(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
2,5-ジヒドロ-7-(4-メトキシフェニル)-5-[(2-メトキシフェニル)メチル]-8-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-3H-ピラゾロ[3,4-d]チエノ[2,3-b]-ピリジン-3-オン、または4,7-ジヒドロ-2-(4-メトキシフェニル)-7-[(2-メトキシフェニル)メチル]-3-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-4-オキソ-チエノ[2,3-b]ピリジン-5-カルボン酸ヒドラジド、またはそれらの医薬的に許容される塩。
【請求項２】
医薬的に許容されるキャリアーおよび請求項１に記載の化合物を含んで成る医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物および医薬的に許容されるキャリアーを混合することにより作成される医薬組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物および医薬的に許容されるキャリアーを混合することを含んで成る医薬組成物の作成法。
【請求項５】
有効成分として請求項２に記載の組成物を含んで成る、GnRHの拮抗作用に応答する障害または疾患の処置が必要な個体における、GnRHの拮抗作用に応答する障害または疾患を処置するための医薬組成物。
【請求項６】
障害または疾患が不妊症、前立腺癌および良性の前立腺肥大（BPH）から成る群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
有効成分として請求項１に記載の化合物を含んで成る、避妊が必要な個体を避妊するための医薬組成物。
【請求項８】
有効成分として請求項１に記載の化合物を含んで成る、不妊症、前立腺癌および良性の前立腺肥大（BPH）から成る群から選択される状態の処置が必要な個体における、不妊症、前立腺癌および良性の前立腺肥大（BPH）から成る群から選択される状態を処置するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
発明の分野
本発明は、新規な7-ヘテロシクリルキノリンおよびチエノ[2,3-b]ピリジン誘導体、それらを含む医薬組成物、およびゴナドトロピン放出ホルモン（GnRH）に関連する障害および状態の処置におけるそれらの使用を対象とする。本発明の化合物は、不妊症、前立腺癌、良性の前立腺肥大（BPH）の処置に有用であり、しかも避妊薬として有用であるGnRHのアンタゴニストである。
発明の背景
ゴナドトロピン放出ホルモン（GnRH）は性腺刺激ホルモン（LHRH）とも呼ばれるが、始めはブタ（Matsuo,H.,et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.1972,43,1334-1339）およびヒツジ（Burgus,R.et.al.,PNAS,USA,1972,69,278-282）の起源から単離された線状のデカペプチドアミド、pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2である。GnRHは生殖系に重要な役割を果たす。このホルモンは視床下部から放出され、そして下垂体に作用して黄体形成ホルモン（LH）および濾胞刺激ホルモン（FSH）の生合成および分泌を刺激する。下垂体から放出されるLHは男性および女性の両方で性腺ステロイド生産の調節の主な原因であるが、FSHは男性における精子形成および女性における濾胞生育を調節する。
【０００２】
ペプチドGnRHアゴニストおよびアンタゴニストを使用したGnRH-に基づく治療は子宮内膜症、子宮筋腫、多嚢胞性卵巣疾患、性的早熟および幾つかの性腺ステロイド依存性新生物（gonadal steroid-dependent neoplasia）、特に前立腺癌、胸部癌および卵巣癌のようなLH/FSH放出が関係する状態の処置に効果的であることが示された。GnRHアゴニストおよびアンタゴニストは受精の処理、ならびに男性および女性の避妊薬としても有用である。
【０００３】
本発明の化合物は主に生殖系に関係する障害および状態の処置に有用であるが、それらは下垂体ゴナドトロピン腺腫、睡眠障害、良性の前立腺肥大および前立腺癌を含む他のGnRHが媒介する障害および状態の処置にも有用である。
【０００４】
ペプチド−様のGnRHアンタゴニストは例えば、直鎖ペプチド（米国特許第5140009および517835号明細書）の誘導体、環式ヘキサペプチド誘導体（特開昭61(1986)-191698号公報）および二環式ペプチド誘導体（J.Med.Chem.1993,36,3265）が知られている。しかし生物化学的利用性の欠如から、これらの化合物は静脈内および皮下投与に限られている。
【０００５】
最近、低分子の非-ペプチドGnRHアンタゴニストが開示された。欧州特許0679642号明細書でKato,et al.は、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体拮抗活性ならびにカルシウム-拮抗およびモノアミン-取り込み阻害活性を有するイソクロマン誘導体を開示している。
【０００６】
Ohkawa et al.は国際公開第96/38438号明細書で、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体アンタゴニスト活性を有する三環式ジアゼピン誘導体を開示する。Ohkawa et al.は国際公開第95/29900号明細書で、GnRH受容体アンタゴニスト作用および／または睡眠障害の改善作用を有する縮合複素環式化合物を開示する。
【０００７】
Furuya et al.は国際公開第97/14682号明細書で、性ホルモン依存的疾患の防止または処置のための予防または治療薬として有用なGnRHアンタゴニストとしてキノロン誘導体を開示する。
【０００８】
Goulet et al.は国際公開第97/44037号および同第97/44041号明細書で、Goulet et al.は国際公開第97/44321号明細書で、そしてGoulet et al.は国際公開同第97/44339号明細書で、男性および女性において種々の性-ホルモン関連状態の処置に有用なGnRHの非-ペプチドアンタゴニストを開示する。Goulet et al.は国際公開第97/21703号および同第97/21707号明細書で、男性および女性において種々の性-ホルモン関連状態の処置に有用なGnRHの非-ペプチドアンタゴニストを開示する。
【０００９】
Furuya et al.は国際公開第95/28405号明細書で、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体拮抗活性を持つ二環式チオフェン誘導体を開示する。Furuya et al.は国際公開第97/41126号明細書で、GnRH拮抗活性を有する4,7-ジヒドロ-4-オキソチエノ[2,3-b]ピリジン誘導体を開示する。Furuya et al.は国際公開第97/14697号明細書で、GnRHアンタゴニストとしてチエノ[2,3-b]ピリジン誘導体を開示する。
【００１０】
発明の要約
本発明は、式（I）または（II）
【００１１】
【化５】
0004427251.tif 000002
【００１２】
式中、
Ｌ1は、CH2、CH(CH3)およびC(CH3)2から成る群から選択され；
Ｒ1およびＲ2は、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルから成る群から独立して選択され；ここでアリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(アルキル)、N(アルキル)2、-C(O)-アルキル、-C(O)-アリールまたは-C(O)-シクロアルキルから独立して選択される１以上の置換基で場合により置換されており；
Ｘは、Ｏ、ＳおよびNRAから成る群から選択され；ここでＲAは水素、アルキル、アリールまたはアラルキルから選択され；
Ｒ4は、-C(O)-RB、-C(O)O-RB、-C(O)NH2、-C(O)-NHRB、-C(O)-N(RB)2および
-C(O)NHNH2から成る群から選択され；
ここでＲBはアルキル、アリール、アラルキルおよびシクロアルキルから成る群から選択され；
あるいはＸはＮであり、そしてＲ4と一緒にピラゾリル、ジヒドロピラゾリル、イソキサゾリニルおよびジヒドロピリミジニルから成る群から選択される環構造を形成し；ここで環構造は場合により１以上のＲCで置換されており；
かつ各ＲCは、オキソ、アルキル、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリール、-O-アリール、アラルキルおよび-O-アラルキルから成る群から独立して選択され；
Ｌ2は、アルキルから成る群から選択され；
Ｒ3は、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；ここでシクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(アルキル)、N(アルキル)2、シアノまたはスルホンアミドから独立して選択される１以上の置換基で場合により置換されており；
Ｒ5は、ハロゲン、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；ここでシクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(アルキル)、N(アルキル)2、シアノまたはスルホンアミドから選択される１以上の置換基で場合により置換されており、
ただしＸがＯである時、Ｒ5はヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；ここでヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(アルキル)、N(アルキル)2、シアノまたはスルホンアミドから選択される１以上の置換基で場合により置換されている、
の化合物、ならびにそれらの医薬的に許容される塩、エステルおよびプロドラッグを対象とする。
【００１３】
本発明の１つの観点は、化合物4,7-ジヒドロ-2-(4-メトキシフェニル)-7-[(2-メトキシフェニル)メチル]-3-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-4-オキソ-チエノ[2,3-b]ピリジン-5-カルボン酸ヒドラジド、ならびにそれらの医薬的に許容される塩、エステルおよびプロドラッグである。
【００１４】
本発明の具体的説明は、医薬的に許容されるキャリアーおよび上記の任意の化合物を含んで成る医薬組成物である。本発明の具体的説明は、上記の化合物および医薬的に許容されるキャリアーを混合することにより作成される医薬組成物である。本発明の具体的説明は、上記の任意の化合物および医薬的に許容されるキャリアーを混合することを含んで成る医薬組成物の作成法である。
【００１５】
本発明の例は、治療に効果的な量の任意の上記の化合物または医薬組成物を個体に投与することを含んで成る、処置が必要な個体におけるGnRHの拮抗作用に応答する障害または疾患の処置法である。
【００１６】
本発明の例は、効果的な量の任意の上記化合物または医薬組成物を個体に投与することを含んで成る、処置が必要な個体における不妊症、前立腺癌、良性の前立腺肥大（BPH）を処置する方法である。
【００１７】
さらに本発明の例は、治療に効果的な量の任意の上記化合物または医薬組成物を個体に投与することを含んで成る、避妊が必要な個体における女性または男性の避妊法である。
【００１８】
さらに本発明の別の例は、必要な個体における（ａ）不妊症、（ｂ）前立腺癌、（ｃ）良性の前立腺肥大（BPH）を処置するための、または（ｄ）避妊のための薬剤の調製において、本明細書に記載する任意の化合物の使用である。
【００１９】
発明の詳細な記述
本発明は、不妊症、前立腺癌、良性の前立腺肥大（BPH）等のようなGnRHの拮抗作用に応答する障害または疾患の処置に有用な式（I）または（II）：
【００２０】
【化６】
0004427251.tif 000003
【００２１】
式中、Ｌ1、Ｒ1、Ｒ2、Ｘ、Ｒ4、Ｌ2、Ｌ3およびＲ5は既に記載した通りである、
の化合物を対象とする。
【００２２】
本発明の１つの態様では、
Ｌ1が、CH2であり；
Ｒ1およびＲ2が、低級アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルから成る群から独立して選択され；ここでアリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルは、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(低級アルキル)またはN(低級アルキル)2から独立して選択される１〜２個の置換基で場合により置換されてもよく；
Ｘが、Ｏであり；
Ｒ4が、-C(O)O-アルキル、-C(O)O-アリールおよび-C(O)NHNH2から成る群から選択され；
あるいはＸがＮであり、そしてＲ4と一緒にピラゾリル、ピラゾリニル、ジヒドロピリジルおよびジヒドロピリミジルから成る群から選択される環構造を形成し、ここで環構造はオキソ、低級アルキル、低級アルコキシ、アリール、-O-アリール、アラルキルまたは-O-アラルキルから独立して選択される１〜２個の置換基で場合により置換されており；
Ｌ2が、低級アルキルから成る群から選択され；
Ｒ3が、アリールから成る群から独立して選択され；ここでアリール基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(低級アルキル)、N(低級アルキル)2、シアノまたはスルホンアミドから独立して選択される１〜２個の置換基で場合により置換されており；
Ｒ5が、ハロゲン、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルから成る群から選択され、ここでシクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルは、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(低級アルキル)、N(低級アルキル)2、シアノまたはスルホンアミドから独立して選択される１〜２個の置換基で場合により置換されており、
ただしＸがＯである時、Ｒ5はヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；ここでヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(低級アルキル)、N(低級アルキル)2、シアノまたはスルホンアミドから選択される１〜２個の置換基で場合により置換されている、
式（I）の化合物、ならびにそれらの医薬的に許容される塩、エステルおよびプロドラッグである。
【００２３】
別の態様では、本発明はＸがＳであり、Ｒ5がヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルから成る群から選択され；ここでヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、NH2、NH(アルキル)、N(アルキル)2、シアノまたはスルホンアミドから選択される１以上の置換基で場合により置換されている、式（I）または（II）の化合物である。
【００２４】
本発明のさらなる態様は、ＸがNRAであるか、あるいはＸがＮであり、そしてＲ4と一緒に、ピラゾリル、ジヒドロピラゾリル、イソキサゾリニルおよびジヒドロピリミジニルから成る群から選択される環構造を形成し；ここで環構造は１以上のＲCで場合により置換され；かつＲCは上記定義の通りである、式（I）または（II）の化合物である。
【００２５】
本発明の特に好適な態様は、表１および２に掲げる式（I）および（II）の化合物である。
【００２６】
【表１】
0004427251.tif 000004
【００２７】
【表２】
0004427251.tif 000005
【００２８】
本明細書で使用する「ハロゲン」は、塩素、臭素、フッ素およびヨウ素を意味する。
【００２９】
本明細書で使用する「アルキル」は、単独または置換基の一部として使用されても、１〜10個の炭素原子を含んで成る直鎖および分枝鎖を含む。例えばアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、t-ブチル、ペンチル等を含む。特に言及しない限り、アルキルとの関連で使用する時、「低級」とは１〜６個の炭素原子の炭素鎖組成を意味する。
【００３０】
特に言及しない限り、本明細書で使用する「アルコキシ」は、前述の直鎖もしくは分枝鎖アルキル基の酸素エーテル基を表す。例えばメトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、sec-ブトキシ、t-ブトキシ、n-ヘキシルオキシ等である。特に言及しない限り、アルコキシと使用する時、「低級」とはアルキルが１〜６個の炭素原子である上記の直鎖もしくは分枝炭素鎖アルキル基の酸素エーテル基を意味する。
【００３１】
特に言及しない限り、本明細書で使用する「アリール」は、フェニル、ナフチル等の炭素環式芳香族基を称する。
【００３２】
特に言及しない限り、本明細書で使用する「アラルキル」は、フェニル、ナフチル等のようなアリール基で置換された低級アルキル基を意味する。例えばベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、ナフチルメチル等である。
【００３３】
特に言及しない限り、本明細書で使用する「シクロアルキル」とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む３〜８員の単環式の飽和炭素環式環構造を意味する。
【００３４】
特に言及しない限り、本明細書で使用する「ヘテロアリール」は、Ｏ、ＮおよびＳから成る群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含み、場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される１〜３個のさらなるヘテロ原子を含む５もしくは６-員の単環式芳香族環構造；あるいはＯ、ＮおよびＳから成る群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含み、場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される１〜４個のさらなるヘテロ原子を含む９もしくは10-員の二環式芳香族環構造を表す。ヘテロアリール基は環の任意のヘテロ原子または炭素原子で結合することができるので安定な構造が生じる。
【００３５】
適当なヘテロアリール基の例には限定するわけではないが、ピロリル、フリル、チエニル、オキサゾリル、イミダゾリル、プラゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラニル、フラザニル、インドリジニル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、プリニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、イソチアゾリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、プテリジニル等を含む。
【００３６】
本明細書で使用する「ヘテロシクロアルキル」は、Ｏ、ＮおよびＳから成る群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含み、場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される１〜３個のさらなるヘテロ原子を含む５〜７員の単環式の飽和、部分的に不飽和または部分的に芳香族の環構造；あるいはＯ、ＮおよびＳから成る群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含み、場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される１〜４個のさらなるヘテロ原子を含む９〜１０員の飽和、部分的に不飽和または部分的に芳香族の二環式構造を表す。ヘテロシクロアルキル基は環の任意のヘテロ原子または炭素原子で結合することができるので、安定な構造を生じる。
【００３７】
適当なヘテロシクロアルキル基の例には、限定するわけではないが、ピロリニル、ピロリジニル、ジオキサラニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、トリチアニル、インドリニル、クロメニル、3,4-メチレンジオキシフェニルおよび2,3-ジヒドロベンゾフリル等を含む。
【００３８】
特定の基が「置換」される時（例えば、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール）、その基は置換基のリストから独立して選択される１以上の置換基、好ましくは１〜５個の置換基、より好ましくは１〜３個の置換基、最も好ましくは１〜２個の置換基を有することができる。
【００３９】
置換基に関して、用語「独立して」とは、１以上のそのような置換基が可能である時、そのような置換基は互いに同じでも異なってもよいことを意味する。
【００４０】
本開示を通じて標準的な命名法の下、示した側鎖の末端部分を最初に記載し、続いて隣接する官能基を結合点に向かって記載する。すなわち例えば「フェニルアルキルアミノカルボニルアルキル」置換基は、式
【００４１】
【化７】
0004427251.tif 000006
【００４２】
の基を称する。
【００４３】
本発明の化学物質の名前は当該技術分野で知られている命名法を使用して作成するか、または市販されている化学的命名法のソフトウェア、例えばACD／インデックスネーム（Index Name）（アドバンスト ケミストリー デベロップメント社（Advanced Chemistry Development,Inc.)、トロント、オンタリオ州）を使用して作成することができる。
【００４４】
薬剤に使用するために、本発明の化合物の塩は非毒性の「医薬的に許容される塩」を指す。しかし他の塩も本発明の化合物またはそれらの医薬的に許容される塩の調製に有用となり得る。化合物の適当な医薬的に許容される塩は、化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸のような医薬的に許容される酸の溶液と混合することにより形成され得る酸付加塩を含む。さらに本発明の化合物が酸性部分を持つ場合、それらの適当な医薬的に許容される塩にはアルカリ金属塩、例えばナトリウムまたはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および適当な有機リガンドと形成される塩、例えば４級アンモニウム塩を含む。このように代表的な医薬的に許容される塩には以下を含む：
アセテート、ベンゼンスルホネート、ベンゾエート、ビカーボネート、ビスルフェート、ビタートレート、ボレート、ブロミド、エデト酸カルシウム、カムシレート、カーボネート、クロライド、クラブラネート、シトレート、ジヒドロクロライド、エデテート、エジシラート、エストラート、エシラート、フマレート、グルセプテート、グルコネート、グルタメート、グリコーリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシネート、ヒドラバミン、ヒドロブロミド、ヒドロクロライド、ヒドロキシナフトエート、ヨージド、イソチオネート、ラクテート、ラクトビオネート、ラウレート、マレート、マレエート、マンデレート、メシラート、メチルブロミド、メチルニトレート、メチルスルフェート、ムケート、ナプシレート、ニトレート、N-メチルグルカミンアンモニウム塩、オレート、パーモエート（エンボネート）、パルミテート、パントテネート、ホスフェート／ジホスフェート、ポリガラクツロネート、サリチレート、ステアレート、スルフェート、サブアセテート、スクシネート、タンネート、タートレート、テオクラート、トシラート、トリエチオジドおよびバレレート。
【００４５】
本発明はその範囲に本発明の化合物のプロドラッグを含む。一般にそのようなプロドラッグは、インビボで必要な化合物に容易に転換可能な化合物の機能的誘導体である。すなわち本発明の処置法において、用語「投与する」とは記載した種々の障害を具体的に開示した化合物を用いて、または具体的には開示していないが患者に投与した後にインビボで具体的な化合物に転換する化合物を用いて処置することを包含する。適当なプロドラッグ誘導体を選択および調製するための通例の手順は、例えば「プロドラッグの設計（Design of Prodrugs)」、H.Bundgaard編集、エルセビア（Elsevier）、1985に記載されている。
【００４６】
本発明の化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、したがってそれらはエナンチオマーとして存在することができる。化合物が２以上のキラル中心を有する場合、さらにそれらはジアステレオマーとして存在することができる。すべてのそのような異性体およびそれらの混合物は、本発明の範囲内に包含されると理解される。さらに化合物の結晶形の中には多形として存在することができるものもあり、そしてそれ自体が本発明に含まれる。さらに化合物の中には水（すなわち水和物）または通常の有機溶媒との溶媒和物を形成することができるものもあり、そしてそのような溶媒和物も本発明の範囲に包含するものとする。
【００４７】
本明細書で使用する用語「個体」は、処置、観察または実験の対象となった動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを称する。
【００４８】
本明細書で使用する「治療に効果的な量」とは、研究者、獣医師、医師または他の臨床技師が考える組織系、動物またはヒトにおいて、生物学的または医学的応答を現す活性化合物または薬剤の量を意味し、そのような応答には処置する疾患または障害の症状の軽減を含む。
【００４９】
用語「組成物」は、特定した成分を特定した量で含んで成る生成物、ならびに特定した量の特定した成分の組み合わせから直接的または間接的に生じる生成物を包含する。
【００５０】
明細書中、特にスキームおよび実施例で使用する略号は、以下の通りである：
αMEM     ＝最少必須培地
DCM       ＝ジクロロメタン
DIPEA     ＝ジイソプロピルエチルアミン
DMF       ＝N,N-ジメチルホルムアミド
DME       ＝ジメトキシエタン
DMSO      ＝ジメチルスルフォキシド
Et3N      ＝トリエチルアミン
EtOAc     ＝酢酸エチル
LHMDS     ＝リチウムヘキサメチルジシラジド
MeOH      ＝メタノール
NBS       ＝1-ブロモ-2,5-ピロリジンジオン
Ph        ＝フェニル
RTまたはrt＝室温
TEA       ＝トリエチルアミン
THF       ＝テトラヒドロフラン
ＸがＯである一般式（I）の化合物は、スキーム１に概説する方法に従い調製することができる。
【００５１】
【化８】
0004427251.tif 000007
【００５２】
より詳細には、Ｑがブロモまたはヨードである式（III）の化合物（既知の化合物または既知の方法により調製される化合物）を、適当に置換された式（IV）の化合物と、炭酸カリウム、TEA、NaOH、NaH、DIPEA等のような塩基の存在下にてTHF、DMF、DCM等のような有機溶媒中でと反応させて、対応する式（V）の化合物を得る。
【００５３】
式（V）の化合物を70％NBS等のような臭化剤と、THF、DMF、DCM等のような有機溶媒中で反応させて、対応する式（VI）の化合物を得る。
【００５４】
式（VI）の化合物を式（VII）の適当に置換されたアミンと、TEA、DIPEA等のような塩基の存在下にてTHF、DMF等のような有機溶媒中で反応させて対応する式（VIII）の化合物を得る。
【００５５】
式（VIII）の化合物を式（IX）の適当に置換されたボロン酸と、パラジウムテトラキス(トリフェニルホスフィン）（Pd(PPh3)4）のような触媒の存在下にてNaCO3、NaOH等のような塩基の存在下で、THF、DMF、ジオキサン等のような有機溶媒中にて場合により水との混合物で反応させて、対応する式（Iａ）の化合物を得る。
【００５６】
ＸがＳである式（I）の化合物は、スキーム２に概説する方法に従い調製することができる。
【００５７】
【化９】
0004427251.tif 000008
【００５８】
具体的には、スキーム１で調製した適当に置換された式(Iａ）の化合物を、P4S10、Lawessonの試薬等のようなスルホン化剤と、約60〜140℃の範囲の高温でピリジン、トルエン、キシレン等のような有機溶媒中で反応させて、対応する式（Iｂ）の化合物を得る。
【００５９】
ＸがＮであり、そしてＲ4と一緒に
【００６０】
【化１０】
0004427251.tif 000009
【００６１】
（式中、ＲDはアルキル、アリールおよびアラルキルからなる群から選択される）を形成する式（I）の化合物は、スキーム３に概説する方法に従い調製することができる。
【００６２】
【化１１】
0004427251.tif 000010
【００６３】
より詳細には、スキーム２で調製された適当に置換された式（Iｂ）の化合物を式（X）の化合物と、約80〜110℃の範囲の高温でDMF、DMSO等のような有機溶媒中で反応させて、対応する式（Iｃ）の化合物を得る。
【００６４】
式（Iｃ）の化合物は場合により、ＲDがアルキル、アリールおよびアラルキルから成る群から選択される式（XI）の化合物と、LHMDS、NaH、カリウムt-ブトキシド等のような強塩基の存在下でさらに反応させて、対応する式（Iｄ）の化合物を得る。
【００６５】
あるいは式（Iｃ）の化合物は、ピラゾリル基に１以上の置換基を導入するために知られている方法に従いさらに反応させることができる。
【００６６】
ＸがNRAである式（I）の化合物は、スキーム４に概説する方法に従い調製することができる。
【００６７】
【化１２】
0004427251.tif 000011
【００６８】
より詳細には、スキーム２で調製した適当に置換された式（Iｂ）の化合物を、適当に置換された式（XII）のアミンと、好ましくは約60〜120℃の範囲の高温でDMF、DMSO等のような有機溶媒中にて反応させて、対応する式（Iｅ）の化合物を得る。
【００６９】
ＸがＮであり、そしてＲ4と一緒にジヒドロピラゾリル、イソキサゾリニルおよびジヒドロピリミジニルから成る群から選択される環構造を形成する式（I）の化合物は、当業者に既知な方法により調製することができる。
【００７０】
例えばＸがＮであり、そしてＲ4と一緒にジヒドロピラゾリル（
【００７１】
【化１３】
0004427251.tif 000012
【００７２】
）を形成する式（I）の化合物は、ＸがＯであり、そしてＲ4が式-CO2RBのエステルである式（Iａ）の適当に置換された化合物（スキーム１のように調製）を、適当な還元剤と反応させてＲ4が式-C(O)Hのアルデヒドである対応する化合物を生成し、続いてＲ4アルデヒドをベンジルカルバゼートと反応させてＲ4がヒドラゾン（-CHNNH-C(O)O-ベンジル）である対応する化合物を生成し、Ｒ4ヒドラゾンを水酸化パラジウムのような触媒の存在下で水素ガスにより還元して、Ｒ4がヒドラジン（-CH2NHNH2）である対応する化合物を生成し、そして次いでＲ4ヒドラジンを高温でP2O5のような脱水試薬を用いて処理して、式（I）の対応するジヒドロピラゾール置換化合物を得る。
【００７３】
ＸがＮであり、そしてＲ4と一緒にイソキサゾリニル（
【００７４】
【化１４】
0004427251.tif 000013
【００７５】
）を形成する式（I）の化合物は、ＸがＯであり、そしてＲ4が式-CO2RBのエステルである式（Iａ）の適当に置換された化合物（スキーム１のように調製）をケン化に供して、Ｒ4エステル基を対応するカルボキシ基（-CO2H）に転換し、次いでＲ4カルボキシ基を適当な還元剤で処理してＲ4が式-CH2OHのアルコールである対応する化合物を生成し、ＸがＯカルボニル基を対応するＸがＳチオカルボニル基に転換し、チオカルボニル基を対応するヒドロキシアミンに転換し（ここでＸはN-OHである）、次いでＸヒドロキシアミンを閉環し、そしてＲ4アルコールを高温でP2O5のような脱水試薬を用いて処理して、式（I）の対応するイソキサゾリニル置換化合物を得る。
【００７６】
ＸがＮであり、そしてＲ4と一緒にジヒドロピリミジニル（
【００７７】
【化１５】
0004427251.tif 000014
【００７８】
）またはオキソ-置換ジヒドロピリミジニル（
【００７９】
【化１６】
0004427251.tif 000015
【００８０】
）を形成する式（I）の化合物は、Ｒ4が式-CO2RBのエステルである式（Iａ）の適当に置換された化合物（スキーム１のように調製）を、高温で有機溶媒中にてウレア、チオウレア、グアニジンまたは適当に置換されたアルキルまたはアリールアミジンと反応させて、
式（I）の対応するオキソ-置換ジヒドロピリミジニル（
【００８１】
【化１７】
0004427251.tif 000016
【００８２】
）、チオ-置換ジヒドロピリミジニル（
【００８３】
【化１８】
0004427251.tif 000017
【００８４】
）、イミノ-置換ジヒドロピリミジニル（
【００８５】
【化１９】
0004427251.tif 000018
【００８６】
）、またはアルキルもしくはアリール置換ジヒドロピリミジニル（
【００８７】
【化２０】
0004427251.tif 000019
【００８８】
）置換化合物を得る。式（I）のオチソ-置換ジヒドロピリミジニル置換化合物は、さらに場合によりスキーム３に記載した方法に従いアルキル化して、対応する式（I）のジヒドロピリミジニル置換化合物を得る。同様に、式（I）のチオ-、イミノ-置換ジヒドロピリミジニル置換化合物は、さらに場合により既知の方法に従い反応させて、それぞれチオ基（＝Ｓ）を置換するか、またはイミノ基（＝NH）を修飾することができる。
【００８９】
Ｒ4が-C(O)O-R6であり、ＸがＳであるか、またはＸがＮであり、そしてＲ4と一緒に
【００９０】
【化２１】
0004427251.tif 000020
【００９１】
を形成する式（II）の化合物は、スキーム５に概説する方法に従い調製することができる。
【００９２】
【化２２】
0004427251.tif 000021
【００９３】
より詳細には、式（X）の化合物（既知であるか、または既知の方法により調製した化合物）を、P4S10、Lawessonの試薬等のようなスルホン化剤と、ピリジン、TEA、Huenig塩基（DIEA）等のような有機塩基の存在下で、約60〜120℃の範囲の高温で、好ましくはおよそ還流温度で反応させて、対応する式（IIａ）の化合物を得る。
【００９４】
式（IIａ）の化合物は場合によりさらにH2N-NH2と、DMF、DMSO等のような有機溶媒中で、約80〜110℃の範囲の高温にて反応させて、対応する式（IIｂ）の化合物を得る。
【００９５】
式（IIｂ）の化合物はさらに場合により既知の方法に従い反応させて、１以上の置換基をピラゾリル基上に導入することができる。
【００９６】
ＸがＮであり、そしてＲ4と一緒にジヒドロピラゾリル、イソキサゾリニルおよびジヒドロピリミジニルから成る群から選択される環を形成する式（II）の化合物は、式（Iａ）の化合物を式（X）の化合物に適当に代えて、上記の方法に従い同様に調製することができる。
【００９７】
ＸがＯ、ＳおよびNRAから成る群から選択される式（II）の化合物は、当業者に既知の方法により対応する式（X）の化合物から調製することができる。
【００９８】
例えば、ＸがＯであり、そしてＲ4が-C(O)OR6以外である式（II）の化合物は、式（X）の適当に置換された化合物上のＲ4エステル基を対応するＲ4カルボキシ基に転換し、次いで既知のキノロン化学を使用してＲ4カルボキシ基を所望するＲ4官能基に転換することにより調製することができる。
【００９９】
ＸがＳであり、そしてＲ4が-C(O)OR6以外である式（II）の化合物は、式（X）の化合物上の-C(O)OR6エステルを上記のように所望するＲ4基に転換し、次いでスキーム５に記載するようにスルホン化剤と反応させることによりＸがＯ（カルボニル基）である化合物を対応するＸがＳ(チオカルボニル基）である化合物に転換することにより同様に調製することができる。
【０１００】
ＸがNRAであり、そしてＲ4が-C(O)OR6以外である式（II）の化合物は、式（X）の化合物上の-C(O)OR6エステルを上記のように所望するＲ4基に転換し、次いでスキーム４に記載するように適当に置換されたアミンと反応させることによりＸがＯ（カルボニル基）である化合物を対応するＸがNRA(アミン基）である化合物に転換することにより同様に調製することができる。
【０１０１】
以下の実施例は本発明を理解する目的で説明し、そして前記の特許請求の範囲に説明した本発明をどのようにも限定するとは意図せず、そして解釈されない。
【０１０２】
【実施例】
実施例１
7-ブロモ-6-ブロモメチル-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-4-
オキソキノリン-3-カルボン酸 エチルエステル
国際公開第97/14682号明細書、参考例３に概説される手順に従い調製した7-ブロモ-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-6-メチル-4-オキソキノリン-3-カルボン酸 エチルエステル（3.5g、8ミリモル）、NBS（1.5g、8.4ミリモル）および2,2'-アゾビスイソブチロニトリル（AIBN、100mg）の混合物（200mlのDCM中）を４時間、還流で撹拌した。さらなるNBS（750mg）を加え、そして混合物を４時間還流した。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：７)により生成物として白色固体を得た。
【０１０３】
収量：2.95g（72％）
融点：184〜187℃
1H NMR（CDCl3)，δ1.41（t，J＝8Hz，3H)，4.40（q，J＝8Hz，2H)，4.66（s，2H)，5.36（s，2H)，7.03（m，2H)，7.39（m，1H)，7.92（s，1H)，8.54（s，1H)，8.68（ds，1H)；
MS（m/z)：514（MH+)。
【０１０４】
実施例２
6-(N-ベンジル-N-メチルアミノメチル)-7-ブロモ-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-       1,4-ジヒドロ-4-オキソキノリン-3-カルボン酸 エチルエステル
7-ブロモ-6-ブロモメチル-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-4-オキソキノリン-3-カルボン酸 エチルエステル（110mg、0.21ミリモル）、メチルベンジルアミン（31mg、0.26ミリモル）の混合物（0.045mLのDIPEAおよび15mLのDMF中）を、室温で16時間撹拌した。酢酸エチルを加えた。有機層を分離し、そして水で洗浄し、MgSO4で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、そして残渣を真空下で乾燥させて生成物を白色固体として得た。
【０１０５】
収量：120mg（100％）
1H NMR（CDCl3)，δ1.41（t，J＝8Hz，3H)，2.17（s，2H)，3.62（s，2H)，3.67（s，2H)，4.40（q，J＝8Hz，2H)，5.36（s，2H)，7.03（m，2H)，7.25-7.39（m，6H)，7.88（s，1H)，8.59（s，1H)，8.67（ds，1H)；
MS（m/z)：555（MH+)。
【０１０６】
実施例３
6-(N-ベンジル-N-メチルアミノメチル)-7-(ベンゾフラン-2-イル)-1-
(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-4-オキソキノリン-3-
カルボン酸 エチルエステル
化合物＃２
7-ブロモ-6-ブロモメチル-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-4-オキソキノリン-3-カルボン酸 エチルエステル（278mg、0.5ミリモル）、ベンゾフラン-2-ボロン酸（97mg、0.6ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(O)（69mg、0.06ミリモル）および２M 炭酸ナトリウム（414mg、３ミリモル）の混合物（20mLのDME中）を16時間、加熱還流した。酢酸エチルおよび水を加えた。有機層を分離し、そして水で洗浄し、MgSO4で乾燥させた。カラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）により生成物を黄色の固体として得た。
【０１０７】
収量：55mg（19％）
1H NMR（CDCl3)，δ1.4４（t，J＝8Hz，3H)，2.17（s，3H)，3.63（s，2H)，3.90（s，2H)，4.42（q，J＝8Hz，2H)，5.49（s，2H)，7.00（m，2H)，7.22-7.81（m，11H)，8.23（s，1H)，8.62（s，1H)，8.76（ds，1H)；
MS（m/z)：593（MH+)。
【０１０８】
実施例４
2,5-ジヒドロ-7-(4-メトキシフェニル)-5-[(2-メトキシフェニル)メチル]-
8-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-3H-ピラゾロ[3,4-d]チエノ
[2,3-b]ピリジン-3-オン
化合物＃８
4,7-ジヒドロ-2-(4-メトキシ-フェニル)-7-[(2-メトキシフェニル)メチル]-3-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-4-オキソ-チエノ[2,3-b]ピリジン-5-カルボン酸、エチルエステル（Furuya,S.et al.,国際公開第95/28405号明細書により記載された手順に従い調製）（387mg、0.66ミリモル）の溶液（3mLのピリジン中）に、P4S10を加えた。反応フラスコにアルゴンを流し、そして５時間、還流しながら撹拌した。溶媒を除去し、そして生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製して対応するチオカルボニルを得た。
【０１０９】
チオカルボニル（118mg、0.19ミリモル）を乾燥DMF（0.25mL）に溶解し、そしてヒドラジン１水和物（0.02mL、0.42ミリモル）で処理した。生成した溶液を80℃で２時間加熱し、混合物を冷却し、そしてフラッシュクロマトグラフィーにより精製した（０−10％ MeOH／CHCl3）。生成物はHClで処理して塩酸塩に転換し、生成物を黄色い粉末として得た。
【０１１０】
収量：7.5mg
MS(m/z)551(MH+).
実施例５
2,5-ジヒドロ-7-(ベンゾフラン-2-イル)-8-[[(メチル(フェニルメチル)
アミノ]メチル]-5-[(2,6-ジフルオロフェニル)メチル]-3H-
ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-オン
化合物＃４
7-(ベンゾフラン-2-イル)-8-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-5-[(2,6-ジフルオロフェニル)メチル]-3-キノリンカルボン酸、エチルエステル（500mg、0.84ミリモル）の溶液（5mLのピリジン中）に、P4S10（240mg、0.65当量）を加えた。反応フラスコにアルゴンを流し、そして２時間、還流しながら撹拌し、100℃に冷却し、そして水（100mL）に注いだ。生成物をクロロホルムに抽出し、乾燥させ（MgSO4）、そして濃縮して赤茶色の固体を得た。
【０１１１】
この固体（337mg、0.55ミリモル）を乾燥DMF（５mL）に溶解し、そしてヒドラジン１水和物（60mg、1.1ミリモル）で処理した。生成した混合物を100℃で３時間温め、混合物を冷却し、そして水に注いだ。生成した黄色い沈殿を濾過により集め、そして乾燥して生成物を得た。
【０１１２】
収量：149mg
1H NMR（CDCl3)，δ2.09（s，3H)，3.57（s，2H)，3.86（s，2H)，5.84（s，2H)，7.18-7.49（m，12H)，7.66-7.77（m，2H)，8.16（s，1H)，8.33（s，1H)，8.95（s，1H)。
【０１１３】
実施例６
7-(ベンゾフラン-2-イル)-3-[(フェニルメチル)オキシ]-5-
[(2,6-ジフルオロフェニル)メチル]-8-[[メチル(フェニルメチル)
アミノ]メチル]-5H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン
化合物＃５
2,5-ジヒドロ-7-(ベンゾフラン-2-イル)-8-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-5-[(2,6-ジフルオロフェニル)メチル]-3H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-オン（（120mg、0.21ミリモル）の溶液（5mLの乾燥DMF中）を、リチウムヘキサメチルジシラジド（0.25mL、0.25モル、1.0M）の溶液（テトラヒドロフラン THF中）で処理した。ベンジルブロミド（40mg、0.22ミリモル）をシリンジを介して導入し、そして混合物を一晩撹拌した。１当量の塩酸（エーテル中）を加え、そして溶媒を蒸発させて対応する塩酸塩を黄色の固体として得た。
【０１１４】
収量：47mg
1H NMR（CDCl3)，δ2.08（s，3H)，3.55（s，2H)，3.87（s，2H)，5.13（s，2H)，5.88（s，2H)，7.12-7.51（m，16H)，7.66-7.70（m，2H)，8.16（s，1H)，8.37（s，1H)，9.10（s，1H)。
【０１１５】
実施例７
6-(N-ベンジル-N-メチルアミノメチル)-7-(チエン-3-イル)-1-
(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-4-オキソキノリン-3-
カルボン酸 エチルエステル
化合物＃１
実施例３に記載した手順に従い、実施例２で調製した化合物（6-(N-ベンジル-N-メチルアミノメチル)-7-ブロモ-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-4-オキソキノリン-3-カルボン酸 エチルエステル）（150mg、0.27ミリモル）をチオフェン-3-ボロン酸（38.4mg、0.30ミリモル）と反応させて、生成物を黄色い固体として得た。
【０１１６】
収量：48mg
MS(m/z)559(MH+).
実施例８
2,5-ジヒドロ-7-ブロモ-8-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-5-
[(2,6-ジフルオロフェニル)メチル]-3H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-オン
化合物＃３
実施例４に記載した手順に従い、6-(N-ベンジル-N-メチルアミノメチル)-7-ブロモ-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-1,4-ジヒドロ-4-オキソキノリン-3-カルボン酸 エチルエステル（0.6g、1.1ミリモル）を表題化合物に転換し、そして対応する塩酸塩で黄色い粉末として単離した。
【０１１７】
収量：0.15g
MS(m/z)524(MH+).
実施例９
7-(ベンゾフラン-2-イル)-3-エトキシ-5-[(2,6-ジフルオロフェニル)
メチル]-8-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-5H-
ピラゾロ[4,3-c]キノリンHCl
化合物＃６
実施例６に記載した手順に従い、2,5-ジヒドロ-7-(ベンゾフラン-2-イル)-8-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-5-[(2,6-ジフルオロフェニル)メチル]-3H-ピラゾロ[4,3-c]キノリン-3-オン（0.05g、0.09ミリモル）を、ヨウ化エチル（0.018g、0.116ミリモル）と反応させて表題化合物を得、これをその対応する塩酸塩で黄色い粉末として単離した。
【０１１８】
収量：0.05g
MS(m/z)589(MH+).
実施例１０
4,7-ジヒドロ-2-(4-メトキシフェニル)-7-[(2-メトキシフェニル)メチル]-
3-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-4-オキソ-チエノ[2,3-b]
ピリジン-5-カルボン酸 ヒドラジド ビス-ヒドロクロライド
化合物＃７
4,7-ジヒドロ-2-(4-メトキシフェニル)-7-[(2-メトキシフェニル)メチル]-3-[[メチル(フェニルメチル)アミノ]メチル]-4-オキソ-チエノ[2,3-b]ピリジン-5-カルボン酸 エチルエステル（57mg、0.097ミリモル）の溶液（２mLのエチルアルコール中）に、ヒドラジン（0.030mL、0.096ミリモル）を加えた。混合物を６時間、加熱還流し、そして真空下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、そして沈殿により固体を集めて、生成物を淡黄色の固体として得た。
【０１１９】
収量：38mg
MS(m/z)569(MH+).
実施例１１
GnRH受容体結合アッセイ
メスおよびオスのラット下垂体の等量の混合物から調製したホモジネートを、膜に結合したGnRH受容体の供給源として使用した。受容体は溶液中で[125]-ヒストレリン（histrelin）単独と、または混合物中で競合リガンド（試験する化合物）と相互反応させた。結合した放射標識リガンドを遊離（非結合）放射標識リガンドからガラスフィルターマットを通す濾過により、96-ウェルプレート回収システム（Tomtec Mach  II 96）を使用して分離した。競合リガンドが存在しない場合、放射標識リカンドの最大量が受容体に結合し、そしてガラスフィルターマットによりトラップされる。受容体部位について競合することができる非標識リガンドが存在する時、受容体に結合し、そしてフィルターマット上にトラップされる放射標識リガンドの量は、競合体の濃度および受容体に対する競合体の親和性の強さに依存して比例して減少する。フィルターマット上の受容体に結合した[125]-ヒストレリンの量は、ワラック（Wallac）のBataplate(商標)液体シンチレーションカウンターを使用して測定した。結合は以下のように決定した：
NSB                 非特異的結合
B0                  化合物の最大濃度
平均NBS：           （NBS1＋NSB2）／２
平均B0：            （B01＋B02）／２
回収したB0：         平均B0−平均NSB
集めたB0の％阻害（または最大応答）は以下のように算出した：
【０１２０】
【数１】
0004427251.tif 000022
【０１２１】
実施例１２
GnRHに関するルシフェラーゼアッセイ
GnRH遺伝子を持つHek 293細胞をhCGプロモーターおよびルシフェラーゼレポーター系を用いてトランスフェクトした。１日目に、細胞を80,000細胞／ウェルの密度でポリ-D-リシンを前以てコートした96-ウェルプレートにまいた。プレートを37℃で24時間インキューベーションした。２日目に消費された培地をデカントし、そして新しい培地と交換した。試験化合物、標準および対照を個々のウェルに加えた。すべての希釈を7.5％ DMSO／αMEM培地で行った。アッセイはアゴニストおよびアンタゴニストの両形式で行った。アンタゴニスト形式について、アッセイの測定は0.6nM ヒストレリンの標準に対して行った。３日目にルシフェラーゼ生産のレベルは、強化されたルシフェラーゼアッセイ（Enhanced Luciferase Assay）キットを使用して化学発光アッセイで測定した。結果は以下の式を使用して％阻害で表した：
RLU       相対的な光の単位、化学発光の単位
アゴニスト     ［RLU値（試験化合物）−（バックグラウンド／0.6nMヒス
トレリン)−バックグラウンド］★100
アンタゴニスト     （１−［RLU値−（バックグラウンド／0.6nMヒストレリン
）                    −バックグラウンド）★100］）
算出された割合は、Graph Pad Prizmを使用してグラフ上にプロットし、そしてIC50/EC50値を決定した。
【０１２２】
実施例１３
初代下垂体細胞培養アッセイ
オスのラット（未成熟と成体との間）を屠殺し、そしてそれらから前方下垂体を集めた。下垂体を解離し、そして細胞を0.33×106細胞／ウェルの濃度で１日目にプレートにまいた。３日目に細胞上の培地を流し、そして新しい培地と交換した。次いで試験化合物を１nM〜1000nMの範囲の濃度でまいた細胞に加えた。プレートを37℃で５％CO2にて２日間、インキューベーションした。５日目に培地を再度流し、そして新しい培地に交換した。次いでこのプレートに試験化合物および１nM GnRHを加えた。細胞を４時間インキューベーションし、培地を1200rpm Sorvall RT7で10分間、遠心することにより集め、900μLの上清を各ウェルからピペットで取り、そして96ウェルプレートに分配した。深いウェルプレートを覆い、そして20℃で１日保存した。ついでプレートをELISAにより評価して（ラジオイムノアッセイ系）、培地中の黄体ホルモンの濃度を測定した。このアッセイを様々な濃度の試験化合物で繰り返してIC50値を決定した。IC50値は50％阻害が達成される試験化合物の濃度と定める。
【０１２３】
上記に説明した手順に従い、本発明の選択した化合物を試験し、その結果を表３に掲げた。
【０１２４】
【表３】
0004427251.tif 000023
【０１２５】
前述の明細書では本発明の原理を教示し、実施例は具体的説明の目的で提供されるが、本発明の実施には前記特許請求の範囲およびそれらの均等物の範囲内にあるものとしてすべての通常の変更態様、適合および／または修飾を包含する。