(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
赤ピーマンおよび／またはその抽出物を有効成分として含有する老化による学習・記憶能力の衰退抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、老化防止剤に関し、詳しくは、赤ピーマンおよび／またはその抽出物を有効成分として含有する老化防止効果に優れた老化防止剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
赤ピーマン（Capsicum annum L.）は、なす科トウガラシ属に属する植物で、果実を食用とするために栽培されている。しかしながら、これまでに赤ピーマンの薬剤効果についての報告はない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、赤ピーマンの新規な用途を提供することを課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、赤ピーマンが、毛髪や皮膚の老化等の外見に現れる老化の進行を抑制する作用や、老化による学習・記憶能力の衰退を抑制する作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち本発明は、赤ピーマンおよび／またはその抽出物を有効成分として含有する老化による学習・記憶能力の衰退抑制剤である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。まず、本発明の老化防止剤が含有する赤ピーマンについて説明する。
【０００７】
（１）本発明に用いる赤ピーマン
本発明の老化防止剤に用いられる赤ピーマンは、通常には、熟した果実の部分である。
【０００８】
上記赤ピーマンの果実は、赤ピーマンを通常の方法により栽培することにより得られる。また、赤ピーマンの果実は、日本国内外で販売されているので、これを本発明に用いることも可能である。
【０００９】
この様にして得られる赤ピーマンの果実には、毛髪や皮膚の老化等の外見に現れる老化の進行を抑制したり老化による学習・記憶能力の衰退を抑制する等の老化を防止する作用を有する物質が含まれており、これをそのまま使用してもよいが、通常は、これを処理して、具体的には、破砕、摩砕、濃縮、乾燥、凍結乾燥等の操作やこれらを組み合わせた操作により処理して、得られる破砕物、摩砕物、濃縮物、乾燥物、凍結乾燥物等の処理物やこれらの混合物を本発明の老化防止剤に用いる。本発明において赤ピーマンとは、赤ピーマンの果実に加えて、上記の様な処理物を含む概念で用いられる。
【００１０】
本発明においては、さらに、上記赤ピーマンの果実やこれらの処理物を抽出処理することで前記老化防止作用を有する物質を抽出物に含有するかたちで取り出して、これを本発明の老化防止剤に配合してもよい。また、前記赤ピーマン抽出物を濃縮、乾燥等して得られる濃縮物や乾燥物やこれらの混合物も本発明における抽出物に含まれる。
【００１１】
赤ピーマンの抽出処理は、連続式、バッチ式等の方法で、一般的な方法により、任意の時間、冷浸または温浸することで行うことが可能である。例えば、上記赤ピーマンの果実を細切後、抽出溶媒に室温にて１〜５０時間、穏やかに撹拌しながら抽出し、濾過または遠心分離して抽出液を得る。さらに、抽出残渣について前記同様の抽出操作を２〜３回繰り返しこれらの抽出液を合わせる。得られた抽出液を減圧あるいは限外濾過等で濃縮して濃縮物とすることも可能である。さらに、必要に応じて溶媒を完全に除去して乾固するかまたは凍結乾燥させてもよい。
【００１２】
上記抽出に用いる溶媒としては、有機溶媒が利用可能であり、特に、メタノール、エタノール等のアルコール類が好ましい。
【００１３】
次に、上記赤ピーマンおよび／またはその抽出物を含有する本発明の老化防止剤について説明する。
【００１４】
（２）本発明の老化防止剤
本発明の老化防止剤は、上記赤ピーマンおよび／またはその抽出物を有効成分として含有する。本発明の老化防止剤は、上記赤ピーマンおよび／またはその抽出物を含有することにより、毛髪や皮膚の老化等の外見に現れる老化の進行を抑制したり老化による学習・記憶能力の衰退を抑制する等の老化を防止する作用を有する。
【００１５】
本発明の老化防止剤は有効成分である赤ピーマンおよび／またはその抽出物のみで構成されてもよいし、また、剤形等を考慮して各種担体を構成成分として含んでもよい。ここで、本発明の老化防止剤の剤形は特に制限されない。
【００１６】
また、本発明の老化防止剤を、さらに、各種用途に応じて本発明の効果を損なわない範囲で各種任意成分と組み合わせて組成物、例えば、老化防止効果を有する医薬組成物や食品組成物等とすることができる。
【００１７】
本発明の老化防止剤を用いて医薬組成物を作製する場合、上記任意成分としては、一般に製剤上許容される無機または有機の一種、あるいは数種のベヒクル、坦体、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化・可溶化・分散剤、ｐＨ調整剤、等張剤、甘味剤、芳香剤、着色剤等を挙げることができる。医薬組成物の剤形は、特に限定されないが、その組成が投与経路、投与計画等によって決定され、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、液剤等、通常用いられている各種剤形に、従来公知の技術を用いて製剤化することが可能である。投与形態としては、経口投与が挙げられる。
【００１８】
製剤化について具体的には、固形製剤を製造する際には、上記老化防止剤と共に、コーンスターチ、ゼラチン等の結合剤、炭酸カルシウム、微晶性セルロース等の賦形剤、デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム等の崩壊剤、タルク等の滑沢剤、乳糖、ショ糖等の甘味剤等を配剤することで散剤、錠剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤とすることができる。また、乳剤、懸濁剤、液剤等の液体製剤の場合には、担体として、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば、水や植物油等を用いることができる。液体製剤には、上記不活性な希釈剤以外に湿潤剤、乳化・可溶化・分散剤、ｐＨ調整剤、等張剤、甘味剤、着色剤、防腐剤、安定剤等を配合してもよい。更に、この様な液体製剤をゼラチンのような吸収され得る物質のカプセル中に含ませて製剤化することもできる。
【００１９】
また、本発明の老化防止剤を用いて食品組成物を作製する場合、本発明の老化防止剤を、種々の食品へ、食品で通常用いられる任意成分と共に配合することができる。この様な食品組成物として、例えば、クラッカー、ケーキ、クッキー、ゼリー等の菓子類やジュース、野菜飲料、アルコール飲料等のドリンク類、パン等の主食、ソース類、ケチャップ等の調味料等が挙げられる。
【００２０】
また、上記食品組成物は、健康食品、健康飲料として通常用いられている各種形態、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤等も含むものであり、これらの製剤化に際しては、本発明の老化防止剤とともに、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、増量剤、被覆剤等の通常、健康食品、健康飲料の製剤化に用いられる任意成分を任意の量、配合することが可能であり、これらは、有効成分として本発明の老化防止剤を配合する以外は、上記製剤を一般に製造する方法と同様の製法で製造することができる。
【００２１】
赤ピーマンおよび／またはその抽出物が老化防止作用を示す理由は明らかではないが、老化現象の進行には活性酸素が関与しているとの説もあることから、赤ピーマンに含まれる抗酸化作用を持つカロテノイドが老化防止作用に関わっている可能性がある。特に、赤ピーマンに特徴的なカロテノイドであるカプサンチンは構造の中に水酸基を含むことから、経口で摂取した場合、リコペンやβ−カロテンに比べ吸収性に優れていると考えられるので、赤ピーマンを摂取した個体においてその抗酸化作用が発現して老化を防止した可能性もあると推測される。
【００２２】
【実施例】
以下に本発明の実施例を説明する。
【００２３】
【実施例１】
赤ピーマンペーストの凍結乾燥粉末の製造
赤ピーマン果実を磨砕して得たペーストを凍結乾燥し、ミキサーにて粉末化し、凍結乾燥粉末として老化防止剤を得た。
【００２４】
＜本発明の老化防止剤の評価＞
実験動物として、生理的に進行する発育・発達・成熟・老化のうち普通のマウスと比較して老化のみが早期に現れかつ不可逆的に進行する、老化促進モデルマウス（ＳＡＭ）を用い、以下の方法に従って、上記実施例で得られた老化防止剤を配合した飼料を前記マウスに摂取させたときの、外見の老化度の進行を防止する効果や、学習・記憶能力の衰退を防止する効果を調べることにより、本発明の老化防止剤の評価を行った。
【００２５】
（１）飼料の調製
実験には、対照飼料として、表１の対照飼料欄に組成を示すオリエンタル酵母（株）製のＯＹＣ改変ＡＩＮ９３−Ｇ粉末飼料を用いた。また、この対照飼料のコーンスターチの一部を、表１に示す様に上記実施例で得られた老化防止剤に置き換えて、試験飼料を調製し、実験に用いた。
【００２６】
【表１】
表１
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表中、ミネラル混合（AIN-93M）、ビタミン混合（AIN-93-VX）は、それぞれオリエンタル酵母（株）製のミネラル組成物、ビタミン組成物である。
【００２７】
（２）老化促進モデルマウスの飼育実験
上記で調製した各飼料を用いてマウスの飼育を行った。飼育実験には、老化促進モデルマウス（ＳＡＭ）のうちでも、特に学習・記憶能力が早期に減退するＳＡＭＰ８系統（以下、Ｐ８系マウスという）と、その対照である（老化の進行が通常のマウスと同程度である）ＳＡＭＲ１系統（以下、Ｒ１系マウスという）を用いた。なお、Ｐ８系マウスでは、外見の老化についても通常のマウスに比べて早期に起こることが知られている。
【００２８】
Ｒ１系マウス、Ｐ８系マウスのそれぞれを、誕生後３週間母親と同居させた後、離乳し雌雄分けして、誕生からほぼ６週齢までは通常の飼料（日本クレア（株）製、ＣＥ−２）で飼育した。誕生後６週齢から雄のみを用いて上記各飼料による飼育実験を開始した。なお、試験飼料を摂取させる３日前から対照飼料を与えた。
【００２９】
用いたマウスと飼料の組合せを表２に示す。Ｒ１系マウス４匹には対照飼料を供与してＲ１対照群（正対照）とした。Ｐ８系マウスは２群に分け、そのうちの１群（４匹）には対照飼料を供与してＰ８対照群（負対照）とした。Ｐ８系マウスの残りの群（４匹）には、上記で得られた試験飼料をそれぞれ供与して、これらをそれぞれＰ８試験（Ｐ８赤ピーマン）群とした。Ｐ８系マウスに関しては、各飼料摂取群間で平均体重になるべく差がでないように群分けをおこなった。なお、群分けに際しては、ある特定の親から産まれた仔が特定の群に偏らないように考慮した。
【００３０】
飼育実験は、温度（２４±２℃）と湿度（５０±２０％）とを一定に保ち、１ケージ（１７５×２４５×１２５ｍｍ）中に２個体の条件で、３ヶ月間行った。照明は１２時間周期で点灯と消灯を繰り返した（明期：6:00〜18:00）。また、飼料と飲用水はともに自由摂取とした。
【００３１】
【表２】
表２
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【００３２】
ここで、上記飼育実験において、各マウス群間で体重および飼料摂取量に概ね差がないことを確認するために、体重と飼料摂取量を、飼育実験期間中１週間に２回以上測定した。飼料摂取量は、各ケージごとに餌壺の重量を測定して求めた。
【００３３】
３ヶ月間にわたる飼育実験期間における各マウス群の体重の平均値の変化を標準偏差とともに図１に示す。なお、Ｒ１対照群では、１個体の脱落があったため、６４日以降は、３匹の平均と標準偏差を示している。また、飼育実験期間における各マウス群の飼料摂取量（ｇ／日／マウス）の平均値を表３に示す。
【００３４】
【表３】
表３
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【００３５】
図１から、Ｒ１対照群がＰ８系の２群と比較して飼育実験中の体重増加が顕著であったことがわかるが、この差はマウスの系統間の差として既に知られているものであり、この飼育実験に特異的なものではないといえる。また、Ｐ８系の２群間ではその体重変化に差は認められず、これより、この飼育実験において各飼料がマウスの成長を著しく促進したり阻害したりする作用は示さなかったといえる。また、飼料摂取量については、Ｐ８試験（Ｐ８赤ピーマン）群の飼料摂取量が他の群のそれと比較してやや少ない傾向が認められたが、これはβ−コーンスターチの替わりに添加した赤ピーマンペースト凍結乾燥粉末に糖が含まれていたことに起因すると考えられる。
【００３６】
（３）老化防止効果の評価
上記老化促進モデルマウスの飼育実験を通して、上記各マウス群の外見の老化度と、学習・記憶能力の衰退の度合いを以下の方法で測定して各群間で比較することにより、本発明の老化防止剤を評価した。
【００３７】
１）外見の老化度に基づく老化防止効果の評価
上記飼育実験期間中に、マウスの外見に現れる老化の度合いを評価する評価項目として、マウスをゲージから出した直後の行動（reactivity）、真上から手で捕獲を試みた際の反応（passivity）、毛艶（glossiness）、毛と皮膚の荒れ具合（coarseness）、脱毛の程度（loss of hair）、皮膚のただれ（瘢痕も含む）（ulcer of the skin）、目の周辺のただれ（periophthalmic lesion）、角膜の濁り（cornear opacity）、角膜の傷（cornear ulcer）、網膜の濁り（白内障）（cataract）、背骨の屈曲度（lordokyphosis）の１１項目を設定し、上記各マウス群について、各評価項目ごとに老化の度合いを以下の基準により判定し、得られた１１項目の評点を合計して老化度評点とした。なお、上記外見の老化度の測定は、飼育実験開始から２ヶ月目および３ヶ月目に行った。
【００３８】
（判定基準）
ａ）マウスをゲージから出した直後の行動（reactivity）
０点 ： 自分のテリトリーを確認するために動き回る。
１点 ： つま先立ち（チョコチョコ歩き）または興奮状態。
２点 ： ゆっくり、のそのそと動く。
３点 ： 動かない。お尻を押すと動き出す。
４点 ： 全く動かない。
【００３９】
ｂ）真上から手で捕獲を試みた際の反応（passivity）
０点 ： 力強く、すっと逃げる。
１点 ： 逃げ方が遅い。
２点 ： 逃げない。首を掴んで仰向けにすると寝返る。
３点 ： 仰向けにしても寝返らないが、足を掴んでぶら下げるともがく。
４点 ： 足を掴んでぶら下げても逃げようとしない。
【００４０】
ｃ）毛艶（glossiness）
０点 ： 真白でピカピカ健康なヤングアダルトな状態。
１点 ： 毛にあまり艶がない状態。
２点 ： はっきりと艶がない状態。ただし、毛は清潔。
３点 ： 毛に艶がなく、汚れがある状態。
４点 ： 非常に汚れきった状態。
【００４１】
ｄ）毛と皮膚の荒れ具合（coarseness）
０点 ： 毛玉が全くないスベスベ状態。
１点 ： 頭や目のあたりがゴワゴワしている。
２点 ： 肩のあたりまでゴワゴワしている。
３点 ： 背中にまでゴワゴワが達している。
４点 ： お尻まで以上にゴワゴワの症状が広がっている。
【００４２】
ｅ）脱毛の程度（loss of hair）
０点 ： 脱毛が全くない。
１点 ： 毛のない部分が頭の大きさ程度。または毛の薄い面積が背中全体の半分以下。
２点 ： 毛のない部分が背中全体の1/4以下。または毛の薄い部分が背中全体の1/2より多い。
３点 ： 全く毛のない部分が背中全体の1/4より多く1/2以下。
４点 ： 全く毛のない部分が背中全体の1/2より多い。
【００４３】
ｆ）皮膚のただれ（瘢痕も含む）（ulcer of the skin）
０点 ： 皮膚のただれが全くない。
１点 ： 瘢痕や痂痕が観察される。
２点 ： 赤くズルズルにただれている部分が頭の面積以下。
３点 ： 赤くズルズルにただれている部分が全身の1/4以下。
４点 ： 赤くズルズルにただれている部分が全身の1/4より多い。
【００４４】
ｇ）目の周辺のただれ（periophthalmic lesion）
０点 ： 目の周辺のただれが全くない。
１点 ： 瞼が腫れていたり眼が閉じてしまっている。または目の周囲にのみただれあり。
２点 ： ただれや瘢痕が鼻先まで広がってしまっている。
３点 ： 症状が顔全体にまで広がってしまっている。
【００４５】
ｈ）角膜の濁り（cornear opacity）
０点 ： 角膜の濁りが全くない。
１点 ： 虹彩が見える。
２点 ： 虹彩が見えにくい。ただし、網膜反射光（黄金色）はある。
３点 ： 網膜反射光がない。
【００４６】
ｉ）角膜の傷（cornear ulcer）
０点 ： 角膜に傷が全くない。
１点 ： 瞼のところに線条傷。
２点 ： 症状が角膜にだいぶ現れている。ただし、網膜反射光はある。
３点 ： 殆ど角膜全体に症状が広がっている。網膜反射光がない。
【００４７】
ｊ）網膜の濁り（白内障）（cataract）
０点 ： 白濁なし。網膜反射光あり。
１点 ： 網膜反射光はやや減弱している。
２点 ： 網膜反射光がない。
【００４８】
ｋ）背骨の屈曲度（lordokyphosis）
０点 ： 背中を撫でたときひっかかりが全くない。
１点 ： 優しく撫でるとひっかかるが、強く撫でればなくなる。
２点 ： 強く撫でてもひっかかりはなくならないが、尻尾を引っ張ればなくなる。
３点 ： どうしてもひっかかりが消えない。
【００４９】
実験開始から２ヶ月目および３ヶ月目の、各マウス群毎の個体別老化度評点およびその平均値を表４に示す。
【００５０】
【表４】
表４
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【００５１】
試験開始時にはどの群も老化度評点は０であったが、加齢とともに数値は上昇し、試験終了時（３ヶ月目）には最も老化度の高い個体の評点は８になった。試験群ごとに比較すると、２ヶ月目においては、Ｐ８対照群がＰ８試験（Ｐ８赤ピーマン）群とＲ１対照群よりも高い老化度を示す傾向が見られた。３ヶ月目ではＰ８対照群が他の２群よりも高い老化度を示した。これは、主に毛艶とケージの外に出した時の行動の差に起因していた（Ｐ８対照群では、ケージの外に出しても探索行動を行わなかったり、捕獲を試みた時に逃げなかったりした個体があった。）。
【００５２】
２）学習・記憶能力の衰退の度合いに基づく老化防止効果の評価
上記各マウス群の学習能力および記憶能力を調べるために、ステップスルー式行動測定装置を用いた受動回避試験を行った。
【００５３】
▲１▼試験装置
試験には、UGO BASILE社（VA,Italy）の受動回避装置（PASSIVE AVOIDANCE APPARATUS）を用いた。この装置は暗室（２２２×２１０×２１２）と明室（１１０×２１０×２１２）とからなり、両室は壁で隔てられており、その隔壁には両室を結ぶ左右にスライドして開く約７ｃｍ四方の扉がある。両室を隔てる壁の下を支点として、床は金属のスノコ状のシーソーになっており、明室側に入れた動物が暗室側に移動してシーソー（床）が傾くと、床の金属棒に任意の強度の電流が流れ、刺激が与えられる。与える刺激の強さは電流の強度（０．０〜２．０ｍＡ）と電流を流す時間（持続時間：０〜９秒）とで決定することができる。
【００５４】
▲２▼受動回避試験
マウスは上記の様な装置において明室に入れられると暗室側に移動する習性を持っている。そこで、上記装置を用いて明室に入れたマウスが暗室に移動して床が傾いたときに電気刺激を与える操作を繰り返せば、マウスは明室側に留まることを学習する。また、上記電気刺激を中止すれば時間の経過とともに学習の記憶を喪失し、明室に入れられてもそこに留まることなく暗室側に移動する。
【００５５】
この様なマウスの行動を利用して、３カ月間飼育実験を行った上記各マウスについて上記試験装置を用いて表５に示すスケジュールと電気刺激の強度で受動回避試験を、学習獲得の過程において最初の４回、続いて記憶喪失の過程において２回の合計６回行い、学習獲得や記憶喪失の様子を観察、評価した。
【００５６】
与えた電気刺激の強度は、１．２ｍＡ、３秒とした。潜時の打ち切り時間は５分とし、明室側に５分間留まった場合は試験をそこで打ち切った。また、暗室側にマウスが移動した時点で試験は打ち切った。５回目および６回目の試行は、上記で学習した記憶を喪失する様子を観察するための無刺激の試験であった。
【００５７】
【表５】
表５
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【００５８】
▲３▼評価方法
受動回避試験の評価のために、各試行において、試験時間中に明室側に継続して留まった時間をステップスルー潜時として測定した。このステップスルー潜時は最大を３００秒として、それ以上留まってもステップスルー潜時は一定の３００秒とした。各試行毎に得られたステップスルー潜時の測定値を各群毎に平均し、その変化の過程を各群間で比較する方法により学習獲得、記憶喪失の評価を行った。
【００５９】
▲４▼結果
上記受動回避試験で測定された各個体のステップスルー潜時（秒）の結果（平均および標準誤差）を図３に示す。なお、図３の横軸は試行開始日を第１日とした日数を示し、図中のエラーバーは標準誤差を示すものである。
【００６０】
記憶獲得の評価では、Ｐ８対照群に対しＰ８試験（Ｐ８赤ピーマン）群は、記憶獲得が早く、正常老化として用いたＲ８対照群と同様なパターンを示した。また、記憶の喪失を評価した８および９日目の結果では、Ｐ８対照群が９日目にほとんど記憶が保持されていない結果を示したのに対し、Ｐ８試験群は、Ｒ８対照群より保持程度は劣るが、９日目においても記憶が保持されていることが分かった。
【００６１】
以上の結果より、本発明の老化防止剤は、外見の老化の進行を抑制する効果や老化による学習獲得や記憶保持に関する能力の衰退を抑制する効果を有することが明らかである。
【００６２】
【発明の効果】
本発明は、赤ピーマンの新規な用途として、赤ピーマンおよび／またはその抽出物を配合する老化防止剤を提供するものであり、前記老化防止剤は、外見の老化の進行を抑制したり、老化による学習獲得や記憶保持に関する能力の衰退を抑制する等の老化防止効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】  飼育実験期間中の各マウス群の体重の平均値の変化を標準偏差とともに示すグラフである。
【図２】  飼育実験における各マウス群の老化度評点の平均値と標準偏差を示すグラフである。
【図３】  受動回避試験における各マウス群のステップスルー潜時の平均値の変化を標準偏差とともに示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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