(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：
0004491866.tif 000013
｛式中、Ｒ１及びＲ２は、以下の（１）又は（２）の通りである。
（１）Ｒ１が、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ２０のアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルスルフィニル基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルスルホニル基、Ｃ１〜Ｃ４のハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ４のハロアルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ８のアルコキシカルボニル基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルアミノ基、Ｃ２〜Ｃ６のジアルキルアミノ基、Ｃ６〜Ｃ１４のアリール基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、アミジノ基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル基若しくはアルケニル基を有するカルボキシル基及び水酸基から選ばれる１〜２個の同じ若しくは異なる置換基を有していても良いフェニル基又はナフチル基を示し、
Ｒ２が、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０のアルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基及びニトロ基から選ばれる１〜２個の同じ又は異なる置換基を有していても良いフェニル基を示す。
（２）Ｒ１が、水素原子を示し、
Ｒ２が、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０のアルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基及びニトロ基から選ばれる１〜２個の同じ又は異なる置換基を有するフェニル基を示す。
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を示す。｝
で示されるアシルスルホンアミド誘導体、その製薬上許容し得る塩、その水和物又はその溶媒和物。
【請求項２】
一般式：
0004491866.tif 000014
｛式中、Ｒ１は、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ２０のアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルチオ基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルスルフィニル基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルスルホニル基、Ｃ１〜Ｃ４のハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ４のハロアルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ８のアルコキシカルボニル基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキルアミノ基、Ｃ２〜Ｃ６のジアルキルアミノ基、Ｃ６〜Ｃ１４のアリール基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、アミジノ基、Ｃ１〜Ｃ１０のアルキル基若しくはアルケニル基を有するカルボキシル基及び水酸基から選ばれる１〜２個の同じ若しくは異なる置換基を有していても良いフェニル基若しくはナフチル基又は水素原子を示す。
Ｒ２は、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０のアルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基及びニトロ基から選ばれる１〜２個の同じ又は異なる置換基を有していても良いフェニル基を示す。
Ｒ３は、フェニル基又はナフチル基を示す。
Ｘは、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を示す。｝
で示されるアシルスルホンアミド誘導体、その製薬上許容し得る塩、その水和物又はその溶媒和物を有効成分とする医薬組成物。
【請求項３】
キマーゼ阻害剤である請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
高血圧、鬱血性心不全、心筋症、動脈硬化症、冠状動脈疾患、心筋梗塞、血管形成手術若しくは血栓溶解治療後の血管再狭窄、抹消循環障害、血管炎、糖尿病性若しくは非糖尿病性腎臓病、肺高血圧症、気管支喘息、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、肺気腫、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ、関節炎又は癌の治療及び／又は予防のための請求項２記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、キマーゼ阻害作用を有する新規なアシルスルホンアミド誘導体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
キマーゼは、肥満細胞顆粒中に存在し、キモトリプシン様基質に対して特異性を示すセリンプロテアーゼであるが、肥満細胞の脱顆粒により分泌され、ヘパラン硫酸プロテオグリカンなどの細胞外マトリックスに結合することで、心臓、血管、皮膚などにおいて長期にわたって酵素活性を発揮し、様々な生体反応に深く関与していることが知られている。最近、キマーゼが、心臓や血管などにおいて、極めて強力な血管収縮物質であるアンジオテンシンIIの産生に関与していることが報告された（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．６６，８８３，１９９０）。従って、キマーゼ阻害作用を有する化合物は、アンジオテンシンIIが関与する循環器疾患（例えば、高血圧、心不全、冠状動脈性疾患、糖尿病性及び非糖尿病性腎症等）の新しい治療薬として期待されている。また、キマーゼは、アンジオテンシンIIを産生する以外に、肥満細胞の脱顆粒促進、インターロイキン−１−βの活性化、マトリックスメタロプロテアーゼの活性化、トランスフォーミンググロースファクターβの遊離など多様な作用を有しており、その阻害剤は、新しいタイプの抗炎症剤や抗アレルギー剤になり得るとして注目されている。
現在までに、キマーゼ阻害作用を有する化合物が、例えば、国際特許出願公開第９３／２５５７４号、国際特許出願公開第９６／０４２４８号、国際特許出願公開第９８／０９９４９号等に開示されているが、医薬品として実用上満足な結果が得られているとは言えず、臨床的に応用された例もない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、ヒトキマーゼを選択的に阻害することによって、各種の疾患を予防、治療できる新規なアシルスルホンアミド誘導体及びそれを有効成分とする医薬を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は上記目的を達成するため、鋭意検討した結果、優れたキマーゼ阻害作用を有する新規なアシルスルホンアミド誘導体を見出した。すなわち本発明の要旨は、下記一般式（Ｉ）
【０００５】
【化２】
0004491866.tif 000002
【０００６】
｛式中、Ｒ1 は置換基を有していても良いフェニル基、ナフチル基又は水素原子を示し、Ｒ2 はハロゲン原子、アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基及びニトロ基から選ばれる置換基を有していても良いフェニル基又は水素原子を示す。但し、Ｒ1 とＲ2 が同時に水素原子であることは無い。Ｒ3 は置換基を有していても良いアリール基を示す。Ｘは−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ｎは０〜２の整数を表す）又は単結合を示す。｝で示されるアシルスルホンアミド誘導体、その製薬上許容し得る塩、並びにその水和物もしくは溶媒和物及びこれらを有効成分とする医薬組成物並びにキマーゼ阻害剤、各種疾患の治療及び予防薬に存する。
一般式（Ｉ）の化合物には、光学活性体が存在する場合があるが、本発明はラセミ体及び光学活性体の何れをも包含するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の新規なアシルスルホンアミド誘導体は前記一般式（Ｉ）で示される。一般式（Ｉ）において、Ｒ1 は置換基を有していても良いフェニル基、ナフチル基又は水素原子を示す。
【０００８】
これらの基の置換基としては、ハロゲン原子、Ｃ1 〜Ｃ20のアルキル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルコキシ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルチオ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルフィニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルホニル基、Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルキル基、Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルコキシ基、Ｃ2 〜Ｃ8 のアルコキシカルボニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基、Ｃ2 〜Ｃ6 のジアルキルアミノ基、Ｃ6 〜Ｃ14のアリール基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、アミジノ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキル基またはアルケニル基を有するカルボキシル基、水酸基及び複素環基の中から選ばれる１〜２個の同じ又は異なる基が挙げられる。
【０００９】
上記ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子が挙げられ、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルコキシ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルチオ基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルフィニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルスルホニル基、Ｃ2 〜Ｃ8 のアルコキシカルボニル基、Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基、Ｃ2 〜Ｃ6 のジアルキルアミノ基におけるアルキル鎖部分としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、イソヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などが挙げられる。
【００１０】
上記Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルキル基としては、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、トリクロロメチル基、ペンタクロロエチル基などが挙げられ、上記Ｃ1 〜Ｃ4 のハロアルコキシ基としては、トリフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、２，２，２−トリフルオロエトキシ基、１，１，２，２−テトラフルオロエトキシ基などが挙げられる。
【００１１】
Ｃ2 〜Ｃ6 のアルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基などが挙げられる。
Ｃ1 〜Ｃ10のアルキルアミノ基としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基などが挙げられ、Ｃ2 〜Ｃ6 のジアルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基などが挙げられ、上記のＣ6 〜Ｃ14の芳香族炭化水素環基としては、例えばフェニル基、ナフチル基などが挙げられる。
【００１２】
また、上記の複素環基としては、２−チエニル基、３−チエニル基、１−チアンスレニル基、２−チアンスレニル基、２−フリル基、３−フリル基、２Ｈ−ピラン−３−イル基、２Ｈ−ピラン−４−イル基、２Ｈ−ピラン−５−イル基、２Ｈ−ピラン−６−イル基、イソベンゾフラニル基、２Ｈ−クロメン−３−イル基、２Ｈ−クロメン−４−イル基、２Ｈ−クロメン−５−イル基、２Ｈ−クロメン−６−イル基、２Ｈ−クロメン−７−イル基、２Ｈ−クロメン−８−イル基、２Ｈ−ピロール−３−イル基、２Ｈ−ピロール−４−イル基、２Ｈ−ピロール−５−イル基、２−ピロリル基、３−ピロリル基、１−イミダゾリル基、２−イミダゾリル基、４−イミダゾリル基、５−イミダゾリル基、１−ピラゾリル基、３−ピラゾリル基、４−ピラゾリル基、５−ピラゾリル基、３−イソチアゾリル基、４−イソチアゾリル基、５−イソチアゾリル基、３−イソキサゾリル基、４−イソキサゾリル基、５−イソキサゾリル基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、４−ピリジル基、２−ピラジニル基、２−ピリミジニル基、４−ピリミジニル基、５−ピリミジニル基、３−ピリダジニル基、４−ピリダジニル基、１−インドリジニル基、２−インドリジニル基、３−インドリジニル基、５−インドリジニル基、６−インドリジニル基、７−インドリジニル基、８−インドリジニル基、１−イソインドリル基、４−イソインドリル基、５−イソインドリル基、３Ｈ−インドール−２−イル基、３Ｈ−インドール−４−イル基、３Ｈ−インドール−５−イル基、１−インドリル基、２−インドリル基、３−インドリル基、４−インドリル基、５−インドリル基、６−インドリル基、７−インドリル基、１Ｈ−インダゾール−３−イル基、１Ｈ−インダゾール−４−イル基、１Ｈ−インダゾール−５−イル基、１Ｈ−インダゾール−６−イル基、１Ｈ−インダゾール−７−イル基、２−プリル基、６−プリル基、８−プリル基、４Ｈ−キノリジン−１−イル基、４Ｈ−キノリジン−２−イル基、４Ｈ−キノリジン−３−イル基、４Ｈ−キノリジン−６−イル基、４Ｈ−キノリジン−７−イル基、４Ｈ−キノリジン−８−イル基、４Ｈ−キノリジン−９−イル基、１−イソキノリル基、３−イソキノリル基、４−イソキノリル基、５−イソキノリル基、６−イソキノリル基、７−イソキノリル基、８−イソキノリル基、２−キノリル基、３−キノリル基、４−キノリル基、５−キノリル基、６−キノリル基、７−キノリル基、８−キノリル基、１Ｈ−テトラゾール−５−イル基、３Ｈ−テトラゾール−５−イル基、１−フタラジニル基、５−フタラジニル基、６−フタラジニル基、１，８−ナフチリジン−２−イル基、１，８−ナフチリジン−３−イル基、１，８−ナフチリジン−４−イル基、２−キノキサリニル基、５−キノキサリニル基、６−キノキサリニル基、２−キナゾリニル基、４−キナゾリニル基、５−キナゾリニル基、６−キナゾリニル基、７−キナゾリニル基、８−キナゾリニル基、３−シンノリニル基、４−シンノリニル基、５−シンノリニル基、６−シンノリニル基、７−シンノリニル基、８−シンノリニル基、２−プテリジニル基、４−プテリジニル基、６−プテリジニル基、７−プテリジニル基、４ａＨ−カルバゾール−１−イル基、４ａＨ−カルバゾール−２−イル基、４ａＨ−カルバゾール−３−イル基、４ａＨ−カルバゾール−４−イル基、４ａＨ−カルバゾール−５−イル基、４ａＨ−カルバゾール−６−イル基、４ａＨ−カルバゾール−７−イル基、４ａＨ−カルバゾール−８−イル基、１−カルバゾリル基、２−カルバゾリル基、３−カルバゾリル基、４−カルバゾリル基、β−カルボリン−１−イル基、β−カルボリン−３−イル基、β−カルボリン−４−イル基、β−カルボリン−５−イル基、β−カルボリン−６−イル基、β−カルボリン−７−イル基、β−カルボリン−８−イル基、１−アクリジニル基、２−アクリジニル基、３−アクリジニル基、４−アクリジニル基、９−アクリジニル基、１−フェナジニル基、２−フェナジニル基、１−フェノチアジニル基、２−フェノチアジニル基、３−フェノチアジニル基、４−フェノチアジニル基、３−フラザニル基、１−フェノキサジニル基、２−フェノキサジニル基、３−フェノキサジニル基、４−フェノキサジニル基、１−イソクロマニル基、３−イソクロマニル基、４−イソクロマニル基、５−イソクロマニル基、６−イソクロマニル基、７−イソクロマニル基、８−イソクロマニル基、２−クロマニル基、３−クロマニル基、４−クロマニル基、５−クロマニル基、６−クロマニル基、７−クロマニル基、８−クロマニル基、１−ピロリジニル基、２−ピロリジニル基、３−ピロリジニル基、２−ピロリン−１−イル基、２−ピロリン−２−イル基、２−ピロリン−３−イル基、２−ピロリン−４−イル基、２−ピロリン−５−イル基、１−イミダゾリジニル基、２−イミダゾリジニル基、３−イミダゾリジニル基、２−イミダゾリン−１−イル基、２−イミダゾリン−２−イル基、２−イミダゾリン−４−イル基、２−イミダゾリン−５−イル基、１−ピラゾリジニル基、３−ピラゾリジニル基、４−ピラゾリジニル基、３−ピラゾリン−１−イル基、３−ピラゾリン−２−イル基、３−ピラゾリン−３−イル基、３−ピラゾリン−４−イル基、３−ピラゾリン−５−イル基、１−ピペリジル基、２−ピペリジル基、３−ピペリジル基、４−ピペリジル基、１−ピペラジニル基、２−ピペラジニル基、１−インドリニル基、２−インドリニル基、３−インドリニル基、４−インドリニル基、５−インドリニル基、６−インドリニル基、７−インドリニル基、１−イソインドリニル基、２−イソインドリニル基、４−イソインドリニル基、５−イソインドリニル基、１−キヌクリジニル基、２−キヌクリジニル基、３−キヌクリジニル基、４−キヌクリジニル基、２−モルフォリニル基、３−モルフォリニル基、４−モルフォリニル基、１，２，４−トリアゾール−３−イル基、１，２，３−トリアゾール−４−イル基、１，２，４−オキサジアゾール−３−イル基、１，２，４−オキサジアゾール−５−イル基、１，２，４−チアジアゾール−３−イル基、１，２，４−チアジアゾール−５−イル基、ベンゾチアゾール−２−イル基、ベンズオキサゾール−２−イル基、ベンズイミダゾール−２−イル基、ベンズイソキサゾール−３−イル基、ベンズイソチアゾール−３−イル基、ベンズイソチアゾール−３−イル−１，１−ジオキサイド基、インドール−３−イル基、ｓｙｎ−���リアジニル基、ａｓ−トリアジニル基などが挙げられる。
また、２つの置換基が連結して環状構造を形成しても良く、その環の大きさは、化学的に安定に存在し得る４員環、５員環、６員環、７員環、８員環であり、その環状構造に１つ以上のヘテロ原子（酸素原子、窒素原子、硫黄原子、）を含むものが挙げられる。
【００１３】
一般式（Ｉ）において、Ｒ2 は水素原子又はハロゲン原子、アルコキシ基、アミノ基、シアノ基、カルボキシル基、ニトロ基から選ばれる置換基を有していても良いフェニル基である。上記ハロゲン原子としてはフッ素原子、塩素原子、臭素原子が挙げられる。アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ｉ−プロポキシ基、ブトキシ基、ｉ−ブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ペントキシ基、ｉ−ペントキシ基、ネオペントキシ基、ｔ−ペントキシ基、ヘキシルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基等のＣ1 〜Ｃ10の直鎖もしくは分岐鎖を有するアルコキシ基が挙げられる。
一般式（Ｉ）において、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2 又は単結合を示す。なお、一般式（Ｉ）においてＲ1 とＲ2 が同時に水素原子であることは無い。
【００１４】
一般式（Ｉ）の化合物は、それ自体公知の方法を組み合せて製造することができる。
本発明化合物には光学異性体が存在するが、Ｒ配置、Ｓ配置およびそれらの混合配置いずれもが本発明の範囲内である。
本発明化合物は、例えば以下の様な方法で製造することができる。
【００１５】
【化３】
0004491866.tif 000003
【００１６】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＸは前記と同義であり、Ｘ′は−ＯＨまたは−ＳＨであり、Ｈａｌはハロゲンであり、Ｒは低級アルキルである。）
本製造方法では化合物（１）と（２）を適当な条件下で縮合させて化合物（３）を得、それを通常の方法で加水分解して化合物（４）を得る。縮合反応は、例えばジメチルホルムアミド、アセトニトリル、アセトン等の溶媒中で炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム等の塩基の存在下に室温〜加温下、好ましくは８０℃付近で、数時間〜２４時間、好ましくは０．５〜６時間程度反応させればよい。加水分解はメタノール、エタノール等の低級アルコールに化合物（３）を溶解し、適当な濃度、例えば１Ｎの水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム水溶液等の塩基を加えて冷却下〜加温下、好ましくは室温付近で１時間〜２４時間程度反応させれば化合物（４）が得られる。
【００１７】
【化４】
0004491866.tif 000004
（式中Ｒ3 は前記と同義である。）
【００１８】
次に、溶媒に溶かした化合物（４）のカルボキシル基を活性化し、塩基存在下で冷却下〜加温下、好ましくは室温付近でスルホンアミド化合物（５）と縮合させて化合物（Ｉ）を得る。
溶媒としては例えばテトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメトキシエタン、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン等を用いればよく、カルボキシル基の活性化には例えば１，１′−カルボニルジイミダゾールが用いられる。塩基としては例えば１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エンを好適に用いることができる。
上記合成法に用いる化合物（１）、（２）、（５）は、公知の化合物または公知物から通常の方法で合成した化合物を用いることも可能である。
【００１９】
本発明のアシルスルホンアミド誘導体は、キマーゼに対する選択的な阻害作用を有することから、キマーゼの関与する各種疾患の治療及び予防に有用である。具体的には、高血圧、鬱血性心不全、心筋症、動脈硬化症、冠状動脈疾患、心筋梗塞、血管形成手術又は血栓溶解治療後の血管再狭窄、抹消循環障害、血管炎、糖尿病性又は非糖尿病性腎臓病、肺高血圧症、気管支喘息、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、肺気腫、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、リウマチ、関節炎、癌等が挙げられる。
【００２０】
本発明化合物を医薬として用いる場合には、その有効成分として、本発明で構造を規定する化合物又はその製薬上許容しうる塩、並びにそれらの水和物及び溶媒和物から選ばれる有効成分である物質と、薬学的に許容され得る固体又は液体の医薬用担体又は希釈剤と共に、即ち賦形剤や安定剤等と共に、製剤とし、ヒトを含む動物に経口又は非経口的に投与可能である。非経口投与としては、例えば、静脈、皮下、筋肉、経皮、直腸、経鼻、点眼内への投与が挙げられる。なお、当該製剤において、前記有効成分の担体成分に対する割合は、１〜９０重量％の間で変動させることができる。
【００２１】
経口投与剤の剤型としては、例えば、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、カプセル剤等が挙げられる。錠剤の成型方法としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤等の製薬学的に許容される担体を用いて通常の方法により成型することができる。丸剤、顆粒剤、散剤も錠剤の場合と同様に賦形剤等を用いて通常の方法により成型することができる。液剤、シロップ剤の成型方法は、グリセリンエステル類、アルコール類、水、植物油等を用いて通常の方法により成型することができる。カプセル剤の成型方法は、顆粒剤、散剤、あるいは液剤等を、ゼラチン等のカプセルに充填することによって成型することができる。
【００２２】
非経口投与剤のうち、静脈、皮下、筋肉内投与の場合には、注射剤として投与することができる。注射剤としては、本発明で構造を規定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を生理的食塩水などの水溶性液剤に溶解する場合、あるいは、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油等の有機エステルからなる非水溶性液剤に溶解する場合等が挙げられる。
経皮投与の場合には、例えば軟膏剤、クリーム剤などの剤型として用いることができる。すなわち、本発明で構造を規定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を、軟膏剤としては、油脂類又はワセリン等と混合し、クリーム剤としては、乳化剤と混合し、成型することができる。
直腸投与の場合には、ゼラチンソフトカプセルなどを用いて坐剤とすることができる。
【００２３】
経鼻投与の場合には、液状又は粉末状の組成物からなる製剤として用いることができる。液状剤の基剤としては、水、食塩水、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液等が用いられ、更に、界面活性剤、酸化防止剤、安定剤、保存剤、粘性付与剤を含んでいてもよい。粉末状剤の基剤としては、例えば、水易溶性のポリアクリル酸塩類、セルロース低級アルキルエーテル類、ポリエチレングリコールポリビニルピロリドン、アミロース等の水吸収性のもの、あるいは、例えば、セルロース類、タンパク類、ガム類、架橋ビニル重合体類等の水難溶性のものが挙げられ、これらを混合して用いてもよい。さらに、粉末状剤には、酸化防止剤、着色剤、保存剤、防腐剤、矯腐剤等を添加してもよい。
【００２４】
点眼内投与の場合は、水性あるいは非水性の点眼剤として使用することができる。水性点眼剤としては、溶剤として滅菌精製水、生理的食塩水等を用いることができる。溶剤として滅菌精製水のみを用いた場合、界面活性剤、高分子増粘剤等の懸濁剤を加えて水性懸濁点眼剤として用いることができ、また、非イオン性界面活性剤等の可溶化剤を加えて可溶化点眼液として用いることもできる。非水性点眼剤としては、溶剤に注射用非水性溶剤を用いることができ、非水性懸濁点眼液として用いることができる。
鼻、口等から吸入する場合においては、本発明で構造を規定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を、一般的に用いられる製薬賦形剤との溶液または懸濁液として、例えば、吸入用エアゾルスプレー等を用いて投与する。あるいは、本発明で構造を規定する化合物又はその製薬上許容しうる塩を、乾燥粉末状とし、肺と直接接触させる吸入器等を用いて投与することもできる。
【００２５】
これらの種々の製剤には、必要に応じて、等張化剤、保存剤、防腐剤、湿潤剤、緩衝剤、乳化剤、分散剤、安定剤等の製薬学的に許容される担体を添加することができる。また、これらの製剤には、必要に応じて、殺菌剤の配合、バクテリア保留フィルターを用いた濾過、加熱、照射等の処置を行い無菌化することができる。あるいは、無菌の固形製剤を製造し、使用直前に適当な無菌溶液に溶解あるいは懸濁して使用することもできる。
臨床投与量は、疾患の種類、投与経路、患者の症状、年齢、性別、体重等を考慮した上で設定することが望ましいが、成人に対し経口的に投与する場合には、１〜１０００ｍｇ／日を１回〜数回に分けて投与する。非経口投与的に投与する場合には、投与経路により大きく異なるが、通常、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ／日を１回〜数回に分けて投与する。
【００２６】
【実施例】
以下、本発明化合物の製造例及び薬理試験例を示して本発明を更に具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例に制約されるものではない。
なお、薬理試験に使用したキマーゼの取得方法を参考例として示す。
また、化合物Ｎｏ．は表−１の化合物Ｎｏ．に対応する。
【００２７】
参考例１
ヒト心臓由来キマーゼｃＤＮＡの取得
ヒト心臓のｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）から、ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）法により、ヒト心臓キマーゼのｃＤＮＡの取得を行った。反応に用いた合成オリゴヌクレオチドＤＮＡの配列は以下の通りである。
ＭＹ８１：
ＡｇＣＣＴＣＴＣＴｇｇｇＡＡｇＡＴｇＣＴｇＣＴＴ
ＭＹ８２：
ＧｇＡＴＣＣＡｇｇＡＴＴＡＡＴＴＴｇＣＣＴｇＣＡｇ
ＭＹ９７：
ｇＡＴｇＣＴｇＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＣＣＣＣＣＴｇＣＴｇ
ＭＹ９９：
ＴＴＡＡＴＴＴｇＣＣＴｇＣＡｇｇＡＴＣＴｇｇＴＴｇＡＴＣＣＡ
なお、このプライマー配列は、ＧｅｎＢａｎｋのアクセッション番号Ｍ６９１３６を参考にして決定した。
【００２８】
まず始めに、ヒト心臓由来のｃＤＮＡを１ｕｌ、２．５ｍＭ  ｄＡＴＰ，２．５ｍＭ  ｄＴＴＰ，２．５ｍＭ  ｄＧＴＰ，２．５ｍＭ  ｄＣＴＰを２ｕｌ、２０ｕＭ  ＭＹ８１を５ｕｌ、２０ｕＭ  ＭＹ８２を５ｕｌ、Ｔａｑ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社製）を１ｕｌ、Ｔａｑ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅに添付されてきた反応バッファー１０ｕｌの混合液に滅菌した水を７６ｕｌ加えて１００ｕｌとし、９４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、１分間を１サイクルとする反応を２４回繰り返した後、９４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、５分間の反応を１回行った。更に、この反応産物の溶液１ｕｌ、２．５ｍＭ  ｄＡＴＰ，２．５ｍＭ  ｄＴＴＰ，２．５ｍＭ  ｄＧＴＰ，２．５ｍＭ  ｄＣＴＰを２ｕｌ、２０ｕＭ  ＭＹ９７を５ｕｌ、２０ｕＭ  ＭＹ９９を５ｕｌ、Ｔａｑ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  を１ｕｌ、反応バッファー１０ｕｌの混合液に滅菌した水を７６ｕｌ加えて１００ｕｌとし、９４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、１分間を１サイクルとする反応を２４回繰り返した後、９４℃、１分間、５５℃、２分間、７２℃、５分間の反応を１回行った。反応液５ｕｌを１％アガロースゲルで電気泳動を行ったところ、約７４５ｂｐのＤＮＡ断片が特異的に増幅されていることが確認された。このＤＮＡ断片をｐＣＲIIベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）にサブクローニングし（このベクターをｐＣＲII−ｈＣｈｙと呼ぶことにする）、ＤＮＡ配列を蛍光ＤＮＡシークエンサー（ｍｏｄｅｌ  ３９４：Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使って解析した。その結果、増幅されたＤＮＡは、ＧｅｎＢａｎｋのアクセッション番号Ｍ６９１３６として登録されているＤＮＡ配列の１６番から７５９番の間の領域を含み、ヒト心臓キマーゼのタンパク質をコードするＤＮＡであることが確認された。
【００２９】
参考例２
ヒトキマーゼ遺伝子を大腸菌で発現させるためのベクターの構築（１）
ヒトキマーゼ遺伝子を大腸菌に発現させるためのベクターの構築を行った。
まず参考例１において取得されたｐＣＲII−ｈＣｈｙベクターを鋳型とし、Ｓｐ６、ＭＹ１１９をプライマーとしてそれぞれ用いてＰＣＲを行った。合成オリゴヌクレオチドＤＮＡプライマーＳｐ６とＭＹ１１９の配列は以下のとおりである。
Ｓｐ６
ＡＴＴＴＡｇｇＴｇＡＣＡＣＴＡＴＡｇＡＡ
ＭＹ１１９
ＣＡｇＡＡＡＴＡＴＴｇＡＡｇｇｇＡｇｇＡＴＣＡＴＣｇｇｇｇｇＣＡＣＡｇＡＡＴｇＣＡＡ
なお、ＭＹ１１９には、ヒトキマーゼの遺伝子を増幅するために必要な塩基配列に加えて、ＳｓｐＩ制限酵素切断部位、ファクターＸａプロテアーゼによって切断されるアミノ酸配列（ＩＥＧＲ：イソロイシン、グルタミン酸、グリシン、アルギニン）を導入するための塩基配列が付加されている。
【００３０】
ＰＣＲにより増幅された約８００ｂｐのＤＮＡ断片を、制限酵素ＳｓｐＩとＥｃｏＲＩによって処理した後、制限酵素ＥｈｅＩとＥｃｏＲＩ処理によって直鎖状にしたｐＰＲＯＥＸ−１ベクター（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）とライゲーション反応を行った。得られたコンストラクションを蛍光ＤＮＡシークエンサーを使ってタンパク質翻訳領域の配列解析を行ったところ、Ｎ末端側にｐＰＲＯＥＸ−１ベクターに由来するペプチド（翻訳開始のメチオニン、６個の連続したヒスチジン残基、ｒＴＥＶプロテアーゼ切断配列を含む）を、Ｃ末端側にファクターＸａプロテアーゼによって切断されるアミノ酸配列と成熟型ヒトキマーゼ（前駆体型ヒトキマーゼの１１番のイソロイシンから２４７番のアスパラギンまで）のアミノ酸配列をもつ融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列であることが確認された。そして、このベクターをｐＰＲＯ−ｈＣｈｙと呼ぶことにした。
【００３１】
参考例３
ヒトキマーゼ遺伝子を大腸菌で発現させるためのベクターの構築（２）
ｐＰＲＯ−ｈＣｈｙベクターは、制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＩで処理すると、２つのＤＮＡ断片に切断される。このうち小さい方の約７７０ｂｐの断片をアガロース電気泳動で精製し、制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＩ処理によって直鎖状にしたｐＥＴ２４Ｄベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ社製）とライゲーション反応を行った。得られたコンストラクションを蛍光ＤＮＡシークエンサーを使ってタンパク質翻訳領域の配列解析を行ったところ、ｐＰＲＯ−ｈＣｈｙと全く同じ融合タンパク質が翻訳されるＤＮＡ配列であることが確認された。このベクターをｐＥＴ−ｈＣｈｙと呼ぶことにした。
ヒト心臓キマーゼのｃＤＮＡ取得から、ｐＥＴ−ｈＣｈｙの構築までの流れを図１として示す。
【００３２】
参考例４
ヒトキマーゼ部分ペプチドに対する抗血清の作製
Ｎ−ＣＶＧＮＰＲＫＴＫＳＡＦＫＧＤＳＧＧ−Ｃの配列を有するペプチドを合成し、ＭＢＳ（ｍ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｂｅｎｚｏｙｌ−Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｅｓｔｅｒ）を介してＫＬＨ（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）と結合させる。この複合体をフロインド完全アジュバントまたは、フロインド不完全アジュバントと一緒に雌性日本白色種ウサギに注射する。得られた抗血清をＶ８０と呼ぶことにした。ペプチドの合成及び抗血清取得は、パナファーム・ラボラトリーズ株式会社に依頼した。
【００３３】
参考例５
成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の大腸菌における発現
大腸菌ＢＬ２１株コンピテントセルに参考例２で示したｐＰＲＯ−ｈＣｈｙベクターを導入し、１００ｕｇ／ｍｌのアンピシリンを含むＬＢ（Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ培地）アガロースプレートで選択培養を行った。また、大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株コンピテントセルに参考例３で示したｐＥＴ−ｈＣｈｙベクターを導入し、３０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＬＢアガロースプレートで選択培養を行った。プレート上でクローン化した大腸菌は、１００ｕｇ／ｍｌのアンピシリン、もしくは、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含む１００ｍｌのＬＢ培地中において、３７℃で振盪培養した。１２時間後、この培養液を１００ｕｇ／ｍｌのアンピシリン、もしくは、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンを含む新しい９００ｍｌのＬＢ培地に入れて、３７℃で振盪培養を続けた。６００ｎｍの吸光度が０．４の細胞密度に到達したところで、１００ｍＭのＩＰＴＧ（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１−ｔｈｉｏ−ｂ−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）を最終濃度が１ｍＭになるように加えて、更に３時間３７℃で振盪培養を行った。
【００３４】
参考例６
大腸菌からの成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の抽出
液体培地で大量に培養した大腸菌は、４０００Ｘｇ、２０分、４℃の遠心分離で沈殿させ、１００ｍｌの結合バッファー（５ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウム、２０ｍＭトリス塩酸バッファー（ｐＨ７．９））で４℃にて再懸濁後、再び４０００Ｘｇ、２０分、４℃の遠心分離で沈殿させた。そして、回収した大腸菌を、１００ｍｌの結合バッファーで再懸濁し、ソニケーター（ＴＡＩＴＥＣ社製、ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃａｔｏｒ）を出力レベルを１０、サイクルを４０％に設定して４℃にて粉砕した。このソニケーションをかけたサンプルを１２０００Ｘｇ、２０分、４℃の遠心によって、上清（上清１と呼ぶ）と沈殿（沈殿１と呼ぶ）に分離し、上清１を更に、１２０００Ｘｇ、２０分、４℃で遠心することにより上清（上清２と呼ぶ）と沈殿（沈殿２と呼ぶ）に分離した。沈殿１と沈殿２は、一緒に合わせ、６Ｍ尿素を含む結合バッファーを１００ｍｌ加えて再び同一条件のソニケーションにかけて完全に再懸濁し、１時間、氷上にてインキュベートした。この溶液を１２０００Ｘｇ、２０分、４℃で遠心して上清（上清３と呼ぶ）と沈殿（沈殿３と呼ぶ）に分離した。最終的に得られた画分は次のようになる。
上清２：可溶性画分
上清３：６Ｍ尿素で可溶化された画分
沈殿３：６Ｍ尿素で可溶化されない画分
大腸菌にて発現させた成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質がこの３つの画分のどれに主要に存在するかを、参考例４で取得した抗ヒトキマーゼペプチド抗体（Ｖ８０）を用いたウェスタンプロッティングにより解析した。上清２と上清３にヒトキマーゼ融合タンパク質が１対４に割合で存在することが確認された。
【００３５】
参考例７
大腸菌からの成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の精製
融合タンパク質を精製するのには、ヒスチジンタグアミノ酸配列へのニッケルイオンキレートカラム（Ｎｏｖａｇｅｎ社製）のアフィニティーを利用した。上清２から精製を行う場合は、通常の結合バッファー、洗浄バッファー、溶出バッファーを用いたが、尿素を含む上清３からの精製を行う場合には、それぞれのバッファーに６Ｍの尿素を加えた。まず、カラム樹脂（上清２０ｍｌにつき、樹脂体積１ｍｌを使用）を、その５倍体積の５０ｍＭ硫酸ニッケル水溶液で前処理し、３倍体積の結合バッファーで平衡化した。上清２および３は、０．４５ｕｍのポアサイズのフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）で濾過した後、カラムにロードした。サンプルをのせた後のカラムは、１０倍体積の結合バッファー、６倍体積の洗浄バッファー（２０ｍＭイミダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウム、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．９））で洗浄し、５倍体積の溶出バッファー（１Ｍイミダゾール、０．５Ｍ塩化ナトリウム、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．９））で溶出を行った。溶出液は、１．２５ｍｌずつの分画として集めて−２０℃にて保存した。どの分画に融合タンパク質が溶出してきているかは、抗ヒトキマーゼペプチド抗体（Ｖ８０）を用いたウェスタンプロッティングによって解析を行った。
【００３６】
参考例８
成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の再構成
上清３より精製を行った場合、溶出液には６Ｍの尿素が含まれている。タンパク質の沈殿を極力防ぎかつ精製タンパク質が酵素活性を保持する条件でこの尿素を除去した。まず、溶出液を６Ｍ尿素、０．１％トライトンＸ−１００を含む結合バッファーで１０倍希釈し、以下に示した１）から４）の溶液（希釈したサンプル５０ｍｌ対して２Ｌの透析液を使用）に対して、この番号順で４℃、１２時間ずつ合計４８時間透析を行った。
１）４Ｍ尿素、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１００
２）２Ｍ尿素、２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１００
３）トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１００
４）トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１００、１ｍＭ塩化カルシウム
透析後のサンプルは、１２，０００Ｘｇ、４℃、２０分の遠心分離で沈澱物を除き、更に、０．２２ｕｍのフィルターで濾過を行い、アミコンＹＭ１０とセントリコン−１０（Ａｍｉｃｏｎ社製）を使って約１０倍程度に濃縮をした。濃縮液のタンパク質濃度は、プロテインアッセイ（Ｂｉｏｒａｄ社製）を使って定量した。
【００３７】
参考例９
成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質の活性化
生体では、細胞内で翻訳されたキマーゼタンパク質は、Ｎ末端側に１９アミノ酸残基のシグナルペプチド配列を持っている。この最初に翻訳されたキマーゼタンパク質は細胞外に分泌される過程において、シグナルペプチド領域が切断され、成熟体のＮ末端にグリシンとグルタミン酸の２アミノ酸残基がついたプロ体となる。プロ体にはプロテアーゼの活性はなく、何らかのプロテアーゼによってこの２アミノ酸プロ配列がプロセシングを受け、活性を有する成熟体に変換することがわかっている。
【００３８】
本明細書において大腸菌で発現させた成熟型ヒトキマーゼは、参考例２において示したように、成熟型ヒトキマーゼのＮ末端側に６個の連続したヒスチジン残基、ｒＴＥＶプロテアーゼ切断配列、ファクターＸａプロテアーゼによって切断されるアミノ酸配列との融合タンパク質である。従って、この融合タンパク質にはキマーゼの活性が無いことが予測される。成熟型ヒトキマーゼのＮ末端側に付加したアミノ酸タグ配列を切り出して、活性を有するヒトキマーゼを取得するために、ファクターＸａ（Ｄａｎｅｘ  Ｂｉｏｔｃｋ社製）による処理を行った。
【００３９】
１００ｕｇのヒトキマーゼ融合タンパク質を、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）、０．５Ｍ塩化ナトリウム、０．１％トライトンＸ−１００、１ｍＭ塩化カルシウム中で１ｕｇのファクターＸａと３７℃で３時間インキュベートした。ファクターＸａ処理前と処理後のサンプルをＳＤＳ  Ｐｏｌｙ  ａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）及び、ウェスタンプロッティングによって解析すると、処理前に約３０ｋＤａであった分子量が、処理後に約２７ｋＤａへシフトすることがわかった。使用した酵素の特異性と分子量の変化より、成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質のＮ末端側に付加したタグ配列がファクターＸａ認識部位で切断されたものと考察された。
【００４０】
次にファクターＸａ処理したサンプルのキマーゼ活性を測定した。アンジオテンシンＩは、活性化したキマーゼによって、アンジオテンシンIIとヒスチジン−ロイシンのジペプチドに分解されることが知られている。
アンジオテンシンＩ→アンジオテンシンII＋Ｈｉｓ−Ｌｅｕ        （イ）
ファクターＸａ処理したキマーゼサンプルを１５０ｍＭホウ酸−四ホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．５）中で、０．７７ｍＭアンジオテンシンＩと３７℃で２時間インキュベーションした。このプロテアーゼ反応を逆相クロマトグラフィー（カラム：Ｗｉｄｅ−Ｐｏｒｅ  Ｏｃｔａｄｅｃｙｌ（Ｃ１８）５  ｕｍ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ４．６Ｘ  ２５０ｍｍ（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ社製）、アセトニトリルの勾配：０％から４０％（０．１％トリフルオロ酢酸、０．０８％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルを使用）、流速：１ｍｌ／分）によって分析したところ、確かに上記（イ）の変換反応が起きていることがわかった。
【００４１】
（イ）の反応を多検体で評価し、反応の効率を定量化するためにマイクロプレートを使った反応と計測を行った。９％のトリクロロ酢酸を加えた後、１０，０００ｒｐｍで５分間遠心を行う。上清を回収し。０．８４Ｎの水酸化ナトリウム、０．７７％のオルトフタルアルデヒドを加えて、室温（２５℃）で５分間反応させる。２．６Ｎの塩酸を加えて、３４０ｎｍで励起し、４９０ｎｍの蛍光強度を測定した。その結果、
（Ａ）ファクターＸａで処理したキマーゼサンプルでは、アンジオテンシンＩの切断を観察することができた。しかし、
（Ｂ）ファクターＸａで処理していないキマーゼサンプル
（Ｃ）ヒトキマーゼ融合タンパク質と同等の精製過程を経た大腸菌（ＩＰＴＧによる誘導前）のタンパク質サンプル
（Ｄ）ファクターＸａのみでは、アンジオテンシンＩの切断は観察されなかった。
以上より、
＜１＞大腸菌によって発現させた成熟型ヒトキマーゼ融合タンパク質は、そのままでは、プロテアーゼ活性を持たないが、ファクターＸａ処理によって活性化しうること。
＜２＞ファクターＸａによって活性化されたヒトキマーゼは、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンIIに特異的に変換すること。
＜３＞この変換の活性は、大腸菌が持つ他のプロテアーゼやファクターＸａに起因する物ではなく、活性化させたヒトキマーゼによるものであること。
が確認された。
【００４２】
薬理試験例
組み換えヒトキマーゼの酵素活性阻害測定
参考例で得られた０．１〜０．２単位（なお、１単位は１秒間に１ｐｍｏｌのアンジオテンシンIIをアンジオテンシンＩから生成するキマーゼの酵素活性を示す）の活性型ヒトキマーゼを含むバッファーＡ（２Ｍ  ＫＣｌ，２０ｍＭトリス塩酸、ｐＨ８．０）の４０μｌに、バッファーＢ（４０ｍＭトリス塩酸，０．２％トライトンＸ−１００，５％アセトニトリル、ｐＨ８．０）１００μｌと、０．１ｍＭアプロチニン（和光純薬）２０μｌと、適当な濃度となるように調整された本発明において合成された化合物を含むスルホキシド溶液２０μｌを加えた後、基質として、２．５ｍＭスクシニル−アラニル−アラニル−プロリル−フェニルアラニル−パラニトロアニリド（ＳＩＧＭＡ）２０μｌを加え室温で反応させた。４０５ｎｍの吸光度の経時変化を測定し、阻害活性を調べｃｈｙｍａｓｅＩＣ50として示した。
【００４３】
キモトリプシンの酵素活性阻害測定
０．２Ｕ／ｍｌのキモトリプシン（ウシ膵臓由来、和光純薬）４０μｌに、バッファーＣ（５０ｍＭトリス塩酸，０．２％トライトンＸ−１００，５％アセトニトリル、ｐＨ８．３）１００μｌと、適当な濃度となるように調整された本発明において合成された化合物を含むジメチルスルホキシド溶液２０μｌを加えた後、基質として１ｍＭメトキシ−スクシニル−アルギニル−プロリル−チロシル−パラニトロアニリド（ＣＨＲＯＭＯＧＥＮＩＸ）４０μｌを加え室温で反応させた。４０５ｎｍの吸光度の経時変化を測定し、阻害活性を調べｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ  ＩＣ50として示した。
【００４４】
実施例１＜化合物Ｎｏ．１の合成＞
テトラヒドロフラン（以下ＴＨＦと略す）２０ｍｌ中に１．６２ｇ（１０ｍｍｏｌ）の１，１′−カルボニルジイミダゾールを溶解し、２．１２ｇ（１０ｍｍｏｌ）のジフェニル酢酸をＴＨＦ２０ｍｌに溶解したものを滴下した。０．５時間２５℃で撹拌した後０．５時間加熱還流した。反応液を２５℃に冷却し、２．０７ｇ（１０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミド及び１．４９ｍｌ（１０ｍｍｏｌ）の１，８−ジアザビシクロ−［５．４．０］−７−ウンデセンをＴＨＦ１０ｍｌに溶解したものを滴下し、一晩２５℃で撹拌した。反応液を１Ｎ塩酸水溶液２００ｍｌ中にあけ析出した結晶を濾取し、表題化合物を白色固体として３．８１ｇ（収率９５％）を得た。
【００４５】
実施例２＜化合物Ｎｏ．２の合成＞
実施例１と同様の方法で１．４１ｇ（５．０ｍｍｏｌ）のビス（４−クロロフェニル）酢酸と１．０４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから表題化合物を白色固体として１．５７ｇ（収率６７％）得た。
【００４６】
実施例３＜化合物Ｎｏ．３の合成＞
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下ＤＭＦと略す）２０ｍｌ中に１．２９ｇ（１０ｍｍｏｌ）の４−クロロフェノールと２．７８ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブロモフェニル酢酸エチルエステルから２−フェニル−２−（４−クロロフェノキシ）酢酸エステルを白色固体として１．７０ｇ（５７％）得た。次いで４．１５ｇ（３０ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムを加え、１時間８０℃で撹拌した。反応液を酢酸エチルで抽出し、蒸留水で１回洗浄後有機層を減圧下濃縮した。残渣をエタノール２０ｍｌに溶解し、１５ｍｌ（１５ｍｍｏｌ）の１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加え、０．５時間８０℃で撹拌した。氷冷下反応液を希塩酸で酸性とし、析出した固体を濾取し、２−フェニル−２−（４−クロロフェノキシ）酢酸を白色固体として２．３６ｇ（収率９０％）を得た。
この化合物１．３１ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから実施例１と同様にして、表題化合物を白色固体として１．４８ｇ（収率６５％）得た。
【００４７】
実施例４＜化合物Ｎｏ．４の合成＞
実施例３と同様にして０．９４ｇ（１０ｍｍｏｌ）のフェノールと２．４３ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブロモフェニル酢酸エチルエステルから２−フェニル−２−フェノキシ酢酸を白色固体として１．６３ｇ（収率７１％）得た。
この化合物１．１４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから表題化合物を白色固体として１．４４ｇ（収率６９％）得た。
【００４８】
実施例５＜化合物Ｎｏ．５の合成＞
実施例３と同様にして１．２９ｇ（１０ｍｍｏｌ）の４−クロロフェノールと２．７８ｇ（１０ｍｍｏｌ）のブロモ−４−クロロフェニル酢酸エチルエステルから２−（４−クロロフェニル）−２−（４−クロロフェノキシ）酢酸を白色固体として１．７０ｇ（収率５７％）得た。
この化合物１．４９ｇ（５．０ｍｍｏｌ）と１．０４ｇ（５．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから表題化合物を白色固体として２．１０ｇ（収率８６％）得た。
【００４９】
実施例６＜化合物Ｎｏ．１３の合成＞
実施例３と同様の方法で０．７７ｇ（７．０ｍｍｏｌ）のチオフェノールと２．０５ｇ（７．０ｍｍｏｌ）のブロモナフチル酢酸エチルエステルから２−ナフチル−２−フェニルチオ酢酸を白色固体として１．２０ｇ（収率５８％）得た。
この化合物１．１８ｇ（４．０ｍｍｏｌ）と０．８３ｇ（４．０ｍｍｏｌ）の２−ナフタレンスルホンアミドから表題化合物を白色固体として１．３０ｇ（収率６７％）得た。
実施例１〜６と同様にして合成したＮｏ．１〜Ｎｏ．１６の化合物の構造、分析値、薬理データを下記表−１に示した。
【００５０】
【表１】
0004491866.tif 000005
【００５１】
【表２】
0004491866.tif 000006
【００５２】
【表３】
0004491866.tif 000007
【００５３】
【表４】
0004491866.tif 000008
【００５４】
【表５】
0004491866.tif 000009
【００５５】
【表６】
0004491866.tif 000010
【００５６】
【表７】
0004491866.tif 000011
【００５７】
【表８】
0004491866.tif 000012
【００５８】
【発明の効果】
実施例から明らかな様に、本発明で得られる前記一般式（Ｉ）で示される新規なアシルスルホンアミド誘導体は、優れたキマーゼ阻害活性を有し、キマーゼの関与する各種疾患の治療及び予防のための医薬として期待される。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒト心臓キマーゼのｃＤＮＡ取得から、ｐＥＴ−ｈＣｈｙの構築までの流れを示す図。
【図１】
0004491866.tif 000015