(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式：
【化１】
0004450435.tif 000184
（式中、
Ｒ1は１〜２個の水素原子および炭素数１〜１０のアルキルからなる群から選ばれ；
Ｒ2は存在しないか、または水素原子、メチルおよび酸素原子からなる群から選ばれ、ここで、該酸素原子はＣ17とエポキシ環を形成していてもよく；
Ｒ3はオキソ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、ベンゾイル、シピオニル、グルクロニドおよびスルホニルからなる群から選ばれ；
Ｒ4は水素原子、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アシルオキシおよびハロからなる群から選ばれ；
Ｒ5は存在しないか、または水素原子、ヒドロキシ、低級アルコキシおよび低級アシルオキシからなる群から選ばれ；
Ｒ6は水素原子またはハロであり；
「ａ」は該ステロイドの環Ａの任意の芳香族不飽和を表すか、または、「ｂ」、「ｃ］および「ｄ」は各々任意の２重結合であり；
「ｇ」、「ｈ」、「ｉ」および「ｊ」は各々任意の２重結合であり；
「ｅ」、「ｆ」、または「ｋ」はエポキシ環を形成し、ここで、
「ｅ」はＣ16およびＣ17と一緒になってエポキシ環を形成していてもよく；
「ｆ」はＣ13およびＣ17と一緒になってエポキシ環を形成していてもよく；または、
「ｋ」はＣ17およびＣ20と一緒になってエポキシ環を形成していてもよい）
で示されるステロイド化合物を含有する、月経前不快気分障害を処置するための医薬組成物。
【請求項２】
ステロイド化合物として16α,17α−エポキシエストラ−4−エン−10β−オール−3−オンを含む、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
ステロイド化合物として17α,20α−エポキシ−19−ノルプレグナ−1,3,5（10）−トリエン−3−オールを含む、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
ステロイド化合物として16α,17α−エポキシプレグナ−4−エン−3−オンを含む、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項５】
ステロイド化合物として13,17−エポキシ−10,17−ジメチルゴナ−4−エン−3−オンを含む、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
ステロイド化合物として16α,17α−エポキシ−19,21−ビスノルコラ−4−エン−10β−オール−3−オンを含む、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
16α,17α−エポキシエストラ−4−エン−10β−オール−3−オン、
17α,20α−エポキシ−19−ノルプレグナ−1,3,5（10）−トリエン−3−オール、
16α,17α−エポキシプレグナ−4−エン−3−オン、
13,17−エポキシ−10,17−ジメチルゴナ−4−エン−3−オン、および
16α,17α−エポキシ−19,21−ビスノルコラ−4−エン−10β−オール−3−オン
からなる群から選ばれる、化合物。
【請求項８】
16α,17α−エポキシエストラ−4−エン−10β−オール−3−オンである、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
17α,20α−エポキシ−19−ノルプレグナ−1,3,5（10）−トリエン−3−オールである、請求項７記載の化合物。
【請求項１０】
16α,17α−エポキシプレグナ−4−エン−3−オンである、請求項７記載の化合物。
【請求項１１】
13,17−エポキシ−10,17−ジメチルゴナ−4−エン−3−オンである、請求項７記載の化合物。
【請求項１２】
16α,17α−エポキシ−19,21−ビスノルコラ−4−エン−10β−オール−3−オンである、請求項７記載の化合物。
【請求項１３】
化学式：
【化２】
0004450435.tif 000185
で示される、化合物。
【請求項１４】
化学式：
【化３】
0004450435.tif 000186
で示される、化合物。
【請求項１５】
化学式：
【化４】
0004450435.tif 000187
で示される、化合物。
【請求項１６】
化学式：
【化５】
0004450435.tif 000188
で示される、化合物。
【請求項１７】
化学式：
【化６】
0004450435.tif 000189
で示される、化合物。
【発明の詳細な説明】
関連出願に対するクロスリファレンス
本発明は、米国特許出願番号08/725,862（1996年10月4日出願）、米国特許出願番号08/686,092（1996年7月23日出願）、米国特許出願番号08/625,268（1996年3月29日出願）、米国特許出願番号08/286,073（1994年8月4日出願）の一部継続である。
本出願は、米国特許出願番号08/127,908（1993年9月28日出願）に関連し、米国特許出願番号07/903,604（1992年6月24日出願）の一部継続であり、順次、米国特許出願番号07/708,936（1991年5月31日出願）、米国特許出願番号07/638,185（1991年1月7日出願、現在放棄済み）の一部継続である。
本出願はまた、米国特許出願番号08/127,980（1993年9月28日出願）に関連し、このものは米国特許出願番号07/903,604、米国特許出願番号08/077,359（1993年6月15日出願）の一部継続であり、また共通に譲渡されている係属中の米国特許出願番号07/903,525（1992年6月24日出願）、発明の名称:“Estrene Steroids as Neurochemical Initiators of Change in Human Hypothalamic Function and Related Pharmaceutical Compositions and Methods”（米国特許出願番号07/707,862（1991年5月31日出願）の一部継続であり、順次、米国特許出願番号07/638,743（1991年1月7日出願、現在放棄済み）の一部継続）および、共通に譲渡されている係属中の一部継続の米国特許出願番号07/903,525、米国特許出願番号08/077,140に関連している。
前述の米国特許出願は、各引用文献として本明細書に盛り込む。
最後に、本出願は米国特許第5,278,141号（1994年1月11日発行）、発明の名称：“Fragrance Compositions Containing Human Pheromones”および、米国特許第5,272,134号（1993年12月21日発行）、発明の名称：“Fragrance Compositions and Other Compositions Which Contains Human Pheromones”に関連する。
技術分野
本発明は、概してPMSおよび不安の症状を緩和する方法に関連する。
関連技術の説明
本発明は、特定のステロイド並びに、そのステロイドを視床下部機能を変える目的でヒトのボメロフェリン（vomeropherin；鋤鼻骨作用物質）として使用し、それによって特定の行動および生理、例えば不安の軽減に影響を及ぼす方法に関する。Ohloff, G.ら（Helv. Chim. Acta（1983）66: 192-217、引用文献として本明細書に引用する）は、数種のステロイド（アンドロステン）が異性体、ジアステレオマーおよびエナンチオマーの違いにより変化する臭いを有することを見出した。この群のいくつかは、数種の哺乳類においてフェロモンとして作用することが報告されており、例えばブタの5α-アンドロスタ-16-エン-3-オンおよび5α-アンドロスタ-16-エン-3α-オール（Melrose, D.R.らによる、Br.vet.J.（1971）127: 497-502）が挙げられる。雄豚により産出されるこれら16-アンドロステンは、発情期の雌豚の交配行動を誘起する（Clausら、Experimentia（1979）35: 1674-1675）。
いくつかの研究では、ある種のものでは、特定の16-アンドロステン類（5α-アンドロスタ-16-エン-3α-オールおよび5α-アンドロスタ-16-エン-3-オンを含有）の様々な特性、たとえば濃度、代謝および局在化が性的に二形態である（Brooksbankら、J. Endocr.（1972）52: 239-251；Clausら、J. Endocr.（1976）68: 483-484；Kwanら、Med. Sci. Res.（1987）15; 1443-1444）と述べられている。例えば、5α-アンドロスタ-16-エン-3α-オールおよび5α-アンドロスタ-16-エン-3-オン、並びにアンドロスタ-4,16-ジエン-3-オンは、男性や女性の末梢血液、唾液および腋窩分泌物中に異なる濃度で見出され（Kwan, T.K.ら、Med. Sci. RES.,（1987）、15; 1443-1444）、また選択および判断に影響を与える程度のそれらのヒトのホルモンとしての機能が示唆されている（同上；Gowerらによる“The Significance of Odorous Steroids in Axilliary Odour”Perfumery（1988）p68-72中、Van Toller and Dodds Eds., Chapman and Hall（1988）；Kirk- Smith、D.A.ら、RES. Comm. Psychol. Psychiat. Behav.（1978）3；379）。アンドロステノール（5α-アンドロスタ-16-エン-3α-オール）は、商業上の男性用コロンおよび女性用香水（ヤーバン製、男性用“アンドロン”登録商標および女性用“アンドロン”登録商標）においてフェロモン様な活性を示すと述べられている。日本公開特許番号2295916では、アンドロステノールおよび／またはその類縁体を含有した香水の組成物について言及している。アンドロスタジエン-3β-オール（および多分その3α-オール）が、またヒトの腋窩分泌物において同定されている（Gowerら、前述57-60）。一方、いずれの推定フェロモンも、ヒトの性もしくは生殖行動において実際に役割を果たしているかどうかについては文献上ほとんど一致していない。（Beauchamp, C.K.ら、“The Pheromone Concept in Mammalian Chemical Communication: A Critique”、Mammalian Olfaction, Reproductive Processes and Behavior、Doty、R.L.、Ed.、アカデミックプレス、1976年、およびGowerら前述68-73参照）。
哺乳類数種におけるいくつかのエストレンステロイドのフェロモン特性についてはこれまで記載がある。Michael, R.P.ら（Nature（1968）218：746）は、雄アカゲザルのフェロモン誘引物質としてエストロゲン（特にエストラジオール）について言及している。Parrot, R.F.ら（Hormones and Behavior（1976）7: 207-215）は、エストラジオールベンゾエートの注入により卵巣摘出したラットにおいて交配行動が誘起されることを報告しており；並びにアカゲザルの雄性性応答（Phoenix, C.H., Physiol. and Behavior（1976）16: 305-310）およびアカゲザルの雌性性応答（Phoenix, C.H., Hormones and Behavior（1977）8: 356-362）におけるエストラジオールの血中濃度の役割について記載している。一方、該フェロモンが哺乳類の生殖行動および個体間のコミュニケーションにおいて何らかの役割を果たしているかどうかということについては、文献内ではほとんど一致は見られない（Beuchamp, G. K.,ら、The Pheromone Concept in Mammalian Chemical Communication: A Critique, Mammalian Olfaction, Reproductive Processes, and Behavior中、Doty R.L., Ed.，アカデミックプレス、1976）。
本発明の課題は、特定のステロイドを鋤鼻骨器官（VNO）に非全身的に投与し、PMSおよび不安の症状を緩和、併せて体温の上昇および発作性頻拍（高い脈拍速度）の治療することである。投与により、VNO中の神経化学レセプター（“ヤコブソン器官”としても知られている）と１個以上のステロイドもしくは該ステロイド含有成分とが接触する。本器官はほとんどの高等動物−蛇からヒトの外鼻孔を通じて到達し、なかんずく特定種のフェロモンレセプターと関連している（概論Muller- Schwarze & Silverstein, Chemical Signals，プレナムプレス，ニューヨーク（1980）を参照）。鋤鼻骨器官の神経上皮の軸索は、口蓋上部に局在しており、鋤鼻骨神経を形成し、また副嗅球に対し直接のシナプス結合を、並びにそこから皮質内側の偏挑様基底前脳および脳の視床下部の核にまで関節インプットを有している。末梢神経ニューロンの遠位の軸索もまたVNOの神経化学レセプターとして作用する（Stensaas, L.J.,ら、J. Steroid Biochem. and Molec. Biol.（1991）39: 553）。この神経は視床下部と直接のシナプス結合を有する。
Johnson, A.ら（J. Otolaryngology（1995）14: 71-79）は、ほとんどの成人において鋤鼻骨器官が存在する証拠を報告しており、該器官が非機能的であろうと結論付けている。VNOは機能的な化学的感覚のレセプターであることを示唆しているとする矛盾する結果が報告されている（Stensaas, L.,ら（前述）；およびMoran, D. T.,らによるGarcia-Velasco, J.およびM. Mondragon; Monti-Bloch, L.およびB. Grosser J.らによるSteroid Biochem. and Molec. Biol.（1991）39中全て）。
本発明は予期しない発見、つまりヒト被験者のVNOに投与した際、特定の神経化学リガンド、特にステロイドおよびその関連化合物は特定の鼻神経上皮細胞の化学的レセプターに特異的に結合し、この結合はPMSおよび不安の症状を緩和する際に生じる一連の神経生理学的応答を生じるといったことに関連する。VNOを介しての視床下部での影響は、自律神経系の機能および様々な行動的もしくは生理学的現象、例えば、以下の不安、月経前のストレス、恐怖、攻撃性、空腹、血圧および視床下部により正常に調節されている他の行動的および生理学的機能（これらに限定されない）に及ぶ。Otto AppenzellerによるThe Autonomic Nervous System. An Introduction of basic and clinical concepts（1990）; Korner, P. I.によるCentral nervous control of autonomic cardiovascular function，並びに、Levy, N.M.およびMartin, P. J.によるNeural control of the heart（Handbook of Physiology; Section 2; cardiovascular System-the heart, Vol. I，ワシントンDC, 1979,アメリカ生理学学会；Fishman, A.P.,ら編集、Handbook of Physiology; Section 3; Respiratory System. Vol. II, Control of breathing, Bethesda MD, 1986,アメリカ生理学学会の両方における）。月経前不快気分障害（PMDD、一般に月経前症候群もしくはPMSと指称）と診断された患者は、月経周期の黄体期の間身体的症状と共に気分において負の変化を示す（表I参照）。該症状は身体的もしくは情動的窮迫を引き起こすのに十分なぐらい激しく、また月経の開始後すぐに減退する。しかしながら、それらの症状は本疾患に特有でもまた特徴的でもない。いくつかの概説では女性の30％が典型的な月経開始前の身体違和感の症状を有し、2％から10％は非常に影響が大きい（Woodsら、Am. J. Pub. Health, 72：1257-62、1982；Van Keepら“The Premenstrual Syndrome-An Epidemiologic and Statistical Exercise”、Van Keep, P.A.およびUtian, W.H., Eds., The Premenstrual Syndrome, MTP Press Ltd.，ランカスター、英国、1981；およびAnderschら、J. Psychomsom. Obstet. Gyn. 5: 39-46,1986）。ティーンエージャーや若い女性が年配女性と同程度の頻度で該症状を有することから、PMDDは年配女性だけの疾患ではないとも報告されている（Rivera-Tovarら、Am. J. Psychiatry, 147: 1634-43, 1990）。
PMDDの治療を必要とする多くの患者が一般的な精神的疾患を被っていることが分かった。しかしながら、PMDDを慢性精神的疾患と区別する主な特徴は、毎月経周期の卵胞期において無症状の週が少なくとも一つ存在することである。この症候群に共通する症状のリストを表Ｉに挙げる。ほとんどの女性は月経周期の黄体期と関連して様々な情動的、生理的および行動的な変化を訴えている。しかし、月経の間減退する周期的黄体期の症状を訴え、また心理学的もしくは職業的機能のレベルで大いに影響を受ける女性だけがPMDDを抱えている。
0004450435.tif 000002
最近の研究では、正常な女性（20〜60歳）のVNOに蒸気の形で局所的に輸送されるいくつかのボメロフェリンのピコグラム量により大きな情動的および自律的変化が起こることが分かった（Monti-Blochら、J. Ster. Biochem. Molec. Biol., 39（4B）: 573-582（1991）；Monti-Blochら、Psychoneuroendocrinology, 19: 673-686（1994））。被験者は負の減少に特徴付けられる気分の変化を示す。負の面および負の特性が明らかに減少し、患者はリラックスを感じる。これらの変化は個体全てにおける副交感神経の緊張の増加と相関関係がある（緩徐呼吸および緩徐脈、これらは体温の上昇に対して重大ではなく小さい［0.7℃+0.5］が、変化は皮膚のコンダクタンスであり、またアルファ-皮質活性を増加する）。また、これらの影響の潜伏期が多シナプス反射の潜伏期と相関関係があることは注目すべきことである。結論として、これらボメロフェリンが鋤鼻骨器官の末梢系を介して視床下部に交互に影響を与える、鋤鼻骨器官内のレセプターを刺激すると言える
本発明はまた、ハミルトン-A標準法により特徴付けられる一般的不安症状の減衰を提供するものである。
発明の概要
本発明の方法は下記の長所を持つ：
１）鼻経路および鋤鼻器官にある化学レセプターに、丸薬や針を用いず、つまり非侵略的に、直接投与すること；
２）循環系を通さず、発明系を通した薬効モード、つまり、脳機能が脳血液関門を考慮することなく影響を受けることが出来る；
３）視床下部に作用する直接手段・・・フェロモンレセプターと視床下部の間には唯一のシナプス連結がある；および
４）高度に特異的な薬効を提供することにより、望ましくない副作用を大きく減少させる・・・これは知覚神経が脳内の特異な場所に送られるからである。
本発明の追加の目的、利点、および新規な特徴は、部分的には以下の明細書に記載され、部分的には、本分野の技術者には下記の試験により自明、または、本発明の実施により習得され得る。
組成物の中で、好ましいクラスは薬理学的に許容される担体および下記式のプレグナンステロイドを含有する。
0004450435.tif 000003
式中、Ｐ1はオキソ、α−（β−）ヒドロキシ、α−（β−）アセトキシ、α−（β−）プロピオンオキシ、α−（β−）メトキシ、α−（β−）低級アシルオキシ、α−（β−）低級アルキルオキシ、およびα−（β−）ベンゾイルオキシから選ばれる基；Ｐ2はメチル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル、アルコキシメチル、低級アルキル、ヒドロキシアルキル、アシルオキシアルキル、およびアルコキシアルキルから選ばれる基；Ｐ3は水素原子、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、およびアシルオキシから選ばれる基；Ｐ4からＰ12は各々独立して、水素原子、ハロ、メチル、またはハロ−、ジハロ−、またはパーハロ−メチルであるか、または、Ｐ2がメチルおよびＰ3がβ−ヒドロキシの時は、Ｐ2およびＰ3は結合して環状エーテルを形成していてもよく；Ｐ13は水素原子、メチル、メチレン、ハロ−置換メチル、ハロ−置換メチレン、エチル、エチレニル、アセチレニル、メチル−メチレニル、またはメチル−メチニル；および「ａ」、「ｂ」、「ｃ」、「ｄ」、「ｅ」、「ｈ」、「ｉ」および「ｊ」は任意の２重結合の代替位置であり、および「ｊ」または「ｋ」は３重結合であってもよい。ハロ置換基はフッ素、臭素、塩素およびヨウ素原子である。
好ましいステロイドの一クラスは、「ｂ」が２重結合であり、特に「ｄ」または「ｅ」もまた２重結合であるものである。他の好ましいクラスは、「ａ」および「ｃ」が２重結合であり、または「ｃ」のみが２重結合であるものである。別の好ましいクラスは「ｈ」が２重結合であり、「ｉ」および「ｊ」が共に存在せず（つまり、単結合）、「ｊ」が２重結合か、または「ｊ」が３重結合であるものである。他のクラスでは、「ｈ」は存在せず、および「ｊ」または「ｉ」が２重結合であり、または、「ｉ」および「ｊ」は存在せず、または「ｊ」または「ｉ」が２重結合である、または「ｊ」が３重結合であるものである。
低級アルキル、低級アルコキシ等の用語は炭素数１〜６の炭素鎖を、好ましくは炭素数１〜４の炭素鎖を包含するものである。
組成物の２番目のクラスは薬理学的に許容される担体および下記式のプレグナンステロイドを含有する。
0004450435.tif 000004
式中、Ｐ1はオキソ、α−またはβ−ヒドロキシ、α−またはβ−アセトキシ、α−またはβ−プロピオンオキシ、α−またはβ−低級アセトキシ、α−またはβ−アシルオキシ、またはα−またはβ−ベンジルオキシであり；
「ａ」、「ｂ」、「ｃ」、「ｄ」、「ｅ」、「ｆ」、「ｇ」、「ｈ」、「ｉ」、「ｊ」、「ｍ」および「ｎ」は任意の２重結合の代替位置であり、「ｋ」は存在しないか、または「ｊ」と一緒になって３重結合を形成していてもよく；
Ｐ2はヒドロキシ、水素原子、炭素数１〜６の低級アルコキシ、またはＰ2は存在せず；
Ｐ3はオキソ、水素原子、ヒドロキシ、炭素数１〜６の低級アルコキシ、またはハロ；
Ｐ4はメチルまたはエチル；
Ｐ5は水素原子、メチルまたはハロ；
Ｐ6は水素原子またはメチルである。
ステロイド組成物の２番目の好ましいクラスの下位概念の態様の一つは、「ｄ」が２重結合で、時として「ｂ」が２重結合として存在するステロイドを包含する。他の好ましいクラスは「ａ」、「ｄ」および「ｅ」が存在し、「ｇ」または「ｈ」が任意に存在するものである。「ｇ」がこの場合に存在すれば、「ｎ」は任意に存在してもよい。他の好ましいクラスは「ｃ」が存在し、「ｆ」が任意に存在するものである。
３番目のクラスの組成物は下記式のステロイドを含有する。
0004450435.tif 000005
式中、Ｒ1は本質的に１〜２個の水素原子、メチル、メチレン、および１〜２個のハロゲン原子から選ばれる基；Ｒ2は存在しないか、または本質的に水素原子およびメチルから選ばれる基；Ｒ3は本質的にオキソ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、ベンゾイル、シピオニル、グルクロニドおよびスルホニルから選ばれる基；Ｒ4は本質的に水素原子、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、オキソおよびハロから選ばれる基；Ｒ5は存在しないか、または本質的に水素原子、ヒドロキシ、低級アルコキシおよび低級アシルオキシから選ばれる基；Ｒ6は水素原子またはハロ；および「ａ」は該ステロイドの環Ａの任意の芳香族不飽和を示し、あるいは「ｂ」、「ｃ」および「ｄ」は各々任意の２重結合であり；「ｅ」、「ｆ」、「ｇ」、「ｈ」、「ｉ」および「ｊ」は各々任意の２重結合であり；および「ｅ」はＣ16およびＣ17と一緒になってエポキシ環を形成してもよい。この態様では、ステロイドは好ましくは１つまたはそれ以上の薬理学的に許容される担体を含有した医薬組成物の形で投与される。
ステロイドの３番目のクラスの好ましい下位概念の態様は、「ａ」が存在し、「ｇ」、「ｈ」または「ｉ」が任意の２重結合であるものである。他の好ましいクラスは、「ｂ」、「ｃ」または「ｊ」が２重結合であるものである。他の好ましいクラスは、「ｃ」および「ｄ」が２重結合であるものである。さらに他のクラスでは、Ｒ2はメチルで、「ｅ」は２重結合であるものである。
低級アルキル、低級アルコキシ等の用語は炭素数１〜６の炭素鎖を、好ましくは炭素数１〜４の炭素鎖を包含する。ハロとはＩ、Ｂｒ、ＦおよびＣｌである。
好ましい組成物の４番目のクラスは薬理学的に許容される担体および下記式のアンドロスタンステロイドを含有する。
0004450435.tif 000006
式中、Ｐ1はオキソ、α−（β−）ヒドロキシ、α−（β−）アセトキシ、α−（β−）プロピオンオキシ、α−（β−）メトキシ、α−（β−）低級アシルオキシ、α−（β−）低級アルキルオキシ、およびα−（β−）ベンゾイルオキシから選ばれる基；Ｐ2はメチル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル、アルコキシメチル、低級アルキル、ヒドロキシアルキル、アシルオキシアルキル、およびアルコキシアルキルから選ばれる基；Ｐ3は存在しないか、またはメチル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル、アルコキシメチル、低級アルキル、ヒドロキシアルキル、アシルオキシアルキル、およびアルコキシアルキルから選ばれる基；Ｐ4は水素原子、オキソ、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、およびアシルオキシから選ばれる基；Ｐ5は１または２個の置換基を意味し、１〜２個の水素原子、メチル、メチレン、または１〜２個のハロゲン原子から選ばれる基：Ｐ6は水素原子またはハロ；および「ａ」、「ｂ」、「ｃ」、「ｄ」、「ｅ」、「ｆ」および「ｈ」は任意の２重結合の代替位置である。
ステロイドの４番目の好ましいクラスの下位概念の態様は、「ｂ」が２重結合であり、特に、「ｃ」または「ｄ」もまた２重結合であるものである。他の下位概念の態様は、「ａ」および「ｃ」は２重結合であるものである。さらに他の下位概念の態様はＰ3がメチル基、「ｈ」が任意の２重結合であり、Ｐ5がメチレンか１〜２個の水素原子であるものである。「ａ」または「ｂ」が２重結合であるステロイドの部分集合もまた好ましい。
ハロとは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。低級アルキル、低級アルコキシ等の用語は炭素数１〜６の炭素鎖を、好ましくは炭素数１〜４の炭素鎖を包含する。
組成物の５番目のクラスは薬理学的に許容される担体および下記式の１９−ノルコランを含有する。
0004450435.tif 000007
式中、Ｐ1はオキソ、α−またはβ−ヒドロキシ、α−またはβ−アセトキシ、α−またはβ−プロピオンオキシ、α−またはβ−低級アセトキシ、α−またはβ−低級アシルオキシ、またはα−またはβ−ベンジルオキシ；
「ａ」、「ｂ」、「ｃ」、「ｄ」、「ｅ」、「ｆ」、「ｇ」、「ｈ」、「ｉ」、「ｊ」、「ｍ」、「ｓ」および「ｎ］は任意の２重結合の代替位置であり、「ｋ」は存在しないか、または「ｊ」と一緒になって３重結合を形成していてもよく；
Ｐ2はヒドロキシ、水素原子、炭素数１〜６の低級アルコキシ、またはＰ2は存在せず；
Ｐ3はオキソ、水素原子、ヒドロキシ、炭素数１〜６の低級アルコキシ、またはハロ；
Ｐ4はメチルまたはエチル；
Ｐ5およびＰ7はそれぞれ独立して水素原子、メチルまたはハロ；
Ｐ6は水素原子またはメチル；
Ｒ’およびＲ”はおのおの独立して水素原子またはハロ、または存在しないか、または一緒になって＝ＣＨ2を形成し；ｑは０〜２の整数で、好ましくは、ｑは１である。
好ましい１９−ノル−コランステロイド組成物の一クラスは、「ｄ」が２重結合であり、「ｂ」が２重結合として存在していてもよいステロイドを含有する。他の好ましいクラスは、「ａ」、「ｄ」および「ｅ」が存在し、「ｇ」または「ｈ」が任意に存在するものである。「ｇ」がこの場合に存在すれば、「ｎ」は任意に存在していてもよい。他の好ましいクラスは、「ｃ」または「ｓ」が存在しているものである。
１９−ノル−コランの新規なクラスは上記の式で表され、ただし、Ｐ3、Ｐ6、Ｐ5、Ｐ7、Ｒ’およびＲ”が水素原子であり；Ｐ4がメチル、ｅ、ａ、ｄが存在し；ｂ、ｃ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋ、ｎおよびｓは存在せず；ｑは０、Ｐ1はヒドロキシおよびｍが存在するか、または存在しないものを除いたものである。
低級アルキル、低級アルコキシ等の用語は炭素数１〜６の炭素鎖を、好ましくは炭素数１〜４の炭素鎖を包含する。
Ｄ環に酸素原子が結合した新規ステロイドの１クラスも提供される。そのようなステロイドは下記の式で表される。
0004450435.tif 000008
式中、Ｒ1は本質的に１〜２個の水素原子、炭素数１〜１０のアルキルから選ばれる基；Ｒ2は存在しないか、または本質的に水素原子、メチルおよび酸素原子から選ばれる基で、Ｃ17とエポキシ環を形成し；Ｒ3は本質的にオキソ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アシルオキシ、ベンゾイル、シピオニル、グルクロニドおよびスルホニルから選ばれる基；Ｒ4は本質的に水素原子、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アシルオキシおよびハロから選ばれる基；Ｒ5は存在しないか、または本質的に水素原子、ヒドロキシ、低級アルコキシおよび低級アシルオキシから選ばれる基；Ｒ6は水素原子またはハロ；および「ａ」は該ステロイドの環Ａの任意の芳香族不飽和を表すか、または「ｂ」、「ｃ］および「ｄ」は各々任意の２重結合；「ｇ」、「ｈ」、「ｉ」および「ｊ」は各々任意の２重結合；および「ｅ」はＣ16およびＣ17と一緒になってエポキシ環を形成していてもよく；「ｆ」はＣ13およびＣ17と一緒になってエポキシ環を形成していてもよく；および「ｋ」はＣ17およびＣ20と一緒になってエポキシ環を形成していてもよい。
本発明の他の目的は、個体の視床下部機能および／または自律神経系機能を変化させる方法を提供することにより達成される。細胞が嗅覚上皮細胞以外の組織の一部である場合は鼻神経上皮細胞の表面上に散在している化学レセプターのリガンドが提供され；およびリガンドは個体の鼻経路内に投与され、そのリガンドが特異的に化学レセプターに結合し、それにより個体の視床下部機能を変化させる。
本発明のすべての態様は、これらの態様に開示されるステロイド構造と機能的同等なもの、および、明確に開示されているかどうかに関係無く、その機能的同等を発揮する修飾されたステロイドに関し、または、包含する。
【図面の簡単な説明】
図１は実施例16および17に従い試験を行なった、男性における化合物A1-P1に関する積分化EVG、GSRおよびSTのデータである。
図２は女性における化合物A1-P1、A2-P1、A4-P1、A3-P1、A1-P4、A2-P4に関する積分化EVGのデータである。
図３は女性における化合物A1-P1、A2-P1、A4-P1、A3-P1、A1-P4、A2-P4のST測定データである。
図４は女性における化合物A1-P1、A2-P1、A4-P1、A3-P1、A1-P4、A2-P4のGSR測定データである。
図５は女性における化合物A1-P3のST、GSRおよびEVG測定データである。
図６は女性における化合物A1-P3のRFおよびEKG測定データである。
図７は女性における化合物A1-P3のEEG測定データである。
図８は男性における化合物A1-P3のST、GSRおよびEVG測定データである。
図９は男性における化合物A1-P3のRFおよびEKG測定データである。
図１０は男性における化合物A1-P3のEEG測定データである。
図１１および１２は男性および女性それぞれにおける化合物A2-P3に関するST、GSRおよびEVG測定データである。
図１３および１４は男性および女性それぞれにおける化合物A2-P3に関するEEG測定データである。
図１５および１６は男性および女性それぞれにおける化合物A2-P3に関するRFおよびEKG測定データである。
図１７および１８は男性および女性それぞれにおける化合物A8-P1に関するST、GSRおよびEVG測定データである。
図１９および２０は男性および女性それぞれにおける化合物A8-P1に関するRFおよびEKG測定データである。
図２１および２２は男性および女性それぞれにおける化合物A8-P1に関するEEG測定データである。
図２３および２４は男性および女性それぞれにおける化合物A6-P1に関するST、GSRおよびEVG測定データである。
図２５および２６は男性および女性それぞれにおける化合物A6-P1に関するRFおよびEKG測定データである。
図２７および２８は男性および女性それぞれにおける化合物A6-P1に関するEEG測定データである。
図２９、３０および３１は男性における20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3β-オールのST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定データである。
図３２、３３および３４は女性における20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3β-オールのST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定データである。
図３５、３６および３７は男性における20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3-オンのST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定データである。
図３８、３９および４０は女性における20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3-オンのST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定を示す。
図４１、４２および４３は男性における化合物A14-P2のST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定を示す。
図４４、４５および４６は女性における化合物A14-P2のST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定を示す。
図４７、４８および４９は男性における化合物A7-P2のST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定を示す。
図５０、５１および５２は女性における化合物A7-P2のST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定を示す。
図５３および５４は男性における化合物A11-P1のST、GSR、EVGおよびEEG測定を示す。
図５５は男性における化合物A13-P1のEEG測定データを示す。
図５６、５７および５８は女性における化合物A13-P1のST、GSR、EVG、RF、EKGおよびEEG測定データを示す。
図５９は女性における化合物A3-P1のEVG、EDAおよびBT測定データを示す。
図６０は女性における化合物A4-P1のEVG、EDAおよびBT測定データを示す。
図６１および６２は男性および女性それぞれにおける化合物A8/P1の測定データを示す。
図６３および６４は男性および女性それぞれにおける化合物A13/P8の測定データを示す。
図６５および６６は男性および女性それぞれにおける化合物A6/P1の測定データを示す。
図６７および６８は男性および女性それぞれにおける化合物A6/P1の20-メチル誘導体の測定データを示す。
図６９および７０は男性および女性それぞれにおける化合物A1/P1の20,21-ジメチル誘導体の測定のデータを示す。
図７１および７２は男性および女性それぞれにおける化合物A6/P1の20,21-ジメチル誘導体の測定データを示す。
図７３および７４は男性および女性それぞれにおける化合物A14/P2の測定データを示す。
図７５および７６は男性および女性それぞれにおける化合物A12/P1の測定データを示す。
図７７および７８は男性および女性それぞれにおける化合物A7/P2の測定データを示す。
図７９および８０は男性および女性それぞれにおける化合物A13/P1の測定データを示す。
図８１および８２は男性および女性それぞれにおける化合物A2/P7の測定データを示す。
図８３および８４は男性および女性それぞれにおける化合物A3/P5の測定データを示す。
図８５−９６はチャートIIのコランについて述べる。
図８５および８６は男性および女性それぞれにおける化合物A8/C1の測定データを示す。
図８７および８８は男性および女性それぞれにおける化合物A2/C1の測定データを示す。
図８９および９０は男性および女性それぞれにおける化合物A2/C1のアセテートの測定データを示す。
図９１および９２は男性および女性それぞれにおける化合物A1/C1の測定データを示す。
図９３および９４は男性および女性それぞれにおける化合物A3/C1の測定データを示す。
図９５および９６は男性および女性それぞれにおける化合物A13/C1の測定データを示す。
図９７および９８には雌性ラットにおけるステロイドE2/P4およびコントロールの各EVGおよび鋤鼻骨の神経分泌振動数を示す。
図９９から１２０には女性のVNOに設計した19-ノル-ステロイドを投与した場合のEVG、EDA、RF、CF、EMG、BTおよびEEG（アルファ-V、アルファ-T、ベータ-Vおよびベータ-T）データを示す。
図１２１から１４２には男性のVNOに設計した19-ノル-ステロイドを投与した場合のEVG、EDA、RF、CF、EMG、BTおよびEEGデータを示す。
図１４３には1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オールの製造を例示する。
図１４４A、１４４Bおよび１４４Cは、特定のステロイドを男性被験者の鋤鼻骨器官への（図１４４A）、また嗅覚の上皮への（図１４４C）局所投与によるレセプター電位の電気生理学的効果に関するグラフである。図１４４Bは男性および女性被験者のVNOレセプター電位におけるエストレンの効果を比較したグラフである。
図１４５は、特定のステロイドを男性被験者（図１４５A）および女性被験者（１４５B）の鋤鼻骨器官への局所投与による電気生理学的効果に関するグラフである。
図１４６は、1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-イルアセテートへの男性被験者の様々な自律性応答を示す。
A＝鋤鼻骨神経上皮のレセプター電位；B＝直流電気皮膚応答の変化（K-オーム）；C＝皮膚温度の変化（℃）。
図１４７は、1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オールのメチル５エーテルおよびアセテートへ被曝後の、VNOの電位の相対変化を示す。
図１４８は、ボメロフェリンとのVNOの刺激への局所的および自律的応答における性的二形態を示す。記載の通り、様々なボメロフェリン（200  10fmmol）および希釈剤コントロールを30男性被験者および30女性被験者（20〜45歳）に投与した。バーは個体群数の平均の応答を示す。
図１４８Aおよび１４８B：EVG応答は、男性（A）被験者および女性（B）被験者において記載したと同様にして測定した。
図１４８Cおよび１４８D：皮膚電気性活性を記載の通りに測定した。各被験者のVNOへのボメロフェリンの輸送による応答変化（xΩを測定）を、男性被験者（C）および女性被験者（D）について示す。
図１４８Eおよび１４８F：アルファ-皮質活性を記載の通り測定した。男性被験者（E）および女性被験者（F）のVNOへのボメロフェリンの輸送による応答変化。
図１４８Gおよび１４８H：皮膚温度（ST）を記載の通り測定した。各被験者のVNOへのボメロフェリンの輸送による応答変化を、男性被験者（G）および女性被験者（H）について示す。
A＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-イルアセテート
B＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン
C＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オール
D＝3-メトキシ-エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン
E＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3α-オール
F＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オール
図１４９は、嗅覚作用物質およびボメロフェリンAによるOEの刺激により誘因される男性および女性被験者の電気嗅覚図を示す；A：嗅覚作用物質l-カルボンおよびシネオール400fmolおよびボメロフェリンA、B、C、DおよびF並びに10立体異性体E200fmolを20人の被験者（男性、女性両方）のOEに1/2パルス毎に個別に適用し、各EOG応答を記載の通り記録した。嗅覚作用物質およびEとBは著しい（p<0.01）局所的応答を引き起こした。B:嗅覚作用物質l-カルボンおよびシネオール400fmolは、男性被験者および女性被験者のVNOへ輸送された場合、著しいEVG応答を誘起しない。
図１５０は20人の女性被験者の鋤鼻骨器官に対する下記のボメロフェリン類の電気生理学的効果を示す。
G＝アンドロスタ-4-エン-3-オン
H＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3,6-ジオン
J＝10,17-ジメチルゴナ-4,13（17）-ジエン-3-オン
K＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オール-メチルエーテル
L＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-イル-プロピオネート
EVG＝電気−鋤鼻骨図
GSR＝直流電気皮膚応答
＝皮膚電気性活性（EDA）
ST＝皮膚温度
図１５１は20人の男性被験者の鋤鼻骨器官に対するボメロフェリンの電気生理学的効果を示す。
M＝1,3,5（10）-エストラトリエン-3-オール
図１５２は、1,3,5（10）,6-テトラエン-3-オールおよびエストラ-4,16-ジエン-3-オールの製法を示す。
図１５３は、実施例６３〜６６に記載する化合物の製法を示す。
図１５４は、実施例６７〜７１に記載する製造工程を示す。
図１５５は、実施例７２〜７５に記載する製造工程を示す。
図１５６は、実施例７６〜７７に記載する製造工程を示す。
図１５７は、実施例７８〜８３に記載する製造工程を示す。
図１５８は、実施例８４〜８６に記載する製造工程を示す。
図１５９は、実施例８７〜９３に記載する製造工程を示す。
図１６０は、実施例９４〜９６に記載する製造工程を示す。
図１６１は、実施例９７〜９８に記載する製造工程を示す。
図１６２A、１６２Bおよび１６２Cは、女性におけるチャート１の13エストラン類に対するEVG、GSRおよびST各データを示す。
図１６３A、１６３Bおよび１６３Cは、男性におけるチャート１の13エストラン類に対するEVG、GSRおよびST各データを示す。
図１６４Aおよび１６４B〜１７６Aおよび１７６Bは、図１６３A〜１６３Cで同定した、13エストラン類に対する男性（A）および女性（B）における各EEGデータを示す。
図１７７は、アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン、アンドロスタ-4,16-ジエン-3α-オールおよびアンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オールの製法を示す。
図１７８は、アンドロスタ-5,16-ジエン-3α-オールおよびアンドロスタ-5,16-ジエン-3β-オールの製法を示す。
図１７９は、アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オンの別製造法を示す。
図１８０は、特定のステロイドを女性被験者の鋤鼻骨器官への（図１８０A）、また嗅覚の上皮への（図１８０C）局所投与によるレセプター電位における電気生理学的効果に関するグラフである。図１８０Bは男性および女性被験者のVNOレセプター電位におけるアンドロスタンの効果を比較したグラフである。
図１８１は、特定のステロイドを男性被験者（図１８２A）および女性被験者（１８２B）の鋤鼻骨器官への局所投与による電気生理学的効果を示すグラフである。
図１８２A〜１８２Fは、アンドロスタンへの女性被験者の様々な自律性応答を示す。A＝鋤鼻骨神経上皮のレセプター電位；B＝脳波の皮質アルファ活性の変化（％）；C＝直流電気皮膚応答の変化（K-オーム）；D＝末梢の動脈性脈拍の変化（回数／分）；およびE＝皮膚温度の変化（℃）；およびF＝呼吸頻度の変化（回数／分）。
図１８３は、2種の異なるアンドロスタンへ５女性の被曝後の、VNOのレセプター電位の変化を示す。
図１８４は、ボメロフェリン類によるVNOの刺激への局所的および自律的応答における性的二形態を示す。記載の通り、様々なボメロフェリン（200fmol）および希釈剤コントロールを30人の男性被験者および30人の女性被験者（20〜45歳）に投与した。バーは個体群数の平均の応答を示す。
図１８４Aおよび１８４B：EVG応答を、男性被験者（A）および女性（B）被験者において記載した通りに測定した。
図１８４Cおよび１８４D：皮膚電気性活性を記載の通りに測定した。各被験者のVNOへのボメロフェリンの輸送による応答変化（xΩを測定）を、男性被験者（C）および女性被験者（D）について示す。
図１８４Eおよび１８４F：アルファ-皮質性活性を記載の通り測定した。男性被験者（E）および女性被験者（F）被験者のVNOへのボメロフェリンの輸送による応答変化。
図１８４Gおよび１８４H：皮膚温度（ST）を記載の通り測定した。各被験者のVNOへのボメロフェリンの輸送による応答変化を、男性被験者（G）および女性被験者（H）について示す。
グラフ中の化合物は、
A＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-イルアセテート
B＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン
C＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オール
D＝3-メトキシ-エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン
E＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3α-オール
F＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オール
である。
図１８５は、嗅覚作用物質およびボメロフェリンによるOEの刺激により誘因される男性被験者および女性被験者の電気嗅覚図を記す。図１８５A：嗅覚作用物質l-カルボンおよびシネオール400fmolおよびボメロフェリンA、B、C、DおよびF並びに立体異性体E200fmolを20人の被験者（男性、女性両方）のOEに1/2パルス毎に個別に適用し、各EOG応答を記載の通り記録した。嗅覚作用物質およびEとBは著しい（p<0.01）局所的応答を引き起こした。図１８５B:嗅覚作用物質l-カルボンおよびシネオール400fmolは、男性被験者および女性被験者のVNOへ輸送された場合、著しいEVG応答を誘起しない。
図１８６は20人の女性被験者の鋤鼻骨器官における下記のボメロフェリン類の電気生理学的効果を示す。
G＝アンドロスタ-4-エン-3-オン
B＝アンドロスタ-4,16-ジエン-3,6-ジオン
C＝10,17-ジメチルゴナ-4,13（17）-ジエン-3-オン
D＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オール-メチルエーテル
E＝1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-イル-プロピオネート
EVG＝電気−鋤鼻骨図
GSR＝直流電気皮膚応答
＝皮膚電気性活性、EDA
ST＝皮膚温度
図１８７は20人の男性被験者の鋤鼻骨器官におけるボメロフェリン類の電気生理学的効果を記す。
M＝1,3,5（10）-エストラトリエン-3-オール
図１８８は、実施例１０８〜１１２に記載する化合物の製法を示す。
図１８９は、実施例１１３〜１１８の製造工程を示す。
図１９０は、実施例１２０〜１２１の製造工程を示す。
図１９１は、実施例１２３〜１２４に記載する製造工程を示す。
図１９２は、実施例１２５〜１２６に記載する製造工程を示す。
図１９３Aは、男性におけるVNO中のアンドロスタ-5,16-ジエン-3β,19-ジオールの試験での呼吸頻度およびEKGデータを示す。
図１９３Bは、女性におけるVNO中のアンドロスタ-5,16-ジエン-3β,19-ジオールの試験での呼吸頻度およびEKGデータを示す。
図１９４A、１９４Bおよび１９４Cは、女性におけるチャート内の４個のアンドロスタンおよびアンドロスタ-5,16-ジエン-3β,19-ジオールのEVG、GSRおよびSTデータを示す。
図１９５A、１９５Bおよび１９５Cは、男性における図１９４で同定した５個のアンドロスタンのEVG、GSRおよびSTデータを示す。
図１９６Aおよび１９６Bは、男性および女性におけるアンドロスタンA4/N3のEEGデータを示す。
図１９７Aおよび１９７Bは、男性および女性におけるアンドロスタンA3/N3のEEGデータを示す。
図１９８Aおよび１９８Bは、男性および女性におけるアンドロスタンA13/N1のEEGデータを示す。
図１９９Aおよび１９９Bは、男性および女性におけるアンドロスタ-5,16-ジエン-3β,19-ジオールのEEGデータを示す。
図２００Aおよび２００Bは、男性および女性におけるアンドロスタンA6/N3のEEGデータを示す。
図２０１Aおよび２０１Bは、２個のボメロフェリンで試験した男性被験者のVNOにおける微量のEVG（図２０１A）および同一のボメロフェリンを用いた鼻呼吸粘膜からの電気曲線図（図２０１B）である。
図２０２は男性被験者における２個のボメロフェリンの服用量依存効果を示す。
図２０３は男性被験者における２個のボメロフェリンの中枢神経系反射応答を示す。
図２０４は、一つ目の検査として偽薬を（B曲線）および二番目の検査として化合物プレグナ-4,20-ジエン-3,6-ジオンを（A曲線）VNOへ投与した被験者における、テストロステロンレベル差を示す。
図２０５、２０６および２０７は、Bの場合に偽薬を与え、およびAの場合にプレグナ-4,20-ジエン-3,6-ジオンを与えたさらに3人の被験者におけるテストロステロン試験に関するデータを示す。
図２０８および２０９は、各ヒト男性VNOおよび女性VNOにおけるチャートVIのステロイドE2/NC2、E1/NC2、E2/NC3、メチル化E2/NC2、メチル化E2/NC3およびE8/NC3の較差を示す。
図２１０は、偽薬もしくはエストラ-4,16-ジエン-10β-オール-3-オンを投与した女性における11個のPMDD症状の結果を示す。
図２１１は、偽薬もしくはエストラ-4,16-ジエン-10β-オール-3-オンを投与した女性における筋電図の結果を示す。
図２１２は、偽薬もしくはエストラ-4,16-ジエン-10β-オール-3-オンを投与した女性における皮膚電気性の活性事象の頻度を示す。
図２１３および２１４は、アンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オールによる不安症状の患者のVNOの治療に関するハミルトン-A不安試験の結果を示す。
図２１５は、アンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オールによる不安症状の患者のVNOの治療における呼吸頻度および心拍に関する効果を示す。
図２１６は、アンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オールによる不安症状の患者のVNOの治療における副交感神経状態に関する結果を示す。
図２１７は、アンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オールによる不安症状の患者のVNOの治療における皮膚電気性活性の結果を示す。
図２１８は、アンドロスタ-4,16-ジエン-3β-オールによる不安症状の患者のVNOの治療における体温変化の結果を示す。
図２１９は、実施例１３３、１３４および１３４Aの化合物を投与した女性におけるEVG試験の結果を示す。
図２２０は、実施例１３３、１３４および１３４Aの化合物を投与した女性においてアルファ脳波を調べた結果を示す。
図２２１Aは、D環上にエポキシ基を有する８個のステロイドによる男性被験者のVNOの刺激に基づく電気生理学的効果の要約である。
図２２１Bは、D環上にエポキシ基を有する８個のステロイドによる女性被験者のVNOの刺激に基づく電気生理学的効果の要約である。
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
“情動”（“affect”）とは、一過性の感情状態である。典型的な負の情動としては、神経質、緊張、羞恥心、不安、苛立ち、怒り、渇望などの感情が挙げられる。“気分”（“moods”）とは、罪責感、悲しみ、絶望感、軽蔑感、罪悪感、惨めさ、不幸感などといった、より長く続く感情状態である。“性格の特徴”（“character traits”）とは、個人の人格のより不変な一面である。典型的な負の性格の特徴とは、過敏さ、失望、非難、不埒、強情、怒りっぽさ、辛らつさ、臆病、怠惰などが挙げられる。
本発明によるボメロフェリンは、VNOとの接触を通じて1個以上の視床下部のホルモン的、行動的および自律的な機能を刺激するのに使用可能である。非常に様々な体内機能、およびVNOと視床下部間の神経結合において、視床下部は優先的役割を果たすために、本発明によるボメロフェリンは内分泌の産出量の制御、例えば他の多くのペプチドと同様にバソプレシンおよびオキシトシンの下垂体産出量の制御といった機能を刺激する部位に存在する。バソプレシンは腎臓内で水の摂取を増大し、尿を濃縮する作用のため抗利尿ホルモンである。加えて、このものは動脈平滑筋上の作用、および肝臓内でグリコーゲンのグルコースへの変換を増大する代謝作用を通じて、体内で血圧を調節する機能を有する。オキシトシンは、子宮の平滑筋上および乳房の平滑筋上でみられるが、乳房の平滑筋の収縮を介して母乳を輸送し、また分娩の間子宮の収縮を起こす。視床下部はまた、ACTH、プロラクチン、LH（黄体化ホルモン）、GH（成長ホルモン）、TSH（チロイド刺激ホルモン）、FSH（卵胞刺激ホルモン）およびベータエンドロフィンといった腹側の下垂体からのホルモンの放出を制御する。したがって、例えばLH分泌を制御することができれば、女性の場合には受胎力を制御することができ、男性の場合にはテストステロンの産出を制御することができる。テストステロンの産出は男性の低リビドーといった症状の治療もしくは、筋肉が衰弱する病気や症状の治療に有用である。テストロステロンの減少は前立性癌といった症状の治療にも有用である。
行動的視床下部の機能の制御は、本発明によるボメロフェリンを用いることでもまた実行可能である。視床下部は恐れ、渇望、喜びといった行動的産出物並びに、睡眠および不眠を調節する約24時間周期のリズムを制御することが知られている。視床下部によって制御される他の機能としては、食欲、のどの渇き、逃避や格闘といった交感神経機能、および心臓血管の制御といった機能、温度調節および腸筋肉や消化のための酸分泌の制御といった内臓機能が挙げられる。したがって、様々な解剖学上の部分から視床下部へ多くの感覚的インプットが存在するにもかかわらず、本発明のボメロフェリンはVNO中の上皮細胞に接触するために吸収による鼻腔を通じて刺激する様式、および上述した視床下部の機能を刺激する方法を初めて提供するものであると信じている。
“プレグナステロイド”とは、10-と13-位でメチル化および17-位でエチル化（不飽和基を含む）された４員ステロイド構造によって特徴付けられる脂肪族多環炭化水素である。プレグナンは通常少なくとも1個の二重結合を有することを意味すると理解されているプレグナン類の部分集合である。さらに言えば、上記に記載の構造的特徴を有する全ての誘導体はまた、プレグナンステロイドと総称されている。
“コランステロイド”とは、10-と13-位でメチル化および17-位で2-ペンチル基（不飽和基を含む）を有する４員ステロイド構造によって特徴付けられる脂肪族多環炭化水素である。
“化学レセプター”とは、特定のリガンドもしくはリガンド類に立体特異的な様式で結合する“化学的感覚の”神経上皮細胞の表面に見られるレセプター分子である。この特定の結合により、求心性の（afferent）神経インパルスを始めるシグナル形質導入が始まる。化学レセプターはなかんずく、味蕾、嗅覚上皮および鋤鼻骨組織にみられる。
“プレグネンステロイド”とは、本明細書で使用する語句の通り、A環で少なくとも1個の二重結合を有し、10-と13-位でメチル化および17-位でエチル化（不飽和基を含む）され、3-位でアルコキシ、エステル、ベンゾエート、シピオネート、スルフェートもしくはグルクロニドといったオキソ、ヒドロキシもしくはヒドロキシ誘導体を有する４員ステロイド構造を持つ脂肪族多環炭化水素である。これらの構造的特徴からなる誘導体はまた、プレグネンステロイドと総称される。
以下に、ステロイド類に共通の４員環ステロイド構造を示す。例示した目的として、プレグナンに関してD環上の側鎖を示す必要があるからである。基や置換基の位置を記述する際、以下の位置番号に従う。
0004450435.tif 000009
“性的二形態”とは、同種の雄性および雌性間での医薬的作用物質の効果、もしくはそれに対する応答上の差異を指称する。
薬物の“有効量”とは、該薬物の必要量を個体へ投与した際の、目的の生理学的および／または心理学的効果をもたらす量および／または濃度範囲のことである。この場合の困窮した個体とは、視床下部によって正常に調節された生理学的もしくは行動学的体質を持ち、視床下部もしくは体質の機能に影響を受けると期待されるものである。与える薬剤の有効量は影響を及ぼす機能、目的の効果、投与経路などにより変わってくる。例えば、該ステロイドを被験者の顔の皮膚に溶剤として投与する場合、有効濃度は1μg（マイクログラム）／ml〜100μg/mlであり、好ましくは10〜50μg/ml、最も好ましいのは20〜30μg/mlである。ステロイドを直接VNOに導入する場合、有効量は約1pg（ピコグラム）〜約1ng（ナノグラム）であり、より好ましくは約10pg〜約50pgである。該ステロイドを軟膏剤、クリーム剤もしくはエアロゾール剤等により鼻を通して投与する場合、有効量は約100pg〜約100μgであり、好ましくは約1ng〜約10μgである。薬剤はある経路で投与すると有効であるが、別の経路で投与すると有効ではなくなる。
“視床下部”は、視床下溝下の第三脳室の腹壁からなり、脳室底を形成する構造を含有し、視神経交差、結節灰白質、ろうとおよび乳頭部を含有する間脳部である。視床下部は自律神経系を調節し、いくつかの生理学的および行動学的機能、いわゆる格闘および逃避応答、性的動因、水バランス、糖や脂肪の代謝、空腹、体温の調整、内分泌分泌などを制御する。視床下部はまた、血圧を調節するバソプレシン、分娩および母乳放出を誘起するオキシトシンの源である。全ての視床下部の機能がここに記載のボメロフェリンの療法により潜在的に調整可能である。
本明細書で用いる“リガンド”とは、レセプター細胞の表面に見られるレセプター細胞に特異的に結合することによって化学的シグナルとして作用し、細胞表面にまたがり形質導入を開始する分子である。化学的感覚のレセプターへのリガンドの結合は測定可能である。鋤鼻骨神経上皮もしくは嗅覚神経上皮といった化学的感覚の組織は、多重の神経レセプター細胞からなり、それぞれは少なくとも1個の細胞表面レセプターでみられる。レセプター細胞の多くは同一のリガンド特異性を有する。それゆえに、ある組織をそれに対し特異性を有するリガンドに被曝した場合（例えば、ボメロフェリンへのVNOの被曝）、細胞表面レセプター電位の累積変化を測定可能である。
本明細書で用いる通り、“低級アルキル”とは炭素数1〜4の分枝もしくは非分枝飽和炭化水素鎖、例えばメチル、エチル、n-プロピル、i-ブチル等を意味する。本明細書で用いる“アルコキシ”は、基-OR（ここでRは本明細書で定義する通りアルキル）を意味する従来の意味で使用する。
“フェロモン”とは、分泌および末梢化学的受容を通じて多くの同種間でのコミュニケーションの化学的手段を提供する物質である。哺乳類ではフェロモンを通常、鼻の鋤鼻骨器官におけるレセプターにより検出する。一般にフェロモンは発生、繁殖および関連行動に影響を与える。“ボメロフェリン（vomeropherin）”とは、フェロモンを含め、また化学的感覚のメッセンジャーとして機能し、特定の鋤鼻骨の神経上皮レセプターに結合し、生理学的もしくは行動的効果を誘起するいかなる源からの物質かを表す、より総括的な語句である。“ボメロフェリン”の生理学的効果は、鋤鼻骨器官を通じて媒介する。
ピコグラム（pg）は0.001ナノグラム（ng）に等しい。ngは0.001マイクログラム（μg）に等しい。μgは0.001mgに等しい。
II．本発明の実施の形態
A．本発明に有効なステロイド類
本発明は特定のステロイド群に関する。
ここで、チャート上にデザインした以下の化合物についての製造を記載する。
チャート１では本発明が指向するプレグナンを含有するが、この範囲に限定されるものではない。以下の製造図式ではこれらプレグナンの製造法における中間体および基本構造体の製造を示す。
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基本構造の製造
先の表を参照して、以下、列（A1〜A13）もしくは段（P1〜P8）における中間体の典型的な製造について示す。
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また、商業上入手可能な基本構造体として、例えば17α-エチニルテストステロンを挙げる。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばデヒドロエピアンドロステロン、プレグネノロンである。
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実施例参照
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また、商業上入手可能な基本構造体である、例えば17α-エチニルジヒドロテストステロンを挙げる。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばプレグナノロン、アンドロステロンである。
および：
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実施例参照。
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また、商業上入手可能な基本構造体である、例えば5α-プレグナ-17（20）-エン-3β-オール（ステラロイド）を挙げる。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばプレグナ-5,16-ジエン-3β-オール（ステラロイド）である。
商業上入手不可能な場合、製造を以下の通りに進める：
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また、商業上入手可能な基本構造体である、例えば5α-プレグナン-3β-オール（ステラロイド）を挙げる
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17α-プレグナン
基本構造P1、P4およびP5については、17-位の通常の立体配置はβである。しかしながら、相当する17αアナローグは出発物質として17α-プレグノロンを用いても製造可能である。
0004450435.tif 000043
メチルプレグナン
以下の方法論により、いわゆるP1、P2、P3、P4およびP6を有する構造に適用するいずれの場合においてメチル基で20-位を置換可能となる。
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特定のメチル化されたプレグネロン前駆体、6,16α（β）-メチル体を商業上入手可能である。
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加えて、17α-メチルプレグネロンを容易に入手可能である：
0004450435.tif 000048
したがって、プレグネノロンから製造した化合物もまた、適当なメチルプレグネノロン前駆体を用いることで、6、16もしくは17位にメチル基を持つものを製造可能である。
記載の18,21-ジメチルプレグナ-4,16-ジエン-20-イン-3-オンといったジメチル化合物を３個の常法中の１法によって製造可能である。
最初の方法は、6、16もしくは17-位などのメチル化前駆体と20-位などでメチル基を導入する方法論とを組合せるものである。
二番目の方法では、商業上入手可能な6,16α-ジメチルプレグネノロンなどのジメチル化前駆体を用いる。
他のジメチル化プレグネノロン前駆体の製造については以下の実施例に記載した通りである。
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3番目の方法はプレグネノロンなどの未メチル化前駆体を出発とし、かつ以下の実施例などの２個のメチル基を導入する方法論を活用するものである。
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20,21-ジメチルプレグナンはまた、24-ノルコランとして知られている。24-ノルコランは別法として、以下の例の通りコラン前駆体の分解によっても製造可能である。
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ハロプレグナン
米国特許番号3,681,410では以下の化合物の製造を教示している。
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特定のメチル化プレグネノロン前駆体、6,16α（β）-メチル体を商業上入手可能である。
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加えて、17α-メチルプレグネノロンを容易に入手可能である：
フランス特許番号1,363,191：
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したがって、プレグネノロンから製造した化合物を適当なメチルプレグネノロン前駆体を用いることにより、6、16もしくは17位にメチル基を有するものをまた製造可能である。
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基本構造の製造
先の表を参照して、以下、列（A1〜A13）もしくは段（C1〜C7）における基本構造の典型的な製造について示す。
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実施例参照。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばプレグネノロン、スチグマステロール、コレン酸（cholenic acid）である。
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実施例参照。
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実施例参照。
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実施例参照。
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実施例参照。
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24-ノルコランおよび24-メチルコラン
24-位の1個の炭素原子分だけ短くしたり、もしくは長くしたりした側鎖を有する構造は、類似体の方法論を用いて製造可能である。23-メチルコランもまた同様の手段で入手可能である。以下に例を挙げる。
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C．製造方法
１．3-,6-,19-,20-および21-位の誘導体の製造
本発明の方法で使用する化合物は、3-、6-、19-、20-および21-位で置換されたプラグナンステロイドである。3-置換ステロイドの多くは3-オキソ-ステロイドから誘導可能な公知の化合物である。図１に示すとおり、プレグナ-4,20-ジエン-3-オン（1）を3,5,20-トリエンエーテル体（2）もしくは1,4,20-トリエンエーテル-3-オン体（3）に変換可能であり、これらはそれぞれ6-および3-置換ヒドロキシ誘導体の出発原料である。
アルコキシ誘導体は、トリメチルオキソニウムフルオロボレート、トリエチルオキソニウムフルオロボレートもしくはメチルフルオロスルホネートなどのアルキル化剤とジクロロメタンなどの不活性なクロロ炭素溶媒中反応させることにより、相当するヒドロキシステロイドから製造する。別法としては、アルキル化剤をNaH、KMもしくはKOBut、酸化銀もしくは酸化バリウムなどと非プロトン性溶媒、例えばDMF、DMSOおよびヘキサメチルホスホリックアミド中で用いることができる。
ステロイドの製造反応における一般的な方法は、当業者に知られるところである。反応の時間および温度が決まれば、製造方法は規定の方法論により決定できる。必要な試薬を加えた後、混合物を不活性雰囲気下攪拌し、その一部を１時間間隔で取り出した。出発原料の消失を追跡するために該一部をクロマトグラフィーによって分析し、各時点でワークアップ方法を開始した。出発原料が24時間以内に消費されない場合、出発原料が消失するまで先と同様に混合物を還流するまで加熱し、時間毎にその一部を分析した。この場合、ワークアップ方法を開始する前に混合物を冷却した。
生成物の精製は、当業者に知られているクロマトグラフィーおよび／または結晶化の手段により達成した。
２．19-OH誘導体の製造
19-OH-プレグナ-4,17-ジエン-3-オンの製造
本化合物を製造する方法をスキーム３に提供する。
以下のチャートIIIに、特に好ましい19-ノル-プレグナンを示す。
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また、商業上入手可能な基本構造体である、例えば17α-エチニル-19-ノルテストロステロンが挙げられる。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばエストロン、エチニルストラジオールである。
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Pierre Crabbleによる、米国特許番号3,492,318（1970年）。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えば6-デヒドロエストロンである。
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実施例を参照。
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実施例を参照
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実施例を参照。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばエキリンである。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばエキレニンである。
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実施例を参照。
0004450435.tif 000083
実施例を参照。
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実施例を参照。
0004450435.tif 000085
また実施例を参照。
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メチルノルプレグナン
この系列における19-ノルプレグナンは6α、7α、18、20もしくは21位にメチル基を有するものを製造可能である。
米国特許番号3,681,410では、6α-メチル類似体の製造を教示している。
0004450435.tif 000092
米国特許番号3,682,983では、18-メチル類似体の製造を教示している。
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米国特許番号3,492,318では、7α,18および21-メチル類似体の製造を教示している。
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21-メチル類似体：
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7α,18,20および21-メチル類似体
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加えて、特定のメチル化前駆体、例えば以下の化合物を入手可能である。
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上記より、7α-メチルもしくは18-メチル類似体はそれぞれエストロンもしくは17α-エチニル-19-ノルテストステロン（ノルエチンドロン）を前駆体とする物質から作ることが可能である。
ハロノルプレグナン
米国特許番号2,840,582では以下の化合物の製造を教示している。
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米国特許番号3,681,410では以下の化合物の製造を教示している。
0004450435.tif 000099
アルコキシ誘導体は、トリメチルオキソニウムフルオロボレート、トリエチルオキソニウムフルオロボレートもしくはメチルフルオロスルホネートなどのアルキル化剤とジクロロメタンなどの不活性なクロロ炭素溶媒中反応させることにより、相当するヒドロキシステロイドから製造する。別法としては、アルキルハライド、アルキルトシレート、アルキルメシレートおよびジアルキルスルフェートなどのアルキル化剤をNaH、KMもしくはKOButなどの塩基、酸化もしくは酸化バリウムなどと非プロトン性溶媒、例えばDMF、DMSOおよびヘキサメチルホスホリックアミド中で用いることができる。
ステロイドの製造反応における一般的な方法は、当業者に知られるところである。反応の時間および温度が決まれば、製造方法は規定の方法論により決定できる。必要な試薬を加えた後、混合物を不活性雰囲気下攪拌し、その一部を１時間間隔で取り出した。出発原料の消失を追跡するために該一部をクロマトグラフィーによって分析し、消失時点でワークアップ方法を開始した。出発原料が24時間以内に消費されない場合、出発原料が消失するまで先と同様に混合物を還流するまで加熱し、時間毎にその一部を分析した。この場合、ワークアップ方法を開始する前に混合物を冷却した。
生成物の精製は、当業者に知られているクロマトグラフィーおよび／または結晶化の手段により達成した。
0004450435.tif 000100
基本構造の製造
先の表を参照して、以下、列（E1〜E12）もしくは段（N1〜N4）における中間体の典型的な製造について示す。
0004450435.tif 000101
商業上入手可能な基本構造体である、例えばエストロンである。
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商業上入手可能な基本構造体である、例えば6-デヒドロエストロンである。
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エキリン内にみられる、商業上入手可能な基本構造体である。
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エキレニン内にみられる、商業上入手可能な基本構造体である。
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メチルエストレン
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したがって、製造可能な化合物としては、それらからの誘導体を含めた、すなわち17-メチル-N1、17β-メチル-N2もしくは14α-メチル-14と、E1、E2、E3、E5、E6、E7、E8、E11もしくはE12とを組合せたものが挙げられる。
ハロエストレン
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George A. Boswellによるカナダ特許番号70:58140g中に、以下の化合物がある。
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したがって、製造可能な化合物としては、それらからの誘導体を含めた、すなわち17-フルオロ-N1と、E1、E2、E3、E5、E6、E7、E11もしくはE12とを組合せたものが挙げられる。加えて、17-ヨード-N1と、E2、E6もしくはE12とを組合せたものが挙げられる。
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ヨーロッパ特許出願  EP208,497。
したがって、製造可能な化合物としては、それらからの誘導体を含めた、すなわち（4-クロロ、4-ブロモ、6α-クロロ、6α-ブロモ、6β-クロロ、6β-ブロモもしくは6β-ヨード）-A1と、N1、N2、N3もしくはN4とを組合せたものが挙げられる。加えて、（17-フルオロ、17-クロロ、17-ブロモもしくは17-ヨード）-N1と、A1、A2、A3、A4、A5、A6、A8、A9、A10もしくはA11とを組合せたものが挙げられる。
１．3-,5-,6-,18-および19-位の誘導体の製造
本方法で使用した化合物は、3-、5-、6-、18-および19-位で置換されたアンドロスタンステロイドである。3-および5-置換ステロイドの多くは、Δ16同属体への脱離もしくは還元による17-ヒドロキシ-および17-オキソ-ステロイド（例えば、アルドリッチ化学社から商業上入手可能）から誘導可能な公知の化合物である。ほとんどのこれら化合物の製造はOhloff（上述）により記載されている。図１に示すとおり、17-β-ヒドロキシ-5α-アンドロスタン-3-オン（Ｉ）およびクロロギ酸メチル（a）／ピリジン中によりメチルカルボネート17β-メトキシカルボニルオキシ-5α-アンドロスタン-3-オン（II）を得、このものは5α-アンドロスタ-16-エン-（3-オンおよび3-オール）の出発原料となる（Ofloffによる、上記p200）。アルコキシ誘導体は、トリメチルオキソニウムフルオロボレート、トリエチルオキソニウムフルオロボレートもしくはメチルフルオロスルホネートなどのアルキル化剤とジクロロメタンなどの不活性なクロロ炭素溶媒中反応させることにより、相当するヒドロキシステロイドから製造する。別法としては、アルキルハライド、アルキルトシレート、アルキルメシレートおよびジアルキルスルフェートなどのアルキル化剤をNaH、KMもしくはKOButなどの塩基、酸化もしくは酸化バリウムなどと非プロトン性溶媒、例えばDMF、DMSOおよびヘキサメチルホスホリックアミド中で用いることができる。
ステロイドの製造反応における一般的な方法は、当業者に知られるところである。反応の時間および温度が決まれば、製造方法は規定の方法論により決定できる。必要な試薬を加えた後、混合物を不活性雰囲気下攪拌し、その一部を１時間間隔で取り出した。出発原料の消失を追跡するために該一部をクロマトグラフィーによって分析し、消失時点でワークアップ方法を開始した。出発原料が24時間以内に消費されない場合、出発原料が消失するまで先と同様に混合物を還流するまで加熱し、時間毎にその一部を分析した。この場合、ワークアップ方法を開始する前に混合物を冷却した。
生成物の精製は、当業者に知られているクロマトグラフィーおよび／または結晶化の手段により達成した。
２．19-OH誘導体の製造。19-OH-アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オンの製造。
本化合物は19-オキソ-3-アザ-A-ホモ-5B-アンドロスタン製造の中間体として開示されている（Habermehlら、Z. Naturforsh.（1970）25b: 191-195）。本化合物を製造する方法を提案する。
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新規なアンドロスタン
17-メチレンアンドロスタ-4-エン-3α-オール（A4/N3）
17-メチレンアンドロスタ-4-エン-3β-オール（A3/N3）
6β-ヒドロキシアンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン（A13/N1）
6β-ヒドロキシ-17-メチル−18-ノルアンドロスタ-4,13（17）-ジエン-3-オン（A13/N4）
アンドロスタ-5,16-ジエン-3β,19-ジオール（A5/N1の19-ヒドロキシ誘導体）
17-メチレンアンドロスタ-4-エン-3,6-ジオン（A6/N3）
17-メチル-18-ノルアンドロスタ-4,13（17）-ジエン-3α-オール（A4/N4）
17-メチル-18-ノルアンドロスタ-4,13（17）-ジエン-3β-オール（A3/N4）
17β-メチルアンドロスタ-4-エン-3,6-ジオン（A6/N2の17βメチル誘導体）
3-メトキシ-17-メチレンアンドロスタ-3,5-ジエン（A8/N3）
6β-ヒドロキシ-17-メチレンアンドロスタ-4-エン-3-オン（A13/N3）
17-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3-オン（A11/N3）
6β-ヒドロキシアンドロスタ-1,4,16-トリエン-3-オン（A11/N1の6β-ヒドロキシ誘導体）
6β-ヒドロキシ-17-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3-オン（A11/N3の6β-ヒドロキシ誘導体）
17β-メチルアンドロスタ-4-エン-3α-オール（A4/N2の17β-メチル誘導体）
17β-メチルアンドロスタ-4-エン-3β-オール（A3/N2の17β-メチル誘導体）
3-メトキシ-17-メチル-18-ノルアンドロスタ-3,5,13（17）トリエン（A8/N4）
基本構造の製造
先のチャートＶを参照して、以下、列（A1〜A11）もしくは段（N1〜N4）における中間体の典型的な製造について示す。
0004450435.tif 000115
このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばデヒドロエピアンドロステロンである。
0004450435.tif 000116
0004450435.tif 000117
ドイツ特許番号2,631,915
0004450435.tif 000118
0004450435.tif 000119
実施例15参照。
0004450435.tif 000120
0004450435.tif 000121
実施例19参照。
0004450435.tif 000122
0004450435.tif 000123
メチルアンドロステン
0004450435.tif 000124
ドイツ特許番号2,631,915では、1α、2α、4、6α、6β、7αおよび16位のいずれの１つの位置でメチル基を有する以下の化合物の製造を教示している。
0004450435.tif 000125
ドイツ特許番号2,428,679
17-メチルアンドロステンの製造
0004450435.tif 000126
したがって、製造可能な化合物としてはそれらからの誘導体を含めた、すなわち1α、2α、4、6α、6β、7α、16もしくは17位でメチルを有するN1と、A1、A3、A4、A5、A8、A9、A10もしくはA11、併せて17-メチルを有するA2もしくはA6とを組合せたものが挙げられる。
ハロアンドロステン
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米国特許番号  3,413,321
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ドイツ特許番号  2,631,915
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実施例参照。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばエストロンである。
0004450435.tif 000132
このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えば6-デヒドロエストロンである。
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0004450435.tif 000135
実施例参照。
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このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばエキリンである。
0004450435.tif 000137
このものは、商業上入手可能な基本構造体である、例えばエキレニンである。
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メチルノルコラン
この系列の19-ノルコランは1もしくは7α位にメチル基を持つものを製造可能である。
1-メチル類似体の前駆体は以下の通り製造可能である。
0004450435.tif 000143
出発原料はCarl Djerassi、G. Rosenkanz、J. Iriarte、J. BerlinおよびJ. RomoによるJ. Amer. Chem. Soc. 1951, 73, 1523により製造した。
7α-メチル類似体は、商業上入手可能な7α-メチルエストロンから製造可能である。
0004450435.tif 000144
Ｄ．使用方法
本発明の方法は、非全身性のある種のステロイド、ステロイドの組み合わせの鼻腔投与方法で達成する。
この特定の投与様式は、ステロイドリガンドの鼻腔投与により提供されるVNOとの直接接触のおかげで、これらいくつかの重要な方法において経口摂取または注入などの別法様式から区別される。本発明の方法において、適当なリガンドを直接鼻腔経路および鋤骨器官経路の化学受容体に、丸薬または針を使用せず、すなわち非侵襲的に直接投与する。薬物作用は、本明細書に記載されるように、鼻中の神経上皮細胞、好ましくはVNOにより提示される受容体に特異的であるリガンドの結合によって媒介される。さらに薬剤作用の様式は神経系を通すが、循環器系を通さず−従って血液脳関門を考慮せずに脳機能に影響を及ぼすことができる。これらの治療方法は、神経系を通して視床下部に影響する直接的方法を提供する。というのは、フェロモン受容体と視床下部の間には唯一のシナプス結合しかないからである。感覚神経は脳の特定の位置に向かっているので、この方法は非常に特異的な薬剤影響を保有し、それによって、望ましくない副作用の可能性を激減させる。
VNO接触は、VNOが化学受容体／フェロモン機能に関するので重要である。VNOは、鼻中隔の下端に見られる一対の盲管状憩室（blind tubular diverticula）からなる。VNOは神経上皮を含み、そこから扁桃体へ、視床下部へと伸びる直接的シナプスを保有する軸索を含む。VNOの存在は、ヒト胎児を含むたいていの陸生脊椎動物においてよく記載されている；しかしながら、VNOは成人において一般的には痕跡器官として考えられている（ジョンソン（Johnson）ら、上記）。
本明細書に記載されるリガンド物質、またはその硫酸塩、cypioninc酸塩、安息香酸塩、プロピオン酸塩またはグルクロン酸塩誘導体は直接投与されてよいが、好ましくは組成物として投与される。それらは、例えば液体、懸濁液などの液体投与形態で調製され、好ましくは正確な用量の単独投与に適した単位用量形態にて調製される。液体用量は点鼻薬またはエアロゾルなどとして投与されてよい。別法として、活性化合物はクリームまたは軟膏組成物として調製することができ、鼻腔内の局所に塗ることができる。さらに、ボメロフェリン（vomeropherin）は、鼻腔に運ばれる空気の一息に含まれる吸入剤として投与することができる。さらに別法として、運搬はこれらの試薬の、シリコンなどの合成ポリマーおよびゼラチンまたはセルロースなどの天然に存在するポリマーを用いて、巨大または微小レベルのいずれかにおいてカプセル化することにより、統制された放出によって起こってよい。放出速度は、拡散速度のコントロールに使用した重合システムの適当な選択によってコントロールすることができる（レンジャー（Langer, R.S.）およびペッパス（Peppas, N.A.）、Biomaterials ２，２０１、１９８１）。ゼラチンおよびセルロースなどの天然のポリマーは、数分から数時間の問題でゆっくりと溶解するが、一方、シリコンは数ヶ月の期間、完全なままである。該組成物は、従来の製薬学的担体または賦形剤、１またはそれ以上の活性化合物を含むであろう。さらに、該組成物は他の医薬剤、製薬学的試薬、担体、アジュバントなどを含んでいてよい。
半化学的なリガンドとのやりとり方法のうちの最もありそうなものは、他者の皮膚上にあり、天然に存在するフェロモンの吸入である。これらの化合物は相対的に不揮発性であるので、親密な接触の間でさえ、ヒト被験者が他者の皮膚からの天然に存在するステロイドのpg量を吸入するであろうことが推定される。吸入した量から、たった約１％のみが鋤鼻器の受容体に到達するであろうことが推定される。
もちろん投与されたボメロフェリンの量は、治療されている被験体、罹患の重篤度、投与様式、投与頻度、および処方する医師の判定に依存するであろう。しかしながら、鋤鼻器腔に直接運搬された少なくとも約１０ピコグラムの単独投与量は、一時的な自律神経系応答を引き出すのに有効である。鼻腔に投与された場合、その用量は約１００ピコグラム〜約１００マイクログラムであり、好ましくは約１ナノグラム〜約１０マイクログラムであり、より好ましくは約１０ナノグラム〜約１マイクログラムである。投与頻度は望ましくは時間での投与〜月間投与の範囲にあり、好ましくは８回／日〜１日おきに１回、より好ましくは１回〜３回／日である。１またはそれ以上の活性成分および例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなどの担体中の任意での製薬学的アジュバントを含む軟膏は、例えば、ワセリン（petroleum jelly）、ラードまたはラノリンなどの主薬を用いて調製することができる。
液化投与可能な医薬組成物は、例えば、上記に定義した活性成分および任意には、例えば水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノールなどの担体中の製薬学的アジュバントを溶解、分散するなどにより、溶液または懸濁液を形成して調製することができる。所望ならば、投与されるべき該医薬組成物はまた、例えば湿潤剤または乳剤、例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウラート、トリエタノールアミンソディウムアセテート（triethanolamine sodium acetate）、トリエタノールアミンオリエート（triethanolamine oleate）などのｐＨ緩衝剤などの非毒性補助物質を少量含んでいてよい。そのような投与の形態を調製する実際方法は、当業者には公知であるかまたは明らかであるだろう：例えば、レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンスィズ（Remington’s Pharmaceutical Sciences）、マック・パブリッシング・コ（Mack Publishing Co.）、イーストン、フィラデルフィア、第１５版、１９７５参照。投与されるべき組成物または製剤は、とにかく、治療されるべき被験体の徴候を緩和するのに有効な量にて、１またはそれ以上の活性化合物の量を含むであろう。
エアロゾル投与に関して、該活性成分は、好ましくは界面活性剤およびプロペラント（propellant）と共に粉砕型で用いる。典型的な活性成分のパーセンテージは０．００１〜２重量％、好ましくは０．００４〜０．１０％である。
もちろん、活性剤は非毒性であり、好ましくはプロペラントに可溶である。代表例はＣ6〜Ｃ22の脂肪酸エステルまたは部分エステルであり、カプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレン酸、オレステアリン酸、オレイン酸と脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物、例えば、エチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、アラビトール、マンニトール、ソルビトールおよびソルビトールから誘導されるヘキシトール無水物（商標名「スパン」の名で市販されている）、およびこれらエステルのポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレン誘導体である。混合エステル、例えば混合または天然グリセリドを用いてもよい。好ましい界面活性剤はオレートまたはソルビタン、例えば「Arlacel C」（ソルビタンセスキオレート（Sorbitan sesquioleate））、「Span 80」（ソルビタンモノオレート）、「Span 85」（ソルビタントリオレート）等の名称で市販される。該活性剤は０．１〜２０重量％、好ましくは０．２５〜５％配合される。
組成物の平衡は通常プロペラントで行う。液化プロペラントは一般に室温でガス状であり、加圧圧縮される。好ましい液化プロペラント中、Ｃ5までの低級アルカン類（例えば、ブタン、プロパン）、フッ素化またはフッ素塩素化アルカン類（例えば「Freon」として市販されている）があり、それらの混合物でもよい。
エアロゾルの調整には、適当なバルブを備えた容器に適当なプロペラントと共に微細紛の活性化合物および活性剤を充填する。該成分はバルブをゆるめるまで加圧下に維持される。
他の投与手段としては、揮発性液状組成分の個人の皮膚への適用、好ましくは顔面皮膚に適用する。その組成物は通常エタノール、イソプロパノールなどのアルコールを含む。好ましくは組成物に芳香剤も配合する。
Ｅ．避妊活性
ステロイド１９−ノルプレグナ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（１９−ノルプレグナンチャート中のE2/P４化合物）を雌性ラットのVNO中で試験した。EVGおよびボメロナーザル曲線（VNn）放電頻度をそれぞれ、図９７および図９８において示す。このデータはVNOの刺激を示している。雌性ラットが低ホルモン活性を保有（エストロゲン受容体結合により測定）しており、ステロイドE2/P4が経口投与された場合には、性交後に避妊活性を有することを示した。（ピーターズ（Peters）ら、J. Med. Chem.、１９８９、３２、１６４２−５２）。図９７および９８のデータは、この避妊活性がE2/P4がホルモンではないが、VNOの刺激を介してボメロフェリンとして機能し、今度は視床下部に影響を及ぼすため、説明可能であると示唆している。ラットモデルのデータと一致して、化合物E2/P4はまた、女性におけるVNO刺激を示し（図１１８参照）、ついで程度は低いが、男性においても刺激を示し（図１４０参照）、従ってヒトにおいて該ボメロフェリンが避妊活性を保有することが期待される。
VNOを介した視床下部の刺激は、LHおよびFSHの放出を抑制することができる。これは前立腺癌、思春期早熟症（男性および女性において）、子宮内膜症、子宮筋腫、乳癌、月経前症候群および異常性子宮内出血の治療の臨床的方法を提供する。
Ｆ．情動、気分および性格特性の測定
情動、気分および性格特性に関する感情状態を質問票を使用して一般的に測定する。例えば、感情状態をいう形容詞を多数含む質問票を個々人に与えるかもしれない。個々人は形容詞によって記載された感情状態を評価し、および多数のスケールで該感情の強度を評価する。関連形容詞群および各形容詞の被験者による評価の統計学的分析は、多様な感情状態の測定の基礎を提供する。
別法として、感情状態はポリグラフィー評価（ガルヴァーニ電気皮膚反応、パルス速度など）などで使用される自動的変化によって測定されるかもしれない。キャバナック（Cabanac, M.）Annual Review of Physiology（１９７５）３７：４１５；ハーディー（Hardy, J. D.）、″Body Temperature Regulation″、第５９章、１４１７ページ。Medical Physiology. Vol. II、編：VB Mountcastle（１９８０）；Wolfram Bouscein. Electrodermal Activity（Plenum Press １９９２）。さらに、顔の表情および体姿勢などの非言語的手掛かりを評価することができる。
月経前症候群の治療
本研究に参加した患者（２０−４５歳齢の女性）はPMDD徴候が最高レベル（月経カレンダーの第２４から第２８日）の日に催される記録セッションに参加した。全手続きは、患者が仰向きになって横たわり、静かな室内で約１時間続けられた。
本実験に使用した活性成分は、１６α，１７α−エポキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールであった。鋤鼻器官の鼻への開口部は、鼻中隔の両側で同定され、および鼻腔プローブ（鋤鼻器用薬）はVNO開口部を示す出力穴を有する１つの鼻腔に設置する。活性物質の１パルスまたは偽薬がVNOに運搬された。以下、同手続きを他方の外鼻孔で反復した。最初の使用３０分後に鋤鼻器の２側のパフィング（puffing）を反復した。
該装置の活性化は２００μl、１秒のパルスを運搬する。パルスに運搬する活性物質の量は１００pgである。全セッションでの患者のVNOに運搬される活性化物質の総量は４００pgである（表II）。
0004450435.tif 000145
はっきりしたPMDDの総合症状を有する期間に候補者たちを試験した。これは通常、月経カレンダーの第２４日から２８日の間に生じる。精神測定試験（表III）を試験物質または偽薬のいずれかでVNOの２側を刺激する１０分前および、３０分後に示す（また表II参照）。３０分の質問票による調査の終了後、両VNOを再度、同物質で刺激し（ボメロフェリン、または偽薬）、ついで該患者を再度同様の精神測定試験にかけ、記録実験室から帰宅後５時間で回答させた。実験セッション翌日の該患者のインタビューは、２回目のVNOパフィング後の、気分の変化、感情および他の人々によっていかに認知されているかを示した。
自立反射およびEEG
患者の皮膚に接触させたいくつかの末梢電極導線を自律神経系機能および脳波図（EEG）を調べるのに使用した。記録は、VNOの刺激１５分前および３０分後に行った。皮膚電気活性（EDA）を中指（major finger）および藥指（右手）の掌の皮膚に設置した２つの銀製dectrodeディスクを用いて記録した。心電図（ECG）を導線I（標準フロンタルプレインI）からモニターした。呼吸数（RF）を下胸部周辺に設置したひずみゲージを用いて記録した。洞呼吸器生理学的不整脈をRFおよびECG頻度の相関関係から入手した。副交感神経状態における変化を評価した。体温（BT）を小サーミスタープローブを用いた外耳管から得た。双極性の筋電図記録（EMG）をあご先に置いた２つの電極で達成した。脳波図を標準的な１０/２０系のCzA1およびT3A1から記録する。全シグナルを増幅およびデジタル化（Biopac Systems）し、ついで連続的にモニターし、ついでコンピューターを用いてデータ保存した（マッキントッシュLC-III）。自律神経系機能およびEEGをスクリーニングセッションおよび再度二重盲検セッションの両方においてVNO刺激の後に記録した（表II参照）。
気分の変化を質問票を用いて０〜４までのスケールで評価した。以前に記録した自律神経系機能および偽薬の投与の３０分後またはVNOに対する試験物質の投与３０分後に″aqknowledge″ソフトウェアを用いて処理した（Biopac Systems）。結果の有意性をｔ−検定および分散分析を用いて査定した。
PMDDと診断された１４人の患者をスクリーニングした。２人の患者は偽薬に応答し、実験から脱落した。６人の患者がそれぞれのVNOにステロイドを受け、ついで他の６人は偽薬を受けた。結果の要約を表IIIに示す。
該患者はステロイド（総投与量＝２００pg）または偽薬でのVNOの刺激の３０分前後で１１のPMDD徴候のリストを評価するよう要求された。偽薬による２側性刺激は、徴候の大きさをコントロールレベル（図２１０、影のついたバー）からは有意には変化させなかった。しかしながら、ステロイド（総投与量＝２００pg）でのVNO２側刺激の３０分後、たいていのPMDDの徴候が有意に低減した（ｐ＝または<０．０３）。「私は物を投げたいような気がする」および「私は怒っている」などのいくつかの徴候に関して、改善点はｐ＝０．０１で有意であった。「私の心が冴えないような気がする」および「世界は私がいなかったらもっとよくなるのにという気がする」などの他の徴候に関するスコアは、ステロイド投与後でもコントロールからは異ならなかった（P>０．０５）。
ステロイドによるVNOの刺激３０分後の自律神経系機能分析は、いくつかの反射の変化、患者の気分の改善に相関する変化を示す。筋電図（EMG）によって測定された骨格筋の活動度は、VNOへのステロイド投与後３０分で減少するが、偽薬投与後では減少しない（図２１１）。また、皮膚の電気的性質に関する活動事象は、ボメロフェリンの投与後には減少するが、偽藥投与後では減少しなかった（図２１２）。他の自律神経反射は有意な変化を示さない。脳波パターンは、VNOへのステロイドの投与後に、基線から実質的には変化しなかった。しかしながら、ボメロフェリンで処理した４人の患者において、α皮質活性が増加した。
PMDD徴候のスコアはまた、VNOへのボメロフェリンの第２回投与の５時間後に調査された。今回はコントロールと全く有意差が見られなかった。しかしながら、記録セッション後の午前中に行われた電話インタビューで、患者は記録実験室を去った後、気分がよく、この効果は１〜２時間持続したことを述べた。
PMDDを罹患している患者のVNOに、吸入剤形態で少量のステロイド（２００pg）を投与し、有意な改善を生み出した。図２１０に示されるように、徴候の多数は該物質の投与３０分後に減少する。この効果はVNOへの偽藥投与後には見られない。徴候の減少は休養により達成し、EMGおよびEDA頻度の減少によって測定された。最終的に、患者の改善は、言語的報告（電話インタビュー）によって例証され、記録セッションの翌朝に得た。
0004450435.tif 000146
不安試験
８人の患者が偽藥で処理され、１１人がアンドロスタ−４，１６−ジエン−３β−オールで処理された。以下を測定する慣習ハミルトン−A（Hamilton-A）不安試験を用いて、不安徴候に関するスコアをとった：
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その結果を図２１３〜２１８にまとめる。図２１３において処理された被験者（T）は例、静および総ハミルトン−Aの結果にわたってコントロール（C）を越えて改善を示す。図２１４を参照すると、偽藥を投与された被験体のわずか２５％がハミルトン−Aスコアの４５％かまたはそれ以上減少するのだが、処理した被験者の６４％がスコアの４５％かまたはそれ以上減少する。
図２１５は、コントロールに比較して処理された不安被験者における呼吸数（RF）および心拍数（CF）における有意な減少を示す。
図２１６はコントロールに比較して、処理された不安被験者における副交感神経トーンの改善を示す。この特徴は生理学的洞不整脈に関数標準的試験を介して測定した。
図２１７はコントロールに比較して、処理された不安被験者における皮膚の電気的性質の活性（EDA）に関する改善（減少）を示す。
図２１８はコントロールに比較して処理された不安被験体における体温の改善（上昇）を示す。
エレクトロボメログラム（EVG）
図２０１Aは、２５才齢の男性被験者から記録したEVGのトレースを重ね合わせて示す。ETA（エストラテトラエニルアセテート）刺激は、コントロールと有意に異なるEVGを生み出した。調査された全被験者で産生されたEVG平均的な増幅はM=１．９５mV、S.D.＝＋０．８mV、n＝１０であった。PDDの同量を運搬する空気のパルスは一層大きなEVGを誘発した。記録されたすべての被験者におけるPDDの同量の投与量に関する平均的な増幅がM=３．６mV、S.D.＝＋０．７mV、n＝１０であった。
ボメロフェリンの鼻腔呼吸粘膜のエレクトログラムへの作用の結果は図２０１Bに示す。その実験は、呼吸粘膜がETAまたはPDD（プレグナジエンンジオン）のいずれにも全く反応しなかったことを示す（ｐ>０．１、n＝１０）。嗅上皮において試験された場合（未公開観察）、同じボメロフェリンもまた全くエレクトログラム応答は示さなかった。
図２０２は、男性被験体において得たETAおよびPDDの投与量の効果曲線を示す。両ボメロフェリンに関して、EVG増幅が濃度の機能として上昇することおよび５分間隔の刺激間の用量−効果関係がS字型であることに注目せよ。ETAに関する勾配はPDDのものから有意には異ならない（ｐ>０．０２、n＝２０）。
ボメロフェリンによって産生された自律神経系反射
ETA（５×１０−９M）およびPDD（５×１０−９M）含有エアーパルスでのVNOの刺激に対する中枢神経系（CNS）反射応答の実験は図２０３に示し、以下で議論する。
皮膚の電気的活性（EDA）
両ボメロフェリンはコントロールに比較して皮膚コンダクタンスの増加を誘発する（ｐ<０．０１）。ETAまたはPDDのいずれかのボメロフェリン含有単独エアーパルスの効果はXLat＝５２０ms、SD＝１１０msの潜伏期で一過性単相波（transient monophasic wave）からなる。PDDに関する効果の平均ピーク増幅はXPDD＝２１．１S、SD＝１９μSであり、ETAに関してはXETA＝２２．０１μS、SD＝１３．６μSである。波の平均的な持続時間は３２秒間であった。ボメロフェリンETAおよびPDDは、また自発的に生じるEDA事象の頻度を変化させた。ETAまたはPDDの適用後、波の頻度は４．１〜０．９へと減少した。
体温（BT）。ETAを含む単独のエアーパルスは、少量だが有意な温度上昇を生み出し（XLTA＝０．２４℃、SD＝０．１℃、ｐ<０．０２）、２分間持続し、ついで基線に戻った。
心拍数（CF）。心拍数はEKGのR−間隔から測定された。両ボメロフェリンにより誘発された効果は、男性被験者におけるものと有意に異なっている（ｐ<０．０１）、（図２１５参照）。コントロール値に比較して、ETAは心拍数をXETA＝−３．３打／分、SD＝１打／分だげ減少させる一方、PDDは心拍数をXPDD＝３．８打／分、SD＝１．５打／分だけ増加させた。これらの変化は、ボメロフェリンでのVNO刺激の約１０秒後に露見し、ついで約２分後に心拍数はコントロール値にまで戻った。
呼吸数（RF）。PDDは少量だが重大な呼吸数における減少を誘発し（XRF＝−２周期／分、SD＝１周期／分、n＝１０）、それはVNO刺激後約５分で現れ、１分間持続した。
脳波（EEG）。脳波を頭頂野CzA1から記録し、ついで一時野（T3A1）から記録し、４分持続期間はFast Fourier Transformを用いてオフラインを分析した。後に、α〜β脳波活性の割合（α／β）をVNOに対するボメロフェリンの投与前および後で生じる時期にて計算した。PDDはコントロール被験者からのα／β割合０．１１〜処理した被験者の割合１．８５へと変化させる一方、ETAはコントロール被験者からの割合０．１４〜処理した被験者の割合を１．７１へと変化させたこれらの効果はコントロール値と有意に異なっている（ｐ<０．０２）。
記載のように自律神経の測定はボメロフェリンを有するヒトVNOの刺激が中枢神経系における反射活性を誘発することを示す。
下垂体ホルモンおよびテストステロンのプラズマレベル。ボメロフェリンによるVNO刺激の下垂体ホルモンのプラズマレベルへの影響は表IIおよび表IIIに示す。表IIはETA処理前および処理中のB群の１０被験者におけるTSH、PRL、FSHおよびLHの脈動性放出の特徴を示している。
ETAで処理した１０人の正常男性有志者では、正常偽薬コントロール群に比較してTSH、PRLおよびFSHに関して有意差は全く検出されなかった（ｐ<０．０５）。しかしながら、処理したETA被験者は、中間ピーク（Mid Peaks）およびピークの幅（peak Width）の測定において増加を示し、それぞれコントロール７９vs.処理した被験者９２およびコントロール４５vs.処理した被験者５４（ｐ<０．０５）を示し、処理した被験者に関するLHのピークの数はコントロール値６．８に比較して、５．２から有意に減少した。
１０人の男性被験者および１０人の女性被験者において（C群）、PDDを１０分ごとに６時間、５×１０-9Mの濃度で投与した。脈動性分析を各サンプリング時点で得られたLHおよびFSH血清濃度に適用した。表IIIに示すように、ピーク下の平均領域（濃度／時間）および基底より上の増加分は、女性群のサブ集団における明らかな変化なしに男性においてのみ、両ゴナドトロピンに関してPDDでの書入りの間に有意に減少した。
PDD処理した男性において、FSH値はM.領域およびI.A.基本測定の両方に関して、有意に減少した：処理した１２．７vs.コントロール１７．６および処理した０．６３vs.コントロール０．８９。同様に、同群において、LH値はM.領域およびI.A.基本測定の両方に関して、有意に減少した：それぞれ、処理したもの４４vs.コントロール７７および処理した１．４vs.コントロール２．０。
記載されるすべての測定に関して、統計学的に有意な変化は全くPDDで処理された女性被験者においては検出され得なかった（表III）。
特にLHに関する基本値からの増加分の減少（２．０vs．１．４ｐ<０．００９）において大きな変化が観察された。
ETAの投与間の発見同様、分析された他の下垂体ホルモン（PRLおよびTSH）は、その絶対的濃度または脈動性特徴のいずれにおいても統計学的に有意な変化を示さなかった。
ボメロフェリンETAおよびPDDは、VNOおよび視床下部応答の両者に性特異的であるようである。それらは、男性においてゴナドトロピン脈動性を有意に低下させるが、女性においては低下させない（表III）。VNOへのこの性特異的な影響（エレクトロボメログラム）を、ヒトの皮膚由来の天然に存在するボメロフェリン（フェロモン）を使用して以前に報告した：エストラ−１，３，５（１０），１６−テトラエン−３−オールは男性のヒトVNOを特異的に刺激するが、女性には刺激しなかった。しかしながら、アンドロスタ−４，１６−ジエン−３−オンは女性のヒトVNOを特異的に刺激するが、男性には刺激しなかった。
データはVNOおよび基底前頭葉間の機能的結合に関しての支持を提供する。さらに、ETA（３×１０-9M）での男性におけるヒトのVNOの刺激は、LHの脈動性を有意に変化させるがFSHは変化しない。PDD（５×１０-9M）は男性のみにおいてLHおよびFSHの脈動性を有意に変化させる。これらの発見は特定のボメロフェリン（化学的に合成されているが天然には存在しない）を使用する機会を与え、性特異的なある種の疾患の治療に使用され得る。
異性の同種の半化学物質に対する暴露を介してのLHRHおよびゴナドトロピンの放出は、いく種類かの哺乳類種において報告されている（ベルトラミノ（Beltramino）ら、Neuroendocrinology ３６（１９８３）：５３−５８、コケリン（Coquelin）ら、J. Neuroscience ４（１９８４）：２２３０−２２３６）。VNO受容体が神経内分泌反射を誘発するのに不可欠であることが実験動物においても見られる（ジョーンズ（Johns）１９７８、ウィソッキ（Wysocki）２９７９、Meredith １９９４）。本結果は、この神経内分泌反射はヒトにおいて機能的であり、かつ、ボメロフェリンに対して感受性のあるVNO受容体部位を介して調節され得ることを示す。LHおよびFSHのピークの高さにおいて減少が見られ、そのピーク間隔に頻度および増加が現れる表IIおよび表IIIを参照。それゆえ、ETAおよびPDDは、視床下部LHRHニューロンのプールを調節する鋤鼻器求心性シグナルに影響を及ぼすに違いない。
いくつかの動物種における実験研究は、LH脈動性と視床下部−下垂体門脈（hypothalamic-pituitary-portal）血液中へのGnRHのエピソード的放出間の密接な相関を証明した（ベルジュイス（Veldhuis）ら、J. Clin. Endocr. Metab.、６４（１９８７）：１２７５−１２８２）。正常男性、閉経後の女性および月経周期中を研究した若い女性におけるLHの脈動的放出は、エピソード的内分泌ゴナドトロピン放出ホルモン（GnRH）作用を反映する。対生物活性のLHパルス増幅における分散は内分泌GnRHパルスシグナルの増幅および／または下垂体ゴナドトロピン細胞応答性における変化のいずれかにおける変化から生じることができ、LHパルス頻度における重要な変化は、対応する視床下部性のGnRHパルスの調節を反映するようにとることができる（クノビル（Knobil, E.）１９８０、Recent Prog Horm Res ３６：５３）。VNOに対するボメロフェリンのfemtomolar量投与間の、雄性被験者におけるゴナドトロピンの放出の両およびパターンにおいて観察された変化は視床下部／下垂体レベルでの神経薬理学的効果を生じる。
視索前視床下部からのLHRHの脈動的放出は、下垂体からの両ゴナドトロピン（LHおよびFSH）の放出を駆り立てる（イェナンド・シャッフェ（Yenand Jaffe）、Textbook of Reproductive Endocrinology）。
数人の患者に関するデータは血中テストステロンレベル（それぞれ被験者１，２，４および８は図２０４，２０５，２０６および２０７に示される）に関して示されている。検査「A」はプレグナ−４，２０−ジエン−３，６−ジオンのVNOへの投与後のレベルを示す。検査「B」は偽藥の投与後のテストステロンレベルを示す。プレグナジエンジオンでの処理後のレベルの曲線勾配は、統計学的にコントロールの曲線勾配から異なっている。また、たいていの場合には、テストステロンレベルはコントロールと比較してプレグナジエンジオンの治療後に低下している。これはVNOに対するボメロフェリンの投与による血中テストステロンレベルに影響を及ぼすことができる能力を示す。
III．実施例
下記の実施例は例示を意図するものであって、本発明を限定するものではない。
実施例中で使用する略語は、以下の通りである：aq.＝水性；RT＝室温；PE＝エーテル（b.p．５０−７０℃）；DMF＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；DMSO＝ジメチルスルホキシド、THF＝テトラヒドロフラン。
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実施例
実施例１  プレグナ-4,20-ジエン3α-（β-）-オール
トリシアミル水素化ホウ素リチウム（5.0ml、5.0mmol）の１M溶液に、-78℃でアルゴン下、プレグナ-4,20-ジエン-3-オン（1.10g、3.70mmol）／乾燥THF（14ml）溶液を、攪拌しながら加え、その混合物を室温まで昇温した。3時間後、その混合物を−78℃まで冷却し、以下の試薬：水（2ml）、エタノール（6ml）、12%KOH水溶液（10ml）および3%過酸化水素（50ml）を続けて加えた。混合物を攪拌したまま、室温まで昇温した。２時間後、酢酸エチル（200ml）を加え、攪拌を続けた。有機層を分離し、飽和NaHSO3溶液、飽和NaHCO3溶液および飽和NaCl溶液で洗浄し、乾燥（Na2SO4）、真空下で蒸発したところ粗物質（2.1g）を得た。このものを、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル210g、230-400メッシュ；溶出液：EtOAc/CH2Cl2（5：95- - →7：93））で精製したところ、３つのフラクションを得た。フラクション１（0.8g）は不純な3α-アルコール体を含有した。フラクション２（0.1g）は3α-および3β-アルコール体の混合物であった。フラクション３（0.25g）は純粋な3β-アルコール体（23%）であった。フラクション１を、再度フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル80g、230-400メッシュ；溶出液：EtOAc/ヘキサン（10：90- - →15：85））で精製したところ、純粋な3α-アルコール体（0.15g、14%）であった。
実施例２  プレグナ-3,5,20-トリエン3-イルメチルエーテル、２
スキーム１に示すようにして、化合物２,３,４および５を以下の通り製造した。
プレグナ-4-,20-ジエン-3-オン（1、1.00g、3.35mmol）／2,2-ジメトキシプロパン（5.0ml）、ジメチルホルムアミド（5.0ml）およびメタノール（0.2ml）の溶液を、触媒量のp-トルエンスルホン酸一水和物（26.9mg、0.141mmol）と共に、2時間還流した。冷却後、炭酸水素ナトリウム（153.6mg、1.828mmol）を加え、反応混合物をヘキサン（75ml）と氷水（50ml）で分配した。有機層を水（50ml×2）、食塩水（50ml×1）で洗浄し、その後カラム（高さ17mm、直径30mm；シリカゲル60）を通してろ過した。併せた溶出液を濃縮し、アセトン／メタノールから再結晶したところ、光沢のあるわずかに黄色板状晶（828.7mg、2.652mmol、79%）を得た。m.p.111-114℃。
実施例３  プレグナ-1,4,20-トリエン-3-オン
プレグナ-4,20-ジエン-3-オン（1、1.19g、3.99mmol）を2,3-ジクロロ-5,6-ジシアノ-1,4-ベンゾキノン（DDQ、2.72g、12.1mmol）／ベンゼン（40ml）と共に、アルゴン下、２４時間還流した。冷却した懸濁液をエーテルで希釈し、5%（w/w）水酸化ナトリウム溶液（100ml×2）、水（100ml×2）および食塩水（100ml×1）で洗浄した。エーテル（100ml）を生成した乳濁液に加え、硫酸ナトリウムで乾燥、次いで硫酸ナトリウムのカラム（20g）を通してろ過した。残渣をエーテル（50ml）で2回洗浄後、ろ液を併せて減圧下濃縮し、再度フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、わずかに黄色結晶（0.26g、0.88mmol、22%）を得た。
実施例４  プレグナ-1,4,20-トリエン-3-オール、４.
プレグナ-1,4,20-トリエン-3-オン（3、0.26g、0.88mmol）／無水エーテル（25ml）を、水素化アルミニウムリチウム（250.5mg、6.601mmol）で、アルゴン雰囲気下、２時間還流し、次いでグラウバー塩（2.50g）で反応を抑制した。生成した懸濁液を７０分間攪拌し、ろ過、エーテル（50ml×2）で洗浄した。併せたろ液を減圧下濃縮後、残渣を分取TLC（アルミナ；溶出液：35%酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、白色微結晶（26.1mg、87.4μmol、10%）を得た。m.p.98-128℃。
実施例５  プレグナ-4,20-ジエン-6β-オール-3-オン、５.
1,2-ジメトキシエタン（DME；30ml）に懸濁した、m-クロロ過安息香酸（MCPBA；77.4％、763.4mg、3.42mmol）、水（6ml）および5％（w/w）水酸化ナトリウム（2.4ml）を、プレグナ-3,5,20-トリエン-3-イルメチルエーテル（２、400.3mg、1.281mmol）／DME（20ml）＋水（2ml）の溶液に、攪拌しながら85分間かけて加えた。反応を5時間続け、次いで飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）に注いだ。混合物をエーテル（50ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（50g）＋食塩水（50ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライトろ過した。その残渣をエーテル（10ml）で洗浄後、併せたろ液を真空下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：35%酢酸エチル/ヘキサン）およびプレパラティブTLC（シリカゲル：溶出液：35%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、白色結晶（95.5mg、0.304mmol、24%）の分離困難な混合物を得た。
実施例６  20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3β-オール、６.
スキーム２に示すようにして、化合物６、７、８および９を以下の通り製造した。
エチルトリフェニルホスホニウムブロミド（25.99g、70.00mmol）、t-ブトキシカリウム（7.86g、70.0mmol）、併せて無水DMSO（80ml）を油浴でアルゴン下、約80℃で１時間攪拌し、その後プレーン-5-エン-3β-オール-20-オン（4.43g、14.0mmol）／温無水DMSO（80ml）を加えた。赤色懸濁液を1時間攪拌し、加熱装置からはずし、氷冷食塩水（200ml）に注いだ。次いで、混合物をエーテル（100ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて食塩水（100ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過した。その残渣をエーテル（50ml）で洗浄後、併せたろ液を減圧下で濃縮した。黄色残渣を加温しながら95％エタノールに溶かし、活性炭（1g）と共に簡単に沸騰させ、セライトろ過した。冷却およびろ過後、残渣をエタノールから2回以上再結晶したところ、白色結晶（1.746g、5.314mmol、38％）を得た。m.p.140-145℃。
実施例７  20,21-ジメチルプレグナ-4,20-ジエン-3,6-ジオン、７
ジョーンズ試薬（2.67M、2.0ml、5.3mmol）を20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3β-オール（６、460.1mg、1.400mmol）／アセトン（50ml）溶液に加え、45分間攪拌した。2-プロパノール（1.0ml）で反応を抑制後、混合物を水（100ml）に注ぎ、酢酸エチル（50ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）＋食塩水（50ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過した。その残渣を酢酸エチル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）で精製および残渣を95％エタノールから再結晶したところ、黄色微結晶（138.2mg、0.4059mmol、29%）を得た。m.p.172-178℃。
実施例８  20,21-ジメチルプレグナ-4,20-ジエン-3-ジオン、８
20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3β-オール（６、400.3mg、1.218mmol）／ジクロロメタン（5ml）溶液をクロロクロム酸ピリジニウム塩（525.4mg、2.437mmol）で42時間酸化した。エーテル（3.5ml）を加え、懸濁液をシリカゲルカラム（直径：5mm×高さ：60mm）でろ過精製し、さらにカラムをエーテル（3.5ml）で溶出、併せたろ液を減圧下で濃縮した。該樹脂をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製、続いて水性エタノールから再結晶したところ、黄色結晶（43.6mg、0.134mmol、11%）を得た。m.p.157-165℃。
実施例９  プレグナ-4,20-ジエン-3,6-ジオン、９.
プレグナ-5,20-ジエン-3β-オール（300.5mg、1.000mmol）／アセトン（35ml）溶液を氷浴下冷却し、2.67Mジョーンズ試薬（0.71ml、1.9mmol）を加えた。1 1/2時間後、ジョーンズ試薬（0.71ml）をさらに加え、45分間反応を続けた。2-プロパノール（1.0ml）を加え、混合物を水（100ml）に注いだ。次いで、混合物を酢酸エチル（50ml）で2回抽出し、有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）+水（50ml）+食塩水（50ml）で洗浄し、シリカゲルカラム（シリカゲル60、直径：21mm×高さ：22mm）でろ過精製した。さらにカラムを酢酸エチル（25ml）で溶出、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣を95％エタノールから再結晶したところ、淡黄色粉末（104.6mg、0.3348mmol、33%）を得た。m.p.114-120℃。
実施例１０  プレグナ-5,17,20-トリエン-3β-オール、10.
17α-エチニルアンドロステンジオール（439.4mg、1.397mmol）／乾燥THF（10ml）溶液を、水素化アルミニウムリチウム（106.5mg、2.  mmol）および塩化アルミニウム（122.9mg、0.9220mmol）／乾燥THF（10ml）の懸濁液に、アルゴン下で加えた。17時間還流後、反応混合物を硫酸ナトリウム十水和物（1.00g、3.10mmol）と共に２時間攪拌することにより、抑制した。反応液をろ過し、残渣をTHF（10ml×3）で洗浄した。併せたろ液を減圧下で濃縮したところ、白色固体（0.44g）を得、このものをフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：30％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、水性エタノールから２回再結晶したところ、光沢のある白色結晶（92.0mg、0.303mmol、22%）を得た。m.p.144-149℃。
実施例１１  5α-クロロ-6β,19-エポキシプレグナ-17-エン-3β-オール、１１.
スキーム３に示すようにして、化合物１１、１２、１３および１４を以下の通りに製造した。
エチルトリフェニルホスホニウムブロミド（3.05g、8.22mmol）およびt-ブトキシカリウム（0.92g、8.2mmol）を76-86℃浴において、アルゴン下無水DMSO（9.2ml）中１時間反応し、続いて5α-クロロ-6β,19-エポキシアンドロスタン-3β-オール-17-オン（555.9mg、1.640mmol）／温無水DMSO（9.2ml）を加え、混合物をさらに1時間攪拌した。次いで、反応液を氷-食塩水（25ml）に注ぎ、エーテル（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過した。その残渣をエーテル（5ml×2）で洗浄、併せたろ液を真空下で乾燥した。黄色油状残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：60％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、白色シロップ状固体（0.34g、0.97mmol、59%）を得た。
実施例１２  5α-クロロ-6β,19-エポキシプレグナ-17-エン-3-オン、１２.
5α-クロロ-6β,19-エポキシプレグナ-17-エン-3β-オール（１１、0.34g、0.97mmol）／アセトン（35ml）溶液を、ドライアイスアセトン浴下冷却し、ジョーンズ試薬（2.67M、0.47ml）を加えた。40分間攪拌後、2-プロパノール（0.5ml）を加えて反応液を抑制した。水（15ml）を加え、揮発性成分を減圧下除去し、混合物をジクロロメタン（15ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（15ml）＋食塩水（15ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過した。その残渣をジクロロメタン（5ml×2）で洗浄後、併せたろ液を真空下で乾燥した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：30%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、白色結晶性固体（0.34g、0.97mmol、定量的）を得た。
実施例１３  6β,19-エポキシプレグナ-4,17-ジエン-3-オン、１３.
5α-クロロ-6β,19-エポキシプレグナ-17-エン-3-オン（１２、0.34g、0.97mmol）を加温しながら、無水メタノール（10ml）に溶解し、酢酸カリウム塩（0.60g、6.1mmol）を加え、溶媒（6.5ml）を室温で留去した。残渣を減圧下濃縮し、水（25ml）に溶かし、ジクロロメタン（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過した。その残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮したところ、TLC上単一（シリカゲル；溶出液：60％酢酸エチル／ヘキサン；Rf0.61）の白色結晶性固体（290.0mg、0.9281mmol、96％）を得た。
実施例１４  プレグナ-4,17-ジエン-19-オール-3-オン、１４.
6β,19-エポキシプレグナ-4,17-ジエン-3-オン（290.0mg、0.9281mmol）／氷酢酸（10ml）溶液に、10％塩酸と2分間攪拌することにより活性化した亜鉛末（1.12g、17.1mg−原子）を加え、続いて水およびアセトンで洗浄した。懸濁液を10分間、99-102℃で激しく攪拌し、次いでセライトろ過した。残渣を酢酸（10ml×4）で洗浄し、ろ液を併せて真空下濃縮した。残渣を酢酸エチル（50ml）に溶かし、水（50ml）+飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）+食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウム（50ml）で乾燥、セライトろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を真空下で乾燥した。残渣を酢酸エチルから再結晶したところ、白色結晶（46.4mg、0.148mmol、16％）を得た。ｍ.ｐ.192-195℃。
実施例１５  プレグナ-4-エン-3β-オール-20-イン、１５.
プレグナ-4-エン-3-オン-20-イン（200.1mg、0.6750mmol）およびトリ（ｔ-ブトキシ）水素化アルミニウムリチウム（343.8mg、1.352mmol）を、無水エーテル（3.6ml）中に懸濁した。4時間反応後、さらに水素化物（343.5mg、1.351mmol）を加え、16時間反応を続けた。スキーム4を参照。硫酸ナトリウム十水和物（3.41g）で反応を抑制後、反応混合物を15分間かき混ぜ、次いで珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で5回抽出し、ろ液を併せて減圧下濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：25％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、続いて水性エタノールから再結晶したところ、白色粉末（85.0mg、0.285mmol、42%）を得た。m.p.120.5-123.5℃。
実施例１６  20,21-ジメチルプレグナ-4,20Ｅ-ジエン-3,6-ジオン、１６.
ジョーンズ試薬（2.67M、1.75ml、4.67mmol）を20,21-ジメチルプレグナ-5,20Ｅ-ジエン-3β-オール（400.0mg、1.281mmol）／アセトン（45ml）溶液に加え、30分間攪拌した。次いで、混合物を水（85ml）に注ぎ、酢酸エチル（40ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（40ml）＋食塩水（40ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）で精製、続いて水性エタノールから再結晶したところ、淡黄色微結晶（119.1mg、0.3497mmol、29%）を得た。m.p.171-173℃。TLC（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）上、主要成分をRf0.17で、少量の混入物をRf0.24で示した。
実施例１７  20-メチルプレグナ-4,20-ジエン-3,6-ジオン、１７
ジョーンズ試薬（2.67M、1.83ml、4.89mmol）を20-メチルプレグナ-5,20-ジエン-3β-オール（400.0mg、1.272mmol）／アセトン（45ml）溶液に加え、20分間攪拌した。2-プロパノール（0.91ml）で反応を抑制後、混合物を水（85ml）に注ぎ、酢酸エチル（40ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（40ml）＋食塩水（40ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。固体残渣を水性エタノールから再結晶したところ、黄色結晶（235.0mg、0.7298mmol、57%）を得た。m.p.148-150℃。TLC（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）上、主要成分をRf0.24に、少量の不純物を原点に示した。
実施例１８  プレグナ-4,16-ジエン-3,6-ジオン、１８.
ジョーンズ試薬（2.67M、0.23ml、0.61mmol）をプレグナ-5,16-ジエン-3β-オール（45.5mg、0.151mmol）／アセトン（5ml）溶液に加え、20分間攪拌した。2-プロパノール（0.11ml）で反応を抑制後、水（10ml）を加え、混合物を酢酸エチル（5ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（5ml）＋食塩水（5ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣をプレパラティブTLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン上、Rf0.41；出発原料：Rf0.30）上単一の淡黄色固体（10.6mg、33.9μmol、22%）を得た。
実施例１９  プレグナ-4,17,20-トリエン-3,6-ジオン、１９.
ジョーンズ試薬（2.67M、1.03ml、2.75mmol）をプレグナ-5,17,20-トリエン-3β-オール（214.5mg、0.7187mmol）／アセトン（25ml）溶液に加え、混合物を20分間攪拌した。2-プロパノール（0.52ml）で反応を抑制後、混合物を水（50ml）に注ぎ、酢酸エチル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）＋食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。水性エタノール中、活性炭での混入物処理と併せて再結晶したところ、淡黄色微結晶（67.7mg、0.218mmol、30%）を得た。m.p.140-143℃。TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）上、生成物をRf0.43で、少量の混入物をRf0.86、0.14、0.08、0.00で示した（プレグナ-5,17-ジエン-3β-オール、Rf0.32）。
実施例２０  21-メチレン-20（R）-メチルプレグナ-4-エン-3-オン、２０.
イソプロポキシアルミニウム（0.39g、1.9mmol）／熱トルエン（3.6ml）を21-メチレン-20（R）-メチルプレグナ-5-エン-3β-オール（208.2mg、0.6337mmol）／シクロヘキサノン（3.6ml、35mmol）およびトルエン（18ml）溶液に加え、混合物を排気しながら2時間還流した。氷中冷却後、水（0.92ml）および3.6N硫酸（2.2ml）を加え、混合物を1分間振とうした。さらに水（4.6ml）を加え、混合物を5分間振とうし、水層を廃棄した。揮発性成分を共沸／水蒸気蒸留により除去し、生成した水性懸濁液をジクロロメタン（5ml）で3回抽出した。併せた有機抽出液を、珪藻土の上部に硫酸ナトリウムを載せ、これらをパスツールピッペットに入れた小カラムを通してろ過した。その残渣をジクロロメタン（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣のフィルムを再結晶したところ、白色微結晶（152.7mg、0.4677mmol、74%）を得た。m.p.138-139℃。TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）上、生成物をRf0.54で、微量の混入物をRf0.71（出発原料Rf0.36）で示した。
実施例２１  21-メチレン-20（R）-メチルプレグナ-4-エン-3β-オール、２１.
21-メチレン-20（R）-メチルプレグナ-4-エン-3-オン（５、100.0mg、0.3063mmol）およびトリ（ｔ-ブトキシ）水素化アルミニウムリチウム（319.4mg、1.256mmol）／無水THF（5ml）懸濁液を、アルゴン下６時間攪拌し、その後、水（48μl）、15%（w/w）水酸化ナトリウム（48μl）および水（143μl）を加えた。混合物を珪藻土でろ過し、残渣をTHF（5ml）で4回抽出した。ろ液を併せて減圧下濃縮し、水性エタノールから2回再結晶したところ、白色板状晶（42.6mg、0.130mmol、42%）を得た。m.p.121-123℃。TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）上、主生成物をRf0.38で、少量生成物をRf0.43（出発原料Rf0.50）で示した。
実施例２２  21-メチレン-20（R）-メチルプレグナ-4-エン-3,6-ジオン、２２.
ジョーンズ試薬（2.67M、0.68ml、1.8mmol）を21-メチレン-20（R）-メチルプレグナ-5-エン-3β-オール（149.8mg、0.4560mmol）／アセトン（15ml）溶液に加え、20分間攪拌した。2-プロパノール（0.34ml）で反応を抑制後、混合物を水（30ml）に注ぎ、酢酸エチル（15ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（15ml）＋食塩水（15ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣をプレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC（溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン上、Rf0.47；出発原料：Rf0.35）上単一の黄色結晶性固体（49.7mg、0.146mol、32%）を得た。
実施例２３  プレグナ-4-エン-3β-オール-20-イン、２３.
トリ（ｔ-ブトキシ）水素化アルミニウムリチウム（343.8mg、1.352mmol）を、無水エーテル（3.6ml）に懸濁したプレーン-4-エン-3-オン-20-イン（200.1mg、0.6750mmol）に加え、混合物を4時間攪拌した。さらに水素化物（343.5mg、1.351mmol）を加え、さらに16時間反応を続けた。グラウバー塩（3.41g）を加え、懸濁液を15分間かき混ぜた。混合物を珪藻土でろ過し、残渣をエーテル（10ml）で5回抽出した。ろ液を併せて減圧下濃縮し、続いてフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：25％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、および水性エタノールから再結晶したところ、白色粉末（85.0mg、0.285mmol、42%）を得た。m.p.120.5-123.5℃。TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）上、生成物をRf0.23で、出発原料と思われる微量の混入物をRf0.29で示した。
実施例２４  プレグナ-4,16-ジエン-6β-オール-3-オン-20-イン、２４.
3-クロロ過安息香酸（290.0mg、1.680mmol）／1,2-ジメトキシエタン（9.4ml）＋水（3.6ml）を、プレグナ-3,5,16-トリエン-20-イン-3-イルメチルエーテル（471.0mg、1.527mmol）／1,2-ジメトキシエタン（9.4ml）の懸濁液に加え、30分間攪拌した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）に注ぎ、酢酸エチル（50ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（50g）＋食塩水（50ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：50%酢酸エチル/ヘキサン）で精製、続いて水性エタノールから再結晶したところ、淡黄色固体（145.9mg、0.4700mmol、31%）を得た。m.p.>300℃。
実施例２５  コラ-5,16,20（22）-トリエン-3β-オール、２５.
プロピルトリフェニルホスホニウムブロミド（12.13g、31.48mmol）およびt-ブトキシカリウム（3.54g、31.5mmol）／無水DMSO（35ml）の懸濁液を、アルゴン下、油浴（72-87℃）に設置し、次いで１時間攪拌した。プレグナ-5,16-ジエン-3β-オール-20-オン（1.9807g、6.298mmol）／温無水DMSO（35ml）を加え、90分間攪拌した。次いで、混合物を氷-食塩水（90ml）に注ぎ、エーテル（45ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（45ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。その残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、琥珀樹脂（103.6mg、0.3042mmol、4.8%）を得た。
実施例２６  コラ-4,20（22）E-ジエン-4,6-ジオン、２６.
ジョーンズ試薬（2.67M、1.26ml、3.36mmol）をコラ-5,20（22）E-ジエン-3β-オール（300.0mg、0.8758mmol）／アセトン（30ml）溶液に加え、20分間攪拌した。2-プロパノール（0.63ml）で反応を抑制後、混合物を水（60ml）に注ぎ、酢酸エチル（30ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（30ml）＋食塩水（30ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。水性エタノールから再結晶したところ、黄色固体（139.3mg、0.3929mol、45%）を得た。m.p.109−116℃。TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）上、主生成物をRf0.45で、併せて混入物をRf0.24、0.1および0.08（コラ-4,20（22）E-ジエン-3-オンをRf0.49）で示した。
実施例２７  コラ-4,20（22）E-ジエン-3-オン、２７.
イソプロポキシアルミニウム（2.82g、13.8mmol）／熱トルエン（26ml）をコラ-5,20（22）E-ジエン-3β-オール（1.5777g、4.605mmol）／シクロヘキサノン（26ml、0.25mmol）+トルエン（130ml）溶液に加え、排気しながら4時間還流した。冷却後、水（6.7ml）および3.6N硫酸（16ml）を加え、混合物を1分間振とうした。さらに水（32ml）を加え、混合物を5分間振とうし、水層を廃棄した。揮発性成分を共沸／水蒸気蒸留により除去し、生成した水性懸濁液をジクロロメタン（20ml）で3回抽出した。併せた有機抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。活性炭での混入物処理と併せて水性エタノールから再結晶したところ、淡黄色結晶（1.3317g、3.9104mmol、85%）を得た。m.p.133-135℃。TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）上、単一の生成物（Rf0.54；出発原料 Rf0.31）を示した。
実施例２８  コラ-4,20（22）E-ジエン-3β-オール、２８.
コラ-4,20（22）E-ジエン-3-オン（３、400.0mg、1.175mmol）およびトリ（ｔ-ブトキシ）水素化アルミニウムリチウム（1.2250g、4.8158mmol）／無水エーテル（15ml）懸濁液を、アルゴン下8時間攪拌した。グラウバー塩（6.07g）を加え、混合物を5分間攪拌し、次いで珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（15ml）で5回抽出し、ろ液を併せて減圧下濃縮した。残渣をプレパラティブTLC（シリカゲル、1000μ、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン上、Rf0.34；プレグナ-5,20-ジエン-3β-オール：Rf0.26）上単一の淡黄色固体（49.9mg、0.146mol、12%）を得た。
実施例２９  コラ-3,5,20（22）E-トリエン-3-イルメチルエーテル、２９.
コラ-4,20（22）E-ジエン-3-オン（808.6mg、2.374mmol）、2,2-ジメトキシプロパン（3.1ml、25mmol）、ジメチルホルムアミド（3.1ml）、メタノール（0.13ml）およびp-トルエンスルホン酸一水和物（28.0mg、0.147mmol）の混合物を排気しながら4時間還流した。冷却後、炭酸水素ナトリウム（0.17g）を加え、混合物を水（30ml）およびエーテル（50ml）で分配した。有機層を食塩水（30ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した固体をアセトンから再結晶したところ、淡黄色固体（453.8mg、1.280mmol、54%）を得た。m.p.94-96℃。TLC（シリカゲル、溶出液：10%酢酸エチル/ヘキサン）上、微量の出発原料（Rf0.14）と併せて生成物をRf0.62で示した。
実施例３０  コラ-4,20（22）E-ジエン-6β-オール-3-オン、３０.
3-クロロ過安息香酸（183.0mg、1.060mmol）／1,2-ジメトキシエタン（5.9ml）＋水（2.3ml）を、コラ-3,5,20（22）E-トリエン-3-イルメチルエーテル／1,2-ジメトキシエタン（5.9ml）に2 1/2分間攪拌しながら加えた。さらに1/2時間攪拌後、飽和炭酸水素ナトリウム（30ml）に注ぎ、酢酸エチル（30ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（30g）＋食塩水（30ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。その残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：60%酢酸エチル/ヘキサン）および、続いてプレパラティブTLC（シリカゲル、1000μ：溶出液：50%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：50%酢酸エチル/ヘキサン；主成分Rf0.48、少量成分Rf0.41；コラ-4,20（22）E-ジエン-3-オン Rf0.74）により二成分からなる白色結晶（114.3mg、0.3206mmol、33%）を得た。
実施例３１  VNOでの刺激に対する自律性応答の測定
様々な自律性パラメーターを、以下の
A1-P3  プレグナ-4,16-ジエン-3-オン
A2-P3  プレグナ-5,16-ジエン-3β-オール
A8-P1  3-メトキシ-プレグナ-3,5,20-トリエン
A6-P1  プレグナ-4,20-ジエン-3,6-ジオン
20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3β-オール
20,21-ジメチルプレグナ-5,20-ジエン-3-オン
A14-P2  6β,19-エポキシプレグナ-4,17-ジエン-3-オン
A7-P2  19-ヒドロキシ-プレグナ-4,17（20）-ジエン-3-オン
A13-P1  プレグナ-4,20-ジエン-6β-オール-3-オン
A11-P1  プレグナ-1,4,20-トリエン-3-オン
A1-P1  プレグナ-4,20-ジエン-3-オン
A2-P1  プレグナ-5,20-ジエン-3β-オール
A4-P1  プレグナ-4,20-ジエン-3α-オール
A3-P1  プレグナ-4,20-ジエン-3β-オール
A1-P4  プレグナ-4-エン-3-オン
A2-P4  プレグナ-5-エン-3β-オール
を実施例32に記載の方法を用いて、24人の男性および女性24人の被験者に投与しながら、追跡した。プロピレングリコールをまたコントロールとして投与した。プロピレングリコールと比較した場合、試験化合物はVNOにおける集中レセプター電位、直流電気の皮膚応答（GSR）、皮膚温度（ST）並びに、脳波（EEG）、心電図（EKG）および呼吸頻度（RF）によって測定される皮質α波活性度のパーセントにおいて大きな変化を誘起する。該結果を図2〜58に示す。追加試験を他のプレグナン誘導体について行ない、その結果を図58〜84に示す。コラン誘導体についての試験結果を図85〜96に示す。
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実施例３２  19-ノルプレグナ-4,20-ジエン-3β-オール
19-ノルプレグナ-4,20-ジエン-3-オン（0.38g、13mmol）およびトリ（ｔ-ブトキシ）水素化アルミニウムリチウム（1.36g、5.35mmol）／無水エーテル（20ml）懸濁液を、室温で5時間攪拌し、グラウバー塩（6.74g）を加えた。生成した混合物を5分間攪拌し、次いでガラスフリットでろ過した。残渣をエーテル（20ml×5）で洗浄し、ろ液を併せて減圧下濃縮した。粗生成物をプレパラティブTLC（シリカゲルGF、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン上、Rf0.29）上単一の黄色樹脂（39.6mg、0.138mol、11%）を得た。
実施例３３  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,17,20-ペンタエン-3-オール
水素化アルミニウムリチウム（LAH、256.1mg、6.748mmol）および塩化アルミニウム（296.8mg、2.227mmol）／無水エーテル（20ml）の懸濁液に、アルゴン下でエチニルストラジオール（1.0000g）／無水エーテル（20ml）を加えた。20時間還流後、グラウバー塩（2.00g）を加えて反応を抑制し、さらに2時間攪拌した。次いで、混合物を珪藻土でろ過し、残渣を酢酸エチル（10ml×3）で洗浄した。併せたろ液を濃縮、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：15％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、水性エタノールから２回再結晶したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン上、Rf0.36；エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オール、Rf0.36）上単一のわずかに黄褐色の微結晶（367.5mg、1.311mmol、39%）を得た。m.p.132-133℃。
実施例３４  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール-20β-イン
19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,17,20-ペンタエン-3-オール（２、280.4mg、1.000mmol）／無水THF（28ml）の冷（ドライアイス／アセトン浴）溶液に、アルゴン下、n-BuLi（2.5Mヘキサン中、1.2ml、3.0mmol）を10分間かけて加えた。18時間攪拌を続け、反応液を徐々に室温（15℃）まで昇温した。反応液を1N HCl（25ml）で抑制し、次いでエーテル（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）＋食塩水（25ml）で洗浄し、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した黄色樹脂をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、続いて水性エタノールから再結晶したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン上、Rf0.34；出発原料、Rf0.37）上単一の細かい白色微結晶（150.5mg、0.5367mmol、54%）を得た。m.p.148-149℃。
実施例３５  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,16,20-ペンタエン-3-オール
19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オール-20-イン（200.0mg、0.7184mmol）／無水THF（9ml）に、無水アンモニア（約30ml）の溶液を加えた。ナトリウム（0.07g、3mg-原子）を小片にして加え、1時間攪拌した。その間、溶液の色が消失した。無水エタノール（3ml）を加え、混合物を一晩室温まで昇温した。HCl（1N、20ml）を加え、混合物をジクロロメタン（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（10ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した琥珀樹脂をプレパラティブTLC（シリカゲルGF、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、続いてベンゼン／ヘキサンから再結晶したところ、帯灰白色粉末を得た。m.p.123-125℃。TLC（溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）上、少量の混入物（Rf0.04）と併せて、主生成物（Rf0.38）を示した。
実施例３６  19-ノルプレグナ-5（10）,20-ジエン-3-オン
19-ノルプレグナ-2,5（10）,20-トリエン-3-イルメチルエーテル（750.0mg、2.513mmol）をアセトン（80ml）に溶解し、およびシュウ酸（0.88g、7.0mmol）／水（12ml）を加えた。さらに、溶液中にほとんどの沈殿が再沈するまでアセトン（20ml）を加え、6時間攪拌した。飽和炭酸水素ナトリウム（30ml）での抑制に続いて、反応混合物を酢酸エチル（40ml）で2回処理した。有機抽出液を併せて、食塩水（50ml）で2回洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、無色の樹脂（0.54g、1.9mmol、76％）を得た。
実施例３７  19-ノルプレグナ-5（10）,20-ジエン-3-オール
19-ノルプレグナ-5（10）,20-ジエン-3-オン（0.42g、1.5mmol）のエーテル性溶液（8.4ml）に、LAH（69.7mg、1.84mmol）を加え、30分間攪拌した。グラウバー塩（2.79g）を加え、懸濁液をさらに10分間攪拌した。次いで、混合物を珪藻土でろ過し、残渣をエーテル（435ml）で抽出した。併せたろ液を減圧下で濃縮し、生成した油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、帯灰白色の発泡体（0.38g、1.3mmol、88％）を得た。
実施例３８  19-ノルプレグナ-4,20-ジエン-10β-オール-3-オン
19-ノルプレグナ-5（10）,20-ジエン-3-オン（５、0.45g、1.6mmol）／DMF（5.7ml）をアイス-アセトン浴中で冷却し、ジョーンズ試薬（2.67M、0.19ml、0.51mmol）を加えた。1 1/2時間攪拌後、さらにジョーンズ試薬（0.19ml）を加えた。攪拌を45分間続け、その後ジョーンズ試薬（0.38ml）を加えた。1時間以上攪拌後、2-プロパノール（0.38ml）を加えて反応を抑制した。酢酸エチル（100ml）を加え、混合物を水（50ml×3）+食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、ろ液を併せて減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC（アルミナ、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、白色結晶（89.2mg、0.297mmol、19％）を得た。TLC（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）上、少量の出発原料（Rf0.73）が混入した、ほとんどの生成物（Rf0.46）を示した。
実施例３９  19-ノルプレグナ-4,9（10）,20-トリエン-3-オン
19-ノルプレグナ-5（10）,20-ジエン-3-オン（0.34g、1.2mmol）／無水ピリジン（4.0ml、49mmol）溶液を、氷-塩浴中5〜80℃以下まで冷却し、固体のピリジニウムブロミドパーブロミド（1.26g、3.94mmol）を反応温度が-2℃を越えない程度に加えた。1分間攪拌後、フェノール（0.20g）を加え、冷浴を取り除き、室温で24時間攪拌した。酢酸エチル（50ml）を10回加え、混合物を１N HCl（50ml）+飽和CuSO4（25ml）+5%水酸化ナトリウム（25ml）+水（25ml）+食塩水（25ml）で洗浄した。次いで、混合物を硫酸ナトリウムで4時間乾燥し、その後ガラスフリットでろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した暗色シロップを無水エタノール（8ml）に溶かし、亜鉛末（260.8mg、3.990mg-原子）を加え、懸濁液を1/2時間還流した。還元混合物を絹でろ過し、残渣をエタノール（10ml）で洗浄した。併せたろ液を濃縮し、プレパラティブTLC（一回目はシリカゲルGF、1000μ、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン；次いでアルミナGF、1000μ、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：10%酢酸エチル/ヘキサン上、Rf0.22；プレグナ-4,20-ジエン-3-オン、Rf0.25）上単一のほとんど無色の樹脂（152.8mg、0.5410mmol、45％）を得た。
実施例４０  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,20-テトラエン-3-オール
エチニルエストラジオールジアセテート（2.0004g、5.2576mmol）／無水THF（100ml）に、無水NH3（約140ml）の溶液を加えた。ナトリウム（1.88g、81.8mg-原子）を小破片（sliver）にして5分間かけて加えた。暗青色溶液を1時間攪拌後、無水エタノールを加え、徐々に室温まで一晩昇温した。1N HCl（100ml）を加え、層を分離し、水層をエーテル（50ml）で2回抽出した。有機層を併せて食塩水（100ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄、ろ液を併せて減圧下濃縮した。残渣をジクロロメタン（25ml）に溶かし、硫酸ナトリウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をジクロロメタン（10ml×2）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：15％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、黄色スポットを持つ白色結晶性固体（0.86g、3.0mmol、58%）を得た。
実施例４１  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,20-テトラエン-3-イルメチルエーテル
粗19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,20-テトラエン-3-オール（９、0.86g、3.0mmol）／90%エタノール（75ml）に、炭酸カリウム（6.73g、55.2mmol）を5回加え、懸濁液を1/2時間還流した。硫酸ジメチル（0.75ml）を加え、さらに1/2時間還流した。硫酸ジメチル（1.8ml×3）（総量＝6.5ml、65.0mmol）を1時間かけて加え、1/2時間還流を続けた。氷水（65ml）を加え、混合物を氷浴で冷却し、2時間攪拌した。懸濁液を遠心分離にかけ、ついで粗い（coarse）フリットでろ過した。残渣を水（50ml）＋5%水酸化ナトリウム（50ml）＋水（50ml×3）で洗浄した。残渣を水性エタノールから再結晶したところ、細かい白色微結晶を得た。m.p.108.5-110℃（文献：m.p.108-110℃）。
実施例４２  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-20-イン-3-イルアセテート
三酸化クロム（2.68g、2.68mmol）をジクロロメタン（40ml）に懸濁し、懸濁液を氷-塩浴下-8℃まで冷却した。3,5-ジメチルピラゾール（2.58g、26.8mmol）を加え、懸濁液を20分間攪拌した。19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,16-テトラエン-20-イン-3-イルアセテート（0.86g、2.7mmol）を反応温度が-7℃を越えない程度に5分間かけて加えた。さらに2時間攪拌後、反応混合物をシリカゲルカラム（30mm×116mm）に注ぎ、圧をかけてジクロロメタンで溶出を続けた。適当なフラクションを濃縮したところ、褐色のフィルム（0.16g、0.48mmol、18%）を得た。
実施例４３  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3,6β-ジオール-20-イン
粗19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-20-イン-3-イルアセテート（11、0.16g、0.48mmol）を無水エーテル（20ml）に懸濁し、LAH（36.7mg、0.967mmol）を加え、混合物を水を除去しながら18時間還流した。冷却後、グラウバー塩（1.22g）を加え、懸濁液を1/2時間攪拌した。混合物を珪藻土でろ過し、残渣を410ml量で洗浄した。併せたろ液を濃縮し、続いてプレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン上、Rf0.48）上単一の白色固体（26.0mg、88.3mmol、18％）を得た。
実施例４４  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,17-テトラエン-3-オール
アルゴン下、無水DMSO（4.1ml）に懸濁した、エチルトリフェニルホスホニウムブロミド（1.3947g、3.7572mmol）およびt-ブトキシカリウム（422.5mg、3.765mmol）を、油浴（80-84℃）に設置し、１時間攪拌した。エキリン（200.2mg、0.7459mmol）／無水DMSO（4.1ml）を加え、さらに1時間攪拌した。冷却後、氷-1N HCl（25ml）を加え、混合物をエーテル（20ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）+食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）、続いてプレパラティブTLC（シリカゲルGF：溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC（溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン上、Rf0.42）上単一のわずかに黄色樹脂（182.9mg、0.6523mmol、87％）を得た。
実施例４５  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,6,17-ペンタエン-3-オール
アルゴン下、無水DMSOに懸濁した、エチルトリフェニルホスホニウムブロミド（1.3945g、3.7561mmol）およびt-ブトキシカリウム（422.8mg、3.768mmol）を、浴（77-79℃）に設置し、１時間攪拌した。6-デヒドロエストロン（200.4mg、0.7466mmol）／無水DMSO（4.1ml）を加え、1時間攪拌した。反応混合物を冷却し、次いで1N  HCl（25ml）に注いだ。混合物をエーテル（20ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）+食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）、およびプレパラティブTLC（シリカゲルGF：溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC（溶出液：15％酢酸エチル／ヘキサン上、Rf0.21）上単一の帯灰白色結晶（212.9mg、>100％）を得た。
実施例４６  19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,6,8,17-ヘキサエン-3-オール
アルゴン下、無水DMSO（4.1ml）に懸濁した、エチルトリフェニルホスホニウムブロミド（1.3945g、3.7561mmol）およびt-ブトキシカリウム（422.3mg、3.763mmol）を、油浴（74-83℃）に設置し、１時間攪拌した。エキレニン（200.2mg、0.7518mmol）／無水DMSO（4.1ml）を加え、反応混合物をさらに1時間攪拌した。混合物を冷-1N HCl（25ml）に注ぎ、エーテル（20ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）+食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。その残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）、およびプレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ：溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC上単一の淡黄色結晶性ワックス（180.6mg、0.6487mmol、86％）を得た。
実施例４７
以下の研究について、19-ノルプレグナン構造を有する23ボメロフェリンと偽薬（プロピレングリコール）の効果を、自律性活性およびEEGについて比較した。19〜29才の12人の健康なヒト被験者（6人の女性と6人の男性）が本研究に参加した。全物質を鋤鼻器官（VNO）へ５秒間吹きつけて風媒輸送した。この目的のために、別に記載のミニプローブ電極を用い、局所刺激し、絶えず該器官の電気鋤鼻骨図（EVG）を記録した。皮膚電気性活性（EDA）、呼吸頻度（RF）、電気心拍曲線図（CF）、電気筋運動曲線図（EMG）、体温（BT）およびCzA1とT3A1からのEEGに関するパラメーターを記録した。自律性活性、EEGおよびEVGを表面電極を用いて記録した。使用した全技法は非浸襲性である。方法として各１時間にわたる間、２回記録した。電気的に記録したものを較差し、ディジタル化し、追跡しおよびコンピューターに蓄えた。該結果の処理および分析をオフラインで行なった。
女性におけるテストデータを図９９〜１２０に、男性におけるデータを図１２１〜１４２に示す。
該結果を、コントロールから差し引いた各ボメロフェリンの総効果を示す下記の表にまとめる。任意のスコア０〜５を互いに相対する化合物の活性を比較するのに適用したが、実際テストした全化合物は相当の効果を有していた。
これらの結果は、自律性活性およびEEGにおいていくつかのボメロフェリンによる効果が偽薬とは著しく異なることを示している。また、いくつかの物質では効果において両性間に著しい差異は認められなかった。
実施例４８  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オールの製造
以下の製造方法を図1に示す：
エストロンp-トルエンスルホニルヒドラゾンの製造
エストロン（270g、1.00mol）およびp-トルエンスルホニルヒドラジド（232.8g、1.25mol）／乾燥メタノール（2.5L）を20時間加熱還流した。混合物を円錐フラスコに移し、冷却した。結晶性生成物を吸引ろ取し、メタノール（300ml）で洗浄した。生成物の追加収量を、ろ液を連続して2000ml、800mlおよび400mlにまで蒸発させ、また随時結晶化させることで得た。総収量：433.5g（99%）。
1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オールの製造
エストロンp-トルエンスルホニルヒドラゾン（219.9g、500mmol）／乾燥
THF（8.0L）を氷／塩浴下冷却した。n-ブチルリチウム（2.5Mヘキサン中、800ml、2.00mol）を両端ニードルを用いて加える間、混合物をメカニカル攪拌した。混合物を室温で3日間攪拌した。氷（250g）、続いて飽和塩化アンモニウム溶液（500ml）を加えた。層間を攪拌することで混合し、次いで沈降させた。水層をテフロンチューブを用いて除去し、エーテル（500ml）で抽出した。二つの有機層を連続して同量の飽和炭酸水素ナトリウム溶液（500ml）、続いて飽和塩化ナトリウム溶液（500ml）で洗浄した。有機層を乾燥（MgSO4）し、真空下で蒸発させ粗生成物を得た。このものをフラッシュカラム（シリカゲル60、500g、230-400メッシュ）上部に置き、溶出した（溶出液：酢酸エチル／ヘキサン25：75、2.5L）。ろ液を真空下で蒸発し、結晶性物質を得た。生成物をメタノール（300ml）／水（75ml）から再結晶させ、メタノール（80ml）／水（20ml）で洗浄した。さらに、酢酸エチル／ヘキサン（12.5：87.5）から再結晶させたところ、純粋な生成物（88.9g、70％）を得た。
実施例４９  1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オールのアシル誘導体の製造
1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オール（254mg、1.00mmol）／エーテル（10ml）に、無水酢酸（0.25ml）（もしくはプロピオネートとしてプロピオン酸無水物）、続いてピリジン（0.25ml）を加え、混合物を室温で16時間攪拌した。混合物を氷／水に注ぎ、エーテル（2×20ml）で抽出した。有機層を水洗し、飽和硫酸銅溶液、水および飽和食塩水で洗浄、乾燥（MgSO4）し、真空下で蒸発させたところ純粋な生成物（192mg、65％）を得た。
実施例５０  エストラ-4,16-ジエン-3-オンの製造
エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-メチルエーテル（551.5mg、2.055mmol）／無水THF（8.6ml）、無水アンモニア（約30ml）およびt-ブチルアルコール（6.76g）に、リチウムワイヤー（0.24g、35mg-原子）を小片に切断して加えた。反応混合物を4 1/2時間アルゴン下還流し、その後、メタノール（2.3ml）を加え、アンモニアを一晩沸騰させ除去した。残渣をメタノール（25ml）に溶解し、5N HClでpH 1に酸性化した。油浴（55〜70℃）上で15分間加熱後、冷却した加水分解混合物を水（25ml）と酢酸エチル（50ml）で分配し、水層を酢酸エチル（25ml）で抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）および食塩水（25ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。溶媒を減圧下で除去したところ、油状残渣（0.57g）を得、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）で精製し、続いてペンタンから再結晶したところ、TLC上単一の結晶（206.1mg、39％）を得た。m.p.67-71℃。
実施例５１  エストラ-2,5（10）,16-トリエン-3-メチルエーテルの製造
エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-メチルエーテル（1.22g、4.54mmol）／無水THF（19ml）、t-ブチルアルコール（14.99g）および無水アンモニア（約70ml）に、リチウムワイヤー（0.53g、76mg-原子）を小片に切断して加えた。6時間アルゴン下還流後、メタノール（5ml）を加えて反応を抑制し、アンモニアを一晩沸騰させ除去した。残渣／水（100ml）の懸濁液を酢酸エチル（100ml×2）で抽出し、有機抽出液を併せて、食塩水で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥した。続いて、溶媒を減圧下で除去し、続いてフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：1% 酢酸エチル/ヘキサン）で精製し、次いで無水エタノールから再結晶したところ、TLC上単一のふんわりした白色結晶（884.1mg、3.269mmol、72％）を得た。m.p.72-73℃。
実施例５２  エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オンの製造
アセトン（50ml）に溶解した、エストラ-2,5（10）,16-トリエン-3-メチルエーテル（２）（646.3mg、2.390mmol）をシュウ酸二水和物（0.84g、6.7mmol）を用いて、室温で6時間加水分解した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）で抑制し、次いで酢酸エチル（25ml×2）で抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（25ml×2）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンから再結晶したところ、生成物（462.5mg、1.804mmol、75％）を得た。m.p.112-116℃。
実施例５３  エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オール（４）の製造
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（３）（301.1mg、1.74mmol）／無水エーテル（6ml）を、水素化アルミニウムリチウム（50.0mg、1.32mmol）を用いて室温で1時間還元した。硫酸ナトリウム十水和物（2.00g）で10分間反応を抑制後、懸濁液をセライトろ過し、残渣をエーテル（25ml×4）で洗浄した。併せたろ液を減圧下で濃縮、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：5%酢酸エチル/ヘキサン）で精製し、引き続いて混合したフラクションをプレパラティブTLCで精製した。極性の高い方の生成物はかなりの損失を伴って水性エタノールから再結晶したところ、固体（4.8mg）を得た。極性の低い方の生成物は水性メタノールから再結晶したところ、白色結晶（59.5mg）を得た。m.p.98-100℃。総収量：64.3mg（0.249mmol、21%）。
実施例５４  エストラ-4,9,16-トリエン-3-オンの製造
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（３）（0.38g、1.5mmol）／無水ピリジン（5.0ml、62mmol）溶液を、氷-塩浴中-13℃以下まで冷却し、ピリジニウムブロミドパーブロミド（1.58g、4.94mmol）を-4℃以下になるよう少量で加えた。1分間渦巻き後、フェノール（0.25g、2.7mmol）を加え、反応を室温で24時間続けた。酢酸エチル（50ml）を加え、反応混合物を１N HCl（25ml）、飽和硫酸銅（25ml）、5%水酸化ナトリウム（25ml）および食塩水（25ml）で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、減圧下で濃縮後、残渣を無水エタノール（10ml）に溶かし、亜鉛顆粒（0.33g、5.0mg-原子）を加え、混合物を1/2時間還流した。上澄み液を除去し、残渣を無水エタノール（10ml）で洗浄、併せた上澄み液を減圧下で濃縮した。生成した樹脂をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）で精製した。適当なフラクションを貯めておき、濃縮、次いでヘキサンから再結晶したところ、固体の生成物（117.5mg、0.4619mmol、31％）を得た。m.p.87-92℃。
実施例５５  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-アセテートの製造
三酸化クロム（13.40g、0.1340mmol）をジクロロメタン（200ml）に懸濁し、次いで氷-塩浴下-10℃まで冷却した。3,5-ジメチルピラゾール（12.90g、0.1342mol）を加え、混合物を20分間攪拌した。エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルアセテート（4.00g、13.5mmol）／ジクロロメタン（20ml）の冷蔵した溶液を加え、2時間攪拌し、その間反応温度を-8℃以下とした。次いで、混合物をシリカゲル（200g）を通してろ過し、生成物をさらにジクロロメタンで溶出した。適当なフラクションを集め、濃縮後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）で精製した。適当なフラクションを貯めておき、減圧下で濃縮したところ、白色固体（0.92g、3.0mmol、22％）を得た。m.p.87-103℃。
実施例５６  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オール-6-オンの製造
エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-アセテート（203.1mg、0.6543mmol）／メタノール（30ml）を5%（w/w）水酸化ナトリウム（1.5ml）で40分間けん化した。反応混合物を減圧下で濃縮し、水（50ml）に溶かし、1N HClで中和、ジクロロメタン（30ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（50ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、濃縮したところ、白色固体を得、このものをベンゼン／ヘキサンから再結晶およびプレパラティブTLCで精製したところ、白色結晶性固体（52.8mg、0.197mmol、30％）を得た。m.p.188-191℃。
実施例５７  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6α-オール-3-イルアセテートの製造
95%エタノール（35ml）に懸濁したエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-イルアセテート（421.4mg、1.358mmol）を、水素化ホウ素ナトリウム（98.8mg、2.61mmol）で、100分間、室温で還元した。減圧下濃縮後、残渣を水（25ml）に懸濁し、1N HClで中和、ジクロロメタン（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、濃縮した。生成した白色発泡体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）で精製した。フラクションを集めて、濃縮したところ、白色固体（0.12g、0.38mmol、28％）を得た。m.p.209-212℃。
実施例５８  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3,6-ジオールの製造
水素化アルミニウムリチウム（LAH、95%、46.9mg、1.17mmol）／無水THF（5ml）の懸濁液に、攪拌しながらエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-イルアセテート（６）（422.9mg、1.360mmol）／無水THF（5ml）を滴下した。50分間攪拌し、その後さらにLAH（46.5mg、1.16mmol）を加え、22時間攪拌した。4時間還流後、TLCではまだ出発原料がみられた。反応液を水（0.5ml）+20%（w/w）硫酸（0.5ml）で抑制し、減圧下で濃縮した。残渣を熱酢酸エチル（10ml）で4回抽出し、セライトろ過した。併せたろ液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで2回精製したところ、固体生成物（0.05g、0.2mmol、10%）を得た。m.p.150-157℃。
実施例５９  エストラ-1,3,5（10）,7-テトラエン-3-オールの製造
エキリン（100.2mg、0.3733mmol）／ジエチレングリコール（2ml）の懸濁液に、ヒドラジン（59μL、1.9mmol）および水酸化カリウム（0.04g、0.7mmol）を加えた。混合物を油浴中200〜214℃で2時間攪拌し、その後冷却した反応液を水（10ml）で希釈、1N HClで中和、エーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（10ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、濃縮し、プレパラティブTLC（シリカゲル：溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、黄色樹脂を得た。
生成物をさらに活性炭で脱色精製し、水性エタノールから再結晶したところ、黄褐色結晶（13.2mg、51.9μM、14％）を得た。m.p.130-134℃。
実施例６０  20-ホモエストラ-1,3,5（10）,6,8,17-ヘキサエン-3-オールの製造
トリフェニルメチルホスホニウムブロミド（671.0mg、1.878mmol）およびt-ブトキシカリウム（212.1mg、1.890mmol）／無水DMSO（2.1ml）の懸濁液を76〜86℃浴中、アルゴン下1時間加熱し、その後エキレニン（100.1mg、0.3579mmol）／無水DMSO（2.1ml）を加え、緑色溶液を1時間攪拌した。冷却後、冷-1N HCl（10ml）を加え、混合物をエーテル（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（10ml）+食塩水（10ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過し、減圧下で濃縮した。残渣の橙色油状物をプレパラティブTLC（シリカゲル：溶出液：25％酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC上単一の生成物（75.5mg、0.286mmol、76％）を得た。m.p.113-121℃。
実施例６１  20-ホモエストラ-1,3,5（10）,6,8,17-ヘキサエン-3-オールの製造
エストラ-1,3,5（10）,6-テトラエン-3-オール-17-オン（91.1mg、0.339mmol）、ヒドラジン（54μL、1.7mmol）および水酸化カリウム（0.06g）／ジエチレングリコール（1.8ml）を200℃浴中、アルゴン下、2時間加熱した。室温まで冷却後、水（10ml）を加え、溶液を1N HClでpH≒2に酸性化した。生成した懸濁液をエーテル（10ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて食塩水（10ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過、減圧下で濃縮した。粗固体をプレパラティブTLC（シリカゲル：溶出液：25％酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC上単一の生成物（5.9mg、23mmol、7％）を得た。
実施例６２  エストラ-4,16-ジエン-3-オールの製造
エストラ-4,16-ジエン-3-オン（１）（87.2mg、0.340mmol）／無水エーテル（1.7ml）に、水素化アルミニウムリチウム（15.0mg、0.395mmol）を加え、懸濁液を17分間攪拌した。次いで、硫酸ナトリウム十水和物（0.50g）と共に10分間かき混ぜ、セライトろ過した。残渣をエーテル（10ml×3）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC（シリカゲル：溶出液：5％酢酸エチル/ジクロロメタン）で精製したところ、黄色樹脂の粗生成物（50.0mg）を得た。このものはクロマログラフィーによる精製を再度行なうことで十分に純粋にすることができた。
実施例６３  エストラ-4,16-ジエン-3-オン
本製造を図153に示す。19-ノル-テストロステロン（XIX）は、例えばChemical Dynamics Corp.から商業上入手可能である。出発原料として19-ノル-16-アンドロステン誘導体が提供されている。19-ノルテストステロン（XIX）は、無水酢酸とピリジンとを用いてアセテートに変換される（Hartman, J.A.ら、J. Am. Chem. Soc.（1956）78：5662）。（a）このアセテート溶液（4.8g、15.17mmol）／トルエン（10ml）を、石英の小片で封したガラス管中、（b）540℃（200トル、N2をゆっくりと流入）で熱分解した。粗分解物（3.1g）をクロマトグラフィー（シリカゲル150g、溶出液：ジクロロメタン）で精製したところ、単一の油状ケトン９（1.1g、28％）を得た。
0004450435.tif 000161
実施例６４  エストラ-16-エン-3-オン
本製造を図153に示す。19-ノル-テストステロンは、（c）Villotti, R.ら（J. Am. Chem. Soc.（1960）82：5693）によれば、リチウムおよびアンモニアを用いて19-ノル-5a-アンドロスタン-17-オール-3-オン（XX）に還元される。アンドロスタ-5α,17-ジオール-3-オン（XX）は、無水酢酸とピリジンとを用いてアセテートに変換される（Hartman, J.A.ら、J. Am. Chem. Soc.（1956）78：5662）。（a）17B-アセトキシ-5a-エストラン-3-オン（8.0g、25.1mmol）をオクタン／アセトン10：1（22ml）中、（b）550℃（200トル、N2をゆっくりと流入）で熱分解した。粗生成物（5.4g）をクロマトグラフィー（シリカゲル600g、溶出液：ジクロロメタン）で精製し、単一のフラクションをPEから再結晶したところ、純粋なケトン１０（3.13g、48.3％）を得た。
0004450435.tif 000162
実施例６５  エストラ-16-エン-3α-オール
本製造を図153に示す。L-セレクトリド（d、トリ（二級ブチル）水素化ホウ素リチウム、1M THF溶液、4ml、4mmol）をケトン10（800mg、3.10mmol）／乾燥エーテル（5ml）の溶液に滴下した。1時間0℃で攪拌後、水（10ml）を加えた。ボランを10％NaOH水溶液（5ml）、続いて30％H2O2水溶液（3ml）を加えて酸化し、3時間室温で攪拌した。ワークアップ（エーテル）後、粗生成物（790mg、11と12の約9：1混合物）をクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：CH2Cl2）で精製したところ、純粋なアルコール１１（700mg、87％）を得た。
0004450435.tif 000163
実施例６６  エストラ-16-エン-3B-オール
本製造を図153に示す。ケトン１０（800mg、3.10mmol）／乾燥エーテル（5ml）の溶液を、LiAlH4（38mg、1mmol）／エーテル（3ml）のスラリーに室温で滴下した。（e）1時間後、混合物を10％H2SO4水溶液で加水分解した。ワークアップ（エーテル）後、粗生成物（802mg、11と12の9：1混合物）をクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：CH2Cl2）で精製した。１１（70mg）の少量のフラクションを最初に、続いて１２（705mg、87％）の主要フラクションを溶出した。
0004450435.tif 000164
実施例６７  エストラ-4,16-ジエン-3-オンの別製造法
エストラ-4,16-ジエン-3-オン
エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-メチルエーテル（551.5mg、2.055mmol）／無水THF（8.6ml）、無水アンモニア（約30ml）およびt-ブチルアルコール（6.76g）に、リチウムワイヤー（0.24g、35mg-原子）を小片に切断して加えた。反応混合物を4 1/2時間アルゴン下還流し、その後、メタノール（2.3ml）を加え、アンモニアを一晩沸騰させ除去した。残渣をメタノール（25ml）に溶解し、５N HClで約pH 1に酸性化した。油浴中、55〜70℃で15分間加熱後、冷却した加水分解混合物を水（25ml）と酢酸エチル（50ml）で分配し、水層を酢酸エチル（25ml）で抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）および食塩水（25ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。溶媒を減圧下で除去したところ、油状の残渣（0.57g）を得、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：15% 酢酸エチル/ヘキサン）で精製し、続いてペンタンから再結晶したところ、TLC上単一の結晶（206.1mg、39％）を得た。m.p.67-71℃。
実施例６８  エストラ-2,5（10）,16-トリエン-3-メチルエーテル、２
エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-メチルエーテル（1.22g、4.54mmol）／無水THF（19ml）、t-ブチルアルコール（14.99g）および無水アンモニア（約70ml）に、リチウムワイヤー（0.53g、76mg-原子）を小片に切断して加えた。図１２を参照。6時間アルゴン下還流後、メタノール（5ml）で反応を抑制し、アンモニアを一晩沸騰させ除去した。残渣／水（100ml）の懸濁液を酢酸エチル（100ml）で2回抽出し、食塩水で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥した。続いて溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：1%酢酸エチル/ヘキサン）で精製し、次いで無水エタノールから再結晶したところ、TLC上単一のふんわりした白色結晶（884.1mg、3.269mmol、72％）を得た。m.p.72-73℃。
実施例６９  エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン、３
アセトン（50ml）に溶解した、エストラ-2,5（10）,16-トリエン-3-メチルエーテル（２、646.3mg、2.390mmol）をシュウ酸二水和物（0.84g、6.7mmol）を用いて、室温で6時間加水分解した。図１２参照。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）で抑制し、次いで酢酸エチル（25ml）で２回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（25ml×2）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過、減圧下で濃縮した。残渣をヘキサンから再結晶したところ、生成物（462.5mg、1.804mmol、75％）を得た。m.p.112-116℃。
実施例７０  エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オール
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（３、301.1mg、1.174mmol）／無水エーテル（6ml）を、水素化アルミニウムリチウム（50.0mg、1.32mmol）を用いて室温で1時間還元した。図１５５参照。硫酸ナトリウム十水和物（2.00g）で10分間反応を抑制後、懸濁液をセライトろ過し、残渣をエーテル（25ml×4）で洗浄した。併せたろ液を減圧下で濃縮、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：溶出液：5% 酢酸エチル/ヘキサン）で精製し、引き続いて混合したフラクションをプレパラティブTLCで精製した。極性の高い方の生成物をかなりの損失を伴って水性エタノールから再結晶したところ固体（4.8mg）を得た。極性の低い方の生成物を水性メタノールから再結晶したところ白色結晶（59.5mg）を得た。m.p.98-100℃。総収量：64.3mg（0.249mmol、21%）。
実施例７１  エストラ-4,9,16-トリエン-3-オン
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（３、0.38g、1.5mmol）／ピリジン（5.0ml、62mmol）溶液を、氷-塩浴中-13℃以下まで冷却し、ピリジニウムブロミドパーブロミド（1.58g、4.94mmol）を-4℃以下になるよう少量で加えた。1分間渦巻き後、フェノール（0.25g、2.7mmol）を加え、反応を室温で24時間続けた。図１２参照。酢酸エチル（50ml）を加え、反応混合物を１N HCl（25ml）、飽和硫酸銅（25ml×2）、5% 水酸化ナトリウム（25ml）および食塩水（25ml）で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過、減圧下で濃縮後、残渣を無水エタノール（10ml）に溶かし、亜鉛顆粒（0.33g、5.0mg-原子）を加え、混合物を1/2時間還流した。上澄み液を除去し、残渣を無水エタノール（10ml）で洗浄、併せた上澄み液を減圧下で濃縮した。生成した樹脂をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：15% 酢酸エチル/ヘキサン）で精製した。適当なフラクションを貯めておき、濃縮、次いでヘキサンから再結晶したところ、固体の生成物（117.5mg、0.4619mmol、31％）を得た。m.p.87-92℃。
実施例７２  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-アセテート
三酸化クロム（13.40g、0.1340mmol）をジクロロメタン（200ml）に懸濁し、次いで氷-塩浴下-10℃まで冷却した。3,5-ジメチルピラゾール（12.90g、0.1342mol）を加え、混合物を20分間攪拌した。図１３参照。エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルアセテート（4.00g、13.5mmol）／ジクロロメタン（20ml）の冷蔵溶液を加え、2時間攪拌し、その間温度を-8℃以下とした。次いで、混合物をシリカゲル（200g）を通してろ過し、生成物をさらにジクロロメタンで溶出した。適当なフラクションを集め、濃縮後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）で精製した。適当なフラクションを貯蔵しておき、減圧下で濃縮したところ、白色固体（0.92g、3.0mmol、22％）を得た。m.p.87-103℃。
実施例７３  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オール-6-オン
エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-アセテート（203.1mg、0.6543mmol）／メタノール（30ml）を5%（w/w）水酸化ナトリウム（1.5ml）で40分間けん化した。図１５６参照。反応混合物を減圧下で濃縮し、水（50ml）に溶かし、1N HClで中和、ジクロロメタン（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（50ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、濃縮したところ、白色固体を得、このものをベンゼン／ヘキサンから再結晶およびプレパラティブTLCで精製したところ、白色結晶性固体（52.8mg、0.197mmol、30％）を得た。m.p.188-191℃。
実施例７４  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6α-オール-3-イルアセテート
95%エタノール（35ml）に懸濁したエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-イルアセテート（６、421.4mg、1.358mmol）を、水素化ホウ素ナトリウム（98.8mg、2.61mmol）で100分間室温で還元した。図１３参照。減圧下濃縮後、残渣を水（25ml）に懸濁し、1N HClで中和、ジクロロメタン（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、濃縮した。生成した白色発泡体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル/ヘキサン）で精製した。フラクションを集めて濃縮したところ、白色固体（0.12g、0.38mmol、28％）を得た。m.p.209-212℃。
実施例７５  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3,6-ジオール
水素化アルミニウムリチウム（LAH、95%、46.9mg、1.17mmol）／無水THF（5ml）の懸濁液に、攪拌しながらエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-6-オン-3-イルアセテート（６、422.9mg、1.360mmol）／無水THF（5ml）を滴下した。図１５６参照。50分間攪拌し、その後さらにLAH（46.5mg、1.16mmol）を加え、22時間攪拌した。4時間還流後、TLCではまだ出発原料がみられた。反応液を水（0.5ml）+20%（w/w）硫酸（0.5ml）で抑制し、減圧下で濃縮した。残渣を熱酢酸エチル（10ml）で4回抽出し、セライトろ過した。併せたろ液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで2回精製したところ、固体生成物（0.05g、0.2mmol、10%）を得た。m.p.150-157℃。
実施例７６  エストラ-1,3,5（10）,7-テトラエン-3-オール
エキリン（100.2mg、0.3733mmol）／ジエチレングリコール（2ml）の懸濁液に、ヒドラジン（59μL、1.9mmol）および水酸化カリウム（0.04g、0.7mmol）を加えた。図１５７参照。混合物を油浴中200〜214℃で2時間攪拌し、その後冷却した反応液を水（10ml）で希釈、1N HClで中和、エーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（10ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、濃縮し、プレパラティブTLC（シリカゲル、溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ黄色樹脂を得た。生成物をさらに活性炭で脱色精製し、水性エタノールから再結晶したところ、黄褐色結晶（13.2mg、51.9μM、14％）を得た。m.p.130-134℃。
実施例７７  20-ホモエストラ-1,3,5（10）,6,8,17-ヘキサエン-3-オール
トリフェニルメチルホスホニウムブロミド（671.0mg、1.878mmol）およびt-ブトキシカリウム（212.1mg、1.890mmol）／無水DMSO（2.1ml）の懸濁液を76〜86℃浴中、アルゴン下1時間加熱し、その後エキレニン（100.1mg、0.3579mmol）／無水DMSO（2.1ml）を加え、緑色溶液を1時間攪拌した。図１５７参照。冷却後、冷-1N HCl（10ml）を加え、混合物をエーテル（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（10ml）+食塩水（10ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、セライトろ過、濃縮し、精製した。
実施例７８  エストラ-1,3,5（10）,6-テトラエン-3-オール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン
6-デヒドロエステロン（538.0mg、2.004mmol）およびp-トルエンスルホニルヒドラジド（pTsNHNH2、466.6mg、2.506mmol）／無水メタノール（5.4ml）の懸濁液を排気しながら25時間還流した。図１５参照。減圧下濃縮後、反応残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：50%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、帯灰白色発泡体（942.5mg、収率>100％）を得た。
実施例７９  エストラ-1,3,5（10）,6-テトラエン-3-オール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン
粗エストラ-1,3,5（10）,6-テトラエン-3-オール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン（１、942.5mg、≦2.004mmol）／テトラヒドロフラン（THF）の冷却した（氷水浴）溶液に、アルゴン下攪拌しながら、n-ブチルリチウム（2.5Mヘキサン中、3.2ml、8.0mmol）を7分間かけて滴下した。図１５８参照。48時間攪拌し、その間反応液を徐々に室温まで昇温した。1N 塩酸（50ml）を加え、反応混合物をエーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）およびプレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚み1000μ、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン、Rf0.39）上単一の白色結晶性フィルム（134.5mg、0.5331mmol、27％）を得た。
実施例８０  エストラ-1,3,5（10）,6,16-ペンタエン-3-イル-アセテート
エストラ-1,3,5（10）,16-ペンタエン-3-オール（２、97.9mg、0.388mmol）／無水ピリジン（1.3ml、16mmol）および無水酢酸（0.18ml、1.9mmol）の溶液を24時間攪拌し、その後酢酸エチル（15ml）を加え、混合物を1N 塩酸（5ml×3）+飽和炭酸水素ナトリウム（5ml）+食塩水（5ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。図１５参照。残渣を酢酸エチル（15ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣をプレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚み1000μ：溶出液：10%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：10%酢酸エチル/ヘキサン、Rf0.40）上単一の僅かに黄色結晶性固体（74.9mg、0.254mmol、66％）を得た。
実施例８１  エストラ-1,3,5（10）,7-テトラエン-3-オール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン
無水メタノール（5.0ml）に懸濁したエキリン（500.1mg、1.863mmol）およびp-TsNHNH2（433.7mg、2.329mmol）を排気しながら24時間還流した。図１５参照。減圧下濃縮後、残渣の反応混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：35%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、白色発泡体（899.9mg、収率>100％）を得た。
実施例８２  エストラ-1,3,5（10）,7,16-ペンタエン-3-オール
粗エストラ-1,3,5（10）,7-テトラエン-3-オール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン（４、899.9mg、≦1.863mmol）／無水THF（20ml）の冷却した（氷水浴）溶液に、アルゴン下攪拌しながら、n-ブチルリチウム（2.5Mヘキサン中、3.0ml、7.5mmol）を3分間かけて滴下した。図１５参照。48時間攪拌し、その間反応液を徐々に室温まで昇温した。反応液を1N 塩酸（50ml）に注ぎ、混合物をエーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）で精製、および活性炭で脱色したところ黄色結晶性固体（274.8mg、1.089mmol、58％）を得た。
実施例８３  エストラ-1,3,5（10）,7,16-ペンタエン-3-イルアセテート
エストラ-1,3,5（10）７,16-ペンタエン-3-オール（５、192.1mg、0.7612mmol）／無水ピリジン（2.6ml、32mmol）および無水酢酸（0.36ml、3.8mmol）の溶液を6時間攪拌し、その後酢酸エチル（30ml）を加えた。混合物を1N 塩酸（10ml×3）+飽和炭酸水素ナトリウム（10ml）+食塩水（10ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。図１５参照。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚み1000μ、溶出液：5%酢酸エチル/ヘキサン）で精製および水性エタノールから再結晶したところ、細かい白色微結晶（78.6mg、0.267mmol、35％）を得た。m.p. 77-80℃。TLC（シリカゲル、溶出液：4%酢酸エチル/ヘキサン）上、Rf0.21および0.24に２スポットを示した。
実施例８４  エストラ-1,3,5（10）,6,8-ペンタエン-3-オール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン
無水メタノール（8.2ml）に懸濁したエキレリン（0.6559mg、2.463mmol）およびp-TsNHNH2（573.6mg、3.080mmol）を排気しながら24時間還流した。図１６参照。冷却および減圧下濃縮後、反応混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶出液：35-40％酢酸エチル/ヘキサン57％）で精製した。m.p. 95-96℃。TLC（シリカゲル、溶出液：2%酢酸エチル/ヘキサン）上、原点に微量の混入物を含有した生成物（Rf0.1）を示した。
実施例８５  エストラ-1,3,5（10）,6,8,16-ヘキサエン-3-オール
粗エストラ-1,3,5（10）,6,8-ペンタエン-3-オール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン（７、1.0887g、≦2.463mmol）／無水THF（25ml）の冷却した（氷水浴）溶液に、アルゴン下攪拌しながら、n-ブチルリチウム（2.5Mヘキサン中、3.9ml、9.8mmol）を2分間かけて滴下した。図１５９参照。3日間攪拌し、その間反応液を徐々に室温まで昇温した。1N 塩酸-氷（50ml）を加え、混合物をエーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）で精製、および活性炭での脱色と併せて無水エタノールから再結晶したところ、黄褐色板状晶（245.8mg、0.9819mmol、40％）を得た。m.p.162-163℃。
実施例８６  エストラ-1,3,5（10）,6,8,16-ヘキサエン-3-イルアセテート
エストラ-1,3,5（10）,6,8,16-ヘキサエン-3-オール（８、148.8mg、0.5944mmol）／無水ピリジン（2.0ml、25mmol）および無水酢酸（0.28ml、3.0mmol）の溶液を6時間攪拌し、その後酢酸エチル（20ml）を加えた。図１５９参照。混合物を1N 塩酸（10ml×3）+飽和炭酸水素ナトリウム（10ml）+食塩水（10ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過した。残渣を酢酸エチル（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。95％エタノールから再結晶したところ、光沢のある白色板状晶（99.4mg、0.340mmol、55％）を得た。m.p. 95-96℃。TLC（シリカゲル、溶出液：2%酢酸エチル/ヘキサン）上、原点に微量の混入物を含有した生成物（Rf0.1）を示した。
実施例８７  17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（100.03g、0.28001mol）およびt-ブトキシカリウム（31.42g、0.2800mol）／無水ジメチルスルホキシド（DMSO、320ml）の懸濁液をアルゴン下、油浴（68〜81℃）中、1時間攪拌し、その後エストロン（15.14g、55.99mmol）／無水DMSO（320ml）をシリンジで加えた。図１６０参照。1時間攪拌し、反応液を冷却した。混合物を冷-1N HCl（800ml）に注ぎ、次いでエーテル（400ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（350ml）+食塩水（400ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル200-400メッシュ、高さ58mm×直径84mm）により精製した。生成物をさらにエーテルで溶出した。適当なフラクションを減圧下濃縮し無水エタノールから3回再結晶したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン、Rf0.45）上、単一の非常に細かい白色微結晶（11.47g、42.73mmol、76％）を得た。m.p. 134-136℃。
実施例８８  17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-イルアセテート
17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール（10、5.84g、21.8mmol）／無水ピリジン（32ml、0.40mmol）および無水酢酸（9.7ml、0.10mmol）の溶液を24時間攪拌し、その後酢酸エチル（250ml）を加えた。図１６０参照。混合物を1N 塩酸（100ml×3）+飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）+飽和硫酸銅（100ml）+食塩水（100ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。水性エタノールから再結晶したところ、光沢のある白色板状晶（5.84g、18.8mmol）を得た。m.p. 77-79℃。
実施例８９  17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-6-オン-3-イルアセテート
ジクロロメタン（100ml）中-8℃（氷-塩浴）まで冷却した三酸化クロム（6.19g、61.9mmol）の懸濁液に、2,4-ジメチルピラゾール（5.95g、61.9mol）を加えた。図１７参照。20分間攪拌後、17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-イルアセテート（11、2.0001g、6.4428mmol）／冷蔵ジクロロメタン（10ml）溶液を温度が-6℃に達しないように2分間かけて加えた。2時間攪拌し、次いで混合物をカラム（シリカゲル、100g、200-400メッシュ）を通してろ過精製した。生成物をさらにジクロロメタンで溶出した。適当なフラクションを貯蔵、減圧下濃縮後、粗生成物を得、このものを水性エタノールから2回再結晶することで精製したところ、光沢のある帯灰白色結晶（334.0mg、1.030mmol、16％）を得た。m.p. 91-94℃。TLC（シリカゲル、溶出液：25%酢酸エチル／ヘキサン）上、二つの少量の不純物（Rf0.30、Rf0.39）を伴う生成物（Rf0.47）を示した。
実施例９０  17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3,6B-ジオール
アルゴン下ドライアイス/アセトン浴中冷却した、水素化アルミニウムリチウム（53.6mg、1.41mmol）／無水THF（3.0ml）の懸濁液に、17,35-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-6-オン-3-イルアセテート（１２、251.7mg、0.7758mmol）／無水THF（3.0ml）を攪拌しながら8時間かけて滴下した。図１６０参照。2時間後、浴を除去し、さらに4時間攪拌した。反応液をグラウバー塩（1.78g）で1/2時間攪拌しながら抑制した。生成した混合物を珪藻土の短いパッドにかけて、酢酸エチル（10ml）で4回抽出した。熱酢酸エチル（10ml）で5回抽出を続け、全抽出液を減圧下濃縮したところ、無色のフィルムを得た。プレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚み1000IL、溶出液：40%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、白色発泡体（15.3mg、53.8ILmol、7％）を得た。TLC（シリカゲル：溶出液：40%酢酸エチル/ヘキサン）上、主成分（Rf0.29）および少量成分（Rf0.37）を示した。
実施例９１  17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-イルメチルエーテル
17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール（5.37g、20.0mmol）および炭酸カリウム（50.82g、0.3678mol）／90%エタノール（500ml）の攪拌懸濁液に還流下、硫酸ジメチル（5.0ml、53mmol）を加えた。1/2時間還流後、追加の硫酸ジメチル（36ml、0.38mmol、3×12ml）を1時間かけて加えた。図１６０参照。さらに1時間還流し、続いて水（360ml）を加え、混合物を一晩冷蔵庫中に置いた。生成した懸濁液をろ過し、60%メタノール（80ml）+5％（w/w）水酸化ナトリウム（80ml×3）+水（80ml×3）で洗浄した。残渣を水性メタノールから再結晶したところ、白色結晶（3.88g、13.7mmol、69％）を得た。m.p. 59-62℃。TLC（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）上、微量の混入物（Rf0.37および原点）を伴う生成物（Rf0.63）を示した。
実施例９２  17-メチレンエストラ-2,5（10）-ジエン-3-イルメチルエーテル
無水アンモニア（約70ml）を、挿入アダプター、磁気攪拌子、ドライアイスアセトンコンデンサーおよびVガラス共栓を備え、フレーム乾燥した三ツ口フラスコ（250ml）中、KOH塔で蒸留した。図１６０参照。17-メチレンエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-イルメチルエーテル（１４、1.1297g、4.0001mmol）およびt-ブチルアルコール（13.21g、0.1782mmol）／乾燥THF（17ml）を、続いてリチウムワイヤー（0.47g、68mg-原子）を小片に切断して加えた。アルゴン下6時間還流後、無水メタノール（6.6ml）を加え、アンモニアを沸騰して除去しながら懸濁液を一晩攪拌した。水（100ml）を加え、懸濁液をジクロロメタン（50ml）で3回抽出した.有機抽出液を併せて食塩水（100ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過した。残渣をジクロロメタン（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下濃縮した。生成した淡黄色油状物を水性エタノールから結晶化したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：10%酢酸エチル/ヘキサン、Rf0.60）上単一の光沢のある白色結晶（815.0mg、2.865mmol、72％）を得た。m.p. 77-78℃。
実施例９３  17-メチレンエストラ-4-エン-3-オン
濃塩酸（6.0ml）および水（6.0ml）を、17-メチレンエストラ-2,5（10）-ジエン-3-イルメチルエーテル（１５、702.8mg、2.471mmol）／メタノール（6ml）およびアセトン（20ml）溶液に加えた。実施例１６０参照。1時間攪拌後、炭酸水素ナトリウム（7.50g）を注意深く加えた。混合物を一旦泡立たくなるまで減圧下濃縮し、水（50ml）を加えた。混合物をジクロロメタン（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下濃縮した。生成物を活性炭で脱色、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）および無水エタノールから再結晶して精製したところ、白色粉末（302.8mg、1.120mmol、45％）を得た。m.p. 83-89℃。
実施例９４  17-メチレンエストラ-4-エン-3β-オール
トリ-t-ブトキシ水素化アルミニウムリチウム（766.6mg、3.015mmol）を17-メチレンエストラ-4-エン-3-オン（１６、203.7mg、0.7533mmol）／無水エーテル（10ml）に加え、420時間攪拌した。図１６１参照。グラウバー塩（3.80g）を加え、懸濁液をさらに1/2時間攪拌した。混合物を珪藻土でろ過し、残渣をエーテル（10ml×5）で洗浄した。併せたろ液を減圧下濃縮し、次いでプレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚さ1000、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン）で精製を行ったところ、TLC（シリカゲル、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン、Rf0.37）上単一の白色微結晶（60.2mg、0.221mmol、29％）を得た。
実施例９５  17-メチレンエストラ-1,3,5（10）,17-テトラエン-3-オール
無水DMSO（6.1ml）に懸濁したメチルトリフェニルホスホニウムブロミド（1.9967g、5.5892mmol）およびt-ブトキシカリウム（627.2mg、5.589mmol）をアルゴン下、1時間油浴（71〜83℃）中に置き、その後エキリン（300.0mg、1.118mmol）／無水DMSO（6.1ml）をシリンジで加えた。図１６１参照。さらに70分間攪拌後、反応混合物を氷水（40ml）に注ぎ、エーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：15%酢酸エチル/ヘキサン）続いてプレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚さ1000μ、溶出液：20%酢酸エチル/ヘキサン）により精製したところ、不透明な白色フィルム（162.3mg、0.6093mmol、54％）を得た。
実施例９６  17-メチレンエストラ-1,3,5（10）,7-テトラエン-3-イルアセテート
無水DMSO（10ml）に懸濁したメチルトリフェニルホスホニウムブロミド（3.33g、9.32mmol）およびt-ブトキシカリウム（1.05g、9.36mmol）をアルゴン下、1時間油浴（77〜79℃）中攪拌し、続いてエキリン（500.0mg、1.863mmol）／無水DMSO（10ml）をシリンジで加えた。図１６１参照。さらに1時間攪拌後、冷却した反応混合物を氷-1N 塩酸（50ml）に注ぎ、エーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した淡黄色シロップを無水ピリジン（6.3ml、78mmol）に溶かし、無水酢酸（0.88ml、9.3mmol）を加え、反応混合物を16時間攪拌した。次いで、混合物を1N 塩酸（100ml）に注ぎ、エーテル（50ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）+食塩水（100ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。粗アセテートをフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：5%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、黄色樹脂（494.7mg、1.604mmol、86％）を得た。
実施例９７  16α,7α-エポキシエストラ-4-エン-10β-オール-3-オン
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（１、115.7mg、0.4513mmol）／クロロホルム（3ml）の凍結（ドライアイス／アセトン）懸濁液に、エーテル（4.3ml）に懸濁したm-クロロ過安息香酸（MCPBA、77.4％、420.8mg、過酸の1.89当量）を加え、混合物を2時間攪拌した。次いで、反応液を冷蔵庫に18時間貯蔵し、その後チオ硫酸ナトリウム五水和物［5％（w/w）、25g］を加えた。5分間攪拌後、混合物をエーテル（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）+食塩水（25ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。TLCにより、5B,10B-エポキシド中間体が一部脱離していることが示唆された。白色結晶性残渣を5％（w/w）水酸化カリウム（20g）／無水メタノール中1時間還流することにより、脱離反応を完結させた。反応混合物を氷水（50ml）に注ぎ、エーテル（50ml）で抽出した。有機抽出液を水洗（50ml×2）し、硫酸ナトリウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（20ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣をプレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚さ1000μ、溶出液：50%酢酸エチル/ヘキサン）で精製したところ、無色樹脂（19.7mg、72.3μmol、16％）を得た。
実施例９８  18-ノル-17-メチルエストラ-4,13（17）-ジエン-3-オール
18-ノル-17-メチルエストラ-4,13（17）-ジエン-3-オン（３、0.23g、0.90mmol）／無水メタノール（2.3ml）の冷却（氷水浴）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（0.23g、6.1mmol）を加え、2時間攪拌した。図１６２参照。溶媒を減圧下で除去し、水（10ml）を残渣に加えた。次いで、混合物をジクロロメタン（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（10ml）で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をジクロロメタン（5ml×2）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した僅かに黄色固体を、プレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚さ1000、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：5%酢酸エチル/ジクロロメタン、Rf0.32）上単一の黄色固体（53.6mg、0.207mmol、23％）を得た。
実施例９９  アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン
本製造を図１７８に示す。テストステロンのアンドロスタ-4,16-ジエン-3-オンへの変換について、いくつかの方法が知られている（Brooksbankら、Biochem. J.（1950）AZ：36）。別法として、テストステロンのメチル15カルボネートの熱分解（460℃）により、アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オンを収率90％で得る。17B-メトキシカルボニルオキシ-アンドロスタ-4-エン-3-オン（IV）を、クロロギ酸メチル／ピリジンと反応させたテストステロン（III、フルカ）から製造する（a）収率76％（MeOHから再結晶後）。
0004450435.tif 000165
メチルカルボナートIV／トルエンの溶液を（b）Iで記載の通り25℃で熱分解した。粗生成物をアセトンから室温で再結晶したところ、純粋なケトン４を収率90％で得た。
0004450435.tif 000166
実施例１００  アンドロスタ-4,16-ジエン-3α-オール（５）および-3β-オール
これらの製造法を図１７８に示す。アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン（４）を、（c）２の製造で記載の通り（図1）、トリス（1,2-ジメチルプロピル）水素化ホウ素リチウム／THFを用いて-55℃で還元した。クロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：CH2Cl2/酢酸エチル9：1）で精製し、純粋なアキシアルアルコール５（収率48％）および純粋なエクアトリアルアルコール６（収率48％）を得た。分析用の試料としては、さらに再結晶（５の場合-30℃でPEから、６の場合室温でシクロヘキサンから）により精製した。
0004450435.tif 000167
実施例１０１  アンドロスタ-5,16-ジエン-3α-オール
本製造を図１７９に示す。アルコール８（545mg、2.0mmol）／アセトン（100ml）溶液に、０℃でN2下、ジョーンズ試薬（i、1.5ml、約4mmol）を急激に加えた。5分後、混合物を希ホスフェート緩衝液（pH7.2、1200ml）に注ぎ、エーテルで抽出した。抽出液を飽和NaCl溶液で洗浄、乾燥（Na2SO4）および蒸発したところ、主にアンドロスタ-5,16-ジエン-3-オンを油状物（567mg）として得た。粗生成物をTHF（7ml）に溶解し、トリス（1,2-ジメチルプロピル）水素化ホウ素リチウムを用いて（c）55℃で、２の製造で記載の通り還元した。粗生成物（530mg）をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、100g、溶出液：CH2Cl2／酢酸エチル4：1）で精製したところ、純粋なアルコール７（280mg、51％、最初に溶出）および出発アルコール８（13mg）を得た。７の少量の試料をアセトン／水から室温で再結晶した。
0004450435.tif 000168
実施例１０２  アンドロスタ-5,16-ジエン-3B-オール
本化合物を、公知の方法（Marx, A.F.ら、Ger. Offen. 2,631,915；Chem. Abst. 87：23614p（1977））により、市販品（フルカ）の3B-ヒドロキシ-アンドロスタ-5-エン-17-オン（VII）から収率73％で製造した。
0004450435.tif 000169
本製造方法を図４に示す。
実施例１０３  アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オンの別製造法
以下の製造方法を図１８０に示す：
デヒドロエピアンドロステロンp-トルエンスルホニルヒドラゾンの製造
デヒドロエピアンドロステロン（VII）（14.4g、50.0mmol）およびp-トルエンスルホニルヒドラジド（12.75g、68.5mmol）／乾燥メタノール（300ml）を20時間加熱還流した。混合物を円錐フラスコに移し、冷却した。結晶性生成物を吸引ろ過し、メタノール（50ml）で洗浄した。生成物の更なる収量物を、ろ液を連続して75mlおよび20mlにまで蒸発させ、また随時結晶化させることで得た。総収量：21.6g（95%）。
アンドロスタ-5,16-ジエン-3β-オールの製造
デヒドロエピアンドロステロンp-トルエンスルホニルヒドラゾン（22.8g、50.0mmol）／乾燥テトラヒドロフラン（1.0L）をドライアイス／イソプロパノール浴中冷却した。n-ブチルリチウム（1.6Mヘキサン中、125ml、200mmol）を加える間、混合物を攪拌した。混合物を室温まで昇温し、24時間攪拌した。水（50ml）を氷中冷却しながら加えた。混合物を飽和塩化アンモニウム溶液／氷（500ml）に注ぎ、エーテルで2回抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（500ml）および飽和塩化ナトリウム溶液（500ml）で洗浄し、乾燥（MgSO4）、真空下で蒸発させたところ粗生生物を得た。このものをフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル60、190g、230-400メッシュ、溶出液：酢酸エチル／ヘキサン20：80→50：50）で精製したところ、結晶性物質を得た。生成物をメタノール（45ml）／3％過酸化水素（8ml）から再結晶し、メタノール（30ml）／水（8ml）で洗浄したところ、純粋な生成物（6.75g、50％）を得た。
アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オンの製造
アンドロスタ-5,16-ジエン-3β-オール（10g）／トルエン（475cc）および30シクロヘキサノン（75cc）の溶液を水分を除くために蒸留（留出物（約50cc）を集めた）し、Al（OPri）3（5g）／トルエン（50cc）を加え、溶液を室温で1時間還流した。次いで水を加え、揮発成分を水蒸気蒸留で除き、残渣をクロロホルムで抽出した。乾燥した抽出液を蒸発させ、続いて残渣をクロロホルム−ヘキサンから結晶化し、アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン（25）（7.53g）を得た。別に、母液をカラムクロマトグラフィー（中性アルミナ）で精製し、0.97g（総量8.5g、86％）を得た。
実施例１０４  アンドロスタ-3,5,16-トリエン-3-イルメチルエーテルの製造
アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン（1.00g、3.70mmol）／2,2-ジメトキシプロパン（5.0ml、41mmol）およびDMF（5ml）の一部の溶液に、メタノール（0.2ml）およびp-トルエンスルホン酸一水和物（26.4mg、0.139mmol）を加えた。混合物を5時間還流し、その後冷却、炭酸水素ナトリウム（152.5mg）を加えた。懸濁液を氷水（50ml）および酢酸エチル（50ml）で分配した。有機層を水（50ml×2）+食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣の油状物を熱ヘキサン（50ml）に溶かし、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル60、12mm×30mm、溶出液：熱ヘキサン150ml）で精製した。併せたろ液を減圧下で濃縮し、アセトン／メタノールから再結晶したところ、白色結晶（468.0mg、1.645mmol、44％）を得た。m.p. 83-92℃。
実施例１０５  17-メチレン-アンドロスタ-4-エン-オールの製造
20-ホモアンドロスタ-4,17-ジエン-3-オン（119.0mg、0.4184mmol）／メタノール（5ml）に、水素化ホウ素ナトリウム（6.0mg、0.16mmol）および水（77μL）を加えた。2時間攪拌後、さらに水素化ホウ素ナトリウム（32.0mg、0.846mmol）を加え、混合物を一晩攪拌した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：5％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、減圧下で濃縮後、極性のより高い生成物（59.8mg）および極性のより低い生成物（1.7mg）を得た。
実施例１０６  17-メチレン-6-オキソ-アンドロスタ-4-エン-3-オンの製造
20-ホモアンドロスタ-5,17-ジエン-3-オール（399.4mg、1.394mmol）／アセトン（50ml）に、ジョーンズ試薬（2.67M、2.0ml、5.3mmol）を加えた。1時間攪拌後、反応液をイソプロパノール（1.0ml、13mmol）で抑制し、水（100ml）に注いだ。混合物を酢酸エチル（50ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）+食塩水（50ml）で洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を95％エタノールから再結晶したところ、ほとんど白色粉末（177.8mg、0.5958mmol、43％）を得た。m.p. 113-115℃。
実施例１０７  6β-OH-アンドロスタ-4,16-ジエン-3-オン
アンドロスタ-3,5,16-トリエン-3-イルメチルエーテル（12）（200.5mg、0.7049mmol）／1,2-ジメトキエタン（DME、5ml）および水（1ml）の溶液に、DME（5ml）＋水（1ml）＋5％（w/w）NaOH（0.40g）に懸濁した、m-クロロ過安息香酸（MCPBA、77.4％、173.2mg、0.776mmol）を、攪拌しながら90分間かけて滴下した。18時間攪拌後、さらにDME（10ml）＋水（2ml）＋5％（w/w）NaOH（0.8g）に懸濁したMCPBA（247.0mg、1.11mmol）を、攪拌しながら1 1/2時間かけて滴下した。反応混合物を1/2時間攪拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）に注いだ。水性混合物をエーテル（25ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて、5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム（50g）+食塩水（50ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライトろ過し、減圧下で濃縮した。生成した結晶性残渣をプラパラティブTLC（シリカゲル、溶出液：35％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、続いて水性エタノールから2回再結晶したところ、光沢のある白色板状晶（102.3mg、0.3571mmol、51％）を得た。m.p. 165-166℃。
実施例１０８  18-ノル-17-メチルアンドロスタ-4,13（17）-ジエン-3-オール
図１８９参照。18-ノル-17-メチルアンドロスタ-4,13（17）-ジエン-3-オン（１、378.2mg、1.399mmol）／無水エーテル（7.5ml）溶液に、水素化アルミニウムリチウム（LAH）（59.7mg、1.57mmol）を加えた。生成した懸濁液を30分間攪拌後、グラウバー塩（2.00g）を加え、混合物を30分間攪拌した。次いで、混合物をろ過し、エーテル（25ml）で4回抽出した。併せたろ液を減圧下で濃縮し、次いでプレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：5％酢酸エチル／ジクロロメタン）で精製したところ、極性のより低いフラクション（Rf0.63、34.5mg、0.127mmol、9％）および極性のより高いフラクション（Rf0.45、273.8mg、1.005mmol、72％）を得た。
実施例１０９  18-ノル-17-メチルアンドロスタ-3,5,13（17）-トリエン-3-イルメチルエーテル
図１８９参照。無水メタノール（0.17ml）およびp-トルエンスルホン酸一水和物（21.3mg）を含有した、18-ノル-17-メチルアンドロスタ-4,13（17）-ジエン-3-オン（１、0.86g、3.2mmol）／2,2-ジメトキシプロパン（4.3ml、35mmol）およびジメチルホルムアミド（DMF、4.3ml）溶液を4時間還流し、次いで冷却した。炭酸水素ナトリウム（0.13g）を加え、混合物をヘキサン（65ml）および氷水（40ml）で分配した。有機層を水（40ml×2）+食塩水（40ml）で洗浄し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、200-400メッシュ、17mm高さ×30mm直径）で精製した。併せたろ液を濃縮し、続いてアセトン／95％エタノールから再結晶したところ、明黄色結晶（489.6mg、1.721mmol、54％）を得た。m.p. 95-101℃。TLC（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン）上、原点に微量の混入物を併せた主生成物（Rf0.69）を示した。
実施例１１０  18-ノル-17-メチルアンドロスタ-4,13（17）-ジエン-6β-オール-3-オン
図１８９参照。反応を、D. N. KirkおよびJ. M. Wiles（J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1974 927）の方法と同様にして、行なった。18-ノル-17-メチルアンドロスタ-3,5,13（17）-トリエン-3-イルメチルエーテル（477.0mg、1.677mmol）／1,2-ジメトキエタン（DME、20.26ml）の攪拌溶液に、DME（39ml）、水（8ml）および5％（w/w）水酸化ナトリウム（7.1ml）に懸濁した、77%m-クロロ過安息香酸（MCPBA、999.7mg、4.48m当量）を、88分間かけて加えた。20時間攪拌後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）に注ぎ、エーテル（50ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、5％（w／w）チオ硫酸ナトリウム一水和物（50g）+食塩水（50ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮したところ、黄色シロップを得た。プレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：35％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、帯灰白色結晶性フィルム（132.1mg、0.4612mmol、28％）を得、このものはTLC（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン）上、主成分（Rf0.23）および少量成分（Rf0.18）を含有していることを示した。
実施例１１１  17β-メチルアンドロスタ-4-エン-3,6ジオン
図１８９参照。ジョーンズ試薬（2.67M、0.88ml、2.3mmol）を、17β-メチルアンドロスタ-5-エン-3β-オール（５、135.5mg、0.4697mmol）（J. B. JonesおよびK. D. Gordon、Can. J. Chem. 1972、50、2712-2718）／アセトン（15ml）溶液に加え、混合物を45分間攪拌した。2-プロパノール（0.44ml）を加えて反応を抑制した。さらに10分間攪拌後、反応混合物を水（30ml）に注ぎ、酢酸エチル（15ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（15ml）+食塩水（15ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：25％酢酸エチル／ヘキサン）で精製および水性エタノールから再結晶したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：25％酢酸エチル／ヘキサン、Rf0.39）上単一の光沢のある帯灰白色結晶（37.5mg、0.125mmol、27％）を得た。m.p. 94-95℃。
実施例１１２  17β-メチルアンドロスタ-4-エン-3-オール
図１８９参照。LAH（21.3mg、0.561mmol）を17β-メチルアンドロスタ-4-エン-3-オン（７、143.2mg、0.4999mmol）（J. B. JonesおよびK. D. Gordon、Can. J. Chem. 1972、50、2712-2718）／無水エーテル（2.8ml）の溶液に加えた。懸濁液を30分間攪拌後、グラウバー塩（0.76g）を加え、混合物をさらに1/2時間攪拌した。エーテル（10ml）を加え、懸濁液を珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml×3）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物をプレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：5％酢酸エチル／ジクロロメタン）で精製したところ、極性のより高い成分（Rf0.30、77.9mg、0.270mmol、54％）および極性のより低い成分（Rf0.43、10.3mg、0.0357mmol、7％）を得た。
実施例１１３  17-メチレンアンドロスタ-3,5-ジエン-3-イルメチルエーテル
図１９０参照。17-メチレンアンドロスタ-4-エン-3-オン（９、2.0000g、7.0314mmol）／2,2-ジメトキシプロパン（9.4ml、76mmol）およびDMF（9.4ml）に、無水メタノール（0.37ml）およびp-トルエンスルホン酸（47.0mg）を加えた。4時間還流後、反応混合物を冷却し、次いでヘキサン（140ml）および水（90ml）で分配した。有機層を水（90ml×2）+食塩水（90ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、200-400メッシュ、直径30mm×高さ37mm）でろ過精製した。生成物をヘキサン（200ml）で溶出し続けた。併せたろ液を減圧下濃縮し、残渣をアセトン／メタノールから再結晶したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：25％酢酸エチル／ヘキサン、Rf0.72）上単一の非常に僅かに黄色の板状晶（1.5291g、5.1231mmol、73％）を得た。m.p. 97-99℃。
実施例１１４  17-メチレンアンドロスタ-4-エン-6β-オール-3-オン
図１９０参照。17-メチレンアンドロスタ-3,5-ジエン-3-イルメチルエーテル（１０、500.1mg、1.676mmol）／DME（10ml）の攪拌溶液に、MCPBA（318.6mg、1.846mmol）／DME（10ml）および水（4ml）を15分間かけて加えた。30分間攪拌後、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）に注ぎ、エーテル（50ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（50g）+食塩水（50ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：45％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、続けて水性エタノールから再結晶したところ、僅かに黄色の結晶（187.1mg、0.6228mmol、37％）を得た。m.p. 192-194℃。このものはTLC（シリカゲル、溶出液：35％酢酸エチル／ヘキサン）上、主成分（Rf0.17）および少量成分（Rf0.13）からなることを示した。
実施例１１５  17-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3-オン
図１９０参照。17-メチレンアンドロスタ-4-エン-3-オン（９、1.0001g、3.5160mmol）および2,3-ジクロロ-5,6-ジシアノ-1,4-ベンゾキノン（DDQ、2.43g、10.7mmol）／ジオキサン（60ml、一晩ナトリウム上で還流後新たに蒸留）を、6時間還流し、次いで水流中かき混ぜながら冷却した。メチルt-ブチルエーテル（MTBE、50ml）を加え、懸濁液を珪藻土でろ過した。残渣をMTBE（50ml×2）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、続けて95％エタノールから再結晶したところ帯灰白色結晶（498.9mg、1.767mmol、50％）を得た。m.p.155-157℃。
実施例１１６  17-メチレンアンドロスタ-1,3,5-トリエン-3-イルベンゾエート
図１９０参照。反応をR. W. Draperら（Arzneim.-Forsch. 1982、32、317-322、927）の方法を修正した方法で行ない、以下の通りである：17-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3-オン（１２、389.0mg、1.378mmol）、無水ピリジン（4.7ml、58mmol）および塩化ベンゾイル（1.2ml、10mmol）をアルゴン下、油浴（68-73℃）中18時間攪拌した。氷中冷却後、反応混合物を氷-1N HCl（40ml）中に注ぎ、ジクロロメタン（20ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、冷1N HCl（40ml）+飽和炭酸水素ナトリウム（40ml）+食塩水（40ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：4％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、黄色固体（0.43g、1.1mmol、81％）を得た。
実施例１１７  17-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-6β-オール-3-オン
図１９０参照。反応を、R. W. Draperら（Arzneim.-Forsch.1982、32、317-322、927）の方法を修正した方法で行ない、以下の通りである：MCPBA（211.4mg、1.225mmol）／DME（6.6ml）および水（2.7ml）を、17-メチレンアンドロスタ-1,3,5-トリエン-3-イル-ベンゾエート（１３、0.43g、1.1mmol）／DME（6.6ml）に攪拌しながら20分間かけて加えた。30分間攪拌し、次いで反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（35ml）に注いだ。混合物を酢酸エチル（35ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、5％チオ硫酸ナトリウム五水和物（35g）+食塩水（35ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン、Rf0.50）上単一の、黄色結晶性固体（83.7mg、0.280mmol、25％）を得た。
実施例１１８  アンドロスタ-1,4,16-トリエン-6-オール-3-オン
図１９０参照。アンドロスタ-1,4,16-トリエン-3-オン（１５、500.0mg、1.863mmol）、無水ピリジン（6.4ml、79mmol）および塩化ベンゾイル（1.6ml、14mmol）をアルゴン下、油浴（70-73℃）中に置き、18時間攪拌した。氷中冷却後、混合物を氷-1N HCl（50ml）中に注ぎ、ジクロロメタン（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、冷1N HCl（50ml）+飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）+食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：2％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、黄色結晶のベンゾエート中間体（0.47g、1.3mmol、68％）を得た。このものをMCPBA（240.0mg、1.391mmol）と共にクロロホルム（30ml）に溶かした。1時間攪拌後、さらにMCPBA（239.5mg、1.388mmol）を加え、さらに1時間攪拌した。次いで混合物を5％チオ硫酸ナトリウム五水和物（30g）+飽和炭酸水素ナトリウム（30ml）+食塩水（30ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をクロロホルム（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：40-45％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、黄色樹脂（106.1mg、0.3731mmol、29％）を得、このものはTLC（シリカゲル、溶出液：40％酢酸エチル／ヘキサン）上、主成分（Rf0.34）および少量成分（Rf0.40）を含有することを示した。
実施例１１９  アンドロスタ-4,16-ジエン-6β-オール-3-オン
アンドロスタ-3,5,16-トリエン-3-イルメチルエーテル（１２、200.5mg、0.7049mmol）／1,2-ジメトキエタン（DME、5ml）および水（1ml）の溶液に、DME（5ml）＋水（1ml）＋5％（w/w）NaOH（0.40g）に懸濁した、m-クロロ過安息香酸（MCPBA、77.4％、173.2mg、0.776mmol）を、攪拌しながら1 1/2時間かけて滴下した。18時間攪拌後、さらにDME（10ml）＋水（2ml）＋5％（w/w）NaOH（0.8g）に懸濁したMCPBA（247.0mg、1.11mmol）を、攪拌しながら1/2時間かけて滴下した。反応混合物を1/2時間攪拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）に注いだ。水性混合物をエーテル（25ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて、5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム（50g）+食塩水（50ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライトろ過し、減圧下で濃縮した。生成した結晶性残渣を、プレパラティブTLC（シリカゲル、溶出液：35％酢酸エチル／ヘキサン）で精製、続いて水性エタノールから2回再結晶したところ、光沢のある白色板状晶（102.3mg、0.3571mmol、51％）を得た。m.p. 165-166℃。
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実施例１２０  20-ホモアンドロスタ-4,17-ジエン-3-オン
図１９１参照。20-ホモアンドロスタ-5,17-ジエン-3-オール（1.0001g、3.4911mmol）／トルエン（100ml）およびシクロヘキサノン（20ml、0.19mol）の溶液に、アルミニウムイソプロポキシド（2.00g、9.79mmol）／トルエン（20ml）を加えた。4時間還流後、冷却した反応混合物を水（5ml）および3.6N 硫酸（12.5ml）と共に1分間振り混ぜた。有機層を食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライトろ過し、減圧下で濃縮した。続いて、シクロヘキサノンを除去するために、水蒸気蒸留を行ない、非揮発性の残渣をジクロロメタン（10ml×2）に溶かし、硫酸マグネシウムで乾燥、ろ過し、濃縮した。油状残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：15％酢酸エチル／ヘキサン）および水性アセトンから再結晶により精製したところ、無色微結晶（238.8mg、0.8400mmol、24％）を得た。m.p. l30-134℃［文献B.S. Macdonald.ら、Steroids 1971、18、753-766）、m.p. 129-131℃］。
実施例１２１  20-ホモアンドロスタ-4,17-ジエン-3-オール
図１９１参照。20-ホモアンドロスタ-4,17-ジエン-3-オン（119.0mg、0.4184mmol）／メタノール（5ml）に、水素化ホウ素ナトリウム（6.0mg、0.16mmol）および水（77ml）を加えた。2時間攪拌後、水素化ホウ素ナトリウム（32.0mg、0.846mmol）を加え、混合物を一晩攪拌した。減圧下濃縮後、残渣をプレパラティブTLC（シリカゲル、溶出液：5％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、極性のより高い生成物（59.8mg）および極性のより低い生成物（1.7mg）を得た。
実施例１２２  20-ホモアンドロスタ-4,17-ジエン-3,6-ジオン
図１９１参照。20-ホモアンドロスタ-5,17-ジエン-3-オール（399.4mg、1.394mmol）／アセトン（50ml）の冷却した溶液に、ジョーンズ試薬（2.67M、2.0ml、5.3mmol）を加えた。1時間攪拌後、イソプロパノール（1.0ml、13mmol）で反応を抑制し、水（100ml）に注いだ。混合物を酢酸エチル（50ml）で3回抽出し、有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（50ml）+食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄した。次いで、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、減圧下で濃縮した。残渣を95％エタノールから再結晶したところ、ほとんど白色の粉末（177.8mg、0.5958mmol、43％）を得た。m.p. 113-115℃。
実施例１２３  6β,19-エポキシ-17-ヨードアンドロスタ-4,16-ジエン-3-エチレンケタール
図１９２参照。粗6β,19-エポキシ-5β-クロロ-17-ヨードアンドロスタ-16-エン（17、1.38g、3.09mmol）（G. HabermehlおよびA. Haafによる、Z. Naturforsch. 1970、25b、191-195）、エチレングリコール（0.97g、16mmol）、トルエン（50ml）およびp-トルエンスルホン酸一水和物（20.3mg、0.107mmol）の混合物を水を共沸除去しながら（ディーンスターク）、19時間還流した。冷却後、酢酸エチル（100ml）を加え、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）+食塩水（100ml）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮したところ黄褐色結晶性固体（1.47g）を得た。この残渣を無水メタノール（40ml）に懸濁し、酢酸カリウム塩（2.44g、24.9mmol）を加え、メタノール（約26ml）を留去した。残留物を減圧下で濃縮し、水（50ml）を加え、混合物をジクロロメタン（25ml）で3回抽出した。乾燥（硫酸ナトリウム）した抽出液を珪藻土でろ過し、残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄した。併せたろ液を減圧下で濃縮したところ、黄色固体を得、このものをフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：5-7.5-10％酢酸エチル／ジクロロメタン）およびメタノールから再結晶により精製したところ、淡黄色微結晶（914.6mg、2.013mmol、65％）を得た。
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実施例１２４  アンドロスタ-4,16-ジエン-19-オール-3-オン
図１９２参照。無水アンモニア（約75ml）を、挿入アダプター、磁気攪拌子、ドライアイス／アセトンコンデンサーおよび共栓を備え、フレーム乾燥した三ツ口フラスコ（250ml）中、KOH塔で蒸留した。6β,19-エポキシ-17-ヨードアンドロスタ-4,16-ジエン-3-エチレンケタール（１８、880.4mg、1.938mmol）／乾燥テトラヒドロフラン（THF、45ml）、続いて金属ナトリウム（0.20g、8.7mg-原子）を小片に切断して加えた。アルゴン加圧下30分間攪拌後、無水メタノール（1.0ml）を加え反応を抑制した。アンモニアを一晩沸騰して除去し、水（50ml）を加え、混合物をジクロロメタン（25ml）で3回抽出した.有機抽出液を併せて食塩水（50ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄後、併せたろ液を減圧下濃縮した。ケタール中間体は顕著に非反応性であったが、最終的にクロロホルム（5ml）および4N 塩酸（2.5ml）中18時間還流することにより加水分解した。冷却した加水分解混合物に、酢酸エチル（50ml）を加え、水層を分離した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）+食塩水（25ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。精製した茶色発泡体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）およびプレパラティブTLC（シリカゲルGF、厚み1000μ、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）精製を行なったところ、いくらか結晶性のフィルム（66.7mg、0.233mmol、12％）を得た。
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実施例１２５  アンドロスタ-5-エン-3β,19-ジオール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン
図１９３参照。アンドロスタ-5-エン-3β,19-ジオール-17-オン（１、リサーチプラスから商業上入手可能、512.5mg、51.684mmol）およびp-トルエンスルホニルヒドラジド（p-TsNHNH2、392.1mg、2.105mmol）／2-プロパノール（6.0ml）を24時間還流した。冷反応混合物にエーテル（20ml）を加え、溶媒を減圧下で除去した。残渣をエーテル（10ml）に溶かし、溶液を珪藻土でろ過した。ヘキサン（10ml）をろ液に加え、懸濁液を減圧下で濃縮した。残渣を熱ベンゼン（10ml）に溶かし、冷却した懸濁液をろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：40％酢酸エチル／ヘキサン）により精製したところ、不透明樹脂（0.69g、1.5mmol、87％）を得た。
実施例１２６  アンドロスタ-5,16-ジエン-3β,19-ジオール
図１９３参照。アンドロスタ-5-エン-3β,19-ジオール-17-（p-トルエンスルホニル）ヒドラゾン（２、0.69g、1.5mmol）／無水テトラヒドロフラン（THF、35ml）溶液を、アイス／アセトン浴中アルゴン下冷却し、n-ブチルリチウム（2.5M、ヘキサン中、3.7ml、9.3mmol）を攪拌しながら1分間かけて滴下した。反応混合物を４日間攪拌し、その間反応温度を徐々に室温まで昇温した。次いで、反応液を氷−飽和塩化アンモニウム（50ml）に注ぎ、層を分離した。水層を酢酸エチル（25ml）で2回抽出した。有機層を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）+食塩水（25ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残りの黄色樹脂をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：50-55-60％酢酸エチル／ヘキサン）精製およびメチルt-ブチルエーテル／ベンゼンから結晶化を行なったところ、ふんわりした白色結晶（92.5mg、0.361mmol、24％）を得た。m.p. 169-171℃。
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実施例１２７  19,21-ビスノルコラ-1,3,5（10）-17Z-テトラエン-3-イルメチルエーテル、２（スキーム14）
19,21-ビスノルコラ-1,3,5（10）-17Z-テトラエン-3β-オール（１、1.0000g、3.2208mmol）／アセトン（50ml）溶液に、炭酸カリウム（0.67g、4.8mmol）を加え、生成した懸濁液を排気しながら加熱還流した。硫酸ジメチル（0.76mL、8.0mmol）を加え、22時間反応を続けた。次いで、混合物を5％（w/w）水酸化ナトリウム（50ml）に注ぎ、エーテル（50ml）で3回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。活性炭で中間処理した、残渣の褐色固体を95％エタノールから結晶化を行なったところ、TLC（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン、生成物 Rf0.69、エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル Rf0.69）上単一の、光沢のある白色板状晶（753.1mg、2.321mmol、72％）を得た。m.p. 80.5-82℃。
実施例１２８  19,21-ビスノルコラ-2,5（10）-17Z-トリエン-3-イルメチルエーテル、３（スキーム14）
19,21-ビスノルコラ-1,3,5（10）-17Z-テトラエン-3イルメチルエーテル（２、450.0mg、1.387mmol）／無水THF（13ml）+t-ブタノール（4.60g、62.1mmol）の溶液を無水アンモニア（約50ml）に加え、続けてリチウムワイヤー（0.20g、29mg-原子）を小片に切断して加えた。反応を7時間続け、その後メタノール（1.6ml）を加え、アンモニアを一晩沸騰して除去した。水（40ml）を加え、混合物をエーテル（40ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（40ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した白色板状晶をフラッシュろ過精製（溶出液：ヘキサン−1％酢酸エチル／ヘキサン−2％酢酸エチル／ヘキサン）、続いて95％エタノールから再結晶を行なったところ、光沢のある細かい白色板状晶（329.7mg、1.010mmol、73％）を得た。m.p. 76-77℃。TLC（溶出液：1％酢酸エチル／ヘキサン）では、このものが目的のバーチ反応生成物（Rf0.15）および出発原料（Rf0.09）の混合物であることを示した。
実施例１２９  19,21-ビスノルコラ-4-17Z-ジエン-3-オン、４（スキーム14）
19,21-ビスノルコラ-2,5（10）-17z-トリエン-3イルメチルエーテル（３、130.0mg、0.3981mmol）／アセトン（35ml）の溶液に、メタノール（1.3ml）および濃（12.1M）HCl（1.3ml）を加えた。1時間攪拌後、炭酸水素ナトリウム（1.33g）および水（10ml）を加え、混合物をジクロロメタン（5ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（5ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をジクロロメタン（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した黄色シロップをプレパラティブTLC（アルミナGF、1000μ、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン、生成物 Rf0.1；エストラ-4,16-ジエン-3-オン Rf0.1）上単一の、わずかに黄色の樹脂（293mg、93.7μmol、24％）を得た。
実施例１３０  19,21-ビスノルコラ-1,3,5（10）-トリエン-3-イルメチルエーテル、６（スキーム14）
19,21-ビスノルコラ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール（５、460.0mg、1.472mmol）／アセトン（25ml）溶液に、炭酸カリウム（0.31g、2.2mmol）を加え、懸濁液を排気しながら加熱還流した。硫酸ジメチル（0.34mL、3.6mmol）を加え、20時間反応を続けた。次いで、混合物を5％（w/w）水酸化ナトリウム（25ml）に注ぎ、エーテル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（25ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン）による精製を行なったところ、無色のシロップ（0.43g、1.3mmol、89％）を得た。
実施例１３１  19,21-ビスノルコラ-2,5（10）-ジエン-3-イルメチルエーテル、７（スキーム14）
19,21-ビスノルコラ-1,3,5（10）-トリエン-3イルメチルエーテル（６、0.36g、1.1mmol）／無水THF（10ml）+t-ブタノール（3.68g、49.6mmol）の溶液を無水アンモニア（約35ml）に加え、続けてリチウムワイヤー（0.16g、23mg-原子）を小片に切断して加えた。反応を8時間続け、次いでメタノール（1.6ml）で反応を抑制した。アンモニアを一晩沸騰して除去後、水（30ml）を加え、混合物をエーテル（30ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（30ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：5％酢酸エチル／ヘキサン、Rf0.69；出発原料 Rf0.56、0.49）上単一の、無色シロップ（0.33g、1.0mmol、91％）を得た。
実施例１３２  19,21-ビスノルコラ-4-エン-3-オン、８（スキーム14）
19,21-ビスノルコラ-2,5（10）-ジエン-3-イルメチルエーテル（７、0.27g、0.82mmol）／アセトン（7.2ml）の溶液に、メタノール（2.3ml）および濃（12.1M）HCl（2.3ml）を加えた。1時間攪拌後、炭酸水素ナトリウム2.75g）および水（20ml）を加え、混合物をジクロロメタン（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（10ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をジクロロメタン（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC（アルミナGF、1000μ、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）で精製したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン、生成物 Rf0.39；エストラ-4,16-ジエン-3-オン Rf0.34）上単一の、淡黄色シロップ（125.6mg、0.3994mol、49％）を得た。
実施例１３３  16α,17α-エポキシエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール、２（スキーム15）
1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オール（２、CAS番号［1150-90-9］、636.0mg、2.500mmol）／1,2-ジメトキエタン（DME、15ml）の溶液に、m-クロロ過安息香酸（862.9mg、5.000mmol）／DME（25ml）を3分間かけて加え、6時間攪拌した。混合物を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（140g）に注ぎ、酢酸エチル（100ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）＋飽和塩化ナトリウム（100ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト（登録商標）503でろ過した。残渣を酢酸エチル（50ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）、続いて酢酸エチルから再結晶による精製を行なったところ、TLC（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン、Rf0.32；出発原料 Rf0.50）上単一の光沢のある白色板状晶（349.9mg、1.294mmol、52％）を得た。m.p. 217-219℃（文献［Prelog, V.、Ruzicka, L.およびWieland, P. （1945）による、”Steroids and Sexualhormone”、（111. Mitteilung）、Uberein neues Stereoisomeres des Oestroids.、Helv. Chem. Acta. 28: 250-256］）。
実施例１３４  エストラ-4,16-ジエン-10β-オール-3-オン、４（スキーム15）
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（３、256.4mg、1.000mmol）／1,2-ジメトキエタン（DME、6ml）の溶液に、MCPBA（189.8mg、1.100mmol）／DME（6ml）+水（2.4ml）を加えた。1/2時間攪拌後、反応混合物を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（30g）に注ぎ、酢酸エチル（30ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（30ml）＋飽和食塩水（30ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した結晶性フィルムに5％（w/v）水酸化カリウム（45ml）／メタノールを加え、混合物を排気しながら1時間還流し、その後氷水（100ml）に注ぎ、エーテル（70ml）で3回抽出した。エーテル性抽出液を併せて、食塩水（70ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣の樹脂をプレパラティブTLC（アルミナGF、1000μ、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）、続いて水性エタノールから再結晶による精製を行なったところ、淡黄色微結晶（62.4mg、0.229mmol、23％）を得た。m.p. 156-166℃。TLC（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン、エストロン Rf0.59）では、主要生成物（Rf0.44）並びに少量の混入物（Rf0.62と0.73）を示した。
実施例１３４A  16α,17α-エポキシエストラ-4-エン-10β-オール-3-オン、５（スキーム15）
エストラテトラ-5（10）,16-ジエン-3-オンの溶液を、MCPBAを1当量の若干過剰量の代わりに4当量用いる点を除いては実施例１３４と同様にMCPBAで処理した。還流し、5％（w/v）水酸化カリウム／メタノール中で生成物を生成させ、並びにワークアップおよび実施例１３４と同様に精製後、16α,17α-エポキシエストラ-4-エン-10β-オール-3-オンを得た。
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実施例１３５  エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン、２（スキーム16）
無水アンモニア（約200ml）に、エストラテトラエンオールメチルエーテル（2.20g、8.20mmol）／t-ブチルアルコール（27.07g、0.3652mmol）および無水THF（34ml）を加え、続けてリチウムワイヤー（1.01g、0.146g-原子）を小片に切断して加えた。4時間還流後、メタノール（9.2ml）を加え、アンモニアを一晩沸騰して除去した。水（200ml）を加え、混合物をエーテル（100ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（100ml×2）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した結晶性シロップを（おそらく粗エーテル1）をアセトン（200ml）に溶解し、シュウ酸二水和物（2.88g）／水（38ml）を加えた。7時間攪拌後、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）に注ぎ、エーテル（100ml）で3回抽出した。併せた有機抽出液を食塩水（100ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した白色固体をヘキサンから2回再結晶したところ、白色結晶（1.2931g、5.0435mmol、62％）を得た。m.p. 117-119℃。TLC（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン、エストラテトラエノールメチルエーテル Rf0.61）では、生成物（Rf0.34）並びに微量の混入物（Rf0.14）を示した。
実施例１３５A  16α,17α-エポキシエストラ-4-エン-10β-オール-3-オン、３（スキーム16）
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（２、270.4mg、1.055mmol）／クロロホルム（6.7ml）の溶液をアセトン／ドライアイス浴中冷却し、3-クロロ過安息香酸（724.8mg、4.200mmol）／エーテル（7.4ml）を加えた。2時間攪拌後、混合物を冷蔵庫に置いた。18時間後、混合物を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（60g）に注ぎ、酢酸エチル（25ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（25ml）＋飽和食塩水（25ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、珪藻土でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した白色固体に5％（w/v）水酸化カリウム（50ml）／メタノールを加え、混合物を排気しながら1時間還流した。冷却後、混合物を氷水（100ml）に注ぎ、エーテル（70ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、食塩水（70ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、珪藻土でろ過した。残渣をエーテル（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した黄色樹脂をプレパラティブTLCプレートクロマトグラフィー（アルミナGF、1000μ）による精製を2回行なったところ、白色結晶性固体（55.1mg、0.191mmol、18％）を得た。
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実施例  １３６−ヒトVNOおよび嗅上皮のアンドロスタン刺激の電気生理学
非侵襲的方法を使用して、ヒト鋤鼻器（VNO）および嗅上皮（OE）からの局所的電気電圧を記録した。限局した気体刺激を適用して、マルチチャンネル・ドラッグ・デリバリー・システム結合の特別に設計したカテーテル／電極を用いて異なる実施例にて両方の鼻腔構造に適用した。この電極およびデリバリーシステムはモンチ（Monti）およびグロッサー（Grosser）によって記載され（J. Steroid Biochem. and Molec. Biol.（１９９１）３９：５７３）、および共同所有され、継続中である米国特許第０７／７７１，４１４号（参照のため本明細書に包含する）。VNOおよびOEの局所的応答はリガンド刺激の濃度と相関を示す。
該実験は、１０人の臨床上正常な（スクリーニングした）有志者−１８歳〜８５歳までの年齢にわたる２名の男性および８名の女性に関して行った。該実験は全身麻酔または局所麻酔なしで行った。
カテーテル／電極は、限局した刺激を運ぶと同時に応答を記録するように設計した。VNO記録の場合では、被験者の右の鼻腔窩を鼻腔鏡（nasal specula）を使用して調べ、鋤鼻器の開口部は、鋤骨の前端と鼻底の交点に近接して局在していた。カテーテル／電極を静かにVNO−開口部を通して動かし、電極先端を開口部から１〜３mmで鋤鼻器内腔に静置した。鼻腔鏡をついで除去する。OEの場合では、記録手続は、カテーテル／電極の位置を嗅粘膜に達する内側鼻腔管の側面部位にて深く静置する点を除いて同様であった。
局在化した気体刺激は、カテーテル／電極を通して行った。清潔で無臭、加湿化室温での一定気流は、持続的に刺激系のチャンネルを通過した。刺激リガンド物質をプロピレングリコールに希釈し、加湿化空気と混合し、ついでカテーテル／電極を通して１〜２秒間一吹きした。この投与は、鼻腔に対するステロイド−リガンドのおよそのpgを提供すると推定されている。この実験の結果を図１８０A、１８０Bおよび１８０Cに提示する。その応答をミリボルト−秒（millivolt-seconds）（mV×s）で測定する。アンドロスタ−４，１６−ジエン−３−オンは女性において、試験した他の化合物よりも有意に強いVNO応答を引き出す（図１８０A）。さらに、アンドロスタ−４，１６−ジエン−３−オンに対するVNOの応答は性的二型性−男性と比較して女性において２倍である（図１８０B）。対照的に、男性および女性の両方におけるOE応答は、クローブ同様の強い臭気剤に比較して低かった（図１８０C）。
実施例  １３７−多様なステロイドに対する応答におけるVNOの神経上皮受容体電位における変化の測定
５つの異なるリガンドに対する応答における受容体電位における変化を４０名の女性（図１８１A）および４０人の男性（図１８１B）被験者において測定した。各被験者に図中に指示するように７つの物質各々を６０pg投与した。物質を個別に１秒間投与した。VNOの神経上皮の電位における変化は時間中記録され、被験者各４０名の電位変化の総和を平均化した。結果を図に示す。各ステロイドがその活性に関して性的二型であり、かつリガンド物質のいくつかは男性において一層強力であるが、他は女性において一層強力であるということを図１８１Ａおよび１８１Ｂの比較が示す。
実施例  １３８−VNOの１６−アンドロステン刺激に関する自律神経応答の測定。
アンドロスタ−４，１６−ジエン−３−オンを４０名の女性被験者に投与し、多様な自律神経パラメーターをモニターした。プロピレングリコールもまた、コントロールとして投与した。そのリガンドを１秒パルスとして投与した。自律神経機能における変化を最初は２秒内、ついで４５秒にまで持続して記載した。図１８２に示すように、プロピレングリコールコントロールに比較して、アンドロスタンはVNO（182A）、皮膚電気応答（１８２B）、皮膚の温度（１８２C）、脳波によって測定されるような皮質α波活性のパーセンテージ（１８２D）、末梢動脈拍（１８２E）および呼吸数（１８２F）における総受容体電位に有意な変化を誘発した。
実施例  １３９−２つのアンドロスタンステロイドにより誘発される受容体電位における変化比較
各リガンドステロイドおよびプロピレングリコールコントロールのうちの６０ピコグラムを５名の女性被験者に投与した。図１８３に示すように、アンドロスタ−４，１６−ジエン−３β−オールは、アンドロスタ−４，１６−ジエン−３−オンが受容体電位に起こす変化よりも大きな変化を誘発した。
実施例  １４０−VNOのアンドロスタン刺激の心理生理学的効果
VNOのアンドロスタン刺激の心理生理学的効果をフェロモンの投与と投与前後の被験者の質問票評価の調和により測定した。質問票には、標準的なデロガティス性的調査記録（Derogatis Sexual Inventory）評価の一部として使用した一群の形容詞を含む。
被験者は健康な２０歳〜４５歳間の年齢にわたる４０名の女性であった。その女性をランダムに２０名は偽薬に、２０名は約２０pgのアンドロスタ−４，１６−ジエン−３−オンにさらすように割り当てた。被験者には、偽薬または実験物質のいずれかの投与直前および３０分後の感情状態を評価する７０項目の質問票を与えた。質問票の７０形容詞をランダムに与え、ついで各気分、感情または性格特性関連に基づく評価について連続して収集した。その結果は以下の通りである：投与前から投与３０分後までの社会的な思いやりの感情、個人的安寧、覚醒／興奮、および攻撃性の感情における変化は、コントロール投与から生じる変化に比較した１６−アンドロステンに対してさらされたものにおいて有意ではなかった。しかしながら、負の情動（神経質、緊張、恥辱、不安、短気、怒り、激怒−T検定：P<０．０００１、分散分析：P<０．０４）、負の気分および性格特性（敏感、遺憾、非難に値する、気がとがめる、自責の念にかられる、悲しみ、絶望、無益な、悲惨な、不幸な、辛い、臆病な−T検定：P<０．０００４、分散分析：P<０．０６）、および全体的な陰性−T検定：P<０．０００３、分散分析：P<０．０５）は、コントロール投与に比較して、１６−アンドロステン投与後に非常に有意であった。
概して、これらの結果は、鼻腔内投与される場合、アンドロスタ−４，１６−ジエン−３−オンの鎮静剤および／または抗不安、および／または抗鬱効果を示唆する。
実施例１４１−電気生理学的実験
以下の電気生理学的実験を、２０歳〜４５歳の年齢にわたる６０名の両性の（男性３０人および女性３０人）臨床上正常である有志者で行った。麻酔は全く使用せず、女性被験者で妊娠している人は排除した。
刺激および記録システムは、他に記載される「多機能的ミニプローブ」（モンチ−ブロク（Monti-Bloch, L.）およびグロスナー（Grosner, B. l.）（１９９１）”Effect of putative pheromones on the electrical actvity of the human vomeronasal organ and olfactory 35 epithelium”、J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 39: 573-582.）からなる。記録電極は、テフロン▲Ｃ▼（Teflon▲Ｃ▼）で絶縁した小（０．１mm）銀導線に接続した０．３mmの銀球であり、電極表面は最初に塩化銀界面を作成するように処理され、ついでゼラチンで覆われる。電極先端は、約２mmはみ出すような小内径のテフロン▲Ｃ▼カテーテル（直径＝Smm）内に設置する。そのテフロン▲Ｃ▼カテーテルは長さ１０cmであり、化学的感覚刺激のかすかなパルスを伝える連続的気流を運ぶマルチ・チャンネル・デリバリー・システム用に終端が拡張されている。気流は最初、小さなチャンバーを通り、希釈剤または希釈剤中のボメロフェリンまたはオルファクタント（olfactant）のいずれかを含む溶液を通しバブリングする。ソレノイドは、チャンバーからチャンバーを迂回させる経路へと気流の向きを変更するように使用する。これは、かすかな刺激のパルスを気流中に作り出す。第２に、直径２mmの外側のテフロン▲Ｃ▼チューブをカテーテル−電極集合体（assemblage）で取り囲み、その中心端を３ml／sの持続的な吸引を提供する吸引器に接続する。外側吸引チューブを同心円アレンジメントにすることにより、本発明者らが「微小領域（minifield）（約直径＝１mm）」と呼ぶ領域に局在すべき化学的感覚刺激を発することを可能とし、ついで意図した刺激部位の外側領域または呼吸器系のいずれかの物質の拡散を回避する。全体的な刺激および記録集合体は、VNO内の感覚神経上皮上または嗅上皮または呼吸上皮の表面上のいずれにに位置してもよい。
電気−ボメロナソグラム（EVG）：被験者を仰向けにし、静かな室内で記録した；多機能的ミニプローブを前庭に静置した鼻腔開創器を用いて最初に鼻腔内に取り付ける。基準およびアース電極は銀盤（８mm）からなり、両者は、眉間に設置する。
VNOの入り口または鼻腔孔（vomeronasal pit）は、最初に鼻腔開口部および前庭部を拡張することによって同定する。ついで、ハロゲン照明を備えた６×倍率拡大双眼鏡ルーペ（binocular loupe）を用いて、テフロン▲Ｃ▼カテーテルの先端および記録電極集合体を鼻腔内経路の内側おおよそ深さ１mmで固定するVNO開口部へと導入する。記録電極の最適な設置は、試験物質に対する応答における適当な脱分極に関して試験した後にシグナル化される。
記録電極からの電気シグナルは、デジタル化し、コンピューターがモニターし、保存した後、DC増幅気に供給する。シグナルのピーク同士振幅を測定し、ついで脱分極波下領域を積分し、コンピュータースクリーン上およびデジタルオシロスコープ上の両方でシグナルを持続的にモニターした。呼吸運動によって産生された人工産物は、口蓋帆咽頭閉鎖による口呼吸を実施するよう被験者を訓練することによって削除する。
化学的感覚刺激：嗅覚試験物質はシネオールおよび１−カルボンであり；ボメロフェリンは図１８０〜１８４中のA、B、C、D、EおよびFである。２５〜８００フェムトモルの濃度中のボメロフェリンサンプルを、３００ミリ秒〜１秒の持続期間で連続的な気流中に運搬する。通常、３〜５分の間隔が短い連続した各試験パルスを分離する。試験刺激を伝える線のすべての要素は、テフロン▲Ｃ▼、ガラスまたはステンレススチールからなり、各使用の前に注意深く洗浄および滅菌する。
電気−オルファクトグラム（EOG）：嗅覚記録はVNOに使用したものと同じ刺激および記録多機能ミニプローブを使用した。その先端は、ゆっくりと記録電極が嗅粘液に接触するまで導入した。適当な位置を臭気試験物質のパルスに応じた脱分極によってシグナルを出した。
皮質喚起活性をボメロフェリンでのVNO刺激により誘発し、ついで３００msエアパルスで運搬した臭気物質で嗅覚を刺激することによって誘発した。国際的１０１２０系のCz-A1およびTz-A1位置に設置した標準的脳波記録検査法（EEG）電極を用いて記録した；アースを乳様突起にとりつけた。電気皮膚活性（EDA）を中指および親指それぞれの掌の皮膚と接触する標準的な８mm銀電極を用いて、伝導性のゲル界面を介した。皮膚温度（ST）を右耳たぶに取り付けた小（１．０mm）サーミスター（thermistor）プローブにより記録した。末梢動脈拍（PAP）を人差し指の先端につけたプレチスモグラフでモニターした。呼吸数（RF）を下胸部周辺に置いた適当なひずみゲージで測定した。すべての電気シグナルはDC増幅し、デジタル化し（MP-100、Biopac Systems）ついでコンピューターを用いて持続的にモニターした。
統計学的分析：EVGsまたはEOGs、他のパラメーターのピーク同士の変化および頻度の変化を測定し、ついで統計学的に分析した。その結果の有意性を両側ｔ−検定または分散分析（ANOVA）のいずれかを用いて決定した。
ボメロフェリンがEVGに及ぼす効果：各ボメロフェリンが性的二型性受容体電位を生み出すとわかっている（図１８４Aおよび１８４B）。EVGの記録を３０名の男性および３０名の女性（年齢２０〜４５歳）に関して行った。質問される時、被験者は「匂う」ことができないかまたはいずれのボメロフェリンも意識的に検出することができなかった場合、パルス間の間隔はｂ分でVNOに対する１秒パルスとしてアプライされた。この結果は以前に報告された結果と一致する（モンチ−ブロクおよびグロッサー（Grosser, B. l.）（１９９１）”Effect of putative pheromones on the electrical activity of the human vomeronasal organ and olfactory 5 epithelium”、J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 39: 573-582.）。それによって嗅覚試験刺激もボメロフェリン試験刺激も、伝えられた濃度での知覚可能な感覚を引き出すよう伝えたことを示した。
図１８４Aは男性被験者（年齢２０歳〜３８歳）の希釈剤および５つのボメロフェリン（A、B、C、DおよびF）の等モル量（１００フェムトモル）およびFの立体異性体に対する平均的な応答をする。各物質に対する応答のおおよその特性は、年齢に関係無く全被験者において類似であり、ｔ−検定または分散分析のいずれかによっても有意差は明らかにならなかった。例えば、A、CおよびDは有意な効果を産生し（M15＝１１．４mV、SD＝３．６mV；M76＝６．４mV、SD＝２．５mVおよびM84＝１５．１mV、SD＝４．９mV；ｐ<０．０１）、それらは個々の場合すべてにおいて首尾一巻していた。他のボメロフェリンは非常にわずかな程度、VNO受容体を脱分極させたが、平均的な応答の振幅は個々によって一致した。男性被験者において活性であるボメロフェリンは希釈剤より多大な応答を生み出した（ｐ<０．００１）。B、Fおよび同程度の濃度のオルファクタントは男性のVNOにおける応答の有意な減少を誘発した（図１８４Aおよび図１８５）。
同様の実験プロトコールを３０名の女性被験者（年齢２０〜４５歳）に適用した。ボメロフェリンのうちでF（１００フェムトモル）はグループ内で最も有意差を生み出した（図１８４B）。ここでAは、Fとは有意に異なる小効果を誘発した（ｐ<０．０１）。被験者の両集団において、活性ボメロフェリンは多大な標準偏差を有する受容体応答を誘発した（図１８４）。AおよびFの効果の頻度分布がそれぞれ男性および女性において調べられる場合、本発明者らは並数分布を見出した。本観察の意義はこの５ポインドで調べられた。
Fの立体異性体であるEは、Fが女性被験者のVNOを刺激する一方、刺激しない（図１８４B）。これはボメロフェリンのVNO認識の特異性を証明する。この点において、Fは上位のボメロフェリンであるがEはFより一層強力な嗅覚効果を生み出す（図１８４Bおよび図１８５）ことに注目するのは興味深い。
男性（図２０８）および女性（図２０９）のVNOにおいて試験されたEVG増幅に関する結果は，チャートのIVで、ステロイドE2／NC２、E１／NC２、E2／NC３、E１／NC３、メチル化E2／NC２、メチル化E2／NC3およびE8／NC3に関して示す。
ボメロフェリンのEOGへの効果：嗅上皮（OE）からの合計した受容体電位を２０名の被験者で記録した；１０名の男性および１０名の女性である。ボメロフェリンに対するVNOの感受性の対照において、OEはこれらの物質に対して一層感受性が少ない。これは男性および女性の両性にとって真実である（図１８５A）。平均的な受容体電位の振幅は２．３mV〜０．７８mVの範囲であった。この実験において、BはOE（ｐ<０．０２）における有意な効果を保有する唯一のボメロフェリンである。各刺激の提示後、臭気物質の知覚について質問し、１６名は嗅感覚が全く無いことを報告したが、3名の男性および１名の女性被験者Bを不快な臭気として記述した。この発見は、本実験において使用した濃度で、たいていのボメロフェリンは嗅覚受容体の有効な刺激物ではないが、鋤鼻器受容体には明白な効果を保有していることを明らかにしている。
EVGおよびEOGへのオルファクタントの効果：ボメロフェリンと対照的に、オルファクタント１−カルボンおよびシネオールは、VNOにおいて少数の局所的応答のみ生み出す（図１８５B）。これは男性および女性の両方に真実である。期待されるように、局所的にOEに接触のあった（図１８５A）場合、これらのオルファクタントは男性および女性の両性において強い応答を生み出す（ｐ<０．０１）。希釈剤は、シネオールまたは１−カルボン（ｐ<０．０１）より低い程度まで脱分極し、嗅覚受容体およびそれは嗅覚感覚を生み出さなかった。
ボメロフェリンの反射効果：VNOのボメロフェリン刺激に対する中枢神経系
（CNS）反射応答を決定するために実験を行った。ボメロフェリンによって誘発される性的二型局所応答（図１８４Aおよび１８４B）は男性および女性被験者の自律神経応答を反映した。男性被験者において（図１８４C）、AおよびCは皮膚抵抗（皮膚電気活性＝EDA）を低減させた（ｐ<０．０１、n＝３０）。女性被験者において（図１８４B）、FおよびBはAまたはC（ｐ<０．０１、n＝３０）においてよりEDAを多大に低減させた。
ボメロフェリンAおよびCは３０名の男性被験者において（ｐ<０．０１）皮膚温度（ST）（図１８４G）を上昇させた；しかしながらDは有意な温度低下を誘発した（ｐ<０．０１）。３０名の女性被験者（図１８４H）において、BおよびFは、AおよびCに比較して皮膚温度（ST）において有意な上昇を喚起した（ｐ<０．０１）。女性被験者において、ボメロフェリンは男性においてより多大な標準偏差で、EDAおよびSTにおける変化を産生する。
２００フェムトモルのボメロフェリン（図１８４Gおよび１８４H）を含むエアー・パルス（３００ms〜２秒）に適用する間、男性および女性被験者におけるCzおよびTz皮質活性を記録した、男性おいて（図１８４E）、A、CおよびDは、有意にα皮質活性を２７０−３８０msで増大させた。DおよびAは最も強い効果を喚起した（ｐ<０．０１）。EEGの同期化を活性物質の単独のパルスの適用後に１．５〜２．７分間維持続した。女性において（図１８４F）、VNOに適用したBまたはFの単独パルス（２００フェムトモル）が嗅覚受容体の応答とは独立してα皮質を増大させた。本発明者らはヒトVNOおよび嗅上皮の応答における特徴的な特異性を発見し、そのことはそれらがCNSに別個に結合した独立した機能的なシステムであることを示唆する（ブルックオーバー（Brookover, C.）（１９１４）The Nervus terminalis in adult man. J. Comp. Neurol. ２４：１３１−１３５）。また、鼻中隔の呼吸上皮に局所麻酔（２％リドカイン）を適用するとEVGを阻害も消滅もさせないので、三叉神経受容体（trigeminal noiceptor）末端と関連がないという予備的な証拠があり（モンチ−ブロク；およびグロッサー（１９９１）”Effect of putative pheromones on the electrical activity of the human vomeronasal organ and olfactory 5 epithelium”、J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 39: 573-582.）、また、いずれの刺激操作の結果においても被験者は痛み感覚を報告できなかった。
アンドロスタ−５，１６−ジエン−３β，１９−ジオールおよび他の４つのアンドロスタンを用いて本発明者らが行ったさらなる試験は、そのチャート上のそれらの位置によって同定される。その結果は図１９３〜２００までに示す。アンドロスタ−５，１６−ジエン−３β，１９−ジオールはEEG、RFおよびEKG応答に関しては男性に比較して、女性において一層強いが、ST、GSRおよびEVG応答は男性において一層強い。その化合物を投与された女性の中には幸福の感情を報告した者もあり、そのような報告は、図１９４Ｂおよび１９４Ｃにおいて示されるより一層高いＲＦおよびＧＳＲのデータに正常は伴われるという点で通常ではない、。
VNO受容体は、試験したオルファクタントのいずれよりもはっきりと一層ボメロフェリンに対して敏感である；逆は嗅覚受容体に関して真である。OEがいくつかのボメロフェリンに関して受容体部位を有するかもしれないが、VNOの応答特異性は明白に異なる。
性差はボメロフェリンA、CおよびD；BおよびFの２群の特異性および効果において記載された。これは受容体関連性的二型性の可能性を示唆している。その発見は、VNOのボメロフェリンによる刺激によって、成人における自律神経系の要素の活性化を示唆する。
さらにその上、その結果はボメロフェリンでのVNOの刺激がEEGの同期化（図１８４Gおよび１８４H）を生じると示唆する。従って、本明細書の証拠は鋤鼻器系が多様な化学的感覚刺激に応答し、およびそのいくつかが反射自律活性を誘発することができることを示す。
実施例１４２−電気生理学的実験
電気生理学的実験は、臨床的に正常である２０歳〜４５歳の範囲にわたる年齢の両性の有志者において、実施例１４１に記載するようにして行った。麻酔は使用せず、女性被験者は妊娠していれば除外した。
電気−ボメロナソグラム（EVG）：取り込まれたEVGは、A1−P1、A2-P1、A4-P1、A3-P1、A1-P4、A2-P4（チャートI参照）化合物に関しては図１および２に示した。呼吸運動によって生み出された人工産物は口蓋帆咽頭閉鎖により口呼吸を実施するよう被験者を訓練することによって排除した。２５〜８００フェムトモルの濃度のボメロフェリンサンプルは、３００ミリ秒〜１秒の持続期間、連続的気流で運搬される。
実施例１４３−電気生理学的実験は、臨床上正常な成人女性における実施例１３３、１３４および１３４Aの化合物に関して行った。以下のチャートに結果をまとめる。EVGおよびα−CAに関するデータをそれぞれ図２１９および２２０に示す。
ヒト女性VNO、自律神経活性、筋電図および脳波のα波へのエストレンボメロフェリンの効果のまとめ。
0004450435.tif 000176
実施例１３３：１６α，１７α−エポキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール
実施例１３４：エストラ−４，１６−ジエン−１０β−オール−３−オン
実施例１３４A：１６α，１７α−エポキシエストラ−４−エン−１０β−オール−３−オン
ＥＶＧ＝電気ボメロナソグラム
ＲＦ＝呼吸数
ＣＦ＝心拍数
ＥＤＡ＝電気皮膚活性
ＢＴ＝体温
ＥＭＧ＝筋電図
α−ＣＡ＝脳波α波
０        コントロールと有意差がない効果を示す化合物
＋
＋＋      データ間の有意差に相関した、コントロールよりよい効果の恣意的なスケール（ｐ−値）
＋＋＋
＋＋＋＋
１９−ノルプレグナンボメロフェリンの女性におけるＥＥＧおよび自律神経活性への効果のまとめ（n＝６）
0004450435.tif 000177
１９−ノルプレグナンボメロフェリンの男性におけるＥＥＧおよび自律神経活性への効果のまとめ（n＝６）
0004450435.tif 000178
0004450435.tif 000179
0004450435.tif 000180
実施例１４４  17α,20α-エポキシ-19-ノルプレグナ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール、１
19-ノルプレグナ-1,3,5（10）,17Z-テトラエン-3-オール（282.4mg、0.9999mmol）／1,2-ジメトキシエタン（DME、6ml）の溶液に、3-クロロ過安息香酸（92.2％、207.1mg、1.200mmol）／DME（6ml）を加え、5時間攪拌した。混合物を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（50g）に注ぎ、酢酸エチル（20ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（20ml）＋食塩水（20ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣を酢酸エチル（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した白色固体を、１回目はメチルt-ブチルエーテル（MTBE）／ヘキサンから、次いで２回目は水性エタノールから２回再結晶を行なったところ、TLC（シリカゲル、溶出液：25％酢酸エチル／ヘキサン、生成物 Rf0.42、出発原料 Rf0.57、0.42（微量））上単一の、細かい光沢のある帯灰白色板状晶（160.0mg、0.5362mmol、54％）を得た。m.p. 154-159℃。
実施例１４５  3-メトキシスピロ［エストラ-1,3,5（10）-17,2’-オキセタン］、２
3-メトキシ-19-ノルプレグナ-1,3,5（10）-トリエン-17β-オール-21-トシラート（168.1mg、0.3469mmol）およびカリウムt-ブトキシド（168.1mg、1.498mmol）にアルゴン下、無水ジメチルスルホキシド（DMSO、8ml）を加え、加熱（77-99℃）油浴中、3 1/2時間攪拌した。MTBE（20mL）を冷却下加え、混合物を水（5ml×3）+食塩水（5ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。プレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン）による精製を行なったところ、帯灰白色結晶（72.2mg、0.231mmol、67％）を得た。TLC（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン、エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル Rf0.70）では、生成物（Rf0.33）並びに微量の混入物（Rf0.42）を示した。
実施例１４６  16α,17α-エポキシプレグナ-4-エン-3-オン、３
プレグナ-4,6-ジエン-3-オン（31.0mg、0.104mmol）／DME（0.6ml）の溶液に、3-クロロ過安息香酸（92％、21.5mg、1.25mmol）／DME（0.6ml）を加え、5時間攪拌した。混合物を直接プレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：30％酢酸エチル／ヘキサン）による精製を行なったところ、白色結晶性固体（13.1mg、41.7μmol、40％）を得た。TLC（シリカゲル、溶出液：30％酢酸エチル／ヘキサン、出発原料 Rf0.53、0.00（微量））では、微量の混入物（Rf0.38）と併せて生成物（Rf0.33）を示した。
実施例１４７  13,17-エポキシ-10,17-ジメチルゴナ-4-エン-3-オン、４
10,17-ジメチルゴナ-4,13（17）ジエン-3-オン（342.1mg、1.265mmol）／DME（7.6ml）溶液に、3-クロロ過安息香酸（92％、262.0mg、1.518mmol）／DME（7.6ml）を加えた。5時間攪拌後、反応混合物を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（60g）に注ぎ、酢酸エチル（30ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（30ml）＋食塩水（30ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣を酢酸エチル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した黄色樹脂を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：30％酢酸エチル／ヘキサン）、続いてプレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：30％酢酸エチル／ヘキサン）による精製を行なったところ、TLC（シリカゲル、溶出液：30％酢酸エチル／ヘキサン；プレグナ-4,16-ジエン-3-オン Rf0.54）上、3個のスポット（Rf0.23、0.29および0.32）を示す、淡黄色固体（87.2mg、0.304mmol、24％）を得た。
実施例１４８  19,21-ビスノルコナ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル、５
17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル（788.6mg、2.000mmol）、15％（w/w）NaOH（2.0ml）および［1,1’-ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（II）クロライド・ジクロロメタン錯体（1：1）（40.8mg、50.0  淡黄褐色）に、アルゴン下無水THF（8.0ml）およびトリブチルボラン（1.0M、THF中、2.2ml、2.2mmol）を加えた。24時間還流後、ベンゼン（20ml）を冷却した反応液に加えた。混合物を食塩水（10ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をベンゼン（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。残渣の暗色シロップを、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：1％酢酸エチル／ヘキサン）、続いて活性炭による中間処理と併せて95％エタノールから結晶化を行なったところ、TLC（シリカゲル、溶出液：5％酢酸エチル／ヘキサン、Rf0.48；エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル Rf0.45）上単一の白色板状晶（425.4mg、1.311mmol、66％）を得た。m.p. 50-52℃。
実施例１４９  19,21-ビスノルコナ-5（10）,16-ジエン-3-オン、６
無水アンモニア（約30ml）を、挿入アダプター、磁気攪拌子、ドライアイス／アセトンコンデンサーおよびガラス共栓を備え、フレーム乾燥した三ツ口フラスコ中、KOH塔で蒸留した。19,21-ビスノルコナ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル（５、300.0mg、0.9245mmol）／無水THF（8ml）とt-ブチルアルコール（3.09g、41.7mmol）を加え、その後リチウムワイヤー（ナトリウム含量高い（high sodium）、0.13g、19mg-原子）を小片に切断して加えた。反応混合物を6時間攪拌し、次いで、無水メタノール（1.0ml）を加え反応を抑制した。NH3を一晩沸騰して除去後、水（25ml）を加え、反応混合物をMTBE（25ml）で3回抽出した.有機抽出液を併せて食塩水（25ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下濃縮した。生成したシロップをアセトン（25ml）に溶かし、シュウ酸二水和物（0.37g）／水（5ml）を加え、懸濁液を4時間攪拌した。加水分解混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（10ml）に注ぎ、MTBE（10ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（10ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下濃縮した。残渣のシロップをヘキサン（5ml）に溶かし、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をヘキサン（2ml）で洗浄し、併せたろ液を約2mlになるまで煮つめた。生成した溶液をプレパラティブTLCプレート（シリカゲルGF、厚み1000ｐ）に適用し、10％酢酸エチル／ヘキサンで展開した。適当なバンドを抽出および濃縮したところ無色のシロップ（226.4mg、0.7245mmol、78％）を得た。TLC（シリカゲル、溶出液：10％酢酸エチル／ヘキサン）上、微量の混入物（Rf0.14）と併せて生成物（Rf0.34）を示した。
実施例１５０  16α,17α-エポキシ-19,21-ビスノルコラ-4-エン-10β-オール-3-オン、７
19,21-ビスノルコラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（６、270.2mg、0.8647mmol）／ジクロロメタン（1.6ml）の冷却（ドライアイス／アセトン）した溶液に、3-クロロ過安息香酸（97.4％、328.3mg、1.902mmol）／ジクロロメタン（6.3ml）を3分間かけて加えた。残った過酸をジクロロメタン（1.8ml）で容器中にすすぎ、5時間攪拌した。冷却浴を取り外し、さらに1時間攪拌した。次いで、反応液をセライト503でろ過し、残渣をジクロロメタン（1ml）で洗浄した。併せたろ液を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（5g）+飽和炭酸水素ナトリウム（5ml）+食塩水（5ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をジクロロメタン（1ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した淡黄色固体を加温しながらメタノール（22ml）に溶かし、トリエチルアミン（3.6ml）を加え、2時間攪拌した。次いで、混合物を減圧下で濃縮したところ、琥珀樹脂を得た。このものをプレパラティブTLC（シリカゲルGF、1000μ、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）による精製を行なったところ、白色結晶性固体（133.0mg、0.3861mmol、45％）を得た。TLC（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン；16α,17α-エポキシエストラ-エン-10β-オール-3-オン Rf0.26）上、微量の混入物（Rf0.30）と併せて生成物（Rf0.38）を示した。
実施例１５１  エストラ-5（10）-ジエン-3-オン、８
無水アンモニア（約2.4L）を、２個のアセトン／ドライアイスコンデンサー、磁気攪拌子およびガラス共栓を備え、フレーム乾燥した四ツ口丸底フラスコ中、KOH塔で蒸留した。エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル（27.45g、0.1023mmol）／無水THF（260ml）+t-ブチルアルコール（133.24g、1.798mmol）を加え、続けてリチウムワイヤー（総量12.49g、1.79g-原子）を4個の小片（3.12g）に切断し、１個の小片毎に1/2時間かけて加えた。その間、沸騰し過ぎないようにメカニカル攪拌を中断した。さらに3時間攪拌後メタノール（100ml）を加え、一晩攪拌しその間アンモニアを沸騰して除去した。水（600ml）を加え、混合物をMTBE（300ml）で3回抽出した.有機抽出液を併せて食塩水（300ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（50ml）で洗浄し、併せた有機抽出液を減圧下濃縮した。生成した淡黄色油状物をアセトン（500ml）に溶かし、シュウ酸二水和物（7.19g）／水（95ml）を加えた。8時間攪拌後、加水分解混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（250ml）に注ぎ、MTBE（250ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（250ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（50ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下濃縮した。ヘキサンから2回再結晶（中間体を、残渣の水を除去するのに必要なだけ硫酸マグネシウムで乾燥）したところ、白色結晶の収量物（crop）を2回で得た。総収量は12.18gであった。１番目の収量物はm.p.117.5-119.5℃、2番目の収量物はm.p.115-119℃であった。
実施例１５２  5β,10β,16α,17α-ビスエポキシエストラン-3-オン、９
０℃まで冷却したエストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（８、12.02g、46.88mmol）／ジクロロメタン（70ml）の溶液に、ジクロロメタン（340ml）に懸濁した3-クロロ過安息香酸（97.4％、17.80g、0.1031mol）を58分間かけて加え、反応温度を0℃±2℃になるようにした。さらにジクロロメタン（100ml）を加え、付着した過酸をすすいで容器中にいれ、混合物を5時間攪拌した。生成した懸濁液をセライト503でろ過し、残渣をジクロロメタン（50ml）で洗浄した。併せたろ液を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（250g）+飽和炭酸水素ナトリウム（250ml）+食塩水（250ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をジクロロメタン（50ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した淡黄色固体を活性炭での中間処理と併せて、95％エタノールから再結晶したところ、光る（shiny）白色板状晶（11.38g、39.46mmol、84％）を得た。m.p.168-173℃。
実施例１５３  16α,17α-エポキシエストラ-4-エン-10β-オール-3-オン、１０
5β,10β,16α,17α-ビスエポキシエストラン-3-オン（９、11.30g、39.18mmol）を加温しながらメタノール（1ml）に溶解し、トリエチルアミン（166mL、1.19mmol）を加えた。6時間攪拌後溶液を減圧下で濃縮し、生成した黄色に色づいた固体を熱95％エタノール（250ml）に溶かした。活性炭（Dargo G-60、0.58g）を加え、混合物を沸騰するまで加熱した。熱懸濁液をセライト503でろ過し、残渣を熱エタノール（50ml）で洗浄した。併せたろ液を約150mlまで煮つめ、次いで水流下渦巻きながら冷却した。溶液に”副生成物”の結晶種を入れて、次いで一晩冷蔵し、続いて結晶化を始めた。該”副生成物”をろ別し、冷エタノール（10ml）で洗浄した（乾燥後、残渣は重量：3.7262g、m.p.262-269℃であった）。併せたろ液を約50mlまで煮つめ、次いで水流下渦巻きながら冷却した。溶液に標準物の種を入れて、次いで一晩冷蔵し続いて結晶化を始めた。懸濁液をろ過し、残渣を真空下P2O5で乾燥したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン、生成物 Rf0.47；標品 Rf0.47）上単一の、平たい白色結晶（4.6827g、16.283mmol、41％）を得た。m.p.193-195℃。
実施例１５４  16α,17α-エポキシエストラ-1,3,5（10）-トリエン-3-オール、11
1,3,5（10）,16-エストラテトラエン-3-オール（CAS番号11150-90-91、636.0mg、2.500mmol）／DME（15ml）の溶液に、m-クロロ過安息香酸（862.9mg、5.000mol）／DME（25ml）を3分間かけて加え、6時間攪拌した。混合物を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（140g）に注ぎ、酢酸エチル（100ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）+飽和塩化ナトリウム（100ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣を酢酸エチル（50ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン）、続いて酢酸エチルから再結晶したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：20％酢酸エチル／ヘキサン、Rf0.32；出発原料 Rf0.50）上単一の光沢のある白色板状晶（349.9mg、1.294mmol、52％）を得た。m.p.217-219℃（文献［Prelog, V.、Ruzicka, L.およびWieland, P. （1945）： Steroide und Sexualhormone. （III. Mitteilung）. Uber ein neues Stereoisomeres des Oestriols. Helv. Chim. Acta 28, 250-256. 1 m.p.215℃］）。
実施例１５５
電気物理学的研究は、実施例１４４、１４６、１４７、１５０、１５３および１５４の化合物、併せて他の２個のジント-D-エポキシステロイドについて、臨床上正常な成人男性および女性において行なった。結果を図２２１Aおよび２２１Bにまとめた。
17,20-エポキシプレグナ-4-エン-3-オンの製造については、J. HaderおよびE. Blankeにより英国特許番号1,049,988（1966）に記載されている。
16β,20β-エポキシプレグナ-4-エン-3β-オールの製造については、M. MatsuiおよびD. FukushimaによりJ. Org. Chem. 35（3）, 561（1970）に記載されている。
18,20-エポキシプレグナ-4-エン-3-オンの製造については、G. Cainelli, B. Kamber, J. Keller, M. Lj. Michailovic, D. ArigoniおよびO. JegerによりHelv. Chim. Acta, 62, 518（1961）に記載されている。
16α,17α-エポキシアンドロスタ-4-エン-3-オン（アンドロステイノキシド）は、文献：F. Sondheimer, O. Mancera, M. UrquizaおよびG. RosenkanzによるJ. Chem. Soc. 77, 4145（1955）の方法に従い製造した。
17β,21-エポキシ-3-メトキシ-19-ノル-17α-プレグナ-1,3,5（10）-トリエンは、文献：B. SinghおよびR. G. ChristiansenによるJ. Pharm. Sci. 60, 491（1971）の方法に従い製造した。
0004450435.tif 000181
0004450435.tif 000182
実施例１５６  エストロンヒドラゾン、１
エストロン（20.00g、73.97mmol）／無水エタノール（150ml）、トリエチルアミン（34ml、0.24mmol）およびヒドラジン（64ml、2.0mmol）の懸濁液を、排気しながら1/2時間還流した。反応混合物を攪拌およびかき混ぜながら水（580ml）に加え、次いで一晩冷蔵した。粗ヒドラゾンをろ過し、水洗（100ml）および真空下P2O5で乾燥したところ、帯灰白色固体（22.57g、>100％）を得た。
実施例１５７  17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オール、２
粗エストロンヒドラゾン（１、22.45g）、無水テトラヒドロフラン（THF、200ml）およびトリエチルアミン（50ml、0.36mmol）の冷却（氷水浴）混合物に、アルゴン下、ヨウ素（44.31g、0.1746mol）／無水THF（150ml）を気体の発生がなくなるまで（残留溶液：8ml）33分間かけて加えた。さらに20分間攪拌後、反応混合物を1N HCl（300ml）に注ぎ、エーテル（100ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（100g）+飽和炭酸水素ナトリウム（100ml）+食塩水（100ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥、粗粒ガラスフリットでろ過した。残渣をエーテル（50ml×2）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した赤色発泡体を両回ともに活性炭での中間処理を伴った水性メタノールからの結晶化を2回行なったところ、細かい帯灰白色板状晶（18.70g、49.18mmol、エストロンからの総収率66％）を得た。m.p.134-135℃。
実施例１５８  17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オールからの17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル、３
17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-オール（２、17.11g、44.99mmol）および炭酸カリウム（9.33g、67.5mmol）／アセトン（600ml）の懸濁液を排気しながら加熱還流し、硫酸ジメチル（11ml、0.12mmol）を加えた。24時間攪拌後、冷却した反応混合物を5％（w/w）水酸化ナトリウム（500g）に注ぎ、メチルt-ブチルエーテル（MTBE、250ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（250ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（50ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した褐色固体を結晶化させたところ、桃色から紫色の微結晶（14.85g、37.66mmol、84％）を得た。m.p.14-147℃。
実施例１５９  エストラ-1,3,5（10）-トリエン-17-ヒドラゾン-3-イルメチルエーテル、４
エストロン-3-メチルエーテル（1.0000g、3.5162mmol）／無水EtOH（7ml）、トリエチルアミン（1.6ml、11mmol）およびヒドラジン（3.1ml、99mmol）の懸濁液を、排気しながら90分間還流し、その間反応液は均一になった。水（28ml）をかき混ぜながら加え、混合物を一晩冷蔵した。ろ過し、その残渣を真空下P2O5で乾燥したところ、光る白色板状晶（1.0437g、3.4973mmol、99％）を得た。m.p.166-169℃。
実施例１６０  エストラ-1,3,5（10）-トリエン-17-ヒドラゾン-3-イルメチルエーテルからの17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル、３
エストラ-1,3,5（10）-トリエン-17-ヒドラゾン-3-イルメチルエーテル（４、1.0000g、3.3509mmol）／無水THF（18ml）の混合物に、アルゴン下ヨウ素（2.01g、7.92mmol）／無水THF（10ml）を黄色が持続するまで（残留溶液：3ml）30分間かけて加えた。さらに15分間攪拌後、反応混合物を1N HCl（35ml）に注ぎ、エーテル（15ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて、5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（15g）+飽和炭酸水素ナトリウム（15ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥、粗粒ガラスフリットでろ過した。残渣をエーテル（10ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した黄色−橙色固体を活性炭での中間処理を伴った無水EtOHから結晶化を行なったところ、淡黄色結晶性固体（764.5mg、1.939mmol、58％）を得た。m.p.145-146℃。
実施例１６１  エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテルからのエストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン、５
無水アンモニア（約2.4L）を、２個のアセトン／ドライアイスコンデンサー、磁気攪拌子およびガラス共栓を備え、フレーム乾燥した四ツ口丸底フラスコ中、KOH塔で蒸留した。エストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル（27.45g、0.1023mmol）／無水THF（260ml）+t-ブチルアルコール（133.24g、1.798mmol）を加え、続けてリチウムワイヤー（総量12.49g、1.799g-原子）を4個の小片（3.12g）に切断し、１個の小片毎に1/2時間かけて加えた。その間、発泡し過ぎないようにメカニカル攪拌を中断した。さらに3時間攪拌後メタノール（100ml）を加え、一晩攪拌しその間アンモニアを沸騰して除去した。水（600ml）を加え、混合物をMTBE（300ml）で3回抽出した.有機抽出液を併せて食塩水（300ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（50ml）で洗浄し、併せた有機抽出液を減圧下濃縮した。生成した淡黄色油状物をアセトン（500ml）に溶かし、シュウ酸二水和物（7.19g）／水（95ml）を加えた。8時間攪拌後、加水分解混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（250ml）に注ぎ、MTBE（250ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（250ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（50ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下濃縮した。ヘキサンから2回再結晶（途中残渣の水を除去するのに必要なだけ硫酸マグネシウムで乾燥）したところ、白色結晶の収量物（crop）を2回得た。総収量は12.18g（47.51mmol、46％）であった。１番目の収量物はm.p.117.5-119.5℃、2番目の収量物はm.p.115-119℃であった。
実施例１６２  17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテルからのエストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン、５
無水NH3（約1.2L）を、２個のアセトン／ドライアイスコンデンサーおよび磁気攪拌子を備え、17-ヨードエストラ-1,3,5（10）,16-テトラエン-3-イルメチルエーテル（14.71g、37.31mmol）／無水THF（200ml）をいれた、三ツ口丸底フラスコ（3L）中KOH塔で蒸留した。小片に切断したリチウムワイヤー（ナトリウム含量高い、5.18g、0.7469g-原子）を発泡を制御するために少量ずつ加え、１時間攪拌した。メタノール（40ml）を3時間かけて加え、その間反応液は色が消失した。混合物を一晩攪拌しその間アンモニアを沸騰して除去した。水（400ml）を加え、混合物をMTBE（200ml）で3回抽出した.有機抽出液を併せて食塩水（200ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBEで洗浄し、併せた有機抽出液を減圧下濃縮した。生成した薄（pale）黄色シロップをアセトン（175ml）に溶かし、シュウ酸二水和物（2.51g）／水（33ml）を加え、加水分解混合物を6時間攪拌した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（65ml）に注ぎ、MTBE（65ml）で3回抽出した。有機抽出液を併せて食塩水（65ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をMTBE（25ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下濃縮した。ヘキサンから2回再結晶（途中残渣の水を除去するのに必要なだけ硫酸マグネシウムで乾燥）したところ、淡黄色結晶の収量物（crop）を2回得た。総収量は4.7217g（18.416mmol、Limo）であった。１番目の収量物はm.p.116-118℃、2番目の収量物はm.p.117-118℃であった。
実施例１６３  3-クロロ過安息香酸の精製と滴定
商業上入手可能な3-クロロ過安息香酸（MCPBA、57-86％、50.00g）を、ナトリウムホスフェイト緩衝水溶液（0.5M一塩基性、0.5M二塩基性、１L）に加え、懸濁液を5分間メカニカル攪拌した。混合物を粗いガラスフリットを通してろ過し、残渣を水（200ml）で洗浄した。残渣を真空下P2O5で乾燥したところ、白色固体（33.50g、回収量67％）を得た。精製した過酸試料（0.25g）を以下の通り3回滴定した：ヨウ化ナトリウム（1.50g）を水に溶解し、酢酸（5.0ml）およびクロロホルム（5.0ml）、続いて過酸試料を加えた。標準0.1Nチオ硫酸ナトリウム（アルドリッチから入手可能）に対し、無色の終点まで混合物を急激に攪拌した。以下の式は試料中のMCPBAの百分率を計算するのに用いる。
見かけの分子量＝2（試料の重量、g）／［（チオ硫酸の体積、L）（標準チオ硫酸の濃度）］
MCPBAの百分率＝172.57／見かけの分子量
3回の記録を平均化したところ、MCPBAの百分率92.2％を得た。
実施例164  5β,10β,16α,17α-ビスエポキシエストラン-3-オン、６
０℃まで冷却したエストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（５、12.02g、46.88mmol）／ジクロロメタン（70ml）の溶液に、ジクロロメタン（340ml）に懸濁した3-クロロ過安息香酸（97.4％、17.80g、0.1031mol）を58分間かけて加え、反応温度を0℃±2℃に維持した。さらにジクロロメタン（100ml）を加え、付着した過酸をすすいで容器中にいれ、冷却浴を取り外し、混合物を5時間攪拌した。生成した懸濁液をセライト503でろ過し、残渣をジクロロメタン（50ml）で洗浄した。併せたろ液を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（250g）+飽和炭酸水素ナトリウム（250ml）+食塩水（250ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をジクロロメタン（50ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した淡黄色固体を活性炭での中間処理と併せて、95％エタノールから再結晶したところ、光る白色板状晶（11.38g、39.46mmol、84％）を得た。m.p.168-173℃。
実施例１６５  エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オンから16α,17α-エポキシエストラ-4-エン-10β-オール-3-オン、７
エストラ-5（10）,16-ジエン-3-オン（５、331.8mg、1.294mmol）／1,2-ジメトキシエタン（DME、6ml）の溶液に、3-クロロ過安息香酸（95.6％、491.3mg、2.847mol）／DME（16ml）を加えた。24時間攪拌後、反応混合物を5％（w/w）チオ硫酸ナトリウム五水和物（15g）に注ぎ、酢酸エチル（30ml×3）で抽出した。有機抽出液を併せて、飽和炭酸水素ナトリウム（30ml）+食塩水（30×3ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣を酢酸エチル（15ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した白色固体をアルゴン下無水THF（20ml）に溶かし、アセトン／ドライアイス浴中で冷却した。リチウムジイソプロピルアミド（LDA、1.5M、ヘキサン中、0.86ml、1.3mmol）を2  かけて加え、反応混合物をさらに25分間攪拌した。飽和塩化アンモニウム（0.5ml）およびエーテル（30ml）を加え、混合物を食塩水（10ml×3）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥、セライト503でろ過した。残渣をエーテル（5ml）で洗浄し、併せたろ液を減圧下で濃縮した。生成した湿った黄色固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル150、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）、続いてプレパラティブTLC（シリカゲルOF、1000p、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン）およびジクロロメタン／ヘキサンからの再結晶による精製を行なったところ、TLC（シリカゲル、1000p、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン；生成物 Rf0.32; エストロン Rf0.59）上単一の、白色結晶を得た。m.p.192-194℃。
0004450435.tif 000183
元素分析（C18H24O3）：理論値：C,74.96%、H,8.33%、実測値：C,74.94%±0.06%、H,8.33±0.07%。HR-EIMS（C18H24O3）：理論値：288.172544、実測値：288.1726180）。
実施例１６６  16α,17α-エポキシエストラン-4-エン-10β-オール-3-オン、７
5β,10β,16α,17α-ビスエポキシエストラ-3-オン（６、11.30g、39.18mmol）を加温しながらメタノール（１L）に溶解し、トリエチルアミン（166mL、1.19mmol）を加えた。6時間攪拌後溶液を減圧下で濃縮し、生成した黄色に色づいた固体を熱95％エタノール（250ml）に溶かした。活性炭（Dargo G-60、0.58g）を加え、混合物を沸騰するまで加熱した。熱懸濁液をセライト503でろ過し、残渣を熱エタノール（50ml）で洗浄した。併せたろ液を約150mlまで煮つめ、次いで水流下渦巻きながら冷却した。溶液に副生成物の結晶種を入れて、次いで一晩冷蔵し、続いて結晶化を始めた。該副生成物をろ別し、冷エタノール（10ml）で洗浄した（乾燥後、残渣は重量：3.7262g、m.p.262-269℃であった）。併せたろ液を約50mlまで煮つめ、次いで水流下渦巻きながら冷却した。溶液に標準物の種を入れて、次いで一晩冷蔵し続いて結晶化を始めた。懸濁液をろ過し、残渣を真空下P2O5で乾燥したところ、TLC（シリカゲル、溶出液：50％酢酸エチル／ヘキサン、生成物 Rf0.47；標品 Rf0.47）上単一の、平たい白色結晶（4.6827g、16.283mmol、41％）を得た。m.p.193-195℃。
【図１Ａ】
0004450435.tif 000190
【図１Ｂ】
0004450435.tif 000191
【図１Ｃ】
0004450435.tif 000192
【図２】
0004450435.tif 000193
【図３】
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【図４】
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【図５】
0004450435.tif 000196
【図６】
0004450435.tif 000197
【図７】
0004450435.tif 000198
【図８】
0004450435.tif 000199
【図９】
0004450435.tif 000200
【図１０】
0004450435.tif 000201
【図１１】
0004450435.tif 000202
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２９】
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【図３０】
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【図２０９】
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【図２１１Ａ】
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【図２１５】
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【図２１６】
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【図２２０】
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【図２２１Ａ】
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【図２２１Ｂ】
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