(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
陳皮（Citrus unshiu Mare.）またはマンダリン（Citrus reticulata）から抽出されるチラミンをヒトチロシナーゼ阻害活性成分として、０．０１〜７．０重量％含有する美白化粧料組成物。
【請求項２】
合成又は発酵工程で生成されるチラミンをヒトチロシナーゼ阻害活性成分として、０．０１〜７．０重量％含有する美白化粧料組成物。
【請求項３】
形態が、Ｏ／Ｗエマルション、Ｗ／Ｏエマルション、乳液、ローション、ポマード、ヘアローション、シャンプー、石鹸、スティック、ペンシル、スプレー、ボディオイルから選択されるいずれか一つである請求項１又は２のいずれかに記載の美白化粧料組成物。
【請求項４】
チラミンが、リポソーム、マイクロエマルジョン、マクロ粒子、ミクロ粒子、ナノ粒子、マクロカプセル、ミクロカプセル、ナノカプセルから選択されるいずれか一つの化粧品用キャリアの中に取り込まれたものであることを特徴とする請求項１乃至３いずれか記載の美白化粧料組成物。
【請求項５】
チラミンが、粉体有機ポリマー、タルク、ベントナイトから選択されるいずれか一つに吸収されていることを特徴とする請求項１乃至３いずれか記載の美白化粧料組成物。
【請求項６】
チラミンが、天然抽出又は合成の脂質、ゲル状及び粘性のポリマー、界面活性剤及び乳化剤、水溶性活性剤又は脂溶性活性剤、組織抽出物、海産品抽出物から選択されるいずれか一つと共に使用されることを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の美白化粧料組成物。
【請求項７】
化粧料が、クリーム、芳香剤、ジェル状又はローション状又はクリーム状の日焼け止めや日焼け処理薬、アフターシェービング、脱毛剤、又は脱毛後手入れクリームであることを特徴とする請求項１乃至６のいずれかに記載の美白化粧料組成物。
【請求項８】
肌を色白又は薄い色にしたり、人工又は自然の紫外線に露出されたときの色素沈着を軽減することを特徴とする請求項１乃至７のいずれかに記載の美白化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
表皮の特殊細胞で合成されるメラニンは色素細胞でこれによって皮膚の色が与えられる。普通の肌では、メラニンの合成は種々のファクターによって調整されている。このファクターの中でも良く知られているのが太陽光線で、メラニンは照射される紫外線（ＵＶ）（通常の生活での日光露出や自然の太陽光線照射、又はビューティーサロンのＵＶ照射等）の線量に比例して増加する。これは日焼けとして現われる。比較的軽い或いは生理上の障害としてのメラニンが発生すると、そばかす、ほくろ、広がったしみ（クロアスマ、妊娠シミ）として現われる。老化による自然な生理的障害は多数あるが、そのうちメラニン色素の発生としては不規則に発現する老化性シミがある。
【０００２】
生命に直接関わるのでない種々の不都合を調整するため、化粧品産業が独自の解決法を提供するのは、その当然の役割を果たしているといえる。
肌の色素過剰を手当てするため、多種の化学分子や物質が提供されてきた。しかし、そのうちで化粧品への適用として採用されたものは非常に少ない（かぶれ、法規上の規制、有毒性の問題などがあるため。）。そして、この選択に残ったものはあまり効果的でないのが一般的である。
化粧品又は皮膚薬品の成分としてチラミンを使用することが、この問題に有効な解答を与えることが明らかにされたので、本発明を特許として出願することにした。
【０００３】
主として食物の中に存在する（生チーズ、キャベツ、じゃがいも、鰯、グルイエールチーズ、キアンティ、カマンベールチーズ等）チラミンは、今日まで製薬や化粧品には殆ど使用されていない。チラミンは調剤や診断において使用される（ＥＰ０７９５６１０）、或いは鬱症の治療（ＵＳ４８６８２１８）、及び／又はアルツハイマー病やパーキンソン病（ＥＰ０４０６４８８）の治療、又はコレステロール生成防止（ＵＳ４８５７５２２）剤として使用されてきた。
【０００４】
生化学上の説明では、チラミンはドーパミンの直接前駆体である。ドーパに近い化学構造であるから、チラミンは抗チロシナーゼ効果を有するのではないか、そしてこれによって上記状況でおこるメラニン色素の生成を減少させるような製品が可能であろうという仮定を立てた。
【０００５】
ところで、メラニン細胞は、チロシンがメラニンに変化するときの触媒酵素であるチロシナーゼとＯ−ジフェノールオキシダーゼを含んでいる。その反応は、以下の式で表される。
チロシン⇒ドーパ⇒ドーパキノン⇒ドーパクロム⇒インドールキノン⇒メラニン
【０００６】
アルビノ（色素欠乏症）のヒトは、先天的にＯ−ジフェノールオキシダーゼが欠乏しており、これによってメラニン形成ができず、従って皮膚色素が欠如しているわけである。
【０００７】
本発明の目的は、チラミンがそれ自身はドーパに変化することなく、システムを阻害することによって、メラニン形成を減少するように作用するということを証明するものである。すなわち、メラニンは代替物質ではなく競争阻害物質である。
【０００８】
チラミンは様々な素材料から得ることができる。チラミンを含有する植物は全て原料として利用することができるが、その中でも特に、マンダリン（Citrus reticulata）はチラミンを豊富に含んでいる（Wheaton TA ＆ Stewart I(1970) Lloydia 33：244-254）ので、植物体全体または一部から抽出によってチラミンを得ることができる。
【０００９】
植物全体又はその一部（１５ｇ）を８５ｇの蒸留水に浸漬し、常温で４８時間スクリュー攪拌する。植物は分散して水の体積と同量になる。濾過（８００μｍ）後、抽出液はそのまま使用することができる。
或いは、後述する形態に利用できるように、従来の物質乾燥方法によって乾燥抽出体にすることもできる。
【００１０】
高速液体クロマトグラフィーによる分析によって、このようにして得られた抽出体はチラミンを含んでいることが示される。植物の原産地や収穫時期によってチラミン含有量が異なることがあるが、この分野の専門家であればチラミン含有量が一定になるように抽出体を調整することができる。
【００１１】
マンダリン（Citrus reticulata）抽出からチラミンを収集する方法は、上述のものに限定されない。例えば、浸漬、煎じ法、浸出、還流、超音波やマイクロ波による抽出、洗浄法等の方法でエキス抽出が可能である。方法は例示したものに限定されない。
また抽出溶剤としては、上記のものに限定されず、水、プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン、ポリエチレングリコール、メチルエーテルジグリコール、エチルエーテルジグリコール、環状ポリアルコール、エトキシルジグリコール、プロポキシルジグリコール、アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール）、またはこれらの混合溶媒を使用することができる。
【００１２】
本発明において期待される活性を得るためのチラミンは、以下のように要約される。
・植物の抽出エキスから得られ、例えば陳皮（Citrus unshiu Mare.）、好ましくはマンダリン（Citrus reticulata）から抽出されるものが好ましい。
・あらゆる方法の化学合成からも得られる。
・単独または他の活性分子と組み合わせて使用することができる。
・精製され、リポゾーム等のサポート媒体に付けられる。
・１乃至２４個の炭素原子を含む、直鎖または分岐の、飽和化合物又は不飽和化合物の、或いはヒドロキシル基化合物又はイオウ化合物を含むか含まない、アルキル基分子鎖によって、ＯＨ基又はＮＨ２基に接合したもの。
【００１３】
チラミンは化粧品や皮膚用薬品に使用される植物成分の含有形態として配合される。例えば、以下に二つの成分構成を例示する。
【００１４】
例１  日常クリーム
ボルポＳ２０                        ２．４ｇ
ボルポＳ２                          ２．６ｇ
プロステアリル１５                  ８．０ｇ
ミツロウ                            ０．５ｇ
アビル（登録商標）ＺＰ２４３４      ３．０ｇ
プロピレングリコール                ３．０ｇ
カーボポール（登録商標）１９４１    ０．２５ｇ
トリエタノールアミン                ０．２５ｇ
チラミン                            ５．０ｇ
水分及び防腐剤を加えて１００ｇとする。
【００１５】
例２  ボディーローション美白デオドラント
クリレット３                      ２．５ｇ
ノボル                            ０．９ｇ
フルイラン                        ２．５ｇ
カーボポール９４０                ０．３ｇ
ミツロウ                          ２．０ｇ
トリエタノールアミン              ０．１ｇ
グリセリン                        ５．０ｇ
チラミン                          ３．０ｇ
水分及び防腐剤を加えて１００ｇとする。
【００１６】
以下の例において、チラミンの美白作用効果を証明する。
例３  ヒトチロシナーゼ阻害作用（インビトロ試験）
この例ではドーパミンオキシダーゼの活性が明らかにされる。培養されたヒト正常メラニン細胞（ＭＮＨ）をイゲパル緩衝液と超音波で溶解させ、この抽出細胞をそれぞれ重量濃度０．１％、０．３％、１％のチラミンを含む緩衝液およびチラミンを含まないコントロール液に接触させた。
チロシナーゼの活性度は、Ｌ−ドーパオキシダーゼ活性から、Ｌ−ドーパからつくられたドーパクロムの量を波長４９０ｎｍにおける光学スペクトル濃度測定によって定量化した。反応はＬ−ドーパを加えることにより開始された。
波長４９０ｎｍで、開始より１時間後までは１０分ごとに、２時間後までは３０分ごとに動的変化を追跡した。異なる緩衝液における８回のテスト結果をコントロール液と比較した。阻害作用の平均結果をパーセント表示で以下の表１に記載する。
【００１７】
【表１】
0004393064.tif 000002
【００１８】
この表１の結果によれば、チラミンの存在でチロシナーゼ活性が非常に低下することが示されている。チラミンの存在、非存在がこの実験の唯一の変数であるから、観察された効果はチラミンに由来するものであることは明らかである。また観察されたこのシステムの効果は、明らかに濃度依存性を示しているから、チラミンに特徴付けられる効果といえる。
またこの実験はＬ−ドーパおよびチラミンなしのテストを行い、システムの安定性が確認されている。
【００１９】
例４  チロシナーゼの阻害作用（インビトロ実験）
生理的効果を立証するため、ヒト細胞を使用することは理にかなっているが、試料提供者の個人差があるので、時として結果が対象ごとに大差を示すことは周知の事実である。
この理由から、前記のテスト結果は、チラミンのチロシナーゼに対する阻害効果を疑いなく示すものであるが、他のモデルを使用して別の実験を行った。
この例で用いた細胞は、メラニンを多数生成し、チロシナーゼ活性やメラニン合成の活性に関する研究に広く使用されているメラノーマＢ１６細胞である。
この細胞を培養プレートのくぼみ（１プレートにつき２４個のくぼみが設けてある）に植えつけ、３７℃で２４時間培養した。洗浄後、細胞はチラミン濃度がそれぞれ０．０１％、０．０３％の緩衝液、またチラミンを含まないコントロール液に４８時間接触させた。
比較例として、濃度０．０１×１０−２％のハイドロキノン液を用いた。前記実験と同様、細胞はイゲパル緩衝液で超音波を用い溶解して測定した。活性チロシナーゼ量は共存するタンパク質量当りに換算することで標準化した。
【００２０】
【表２】
0004393064.tif 000003
【００２１】
この結果は、チラミン存在のためチロシナーゼ活性が非常に減少していること、それは相当する濃度のハイドロキノンによるものより良い効果を示している。チラミンの存在、非存在がこの実験の唯一の変数であるから、観察された効果はチラミン由来のものであることは明らかである。また実験は二種類の異なる濃度のチラミンで行われたに過ぎないが、観察されたこのシステムの効果は明らかに濃度依存性を示し、チラミンに特徴付けられる効果といえる。
【００２２】
例５．合成チラミンの阻害作用（インビトロ試験）
培養（６０％と８０％の混合）されたヒト正常メラニン細胞（ＭＮＨ）を、それぞれチラミン濃度が０．００３％と０．０１％の緩衝液、およびチラミンを含まないコントロール液中で接触させた。８日間緩衝液と接触させ、この期間中、細胞を維持するため毎日同じ濃度（重量濃度で０．００３％と０．０１％）の緩衝液を更新した。
この期間中、半数のプレートを五回にわたって紫外線ＵＶ−Ｂ（２０ｍＪ／ｃｍ２）で照射した。他の半数のプレートは照射しなかった。
８日後、細胞を培養から取り出し洗浄した。抽出後、細胞間メラニンの量を従来の光学スペクトル濃度測定法で測定した。この測定値は、一定細胞数当りに換算して標準化した。
【００２３】
以下に、実験後の平均阻害効果率パーセンテージ（５回の異なるテストの）結果を、同じ時間で実験した比較例と比較して示す。
【表３】
0004393064.tif 000004
【００２４】
この結果は、
・一方、ＵＶ−Ｂ照射がない場合、チラミン量に基づいたメラニンの減少効果が示されている。すなわち形成されるメラニンの全体量が減少されるから期待される美白効果となる。
・他方、ＵＶ−Ｂを五回照射した後も、チラミンの存在でメラニン生成の阻害効果は維持され、比較例より低い値を示している。このように、紫外線照射による新しいメラニンの合成促進効果（比較例でほぼ２倍）は限定される。
【００２５】
チラミンの存在、非存在がこの実験の唯一の変数であるから、観察された効果はチラミン由来のものであることは明らかである。また実験は二つの違う濃度のチラミンでしか行われていないが、観察されたこのシステムの効果は、明らかに濃度依存性を示しているから、チラミンに特徴付けられる効果であるといえる。
【００２６】
例６．抗シミ作用（臨床試験）
この実験は、年齢が４５歳から６５歳で、肌や手に老化性シミのある女性志願者を対象に行った。
被験者の一方の手の五ケ所のシミを選び、色と大きさを正確に測定した後、例１に記述したテスト物質（５％）含有クリームを１．５ヶ月間にわたって一方の手（どちらでもよい）にだけ塗り、他方の手は比較例として、テスト物質を含まないクリームを塗った。結果を標準化するため、当然、シミの無い皮膚５箇所の色素測定も行った。１ヶ月後、および１．５ヶ月後に皮膚の色素定量化を行った。メラニン色素の量はメキサ測定器で測定した。この機器はセンサー中に内蔵された異なる三色光を発する特殊ランプでメラニン量を測るものである。
テスト物質を塗った手の老化性シミの色は、チラミンを含まないクリームで処理した手に比較して、一ヶ月で６．４％、１．５ヶ月後で２４％低くなった。
この実験は２０００年春、特に太陽光の多い時期に行われたことを考慮すると、結果の著しい効果を示しているといえる。
【００２７】
これらの例はいずれも美白効果および自然光または人工のUV照射による皮膚の着色を弱める効果をはっきりと証明している。
最終の化粧品または皮膚用薬品成分として、チラミンの重量濃度は０．００１〜１０％の範囲で、好ましくは０．０１〜７．０％がよい。
チラミンは化粧品や皮膚用薬品で使用されるあらゆる形態で使用することができる。すなわち、Ｏ／Ｗ又はＷ／Ｏエマルション、乳液、ローション、ポマード、ヘアローション、シャンプー、石鹸、スティック、ペンシル、スプレー、ボディオイルなどの形態で、使用することができる。但し、これらの形態に限定されるものではない。
【００２８】
チラミンを化粧品用のキャリアに取り込むことも可能である。例えば、リポゾーム、マイクロエマルション、マクロ粒子、ミクロ粒子、ナノ粒子、あるいはマクロカプセル、ミクロカプセル、ナノカプセルなどの媒体に取り込んだり、粉状有機ポリマーやタルク、ベントナイト等の鉱物サポートに吸収させたりすることもできる。
チラミンは通常化粧品で使用されるその他のいかなる材料とも組み合わせて化粧品成分とすることができる。例えば、天然抽出または合成の脂質、ゲル状および粘質のポリマー、界面活性剤およびエマルション、水溶性活性剤または脂溶性活性剤、他の植物からの抽出物、繊維抽出物、海産物抽出物などを例示することができる。
【００２９】
チラミンを含む化粧品または皮膚用薬品としてはクリーム、芳香剤、ゲル、ローション状、またはクリーム状の日焼け止めや日焼け止め処置薬、アフターシェービング、脱毛剤、脱毛後手入れクリームなどがある。
チラミンは、肌の手入れ、特に肌を色白にしたり、人工または自然の紫外線照射時の色素沈着を軽減するあらゆる化粧品または皮膚用薬品の中に混入したりすることができる。
化粧品または皮膚用薬品のこれらの成分は、肌の手入れ、特に肌を白くしたり、人工または自然の紫外線照射時の色素沈着を軽減したりするための薬品下地に使用される。
【００３０】
チラミンは化粧品または皮膚用薬品の中に単体または複合体として使用され、マクロ、ミクロ、ナノ粒子やマクロ、ミクロ、ナノカプセルのかたちで化学結合、混入、吸収、吸着させ、織物、天然または合成の繊維、羊毛など昼夜を問わず肌や毛髪と直接接触することによって局所的にチラミンを連続放出するような着物や下着を仕立てるものに用いるあらゆる材料の中に使用される。