(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
tert-ロイシン及びtert-ロイシンアミドを含む溶液からtert-ロイシンアミドを精製する方法において、該溶液に金属カリウム及び／又は塩基性カリウム化合物を添加し、tert-ロイシンアミドを該溶液中から析出させることを特徴とするtert-ロイシンアミドの精製方法。
【請求項２】
tert-ロイシン及びtert-ロイシンアミドを含む溶液からtert-ロイシンアミドを精製する方法において、該溶液に金属カリウム及び／又は塩基性カリウム化合物を添加し、tert-ロイシンアミドのラセミ化反応を行い、次いでtert-ロイシンアミドを該溶液中から析出させることを特徴とするtert-ロイシンアミドの精製方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する分野】
本発明は、医農薬等に有用な中間体であるアミノ酸アミドの精製法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、医農薬等の生理活性物質の合成中間体として光学活性アミノ酸及び該アミド体の需要が高まっており、様々な手法を用いた合成研究が盛んに行われている。光学活性アミノ酸及びアミノ酸アミドの製造法の報告は、例えば、ラセミ体のアミノ酸アミドを酵素的に不斉加水分解して光学活性アミノ酸及び光学活性アミノ酸アミドを製造する方法が挙げられる。該方法では、一方の対掌体は加水分解を受けて、光学活性アミノ酸に変換されるが、他方の対掌体は光学活性アミノ酸アミドとして残存するため、アミノ酸とアミノ酸アミドを分離する必要がある。
分離法としては、水系溶媒にて酵素的不斉加水分解反応を行った後、反応液を濃縮し、アミノ酸の貧溶媒であるアルコール等の有機溶媒を加えて、結晶化したアミノ酸を取り出し、未反応のアミノ酸アミドはろ液として水−アルコール混合溶媒に溶解した状態で取得する方法が考えられる。さらには、より効率よく製造する方法として、ラセミ化を組み合わせた光学活性アミノ酸及びアミノ酸アミドの製造法が報告されている。
アミノ酸アミドのラセミ化法及びその取得法に関しては、例えば、特開昭６１−１９７５３０号、特開昭６１−２９３３９４号記載の方法等が挙げられる。該公報には、アルカリ条件下、有機溶媒中で、効率よくラセミ化が進行することが記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、上記の方法では、必ずしも、アミノ酸のみが完全に結晶化できるとは限らず、アミノ酸アミド中にアミノ酸が混入する可能性がある。
また、光学活性体の一方のみが必要な場合は、例えば、光学活性アミノ酸アミドをラセミ化して、不斉加水分解反応の原料として再利用できれば極めて好都合であるが、混入したアミノ酸により光学純度が低下することが危惧される。
本発明は、上記問題点を解決したアミノ酸アミドの有効な精製法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、アミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液から、アミノ酸アミドを精製する方法について鋭意研究を重ねた結果、アミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液中に塩基性化合物を添加することで、アミノ酸の有機溶媒に対する溶解度が向上し、該溶液中より、アミノ酸アミドを析出させることにより、アミノ酸の混入が少ないアミノ酸アミドを純度よく取得できること、さらには塩基性化合物の添加は、アミノ酸及びアミノ酸アミドの分離及びアミノ酸アミドのラセミ化に非常に有効であるを見出し本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、塩基性化合物を用いることを特徴とするアミノ酸アミドの精製法、である。
【０００５】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明を具体的に説明する。
本発明において対象となるアミノ酸アミドとしては、tert-ロイシンアミド、ロイシンアミド、アラニンアミド、フェニルアラニンアミド、ｐ−クロロフェニルアラニンアミド、ｐ−ヒドロキシフェニルアラニンアミド等が例示できる。
アミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液からアミノ酸アミドを精製する際、用いる塩基性化合物とは、アミノ酸が有機溶媒に溶けやすい塩になるものであれば何れでも構わない。特にカリウム化合物が好ましい。例えば、アミノ酸がカリウム塩となるような、水酸化カリウム、金属カリウム、水素化カリウム、tert-ブトキシカリウム、炭酸カリウム等が挙げられる。
これら塩基性化合物の使用量は、アミノ酸アミドに対して１〜１００％モル、好ましくは５〜５０％モルが良い。
また、アミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液には、塩基性化合物を混入しているため、ラセミ化も同時に行うことが可能である。アミノ酸アミドのラセミ化反応の条件は、α−アミノ酸アミド、塩基化合物の種類、濃度等の諸要因により異なり特に限定されるものではないが、一般には反応温度８０〜２００℃、好ましくは１００〜１５０℃で１０分〜２４時間行う。
アミノ酸アミドの取得は、塩基性化合物を混入したアミノ酸及びアミノ酸アミドを含む溶液に適当な有機溶媒を加え、アミノ酸アミドを優先的に析出させることにより行う。析出の際、使用する有機溶媒は、塩基性化合物の塩となったアミノ酸塩が溶解し、アミノ酸アミドが溶解し難い溶媒であればいずれでも構わない。
アミノ酸アミドを該溶液より析出させるには、濃縮又は冷却等の操作により行うことができる。
該方法で取得したラセミ体のアミノ酸アミドは、例えば、酵素的に不斉加水分解して光学活性アミノ酸を製造する方法に用いることができる。
【０００６】
【実施例】
以下に、実施例で本発明をさらに詳細に説明する。
〔実施例１〕
Ｄ−tert-ロイシンアミド７０ｇ（光学純度＞９９％ｅｅ）、Ｌ−tert-ロイシン（光学純度＞９９％ｅｅ）２ｇを、水４８ｇ及びイソプロピルアルコール８０ｇに溶解した溶液全量２００ｇ（水分量２４％）に、ｎ−ブタノール１００ｇを加えて６０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮した。
そこへ、水酸化カリウム４．９ｇ（アミノ酸に対して等量及びアミドに対して２０％モル）及びｎ−ブタノール１４５ｇを加えて室温で１時間攪拌して水酸化カリウムを溶解させた（全量３００ｇ）。水分量を測定したところ６％であった。
さらに、８０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮後、ｎ−ブタノール１５０ｇを加えて全量３００ｇとした（水分量０．１％）。該溶液を１２０℃で６時間攪拌した。
結果、反応前は２．８％（ｗ／ｗ）であったアミノ酸比が、反応後は５．４％（ｗ／ｗ）であった。
反応後、全量１００ｇになるまで濃縮し、ｎ−ヘプタン１００ｇを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、乾燥させて、ラセミ体のtert-ロイシンアミド６３ｇを取得した。
tert-ロイシン及びtert-ロイシンアミドの濃度は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析条件１で、各々の光学純度は、ＨＰＬＣ分析条件２で分析を行った。
【０００７】
ＨＰＬＣ分析条件１：
カラム：イナートシル  ＯＤＳ−３Ｖ（４．６φ×２５０ｍｍ）
移動層：０．１％  リン酸水溶液
流速：  １ｍＬ／ｍｉｎ
検出：  ＲＩ
ＨＰＬＣ分析条件２：
カラム：ＳＵＭＩＣＨＩＲＡＬ  ＯＡ−５０００（４．６φ×２５０ｍｍ）
移動層：水−メタノール（８５：１５）
流速：  １ｍＬ／ｍｉｎ
検出：  ＵＶ  ２５４ｎｍ
【０００８】
上記条件で、HPLCで分析したところ、採取したtert-ロイシンアミド中に含まれるtert-ロイシンは０．１３％（ｗ／ｗ）であった。アミノ酸アミドの取得収率は９０％、ラセミ化率は９９％であった。
【０００９】
〔実施例２〕
Ｄ−tert-ロイシンアミド７０ｇ（光学純度＞９  ９％ｅｅ）、Ｌ−tert-ロイシン（光学純度＞９９％ｅｅ）５．５ｇを、水４４ｇ、及びイソプロピルアルコール８０ｇに溶解した溶液全量２００ｇ（水分量２２％）に、ｎ−ブタノール１００ｇを加えて６０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮した。
そこへ、水酸化カリウム９．８７ｇ（アミノ酸に対して等量及びアミドに対して２０％モルに相当）及びｎ−ブタノール１４０ｇを加えて室温で１時間攪拌して水酸化カリウムを溶解させた（全量３００ｇ）。水分量を測定したところ４％であった。
さらに、８０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮した後、ｎ−ブタノール１５０ｇを加えて全量３００ｇとした（水分量０．１％）。該溶液を１２０℃で６時間攪拌した。
結果、反応前は７．３％（ｗ／ｗ）であったアミノ酸比が反応後は１１．９％（ｗ／ｗ）であった。
反応後、全量１００ｇになるまで濃縮し、ｎ−ヘプタン１００ｇを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、乾燥させて、ラセミ体のtert-ロイシンアミド６３ｇを取得した。
実施例１の条件で、HPLCで分析したところ、採取したtert-ロイシンアミド中に含まれるtert-ロイシンは１．０７％（ｗ／ｗ）であった。アミノ酸アミドの取得収率は８９％、ラセミ化率は９９％であった。
【００１０】
〔実施例３〕
Ｄ−tert-ロイシンアミド７０ｇ（光学純度＞９  ９％ｅｅ）、Ｌ−tert-ロイシン（光学純度＞９９％ｅｅ）５．５ｇを、水４４ｇ及びイソプロピルアルコール８０ｇに溶解した溶液全量２００ｇ（水分量２２％）に、ｎ−ブタノール１００ｇを加えて６０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮した後、ｎ−ブタノール１５０ｇを加えて全量３００ｇにした。水分量を測定したところ４％であった。
さらに、８０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮した後、ｎ−ブタノール１５０ｇを加えて全量３００ｇとした。水分量を測定したところ０．１％であった。
そこへ、tert-ブトキシカリウム１０．７４ｇ（アミノ酸に対して等量及びアミドに対して１０％モル相当）加えて、１２０℃で６時間攪拌した。
結果、反応前は７．３％（ｗ／ｗ）であったアミノ酸比が反応後は９．４％（ｗ／ｗ）であった。
反応後、全量１００ｇになるまで濃縮し、ｎ−ヘプタン１００ｇを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、乾燥させて、ラセミ体のtert-ロイシンアミド６３ｇを取得した。
実施例１の条件で、HPLCで分析したところ、採取したtert-ロイシンアミド中に含まれるtert-ロイシンは０．８９％（ｗ／ｗ）であった。アミノ酸アミドの取得収率は８９％、ラセミ化率は９６％であった。
【００１１】
〔比較例１〕
Ｄ−tert-ロイシンアミド７０ｇ（光学純度＞９９％ｅｅ）、Ｌ−tert-ロイシン（光学純度＞９９％ｅｅ）５．５ｇを、水４４ｇ及びイソプロピルアルコール８０ｇに溶解した溶液２００ｇ（水分量２２％）に、ｎ−ブタノール１００ｇを加えて６０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮した。
そこへ、水酸化ナトリウム６．００ｇ（アミノ酸に対して等量及びアミドに対して２０％モルに相当）及びｎ−ブタノール１４４ｇを加えて室温で１時間攪拌して水酸化ナトリウムを溶解させた（全量３００ｇ）。水分量を測定したところ４％であった。
さらに、８０℃／８０ｔｏｒｒで全量１５０ｇになるまで濃縮後、ｎ−ブタノール１５０ｇを加えて全量３００ｇとした（水分量  ０．１％）。該溶液を１２０℃で６時間攪拌した。
結果、反応前は７．３％（ｗ／ｗ）であったアミノ酸比が、反応後は１２．１％（ｗ／ｗ）であった。
反応後、全量１００ｇになるまで濃縮し、ｎ−ヘプタン１００ｇを加えて、析出した結晶を遠心濾過後、乾燥させて、ラセミ体のtert-ロイシンアミド６５ｇを採取した。
実施例１の条件でHPLCで分析したところ、採取したtert-ロイシンアミド中に含まれるtert-ロイシンは５．９６％（ｗ／ｗ）であった。アミノ酸アミドの取得収率は８７％、ラセミ化率は９８％であった。
【００１２】
【発明の効果】
アミノ酸混液からアミノ酸アミドの精製する際、塩基性化合物、特にカリウム化合物を用いることにより、アミノ酸の有機溶媒に対する溶解度が向上し、アミノ酸アミドを純度良く、分離することができる。