(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オルニチン及び分岐鎖アミノ酸を有効成分として含有し、前記オルニチンがＬ−体であり、前記分岐鎖アミノ酸がＬ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン及びＬ−バリンの３種混合アミノ酸であることを特徴とする関節炎疾患又はリウマチ関節炎治療予防剤；
但し、オルニチン及び分岐鎖アミノ酸はそれぞれ、存在する場合には遊離体及び塩のうち何れの形態でもよい。
【請求項２】
混合アミノ酸の配合割合が遊離体でＬ−イソロイシン：Ｌ−ロイシン：Ｌ−バリン＝１：２：１．２（重量比）である請求の範囲１記載の関節炎疾患又はリウマチ関節炎治療予防剤。
【請求項３】
経口投与又は経口摂取に適した請求の範囲１又は２記載の関節炎疾患又はリウマチ関節炎治療予防剤。
【請求項４】
医薬品の形態にある請求の範囲１〜３何れか記載の関節炎疾患又はリウマチ関節炎治療予防剤。
【請求項５】
医薬品が栄養剤及び輸液の何れかの形態にある請求の範囲４記載の関節炎疾患又はリウマチ関節炎治療予防剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は新規炎症性疾患治療予防剤、詳しくはオルニチン及び／又は分岐鎖アミノ酸（遊離体、塩、生体内で遊離体に変換可能なアミノ酸誘導体等何れの形態でもよい。）を有効成分として含有し、関節炎疾患、リウマチ性疾患、特に慢性関節リウマチ（リウマチ関節炎）を典型とする炎症性疾患の治療、予防、進展防止、及び／又は改善等に有用な薬剤（組成物）（以下、本発明において「炎症性疾患治療予防剤」と称する。）に関し、この発明により、安全性が高く（副作用が無いか極めて少ない。）そのような優れた作用を有する医薬品（輸液、栄養剤等を含む。）や、飲食品（医療用食品、健康食品、特定保険食品等を含む。）を提供することができる。更に、本発明は炎症性疾患治療（炎症性疾患の治療、改善、進展防止等を含む。）又は予防方法や、その特定の活性成分の炎症性疾患治療（炎症性疾患の治療、改善、進展防止等を含む。）予防剤への使用等にも関する。
背景技術
リウマチ性疾患とは、関節並びにその周囲に疼痛を来たす疾患の総称である。リウマチ性疾患は多数に上るが、主に原因別に分類すると、免疫異常（慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等）、感染（細菌性関節炎等）、アレルギー（血清病等）、生化学的及び内分泌異常（痛風、副甲状腺機能亢進症等）、退行性変化（変形性関節症、変形性脊椎症）、外傷性及び神経性（外傷性関節炎、糖尿病、肩腕症候群等）、遺伝性及び先天性（先天性股関節形成不全症等）、腫瘍（多発性骨髄腫等）、及びその他（アミロイドーシス等）が挙げられる。その病態は、滑膜炎（慢性関節リウマチ）、軟骨の変性（変形性関節症）、結晶誘発性関節炎（痛風）、関節の感染症（細菌性関節炎）、腱付着部症（強直性脊椎炎）、腱炎（石灰化鍵炎）、筋炎（皮膚筋炎）、及び精神身体的要因（結合組織炎）に分類される。
リウマチ性疾患の有病率は高齢化社会になればなる程ど高くなり、先進国での有病率は１０％以上である。特に、変形性関節症は２０歳代以降加齢と共に増加し、５０歳代では軽症も含めると半数以上が本症を有する。リウマチ性疾患の主要な臨床症状は関節並びにその周囲の痛みであるが、病態によって全身の臓器に種々の随伴症状を伴うことがある。リウマチ性疾患の治療は、関節症状を起こす原因疾患を見い出し、またその病態を考慮して行うのが原則である。関節症状に対する対症療法としては、非ステロイド性抗炎症薬やステロイド剤を経口的又は非経口的に投与し炎症や疼痛を抑えると共に、患部の冷却や加温等の理学療法を行う方法が存在する。機能障害がある場合には運動療法や、装具が処方され、人工関節等の外科療法がなされることもある。関節病変が長期にわたると患者の精神状態もおかされ、抗うつ薬、又は心理的カウンセラー等専門家の治療を要することもある。
以下、薬物療法の現状を詳しく述べる。
リウマチ性疾患（以下、「ＲＡ」と略記する。）の治療に際し、第一選択薬としては非ステロイド系消炎鎮痛薬（ＮＳＡＩＤｓ）が用いられてきた。しかし、最近になり、ＲＡの治療におけるＮＳＡＩＤｓの役割は縮小しつつある。それはＲＡにおいてＮＳＡＩＤｓによる鎮痛作用は期待できるものの、抗リウマチ作用が無いためである。更に、消化管障害、腎機能低下等に代表されるＮＳＡＩＤｓの副作用が、臨床上、無視できないことも原因の一つである。このような状況で、オーラノフィン、ペニシラミン等の抗リウマチ薬（ｄｉｓｅａｓｅ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ａｎｔｉｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ：ＤＭＡＲＤｓ）の早期使用が行なわれている。最近の傾向として、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ＦＫ５０６等を初めとする新たな抗リウマチ薬の使用が始まっている。本薬剤は免疫系に作用してその異常を是正するが、その作用機序については未だに不明な点が多く、今後の課題として残されている。従来はその副作用の重篤さより、あまり早期使用は行われなかったが、最近では、専門医の間ではかなり早期よりＤＭＡＲＤｓを投与する傾向にある。
また、ＲＡの原因、病態の解析が急速に進歩する中で、抗サイトカイン療法、経口ペプチド療法、アンチセンス療法、或いは抗接着分子抗体による治療等の新治療法が開発されつつある。一方、慢性関節リウマチの予防を目的とした医薬品や飲食品は見られないのが現状である。これまではＲＡ発症後に症状の軽減を目的とした治療薬が主に開発されてきたが、発症前から投与可能な予防薬は見られなかった。このようなＲＡに伴う局所炎症を予防することを主たる目的とした治療、予防薬の開発が求められている。遺伝的にＲＡ発症の可能性が高いと考えられるケース等では、予防を目的として経口摂取することが可能である飲食品の開発が期待される。
発明の課題、目的
リウマチ性疾患の治療は、関節症状を起こす原因疾患を見い出し、またその病態を考慮して行うのが原則である。しかしながら、その原因疾患は多種多様であり、また基本的に難治性疾患が多くその治療も難渋することが多い。従って、非ステロイド性抗炎症薬やステロイド剤等の対症療法薬や理学療法によってその疼痛を如何に抑えるかが当面の治療の基本となる。しかし、リウマチ性疾患はその多くが難治性疾患であり、その治療も長期にわたることが多く、従ってその薬物療法も副作用が少なく長期投与が可能なものでなければならないが、現在使用されている非ステロイド性抗炎症薬やステロイド剤は種々の副作用があり長期的に使用するには多くの問題がある。例えば、非ステロイド性抗炎症薬は重篤な胃出血、消化性潰瘍や腎障害等を引き起こすことがある。ステロイド剤は免疫抑制作用による感染症の増悪、消化性潰瘍、骨粗鬆症等多くの副作用を引き起こす。理学療法も一時的な疼痛の軽減が図られるに過ぎない。
以上のような状況下、本発明の課題は、安全性に優れ、経口投与や、経口摂取による飲食が可能で飲食品としても使用でき、上記作用を有する優れた炎症性疾患治療予防剤を開発することにある。特に、前記ＲＡに伴う局所炎症を予防することを主たる目的とし、飲食品としても好適な、薬剤の開発にある。
発明の開示
本発明者等は、オルニチンや、分岐鎖アミノ酸（ロイシン、イソロイシン、バリン等）を含有する組成物が、関節炎の典型的な動物モデルへの経口投与において優れた効果を示すことを見い出し、これ等アミノ酸を有効成分として含有する薬剤が、炎症性疾患、特に関節炎疾患やリウマチ性疾患の治療、予防、進展防止、改善等に極めて有効であり、副作用も殆ど無く医薬品（輸液、栄養剤等を含む。）や、飲食品（医療用食品、健康食品、特定保険食品等を含む。）として好適であることを見い出し、これ等各種の知見に基づいて本発明を完成するに到った。
即ち、本発明は、オルニチン及び／又は分岐鎖アミノ酸を有効成分として含有することに特徴を有する炎症性疾患治療予防剤（炎症性疾患の治療、予防、進展防止及び／又は改善等の薬剤）に存する。
オルニチン及び分岐鎖アミノ酸はそれぞれ、存在する場合には遊離体、塩及び体内で遊離体に変換され得る誘導体等、何れの形態でもよい。
塩の形態で使用する場合、有効成分のアミノ酸に関し存在する塩の中から飲食品或いは医薬品として許容される塩を選択するとよい。
有効成分のオルニチンや分岐鎖アミノ酸には、光学異性体が存在するが、本発明においては光学異性体の種類に関して特に制限は無い。天然に存するということでＬ−体を使用するのが好ましい。
分岐鎖アミノ酸には、ロイシン、イソロイシン及びバリン等が含まれる。前記本発明に使用する有効成分としては、オルニチン、ロイシン、イソロイシン及びバリンの少なくとも１種（１種以上）が好ましく採用される。
前記有効成分として、オルニチンと、分岐鎖アミノ酸であるロイシン、イソロイシン及びバリンの少なくとも１種（１種以上）とを含有する混合アミノ酸が好適に採用される。この４種アミノ酸を全て含む方がより好ましい。
本発明の薬剤を適用する対象疾患は炎症性疾患であるが、炎症性疾患として代表的には関節炎疾患やリウマチ性疾患を挙げることができる。
本発明において、有効成分とし使用するオルニチン或いは分岐鎖アミノ酸には、体内でそれぞれのアミノ酸に変換され得るアミノ酸誘導体（オルニチン誘導体、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、バリン誘導体等）を使用することができ、その例として構成アミノ酸として当該有効成分のアミノ酸を分子内に、しかもできるだけ多く、含むペプチド類を挙げることができる。
本発明品は、非経口的にも使用することができるが、特に経口投与又は経口摂取で前記優れた作用を示し、経口投与又は経口摂取に適している。従って、医薬品又は飲食品の形態で容易に使用することができる。
前記医薬品には、通常の経口製剤、非経口製剤の外に、栄養剤、輸液等の製剤が含まれ、一方飲食品としては、前記効果を、期待或いは求める通常の食品類や、飲料の外、医療用食品、健康食品、特定保険食品等の形態で使用することができる。
尚、上記本発明の薬剤には、本発明の前記有効成分を含み、目的とする前記効果、作用を有する限り、その他の有効成分（同質又は別質）や添加剤を含むことができ、これ等も本発明に含まれる。
本発明は、別の形態として、オルニチン及び／又は分岐鎖アミノ酸を生体内に摂取又は投与することに特徴を有する炎症性疾患治療又は予防方法に存する。
（オルニチン及び分岐鎖アミノ酸はそれぞれ、存在する場合には遊離体、塩及び体内で遊離体に変換され得る誘導体のうち何れの形態でもよい。）
当該摂取又は投与する形態には前記炎症性疾患治療予防剤を採用することができる。特に、その医薬品（栄養剤、輸液等）の形態で又は飲食品（医療用食品、健康食品、特定保険食品等）に使用された形態で、好ましくは摂取又は投与することができる。この方法は、特に関節炎疾患の予防又は治療方法に好適である。
本発明は、更に別の形態として、オルニチン及び／又は分岐鎖アミノ酸（活性成分）の炎症性疾患治療予防剤、好ましくは関節炎疾患予防治療剤への使用にも存する。
（オルニチン及び分岐鎖アミノ酸はそれぞれ、存在する場合には遊離体、塩及び体内で遊離体に変換され得る誘導体のうち何れの形態でもよい。）
当該炎症性疾患治療予防剤については前記説明の通りであり、前記の如く、医薬品（栄養剤、輸液等）の形態又は飲食品（医療用食品、健康食品、特定保険食品等）に使用された形態を好ましい例として挙げることができる。
実施の形態
以下、本発明の実施の形態について説明する。
オルニチン（Ｌ−体）はタンパク質中に含まれる塩基性アミノ酸の一種である。オルニチンや、分枝鎖アミノ酸の薬理生理効果については以下の様なことが知られているが、リウマチ性疾患との関連については知られていない。
オルニチンはアミノ酸代謝の結果生じ、中枢神経毒であるアンモニアを、肝臓で尿素に変換し無毒化する尿素サイクルの構成成分の一つである。オルニチンはカルバミルリン酸合成酵素のアロステリックな活性化剤であるＮ−アセチルグルタミン酸と共にその濃度変化によって、急激な食事中の窒素量の変動に対応している。また、オルニチンはプトレッシン、スペルミジン、スペルミン等、ポリアミンの原料である。ポリアミンは塩基性で、ＤＮＡと強く結合し、その複製を制御するのでタンパク合成や細胞分裂に影響を与える。タンパク質や核酸合成の盛んな組織中に多く含まれている。
分枝鎖アミノ酸はロイシン、イソロイシン、バリン等側鎖に分枝アルキル鎖を持つ疎水性アミノ酸である。側鎖は疎水結合に関与し、酵素等の活性中心のポケットにおいて結合部位の形成に関与している。また、分枝鎖アミノ酸は必須アミノ酸の４０％を占め、その代謝は、特に臨床的意義が高い。肝硬変症では摂取量が低下するだけでなく、血液中からの筋肉組織への分枝鎖アミノ酸の取り込みが高アンモニア血の解毒のために亢進すると考えられる。そこで、分枝鎖アミノ酸の経口補充療法での肝臓が合成するアルブミン等が上昇し、肝性脳症と肝硬変症の改善が見られる。後述の実施例では、分岐鎖アミノ酸としてＬ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン及びＬ−バリンの３種混合アミノ酸を、特に遊離体で２：１：１．２程度の特定の配合割合で混合して用いているが、この配合割合には幅が許される。また、分岐鎖アミノ酸を本発明の有効成分として使用する場合、このような分岐鎖アミノ酸を１種単独で、若しくは複数（２種以上）を組み合わせて用いることもでき、このような有効成分の使用も当然本発明に含まれる。当該アミノ酸は遊離体の外に、存在する場合には塩の形態或いは塩の形態にあるものを遊離体に混合して用いることもでき、その場合に使用する塩の形態も、医薬用或いは飲食品用に許容され、当該業者が常用する範囲のものは全て、本発明において一つの形態として当該有効成分に使用するアミノ酸の中に含まれる。
リウマチ性疾患のうち、患者数の最も多い慢性関節リウマチ（リウマチ関節炎）は、再燃と寛解を繰り返す多発性関節炎で、軽症例から関節破壊或いは関節外症状を伴う症例まで幅広い疾患である。その原因は未だ明らかにされていないが、現在二つの考え方がある。関節、特に滑膜や軟骨に存在するある自己抗原に対し、リンパ球等の免疫応答異常が生じた結果というものと、滑膜細胞自体の増殖活性が何等かの原因で亢進した結果というものである。ＲＡの主病変は滑膜組織であり、滑膜が異常増殖し、肉芽組織（パンヌス）を形成し、これにより軟骨や骨を侵蝕・破壊する。また、炎症滑膜にはＴ細胞の巨大な集積巣があり、炎症が更に進展するとＢ細胞の浸潤巣も現れる。リウマチの病態にはＴ細胞や炎症によって誘導されたＩＬ−１や腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ：ＴＮＦ）−α等、数多いサイトカインが関わっている。また、リウマチ患者から頻繁に認められる自己の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇに対する抗体として知られるリウマチ因子も病態に関与すると思われる。更に、リウマチ患者の単球やマクロファージの細胞からは活性酸素やリソソーム酵素の放出も観られ、リウマチで見られる炎症等の病態に関わるものと考えられる。
このように発症原因の判明していないリウマチ性疾患の予防法、治療法を検討するためには動物を用いた病態モデルが不可欠となるが、慢性関節リウマチの動物モデルとして、抗原／アジュバンド投与による誘導型モデル、自然発症モデル、遺伝子操作マウスを用いる工学モデルが知られている。
ＲＡの動物実験モデルはリウマチ性滑膜炎の持つ組織学的所見のうち、（イ）滑膜の表層細胞の増殖と肥厚；（ロ）滑膜組織内単球、リンパ球及びプラズマ細胞の浸潤とリンパ濾胞の形成；（ハ）フィブリンの貯留；（ニ）パンヌスの形成；及び（ホ）軟骨浸蝕と繊維化、の五つの所見を最小限満たす必要があるとされている。更に、これに加えて、（ヘ）滑膜炎の慢性化傾向；（ト）関節炎が多発性であること；（チ）雌雄の性比がＲＡの場合と同じくほぼ３：１と雌に多いこと；及び（リ）家族性素因等が挙げられているが、（ヘ）〜（リ）を満たすモデルは少ない。従って、研究目的に沿ったモデルを選んで用いているのが実情である。
動物モデルは大別して自然発症モデルと誘発モデルに分けられる。自然発症モデルは免疫等の人工操作を加えずに発症する点が利点であるが、多くの場合、発症年齢は老齢で時間がかかること、発症時期をコントロールできないこと等が欠点である。一方、誘発モデルは抗原等で感作して誘発する点が人工的であるが、好みの時期に希望する数だけ揃えて発症させ得るという点が利点である。一般的によく用いられるモデルとして、マウス或いはラットのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）とラットのアジュバント関節炎（ＡＡ）がある。ＣＩＡはマウス或いはラットに誘導された慢性多発性関節炎で同種或いは異種のＩＩ型コラーゲン（ＩＩｃ：軟骨に豊富）をアジュバントと共に皮内に感作することにより引き起こされる。ＭＨＣクラスＩＩのＲＴＩのＤβ鎖のｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ領域に、ヒトのＲＡに相関性が高いとされるＨＬＡ  ＤＲ１やＤＲ４等に共通して認められるＲＡ感受性配列（ＲＡＳＳ）と相似性の高い配列を持つＢＢ／ＤＲラットやＨ−２ｑやＨ−２ｒハプロタイプのマウス（ＤＢＡ−１等）が発症し易い系統として知られている。ラットの場合は、１回の免疫で１０〜１５日後に発症するが、マウスの場合は通常追加免疫が必要で、その後１０〜２週間後に８０〜１００％の動物が発症する。症状は数ヶ月持続し、後に関節の硬直と指の外側湾曲を残して自然治癒する。ＡＡは、結核菌等の抗酸菌の加熱死菌のオイルエマルジョンをラットの皮内に感作することによって誘導される多発性関節炎で、抗炎症剤や抗リウマチ薬のスクリーニングや開発に広く用いられている。関節炎は四肢の関節の発赤腫脹として感作後１０〜１４日頃発症し、数ヶ月持続後、関節強直や変形を残して炎症は自然治癒する。組織学的には、ＲＡによく似た慢性増殖性滑膜炎の像を呈し、パンヌスを形成するが、反応性の骨増殖も認められる。ＡＡの発症機序に関しては、下記に示す三つの考え方がある。
（ａ）ペプチドグリカン（ＰＧ）等の細菌細胞壁成分に対する遅延型過敏反応による；（ｂ）ＰＧ、特にムラミルジペプチド（ＭＤＰ）のアジュバント作用によって、動物のなんらかの組織が自己抗原となって発症する自己免疫病である；及び（ｃ）関節軟骨のプロテオグリカンのリンクタンパク質と菌体成分（特に熱ショックタンパク質ＨＳＰ６５）との間の共通抗原性の結果起きる交差反応性による、という説がある。
自然発症モデルとしてＳＫＧマウスモデルがある。ＢＡＬＢ／ｃマウスコロニーの中に関節腫脹を示すマウスとして発見され、兄妹交配により維持されている。ＳＫＧマウス間の交配では６ヶ月齢で判定した場合、ほぼ全例のマウスが四肢関節何れかに関節腫脹が観られる。この関節炎は微生物の垂直・水平感染によるものではなく、常染色体劣性遺伝変異によるものである。関節腫脹は生後２ヶ月頃から主として前足指関節に始まり、その後、手関節、足関節に及ぶ。６ヶ月を経過すると大多数は関節硬直を示す。病理組織学的には、滑膜炎から始まり関節周囲炎、パンヌス形成、軟骨・軟骨下骨組織破壊、繊維化が進む。このモデルは滑膜炎が慢性化を示し、上記のモデルと異なり関節炎の自然治癒が見られないのが特徴である。炎症の遷延化のメカニズムを研究する上で大変興味深いモデルである。工学モデルとしては、ヒトＴ細胞白血病ウイルス−１（ＨＴＬＶ−１）のＴａｘ遺伝子を挿入したトランスジェニック（ｔｇ）マウスがある。このｔｇマウスでは、トランスジーンが関節局所に発現しており、それらの部位ではＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＩＦＮ−γ、及びＩＬ−２等の炎症性サイトカイン及びＭＨＣ遺伝子が活性化されていた。これ等マウスは抗核抗体、ＲＦ、熱ショックタンパク質やＩＩｃに対する免疫反応が非ｔｇマウスに比べて高い。Ｔａｘ遺伝子のｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎによると思われる炎症性サイトカインの産生の影響や、自己免疫反応の機序におけるウイルスの関与等について考慮する場合、有意なモデルである。
ＲＡによる炎症滑膜は高度のＴ細胞浸潤を伴うこと、またＨＬＡ−ＤＲ分子上に特定のペプチド配列を持つこととＲＡ発症に強い相関があること等からＲＡの炎症においてＴ細胞が大きな役割を持っていることは明らかである。関節内或いは関節外の何等かの抗原刺激により活性化されたＴ細胞はＩＬ−２を産生し、ＩＬ−２受容体であるＣＤ２５を発現している他のＴ細胞或いは自分自身を増殖させる。関節外で活性化したＴ細胞はＣＤ２５やＣＤ６９等の早期の活性化因子を一時的に表出した後、ＶＬＡ−１を発現しながらＩＣＡＭ−１を強く発現する滑膜内の血管内皮細胞にたどり着き、血管外、即ち滑膜内に脱出するとともにＣＤ６９を再発現する。この活性化Ｔ細胞によるＩＬ−２の産生を抑制する因子としてポリアミンがある。ポリアミンとは第一級アミノ基を二つ以上持つ直鎖の脂肪族炭化水素の総称で、代表的なものとしてプトレッシン、スペルミジン、スペルミン等がある。ポリアミンはポリアミンオキシデースにより酸化されてできる産物の一つ過酸化水素を介してＩＬ−２の産生を抑制する。単核球はこのポリアミンを産生し、活性化Ｔ細胞のＩＬ−２産生をひいては細胞増殖を抑制する。オルニチンはオルニチンデカルボキシラーゼの働きでプトレッシンとなる。プトレッシンはスペルミンシンターゼ或いはスペルミジンシンターゼの働きでスペルミン或いはスペルミジンとなる。ＲＡ患者の血清中のスペルミン或いはスペルミジンの濃度が正常人に比べて高値となっていることから、生体内で活性化Ｔ細胞の細胞増殖を抑制しようとする何らかの力が働いていると思われる。本発明では、ポリアミンの原料ともいうべきオルニチンが関節炎の治療、予防等の薬剤となり得ることを三つの機序の異なる関節炎動物モデルを用いて明らかとした。
また、分岐鎖アミノ酸製剤として医療現場に提供されているＬ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン及びＬ−バリン（何れも遊離体）を含む「リーバクト」（味の素株式会社登録商標）は、低アルブミン血症を呈する非代償性肝硬変患者の低アルブミン血症の改善を目的として利用されている。この分岐鎖アミノ酸製剤は、本発明で使用した三つの関節炎動物モデルの何れにおいても関節腫脹を抑制した。
本発明による炎症性疾患治療予防剤は、特にリウマチ性疾患及び同疾患に伴う合併症の治療、予防、進展防止、病態改善等に有用である。この薬剤は、前記有効成分を単独若しくは混合物として用いることができる。また、他の作用機序の異なるリウマチ性疾患治療剤との併用投与も可能である。投与形態には特に制限が無く、注射投与等非経口投与、経口投与等何れの投与形態でもよく、経口投与可能ということで本発明の薬剤は有利である。
本発明において有効成分に使用するオルニチンは、遊離体、オルニチン塩、体内で遊離体に変換し得る誘導体を使用することができる。分岐鎖アミノ酸についても、同様に遊離体や、存在する場合には当該アミノ酸塩、体内で遊離体に変換し得る当該アミノ酸の誘導体等を使用することができる。このようなオルニチンと、分岐鎖アミノ酸の１種以上とを併用して使用することもできる。前記有効成分を少なくとも含有する組成物の形態で使用することができ、具体的には、医薬品や飲食品等として投与又は摂取したとき、炎症性疾患の治療、予防、進展防止、改善等、特に関節炎疾患や、リウマチ性疾患の治療、予防、進展防止、改善等にその効果を発揮することができる。
前記本発明の有効成分に使用するアミノ酸には、各種の光学異性体やその混合物が存在するが、その種類等に関し本発明においては特に制限は無い。即ち、光学異性体、ラセミ体何れも使用可能であるが、天然に存在するということで、Ｌ−体が好ましく使用される。
本発明で有効成分に使用されるオルニチンは、動物或いは植物由来の天然タンパク質の加水分解から得られたもの、発酵法或いは化学合成法によって得られたもの何れも使用可能である。オルニチンは光学異性体として、前述の如くＤ−体、Ｌ−体、ＤＬ−体等が存在するが、本発明に使用するには、生体タンパク質成分であるＬ−体を用いるのが望ましい。オルニチンはそのまま（遊離体）或いは種々の塩の形で用いてもよい。オルニチンの塩としては、オルニチンが塩基性を示すために主に酸との塩が用いられる。塩を形成する酸としては、無機酸、有機酸何れも使用可能である。無機酸の例としては、硫酸、硝酸、燐酸、ハロゲン化水素酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸等）が挙げられる。有機酸の例としては、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、蓚酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、ガンマリノレン酸、コハク酸トコフェロールモノエステル、トコフェロール燐酸、アスコルビン酸、アスコルビル燐酸、トコフェロールアスコルビル燐酸、チオクト酸、Ｎ―アセチルシステイン、Ｎ，Ｎ’−ジアセチルシステイン、リポ酸（ｌｉｐｏｉｃ  ａｃｉｄ）等が挙げられ、光学異性体の場合にはＬ−体が好ましく使用される。
本発明の有効成分として使用されるオルニチンには、生体内で遊離のオルニチンに変換可能な誘導体を使用することもできるが、この誘導体としては、飲食品等として摂取されたとき生体内でオルニチン（遊離体）に速やかに変換される誘導体であればどのようなものでもよい。例えば、そのような誘導体としてオルニチンを構成成分とするペプチド（オルニチンペプチド）が挙げられる。ペプチドは２〜５０個程度のアミノ酸から構成されているものを使用することができるが、本発明においては活性本体であるオルニチン換算で摂取されるため、できるだけオルニチン含量が高い方が望ましい。例えば、このようなペプチドとして、ペプチド中の構成アミノ酸としてオルニチン含量が好ましくは１０％（重量）程度以上、より好ましくは３０％（重量）程度以上であるものを採用することができる。ペプチドの構成成分として、オルニチンは活性本体であるから必須であるがそれ以外はアミノ酸の種類は問わないが、分岐鎖アミノ酸を多く含む方が望ましい。このようなペプチドは、化学合成法、発酵法、天然タンパク質の加水分解、天然ペプチド等種々の方法によって入手できるが、何れも使用できる。天然タンパク質の例として、大豆タンパク質が挙げられるが、これを常法に従って、化学的に或いは酵素を用いてペプチドまで加水分解し、イオン交換樹脂法等によって精製した、オルニチン短鎖ペプチドは、飲食品等として使用するには、安価で大量に供給できるため望ましい。また、オルニチン短鎖ペプチドは、オルニチンに比較し、味、安定性、吸収性、安全性等に優れるために、特に飲食品等として摂取するには適している。これ等のオルニチンペプチドは飲食品等として摂取されたとき、医薬品として使用された場合と同様に、生体内で速やかに分解され、オルニチン（遊離体）としての作用を示すことができる。
本発明の有効成分、特にオルニチン（遊離体、特にＬ−体）、オルニチン塩、オルニチン誘導体又はこれ等オルニチンと分岐鎖アミノ酸を含有する組成物を医薬品や飲食品等の形態で使用することができる。
医薬品として使用される場合には、後述の如く各種の医薬品製剤の形態で使用することができる。
一方、飲食品等として摂取する場合には、各種の添加剤を用いるこのなくそのままの形でも摂取することができるが、より摂取し易くするために、調味料、香味料等を加えて使用することもできる。
医薬品の形態については後述の通りであり、また飲食品等の形態としては、粉末、顆粒、細粒、錠剤、カプセル、液体、ゼリー等通常飲食品等として用いられる如何なる形態も可能である。前記有効成分、特にオルニチン、オルニチン塩、オルニチン誘導体又はこれ等オルニチン等と分岐鎖アミノ酸を含有する組成物は既存の飲食品等に添加、含有させることによっても摂取できる。例えば、ドリンク、清涼飲料水、ヨーグルト、飴、ゼリー、乳酸菌飲料等に添加、含有させた形で摂取することができる。
本発明を利用して、目的とする疾患の治療、予防、進展防止、改善等を行う場合、本発明で使用する前記有効成分、オルニチンや分岐鎖アミノ酸、特にオルニチン、オルニチン塩、オルニチン誘導体（本発明においては広く「オルニチン」に包含される。）又はこれ等オルニチンと分岐鎖アミノ酸を含有する組成物を、そのまま単独で、医薬品、飲食品等として、投与又は摂取してもよいが、更にその効果を高めるために、前記有効成分と相加的或いは相乗的に働くと考えられる成分を添加使用することもできる。例えば、前記組成物の作用と相加的或いは相乗的に働くと考えられるアスコルビン酸、システイン或いはビタミンＥ等の抗酸化剤を併用して飲食品等として摂取することは更に望ましい摂取形態である。
本発明の炎症性疾患治療予防剤を医薬品や飲食品等の形態で投与又は摂取する場合、その投与量（経口）或いは摂取量については、本発明で対象とする病気、疾患の状態、病人の体重、年齢、体質、体調等によって調整されるべきであるが、オルニチン（遊離体、塩、誘導体等）を有効成分とする場合、一般に１日当たり、オルニチン（遊離体）に換算して、好ましくは０．２５〜１０ｇ程度、より好ましくは１〜１０ｇ程度の範囲で適宜選択することができる。一方、分岐鎖アミノ酸を有効成分とする場合、イソロイシン（遊離体）に換算して、好ましくは０．２５〜１０ｇ程度、より好ましくは１〜１０ｇ程度の範囲で適宜選択することができる。
前記オルニチンと分岐鎖アミノ酸を併用する場合には、前記オルニチン換算量を参考に適宜その使用量を選択することができる。
併用する場合、オルニチンと分岐鎖アミノ酸の配合比率については特に制限は無いが、重量比でオルニチン１に対して、好ましくは分岐鎖アミノ酸０．１〜１０程度、より好ましくは分岐鎖アミノ酸１〜５程度、更に好ましくは分岐鎖アミノ酸１〜２程度を使用することができる。
尚、医薬品として非経口投与する場合、患者の状態や製剤の形態等にもよるが、前記経口投与量の二分の一〜二十分の一程度を選択して決めることができる。
１日当たりの投与又は飲食（摂取）の回数について、前記病気の状態や、医薬品、飲食品等の形態によって１日１乃至数回に分けて摂取することができる。
次に、医薬品として使用する場合の製剤化について若干説明する。
本発明で使用する有効成分（１種又は複数）に加えて、薬理学的に許容し得る各種の製剤用物質（補助剤等として）を含むことができる。製剤用物質は製剤の剤型により適宜選択することができるが、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等を挙げることができる。更に、製剤用物質を具体的に例示すると、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、牛乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、及び溶剤、例えば滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセロールを挙げることができる。
本発明の薬剤は、公知の又は将来開発される様々な医薬製剤の形態、例えば、経口投与（内服薬）や、腹腔内投与、経皮的投与、吸入投与、目薬の形態等各種の投与形態に調製することができる。本発明の訳剤をこれら様々な医薬製剤の形態に調製するためには公知の又は将来開発される方法を適宜採用することができる。
これら様々な医薬製剤の形態として、例えば適当な固形又は液状の製剤形態、例えば顆粒、粉剤、被覆錠剤、錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、ジュース、懸濁液、乳濁液、滴下剤、注射用溶液、活性物質の放出を延長する製剤等を挙げることができる。
以上に例示した製剤形態にある本発明の薬剤には、薬効を奏するに有効な量の前記有効成分を含有すべきことは当然のことである。
本発明の薬剤の投与量については、前記の通りである。
本発明で使用する必須の有効成分以外で各種成分を使用することもでき、その場合でも、当該使用する成分に基づき知られている製剤技術を利用して、また各種の剤型に応じて必要な製剤を調製することができる。
前記の通り本発明は、別の形態として、オルニチン及び／又は分岐鎖アミノ酸を生体内に摂取又は投与することに特徴を有する炎症性疾患治療又は予防方法や、更に別の形態として、オルニチン及び／又は分岐鎖アミノ酸（活性成分）の炎症性疾患治療予防剤、好ましくは関節炎疾患予防治療剤への使用にも存する。
これらの発明については、何れも前記本発明の炎症性疾患治療予防剤についての説明や後述の実施例等に基づいて、また必要により従来の公知技術を参考にすることにより、容易に実施をすることができる。
好適な実施の形態
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれ等実施例に限定されるものではない。
（実施例１）
＜コラーゲン誘導関節炎マウスへのオルニチン投与効果＞
ＤＢＡ−１マウスを用いて定法によりコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を誘導し、Ｌ−オルニチン（遊離体）の薬剤効果を検討した。ＣＩＡについては、マウスをＩＩ型コラーゲンで感作することで誘発する実験的関節炎としてよく知られている（Ｃｏｕｒｔｅｎａｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２８３，６６６−６６８，１９８０参照。）方法を利用した。
マウス１匹当たり抗原量１００ｕｇ／０．１ｍｌのエマルジョンを尾根部に皮内注射した。初回感作の３週間後に追加免疫として同組成のエマルジョンを初回感作と同様１匹当たり抗原量１００ｕｇ／０．１ｍｌを尾根部に皮内注射した。追加免疫後４日目頃から関節炎が発症し、発赤を伴う浮腫として観察された。関節炎の程度は追加免疫から約２週間後にピークとなった。浮腫の程度は４段階に分類し四肢各々について肉眼的に判定した。オルニチン（０．０３％）は経口投与法にてＩＩ型コラーゲンとＦＣＡのエマルジョン皮内投与と同時に投薬を開始した。結果、コントロール群では２回目の皮下投与から６日目に５匹中１匹に、７日目に５匹中２匹に足関節に腫脹が観られ、１０日後には５匹中４匹のマウスにおいて関節腫脹の発症が確認された。
一方、オルニチン投与群では、２回目の皮下投与後１３日目まで全例のマウスにおいて発症は認められなかった（表１参照。）。
関節スコアーの平均は、コントロール群では２回目の皮下投与から１２日目に２．８まで上昇し、その後この値を１７日目まで維持した。オルニチン投与群では関節腫脹が認められず関節スコアーはゼロである（表１参照。）。
以上の結果から、オルニチンの投与によりＣＩＡが顕著に抑制されることが分かった。
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抗原惹起とは追加免疫のことである。
飲水量より換算したオルニチンの経口摂取量は約４０ｍｇ／ｋｇ／日となり、ヒトに換算すると約２−３ｇ／日の経口摂取に相当する。
（実施例２）
＜コラーゲン誘導関節炎マウスへの分岐鎖アミノ酸投与効果＞
ＤＢＡ−１マウスを用いて定法によりコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を誘導し、分岐鎖アミノ酸混合物の薬剤効果を上記実施例１と同様に検討した。条件は上記と同様である。
分岐鎖アミノ酸混合物（Ｌ−イソロイシン：Ｌ−ロイシン：Ｌ−バリン＝１：２：１．２（重量比）、何れも遊離体、以下「ＢＣＡＡ」と略す。）を２５０ｍｇ／Ｌの容量で経口投与した結果、２回目の皮下投与から７日目に５匹中１匹に、１２日目に５匹中２匹に足関節に腫脹が観られたが、その後１８日目まで発症マウス数の増加は見られなかった（表２参照。）。関節スコアーの平均は、コントロール群では２回目の皮下投与から１２日目に２．８まで上昇し、その後この値を１４日目まで維持していた。ＢＣＡＡ投与群では２回目の皮下投与から１２日目に１．４まで上昇したが、その後の上昇は見られなかった（表２参照。）。
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抗原惹起とは追加免疫のことである。
飲水量より換算したＢＣＡＡの経口摂取量は総量で約４０ｍｇ／ｋｇ／日となり、ヒトに換算するとＢＣＡＡを構成する各アミノ酸当たり０．５−２ｇ、総量で約２−３ｇ／日の経口摂取に相当する。
（実施例３）
＜慢性関節リウマチ自然発症モデルマウスへのオルニチン投与効果＞
慢性関節リウマチ（リウマチ関節炎）を自然発症するモデルマウスであるＳＫＧマウスを用いてＬ−オルニチン（遊離体）の投与効果を検討した。生後４、８週の雄のＳＫＧマウスに対し、実施例１と同様に０．０３％の濃度のＬ−オルニチン（遊離体）を経口投与法にて投与を行った。結果、生後４週で投与を開始した群では、コントロール群、投与群の何れの群においても生後１０週で発症が観られた。しかし、生後１１週ではコントロール群がスコアー平均０．７４に対してオルニチン投与群では０．１８と抑制傾向を示した。生後２０週でも対照群が関節スコアー平均３．１に対してオルニチン投与群では２．０と３５％の抑制効果が見られた。生後４週から投与した群では発症開始から抑制傾向が見られた。生後８週で投与を開始した群では、発症２週間後から抑制傾向が見られたが、その効果は生後４週開始の群に比べて低かった。
以上の結果から、オルニチンが慢性関節リウマチ自然発症モデルＳＫＧマウスに対して顕著な関節腫脹抑制効果を示すことが明らかになった。更に、投与時期に関しオルニチンはより早期に投与を開始した方が強い効果が得られることも明らかとなった（図１参照。）。
（実施例４）
＜慢性関節リウマチ自然発症モデルマウスへの分岐鎖アミノ酸投与効果＞
慢性関節リウマチを自然発症するモデルマウスであるＳＫＧマウスを用いて分岐鎖アミノ酸として前記ＢＣＡＡを使用してその投与効果を検討した。生後４週（ＲＡ発症前）、生後１２週（ＲＡ発症後）のＳＫＧマウス雄に対して実施例２と同様にＢＣＡＡを２５０ｍｇ／Ｌの容量で経口投与した。生後４週で実験開始した群は対照群、投与群の何れも生後１０週で発症を開始した。
以上の結果、関節腫脹のスコアーは生後１１週で対照群が０．５に対し投与群では０．２４と顕著な抑制傾向（５０％）が見られた。また、生後１５週でも対照群が１．９４に対し投与群では０．５と顕著な抑制傾向が見られた（図２参照。）。
（実施例５）
＜コラーゲン誘導関節炎マウスへのオルニチン投与効果の投与量による変化＞
同様にコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を誘導し、前記同様の実験を行った。Ｌ−オルニチン（遊離体）濃度として０．１５％、０．０３％及び０．００６％（何れも重量％）の３種類の水溶液を投与した結果、投与量に準ずる関節腫脹抑制効果が認められた。判定は追加免疫後、１４日目に実施した。その結果を表３に示す。
尚、摂取された水溶液の量は全ての実験群においてほぼ同程度であった。
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（実施例６）
＜ＳＫＧマウスへのオルニチン投与効果の投与量による変化＞
同様に慢性関節リウマチを自然発症するモデルマウスであるＳＫＧマウスを用いてオルニチン投与効果の投与量による変化を調べた。
Ｌ−オルニチン（遊離体）について前記同様の実験を行い、０．１５％、０．０３％及び０．００６％（重量％）の３種類の水溶液を投与した結果、投与量に準ずる関節腫脹抑制効果が認められた。その結果を図３に示す。
尚、摂取された水溶液の量は全ての実験群においてほぼ同程度であった。
（実施例７）
＜アジュバント誘導関節炎へのオルニチン投与効果＞
Ｌｅｗｉｓラットを用いて定法によりアジュバント誘導関節炎（ＡＡ）を誘導し、Ｌ−オルニチン（遊離体）の薬剤効果を検討した。ＡＡはラットに誘発できる実験的関節炎としてよく知られている（Ｔａｕｒｏｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏ．１６２，３３９−３５５，１９８８参照。）方法を利用した。ラット１匹当たり１％（Ｗ／Ｖ）のアジュバント５０ｕｌを右足蹠に投与した。投与１、２、３週間後の右足蹠の浮腫の容積をラット後肢浮腫測定装置により測定し、対象群に対する割合で効果を評価した。オルニチン（０．０３％）は経口投与法にてアジュバント投与と同時に投薬を開始した。生理食塩水投与群を１００％としたとき、オルニチン投与群の腫脹は対照群の２５％となり（１週目）、抑制が認められた。その結果を表４に示す。
以上の結果から、オルニチンは、ＣＩＡモデル及びＳＫＧモデルに続き、ＡＡモデルでも関節腫脹を顕著に抑制することを示した。
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投与量は実施例１と同様、０．０３％の濃度のオルニチンを経口投与した。
判定はアジュバンド投与後７、１４、及び２１日目に行った。
（実施例８）
＜コラーゲン誘導関節炎マウスへの固形飼料によるオルニチン投与効果＞
ＤＢＡ−１マウスを用いて定法によりコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を誘導し、固形飼料に含有させたＬ−オルニチン（遊離体）の薬剤効果を実施例１と同様に検討した。実験の条件は前記と同様である。その結果、コントロール群では２回目の皮下投与から１４日後には５匹中４匹のマウスにおいて関節腫脹の発症が確認されたが、オルニチン投与群では２回目の皮下投与後１４日目まで全例のマウスにおいて発症は認められなかった。発症率（％）についての結果を表５に示す。
以上の結果から、オルニチンは自由飲水による投与のみならず、固形飼料に含有させてもその関節腫脹抑制効果を有することが明らかとなった。
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投与には固形飼料１００ｇ当たり３０ｍｇのオルニチンを含むように調整されたＬ−オルニチン（遊離体）含有固形飼料を用いた。
給餌量より換算したオルニチンの経口摂取量は約４６ｍｇ／ｋｇ／日となり、ヒトに換算すると約２−３ｇ／日の経口摂取に相当する。
（実施例９）
＜コラーゲン誘導関節炎マウスへのオルニチン及び分岐鎖アミノ酸併用効果＞
ＤＢＡ−１マウスを用いて定法によりコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を誘導し、Ｌ−オルニチン（遊離体）（０．０１％）及び前記特定配合比率の分岐鎖アミノ酸混合物ＢＣＡＡ（１２５ｍｇ／Ｌ）を自由飲水法にて経口で併用投与した。対照群では、２回目の皮下投与から１２日目に１０匹中１０匹に足関節に腫脹が観られたのに対しオルニチン、ＢＣＡＡの単独投与群では１０匹中３匹に発症が観られたが、併用投与では発症したマウスは認められなかった。関節スコアーの平均は、対照群では２回目の皮下投与から１２日目に３．２に対し、オルニチン単独投与群では０．８、ＢＣＡＡ単独投与群では１．２であった。併用群では０であった。これ等の結果を表６に示す。
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飲水量より換算したオルニチンの経口摂取量は約１５ｍｇ／ｋｇ／日となり、ヒトに換算すると約２−３ｇ／日の経口摂取に相当する。ＢＣＡＡの経口摂取量は総量で約２０ｍｇ／ｋｇ／日となり、ヒトに換算するとＢＣＡＡを構成する各アミノ酸当たり０．２５−２ｇ、総量で約１−１．５ｇ／日の経口摂取に相当する。
発明の効果
オルニチン及び／又は分岐鎖アミノ酸を有効成分として含有する本発明の炎症性疾患治療予防剤は、特に慢性関節リウマチを典型とする炎症性疾患の治療、予防、進展防止及び／又は改善等に極めて有用であり、このような炎症性疾患の治療、予防、進展防止及び／又は改善等として副作用が無いか、極めて少ないため、医薬品（輸液、栄養剤等含む。）は勿論、中でも予防や改善効果を期待して、飲食品（医療用食品、健康食品、特定保険食品等を含む。）の形態でも適用することができる。
オルニチンと分岐鎖アミノ酸、特にロイシン、イソロイシン及びバリンの混合物とを、併用することにより前記効果が更に高まる。
本発明によれば、更に、この薬剤を使用した炎症性疾患治療又は予防方法や、当該有効成分の炎症性疾患治療予防剤への使用等も提供する。
従って、本発明は産業上、特に医療、医薬品、食品等の多くの分野Ｙにおいて極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
図１
図１は実施例３において得られた、慢性関節リウマチを自然発症するＳＫＧマウスへのオルニチン投与効果を示す図であり、ＳＫＧマウスにＬ−オルニチン（遊離体）を投与した際の関節スコアーの変化を経時的に示したものである。
尚、スコアーについては、未発症を０；指関節に赤い浮腫が認められた場合を０．１；四肢関節に腫れが認められた場合を０．５；及び関節の腫れが甚だしい場合を１．０と、それぞれ肉眼で判定した。四肢のスコアーの合計をマウスのスコアーとした。
■：対照；及び▲：オルニチン。
図２
図２は実施例４において得られた慢性関節リウマチを自然発症するＳＫＧマウスへの分岐鎖アミノ酸混合物ＢＣＡＡの投与効果を示す図であり、ＳＫＧマウスにＢＣＡＡを投与した際の関節スコアーの変化を経時的に示したものである。
尚、スコアーについては、未発症を０；指関節に赤い浮腫が認められた場合を０．１；匹肢関節に腫れが認められた場合を０．５；及び関節の腫れが甚だしい場合を１．０と、それぞれ肉眼で判定した。四肢のスコアーの合計をマウスのスコアーとした。
■：対照；及び▲：ＢＣＡＡ。
図３
図３は実施例６において得られた、オルニチンの濃度の相違による慢性関節リウマチの抑制効果を示す図である。ＳＫＧマウスにＬ−オルニチン（遊離体）を経口投与した際の関節スコアーの変化を経時的に示し、Ｌ−オルニチンに関し３種の異なる濃度での投与量依存性を観察したものである。
尚、スコアーについては、未発症を０；指関節に赤い浮腫が認められた場合を０．１；四肢関節に腫れが認められた場合を０．５；及び関節の腫れが甚だしい場合を１．０と、それぞれ肉眼で判定した。四肢のスコアーの合計をマウスのスコアーとした。
□：対照群；○：０．００６％；●：０．０３％；及び■：０．１５％（数値は何れも水溶液中のオルニチン濃度（重量％））。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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