(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オンを有効成分とする筋萎縮性側索硬化症の予防又は治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、神経変性疾患の予防又は治療薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
神経変性疾患の代表的なものには、大脳皮質を主座とするアルツハイマー病やピック病（Pick) など、大脳基底核を主座とするパーキンソン病やハンチントン病など、小脳を主座とする脊髄小脳変性症、脊髄を主座とする筋萎縮性側索硬化症などがある。神経変性疾患の定義は教科書でも正面きって取り上げているものは少ない。あえて定義するとすれば、ある系統（例えば、錐体路系、後索系、脊髄小脳系など）の障害が単独で、あるいはそれらが組み合わさった臨床症状として、じわじわと緩除に発現し進行する疾患であり、かつその真の原因が不明なものを神経変性疾患と総称する［金澤一郎：最新内科学大系, 68 : p.3, 中山書店(1997)］。
【０００３】
筋萎縮性側索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis : ALS ）は、皮質、脳幹、及び脊髄の運動ニューロン（motor neuron）の選択的障害によって特徴づけられる致死的な神経性疾患で、進行性の筋萎縮と深部腱反射の亢進などを主症状とする。最近、家族性ALS （familial amyotrophic lateral sclerosis : FALS ）や孤発性ALS （SALS）の一部について、その原因遺伝子として、フリーラジカルスカベンジャーであるCu/Zn スーパオキシドジスムターゼ（superoxide disumutaze :SOD）遺伝子の点突然変異が相次いで報告され注目を集めている（Deng, H. et al. : Science, 261 : 1047-1051, 1993; Rosen, DR. et al. : Nature, 363 : 59-62, 1993; Jones, CT. et al. : Lancet, 342 : 1050-1061, 1993）。
【０００４】
ALS の治療に、神経保護剤（抗酸化剤及び抗興奮剤）や神経再生剤（neuroregenerative ）神経栄養因子（neurotrophic factor）が試みられているが、非常に弱い効果しか認められていない。すなわち、毛様体由来神経栄養因子（ciliary neurotrophic factor:CNTF）、インスリン様増殖因子（insulin growth factor-1:IGF-1 ）、脳由来神経栄養因子（brain-derived neurotrophic factor:BDNF）及び神経成長因子（nerve growth factor: NGF）の、ALS に対する作用が数多く報告されているが、その効果は弱く、満足できるものではなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ALS を含む神経変性疾患の予防又は治療薬を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、すでに、シクロヘキセノン骨格を有する長鎖アルコールが、優れた神経突起伸展能を有し、神経成長因子として有用性であることを見出し特許出願している（PCT/JP98/03560）。その後、本発明者らは、Cu/Zn SOD-1 遺伝子のミスセンス変異を有するトランスジェニックマウスに該化合物を投与すると、対照群に比較して、生存期間が有意に延長されることから、該化合物が、SOD-1 変異遺伝子の過剰発現による運動ニューロンの変性に起因する神経変性疾患、とりわけ、ALS の予防・治療薬として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、
【０００９】
３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オンを有効成分とする筋萎縮性側索硬化症の予防又は治療薬を提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
上記一般式（１）中、Ｘは炭素数１０〜２８の直鎖状又は分岐状のアルキレン又はアルケニレン基であるが、分岐状のアルキレン又はアルケニレン基の場合の側鎖としては炭素数１〜１０のアルキル基が挙げられる。当該側鎖アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert- ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、tert- ペンチル基、ヘキシル基、イソヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、などが挙げられ、このうち特にメチル基が好ましい。また直鎖状のアルキレン基又はアルケニレン基（少なくとも１つの炭素- 炭素二重結合を有するアルケン構造を意味する）への側鎖の置換は、３及び／又は７位が好ましい。これらのＸのうち、炭素数１０〜２８の直鎖状アルキレン基がより好ましく、炭素数１０〜１８の直鎖状アルキレン基が特に好ましい。また、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又はメチル基を示すが、少なくとも１個がメチル基である場合がより好ましい。
【００１１】
また、一般式（１）の化合物は、薬学的に許容される塩、又はその溶媒もしくは水和物の形態であってもよい。またこの化合物（１）には、各種の異性体が存在し得るが、これらの異性体も本発明に含まれる。
【００１２】
この化合物（１）は、例えば次の製法Ａ又は製法Ｂに従って製造することができる。
【００１３】
【化３】
0004469441.tif 000002
【００１４】
〔式中、Ｒ1a、Ｒ2a及びＲ3aは水素原子又はメチル基を示すが、少なくとも１個はメチル基を示し、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｘ、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は前記と同じ〕
【００１５】
すなわち、シクロヘキセノン（２）又はメチル置換２−シクロヘキセン−１−オン（３）にベンゼンスルフィン酸塩を酸の存在下に反応させて化合物（４）とし、これにエチレングリコールを反応させてケタール体（５）を得、次いでω−ハロゲノアルカノール又はω−ハロゲノアルケノールを反応させて化合物（６）とし、これを酸処理して保護基を脱離せしめることにより化合物（１）が得られる。
【００１６】
ここで原料として用いられるメチル置換２−シクロヘキセン−１−オン（３）は、メチル置換シクロヘキサノンにブチルリチウムの存在下トリアルキルシリルハライドを反応させた後、パラジウム系触媒の存在下に酸化することにより得られる。
【００１７】
まず、シクロヘキセノン（２）又はメチル置換２−シクロヘキセン−１−オン（３）とベンゼンスルフィン酸塩、例えばベンゼンスルフィン酸ナトリウムとの反応は、塩酸、硫酸、リン酸等の酸の存在下、０〜１００℃の温度で５〜４０時間行うのが好ましい。
【００１８】
化合物（４）とエチレングリコールとの反応は、無水パラトルエンスルホン酸などの縮合剤の存在下５０〜１２０℃の温度で１〜１０時間行うのが好ましい。
【００１９】
ケタール体（５）に反応させるω−ハロゲノアルカノールとしては、ω−ブロモアルカノールが好ましい。ケタール体（５）とω−ハロゲノアルカノールとの反応は、ブチルリチウム等の金属化合物の存在下、低温条件で行うのが好ましい。
【００２０】
得られた化合物（６）からフェニルスルホニル基及びケタール保護基を脱離せしめるには、例えばパラトルエンスルホン酸等の酸を反応させることにより行うのが好ましい。
【００２１】
【化４】
0004469441.tif 000003
【００２２】
〔式中、Ｘ1 は炭素数９〜２７のアルキレン又はアルケニレン基を示し、Ａｃはアシル基を示し、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 及びＰｈは前記と同じ〕
すなわち、化合物（７）〔例えば、Synthesis, 1996, Nov. に準じて得られる〕にω−ブロモアルコールを反応させて化合物（９）とし、次いでフェニルスルホニル基を脱離せしめて化合物（１０）を得、このヒドロキシ基を保護して化合物（１１）とした後、酸化して化合物（１２）とし、次いでヒドロキシ保護基を脱離せしめることにより化合物（１ａ）が得られる。
化合物（７）と化合物（８）との反応は、ブチルリチウム等の金属化合物の存在下、低温条件で行うのが好ましい。
化合物（９）からフェニルスルホニル基を脱離せしめるには、例えばナトリウムアマルガムの存在下リン酸塩等を反応させることにより行われる。
化合物（１０）のヒドロキシ保護基としては、アセチル基等が好ましく、保護反応は例えば化合物（１０）に無水酢酸を反応させることにより行われる。
化合物（１１）の酸化反応は三塩化ルテニウム等の金属化合物の存在下、ｔ−ブチルヒドロパーオキサイド等のアルキルヒドロパーオキサイドを反応させることにより行われる。
化合物（１２）の保護基の脱離反応は、炭酸カリウム等の塩基の存在下に加水分解するのが好ましい。
【００２３】
上記したように、 FALS やSALSの一部に、Cu/Zn SOD （SOD-1 ）の変異が見出されていることから、マウスSOD-1 遺伝子に、FALSの遺伝子に見出される変異の一つに対応するミスセンス変異を導入したトランスジェニックマウスを用いて、化合物（１）投与による、該トランスジェニックマウスの生存期間延長効果を調べた。化合物（１）を該トランスジェニックマウスに投与した群の生存期間は、対照群のそれに対して、有意に延長した。
【００２４】
該トランスジェニックマウスは、マウスSOD-1 遺伝子の第四エクソン中のGly-86をArg に変異（G86R）させたマウス（Ripps M. E. et al.: Proc.Natl.Acad.Sci.USA.92:689-693,1995）である。該トランスジェニックマウスの中枢神経系での該変異遺伝子の過剰発現は、脊髄、脳幹、及び新皮質の運動ニューロンの退行性の変性に伴う、年令関連の急速な進行性の運動機能の低下と関連している（Ripps M. E. et al.: Proc.Natl.Acad.Sci.USA.92:689-693,1995）。一部のFALS患者は、該トランスジェニックマウスと同様の遺伝子変異が原因とされているため、ALS 疾患のモデルの一つである。
【００２５】
本発明で用いたトランスジェニックマウスは、Cu/Zn SOD-1 をコードする遺伝子にミスセンス変異（G86R) を導入したマウスで、このALS にリンクした変異体の過剰発現によって、ALS 患者に観察されるのに類似する運動ニューロンの変性が進行し、麻痺のため、生存後９０±5 日で死亡する。
【００２６】
化合物（１）が、該トランスジェニックマウスの生存期間を大幅に延長させる機序は、現在のところ不明であるが、本発明の実験結果は、化合物（１）が、SOD 変異遺伝子の発現による障害の予防又は治療に有用であることを示している。
【００２７】
また、化合物（１）は、胎児ラット大脳半球由来ニューロンに対し、優れた神経突起伸展効果を示し、とりわけ、化合物番号９、１０、２０、２３、及び２４は、bFGFに比較して、極めて優れた神経突起伸展効果を示す（表１参照）。
【００２８】
すなわち、化合物（１）は、SOD 遺伝子変異による障害を抑制する作用を有し、また、神経細胞に直接作用して、神経突起伸展促進などの神経栄養因子効果を示すので、SOD 遺伝子変異による障害、ALS などの神経変性疾患の予防又は治療に有用である。
【００２９】
化合物（１）は、経口投与又は非経口投与（筋肉内、皮下、静脈内、坐薬など）のいずれでも投与できる。
【００３０】
経口用製剤を調製する場合、賦形剤、さらに必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により、錠剤、被服錠剤、顆粒剤、カプセル剤、溶液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性又は水性の懸濁液剤などとする。賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、ソルビット、結晶セルーロスなどが挙げられる。結合剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
【００３１】
崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、ゼラチン未、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストラン、ペクチンなどが挙げられる。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油などが挙げられる。着色剤としては、医薬品に添加することが許可されているものが使用できる。矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、竜脳、桂皮末などが使用できる。これらの錠剤は、顆粒剤には、糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングしてもよい。
【００３２】
注射剤を調製する場合、必要により、pH調整剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤などを添加し、常法により、皮下、筋肉内、静脈内注射剤とする。注射剤は、溶液を容器に収納後、凍結乾燥などによって、固形製剤として、用事調製の製剤としてもよい。また、一投与量を容器に収納してもよく、また、多投与量を同一の容器に収納してもよい。
【００３３】
本発明の化合物の医薬としての投与量は、ヒトの場合、成人１日当たり通常０．０１〜１０００mg、好ましくは、０．１〜１００mgの範囲で、１日量を１日１回、あるいは２〜４回に分けて投与する。
【００３４】
【実施例】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３５】
製造例１
（１）ベンゼンスルフィニック酸ナトリウム１０．２５ｇをシクロヘキサノン５mlと水３０mlの溶液に加える。この溶液に１Ｎ塩酸６０mlを滴下する。室温で２４時間撹拌後、析出晶をろ過し、水、イソプロパノール、冷エーテルで洗浄する。イソプロパノールで再結晶し、白色結晶の３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オンを５．７４ｇ（融点８３〜８５℃）を得る。（収率９７％）
【００３６】
（２）３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オン５．３ｇをベンゼン６０mlに溶解した液に１，２−エタンジオール０．３mlと無水パラトルエンスルホン酸０．２ｇを加える。反応液を４時間加熱還流させる。反応後、２Ｍ炭酸水素ナトリウム水を加え、酢酸エチルで３回抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、エーテルで再結晶し、白色結晶の１，１−（エチレンジオキシ）−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン６．１ｇ（融点９３〜９５℃）を得る。（収率９７％）
【００３７】
（３）１，１−（エチレンジオキシ）−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン５６５mgとトリフェニルメタン４mgの５mlＴＨＦ溶液にアルゴン気流下、−７８℃でｎ−ブチルリチウム２mlの溶液を滴下する。１０分撹拌後、室温で１時間反応する。ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＴ）１mlを加え、再び−７８℃に冷却し、１０−ブロモ−１−デカノール１５９mgの２mlＴＨＦ溶液を滴下する。
−２０℃で２時間反応後、飽和の塩化アンモニウム液に反応液を注ぐ。エーテルで溶液を抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン−酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン２６５mgを得る。（収率：９０％）
【００３８】
（４）１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン１９３mgのクロロホルム３ml及びアセトン０．６mlの溶液にパラトルエンスルホン酸２０mgを加える。混合液を２４時間５０℃で反応する。飽和炭酸水素ナトリウム水１０mlを加え、ジクロルメタンで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン- 酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの３−（１０−ヒドロキシデシル）−２−シクロヘキセン−１−オン８６mgを得る。（収率：７７％）
【００３９】
製造例１と同様にして次の化合物を得た。
製造例２：３−（１１−ヒドロキシウンデシル）−２−シクロヘキセン−１−オン（融点３４〜３５℃）。
【００４０】
製造例３：３−（１２−ヒドロキシドデシル）−２−シクロヘキセン−１−オン（融点３５〜３６℃）。
【００４１】
製造例４：３−（１３−ヒドロキシトリデシル）−２−シクロヘキセン−１−オン（融点４２〜４３℃）。
【００４２】
製造例５：３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−２−シクロヘキセン−１−オン（融点４４〜４５℃）。
【００４３】
製造例６
（１）Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン７mlの２０mlＴＨＦ溶液に−７８℃にて、１．４Ｍのｎ−ブチルリチウム液３５．４mlを滴下する。溶液を０℃で３０分撹拌する。４−メチルシクロヘキサン−１−オン４mlの１０mlＴＨＦ液に−７８℃にて、先のリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）溶液を滴下する。−７８℃で１時間撹拌後、トリメチルシリルクロライド６．５mlを滴下する。室温で１時間撹拌後、溶液を炭酸水素ナトリウム水に注ぎ、エーテルで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、減圧蒸留し、４−メチル−１−（トリメチルシリルオキシ）−１−シクロヘキセン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:8-2)Rf=0.8）を５．８３ｇを得る。（収率：９６％）
【００４４】
（２）４−メチル−１−（トリメチルシリルオキシ）−１−シクロヘキセン３．５３ｇの７０mlＤＭＳＯ溶液に酢酸パラジウムを触媒量加え、６時間酸素を導入し撹拌する。０℃で水を加え、ろ過後、エーテルで抽出する。有機層を減圧下溶媒を留去し、残渣をヘキサン- 水に溶解しヘキサンで抽出する。ヘキサン層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去し、４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:8-2)Rf=0.35）のオイルを得る。（収率７２％）
【００４５】
（３）ベンゼンスルフィニック酸ナトリウム３．０ｇを４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン１．５２ｇと水９mlの溶液に加える。この溶液に１Ｎ塩酸１８mlを滴下する。室温で２４時間撹拌後、析出晶をろ過し、水、イソプロパノール、冷エーテルで洗浄する。イソプロパノールで再結晶し、白色結晶の４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オン（融点７１〜７４℃）を得る。（収率７２％）
【００４６】
（４）４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オン２．４５ｇをベンゼン４０mlに溶解した液に１，２−エタンジオール０．７mlと無水パラトルエンスルホン酸０．２ｇを加える。反応液を４時間加熱還流させる。反応後、２Ｍ炭酸水素ナトリウム水を加え、酢酸エチルで３回抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、エーテルで再結晶し、白色結晶の１，１−（エチレンジオキシ）−４−メチル−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン（融点１０５〜１０６℃）を得る。（収率９７％）
【００４７】
（５）１，１−（エチレンジオキシ）−４−メチル−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン５６０mgとトリフェニルメタン４mgの５mlＴＨＦ溶液にアルゴン気流下、−７８℃でｎ−ブチルリチウム１．８mlの溶液を滴下する。１０分撹拌後、室温で１時間反応する。ＨＭＰＴ１mlを加え、再び−７８℃に冷却し、１０−ブロモ−１−デカノール１６６mgの２mlＴＨＦ溶液を滴下する。−２０℃で２時間反応後、飽和の塩化アンモニウム液に反応液を注ぐ。エーテルで溶液を抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン- 酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.14）を得る。（収率：９７％）
【００４８】
（６）１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−４−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン２３５mgのクロロホルム２０ml及びアセトン４mlの溶液にパラトルエンスルホン酸２０mgを加える。混合液を２４時間５０℃で反応する。飽和炭酸水素ナトリウム水１０mlを加え、ジクロルメタンで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン−酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの３−（１０−ヒドロキシデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.2）を得る。（収率：７５％）
【００４９】
製造例６と同様にして次の化合物を得た。
製造例７：３−（１１−ヒドロキシウンデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.21）。
【００５０】
製造例８：３−（１２−ヒドロキシドデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.22）。
【００５１】
製造例９：３−（１３−ヒドロキシトリデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.25）。
【００５２】
製造例１０：３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.3）。
【００５３】
製造例１１
（１）  ベンゼンスルフィニック酸ナトリウム５．９８ｇを４，４−ジメチル−２−シクロヘキセン−１−オン３mlと水３０mlの溶液に加える。この溶液に１Ｎ塩酸４０mlを滴下する。室温で２４時間撹拌後、析出晶をろ過し、水、イソプロパノール、冷エーテルで洗浄する。イソプロパノールで再結晶し、白色結晶の４，４−ジメチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オン（融点８４〜８６℃）を得る。（収率８９％）
【００５４】
（２）４，４−ジメチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オン４．４ｇをベンゼン４５mlに溶解した液に１，２−エタンジオール１．１mlと無水パラトルエンスルホン酸０．３ｇを加える。反応液を４時間加熱還流させる。反応後、２Ｍ炭酸水素ナトリウム水を加え、酢酸エチルで３回抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、エーテルで再結晶し、白色結晶の４，４−ジメチル−１，１−（エチレンジオキシ）−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン（融点１１３〜１１５℃）を得る。（収率８４％）
【００５５】
（３）４，４−ジメチル−１，１−（エチレンジオキシ）−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン９３０mgとトリフェニルメタン４mgの５mlＴＨＦ溶液にアルゴン気流下、−７８℃でｎ−ブチルリチウム２．９３mlの溶液を滴下する。１０分撹拌後、室温で１時間反応する。ＨＭＰＴ１mlを加え、再び−７８℃に冷却し、１０−ブロモ−１−デカノール２３６mgの２mlＴＨＦ溶液を滴下する。
−２０℃で２時間反応後、飽和の塩化アンモニウム液に反応液を注ぐ。エーテルで溶液を抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン−酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの４，４−ジメチル−１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.15）を得る。（収率：９４％）
【００５６】
（４）４，４−ジメチル−１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン４００mgのクロロホルム３０ml及びアセトン６mlの溶液にパラトルエンスルホン酸２０mgを加える。混合液を２４時間５０℃で反応する。飽和炭酸水素ナトリウム水１０mlを加え、ジクロルメタンで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン−酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの４，４−ジメチル−３−（１０−ヒドロキシデシル）−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.25）を得る。（収率：７８％）
【００５７】
製造例１１と同様にして次の化合物を得た。
製造例１２：３−（１１−ヒドロキシウンデシル）−４，４−ジメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.25）。
【００５８】
製造例１３：３−（１２−ヒドロキシドデシル）−４，４−ジメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.27）。
【００５９】
製造例１４：３−（１３−ヒドロキシトリデシル）−４，４−ジメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.3）。
【００６０】
製造例１５：３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−４，４−ジメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.3）。
【００６１】
製造例１６
（１）ベンゼンスルフィニック酸ナトリウム２．９ｇを２−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン１．５ｇと水８mlの溶液に加える。この溶液に１Ｎ塩酸１６mlを滴下する。室温で２４時間撹拌後、析出晶をろ過し、水、イソプロパノール、冷エーテルで洗浄する。イソプロパノールで再結晶し、白色結晶の２−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.25）を得る。（収率９３％）
【００６２】
（２）２−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン−１−オン１．４ｇをベンゼン２０mlに溶解した液に１，２−エタンジオール０．４１mlと無水パラトルエンスルホン酸０．１ｇを加える。反応液を４時間加熱還流させる。反応後、２Ｍ炭酸水素ナトリウム水を加え、酢酸エチルで３回抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、エーテルで再結晶し、白色結晶の１，１−（エチレンジオキシ）−２−メチル−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン（融点７６〜７７℃）を得る。（収率９５％）
【００６３】
（３）１，１−（エチレンジオキシ）−２−メチル−３−（フェニルスルフォニル）−シクロヘキサン３０４mgとトリフェニルメタン４mgの５mlＴＨＦ溶液にアルゴン気流下、−７８℃でｎ−ブチルリチウム１．０２mlの溶液を滴下する。１０分撹拌後、室温で１時間反応する。ＨＭＰＴ１mlを加え、再び−７８℃に冷却し、１０−ブロモ−１−デカノール９０mgの２mlＴＨＦ溶液を滴下する。−２０℃で２時間反応後、飽和の塩化アンモニウム液に反応液を注ぐ。エーテルで溶液を抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン−酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−２−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.2）を得る。（収率：９２％）
【００６４】
（４）１，１−（エチレンジオキシ）−３−（１０−ヒドロキシデシル）−２−メチル−３−（フェニルスルホニル）−シクロヘキサン３８８mgのクロロホルム３０ml及びアセトン６mlの溶液にパラトルエンスルホン酸２０mgを加える。混合液を２４時間５０℃で反応する。飽和炭酸水素ナトリウム水１０mlを加え、ジクロルメタンで抽出する。有機層を飽和食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥する。減圧下溶媒を留去後、ヘキサン−酢酸エチルでのシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製し、無色オイルの３−（１０−ヒドロキシデシル）−２−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.2）を得る。（収率：４５％）
【００６５】
製造例１６と同様にして次の化合物を得た。
製造例１７：３−（１１−ヒドロキシウンデシル）−２−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.24）。
【００６６】
製造例１８：３−（１２−ヒドロキシドデシル）−２−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.26）。
【００６７】
製造例１９：３−（１３−ヒドロキシトリデシル）−２−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.28）。
【００６８】
製造例２０：３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−２−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.3）。
【００６９】
製造例２１
（１）１−フェニルスルホニル−２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン１ｇ及びトリフェニルメタン４mgを含む乾燥テトラヒドロフラン（８ml）の溶液にアルゴンガス雰囲気下−７８℃でｎ−ブチルリチウムのヘキサン溶液（１．４Ｍ）４mlを加えた。１０分間攪拌後、室温で攪拌しヘキサメチルリン酸トリアミド１．５mlを加えた。この温度で１時間３０分後混合物を−７８℃に冷却し、１１−ブロモウンデカノール４３９mgをゆっくり加えた。混合物を−２０℃で３時間攪拌し、飽和アンモニウムクロリド溶液４０mlに加えた。得られた溶液をエーテルで抽出し、有機層を食塩水で洗浄後硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下に溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色固体として１−（１２−ヒドロキシドデシル−１−フェニルスルホニル）−２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:6-4)Rf=0.43）を６２２mg得た。
【００７０】
（２）１−（１２−ヒドロキシドデシル−１−フェニルスルホニル）−２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン５７９mgを含む乾燥エタノール溶液２５mlに、アルゴンガス雰囲気下０℃でNa2HPO4 ３６６mg及び水銀ナトリウムアマルガム４ｇを加えた。混合物を室温で１時間攪拌した後５％HCl で冷却し、エーテルで抽出し、水で洗浄した。次に硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下に溶媒を留去し、無色オイルとして１−（１２−アセトキシドデシル）−２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン３５３mg（TLC：(ヘキサン-AcOEt:5-5)Rf=0.75）を得た。
【００７１】
（３）１−（１２−アセトキシドデシル）−２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセン３２１mgを含むシクロヘキサン溶液６mlに、水０．８ml、ルテニウムトリクロリドヒドラート１．３mg及び７０％tBuOOH １．２６mlを加えた。溶液を室温で６時間攪拌し、セライトで濾過し、濾液を１０％Na2SO3溶液に加えた。溶液をエーテル抽出し、食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後減圧下に溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色オイルとして３−（１２−アセトキシドデシル）−２，４，４−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−オン２２７mg（TLC：(ヘキサン-AcOEt:3-7)Rf=0.68）を得た。
【００７２】
（４）３−（１２−アセトキシドデシル）−２，４，４−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−オン１３２mgを含む乾燥メタノール溶液（８ml）に水３滴及びK2CO3 ７４mgを加えた。室温で２時間３０分攪拌した後、５％HCl でpHを７に調整し、エーテル抽出し硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下に溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色オイルとして３−（１２−ヒドロキシドデシル）−２，４，４−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−オン９４mg（TLC：(ヘキサン-AcOEt:7-3)Rf=0.2）を得た。
【００７３】
製造例２１と同様にして次の化合物を得た。
製造例２２：３−（１３−ヒドロキシトリデシル）−２，４，４−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:7-3)Rf=0.2）。
【００７４】
製造例２３：３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−２，４，４−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:7-3)Rf=0.25）。
【００７５】
製造例２４：３−（１５−ヒドロキシペンタデシル）−２，４，４−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:7-3)Rf=0.29）。
【００７６】
製造例２５：３−（１６−ヒドロキシヘキサデシル）−２，４，４−トリメチル−２−シクロヘキセン−１−オン（TLC：(ヘキサン-AcOEt:7-3)Rf=0.26）。
【００７７】
試験例１  変異SOD-1 遺伝子を発現するトランスジェニックマウスの生存試験
１０匹のトランスジェニックマウスで実施した。該トランスジェニックマウスは、マウスSOD-1 遺伝子の第四エクソン中のGly-８６をArg に変異（G86R）させたマウス（Ripps M. E. et al.: Proc.Natl.Acad.Sci.USA.92:689-693,1995）である。５匹は、生理食塩水、５匹は、エタノール/Tween ８０／生理食塩水（８/10/82）に溶解した製造例１０の化合物［３−（１４−ヒドロキシテトラデシル）−４−メチル−２−シクロヘキセン−１−オン］２mg/kg を４０日間連続腹腔内投与（i.p.）した。１匹は、injection complicationのため９０日前に死んだ。残りの４匹は、１５０日後に死んだ。対照のマウスは全て９０日頃に死んだ。生存期間の延長は、１５０％以上であった。この値は有意性が高かった。
【００７８】
試験の間、製造例１０の化合物を投与したマウスは、全例非常に活動的であったが、対照群では、非常に病的で、６０日後には、適切に動くことができなかった。
【００７９】
試験例２
（１）製造例１０の化合物８mg／kgを１週間に３回、死亡するまで腹腔内投与する以外は試験例１と同様にして、変異SOD-1 遺伝子を発現するトライスジェニックマウスの生存試験を行った。その結果、対照のマウスが１１０日頃に全例死亡したが、製造例１０の化合物を投与したマウスは平均で１５０日頃に死亡し、２例は２００日以上生存しており、生存期間の延長は１３０％以上であった。
【００８０】
（２）また、（１）のトランスジュニックマウスの生存試験中に、運動機能を確認するためにバー・テストを実施した。すなわち、製造例１０の化合物を投与したマウス及び対照のマウスが、直径１０mm×長さ４５cmの金属棒を何秒で渡れるかを生後８０日から９１日まで測定した。その結果、図１に示すように製造例１０の化合物を投与したマウス、対照のマウス共に、試験開始日に比較し試験最終日まで次第に金属棒を渡る速度が早くなっている。しかし、製造例１０の化合物を投与したマウス及び対照のマウスの試験開始日と試験最終日では差の割合が約４０％と、製造例１０の化合物を投与したマウスが、活動的であった。
【００８１】
（３）さらに（１）のトランスジェニックマウスの生存試験において、発症日、すなわちマウスが動けなくなった日を製造例１０の化合物を投与したマウス及び対照のマウスで比較した。その結果、製造例１０の化合物を投与したマウスは、対照のマウスと比較し、１６１〜１８０日まで発症日が延長した。発症日は、１２０％期間が延長した。
【００８２】
試験例３  神経突起伸展効果
胎児ラット大脳半球ニューロン（13〜15日）を用いた。該ニューロン細胞の培養は、Borgらの方法（Borg, J., et al.: Dev. Brain Res., 18 : 37, 1985）に準じて実施した。バラバラにした細胞１．５×１０5 を、ポリリジンでコートした３５mmディッシュにまき、DMEM（インスリン、トランスフェリン、プロゲステロン、セレン酸ナトリウム、及びプテスシンを添加）３mlを加えた。本発明の化合物（１）は、エタノールで１×１０-8M になるように溶解して加えた。細胞は、３日間培地交換なしで培養した。その後、細胞を、２％グルタルアルデヒドを含むPBS で固定し、位相差顕微鏡で観察した。結果を表１に示す。
【００８３】
【表１】
0004469441.tif 000004
【００８４】
【発明の効果】
化合物（１）は、優れた神経突起伸展効果を有し、また、SOD 遺伝子変異による障害を抑制する作用を有するので、神経変性疾患、とりわけ、筋萎縮性側索硬化症の予防又は治療薬として有用であり、また、SOD 変異遺伝子変異による障害を抑制する薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】変異SOD-1 遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるバーテスト（運動機能確認）の結果を示す図である。
【図１】
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