(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離形または塩形の式Ｉ：
0004451496.tif 000016
［式中、
Ｒ1はフェニル、ベンジル、３−ニトロフェニル、３−クロロフェニル、３−シアノフェニル、３−（テトラゾリル）フェニル、ベンゾフラザニルまたはベンゾチオフラザニルを表す；
Ｒ2はヒドロキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、アルキル（alkyl）、アルケニル（alkenyl）、アルキニル（alkynyl）、アルコキシ（alkoxy）、アリール（aryl）、アラルキル（aralkyl）、アリールオキシ（aryloxy）、アミノ、アリールアミノ（arylamino）、ジアリールアミノ（diarylamino）、アルカミノ（alkamino）、ジアルカミノ（dialkamino）、アルカリール（alkaryl）、アリールアミド（arylamido）またはアルカミド（alkamido）を表す
；ただし、これらの基におけるアルク（alkまたはalkyl）部分は炭素数８個までの脂肪族基であって、当該脂肪族基はカルボキシ基、エステル化カルボキシ基またはヒドロキシ基で置換されているかまたは置換されておらず、および／またはエーテル結合および／またはエステル結合を含んでいるかまたは含んでおらず、アリール（arまたはaryl）部分は１０個までの環原子を有する単環式または双環式の芳香族または異項環芳香族基である；
なお、Ｒ2で表される基がカルボキシで置換されている場合、当該カルボキシはエステル化されてアルコキシカルボニルを形成していてもよく、またはアミド化されてカルバモイルを形成していてもよい。］
で示される化合物。
【請求項２】
アリール部分が６個までの環炭素原子を有する単環式の芳香族基であって、当該環炭素原子のうちの２個までは窒素原子に変換されていてもよく、そして当該芳香族基はカルボキシ基、エステル化カルボキシ基またはヒドロキシ基で置換されているかまたは置換されていない、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
遊離形または塩形の６−（カルボキシフェニルまたはカルボキシメチルフェニル）−８−（フェニル、ベンゾ[ｃ]チオフラザニルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル）−１，７−ナフチリジンである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
遊離形または塩形の式ＩＩ：
0004451496.tif 000017
［式中、
ｎは０または１である；
Ｒ7はヒドロキシ、アミノ、Ｃ1-4アルキルアミノまたはＣ1-4アルコキシである；
および
Ｒ3はＨであり、Ｒ4はニトロ、ハロゲン、シアノまたはテトラゾリルであり、
Ｒ5およびＲ6は一緒になって付加的結合を形成するか、または
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は一緒になって＝Ｎ−Ｏ−Ｎ＝または＝Ｎ−Ｓ−Ｎ＝である。］
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
塩形または遊離形の、以下に記載のいずれかの化合物：
６−アミノ−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−アミノ−８−（４−ベンゾ[c]フラザニル）−１，７−ナフチリジン；
６−ヒドロキシ−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−メトキシカルボニルメトキシ−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−アセタミド−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−アミノ−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン；
６−フェニルアミノ−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−フェニル−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−ビニル−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−エチニル−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−（４−カルボキシフェニル）−８−（３−シアノフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−（４−カルバモイルフェニル）−８−（３−シアノフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−（４−カルボキシフェニル）−８−（４−ベンゾ[c]フラザニル）−１，７−ナフチリジン；
６−アミノ−８−（３−クロロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−アミノ−８−（３−シアノフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−アミノ−８−（４−（５−テトラゾリル）フェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−フェニルアミノ−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン；
６−ジフェニルアミノ−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン；
６−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン；
６−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−８−（３−クロロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−８−（３−シアノフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−８−（４−ベンゾ[c]フラザニル）−１，７−ナフチリジン；
６−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−８−（４−（５−テトラゾリル）フェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−フェニル−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン；
６−ビニル−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン；
６−エチニル−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン；
６−（４−カルボキシフェニル）−８−（３−クロロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−（４−カルボキシフェニル）−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−（４−アミノカルボニルフェニル）−８−（３−クロロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−（４−アミノカルボニルフェニル）−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン；
６−（４−メトキシカルボニルフェニル）−８−（３−クロロフェニル）−１，７−ナフチリジン；および
６−（４−メトキシカルボニルフェニル）−８−（３−ニトロフェニル）−１，７−ナフチリジン。
【請求項６】
６−（４−カルボキシフェニル）−８−（４−ベンゾ[c]フラザニル）−１，７−ナフチリジン・Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩。
【請求項７】
式Ｖ’
0004451496.tif 000018
［式中、Ｑ’はハロゲンまたは−Ｏ−Ｃ1-8アルキルである。］
で示される化合物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規８−アリール−１，７−ナフチリジン、その製造法、医薬としての使用およびそれらを含む医薬組成物に関する。
本発明は、遊離または薬学的に許容される塩の形の８−アリール−１，７−ナフチリジンを提供する。“アリール”なる用語は、１０個までの環原子を有する単または二環式芳香族またはヘテロ芳香族部分を意味し、１，７−ナフチリジンに直接(例えば、フェニル、ピリジル、テトラゾリル、ベンゾフラニルまたはベンゾチオフラザニル)またはメチレン架橋を介して(例えば、ベンジルまたはピリジルメチル)結合している；好ましくは、６個までの芳香族炭素原子を有し、その二個までが窒素で置換され得る単環芳香族部分、例えばフェニル、ベンジル、４−ピリジルまたは４−ピリジルメチルであり、所望によりカルボキシ、カルボキシエステルまたはヒドロキシ基を担持する。８−アリール部分は所望により、特に、電子吸引置換基、例えばニトロ、ニトリロ、イミノ、ハロゲンまたはハロゲン含有置換基(例えば、トリフルオロメチル)、またはシアノで更に、好ましくはメタ位を置換され得る。例えば、８−アリール部分は、シアノフェニル、ニトロフェニル、テトラゾリルフェニル(例えば、テトラゾル−１−イルフェニル)、またはシクロフェニルであり得る。所望により、本分子のナフチリジン部分の二重環は、更に、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、アミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、アルカミノ、ジアルカミノ、アリールアミド、またはアルカミドで置換されるか二置換され、特に、６−置換され、ここで“alk”は８個までの炭素原子の脂肪族部分を意味し、所望によりカルボキシ、またはカルボキシエステルまたはヒドロキシ基を担持するおよび／または所望によりエーテル結合および／またはエステル結合を含む。
特に、本発明は新規８−フェニル−および８−ベンジル−１，７−ナフチリジンを提供し、ここで１，７−ナフチリジンの二重環は、所望により、例えば、下記に例示のように６−置換され、フェニル環は所望によりニトロのような電子吸引置換基で置換されている；例えば、遊離または薬学的に許容される塩の形の式Ｉ：
0004451496.tif 000002
〔式中、
Ｒ1はフェニル、ベンジル、３−ニトロフェニル、３−クロロフェニル、３−シアノフェニル、３−(テトラゾリル)フェニル、ベンゾフラザニル、またはベンゾチオフラザニル；
Ｒ2はヒドロキシ、アミノ、トリフルオロメタンスルホニル、アリル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、アミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、アルカミノ、ジアルカミノ、アルカリール、アリールアミドまたはアルカミド〕
の化合物およびそのエステルおよびアミドである。
式Ｉおよび本明細書中の“alk”および“アリール”は、本発明の８−アリール−１，７−ナフチリジンに関して上記した意味を有する。
好ましくは、Ｒ2は、ヒドロキシ、アミノ、アリールアミノ(例えば、フェニルアミノ)、アリール(例えば、フェニル)、アルカリール(例えば、低級アルキルフェニル)、アルケニル(例えば、ビニル)、アルキニル(例えば、エチニル)、エーテル結合および／またはエステル結合を有するアルコキシ(例えば、メトキシカルボニルメトキシ)およびアルカミド(例えば、アセトアミド)から選択される。
特に、完全に新規なクラスの６，８−アリール−１，７−ナフチリジンは医薬として、特に経口活性ＰＤＥ４阻害剤として、例えば、喘息の処置に有用であることが、驚くべきことに判明した。
従って、好ましい態様において、本発明は、遊離または薬学的に許容される塩の形の６−(カルボキシフェニルまたはカルボキシメチルフェニル)−８−(フェニル、、ベンゾ[ｃ]チアジアゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンおよびそのエステルおよびアミドを提供する。
更に好ましくは、本発明は遊離または薬学的に許容される塩の形の６−(４−カルボキシフェニルまたは４−カルボキシメチルフェニル)−８−(フェニル、４−ベンゾ[ｃ]チアジアゾリルまたは４−ベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンおよびそのエステルおよびアミドを提供する。
ベンゾ[ｃ]チアジアゾリルおよびベンゾ[ｃ]フラザニルは、それぞれ式ＡおよびＢ：
0004451496.tif 000003
の基を意味する。
従って、特に好ましい態様において、本発明は遊離または薬学的に許容される塩の形の式II
0004451496.tif 000004
〔式中、
ｎは０または１；
Ｒ7はヒドロキシ、アミノ、Ｃ1-4アルキルアミノまたはＣ1-4アルコキシ、好ましくはヒドロキシまたはアミノ；
および
Ｒ3はＨおよびＲ4はニトロ、ハロ(例えばクロロ)、シアノまたはテトラゾリル(例えば、１−テトラゾリル)およびＲ5およびＲ6は一緒に付加的結合を形成するか、または
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は一緒に＝Ｎ−Ｏ−Ｎ＝または＝Ｎ−Ｓ−Ｎ＝である〕
の化合物およびそのエステルおよびアミドを提供する。
薬学的使用のための、例えば、式ＩまたはIIの８−アリール−１，７−ナフチリジンの薬学的に許容される塩は、慣用法により製造する。例えば、遊離カルボン酸基を有する化合物、例えば、Ｒ7がＯＨである式IIの化合物を、適当な塩基、例えば、Ｎ−メチル−グルカミンと接触させ、対応する塩基付加塩を提供し得る。簡便には、このような塩基付加塩は、水溶性であり得る。
本発明の、例えば、式Ｉの８−アリール−１，７−ナフチリジンは、２−シアノ−３−ピリジルアセトニトリルを
ａ)酸、例えばＨ−Ａ(式中、Ａはハロゲン、例えば臭素)と反応させ、式III：
0004451496.tif 000005
の化合物を得、これを次いで本発明の化合物を得るために、例えば、パラジウムまたはニッケル触媒存在下で金属試薬を使用して交差結合させて誘導体化して、例えば、Stille、SuzukiまたはHeck反応で、炭素−炭素結合を形成させ得、即ち、式IIIの化合物を、化合物Ｙ−Ｒ8(式中、Ｙは金属脱離基、例えば、Ｂ(ＯＨ)2−、(ＣＨ2)3Ｓｎ−(ＣＨ3(ＣＨ2)3)3Ｓｎ−およびＲ8は上記で定義の８−アリール部分、例えば、ベンジルまたは３−ニトロフェニル)と反応させ、対応する式IV
0004451496.tif 000006
の化合物を得る、または
ｂ)グリニャール試薬、例えば、Ｒ8−ＭｇＢｒ(式中、Ｒ8は上記のような８−アリール部分、例えば、ベンジルまたは３−ニトロフェニル)と反応させ、対応する式IVの化合物を得る；または
ｃ)アルカリ金属アルカノール、例えばナトリウム−メタノール混合物と反応させ、式III’
0004451496.tif 000007
〔式中、ＡｌｋはＣ1−Ｃ8アルキル基、例えばメチル〕
の化合物を得る。−Ｏ−Ａｌｋ置換基は、ハロゲンに変換し得、その化合物を、その後、式IIIの化合物に関して記載のように、８位で誘導体化する。
式III、III’またはIVのアミノ基は、更なる反応を受ける、例えば、
(ｉ)適当な活性化剤、例えば、トリフルオロメタンスルホン酸およびＮａＮＯ2による活性化により、式Ｖ：
0004451496.tif 000008
〔式中、Ｑは上記のハロゲンＡ、式III’の化合物で定義の−Ｏ−Ａｌｋ置換基または上記の８−アリール部分Ｒ8のいずれか〕
のトリフラートを得、これは新規であり、本発明の化合物の製造に非常に有用な中間体であり、例えば、式ＩのＲ2が炭素−炭素結合により残りの分子に結合している場合、例えば、パラジウムまたはニッケル触媒の存在下で金属試薬を使用して交差結合反応を達成でき、炭素−炭素結合を形成でき、例えば、Stille、SuzukiまたはHeck反応であり、例えば、ＱがＲ8である式Ｖの化合物を、式Ｙ−Ｒ2(式中、Ｙは上記で定義の金属脱離基およびＲ2は所望により保護形の、望む炭素置換基、例えば、式Ｉで定義のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアルカリール)の化合物と反応させ、続いて必要により脱保護する；
(ii)アルキルまたはアリール置換し(例えば、対応するアルキルハライドまたは有機金属との反応により)、所望の２級または３級アミンを得る；または
(iii)慣用法を使用して、アシル化し(例えば、カルボン酸または酸無水物との反応により)、対応するアミドを得る；または
(iv)例えば、希釈酸、例えば、硫酸存在下でのＮａＮＯ2との反応によるヒドロキシへの変換、および所望による更なる誘導体化、例えば、適当な反応条件下でのアルキルハライドとの反応による、例えば、Ｏ−アルキル化。
好ましい、例えば、式IIの６−(カルボキシ、またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジン、またはそのエステルまたはアミドは、簡便には以下の方法により製造する
(Ａ)６−(カルボキシ−またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジン、またはそのエステルまたはアミドの製造のために、６−Ｘ−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンとＸ’−(カルボキシ−、またはカルボキシメチル−−フェニル)またはそのエステルまたはアミドを反応させるか、または６−(カルボキシ−またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−Ｘ−１，７−ナフチリジンまたはそのエステルまたはアミドを、Ｘ’−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニルと反応させる(式中、ＸおよびＸ’は交差結合反応に関与できる脱離基；例えば、Ｘがトリフルオロメタンスルホニルまたはハロゲン、例えば、臭素または塩素であり、Ｘ’が金属脱離基、例えば、置換ホウ素(例えば、−Ｂ(ＯＨ)2、−(ＯＡｌｋ)2または−Ｂａｌｋ2(Ａｌｋはアルキル、例えば、メチルまたはエチル))またはトリアルキルスタニル(例えば、(ＣＨ3(ＣＨ2)3)3Ｓｎ−または(ＣＨ3)3Ｓｎ−)またはグリニャール基(例えば、ＭｇＢｒ)である)；および／または
(Ｂ)所望により、６−(カルボキシ−またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンと適当なアミン、例えば、アンモニアまたは(Ｃ1-4)アルキルアミンを反応させ、対応するアミドを得る；および／または
(Ｃ)所望により、６−(カルボキシ−またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンと適当なアルコール、例えば、(Ｃ1-4)アルコールを反応させ、対応するエステルを得る；および
得られる遊離または塩の形の６−(カルボキシ−またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンまたはそのエステルまたはアミドを回収する。
ステップ(Ａ)の反応は、例えば、パラジウムまたはニッケル触媒存在下での、金属試薬を使用した交差架橋反応の分野で既知であり、炭素−炭素結合を形成する；例えば、Stille、SuzukiまたはHeck反応のように。ステップ(Ｂ)および(Ｃ)の反応条件は、カルボン酸とアミンの反応によるアミドの製造およびカルボン酸とアルコールの反応によるエステルの製造の分野で既知の、例えば、酸性または塩基性条件下である。回収および精製は、通常法により、例えば、クロマトグラフィーまたは結晶化による。
従って、精製態様において、本発明は、式VI
0004451496.tif 000009
〔式中、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＸは上記で定義の通り〕
の化合物を式VII
0004451496.tif 000010
〔式中、Ｒ7およびＸ’は上記で定義の通り〕
の化合物と反応させ、このように遊離または塩の形で得た式IIの化合物を回収することを含む、上記の式IIの化合物の製造法を提供する。
上記反応に使用する６−Ｘ−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンおよび６−(カルボキシ−またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−Ｘ−１，７−ナフチリジンまたはそのエステルまたはアミドは、適当には、２−シアノ−３−ピリジルアセトニトリルと酸、例えばＨ−Ａ(式中、Ａはハロゲン、例えば臭素)と反応させ、式IIIの化合物を得、その後更に上記のように必要に応じて誘導体化して製造する。
本発明の８−アリール−１，７−ナフチリジン、特に好ましくは６−(カルボキシ−またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンおよびそのエステルおよびアミドは、式IV、ＶおよびVIの中間体として新規であり、これらの新規方法および中間体は本発明の範囲内である。ＱがＲ8である式Ｖの化合物は、本発明の８−アリール−１，７−ナフチリジンに包含されることは認められる。
従って、更なる態様において、本発明は、式Ｖ’
0004451496.tif 000011
〔式中、Ｑ’はハロゲンまたは−Ｏ−Ａｌｋ(式中、AlkはＣ1−Ｃ8アルキル基〕
および、式VI
0004451496.tif 000012
〔式中、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＸは上記で定義の通り〕
の中間体を提供する。
以下の実施例は本発明を説明する。
実施例
実施例１：６−アミノ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
Ａ.２−シアノ−３−ピリジルアセトニトリル
３−シアノメチルピリジン−Ｎ−オキサイド(３０ｇ、０．２２mol；合成に関してShigenobu Okuda, Michael M. Robinson, J. Am. Chem. Soc. 81, 740(1959)参照)のジクロロメタン(２００ml)名かの攪拌懸濁液に、トリメチルシランカルボニトリル(２６ｇ、０．２６mol)を添加する。本懸濁液に、ジメチルカルバミルクロライド(２８ｇ、０．２６mol)を添加する。混合物を４５時間攪拌する。溶媒を除去し、残渣を酢酸エチルに溶解する。溶液を１Ｎ  ＮａＯＨおよび水で洗浄し、真空で濃縮する。生産物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(１５：２トルエン／アセトン)で精製し、表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ１４４．１。融点６２−６３℃。
Ｂ.６−アミノ−８−ブロモ−１，７−ナフチリジン
２−シアノ−３−ピリジルアセトニトリル(３．６ｇ、０．０２５mol)のトルエン(８０ml)中の攪拌した溶液をＨＢｒで５時間あわ立たせる。次いで、４Ｎ  ＮａＯＨを注意深く添加し、懸濁液を激しく攪拌する。混合物を濾過し、生産物を水で洗浄して乾燥させる。トルエンからの結晶化により、表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ２２５．融点１８８℃、分解。
Ｃ.６−アミノ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−アミノ−８−ブロモ−１，７−ナフチリジン(４ｇ、０．０１８mol)の、テトラヒドロフラン(８０ml)および水性Ｎａ2ＣＯ3(３４ml、２Ｎ)の混合物中の攪拌した溶液に、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(０．４０ｇ、０．０００７mol)、トリフェニルホスフェン(０．３７ｇ、０．００１４mol)および３−ニトロフェニルホウ酸(３．７ｇ、０．０２２mol)を添加する。混合物を１６時間、８０℃で攪拌する。本混合物を濾過し、酢酸エチルを添加し、本混合物を１Ｎ  ＮａＯＨおよび水で洗浄する。有機溶媒を除去し、残渣をエーテルに懸濁する。濾過により、表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ２６７。mp  ２２１−２２３℃。
実施例２：６−アミノ−８−(４−ベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジン
６−アミノ−８−ブロモ−１，７−ナフチリジン(３．０ｇ、１３．４mmol)の、ＤＭＦ(５０ml)中の攪拌した溶液に、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(３０８mg、０．５４mol)、トリフェニルホスフィン(５６５mg、２．１５mmol)および４−トリメチルスタニル−ベンゾ[ｃ]フラザニル(４．９２ｇ、１６．０mmol)を添加する。混合物を１２５°に４時間保つ。酢酸エチル(５００ml)、続いて、水性ＫＦ(４０％、１００ml)を添加する。混合物を激しく４５分攪拌し、濾過する。有機相を分離し、水で洗浄して濃縮する。残渣をエーテル(２０ml)に取りこみ、３０分(０°)で攪拌して、濾過し、表題化合物(２．８ｇ)を得る。Ｍ＋Ｈ＝２６４  mp  ２４４−２５０。
実施例３：６−ヒドロキシ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−アミノ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(５００mg、１．８７mmol；実施例１に従って製造)の濃硫酸と水(３ml、２：１)溶液に、硝酸ナトリウム(１５５mg、２．２５mmol)を４℃で添加する。３０分後、氷浴を外し、混合物を７０℃で３０分暖める。反応混合物を氷に注ぎ、溶液を重炭酸ナトリウムの添加により中和する。沈殿を濾過し、水で洗浄して、表題化合物を得る。mp  ２６２−２６５℃。
実施例４：６−メトキシカルボニルメトキシ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−ヒドロキシ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(１０７mg、０．４０mmol；前記実施例に従って製造、所望により、更なる精製はしない)、炭酸カリウム(５５mg、０．４０mmol)および臭化酢酸メチルエステル(３７μl、０．４mmol)の懸濁液を、２時間、アセトン−ジメチルホルムアミド、(２ml、１：１)中で環境温度で攪拌する。酢酸エチルを添加し、有機相を２Ｎ  ＮａＯＨで洗浄する。溶媒を真空で除去し、粗生産物を分取薄層クロマトグラフィーで精製し、表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ３４０；mp  １６０−１６２℃。
実施例５：６−アセトアミド−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン塩酸塩
６−アミノ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(３００mg、１．１mmol；実施例１に従って製造)および無水酢酸(０．１２ml、１．２mmol)のピリジン(１ml)およびジメチルホルムアミド(３ml)懸濁液を８０℃に３時間保つ。水を添加し、沈殿を濾過して、水で激しく洗浄する。濾過により、表題生産物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ２０９；mp  235-238℃。
実施例６：６−アミノ−８−ベンジル−１，７−ナフチリジン
２−シアノ−３−ピリジルアセトニトリル(２ｇ、０．０１４mol)のトルエン(２０ml)溶液に、テトラヒドロフラン中２Ｍのベンジルマグネシウムブロミド８．４ml、０．１７molを環境温度で添加する。１時間の反応後、塩化アンモニウムの飽和溶液で停止させる。生産物を酢酸エチルで抽出し、有機相を２Ｎ  ＮａＯＨおよび水で洗浄する。生産物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(１０：３トルエン／アセトン)で洗浄し、表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ２３６；mp  １１３−１１６℃。
実施例７：６−フェニルアミノ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
トリフェニルビスマス(１８２mg、０．４１mmol)のジクロロメタン(０．５ml)およびテトラヒドロフラン(０．５ml)溶液に、過酢酸(０．０８３ml、４０％)を添加する。混合物を１時間攪拌する。次いで、６−アミノ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(１００mg、０．３７mmol；実施例１に従って製造)のジクロロメタン(０．５ml)およびＴＨＦ(０．５ml)溶液を添加する。銅(３０mg、０．４７mmol)を添加し、懸濁液を４０時間攪拌する、懸濁液を酢酸エチルで希釈して濾過する。濾液を２Ｎ  Ｎａ2ＣＯ3および水で洗浄し、有機相を真空で濃縮する。分取薄層クロマトグラフィー(８：２ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン)により表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ３４３．１；mp  １５８−１６０℃。
実施例８：６−トリフルオロメタンスルホニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−アミノ−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(１．２４ｇ、０．００４７mol；実施例１に従って製造)のトリフルオロメタンスルホン酸(１２ml)溶液に、亜硝酸ナトリウム(０．６４ｇ、０．００９３mol)を数回に分けて添加する。溶液を６０°に加温し、一晩攪拌する。溶液を酢酸エチルと氷の混合物に注ぐ。次いで、２Ｎ  ＮａＯＨを水性相がアルカリになるまで添加した。有機相を水で洗浄し、真空で濃縮する。生産物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(７：３ヘキサン／酢酸エチル)で精製し、表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ４００；mp  １０６−１０８℃。
実施例９：６−フェニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−トリフルオロメタンスルホニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(３００mg、０．７５mmol；実施例８に従って製造)のテトラヒドロフラン(５ml)溶液に、フェニルボロン酸(１１８mg、０．９７mmol)、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(１８mg、０．０３mmol)、トリフェニルホスフィン(１６mg、０．０６mmol)および水性Ｎａ2ＣＯ3(２Ｎ、１．４４ml)を添加する。溶液を６０℃に２０時間保つ。溶液を酢酸エチルで希釈し、濾過し、１Ｎ  ＮａＯＨおよび水で洗浄する。溶媒を真空で除去して純粋生産物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ３２８.mp  １７２−１７５℃。
実施例１０：６−ビニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−トリフルオロメタンスルホニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(２５０mg、０．６２mmol；実施例１３に従って製造)のテトラヒドロフラン(３ml)溶液に、ビニルトリブチルスタンナン(２１８mg、０．６８mmol)、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(１４mg、０．０２５mmol)、トリフェニルホスフィン(１３mg、０．０４９mmol)および塩化リチウム(７８mg、１．８６mmol)を添加する。混合物を一晩７０℃に保つ。溶液を酢酸エチルで希釈し、濾過し、水で洗浄する。分取薄層クロマトグラフィー(８：２ジクロロメタン／ｎ−ヘキサン)により表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ２７８；mp  １４５−１５１℃。
実施例１１：６−エチニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン
Ａ．６−トリメチルシリルエチニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジンを下記のように製造する：
６−トリフルオロメタンスルホニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(２００mg、０．５０mmol；実施例１３に従って製造)のジメチルホルムアミド(１ml)およびトリエチルアミン(０．５ml)溶液に、エチニルトリメチルシラン(０．０７８ml、０．５６mmol)、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(５．８mg、０．０２０mmol)、トリフェニルホスフィン(５．３mg、０．０２０mmol)およびヨウ化銅(３．８mg、０．０２０mmol)を添加する。混合物を６０℃に２時間保つ。溶液を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄する。生産物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(２０：０．２トルエン／アセトン)で精製し、６−トリメチルシリルエチニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジンを得る。(質量  Ｍ＋Ｈ  ３４８；mp  １６０−１６３℃。)
Ｂ．６−トリメチルシリルエチニル−８−(３−ニトロフェニル)−１，７−ナフチリジン(７７mg、０．２２mol)のメタノール(０．５ml)およびトルエン(０．５ml)溶液に、１Ｎ水酸化カリウム(０．２２ml)を添加する。混合物を２時間攪拌した。懸濁液を濾過し、生産物を水およびエーテルで洗浄して、表題化合物を得る。質量  Ｍ＋Ｈ  ２７６；mp  ２１５℃分解。
実施例１２：６−(４−カルボキシフェニル)−８−(３−シアノフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−トリフルオロメタンスルホニル−８−(３−シアノフェニル)−１，７−ナフチリジン(２．１５ｇ、５．６７mmol)のＤＭＦ(２１．５ml)溶液に、４−カルボキシ−フェニルボロン酸(１．１３ｇ、６．８１mmol)、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(１３１mg、０．２３mmol)、トリフェニルホスフィン(９５mg、０．３６mmol)および水性Ｋ2ＣＯ3(２Ｎ、１７ml)を添加する。反応混合物を８０℃で２．５時間攪拌する。温溶液をセライト(cellit)で濾過し、粗生産物を水(１０ml)および水性ＨＣｌ(２Ｎ、８ml)を注意深く添加することにより沈殿させる。懸濁液を濾過し、粗生産物を温ＴＨＦ(３０ml)中で攪拌する。冷懸濁液を再び濾過して、表題化合物を得る(１．１２ｇ)。Ｍ＋Ｈ＝３５２。融点＞３００°。保持時間ＨＰＬＣ＝７．５８分(カラム：LiChroCart 125-4, Supersphere 60 RP-select B, ４０°；溶出液：アセトニトリル−水(０．１％ＴＦＡ)＝４５：５５；１ml／分；２５４nmで検出)。
実施例１３：６−(４−カルバモイルフェニル)−８−(３−シアノフェニル)−１，７−ナフチリジン
６−(４−カルボキシフェニル)−８−(３−シアノフェニル)−１，７−ナフチリジン(１００mg、０．２８mmol)のトルエン(２ml)懸濁液に、塩化チオニル(０．１ml、１．３７mmol)を添加する。反応混合物を３時間還流させる。溶媒を蒸発させ、残渣をＴＨＦ(２ml)に取りこむ。水性アンモニアを添加し、溶液を２時間環境温度で攪拌する。酢酸エチルを添加し、有機相を水で洗浄して、融点２３７−２４０℃の純粋表題化合物を得る。
実施例１４：６−(４−カルボキシフェニル)−８−(４−ベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジン
Ａ．６−アミノ−８−メトキシ−１，７−ナフチリジン
ナトリウム(３．２ｇ、０．１３９mol)のメタノール(１４００ml)溶液に、２−シアノ−３−ピリジルアセトニトリル(２０ｇ、０．１３９mol)を添加し、反応混合物を１７時間、環境温度で攪拌した。次いで、水(７００ml)を添加し、ほとんどのメタノールを蒸発させると表題化合物が晶出する。融点１７８−１８０℃。
Ｂ．６−トリフルオロメタンスルホニル−８−メトキシ−１，７−ナフチリジン
６−アミノ−８−メトキシ−１，７−ナフチリジン(１９ｇ、０．１０８mol)の水とトリフルオロメタンスルホン酸１：１混合物(３８０ml)溶液に、亜硝酸ナトリウム(１１．２ｇ、０．１６２mol)の水(４０ml)溶液を０℃で注意深く添加する。１時間後、冷却浴を外し、反応混合物を更に１時間環境温度で攪拌する。次いで、酢酸エチル(５００ml)を添加し、溶液を重炭酸ナトリウム(４Ｎ、１ｌ)の添加により中和する。水相を再び酢酸エチルで抽出する(３×５００ml)。有機溶媒を蒸発させ、粗生産物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(２０：３トルエン／アセトン)で精製して、表題化合物を得る。Ｍ＋  ３０８；融点９９−１０１℃。
Ｃ．６−(４−カルボキシフェニル)−８−メトキシ−１，７−ナフチリジン
６−トリフルオロメタンスルホニル−８−メトキシ−１，７−ナフチリジン(１．５ｇ、４．８６mmol)のＤＭＦ(４０ml)溶液に、４−カルボキシ−フェニルボロン酸(０．８６６ｇ、５．３４mmol)、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(１１２mg、０．１６７mmo)、トリ−ｏ−トリルホスフィン(９６mg、０．３２mmol)および水性Ｎａ2ＣＯ3(１４．６ml、２Ｎ)を添加する。反応混合物を１１０°で３時間攪拌する。温溶液をセライトで濾過し、溶液を蒸発乾固する。粗生産物を温水(６０ml)に溶解し、水相を酢酸エチル(３×５０ml)で洗浄する。生産物を、水性ＨＣｌ(２Ｎ、６ml)を注意深く添加することにより水相から沈殿させる。懸濁液を濾過し、粗生産物を再び温酢酸エチル(５０ml)中で攪拌する。冷懸濁液を濾過して、表題化合物(１．１０ｇ)を得る。Ｍ＋２８０；融点＞３００°。
Ｄ．６−(４−カルボキシフェニル)−８−ブロモ−１，７−ナフチリジン)
６−(４−カルボキシフェニル)−８−メトキシ−１，７−ナフチリジン(２５０mg、０．８９２mmol)のＤＭＦ(１０ml)溶液に、ＰＢｒ3(０．６３ml、６．６３mmol)を添加する。反応混合物を１００℃で３０分加熱する。次いで、懸濁液を水(５０ml)に注ぎ、溶液を酢酸エチル(２×５０ml)で洗浄する。有機溶媒を除去し、粗生産物をエーテル中で攪拌する。懸濁液を濾過して表題化合物(２１５mg)を得る。融点２４８−２５０、分解。
Ｅ．４−ベンゾ[ｃ]フラザニルボロン酸
４−ベンゾ[ｃ]フラザニルブロミド(４ｇ、０．０２０mol)のテトラヒドロフラン(８０ml)およびｎ−ペンタン(２０ml)溶液に、トリエチルボレート(３．８ml、０．０２２mol)およびＮ,Ｎ,Ｎ,Ｎ−テトラエチレンジアミン(３ml、０．０２mol)を添加する。次いで、ｎ−ＢｕＬｉ(８．８ml、ヘキサン中２．５Ｎ、０．０２２mol)を−１００°で滴下し、溶液を５分以上攪拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ、水相を酢酸エチルで抽出する。有機溶媒を除去し、粗生産物をジクロロメタン／ｎ−ヘキサン(５：６)に取りこむ。懸濁液を濾過し、表題化合物(１．０５ｇ)を得、これを更に精製することなく使用する。
Ｆ．６−(４−カルボキシフェニル)−８−(４−ベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジン
６−(４−カルボキシフェニル)−８−ブロモ−１，７−ナフチリジン(１００mg、０．３０４mmol)のＤＭＦ(２．５ml)溶液に、４−ベンゾ[ｃ]フラザニルボロン酸(６０mg、０．３６mmol)、ビス(ジベンジリデンアセトン)パラジウム(７mg、０．０１２２mmol)、トリ−ｏ−トリルホスフィン(７．４mg、０．０２４mmol)および水性Ｎａ2ＣＯ3(０．９ml、２Ｎ)を添加する。反応混合物を８０°で２時間攪拌する。温溶液をセライトで濾過し、溶液を蒸発乾固する。残渣を酢酸エチル(２０ml)中で攪拌し、懸濁液を濾過して有機溶媒を除去する。残渣を温ＤＭＦ(７ml)に溶解し、粗生産物を水性ＨＣｌ(２Ｎ、１ml)を注意深く添加することにより沈殿させる。粗生産物を温ＤＭＦから再結晶し、表題化合物(６８mg)を得る。ＭＨ＋  ３６９；融点＞３００℃。Ｍ＋Ｈ＝３６９。保持時間ＨＰＬＣ＝１０．４０分(カラム：LiChroCart 125-4, Supersphere 60 RP-select B，４０°；溶出液：アセトニトリル−水(０．１％ＴＦＡ)＝４５：５５；１ml／分；２５４nmで検出)。
上記の適当な実施例に記載の方法を繰り返し、適当な出発物質を選択して、以下の式Ｉの化合物が下記表１に同定のように得られる。
0004451496.tif 000013
0004451496.tif 000014
0004451496.tif 000015
例えば、上記のような遊離カルボキシ基を有する化合物の塩基付加塩は、化合物を適当なアミノ糖、例えば、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンと接触させて製造し得る。以下の実施例は、このような塩基付加塩の製造法を説明する。
実施例３４：６−(４−カルボキシフェニル)−８−(４−ベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジン：Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンとの塩
６−(４−カルボキシフェニル)−８−(４−ベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジン(１ｇ、２．７２mmol)のＤＭＦ(１００ml)溶液に、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン(０．５３ｇ、２．７２mmol)を添加する。溶媒を減圧下除去し、残渣を温メタノール(約５０ml)から再結晶し、純粋生産物(１．１１ｇ)を得る。融点：２３０℃、分解。保持時間ＨＰＬＣ＝６．６５分(カラム：LiChroCart 125-4, Supersphere 60 RP-select B，５０°；溶出液：１５分の０％Ｂ／１００％Ａから７０％Ｂ／３０％Ａの勾配；Ａ：９００ml水／１００mlアセトニトリル中の２．７ｇ  ＫＨＰＯ4／０．０２７ｇ  Ｎａ2ＨＰＯ4およびＢ：１００ml水／９００mlアセトニトリル；２２０nmで検出)。生産物は水溶性である。
本発明の、遊離形または塩形の、例えば、式Ｉの８−アリール−１，７−ナフチリジンおよび特に好ましい６−(カルボキシ−、またはカルボキシメチル−−フェニル)−８−(フェニル、ベンゾ[ｃ]チアダゾリルまたはベンゾ[ｃ]フラザニル)−１，７−ナフチリジンおよびそのエステルおよびアミド(以後、本発明の薬剤)は、薬学的特性を示し、従って、医薬として、例えば、下記の疾病および状態の処置における治療に有用である。
特に、本発明の薬剤は環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ(ＰＤＥ)イソ酵素阻害活性を示し、タイプ４イソ酵素に選択的である。
本発明の薬剤は、抗炎症性、抗気道過敏症および気管支拡張特性を有する。それらは更に免疫抑制性、ＴＮＦα分泌阻害および他の薬理活性を、例えば、下記の標準試験法で証明し得るように有する：
Ａ．ＰＤＥ４阻害：組換えＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ、ＰＤＥ４ＣおよびＰＤＥ４Ｄイソ酵素阻害アッセイ。
クローニングおよび発現：４つのイソ酵素、ヒトＰＤＥ４Ａ(Sullivan et al., Cell Signal 1994;6:793-812に記載のような)、ラットＰＤＥ４Ｂ(Colicelli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989;86:3599-3903に記載のような)、ヒトＰＤＥ４Ｃ(Engels et al., FEBS Lett. 1995;358:305-310に記載のような)およびヒトＰＤＥ４Ｄ(Baecker et al., Gene 1994;138:253-256)をコードするＰＤＥ４  ｃＤＮＡを染色体外酵母発現ベクターにクローンする(ＰＤＥ４Ｃ、ＰＤＥ４Ｄ)か、野性型酵母ＰＤＥ遺伝子の両方を欠くサッカロマイセス・セレビシアエ株のpep4座に統合させる(ＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ；１コピー)。ＰＤＥ４イソ酵素を発現する酵母株を１リットル培養で３０℃で生育させ、ペレット化し、均質化するまで凍結させる。
均質化：ペレット化酵母(５mL)を５０mLの緩衝液(１０mMトリス−ヒドロキシメチルアミノメタン、１mMエチレンジアミン−四酢酸、各１mg／mLのロイペプチンおよびペプスタチンＡ、１７５mg／mLフェニルメチルスルホニルフロリド、１mMジチオスレイトール、ＨＣｌでｐＨ７．４)に懸濁する。遠心後、緩衝液で洗浄した１５ｇのガラスビーズ(４２５−６００mm、酸で洗浄、Sigma Chemical Co.)をペレットに添加する。このスラリーに、１mLの緩衝液および６０mgのクロルアミドプロパンスルホン酸を添加し、スラリーを４時間、４℃で激しく攪拌する。酵母細胞は、顕微鏡(位相差光学)で暗細胞として観察されるまで破砕し、それは＞３０％(通常５０％)である。スラリーを粗いガラス漏斗に移し、均質物を吸引により回収し、ガラスビーズを全量１５mL緩衝液で洗浄する。細胞フラグメントを遠心(２０００×ｇ、１０分、４℃)によりサイトソルから分離する。ペレットを１５mLの緩衝液に再懸濁し、ＰＤＥ活性に関して、サイトソルと共にアッセイする。
さもなければ、イソ酵素調製物はヒト源から得られる。タイプ３および４調製物は、血小板中のタイプ３イソ酵素および好中球中のタイプ４イソ酵素の優勢を利用して、以下の方法を適用して得る：
細胞および組織を氷上で、スクロース(２５０mM)、ＥＤＴＡ  １mM、ジチオスレイトール(１mM)、ロイペプチンおよびペプスタチンＡ(各１μg／ml)およびフェニル−メチル−スルホニルフロリド(ＰＭＳＦ、０．１７mg／ml、均質化直前に添加)：含有トリス−ＨＣｌ  １０ｍＭ  ｐＨ７．４中で均質化する。好中球(タイプ４)および血小板(タイプ２および３)を、ヒト血液から得、超音波処理する(Branson probe，４×１５秒)。ヒト肺(タイプ１および５)を手術を受けている患者から得、ポリトロンホモジナイザー(３０秒、２回バースト)を使用して均質化する。
イソ酵素調製物：ＰＤＥ３および４(基質ｃＡＭＰ  １μM)調製物は、それぞれ、血小板および好中球均質物の低速上清から成る。タイプ１(基質ｃＡＭＰ  １μM、Ｃａ2+  ０．５mM、カルモジュリン１２５nM)、２(ｃＡＭＰ  １００μM)および５(ｃＧＭＰ  １μM)を、スクロースおよびＰＭＳＦなしの均質化緩衝液中のＮａＣｌ勾配(２．５カラム容量で０から０．１Ｍ  ＮａＣｌ、２４カラム容量で０．１から０．４５Ｍ)を使用して、アニオン交換クロマトグラフィー(Ｑ−Sepharose)で分離する。ＰＤＥ１：ｃＡＭＰ  １μMの加水分解を、Ｃａ2+＋カルモジュリン(それぞれ０．５mMおよび１２５nM)により促進できるフラクション；０．１７−０．１８Ｍ  ＮａＣｌで溶出。ＰＤＥ２：１００μMで明白なｃＡＭＰ加水分解活性を示すが、１μMでは示さないフラクション；０．３１−０．３２Ｍ  ＮａＣｌで溶出。ＰＤＥ５：ｃＡＭＰ  １μMよりもｃＧＭＰ  １μMを選択的に加水分解するフラクション；０．２０−０．２４Ｍ  ＮａＣｌで溶出。
ＰＤＥアッセイ：アッセイプロトコールは、Thompson et al. (Adv. Second Messenger Phosphoprotein Res. 1979;10:69-92)に記載の二段階法を基本にし、９６ウェルマイクロタイタープレート用に変える。簡単に、酵素を、アッセイ中に１０％および３０％の間の全基質加水分解を得るために、均質化緩衝液(上記参照)で希釈する。反応を開始するために、２５mLの希釈酵素を２５mLの基質([３Ｈ]−ｃＡＭＰ、１．２５mM、７４０Bq)および７５mLの阻害溶液(下記参照)に添加する。３０分、３７℃の後、反応を温水浴(６５℃、５分)中で停止させる。プレートを氷で冷やし、１０分、３７℃で２５mLの５’−ヌクレオチダーゼ(ヘビ毒、オイオファガス・ハンナ(oiophaghus hannah)、Sigma Chemical Co.、０．１mg／mL水溶液)とインキュベートする。未反応基質を[３Ｈ]−アデノシンから、３０％(ｖ／ｖ)Dowex１×２スラリー(アセテート形)の０．２％(ｖ／ｖ)酢酸溶液の連続した一定量(１００＋５０＋５０mL、５分間隔)の添加により、分離する。Dowexを遠心(１５０×ｇ、５分)によりペレット化する。上清の一定量を９６ウェル、固相シンチレーションプレート(LumaPlate, Canberra Packard)に、自動ピペット移動装置(Hamilton MicroLab 2200)を使用して移し、乾燥させ(少なくとも４時間、５０℃)、計数する(Canberra Packard TopCount)。
阻害剤：阻害剤貯蔵溶液を、ジメチルスルフオキシド(ＤＭＳＯ)中に調製し、水／ＤＭＳＯで希釈して、３０％から７０％阻害の範囲をカバーするように選択した７種の濃度とする。ＤＭＳＯの濃度はアッセイを通じて５０mL／mLに一定に保つ。
阻害パラメーターの測定：最大の半分の阻害が起こる濃度(ＩＣ50)および用量−反応曲線(ヒルの係数)の急勾配を、２パラメーターロジスティック式に会わせた非直線最少二乗法により、濃度−阻害曲線から決定する。結果は、最大の半分の阻害が達成される阻害剤濃度(ＩＣ50)での負のデシマール対数として示す(モル／Ｌで；ｐＩＣ50)。９５％信頼区間を概算し、ｐＬおよびｐＵ(それぞれ信頼区間限界の最低および最高の負のデシマール対数)として示す。アッセイで可視沈殿の原因となる濃度は分析から外す。
本試験法で、本発明の薬剤は主にタイプ４のＰＤＥイソ酵素を阻害し、相対的にタイプ１、２、３および７には効果が少ない。ＰＤＥタイプ４イソ酵素グループ(即ち、ＰＤＥタイプ４ＡからＤ)の中で、本発明の薬剤は、一般に、ＰＤＥタイプ４Ａ、４Ｂおよび４Ｃイソ酵素と比較して、ＰＤＥタイプ４Ｄイソ酵素の阻害を選択的に示す。
抗炎症活性：ホルミル−ＭｅｔＬｅｕＰｈｅ(ｆＭＬＰ)による好酸球活性化の阻害
精製ヒト好酸球(０．２ml  ＨＢＳＳ中１０4／ウェル)を、ルシゲニン(２５μM)存在下でｆＭＬＰ(１μM)で刺激する。酸化的バースト(化学ルミネセンスの変化として測定)は、対数式を使用した用量反応曲線から測定する。
本発明の薬剤は、上記試験法で、０．００１から５μMの範囲の濃度で、一般に、低nM範囲で活性である。実施例２の化合物は、例えば、本アッセイで０．００６μMのＩＣ50を有する。
その抗炎症活性、その気道過敏症への影響およびＰＤＥイソ酵素阻害に関する、特に、選択的タイプ４阻害剤としてのプロフィールを考慮して、本発明の薬剤は、特に、閉塞性または炎症性気道疾病の処置、特に予防的処置に有用である。従って、長期間に渡る継続した規則的な投与により、本発明の薬剤は、閉塞性または炎症性気道疾病の結果起こる、気管支収縮を起こさせるまたは他の症候に関する発作に対する先立つ防御の提供、またはこのような疾病の基底状態のコントロール、軽減または回復に有効である。
気管支拡張活性を考慮して、本発明の薬剤は、気管支拡張剤として、例えば、閉塞性または炎症性気道疾患の症状の処置のための、例えば、慢性または急性気道閉塞の処置に有用である。
本明細書および請求の範囲を通して、閉塞性または炎症性気道疾病に関して使用する“処置”および“処置する”なる用語は、従って、治療の予防的および対症状的治療の両方を含むと理解される。
前記に従って、本発明は更に
Ａ．必要とする患者に
ａ)気道過敏症の処置をする
ｂ)気管支拡張に作用する、または特に、
ｃ)閉塞性または炎症性気道疾患の処置をする
方法を提供し、該方法は該患者に有効量の本発明の薬剤を投与することを含む。
本発明を適用する閉塞性または炎症性気道疾病は、喘息、塵肺、慢性閉塞性気道または肺疾患(ＣＯＡＤまたはＣＯＰＤ)および成人呼吸窮迫症候群(ＡＲＤＳ)、および他の医薬治療、例えば、アスピリンまたはβ−アゴニスト治療の結果の気道過敏症の悪化を含む。
本発明は、内因性および、特に、外因性喘息を含む、どんなタイプまたは起源でも喘息の処置に適用できる。アレルギー性(アトピー性／ＩｇＥ−介在)喘息の処置に適用できる。気管支炎、運動誘発および職業喘息、細菌感染後誘発される喘息および他の非アレルギー性喘息を含む、非アトピー性喘息にも適用できる。幼児喘鳴症候群(幼児、初期喘息)の処置にも更に適用可能である。
本発明は、例えば、アルミニウム症、炭粉症、石綿症、石粉症、ダチョウ塵肺症、鉄症、珪肺症、タバコ肺症(tobacoosis)および綿肺症を含む、どんなタイプまたは起源の塵肺症でも処置に適用できる。
本発明は、慢性気管支炎、肺気腫またはそれに関連する呼吸困難を含む、ＣＯＰＤまたはＣＯＡＤの処置に適用できる。
本発明はまた、急性、アラキジン(arachidic)、慢性、クルップまたはフチノイド(phthinoid)気管支炎などを含む、どんなタイプまたは起源の気管支炎でも処置に適用できる。
ＴＮＦ−α放出の選択的阻害剤としてのその活性を考慮して、本発明の薬剤は、ＴＮＦ−α放出の下方制御または阻害のために、例えば、ＴＮＦ−α放出が関連しているまたは介在の役割をになう疾病または病気、例えば、病的な、例えば、望ましくない、過剰なまたは非制御ＴＮＦ−α放出が関与するまたは含む病因を有する疾病または病気の処置、特に、悪液質または内毒素ショックの処置、およびＡＩＤＳの処置[Sharief et al., Mediators of Inflammation, 1, 323-338(1992)参照]にも有用である。
本発明の方法は、例えば、細菌、ウイルスまたは寄生虫感染、またはホルモンまたは他の臓器、例えば、腎臓機能の不全または悪化の結果もたらされる悪液質を含む、どんな起源でも、病的ＴＮＦ−α放出またはＴＮＦ−α血流レベルが関連する悪液質の処置に適用できる。例えば、癌、マラリアおよび寄生虫(vermal)悪液質、下垂体、甲状腺または胸腺の不全によりもたらされる悪液質および尿毒悪液質の処置に適用できる。特に、ＡＩＤＳ関連悪液質、即ち、ＨIV感染によりもたらされるまたはそれに関連する悪液質に適用できる。
本発明の方法は、また敗血症ショック、例えば、細菌感染によりもたらされるショック状態の処置にも適用できる。この点に関して、本発明は、敗血症それ自体および敗血症の結果おこる病気またはその症状、例えば、ＡＲＤＳ(成人呼吸窮迫症候群)の処置法を提供することは注目である。
本発明の方法は、更に、ＨIV感染の結果おこる疾病、例えば、ＡＩＤＳの処置にも、例えば、このような疾病の軽減または進行のコントロールのために適用できる。
ＰＤＥイソ酵素の阻害および／またはＴＮＦα放出阻害およびその免疫抑制活性に関するプロフィールを考慮して、本発明の薬剤は、また、例えば、自己免疫疾患の処置のための、免疫抑制剤として、特に、炎症過程が関与している、または炎症因子または病因を有する自己免疫疾患の処置に、または、抗炎症剤として、炎症性疾患の処置に、特に、自己免疫反応が関与している、または自己免疫因子または病因を有する炎症性疾患の処置に、有用である。
本発明が適用できるこのような疾患の例は、自己免疫血液学的疾患(例えば、溶血性貧血症、形成不全貧血症、赤芽球癆および特発性血小板減少症)、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、スティーブン−ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫炎症性大腸疾病(例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病)、内分泌性眼疾患、グレーヴズ病、サルコイドーシス、肺胞炎、慢性過敏性肺炎、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病(Ｉ型糖尿病)、ブドウ膜炎(前部および後部)、乾性角結膜炎および春季角結膜炎、間質性肺繊維症、乾癬性関節炎および糸球体腎炎(ネフローゼ症候群有りまたは無し、例えば、特発性ネフローゼ症候群または微小変化ネフローゼ)ならびに乾癬、アトピー性皮膚炎、天疱瘡および特に接触性皮膚炎、例えば、アレルギー性接触性皮膚炎のような炎症性および／または過増殖性皮膚疾患を含む。
本発明の薬剤は、特に、関節炎および他のリウマチまたは炎症性疾患の処置、特に、関節リウマチの処置に有用である。
免疫抑制剤として、本発明の薬剤は、更に、例えば、腎臓、肝臓、肺、心臓、心肺、大腸、骨髄、皮膚または角膜移植に関連する、例えば、同種臓器移植片の維持などの、移植片拒絶反応の予防への使用が更に示される。
特に、好酸球活性化の阻害に関するその抗炎症性活性を考慮して、本発明の薬剤はまた好酸球関連疾病、例えば、好酸球増加症、特に、それが気道および／または肺で作用するため、過好酸球増加症を含む気道(例えば、肺組織への病的好酸球浸潤に関与する)の好酸球関連疾患の処置および、例えば、レフラー症候群、好酸性肺炎、寄生虫(特に、後生動物)侵入(局所好酸球増加症を含む)、気管支肺アスペルギルス症、結節性多発性動脈炎(チュルグ−ストラウス症候群を含む)、好酸性肉芽腫の結果またはそれに付随する、好酸球関連疾患、および医薬反応により引き起こされる気道に作用する好酸球関連疾病にも有用である。
ＰＤＥイソ酵素の阻害に関連するそのプロフィール、特に、選択的タイプ４阻害剤としてのプロフィールを考慮して、本発明の薬剤は更にタイプ４ＰＤＥ阻害剤として、例えば、組織カルシウム枯渇に関連する疾病の処置、特に、骨および関節のカルシウム枯渇に関連する退行性疾病、特に骨粗鬆症の処置に有用である。この点に関して、それらは更に鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹および胃腸アレルギーの処置に；血管拡張神経薬として、例えば、アンギナ、高血圧、鬱血性心不全および多重梗塞性痴呆症の処置に；およびＰＤＥ４の阻害が示される疾病、例えば、鬱病、アルツハイマー病、パーキンソン病および脳卒中を含む認識機能障害により特徴付けられる病気および疾病の処置に有用である。
免疫抑制および／または抗炎症性医薬物質との相乗的相互作用を考慮して、本発明の薬剤はまた、例えば、このような医薬の治療的活性の増強剤として、または必要な投与量またはこのような医薬の副作用の可能性を減少させる手段として、このような医薬と共に使用する共治療薬としても有用である。本発明の薬剤を適当に共投与し得る医薬物質は、例えば、シクロペプチド、シクロペプトリドまたはマクロライド系免疫抑制剤または抗炎症性医薬物質、例えば、シクロスポリンクラスに属する医薬、例えば、シクロスポリンＡまたはＧ、タクロリムス(ＦＫ５０６としても既知)医薬物質、アスコマイシンおよびラパマイシンおよびそれらの既知の同種のものおよび誘導体、ならびにグルココルチコステロイド医薬を含む。このような共治療を適用し得る疾病は、例えば、免疫抑制または抗炎症医薬治療が必要な、例えば、前記のような、任意の疾病または病気を含む。
特に、本発明の薬剤は、前記のように、例えば、免疫抑制、抗炎症または抗喘息治療の目的で、例えば、シクロスポリン、例えば、シクロスポリンＡ−、マクロライド−またはステロイド−節約効果を達成するために、共治療で使用するのに適当である。
前記に従って、本発明はまた：
Ｂ．処置を必要とする患者の
ａ)ＴＮＦ−α放出の下方制御または阻害、
ｂ)ＰＤＥ４イソ酵素活性の阻害、
ｃ)免疫抑制に作用する、
ｄ)炎症性疾病の処置、または
ｅ)前記の任意の特定の疾病または病気の処置
の方法を提供し、該方法は患者に本発明の薬剤の有効量を投与することを含む。
本発明はまた：
Ｃ．医薬として使用する、例えば、上記ＡまたはＢで定義のような、例えば、前記の疾病または病気の処置の方法または処置に使用する本発明の薬剤を提供する。
本発明の実施に使用する量は、もちろん例えば、処置する特定の疾病または病気、使用する特定の本発明の薬剤、投与形態および所望の治療に依存して変化する。一般に、しかしながら、例えば、前記の疾病の処置における十分な結果が、約０．０１から２．０mg／kgの範囲の投与量の経口投与で得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトでは、示される一日量は従って約０．７５から１５０mgの範囲であり、簡便には一日１回または２から４回に分けた量で、または持続性放出形で投与する。経口投与用単位投与形は、従って、適当には約０．２から７５、または１５０、例えば、０．２または２．０から５０、７５または１００mgの本発明の薬剤を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む。
慢性または閉塞性気道疾患、例えば喘息の処置への使用のために、本発明の薬剤は、また吸入経路でも投与し得る。用いる投与量はまた例えば、処置する特定の疾病または病気、使用する特定の本発明の薬剤、特定の投与形態(例えば、乾燥粉末吸入か他のものか)および所望の治療に依存して変化する。一般に、しかしながら、示される吸入一日量は約２．５から約１３０．０μg／kg／日、例えば、約１３．０から約６０．０μg／kg／日の範囲である。大型哺乳類、例えば、ヒトでは、例えば、喘息の処置における、示される吸入による投与の一日量は、約０．２から約１０．０mg、例えば、約１から約５mgの範囲であり、簡便には一日１回投与または２または３回に分けた量である。投与当たりの適当な投与量は、従って、約２００μgから約３．３mgであり、一日３回まで投与し、適当には各投与当たり２から８パフの乾燥粉末吸入輸送装置から投与する。
本発明の薬剤は、また他の適当な経路で、例えば、内毒素ショックの処置のための例えば、点滴；例えば、鼻炎の処置のための経鼻；例えば、眼の自己免疫疾患の処置のための眼；皮膚病または乾癬の処置のための皮膚に、即ち、皮膚への局所；または、例えば、炎症性大腸疾患の処置のための、例えば、浣腸または坐薬を介した経直腸でも投与し得る。このような経路での投与の適当な投与量は、一般に、経口投与で必要な量より１０から１００倍少ない。
本発明の薬剤を含む医薬組成物は、慣用の希釈剤または賦形剤およびガレヌス技術で既知の方法を使用して製造し得る。即ち、経口投与形は、錠剤、カプセル等を含み得る。経皮投与用製剤は、クリーム、軟膏または経皮輸送システム、例えばパッチの形を取り得、不活性希釈剤または担体に加えて、適当には皮膚浸透促進剤を含み得、これも当分野で既知である。
吸入用組成物は、エアロゾルまたは他の噴霧可能製剤および吸入可能乾燥粉末製剤を、当分野で既知の適当な乾燥粉末吸入システムで投与するための希釈剤有りまたは無しで含み得る。吸入用乾燥粉末形の製造のために、本発明の薬剤は、適当には薬学的に許容される酸付加塩形で使用する。該塩形は、適当には、例えば、エアー−ジェットまたはセラミック製粉機を使用して粉砕し、例えば、平均粒子直径約２−３μの微細な吸入可能粉末を提供する。適当には、少なくとも９０％の物質が７．８μ以下、より好ましくは４．８μ以下の平均粒子直径を有する。乾燥粉末形での投与に適当な適当な一貫した特定の生産物の獲得を確実とするために、適当な吸入可能担体媒体、例えばラクトースと、予め混合した活性成分を、低い温度下で粉砕することが好ましいことがある。
前記に従って、本発明はまた：例えば、前記で定義の方法に使用するための、本発明の薬剤を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む医薬組成物も提供する。