(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
0004463550.tif 000041
［式中：Ｒは、アダマンチルを表す；
Ｒ'は、ＯＲ'''、ＯＣＯＲ'''、またはＣＯＲＩＶを表す；
Ｒ'−Ｄは、Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏを表す；ここでｎ＝１−３である；
Ｄは、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−アルキル、または（ＣＨ２）ｎ−ＯＨを表し、ｎ＝１−４である；
Ｒ''は、ＣＯＯＨ、またはＣＯＯ−アルキルを表す；
Ｒ'''は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ＳＯ３Ｈ、またはαまたはβＤ−またはＬ−グリコシルを表す；
ＲＩＶは、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲ'''を表す；
［Ａ］は、エポキシ、シクロプロピル、ジハロゲン化シクロプロピル、Ｒ'''により置換されたシクロプロピル、［Ｃ（ＲＶ，ＲＶＩ）−Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）］ｎ、［Ｃ（ＲＩＸ）＝Ｃ（ＲＸ）］ｎ、または［Ｃ≡Ｃ］ｎを表し、ｎ＝１である；
ＲＶ、ＲＶＩ、ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩは、独立に、Ｈ、またはアルキルを表す；
ＲＩＸ、ＲＸは、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、ＣＮ、ＮＯ２、またはＣＯＯＲ'''を表す］。
【請求項２】
活性成分として請求項１の式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの医薬上許容される賦形剤および／または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項３】
血管新生の変化に関連する疾患の治療のための請求項１の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物。
【請求項４】
疾患が、関節炎疾患、腫瘍、転移、糖尿病性網膜症、乾癬、慢性炎症、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
疾患が糖尿病性網膜症である、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
疾患が乾癬である、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
疾患が慢性炎症性疾患である、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項８】
疾患がアテローム性動脈硬化症である、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項９】
関節炎疾患の治療のための、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１の式（Ｉ）の化合物を含む抗腫瘍活性を有する医薬組成物。
【請求項１１】
抗腫瘍活性が細胞障害性である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
抗腫瘍活性がアポトーシス誘導性である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
抗腫瘍活性が抗血管新生性である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
腫瘍転移の予防および治療のための請求項１の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１５】
腫瘍が、肉腫、癌腫、癌様体、骨腫瘍、神経内分泌腫瘍、リンパ白血病、骨髄球性白血病、単核球性白血病、巨核球白血病およびホジキン病からなる群から選択される、請求項１０から１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】
腫瘍が急性前骨髄球性白血病である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１の式（Ｉ）の化合物と１または複数の既知の抗癌薬を組合せて含む組成物。
【請求項１８】
抗癌薬が、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイドを含む天然物、エピポドフィロトキシン、抗生物質、酵素、タキサン、細胞分化化合物、イレッサまたはグリベックを含むホスホチロシンキナーゼ阻害剤、ＴＲＡＩＬ（腫瘍壊死因子−関連アポトーシス−誘導性リガンド）、ＤＲ４またはＤＲ５受容体（ＴＲＡＩＬの部位）のアゴニスト、免疫抗腫瘍療法用化合物、抗腫瘍ワクチン、およびインターフェロンα、β、γからなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項１７に記載の組成物および１または複数の医薬上許容される賦形剤または媒体を含む医薬組成物。
【請求項２０】
腫瘍治療のための、１または複数の既知の抗癌薬と組合された１または複数の請求項１の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物。
【請求項２１】
腫瘍治療のための、１または複数の既知の抗癌薬と組合された１または複数の請求項１の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物であって、請求項１の式（Ｉ）の化合物が抗癌薬の補助剤として存在することを特徴とする医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍性、抗血管新生、アポトーシス促進性、抗炎症性の活性を有する下記一般式（Ｉ）で表されるレチノイド誘導体に関する。
【０００２】
【化１】
0004463550.tif 000002
［式中、Ｒは、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、置換されたフェニル、アダマンチル（ここで少なくとも１つのＣＨは、Ｃ−ハロゲンまたはＣ−アルキルで置換されていてもよく、ＣＨ２のうち１つは、Ｏ、Ｓ、ＣＨ−ハロゲン、ＣＨ−アリール、ＣＨ−ヘテロアリール、ＣＨ−アリールアルキル、ＣＨ−ヘテロアリールアルキル、ＣＨ−アミノによって置換されていてもよい）を表す；
Ｒ'は、ＯＲ'''、ＯＣＯＲ'''、ＣＯＲＩＶを表す；
Ｒ'−Ｄは、Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ；（ここでｎ＝１−３）を表す；
Ｄは、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２、（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−アルキル、（ＣＨ２）ｎ−ＯＨ（ここでｎ＝１−４）を表す；
Ｒ''は、テトラゾール、ＳＯ３Ｈ、ＮＨＳＯ３Ｈ、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、ＣＯＮＨＯＨ、ＣＯＮＨ−アリール、ＣＯＮＨ−Ｃ６Ｈ４ＯＨ、ＣＨ２ＯＲ'''；ＰＯ３Ｈ２；ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ−アリール（ここでｎ＝０−４）を表す；
Ｒ'''は、Ｈ、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ＳＯ３Ｈ、αまたはβＤ−およびＬ−グリコシルを表す；
ＲＩＶは、Ｈ、ＯＨ、ＯＲ'''を表す；
［Ａ］は、［Ｃ（ＲＶ，ＲＶＩ）−Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）］ｎ、［Ｃ（ＲＩＸ）＝Ｃ（ＲＸ）］ｎ、［Ｃ≡Ｃ］ｎ（ここでｎ＝０−３）を表す；
ＲＶ、ＲＶＩ、ＲＶＩＩ、ＲＶＩＩＩは、Ｈ、アルキル、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ'''、ＮＯ２、ＮＨ２、アリール、−Ｏ−、−ＣＨ２−、ＣＸ２−（ここでＸはハロゲン）、−ＣＨ（Ｒ'''）−を表す；
ＲＩＸ、ＲＸは、Ｈ、ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アリール、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＯＲ'''を表す］。
【背景技術】
【０００３】
ビタミンＡおよびその生物学的に活性な誘導体であるレチナールおよびレチノイン酸は、視覚において重要な役割を果たし、生殖システムに必須であり、胚の成長において形態形成剤として作用し、生物体の成長を基礎とし、広範な細胞タイプの成長および分化を調節する［M.Sporn、A.Roberts、D.Goodman、The Retinoids、Raven Press、New York 1994］。レチノイン酸およびその誘導体の生物学的作用は、２つのファミリーに属する核内受容体との相互作用によって媒介される：その一方はＲＡＲ（レチノイン酸受容体）とよばれ、他方はＲＸＲ（レチノイドＸ受容体）とよばれる［P.Chambon、FASEB J.、1996、10、940-54］。それぞれのファミリーは３種類の遺伝子によってコードされる３つのサブタイプ（α、β、γ）に分類される。
【０００４】
全−トランス−レチノイン酸（ＡＴＲＡ）は、ＲＡＲおよびＲＸＲに結合するが、９−シスＲＡはＲＸＲにのみ結合する。
【０００５】
天然のものであれ、合成ビタミンＡアナログであれ、レチノイドは、細胞増殖、分化およびアポトーシスに大きな影響を与える：これらの特性は、腫瘍疾患、皮膚疾患、および血管新生の変化に関連する疾患の制御において十分に利用されている。
【０００６】
成人における血管新生は通常は静止状態であるが、例えば創傷の治癒または女性の生殖周期における子宮内膜の再構築においては、正常な機能を果たす。
【０００７】
血管新生応答は、血管機能が低減し、組織灌流が不充分な場合に生理的に刺激される。
【０００８】
より一般的には、生理条件においては、血管新生は不充分な灌流、または酸素および栄養素の不十分な供給に対する応答において正のフィードバックを構成するといえる。例えばこれは動脈の閉塞、組織集団の成長（例えば筋組織の形成に伴う新血管新生）、および仕事の負荷が増加し、酸素および栄養素の要求が大きくなったような状況において起こる。
【０００９】
動脈の部分的または完全な閉塞による局所虚血の過程において、灌流を維持するためには側副血管の発達が必要となる。
【００１０】
原発性腫瘍の成長は腫瘍組織の良好な血管新生によって促進されることがよく知られている。酸素および栄養素の十分な供給により腫瘍自体の迅速な成長が促進される。
【００１１】
血管新生の程度が腫瘍の予後における高度に負の因子であることが証明されている（van Hinsbergh VW、Collen A、Koolwijk P; Ann. Oncol.、10 Suppl.、4:60-3、1999; Buolamwini JK; Curr.、Opin.、Chem.、Biol.、3(4):500-9、1999 Aug.）。
【００１２】
腫瘍細胞の生物学における基本段階は転移能力の獲得であることも知られている。
【００１３】
転移する腫瘍細胞は周囲の構造に対する接着を失い、血管およびリンパ管に侵入し、離れた場所にあるその他の組織にコロニーを形成することができ、そこで腫瘍細胞は自己複製を続けることができる。
【００１４】
転移は、癌による死の主要な原因であることから疾患の臨床歴における重要な事象でも有る。それは腫瘍部位または隣接領域における脈管組織の存在に密接に関連し、それによって促進される。
【００１５】
周囲の構造を横切る腫瘍細胞の遊走により、腫瘍細胞が腫瘍内の血管に到達する。この血管は既存のものでも新血管新生によって形成されたものであってもよく、そして血流に到達する（Ray JM.、Stetler-Stevenson WG; Eur. Respir. J.、7(11):2062-72、1994; Stetler-Stevenson WG、Liotta LA、Kleiner DE Jr; FASEB J.、7(15):1434-41、1993 Dec.）。
【００１６】
腫瘍の脈管領域におけるリンパ管と血管の間の連絡の存在により、腫瘍細胞は両方の脈管系に入ることができる。
【００１７】
最近の研究により、血管新生と関節炎疾患との直接的相関が示された（Koch AE; Arthritis and Rheumatism 41:951-962、1998）。特に、関節軟骨の新血管新生がパンヌス形成および関節炎の進行に重要な役割を果たしていることが示された。正常な軟骨は血管を有さないが、関節炎の患者の関節液は内皮細胞によって産生される血管新生−刺激因子を含んでいる（ＥＡＳＦ）。
【００１８】
この因子の存在が血管新生および軟骨の分解に関与している。
【００１９】
その他にも異常な血管新生に関連する疾患がある。
【００２０】
糖尿病性網膜症［Histol Histopathol 1999 Oct; 14(4):1287-94］、乾癬［Br. J. Dermatol. 1999 Dec; 141(6):1054-60］、慢性炎症およびアテローム性動脈硬化症［Planta Med. 1998 Dec; 64(8):686-95］において、罹患組織の血管新生が促進因子であることが見出された。
【００２１】
それゆえ血管新生の制御がこれらの疾患の管理および治療のための基本的な要素の１つである。
【００２２】
癌の治療に有用であって、抗血管新生活性を有するレチノイドは既に知られている。
【００２３】
最近みいだされたレチノイドに属する化合物であるＣＤ４３７（Cancer Research、2002; 62(8)、2430-6; Blood、2000; 95、2672-82; Leukemia、1999、13、739-49; Cancer Letters、1999、137、217-2）はＲＡＲγに対して選択的であり、ＡＴＲＡ−耐性のものを含む乳癌、メラノーマおよび子宮頚癌細胞系において、受容体結合とは独立の機構により細胞成長を阻害し、アポトーシスを誘導する（国際特許出願ＷＯ９７０３６８２号； J.Med.Chem. 1995、38、4993-5006）。ＣＤ４３７および例えばシス−ＴＴＮＰＢ誘導体（脂環式(ac.) テトラメチル−テトラヒドロ−ナフタレニル−プロペニルベンゾエート）などのその他の誘導体は共に、新規なアポトーシス誘導薬の開発のためのリード化合物として作用する。
【００２４】
また、合成によって得られるレチノイドのなかには、例えば、ＴＡＣ−１０１［Clin.Cancer Res. 1999、5,2304-10］またはＲＥ−８０、ＡＭ−５８０あるいはＡｍ−８０などの誘導体［Eur.J.Pharmacol. 1993、249、113-6］のように、抗血管新生特性を示すものもある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
最近になされた進展にもかかわらず、腫瘍疾患および異常な血管新生によって特徴付けられる疾患の新規な治療薬の発見に関する医薬研究が、いまだに医薬分野における多くの専門家にとってもっとも有望な分野の一つであると考えられている。
【００２６】
実際、現在まで腫瘍疾患および異常な血管新生によって引き起こされる疾患を阻害または妨害することができる新規化合物に対する要求が強く認識されている。上記のように、これらの疾患には、腫瘍、腫瘍転移、慢性炎症、関節炎疾患、糖尿病性網膜症、乾癬、慢性炎症およびアテローム性動脈硬化症が含まれる。
【課題を解決するための手段】
【００２７】
このたび驚くべきことに一般式（Ｉ）を有する化合物が抗腫瘍、アポトーシス促進、および抗血管新生活性を有することが見出された。
【００２８】
本発明による式（Ｉ）の化合物は以前には記載されていなかった。
【００２９】
それゆえ、一般式（Ｉ）の化合物が本明細書に記載する本発明の目的である。
本明細書に記載する本発明のさらなる目的は、一般式（Ｉ）の化合物およびその医薬分野での使用である。
本明細書に記載する本発明のさらなる目的は、一般式（Ｉ）の化合物およびその調製方法である。
本明細書に記載する本発明のさらなる目的は、活性成分として式（Ｉ）の化合物および少なくとも医薬上許容される賦形剤および／または希釈剤を含む医薬組成物である。
【００３０】
本発明のさらなる目的は、血管新生の変化に関連する疾患の治療薬の調製のための式（Ｉ）の化合物の使用に関し、ここで疾患は、関節炎疾患、腫瘍、転移（metastatisation）、糖尿病性網膜症、乾癬、慢性炎症性疾患、およびアテローム性動脈硬化症を含む群から選択される。
【００３１】
本発明のさらなる目的は、腫瘍の治療薬の調製のための式（Ｉ）の化合物の使用に関し、ここで抗腫瘍活性は細胞障害性の性質、および／またはアポトーシス誘導性の性質、および／または抗血管新生の性質のものである；ここで腫瘍は、肉腫、癌腫、癌様体、骨腫瘍、神経内分泌腫瘍、リンパ白血病、骨髄球性白血病、単核球性白血病、巨核球白血病、急性前骨髄球性白血病またはホジキン病を含む群から選択される。
【００３２】
本発明のさらなる目的は、腫瘍転移の予防および治療に有用な薬物の調製のための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【００３３】
上記のように、原発性腫瘍の成長は腫瘍組織の良好な血管新生によって促進され、新血管新生の程度は腫瘍の予後における高度に負の因子でありうる。腫瘍部位における酸素および栄養素の十分な供給は、実際、腫瘍自体の迅速な成長を促進する。
【００３４】
腫瘍の治療のために医師に利用可能な抗腫瘍薬を用いても、こういった疾患により多くの患者が死ぬことを防ぐことがいまだに不可能であることがよく知られている。また、ほとんどの腫瘍患者が１つの抗癌薬だけでなくいくつかの抗癌薬の組合せによって治療されていることもよく知られている。
【００３５】
組合せて抗癌薬を投与する必要性は、様々な代謝レベルにおいて作用させることにより、腫瘍が完全に緩解する場合があり、また、患者の延命および／または治療される患者の生活の質の向上がもたらされる場合があるという事実によって生じる。
【００３６】
今日まで、既知の抗腫瘍化合物と組合せて用いられる新規化合物に対する強い要求がいまだに認識されている。
本明細書において記載する本発明の化合物は１または複数の抗癌薬と組合せて用いることができる。
【００３７】
本明細書に記載する本発明のさらなる目的は、１または複数の既知の抗癌薬との、１または複数の式（Ｉ）の化合物との組合せであり、ここで、抗癌薬は、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、抗チューブリン剤、インターカレート化合物、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイドなどの天然物、エピポドフィロトキシン、抗生物質、酵素、タキサン、細胞分化化合物、ホスホチロシンキナーゼ阻害剤（例えばイレッサ(Iressa)またはグリベック(Glivec)）、ＴＲＡＩＬ（腫瘍壊死因子−関連アポトーシス誘導性リガンド）、ＤＲ４またはＤＲ５受容体（ＴＲＡＩＬの部位）のアゴニスト、免疫抗腫瘍治療用化合物、抗腫瘍性ワクチンまたはインターフェロンα、β、γを含む群から選択される。
【００３８】
本明細書に記載する本発明のさらなる目的は、１または複数の式（Ｉ）の化合物と１または複数の既知の抗癌薬との組合せと、１または複数の医薬上許容される賦形剤または媒体を含む医薬組成物である。
【００３９】
本明細書に記載する本発明のさらなる目的は、腫瘍治療薬の調製のための、１または複数の既知の抗癌薬と組合せての１または複数の式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００４０】
本明細書に記載する本発明のさらなる目的は、腫瘍治療薬の調製のための、１または複数の既知の抗癌薬と組合せての１または複数の式（Ｉ）の化合物の使用であって、式（Ｉ）の化合物が抗癌薬の補助剤として存在することによって特徴付けられる使用である。  
【００４１】
以下の実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
（一般的合成方法）
式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物
【化２】
0004463550.tif 000003
［式中、Ｒ、Ｒ'およびＤは、式（Ｉ）について記載したものと同じ意味であり、Ｘはハロゲンを表す］と、４−ホルミルボロン酸とを、ミヤムラ・スズキ反応（Miyaura-Suzuki reaction）（Chem. Rev. 1995、95、2457-83）において反応させて、式（ＩＩＩ）のアルデヒドを得ることによって調製した。
【化３】
0004463550.tif 000004
【００４２】
式（ＩＩＩ）の化合物［式中、Ｒ、Ｒ'およびＤは前記と同じ意味である］を、文献に記載されている周知の手順にしたがって［例えば、Wittig反応（Org. Reactions、Vol.14)、Wadsworth-Horner-Emmons反応 (Org. Reactions、Vol.25)、Knoevenagel反応 (Org. Reactions、Vol.15)、Henry反応 (Houben-Weyl、Methoden der organischen Chemie、Vol. 10/1、p. 250)、Darzens 反応(Org. Reactions、Vol.5)など］反応させて一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］は、Ｃ（ＲＶ，ＲＶＩ）＝Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）を表し、ＲＶ，ＲＶＩ，ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩはＨ、アルキル、ハロゲン、ＯＨ、ＯＲ'''、ＮＯ２、ＮＨ２、アリール、−Ｏ−を表すか、［Ａ］はＣ≡Ｃを表す］を得る。
【００４３】
あるいは、一般式（Ｉ）の化合物は、一般式（ＩＩ）の化合物から、一般式（ＩＶ）のボロン酸とのミヤムラ・スズキ反応によって（Chem. Rev. 1995. 95、2457-83）調製することができる。
【化４】
0004463550.tif 000005
［式中、ＡおよびＲ''は上記と同じ意味を有する］。
【００４４】
あるいは、一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ（ＲＶ，ＲＶＩ）＝Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）またはＣ≡Ｃを表す］は一般式（Ｖ）の化合物から開始して調製することができる。
【化５】
0004463550.tif 000006
［式中、Ｒ、Ｒ'およびＤは上記と同じ意味であり、Ｘはハロゲンを表す］、これは既知の方法、例えばHeck (Org. Reactions、Vol.27)に記載の方法による、置換されたアルケンまたはアルキンとの、金属または有機金属触媒の存在下での反応による。
【００４５】
あるいは、一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ（ＲＶ，ＲＶＩ）＝Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）またはＣ≡Ｃを表す］は一般式（Ｉ）の化合物［式中、ＲおよびＤはＨであり、Ｒ'は上記と同じ意味である］から開始して、アルコール（例えば、アダマンタン−１−オール、１−メチル−１−シクロヘキサノール、ｔｅｒｔ−ブタノールなど）との、触媒としての硫酸またはその他の酸（例えば、Charpentier et al. (J.Med.Chem. 1995、38、4993-5006に記載のもの）の存在下でのアルキル化反応によって、調製することができる。類似の反応および適当なアルコールを用いて、一般式（Ｉ）の化合物［式中、ＤはＨ、およびＲ、Ｒ'は上記と同じ意味を有する］から開始して、一般式（Ｉ）の化合物を調製することができる。
【００４６】
一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ（ＲＶ，Ｈ）−Ｃ（Ｈ，ＲＶＩＩＩ）でありＲＶ，ＲＶＩＩＩが−ＣＨ２−である］は、一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ（ＲＶ，ＲＶＩ）＝Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）を表す］から、文献公知（例えば、Simmons-Smithに記載の方法および例えばJ.Am.Chem.Soc. 1959、81、4256またはJ. Am. Chem. Soc. 1981、103、5813に記載の類似の方法）のシクロプロパン化反応によって調製することができる。あるいは一般式（Ｉ）の化合物［式中、ＡはＣＨ＝ＣＨ２、そしてＲ''はＨ］から、ジアゾ酢酸エチルとの反応によって調製することができる。一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ（ＲＶ，Ｈ）−Ｃ（Ｈ，ＲＶＩＩＩ）を表し、ＲＶ，ＲＶＩＩＩは−Ｏを表す］は、一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ（ＲＶ，ＲＶＩ）＝Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）を表す］から、例えばジオキシランまたはその類縁体との文献公知のエポキシ化反応によってYang and colleagues. in J. Org. Chem.、1995、60、3887-9に記載のようにして調製することができる。
【００４７】
一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ−Ｃを表す］は、一般式（Ｉ）の化合物［式中、［Ａ］はＣ（ＲＶ，ＲＶＩ）＝Ｃ（ＲＶＩＩ，ＲＶＩＩＩ）またはＣ≡Ｃを表す］から、二重結合または三重結合のための公知の還元反応（例えば、触媒的水素付加）によって調製することができる。
【００４８】
一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ''はＣＯＮＨＯＨを表す］は、一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ''はＣＯＯＨを表す］から開始してヒドロキサム酸の合成のための文献公知の方法（例えば、Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミンおよび縮合剤との反応［De Luca et al. J.Org.Chem.、2001、66、2534］、その後、触媒的水素付加、またはＯ−トリメチルシリルヒドロキシルアミンとの反応、その後、脱シリル化（desilylation））によって調製できる。
【００４９】
一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ''はＣＯＮＨアリールを表す］は、一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ''はＣＯＯＨを表す］からアミド合成の文献公知の方法（例えば、レチノイン酸アミドについてSangmam、et. al.  (Synth.Commun.、1998、28、2945-58)によって記載されている）によって調製できる。
【００５０】
一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ''はＣＨ２ＯＨを表す］は、一般式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ''はＣＯＯＨを表す］またはそのエステルまたは誘導体から開始して、文献公知のアルコール合成方法（例えば、ＬｉＡｌＨ４による還元）によって調製することができる。
【実施例１】
【００５１】
４−（３−（１−アダマンチル）−４−ｔｅｒｔ−ブチルジメチル−シリルオキシフェニル）ベンズアルデヒドの調製
表題の化合物を以下に報告する合成図式１にしたがって調製した。
【化６】
0004463550.tif 000007
【００５２】
１．５６ｇ（３．７０ｍｍｏｌ）の４−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−３−（１−アダマンチル）−ブロモベンゼン［Charpentier et al. J. Med. Chem.、1995、38、4993-5006］を、７．５ｍｌのトルエンに溶解した。３．７ｍｌの２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液、０．１２８ｇ（０．１１ｍｍｏｌ）のテトラキス−トリフェニルホスフィン−パラジウム、および６１０ｍｇ（４．０７ｍｍｏｌ）の４−ホルミルベンゼンボロン酸の１．７３ｍｌのエタノール中の溶液を添加した。このようにして得た溶液を窒素流中で２時間還流した。次に溶液を冷却し、酢酸エチルで処理し、ＮａＣｌ飽和溶液で洗浄した。
【００５３】
相を分離し、有機相をろ過し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、再びろ過し、溶媒を蒸発させて残渣をシリカゲル（Merck）でのフラッシュクロマトグラフィーにかけた。溶出液としてヘキサン：酢酸エチル３：１を用いた。
１．０９ｇの表題の化合物を得た。
【００５４】
Ｍ．ｐ．１５８℃．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．３７（６Ｈ、ｓ、−Ｓｉ（ＣＨ３）２）；１．０５（９Ｈ、ｓ、−ｔ−Ｂｕ）；１．７８（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０９（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１５（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；６．８８（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．５４Ｈｚ）；７．３５（１Ｈ、ｄｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．２４Ｈｚ、Ｊ＝８．５４Ｈｚ）；７．５１（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．２４Ｈｚ）；７．７０（２Ｈ、ｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．１４Ｈｚ）；７．９０（２Ｈ、ｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．１４Ｈｚ）；１０．０１（１Ｈ、ｓ、−ＣＨＯ）
【実施例２】
【００５５】
メチルＥ−４（３−（１−アダマンチル）−４−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシフェニル）シンナメート(cinnamate)の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム２にしたがって調製した。
【化７】
0004463550.tif 000008
【００５６】
３８６ｍｇ（０．８６４ｍｍｏｌ）の４−（１−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ−２−（１−アダマンチル）フェニル））−ベンズアルデヒドを４．５ｍｌのクロロホルムに溶解し、２９８ｍｇ（０．８６４ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフォアニリデン酢酸メチル（methyltriphenylphosphoranylidenacetate)を添加し、こうして得た溶液を３時間還流した。溶液を冷却し、溶媒を蒸発させ、次いでシリカゲル(Merck)でのフラッシュクロマトグラフィーにかけた。溶出液としてヘキサン：ＣＨ２Ｃｌ２  １：１を用いた。３５０ｍｇの表題の化合物を得た。
【００５７】
Ｍ．ｐ．１４８℃．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．３６（６Ｈ、ｓ、−Ｓｉ（ＣＨ３）２）；１．０５（９Ｈ、ｓ、−ｔ−Ｂｕ）；１．７７（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０８（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１５（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；３．８０（３Ｈ、ｓ、−ＯＣＨ３）；６．４４（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６．０７Ｈｚ）；６．８６（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．５４Ｈｚ）；７．３０（１Ｈ、ｄｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．２４Ｈｚ、Ｊ＝８．５４Ｈｚ）；７．４７（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．２４Ｈｚ）；７．５０−７．７０（４Ｈ、ｍ、４Ａｒ）；７．７１（１Ｈ、ｄ、ＣＨ＝、Ｊ＝１６．０７Ｈｚ）
【実施例３】
【００５８】
メチルＥ−４−（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシフェニル）シンナメートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム３にしたがって調製した。
【化８】
0004463550.tif 000009
【００５９】
１．２ｍｌのトリエチルアミン中の１ｇ（２．６ｍｍｏｌ）の２−（１−アダマンチル）−４−（４−ブロモフェニル）フェノール、３５８ｍｇ（４．１６ｍｍｏｌ）のアクリル酸メチル、５．８ｍｇ（０．０２ｍｍｏｌ）のパラジウム酢酸塩および３０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）のトリ−（ｏ−トリル）−ホスフィンの混合物を４時間還流した。トリエチルアミンを蒸発させ、２Ｎ  ＨＣｌと酢酸エチルで処理し、有機相を分離し、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。６４０ｍｇの生成物を得た。
【００６０】
Ｍ．ｐ．＞２４０℃
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７５（６Ｈ）、２．１（９Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、６．６３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．８５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．８、１．８Ｈｚ）、７．３−７．４（２Ｈ  芳香族(arom.)）、７．５５−７．８５（５Ｈ）、９．５５（ｓ、１Ｈ、ＯＨ）
【実施例４】
【００６１】
Ｅ−４−（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシフェニル）桂皮酸（ＳＴ１９２６）の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム４にしたがって調製した。
【化９】
0004463550.tif 000010
【００６２】
４２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）のＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを８．２ｍｌのＴＨＦ（テトラヒドロフラン）：Ｈ２Ｏ  １：１に溶解し、１００ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）のメチルＥ−４（３−（１−アダマンチル）−４−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシフェニル）シンナメートを添加し、こうして得た溶液を室温で３時間攪拌した。ＴＨＦを蒸発させ、２Ｎ  ＨＣｌで酸性にし、酢酸エチルで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。ろ過および蒸発させ、次いでシリカゲル(Merck)でのフラッシュクロマトグラフィーにかけた。溶出液としてヘキサン：酢酸エチル２：３、次いで１：１を用いた。５５ｍｇの生成物を得た。
【００６３】
Ｍ．ｐ．＞２４０℃．Ｒｆ＝０．５０（Merckシリカゲル６０Ｆ２５４、ＥｔＯＡｃ）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７４（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０４（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；６．５１（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；６．８５（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．８２Ｈｚ）；７．３０−７．４０（２Ｈ、ｍ、２Ａｒ）；７．５５−７．６３（３Ｈ、ｍ、２Ａｒ＋ＣＨ＝）；７．７０（２Ｈ、ｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．０９Ｈｚ）；９．５４（１Ｈ、ｓ、−ＯＨ）；１２．３４（１Ｈ、ｂｒｓ、−ＣＯＯＨ）
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７４（Ｍ＋、１００）．
【実施例５】
【００６４】
メチル４−（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）プロピオラートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム５にしたがって調製した。
【化１０】
0004463550.tif 000011
【００６５】
３０１ｍｇ（１．２６ｍｍｏｌ）のメチル４−ブロモフェニルプロピオラートを２．５ｍｌのトルエンに溶解し、１．３４ｍｌの２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液、次いで４３．７ｍｇのＰｄ−テトラキストリフェニルホスフィン、そして最後に３９８ｍｇ（１．３９ｍｍｏｌ）の３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニルボロン酸を添加し、混合物を３時間還流した。粗生成物をエチルエーテルで処理し、有機相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて乾燥させて５７０ｍｇの粗生成物を得た。シリカゲル(Merck)でのフラッシュクロマトグラフィーにより、１５ｍｇの純粋な生成物を得た。溶出液として、ヘキサン：酢酸エチル２：１を用いた。
【００６６】
Ｍ．ｐ．１７５℃
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：３．８６（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、３．９０（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、６．９６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．５）、７．４３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．２、８．５）、７．４７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．２）、７．５５．７．７０（４Ｈ  芳香族．）
【実施例６】
【００６７】
４−（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）プロピオン酸（propiolic acid）（ＳＴ１８７９）の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム６にしたがって調製した。
【化１１】
0004463550.tif 000012
【００６８】
１５ｍｇ（０．０３７４ｍｍｏｌ）のメチルＥ−４−（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）プロピオラートをメタノール中の２．１４ｍｌの０．７Ｎ  ＮａＯＨに溶解し、混合物を１時間還流した。メタノールを蒸発させ、水で処理し、６Ｎ  ＨＣｌで酸性にし、エチルエーテルで抽出した。Ｎａ２ＳＯ４での乾燥および溶媒の蒸発後、残渣をヘキサンで洗浄し、それからろ過後に１０ｍｇの生成物を得た。
【００６９】
Ｍ．ｐ．１５６℃．Ｒｆ＝０．４１（Merckシリカゲル６０Ｆ２５４、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ２／１）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７０（ｓ、６Ｈ）、２．１０（ｓ、９Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、７．０５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４、Ｈ−６'）、７．４０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２、Ｈ−Ｈ'）、７．４５−７．６０（３Ｈ  芳香族．）、７．６５（２Ｈ  芳香族．）
【実施例７】
【００７０】
Ｅ−４−（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）ケイヒアルコールの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム７にしたがって調製した。
【化１２】
0004463550.tif 000013
【００７１】
テトラヒドロフラン中の３７５μｌの１Ｍ  ＬｉＡｌＨ４溶液（０．３６５ｍｍｏｌ）を５ｍｌの無水テトラヒドロフランに添加した。氷浴中で冷却し、１５１ｍｇ（０．３７５ｍｍｏｌ）のメチルＥ−４−（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）シンナメート（実施例１９を参照）を添加し、冷条件下で1時間、次いで室温で一晩攪拌した。氷浴中で冷却し、５ｍｌの１０％  ＮＨ４Ｃｌ水溶液を添加し、テトラヒドロフランを蒸発させ、次いで酢酸エチルで処理した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を蒸発させることにより、１２６ｍｇの粗生成物を得、これを溶出液としてメチレンクロリド：ヘキサン３：１、次いでヘキサン：酢酸エチル２８：７２を用いたシリカゲル(Merck)でのクロマトグラフィーにかけ、１１ｍｇの生成物を得た。
【００７２】
Ｍ．ｐ．１４８℃．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７５（ｓ、６Ｈ）、２．１５（９Ｈ）、３．９０、ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、４．３８（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝６、１．６）、６．４１（ｄｔ、１Ｈ、Ｊ＝６、１６、＝ＣＨＣＨ２ＯＨ）、６．６７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．６、１６、アリールＣＨ＝）、６．９６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．３、Ｈ−６'）、７．４２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．２、８．３、Ｈ−５'）、７．４５（ｍ、２Ｈ、Ｈ−２およびＨ−６）、７．４８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．２、Ｈ−３'）、７．５５（ｍ、２Ｈ、Ｈ−３およびＨ−５）
ＭＳｍ／ｚ３７４（Ｍ＋）
【実施例８】
【００７３】
メチルＥ−４−（４−ヒドロキシフェニル）シンナメートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム８にしたがって調製した。
【化１３】
0004463550.tif 000014
【００７４】
３．７ｍｌのトリエチルアミン中の２ｇ（８．０３ｍｍｏｌ）の４−（４−ブロモフェニル）フェノール、１．１ｇ（１２．８ｍｍｏｌ）のアクリル酸メチル、１８ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ）のパラジウム酢酸塩、および９４ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）のトリ−（ｏ−トリル）ホスフィンの混合物を６時間還流した。さらに６ｍｇのパラジウム酢酸塩および３０ｍｇのトリ−（ｏ−トリル）ホスフィンを添加し、１時間加熱し、次いでさらに３０ｍｇのパラジウム酢酸塩および９４ｍｇのトリ−（ｏ−トルイル）ホスフィンを添加し、３．５時間加熱した。次いで反応物を６Ｍ  ＨＣｌで酸性にし、酢酸エチルを添加し、しばらく攪拌して沈殿を溶解させ、相を分離し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。粗生成物（９３４ｍｇ）をヘキサン／エチルエーテル中での処理により精製し、ろ過して１．７ｇの表題の生成物を得た。
【００７５】
Ｍ．ｐ．．２３３−２３５℃
１ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：３．７０（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、６．１３（ｄ、１Ｈ、ＣＨ＝、Ｊ＝１６）、６．８２（ｄ、２Ｈ、Ｈ−３'およびＨ−５'）、７．４８、ｄ、２Ｈ、Ｈ−２'およびＨ−６'）、７．６−７．７５（５Ｈ）
【実施例９】
【００７６】
メチルＥ−４−（３−（１−メチルシクロヘキシル）−４−ヒドロキシフェニル）シンナメートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム９にしたがって調製した。
【化１４】
0004463550.tif 000015
【００７７】
１５０ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）のメチルＥ−４−（４−ヒドロキシフェニル）シンナメートおよび６８．５ｍｇの１−メチル−１−シクロヘキサノールを１．２ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、０．０３２ｍｌの濃Ｈ２ＳＯ４で処理し、混合物を１日還流した。水を添加し、混合物を炭酸水素ナトリウム飽和溶液で中和した。水相を数回酢酸エチルで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過および蒸発させた。その結果得た粗生成物をシリカゲル(Merck)でのフラッシュクロマトグラフィーにかけた。溶出液としてヘキサン：酢酸エチル９：１を用いた。２０ｍｇの生成物を得た。
【００７８】
１ＨＮＭＲ（アセトン−ｄ６）δ：１．４３（３Ｈ、ｓ、−ＣＨ３）；１．４−１．９（８Ｈ、ｍ、シクロヘキサン）；２．３−２．４５（２Ｈ、ｍ、シクロヘキサン）；３．８０（３Ｈ、ｓ、−ＯＣＨ３）；６．６０（１Ｈ、ｄ、ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；７．０（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）；７．４４（１Ｈ、ｄｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２．２Ｈｚ）；７．６５（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．２Ｈｚ）；７．７−７．８５（５Ｈ、ｍ、４Ａｒ＋ＣＨ＝）；８．６５（１Ｈ、ｓ、−ＯＨ）
【実施例１０】
【００７９】
２−（１−アダマンチル）−４−ブロモ−６−Ｎ−フタルイミドメチル）フェノールの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１０にしたがって調製した。
【化１５】
0004463550.tif 000016
【００８０】
７ｍｌのジクロロメタン中の５００ｍｇ（１．６３ｍｍｏｌ）の２−アダマンチル−４−ブロモフェノールの溶液に、２８９ｍｇ（１．６３ｍｍｏｌ）のＮ−ヒドロキシメチルフタルイミドおよび２滴の濃Ｈ２ＳＯ４を添加した。混合物を３日間還流し、水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。溶媒の蒸発および溶出液としてヘキサン：酢酸エチルを８０：２０を用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにより、３４８ｍｇ（４６％）の生成物を得た。
【００８１】
Ｍ．ｐ．２５３℃．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７８（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０９（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．９；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；４．７６（２Ｈ、ｓ、−ＣＨ２−）；７．２８（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．９４Ｈｚ）、７．４５（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．９４Ｈｚ）；７．７６（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝２．９４Ｈｚ、Ｊ＝５．５２Ｈｚ）；７．８８（２ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝２．９４Ｈｚ、Ｊ＝５．５２Ｈｚ）；８．１３（１Ｈ，ｓ、−ＯＨ）
【実施例１１】
【００８２】
メチルＥ−４−（３−（１−アダマンチル）−５−（Ｎ−フタルイミドメチル）−４−ヒドロキシフェニル）シンナメートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１１にしたがって調製した。
【化１６】
0004463550.tif 000017
【００８３】
１００ｍｇの２−（１−アダマンチル）−４−ブロモ−６−Ｎ−フタルイミドメチル）フェノールを１．６ｍｌのジオキサンに懸濁し、窒素流下で；５９．７ｍｇのボロ（ビスピナコレート）、６３ｍｇの無水酢酸カリウム、５ｍｇのジクロロ（ジフェニルホスフィンフェロセン）パラジウムおよび１０３ｍｇのメチル４−ブロモシンナメートを添加した。これを２時間還流し、酢酸エチルに再懸濁し、１ｍｌの２Ｍ  ＨＣｌで酸性にし、有機相をＮａＣｌ飽和溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させて、ヘキサン：酢酸エチル６５：３５を用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけた。３２ｍｇ（２７％）の生成物を得た。
【００８４】
Ｍ．ｐ．２１６℃．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７８（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０９（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；３．８３（３Ｈ、ｓ、−ＯＣＨ３）；４．９０（２Ｈ、ｓ、−ＣＨ２−）；６．４４（１Ｈ、ｄ、ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；７．４５−７．９０（１１Ｈ、ｍ、１０Ａｒ＋ＣＨ＝）；８．２２（１Ｈ，ｓ、−ＯＨ）
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５４７（Ｍ＋、１００）；４００（３０）；１６０（３０）
【実施例１２】
【００８５】
Ｅ−４−（３−（１−アダマンチル）−５−（Ｎ−フタルイミドメチル）−４−ヒドロキシフェニル）桂皮酸の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１２にしたがって調製した。
【化１７】
0004463550.tif 000018
【００８６】
３０ｍｇのメチルＥ−４−（３−（１−アダマンチル）−５−（Ｎ−フタルイミドメチル）−４−ヒドロキシフェニル）シンナメートを１ｍｌの酢酸と３７％塩酸の３：１混合物に添加し、混合物を３０時間還流した。酢酸を蒸発させ、水で処理し、固体残渣をろ過して水で洗浄した。２４ｍｇの生成物を得た。
【００８７】
Ｍ．ｐ．２１６℃
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７３（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０４（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；４．８１（２Ｈ、ｓ、−ＣＨ２−）；６．４５（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；７．０７（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．３０（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．４６（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．８２Ｈｚ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．５３（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；７．６４（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．８２Ｈｚ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．７８−７．９４（４Ｈ、ｍ、４Ａｒ）；８．６０（１Ｈ、ｓ、−ＯＨ）；１２．５（１Ｈ、ｂｒｓ、ＣＯＯＨ）
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３３（Ｍ＋、１００）；３８６（４０）；１６０（６０）１３０（５０）
【実施例１３】
【００８８】
Ｅ−４−（３−（１−アダマンチル）−５−（アミノメチル）−４−ヒドロキシフェニル）桂皮酸の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１３にしたがって調製した。
【化１８】
0004463550.tif 000019
【００８９】
２０ｍｇのＥ−４−（３−（１−アダマンチル）−５−（Ｎ−フタルイミドメチル）−４−ヒドロキシフェニル）桂皮酸を０．１５ｍｌのメタノールに懸濁し、０．０１３ｍｌのヒドラジン水和物を添加し、混合物を５０℃で５時間加熱した。溶媒を蒸発させ、水に再懸濁し、２Ｍ  ＨＣｌで酸性にし、沈殿を減圧下でろ過した。粗生成物を乾燥させ、テトラヒドロフランで処理してフタリルヒドラジドに溶解し、そしてろ過した。
【００９０】
Ｍ．ｐ．１９５℃
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７３（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０４（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；４．００（２Ｈ、ｓ、−ＣＨ２−）；６．４５（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；７．０７−８．００（５Ｈ、ｍ、５Ａｒ）
【実施例１４】
【００９１】
４−（７−アダマンタン−１−イル−ベンゾ（１，３）ジオキソール−５−イル）−ベンズアルデヒドの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１４にしたがって調製した。
【化１９】
0004463550.tif 000020
【００９２】
０．８７５ｇ（２．６１ｍｍｏｌ）の４−アダマンタン−１−イル−６−ブロモ−ベンゾ（１，３）ジオキソールを５．２ｍｌのトルエンおよび２．６ｍｌの２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液に溶解し、０．０９０ｇ（０．０８ｍｍｏｌ）のテトラキス−トリフェニルホスフィン−パラジウム、および１．２ｍｌのエタノール中の０．４３０ｇ（２．８７ｍｍｏｌ）の４−ホルミルベンゼンボロン酸の溶液を添加した。これを窒素流下で７時間還流した。これを冷却し、酢酸エチルで処理し、ＮａＣｌ飽和溶液で洗浄した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、溶媒を蒸発させた。溶出液としてヘキサン：酢酸エチル９：１を用いたシリカゲル(Merck)でのフラッシュクロマトグラフィーの後、０．６６ｇの生成物（７０％）を得た。
【００９３】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．８０（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０９（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；６．０２（２Ｈ、ｓ、−ＣＨ２−）；７．０１（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８６Ｈｚ）；７．０４（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８６Ｈｚ）；７．６８（２Ｈ、ｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．１９Ｈｚ，）；７．９２（２Ｈ、ｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．１９Ｈｚ，）；１０．０２（１Ｈ、ｓ、−ＣＨＯ）
【実施例１５】
【００９４】
メチルＥ−４−（７−アダマンタン−１−イル−ベンゾ（１，３）ジオキソール−５−イル）−シンナメートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１５にしたがって調製した。
【化２０】
0004463550.tif 000021
【００９５】
４．５ｍｌのＣＨＣｌ３中の３００ｍｇの４−（７−アダマンタン−１−イル−ベンゾ（１，３）ジオキシル−５−イル）−ベンズアルデヒドの溶液を、窒素下で２７８ｍｇのトリフェニルホスフォアニリデン酢酸メチルで処理し、５時間還流し、さらに３時間後にイリド（２０％）を添加した。この期間の最後に、溶媒を蒸発させ、残渣を溶出液としてヘキサン：ジクロロメタン４５：５５を用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけた。２９８ｍｇの生成物を得た。
【００９６】
Ｍ．ｐ．２０５℃．
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０６（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；３．８０（３Ｈ、ｓ、−ＯＣＨ３）；５．９７（２Ｈ、ｓ、−ＣＨ２−）；６．４４（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６Ｈｚ）；６．９５（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８６Ｈｚ）；６．９８（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８６Ｈｚ）；７．５２−７．５８（４Ｈ、ｍ、４Ａｒ）；７．７１（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６Ｈｚ，）
【実施例１６】
【００９７】
Ｅ−４−（７−アダマンタン−１−イル−ベンゾ（１，３）ジオキソール−５−イル）−桂皮酸の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１６にしたがって調製した。
【化２１】
0004463550.tif 000022
【００９８】
２００ｍｇ（０．４８）のメチルＥ−４−（７−アダマンタン−１−イル−ベンゾ（１，３）ジオキソール−５−イル）−シンナメートを２５ｍｌのＴＨＦ／Ｈ２Ｏ３：２中のＬＩＯＨ．Ｈ２Ｏの溶液に懸濁し、室温で一晩攪拌した。ＴＨＦを蒸発させ、カルボキシラート懸濁液をヘキサンで洗浄し、２Ｎ  ＨＣｌで酸性にし、氷浴中で冷却した。ろ過後、１５０ｍｇ（７８％）の生成物を得た。
【００９９】
Ｍ．Ｐ．＞３００℃．Ｒｆ＝０．５９（Merckシリカゲル６０Ｆ２５４、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン９／１）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０１（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；６．０１（２Ｈ、ｓ、−ＣＨ２−）；６．５２（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；６．９９（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．１４（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．６０（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６．１８Ｈｚ）；７．６２（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．４６Ｈｚ、１．８４Ｈｚ）；７．６８（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．４６Ｈｚ、１．８４Ｈｚ）
【実施例１７】
【０１００】
メチル２−［４−（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシフェニル）］シクロプロパンカルボキシラートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１７にしたがって調製した。
【化２２】
0004463550.tif 000023
【０１０１】
０．５ｍｇのテトラ酢酸ロジウム二水和物および３６μｌのジアゾ酢酸エチルを２ｍｌのジクロロメタン中の１５０ｍｇの（３−アダマンタン−１−イル−４'−ビニルビフェニル−４−オキシ）ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシラン（対応するアルデヒドからのＷｉｔｔｉｇ反応により調製したもの）の溶液に添加した。反応物を室温で５日間放置し、合計５ｍｇの触媒および１０μｌのジアゾ酢酸エチルを添加した。触媒をセライトでろ過し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、ヘキサン：酢酸エチルの６５：３５混合物を用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけた。２つのシスとトランスのジアステレオ異性体の４３ｍｇの混合物を得た。
【０１０２】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ；０．４５（６Ｈ、ｓ、−Ｓｉ（ＣＨ３）；０．９５（３Ｈ、ｔ、−ＣＨ３、Ｊ＝７Ｈｚ）；１．１（９Ｈ、ｓ、ｔＢｕ）；１．２５（３Ｈ、ｔ、−ＣＨ３、Ｊ＝７Ｈｚ）；１．３５−１．５５（１Ｈ、ｍ、１−ＣＨ２）；１．５５−１．７４（１Ｈ、ｍ、１−ＣＨ２）；１．７９（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；１．９５（１Ｈ、ｍ、−ＣＨ−ＣＯＯＥｔ）２．０７（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．４８−２．６５（１Ｈ、ｍ、−ＣＨ−Ａｒ）；３．８５（２Ｈ、ｑ、−ＯＣＨ２、Ｊ＝７Ｈｚ）；４．１８（２Ｈ、ｑ、−ＯＣＨ２、Ｊ＝７Ｈｚ）；６．８２（１Ｈ、ｄｄ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ、８．４６Ｈｚ）；７．１５（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．４６Ｈｚ）；７．２５（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１．８４Ｈｚ）；７．４５−７．５０（３Ｈ、ｍ、３Ａｒ）
【実施例１８】
【０１０３】
シスおよびトランス２−（４−（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシフェニル）］シクロプロパンカルボン酸の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１８にしたがって調製した。
【化２３】
0004463550.tif 000024
【０１０４】
微細に粉砕したＡｌ２Ｏ３（４０％）上の１１３ｍｇのＫＦを４．４ｍｌのジメトキシエタン中のメチル２−［４−（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシフェニル）］シクロプロパンカルボキシラート（１１０ｍｇ）の溶液に添加し、室温で２日間攪拌した。ろ過後、溶媒を蒸発させ、粗生成物を水中の１２．４ｍｌの５０％テトラヒドロフラン中の６３ｍｇのＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ溶液に添加した。これを室温で３日間攪拌し、溶媒を蒸発させ、エチルエーテルで抽出し、２Ｍ  ＨＣｌで酸性にし、酢酸エチルで抽出した。蒸発後、生成物（５８ｍｇ）をヘキサン：酢酸エチル４０：６０を用いたシリカゲルでのクロマトグラフィーにかけた。６ｍｇのトランス−２−４−（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシフェニル）］シクロプロパンカルボン酸（Ｍ．ｐ．１９０℃）、１０ｍｇのジアステレオ異性体の混合物および２０ｍｇのシス−２−［４−（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシフェニル）］シクロプロパンカルボン酸（Ｍ．ｐ、２０４℃）を得た。
【０１０５】
Ｒｆ＝０．２３シス；０．４４トランス（Merckシリカゲル６０Ｆ２５４、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン６／４）
１ＨＮＭＲ（ＭｅＯＤ）δトランス：１．４５−１．５０（１Ｈ、ｍ、１−ＣＨ２）；１．６０−１．６５（１Ｈ、ｍ、１−ＣＨ２）；１．９５−２．０（７Ｈ、ｍ、−ＣＨ−ＣＯＯＥｔ＋６Ａｄ）２．２（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．３５（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．５０−２．５８（１Ｈ、ｍ、−ＣＨ−Ａｒ）；６．８４（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．４６Ｈｚ）；７．２４（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝７．３５Ｈｚ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．３１（１Ｈ、ｄｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．４６Ｈｚ、２．５７Ｈｚ）；７．４２（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．５７Ｈｚ）；７．５２（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝７．３５Ｈｚ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）
１ＨＮＭＲ（ＭｅＯＤ）δシス：１．４０−１．５０（１Ｈ、ｍ、１−ＣＨ２）；１．７０−１．７５（１Ｈ、ｍ、１−ＣＨ２）；１．９５−２．０（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ）；２．１０−２．１５（４Ｈ、ｍ、３Ａｄ＋−ＣＨ−ＣＯＯＨ）；２．３０（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．７０−２．７８（１Ｈ、ｍ、−ＣＨ−Ａｒ）；６．８３（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．４６Ｈｚ）；７．３０（１Ｈ、ｄｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．４６Ｈｚ、２．５７Ｈｚ）；７．３８（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝７．３０Ｈｚ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）；７．４２（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝２．５７Ｈｚ）；７．４９（２Ｈ、ｄｄ、２Ａｒ、Ｊ＝７．３０Ｈｚ、Ｊ＝１．８４Ｈｚ）
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８８（Ｍ＋、１００）；１３５（５０）
【実施例１９】
【０１０６】
メチルＥ−４−（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）シンナメートの調製
表題の化合物を以下の合成スキーム１９にしたがって調製した。
【化２４】
0004463550.tif 000025
【０１０７】
３．３ｍＬのＤＭＦ中のＮａＨ（鉱油中６０％、６６ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ２下で、９６９ｍｇ（２．４９ｍｍｏｌ）のメチルＥ−４（３−（１−アダマンチル）−４−ヒドロキシシンナメートを添加した。混合物を室温で１時間攪拌し、次いで１８６μＬ（２．９９ｍｍｏｌ）のＣＨ３Ｉを滴下した。
【０１０８】
反応物を室温で一晩放置した；８０ｍｌの冷水の添加後、水相をＣＨ２Ｃｌ２（４ｘ６０ｍｌ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。９７２ｍｇの生成物を得た（９７％）。
【０１０９】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７５（６Ｈ）、２．１（９Ｈ）、３．７５（ｓ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、３．８０（ｓ、３Ｈ，−ＣＯＯＣＨ３）；６．４０（ｄ、１Ｈ、ＣＨ＝、Ｊ＝１６Ｈｚ）、６．９０（ｄ、１Ｈ、１Ａｒ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．３５（ｄｄ、１Ｈ、１Ａｒ、Ｊ＝８．８、１．８Ｈｚ）；７．４２（ｄ、１Ｈ、１Ａｒ、Ｊ＝１．８Ｈｚ）；７−４８−７．５３（ｍ、４Ｈ、４Ａｒ）；７．６５（ｄ、１Ｈ、ＣＨ＝、Ｊ＝１６Ｈｚ）
【実施例２０】
【０１１０】
Ｅ−４−（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）桂皮酸（ＳＴ１８９８）の調製
表題の化合物を以下の合成スキーム２０にしたがって調製した。
【化２５】
0004463550.tif 000026
【０１１１】
４５５ｍｇ（１０．８ｍｍｏｌ）のＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏを９０ｍｌのＴＨＦ：Ｈ２Ｏ１：１に溶解した；８７３ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）のメチルＥ−４（３−（１−アダマンチル）−４−メトキシフェニル）シンナメートを添加し、こうして得た溶液を室温で２日間攪拌した。ＴＨＦを蒸発させ、２Ｎ  ＨＣｌで酸性にし、白色沈殿をろ過した。固体をＡｃＯＥｔおよびＥｔ２Ｏで洗浄し、７９２ｍｇ（９４％）の表題の化合物を得た。
【０１１２】
Ｒｆ＝０．２８（Merckシリカゲル６０Ｆ２５４、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン９／１）
１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７４（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；２．０４（３Ｈ、ｓ、３Ａｄ．）；２．１２（６Ｈ、ｓ、６Ａｄ．）；３．７５（３Ｈ、ｓ、−ＯＣＨ３）；６．５０（１Ｈ、ｄ、−ＣＨ＝、Ｊ＝１６Ｈｚ）；６．９８（１Ｈ、ｄ、１Ａｒ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）；７．４０−７．７０（７Ｈ、ｍ、６Ａｒ＋ＣＨ＝）；１２．３（１Ｈ、ｂｒｓ、−ＣＯＯＨ）
【０１１３】
腫瘍細胞系に対するＳＴ１９２６の細胞障害性
細胞障害性試験を行なうために、２つの急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）細胞系を用いた。
１．細胞系ＮＢ４。これは、染色体転座ｔ（１５；１７）を有し、融合タンパク質ＰＭＬ／ＲＡＲαを産生する。この細胞系は医薬用量のＡＴＲＡ（１０−７−１０−６Ｍ）の分化作用に対して極めて感受性である；
２．細胞系ＨＬ６０。これは、ＡＴＲＡに応答するが、細胞系ＮＢ４と比べると感受性が低い。この細胞系は上記の染色体転座を有さない。
【０１１４】
これらの細胞系を１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）および１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０中に維持した。
【０１１５】
固形腫瘍に由来する様々な細胞系も用いた。
１．ヒト前立腺癌ＰＣ３およびＤＵ１４５。これらの細胞系は、１０％ＦＣＳ、１％ピルビン酸ナトリウムおよび１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中に維持した；
２．ヒト大腸腺癌ＬｏＶｏ。この細胞系は、１０％ＦＣＳおよび１％グルタミンを含有するＨＡＭ'ｓＦ−１２培地中に維持した。
３．ヒト卵巣癌。例えば、Ａ２７８０およびＡ２７８０／Ｄｘ。これらはそれぞれ薬剤に感受性および耐性である（ドキソルビシン、タキソール、エトポシド、ビンクリスチン）；ＩＧＲＯＶ−１およびＩＧＲＯＶ−１／Ｐｔ。これらはそれぞれ、プラチナ・ベースの化学療法に感受性および耐性である。これらを１０％ＦＣＳ、１％ピルビン酸ナトリウムおよび１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地に維持した；
４．ヒトメラノーマＭｅＷｏおよびＭｅＳ２．２１、グリア芽細胞腫ＧＢＭ、非小細胞肺癌Ａ４３１、ＮＣＩ−Ｈ４６０、骨肉腫ＳＡＯＳおよびＵ２ＯＳを、１０％ＦＣＳ、１％ピルビン酸ナトリウムおよび１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中に維持した。
【０１１６】
細胞障害性試験は、懸濁液中のＮＢ４またはＨＬ−６０細胞（１００００／ウェル）を用いて行なった。細胞を９６ウェルプレートに２５０μｌの容量で播き、３７℃で２４時間インキュベートした。翌日、様々な濃度の被験化合物ＳＴ１９２６［（２Ｅ）−３−［３'−（１−アダマンチル）−４'−ヒドロキシ［１，１'−ビフェニル］−４−イル］−２−プロペノエート／プロペン酸（propenoate/ic acid）］を添加し、細胞をさらに２４時間、３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中でインキュベートした。３日目に、プレートを１０分間１６００ｘｇで遠心分離して上清をデカントして捨てることによって培地を除去した。２５０μｌのＰＢＳを添加した；次いでプレートを再び１６００ｘｇで１０分間遠心分離し、上清をデカントして捨てた。２００μｌ／ウェルの、１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を添加し、プレートを３７℃でさらに４８時間インキュベートした。５日目に、プレートを再び１６００ｘｇで１０分間遠心分離し、プレートを逆さにすることにより培地を除去し、２００μｌのＰＢＳおよび５０μｌの冷却した８０％ＴＣＡを添加した。プレートを次いで静置して少なくとも１時間氷上でインキュベートした。ＴＣＡをプレートを逆さにして除去した；プレートを蒸留水に浸漬することにより３回洗浄し、まず紙上で乾燥させ、次いで熱気流によって乾燥させた。すべてのウェルに１％酢酸中の２００μｌの０．４％スルホローダミンＢを添加した。プレートを室温でさらに３０分間インキュベートした。スルホローダミンＢをプレートを逆さにすることによって除き、プレートを１％酢酸中に浸漬することによって３回洗浄し、次いでまず吸収紙で、そして熱気流で乾燥させた。２００μｌの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基をすべてのウェルに添加し、プレートを少なくとも２０分間振盪した。吸光度をMultiskan分光光度計を用いて５４０ｎｍで測定した。
【０１１７】
接着細胞については、用いた手順は同じであったが、３日目のプレートの洗浄はプレートを逆さにした後、ＰＢＳを添加することによって３回行ない、１６００ｘｇでの遠心分離によっては行わなかった。５日目についても、上清はプレートを逆さにすることによって除去した。
【０１１８】
細胞生存度は、ＳＴ１９２６とともに２４時間インキュベーションし、化合物を除去してから４８時間後に測定した。化合物との２４時間のインキュベーションにより、細胞増殖を濃度依存的に阻害することができた。表１はＩＣ５０値（細胞生存度を５０％阻害する化合物の濃度）を示す。これは調査したそれぞれの腫瘍細胞系について計算した。ＳＴ１９２６はヒト前骨髄球性白血病腫瘍細胞系ＮＢ４に対して、その他の腫瘍系に対して計算された値と比べておよそ１０倍大きい細胞障害性を示した（ＩＣ５０＝０．０２２μＭ）。
【０１１９】
【表１】
0004463550.tif 000027
【０１２０】
（実施例９）
腫瘍細胞周期に対するＳＴ１９２６の効果の評価
本発明による化合物の細胞周期の様々な時期に対する効果を評価するために、細胞蛍光測定法による細胞周期の分析を行なった。
【０１２１】
ＨＬ６０またはＮＢ４細胞を、１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中に１５０．０００細胞／ｍｌの密度でプレートに播き、０．１％ＤＭＳＯに溶解した０．０１から０．１μＭの濃度の被験化合物（ＳＴ１９２６）を、最適以下の用量のＡＴＲＡ（ＮＢ４については５−１０ｎＭ、ＨＬ６０については０．５μＭ）の存在下または不在下で暗条件で添加し、培地を交換せずに３日間インキュベーターに入れた。
【０１２２】
処理の３日目に、５００．０００の細胞をサンプリングし、１８０ｘｇで５分間遠心分離し、カルシウムおよびマグネシウムを含まないＰＢＳで２回洗浄した。細胞（１ｍｌの固定液当たり１ｘ１０６）を、−２０℃に維持したアセトン／メタノール１：４ｖ／ｖおよびカルシウムおよびマグネシウムを含まない５０％のＰＢＳからなる固定混合液中で少なくとも１時間固定した；次いで細胞を遠心分離し、カルシウムおよびマグネシウムを含まないＰＢＳで洗浄し、そして再び遠心分離して洗浄した。細胞沈殿を２００μｌのヨウソ酸プロピジウム（１００μｇ／ｍｌ）および２００μｌのＲＮＡｓｅ（１５０ＫＵ／ｍｇ）とともに３０分間暗条件下で室温でインキュベートした。
【０１２３】
サンプルをナイロンフィルター（直径６０−８０μｍ）でろ過し、細胞蛍光測定計ＦＡＣＳｃａｎ（Becton Dickinson）で、励起波長４８８ｎｍ、発光波長６２０ｎｍで分析し、これは２００００事象／サンプルを捕らえるものであった。細胞周期の時期のパーセンテージの分析は、専用ソフトウェアパッケージ、Modfit v. 2.0 (Becton Dickinson)を用いて行なった。
【０１２４】
前立腺癌細胞ＰＣ３の細胞周期の分析のために、細胞をＲＰＭＩ培地中５０００００細胞／ｍｌの密度でプレートに播いた。化合物ＳＴ１９２６での２４時間の処理後、細胞を上記のようにして分析した。
【０１２５】
（実施例９／１）
ヒト前骨髄球性白血病ＮＢ４細胞の細胞周期に対するＳＴ１９２６の効果の評価
ＳＴ１９２６による処理（３日間）のＮＢ４の細胞周期に対する効果の分析により、本発明による化合物は０．０８および０．１μＭの濃度で細胞周期の複製Ｓ期における成長停止およびアポトーシスを誘導することが示された。得られた結果を表２に示す。
【０１２６】
【表２】
0004463550.tif 000028
【０１２７】
（実施例９／２）
ヒト前骨髄球性白血病ＨＬ−６０細胞の細胞周期に対するＳＴ１９２６の効果の評価
ＳＴ１９２６による３日間の処理のＨＬ−６０細胞の細胞周期に対する効果の分析により、０．５および１μＭの濃度において、細胞周期は測定不能であるが、該化合物は強いアポトーシス促進効果を有することが示された。得られた結果を表３において報告する。
【０１２８】
【表３】
0004463550.tif 000029
【０１２９】
（実施例９／３）
前立腺癌ＰＣ３細胞の細胞周期に対するＳＴ１９２６の効果
ＳＴ１９２６での２４時間の処理のＰＣ３の細胞周期に対する効果の分析により、処理の直後に被験化合物が調査した最高濃度（０．４μＭ）においてアポトーシスを誘導することが示された；細胞収集の２４時間後に細胞はＳ期に蓄積したが、０．４μＭ濃度では細胞のアポトーシスが誘導された。得られた結果を表４に報告する。
【０１３０】
【表４】
0004463550.tif 000030
【０１３１】
ＴＲＡＩＬ（腫瘍壊死因子−関連アポトーシス−誘導性リガンド）と組合せてのＳＴ１９２６のインビトロでの細胞障害性活性
ナチュラルキラー細胞とともにリンパ球は、ＴＮＦサイトカインファミリー（腫瘍壊死因子）のメンバーであるＴＲＡＩＬ生成（腫瘍壊死因子−関連アポトーシス−誘導性リガンド）に必要である。この膜タンパク質は広範な形質転換細胞においてアポトーシスを誘導し、このファミリーの他のメンバーと異なり、インビトロで正常細胞に対して細胞障害性ではないようである。ＴＲＡＩＬは、２つのデスドメイン−含有デス受容体ＤＲ４およびＤＲ５と相互作用することによってアポトーシスを誘導する。それゆえ、ＴＲＡＩＬは腫瘍選択的、アポトーシス誘導性サイトカインであると考えられ、癌の予防および治療の有望な新規候補化合物である（Neoplasia、6: 535-546、2001）。
【０１３２】
ＴＲＡＩＬと組合せてのＳＴ１９２６の細胞障害性の研究は、Ｍ１０９マウス肺癌およびＡ２７８０／Ｄｘ多剤耐性ヒト卵巣癌の２種の腫瘍細胞系を用いて行なった。細胞を１０％ＦＣＳ、１％ピルビン酸ナトリウムおよび１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地に維持した。
【０１３３】
細胞を９６ウェルプレートに２５０μｌの容積で播き、３７℃で２４時間インキュベートした。翌日、被験化合物ＳＴ１９２６［（２Ｅ）−３−［３'−（１−アダマンチル）−４'−ヒドロキシ［１，１'−ビフェニル］−４−イル］−２−プロペノエート／プロペン酸（propenoate/ic acid）］またはＴＲＡＩＬを種々の濃度で添加し、細胞をさらに７２時間、３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中でインキュベートした。５日目に、上清をプレートを逆さにすることによって除去した。２００μｌのＰＢＳおよび５０μｌの冷却した８０％ＴＣＡを添加した。次いでプレートを氷上で少なくとも１時間インキュベートした。ＴＣＡをプレートを逆さにすることによって除去した；プレートを蒸留水地中に浸漬することによって３回洗浄し、まず紙上で乾燥させ、次いで熱気流で乾燥させた。すべてのウェルに、２００μｌの１％酢酸中の０．４％スルホローダミンＢを添加した。プレートを室温でさらに３０分間インキュベートした。スルホローダミンＢをプレートを逆さにすることによって除去し、プレートを１％酢酸に浸漬することによって３回洗浄し、まず吸収紙で、次いで熱気流で乾燥させた。２００μｌの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基をすべてのウェルに添加し、プレートを少なくとも２０分間攪拌した。吸光度をMultiskan分光光度計を用いて５４０ｎｍで測定した。
【０１３４】
ＳＴ１９２６とＴＲＡＩＬの間の相互作用は、Drewinko et al. (Cancer Biochem. Biophys. 1: 187-195、1976)の分析法を用いて測定した。
分析は以下のように行なった：
（ＳＦａｘＳＦｂ／Ｓｆａ＋ＳＦｂ）／１００（ここでＳＦａはＳＴ１９２６の生存画分（survival fraction)であり、ＳＦｂはＴＲＡＩＬの生存画分である）。
値は以下の効果を示す：
値＞１相乗作用、＜１拮抗作用、＝１効果無し。
両方の細胞系において、ＳＴ１９２６はＴＲＡＩＬとの相乗活性を示した（図１および図２）。
【０１３５】
マウス肺癌モデルＭ１０９および３ＬＬにおけるＳＴ１９２６の抗腫瘍活性
マウス肺腺癌Ｍａｄｉｓｏｎ１０９細胞（Ｍ１０９）を腫瘍断片の皮下(s.c.)継代によって維持した。接種日に、細胞懸濁液を２０ｇ雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスの左後足に３ｘ１０５細胞／マウスの密度で筋肉内注射した。３ＬＬマウスルイス肺癌を常套方法によって、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて１ｘ１０５細胞／マウスの筋肉内継代（１０−１４日毎）によって維持した。抗腫瘍活性の実験のために、腫瘍をドナーマウスから切り出し、機械的脱分離（desegregation）および酵素消化の後に、腫瘍細胞生存度をトリパンブルー色素排除試験によって評価した。次いで、１ｘ１０５細胞／１００μｌ／マウスを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの右後足の筋肉に筋肉内注射した。
【０１３６】
腫瘍の大きさの測定は、デジタルキャリパー（Vernier Caliper）を用いて塊が測定可能になった日から週に２回行なった。腫瘍塊は、ｍｍで表した、２つの主な寸法（長さと幅）のサイズから、式（長さｘ幅２）／２、即ち、ｍｍ３で表した腫瘍体積によって評価した。各実験群について、腫瘍体積の阻害の対照に対するパーセンテージ（ＴＶＩ％）、即ち（１００−（Ｔ／Ｃ％）を算出した。ＴＶＩは、ＳＴ１９２６の最後の投与の２日後に評価した。
【０１３７】
平均生存時間（ＭＳＴ）も測定し、（ＭＳＴＴ／ＭＳＴＣ）ｘ１００−１００として計算されるＩＬＳ％（寿命の増加）として表される平均寿命の増加を算出した。
【０１３８】
各群に付いて得られたＴＶＩの値と生存時間の比較を、非対データ用の非パラメトリックMann Whitney検定によって、GraphPad inc.からのInstatソフトウェアを用いて行なった。
【０１３９】
ＳＴ１９２６溶液は使用の直前に調製し、クレモフォア（cremophor）：エタノール１：１に可溶化し、次いで緩衝食塩水に１：４に希釈した。動物の処理は１０ｍｌ／ｋｇの容積で行なった。様々な用量のＳＴ１９２６の処理スキームは、５日間連続（ｑｄｘ５）、腫瘍細胞の接種の１日後から開始し、３サイクル繰り返した。
【０１４０】
マウス（各群に付き８匹）はまず、薬物投与期間にわたって観察される体重の最終的変動に基いて、物質を正確な量投与するために、そして、処理期間中の体重の最大減少（ＢＷＬ％  ｍａｘ）を記録するために、各処理の前に体重を量った。
【０１４１】
結果を以下の表５において報告する。ＳＴ１９２６は、処理プロトコールｑｄｘ５ｘ３ｗによって、１０ｍｇ／ｋｇ、経口（p.o.)および１５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内(i.p.)の用量で、マウス肺腫瘍Ｍ１０９を有する動物の寿命を増加させ、腫瘍塊を阻害することが示された。
【０１４２】
さらに、ＳＴ１９２６は３ＬＬ−腫瘍担持マウスの寿命を１０ｍｇ／ｋｇ、経口（p.o.)の用量で増加させ、腫瘍体積を６５％減少させた。
【０１４３】
【表５】
0004463550.tif 000031
【０１４４】
ヒト卵巣癌モデルＡ２７８０およびＡ２７８０／Ｄｘおよびヒト非小細胞肺癌ＮＣＩ−Ｈ４６０におけるＳＴ１９２６の抗腫瘍活性
ヒト卵巣癌細胞Ａ２７８０、Ａ２７８０／ＤｘおよびＮＣＩ−Ｈ４６０を１０％ＦＣＳ、２ｍＭグルタミン、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含有するＲＰＭＩ−１６４０に、３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気下で維持した。細胞をトリプシン処理し、完全培地中に回収し、およそ１１００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、沈殿をハンクス１９９培地に再懸濁した；この操作を２回行なった。細胞を２０ｘ１０６／ｍｌの密度でハンクス１９９培地に再懸濁し、０．１ｍｌ（２ｘ１０６細胞／マウスに相当）を６週齢の雌性ＣＤ１ｎｕ／ｎｕマウスの右脇腹に皮下注射した。
【０１４５】
ＳＴ１９２６溶液は使用の直前に調製し、クレモフォア：エタノール１：１に可溶化し、次いで緩衝食塩水で１：４に希釈した。動物の処理は１０ｍｌ／ｋｇの容積を投与することで行なった。種々の用量のＳＴ１９２６の処理プロトコールは、５日間連続（ｑｄｘ５）、腫瘍細胞接種の１日後から開始して３サイクル繰り返した。
【０１４６】
腫瘍の大きさの測定は、デジタルキャリパー（Vernier Caliper）を用いて塊が測定可能になった日から週に２回行なった。腫瘍塊は、ｍｍで表した、２つの主な寸法（長さと幅）のサイズから、式（長さｘ幅２）／２、即ち、ｍｍ３で表した腫瘍体積によって評価した。各実験群について、腫瘍体積の阻害の対照に対するパーセンテージ（ＴＶＩ％）、即ち（１００−（Ｔ／Ｃ％）を算出した。ＴＶＩは、ＳＴ１９２６の最後の投与の２日後に評価した。
【０１４７】
対照群の腫瘍の重さが２ｇとなるまでマウスを測定し、次いで頚部脱臼によってマウスを屠殺した。
【０１４８】
各群に付いて得られたＴＶＩの値の比較を、非対データ用の非パラメトリックMann Whitney検定によって、GraphPad inc.からのInstatソフトウェアを用いて行なった。
【０１４９】
マウスは、まず、薬物投与経過に渡って観察され得る変化に基いて正確な量の物質を投与するため、そして処理期間中の体重の最大減少（ＢＷＬ％  ｍａｘ）を記録するために、各処理の前に体重を量った。
【０１５０】
結果を以下の表６において報告する。この場合もＳＴ１９２６は、処理プロトコールｑｄｘ５ｘ３ｗによって、１５から５ｍｇ／ｋｇ、経口（p.o.)の範囲の用量で、ヒト卵巣腺癌Ａ２７８０、多剤耐性Ａ２７８０／Ｄｘおよびヒト非小細胞肺癌ＮＣＩ−Ｈ４６０を有するマウスの腫瘍塊を阻害した。
【０１５１】
【表６】
0004463550.tif 000032
【０１５２】
ＳＴ１９２６は、スケジュールｑｄｘ４ｘ３ｗにより、１５ｍｇ／ｋｇ、経口(p.o.）の用量でタキソールと併用しても併用しなくても（スケジュールｑ７ｄｘ３により１５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内(i.p.)）ＮＣＩ−Ｈ４６０非小細胞肺癌において有効であることが示された（表７）。
【０１５３】
【表７】
0004463550.tif 000033
【０１５４】
ＳＴ１９２６は、スケジュールｑｄｘ３ｘ３ｗによって１５ｍｇ／ｋｇ、経口(p.o.)の用量で投与した場合有意な抗腫瘍活性を示した（表８）。
【０１５５】
【表８】
0004463550.tif 000034
【０１５６】
ウシ副腎微小循環(microcircle) 内皮（ＢＭＥＣ）細胞系に対するＳＴ１８７９の細胞障害性
以下のようにして新鮮なウシ副腎から以前に調製した内皮細胞系ＢＭＥＣを用いた。副腎を屠殺直後に動物から取り出し、実験室に届くまで氷中で保存した。無菌条件（バイオハザード層流フード(Bio-Hazard laminar flow hood)）中で、副腎をベータダイン溶液中で５分間洗浄し、次いで２リットルの無菌ＰＢＳで洗浄した。副腎を次いで無菌使い捨てメスで切断して約２ｍｍの断片にし、ＰＢＳ（副腎あたり３０ｍｌ）を含有するポリスチレンファルコン（Falcon）チューブに移した。冷凍遠心機での４℃、６００ｒｐｍでの遠心分離の後、上清をデカントして捨てた。ペレットを等量（沈殿物の体積に対して）の０．１２％コラゲナーゼＡ（Boehringer Mannheim）に再懸濁し、３７℃で２時間攪拌しながらインキュベートした。その後、まず２００メッシュ、次いで１００メッシュでのフィルター（Sigma）ろ過に続いて、上清を１５％ＤＭＥＭ  ＦＢＳの溶液に添加してコラゲナーゼＡの作用を阻害した。溶液を１０００ｒｐｍで室温で遠心分離して、沈殿を２０％ＦＢＳ、５０μｇ／ｍｌのウシ脳抽出物（ＢＢＥ）、５０μｇ／ｍｌヘパリン（Sigma）、０．５％ｖ／ｖゲンタマイシン（Sigma）、１％ｖ／ｖＬ−グルタミンを含有するＤＭＥＭ培地に再懸濁し、１％ゼラチン（ブタゼラチン Sigma）によりゼラチン化したペトリ皿に播いた。集密に達すると、細胞を因子VIIIなどの内皮マーカーで特徴付けた。
【０１５７】
細胞障害性試験はＢＭＥＣ細胞を用いて行なった。細胞を９６ウェルプレートに２００μｌの容積で播き、２４時間３７℃でインキュベートした。翌日、被験化合物ＳＴ１８７９を２００μＭから１．５６μＭの種々の濃度で添加した。細胞をさらに３７℃で２４時間５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中でインキュベートした。３日目、培地をプレートを逆さにすることによって捨て、プレートの３日目の洗浄は、プレートを逆さにし、３００μｌのＰＢＳを添加することを４回繰り返すことによって行なった。洗浄後、前述のようにゼラチン上に播くために使用する２００μｌ／ウェルの培地を添加した。５日目に、培地をプレートを逆さにすることにより捨て、細胞を冷却した１５％ＴＣＡ溶液で１時間処理した。ウェルをプレートを水に浸漬して逆さにして水を捨てることによって水で３回洗浄した。各ウェルに１％酢酸中の２００μｌの０．４％スルホローダミンＢを添加した。プレートを室温でさらに３０分間インキュベートした。スルホローダミンＢをプレートを逆さにすることによって捨て、プレートを１％酢酸に浸漬することによって３回洗浄し、まず吸収紙で、次いで熱気流で乾燥させた。各ウェルに、２００μｌの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基を添加し、プレートを少なくとも２０分間振盪しながら放置した。吸光度をMultiskan分光光度計を用いて５４０ｎｍで測定した。
【０１５８】
ＳＴ１８７９との２４時間のインキュベーションによる細胞の生存度を化合物を除去した４８時間後に測定した。化合物との２４時間のインキュベーションにより濃度依存的に細胞増殖を阻害することができた。表５は算出したＩＣ５０値（細胞生存度を５０％阻害する化合物の濃度）を示す。ＳＴ１８７９は１０５μＭに対応する弱い細胞障害性、２５μＭに対応する非毒性濃度を示した。これを後にＳＴ１８７９の内皮細胞遊走に対する効果の研究に用いた（表９を参照されたい）。
【０１５９】
【表９】
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【０１６０】
内皮ＢＭＥＣ細胞走化性
ＳＴ１８７９の内皮細胞走化性に対する効果を評価するために、ボイデンチャンバを用いた。これは２つのウェルを有するチャンバからなり、その一方は下部、他方は上部にあり、規定孔サイズ８μｍのポリカーボネートフィルターによって分離されている。下方のウェルにはＤＭＥＭ中の化学遊走因子、１％ＦＢＳを入れ、上方のウェルには１％脂肪酸非含有ブタ血清アルブミンを含有するＤＭＥＭに懸濁したウシ副腎微小循環（subrenal microcircle）内皮細胞（ＢＭＥＣ）を入れた。ＳＴ１８７９のポリカーボネートフィルターを通る化学遊走因子に向かう細胞遊走の阻害能力を、フィルターの下方に存在する細胞数を計数することによって定量的に評価した。表８において報告する遊走のパーセンテージは、式：（処理−対照／対照）ｘ１００にしたがって算出した。ＳＴ１９２６は、５０および２５μＭの濃度で化学遊走刺激因子ＦＣＳに向かうＢＭＥＣ細胞の走化性の阻害を示した（表１０）。
【０１６１】
【表１０】
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【０１６２】
マトリゲル上でのＨＵＶＥＣ細胞の分化に対するＳＴ１８７９の効果
マトリゲル上での内皮細胞の分化アッセイは、化合物の抗血管新生活性を評価するために一般的に用いられるアッセイである。マトリゲルは腫瘍から再構築された基底膜抽出物であり、主にラミニンおよびコラーゲンＩＶからなり、この上に内皮細胞が毛細血管と類似した３次元構造において組織化する。網状組織強度は３以上の管状構造が出発する交差点によって規定される「ノード」を顕微鏡で計数することにより測定できるし、あるいは、コンピュータ化された画像システムによって毛細血管構造によって占められた領域のパーセンテージを計算することにより測定できる。
【０１６３】
４℃でマトリゲル（Becton-Dickinson）を２４ウェルプレートに入れ、インキュベーター中、３７℃で３０分間ゲル化させた。ヒト−臍帯内皮細胞ＨＵＶＥＣ（Clonetics）を５００μｌの培地に非毒性濃度である２５μのＳＴ１８７９の存在下または不在下で再懸濁し、マトリゲル上に播いた。５時間のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド溶液で固定化した。結果を３つの別々の領域の、ノードの数／領域を顕微鏡で計数することによって定量し、陽性対照に対するパーセンテージとして表した。
【０１６４】
ＳＴ１８７９はマトリゲル上で２５μＭの濃度で内皮細胞の分化を６１％阻害することが示された（表１１）。
【０１６５】
【表１１】
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【０１６６】
ヒト腫瘍細胞系に対するＳＴ１８７９およびＳＴ１８９８の細胞障害性
１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）および１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０に維持したヒト急性前骨髄球性白血病細胞系ＮＢ４を用いて細胞障害性試験を行なった。
【０１６７】
さらに２種の固形腫瘍細胞系も用いた：
１．ヒト前立腺癌ＰＣ３。この細胞系を１０％ＦＣＳ、１％ピルビン酸ナトリウムおよび１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地に維持した。
２．ヒト大腸腺癌ＬｏＶｏ。この細胞系を１０％ＦＣＳおよび１％グルタミンを含有するＨＡＭ'ｓ  Ｆ−１２培地に維持した。
【０１６８】
細胞障害性試験は１００００のＮＢ４細胞／ウェルを用いて行なった。細胞を９６ウェルプレートに２５０μｌの容積で播き、３７℃で２４時間インキュベートした。翌日、被験化合物ＳＴ１８７９を様々な濃度で添加し、細胞をさらに２４時間、３７℃で５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中でインキュベートした。３日目、培地をプレートを１６００ｘｇで１０分間遠心分離することによって除き、上清をデカントした。２５０μｌのＰＢＳを添加した；次いでプレートを再び１６００ｘｇで１０分間遠心分離し、上清をデカントして捨てた。２００μｌ／ウェルの１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を添加し、プレートを３７℃でさらに４８時間インキュベートした。５日目、プレートを再び１６００ｘｇで１０分間遠心分離し、培地をプレートを逆さにすることによって除去し、２００μｌのＰＢＳおよび５０μｌの８０％冷却ＴＣＡを添加した。プレートを次いで氷中で少なくとも１時間インキュベートした。ＴＣＡをプレートを逆さにすることによって除去した；プレートを蒸留水に浸漬することによって３回洗浄し、まず紙上で、次いで熱気流で乾燥した。各ウェルに、１％酢酸中の２００μｌの０．４％スルホローダミンＢを添加した。プレートを室温でさらに３０分間インキュベートした。スルホローダミンＢをプレートを逆さにすることによって除去し、プレートを１％酢酸に浸漬することによって３回洗浄し、次いで、まず吸収紙で、次に熱気流で乾燥した。各ウェルに２００μｌの１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ塩基を添加し、プレートを少なくとも２０分間振盪した。吸光度をMultiskan分光光度計を用いて５４０ｎｍで測定した。
【０１６９】
接着細胞系ＰＣ３およびＬｏＶｏについて同じ手順を用いたが３日目のプレートの洗浄は、プレートを逆さにすることとＰＢＳの添加によって３回行ない、１６００ｘｇでの遠心分離は行なわなかった。５日目に付いても、上清はプレートを逆さにすることによって除去した。
【０１７０】
ＳＴ１８７９またはＳＴ１８９８との２４時間のインキュベーションによる細胞生存度を化合物の除去の４８時間後に測定した。化合物との４８時間のインキュベーションは、濃度依存的に細胞増殖を阻害するのに十分であった。表１０は試験した腫瘍細胞系についてそれぞれ計算したＩＣ５０値（細胞生存度を５０％阻害する化合物の濃度）を示す。ＳＴ１８７９は、ＬｏＶｏ細胞（ＩＣ５０＝５．２μＭ）に対して、前立腺癌系ＰＣ３（ＩＣ５０＝１３．６μＭ）およびヒト前骨髄球性ＮＢ４系（５８．５μＭ）に対して計算されたものよりも大きな細胞障害性を示した。ＳＴ１８９８もまた、大腸癌腫ＬｏＶｏに対してより活性であることが示された（表１２を参照されたい）。
【０１７１】
【表１２】
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【０１７２】
ＳＴ１８７９およびＳＴ１８９８のＮＢ４細胞に対する分化促進効果
ＮＢ４細胞を１０％胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地に１５００００細胞／ｍｌの密度でプレートに播いた。細胞を次いで０．４μＭから０．０１μＭの様々な濃度のＳＴ１８７９またはＳＴ１８９８で処理し、３日間インキュベーターに入れておき培地交換はしなかった。分化促進効果を測定するために、各サンプルから５０００００細胞を収集し、遠心分離し、１０％血清、１ｍｇ／ｍｌニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）および１００ｎｇのＰＭＡ（フォルボールミリスチル酢酸）を含有する１ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁した。上記のように再懸濁した細胞を、３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベーションの最後に細胞を遠心分離し、沈殿を１ｍｌの１０％Ｔｒｉｔｏｎｘ１００を含有するＰＢＳに再懸濁した。サンプルを超音波処理して溶解し、次いで分光光度計で５４０ｎｍの波長の読みを得た。分化した細胞を含有するサンプルは紫がかった色になり、対照サンプルおよび／または分化した細胞を含まないサンプルは白色のままであるか、弱く着色した。ＳＴ１８７９またはＳＴ１８９８の分化促進作用をＡＣ５０（５０％の細胞分化を活性化する濃度）について評価した。これを以下に報告する。ＳＴ１８９８はＡＣ５０値が１９ｎＭであることから判定できるように、良好な分化促進能力を有することが示された（表１３を参照されたい）。
【０１７３】
【表１３】
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【０１７４】
ニワトリ絨毛尿膜（ＣＡＭ）モデルにおけるＳＴ１８７９、ＳＴ１９２６およびＳＴ１８９８の血管形成抑制（Angiostatic）活性
ニワトリ絨毛尿膜は非常に血管新生化した膜であり、血管が発達の４日目において現れ、発達の８日目において動脈血管系（arteriovenal system）が発達し、１１日目まで活動的に増殖する。
【０１７５】
この研究の目的は、基底状態および血管増殖(vasoprolification)の誘導物質ｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞成長因子）の存在下でのＣＡＭにおける血管の発達を調べることである。この研究にはその発達の初期段階のニワトリ胚性卵を用いた。発達の３日目に殻を開ける操作を行い、ＣＡＭの血管を目視できるようにした。発達の９日目に約１ｍｍ３の無菌ゼラチン（GELFOAM Pharmacia-Upjohn）の断片を、ＣＡＭ表面に導入し、そのうえにｂＦＧＦ（５０ｎｇ／胚）または問題の化合物を３日間連続して投与することにより処理した。
【０１７６】
分子の血管増殖に対する効果の評価は、処理０時の血管と後の時間（１２日目）の血管を比較することによって得た。
【０１７７】
表１４において結果を報告する。３つの化合物は０．２５から０．５μｇ／胚の濃度においてニワトリ絨毛尿膜モデルにおいて血管形成抑制活性を有することが示された（表１４）。
【０１７８】
【表１４】
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【０１７９】
結果は、スポンジ当たりの血管の数の平均±ＳＥである。
【図面の簡単な説明】
【０１８０】
（原文に記載なし）
【図１】
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【図２】
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