(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
センシタイザー剤を体内に投与するソノダイナミック療法に用いられるセンシタイザー剤であって、当該センシタイザー剤が、
（ｉ）アルコール（ＯＨ）、第一アミン（ＮＨ2）及び第二アミン（ＮＨ）を包含するニトリロ基、カルボン酸（ＣＯＯＨ）、スルフヒドリル基（ＳＨ）、リン酸基、ホスホン酸基、フエノール基、スルホン酸基、炭素−炭素二重結合及びケトンからなる群から選択される１個以上の化学官能基を有するポリアルキレンオキシド系界面活性剤化合物からなる分子量１０００〜５００００の水溶性ポリマーコンジュゲートであって、該化学官能基が、シアニン又はシアニノイド化合物及びフタロシアニン又はフタロシアニノイド化合物から選択される発色団とコンジュゲートしている、水溶性ポリマーコンジュゲートであるとともに、（ｉｉ）超音波の作用によって該センシタイザー剤が遊離基へと変換することによってソノダイナミック療法の細胞変性効果を増強することができる、
生理学的に許容し得る遊離基前駆物質である、センシタイザー剤。
【請求項２】
前記水溶性ポリマーコンジュゲートがさらに標的ベクターを含む、請求項１記載のセンシタイザー剤。
【請求項３】
前記界面活性剤化合物がポリアルキレンオキシドブロックコポリマー部分を有する、請求項１記載のセンシタイザー剤。
【請求項４】
前記標的ベクターが、抗体、抗体フラグメント、受容体結合ペプチド及びペプトイド、腫瘍標的薬剤化合物、血中残留延長化合物、葉酸及びその誘導体から選択される、請求項２記載のセンシタイザー剤。
【発明の詳細な説明】
本発明は、ソノダイナミック療法（sonodynamic therapy）によるヒトまたは動物の体の治療法における超音波感受性変性剤、例えばポリアルキレンオキシドおよびそれらの誘導体のような水溶性ポリマー、界面活性剤、水中油形乳剤、安定化粒子、およびある種の発色団基例えばスルホン化色素の使用に関する。
フォトダイナミック（photodynamic）療法（PDT）での色素化合物の使用は十分に確立したものである。PDTにおいて、病変部位（例えば腫瘍）に蓄積する例えばポルフィリンのような色素化合物を患者に投与し、その後病変部位に色素化合物で吸収される波長の光が照射されている。生じた局在する一重項酸素の存在により、病変部位で細胞が破壊される。
最近、ある種の色素化合物、特にポルフィリンが病変部位に超音波照射を施すと、同様な細胞障害性効果（cytopathogenic effect）を達成し得ることが見い出された。この技術をソノダイナミック療法（SDT）と称し、例えばJeffers等, IEEE Ultrasonics Symposium, 1991, 1367-1370頁, Umemura等, Ultrasonics Sonochemistry 3: S187-191（1996）, Yumita等, Jpn J. Cancer Res. 80: 219-222（1989）, Umemura等, Jpn J. Cancer Res. 81: 962-966（1990）, Umemura等, Jpn J. Cancer Res. 84: 582-588（1993）, Yumita等, Jpn J. Cancer Res. 87: 310-316（1996）, Yumita等, Cancer Letters 112: 79-86（1997）, Miyoshi等, Radiation Research 143: 194-202（1995）, Kessel等, Int. J. Radiat. Biol 66: 221-228（1994）およびKessel等, J. Photochem. and Photobiol. B. Biology 28: 219-221（1995）に論述されている。
本文で使用されている「ソノダイナミック療法剤」（sonodynamic therapy agent）は「超音波感受性変性剤」（ultrasound-susceptibility modification agent）と同義である。有効量の超音波の音エネルギーと共に本発明のSDT剤の一種または二種以上の有効量を、ヒトまたは動物体の細胞例えば病変細胞および疾患の原因となる細胞に投与した場合、これらの細胞に対する細胞障害となる。前記有効量のソノダイナミック療法剤の不存在下では、有効量の超音波の音エネルギーは実質的に細胞に対して非細胞障害性であり、また前記有効量の超音波の音エネルギーの不存在下では、前記有効量のソノダイナミック療法剤は細胞に対して実質的に非細胞障害性である。
「細胞障害性」とは、本文では細胞毒性、細胞崩壊性、細胞致死性、細胞破壊性、細胞増殖抑制性の各用語を包含し、またヒトまたは動物体に関し、細胞死、細胞フラグメント化、細胞破壊、細胞休眠または病変状態乃至非病変状態の変化（感染乃至非感染を包含する）をもたらす細胞機能の一種または二種以上の変化の開始または増強または開始に関係するその他の記述語を包含することを意味している。
mmの距離にわたって散乱することにより急速に拡散するPDTで使用する光よりも超音波はさらに深く体に浸透する点で、SDTはPDTにまさる利点を有している。
本発明の一つの特徴は、ある種の物質例えば水溶性ポリマー（例えば、ヘキサマーおよびそれ以上のポリマー）、特にポリアルキレンオキシド化合物がソノダイナミック療法（SDT）で有効なセンシタイザー剤であるとの認識に基づくものである。
センシタイザー剤とは、SDT手法の細胞障害効能を増強する物質を意味する。本文における「センシタイザー剤」（sensitizer agent）はソノダイナミック療法（SDT）剤と同義である。このような剤はそれ自体で、またはその他のセンシタィザー剤例えば上に列挙した参考文献に記述されているポリフィリン化合物と組み合わせて投与することができる。
従って、本発明の一つの特徴からみるに、センシタイザー剤をヒトまたは動物の体（例えば、血管化哺乳動物、鳥類または爬虫類動物の体）に投与し、そして前記体を超音波に暴露してその部位（例えば、腫瘍部位）で細胞障害効果を達成するソノダイナミック療法によるヒトまたは動物体の治療法において、前記センシタイザー剤が前記ソノダイナミック療法の細胞障害効能を増強し得る生理学的に許容し得る物質である前記治療法が提供される。
センシタイザー剤は、水溶性ポリマーおよびそれらの誘導体、界面活性剤、水中油形乳剤、安定化粒子およびある種の発色団基例えばスルホン化色素から選択されうる。好ましくは、センシタイザー剤は水溶性ポリマー例えばポリアルキレンオキシドまたはそれらの誘導体である。
本発明のさらに他の特徴からみると、ソノダイナミック療法の方法で使用するためのセンシタイザー組成物の製造のための生理学的に許容し得る水溶性ポリマー化合物またはそのコンジュゲートの使用が提供される。
本発明の方法では、SDTの標的部位を好ましくはSDTを開始する前に超音波照射に暴露する。これは標的部位でのセンシタイザー剤の取込みを容易にする。
本発明に従ってセンシタイザー剤として有用な水溶性ポリマー化合物は、好都合には150〜1000000（殊に、500〜500000、最も好ましくは1000〜50000）の分子量を有し、そして好ましくはヘキサマーまたはそれ以上のポリマーである。ポリマーは好ましくはポリマー主鎖に２〜６個の原子、殊に２、３または４個の原子を与えるモノマー残基を含有している。場合によっては、ポリマーは遊離基前駆物質として機能し得る基または酸化を受けて該基を生成し得る基を含有している。特に好ましくは、ポリマーはエーテルまたはヒドロキシ基またはヘテロ原子：ヘテロ原子結合（例えば、窒素−窒素、窒素−酸素または酸素−酸素結合例えば過酸化物結合）を有する基を含有している。ポリマーは好都合にはモノマー例えばアルキレンオキシド、ヒドロキシアルキル−アクリレートまたはメタクリレート、ビニルアルコール、ビニルピロリドン、アクリルアミド、スチレン等の残基からなっていてよい。ポリマー化合物は場合によっては部分的に酸化されていて、例えばヒドロペルオキシドまたはペルオキシドであり、すなわちペンダント基-OOHまたは-OOR1（ここでR1は30個までの炭素原子を含有する線状、分枝鎖状および（または）環状アルキルまたはアルケニル基、またはヒドロキシ残基例えばPEG-である）を担持している。このような基の導入はポリマーを空気または酸素に暴露することによりよく行われている。ペルオキシ基は、金属触媒例えばコバルト、マグネシウムまたは銅の塩、例えばSosnovskyおよびRawlinson（Organic Peroxides 2巻, 153-268頁, Interscience, New York 1970）に開示されているような塩化第一銅の存在下に、ヒドロペルオキシドで処理することによって導入できる。このような基または結合の存在によって、SDTで超音波照射の作用下に遊離基に変換可能な遊離基前駆物質として機能する化合物となる。
コンジュゲートとは、さらにその他の部分例えば発色団、標的ベクターまたはレポーター部分の一個または二個以上に結合されたポリマー性部分、好ましくは前のパラグラフに記載したようなポリマー性化合物の残基を含有する例えば化合物または集合体のような合成物を意味する。すなわち、ポリマー性部分は発色団とコンジュゲートしていてもよいが、ポリマー性部分はそれ自体発色団である必要はなく、単なる非発色団性の非コンジュゲート（水溶性）ポリマーを有利に本発明の方法に使用することができる。
本文で使用される分枝鎖ポリマーは、少なくとも一個の分枝鎖基を有し、この基に少なくとも追加の一個のポリアルキレンオキシジル基が結合されているポリアルキレンオキシド部分である。
一つの特徴によれば、ポリアルキレンオキシド部分の主鎖中の分枝鎖基は窒素原子および炭素原子からなる群から選択される。少なくとも一個の追加のポリアルキレンオキシジル基は、炭素−炭素、炭素−窒素および炭素−酸素化学結合からなる群から選択される化学結合により、または連結基により分枝鎖基に結合されている。
窒素分枝鎖基に対する好ましい連結基には次のものが包含される：
メチレン基、〔-CH2-〕；
ポリ（メチレン）基、〔-（CH2）n-〕（ここでｎは２乃至約16の整数である）、例えば窒素NH基と末端ハライド（例えばCl、Br、Ｉ）またはスルホネート基（例えば、メタンスルホネート、トルエンスルホネート、ベンゼンスルホネート等）を含有するアルキレニル基との反応によって形成し得るもの；
アルキレンカルボニル基〔-（CH2）n″-C（=O）-〕（ここでn″は１乃至約16の整数である）例えばNH基とハロアルキレンカルボニル基との反応により形成し得るもの；
エチレンスルホニルエチレン基〔-CH2CH2-S（=O）2-CH2CH2-〕、例えばNH基とビニルスルホニルエチレン基〔CH2=CH-S（=O）2-CH2CH2-〕との反応によって形成し得るもの；
エチレンスルホニルメチレンオキシメチレンスルホニルエチレン基〔-CH2CH2-S（=O）2-CH2-O-CH2-S（=O）2-CH2CH2-〕、例えばNH基とビニルスルホニルメチレンオキシメチレンスルホニルエチレン基〔CH2=CH-S（=O）2-CH2-O−CH2-S（=O）2-CH2CH2-〕との反応により形成し得るもの；
エチレンスルホニルメチレンスルホニルエチレン基〔-CH2CH2-S（=O）2-CH2-S（=O）2-CH2CH2-〕、例えばNH分枝鎖基とビニルスルホニルメチレンスルホニルエチレン基〔CH2=CH-S（=O）2-CH2-S（=O）2-CH2CH2-〕との反応により形成し得るもの；
カルボニル基〔-（C=O）-〕、この基は例えばNH分枝鎖基と、活性化エステル例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミジル−エステル、混合無水物例えばトリフルオロメチルオキシカルボニルまたは酸ハロゲン化物例えば酸クロリド例えばCl-（C=O）-との反応により形成されるアミド連結基を包含し得るもの；
スルホニル基〔-S（=O）2〕、この基は例えばNH分枝鎖基と、スルホニルハライド例えばポリアルキレンオキシジルアルキレンスルホニルクロリド、例えばCl-S（=O）2-（CH2）n-O-PAO（ここでｎは２乃至約16の整数であり、そしてPAOはポリアルキレンオキシジル基である）との反応によって形成されるスルホンアミド連結基を包含し得るもの；
カルボニルオキシ基〔-C（=O）-O-〕例えばウレタン基にみられるような基、例えばポリアルキレンオキシ基をホスゲン次いでNH基と反応させることによって得ることができるもの；
チオカルボニル基〔-（C=S）-〕例えばチオウレタン基にみられるような基例えばポリアルキレンオキシ基をチオホスゲン次いでNH基と反応させることによって得ることができるもの；
アルキレンカルボニルオキシメチレンオキシカルボニルアルキレン基〔-（-CH2）n′-C（=O）-O-C（R′R″）-O-C（=O）-（-CH2-）n′-〕（ここで各々のn′は独立して１〜16の整数の群から選択され、そしてR′およびR″の各々は独立してＨおよびメチルからなる群から選択される）；および
カルボニルアルキレンカルボニル基〔-C（=O）-（CH2）w-C（=O）-〕（ここでｗは１乃至約６の整数である）例えばスクシネートおよびアジペート。
炭素分枝鎖基に対する好ましい連結基には次のものが包含される：
エーテル基〔-O-〕；
チオエーテル基〔-S-〕；
チオスルホキシド基〔-S（=O）-〕；
チオスルホニル基〔-S（=O）2-〕;
オキシカルボニル基〔-O-C（=O）-〕；
アミノカルボニル基〔-NH-C（=O）-〕；
カルボニル基〔-（C=O）-〕；
カルボニルオキシ基〔-C（=O）-O-〕；
カーボネート基〔-O-C（=O）-O-〕；
カルボニルオキシメチレンオキシカルボニルアルキレン基〔-C（=O）-O-C（R′R″）-O-C（=O）-（-CH2）n′-〕（ここでn′は１〜16の整数であり、そして各々のR′およびR″は独立してＨおよびメチルからなる群から選択される）；
ウレタン基〔-O-C（=O）-NH-〕；および
チオウレタン基〔-O-（C=S）-NH-〕。
別の特徴では、分枝鎖基は単位-NR1′-CR2′R3′-R4′R5′-を包含することができ、この単位において
R1′はＨ、線状、分枝鎖状、飽和、不飽和であるか、または約３乃至10個の炭素原子の炭素環を含有していてよい約１乃至約16個の炭素原子のアルキル基またはアルキル基がすぐ上に定義されているカルボニルアルキル基からなる群から選択され；
R2′およびR3′は独立してＨ、線状、分枝鎖状、飽和または不飽和であり得る、そして３乃至約10個の炭素原子を含有し、そしてNH、Ｏ、Ｓ、O-C（=O）およびC（=O）-Oからなる群から選択されるヘテロ原子を介してポリアルキレンオキシジル基に結合されている１乃至約16個の炭素原子のアルキレン基、例えば４−（ポリアルキレンオキシエチルカルボニルアミノブチル）、〔PAO-CH2CH2C（=O）NH-（CH2）4-〕、２−（ポリアルキレンオキシカルボニル）エチル、〔PAO-C（=O）CH2CH2-〕、ポリアルキレンオキシカルボニルメチル、〔PAO-C（=O）CH2-〕、ポリアルキレンオキシエチルアミノカルボニルメチル、〔PAO-CH2CH2NHC（=O）CH2-〕、ポリアルキレンオキシエチルアミノカルボニルエチル、〔PAO-CH2CH2NHC（=O）CH2CH2-〕、およびポリアルキレンオキシエチルチオメチル、〔PAO-CH2CH2-S-CH2-〕から選択され；
R4′およびR5′はＨ、線状、分枝鎖状、飽和、不飽和であってよいか、または３乃至約10個の炭素原子の炭素環基を含有していてよい１乃至約16個の炭素原子を有するアルキル基、またはアルキル基が先の定義のとおりであるカルボニルアルキル基からなる群から独立して選択され、または好ましくはR4′およびR5′は一緒になってカルボニル基を形成し；
そして、R2′R3′の少なくとも一個はＨではないものである。
好ましい単位-NR1′-CR2′R3′-CR4′R5′-はポリアルキレンオキシド部分の主鎖におけるリジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびセリンからなる群から選択され、そして例えばリジンのε−アミン部位、アスパラギン酸のγカルボン酸部位、グルタミン酸のδカルボン酸部位、システインのβスルフヒドリル基およびセリンのβ−ヒドロキシ部位に結合された少なくとも一個の追加のポリアルキレンオキシドを含有している。
別の特徴では、一個の分枝鎖基とポリアルキレンオキシド部位の主鎖中の炭素原子とが、またポリアルキレンオキシド部分の主鎖中の二個の分枝鎖基が２〜12個の炭素原子のアルキレン基により結合されている。アルキレン基は線状または分枝鎖状であり、例えばエチレン、プロピレン、ブチレン、イソブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、オクチレン、デシレンおよびドデシレンである。アルキレン基は飽和または不飽和であり、例えば２−ブテニリデン、イソプレニレンおよび２−ブチニリデンである。別の特徴では、アルキレン基は飽和または不飽和環状基を包含していてよく、例えばシクロプロピリデン、シクロブチリデン、1,2−シクロペンチリデン、1,3−シクロペンチリデン、1,2−シクロヘキシリデン、1,3−シクロヘキシリデン、1,4−シクロヘキシリデン、例えばジエンとジエノフィルとのDiels-Alder反応により形成されるシクロヘキセニリデン環、1,4−シクロヘキシリデンビスメチレン、エチレン−1,2−シクロプロピリデンメチレン、1,1−スピロシクロプロピリデンビスメチレン等、そして酸素または硫黄エーテル原子を含有することができ、例えば2,5−テトラヒドロフラニレン基および2,6−テトラヒドロピラニレン基である。
他の特徴では、ポリアルキレンオキシド部分の主鎖での一個の分枝鎖基および一個の炭素原子、またはポリアルキレンオキシド部分の主鎖での二個の分枝鎖基は６〜14個の炭素原子の芳香環、例えばｐ−フェニレン、またはｍ−フェニレン、またはｍ−トルイデン、9,10−アントラセニリデン、または1,4−ナフタレニリデン、またはアラルキレン基例えばｐ−フェニレンビスメチレンまたは9,10−アントラセニリデンビスメチレンにより分離されていて、該芳香環は窒素、酸素および硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子を一個または二個以上含有する５員環または６員環のヘテロシクリレン基、例えば2,6−ピリジニレン、1,4−イミダゾリデン、5,8−キノリニリデン、および1,1−スピロ−2,6−ジチアシクロヘキシレンまたは対称トリアジニレン基を包含することができる。
適当なポリマーおよびポリマー性部分の例には次のものが包含される：
ポリアルキレンオキシドポリマーおよびコポリマー（ランダムおよびブロックおよびグラフトコポリマーを包含する）およびオリゴマー例えばPEGとしても知られているポリ（エチレングリコール）としても知られているポリ（エチレンオキシド）、さらにはpoloxamersおよびpoloxamines（Pluronics（CA登録番号106392-12-5）およびTetronics（CA登録番号110617-70-4）としても知られている）；PEG誘導体例えば１乃至約20個の炭素原子を含有するアルキル、アルケニルおよびアルキニル基のPEGモノ−およびビス−エーテル、これらは線状または分枝鎖状であってよく、そして３乃至10個の炭素のリングサイズを有するシクロアルキルまたはシクロアルケニル基（好ましくは、シクロヘキセニル、シクロオクテニルまたはシクロオクタジエニル基）を包含し、その結果、基の中の炭素の総数が20未満であり；１乃至約20個の炭素原子を含有するアルキル、アルケニルおよびアルキニルカルボン酸基のPEGモノ−およびビス−エステル（α−メトキシ−PEGモノエステルを包含）およびPEGモノ−およびビス−アミド（α−メトキシ−PEGモノアミドを包含）、これらは線状または分枝鎖であってよく、そして３乃至10個の炭素のリングサイズを有するシクロアルキルまたはシクロアルケニル基（好ましくは、シクロヘキセニル、シクロオクテニルまたはシクロオクタジエニル基）を包含し、その結果、基の中での炭素の総数が20未満であり；
PEGおよびPEG誘導体のヒドロペルオキシドおよびアルキルおよびアルケニルペルオキシド、ここでアルキルおよびアルケニルは先に記載のとおりであり、そしてこれらはヒドロペルオキシド（構造上は-O-CH（OOH）-CH2-と記載される）またはペルオキシド（構造上は-O-CH（OOR1）-CH2-と記載され、ここでR1は先に記載のとおりのアルキルまたはアルケニルである）をポリマー分子当たり一単位ほどの小さい量のヒドロペルオキシドまたはペルオキシド乃至ヒドロペルオキシドまたはペルオキシドまたはヒドロペルオキシドおよびペルオキシド両者の混合物であるポリマーのモノマー単位の約15％までの範囲にある含量で包含し；
ポリヨウ素化芳香族化合物とコンジュゲートしたPEG誘導体および先に記載のとおりのPEGのペルオキシドおよびヒドロペルオキシド、例えば一、二および三ヨウ素化芳香族安息香酸誘導体のPEGエステルおよびアミド例えばジアトリゾ酸エステルおよびアミド；
ポリ（プロピレングリコール）（PPG、ポリ（プロピレンオキシド）としても知られている）およびPPG誘導体およびPEG-PPGランダム、好ましくはプロックコポリマーおよびこれらのヒドロペルオキシド（ヒドロペルオキシドがPEGの一部であるときは、-O-CH（OOH）-CH2-と構造上記載され、そしてヒドロペルオキシドがPPGの一部であるときは、-O-C（CH3）（OOH）-CH2-そしてまた-O-CH（CH3）-CH（OOH）-と構造上記載される）およびペルオキシド（ペルオキシドがPEGの一部であるときは、-O-CH（OOR1）-CH2-と構造上記載され、そしてペルオキシドがPPGの一部であるときは、-O-C（CH3）（OOR）-CH2-そしてまた-O-CH（CH3）-CH（OOR）-と構造上記載され、ここでR1は先の記載のとおりのアルキルまたはアルケニルである）；
ポリ（ヒドロキシアルキル）アクリレートおよびメタアクリレートおよびそれらのヒドロペルオキシドおよびペルオキシド；ポリビニルアルコールおよびそのヒドロペルオキシドおよびペルオキシド；
ポリビニルピロリドンおよびそのヒドロペルオキシドおよびペルオキシド；
ポリアクリルアミドおよびそのヒドロペルオキシドおよびペルオキシド；
水溶性ポリスチレンおよびそれらのヒドロペルオキシドおよびペルオキシド、スルホン化ポリスチレン、ヒドロキシアルキル化およびポリヒドロキシアルキル化ポリスチレン、およびヒドロキシアルキル化およびポリヒドロキシアルキル化ポリスチレンのPEGエーテルおよびエステルを包含し；
PEGおよびPEGのヒドロペルオキシドおよびペルオキシドを包含する界面活性剤、例えば空気中の酸素の作用により酸化されたPluronicsと（例えばBASFからのPluronic F-108）。
ポリマー性化合物はホモ−またはコポリマーであってよく、そしてコポリマーはランダム、ブロックまたはグラフトであってよいし、またポリオキサミンポリマー中に個々のコモノマー残基例えばジアミン残基を含有していてもよい。ポリアルキレンオキシドポリマーが殊に好ましい。
別の態様では、本発明の好ましい生理学的に許容し得るSDT剤は界面活性剤分子である。
本発明では、界面活性剤分子とは、McCutcheon’s Directories, Volume 1: Emulsifiers and Detergents（1994）に列挙されているような乳化剤または洗浄剤であり、そしてアルコール（OH）、ニトリロ基（第一アミン（NH2）および第二アミン（NH）を包含する）、カルボン酸（COOH）、スルフヒドリル（SH）、リン酸基、ホスホン酸基、フェノール性基、スルホン酸基、炭素−炭素二重結合およびケトンからなる群から選択される化学官能基を少なくとも一個含有している乳化剤または洗浄剤と定義される。
従って、センシタイザー剤をヒトまたは動物の体に投与し、そしてこの体を超音波に暴露してその中の部位で細胞変性効果を達成するソノダイナミック療法によりヒトまたは動物の体を治療する方法において、センシタイザー剤がアルコール（OH）、ニトリロ基（第一アミン（NH2）および第二アミン（NH）を包含する）、カルボン酸（COOH）、スルフヒドリル（SH）、リン酸基、ホスホン酸基、フェノール性基、スルホン酸基、炭素−炭素二重結合およびケトンからなる群から選択される化学官能基を少なくとも一個含有している界面活性剤化合物である上記の方法が提供される。
本発明のさらに他の特徴では、界面活性剤化合物がアルコール（OH）、ニトリロ基（第一アミン（NH2）および第二アミン（NH）を包含する）、カルボン酸（COOH）、スルフヒドリル（SH）、リン酸基、ホスホン酸基、フェノール性基、スルホン酸基、炭素−炭素二重結合およびケトンからなる群から選択される化学官能基を少なくとも一個含有している生理学的に許容し得る界面活性剤化合物のソノダイナミック療法に使用するためのセンシタイザー組成物の製造のための使用が提供される。
界面活性剤分子中の化学官能基は当業者に周知の化学反応により相互変換することができる。例えば、ヒドロキシ基はメタンスルホン酸エステルに変換される。このエステルはアジ化ナトリウムで処理し、そして還元してアミン基を形成させることができる。カルボン酸基およびケトンは還元してアルコールを形成させることができ、そしてアルコールは酸化してケトン、アルデヒドおよびカルボン酸基を形成させることができる。
有用な界面活性剤分子は、分散剤、湿潤剤、吸着剤、凝結防止剤、土壌再処理剤、帯電防止剤、結合剤、担体、真珠箔剤、コンディショニング剤、ヒドロトロープ剤、消泡剤、皮膚緩和剤、凝集剤、吸湿剤、滑沢剤、乳白剤、可塑剤、防腐剤、離型剤、はがれ防止剤、安定剤、懸濁剤、増粘剤、UV吸収剤、撥水剤、ワックスおよび艶出剤として機能することができ、そしてアルコール（OH）、ニトリロ基（第一アミン（NH2）およぴ第二アミン（NH）を包含する）、カルボン酸（COOH）、スルフヒドリル（SH）、リン酸基、ホスホン酸基、フェノール性基、スルホン酸基、炭素−炭素二重結合およびケトンからなる群から選択される化学官能基を少なくとも一個含有している乳化剤または洗浄剤である。
好ましくは、界面活性剤分子は、場合によっては本文に定義したような分枝鎖基を含有するポリアルキレンオキシド部分；さらに好ましくは、場合によっては本文に定義したような分枝鎖基を含有するポリアルキレンオキシドブロックコポリマー性部分；そして最も好ましくは、場合によっては本文に定義したような分枝鎖基を含有し、そしてポリプロピレンオキシドブロックおよびポリエチレンオキシドブロックからなるポリアルキレンオキシドブロックコポリマー性部分を包含している。有用な界面活性剤分子の例には、ブロックコポリマー例えばICI Surfactantから入手可能なAL 2070、Rhone-Poulencから入手可能なAntaroxブロックコポリマー、DeForest, Inc.から入手可能なDelonicブロックコポリマー、Texaco Chemical Canadaから入手可能なHartopolブロックコポリマー、PPG Industriesから入手可能なMacolブロックコポリマー、Huls Americaから入手可能なMarloxブロックコポリマー、BASF Corp.から入手可能なPluronicブロックコポリマー（Pluronic F, L, PおよびRを包含する）、Olin Corp.から入手可能なPoly-Tergentブロックコポリマー、およびBASF Corp.から入手可能なTetronicおよびTetronic Rブロックコポリマーがあげられる。現在好ましい界面活性剤分子には、TetronicおよびPluronicブロックコポリマーがあげられ、そして現在最も好ましいのはTetronicブロックコポリマーである。
ポリアルキレンオキシド化合物は、例えばPluronics、Tetronicsまたは様々な分子量のPEGとして商業上容易に入手し得る。
ポリアルキレンオキシドはポリアルキレンオキシド部分（例えば、式（（X）nO）pの部分、式中Ｘはアルキレン基（例えば、C2-4アルキレン）であり、そしてｎおよびｐは正の整数であり、場合によってはアルキレンアミノまたはアルキレンジアミノ基を結合している）を含有していてよく、また簡単な官能基例えばヒドロキシ、アミン、ホスフェートおよびホスホネート基の末端基を有する部分のみからなっていてもよい。
本発明に従って使用される化合物のコンジュゲートは一緒に共有結合されているその他の部分、例えば発色団、親油性基、生物標的ベクター基およびインビボ診断画像法例えばMRおよびＸ線（例えばCT）画像で検出可能な基を含有していてよい。
その他の基の例の、親水性ポリマーはコンジュゲートして遊離基前駆物質を包含することができる。すなわち、例えば、このコンジュゲートは式PAO-C6H4-CHR′R″またはPAO-O-CH2CH=CH2の化合物であり、式中PAOはポリアルキレンオキシド部分（例えば、PEG）であり、R′はＨまたはアリールであり、そしてR″はアリール（ここでアリールはいずれの飽和または不飽和、同素環または複素環式、単環または多環式アリール基、例えば場合によってはＯ、ＮおよびＳから選択された環ヘテロ原子１、２または３個を含有する単環または二環式アリール基）である。
水溶性ポリマー部分がより大きな分子構造の一部である場合、分子全体は単一の水溶性ポリマー部分（例えば、側基または末端基として、または二個の他の部分の連結基として）を含有していてもよいし、また分子全体はこのような部分を複数（すなわち、２またはそれ以上）、例えば側基または末端基として、または例えば多発色団化合物中の発色団基を連結する連結基として含有していてもよい。
本発明の特に好ましい態様では、センシタイザー化合物は、インビボ診断画像法で検出可能なレポーター部分（Ｒ）および、場合によっては、例えば化合物の血液保持時間を延長することにより、または化合物を特別な体の部位、例えば病変部位またはSDTのためのその他の提案された部位に積極的に標的設定することにより、センシタイザー化合物の生体内分布を変更するのに役立つベクター部分（Vc）を含有している。このようにして、適切な画像法を用いるとレポーター部分はSDTのための処置部位の位置づけを容易にする。この画像と療法との組み合わせは新規であって、本発明のさらにその他の特徴を形成している。この特徴からみて、本発明によれば、ソノダイナミック療法によるヒトまたは動物体（例えば血管化哺乳動物、鳥類または爬虫類の体）の治療方法が提供され、この方法ではセンシタイザー剤を前述した体に投与し、そして前述した体に超音波を暴露してその中の部位（例えば腫瘍部位）で細胞変性効果を達成させ、そして前記センシタイザー剤は親水性ポリマー部分およびインビボ診断画像法で検出可能なレポーター部分からなる生理学的に許容し得るコンジュゲートであり、そして前記の方法を用いて前記コンジュゲートが分布している前記体の少なくとも一部分の画像を発生させ、例えばソノダイナミック療法において超音波による照射のための部位を特定化するか、または前記体内の部位のソノダイナミック療法の進行を追随する。
この方法では、いずれの適当な画像法も使用することができる。例えば、Ｘ線、MRI、超音波、光画像、シンチグラフィー、インビボ鏡検例えば共焦点光音響画像形成および音響光学画像形成および目視観察および写真画像形成、磁気断層撮影法または電気インピーダンス断層撮影法を使用できるが、Ｘ線、MRI、超音波、光画像形成およびシンチグラフィー（特にＸ線、MRIおよび超音波）が好ましい。
さらにその他の特徴からみて、本発明によれば、SDTによる治療法で使用するための組成物を製造するための親水性ポリマー部分およびインビボ診断画像形成で検出可能なレポーター部位からなる生理的に許容し得るコンジュゲートの使用が提供される。
使用するレポーター部分の選択は言うまでもなく画像法の選択に左右される。Ｘ線画像形成については、レポーターは好ましくは重原子（37より大きい原子番号）、例えば共有結合された種例えばヨウ素、キレート化重金属イオンまたは錯イオン、または微粒子物質例えば重金属化合物、不溶性ヨウ素化有機化合物またはヨウ素化有機化合物または重金属化合物を封入している小胞である。ヨウ素化有機化合物が殊に好ましい。
MRIについては、レポーターは好ましくは常磁性、超常磁性、強磁性またはフェリ磁性物質であり、例えば、キレート化遷移金属またはランタニドイオン（例えば、Gd、Dy、MnまたはFe）または超常磁性金属酸化物粒子である。また、これらの物質はセンシタイザーの残部に直接結合されていてもよいし、またはセンシタイザーの残部に結合している小胞内に閉じ込められていてもよい。
超音波画像形成については、画像形成および療法が同一または類似の装置で実施することができるので特に好ましく、レポーターは好ましくはセンシタイザーの残部に結合された微粒子物質、例えばエコー源性造影剤例えば気体または気体前駆物質（37℃で気体の物質）またはこれらの混合物を封入している小胞（例えば、リポソーム、ミセルまたはマイクロバルーン）である。エコー源性物質としては、ペルフルオロアルカン例えばペルフルオロペンタンおよびペルフルオロブタンを特にあげることができる。
超音波レポーターは言うまでもなく治療的処置に超音波を使用する点からみて非常に好ましい。すなわち、超音波レポーター標識センシタイザーによるSDT（または超音波造影剤によるSDT）では、同一の超音波照射を用いて治療および画像形成が同時に可能となる。
シンチグラフィーについては、レポーターは一般には共有結合非金属放射性核種（例えば、ヨウ素アイソトープ）またはキレート化された金属放射性核種である。
光画像形成については、レポーターは発色団であり（本文で使用される発色団なる用語は300〜1300nm、好ましくは600〜1300nmで光を吸収する構造を包含している）、そして蛍光団およびリン光物質および／または光散乱体例えば発色団と会合しているかまたはいない微粒を包含している。
適当な発色団の例には次のものがあげられる：ポルフィリン例えばヘマトポルフィリン、ジヘマトポルフィリンエステル、ヘマトポルフィリンジメチルエーテル、Photohem（e）、ポリヘマトポルフィリン、ベンゾポルフィリン誘導体（例えばBPD、BPD-MAモノ−酸環ベルテポルフィン（verteporfin）、メタロテトラベンゾポルフィリン、メソ−テトラヒドロキシフェニルポルフィン（mTHPP）およびオルト−およびパラ−形態、フッ素化THPP、メソ−テトラ−（４−カルボキシフェニル）ポルフィン、ルテチウムテキサフィリン（LuTex、PCL-0123）、メソ−（２−シアノビニル）ポルフィリン、ジメトキシヘマトポルフィリンIX（DMHp）、メソテトラフェニルポルフィンテトラスルホネート（TPPS4）、９−アセトアミド−2,7,12,17−テトラ−ｎ−プロピルポルフィセン（Aam TPPn）、９−アセトキシ−2,7,12,17−テトラキス−（β−メトキシエチル）−ポルフィセン（ATMPn）、グリココンジュゲートポルフィリン、ウロポルフィリンIII／コプロポルフィリンIII（天然）、５−ALAにより誘導されるプロトポルフィリンIX、デューテロポルフィリン、ヒドロキシオクタエチルポルフィリン、トリベンゾナフト−およびトリナフトベンゾポルフィラゾンから誘導されるビニルポルフィリン、ジ−およびテトラヒドロポルフィリン、テトラピロール、ホウ素化ポルフィリン（BOPP）、陽イオン性ポルフィリン；フタロシアニンおよびナフタロシアニン例えば亜鉛フタロシアニン、クロロアルミニウムスルホン化フタロシアニン（CASPc）、ホスホン酸化フタロシアニン誘導体、フタロシアニン免疫コンジュゲート、Si−フタロシアニンおよびSi−ナフタロシアニン（例えば、isoBOSINC）、アルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート（AlPcS4、Photosens（e））、アルミニウムフタロシアニンジ−およびトリスルホネート（AlPcS2、AlPcS3）、亜鉛ナフタロシアニン（テトラベンジルアミドテトラナフトポルフィラジノ亜鉛）、ピリジニウムフタロシアニン（PPc）、陽イオンフタロシアニン；クロリン例えばメソ−テトラ−ヒドロキシフェニルバクテリオクロリン（mTHPBC）、バクテリオクロリンα（BCA）、メソ−テトラヒドロキシフェニルクロリン（mTHPC、Temoporfin、Foscan）、mTHPCバクテリオクロリン誘導体、フッ素化THPC、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリン（ME 2906、NPE-６、Chlorine6、Cle6）、官能化ベンゾクロリン、Ｎ−アルキル化クロリン、両親媒性クロリン、３−デスビニル−３−ホルミルクロリン（Chlorin p6）、４−ホルミルオキシメチリデン−３−ヒドロキシ−２−ビニル−デュテリオ−ポルフィニル−6,7−ビアスパラギン酸（Photochlorin ATX-S10）、シアノプルプリン、スズエチオプルプリン、（バクテリオ）プルプリン−18；およびその他のもの、例えばハイペリシン（hypericin）、Rhodamine-6G-クロリド、（ヒドロキシ−）バクテリオフェオフォルビド−ａ−メチルエステル（OH-BPME）、ピロフェオフォルビド、フェオホルビド−ａ／メチル−フェオフォルビド、二フッ化ホウ素JM 2929、消光剤基を有するRose Bengal（キサンテン誘導体）、δ−アミノレブリン酸（5-ALA）、δ−アミノレブリン酸エステルまたはアミド、ヘプタニトロシル−トリ−μ−チオテトラフェレート、PH-1126、HAT-DOl、アゾ染料、シアニン染料（インドシアニングリーン（ICG）および誘導体を包含）、シアリールメタン染料（Michler ヒドロールブルーを包含）、オーラミン、アクリフラビン、チオピロニン、ピロニンＧ（および類似体例えばBindschedlerグリーンを包含）、チオニン、オキソニン、トリアリールメタン染料（マラカイトグリーン、クリスタルバイオレット、Victoriaブルー、エリスロシンＢ、ローダミン123および全てのローダミンを包含）、陽イオン性染料（トルイジンブルー、Nileブルー、Taylon′s Blue、メチレングリーン、ニューメチレングリーン、アズレンＡ、ＢおよびＣ、クリプトシアニン（EDKC）、ベンゾフェノキサジン、ベンゾチアジン、カルコゲンアピリリウム、メロシアニン染料例えばMerocyanine 540、チトクロームＣ、およびPEGまたはこれらのいずれかのその他の親水性誘導体（メチレンブルー、フルオレセイン、ローズベンガル、テトラサイクリン、ニュートラルレッドおよびアクリジンオレンジをも包含）。これには染料（PEG）n（ｎ＝１〜10）または染料−PEG−染料タイプの誘導体が包含される。芳香族環上でPEGまたはその他の親水性基で直接または誘導体例えばPEGカルボキサミドまたはスルホンアミドとして置換されたフタロシアニン（Pc）およびナフタロシアニン（Nc）も包含される。これらのPcまたはNcは場合によってはそれらの中心において例えばZn、Al、Si、Ga等のような元素の原子を含有していてもよい。この元素が三価または四価である場合、PEG基はこの元素上で直接または適当なリンカー基を用いて置換されていてもよいし、また代わりに芳香族環上で置換されていてもよい。前述の如く、染料（PEG）nおよび染料−PEG−染料誘導体が包含される。
特に好ましくは、レポーターはシアニン、メロシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニンまたは線状シアニン類似発色団により提供され、この発色団にはスクェアリリウムおよびクロコニウム染料、殊に広い非局在化π電子系を有する発色団（ここで芳香環構造は不飽和炭素鎖（例えば構造-CH=CH-CH=を包含する鎖）を介して結合している）、例えばシアニンまたは線状シアニン類似体が包含されている。センシタイザーが多発色団であること、すなわちセンシタイザーが少なくとも二個の発色団を含有していることも特に好ましい。これに関連して、可溶性（すなわち、親水性）ポリマー部分を組み入れている基で一緒に連結されるのが発色団にとって特に好都合である。
磁気断層撮影については、レポーターは本文でMRレポーターについて記載したような物質、殊にキレート化ランタニドまたは超常磁性金属酸化物である。
電気インピーダンス断層撮影については、レポーターは好ましくは多分子電解質である。
本発明の方法において、画像形成は選択した画像形成法のための慣用の画像形成装置を用いて常法で実施される。この方法におけるレポーター含有センシタイザー剤は、コントラスト増強投与量、例えば選択された画像形成操作に通常の投与量で、または剤をSDTのための標的部位近くに投与する場合またはベクター部分により標的部位に積極的に標的設定されている場合、通常の投与量よりも低い投与量で投与する。
センシタイザー化合物は所望によりその生体内分布を変更するのに役立つベクター部分を包含していてもよい。適当なベクターの例には、抗体、抗体フラグメント、細胞表面受容体に対して親和性を有するタンパク質およびオリゴペプチド、殊に病変または急速に増殖している細胞の表面と組み合わさっている受容体、および病変または急速に増殖している細胞に優先的に取り込まれるペプチド系および非ペプチド系薬物があげられる。
センシタイザー化合物はそれ自体で血液滞留を延長する何らかのベクター効果を有していてもよく、殊にセンシタイザーが粒子であるかまたは粒子を組み入れている場合はそのとおりである。
一般に、センシタイザー剤が血液滞留延長効果を達成するために親水性ポリマー部分を一つまたは二つ以上包含する場合、親水性ポリマー部分（例えば、ポリアルキレンオキシド部分例えばPEG）の総分子量は少なくとも3400でなければならず、好ましくは少なくとも10,000、そしてさらに好ましくは少なくとも20,000でなければならない。
分子量（MW）は重量平均を言うものである。本発明のポリマーについて使用されている「分子量」なる用語は、狭い分子量のポリ（エチレンオキシド）または対照としてのAmerican Polymer Standards Corporation提供に係わるポリ（エチレングリコール）標準品を用いて、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定したポリマーの平均分子量を言うものである。
レポーターおよびベクター基、ならびにこれらの基を一緒にポリマー部分にカップリングする方法を以下にさらに詳しく記述する。
本発明の特に好ましい態様において、センシタイザー化合物は親油性基、好ましくは側基または末端基、そして特に好ましくは細胞膜と結合し得る基を包含している。特に好ましくは、親油性基は線状の、場合によっては非置換のC8-40アルキル鎖、殊に好ましくはC12-23不飽和アルキル鎖であるか、またはそれを有している。親油性基は殊に好ましくは二重エステル（double ester）Y-COO-Z-COO-（ここでＹはC12-25アルキル基であり、そしてＺはC12-25アルキレン基例えばCH3（CH2）16COO（CH2）17COO-である）である。親油性基は、以下の実施例に記載されている化合物P79のように、水溶性（すなわち、親水性）ポリマー部分に直接結合されているか、またはこれらの二つのものは、例えば有機発色団上の異なった部位またはセンシタイザーの微粒成分の異なった表面部位に共有結合されることにより、間接的にカップリングされていてよい。親油性基を包含していることは、SDTのための標的部位でのセンシタイザーと細胞膜との会合を促進し、またこのように会合された細胞に対する超音波照射の細胞変性効果を、おそらくは細胞膜の弱体化により、増強させるものと考えられる。
本発明の特に新規な特徴では、SDTの超音波照射は、異なったコントラスト効能を有する状態、すなわち超音波照射による画像と超音波照射なしの画像とが異なる状態の間で診断画像形成法に対する造影剤を「スイッチ」（switch）するのに使用することができる。このような差異がSDTの領域を目立たせることとなり、例えば医師が腫瘍の縁を検知したり、またはSDTの進行を追跡することが可能となる。画像はSDT照射により、またはSDT照射なしで生じ、そして所望により示差画像を形成させて画像のSDT増強が起っている領域を引き立たせることができる。このようなスイッチは例えば造影剤、場合によっては本発明によるセンシタイザーが音ルミネセンス性を有している場合に達成され、この場合造影法は光造影技術であり、または超音波照射効果により遊離基に変換される遊離基前駆物質である場合、そしてこの場合造影法はラジカルがコントラスト効果を有する方法例えばMRI、OMRIまたはESR造影である。
それで、本発明のさらに他の特徴からみて、ヒトまたはヒト以外の動物の体の画像を生成させる方法が提供され、この方法は前記体に生理学的に許容し得る物質を投与し、そして前記物質が分布されている体の少なくとも一部の画像を生成させるインビボ診断造影法を使用することからなり、そして画像生成操作の少なくとも一部分の過程で前記体に前記造影法での該物質のコントラスト有効性（contrast effectiveness）を変更するのに十分な超音波照射を施すことを特徴とする。
このような方法では、造影剤として使用される物質は本文に記載したようなSDTセンシタイザーとして使用されるようなポリマーまたはコンジュゲートまたは場合によってはベクター部分または親油性基に結合されている本文に記載したような発色団またはその他のレポーターである。
本発明のさらにその他の特徴からみて、治療法または診断法に使用するための組成物の製造のための、超音波に暴露することにより選択された造影法でのコントラスト有効性が変更されている生理学的に許容し得る物質の使用が提供され、この使用は前記組成物を体に投与し、そして前記物質のコントラスト有効性を変更するのに十分な超音波照射を前記体に施す画像生成操作の少なくとも一部の過程で画像を生じさせることを包含している。
さらには、この造影方法によって、局所での生理学的条件が「スイッチされた」（switched）造影剤の安定性に影響を及ぼす限り、該条件例えばpH、酸素濃度、遊離基の存在等に関する情報が提供される。このような情報は、患者が治療的SDT操作の開始前に腫瘍酸素化を増大させるための血管拡張剤または酸素の投与による恩恵を蒙ることを指示するものである。操作の過程で、この信号は腫瘍が脱酸素されたことを指示し、腫瘍が再酸素化されるように短時間の間、治療を中止するよう医師に示唆するものである。言うまでもなく、この技法は技法の細胞変性の増強を必要とするほとんどいずれの化学的または生理学的状態をカバーするよう拡大することができる。
ソノダイナミック相互作用に由来する診断法はこれまで報告されていない。誘導された信号に含まれている情報は、予め特定した範囲に相当する数値として、医師に提示することができるし、または、集束超音波技術を用いるときは、信号をｘ、ｙおよびｚ座標で図表とし、そして画像として表示することができる。
レポーター
前述の如く、本発明に従って使用されるセンシタイザーおよび本発明の画像形成技術で使用される造影剤は好ましくは少なくとも一個のレポーター部分、好ましくは発色団を含有している。適当なレポーターおよびそれらを親水性ポリマー部分、ベクター部分および親脂質性基に結合させる手段を以下に論述する。
発色団のほかにも、本発明のセンシタイザーまたは造影剤のレポーター部分はインビボ診断造影手法で直接または間接に検出し得るいずれの部分であってもよく、例えば検出可能な放射線を発するか、または発するようにされている部分（例えば放射性崩壊、スピン共鳴励起等により）、局所電磁場に影響を及ぼす部分（例えば、常磁性、超常磁性、フェリ磁性または強磁性種）、体内でプロトンおよびその他の化学種のスピン緩和に影響を及ぼす部分、放射エネルギーを吸収または拡散する部分（例えば、粒子（小胞含有気体または液体を包含する）、重元素およびそれらの化合物等）および検出可能な物質を発生する部分（例えばガス小気泡発生体）等がある。
診断造影法で検出可能な非常に広い範囲の物質が当該分野で知られていて、そしてレポーターは使用される造影法に従って選択される。すなわち、例えば超音波造影については、エコー源物質またはエコー源物質を発生し得る物質が普通選択され、Ｘ線造影については、レポーターは一般には重原子（例えば、原子量38以上のもの）であるか、または重原子を含有し、MR造影については、レポーターは零でない核スピン同位元素（例えば19F）または不対電子スピンを有する物質であり、それ故常磁性、超常磁性、フェリ磁性または強磁性特性を有する物質であり、光造影については、レポーターは光散乱体（例えば、着色または非着色粒子）、光吸収体または光発生体であり、磁気造影については、レポーターは検出可能な磁気特性を有し、電気インピーダンス造影については、レポーターは電気インピーダンスに影響を及ぼし、またシンチグラフィー、SPECT、PET等については、レポーターは放射性核種である。
適当なレポーターの例は診断造影文献で広く知られている。例えば磁気酸化鉄粒子、気体含有小胞、キレート化常磁性金属（例えば、Gd、Dy、Mn、Fe等）である。例えば、US-A-4647447、PCT／GB 97／00067、US-A-4863715、US-A-4770183、WO 96／09840、WO 85／02772、WO 92／17212、PCT／GB 97／00459、EP-A-554213、US-A-5228446、WO 91／15243、WO 93／05818、WO 96／23524、WO 96／17628、US-A-5387080、WO 95／26205、GB 9624918.0等を参照。
レポーターとして特に好ましいのは次のようなものである：キレート化常磁性金属イオン例えばGd、Dy、FeおよびMn、特に大環状キラント基（例えば、テトラアザシクロドデカンキラント例えばDOTA、DO3A、HP-DO3Aおよびその類縁体）またはリンカーキラント基例えばDTPA、DTPA-BMA、EDTA、DPDP等でキレート化されている場合；金属放射性核種例えば90Y、99mTc、111In、47Sc、67/Ga、51Cr、177mSn、67Cu、167Tm、97Ru、188Re、177Lu、199Au、203Pbおよび141Ce；超常磁性酸化鉄結晶；300〜1400nm、特に600nm〜1200nm、殊に650〜1000nmの吸収および／または発光極大を有する発色団および発蛍光団；フッ素化ガスを含有する小胞（すなわち、37℃で気相の物質、フッ素含有、例えばSF6または過フッ素化C1-6炭化水素またはPCT／GB 97／00459に列挙されているその他の気体および気体前駆物質を含有している）；キレート化重金属クラスターイオン（例えば、ＷまたはMoポリオキソアニオンまたは硫黄または混合酸素／硫黄類縁体）；高原子番号（ヨウ素）または放射性原子例えば123I、131I等である共有結合非金属原子；小胞を含有するヨウ素化化合物等である。
一般的に言うと、レポーターは（１）金属が高原子番号金属（例えば37よりも大きい原子番号）、常磁性種（例えば、遷移金属またはランタニド）または放射性同位元素である場合、キレート化可能な金属または多原子金属含有イオン、（２）不対電子サイト（例えば、永存遊離ラジカル中の酸素または炭素）、高原子番号非金属または放射性同位元素である共有結合非金属種、（３）高原子番号原子を含有するか、協同磁気挙動（例えば超常磁性、フェリ常磁性または強磁性）を示すか、または放射性核種を含有する多原子クラスターまたは結晶、（４）気体または気体前駆物質（すなわち、37℃で気体状である物質またはこれらの物質の混合物）または（５）例えば広い非局在化電子システムによって電気インピーダンス変動特性を有する構造または基であってよい。
特に好ましいレポーター群の例を以下にさらに詳しく記載する。
キレート化金属レポーター：金属放射性核種、常磁性金属イオン、蛍光性金属イオン、重金属イオンおよびクラスターイオン
好ましい金属放射性核種には、次のものがあげられる。90Y、99mTc、111In、47Sc、67Ga、51Cr、177mSn、67Cu、167Tm、97Ru、188Re、177Lu、199Au、203Pbおよび141Ce。
好ましい常磁性金属イオンには遷移およびランタニド金属（例えば、原子番号６〜９、21〜29、42、43、44または57〜71を有する金属）のイオンがあげられ、特にCr、バナジウム、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、YbおよびLu、殊にMn、Cr、Fe、GdおよびDy、さらに殊にGdのイオンがあげられる。
好ましい蛍光性金属イオンにはランタニド、特にLa、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、YbおよびLuがあげられる。Euが殊に好ましい。
好ましい重金属含有レポーターには、Mo、Bi、SiおよびＷの原子があげられ、特にWO 91／14460、WO 92／17215、WO 96／40287およびWO 96／22914に記載の多原子クラスターイオン（例えば、Bi化合物およびＷおよびMo酸化物）であってよい。
金属イオンは望ましくはリンカー部分上のまたは粒子中もしくは粒子上のキラント基でキレート化されていてよく（例えば、小胞または多孔性もしくは非多孔性無機または有機固体）、特に、線状、大環状、テルピリジンおよびN2S2キラント例えばDTPA、DTPA-BMA、EDTA、DO3A、TMTである。適当なキラント基のその他の例はUS-A-4647447、WO 89／00557、US-A-5367080、US-A-5364613等に記載されている。
リンカー部分または粒子はこのようなキラント基の一種または二種以上を含有し、また所望により二種以上の金属種で金属化されていてよい（例えば、異なった造影法で検出可能なレポーターを提供するように）。
金属が非放射性である場合は特に、ポリキラントリンカーまたは粒子状レポーターを使用するのが好ましい。
本文に記載のキラントまたはキレート基は、金属イオンまたは多原子イオン（例えばTcO）を錯体化し得る種々のキレート化剤の一種または二種以上の残基を包含していてよい。
周知の如く、キレート化剤は、金属原子との配位結合により結合してキレート錯体またはキレートと称する環状構造を形成し得る供与体原子を含有する化合物である。この組の化合物はKirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, Vol.5, 339-368に記載されている。
適当なキレート化剤の残基は次のものから選択することができる。ポリホスフェート、例えばトリポリリン酸ナトリウムおよびヘキサメタリン酸；アミノカルボン酸例えばエチレンジアミン四酢酸、Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチレンジアミン三酢酸、ニトリロ三酢酸、N,N−ジ（２−ヒドロキシエチル）グリシン、エチレンビス（ヒドロキシフェニルグリシン）およびジエチレントリアミン五酢酸；1,3−ジケトン例えばアセチルアセトン、トリフルオロアセチルアセトン、およびテノイルトリフルオロアセトン；ヒドロキシカルボン酸例えば酒石酸、クエン酸、グルコン酸、および５−スルホサリチル酸；ポリアミン、例えばエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、およびトリアミノトリエチルアミン；アミノアルコール例えばトリエタノールアミンおよびＮ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン；芳香族複素環式塩基、例えば2,2′−ジイミダゾール、ピコリンアミン、ジピコリンアミンおよび1,10−フェナントロリン；フェノール、例えばサリチルアルデヒド、ジスルホピロカテコールおよびクロモトロプ酸；アミノフェノール例えば８−ヒドロキシキノリンおよびオキシムスルホン酸；オキシム、例えばジメチルグリオキシムおよびサリチルアルドキシム；近接キレート化官能基を含有するペプチド例えばポリシステイン、ポリヒスチジン、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、またはこれらのアミノ酸の組み合わせ；シッフ塩基例えばジサリチルアルデヒド、1,2−プロピレンジイミン；テトラピロール例えばテトラフェニルポルフィンおよびフタロシアニン；硫黄化合物、例えば、トルエンジチオール、メソ−2,3−ジメルカプトコハク酸、ジメルカプトプロパノール、チオグリコール酸、エチルキサント酸カリウム、ジエチルジチオカルバミン酸ナトリウム、ジチゾン、ジエチルジチオリン酸およびチオ尿素；合成大環状化合物、例えばジベンゾ〔18〕クラウン−６、（CH3）6-〔14〕-4,11〕−ジエン−N4、および（2.2.2−クリプテート）；ホスホン酸例えばニトリロトリメチレンホスホン酸、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）およびヒドロキシエチリデンジホスホン酸、または上述した薬剤の２種以上の組み合わせ。適当なキレート化剤の残基は好ましくはポリカルボン酸基を包含し、そして好ましい例には、次のものが包含される：エチレンジアミン−N,N,N′,N′−四酢酸（EDTA）；N,N,N′,N″,N″−ジエチレン−トリアミン五酢酸（DTPA）；1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−N,N′,N″,N″′−四酢酸（DOTA）；1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−N,N′,N″−三酢酸（DO3A）；１−オキサ−4,7,10−トリアザシクロドデカン−N,N′,N″−三酢酸（OTTA）；トランス（1,2）−シクロヘキサノジエチレン−トリアミン五酢酸（CDTPA）。
キレート化剤のその他の適当な残基は米国特許第5078985号に記載の如く例えばテクネチウムおよびレニウムのような金属のキレート化のために変性されたタンパク質を包含している。この米国特許の記載を参照により本文に組み入れる。
キレート化剤の適当な残基は、例えば、次の米国特許に記載されているようなN3SおよびN2S2含有化合物からも誘導される：米国特許第4444690；4670545；4673562；4897255；4965392；4980147；4988496；5021556および5075099号。
キレート化剤のその他の適当な残基はPCT／US 91／08253に記載され、この記載を参照により本文に組み入れる。
好ましいキレート化基およびキレート化基の残基は、２−アミノメチルピリジン、イミノ酢酸、イミノ二酢酸、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ジエチレントリアミン五酢酸（DTPA）、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸（DOTA）、カルボニルイミノ二酢酸、メチレンイミノ酢酸、メチレンイミノ二酢酸、エチレンチオエチレン−イミノ酢酸、エチレンチオエチレンイミノ二酢酸、TMT、テルピリジニル基、テルピリジル基およびカルボキシメチルアミノ基からなるキレート化剤、または上述した酸のいずれかの塩からなる群から選択される。殊に好ましいキレート化基はDTPA、DTPA-BMA、DPDP、TMT、DOTAおよびHPDO3Aである。
代表的なキレート化基はUS 5559214 A、WO 9526754、WO 9408624、WO 9409056、WO 9429333、WO 9408624、WO 9408629 A1、WO 9413327 A1およびWO 9412216 A1にも記載されている。
存在しているいずれのキレート化剤を金属化する方法は当業者の技術水準内にある。金属は三種の一般的方法：すなわち、直接組み込み、鋳型合成および／または金属交換反応のいずれか一つによりキラント部分に組み込むことができる。直接組み込みが好ましい。
すなわち、金属イオンが、例えばキレート剤含有部分の水溶液を好ましくは約４〜約11のpH領域を有する水溶液中の金属塩に単に暴すか、またはそれと混合することによって、キレート化剤と容易に錯体形成するのが望ましい。塩はいずれの塩であってもよいが、好ましくは塩は金属の水溶性塩例えばハロゲン塩であり、そしてさらに好ましくはこのような塩はカウンターイオンが金属イオンとキレート化剤との結合を妨害しないように選択する。キレート化剤含有部分は好ましくは約５〜約９、さらに好ましくは約６〜約８のpHの水溶液中にある。キレート化剤含有部分は緩衝剤塩例えばクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩およびホウ酸塩と混和して最適pHを生じることができる。好ましい緩衝剤塩は酢酸塩である。好ましくは、緩衝剤塩はその次の金属イオンがキレート化剤に結合するのを妨害しないように選択される。
放射性核種を用いる診断造影では、造影剤は好ましくはこのような診断造影適用に当り有効な金属放射性核種イオン対キレート化剤の比を含有している。好ましい態様では、キレート化剤当りの金属イオンのモル比は約１：1,000乃至約１：１である。
放射線治療の適用においては、造影剤は好ましくはこのような治療の適用で有効な金属放射性核種イオン対キレート化剤の比を含有している。好ましい態様において、キレート化剤当りの金属イオンのモル比は約１：100乃至約１：１である。放射性核種は例えばSc、Fe、Pb、Ga、Ｙ、Bi、Mn、Cu、Cr、Zn、Ge、Mo、Ru、Sn、Sr、Sm、Lu、Sb、Ｗ、Re、Po、TaおよびTlの放射性同位元素から選択することができる。好ましい放射性核種には44Sc、64Cu、67Cu、212Pb、68Ga、90Y、153Sm、212Bi、186Reおよび188Reが包含される。これらのうち、90Yが殊に好ましい。これらの放射性同位元素は原子形態であり、好ましくはイオン性である。
以下の同位元素または同位元素対は、放射性同位元素標識法またはキレート化剤を変更することなく、造影および療法の双方に使用することができる：47Sc21；141Ce58；188Re75；177Lu71；199Au79；47Sc21；131I53；67Cu29；131I53および123I53；188Re75および99mTc43；90Y39および87Y39；47Sc21および44Sc21；90Y39および123I53；146Sm62および153Sm62;および90Y39および111In49。
リンカー基は、少なくとも二種の分子を一緒に、一つの分子の少なくとも残基と別の分子とを一緒にまたは一つの分子の少なくとも残基と別の分子の残基とを一緒に結合している化学部分である。
リンカー部分が単一のキラントを含有している場合、このキラントは例えばベクターでアミン基、チオール基またはヒドロキシ基とエステル、アミド、チオエステルまたはチオアミド結合を形成し得るキラントの金属配位基の一つを介して、ベクター部分に直接連結されていてよい。あるいはまた、ベクターとキラントとはキラント主鎖に連結している官能基、例えば、Meares等がJACS 110：6266-6267（1988）に提案しているようなDOTAの環炭素に連結しているCH2−フェニル−NCS基を介して直接連結されていてもよいし、またはホモまたはヘテロ二官能性リンカー例えばビスアミン、ビスエポキシド、ジオール、二酸、二官能基化PEG等を介して間接的に連結されていてもよい。この場合、二官能基性リンカーは好都合にはベクターとキラント残基との間に１〜200個、好ましくは３〜30個の原子の鎖を提供する。
リンカー部分は多数のキラント基を含有する場合、リンカーは好ましくは次の式の部分であるか、またはこれらの部分を含有している。
0004503103.tif 000002
ここで、Chはキラント部分であり、そしてＬはリンカー主鎖成分であり、すなわちリンカーは好ましくは側鎖キラント、主鎖内キラントもしくは末端キラントまたはこれらの組み合わせを有している。側鎖および主鎖内重合体性構造は分枝鎖または線状であってよく、そして重合体中の反覆単位（LCh）またはその他の反覆単位は主鎖内または側鎖生体内分布修飾基例えばWO 94／08629、WO 94／09056およびWO 96／20754におけるようなポリアルキレン基を有していてよい。WO 93／06868におけるようなデンドリティック重合体であってよい末端キラント構造L（Ch）nはキラントが占めていない末端に連結された生体内分布修飾基を有していてよく、またWO 95／28966におけるようなリンカー構造内に生分解促進部位を有していてもよい。
ポリキラントリンカー内のキラント部分はキラントの主鎖官能化を介して、またはキラントの金属配位基の一種または二種以上を利用することにより、または例えばPCT／EP 96／00565のポリリジン−ポリDTPA、ポリリジン−ポリDOTAおよび所渭マグニファイアー（magnifier）ポリキラントにおけるように、酸キラントとアミンまたはヒドロキシ担持リンカー主鎖との間のアミドまたはエーテル結合形成により連結されていてよい。このようなポリキラントリンカーは直接（例えば、ポリキラントリンカー中のアミン、酸またはヒドロキシ基を利用して）またはモノキラントリンカーについて前述したように二官能性リンカー化合物を介してベクター基の一つまたは二つ以上にコンジュゲートされていてよい。
キレート化された種が微粒（または分子凝集体例えば小胞体）リンカーで担持されている場合、キレートは例えば粒子内に封入されている非連結モノまたはポリキレート（例えばGd DTPA-BMAまたはGd HP-DO3A）であってよいか、またはキレートは共有結合により、または小胞の膜とモノ／ポリキレート上の定着基（例えば、親油性基）の相互作用により粒子にコンジュゲートされたモノまたはポリキレートであってよい（例えば、PCT／GB 95／02378を参照）。
好ましい非金属原子レポーターには、例えば123Iおよび131Iのような放射性同位元素、および例えば18Fのような零でない核スピン原子およびＩのような重原子が包含される。
このようなレポーター、好ましくは例えば２〜200のような多数のレポーターは通常の化学合成技術を用いて、またはトリヨードフェニル基のような支持基を介してリンカー主鎖に共有結合されている。
本発明の態様では、ヨウ素の放射性同位元素の使用が具体的に企図されている。例えば、造影剤またはセンシタイザーの残部が共有結合形成反応においてヨウ素で化学的に置換されている置換分例えばヒドロキシフェニル官能基を含有する置換分からなる場合、このような置換分はヨウ素の放射性同位元素で当該分野で周知の方法によって標識されている。ヨウ素体（species）は治療的および診断造影適用で使用することができる。同時に、同じベクター・リンカーでのキレート化剤中の金属は治療的または診断造影適用で使用することもできる。
上述した金属キレートによる如く、このような金属原子レポーターはリンカーに連結してもよいし、また例えば小胞のような微粒リンカー中または上に担持されていてもよい（WO 95／26205およびGB 9624918.0を参照）。
金属レポーターに関連して上述したタイプのリンカーは非金属原子レポーターに使用することもでき、かかるレポーターを担持する非金属原子レポーターまたは基はキラント基の若干または全体の場を占めている。
明瞭にするために、「粒子」なる用語は、いずれの生理学的に許容し得る微粒物質を言うのに使用する。このような粒子は固体（例えば、被覆または非被覆結晶性物質）または流体（例えば、乳濁液中の液体粒子）であってよいし、または凝集体（例えばリポソーム含有流体）であってよい。入射光波長よりも小さいかまたは同様な粒子サイズを有する微粒材料が好ましい。
微粒レポーターおよびリンカー−レポーターは一般には二つのカテゴリーに属する。すなわち、粒子がレポーターを担持しているかまたは含有しているマトリックスまたはシェルを包含しているもの、および粒子マトリックスがそれ自体でレポーターであるものである。第一のカテゴリーの例には次のものがあげられる：コントラスト有効レポーター、例えばエコー源気体またはその前駆物質（例えば、GB 9700699.3を参照）、キレート化常磁性金属または放射性核種または水溶性ヨウ素化Ｘ線造影剤を含む液相、気相または固相を含有する小胞（例えば、ミセル、リポソーム、マイクロバルーンおよび微小気泡）；レポーターを担持する多孔性粒子、例えば分子ふるい粒子を担持する常磁性金属；および例えばレポーターが結合または被覆されている不活性の生体許容し得るポリマーの固体粒子、例えば色素担持ポリマー粒子。
第二のカテゴリーの例には次のものがある：光散乱性有機または無機粒子；磁性粒子（すなわち、超常磁性、強磁性またはフェリ磁性の粒子）；および染料粒子。
微粒レポーターはさらに超音波照射の微粒に対する効果（例えば、粒子破裂または膜破裂）によって治療部位で放出される細胞変性剤を担持することができる。それで、例えば、PEGの「ステルス」（stealth）コーティングを有するリポソームは蛍光色素（例えば６−カルボキシフルオレセイン）および細胞毒性物質（例えば、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、マイトマイシン、ブレオマイシンまたはパクリタキセル）を含有していてよく、そして治療および画像形成の両方のためにSDTで使用することができる。
好ましい微粒レポーターまたはレポーター−リンカーは超常磁性粒子（US-A-4770183、PCT／GB 97／00067、WO 96／09840等を参照）、エコー源小胞（WO 92／17212、PCT／GB 97／00459等を参照）、ヨウ素含有小胞（WO 95／26205およびGB 9624918.0を参照）および色素担持ポリマー粒子（WO 96／23524を参照）を包含している。
微粒レポーターはそれらの表面に直接または間接に結合されたベクターを一個または二個以上含有していてよい。一般に、粒子当たり複数（例えば２−50）のベクター部分を結合させるのが好ましい。特に好都合なのは、所望の標的設定ベクターに加えて、粒子に流れ減速性ベクター、すなわち毛細管管腔またはその他の器官表面に対して親和性を有するベクターを結合させることができ、この親和性は造影剤が毛細管または標的器官中を通過するのを遅くするのに十分ではあるが、それ自体で造影剤を固定化するのに十分ではない。このような流れ減速性ベクター（例えばGB 9700699.3に記載）はさらにまた一旦その標的部位に結合されると造影剤を固定するのにも役立っている。
ベクターを粒子に結合させる手段は粒子表面の性状に依存する。無機粒子については、粒子に対する結合は例えばベクターまたはベクターに結合されているリンカーでの金属結合性基（例えば、ホスフェート、ホスホネートまたはオリゴ−もしくはポリホスフェート基）の間の相互作用によるものである。有機（例えば、ポリマー性）粒子については、ベクターの結合は粒子表面の基とベクター中の反応性基との間の直接共有結合例えばアミドまたはエステル結合により、またはベクターおよび粒子のリンカーへの共有結合により行われる。キレート化金属レポーターに関連して上述したタイプのリンカーを使用することができるが、一般にはリンカーは粒子を一緒にカップリングするのには使用されない。
非固体粒子、例えば小滴（例えば、US-A-5318767、US-A-5451393、US-A-5352459およびUS-A-5569448に記載の水不溶性ヨウ素化液体）および小胞については、リンカーは都合よくは疎水性「アンカー」（ancher）基例えば飽和または不飽和C12-30鎖を含有していてよく、これらの基は粒子表面を浸透し、ベクターを粒子に結合している。それで、リン脂質小胞については、リンカーはベクターを小胞膜と相容性を有するリン脂質に共有結合させるのに役立つものである。小胞に結合しているリンカーおよび無機粒子の例はGB 9622368.0およびPCT／GB 97／00067に記載されている。
ベクターに加えて、その他の基を粒子表面に結合させることができ、例えば安定剤（凝集防止のため）および生体内分布変更剤例えばPEGがある。このような基は例えばPCT／GB 97／00067、WO 96／09840、EP-A-284549およびUS-A-4904479に論述されている。
好ましくは、本発明のセンシタイザーおよび造影剤は非ペプチド系エンドセリン受容体標的設定ベクター（例えばボセンタン（bosentan）またはBMS 182874）を有し、これらのベクターは例えば共有結合ヨウ素放射性同位元素により、直接にまたは有機リンカー基を介して結合されている金属キレートにより直接または間接にレポーターにカップリングされているか、または微粒レポーターまたはリンカー−レポーター例えば超常磁性結晶（場合によっては例えばPCT／GB 97／00067のようにコーティングされている）または小胞、例えばミセル、リポソームまたはマイクロバルーンを含有する気体含有またはヨウ素化造影剤にカップリングされている。
発色団
発色団は、問題の組成物中の基、例えば光を吸収および／または放射する有機または無機基を意味する。従ってこの用語は、発蛍光団、蛍光を発する基、同様に燐光性基を包含する。一般的に、発色団は錯化された金属イオンまたは示量性非局在電子系［extensive delocalized electron system］を含む。本発明の一つの態様は、特に後者のタイプに関する。発色団を含有する化合物を、本明細書では発色団という。
光とは、300〜1300nmの波長を有する電磁放射線を意味する。可視光から遠赤外範囲において最大吸収および／または放射を有する発光団は、本発明において特に適する。
上述のように、本発明によるセンシタイザーおよび造影剤は、少なくとも一つの発光団を含有するのが好ましい。好ましくは、複数のスルホン酸基（またはその誘導体、例えば塩）を含有する。そのような基は、腫瘍の部位における滞留を促進し得る。センシタイザーが一つより多くの発色団を含有する場合、これらは同じかまたは異なっていてもよい。しかしながら、一般的には発色団は同一であるのが好ましい。レポーター基として使用する場合、発色団は発蛍光団であるのが好ましい、即ちセンシタイザーは蛍光性であるのが好ましい。このように、これらは肉眼でまたは適する画像装置を用いて容易に検出される。特に好ましくは、発色団が300〜1300nmの波長の範囲において最大吸収を有し、最も好ましくは600〜1300nmの範囲である。適当な発色団は公知であり、もし必要があれば容易に修飾してスルホン酸基を担持することができ、これらの基は、全てを分子の同じ全般的な領域に結合させるよりも発色団に配置するのが好ましい。スルホン酸基は、直接またはアルキレン鎖などのC1-10リンカーを介して発色団のアリール基に結合させるのが好ましい。
好ましい発色団は、示量性非局在電子系を有する化合物、例えばシアニン、メロシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内および分子間電荷移動色素および色素錯体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、インドアニリン色素、ビス（S,O−ジチオレン）錯体などを包含する。適する有機または含金属有機発色団の例は、“Topics in Applied Chemistry: Infrared absorbing dyes”, Ed. M. Matsuoka, Plenum, NY 1990年, “Topics in Applied Chemistry: The Chemistry and Application of Dyes”, Waring等, Plenum, NY 1990年, “Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals”, Haugland, Molecular Probes Inc, 1996年, DE-A-4445065, DE-A-4326466, JP-A-3/228046, Narayanan等, J. Org. Chem. 60: 2391-2395（1995年）, Lipowska等, Heterocyclic Comm. 1: 427-430（1995年）, Fabian等, Chem. Rev. 92: 1197（1992年）, WO 96／23525, Strekowska等, J. Org. Chem. 57: 4578-4580（1992年）およびWO 96／17628に見出されるものである。使用し得る発色団の特別な例には、キシレンシアノール、フルオレセイン、ダンシル、NBD、Pc、インドシアニン・グリーン、DODCI、DTDCI、DOTCIおよびDDTCIが包含される。
600〜1000nmの間で吸収最大を有し、ヘモグロビン吸収との干渉を回避する化合物（例えばキシレンシアノール）が特に好ましい。
更にそのような例には次のものが包含される：
シアニン色素：ヘプタメチンシアニン色素など、例えばMatsuoka（上記）の第26頁の表IIの化合物４ａ〜４ｇ
0004503103.tif 000003
４ａ：式中Ｙ＝Ｓ、Ｘ＝Ｉ、Ｒ＝Et
４ｂ：式中Ｙ＝Ｓ、Ｘ＝ClO4、Ｒ＝Et
４ｃ：式中Ｙ＝CMe2、Ｘ＝Ｉ、Ｒ＝Me
４ｄ：式中Ｙ＝CMe2、Ｘ＝ClO4、Ｒ＝Me
４ｅ：式中Ｙ＝CH=CH、Ｘ＝Ｉ、Ｒ＝Et
４ｆ：式中Ｙ＝CH=CH、Ｘ＝Br、Ｒ＝Et
４ｇ：式中Ｙ＝CH=CH、Ｘ＝ClO4、Ｒ＝Et
およびMatsuoka（上記）の第28頁の表IIIにおけるもの、即ち
0004503103.tif 000004
式中Ｙ＝Ｏ、Ｘ＝Ｉ、Ｒ＝Me
式中Ｙ＝CMe2、Ｘ＝Ｉ、Ｒ＝Me
式中Ｙ＝Ｓ、Ｘ＝Br、Ｒ＝Et；
カルコゲノピリロメチン色素、例えばMatsuoka（上記）の第31頁の化合物12、即ち
0004503103.tif 000005
式中Ｙ＝Te、Se、ＯまたはNR；
モノカルコゲノピリロメチン色素、例えばMatsuoka（上記）の第31頁の化合物13、即ち
0004503103.tif 000006
式中ｎ＝１または２；
ピリリウム色素、例えばMatsuoka（上記）の第32頁の化合物14（Ｘ＝Ｏ）、即ち
0004503103.tif 000007
式中Ｘ＝Ｏ、Ｓ、またはSe；
チアピリリウム色素、例えばMatsuoka（上記）の第32頁の化合物15、および第167頁の化合物Ｉ、即ち
0004503103.tif 000008
式中ｎは１または２；
スクアリリウム色素、例えばMatsuoka（上記）の第30頁の化合物10および表IVにおけるもの、即ち
0004503103.tif 000009
式中、Ｘ＝CH=CH、Ｙ＝ＨおよびＲ＝Et、
Ｘ＝Ｓ、Ｙ＝ＨおよびＲ＝Et、並びに
Ｘ＝CMe2、Ｙ＝ＨおよびＲ＝Me、
並びにMatsuoka（上記）の第26頁の化合物６、即ち
0004503103.tif 000010
クロコニウム色素、例えばMatsuoka（上記）の第30頁の化合物９および表IVのもの、即ち
0004503103.tif 000011
式中、Ｘ＝CH=CH、Ｙ＝ＨおよびＲ＝Et、
Ｘ＝Ｓ、Ｙ＝ＨおよびＲ＝Et、
Ｘ＝CMe2、Ｙ＝ＨおよびＲ＝Me、
並びにMatsuoka（上記）の第26頁の化合物７、即ち
0004503103.tif 000012
アズレニウム色素、例えばMatsuoka（上記）の第27頁の化合物８、即ち
0004503103.tif 000013
メロシアニン色素、例えばMatsuoka（上記）の第32頁の化合物16、Ｒ＝Me、即ち
0004503103.tif 000014
インドアニリン色素の銅およびニッケル錯体などのインドアニリン色素、例えばMatsuoka（上記）の第63頁の化合物６、即ち
0004503103.tif 000015
式中Ｒ＝Et、R′＝Me、Ｍ＝Cu、
Ｒ＝Et、R′＝Me、Ｍ＝Ni、
Ｒ＝Me、R′＝Ｈ、Ｍ＝Cu、または
Ｒ＝Me、R′＝Ｈ、Ｍ＝Niである
ベンゾ［ａ］フェノキサジニウム色素およびベンゾ［ａ］フェノチアジニウム色素、例えばMatsuoka（上記）の第201頁に示されるもの、即ち
0004503103.tif 000016
式中Ｘ＝ＯまたはＳである；
1,4−ジアミノアントラキノン（Ｎ−アルキル）−3′−チオキソ−2,3−ジカルボキシイミド、例えばMatsuoka（上記）の第41頁の化合物20、即ち
0004503103.tif 000017
インダンスレン顔料、例えば
0004503103.tif 000018
Matsuoka（上記）の第41頁の化合物21を参照；
２−アリールアミノ−3,4−フタロイルアクリドン色素、例えばMatsuoka（上記）の第41頁の化合物22
0004503103.tif 000019
トリスフェノキノン色素、例えばMatsuoka（上記）の第41頁の化合物23
0004503103.tif 000020
アゾ色素、例えばMatsuoka（上記）の第90頁の化合物２のモノアゾ色素、即ち
0004503103.tif 000021
式中Ｘ＝CH=C（CN）2、R1＝R2＝Et、R3＝R4＝Ｈ、
Ｘ＝C（CN）=C（CN）2、R1＝R2＝Et、R3＝R4＝Ｈ、または
Ｘ＝
0004503103.tif 000022
およびＹ＝Ｃ＝Ｏ、R1＝R2＝Et、R3＝R4＝Ｈ、または
Ｙ＝SO2、R1＝Ｈ、R2＝CH（Me）nBu、R3＝OMeおよびR4＝NHAc；
アゾ色素、例えばMatsuoka（上記）の第91頁の化合物５のポリアゾ色素、即ち
0004503103.tif 000023
分子内電荷移動供与体−受容体赤外色素、例えばMatsuoka（上記）の第91頁の化合物６および７、即ち
0004503103.tif 000024
非ベンゼノイド芳香族色素、例えばMatsuoka（上記）の第92頁の化合物８のトロポン、即ち
0004503103.tif 000025
テトラジンラジカル色素、例えばMatsuoka（上記）の第92頁の化合物９、即ち
0004503103.tif 000026
式中、Ｘ＝ｐ−フェニレンまたは
Ｘ＝ｐ−テルフェニレン、同様にMatsuoka（上記）の第92頁の化合物10、即ち
0004503103.tif 000027
式中、Ｘ＝ｐ−ビフェニル；
テトラジンラジカル色素のカチオン塩、例えばMatsuoka（上記）の第92頁の化合物11
0004503103.tif 000028
式中、Ｘ＝ｐ−フェニレン；
供与体−受容体分子間電荷移動色素、例えばMatsuoka（上記）の第93頁の化合物13ｂおよび14ａ〜14ｃの電荷移動（CT）錯体、即ち
0004503103.tif 000029
式中、供与体においてＸ＝CH=N-N（Ph）2および受容体において
a）Ｙ＝CN、Ｚ＝NO2
b）Ｙ＝CN、Ｚ＝Ｈまたは
c）Ｙ＝Cl、Ｚ＝NO2
アントラキノン色素、例えばMatsuoka（上記）の第38頁の化合物12（Ｘ＝ＳまたはSe）、即ち
0004503103.tif 000030
式中、Ｘ＝ＳまたはSeおよびＹ＝テトラクロロ、テトラブロモ、2,3−ジカルボン酸、2,3−ジカルボン酸無水物または2,3−ジカルボン酸Ｎ−フェニルイミド；
ナフトキノン色素、例えばMatsuoka（上記）の第37頁の化合物２、３および４、即ち
0004503103.tif 000031
含金属アゾ色素、例えばニッケル、コバルト、銅、鉄およびマンガンを含有するアゾ色素；
フタロシアニン色素、例えばMatsuoka（上記）の第51頁の表IIの化合物１、例えば
0004503103.tif 000032
ナフタロシアニン色素、例えばMatsuoka（上記）の第51頁の表IIの化合物３、例えば
0004503103.tif 000033
金属フタロシアニン、例えばアルミニウム、ケイ素、ニッケル、亜鉛、鉛、カドミウム、マグネシウム、バナジウム、コバルト、銅および鉄を含有するフタロシアニン、（蛍光団がAl、SiおよびZnを含有するもの）、例えば、Matsuoka（上記）の第52頁の表IIIの化合物１、例えば
0004503103.tif 000034
式中、例えばＭ＝Mgである；
金属ナフタロシアニン、例えばアルミニウム、亜鉛、コバルト、マグネシウム、カドミウム、ケイ素、ニッケル、バナジウム、鉛、銅および鉄を含有するナフタロシアニン、（蛍光団がAl、SiまたはZnを含有するもの）、Matsuoka（上記）の第52頁の表IIIの化合物３を参照、例えば
0004503103.tif 000035
式中、例えばＭ＝Mgである；
ビス（S,S′−二座）配位子錯体中において４つのイオウ原子と配位したニッケル、コバルト、銅および鉄のような金属イオンを含有するビス（ジチオレン）金属錯体、例えばMatsuoka（上記）の第59頁の表Ｉを参照
0004503103.tif 000036
式中、
R1＝R2＝CF3、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝フェニル、Ｍ＝Pd、
R1＝R2＝フェニル、Ｍ＝Pt、
R1＝C4〜C10アルキル、R2＝Ｈ、Ｍ＝Ni、
R1＝C4〜C10アルキル、R2＝Ｈ、Ｍ＝Pd、
R1＝C4〜C10アルキル、R2＝Ｈ、Ｍ＝Pt、
R1＝R2＝フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝p-CH3−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝p-CH3O−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝p-Cl−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝p-CF3−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝3,4,−ジCl−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝o-Cl−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝o-Br−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝3,4,−ジCl−フェニル、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝p-CH3、Ｍ＝Ni、
R1＝R2＝２−チエニル、Ｍ＝Ni、
R1＝p-（CH3）2N−フェニル、R2＝フェニル、Ｍ＝Ni、および
R1＝p-（CH3）2N-フェニル、R2＝p-H2N−フェニル、Ｍ＝Ni；
配位錯体中において４つのイオウ原子と配位したニッケル、コバルト、銅および鉄などの金属イオンを含むビス（ベンゼンジチオレート）金属錯体、例えばMatsuoka（上記）の第62頁の表IIIを参照、即ち
0004503103.tif 000037
式中、
Ｘ＝テトラメチル、Ｍ＝Ni、
Ｘ＝4,5−ジメチル、Ｍ＝Ni、
Ｘ＝４−メチル、Ｍ＝Ni、
Ｘ＝テトラクロロ、Ｍ＝Ni、
Ｘ＝Ｈ、Ｍ＝Ni、
Ｘ＝４−メチル、Ｍ＝Co、
Ｘ＝４−メチル、Ｍ＝Cu、および
Ｘ＝４−メチル、Ｍ＝Fe；
２つのN,O−二座インドアニリン配位子中において２つの窒素原子および２つの酸素原子と配位したニッケル、コバルト、銅および鉄などの金属イオンを含むN,O−二座インドアニリン色素、例えばMatsuoka（上記）の第63頁の表IVにおける化合物６、例えば
0004503103.tif 000038
式中、Ｒ＝Et、R′＝Me、Ｍ＝Cu、
Ｒ＝Et、R′＝Me、Ｍ＝Ni、
Ｒ＝Me、R′＝Ｈ、Ｍ＝Cu、および
Ｒ＝Me、R′＝Ｈ、Ｍ＝Ni；
ビス（S,O−二座）配位子錯体中において２つのイオウ原子および２つの酸素原子と配位したニッケル、コバルト、銅および鉄などの金属イオンを含むビス（S,O−ジチオレン）金属錯体、例えば米国特許第3,806,462号を参照、例えば
0004503103.tif 000039
混合S,S−およびN,N−二座ジリガンド錯体中において２つのイオウ原子および２つのイミノ−窒素原子と配位したニッケル、コバルト、銅および鉄などの金属イオンを含むα−ジイミン−ジチオレン錯体、例えばMatsuoka（上記）の第180頁の表IIの下から２つ目を参照（更に日本国特許第62／39,682号、第63／126,889号および第63／139,303号を参照）、例えば
0004503103.tif 000040
およびトリリガンド錯体中において６つの窒素原子と配位した金属イオンを含有するトリス（α−ジイミン）錯体、例えばMatsuoka（上記）の第180頁の表IIの一番下の化合物を参照（更に日本国特許第61／20,002号および第61／73,902号を参照）、例えば
0004503103.tif 000041
可視的色素の代表例には、フルオレセイン誘導体、ローダミン誘導体、クマリン、アゾ色素、金属化色素、アントラキノン染料、ベンゾジフラノン色素、多環芳香族カルボニル色素、インジゴイド色素、ポリメチン色素、アザカルボシアニン色素、ヘミシアニン色素、バルビツレート、ジアザヘミシアニン色素、スチリル色素、ジアリールカルボニウム色素、トリアリールカルボニウム色素、フタロシアニン色素、キノフタロン色素、トリフェノジオキサジン色素、ホルマザン色素、フェノチアジン色素、例えばメチレンブルー、アズールＡ、アズールＢおよびアズールＣなど、オキサジン色素、チアジン色素、ナフトラクタム色素、ジアザヘミシアニン色素、アゾピリドン色素、アゾベンゼン色素、媒染染料、酸性染料、塩基性染料、金属化および金属化前色素、キサンテン色素、直接染料、酸化してロイコ色素前駆体から変換される濃い色相を有する色素を生成し得るロイコ色素、並びに他の色素、例えばWaring, D. R.とHallas, G., “The Chemistry and Application of Dyes”, Topics in Applied Chemistry, Plenum Press, New York, N.Y., 1990年に列記されているものが包含される。別の色素は、Haugland, R. P., “Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals”, 第6版, Molecular Probes, Inc., Eugene OR, 1996年に列記されているものから見出すことができる。
本発明において使用することができる他の色素のタイプには、アクリジンオレンジ、イエロー、レッド、ナイルブルー、ルシファーイエローCH、メチレンブルー、ミヒラーヒドロールブルー、ビンドシェドラーグリーン、トルイジンブルーおよびこれらの誘導体を包含するアクリジン色素を含むジアリールメタン色素が包含されるが、これに限定されない。トリアリールメタン色素には、マラカイトグリーン、クリスタルバイオレット、ビクトリアブルー、フルオレセイン、ローズベンガル、ローダミン、イソスルファンブルーおよびこれらの誘導体が包含されるが、これに限定されない。メエロシアニン色素には、メロシアニン540およびその誘導体、ポルフィリンが包含される。
発色団はトリフェニルメタン、シアニン、メロシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニンまたはポルフィリンが最も好ましい。
上述したように、本発明のセンシタイザーまたは造影剤は単一の発色団（“単量性”色素）を含有するかまたは１つより多い、例えば２〜100、特に２〜10の発色団（“ポリマー性”色素）を含むことができる。色素化合物がポリマー性である場合、その構造は任意の公知のポリマー構造、例えばバックボーン分子（好ましくはポリマー性）からペンダント状となっている発色団を有するもの、バックボーンポリマーの一部を形成する発色団を有するもの、枝分かれ状分子構造の末端もしくは内部に結合した発色団を有するものまたはこれらの構造の組み合わせとすることができる。発色団はまた、樹状ポリマーの腕の末端に結合していてもよい。これらの場合、発色団の有機骨格は、例えば連結基の結合を介してカップルした一対の発色団の骨格と一緒にカップリングし、または複数の発色団の骨核はカップリングして共通のバックボーン構造となり後で述べるようにこの連結基またはバックボーン構造はベクターとなりうる。そのような構造は、MRIの造影剤として有用なポリキラント化合物に関して広く記載されている。発色団を含有するものが金属または擬金属［pseudometal］を有する、例えばポルフィリン、フタロシアニンおよびナフタロシアニン並びに上記した他のものの場合、発色団の連結が有機骨格ではなく金属を介する場合別のポリマー構造が可能である。そのようなポリマーは共面［cofacial］ポリマーと称し、本発明の特に新規な態様を表す。この記載の目的において、多数性発色団は、２つまたはそれ以上の発色性基を含有する化合物である。
従って、そのようなポリマー性色素化合物は次の式を有するものが好都合である：
0004503103.tif 000042
式中、ｎは２またはこれより大きい値の整数（例えば２〜100）、Chrは発色団であり、Ｌは結合、連結基（例えば二価または三価の有機リンカー）、枝分かれ多価リンカー構造（例えば樹状または星形［starburst］のポリマー）または下記のベクター基（またはベクター−リンカーの組合わせ）である。
使用するリンカーおよびベクター−リンカー基は、MRIの造影剤の分野で知られるポリキラントにおいて使用されるものとすることができる。しかし、リンカー基は、その連結骨格中の親水性ポリマー部分、例えばポリアルキレンオキシ成分、例えば成分［（CRaRb）x-（CH2）y-O-］s、［-O-（CRaRb）x-（CH2）y-］s、式中ｘ＝１、ｙ＝１〜３、式中ｘ＝０、ｙ＝２〜４およびRa、Rb＝Ｈ、CH3、CH2CH3並びにｓは、好ましくは［（CRaRb）x-（CH2）y-O-］s、［-O-（CRaRb）x-（CH2）y-］s単位が100〜10,000、特に1000〜5000の分子量を有するようなものを含む。そのような単位は、例えば（（CH2）2O）t（（CH2）3O）v、式中ｔおよびｖは２より大きい値の整数である、などのブロック中にある異なる長さのアルキレン単位、（CH2）qを含有し得る。従って、例えば多数性発色団は、式Chr-L1-（PAO-L2-Chr）u、式中Chrは発色団であり、任意におよび好ましくはスルホン酸基を含有し、L1およびL2は結合または連結官能基であり、PAOはポリアルキレンオキシ基であり、ｕは少なくとも１の値、例えば１〜100の整数である、であることができる。SDTにおいて、有用な化合物は、１つまたはそれ以上のポリオキシアルキレンオキシド基が結合されている発色団を包含する。
１つの態様について、多数性発色団化合物中の各発色団が、少なくとも１つのスルホン酸（または誘導体）基、好ましくは少なくとも２つ、更に好ましくは少なくとも３つのそのような基を有することが好ましい。本発明に従って使用される発色団化合物が少なくとも６つ、好ましくは８つのスルホン酸（または誘導体）基を含有するのが特に好ましい。モノマー性色素について、そのような基の総数は例えば１２である。ポリマー性色素化合物について、総数は重合度に依存するが、総数は例えば発色団の総数の10倍である。
スルホン酸基は、遊離酸（SO3H）として、または生理的に許容し得るアニオンを有するその塩、例えばアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよび有機アミンイオン（例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、エタノールアミン、ジエタノールアミン、メグルミンなど）として存在し得る。
スルホン酸基の存在、並びにその性質および誘導度は、本発明において使用される発色団化合物の親水性度、親油性度およびイオンの性質に影響を与える。同様にこれは、腫瘍細胞に浸透するまたは単に腫瘍細胞のまわりに蓄積する能力に影響を与える。
レポーター（例えば発色団）の分子量は、選択された部位の最大局在化に対して操作することができ、分子中における多くの局在化基の存在は分子が局在化する可能性を増加させる。更に、複数のレポーターセンシタイザーまたは造影剤（例えば多くの別個の発色団分子からできている多数性発色団）の単一分子中の局在化は、単一レポーターの局在化により生じるよりも非常に強力なシグナルを与える。ポリマー鎖中の個々の分子が鎖自体によって拘束され、故に十分な量で並ぶことができないために、凝集は防止されるかまたは実質的に防止される。
本発明に従って使用されるポリスルホン酸化合物は、腫瘍組織の血管基質において移動不能になる能力から見て特に興味深い。この能力は、スルホン酸基の数が増加するにつれて増加する。これは、新たな腫瘍におけるコラーゲン、特に未架橋コラーゲンに対する結合性のためである。
予め形成したセンシタイザーまたは造影剤化合物にスルホン酸基を導入することも可能であるが、スルホ基の数をよく制御できるために、化合物の骨格を構築する間にスルホ基を導入するのが好ましい。例として用いる発色団について、これは普通発色団の構築に従来用いているアリール試薬のクロロまたはポリクロロ置換類似体を使用することにより達成され得る。これらは、NaSHと反応させ、酸化させて慣用のアリール試薬類似体のスルホまたはポリスルホ類似体にする。従って、フタロシアニンまたはナフタロシアニン（本明細書では略称Pcを指し、PcSnはｎ個のスルホン酸基を有する色素を意味する）について、PcS8はジスルホフタル酸（またはフタロニトリルもしくはフタルアミドなど）を用いて容易に構築することができる。化合物を形成する適当なコアが合成中に存在する場合、金属または擬金属のコアを持つMPcS8化合物（ＭはSi、Al、Znなどの元素である）を生成させることができる。
他の発色団の場合、発色団の骨格の構築の間に多数のスルホン酸基を導入することもできる。従って、例えば末端基としてインドールまたはベンズインドール（または含酸素もしくはイオウの類似体）を有するシアニン用いると、４つまたは６つのスルホン酸基を有するシアニンは、インドールまたはベンズインドール（または含酸素もしくはイオウの類似体）などの２つのスルホン酸基を持つ試薬を使用することにより生成させることができる。更に２つのスルホン酸基は、プロパン−またはブタン−スルホンを用いる四級化によって導入することができる。J. Org. Chem. 42（5）, 885（1997年）の方法に従って製造されるシアニン色素において、追加のスルホン酸基は、中心のシクロアルケン基の置換、例えばクロロ置換基のモノまたはポリスルホン化フェノキシルによる置換によって添加され得る。このように、分子当たり10個までのスルホン酸基を有するシアニン色素は容易に製造することができる。
８つのスルホ基を有するフタロシアニン（またはナフタロシアニン）である新規な単量性色素は、下記のスキームによって製造することができる。
0004503103.tif 000043
各ｏ−ジシアノベンゼン分子を置換する２つの追加の基は、互いにｏ−、ｍ−またはｐ−に配向させることができ、Ｍは任意に存在し得る適切に置換される元素（例えばAl（Cl）、Si（OR）2）を表す。
テトラ置換Pc’sと比較すると、一部のオクタ置換Pc’sは、３つの可能性のある出発物質のうちの２つから位置異性体が生成し得ない、即ち3,6−および4,5−置換ｏ−ジシアノベンゼンは単一のオクタスルホ−Pc誘導体しか生成せず、収率を増加させ且つこれらの生成物の精製を単純にするという利点がある。オクタ置換誘導体はまた、光の皮膚の通過がより大きいより高波長において吸収性を示す傾向がある。使用する前に、これらおよび下記に示す他のスルホン酸誘導体をナトリウムまたは他の生理学的に許容し得るスルホン酸塩に変換する。
好ましい新規な単量性シアニン色素の例は下記のものである：
0004503103.tif 000044
７つのスルホ基を含有するこの新しい化合物は、公知文献の方法を利用して製造できる。（Mujumdar等, Cyanine-labeling reagents. Sulfobenzindo-cyanine succinimidyl esters. Bioconj. Chem. 1996年, 7, 356-62；Narayanan等, A new method for the synthesis of heptamethine cyanine dyes: synthesis of new near-infrared fluorescent labels. J. Org. Chem. 1995年, 60, 2391-5）
比較可能だが、色素を強化した化合物は、ジ−またはポリアミンから、例えばPEGジアミン：
3（HO3S）PcS02NHPEGNHSO2Pc（SO3H）3
およびメラミン、下記のトリアミンから作成することができる：
0004503103.tif 000045
［Ｌ＝Cl、OH、特定の標的ベクターに対してリンカーとして任意に使用される、加水分解的に安定なPEG基、または他の所望される基］
使用し得る他のポリアミンにはエチレンジアミン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラアミンなど、ネオペンチルテトラアミン、トリス（２−アミノエチル）アミン、ジ−およびトリ−アミノシクロヘキサン、ピペラジン、トリアザシクロノナン、テトラアゾシクロドデカンおよびテトラデカンおよびペンタデカン、ジ−およびトリ−アミノベンゼン、ポリアミノビフェニル、ポリアミノナフタレン、ヒドラジンなどが包含される。
上述したポリスルホン酸物質はポリアニオン性である。一部の用途のためおよび血中に注射後に患者を楽にするために、非イオン性の生成物を得ることが所望される。そのような化合物は、アミンとの反応により酸誘導酸塩化物から容易に製造することができる。水溶性であることが要求される場合、PEGアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ジヒドロキシプロピルアミン、Ｎ−メチルグルカミンなどのような親水性アミンが好ましい。例えば、フタロシアニンスルホネート色素PEGベース組成物は下記のものである：
Pc（SO2NHPEG）4
式中、PEG＝適当な分子量のポリエチレングリコール基である。
アミンと反応させたが一部未反応の酸塩化物基をまだ有している、本明細書に記載の酸塩化物色素誘導体の全てを、引き続いて過剰の親水性アミンと更に反応させ、非イオン性とし得るアミド生成物を得ることができる。
製造することができる他の組成物には両性イオン化合物が包含されるが、イオン性化合物が少なくとも２つ、アニオンおよびカチオンを生成するのに対し、これは溶解した際に単一の溶質物質しか生成しないという事実によって実質的に非イオン性とされる。このタイプの化合物は、公知のテトラピリド−フタロシアニンから直接テトラスルホン化によって調製することができるが、しかしこれは強制［forcing］条件を必要とする。これらはピリド−Pc’sをプロパンスルトンと処理して、例えば：
0004503103.tif 000046
［式中、Ｍ＝AlCl、SiCl2など
窒素原子は各イソインドール基の３、４または５位おいてプラスに帯電し得る。］
とすることによってより好都合に製造することができる。
ピリジンを用いるこの反応は公知である（Andersen等, Synthesis of pyridinium-1-propane-3′-sulfonate（PPS）, A powerful electron scavenger and positronium inhibitor, Acta Chem. Scand. Ser. B. 1979年, B33（9）, 695-6）が、しかし、ピリジノ−Pc’sについては報告されていない。対応するオクタ置換誘導体は、ピリダジノ−Pc（２つのＮ原子、オルト位）、ピリミジノ−Pc（２つのＮ原子、メタ位）またはピラジノ−Pc（２つのＮ原子、パラ位）から製造することができる。
非イオン性化合物のこれら２つの概念のいずれか−両性イオン性または親水性アミド化−は、本明細書の開示におけるセンシタイザーまたは造影剤の何れにも適用して、非イオン性の親水性類似体を製造することができる。
アニオン性および非イオン性化合物に加えて、カチオン性化合物も可能であり、そのような化合物が高い腫瘍局在化能を有する観点から特に興味深い化合物である。これらは酸塩化物から、例えばPcテトラスルホニルクロリドおよびコラミン［cholamine］を用いて容易に誘導され、
Pc（SO2NH CH2CH2N+Me3）4  4Cl-
を得ることができる。
そのような化合物の水溶性は、四級化基、例えば-N+（CH2CH2OH）3、-N+Me（CH2CH2OH）2などの親水性を増大させることにより向上させることができる。
上記の概略のタイプの化合物は、シアニン色素から製造することもできる。
オリゴマーおよびポリマー色素は、市場で入手可能な、例えばAlClPcS4から容易に合成することができる有用な化合物であり、合成するには典型的には先ずチオニルクロリドを用いてテトラスルホニルクロリドに変換する。また、Pcまたは他の発色団をクロロスルホン酸およびチオニルクロリドを用いてスルホン化することは、水溶性で、容易に単離できる固体として直接テトラスルホニルクロリドを与える。
１つに態様において、オリゴマーまたはポリマーとし得る生成物は、Pc（SO2Cl）4誘導体をオリゴ−またはポリマー性ポリアミン、例えばポリ（エチレンイミン）などと反応させて、枝分かれポリマー：
0004503103.tif 000047
を形成させることによって作成することができる。
所望するのであればこの段階において他の反応を実施することができ、またはアニオン性生成物を所望するのであれば、最終の加水分解工程で必要なポリスルホンアミドを生成させる。
記載された反応生成物はあまりにも簡略化されており、ペンダント−NH2基は出発ポリマー中に存在し得るものであり、そして枝分かれおよび一定量の架橋は生じ得るが、この量は、多くの未反応スルホ基が最終生成物中に存在する限りは、生成物の効果に影響を与えないと認識される。これは、２つの反応体の相対比率を制御することにより達成することができる。
バックボーン中にスルホンアミドPc基を有する色素は、PcS4スルホニルクロリドをジアミンと等モル比で反応させる（共重合）ことによりオリゴマーまたはポリマーとして作成することができる：
0004503103.tif 000048
式中、Ｒはエチレンからポリ（エチレン）、ジ（エチレンオキシ）からポリ（エチレンオキシ）、フェニレンからポリフェニレンなどを表す。
ペンダントスルホ−Pc基を有するポリマーまたはオリゴマー色素は、Pc含有モノマーのビニル重合、例えば：
0004503103.tif 000049
式中Ｒ＝Ｈまたは低級アルキル
などの化合物から製造することができる。
類似の生成物は、Pcテトラスルホニルクロリドをポリ（アリル）アミンまたはポリ（ビニルアミン）と反応させることにより作成することができる。
一般的に、本発明にて使用されるまたは本発明に従って製造されるポリマー（例えば多数性発色団）が、種々の異なる構造および重合度を包含し得ることに注目すべきである。
本発明はまた、例えば塩化Pcテトラカルボン酸から製造し得る、上記したものに類似のカルボキサミド誘導体の使用も対象とする。関連する物質は、テトラヒドロキシ−Pc’sおよびポリ酸塩化物（例えばアクリル酸）またはポリ酸無水物（例えば無水マレイン酸）からも製造することができる。比較生成物もまた、シアニンおよび他の色素から製造することができる。
本発明に従って使用可能な、特に興味深いセンシタイザーは、オリゴマー性およびポリマー性を含む共面［cofacial］フタロシアニン誘導体を包含する。これらは、Pc分子の中心における元素を介して連結され、従って連結できる軸性基を有するためにこの元素は三価（例えばAl、Ga）または四価（例えばSi、Ge、Sn）である必要がある。四価の元素だけが重合に必要な２つの軸性基を有する。重合化学と干渉せず、故にこのタイプの生成物がイオン性または非イオン性のいずれかである（またはそのようになる可能性を有する）という条件で、任意の基がPc系（例えば、-SO3Na）の周囲に存在し得る。かくしてSi化合物については：
PcSi（OH）2＋ClSiMe2（CH2）3NCO ------> PcSi［OSiMe2（CH2）3NCO］2
このジイソシアネートは、ジオール、例えばエチレングリコールおよび他のHO（CH2）nOH、またはHO（CH2CH2O）nH（PEG）とのポリウレタンオリゴマーおよびポリマーを形成し、これは類似のジアミンと反応させてポリ尿素を形成させることもできる。
対応するイソチオシアネートを製造して、同様に化学反応を実施することもできる。
AlPc化合物は２つより多い発色団を有するポリマー性生成物に使用できないが、そのような分子を２つ共面的に連結して、上記のものに類似の化学反応を用いて、本明細書の目的における多数性発色団である二量体生成物を生成させることができる。
ベクター
上述のように、センシタイザーおよび造影剤は、非活的に腫瘍組織もしくは細胞を標的とし得るか、または活性標的部分、“ベクター”と接合し得るものであり、ベクターは、その生体内分布を改変するのに役立つこと、例えば血中残留時間を長くさせ、かくして幾度もの通過で腫瘍部に蓄積させるかまたは血管を通じてのセンシタイザーの浸透を増加させるかもしくはセンシタイザーを腫瘍細胞表面の受容体あるいは腫瘍の増殖領域に多数ある他の受容体に結合させる。適当なベクターは、抗体、抗体フラグメント、受容体結合ペプチドおよびペプトイド、腫瘍標的剤化合物、血中残留延長化合物、葉酸およびその誘導体などを包含する。トランスフェリンは、通常は増殖腫瘍においてトランスフェリン受容体を上方調節するために、増殖する腫瘍を標的とする発色団に、特に適するベクターである。
ベクターおよびその不随物、例えば二官能価リンカー化合物は、MRIおよびシンチグラフィー用の造影剤に関して、ならびに一般的に標的とされる放射線医薬に関して広く記載されている。例えば、“Handbook of targeted delivery of imaging agents”, Ed, V.P. Torchilin, CRC, Boca Raton, USA, 1995年を参照。
これらのベクターは典型的には高分子であり、センシタイザーもしくは造影剤の残りの部分に直接連結され得るか、またはこれがベクターの標的能と干渉する場合には、媒介体分子もしくはリンカーを使用することができる。
任意に、本発明の化合物は、標的ベクターと結合して、特定の器官、特定の器官の一部または病変組織などの身体の特定部位に化合物を蓄積させることができる。結合方法は、WO 96／40285、優先権主張出願であるUS 08／497,684およびUS 08／640,464、並びにUS 08／392,614に教示されている。
用語「残基」は、ここで化学的成分として用いる。前記化学的成分は、例えばベクター部分、染料、連結基、ベクター反応性基、受容体認識基、免疫反応性物質、抗体、抗体フラグメント、タンパク質、ペプチド、小さい有機分子、ヘテロ二官能価架橋剤などの架橋剤、またはスペーサーの基である。用語「残基」は、１つまたはそれ以上の化学結合である場合には単独で存続し、別個の化学的成分として考えられる場合には前記化学的成分を構成する前記化学的成分の部分が、変換、修飾または置換されて、１つまたはそれ以上の他の化学的成分との１つまたはそれ以上の共有結合を含む化学的成分の部分と定義される。
ここで用いるように、用語「受容体」および「抗原」は、分子中において１つもしくはそれ以上の活性部位を含む前記分子内における化学基、分子中において１つもしくはそれ以上の活性部位を含む前記分子中における化学基の配列、または基もしくは基の配列が分子中において１つもしくはそれ以上の活性部位を含む１つもしくはそれ以上の化学基あるいは１つもしくはそれ以上の化学基の配列を包含する分子とする。受容体の「活性部位」は、ベクターに結合する特異的能力を有するかまたはベクターに対する結合親和性を有する。用語「受容体」または用語「受容体中の活性部位」の使用に関して、ここで用いる用語「ベクター」は、特異的化学基もしくは化学基の特異的配列（基を認識する受容体）を包含する分子を指し、分子、基もしくは基の配列は受容体、特に受容体中の活性部位に対して相補的であるか、または受容体への結合に対して特異的親和性を有するか、さもなくば所望の方法にて物質の全ての組成物の生体内分布を修飾するものである。例には、ホルモンに結合する細胞表面抗原、細胞表面および細胞内受容体；薬剤に結合する細胞表面および細胞内受容体が包含される。前記細胞の受容体に対するホルモンの特異的結合；および細胞の受容体に対する薬剤の特異的結合の特異的関連の部位は、前記受容体の活性部位の例であり、ホルモンまたは薬剤は、対応する受容体に対するベクターの例である。
ベクター基、Veは、酵素、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、リポタンパク質、糖タンパク質、脂肪、リン脂質、ホルモン、増殖因子、ステロイド、ビタミン、多糖類、レクチン、毒素、核酸（オリゴヌクレオチドを含む）、ハプテン、アビジンおよびその誘導体、ビオチンおよびその誘導体、抗体（モノクローナルおよびポリクローナル）、抗−抗体、抗体フラグメント並びに抗原性物質（タンパク質および炭水化物を含む）を包含するが、これに限定されない、広範囲の天然に生じるまたは合成して製造される物質から選択することができる。ベクター基、Veは、ウィルス、細菌、原生動物、菌類、寄生虫、リケッチア、カビ、同様に動物およびヒトの血液、組織並びに器官構成物の成分または産物を包含するが、これに限定されないものからも選択することができる。更に、ベクター基、Veは、医薬剤または上述の物質と同様に当業者に知られた他のものの任意の合成類似体とすることができる。別の特異的ベクター基はWO 96／40285に記載されており、その全てをここに組み入れる。
ベクター基、Ｖは、腫瘍に関連する抗原または受容体を認識するかまたはこれに特異的である抗体、抗体フラグメント、タンパク質またはペプチドが好ましい。一部の態様において、Ｖは、化学結合または受容体認識基の残基およびＶにおける反応性基の残基から誘導される連結基を介して、受容体に共有結合する受容体認識基を包含することができる。ここで用いる、“RRG”と省略することができる用語「受容体認識基」は、ベクターと共有結合でき、そして生きている生物中に見出されるかまたは診断、治療、もしくは細胞材料あるいは生きている生物の遺伝子操作に有用である有機化合物もまた包含し、ベクターは、生物液体中に見られ得るかまたは腫瘍細胞などの治療すべき細胞に結合し得る別の成分（受容体の“活性部位”）と相互作用する能力を有する。
RRGは、上述の広範囲の天然に生じるまたは合成して製造される物質から選択することができる。更に、RRGは、免疫能を有する宿主細胞中に存在する場合にその物質に結合する能力を有する特異的抗体の産生を生じさせるかまたはそのように産生された抗体であり、抗原抗体反応に関与する任意の物質とすることができる。
好ましいベクターは、抗体およびその種々の免疫活性のあるフラグメント、タンパク質並びにペプチドであり、これらは、上述のようにベクターの反応性基または連結基（Ｌ）と反応する少なくとも１つの反応性基を含有するものである。その部位は、ベクターに対して固有でありうるか、またはベクターの適切な化学修飾を介して導入することができる。ここで概略を述べた技術によって産生される抗体およびフラグメントに加えて、分子生物学、ファージ提示および遺伝子工学により産生される他の抗体、タンパク質およびペプチドが特別に包含される。
ここで用いる用語「抗体フラグメント」は抗体の残基からなるベクターを指し、抗体の抗原に対する結合親和性を示すことを特徴とする。ここで用いる用語、抗原に対する結合親和性は、抗体結合部位と抗原決定基との間の相互作用または結合の強度、従ってそれらの間の立体化学的適合性の熱力学的表示を指し、例えば抗体−抗原相互作用の平衡または結合定数の表示である。ここで用いる用語、親和性はまたリガンドと受容体との間の相互作用または結合の強度、従ってそれらの間の立体化学的適合性の熱力学的表示を指し、例えばリガンド／受容体相互作用の平衡または結合定数の表示である。
抗体フラグメントは、前記抗原に対する結合親和性率を少なくとも示し、前記比率は0.001パーセント〜1,000パーセントの範囲、好ましくは0.01パーセント〜1,000パーセント、より好ましくは0.1パーセント〜1,000パーセント、最も好ましくは1.0パーセント〜1,000パーセントの前記抗体の前記抗原に対する相対的親和性である。
抗体フラグメントは、１つまたはそれ以上の化学結合開裂反応からなる化学反応、反応体として、アミノ酸、ペプチド、炭水化物、ここで定義した連結基、ここで定義したスペーサー基、ここで定義したベクター反応性基、およびここで定義したように産生された抗体フラグメントからなる群から選択される１つまたはそれ以上の化学成分を用いる１つまたはそれ以上の化学結合生成反応からなる化学反応よって、抗体から産生することができるが、抗体フラグメントは、ここで定義したようにおよび分子生物学的方法、細菌法または抗体遺伝子の遺伝子操作からなる方法によっておよびその結果生成される。
抗体フラグメントは、次の反応の１つまたはそれ以上からなる化学反応によって抗体から誘導することができる：
（ａ）抗体が含む１つまたはそれ以上の化学結合の開裂であり、前記結合は、例えば炭素−窒素結合、イオウ−イオウ結合、炭素−炭素結合、炭素−イオウ結合および炭素−酸素結合から選択され、前記開裂の方法は；
（ｉ）酵素、例えばパパインまたはペプシンのような生化学的触媒の作用を含む触媒化学反応であり、当業者においては一般的にそれぞれFabおよびFab′2と示されるような抗体フラグメントを生成することが知られているものであり；
（ii）例えば、好都合には７に等しいかまたはこれ未満のpHにて生じるヒドロニウムイオンのような求電子化学触媒の作用を含む触媒化学反応；
（iii）例えば好都合には７に等しいかまたはこれより大きいpHにて生じるヒドロキシドイオンのような求核触媒の作用を含む触媒化学反応；
（iv）スルフヒドリル基を含有する試薬によるジスルフィド結合のイオウ原子の置換反応のような化学量論法において消費される試薬を使用する置換反応を含む化学反応；
（ｖ）ジスルフィド結合の還元のような還元反応を含む化学反応；および
（vi）ヒドロキシ基の酸化または炭水化物部分において生じるようなビシナルジオール基の炭素−炭素結合の酸化などの酸化を含む化学反応
から選択され、
（ｂ）１つまたはそれ以上の反応体との間の１つまたはそれ以上の化学反応の形成であり、例えば炭素−窒素結合（例えばアミド結合、アミン結合、ヒドラゾン結合およびチオウレア結合など）、ジスルフィド結合のようなイオウ−イオウ結合、炭素−炭素結合、炭素−イオウ結合および炭素−酸素結合から選択される１つまたはそれ以上の共有結合の形成などであり、前記化学結合形成において反応体として使用される１つまたはそれ以上の試薬は、アミノ酸、ペプチド、炭水化物、ここで定義した連結基、ここで定義したスペーサー基および（ａ）に記載したように生成されるような抗体フラグメントからなる；または
（ｃ）抗体フラグメントは、１つまたはそれ以上の反応体の間の１つまたはそれ以上の非共有結合の形成によって誘導することができる。そのような非共有結合は、脂肪族基または炭素環基を含むような低極性の相互に接近し得る領域を別個に含む化学物質の間で水性媒体中にて生じるような疎水性相互作用、およびオリゴヌクレオチドと相補的オリゴヌクレオチドの結合において生じるような水素結合の相互作用を含む；または
（ｄ）抗体フラグメントは、分子生物学の方法の結果としてまたは抗体遺伝子の遺伝子操作によって、例えば単一鎖免疫反応性基、Fvフラグメントまたは最小認識単位の遺伝子操作において生成させることができる。
抗体フラグメントは、１つまたはそれ以上の上記方法を組み合わせた結果として生成させることができる。
所望するならば、ベクターを、目的の組織および細胞において見い出される受容体部分または抗原の残基に結合する反応性基を提供するよう修飾または化学的に変換させることができる。そのような技術は、オリゴヌクレオチドの修飾を目的とするWO-A-89／02931およびWO-A-89／2932、並びに米国特許第4,719,182号に記載されるような連結部分および化学的修飾の使用を包含する。
本発明のセンシタイザーおよび造影剤の好ましい使用は、腫瘍の描写または破壊のための使用である。従って、好ましいベクターは腫瘍に関連する抗原に対する抗体（以後時々、Abと示す）を包含する。制限するものではない特定の例には、結腸直腸腫瘍を認識するB72.3および関連する抗体（米国特許第4,522,918号および第4,612,282号に記載）；9.2.27および関連する抗メラノーマ抗体；結腸直腸腫瘍を認識するD612および関連する抗体；小細胞肺癌を認識するUJ13Aおよび関連する抗体；小細胞肺癌および結腸直腸腫瘍（パン−カルシノーマ）を認識するNRLU-10、NRCO-02および関連する抗体；前立腺腫瘍を認識する7E11C5および関連する抗体；結腸直腸腫瘍を認識するCC49および関連する抗体；壊死組織を認識するTNTおよび関連する抗体；結腸癌を認識するPR1A3および関連する抗体；WO-A-90／02569に記載のING-1および関連する抗体；有棘細胞癌を認識するB174、C174および関連する抗体；特定のリンパ腫および白血病と反応するB43および関連する抗体；抗−HLBおよび関連するモノクローナル抗体；並びに当業者に知られている、他の腫瘍、組織または細胞特異的抗体が包含される。
更に好ましいベクターはタンパク質、特に組換えヒトタンパク質であり、それらは分子生物学的、ファージ提示または遺伝子工学的に生成または修飾され、修飾は前記タンパク質のペプチド配列における特定のアミノ酸の組込み、置換、挿入および欠失からなり、受容体の活性部位に対する結合親和性を有するRRGを含有する組換えヒトタンパク質を生成させる。そのように修飾した組換えタンパク質ベクターは、受容体の活性部位に対する天然の修飾していないベクターより強い、受容体の活性部位に対する親和性を有する。
他の態様において、ベクター（またはベクター−リンカー）は融合タンパク質からなる。ここで用いる用語「融合タンパク質」は遺伝子工学的につくられたタンパク質を含む物質であり、そのコード化領域は、第１タンパク質残基のコード化領域がフレーム中において第２タンパク質残基のコード化領域と融合されているものからなる。好ましくは、前記融合タンパク質は、コード化領域がフレーム中において１つまたはそれ以上のベクターまたはリンカーのコード化領域と融合されているRRG残基のコード化領域を含むタンパク質からなり、そのリンカーはタンパク質またはペプチドとし得る。ベクターを含む上記の遺伝子工学的に作られる融合タンパク質は、そのコード化領域が独立的に、フレーム中において、ヒトまたは非ヒトの第２タンパク質の残基のコード化領域と融合されているヒトまたは非ヒトの第１タンパク質の残基のコード化領域を含むタンパク質からなり得る。前記コード化領域は独立的にヒトおよび細菌のものまたは上記のような遺伝子工学技術によって修飾されたものが好ましい。
更に好ましいベクターは、ペプチド、オリゴペプチドまたはペプトイドであり、そのベクターは、その配列および組成が分子、特別な化学基または化学基の特別なアレーを含む１つまたはそれ以上のアミノ酸を包含し、受容体、特に受容体における活性部位と相補的であるかまたはこれに対する特異な親和性を有する。そのようなペプチドは、同じ受容体を認識する抗体、抗体フラグメント、タンパク質または融合タンパク質のRRGを含むアミノ酸と組成的に同じである。また、そのようなペプチド性ベクターは、他のRRGと同じアミノ酸配列を有するのではなく、同じ受容体に結合する他のRRGと構造的にまたは立体的に等しい。そのような同等なペプチドは、点突然変異などの分子生物学的技術、ファージ提示［phage display］、遺伝子工学および当業者に知られた他の技術によって同定することができる。また、ペプチド性またはオリゴペプチド性ベクターは、計算機化学およびペプチド合成のよく実施された方法論をもちいて新たに設計することができる。合成ペプチド性ベクターは、アミノ酸の線状アレーに制限されるのではなく、環状とすることができ、そしてペプチド当たり１つ以上のRRGを含有し得る。ペプチドまたはペプトイドベクターは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、天然には生じないアミノ酸、合成アミノ酸誘導体、有機分子またはこれら全ての混合物を含むことができ、ペプチド（アミド）または非ペプチド結合により互い結合されている。
特に好ましいベクターはペプチド模倣性［peptideomimetic］分子であり、その分子は抗体、抗体フラグメント、タンパク質、融合タンパク質、ペプチドまたはペプトイドから誘導または同定され、同じ受容体に対して親和性を有するRRGと構造的または機能的に同等な完全な合成有機物質である。ペプチド模倣性と考えられる他のベクターは、薬剤などの化学的構成要素、例えば目的の受容体、特に受容体の活性部位に対する親和性を有するものを包含する。ペプチド模倣性ベクターは、点突然変異などの分子生物学的技術、ファージ提示、遺伝子工学および当業者に知られた他の技術の使用を通じて同定することができる。ペプチド模倣性ベクターは、現在の化学的方法、同様に計算機化学および組み合わせ化学の技術を使用して新たに設計および合成することができる。
ここで用いる「ベクター反応性基」は、典型的にはベクター中に見出されるかまたはこの中に導入される反応性官能基と反応して、連結基とベクターとの間に結合を形成し得る１つまたはそれ以上の化学基を指す。レポーターおよび／または親水性ポリマー部分を非−タンパク質生体分子、同様に合成化学物質、例えば目的の受容体の活性部位に対して親和性を有する薬剤または他の分子のような非生体分子に結合させるためにベクター反応性基を使用することができると特に予測される。ベクター反応性基は、そのような合成化学物質を含有し得る混合物で、そして物質がベクター反応性基と反応する基を含有する混合物中のそのような分子の検出の目的に使用することもできる。従って、本発明の実施において有用なベクター反応性基は、反応性基を含有する任意の分子、好ましくは生体分子（例えば、タンパク質、炭水化物、核酸および脂質）と反応して、色素と分子の間で連結基を形成し得る基を包含する。その分子がタンパク質である場合、好ましい反応性基はアミン基およびスルフヒドリル基を含む。特に好ましい生体分子は、上述のようにRRGを含有する。
本発明の実施において有用なベクター反応性基は、例えば酸化、還元、または別の化学種、例えばアミン、アミノ酸、置換アミンもしくは置換アミノ酸とのアミド結合形成のような共有結合形成によって化学的に修飾された任意の生体分子と反応して、生体分子中に反応性基を導入させて、レポーターおよび／または親水性ポリマー部分と化学的に修飾した生体分子との間で連結基を形成することができる基を包含する。
親油性造影剤は、光吸収そして５〜10000nm、好ましくは10〜2000nm、最も好ましくは50〜500nmの大きさの油滴を有する水中油型エマルジョンのような粒子加熱のために処方し得る。これらは、燐酸緩衝生理食塩水のような医薬上許容し得る水相中に懸濁させることができる。
親油性造影剤は、水中油型エマルジョン単独または１つ以上の親油性造影剤の混合物として処方し得る。親油性造影剤の混合物中の１つの親油性造影剤の割合は、低くても0.1％、そして高くても99.9％とすることができる。
水中油型エマルジョン小滴は主に放射線吸収成分のみから構成されるか、または小滴の間に分布する他の親油性物質を包含することができる。これらのエマルジョンは、レシチン、Larodan Lipidsから入手できるようなリン脂質、テトロニック［Tetronics］およびプルロニック［Pluronics］などの界面活性剤、ゴマ油などの親油性添加物、並びに等張性、pHおよび浸透圧を調整または調節するのに通常使用される他の成分などの当該分野に知られた医薬上許容し得る賦形剤を含有することができる。
好ましい態様において、水中油型エマルジョン小滴は、ポリエチレンオキシドベース界面活性剤、好ましくは非イオン性ポリエチレンオキシドベース界面活性剤を含むことができる。これらの界面活性剤は、任意に水中油型エマルジョン小滴に対して安定剤として作用し得る。これらの界面活性剤の濃度は、エマルジョンの0.0001％から高くても25％の範囲、好ましくは0.01〜約５％であり得る。また、酸素で処理、例えば空気中で酸素に暴露させることにより、これらを反応させて、１つまたはそれ以上のヒドロペルオキシド種を形成させることができる。
好ましいベクター反応性基は、これのみに制限されないが、タンパク質またはペプチドにおけるリジンエプシロンアミン基もしくは末端アミン基のようなアミン基、またはタンパク質もしくは他の生体分子に共通に見出されるシステインメルカプト基のようなメルカプト基と直接反応する基から選択される。そのようなタンパク質反応性基の例には、クロロメチルフェニル基、クロロメチルカルボニル基およびヨードメチルカルボニル基などの活性ハロゲン含有基；２−クロロエチルスルホニル基および２−クロロエチルカルボニル基などの活性化２−（脱離基）−置換エチルスルホニルおよびエチルカルボニル基；ビニルスルホニル基；ビニルカルボニル基；オキシラニル基；イソシアネート基；イソチオシアネート基；アルデヒド基；アジリジル基；スクシンイミドオキシカルボニル基；カルボン酸ハライド基などの活性化アシル基；無水物基；チオエステル基；ニトロフェニルカルボネートなどのカルボネート類；スルホン酸エステルおよび塩化物；蛍光体アミデート；モノ塩化シアヌル酸およびジ塩化シアヌル酸；並びに慣用の写真用ゼラチン硬化剤において有用であることが知られている他の基が包含される。
上に列記したベクター反応基は、化学的に修飾されて反応性アミン基およびメルカプト基を含むタンパク質またはベクターと反応し得る。アミン基は、よく知られている技術、例えば芳香族基をニトロ化し次いで還元することによって、還元による第一級アミドをアミンに変換することによって、アルコールのヒドロキシル基をスルホン酸エステルに変換し次いでアジド基で置換し、その後還元してアミンにすることなどによって導入することができる。メルカプト基は、例えばアルコールのヒドロキシル基をスルホン酸エステルに変換し次いで硫化水素ナトリウムで置換することによって、タンパク質のアミン基とアセチル化システインのカルボン酸基との間にカルボジイミド試薬を用いて脱水アミド結合を形成させることによってなどのよく知られた技術によって導入することができる。
また、タンパク質、ペプチド、ペプトイドまたはペプチド疑似物が、例えば部分的酸化によって化学的に修飾されてアルデヒド基またはカルボン酸基を導入する場合、好ましいベクター反応性基は、アミノ、アミノアルキル、アミノアリール、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヒドラジノ、アルキルヒドラジノ、アリールヒドラジノ、カルバジド、セミカルバジド、チオカルバジド、チオセミカルバジド、メルカプト、メルカプトアルキル、メルカプトアリール、ヒドロキシ、カルボキシ、カルボキシアルキルおよびカルボキシアリールから選択される。タンパク質反応性基のアルキル部分は、１〜約20個の炭素原子を含有することができ、タンパク質反応性基のアリール部分は、約６個〜約24個の炭素原子を含有することができる。
別の好ましいベクター反応性基は、架橋剤の残基を含有し得る。有用な架橋剤は、リンカー中に見出される例えばアミンまたはメルカプトまたはカルボン酸基またはアルデヒド基などの官能基およびベクターまたは上述のような化学的に修飾されたタンパク質もしくは生体分子中に見出される例えばアミンまたはメルカプトまたはカルボン酸基またはアルデヒド基などの官能基と反応し得る。例えば二官能性ゼラチン硬化剤、ビスエポキシドおよびビスイソシアネートなどの特定の有用な架橋剤の残基は、そのような架橋性ベクター反応性基とレポーターおよび／または親水性ポリマー部分との架橋反応の結果として形成される接合体において、その一部、即ち連結基となる。The Pierce Chemical Company Catalog and handbook-Protein Modification Section, （1994/5）に列記されているような種々のヘテロ二官能性架橋試薬から誘導されるベクター反応性基は有用であり、その例には：
Sulfo-SMCC：スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキセン−１−カルボン酸エステル
Sulfo-SIAB：スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート
Sulfo-SMPB：スルホスクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート
2-IT：２−イミノチオラン
SATA：Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート
が包含されるが、これらの試薬に限定されるものではない。
しかし、他の有用な架橋剤は、例えば消費され得る触媒として架橋を促進し、最終の接合体中に存在しない。そのような架橋剤の例は、参照によりその開示を全てにおいてここに組み込む、米国特許第4,421,847号に開示されているようなカルボジイミドおよびカルバモイルオニオムの架橋剤、並びに参照によりその開示を全てにおいてここに組み込む、米国特許第4,877,724号のジカチオンエーテルである。これらの架橋剤に関しては、反応体の１つはカルボキシル基および他のアミンまたはメルカプト基を有していなければならない。架橋剤は、最初にカルボキシル基、好ましくはベクターのカルボキシル基と選択的に反応し、次に“活性化”カルボキシル基とアミン、好ましくはリンカーのアミン基との反応中に分割して、ベクターと親水性ポリマーおよび／またはレポーターとの間にアミド結合を形成し、それにより各部分を共有結合させる。この方法の利点は、二官能性架橋剤の反応が非選択的であるために所望されない架橋分子が得られる可能性があるのに対し、同様な分子の架橋、例えば色素と色素との架橋を回避することができることである。
別の好ましいベクター反応性基の例としては、次のものがある。
セミカルバジド；チオカルバジド；チオセミカルバジド；イソシアネートおよびイソチオシアネート；ビニルスルホニルアルキルオキシ、好ましくはそのアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有するもの；ビニルスルホニルアルキルポリ（オキシアルキル）オキシ、好ましくはそのスルホニルアルキル部分のアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有するもの、好ましくはそのポリオキシアルキル部分のアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有するもの、例えばポリ（オキシアルキル）部分はポリ（オキシエチレン）基またはポリオキシ（オキシエチレン）−コ−ポリ（オキシプロピレン）コポリマー基が好ましく、そのポリマーは２〜約100のモノマー性オキシアルキレン単位を有するもの；アミドアルキルオキシ、好ましくはそのアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；ヒドラジドアルキルオキシ、好ましくはそのアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；アジドアルボニルアルキルオキシ、好ましくはそのアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；アリールオキシカルボニルオキシアルキルオキシ、好ましくはそのアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有するもの、およびそのアリール基が上記されるもの；アリールオキシカルボニル（ポリオキシアルキル）オキシ、そのアリール基が上記されるもの、および好ましくはそのポリオキシアルキル部分のアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有する上記のようなもの、例えばポリ（オキシアルキル）部分はポリ（オキシエチレン）基またはポリ（オキシエチレン）−コ−ポリ（オキシプロピレン）コポリマー基であるのが好ましく、そのポリマーは２〜約100のモノマー性オキシアルキレン単位を有するもの；4,6−ジクロロ−２−トリアジニルアミノ、4,6−ジクロロ−２−トリアジニルオキシ、4,6−ジクロロトリアジニル−２−オキシ（ポリアルキルオキシ）、４−アルコキシ−６−クロロ−２−トリアジニルオキシ、および４−アルコキシ−６−クロロ−２−トリアジニル（ポリオキシアルキル）オキシなどのトリアジンであり、好ましくはそのアルコキシ部分のアルキル基が各々２〜10個の炭素原子を含有するものであり、そのポリオキシアルキル部分のアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有するもの、例えばポリ（オキシアルキル）部分はポリ（オキシエチレン）基またはポリ（オキシエチレン）−コ−ポリ（オキシプロピレン）コポリマー基であるのが好ましく、そこでそのポリマーは２〜約100のモノマー性オキシアルキレン単位を有するもの；ホルミルアルキル、好ましくはそのアルキル基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；アミノアルキル、好ましくはそのアルキル基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；活性エステル、例えばスクシンイミドオキシカルボニル；活性無水物および混合無水物；アリールカルボナートアリール、アルキルカルボナートアリール、アリールカルボナートアルキルおよびアルキルカルボナートアルキルなどの活性炭酸塩、好ましくはそのアルキル基が２〜10個の炭素原子を含有し、上記されたものであり、好ましくはそのアリール基が例えば窒素およびハロゲンなどの電子求引性置換基を含有する６員環からなり、並びに場合によりスルホン酸塩などの水溶性基を含有するもの；メルカプト基；���ルカプトアルキル、好ましくはそのアルキル基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；チオアルキルカルボニルアミノアルキルオキシ、好ましくはそのチオアルキルカルボニル部分のアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有し、そして好ましくはそのアミノアルキルオキシ部分のアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有するもの；マレインイミドアルキルカルボニルアミノアルキルオキシ、好ましくはそのマレインイミドアルキルカルボニル部分のアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有し、そして好ましくはそのアミノアルキルオキシ部分のアルキレン基が２〜10個の炭素原子を含有するもの；アジド；インドアルキルカルボニルアミノ、そのアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；アミド化アルキルアミノ、そのアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有するもの；並びにアミド化アリールアルキルアミノ、そのアルキレン基が１〜10個の炭素原子を含有し、そのアリール基が上記したもの。
従って、本発明により使用されるセンシタイザーおよび／または造影剤のにおける親水性ポリマー部分はリンカー部分並びにベクター部分としておよびセンシタイザーとして機能し得ると理解される。
ベクターの残基は、化学結合または連結基を介して、本発明に従って使用される接合体の他の成分と連結することができる。好ましい連結基はベクター反応性基から誘導することができ、次のものが包含される：アミノ、イミド、ニトリロおよびイミノ基中の窒素原子；アルキレン、好ましくは１〜18個の炭素原子を有するもの、例えばメチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンおよびヘキシレンであり、そのようなアルキレンは任意的に１つまたはそれ以上の酸素、窒素およびイオウなどのヘテロ原子並びにヘテロ原子含有基によって中断されているもの；カルボニル；スルホニル；スルフィニル；エーテル、チオエーテル；エステル、即ちカルボニルオキシおよびオキシカルボニル；チオエステル、即ちカルボニルチオ、チオカルボニル、チオカルボニルオキシおよびオキシチオカルボキシ；アミド、即ちイミノカルボニルおよびカルボニルイミノ；チオアミド、即ちイミノチオカルボニルおよびチオカルボニルイミノ；チオ；ジチオ；リン酸エステル；ホスホネート；ウレイレン［urelene］；チオウレイレン［thiourelene］；ウレタン、即ちイミノカルボニルオキシおよびオキシカルボニルイミノ；アミノ酸連結基、即ち次の基
0004503103.tif 000050
式中、ｋ＝１、およびX1、X2、X3は独立的にＨ、１〜18個、好ましくは１〜６個の炭素原子を有するアルキル、例えばメチル、エチルおよびプロピルであり、そのようなアルキルは場合により１つまたはそれ以上の酸素、窒素およびイオウなどのヘテロ原子により中断されているもの、６〜18個、好ましくは６〜10個の炭素原子を有する置換または未置換アリール、例えばフェニル、ヒドロキシヨードフェニル、ヒドロキシフェニルフルオロフェニルおよびナフチル、アラルキル、好ましくは７〜12個の炭素原子を有するもの、例えばベンジル、複素環式基、好ましくは５〜７個の核炭素および１つまたはそれ以上のＳ、Ｎ、ＰまたはＯなどのヘテロ原子を含有するもの、好ましい複素環式基の例はピリジル、キノイル、イミダゾリルおよびチエニルである；複素環状アルキル、好ましくはその複素環およびアルキル部分は上記したもの；またはペプチド連結、即ち次の基
0004503103.tif 000051
式中、ｋ＞１であり、各Ｘは独立的に上記のX1、X2、X3に記載される基を表す。２つまたはそれ以上の連結基、例えばアルキレンイミノおよびイミノアルキレンなどを使用することができる。他の連結基がここで使用するために適し、そのような連結基は上記したタンパク質ヘテロ二官能価およびホモ二官能価接合体並びに架橋化学において普通使用されることが考えられる。特に好ましい連結基には、色素中のイソチオシアネートを介して色素の残基に連結する場合にチオウレア基を形成するアミノ基が包含される。
連結基は、本発明に従って使用される接合体の種々の成分との間のカップリング反応を干渉しない種々の置換基を含有することができる。連結基はまた、そのような反応と干渉しうるが、しかしカップリング反応中に当該分野において一般的に知られている適する保護基を用いてそのような反応を防止する置換基を含有することができ、カップリング反応の後で適する脱保護により置換基を再形成させる。連結基はまた、カップリング反応後に導入される置換基を含有することもできる。例えば、連結基は、次のような置換基で置換され得る：例えば、Ｆ、Cl、BrまたはＩなどのハロゲン；エステル基；アミド基；アルキル、好ましくは１〜18個、さらに好ましくは１〜４個の炭素原子を有するもの、例えばメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピルブチルなど；置換または未置換アリール基、６〜約20個、更に好ましくは６〜10個の炭素原子を有するもの、例えばフェニル、ナフチル、ヒドロキシフェニル、ヨードフェニル、ヒドロキシヨードフェニル、フルオロフェニルおよびメトキシフェニル；置換または未置換アラルキル、好ましくは７〜約12個の炭素原子を有するもの、例えばベンジルおよびフェニルエチル；アルコキシ、アルキルについて上記したように好ましくはアルキル部分が１〜18個の炭素原子を有し、アルコキシアラルキル、例えばエトキシベンジル；置換または未置換ヘテロシクリル、好ましくは５〜７個の核炭素およびＳ、Ｎ、ＰまたはＯなどのヘテロ原子を有するもので、好ましいヘテロシクリル基の例はピリジル、キノリル、イミダゾイルおよびチエニルである；カルボキシル基；カルボキシアルキル基、好ましくはアルキル部分が１〜８個の炭素原子を有するもの；または色素の残基である。
SDTおよび画像形成
本発明の方法がレポーター含有ソノダイナミック治療剤の投与を包含する場合、用いる投与量は、投与の方法、画像形成する状態、患者の背格好および人種、画像形成方式、並びにレポーターの性質に依存する。レポーターが非放射性金属イオンである場合、一般的に患者の体重の１キログラム当たり0.001〜5.0ミリモルのキレート画像形成性金属イオンの投与量が適当なコントラストの増強を達成するのに有効である。大部分のＭＲＩの用途において、画像形成性金属イオンの好ましい投与量は0.02〜1.2ミリモル／kg体重の範囲であるが、Ｘ線に適用するには一般的に0.05〜2.0ミリモル／kg体重の投与量がＸ線の減衰を達成するのに有効である。大部分のＸ線の用途における好ましい投与量は、0.1〜1.2ミリモル／kg体重のランタニドまたは重金属化合物である。レポーターが放射線核種である場合、通常70kgの体重当たり0.01〜100mCi、好ましくは0.1〜50mCiの投与量で十分である。レポーターが超常磁性粒子である場合、投与量は通常Fe 0.5〜30mg／kg体重に相当する。レポーターが気体または気体を発生するもの、例えば微少気泡である場合、投与量は通常70kgの体重当たり0.05〜100μLの気体に相当する。レポーターが光吸収性発色団である場合、100,000の吸収度を基準にすると投与量は通常0.001ミリモル／kg体重の発色団から2.0ミリモル／kg体重の発色団の範囲にある。画像形成剤の使用方法に依存して、投与量を最大４等級で下方調節する。例えば、薬剤を直接病気の組織に注射する場合または子宮内膜の組織などの病変の組織への局所適用の場合、全体重について計算される投与量レベルは、全身に対する病変の組織の大きさ、重量または面積の関数として実質的に減少させることができる。
本発明に従って使用されるレポーター含有ソノダイナミック治療剤が任意の経路、例えば筋肉、腫瘍組織または血管系への皮下的または間質的注射または注入によって、外部に放出する体腔への投与（例えば、消化管（例えば経口的または直腸的）、膣、子宮、膀胱、耳、鼻または肺）によって、経皮投与（例えばイオン療法または局所使用）または外科的に暴露した部位に対する局所使用によって投与することができる。腫瘍中への直接注射は、好ましい投与経路の１つである。
しかしながら、例えばレポーター含有ソノダイナミック治療剤の溶液または分散物またはこれを含有する剤の非経口投与が一般には好ましい。
使用する投与形態は、医薬の投与において慣用的に使用される方法の任意のもの、例えば溶液、懸濁液、分散物、シロップ、粉末、錠剤、カプセル剤、噴霧、クリーム、ゲルなどでよい。
レポーター含有ソノダイナミック治療剤が水溶液である場合、水溶液の形態で投与することができる。代わりに、そして多くの場合において、センシタイザーまたは造影剤を粒状例えば感剤もしくは造影剤またはこれを含有するものの液滴（水−非混和液体中の溶液）、センシタイザーもしくは造影剤含有またはこれで被覆した固体または半固体粒子で存在させ得る。後者の類は、センシタイザーまたは造影剤を含有する小胞［vesicle］（例えばリポソーム、ミセルまたは微小気泡）を包含する。
レポーター含有ソノダイナミック治療剤が粒状である場合、用いる投与量にて生理的に許容される、他の粒子状成分、例えば基質もしくは膜形成性物質、被覆剤、造影剤、溶媒、気体またはまたは気体を発生するものなどが好都合な材料である。液滴、被覆粒子、混合粒子、小胞などの形成は、文献、特に医薬および造影剤（例えば、超音波造影剤）の製剤および剤型に関する文献によく記載されている。
レポーター含有ソノダイナミック治療剤は、胃、腸および結腸の内壁を通じて吸収させる経口経路を介して投与することができ、例えば次の文献を参照：“Carrier-mediated intestinal transport of drugs”, Tsuji, A.およびTamai, I., Pharmaceutical Research（New York）Vol. 13, No. 7, p.963-977, 1996年；“Oral protein drug delivery”, Wang, Wei, J. Drug Targeting Vol. 4, No. 4, 1996年, pp. 195-232；“Improved passive oral drug delivery via prodrugs”, Taylor, Michael D., Adv. Drug Delivery Rev. Vol. 19, No. 2, 1996年, pp. 131-148；“Oral colon-specific drug delivery: a review”, Van den Mooter, Guy; Kinget, Renaat, Drug Delivery, Vol. 2, No. 2, 1995年, pp. 81-93；“Present status of controlled drug delivery system-overview”, Naik, S.R.；Shanbhag, V., Indian Drugs, Vol. 30, No., 1993年9月, pp. 423-429；“Novel formulation strategies for improving“oral”bioavailability of drugs with poor membrane permeation or presystemic metabolism”, Aungst, B.J., Journal of Pharmaceutical Sciences（USA）, Vol. 82, No. 1993年10月, pp. 979-987；“Remington’s Pharmaceutical Sciences”, A. Osol, ed., Mack Publishing Co. 1975年, 6巻, 40章およびその引用文献（pp 731-753）, 8巻, 全ての章（pp 1355-1644）；“The Extra Pharmacopoeia”, Martindale, 29版, The Pharmaceutical Press, London, 1989年。
経口経路による医薬およびその他の薬剤の投与は、患者の承諾（反復投与に対して）および投与の容易性を促進するためにしばしば好ましい。全ての薬剤が必ずしもこの経路を介して生物学的に利用可能ではない；即ち、全ての分子が、必ずしも１）腸の周囲で化学的に安定的であり、２）消化管の膜中を輸送可能で血液／リンパ液中に吸収され、そして３）腸内における代謝作用の影響を受けやすいかまたは溶解性の問題などがあるとしても有効ではないことは当業界において公知である。しかし、分子構造を選択して分子の相対的疎水性（即ち、オクタノールと水との間の分配係数；log（Ｐ））を好ましい範囲内に制御することは、薬剤の経口的利用可能性を増加させることができるということも当業界において公知である。
薬剤はまた、局所的、筋肉内、皮下および肺投与と同様に、体腔、例えば胃、直腸、膣、腹腔などを介して（例えば腹腔内注射）投与することができる。哺乳類に対しての医薬／薬剤投与の全ての公知の経路は、本発明に従って考えられる。
レポーター含有ソノダイナミック治療剤は、SDTの前およびその間に血管に注射することができる。リンパ節の検出には、SDT標的領域に流れるリンパ管に注射することができる。また、局所用軟膏、液体または噴霧としてSDT間に適用することもできる。
本発明の方法におけるレポーター含有ソノダイナミック治療剤の投与量は、治療すべき状態、使用する物質および画像形成様式に依存するが、一般的には１ピコモル／kg体重〜１ミリモル／kg体重程度である。
本発明において使用するレポーター含有ソノダイナミック治療剤は、慣用の医薬上または獣医学上の補助物、例えば乳化剤、脂肪酸エステル、ゲル化剤、安定剤、酸化防止剤、浸透調整剤、緩衝剤、pH調整剤などを用いて製剤化することができ、そして非経口または腸内投与、例えば注射または注入または外側に抜ける管を有する体腔、例えば胃腸管、膀胱または子宮中への直接投与に適する形態とすることができる。従って、本発明の化合物は、慣用の医薬投与形態、例えば錠剤、カプセル剤、粉剤、溶液、懸濁液、分散液、シロップ、座剤などとすることができる。しかし、生理的に許容されるキャリヤー媒体、例えば注射用水における溶液、懸濁液および分散液が一般的に好ましい。
身体の一部分に対して、センシタイザーを投与するのに最も好ましい様式は、非経口的、例えば静脈注射投与である。非経口的に投与し得る形態、例えば静脈注射溶液または分散液は、滅菌で且つ生理的に許容されない薬剤を含まず、そして浸透性を低くして、炎症や投与における他の副作用を最小限にする、すなわち、投与される組成物は等張またはわずかに高張であるのが好ましい。適するベヒクルには、非経口的溶液または分散液を投与するのに通例使用される水溶性ベヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液およびRemington’s Pharmaceutical Sciences, 15版, Easton:Mack Publishing Co., pp. 1405-1412および1461-1487（1975年）並びにThe National Formulary XIV, 14版, Washington: American Pharmaceutical Association（1975年）に記載されるような他の溶液が包含される。溶液または分散液は、非経口溶液に従来使用される防腐剤、抗菌剤、緩衝剤および酸化防止剤、並びにセンシタイザーまたは造影剤に相容性を有し、そしてその製造、保管または使用において干渉しない賦形剤および他の添加剤を含有することができる。
本発明の方法において、ソノダイナミック治療は、本明細書に記載されるように患者に超音波音響エネルギーの有効量を暴露することによって達成され得る。一般的に、これは集束させた超音波、例えば0.1〜20Wcm-2、好ましくは４〜12Wcm-2の出力レベル、0.01〜10.0MHz、好ましくは0.1〜5.0MHz、特に0.01〜2.2MHzの周波数で、10ミリ秒〜60分、好ましくは１秒〜２分間暴露させることからなる。患者を、0.01〜1.2MHzの基本周波数および対応する第２調和周波数を有する５mW〜10Ｗの音響力の超音波に暴露させるのが特に好ましく、これは細胞変性効果を達成するのに必要な暴露を減少させる（例えば、Umemura等, 1995年, IEEE Ultrasonics Symposium, 1567-1570頁；Umemura等, IEEE Trans. Ultrasonics, Ferroelectrics and Freq. Control 43: 1054-1062（1996年）およびKawabara等, Ultrasonics Sonochemistry 3.：1-5（1996年）を参照）。場合により、超音波を、投与期間にわたって連続波またはパルス様式で投与することができる。
本発明による方法において使用されるセンシタイザーは単一のセンシタイザー物質を含有するかまたは上述した複数のセンシタイザーを含有することができる。センシタイザー物質が複数である場合、これらは別個に、逐次的にまたは同時に投与することができる。同様に、センシタイザーは、診断画像形成法において検出可能な別の成分例えば気体含有小胞、可溶性もしくは不溶性常磁性金属または金属放射線核種キレートまたはヨウ素化有機Ｘ線造影剤、超常磁性金属（例えば微小粒子）などを含有してもよい。再度、そのような造影剤は、別個に、逐次的にまたは同時に投与することができる。
また、粒状物質、即ち固体粒子または液滴をSDTにおけるセンシタイザーとして使用することができ、これは本発明の別の態様を形成する。この態様によると、本発明は、ソノダイナミック治療によって人体または動物体（例えば、血管新生している哺乳類、鳥類またはは虫類）の治療方法を提供し、その中でセンシタイザーを前記人体または動物体に投与し、前記人体または動物体を超音波に暴露させて、その部位（例えば腫瘍の部位）において細胞変性効果を達成し、そして前記センシタイザーが生理的に許容し得る固体粒子または液滴を含有する物質である。
この方法において、微粒子は固体であるのが好ましく、５nm〜12μmの平均粒径を有するのが特に好ましく、この範囲の上限は実質的に変形固体粒子にのみ有効である。より好ましい粒径は、100nm〜５μmの範囲である。粒子は、必ずしも必要ではないが、水溶性ポリマー物質と会合するのが好ましく、例えばそのような物質が粒子の表面と結合もしくは会合するかまたは粒子に対して水性分散媒体における溶液中にある。粒子は、必ずしも必要ではないが、発色団物質を包含するまたは発色団物質、例えば上述の色素化合物、例えばシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメタンまたはポルフィリンを包含するまたはこれらからなるのが好ましい。
場合により、粒子はヨウ素化Ｘ線造影剤、例えば水溶性固体または液体トリインドフェニル基含有化合物およびMR造影剤として提案されているタイプの超常磁性粒子を含むまたはこれらからなる。
そのような粒子は、所望により、上述のベクター部分と共役させて、SDT治療部位に対して粒子を高活性に標的とすることができる。
別の実施態様において、本発明は、ソノダイナミック治療法において使用するセンシタイザー組成物の製造における、生理的に許容される固体粒子または液滴を含有する物質の使用を提供する。
また、フタロシアニンおよび類似のアリール−リンカー−アリール（ここで“リンカー”は単一および複数の炭素−炭素結合を交互に有する多数重なった未飽和炭素鎖であり、任意にペンダントまたは融合する環置換基を有する）発色団は、ここではフタロシアニノイドを指すが、SDTにおけるセンシタイザーとして使用するのに特に適すると理解される。従って、更に別の態様から見ると、本発明は、ソノダイナミック治療によってヒトまたは動物の体（例えば、血管新生している哺乳類、鳥類または爬虫類）の治療方法を提供し、その中でセンシタイザーを前記の体に投与し、前記の体を超音波に暴露させて、その部位（例えば腫瘍の部位）において細胞変性効果を達成し、そしてセンシタイザーが生理的に許容し得るフタロシアニンまたはフタロシアニノイド化合物、好ましくは上述の水溶性ポリマー部分および／または親油性基を含む化合物である。
更に別の態様から見ると、本発明は、SDTにおいて使用するセンシタイザー化合物の製造における、生理的に許容されるフタロシアニンまたはフタロシアニノイド化合物、好ましくは既に定義したように水溶性ポリマー部分および／または親油性基を含む化合物の使用を提供する。
更に、シアニンおよび類似のアリール−リンカー−アリール（ここで“リンカー”は単一および複数の炭素−炭素結合を交互に有する多数重なった未飽和炭素鎖であり、任意にペンダントまたは融合する環置換基を有する）発色団は、ここではシアニノイドを指すが、SDTにおけるセンシタイザーとして使用するのに特に適すると理解される。従って、更に別の態様から見ると、本発明は、ソノダイナミック治療によってヒトまたは動物の体（例えば、血管新生している哺乳類、鳥類または爬虫類）の治療方法を提供し、その中でセンシタイザーを前記ヒトおよび動物の体に投与し、前記体を超音波に暴露させて、その部位（例えば腫瘍の部位）において細胞変性効果を達成し、そしてセンシタイザーが生理的に許容し得るシアニンまたはシアニノイド化合物、好ましくは既に定義した水溶性ポリマー部分および／または親油性基を含む化合物である。
更に別の態様から見ると、本発明は、SDTにおいて使用するセンシタイザー化合物の製造における、生理的に許容し得るシアニンまたはシアニノイド化合物、好ましくは既に定義した水溶性ポリマー部分および／または親油性基を含む化合物の使用を提供する。
更に上記したように、SDT治療は、フリーラジカル造影剤の活性化、例えばラジカル前駆体をフリーラジカル（好ましくは患者の体中において少なくとも１分の半減期を有する持続性フリーラジカル）に変換することによって活性化するのに使用することができると理解される。そのようなフリーラジカルは、画像形成法、例えMRI、オーバーハウザー［Overhauser］-MRIおよびesr画像形成における画像コントラスト促進剤［enhancing agent］として機能し得る。このように活性化され得る薬剤の例には、トリチル、特にNycomed Innovation and HafslundとNycomed Innovationの特許公報に開示されているOMRI剤が包含される。従って、別の態様から見ると、本発明は、ヒトまたはヒトではない動物の体に生理的に許容し得る物質を投与し、フリーラジカルの存在に対して感受性の画像形成技術を用いて、前記物質を分布させる前記の体の少なくとも一部の画像を形成させることからなり、フリーラジカル前駆体を前記物質として使用し、前記前駆体からフリーラジカルを十分に生成するような力および周波数の超音波に前記の体を暴露することを含む前記ヒトまたは動物の体の画像形成法を提供する。
更に別の態様から見ると、本発明はまた、造影剤組成物の製造における生理的に許容し得るフリーラジカル前駆体の使用を提供し、前記造影剤組成物は、前記組成物を投与し、次いで超音波を適用することによって前記前駆体からフリーラジカルを発生させることを包含する治療または診断方法において使用される。
この方法は、フリーラジカルが発生した領域においてSDTの細胞変性効果が起こり、そしてSDTが開始された場合にその部位に対応する画像の部分の修飾（例えば強調）をフリーラジカルが引き起こすようにしてSDTが画像形成することによる手段を提供する。
上述したようにトリチルおよび他のラジカルに加えて、画像修飾の原因であるラジカルは、シアニン、アゾ色素、ポルフィリンなどまたは他のSDTセンシタイザー化合物のような発色団とし得る。
図１は、塩化アルミニウムフタロシアニンテトラスルホネートの存在下または不存在下においてのHL-60細胞の懸濁物における超音波の効果の比較を表している。これについては、後に詳細に記載する。
図２Ａは、HT-29腫瘍を包含する雌の免疫不全マウスに各リン酸緩衝生理食塩水を静脈注射した後１時間における対照としてのインドシアニングリーンに対する造影剤ポリマー３（NC100448）の生体内分布データの比較のグラフである。ポリマー３は腫瘍にて検出され、対照化合物はほとんど検出されない。
図２Ｂは、HT-29腫瘍を包含する雌の免疫不全マウスに各リン酸緩衝生理食塩水を静脈注射した後３時間における対照としてのインドシアニングリーンに対する造影剤ポリマー３（NC100448）の生体内分布データの比較のグラフである。ポリマー３は腫瘍にて検出され、対照化合物はほとんど検出されない。図２Ａに比例して、腫瘍中の造影剤の濃度は増加するが、血中の濃度は減少している。
ここで引用する全ての刊行物および特許出願を引用することにより組み入れる。
本発明を、下記の非制限実施例を参照して更に記載する。
化合物についてここで用いる用語「空気暴露」は、空気がその気体含量の約１％〜約99％、好ましくは約15％〜約25％の量の酸素を含み、酸素が公知の酸化試薬であり、そして酸素がポリ（アルキレンオキシド）とヒドロペルオキシドを生成し得ることが知られており、前記化合物と化学的に接触されて少なくとも１つの酸化反応を生じさせることを意味する。例えば、酸素を-（O-CH2-CH2）n-の繰り返し単位［式中、ｎはポリマーもしくはオリゴマー中のその繰り返し単位の数を表す整数またはｎはポリ（エチレンオキシド）単位の平均分子量を表す数である］からなるポリ（エチレンオキシド）含有化合物と反応させる場合、空気暴露したポリ（エチレンオキシド）含有化合物は少なくとも１つの-（O-CH（OOH）-CH2）-単位をｎ−１またはこれより少ない-（O-CH2-CH2）-単位からなるポリマーの残部と一緒に含有する。これについて、個々に酸化された空気暴露ポリ（エチレンオキシド）単位は、-（O-CH2-CH2）a-（O-CH（OOH）-CH2）b-（O-CH2-CH2）c-［式中ａ＋ｂ＋ｃ＝ｎおよびｂ＝１である］と記載し得る。ヒドロペルオキシドに対する酸化が１より大きい場合、その結果ｂ＞１となり、ｂ個の-（O-CH（OOH）-CH2）-単位はｎ−ｂ個の-（O-CH2-CH2）-の中に無作為に分布し得る。同様に、ポリ（プロピレンオキシド）からなるポリマーが-（O-CH（CH3）-CH2）-の繰り返し単位を含有するものとして表すことができ、空気暴露されたポリ（プロピレンオキシド）を含むポリマーは、-（O-C（CH3）（OOH）-CH2）-または-（O-CH（CH3）-CH（OOH））-として表される少なくとも１つのヒドロペルオキシド単位を含有する。１つより多いヒドロペルオキシド単位をポリ（アルキレンオキシド）含有ポリマー中に導入することができる。上述の中で、ｂは１そして大きくてもｎ／５の範囲であり、ｎ＞10の場合には１〜約ｎ／10の範囲であるのが好ましい。
実施例  １
好気的処理によるPEG3400−α,ω−ジアミンおよびアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリドの共重合体の製造
PEG3400−α,ω−ジアミン（Shearwater Polymers, Huntsville, AL；0.391ｇ、0.115ミリモル）を、磁気的撹拌下でピリジン（75ml）に溶解した。ピリジン約50mlを、120〜130℃の油浴上で窒素下で溜去して反応混合物を脱水し、溶液を周囲温度に冷却しそしてアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリド（0.111ｇ、0.115ミリモル、相当する酸から製造した、Porphyrin Products, Logan, UT）を加えた。反応混合物を、20℃で18時間撹拌しそしてそれから、30分還流下で加熱した。それから、溶剤を40℃で回転蒸発器上で除去し、生成物残留物を空気飽和水に分布し、そして混合物を真空下空気中で濾過した。それから、濾過した溶液を、空気および周囲の蛍光光線の存在下において、順次に強酸イオン交換樹脂を含有するカラム、それから強塩基（Na形態）イオン交換樹脂を含有するカラムを通して通過させて、生成物中の酸性基をナトリウム塩に変換した。可溶性の低分子量の成分を、空気−飽和した水に対する10,000MW膜（Amicon, Beverly, MA）を通したダイアフィルトレーションによって除去した。暗青色の残留液体を、40℃以下の温度で回転蒸発器上で蒸発して暗青色の固体（0.09ｇ）を得た。この固体の生成物を空気に暴露した。サイス排除HPLC分析は、生成物が150000の平均分子量を有しそしてそれがλmax676nm（水）を有していることを示す。この物質の溶液を滅菌したリン酸塩緩衝化された生理食塩水に再溶解しそしてHT-29腫瘍を有する雌の免疫不全マウスに注射した場合に、注射した用量の４％が、１時間後に腫瘍に局在した。
実施例  ２
PEG3400−α,ω−ジアミンおよびアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリドの共重合体の製造
ピリジン中のPEG-3,400−ビスアミン（Shearwater Polymers, Inc.から入手できる）の溶液を、アルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホネートクロライドに対する塩化チオニルの作用により製造された固体のアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリド（Porphyrin Productsから入手できる）で処理しそして反応混合物を、窒素下周囲温度で固体が溶解するまでそしてそれから、さらに24時間撹拌する。得られた生成物の混合物を、10倍の容量のエンドトキシを含まない氷水に注加し、得られた混合物を濾過しそして重合体反応成分を、容量を10倍まで減少させる10,000分子量カット−オフ膜を使用した限外濾過次いでダイアフィルトレーション媒質として滅菌したリン酸塩緩衝化生理食塩水を使用したダイアフィルトレーションによって精製する。10の容量を集めた後、重合体生成物は、溶液を滅菌した空気で１時間泡立たさせることによって、酸素で処理する。それから、反応生成物の溶液を、滅菌した0.2ミクロン注射器フィルターを通して濾過する。この溶液のボーラスを、側腹部HT-29腫瘍を含有する雌の免疫不全マウスに注射する。血液中の色素の濃度を、吸収分光学によって監視する。血液中の色素の濃度が注射した用量の１％以下に減少された後に、腫瘍面積を、腫瘍の成長速度の減少を誘発するのに十分な時間、100mW／平方cmの空間ピーク時間平均強度（spatial peak temporal average intensity）（SPTA）で連続的なおよび場合によってはパルス状の超音波エネルギーにうけしめる。
実施例  ３
好気的処理によるエチレン−1,2−ジアミンおよびアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリドの共重合体の製造
この物質は、PEG3400−α,ω−ジアミンの代りにエチレンジアミン（Aldrich、0.0058ｇ、0.10ミリモル）を使用する以外は、上記実施例２において使用したと同じ方法によって製造した。生成物の水溶液を、500MW膜を通してダイアフィルトレーションしそして暗青色の残留溶液をイオン交換してナトリウム塩を得そして蒸発して暗青色の固体（0.10ｇ）を得た。
実施例  ４
好気的処理によるPEG5000−α,ω−ジアミンおよびアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリドの共重合体の製造
使用した方法は、PEG3400−α,ω−ジアミンを使用した共重合に対して上述した実施例２に記載された方法と同様である。しかしながら、この場合においては、次の試薬および量を使用した：PEG5000−α,ω−ジアミン（Shearwater Polymers, Huntsville, AL；2.50ｇ、0.50ミリモル）；ピリジン（50ml、その30mlを蒸溜によって除去した）；およびアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリド（0.10ｇ、0.10ミリモル）。反応混合物を、窒素下で30分加熱還流しそしてそれから、溶剤を除去した。10.000MW膜を使用して、空気飽和した水に対してダイアフィルトレーションを遂行した。貯留物（retentate）を限外濾過により濃縮しそして残留水を空気中で回転蒸発器上で除去して暗青色の固体（0.08ｇ）を得た。それは、λmax676nm（水）を有している。リン酸塩緩衝化生理食塩水中のこの化合物の溶液を、HT-29腫瘍を有する雌の免疫不全マウスに注射した。注射した用量の2.5％が、１時間後に腫瘍に局在した。
実施例  ５
好気的処理によるメラミンおよびアルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリドの共重合体の製造
アルミニウム（III）フタロシアニンテトラスルホニルクロリド（0.10ｇ、0.10モル）を、N,N−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミン（0.1ml、0.57ミリモル）を含有するジメチルホルムアミド（１ml）に加えそして窒素下で１時間撹拌した。それから、メラミン（Aldrich、0.0022ｇ、0.017ミリモル）を加えた。メラミンは、反応混合物に非常に難溶性であった。混合物を周囲温度で４日間撹拌した。この時間の終わりまでに、メラミンは溶解した。反応混合物を、空気中の氷上に注加しそして得られた青色の溶液を、空気で平衡化された水に対して3000MW膜を通してダイアフィルトレーションした。暗青色の貯留物を空気に暴露しながら蒸発して暗青色の固体（λmax680nm（水））を得た。リン酸塩緩衝化生理食塩水中のこの化合物の溶液を、HT-29腫瘍を有する雌の免疫不全マウスに注射した場合、注射した用量の0.1％が１時間後に腫瘍に局在した。
実施例  ６
40：20：40のブロック比および約14600の重量平均分子量を有するトリブロックポリ（エチレンオキシド−CO−プロピレンオキシド−CO−エチレンオキシド）−α,ω−ジアミンの好気的処理による合成
40：20：40のブロック比および約14,600の重量平均分子量を有するトリブロックα,ω−ジヒドロキシポリ（エチレンオキシド−CO−プロピレンオキシド−CO−エチレンオキシド）（また、プルロニック界面活性剤F-108としても知られている、BASF Corp.）50ｇを、トルエン275mlで処理しそしてそれから、Dean Starkトラップ上で２時間加熱還流した。それから、系を冷却しそしてトラップおよびその内容物（約25ml）を除去した。それから、トルエン中の重合体を、塩化チオニル1.25mlおよび無水のジメチルホルムアミド0.053mlで処理した。反応混合物を105℃で２時間撹拌し、室温に冷却しそしてそれから、室温で一夜撹拌した。それから、揮発性物質を回転蒸発器上で除去して灰白色の固体49.35ｇを得た。この固体は容易に粉末化された。出発界面活性剤F-108においてもみられる70ppmと80ppmとの間の主なポリアルキレンオキシドピークのほかに、生成物の13C NMRスペクトルは42.69ppmにおいて単一線を含有する。これは、塩素に結合した末端炭素の存在と一致する。さらに、界面活性剤F-108の末端ヒドロキシを有する炭素が共鳴する61ppm付近におけるピークは、観察されなかった。
この重合体クロライド反応混合物49.08ｇ、ナトリウムアジド0.89ｇおよび沃化カリウム2.83ｇの全体を、無水のジメチルホルムアミド350mlで処理しそして乾燥アルゴン下において100℃で５時間撹拌した。それから反応混合物を、アルゴン下において室温で一夜撹拌した。それから揮発性物質を、50℃で回転蒸発器上で除去して融解残留物を得た。このものは固化して黄褐色の固体が得られた。この固体を、蒸溜水500mlに溶解しそしてクロロホルム500mlと一緒に振盪した。層の分離（非常に緩慢）後、水性層を、クロロホルム500mlずつで２回抽出した。三つのクロロホルム抽出液を合しそして硫酸マグネシウム上で乾燥した。揮発性物質を除去して白色の固体45.58ｇを得た。この生成物の13C NMRスペクトルは、50.6ppmにおいて単一線を含有する。これはアジドを有する末端炭素の存在と一致する。出発クロライドに起因する42ppm付近のピークは、観察されなかった。
上記反応生成物44.05ｇを、トリフェニルホスフィン3.15ｇおよび無水のピリジン2300mlで処理した。反応混合物を、アルゴン下室温で撹拌しそして反応生成物を単離することなしに、合成の次の工程に使用した。
前の工程からの反応混合物を、30％水酸化アンモニウム（水性）200mlで処理しそして室温で７時間撹拌した。反応は、はげしい起泡を生じそして泡立てて流れでることを避けるために非常に大きな容器が必要であった。それから揮発性物質を、回転蒸発器上で一夜除去し、残留固体をクロロホルム500mlに再溶解し、溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥しそして揮発性物質を蒸発して白色の固体39.31ｇを得た。生成物のリンNMRスペクトルが、有意なリンシグナルがなお残留していることを示すときは、生成物の2.0ｇの試料を30％水酸化アンモニウム（水性）38mlで処理しそして60℃で４時間撹拌した。それから、反応混合物を室温に冷却し、エーテル40mlずつで４回洗浄し、そしてそれから、揮発性物質を回転蒸発器上で除去した。生成物は1.46ｇからなる灰白色のワックス状の固体であった。この場合、リンシグナルは、リンNMRにおいて見出されなかった。また、生成物の13C NMRスペクトルは、アミンを有する末端炭素と一致する41.78ppmにおけるピークを含有する。出発ビス−アジドに相当する50ppm付近のピークは残らなかった。この物質を空気と接触させた。
実施例  ７
40：20：40のブロック比および約14600の重量平均分子量を有するトリブロックポリ（エチレンオキシド−CO−プロピレンオキシド−CO−エチレンオキシド）−α,ω−ビス−（ローダミンＢスルホンアミド）の好気的処理による合成
上記実施例６において製造された合計1.25ｇのトリブロックポリ（エチレンオキシド−CO−プロピレンオキシド−CO−エチレンオキシド）−α,ω−ジアミンを、４−N,N−ジメチルアミノピリジン0.026ｇおよび無水のピリジン10mlで処理した。得られた溶液を、ローダミンＢスルホニルクロライド（Molecular Probes）0.12ｇで処理しそして窒素下室温で一夜撹拌した。得られた強度に紫色の溶液を回転蒸発器上でストリップして1.42ｇからなる強度に紫色の固体を得、これを空気に暴露した。合計1.0ｇの粗製生成物を空気−飽和した蒸溜水40mlに溶解した。得られた溶液を、空気中で0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過し、そして濾液を、3000MW表示分子量カット−オフ酢酸セルロースダイアフィルトレーション膜（Amicon YM-3）を含有する50mlの磁気的に撹拌したダイアフィルトレーションセル（Amicon）中で空気−飽和した蒸溜水に対してダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーションは、35回の容量繰り返しを使用して続行した。すなわち、ダイアフィルトレーション透析液1,750mlを集めた。はじめにダイアフィルトレーション透析液は強度に紫色であるが、ダイアフィルトレーションを続行するにつれて、紫色の強度はダイアフィルトレーション透析液が35回の繰り返しにおいて眼に無色となるまで減少した。強度に無色の貯留物中における揮発性物質を回転蒸発により除去して強度に紫色の固体0.92ｇを得、これを空気に暴露した。生成物の13C NMRスペクトルは、合成順序における出発物質としてはじめに使用されたF-108界面活性剤のスペクトルにおいてもみられそしてまたすべての中間体のスペクトルにおいてもみられる70ppmと80ppmとの間の主なポリアルキレンオキシドピークを含有している。さらに、反応生成物のスペクトルにおいて、新しい単一線が45.69ppmにおいて観察された。プレカーサージアミン重合体中間体のスペクトルにおいて観察された41ppm付近のピークは存在しない。サイズ排除HPLC研究は、PEG対照標準に比べて約15000のピーク分子量を有する単一の広いピークを示す。化合物は584ppmにおいてピークの広いスペクトル吸光度を示す。
実施例  ８
リンパ節マーカー
実施例７において製造された空気−暴露したトリブロックポリ（エチレンオキシド−CO−プロピレンオキシド−CO−エチレンオキシド）−α,ω−ビス−（ローダミンＢスルホンアミド）の溶液を、手の背側または指のみずかきスペースの間において皮下的に注射しそしてリンパ管に移動させることができる。いったんリンパ管に移動すれば、トリブロックポリ（エチレンオキシド−CO−プロピレンオキシド−CO−エチレンオキシド）−α,ω−（ローダミンＢスルホンアミド）は、血管およびリンパ節の輪郭を描き、その結果、リンパ節の切除は容易にされる。またこのようにする代りに、トリブロックポリ（エチレンオキシド−CO−プロピレンオキシド−CO−エチレンオキシド）−α,ω−ビス−（ローダミンＢスルホンアミド）の溶液を、胸部または他の場所において腫瘍周囲的に（すなわち、黒色腫、前立腺癌、結腸癌などの皮膚病変の周囲に腫瘍周囲的に）注射して局所ドレイニング（regional draining）リンパ節（しばしば徴候リンパ節と称する）を標識することができる。またこれらの空気−暴露した重合体物質を、病変付近または病変と同じ葉において肺に少しずつ入れて局所ドレイニングリンパ節に移動させることができる。超音波音響エネルギーの有効量を投与することによって、SDTを使用して癌組織を破壊することができる。
実施例  ９
空気−暴露した−フルオレセインイソチオシアネートにコンジュゲートされたテトロニック−908の製造
テトロニック−908（Tetronic-908）（中心エチレンジアミン単位およびこのエチレンジアミンの窒素原子から角を張った（subtended）ポリ（プロピレンオキシド−CO−ブロック−エチレンオキシド）の四つの単位からなりそして白ウサギに対して＞15ｇ／kgの100％濃度において急性経口毒性を有することがBASFによって報告されている27,000の平均分子量のブロック共重合体、BASF）の試料を、空気−飽和した蒸溜水に対して空気中でダイアフィルトレーションしそして生成物を貯留物からの凍結乾燥により単離した。この物質を、フルオレセインイソチオシアネート（Molecular Probes Inc., Eugene, OR）と反応させた。空気−暴露した色素−重合体生成物は、空気−暴露した重合体の１分子当り色素0.9分子の平均を有するものとして吸収分光により特徴づけられた。これは色素の可能な４分子よりはむしろ重合体単位当り色素１分子の結合を示唆する。
実施例  10
犬の血液中における空気−暴露した−フルオレセインイソチオシアネートにコンジュゲートされたテトロニック−908の動向
上記実施例９において製造した空気−暴露した−フルオレセインイソチオシアネートにコンジュゲートされたテトロニック−908の溶液を、ビーグル犬に注射しそして血液試料を規則的な間隔で採取した。共焦点走査型顕微鏡による生体内画像形成および流動細胞計測法による試験管内検査は、蛍光T-908が血液内の特定の細胞クラスに結合するということを示唆する。細胞集団は確認されていないけれども、T-908−フルオレセインイソチオシアネートが細胞上に共有的に結合または吸着されることができる場合は、問題の集団はソノダイナミック治療により破壊することができそしてそれによって超音波の影響下において細胞を破壊することができると信じられる。すなわち、比較的短時間の主要動脈の超音波照射は、実質的に体中の問題の細胞クラスを除去し、それによって治療効果を生じる。
結果は、空気−暴露した−フルオレセインイソチオシアネートにコンジュゲートされたテトロニック−908は、白血球の機能を損傷することなしに、白血球（白血細胞）に結合することを示す。これは流動細胞計測法ならびに蛍光検出器を具備した顕微鏡検査によって観察した。
実施例  11
スダンIIIの空気−暴露した安定なエマルジョンの製造
D&C Red No17, Solvent Red 23およびCerasin Redとしても知られているスダンIII（Aldrich Chemical Co.）は、水に不溶性であるが、非経口的水中油エマルジョン（すなわち、イントラリピド、リポシンなど）に対して公知の油である胡麻油に可溶性である。すなわち、スダンIIIのエマルジョンは、次のようにして製造した。容器を週末にわたって（約72時間）おだやかに回転することによって、胡麻油中のスダンIIIの飽和溶液を製造した。それからこの油溶液を、５ミクロンの注射器フィルター次いで0.8ミクロンのフィルターを通して濾過して溶解しない固体のスダンIIIを除去した。それから得られた飽和溶液を、超音波エネルギー次いで約14,000PSIにおけるミクロ流動化を使用して、“油”10％対空気−暴露した界面活性剤水溶液（空気−暴露したF-68または空気−暴露したP79を含有する）90％の比において、空気−暴露した水中で一定の小滴の大きさが達成されるまで乳化した。小滴の大きさは、Horiba910および容量加重平均を使用して光散乱によって測定した。得られたエマルジョンはまた、慣用の蒸気滅菌により滅菌しそして小滴の大きさを再び測定した。結果は次の通りである。
0004503103.tif 000052
P79（PCT／GB95／02109の実施例2K参照−分子量約10kDのPEG−二重エステル）は、スダンIIIで飽和した胡麻油の小さいエマルジョン小滴をつくる能力を非常に増加するように思われる。得られたばら色に着色したエマルジョンは、貯蔵に対して安定である。
F68は、空気−暴露したプルロニックF68（BASF）を意味する。
実施例  12
フルオレセインの空気−暴露した微小粒子の製造
摩砕ビーズ（0.7mmの珪酸ジルコニウム）7.5mlおよびフルオレセイン0.9ｇを15mlのびんに入れることによって、フルオレセイン（Aldrich Chemical Co.）の微小粒子懸濁液からなる組成物を製造した。空気−暴露したポリ（アルキレンオキシド）−含有界面活性剤の原溶液を使用して、懸濁液を水性相中の3.3mlまでにした。これは３種の界面活性剤：空気−暴露したブリージ58（Brij 58）〔ポリ（エチレンオキシド）20セチルエーテル〕、空気−暴露したチロキサポール（Tyloxapol）および空気暴露したプルロニックF-108（BASF）のそれぞれに対して実施した。粒子径測定の結果は、次の通りであった。
0004503103.tif 000053
他の固体、例えばＸ線造影剤として有用であるおよびCT造影剤として有用である３−（Ｎ−アセチル−Ｎ−エチルアミノ）−５−〔（５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル）アミノ〕−2,4,6−トリヨード安息香酸エチルのような沃素化芳香族物質の微小粒子分散液からなる組成物は、少なくとも１種の空気−暴露したポリ（アルキレンオキシド）−含有界面活性剤を使用して同様な方法で製造することができる。
実施例  13
CTおよび可視蛍光によるリンパ節の標識における組成物３−（Ｎ−アセチル−Ｎ−エチルアミノ）−５−〔（５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル）アミノ〕−2,4,6−トリヨード安息香酸エチルおよび空気−暴露した界面活性剤の局在化および利用性
張度および滅菌のために15％のPEG1450を加えた、３％（重量／容量％）および15％（重量／容量％）の３−（Ｎ−アセチル−Ｎ−エチルアミノ）−５−〔（５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル）アミノ〕−2,4,6−トリヨード安息香酸エチルで空気−暴露したプルロニックF108を使用して上記実施例におけるようにして、３−（Ｎ−アセチル−Ｎ−エチルアミノ）−５−〔（５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル）アミノ〕−2,4,6−トリヨード安息香酸エチル（WO96／23524参照）の微小粒子懸濁液からなる組成物を製造した。この懸濁液組成物の平均粒子の大きさは、オートクレーブ処理後約220nmであった。ウサギに、前および後足の背側において２×0.5mlを投与した。CT画像形成におけるリンパ節混濁化の次のレベルを、注射後の種々の時間で測定した。
0004503103.tif 000054
さらに、膝窩リンパ節を可視検査のため切除することができるように、一匹の動物は注射の24時間後に犠牲にした。この節は、UV光線で照射した場合に、この空気−暴露したダンシル−含有組成物に対して予測されるような緑色の蛍光を与えた。
実施例  14
PEG3400−α,ω−ジアミンとの２−〔２−〔２−（４−イソチオシアノ）フェノキシ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム、内部塩、ナトリウム塩、反応生成物の製造
次の反応スキームを使用して、標記化合物を製造した。
0004503103.tif 000055
実施例  15
PEG10000−α,ω−ジアミンとの２−〔２−〔２−（４−イソチオシアノ）フェノキシ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム、内部塩、ナトリウム塩、反応生成物の製造
標記生成物は、PEG10000 α,ω−ジアミンを使用して、実施例14の方法と同様にして製造した。
実施例  16
リポソームの製造
６−カルボキシフルオレセインおよびシクロホスファミドを、8.2％のレシチン（ホスファチジルコリン）および0.8％のジミリスチルホスファチジルエタノールアミンPEG（5K）から形成されたリポソーム懸濁液に加える。これは、リポソームに延長された血液プール滞留を与えることを企図する。プローブソニケーター（Bransonic Sonifier 450、90％ジューティーサイクル、出力10）からの超音波エネルギーを使用して、リン脂質および界面活性剤を水中で混合する。リポソームは、14,000-PSIにおけるMicrofluidics M11OSミクロ流動化装置を使用してリン脂質混合物の相互作用室を通した４回の通過によって製造した。得られたリポソームは、光散乱により測定して平均直径が約100nmでありそしてオートクレーブ滅菌後において同じ大きさが残留する。さらに、これらのリポソームはまた、滅菌フィルター（すなわち、0.2ミクロンの細孔径）を通して通過させることもできる。懸濁液を製造するのに十分な量の両者約７mg／mlの色素および毒性剤の添加は、リポソームの懸濁液の物理的特性を変化しない。
実施例  17
血液プール剤：PEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびガドリニウム金属化ジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
（ａ）ジメチルスルホキシド（DMSO）中の５％溶液としてのPEG3,400−α,ω−ジアミン（Shearwater Polymers, Inc.）10部の溶液に、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸（Aldrich Chemical Co.）１部およびジシクロヘキシルカルボジイミド２部を加える。反応混合物を、20℃以下で暗所で24時間撹拌する。それから反応混合物を、はじめにトリエチルアミン20部でそしてそれから、25ml当り１ｇの濃度におけるDMSO中のジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物（Aldrich Chemical Co.）９部で処理する。それから反応混合物を、暗所で室温でさらに24時間撹拌する。生成物の混合物に、徐々に滅菌水の10容量過剰を加えそして反応混合物を６時間放置する。水性部分を傾瀉分離しそして0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過する。それから濾液を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションする。水性貯留物は、凍結乾燥により単離することができる。
（ｂ）実施例17（ａ）で製造された重合体貯留物溶液の水溶液を、ダイアフィルトレーションに先立って過剰の酢酸ガドリニウムで処理する。反応混合物を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において、滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションする。重合体にキレートしたガドリニウムを含有する水性貯留物を、凍結乾燥により単離する。
実施例  18
血液プール剤：共有的に結合した４−アミノ−2,2,6,6−テトラメチルピペリジンを含有するPEG3400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびガドリニウム金属化ジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
（ａ）実施例17で製造された凍結乾燥した重合体を、ジクロロメタンに溶解しそして４−アミノ−2,2,6,6−テトラメチルピペラジン（Aldrich）１部およびジシクロヘキシルカルボジイミド１部で処理する。暗所で24時間後に、揮発性物質を冷窒素の流れ中で蒸発し、残留物を水にとり、0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過しそしてそれから、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションした。水性貯留物を凍結乾燥により単離した。
（ｂ）実施例18（ａ）で製造された重合体貯留物溶液の水溶液を、ダイアフィルトレーションに先立って過剰の酢酸ガドリニウムで処理する。反応混合物を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションした。重合体にキレートしたガドリニウムを含有する水性貯留物を、凍結乾燥によって単離した。
実施例  19
血液プール剤：PEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびジスプロシウム金属化ジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
実施例17（ａ）で製造された重合体貯留物溶液の水溶液を、ダイアフィルトレーションに先立って過剰の酢酸ジスプロシウムで処理する。反応混合物を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションした。重合体にキレートしたジスプロシウムを含有する水性貯留物を、凍結乾燥によって単離する。
実施例  20
血液プール剤：共有的に結合した４−アミノ−2,2,6,6−テトラメチルピペリジンを含有するPEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびジスプロシウム金属化ジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
実施例18（ａ）の重合体貯留物溶液の水溶液を、ダイアフィルトレーションに先立って過剰の酢酸ジスプロシウムで処理する。反応混合物を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションする。重合体にキレートしたジスプロシウムを含有する水性貯留物を、凍結乾燥によって単離する。
実施例  21
（ａ）部
Ｎ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸ジ−ｔ−ブチル
暗所におけるアルゴン下室温のDMF中の4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボン酸（Sigma Chemical Co.）１部およびイミノ酢酸ジ−ｔ−ブチル１部の溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド１部を加える。48時間後に、揮発性溶剤をアルゴンの清掃流れ下で除去しそして生成物を、酢酸エチルおよびメタノールを使用してシリカ上でクロマトグラフィー処理することにより精製する。
（ｂ）部
Ｎ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸
アルゴン下クロロホルム中の上記のＮ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸ジ−ｔ−ブチルの溶液を、暗所で室温でトリフルオロ酢酸の１％溶液で処理する。揮発性物質をアルゴンの清掃流れ中で除去してＮ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸の粗製試料を得、これを酢酸エチルおよびメタノールから結晶化させた。
（ｃ）部
PEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびＮ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸の共重合体
ジメチルホルムアミド（DMF）中の５％溶液としてのPEG3,400−α,ω−ジアミン（Shearwater Polymers Inc.）４部の溶液に、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸（Aldrich Chemical Co.）１部、Ｎ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸（実施例26）１部およびジシクロヘキシルカルボジイミド４部を加える。反応混合物を暗所で20℃以下で48時間撹拌する。生成物の混合物に、徐々に10容量過剰の滅菌水を加えそして反応混合物を１時間放置した。水性部分を傾瀉分離しそして0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過する。それから濾液を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションする。水性貯留物を凍結乾燥により単離する。
実施例  22
PEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）、Ｎ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸およびジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
ジメチルホルムアミド（DMF）中の５％溶液としてのPEG3,400−α,ω−ジアミン（Shearwater Polymers, Inc.）10部の溶液に、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸（Aldrich Chemical Co.）１部、Ｎ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸（実施例21.（ｂ）部）１部およびジシクロヘキシルカルボジイミド４部を加える。反応混合物を、暗所で20℃以下で48時間撹拌する。それから反応混合物をはじめにトリエチルアミン20部でそしてそれから25ml当り１ｇの濃度におけるDMF中のジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物（Aldrich Chemical Co.）８部で処理する。それから反応混合物を暗所において室温でさらに24時間撹拌する。生成物の混合物に、徐々に、10容量過剰の滅菌水を加えそして反応混合物を６時間放置する。水性部分を傾瀉分離しそして0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過する。それから濾液を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において、滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションする。水性貯留物は、凍結乾燥により単離する。
実施例  23
血液プール剤：ガドリニウムイオンを含有するPEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸、Ｎ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸およびジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
実施例22において製造された重合体貯留物溶液の水溶液を、ダイアフィルトレーションに先立って過剰の酢酸ガドリニウムで処理する。反応混合物を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションする。重合体にキレートしたガドリニウムを含有する水性貯留物は、凍結乾燥によって単離する。
実施例  24
血液プール剤：ジスプロシウムイオンを含有するPEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸、Ｎ−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸およびジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
実施例22で製造された重合体貯留物溶液の水溶液を、ダイアフィルトレーションに先立って過剰の酢酸ジスプロシウムで処理する。反応混合物を、3,000分子量カット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中において滅菌水に対して空気中でダイアフィルトレーションする。重合体にキレートしたガドリニウムを含有する水性貯留物を凍結乾燥することによって単離する。
実施例  25
血液プール剤：イットリウム90イオンを含有するPEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
実施例17（ａ）で製造された重合体貯留物の水溶液を、pH5.6における150mM塩化ナトリウムを含有する50mM酢酸ナトリウム緩衝液に対して12回の容量通過ダイアフィルトレーションする。放射性塩化イットリウム（＞500Ci／ｇの比活性における0.04Ｍ塩酸中の90Y+3 Cl3：Amersham-Mediphysics）の１容量を、pH6.0の0.5Ｍ酢酸ナトリウム２容量を使用して中和する。中和した酢酸90Y+3（1.0mCi）を、酢酸ナトリウム／塩化ナトリウムpH5.6溶液中の上記重合体貯留物１ml容量に加える。重合体の標識を１時間進行させそしてそれから、反応混合物PD-10クロマトグラフィーカラム上に負荷する。このカラムは、150mM塩化ナトリウムを有する50mMリン酸ナトリウムを含有する緩衝液（pH7.4）（PBS）で予備洗浄しそして平衡化した。試料を、PBSでカラムから溶離する。放射線標識した重合体のフラクションを集め、放射能について検査しそしてプールする。標識効率は、試料1.0ミクロリットルを取出しそしてそれをGelman ITLCストリップ上にスポットすることにより測定する。このストリップを、pH6.0の0.1Ｍクエン酸ナトリウムを含有するガラスビーカー中で、展開前端がペーパーの頂部への方向の４分の３に達するまで数分展開する。このストリップを90Yに適合させたSystem 200 Imaging Scanner（Bioscan）に挿入する。この系において、遊離の90Yは展開前端に向かって移動するが、キレートした90Yは移動しない。
実施例  26
血液プール剤：イットリウム−90イオンを含有するPEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸、N−〔4,5−ジヒドロ−２−（６−ヒドロキシ−２−ベンゾチアゾリル）−４−チアゾールカルボキサミド〕−N,N−ジ酢酸およびジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
実施例22で製造された重合体貯留物溶液の水溶液を、実施例25におけるように処理してイットリウム−90イオンを含有する重合体を得る。
実施例  27
血液プール剤：サマリウム−153イオンを含有するPEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
この物質は、＞500 Ci／ｇの比活性の0.04Ｍ塩酸中の153Sm+3 Cl3（Amersham-Mediphysics）を使用する以外は実施例25に記載したと同じ方法で製造する。
実施例  28
酸素の不存在下において製造されたPEG3,400−α,ω−ジアミン、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸およびジエチレントリアミンペンタ酢酸の共重合体
アルゴン充填したグローブバッグ中において、新しく製造したPEG3,400−α,ω−ジアミン（Shearwater Polymers Inc., 酸素を含まない条件下で製造された）10部を、予めアルゴンで１時間掃過することにより脱酸素されたジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解して５％溶液を形成する。この溶液に、アルゴン下において、4,4′−アゾビス（４−シアノ吉草酸）酸（Aldrich Chemical Co.）１部およびジシクロヘキシルカルボジイミド２部を加える。反応混合物を暗所で20℃以下で24時間撹拌する。それから反応混合物を、はじめにトリエチルアミン20部でそしてそれから、25ml当り１ｇの濃度におけるアルゴン−掃過したDMSO中のジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物（Aldrich Chemical Co.）９部で処理する。それから反応混合物を、暗所で室温でさらに24時間撹拌する。生成物の混合物に、徐々に10容量過剰の滅菌水を加えそして反応混合物を６時間放置する。水性部分を傾瀉分離しそしてアルゴン中で0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過する。それから濾液を、アルゴン圧力下において、5,000分子量カット−オフYM-5膜を具備したダイアフィルトレーションセル（Amiconシリーズ8000撹拌セル）中でアルゴン−掃過した滅菌水に対してダイアフィルトレーションする。水性貯留物を、アルゴン下でVirtus Corporation凍結乾燥機中で凍結しそして重合体を凍結乾燥によって水を除去して単離する。方法の完了時に、アルゴンガスの緩慢な放出を使用して真空を破壊しそして重合体を暗所でアルゴン下で貯蔵する。
実施例17〜27における組成物は、アルゴンが方法のすべての工程において保護雰囲気として使用されそして空気および酸素に対する暴露がすべての工程において除かれる場合に、同様な嫌気的方法で酸素の不存在下において製造することができる。
実施例  29
トルエン（1500ml）中の平均分子量（MW）1450のポリエチレングリコール100.0ｇ（0.0690モル）の溶液を、水を共沸的に除去しながら、２時間還流した。溶液を25℃に冷却し、それからトリエチルアミン（46.1ml、0.331モル）、４−ジメチルアミノピリジン（1.69ｇ、0.0138モル）およびｐ−トルエンスルホニルクロライド（57.9ｇ、0.303モル）で処理しそしてそれから、窒素の雰囲気下で60℃で４日間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物を濾過しそして濾液を水で２回抽出した。合した水性抽出液をエーテルで洗浄し、それからCHCl3で２回抽出した。合したCHCl3抽出液を、無水の硫酸マグネシウム上で乾燥しそしてそれから濃縮して生成物121.3ｇを得た。
ジオキサン420ml中のジトシレート42.2ｇ（0.0240モル）の溶液を、氷浴中で冷却しそしてメチルアミンの流れを35分にわたって導入した。それから、反応混合物を密閉したステンレス鋼製反応器中で160℃で16時間加熱し、室温に冷却しそしてそれから濾過した。濾液を濃縮して溶剤を除去し、それから水（844ml）および1.0Ｎ FNaOH（95.2ml）で処理しそしてCHCl3で２回抽出した。合したCHCl3抽出液を、無水の硫酸マグネシウム上で乾燥しそして濃縮して生成物31.0ｇを得た。
ジメチルスルホキシド（DMSO）45ml中のPEG−ビス−（Ｎ−メチルアミン）9.00ｇ（6.10ミリモル）の溶液を、トリエチルアミン（1.70ml、12.2ミリモル）およびDMSO（45ml）中のジエチレントリアミンペンタ酢酸内部ジ無水物2.18ｇ（6.10ミリモル）の溶液で処理した。反応混合物を、室温で16時間撹拌し、それから水360mlで処理した。得られた溶液を0.45μmナイロンフィルターを通して濾過しそして濾液を、3,000MWカット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中で、空気平衡化した水に対してダイアフィルトレーションして、重合体生成物の溶液170mlを得た。
上記水溶液の160mlの量を、２倍のモル過剰の塩化ガドリニウム（III）六水和物で処理し、そしてそれから上述したように空気中で水に対してダイアフィルトレーションした。貯留物の凍結乾燥によって、平均MW16300（PEO分子量標準を使用してSEC-HPLCによって測定）の生成物8.66ｇを得た。
20MHzおよび40℃におけるこの物質のリラキシビティー（relaxivity）（T1）-1は、6.2mM-1s-1であることが見出された。
マウスに対する100、200および400mg／kgの静脈内投与は、14日後において、死亡させることなく、体重に影響を与えずそして剖検による異常を与えない。
放射性153Gdを使用して製造する以外同じ生成物は、ラットにおける生体内分布研究に使用して、75分の血液−プール半減期（消失期）を測定した。
実施例  30
実施例29と同様な方法において、MW1000のPEG−α,ω−ビス−Ｎ−メチルアミンから平均MW8,010の重合体状ガドリニウムキレートを製造した。血液−プール半減期（消失期）は、48分であることが測定された。
実施例  31
実施例29と同様な方法において、平均MW2000のPEG−α,ω−ビス−Ｎ−メチルアミンから平均MW16,800の重合体状ガドリニウムキレートを製造した。
実施例  32
実施例29と同様な方法において、MW3350のPEG−α,ω−ビス−Ｎ−メチルアミンから平均MW22,400の重合体状ガドリニウムキレートを製造した。
ラットにおけるこの物質の血液−プール半減期（消失期）は、141分であることが測定された。
実施例  33
無水のエタノール153ml中の平均MW1000のPEGから製造されたPEGジトシレート15.30ｇ（11.70ミリモル）の溶液を、氷浴中で冷却し、そしてアンモニアの流れを30分にわたって導入した。反応混合物を、ステンレス鋼製の反応器中において100℃で16時間加熱し、室温に冷却しそしてそれから濾過した。濾液を濃縮して溶剤を除去し、水（153ml）および1.0Ｎ NaOH（46.8ml）で処理しそしてCHCl3で２回抽出した。CHCl3抽出液を無水の硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過しそしてそれから濃縮して生成物PEG−α,ω−ジアミン12.20ｇを得た。
DMSO 56ml中のこのジアミン11.22ｇ（11.24ミリモル）の溶液を、トリエチルアミン（3.13ml、22.5ミリモル）およびDMSO（56ml）中のジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物4.017ｇ（11.24ミリモル）の溶液で処理した。反応混合物を、室温で16時間撹拌し、そしてそれから水448mlで処理した。得られた溶液を0.45μmフィルターを通して濾過しそして濾液を、3,000MWカット−オフ膜を具備したダイアフィルトレーションセル中においてダイアフィルトレーションして、溶液225mlを得た。
この水溶液の208mlの量を、２倍過剰の塩化ガドリニウム（III）六水和物で処理し、そしてそれから水に対してダイアフィルトレーションした。貯留物の凍結乾燥によって、平均MW12,500の生成物11.58ｇを得た。
実施例  34
出発PEGが1450のMWを有することを除いては、実施例33をくり返した。凍結乾燥した生成物は、21,900の平均MWを有することが測定された。
実施例  35
2,2′−ビピリジル−6,6′−ビス−メチレンイミノ二酢酸無水物（B4A−二無水物）をDTPA−ジ無水物の代りに使用することを除いては、実施例29をくり返した。生成物は17,600の平均MWを有することが測定された。
実施例  36
ピリジン−2,6−ビス−メチレンイミノ二酢酸無水物（P4A−二無水物）をDTPA−二無水物の代りに使用することを除いては、実施例29をくり返した。生成物は20,000の平均MWを有することが測定された。
実施例  37
DyCl3をGdCl3の代りに使用することを除いては、実施例29をくり返した。凍結乾燥した生成物は、14,800の平均MWを有することが見出された。20MHzおよび40℃におけるこの物質のリラキシビティー（T2）-1は、0.109mM-1s-1であることが見出された。
実施例  38
出発PEGが2000の平均MWを有することを除いては、実施例37をくり返した。凍結乾燥した生成物は、15,300の平均分子量を有することが見出された。
実施例  39
出発PEGが3350の平均MWを有することを除いては、実施例37をくり返した。凍結乾燥した生成物は、20,100の平均分子量を有することが見出された。
実施例  40
DyCl3をGdCl3の代りに使用することを除いては、実施例33をくり返した。凍結乾燥した生成物は、45,500の平均MWを有することが見出された。20MHzおよび40℃におけるこの物質のリラキシビティー（T2）-1は、0.122mM-1s-1であることが見出された。
実施例  41
テトラ−（エリトロシン−５−アミノチオカルボニルアミノ）−T908の製造
（ａ）T908−テトラアミン
トルエン525ml中のテトロニックT908（BASF）100ｇを、25mlのDean-Starkトラップを使用して１時間共沸蒸溜することによって乾燥した。室温に冷却した後、溶液を塩化チオニル2.92mlおよびDMF 0.12mlで処理した。反応混合物をアルゴン下で撹拌しながら、はげしい還流下で３時間加熱し、室温に冷却しそして揮発性物質を回転蒸発器上で減圧下で除去して、“クロロ−T908”中間体と称される明るい黄褐色の粉末を得た。
“クロロ−T908”中間体100ｇを、DMF 700mlに溶解しそしてナトリウムアジド2.08ｇおよび沃化カリウム5.98ｇで処理した。この反応混合物を６時間100℃に加熱しそしてそれから室温に冷却した。揮発性物質を回転蒸発器上で減圧下69℃で除去した。粗製生成物を蒸溜水900mlに溶解しそしてクロロホルム１×1000mlおよび２×500mlで抽出した。クロロホルム層を合し、硫酸マグネシウム上で乾燥しそして溶剤を蒸発して、“アゾ−T908”中間体と称される明るい黄褐色のもろい固体65.69ｇを得た。
“アゾ−T908”中間体の62.5ｇの量を、無水のピリジン300mlに溶解しそしてトリフェニルホスフィン6.56ｇで処理した。室温で18時間撹拌した後、得られた透明な溶液を30％アンモニア（水性）300mlで処理しそしてそれからアルゴン下で50℃で５時間撹拌した。揮発性物質を回転蒸発器上で減圧下で除去しそして残留物をDMSO 562.5mlおよび蒸溜水2250mlで処理した。得られた溶液を、表示10Kカットオフを有するMillipore渦状屈曲透過器を使用して12回の繰り返しダイアフィルトレーションした。最後の貯留物を凍結乾燥して“T908−テトラアミン”中間体と称される灰白色の粉末43.22ｇを得た。生成物の高フィールド13C NMRは、所望の生成物の末端アミンに隣接したメチレン炭素に対して予測されるピークと一致する41.78ppmにおけるピークを示す。芳香族ピークは、13Cまたは1H NMRスペクトルにおいて観察されなかった。
（ｂ）エリトロシン−５−イソチオシアネートと“T908−テトラアミン”中間体との反応
蒸溜水10部および0.5Ｍ水性炭酸ナトリウム３部に溶解した“T908−テトラアミン”中間体１部を、室温で撹拌しながら過剰のエリトロシン−５−イソチオシアネート（Molecular Probes）で処理する。反応の進行は完了するまでSE-HPLCにより監視する。それから反応混合物を蒸溜水60部でうすめ、撹拌ダイアフィルトレーションセル中で出発容量の約1／10の貯留物容量まで限外濾過しそしてそれから、水に対して24回の容量通過ダイアフィルトレーションする。それから貯留物を凍結乾燥し、最小容量の塩化メチレンにとり、乾燥エーテル100部中で沈澱させ、濾過により集めそしてエーテルで洗浄しそして乾燥して所望の生成物を得た。
実施例  42
ジ−（エリトロシン−５−アミノチオカルボニルアミノ）−F108の製造
実施例41の（ａ）部に記載した操作を使用して、ジオールとしてのプルロニックF108（BASF）を相当するジアミンに変換する。それからこのジアミンを実施例41の（ｂ）部に記載したようにエリトロシンイソチオシアネートと反応させて所望の生成物を得た。
実施例  43
〔NH（PEG3400）NHSO2PcAlCl（SO3H）2SO2〕n（NC 100479）の製造
PEG3400ジアミン（Shearwater Polymers, Huntsville, AL；0.319ｇ、0.115ミリモル）を、磁気撹拌しながらピリジン（75ml）に溶解した。約50mlのピリジンを、窒素下120〜130℃の油浴上で溜去してPEGを脱水しそしてそれから、溶液を周囲温度に冷却しそしてClAlPc（SO2Cl）4（相当する酸から製造した、Porphyrin Products, Logan, utah）（0.111ｇ、0.115ミリモル）を加えた。溶液を20℃で18時間撹拌しそしてそれから30分還流し、その後溶剤を回転蒸発器上で40℃で除去しそして残留物を水に溶解した。それからこの溶液を順次に、強酸および強塩基（Na形態）イオン交換樹脂を通して通過させて、生成物をNa塩に変換した。低分子量の成分を、10,000膜（Amicon, Bevery, MA）を通したダイアフィルトレーションにより除去しそして暗青色の残留液体を回転蒸発器上で40℃で蒸発して暗青色の固体（0.09ｇ）を得た。
サイズ排除HPLC分析は、生成物が150,000の平均分子量を有しそしてそれがλmax676nm（水）を有することを示す。
リン酸塩緩衝化生理食塩水中のこの化合物の溶液を、HT-29腫瘍を有する雌の免疫不全マウスに注射した場合、１時間後に注射した用量の４％が腫瘍に局在した。
実施例  44
〔NHCH2CH2NHSO2PcAlCl（SO3H）2SO2〕n（NC 100477）の製造
このものは、PEGジアミンの代りにエチレンジアミン（Aldrich、0.0058ｇ、0.10ミリモル）を使用する以外は、実施例43において使用したと同じ方法によって製造した。生成物の水溶液を、500膜を通してダイアフィルトレーションしそして暗青色の残留溶液をイオン交換してNa塩にしそして蒸発して暗青色の固体（0.10ｇ）を得た。
実施例  45
ClAlPc（SO2NHPEG5000）4の製造
使用した方法は、PEG5000 α,ω−ビスアミン（Shearwater Polymers, Huntsville, AL；2.50ｇ、0.50ミリモル）、ピリジン（50ml、その約30mlを溜去した）およびClAlPc（SO2Cl）4（0.10ｇ、0.10ミリモル）を使用する以外は、実施例43に記載した方法と同様である。溶液を窒素下で30分還流し、そしてそれから溶剤を除去した。10,000膜を使用してダイアフィルトレーションし、膜を通って通過しない生成物を集めて、暗青色の固体（0.08ｇ）を得た。それはλmax676nm（水）を有す。リン酸塩緩衝化生理食塩水中のこの化合物の溶液を、HT-29腫瘍を有する雌の免疫不全マウスに注射した場合、注射した用量の2.5％が１時間後に腫瘍に局在する。
実施例  46
〔メラミン〕〔SO2ClAlPc（SO3H）3〕3（NC 100478）の製造
ClAlPc（SO2Cl）4（0.10ｇ、0.10モル）を、ジイソプロピルエチルアミン（0.1ml、0.57ミリモル）を含有するジメチルホルムアミド（１ml）に加えそして窒素下で１時間撹拌した。メラミン（Aldrich、0.0022ｇ、0.017ミリモル）を加えた。それは反応混合物に非常に難溶性であった。混合物を周囲温度で４日間撹拌した。この時間までに、メラミンは溶解した。溶液を氷上に注加し、そして得られた青色の溶液を、3000膜を通してダイアフィルトレーションした。膜を通って通過しない暗青色の溶液を蒸発して、λmax680nm（水）を有する暗青色の固体を得た。リン酸塩緩衝化生理食塩水中のこの化合物の溶液をHT-29腫瘍を有する雌の免疫不全マウスに注射した場合、注射した用量の0.1％が１時間後に腫瘍に局在する。
実施例  47
スダンIIIの安定なエマルジョンの製造
スダンIII（これはまた、D&C Red No.17, Solvent Red 23, Cerasin Redとしても知られている）は、水に非常に不溶性であるが、非経口的水中油エマルジョン（例えばイントラリピド、リポシンなど）に対して公知の油である胡麻油に可溶性である。すなわち、スダンIIIのエマルジョンは次のようにして製造した。容器を週末にわたって（約72時間）おだやかに回転することによって、胡麻油中のスダンIIIの飽和溶液を製造した。それからこの油溶液を５ミクロン注射器フィルター次いで0.8ミクロンフィルターを通して濾過して溶解しない固体のスダンIIIを除去した。それから得られた飽和溶液を、超音波エネルギー次いで約14,000PSIにおけるミクロ流動化を使用して“油”10％対界面活性剤水溶液90％の比において一定の小滴の大きさが達成されるまで水中で乳化した。小滴の大きさは、Horiba 910光散乱装置および容量加重平均を使用して光散乱によって測定した。得られたエマルジョンはまた、慣用の蒸気滅菌によって滅菌しそして小滴の大きさを再び測定した。
0004503103.tif 000056
（PCT／GB95／02109の実施例2Kに記載されているP79は、分子量約10000および式CH3（CH2）14COO（CH2）15COO（（CH2）2O）nCH3のPEG−二重エステルである。
P79は、スダンIIIで飽和した胡麻油の小さいエマルジョン小滴をつくる能力を非常に増加するように思われる重合体状界面活性剤である。得られたばら色に着色したエマルジョンは、貯蔵に対して安定である。
このエマルジョン（スダンIII）は、切除を容易にするために腫瘍周囲的に注射して局所ドレーニング（draining）リンパ節に移動させることができる。これは現在、黒色腫および乳癌において行われている。これらのリンパ節は、疾患の進行をステージング（staging）しそして患者管理を設計するのに重要でありそして前衛リンパ節マッピングとして知られている。このエマルジョンはまた、健全な組織を染色し、それによって疾患組織をエマルジョンに対する充填欠陥としてより明らかにすることによって、組織病理学をより容易に且つより正確にすることができる。さらにエマルジョンは、静脈内的に投与し肝臓および脾臓およびMPSに富んでいる他の器官の健全な組織の標識を行うことができる。これは外科切除を容易にする健全な組織と疾患組織、病変、奇形などとの間の可視コントラストを与える。低いまたはブロックされた血流の面積でさえも、スダンIIIエマルジョンの血液の含量によって正常な血管床とコントラストすることができる（P79は、相当するＸ線コントラスト処方におけるリポソームおよびエマルジョンに対して延長された循環を与えることを示す）。
実施例  48
フルオレセインの微小粒子の製造
摩砕ビーズ（0.7mmの珪酸ジルコニウム）7.5mlおよびフルオレセイン0.9ｇを15mlのびんに入れることによって、フルオレセインの微小粒子懸濁液を製造した。界面活性剤の原溶液を使用して、懸濁液を水性相中の3.3mlまでにした。これは３種の界面活性剤：ブリージ58、チロキサポールおよびプルロニックF-108のそれぞれについて行った。粒子径測定結果は次の通りであった。
0004503103.tif 000057
この方法で製造したフルオレセインの滅菌濾過した懸濁液を、リンパの流れおよび内容物を監視するカニューレ挿入した胸管を有する麻酔された犬に皮下投与した。切除および癌ステージングにおける使用のためにリンパ節の可視確認を助けるのに必要であるように、フルオレセインはリンパ液中で検出することができ、色素微小粒子がリンパ管を通って通過し、それによってリンパ節を標識することを示す。
これらの粒子はまた、静脈内投与後に、健全な組織は標識されるが疾患の組織は暗いままであるMPS細胞に富んだ組織の標識に機能しそして外科切除中容易に確認できる。
実施例  49
リポソーム中のインドシアニングリーンの処方
インドシアニングリーン（ICG）を、8.2％のレシチン（ホスファチジルコリン）、0.8％のジミリスチルホスファチジルグリセロール）および0.1％の非イオン性の重合体状界面活性剤P-79（これは、リポソームに延長された血中プール滞留を与えるように企図された）から形成されたリポソーム懸濁液に加えた。リン脂質および界面活性剤は、プローブソニケーター（Bransonic Sonifier 450, 90％ デューティーサイクル、出力10）からの超音波エネルギーを使用して水中で混合した。リポソームは、14,000PSIにおけるMicrofluidics M110Sミクロ流動化器およびリン脂質混合物の相互作用室を通した４回の通過を使用して製造した。得られたリポソームは、光散乱により測定して平均直径約100nmでありそしてオートクレーブ滅菌後同じ大きさが残留する。さらに、これらのリポソームはまた、滅菌フィルター（すなわち、0.2ミクロンの細孔径）を通して通過することができる。懸濁液を製造するのに十分な量のICG約７mg／mlの添加は、リポソームの懸濁液の物理的特性を変化しない。窒素雰囲気下における滅菌後、これらのICGリポソームは、室温で少なくとも６週間安定であった。
水または生理食塩水に溶解したICGに比べてリポソームのICGのスペクトル性の評価は、リポソームの環境のインパクト（impact）を証明する。励起最大波長および発光最大波長は、均質な水溶液に比べてより低いエネルギー（すなわちより高い波長）にシフトした。さらに、量子収率の注意深い測定は、ICG水溶液に比べてリポソームのICGの量子収率の少なくとも４倍の増加を示す。すなわち、ICGのリポソーム処方の光画像形成コントラスト利用に対して必要な用量は、ICGの均質な水溶液からの必要な用量より有意に少ない。
実施例  50
PEG3,400 α,ω−ジアミンとの２−〔２−〔２−（４−イソチオシアネート）フェノキシ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム、内部塩、ナトリウム塩、反応生成物の製造
次の反応スキームを使用して、標記化合物を製造した。
0004503103.tif 000058
実施例  51
PEG10,000 α,ω−ジアミンとの２−〔２−〔２−（４−イソチオシアネート）フェノキシ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム、内部塩、ナトリウム塩、反応生成物の製造
標記生成物は、実施例50の方法と同様にして製造した。
実施例  52
３−（Ｎ−アセチル−Ｎ−エチルアミノ）−５−〔（５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル）アミノ〕−2,4,6−トリヨード安息香酸エチルの製造
氷浴中で冷却した乾燥ピリジン（75ml）中の３−（Ｎ−アセチル−Ｎ−エチルアミノ）−５−アミノ−2,4,6−トリヨード安息香酸エチル（11.6ｇ、18.5ミリモル）の撹拌溶液に、60％NaH油分散液（1.8ｇ、46.3ミリモル）を加えた。水素化ナトリウムとの反応が静まった後に、塩化ダンシル（５ｇ、18.8ミリモル）を加えた。反応混合物を氷浴温度で４時間そしてそれから室温で20時間撹拌した。反応を酢酸（10ml）でクエンチした後に、褐色の溶液を回転蒸発器上で濃縮した。得られた褐色の残留物をヘキサンで洗浄しそしてそれから水（200ml）中でスラリー化した。黄色のゴム状の固体を集め、水で洗浄し、乾燥しそしてそれからエタノールから結晶化して鮮やかな黄色の結晶5.3ｇ（33％）を得た。融点238〜240℃。ms（FAB）862〔（M＋H）、90％〕。1H-NMRおよび13C-NMRスペクトルは所望の生成物と一致する。
分析値（C25H26I3N3O5Sに対する）
計算値：C 34.86；H 3.05；I 44.20；N 4.88
実測値：C 34.91；H 3.02；I 44.53；N 4.74
実施例  53
１−〔〔２−ジエチルアミノエチル〕アミノ〕−４−〔（メチルアミノ）メチル〕チオキサンテン−９−オンの製造
この化合物は、U.S. 5,346,917（Miller等）実施例５に記載されているようにして製造した。融点241〜243℃。
実施例  54
（合成スキームＡ→Ｆ参照）
40：20：40のブロック比および約14,600の平均分子量を有するポリ（オキシエチレン−CO−オキシプロピレン−CO−オキシエチレン）ブロック共合体のα,ω−ビス−（ローダミンＢスルホンアミド）類似体の製造。
40：20：40のブロック比および約14,600の重量平均分子量を有するポリ（オキシエチレン−CO−オキシプロピレン−CO−オキシエチレン）ブロック共合体のα,ω−ビス−（アミノ）類似体（化合物Ｅ）の合成。
40：20：40のブロック比および約14,600の重量平均MWを有するポリ（オキシエチレン−CO−オキシプロピレン−CO−オキシエチレン）共合体（プルロニック界面活性剤F-108、BASF Corp.）（上記出発物質Ａ）50.0ｇをトルエン275mlで処理しそしてDean Starkトラップ下で２時間還流した。それから系を冷却しそしてトラップおよびその内容物（約25ml）を除去した。この点において、反応混合物を塩化チオニル1.25mlおよび無水のジメチルホルムアミド0.053mlで処理しそして２時間105℃で撹拌した。それから系を室温で一夜撹拌した。次の日に、反応混合物を回転蒸発器上でストリップして灰白色の固体49.35ｇを得た。この固体（中間体Ｂ）は容易に粉末化される。70ppmと80ppmとの間の主なポリアルキレンオキシドピーク（出発界面活性剤F-108においてもみられる）のほかに、生成物の13C NMRスペクトルは、塩素を有する末端炭素と一致する42.69ppmにおける単一線を含有しそして界面活性剤F-108の末端のヒドロキシルを有する炭素が示す61ppm付近におけるピークは残っていない。
中間体Ｂ 49.08ｇ、ナトリウムアジド0.89ｇおよび沃化カリウム2.83ｇを、無水のジメチルホルムアミド350mlで処理しそして乾燥アルゴン下で100℃で５時間撹拌した。それから反応混合物をアルゴン下で室温で一夜撹拌した。それからそれを回転蒸発器上で50℃でストリップして融解物を得た。このものは固化して黄色の固体が得られた。この固体を蒸溜水500mlに溶解しそしてクロロホルム500mlと一緒に振盪した。層分離（非常に緩慢）後、水性層をクロロホルム500mlずつで２回抽出した。三つのクロロホルム層を合しそして硫酸マグネシウム上で乾燥した。揮発物質をストリップした後、白色の固体（中間体Ｃ）45.58ｇを得た。生成物の13C NMRスペクトルは、アジドを有する末端炭素と一致する50.6ppmにおける単一線を含有しておりそして出発ビス−クロライドからの42ppm付近におけるピークは残らない。
中間体Ｃの合計44.05ｇを、トリフェニルホスフィン3.15ｇおよび無水のピリジン200mlで処理した。反応混合物をアルゴン下において室温で撹拌した。この反応において製造されたビス−トリフェニルホスフィン類似体（中間体Ｄ）は、単離することなしに合成の次の工程に直接使用した。
前記工程からの反応混合物を、30％水酸化アンモニウム（水性）200mlで処理しそして室温で７時間撹拌した。泡立ちがはげしく、泡が流出することを避けるために非常に大きな容器が必要であった。それからそれを回転蒸発器上でストリップしそして残留した固体をクロロホルム500mlに再溶解した。硫酸マグネシウム上で乾燥した後、揮発性物質を除去して39.31ｇからなる灰白色の固体を得た。生成物のリンNMRスペクトルが有意なリンシグナルがなお残留していることを示す場合は、生成物の2.0ｇの試料を30％水酸化ナトリウム（水性）38mlで処理しそして60℃で４時間撹拌した。それから反応混合物を室温に冷却し、エーテル40mlずつで４回洗浄しそして回転蒸発器上で再ストリップした。生成物は1.46ｇからなる灰白色のワックス状固体（中間体Ｅ）であった。この場合において、リンシグナルはリンNMRにおいて見出されない。
また13C NMRスペクトルは、アミンを有する末端炭素と一致する41.78ppmにおけるピークを含有しておりそして出発ビス−アジドに相当する50ppm付近におけるピークは残っていない。
40：20：40のブロック比および約14,600の重量平均分子量を有するポリ（オキシエチレン−CO−オキシプロピレン−CO−オキシエチレン）ブロック共合体のα,ω−ビス−（ローダミンＢスルホンアミド）類似体の合成。
上記からのプルロニック界面活性剤F-108のα,ω−ビス−（アミノ）類似体（中間体Ｅ）1.25ｇを、ジメチルアミノピリジン0.026ｇおよび無水のピリジン10mlで処理した。得られた溶液をローダミンＢスルホニルクロライド（Molecular Probes）0.12ｇで処理しそして窒素下において室温で一夜撹拌した。得られた強度に紫色の溶液を、回転蒸発器上でストリップして1.42ｇからなる強度に紫色の固体を得た。粗製生成物の合計1.0ｇを蒸溜水40mlに溶解し、0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過しそして濾液を、Amicon YM-3（表示3000MW カット−オフダイアフィルトレーション膜）を含有する50mlの撹拌ダイアフィルトレーションセル（Amicon）を使用して、蒸溜水に対してダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーションは35回の繰り返し（除去したダイアフィルトレーション透析液1.750ml）つづけた。はじめにダイアフィルトレーション透析液は強度に紫色であるが、精製をつづけるにつれて色の強度は35回の繰り返しにおいて実際に無色となるまで減少する。強度に紫色の貯留物を回転蒸発器上でストリップして0.92ｇからなる強度に紫色の固体（最終生成物Ｆ）を得た。生成物の13C NMRスペクトルは、F-108およびすべての次の中間体においてみられる70ppmと80ppmとの間の主たるポリアルキレンオキシドピーク、ならびに45.69ppmにおける新規な単一線を含有する。前のビス−アミン中間体に相当する41ppm付近における残留ピークは観察されなかった。サイズ排除HPLC研究は、PEG標準に基づく約15,000のピーク分子量を有する単一の広いピークを示す。化合物は584nmにおいてピークの広いスペクトル吸光度を示す。
0004503103.tif 000059
実施例  55
界面活性剤T-908のフルオレセインチオカルバメート誘導体の合成
テトロニック−908界面活性剤（T-908、BASF Corp., 平均分子量25,000）（出発物質Ａ）5.0ｇを、ジメチルアミノピリジン0.10ｇおよび無水のピリジン50mlで処理した。得られた混合物をフルオレセインイソチオシアネート（Molecular Probes Inc.）0.15ｇで処理しそして窒素下において室温で一夜撹拌した。得られた溶液を回転蒸発器上でストリップして5.4ｇからなる黄色〜緑色の固体を得た。合計5.1ｇの生成物を、蒸溜水200mlに溶解し、0.45ミクロンナイロンフィルターを通して濾過しそして濾液を、Amicon YM-3（表示3000MW カット−オフ）ダイアフィルトレーション膜を含有する撹拌ダイアフィルトレーションセル（Amicon）中において蒸溜水に対してダイアフィルトレーションした。ダイアフィルトレーションはダイアフィルトレーション透析液が本質的に無色になるまで25回の繰り返しつづけた。貯留物を凍結乾燥して、3.4ｇからなる黄色−緑色の固体を得た。生成物の13C NMRスペクトルは、70ppmと80ppmとの間における主たるポリアルキレンオキシドピークならびにフルオレセイン部分と一致する芳香族ピークを含有する。サイズ排除HPLC研究は、PEG標準に基づく約25,000のピーク分子量を有する単一の広いピークを示す。
実施例  56
末端がフルオレセインであるジエチレントリアミン−ペンタ酢酸および1,6−ジアミノヘキサンの線状共重合体の製造
アミン−末端の重合体状リガンド
無水のジメチルスルホキシド68.8ml中の1,6−ジアミノヘキサン4.42ｇの溶液を、トリエチルアミン13.24mlおよびジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物11.32ｇで処理した。得られたスラリーを、アルゴン下で一夜撹拌した。次の朝、得られたかなり粘稠な重合体ドープを水中の0.5Ｍ炭酸ナトリウム600mlで処理しそしてAmicon YM-10ダイアフィルトレーション膜（表示10K カットオフ）を具備した撹拌ダイアフィルトレーションセル中で限外濾過して約300mlにした。この点において、方法様式を0.5Ｍ水性炭酸ナトリウムを供給するダイアフィルトレーションに変えそして約1,800mlのダイアフィルトレーション透析液が得られる（約６回の繰り返し）までつづけた。それから供給溶液を蒸溜水に変えそして別の1,800mlのダイアフィルトレーション透析液が得られる（６回の繰り返し）までダイアフィルトレーションをつづけた。それから貯留物を除去しそして凍結乾燥して白色の綿毛状の重合体状固体7.35ｇを得た。この重合体状リガンドは、10000の数平均分子量、25000の重量平均分子量および2.50の分散性を有することが見出された。
フルオレセイン−末端の重合体状リガンド
0.5Ｍ水性炭酸ナトリウム29.6mlに溶解した上記のアミン−末端の重合体状リガンド3.50ｇの溶液を、フルオレセインイソチオシアネート、異性体１の0.72ｇで処理しそしてアルゴン下において室温で２時間撹拌した。得られた明るいオレンジ色の溶液を、蒸溜水でうすめそしてAmicon YM-10ダイアフィルトレーション膜（表示10K カットオフ）を具備した撹拌ダイアフィルトレーション装置に入れる。それからそれを約1,450mlのダイアフィルトレーション透析液が得られる（約18回の繰り返し）までダイアフィルトレーションした。それから貯留物を除去しそして凍結乾燥した。3.00ｇからなる強度に金黄色の綿毛状重合体状固体を得た。それは492nmのラムダ極大を有することが見出された。
実施例  57
末端がフルオレセインであるジエチレントリアミンペンタ酢酸および1,6−ジアミノヘキサンの線状共重合体のガドリニウム複合体の製造
上記の実施例56に記載した末端がフルオレセインであるジエチレントリアミンペンタ酢酸および1,6−ジアミノヘキサンの線状共重合体2.00ｇを、蒸溜水50mlで処理しそして室温で撹拌した。別の容器において、塩化ガドリニウム六水和物3.13ｇを、蒸溜水31.3mlに溶解した。それから塩化ガドリニウム溶液を、撹拌した重合体溶液に徐々に注加し、それからそれを室温でさらに２時間撹拌した。それから得られた強度に黄色の溶液を、Amicon YM-10ダイアフィルトレーション膜（表示10Kカットオフ）を具備した撹拌ダイアフィルトレーション装置に入れる。それを限外濾過して約60mlの貯留物容量にする。その後、方法様式を蒸溜水を供給するダイアフィルトレーションに変えた。ダイアフィルトレーション透析液1,400mlが得られた（約18回の繰り返し）後に、強度に黄色の貯留物を除去しそして凍結乾燥した。1.09ｇからなる強度に黄色の綿毛状の重合体状固体を得た。スペクトル分析は、重合体が499nmのラムダ極大（吸収）を有することを示す。
実施例  58
末端がスルホン化フタロシアニンであるジエチレントリアミンペンタ酢酸および1,6−ジアミノヘキサンの線状共重合体の製造
上記実施例56に記載した方法と同じ方法で製造されたアミン−末端の重合体状リガンド0.43ｇを、0.5Ｍ水性炭酸ナトリウム4.25mlに溶解しそして氷水浴中で15分撹拌した。この点において、合計0.242ｇの粉末状のアルミナムクロロフタロシアニンテトラスルホニルクロライドを徐々に冷撹拌重合体溶液に加えて緑色のスラリーを形成させる。反応混合物を一夜撹拌し、氷を融解しそして反応混合物を周囲温度にする。次の朝、反応混合物は強度の緑色の溶液となった。それを蒸溜水20mlを使用して、Amicon YM-10ダイアフィルトレーション膜（表示10Kカットオフ）を具備した撹拌ダイアフィルトレーションセル装置にすすぎ入れそして約13回の繰り返しダイアフィルトレーションした。それから貯留物を凍結乾燥して、0.48ｇからなる強度に緑色の綿毛状の重合体状固体を得た。スペクトル分析は、重合体が650nmのラムダ極大（吸収）を有することを示す。
実施例  59
末端がスルホシアニンであるジエチレントリアミン−ペンタ酢酸および1,6−ジアミノヘキサンの線状共重合体の製造
上記実施例56に記載した方法と同じ方法で製造されたアミン−末端の重合体状リガンド0.568ｇを、水中の0.5Ｍ炭酸ナトリウム4.8mlで処理しそして撹拌して透明な溶液を形成させる。この溶液をNycomed AmershamによってCy-5単官能性色素として販売されている単官能性スルホシアニン色素0.23ｇで処理する。反応混合物を室温で２時間撹拌する。そこで透明な赤色の溶液を、蒸溜水20mlでうすめそしてAmicon YM-10ダイアフィルトレーション膜（表示10Kカットオフ）を具備した撹拌したダイアフィルトレーションセル装置に入れる。それからそれを蒸溜水を供給して18時間ダイアフィルトレーションする。ダイアフィルトレーション透析液約650ml（ダイアフィルトレーションの約26回の繰り返し）を除去し、その後貯留物を凍結乾燥する。
実施例  60
界面活性剤T908（BASF）のフルオレセインチオ尿素誘導体の製造
界面活性剤T908の末端アミノ誘導体
合計100.0ｇの界面活性剤T908（BASF）を、トルエン525mlで処理しそしてDean-Starkトラップ下で１時間還流した。それから、Dean-Starkトラップを、それが含有しているトルエン／水約25mlと一緒に除去した。室温に冷却したときに、反応混合物を、塩化チオニル2.92mlおよびDMF 0.12mlで処理した。それを105℃に再加熱しそしてアルゴン下において３時間撹拌し、室温に冷却しそして回転蒸発器上でストリップして、101.99ｇからなる明るい黄褐色の粉末を得た。
合計100.0ｇのこの“クロロ−T908”中間体を、ナトリウムアジド2.08ｇ、沃化カリウム5.98ｇおよびDMF 700mlで処理した。反応混合物を６時間100℃に加熱し、室温に冷却しそしてそれから、回転蒸発器上で69℃でストリップした。粗製生成物を蒸溜水900mlに溶解しそしてクロロホルム１ｌと一緒に振盪した。クロロホルム層を集めそして水性層の２回の追加的な500mlのクロロホルム洗液と合する。合したクロロホルム層を硫酸マグネシウム上で乾燥した後、クロロホルムを回転蒸発器上で除去して明るい黄褐色のもろい固体65.69ｇを得た。
合計62.5ｇのこの“アジド−T908”中間体を、無水のピリジン300mlに溶解しそしてトリフェニルホスフィン6.56ｇで処理した。それを室温で18時間撹拌した後に、得られた透明な溶液を30％アンモニア（水性）300mlで処理しそしてアルゴン下において50℃で５時間撹拌した。それからそれを回転蒸発器上でストリップしそしてその後、DMSO 562.5mlおよび蒸溜水2,250mlで処理した。得られた溶液を表示10Kカットオフを有するMillipore渦状屈曲透過器を使用して12回の繰り返しダイアフィルトレーションした。最終の貯留物を凍結乾燥して灰白色の粉末43.22ｇを得た。生成物の高フィールド13C NMRは、所望の生成物の末端アミノに隣接したメチレンに対して予測されたピークと一致する41.78ppmにおけるピークを示しそして13Cまたは1Hスペクトルにおけるピークならびに31Pスペクトルにおけるピークを示さず、トリフェニルホスフィン付加物が完全に所望のアミノ付加物に変換されたことを示す。
界面活性剤T908の末端フルオレセイン誘導体
合計1.00ｇの上記の界面活性剤T908の末端アミノ誘導体を、蒸溜水10mlに溶解しそしてそれから、0.5Ｍ水性炭酸ナトリウム3.2mlで処理した。得られた透明な溶液を、フルオレセインイソチオシアネート、異性体１（Aldrich）0.156ｇで処理しそして室温で18時間撹拌した。得られた透明な強度にオレンジ色の溶液を蒸溜水60mlでうすめそしてAmicon YM-10（表示10Kカット−オフ）ダイアフィルトレーション膜を具備した撹拌ダイアフィルトレーションセルに入れた。それをはじめに限外濾過して25mlの貯留物となしそして次に、ダイアフィルトレーション透析液の600mlが除去される（24回の繰り返し）までダイアフィルトレーションした。それから貯留物を凍結乾燥して、0.43ｇからなる明るいオレンジ色の綿毛状の重合体状固体を得た。スペクトル分析は重合体が307nmのラムダ極大（吸収）を有することを示す。
実施例  61
末端がスルホシアニンである重合体状BASF界面活性剤T908の誘導体の製造
実施例60に記載した界面活性剤T908の末端アミノ誘導体の合計0.30ｇを、蒸溜水3.0mlに溶解しそして0.5Ｍ水性炭酸ナトリウム2.9mlで処理する。得られた透明な溶液を、AmershamによってCy-7色素として販売されているスルホインドシアニン色素0.19ｇで処理しそして室温で18時間撹拌する。得られた透明な溶液を蒸溜水６mlでうすめそしてAmicon YM-10（表示10Kカットオフ）ダイアフィルトレーション膜を具備した撹拌ダイアフィルトレーションセルに入れる。それをダイアフィルトレーション透析液約250mlが除去される（約20回の繰り返し）までダイアフィルトレーションした。貯留物を凍結乾燥する。
実施例  62
カルボン酸置換されたベンゾフルオレセインの製造
2,7−ジヒドロキシナフタレンおよびＸ−置換されたフタール酸無水物（例えば、Ｘ＝NO2、SO3H、MeO、ハロゲン、CN、COOH、COOMeのようなエステルとしてのCOOR、エーテル、チオエーテル、スルホンアミド、アミド等）を、混合しそして塩化亜鉛のようなルイス酸の存在下において、融解した溶剤として過剰の無水物を使用して融解物中で一緒に加熱して所望の化合物を生成させる。この発色団は普通の方法によってハロゲン化またはスルホン化またはカルボキシル化して可溶性を変性するための；還元および置換反応によりさらに合成生成するための；抗体、ペプチド、例えばStaペプチドのような固定ベクターに結合させるための；およびPEGのような重合体に結合させるための付加された官能基を有する新規な発色団を生成することができる。物質は沃素イオンとしてのアイソトープのような沃素のアイソトープ源（例えば塩化沃素、ジアイオジンなど）で処理することによって、沃素のアイソトープで放射線標識することができる。
実施例  63
スルホン酸置換されたベンゾフルオレセインの製造
2,7−ジヒドロキシナフタレンおよびＸ−置換された２−スルホ安息香酸環式無水物（例えば、Ｘ＝NO2、SO3H、MeO、ハロゲン、CN、COOH、COOMeのようなエステルとしてのCOOR、エーテル、チオエーテル、スルホンアミド、アミド等）を、混合しそして塩化亜鉛のようなルイス酸の存在下において融解した溶剤として過剰の無水物を使用して融解物中で一緒に加熱して所望の化合物を生成させる。この発色団は普通の方法によりハロゲン化またはスルホン化またはカルボキシル化して、可溶性を変性するための；還元および置換反応によりさらに合成生成するための；抗体、ペプチドのような固定ベクターに結合させるための；およびPEGのような重合体に結合させるための付加された官能基を有する新規な発色団を生成することができる。物質は沃素イオンとしてのアイソトープのような沃素のアイソトープ源（例えば塩化沃素、ジアイオジンなど）で処理することによって、沃素のアイソトープで放射線標識することができる。
実施例  64
pH感受性ナフトインドールシアニン色素のPEG誘導体（中央シクロヘキセン環の４−カルボン酸を経てアミド結合）の製造
フェニル−Ｎ−フェニルホスホラミドクロリデート（Aldrich）134mgを、塩化メチレン中の４−カルボン酸−１−ヒドロキシシクロヘキセン固定したビス（３−スルホプロピル−1H−1,1−ジメチル−ベンズインドール）−C7シアニン色素430mgおよびトリエチルアミン0.2mlの溶液に加える。混合物を窒素雰囲気下において室温で約30分撹拌する。上記溶液に、塩化メチレン中のメトキシポリ（エチレングリコール）アミン（MW5,000）2.5ｇおよびトリエチルアミン0.07mlの溶液を30分滴加する。これを窒素雰囲気下において室温で約１日または反応の完了が観察されるまで撹拌する。揮発性物質を、減圧下におくことによって反応混合物から除去した。得られた残留物をクロマトグラフィー（SiO2、クロロホルム中メタノール15〜20％）によって精製して、所望のアミド結合したシアニン色素を得た。
実施例  65
Ｎ−〔５−アニリノ−３−クロロ−2,4−（２−エトキシカルボニルプロパン−1,3−ジイル）−2,4−ペンタジエン−１−イリデン〕アニリニウムクロライドの製造
窒素下で撹拌しそしてドライアイス／イソプロパノール浴によって０〜５℃に調節した無水のN,N−ジメチルホルムアミド34mlに、オキシ塩化燐28mlを20分にわたって滴加した。反応混合物を１時間15℃に加温した。それからこれに、塩化メチレン20ml中の４−オキソシクロヘキサンカルボン酸エチル（Aldrich Chemical Co.）10ｇの溶液を５分にわたって滴加した。短い発熱が静まった後に、反応混合物を２時間加熱還流した。それから溶剤を回転蒸発器上で除去しそして暗オレンジ色の粘稠な残留物を氷中で冷却した。これに、エタノール22mlに溶解したアニリン22mlの溶液を35分にわたって加えた。添加は煙の発生および温度の上昇を伴った。温度は氷−温浴を使用して調節した。添加完了後に粘稠な反応生成物を、濃塩酸25mlを含有する氷250ｇ上に注加した。それからこの混合物を冷却器中で２日間放置した。粗製生成物を濾過によって単離し、水それからエーテルで洗浄しそして真空下においてP2O5上で乾燥して固体14ｇを得た。この物質はさらに処理することなしに使用した。
実施例  66
３−（2,3,3−トリメチル−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリオ）プロパンスルホネートの製造
窒素下室温における無水のアセトニトリル100ml中の1,1,2−トリメチル−1H−ベンズ〔ｅ〕インドール（Fisher Chemical Co.）8.72ｇの磁気的に撹拌した溶液に、アセトニトリル３ml中の1,3−プロパンスルトン（Aldrich Chemical Co.）5.09ｇを加えた。反応混合物を24時間加熱還流しそしてそれから周囲温度に冷却した。灰白色の沈澱を付随する暗緑色の液体から濾過により単離し、アセトニトリル100mlそしてそれからエーテル100mlで洗浄しそしてそれから空気中で乾燥して、所望の化合物10.24ｇを得た。
実施例  67
２−〔２−〔２−クロロ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−５−（エトキシカルボニル）−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム、内部塩、ナトリウム塩の製造
トルエン75mlを含有するｎ−ブタノール190ml中のＮ−〔５−アニリノ−３−クロロ−2,4−（２−エトキシカルボニルプロパン−1,3−ジイル）−2,4−ペンタジエン−１−イリデン〕アニリニウムクロライド1.87ｇおよび３−（2,3,3−トリメチル−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリオ）プロパンスルホネート4.3ｇの混合物を、水を除去しながら１時間加熱還流した。それから混合物に無水の酢酸ナトリウム0.65ｇを加え、そして還流をさらに2.5時間つづけた。それから溶剤を結晶を形成しはじめる点まで蒸溜によって除去した。冷後、結晶を濾過によって集め、エチルエーテルと一緒にすりつぶしそしてそれからメタノール性エチルエーテルから再結晶して所望の化合物1.7ｇを得た。
実施例  68
２−〔２−〔２−クロロ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−５−（エトキシカルボニル）−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム、内部塩、ナトリウム塩とジナトリウムPEG3,400−α,ω−ジチオレート、重合体との間のビスチオエーテル ２：１ 色素：重合体反応生成物の製造
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乾燥したそして窒素−掃過したジメチルホルムアミド8.5ml中のShearwater Polymers Inc.からの3,400の分子量のポリ（エチレングリコール）−α,ω−ジチオール1.9ｇの溶液を、50％水素化ナトリウム0.1ｇで処理しそしてそれから、窒素下室温で15分にわたって、窒素−掃過した無水のジメチルホルムアミド９ml中の２−〔２−〔２−クロロ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−５−（エトキシカルボニル）−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム0.89ｇの撹拌溶液に滴加した。2.5時間後に、反応混合物を過剰の二酸化炭素で処理し、溶剤を蒸発しそして所望の２：１の色素：重合体付加物をカラムクロマトグラフィー（SiO2：クロロホルム中のメタノール15％）によって単離した。
生体内分布結果は、図2A（投与後１時間）および図2B（投与後３時間）に示す。
実施例  69
２−〔２−〔２−クロロ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−５−（エトキシカルボニル）−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム、内部塩、ナトリウム塩とジナトリウムPEG10,000−α,ω−ジチオレートとの間のビスチオエーテル ２：１ 色素：重合体反応生成物の製造
0004503103.tif 000061
乾燥したそして窒素掃過したジメチルホルムアミド14ml中のShearwater Polymers Inc.からの10,000分子量のポリ（エチレングリコール）−α,ω−ジチオール2.45ｇの溶液を、50％水素化ナトリウム43mgおよび乾燥したジメチルホルムアミド1.5mlで処理した。約30分後にこの溶液を1／3時間以内に、撹拌しながら乾燥した窒素掃過したジメチルホルムアミド５ml中の２−〔２−〔２−クロロ−３−〔〔1,3−ジヒドロ−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−2H−ベンズ〔ｅ〕インドール−２−イリデン〕エチリデン〕−５−（エトキシカルボニル）−１−シクロヘキセン−１−イル〕エテニル〕−1,1−ジメチル−３−（３−スルホプロピル）−1H−ベンズ〔ｅ〕インドリウム0.4ｇの窒素掃過した溶液に滴加した。窒素雰囲気下で４時間の撹拌後に、反応混合物を過剰の二酸化炭素で処理し次いで溶剤を蒸発した。所望の暗緑色の２：１の色素：重合体付加物をカラムクロマトグラフィー（SiO2：クロロホルム中のメタノール20％）によって単離した。リン酸塩緩衝化生理食塩水中の吸収極大：814nm、744nm。質量スペクトルは予測されたように、約12,000質量単位において集中した分布を有す。
実施例  70
末端が亜鉛トリスルホフタロシアニン基である重合体状BASF界面活性剤T908の誘導体（NC 100526）の製造
この色素は、10倍過剰の亜鉛フタロシアニンテトラスルホニルクロライド（4.0ｇ、4.1mM）を使用する以外は、実施例61の方法と同様な方法によって界面活性剤T908アミノ誘導体（2.50ｇ、0.1mM）から製造した。ダイアフィルトレーション貯留物（10,000MW膜）を蒸発しそして凍結乾燥して、暗青色の固体3.2ｇを得た。ラムダ極大水中で635nm（671nmでショルダー）。
実施例  71
〔PcAlCl（SO3H）3SO2NH〕2〔PEG10,000〕（NC 100481）の製造
これはPEG10,000ジアミン（Shearwater Polymers、1.0ｇ、0.1mM）および過剰のクロロ−アルミナムフタロシアニンテトラスルホニルクロライド（0.217ｇ、0.22mM）を使用する以外は、実施例43において使用した方法と同様な方法によって製造した。ダイアフィルトレーション貯留物（3,000MW膜）を蒸発して暗青色の固体0.82ｇを得た。ラムダ極大。水中で675nm。
実施例  72
ClAlPc（SO2NH（CH2）2N+（CH3）3〕44Cl-の製造
この色素はクロロ−アルミナムフタロシアニンテトラスルホニルクロライド（1.25ｇ、1.29mM）および（２−アミノエチル）−トリメチルアンモニウムクロライド塩酸塩（Aldrich、1.0ｇ、5.7mM、10％過剰）を使用する以外は、実施例56の方法と同様な方法によって製造した。ダイアフィルトレーション貯留物（500MW膜）を蒸発して暗青色の固体0.44ｇを得た。ラムダ極大。水中で677nm。
実施例  73
ZnPc（SO3H）8の製造
１．ｏ−トルイル酸のジスルホン化
発煙硫酸（30％発煙硫酸、150ml）を、撹拌しながらｏ−トルイル酸（50.0ｇ、0.37モル）に加えて85℃に発熱させた。溶液を170℃で６時間加熱した。さらに発煙硫酸50mlを加えそして溶液をさらに６時間加熱した。それから冷却した溶液を氷上に注加しそして生成物を固体の炭酸カルシウムでpH７に中和した。沈澱した硫酸カルシウムを濾過しそして溶液を次の工程に使用した。
２．ジスルホ−ｏ−トルイル酸溶液の酸化
工程１からの溶液（100ml）を、撹拌しそして殆ど沸騰するまで加熱しそして固体の過マンガン酸カリウムを、溶液が永続的な紫色に達するまで１ｇの増加分で加えた。過剰の過マンガン酸塩をエタノールの添加によって分解し、沈澱を濾過しそして得られた淡黄色の溶液を、酸形態の強酸イオン交換樹脂（AG 50W-X8、Bio-Rad）を通して通過させることによって、金属イオンを除去した。溶出液を回転蒸発器上で蒸発乾固し、その後結晶化させた。生成物3,5−ジスルホフタール酸は、325におけるエレクトロスプレーMS（M-H）-ピーク（理論値＝325）によって確認した。
３．亜鉛フタロシアニンオクタスルホネートの製造
3,5−ジスルホフタール酸（6.4ｇ）の水溶液を、水酸化アンモニウムで中和してpH4となしそして溶液を蒸発乾固する。この固体を、尿素（10.0ｇ）、酢酸亜鉛（1.8ｇ）、塩化アンモニウム（0.8ｇ）、モリブデン酸アンモニウム（0.12ｇ）、硼酸（0.12ｇ）およびスルホラン（12.5ml）と混合しそして混合物を窒素下で撹拌しながら220℃で３時間加熱する。混合物を冷却し、溶剤を傾瀉分離しそして残留物の水溶液を、セルロース上でクロマトグラフィー処理して、暗青色の粉末として亜鉛フタロシアニンオクタスルホネートを得た。
実施例  74
実施例73のフタロシアニンの99mTc誘導体の製造
これらの誘導体は、酢酸亜鉛の代りにヒドロキシルアミンの還元量と一緒にナトリウムパーテクネテート（Na 99mTcO4、ジェネレーターから）（８M／Mパーテクネテート）を使用する以外は、実施例73に記載した方法によって製造する。クロマトグラフィー分離は、青色の１：１ Pc／Tc複合体および緑色の２：１ Pc／Tc複合体を与える。
実施例  75
５個のスルホ基を含有するシアニン色素の製造
0004503103.tif 000062
１．１−（Ｎ−スルホネートプロピル）−2,3,3−トリメチルインドーレニニウム−５−スルホネートの製造
Mujumdar等（Mujumdar, Ernst. Mujumdar, LewisおよびWaggoner, Bioconj. Chem. 1993 4（2）105）の方法によって、2,3,3−トリメチルインドリニウム−５−スルホネートのカリウム塩を製造した。この塩（42.0ｇ、0.15Ｍ）、1,3−プロパンスルトン（25.0ｇ、0.20Ｍ）およびアセトニトリル（500ml）を、窒素下で４時間還流した。淡黄色の上澄液を、沈澱した赤色−青色の固体から傾瀉分離しそして固体をアセトニトリルで２回洗浄した。それからそれをイソプロパノール（800ml）と一緒に２日間撹拌しそして得られた微細な固体を濾過し、イソプロパノールで洗浄しそして真空下で乾燥して生成物（43.5ｇ、72％）を得た。
２．シアニン色素の製造
上記のカリウム塩（8.0ｇ、0.02Ｍ）および２−クロロ−１−ホルミル−３−（ヒドロキシメチレン）シクロヘキス−１−エン（1.7ｇ、0.01Ｍ）を、窒素下で無水酢酸（60ml）および酢酸（40ml）の混合物に溶解した。それからジイソプロピルエチルアミン（６ml）を加えそして溶液を２日間撹拌した。それから混合物を濾過し、溶剤を蒸発しそして残留物を、95％エタノール（500ml）で処理し、撹拌しそして濾過した。沈澱した固体を、95％エタノール（500ml）で洗浄しそして真空下40℃で乾燥した。生成物は暗緑色の固体5.3ｇ（55％）であった。λmax780nm。FAB-MSをイオン交換クロマトグラフィーによって得られた酸形態の色素に対して実施した。計算値MH+＝859（理論値＝859）。TLC（SiO2、塩化メチレン中のメタノール40％）は、高度な純度を示すそしてさらに精製は実施しなかった。
３．シアニン色素スルホフェニル誘導体の製造
DMF（20ml）中のフェノール−４−スルホン酸二水和物（Acros, 0.23ｇ、1.0mM）を、窒素下において氷浴中で撹拌しそしてDMF（10ml）中の水素化ナトリウム（Aldrich、鉱油中60％分散液、0.12ｇ、3.0mM）を加えた。10分撹拌した後に、この溶液をDMF（35ml）中の工程２からの生成物（0.83ｇ、0.9mM）に加えそして混合物を３日間撹拌した。溶液を酢酸で酸性にし、エーテル（500ml）を加えそして得られた沈澱を濾過しそしてエーテルで洗浄した。生成物は溶離剤として塩化メチレン中の40％メタノールを使用してシリカ上でクロマトグラフィー処理することによって精製した。暗緑色の溶出液を集めそして蒸発して暗青色−緑色の固体（0.39ｇ）を得た。λmax773nm。これは最小量のメタノールに溶解しそして過剰のイソプロパノールで沈澱することによって精製した。FAB-MSを酸形態の色素（イオン交換によって得られた）に対して実施した。実測値NH+＝997（理論値＝997）。
実施例  76
７個のスルホ基を含有するシアニン色素の製造
0004503103.tif 000063
Mujumdar等（Mujumdar, Mujumdar, GrantおよびWaggoner, Bioconj. Chem. 1996 7（3）356）の方法によって、2,3,3−トリメチルベンズインドーレニニウム−5,7−ジスルホネートのカリウム塩を製造した。次の工程は実施例75の方法によって実施する。
実施例  77
共面（cofacial）SiPc-PEG3400交互重合体の製造
珪素フタロシアニンジヒドロキシド（Aldrich、1.0mM）、イミダゾール（Aldrich、3.0mM）およびDMF（２ml）を、窒素下で５分撹拌する。３−イソシアネートプロピル−ジメチル−クロロシラン（Gelest、2.0mM）を加えそして混合物を48時間撹拌する。メタノール（５ml）を加え、溶液を濾過しそして溶剤を真空下で除去する。残留物を溶離剤として増加した濃度のメタノールを含有するトルエンを使用してシリカ上でクロマトグラフィー処理する。必要な生成物を含有する青色の溶出液を集めそして溶剤を真空下で蒸発する。イソプロパノール（10ml）中のこの生成物（1.0mM）を、イソプロパノール（10ml）中のPEG3400ジアミン（Shearwater Polymers, 1.0mM）の溶液と混合しそして窒素下で撹拌しながら40℃で５時間加熱する。溶剤を真空下で除去しそして必要な生成物をシリカ上のクロマトグラフィーによって単離した。
実施例  78
共面AlPc-PEG10,000化合物の製造
アルミニウムフタロシアニンヒドロキシド（Aldrich 1.0mM）、イミダゾール（Aldrich、3.0mM）およびDMF（２ml）を、窒素下で５分撹拌する。３−イソシアネートプロピル−ジメチル−クロロシラン（Gelest、2.0mM）を加えそして混合物を48時間撹拌する。メタノール（５ml）を加え、溶液を濾過しそして溶剤を真空下で除去する。残留物を溶離剤として増加した濃度のメタノールを含有するトルエンを使用してシリカ上でクロマトグラフィー処理する。必要な生成物を含有する青色の溶出液を集めそして溶剤を真空下で除去する。イソプロパノール（10ml）中のこの生成物（2.0mM）を、イソプロパノール（10ml）中のPEG10,000ジアミン（Shearwater Polymers, 1.0mM）の溶液と混合しそして窒素下で撹拌しながら40℃で５時間加熱する。溶剤を真空下で除去しそして必要な生成物をシリカ上のクロマトグラフィーによって単離した。
実施例  79
STa（syn.2）に対してチオ尿素結合した５−フルオレセイン：NC 100506
0.1Ｍ硼酸塩緩衝液（pH8.3）0.32ml中の５−フルオレセインイソチオシアネート（Molecular Probes）0.12mgおよび熱安定なＥ−コリーエンテロトキシンSTa（syn 2、Bachem）（Scott Waldman、米国特許第5,518,888号）0.24mgの溶液を、室温から約40℃の温度（外部）上昇を使用して１時間音波処理した。この溶液をさらに30分室温で栓をしたままにしておいた（sit stoppered）。この時間において、氷酢酸0.03mlを加えそして反応混合物に混合した。
生成物は出発ペプチドより長いそして５−フルオレセインイソチオシアネートより短い保持時間（RP C18 HPLC）を有す。単離および精製を同じHPLC条件を使用して実施して、黄色の生成物約0.1mgを得た。1／1の水／メタノール10mM酢酸アンモニウム中の紫外線極大：202nm（a 0.822）、277nm（a 0.096）、457nm（a 0.096）、482nm（a 0.107）。質量スペクトル（エレクトロスプレー、ネガティブ）：M-H 2359；M＋Na 2381；理論値 M 2360。コンジュゲートはSTa受容体の競合阻害剤としてポジティブに試験された。
0004503103.tif 000064
実施例  80
CT−Ｘ−線診断リポソーム中のインドシアニングリーンの処方
インドシアニングリーン（ICG）を、8.2％のレシチン（ホスファチジルコリン）、0.8％のジミリスチルホスファチジルグリセロールおよび0.1％の非イオン性重合体状界面活性剤P-79（これは、リポソームに延長された血液プール滞留を与えるように企図された）から形成されたCT−Ｘ−線診断リポソーム懸濁液（すなわち、CTP-10）に加えた。リン脂質および界面活性剤は、プローブソニケーター（Bransonic Sonifier 450、90％デューティサイクル、出力10）からの超音波エネルギーを使用して80℃の40％イオヘキソール（すなわち、Omnipaque）の溶液中で混合した。リポソームは６×１ミクロンの細孔径のフィルターを有する押出機（Avestin, Canada）を使用して製造した。得られたリポソームは、光散乱により測定して平均直径約600nmでありそしてオートクレーブ滅菌後同じ大きさが残留する。懸濁液を製造するのに十分な量のICG約７mg／mlの添加は、リポソームの懸濁液の物理的特性を変化しない。窒素雰囲気下における滅菌後、これらのICGリポソームは、室温で少なくとも６週間安定であった。
水または生理食塩水に溶解したICGに比べてリポソームのICGのスペクトル特性の評価は、リポソームの環境のインパクトを証明する。励起最大波長および発光最大波長は、均質な水溶液に比べてより低いエネルギー（すなわち、より高い波長）にシフトした。さらに量子収率の評価は、ICG水溶液に比べてリポソームのICGの量子収率の少なくとも４倍の増加を示唆した。すなわち、ICGのリポソーム処方の光画像形成コントラスト利用に対して必要な用量は、ICGの均質な水溶液からの必要な用量より有意に少ない。さらにこれらのリポソームは、３ml／kgまでのボーラス注射後のウサギにおけるCT Ｘ線検査によって十分な血管および肝臓画像形成を与えることを証明する。それ故に、これらの方法のいずれかを使用して投与後の体中の剤の分布を確認しそしてそれぞれの分析を確認することができる。
実施例  81
1,1′,3,3,3′,3′−ヘキサメチルインドトリカルボシアニンアイオダイドを含有する微粒子懸濁液の製造
ヘキサメチルインドトリカルボシアニンアイオダイド7.6mgおよび約15000ｇ／モルの分子質量を有する乳酸およびグリコール酸の共重合体0.2ｇを、塩化メチレン2.5mlに溶解する。溶液をはげしく撹拌しながら、予め121℃で15分オートクレーブ処理した２％ゼラチン溶液20mlに加える。撹拌を45分つづける。得られた懸濁液を、５mlずつ使用して20mlのガラス容器をみたしそして直接液体窒素で凍結する。それから凍結した懸濁液を凍結乾燥する。一部分を0.9％生理食塩溶液５mlで再懸濁した後、懸濁液は１ml当り約1010ヘキサメチルインドトリカルボシアニンアイオダイド−含有粒子（粒子の大きさ約１〜10μm）を含有する。
実施例  82
Ａ部：MR画像形成研究
実施例23、24、26、27および28の組成物を、次のようにしてウサギV-2（癌）腫瘍モデルにおいて画像形成した。それぞれの組成物の用量は、１kg当りGd 0.1ミリモルに調節した。すなわち、濃度はそれぞれ、102mM、124mM、49mM、131mMおよび53.5mM溶液に調節した。それぞれの実施例に対して３匹のウサギを使用した。ウサギを麻酔し、注射しそして標準磁気共鳴映像装置によって画像形成した。ｔ＝０（注射後ただちに）、15分、30分、60分および24時間の時間的間隔における軸プレ−コントラストおよびポスト−コントラスト走査を、肝臓から脚への面積の３mmスライス（５mm離れた）において実施した。相対的エンハンスメント対時間のプロットは、右脚における促進（enhancing）腫瘍からの三つの関心領域（ROI）、左脚における促進腫瘍からの三つのROIおよび筋肉からの一つのROIから誘導した。
組成物はMagnevist▲Ｒ▼対照に比較して、顕著な画像エンハンスメントおよび非常に改善された吸収を示す。
Ｂ部：ソノダイナミック治療
超音波のソノダイナミック的に有効な量を、Ａ部における動物に投与して、Ａ部において画像形成した腫瘍の細胞変性変化をおこすことができる。
実施例  83
クロロアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネートの存在下における試験管中での細胞致死（Killing）の強化
試験管中における音波処理操作
HL-60ヒト末梢血液前骨髄球性白血病細胞（American Type Culture Collection, Rockville, MD）を、５％CO2／空気雰囲気中において、10％のウシ胎仔血清で強化したDMEMおよびIMEMの１：１の混合物中で37℃で増殖した。使用前に細胞を遠心分離（1500rpmで５分）し、リン酸緩衝化生理食塩水（PBS）で洗浄しそしてそれから、PBS中に再懸濁した。容量は細胞５〜10×105／mlを含有する細胞懸濁液を与えるように調節する。これらは使用するまで破砕した氷中で貯蔵した。
Trypan Blue色素で染色することによって生存率を評価した。懸濁液50μlを、Trypan Blue溶液（0.4％、Sigma）50μlと混合しそして細胞濃度をノイバウエル型の血球計算板を使用して計算した。４または５個の大きな正方形を計算した。青色（死亡した）の細胞を染色されない（生存している）細胞から別個に計算しそして結果を平均した。２×104を乗じた生存細胞の平均数は、１ml当りの細胞数を与えた。細胞生存率は、細胞の全体の数に対する生存細胞の比から誘導された。＞90％の生存率を有する培養物のみを使用した。
細胞懸濁液のアリコート1.5mlを、10×75mlの使い捨てガラス培養管（予め空気を送風してすべての微粉粒子を除去した）に移しそして化合物がそのソノダイナミック可能性について試験されるのでない限りPBS 150μlでうすめた。後者の場合においては、PBSの代りに化合物のPBS溶液150μlを加えた。一般に、化合物−含有音波処理溶液は、１ml当り化合物０〜300μgを含有する。これらの管を音波処理浴（Branson Model 1210、周波数47KHz）に中心的にしっかり固定したオーバーヘッド撹拌器に挿入することによって、長軸の周りに回転（35±５回転／分）した。懸濁液はまた小さなPTFE-被覆した撹拌棒によって磁気的に撹拌した。音波処理浴に供給される電圧は、可変変圧器によって調節することができる。浴は蒸溜水でマークまでみたしそして使用前に音波処理によって脱ガスした。上記のガラス管を、管中の液体レベルが浴中のレベルの1／4インチ以下にあるようにして、浴に浸漬した。音波処理は周囲温度で実施した。そして操作中、細胞懸濁液温度の有意な上昇はなかった。
音波を当てる（insonation）に際しては、電圧を必要な値にセットし、動力を作動させそして試料を必要な量の時間（秒）暴露した。生存率を再びTrypan Blueで評価し、それから試料を2000rpmで５分遠心分離しそして細胞を含有していない上澄液の試料を、乳酸脱水素酵素（LDH）測定にかけた。膜が音波処理法により破壊された細胞（死亡した細胞）はLDHをPBS溶液中に放出するが、生存細胞はLDHを放出しなかった。LDHはBeckman Synchron CX5CE装置を使用した標準操作により測定し、結果はIU／ｌで測定しそして試料中の細胞死の定量的測定値を与えた。
92％の生存率のPBS １ml当り531000の細胞を含有するHL-60細胞懸濁液を使用した。試料に上述したように、65ボルトにセットされたソニケーター電圧で120秒音波を当てた（insonated）。クロロアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート（148ナノモル／ml）を加えそして試料を60および120秒音波を当てた。クロロアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネートの不存在下（ダイヤモンド形のそして破線の平均線）および存在下（正方形そして実線の平均線）におけるHL-60細胞の懸濁液に対する超音波の平均効果を比較した結果は、図１に示される通りである。
細胞死は、上述したようなLDH測定法を使用して測定した。全細胞死およびLDHレベルの間のピアソン（0.8）およびスピアマン（0.68）相関係数を評価しそして有意性についてはｐ＜0.05を使用してＯに対するこれらの同等性について試験した。グループ平均は、全体偽似した正の誤差率（overall false positive error rate）において0.05を使用して、1-Way Anova Model次いでTukey Honest Significant Difference（HSD）検定を使用して比較した。
実施例  84
ソノダイナミック剤および二次調和インポーズ（second harmonic imposition）を有する集束超音波の相乗相互作用による生体内における腫瘍細胞の致死
ソノダイナミック治療剤のソノダイナミック的に有効な用量を、腫瘍を有するマウスの尾部静脈に注射する。剤を腫瘍に局在することを可能にする十分な時間の経過後に、マウスを麻酔しそして37℃の脱ガスした水の浴中に支持する。それから腫瘍に腫瘍細胞を死滅させるのに適当な強度において十分な時間、二次調和スーパーインポーズ（superimposition）を有する集束超音波のソノダイナミック的に有効な量を当てる。
実施例  85
ソノダイナミック治療剤および二次調和スーパーインポーズを有する集束超音波の相乗相互作用による生体内における腫瘍細胞の致死
実施例１〜７、９、11、12、14〜65および67〜81のソノダイナミック治療化合物を使用して、実施例84の操作を使用した。
【図１】
0004503103.tif 000065
【図２ａ】
0004503103.tif 000066
【図２ｂ】
0004503103.tif 000067