(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式で表される化合物：
【化１】
0004555476.tif 000076
上式で、Aは単結合または二重結合によって環に結合されている酸素または硫黄であり；R2は水素、アリール、低級脂肪族置換基、および-CH2COOCH3からなる群より選択され；R4〜R7はアルコキシ、アミノ、アシル、脂肪族、脂肪族アルコール、脂肪族ニトリル、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、イミノおよびα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択され；R8〜R11は脂肪族、脂肪族アルコール、アルコキシ、アシル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル基、ハロゲン、水素およびヒドロキシルからなる群より個別に選択され；R12は脂肪族、脂肪族アルコール、カルボン酸、および水素からなる群より選択され；および
R4-R11のうち少なくとも一つは、水素およびハロゲンからなる群から選択される基以外の基を示す。
【請求項２】
Aが二重結合の酸素である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
R2がH、-CH2COOCH3、-CH3、および-CH2Phからなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
R2が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
R4〜R7がアルコキシ、アミノ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシルおよびイミノ、低級脂肪族アルコール、低級脂肪族ニトリル、ならびにα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
R4〜R7が-H、-OH、-C(=NH)NH2、-CO2H、-Br、-OCH3、シアノエチル、3-ヒドロキシ-1-プロピニル、3-オキソ-1-ブテニル、および2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニルからなる群より個別に選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
R8〜R11がアルコール、アルコキシ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル、ハロゲン、水素、およびヒドロキシルからなる群より個別に選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
R8〜R11が-H、ハロゲン、-OH、-CH2OH、-CH2CHOCH2、-CH2CH2CHOCH2、-CF3および-OCH3からなる群より個別に選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
R12がアルコール、カルボン酸、水素および低級アルキル基からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
R12が-H、-CH2CH2OH、-CH3および-CH2CH3からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-4-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-4-ヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-4-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-9-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-9-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2-(メチルイミノアミン)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2-(カルボン酸)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-10-ヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-11-ヒドロキシメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-4-ヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンおよび
7,12-ジヒドロ-2,3-ジヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
2,3-ジメトキシ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
2,3-ジメトキシ-9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-プロピオニトリル、
2-ブロモ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-アクリロニトリル、
2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル)-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
11-メチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
2-[2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニル]-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
2-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
11-エチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)アクリル酸メチルエステルからなる群より選択される、
請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
7,12-ジヒドロ-9-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-メチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、および
7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンからなる群より選択される、
請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、および7,12-ジヒドロ-9-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンからなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンである、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
下記の式で表される化合物の有効量を含む医薬組成物：
【化２】
0004555476.tif 000077
上式で、Aは単結合または二重結合によって環に結合されている酸素または硫黄であり；R2は水素、アリール、低級脂肪族置換基、および-CH2COOCH3からなる群より選択され；R4〜R7はアルコキシ、アミノ、アシル、脂肪族、脂肪族アルコール、脂肪族ニトリル、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、イミノおよびα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択され；R8〜R11は脂肪族、脂肪族アルコール、アルコキシ、アシル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル基、ハロゲン、水素およびヒドロキシルからなる群より個別に選択され；R12は脂肪族、脂肪族アルコール、カルボン酸、および水素からなる群より選択され；および
R4-R11のうち少なくとも一つは、水素およびハロゲンからなる群から選択される基以外の基を示す。
【請求項１６】
Aが酸素に二重結合されている、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
R2がH、-CH2COOCH3、-CH3、および-CH2Phからなる群より選択される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１８】
R2が水素である、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１９】
R4〜R7がアルコキシ、アミノ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、イミノ、低級脂肪族アルコール、低級脂肪族ニトリル、およびα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２０】
R4〜R7が-H、-OH、-C(=NH)NH2、-CO2H、-Br、-OCH3、シアノエチル、3-ヒドロキシ-1-プロピニル、3-オキソ-1-ブテニル、および2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニルからなる群より個別に選択される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２１】
R8〜R11がアルコール、アルコキシ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、および低級アルキルからなる群より個別に選択される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２２】
R8〜R11が-H、ハロゲン、-OH、-CH2OH、-CH2CHOCH2、-CH2CH2CHOCH2、-CF3および-OCH3からなる群より個別に選択される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２３】
R12がアルコール、カルボン酸、水素および低級アルキル基からなる群より選択される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２４】
R12が-H、-CH2CH2OH、-CH3および-CH2CH3からなる群より選択される、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２５】
不活性担体、賦形剤、診断薬、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定化剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、潤滑剤、他の活性成分、薬学的組成物の調合において都合よく用いられる他の物質、およびその混合物をさらに含む、請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項２６】
対象者において生細胞の増殖が起きる状態の治療のための医薬組成物の調製のための、下記式で表される化合物の使用：
【化３】
0004555476.tif 000078
上式で、Aは単結合または二重結合によって右に結合されている酸素または硫黄であり；R2は水素、アリール、低級脂肪族、および-CH2COOCH3からなる群より選択され；R4〜R7はアルコキシ、アミノ、アシル、脂肪族、脂肪族アルコール、脂肪族ニトリル、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、イミノおよびα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択され；R8〜R11は脂肪族、脂肪族アルコール、アルコキシ、アシル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル基、ハロゲン、水素およびヒドロキシルからなる群より個別に選択され；R12は脂肪族、脂肪族アルコール、カルボン酸、および水素からなる群より選択され；および
R4-R11のうち少なくとも一つは、水素およびハロゲンからなる群から選択される基以外の基を示す。
【請求項２７】
Aが酸素である、請求項２６記載の使用。
【請求項２８】
R2がH、-CH2COOCH3、-CH3、および-CH2Phからなる群より選択される、請求項２６記載の使用。
【請求項２９】
R2が水素である、請求項２６記載の使用。
【請求項３０】
R4〜R7がアルコキシ、アミノ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、イミノ、低級脂肪族アルコール、低級脂肪族ニトリル、およびα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択される、請求項２６記載の使用。
【請求項３１】
R4〜R7が-H、-OH、-C(=NH)NH2、-CO2H、-Br、-OCH3、シアノエチル、3-ヒドロキシ-1-プロピニル、3-オキソ-1-ブテニル、および2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニルからなる群より個別に選択される、請求項２６記載の使用。
【請求項３２】
R8〜R11がアルコール、アルコキシ、エポキシ、ハロアルキル基、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、および低級アルキル基からなる群より個別に選択される、請求項２６記載の使用。
【請求項３３】
R8〜R11が-H、ハロゲン、-OH、-CH2OH、-CH2CHOCH2、-CH2CH2CHOCH2、-CF3および-OCH3からなる群より個別に選択される、請求項２６記載の使用。
【請求項３４】
R12がアルコール、カルボン酸、水素および低級アルキル基からなる群より選択される、請求項２６記載の使用。
【請求項３５】
R12が-H、-CH2CH2OH、-CH3および-CH2CH3からなる群より選択される、請求項２６記載の使用。
【請求項３６】
細胞が過増殖性である、請求項２６記載の使用。
【請求項３７】
細胞が新生物である、請求項２６記載の使用。
【請求項３８】
細胞が悪性腫瘍である、請求項２６記載の使用。
【請求項３９】
下記の式で表される化合物：
【化７】
0004555476.tif 000079
上式で、R7〜R１０は脂肪族、脂肪族アルコール、アルコキシ、アシル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル基、ハロゲン、水素、およびヒドロキシルからなる群より個別に選択され；および
R7-R10のうち少なくとも一つは、水素以外の基を示す。
【請求項４０】
8-ブロモ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、8-クロロ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、8-メチル-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、および8-トリフルオロメチル-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オンからなる群より選択される、請求項３９記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
分野
本発明は、縮合アゼピノン型サイクリン依存性キナーゼ阻害物質、これらの化合物を含む組成物、ならびに細胞増殖性疾患および／または蛋白質リン酸化異常疾患に対し、このような化合物を投与するための方法に関する。
【０００２】
背景
細胞周期の制御について理解する上での大きな進歩は、サイクリン依存性キナーゼ（cdk）と呼ばれる酵素ファミリーの発見であった。構造的には、これらは触媒サブユニットと、調節サブユニットとからなる。触媒サブユニットはいくつかのセリン／トレオニンキナーゼの触媒領域と類似しており、少なくとも8つの異なるサブユニットが記載されている（cdk1（＝cdc2）〜cdk8）。調節サブユニットは活性のために必要不可欠で、このファミリーのいくつかの蛋白質が報告されている（サイクリンA〜サイクリンH）。ほとんどのサイクリンは複数のcdkと相互作用することができ、既知のサイクリン−cdkペアはそれぞれ、細胞周期の調節において異なる役割を持つようである。これらの活性は、サブユニットの転写および翻訳制御のみならず、サブユニットのリン酸化および脱リン酸化によって調節される。加えて、サイクリン−cdk複合体に結合し、活性を阻害する、負の調節蛋白質が見いだされている（p15、p16INK4、p21cip1およびp27Kip1）。cdkおよびその調節の構造的理解は、cdk2、サイクリンA、cdk2−サイクリンA、およびcdk2−サイクリンA−p27kip1の結晶構造の解明によって進められた［Russoら、「サイクリンA−Cdk2複合体に結合したp27Kip1サイクリン依存性キナーゼ4の結晶構造（Crystal Structure of the p27Kip1 Cyclin-Dependent Kinase-4 Bound to the Cyclin-A-Cdk2 Complex）」、Nature、382（6589）：325〜331（1996）］。
【０００３】
細胞周期の制御においてcdkが重要であるということは明らかである。その結果、cdkの発現、機能または調節の変化が細胞増殖性疾患に関連していると思われる。cdk活性を増強する変化（触媒および／もしくは正の調節サブユニットの過剰発現、または負の調節蛋白質の発現不足もしくは欠失）が多くの癌で報告されている。最もよく見られるのはp16（MTS1、CDKN2、p16INKとも呼ばれる）遺伝子の欠失である。この遺伝子はcdk4およびcdk6の活性を阻害する蛋白質をコードしている。この阻害活性の欠落は、肺、乳房、脳、骨、皮膚、膀胱、腎臓、卵巣、肝臓、結腸、膵臓および白血病を含む広範囲のヒト原発性腫瘍およびヒト腫瘍由来細胞株で観察されている。卵巣癌におけるcdk1の過剰発現および非小細胞肺癌におけるサイクリンDの過剰発現も認められている。
【０００４】
臨床試験により、cdk経路における変化が予後にとって重要であることが明らかにされている。p16遺伝子の欠失がB細胞リンパ腫［R. Garcia-Sanzら、「サイクリン依存性キナーゼ4阻害遺伝子p16の欠失および再編成はB細胞非ホジキンリンパ腫の予後不良に関連している（Deletion and Rearrangement of Cyclin-Dependent Kinase 4 Inhibitor Gene p16 are Associated with Poor Prognosis in B cell Non-Hodgkin's Lymphomas」、Leukemia、11（11）：1915〜20（1997）］および小児急性リンパ芽球性白血病［例えば、U.R. Keesら「小児急性リンパ芽球性白血病におけるp16/MTS1遺伝子の同型接合欠失は臨床転帰不良に関連している（Homozygous Deletion of the p16/MTS1 Gene in Pediatric Acute Lymphoblastic Leukemia is Associated with Unfavorable Clinical Outcome）」、Blood、89（11）：4161〜6（1997）］の予後不良に関連していることが示されている。サイクリンD1の高発現から、小児ALLの早期再発が予測されることも明らかにされている。［U.R. Keesら、「小児白血病および対応する細胞株におけるp16遺伝子の欠失（Deletions of the p16 Gene in Pediatric Leukemia and Corresponding Cell Lines）」、Oncogene、12（10）：2235〜9（1996）。］cdk1の高発現からは、前立腺癌の再発が予測される。［B.V. Kallakuryら、「前立腺癌におけるp34cdc2およびサイクリンD1蛋白質発現の予後に対する重要性（The Prognostic Significance of p34cdc2 nd Cyclin D1 Protein Expression in Prostate Adenocarcinoma）」、Cancer、80（4）：753〜63（1997）。p21が発現されない場合には、胃癌手術後の再発のリスクが有意に高まった。M. Ogawaら、「p21WAF1/CIP1発現の欠落は胃癌の進行と相関する（Loss of p21WAF1/CIP1 Expression Correlates with Disease Progression in Gastric Carcinoma）」、Br. J. Cancer、75（11）：1617〜20（1997）。］p27の発現が高くなるほど、乳癌［例えば、C. Catzavelら、「p27KIP1蛋白質の細胞周期阻害因子のレベル低下：原発性乳癌における予後との関係（Decreased Level of the Cell-Cycle Inhibitor of p27KIP1 Protein: Prognostic Implication in Primary Breast Cancer）」、Nat. Med.、3（2）：227〜30（1997）］、および非小細胞肺癌［V. Esposite、「非小細胞肺癌におけるサイクリン依存性キナーゼ阻害因子p27の予後に対する役割（Prognostic Role of the Cyclin-Dependent Linase Inhibitor p27 in Non-Small Lung Cancer）」、Cancer Res.、57（16）：3381〜5（1997）］における生存期間が長くなるという相関性が見られた。
【０００５】
アテローム性動脈硬化症も、細胞過増殖に関連するもう一つの疾患である。血管平滑筋細胞増殖の重要なシグナルは、cdk2と、関連の調節サブユニット、サイクリンEおよびサイクリンAの発現増大である。［例えば、C. Ihlingら、「ヒトアテローム硬化性組織におけるサイクリン依存性キナーゼ阻害因子P21、p53の蓄積、および細胞増殖の間の局所解剖学的関連（Topographical Association Between the Cyclin-Dependent Kinases Inhibitor P21, p53 Accumulation, and Cellular Proliferation in Human Atherosclerotic Tissue）」、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、17（10）：2218〜24（1997）。］このことは、閉塞性動脈疾患の原因であることが知られているホモシステインが高レベルで存在すると、大動脈のcdk活性を増大させるという知見に一致している。［B. Lubecら、「ラット大動脈組織においてホモシステインはサイクリン依存性キナーゼを増加させる（Homocysteine Increases Cyclin-dependent Kinase in Aortic Rat Tissue）」、Circulation、94（10）：2620〜5（1996）。］cdk2の関与も、アンチセンスcdk2オリゴヌクレオチドが移植冠動脈硬化症を予防しうるという報告に一致している。［J. Suzukiら、「アンチセンスcdk2キナーゼオリゴヌクレオチドによる移植冠動脈硬化症の予防（Prevention of Graft Coronary Arteriosclerosis by Antisense cdk2 Kinase Oligonucleotide）」、Nat. Med.、3（8）：900〜3（1997）。］
【０００６】
cdk阻害物質が治療上有用でありうるという証拠が得られている他の疾患には、メサンギウム増殖性糸球体腎炎［J.W. Pippinら、「新規サイクリン依存性キナーゼ拮抗物質ロスコビチンを用いた、実験的メサンギウム増殖性糸球体腎炎における核細胞周期カスケードのインビボでの直接阻害（Direct in vivo Inhibition of the Nuclear Cell Cycle Cascade in Experimental Mesangial Proliferative Glomerulonephritis with Roscovitine, a Novel Cyclin-Dependent Kinase Antagonist）」、J. Clin. Invest.、1900（9）：2512〜20（1997）］、ヒトサイトメガロウイルス感染症［W.A. Bresnahanら、「細胞cdk2活性の阻害によりヒトサイトメガロウイルスの複製が阻止される（Inhibition of Cellular cdk2 Activity Blocks Human Cytomegalovirus Replication）」、Virology、231（2）：239〜47（1997）］、およびマラリア［R. Graeserら、「熱帯熱マラリア原虫蛋白質キナーゼ5とマラリア核分裂周期（Plasmodium Falciparum Protein Kinase 5 and the Malarial Nuclear Dibision Cycles）」、Mol. Biochem. Parasitol.、82（1）：37〜49（1996）］が含まれる。タウ蛋白質の異常なリン酸化はアルツハイマー病の特徴である。最近の報告により、このようなリン酸化は、少なくとも部分的には、脳cdk5によって実施されることが明らかにされている［例えば、A. Senguptaら、「cdk5によるヒトタウのGSK-3-触媒アルツハイマー様リン酸化の強化（Potentiation of GSK-3-Catalyzed Alzheimer-like Phosphorylation of Human tau by cdk5）」、Mol. Cell. Biochem.、167（1〜2）：99〜105（1997）］。cdk5の阻害物質は、疾患の治療において有用であると考えられる。
【０００７】
多くの疾患の治療においてcdk阻害物質が役割を果たす可能性があることから、すべてのcdkまたはそのいくつかを阻害する小分子を見つけだす努力がなされてきた。cdkを特異的に阻害するいくつかの小分子が発見されている。これらには、プリン類似体のオロモウシン、ロスコビチン、およびCVT-313；フラボノイドのフラボピリドール；ならびにブチロラクトンIが含まれる。他にもスタウロスポリン、UCN-01、およびスラミンを含む強力なcdk阻害物質が知られているが、これらの化合物は他の蛋白質キナーゼの強力な阻害物質でもある。オロモウシン、ロスコビチン、およびフラボピリドールを含むいくつかの特異的cdk阻害物質について、cdk2との複合体中での結晶構造が調べられている。特異的cdk阻害剤であるフラボピリドールは臨床試験にたどりついており［H.H Sadlacekら、「フラボピリドール（186ー8275、NSC-649890）、腫瘍治療のための新規キナーゼ阻害剤（Flavopiridol (186-8275, NSC-649890), a New Kinase Inhibitor for Tumor Therapy）」、International Jounal of Oncology、9：1143（1996）］、第I相試験でいくつかの腫瘍型において抗腫瘍活性を示し、第II相試験に進もうとしているところである。他の既知のcdk阻害物質はすべて、培養中の腫瘍細胞の増殖を阻害することが示されているが、フラボピリドールほど強力なものはない。これらの化合物について、インビボでの抗腫瘍試験は報告されていないが、イヌの自然発生黒色腫でオロモウシンに対する反応の逸話的報告がなされている。
【０００８】
いくつかのcdk阻害物質は、他の疾患モデルにおいて活性が認められている。動物実験により、CVT-313はラット再狭窄モデルにおいて新内膜増殖の効果的な阻害剤であることが明らかにされている。［E.E. Brooksら、「CVT-313、新内膜増殖を予防するCDK2の特異的かつ強力な阻害剤（CVT-313, a Specific and Potent Inhibitor of CDK2 that Prevents Neointimal Proliferation）」、J. Biol. Chem.、272（46）：29207〜11（1997）。］ロスコビチンはラット糸球体腎炎モデルで腎機能を改善し、培養中のヒトサイトメガロウイルス複製の阻害物質であると報告されている。ロスコビチンは、マラリア寄生虫である熱帯熱マラリア原虫（plasmodium falciparum）におけるDNA合成も阻害する。R. Graserら、上記。
【０００９】
7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンは既知の化合物である。この化合物はもとはコンラッド博士（Conrad Kunick）によって、次いでPharmazeutisches Institut der Universitat Bonnで合成された。C. Kunick、「7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オネンおよび6,11-ジヒドロ-インドロ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オンの合成（Synthese von 7,12-dihydro-indolo[3,2-d][1]benzazepin-6(5H)-onen und 6,11-dihydro-indolo[3',2':2,3]azepino[4,5-b]indol-5(4H)-on）」、Arch. Pharm. (Weinheim)、325：297〜299（1992）。
【００１０】
前述の説明から、既知のサイクリン依存性キナーゼ阻害物質は細胞増殖性疾患および／または蛋白質リン酸化異常疾患の治療に有用であることが明らかである。しかし、新しく強力で、好ましくは選択的なcdk阻害物質がいまだに必要とされている。
【００１１】
概要
本発明は、ヒト腫瘍細胞株アッセイ法において抗増殖活性も認められている、サイクリン依存性キナーゼ阻害物質の新しいクラスを提供する。これらの化合物は典型的には下記の式を満たす：
【化７】
0004555476.tif 000002
上式で、Aは単結合または二重結合によって環に結合されている酸素または硫黄である。YおよびZは共役環であり、Y環はアルコキシ、アミノ、アシル、脂肪族置換基、特にアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基、さらにより特定的には低級脂肪族置換基、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、ならびにイミノからなる群より選択される置換基R1で置換された、少なくとも1個の炭素原子を有し、R2は水素、ベンジル、低級アルキル、および低級アルキルエステルからなる群より選択され、Z環は水素、低級脂肪族置換基、特に低級アルキル置換基、または環状アルキルからなる群より選択される置換基R3を有する。本明細書において用いられる「低級」とは典型的に、鎖中に10個以下の炭素原子を有する化合物または置換基を意味し、そのような置換基または化合物のすべての位置異性体、幾何異性体および立体異性体を含む。さらに、R1およびR2が水素であり、Z環が6員環に縮合した5員環を含む場合、該6員環は臭素以外の置換基を含む。Aは最も典型的には二重結合で、これまでに製造された化合物の大多数は酸素に二重結合したAを有する。
【００１２】
本発明の化合物のほとんどは、下記の式をさらに満たす：
【化８】
0004555476.tif 000003
上式で、Aは単結合または二重結合によって環に結合されている酸素または硫黄であり、R2は水素、アリール、低級脂肪族置換基、特にアルキルおよび低級アルキルエステルからなる群より選択され、R4〜R7はアルコキシ、アミノ、アシル、脂肪族置換基、特にアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基、脂肪族アルコール、特にアルキルアルコール、脂肪族ニトリル、特にアルキルニトリル、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、イミノならびにα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択され、R8〜R11は脂肪族置換基、特にアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基、特に低級脂肪族置換基、脂肪族アルコール、特にアルキルアルコール、アルコキシ、アシル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル、ハロゲン、水素ならびにヒドロキシルからなる群より個別に選択され、かつR12は脂肪族の基、特に低級アルキル基、脂肪族アルコール、特にアルキルアルコール、カルボン酸、および水素からなる群より選択される。これらの式を満たす化合物の特定の例は下記の基を有する：H、-CH2COOCH3、-CH3、および-CH2Phからなる群より選択されるR2、好ましくは水素と；アルコキシ、アミノ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシルおよびイミノ、低級脂肪族アルコール、低級脂肪族ニトリル、およびα、β不飽和ケトン、シアノ基、ならびにニトロ基、特に-H、-OH、-C(=NH)NH2、-CO2H、-Brおよび-OCH3からなる群より個別に選択されるR4〜R7と；アルコール、アルコキシ、アシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、シアノ、ニトロ、エポキシ、ハロアルキル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、および低級アルキル、特に-H、ハロゲン、-OH、-CH2OH、-CH2CHOCH2、-CH2CH2CHOCH2、-CF3および-OCH3からなる群より個別に選択されるR8〜R11と；アルコール、カルボン酸、水素および低級アルキル基、特に-H、-CH2CH2OH、-CH3および-CH2CH3からなる群より選択されるR12。
【００１３】
本発明はまた、前述の式を満たす一つまたは複数の化合物の有効な量を含む組成物も提供する。そのような組成物は、不活性担体、賦形剤、診断薬、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定化剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、潤滑剤、他の活性成分、薬学的組成物の調合において都合よく用いられる他の物質、およびその混合物をさらに含んでいてもよい。
【００１４】
対象者における過増殖性細胞および／もしくは腫瘍細胞などの生細胞の増殖を阻害する、または対象者の新生物を治療するための方法も提供される。この方法は第一に、前述の一つもしくは複数の化合物、または一つもしくは複数の化合物を含む組成物を提供することを含む。次いで、一つもしくは複数の化合物または一つもしくは複数の組成物の有効な量を対象者に投与して、生細胞の増殖を阻害する。一つもしくは複数の化合物または一つもしくは複数の組成物を投与することは一般に、局所、経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、腹腔内、病巣内、または静脈内に投与することを含む。現在のところ好ましい投与方法は静脈内投与である。有効な量は、対象者が耐容することができるだけの量でなくてはならないが、典型的には化合物約0.1グラムから約3.0グラムで、1回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから約400mg、好ましくは1回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから約50mgである。
【００１５】
詳細な説明
本発明の化合物は特異的cdk阻害物質であり、ヒト腫瘍細胞株アッセイ法において顕著な生物活性も有している。下記文中で、本発明の化合物の製造法、そのような化合物を含む薬学的組成物、ならびに癌、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、およびマラリアなどの細胞増殖性疾患、蛋白質リン酸化異常疾患および／または感染症を治療するためのそのような化合物の投与法について記載する。
【００１６】
I.  化合物
A.  一般分子式
本発明の化合物は一般に、下記の式1を満たす。
【化９】
0004555476.tif 000004
式1に関して、Aは単結合または二重結合、典型的には二重結合によってB環に結合されている酸素または硫黄である。Aが単結合である場合、Aはそれに結合されている水素または低級脂肪族基、特に低級アルキル基も含む。YおよびZは共役環または共役複素環であり、一般には個別に5または6員環である。「共役」とは、環が二重結合またはO、SもしくはNなどの孤立電子対を有するヘテロ原子から1つの単結合によって隔てられた少なくとも1つの二重結合、または単結合によって隔てられた複数の二重結合を有することを意味する。別に規定する場合を除き、「環」という用語は、環構造を形成する炭素原子だけを有する環、ならびに環構造を形成するヘテロ原子を含む環、すなわち複素環を含む。本発明に従って製造される化合物の実用的な例には、Y環としてベンゼン環およびチオフェンが含まれ、Z環にはピロリジンおよびピリジンが含まれる。
【００１７】
YおよびZはまた、縮合環構造を含むこともできる。例えば、下記にさらに詳細に記載するとおり、式1を満たす化合物クラスの一例は、6員環に縮合した5員環を含むZ環を有する。環構造のその他の例を下記の表1に示す。
【００１８】
YおよびZはまた、それに結合された水素以外の置換基を含むこともできる。式1を満たす化合物の例は、置換基R1が結合された少なくとも1個の炭素原子を有するY環を含む。R1は典型的には、アシル、脂肪族置換基、特にアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基、シアノ、ニトロ、アルコキシ（例えば、RO-）、アミノ（例えば、1級、2級および3級アミンを含むNR2）、カルボキシル（-CO2H）、ハロゲン、水素、ヒドロキシルおよびイミノ［炭素−窒素二重結合を有する窒素含有有機原子団］からなる群より選択される。本発明の特定の化合物は、H、-OH、-C(=NH)-NH2、-CO2H、Brおよび-OCH3からなる群より選択されたR1基を含んでいる。
【００１９】
R2は典型的には、水素、アリール、低級脂肪族、特に低級アルキル、アルキルアリール、例えばベンジル、および低級アルキルエステルからなる群より選択される。式1のアミド窒素に結合された特定の基の例には、H、-CH2COOCH3、-CH3および-CH2Phが含まれる。
【００２０】
式1を満たす化合物は、置換基R3が結合された少なくとも1個の炭素原子を有するZ環を含む。R3は一般的には、水素、低級アルキルまたは環状アルキル、例えばシクロヘキシルからなる群より選択される。さらに、R1およびR2が水素であり、Z環が6員環に縮合した5員環を含む場合、該6員環は臭素以外の置換基を含む。
【００２１】
式1は本発明の化合物の一般式であるが、本発明の化合物のほとんどは式2をさらに満たす。
【化１０】
0004555476.tif 000005
式2に関して、Aは単結合または二重結合、一般的には二重結合によってB環に結合されている酸素または硫黄である。R2は水素、アシル、脂肪族置換基、特にアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基、さらにより特定的には低級アルキル置換基、シアノ、ニトロ、アリール、および低級アルキルエステルからなる群より選択され、好ましくは水素である。R4〜R7はアルコキシ、アミノ、カルボキシル、ハロゲン、水素、ヒドロキシル、イミノ、脂肪族アルコール、特に低級アルキルアルコール、脂肪族ニトリル、特に低級脂肪族ニトリル、およびα、β不飽和ケトンからなる群より個別に選択される。R4〜R7の特定の例には、-H、-OH、-C(=NH)NH2、-CO2H、シアノエチル、3-ヒドロキシ-1-プロピニル、2-オキソ-1-ブテニル、2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニル、ハロゲン、特に-Br、および-OCH3が含まれるが、これらに制限されることはない。R8〜R11は脂肪族アルコール、特に低級アルキルアルコール、アルコキシド、アシル置換基、脂肪族置換基、特にアルキル、アルケニルおよびアルキニル置換基、さらにより特定的には低級アルキル置換基、シアノ、ニトロ、エポキシド、α、β不飽和カルボニルを有する基、エーテル、ハロアルキル（例えば、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル）などのハロ脂肪族置換基、ハロゲン、水素、およびヒドロキシルからなる群より個別に選択される。R8〜R11の特定の例には、-H、-CN、Br、Cl、およびF、-OH、-CH2OH、-CH2CHOCH2（プロピレンオキサイド）、-CH2CH2CHOCH2（ブチレンオキサイド）、-CF3、ならびに-OCH3が含まれるが、これらに制限されることはない。
【００２２】
R12は一般に、低級脂肪族、特に低級アルキル、低級脂肪族アルコール、特に低級アルキルアルコール、カルボン酸、および水素からなる群より選択される。R12の特定の例には-H、-CH2CH2OH、-CH3、および-CH2CH3が含まれるが、これらに制限されることはない。
【００２３】
式1と2の両方を満たす化合物の例は、7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-クロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-クロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、10-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-ブロモ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-4-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-4-ヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-4-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-チオン、9-ブロモ-5,12-ビス-(t-ブチルオキシカルボニル)-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-12-(t-ブチルオキシカルボニル)-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-5,7-ビス-(t-ブチルオキシカルボニル)-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-5,7,12-トリ-(t-ブチルオキシカルボニル)-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-5-メチルオキシカルボニルメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-メチルオキシカルボニルメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-(2-ヒドロキシエチル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2,9-ジブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8,10-ジクロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-5-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、5-ベンジル-9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-5-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-12-エチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-(2-プロペニル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-9-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-9-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-フルオロ-7,12-ジヒドロ-12-(2-プロペニル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2-(メチルイミノアミン)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2-(カルボン酸)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-10-ヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-11-ヒドロキシメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-4-ヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンおよび7,12-ジヒドロ-2,3-ジヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2,3-ジメトキシ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2,3-ジメトキシ-9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル),9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ヨード-9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-(3-オキソ-1-ブテニル),9-トリフルオロメチル-7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ヨード,9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-ピリド[3',2':4,5]ピロロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-メチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-[2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニル],9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ヨード-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-エチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-ブロモ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、8-クロロ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、8-メチル-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-プロピオニトリル、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-アクリロニトリル、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)アクリル酸メチルエステルからなる群より選択することができるが、これらに制限されることはない。
【００２４】
本発明の化合物のその他の例を、下記の式3〜5で示す。
【化１１】
0004555476.tif 000006
【化１２】
0004555476.tif 000007
【化１３】
0004555476.tif 000008
【００２５】
B.  化合物の合成
式1の基本環構造を得るためにはいくつかの合成アプローチがある。記載する7,12-ジヒドロインドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの第一の既知の例は、下記のスキーム1に示すラクタムで、イボガアルカロイドのセレニウム脱水素生成物を合成する一連の反応の中間体として合成された。このラクタムは11段階の手順を経て得られ、最終段階はスキーム1に示すラクタム前駆体のトシル保護基の切断によって開始されるラクタム環閉環であった。
【式１】
0004555476.tif 000009
【００２６】
7,12-ジヒドロインドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンを合成するための一つの方法は、下記のスキーム2に示すとおりKunickによって報告された。
【式２】
0004555476.tif 000010
Kunickの方法はフィッシャーのインドール化を用いている。類似化合物の合成がA.P. Kozikowskiのグループによって直後に発表され、彼らは無置換ラクタムをミトコンドリアDBI（ジアゼパム結合阻害剤）受容体複合体の推定リガンドとして調製した。
【００２７】
縮環アゼピノンは[b,d]-縮合アゼピノンの合成における主要中間体である。この構造を得るためのいくつかの戦略が報告されている。[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオンへの一般的経路がWitteおよびBoekelheideによって記載されており［J. WitteおよびV. Boekelheide、「イソキヌクリドンの立体選択的合成（Stereoselective Syntheses of Isoquinuclidones）」、J. Org. Chem.、32：2849〜2853（1972）、この文献は参照として本明細書に組み入れられる］、下記にスキーム3として示す。
【式３】
0004555476.tif 000011
Kunickは段階がより少なく、全収率が高い、別の一般的戦略を報告している。
【式４】
0004555476.tif 000012
式2の環構造に基づき、本発明の化合物の合成は下記の戦略によって達成することができる。
【００２８】
・環Aの置換基導入と、複素環の形成    合成経路中のいくつかの段階で、親電子芳香族置換を介して2位に置換基を結合させることができる。例えば、ハロゲンおよびニトロ置換基を導入することができる。このハロゲンの求核置換によって、またはニトロ化合物由来のジアゾニウム中間体を介して、他の置換基を導入することができる。ハロゲン置換誘導体を用い、パラジウム触媒反応によって、炭素鎖を2位に導入することができる。1、3、および／もしくは4位に一つまたは複数の置換基を有する化合物、または環Aに1個のヘテロ原子を有する化合物に関して、合成系路は適当なアミノ置換芳香族カルボン酸から出発する。この戦略の一例を下記のスキーム5に示す。
【式５】
0004555476.tif 000013
【００２９】
・5位および6位の修飾    5位の窒素置換は塩基存在下でハロゲン化アルキルと反応させることによって達成される。硫化リンとの反応により、硫黄と酸素を交換することができる。このチオラクタムは、5、6位で縮環した化合物のための出発物質、またはヨードメタンとの反応によるメチルチオイミデート合成の出発物質となる。
【００３０】
・D環への置換基の導入    9位もしくは11位への置換基、または適当な前駆基はフェニルヒドラジンに含まれる（スキーム2）。10位の置換は親電子芳香族置換を介して含まれる。9位、10位、または11位のハロゲン置換基、例えば臭素置換基は、ローゼンムント−フォンブラウン反応によって、他の置換基、例えばシアノ基に交換することもできる。臭素置換基はさらに、パラジウム触媒カップリング反応、例えばヘック反応の反応中心として役に立つこともある。9位および11位のメチル置換基は酸化してカルボキシル基とすることもでき、これを公知の方法によって他の官能基、例えばアルコール、エステル、ケトン、アルデヒド、およびこれらに類するものに変換することもできる。
【００３１】
・12位の置換基の導入    12位の窒素は、適当な塩基を用い、ハロゲン化アルキルによって選択的にアルキル化することができる。マンニッヒ反応によってアミノアルキル基を12位に導入することもできる。
【００３２】
・インドール部分C、Dの他の環構造への置換    前述のスキームに示した中間体のアリール-(CO)-CH2モチーフは、様々な複素環構造の縮環のための基本構造を提供する。例えば、次の複素環、すなわちピラゾール、ピリミジン、ピラン、ピリジン、キノリン、およびキノキサリンは、ケト基の求電子性とビシナルの位置にあるCH2基のC、H-酸性度とを用いて、この位置で縮環している。または、ラクタム環閉環戦略を用いて、C、D部分が他の構造に置換されている誘導体を調製することもできる。
【００３３】
一般的合成アプローチに関するその他の情報を、下記の実施例1〜5に示す。特定の化合物の合成を実施例6〜30に記載する。
【００３４】
II.組成物
本明細書に記載の化合物は、ヒトおよび動物（すなわち対象者）に投与して、例えば生細胞、特に過増殖性細胞または腫瘍細胞の増殖を阻害するための組成物に調合することができる。そのような組成物は前述の化合物の「有効な量」を含み、また、不活性担体、賦形剤、診断薬、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定化剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、潤滑剤、他の活性成分、薬学的組成物の調合において都合よく用いられる他の物質、およびその混合物をさらに含んでいてもよい。
【００３５】
本発明の方法は、ヒトまたは動物に一つの化合物、化合物の混合物、または一つの化合物もしくは化合物の混合物の「有効な量」を含む組成物の「有効な量」を投与することを含む。当業者であれば、「有効な量」が変動することを理解すると思われる。現在のところ、「有効な量を投与すること」は、対象者に1回の治療ごとに化合物合計量約0.3グラム〜約3グラム、好ましくは約0.5グラム〜約1グラムの本発明の一つもしくは複数の化合物、または一つもしくは複数の化合物を含む組成物を投与することを含むと考えられている。さらに、典型的には、対象者が化合物または一つもしくは複数の化合物を含む組成物の投与を受け、それに耐容する能力に応じて、可能な限り高用量を対象者に供与することが望ましい。有効な量は、化合物投与を受ける対象者の単位質量あたりの物質の量に関して述べることもできる。現在のところ、本発明におけるそのような用量は、1回の投与につき、対象者の体重1kgあたり約30mg〜約400mgであるべきと考えられている。
【００３６】
ほぼ60の異なる癌細胞株を用いて行った試験（下記の実施例参照）により、本発明の化合物の細胞障害特性は、抗腫瘍薬として有用な他の薬剤と特定の類似点があることが明らかにされている。したがって、そのような既知の抗腫瘍薬の調製に用いられるのと類似の様式で、対象者への投与に適した薬学的不活性担体、賦形剤、およびこれらに類するものに、そのような化合物を加えることは、薬学的製剤を調製する分野の技術者の範囲内であると考えられる。本発明の化合物は、他の抗腫瘍薬で用いられるプロトコルと実質的に類似の投与プロトコルを用いて対象者に投与することができる。
【００３７】
前記化合物または組成物は、局所、経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、腹腔内、病巣内、または静脈内を含むいくつかの方法によって投与することができるが、これらに制限されることはない。現在のところ、前記化合物および組成物を投与するために、経口および静脈内投与が好ましい方法であると考えられている。
【００３８】
III.  生物学的結果
本発明の化合物は、それらの生物活性を調べるために、様々な生物学的分析にもかけられている。生物学的分析にはcdk阻害アッセイ法、および抗癌剤として用いられる可能性がある薬物のスクリーニングのために米国国立がん研究所（National Cancer Institute：NCI）によって採用されている薬物スクリーニング法が含まれる。
【００３９】
A.  酵素阻害アッセイ法
本発明の化合物の酵素阻害活性は、フランス、ロスコフに存在するCNRSのメイヤー博士（Dr. Larent Meijer）が彼のcdk阻害アッセイ法を用いて検定した。このアッセイ法はV. RialetおよびL. Meijerの「p13sucIコーティングしたマイクロタイタープレート上にアフィニティ固定された万能M期特異的プロテインキナーゼ、p34cdc2/サイクリンbcdc13を用いた、有糸分裂阻害化合物のスクリーニング試験（A Screening Test for Antimitotic Compounds Using the Universal M Phase-specific Protein Kinase, p34cdc2/Cyclin bcdc13, Affinity-Immobilized on p13sucI-Coated Microtitration Plates）」、Anticancer Res.、11（4）：1581〜90（1991）に記載されており、この文献は参照として本明細書に組み入れられる。これらのアッセイ法の結果を、下記の表1に示す。表1において置換基だけが記載されている場合、そのような置換基は核となる化合物7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（またはチオン）上の置換基を意味する。それ以外は完全なIUPAC名を示す。下記の既知の化合物のIC50値は、比較のために示している：フラボピリドール＝0.4μM；オロモウシン＝7.0μm；ロスコビチン＝4.2μM；CVT-313＝4.2μM；およびブチロラクトンI＝0.6μM。
【表１】
0004555476.tif 000014
0004555476.tif 000015
0004555476.tif 000016
【００４０】
表1は、本発明の代表例として提示した化合物が強力なcdc2/サイクリンB阻害物質であることを明らかに示している。本発明の化合物のIC50は、典型的には約50μM未満であり、好ましくは約10μM未満、さらに好ましくは約5μM未満、特に好ましい化合物のIC50は約1μM未満である。表1に挙げた最初の12の化合物では、IC50はほとんどの既知の化合物よりも低く、約0.3μM以下の範囲である。現在のところ、9-シアノ化合物がcdc2/サイクリンBの阻害効果に関して最良の既知化合物である。IC50が約10μM未満である本発明の好ましい化合物は、9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2,9-ジブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-クロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-ブロモ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、7,12-ジヒドロ-9-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、10-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-クロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-フルオロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-メチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-チオン、8,10-ジクロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-(2-ヒドロキシエチル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジヒドロキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-5-メチルオキシカルボニルメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-ピリド[3',2':4,5]ピロロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-メチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-[2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニル],9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ヨード-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、11-エチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-メチル-6,11-ジヒドロチエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、2-CH=CH-COOCH3,9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、-シアノ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インド��[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-2-CH2CH2-CN-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-シアノ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-2-CH=CH-CN-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ヨード-9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-2-(3-オキソ-1-ブテニル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-ブロモ-6,11-ジヒドロチエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、8-クロロ-6,11-ジヒドロチエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-OCH3-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、12-CH2COOMe-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、および6=S-9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンからなる群より選択することができる。
【００４１】
cdk阻害のための特に好ましい化合物は約1μM未満のIC50を有する。これらの化合物には、9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2,9-ジブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-クロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-ブロモ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、7,12-ジヒドロ-9-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、（緑の化合物はIUPAC名が必要である）2,3-ジメトキシ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2,3-ジメトキシ,9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-CH2CH2-CN,9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ブロモ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-CH=CH-CN,9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル),9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-ヨード-9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、2-(3-オキソ-1-ブテニル),9-トリフルオロメチル-7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-クロロ-6,11-ジヒドロチエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オン、2-ヨード,9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン、8-ブロモ-6,11-ジヒドロチエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オンおよび9-OCH3-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンが含まれる。
【００４２】
B.  インビトロヒト腫瘍細胞株アッセイ法
ヒト腫瘍細胞株スクリーニング法は、疾患特異的サブパネルに組織された約60の異なるヒト腫瘍細胞株からなる多様な疾患指向パネルを用いる。本発明の化合物を、パネルを構成する細胞株に対する細胞障害または増殖阻害効果について、一定の濃度範囲で試験した。8つのサブパネルは異なる組織構造に相当する（白血病、黒色腫、肺癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、卵巣癌および脳腫瘍）。
【００４３】
本発明の化合物を、数日間にわたり試験した。この期間中、細胞を様々な濃度の試験化合物に曝露した。この試験により、各細胞株ごとに1つ（すなわち各例ごとに1つ）の個別の用量反応が得られ、データを用量反応曲線で示す。これらの用量反応曲線によって提示されたデータを、図1〜30に示した平均−グラフ形式を用いてまとめている。
【００４４】
平均−グラフ形式のためのデータを得るために、各細胞株について標的となるレベルの反応を引き出した化合物濃度を計算した。3つの異なる反応パラメーターを評価した。第一の反応パラメーターは増殖阻害（「GI50」）であった。GI50は、インキュベーション期間終了時に、腫瘍細胞の数を対照腫瘍細胞（本発明の化合物に曝露していない）に比べて見かけ上50％低下させる、本発明にしたがって製造した化合物の濃度である。
【００４５】
第二の反応パラメーターは全増殖阻害（「TGI」）であった。TGIは、インキュベーション期間終了時に残存している腫瘍細胞数がインキュベーション期間開始時に存在している腫瘍細胞数と実質的に等しくなる濃度である。
【００４６】
第三の反応パラメーターは致死濃度（「LC50」）であった。LC50は、腫瘍細胞の数をインキュベーション期間開始時に存在していた腫瘍細胞数に比べて見かけ上50％低下させる、本発明にしたがって製造した化合物の濃度である。
【００４７】
典型的なGI50平均グラフ（例えば、図2の左図）において、化合物に対して試験したすべての細胞株について、負のlog10GI50値を平均することにより、垂直基準線の水平濃度軸にそった相対位置が得られた。次いで、垂直基準線に対し、各細胞株の個々の負のlog10GI50値について水平バーをプロットした。したがって、GI50グラフから、化合物についての特徴的フィンガープリントが得られ、これは平均に比べて比例的に感受性が高い（基準線の右側に伸びているバー）または平均に比べて比例的に感受性が低い（基準線の左側に伸びているバー）個々の細胞株を示している。
【００４８】
TGI（中央図）およびLC50（右図）についても、同様の平均グラフを図2に示している。
【００４９】
図1〜30は、本発明の代表例となる特定の化合物についての平均グラフ形式を提示している。これらの図は、前述の式1および2を満たす化合物がヒト腫瘍細胞の増殖阻害に有用であることを明らかに示している。ヒト腫瘍細胞アッセイ法からの特定の結果を下記の表2にまとめている。
【００５０】
【表２】
本発明の化合物によるNCIキャンセル・セル・スクリーン(NCI Cancel Cell Screen)の細胞株に対するインビトロ抗腫瘍活性：GI50［μM］
0004555476.tif 000017
0004555476.tif 000018
0004555476.tif 000019
【００５１】
表2は、式1および2を満たす化合物が強力なサイクリン依存性キナーゼ阻害物質であるだけでなく、ヒト腫瘍細胞の強力な増殖阻害物質であることを示している。
【００５２】
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンに関して、その他の生物活性に関する情報が得られている。例えば、ヒト腫瘍細胞株スクリーンにおいても試験されており、あまり強くはないが分化活性を示した。この化合物の全体のGI50は43μMで、いくつかの結腸株（HCT-116およびKM12）、ならびにCNS株（SF-539）で最も活性が強かった。この化合物は2つの細胞株、HCT-116およびSF-539では増殖を完全に阻害することもでき、その濃度はいずれも28μMであった。
【００５３】
指数関数的に増殖するSUDHL-4細胞を9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンに48時間曝露した。この化合物の細胞増殖に対するIC50は約3μMである。これらの細胞の細胞周期分析により、顕著なG2/M停止が認められ、これはcdk1の阻害と一致している。
【００５４】
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの予備的毒性試験により、最大耐容1回用量は約400mg/Kgであることが明らかにされている。
【００５５】
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンを用いて中空糸分析も行われた。これらの試験より、この化合物は中空糸アッセイ法で実質的な増殖阻害、すなわち、腹腔内植え込み線維では150mg/Kgで56％の阻害、皮下植え込み線維では150mg/Kgで98％の阻害を示すことが明らかにされている。インビボ試験に用いた方法については、下記の実施例31を参照されたい。データは、実施例31のプロトコルに従い、各細胞株に対する2段階の化合物用量それぞれについて、腹腔内および皮下試料について別々に計算した値により％T/Cで報告しており、％T/Cの標的値は約50以下である。
【００５６】
IV.  実施例
下記の実施例は本発明の特定の特徴を例示するために示すものである。これらの実施例によって、本発明が例示された特定の特徴に限定されると解釈されるべきではない。
【００５７】
実施例1
この実施例は、一般式2を満たす化合物を合成するための一般法について述べる。氷酢酸（10mL）中、適当な1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（6mmol）のスラリーを、油浴、温度計、還流冷却器および磁気撹拌機を備えた丸底フラスコに入れる。適当なフェニルヒドラジン（7mmol）を加えた後、混合物を撹拌しながら70℃で1時間加熱する。室温まで冷却後、濃硫酸（0.56mL）を加え、混合物を70℃で示された反応時間撹拌する。室温まで冷却後、混合物を10％酢酸ナトリウム水溶液（50mL）に注ぐ。沈殿が生じ、これを吸引濾過し、再結晶またはカラムクロマトグラフィーによって精製する。
【００５８】
実施例2
この実施例は、一般式2を満たす化合物を合成するための第二の一般法について述べる。氷酢酸（2mL）中、適当な1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（1mmol）のスラリーを、油浴、温度計、還流冷却器および磁気撹拌機を備えた丸底フラスコに入れる。氷酢酸（5mL）中、酢酸ナトリウム（123mg、1.5mmol）および適当な置換フェニルヒドラジン（1.5mmol）または適当な塩酸フェニルヒドラジン（1.5mmol）の懸濁液を撹拌しながら滴下する。70℃で1時間撹拌後、混合物を室温まで冷却する。濃硫酸（0.1mL）を加え、混合物を70℃で1時間撹拌する。室温まで冷却後、混合物を5％酢酸ナトリウム水溶液（15mL）に注ぐ。沈殿が生じ、これを吸引濾過し、所与の溶媒から再結晶によって精製する。
【００５９】
実施例3
この実施例は、一般式2を満たす化合物を合成するための第三の一般法について述べる。氷酢酸（5mL）中、1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（528mg、3mmol）の懸濁液に、氷酢酸中、適当な置換フェニルヒドラジン（3.5mmol）および酢酸ナトリウム（287mg、3.5mmol）の懸濁液を撹拌しながら滴下する。混合物を70℃で1時間撹拌し、次いで室温まで冷却する。濃硫酸（0.25mL）を加え、混合物を70℃で1時間撹拌する。混合物を室温まで冷却し、次いで5％酢酸ナトリウム水溶液（50mL）に注ぐ。沈殿が生じ、これを吸引濾過し、精製する。
【００６０】
実施例4
この実施例は、一般式2を満たす化合物を合成するための第四の一般法であって、メトキシ化合物の切断によるフェノールの合成を含む方法について述べる。三臭化ホウ素（1002mg、4mmol）を適当なメトキシ化合物（1mmol）の塩化メチレン（10mL）溶液に加えた。混合物を磁気撹拌機によって撹拌し、反応を薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、溶出液アセトン／トルエン1：1）でモニターした。出発物質のメトキシ化合物によるスポットが検出されなくなった時点で、水（10mL）を加え、混合物を1時間撹拌した。固体が生じ、これを吸引濾過し、水洗し、精製のために再結晶させた。
【００６１】
実施例5
この実施例は、一般式2を満たす化合物を合成するための第五の一般法であって、ハロゲン化アルキルとの反応を含む方法について述べる。粉末水酸化カリウム（45mg、1mmol）を、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（327mg、1mmol）の無水アセトン（120mL）溶液に、氷浴で冷却し、撹拌しながら加えた。混合物を0℃で1時間撹拌後、適当なハロゲン化アルキル（10mmol）を加え、撹拌を室温で3日間続けた。水（120mL）を加えた後、固体が生じ、これを濾過し、エタノール／トルエンから再結晶させた。
【００６２】
実施例6
この実施例は、9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化１４】
0004555476.tif 000020
前述の実施例2の一般法を用い、9-シアノ誘導体合成のための前駆体として、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンをまず合成した。合成は1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（1.05g）および4-ブロモ-フェニルヒドラジン（1.31g）を用い、反応時間1時間で実施した。淡黄色結晶を58％の収率で得た：融点＞330℃（1,4-ジオキサン）；
0004555476.tif 000021
【００６３】
ジメチルホルムアミド（15mL）中、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（327mg、1mmol）およびシアン化銅（I）（180mg、2mmol）の混合物を12時間還流させた。室温まで冷却後、水（20mL）を加えた。沈殿を吸引濾過し、水洗し、次いで水（25mL）および1,2-ジアミノエタン（40mL）の混合物に懸濁した。15分間撹拌後、固体を吸引濾過し、10％シアン化ナトリウム水溶液で2回洗浄し、エタノール／トルエンから2回再結晶させて、収率42％で無色結晶を得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000022
【００６４】
実施例7
この実施例は、7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化１５】
0004555476.tif 000023
合成は1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（175mg、1mmol）およびトリフルオロメチルフェニルヒドラジン（264mg、1.5mmol）を用い、前述の実施例2の一般法に従って実施した。この反応により、エタノールからクリーム色の結晶を33％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000024
【００６５】
実施例8
この実施例は、7,12-ジヒドロ-9-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化１６】
0004555476.tif 000025
合成は塩酸4-メチルフェニルヒドラジン（555mg、3.5mmol）を用い、前述の実施例3の一般法に従って実施した。反応収率は、エタノールからの再結晶後、クリーム色の結晶59％であった。融点＞330℃；
0004555476.tif 000026
【００６６】
実施例9
この実施例は、7,12-ジヒドロ-9-メトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化１７】
0004555476.tif 000027
【００６７】
合成は塩酸4-メトキシフェニルヒドラジン（611mg、3.5mmol）を用い、前述の実施例3の一般法に従って実施した。カラムクロマトグラフィ（シリカゲル60A、100〜200メッシュの6cmカラム、溶出液塩化メチレン）での精製により、クリーム色の粉末を48％の収率で得た。融点＞330℃（290℃で収縮開始）；
0004555476.tif 000028
【００６８】
実施例10
この実施例は、9-フルオロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化１８】
0004555476.tif 000029
【００６９】
合成は塩酸4-フルオロフェニルヒドラジン（569mg、3.5mmol）を用い、前述の実施例4の一般法に従って実施した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル60A、100〜200メッシュの6cmカラム、溶出液塩化メチレン）での精製により、クリーム色の粉末を52％の収率で得た。融点＞330℃（180℃で収縮開始）；
0004555476.tif 000030
【００７０】
実施例11
この実施例は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化１９】
0004555476.tif 000031
【００７１】
調製は7,8-ジメトキシ-1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（235mg、1mmol）および塩酸4-ブロモフェニルヒドラジン（336mg、1.5mmol）から、前述の実施例2の一般法に従って実施し、エタノール／トルエンから赤褐色の結晶を55％の収率で得た。融点＞330℃、
0004555476.tif 000032
【００７２】
実施例12
この実施例は、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２０】
0004555476.tif 000033
【００７３】
合成は7-ブロモ-1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（1.52g）およびフェニルヒドラジン（0.69mL）を用い、反応時間約1時間で、前述の実施例2の一般法に従って実施した。灰白色の結晶（エタノール）を63％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000034
【００７４】
実施例13
この実施例は、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２１】
0004555476.tif 000035
【００７５】
合成は7,8-ジメトキシ-1H-1-ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（235mg、1mmol）および4-トリフルオロメチルフェニルヒドラジン（264mg、1.5mmol）から、前述の実施例2の一般法に従って実施し、淡黄色の結晶を38％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000036
【００７６】
実施例14
この実施例は、2-ブロモ-7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２２】
0004555476.tif 000037
【００７７】
合成は7-ブロモ-1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（254mg、1mmol）および4-トリフルオロメチルフェニルヒドラジン（264mg、1.5mmol）を用い、前述の実施例2の一般法に従って実施し、エタノール／トルエンから無色の結晶を51％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000038
【００７８】
実施例15
この実施例は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-5-メチルオキシカルボニルメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２３】
0004555476.tif 000039
【００７９】
9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（327mg、1mmol）のTHF（35mL）溶液を水素化ナトリウム（24mg、1mmol、60％ホワイト油懸濁液）と共に1.5時間還流させた。ブロモ酢酸エチルエステル（153mg、1mmol）を加え、還流を5時間続けた。室温まで冷却後、水（50mL）を加えた。混合物を塩化メチレン（各20mL）で3回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて残渣とし、これをエタノールから再結晶させて無色の結晶を46％の収率で得た。融点240℃、
0004555476.tif 000040
【００８０】
実施例16
この実施例は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-(2-ヒドロキシエチル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２４】
0004555476.tif 000041
【００８１】
9-ブロモ-12-メチルオキシカルボニルメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（399mg、1mmol）のTHF（80mL）溶液を、撹拌中の水素化アルミニウムリチウム（19mg、0.5mmol）のTHF（10mL）懸濁液に滴下漏斗を用いて加えた。滴下完了後、混合物を2時間還流させた。さらに水素化アルミニウムリチウム（19mg、0.5mmol）を追加し、還流を1時間続けた。室温まで冷却後、水素の発生が終わるまで水を注意深く加えた。（警告：発生した水素は引火性で、発火の可能性もある！）水酸化アルミニウムの沈殿が生じ、これを25％硫酸を滴下することにより再度溶解した。溶液を塩化メチレン（各20mL）で2回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣をエタノールから再結晶させて無色の結晶を48％の収率で得た。融点267℃、
0004555476.tif 000042
実施例17
この実施例は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-メチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２５】
0004555476.tif 000043
【００８２】
合成はヨードメタン（1420mg、10mmol）を用い、前述の実施例5の一般法に従って実施し、エタノール／トルエンから黄色がかった結晶を28％の収率で得た。融点313℃；
0004555476.tif 000044
【００８３】
実施例18
この実施例は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-チオンの合成について述べる。
【化２６】
0004555476.tif 000045
【００８４】
9-ブロモ-7,12-ジヒドロインドロ[3,2-d]-1-ベンズアゼピン-6(5H)-オン（327mg、1mmol）のTHF（30mL）溶液を窒素雰囲気下、50℃で撹拌した。五硫化リン（250mg、1.12mmol）および炭酸水素ナトリウム（370mg、4.4mmol）を順次加えた。窒素雰囲気下で3時間還流させた後、混合物を室温まで戻し、次いで砕氷（50g）上に注いだ。次いで、氷が融けるまで混合物を撹拌し、生じた沈殿を吸引濾過し、水洗して、エタノール／トルエンから再結晶させた。淡黄色の結晶を67％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000046
【００８５】
実施例19
この実施例は、8-ブロモ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オンの合成について述べる。
【化２７】
0004555476.tif 000047
【００８６】
塩酸4-ブロモフェニルヒドラジン（391mg、1.75mmol）および酢酸ナトリウム（144mg、1.75mmol）の氷酢酸（2.5mL）懸濁液を、4H-チエノ[3,2-b]アゼピン-5,8(6H,7H)-ジオン（264mg、1.5mmol）の氷酢酸（2.5mL）懸濁液に滴下した。70℃で1時間撹拌後、混合物を室温まで冷却した。濃硫酸（0.125mL）を加え、混合物を70℃で1.5時間撹拌した。室温まで冷却後、混合物を25％酢酸ナトリウム水溶液（25mL）に注いだ。沈殿が生じ、これを吸引濾過し、エタノール／トルエンから再結晶させて、金属的光沢を持つ結晶を26％の収率で得た。融点＞280℃（288℃以上で分解）；
0004555476.tif 000048
【００８７】
実施例20
この実施例は、9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２８】
0004555476.tif 000049
1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（175mg、1mmol）、塩酸4-ニトロ-フェニルヒドラジン（284mg、1.5mmol）、および酢酸ナトリウム（123mg、1.5mmol）を氷酢酸（10mL）中、70℃で1時間撹拌した。濃硫酸（0.1mL）を加えた後、70℃で撹拌を続けた。撹拌1時間後および2時間後にさらに濃硫酸（各0.1mL）を追加した。反応時間合計4時間後、混合物を室温まで冷却し、5％酢酸ナトリウム水溶液（20mL）に注いだ。沈殿を吸引濾過し、エタノール／トルエンから結晶化させて、黄色結晶を33％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000050
【００８８】
細胞増殖を阻害するために必要な薬物適用の濃度および期間を調べるために、この化合物でインビトロ時間経過アッセイ法を実施した。4つの細胞株（Colo-205、HL-60TB、A-498、UO-31）を、この化合物を含む培地中で、時間を漸増させて培養し、次いで、残りの観察時間は化合物を含まない培地に切り換えた。結果（図31および32に示す）より、この特定の化合物は2〜5μMで全合成阻害を引き起こし（GI50、TGIおよびLC50で測定）、最大の阻害を得るためにこのような短時間曝露で十分であることが示された。化合物に48時間暴露された細胞では、全増殖阻害を得るのに1〜3μMという低い濃度を必要とするにとどまった。これらのデータは、最大細胞増殖阻害を達成する投与計画、すなわち、1日1回45分暴露する場合には化合物の血漿または血中濃度2〜5μMという計画を決定する際に有効である。
【００８９】
実施例21
この実施例は、2-ブロモ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化２９】
0004555476.tif 000051
7-ブロモ-1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（254mg、1mmol）、塩酸4-ニトロ-フェニルヒドラジン（284mg、1.5mmol）、および酢酸ナトリウム（123mg、1.5mmol）を氷酢酸（10mL）中、70℃で1時間撹拌した。室温まで冷却後、混合物を5％酢酸ナトリウム水溶液（20mL）に注いだ。沈殿を吸引濾過し、水洗し、エタノールから結晶化させて、前駆体7-ブロモ-5-(4-ニトロ-フェニルヒドラゾノ)-4,5-ジヒドロ-1H-[1]ベンズアゼピン-2(3H)-オンの黄色結晶を52％の収率で得た。融点300℃（分解）；
0004555476.tif 000052
【００９０】
7-ブロモ-5-(4-ニトロ-フェニルヒドラゾノ)-4,5-ジヒドロ-1H-[1]ベンズアゼピン-2(3H)-オン（389mg、1mmol）をジフェニルエーテル（20mL）中、窒素雰囲気下で2時間還流させた。室温まで冷却後、ヘキサン（50mL）を加えた。沈殿を吸引濾過し、ヘキサンで洗浄し、エタノール／トルエンから結晶化させて、黄褐色の結晶を35％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000053
【００９１】
実施例22
この実施例は、2,3-ジメトキシ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化３０】
0004555476.tif 000054
7,8-ジメトキシ-1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（235mg、1mmol）、塩酸4-ニトロ-フェニルヒドラジン（569mg、3mmol）、および酢酸ナトリウム（246mg、3mmol）を氷酢酸（10mL）中、70℃で1時間撹拌した。室温まで冷却後、混合物を5％酢酸ナトリウム水溶液（20mL）に注いだ。沈殿を吸引濾過し、水洗し、エタノールから結晶化させて、前駆体7,8-ジメトキシ-5-(4-ニトロ-フェニルヒドラゾノ)-4,5-ジヒドロ-1H-[1]ベンズアゼピン-2(3H)-オンの黄色結晶を60％の収率で得た。融点286℃（分解）；
0004555476.tif 000055
【００９２】
7,8-ジメトキシ-5-(4-ニトロ-フェニルヒドラゾノ)-4,5-ジヒドロ-1H-[1]ベンズアゼピン-2(3H)-オン（370mg、1mmol）をジフェニルエーテル（20mL）中、窒素雰囲気下で2時間還流させた。室温まで冷却後、ヘキサン（50mL）を加えた。沈殿を吸引濾過し、ヘキサンで洗浄し、エタノール／トルエンから結晶化させて、黄褐色の結晶を63％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000056
【００９３】
実施例23
この実施例は、2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化３１】
0004555476.tif 000057
【００９４】
2-アミノ-5-ヨード安息香酸メチルエステル（4156mg、15mmol）、ピリジン（1.7mL）およびトルエン（10mL）の混合物を撹拌し、冷却しているところへ、塩化メチルスクシニル（3011mg、20mmol）のトルエン（10mL）溶液を滴下漏斗を用いて滴下した。得られた懸濁液を3時間還流させた。室温まで冷却後、水（15mL）を加えた。有機層を分離し、10％塩酸（5mL）および5％炭酸ナトリウム水溶液（5mL）で順次洗浄した。続いて、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣をエタノールから結晶化させて、前駆体5-ヨード-2-[(4-メトキシ-1,4-ジオキソブチル)アミノ]-安息香酸メチルエステルの無色結晶を72％の収率で得た。融点133℃；
0004555476.tif 000058
【００９５】
水素化カリウム（4g、100mmol）を窒素雰囲気下、トルエン（20mL）で3回洗浄し、次いでトルエン（20mL）に懸濁させた。5-ヨード-2-[(4-メトキシ-1,4-ジオキソブチル)アミノ]-安息香酸メチルエステル（7823mg、20mmol）のN,N-ジメチルホルムアミド（9mL）およびトルエン（80mL）溶液を、窒素雰囲気下で冷却し、撹拌している水素化カリウム懸濁液に、滴下漏斗を用いて滴下した。水素の発生が終わった後、混合物を80℃に加熱し、3時間持続的に撹拌した。室温まで冷却後、氷酢酸（6mL）と、次いで水（60mL）を撹拌しながら注意深く滴下した。得られた懸濁液を氷浴中で15分間撹拌した。沈殿が生じ、これを吸引濾過し、水およびヘキサンで洗浄した。エタノール／トルエンからの結晶化により、前駆体5-ヒドロキシ-7-ヨード-2-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-[1]ベンズアゼピン-4-カルボン酸メチルエステルの無色結晶を41％の収率で得た。融点271℃；
0004555476.tif 000059
【００９６】
5-ヒドロキシ-7-ヨード-2-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-[1]ベンズアゼピン-4-カルボン酸メチルエステル（349mg、1mmol）のジメチルスルホキシド（10mL）溶液に水（0.5mL）を加えた。混合物を窒素雰囲気下、150℃で撹拌した。撹拌1時間後および2時間後にそれぞれ水（0.5mL）を加えた。反応時間合計3時間後、混合物を室温まで冷却し、水（20mL）に注いだ。放置（6℃で12時間）により溶液から固体が沈殿し、これを吸引濾過し、エタノールから結晶化させて、前駆体7-ヨード-1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオンの無色結晶を78％の収率で得た。融点217℃；
0004555476.tif 000060
【００９７】
次に、7-ヨード-1H-[1]ベンズアゼピン-2,5(3H,4H)-ジオン（301mg、1mmol）、4-トリフルオロメチル-フェニルヒドラジン（264mg、1.5mmol）および氷酢酸（10mL）の混合物を70℃で1時間撹拌した。濃硫酸（0.1mL）を加え、1時間撹拌を続けた。次いで、混合物を室温まで冷却し、5％酢酸ナトリウム水溶液（20mL）に注いだ。沈殿を吸引濾過し、水洗し、エタノールから結晶化させて、黄色結晶を50％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000061
【００９８】
実施例24
この実施例は、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-アクリロニトリルの合成について述べる。
【化３２】
0004555476.tif 000062
【００９９】
2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（442mg、1mmol）、アクリロニトリル（531mg、10mmol）、トリエチルアミン（121mg、1.2mmol）、酢酸パラジウム（II）（45mg、0.2mmol）、およびトリフェニルホスフィン（52mg、0.2mmol）を、N,N-ジメチルホルムアミド（30mL）中、窒素雰囲気下、150℃で約8時間、薄層クロマトグラフィ（シリカゲル、トルエン／アセトン1：1）で出発物質の2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンが検出されなくなるまで撹拌した。次いで、反応混合物を熱いうちに濾過し、得られた溶液を蒸発させた。残渣をエタノール（エタノール／トルエンも用いることができる）から結晶化させた。エタノールからの結晶化により、黄色結晶を43％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000063
【０１００】
実施例25
この実施例は、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-プロピオニトリルの合成について述べる。
【化３３】
0004555476.tif 000064
【０１０１】
3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-アクリロニトリル（367mg、1mmol）、マグネシウム旋削（972mg、40mmol）、およびメタノール（50mL）の混合物を1時間還流させた。室温まで冷却後、10％塩酸を加えることによって混合物を中和した。次いで、この混合物を塩化メチレン（各20mL）で5回抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。残渣をエタノールから結晶化させることにより、淡黄色の結晶を51％の収率で得た。融点286℃；
0004555476.tif 000065
【０１０２】
実施例26
この実施例は、2-(3-オキソ-1-ブテニル)-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化３４】
0004555476.tif 000066
【０１０３】
2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（442mg、1mmol）、メチルビニルケトン（701mg、10mmol）、トリエチルアミン（121mg、1.2mmol）、酢酸パラジウム（II）（45mg、0.2mmol）、およびトリフェニルホスフィン（52mg、0.2mmol）を、N,N-ジメチルホルムアミド（30mL）中、窒素雰囲気下、150℃で約4時間、薄層クロマトグラフィ（シリカゲル、トルエン／アセトン1：1）で出発物質の2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンが検出されなくなるまで撹拌した。次いで、反応混合物を熱いうちに濾過し、得られた溶液を蒸発させた。残渣をエタノール（エタノール／トルエンも用いることができる）から結晶化させ、黄色結晶を48％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000067
【０１０４】
実施例27
この実施例は、2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル)-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化３５】
0004555476.tif 000068
【０１０５】
2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（221mg、0.5mmol）、プロパルギルアルコール（112mg、2mmol）、ビス-(トリフェニルホスフィン)-パラジウム（II)-ジクロライド（7mg、0.01mmol）、およびヨウ化銅（I）（3.8mg、0.02mmol）を、トリエチルアミン（10mL）中、窒素雰囲気下、50℃で約5時間、薄層クロマトグラフィ（シリカゲル、トルエン／アセトン1：1）で出発物質の2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンが検出されなくなるまで撹拌した。次いで、アセトン（25mL）を加えた。続いて、混合物を濾過し、得られた溶液を蒸発させた。残渣をエタノールから結晶化させ、黄色結晶を59％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000069
【０１０６】
実施例28
この実施例は、2-[2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニル]-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの合成について述べる。
【化３６】
0004555476.tif 000070
【０１０７】
2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（221mg、0.5mmol）、1-エチニル-1-シクロヘキサノール（248mg、2mmol）、ビス-(トリフェニルホスフィン)-パラジウム（II)-ジクロライド（7mg、0.01mmol）、およびヨウ化銅（I）（3.8mg、0.02mmol）を、トリエチルアミン（10mL）中、窒素雰囲気下、50℃で約1時間、薄層クロマトグラフィ（シリカゲル、トルエン／アセトン1：1）で出発物質の2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンが検出されなくなるまで撹拌した。次いで、アセトン（25mL）を加えた。続いて、混合物を濾過し、得られた溶液を蒸発させた。残渣をエタノールから結晶化させ、無色結晶を55％の収率で得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000071
【０１０８】
実施例29
この実施例は、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-アクリル酸メチルエステルの合成について述べる。
【化３７】
0004555476.tif 000072
【０１０９】
2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（442mg、1mmol）、アクリル酸メチルエステル（861mg、10mmol）、トリエチルアミン（121mg、1.2mmol）、酢酸パラジウム（II）（45mg、0.2mmol）、およびトリフェニルホスフィン（52mg、0.2mmol）を、N,N-ジメチルホルムアミド（30mL）中、窒素雰囲気下、150℃で約14時間、薄層クロマトグラフィ（シリカゲル、トルエン／アセトン1：1）で出発物質の2-ヨード-9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンが検出されなくなるまで撹拌した。次いで、反応混合物を熱いうちに濾過し、得られた溶液を蒸発させた。残渣をエタノール／トルエン（エタノールも用いることができる）から結晶化させ、ベージュの結晶を得た（28％）。融点＞330℃；
0004555476.tif 000073
【０１１０】
実施例30
この実施例は、2,3-ジメトキシ-6-オキソ-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-9-カルボニトリルの合成について述べる。
【化３８】
0004555476.tif 000074
【０１１１】
N-メチル-2-ピロリドン（10mL）中、9-ブロモ-2,3-ジメトキシ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オン（387mg、1mmol）およびシアン化銅（I）（179mg、2mmol）を2時間還流させた。室温まで冷却後、水（10mL）を加え、混合物を15分間撹拌した。沈殿を吸引濾過し、続いて水（10mL）およびエチレンジアミン（2.5mL）の混合物中で15分間撹拌した。次いで、沈殿を吸引濾過し、10％シアン化ナトリウム水溶液で洗浄し、エタノール／トルエンから結晶化させて、収率40％で無色結晶を得た。融点＞330℃；
0004555476.tif 000075
【０１１２】
実施例31
この実施例は、マウスの中空糸インビボ試験に用いる方法について述べる。ヒト癌細胞をポリフッ化ビニリデン（PVDF）中空糸中で培養した。各癌細胞株の試料をマウスの腹腔内および皮下に植え込んだ。各マウスに異なる癌細胞株にあたる複数の線維を、数匹には腹腔内と皮下の両方に植え込んだ。マウスを、本発明に従って製造した9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンの2段階の試験用量それぞれを、1日4回の治療計画を用いて腹腔内投与することにより治療した。媒体対照群は化合物希釈剤だけの投与を受けたマウスで構成された。最終治療の翌日に線維培養物を回収した。ホルマザン色素（MTT）変換アッセイ法を用いて各細胞株の生存細胞量を定量することにより、抗癌効果を評価した。これにより、化合物によって治療した試料の平均光学密度を媒体対照の平均光学密度で除して％T/Cを計算した。加えて、マウスへの植え込み当日に線維培養物試料の生存細胞量を評価して、各試料の細胞量の正味の増加を求めた。これにより、これらの化合物の細胞分裂抑制能および細胞破壊能を評価することができた。
【０１１３】
実施例32
この実施例は、本発明の化合物を用いてヒトを治療する方法について述べる。式1および／または2を満たす化合物を得る。次いで、これらの化合物をヒトに、1回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから約400mgまでの用量で、しかし好ましくは1回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから約50mgの用量で経口または静脈内投与するか、または1つもしくは複数の化合物の合計量で1回の治療につき約0.1グラムから約3グラムを対象者に提供するよう投与する。あるいは、式1または2を満たす1つまたは複数の化合物と、不活性担体、賦形剤、診断薬、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定化剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、潤滑剤、他の活性成分、薬学的組成物の調合において都合よく用いられる他の物質、またはその混合物からなる群より選択される少なくとも1つの物質とを含む組成物を、ヒトに経口または静脈内投与する。この組成物を、1つまたは複数の化合物の合計量として1回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから約400mgまで、しかし好ましくは1回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから約50mgを対象者に提供するか、または1つもしくは複数の化合物の合計量で1回の治療につき約0.1グラムから約3グラムを対象者に提供するよう投与する。
【０１１４】
ここまで、本発明を好ましい態様について述べてきた。本明細書に開示された発明の明細または実例を考察することにより、当業者には本発明の他の態様も明らかになると考えられる。本明細書および実施例は単なる例示にすぎないと考えられるべきであり、本発明の真の範囲および精神は添付の特許請求の範囲によって示される。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２】  図２は、7,12-ジヒドロ-2,3-ジメトキシ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図３】  図３は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図４】  図４は、7,12-ジヒドロ-9-トリフルオロメチル-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図５】  図５は、9-クロロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図６】  図６は、8-ブロモ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図７】  図７は、9-メトキシ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図８】  図８は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-チオンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図９】  図９は、9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-12-(2-ヒドロキシエチル)-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１０】  図１０は、6-メチルチオ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１１】  図１１は、2,3-ジメトキシ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１２】  図１２は、9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１３】  図１３は、2,3-ジメトキシ-9-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１４】  図１４は、9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１５】  図１５は、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-プロピオニトリルについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１６】  図１６は、2-ブロモ-9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１７】  図１７は、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-アクリロニトリルについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１８】  図１８は、2-(3-ヒドロキシ-1-プロピニル),9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図１９】  図１９は、2-ヨード-9-ブロモ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２０】  図２０は、2-(3-オキソ-1-ブテニル),9-トリフルオロメチル-7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２１】  図２１は、8-クロロ-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２２】  図２２は、2-ヨード,9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２３】  図２３は、7,12-ジヒドロ-ピリド[3',2':4,5]ピロロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２４】  図２４は、11-メチル-7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２５】  図２５は、2-[2-(1-ヒドロキシシクロヘキシル)-エチニル],9-トリフルオロメチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２６】  図２６は、2-シアノ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２７】  図２７は、2-ヨード-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２８】  図２８は、11-エチル-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図２９】  図２９は、8-メチル-6,11-ジヒドロ-チエノ[3',2':2,3]アゼピノ[4,5-b]インドール-5(4H)-オンについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図３０】  図３０は、3-(6-オキソ-9-トリフルオロメチル-5,6,7,12-テトラヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-2-イル)-アクリル酸メチルエステルについて、インビトロでのヒト腫瘍細胞株スクリーニングによって得られたデータの平均プロットを示す図である。
【図３１】  図３１は、9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでの時間経過アッセイ法を示すグラフである。
【図３２】  図３２は、9-ニトロ-7,12-ジヒドロ-インドロ[3,2-d][1]ベンズアゼピン-6(5H)-オンについて、インビトロでの時間経過アッセイ法を示すグラフである。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
0004555476.tif 000081
【図１ｃ】
0004555476.tif 000082
【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図４ｃ】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図５ｃ】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図６ｃ】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図７ｃ】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図８ｃ】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図９ｃ】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【図１０ｃ】
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【図１１ａ】
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【図１１ｂ】
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【図１１ｃ】
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【図１２ａ】
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【図１２ｂ】
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【図１２ｃ】
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【図１３ａ】
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【図１３ｂ】
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【図１３ｃ】
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【図１４ａ】
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【図１４ｂ】
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【図１４ｃ】
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【図１５ａ】
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【図１５ｂ】
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【図１５ｃ】
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【図１６ａ】
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【図１６ｂ】
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【図１６ｃ】
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【図１７ａ】
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【図１７ｂ】
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【図１７ｃ】
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【図１８ａ】
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【図１８ｂ】
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【図１８ｃ】
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【図１９ａ】
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【図１９ｂ】
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【図１９ｃ】
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【図２０ａ】
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【図２０ｂ】
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【図２０ｃ】
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【図２１ａ】
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【図２１ｂ】
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【図２１ｃ】
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【図２２ａ】
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【図２２ｂ】
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【図２２ｃ】
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【図２３ａ】
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【図２３ｂ】
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【図２３ｃ】
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【図２４ａ】
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【図２４ｂ】
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【図２４ｃ】
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【図２５ａ】
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【図２５ｂ】
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【図２５ｃ】
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【図２６ａ】
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【図２６ｂ】
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【図２６ｃ】
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【図２７ａ】
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【図２７ｂ】
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【図２７ｃ】
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【図２８ａ】
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【図２８ｂ】
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【図２８ｃ】
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【図２９ａ】
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【図２９ｂ】
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【図２９ｃ】
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【図３０ａ】
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【図３０ｂ】
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【図３０ｃ】
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【図３１】
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【図３２】
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