(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化合物：
【化１】
0004555401.tif 000004
からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、無機イオン受容体の活性を調節することができる新規な分子の設計、開発、組成物および使用に関する。
発明の背景
体内のある種の細胞は、化学シグナルのみならず、細胞外カルシウムイオン（Ｃａ2+）のごときイオンにも応答する。細胞外Ｃａ2+（以後「Ｃａ2+」という）濃度の変化は、これらの細胞の機能応答性を変化させる。かかる特殊細胞の１つは副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）を分泌する副甲状腺細胞である。ＰＴＨは、血中および細胞外流体におけるＣａ2+恒常性を調節する主な内分泌因子である。
骨および腎臓細胞に作用することによって、ＰＴＨは血中のＣａ2+レベルを上昇させる。このことによって［Ｃａ2+］が上昇し、次いで、ＰＴＨ分泌を低下させる負のフィードバックシグナルとして作用する。［Ｃａ2+］およびＰＴＨ分泌の間の相互関係は、身体Ｃａ2+恒常性を維持する必須の機構を形成している。
細胞外Ｃａ2+は、副甲状腺細胞に直接作用してＰＴＨ分泌を調節する。［Ｃａ2+］の変化を検出する副甲状腺細胞表面蛋白質の存在が確認されている（ブラウン（Ｂrown）ら、第３６６巻、ネイチャー（Ｎature）５７４頁、１９９３年）。副甲状腺細胞において、これらの蛋白質は、細胞外Ｃａ2+の受容体（「カルシウム受容体」）として作用し、［Ｃａ2+］の変化を検出し、機能的な細胞応答、ＰＴＨ分泌を起こす。
細胞外Ｃａ2+は、種々の細胞機能に対する効果に働きかけることができ、これはネメス（Ｎemeth）ら、第１１巻、セル・カルシウム（Ｃell Ｃalcium）３１９頁、１９９０年に概説されている。傍濾胞細胞（Ｃ-細胞）および副甲状腺細胞における細胞外Ｃａ2+の役割は、ネメス（Ｎemeth）、第１１巻、セル・カルシウム（Ｃell Ｃalcium）３２３頁、１９９０年に論じられている。これらの細胞は、同様なＣａ2+受容体を発現していることが示されている（ブラウン（Ｂrown）ら、第３６６巻、ネイチャー（Ｎature）５７４頁、１９９３年；ミサル（Ｍithal）ら、増刊号９、第１巻、ジャーナル・オブ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ（Ｊ.Ｂone and Ｍineral Ｒes.）ｓ２８２頁、１９９４年；ロジャーズ（Ｒogers）ら、増刊号９、第１巻、ジャーナル・オブ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ（Ｊ.Ｂone and Ｍineral Ｒes.）ｓ４０９頁、１９９４年；ギャレット（Ｇarrett）ら、増刊号９、第１巻、ジャーナル・オブ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ（Ｊ.Ｂone and Ｍineral Ｒes.）ｓ４０９頁、１９９４年）。骨破骨細胞に対する細胞外Ｃａ2+の役割は、ザイディ（Ｚaidi）、第１０巻、バイオサイエンス・レポーツ（Ｂioscience Ｒeports）４９３頁、１９９０年によって論じられている。加えて、ケラチン細胞、傍糸球体細胞、トロホブラスト、膵臓β細胞および脂肪細胞（fat/adipose cell）は、全て、これらの細胞のカルシウム受容体の活性化を反映するようである細胞外カルシウムの上昇に応答する。
イン・ビトロ（in vitro）において細胞外Ｃａ2+を模倣する種々の化合物の能力は、ネメス（Ｎemeth）ら、「健康および疾病におけるカルシウム-結合蛋白質（Ｃalcium-Ｂinding Ｐroteins in Ｈealth and Ｄisease）」、１９８７年、アカデミック・プレス・インコーポレイテッド（Ａcademic Ｐress,Ｉnc.）社の（スペルミンおよびスペルミジン）３３-３５頁；ブラウン（Ｂrown）ら、（例えば、ネオマイシン）、第１２８巻、エンドクライノロジー（Ｅndocrinology）３０４７頁、１９９１年；チェン（Ｃhen）ら、（ジルチアゼンおよびそのアナログ、ＴＡ-3090）、第５巻、ジャーナル・オブ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ（Ｊ.Ｂone and Ｍineral Ｒes.）５８１頁、１９９０年；および、ザイディ（Ｚaidi）ら、（ベラパミル）、第１６７巻、バイオケミカル・アンド・バイオフィジックス・リサーチ・コミューニケイションズ（Ｂiochem.Ｂiophys.Ｒes.Ｃommun.）８０７頁、１９９０年によって論じられている。ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号、およびネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９２/０７１７５号、国際公開番号ＷＯ ９３/０４３７３号は、無機イオン受容体を有する細胞に対する無機イオンの効果を調節することができる、好ましくは、カルシウム受容体に対するカルシウムの効果を調節することができる種々の化合物を記載している。
発明の背景に供した参考文献は、先行技術であると受け入れうるべきものでない。
発明の概要
本発明は、１またはそれを超える無機イオン受容体活性を調節することができる分子をその要旨とする。好ましくは、該分子は、カルシウム受容体に対する細胞外Ｃａ2+の効果を模倣もしくは遮断することができる。かかる分子の好ましい使用は、無機イオン受容体活性、好ましくはカルシウム受容体活性を変化させることによって疾病または不全症を治療することにある。
細胞外Ｃａ+は、厳格な恒常性の制御下にあり、血液凝固、神経および筋肉の興奮性、および適切な骨形成のごとき種々のプロセスを制御している。カルシウム受容体蛋白質は、細胞外Ｃａ2+濃度の変化に対してある種の特殊細胞を応答させることができる。例えば、細胞外Ｃａ2+は、副甲状腺細胞からの副甲状腺ホルモンの分泌を阻害し、破骨細胞による骨再吸収を阻害し、Ｃ-細胞からのカルシトニンの分泌を刺激する。
無機イオン受容体活性を調節する化合物を用いて、患者に対して有益な効果を生じる１またはそれを超える無機イオン受容体の活性に作用することによって、疾病または不全症を治療することができる。例えば、骨粗鬆症は、骨体積の損失によって特徴付けられ、骨折の危険性が増す加齢に関連する不全症である。内因性のカルシトニンレベルを上昇させる（例えば、Ｃ-細胞のイオン模倣物（ionmimetic））ことによって、および/または副甲状腺ホルモンレベルを低下させる（例えば、副甲状腺細胞のイオン模倣物）ことによって、破骨細胞の骨再吸収を直接的（例えば、破骨細胞のイオン模倣化合物）または間接的に遮断する化合物は、骨損失を阻止することができ、よって、骨粗鬆症に苦しむ患者に有益な効果を生じる。
加えて、ＰＴＨの間欠的な低用量投与によって、骨体積および適当な骨再形成に対する同化作用が生じることが知られている。よって、副甲状腺ホルモンの一過性の上昇を誘起する化合物および投与様式（例えば、副甲状腺細胞イオン分解物（ionlytic）の間欠的投与）は、骨粗鬆症に苦しむ患者の骨体積を増加することができる。
加えて、１またはそれを超える無機イオン受容体活性の欠陥により特徴付けられる疾病または不全症も、本発明によって治療することができる。例えば、ある種の形態の原発性副甲状腺亢進症は、異常に高レベルの副甲状腺ホルモンと循環カルシウムに対する副甲状腺応答性の低下によって特徴付けられる。カルシウム受容体調節剤を用いて、カルシウムに対する副甲状腺細胞応答性を調節することができる。
好ましくは、該化合物は、カルシウム受容体活性を調節し、カルシウム受容体の１またはそれを超える活性を調節することによって作用できる疾病または不全症の治療に用いられる。好ましくは、該疾病または不全症は、異常な骨およびミネラルの恒常性、さらに好ましくはカルシウム恒常性によって特徴付けられる。
異常なカルシウム恒常性は、１またはそれを超える以下の活性：
（１）血清カルシウムの異常な上昇または低下；
（２）カルシウムの尿排泄の異常な上昇または低下；
（３）例えば、骨ミネラル密度測定によって評価されるような、骨カルシウムレベルの異常な上昇または低下；
（４）食餌カルシウムの異常な吸収；および
（５）副甲状腺ホルモンおよびカルシトニンのごときカルシウム恒常性に作用する循環メッセンジャーまたはホルモンの産生および/または放出の異常な上昇または低下
によって特徴付けられる。カルシウム恒常性のこれらの種々の態様の異常な上昇または低下は、一般集団において発生するものに関連し、疾病または不全症と一般的に関連している。
より一般的に、無機イオン受容体の活性を調節する分子は、異常な無機イオン恒常性によって特徴付けられる疾病の治療に有用である。好ましくは、該分子は、無機イオン受容体の１またはそれを超える効果を調節する。無機イオン受容体調節剤には、イオン模倣物、イオン分解物、カルシウム模倣物（calcimimetic）およびカルシウム分解物（calcilytic）が含まれる。
イオン模倣物とは、無機イオン受容体で、イオン濃度を上昇させる効果を模倣する分子である。好ましくは、該分子は、１またはそれを超えるカルシウム受容体活性に作用する。カルシウム模倣物とは、１またはそれを超えるカルシウム受容体活性に作用し、好ましくはカルシウム受容体に結合するイオン模倣物である。
イオン分解物とは、無機イオン受容体上の無機イオンによって引き起こされる１またはそれを超える活性を低下または遮断する分子である。好ましくは、該分子は、１またはそれを超えるカルシウム受容体活性を阻害する。カルシウム分解物とは、細胞外カルシウムによって誘起される１またはそれを超えるカルシウム受容体活性に作用し、好ましくはカルシウム受容体に結合するイオン分解物である。
無機イオン受容体調節剤は、薬理剤または組成物として処方化して、患者の投与を容易にすることができる。薬理剤または組成物とは、哺乳動物、好ましくはヒトへの投与に適した形態の剤または組成物である。投与に適した形態に関して考慮すべき事柄は、当該分野で知られており、毒性効果、溶解性、投与経路および活性の維持が含まれる。
かくして、本発明の第一の態様は、１またはそれを超える無機イオン受容体活性を誘起するか、または細胞外無機イオンによって引き起こされる１またはそれを超える無機イオン受容体活性を遮断するかのいずれかの分子よりなる無機イオン受容体調節剤をその要旨とする。該分子は式：
0004555401.tif 000002
［式中、各Ｘは、独立して、イソプロピル、ＣＨ3Ｏ、ＣＨ3Ｓ、ＣＦ3Ｏ、脂肪族環、および結合または縮合した芳香族環よりなる群から選択され；および
各ｍは、独立して、０〜５］を有する。
好ましくは、芳香族環および脂肪族環は５〜７員を有する。さらに好ましくは、芳香族環および脂肪族環は、炭素原子のみを含有する（すなわち、環は複素環ではない）。
好ましくは、分子は、細胞外カルシウムによって引き起こされる１またはそれを超えるカルシウム受容体活性を誘起するか、または１またはそれを超えるカルシウム受容体活性を遮断する。
本発明のもう１つの態様は、式：
0004555401.tif 000003
［式中、各Ｘは、独立して、Ｈ、ＣＨ3、ＣＨ3Ｏ、ＣＨ3ＣＨ2Ｏ、メチレンジオキシ、Ｂｒ、Ｃl、Ｆ、ＣＦ3、ＣＨＦ2、ＣＨ2Ｆ、ＣＦ3Ｏ、ＣＨ3Ｓ、ＯＨ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＯＮＨ2、ＣＮ、ＮＯ2、ＣＨ3ＣＨ2、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ-ブチル、アセトキシ、脂肪族環、および結合または縮合した芳香族環よりなる群から選択され；
各Ｒは、独立して、水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、アリル、イソブチル、ｔ-ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、インデニル、インダニル、ジヒドロインドリル、チオジヒドロインドリル、および２-、３-もしくは４-ピペリジ（ニ）ルよりなる群から選択され；および
各ｍは、独立して、０〜５］
を有する無機イオン受容体調節剤をその要旨とする。
該分子は、１またはそれを超える無機イオン受容体活性を誘起するか、または細胞外無機イオンによって引き起こされる１またはそれを超える無機イオン受容体活性を遮断する。好ましくは、該分子は、細胞外カルシウムによって引き起こされる１またはそれを超えるカルシウム受容体活性を引き起こすか、または１またはそれを超えるカルシウム受容体活性を遮断する。
好ましい具体例において、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3、エチルまたはイソプロピルのいずれかであって、各Ｘは、独立して、イソプロピル、ＣＨ3Ｏ、ＣＨ3Ｓ、ＣＦ3Ｏ、脂肪族環、および結合または縮合した芳香族環よりなる群から選択される。好ましくは、脂肪族環、および結合または縮合した芳香族環は、５〜７員を有する。さらに好ましくは、芳香族環および脂肪族環は炭素原子のみを含んでいる。
本発明のもう１つの態様は、化合物４Ｌ、化合物８Ｊ、化合物８Ｕ、化合物９Ｒ、化合物１１Ｘ、化合物１２Ｕ、化合物１２Ｖ、化合物１２Ｚ、化合物１４Ｕ、化合物１６Ｍおよび化合物１６Ｐよりなる群から選択される分子よりなる無機イオン受容体調節剤をその要旨とする。
本発明のもう１つの態様は、無機イオン受容体活性を調節することにより疾病または不全症を治療するための、本明細書に記載した剤を使用する方法をその要旨とする。かかる治療を要する患者は、日常的な血液分析のごとき、標準的な医学技術によって、例えば、無機イオン濃度の変化によってその産生または分泌が影響される蛋白質の欠陥を検出することによって、または無機イオン恒常性に作用する異常なレベルの無機イオンまたはホルモンを検出することによって、同定することができる。
治療方法には、治療有効量の無機イオン受容体調節剤を患者に投与することが含まれる。好ましい具体例において、これらの方法を用いて、異常な無機イオン恒常性によって特徴付けられる疾病または不全症、さらに好ましくは異常なカルシウム恒常性によって特徴付けられる疾病または不全症を治療する。異常なカルシウム恒常性によって特徴付けられる疾病および不全症には、副甲状腺亢進症、骨粗鬆症、ならびに他の骨およびミネラル-関連疾病など（例えば、「ハリソンの内科学の原理（Ｈarrison’s Ｐrinciples of Ｉnternal Ｍedicine）」のごとき標準的な医学書に記載されているもの）が含まれる。かかる疾病および不全症は、１またはそれを超えるＣａ2+の作用を模倣または遮断し、それによって患者の体内の蛋白質または他の分子のレベルに直接的または間接的に作用するカルシウム受容体調節剤を用いて治療する。
「治療有効量」とは、患者における疾病または不全症の１またはそれを超える症状をある程度緩和するか；あるいは、疾病もしくは不全症に関連するか、または原因となる１もしくはそれを超える生理学的指標もしくは生化学的指標を部分的または完全に正常に戻す剤の量を意味する。
好ましい具体例において、患者は、１またはそれを超える異常なレベルのカルシウム受容体調節要素によって特徴付けられる疾病または不全症を有し、分子は、副甲状腺細胞、骨破骨細胞、傍糸球体腎臓細胞、近位尿細管腎臓細胞、遠位尿細管腎臓細胞、中枢神経系細胞、末梢神経系細胞、ヘンレ係蹄の厚上向脚の細胞および/または集合管、上皮細胞のケラチン細胞、甲状腺の傍濾胞細胞（Ｃ-細胞）、腸細胞、胎盤のトロホブラスト、血小板、血管平滑筋細胞、心臓心房細胞、ガストリン-分泌細胞、グルカゴン-分泌細胞、腎臓メサンギウム細胞、乳細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞およびＧＩ管細胞よりなる群から選択される細胞のカルシウム受容体に対して活性である。
さらに好ましくは、細胞は副甲状腺細胞であって、分子は患者の血清中の副甲状腺ホルモンレベルを低下させ、なおさらに好ましくは、レベルは血漿Ｃａ2+の低下を引き起こすに十分な程度まで低下し、最も好ましくは、副甲状腺ホルモンレベルは正常な個人に存在するレベルまで低下する。
かくして、本発明は、無機イオン受容体活性を調節することにより疾病または不全症を治療するのに有用な剤および方法をその要旨とする。例えば、本発明の分子を用いて、外部カルシウムに対する変化を検出し、それに応答する種々の細胞型上のカルシウム受容体を標的化することができる。例えば、外部カルシウムを模倣する分子を用いて、副甲状腺細胞からの副甲状腺ホルモンの分泌を選択的に低下することができ、あるいは、破骨細胞による骨再吸収を低下することができ、あるいは、Ｃ-細胞からのカルシトニンの分泌を刺激することができる。かかる分子を用いて、副甲状腺亢進症および骨粗鬆症のごとき異常なカルシウム恒常性によって特徴付けられる疾病または不全症を治療することができる。
本発明の他の要旨および有利な点は、以下の好ましい具体例の説明および請求の範囲から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
図１Ａ-Ｄ、２Ａ-Ｄ、３Ａ-Ｅ、４Ａ-Ｅ、５Ａ-Ｄ、６Ａ-Ｅ、７Ａ-Ｅ、８Ａ-Ｅ、９Ａ-Ｆ、１０Ａ-Ｅ、１１Ａ-Ｅ、１２Ａ-Ｄ、１３Ａ-Ｄ、１４Ａ-Ｄ、１５Ａ-Ｄ、１６Ａ-Ｄ、１７Ａ-Ｄ、１８Ａ-Ｅ、１９Ａ-Ｄおよび２０Ａ-Ｄは、本発明の有用な分子を見出すために調製およびスクリーニングした分子のファミリーを説明する、ジフェニルプロピル-α-フェネチルアミン由来の分子の化学構造を示している。
好ましい具体例の説明
本発明は、無機イオン受容体で無機イオンの効果を模倣または遮断することができる無機イオン受容体調節剤を記載する。無機イオン受容体調節剤の好ましい使用は、無機イオン受容体活性を調節することによって、疾病または不全症を治療することにある。好ましくは、該分子を用いて、異常なイオン恒常性、さらに好ましくは異常なカルシウム恒常性によって特徴付けられる疾病または不全症を治療する。診断使用のごとき、無機イオン受容体調節剤の他の使用は、当該分野で知られている（ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号）。
Ｉ．カルシウム受容体
カルシウム受容体、およびカルシウム受容体をコードする核酸は、ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号によって記載されている。カルシウム受容体は、副甲状腺細胞、破骨細胞、傍糸球体腎臓細胞、近位尿細管腎臓細胞、遠位尿細管腎臓細胞、中枢神経系細胞、末梢神経系細胞、ヘンレ係蹄の厚上向脚の細胞および/または集合管、上皮細胞のケラチン細胞、甲状腺の傍濾胞細胞（Ｃ-細胞）、腸細胞、胎盤のトロホブラスト、血小板、血管平滑筋細胞、心臓心房細胞、ガストリン-分泌細胞、グルカゴン-分泌細胞、腎臓メサンギウム細胞、乳細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞、およびＧＩ管細胞のごとき種々の細胞型に存在する。これらの細胞型のカルシウム受容体は、異なっていてもよい。細胞が２以上の型のカルシウム受容体を有することもできる。
カルシウム受容体活性と種々の細胞からのアミノ酸配列との比較は、種々のカルシウム受容体型が存在することを示している。例えば、カルシウム受容体は、種々の二価および三価のカチオンに応答することができる。副甲状腺カルシウム受容体がカルシウムおよびＧｄ3+に応答する一方、破骨細胞はカルシウムのごとき二価カチオンには応答するが、Ｇｄ3+には応答しない。かくして、副甲状腺カルシウム受容体は、破骨細胞上のカルシウム受容体と薬理学的に異なる。
それとは反対に、副甲状腺細胞およびＣ-細胞に存在するカルシウム受容体をコードする核酸配列は、これらの受容体が酷似したアミノ酸構造を有することを示している。それにもかかわらず、カルシウム模倣化合物は、種々の薬理学を示し、副甲状腺細胞およびＣ-細胞において異なる活性を調節している。かくして、カルシウム受容体の薬理学的特性は、カルシウム受容体は同様な構造を有し得るが、それらが発現される細胞型または器官に依存して顕著に変化し得る。
一般に、カルシウム受容体は、細胞外Ｃａ2+に対して低い親和性を有する（見かけのＫｄは一般的に約０．５ｍＭより大きい）。カルシウム受容体は、クーパー（Ｃooper）、ブルーム（Ｂloom）およびロス（Ｒoth）、「神経薬理学の生化学的基礎（Ｔhe Ｂiochemical Ｂasis of Ｎeuropharmacology）」第４章によって定義されている遊離または結合エフェクター機構を含んでいるかも知れず、よって、細胞内カルシウム受容体、例えば、カルモジュリンおよびトロポニンとは異なる。
カルシウム受容体は、細胞外カルシウムレベルの変化に応答する。正確な変化は、特定の受容体、および該受容体を含む細胞系に依存して変化する。例えば、副甲状腺細胞中のカルシウム受容体に対するカルシウムのイン・ビトロ（in vitro）の効果には以下のものが含まれる：
１．内部カルシウムが、外部カルシウムの流入および/または内部カルシウムの流動化によって上昇すること。内部カルシウムの上昇の特徴には以下のものが含まれる：
（ａ）［Ｃａ2+］ｉの迅速（ピークまでの時間＜５秒）かつ一過性の上昇が、１μＭ Ｌａ3+または１μＭ Ｇｄ3+による阻害に対して耐性であって、（細胞外Ｃａ2+不存在下）イオノマイシンで前処理することによって阻害されること；
（ｂ）該上昇が、ジヒドロピリジンによって阻害されないこと；
（ｃ）該一過性の上昇が、１０ｍＭフッ化ナトリウムで１０分間前処理することによって阻害されること；
（ｄ）該一過性の上昇が、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、メゼレインまたは（-）-インドラクタムＶのごときプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）のアクチベーターで前処理することによって低下すること。プロテインキナーゼＣアクチベーターの全体的効果が、最大応答に影響することなしに、カルシウムに対する濃度-応答曲線を右へシフトすること；および
（ｅ）百日咳毒での処理（１００ｎｇ/ｍlを＞４時間）が上昇に影響しないこと
２．イノシトール-１，４，５-三リン酸またはジアシルグリセロールの形成が迅速に上昇すること（＜３０秒）。百日咳毒での処理（１００ｎｇ/ｍlで＞４時間）がこの上昇に影響しないこと；
３．ドーパミン-およびイソプロテレノール-刺激性サイクリックＡＭＰ形成の阻害。この効果が、百日咳毒（１００ｎｇ/ｍlで＞４時間）で前処理することによって遮断されること；ならびに
４．ＰＴＨ分泌の阻害。百日咳毒での処理（１００ｎｇ/ｍlで＞４時間）が、ＰＴＨ分泌の阻害に影響しないこと。
当該分野で知られている技術を用いて、種々の細胞の他のカルシウム受容体に対するカルシウムの効果を容易に測定することができる。かかる効果は、副甲状腺細胞で認められた内部カルシウムの上昇に関して同様となり得る。しかしながら、該効果は、副甲状腺ホルモン以外のホルモンの放出を引き起こす、または阻害するごとく、他の態様においては異なると予想される。
II．無機イオン受容体調節剤
無機イオン受容体調節剤は、１またはそれを超える無機イオン受容体活性を誘起するか、または細胞外無機イオンによって引き起こされる１またはそれを超える無機イオン受容体活性を遮断する。カルシウム受容体調節剤は、カルシウム受容体に対する細胞外Ｃａ2+の効果を模倣または遮断することができる。好ましいカルシウム受容体調節剤は、カルシウム模倣物およびカルシウム分解物である。無機イオン受容体調節剤の一般的かつ特異的な構造は、前掲の概要および図１に供する。
無機イオン受容体調節剤は、分子が特定の活性を有することが示された後にモデル化された分子（すなわち、リード分子）をスクリーニングすることによって同定できる（ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号）。
本発明によって記載される好ましい無機イオン受容体調節剤は、８Ｊ、８Ｕ、９Ｒ、１１Ｘ、１２Ｕ、１２Ｖ、１２Ｚ、１４Ｕ、１６Ｍおよび１６Ｐである。これらの化合物は、全て、５μＭ未満のＥＣ50値を有する。
ＥＣ50とは、最大効果の半分を誘起する分子の濃度である。ＩＣ50とは、最大遮断効果の半分を引き起こす分子の濃度である。ＥＣ50またはＩＣ50は、無機イオン受容体における無機イオンの１またはそれを超える活性をアッセイすることによって測定することができる。好ましくは、かかるアッセイは特定のカルシウム受容体に特異的である。例えば、特定の無機イオン受容体によってその産生または分泌が調節されるホルモンを測定するアッセイが好ましい。
［Ｃａ2+］ｉにおける上昇は、蛍光表示薬を用いるか、またはカルシウム受容体をコードする核酸を注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞中のＣｌ-電流の上昇を測定するごとき標準的な技術を用いて検出できる（ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号）。例えば、ポリ（Ａ）+ｍＲＮＡは、副甲状腺細胞、骨破骨細胞、傍糸球体腎臓細胞、近位尿細管腎臓細胞、遠位尿細管腎臓細胞、ヘンレ係蹄の厚上向脚の細胞および/または集合管、上皮細胞のケラチン細胞、甲状腺の傍濾胞細胞（Ｃ-細胞）、腸細胞、中枢神経系細胞、末梢神経系細胞、胎盤のトロホブラスト、血小板、血管平滑筋細胞、心臓心房細胞、ガストリン-分泌細胞、グルカゴン-分泌細胞、腎臓メサンギウム細胞、乳細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞、およびＧＩ管細胞のごとき、カルシウム受容体を発現している細胞から得ることができる。好ましくは、該核酸は、副甲状腺細胞、Ｃ-細胞または破骨細胞からのものである。さらに好ましくは、該核酸は、カルシウム受容体をコードし、プラスミドまたはベクター上に存在する。
好ましくは、分子は、５μＭ以下、よりさらに好ましくは１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭまたは１ｎＭ以下のカルシウム受容体にＥＣ50またはＩＣ50を有するカルシウム模倣物またはカルシウム分解物である。治療または診断のためにイン・ビボ（in vivo）またはイン・ビトロ（in vitro）で用いるのに低濃度の分子で可能なため、かかる低いＥＣ50値またはＩＣ50値は有利である。かかる低いＥＣ50値およびＩＣ50値を有する分子の発見により、同様な潜在能力および効果を有するさらなる分子を設計および合成することができる。
好ましい具体例において、カルシウム受容体調節剤は、イン・ビトロ（in vitro）で副甲状腺細胞からの副甲状腺ホルモンの分泌を阻害し、イン・ビボ（in vivo）でＰＴＨ分泌を低下させ；イン・ビトロ（in vitro）でＣ-細胞からのカルシトニン分泌を刺激し、イン・ビボ（in vivo）でカルシトニンレベルを上昇させ；あるいは、イン・ビトロ（in vitro）で破骨細胞の骨再吸収を遮断し、イン・ビボ（in vivo）で骨再吸収を阻害するカルシウム模倣物である。
もう１つの好ましい具体例において、カルシウム受容体調節剤は、イン・ビトロ（in vitro）で副甲状腺細胞からの副甲状腺ホルモンの分泌を誘起し、イン・ビボ（in vivo）で副甲状腺ホルモンのレベルを上昇させるカルシウム分解物である。
好ましくは、該剤は、特定の細胞において、無機イオン受容体活性、さらに好ましくはカルシウム受容体活性を選択的に標的化する。「選択的」とは、所定の濃度の剤につき、他の細胞型でよりも１種の細胞型における無機イオン受容体活性により大きな効果を分子が発揮することを意味する。好ましくは、差効果は１０倍またはそれを超える。好ましくは、濃度は血漿濃度を示し、測定した効果は、血漿カルシトニン、副甲状腺ホルモンまたは血漿カルシウムのごとき細胞外メッセンジャーの生成である。例えば、好ましい具体例において、該剤は、カルシトニン分泌以上のＰＴＨ分泌を選択的に標的化する。
もう１つの好ましい具体例において、分子は、副甲状腺細胞、骨破骨細胞、傍糸球体腎臓細胞、近位尿細管腎臓細胞、遠位尿細管腎臓細胞、ヘンレ係蹄の厚上向脚の細胞および/または集合管、中枢神経系細胞、末梢神経系細胞、上皮細胞のケラチン細胞、甲状腺の傍濾胞細胞（Ｃ-細胞）、腸細胞、胎盤のトロホブラスト、血小板、血管平滑筋細胞、心臓心房細胞、ガストリン-分泌細胞、グルカゴン-分泌細胞、腎臓メサンギウム細胞、乳細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞およびＧＩ管細胞よりなる群から選択される全てではないが、１またはそれを超える細胞で５μＭ以下のＥＣ50またはＩＣ50を有する。
好ましくは、無機イオン受容体調節剤は、無機イオン受容体を有する細胞中の細胞外イオンの全ての効果を模倣または遮断する。例えば、カルシウム受容体調節剤は、好ましくは、カルシウム受容体を有する細胞における細胞外イオンの全ての効果を模倣または遮断する。カルシウム模倣物は、細胞外Ｃａ2+の全ての生物学的活性を有している必要はないが、むしろ、少なくとも１種のかかる活性を模倣する。同様に、カルシウム分解物は、細胞外カルシウムによって引き起こされる全ての活性を低下または阻害する必要はない。くわえて、異なるカルシウム模倣物および異なるカルシウム分解物が、細胞外Ｃａ2+が行うように、カルシウム受容体の同一部位に結合してそれらの効果を発揮する必要はない。
Ａ．カルシウム模倣物
カルシウム受容体でＣａ2+の活性を模倣または遮断する分子の能力は、当該分野で知られ、ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号によって記載されている方法を用いて測定することができる。例えば、カルシウム模倣物は、イン・ビトロ（in vitro）で副甲状腺細胞で試験した場合には、１またはそれを超える、好ましくは全ての以下の活性を有している：
１．分子が、１μＭ Ｌａ3+または１μＭ Ｇｄ3+による阻害に対して耐性である［Ｃａ2+］ｉにおける迅速（ピークまでの時間＜５秒）かつ一過性の上昇を引き起こすこと。［Ｃａ2+］ｉの上昇が、細胞外Ｃａ2+不存在下では持続するが、（細胞外Ｃａ2+不存在下）イオノマイシンで前処理することによって阻害されること；
２．分子が、最大濃度未満の細胞外Ｃａ2+によって誘導した［Ｃａ2+］ｉの上昇を強化すること；
３．細胞外Ｃａ2+によって誘導した［Ｃａ2+］ｉの上昇が、ジヒドロピリジンによって阻害されないこと；
４．分子によって引き起こされる［Ｃａ2+］ｉの一過性の上昇が、１０ｍＭフッ化ナトリウムで１０分間前処理することによって阻害されること；
５．分子によって引き起こされる［Ｃａ2+］ｉの一過性の上昇が、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、メゼレインまたは（-）-インドラクタムＶのごときプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）のアクチベーターで前処理することによって低下されること。プロテインキナーゼＣアクチベーターの全体的効果が、最大応答に影響することなしに、該分子の濃度-応答曲線を右にシフトすること；
６．分子が、イノシトール-１，４，５-三リン酸および/またはジアシルグリセロールの形成における迅速（＜３０秒）な上昇を引き起こすこと；
７．分子が、ドーパミン-またはイソプロテレノール-刺激性サイクリックＡＭＰ形成を阻害すること；
８．分子が、ＰＨＴ分泌を阻害すること；
９．百日咳毒での前処理（１００ｎｇ/ｍlで＞４時間）が、サイクリックＡＭＰ形成に対する該分子の阻害効果は遮断するが、［Ｃａ2+］ｉ、イノシトール-１，４，５-三リン酸、もしくはジアシルグリセロールの上昇にも、ＰＴＨ分泌の低下にも作用しないこと；
１０．分子が、ウシまたはヒト副甲状腺細胞からのポリ（Ａ）+-リッチなｍＲＮＡを注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞中のＣｌ-電流の上昇は誘導するが、水またはラット脳もしくは肝臓のｍＲＮＡを注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞には作用しないこと；および
１１．同様にして、副甲状腺細胞からのクローン化カルシウム受容体を用いて、分子が、受容体をコードする特異的なｃＤＮＡまたはｍＲＮＡを注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞における応答を誘導するであろうこと。
種々のカルシウム活性は、利用可能な技術を用いて測定することができる（ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号）。他のカルシウム応答性細胞、好ましくはカルシウム受容体でＣａ2+活性を模倣する分子の平行した定義付けは、本明細書に供する実施例およびネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号から明らかである。
好ましくは、本明細書に記載したバイオアッセイ、またはネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号によって測定した剤は、１またはそれを超える、さらに好ましくは全ての以下の活性を有する：３０秒未満の間を有する内部カルシウムの一過性の上昇を誘起する（好ましくは、内部カルシウムを流動化することによって）こと；３０秒以内に生じる、［Ｃａ2+］ｉの迅速な上昇を誘起すること；［Ｃａ2+］ｉの持続した（３０秒より長い）上昇を誘起する（好ましくは、外部カルシウムの流入を引き起こすことによって）こと；好ましくは６０秒以内に、イノシトール-１，４，５-三リン酸またはジアシルグリセロールの上昇を誘起すること；および、ドーパミン-またはイソプロテレノール-刺激性サイクリックＡＭＰ形成を阻害すること。
［Ｃａ2+］ｉの一過性の上昇は、好ましくは、１０ｍＭフッ化ナトリウムで１０分間細胞を前処理することによって阻害され、あるいは、該一過性の上昇は、プロテインキナーゼＣのアクチベーター、好ましくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、メゼレインまたは（-）インドラクタムＶで細胞を簡単に前処理する（１０分以内）ことによって低下する。
Ｂ．カルシウム分解物
外部カルシウムの活性を遮断する分子の能力は、標準的な技術を用いて測定できる（ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号）。例えば、外部カルシウムの効果を遮断する分子は、副甲状腺細胞に関して用いた場合には、イン・ビトロ（in vitro）で副甲状腺細胞で試験した場合に１またはそれを超える、好ましくは、全ての以下の特性を有する：
１．分子が、上昇した細胞外Ｃａ2+濃度の能力を部分的または完全に遮断して：
（ａ）［Ｃａ2+］ｉを上昇させること、
（ｂ）細胞内Ｃａ2+を流動化させること、
（ｃ）イノシトール-１，４，５-三リン酸の形成を上昇させること、
（ｄ）ドーパミン-またはイソプロテレノール-刺激性サイクリックＡＭＰの形成を低下させること、および
（ｅ）ＰＴＨ分泌を阻害すること；
２．分子が、細胞外Ｃａ2+またはカルシウム模倣化合物によって誘導した、ウシまたはヒト副甲状腺細胞からのポリ（Ａ）+ｍＲＮＡを注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞中のＣｌ-電流の上昇は遮断するが、水または肝臓ｍＲＮＡを注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞では遮断しないこと；
３．同様にして、副甲状腺細胞からのクローン化カルシウム受容体を用いて、分子が、細胞外Ｃａ2+またはカルシウム模倣化合物によって誘導した、カルシウム受容体をコードする特異的なｃＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはｃＲＮＡを注射したゼノプス（Ｘenopus）卵母細胞の応答を遮断するであろうこと。
カルシウム応答細胞における、好ましくはカルシウム受容体におけるＣａ2+活性を遮断する分子の平行した定義付けは、本明細書に供した実施例およびネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号から明らかである。
III．疾病または不全症の治療
本発明によって記載した化合物の好ましい使用は、無機イオン受容体活性を調節することによって種々の疾病または不全症を治療または予防することにある。本発明の無機イオン受容体調節剤は、１またはそれを超える細胞作用を引き起こして最終的には治療効果を発揮する無機イオン受容体上の作用にはたらく。
種々の疾病および不全症が、カルシウム受容体のごとき無機イオン受容体を有する細胞を標的化することにより、本発明によって治療することができる。例えば、原発性副甲状腺亢進症（ＨＰＴ）は、高カルシウム血症、および循環ＰＴＨレベルの上昇によって特徴付けられる。主要な型のＨＰＴに関連する欠陥は、細胞外Ｃａ2+による負のフィードバック調節に対する副甲状腺細胞の感度が低下することである。かくして、原発性ＨＰＴを患う患者からの組織においては、ＰＴＨ分泌を低下させるのに要する細胞外Ｃａ2+の正常な濃度よりも高いように、細胞外Ｃａ2+の「設定値」が右にシフトしている。さらに、原発性ＨＰＴにおいては、高濃度の細胞外Ｃａ2+でさえ、しばしば、部分的にのみＰＴＨ分泌を低下する。続発性（尿毒性）ＨＰＴにおいては、Ｃａ2+がＰＴＨ分泌を抑制する程度は正常であるが、細胞外Ｃａ2+の設定値の同様な上昇が認められる。ＰＴＨ分泌の変化は、［Ｃａ2+］ｉの変化によって平行される：［Ｃａ2+］ｉにおける細胞外Ｃａ2+-誘導性の上昇の設定値は右にシフトし、かかる上昇の程度は低下する。
細胞外Ｃａ2+の作用を模倣する分子は、原発性および続発性ＨＰＴの双方の長期管理に有利である。かかる分子は、高カルシウム血症状態単独では達成できないＰＴＨ分泌を低下するのに必要な付加機動力を供し、それによって高カルシウム血症状態を緩和するのを助ける。細胞外Ｃａ2+よりも大きな効率性を有する分子は、腺腫組織において特に厄介であるＰＴＨ分泌の明らかな非抑制性要素を克服することができる。別法として、またはさらに、かかる分子は、ウシおよびヒトの腺腫副甲状腺組織におけるプレプロＰＴＨ ｍＲＮＡレベルを低下させることが示されている長期の高カルシウム血症のように、ＰＴＨの合成を低下させることができる。また、長期の高カルシウム血症は、イン・ビトロ（in vitro）で副甲状腺細胞の増殖も低下させ、よって、カルシウム模倣物は、続発性ＨＰＴの特性を示す副甲状腺細胞の過形成を制限するのにも有効となり得る。
副甲状腺細胞以外の細胞は、細胞外Ｃａ2+濃度の生理学的な変化に直接的に応答できる。例えば、甲状腺の傍濾胞細胞（Ｃ-細胞）からのカルシトニン分泌は、細胞外Ｃａ2+濃度の変化によって調節されている。
単離破骨細胞は、細胞内Ｃａ2+の流動化から部分的に生じる［Ｃａ2+］ｉの上昇に対応した細胞外Ｃａ2+濃度の上昇に応答する。破骨細胞における［Ｃａ2+］ｉの上昇は、骨再吸収の阻害と関連している。造骨骨芽細胞からのアルカリホスファターゼの放出は、カルシウムによって直接的に刺激される。
腎臓中の傍糸球体細胞からのレニンの分泌は、ＰＴＨ分泌と同様に、細胞外Ｃａ2+濃度の上昇によって低下する。細胞外Ｃａ2+は、これらの細胞における細胞内Ｃａ2+の流動化を引き起こす。他の腎臓細胞は以下のようにカルシウムに応答する：Ｃａ2+の上昇は近位尿細管細胞による１，２５（ＯＨ）2-ビタミンＤの形成を阻害し、遠位尿細管細胞におけるカルシウム結合蛋白質の産生を刺激し、Ｃａ2+およびＭｇ2+の管再吸収およびヘンレ係蹄の厚上行脚の髄質（ＭＴＡＬ）へのバソプレシンの作用を阻害し、皮質集合管細胞におけるバソプレシン作用を低下させ、副腎糸球体の血管中の血管平滑筋細胞に作用する。
また、カルシウムは、腸杯細胞、乳細胞、および皮膚細胞の分化を促進し；心臓心房からの心房性Ｎａ利尿ペプチド分泌を阻害し；血小板におけるｃＡＭＰの蓄積を低下し；ガストリンおよびグルカゴンの分泌を変化させ；血管平滑筋細胞に作用して、血管作用因子の細胞分泌を改善し；中枢神経系および末梢神経系の細胞に作用する。
かくして、細胞内シグナルとしてのその偏在する役割に加えて、Ｃａ2+が細胞外シグナルとしても機能して、ある種の特殊細胞の応答性を調節することを示す十分な示唆が存在する。本発明の分子は、これらの細胞における崩壊したＣａ2+応答に関連する疾病または不全症の治療に用いることができる。
作用細胞に基づいて治療または予防することができる特異的な疾病および不全症には、発作、脳卒中、頭部の外傷、脊髄の損傷のごとき中枢神経系のもの、心停止、新生児の窮迫または癲癇のごとき低酸素症−誘導性神経細胞の外傷、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病およびパーキンソン病、痴呆、筋肉の硬直、鬱病、不安症、パニック反応、強迫疾患、外傷後のストレス疾患、精神分裂症、神経弛緩悪性症候群、およびトゥーレット症候群のごとき神経変性疾患；不適当なＡＤＨの分泌症候群（ＳＩＡＨ）、肝硬変、心不全および腎症のごとき腎臓による過剰な水の再吸収を含む疾病；高血圧；カチオン性抗生物質（例えば、アミノグルコシド抗生物質）からの腎臓毒性の予防および/または減少；下痢および過敏性腸症候群のごとき腸運動性不全；サルコイドーシスのごときＧＩ吸収病；ならびに自己免疫疾患および組織移植片の拒絶反応が含まれる。
本発明の無機イオン受容体調節剤は、典型的にヒト患者の治療に用いられるであろうが、他の霊長類のごとき他の恒温動物種、ブタ、ウシおよび家禽のごとき畜産動物；およびウマ、イヌおよびネコのごときスポーツ動物およびペットにおける同様または同一の疾病または不全症を治療するのにもそれを用いることができる。
IV．投与
本発明の分子は、種々の投与様式用に処方化して、無機イオン受容体活性を調節することによって患者を治療することができる。化合物を投与する技術および処方は、一般的に、「レミントンの医薬科学（Ｒemington’s Ｐharmaceutical Ｓciences）」、ペンシルベニア州、イーストンのマック・パブリッシング・コーポレイション（Ｍack Ｐublishing Ｃo.）社に見出すことができる。イオン模倣物およびイオン分解物の投与は、ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号によって論じられている。
適当な形態は、部分的に、使用または投入経路、例えば、経口、経皮、または注射に依存する。かかる形態は、標的細胞が多細胞宿主または培養物のいずれに存在するにせよ、剤を標的細胞に到達させなければならない。例えば、血流に注射した薬理剤または組成物は、用いる濃度で可溶性でなければならない。他の因子は当該分野で知られており、毒性、および剤または組成物をその作用の発揮から防ぐ形態のごとき事柄が含まれる。
また、剤は、医薬上許容される塩（例えば、酸付加塩）およびその複合体として処方化することもできる。かかる塩の調製は、その生理学的作用の発揮から剤を防げることなしに、剤の物理学的特性を変化させることによって、薬理学的使用を促進することができる。物理学的特性の有用な変化の例には、経粘膜投与を促進するために融点を低下すること、およびより高濃度の薬物の投与を容易にするために溶解性を上昇させることが含まれる。
全身投与には、経口投与が好ましい。別法として、例えば、筋肉内、静脈内、腹膜内、および皮下のような注射を用いることができる。注射には、液体溶液、好ましくはハンク溶液もしくはリンゲル溶液のごとき生理学的に融和性の緩衝液中に本発明の分子を処方化する。くわえて、分子は、固体形態に処方化して、使用の直前に再溶解または懸濁することができる。また、凍結乾燥形態も作製することができる。
また、全身投与は、経粘膜または経皮方法によって行うことができ、あるいは、分子は、経口的に投与することができる。経粘膜または経皮投与には、浸透すべき遮蔽物に適した浸透剤を処方に用いる。かかる浸透剤は、一般的に当該分野で知られており、例えば、経粘膜投与には胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が含まれる。加えて、洗剤を用いて浸透性を促進することができる。経粘膜投与は、例えば、鼻腔スプレーを介して、または坐薬を用いて行うことができる。経口投与には、カプセル、錠剤およびトニックのごとき慣用的な経口投与形態に分子を処方化する。
局所投与には、当該分野で一般的に知られているように、軟膏、膏薬、ジェルまたはクリームに本発明の分子を処方化する。
一般的に、治療有効量は、そのＥＣ50およびＩＣ50ならびに患者の年令およびサイズ、ならびに患者に関連する疾病または不全症に依存して、約１nmolおよび３μmolの間の、好ましくは０．１nmolおよび１μmolの間の分子である。一般的に、それは、治療すべき動物の体重当たり、約０．１および５０ｍｇ/ｋｇの間、好ましくは０．０１および２０ｍｇ/ｋｇの間の量である。
Ｖ．実施例
本明細書に記載する化合物は、ネメス（Ｎemeth）ら、ＰＣＴ/ＵＳ９３/０１６４２号、国際公開番号ＷＯ ９４/１８９５９号によって記載されているもののごとき標準的な技術を用いて合成することができる。化合物４Ｌ、８Ｊ、８Ｕ、９Ｒ、１１Ｘ、１２Ｕ、１２Ｖ、１２Ｚ、１４Ｕ、１６Ｍおよび１６Ｐの合成を記載している実施例は以下に供する。化合物４Ｌ、８Ｊ、８Ｕ、１１Ｘおよび１６Ｍは、チタン（IV）イソプロポキシドの存在下にて第一級アミンをアルデヒドまたはケトンと縮合して調製した。次いで、得られた中間体イミンを、ホウ水素化シアノナトリウム、ホウ水素化ナトリウムまたはホウ水素化トリアセトキシナトリウムの作用によってイン・サイチュ（in situ）で還元した。化合物８Ｕを合成するための中間体エナミンは、水酸化パラジウムを用いて接触還元した。
化合物９Ｒ、１４Ｕおよび１６Ｐの合成は、ホウ水素化シアノナトリウムまたはホウ水素化トリアセトキシナトリウムの存在下にて、販売されているアルデヒドまたはケトンを第一級アミンで還元的にアミノ化することによって調製した。これら３種の化合物（９Ｒ、１４Ｕおよび１６Ｐ）の合成に関しては、ホウ水素化シアノナトリウムを用いるよりもホウ水素化トリアセトキシナトリウムの方が、より大きなジアステレオマー選択性を有する所望のジアステレオマーが得られることが判明した。順相ＨＰＬＣ、または有機溶媒からの再結晶によって、リッチな混合物をさらに精製して、単一のジアステレオマーとした。
化合物１２Ｕ、１２Ｖおよび１２Ｚは、ニトリルでのアミンの水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）媒介縮合によって調製した。得られた中間体イミンは、ホウ水素化シアノナトリウムまたはホウ水素化ナトリウムの作用によって、イン・サイチュ（in situ）で還元する。中間体アルケン（化合物１２Ｕおよび１２Ｖ）は、炭素パラジウムを用いたＥｔＯＨ中の接触水素化によって還元した。化合物のその対応する塩酸塩への転化をエーテルを含んだＨＣｌで遊離塩基を処理することによって行い白色固形物を得た。
これらの合成におけるアミンは、（１）ワイオミング州、ミルウォーキーのアルドリッチ・ケミカル社（Ａldrich Ｃhemical Ｃo.）から購入するか、（２）ニュージャージー州、ワレンのセルジェン・コーポレイション（Ｃelgene Ｃorp.）社から購入するか、あるいは（３）標準的な技術を用いて合成的に調製した。他の全ての試薬化学薬品は、アルドリッチ・ケミカル社（Ａldrich Ｃhemical Ｃo.）から購入した。
実施例１：化合物４Ｌの合成
Ｎ-３-フェニル-１-プロピル-１-（１-ナフチル）エチルアミン
３-フェニル１-プロピルアミン（１３５ｍｇ、１ミリモル）、１’-アセトナフトン（１７０ｍｇ、１ミリモル）およびチタン（IV）イソプロポキシド（３５５ｍｇ、１．３ミリモル）の混合物を室温にて１時間撹拌した。その反応物をエタノールを含む１Ｍホウ水素化シアノナトリウム（１ｍＬ）で処理し、室温にて１６時間撹拌した。その反応物をエーテルで希釈し、水（０．１ｍＬ）で処理した。その反応物を遠心してエーテル層を除去し、乳液状の油性物に濃縮した。少量のこの物質（１０ｍｇ）を、０．１％イソプロピルアミンを含有するジクロロメタン中の１０％メタノールまでのジクロロメタンの勾配を用いたＨＰＬＣ（フェノメネックス（Ｐhenomenex）、１．０×２５ｃｍ、５μＭシリカ）によって精製した。これにより、ＧＣ/ＥＩ-ＭＳ（Ｒ＝１０．４８分）により単一成分として生成物（遊離塩基）を得た。
ｍ/ｚ（相対強度）289（M+,11）,274（63）,184（5）,162（5）,155（100）,141（18）,115（8）,91（45）,77（5）
実施例２：化合物８Ｊの合成
Ｎ-（３-フェニルプロピル）-１-（３-チオメチルフェニル）エチルアミン塩酸塩
３’-アミノアセトフェノン（２．７ｇ、２０ミリモル）を濃ＨＣｌ４ｍＬ、氷４ｇおよび水８ｍＬに溶解した。その溶液を０℃に冷却し、温度を６℃以下に維持しつつ、水３−５ｍＬに溶解した亜硝酸ナトリウム（１．４５ｇ、２１ミリモル）を５分間にわたって添加した。チオメトキシナトリウム（１．７５ｇ、２５ミリモル）を水５ｍＬに溶解し、０℃に冷却した。温度を１０℃以下に維持しつつ、この溶液にジアゾニウム塩を１０分間にわたって添加した。温度を常温に上昇させつつ、その反応物をさらに１時間撹拌した。その反応混合物をエーテルおよび水の間に分配させた。そのエーテル層を分離し、重炭酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。エーテルを蒸発させて収率７４％の３’−チオメチルアセトフェノンを得た。減圧下にて蒸留することによって粗製物質を精製した。
３-フェニルプロピルアミン（０．１３ｇ、１ミリモル）、３’-チオメチルアセトフェノン（０．１７ｇ、１ミリモル）およびチタン（IV）イソプロポキシド（０．３６ｇ、１．２５ミリモル）を一緒に混合し、４時間放置した。エタノール（１ｍＬ）およびホウ水素化シアノナトリウム（０．０６３ｇ、１ミリモル）を添加し、その反応物を一晩撹拌した。エーテル４ｍＬおよび水２００μＬを添加することによって、その反応物を仕上げ処理した。その混合物を激しく撹拌し、次いで遠心して固形物を分離した。沈殿物からエーテル層を分離し、真空下にて溶媒を除去した。その油性物をジクロロメタンに再溶解し、シリカゲル上の分取用ＴＬＣによって化合物を精製し、３％メタノール/ジクロロメタンで溶出して標題化合物を精製油性物として得た：ＧＣ/ＥＩ−ＭＳ（Ｒf＝７．６４分）ｍ/ｚ（相対強度）285（M+,18）,270（90）,180（17）,151（100）,136（32）,104（17）,91（54）,77（13）
実施例３：化合物８Ｕの合成
Ｎ-３-（２-メトキシフェニル）-１-プロピル-（Ｒ）-３-メトキシ-α-メチルベンジルアミン塩酸塩
（Ｒ）-（＋）-３-メトキシ-α-メチルベンジルアミン（３．０２ｇ、２０ミリモル）、２-メトキシシンナムアルデヒド（３．２４ｇ、２０ミリモル）、およびチタン（IV）イソプロポキシド（８．５３ｇ、３０ミリモル、１．５当量）の混合物を室温にて２時間撹拌し、エタノールを含む１Ｍホウ水素化シアノナトリウム（２０ｍＬ）で処理した。その反応物を一晩（１６時間）撹拌し、ジエチルエーテルで希釈し、水（１．４４ｍＬ、８０ミリモル、４当量）で処理した。１時間混合した後、反応混合物を遠心し、エーテル層を除去し、油性物に濃縮した。この物質を氷酢酸に溶解し、水酸化パラジウムと共に振盪し、６０p.s.i.水素下、室温にて２時間水素添加した。濾過によって触媒を除去し、得られた溶液を濃厚な油性物に濃縮した。この物質をジクロロメタンに溶解し、１Ｎ ＮａＯＨで中和した。水相からジクロロメタン溶液を分離し、無水炭酸カリウム上で乾燥し、油性物に濃縮した。この物質をエーテルに溶解し、ジエチルエーテル中の１Ｍ ＨＣｌで処理した。得られた沈殿（白色固形物）を採取し、ジエチルエーテルで洗浄し、風乾した。この物質（遊離塩基）のＧＣ/ＥＩ-ＭＳ（Ｒf＝９．６９分）は単一の成分を示した：
ｍ/ｚ（相対強度）299（M+,21）,284（100）,164（17）,150（8）,135（81）,121（40）,102（17）,91（43）,77（18）
実施例４：化合物９Ｒの合成
（Ｒ）-Ｎ-（１-（２-ナフチル）エチル）-（Ｒ）-１-（１-ナフチル）エチルアミン塩酸塩
（Ｒ）-（＋）-１-（１-ナフチル）エチルアミン（１０．０ｇ、５８ミリモル）、２’-アセトナフトン（９．４ｇ、５６ミリモル）、チタン（IV）イソプロポキシド（２０．７ｇ、７３．０ミリモル）およびＥｔＯＨ（無水）（１００ｍＬ）の混合物を６０℃に３時間加熱した。次いで、ホウ水素化シアノナトリウム（ＮａＣＮＢＨ3）（３．６７ｇ、５８．４ミリモル）を添加した。その反応混合物を室温にて１８時間撹拌した。エーテル（１Ｌ）およびＨ2Ｏ（１０ｍＬ）をその反応混合物に添加し、次いで生じた沈殿を遠心によって除去した。真空下にて上清を蒸発させ、粗製生成物を熱ヘキサンから４回再結晶して、精製（９８＋％）ジアステレオマー１．５ｇを得た。遊離塩基をヘキサンに溶解し、濾過し、次いでエーテルを含むＨＣｌを添加して、白色固形物として生成物を沈殿させた（１．１ｇ、６％収率）。融点：軟化点２００−２４０℃（分解）
実施例５：化合物１１Ｘの合成
Ｎ-（４-イソプロピルベンジル）-（Ｒ）-１-（１-ナフチル）エチルアミン塩酸塩
（Ｒ）-（＋）-１-（１-ナフチル）エチルアミン（１．０６ｇ、６．２ミリモル）、４-イソプロピルベンズアルデヒド（０．９２ｇ、６．２ミリモル）およびチタン（IV）イソプロポキシド（２．２ｇ、７．７ミリモル）の混合物を１００℃に５分間加熱し、次いで室温にて４時間撹拌させた。次いで、ホウ水素化シアノナトリウム（ＮａＣＮＢＨ3）（０．３９ｇ、６．２ミリモル）、続いてＥｔＯＨ（１ｍＬ）を添加した。その反応混合物を室温にて１８時間撹拌した。エーテル（１００ｍＬ）およびＨ2Ｏ（１ｍＬ）をその反応混合物に添加し、次いで生じた沈殿を遠心によって除去した。上清を真空下にて蒸発させ、粗製生成物をシリカゲル（５０ｍｍ×３０ｃｍカラム）（１％ＭｅＯＨ/ＣＨＣｌ3で溶出）上のクロマトグラフィーに付した。次いで、クロマトグラフィーに付した物質をヘキサン中に溶解し、エタノールを含有するＨＣｌを添加して、白色固形物として生成物を沈殿させた（０．６７ｇ、３５％収率）。融点；２５７−２５９℃
実施例６：化合物１２Ｕの合成
Ｎ-３-（２-メチルフェニル）-１-プロピル-（Ｒ）-３-メトキシ-α-メチルベンジルアミン塩酸塩
ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の２−メチルシンナモニトリル（１．４３ｇ、１０ミリモル）の溶液を０℃に冷却し、１Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウム（１０ｍＬ、ジクロロメタン）で滴下処理（１５分）した。その反応物を０℃にて１５分間撹拌し、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の１Ｍ（Ｒ）-（＋）-３-メトキシ-α-メチルベンジルアミン（１．５１ｇ、１０ミリモル）溶液で滴下処理した（１５分）。その反応物を０℃にて１時間撹拌し、ホウ水素化シアノナトリウム（１ｇ、１６ミリモル）を含有するエタノール溶液（１００ｍＬ）に注入した。その反応混合物を室温にて４８時間撹拌した。その反応物をエーテルで希釈し、１Ｎ  ＮａＯＨで中和した。そのエーテル層を除去し、無水炭酸カリウム上で乾燥し、油性物に濃縮した。この物質を、ジクロロメタン中の５％メタノールまでのジクロロメタンの勾配を用いたシリカゲルを通してクロマトグラフィーに付して、ＧＣ／ＥＩ−ＭＳ（Ｒf＝１０．０６分）により単一成分である、不飽和中間体を得た。ｍ/ｚ（相対強度）281（M+,17）,266（59）,176（19）,146（65）,135（73）,131（100）,91（21）,77（13）
エタノール中の不飽和中間体を、炭素パラジウム存在下、室温にて１６時間水素添加した（１気圧のＨ2）。ジエチルエーテル中の１Ｍ  ＨＣｌで処理することによって、この反応からの生成物を塩酸塩に転化した。この物質（遊離塩基）のＧＣ/ＥＩ-ＭＳ（Ｒf＝９．３１分）は、単一成分であることを示した：
ｍ/ｚ（相対強度）283（M+,21）,268（100）,164（12）,148（8）,135（85）,121（12）,105（49）,91（23）,77（21）
実施例７：化合物１２Ｖの合成
Ｎ-３-（３-メチルフェニル）-１-プロピル-（Ｒ）-３-メトキシ-α-メチルベンジルアミン塩酸塩
化合物は、２-メチルシンナモニトリルを用いる以外は実施例６に記載した方法に従って調製した。不飽和中間体は、ＧＣ/ＥＩ−ＭＳ（Ｒf＝１０．２１分）によって単一成分であった。ｍ/ｚ（相対強度）281（M+,57）,266（86）,146（98）,135（88）,131（100）,115（43）,102（26）,91（43）,77（18）
実施例６に記載した方法を用いて、この物質を還元し、塩酸塩を形成させて生成物を得た。この物質（遊離塩基）のＧＣ／ＥＩ−ＭＳ（Ｒf＝９．１８分）は、単一成分であることを示した；ｍ/ｚ（相対強度）283（M+,19）,268（100）,164（11）,148（8）,135（76）,121（16）,105（45）,91（23）,77（21）
実施例８：化合物１２Ｚの合成
Ｎ-３-（２-クロロフェニル）-１-プロピル-（Ｒ）-１-（１-ナフチル）エチルアミン塩酸塩
化合物は、１０ミリモルスケールの２-クロロヒドロシンナモニトリルおよび（Ｒ）-（＋）-１-（１-ナフチル）エチルアミンを用いる以外は、実施例６に記載の方法に従って調製した。ジクロロメタン中の５％メタノールまでのジクロロメタンの勾配を用いるシリカゲルを通してクロマトグラフィーに付して、ＴＬＣ分析（ジクロロメタン中の５％メタノール）により単一成分の生成物を得た。塩酸塩は、ジエチルエーテル中の１Ｍ  ＨＣｌで処理することによって調製した。
実施例９：化合物１４Ｕの合成
（Ｒ）-Ｎ-（１-（４-メトキシフェニル）エチル）-（Ｒ）-１-（１-ナフチル）エチルアミン塩酸塩
（Ｒ）-（＋）-１-（１-ナフチル）エチルアミン（１．１ｇ、６．２ミリモル）、４’-メトキシアセトフェノン（０．９３ｇ、６．２ミリモル）、チタン（IV）イソプロポキシド（２．２ｇ、７．７ミリモル）およびＥｔＯＨ（無水）（１ｍＬ）の混合物を、６０℃に３時間加熱した。次いで、ホウ水素化シアノナトリウム（ＮaＣＮＢＨ3）（０．３９ｇ、６．２ミリモル）を添加し、その反応混合物を室温にて１８時間撹拌した。エーテル（２００ｍＬ）およびＨ2Ｏ（２ｍＬ）をその反応混合物に添加し、次いで、生じた沈殿を遠心によって除去した。真空下にて上清を蒸発させ、粗製生成物をシリカゲル（２５ｍｍ×２５ｃｍカラム）（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3で溶出）上のクロマトグラフィーに付した。この物質の一部分をＨＰＬＣクロマトグラフィー［セレクトシル（Ｓelctosil）、５μＭシリカゲル；２５ｃｍ×１０．０ｍｍ（カリフォルニア州、トランスのフェノメネックス（Ｐhenomenex）社）、１分当たり４ｍＬ；ＵＶ検出、２７５ｎｍ；１２％酢酸エチル−８８％ヘキサン（溶出時間１２．０分）］に付した。次いで、ＨＰＬＣ精製ジアステレオマーをヘキサンに溶解し、エーテルを含むＨＣｌを添加して、白色固形物として生成物を沈殿させた（２０ｍｇ）。融点：２０９-２１０℃（分解）
実施例１０：化合物１６Ｍの合成
Ｎ-（３-クロロ-４-メトキシベンジル）-（Ｒ）-１-（１-ナフチル）エチルアミン塩酸塩
（Ｒ）-（＋）-１-（１-ナフチル）エチルアミン（６．６ｇ、３９ミリモル）、３’-クロロ-４’-メトキシベンズアルデヒド（６．６ｇ、３９ミリモル）、およびチタン（IV）イソプロポキシド（１３．８ｇ、４８．８ミリモル）の混合物、およびＥｔＯＨ（無水）（３０ｍＬ）を８０℃に３０分間加熱し、次いで、室温にて３時間撹拌させた。次いで、ホウ水素化シアノナトリウム（ＮaＣＮＢＨ3）（２．４５ｇ、３９ミリモル）を添加した。その反応混合物を室温にて１８時間撹拌した。エーテル（１００ｍＬ）およびＨ2Ｏ（２ｍＬ）をその反応混合物に添加し、次いで生じた沈殿を遠心によって除去した。真空下にて上清を蒸発させ、粗製生成物をシリカゲル（５０ｍｍ×３０ｃｍカラム）（ＣＨ2Ｃl2で溶出）上のクロマトグラフィーに付した。次いで、クロマトグラフィーに付した物質をヘキサン（５００ｍＬ）に溶解し、ノリットR（ＮoritR）フィルター（０．２μＭ）に付して脱色し、次いでエーテルを含むＨＣｌを添加して、白色固形物として生成物を沈殿させた（１０．２ｇ、５６％収率）。融点：２４１−２４２℃（分解）
実施例１１：化合物１６Ｐの合成
４-メトキシ-３-メチルアセトフェノン［１６Ｐ前駆体］
４’-ヒドロキシ-３’-メチルアセトフェノン（５．０ｇ、３３．３ミリモル）、インドメタン（５．７ｇ、４０．０ミリモル）、Ｋ2ＣＯ3（顆粒、無水物）（２３．０ｇ、１６７ミリモル）およびアセトン（２５０ｍＬ）の混合物を３時間還流した。次いで、その反応混合物を室温に冷却し、濾過して無機塩を除去し、真空下にて蒸発させた。その粗製生成物をエーテル（１００ｍＬ）に溶解し、Ｈ2Ｏ（２×２０ｍＬ）で洗浄した。その有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、蒸発させて４．５ｇ（収率８２．４％）を得た。このケトンは、さらに精製することなしに、以下の反応に用いた。
（Ｒ）-Ｎ-（１-（４-メトキシ-３-メチルフェニル）エチル）-（Ｒ）-１-（１-ナフチル）エチルアミン塩酸塩［化合物１６Ｐ］
（Ｒ）-（＋）-１-（１-ナフチル）エチルアミン（４．２４ｇ、２４．８ミリモル）、４’-メトキシ-３’-メチルアセトフェノン（４．０６ｇ、２４．８ミリモル）、およびチタン（IV）イソプロポキシド（８．８ｇ、３０．９ミリモル）の混合物、およびＥｔＯＨ（無水）（１ｍＬ）を１００℃に２時間加熱した。イソプロパノール（４５ｍＬ）を添加し、次いで、その反応物を氷浴中で１０℃に冷却した。次いで、ホウ水素化トリアセトキシナトリウム（ＮａＨＢ（Ｏ2ＣＣＨ3）3）（１０．５ｇ、４９．５ミリモル）を１５分間にわたって徐々に添加した。次いで、その反応混合物を７０℃に１８時間加熱した。その混合物を室温に冷却し、エーテル（４００ｍＬ）に注入した。その懸濁液を遠心し、その上清を採取し、ペレットをエーテル（４００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機洗液を真空下にて蒸発させた。その残渣をエーテル（４００ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＮaＯＨ（４×５０ｍＬ）およびＨ2Ｏ（２×５０ｍＬ）で洗浄した。その有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濾過し、真空下にて蒸発させた。その湿潤残渣にＥｔＯＨ（無水）を添加し、次いでこれをロータリーエバポレーターで完全に乾燥して油性物を得た。次いで、この混合物をシリカゲル（５０ｍｍ×３０ｃｍ）［（１％ＭｅＯＨ：１％ＩＰＡ：ＣＨＣl3）で溶出］上のクロマトグラフィーに付して、油性物４．８ｇを得た。
所望のジアステレオマーは、ＨＰＬＣクロマトグラフィー［スペルコシルTM（SUPELCOSILTM）ＰＬＣ−Ｓｉ、１８μＭシリカゲル；２５ｃｍ×２１．２ｍｍ（ペンシルベニア州、ベルフォンテのスペルコ・インコーポレイテッド（Ｓupelco,Ｉnc.）社）、１分間当たり７ｍＬ；ＵＶ検出、２７５ｎｍ：２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン（溶出時間９．５−１１．０分）］によってさらに精製した。混合物（溶出液中の１００ｍｇ／ｍＬ溶液）を注射（８００μＬアリコート）して、所望の異性体６５ｍｇを得た。多段階ＨＰＬＣ注射により、精製物質１．０ｇを得た。ＨＰＬＣクロマトグラフィーに付した物質を、ヘキサン（５０ｍＬ）に溶解し、エーテルを含有するＨＣｌで塩酸塩を沈殿させた。その塩を焼成ガラスに採取し、ヘキサンで洗浄して白色固形物１．０ｇを得た。融点２０４−２０５℃
他の具体例も以下の請求の範囲の範囲内である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
0004555401.tif 000006
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図８Ａ】
0004555401.tif 000038
【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
0004555401.tif 000041
【図８Ｅ】
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【図９Ａ】
0004555401.tif 000043
【図９Ｂ】
0004555401.tif 000044
【図９Ｃ】
0004555401.tif 000045
【図９Ｄ】
0004555401.tif 000046
【図９Ｅ】
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【図９Ｆ】
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【図１０Ａ】
0004555401.tif 000049
【図１０Ｂ】
0004555401.tif 000050
【図１０Ｃ】
0004555401.tif 000051
【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
0004555401.tif 000053
【図１１Ｂ】
0004555401.tif 000054
【図１１Ｃ】
0004555401.tif 000055
【図１１Ｄ】
0004555401.tif 000056
【図１１Ｅ】
0004555401.tif 000057
【図１２Ａ】
0004555401.tif 000058
【図１２Ｂ】
0004555401.tif 000059
【図１２Ｃ】
0004555401.tif 000060
【図１２Ｄ】
0004555401.tif 000061
【図１３Ａ】
0004555401.tif 000062
【図１３Ｂ】
0004555401.tif 000063
【図１３Ｃ】
0004555401.tif 000064
【図１３Ｄ】
0004555401.tif 000065
【図１４Ａ】
0004555401.tif 000066
【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
0004555401.tif 000070
【図１５Ｂ】
0004555401.tif 000071
【図１５Ｃ】
0004555401.tif 000072
【図１５Ｄ】
0004555401.tif 000073
【図１６Ａ】
0004555401.tif 000074
【図１６Ｂ】
0004555401.tif 000075
【図１６Ｃ】
0004555401.tif 000076
【図１６Ｄ】
0004555401.tif 000077
【図１７Ａ】
0004555401.tif 000078
【図１７Ｂ】
0004555401.tif 000079
【図１７Ｃ】
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【図１７Ｄ】
0004555401.tif 000081
【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
0004555401.tif 000083
【図１８Ｃ】
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【図１８Ｄ】
0004555401.tif 000085
【図１８Ｅ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
0004555401.tif 000088
【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
0004555401.tif 000092
【図２０Ｃ】
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【図２０Ｄ】
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