(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵素処理或いは非酵素処理した酵母から可溶性菌体内成分を除去した水不溶性の酵母細胞壁画分であって乾燥物中の食物繊維含量が６０重量％以上である該酵母細胞壁画分を有効成分として含む、保湿、美白、及び活性酸素原因の皮膚状態(但し、アトピー性皮膚炎を除く)の改善からなる群から選択される皮膚状態改善のための経口医薬組成物。
【請求項２】
酵母エキス抽出残渣を、水洗浄処理、或いは高圧処理及び水洗浄処理を施すことにより得られる水不溶性の酵母細胞壁画分を有効成分とすることを特徴とする請求項１に記載の経口医薬組成物。
【請求項３】
水不溶性の酵母細胞壁画分の乾燥物中の食物繊維含量が８０重量％以上であることを特徴とする請求項１又は２に記載の経口医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酵母細胞壁画分を有効成分とする皮膚状態改善用組成物、更に詳しくは、酵素処理した酵母、又は非酵素的に処理した酵母から可溶性菌体内成分を除去した酵母細胞壁画分を有効成分とする皮膚状態改善組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
美しい肌、即ち健全な皮膚状態は誰しもが切望するものである。しかし、加齢や紫外線、環境の変化等によって、シミやシワ、肌荒れ等様々な問題が生じる。これらの問題を解決するために、化粧品や内服薬、食品などの形態で、多くの技術が開発されてきた。それらの技術は、例えば、皮膚細胞の内部で減少した成分を一時的に補給して健康な肌にするものであったり、肌の表面を一時的に被覆して健康な肌にするものであり、かかる皮膚改善剤を使用することによって、肌を一時的に問題のない健康な状態にすることが可能であった。
【０００３】
例えば、皮膚に塗布することにより、美白効果を期待するものとして、プロアントシアニジンを有効成分とする美白化粧品（特許文献１）や美白効果ならびに皮膚の弾力回復効果を期待する機能性成分としてツバキ科スチマ属の植物抽出物（特許文献２）がある。
【０００４】
また、保湿作用や皮膚用基剤などの例として、特許文献３には、微生物由来のβグルカンを含有する皮膚化粧料が記載されている。さらに、特許文献４には、分子量、粘度を規定した微生物由来のβグルカンを含有する皮膚用基剤が記載されている。特許文献５には、酵母細胞壁水溶性画分を含有させた化粧水の使用で、保湿効果があることが記載されている。特許文献６には、マンノースからなる保湿剤、化粧料および皮膚外用剤が記載されている。
【０００５】
一方で食品としては、機能素材として、アスコルビン酸、杜仲、人参、ハトムギエキス、セラミド、コラーゲン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ＤＮＡなどを配合したものが開発されており、例えばコラーゲン蛋白、もしくはその加水分解物を必須成分とした新陳代謝促進剤（特許文献７）や、セラミドを有効成分として含有する健康食品（特許文献８）などが挙げられる。
【０００６】
また近年、肌荒れや皮膚の老化の原因として、活性酸素が注目されている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド（即ち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン、過酸化水素、一重項酸素、ヒドロキシラジカル等がある。）として知られている。これら活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須でありウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしているが、活性酸素の過剰な生成は生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。例えば、活性酸素は、コラーゲン等の生体組織を分解、変性あるいは架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされるこれらの障害が、シワ形成や弾力性低下等の皮膚老化の原因になるものと考えられている。
【０００７】
生体内において、酸素を基に最初に生成されるラジカルはスーパーオキサイドであり、ヒドロキシラジカル等の他のラジカルはスーパーオキサイドを経て生成される。細胞内のスーパーオキサイドは、細胞内で産生されたスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）によって過酸化水素に変換されるが、ＳＯＤ量は加齢に伴って減少し、ＳＯＤ量の減少によってスーパーオキサイドの細胞内濃度が上昇し、スーパーオキサイドが生体に対して障害を及ぼすようになる。このため、ＳＯＤ量の減少を補うために、ＳＯＤ様作用剤としてＳＯＤそのものやトコフェロール類、オウゴン抽出物などが使用されている。また、ある重合度のマンノオリゴ糖を含有する過酸化脂質上昇抑制組成物も報告されている（特許文献９）。
【０００８】
他方、酵母から可溶性菌体内成分を除去した酵母細胞壁画分自体は、既に公知である。該酵母細胞壁画分は、その製造法にしたがって各種のものが知られており、その製造法に起因して酵母細胞壁画分に食物繊維含量やタンパク質含量等、種々の組成比のものが知られている（特許文献１０、特許文献１１）。また、これらの酵母細胞壁画分は、種々の生理活性機能が知られており、例えば、便秘の予防及び／又はその症状改善、アレルギー性疾患の予防及び／又はその症状改善等（特許文献１０）、離水防止作用（特許文献１２）、腎機能低下の予防および改善（特許文献１３）、ミネラル吸収促進および骨粗しょう症の予防と改善（特許文献１４）の種々の機能が知られている。しかしながら、該酵母細胞壁画分を経口摂取しての皮膚状態改善に対する作用は知られていない。
【０００９】
【特許文献１】特開平２−１３４３０９号公報
【特許文献２】特開平９−９５４２０号公報
【特許文献３】特開２００５−１５３４８
【特許文献４】特開２００５−１６２６６３
【特許文献５】特開２００５−１８５１８７
【特許文献６】特開２００１−１６３７２０
【特許文献７】特開平７−２７８０１２号公報
【特許文献８】特開平１１−１１３５３０号公報
【特許文献９】特開２００２−２６２８２８
【特許文献１０】特開２００１−５５３３８
【特許文献１１】特開２００２−１５３２６３
【特許文献１２】特許第３５０２３４１号
【特許文献１３】特開２００４−１６１６１８
【特許文献１４】特開２００４−２９２３８２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
このように、肌の保湿、美白を目的にした技術開発は多く行なわれているが、その効果が十分に発揮されない場合が多く、有効成分の配合量を増加する等の手段により解決を図っていたが、コスト及び製剤中での安定性の面で問題が生じるため、その効果の改善が強く求められていた。例えば、特許文献３、４、５、６は有効成分を水溶性とする外用剤であり、このように皮膚に塗布する化粧品の場合、発汗作用のため効果成分が経時的に落ちてしまうため効果が持続できず、肌の老化防止の効果が不十分であったり、皮膚に塗った部分のみ局部的にしか効果が出ないなどの問題がある。
【００１１】
このような外的影響が原因となる問題を解決するために、経口で摂取する肌の改善を目的とした食品も開発されている。しかしながら、これらの場合、経口摂取するために起こる有効成分によるアレルギー発症の可能性、さらには消化酵素などの作用に不可欠な金属イオンへの影響などによる不測の副作用などが懸念されている。さらには、胃酸、消化酵素による有効成分の分解、改質、腸管からの吸収消化率の低下などから十分な肌への効果は期待できないといった問題など、経口摂取のために起こり得る問題が指摘されている。
【００１２】
現在まで開発されている塗布或いは摂取可能な肌の改善を期待する製品は、十分な機能、安全性を持ち合わせていないということが指摘されているわけである。
【００１３】
また、活性酸素消去物質として、生体内の酵素であるＳＯＤは、その精製が困難で熱に不安定で失活し易いため著しく高価なものであり、ＳＯＤと同様に活性酸素消去作用を示し安定性が高く安価に得られるＳＯＤの代用物質（ＳＯＤ様活性物質）の出現が望まれている。
【００１４】
そこで、本発明は、安全性の高い天然物の中から、肌の保湿作用および／または美白作用（色素沈着抑制作用）および／またはＳＯＤ様活性を有する活性酸素消去作用を有する物質を見出し、それを利用した保湿組成物および美白組成物および活性酸素消去組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、安全で、しかも、優れた皮膚状態改善効果を発揮する天然物由来の皮膚状態改善作用をもつ物質について鋭意探索する中で、酵素処理或いは非酵素処理した酵母から可溶性菌体内成分を除去した酵母細胞壁画分が、意外にもそれを摂取することによって、皮膚機能に対して優れた改善効果を発揮し、しかも、安全で、副作用がない皮膚状態改善組成物として用いることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１６】
本発明の皮膚状態改善組成物として用いる酵母細胞壁画分としては、酵母エキス抽出残渣を、水洗浄処理、或いは高圧処理及び水洗浄処理を施すことにより得られる酵母細胞壁画分を、本発明において用いられる特に好ましい酵母細胞壁画分として挙げることができる。
【００１７】
本発明の皮膚状態改善用組成物の有効成分として用いられる酵母細胞壁画分は、酵母から可溶性菌体内成分を除去し、精製して、酵母細胞壁画分の乾燥物中の食物繊維含量が６０重量％以上とすることが好ましい。さらに好ましくは６５重量％以上、最も好ましくは８０重量％以上である。
【００１８】
本発明の酵母細胞壁画分からなる皮膚状態改善用組成物は、天然物由来で、安全で、副作用がなく、生体内に投与しても安全に使用することができ、かかる投与により皮膚状態改善効果を得ることができる。また、本発明の皮膚状態改善組成物は、医薬品、飲食品、飼料等の広い範囲に適用して、優れた皮膚状態改善効果を得ることができる。
【００１９】
（発明の概要）
したがって、本発明は、要約すると、以下の特徴を有する。
（１）酵素処理或いは非酵素処理した酵母から可溶性菌体内成分を除去した酵母細胞壁画分を有効成分とする皮膚状態改善用組成物。
（２）酵母エキス抽出残渣を、水洗浄処理、或いは高圧処理及び水洗浄処理を施すことにより得られる酵母細胞壁画分を有効成分とすることを特徴とする（１）に記載の組成物。
（３）酵母細胞壁画分の乾燥物中の食物繊維含量が６０重量％以上であることを特徴とする（１）または（２）に記載の組成物。
（４）皮膚状態改善用組成物が、生体に摂取されて適用されることを特徴とする（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）皮膚状態改善が保湿作用であることを特徴とする（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物。
（６）皮膚状態改善が美白作用であることを特徴とする（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物。
（７）皮膚状態改善が活性酸素消去作用であることを特徴とする（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物。
（８）医薬品、飲食品または飼料であることを特徴とする（１）〜（７）のいずれかに記載の組成物。
【００２０】
（用語の定義）
本明細書中で使用する用語は、以下の定義を有する。
「酵母細胞壁画分」は、酵素処理或いは非酵素処理した酵母菌体から水又は極性溶剤に可溶性の菌体内成分（例えば蛋白質、アミノ酸、核酸など）を除去することにより得られる酵母細胞壁を主成分とする分画物質を意味する。さらに具体的には、酵母細胞壁画分は、従来公知の酵母エキス製造の際に排出される酵母エキス抽出残渣を水洗浄処理するか、或いは高圧処理および水洗浄処理することによって得ることができる（後述の実施例１および２参照のこと）。酵母細胞壁画分の特徴の１つとして、乾燥物中の食物繊維含量が６０重量％以上、好ましくは６５重量％以上、最も好ましくは８０重量％以上である。
【００２１】
「高圧処理」は、酵母エキス抽出残渣から可溶性菌体内成分などの夾雑物を効率的除去するための処理であり、高い圧力下でのホモジナイザー、フレンチプレス、エクストルーダーなどによる処理をいう。
【００２２】
「食物繊維」は、ヒトの消化酵素で消化されにくい繊維質成分をいう。本発明では、特に水不溶性食物繊維を指す。
【００２３】
「皮膚状態」は、哺乳動物（好ましくはヒト）の非健康的な皮膚状態、例えば皮膚の乾燥による肌荒れ、カサつき、張り、シワなど、日焼けなどによる色素沈着、しみ、そばかすなど、活性酸素が原因の皮膚病（アトピー性皮膚炎を除く）などを意味する。
【００２４】
「保湿作用」は、皮膚表面からの水分の蒸散を抑制し、水分を保持する作用をいう。
【００２５】
「美白作用」は、メラニンの産生を抑制し、したがって色素沈着を抑制する作用をいう。
【００２６】
「活性酸素消去作用」は、生体内での活性酸素（「スーパーオキサイド」ともいう）の低減または生成阻害作用をいう。
【００２７】
「摂取」は、口や食道を介して飲食品や薬剤を消化管に送り込むことをいい、一般に経口摂取または経口投与を指す。
【発明の効果】
【００２８】
本発明の組成物は、保湿作用、美白作用および活性酸素消去作用を含む皮膚状態改善効果を有するため、皮膚状態改善用の医薬品、飲食品または飼料として使用することができる。その有効成分である酵母細胞壁画分は、天然物由来で、安全で、副作用がなく、生体内に投与しても安全に使用することができるうえに、該有効成分の皮膚状態改善効果は、実際、後述の実施例でヒトおよびラットにおいて有意な効果として証明されている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明は、酵素処理或いは非酵素処理した酵母から可溶性菌体内成分を除去した酵母細胞壁画分を有効成分とする皮膚状態改善組成物からなる。
【００３０】
該酵母細胞壁画分としては、酵母エキス抽出残渣を、水洗浄処理、或いは高圧処理及び水洗浄処理を施すことにより得られる酵母細胞壁画分を特に好ましい酵母細胞壁画分として挙げることができる。本発明の皮膚状態改善組成物の有効成分として用いられる酵母細胞壁画分は、優れた皮膚状態改善効果を発揮するために、酵母から可溶性菌体内成分を除去し、精製して、酵母細胞壁画分の乾燥物中の食物繊維含量が６０重量％以上とすることが好ましい。さらに好ましくは６５重量％以上、最も好ましくは８０重量％以上である。
【００３１】
以下に本発明をさらに具体的に説明する。
【００３２】
（原料酵母）
本発明に用いられる酵母細胞壁画分の原料となる酵母としては、分類学上酵母に属し、可食性の酵母であれば特に制限はなく、例えばビール醸造工程の副生成物であるビール酵母の他、ワイン酵母、パン酵母、トルラ酵母、アルコール酵母、清酒用酵母などを用いることができ、より具体的には、ビール酵母、パン酵母の属するサッカロマイセス属のサッカロマイセス・セレビッシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）あるいはサッカロマイセス・パストリアヌス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ）、その他サッカロマイセス・ルーキシ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉ）、サッカロマイセス・カールスバーゲンシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）、サッカロマイセス・ポンベ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、またメタノール資化性酵母であるキャンディダ属のキャンディダ・ウティリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ）、キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、キャンディダ・リポリティカ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、キャンディダ・フレーベリ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｆｌａｖｅｒｉ）、キャンディダ・ボイジニィ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｂｏｉｄｉｎｉｉ）等を、さらにトルラ属のロドトルラ・ミニュータ（Ｒｈｏｄｏｔｒｕｒａ  ｍｉｎｕｔａ）等を挙げることができる。
【００３３】
そして、これらの酵母は単独あるいは組み合わせて使用することができる。酵母としては生酵母を用いることが好ましいが、乾燥酵母等の生酵母以外の形態の酵母を用いる場合であっても、例えば水中等に懸濁して生酵母同様に処理することもできる。さらに、使用する酵母の形状や大きさに特に制限はなく、その大きさは１〜２０μｍの範囲のものが好ましい。また、上記酵母エキス抽出残渣としては、従来公知の方法（例えば、特開平８−５６６１１号公報、特開平９−５６３６１号公報、特開平１１−３３２５１１号公報など）で得られる酵母エキス抽出残渣であれば、特に制限されることなく使用することができる。
【００３４】
（酵母細胞壁画分の調製）
本発明において有効成分として用いられる酵母細胞壁画分は、酵素処理或いは非酵素処理した酵母菌体から、例えば蛋白質、アミノ酸、核酸などの水又は極性溶剤に可溶性菌体内成分を除去したものであり、通常、酵素処理により酵母菌体を溶菌して可溶性菌体内成分を菌体外に分離・除去することにより調製することができる。かかる酵素処理方法としては、酵母菌体の酵素を使用するいわゆる自己消化法、外部からプロテアーゼ、ヌクレアーゼ、グルカナーゼ、エステラーゼなどの酵素を添加する酵素添加法、それらを併用する方法などを例示することができる。かかる酵素処理酵母菌体から、可溶性菌体内成分を遠心分離などの除去処理を施すことによって酵母細胞壁画分を得ることができる。更に、好ましくは、得られた酵母細胞壁画分に高圧処理を施し、水洗浄を行うことによって、より純度の高い酵母細胞壁画分を得ることもできる。
【００３５】
上記例示の酵素処理方法は、いずれも可溶性菌体内成分を酵母エキスとして製造する際に用いる方法であることからして、製造コストの点を考慮すると、酵母細胞壁画分として、酵母エキス製造における副生成物である酵母エキス抽出残渣を用いることが有利である。
【００３６】
酵母エキス抽出残渣は、特開平８−５６６１１号公報で示されるような、加熱失活させた酵母の水懸濁液を酵素で分解処理した後、キトサンまたはキトサンとポリアクリル酸塩を添加して水不溶物の除去を行い、酵母エキス水溶液を得ることを特徴とする酵母エキスの製造方法や、特開平９−５６３６１号公報で示されるような、高圧ホモジナイザー処理した酵母菌体懸濁液を中性〜弱アルカリ性（例えばｐＨ約９以下）に調整し、該酵母菌体懸濁液にエンド型プロテアーゼを含む酵素剤を添加し、自己消化させることを特徴とする酵母エキスの製造方法や、特開平１１−３３２５１１号公報で示されるような、原料となる酵母菌体を加温処理した後に、核酸分解酵素の含まれる条件下で、かつ５'−ヌクレオチドを分解する酵素活性が抑制される条件下で菌体成分を消化し抽出することを特徴とする、酵母エキスの製造法などの技術により得ることができる。また、これらの技術以外にも、公知の酵母エキスの製造における酵母エキス抽出残渣を有効に用いることができる。
【００３７】
また、酵母細胞壁画分として、水洗浄処理、或いは高圧処理及び水洗浄処理を施すことにより得られる酵母細胞壁画分を用いることが、より優れた皮膚状態改善効果を奏するばかりでなく、自己消化による特有の異味異臭がなく、経口摂取に適している点で好ましい。
【００３８】
高圧処理は、可溶性菌体内成分が効率的に除去できる方法であれば、どのような方法でもよく、例えば、高圧ホモジナイザー処理、フレンチプレス処理、エクストルーダー処理等が挙げられる。高圧処理の中でも夾雑物の除去効率の点で高圧ホモジナイザー処理が最も好ましい。かかる酵母エキス抽出残渣の高圧処理としては、例えば高圧ホモジナイザー処理の場合、好ましくは１００〜１５００ｋｇ／ｃｍ2、より好ましくは５００〜１５００ｋｇ／ｃｍ2の圧力下での高圧処理を挙げることができる。また、かかる酵母エキス抽出残渣の高圧処理は、夾雑物の除去効果をさらに高めるために、複数回実施したり、或いは種類の異なる上記の各種高圧処理を２種類または３種類適宜組み合わせて実施することもできる。
【００３９】
酵母エキス抽出残渣の高圧処理に続いて行われる水洗浄処理の方法としては、可溶性菌体内成分と、水不溶性の酵母細胞壁画分を分離できる方法であればどのような方法でもよく、遠心分離処理、濾過処理等の方法を挙げることができるが、作業効率を考慮すると遠心分離処理の方が好ましい。水洗浄に用いられる水としては通常の上水道水を用いることができるが、夾雑物の除去効率を低下させない範囲で、酸性水、アルカリ性水、アルコール（エタノール）含有水を用いることもできる。また、洗浄回数については、夾雑物の除去の程度・度合いにより適宜選択することができる。
【００４０】
高圧処理、水洗浄処理の後、必要に応じて、有機溶剤処理、酵素処理、酸、アルカリ処理等を行い、より純度の高い酵母細胞壁画分とすることもできる。
【００４１】
上記の方法によって得られた酵母細胞壁画分はさらに、乾燥に供することができる。乾燥は、例えば凍結乾燥、噴霧乾燥、自然乾燥、熱風乾燥等のいずれも使用できる。
【００４２】
本発明の酵母細胞壁画分は、乾燥物あたりの食物繊維含量が、通常６０重量％以上、好ましくは６５重量％以上、さらに好ましくは８０重量％以上のものとして作製される。
【００４３】
（食物繊維含量の測定）
上記の食物繊維含量は、以下に示す酵素−重量法により測定して得られた値である。
即ち、５００ｍｌ容トールビーカー２個に採取量の差が２０ｍｇ以内であるように試料を１ｇずつ分取し（Ｓ）、０．０８ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）を５０ｍｌずつ、及びターマミル（ＮＯＶＯ ＮＯＲＤＩＳＫ, １２０Ｌ）を０．１ｍｌずつ添加し、沸騰水中で約５分間隔で振とうしながら３０分間加熱する。放冷後、０．２７５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム溶液１０ｍｌでｐＨ７．５±０．１に調整し、リン酸緩衝液に５０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させたプロテアーゼ溶液（ＳＩＧＭＡ「Ｐ−５３８０」）を０．１ｍｌずつ添加した後、６０℃、３０分間振とうする。放冷後、０．３２５ｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液１０ｍｌでｐＨ４．３±０．３に調整し、アミログルコシダーゼ溶液（ＳＩＧＭＡ「Ａ−９９１３」）を０．１ｍｌずつ添加した後、６０℃、３０分間振とうする。その後、６０℃に加温した９５％エタノールを４倍容ずつ加え、室温で１時間放置後、あらかじめ約１．１ｇのセライトでろ過層を形成させてある２Ｇ２のガラスフィルターを用い、吸引ろ過する。残留物を７８％エタノール２０ｍｌで３回、次いで９５％エタノール１０ｍｌで２回以上、最後にアセトン１０ｍｌで２回以上洗浄し、１０５℃で一晩乾燥させる。恒量測定（Ｒ１、Ｒ２）後、一つは５２５℃で５時間灰化させ、灰分含有率（Ａ）を算出する。もう一つはケルダール法（係数６．２５）により蛋白質含有率（ｐ）を算出する。試料を添加せず同様の方法により処理した各値をブランク値とする。それぞれの値をもとに以下の計算式によって食物繊維含量を算出する。
【００４４】
食物繊維（重量％）＝（Ｒ×（１−（Ｐ＋Ａ）／１００−Ｂ）／Ｓ×１００
Ｒ：残留物の重量（平均値、（Ｒ１＋Ｒ２）／２、ｍｇ）
Ｐ：残留物中の蛋白含有率（％）
Ａ：残留物中の灰分含有率（％）
Ｓ：試料採取量（平均値、ｍｇ）
Ｂ：ブランク（ｍｇ）
Ｂ（ｍｇ）＝ｒ×（１−（ｐ＋ａ）／１００）
ｒ：ブランク残留物の重量（平均値、ｍｇ）
ｐ：ブランク残留物中の蛋白含有率（％）
ａ：ブランク残留物中の灰分含有率（％）
【００４５】
また、蛋白質含量はケルダール法で測定した値であり、例えば文献「食品分析法、日本食品工業学会食品分析法編集委員会編、ｐ１０１」記載の方法に準じて行うことができる。
【００４６】
（皮膚状態改善組成物の適用）
本発明の組成物は、皮膚（または、肌）表面の水分蒸散量を抑制する効果を有しているため、肌の保湿作用を有しており、また、水分を保持する効果を有している。従って、該組成物を摂取することにより、肌の乾燥状態を改善（ドライスキンの改善）したり、肌の乾燥を予防（ドライスキンの予防）したり、肌の角層バリア機能を向上・改善したりすることができる。このような優れた作用のために、肌に張りやツヤを付与し、シワやタルミの改善や、乾燥による肌荒れの防止や改善も期待できる。また、本発明の組成物は、保湿効果を有しているため、肌に潤いを与える、肌をしっとりさせる、肌を柔らかくさせる、肌をすべすべさせる、肌をつやつやさせるなどの効果を発揮することが期待される。
【００４７】
それゆえ、本発明の組成物は、その保湿作用や肌の角層バリア機能の改善作用のために、肌が乾燥しているヒト、肌が乾燥しがちのヒト、肌が乾燥しやすいヒト、敏感肌のヒト、肌のカサつきが気になるヒト、頭皮がカサつくヒトなどに好ましく適用することができる。
【００４８】
さらに、本発明の組成物を摂取することにより、老人性乾皮症、小児乾燥性皮膚など、皮膚の乾燥に起因（関与）する種々の症状や疾患を予防または緩和することができる。
【００４９】
また、本発明の組成物は、メラニンの産生を抑制する効果を有している。従って、該組成物を摂取することにより、日焼け後の色素沈着・シミ・そばかす・肝斑等の予防および改善作用を有して、皮膚の美白に優れた効果を発揮することが期待される。
【００５０】
さらにまた、本発明の組成物は、活性酸素消去作用を有しており、活性酸素（Ｏ２−）が原因となる皮膚病（しみ、そばかす、肌荒れ、冷え症、しわ等）等の予防・治療にとどまらず、活性酸素（Ｏ２−）が原因となる各種の病気、例えば、血流障害による病気（心筋梗塞、脳卒中、高血圧、生理痛、肩こり、神経痛、腰痛、二日酔い等）、成人病・内科疾患（癌、肝炎、糖尿病等）等の治療、改善、予防等を目的として、医薬品、健康食品などの飲食品、食品添加物等の分野に於いて利用可能である。
【００５１】
本発明の組成物はさらに、家畜の飼料やペットフードとして使用することも可能である。
これらは、上記組成物の例と同様に、飼料やペットフードに用いられている形態であればいずれの形態であってもよく、通常飼料やペットフードに含有される添加剤や食品素材と組み合わせて、常法に従って種々の形態に調製することができる。もちろん、本発明の組成物をそのまま用いて飼料又はペットフードとしてもよい。また、本発明組成物の含有量、飼料やペットフードの摂取量等については、本発明の効果を発揮できるようなものであれば特に限定はされず、その形態、家畜やペットの種類等により適宜選択されるものであり、例えば、上記食品の場合と同様とすることができる。さらに、家畜の飼料やペットフードとして利用する場合にも、皮膚（肌）の水分蒸散量を抑制する効果や、それに伴う、肌の乾燥状態改善など、上記したような肌の状態の改善を期待して摂取させることができる。
【００５２】
本発明の組成物は、有効成分としての酵母細胞壁画分を単独で、或いは酵母細胞壁画分と他の皮膚状態改善成分若しくは皮膚状態改善素材との混合物として用いることができる。他の皮膚状態改善成分や皮膚状態改善素材の例は、コラーゲン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、プロアントシアニジン、トコフェノール、アスコルビン酸などである。
【００５３】
本発明の組成物は、医薬品、健康食品を含む飲食品、飼料等それぞれの適用対象に応じて製剤化することができる。或いは、製剤化したものを食品や飼料等に配合または混合して用いることもできる。本発明の組成物は、例えば、肌の乾燥状態の予防又は改善剤、肌の保湿用食品、肌の角層バリア機能改善剤、抗酸化剤、抗老化剤、美容用飲食品、皮膚化粧料、美白食品として使用することができる。
【００５４】
製剤形態としては、固体状（固形状、粉末状、顆粒状、その他）、ペースト状、ゲル状、液状、或いは混濁状（若しくは、懸濁状）のいずれの形態でもよく、該製剤の製造に際しては、担体、賦形剤、希釈剤、滑沢剤、保存剤、崩壊剤、懸濁剤、着色剤、風味剤、甘味剤等、固体製剤の製造に通常用いられる補助剤を適宜使用することができる。
【００５５】
製剤の例は、各種の内用製剤類（動物用に使用する製剤も含む）、具体的には、アンプル、カプセル、丸剤、錠剤、粉末、顆粒、固形、液体、ゲル又は気泡の1)医薬品類、2)医薬部外品類、等が挙げられる。
【００５６】
担体および賦形剤の例は、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどを含む。
【００５７】
希釈剤の例は、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどである。
滑沢剤の例は、ステアリン酸マグネシウムなどである。
崩壊剤の例は、繊維素グリコール酸カルシウムなどである。
懸濁剤の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールのようなグリコール類、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート80（商標）などである。
保存剤の例は、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、メチルパラベン、エチルパラベン、ソルビン酸ナトリウムなどである。
風味剤の例は、ペパーミントなどである。
甘味剤の例は、蔗糖、人工甘味料、例えばアスパルテーム（商標）などである。
錠剤や丸剤は、必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣や、胃溶性又は腸溶性物質のフィルムで被覆してもよいし、２つ以上の層で被覆してもよい。
カプセル剤は、軟質または硬質ゼラチンを被覆剤として使用しうる。
投与方法は、経口投与が好ましい。
【００５８】
さらにまた、本発明の皮膚状態改善組成物の有効成分である酵母細胞壁画分を飲食品に添加・配合して用いる場合、該飲食品素材としては、例えば、ドリンクヨーグルト、果汁ジュース、野菜ジュース、果汁と野菜の混合ジュース、牛乳、豆乳、酒類、コーヒー、紅茶、緑茶、煎茶、玉露、ウーロン茶、ウコン茶、プーアル茶、ジャスミン茶、スポーツ飲料、ミネラルウォーター、みそ汁、スープ等の各種飲料や、チーズ、バター、ヨーグルト、ヨーグルトゼリー等乳製品や、プリン、ビスケット、クッキー、ケーキ、ドーナツ、ゼリーなどの洋菓子、煎餅などの焼き菓子、羊羹、大福、おはぎ、カステラなどの和菓子、冷菓等の菓子類や、ガム、キャンデー等の口腔用組成物や、食パン、フランスパン、ロールパン等のパン類や、うどん、そば等の麺類や、かまぼこ、ちくわ、ハム、魚肉ソーセージ等の加工水産練り製品や、ハム、ソーセージ、ハンバーグ等の蓄肉製品や、みそ、しょう油、ソース、ドレッシング、マヨネーズ、ハチミツ、甘味料等の調味料や、カレー粉、からし粉、コショウ粉等の香辛料や、たこ焼き、お好み焼き、焼きそば等の鉄板焼き食品や、豆腐、こんにゃく、その他ジャム、マーマレード、チョコレートスプレッド、漬物、佃煮、ふりかけ、餃子、ピザ、サンドイッチ、ハンバーガー、コロッケ、サラダ等の各種惣菜等の各種食品を挙げることができる。
【００５９】
その他、美容食品・健康食品（肌荒れ改善、肌質改善）等の一般的な飲食品への使用が挙げられる。
【００６０】
本発明の組成物は、形態に応じて、通常の食品に含有されるような添加剤および食品原料を配合することが好ましい。添加剤としては、例えば、甘味剤、着色剤、抗酸化剤、ビタミン類、香料等を、食品形態に応じて適宜選択できる。
【００６１】
本発明の組成物は、任意の食品を調製するための食品素材として用いることもできる。本発明の組成物を、食品素材として用いる場合は、既に調製された食品、例えば、市販の飲料等に添加してもよい。
【００６２】
本発明の組成物中の酵母細胞壁画分の含量は、０．１〜１００重量％、好ましくは１〜３０重量％であるが、この範囲に限定されないものとする。また、投与または摂取量については、その食品の形態、摂取者の年齢、性別その他の条件等により適宜選択されるが、通常本発明の組成物の有効成分である酵母細胞壁画分の量が、乾燥重量として１日体重１ｋｇ当たり１〜１０００ｍｇ程度、好ましくは１０〜２００ｍｇ程度とするのがよく、１日に１回又は数回に分けて投与または摂取することができる。
【００６３】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。なお、特に断らない限り、実施例中に示された酵母菌体重量は全て実状態での乾燥重量（ドライウエイト）である。
【実施例１】
【００６４】
［酵母細胞壁画分１：ＹＣＷ（Yeast Cell Wall）の調製］
ビール醸造工程より副生成物として得られる、発酵後ビール酵母スラリーの重量を正確に量った後、固形分が１０重量％になるように加水した。水酸化ナトリウムをｐＨ９となるまで添加し、遠心分離を行い、沈殿画分に加水して洗浄後、再度遠心分離を行った。固形分が１０重量％になるように加水した懸濁物を冷却しながら高圧ホモジナイザー処理を行った後、５０℃、３時間以上の反応条件で自己消化させ、さらにプロテアーゼを添加し５０℃で一晩酵素反応を行った後、遠心分離を行い可溶性菌体成分を除去した。得られた酵母エキス抽出残渣の固形分が１０重量％になるように加水して洗浄後に遠心分離を行う操作を２度繰り返し、ここで得られる沈殿画分を凍結乾燥したものを「酵母細胞壁画分１：ＹＣＷ凍結乾燥物」とし、その成分分析を行った。水分は試料を常圧下１０５℃で５時間加熱する常圧加熱乾燥法（「食品分析法、日本食品工業学会食品分析法編集委員会編、ｐ４」参照）により、タンパク質は前述のケルダール法により、灰分は前述の直接灰化法により、食物繊維は前述の酵素−重量法によりそれぞれ測定した。測定は３回行い、その平均値を重量％で示した。成分分析値を表１に示す。
【００６５】
【表１】
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【実施例２】
【００６６】
［酵母細胞壁画分２：ＢＹＣ（Brewer's Yeast Cell）の調製］
ビール醸造工程より副生成物として得られる、発酵後ビール酵母スラリーの重量を正確に量った後、固形分が１０重量％になるように加水した。水酸化ナトリウムをｐＨ９となるまで添加し、遠心分離を行い、沈殿画分に加水して洗浄後、再度遠心分離を行った。固形分が１０重量％になるように加水した懸濁物を冷却しながら高圧ホモジナイザー処理を行った後、５０℃、３時間以上の反応条件で自己消化させ、さらにプロテアーゼを添加し５０℃で一晩酵素反応を行い、その後、遠心分離を行うことで可溶性菌体成分を除去した。得られた酵母エキス抽出残渣を、高圧ホモジナイザー（ＡＰＶ社製「Ｂｌｕｅ−ｔｏｐ  ４０．８０Ｈ」）を用いて６０℃下９００ｂａｒで高圧処理を行った。高圧処理は４回行い、それぞれの該高圧処理液状物を水で４倍に希釈・攪拌後、遠心分離機（アルファラバル社製「ＦＥＵＸ５１２型」）を用いて固液分離を行い、エキス分の洗浄・除去を行った。この洗浄・除去操作をさらに３回繰り返し、酵母細胞壁画分スラリー（以下「ＢＹＣスラリー」と略す）を製造した。高圧処理を４回施したＢＹＣスラリーを凍結乾燥したものを「酵母細胞壁画分：ＢＹＣ１」、またＢＹＣスラリーを噴霧乾燥したものを「酵母細胞壁画分：ＢＹＣ２」とし、実施例１にならい成分分析を行った。値を上記表１に示した。
【実施例３】
【００６７】
［ヒトでの皮膚状態改善効果試験］
２５〜３５歳までの健常人女性６名を被験者とし、実施例２で得られたＢＹＣ２を１日６ｇ摂取させた。摂取期間は３週間連日とし、摂取前後における肌の状態変化（角層水分量、バリア機能、メラニン値）について皮膚測定機を用いた評価を実施した。被検者は、測定部位の洗浄後３０分間椅子に座って安静待機し、測定は室温２０〜２３度、湿度４０〜５０％に調整した環境試験室内で実施した。
【００６８】
１）角層水分量
角層の水分測定は、Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｇｍｂｈ社製「Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ  ＣＭ８２５」を用い、低周波キャパシタンス法にて測定した。測定部位は、前腕、頬、乾燥の目立つ口角付近の３箇所とした。測定の結果を表２に示す。ＢＹＣ摂取前から十分な水分量を示した頬では、ＢＹＣ摂取による効果は確認できなかったものの、前腕ならびに口角付近ではＢＹＣ摂取後に明らかな水分量の増加が認められた。特に乾燥していた口角付近では、ＢＹＣ摂取前と比較し水分量の有意な増加が認められた（ｐ＜０．０５）。
【００６９】
【表２】
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【００７０】
２）バリア機能
Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｇｍｂｈ社製「Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ  ＴＭ３００」を用いて上腕の経表皮水分蒸散量を測定し、バリア機能を評価した。経表皮水分蒸散量は、皮膚から蒸散する水分量を測定することから、値が低いほどバリア機能が高いといえる。結果を図１に示す。ＢＹＣ摂取により、被験者ほぼ全員で経表皮水分蒸散量の低下が認められた。ＢＹＣ前の経表皮水分蒸散量平均値が１４．４ｇ／ｍ２／ｈｒだったのに対し、ＢＹＣ摂取後では１２．１ｇ／ｍ２／ｈｒと有意に低下しており（ｐ＜０．００１）顕著なバリア機能の向上が認められた。また、今回計測した経表皮水分蒸散量は、体内からいかに水分が外に透過しやすいかを示すだけでなく、外界から皮膚内部へ物質がいかに透過しやすいかを示していると考えられており、このことから、ＢＹＣを摂取することにより、外界からの刺激の侵入をも抑制できる可能性が示唆される。
【００７１】
３）メラニン値
Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  Ｇｍｂｈ社製「Ｍａｘａｍｅｔｅｒ  ＭＸ１８」を用いて、メラニン値を測定した。測定部位は、顎下（紫外線の影響を受けにくい部位）と頬（紫外線の影響を受けやすい部位）の２箇所とした。結果をそれぞれ図２、図３に示す。ＢＹＣの摂取により、顎下・頬ともに有意なメラニン値の低下が認められた。（ｐ＜０．０５）
【実施例４】
【００７２】
［ヒトでの皮膚状態改善効果試験２］
肌の乾燥に悩む２８〜４０歳までの男女９名（男性４名、女性５名）を被験者とし、実施例２で得られたＢＹＣ２を１日２ｇ摂取させた。摂取期間は３週間連日とし、肌の水分保持機能（角層水分量、バリア機能）の経時変化について皮膚測定機を用いた評価を実施した。また被験者のうち、顔面に濃いシミのある男性１名について、ＢＹＣ摂取によるシミへの効果をメラニン値測定により評価した。測定条件、測定方法は実施例３に倣った。
【００７３】
各被験者について頬水分含量の経時変化を図４に示す。なお、点線は男性被験者、実線は女性被験者を表す。ＢＹＣ摂取の結果、摂取前から十分な水分量を保持していた１名を除く全員で、頬水分量の増加が認められた。摂取前、「やや乾燥している」と診断された女性４名については、ＢＹＣ３週間摂取後、全員が「十分な水分量を保持している」と診断され、非常に乾燥していた男性２名については、軽度な乾燥にまで回復していた。
【００７４】
また、バリア機能を示す頬水分蒸散量の経時変化を図５に示す。結果、９名中７名でバリア機能の改善が認められ、ほとんど全員が普通の状態まで回復した。
【００７５】
男性１名における顔面のシミに対する効果を図６に示す。ＢＹＣ摂取により経時的にシミ部分のメラニン値は減少しており、すでに存在するシミに対する美白効果が認められた。
【実施例５】
【００７６】
［ヒトでの皮膚状態改善効果試験３］
本発明の実施例１で作製したＹＣＷならびに実施例２で作製したＢＹＣ２について、それぞれ１０名（２０代〜５０代の男女）の被験者に対し、２ヶ月間１日２ｇ摂取させ、投与前後における肌の状態変化について調査した。調査項目は、肌の潤い、肌のはり（弾力性）、小じわの３項目とし、評価方法はアンケートにて「改善」、「やや改善」、「変化なし」、「悪化」の４段階で評価してもらった。結果は、各段階の被験者数で表３に示した。ＹＣＷ摂取群、ＢＹＣ摂取群ともに、各パラメーターの改善傾向が認められ、ＢＹＣ摂取群でより顕著な効果が認められた。特に肌の潤いについては、ＢＹＣ摂取群でほとんどの被験者で改善傾向が認められた。また、ＹＣＷ摂取群、ＢＹＣ摂取群ともに副作用は一例もなく、皮膚状態の悪化も認められなかった。
【００７７】
【表３】
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【実施例６】
【００７８】
［ヘアレスラットでの皮膚状態改善効果試験］
ＨＹＷ／Ｓｌｃ系雄ラット（５週齢）を標準粉末食（ＣＥ-２、日本クレア）の自由摂食下で１週間予備飼育し実験環境への馴化を行った後、体重を指標に1群１０匹で２群に群分けした。標準粉末食を投与したものを対照とし、供試飼料（被検サンプル）としては、実施例２によりそれぞれ調整されたＢＹＣ１を５％の割合で標準粉末食と混合したものを用いた。これらの試験飼料を３週間自由摂食させ、試験飼料投与前、投与１０日目、投与２２日目の皮膚の状態（角層水分量、バリア機能、メラニン値）について皮膚測定機を用いた評価を実施した。測定部位は背部とし、測定機は実施例３で用いたものを使用した。結果は、試験飼料投与前の値「１００」としたときの変化率で示した（図７〜９）。
【００７９】
水分量、経表皮水分蒸散量、メラニン値について、投与１０日目では、対照群とＢＹＣ投与群でほとんど差は認められなかった。しかし投与２２日目には、対照群と比較しＢＹＣ投与群で皮膚水分量の増加が認められた（図７）。また、経表皮水分蒸散量はＢＹＣ投与群で低下傾向を示し、ＢＹＣ摂取によるバリア機能の増強が確認できた（図８）。さらにメラニン値についてもＢＹＣ投与群で顕著な減少が認められた（図９）。以上より、ヘアレスラットにおいてＢＹＣ混餌投与により皮膚機能の向上が認められた。
【実施例７】
【００８０】
［ヘアレスラットに対する酵母細胞壁画分のスーパーオキサイド消去作用試験］
ＨＹＷ／Ｓｌｃ系雄ラット（５週齢）を標準粉末食（ＣＥ-２、日本クレア）の自由摂食下で１週間予備飼育し実験環境への馴化を行った後、体重を指標に1群５匹で３群に群分けした。標準粉末食を投与したものを対照とし、供試飼料（被検サンプル）としては、実施例１と２によりそれぞれ調整されたＹＣＷ及びＢＹＣ１をそれぞれ５％ずつの割合で標準粉末食と混合したものを用いた。これらの供試飼料を２週間自由摂食させた後、腹部大動脈より全採血を行い、エチレンジアミン四酢酸二カリウム二水和物により抗凝固処理を施した血液ならびに遠心分離により血清を取得し分析に供した。血清のＳＯＤ様活性は、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）還元法を原理とするＳＯＤテストワコー（和光純薬）を用いて９６ウエルマイクロプレートで測定した。
【００８１】
つまり、０．２４ｍＭのＮＢＴと０．４ｍＭキサンチンを含む発色試薬１００μＬに検体１０μＬを添加し、更に酵素液（キサンチンオキシダーゼ）１００μＬを加え、３７℃で２０分間インキュベーションした。その後、反応停止液（６９ｍＭ ドデシル硫酸ナトリウム）２００μＬにて酵素反応を停止させ、マイクロプレートリーダーにてＯＤ５６０ｎｍを測定した。酵素のかわりに０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）を加えたサンプルをブランクとし、検体のかわりに蒸留水を加えたサンプルをコントロールとして、以下の算出式によってスーパーオキサイドアニオン（Ｏ２−）消去率を算出した。
【００８２】
Ｏ２−消去率（％）＝（Ａ−Ｂ）／ Ａ ×100
Ａ：コントロールの吸光度
Ｂ：試料添加のときの吸光度
【００８３】
結果を図１０に示す。
その結果、対照と比較し、ＹＣＷならびにＢＹＣを混餌投与した群ではスーパーオキサイド消去率が顕著に上昇しており、とりわけＢＹＣ混餌投与群で強いＳＯＤ様活性が認められた（ｐ＜０．０５）。
【実施例８】
【００８４】
［酵母細胞壁画分を含有する飲食品の製造］
（１）実施例２で調製した「ＢＹＣ１」を用いて、表４記載の通り酵母細胞壁配合ヨーグルトゼリーを製造した。
【００８５】
【表４】
0004545063.tif 000005
【００８６】
（２）実施例２で調整した「ＢＹＣ１」を用いて、表５記載の通り酵母細胞壁配合ビスケットを製造した。
【００８７】
【表５】
0004545063.tif 000006
【産業上の利用可能性】
【００８８】
本発明の組成物は、保湿作用、美白作用および活性酸素消去作用を含む皮膚状態改善効果を有するため、皮膚状態改善用の医薬品、飲食品または飼料として使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】ヒト被験者におけるＢＹＣ摂取後の経表皮水分蒸散量を示す。
【図２】ヒト被験者におけるＢＹＣ摂取後の顎下のメラニン値を示す。
【図３】ヒト被験者におけるＢＹＣ摂取後の頬のメラニン値を示す。
【図４】ヒト被験者におけるＢＹＣ摂取による頬水分含量の経時変化を示す。
【図５】ヒト被験者におけるＢＹＣ摂取による頬水分蒸散量の経時変化を示す。
【図６】ヒト被験者（男性1名）におけるＢＹＣ摂取による顔面のシミに対する効果を示す。
【図７】ラットのＢＹＣ投与群における対照群からの皮膚水分量の変化を示す。
【図８】ラットのＢＹＣ投与群における対照群からの経表皮水分蒸散量の変化を示す。
【図９】ラットのＢＹＣ投与群における対照群からのメラニン変化を示す。
【図１０】ラットのＹＣＷ投与群およびＢＹＣ投与群におけるスーパーオキサイド消去率を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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