(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
海苔由来のタンパク質を加水分解して得られるペプチドを有効成分とする血管拡張による肩凝り又は冷え症治療用の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血管拡張作用を有し、それにより肩凝り、頭痛、冷え症およびそれに関連する機態低下症状を抑制、改善することができる医薬組成物に関し、さらに詳しくは、海苔由来のタンパク質を加水分解して得られるペプチドを有効成分とする血管拡張による肩凝り又は冷え症治療用の医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血液循環を改善することは、肩凝り、冷え性、頭痛、手足のしびれなどの症状の改善、疲労回復、末端組織および毛髪の新陳代謝の促進に繋がる。血液循環の改善により、全体としては末端組織に酸素、栄養が十分行き渡り、炭酸ガス、乳酸など老廃物が回収され、入浴後のような心地よい状態になり、身体が温まり、疲労、神経痛、更年期障害が解消するなどの症状が改善される。
【０００３】
血流を促進するメカニズムは幾つかある。一つは赤血球の変形能向上による血液流動性の増加であり、もう一つは血管を拡張することによる血流量の増加である。前者に関する従来技術としては、例えばナツメおよびその抽出物により赤血球の変形能低下を防止するものがあり(特許文献１および特許文献２参照)、また、赤血球、白血球、血小板など血液成分の粘性を下げ、血液流動性を改善するコラーゲンペプチドに関する報告もある（特許文献３参照）。
【０００４】
また、次のような各種天然物またはその抽出物による血流改善効果の報告があるが、その血流改善のメカニズムについては必ずしも明確ではない。例えば、サフランまたはサフランの抽出物(特許文献４参照)、タンポポとヨモギのエキス(特許文献５参照)、牛の内臓と骨を粥状に煮沸したもの(特許文献６参照)、蓮根の節と根毛の焼焦物(特許文献７参照)、ムラサキサツマイモの水溶性抽出物(特許文献８参照)、テアニン含有物(特許文献９参照)、地黄(特許文献１０参照)、イヌゴマのサポニン（特許文献１１参照）の例が知られている。
【０００５】
また、血管拡張の認められた例としてはウサギの耳の血管をイワシ筋肉由来ペプチドが拡張することが報告されている（特許文献１２参照）。しかし、現象面だけの報告であって、人に対する有効例の報告や用途については記載されていない。
近年、種々の血流改善メカニズムによる血流改善物質の更なる開発が求められている。
【０００６】
【特許文献１】
特開平０５−２１０６３９号公報
【特許文献２】
特開平０７−６１９３３号公報
【特許文献３】
特許第３１９７５４７号明細書
【特許文献４】
特開平１０−２８７５７６号公報
【特許文献５】
特開昭６０−１６０８５６号公報
【特許文献６】
特開昭５４−４１３５４号公報
【特許文献７】
特開昭５３−１３３６４６号公報
【特許文献８】
特開２００１−１４５４７１号公報
【特許文献９】
特開２０００−２４７８７８号公報
【特許文献１０】
特開２０００−１６９３８５号公報
【特許文献１１】
特開平０７−２３３１９１号公報
【特許文献１２】
特許２７３２０５６号明細書
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、血管を拡張する作用を有し、それによって血液循環を改善して肩凝り、冷え性、頭痛、疲労、更年期障害を抑制または軽減し、新陳代謝を促進する新規素材を提供することを目的とし、さらにかかる作用を有する医薬品を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、海苔、ワカメ、ヒジキ、コンブ、クロレラ、スピルリナから選ばれた海藻由来のタンパク質を加水分解して得たペプチド類を主体とする成分を、ウサギの耳の血管を用いてスクリーニングした結果、これらのペプチド類に血管を拡張する効果が存在することを見出した。すなわち、上記タンパク質の酸またはアルカリによる加水分解、および／または酵素プロテアーゼによる加水分解により得られるペプチド類を含む成分を、そのまま、または精製して、ウサギに経口投与して血管の拡張を確認した。
【０００９】
これらのウサギの耳で認められた血管拡張は血流の増加に繋がり、その結果、血圧低下効果、肩凝り、冷え性および頭痛の改善効果、疲労回復効果、更年期障害の抑制および軽減効果、新陳代謝の促進による育毛効果、皮膚の状態改善効果など幅広い効果が確認された。
【００１０】
したがって本発明は、上記タンパク質の加水分解により得られたペプチドを有効成分とする血管拡張による血流促進性医薬組成物に関する。
【００１１】
本発明においてタンパク質の加水分解は、酸またはアルカリによる分解、プロテアーゼを用いる酵素分解が一般的に用いられる。酸またはアルカリは、有機、無機いずれの酸、アルカリを用いてもよく、酸加水分解の場合はｐH１〜４の範囲、アルカリ加水分解の場合はpH８〜13の範囲が好ましい。分解時の温度、時間などの反応条件は適宜設定する。
【００１２】
プロテアーゼとしては、ペプシン、パンクレアチン、パパイン、プロレザー(天野製薬社製)、サモアーゼ(大和化成社製)、スミチームAP、スミチームMP、スミチームFP(いずれも新日本化学社製)、その他、一般的に用いられるプロテアーゼ活性を有する酵素を用いることができる。反応の際、酵素の使用濃度、反応のpHや反応温度、その他の条件などは、各酵素剤毎に最適な条件を選択すればよい。
【００１３】
酸、アルカリによる加水分解では、反応の進行を一定に調節することは必ずしも易しくはない。したがって厳密な反応管理が必要である。さらに、酸またはアルカリによる加水分解処理と酵素による加水分解を併用することができる。酸またはアルカリによる処理後、続いてタンパク分解酵素処理を行うことによって、ペプチドの低分子化が進み、低分子ペプチド類の比率が高まる。低分子のペプチドは消化管で吸収され易く、血管拡張効果が高いので、このようにして低分子ペプチドの比率を高めることが望ましい。ただ、人の消化管内では高分子のペプチドも消化管のペプシン、トリプシン、およびペプチダーゼにより低分子ペプチドを生成するため、低分子以外のペプチドでも効果が認められる。しかし、低分子ペプチドの方が短時間で確実に効果の発現するものと考えられる。したがって、ペプチドの分子量については、低分子ペプチドの比率の高い方が望ましいが、食品として利用する場合は中、高分子ペプチドを含んでいても同様に血管拡張の効果が認められる。
【００１４】
各タンパク質の加水分解によって得られたペプチド成分は反応物をそのまま用いてもよいが、ペプチド成分を濃縮精製して用いてもよい。濃縮精製処理は、電気透析膜による脱塩処理、イオン交換樹脂による脱塩・濃縮処理、活性炭による脱色、脱臭および濃縮処理、有機溶媒による沈殿処理により行うことができる。それぞれの成分は液体のまま用いてもよいが、噴霧乾燥、凍結乾燥を施すことによって粉末化することもできる。また、クロマトグラフィーを用いて更に精製したものを用いることもできる。
【００１５】
血管の拡張効果の確認はウサギの耳を用いて行った。すなわち、ウサギに試料を経口投与し、耳の血管の変化を視覚的に確認し、その写真から面積計算ソフトを使って血管拡張の程度の数値化を行った。以下に示す実施例ではすべてこの方法により血管拡張効果を確認した。
【００１６】
本発明においては、タンパク質の加水分解物による血管の血管拡張の結果、血流が増加し、それによって栄養分の末端組織への移行が改善されると共に老廃物の移行も改善されるものと推定される。その結果、ヒトで肩凝り、頭痛、冷え性の抑制、軽減の目的に使用できる。また、血液循環の改善によって、循環器系のみならず神経系、内分泌系、免疫系の関係する生理機能の改善もはかられ、睡眠障害、更年期障害の抑制および改善を目的に使用できる。また、末梢組織からの炭酸ガス、乳酸その他老廃物を適宜回収し、末梢組織への酸素、栄養成分が十分に供給されることから、疲労回復、さらには皮膚状態の改善、美容効果、育毛効果も得られる。これらの効果についてはヒトでの試験の結果を実施例として示した。
【００１７】
本発明の海藻由来タンパク質加水分解物の使用態様としては、食品添加剤として一般食品に添加したり、健康食品組成物または医薬組成物として用いることができる。また、上記タンパク質の加水分解物の形態は、水溶液、懸濁物、粉末、固体成型物などいずれでもよく、特に限定されない。したがって、幅広い一般食品に添加使用出来るし、健康食品、医薬品としてはカプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤などとして提供される。その場合に単味成分として使用するのみならず、他の呈味成分、増量剤、安定剤、および生薬、ハーブなどの機能性素材やその機能性成分と混合、併用して用いることができ、また、ビタミン、ミネラルなど栄養成分、食品として許容される素材などと混合、併用して用いることもできる。
【００１８】
これらの効果を発揮させるためのヒトでの投与量はタンパク質加水分解物として０．５〜２０００ｍｇ／ｋｇ・日が好ましく、１０〜４００ｍｇ／ｋｇ・日が更に好ましい。ただし、症状の種類、度合いには個人差があるため、かかる範囲に限定されるものではない。
【００１９】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の実施の態様を製造例、実施例を示し、説明する。
（製造例１）
次の方法によって、アマノリ属海藻である海苔のタンパク質より海苔ペプチドを調製した。
【００２０】
乾海苔５０ｋｇを９５℃に加温した熱湯９５０リットルに懸濁し、１時間煮沸後、煮汁を除去した。その後、５０℃の水９５０リットルを加え、硫酸でｐＨを２．０に調整し、ペプシン（天野製薬製）２ｋｇを加え、攪拌下５０℃で２４時間反応させた。得られた分解液を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ５．０に調整し、５０℃に１０分間保持してペプシンを失活させた。次に遠心分離（１４０００ｒ．ｐ．ｍ．で２０分間）により抽出残さを除去し、上清液を濃縮した後に噴霧乾燥して海苔ペプシン分解物を得た（試料１）。
【００２１】
この海苔ペプシン分解物１ｋｇを蒸留水に溶解し、塩酸で置換したバイオフッド社製Dowex-50(H＋)カラム（φ５０cm×２００cm）に負荷し、１２０リットルの蒸留水で洗浄後、２Ｎアンモニア水にて吸着しているペプチドを溶出した。次に、エバポレーターにてアンモニア水を除去した後、凍結乾燥にて含量９０％の海苔ペプチド３８５ｇを得た（試料２）。
【００２２】
（製造例２）
海苔粉末（１０〜５０メッシュ）２ｋｇに水１０リットルを加えて攪拌後、自動粉砕機を用いて室温で１時間磨砕し、遠心分離して海苔抽出物残物と上清液とを分離する。
【００２３】
得られた上清液にエタノールを添加して、−２０℃にて１２時間放置してタンパク質成分を沈殿せしめ、遠心分離して沈殿物として水可溶性海苔タンパク質４００ｇを得た。
【００２４】
この海苔タンパク質に対して以下に示すように酸加水分解と酵素分解とを併用して行い、低分子ペプチドを調製した。すなわち海苔タンパク質２００ｇを１Ｎ塩酸溶液１リットルに溶解し、１００℃にて２時間加温して酸分解を行った。次に水酸化ナトリウムでｐＨ６．０に調整した後、スミチームＦＰ（日本化学工業社製）を５ｇ添加し、４０℃にて８時間分解を行った。分解液を１００℃にて２０分間保持して酵素を失活させ、減圧濃縮後、製造例１の試料２と同様に処理し、海苔ペプチド１６０ｇを得た（試料３）。
【００２５】
（製造例３）
若芽タンパクから若芽ペプチドを以下のようにして調製した。乾燥若芽１ｋｇを粉砕して３５メッシュに微粉化し、蒸留水２０リットルに懸濁して湿式磨砕機により磨砕した。これを遠心分離して若芽タンパク質含有溶液５リットルを得た。次いで１リットルに減圧濃縮後、８リットルのエタノールを添加し、−２０℃で１２時間放置し、タンパク質を沈殿させた。これを遠心分離し、得られた沈殿物を室温で風乾後、水溶性若芽タンパク質１００ｇを得た。
【００２６】
この若芽タンパク質５０ｇをリン酸緩衝液（ｐＨ７．７）５００ｍｌに溶解して、サーモライシン２．５ｇを加え、４０℃にて１２時間反応させてタンパク質の加水分解を行った。反応後１００℃に２０分間保持して酵素を失活させた後、反応液を凍結乾燥して若芽ペプチド３５ｇを得た（試料４）。
同様な処理により昆布ペプチド（試料５）、ヒジキペプチドが得られた（試料６）。
【００２７】
（製造例４）
クロレラペプチド、スピルリナペプチドを以下のようにして調製した。クロレラ粉末、スピルリナ粉末それぞれ５０ｇを０．５Ｎ水酸化ナトリウム１リットルに溶解し、８０℃にて５時間加温してアルカリ分解を行った。次いで、塩酸にて中和後、塩酸で置換したDowex-50（Ｈ＋）カラム（φ１０cm×６５cm）に負荷し、５リットルの蒸留水で洗浄後、２Ｎアンモニア水で吸着しているペプチドを溶出した。さらに、エバポレーターでアンモニアを除去した後、凍結乾燥してクロレラペプチドを２１ｇ（試料７）、スピルリナペプチドを１８ｇ（試料８）得た。
【００２８】
次に、上記製造例で得られた各試料の血管拡張効果を確認した実施例および使用例を示す。
（実施例１）
体重１．５〜１．８ｋｇの９週齢の雄ウサギ（Ｓｌｃ：ＪＷ・ＣＳＫ）を１週間予備飼育後、実験に供した。飼育室は温度２２℃±１℃、湿度５０％、１２時間サイクルの明暗周期とし、餌はLab Diet 5L95（日本ＳＬＣ社製）を自由摂餌させ、水も自由に与えた。なお、試料を与える前は２時間絶食させた。体重１ｋｇ当たり試料１０００ｍｇを３〜１０ｍｌの生理食塩水に溶かし、経口ゾンデで強制摂取させた。
【００２９】
ウサギの耳の血管状態測定は次のようにして行った。ウサギを採血箱に固定後、ウサギが落ち着き、耳血管の変化が見られなくなった時点でデジタルカメラで撮影し、この時点を０分とした。試料を摂取後１０分後から写真撮影を開始し、血管の拡張が沈静化するまで１０分おきに撮影を続けた。得られた写真を面積計算ソフトLIA32で面積計算を行い、数値化した。
【００３０】
以上の測定を、製造例１から製造例４で得た試料１〜８について行い、結果をグラフ化して図１〜図２に示した。図はタテ軸に測定血管断面積を０分の場合を１として数値化したものを示し、その時間経過後の変化を図示したものである。その結果、いずれの試料を用いてもウサギの耳血管拡張作用のあることが認められた。
【００３１】
（実施例２）
試料１を７５重量％含み、還元麦芽糖水飴１５％、デキストリン５．８％、クエン酸０．９％、香料２．３％、甘味料（ステビア）１．０％を含む顆粒剤とし、１．２ｇづつ分包して製品とした。また、試料１を８８重量％、還元麦芽糖9％、蔗糖脂肪酸エステル３％含む３００ｍｇ重量の錠剤を製造した。
【００３２】
（実施例３）
試料２〜８をそれぞれ８０％、還元麦芽糖水飴10％、デキストリン7％、蔗糖脂肪酸エステル３％(いずれも重量％)含む３００ｍｇ重量の錠剤をそれぞれ製造した。
【００３３】
（実施例４）
実施例２の顆粒剤を用いて肩凝りに悩む２０名のボランテアに毎日朝夕１包ずつ、１日２包を３０日間服用してもらった。３０日終了後に各ボランテアからアンケートを採った。その結果を表１に示した。その結果、７０％の人の肩凝りが解消または軽減し、効果がみられた。
【００３４】
【表１】
0004505707.tif 000002
【００３５】
（実施例５）
実施例３の試料２を含む錠剤を用いて肩凝りに悩む１０名のボランテアに毎日６錠剤を３０日間服用してもらった。３０日終了後に各ボランテアからアンケートを採った。その結果を表２に示した。その結果６０％の方に肩凝りの解消または軽減が認められた。
【００３６】
【表２】
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【００３７】
（実施例６）
実施例３の試料３を含む錠剤を用いて肩凝りに悩む１０名のボランテアに毎日６錠剤を３０日間服用してもらった。３０日終了後に各ボランテアからアンケートを採ったところ、肩凝りの解消した人は３人、軽減した人が３人、他の４人は変わらなかった。
【００３８】
（実施例７）
実施例２の錠剤を用いて冷え性に悩む２０才から４０才の２０名の女性ボランテアに毎日６錠剤を２週間服用してもらい、２週間後アンケートを採った。その結果を表３に示した。１３人に冷え性が解消または改善がみられた。
【００３９】
【表３】
0004505707.tif 000004
【００４０】
（実施例８）
実施例２，３に記載した試料１〜８を含む錠剤を服用した後の指先の温度を測定した。試験は実施例７のボランテアの中で冷え症の解消、または軽減の効果のあった人から１０人のボランテアを選び、複数日にわたって試験した。試験は朝食抜きで、２０℃、湿度５０％に調整した部屋に入って１時間経過後から行い、試料１〜８を含むそれぞれの錠剤６錠を水５０ｍｌと共に服用して、手指先温度の変化を服用３０分経過後サーミスタ温度計で測定し、０時間からの上昇温度で表記した。なお、１試料について２人のボランテアが試験し、その平均値を記録した。
【００４１】
【表４】
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【００４２】
（実施例９）
実施例２の顆粒剤を用いて偏頭痛のある１５名のボランテアに毎日２包を３０日間服用してもらい、３０日後にアンケートを回収した。その結果は表６に示したように８名の方に頭痛の解消または軽減が認められた。
【００４３】
【表５】
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【００４４】
（実施例１０）
更年期性高血圧症を有する５５才から６３才までの５人の女性に実施例２の顆粒剤を毎日２包、３０日間服用してもらった。なお、いずれの人も本剤と共に卵胞ホルモンを併用した。その結果、いずれの人も血圧が正常範囲に下がり、さらに卵胞ホルモンのみを使った場合と比較して身体が暖まるという感想を得た。また、更年期障害の軽減も認められた。
【００４５】
（実施例１１）
スポーツ選手５人に１５００ｍを全力で走ってもらい、走る前および走った後５分後の血液を採取し、血中の乳酸値を測定した。翌日、実施例２の顆粒剤２包を服用後、１５００ｍを全力で走り、前日と同じように血中の乳酸値を計測した。その結果を表７に示した。顆粒剤を服用しなかった場合に比較して、顆粒剤を服用した場合、いずれの選手も走った後の血中乳酸値の減少が見られた。
【００４６】
【表６】
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【００４７】
（実施例１２）
３０才から３５才までの女性２０人に実施例２の錠剤６錠を服用してもらい、１ヶ月後の皮膚症状の変化を自己評価（複数項の回答を可とした）してもらった。その結果次の皮膚改善効果が認められた。
【００４８】
血色が良くなった（１４）、皮膚の艶が良くなった（１２）、皮膚の潤いが向上した（９）、皮膚のざらつきが無くなった（9）、化粧が乗りやすくなった（８）、皮膚の弾力性が向上した（７）。
【００４９】
（実施例１３）
３０才から３５才までの女性１０人に実施例３の試料４を含む錠剤６錠を服用してもらい、１ヶ月後の皮膚症状の変化を自己評価（複数項回答）してもらった。その結果、次の皮膚改善効果が認められた。
血色が良くなった（７）、皮膚の艶が良くなった（６）、皮膚のざらつきが無くなった（４）、皮膚の潤いが向上した（４）、化粧が乗りやすくなった（３）
（実施例１４）
抜け毛の多いと感じる男性２０人に実施例２の顆粒剤を１日２包３ヶ月間服用してもらい、抜け毛の変化について質問した。その結果、抜け毛の減少を自覚した人が８人、毛が太くなったという人が７人あった。
【００５０】
【発明の効果】
本発明によれば、海藻由来のタンパク質を加水分解して得られたペプチドを含有する組成物を医薬に用いることによって、血管拡張による血流促進効果を奏することができ、それにより肩凝り、頭痛、冷え症およびそれに関連する機態低下症状を抑制、改善することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ウサギの耳について行なった海藻由来ペプチドの血管拡張作用の実験データを示すグラフ。
【図２】  ウサギの耳について行なった海藻由来ペプチドの血管拡張作用の実験データを示すグラフ。
【図１】
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【図２】
0004505707.tif 000009