(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．２重量％のＬ−アルギニンと０．０２重量％のエタノールアミンとを含む米調製物を含有してなる皮膚の水分保持能改善剤であって、米調製物が、米あるいは米粉砕物に加水し、α−アミラーゼ及びβ−アミラーゼからなる澱粉分解酵素、さらに酸性プロテアーゼ及び酸性カルボキシペプチダーゼからなる蛋白質分解酵素を加え反応させ、反応終了後にアスペルギルス・オリゼ及びサッカロミセス・セルビシエを添加し、糖化、発酵を行うことにより製造される、皮膚の水分保持能改善剤。
【請求項２】
請求項１記載の皮膚の水分保持能改善剤を含有してなる皮膚用化粧品。
【請求項３】
請求項１記載の皮膚の水分保持能改善剤を含有してなる皮膚外用医薬部外品。
【請求項４】
請求項１記載の皮膚の水分保持能改善剤を含有してなる皮膚外用医薬品。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、化粧品、医薬部外品、医薬品等幅広い分野で使用可能な皮膚健全化剤に関する。
背景技術
人間の皮膚や毛髪は、加齢（老化）のみならず、近年、外からは、紫外線、乾燥、冷暖房、空気汚染、その他刺激物質、微生物、内からは、食物、水、またこれらを通じての、農薬、添加物による汚染や、睡眠、疲れ、ストレス等、常に危険にさらされている。
これらの結果として、不健康な皮膚の人、あるいは、一見健常な皮膚でも、機能的、構造的に不健康な状態である人が多く、若く本来健康な皮膚であるべき年齢の人でも、化粧が欠かせないものになってきている。しかし、現在化粧品に使用されている一般保湿剤及び油分は、皮膚表面にとどまり、それぞれ水分カバー、オイルカバーの機能でしかなく、皮膚そのものには作用しないことが知られている。
一方、治療については、皮膚の乾燥に起因する症状、疾病に関してはワセリンなどの油分が古くから用いられているが、これも皮膚表面に乗っかっているだけであり、自然治癒を待つしかない。また、一般の薬剤の効果は、その症状のみに対処するだけであって皮膚そのものを健康にするわけではないので、現在のような環境では、使用中止後、同じ原因に直面すれば、再び発症することが多い。また、薬剤では、副作用を伴う危険性は常にある。
発明の開示
現在皮膚科領域においては人体の外界からのバリヤー機構は、表皮角質層であることが、世界的に定説となっている。そこで、我々は人間本来の健康な皮膚を取り戻すことが美しさの基本であり、かつ皮膚のあらゆる疾病から身体を守る基本対策であると考えた。それにはまず角質層を健全化し、表皮全体を健全化し、さらには真皮をも含む皮膚組織全体を健全化することを目的とする。
前記の目的を達成するため、請求の範囲１の発明は、次式の一般式（１）
0004522580.tif 000002
（式中、Ｒ１は、水酸基、置換基を有してもよい低級アルコキシ基、ホスホリルオキシ基、アリール基、アミノ基、スルホン酸基、ホスファチジルオキシ基、水酸基若しくはアミノ基で置換された低級アルキル基、又は、グアニジノ基で置換された低級アルキル基、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、各々独立して、水素原子、水酸基で置換されていてもよい低級アルキル基、又は、水酸基で置換されていてもよいアリール基、カルボキシル基、又は、Ｒ４とＲ５が一緒になって隣接する炭素原子と共にカルボニル基を形成する基、
Ｒ６、Ｒ７は、各々独立して、水素原子、水酸基で置換されていてもよい低級アルキル基、低級アルキルカルボニル基、アリール基、アラルキル基、又は、Ｒ６はＲ２と一緒になって隣接する原子と共に５員環を形成する置換基を有してもよいアルキレン基を示す。式中の窒素原子は低級アルキル基で四級化されていてもよい。）
で表わされる化合物の１種又は２種以上を含有してなる皮膚健全化剤を提供する。
本発明における低級アルキル基とは、炭素数１〜１０、好ましくは、１〜５の直鎖又は分枝のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基などがある。低級アルコキシ基としては、前記した低級アルキル基から誘導されるものであり、例えば、メトキシ基、エトキシ基などである。アリール基としては、炭素数６〜１８、好ましくは６〜１０のものであり、例えば、フェニル基、α−ナフチル基などである。アラルキル基としては、前記した低級アルキル基に前記したアリール基が置換したものであり、例えば、ベンジル基、フェニチル基などである。
また、これらの基は置換基で置換されていてもよいし、好ましい置換基としては、水酸基、アミノ基、カルボキシル基などが挙げられる。
請求の範囲２の発明は、一般式（１）で表わされる化合物がＬ−アルギニンである皮膚健全化剤を提供する。
請求の範囲３の発明は、一般式（１）で表わされる化合物がエタノールアミンである皮膚健全化剤を提供する。
請求の範囲４の発明は、一般式（１）で表わされる化合物が２−メトキシエチルアミン、Ｏ−ホスホリルエタノールアミン、２−エチルアミノエタノール、ジエタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、コリン、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール、ノルアドレナリン、フェネチルアミン、エチレンジアミン、タウリン、ホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド、２−（メチルアミノ）エタノール、２−アニリノエタノール、２−（ベンジルアミノ）エタノール、３−アミノ−１−プロパノール、２−アミノ−１−ブタノール、プトレッシン、ＤＬ−ピログルタミン酸、及びトリエタノールアミンからなる群から選ばれる化合物である皮膚健全化剤を提供する。
発明を実施するための最良の形態
試験例１
ダメージを受けた線維芽細胞のコラーゲン産生能回復試験を行った。
線維芽細胞は皮膚表皮の内側にある真皮を構成する細胞である。線維芽細胞から産生されるコラーゲンは真皮の重量の約７０％以上を占め、皮膚にハリや弾力性、柔軟性をもたらす。また傷を受けた際等においては皮膚の再生機能の役割を果たす。加齢皮膚においてはコラーゲンが著明に減少しており、このため、皮膚のハリ、弾力性が失われ、創傷治癒は遅れることが知られている。また、加齢皮膚ではなくとも、日常的に紫外線や放射線、活性酸素の発生といった様々な原因によりコラーゲン産生能が低下しているのが現状である。
試料：
実施例１
Ｌ−アルギニン（ナカライテスク株式会社製）の１％水溶液
実施例２
エタノールアミン（ナカライテスク株式会社製）の１％水溶液
実施例３
米１ｋｇを粉砕機により粉砕した後、２５０ｇの水を散水しながらよく混合し、３０分間放置した。その後この米を６０分間蒸煮し、これに水２０００ｍＬを添加した。さらにα−アミラーゼ、β−アミラーゼを各７．５ｇずつ添加した後、５５℃で１０時間放置した。その後、徐々に温度を上げて行き５分間煮沸した後、５０℃まで冷却し、クエン酸３０ｇと酸性プロテアーゼ８ｇ及び酸性カルボキシペプチダーゼ８ｇを加え２４時間反応させた。反応終了後２０℃まで冷却し、麹米（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）２００ｇ及び予め培養しておいたＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｃｉａｅ培養液を加え、２０〜２５℃で２０日間発酵を行った。
発酵終了後圧搾ろ過し、ろ過液２７００ｍＬを得た。次いで活性炭５００ｍＬをカラムにつめ、ろ過液を通液した。そしてこの流出液を回収し、１９３４ｍｇ／ＬのＬ−アルギニンと１６２ｍｇ／Ｌのエタノールアミンを含有する生成物２７００ｍＬを得た。（Ｌ−アルギニンの濃度は約０．２％、エタノールアミンの濃度は約０．０２％である。）
実施例１と実施例２を混合したもの
実施例３に実施例１と実施例２を混合したもの
試験方法：
試験には、正常ヒト皮膚線維芽細胞（理化学研究所・細胞開発銀行ＮＢＩＲＧＢ）継代数６〜８の細胞を用いた。
細胞のコラーゲン産生能を低下させるため、培養液中に最終濃ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ  ５０μＭ、ｘａｎｔｈｉｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ３４．５ｍＵ／ｄｉｓｈになるように添加して、活性酸素を発生させた。
定常期のコンフルエントな状態のコラーゲン産生能の測定は、Ｗｅｂｓｔｅｒらの方法に従い、生成されたコラーゲンへの３Ｈｐｒｏｌｉｎｅの取り込みを指標として行った。なお試料は、最終濃度３．３％（１％水溶液は、１％を１００％として）になるよう細胞に共存させて５％ＣＯ２、３７℃で２４時間培養した後、細胞内のコラーゲンに取り込まれた３Ｈ活性を測定した。
参考：コラーゲン産生能測定の原理
プロリンは、コラーゲンの構成アミノ酸の主要成分であることから、３Ｈ−プロリン含有培地で線維芽細胞を培養し、細胞内のコラーゲンに取り込まれた３Ｈ活性を測定する方法である。単位ｄ．ｐ．ｍ．は、１分間あたり何ダルトンの放射能を放出したかを表す。
試験結果：
コラーゲン産生能回復試験の結果は第１図のとおりであり、Ｌ−アルギニン及びエタノールアミンは活性酸素でダメージを受けた線維芽細胞のコラーゲン産生能を顕著に改善していることが判る。実施例３の生成物の中にＬ−アルギニンとエタノールアミンが含有されているが、その量が少ないので実施例１とほぼ同等であった。実施例３の生成物にさらにＬ−アルギニン１％とエタノールアミン１％を添加するとほぼ完全に回復した。
即ち、Ｌ−アルギニン又はエタノールアミン単独でも顕著な回復が見られるが、Ｌ−アルギニン及びエタノールアミンの両物質が存在し、その量が多くなれば、ダメージを受けた線維細胞のコラーゲン産生能をもとの正常なレベルまでほぼ完全に回復させることができる。
試験例２
保湿持続性試験を行なった。
保湿とは塗布１５分後の皮膚水分量（皮膚電気伝導度）のピークであり、保湿持続性とは塗布３０分から１２０分までの皮膚水分量（皮膚電気伝導度）が示す曲線の積分値である。
試料：
実施例４（Ｌ−アルギニン１％単純剤型）
Ｌ−アルギニン（ナカライテスク株式会社製）                １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例５（エタノールアミン１％単純剤型）
エタノールアミン（ナカライテスク株式会社製）              １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例６（Ｌ−アルギニン０．２％＋エタノールアミン０．０２％＋
単純剤型）
実施例３                                                ９０．００ｍＬ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例１（単純剤型）
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例２（ヒアルロン酸＋単純剤型）
ヒアルロン酸ナトリウム（２）                              １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
パネラー：健常人  ５名
試験方法：パネラーの前腕内側部位（４×４ｃｍ２）に各試料を塗布し、塗布１５分後、３０分後、６０分後、９０分後、１２０分後の表皮角質水分含量を測定した。
角質には、水分のほかに、塩類、アミノ酸をはじめとする電解質が含まれている。このため純水内を電流は流れないが、皮膚においては角質に含まれる電解質のため、水分があればその量に応じて電流が流れる。実際には、インピーダンスを構成する抵抗の逆数である電気伝導度を測定する。
測定方法：
（１）  被験部位を石鹸で洗浄する。
（２）  温度２０℃、湿度５０％の恒温恒湿室で被験部位を露出し、測定６０分前から安静にし肌の状態を一定にならす。
（３）  被験部位の角質水分含有量を測定し、塗布前の値とする。
（４）  被験部位に試料を０．０３ｍＬずつ均一に４回塗布した後、ガーゼで軽く拭き取る。
（５）  その後、１５、３０、６０、９０、１２０分後に被験部位及び、コントロールとして、無塗布部位の角質水分含有量を測定する。
各時間ごとの角質水分含有量から塗布前の値、無塗布部位の値を引いた数値を皮膚水分量とする。
試験装置：
ＳＫＩＣＯＮ−２００〔ＩＢＳ株式会社製の皮表角質水分量測定装置（３．５ＭＨｚ高周波伝導度測定装置）〕
試験結果：
保湿持続性試験の結果は第２図及び第３図のとおりである。
実施例４、実施例５、実施例６は、塗布１５分後にもピークが上昇し、保湿効果が顕著であるが、３０分以降も２時間にわたり保湿が持続する。保湿持続性はＬ−アルギニン単独、エタノールアミン単独でも認められるが、両物質が存在すると、単独のときよりも低い濃度でも保湿持続性が高まる。
他方、比較例１及び比較例２の場合には、１５分後にピークが認められるが、３０分後にはもとに戻り、保湿持続性は全くみられない。
試験例３
皮膚の健康状態を表す水分保持能試験を行った。
試料：
実施例４（Ｌ−アルギニン＋単純剤型）
実施例５（エタノールアミン＋単純剤型）
実施例６（Ｌ−アルギニン＋エタノールアミン＋単純剤型）
実施例７（Ｌ−アルギニン＋エタノールアミン＋ボディーソープ
型）
実施例３                                                ２０．００ｍＬ
ラウリン酸                                                ２．５０ｇ
ミスチリン酸                                              ７．５０ｇ
パルミチン酸                                              ２．５０ｇ
オレイン酸                                                ２．５０ｇ
ラウロイルジエタノールアミド                              ５．００ｇ
グリセリン                                              ２０．００ｇ
パラベン                                                  ０．２０ｇ
カセイカリ                                                ３．６０ｇ
エデト酸塩                                                ０．２０ｇ
香料                                                      適量
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例１（単純剤型）
比較例３
ラウリン酸                                                ２．５０ｇ
ミスチリン酸                                              ７．５０ｇ
パルミチン酸                                              ２．５０ｇ
オレイン酸                                                ２．５０ｇ
ラウロイルジエタノールアミド                              ５．００ｇ
グリセリン                                              ２０．００ｇ
パラベン                                                  ０．２０ｇ
カセイカリ                                                ３．６０ｇ
エデト酸塩                                                ０．２０ｇ
香料                                                      適量
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
被験者：健常人  ４名
測定方法：
（１）  被験部位を石鹸で洗浄する。
（２）  温度２０℃、湿度５０％の恒温恒湿室で被験部位を露出し、測定６０分前から安静にし肌の状態を一定にならす。
（３）  被験部位の角質水分含有量を測定する。
（４）  被験部位に蒸留水を０．０３ｍＬのせ、１０秒後にガーゼで拭き取り、直後、３０、６０、９０、１２０秒後に、被験部位の角質水分含有量を測定する。
（５）  試験部位に試料を０．０３ｍＬずつ３回塗布し、１５分間放置する。
（６）  被験部位を充分洗浄する。
（７）  １２０分後に（４）と同様の操作を行い１２０秒後の角質水分含有量を測定する。
水分保持能の求め方は次のとおりである。
水分保持能（％）＝〔水負荷３０〜１２０秒後の角質水分含有量／
水負荷直後の角質水分含有量〕×１００
なお、水分保持能（比率）は、洗浄前の水分保持能（％）を１とし、その比率で表した。
試験装置：試験例２と同じ
試験結果：
水分保持能試験の結果は第４図及び第５図のとおりである。
比較例１は皮膚の健康状態を表す水分保持能の増大は全く認められなかったが、実施例４、実施例５、実施例６の塗布２時間後の水分保持能は、塗布前の水分保持能よりも顕著に上昇した。塗布前の水分保持能を１とすると、実施例４及び実施例５では２倍近くになるが、実施例６では３倍近くまで上昇する。
比較例３で洗浄した場合、水分保持能は洗浄前よりも低下するが、実施例７で洗浄すると洗浄前よりも水分保持能が増大する。
試験例４
かさかさ肌を対象とした保湿持続性試験を行った。
試料：
実施例４（Ｌ−アルギニン＋単純剤型）
実施例５（エタノールアミン＋単純剤型）
実施例６（Ｌ−アルギニン＋エタノールアミン＋単純剤型）
比較例１
比較例２
パネラー：かさかさ肌の人  ６名
試験方法：
パネラーの前腕内側部位（４×４ｃｍ２）に各試料を塗布し、塗布１５分後、３０分後、６０分後、１２０分後の表皮角質水分含量を測定した。
測定方法：試験例２の測定方法と同じ。
皮膚水分量の求め方：試験例２と同じ。
試験装置：試験例２と同じ。
試験結果：
第６図及び第７図に示すとおり、実施例４、実施例５、実施例６は塗布１５分後にもピークが上昇し保湿効果が顕著であるが、３０分以降も２時間にわたって保湿が持続する。この保湿持続性は実施例４及び実施例５においても認められるが、Ｌ−アルギニンとエタノールアミンを含有している実施例６は保湿持続性が一層高い。
比較例２は１５分後にピークが認められ、保湿効果はあるものの、３０分後には元に戻り、かさかさ肌に対する保湿持続性は全くみられない。
試験例５
傷んだ状態の皮膚（外的内的刺激を受けやすい皮膚）に対する効果を見るために、人工的に荒れ肌を作製し、回復試験を行った。
試料：
実施例６（Ｌ−アルギニン＋エタノールアミン＋単純剤型）
実施例８（Ｌ−アルギニン＋エタノールアミン＋クリーム剤型）
実施例３                                                ４０．００ｍＬ
１，３−ブチレングリコール                                ６．００ｇ
濃グリセリン                                              ６．００ｇ
メチルポリシロキサン                                      ６．００ｇ
ステアリン酸                                              ３．００ｇ
セタノール                                                ３．００ｇ
２−エチルヘキサン酸セチル                                ６．００ｇ
スクワラン                                                ６．００ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                      ３．００ｇ
天然ビタミンＥ                                            ０．３０ｇ
カゼインナトリウム                                        １．５０ｇ
エデト酸二ナトリウム                                      ０．０３ｇ
パラベン                                                  ０．３０ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例１
比較例２
比較例４（クリーム剤型）
１，３−ブチレングリコール                                ６．００ｇ
濃グリセリン                                              ６．００ｇ
メチルポリシロキサン                                      ６．００ｇ
ステアリン酸                                              ３．００ｇ
セタノール                                                ３．００ｇ
２−エチルヘキサン酸セチル                                ６．００ｇ
スクワラン                                                ６．００ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                      ３．００ｇ
天然ビタミンＥ                                            ０．３０ｇ
カゼインナトリウム                                        １．５０ｇ
エデト酸二ナトリウム                                      ０．０３ｇ
パラベン                                                  ０．３０ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
パネラー：健常人  ４名
試験方法：健常部位に５％ＳＤＳを３０分皮膚処理し、荒れ肌を作成した後、各試料を１日２回塗布し、塗布前、塗布１日後〜塗布２週間後までの即時水分保持能を試験例３と同様の方法で測定した。
荒れ肌作製方法：被験部位にガラス筒を置き、テープで固定する。次に、ガラス筒に５％ＳＤＳ（ソディウムラウリルサルフェート）を１０ｍＬ注ぎ、時々かき混ぜながら３０分間荒れ肌処理を行う。最後に、ＳＤＳを吸い取り、ガラス筒を外す。
試験装置：試験例２と同じ。
試験結果：
荒れ肌回復試験の結果（第８図）、単純剤型や、一般的な保湿剤であるヒアルロン酸、及びＬ−アルギニン及びエタノールアミンを含有しない一般的なクリーム剤型では、皮膚の自然回復しか見られず、荒れ肌の改善効果は認められなかった。一方、実施例６及び実施例８は塗布開始から３日後、５日後、７日後でコントロール群よりも有意に水分保持能が高まり、また、５日以降は、未処理部（健常部）よりも水分保持能が高くなった。
このように、実施例６及び実施例８は傷んだ皮膚を速やかに回復させ、さらに未処理部よりもより健全な皮膚に改善することが判明した。
本発明は傷んだ皮膚を短時間で速やかに回復させ、さらに、もとよりも健全な皮膚の状態にし、個人のもっている最も健全な肌に改善する効果を有することが証明された。このことから、荒れ肌そのものに作用し、健全化させ、荒れ肌に起因する皮膚疾患が予防できることおよび、荒れ肌治療効果を持つことが証明された。
試験例６
皮膚健全化による皮膚疾患治療効果を見るため、乾燥性湿疹、乾皮症、顔面乾燥性湿疹患者を対象として臨床試験を行い、その効果をかゆみ、硬化、角化、鱗屑、亀裂、紅斑、乾燥、紋理の重症度スコア、各疾患に対する全般改善度（有用性）で評価した。
試料：
実施例９（Ｌ−アルギニン＋乳液剤型）
Ｌ−アルギニン（ナカライテスク株式会社製）                ０．１０ｇ
１，３−ブチレングリコール                              １０．００ｇ
濃グリセリン                                              １．００ｇ
ステアリン酸                                              ０．５０ｇ
ミリステン酸                                              ０．５０ｇ
サラシミツロウ                                            ０．５０ｇ
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリン                        ４．８０ｇ
ミリスチン酸オクチルドデシル                              ２．００ｇ
スクワラン                                                １．００ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                      ０．６０ｇ
キサンタンガム                                            ０．１０ｇ
天然ビタミンＥ                                            ０．１０ｇ
カゼインナトリウム                                        ０．３０ｇ
クエン酸                                                  適量
エデト酸二ナトリウム                                      ０．０２ｇ
パラベン                                                  ０．２０ｇ
軟水を加えて全量を１００．００ｇとする。
パネラー：乾燥性湿疹患者      ３名
乾皮症患者          ２名
顔面乾燥性湿疹患者  ２名
被験部位：
評価に適する疾状を有する部位で、左右もしくは上下で比較できる部位。（無塗布との比較）
外用方法：１日２回（朝・夕）単純塗布
外用期間：３週間
評価項目：
評価項目は、
▲１▼  かゆみ
▲２▼  硬化・角化
▲３▼  鱗屑
▲４▼  亀裂
▲５▼  紅斑
▲６▼  乾燥
▲７▼  紋理
とした。
評価方法：
評価項目について、視診により、以下の４段階の重症度スコアで評価した。
３  症状が高度の状態
２  症状が中等度の状態
１  症状が軽度の状態
０  症状がないかあるいは消失
また、全般改善度（有用性）として
極めて有用
有用
やや有用
有用なし
の４段階で評価した。
試験結果：
全般改善度（有用性）は第９図のとおりである。実施例９を乾燥性湿疹、乾皮症、顔面乾燥性湿疹患者に使用したところ、全般改善度は１００％を示し、高い有用性が得られ、これらの疾病に極めて有用であると認められた。
第１０図はかゆみ、硬化、角化重症度スコアの推移を示し、第１１図は鱗屑、亀裂の重症度スコアの推移を示し、第１２図は紅斑、乾燥、紋理の重症度スコアの推移を示す。効果の発現はいずれも速やかで、全ての症状とも１週間使用後に大幅に軽減し、その後も順調に改善効果が見られ、３週間後にはほとんどの症状が軽減、消失した。なお、使用中副作用は全く認められず、使用中止後は再発する例もなく、完全に治癒された。
このように、本発明は、皮膚健全化を通じて、かゆみ、硬化、角化、鱗屑、亀裂、紅斑、乾燥、紋理等にみられる皮膚疾患の症状を改善することができる。
試験例７
皮膚健全化による皮膚疾患治療効果を見るため、皮脂欠乏症、乾皮症、顔面乾燥性湿疹、進行性手掌角皮症患者を対象として臨床試験を行い、その効果をかゆみ、硬化、角化、鱗屑、亀裂、紅斑、乾燥、紋理の重症度スコア、及び各疾患に対する全般改善度（有用性）で評価した。
試料：
実施例１０（Ｌ−アルギニン＋エタノールアミン＋乳液剤型）
実施例３                                                ３５．００ｍＬ
１，３−ブチレングリコール                              １０．００ｇ
濃グリセリン                                              １．００ｇ
ステアリン酸                                              ０．５０ｇ
ミリスチン酸                                              ０．５０ｇ
サラシミツロウ                                            ０．５０ｇ
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリン                        ４．８０ｇ
ミリスチン酸オクチルドデシル                              ２．００ｇ
スクワラン                                                １．００ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                      ０．６０ｇ
キサンタンガム                                            ０．１０ｇ
天然ビタミンＥ                                            ０．１０ｇ
カゼインナトリウム                                        ０．３０ｇ
クエン酸                                                  適量
エデト酸二ナトリウム                                      ０．０２ｇ
パラベン                                                  ０．２０ｇ
軟水を加えて全量を１００．００ｇとする。
パネラー：皮脂欠乏症患者          ６名
乾皮症患者              ４名
顔面乾燥性湿疹患者      ４名
進行性手掌角皮症患者    ５名
被験部位：
評価に適する症状を有する部位で、左右もしくは上下で比較できる部位。（無塗布との比較）
外用方法：１日１回（朝・夕）単純塗布
外用期間：３週間
評価項目：
評価項目は、
▲１▼  かゆみ
▲２▼  硬化・角化
▲３▼  鱗屑
▲４▼  亀裂
▲５▼  紅斑
▲６▼  乾燥
▲７▼  紋理
とした。
評価方法：
評価項目について、視診により、以下の４段階の重症度スコアで評価した。
３  症状が高度の状態
２  症状が中等度の状態
１  症状が軽度の状態
０  症状がないかあるいは消失
また、全般改善度（有用性）として
極めて有用
有用
やや有用
有用なし
の４段階で評価した。
試験結果：
全般改善度（有用性）は第１３図に示すとおりである。
実施例１０を皮脂欠乏症、乾皮症、顔面乾燥性湿疹、進行性手掌角皮症患者に使用したところ、全般改善度は９４．７４％を示し、高い有用性が得られ、これらの疾病に極めて有用であると認められた。
第１４図はかゆみ、硬化、角化重症度スコアの推移を示し、第１５図は鱗屑、亀裂の重症度スコアの推移を示し、第１６図は紅斑、乾燥、紋理の重症度スコアの推移を示す。効果の発現はいずれも速やかで、全ての症状とも１週間使用後に大幅に軽減し、その後も順調に改善効果が見られ、３週間後にはほとんどの症状が軽減、消失した。なお、使用中副作用は全く認められず、使用中止後は再発する例もなく、完全に治癒された。
このように、本発明は、皮膚健全化を通じて、かゆみ、硬化、角化、鱗屑、亀裂、紅斑、乾燥、紋理等にみられる皮膚疾患の症状を改善することができる。
試験例８
炎症、光炎症に対する予防治療効果を見るために、モルモットを用い、起炎の一要因である紫外線を照射し、表皮組織、真皮組織の炎症性変化の程度を組織学的に検討した。
試料：
実施例６（Ｌ−アルギニン＋エタノールアミン＋単純剤型）
比較例１（単純剤型）
実験動物：モルモット  ５匹
被験部位：
除毛したモルモット背部（単純剤型との比較）
試験方法：
紫外線照射３日前に、実験動物の背部を、毛刈り、除毛クリームにて、剃毛する。
被験部位に紫外線を照射し、照射直後から試料塗布を開始する。
紫外線照射による炎症を、組織学的に評価するため、照射後７日、１４日目に６ｍｍディスポーザブルパンチにて生検を行い、中性ホルマリン１０％液に浸せきし固定した後、組織切片を作成した。
塗布方法：照射後１日２回（朝・夕）単純塗布
塗布期間：２週間
評価方法：
組織切片を観察し、表皮組織の炎症性変化として角質増生、錯角化、真皮組織の炎症性変化として、細胞浸潤、血管拡張を以下に記載する５段階の重症度（炎症強度）スコアで評価した。
重症度スコア
４  症状が高度の状態
３  症状が中等度の状態
２  症状が軽度の状態
１  症状が軽微の状態
０  症状がないかあるいは消失
試験結果：
第１７図、第１８図、第１９図、第２０図に示すとおりである。
本発明の実施例６は真皮組織における炎症発生の初期段階の血管拡張を治癒させる効果があることが判明し、初期段階での治癒効果のみならず炎症の本格化を防ぐ予防効果もあることが認められた。また真皮での炎症の症状である細胞浸潤もより早く治癒させることも明らかとなった。なお炎症に伴う表皮での異常である角質増生、及び錯角化をより軽減することも認められた。
このことから、皮膚健全化により、炎症、光炎症が予防、治療されることが判明した。
試験例９
アトピー皮膚を対象として、２時間保湿持続性試験を行った。
パネラー：アトピー皮膚  ７名
試験方法：試験例２と同様
測定方法：試験例２と同様
試験装置：試験例２と同様
試料は次のとおりである。
実施例４（Ｌ−アルギニン１％単純剤型）
Ｌ−アルギニン（ナカライテスク株式会社製）                １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例５（エタノールアミン１％単純剤型）
エタノールアミン（ナカライテスク株式会社製）              １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例６（Ｌ−アルギニン０．２％＋エタノールアミン０．０２％＋
単純剤型）
実施例３                                                ９０．００ｍＬ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１１（２−メトキシエチルアミン１％単純剤型）
２−メトキシエチルアミン（東京化成工業株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１２（Ｏ−ホスホリルエタノールアミン１％単純剤型）
Ｏ−ホスホリルエタノールアミン（東京化成工業株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１３（２−エチルアミノエタノール１％単純剤型）
２−エチルアミノエタノール（東京化成工業株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１４（ジエタノールアミン１％単純剤型）
ジエタノールアミン（三井東圧化学株式会社製）              １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１５（２−ジメチルアミノエタノール１％単純剤型）
２−ジメチルアミノエタノール（関東化学株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１６（コリン１％単純剤型）
コリン（ナカライテスク株式会社製）                        １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１７（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロ
パンジオール１％単純剤型）
２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオー
ル（関東化学株式会社製）                                １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１８（ノルアドレナリン１％単純剤型）
ノルアドレナリン（ナカライテスク株式会社製）              １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例１９（フェネチルアミン１％単純剤型）
フェネチルアミン（関東化学株式会社製）                    １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２０（エチレンジアミン１％単純剤型）
エチレンジアミン（ナカライテスク株式会社製）              １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２１（タウリン１％単純剤型）
タウリン（ナカライテスク株式会社製）                      １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２２（ホスファチジルエタノールアミン１％単純剤型）
ホスファチジルエタノールアミン（関東化学株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２３（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド１％単
純剤型）
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド
（関東化学株式会社製）                                  １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２４（２−（メチルアミノ）エタノール１％単純剤型）
２−（メチルアミノ）エタノール（関東化学株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２５（２−アニリノエタノール１％単純剤型）
２−アニリノエタノール（関東化学株式会社製）              １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２６（２−（ベンジルアミノ）エタノール１％単純剤型）
２−（ベンジルアミノ）エタノール（関東化学株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２７（３−アミノ−１−プロパノール１％単純剤型）
３−アミノ−１−プロパノール（関東化学株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２８（２−アミノ−１−ブタノール１％単純剤型）
２−アミノ−１−ブタノール（ナカライテスク株式会社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例２９（プトレッシン１％単純剤型）
プトレッシン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）
１．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３０（ＤＬ−ピログルタミン酸１％単純剤型）
ＤＬ−ピログルタミン酸（東京化成工業株式会社製）          １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３１（トリエタノールアミン１％単純剤型）
トリエタノールアミン（三井東圧化学株式会社製）            １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３２（Ｌ−アルギニン０．０３％含有する米調製物）
玄米１ｋｇを粉砕機により粉砕した。これに水３０００ｍＬ及びα−アミラーゼ７．５ｇ，プロテアーゼ８ｇ，ペプチダーゼ８ｇを添加し、５５℃まで加温後その温度を保ちながら１０時間放置した。その後、徐々に温度を上げて行き、５分間煮沸抽出を行った。そして２０℃まで冷却後、圧搾ろ過を行い、このろ液にクエン酸を添加しｐＨを３．３まで落とした。これに酸性プロテアーゼ８ｇ，酸性カルボキシペプチダーゼ８ｇを添加し、５５℃で１０時間反応させた。
その後７０℃に加温し、冷却後ろ過を行い、３５４ｍｇ／ＬのＬ−アルギニンを含有する生成物２７００ｍＬを得た。
実施例３３（Ｌ−アルギニン０．０３％含有する米調製物＋単純剤
型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３４（２−メトキシエチルアミン１％＋Ｌ−アルギニン
０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−メトキシエチルアミン（東京化成工業株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３５（Ｏ−ホスホリルエタノールアミン１％＋Ｌ−アルギ
ニン０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
Ｏ−ホスホリルエタノールアミン（東京化成工業株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３６（２−エチルアミノエタノール１％＋Ｌ−アルギニン
０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−エチルアミノエタノール（東京化成工業株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３７（ジエタノールアミン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％
含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
ジエタノールアミン（三井東圧化学株式会社製）              ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３８（２−ジメチルアミノエタノール１％＋Ｌ−アルギニ
ン０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−ジメチルアミノエタノール（関東化学株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例３９（コリン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含有する米調
製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
コリン（ナカライテスク株式会社製）                        ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４０（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロ
パンジオール１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含有す
る米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール
（関東化学株式会社製）                                  ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４１（ノルアドレナリン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含
有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
ノルアドレナリン（ナカライテスク株式会社製）              ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４２（フェネチルアミン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含
有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
フェネチルアミン（関東化学株式会社製）                    ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４３（エチレンジアミン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含
有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
エチレンジアミン（ナカライテスク株式会社製）              ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４４（タウリン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含有する米
調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
タウリン（ナカライテスク株式会社製）                      ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ  パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４５（ホスファチジルエタノールアミン１％＋Ｌ−アルギ
ニン０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
ホスファチジルエタノールアミン（関東化学株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４６（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド１％＋
Ｌ−アルギニン０．０３％含有する米調製物＋単純剤
型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド
（関東化学株式会社製）                                  ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４７（２−（メチルアミノ）エタノール１％＋Ｌ−アルギ
ニン０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−（メチルアミノ）エタノール（関東化学株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４８（２−アニリノエタノール１％＋Ｌ−アルギニン０．０３
％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−アニリノエタノール（関東化学株式会社製）              ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例４９（２−（ベンジルアミノ）エタノール１％＋Ｌ−アル
ギニン０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−（ベンジルアミノ）エタノール（関東化学株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例５０（３−アミノ−１−プロパノール１％＋Ｌ−アルギニ
ン０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
３−アミノ−１−プロパノール（関東化学株式会社製）
０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例５１（２−アミノ−１−ブタノール１％＋Ｌ−アルギニン
０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
２−アミノ−１−ブタノール
（ナカライテスク株式会社製）                            ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例５２（プトレッシン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含有す
る米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
プトレッシン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）          ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例５３（ＤＬ−ピログルタミン酸１％＋Ｌ−アルギニン０．０３
％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
ＤＬ−ピログルタミン酸（東京化成工業株式会社製）          ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
実施例５４（トリエタノールアミン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３
％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３２（米からのＬ−アルギニン０．０３％含有する）
９０．００ｍＬ
トリエタノールアミン（三井東圧化学株式会社製）            ０．９０ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例１（単純剤型）
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例２（ヒアルロン酸＋単純剤型）
ヒアルロン酸ナトリウム                                    １．００ｇ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
保湿持続性試験の結果は第２１図〜第３１図に示すとおりである。アトピー皮膚について、塗布１５分後の保湿効果が顕著であり、３０分以降も２時間にわたり保湿が持続する。この保湿持続性効果は、Ｌ−アルギニン単独、エタノールアミン単独でも認められるが、２種類の物質が存在すると、単独のときよりも低い濃度でも保湿持続性が高まる（例えば、第２１図の実施例６参照）。
実施例３４〜実施例５４（以下「前者」という。）は、それぞれ、実施例１１〜実施例３１（以下「後者」という。）にＬ−アルギニン０．０３％含有する米調製物を混合したものであるが、前者の方が後者よりも保湿持続性が高い（第２７図〜第３１図参照）。
試験例１０
アトピー皮膚を対象として、水分保持能試験を行った。
パネラー：アトピー皮膚  ４名
測定方法：試験例３の測定方法と同様
試験装置：試験例２の試験装置と同様
試料は次のとおりである。
実施例４（Ｌ−アルギニン１％単純剤型）
実施例５（エタノールアミン１％単純剤型）
実施例６（Ｌ−アルギニン０．２％＋エタノールアミン０．０２％
＋単純剤型）
実施例１１（２−メトキシエチルアミン１％単純剤型）
実施例１４（ジエタノールアミン１％単純剤型）
実施例１６（コリン１％単純剤型）
実施例１７（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プ
ロパンジオール１％単純剤型）
実施例１８（ノルアドレナリン１％単純剤型）
実施例３４（２−メトキシエチルアミン１％＋Ｌ−アルギニン
０．０３％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３７（ジエタノールアミン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３
％含有する米調製物＋単純剤型）
実施例３９（コリン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含有する米
調製物＋単純剤型）
実施例４０（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プ
ロパンジオール１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％含
有する米調製物＋単純剤型）
実施例４１（ノルアドレナリン１％＋Ｌ−アルギニン０．０３％
含有する米調製物＋単純剤型）
比較例１（単純剤型）
水分保持能試験の結果は第３２図〜第３４図のとおりである。
比較例１はアトピー皮膚に対して水分保持能の増大効果は全く認められなかったが、本発明の上記実施例の試料を塗布して２時間後の水分保持能は、塗布前のそれより顕著に上昇した。
第３２図において、水分保持能はＬ−アルギニン単独（実施例４）、エタノールアミン単独（実施例５）でも上昇するが、両物質が存在する場合（実施例６）には単独のときよりも低い濃度でも水分保持能が上昇する。
実施例３４〜実施例４１（以下「前者」という。）は、それぞれ、実施例１１〜実施例８（以下「後者」という。）にＬ−アルギニン０．０３％含有する米調製物を混合したものであるが、前者の方が後者よりも水分保持能が高い（第３４図）。
このように、本発明の試料は角質層に作用して皮膚バリアー機能を上昇させ、角質層になっていない表皮角化細胞にも働きかけてバリアー機能の高い角質層を作らせることができる。
試験例１１
バリアー機能の改善効果を確認するために、皮膚からの水分喪失量（経表皮水分蒸発量）を測定した。
パネラー：アトピー皮膚  ４名
試験方法：パネラーの前腕内側部位（約０．３×０．３ｃｍ）に各試料を塗布し、塗布６０分後、１２０分後の経表皮水分蒸発量を測定した。
測定方法：
（１）  被験部位を石鹸で洗浄する。
（２）  温度２０℃、湿度５０％の恒温恒湿室で被験部位を露出し、測定６０分前から安静にし肌の状態を一定にならす。
（３）  被験部位のｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｗａｔｅｒ  ｌｏｓｓ−経表皮性水分喪失−（以下ＴＥＷＬ）を約１分間測定する（ＴＥＷＡＭＥＴＥＲ  ＴＭ２１０の円筒状のプローブを被験部位に垂直に当てることにより、ソフト計算で自動的に、被験部位の水分蒸発速度がＴＥＷＬ（ｇ／ｍ２・ｈ）として測定される）。
試験装置：
ＴＥＷＡＭＥＴＥＲ  ＴＭ２１０〔日本ユーロテック株式会社〕
ＴＥＷＡＭＥＴＥＲソフト  Ｖｅｒ．１．１〔日本ユーロテック株式会社〕
試料：試験例１０で用いた試料と同様
経表皮水分蒸発量の試験結果は第３５図〜第３７図のとおりである。
本発明の試料を塗布する前のアトピー皮膚においては、皮膚バリアー機能の低下により、健常皮膚にくらべて水分喪失量が多い。そのようなアトピー皮膚に本発明の試料を４週間塗布することにより水分喪失量が健常レベル近くまで減少し、皮膚のバリアー機構・機能が改善されたことが判る。
実施例３４〜実施例４１（以下「前者」という。）は、それぞれ、実施例１１〜実施例１８（以下「後者」という。）にＬ−アルギニン０．０３％含有する米調製物を混合したものであるが、前者の方が後者よりも水分喪失量を減少させる効果がある（第３７図）。
このように、本発明の試料をアトピー皮膚に塗布することにより皮膚バリアー機構・機能の障害が改善され、内部からの水分の喪失が抑制される。
試験例１２
ハウスダスト感作モデル動物（モルモット）でのアレルギー反応抑制試験を行った。
実験動物：モルモット  ６匹
試験方法：
（１）  ハウスダストエキスとアジュバンドを混合し、モルモットに皮下注射し、感作させる。
（２）  感作成立後、モルモット側腹部を剃毛した後、荒れ肌を作製する。
（３）  荒れ肌作製部位に試料を塗布する。
（４）  試料塗布部位にハウスダストエキスを塗布する。
（５）  （４）から１〜５日間、皮膚反応を判定する。
惹起された皮膚反応（皮膚炎）の判定は以下の基準に基づいて点数化した。
０：反応無し
１：軽度の紅斑
２：中程度の紅斑
３：強度の紅斑
４：浮腫を伴う強度の紅斑
試料は次のとおりである。
実施例５５（実施例３を４０％した単純剤型）
実施例３（米からのＬ−アルギニン０．２％とエタノールアミン
０．０２％含有する）                          ４０．００ｍＬ
９５％エタノール                                          ２．００ｍＬ
パラベン                                                  ０．１８ｇ
精製大豆レシチン                                          ０．０５ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例１（単純剤型）
ハウスダスト感作モデル動物（モルモット）でのアレルギー反応抑制試験の結果は第３８図のとおりである。
人工的に荒れ肌を作製したハウスダスト感作モルモット皮膚に本発明の試料を塗布し、ハウスダストを再塗布したところ、ハウスダスト液惹起皮膚炎の程度は塗布後５日間にわたり抑制された。
このように、本発明の試料を塗布することにより皮膚バリアー機構・機能の障害が改善された皮膚は外からの抗原の侵入を防ぎ、皮膚炎を抑制することができる。
試験例１３
アトピー性皮膚炎患者のアトピー皮膚を対象として臨床試験を行った。
パネラー：アトピー性皮膚炎患者  １２名
被験部位：
評価に適する症状を有する部位で、左右もしくは上下で実施例８使用部位と比較例５使用部位を比較できる部位。
外用方法：
１日２回（朝・夕）、実施例８、比較例５を各々別の部位に単純塗布。
外用期間：４週間
評価項目：
評価項目は、アトピー皮膚の主症状である、
▲１▼  皮膚乾燥
▲２▼  落屑
▲３▼  かゆみ
とした。
評価方法：
評価項目について、実施例８塗布部位の効果を視診により、以下の４段階の重症度スコアで評価した。
３  症状が高度の状態
２  症状が中等度の状態
１  症状が軽度の状態
０  症状がないかあるいは消失
また、比較例５と比べての効果を各週ごとの改善度（有用性）として、
極めて有用
有用
やや有用
有用なし
の４段階で評価し、最終的には使用期間中の全般改善度として本発明の有用性を評価した。
試料は次のとおりである。
実施例８（実施例３＋クリーム剤型）
実施例３（米からのＬ−アルギニン０．２％とエタノールアミン
０．０２％含有する）                          ４０．００ｍＬ
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１０ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ６．００ｇ
濃グリセリン                                              ６．００ｇ
メチルポリシロキサン                                      ６．００ｇ
ステアリン酸                                              ３．００ｇ
セタノール                                                ３．００ｇ
２−エチルヘキサン酸セチル                                ６．００ｇ
スクワラン                                                ６．００ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                      ３．００ｇ
酢酸ｄｌ−α−トコフェロール                              ０．３０ｇ
カゼインナトリウム                                        １．５０ｇ
エデト酸二ナトリウム                                      ０．０３ｇ
パラベン                                                  ０．３０ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例５（クリーム剤型）
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１０ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ６．００ｇ
濃グリセリン                                              ６．００ｇ
メチルポリシロキサン                                      ６．００ｇ
ステアリン酸                                              ３．００ｇ
セタノール                                                ３．００ｇ
２−エチルヘキサン酸セチル                                ６．００ｇ
スクワラン                                                ６．００ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                      ３．００ｇ
酢酸ｄｌ−α−トコフェロール                              ０．３０ｇ
カゼインナトリウム                                        １．５０ｇ
エデト酸二ナトリウム                                      ０．０３ｇ
パラベン                                                  ０．３０ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
試験結果：
本発明の試料と比較例５をアトピー性皮膚炎患者の患部近くの、皮膚炎を誘発しやすい皮膚（アトピー皮膚）に各々使用したところ、比較例５においては、全く効果がなかったのに対し、本発明は高い有用性を示した。
第３９図〜第４２図は、皮膚乾燥、落屑、かゆみの重症度スコアの推移を示す。これにより、本発明はアトピー性皮膚炎の皮膚乾燥、落屑、痒みといった皮膚症状を軽減させ、これら各症状に対しても高い有用性が認められる。副作用は一例も見られず安全性が高い。
痒みについて顕著な効果を有するから、痒いから掻く、掻くから更に痒みが増す、さらに掻くことによりアトピー性皮膚炎が悪化するという悪循環を断ち切り、アトピー性皮膚炎の発症及び悪化を予防することができる。また、痒みから解放されることにより、アトピー性皮膚炎患者の精神面に対しても効果を有する。  このように本発明は、皮膚健全化を通じて、皮膚バリアー機構・機能を健全化することにより、アトピー皮膚にみられる、皮膚乾燥、落屑、痒みといった皮膚症状を改善することができ、アトピー性皮膚炎の発症、悪化を予防することができる。
試験例１４
皮膚健全化、皮膚バリアー機構・機能健全化によるアトピー性皮膚炎治療効果をみるため、アトピー性皮膚炎患者の患部皮膚を対象として臨床試験を行った。
パネラー：アトピー性皮膚炎患者  ７名
試料：試験例１３の場合と同様である。
実施例８（実施例３＋クリーム剤型）
比較例５（クリーム剤型）
被験部位：
評価に適する症状を有する部位で、左右もしくは上下で実施例８の使用部位と比較例５の使用部位とを比較できる部位。
外用方法：
１日２回（朝・夕）、実施例８、比較例５を各々別の部位に単純塗布。
外用期間：４週間
評価項目：
評価項目は、
▲１▼  痒み
▲２▼  乾燥痕
▲３▼  紅斑
▲４▼  苔癬化
とした。
評価方法：
評価項目について、実施例８の塗布部位の効果を視診により、以下の４段階の重症度スコアで評価した。
３  症状が高度の状態
２  症状が中等度の状態
１  症状が軽度の状態
０  症状がないかあるいは消失
また、比較例５と比べての効果を各週ごとの改善度（有用性）として、
極めて有用
有用
やや有用
有用なし
の４段階で評価し、最終的には使用期間中の全般改善度として本発明の有用性を評価した。
試験の結果：
本発明の実施例８と比較例５をアトピー性皮膚炎患者に使用したところ、比較例５は全く治療効果がなかったのに対して、本発明の実施例８は、第４３図〜第４６図に示すとおり、高い有用性を示した。
第４３図〜第４６図は、本発明の実施例８の使用部位における痒み、燥般痕、紅斑、苔癬化の重症度スコアの推移を示す。これにより本発明はアトピー性皮膚炎の痒み、燥般痕、紅斑、苔癬化といった皮膚症状を軽減させ、これら各症状に対して高い有用性が認められた。副作用は一例も見られず、使用中止後はリバウンド現象も見られず、再発した例も無かった。
痒みについて顕著な効果を有することから、痒いから掻く、掻くからアトピー性皮膚炎が悪化するという悪循環を断ち切り、アトピー性皮膚炎の発症及び悪化を予防することができる。また、痒みから解放されることにより、アトピー性皮膚炎患者の精神面に対しても効果を有する。
このように本発明は、皮膚健全化を通じて、アトピー性皮膚炎にみられる、痒み、燥般痕、紅斑、苔癬化といった皮膚症状を改善することができ、同疾患を治癒することができる。
試験例１５
皮膚健全化、皮膚バリアー機構・機能の健全化によるアトピー性皮膚炎治療効果をみるため、アトピー性皮膚炎患者の患部皮膚を対象として臨床試験を行った。
パネラー：アトピー性皮膚炎患者  ５名
試料：
実施例５６（エタノールアミン１％＋クリーム剤型）
エタノールアミン（ナカライテスク株式会社製）              １．００ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１０ｇ
１，３−ブチレングリコール                                ６．００ｇ
濃グリセリン                                              ６．００ｇ
メチルポリシロキサン                                      ６．００ｇ
ステアリン酸                                              ３．００ｇ
セタノール                                                ３．００ｇ
２−エチルヘキサン酸セチル                                ６．００ｇ
スクワラン                                                ６．００ｇ
ショ糖脂肪酸エステル                                      ３．００ｇ
酢酸ｄｌ−α−トコフェロール                              ０．３０ｇ
カゼインナトリウム                                        １．５０ｇ
エデト酸二ナトリウム                                      ０．０３ｇ
パラベン                                                  ０．３０ｇ
精製水を加えて全量を１００．００ｇとする。
比較例５（クリーム剤型）
被験部位：
評価に適する症状を有する部位で、左右もしくは上下で実施例５６の使用部位と比較例５の使用部位を比較できる部位。
外用方法：
１日２回（朝・夕）、実施例５６、比較例５を各々別の部位に単純塗布する。
外用期間：４週間
評価項目：試験例１３と同様
評価方法：試験例１３と同様
試験の結果：
本発明の実施例５６と比較例５をアトピー性皮膚炎患者に使用したところ、比較例５は全く治癒効果がなかったのに対し、本発明の実施例５６は、第４７図〜第５０図に示すとおり、高い有用性を示した。
第４７図〜第５０図は、本発明の実施例５６の使用部位における痒み、燥般痕、紅斑、苔癬化の重症度スコアの推移を示す。これより本発明の実施例５６はアトピー性皮膚炎の痒み、燥般痕、紅斑、苔癬化といった皮膚症状を軽減させ、これら各症状に対して高い有用性が認められた。副作用は一例も見られず、使用中止後はリバウンド現象も見られず、再発する例も無かった。
痒みについて顕著な効果を有することから、痒いから掻く、掻くからアトピー性皮膚炎が悪化するという悪循環を断ち切り、アトピー性皮膚炎の発症及び悪化を予防することができる。また、痒みから解放されることにより、アトピー性皮膚炎患者の精神面に対しても効果を有する。
このように本発明は、皮膚健全化を通じて、アトピー性皮膚炎にみられる、痒み、燥般痕、紅斑、苔癬化といった皮膚症状を改善することができ、同疾患を治癒することができる。
本発明に用いられる保湿剤は、グリセリン、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールに代表される多価アルコール、ソルビトール、マルチトール、デキストリン、ヒアルロン酸、キトサンに代表される糖、ムコ多糖類、及び糖誘導体、エラスチン、コラーゲンに代表されるポリペプチド、ピロリドンカルボン酸、クエン酸、乳酸に代表される有機酸、及びその塩、清酒、米糠、アロエ、甘草、カミツレに代表される生薬系、天然系保湿剤、ビタミン類、プラセンタエキス、尿素、レシチン、リン脂質、セラミド、コレステロール、スフィンゴ脂質に代表される生体成分保湿剤、あるいは植物エキス、果実エキス、海藻エキス、酵素、無機塩類からなるグループから選択される１又はそれ以上の物質を含有し、かつ動物油、植物油、炭化水素、高級アルコール、エステルからなるグループから選択される１又はそれ以上の物質である。
本発明に係る皮膚外用剤である医薬品、医薬部外品、化粧品に用いることができる薬剤は、殺菌消毒薬、創傷保護剤・創傷治癒剤、化膿性疾患用剤、鎮痛・鎮痒・収斂・消炎剤、免疫抑制剤、寄生性皮膚疾患用剤、皮膚軟化剤、毛髪用剤、ビタミン剤、生薬類からなるグループから選択される１又はそれ以上の物質であり、基剤は保湿剤、収斂剤、清涼剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、防腐剤、抗菌剤、キレート剤、界面活性剤、発泡剤、安定剤、浸透剤、助剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、乳化剤、乳濁剤、香料、色素からなるグループから選択される１又はそれ以上の物質である。
本発明が対象とする乾燥性皮膚症状は、アトピー皮膚、乾燥・ソゾウ化した皮膚、老化皮膚、魚鱗癬、かさかさ肌、荒れ肌、皮脂欠乏症、乾皮症、乾燥性湿疹、顔面乾燥性湿疹、進行性手掌角皮症から選択される症状、及び／又は紅斑、硬化・角化、亀裂、鱗屑、紋理、痒み、掻般痕から選択され、皮膚老化症状が、しわ、皮膚のハリ、弾力の低下から選択され、紫外線による皮膚障害が、しみ、ソバカスから選択され、表皮に起因する皮膚障害が、ターンオーバー異常、キメ、みずみずしさから選択され、物理的・化学的皮膚障害が、切り傷、火傷、床ずれから選択され、生物的皮膚障害が水虫、皮膚感染症から選択され、皮膚炎、湿疹が炎症性角化症（乾癬）である。
本発明は、アトピー性皮膚炎、乾燥性皮膚症状、掻痒症、しもやけ、ひび、あかぎれ、皮膚老化症状、紫外線による皮膚障害、くすみ、黒ずみ、表皮に起因する皮膚障害、物理・化学的皮膚障害、水、石鹸、洗剤、界面活性剤、溶媒の使用により引き起こされる皮膚症状、皮膚外用剤の副作用、生物的皮膚障害、皮膚炎、湿疹等の皮膚疾患の予防・治療に顕著な効果を奏する。
産業上の利用可能性
本発明は、一般式
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（式中の記号は本文参照）で表わされる化合物を含有してなる皮膚健全化剤に関する。本発明の有効成分の例として、Ｌ−アルギニン、エタノールアミンを挙げることができる。これらの有効成分は化学合成品として入手することができるし、又は、天然物として入手されるものであってもよい。天然物として、米から得られるＬ−アルギニン及び／又はエタノールアミン含有物が好ましい。本発明に係る皮膚健全化剤は、アトピー性皮膚炎予防・治療剤、皮膚保湿剤として顕著な効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
第１図は、ダメージを受けた線維芽細胞のコラーゲン産生回復試験を本発明の実施例について行った結果を示す。
第２図は、本発明の実施例の保湿持続性試験の結果を示す。
第３図は、本発明の実施例の保湿持続性試験の結果を示す。
第４図は、水分保持能試験を本発明の実施例について行った結果を示す。
第５図は、水分保持能試験を本発明の実施例について行った結果を示す。
第６図は、本発明の実施例による２時間の保湿持続性試験の結果を示す。
第７図は、本発明の実施例による２時間の保湿持続性試験の結果を示す。
第８図は、本発明の実施例による荒れ肌回復試験の結果を示す。
第９図は、本発明の実施例を乾燥性湿疹、乾皮症、顔面乾燥性湿疹患者に使用した全般改善度（有用性）を示す。
第１０図は、本発明の実施例によるかゆみ、硬化、角化の改善度を示す。
第１１図は、本発明の実施例による鱗屑、亀裂化の改善度を示す。
第１２図は、本発明の実施例による紅斑、乾燥、紋理の改善度を示す。
第１３図は、本発明の実施例を皮脂欠乏症、乾皮症、顔面乾燥性湿疹、進行性手掌角皮症患者に使用した全般改善度（有用性）を示す。
第１４図は、本発明の実施例によるかゆみ、硬化、角化の改善度を示す。
第１５図は、本発明の実施例による鱗屑、亀裂の改善度を示す。
第１６図は、本発明の実施例による紅斑、乾燥、紋理の改善度を示す。
第１７図は、本発明の実施例による血管拡張の重症度スコアの変化を示す。
第１８図は、本発明の実施例による細胞浸潤の重症度スコアの変化を示す。
第１９図は、本発明の実施例による角質増生の重症度スコアの変化を示す。
第２０図は、本発明の実施例による錯角化の重症度スコアの変化を示す。
第２１図ないし第３１図は、本発明の実施例により、アトピー皮膚を対象として行った保湿持続性試験の結果を示す。
第３２図ないし第３４図は、本発明の実施例により、アトピー皮膚を対象として行った水分保持能試験の結果を示す。
第３５図ないし第３７図は、本発明の実施例により、アトピー皮膚を対象として行った経表皮水分蒸発量の試験結果を示す。
第３８図は、本発明の実施例によるアレルギー反応抑制試験の結果を示す。
第３９図ないし第５０図は、本発明の実施例により、アトピー皮膚を対象として行った重症度スコアの変化を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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