(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分として、下記の式
【化１】
0004522261.tif 000008
で示される化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩を含む、ブドウ膜黒色腫を処置するための薬物。
【請求項２】
ブドウ膜黒色腫が転移ブドウ膜黒色腫である、請求項１に記載の薬物。
【請求項３】
ブドウ膜黒色腫がｃ−ｋｉｔを発現する、請求項１または２に記載の薬物。
【請求項４】
化合物Ｉがモノメタンスルホン酸塩の形である、請求項１から３のいずれかに記載の薬物。
【請求項５】
化合物Ｉのモノメタンスルホン酸塩がベータ結晶形である、請求項４に記載の薬物。
【請求項６】
化合物Ｉを１００mgから１０００mgの化合物Ｉの遊離塩基に対応する一日量で含む、請求項１から５のいずれかに記載の薬物。
【請求項７】
化合物Ｉを１日１回、３ヶ月を超えて使用する、請求項１から６のいずれかに記載の薬物。
【請求項８】
ブドウ膜黒色腫の処置用医薬の製造のための、請求項１から７のいずれかに記載の薬物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、４−(４−メチルピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−(４−ピリジン−３−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)フェニル]−ベンズアミド(以後“化合物Ｉ”と呼ぶ)またはその薬学的に許容される塩の、ブドウ膜黒色腫処置用医薬組成物の製造における使用、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩のブドウ膜黒色腫の処置における使用、ブドウ膜黒色腫に罹患している温血動物、特にヒトを含む哺乳動物の処置法であり、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩の該疾患に対する有効量を該処置を必要とする該動物に投与することを含む方法、に関する。
【０００２】
ブドウ膜黒色腫は成人の最も一般的な原発性眼内腫瘍であり、年間発生率は１００万人あたり６人である。ブドウ膜黒色腫は主に肝臓に転移し、罹患した患者の予後は非常に悪い。ブドウ膜黒色腫の平均生存期間は、肝臓転移が検出された後、わずか２−５ヶ月である。早期発見および管理に向けた進歩が続いている種々の癌の改善した生存率とは対照的に、ブドウ膜黒色腫の生存率は過去数十年ほとんど変換していない(Diener-West et al., 1992, Arch. Ophthalmol. 110:245-50)。ブドウ膜黒色腫は通常摘出または放射線照射により処置し、両方とも患者に悪い予後をもたらす。さらに、放射線療法は、血管新生緑内障のような多くの合併症を誘発する。化学療法および／または免疫療法が転移性黒色腫の処置に使用されているが、結果は一般に非常に期待はずれであり、処置後の生存期間の中央値は５から８ヶ月である(Pyrhonen S. 1998, Eur. J. Cancer 34, Suppl. 3:S27-30)。ブドウ膜黒色腫の有効で、外傷性が少ない処置の必要性がある。
【０００３】
化合物Ｉは、以下の式
【化１】
0004522261.tif 000002
を有する４−(４−メチルピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−(４−ピリジン−３−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)フェニル]−ベンズアミドである。化合物Ｉの遊離塩基、その許容される塩およびその製造は、引用して本明細書に包含させる欧州特許第０５６４４０９号に記載されている。化合物Ｉの遊離塩基は、活性部分に対応する。
【０００４】
化合物Ｉのモノメタンスルホン酸付加塩(以後、“塩Ｉ”と呼ぶ)およびその好ましい結晶形(ベータ結晶形)は、本明細書に引用して包含させる１９９９年１月２８日に公開されたＰＣＴ特許出願ＷＯ９９／０３８５４に記載されている。
【０００５】
化合物Ｉは、血小板由来増殖因子レセプターアルファおよびベータ(ＰＤＧＦＲαおよびβ)、Ｂｃｒ−Ａｂｌおよびｃ−ｋｉｔチロシンリン酸化の阻害剤である。ｃ−ｋｉｔは表皮メラノサイトで発現するが、原発性黒色腫においては、レセプターの損失がより侵襲された病巣で観察されることが示されている(Natali et al., Int. J. Cancer. 1992, 52:197-201)。ｃ−ｋｉｔは、正常メラノサイトで発現されるが、タンパク質およびＲＮＡ発現の両方が、ほとんどの原発性および転移性黒色腫細胞系で失われる(Lassam and Bickford, 1992, Oncogene, 7:51-6)。
【０００６】
ｃ−ｋｉｔが皮膚起源の黒色腫において下方制御されているため、ブドウ膜黒色腫の１３４例中、８４例がｃ−ｋｉｔを発現し、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩でのブドウ膜黒色腫細胞系の処置がｃ−ｋｉｔ自己リン酸化を遮断し、細胞死に導くことが、意外にも発見された。
【０００７】
驚くべきことに、化合物Ｉは、ブドウ膜黒色腫の処置に特に有用であることが判明した。化合物Ｉは、おそらくｃ−ｋｉｔリン酸化および／またはＰＤＧＦＲの阻害を介して、４種のブドウ膜黒色腫細胞系においてインビトロ細胞死を促進する。
【０００８】
“ブドウ膜黒色腫”なる用語は、ブドウ膜に由来する任意の腫瘍を意味する。ブドウ膜は虹彩(瞳孔の周りの着色されたまたは有色素部分であり、その開放が眼球に入る光の量を調節する)、脈絡膜(網膜および眼の前部に血管により栄養を与える、眼球を裏打ちする薄い、有色素層)、毛様体(眼が近くのまたは遠くの物体に焦点を当てることができるようにレンズの形を変える眼の中の筋肉と、眼内の体液である房水を産生する細胞を含む)から成る。
【０００９】
本発明は、したがって、ｃ−ｋｉｔ阻害剤またはその薬学的に許容される塩のブドウ膜黒色腫に対する薬剤としての使用に関する。最も好ましくは、本発明は、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩の、ブドウ膜黒色腫に対する薬剤としての使用に関する。
【００１０】
本発明は、さらに、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩の、ブドウ膜黒色腫処置用医薬の製造における使用に関する。
【００１１】
本発明はまた化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩の、転移ブドウ膜黒色腫処置用医薬の製造における使用に関する。
【００１２】
本発明の医薬組成物は、それ自体既知の方法で製造でき、治療的有効量の少なくとも一つの薬理学的活性成分を、単独で、または、特に経腸または非経腸投与に適した、１個またはそれ以上の薬学的に許容される担体との組み合わせで含む、ヒトを含む温血動物への経口または直腸のような経腸および非経腸投与に適したものである。本発明の投与形の好ましい投与経路は経口である。
【００１３】
本発明は、ブドウ膜黒色腫を有する温血動物の処置法であり、該処置を必要とする該動物に、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩を、ブドウ膜黒色腫に対して治療的に有効である量で投与することを含む、方法に関する。
【００１４】
本発明は、ブドウ膜黒色腫に罹患しているヒト対象に、４−(４−メチルピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−(４−ピリジン−３−イル)ピリミジン−２−イルアミノ)フェニル]−ベンズアミドの酸付加塩、好ましくは塩Ｉ、すなわち化合物Ｉのモノメタンスルホン酸塩を投与することを含む、方法に関する。
【００１５】
本発明の一つの実施態様において、化合物Ｉのモノメタンスルホン酸塩はベータ結晶形である。
【００１６】
当業者は、ブドウ膜黒色腫における本明細書に記載の優れた利益を確認する適切な試験モデルを十分選択できる。このような化合物の薬理学的活性は、例えば、下記の実施例の手段により、インビトロ試験およびインビ試験により、または適当な臨床試験において証明し得る。適当な臨床試験は、例えば、転移性ブドウ膜黒色腫の患者での非盲検、無作為、投与量増加試験である。処置の効果は、これらの試験で、例えば、プラセボで達成されるコントロールと共に、４週間毎の腫瘍サイズを評価することにより決定できる。
【００１７】
化合物Ｉの有効量は、用いる特定の化合物または医薬組成物、投与の形態、処置するブドウ膜黒色腫のタイプまたはその重症度、例えば転移ブドウ膜黒色腫に依存して変化し得る。投与レジメは、患者の腎機能および肝機能を含むさらなる種々の因子にしたがって選択する。通常の技術の内科医、臨床医または獣医師は、状態を予防し、対抗し、または進行を阻止するのに必要な化合物の量を決定し、処方できる。
【００１８】
年齢、個々の状態、投与の形態および問題の臨床像に依存して、有効量、例えば、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩の一日投与量は、１００から１０００mgの活性部分としての遊離塩基に対応し、とりわけ８００mgを約７０kg体重の温血動物に投与する。好ましくは、温血動物はヒトである。一日量に不十分な反応の患者に関しては、投与量増加が安全に考えられ、患者が処置による利益を受けており、限定する毒性がない限り処置し得る。
【００１９】
本発明はまたブドウ膜黒色腫に罹患しているヒト患者に、化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩を投与する方法にも関し、それは、薬学的に有効な量の化合物Ｉまたはその薬学的に許容される塩を、ヒト対象に１日１回、３ヶ月を超える期間投与することを含む。本発明は、とりわけ１００から１０００mg、例えば４００から８００mg、例えば４００mg、６００mg、８００mg、好ましくは８００mgの化合物Ｉの一日量を成人に投与する、このような方法に関する。
【００２０】
実施例１：４種のブドウ膜黒色腫細胞系の塩Ｉでの処置に対する、４８時間暴露後の用量反応。
塩Ｉの抗−増殖性効果を、塩Ｉの存在下での４種のブドウ膜黒色腫細胞系のインビトロ培養により測定する。
細胞培養：ヒト原発性ブドウ膜黒色腫(ＯＣＭ−１、ＯＣＭ−３、９２−１およびｍｅｌ  ２０２)から得た４種の細胞系を使用する。それらは、Dr Martine Jager (Leiden University Medical Center, Leiden, The Netherlands)から寄贈された。
【００２１】
細胞生存能アッセイ：細胞増殖キットIIを、Roche Diagnostic GmbH (Mannheim, Germany)から購入する。試験は、生存細胞の呼吸鎖による、黄色テトラゾリウム塩ＸＴＴのオレンジ色ホルマザン色素への比色分析変化に基づく(Roehm et al., 1991, J. Immunol. Assay, 142:257-265)。
【００２２】
結果：
Ａ)９−２１、ＯＣＭ−１、ｍｅｌ  ２０２およびＯＣＭ−３細胞での塩Ｉの用量反応
【表１】
0004522261.tif 000003
【００２３】
塩Ｉのブドウ膜黒色腫細胞系、ＯＣＭ−１、ＯＣＭ−３、９２−１およびｍｅｌ  ２０２における抗−増殖効果を試験するために、細胞を異なる濃度の薬剤と共に４８時間インキュベートし、その後、細胞生存能のレベルをアッセイする。上記表は、ＯＣＭ−３および９２−１の用量反応を示す。結果は、塩Ｉで処置していないサンプルにおける細胞の１００％生存と比較した、塩Ｉを含むサンプルにおける生存細胞のパーセントとして示す。低濃度の塩Ｉでさえ、大幅な細胞損失がある。
【００２４】
Ｂ)４種のブドウ膜黒色腫細胞系(ＯＣＭ−１、ＯＣＭ−３、ＵＭ  ９２−１、ｍｅｌ  ２０２)および２種の皮膚黒色腫細胞系(ＢＥおよびＤＦＢ)の生存における塩ＩのＩＣ５０。
【表２】
0004522261.tif 000004
【００２５】
上記表において、全４種のブドウ膜黒色腫細胞系および２種の皮膚黒色腫細胞系の生存に対する塩ＩのＩＣ５０用量を比較する。ブドウ膜黒色腫細胞ではＩＣ５０値は０.０７−１.２５μＭであるが、ＢＥおよびＤＦＢでは＞＞２０μＭである。細胞タイプの間の塩Ｉ反応性に有意差があり、皮膚黒色腫細胞系は塩Ｉに反応しない。
【００２６】
実施例２：ブドウ膜黒色腫におけるｃ−ｋｉｔの発現。
ｃ−ｋｉｔの発現を、患者から回収したブドウ膜黒色腫サンプルで、免疫組織化学およびウエスタンブロット分析により比較する。
【００２７】
Ａ)ブドウ膜黒色腫におけるｃ−ｋｉｔの発現。
ブドウ膜黒色腫におけるｃ−ｋｉｔの発現を、原発性ブドウ膜黒色腫の１３４例のパラフィン包埋外科的標本で免疫組織化学により試験する。
モノクローナル抗体：ヒトｃ−ｋｉｔ(ＣＤ１１７)を指向するマウスモノクローナル抗体をＤＡＫＯ(ＣＡ、ＵＳＡ)から購入した。
【００２８】
免疫組織化学：免疫染色を標準ＡＢＣ技術を使用して行う(Vector, Elite Standard Kit. cat. PK-6100)。ｃ−ｋｉｔ染色の結果を、染色が存在しない場合陰性とし、１０％より少ない黒色腫細胞が免疫陽性である場合低いとし、１０から５０％が染色される場合、中程度とし、５０％を超える黒色腫細胞が染色される場合、高いとして報告する。
【００２９】
結果：抗−ｃ−ｋｉｔモノクローナル抗体を使用して分析して、サンプルを染色にしたがい：陽性細胞なし、＜１０％陽性細胞、１０−５０％陽性細胞および＞５０％陽性細胞にグループ分けする。
【表３】
0004522261.tif 000005
【００３０】
腫瘍細胞の原形質膜／細胞質に限定された明瞭な免疫反応性が症例の６４％で見られる(１３４例中８４例)。興味深いことに、１３４例中４８例(３６％)において、腫瘍細胞の大部分がｃ−ｋｉｔを発現する。
【００３１】
Ｂ)凍結サンプルおよび皮膚黒色腫の皮膚サンプルにおけるｃ−ｋｉｔ発現。
免疫組織化学の結果を確認するために、ｃ−ｋｉｔの発現を原発性ブドウ膜黒色腫の新鮮凍結サンプル８例および皮膚黒色腫の新鮮凍結サンプル６例を、ｃ−ｋｉｔに特異的な抗体を使用したウエスタンブロット法により試験する。
【００３２】
ウエスタンブロット法：細胞膜の調製は、本質的に他の場所(Carlberg et al. 1996)に記載のように行う。遠心後、物質をＳＤＳ−ＰＡＧＥのためにサンプル緩衝液に溶解する。タンパク質を一晩ニトロセルロース膜に移す。一次抗体とのインキュベーションを１時間室温で行い、続いてＰＢＳで３回洗浄し、ビオチニル化二次抗体(Amersham)と１時間インキュベーションする。１５分ストレプトアビジン標識セイヨウワサビペルオキシダーゼとインキュベーション後、検出を促進された化学ルミネセンスにより行う。シグナルをHyperfilm-ECL(Amersham)で測定する。
【００３３】
結果：ブドウ膜黒色腫例は６例陽性シグナルをもたらし、皮膚黒色腫サンプルはすべてもたらさない(データは示していない)。この結果は、塩Ｉがｃ−ｋｉｔチロシンリン酸化の阻害を介して作用し、ブドウ膜黒色腫細胞の細胞死を効率的に促進している可能性を示唆する。
【００３４】
実施例３：４−[(４−メチル−１−ピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−[[４−(３−ピリジニル)−２−ピリミジニル]アミノ]フェニル]ベンズアミドメタンスルホン酸塩、ベータ結晶形のカプセル
活性部分としての１００mgの化合物Ｉ(遊離塩基)に対応する１１９.５mgの塩Ｉを含むカプセルを、以下の組成で製造する：
【表４】
0004522261.tif 000006
カプセルを、成分を混合し、混合物をサイズ１の硬ゼラチンカプセルに充填することにより製造する。
【００３５】
実施例４：４−[(４−メチル−１−ピペラジン−１−イルメチル)−Ｎ−[４−メチル−３−[[４−(３−ピリジニル)−２−ピリミジニル]アミノ]フェニル]ベンズアミドメタンスルホン酸塩、ベータ結晶形のカプセル
活性部分としての１００mgの化合物Ｉ(遊離塩基)に対応する１１９.５mgの塩Ｉを含むカプセルを、以下の組成で製造する：
【表５】
0004522261.tif 000007
カプセルを、成分を混合し、混合物をサイズ１の硬ゼラチンカプセルに充填することにより製造する。
【００３６】
実施例５：臨床試験
これは、ｋｉｔタンパク質チロシンキナーゼの関与を示唆する入手できる証拠があるブドウ膜黒色腫の患者において、塩Ｉを試験する、非盲検、第II相臨床試験である。
患者／疾患集団：ブドウ膜黒色腫の患者は、疾患に関して以下の基準に合う場合、塩Ｉ処置を受ける資格があり得る：
−疾患が標準治療選択肢に難治性であるか、または決定的な有利な慣用の治療が存在しないことが立証された患者
−患者からの組織サンプルが、免疫組織化学(ＩＨＣ)アッセイで試験して、ＣＤ１１７(ｃ−ｋｉｔ)を発現する。
【００３７】
処置：ブドウ膜黒色腫の患者に、化合物Ｉの８００mg経口／日(１日２回４００mg)に対応する投与量で、塩Ｉを投与する。治療して最初の８週間後に疾患の有意な改善がない場合、投与量を１日２回５００mg(経口１０００mg／日)まで増加できる。さらに、投与量の変化は、疾患の進行に、または適切な研究室評価に基づき得る。患者が、塩Ｉの増加した投与量から利益を受け得る限り、投与量増加を行い得る。塩Ｉ治療は、患者が任意の安全性の懸念なしで、塩Ｉでの処置による利益を受けている限り、続け得る。
【００３８】
薬物動態アッセイ：疾患の全体的客観的評価を、来院スケジュールにしたがい行う。４週間評価は、科学的(放射線学および研究室結果)および臨床評価を含む、すべての同定された疾患関連パラメータを含まなければならない。
【００３９】
−ＦＤＧ−ＰＥＴスキャン：薬剤の推定される作用機構に基づいて、腫瘍の代謝プロフィールの変化が、任意の腫瘍反応が(標準放射線学法で測定して)起こる前に検出できる可能性がある。この可能性を試験するために、標準フルオロデオキシグルコース(ＦＤＧ)ＰＥＴスキャンは、基底および処置１ヶ月後に実施されるこのプロトコールの任意の測定である。早期の、すなわち、処置７日目のＦＤＧ−ＰＥＴスキャンも推奨し得る。
【００４０】
−動的ＭＲＩ(磁気共鳴造影)：腫瘍血管透過性および血流の変化を試験するために、造影剤を注入する標準動的ＭＲＩ法を行い得る。
【００４１】
実施例６：試験
試験は、いくつかのブドウ膜黒色腫細胞系およびサンプルにおけるＰＤＧＦＲの発現を示す。ブドウ膜黒色腫細胞におけるｃ−ｋｉｔリン酸化のＩＣ５０値は０.８から２.５μＭの範囲である。ブドウ膜黒色腫細胞の細胞増殖に関するＩＣ５０値は、約０.１５から１.２５μＭである。化合物Ｉのｃ−ｋｉｔリン酸化における効果のＩＣ５０値と比較して、生存ブドウ膜黒色腫細胞に対する少し低いＩＣ５０値が、ＰＤＧＦＲの阻害により説明できるはずである。