(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
イロハモミジ（Acer palmatum）からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロニダーゼ阻害剤（抗炎症の用途を除く）。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、植物抽出物を有効成分とする保湿剤、抗酸化剤、抗老化剤及び抗炎症剤、並びに植物抽出物を配合した皮膚化粧料に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
肌荒れ・皮膚の老化の発症機構は多種多様であるが、主な発症機構とその対策には次のようなものがある。
【０００３】
（１）保湿機能の低下
皮膚の保湿機能は、加齢や様々な環境要因によって低下する。保湿機能が低下した皮膚は乾燥してかさかさした状態となり、弾力性が失われる。こうした乾燥肌は、アトピー性皮膚炎を始めとした様々な皮膚疾患を招くおそれがあり、さらにはシミやシワ等の皮膚の老化を招くおそれがある。
皮膚の乾燥を防ぐために、従来よりグリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコールその他の多価アルコールをはじめ、油脂成分、アミノ酸、タンパク質、多糖類等が利用されてきたが、従来の保湿成分には、使用感、保湿効果の持続性、安全性等の点で問題がある。
【０００４】
（２）活性酸素・生体内ラジカルの影響
近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド（即ち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・O2-）、過酸化水素（H2O2）、一重項酸素（1O2）、ヒドロキシラジカル（・OH）等がある。これら活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須でありウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしているが、活性酸素の過剰な生成は生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。例えば、活性酸素は、コラーゲン等の生体組織を分解、変性あるいは架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされるこれらの障害が、シワ形成や弾力性低下等の皮膚老化の原因になるものと考えられている。
【０００５】
生体内において、酸素を基に最初に生成されるラジカルはスーパーオキサイドであり、ヒドロキシラジカル等の他のラジカルはスーパーオキサイドを経て生成される。細胞内のスーパーオキサイドは、細胞内で産生されたスーパーオキシドジスムターゼ（SOD）によって過酸化水素に変換されるが、SOD量は加齢に伴って減少し、SOD量の減少によってスーパーオキサイドの細胞内濃度が上昇し、スーパーオキサイドが生体に対して障害を及ぼすようになる。このため、SOD量の減少を補うために、SOD様作用剤としてSODそのものやトコフェロール類、オウゴン抽出物等が使用されているが、これらのSOD様作用剤は安全性等の点で問題がある。
【０００６】
（３）細胞外マトリックス構成成分の減少・変性
皮膚の真皮・表皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスによって構成されており、若い皮膚においてはこれらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり加齢が進んだりすることによって、細胞外マトリックスの主要構成成分であるエラスチン、コラーゲン、ヒアルロン酸等の産生量が減少するとともに、変性や分解を引き起こす。その結果、角質は異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、肌荒れやシワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、エラスチン、コラーゲン、ヒアルロン酸等の真皮細胞外マトリックス成分の減少、変性が関与している。
【０００７】
近年、この変化を誘導する因子として、特にマトリックス系プロテアーゼの関与が指摘されている。マトリックス系プロテアーゼの中でも、コラゲナーゼ、即ちＭＭＰ−１（マトリックスメタロプロテアーゼ−１）は、皮膚の真皮細胞外マトリックスの主な構成成分であるタイプI，IIIコラーゲンを分解する酵素として知られるが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワの形成等の大きな要因となることが考えられる。従って、コラゲナーゼ活性の阻害は、皮膚の老化を予防・改善する上で重要である。
【０００８】
一方、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因としてヒアルロニダーゼ、サイクリックAMPホスホジエステラーゼによる血小板凝集及びヒスタミン遊離が知られている。
【０００９】
血小板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼA2の活性化を招き、それにより放出されたロイコトリエンB4やプロスタグランジンE2等が炎症反応を引き起こす。このため、血小板の凝集を阻害・抑制する物質によりアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療する試みがなされており、そのような血小板凝集阻害物質として、アスピリン、チクロピジン、スルフィピラゾン等が用いられてきた。しかしながら、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題となっていた。
【００１０】
また、血小板の凝集は血小板中のサイクリックAMPの濃度と関係があり、サイクリックAMPホスホジエステラーゼによってサイクリックAMPが分解されてサイクリックAMPの濃度が低下すると、血小板は凝集しやすくなる。従って、サイクリックAMPホスホジエステラーゼの作用を抑制してサイクリックAMP濃度の低下を防止すれば、血小板凝集を防止できるものと考えられる。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、第一に、安全性の高い天然物の中から、保湿作用を有する物質を見出し、それを有効成分とした保湿剤を提供することを目的とする。
【００１２】
また、本発明は、第二に、安全性の高い天然物の中から、活性酸素消去作用又はラジカル消去作用を通じて、活性酸素や生体内ラジカルを消去し得る物質を見出し、それを有効成分とした抗酸化剤を提供することを目的とする。また併せて、当該物質を有効成分とした活性酸素消去剤及びラジカル消去剤を提供することを目的とする。
【００１３】
さらに、本発明は、第三に、安全性の高い天然物の中から、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖作用、エラスターゼ阻害作用又はエストロゲン様作用を通じて、皮膚の老化を予防・改善し得る物質を見出し、それを有効成分とした抗老化剤を提供することを目的とする。また併せて、当該物質を有効成分としたコラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤、線維芽細胞増殖作用剤、エラスターゼ阻害剤及びエストロゲン様作用剤を提供することを目的とする。
【００１４】
さらに、本発明は、第四に、安全性の高い天然物の中から、ヒアルロニダーゼ阻害作用、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用又はヒスタミン遊離阻害作用を通じて、炎症性疾患を予防・改善し得る物質を見出し、それを有効成分とした抗炎症剤を提供することを目的とする。また併せて、当該物質を有効成分としたヒアルロニダーゼ阻害剤、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害剤及びヒスタミン遊離阻害剤を提供することを目的とする。
【００１５】
さらに、本発明は、第五に、安全性の高い天然物の中から、保湿作用、抗酸化作用、抗老化作用又は抗炎症作用を有する物質を見出し、肌荒れ、皮膚の老化、及び炎症性疾患を始めとした各種皮膚疾患の予防・改善に有用な皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【００１６】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明の保湿剤、抗酸化剤、抗老化剤及び抗炎症剤は、カエデ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。本発明の保湿剤、抗酸化剤、抗老化剤及び抗炎症剤において、前記カエデ属に属する植物はイロハモミジ（Acer palmatum）であることが好ましい。また、本発明の抗酸化剤において、前記抽出物が、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を有することが好ましい。また、本発明の抗老化剤において、前記抽出物が、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖作用、エラスターゼ阻害作用及びエストロゲン様作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましい。また、本発明の抗炎症剤において、前記抽出物が、ヒアルロニダーゼ阻害作用、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用及びヒスタミン遊離阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましい。
また、上記目的を達成するために、本発明の皮膚化粧料は、カエデ属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする。本発明の皮膚化粧料において、前記カエデ属に属する植物がイロハモミジ（Acer palmatum）であることが好ましい。また、本発明の皮膚化粧料には、上記抽出物に加えて美白剤を配合してもよく、好適な美白剤としては、アスコルビン酸又はその誘導体、プラセンタエキス、コウジ酸、ルシノール、エラグ酸及びカミツレ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の美白剤が挙げられる。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において、「カエデ属に属する植物からの抽出物」には、カエデ属に属する植物を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１８】
抽出原料として用いる植物は、カエデ（Acer）属に属する限り特に限定されるものではなく、カエデ属（Acer）に属する植物としては、例えば、Acer aidzuense（カラコギカエデ）、Acer amoenum（オオモミジ）、Acer argutum（アサノハカエデ）、Acer buergerianum（トウカエデ）、Acer campestre（コブカエデ）、Acer carpinifolium（チドリノキ）、Acer crataegifolium（ウリカエデ）、Acer diabolicum（オニモミジ）、Acer distylum（マルバカエデ）、Acer ginnala（チョウセンカラコギカエデ）、Acer japonicum（ハウチワカエデ）、Acer mono（イタヤカエデ）、Acer negundo（トネリコバノカエデ）、Acer nigrum（ブラック・メープル）、Acer nikoense（メグスリノキ）、Acer nipponicum（テツカエデ）、Acer palmatum（イロハモミジ）、Acer platanoides（ヨーロッパカエデ）、Acer pseudoplatanus（セイヨウカジカエデ）、Acer pycnanthum（ハナノキ）、Acer rufinerve（ウリハダカエデ）、Acer saccharum（サトウカエデ）、Acer sieboldianum（コハウチワカエデ）、Acer tschonoskii（ミネカエデ）、Acer ukurunduense（オガラバナ）等が挙げられ、これらのうち特にAcer palmatum（イロハモミジ）を抽出原料として用いることが好ましい。イロハモミジは、カエデ科に属する落葉亜高木であって、イロハカエデ、タカオモミジ、タカオカエデ等とも呼ばれる。イロハモミジは、四国、九州、朝鮮南部、中国東部などに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
【００１９】
抽出原料として用いる植物の構成部位は特に限定されるものではなく、例えば、葉部、枝部、根部、樹皮、種子等の構成部位を抽出原料として用いることができるが、これらのうち特に葉部を抽出原料として用いることが好ましい。
【００２０】
カエデ属に属する植物からの抽出物に含有される保湿作用、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖作用、エラスターゼ阻害作用、エストロゲン様作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用又はヒスタミン遊離阻害作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によってカエデ属に属する植物から得ることができる。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま、又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、カエデ属に属する植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、カエデ属に属する植物からの極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２１】
抽出溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
【００２２】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。
【００２４】
水と親水性有機溶媒との混合液を抽出溶媒として使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０重量部に対して１〜９０重量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０重量部に対して１〜４０重量部、多価アルコールの場合は水１０重量部に対して１０〜９０重量部添加することが好ましい。
【００２５】
本発明において保湿作用、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖作用、エラスターゼ阻害作用、エストロゲン様作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用又はヒスタミン遊離阻害作用を有する抽出物を得るにあたり特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。
【００２６】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、３０分から２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（重量比）であり、抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜９５℃で３０分〜４時間程度である。
【００２７】
得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２８】
得られた抽出液はそのままでも保湿剤、抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、活性酸素消去剤、ラジカル消去剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤、線維芽細胞増殖作用剤、エラスターゼ阻害剤、エストロゲン様作用剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害剤又はヒスタミン遊離阻害剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。カエデ属に属する植物からの抽出物の製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができ、カエデ属に属する植物からの抽出物を粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形に製剤化することができる。
【００２９】
カエデ属に属する植物からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料などに添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。カエデ属に属する植物からの抽出物は、例えば活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって精製することができる。
【００３０】
以上のようにして得られるカエデ属に属する植物からの抽出物は、保湿作用、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖作用、エラスターゼ阻害作用、エストロゲン様作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用又はヒスタミン遊離阻害作用を有するので、当該抽出物を、保湿剤、抗酸化剤、抗老化剤又は抗炎症剤の有効成分として利用できるとともに、活性酸素消去剤、ラジカル消去剤、コラーゲン産生促進剤、コラゲナーゼ阻害剤、線維芽細胞増殖作用剤、エラスターゼ阻害剤、エストロゲン様作用剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害剤又はヒスタミン遊離阻害剤の有効成分として利用することができる。本発明の各種薬剤を皮膚に適用する際、本発明の保湿剤を直接皮膚に適用してもよいし、本発明の各種薬剤を皮膚化粧料に配合し、これを皮膚に適用してもよい。
【００３１】
本発明の保湿剤は、皮膚に対する保湿作用を通じて肌荒れ等の各種皮膚疾患を予防及び／又は改善することができる。
【００３２】
本発明の抗酸化剤は、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を通じて活性酸素や生体内ラジカルを消去し、皮膚の老化及びこれに伴って生じる各種皮膚疾患を予防及び／又は改善することができる。ここで、「活性酸素」には、スーパーオキサイド、過酸化水素、ヒドロキシラジカル、一重項酸素等が含まれる。また、「ラジカル」とは、不対電子を１つ又はそれ以上有する分子又は原子を意味し、スーパーオキサイド、ヒドロキシラジカル、ＤＰＰＨ等が含まれる。
【００３３】
本発明の抗老化剤は、コラーゲン産生促進作用、コラゲナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖作用、エラスターゼ阻害作用及びエストロゲン様作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、皮膚の老化及びこれに伴って生じる各種皮膚疾患を予防及び／又は改善することができる。
【００３４】
本発明の抗炎症剤は、ヒアルロニダーゼ阻害作用、サイクリックAMPホスホジエステラーゼ阻害作用及びヒスタミン遊離阻害作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡等の皮膚疾患を始めとした各種炎症性疾患を予防及び／又は改善することができる。
【００３５】
カエデ属に属する植物からの抽出物は、保湿作用、抗酸化作用、抗老化作用又は抗炎症作用を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感や安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。カエデ属に属する植物からの抽出物を皮膚化粧料に配合することによって、皮膚化粧料に保湿作用、抗酸化作用、抗老化作用又は抗炎症作用を付与することができる。
【００３６】
カエデ属に属する植物からの抽出物を配合する皮膚化粧料は、カエデ属に属する植物からの抽出物の生理活性を妨げないような任意の主剤、助剤に配合したものであってもよいし、当該抽出物を主成分とするものであってもよい。
【００３７】
カエデ属に属する植物からの抽出物を配合し得る皮膚化粧料の種類は特に限定されるものではなく、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーションなどが挙げられる。
【００３８】
皮膚化粧料におけるカエデ属に属する植物からの抽出物の配合量は、皮膚化粧料の種類などによって適宜調整し得るが、皮膚化粧料全体量の通常０．０００１〜１０重量％であり、好ましくは０．００１〜１重量％である。配合量が０．０００１重量％より少ないと十分な効果が得られにくく、配合量が１０重量％を超えると保存安定性が低下してしまう。
【００３９】
本発明の皮膚化粧料には、美白剤、抗炎症剤等の任意の薬効成分や生理活性物質などを必要に応じて配合することができる。皮膚化粧料に配合するのに好適な美白剤としては、例えば、アスコルビン酸又はその誘導体、プラセンタエキス、コウジ酸、ルシノール、エラグ酸及びカミツレ抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の美白剤が挙げられる。また、皮膚化粧料に配合するのに好適な抗炎症剤としては、例えば、アラントイン、グアイアズレン又はその誘導体、グリチルリチン酸又はその塩類若しくは誘導体、グリチルレチン酸又はその塩類若しくは誘導体、イプシロンアミノカプロン酸又はその誘導体、トラネキサム酸、イブプロフェン、インドメタシン、酸化亜鉛、アルニカ抽出物、インチンコウ抽出物、オウゴン抽出物、甘草抽出物、シャクヤク抽出物、ジュウヤク抽出物、シラカバ抽出物、セイヨウトチノミ抽出物、ムクロジ抽出物及びローズマリー抽出物からなる群より選ばれる１種又は２種以上の抗炎症剤が挙げられる。
【００４０】
本発明の皮膚化粧料において、カエデ属に属する植物からの抽出物とともに構成成分として利用可能なものを以下に例示する。なお、以下の構成成分を併用した場合、カエデ属に属する植物からの抽出物と併用された構成成分との間の相乗作用が、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００４１】
収斂剤：クエン酸又はその塩類、酒石酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、塩化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、硫酸亜鉛、プロアントシアニジン類、ガイヨウエキス、ダイオウエキス、スギナエキス、キューカンバーエキス、メリッサエキスなど。
【００４２】
殺菌・抗菌剤：安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ジステアリルメチルアンモニウム、オルトフェニルフェノール、感光素１０１号、感光素２０１号、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、レゾルシン、フェノキシエタノール、ビサボロール、ヒノキチオール、油溶性甘草エキス（カンゾウ疎水性フラボノイド、グラブリジン、グラブレン、リコカルコンＡ）など。
【００４３】
紫外線吸収剤：β−イソプロピルフラノン誘導体、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、オキシベンゾン、パラジメチル安息香酸オクチル、パラアミノ安息香酸オクチル、パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、酸化チタン、β−カロチンなど。
【００４４】
保湿剤：セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチンヘパリン、グリセロリン酸脂質、乳酸発酵物、酵母抽出物、ダイズリン脂質、γ-オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキスなど。
【００４５】
細胞賦活剤：リボフラビン又はその誘導体、ピリドキシン又はその誘導体、ニコチン酸又はその誘導体、パントテン酸又はその誘導体、α−トコフェロール又はその誘導体、ユキノシタエキス、ニンニクエキス、酵母エキス、ニンジンエキス、マンネンロウエキスなど。
【００４６】
消炎・抗アレルギー剤：アズレン、アラントイン、アミノカプロン酸、インドメタシン、塩化リゾチーム、グリチルリチン酸又はその誘導体、グリチルレチン酸又はその誘導体、感光素301号、感光素401号、塩酸ジフェンヒドラミン、アデノシンリン酸、エストラジオール、エスロン、エチニルエストラジオール、オウレンエキス、シソエキス、オウゴンエキスなど。
【００４７】
抗酸化・活性酸素消去剤：ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、バイカリン、バイカレイン、スーパーオキサイドディスムターゼ、カタラーゼ、ローズマリーエキス、ナツメグエキス、メースエキス、ローレルエキス、ターメリックエキス、甘草フラボノイドなど。
【００４８】
油脂類：大豆油、アマニ油、ゴマ油、ナタネ油、サフラワー油、オリーブ油、ツバキ油、アーモンド油、ヒマシ油、ヤシ油、牛脂、ホホバ油、月見草油など。
【００４９】
ロウ類：カルナウバロウ、キャンデリラロウ、蜜ロウ、サラシ蜜ロウ、鯨ロウ、セラックス、ラノリン類など。
【００５０】
炭化水素類：流動パラフィン、ワセリン、マイクロスリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ポリエチレン末など。
【００５１】
脂肪酸類：ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ヘベニン酸、ラノリン酸、オレイン酸など。
【００５２】
アルコール類：ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ラノリンアルコール、オレイルアルコール、ヘキサデシルアルコール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、エチレングリコール又はその重合体、セトステアリルアルコールなど。
【００５３】
エステル類：オレイン酸デシル、ステアリン酸ブチル、ミリスチン酸ミリスチル、モノステアリン酸グリセリン、トリミリスチン酸グリセリン、酢酸ラノリン、乳酸セチルなど。
【００５４】
界面活性剤：陰イオン性界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、キラヤサポニン等の天然素活性剤など。
【００５５】
香料：メントール、カルボン、オイゲノール、アネトール、ハッカ油、スペアミント油、ペパーミント油、ユーカリ油、アニス油その他各種動植物からのオイル状香料など。
【００５６】
【実施例】
以下に実施例を示し、本発明をさらに詳細に説明する。
〔製造例１〕
イロハモミジ（Acer palmatum）の葉部の乾燥物を細切りしたもの１００ｇに水、５０％エタノール（水とエタノールとの重量比１：１）、エタノール各１０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃、２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、さらに乾燥して各部位の抽出物を得た。抽出物の収率は表１のとおりであった。
【００５７】
【表１】
0004567278.tif 000002
【００５８】
〔試験例１〕保湿作用試験
イロハカエデの５０％エタノール抽出物の０．０５％水溶液（試料溶液１）、１％グリセリン（試料溶液２）、精製水（試料溶液３）を、それぞれ直径８ミリメートルのペーパーディスク（東洋製作所製、重量約０．０１７g）に１０μlずつ滴下した。これを試験室内に放置し、０〜８分後の重量を１分ごとに測定した。０分の重量を１００％として各試料溶液の水分残存率（％）を求めた。なお、試験は室温２４℃、湿度６８％で行った。
０〜８分後における各試料溶液の水分残存率（％）を表２に示す。
【００５９】
【表２】
0004567278.tif 000003
【００６０】
表２に示すように、イロハモミジ抽出物を含有する試料溶液（試料溶液１）は、グリセリン（保湿剤）を含有する試料溶液（試料溶液２）と同様に、精製水（試料溶液３）よりも水分残存率が高かった。このことから、イロハモミジ抽出物が保湿作用を有することが確認された。
【００６１】
〔試験例２〕スーパーオキサイド消去作用試験（ＮＢＴ法）
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
【００６２】
３ｍＭキサンチン、０．０５Ｍ Ｎａ2ＣＯ3緩衝液（ｐＨ１０．２）、３ｍＭ ＥＤＴＡ、ＢＳＡ溶液、および０．７５ｍＭ ＮＢＴ各０．１ｍＬを試験管にとり、これに試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いでキサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。
その後６ｍＭ塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「酵素溶液添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。
【００６３】
同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「酵素溶液無添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「酵素溶液添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。さらに、酵素溶液を添加せず、かつ試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「酵素溶液無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。
そして、次式によりスーパーオキサイド消去率（％）を求めた。
【００６４】
消去率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
【００６５】
上記式中、「Ａ」は「酵素溶液添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｂ」は「酵素溶液無添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｃ」は「酵素溶液添加, 試料溶液無添加時の吸光度」、「Ｄ」は「酵素溶液無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
【００６６】
試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度（ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。その結果を表３に示す。
【００６７】
【表３】
0004567278.tif 000004
【００６８】
表３に示す結果から、イロハモミジ抽出物がスーパーオキサイド消去作用を有することが確認された。また、このスーパーオキサイド消去作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００６９】
〔試験例３〕ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用試験
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法により非常に安定なラジカルであるＤＰＰＨを使用してラジカル消去作用を試験した。
【００７０】
１．５×１０−４Ｍ ＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した。その後、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えたのち直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。測定された各吸光度より、次式によりラジカル消去率（％）を算出した。
【００７１】
ラジカル消去率（％）＝{１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ}×１００
【００７２】
上記式中、「Ａ」は「コントロールの吸光度」、「Ｂ」は「試料溶液を添加した場合の吸光度」、「Ｃ」は「ブランクの吸光度」を表す。
【００７３】
試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料濃度（ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
その結果を表４に示す。
【００７４】
【表４】
0004567278.tif 000005
【００７５】
表４に示す結果から、イロハモミジ抽出物がＤＰＰＨラジカル消去作用を有することが確認された。また、このＤＰＰＨラジカル消去作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００７６】
〔試験例４〕コラーゲン産生促進作用試験
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法によりコラーゲン産生促進作用を試験した。
【００７７】
ヒトの線維芽細胞を１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウムを含むＭＥＭ培地で３７℃、５％ＣＯ2−９５％ａｉｒの下にて培養し、トリプシン処理により細胞を集め、２×１０５／ｍＬに調整した後、９６穴マイクロプレートの各穴に１００μＬずつ播種した。３７℃、５％ＣＯ2−９５％ａｉｒの下で一晩培養した後、培地を、試料溶液（２５ｐｐｍ）を含む０．５％ＦＢＳ−ＭＥＭ培地（１５０μＬ）に交換して、３７℃、５％ＣＯ2−９５％ａｉｒの下で３日間培養した。その培養上清を９０μＬ採取し、ＥＬＩＳＡプレートに移した後、抗ヒトコラーゲンタイプ１抗体を用いたＥＬＩＳＡ法によって、培養上清中のコラーゲンを定量した。定量の際には、ヒトコラーゲンタイプ１を標準品とする検量線を用いた。
そして、コラーゲン産生促進率（％）を、試料無添加時の値を１００％として算出した。その結果を表５に示す。
【００７８】
【表５】
0004567278.tif 000006
【００７９】
表５に示す結果から、イロハモミジ抽出物がコラーゲン産生促進作用を有することが確認された。
【００８０】
〔試験例５〕コラゲナーゼ阻害作用試験
製造例１による抽出物について、下記の試験法によりコラゲナーゼ阻害作用を試験した。
【００８１】
試料溶液（溶媒：２０ｍｍｏｌ／Ｌ 塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／Ｌ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）：以下の緩衝液においても同じ）５０μＬ、コラゲナーゼ溶液５０μＬおよび基質溶液４００μＬを混合し、３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで２５ｍｍｏｌ／Ｌ クエン酸溶液１ｍＬで反応を停止し、酢酸エチル５ｍＬで抽出した。得られた抽出液について、波長３２０ｎｍの吸光度（対照液：酢酸エチル）を測定した。このとき測定した吸光度を「酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。なお、コラゲナーゼ溶液はシグマ社のコラゲナーゼＴｙｐｅＩＶ ５ｍｇを緩衝液１ｍＬに溶解させ、使用時に５０倍に希釈したものを使用した。基質溶液には、上記緩衝液にＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ ＡＧ社Ｐｚ−ペプチドを濃度が０．５ｍｏｌ／Ｌになるように溶解して使用した。
【００８２】
上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、試料溶液の代わりに試料溶液と等量の緩衝液を添加して行った。このとき測定した吸光度を「酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。また、上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、コラゲナーゼ溶液の代わりに緩衝液を添加して行った。このとき測定した吸光度を「酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。さらに、上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、試料溶液の代わりに試料溶液と等量の緩衝液を添加するとともに、コラゲナーゼ溶液の代わりに緩衝液を添加して行った。このとき測定した吸光度を「酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。
そして、次式によりコラゲナーゼ阻害率（％）を算出した。
【００８３】
コラゲナーゼ阻害率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
【００８４】
上記式中、「Ａ」は「酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｂ」は「酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｃ」は「酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度」、「Ｄ」は「酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
【００８５】
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、コラゲナーゼの活性を５０％阻害する試料濃度(ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ)を内挿法により求めた。その結果を表６に示す。
【００８６】
【表６】
0004567278.tif 000007
【００８７】
表６に示す結果から、イロハモミジ抽出物がコラゲナーゼ阻害作用を有することが確認された。また、このコラゲナーゼ阻害作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００８８】
〔試験例６〕エラスターゼ阻害作用試験
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法によりエラスターゼ阻害作用を試験した。
【００８９】
９６穴プレートを用意し、１穴に対して試料溶液（溶媒：ＤＭＳＯ＋水）５０μＬおよびエラスターゼ溶液５０μＬを添加し、さらに基質溶液１００μＬを添加し混合した。２５℃で１５分間インキュベーションさせた後、波長４１５ｎｍの吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。なお、エラスターゼ溶液はシグマ社・エラスターゼＴｙｐｅIII ５ｍｇをｐＨ８の０．２ｍｏｌ／Ｌトリス塩酸緩衝液１ｍＬに溶解し使用時に２５０倍に希釈したものを使用した。基質溶液として、シグマ社のＮ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥをＤＭＳＯに溶解した濃度４５．１４ｍｇ／ｍＬの溶液を上記トリス塩酸緩衝液で１００倍に希釈して使用した。
【００９０】
上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、試料溶液の代わりに試料溶液と等量の溶媒のみを添加して行った。このとき測定した吸光度を「酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。また、上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、エラスターゼ溶液の代わりに緩衝液を添加して同じ操作と測定を行った。このとき測定した吸光度を「酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。さらに、上記と同様の酵素反応と吸光度測定を、試料溶液の代わりに試料溶液と等量の溶媒のみを添加するとともに、エラスターゼ溶液の代わりに緩衝液を添加して同じ操作と測定を行った。このとき測定した吸光度を「酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。
そして、次式によりエラスターゼ阻害率（％）を求めた。
【００９１】
エラスターゼ阻害率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
【００９２】
上記式中、「Ａ」は「酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｂ」は「酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｃ」は「酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度」、「Ｄ」は「酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
【００９３】
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、エラスターゼの活性を５０％阻害する試料濃度(ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ)を内挿法により求めた。その結果を表７に示す。
【００９４】
【表７】
0004567278.tif 000008
【００９５】
表７に示す結果から、イロハモミジ抽出物がエラスターゼ阻害作用を有することが確認された。また、このエラスターゼ阻害作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００９６】
〔試験例７〕エストロゲン様作用試験
製造例１で得られた抽出物について、エストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べるThomasらの方法（In vitro cell.Dev.Biol. 28A, 595-602, 1992）に準拠し、エストロゲン様作用を試験した。
【００９７】
ヒト乳ガン由来のＭＣＦ−７細胞を７５ｃｍ２フラスコでコンフルエント様になるまで培養し、トリプシン処理によりこのＭＣＦ−７細胞を集め、１０％ＦＢＳ（活性炭処理済み）、１％ＮＥＡＡ及び１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含みフェノールレッドを含まないＭＥＭ培地（以下、「ＭＥＭ培地」と略す）を用いて、３×１０４cells／ｍＬに調製した。調製したＭＣＦ−７細胞を２４穴プレートに０．９ｍＬずつ播種し、これを定着させるために３７℃、５％ＣＯ２-９５％ａｉｒの下で培養した。６時間後（０日日）、ＭＥＭ培地で終濃度（１２．５ｐｐｍ）の１０倍の濃度に調製した試料溶液１００μＬを上記プレートに添加し、培養を続けた。培養開始から６日目、培地を０．９７ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＴＴを含むＭＥＭ培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【００９８】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
陽性対照としては、０．０２ｐｐｍエチニルエストラジオールを使用した。
エストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）の強さは、試料無添加時の吸光度を１００％として次式に基づき算出した。
試験の結果を表８に示す。
【００９９】
エストロゲン様作用（％）＝Ａ／Ｂ×１００
【０１００】
上記式中、「Ａ」は試料添加の場合の吸光度、「Ｂ」は試料無添加の場合の吸光度を表す。
【０１０１】
【表８】
0004567278.tif 000009
【０１０２】
表８に示すように、イロハモミジ抽出物がエストロゲン様作用を有することが確認された。
【０１０３】
〔試験例８〕紫外線照射による細胞死抑制試験
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法により紫外線照射による細胞死抑制作用試験を行った。
正常ヒト線維芽細胞を４８穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下にて２４時間培養した後、培地を、ＰＢＳ（−）に交換し５．０J／ｃｍ２のＵＶ−Ｂ（３０２ｎｍ）を照射した。照射後直ちにＰＢＳ（−）を捨て、試料を溶解した培地に交換し、さらに２４時間培養した。培養後、ＰＢＳ（−）にて調製した０．４ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ溶液に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度測定した。
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
また、同時に細胞播種後紫外線を照射しない細胞および細胞播種後紫外線を照射し試料を添加しない細胞についても測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
紫外線照射障害からの回復率（％）を下記式より算出し、この値が大きいほど紫外線照射による細胞死抑制効果が大きいと判断した。試験の結果を表９に示す。
【０１０４】
回復率（％）＝｛｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）｝×１００
【０１０５】
上記式中、「Ａ」は「紫外線を照射しない細胞での吸光度」、「Ｂ」は「紫外線を照射し試料を添加しない細胞での吸光度」、「Ｃ」は「紫外線を照射し試料を添加した細胞での吸光度」を表す。
試験の結果を表９に示す。
【０１０６】
【表９】
0004567278.tif 000010
【０１０７】
表９に示すように、イロハモミジ抽出物が紫外線照射による線維芽細胞の細胞死を抑制して線維芽細胞を効率よく増殖させる作用を有することが確認された。
【０１０８】
〔試験例９〕ヒアルロニダーゼ阻害作用試験
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法によりヒアルロニダーゼ阻害作用を試験した。
【０１０９】
ヒアルロニダーゼ溶液（４００ユニット／ｍＬ，ｐＨ３．５酢酸緩衝液）０．１ｍＬと試料溶液０．２ｍＬを混合し、３７℃で２０分間インキュベーションした後、活性化剤溶液(２．５ｍＭ−ＣａＣｌ２)０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間インキュベーションして酵素を活性化した。ヒアルロン酸カリウム緩衝液０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間インキュベーションした後、０．４Ｎ水酸化ナトリウム０．２ｍｌを加えると共に氷冷して反応を停止させた。次いで、０．８Ｍホウ酸溶液（ｐＨ９．１）０．２ｍＬを加え、沸騰浴中で３分間加熱後、直ちに２０分間氷冷した。ｐ−ＤＡＢＡ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸１２．５ｍＬと酢酸８７．５ｍＬの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍＬを加えて３７℃で２０分間インキュベーションすることにより、上記酵素反応で遊離したＮ−アセチルグルコサミンを発色させ、波長５８５ｎｍの吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を以下「酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。
【０１１０】
同様の操作と吸光度測定を、酵素を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を以下「酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度」という。また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を以下「酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。さらに、酵素を添加せず、かつ試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を以下「酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」という。
そして、次式によりヒアルロニダーゼ阻害率（％）を求めた。
【０１１１】
ヒアルロニダーゼ阻害率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
【０１１２】
上記式中、「Ａ」は「酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｂ」は「酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度」、「Ｃ」は「酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度」、「Ｄ」は「酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
【０１１３】
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０(ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ)を内挿法により求めた。その結果を表１０に示す。
【０１１４】
【表１０】
0004567278.tif 000011
【０１１５】
表１０に示すように、イロハモミジ抽出物がヒアルロニダーゼ阻害作用を有することが確認された。また、このヒアルロニダーゼ阻害作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１１６】
〔試験例１０〕サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用試験
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法によりサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を試験した。
【０１１７】
５ｍＭの塩化マグネシウムを含有するトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに胎児血清アルプミン溶液０．１ｍＬおよびサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬを加え、さらに試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間プレインキュベーションした。次いでサイクリックＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間インキュベーションした。沸騰浴中で３分間煮沸して反応を停止させ、４℃で３５００ｒｐｍ遠心分離し、上清中の反応基質５′−ＡＭＰを高速液体クロマトグラフィーにより定量した。試料溶液を添加せずに同様の酵素反応と反応基質の分析を行い、試料無添加時の反応基質量に対する試料添加時の反応基質量の比率より、試料のサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害率（％）を求めた。
【０１１８】
試料溶液の試料濃度を段階的に減少させて上記の測定を繰り返し、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０(ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ)を内挿法により求めた。その結果を表１１に示す。
【０１１９】
【表１１】
0004567278.tif 000012
【０１２０】
表１１に示す結果から、イロハモミジ抽出物がサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有することが確認された。また、このサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１２１】
〔試験例１１〕ヒスタミン遊離抑制作用試験
製造例１で得られた抽出物について、下記の試験法によりヒスタミン遊離抑制作用を試験した。なお、下記の試験法は、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることを利用して、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する試験法である。
【０１２２】
２５ｃｍ２の培養フラスコに入れた培地（１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地；以下同じ）にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１０６個を播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で４日間培養した。次いでトリプシン処理し、遠心分離（８００ｒｐｍ，４分間）して細胞を集めた。得られた細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬで培地に懸濁し、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ）を０．５μｇ／ｍＬの濃度で添加した。この細胞浮遊液を９６穴プレートの１穴に付き１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で２４時間培養した。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で２回洗浄した。次に上記緩衝液３０μＬおよび試料溶液１０μＬを加え、３７℃で１０分間インキュベーションした。次にジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μＬを加え、更に３７℃で１５分間インキュベーションした。その後、氷冷下で上清１０μＬを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍｍｏｌ／Ｌ ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μＬを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。反応終了後、０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液２５０μＬを加え、マイクロプレートリーダーにて６５０ｎｍを対照に４１５ｎｍにおける吸光度測定を行った（このとき測定した吸光度をＡとする）。
【０１２３】
また、試料溶液の代りにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度測定を行った（このとき測定した吸光度をＢとする）。
【０１２４】
また、細胞上清と０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液を同様の処理で反応させたものについても吸光度測定を行った（このとき測定した吸光度をＣとする）。
【０１２５】
また、同様の処理と吸光度測定をＤＮＰ−ＢＳＡのかわりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行った(このとき測定した吸光度をＤとする)。
そして、次式によりへキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を求めた。
【０１２６】
遊離抑制率（％）＝〔１−｛（Ａ−Ｃ−Ｄ）／（Ｂ−Ｄ）｝〕×１００
【０１２７】
試料濃度を段階的に減少させて上記遊離抑制率の測定を行い、ヘキソサミニダーゼの遊離を５０％阻害する試料濃度(ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ)を内挿法により求めた。その結果を表１２に示す。
【０１２８】
【表１２】
0004567278.tif 000013
【０１２９】
表１２に示す結果から、イロハモミジ抽出物がヒスタミン遊離抑制作用を有することが確認された。また、このヒスタミン遊離抑制作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【０１３０】
〔実施例１〜５、比較例１〕
表１３に示す配合処方（重量％）の化粧水（実施例１〜５、比較例１）を常法により製造し、以下の試験を行なった。
【０１３１】
２０〜４０代の女性２０名を４名ずつ５群に分け、朝夕１日２回、２週間、洗顔後に、右顔面に実施例化粧水を、左顔面に比較例化粧水を塗布した。その際、使用時の感触、使用後のべたつき、保湿の持続性、肌荒れ改善効果の４項目について評価を行なった。
【０１３２】
評価は、１〜５点の５段階評価によって行い、「５点」が「非常によい」（使用時の感触が非常によい、使用後のべたつきが全くない、保湿の持続性が非常に高い、肌荒れ改善効果が非常に高い）、「４点」が「よい」（使用時の感触がよい、使用後のべたつきがほとんどない、保湿の持続性が高い、肌荒れ改善効果が高い）、「３点」が「ふつう」（使用時の感触はふつう、使用後のべたつきはあまりない、保湿の持続性はややある、肌荒れ改善効果はややある）、「２点」が「ややわるい」（使用時の感触はややわるい、使用後のべたつきがややある、保湿の持続性はあまりない、肌荒れ改善効果はあまりない）、「１点」が「わるい」（使用時の感触がわるい、使用後のべたつきがかなりある、保湿の持続性が全くない、肌荒れ改善効果が全くない）とした。
評価点の平均を表１３に示す。
【０１３３】
【表１３】
0004567278.tif 000014
【０１３４】
表１３に示す結果から、イロハモミジ抽出物を含有する化粧水（美白剤としてアスコルビン酸誘導体、コウジ酸、ルシノール、エラグ酸又はカミツレ抽出物を含有する）は、使用時の感触がよく、使用後のべたつきが少なく、保湿の持続性及び肌荒れ改善効果に優れていることが確認された。
【０１３５】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
ホホバオイル                                             ４.０ｇ
プラセンタエキス                                         ０．１g
オリーブオイル                                           ２.０ｇ
スクワラン                                               ２.０ｇ
セタノール                                               ２.０ｇ
モノステアリン酸グリセリル                               ２.０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ.Ｏ）            ２.５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ.Ｏ）      ２.０ｇ
１，３-ブチレングリコール                                ３.０ｇ
ヒノキチオール                                           ０.１５ｇ
香料                                                     ０.０５ｇ
イロハモミジ葉部抽出物                                   ０．０１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【０１３６】
〔配合例２〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
流動パラフィン                                            ５.０ｇ
サラシミツロウ                                            ４.０ｇ
セタノール                                                ３.０ｇ
スクワラン                                              １０.０ｇ
ラノリン                                                  ２.０ｇ
ステアリン酸                                              １.０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ.Ｏ）       １.５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                                ３.０ｇ
１，３-ブチレングリコール                                 ６.０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                  １.５ｇ
香料                                                      ０.１ｇ
イロハモミジ葉部抽出物                                    ０．１ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【０１３７】
〔配合例３〕
下記組成のパックを常法により製造した。
ポリビニルアルコール                                    １５ｇ
ポリエチレングリコール                                    ３ｇ
プロピレングリコール                                      ７ｇ
エタノール                                              １０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル                                  ０．０５ｇ
香料                                                      ０．０５ｇ
イロハモミジ葉部抽出物                                    ０．０５ｇ
精製水                                 残部（全量を１００ｇとする）
【０１３８】
【発明の効果】
本発明により保湿剤、抗酸化剤、抗老化剤及び抗炎症剤、並びに保湿作用、抗酸化作用又は抗老化作用を有する皮膚化粧料が提供される。本発明により提供される保湿剤、抗酸化剤、抗老化剤及び抗炎症剤並びに皮膚化粧料は、皮膚に対する使用感及び安全性に優れるとともに、肌荒れの予防・改善に有用である。