(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１３】
0004392473.tif 000025
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【化１４】
0004392473.tif 000026
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル；
であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｑ3およびＱ4はそれぞれ独立にＯ、ＳもしくはＮＨであり；
式中、Ｒ2およびＲ3の一方が水素原子でありかつ他方が
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｃ）３から６個までの炭素原子のシクロアルキル；
（ｄ）直鎖もしくは分枝状であってよい２から８個までの炭素原子のアルケニル
；または
（ｅ）ＲaＱ2Ｒb（ここでＱ2は−Ｏ−もしくは−Ｓ−であり；ここでＲaは直鎖もしくは分枝状であってよい０から６個までの炭素原子のアルキレンであり、また、ここでＲbは直鎖もしくは分枝状であってよい０から８個までの炭素原子のアルキルであるが、但し、Ｒbが０である場合にはＲbは水素原子である）；
であり；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル；
であり；
式中、Ｒ5は
【化１５】
0004392473.tif 000027
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｙ1は、−ＯＨ、メチル、−ＳＨ、直鎖もしくは分枝状の２から４個までの炭素原子のアルキル、１から４個までの炭素原子のアルコキシ、またはＣＨaＺbであり、ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０ないし３、ｂ＝０ないし３、およびＺはシアノ、ニトロもしくはハロゲンであり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル；
であり；
式中、ＴはＯもしくはＳである、
の最低１種のリポキシン化合物であって１５−エピ−１６（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１６−（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１５−エピ−１６−フェノキシ−ＬＸＡ4及び１６−フェノキシ−ＬＸＡ4を除く上記リポキシン化合物、ならびにその製薬学的に許容できる塩の治療上有効な量を含んで成る、被験体における血管収縮または骨髄抑制に関連する疾患または病状を治療するための製薬学的組成物。
【請求項２】
式
【化１６】
0004392473.tif 000028
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【化１７】
0004392473.tif 000029
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル；
であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｒ2およびＲ3の一方が水素原子でありかつ他方が
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｃ）３から６個までの炭素原子のシクロアルキル；
（ｄ）直鎖もしくは分枝状であってよい２から８個までの炭素原子のアルケニル
；または
（ｅ）ＲaＱ2Ｒb（ここでＱ2は−Ｏ−もしくは−Ｓ−であり；ここでＲaは直鎖もしくは分枝状であってよい０から６個までの炭素原子のアルキレンであり、また、ここでＲbは直鎖もしくは分枝状であってよい０から８個までの炭素原子のアルキルであるが、但し、Ｒbが０である場合にはＲbは水素原子である）；であり；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、Ｒ5は
【化１８】
0004392473.tif 000030
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、ＴはＯもしくはＳである、
の最低１種のリポキシン化合物であって１５−エピ−１６（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１６−（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１５−エピ−１６−フェノキシ−ＬＸＡ4及び１６−フェノキシ−ＬＸＡ4を除く上記リポキシン化合物、ならびにその製薬学的に許容できる塩の治療上有効な量を含んで成る、被験体における血管収縮または骨髄抑制に関連する疾患または病状を治療するための製薬学的組成物。
【請求項３】
式
【化１９】
0004392473.tif 000031
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【化２０】
0004392473.tif 000032
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル；
であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル；
であり；
式中、Ｒ5は
【化２１】
0004392473.tif 000033
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、ＴはＯもしくはＳである、
の最低１種のリポキシン化合物であって１５−エピ−１６（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１６−（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１５−エピ−１６−フェノキシ−ＬＸＡ4及び１６−フェノキシ−ＬＸＡ4を除く上記リポキシン化合物、ならびにその製薬学的に許容できる塩の治療上有効な量を含んで成る、被験体における血管収縮または骨髄抑制に関連する疾患または病状を治療するための製薬学的組成物。
【請求項４】
式
【化２２】
0004392473.tif 000034
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【化２３】
0004392473.tif 000035
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル
であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、Ｒ5は
【化２４】
0004392473.tif 000036
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基である；
の最低１種のリポキシン化合物であって１５−エピ−１６（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１６−（パラ−フルオロ）−フェノキシ−ＬＸＡ4、１５−エピ−１６−フェノキシ−ＬＸＡ4及び１６−フェノキシ−ＬＸＡ4を除く上記リポキシン化合物、ならびにその製薬学的に許容できる塩の治療上有効な量を含んで成る、被験体における血管収縮または骨髄抑制に関連する疾患または病状を治療するための製薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
好中球（ＰＭＮ）の活性化は、宿主防禦、炎症および再灌流傷害のような多様な宿主応答で中心的な役割を演じている（Ｗｅｉｓｓｍａｎｎ，Ｇ．、Ｓｍｏｌｅｎ，Ｊ．Ｅ．とＫｏｒｃｈａｋ，Ｈ．Ｍ．（１９８０）Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｆｒｏｍ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０３、２７−３４）。ＰＭＮホスホリパーゼが炎症刺激に応答して活性化されて、細胞膜を再生し（ｒｅｍｏｄｅｌ）、かつ、機能的応答の伝達において細胞内もしくは細胞外媒介物質として作用する生物活性脂質を生成させる（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．、Ｈａｅｇｇｓｔｒｏｍ，Ｊ．Ｚ．とＬｅｓｌｉｅ，Ｃ．Ｃ．（１９９６）Ｌｉｐｉｄ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：ｕｐｄａｔｅ  ａｎｄ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１０、１１４７−１１５８）。微生物応答および急性炎症応答の重要な構成要素は、反応性酸素種および食作用のある液胞に標的を定められる顆粒酵素を包含するが、しかし、これらの潜在的に毒性の作用物質の異常な放出は炎症の拡大ならびに組織傷害につながる可能性があり、そして広範な疾患に関与している（Ｗｅｉｓｓ，Ｓ．Ｊ．（１９８９）Ｔｉｓｓｕｅ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２０、３６５−３７６）。過剰に豊富な炎症応答を予防しかつ宿主に対する損傷を制限するため、これらのＰＭＮプログラムは厳格に調節されている。内在性の抗炎症もしくは保護シグナルとして作用する宿主の媒介物質は、最近になって認識されているのみである（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９４）Ｌｉｐｏｘｉｎ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｍｐａｃｔ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｖｅｎｔｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １２１２、１−２５）。
【０００２】
（発明の要約）
本発明は、ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）活性を伴う疾患もしくは病状の調整方法に関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述される式を有するリポキシン類似物の被験体への投与を包含し、その結果、ＰＬＤ誘導性活性が調整される。
【０００３】
本発明は、被験体におけるホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）活性の治療方法にもまた関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述されるリポキシン類似物の投与を包含し、その結果、ＰＬＤに開始される活性が治療される。
【０００４】
本発明は、被験体におけるホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）誘導性スーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性に随伴する疾患もしくは病状の調整方法にさらに関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述されるリポキシン類似物の投与を包含し、その結果、ＰＬＤのスーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性により開始されるを伴う疾患もしくは病状が調節される。
【０００５】
本発明は、被験体におけるホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）誘導性スーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性の治療方法にさらに関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述されるリポキシン類似物の投与を包含し、その結果、ＰＬＤ誘導性スーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性が治療される。
【０００６】
好ましい態様において、本発明の方法はインビトロもしくはインビボで実施される。
【０００７】
別の局面において、本発明は、被験体における、上に列挙された活性もしくは病状を治療するための包装された製薬学的組成物に向けられる。該包装された製薬学的組成物は、治療上有効な量の下述される式の１つを有する最低１種のリポキシン化合物を保持する容器、および被験体における該活性もしくは病状を治療するためのリポキシン化合物の使用のための説明書を包含する。
【０００８】
（発明の詳細な記述）
本発明の特徴および他の詳細を今やより具体的に記述し、かつ、請求の範囲に指摘することができる。本発明の特定の態様は具体的に説明するために示すものであり、本発明の制限として示すものでないことが理解されよう。本発明の本質の特徴は、本発明の範囲から離れることなく、多様な態様で使用することができる。
【０００９】
反対する細胞外シグナル（正もしくは負）が細胞内シグナル伝達事象にどのように翻訳されるかを理解することは広範に興味深い。受容体とリガンドの相互作用は、宿主の防禦および炎症で重要な細胞応答を調整するシグナルとして作用するヒト好中球（ＰＭＮ）による生物活性脂質の生成を開始する。新規のポリイソプレニルホスフェート（ＰＩＰＰ）シグナル伝達経路が同定され、そしてその構成要素の１つ、プレスクアレンジホスフェート（ＰＳＤＰ）が、ホスファチジン酸を包含する数種の刺激によるスーパーオキシドアニオン生成を調節するＰＭＮ中の強力な負の細胞内シグナルであることが見出された（Ｌｅｖｙら（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ．３８９、９８５−９９０）。ＰＭＮに対する反対する作用をもつオータコイド、強力な化学誘因物質ロイコトリエンＢ4（ＬＴＢ4）、および動員のための「停止シグナル」、リポキシンＡ4（ＬＸＡ4）による細胞内ＰＩＰＰシグナル伝達が決定された。ＬＴＢ4受容体活性化は、ＰＬＤの活性化および細胞応答と同時発生するＰＳＤＰレベルの迅速な低下を開始した。鮮明に対照的に、ＬＸＡ4受容体の活性化は、ＰＳＤＰの蓄積ならびにＰＬＤおよびスーパーオキシドアニオン生成の双方の強力な阻害につながる、ＬＴＢ4に開始されるＰＳＤＰの再生を反転させた。従って、ＰＳＤＰレベルおよびＰＬＤ活性について、反対する応答を惹起する２種のＰＭＮリガンドとの逆の関係が確立された。加えて、ＰＳＤＰは、単離されたヒト組換え体（Ｋｉ＝６ｎＭ）および植物（Ｋｉ＝２０ｎＭ）双方のＰＬＤを直接阻害した。一緒にすれば、これらの知見は、ＰＩＰＰの再生をＰＭＮの機能の細胞内調節に結びつけ、そして、シグナル伝達における脂質抑制物質としてのＰＩＰＰの役割、すなわち細胞のシグナル伝達におけるインビボでのアスピリンの抑制性の作用もまた説明するかも知れない新規のメカニズムを示唆する。
【００１０】
生物活性脂質は、細胞の応答を調節する特定の正もしくは負のいずれかのシグナルを担持する細胞表面受容体の活性化により迅速に生成される。これは、関係するエイコサノイド、ロイコトリエンＢ4（ＬＴＢ4）（強力な化学誘因物質）（Ｂｏｒｇｅａｔ，Ｐ．とＮａｃｃａｃｈｅ，Ｐ．Ｈ．（１９９０）Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３、４５９−４６８）およびリポキシンＡ4（ＬＸＡ4）（ＰＭＮの動員のための内在性の「停止シグナル」）（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９４）Ｌｉｐｏｘｉｎ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｍｐａｃｔ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｖｅｎｔｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １２１２、１−２５）により例示される。ＬＴＢ4およびＬＸＡ4は、高度に特異的かつ別個のＧタンパク質共役型膜受容体と相互作用する（Ｙｏｋｏｍｉｚｏ，Ｔ．、Ｉｚｕｍｉ，Ｔ．、Ｃｈａｎｇ，Ｋ．、Ｔａｋｕｗａ，Ｔ．とＳｈｉｍｉｚｕ，Ｔ．（１９９７）Ａ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4  ｔｈａｔ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８７、６２０−６２４；Ｆｉｏｒｅ，Ｓ．、Ｒｏｍａｎｏ，Ｍ．、Ｒｅａｒｄｏｎ，Ｅ．Ｍ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９３）Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ＨＬ−６０  ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ  ８１、３３９５−３４０３）。それらは、それぞれ、ＬＴＢ4に開始される化学走性、接着および移動（ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ）のＬＸＡ4阻害を包含する反対するＰＭＮ応答を惹起する（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９４）Ｌｉｐｏｘｉｎ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｍｐａｃｔ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｖｅｎｔｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １２１２、１−２５）。
【００１１】
本出願を通じて使用される略語は：ＣＯＸ、シクロオキシゲナーゼ；１５−エピ−ＬＸ、１５−エピマーのリポキシン；１５−エピ−ＬＸａ、１５−エピ−１６−パラフルオロフェノキシＬＸＡ4メチルエステル；ＦＤＰ、ファルネシルジホスフェート；ＧＳＴ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ；ＬＴＢ4、ロイコトリエンＢ4；ＬＯ、リポキシゲナーゼ；ＰＡ、ホスファチジン酸；ＰＣ、ホスファチジルコリン；ｃＰＬＤ、キャベツホスホリパーゼＤ；ＰＩＰＰ、ポリイソプレニルホスフェート；ＰＭＮ、多形核白血球；ＰＳＤＰ、プレスクアレンジホスフェート；ＰＳＭＰ、プレスクアレンモノホスフェート；Ｓｆ９、スポドプテラ  フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）；ＴＬＣ、薄層クロマトグラフィーを包含する。
【００１２】
アスピリンは脂質媒介物質の生合成に影響を及ぼすことが知られており、そしてその抗炎症特性のため臨床上広範に使用されている。アスピリンの抗炎症作用の原因である機構はかなり興味深いままである。とりわけ、消化管に面倒をかけずかつステロイドの有害な副作用を所有しない新たな「スーパーアスピリン」が探索されている（Ｉｓａｋｓｏｎ，Ｐ．、Ｓｅｉｂｅｒｔ，Ｋ．、Ｍａｓｆｅｒｒｅｒ，Ｊ．、Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ，Ｄ．、Ｌｅｅ，Ｌ．とＮｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｐ．（１９９５）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｂｅｔｔｅｒ  ａｓｐｉｒｉｎ．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ，Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  ＆  Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２３、４９−５４）。一局面において、アスピリンは、プロスタノイド形成の阻害に加えて、インビボの炎症の間に細胞を横断する（ｔｒａｎｓｃｅｌｌｕｌａｒ）経路（例えば、組織に存する細胞と浸潤する白血球との間）（図１Ａを参照されたい）による、ＬＸの新規の炭素１５のエピマーの内在性の生成を誘導する（Ｃｈｉａｎｇ，Ｎ．、Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｃｌｉｓｈ，Ｃ．Ｂ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．、Ｔａｉ，Ｈ．−Ｈ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９８）Ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4（ＡＴＬ）  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ  ｅｘｕｄａｔｅｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  １５−ｅｐｉ−ＬＸＡ4  ＥＬＩＳＡ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．２８７、７７９−７９０）。これらのアスピリンに誘導されるリポキシン（１５−エピ−ＬＸ）は、ＰＭＮ応答の阻害剤として天然のＬＸよりもなおより強力である。なぜなら、部分的に、それらはより長く活性であるからである（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．、Ｍａｄｄｏｘ，Ｊ．Ｆ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．、Ａｋｒｉｔｏｐｏｕｌｏｕ−Ｚａｎｚｅ，Ｉ．、Ｐａｐａｙｉａｎｎｉ，Ａ．、Ｂｒａｄｙ，Ｈ．Ｒ．、Ｃｏｌｇａｎ，Ｓ．Ｐ．とＭａｄａｒａ，Ｊ．Ｌ．（１９９５）Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｔｈａｔ  ｂｌｏｃｋ  ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３４、１４６０９−１４６１５）。ＬＸおよび１５−エピ−ＬＸによるＰＭＮ阻害は、「阻害性」シグナルの特異的受容体活性化により（そしてＬＴＢ4受容体での直接の受容体レベルの拮抗作用を介してでなく）惹起される（Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｆｉｏｒｅ，Ｓ．、Ｍａｄｄｏｘ，Ｊ．Ｆ．、Ｂｒａｄｙ，Ｈ．Ｒ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  （ＬＸＡ4）  ａｎｄ  ＬＸＡ4  Ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５、１６９３−１７０４）。さらに、ＬＴＢ4受容体は新規のＨＩＶ−１補助受容体としてもまた作用するという最近の知見（Ｏｗｍａｎ，Ｃ．、Ｇａｒｚｉｎｏ−Ｄｅｍｏ，Ａ．、Ｃｏｃｃｈｉ，Ｆ．、Ｐｏｐｏｖｉｃ，Ｍ．、Ｓａｂｉｒｓｈ，Ａ．とＧａｌｌｏ，Ｒ．（１９９８）Ｔｈｅ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｙｐｅ  ｏｆ  ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｅｄｉａｔｉｎｇ  ｅｎｔｒｙ  ｏｆ  ｐｒｉｍａｒｙ  ＨＩＶ−１  ｉｓｏｌａｔｅｓ  ｉｎｔｏ  ＣＤ４−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５、９５３０−９５３４）により、ＬＴＢ4受容体の調節における興味が高められている。
【００１３】
約１００年の使用にもかかわらず、アスピリンの治療上の影響の完全な知識は、多くの新たに発見される臨床上の利用性を未だ発展させている（Ｍａｒｃｕｓ，Ａ．Ｊ．（１９９５）Ａｓｐｉｒｉｎ  ａｓ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３３、６５６−６５８）。アスピリンの規則的摂取は、心筋梗塞、結腸直腸癌腫およびアルツハイマー病の罹患率を低下させる（Ｖａｉｎｉｏ，Ｈ．とＭｏｒｇａｎ，Ｇ．（１９９７）Ａｓｐｉｒｉｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄ  ｈｕｎｄｒｅｄ  ｙｅａｒｓ：  ｎｅｗ  ｕｓｅｓ  ｆｏｒ  ａｎ  ｏｌｄ  ｄｒｕｇ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ８１、１５１−１５２）が、しかし胃腸の潰瘍形成のようなアスピリンからの副作用がその使用を制限する可能性がある。炎症の間に誘導されるシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の第二のアイソフォームの最近の発見は、ＣＯＸ−１の保護的な構成する機能を混乱させることなくＣＯＸ−２を選択的に阻害することができる「スーパーアスピリン」の探索につながった（Ｉｓａｋｓｏｎ，Ｐ．、Ｓｅｉｂｅｒｔ，Ｋ．、Ｍａｓｆｅｒｒｅｒ，Ｊ．、Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ，Ｄ．、Ｌｅｅ，Ｌ．とＮｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｐ．（１９９５）Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｂｅｔｔｅｒ  ａｓｐｉｒｉｎ．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ，Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  ＆  Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２３、４９−５４；Ｈｅｒｓｃｈｍａｎ，Ｈ．Ｒ．（１９９８）Ｒｅｃｅｎｔ  ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｍｅｄ．８、１４５−１５０）。この点でとりわけ興味深いことに、ＰＭＮの移動を阻害する１５−エピ−ＬＸは、アスピリンの有益な恩恵のいくつかの基礎となるかも知れないアスピリンのアセチル化能力の内在性の生成物である。ＬＸおよび１５−エピ−ＬＸ双方の安定な類似物を調製した。これらは、１５−エピ−ＬＸＡ4と同様にＬＸＡ4受容体を介して作用する（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．、Ｍａｄｄｏｘ，Ｊ．Ｆ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．、Ａｋｒｉｔｏｐｏｕｌｏｕ−Ｚａｎｚｅ，Ｉ．、Ｐａｐａｙｉａｎｎｉ，Ａ．、Ｂｒａｄｙ，Ｈ．Ｒ．、Ｃｏｌｇａｎ，Ｓ．Ｐ．とＭａｄａｒａ，Ｊ．Ｌ．（１９９５）Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｔｈａｔ  ｂｌｏｃｋ  ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３４、１４６０９−１４６１５；Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｆｉｏｒｅ，Ｓ．、Ｍａｄｄｏｘ，Ｊ．Ｆ．、Ｂｒａｄｙ，Ｈ．Ｒ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  （ＬＸＡ4）  ａｎｄ  ＬＸＡ4  Ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ��ｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５、１６９３−１７０４）。リポキシン化合物の適する製造方法は、例えば、引用により本明細書に組み込まれる米国特許第５，４１１，９５１号、同第５，６４８，５１２号、同第５，６５０，４３５号および同第５，７５０，３５４号明細書にもまた見出すことができる。例えば、１５−エピ−１６−パラフルオロフェノキシリポキシンＡ4メチルエステル（１５−エピ−ＬＸａ）は、マウス耳皮膚の炎症において迅速な不活性化に抵抗するのみならずしかし局所に作用してＰＭＮ浸潤および血管透過性を阻害する１５−エピ−ＬＸＡ4（図１、下左）の合成の類似物である（Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｃｌｉｓｈ，Ｃ．Ｂ．、Ｇｒｏｎｅｒｔ，Ｋ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９８）Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｒｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ｔｏｐｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  ａｎｄ  ｎｏｖｅｌ  ｌｉｐｏｘｉｎ  Ｂ4  ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１、８１９−８２６）。
【００１４】
ＰＭＮ応答の受容体に稼働される封鎖の原因であるシグナル伝達経路（１種もしくは複数）の解明は興味深い。ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）を介するシグナル伝達は細胞性応答の装備で中枢的役割を演じている。ＰＬＤは、リガンドへの曝露から数秒以内に、膜のホスファチジルコリン（ＰＣ）を加水分解してホスファチジン酸（ＰＡ）を生成する（Ｂｉｌｌａｈ，Ｍ．Ｍ．、Ｅｃｋｅｌ，Ｓ．、Ｍｕｌｌｍａｎｎ，Ｔ．Ｊ．、Ｅｇａｎ，Ｒ．Ｗ．とＳｉｅｇｅｌ，Ｍ．Ｉ．（１９８９）Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｂｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄａｔｅ  ａｎｄ  ｄｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄａｔｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ  ｉｎ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４、１７０６９−１７０７７）。ＰＡの形成は、小胞の分泌およびＮＡＤＰＨ酸化酵素の集成を包含する機能的応答に一時的に先行する（Ｗａｋｅｌａｍ，Ｍ．Ｊ．Ｏ．、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．、Ｈｏｄｇｋｉｎ，Ｍ．Ｎ．、Ｂｒｏｗｎ，Ｆ．、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｔ．Ｒ．、Ｃｒｏｓｓ，Ｍ．Ｊ．、Ｄｅ  Ｔａｋａｔｓ，Ｐ．Ｇ．とＲｅｙｎｏｌｄｓ，Ｊ．Ｌ．（１９９７）Ｒｏｌｅ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ３７、２９−３４；Ｏｌｓｏｎ，Ｓ．Ｃ．とＬａｍｂｅｔｈ，Ｊ．Ｄ．（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ  ８０、３−１９）。ＰＬＤ１およびＰＬＤ２の数種のアイソザイムをクローン化しかつ特徴づけし（Ｓｔｅｅｄ，Ｐ．Ｍ．、Ｃｌａｒｋ，Ｋ．Ｌ．、Ｂｏｙａｒ，Ｗ．Ｃ．とＬａｓａｌａ，Ｄ．Ｊ．（１９９８）Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＰＬＤ２  ａｎｄ  ｔｈｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＰＬＤ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ｓｐｌｉｃｅ  ｖａｒｉａｎｔｓ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１２、１３０９−１３１７）、ＰＬＤ１ｂがヒト顆粒球中の顕著なアイソフォームとして同定された（Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．、Ｓａｑｉｂ，Ｋ．Ｍ．、Ｈｏｄｇｋｉｎ，Ｍ．Ｎ．、Ｂｒｏｗｎ，Ｆ．Ｄ．、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｔ．Ｒ．、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｓ．とＷａｋｅｌａｍ，Ｍ．Ｊ．Ｏ．（１９９７）Ｒｏｌｅ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２５、１１５７−１１６０）。ヒトＰＬＤの完全なＤＮＡおよびアミノ酸配列はＨａｍｍｏｎｄら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２９６４０−２９６４３およびＨａｍｍｏｎｄら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：３８６０−３８６８に開示され、その完全な内容は引用により本明細書に組み込まれ、また、���ェンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）受託番号第ＮＭ００２６６２号および第Ｕ３８５４５号でもまた見出すことができる。
【００１５】
最近、新規のポリイソプレニルホスフェート（ＰＩＰＰ）シグナル伝達経路が同定され（図１Ａ）、そして、ＰＭＮにおいては、プレスクアレンジホスフェート（ＰＳＤＰ）が生物学的活性を担持し、そしてＰＡを包含する数種の刺激によるスーパーオキシドアニオンの生成を予防する負の細胞内シグナルとして作用することが見出された（Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）。ＰＬＤの活性化はスーパーオキシドアニオンの生成に結びつけられる（Ａｇｗｕ，Ｄ．Ｅ．、ＭｃＰｈａｉｌ，Ｌ．Ｃ．、Ｓｏｚｚａｎｉ，Ｓ．、Ｂａｓｓ，Ｄ．Ａ．とＭｃＣａｌｌ，Ｃ．Ｅ．（１９９１）Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ  ａｓ  ａ  ｓｅｃｏｎｄ  ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ．Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＡＤＰＨ  ｏｘｉｄａｓｅ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８８、５３１−５３９）ため、ＰＩＰＰのシグナル伝達が包括的な細胞の活性化に決定的なホスホリパーゼ活性もまた調節することが決定された。（ｉ）ＬＴＢ4受容体の活性化が、ＰＩＰＰのシグナル伝達の重要な構成要素であるＰＳＤＰを迅速に分解する（これはＬＸＡ4受容体アゴニストにより反転される）こと、（ｉｉ）アスピリンに誘導される１５−エピ−ＬＸＡ4の安定な類似物が、ＬＴＢ4に開始されるＰＬＤの活性化およびスーパーオキシドアニオンの生成を強力に阻害すること、ならびに（ｉｉｉ）ＰＳＤＰはヒト組換えおよび植物双方のＰＬＤを直接阻害することが見出された。これらの知見は、調節的シグナル伝達経路としての受容体に開始されるＰＩＰＰの再生の証拠を提供する。
【００１６】
本発明は、ホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）活性に随伴する疾患もしくは病状の調整方法に関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述される式を有するリポキシン類似物の被験体への投与を包含し、その結果、ＰＬＤ誘導性活性が調整される。
【００１７】
本発明は、被験体におけるホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）活性の治療方法にも関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述されるリポキシン類似物の投与を包含し、その結果、ＰＬＤ誘導性活性が治療される。
【００１８】
本発明は、被験体におけるホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）誘導性スーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性に随伴する疾患もしくは病状の調整方法にさらに関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述されるリポキシン類似物の投与を包含し、その結果、ＰＬＤのスーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性の誘導に随伴する疾患もしくは病状が調節される。
【００１９】
本発明は、被験体におけるホスホリパーゼＤ（ＰＬＤ）誘導性スーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性の治療方法にさらに関する。該方法は、有効な抗ＰＬＤ量の下述されるリポキシン類似物の投与を包含し、その結果、ＰＬＤ誘導性スーパーオキシド生成もしくは脱顆粒活性が治療される。
【００２０】
好ましい態様において、本発明の方法はインビトロもしくはインビボで実施される。
【００２１】
別の局面において、本発明は、被験体における上に列挙された活性もしくは病状を治療するための包装された製薬学的組成物に向けられる。該包装された製薬学的組成物は、治療上有効な量の下述される式の１つを有する最低１種のリポキシン化合物を保持する容器、および被験体における活性もしくは病状を治療するための該リポキシン化合物の使用のための説明書を包含する。
【００２２】
一態様において、本発明で有用な化合物は、式（Ｉ）
【００２３】
【化２５】
0004392473.tif 000002
【００２４】
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【００２５】
【化２６】
0004392473.tif 000003
【００２６】
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル；であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｑ3およびＱ4はそれぞれ独立にＯ、ＳもしくはＮＨであり；
式中、Ｒ2およびＲ3の一方が水素原子でありかつ他方が
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｃ）３から６個までの炭素原子のシクロアルキル；
（ｄ）直鎖もしくは分枝状であってよい２から８個までの炭素原子のアルケニル；または
（ｅ）ＲaＱ2Ｒb（ここでＱ2は−Ｏ−もしくは−Ｓ−であり；ここでＲaは直鎖もしくは分枝状であってよい０から６個までの炭素原子のアルキレンであり、また、ここでＲbは直鎖もしくは分枝状であってよい０から８個までの炭素原子のアルキルであるが、但し、Ｒbが０である場合にはＲbは水素原子である）；
であり；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、Ｒ5は
【００２７】
【化２７】
0004392473.tif 000004
【００２８】
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｙ1は、−ＯＨ、メチル、−ＳＨ、直鎖もしくは分枝状の２から４個までの炭素原子のアルキル、１から４個までの炭素原子のアルコキシ、またはＣＨaＺbであり、ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０ないし３、ｂ＝０ないし３、およびＺはシアノ、ニトロもしくはハロゲンであり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル；
であり；
式中、ＴはＯもしくはＳである、
ならびにその製薬学的に許容できる塩
を有する。
【００２９】
別の態様において、本発明で有用な化合物は、式（ＩＩ）
【００３０】
【化２８】
0004392473.tif 000005
【００３１】
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【００３２】
【化２９】
0004392473.tif 000006
【００３３】
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル
であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｒ2およびＲ3の一方が水素原子でありかつ他方が
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｃ）３から６個までの炭素原子のシクロアルキル；
（ｄ）直鎖もしくは分枝状であってよい２から８個までの炭素原子のアルケニル；または
（ｅ）ＲaＱ2Ｒb（ここでＱ2は−Ｏ−もしくは−Ｓ−であり；ここでＲaは直鎖もしくは分枝状であってよい０から６個までの炭素原子のアルキレンであり、また、ここでＲbは直鎖もしくは分枝状であってよい０から８個までの炭素原子のアルキルであるが、但し、Ｒbが０である場合にはＲbは水素原子である）；
であり；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、Ｒ5は
【００３４】
【化３０】
0004392473.tif 000007
【００３５】
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｙ1は、−ＯＨ、メチル、−ＳＨ、直鎖もしくは分枝状の２から４個までの炭素原子のアルキル、１から４個までの炭素原子のアルコキシ、またはＣＨaＺbであり、ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０ないし３、ｂ＝０ないし３、およびＺはシアノ、ニトロもしくはハロゲンであり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、ＴはＯもしくはＳである、
ならびにその製薬学的に許容できる塩
を有する。
【００３６】
本発明は、式（ＩＩＩ）
【００３７】
【化３１】
0004392473.tif 000008
【００３８】
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【００３９】
【化３２】
0004392473.tif 000009
【００４０】
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル
であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｒ2およびＲ3の一方が水素原子でありかつ他方が
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｃ）３から６個までの炭素原子のシクロアルキル；
（ｄ）直鎖もしくは分枝状であってよい２から８個までの炭素原子のアルケニル；または
（ｅ）ＲaＱ2Ｒb（ここでＱ2は−Ｏ−もしくは−Ｓ−であり；ここでＲaは直鎖もしくは分枝状であってよい０から６個までの炭素原子のアルキレンであり、また、ここでＲbは直鎖もしくは分枝状であってよい０から８個までの炭素原子のアルキルであるが、但し、Ｒbが０である場合にはＲbは水素原子である）；
であり；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、Ｒ5は
【００４１】
【化３３】
0004392473.tif 000010
【００４２】
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、ＴはＯもしくはＳである、
を有する有用なリポキシン化合物、ならびにその製薬学的に許容できる塩にもまた向けられる。
【００４３】
本発明は、さらに、式（ＩＶ）
【００４４】
【化３４】
0004392473.tif 000011
【００４５】
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【００４６】
【化３５】
0004392473.tif 000012
【００４７】
（ここで、Ｚi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである）；
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子；または
（ｖｉｉｉ）２から８個までの炭素原子の直鎖もしくは分枝状鎖のアルケニル；であり；
式中、Ｑ1は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ2もしくは（ＣＮ）であるが、但し、Ｑ1がＣＮである場合にはＸは存在せず；
式中、Ｒ4は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状であってよい１から６個までの炭素原子のアルキル
であり；
式中、Ｒ5は
【００４８】
【化３６】
0004392473.tif 000013
【００４９】
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル；
であり；
式中、ＴはＯもしくはＳである、
を有する有用なリポキシン化合物、ならびにその製薬学的に許容できる塩に向けられる。
【００５０】
本発明は、さらに、式（Ｖ）
【００５１】
【化３７】
0004392473.tif 000014
【００５２】
式中、ＸはＲ1、ＯＲ1もしくはＳＲ1であり；
式中、Ｒ1は、
（ｉ）水素原子；
（ｉｉ）直鎖もしくは分枝状であってよい、１から８個までの炭素原子のアルキル；
（ｉｉｉ）３ないし１０個の炭素原子のシクロアルキル；
（ｉｖ）７ないし１２個の炭素原子のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【００５３】
【化３８】
0004392473.tif 000015
【００５４】
（式中、Ｚi 、Ｚii、Ｚiii 、ＺivおよびＺv は、それぞれ独立して−ＮＯ2 、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1 、−ＳＯ3 Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲx （式中、Ｒx は直鎖または分枝状であってもよい炭素原子１〜８個である）、およびヒドロキシルより選ばれる）
（ｖｉｉ）検出可能な標識分子、または
（ｖｉｉｉ）炭素原子２〜８個の直鎖または分枝状アルケニル
であり、
式中、Ｑ1 は、（Ｃ＝Ｏ）、−ＳＯ2 または（ＣＮ）であり、ただしＱ1 がＣＮの場合には、Ｘは存在せず、
式中、Ｒ4 は、
（ａ）Ｈ、
（ｂ）直鎖または分枝状であってもよい炭素原子１〜６個のアルキル
であり、
式中、Ｒ5 は、
【００５５】
【化３９】
0004392473.tif 000016
【００５６】
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシル、または置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であり；
式中、Ｒ6は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖もしくは分枝状の１から４個までの炭素原子のアルキル；
である、
を有する有用なリポキシン化合物；ならびに
その製薬学的に許容できる塩
に向けられる。
【００５７】
好ましい態様において、ＸはＯＲ1であり、ここでＲ1は水素原子、１ないし４個の炭素原子のアルキル基もしくは製薬学的に許容できる塩であり、Ｑ1はＣ＝Ｏであり、Ｒ2およびＲ3（存在する場合）は水素原子であり、Ｒ4は水素原子もしくはメチルであり、Ｑ3およびＱ4（存在する場合）は双方ともＯであり、Ｒ6（存在する場合）は水素原子であり、Ｙ1（存在する場合）はＯＨであり、ＴはＯであり、そしてＲ5は置換フェニル、例えば
【００５８】
【化４０】
0004392473.tif 000017
【００５９】
であり、
ここでＺi、Ｚii、Ｚiii、ＺivおよびＺvは、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ1、−ＳＯ3Ｈ、水素原子、ハロゲン、メチル、−ＯＲxからそれぞれ独立に選択され、ここで、Ｒxは、直鎖もしくは分枝状であってよい１から８個までの炭素原子およびヒドロキシルである。ある態様において、Ｒ5についてパラフルオロフェニルおよび／もしくは未置換フェニルが除外される（例えば１５−エピ−１６−（パラフルオロ）フェノキシ−ＬＸＡ4、１６−（パラフルオロ）フェノキシ−ＬＸＡ4、１５−エピ−１６−フェノキシ−ＬＸＡ4もしくは１６−フェノキシ−ＬＸＡ4）。米国特許第５，４４１，９５１号明細書により包含される化合物は本発明の一定の態様から除外される。
【００６０】
さらに別の態様において、本発明は、上述された式を有する化合物および製薬学的に許容できる担体を包含する製薬学的組成物に向けられる。一態様において、好ましい化合物は
【００６１】
【化４１】
0004392473.tif 000018
【００６２】
である。好ましい一態様において、製薬学的担体はケトン、例えばアセトンでない。
【００６３】
好ましい態様において、Ｙ1はヒドロキシルであり、また、ヒドロキシルを担持する炭素はＲもしくはＳ配置を有することができる。最も好ましい態様において、ヒドロキシル基（例えばＹ1）を担持するキラル炭素は、当該技術分野で既知であるように、１５−エピ−リポキシンと呼称される。
【００６４】
ある態様において、Ｒ2、Ｒ3、Ｑ3およびＱ4基を担持する炭素のキラリティーは、それぞれ独立にＲもしくはＳのいずれかであることができる。好ましい態様において、Ｑ3およびＱ4は構造ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶもしくはＶに示されるキラリティーを有する。
【００６５】
好ましい態様において、Ｒ4は水素である。他の好ましい態様において、Ｒ6は水素である。
【００６６】
加えて、Ｒ5は、１と約６個との間の炭素原子、好ましくは１と４個との間の炭素原子、最も好ましくは１と３個との間、そして好ましくは１もしくは２個の炭素原子を有する置換もしくは未置換、分枝状もしくは非分枝状のアルキル基であることができる。炭素原子は、ハロゲン原子、ヒドロキシル基もしくは他の基を包含する置換基を有することができる。
【００６７】
本発明で有用な化合物は、以下の合成スキームにより製造することができる：
【００６８】
【化４２】
0004392473.tif 000019
【００６９】
ここで、Ｘ、Ｑ1、Ｑ3、Ｑ4、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｙ1およびＴは上で定義されたとおりである。当該技術分野で既知の適する方法を使用して各断片を製造することができる。例えば、アセチレン断片は、Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ら（１９９１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０：１１００；Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ら（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：５５２７；Ｗｅｂｂｅｒ，Ｓ．Ｅ．ら（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２９：６１；および米国特許第５，４４１，９５１号明細書に論考される方法により製造することができる。第二の断片は、Ｒａｄｕｃｈｅｌ，Ｂ．とＶｏｒｂｒｕｇｇｅｎ，Ｈ．（１９８５）Ａｄｖ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｒｅｓ．１４：２６３の方法により製造することができる。
【００７０】
「リポキシン類似物」は、「天然のリポキシン」の活性領域と同様に機能する「活性領域」を有するがしかし天然のリポキシンと異なる「代謝転化領域（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｒｅｇｉｏｎ）」を有する化合物を意味する。リポキシン類似物は、天然のリポキシンに構造的に類似である化合物、同一の受容体認識部位を共有する化合物、リポキシンと同一もしくは類似のリポキシン代謝転化領域を共有する化合物、およびリポキシンの類似物であると技術に認識される化合物を包含する。リポキシン類似物は、リポキシン類似物の代謝物を包含する。本明細書に開示される化合物は１個もしくはそれ以上の非対称中心を含有してよい。非対称炭素原子が存在する場合、１個以上の立体異性体が可能であり、そして、示される構造表示内に全部の可能な異性体が包含されることを意図している。光学的に活性の（Ｒ）および（Ｓ）異性体は、当業者に既知の慣習的技術を使用して分割してもよい。本発明は、可能なジアステレオマーならびにラセミおよび光学的に分割された異性体を包含することを意図している。
【００７１】
「対応するリポキシン」および「天然のリポキシン」という用語は、天然に存在するリポキシンもしくはリポキシン代謝物を指す。類似物がリポキシン特異的受容体に対する活性を有する場合、対応するもしくは天然のリポキシンはその受容体に対する正常なリガンドである。例えば、類似物が、分化されたＨＬ−６０細胞上のＬＸＡ4特異的受容体である場合、対応するリポキシンはＬＸＡ4である。類似物が、天然に存在するリポキシンにより拮抗される（ロイコトリエンのような）別の化合物に対するアンタゴニストとしての活性を有する場合、その天然のリポキシンが対応するリポキシンである。
【００７２】
「活性領域」は、インビボで細胞の相互作用に関連する天然のリポキシンもしくはリポキシン類似物の領域を意味する。活性領域は、細胞のリポキシン受容体、または酵素およびその補助因子を包含する巨大分子もしくは巨大分子の複合体の「認識部位」を結合することができる。好ましいリポキシンＡ4類似物は、天然のリポキシンＡ4のＣ5−Ｃ15を含んで成る活性領域を有する。好ましいリポキシンＢ4類似物は、天然のリポキシンＢ４のＣ５−Ｃ１４を含んで成る活性領域を有する。
【００７３】
「認識部位」もしくは受容体という用語は技術に認識され、そしてホルモン、ロイコトリエンおよびリポキシンのようなある群の細胞のメッセンジャーが、それらのメッセンジャーに対する生化学的および生理学的応答が開始される前に最初に相互作用しなくてはならない、機能的な巨大分子もしくは巨大分子の複合体を全般として指すことを意図している。本出願で使用されるところの受容体は、無傷のもしくは浸透化された細胞上、または器官を包含する組織中で単離することができる。受容体は生存する被験体から、もしくはその中にあってよいか、またはそれはクローン化してもよい。受容体は通常存在してよいか、または疾患状態、傷害もしくは人工的手段により誘導してもよい。本発明の化合物は、認識部位の天然の基質に関して可逆的に、不可逆的に、競争的に、非競争的に（ｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙ）もしくは競合せずに（ｕｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙ）結合してよい。
【００７４】
「代謝転化領域」という用語は、その上で酵素もしくは酵素およびその補助因子が、その酵素もしくは酵素および補助因子が通常リポキシン上で転化する１種もしくはそれ以上の代謝転化を実施することを試みる、リポキシン、リポキシン代謝物、もしくはリポキシン類似物の代謝物を包含するリポキシン類似物の部分を全般として指すことを意図している。代謝転化領域は転化を受けやすくても受けやすくなくてもよい。リポキシンの代謝転化領域の制限しない一例は、Ｃ−１３，１４の二重結合もしくはＣ−１５のヒドロキシル基または双方を包含するＬＸＡ4の一部分である。
【００７５】
「検出可能な標識分子」という用語は、該検出可能な標識分子が結合されている化合物もしくは受容体認識部位を追跡（ｔｒａｃｅ）、追跡（ｔｒａｃｋ）もしくは同定するのに使用される蛍光、リン光および放射標識された分子を包含することを意味する。標識分子は、当該技術分野で既知の数種の方法のいずれかにより検出することができる。
【００７６】
「標識されたリポキシン類似物」という用語は、限定されるものでないがトリチウム（3Ｈ）、重水素（2Ｈ）、炭素（14Ｃ）もしくは別の方法で標識された（例えば蛍光で）ような放射活性同位体で標識されている化合物を包含することがさらに理解される。本発明の化合物は、例えば動力学的結合実験のため、代謝経路および酵素の機構をさらに解明するため、もしくは分析化学の技術分野で既知の方法による特徴づけのため、標識もしくは誘導体化してよい。
【００７７】
「代謝を阻害する」という用語は、天然のリポキシンを代謝する酵素の活性の封鎖もしくは抑制を意味する。封鎖もしくは抑制は、共有結合、不可逆的結合、不可逆的結合の実際的効果を有する可逆的結合、または酵素がその通常の様式でリポキシン類似物の代謝物、リポキシンもしくはリポキシン代謝物を包含する別のリポキシン類似物上で稼働することを予防するいずれかの他の手段により発生してよい。
【００７８】
「代謝に抵抗する」という用語は、リポキシンを代謝する最低１種の酵素による代謝分解的転化の１種もしくはそれ以上をうけることに失敗することを包含することを意味している。代謝に抵抗するＬＸＡ4類似物の２つの制限しない例は、１）１５−オキソの形態に酸化することができない構造、および２）１５−オキソの形態に酸化することができるがしかし１３，１４−ジヒドロの形態への酵素的還元を受けやすくない構造、である。
【００７９】
「代謝をよりゆっくりとうける」という用語は、より遅い反応の動力学を有すること、またはリポキシンを代謝する酵素の１種もしくはそれ以上による一連の代謝転化の完了により長い時間を必要とすることを意味する。よりゆっくりと代謝をうけるＬＸＡ4類似物の制限しない一例は、Ｃ−１５の脱水素についてＬＸＡ4が有するよりもより大きな遷移状態エネルギーを有する構造である。なぜなら、該類似物はＣ−１６で立体的に妨げられているからである。
【００８０】
「組織」という用語は、無傷の細胞、血液、血漿および血清のような血液調製物、骨、関節、筋、平滑筋および器官を包含することを意図している。
【００８１】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素、もしくはフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを包含することを意味している。ある局面において、本発明の化合物はハロゲン化化合物（例えばフッ素化化合物）を包含しない。
【００８２】
「被験体」という用語は、炎症、炎症応答、血管収縮および骨髄抑制により引き起こされるもしくはそれらに寄与される病状もしくは疾患を受けやすい生存する生物体を包含することを意図している。被験体の例は、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギおよびマウスを包含する。被験体という用語はトランスジェニック種を包含することをさらに意図している。
【００８３】
本発明の化合物を医薬としてヒトおよび哺乳動物に投与する場合、それらはそれ自体、または例えば製薬学的に許容できる担体とともに０．１ないし９９．５％（より好ましくは０．５ないし９０％）の有効成分を含有する製薬学的組成物として与えることができる。
【００８４】
本明細書で使用されるところの「製薬学的に許容できる担体」という句は、それがその意図された機能を実施できるような、被験体内でもしくは被験体に本発明の化合物（１種もしくは複数）を運搬もしくは輸送することに関与する、液体もしくは固体の増量剤、希釈剤、賦形剤、溶媒もしくは被包化物質のような製薬学的に許容できる物質、組成物もしくはベヒクルを意味する。典型的には、こうした化合物は、１つの器官もしくは身体の部分から別の器官もしくは身体の部分まで運搬もしくは輸送される。各担体は、該製剤の他の成分と適合性であるという意味において「許容でき」なければならず、また、患者に対し有害であってはならない。製薬学的に許容できる担体として作用することができる物質のいくつかの例は：乳糖、ブドウ糖およびショ糖のような糖類；トウモロコシデンプンおよびバレイショデンプンのようなデンプン類；セルロースならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびセルロースアセテートのようなその誘導体；粉末にされたトラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび坐剤蝋のような賦形剤；ラッカセイ油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油のような油類；プロピレングリコールのようなグリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールのような多価アルコール類；エチルオレエートおよびエチルラウレートのようなエステル類；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張の生理的食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；ならびに製薬学的製剤で使用される他の非毒性の適合性の物質を包含する。
【００８５】
ある態様においては、本発明の化合物は１種もしくはそれ以上の酸官能基を含有してよく、そして、従って、製薬学的に許容できる塩基とともに製薬学的に許容できる塩を形成することが可能である。これらの例における「製薬学的に許容できる塩」という用語は、本発明の化合物の比較的非毒性の無機および有機塩基付加塩を指す。これらの塩は、同様に、該化合物の最終の単離および精製の間に、あるいはその遊離酸の形態の精製された化合物を、製薬学的に許容できる金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩もしくは重炭酸塩のような適する塩基、アンモニア、または製薬学的に許容できる有機の一級、二級もしくは三級アミンと別個に反応させることによりインシトゥで製造することができる。代表的なアルカリもしくはアルカリ土類の塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩などを包含する。塩基付加塩の形成に有用な代表的有機アミンは、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどを包含する。
【００８６】
「製薬学的に許容できるエステル」という用語は、本発明の化合物の比較的非毒性のエステル化された生成物を指す。これらのエステルは、該化合物の最終の単離および精製の間に、またはその遊離酸の形態もしくはヒドロキシルの精製された化合物を適するエステル化剤と別個に反応させることにより、インシトゥで製造することができる。カルボン酸は触媒の存在下でアルコールでの処理を介してエステルに転化することができる。該用語は、生理学的条件下で溶媒和されることが可能な低級炭化水素基、例えばアルキルエステル、メチル、エチルおよびプロピルエステルを包含することをさらに意図している。好ましい一態様において、エステルはメチルエステルでない（例えば、Ｂｅｒｇｅら、上記を参照されたい）。
【００８７】
ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムのような湿潤剤、乳化剤および滑沢剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、矯味矯臭剤および香料、保存剤および抗酸化剤もまた該組成物中に存在することができる。
【００８８】
製薬学的に許容できる抗酸化剤の例は：アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどのような水溶性抗酸化剤；アスコルビルパルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどのような脂溶性抗酸化剤；およびクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などのような金属キレート剤を包含する。
【００８９】
本発明の製剤は、静脈内、経口、鼻、局所、経皮、口腔内、舌下、直腸、膣および／もしくは非経口投与に適するものを包含する。該製剤は、単位投与剤形で便宜的に存在してよく、また、調剤の技術分野で公知のいずれかの方法により製造してよい。単一の投薬形態を生じさせるため担体物質と組み合わせることができる有効成分の量は、一般に、治療効果を生じさせる化合物の量であることができる。一般に、この量は、１００パーセントから、約１パーセントから約９９パーセントまでの有効成分、好ましくは約５パーセントから約７０パーセントまで、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントまでの範囲にあることができる。
【００９０】
これらの製剤もしくは組成物の製造方法は、本発明の化合物を担体および場合によっては１種もしくはそれ以上の補助成分と連合させる段階を包含する。一般に、該製剤は、本発明の化合物を液体の担体もしくは微細に分割された固体の担体、または双方と均一にかつ緊密に連合させること、および、その後、必要な場合は生成物を造形することにより製造する。
【００９１】
経口投与に適する本発明の製剤は、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、（味を付けられた主薬、通常はショ糖およびアラビアゴムもしくはトラガカントを使用する）トローチ剤、散剤、顆粒剤の形態で、あるいは水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁剤、または水中油もしくは油中水の液体乳剤、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤、または（ゼラチンおよびグリセリンもしくはショ糖およびアラビアゴムのような不活性基剤を使用する）香錠ならびに／または含嗽剤などとしてであってよく、それぞれは、有効成分として予め決められた量の本発明の１種の化合物を含有する。本発明の化合物はボーラス、舐剤もしくはパスタ剤として投与してもよい。
【００９２】
経口投与のための本発明の固形の投薬形態（カプセル剤、錠剤、丸剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤など）においては、有効成分を、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムのような１種もしくはそれ以上の製薬学的に許容できる担体、ならびに／または以下、すなわちデンプン、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、マンニトールおよび／もしくはケイ酸のような増量剤（ｆｉｌｌｅｒ）もしくは増量剤（ｅｘｔｅｎｄｅｒ）；例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖および／もしくはアラビアゴムのような結合剤；グリセロールのような湿潤剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）；寒天、炭酸カルシウム、バレイショもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩および炭酸ナトリウムのような崩壊剤；パラフィンのような溶解遅延剤；四級アンモニウム化合物のような吸収促進剤；例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートのような湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）；カオリンおよびベントナイト粘土のような吸収剤；タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物のような滑沢剤；ならびに着色剤のいずれかと混合する。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合には、製薬学的組成物は緩衝剤もまた含んでよい。類似の型の固体の組成物は、乳糖（ｌａｃｔｏｓｅ）もしくは乳糖（ｍｉｌｋ  ｓｕｇａｒ）、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を使用する軟および硬充填ゼラチンカプセル中の増量剤としてもまた使用してよい。
【００９３】
錠剤は、場合によっては１種もしくはそれ以上の補助成分とともに圧縮もしくは成形により作成してよい。圧縮錠剤は、結合剤（例えばゼラチンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えばデンプングリコール酸ナトリウムもしくは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤を使用して製造してよい。成形錠剤は、適する機械中で、不活性の液体希釈剤で湿らされた粉末にされた化合物の混合物を成形することにより作成してよい。
【００９４】
本発明の製薬学的組成物の錠剤、ならびに糖衣錠、カプセル剤、丸剤および顆粒剤のような他の固体の投薬形態は、場合によっては、割線をつけてよいか、もしくは腸溶コーティングおよび医薬処方の技術分野で公知の他のコーティングのようなコーティングおよび殻（ｓｈｅｌｌ）をもって製造してよい。それらはまた、例えば所望の放出プロフィルを提供する変動する比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／もしくは微小球体を使用してその中の有効成分の遅いもしくは制御された放出を提供するように処方してもよい。それらは、例えば、細菌を保持するフィルターを通す濾過により、または使用直前に滅菌水もしくはいくらかの他の滅菌の注入可能な媒体に溶解することができる滅菌の固形組成物の形態中に滅菌剤を組み込むことにより、滅菌してよい。これらの組成物は、場合によっては乳白剤もまた含有してよく、そして、それらが有効成分（１種もしくは複数）のみを、もしくは優先的には消化管のある一部分で、場合によっては遅延された様式で放出する組成物のものであってよい。使用することができる埋め込む組成物の例はポリマー性物質および蝋を包含する。有効成分は、適切な場合は１種もしくはそれ以上の上述された賦形剤で微小被包化された形態にあることもまたできる。
【００９５】
本発明の化合物の経口投与のための液体の投薬形態は、製薬学的に許容できる乳剤、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を包含する。液体の投薬形態は、有効成分に加えて、例えば水もしくは他の溶媒のような当該技術分野で普遍的に使用される不活性の希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油類（とりわけ綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールならびにソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物のような可溶化剤および乳化剤を含有してよい。
【００９６】
経口組成物は、不活性の希釈剤を除いて、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、矯味矯臭剤、着色料、香料および保存剤のような補助物質もまた包含することができる。
【００９７】
懸濁剤は、有効成分に加えて、例えばエトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微晶質セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物のような懸濁化剤を含有してよい。
【００９８】
直腸もしくは膣投与のための本発明の製薬学的組成物の製剤は坐剤として提示することができ、これは、本発明の１種もしくはそれ以上の化合物を、例えばカカオバター、ポリエチレングリコール、坐剤蝋もしくはサリチレートを含んで成る１種もしくはそれ以上の非刺激性の賦形剤もしくは担体と混合することにより製造してよく、また、これは室温で固体であるがしかし体温で液体であり、そして従って直腸もしくは膣腔中で溶融しかつ有効成分を放出することができる。
【００９９】
膣投与に適する本発明の製剤は、適切であることが当該技術分野で既知であるような担体を含有する膣坐剤、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、パスタ剤、泡剤もしくはスプレー製剤もまた包含する。
【０１００】
本発明の化合物の局所もしくは経皮投与のための投薬形態は、散剤、スプレー剤、軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶液、貼付剤および吸入剤を包含する。有効成分を、製薬学的に許容できる担体、および必要とされることができるいずれかの保存剤、緩衝剤もしくは噴射剤と滅菌条件下で混合してよい。
【０１０１】
軟膏剤、パスタ剤、クリーム剤およびゲル剤は、本発明の有効成分に加えて、動物および植物脂肪、油、蝋、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、もしくはそれらの混合物のような賦形剤を含有してよい。
【０１０２】
散剤およびスプレー剤は、本発明の化合物に加えて、乳糖、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミド粉末、もしくはこれらの物質の混合物のような賦形剤を含有することができる。スプレー剤は、クロロフルオロヒドロカーボン、ならびにブタンおよびプロパンのような揮発性の未置換の炭化水素のような通例の噴射剤を付加的に含有することができる。
【０１０３】
経皮貼付剤は、身体に対する本発明の化合物の制御された送達を提供するという付加される利点を有する。こうした投薬形態は、化合物を適正な媒体に溶解もしくは分散させることにより作成することができる。皮膚を横断する化合物の流入を増大させる吸収促進剤もまた使用することができる。こうした流入の速度は、速度制御膜を提供すること、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中に有効成分を分散させることのいずれかにより制御することができる。
【０１０４】
眼用製剤、眼用の軟膏剤、散剤、溶液などもまた本発明の範囲内にあるとして企図される。
【０１０５】
非経口投与に適する本発明の製薬学的組成物は、１種もしくはそれ以上の製薬学的に許容できる滅菌の等張の水性もしくは非水性の溶液、分散液、懸濁液もしくは乳液、または使用直前に滅菌の注入可能な溶液もしくは分散剤に再構成してよい滅菌粉末とともに１種もしくはそれ以上の本発明の化合物を含んで成り、それらは、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、意図される受領者の血液と製剤を等張にする溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤を含有してよい。
【０１０６】
本発明の製薬学的組成物で使用してよい適する水性および非水性の担体の例は、水、エタノール、（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどのような）多価アルコールおよびそれらの適する混合物、オリーブ油のような植物油、ならびにエチルオレエートのような注入可能な有機エステルを包含する。適正な流動性は、例えばレシチンのようなコーティング物質の使用、分散剤の場合には必要とされる粒子径の維持、および界面活性剤の使用により維持することができる。
【０１０７】
これらの組成物は、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤のような補助物質もまた含有してよい。多様な抗菌および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含により、微生物の作用の予防を確実にしてよい。糖類、塩化ナトリウムなどのような等張剤を組成物中に包含することもまた望ましいことができる。加えて、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンのような吸収を遅延させる作用物質の包含により、注入可能な医薬の形態の持続性の吸収をもたらしてもよい。
【０１０８】
いくつかの場合には、薬物の効果を延長させるために、皮下もしくは筋肉内注入からの薬物の吸収を遅延させることが望ましい。これは、乏しい水溶解性を有する晶質もしくは非晶質物質の液体懸濁液の使用により達成してよい。その場合、薬物の吸収速度はその溶解速度に依存し、溶解速度は順に結晶の大きさおよび結晶形に依存することができる。あるいは、非経口で投与される薬物の形態の遅延される吸収は、油性ベヒクル中に薬物を溶解もしくは懸濁することにより達成する。
【０１０９】
注入可能なデポーの形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドのような生物分解可能なポリマー中で主題の化合物の微小被包化マトリックスを形成することにより作成する。ポリマーに対する薬物の比、および使用される特定のポリマーの性質に依存して、薬物放出速度を制御することができる。他の生物分解可能なポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）を包含する。デポーの注入可能な製剤は、リポソームもしくは身体組織と適合するマイクロエマルジョン中に薬物を捕捉することによってもまた製造する。
【０１１０】
本発明の製剤は、経口、非経口、局所もしくは直腸で与えてよい。それらはもちろん、各投与経路に適する形態により与える。例えば、それらは、錠剤もしくはカプセル剤の形態で、注入、吸入、眼用ローション、軟膏、坐剤など、注射（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、点滴（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）もしくは吸入による投与；ローション剤もしくは軟膏剤による局所；および坐剤により直腸により投与する。静脈内注入投与が好ましい。
【０１１１】
本明細書で使用されるところの「非経口投与」および「非経口で投与される」という句は、通常は注入による腸および局所投与以外の投与様式を意味し、そして、静脈内、筋肉内、動脈内、硬膜下腔内、被膜内、眼内、心内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内および胸骨下の注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）および注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）を制限なしに包含する。
【０１１２】
本明細書で使用されるところの「全身投与」、「全身に投与される」、「末梢投与」および「末梢に投与される」という句は、それが患者の全身に進入し、そして従って代謝および他の同様の過程を受けるような中枢神経系中に直接以外の化合物、薬物もしくは他の物質の投与、例えば皮下投与を意味する。
【０１１３】
これらの化合物は、経口で、例えばスプレー剤によるような鼻で、直腸で、膣内に、非経口で、槽内に、ならびに口腔内および舌下を包含する散剤、軟膏剤もしくはドロップ剤によるように局所を包含するいずれかの適する投与経路により、治療のため、ヒトおよび他の動物に投与してよい。
【０１１４】
選択された投与経路に関係なく、適する水和された形態で使用することができる本発明の化合物、および／もしくは本発明の製薬学的組成物は、当業者に既知の慣習的方法により製薬学的に許容できる投薬形態に処方する。
【０１１５】
本発明の製薬学的組成物中の有効成分の実際の投薬量レベルは、患者に対し毒性であることなく、特定の患者、組成物および投与様式について所望される治療応答を達成するのに有効である有効成分の量を得るように変動してよい。
【０１１６】
選択される投薬レベルは、使用される本発明の特定の化合物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用されている特定の化合物の排泄速度、治療の期間、使用される特定の化合物とともに使用される他の薬物、化合物および／もしくは物質、治療されている患者の年齢、性別、体重、病状、全体的健康状態および以前の病歴、ならびに医学の技術分野で公知の同様の因子を包含する多様な因子に依存することができる。
【０１１７】
当該技術分野の通常の熟練を有する医師もしくは獣医師は、必要とされる製薬学的組成物の有効量を容易に決定しかつ処方することができる。例えば、医師もしくは獣医師は、製薬学的組成物中で使用される本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるものより低いレベルで開始しそして所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増加させることができる。
【０１１８】
一般に、本発明の化合物の適する一日用量は、治療効果を生じさせるのに有効な最低用量である化合物の量であることができる。こうした有効用量は、一般に、上述された因子に依存することができる。一般に、患者のための本発明の化合物の静脈内および皮下の用量は、指示された鎮痛効果のために使用される場合、１日あたり体重１キログラムあたり約０．０００１から約１００ｍｇまで、より好ましくは１日あたり１ｋｇあたり約０．０１から約５０ｍｇまで、そしてさらにより好ましくは１日あたり１ｋｇあたり約０．１から約４０ｍｇまでの範囲にあることができる。例えば、約０．０１マイクログラムと２０マイクログラムとの間、約２０マイクログラムと１００マイクログラムとの間、および約１０マイクログラムと２００マイクログラムとの間の本発明の化合物を、被験体の体重２０グラムあたりに投与する。
【０１１９】
所望の場合は、有効成分の有効一日用量を、場合によっては単位投与剤形で、その日を通じて適切な間隔で別個に投与される２、３、４、５、６もしくはそれ以上の下位用量として投与してよい。
【０１２０】
本発明の化合物を単独で投与することが可能である一方、該化合物を製薬学的組成物として投与することが好ましい。
方法
材料。
【０１２１】
１５−エピ−ＬＸａ、ＰＳＤＰおよびＰＳＭＰは全有機合成により調製し、そしてそれらの物理的、化学的および生物学的特性により特徴づけした（Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｃｌｉｓｈ，Ｃ．Ｂ．、Ｇｒｏｎｅｒｔ，Ｋ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９８）Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｒｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ｔｏｐｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  ａｎｄ  ｎｏｖｅｌ  ｌｉｐｏｘｉｎ  Ｂ4  ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１、８１９−８２６；Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）。ＬＴＢ4はケイマン  ケミカル（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（ミシガン州アナーバー）から購入し、キャベツＰＬＤ（ｃＰＬＤ）、ＦＤＰ、スクアレン、溶解緩衝液試薬およびチトクロームｃはシグマ  ケミカル  カンパニー（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）（ミズーリ州セントルイス）からであり、また、ＰＣおよびＰＡはアヴァンティ  ポーラー  リピッズ（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ）（アラバマ州アラバスター）からであった。各生物活性脂質の完全性および濃度は、各一連の実験の直前に、ＵＶ分析（エイコサノイドおよび類似物）ならびにリン定量（ポリイソプレニルホスフェート）（Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｃｌｉｓｈ，Ｃ．Ｂ．、Ｇｒｏｎｅｒｔ，Ｋ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９８）Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｒｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ｔｏｐｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  ａｎｄ  ｎｏｖｅｌ  ｌｉｐｏｘｉｎ  Ｂ4  ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１、８１９−８２６；Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）により評価した。
ヒトＰＭＮ
末梢静脈血（約１８０ｍｌ）は、最低２週間いずれかの医薬の服用を否定しかつブリガム  アンド  ウィメンズ  ホスピタル（Ｂｒｉｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）のヒト研究委員会（Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認されたプロトコルに対し書かれたインフォームド・コンセントを与えた健康志願者から静脈穿刺により得た。ＰＭＮを全血から単離し、そして（Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）でのとおり、［γ−32Ｐ］ＡＴＰ（４０μＣｉｍｌ-1、９０分、３７℃）で定常状態標識（ｓｔｅａｄｙ  ｓｔａｔｅ  ｌａｂｅｌｅｄ）した。標識されたＰＭＮを再懸濁し（１ｍＭ  ＣａＣｌ2を含むＰＢＳ、ｐＨ７．４０の１ｍｌあたり２０×１０6個）、そしてＬＴＢ4（１００ｎＭ）、１５−エピ−ＬＸａ（１００ｎＭ）もしくはベヒクル（０．１％ＥｔＯＨ）に０ないし３００秒間（３７℃）曝露した。指定された間隔で各インキュベーションからアリコートを取り出して、ケン化不可能な脂質（１０〜１２×１０6個のＰＭＮ）の放射標識およびＰＬＤ活性（１〜１．２５×１０6個のＰＭＮ）を測定した。各インキュベーション中に存在する物質をケン化し、抽出し、そしてホスホイメージング（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｉｎｇ）を伴うＴＬＣ（モデル４２５Ｅおよび積分ソフトウェア；モレキュラー  ダイナミックス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ））により分離し、これを参考文献２２でのとおりＰＳＤＰの質量決定に使用した。
組換えヒトＰＬＤ１ｂの調製
スポドプテラ  フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（Ｓｆ９）細胞は、１０％ウシ胎児血清（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ））を補充されたＴＣ１００培地１ｍｌ中に細胞２×１０5ないし２×１０6個で懸濁液中で培養した。ヒトＰＬＤ１ｂをコードするｃＤＮＡ（胎盤組織からクローン化された）を、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、ヘキサヒスチジン、プロテインキナーゼＡのリン酸化部位およびトロンビン切断部をコードするベクター配列の下流かつそれと同じ読み枠で伝達ベクターｐＡＣＧＨＬＴ（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））に挿入した。供給元の説明書（インヴィトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））に従い、ＧＳＴ−ｈＰＬＤ１ｂ構築物を、直線状にされたポリへドリンを含まない（ＰＨ−）ＡｃＭＮＰＶ  ＤＮＡ、Ｂａｃ−Ｎ−ＢｌｕｅとともにＳｆ９細胞にコトランスフェクションした。直鎖状にされたウイルスと伝達ベクターとの間の相同的組換えは、感染性の組換えウイルスを生じるのに不可欠なウイルス遺伝子ＯＲＦ１６２９の機能を復帰させた。２回のプラーク精製の後に、８×１０7ｐｆｕ／ｍｌの力価が得られるまで、Ｓｆ９細胞の大スケール感染により組換えウイルスを増幅した。ＧＳＴ−ｈＰＬＤ１ｂを生成させるため、細胞２×１０6個／ｍｌのＳｆ９細胞５００ｍｌを、１０：１の感染多重度でウイルスに感染させた。細胞を感染７２時間後に収穫し、溶解し、そして供給元の説明書（ファーミンゲン（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ））に従って、発現されたＧＳＴ−ｈＰＬＤ１ｂをグルタチオンアガロースビーズ上で精製した。ヤギ抗ＧＳＴ  ｐＡｂ（アマーシャム  ファルマシア  バイオテック（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ））、およびＰＬＤのコンセンサスペプチド配列ＧＳＡＮＩＮ（Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ、ＩＣＲＦ、英国ロンドンの贈与物）に対し生じられたウサギｐＡｂとの免疫反応性、ならびにインビトロＰＬＤアッセイ（２４）での活性により、精製された組換えタンパク質を同定した。
ＰＬＤ活性およびスーパーオキシドアニオン生成。
【０１２２】
休止期、もしくはアゴニストへの曝露後に、０．１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ  ７．４）、０．７ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム、１０μＭ  ｐ−ニトロフェニルリン酸、１０ｍＭ  ＥＧＴＡ、５．５％トリトン  Ｘ−１００、０．５Ｍ  β−グリセロリン酸、１０ｍＭ  フッ化フェニルメチルスルホニル、０．１ｍＭモリブデン酸アンモニウム、１２ｍＭ  ＤＦＰ、５μｇｍｌ-1ロイペプチン、２μｇｍｌ-1アプロチニンおよび７μｇｍｌ-1ペプスタチンＡより構成される溶解緩衝液を使用して、細胞からライセートを生成させ（参考文献２５でのとおり）、そしてバイオアッセイに利用した。
【０１２３】
ＰＭＮライセート（９０〜１３０μｇタンパク質）、精製されたホスホリパーゼＤ（３〜３０単位）（ＥＣ３．１．４．４．、シグマ  ケミカル  カンパニー（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．））もしくは組換えｈＰＬＤ１ｂを加温し（哺乳動物酵素について３７℃およびキャベツについて３０℃、３分）、そして、ＣａＣｌ2（３０ｍＭ）を含むトリス−ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ７．５）中でＰＳＤＰ、ＰＳＭＰもしくはＦＤＰ（１０〜１０００ｎＭ、５分、３７℃もしくは３０℃）次いでＰＣ（０．５ないし５ｍＭ）に曝露した。ＥＤＴＡ（５０ｍＭ）を含むトリス−ＨＣｌ（１Ｍ）を用いて３０秒間隔で（０〜９０秒）反応を停止した。参考文献２６でのとおり、コリン放出を定量した。
【０１２４】
新たに単離されたヒトＰＭＮ（ＨＢＳＳ＋１．６ｍＭ  ＣａＣｌ2１ｍｌあたり１〜３×１０6個のＰＭＮ）を、１５−エピ−ＬＸａ（１〜１００ｎＭ）もしくはベヒクル（０．１％エタノール）の存在下でインキュベート（５分、３７℃）し、そしてその後チトクロームｃ（７ｍｇ／ｍｌ）の存在下でＬＴＢ4（１００ｎＭ）に曝露した（１０分）。参考文献２２でのとおりにスーパーオキシドアニオンの生成を測定した。
統計学的解析。
【０１２５】
結果は平均±Ｓ．Ｅ．として表し、また、統計学的有意差はスチューデントのｔ検定を使用して評価した。
結果
ロイコトリエンＢ4はＰＩＰＰの迅速な再生：ＰＳＤＰの分解を刺激する。
【０１２６】
ロイコトリエンＢ4はその受容体と相互作用して、ホスホリパーゼおよびシグナルへの細胞の応答を迅速に活性化する（Ｙｏｋｏｍｉｚｏ，Ｔ．、Ｉｚｕｍｉ，Ｔ．、Ｃｈａｎｇ，Ｋ．、Ｔａｋｕｗａ，Ｔ．とＳｈｉｍｉｚｕ，Ｔ．（１９９７）Ａ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4  ｔｈａｔ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８７、６２０−６２４）。ＬＴＢ4受容体の活性化がＰＩＰＰおよびとりわけＰＳＤＰの再生につながるかどうかを決定するため、細胞のリン酸のプールを［γ−32Ｐ］−ＡＴＰで定常状態標識し（方法を参照されたい）、そしてＬＴＢ4（１００ｎＭ）もしくはベヒクル（０．１％エタノール）単独のいずれかに曝露した。０から３００秒（３７℃）までの時間を設定された間隔でアリコートを取り出し、そしてケン化不可能なリン酸化された脂質を単離し、かつ、［32Ｐ］の取込みについてホスホイメージャーにより定量した。刺激されないＰＭＮ中のＰＳＤＰレベルは、１０7個のＰＭＮあたり約１．７ｎｍｏｌ（約５０ｎＭ）である（Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）。ＰＳＤＰおよびプレスクアレンモノホスフェート（ＰＳＭＰ）はＡＴＰから［32Ｐ］を取込み（しかしファルネシルジホスフェート（ＦＤＰ）は取り込まない）、最近の証拠（Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）と矛盾しない。ＬＴＢ4は、迅速な（３０秒以内に明白）（図１Ｂ）および６０秒以内での［32Ｐ］−ＰＳＤＰの統計学的に有意の減少（２８％）（図１Ｃ）を開始した。［32Ｐ］−ＰＳＤＰレベルは、続く２７０秒以内に基礎の量（ｔ＝０）に戻った。ＬＴＢ4受容体活性化後の［32Ｐ］−ＰＳＤＰの変化はＰＳＤＰ量の変化を反映した。これらの結果は、ＰＳＤＰがＰＭＮ中に存在したことを確認し（Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）、また、ＬＴＢ4が、細胞の活性化のＬＴＢ4の動力学と同時のＰＩＰＰの再生の時間経過とともにＰＳＤＰの顕著な減少を開始した（図１）ことを示した（Ｂｏｒｇｅａｔ，Ｐ．とＮａｃｃａｃｈｅ，Ｐ．Ｈ．（１９９０）Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３、４５９−４６８；Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）。１５−エピマーのＬＸ類似物は��ＳＤＰを高めるＬＴＢ4のプログラムを切り替える。
【０１２７】
ＬＸＡ4および数種の１５−エピ−ＬＸＡ4の安定な類似物の双方が、ＰＭＮ上のＬＸＡ4受容体に作用してインビボの浸潤を阻害する。ＬＸおよび１５−エピ−ＬＸがＰＩＰＰのシグナル伝達を介して阻害作用を媒介するかどうかを決定するため、ＰＳＤＰのＬＴＢ4（１００ｎＭ）に刺激される変化に対する１５−エピ−ＬＸＡ4類似物（１５−エピ−ＬＸａ）（１００ｎＭ、５分、３７℃）の影響を、ＰＭＮの脂質の［32Ｐ］標識を使用して検査した（上を参照されたい、平行のインキュベーションで）。１５−エピ−ＬＸａは、単独ではＰＩＰＰの再生の速度に影響を及ぼさなかった（図１Ｂ）。興味深いことに、等モル濃度の１５−エピ−ＬＸａの存在下でのＬＴＢ4への曝露は、ＰＳＤＰのＬＴＢ4に開始される減少を予防したのみならず、しかし付加的に６０秒での［32Ｐ］−ＰＳＤＰの有意の増大（約７２％）を刺激した（図１Ｃ）。ＰＳＤＰレベルは、ＬＴＢ4への曝露後最低３００秒間上昇し続けた（図１Ｂ）。天然のＬＸＡ4、およびその関連するＬＸＡ4受容体アゴニスト、１６−フェノキシ−ＬＸＡ4メチルエステルは、１５−エピ−ＬＸａ＞１６−フェノキシ−ＬＸＡ4＞ＬＸＡ4という潜在力の等級の順序をもつ、１５−エピ−ＬＸａと質的に類似の応答を与え、１５−エピ−ＬＸａが１〜２桁より強力であった。これらの結果は、インビボでＬＴＢ4応答を阻害する１５−エピ−ＬＸａ（Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｆｉｏｒｅ，Ｓ．、Ｍａｄｄｏｘ，Ｊ．Ｆ．、Ｂｒａｄｙ，Ｈ．Ｒ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4（ＬＸＡ4）  ａｎｄ  ＬＸＡ4  Ｓｔａｂｌｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５、１６９３−１７０４）が、ＬＴＢ4に開始されるＰＩＰＰシグナル伝達を劇的に切り替えることを示す。さらに、ＬＸＡ4およびＬＴＢ4受容体の共活性化により惹起されるＰＳＤＰレベルの上昇は、ＰＳＤＰの蓄積の時間経過がＬＸおよび１５−エピ−ＬＸａによるＬＴＢ4の作用の調節と相互に関係したことを示す（下を参照されたい）。
１５−エピ−ＬＸａはＬＴＢ4に刺激されるＰＬＤ活性およびＯ2-生成を阻害する。
【０１２８】
ＬＴＢ4に刺激されるＰＬＤ活性は、ＰＭＮの形態学的変化、脱顆粒およびＯ2-産生を伴う（Ｏｌｓｏｎ，Ｓ．Ｃ．とＬａｍｂｅｔｈ，Ｊ．Ｄ．（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ  ８０、３１−１９；Ｚｈｏｕ，Ｈ．−Ｌ．、Ｃｈａｂｏｔ−Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｍ．、Ｆｏｌｅｙ，Ｊ．Ｊ．、Ｓａｒａｕ，Ｈ．Ｍ．、Ｔｚｉｍａｓ，Ｍ．Ｎ．、Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．とＴｏｒｐｈｙ，Ｔ．Ｊ．（１９９３）Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６、１３９−１４８）。ＰＩＰＰのＬＴおよびＬＸに媒介される再生が特定の細胞シグナル伝達事象と相互に関係しているかどうかを決定するため、図１で使用された同一のインキュベーションからの細胞ライセート中でＰＬＤ活性をモニターした。ＬＴＢ4はＰＬＤ活性の増大を与え、これは６０秒までに最大となった（図２Ａ）。ＬＴＢ4およびＰＬＤのこれらの値は、より早期の報告（Ｇｏｍｅｚ−Ｃａｍｂｒｏｎｅｒｏ，Ｊ．（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．１５、８７７−８８５；Ｚｈｏｕ，Ｈ．−Ｌ．、Ｃｈａｂｏｔ−Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｍ．、Ｆｏｌｅｙ，Ｊ．Ｊ．、Ｓａｒａｕ，Ｈ．Ｍ．、Ｔｚｉｍａｓ，Ｍ．Ｎ．、Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．とＴｏｒｐｈｙ，Ｔ．Ｊ．（１９９３）Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４６、１３９−１４８）のものと矛盾しない。１５−エピ−ＬＸａの存在下では、ＬＴＢ4に刺激されるＰＬＤ活性が６０秒で阻害された（約８１％）（図２ＡおよびＢ）。１５−エピ−ＬＸａはＬＴＢ4に刺激されるＯ2-生成もまた強力に阻害した（図２Ｃ）。一緒にすれば、これらの知見は、反対する細胞応答にシグナルを送るリガンドと受容体の相互作用が、［32Ｐ］−ＰＳＤＰレベルとＰＬＤ活性との間の逆の関係を与えたことを示し、ＰＳＤＰがＰＬＤを制御することができたことを立証する。
植物および哺乳動物双方のＰＬＤの直接阻害。
【０１２９】
ポリイソプレニルホスフェートがＰＬＤに直接作用するかどうかを決定するため、ＰＳＤＰおよび緊密に関係する脂質を、精製された植物酵素（ＥＣ  ３．１．４．４．；Ｖｍ＝０．２９ｎｍｏｌ／秒、Ｋｍ＝１．４ｍＭ）とともにインキュベートした。図３に見られるとおり、ＰＳＤＰは、２０ｎＭのＫｉで（（ＰＳＤＰ）＝１０ｎＭ）濃度依存性の様式で（１０ないし１０００ｎＭ）ｃＰＬＤを阻害した。ラインウィーバー・バーク解析（図３）は競争的阻害モデルと矛盾しなかった。ＰＳＭＰ（１個のリン酸のみ少ない）ような緊密に関係する脂質は、ＰＳＤＰに比較して、阻害能力の１００倍より大きい喪失を示した（表Ｉ）。匹敵する阻害は、他のポリイソプレノイド（すなわちＦＤＰおよびスクアレン）もしくはＰＬＤ生成物（ＰＡ）で明白でなかった。ＰＳＤＰを用いてインビトロで組換えヒトＰＬＤ１ｂの動力学を決定することにより、ＰＳＤＰが哺乳動物のＰＬＤもまた阻害することができるかどうかを決定した。組換え酵素（Ｖｍ＝０．３６ｎｍｏｌ／秒、Ｋｍ＝１３．８ｍＭ）もまた、６ｎＭのＫｉで、ＰＳＤＰにより劇的に阻害された（表Ｉ）。
【０１３０】
【表１】
0004392473.tif 000020
【０１３１】
ＰＬＤの活性化は、その活性を調整する多くの補助因子の存在下にインビボで起こるため、ＰＭＮライセート中のＰＬＤ活性に対するＰＳＤＰの影響もまた決定した。ＬＴＢ4の６０秒後にＰＳＤＰレベルが低下し（２８％、図１）、また、ＰＬＤ活性は最大であった（図２）。この時点（６０秒、ＬＴＢ4  １００ｎＭ）でのＰＭＮライセートへのＰＳＤＰ（１００ｎＭ）の添加は、ＰＬＤ活性の８９．５±９．７％の阻害を与えた。これらの結果は、集合的に、ＰＳＤＰが植物および哺乳動物双方のＰＬＤの強力な阻害剤であったことを示し、そして、ＰＬＤ活性に伴うＰＳＤＰの作用における末端のリン酸およびイソプレノイド鎖長の双方の決定的な役割を確立する。
【０１３２】
本結果は、ＰＩＰＰの再生を、ＰＭＮの応答の細胞外調節物質により使用される「停止」シグナル伝達のための迅速なスイッチとして特徴づける。ＬＴＢ4受容体の活性化は、増大されたＰＬＤ活性（図２）と一時的に時を同じくしたＰＳＤＰの迅速かつ一過性の減少（図１）を開始した。ＰＳＤＰの再生が基礎の値に戻る際に、ＰＬＤの活性が低下し、逆の関係を示しかつこの中枢的な脂質修飾酵素の調節におけるＰＳＤＰの役割を示唆している。ＬＴＢ4およびＬＸＡ4受容体アゴニスト（１５−エピ−ＬＸａ）に曝露された細胞は、ＰＳＤＰの再生の劇的な切り替えを示し、増大された［32Ｐ］−ＰＳＤＰならびにＰＬＤ活性およびスーパーオキシドアニオン生成の双方の顕著な阻害を与えた（図１および２）。加えて、合成のＰＳＤＰは単離されたＰＬＤの選択的かつ強力な阻害剤であり（図３、表Ｉ）、これは他の緊密に関係する脂質により共有されない特性である。一緒にすると、ＰＳＤＰレベルとＰＬＤ活性との間の相反する関係、ならびに組換えヒトＰＬＤ１ｂ、精製されたｃＰＬＤおよびＰＭＮライセート中でのＰＬＤ活性の直接の阻害は、ＰＭＮのＰＬＤ活性の内在性の脂質調節物質としてのＰＳＤＰの役割を支持する。反対する作用（すなわち刺激および阻害）をもつＰＭＮリガンドによる受容体活性化に際して開始されるＰＩＰＰの再生の異なる一時的プロフィルは、ＰＩＰＰの再生およびＰＳＤＰそれ自身が、細胞内シグナル伝達における重要な構成要素として、とりわけ「停止」シグナルとして作用するかもしれないことを示唆している。
【０１３３】
コレステロールはＰＭＮにおける生合成産物でない。なぜなら、それらは、アセテートからのその内在性の形成に必要な雑多な機能の酸化酵素および環化酵素を欠くからである（Ｓｈｅｃｈｔｅｒ，Ｉ．、Ｆｏｇｅｌｍａｎ，Ａ．Ｍ．とＰｏｐｊａｋ，Ｇ．（１９８０）Ａ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｏｆ  ｍｉｘｅｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｘｉｄａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．２１、２７７−２８３）。本知見を考慮すれば、ＰＭＮにおける結果として生じる生合成のスクアレンでの終了は、スクアレンの直接の前駆物質ＰＳＤＰのような生成物はコレステロール生合成と別個の機能を担持することを示唆している。これゆえに、ヒトＰＭＮにおいて明らかにされたＰＩＰＰのシグナル伝達経路が他の細胞型に広がっているかも知れないことがありそうである。ＰＳＤＰの形成は、メバロン酸およびポリイソプレニルホスフェートの生合成に影響を与えることが既知の食餌の影響に加え、可溶性の免疫刺激および増殖因子によってもまた活発に調節されている（図１Ｂ、Ｃ）。例えば顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子はＰＭＮにおけるＰＳＤＰの再生を増大させる一方、化学走性ペプチドｆＭＬＰは（数秒以内で）ＰＳＤＰの迅速な減少およびＰＳＭＰの相反する増大を誘発し、これらは５〜１０分以内に基礎に戻る（Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）。ＰＩＰＰの再生のこの時間経過は、大きさおよび程度において、ＰＳＤＰのＬＴＢ4に開始される減少に類似であり（図１ＢおよびＣ）、そして、ＰＳＤＰにより阻害されるＯ2-生成のような活性化する好中球応答の時間経過と良好に相互に関係する。末梢血ＰＭＮ中のＰＳＤＰの存在は、内在性の供給源からそれらがコレステロールを生成させる能力がないこと、多様な分類の受容体アゴニストの受容体に媒介される炎症刺激に応答してのその迅速な再生、およびナノモル濃度レベルでＰＬＤ活性およびＮＡＤＰＨ酸化酵素を阻害するその能力にもかかわらず、新規の負の細胞内シグナルとしてのＰＳＤＰの役割を支持する証拠である。従って、この新たに明らかにされたＰＩＰＰシグナル伝達は、活性化される場合に迅速に正の細胞内刺激（例えばイノシトール三リン酸、ジアシルグリセロールおよびＣａ2+）を生成させる、十分に認識されたホスホチジルイノシトールシグナル伝達経路（Ｐｅｔｔｉｔ，Ｔ．Ｒ．、Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．、Ｈｏｒｔｏｎ，Ｔ．、Ｌｉｏｓｓｉｓ，Ｃ．、Ｌｏｒｄ，Ｊ．Ｍ．とＷａｋｅｌａｍ，Ｍ．Ｊ．Ｏ．（１９９７）Ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄａｔｅ  ｇｅｎｅｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅｓ  Ｃ  ａｎｄ  Ｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，  ｈａｖｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２、１７３５４−１７３５９に概説される）に対照的に、負のシグナルレベルを低下させるよう機能するかも知れない。
【０１３４】
先導的非ステロイド性抗炎症薬アスピリンは、完全に解明されるべきままである機構によるコレステロール生合成もまた達成する（Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ，Ｊ．Ｌ．、Ｂａｋｅｒ，Ｄ．Ｇ．、Ｖｉｌｌａｎｕｅｖａ，Ｔ．Ｇ．、Ａｓａｎｚａ，Ａ．Ｐ．とＣａｐｕｚｚｉ，Ｄ．Ｍ．（１９９２）Ｌｉｖｅｒ  ｌｉｐｉｄ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｏｆ  ａｄｕｌｔｓ  ｔａｋｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｏｓｅｓ  ｏｆ  ａｓｐｉｒｉｎ．Ｌｉｐｉｄｓ  ２７、３１１−３１４）。アスピリンは、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）のその十分に認識された阻害を越えて、アスピリンにアセチル化されるＣＯＸ−２および５−リポキシゲナーゼによる細胞と細胞の相互作用の間に、１５−エピ−ＬＸ（天然の１５−Ｓを含有するＬＸの炭素１５−Ｒ−エピマー）を生成させる抗炎症回路を定位置に設定するよう、この系を略奪する可能性がある（図１Ａ、およびＣｈｉａｎｇ，Ｎ．、Ｔａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｃｌｉｓｈ，Ｃ．Ｂ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．、Ｔａｉ，Ｈ．−Ｈ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９８）Ａｓｐｉｒｉｎ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−ｌｉｐｏｘｉｎ  Ａ4  （ＡＴＬ）  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｐｅｒｉｔｏｎｉｔｉｓ  ｅｘｕｄａｔｅｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  １５−ｅｐｉ−ＬＸＡ4  ＥＬＩＳＡ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐｅｒ．Ｔｈｅｒ．２８７、７７９−７９０）。これらのアスピリンに誘導されるＬＸは抗炎症および抗増殖特性を担持し（Ｃｌａｒｉａ，Ｊ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９５）Ａｓｐｉｒｉｎ  ｔｒｉｇｇｅｒｓ  ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ  ｕｎｄｅｓｃｒｉｂｅｄ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｅｉｃｏｓａｎｏｉｄｓ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ−ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９２、９４７５−９４７９；Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｌｉｐｏｘｉｎｓ  ａｎｄ  Ｎｏｖｅｌ  Ａｓｐｉｒｉｎ−Ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  １５−ｅｐｉ−Ｌｉｐｏｘｉｎｓ：Ａ  Ｊｕｎｇｌｅ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｒ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｙ  Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ５３、１０７−１３７）、かつ、アスピリンの有益な治療作用の構成要素を媒介することができる。本実験で観察されるとおり、１５−エピ−ＬＸ模倣物によるＬＸＡ4受容体の活性化は、ＬＴＢ4受容体により開始されるＰＳＤＰの再生を反転させ、ＰＳＤＰレベルの上昇につながった（図１）。１５−エピ−ＬＸａがＰＬＤ活性およびスーパーオキシドアニオン生成の双方を阻害した（図２）ため、これらの結果は、ＰＩＰＰの再生を過剰な炎症応答のアスピリンの阻害の細胞の基礎の一構成要素として関係させる。調節するＬＴＢ4の刺激作用に加え、ＬＴＢ4受容体シグナル伝達の阻害のこの新規の機構は、宿主防禦においてより広範な役割もまた演じているのかも知れない。なぜなら、この受容体は最近、ＨＩＶ−１の補助受容体として同定されたからである（Ｏｗｍａｎ，Ｃ．、Ｇａｒｚｉｎｏ−Ｄｅｍｏ，Ａ．、Ｃｏｃｃｈｉ，Ｆ．、Ｐｏｐｏｖｉｃ，Ｍ．、Ｓａｂｉｒｓｈ，Ａ．とＧａｌｌｏ，Ｒ．（１９９８）Ｔｈｅ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ  Ｂ4  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｙｐｅ  ｏｆ  ｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｅｄｉａｔｉｎｇ  ｅｎｔｒｙ  ｏｆ  ｐｒｉｍａｒｙ  ＨＩＶ−１  ｉｓｏｌａｔｅｓ  ｉｎｔｏ  ＣＤ４−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５、９５３０−９５３４）。
【０１３５】
ＰＬＤによるＰＣのＰＡへの加水分解は、ＰＭＮの活性化の間の広範な受容体分類による経膜的シグナル伝達で決定的であるようである（Ｏｌｓｏｎ，Ｓ．Ｃ．とＬａｍｂｅｔｈ，Ｊ．Ｄ．（１９９６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ  ８０、３−１９）。Ｇタンパク質に結合される（ｌｉｎｋｅｄ）受容体および受容体チロシンキナーゼの双方がＰＬＤを活性化する。白血球においては、ＰＫＣαを包含する数種の因子（キナーゼに依存しない様式で）、および増大された細胞内カルシウムが、ＰＬＤ１を活性化することができる（Ｅｘｔｏｎ，Ｊ．Ｈ．（１９９７）Ｎｅｗ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２、１５５７９−１５５８２）。ＰＭＮにおけるｆＭＬＰに刺激されたＰＬＤの活性は、ＡＤＰ−リボシル化因子（ＡＲＦ）および小型のＧＴＰアーゼ、ＲｈｏＡの膜会合により増大される（Ｆｅｎｓｏｍｅ，Ａ．、Ｗｈａｔｍｏｒｅ，Ｊ．、Ｍｏｒｇａｎ，Ｃ．、Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．とＣｏｃｋｃｒｏｆｔ，Ｓ．（１９９８）ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  Ｒｈｏ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｍｅｄｉａｔｅ  ｆＭＬＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３、１３１５７−１３１６４）。ここでかなり興味深いことに、ＰＳＤＰは調節タンパク質の非存在下で組換えｈＰＬＤ１ｂを直接阻害した（表Ｉを参照されたい）。これらの結果は、ＰＳＤＰはＰＬＤをその触媒中心で阻害することができ、また、触媒中心が保存されているＰＬＤ１ａおよびＰＬＤ２アイソフォームのような他のＰＬＤアイソフォームで作用することがありそうであることを示唆する。ＰＬＤの内在性の阻害剤として作用するＰＳＤＰの能力は、ここで明らかにされた構造活性相関を満たす設計による、より強力なＰＬＤ阻害剤の製造のための鋳型として今や作用することができる、ＰＳＤＰの独特の三次元および物理的化学的特性から生じることがありそうである。
【０１３６】
複雑な宿主応答におけるＰＭＮの活性化の調節は、可溶性の媒介物質、および、とりわけ、ここでＰＩＰＰの再生の顕著に異なる特徴を与えた（図１）、ＬＴおよびＬＸのような反対する作用をもつオータコイドにより部分的に制御されている（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．、Ｈａｅｇｇｓｔｒｏｍ，Ｊ．Ｚ．とＬｅｓｌｉｅ，Ｃ．Ｃ．（１９９６）Ｌｉｐｉｄ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｎｅｔｗｏｒｋｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：ｕｐｄａｔｅ  ａｎｄ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１０、１１４７−１１５８）。大部分の細胞型において、ＰＳＤＰは、２個のＦＤＰの頭部と頭部の縮合を触媒するミクロソームのスクアレン合成酵素によるコレステロール産生における生合成中間体として認識されている（Ｊａｒｓｔｆｅｒ，Ｍ．Ｂ．、Ｂｌａｇｇ，Ｂ．Ｓ．Ｊ．、Ｒｏｇｅｒｓ，Ｄ．Ｈ．とＰｏｕｌｔｅｒ，Ｃ．Ｄ．（１９９６）Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｓｑｕａｌｅｎｅ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ｔｅｒｔｉａｒｙ  ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｉｎｙｌ  ｃａｔｉｏｎｉｃ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｅｓｑｕａｌｅｎｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔｏ  ｓｑｕａｌｅｎｅ．Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１８、１３０８９−１３０９０）。ＰＭＮにおけるＰＳＤＰのリガンドに稼働される迅速な再生は、膜中のＬＴＢ4およびＬＸＡ4受容体の近傍で発生することがありそうであり、そして１）新規の生合成および／もしくは代謝経路、または２）小胞体から膜ドメインまでのタンパク質とのＰＩＰＰの細胞内トラフィッキング（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）から生じることができるＰＳＤＰの非ミクロソームのプールを示唆する。ＡＴＰからＰＳＤＰ（しかしＦＤＰでない）への［32Ｐ］の取込み（結果を参照）は、ＰＭＮにおけるＰＳＤＰ形成の新規経路を支持するさらなる証拠である。本結果は、ＰＩＰＰの再生が、細胞表面受容体の活性化に結びつけられ、また、反対する生物学的作用をもつ細胞外リガンドの細胞内伝播に関与することを示唆する。本作業モデルにおいて、「負の脂質シグナル」（すなわちＰＳＤＰ）は、「休止」細胞において爪車装置のように設定点で保持される。入ってくる正のシグナル（ＬＴＢ4、ｆＭＬＰなど）がこの阻害性脂質の分解および不活性化（例えば、不活性の一リン酸種ＰＳＤＭＰへのＰＳＤＰの再生）を開始する（図１Ａおよび参考文献２２）。従って、ＰＩＰＰの再生は選んだ細胞過程の活性化の閾をなす（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）細胞内の正のシグナルの装備を可能にする。この型のシグナル伝達が、化学走性、顆粒の流動化およびスーパーオキシドアニオン生成のようなＰＭＮの高度に特化された機能的応答を刺激するＬＴＢ4のようなアゴニストにより必要とされる選択性およびかたい結合を説明するのかも知れない。細胞のシグナル伝達のこのモデル、すなわち負の脂質シグナルの受容体に開始される分解が他の受容体および細胞型で起こる程度は、さらなる研究のため存続する。
【０１３７】
要約すると、ヒトＰＭＮにおけるＰＩＰＰのリガンドに稼働される迅速な再生、およびナノモル濃度レベルでのＰＬＤ活性の直接の阻害は、細胞内シグナルとしてのＰＳＤＰの役割を支持し、そして、それによりＰＳＤＰが細胞応答を調節することができる新規の細胞内標的を提供する（Ｌｅｖｙ，Ｂ．Ｄ．、Ｐｅｔａｓｉｓ，Ｎ．Ａ．とＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９７）Ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｉｎ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８９、９８５−９８９）。ＰＩＰＰの広範な存在、ならびに植物および動物界におけるＰＬＤの決定的な役割を考えれば、ヒトＰＭＮにおけるここで最初に確立されたＰＩＰＰの再生およびＰＬＤの直接の阻害は、他の細胞型および種での細胞のシグナル伝達においてより広範な意味を有することができる（Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．、Ｓａｑｉｂ，Ｋ．Ｍ．、Ｈｏｄｇｋｉｎ，Ｍ．Ｎ．、Ｂｒｏｗｎ，Ｆ．Ｄ．、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｔ．Ｒ．、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｓ．とＷａｋｅｌａｍ，Ｍ．Ｊ．Ｏ．（１９９７）Ｒｏｌｅ  ａｎｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２５、１１５７−１１６０；Ｂａｃｈ，Ｔ．Ｊ．（１９９５）Ｓｏｍｅ  ｎｅｗ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｐｌａｎｔｓ――ａ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｌｉｐｉｄｓ  ３０、１９１−２０２）。本結果は、内在性の細胞内脂質によるシグナル伝達に関与するホスホリパーゼの直接の阻害を示し、また、細胞応答の制御における脂質とタンパク質の相互作用、すなわち抑制物質脂質の受容体に開始される分解（アスピリンに誘導される１５−エピマーのＬＸの作用を介してアスピリン摂取による調節にもまたさらされる）についての新たなパラダイムを述べた、最初のものである。一緒にすると、これらの結果は、ＰＩＰＰシグナル伝達経路が薬理学的介入においてもまた興味深いかも知れないこと、および、とりわけ、ＰＳＤＰのコンホメーションが新規阻害剤の設計の鋳型として作用する可能性があることを示唆している。
【０１３８】
【表２】
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【０１３９】
【表３】
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【０１４０】
【表４】
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【０１４１】
【表５】
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【０１４２】
当業者は、上述された態様に基づく、本発明のさらなる特徴および利点を認識するであろう。従って、本発明は、付属として付けられた請求の範囲により示されるようなものを除き、とりわけ示されかつ記述されたものにより制限されるべきでない。背景の節にあるものを包含する、本明細書で引用される全部の刊行物および参考文献は、はっきりと、そっくりそのまま引用により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
本発明は、付随する図面とともに利用される以下の詳細な記述からより完全に理解することができ、ここで：
【図１】  発明にかかる、アスピリンに誘導されるＬＸＡ4類似物によるヒトＰＭＮ：生合成スイッチにおいてＬＴＢ4がＰＳＤＰを迅速に再生することを示す。図Ａ：アスピリンに誘導される１５−エピ−ＬＸＡ4生合成のスキームおよび安定な類似物、１５−エピ−１６−パラフルオロフェノキシ−ＬＸＡ4メチルエステル（１５−エピ−ＬＸａ）の構造（左）、ならびにＰＩＰＰシグナル伝達の仮説のスキーム（右）。ＰＭＮを［γ−32Ｐ］−ＡＴＰで標識し、そしてＬＴＢ4（●、１００ｎＭ）、１５−エピ−ＬＸａ（◆、１００ｎＭ）、ベヒクル（□、０．１％エタノール）もしくは１５−エピ−ＬＸａ（１００ｎＭ、５分）次いでＬＴＢ4（▲、１００ｎＭ）とともにインキュベートした（１２．５×１０6ｍｌ-1、３７℃）。ケン化不可能な脂質を抽出しかつＴＬＣにより分離し、そしてホスホイメージングにより［32Ｐ］の取込みを定量した（方法を参照されたい）。値は濃度計の測定値である。図Ｂは代表的な時間経過（ｎ＝５）を報告し、そして図Ｃは６０秒での変化（平均±Ｓ．Ｅ．）を示す。*はスチューデントのｔ検定によりＰ＜０．０５。
【図２】  発明にかかる、１５−エピ−ＬＸＡ4類似物がＬＴＢ4に刺激されるＰＬＤ活性およびスーパーオキシドアニオン生成を阻害することを立証する。ＰＳＤＰを測定するのに使用されたＰＭＮの同一のアリコートから細胞ライセート（細胞２〜５×１０6個、９０〜１３０μｇタンパク質）を調製し（図１および方法を参照されたい）、３７℃に加温し、そしてＰＣ（３０ｍＭ  ＣａＣｌ2を含む５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５中２ｍＭ）に曝露した。３０秒間隔で反応を停止し、そしてコリンの放出を定量した（２６）。図Ａ中の値は、コリン放出に対する１５−エピ−ＬＸａの影響の代表的なもの（ｎ＝５、ｄ＝４）であり、また、図Ｂは６０秒での変化（平均±Ｓ．Ｅ．）を示す。新たに単離されたヒトＰＭＮによるスーパーオキシドアニオンの生成を、ＬＴＢ4（１００ｎＭ）、１５−エピ−ＬＸａ（１００ｎＭ）、および増大する濃度の１５−エピ−ＬＸａ（１〜１００ｎＭ、５分、３７℃）次いでＬＴＢ4（１００ｎＭ、１０分、３７℃）について測定した（１０分、３７℃）。図Ｃ中に報告される値はｎ＝３の別個のＰＭＮドナーについての平均±Ｓ．Ｅ．である。*はスチューデントのｔ検定によりＰ＜０．０５。
【図３】  発明にかかる、ＰＳＤＰがホスホリパーゼＤを阻害することを立証する。精製されたＰＬＤ（３単位のＥＣ３．１．４．４．／１２５μｌ）を加温（３分、３０℃）し、そして、３０ｍＭ  ＣａＣｌ2を含む５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）中でＰＳＤＰ（１０〜１０００ｎＭ、５分、３０℃）もしくはベヒクル（０．０４％のエタノール最終濃度）次いでＰＣ（０．５〜５ｍＭ）に曝露した。３０秒間隔で反応を停止し、そして図２の説明中のとおりコリン放出を定量した。値は、ＰＳＤＰの非存在下（●、ｒ2＝０．９６３）での反応についてのｎ≧４の平均、ならびにＰＳＤＰ（△、１０、１００および１０００ｎＭについてそれぞれｒ2＝０．９９５、０．９７１および０．９５３）を伴うｎ≧３の平均を表す。ＣＳ  Ｃｈｅｍ３Ｄ  Ｐｒｏソフトウェア（ケンブリッジソフト  コーポレーション（ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ、Ｃｏｒｐ．）、マサチューセッツ州ケンブリッジ）を使用して、ＰＳＤＰのエネルギー最小化モデルを計算した（挿入図）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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