことを特徴とする。
【００２５】
投与すべき構造化グリセリド成分の量もまた、個体の年齢、体重、性別、または他の疾患状態の存在に依存して大きく変わり得る。しかしながら、一般的なガイドラインとして、個体は典型的に投与量当たり少なくとも１ｇの構造化グリセリド成分、さらに好ましくは１〜１００ｇ、最も好ましくは１０〜５０ｇの構造化グリセリド成分を投与されるであろう。
【００２６】
ストレスを受けた個体の免疫系に有利な効果を奏するために、構造化グリセリド成分と抗酸化剤との組み合わせを１日に少なくとも１回、さらに好ましくは１日に２回、投与すべきである。この組み合わせは、ストレスの結果としての免疫系の制御異常を低減または防止するうえで極めて有効であることが示された。「制御異常」なる語は、免疫系が典型的もしくは正常な状態で認められるよりも有効でない仕方で機能することを意味する。その免疫系が制御異常である動物は、疾患により罹りやすく、感染に対して闘争することもよりできにくい。
【００２７】
本発明によれば、選択した抗酸化剤を構造化グリセリド成分とともに用いる。ここで「とともに」とは、構造化グリセリド成分を投与してから１時間以内に抗酸化剤化合物を該個体に投与することを意味する。さらに好ましくは、抗酸化剤を構造化グリセリド成分と同時に投与し、最も好ましくは、同じ組成物、たとえば、腸内栄養剤、栄養補助剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、坐剤、スプレー剤、舌下剤、滴剤、ローション剤、軟膏、マイクロカプセル剤およびリポソーム中に混合して投与する。
【００２８】
「可食性の油」なる語は、植物、動物、単細胞生物などから得られ、哺乳動物が食べることができ、栄養源として利用できる油を意味する。「脂質」なる語は、一般に、生体系に関連する雑多な一群の物質であって、水に不溶で炭化水素やアルコールなどの非極性溶媒に可溶であるという共通の性質を有するものをいう。
【００２９】
「構造化脂質」なる語は、一般に、グリセロール骨格上の特定の位置に特定の脂肪酸アシル残基を含む油脂類をいう。本明細書において「構造化グリセリド成分」とは、モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリド、さらに典型的にはジグリセリドおよびトリグリセリド、理想的には高パーセントのトリグリセリドを含むことを特徴とするグリセリド混合物をいう。トリグリセリド種の少なくとも４０％が、炭素数４〜１２のアシル残基を約３３〜７０重量％、１２を超える炭素数のアシル残基を約３０〜６７重量％および３０を超え４８未満の等価炭素数を有する。
【００３０】
グリセリドは脂肪酸のアシルラジカルによるグリセロール（１,２,３−プロパントリオール）のエステルであり、アシルグリセロールとしても知られる。グリセロール分子の一つの位置のみが脂肪酸でエステル化されると「モノグリセリド」が生成し、２つの位置がエステル化されると「ジグリセリド」が生成し、グリセロールの３つのすべての位置が脂肪酸でエステル化されると「トリグリセリド」または「トリアシルグリセロール」が生成する。グリセリドはすべてのエステル化位置が同じ脂肪酸を含むときは「単純」であるといわれ、または異なる脂肪酸が関与するときには「混合」であるといわれる。グリセロール骨格の炭素はｓｎ−１、ｓｎ−２およびｓｎ−３と称され、ｓｎ−２はグリセロールの中央であり、ｓｎ−１およびｓｎ−３はグリセロールの両端である。
【００３１】
天然に存在する油脂類は大部分トリグリセリドからなり、その３つの脂肪酸アシル残基は同じであっても同じでなくてもよい。「長鎖トリグリセリド（ＬＣＴ）」なる語は、１２を超える炭素数の脂肪酸（長鎖脂肪酸（「ＬＣＦＡ」））を含む単純または混合トリグリセリドの両者を意味し、一方、「中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）」なる語は、炭素数４〜１２の脂肪酸を含む単純および混合トリグリセリドの両者を意味する。
【００３２】
「ＥＣＮ」または「等価炭素数」なる語は、グリセリド分子のアシル鎖中の合計炭素数を意味する。たとえば、１６の炭素数の３つのアシルラジカルを含む単純トリグリセリドであるトリパルミチン（トリパルミチングリセロール）は、３×１６＝４８のＥＣＮを有する。逆に、ＥＣＮ＝４０であるトリグリセリドは、アシル鎖の長さが８、１６および１６；１０、１４および１６；８、１４および１８などの「混合」アシル鎖を有する。天然に存在する油脂類は特定の脂肪酸に関して「混合」であることがしばしばであるが、同じグリセロール骨格上にはＬＣＦＡおよびＭＣＦＡを含む傾向はない。それゆえ、ＥＣＮが２４〜３０であるトリグリセリドは典型的に中鎖脂肪酸を主として含むのに対して、ＥＣＮが４３を超えるトリグリセリドでは典型的に長鎖脂肪酸を主として含む。ＥＣＮが３２〜４２であるトリアシルグリセロールは典型的に１または２のＭＣＦＡを１または２のＬＣＦＡとともに含んでグリセリドを「充填」する。ＥＣＮの範囲が３０を超えて４８未満であるトリアシルグリセロールは、本質的に構造化トリグリセリドに特有で物理的混合物（physical mixtures）中に存在しないかまたは有意に低濃度で存在する混合トリアシルグリセロール種を表す。
【００３３】
「重量％」なる語は、特定の成分または全組成物の質量に対する当該成分の質量の比に１００を掛けたものを意味する。たとえば、「炭素数１０のアシル残基を４０重量％含むトリグリセリド」とは、１００ｇのトリグリセリド油が４０ｇの炭素数１０のアシルラジカルおよび６０ｇの他の成分（他のアシルラジカルおよびグリセロール骨格を含む）からなることを意味する。
【００３４】
食物脂質の特性の多くは、その成分の脂肪酸により直接説明することができる。食品中に存在する脂肪酸は、通常、たとえばラウリン酸やドデカン酸のように非分枝鎖中に偶数個の炭素原子を含んでいる。飽和脂肪酸（ラウリン酸がその例である）に加えて、脂肪酸は１、２またはしばしば６までの二重結合を有していてよく、それゆえ不飽和であってよい。脂肪酸中の二重結合の数および位置は、有機化学者によって一般に理解される通常の命名法により表示される。たとえば、アラキドン酸（「ＡＡ」または「ＡＲＡ」）は２０炭素の長さで、メチル末端から６番目の炭素から始まる４つの二重結合を有する。その結果、アラキドン酸は「２０：４ ｎ−６」と称される。同様に、ドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）は２２炭素の鎖長で、メチル末端から３番目の炭素から始まる６つの二重結合を有し、それゆえ「２２：６ ｎ−３」と称される。
【００３５】
「ＮＡＳ−ＮＲＣ ＲＤＡ」なる語は、ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ−ニュートリション・リサーチ・カウンシル・リコメンデッド・ダイエタリー・アラウアンシーズ（National Academy of Sciences-Nutritional Research Council Recommended Dietary Allowances）を意味する。
本明細書に含まれる開示の目的のためには、「抗酸化剤」なる語は、以下の４つの物質を意味する：ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレンおよびβ−カロテン。
【００３６】
「β−カロテン」なる語は、植物にみられるビタミンＡのカロテノイド前駆体を意味する。ビタミンＡ活性を有する種々の化合物が存在するので、採取源は通常、レチノール等価物（ＲＥ）として表される。β−カロテンを１ＲＥとした変換は、６μｇの全トランスβ−カロテンに等しい。それゆえ、１５ｍｇのβ−カロテンは２５００ＲＥに等しい。食品のカロテノイド含量に関するデータは不完全であるため、食事中のビタミンＡ活性のどれだけのパーセントがカロテノイドによるものかを正確に記載することはできない。利用できる食品組成データを用い、米国農務省は成人の１日当たりのビタミンＡの平均摂取量を１４１９ＲＥであると認めた。成人男性に対するＮＡＳ−ＮＲＣ ＲＤＡは１日当たり１０００ＲＥに設定されている。ビタミンＡ毒性の徴候は、通常、食品および補助剤の両者を含めて１５,０００ＲＥを超える毎日の持続的な摂取でのみ認められる。
【００３７】
レチノールとは対照的に、カロテノイドはたとえ数週間から数年にわたって非常に大量に摂取したとしても毒性は知られていない。カロテノイドの毒性が欠如している主たる理由は、高投与量での吸収効率が極めて低いこと、および腸、肝臓および他の臓器でビタミンＡに変換されるのが比較的限られていることである。β−カロテンはビタミンＡ源ではある。しかしながら、β−カロテンは非常に高投与量で与えたときにビタミンＡのように毒性ではない。β−カロテンは、黄色、オレンジ色および暗色の緑葉野菜に認められ、独特の抗酸化剤であると思われる。
【００３８】
「ビタミンＥ」なる語は、α−、β−、δ−およびγ−で表示される、環中のメチル基の数および位置のみが異なる一群のトコフェロールを意味する。最も活性な形態のビタミンＥであるα−トコフェロールはまた天然に最も広く分布する。α−トコフェロールが最初に合成されたとき、合成された物質は植物からのα−トコフェロールよりも生物学的活性がわずかに低いことがわかった。この現象のために、天然に存在する形態はＲＲＲ−α−トコフェロールとして表された。食事の目的のためには、ビタミンＥ活性はＲＲＲ−α−トコフェロール等価物（−ＴＥｓ）として表される。１α−ＴＥは１ｍｇのＲＲＲ−α−トコフェロールの活性である。１ｍｇのＲＲＲ−α−トコフェロールは１.４９ＩＵのビタミンＥと等価である。ＮＡＳ−ＮＲＣ ＲＤＡは成人男性に対して１日当たり１０ｍｇのＴＥとして確立されている。バランス食品の分析は、７〜１１ｍｇの範囲のα−ＴＥの１日当たりの平均摂取を示している。成人は、１００〜８００ｍｇ／日の経口投与量まで毒性の徴候または生化学的証拠なしに許容できる。
【００３９】
「ビタミンＣ」なる語はアスコルビン酸を意味する。２０歳〜２９歳の年齢の成人男性のアスコルビン酸摂取量は、１日当たり平均１２１ｍｇであることがわかった（米国保健社会福祉省、１９９４）。アスコルビン酸のＮＡＳ−ＮＲＣ ＲＤＡは成人男性に対して６０ｍｇと設定されている。多くの人々は、明らかな毒性を表すことなく１日当たり１０００ｍｇのアスコルビン酸を習慣的に摂取している。
【００４０】
「セレン」なる語は、生物学的に利用できるセレンを提供する化合物を意味する。米国での食物摂取分析は、全成人の平均食事セレン摂取量が１９７４年〜１９８２年の間で１日当たり１０８μｇであったことを示している。セレンのＮＡＳ−ＮＲＣ ＲＤＡは、成人男性に対して１日当たり７０μｇとして確立されている。ヒトにおいて慢性の毒性を引き起こすのに必要な食事のセレン暴露のレベルは確実なことはわかっていない。しかしながら、中国のセレンを含む地域で１日当たり約５ｍｇを食物から摂取すると指の爪の変化および毛髪の喪失という結果となった。
【００４１】
本明細書においてセレンまたは他のミネラル（銅を含む）の量について言及するときは、該ミネラルの元素量を言及するのであって付随するアニオンを言及するのでないことを理解しなければならない。当業者であれば、所望量の元素のミネラルを提供するために、どれだけの量の無機塩、塩または無機錯体を栄養製品または医薬製品に添加しなければならないかを容易に計算することができるであろう。
【００４２】
「消化できないオリゴ糖」とは、ヒトの上部消化管で内因性の消化に対して耐性の炭水化物をいう。ＦＯＳは、フルクトサン（フルクトース残基からなるポリマー）のイヌリンサブクラスの成員である消化できないオリゴ糖である。詳しくは、イヌリンはグルコフルクトサンであり、（２→１）−β−グリコシド結合により連結されたフルクトース残基の鎖からなり、通常、最初のフルクトース分子に（１→２）−αで並んだ単一のＤ−グリコシル残基を有する炭水化物ポリマーである。ＦＯＳは化学的な方法により酵素的にまたは天然物質からの抽出により製造できる。ＦＯＳは、タマネギ、ニンニク、ワケギ、アーティチョーク、コムギ、ライ麦、バナナ、アスパラガスおよびトマト（これらは一般にヒトの食事の一部を構成する）を含む多くの種類の植物中に天然に存在する。ＦＯＳを工業的に製造する酵素的方法はAdachiらの米国特許第４,６８１,７７１号に教示されており、ショ糖をフルクトシルトランスフェラーゼの存在下で反応させてＧＦ２、ＧＦ３、ＧＦ４およびＧＦ５を得ることを含む。酵素のフルクトシルトランスフェラーゼの採取源は、Aspergillus nigerなどの真菌または野菜である。
【００４３】
「ＦＯＳ」なる語は、フルクトオリゴ糖を意味する。ＦＯＳは主としてフルクトース分子からなる天然物質である。ＦＯＳは多くの異なる植物に存在する炭水化物の一群に属する。ＦＯＳは消化できないオリゴ糖であり、消化されることなく小腸を通過し、大腸に達してある種の微生物により選択的に発酵される。ＦＯＳは、ヒトの健康に有利な細菌種である乳酸桿菌やビフィズス菌（bifidobacteria）により有効に利用され得る。ビフィズス菌によるＦＯＳの選択的発酵はこれら菌の存在の増大および酢酸および乳酸の産生へと導き、その結果、消化管内のｐＨは下がり、大腸菌、Clostridium perfringesおよびClostridium difficileなどの有害な細菌の過剰増殖が防がれる。ＦＯＳなどの消化できないオリゴ糖は本発明による免疫栄養剤に添加して、病原微生物の増殖に資することない胃腸管内での環境を生成し、本発明の免疫栄養剤の免疫支持特性を促進させることができる。
【００４４】
動物毒性試験は、ＦＯＳおよび消化できないオリゴ糖による毒性、変異原性および癌原特性を示していない。本発明におけるＦＯＳまたは消化できないオリゴ糖の治療学的有効量は、１日当たり１.０〜約１０ｍｇの範囲であってよい。さらに好ましくは、消費するＦＯＳの量は１日当たり約５.０〜１０.０ｍｇであり、最も好ましいレベルは１日当たり約８.０〜１０ｇである。本発明の免疫栄養剤中での消化できないオリゴ糖またはＦＯＳの配合は任意のものである。
【００４５】
本明細書において食物繊維とは、ヒトの消化管中の酵素によって分解されて小さな分子状化合物を生成せず、それゆえ吸収されない食物中のあらゆる成分であると理解される。ＦＯＳに加えて利用できる食物繊維の例としては、ダイズ多糖、カラスムギの外皮繊維、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、グアールガム、ペクチン、トウモロコシのふすまなどが挙げられる。さらに好ましくは、本発明の組成物中に利用する食物繊維は、米国特許第５,１０４,６７７号に記載された不溶性繊維、可溶性で発酵性の繊維および可溶性で非発酵性の繊維の混合物であろう。該米国特許の開示は参照のため本明細書中に引用される。本発明の栄養組成物または医薬組成物は、食物繊維を任意に含有していてよい。
本発明の栄養組成物および医薬組成物に利用する抗酸化剤はすべて、当該技術分野でよく知られている。これら抗酸化剤は、当業者にはよく知られた多くの入手源から市販されている。
【００４６】
抗酸化剤に加えて、本発明の栄養組成物および医薬組成物はすべて、少なくとも３３重量％のランダムにエステル化されたＭＣＦＡの構造化グリセリド成分を含んでいる。脂肪酸残基の残りは典型的にＬＣＦＡである。構造化グリセリド成分を調製するのに用いるＭＣＴおよびＬＣＴ源は重要ではない。分別（fractionated）ココヤシ油や分別パーム種油などのＭＣＴの典型的な採取源は当業者に知られている。ＬＣＦＡの採取源としては、ルリヂサ油、クロフサスグリ種油、トウモロコシ油、ココヤシ油、カノラ（canola）油、ダイズ油、マリン油（marine oil）、真菌油（fungal oils）、ベニバナ油、高オレインベニバナ油、ヒマワリ油、高オレインヒマワリ油、オリーブ油、マツヨイグサ油、綿実油、米糠油、ブドウ実（grapeseed）油、アマニ油、乳脂肪油、ニンニク油、落花生油、アーモンド油、クルミ油、小麦麦芽油、鶏卵油、ゴマ油、ラード、タローおよびマトンに由来する油が挙げられる。
【００４７】
より好ましい態様において、本発明の構造化トリグリセリド成分はまた、ｎ−６、ｎ−９および／またはｎ−３長鎖脂肪酸などの長鎖多不飽和脂肪酸（以下、「ＬＣＰＵＦＡ」）をも含む。ＬＣＰＵＦＡの知られた採取源としては、魚油またはマリン油、卵黄脂質、単細胞油（single cell oils）（たとえば、藻類油および真菌油）が挙げられ、ある採取源は他の採取源に比べてより多量の特定ＬＣＰＵＦＡを達成するうえで良好であることが当該技術分野で理解されている。他のＬＣＰＵＦＡの可食性で半精製または精製採取源は当業者に明らかであろう。たとえば、ＬＣＰＵＦＡの新たな採取源を、野菜および油保有植物の遺伝子操作により開発することができる。そのような組換え油の使用はまた、本発明でも考慮される。
【００４８】
本発明において有用な構造化グリセリドは、ＭＣＦＡおよびＬＣＦＡの両者を含む。本発明において有用な構造化トリグリセリドは、それが由来する出発材料とは化学的に区別され、出発材料とは異なる独特の利点を提供する。本発明の一つの側面は、ＭＣＦＡとＬＣＦＡとのある種の混合物を含む構造化トリグリセリドがＬＣＴに比べて速やかな加水分解および吸収を受けやすいという発見にある。さらに、本発明の構造化トリグリセリドは、肝臓ルートではなく主としてリンパ系を介して吸収および輸送される。
【００４９】
天然の油脂類では、種々の脂肪酸は特定の油脂類に特徴的な秩序だったパターンでグリセロール分子の３つのヒドロキシ基の一つでエステル化される。一般に、天然に存在する長鎖飽和脂肪酸（たとえば、Ｃ16−Ｃ18）は、主としてｓｎ−１およびｓｎ−３の位置に存在するのに対して、モノおよび多不飽和脂肪酸はトリグリセリド分子のｓｎ−２すなわち中央の位置に存在する。たとえば、トリパルミチン（Ｃ16）、トリオレイン（Ｃ18）などの「単純トリグリセリド」は天然にはごく少数が存在するのみである。
【００５０】
本発明の構造化グリセリド成分は、トリグリセリドを主として５０重量％以上、しばしば約９０重量％含有するであろう。これらトリグリセリドのうち（その比率がどうであれ）、少なくとも４０重量％は３０を超え４８未満のＥＣＮを有する。さらに好ましくは、構造化グリセリド成分は少なくとも６０重量％がＥＣＮが３０を超え４８種未満のＥＣＮを含み、最も好ましくは少なくとも６０重量％がＥＣＮが約３２を超え約４２種未満のＥＣＮを含む。
【００５１】
本発明の構造化グリセリドは、構造化脂質を製造するのに一般に用いられるいかなる方法によっても製造できる。たとえば、油または油の選択したフラクションを化学量論的な比率で混合し、ついで触媒または酵素を用いてエステル交換反応を進行させるエステル間（interesterification）またはエステル交換反応を用いることができる。さらに、当業者は、油を有する植物を遺伝子操作して本発明に記載する特定の構造化グリセリドを産生させることもできる。標準的なエステル交換反応の結果、他の油とともに本発明の構造化グリセリドを含む成分混合物が得られるが、特許請求の範囲にはそのような成分混合物も含まれることを意図するものである。
ＭＣＴ油を出発材料として用いて本発明に有用な構造化脂質を調製することができる。分別ココヤシ油や分別パーム種油などのＭＣＴ油は、ココヤシ油やパーム種油を加水分解し、脂肪酸を蒸留することによって得られる。ついで、脂肪酸をグリセロール分子に再度エステル化してＭＣＴ油を得る。
【００５２】
下記実施例において構造化トリグリセリドの製造に用いる化学的なエステル間反応は、"Oils and Fats Manual, A Comprehensive Treatise", Vol.2, Chapter 11, Transformation of Fat for Use in Food Products, pg.923-925（その全教示を参照のため本明細書中に引用する）の教示によるものである。化学的なエステル間反応はまた同時ランダム化とも呼ばれ（なぜなら、該反応は非ランダムな分布という性質を変化させるから）、油脂類の混合物をナトリウムメチラートまたはナトリウムメトキシドなどの触媒の存在下（たとえば、０.０５〜０.５重量％、さらに好ましくは０.１〜０.３重量％の範囲）、短時間（たとえば、１００〜１４０℃、好ましくは１１０〜１３０℃の温度にて０.５〜４時間、好ましくは０.５〜２時間）加熱することにより行うことができる。脂肪酸はトリグリセリド上での天然の位置を離れ、ランダムな仕方で（おそらく、３つの位置のそれぞれで均等に）再配置される。それゆえ、各脂肪酸の約１／３がｓｎ−１の位置に再エステル化され、約１／３がｓｎ−２の位置に再エステル化され、約１／３がｓｎ−３の位置に再エステル化される。
【００５３】
上記のように、抗酸化剤と構造化グリセリド成分とを別々に投与することによってストレスによって誘発された免疫系の抑制を防止または低減することができる。そのような別々の投与は本発明の一部を構成すると考えなければならない。しかしながら、抗酸化剤と構造化グリセリド成分とを単一の組成物中で一緒に投与すれば個体にとってはるかに都合がよい。この組成物は、腸溶調合物または濃縮物などの栄養製品の形態で投与することができる。他の栄養製品または食物製品としては、バー（bars）、プリン、ゲル、菓子、たとえば、キャンディー、ガム、飴などが挙げられる。抗酸化剤および構造化グリセリド成分はまた、医薬組成物として投与することもできる。適当な医薬組成物の例としては、錠剤、カプセル剤、懸濁化剤、乳剤、液剤などが挙げられる。
【００５４】
本発明の典型的な栄養組成物は、可食性のマクロ栄養素、ビタミン類およびミネラルを特定の使用に所望される量で含んでいるであろう。そのような成分の量は、調合物がストレスに一時的に曝された正常で健康な個体に使用することを意図しているのか、あるいはある種の慢性または急性疾患状態（たとえば、代謝性疾患）のために特別の必要のある患者に使用することを意図しているのかにより、大きく変わるであろう。本発明の栄養調合物に利用する成分は半精製または精製したものであることが当業者により理解されるであろう。半精製または精製とは、天然物質の精製によってまたは合成によって調製した物質を意味する。これら技術は当該技術分野でよく知られている（たとえば、Code of Federal Regulations for Food Ingredients and Food Processing; Recommended Dietary Allowances、第１０版、ナショナル・アカデミー・プレス、ワシントンＤＣ、1989を参照）。
【００５５】
好ましい態様において、本発明の栄養調合物は、成人、子供、青少年および幼児などのヒトを含む哺乳動物のための液体腸溶栄養製品である。それゆえ、本発明の別の態様において、ストレスを経験している成人に与えるのに適した栄養調合物が提供される。本発明の調合物は、抗酸化剤および構造化グリセリド成分に加えて、マクロ栄養素、ビタミン類およびミネラルを成人の毎日の栄養要求量を提供すべくデザインした量にて含んでいる。
【００５６】
マクロ栄養素成分としては、可食性の脂質、炭水化物およびタンパク質が挙げられる。可食性の脂質の例は、ココヤシ油、ダイズ油、モノグリセリドおよびジグリセリドである。炭水化物の例は、グルコース、可食性の乳糖および水解コーンスターチである。典型的なタンパク質源は、ダイズタンパク質、電気透析したホエーまたは電気透析したスキムミルクまたはミルクホエー、またはこれらの加水分解物であるが、他のタンパク質源もまた利用でき用いることができる。これらマクロ栄養素は、一般に受け入れられている栄養化合物の形態で、エネルギーベース、すなわちカロリー当たりで母乳中に存在するのと等価な量で添加する。
【００５７】
本発明をいかなる意味においても限定することを意図するものではなく、一般的なガイドラインを提供することを意図するにすぎないが、本発明の液体栄養調合物は典型的に以下のカロリー分布を提供するであろう。タンパク質系は、典型的に全カロリーの約５％〜約２５％、さらに好ましくは全カロリーの約１０％〜約２０％を提供するであろう。脂質系は、構造化グリセリドも含めて、全カロリーの約５％〜約５０％、さらに好ましくは全カロリーの約２０％〜約４０％を提供するであろう。典型的に全カロリーの約１０〜４０％、さらに好ましくは１５〜２５％は構造化脂質により提供されるであろう。炭水化物系は、典型的に全カロリーの約２０％〜約９０％、さらに好ましくは全カロリーの約３０％〜約６０％を提供するであろう。
液体調合物および腸溶栄養調合物を調合する方法は当該技術分野でよく知られており、詳細は実施例に記載する。
【００５８】
腸溶調合物は滅菌することができ、ついでインスタント（ready-to-feed）（ＲＴＦ）ベースで利用するか、または濃縮液または濃縮粉末として貯蔵することができる。粉末は上記のようにして調製した腸溶調合物をスプレー乾燥することによって調製でき、該濃縮物を再水和することにより調合物を再構成することができる。成人および幼児の栄養調合物は当該技術分野でよく知られており、市販されている（たとえば、Ross Products Division, Abbott LaboratoriesからのSimilacR、EnsureR、JevityRおよびAlimentumR）。
液体の形状の栄養組成物のエネルギー密度は、典型的に約０.３〜２カロリー／ｍｌの範囲である。固形または粉末の形状のときは、栄養補助剤は約１.０〜７キロカロリー／ｇ以上を含んでいてよい。一般に、液体製品の浸透度は７００ｍＯｓｍ未満、さらに好ましくは６６０ｍＯｓｍ未満でなければならない。
【００５９】
構造化グリセリド成分を栄養組成物中に配合する際には、該成分はしばしば天然に存在するグリセリド（トリグリセリドを含む）（すなわち、非構造化グリセリド）を含む脂質と混合して配合されるであろう。非構造化グリセリドの存在は、本発明に対して有害な作用を及ぼさないであろう。ただし、構造化グリセリド成分がストレスを受けた免疫系に対して有利な効果を奏するに充分な量で存在することを条件とする。これら量は上記に記載した。そのような典型的な栄養製品では、構造化グリセリド成分は該製品内に含まれる全脂質の少なくとも２０ｗ／ｗ％、さらに好ましくは少なくとも５０ｗ／ｗ％、最も好ましくは約８０ｗ／ｗ％を構成するであろう。
【００６０】
典型的に本発明の栄養調合物は、抗酸化剤に加えて、個体がビタミン類やミネラルの毎日の最小必要量を摂取するのを助けるため、ビタミン類およびミネラルを含んでいる。上記抗酸化剤に加えて、本発明の栄養組成物に亜鉛、銅、および葉酸を補充するのも望ましい。これら物質はストレスを受けた免疫系にブースター（boost）をも付与し、それゆえ個体にさらなる利益をもたらすであろう。亜鉛を利用するなら、典型的な投与量は少なくとも１２.５ｍｇ、さらに好ましくは２５〜２００ｍｇ、最も好ましくは５０〜１５０ｍｇであろう。銅を利用するなら、投与量は典型的に少なくとも０.８ｍｇ、さらに好ましくは１.６〜５.０ｍｇ、最も好ましくは２〜４ｍｇである。葉酸を利用するなら、投与量は典型的に少なくとも１００μｇ、さらに好ましくは２００〜６００μｇ、最も好ましくは３００〜５００μｇである。これら投与量は、１日に少なくとも１回、さらに好ましくは１日に２回与えるべきである。亜鉛、銅または葉酸の配合は任意のものであり、免疫抑制に対する有利な効果を得るために必要なわけではない。同様に、医薬組成物もまた、これら同じ物質を補充することができる。
【００６１】
さらに好ましい態様において、本発明の免疫栄養剤は抗酸化剤系および構造化グリセリド成分に加えて炭水化物源を含み、その際、該炭水化物の少なくとも５重量％は消化できないオリゴ糖である。さらに一層好ましい態様において、本発明の栄養組成物はさらにタンパク質、タウリンおよびカルニチンを含む。
栄養調合物に加えて、他の好ましい栄養組成物は固形の形態にあるものである。そのような固形形態は、バー、クッキー、クラッカーなどを含む。そのような組成物はある種の消費者に好まれる。固形組成物は、その重量が軽いことから持ち運びが容易である。消費者の中には噛むことに伴う触感を好む者がおり、それゆえ、これら固形形態は本発明に付随する有利な効果を享受する個体の数を拡張している。
【００６２】
これら固形の栄養組成物を調製する初期の試みは、困難に見舞われた。上記に記載したように、本発明は、ある種の抗酸化剤と組み合わせた構造化脂質がストレスに付随する免疫系の抑制を低減するという知見である。本発明の組成物が実質的な量の構造化脂質を含む必要性のために、組成物の安定性、消費者に対する心地よさ、および免疫系の抑制を低減するうえでの有効性に関してマイナスの影響を及ぼすある種の複雑さに直面した。
【００６３】
初期の試みは、有効量の構造化脂質および抗酸化剤を含有するバーを調製すべくなされた。これら初期の試みはひどい失敗であった。バーのコアを調製して何分も経たないうちに脂質がコアから滲み出始めた。そのようなバーのコアは推測上、被験患者により全く望ましくないと思われたので処理しなかった。さらに、脂質の漏出のため、どれだけの量の構造化脂質を患者が実際に消費し、どれだけの量が失われたかを決定するのは不可能であった。漏出する脂質はまた、バーの物理的な統合性をも破壊しそうであった。この統合性の低下は、バーの成分の安定性に対してマイナスの影響を及ぼすであろうと思われる。成分は酸素に一層暴露されるので、酸化的分解のリスクは一層大きくなる。そのようなバーは許容し得ないほど短い貯蔵寿命（すなわち、所望の１２ヶ月の貯蔵寿命にはるか及ばない）を有する。
【００６４】
さらなる実験により、本発明者らは、もはやこのような漏出の問題を受けることのないバーを開発した。これら新規なバーは、少なくとも２４ヶ月の試験期間の後に漏出を示さなかった。この漏出の問題の解決手段は、バー（または他の固形組成物）のマトリックス中にある種のタンパク質を導入することであった。漏出の問題はまた、固形マトリックス中にある種の炭水化物を導入することによっても改善することができる。
【００６５】
従って、構造化脂質を漏出しない、構造化脂質を配合した固形栄養組成物を調製できることがわかった。この問題に対する解決手段は、組成物中にダイズタンパク質を配合することである。この有利な効果を奏するダイズタンパク質の量は、大きく変わり得る。しかしながら、約４〜約２０ｗ／ｗ％（固形栄養製品の全重量に基づいて）、さらに好ましくは約７〜約９ｗ／ｗ％のダイズタンパク質の配合は漏出の問題を最小にするであろう。Protein Technologies, Inc.からのダイズタンパク質を現在は利用できる。所望なら、他のタンパク質源をバーに配合することができる。
【００６６】
さらなる有利な効果は、乳化剤であるレシチンを組成物に配合することによって得られる。その利用する量は大きく変わり得るが、典型的に約０.４〜約２ｗ／ｗ％、さらに好ましくは約０.８〜約０.９ｗ／ｗ％（組成物の全重量に基づいて）であろう。さらなる利点は、ハチミツを１６〜約２６ｗ／ｗ％、さらに好ましくは約２０〜約２２ｗ／ｗ％の範囲で配合することにより得られる。当業者には容易に明らかであろうが、ハチミツおよびレシチンを組成物に配合すると、漏出の問題を改善するには一層少ない量のダイズタンパク質が必要となるであろう。上記で特定した量はすべて、バーの全重量に基づくものである。当業者であれば本明細書の教示に基づいてこれら量を容易に決定できるであろう。
ダイズタンパク質は当該技術分野でよく知られており、ウィルミントン、デラウエアのDuPont Chemical Companyなどの多くの入手源から入手できる。１９９８年６月３０日に出願した同時継続中の米国特許出願第０９／１０７,８８６号はダイズタンパク質に関する詳細な記載を含んでおり、この特許出願の内容を参照のため本明細書中に引用する。
【００６７】
液体栄養製品について記載したマクロ栄養素のいずれかまたはすべては、固形栄養製品において匹敵する濃度にて利用できる。必要とされる抗酸化剤以外にも、ビタミン類およびミネラルも、液体調合物について記載したものに匹敵する量でこれら組成物中に任意に配合してよい。これら固形組成物の相対的なカロリー分布は大きく変わり得る。タンパク質成分は、典型的に全カロリーの約１０％〜約５０％、さらに好ましくは約１２％〜約２５％を提供するであろう。炭水化物成分は、典型的に全カロリーの約３０％〜約９０％、さらに好ましくは約５０％〜約６０％を提供するであろう。脂質成分は、典型的に約５〜約５０％、さらに好ましくは約２５％〜約３５％を提供するであろう。
【００６８】
固形栄養組成物は、当該技術分野で知られているように冷却押し出し法（cold extrusion technology）を用いて製造できる。そのような組成物を調製するため、典型的にすべての粉末成分を一緒に乾燥ブレンドする。そのような構成分は、典型的にタンパク質、ビタミンの前混合物、ある種の炭水化物などを含む。ついで、脂質可溶性成分を一緒にブレンドし、上記粉末の前混合物と混合する。そのような脂質可溶性物質は、構造化脂質および混合物中に配合した他の脂質を含むであろう。最後に、液体成分をついで組成物中に混合してプラスチック様の組成物または生地を生成する。
上記プロセスは塑性の塊を与えることを意図するものであり、ついでこの塊をさらに物理的または化学的な変化を起こすことなく冷却成型または押し出しとして知られる手順により成型することができる。このプロセスにおいて、塑性の塊は比較的低圧にてダイを通されて所望の形状を付与され、ついで押し出し物を適当な位置で切断して所望の重量の製品を得る。
【００６９】
上記塊は、たとえば、小さな横断面のダイを通してリボンを形成し、これを規則的な間隔で作動するギロチン型のカッターの下で所定のスピードで動くベルト上で運ぶ。カッターは、この場合、一般にリボンは切断するがその下を横たわるベルトは切断しないように調整した鋭利な刃からなるが、ワイヤからなっていてもよい。いずれの場合も原理は同じである：切断プロセスは所定間隔で起こり、移動するリボンを等しい重量および大きさの切片に切断することを可能にする。一般に、このことは、切断のタイミングを合わせ、ベルトのスピードを適当なレベルに維持することによって達成されるが、コンピューターで制御した態様もまた存在し、一層の利便さを付与されるであろう。
【００７０】
別の態様としては、上記塊を大きな横断面のダイに通し、ついで振動するナイフまたはワイヤでダイレベルで切片に切断し、切片は移動するベルト上に落ち、運び去られる。上記塊はまたシートとしても押し出され、ついで、これをたとえばクッキー型のカッターなどのスタンプ型のカッターで適当な形状に切断する。最後に、上記塊はまた、偏心的なカムを備えた回転ダイ上のチャンバ中に通し、かくして形成した材料は円筒状ダイの回転のある時点でチャンバから押し出される。
【００７１】
成型後、生成した製品を移動ベルトまたは他の型の材料コンベヤーにより所定の場所に移され、そこでさらに加工されるかまたはパッケージされる。一般に、上記型の栄養バーは、チョコレート、複合チョコレートコーティングまたは他の型のコーティング物質でコーティングされる。そのような場合はすべて、コーティング材料は、感覚刺激反応に寄与する（organoleptic attributes）他の材料とともに室温では固体だがたとえば８８°Ｆを超える温度では液体である脂質からなる。かくしてバーへのコーティングは、バーを液体コーティングの流下カーテン中を通し、それと同時にプレートまたはローラー上を通してバーの下表面へのコーティングすることによって溶融の間に行われ、過剰のコーティングは空気ジェットにより吹き飛ばされる。最後に、コーティングしたバーをクーリングトンネルに通し、そこで冷気流が熱を除いてコーティングを固化させる。
【００７２】
本発明の医薬組成物または食事補助剤は、ストレスを受けた個体に抗酸化剤および構造化グリセリド成分を投与するために利用する。適当な医薬組成物は、生理学的に許容しうる滅菌した水性または非水性の溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、および摂取のための滅菌溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含む。適当な水性および非水性の担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、その適当な混合物、植物油（オリーブ油など）およびオレイン酸エチルなどの注射しうる有機エステルが挙げられる。適当な流動性は、たとえば、分散液の場合には必要な粒径を維持することにより、および界面活性剤を用いることにより維持できる。等張剤、たとえば、糖、塩化ナトリウムなどを配合することも望ましい。そのような不活性な希釈剤以外に、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤および芳香剤などのアジュバントを配合することができる。
懸濁液は、活性な化合物に加えて、懸濁化剤、たとえば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカントゴム、またはこれら物質の混合物を含んでいてよい。
【００７３】
錠剤やカプセル剤などの固形剤型は、当該技術分野でよく知られた技術により調製できる。たとえば、抗酸化剤および構造化グリセリド成分を、結合剤、たとえば、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチン、崩壊剤、たとえば、ジャガイモデンプンまたはアルギン酸、および滑沢剤、たとえば、ステアリン酸またはステアリン酸マグネシウムとともに、通常の錠剤基剤、たとえば、乳糖、ショ糖およびコーンスターチを用いて打錠することができる。カプセル剤は、これら賦形剤を抗酸化剤および構造化グリセリド成分とともにゼラチンカプセル中に封入することにより調製できる。医薬調合物中に配合する抗酸化剤および構造化グリセリド成分の量は、上記発明の要約のところで記載したガイドライン内に適合するものでなければならない。本明細書において、医薬組成物なる語と食事補助剤なる語とは相互に同義であると考えなければならない。
【００７４】
上記のように、本発明は、ストレスに関連する免疫系の抑制を防止または低減することに関する。本明細書においてストレスとは、個体のホメオスタシスを妨害する身体的、感情的、精神的、外的または内的な有害刺激をいう。ストレスの例としては、仕事や運動などの身体活動、死別や職の不安定性についての懸念などの感情的なもの、慢性の精神的または身体的な疾患、健康傷害などが挙げられる。個体に不安を引き起こし、合い応じて免疫系の抑制へと導きうるあらゆる外的または内的な刺激は、本発明の目的のためにストレスであると考えなければならない。
【００７５】
ストレスは、免疫系に対する有害な作用を伴う。ストレスの間にはリンパ球の応答性の明らかな低減が認められる。さらに、ストレスの間には感染の頻度もまた増大する。本発明の栄養組成物および医薬組成物は、ストレスを受けた個体の免疫系に対して有利な効果を有するであろう。これら組成物は、感染の頻度を低下させるとともにリンパ球の応答性の低下を防ぎまたは最小にするであろう。
【００７６】
本発明による栄養組成物または医薬組成物を治療学的に有効な量で消費すれば、ストレスにより誘発された免疫系の抑制または制御異常のレベルは低下する。当業者であれば、免疫栄養剤の有効量は個体の年齢および体重などのファクターに依存することを認識するであろう。典型的な７０ｋｇの成人男性では、治療学的に有効な１日当たりの投与量は、少なくとも２００ＩＵのビタミンＥ、５０μｇのセレン、２５０ｍｇのビタミンＣ、７.５ｍｇのβ−カロテンおよび１.０ｇの構造化グリセリドである。
【００７７】
本発明のさらなる側面は、動物に本発明の組成物を投与することにより動物において感染の頻度を低減させることに関する。感染とは、生体組織中でのウイルスや細菌などの微生物による侵入および増殖であり、臨床的に不顕性であるか、または競合する代謝、毒素、細胞内増殖または抗原抗体応答のために局所的な細胞障害という結果となるものをいう。下記実施例２において、本発明の組成物はヒトにおいて上気道疾患（ウイルス性および細菌性の両疾患）の頻度を低減するのに極めて有効であることを示してある。
【００７８】
本明細書において「処置」なる語は、所望でない発生（occurrence）を防止するか、またはその頻度を低減するかのいずれかをいう。たとえば、免疫抑制を処置するとは、この抑制の発生を防止するか、またはそのような抑制の量を低減することをいう。「患者」および「個体」なる語は相互に同義で用いられ、動物を意味する。本明細書において「動物」とは、温血哺乳動物をいい、イヌ、ヒト、サル、およびヒトニザル（apes）を含むがこれらに限られるものではない。本明細書において「約」とは、使用した文脈に依存して叙述した範囲または数値から妥当な量で変わる量をいう。本明細書で特定した数値または範囲は、「約」の語で修飾すべきと考えなければならない。
【００７９】
「投与量」および「給仕量（serving）」なる語は相互に同義で用いられ、１回のセッティングで患者により摂取され、有効量の抗酸化剤および構造化トリグリセリドを供すべくデザインされた、栄養組成物または医薬組成物の量をいう。当業者には容易に明らかであるように、液体の栄養粉末の１回の投与量または給仕量は、上記発明の要約のところで検討した量の抗酸化剤および構造化グリセリドを供給しなければならない。投与量または給仕量は、典型的な成人が一度の食事で消費しうる容量でなければならない。この量は、患者の年齢、体重、性別または医学的な状態に依存して大きく変わりうる。しかしながら、一般的なガイドラインとして、液体栄養製品の１回の給仕量または投与量は、１００〜６００ｍｌ、さらに好ましくは１２５〜５００ｍｌ、最も好ましくは１２５〜３００ｍｌの容量であると考えなければならない。固形組成物については、１回のセッティングで消費することのできる量は、典型的に一つのバー、クッキー、クラッカーなどである。そのような組成物の重量は、２７〜約１６５ｇ、さらに好ましくは約６０〜約１００ｇであってよい。
【００８０】
当業者に本発明の原理を知らしめるため、現在のところ好ましい本発明の態様を本明細書の一部を構成する添付の図面を参照しながら以下に記載する。
図面に示した試験の方法
本明細書の一部を構成する図面において、図１および図３は、対照製品または抗酸化剤製品を消費した兵士のリンパ球増殖を示す。血液を基準線および試験の終了時点で採取した（ヘパリンナトリウムバクテーナー（vacutainerR)(Becton Dickinson Co.、ラザフォード、ニュージャージー）中へ）。血液試料は、被験者が水以外は８時間絶食した後の日の同じ時間（０５００）に得た。Coulter JT Blood Analyzerを用いて全血球数のカウントを行って白血球数を決定した。全血培養液を３つずつ（５％ＣＯ2、９５％湿潤空気、３７℃）窒素とともに血液リンパ球の最適最大マイトジェン増殖応答にて７２時間インキュベートした（Kramerら、1990;Bocchieriら、1989により記載されるように）。
【００８１】
図１には細胞培養−完全ＲＰＭＩ１６４０でのマイトジェンにより誘発されたフィトヘムアグルチニン（８ｍｇ／ｍＬ、ＰＨＡ−Sigma Chemical Co.、セントルイス、ミズーリ）を、図３には細胞培養−完全ＰＭＩ１６４０でのコンカナバリンＡ（１０ｍｇ／ｍＬ ConA−Pharmacia、シルバースプリング、メリーランド）を示す。培養液を１ｍＣｉのＨ3−チミジンでパルスし、さらに１８時間培養した。細胞を回収し、標識チミジンの取り込みをベータ液体シンチレーションカウンター（Beckman LS 3801）で検出した。ついで、培養当たりのｄｐｍを全血のリンパ球数で除して細胞当たりのｄｐｍを得た。各個体の基準線での測定値を該試験の終了時点での測定値と比較した。
【００８２】
参考文献：
Bocchieri MH, Talle MA, Maltese LM, Ragucci IR, Hwang CC, Goldstein GAD. Whole blood culture for measuring mitogen induced T cell proliferation provides superior correlations with disease state and T cell phenotype in asymptomatic HIV-infected subjects. J Immunol Methods,1995;181:233-43Kramer TR, Praputpittaya K, Yuttabootr Y, Singkamani R,およびTrakultivakrn M. Relationship between plasma zinc and cellular immunity to candida albicans in young females of Northern Thailand. Ann NY Acad Sci, 587:300,1990
【００８３】
図２は、エネルギーおよびマクロ栄養素は同様の量を含むが、脂質の組成（処置は構造化脂質を含有していた）および微量栄養素（抗酸化剤系を含む）の濃度が異なる対照製品および試験製品を消費した兵士の上気道感染を示す。決定を軍医が診断した。
図４は、各血液サンプリングで測定した体重の変化を示す。兵士をブーツなしで検量デジタル電子バッテリースケール（精度０.１ｋｇ）を用いて測定した。
【００８４】
図５〜図７は、実施例３の対照製品または処置製品を消費した兵士のリンパ球数の変化を示す。血液を下記のようにヘパリンナトリウムvacutainerR（Becton Dickinson Co.、ラザフォード、ニュージャージー）中に４つの時点で採取した。静脈血試料をすべての被験者から同じ日の同じ時点（午前１１時〜午後１時の間）で得た。さらに、血液試料を各時点で正確に同じように処理した。全血球数のカウントおよび微分（differential）をAbbott Laboratories Cell DynR（ノースシカゴ、イリノイ）を用いて行った。
【００８５】
図５および図６は、通常のフローサイトメトリー法またはフローマイクロフルオロメトリー法により分析したＴリンパ球の部分集合の変化（基準線から滞在（visit）２、基準線から滞在３、および基準線から滞在４）を示す。簡単に説明すると、全血試料を採取し、赤血球溶解素（lysine）溶液で処理した。残留する細胞を洗浄して細胞破砕物を除去し、蛍光色素で標識したモノクローナル抗体（すなわち、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ４抗体）とともにインキュベートした。蛍光色素標識抗体が特定の細胞集団に結合したら、洗浄し、固定した。ついで、標識細胞および非標識細胞をフローサイトメーター中に注入し、個々にレーザーで照明した。リンパ球およびリンパ球の特定の亜集団のパーセント並びに全白血球カウントを用いることにより細胞数を計算した。この技術は、単一の細胞または細胞集団の複数の特性の正確かつ迅速な評価を可能とした。分析はFACScanおよびAttractorsソフトウエア（Becton Dickinson、サンホセ、カリフォルニア）で最小１０,０００細胞にて行った。
【００８６】
図７では、リンパ球をプロセシングし、ついでＰＭＡおよびイオノマイシンで４時間刺激した。細胞を浸透性にし（permeabolized）、ついでＴｈ１またはＴｈ２リンパ球により産生されたサイトカインに対して向けられた抗体に暴露した。これら特異的なＣＤ４＋リンパ球の数の変化を上記フローサイトメトリーにより決定した。２試料ｔ検定を用いて各群を比較した。モデルを適合することから得られた誤差を、該誤差が正規分布しているか否かを評価するためにシャピロ−ウィルク検定で調べた。１またはそれ以上の時点で誤差が正規分布でない（Ｐ＜０.０５）との証拠が存在するパラメーターについては、ノンパラメトリック法により分析した。これはデータを順位付け、ついで順位を２試料ｔ検定、本質的にはウィルコクスンの順位和検定で分析することからなっていた。平均の変化は、対照と処置との間でのＳＥＭ、*Ｐ＜０.０５および‡Ｐ＜０.１０差異で表してある。
【００８７】
以下の非限定的な実施例は本発明をさらに説明するであろう。
実施例１
抗酸化剤系の調製
本試験では２つの脂質製品を製造してストレスにより誘発された免疫抑制をヒトにおいて評価した。表１は、対照および試験調合物のバッチに使用した材料の一覧表を示す。
表１
材料の一覧表
抗酸化剤系−調合物
【表２】
0004555471.tif 000003
＊着色剤はβ−カロテンを含有する試験製品の色と一致させるために対照製品に加えた。このことは、被験者をブラインドするのに必要であった。
【００８８】
対照および試験調合物の原材料は商業的供給者からのものであり、食物グレードの品質のものであった。調合物の調製は脂質スラリーとタンパク質スラリーとを混合することにより行った。脂質ブレンドスラリーは、トウモロコシ油を攪拌しながら５４〜６８℃の範囲の温度に加熱することにより調製した。ついで、乳化剤（ダイズレシチン）を攪拌しながら加えて溶解させた。製品の製造は、Central Soya, Incorporated（フォートウェイン、インディアナ、米国）により「Centrol CA」の商品名で流通しているダイズレシチンを用いて行った。ついで、攪拌しながら３０％β−カロテンおよびビタミンＥ（酢酸Ｄ−α−トコフェロール）をスラリーに加えた。完了したスラリーを他のスラリーと混合するまで１２時間以内の期間、５４〜６８℃の範囲の温度にて穏やかに攪拌した。
【００８９】
約半分の水を６３〜７１℃の範囲の温度に攪拌しながら加熱し、ついでカゼインナトリウム（sodium caseinate）を加えることにより水中タンパク質（protein-in-water）（ＰＩＷ）スラリーを調製した。製品の製造は、MD Foods Ingredient Incorporated（２４８０、モリスアベニュー、ユニオン、ニュージャージー、米国）により流通しているカゼインナトリウムタンパク質を用いて行った。
完了したＰＩＷスラリーを最終的な混合まで４時間以内の期間、６０〜７１℃の範囲の温度にて穏やかに攪拌した。
油のブレンドスラリーをＰＩＷスラリーに加え、糖（ショ糖）を攪拌しながら加えた。ついで、クエン酸カリウムを攪拌しながらゆっくりと加え、得られたブレンドをプロセスブレンドのｐＨとする前に５分以内保持した。前プロセスブレンドスラリーを約６０〜７１℃の範囲の温度にて保持した。
【００９０】
１分以上だが２時間以内の期間の後、ブレンドしたスラリーを以下に記載するように、脱気、Ultra-High-Temperature (UHT)加熱処理および均質化に供した。
Ａ．ブレンドスラリーを６５〜７１℃の範囲の温度に加熱；
Ｂ．ブレンドを２５.４〜３８.１ｃｍＨｇまで脱気；
Ｃ．ブレンドスラリーを６３〜７７気圧にて乳化；ついで
Ｄ．混合物をプレート／コイルヒーターに通し、混合物を約１０秒の保持時間にて１２０〜１２２℃に加熱。
【００９１】
対照および試験製品を８オンス（２４１ｍｌ）の金属容器にパッケージングし、最終的に（terminally）滅菌した。表２は、対照および試験製品の１リットル当たりの目標値および各成分の許容範囲を示す。
表２
抗酸化剤系の明細
（１リットル当たりの値）
【表３】
0004555471.tif 000004
【００９２】
抗酸化剤系の評価
特殊部隊考査選別学校（Special Forces Assessment and Selection School）（ＳＦＡＳ）（フォートブラッグ、ノースカロライナ）に参画する兵士を募集して、試験製品がストレスにより誘発された免疫系の崩壊を低減または緩和する能力を評価した。ＳＦＡＳは身体的および精神的に過酷な要求をされるコースであり、期間は２１日間である。兵士は典型的に標準軍用サックに最低４５lbs（１０.５ｋｇ）の野外具を運びながら１５０マイル（２４０ｋｍ）を踏破する。ＳＦＡＳコースの間の重要なストレッサーは、心理的ストレス、カロリー不足、定期的な睡眠の制限および身体的な労力の神経を張り詰めた期間を含む。ＳＦＡＳからの５％の人員減はこのトレーニングコースにとって普通である。１５０人の志願兵にこの試験の目的およびそれに伴うリスクと利益について事情を説明した。３６人の志願兵の亜集団を参照群として募集した。この参照グループは、本試験に使用した種々の免疫アッセイを確認するために用いた。参照グループは試験グループへ無作為化することもなかったし、試験飲料または対照飲料を与えられることもなかった。
【００９３】
血液試料をすべての志願兵から採取し、上記で記載した皮膚試験をトレーニングの開始前に行った。被験者を喫煙の有無に基づいて分け、ついで２つの処置グループの一方へランダムに振り分けた。一方のグループには試験飲料を与え、もう一方のグループには抗酸化剤を含まないプラシーボ（対照）を与えた。対照および試験飲料は液体の形態で消費され、１日当たり約２００カロリー（１ｍｌ当たり０.４キロカロリー）を供した。これら飲料は８オンス（２４１ｍｌ）の缶で供され、被験者は１日に２つの缶を飲むことを要求された。
【００９４】
他に行った測定は、身長、体重、皮膚層の測定および近赤外測定を用いた体脂肪測定を含んでいた。これらの測定および採血はまた２０日目にも行った。血液試料採取の前日、採血前の夜午後９時以降は、兵士は単なる水以外は食物も飲料も摂らないことを要求された。
食物摂取は毎日測定し記録した。被験者は、MRE（Meals-Ready-to-Eat）とA-rations（温かい食事）との混合物プラス２缶の対照もしくは試験飲料を食事として与えられた。データは、被験者が食物および飲料の摂取を毎日記録した２４時間食事記録を用いて採取した。被験者がA-rationsを消費している間、食物の摂取を視覚評価技術を用いてモニターした。栄養の摂取は、食物品目の摂取成績（food item intake forms）および視覚評価食物記録から計算した。データの換算および栄養の計算は、栄養系のコンピューター化した分析を用いて完了した。
【００９５】
血液試料の採取は、基準線（０日目）および２０日目に４つの別個のvacutainer管で行った。試験のために採取した血液の全量は約６８ｍｌであった。管１（１３ｍｌＳＳＴ、赤いふた）は、エネルギー物質、ビタミンＣおよび一般的な健康状態の生化学的マーカーを含む基本的な栄養マーカーの測定のためのものであった。管２（７ｍｌヘパリン、紺青色のふた）は、セレン分析および白血球分析のためのものであった。１ｍｌを全血セレンの分析のために取り、５ｍｌの全血を取ってデキストリンの２％溶液と混合し、３０分間沈殿させた。白血球に富む上澄み液を除去し、洗浄した。残りの血液は、リンパ球の幼若化反応のための全血培養の調製に用いた。
【００９６】
管３（７ｍｌＥＤＴＡ、紫色のふた）は、コールターＪＴ血液分析機で全血球数をカウントするのに用いた。この分析機は、ヘモグロビン、ヘマトクリット、平均赤血球容積、白血球数、赤血球数、血小板数、リンパ球パーセント、単球パーセントおよび顆粒球パーセントを決定するのに用いた。血球数を決定した後、管を遠心し、血漿を除いた。血漿はビタミンＡおよびビタミンＥの含量を決定するのに用いた。管４（７ｍｌ、ヘパリン、紺青色のふた）は、フローサイトメトリーによるリンパ球亜集団および多形核化細胞の食作用を定量するのに用いた。被験者がインビボで免疫応答を起こす能力は、ＤＴＨ試験（Multitest-CMI, Connaught Laboratories, Inc.、スウィフトウォーター、ペンシルベニア）を行うことにより評価した。この試験は２０日目の終わりに与えた。試験キットは、グリセリンの負の対照および以下の微生物からの培養濾液の７つの抗原を含んでいた：Clostridium tetani（破傷風毒素）、Corynebacterium diphtheria（ジフテリア毒素）、Streptococcus Group C（連鎖球菌）、Mycobacterium tuberculosis（ツベルクリン）、Candida albicans（カンジダ抗原）、Trichonphyton mentogrophytes（白癬菌（trichonphyton）抗原）およびProteus mirabilis（プロテウス（proteus））。
【００９７】
尖叉試験（tine test）を、血液試料採取後の午前中に各被験者の前腕の腹側に適用した。４８時間後、８つの尖叉投与部位のそれぞれで生じた硬結の直径（前腕の長軸に対して平行および垂直方向）を測定することにより各抗原に対する応答を決定した。部位が負の対照に比べて直径が２ｍｍまたはそれ以上の硬結を示したときに、その部位は陽性であると記録した。
【００９８】
統計的分析
本試験で変化する一次応答は、インビトロでのリンパ球増殖応答であった。これは培地に入れて放射性チミジンでパルスしたリンパ球の放射能に基づいて決定した。データの統計分析には信頼係数が０.９５のワンテール試験（one tailed test）を用いた。基準線での各群の比較能（comparability）を評価し、一方向（one way）ＡＮＯＶＡモデルを適用し残りをシャピロ−ウィルク検定で調べることにより全ての連続レベルデータを調べて摂取の正規性を試験した。結果は、分析のｐ値が０.０５未満であったときに統計的に有意であると考えられた。
【００９９】
結果
リンパ球増殖の結果を図１に示す。ＳＦＡＳのストレスにより引き起こされた免疫系の崩壊からのリンパ球増殖から明らかなように、対照製品（抗酸化剤系を含まず、タンパク質、脂質および炭水化物）は免疫系を保護するうえで比較的有効でなかったことが極めて明らかである。対照的に、本発明による抗酸化剤系は崩壊を１５％（−２１％対−６％）低減した。（−２１％の値は免疫機能のより大きな低減を表している）この対照と試験免疫栄養剤との差異はｐ＜０.０５で有意であった。
【０１００】
全硬結（合計の平均、ｍｍ）を各被験者について得た。対照飲料を与えられた被験者は平均硬結が４.４ｍｍであり、ＳＥＭは０.８ｍｍであった。処置グループは平均硬結が４.４ｍｍであり、ＳＥＭは０.５ｍｍであった。参照グループは老齢の匹敵する軍隊の同僚（aged matched military cohort）であったが、本試験に用いた免疫アッセイを確認するために用いた。参照グループは被験者当たり全硬結平均が１３.１ｍｍであり、ＳＥＭは１.０ｍｍであった。参照グループは試験グループへ無作為化することもなかったし、試験飲料または対照飲料を与えられることもなかった。
【０１０１】
この情報から、リンパ球増殖に基づき、抗酸化剤の補充がストレスにより誘発された免疫抑制を弱めたと結論付けることができる。抗酸化剤の補充が遅延型皮膚過敏症によって決定されるような細胞媒体免疫機能にはほとんど影響を及ぼさなかったことを認めるのは興味深いことである。以下の実施例２は、開示した構造化グリセリド成分の摂取と組み合わせた抗酸化剤の補充が、リンパ球増殖および遅延型皮膚過敏症の両者によって測定されるようにストレスにより誘発された免疫抑制を弱めることを示す。
【０１０２】
実施例２
構造化グリセリド成分を含む免疫栄養剤
本試験では、フォートブラッグ、ノースカロライナでのＳＦＡＳに参加した兵士の栄養状態および免疫の変化を調べた。対照および試験製品を調合して、タンパク質、脂質、炭水化物、ビタミン類およびミネラルを含むインスタント製品を製造した。試験製品は、（１）脂質成分の一部として構造化グリセリド；（２）本発明による抗酸化剤系；および（３）消化できない炭水化物（すなわち、ＦＯＳ）を利用した。
本発明の液体栄養製品は、３つのスラリーを調製し、これらをブレンドし、加熱処理し、標準化し、パッケージングし、ついで滅菌することにより製造した。表５に示す材料の一覧表を用いて液体栄養製品４５４５ｋｇを製造する手順を以下に詳細に記載する。
【０１０３】
炭水化物／ミネラルスラリーを調製するため、まず約１８５４ｋｇの水を攪拌しながら約６６〜７１℃の範囲の温度に加熱した。ついで、以下に示すミネラルを高攪拌下で記載した順序にて添加した：痕跡量／超痕跡量のミネラル前混合物、クエン酸カリウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、ヨウ化カリウム、硫酸亜鉛、硫酸銅、セレン酸ナトリウムおよび３塩基性リン酸カルシウム。マルトデキストリンを高攪拌下でスラリーに添加し、温度を約６３℃に保持しながら溶解させた。製品の製造は、Cerestar U.S.A. Incorporated （以前はAmerican Maize）（ハモンド、インディアナ、米国）より「Lodex-15」の商品名で流通しているマルトデキストリンを用いて行った。ついで、残りの糖（ショ糖）および消化できないオリゴ糖を高攪拌下で添加した。製品の製造は、Golden Technologies Company（ゴールデン、コロラド、米国）から「Nutriflora-P fructooligosaccharide Powder (96%)」の商品名で流通しているオリゴ糖粉末を用いて行った。完了したスラリーを他のスラリーと混合するまで１２時間以内の期間、６０〜６６℃の範囲の温度にて高攪拌下に保持した。
【０１０４】
カノラ／ＭＣＴ構造化グリセリド、ダイズ油および高オレインベニバナ油を混合し、攪拌しながら３２〜４３℃の範囲の温度に加熱することにより、油中タンパク質（protein-in-fat）（ＰＩＦ）スラリーを調製した。ついで、乳化剤（ダイズレシチン）を攪拌下に添加し、溶解させた。製品の製造は、Central Soya, Incorporated（フォートウェイン、インディアナ、米国）により「Centrol CA」の商品名で流通しているダイズレシチンを用いて行った。ついで、攪拌しながらビタミンＤＥＫ前混合物、ビタミンＡ、ビタミンＥ（酢酸Ｄ−ａ−トコフェロール）、３０％β−カロテン、カラギーナンおよびカゼインナトリウムをスラリーに加えた。完了したＰＩＦスラリーを他のスラリーと混合するまで１２時間以内の期間、３２〜４３℃の範囲の温度にて穏やかに攪拌した。
【０１０５】
まずカゼインカルシウム（calcium caseinate）を約１１７２ｋｇの水に加え、ついで攪拌しながら６６〜７１℃の範囲の温度に加熱することにより、水中タンパク質（ＰＩＷ）スラリーを調製した。ついで、カゼインナトリウムおよびダイズタンパク質単離物を攪拌下でカゼインカルシウムスラリーに加えた。製品の製造は、New Zealand Milk Products, Incorporated（３６３７ウェストウィンドブールバール、サンタロサ、カリフォルニア、米国）によりそれぞれ「Alanate 380」および「Alanate 180」の商品名で流通しているカゼインカルシウムタンパク質およびカゼインナトリウムタンパク質、およびProtein Technologies International（チェッカーボードスクエア、１３Ｔ、セントルイス、ミズーリ、米国）により「Supro 1610」の商品名で流通しているダイズタンパク質単離物を用いて行った。
完了したＰＩＷスラリーを最終的な混合まで４時間以内の期間、６０〜６６℃の範囲の温度にて穏やかに攪拌した。
【０１０６】
ＰＩＷスラリーとＰＩＦスラリーとを攪拌しながらブレンドし、得られたブレンドスラリーを約５４〜６３℃の範囲の温度で保持した。少なくとも１分待った後、炭水化物／ミネラルスラリーを先行工程からのブレンドスラリーに攪拌しながら加え、得られたブレンドスラリーを約５４〜６３℃の範囲の温度で保持した。炭水化物／ミネラルスラリーを入れていた容器を薬理学的に許容しうる４.５４ｋｇの水ですすぎ、すすいだ水をブレンドスラリーに加えた。
【０１０７】
１分以上２時間以内の期間待った後、ブレンドスラリーを産業上知られた装置および技術を用いて脱気、Ultra-High-Temperature（UHT）加熱処理および均質化に供した。
製品を均質化および冷却した後、前以て定めた品質制御のための分析試験を行った。分析結果に基づき、適量の希釈水をバッチに攪拌しながら加えた。ビタミン溶液および香料溶液を別々に調製し、上記で処理したブレンドスラリーに加えた。
【０１０８】
ビタミン溶液の調製は、約３１ｋｇの水を約３２〜４３℃の範囲の温度に攪拌しながら加熱し、ついで以下の成分を列記した順序で攪拌しながら加えることにより行った：アスコルビン酸、４５％水酸化カリウム、タウリン、水溶性ビタミンの前混合物、塩化コリンおよびＬ−カルニチン。ついで、ビタミンスラリーをブレンドスラリーに攪拌下に加えた。
香料溶液の調製は、２.７７２ｇの人造バターおよび１.３８６ｇの人造ペカン香料を約３２ｋｇの水に攪拌しながら加えることにより行った。製品の製造は、Firmenich, Incorporated（ボックス５８８０、プリンストン、ニュージャージー、米国）により「Artificial Butter Flavor 596.333/T」および「Artificial Pecan Flavor 596.332/T」の商品名で流通している人造バターおよびペカン香料を用いて行った。ついで、香料溶液をブレンドスラリーに攪拌下に加えた。
【０１０９】
製品のｐＨは最適の製品安定性を達成するように調節した。ついで、完成した製品を適当な容器に入れ、最終的な滅菌に供した。
対照製品も同様のプロセスで製造したが、表３に示した材料の一覧表を用いた。
表３
対照のための材料の一覧表
（４５４５Ｋｇバッチ）
【表４】
0004555471.tif 000005
（１）着色剤はブラインドを助けるために加えた。
（２）バターペカン香料を加えた。
（３）カロリー密度は１.５カロリー／ｍｌ
【０１１０】
表４は対照製品の栄養分析を示す。
表４
栄養分析−対照製品
【表５】
0004555471.tif 000006
【０１１１】
表５は試験飲料の材料の一覧表を示す。
表５
免疫栄養剤のための材料の一覧表
４５４５Ｋｇバッチ
【表６】
0004555471.tif 000007
【０１１２】
表６は本発明による免疫栄養剤の栄養組成を示す。
表６
栄養分析−免疫栄養剤
【表７】
0004555471.tif 000008
（１）バターペカン香料を加えた。
（２）β−カロテンが色を提供したので着色剤は必要なかった。
【０１１３】
構造化グリセリド成分
本発明の重要な側面は、免疫栄養剤における構造化グリセリド成分の使用である。本実施例において、構造化グリセリドは、ナトリウムメトキシドとともにランダム化し、ついで１８０℃にて８％蒸気で脱臭した５０／５０重量％カノラ油／ＭＣＴ油であった。カノラ油／ＭＣＴ構造化グリセリドの５０／５０ブレンドは、Stepan Company（メイウッド、ニュージャージー）より提供された。試験製品に用いた構造化グリセリドの脂肪酸プロフィルを表７に示す。
【０１１４】
表７
構造化グリセリドの基本的な脂肪酸プロフィル
【表８】
0004555471.tif 000009
（１）遊離脂肪酸の含量は０.１０重量％未満
（２）過酸化物値は１.０ｍＥｇ／Ｋｇ未満
【０１１５】
等価炭素数またはＥＣＮは、トリグリセリド分子のアシル鎖中の炭素原子の合計である。たとえば、１６の炭素原子の３つのアシル残基を含有するトリパルミチン（トリパルミチン酸グリセロール）は４８のＥＣＮを有する。食物の脂質の特性の多くは、その成分の脂肪酸によって直接説明することができる。理論に拘泥されるものではないが、構造化脂質を利用した本発明の免疫栄養剤は、一部は、この独特のトリグリセリドおよびビタミンＥなどの油溶性抗酸化剤の利用可能性が高まったために、ストレスにより誘発された免疫抑制を低減することができるものと思われる。
【０１１６】
構造化グリセリドとその構成油との有意の差異は、トリグリセリドの分子種にある。トリグリセリドの分子種はＥＣＮにより表示することができる。構成油のエステル間交換反応または同時ランダム化は、構造化グリセリドに特有で構成油には存在しない新たなトリグリセリド種を生成する。表８は、ＭＣＴ油とカノラ油との５０／５０ブレンドを同時ランダム化することにより調製した構造化グリセリドの２つのバッチのトリグリセリドプロフィルを示す。表８はまた、ＭＣＴ油とカノラ油との物理的混合物のＥＣＮプロフィルをも示す。
【０１１７】
表８
ＭＣＴ油とカノラ油との５０／５０ブレンドおよび対応構造化グリセリドのトリグリセリドプロフィル
【表９】
0004555471.tif 000010
ａ−ＥＣＮは等価炭素数であり、トリグリセリドのグリセロール骨格上のアシル鎖中の炭素原子の合計である。
ｂ−炭素数が同じで不飽和度の異なるトリグリセリド種のペアは同時に溶出され、１つのピークに統合された。
【０１１８】
表８に報告した値は、物理的なブレンドおよび構造化脂質の実際の分析からのものである。構造化グリセリドの２つのバッチのＥＣＮプロフィルがほとんど同一であることは興味深い。ＥＣＮ数が３２〜４５のトリグリセリドは、構造化トリグリセリドに特有で物理的混合物には存在しない種を表している。
【０１１９】
本発明の免疫栄養剤および対照について、従前に記載された通常の技術および装置を用いて種々の成分を混合した。液体栄養製品を製造する当業者であれば、これら製品を調製するのに用いることのできる多くの変数およびプロセスを容易に認識するであろう。かくして、対照および免疫栄養剤を調製し、８オンス（２４１ｍｌ）の金属缶にパッケージングし、最終的に滅菌した。
本発明による免疫栄養剤は、製品１リットルあたり１０６０ｍｇのビタミンＣ、製品１リットル当たり８４７ＩＵのビタミンＥ、製品１リットル当たり３２.４ｍｇのβ−カロテンおよび製品１リットル当たり２１１μｇのセレンを提供した。主たるミネラルおよび他のすべての痕跡および超痕跡ミネラルは、Ross Products Division of Abbott Laboratories（コロンバス、オハイオ）によって製造され市販されているEnsure Plusなどの医薬栄養製品で典型的に認められるレベルであった。
【０１２０】
試験
米国軍隊ＳＦＡＳコースに参加した２００人の志願兵を、規則的に利用する携帯口糧（MREおよびA-rations）とともに本発明による試験免疫栄養剤を２缶すなわち約１６オンス（４５３ｇ）か（ｎ＝１００）またはプラセボ（対照）飲料を２缶（ｎ＝１００）消費するようにランダムに振り分けた。各飲料は約３６０キロカロリー／缶を供給した。
【０１２１】
対照製品および試験製品は同様の量のエネルギーおよびマクロ栄養素を含んでいたが、脂質組成および微量栄養素（抗酸化剤系）の濃度が異なっていた。実施例１に記載したのと同様の仕方で、細胞集団の変化およびリンパ球の活性化並びに顆粒球の食作用を測定するフローサイトメトリーにより、免疫機能を本試験で決定した。細胞表面の抗原を検出する高感度で高特異性の抗体を蛍光化合物で標識し、ついで単離細胞と混合した。これら抗体は細胞表面上の特異的な抗原に結合し、それゆえ特定の細胞（すなわち、Ｔ細胞またはＢ細胞）を同定し、または限られた程度にではあるが機能する（すなわち、活性化および食作用）。上気道感染の決定を、鼻、副鼻腔、喉、喉頭、気管または気管支を含むいずれかまたはすべての気道の困難の観察に基づき、軍医が診断した。追加の臨床測定には遅延型過敏症が含まれていた（兵士の亜集団に投与した）。臨床観察にはまた、熱的または非熱的な決定（febrile or non-febrile determinations）も含まれていた。図２は、１グループ当たりの上気道感染の割合に関する結果を示す（すなわち、対照対処置）。
【０１２２】
図２は、本発明による免疫栄養剤を消費した被験者が対照および非試験グループに比べて上気道感染の頻度が大きく低減したことを明らかにしている。この知見は統計的に有意であり、驚くべき結果である。
本試験におけるＳＦＡＳの間の被験者の人員減の割合は典型的なものであった。各グループの１００人の被験者のうち、対照の５７人がプログラムを終了し、試験グループの４９人がプログラムを完了し、合計で１０６人の被験者であった。両グループとも、１兵士当たり約６lbsの穏当な体重減を経験した。穏当な差異はまた、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞のレベルにおいても２つのグループの間でトレーニングの終了時に認められた。毎日の食物摂取の記録から、試験グループはすべてのＲＤＡ確立栄養を１００％消費したのに対し、対照グループはビタミンＡ、ビタミンＥおよび葉酸についてＲＤＡの１００％未満を消費した。
【０１２３】
試験免疫栄養剤を与えられたグループは、対照グループに比べて遅延型過敏症（ＤＴＨ）に対してアネルギーを呈した被験者が少なかった。ＤＴＨ試験（Multi-Test-CMI, Connaught Laboratories, Inc.、スウィフトウォーター、ペンシルベニア）は、グリセリンの負の対照と実施例１に示した７つの抗原を含んでいた。抗原の投与は、尖叉試験と同じ装置を用いて皮膚に対する安定した（firm）圧力により行った。生じた硬結をｍｍにて測定し、非応答性（アネルギー）は７つのすべての被験抗原について２.０ｍｍに等しいかまたはそれ以下である全応答として定義した。表９は、得られたデータを示す。
【０１２４】
表９
被験者当たりの全硬結（合計の平均、ｍｍにて）
【表１０】
0004555471.tif 000011
＊参照グループは老齢の匹敵する軍隊の同僚であり、本試験に用いた免疫アッセイを確認するために用いた。参照グループは試験グループへ無作為化することもなかったし、試験飲料または対照飲料を与えられることもなかった。
【０１２５】
図３および表９から、リンパ球増殖に基づき、抗酸化剤と構造化グリセリドとの補充はストレスにより誘発された免疫系の抑制を最小にしたことが明らかである。遅延型過敏症によって決定されるように、試験製品を与えられてアネルギーを示した被験者はほとんどおらず、処置グループでの応答（硬結の全合計）は大きかった。
試験調合物が免疫系の抑制を最小にする効果は、循環しているＴリンパ球、Ｂリンパ球およびナチュラルキラー細胞の数に主たる相違は認められなかったことから、リンパ球および免疫細胞の機能に対する影響の結果であったと思われる。
【０１２６】
本試験から、ＤＴＨ応答の合計は試験グループの方が大きいことが観察されたが、これはアネルギーおよび減少したＤＴＨ応答が感染リスクと相関関係を有するために非常に興味深い知見である。本試験の結果はまた、対照グループに比べて本発明の免疫栄養剤を消費した兵士で上気道感染を経験した者は一層少なかったことをも示した。一般に、本発明による免疫栄養剤を消費した兵士は、対照（同様の量のマクロ栄養およびエネルギーを含有する）を消費した兵士に比べて感染および免疫抑制の徴候が少なかった。
【０１２７】
実施例３
本発明による固形栄養組成物の製造を、３つの前ブレンドを調製し、これを混合し、成型／押し出しし、コーティングし、冷却し、ついでパッケージングすることにより行った。材料の一覧表（添付１０）を用い、約２３４キログラムのバー栄養製品を製造するための４工程プロセスを以下に詳細に記載する。
【０１２８】
工程１
ダブルアームミキサーにダイズタンパク質単離物（Protein Technologies International（セントルイス、ミズーリ６３１８８）により供給される１型：商品名Supro 661、および同供給者からの２型：商品名Supro 1610）、カゼインカルシウム、ビタミン／ミネラル前混合物、フルクトオリゴ糖、カラスムギのふすま、マルトデキストリン、コーンシロップ固形分、パリパリのコメ（crisp rice）およびダイズ多糖を室温（２４°±１０℃）にて加え、約２００ストローク攪拌することにより乾燥ブレンドを調製する。
【０１２９】
工程２
別のミキサー中でカノラ／ＭＣＴ構造化脂質およびダイズレシチンを混合し、室温（２４°±１０℃）で２分間ブレンドすることにより油前ブレンドを調製する。この油ブレンドを乾燥ブレンド（工程１に記載）に加え、約２００ストローク攪拌する。
【０１３０】
工程３
別のミキサー中に高フルクトースコーンシロップ、結晶フルクトース、グリセリン、ハチミツおよび人工グラハム香料を加え、５分間攪拌することにより液体の前ブレンドを調製する。この液体の前ブレンドを乾燥ブレンド（工程１に記載）に加え、約１００（均一な生地が得られるまで）攪拌する。
【０１３１】
工程４
上記生地をフォーマー（former）に移し、そこで「コア」バーが生成し、５７グラム±２グラムの重さにカッティングする。このコアを溶融した（４６〜４８℃）チョコレート菓子コーティングでコーティングし、コア＋コーティングが６５.０グラムの最小重量で７７.０グラムの最大重量を超えないようにする（目標６８.０グラム）。ついで、バーを０°〜１５℃の温度に冷却する。バーはベーキングのために上昇温度に曝されることはない。ついで、バーを低密度ポリエチレン／ホイルラップにパッケージングする。組成に関する一層詳細な情報は表１２に示してある。
【０１３２】
表１０
【表１１】
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【０１３３】
表１１
【表１２】
0004555471.tif 000013
【０１３４】
表１２
開発した（Developmental）明細（１００グラム当たり）
【表１３】
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【表１４】
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【０１３５】
実施例４
構造化グリセリド成分を含むバー食品の形態の免疫栄養剤
実施例１および２に記載したように、過酷な軍事訓練は身体的および心理的なストレスを伴い、このストレスが免疫の制御異常および感染リスクの増大を引き起こす。本実施例では、レンジャートレーニング（ＲＴ）、フォートベニング、ジョージアに参加した兵士の栄養状態および免疫変化を調べた。ＲＴは（Berntonらにより以前に記載されたように）ＳＦＡＳ（２１日間、実施例１および２で調べたように）に比べて一層長期間の（６２日間）トレーニングコースである。タンパク質、脂質、炭水化物、ビタミン類およびミネラルを含有する食品バーとして対照および試験製品を調合した。試験バーは実施例２の試験製品と栄養プロフィルが同様であり、（１）脂質成分の一部として構造化グリセリド；（２）本発明による抗酸化剤系；（３）消化できない炭水化物（すなわち、ＦＯＳ）、および（４）他のビタミン類およびミネラルを利用した。３つの試験バーは組成が同一であり、実施例３で説明したプロセスに従って製造した。対照バーは、ビタミン類およびミネラルの前混合物を添加しなかった点および脂質がトウモロコシ油であった点以外は試験バーと同一であった。
【０１３６】
試験
募集した米国軍隊レンジャートレーニングに参加した１２３人の兵士を、２つのバーまたは約１５０ｇ／日の本発明による試験免疫栄養バー（ｎ＝６３）かまたは２つのバーのプラシーボ（対照）バー（ｎ＝６０）のいずれかを消費するようにランダムに振り分けた。栄養状態（体重）および免疫機能（フローサイトメトリー、Ａ型肝炎ワクチンに対する応答、ＤＴＨ）をレンジャートレーニングを通じて評価した。ストレス並びに栄養製品の効果を、重要な免疫細胞およびリンパ球の基準線から各時点までの変化（滞在２−基準線；滞在３−基準線；滞在４−基準線；）として評価した。本発明者らはＡ型肝炎に対する以前の暴露またはワクチン接種について被験者をスクリーニングし、ついで残りの被験者をワクチン接種した。さらに、本発明者らは、ストレスの強いトレーニングの前後に一群の兵士にＤＴＨを行った。
【０１３７】
本試験の被験者が過酷な身体トレーニングの間に実際に体重を増した（図４）ことは極めて予期しないことであった。この体重増は、一部は試験バーおよび対照バーの超過エネルギーに帰することができた。以前の研究では、本発明者らは兵士が典型的に２０〜３０ポンドの体重を減らしたことを見出した。BentonらはＲＴの間に２０〜３０ポンドの同様の体重減を見出した。処置グループでは一層大きな体重増の傾向があった（Ｐ＝０.０６７）。それゆえ、試験バーに含まれるある種の栄養素が対照グループに比べて兵士が体重を維持するのを助けたものと思われる。
【０１３８】
過激なストレスの結果、各グループでＴ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞の数および細胞活性の有意の変化が生じた。試験バーを消費した被験者は重要な免疫細胞の数の減少が少ないという証拠があった。たとえば、最もストレスの強いレンジャートレーニングコースのときに兵士の単球の数の減少は少なかった（Ｐ＜０.０１３）。さらに、試験グループと対照グループとの比較から（図５）、試験バーはストレスにより誘発された重要なリンパ球の損失（Ｔリンパ球、*Ｐ＝０.０２３）を弱めたという証拠があった。この低減は、免疫系の応答において中枢の役割を果たすＣＤ４＋（ヘルパー）リンパ球の損失の結果であった（図６、*Ｐ＝０.００８）。また、試験製品を消費した被験者ではＴｈ１リンパ球（刺激によりインターフェロンγを産生するリンパ球）の低減がより少なかった（図７、*Ｐ＝０.０２９）。
【０１３９】
ＲＴの間にバーに対する被験者の好みおよびその受容を理解するために短期間の標本調査も行った。試験バーを摂取した被験者の７５％が試験バーがＲＴを完遂するのに役立ったと指摘したのに対し、対照の被験者では６７％しかバーが役立ったと指摘しなかった。ＤＴＨまたはワクチンへの応答では両グループの間に統計的な差異は認められなかったが、ワクチンおよびＤＴＨ応答はともに抑制された。それゆえ、これら知見は、ストレスにより誘発された免疫変化（兵士に感染リスクの増大をもたらす）を最小にするうえで本発明が役割を果たしていることを支持している。
【０１４０】
（産業上の利用可能性）
医学界は、感情的および身体的ストレスに伴う問題を克服するのに有用な方法および組成物を探求し続けている。ストレスは動物において免疫系を損い、それによって動物に疾患に一層罹りやすくすることがよく知られている。たとえば、５８６人の入院患者の研究では、反応性の患者では７％の敗血症および３％の死亡率であるのと比較して、ＤＴＨアネルギーでは敗血症率が４５％、死亡率が３８％であることがわかった。それゆえ、免疫系を保護し、および／または免疫系の崩壊を小さくする方法および製品は長年の必要性を達成するであろう。兵士、過度の運動を行う競技者および慢性的な疾患を患う者のようにストレスを受ける個体に対して適切な保護を提供することの必要性はこれまで充分に記載されてきている。本発明の新規な免疫栄養剤は、ストレスを受けた個体に生じる免疫抑制の量を低減するうえで極めて効果的であることが示された。本発明の方法は、丸剤、カプセル剤、食事補助剤、腸溶栄養剤などを投与することにより都合よく行うことができる。
【０１４１】
上記実施例は説明のためにのみ記載したものであって、特許請求の範囲に記載する本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の変更および別態様は、上記の記載から当業者には明らかであろう。従って、この記載は、説明のためにのみ、および本発明を実施する仕方を当業者に教示する目的で記載したものと解釈されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例１において収集したデータから得られるリンパ球増殖の図表。
【図２】  実施例IIにおいて収集したデータからの、対照飲料または処置製品を消費した兵士の上気道感染を示すグラフ。
【図３】  実施例IIに示す対照飲料または本発明による飲料を消費した兵士の研究における基準線から終了までのリンパ球の増殖の変化を示すグラフ。
【図４】  実施例４に記載するように、対照バー（bar）かまたは本発明によるバーのいずれかを消費したレンジャートレーニングに参加した兵士の体重変化を示すグラフ。
【図５】  実施例４に記載するように、対照バーかまたは本発明によるバーのいずれかを消費した兵士のＴリンパ球数の変化を示すグラフ。
【図６】  実施例４に記載するように、対照バーかまたは本発明によるバーのいずれかを消費した兵士のＴリンパ球（ＣＤ４+）数の変化を示すグラフ。
【図７】  実施例４に記載するように、対照バーかまたは本発明によるバーのいずれかを消費した兵士のＴＨ−１リンパ球数の変化を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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