(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0004505449.tif 000019
〔式中、
Ｙは−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２−であり；
Ｘは所望によりハロ、Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択される１個から３個の置換基で置換されているアリーレンまたはＣ５−６ヘテロアリーレンであり；
Ｒ１は式(ａ)：
【化２】
0004505449.tif 000020
(式中、
ｎは０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ６はＣ１−１０アルキルまたはハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルであり；
Ｒ７は所望によりアリール、Ｃ５−６ヘテロアリールまたはＣ３−８シクロアルキルで置換されているアリールまたはＣ５−６ヘテロアリールであり、ここでＲ７の任意のアリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキル基は所望によりハロゲン、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−１０アルコキシからなる群から選択される１個から３個までの置換基で置換されていてよく、ここでアリールは６個から１０個までの環炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環である)
の基であり；
Ｒ２は所望により末端Ｃ原子上をＯＨで置換されているＣ１−４アルキルまたは式(ｇ)：
【化３】
0004505449.tif 000021
(式中、
ＺはＯ、Ｓ、(ＣＨ２)１−２、ＣＦ２またはＮＲ１１であり、Ｒ１１はＨ、(Ｃ１−４)アルキルまたはハロ置換(Ｃ１−４)アルキルであり；そしてＲ９およびＲ１０はＯＨまたは(Ｃ１−４)アルコキシである)
の基であり；
Ｒ３およびＲ４は独立してＨまたはＣ１−４アルキルであり；そしてＲ５は−ＯＨまたは上記で定義の式(ｇ)の基である。〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｙが−ＣＨ２−ＣＨ２−である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｘがチオフェニレンまたはフェニレンである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ６がＣ１−６アルキルであり、Ｒ７が所望によりチオフェニル、フラニル、ピリジニル、フェニルまたはシクロヘキシルで置換されているチオフェニル、フラニル、ピリジニルまたはフェニルであり、ここでＲ７の任意のチオフェニル、フラニル、ピリジニル、フェニルまたはシクロヘキシルは所望によりハロゲン、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−１０アルコキシからなる群から選択される１個から３個の置換基で置換されていてよい、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を、薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
【請求項６】
活性成分として、請求項１記載の化合物を含む、動物における、ＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプター介在シグナル伝達の改変により、疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻害または軽減できるものである疾患の処置用薬剤。
【請求項７】
活性成分として、請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む、リンパ球により介在される障害または疾患の予防または処置用、急性もしくは慢性移植拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性もしくは自己免疫疾患の予防または処置用、制御されていない血管形成の阻害または調節用、または新血管形成工程により介在されるまたは制御されていない血管形成が関連する疾患の予防または処置用薬剤。
【請求項８】
動物におけるＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプター介在シグナル伝達の改変が該疾患の病状および／または総体的症状に関連しているものである疾患の処置用薬剤の製造における、請求項１記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願の相互参照
本発明は、米国仮出願第６０／４４６,６４８号(２００３年２月１１日出願)、第６０／４６４,８０９号(２００３年４月２１日出願)および第６０／４７２,０１２号(２００３年５月１９日出願)の優先権を主張している。これらの出願の完全な記載を、その全体を引用し、かつ、すべての目的で包含させる。
【０００２】
背景技術
技術分野
本発明は、リンパ球相互作用により介在される疾患または障害、特にＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプター介在シグナル伝達が関連する疾患の処置または予防に有用な、二環式化合物の新規クラスを提供する。
【０００３】
背景
ＥＤＧレセプターは、密接に関連する、脂質活性化Ｇ−タンパク質結合レセプターのファミリーに属する。ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８(各々Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ４、およびＳ１Ｐ５とも呼ばれる)は、スフィンゴシン−１−ホスフェート(Ｓ１Ｐ)に特異的なレセプターとして同定されている。ＥＤＧ２、ＥＤＧ４、およびＥＤＧ７(各々ＬＰＡ１、ＬＰＡ２、およびＬＰＡ３とも呼ばれる)は、リソホスファチジン酸(ＬＰＡ)に特異的なレセプターである。本Ｓ１Ｐレセプターアイソタイプの中で、ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３およびＥＤＧ−５は種々の組織で広範囲に発現され、一方、ＥＤＧ−６の発現は主にリンパ系組織および血小板限定されており、ＥＤＧ−８は中枢神経系に限定されている。ＥＤＧレセプターはシグナル伝達を担い、細胞発育、増殖、維持、移動、分化、可塑性およびアポトーシスが含まれる細胞プロセスに重要な役割を演じると考えられている。あるＥＤＧレセプターは、リンパ球相互作用により介在される疾患、例えば、移植拒絶反応、自己免疫疾患、炎症性疾患、感染症および癌と関連している。ＥＤＧレセプター活性の変化は、これらの疾患の病状および／または総体的症状に関与する。したがって、それ自体ＥＤＧレセプターの活性を変える分子は、このような疾患の処置における治療剤として有用である。
【０００４】
発明の開示
本発明は、式Ｉ：
【化１】
0004505449.tif 000002
〔式中、
Ｙは−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−、−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２−、−Ｃ(Ｏ)ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ(Ｏ)−、−ＣＨ＝ＣＨ−または１,２−シクロプロピレンであり；
Ｘは所望により、ハロ、Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択される１個から３個の置換基で置換されているアリーレンまたはＣ５−６ヘテロアリーレンであり；
Ｒ１は、式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、(ｄ)、(ｅ)または(ｆ)：
【化２】
0004505449.tif 000003
(式中、
ｎは０、１、２、３、４または５であり；
ｍは０、１または２であり；
Ｒ６はＣ１−１０アルキル、シクロアルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ１−１０アルキルチオ、Ｃ１−１０アルキルスルホニル、Ｃ１−１０アルキルスルフィニルまたはハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルであり；これらのいずれの場合も該基の任意の脂肪族部分は直鎖または分枝鎖であってよく、かつ、所望により３個までのヒドロキシ、シクロアルキルまたはＣ１−４アルコキシ基で置換されてよく、かつ、所望により２重もしくは３重結合または１個以上のＣ(Ｏ)、ＮＲ１２、Ｓ、Ｓ(Ｏ)、Ｓ(Ｏ)２もしくはＯ基により中断されており、
Ｒ７は、所望により、アリール、Ｃ５−６ヘテロアリールまたはＣ３−８シクロアルキルで置換されているアリールまたはＣ５−６ヘテロアリールであり、ここで、Ｒ７の任意のアリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキル基は、所望により、ハロゲン、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−１０アルコキシからなる群から選択される１個から３個までの置換基で置換されていてよい)
の基であり；
【０００５】
Ｒ２は水素；所望により１個以上のハロゲンで置換されているＣ１−４アルキル；所望によりハロゲンで置換されているＣ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、またはシクロアルキル；または所望により末端Ｃ原子上をＯＨで置換されているＣ１−４アルキルまたは式(ｇ)：
【化３】
0004505449.tif 000004
(式中、
ＺはＯ、Ｓ、(ＣＨ２)１−２、ＣＦ２またはＮＲ１１であり、Ｒ１１はＨ、(Ｃ１−４)アルキルまたはハロ置換(Ｃ１−４)アルキルであり；そしてＲ９およびＲ１０、独立して、Ｈ、ＯＨ、(Ｃ１−４)アルキル(所望により１個から３個のハロ基で置換されている)、または(Ｃ１−４)アルコキシである。
ただし、Ｒ９およびＲ１０は両方とも水素ではない)
の基であり；
Ｒ３およびＲ４は、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル(所望によりハロゲンまたはアシルで置換されている)；そして
Ｒ５は−ＯＨ、−Ｏアシル、−ＮＨアシル、または上記で定義の式(ｇ)の基である。〕
の化合物、およびそれらのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護されている誘導体、個々の異性体および異性体混合物；およびこのような化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)に関する。
【０００６】
本発明の第２の局面は、式Ｉの化合物またはそれらのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体または異性体の混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を、１種またはそれ以上の適当な賦形剤と共に含む、医薬組成物である。
【０００７】
本発明の第３の局面は、式Ｉの化合物またはそれらのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体または異性体の混合物；またはそれらの薬学的に許容される塩の治療的有効量を動物に投与することを含む、動物における、ＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプター介在シグナル伝達の改変により、該疾患の病状および／または総体的症状を予防、阻害または軽減できるものである疾患の処置法である。
【０００８】
本発明の第４の局面は、必要とする対象における制御されていない血管形成、例えばＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１介在血管形成を阻害または調節する方法であり、治療的有効量の式Ｉの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を該対象に投与することを含む、方法である。
【０００９】
本発明の第５の局面は、必要とする対象における新血管形成工程により介在されるまたは制御されていない血管形成が関連する疾患を予防または処置する方法であり、治療的有効量の式Ｉの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を該対象に投与することを含む、方法である。
【００１０】
本発明の第６の局面は、動物におけるＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプター介在シグナル伝達の改変が該疾患の病状および／または総体的症状に関連しているものである疾患の処置用薬剤の製造における、式Ｉの化合物の使用である。
【００１１】
本発明の第７の局面は、式Ｉの化合物およびそれらのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護されている誘導体、個々の異性体および異性体混合物；およびそれらの薬学的に許容される塩の製造法である。
【００１２】
好ましい態様の記載
本発明は、リンパ球相互作用により介在される疾患または障害の処置および／または予防に有用な化合物を提供する。また提供されるのは、このような疾患または障害の処置法である。
【００１３】
定義
本明細書においては、別に定義されていない限り：
“アシル”は、基Ｒ−ＣＯ−(ここで、ＲはＣ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロプロピル、フェニルまたはフェニルＣ１−４アルキルである)を意味する。
【００１４】
基としてのまたは他の基、例えばハロ−置換−アルキル、アルコキシ、アシル、アルキルチオ、アルキルスルホニルおよびアルキルスルフィニルの構造要素としての“アルキル”は、直鎖または分枝鎖であり得る。基または他の基の構成要素としての“アルケニル”は、１個またはそれ以上の炭素−炭素二重結合を有し、直鎖または分枝鎖のいずれかであってよい。すべての二重結合はｃｉｓ−またはｔｒａｎｓ−立体配置であり得る。好ましいアルケニル基はビニルである。基または他の基もしくは化合物の構成要素としての“アルキニル”は、少なくとも１個のＣ≡Ｃ三重結合を有し、１個またはそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を含んでよく、可能である限り、直鎖または分枝鎖のいずれかであってよい。好ましいアルキニル基はプロパルギルである。また、単独のまたは他の基の構成要素としてのシクロアルキル基は、３から８個の炭素原子、好ましくは３から６個の炭素原子を含み得る。
【００１５】
“アリール”は、６から１０個の環炭素原子を含む、単環式または縮合二環式芳香環を意味する。例えば、アリールはフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルである。“アリーレン”は、アリール基由来の２価ラジカルを意味する。例えば、本明細書で使用するアリーレンは、フェニレンまたはナフチレン、好ましくはフェニレン、より好ましくは１,４−フェニレンであり得る。
【００１６】
“ハロ”または“ハロゲン”は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ、好ましくはＦまたはＣｌを意味する。ハロ−置換アルキル基および化合物は、部分的にハロゲン化されているか、または過ハロゲン化されており、複数ハロゲン化の場合、ハロゲン置換基は同一または異なってよい。好ましい過ハロゲン化アルキル基は例えばトリフルオロメチルである。
【００１７】
“ヘテロアリール”は、特記しない限り、示される環炭素原子の１個またはそれ以上が、Ｎ、ＯまたはＳから選択されるヘテロ原子部分で置換され、かつ、各々の環が５から６個の環原子を含む、本明細書で定義した通りのアリールを意味する。例えば、本明細書で使用するヘテロアリールは、チオフェニル、ピリジニル、フラニル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリルまたはベンゾ[１,３]ジオキソリル、好ましくはチオフェニル、フラニルまたはピリジニルを含む。“ヘテロアリーレン”は、環集合体が２価ラジカルを含む、本明細書で定義した通りのヘテロアリールを意味する。
【００１８】
本明細書で使用する範囲で、ＥＤＧ−１選択的化合物(試薬またはモジュレーター)は、(ｉ)ＥＤＧ−１に、ＥＤＧ−３によりもかつＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８の１個またはそれ以上によりも選択的であるか；または(ii)ＥＤＧ−１およびＥＤＧ−３に、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８の１個またはそれ以上によりも選択的である。本明細書で使用する範囲で、１種のＥＤＧレセプター(“選択的レセプター”)への他のＥＤＧレセプター(“非選択的レセプター”)を超える選択性は、該化合物が、選択的ＥＤＧレセプター(例えば、ＥＤＧ−１)が介在する活性の誘導において、非選択的Ｓ１Ｐ−特異的ＥＤＧレセプターに対するよりも、より高い効果を有することを意味する。ＧＴＰ−γＳ結合アッセイ(下記実施例に記載の通り)で測定したとき、ＥＤＧ−１選択的化合物は典型的に、選択的レセプター(ＥＤＧ−１、またはある態様においてＥＤＧ−１およびＥＤＧ−３の両方)に対して、非選択的レセプター(例えば、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８の１個またはそれ以上)に対するＥＣ５０(最大応答の５０％をもたらす有効濃度)よりも、少なくとも５、１０、２５、５０、１００、５００、または１０００倍低いＥＣ５０を有する。
【００１９】
発明の詳細な説明
本発明は、リンパ球相互作用により介在される疾患または障害の処置または予防に有用な化合物を提供する。ある態様において、これらの化合物は、式Ｉ：
【化４】
0004505449.tif 000005
〔式中、
Ｙは−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ(ＯＨ)−、−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ２−、−Ｃ(Ｏ)ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ(Ｏ)−、−ＣＨ＝ＣＨ−；または１,２−シクロプロピレンであり；
Ｘは所望により、ハロ、Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択される１個から３個の置換基で置換されているアリーレンまたはＣ５−６ヘテロアリーレンであり；
Ｒ１は、式(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、(ｄ)、(ｅ)または(ｆ)：
【化５】
0004505449.tif 000006
(式中、
ｎは０、１、２、３、４または５であり；ｍは０、１または２であり；
Ｒ６はＣ１−１０アルキル、シクロアルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、Ｃ２−１０アルケニル、Ｃ２−１０アルキニル、Ｃ１−１０アルキルチオ、Ｃ１−１０アルキルスルホニル、Ｃ１−１０アルキルスルフィニルまたはハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルであり；これらのいずれの場合も該基の任意の脂肪族部分は直鎖または分枝鎖であってよく、かつ、所望により３個までのヒドロキシ、シクロアルキルまたはＣ１−４アルコキシ基で置換されてよく、かつ、所望により２重もしくは３重結合または１個以上のＣ(Ｏ)、ＮＲ１２、Ｓ、Ｓ(Ｏ)、Ｓ(Ｏ)２もしくはＯ基により中断されており；
Ｒ７は、所望により、アリール、Ｃ５−６ヘテロアリールまたはＣ３−８ヘテロシクロアルキルで置換されているアリールまたはＣ５−６ヘテロアリールであり、ここで、Ｒ７の任意のアリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル基は、所望により、ハロゲン、Ｃ１−１０アルキル、Ｃ１−１０アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−１０アルコキシからなる群から選択される１個から３個までの置換基で置換されていてよい)
の基であり；
【００２０】
Ｒ２は水素；所望により１個以上のハロゲンで置換されているＣ１−４アルキル；所望によりハロゲンで置換されているＣ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、またはシクロアルキル；または所望により末端Ｃ原子上をＯＨで置換されているＣ１−４アルキルまたは式(ｇ)：
【化６】
0004505449.tif 000007
(式中、
ＺはＯ、Ｓ、(ＣＨ２)１−２、ＣＦ２またはＮＲ１１であり、Ｒ１１はＨ、(Ｃ１−４)アルキルまたはハロ置換(Ｃ１−４)アルキルであり；そしてＲ９およびＲ１０、独立して、Ｈ、ＯＨ、(Ｃ１−４)アルキル(所望により１個から３個のハロ基で置換されている)、または(Ｃ１−４)アルコキシである。
ただし、Ｒ９およびＲ１０は両方とも水素ではない)
の基であり；
Ｒ３およびＲ４は、独立して、ＨまたはＣ１−４アルキル(所望によりハロゲンまたはアシルで置換されている)；そしてＲ５は−ＯＨ、−Ｏアシル、−ＮＨアシル、または上記で定義の式(ｇ)の基である。〕
の化合物、それらのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護されている誘導体、個々の異性体および異性体混合物；そしてこのような化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)である。
【００２１】
一つの態様において、式Ｉの化合物に関して、Ｙは好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ２−または−ＣＨ(ＯＨ)−ＣＨ２−、より好ましくは−ＣＨ２−ＣＨ２−である。
【００２２】
他の態様において、Ｘは好ましくは１,４−フェニレンまたはチオフェニレンである。
【００２３】
さらに別の態様において、Ｒ２は好ましくはＲ２'(ここで、Ｒ２'は所望により末端Ｃ原子上をＯＨで置換されているＣ１−４アルキルまたは式(ｇ)の基である)である。より好ましくはＲ２はメチルまたはヒドロキシメチル、もっとも好ましくはヒドロキシメチルである。
【００２４】
好ましくは、少なくとも１個のＲ３およびＲ４は水素である。より好ましくは、両方が水素である。
【００２５】
Ｒ５は好ましくはＲ５'(ここで、Ｒ５'はＨ、−ＯＨ、−ＮＨＣ(Ｏ)Ｃ１−４アルキルまたは式(ｇ)の残基である)である。
【００２６】
好ましくは、式(ｇ)の基において、Ｒ９およびＲ１０の各々が−ＯＨである。
さらなる態様において、Ｒ１は式(ａ)、(ｂ)または(ｄ)の基である。より好ましくは、Ｒ１は式(ａ)の基である。
【００２７】
好ましくは、Ｒ６はＣ１−６アルキルであり、Ｒ７は、所望によりチオフェニル、フラニル、ピリジニル、フェニルまたはシクロヘキシルで置換されているチオフェニル、フラニル、ピリジニルまたはフェニル(ここで、任意のチオフェニル、フラニル、ピリジル、フェニルまたはシクロヘキシルは、ハロゲン、ハロ−置換−Ｃ１−１０アルキルおよびハロ−置換−Ｃ１−１０アルコキシからなる群から選択される１個から３個までの置換基で置換されていてよい)である。
【００２８】
他の態様において、Ｒ７は、パラ位をチオフェニル、フラニル、ピリジル、フェニルまたはシクロヘキシルでモノ置換されているフェニルである。
【００２９】
他の態様において、ｎは３、４または５であり、そしてＲ７はフェニルである。特に好ましい式Ｉの化合物は、化合物表Ｉから選択される化合物である。
【００３０】
本発明は、保護された形で存在するヒドロキシルまたはアミン基を有する、化合物の形を提供する；これらはプロドラッグとして機能する。プロドラッグは、投与後に、１個またはそれ以上の化学的または生化学的変換を介して、活性薬剤形に変換する化合物である。生理学的条件下で容易に本発明の化合物に変換する本発明の化合物形は、本発明の化合物のプロドラッグであり、本発明の範囲内である。プロドラッグの例は、総体的に不安定な酢酸エステルのようなエステルを形成するためにヒドロキシル基がアシル化されている形、およびアミン基がグリシンのカルボン酸基またはセリンのようなＬ−アミノ酸でアシル化され、一般的な代謝酵素による加水分解に特に感受性のアミド結合を形成している形を含む。本発明のある分子は、式(ｇ)の、ヒドロキシ基に酵素的に脱リン酸化され得るホスフェート残基を含むもののように、それ自体プロドラッグであってよい。あるいは、遊離ヒドロキシ基を含む本発明の化合物は、式(ｇ)のホスフェート残基を含む化合物に酵素的にリン酸化され得る。本発明はまた、所望により平衡である酵素的にリン酸化されたまたは脱リン酸化された式Ｉの化合物の両方を含む。
【００３１】
式Ｉの化合物は遊離形または塩形、例えば無機もしくは有機酸の付加塩で存在できる；基(ｇ)が存在し、かつＲ９またはＲ１０が−ＯＨであるとき、基(ｇ)はまた塩形、例えばアンモニウム塩またはリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛またはマグネシウムのような金属との塩、またはこれらの混合物で存在できる。水和物または溶媒和物形の式Ｉの化合物およびそれらの塩も本発明の一部である。
【００３２】
式Ｉの化合物が分子中に不斉中心を有するとき、種々の光学異性体が得られる。本発明はまたエナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオ異性体およびこれらの混合物を含む。例えば、Ｒ２、ＣＨ２−Ｒ５およびＮＲ３Ｒ４を担持する中心炭素原子はＲまたはＳ立体配置を有する。この中心炭素原子がＲ立体配置を有する化合物が好ましい。さらに、式Ｉの化合物が幾何異性体を有するとき、本発明はｃｉｓ−化合物、ｔｒａｎｓ−化合物およびこれらの混合物を包含する。上記のように不斉炭素原子または不飽和結合を有する出発物質に関しても同様の考察が当てはまる。
【００３３】
免疫調節的状態(Immunomodulatory Condition)を処置するための方法および医薬組成物
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は価値のある薬理学的特性、例えばリンパ球再循環調節特性を、例えば、実施例３のインビトロおよびインビボ試験で示すように有し、したがって、治療に適応される。式Ｉの化合物は、好ましくは１×１０−１０から１×１０−５Ｍの範囲、好ましくは５０nM未満のＥＣ５０を有する。本化合物は、ＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターの１個またはそれ以上、好ましくはＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１に選択性を有する。本発明のＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的モジュレーターは、化合物のＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１および他のＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターの１個またはそれ以上(例えば、ＥＤＧ−３／Ｓ１Ｐ−３、ＥＤＧ−５／Ｓ１Ｐ−２、ＥＤＧ−６／Ｓ１Ｐ−４、およびＥＤＧ−８／Ｓ１Ｐ−５)への化合物の結合をアッセイすることにより同定できる。ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的モジュレーターは、通常、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１レセプターに対して、１×１０−１０から１×１０−５Ｍ、好ましくは５０nM未満、より好ましくは５nM未満のＥＣ５０を有する。それはまた他のＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターの１個またはそれ以上に対して、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１に対するそのＥＣ５０よりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、５００、または１０００倍高いＥＣ５０を有する。故に、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１調節性化合物のいくつかは、５nM未満のＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１に対するＥＣ５０を有し、一方、他のＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターの１個またはそれ以上に対するＥＣ５０は少なくとも１００nMまたはそれより高い。ＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターへの結合活性をアッセイする以外に、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的試薬はまた、ＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターにより介在される細胞性プロセスまたは活性を調節する試験試薬の能力を試験することにより同定できる。
【００３４】
式Ｉの化合物は、したがってリンパ球相互作用により介在される疾患または障害、例えば細胞、組織または臓器同種または異種移植の急性または慢性拒絶反応または遅延移植片機能、移植片対宿主病のような移植において、自己免疫疾患、例えばリウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型またはII型糖尿病およびその合併症、脈管炎、悪性貧血、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、乾癬、グレーブス眼症、円形脱毛症など、アレルギー性疾患、例えばアレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎／結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、所望により基礎となる異常反応を伴う炎症性疾患、例えば炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎、内因性喘息、炎症性肺損傷、炎症性肝臓損傷、炎症性糸球体損傷、アテローム性動脈硬化症、骨関節症、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、免疫介在疾患の皮膚症状、炎症性眼疾患、角結膜炎、心筋炎または肝炎、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、外傷性ショック、Ｔ細胞リンパ腫またはＴ細胞白血病、感染症、例えば毒素ショック(例えば超抗原誘発)、敗血症ショック、成人呼吸窮迫症候群またはウイルス感染、例えばＡＩＤＳ、ウイルス性肝炎、慢性真菌感染、または老年痴呆の処置および／または予防に有用である。細胞、組織または固形臓器移植の例は、例えば膵臓島、幹細胞、骨髄、角膜組織、神経組織、心臓、肺、複合心臓−肺、腎臓、肝臓、腸、膵臓、気管または食道を含む。上記使用に関して、必要な投与量は、投与の形態、処置すべき特定の状態および望む効果に依存してもちろん変化する。
【００３５】
さらに、式Ｉの化合物は癌化学療法、特に固形腫瘍、例えば乳癌の癌化学療法、または抗血管形成剤として有用である。
【００３６】
必要な投与量は、投与の形態、処置すべき特定の状態および望む効果に依存してもちろん変化する。一般に、満足な結果が、約０.０３から２.５mg／体重kgの一日投与量で、全身的に得られることが指示される。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示される一日投与量は、約０.５mgから約１００mgであり、簡便には、例えば、１日４回までの分割でまたは遅延形で投与する。経口投与のための適当な単位は、約１から５０mg活性成分を含む。
【００３７】
式Ｉの化合物は慣用の経路のいずれかで、特に、経腸的に、例えば、経口で、例えば錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば、注射可能溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えばローション、ジェル、軟膏またはクリームの形で、または経鼻的にまたは坐薬形で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、少なくとも１個の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、慣用の方法で、薬学的に許容される担体または希釈剤との混合により製造できる。
【００３８】
式Ｉの化合物は、遊離形または薬学的に許容される塩形で、例えば、上記のように投与できる。このような塩は慣用の方法で製造でき、遊離化合物と同程度の活性を示す。
【００３９】
前記によって、本発明はさらに下記を提供する：
１.１  処置を必要とする対象における、例えば、上記のようなリンパ球により介在される障害または疾患の予防または処置法であり、該対象に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を投与することを含む方法；
【００４０】
１.２  処置を必要とする対象における、例えば、上記のような急性もしくは慢性移植拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性もしくは自己免疫疾患の予防または処置法であり、該対象に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を投与することを含む方法；
【００４１】
１.３  必要とする対象における制御されていない血管形成、例えばスフィンゴシン−１−ホスフェート(Ｓ１Ｐ)介在血管形成を阻害または調節する方法であり、該対象に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。
【００４２】
１.４  必要とする対象における新血管形成工程により介在されるまたは制御されていない血管形成が関連する疾患の予防または処置法であり、該対象に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を投与することを含む方法。
【００４３】
２. 医薬として、例えば、上記１.１から１.４の下に示す方法のいずれかにおいて使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物。
【００４４】
３. 遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば上記１.１から１.４のような任意の方法において使用するための医薬組成物。
【００４５】
４. 上記１.１から１.４のような任意の方法において使用するための医薬組成物の製造において使用するための、式Ｉの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩。
【００４６】
式Ｉの化合物は、単独の活性成分として、または、例えば同種−または異種移植片急性または慢性拒絶反応または炎症性もしくは自己免疫疾患の処置または予防に、例えば他の薬剤、例えば免疫抑制剤または免疫調節剤または他の抗炎症性試薬と組み合わせて、または化学療法剤、例えば悪性細胞抗増殖性剤と組み合わせて、アジュバントとして投与できる。例えば式Ｉの化合物は、カルシニューリン阻害剤、例えばシクロスポリンＡまたはＦＫ５０６；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９、ＡＢＴ５７８またはＡＰ２３５７３；免疫抑制性特性を有するアスコマイシン、例えばＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキサート；レフルノミド；ミゾリビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンまたはその免疫抑制性相同体、類似体または誘導体；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球レセプター、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０。ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体；他の免疫調節性化合物、例えば少なくともＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外ドメインの一部を有する組み換え結合分子、例えば非ＣＴＬＡ４タンパク質配列と結合した、少なくともＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外部分、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ(例えば、ＡＴＣＣ６８６２９と命名)またはその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ；接着分子阻害剤、例えばＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１または−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニストまたはＶＬＡ−４アンタゴニスト；または化学療法剤と組み合わせて使用し得る。
【００４７】
“化学療法剤”なる用語はすべての化学療法剤を含み、それは、以下のものを含むが、これらに限定されない；
ｉ. アロマターゼ阻害剤、
ii. 抗エストロゲン、抗アンドロゲン(とりわけ前立腺癌の場合)またはゴナドレリンアゴニスト、
iii. トポイソメラーゼＩ阻害剤またはトポイソメラーゼII阻害剤、
iv. 微小管活性剤、アルキル化剤、抗新生物代謝拮抗剤またはプラチン化合物、
ｖ. タンパク質または脂質キナーゼ活性またはタンパク質または脂質ホスファターゼ活性を標的とする／減少する化合物、さらなる抗血管形成化合物または細胞分化プロセスを誘発する化合物、
vi. ブラジキニン１レセプターまたはアンギオテンシンIIアンタゴニスト、
vii. シクロオキシゲナーゼ阻害剤、ビスホスホネート、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヘパラナーゼ阻害剤(ヘパランスルフェート分解を阻止する)、例えばＰＩ−８８、生物学的応答モディファイアー、好ましくリンフォカインまたはインターフェロン、例えばインターフェロン□、ユビキチン化阻害剤、または抗アポトーシス経路を遮断する阻害剤、
viii. Ｒａｓ発癌性アイソフォーム、例えばＨ−Ｒａｓ、Ｋ−ＲａｓまたはＮ−Ｒａｓの阻害剤、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばＬ−７４４,８３２またはＤＫ８Ｇ５５７、
ix. テロメラーゼ阻害剤、例えばテロメスタチン、
ｘ. プロテアーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤、例えばベンガミドまたはその誘導体、またはプロテオソーム阻害剤、例えばＰＳ−３４１、および／または
xi. ｍＴＯＲ阻害剤。
【００４８】
本明細書で使用する“アロマターゼ阻害剤”なる用語は、エストロゲン生成、すなわち基質アンドロステンジオンおよびテストステロンから各々エストロンおよびエストラジオールへの変換を阻害する化合物に関する。本用語は、ステロイド、とりわけアタメスタン、エクセメスタンおよびホルメスタンおよび、特に、非ステロイド、とりわけアミノグルテチミド、ログレチミド、ピリドグルテチミド、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールを含むが、これらに限定されない。アロマターゼ阻害剤である化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、特にホルモンレセプター陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置に有用である。
【００４９】
本明細書で使用する“抗エストロゲン”は、エストロゲンの作用にエストロゲンレセプターレベルで拮抗する化合物を意味する。本用語は、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよびラロキシフェン塩酸塩を含むが、これらに限定されない。抗エストロゲンである化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、特にエストロゲンレセプター陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置に有用である。
【００５０】
本明細書で使用する“抗アンドロゲン”なる用語は、男性ホルモンの生物学的効果を阻害できるすべての物質に関し、ビカルタミドを含むが、これに限定されない。
【００５１】
本明細書で使用する“ゴナドレリンアゴニスト”なる用語は、アバレリクス、ゴセレリンおよびゴセレリン・アセテートを含むが、これらに限定されない。
【００５２】
本明細書で使用する“トポイソメラーゼＩ阻害剤”なる用語は、トポテカン、イリノテカン、９−ニトロカンプトセシンおよび巨大分子カンプトセシン・コンジュゲートＰＮＵ−１６６１４８(ＷＯ９９／１７８０４の化合物Ａ１)を含むが、これらに限定されない。
【００５３】
本明細書で使用する“トポイソメラーゼII阻害剤”なる用語は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシンのようなアントラシクリン、アントラキノンであるミトトレキサートおよびロソキサントロン、およびポドフィロトキシンであるエトポシドおよびテニポシドを含むが、これらに限定されない。
【００５４】
本明細書で使用する“微小管活性化剤”なる用語は、微小管安定化および微小管脱安定化剤に関し、タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル、ビンカ・アルカロイド、例えば、ビンブラスチン、とりわけビンブラスチン・スルフェート、ビンクリスチン、とりわけビンクリスチン・スルフェート、およびビノレルビン、ジスコデルモライドおよびエポシロンおよびその誘導体、例えばエポシロンＢまたはその誘導体を含むが、これらに限定されない。
【００５５】
本明細書で使用する“アルキル化剤”なる用語は、ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファランまたはニトロソウレア(ＢＣＮＵまたはGliadelＴＭ)を含むが、これらに限定されない。
【００５６】
“抗新生物代謝拮抗剤”なる用語は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビン、チオグアニン、メトトレキサートおよびエダトレキサートを含むが、これらに限定されない。
【００５７】
本明細書で使用する“プラチン化合物”は、カルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチンを含むが、これらに限定されない。
【００５８】
本明細書で使用する“タンパク質または脂質キナーゼ活性を標的とする／減少する化合物、またはさらなる抗血管形成化合物”は、タンパク質チロシンキナーゼおよび／またはセリンおよび／またはスレオニンキナーゼ阻害剤または脂質キナーゼ阻害剤、例えば、レセプターチロシンキナーゼの上皮細胞増殖因子ファミリー(モノ−またはヘテロダイマーとしてのＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４)、レセプターチロシンキナーゼの血管内皮細胞増殖因子ファミリー(ＶＥＧＦＲ)、血小板由来増殖因子レセプター(ＰＤＧＦＲ)、繊維芽細胞増殖因子レセプター(ＦＧＦＲ)、インシュリン様増殖因子レセプター１(ＩＧＦ−１Ｒ)、Ｔｒｋレセプターチロシンキナーゼファミリー、Ａｘｌレセプターチロシンキナーゼファミリー、Ｒｅｔレセプターチロシンキナーゼ、Ｋｉｔ／ＳＣＦＲレセプターチロシンキナーゼ、ｃ−Ａｂｌファミリーのメンバーおよびその遺伝子融合産物(例えばＢＣＲ−Ａｂｌ)、タンパク質キナーゼＣ(ＰＫＣ)およびセリン／スレオニンキナーゼのＲａｆファミリーのメンバー、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫまたはＰＩ(３)キナーゼファミリーのメンバー、ＰＩ(３)−キナーゼ関連キナーゼファミリーのメンバーおよび／またはサイクリン−依存性キナーゼファミリー(ＣＤＫ)のメンバーの活性を標的とし、減少し、または阻害する化合物、およびその活性に関して他の、例えば、タンパク質または脂質キナーゼ阻害と関係ない機構を有する、抗血管形成化合物を含むが、これらに限定されない。
【００５９】
ＶＥＧＦＲの活性を標的とし、減少し、または阻害する化合物は、とりわけＶＥＧＦレセプターチロシンキナーゼを阻害する、ＶＥＧＦレセプターまたはＶＥＧＦへの結合を阻害する化合物、タンパク質または抗体、および特に一般的におよび特異的にＷＯ９８／３５９５８に記載されている、例えば１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンまたはそれらの薬学的に許容される塩、例えばコハク酸塩、ＷＯ００／２７８２０、例えばＮ−アリール(チオ)アントラニル酸アミド誘導体、例えば２−[(４−ピリジル)メチル]アミノ−Ｎ−[３−メトキシ−５−(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミドまたは２−[(１−オキシド−４−ピリジル)メチル]アミノ−Ｎ−[３−トリフルオロメチルフェニル]ベンズアミド、またはＷＯ００／０９４９５、ＷＯ００／５９５０９、ＷＯ９８／１１２２３、ＷＯ００／２７８１９およびＥＰ０７６９９４７に記載されているような；M. Prewett et al in Cancer Research 59(1999) 5209-5218、F. Yuan et al in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, Dec. 1996、Z. Zhu et al in Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214、およびJ. Mordenti et al in Toxicologic Pathology, Vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999に記載されているような；ＷＯ００／３７５０２およびＷＯ９４／１０２０２；M. S. O'Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328により記載されているようなAngiostatinＴＭ；M. S. O'Reilly et al, Cell 88, 1997, 277-285に記載されているようなEndostatinＴＭ；アントラニル酸アミド；ＺＤ４１９０；ＺＤ６４７４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；または抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦレセプター抗体、例えばＲｈｕＭａｂのような化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体である。
【００６０】
抗体は完全な(intact)モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２個の完全な抗体から形成された多特異的抗体および、所望の生理学的活性を示す限り、抗体フラグメントを意味する。
【００６１】
上皮細胞増殖因子レセプターファミリーの活性を標的とし、減少し、または阻害する化合物は、とりわけＥＧＦレセプターチロシンキナーゼファミリーのメンバー、例えばＥＧＦレセプター、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を阻害する、またはＥＧＦまたはＥＧＦ関連リガンドに結合する、またはＥｒｂＢおよびＶＥＧＦレセプターキナーゼに２重阻害効果を有する、化合物、タンパク質または抗体であり、特にＷＯ９７／０２２６６に記載の、例えば実施例３９の化合物、またはＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、ＵＳ５,７４７,４９８、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３および、とりわけ、ＷＯ９６／３０３４７(例えばＣＰ３５８７７４として既知の化合物)、ＷＯ９６／３３９８０(例えば化合物ＺＤ１８３９)およびＷＯ９５／０３２８３(例えば化合物ＺＭ１０５１８０)またはＰＣＴ／ＥＰ０２／０８７８０に一般的にまたは特異的に記載のもの；例えばトラスツズマブ(HerpetinＲ)、セツキシマブ、イレッサ、ＯＳＩ−７７４、ＣＩ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１.１、Ｅ２.４、Ｅ２.５、Ｅ６.２、Ｅ６.４、Ｅ２.１１、Ｅ６.３またはＥ７.６.３のような、化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体である。
【００６２】
ＰＤＧＦＲの活性を標的とし、減少し、または阻害する化合物は、とりわけＰＤＧＦレセプターを阻害する化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブである。
【００６３】
ｃ−ＡｂＩファミリーメンバーの活性およびその遺伝子融合産物を標的とし、減少し、または阻害する化合物は、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ；ＰＤ１８０９７０；ＡＧ９５７；またはＮＳＣ６８０４１０である。
【００６４】
タンパク質キナーゼＣ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫおよびＰＤＫファミリーメンバー、またはＰＩ(３)キナーゼまたはＰＩ(３)キナーゼ−関連ファミリーメンバー、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー(ＣＤＫ)の活性を標的とし、減少し、または阻害する化合物は、とりわけＥＰ０２９６１１０に記載のスタウロスポリン誘導体、例えばミドスタウリンである；さらなる化合物の例は、例えばＵＣＮ−０１、サフィンゴル、ＢＡＹ４３−９００６、ブリオオスタチン１、ペリフォシン；イルモフォシン；ＲＯ３１８２２０およびＲＯ３２０４３２；ＧＯ６９７６；Ｉｓｉｓ３５２１；またはＬＹ３３３５３１／ＬＹ３７９１９６を含む。
【００６５】
さらなる抗血管新生化合物は、例えばサリドマイド(THALOMID)およびＴＮＰ−４７０である。
【００６６】
タンパク質または脂質ホスファターゼの活性を標的とし、減少し、または阻害する化合物は、例えばホスファターゼ１、ホスファターゼ２Ａ、ＰＴＥＮまたはＣＤＣ２５の阻害剤、例えば岡田酸またはその誘導体である。
【００６７】
細胞分化プロセスを誘導する化合物は、例えばレチノイン酸、α−、γ−またはδ−トコフェロールまたはα−、γ−またはδ−トコトリエノールである。
【００６８】
本明細書で使用するシクロオキシゲナーゼ阻害剤なる用語は、例えばセレコキシブ(CelebrexＲ)、ロフェコキシブ(VioxxＲ)、エトリコキシブ、バルデコキシブまたは５−アルキル−２−アリールアミノフェニル酢酸、例えば５−メチル−２−(２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ)フェニル酢酸を含むが、これらに限定されない。
【００６９】
本明細書で使用する“ヒストンデアセチラーゼ阻害剤”は、ＭＳ−２７−２７５、ＳＡＨＡ、ピロキサミド、ＦＲ−９０１２２８またはバルプロ酸を含むが、これらに限定されない。
【００７０】
本明細書で使用する“ビスホスホネート”なる用語は、エトリドン(etridonic)酸、クロドロン(clodronic)酸、チルドロン(tiludronic)酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸およびゾレドロン酸を含むが、これらに限定されない。
【００７１】
本明細書で使用する“マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤”なる用語は、コラーゲンペプチド模倣および非ペプチド模倣阻害剤、テトラサイクリン誘導体、例えばヒドロキサメートペプチド模倣阻害剤バチマスタットおよびその経口で生体内利用可能なアナログマリマスタット、プリノマスタット、ＢＭＳ−２７９２５１、ＢＡＹ１２−９５６６、ＴＡＡ２１１またはＡＡＪ９９６を含むが、これらに限定されない。
【００７２】
本明細書で使用する“ｍＴＯＲ阻害剤”は、ラパマイシン(シロリムス)またはその誘導体、例えば３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンおよび、より好ましくは、４０−０−(２−ヒドロキシエチル)ラパマイシンを含むが、これらに限定されない。ラパマイシン誘導体のさらなる例は、例えばＣＣＩ７７９またはＵＳＰ５,３６２,７１８に記載のような４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシメチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシンまたはそれらの薬学的に許容される塩、ＡＢＴ５７８または４０−(テトラゾリル)−ラパマイシン、特に例えばＷＯ９９／１５５３０に記載のような４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン、または例えばＷＯ９８／０２４４１およびＷＯ０１／１４３８７に記載のようなラパログ(rapalog)、例えばＡＰ２３５７３を含む。
【００７３】
式Ｉの化合物を他の免疫抑制性／免疫調節性、抗炎症性または化学療法的治療と組み合わせて投与するとき、併用する免疫抑制性、免疫調節性、抗炎症性または化学療法化合物の投与量は、もちろん、用いる併用剤のタイプ、例えばそれがステロイドであるかまたはカルシニューリン阻害剤であるか、用いる特異的薬剤、処置する状態などに依存して変化する。
【００７４】
前記によって、本発明はさらに下記の局面を提供する：
５. 治療的有効非毒性量の式Ｉの化合物および少なくとも１個の第２薬剤物質、例えば、上記のような、例えば、免疫抑制剤、免疫調節性、抗炎症性または化学療法剤を、例えば、同時にまたは連続して併用投与することを含む、上記の方法。
【００７５】
６. ａ)本明細書に記載の遊離形または薬学的に許容される塩形式Ｉの化合物である第１薬剤、およびｂ)少なくとも１個の併用剤、例えば、上記のような、例えば抗炎症剤、免疫調節性、抗炎症性または化学療法剤を含む、薬学的組み合わせ、例えば、キット。該キットは投与のための指示書を含んでいてよい。
【００７６】
本明細書で使用する“併用投与”または“組み合わせ投与”などの用語は、選択した治療剤の一人の患者への投与を包含し、薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同じ時間に投与するものではない処置レジメンも含むことを意図する。
【００７７】
本明細書で使用する“薬学的組み合わせ”なる用語は、１個以上の活性剤の混合または組み合わせに由来する製品を意味し、活性剤の固定されたおよび固定されていない組み合わせの両方を意味する。“固定された組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用剤を両方とも患者に同時に、単一の物体または用量の形で投与することを意味する。“固定されていない組み合わせ”は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用剤を両方とも、別々の物体として患者に同時に、一緒に、または具体的制限時間なしに連続して投与することを含み、このような投与が患者の体内で２成分の治療的有効量を提供するものである。後者はまたカクテル療法、例えば、３剤またはそれ以上の活性成分の投与にも適用される。
【００７８】
本発明の化合物の製造法
本発明はまた本発明の免疫調節性化合物の製造法も含む。記載の反応において、官能基、例えばヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基を、これらが最終産物において望まれるとき、望ましくない反応への関与を避けるために、保護する必要がある。慣用の保護基は標準慣習にしたがい使用することができ、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。
【００７９】
Ｒ１が式(ａ)の基である式Ｉの化合物は、下記反応スキーム１のような進行により製造できる：
【化７】
0004505449.tif 000008
〔式中、ｎ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ＸおよびＹは上記式Ｉで定義の通りである〕。
【００８０】
式Ｉの化合物は、式２の化合物と式３の化合物を反応させることにより製造できる。本反応は、適当な酸(例えば、酢酸など)中で行い、完了まで１から２０時間かかり得る。
【００８１】
式Ｉの化合物は、式４：
【化８】
0004505449.tif 000009
〔式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ１およびＲ３は上記で定義の通りであり、Ｒ４'はアミノ保護基であり、Ｒ２'は、上記Ｒ２の定義であるが下記の例外を有する。末端ＯＨがＯＨ−置換Ｃ１−４アルキルに存在するときその保護されている形であり、式(ｇ)の基が式(ｇ')の基に置き換えられ、かつ、Ｒ５'は、Ｒ５”であり、ここで、Ｒ５”はＨ、保護されている形の−ＯＨまたは式(ｇ')の基である。
ただし、Ｒ２'およびＲ５'の少なくとも１個は保護された形の−ＯＨであるかまたは式(ｇ')の基であり、式(ｇ')は：
【化９】
0004505449.tif 000010
(式中、Ｒ９'およびＲ１０'の各々は加水分解性基である)
である。〕
の化合物に存在する加水分解性基を除去し、そして、必要であるとき、遊離形で得られた式Ｉの化合物を塩形に変換し、またはその逆を行うことにより製造できる。
【００８２】
本方法は当分野で既知の方法にしたがい行うことができる。加水分解性基は、例えば、式Ｉの化合物が式(ｇ)の基および／またはＲ９'およびＲ１０'のような基で遊離であるときヒドロキシおよびアミノ保護基であり得る。ヒドロキシおよびアミノ基の保護基の例は、例えば、“Protective Groups in Organic Synthesis” T.W. Greene, J. Wiley & Sons NY, 2nd ed., chapter 7, 1991、およびその中の引用文献に記載の通りであり、例えばベンジル、ｐ−メトキシベンジル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、トリアルキルシリル、アシル、ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニル、ベンジルオキシ−カルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、トリフルオロアセチル、トリメチルシリル−エタンスルホニルなどである。
【００８３】
好ましくはＲ９'およびＲ１０'は同一であり、例えば、フェノキシまたはベンズオキシの意味を有するか、一緒になって１,５−ジヒドロ−２,４,３−ベンゾジオキサホスフェピンのような環系を形成する。
【００８４】
式４の化合物におけるヒドロキシおよびアミノ保護基および／またはＲ４'またはＲ６'基の除去は、当分野で既知の方法にしたがい、例えば、塩基性媒体中の、例えば水酸化バリウムのような水酸化物を使用した、例えば、加水分解により簡便に行うことができる。また、例えばPearlman触媒の存在下、例えば、J. Org. Chem., 1998, 63, 2375-2377に記載のような水素化分解により行うことができる。式４の化合物が式(ｇ')の残基で遊離であるとき、ヒドロキシおよびアミノ保護基の除去はまた酸性媒体中で行うことができる。
【００８５】
本発明の化合物の製造のさらなる工程：
本発明の化合物は、薬学的に許容される酸付加塩として、該化合物の遊離塩基を、薬学的に許容される無機または有機酸と反応させることにより製造できる。別法として、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩を、該化合物の遊離酸と薬学的に許容される無機または有機塩基を反応させることにより製造できる。あるいは、本発明の化合物の塩形は、出発物質または中間体の塩の使用により製造できる。
【００８６】
本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基形は、各々対応する塩基付加塩または酸付加塩形から製造できる。例えば酸付加塩形の本発明の化合物を、対応する遊離塩基に、適当な塩基(例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど)で処理することにより変換できる。塩基付加塩形の本発明の化合物を、対応する遊離酸に適当な酸(例えば、塩酸など)で処理することにより変換できる。
【００８７】
非酸化形の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、還元剤(例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、リチウムボロハイドライド、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭化リンなど)で、適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中、０から８０℃で処理することにより製造できる。
【００８８】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に既知の方法により製造できる(例えば、さらなる詳細はSaulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985を参照のこと)。例えば、適当なプロドラッグは、本発明の非誘導体化化合物を、適当なカルバミル化(carbamylating)試薬(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカーボネートなど)と反応させることにより、製造できる。
【００８９】
本発明の化合物の保護誘導体は、当業者に既知の手段により製造できる。保護基の製造およびそれらの除去に適用可能な技術の詳細な記載は、T W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。
【００９０】
本発明の化合物は、溶媒和物(例えば、水和物)として簡便には製造し、または、本発明の工程中に形成させてよい。本発明の化合物の水和物は、簡便にはジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を使用した、水性／有機溶媒混合物からの再結晶により製造できる。
【００９１】
本発明の化合物は、その個々の立体異性体として、該化合物のラセミ混合物を光学活性分離剤と反応させ、ジアステレオ異性体混合物のペアを形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより製造できる。エナンチオマーの分離は本発明の化合物の電子対を共有するジアステレオマー誘導体を使用して行うことができるが、分離できる複合体が好ましい(例えば、結晶ジアステレオマー塩)。ジアステレオマーは異なる物理特性(例えば、融点、沸点、溶解性、反応性など)を有し、これらの相違点を利用して容易に分離できる。ジアステレオマーはクロマトグラフィーにより、または好ましくは、溶解度の差異に基づく分離／分解技術により分離できる。光学的に純粋なエナンチオマーを、次いで、分離剤と共に、ラセミ体化をもたらさない実際的な手段のいずれかにより回収する。化合物の立体異性体の、そのラセミ混合物からの分離に適用可能な技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見ることができる。
【００９２】
要約すると、式Ｉの化合物は、下記を含む方法により製造できる：
(ａ)式(２)の化合物と式(３)の化合物を反応させ：
【化１０】
0004505449.tif 000011
(式中、ｎ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ＸおよびＹは、上記式Ｉに関して定義の通りである)；または
(ｂ)式４の化合物に存在する加水分解性基を除去し：
【化１１】
0004505449.tif 000012
(式中、Ｒ１、Ｒ２'、Ｒ３、Ｒ４'、Ｒ５'、ＸおよびＹは、上記式Ｉに関して定義の通りである)；または
(ｃ)所望により本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換し；
(ｄ)所望により本発明の化合物の塩形を非塩形に変換し；
(ｅ)所望により本発明の化合物の非酸化形を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換し；
(ｆ)所望により本発明の化合物のＮ−オキシド形をその非酸化形に変換し；
(ｇ)所望により本発明の化合物の個々の異性体を、異性体の混合物から分離し；
(ｈ)所望により本発明の化合物の非誘導体化形を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換し；そして
(ｉ)所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を非誘導体化形に変換する。
【００９３】
出発物質の製造を具体的に記載していない限り、該化合物は既知であるか、当分野で既知の方法に準じてまたは後記実施例に記載のように製造できる。
【００９４】
当業者は、上記の変換が本発明の化合物の製造の例示的な方法であるのみであり、他の既知の方法を同様に使用できることは認識されよう。
【００９５】
実施例
下記実施例は本発明の化合物の製造の詳細を提供するが、説明のために提供し、本発明を限定するために提供するものではない。
【００９６】
実施例１
１−[４−(３−アミノ−４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブチル)−フェニル]−エタノン−Ｏ−ビフェニル−４−イルメチル−オキシム
【化１２】
0004505449.tif 000013
ステップＡ：２−アセチルアミノ−２−(２−オキソ−２−フェニル−エチル)−マロン酸ジエチルエステル
水素化ナトリウム(１５mmol)を無水エタノール(５０mL)に添加し、得られたナトリウムエトキシド溶液に２−アセチルアミノマロン酸ジエチルエステル(１５mmol)を一度に添加する。得られた混合物を室温で３０分攪拌する。２−ブロモアセトフェノン(１０mmol)のエタノール(１０mL)溶液を次いで添加し、得られた混合物を室温で１２時間攪拌する。減圧下で濃縮した後、残渣をＥｔＯＡｃおよび水に溶解する。有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の除去後、粗物質をＥｔＯＡｃ／ヘキサン(１／３)を使用したカラムクロマトグラフィーで精製して、２−アセチルアミノ−２−(２−オキソ−２−フェニル−エチル)−マロン酸ジエチルエステルを白色固体として得る；ＭＳ：(ＥＳ＋)：３３６.１(Ｍ＋１)＋。
【００９７】
ステップＢ：酢酸４−アセトキシ−２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−フェニル−ブチルエステル
２−アセチルアミノ−２−(２−オキソ−２−フェニル−エチル)−マロン酸ジエチルエステル(５mmol)の９５％ＥｔＯＨ(５０mL)溶液に、ＮａＢＨ４(２５mmol)を少しずつ添加する。室温で３時間攪拌後、反応を飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチする。減圧下でＥｔＯＨを除去した後、水性溶液をＥｔＯＡｃで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濃縮後、残渣を無水ＣＨ２Ｃｌ２(２５mL)に溶解する。Ａｃ２Ｏ(３０mmol)およびピリジン(６０mmol)を次いで添加する。室温で１２時間攪拌後、それを連続して１Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３および塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒の除去後、粗物質をＥｔＯＡｃ／ヘキサン(１／１)を使用したカラムクロマトグラフィーで精製して、酢酸４−アセトキシ−２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−フェニル−ブチルエステルを白色固体として得る；ＭＳ：(ＥＳ＋)：３８０.２(Ｍ＋１)＋。
【００９８】
ステップＣ：酢酸２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−フェニル−ブチルエステル
酢酸２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−フェニル−ブチルエステル(５mmol)をＥｔＯＨ(５０mL)に溶解し、大気圧で１０％Ｐｄ−Ｃ(１０％)を使用し、室温で１２時間水素化する。濾過および濃縮後、粗生成物を白色固体として得、次ステップにさらに精製せずに使用する；ＭＳ：(ＥＳ＋)：３２２.２(Ｍ＋１)＋。
【００９９】
ステップＤ：酢酸２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−(４−アセチル−フェニル)−ブチルエステル
ＡｌＣｌ３(１６mmol)のＤＣＥ(２０mL)懸濁液に、ＡｃＣｌ(８mmol)を一度に添加する。室温で３０分攪拌後、その溶液に酢酸２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−フェニル−ブチルエステル(２mmol)のＤＣＥ(５mL)溶液を添加する。さらに３０分後、該混合物を氷冷１Ｎ  ＮａＯＨに注ぎ、ＤＣＭで抽出する。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濃縮後、粗物質をＥｔＯＡｃ／ヘキサン(２／１)を使用したカラムクロマトグラフィーで精製して、酢酸２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−(４−アセチル−フェニル)−ブチルエステルを白色固体として得る。ＭＳ：(ＥＳ＋)：３６４.２(Ｍ＋１)＋。
【０１００】
ステップＥ：１−[４−(３−アミノ−４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブチル)−フェニル]−エタノンＯ−ビフェニル−４−イルメチル−オキシム
酢酸２−アセトキシメチル−２−アセチルアミノ−４−(４−アセチル−フェニル)−ブチルエステル(０.２mmol)のＭｅＯＨ(１mL)溶液に、Ｏ−(４−フェニル)ベンジルオキシルアミン塩酸塩(０.２４mmol)およびＥｔ３Ｎ(０.２３mmol)を添加する。室温で１２時間攪拌後、それを濃縮し、残渣をＤＣＭに溶解し、それを塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濃縮後、粗生成物をＴＨＦ(１mL)に溶解し、２Ｎ  ＬｉＯＨ水性溶液(０.５mL)で処理する。得られた混合物を１時間還流温度で攪拌し、Ｈ２Ｏ(１０mL)で希釈する。それを次いでＥｔＯＡｃ(３×５mL)で抽出し、合わせた有機相を塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濃縮後、粗生成物をＬＣ−ＭＳで精製して、１−[４−(３−アミノ−４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブチル)−フェニル]−エタノンＯ−ビフェニル−４−イルメチル−オキシムを白色固体として得る；ＭＳ：(ＥＳ＋)：４１９.２(Ｍ＋１)＋。
【０１０１】
実施例２
リン酸モノ−(２−アミノ−４−｛４−[１−(４'−フルオロ−ビフェニル−４−イルメトキシイミノ)−エチル]−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル)エステル
【化１３】
0004505449.tif 000014
ステップＡ：１−｛４−[２−(４−ヒドロキシメチル−２−メチル−４,５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル)−エチル]−フェニル｝−エタノン
１−[４−(３−アミノ−４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブチル)−フェニル]−エタノン(１mmol)の無水ジクロロエタン(２mL)懸濁液に、オルト酢酸トリエチル(１.１mmol)および酢酸(０.０５mmol)を添加する。得られた混合物を８０℃で１２時間加熱する。濃縮後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ)で精製して、１−｛４−[２−(４−ヒドロキシメチル−２−メチル−４,５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル)−エチル]−フェニル｝−エタノンを油状物として得る；ＭＳ：(ＥＳ＋)：２６２.１(Ｍ＋１)＋。
【０１０２】
ステップＢ：リン酸４−[２−(４−アセチル−フェニル)−エチル]−２−メチル−４,５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル
１−｛４−[２−(４−ヒドロキシメチル−２−メチル−４,５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イル)−エチル]−フェニル｝−エタノン(１mmol)の乾燥テトラヒドロフラン(５mL)溶液に、１Ｈ−テトラゾール(６mmol)およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジイソプロピルホスホロイミデート(３mmol)を添加する。得られた混合物を室温で４時間攪拌する。ｍＣＰＢＡ(３mmol)のジクロロメタン(５mL)溶液を次いで添加する。さらに１時間後、反応混合物を水(２０mL)およびジクロロメタン(１０mL)で希釈する。水性層をジクロロメタン(１０mL)で抽出する。合わせた有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濃縮後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー(３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン)で精製して、リン酸４−[２−(４−アセチル−フェニル)−エチル]−２−メチル−４,５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステルを油状物として得る；ＭＳ：(ＥＳ＋)：４５４.２(Ｍ＋１)＋。
【０１０３】
ステップＣ：リン酸モノ−(２−アミノ−４−｛４−[１−(ビフェニル−４−イルメトキシイミノ)−エチル]−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル)エステル
リン酸４−[２−(４−アセチル−フェニル)−エチル]−２−メチル−４,５−ジヒドロ−オキサゾール−４−イルメチルエステルジ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル(０.２mmol)の５％水性ＨＣｌ(１mL)およびＴＨＦ(２mL)溶液を、還流温度で２時間加熱する。濃縮後、メタノール(２mL)を該残渣に添加し、続いて、Ｏ−(４−フェニル)ベンジルオキシルアミン(０.３mmol)を添加する。次いで、該溶液をＮａ２ＣＯ３によりｐＨ６まで中和する。得られた混合物を次いで室温で１２時間攪拌する。濃縮後、残渣を分取ＬＣＭＳにより精製して、リン酸モノ−(２−アミノ−４−｛４−[１−(ビフェニル−４−イルメトキシイミノ)−エチル]−フェニル｝−２−ヒドロキシメチル−ブチル)エステルを白色固体として得る；ＭＳ：(ＥＳ＋)：４９９.２(Ｍ＋１)＋。
【０１０４】
上記実施例に記載の方法を繰り返して、適当な出発物質を使用し、下記の式Ｉの化合物が、表１に同定されるように得られる。
【０１０５】
【表１】
0004505449.tif 000015
【表２】
0004505449.tif 000016
【表３】
0004505449.tif 000017
【０１０６】
実施例３
式Ｉの化合物は生物学的活性を示す
Ａ. インビトロ：ヒトＥＤＧ／Ｓ１Ｐレセプターを発現するＣＨＯ細胞からの膜調節物に対するＧＴＰ[γ−３５Ｓ]結合を測定するためのシンチレーション近接アッセイ(ＳＰＡ)
ＥＤＧ−１(Ｓ１Ｐ１)ＧＴＰ[γ−３５Ｓ]結合アッセイ：膜タンパク質懸濁液を、ヒトＥＤＧ−１  Ｎ−末端ｃ−ｍｙｃ標識を安定に発現するＣＨＯ細胞クローンから調製する。１０mMから０.０１nMの範囲の試験化合物の溶液をＤＭＳＯ／５０mM  ＨＣｌ中に調製し、アッセイ緩衝液(２０mM  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、１００mM  ＮａＣｌ、１０mM  ＭｇＣｌ２、０.１％無脂肪ＢＳＡ)で希釈する。１０mM  ＧＤＰを含むアッセイ緩衝液を小麦麦芽アグルチニン−被覆ＳＰＡ−ビーズ(１mg／ウェル)と混合し、続いて、ヒトＥＤＧ−１膜タンパク質懸濁液(１０μｇ／ウェル)および試験化合物を添加する。ビーズ／膜／化合物アッセイ成分を次いで１０−１５分、シェーカーで室温で攪拌する。ＧＴＰ[γ−３５Ｓ](２００ｐＭ)およびビーズ／膜／化合物アッセイ混合物を９６ウェルOptiplateTM(最終容量２２５μｌ／ウェル)の個々のウェルに添加し、密閉し、室温で１１０から１２０分、一定に振盪しながらインキュベートする。遠心分離(２０００rpm、１０分)後、発光をTopCountTM装置で測定する。
【０１０７】
ＥＣ５０値を、ＧＴＰ[γ−３５Ｓ]結合曲線(生データ)を、ORIGIN V. 6.1の用量応答曲線適合ツールで適合させることにより得る。基底結合(化合物なし)およびアゴニストにより達成された最高のＧＴＰ[γ−３５Ｓ]結合刺激を、適合範囲として使用する。７つの異なる濃度を使用して用量応答曲線を作成する(１濃度あたり２個または３個のデータ点を使用)。
【０１０８】
ＥＤＧ−３、−５、−６および−８  ＧＴＰ[γ−３５Ｓ]結合アッセイを、ＥＤＧ−１  ＧＴＰ[[γ−３５Ｓ]結合アッセイと同様の方法で、ＣＨＯからの膜、またはＥＤＧ−８の場合ｃ−末端ｃ−ｍｙｃ標識または非標識レセプターを安定に発現する細胞由来のＲＨ７７７７膜を使用して行う。ＥＤＧレセプターを発現する膜の濃度範囲は１３−１９μｇ／ウェルの範囲である。本発明の化合物を上記アッセイにしたがい試験し、ＥＤＧ−１レセプターへの選択性が示された(表２)。例えば、リン酸モノ−(２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−４−｛４−[１−(４−チオフェン−２−イル−ベンジルオキシ−イミノ)−エチル]−フェニル｝−ブチル)エステル(化合物１０および表２)は、上記アッセイで１.１５nMのＥＣ５０を有し、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６およびＥＤＧ−８と比較して、ＥＤＧ−１に少なくとも１０００倍選択的である。
【０１０９】
【表４】
0004505449.tif 000018
【０１１０】
Ｂ. インビトロ：ＦＬＩＰＲカルシウム流入アッセイ
本発明の化合物を、ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、およびＥＤＧ−６におけるアゴニスト活性に関して、ＦＬＩＰＲカルシウム流入アッセイで試験する。簡単には、ＥＤＧレセプターを発現するＣＨＯ細胞を５％ＦＢＳ添加Ｆ−１２Ｋ培地(ＡＴＣＣ)に、５００μｇ／mlのＧ４１８と共に維持する。アッセイに先立ち、細胞を３８４黒色透明底プレートに、１％ＦＢＳ添加Ｆ−１２Ｋ培地中１０,０００細胞／ウェル／２５μｌの濃度でまく。２日目に、細胞を３回(各２５μｌ)洗浄緩衝液で洗浄する。約２５μｌの色素を各ウェルに添加し、１時間、３７℃および５％ＣＯ２でインキュベートする。次いで、該細胞を４回洗浄緩衝液(各２５μｌ)で洗浄する。カルシウム流入を、２５μｌのＳＥＱ２８７１溶液を細胞の各ウェルに添加後に測定する。同じアッセイを、異なるＥＤＧレセプターを発現する細胞で行う。ＦＬＩＰＲカルシウム流入アッセイにおける力価を３分間隔にわたり記録し、ＥＤＧ−１活性化に対して最高ピーク高反応の割合として定量する。
【０１１１】
Ｃ. インビボ：血液リンパ球枯渇の測定のためのスクリーニングアッセイおよび心臓への影響の評価
循環リンパ球の測定：化合物をＤＭＳＯに溶解し、脱イオン水で希釈する。マウス(Ｃ５７ｂｌ／６雄、６−１０週齢)に２０μｇの化合物(２００μｌ水、４％ＤＭＳＯに希釈)を、イソフルラン麻酔下腹腔内(ＩＰ)注射により投与する。水(２００μｌ)、４％ＤＭＳＯ、およびＦＴＹ７２０(１０μｇ)を各々陽性および陰性コントロールとして包含させる。
【０１１２】
投与１８時間後、イソフルラン麻酔下に血液を眼窩後洞(retro-orbital sinus)から採る。全血液サンプルを血液分析に付す。末梢リンパ球計数を、自動分析器を使用して行う。末梢血リンパ球の下位集団を蛍光色素−結合特異的抗体により染色し、蛍光活性化細胞選別装置(Facscalibur)を使用して分析する。２匹のマウスを、スクリーニングする各化合物のリンパ球枯渇活性の評価に使用する。結果はＥＤ５０であり、それは、５０％の血球リンパ球枯渇に必要な有効量と定義する。本発明の化合物を上記アッセイで試験し、好ましくは１mg／kg未満のＥＤ５０、より好ましくは０.５mg／kg未満のＥＤ５０を示すことが判明した。例えば、化合物９は０.０８mg／kgのＥＤ５０を示す。
【０１１３】
心臓への影響の評価：化合物の心機能への影響を、AnonyMOUSE ECGスクリーニング・システムを使用してモニターする。心電図を有意識マウス(Ｃ５７ｂｌ／６雄、６−１０週齢)で、化合物の投与前および後に記録する。次いでＥＣＧシグナルをe-MOUSEソフトウエアを使用して加工し、分析する。９０μｇの化合物をさらに２００μｌ  水、１５％ＤＭＳＯで希釈し、ＩＰで注射する。４匹のマウスを各化合物の心臓に対する影響の評価に使用する。
【０１１４】
Ｄ：インビボ：抗血管形成活性
(ｉ)スフィンゴシン−１−ホスフェート(５μＭ／チャンバー)または(ii)ヒトＶＥＧＦ(１μｇ／チャンバー)の０.５mlの０.８％ｗ／ｖ寒天(ヘパリン、２０Ｕ／ml含有)溶液を含む多孔性チャンバーを、マウスの脇腹に皮下にインプラントする。Ｓ１ＰまたはＶＥＧＦはチャンバーの周辺の血管新生組織の増殖を誘発する。この応答は用量依存的であり、組織の重量および血液含量の測定により定量できる。マウスを、式Ｉの化合物の経口または静脈内で１日１回処置し、チャンバーのインプラントの４−６時間前に開始し、４日間継続する。動物を最後の投与の２４時間後に血管新生組織の測定のために殺す。チャンバーの周りの血管新生組織の重量および血液含量を決定する。式Ｉの化合物で処置した動物は、媒体単独で処置した動物と比較して、血管新生組織の重量および／または血液含量の減少を示す。式Ｉの化合物は、約０.３から約３mg／kgの投与量で投与したとき、抗血管形成である。
【０１１５】
Ｅ：インビトロ：抗腫瘍活性
元々乳癌腫から単離したマウス乳癌細胞系、例えばＪｙｇＭＣ(Ａ)を使用する。細胞数を、工程の前に新鮮培地にまくために５×１０５に調節する。細胞を、ＦＣＳなしの２.５mMのチミジンを含有する新鮮培地と共に１２時間インキュベートし、次いで２回ＰＢＳで洗浄し、次いで１０％ＦＣＳ含有新鮮培地を添加し、さらに１２時間インキュベートする。その後、細胞をＦＣＳなしの２.５mMのチミジン含有新鮮培地で１２時間インキュベートする。細胞をこのブロックから放出させるために、細胞を２回ＰＢＳで洗浄し、新鮮１０％ＦＣＳ含有培地で繰り返す。同期化後、細胞を種々の濃度の式Ｉの化合物有りまたはなしで３、６、９、１２、１８または２４時間インキュベートする。細胞を０.２％ＥＤＴＡで処理後回収し、氷冷７０％エタノール溶液で固定し、２５０μｇ／mlのＲＮａｓｅＡ(タイプ１−Ａ：Sigma Chem. Co.)で３７℃で３０分加水分解し、ヨウ化プロピジウム１０mg／mlで２０分染色する。インキュベーション期間の後、細胞の数をCoulterカウンターで細胞を計数することによりおよびＳＲＢ比色分析アッセイの両方で決定する。これらの条件下で式Ｉの化合物は腫瘍細胞の増殖を１０−１２から１０−６Ｍの範囲の濃度で阻害する。
【０１１６】
本明細書に記載の実施例および態様は、説明の目的のためだけであり、それに照らして種々の修飾が当業者には示唆され、本出願の精神および理解ならびに添付の特許請求の範囲内にあることは理解されるべきである。本明細書に記載のすべての刊行物、特許および特許出願は出典明示によりすべての目的のために本明細書に包含させる。