(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩酸ドキソルビシン含有溶液からの塩酸ドキソルビシンの晶析法であって、塩酸ドキソルビシン含有溶液が、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、アセトンおよびこれらの２種以上の混合物からなる群より選ばれる塩酸ドキソルビシンに対する貧溶媒とドキソルビシンを含んでなる水性溶液であり、そして４５℃〜７５℃の温度で晶析を行うことを特徴とする晶析法。
【請求項２】
貧溶媒がエタノールおよびアセトンの１種または混合物である請求項１記載の晶析法。
【請求項３】
前記水性溶液における水対貧溶媒が１：２〜１：１０の割合にある請求項１または２に記載の晶析法。
【請求項４】
晶析後に乾燥処理された塩酸ドキソルビシンの結晶集合物が、
（Ａ）２重量％以下の水分と、１.５重量％以下の前記貧溶媒を有し、
（Ｂ）投影像による円相当径として、１５μｍ〜８９μｍの平均粒子径を有し、そして
（Ｃ）２０ｍｌ（内径３０ｍｍ）のビーカーに水５ｍｌを入れ、塩酸ドキソルビシンの結晶試料５０ｍｇを入れ、２５℃において磁気攪拌子（直径６ｍｍ×長さ１０ｍｍ）を用い６００回転／分にて試料を攪拌し、３０秒毎に肉眼で溶解状態を観察しながら完全に溶解するまでの時間を測定した場合に、該時間が２分以下である溶解性を有する、
ものである請求項１〜３のいずれかに記載の晶析法。
【請求項５】
（Ａ）水分が２重量％以下であり、そしてメタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、アセトンおよびこれらの２種以上の混合物からなる群より選ばれる貧溶媒が１.５重量％以下であり、
（Ｂ）平均粒子径が投影像による円相当径として１５μｍ〜８９μｍであり、かつ
（Ｃ）溶解性が、２０ｍｌ（内径３０ｍｍ）のビーカーに水５ｍｌを入れ、塩酸ドキソルビシンの結晶試料５０ｍｇを入れ、２５℃において磁気攪拌子（直径６ｍｍ×長さ１０ｍｍ）を用い６００回転／分にて試料を攪拌し、３０秒毎に肉眼で溶解状態を観察しながら完全に溶解するまでの時間を測定した場合に、該時間が２分以下である、
特徴を有する塩酸ドキソルビシンの結晶集合物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、塩酸ドキソルビシンの晶析法および一定の特性を有する塩酸ドキソルビシンの結晶集合物に関する。
背景技術
ドキソルビシン（また、アドリアマイシンとも称されている）は、次式
0004533537.tif 000002
で表され、ストレプトミセス  ピューセテウス  バル  カエシウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｅｕｃｅｔｉｃｕｓ ｖａｒ ｃａｅｓｔｉｕｓ）により産生される抗生物質である。また、ドキソルビシンは、ダウノルビシン（また、ダウノマイシンとも称されている）からの化学的転化によっても提供されている。この塩酸塩（すなわち、塩酸ドキソルビシン）は、広い抗癌スペクトラムを有し、悪性リンパ腫、肺癌、消化器癌、乳癌、等の化学療法において優れた効能を有する。現に、塩酸ドキソルビシンの液剤（注射用水や生理食塩液の溶液）は、上記の各種癌の臨床上の治療に広く使用されている。
かような液剤用の原料として、粉末状や結晶状の塩酸ドキソルビシンが提供されているが、現在入手しうるものは必ずしも水に対する溶解性において満足しうるものとはいえない。特に、治療現場で使用直前に液剤を調製する場合には、水中でより迅速に溶解する固形状塩酸ドキソルビシンの提供が望まれるであろう。
一方、粉末状または結晶状塩酸ドキソルビシンは、通常、有機溶媒系または有機溶媒を含有する水性溶媒系からの沈殿または晶析によって得られているが、残留溶媒の低減または除去に難点があるか、あるいは目的の結晶の収率が低い場合が多い。
現在、医療用として市販されている固形の塩酸ドキソルビシンは、その使用目的上残留溶媒は許容量以下であるものの、周囲温度（２５℃）における水中での撹拌処理では、溶解するまで約１０分かかるものもある。しかも、大部分は水に溶解した後も、小さな溶け残りが観察される場合もある。塩酸ドキソルビシンの標準であるＵＳＰの標準品（（財）日本公定書協会；東京都渋谷区渋谷２−１２−１５から入手できる）は、中でも水に対する溶解性に優れているが、これもまた、溶解処理後に小さな溶け残りが観察される場合がよくある。
発明の開示
したがって、本発明の目的は、晶析に伴う収率の向上は言うまでもなく、残留溶媒を低減するのに優れ、しかも水中での溶解性の高い最終塩酸ドキソルビシン製品をもたらしうる晶析法、ならびにかような特性を具備した塩酸ドキソルビシン結晶集合物を提供することにある。
本発明者らは、塩酸ドキソルビシンの晶析法について検討してきたところ、晶析についての一般的な常識（例えば、特開昭５９−１１８７９７号公報または米国特許第４，８６１，８７０号明細書参照）と異なり、ある一定の温度以上において、特定の溶媒系で晶析を実施することにより、上記目的が達成できることを、ここに、見い出した。
したがって、本発明は、塩酸ドキソルビシン含有溶液からの塩酸ドキソルビシンの晶析法であって、塩酸ドキソルビシン含有溶液が、塩酸ドキソルビシンに対する貧溶媒およびドキソルビシンを含んでなる水性溶液であり、そして４０℃以上の温度で晶析を行うことを特徴とする晶析法に関する。
また、本発明は、（Ａ）  水分が、２重量％以下であり、そして他の総残留溶媒が１．５％以下であり、
（Ｂ）  平均粒子径が、投影像による円相当径として１５μｍ以上であり、かつ
（Ｃ）  溶解性が、２５℃における撹拌条件下の水中で約２分以下で実質的に完全な溶解を示す、
特徴を有する塩酸ドキソルビシンの結晶集合物にも関する。
発明を実施するための最良の態様
本発明に従う晶析法に供することのできる塩酸ドキソルビシン（以下、ＤＯＸ・ＨＣｌともいう）は、その製造法や精製段階の如何に係わりなく、ある一定以上の純度をもつものであればよい。すなわち、本発明の晶析法は、粗精製ＤＯＸ・ＨＣｌを得るための予備的な精製段階および最終的な製品を得るための最終精製段階において使用できる。しかし、本発明に従う晶析法は、その残留溶媒の低減容易性や水中での高い溶解性の結晶が得られる等の作用、効果を考慮すると、ＤＯＸ・ＨＣｌの最終精製段階で使用するのが好適である。したがって、主として最終精製段階としての使用を念頭において、以下、本発明を説明するが、これらに限定されるものでないことを理解されたい。
本発明に従う晶析法に供されるＤＯＸ・ＨＣｌ含有溶液は、ドキソルビシン（以下、ＤＯＸともいう）およびＤＯＸに対する貧溶媒を含む水性溶液である。かような水性溶液は、まずＤＯＸ・ＨＣｌを水に溶解するか、またはＤＯＸを希塩酸水（例えば、０．００１ＮＨＣｌ）に溶解するが、場合によって、前記水には後述する貧溶媒をはじめとする水混和性有機溶媒を含めていてもよい。次に、こうして調製されたＤＯＸ・ＨＣｌ含有水性溶液（以下、溶解溶液という）は、通常、ＤＯＸに対する貧溶媒と混合される。この混合は、ＤＯＸ・ＨＣｌ含有水性溶液と貧溶媒を一度に混合するか、あるいは前者を少しずつ後者に加えるかまたは逆に後者を少しずつ前者に加えるかの、いずれによってもよい。
貧溶媒としては、水と自由に混和しうる有機溶媒であって、本発明の目的に沿うものであれば如何なるものであってもよいが、一般的に、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトニトリル、アセトンおよびこれらの１種以上の混合溶媒を挙げることができる。これらのうち、エタノール、アセトンおよびエタノールとアセトンの混合溶媒が好ましく、なかでもエタノール、エタノールとアセトンの混合溶媒が特に好ましい。エタノールとアセトンの混合溶媒は、エタノール対アセトンが４：１〜１：１、特に、２．５：１の混合割合のものが好ましい。
一方、前記溶解溶液に有機溶媒を含める場合の有機溶媒は、前記貧溶媒のいずれであってもよい。しかし、エタノールを水（酸性水）に加えることが好ましく、その際、水対エタノールが７．５：５〜７．５：１５の割合のものが、特に好ましい。
かような溶媒系のうち、前記溶解溶液における溶媒が、好ましいとした割合の水とエタノールからなり、貧溶媒が、好ましいとした割合のエタノールとアセトンからなる、溶媒系の組み合わせが特に好ましい。
かかる溶解溶液と貧溶媒の組み合わせは、ＤＯＸ・ＨＣｌの含有量に応じて変動しうるが、一般的に、溶解溶液対貧溶媒を１：２〜１：１０、好ましくは約１：５の割合とする。
かような溶媒系からなるＤＯＸ・ＨＣｌ含有溶液は晶析前にＤＯＸ・ＨＣｌが溶解している状態にあればよく、ＤＯＸ・ＨＣｌの濃度は限定されるものでない。しかし、一般的には、ＤＯＸ・ＨＣｌの１０（重量／容量）％まで、８〜４．５（重量／容量）％の濃度にするのが好ましい。
本発明に従えば、晶析を行う温度は、４０℃以上に設定することが必須である。この温度は、ＤＯＸ・ＨＣｌ含有水性溶液が４０℃以上で調製された場合は、そのままもしくは若干温度を低下してもよいが、通常は、５℃〜３５℃で該ＤＯＸ・ＨＣｌ含有水性溶液を調製し、これらの温度から４０℃以上に昇温して晶析を行う。４０℃以上の温度、好ましくは４５℃〜７５℃、特に好ましい温度は５０℃〜６５℃である。なお、本発明に従えば、晶析中のいずれの時期に前記温度範囲内の温度下にＤＯＸ・ＨＣｌ含有溶液を置いてもよいが、好ましくは、晶析工程全体を通して前記温度範囲内でＤＯＸ・ＨＣｌ含有水性溶液を撹拌するかまたは静置する。また、晶析温度は、前記温度範囲内で変動してもよいが、操作の便宜上、ほぼ一定の温度に設定しておくのがよい。
晶析に要する時間は、目的とするＤＯＸ・ＨＣｌの結晶が所望の収率で得られる時間を、使用する溶媒系に応じて選べばよい。しかし、上記の好ましいとした条件下では、一般的に１時間以上、好ましくは２〜２４時間、場合によって、２．５〜５時間で高収率で目的のＤＯＸ・ＨＣｌが得られる。
こうして、目的のＤＯＸ・ＨＣｌの結晶が形成される。これらの結晶は、晶析溶液から分離、採取され、乾燥される。
本発明の晶析法によって得られる前記結晶は、平均粒子径が約１５μｍ以上であり、粒子径分布も極めて狭いので、分離、採取は適当なフィルターを用いる濾過により都合よく行うことができるが、これに限定されず、他のそれ自体既知の分離手段を用いることもできる。
乾燥手段は、ＤＯＸ・ＨＣｌの生物学的活性に悪影響を及ぼさない手段であれば、如何なる手段を選ぶこともできるが、一般的には、真空（減圧）乾燥法によるのが好ましい。また、真空乾燥に先立って、周囲温度での風乾を行ってもよい。真空乾燥を行う場合の温度は、５℃〜７５℃、好ましくは４０℃〜６０℃に設定することができ、減圧の程度は任意に選ぶことができる。晶析に供する原料として、ＨＰＬＣ法による力価が約９７％（乾物換算）以上のものを使用した場合、真空乾燥時間は、１時間以上とすることにより、通常、ＵＳＰ（ＵＳＰ２３のＤＯＸ・ＨＣｌ）規格として求められる純度試験（ＨＰＬＣによる）、残留溶媒試験（ＧＣによる）および力価試験（ＨＰＬＣによる）に合格する製品が得られる。
本発明に従う晶析法を介して得られるＤＯＸ・ＨＣｌ結晶は、例えば、５〜１０ｍｍＨｇの減圧下、４０℃での４時間の真空乾燥による場合でさえ、結晶全体として下記の特性：
（Ａ）  水分が、２重量％以下であり、そして他の総残留溶媒は１．５％以下であり、
（Ｂ）  平均粒子径が、投影像による円相当径として１５μｍ以上であり、かつ
（Ｃ）  溶解性が、２５℃における撹拌条件下の水中で約２分以下で実質的に完全な溶解を示す、
を有する結晶集合物を得ることができる。なお、本発明にいう「結晶集合物」とは各結晶が特定の物理的結合力等によって凝集したものではなく、単なる各結晶の集団を意味する。
かような結晶集合物は、前述の（財）日本公定書協会からＵＳＰ標準品として入手できるＤＯＸ・ＨＣｌ結晶集合物をはじめとする市販品に比べ、溶解性が有意に高い点で、既知のＤＯＸ・ＨＣｌと明確に区別できる新規の結晶集合物である。
したがって、前記の結晶集合物も本発明の一つの態様である。本発明の晶析法で貧溶媒として、エタノールおよびアセトンを使用した場合、前記結晶集合物は、総結晶集合物重量当たり、水分含有量が約１％以下であり、アセトンが約０．４％以下であり、そしてエタノールが約１．０％以下のものを提供することができる。かような結晶集合物は、本発明の好ましい態様である。
本発明に従う結晶集合物は、前記溶解性が１．５〜２分またはそれ以下にあるのがさらに好ましい態様である。
加えて、本発明に従うＤＯＸ・ＨＣｌ結晶集団は、吸湿性がＵＳＰ標準品に比べて同等またはより低いにもかかわらず、前記のように良好な溶解性を示す点に特徴がある。
こうして、本発明によれば、ＤＯＸ・ＨＣｌの液剤を提供するのに適したＤＯＸ・ＨＣｌ結晶集合物を得ることのできる新規の晶析法および結晶集合物が開示される。
以下の具体例により本発明をさらに具体的に説明するが、これらの例は、本発明の理解を容易にすることのみを目的とするものであり、本発明をこれらの例に限定することを意図するものではない。
本発明にいう各種特性の決定方法：
＜溶解性試験＞
２０ｍｌ（内径３０ｍｍ）のビーカーに水５ｍｌを入れ、ＤＯＸ・ＨＣｌ結晶試料５０ｍｇを入れて、２５℃において磁気撹拌子（直径６ｍｍ×長さ１０ｍｍ）を用い約６００回転／分にて試料を撹拌する。３０秒毎に肉眼で溶解状態を観察しながら、完全に溶解するまでの時間を測定する。
＜残留溶媒の測定＞
ａ）  水分の測定は、試料１０〜１５ｍｇについて平沼産業製ＡＱ−６型微量水分測定装置を用いる電量滴定法に従って行った。測定の際、発生液にはＨＹＤＲＡＮＡＬ−Ｃｏｕｌｏｍａｔ  ＡＫ／ケトン用（林純薬工業）を、そして対極液にはＨＹＤＲＡＮＡＬ−Ｃｏｕｌｏｍａｔ  ＣＧ−Ｋ／ケトン用（林純薬工業）をそれぞれ用いた。
ｂ）  貧溶媒量の測定は、次のようなガスクロマトグラフィー（ヘッドスペース法）によった。ガスクロマトグラフＧＣ−１４Ａ（水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）を装備）（島津製作所製）に、カラムとしてＪ＆Ｗ社製のＤＢ−ＷＡＸを装着し、流量約１．０ｍｌ／分のヘリウムを用いる条件下で試料をヘッドスペース法により分析し、試料中の貧溶媒量を算出した。
＜吸湿性＞
次のようなカップ法によった。具体的には、吸湿性は直径６ｍｍ、深さ６ｍｍの円筒状カップに試料約１５〜２０ｍｇを入れ、一定の温度（２５℃）および相対湿度（５０〜６０％ＲＨ）下に１５分間放置したときの重量変化を測定して評価した。
なお、以下の各例では、重量増加率が０．４０％以上を吸湿性が大（−）、０．２０％以上０．４０％未満を吸湿性が中（±）、０．２０％未満を吸湿性が小（＋）とする評価基準で示す。
＜平均粒子径＞
平均粒子径は、以下に示す、顕微鏡法（投影像）により、粒子の投影面積と同じ面積を持つ円の直径で表す、所謂Ｈｅｙｗｏｏｄ径（円相当径）として表す。  方法：少量の結晶をスライドガラスにのせて親油性の界面活性剤（セスキオレイン酸ソルビタン）を１〜２滴たらして分散させ、写真撮影装置付き偏光顕微鏡（撮影レンズ３．３倍、対物レンズ２０倍）を用いて撮影した。写真上で代表的な任意の結晶１０個を選び、その長径と短径を測った。長径×短径を結晶の（投影）面積とし、それと同じ面積の円の直径を粒子径とした。
例１〜５９：晶析および結晶の採取
所定量のＤＯＸ・ＨＣｌ（力価：約９６０〜９８０μｇ／ｍｇ）を必要により０．００１Ｎ塩酸を加えた下記表Ｉに記載の溶解溶媒系に、室温下（約２５℃）で溶解し、次いで脱脂綿を用いて濾過した。濾液を貧溶媒と一緒にし、所定の温度に上昇した後、約１時間撹拌（２００ｒｐｍ）した。沈殿する結晶を濾取し、貧溶媒１０ｍｌで洗浄した後、４０℃で一晩、真空（５〜１０ｍｍＨｇ）下で乾燥した。
各例で用いたＤＯＸ・ＨＣｌの量、溶媒量、混合溶媒の場合には混合比（容量／容量）、溶媒の添加方法（溶→貧：溶解溶液を貧溶媒に添加；貧→溶：貧溶媒を溶解溶液に添加；貧→溶／数値ｍｉｎおよび溶→貧／数値ｍｉｎは、それぞれ貧溶媒および溶解溶液を数値の時間（分）をかけて少しずつ添加したことを意味する）、晶析温度（℃）、晶析の際の撹拌速度（ｒｐｍ）、収率（％）、水分含有率（％）、各貧溶媒の含有率（％）、平均粒子径（μｍ）は、それぞれ下記表Ｉ〜ＩＩにまとめる。表中のＡはアセトンを、Ｅはエタノール、ＡＮはアセトニトリルを、そしてＩＰはイソプロパノールを意味する。また、晶析温度で２５→６０とあるのは、２５℃から６０℃へ昇温（約３．５℃／分）したことを意味する。表中の空白欄は測定しなかったことを意味する。表ＩＩ中、水分（％）、Ａ（％）、およびＥ（％）は、それぞれ残留溶媒を示し、水分含有率、貧溶媒の含有率を示す。貧溶媒の含有率がアセトニトリルおよびイソプロパノールである場合には、特記している。
0004533537.tif 000003
0004533537.tif 000004
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なお、上記例のうちで、例１〜１８、５８および５９は比較例であり、例１９〜５７は本発明の実施例である。
＜溶解性試験＞
上記溶解性試験を、比較として、ＤＸＲ・ＵＳＰ標準品（Ｌｏｔ  Ｊ）（平均粒子径２８μｍ）、ならびに例２、４６、５１、５５、５６、５７および５８について行った結果を表ＩＩＩにまとめる。
0004533537.tif 000009
産業上の利用可能性
本発明に従う晶析法によれば、高収率でＵＳＰの標準品よりも液剤調製用原料として優れた特性を有する塩酸ドキソルビシン結晶が得られ、特に、これらの結晶は水中での溶解性が有意に高い点に特徴がある。従って、本発明は医薬品製造業において利用できる。