(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被測定物に特異的に結合する第一の標識化物質に検体を接触させた後、前記検体を展開層において毛細管現象により展開し、
前記展開層の途中に形成された測定部に固定化された被測定物に結合する第二の物質により、前記被測定物と前記第一の標識化物質との複合体を捕捉し、
前記捕捉された複合体中の前記第一の標識化物質を測定することにより被測定物を測定する方法において、
第三の標識化物質を前記検体と共に展開し、前記測定部において前記第三の標識化物質の測定も行うことを含み、
前記第一の標識化物質の標識と前記第三の標識化物質の標識とは相互に識別可能であり、
前記第三の標識化物質の測定が、前記第三の標識化物質に結合可能であって前記測定部に固定化された前記第二の物質又は第四の物質によって前記測定部に固定化された前記第三の標識化物質を測定することで行われ、
第三の標識化物質の測定値に対する第一の標識化物質の測定値の比率から、被測定物を定量することを含む、測定方法。
【請求項２】
第一の標識化物質が第一の標識化抗体であり、固定化された第二の物質が固定化された第二の抗体であり、第三の標識化物質が第三の標識化抗体である請求項１記載の測定方法。
【請求項３】
第一の標識化物質が第一の標識化抗体であり、固定化された第二の物質が固定化された第二の抗体であり、第三の標識化物質が第三の標識化抗体であり、固定化された第四の物質が固定化された第四の抗体である請求項１記載の測定方法。
【請求項４】
第一の標識化物質の標識と第三の標識化物質の標識が、相互に色が異なる着色粒子である請求項１〜３のいずれか一項に記載の測定方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の測定方法に用いる検体分析用具であって、試薬部と、展開層と、前記展開層の途中に形成された測定部とを有し、前記測定部には、被測定物に結合する第二の物質が固定化され、前記試薬部は、第三の標識化物質および被測定物に特異的に結合する第一の標識化物質を有する検体分析用具。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の測定方法に用いる検体分析用具であって、試薬部と、展開層と、前記展開層の途中に形成された測定部とを有し、前記測定部には、第四の物質および被測定物に結合する第二の物質が固定化され、前記試薬部は、前記第四の物質に結合する第三の標識化物質および被測定物に特異的に結合する第一の標識化物質を有する検体分析用具。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、免疫クロマトグラフィーを用いた定量分析が可能な測定方法およびそれに用いる検体分析用具に関する。
【０００２】
【従来の技術】
免疫クロマトグラフィーは、免疫反応（抗原−抗体反応）を利用した測定方法であり、様々な物質の検出、定性分析または半定量分析に使用されている。免疫クロマトグラフィーは、被測定物に対する第一の標識化抗体に検体を接触させた後、前記検体を展開層において毛細管現象により展開し、前記展開層の途中に固定化された被測定物に対する第二の抗体により前記被測定物と前記第一の標識化物質との複合体を捕捉し、前記捕捉された複合体中の前記第一の標識化抗体を測定することにより被測定物を測定するという方法である。前記標識としては、通常、金属コロイドや着色ラテックス粒子が使用される。また、酵素を標識として用い、これに酵素反応によって検出可能な物質に変化する基質を作用させる場合もある。
【０００３】
他方、板状支持体上に試薬フィルム等を配置した検体分析用具（試験片ともいう）は、多数の検体を簡便に処理できること等から、多くの病院や検査機関で汎用されており、免疫クロマトグラフィーを適用した検体分析用具も開発され市販されている。例えば、妊娠診断用として、妊娠時に尿中に排出されるヒト繊毛性ゴナドトロビン（ｈＣＧ）に対する抗体を用いた分析用具が市販されている。また、免疫クロマトグラフィーを適用した検体分析用具は、被測定物に対する標識化抗体を含有する試薬部と、ニトロセルロースフィルター等を用いた展開層と、この展開層の途中に形成された測定部（固定化抗体が配置されている）とが板状支持体の上に配置された形態が一般的である。このような検体分析用具の具体例としては、例えば、米国特許第４４４６２３２号公報、特開昭５５−１５１００号公報、特開昭５８−７６７６３号公報、特開平４−６４０６２号公報、特開平５−２８１２３１号公報、特開平８−９４６１８号公報、特開平８−２４０５９１号公報、特開平８−２８５８５０号公報等に記載された検体分析用具がある。
【０００４】
このような免疫クロマトグラフィーを用いた検体分析用具は、被測定物の検出や定性分析はできるものの、定量分析が困難であり、半定量分析が限界であった。また、検出や定性分析においても、免疫クロマトグラフィーを適用した検体分析用具において、その精度に問題がある場合があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明の目的は、被測定物の定量分析が可能であり、また検出や定性分析を精度良く行うことができる免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法およびそれに用いる検体分析用具の提供である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するために、本発明の免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法は、被測定物に特異的に結合する第一の標識化物質に検体を接触させた後、前記検体を展開層において毛細管現象により展開し、前記展開層の途中に形成された測定部に固定化された被測定物に結合する第二の物質により前記被測定物と前記第一の標識化物質との複合体を捕捉し、前記捕捉された複合体中の前記第一の標識化物質を測定することにより被測定物を測定する方法において、第三の標識化物質を検体と共に展開し、前記第一の標識化物質の標識と前記第三の標識化物質の標識とが相互に識別可能であり、前記測定部において前記第三の標識化物質の測定も行う方法である。
【０００７】
免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法において、定量分析が困難であり、場合によっては検出や定性分析の精度が悪くなるのは、展開層における標識化物質（コンジュゲート）や検体の展開が不均一であることに起因する。このため、展開層の途中に形成された測定部（抗体等が固定化されている）において、被測定物とこれに対する標識化抗体等との複合体の濃度も不均一となる。この結果、前記標識からの信号強度（吸光度等）が不均一となって定量分析が困難となり、検出や定性分析の精度の低下の要因ともなる。そこで、本発明の測定方法では、第一の標識物質と共に、前記第三の標識化物質（標準物質）を展開し、前記測定部において、前記第三の標識化物質の測定も行う。このようにすれば、標識化物質や検体の展開が不均一であっても、前記第三の標識化物質の測定値を基準にとることができ、これによって、定量分析が可能となる。例えば、前記第三の標識化物質の測定値に対する前記第一の標識化物質の測定値の比率から、被測定物を定量することが可能である。また、本発明の測定方法によれば、基準が明確となるため、検出や定性分析の精度低下のおそれもなくなる。
【０００８】
本発明の測定方法において、前記第三の標識化物質が、前記測定部に固定化された前記第二の物質に結合することが好ましい。これにより、測定部において、前記第三の標識化物質を捕捉できるため、基準がより明確になる。
【０００９】
本発明の測定方法において、前記測定部に第四の物質を固定化し、前記第三の標識化物質が前記固定化された第四の物質に結合することが好ましい。このように、前記第三の標識化物質のみを捕捉する第四の物質を固定化することにより、前記測定部において、前記第三の標識化物質をさらに効率よく捕捉できるため、基準をより一層明確にすることが可能となる。なお、前記第三の標識化物質は、前記固定化された第二の物質および前記固定化された第四の物質に結合してもよいし、前記固定化された第四の物質のみに結合してもよい。
【００１０】
本発明の測定方法において、前記第一の標識化物質が第一の標識化抗体であり、前記固定化された第二の物質が固定化された第二の抗体であり、前記第三の標識化物質が第三の標識化抗体であることが好ましい。また、前記固定化された第四の物質を有する場合、これが固定化された第四の抗体であることが好ましい。
【００１１】
この場合、前記第一の抗体および第二の抗体は、同一の抗体でもよいが、異なる抗体（例えば、マウス由来とラット由来）であってもよい。また、前記第四の抗体は、前記第三の抗体に対する抗体であることが好ましい。
【００１２】
本発明の測定方法において、前記第一の標識化物質の標識と前記第三の標識化物質の標識が、相互に色が異なる着色粒子であることが好ましい。相互に色が異なる着色粒子であれば、光学的手法により前記両標識を簡単に識別できるからである。
【００１３】
つぎに、本発明の検体分析用具は、前記本発明の測定方法に用いる検体分析用具であって、試薬部と、展開層と、前記展開層の途中に形成された測定部とを有し、前記測定部には、被測定物に結合する第二の物質が固定化され、前記試薬部は、第三の標識化物質および被測定物に特異的に結合する第一の標識化物質を有する。また、前記第三の標識化物質は、前記固定化された第二の物質に結合する物質であることが好ましい。
【００１４】
本発明の検体分析用具は、前記測定部には、さらに第四の物質が固定化され、前記第三の標識化物質が前記固定化された第四の物質に結合する物質であってもよい。この場合、前記第三の標識化物質は、前記固定化された第二の物質および前記固定化された第四の物質の両方に結合する物質でもよいし、前記固定化された第四の物質のみに結合する物質でもよい。
【００１５】
本発明の検体分析用具を用いれば、被測定物の定量分析が可能となり、また検出や定性分析も精度良く行うことができる。
【００１６】
【発明の実施の形態】
図１に、本発明の検体分析用具の一例を示す。図示のように、この検体分析用具１は、展開層１１の一端（同図において左側端部）上に、試薬部１３が形成され、この試薬部１３の上に血球分離部１２が積層形成されており、前記展開層１１の他端（図において右側端部）上には液吸収材１５が配置されている。また、展開層１１の途中には測定部１４が形成されている。
【００１７】
この検体分析用具１の大きさは、通常、全長５〜２００ｍｍ、幅１〜５０ｍｍ、厚み０．５〜３０ｍｍ、測定部の幅０．１〜５０ｍｍである。
【００１８】
図示していないが、前記展開層１１は、通常、支持体上に形成されている。前記支持体としては、例えば、ポリスチレン、ポリエステル、酢酸セルロース等から形成されたものが使用でき、その形状としては、フィルム状、シート状、板状のいずれでもよい。なお、測定部における測定を、支持体の裏側（展開層配置側と反対側）から光を照射して行う場合は、支持体が透明であることが好ましく、具体的には、透明なポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）が好ましい。また、前記展開層には、通常、多孔質膜が使用され、例えば、セルロース膜、酢酸セルロースまたはニトロセルロース等のセルロース誘導体膜、ガラスフィルター、濾紙等などが使用できる。支持体上への展開層の形成は、常法により行うことができる。例えば、支持体上に、多孔質膜を、両面テープや接着剤を用いて固定すればよい。
【００１９】
血球分離部１２は、例えば、分析対象が全血中の血漿成分であり、血球を取り除く必要がある場合に設ける、任意の構成要素である。したがって、血球を分離する必要がない尿等の検体の場合は、血球分離部１２を設ける必要はない。前記血球分離部には、通常、ガラスフィルター等が使用される。
【００２０】
前記試薬部１３には、試薬として、通常、前記第一の標識化抗体および前記第三の標識化抗体が配置される。また、図２（Ａ）に示すように、測定部１４には、固定化された第二の抗体３１が配置される。なお、図２において、図１と同一部分には同一符号を付している。前記抗体は、特に制限されず、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤのいずれであってもよい。また、これらの抗体において、ポリクローナルおよびモノクローナルのいずれでもよい。被測定物に結合する抗体は、マウス、ラット、山羊等の動物を用いて、常法により作製できる。また、固定化された第二の抗体に結合する抗体も、常法により作製できる。
【００２１】
展開層１１の測定部１４への前記第二の抗体３１の固定化は、常法により行うことができる。
【００２２】
前記抗体の標識は、特に制限されず、金コロイド、着色ラテックス粒子、放射性標識、蛍光色素標識、酵素標識等が使用できる。ただし、第一の標識化抗体の標識と、第三の標識化抗体の標識とが、相互に区別できる必要がある。したがって、前記標識は、相互に色が異なる（吸収スペクトルが重ならない）もの、または光学的に区別できるものが好ましい。このような標識物質の組み合せとしては、例えば、金コロイドと着色ラテックス粒子（例えば、青色ラテックス粒子）があげられるが、二つの標識物質が光学的に区別できれば、特に制限されない。また、抗体の標識化は、常法により実施できる。例えば、抗体と前記金コロイド等を緩衝液中で混合すれば、前記抗体が前記金コロイド等に物理的に吸着する。
【００２３】
本発明において、試薬部１３は、図１に示すように展開層１１と別個に形成してもよく、展開層中に形成してもよい。展開層とは別個に試薬部を形成する場合、濾紙等に前記試薬を含浸させ、これを図示のように展開層の一端上に配置すればよい。また、展開層に試薬部を形成する場合は、展開層の所定部分に試薬を含浸させればよい。また、試薬部は、一個でも複数個でもよい。
【００２４】
なお、試薬部に配置する試薬としては、前記抗体の他に、検体の種類や被測定物の種類に応じ、界面活性剤等の溶血試薬、緩衝剤等のｐＨ調整剤、カゼイン等のブロッキング剤等を配置してもよい。
【００２５】
展開層１１の他端上に配置された液吸収材１５は、展開層における毛管現象を補助するとともに、測定部１４を通過して流れてきた検体を保持するためのものである。前記液吸収材としては、濾紙等を使用することができる。
【００２６】
つぎに、図１および図２に基づき、この検体分析用具を用いた測定について、検体として全血を用い、血漿中の特定成分を測定対象とした例をあげて説明する。この検体分析用具では、試薬部１３に、血漿中の特定成分（被測定物）に対する第一の標識化抗体と、固定化された第二の抗体に対する第三の標識化抗体とが配置され、また測定部１４には、前記血漿中の特定成分に対する第二の抗体が固定化されている。また、抗体の標識は、それぞれ色が異なる着色ラテックス粒子である。
【００２７】
まず、図１の矢印ａに示すように、全血５を、血球分離部１２上に滴下する。すると、全血中の血漿成分のみが試薬部１３に移行し、ここで試薬と接触する。この接触により、血漿中の特定成分と第１の標識化抗体とが複合体を形成する。ついで、矢印ｂで示すように、血漿成分は、展開層１１中を展開する。このとき、波線２で示すように、前記複合体等の展開は不均一となる。また、この展開において、第三の標識化抗体も同様に展開する。そして、測定部１４に到達した前記複合体は、図２（Ｂ）に示すように、固定化された第二の抗体３１で捕捉される。同図において、４は血漿中の特定成分を示し、３２は第一の標識化抗体を示し、３３は着色ラテックス粒子を示す。また、前記複合体と共に展開してきた前記第三の標識化抗体も、図２（Ｃ）に示すように、測定部１４に到達すると、固定化抗体３１により捕捉される。また、前記第三の標識化抗体は、複合体を捕捉している第二の抗体３１により捕捉されてもよい。前記同図において、３４は前記第三の標識化抗体を示し、３５は、着色ラテックス粒子を示す。なお、図２は、抗原抗体反応を模式的に示すものであり、また標識の大きさ等も実際とは異なる。そして、前記測定部１４に光を照射して、前記二つの着色ラテックス粒子のそれぞれの吸光度を測定する。これらの吸光度の測定値から、第一の標識化抗体と第三の標識化抗体の量を求め、前記第三の標識化抗体の量を基準にして、前記第一の標識化抗体の量から、血漿中の特定成分（被測定物質）の量を定量する。
【００２８】
本発明において、その測定対象となる検体は、液状のものが好ましいが、これに限定されない。固体状のものであっても、緩衝液等の液体中に溶解もしくは分散させれば、展開可能となるからである。
【００２９】
つぎに、本発明の検体分析用具において、前記図１に示す測定部１４に、前記固定化された第二の抗体の他に、第三の標識化抗体に結合する固定化された第四の抗体が配置されている一例を図３に示す。図３において、図１および図２と同一部分には同一符号を付している。なお、図３は、抗原抗体反応を模式的に示すものであり、また標識の大きさ等も実際とは異なる。
【００３０】
図３（Ａ）に示すように、展開層１１における測定部には、固定化された第二の抗体３１および固定化された第四の抗体３６が配置される。そして、前記複合体と共に展開してきた第三の標識化抗体は、測定部１４に到達すると、図３（Ｂ）に示すように、固定化された第四の抗体３６により捕捉される。これ以外は、前述の例と同様にして測定を行う。前記第四の抗体３６は、前記第三の標識化抗体に結合するものであれば、特に制限されず、前述の他の抗体と同様にして作製でき、その固定化も常法により行うことができる。
【００３１】
【実施例】
(実施例１）
以下に示すようにして、本発明の検体分析用具を作製し、これを用いてヒトＣ反応性タンパク質（ヒトＣＲＰ）抗原の測定を行った。
【００３２】
（１）固相化抗体メンブレンの作製
第二の抗体として抗ヒトＣＲＰ抗体（マウス由来：ＯＹ  Ｍｅｄｉｘ社製、以下同じ）と、第四の抗体として抗ウサギＩｇＧ抗体（ヤギ由来：Ｎｏｒｄｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）とを、それぞれ１ｍｇ／ｍｌの濃度になるように生理食塩水に添加し、混合して固相化抗体液とした。この固相化抗体液を、微細液滴塗出機Ｂｉｏｄｏｔ２０００（Ｂｉｏｄｏｔ社製）を用いて、塗出量１μｌ／ｃｍの条件で、ニトロセルロースメンブレン（Ｈｉｇｈ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）上に、一直線上に塗布した後、４０℃の乾燥空気で３０分間乾燥させて固相化抗体メンブレンを作製した。
【００３３】
（２）コンジュゲートパッドの作製
最大吸収ピークが異なる青色のラテックス溶液（粒径５００ｎｍφ：Ｂａｎｇｓ社製）と赤色のラテックス溶液（粒径５００ｎｍφ：Ｂａｎｇｓ社製）とを準備し、前記各ラテックス５０ｍｇを、それぞれ別の０．１Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）に添加して、この二種類の混合液をそれぞれ遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、１０分間）した。
【００３４】
そして、予め、前記抗ヒトＣＲＰ抗体（マウス由来）を生理食塩水に混合した抗ヒトＣＲＰ抗体溶液（濃度１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを、前記遠心分離により得られた青色ラテックス沈殿物に添加し、攪拌した後、室温で１時間放置した。この溶液を遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、１０分間）し、得られた沈殿物を、１重量％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および５重量％サッカロースを含有するリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．４）１．５ｍｌに分散し、第一の標識化抗体であるラテックス標識抗体液Ａを調製した。
【００３５】
他方、前記遠心分離により得られた赤ラテックス沈殿物に、予め、ウサギ由来ＩｇＧ（Ｎｏｒｄｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を生理食塩水に混合したウサギ由来ＩｇＧ溶液（濃度１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌを添加し、攪拌した後、室温で１時間放置した。この混合液に、さらに４重量％ブロッキング剤（Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ：雪印社製）溶液１ｍｌを添加して、攪拌した後、室温で１時間放置した。この溶液を、遠心分離（１５，０００ｒｐｍ、１０分間）して得られた沈殿物を、１重量％のＢＳＡを含有するリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．４）１．５ｍｌに分散し、第三の標識化抗体であるラテックス標識抗体液Ｂを調製した。なお、前記リン酸緩衝生理食塩液の組成を以下に示す。
【００３６】
（リン酸緩衝生理食塩液組成）
ＮａＣｌ                        ８．０ｇ／リットル
ＫＣｌ                          ０．２ｇ／リットル
Ｎａ2ＨＰＯ4・１２Ｈ2Ｏ        ２．９ｇ／リットル
ＫＨ2ＨＰＯ4                   ０．２ｇ／リットル
【００３７】
この二種類のラテックス標識抗体液Ａ、Ｂをそれぞれ８０：２０の体積割合になるように混合してこれをコンジュゲート液とした。そして、前記コンジュゲート液をいれたバットに、ガラスフィルター（製品番号ＡＰ２５：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）を浸して含浸させた後、これを凍結乾燥させてコンジュゲートパッドを作製した。
【００３８】
（３）検体分析用具の作製
ガラスフィルター（製品番号ＡＰ２５：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）、前記固相化抗体メンブレン、前記コンジュゲートパッド、濾紙（製品番号ＡＰ１０：Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）およびＰＥＴフィルム（テトロンフィルムＵ−２２：帝人社製）をそれぞれ用いて、図４に示すような検体分析用具を作製した。同図（ａ）は、前記検体分析用具の上面図であり、同図（ｂ）は、前記上面図のＩ−Ｉ方向断面図である。同図において、図１〜図３と同一部分には同一符号を付している。図示のように、支持体１６（前記ＰＥＴフィルム）の中央部上に、固定化抗体を有する展開層１１（前記固相化抗体メンブレン）を配置し、前記展開層１１の一端（同図において左側端部）を覆うようにして、前記支持体１６上に、試薬部１３（前記コンジュゲートパッド）を配置した。そして、前記試薬部１３全面と前記支持体１６の一端（同図において左側端部）とを覆うようにして前記ガラスフィルターを配置することにより検体添加部１７を形成した。また、前記展開層１１の他端（同図において右側端部）に一部重なり、かつ前記支持体１６の他端（同図において右側端部）を覆うようにして液吸収材１５（前記濾紙）を配置した。
【００３９】
この検体分析用具の大きさは、全長５９ｍｍ、幅７ｍｍ、最大厚み５５０μｍ、最小厚み３７０μｍである。前記支持体１６は、長さ５９ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み２５０μｍである。前記検体添加部１７は、長さ１８ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み３００μｍである。前記試薬部１３は、長さ５ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み１００μｍである。前記展開層１１は、長さ２５ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み１２０μｍである。また前記液吸収材１５は、長さ１８ｍｍ、幅７ｍｍ、厚み２００μｍである。
【００４０】
このようにして作製した検体分析用具を用い、以下のようにして、ヒトＣＲＰ抗原の検出を行った。
【００４１】
（試料溶液の調製）
予め、０．１重量％Ｔｗｅｅｎ−２０（ナカライテスク社製）および１重量％ＢＳＡを含有する２０Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．０）を調製した。そして、この緩衝液に、ヒトＣＲＰ抗原を５種類の濃度（５０μｇ／リットル、１０μｇ／リットル、１５μｇ／リットル、２５μｇ／リットル、５０μｇ／リットル）で添加して５つの試料を調製し、さらに各試料について８つの検体を準備した。
【００４２】
（測定方法）
前記検体分析用具の検体添加部に前記検体溶液を点着し、１０分後、デンシトメーター（Ｆｌｙｉｎｇ  Ｓｐｏｔ  Ｓｃａｎｅｒ  ＣＳ−９０００：島津製作所社製）を用いて、図４に示す検出ライン１８上における、二波長の吸光度を下記の条件で測定し、得られた吸光度曲線を積分して測定値を得た。そして、この測定値を下記式（１）に代入し、補正した吸光度を算出した。これらの結果を下記表１〜５に示す。
【００４３】
（測定条件）
0004437211.tif 000002
【００４４】
【数１】
Ａ’（ＣＲＰ）＝Ａ（ＣＲＰ）×［Ａ（ウサギ）／Ａ（ウサギ０）］
…（１）
Ａ’（ＣＲＰ）  ：補正した吸光度
Ａ（ＣＲＰ）    ：λ＝６６０ｎｍの吸光度
Ａ（ウサギ）    ：λ＝５００ｎｍの吸光度
Ａ（ウサギ０）  ：赤ラテックスの吸光度の理論値
（Ａｂｓ．＝４０００）
【００４５】
【表１】
0004437211.tif 000003
【００４６】
【表２】
0004437211.tif 000004
【００４７】
【表３】
0004437211.tif 000005
【００４８】
【表４】
0004437211.tif 000006
【００４９】
【表５】
0004437211.tif 000007
【００５０】
表１から表５に示すように、各試料において、補正前の吸光度［Ａ（ＣＲＰ）］のばらつき（ＣＶ）は大きかったが、補正を行うことにより、補正後吸光度［Ａ’（ＣＲＰ）］のばらつき（ＣＶ）は小さくなった。この結果から、本発明の測定方法によれば、測定精度が向上し、免疫クロマトグラフィーにおける定量分析が可能になるといえる。
【００５１】
【発明の効果】
以上のように、本発明の免疫クロマトグラフィーを用いた測定方法および検体分析用具は、定量分析が可能であり、また検出や定性分析の精度の問題も解決できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の検体分析用具の一実施例の構成を示す斜視図である。
【図２】（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）は、前記実施例の測定部における抗原抗体反応の状態を説明する模式図である。
【図３】（Ａ）および（Ｂ）は、本発明の検体分析用具のその他の実施例の測定部における抗原抗体反応の状態を説明する模式図である。
【図４】（Ａ）は、本発明の検体分析用具のさらにその他の実施例の上面図であり、（Ｂ）は、その断面図である。
【符号の説明】
１    検体分析用具
２    展開する検体の先端
４    被測定物
５    検体
１１  展開層
１２  血球分離部
１３  試薬部
１４  測定部
１５  液吸収材
１６  支持体
１７  検体添加部
１８  検出ライン
３１  固定化された第二の抗体
３２  第一の標識化抗体
３３、３５  標識
３４  第三の標識化抗体
３６  固定化された第四の抗体
ａ、ｂ  矢印
【図１】
0004437211.tif 000008
【図２】
0004437211.tif 000009
【図３】
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【図４】
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