(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造を有する化合物：
【化１】
0004546923.tif 000113
式中、
Ｗは、−（Ｃ＝Ｏ）−または存在せず；
Ｒ1は、Ｃ6-12アリール、Ｃ1-12アルキルまたは−ＯＲであり、ここで、Ｒは、Ｃ1-12アルキルまたはＣ7-12アリールアルキルであり、
Ｒ2は、置換フェニル（ここで、置換基はハロゲン、ニトロおよびＣ1-3アルコキシの１個またはそれ以上から独立に選択される）；ベンジル、置換ベンジル（ここで、置換基は、ハロゲン、Ｃ1-3アルコキシ、ニトロおよびヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）；ナフチル；ピリジルＣ1-4アルキル；置換ピリジルＣ1-4アルキル（ここで、置換基はハロゲンの１個またはそれ以上から独立に選択される）；Ｃ7-12アリールアルキル；Ｃ1-12アルキル；２−チエニルメチル；ピラン−２−オン−５−メチル、ピラン−２−オン−４−メチル；クロメン−２−オン−３−メチル；ピペロニル；Ｎ−ベンゾイルアミノエチル；アセトキシメチル；メトキシメチル；２−エチルデカニル；ピラジン−２−メチル；１−ブテニル、４−ブテニル；シアノメチル；または２，４−ペンタジエニルであり、
Ｒ3は、−ＣＨ（Ｒａ）ＣＯＯＨまたは−ＣＨ2ＣＨ（Ｒａ）ＣＯＯＨであり、
ここで、Ｒ3が−ＣＨ（Ｒａ）ＣＯＯＨの場合、Ｒａは、メチル、イソプロピル、イソブチル、２−メチルプロピル；ベンジル、４−ヒドロキシベンジル、４−フェニルベンジル、４−ＮＯ2−ベンジル、３，４−Ｃｌ2−ベンジル、４−メチルベンジル、４−Ｆ−ベンジル、３，４−Ｆ2−ベンジル、２−Ｃｌ−ベンジル、４−Ｃｌ−ベンジル；メチルチオエチル；シクロヘキシルメチル；２−ヒドロキシエチル；１−ナフチルメチル；またはシクロヘキシル；であり、
Ｒ3が−ＣＨ2ＣＨ（Ｒａ）ＣＯＯＨの場合、Ｒａは、プロピル、イソブチル、メチル；ベンジル、４−Ｂｒ−ベンジル、４−Ｆ−ベンジル；フェニルプロピル；アミノ；３−プロペニル；エタン酸、プロピオン酸；４−ビニルベンジル；またはピペロニルメチルである。
【請求項２】
Ｗが−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｒ3が−ＣＨ（Ｒａ）ＣＯＯＨである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｗが存在せず、Ｒ3が−ＣＨ2ＣＨ（Ｒａ）ＣＯＯＨである請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1が、フェニル、メトキシ、ベンジルオキシまたはメチルであり、
Ｒ2が、２，４，５−トリメトキシフェニル、３−メトキシフェニル、２−ニトロ−５−クロロフェニル、３，４−Ｃｌ2−フェニル；ベンジル、４−メトキシベンジル、３，４−Ｃｌ2−ベンジル、４−ニトロベンジル、３−ヒドロキシベンジル；１−ナフチル；４−ピリジルメチル；４−（２，５−Ｃｌ2−ピリジル）メチル、３−（２，６−Ｃｌ2−ピリジル）メチル；１−ナフチルメチル、フェニエチル；エチル；２−チエニルメチル、ピラン−２−オン−５−メチル；クロメン−２−オン−３−メチル；ピペロニル；Ｎ−ベンゾイルアミノエチル；アセトキシメチル；メトキシメチル；２−エチルデカニル；ピラジン−２−メチル；１−ブテニル；シアノメチル；または２，４−ペンタジエニルである請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1が、フェニル、メトキシ、またはベンジルオキシであり、
Ｒ2が、２，４，５−トリメトキシフェニル、３−メトキシフェニル、２−ＮＯ2−５−Ｃｌ−フェニル；ベンジル、４−メトキシベンジル、３，４−Ｃｌ2−ベンジル、３−ヒドロキシベンジル、４−ＮＯ2−ベンジル；１−ナフチル；４−ピリジルメチル；３−（２，６−Ｃｌ2−ピリジル）メチル；１−ナフチルメチル、フェネチル；エチル；ピラン−２−オン−４−メチル；ピペロニル；Ｎ−ベンゾイルアミノエチル；２，４−ペンタジエニル；クロメン−２−オン−３−メチル；メトキシメチル；２−エチルデカニル；ピラジン−２−メチル；４−ブテニル；またはシアノメチルである請求項３に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、β−ストランドミメティック構造体、これに関連した化学ライブラリおよびその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
治療剤としての潜在的な活性のための分子のランダムスクリーニングは、長年にわたって行われてきた。その結果、数多くの薬が発見された。分子生物学および計算機化学の発展により、「合理的薬剤設計(rational drug design)」と命名される分野についての関心は高まっているものの、このような技術は、最初予想した程には、高速ではないし、信頼できないことが判明している。それゆえ、最近は、ランダム薬物スクリーニングに対する関心が再開され、ランダム薬物スクリーニングに関心が戻っている。このために、コンビナトリアル・ケミストリー・ライブラリの開発に基づく新しい技術分野、および生物学的に活性なメンバー(member)を調査するための前記ライブラリのスクリーニング分野において、特に進展してきた。
【０００３】
一般に、コンビナトリアル・ケミストリー・ライブラリは、単純な分子の集合体である。このようなライブラリは、ライブラリ内にある化学種ごとに様々になるだけでなく、前記ライブラリのメンバーを作成し、かつ関心のある生物学的標的と相互反応してメンバーを同定するために使用する方法ごとに様々になる。この分野は未だ初期段階であるが、ライブラリを作成し、スクリーニングする方法は、既に、相当様々で且つ複雑である。例えば、様々なコンビナトリアル・ケミストリー・ライブラリの最近の論文では、数多くの技術が明らかになり(参照：Dolle, J. Com. Chem., 2(3): 383-433, 2000）標識されているライブラリまたは標識されていないライブラリの両メンバーの使用を含んでいる（Janda,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:10779-10785, 1994)。
【０００４】
初期には、コンビナトリアル・ケミストリー・ライブラリは、一般に、ペプチドまたはヌクレオチド起源のメンバーに限られていた。このために、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ等の技術は、スプリット合成技術によって可溶性コンビナトリアル・ペプチド・ライブラリを組み立てるための「二重限定反復（dual-defined iterative）」方法と命名されるものの一例を説明している(Nature (London) 354:84-86, 1991; Biotechniques 13:412-421, 1992; Bioorg. Med. Chem. Lett. 3:405-412, 1993)。この技術により、数千万のメンバーを含む
可溶性ペプチドライブラリが得られた。このようなライブラリは、オピオイドペプチド、例えばメチオニン−およびロイシン−エンケファリンなどのの同定において有効であることが明らかになっており(Dooley and Houghten, Life Sci. 52, 1509-1517, 1993)、また、Ｎ−アシル化ペプチドライブラリは、強力なオピオイドアンタゴニストであるアセタリンの同定に使用されている(Dooley et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10811-10815, 1993)。さらに最近では、全てのＤ−アミノ酸オピオイドペプチドライブラリが、ミュー（「μ」）オピオイドレセプタに対する鎮痛活性のために構成され、スクリーニングされている(Dooley et al, Science 266:2019-2022, 1994)。
【０００５】
ペプチドおよびヌクレオチド起源のメンバーを含むコンビナトリアル・ライブラリは、非常に重要な意味を持つが、依然として、異なる起源のメンバーを含むライブラリが必要とされている。例えば、巨大に拡張された伝統的なペプチドライブラリは、単にライブラリメンバーを発生させるために、そのアミノ酸配列を様々にしたものである。ペプチドの二次構造が生物学的活性に重要であることはよく認知されているが、このようなペプチドライブラリは、そのライブラリメンバーに対して、束縛(constrained)二次構造を与えな
い。
【０００６】
このために、一部の研究者らは、さらに束縛された二次構造を提供するため、ジスルフィド架橋でペプチドを環化させている(Tumelty et al., J. Chem. Soc. 1067-68, 1994; Eichler et al., Peptide Res. 7:300-306, 1994)。しかしながら、このような環化ペプ
チドは、一般に、非常に可変的であり、生体利用能に乏しい。よって、成功が限られている。
【０００７】
さらに最近では、生物学的に活性なタンパク質またはペプチドにおいて見られるリバースターンの二次構造を非常にそっくり模倣した非ペプチド化合物が開発されている。例えば、Ｋａｈｎの米国特許第５，４４０，０１３号およびＫａｈｎの公開ＰＣＴ ＷＯ９４
／０３４９４は、リバースターンの三次元構造を模倣した立体配座的に束縛された非ペプチド化合物を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
立体配座的に束縛されたペプチドミメティックスの合成および同定技術は、著しく進歩しているものの、当該技術分野において、ペプチドの二次構造を模倣した小分子に対する開発の必要性は依然として存在している。また、当該技術分野において、このようなメンバーを含むライブラリだけでなく、関心のある標的、特に生物学的標的に対するライブラリメンバーを合成し、スクリーニングして生理活性のライブラリメンバーを同定する技術が要求されている。例えば、Ｋａｈｎの米国特許第５，９２９，２３７号およびその一部継続出願である米国特許第６，０１３，４５８号は、生物学的に活性なペプチドおよびタンパク質のリバースターン部位の二次構造を模倣した、立体配座的に束縛された化合物を開示している。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、また、これらの要求を満たし、生物学的に活性なペプチドおよびタンパク質のβ−ストランド構造の二次構造を模倣した、立体配座的に束縛された化合物を提供することにより、これに関連した更なる利点を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
要するに、本発明は、生物学的に活性なペプチドと蛋白質のβ−ストランド構造の２次構造を模倣した、立体配座的に束縛された化合物に関する。本発明は、また、このような化合物を含むライブラリだけでなく、その合成とスクリーニングを開示している。
【００１１】
本発明の化合物は、下記化学式（Ｉ）の構造を有する化合物 および これらの化合物
の立体異性体である。
【００１２】
【化６】
0004546923.tif 000002
【００１３】
式中、Ａは−（ＣＨ）−、−Ｎ−または−ＣＨ2−Ｎ−であり、Ｂは−（Ｃ＝Ｏ）−ま
たは−（ＣＨ2）m−であり、Ｗは−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、または存在せず、Ｘは−ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−または存在せず、Ｙは酸素または硫黄であり、Ｚは酸素または水素であり、Ｌは水素、Ｒ5、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3またはその等価体であり、ｎ＝０または１、そしてｍ＝１または２であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、同一または異なって、水素、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体、その分子
の残部、リンカーおよび固体支持体から独立に選択される。
【００１４】
本発明の一つの実施態様において、Ｘが存在せず、Ａが−Ｎ−であり、Ｂが−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3であり、また、他の基が化学式（Ｉ）で定義したと
おりであって、その結果、本発明の化合物は下記化学式（Ｉ’）の構造を有する。
【００１５】
【化７】
0004546923.tif 000003
【００１６】
任意に、Ｗは存在せず、Ｚは酸素である。
【００１７】
本発明の一つの実施態様において、Ｘが存在せず、Ａが−Ｎ−であり、Ｂが−（ＣＨ2
）m−であり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3であり、また、他の基が化学式（Ｉ）で定義した
とおりであって、その結果、本発明の化合物は下記化学式（Ｉ’’）の構造を有する。
【００１８】
【化８】
0004546923.tif 000004
【００１９】
任意に、Ｗは存在せず、Ｚは酸素である。
【００２０】
本発明の一つの実施態様において、Ｘが−ＮＨ−であり、Ａが−（ＣＨ）−であり、Ｂは−（ＣＨ2）m−であり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3であり、また、他の基が化学式（Ｉ
）で定義したとおりであって、その結果、本発明の化合物は下記化学式（Ｉ’’’）の構
造を有する。
【００２１】
【化９】
0004546923.tif 000005
【００２２】
任意に、Ｚは酸素であり、Ｗは存在しない。
【００２３】
本発明の一つの実施態様において、Ａが−ＣＨ2−Ｎ−であり、Ｂが−（ＣＨ2）m−で
あり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3であり、また、他の基が化学式（Ｉ）で定義したとおりで
あって、その結果、本発明の化合物は下記化学式（Ｉ’’’’）の構造を有す
る。
【００２４】
【化１０】
0004546923.tif 000006
【００２５】
任意に、Ｙは酸素であり、および／またはＷは存在せず、および／またはＺは酸素である。
【００２６】
本発明はまた、前記化学式（Ｉ）、（Ｉ’）、（Ｉ’’）、（Ｉ’’’）および（Ｉ’’’’）の構造を有する化合物を含むライブラリだけでなく、このようなライブラリの合成方法、および生物学的に活性な化合物を同定するために前記ライブラリをスクリーニングする方法に関する。医薬的に許容されるキャリアまたは希釈剤と組み合わせた本発明の化合物を含有する組成物も開示されている。
【００２７】
本発明のこれらの態様および他の態様は、添付図面と以下の詳細な説明を参考すると、さらに明らかになる。
【００２８】
発明を実現するための最良の形態
生物学的に活性なペプチドおよび蛋白質のβ−ストランド部位の二次構造を模倣した、
立体配座的に束縛された化合物が開示される。このようなβ−ストランドミメティック構造体は、診断剤および治療剤としての用途を含んだ広範囲な分野にわたって有用性を持つ。本発明のβ−ストランドミメティック構造体を含むライブラリだけでなく、生物学的に活性なメンバーを同定するために前記ライブラリをスクリーニングする方法も開示される。
【００２９】
一つの態様において、本発明は、β−ストランドミメティック構造体およびβ−ストランドミメティック構造体を含む化学的ライブラリに関する。本発明のβ−ストランドミメティック構造体は、診断剤、予防剤および／または治療剤としての使用を含んで（ところが、これらに制限されない）、生理活性剤として有用である。本発明のβ−ストランドミメティック構造体は、このような生理活性剤の同定に有用である。本発明の実施において、ライブラリは、数十個〜数百〜数千個（またはそれ以上）の個々のβ−ストランドミメティック構造体（以下では、「メンバー」という）を含んでもよい。
【００３０】
本発明の一つの実施態様では、下記化学式（Ｉ）を有するβ−ストランドミメティック構造体およびこの立体異性体が開示される。
【００３１】
【化１１】
0004546923.tif 000007
【００３２】
式中、Ａは−（ＣＨ）−、−Ｎ−または−ＣＨ2−Ｎ−であり、Ｂは−（Ｃ＝Ｏ）−ま
たは−（ＣＨ2）m−であり、Ｗは−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−、または存在せず、Ｘは−ＮＨ−、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−または存在せず、Ｙは酸素または硫黄であり、Ｚは酸素または水素であり (Ｚは水素であればＣ＝ＺはＣＨ2を意味する)
Ｌは水素、Ｒ5、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3またはその等価体であり、ｎ＝０または１、そして
ｍ＝１または２であり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、同一または異なって、水素、
アミノ酸側鎖部分またはその誘導体、その分子の残部、リンカーおよび固体支持体から独立に選択される。
【００３３】
一つの実施態様において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、アミノＣ2-5アルキル、グアニジノＣ2〜5アルキル、Ｃ1〜4アルキルグアニジノＣ2〜5アルキル、ジＣ1〜4アルキルグアニジノＣ2〜5アルキル、アミジノＣ2〜5アルキル、Ｃ1〜4アルキルアミジノＣ2〜5アルキル、ジＣ1〜4アルキルアミジノＣ2〜5アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、フェニル、置換フェニル（ここで、置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジン、ヒドラジン、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、ベンジル、置換ベンジル（ここで、ベンジル上の置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、ナフチル、置換ナフチル
（ここで、置換基は、アミノ、アミジン、グアニジン、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、ビス−フェニルメチル、置換ビス−フェニルメチル（ここで、置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジン、ヒドラジン、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、ピリジル、置換ピリジル（ここで、置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、ピリジルＣ1〜4アルキル、置換ピリジルＣ1〜4アルキル（ここで、ピリジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジン、ヒドラジン、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、ピリミジルＣ1〜4アルキル、置換ピリミジルＣ1〜4アルキル（ここで、ピリミジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジン、ヒドラジン、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、トリアジン−２−イル−Ｃ1〜4アルキル、置換トリアジン−２−イル−Ｃ1〜4アルキル（ここで、トリアジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジン、ヒドラジン、アミドラゾニル、Ｃ1
〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル
、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、イミダゾールＣ1〜4アルキル、置換イミダゾールＣ1〜4アルキル（ここで、イミダゾール置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジン、ヒドラジン、アミドラゾニル、Ｃ1〜4アルキルアミノ、Ｃ1〜4ジアルキルアミノ、ハロゲン、パーフルオロＣ1〜4アルキル、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ1〜3アルコキシ、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルの１個またはそれ以上から独立に選択される）、イミダゾリニルＣ1〜4アルキル、Ｎ−アミジノ−ピペラジニル−Ｎ−Ｃ0〜4アルキル、ヒドロキシＣ2〜5アルキル、Ｃ1〜5アルキルアミノＣ2〜5アルキル、ヒドロキシＣ2〜5アルキル、Ｃ1〜5アルキルアミノＣ2〜5アルキル、Ｃ1〜5ジアルキルアミノＣ2〜5アルキル、Ｎ−アミジノピペリジニルＣ1〜4アルキルおよび４−アミノシクロヘキシルＣ0〜2アルキルよりなる群から独立に選択される。
【００３４】
一つの実施態様において、Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3は、同一または異なって、前記化合物
の残部を示し、Ｒ4は、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体から選択される。別の一つの
実施態様において、Ｌは−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ3を示し、Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3は、同一または異なって、前記化合物の残部またはアミノ酸側鎖部分もしくはその誘導体を示し、Ｒ4
は水素である。
【００３５】
ここで使用される「アミノ酸側鎖部分」との用語は、表１に示した天然アミノ酸側鎖部分を含む（ただしこれに制限されない）、天然蛋白質に存在する任意のアミノ酸側鎖部分を示す。本発明の他の天然アミノ酸側鎖部分は、３，５−ジブロモチロシン、３，５−ジヨードチロシン、ヒドロキシリジン、γ−カルボキシグルタメート、ホスホチロシンおよびホスホセリンの側鎖部分を含むが、これらに限定されるものではない。その他に、グルコシル化スレオニン、セリンおよびアスパラギンを含む（ところが、これらに制限されない）、グリコシル化アミノ酸の側鎖部分も本発明の実施に使用されてもよい。
【００３６】
【表１】
0004546923.tif 000008
【００３７】
天然アミノ酸の側鎖部分以外に、本発明のアミノ酸側鎖部分にはまた、これらの誘導体を含む。ここで使用されるアミノ酸側鎖部分の「誘導体」には、天然アミノ酸側鎖部分に対する改変体および／または変形体を含む。例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンおよびフェニルアラニンのアミノ酸側鎖部分は、一般に、低級アルキル、アリールまたはアリールアルキル部分に分類できる。アミノ酸側鎖部分の誘導体には、他の直鎖または分岐鎖、環式または非環式の置換または非置換、飽和または不飽和の低級アルキル、アリールまたはアリールアルキル部分を含む。
【００３８】
ここで使用される用語「化合物の残部」および「分子の残部」は、β−ストランドミメ
ティック構造体に共有結合している任意の部分、薬剤、化合物、支持体、分子、リンカー、アミノ酸、ペプチドまたは蛋白質を意味するように用いられる。結合は、Ｒ1および／
またはＲ2および／またはＲ3位置であるのが好ましい。この用語はまた、アミノ酸側鎖部分およびその誘導体を含む。
【００３９】
ここで使用される「低級アルキル部分」は、１〜１２個の炭素原子を含有し、「低級アリール部分」は、６〜１２個の炭素原子を含有し、そして「低級アラルキル部分」は、７〜１２個の炭素原子を含有する。よって、一つの実施態様において、このアミノ酸側鎖誘導体は、Ｃ1〜12アルキル、Ｃ6〜12アリールおよびＣ7〜12アリールアルキルから選択さ
れ、さらに好適な実施態様では、アミノ酸側鎖誘導体はＣ1〜7アルキル、Ｃ6〜10アリー
ルおよびＣ7〜11アリールアルキルから選択される。
【００４０】
本発明のアミノ酸側鎖誘導体は、低級鎖アルキル、アリールおよびアリールアルキル部分の置換誘導体をさらに含有し、ここで、前記置換基は、下記化学物質部分：−ＯＨ、−ＯＲ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯ2Ｒ、−ＳＯ2Ｈ、−ＳＯＲおよびハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含む）の１またはそれ以上から選択されるが、これらに限定されない。ここで、前記Ｒは、それぞれ独立に、直鎖または分岐鎖、環式または非環式、置換または非置換、飽和または不飽和の低級鎖アルキル、アリールおよびアラルキル部分から選択される。一つの実施態様において、その置換基は１８個の炭素原子より少ない数を有する。しかも、本発明の環式の低級鎖アルキル、アリールおよびアリールアルキル部分は、ナフタレンだけでなく、複素環化合物、例えばチオフェン、ピロール、フラン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、３−ピロリン、ピロリジン、ピリジン、ピリミジン、プリン、キノリン、イソキノリンおよびカルバゾールを含む。アミノ酸側鎖誘導体はまた、アルキルおよびアラルキルホスホネートならびにシランを含む（これらに制限されない）、低級鎖アルキルおよびアラルキル部分のアルキル部分のヘテロアルキル誘導体をさらに含む。
【００４１】
本発明の一態様において、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3部分は、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＣＯＲ、−
ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＲ、−ＣＯＮＲＲ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−ＳＯ2Ｒおよび−ＣＯＳＲから選択され、ここで、各Ｒは上で定義したとおりである。
【００４２】
追加の実施態様において、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体（またはＲ1、Ｒ2およびＲ3の場合の化合物の残部）以外にも、Ｒ1、Ｒ2またはＲ3はもう一つの部分または化合物に対する化合物の結合を促進するリンカーであってもよい。例えば、本発明の化合物は、診断アッセイまたはスクリーニングアッセイで使用するために、１種またはそれ以上の公知化合物（例えば、ビオチン）と結合していてもよい。さらに、Ｒ1、Ｒ2またはＲ3は、
固体支持体（例えば、固相ペプチドの合成に使用される支持体）に化合物を結合させるリンカーであってもよく、あるいは、その支持体そのものであってもよい。この実施態様において、別の部分もしくは化合物または固体支持体に対する結合は、Ｒ1、Ｒ2またはＲ3
位置で、さらに好ましくは、Ｒ3位置であることが好ましい。
【００４３】
Ｘが存在せず、ＡがＮであり、Ｂが−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3で
ある実施態様において、本発明のβ−ストランド化合物は、下記化学式（Ｉ’）の構
造を有する。
【００４４】
【化１２】
0004546923.tif 000009
【００４５】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｗ、Ｙ、Ｚおよびｎは、上で定義したとおりである。
【００４６】
好適な実施態様において、Ｒ2およびＲ3は、化合物の残部を示し、Ｒ1およびＲ4は、アミノ酸側鎖部分から選択される。
【００４７】
Ｘが存在せず、ＡがＮであり、Ｂが−（ＣＨ2）m−であり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3で
ある実施態様において、本発明のβ−ストランドミメティック構造体は、下記化学式（Ｉ’’）の構造を有する。
【００４８】
【化１３】
0004546923.tif 000010
【００４９】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｗ、Ｙ、Ｚ、ｍおよびｎは、上で定義したとおりである。好適な実施態様において、Ｒ2およびＲ3は、化合物の残部を示し、Ｒ1およびＲ4は、アミノ酸側鎖部分から選択される。
【００５０】
Ｘが−ＮＨ−であり、Ａが−（ＣＨ）−であり、Ｂが−（ＣＨ2）m−であり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3であるさらに具体的な実施態様において、β−ストランドミメティック構
造体は、下記化学式（Ｉ’’’）の構造を有する。
【００５１】
【化１４】
0004546923.tif 000011
【００５２】
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｗ、Ｙ、Ｚ、ｍおよびｎは、上で定義したとおりである。
【００５３】
Ａが−ＣＨ2−Ｎ−であり、Ｂが−（ＣＨ2）m−であり、Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3であるさらに具体的な実施態様において、本発明の化合物は、下記化学式（Ｉ’’’’）の構造を有する：
【００５４】
【化１５】
0004546923.tif 000012
【００５５】
任意に、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｗ、Ｙ、Ｚ、ｍおよびｎは上で定義したとおりであり、Ｗは存在せず、Ｚは酸素であり、Ｙは酸素である。
【００５６】
本発明のβ−ストランドミメティック構造体は、適切な出発成分分子（以下、「成分片」という）を用いて製造することができる。要するに、化学式（Ｉ’）の構造を有するβ−ストランドミメティック構造体の合成において、第１および第２成分片をカップリングさせて複合第１−第２中間体を形成し、また必要に応じて、第３および／または第４成分片をカップリングさせて複合第３−第４中間体（または、市販で入手可能な場合、単一の第３中間体が使用され得る）を形成し、複合第１−第２中間体および第３−第４中間体（または第３中間体）をカップリングさせて第１−第２−第３−第４中間体（または、第１−第２−第３中間体）を形成し、これを、環化させて、本発明のβ−ストランドミメティック構造体を得る。あるいは、化学式（Ｉ’）のβ−ストランドミメティック構造体は、個々の成分片を、溶液中にて段階的に、または固相ペプチド合成で通常実施されるような固相合成によって連続的にカップリングさせることにより、製造することができる。
【００５７】
本発明の内容中において、「第１成分片」は下記構造１を有する：
【００５８】
【化１６】
0004546923.tif 000013
【００５９】
式中、Ｒ2、ＡおよびＢは上で定義したとおりであり、Ｒはペプチド合成への使用に適
した保護基である。適切なＲ基には、アルキル基を含み、また、好適な実施態様において、Ｒはメチル基である。このような第１成分片は、ＣＨ（ＯＲ）2−（ＣＨ2）m−ＣＨＯ
とH2N−Ｒ2を結びつけることによる還元的アミノ化によってか、またはＣＨ（ＯＲ）2−
（ＣＨ2）m−Ｂｒからの置換によって容易に合成することができる。
【００６０】
本発明の「第２成分片」は、下記構造２を有する：
【００６１】
【化１７】
0004546923.tif 000014
【００６２】
式中、ＬおよびＲ4は上で定義したとおりであり、Ｐはペプチド合成への使用に適した
アミノ保護基であり、Ｘは活性化されたカルボン酸基の離脱基である。好ましい保護基には、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ＢＯＣ、ＦＭＯＣおよびＡｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）を含む。Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ3の場合、−ＮＨＲ3はカルボキシ保護基であってもよい。Ｎ−保護アミノ酸は、商業的に市販されており、例えば、ＦＭＯＣアミノ酸は、様々な供給源から入手できる。これらＮ−保護アミノ酸を本発明の第２成分片に転換することは、Ｎ−保護アミノ酸のカルボン酸基の活性化によって容易に達成することができる。適切な活性化カルボン酸基には、酸ハロゲン化物（ここで、Ｘは塩素または臭素などのハロゲン）、酸無水物（ここで、Ｘはアセチルのようなアシル基である）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルおよびペンタフルオロフェニルエステルのような反応性エステル、およびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）のようにカルボジイミドを用いてカップリング反応で形成された活性中間体のようなその他の活性中間体を含む。
【００６３】
第２成分片として作用するアミノ酸のアジド誘導体の場合、このような化合物は、Ｚａｌｏｏｍ等（J. Org. Chem. 46:5173-76, 1981）によって開示された反応により、相応するアミノ酸から製造することができる。
【００６４】
本発明の「第３成分片」は、下記構造３を有する：
Ｒ1−ＮＨ2またはＲ3−ＮＨ2
式中、Ｒ1およびＲ3は、上で定義したとおりである。適切な第３成分片は、様々な供給源から商業的に入手することができるか、または第一級アミンの合成に一般的に使用される標準有機合成技術によって容易に製造することができる。
【００６５】
さらに具体的に、化学式（Ｉ’）の構造を有する本発明のβストランドミメティック構造体は、第１成分片を第２成分片と反応させて複合第１−第２中間体を生成させた後、複合第１−第２中間体を第３成分片と連続的に反応させるかあるいは第３および第４成分片と反応させ、複合第１−第２−第３−第４中間体を生成させた後、この中間体を環化させてβストランドミメティック構造体を得ることにより、合成される。
【００６６】
化学式（Ｉ’）の構造を有するβ−ストランドミメティック構造体の一般的合成は、次の技術によって達成することができる。第１成分片（１）は、ポスゲンなどのカップリング剤を用いて第２成分片（２）とカップリングさせ、Ｎ−脱保護の後、下記のような複合第１−第２中間体を得る：
【００６７】
【化１８】
0004546923.tif 000015
【００６８】
式中、Ａ、Ｂ、Ｌ、Ｒ、Ｒ2、Ｒ4、Ｐ、Ｘおよびｎは、上で定義したとおりである。Ｘ2Ｃ（＝Ｓ）は、カップリング剤の一例であり、また他の類型のカップリング剤も使用で
きる。本発明の代表的な成分片の合成は、実施例に記述されている。化学式（Ｉ’’）〜（Ｉ’’’）の構造を有するβ−ストランドミメティック化合物は、前述した分子成分の合成に類似した技術によって製造することができ、成分片に応じて適切な変形が可能である。
【００６９】
本発明の別の態様では、本発明のβ−ストランドミメティック構造体を含むライブラリが開示される。一旦組み合わせられると、本発明のライブラリをスクリーニングして、生理活性を有する各メンバーを同定することができる。このような生理活性メンバーのためのライブラリのスクリーニングには、例えば、ライブラリのメンバーの結合活性を評価し、あるいはライブラリメンバーが機能アッセイに及ぶ効果を評価することを含む。スクリーニングは、通常、例えば抗体、酵素、受容体、または細胞株といった関心のある標的と共にライブラリメンバー（またはライブラリメンバーの亜グループ）を接触させることにより達成される。関心のある標的と共に相互反応することができるライブラリメンバーは、以下、これを「生理活性ライブラリメンバー」または「生理活性ミメティックス」という。例えば、生理活性ミメティックスは、抗体またはレセプタに結合できるか、酵素を阻害できるか、または、例えば細胞系に関連した機能応答を誘発またはアンタゴナイズできるライブラリメンバーであってもよい。言い換えれば、本発明のライブラリスクリーニングは、どんなライブラリメンバーが関心のある一つ以上の生物学的標的と相互作用することができるかを決定する。また、相互作用が起こると、その相互作用する生理活性ミメティックス（またはミメティックス）は、ライブラリメンバーから同定することができる。ライブラリから単一（または制限された数）の生理活性ミメティックスを同定すると、それ自体が生物学的に活性であって診断剤、予防剤または治療剤として有用であり、かつ当該分野でリード化合物の同定を相当進歩させるのに使用できるβ−ストランドミメティックスが得られる。
【００７０】
本発明のライブラリのペプチドミメティックスの合成は、本発明の第１成分片、第２成
分片、第３成分片、および任意に第４成分片を共に組み合わせて公知のペプチド合成技術を用いて行うことができる。さらに具体的に、任意のアミノ酸配列を立体配座的に束縛された化合物のＮ末端および／またはＣ末端に添加できる。この目的のために、ミメティックスは、公知の技術によってＰＡＭ樹脂のような固体支持体上で合成し(参照：John M. Stewart and Janis D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 1984, Pierce Chemical Comp., Rockford, Ill.)、またはアルコール結合によってシリル連結された樹脂上で合成され得る(参照：Randolph et al., J. Am Chem. Soc. 117:5712-14, 1995)。
【００７１】
その他、溶液合成技術と固相合成技術の組み合わせによって本発明のペプチドミメティックスを合成することができる。例えば、立体配座的に束縛されたβストランドが配列に添加される地点まで、固体支持体を用いて、線形ペプチド配列を合成することができる。溶液合成技術によって、予め合成された適切な立体配座的に束縛されたβ−ストランドミメティックス構造体を固相合成において次回の「アミノ酸」に添加させることができる（すなわち、Ｎ末端とＣ末端を有する立体配座的に束縛されたβ−ストランドミメティックスを線形ペプチドに添加する次のアミノ酸として使用することができる）。立体配座的に束縛されたβ−ストランドミメティック構造体を配列に取り込む場合、追加のアミノ酸を、固体支持体に結合したペプチドを完成させるために添加することができる。これとは異なり、線形Ｎ末端およびＣ末端保護ペプチド配列を固体支持体上で合成することができ、支持体から除去することができ、公知の溶液カップリング技術を用いて、溶液中の立体配座的に束縛されたβ−ストランドミメティックス構造体にカップリングさせることができる。
【００７２】
本発明の別の態様では、ライブラリを構成する方法が開示される。伝統的なコンビナトリアル・ケミストリー技術(参照：Gallop et al., J. Med. Chem. 37:1233-1251, 1994) により、基本的な分子骨格への試薬の順次組み合わせによって多数の化合物が迅速に製造される。組み合わせ技術は、天然アミノ酸から誘導されたペプチドライブラリの構成に使用されてきた。例えば、２０個の適切に保護された相異なるアミノ酸からなる２０個の混合物を取り、それぞれを２０個のアミノ酸のいずれか一つとカップリングさせることにより、４００（すなわち、２０2）個のジペプチドからなるライブラリが生成される。この
ような過程を７回繰り返し行うことにより、約２６０億（２０8）個のオクタペプチドか
らなるペプチドライブラリを製造する。
【００７３】
本発明の追加の態様では、生理活性ライブラリをスクリーニングし、生理活性ライブラリメンバーを分離する方法が開示される。本発明のライブラリは、様々な技術および方法によって生理活性をスクリーニングすることができる。一般に、スクリーニングアッセイは、（１）受容体のような興味ある生物学的標的にライブラリを接触させ、ライブラリメンバーと標的間に結合を生じさせ、（２）適切なアッセイ、例えば、Ｌａｍ等(Nature 354:82-84, 1991)またはＧｒｉｍｉｎｓｋｉ等(Biotechnology 12:1008-1011, 1994)（これら両者とも、参考として挿入する）に開示された熱量アッセイなどによって結合が生じたことを検出することにより、行うことができる。好適な実施態様において、ライブラリメンバーは溶液中にあり、かつ標的は固相で固定される。代わりに、ライブラリは固相で固定され、かつこれら溶液中の標的に接触させて探知させてもよい。
【００７４】
本発明のライブラリのペプチドミメティックスの合成は、図１に示したようなβ−ストランドミメティックライブラリを製造する一般反応図式を用いて行うことができる。本発明の二環式テンプレートライブラリの選択ペプチドミメティックスの合成は、９６ウェルプレートを有するＦｌｅｘＣｈｅｍ Ｒｅａｃｔｏｒ Ｂｌｏｃｋを用いて行った。上記図式において、「Ｐｏｌ」は２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を示し、詳細な過程は以下に例示している。
【００７５】
（第１段階）
２−クロロトリチルクロライド樹脂（１ｍｍｏＬ／ｇ）とＤＣＥ中の溶液Ｆｍｏｃ−Ｒ1−アミノ酸（１．５当量）およびＤＩＥＡ（２当量）を、９６ウェルのＲｏｂｉｎｓｏ
ｎ ｂｌｏｃｋ（ＦｌｅｘＣｈｅｍ）に入れた。反応混合物を常温で１２時間振盪した。
前記樹脂はＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。
【００７６】
（第２段階）
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピぺリジンを加えた。その後、反応混合物を常温で３０分間振盪した。このような脱保護工程を繰り返し行い、生成混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の４−Ｒ2−ア
ミノ−２−Ｆｍｏｃ−アミノ酪酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）およびＨＯＢＴ（１．５当量）の溶液を樹脂に加えた。反応混合物を常温で１２時間振盪した後、前記樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、その後ＤＣＭで洗浄した。
【００７７】
（第３段階）
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピぺリジンを加えた。その後、反応混合物を常温で３０分間振盪した。このような脱保護工程を繰り返し行い、生成混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，５−ジメトキシ−ペンタノン酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）およびＨＯＢＴ（１．５当量）の溶液を樹脂に加えた。反応混合物を常温で１２時間振盪した。その後、前記樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。
【００７８】
（第４段階）
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピぺリジンを加えた。その後、反応混合物を常温で３０分間振盪した。このような脱保護工程を繰り返し行い、生成混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の市販で入手可能なＲ3−酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）およびＨＯＢＴ（１．５当量）の溶
液を前記樹脂に加えた。反応混合物を常温で１２時間振盪し、その後、前記樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。
【００７９】
（第５段階）
樹脂を常温で１８時間ギ酸（各ウェル当たり１．２ｍＬ）で処理した。その後、前記樹脂を濾過によって除去し、濾液をスピードバック（ＳｐｅｅｄＶａｃ；Ｓｅｒｖａｎｔ）を用いて減圧下に濃縮させることにより、オイルの形で生成物を得た。これらの生成物は、５０％水／アセトニトリルで希釈し、冷凍させた後、凍結乾燥させた。
【００８０】
表２は本発明によって製造することが可能なβ−ストランドミメティックスライブラリを示し、その代表的な調製を実施例９に示す。表２の化合物および その立体異性体は、
本発明の一つの態様、すなわちＡが−（ＣＨ）−であり、Ｂが−（ＣＨ2）m−（ここで、ｍ＝１）、Ｗが−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｘが−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｙが酸素であり、Ｚが水素であり（その結果Ｃ＝ＺがＣＨ2を示す）、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ3であり、ｎ＝０、Ｒ4が水素であり、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、同一または異なって、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体、前記化合物の残部、リンカーおよび固体支持体から独立に選択される化合物の例示である。本発明の態様の様々な実施態様において、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は
比較的低分子量部分、すなわち１５（メチル）〜１，０００ｇ／ｍｏＬの分子量を有する有機基から独立に選択され、および／またはＲ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも一つがアミ
ノ酸側鎖またはその誘導体を示す。例えば、表２の化合物において、Ｒ3はアスパラギン
酸誘導体を示す。一つの態様において、本発明の化合物は、約４４０〜７５０ｇ／ｍｏＬ範囲内の分子量を有する。ここで、表２の化合物は、このような化合物の例を多数提供す
る。
【００８１】
【表２】
0004546923.tif 000016
0004546923.tif 000017
0004546923.tif 000018
0004546923.tif 000019
0004546923.tif 000020
0004546923.tif 000021
0004546923.tif 000022
0004546923.tif 000023
0004546923.tif 000024
0004546923.tif 000025
0004546923.tif 000026
0004546923.tif 000027
0004546923.tif 000028
0004546923.tif 000029
0004546923.tif 000030
0004546923.tif 000031
0004546923.tif 000032
0004546923.tif 000033
0004546923.tif 000034
0004546923.tif 000035
0004546923.tif 000036
0004546923.tif 000037
【００８２】
本発明のライブラリのペプチドミメティックスの合成は、図２に示すようなβ−ストランドミメティックスライブラリの一般反応図式を用いて行うことができる。本発明の二環式テンプレートライブラリの選択ペプチドミメティックスの合成は、９６ウェルプレートを有するＦｌｅｘＣｈｅｍ Ｒｅａｃｔｏｒ Ｂｌｏｃｋを用いて行った。前記図式において、「Ｐｏｌ」は２−クロロトリチルクロライド樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）を示し、詳細な過程は下記に例示する。
【００８３】
（第１段階）
２−クロロトリチルクロライド樹脂（１ｍｍｏｌ／ｇ）とＤＣＥ中の溶液Ｆｍｏｃ−Ｒ1−ベータ−アミノ酸（１．５当量）およびＤＩＥＡ（２当量）を、９６ウェルのＲｏｂ
ｉｓｏｎ ｂｌｏｃｋ（ＦｌｅｘＣｈｅｍ）に入れた。反応混合物を常温で１２時間振盪
した。前記樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＤＣＭで洗浄した。
【００８４】
（第２段階）
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その後、反応混合物を常温で３０分間振盪した。このような脱保護工程を繰り返し行い、生成混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の４−Ｒ2−ア
ミノ−２−Ｆｍｏｃ−アミノ酪酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）およびＨＯＢＴ（１．５当量）の溶液を前記樹脂に加えた。反応混合物を常温で１２時間振盪した後、前記樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、さらにＤＣＭで洗浄した。
【００８５】
（第３段階）
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その後、反応混合物を常温で３０分間振盪した。このような脱保護工程を繰り返し行った。生成混合物を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、さらにＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，５−ジメトキシ−ペンタン酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）、およびＨＯＢＴ（１．５当量）の溶液を前記樹脂に加えた。反応混合物を常温で１２時間振盪した後、前記樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、さらにＤＣＭで洗浄した。
【００８６】
（第４段階）
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。そ
の後、反応混合物を常温で３０分間振盪した。このような脱保護工程を繰り返し行い、生成混合物を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、さらにＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の市販で入手可能なＲ3−酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）、およびＨＯＢＴ（１．５
当量）の溶液を前記樹脂に加えた。反応混合物を常温で１２時間振盪した後、前記樹脂を、ＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、さらにＤＣＭで洗浄した。
【００８７】
（第５段階）
前記樹脂を常温で１８時間ギ酸（各ウェル当たり１．２ｍＬ）で処理した。その後、前記樹脂を濾過によって除去し、濾液をＳｐｅｅｄＶａｃ（Ｓｅｒｖａｎｔ）を用いて減圧の下に濃縮させることにより、生成物をオイルの形で得た。これらの生成物は、５０％水／アセトニトリルで希釈し、冷凍させた後、凍結乾燥した。
【００８８】
表３は本発明によって製造することが可能なβ−ストランドミメティックスライブラリを示し、その代表的な調製は実施例１０に示す。表３の化合物は、本発明の一つの態様、すなわちＡが−（ＣＨ）−であり、Ｂが−（ＣＨ2）m−（ここで、ｍ＝１）、Ｗが存在せず（すなわち、Ｒbと複素環のＮとの間に直接結合）、Ｘが−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−であり、
Ｙが酸素であり、Ｚが水素であり（その結果、Ｃ＝ＺがＣＨ2を示す）、Ｌが−Ｃ（＝Ｏ
）ＮＨＲ3であり、ｎ＝０、Ｒ4が水素であり、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、同一または異なっ
て、アミノ酸側鎖部分またはその誘導体、分子の残部、リンカーおよび固体支持体から独立に選択される化合物およびこれらの化合物の立体異性体を例示する。本発明の態様の様々な実施態様において、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、比較的低分子量部分、すなわち１５（メ
チル）〜１，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する有機基から独立に選択され、および／またはＲ1、Ｒ2およびＲ3の少なくとも一つがアミノ酸側鎖またはその誘導体を示す。例え
ば、表３の化合物において、Ｒ3はグルタル酸誘導体を示す。一つの態様において、本発
明の化合物は、約４５０〜８００ｇ／ｍｏｌ範囲内の分子量を有する。ここで、表３の化合物は、このような化合物の例を多数提供する。
【００８９】
【表３】
0004546923.tif 000038
0004546923.tif 000039
0004546923.tif 000040
0004546923.tif 000041
0004546923.tif 000042
0004546923.tif 000043
0004546923.tif 000044
0004546923.tif 000045
0004546923.tif 000046
0004546923.tif 000047
【００９０】
本発明のβ−ストランドミメティック構造体は、生理活性剤、例えば診断剤、予防剤および治療剤などとして使用できる。前記化合物は、医薬的に許容される形に剤形化された後、本発明のβ−ストランドミメティック構造体による治療を必要とする患者に投与されるのが好ましい。
【００９１】
したがって、本発明は、化学式（Ｉ’’）から（Ｉ’’’’）の化合物を含む医薬組成物を提供する。本発明の化合物を含む医薬組成物の製造において、当該分野の技術者は、関連分野に知られている公知の知識および技術を使用することができる。一般に知られている様々なキャリアおよびその他の添加剤は、本発明の組成物の製造のために使用される。本発明の医薬組成物は、例えば経口投与、直腸投与または非経口投与によって、治療しようとする疾患症状に対する標準的な方法で投与することができる。
【００９２】
これらの目的のために、本発明の化合物は、例えば錠剤、カプセル剤、水性もしくは油性液剤または懸濁剤、（脂質）エマルジョン、分散可能な粉末剤、座剤、軟膏、クリーム、点滴剤、および滅菌注射可能な水性または油性液剤または懸濁剤の形に当該分野における公知の方法によって剤形化されてもよい。
【００９３】
本発明の適切な医薬組成物は、約１ｍｇ〜約１ｇの本発明の化合物を含有する、例えば錠剤またはカプセルなどの単位用量の形で経口投与に適したものである。
【００９４】
別の特徴は、本発明の医薬組成物は、静脈内、皮下または筋肉内注射に適したものである。患者は、例えば本発明の化合物約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの静脈内、皮下または筋肉内用量の投与を受けることができる。静脈内、皮下または筋肉内用量は、大量注射によって供給されてもよい。代わりに、静脈内用量は、一定の期間連続注入によって供給されてもよい。
【００９５】
代わりに、患者は、一日非経口用量と殆ど同一の一日経口用量の投与を受けてもよい。前記組成物は一日に１〜約４回投与される。
【００９６】
下記表は、人間の治療または予防のために、前記化合物またはその医薬的に許容される塩を含有する代表的な医薬剤形を例示したものである：
[表]
0004546923.tif 000048
【００９７】
一般式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成物は、温血動物でプロテアーゼを阻害すること、温血動物で細胞シグナル転写因子関連ペプチドを調節すること、および温血動物でキナーゼを阻害することを含む、様々な生物学的に望ましい効果のために使用することができる。これらの効果は、一般式（Ｉ）の化合物の有効量を必要とする動物に投与することを含む方法によって達成することができる。
【００９８】
さらに、詳細に後述するように、本発明のβ−ストランドミメティック構造体は、温血動物でＴ−細胞受容体へのペプチドのＭＨＣ−１および／またはＭＨＣ−ＩＩ存在を抑制すること、温血動物でＳＨ２ドメインへのペプチド結合を抑制すること、温血動物でＳＨ３ドメインへのペプチド結合を抑制すること、温血動物でＰＴＢ領域へのペプチド結合を抑制すること、温血動物でＧ蛋白質共役型受容体（ＧＰＣＲ）およびイオンチャネルを調節すること、および温血動物でサイトカインを調節することに効果的であり得る。
キナーゼ阻害（ＳＨ２およびＳＨ３ドメイン抑制を含む）
一つの特徴において、本発明は、温血動物でキナーゼを阻害する方法を提供する。本方法は、キナーゼの阻害に有効な量で本発明の化合物を動物に投与することを含む。キナーゼ（または蛋白質キナーゼとして知られている）は、生体分子（代表的には別の酵素）がリン酸化される反応を触媒する部類の酵素である。１０００個程度のキナーゼは、哺乳動物ゲノムにおいてエンコードされると考えられる(Hunter, Cell 50:823-829, 1987)。多
数のキナーゼにより、速いシグナル増幅および多重点における調節を可能にする。
【００９９】
リン酸化は、シグナル変換工程で発見された非常に一般的な共有結合変形であり、且つ、リン酸化される蛋白質の活性における変化の原因となる。したがって、キナーゼは、シグナル経路の重要な成分である。キナーゼは、いろいろのモジュール作用部位、すなわち「ドメイン」に典型的には体系づけられる(Cohen, G. B., et al. Cell 80:237-248, 1995)。「ＳＨ３」として知られている一つのドメインは、プロリンがたくさん含有されたペプチド、特に延長されたストランドに結合する５５〜７０アミノ酸の領域である。「ＳＨ２」として知られているもう一つのドメインは、長さ約１００個のアミノ酸のホスホチロシン結合領域である。これらの２領域は、蛋白質基質を認識し結合することと関連があるものと考えられている。これらだけでなく、ミリストリル化部位およびパルミトイル化部位を含んだ別のドメインは、正確な標的に触媒領域を導く多蛋白質複合体の集合に関与する(Mayer et al. Mol. Cell. Biol. 12:609-618, 1992; and Mayer and Baltimore, Mol.
Cell. Biol. 14:2883-2894, 1994)。ＳＨ２およびＳＨ３ドメインは、いくつかのキナーゼに存在するものと知られているが、これらのドメインは、別の蛋白質にも存在する。本発明の化合物は、キナーゼまたは別の蛋白質においてＳＨ２−またはＳＨ３−媒介結合を阻害するのに使用できる。
【０１００】
キナーゼは、莫大な数の相異なる且つたまに相互関連している、細胞内シグナル変換メカニズムにおける物質によって使用される。例えば、成長因子、転写因子、ホルモン、細胞サイクル調節蛋白質、および多くの他の部類の細胞調節剤は、そのシグナル伝達系においてチロシンキナーゼを使用する(参照： Bolen et al. FASEB J. 6:3403-3409, 1992; and Ullrich and Schlessinger, Cell 61:203-212, 1990)。セリン／チロシンキナーゼは
、キナーゼファミリーの大部分の残部を形成する。
【０１０１】
生体内および生体外における酵素の役割を決定しかつ酵素作用を理解するための一つの重要なアプローチは、特定の酵素阻害剤の使用である。一つ以上の化合物が酵素を阻害するものと見出されれば、その阻害剤は酵素活性の調節に使用することができ、且つその減少効果が認められる。このようなアプローチは、中間代謝の多くの経路を解読する手段になり、かつ酵素動力学について知ること、および触媒メカニズムを決定するのに重要である。本発明は、このような化合物を提供する。
【０１０２】
多くの免疫反応の調節は、ＳＨ２ドメインを含むチロシンキナーゼを介してシグナルを伝送する受容体を通じて媒介される。抗原特異性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を通じてのＴ細胞活性化は、リンフォカイン分泌および細胞増殖を誘導する情報伝達カスケードを開始する。ＴＣＲ活性化の後、最も初期の生化学的反応の一つは、チロシンキナーゼ活性の増加である。特に、Ｔ細胞活性化および増殖は、ＳＨ２ドメインを含むＺＡＰ−７０およびＳｙｋ(Weiss and Litman, Cell 76:263-274, 1994)だけでなく、ｐ５６lckおよびｐ５９fynチロシンキナーゼのＴ細胞受容体媒介活性化によって調節される。追加的な証拠は、幾
つかのｓｒｃ−ファミリーキナーゼ（ｌｃｋ、ｂｌｋ、ｆｙｎ）がＢ細胞抗原受容体から発生する情報伝達経路に参加し、これにより幾つかの独立した受容体構造体から受け取った刺激を統合するのに役立ち得ることを示す。よって、これらＳＨ２ドメインキナーゼがその認識受容体と相互作用することをブロックする阻害剤は、自己免疫疾患、移植拒否に
おいて有用性を有する免疫抑制剤として、またはリンパ性白血病の場合には抗癌剤だけでなく抗炎症剤として役立ち得るであろう。
【０１０３】
さらに、ＳＨ２ドメインを含む非膜貫通型ＰＴＰａｓｅが知られており、命名法はこれらをＳＨ−ＰＴＰ１およぼＳＨ−ＰＴＰ２と言及し(Neel, Cell Biology 4:419-432, 1993)、ＳＨ−ＰＴＰ１はＰＴＰ１C、ＨＣＰまたはＳＨＰと同一であり、ＳＨ−ＰＴＰ２は
ＰＴＰ１ＤまたはＰＴＰ２Ｃとしても知られている。ＳＨ−ＰＴＰ１は全ての系列および全ての分化段階の造血性細胞において高度で発現される。ＳＨ−ＰＴＰ１遺伝子は、モスイートン（ｍｅ）マウス表現型に関与するものと同定されたため、これはその細胞基質との相互作用をブロックする阻害剤の効果を予測する基準を提供する。したがって、ＳＨ−ＰＴＰ１作用の阻害は、分裂促進刺激に対する損傷Ｔ細胞反応、減少したＮＫ細胞作用、および上述したような強力な治療適用によってＢ細胞前駆体の枯渇を生じさせるものと期待される。
【０１０４】
ＳＴＡＴ６のＳＨ２ドメインに結合し、または蛋白質チロシンホスファターゼＳＨ-Ｐ
ＴＰ１のＳＨ２ドメインに結合する本発明の化合物の能力は、文献(Payne et al., P.N.A.S. USA 90:4902-4906, 1993)に開示された処置によって立証することができる。ＳＨ２
結合ミメティックスのライブラリは、Songyang et al., Current Biology 4:973-982, 1994の処置によってスクリーニングされることができる。化合物の蛋白質キナーゼの基質または抑制剤として作用する能力を試験するためのＳｏｎｇｙａｎｇ等(Current Biology 4:973-982, 1994)によって提示された処置も参照されたい。
【０１０５】
したがって、一つの特徴において、本発明は、ホスファターゼの阻害に有効な量で本発明の化合物を動物に投与することを含む、温血動物でホスファターゼを阻害する方法を提供する。
【０１０６】
タイプ２（非インスリン依存性）糖尿病において、チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ−１ｂ）は、活性化されたインスリン−受容体キナーゼの効果を相殺させ、且つ重要な薬物標的を示すことができる。試験管内実験により、ＰＴＰａｓｅの注射が内因性蛋白質に対するチロシン残基のインスリン刺激によるリン酸化をブロックすることが示される。したがって、本発明の化合物は、糖尿病におけるインスリン作用の調節に使用することができる。
【０１０７】
別の特徴において、本発明は、第２蛋白質のＳＨ２ドメインに第１蛋白質内のホスホチロシン残基の結合を阻害する方法を提供する。この方法は、第１および第２蛋白質を含む組成物に一定量の本発明の化合物を接触させることを含む。この量は、第１蛋白質のホスホチロシン残基および第２蛋白質のＳＨ２ドメインを介して発生する第１および第２蛋白質間の結合を緩めさせることに効果的である。
【０１０８】
プロテアーゼ抑制
別の特徴において、本発明は、温血動物内のプロテアーゼを阻害する方法を提供する。この方法は、ここに記述されたような一定量の本発明の化合物を動物に投与することを含む。この量は、動物内のプロテアーゼの阻害に効果的である。様々な実施態様において、プロテアーゼはセリンプロテアーゼであり、前記プロテアーゼはトロンビン、因子Ｘ、因子ＩＸ、因子ＶＩＩ、因ＸI、ウロキナーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、キマーゼトリプター
ゼおよびカリクレインから選択されたセリンプロテアーゼであり、前記プロテアーゼはトロンビンであり、前記プロテアーゼは因子ＶＩＩであり、前記プロテアーゼはアスパルチック、システイン、およびメタロプロテアーゼから選択される。
【０１０９】
プロテアーゼ抑制に関して、カテプシンＢは、通常、プロ酵素プロセシングおよび蛋白
質代謝回転に関与したリソソームシステインプロテアーゼである。上昇した程度の活性は、腫瘍転移(Sloane, B. F. et al., Cancer Metastasis Rev. 9:333-352, 1990)、関節リウマチ(Werb, Z. Textbook of Rheumatology, Keller, W. N.; Harris, W. D.; Ruddy, S.; Sledge, C. S., Eds., 1989, W. B. Saunder Co., Philadelphia, Pa., pp. 300-321)、および筋ジストロフィー(Katunuma and Kominami, Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 108:1-20, 1987)に関係している。
【０１１０】
カルパインは、細胞質ゾルまたは膜結合Ｃａ++−活性化プロテアーゼであり、これは細胞内のカルシウム濃度を変化させる反応において細胞骨格蛋白質の分解の原因である。これらは関節炎および筋ジストロフィーにおける組織分解に寄与する(参照：Wang  and Yuen Trends Pharmacol. Sci. 15:412-419, 1994)。
【０１１１】
インターロイキン転換酵素（ＩＣＥ）は、プロ−ＩＬ−１ベータを、炎症の主要媒介体であるＩＬ−１ベータに分裂させ、よって、ＩＣＥの阻害剤は、関節炎の治療に有用であることを立証することができる(参照： Miller B. E. et al., J. Immunol. 154:1331-1338, 1995)。ＩＣＥまたはＩＣＥ様プロテーゼも、アポプトーシス（計画された細胞死滅
）に作用し、よって、癌、ＡＩＤＳ、アルツハイマー病、およびその他の疾患（調節されていないアポプトーシスが関与）で重要な役割をする(参照：Barr and Tomei, Biotechnol. 12:487-493, 1994)。
【０１１２】
ＨＩＶプロテアーゼは、ＨＩＶ、ＡＩＤＳウィルスのライフサイクルに重要な役割をする。ウィルス成熟の最終段階において、これは、ポリ蛋白質前駆体をビリオン核の機能酵素と構造蛋白質に分裂させる。ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤は、ＡＩＤＳの優れた治療標的として速く同定され(参照：Huff, J. R., J. Med. Chem. 34:2305-2314)、リトナビル、
クリキシバン、サクイナビルの最近ＦＤＡ承認によって立証されたように、治療などに有用なものと証明されている。
【０１１３】
Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）は、今日、全世界にわたって非Ａ型肝炎および非Ｂ型肝炎の主要原因となっている。５千万名もＣ型肝炎ウィルスに感染したものと推測される。現在、このような消耗性疾患の進行を防ぐことが可能な、満足すべき治療法はない。ウィルスのライフサイクル途中、約３０００個のアミノ酸のポリプロテインが生産され、宿主およびウィルスのプロテアーゼによる蛋白質分解によって分裂され、成熟したウィルス遺伝子生成物を生産する。ＨＣＶ ＮＳ３蛋白質内に位置したセリンプロテアーゼは、４個の
特定の位置で開裂し、ウィルス複製に必須的なものと考えられる非構造性蛋白質を生産する。したがって、ＨＣＶプロテアーゼの抑制剤は、医薬デザインの魅力的な標的であり、且つ大きい治療利点があり得る(Neddermann et al., Biol. Chem. 378:469-476, 1997.)
。
【０１１４】
アンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）は、血圧の調節において中心役割をするレニン・アンギオテンシン系の一部である。ＡＣＥは、アンギオテンシンＩを、その血管収縮作用ゆえに強力な血圧上昇剤であるオクタペプチドアンギオテンシンＩＩに分裂させる。ＡＣＥの阻害は、高血圧の治療に治療学的に有用なものと立証された(Williams, G. H., N. Engl. J. Med. 319:1517-1525, 1989)。
【０１１５】
コラゲナーゼは、細胞外マトリックス（例えば、結合組織、皮膚、血管）の主要構成分であるコラーゲンを分裂させる。増加したコラゲナーゼ活性は、関節炎(Krane et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 580:340-354, 1990.)、腫瘍転移(Flug and Kopf-Maier, Acta Anat. Basel 152:69-84, 1995)、および結合組織の分解を含んだその他の疾患に寄与する。
【０１１６】
トリプシン様セリンプロテアーゼは、止血／凝固(Davie and Fujikawa, Ann. Rev. 799
-829, 1975)および補体活性化(Muller-Eberhard, Ann. Rev. Biochem. 44:697-724, 1975)に関連した大きな高度に選択的なファミリーの酵素を形成する。これらプロテアーゼの
配列順序分析は、アミノ酸の挿入を有する同種のトリプシン様核の存在を示したが、これは特異性を変化させ、一般に、他の巨大分子成分との相互作用の原因である(Magnusson et al., Miami Winter Symposia 11:203-239, 1976)。
【０１１７】
トロンビン、すなわちトリプシン様セリンプロテアーゼは、フィブリノゲンからフィブリンの生成及び血小板受容体の活性化の両方において制限された蛋白質分解を提供するように作用し、これにより血栓症および止血において重要な役割を果たす(Mann, K. G., Trends Biochem. Sci. 12:229-233, 1987)。トロンビンは、フィブリノゲンにおける１８１個のＡｒｇ−またはＬｙｓ−Ｘａａ配列の只２つのＡｒｇ−Ｇｌｙ結合の選択的分裂によって、フィブリノゲンのフィブリノペプチドＡおよびＢの除去において著しい特異性を示す(Blomback, Blood Clotting Enzymology, Seeger, W. H. (ed.), Academic Press, New
York, 1967, pp. 143-215)。
【０１１８】
多くの顕著な疾病症状は、急性冠症候群を含んだ非正常止血に関連している。アスピリンおよびヘパリンは、急性冠症候群を有する患者の治療に広く使用されている。ところが、これらの薬剤は幾つかの固有な制限を有する。例えば、動脈硬化性プラークの破裂を伴う止血は、アスピリンおよびヘパリンによる阻害に比較的耐性を有するトロンビン媒介、血小板依存性プロセスである傾向がある(Fuster et al., N. Engl. J. Med. 326:242-50,
1992)。
【０１１９】
トロンビン抑制剤は、生体内血管損傷部位におけるトロンビンの形成を防止する。さらに、トロンビンは、また、冠状動脈において機械的傷部位の平滑筋細胞増殖を開始する強力な成長因子なので、阻害剤は、このような増殖性平滑筋細胞反応をブロックし、且つ再狭搾症を減少させる。トロンビン抑制剤は、また、血管壁細胞において炎症反応を減少させる(Harker et al., Am. J. Cardiol. 75:122-16B, 1995)。
【０１２０】
しかも、少なくとも２つのよく定義された転写因子、核因子（ＮＦ）ｋＢおよび活性化蛋白質（ＡＰ）−１は、細胞内還元−酸化（レドックス）状態によって調節される。レドックス状態による遺伝子発現の調節は、可能性のある治療との関連に有効である。例えば、レドックス調節転写因子ＮＦ−ｋＢおよびＡＰ−１の結合部位は、ＡＩＤＳ、癌、アテローム性動脈硬化および糖尿合併症といった疾患の病因論に直接連関した様々な遺伝子のプロモーター領域に位置する(Sen and Packer, FASEB Journal 10:709-720, 1996)。さらに具体的に、ＤＮＡ上のコンセンサス部位へのＮＦ−ｋＢおよびＡＰ−１などの転写因子の結合は、酸化剤−抗酸化剤の止血によって、特にチオール−ジスルフィドバランスによって推進される。
【０１２１】
ＮＦ−ｋＢの場合、ＮＦ−ｋＢ作用の調節に重要な役割をする生理学的に関連したチオールは、還元されたチロレドキシンまたは還元されたチオレドキシン様蛋白質である。チオレドキシンは、抗酸化剤の作用を有する重要な蛋白質酸化還元酵素である。チオレドキシンは、活性化ＮＦ−ｋＢのＤＮＡ結合を過度に調節して、遺伝子発現を増加させることが明らかになった(Schenk et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:1672-1676, 1994)。チオレドキシンは、活性化された細胞質ゾルＮＦ−ｋＢの還元（具体的にシス−６２の還元）に関連しており、よってその核転移およびＤＮＡ結合に寄与することができる(Hayashi et at., J. Biol. Chem. 268:11380-11388, 1993)。
【０１２２】
ＡＰ−１複合体におけるＦｏｓおよびＪｕｎのＤＮＡ結合活性は、レドックス状態によって調節されることが明らかになった(Abate et al., Science 249:1157-1162, 1990)。
それぞれの蛋白質は、そのＤＮＡ結合ドメインにおいて単一保存システイン（リジンとア
ルギニンの間に挟まれる）を含む。このチオールは、ジスルフィド結合の一部ではないようで、かつその酸化形態においてスルフェン酸またはスルフィン酸として存在することができる。Ｒｅｆ−１、エンドヌクレアーゼＤＮＡ治癒活性も有する二機能性核蛋白質は、この調節システインの還元によってＡｐ−１ ＤＮＡ結合を刺激する。重要なシステイン
がセリンで置き換えられたＦｏｓ変異体は、ＡＰ−１ ＤＮＡ結合活性において３倍増加
を導出し、かつそれ以上レドックス調節に従わなかった(Okuno et al., Oncogene 8:695-701, 1993)。したがって、転写因子のｆｏｓファミリーの少なくとも４つ、ｊｕｎファミリーの３つ、およびＡＴＦ／ＣＲＥＢファミリーの少なくとも４つはいずれも前記保存システインを含有するので、転写因子のレドックス調節は広く行き渡ったようである。
【０１２３】
上述したように、ＮＦ−ｋＢおよびＡＰ−１などの転写因子の調節は、重要な治療との関連を持つ。例えば、ＡＰ−１は、腫瘍生産の重要な媒介体である(Yoshioka et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:4972-4976, 1995)。したがって、ＡＰ−１転写活性を抑制する化合物は、癌の治療に有用である。しかも、炎症性サイトカインおよびエンドトキシンに対する反応の調節に直接的な役割をするため、ＮＦ−ｋＢの活性化は、関節リウマチなどの慢性疾患および敗血性ショックなどの急性病態の展開において重要な役割をする。自己免疫疾患、たとえば全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、およびアルツハイマー病は、ＮＦ−ｋＢの活性化に関連したものと信じられる。これと同様に、ＮＦ−ｋＢは、ＨＩＶ遺伝子発現の活性化において重要な役割をする。ＮＦ−ｋＢを関与させると考えさせる更なる病気には、インフルエンザ、アテローム性動脈硬化、腫瘍形成および毛細血管拡張性運動失調（ＡＴ）を含む。
【０１２４】
酸化還元酵素の阻害
転写因子の調節に関して、本発明の化合物は、ＤＮＡに結合する能力が細胞酸化還元酵素によるシステイン残基の還元によって調節される転写因子を調節する。一つの実施態様において、転写因子はＮＦ−ｋＢである。この実施態様において、本発明の化合物は、免疫および／または炎症性反応の媒介体として活性を有し、あるいは細胞成長を調節するのに役立つ。別の実施態様において、転写因子はＡＰ−１であり、細胞酸化還元酵素はＲｅｆ−１である。この実施態様において、本発明の化合物は、抗炎症剤および／または抗癌剤として活性を有する。追加の実施態様において、転写因子は、Ｍｙｂおよび糖質コルチコイド受容体から選択される。本発明の範囲内で調節されることが可能な他の転写因子は、Ｒｅｌ−Ａ、ｃ−Ｒｅｌ、Ｒｅｌ−Ｂ、ｐ５０およびｐ５２などのＮＦ−ｋＢファミリーのもの；Ｆｏｓ、ＦｏｓＢ、Ｆｒａ−１、Ｆｒａ−２、Ｊｕｎ、ＪｕｎＢおよびＪｕｎＤなどのＡＰ−１ファミリーのもの；ＡＴＦ；ＣＲＥＢ；ＳＴＡＴ−１、−２、−３、−４、−５および−６；ＮＦＡＴ−１、−２および−４；ＭＡＦ；甲状腺因子；ＩＲＦ；Ｏｃｔ−１および−２；ＮＦ−Ｙ；Ｅｇｒ−１；およびＵＳＦ−４３を含む。
【０１２５】
したがって、別の特徴において、本発明は、酸化還元酵素の阻害に効果的な量で本発明の化合物を動物に投与することを含む、温血動物の酸化還元酵素を阻害する方法を提供する。酸化還元酵素活性の阻害は、転写を調節する手段として使用することができる。
【０１２６】
ＣＡＡＸ抑制
別の特徴によれば、本発明は、温血動物のＣＡＡＸ阻害方法を提供する。本方法は、ここに記述されたような一定量の本発明の化合物を動物に投与することを含む。この量は、動物においてＣＡＡＸ阻害を提供することに効果的である。
【０１２７】
Ｒａｓ、すなわちｒａｓ腫瘍遺伝子の蛋白質生成物は、シグナル転写調節細胞分割および成長に関連している膜結合蛋白質である。ｒａｓ遺伝子における突然変異は、ヒト癌に関連した最も一般的な遺伝子異常中に含まれる(Barbacid, M. Annu Rev Biochem 56:779-827, 1987)。これらの突然変異は、癌細胞の原因となる常時「ｏｎ」の成長シグナルを発
生させる。細胞膜に局所化されるために、Ｒａｓはファルネシルトランスフェラーゼ（ＦＴａｓｅ）によるＣ末端ＣＡＡＸ配列内のシステインのプレニル化を必要とし、配列ＣＡＸＸにおいて、「ａ」は疎水性側鎖を有するアミノ酸と定義され、「Ｘ」は別のアミノ酸と定義される。このような翻訳後の変形はその活性に重要である。配列ＣａａＸを有するＦＴａｓｅのペプチジル阻害剤は、細胞培養および動物全体における腫瘍の成長をブロックまたは遅延させることが示されている(Kohl et al., Science 260:1934-1937, 1993; Buss and Marsters, Chemistry and Biology 2:787-791, 1995)。
【０１２８】
ＣＡＡＸ活性を抑制するための化合物の活性をスクリーニングする方法が、当該分野に公知となっている。参考まで、米国特許第６，３９１，５７４号は、細胞内のCＡＡX蛋白質のＡＡＸトリペプチドの蛋白質分解による除去を阻害する化合物を同定する方法を開示している。また、米国特許第５，９９０，２７７号は、幾つかの適切な分析および引例を開示している(参考文献：Gibbs et al., Cell 77:175, 1994; Gibbs, Cell 65:1, 1991; Maltese, FASEB J. 4:3319, 1990; Moores et al., J. Biol. Chem. 266:14603, 1991; Goldstein et al., J. Biol. Chem. 266:15575, 1991; European Patent 0 461 869 A2; Casey, J. Lipid Res. 33:1731-1740, 1992; Cox et al., Curr. Opin. Cell Biol. 4:1008-1016. 1992; Garcia et al., J. Biol. Chem. 268:18415-18418, 1993; Vogt et al., J. Biol. Chem. 270:660-664, 1995; Kohl et al., Science, 260:1934-1937, 1993; Garcia et al., J. Biol. Chem., 268:18415-18418, 1993; and Vogt et al., J. Biol. Chem. 270:660-664, 1995)。
【０１２９】
ＭＨＣ分子
別の特徴において、本発明は、クラス１およびクラス２ＭＨＣ分子への抗原性ペプチドの結合を阻害する方法を提供する。この方法は、抗原性ペプチドと、クラス１またはクラス２のＭＨＣ分子の２つの中の一つとを含む組成物に本発明の化合物を接触させることを含む。この化合物は、２種間の結合親和性を減少させるのに有効な量で抗原／分子と接触される。
【０１３０】
免疫システムの重要な様相は、Ｔ細胞反応である。この反応は、Ｔ細胞がヒト白血球抗原（「ＨＬＡ」）と呼ばれる細胞表面分子の複合体、または主要組織適合複合体（「ＭＨＣｓ」）、およびペプチドを認識し、これらと相互作用することを必要とする(参照： Male et al., Advanced Immunology (J. P. Lipincott Company, 1987)。抗原は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によってエンコードされるクラスＩＩグリコ蛋白を、その表面に含有する抗原保有細胞（ＡＰＣ）によって摂取されるようにすることにより、少なくとも部分的に免疫反応を流動化する。次いで、抗原は、表面結合ＭＨＣ糖蛋白質の内容物中の特異性Ｔヘルパー細胞に伝えられ、かつ抗原−ＭＨＣ複合体と抗原特異性Ｔ細胞受容体の相互作用によって、Ｔヘルパー細胞は細胞毒性Ｔ細胞機能の誘導、Ｂ細胞作用の誘導、およびこの反応を補助し支援する多数の因子の分泌を含む、抗原特異性免疫反応を媒介することを促進する。本発明の一つの様態において、ＭＨＣ分子は、ＨＬＡ−Ａ２．１、ＨＬＡ−ＡｌまたはＨＬＡ−Ａ３．１、またはメラノーマ患者に存在する他のＨＬＡ対立遺伝子である。
【０１３１】
本発明の化合物のＭＨＣＩ分子に結合する能力は、Elliot et al., Nature 351:402-406, 1991に記述されたように、本質的に明らかにすることができる。同様に、本発明の化
合物のＭＨＣＩＩ分子に結合する能力は、文献「Kwok et al., J. Immunol. 155:2468-
2476, 1995」に提示された処理によって明らかにすることができる。
【０１３２】
１４−３−３ドメインを有する蛋白質
別の特徴によれば、本発明は、１４−３−３ドメインを含む第２ペプチドと第１ペプチドとの結合を阻害する方法を提供し、ここで、第１ペプチドは、第２ペプチドの１４−３
−３ドメインに対して結合親和性を有する。この方法は、第２蛋白質の１４−３−３ドメインに対して結合親和性を有する（第１）ペプチドを含む組成物に、本発明の化合物を接触させることを含む。
【０１３３】
１４−３−３ドメインを有する蛋白質およびその結合パートナーは、文献に記述されている。これらのペプチドは、本発明の方法で使用することができる(参照：Dai and Murakami, J Neurochem 2003 Jan. 84(1):23-34; Lim et al., J Biol Chem 2002 Oct. 25, 277(43):40997-1008; Parvaresch et al., FEBS Lett 2002 Dec. 18, 532(3):357-62; Eilers et al., Mol Cell Biol 2002 Dec. ;22(24):8514-26; Liu et al., Cancer Res 2002 Nov. 15, 62(22):6475-80; Truong et al., Proteins 2002 Nov. 15, 49(3):321-5; Birkenfeld et al., Biochem J 2003 Jan. 1, 369(Pt 1):45-54; Espejo et al., Biochem J 2002 Nov. 1, 367(Pt 3):697-702; and Benzing et al., J Biol Chem 2002 Sep 6, 277(36):32954-62)。
【０１３４】
本発明の方法の実施において、治療学的有効量の本発明の化合物は、治療を必要とする温血動物に投与される。例えば、本発明の化合物は、クローン病、喘息、関節リウマチ、局所貧血、再潅流傷害、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病、同種移植の拒絶反応、および成人Ｔ細胞白血症のいずれか一つまたはそれ以上から選択された症状と診断されるかあるいはこれらの症状に発展する危険のある温血動物に投与されることができる。
【０１３５】
結節硬化合併症
結節硬化合併症（ＴＳＣ）を有する患者は、脳、心臓、腎臓およびその他の組織における多発性病所障害に典型的には展開する(参照：Gomez, M.R. Brain Dev. 17(suppl):55-57, 1995)。哺乳動物細胞の研究は、ＴＳＣ１（ハマルチンを発現する）およびＴＳＣ２（チュベリンを発現する）の過剰発現が、細胞増殖を消極的に調節し且つＧ１／Ｓ拘束を誘発することを示している(参照： Miloloza, A. et al., Hum. Mol. Genet. 9:1721-1727,
2000)。他の研究は、ハマルチンおよびチュベリンがβ−カテニン分解複合体の水準で作用し、さらに具体的には、これら蛋白質がβ−カテニン分解複合体に関係することにより、βカテニン安定性および活性を消極的に調節することを示している(参照：Mak, B.C., et al. J. Biol. Chem. 278(8):5947-5951, 2003)。β−カテニンは、膜−結合カドヘリ
ンファミリーのメンバーとの結合によって細胞接着に関係し、かつＷｎｔ／Ｗｉｎｇｌｅｓｓ経路の主要成分として細胞増殖および分化に関係する９５−ｋＤａ蛋白質である(参
照： Daniels, D.L., et al., Trends Biochem. Sci. 26:672-678, 2001)。この経路の破損は、ヒトおよび齧歯動物において腫瘍原性であることが示された。本発明は、βカテニン活性、特に他の蛋白質との相互作用を調節し、よってＴＳＣの治療に使用することが可能な化合物を提供する。
【０１３６】
以下の実施例は、説明のためのものであり、限定されない。
実施例
製造実施例および実施例において、下記の略字が使用される：
ＢＭＳ:ボロンジメチルスルフィド
ＣｂｚＯＳｕ：ベンジルオキシカルボニルＮ−ヒドロキシスクシンイミド
ＤＩＣ：１，３−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＥＡ：Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＡ：酢酸エチル
ＥＤＣ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＥＤＣＩ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＦｍｏｃＯｓｕ：９−フルオレニルオキシカルボニルＮ−ヒドロキシスクシンイミド
ＨＡＴＵ：［２−（１Ｈ−９−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロフォスフェイト］
Ｈｅｘ．：ヘキサン
ＨＯＢＴ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭＣ：塩化メチレン
ＭｅＯＨ:メタノール
−ＯＢｎ：−Ｏ−ベンジル
ＰＰＴＳ：ピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネート
ＰｙＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェイト
ｐ−ＴｓＯＨ：ｐ−トルエンスルホン酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフロン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィ
製造実施例１
（１）ナフタレン−２−カルボン酸アミドの製造
【０１３７】
【化１９】
0004546923.tif 000049
【０１３８】
ＭＣ（２００ｍＬ）中の２−ナフトエ酸（２５ｇ、０．１４５モル）溶液に塩化オキサリル（３８ｍＬ、０．４３５６モル）および触媒量のＤＭＦを加え、室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、粗塩化アシルをＭＣ（２００ｍＬ）で希釈し、ここに水酸化アンモニウム水溶液（１６０ｍＬ）を氷浴温度で滴下した。１時間攪拌の後、沈殿した生成物を吸引ろ過によって収集し、ヘキサンで粉末にし、乾燥させて標題の化合物を得た。これはそれ以上の精製なしに次の段階に使用された。
【０１３９】
（２）ナフタレン−２−イル−メチルアミンの製造
【０１４０】
【化２０】
0004546923.tif 000050
【０１４１】
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の前記工程（１）で得た粗アミドの溶液に、ＢＭＳ（２７．５ｍＬ、０．２９０４ｍｏＬ）を０℃でゆっくり加えた。生じた反応混合物を、３時間６０℃で加熱し、５％ＨＣｌで０℃に冷却させ、ＥＡで抽出して５％ＨＣｌで洗浄した。水層を合わせて、１Ｎ ＮａＯＨで塩基性にした後、再度ＥＡで抽出した。有機層を合わせて
、濃縮することにより、標題化合物（１３ｇ）を白い固体として得た。
ＴＬＣシステム１：ＭＣ／ＭｅＯＨ＝９０：１０ｖ／ｖ  Ｒｆ＝０．２３
【０１４２】
【数１】
0004546923.tif 000051
【０１４３】
製造実施例２
（１）１Ｈ−インドール−２−カルボン酸アミドの製造
【０１４４】
【化２１】
0004546923.tif 000052
【０１４５】
ＭＣ（３０ｍＬ）中のインドール−２−カルボン酸（１ｇ、６．２１ｍｍｏＬ）溶液に、塩化オキサリル（１．６４ｍＬ、１８.６２ｍｍｏＬ）および触媒量のＤＭＦを加え、
室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、粗塩化アシルをＭＣ（２０ｍＬ）で希釈し、ここに水酸化アンモニウム水溶液（７ｍＬ）を氷浴中で冷却させて滴下した。１時間攪拌の後、沈殿した生成物を吸引ろ過によって収集し、ヘキサンで粉末にし、乾燥させて標題の化合物を得た。これはそれ以上の精製なしに次の段階に使用された。
【０１４６】
（２）（１Ｈ−インドル−２−イル）のメチルアミンの製造
【０１４７】
【化２２】
0004546923.tif 000053
【０１４８】
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の前記工程（１）で得た粗アミドの溶液に、ＢＭＳ（１．１８ｍＬ、１２．４２ｍｍｏＬ）を０℃でゆっくり加えた。生じた反応混合物を３時間６０℃で加熱し、５％ＨＣｌで０℃で失活させ、ＥＡで抽出し、５％ＨＣｌで洗浄した。水層を合わせて、１Ｎ ＮａＯＨで塩基性にした後、再度ＥＡで抽出した。有機層を合わせて、濃
縮することにより、標題化合物（０．２８ｇ）を黄色固体として得た。
ＴＬＣシステム１：ＭＣ／ＭｅＯＨ＝９０：１０ｖ／ｖ  Ｒｆ＝０．１５
【０１４９】
【数２】
0004546923.tif 000054
【０１５０】
製造実施例３
（１）２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−オキソ−酪酸ベンジルエステルの製造
【０１５１】
【化２３】
0004546923.tif 000055
【０１５２】
ＭＣ（２００ｍＬ）中のＺ−Ａｓｐ−ＯＢｎ（１０ｇ、０．０２８ｍｏＬ）溶液に、塩化オキサリル（２．９３ｍＬ、０．０３３６ｍｏＬ）および触媒量のＤＭＦを０℃で加え、室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、粗塩化アシルをベンゼン（４００ｍＬ）に溶解させ、ここに水素化トリブチルスズ（１５．１ｍＬ、０．０５６ｍｏＬ）および触媒量のＰｄ（０）を０℃でゆっくり加え、一晩中、室温で攪拌した。溶媒を蒸発させた後、エーテル（１００ｍＬ）／水（１００ｍＬ）中１０％ＫＦを加えて室温で２時間攪拌した後、濾過によって２相の溶液を得た。有機層を分離し、濃縮することにより、粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィによって精製し、標題化合物Ｚ−Ａｓｐ−ＯＢｎアルデヒド（６ｇ）を淡黄色のオイルの形で得た。
Ｒｆ：ヘキサン／ＥＡ（２／１）中で０．２９
（２）２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４，４−ジメトキシ−酪酸ベンジルエステルの製造
【０１５３】
【化２４】
0004546923.tif 000056
【０１５４】
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の前記工程（１）で得たＺ−Ａｓｐ−ＯＢｎアルデヒド（６ｇ、１７．５８ｍｍｏＬ）の溶液に、触媒量のｐ−ＴｓＯＨを加え、室温で５時間攪拌した。反応完結の後、溶媒を蒸発させ、粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィによって精製することにより、標題化合物Ｚ−Ａｓｐ−ＯＢｎアセタール（５ｇ）を淡黄色のオイルの形で得た。
【０１５５】
Ｒｆ：Ｈｅｘ．／ＥＡ（２／１）中で０．３２
（３）２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４，４−ジメトキシ−酪酸の製造
【０１５６】
【化２５】
0004546923.tif 000057
【０１５７】
前記工程（２）で得たＺ−Ａｓｐ−ＯＢｎアセタール（０．５ｇ、１．２９ｍｍｏＬ）を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）／水（２０ｍＬ）中ＮａＯＨ（０．１１ｇ，２．１ｍｍｏＬ）に溶解させ、室温で３０分間攪拌した。出発物質が完全に消失した後、反応混合物を蒸発によって濃縮し、その後水／ＥＡによって希釈した。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌによって
０℃で非常に注意深くｐＨ４〜５に酸性化し、再度ＥＡで抽出した。有機層を合わせ、濃縮することにより、標題化合物Ｚ−Ａｓｐ−ＯＢｎアセタール（０．２７ｇ）を淡黄色のオイルの形で得た。
ＴＬＣシステム１：ヘキサン／ＥＡ＝２０：１０ｖ／ｖ  Ｒｆ＝０．１０
【０１５８】
【数３】
0004546923.tif 000058
【０１５９】
（４）２−アミノ−４，４−ジメトキシ−酪酸の製造
【０１６０】
【化２６】
0004546923.tif 000059
【０１６１】
水素ガスバルーンを備えた反応容器に、酢酸（２０ｍＬ）中の前記工程（３）で得たＺ−Ａｓｐ−ＯＢｎアセタール（２．２２ｇ，５．７３ｍｍｏＬ）溶液およびパールマン(Pearlman's)触媒を加えて一晩中室温で攪拌した。生じた混合物を濾過した後、濃縮し、凍結乾燥させることにより、粗生成物を得、これはそれ以上の精製なしに次の段階に使用された。
【０１６２】
（５）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４，４−ジメトキシ−酪酸の製造
【０１６３】
【化２７】
0004546923.tif 000060
【０１６４】
ＴＨＦ（１００ｍＬ）／水（１００ｍＬ）中の前記工程（４）で得た粗Ａｓｐ−ＯＨアセタールの溶液に、ＦｍｏｃＯｓｕ（２．１３ｇ、６．３ｍｍｏＬ）／重炭酸ナトリウム（１．９３ｇ、２２．９２ｍｍｏＬ）を加えて室温で一晩中攪拌した。生じた反応物を濃縮し、水／ＥＡで希釈した。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌによって０℃でｐＨ４〜５に非
常に注意深く酸性化し、再度ＥＡで抽出した。有機層を合わせ、濃縮することにより、粗生成物が得られ、これをカラムクロマトグラフィによって精製することにより、標題化合物（１．５ｇ）を泡沫状固体の形で得た。
Ｒｆ：Ｈｅｘ．／ＥＡ（２／１）中で０．１５。
【０１６５】
製造実施例４
（１）２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−ペンタジオン酸の製造
【０１６６】
【化２８】
0004546923.tif 000061
【０１６７】
水／ＴＨＦ（１／１、４００ｍＬ）中のＬ−グルタミン酸（２０ｇ、１３６ｍｍｏＬ）の溶液に、重炭酸ナトリウム（４５．７ｇ、５４４ｍｍｏＬ）を加え、氷浴で０℃に冷却させた。その反応混合物にＣｂｚＯＳｕ（３７．３ｇ、１５０ｍｍｏＬ）を加え、室温で一晩中攪拌した。反応完結の後、生じた反応混合物をＥＡで抽出した。水層を分離し、濃ＨＣｌによって０℃でｐＨ２に酸性化し、再度ＥＡで抽出した（４回）。有機層を濃縮した。これにより、粗生成物が得られ、これをカラムクロマトグラフィによって精製することにより、標題化合物（１６ｇ）を無色オイルの形で得た。
【０１６８】
Ｒｆ：ＭＣ／ＭｅＯＨ（９／１）中で０．２。
【０１６９】
（２）４−（２−カルボキシ−エチル）−５−オキソ−オキサゾリジン−３−カルボン酸ベンジルエステルの製造
【０１７０】
【化２９】
0004546923.tif 000062
【０１７１】
Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ器具中に、前記工程（１）で得たＮ−Ｃｂｚ−Ｌ−グルタミン酸（４ｇ、１４．２２ｍｍｏＬ）、パラホルムアルデヒド（５ｇ）、触媒量のｐＴｓＯＨ、モレキュラーシーブス（５ｇ）、およびトルエン（１００ｍＬ）を仕込み、出発物質が消失するまで還流させた。生じた反応混合物を室温で冷却し、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィによって精製することにより、標題化合物（２ｇ）を無色オイルの形で得た。
【０１７２】
Ｒｆ： ＥＡのみ中で０．４５。
【０１７３】
（３）５−オキソ−５−（３−オキソ−プロピル）−オキサゾリジン−３−カルボン酸ベンジルエステルの製造
【０１７４】
【化３０】
0004546923.tif 000063
【０１７５】
ＭＣ（２００ｍＬ）中の前記工程（２）で得た二箇所保護されたグルタミン酸（２ｇ、６．８２ｍｍｏＬ）溶液に、塩化オキサリル（０．７ｍＬ、７．５ｍｍｏＬ）および触媒量のＤＭＦを０℃で加え、室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、生じた粗塩化アシルをＴＨＦ（４００ｍＬ）に溶解させ、ここに水素化トリブチルスズ（３．８６ｍＬ、１４．３４ｍｍｏＬ）および触媒量のＰｄ（０）を０℃でゆっくり加え、一晩中室温で攪拌した。溶媒を蒸発させた後、エーテル（１００ｍＬ）／水（１００ｍＬ）中１０％ Ｋ
Ｆを加え、室温で２時間攪拌した後、濾過によって２相溶液を得た。有機層を分離し、濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィによって精製することにより、標題化合物（０．７ｇ）を無色オイルの形で得た。
【０１７６】
Ｒｆ：ヘキサン／ＥＡ（４／１）中で０．２３。
【０１７７】
（４）４−（３，３−ジメトキシ−プロピル）５−オキソ−オキサゾリジン−３−カルボン酸ベンジルエステルの製造
【０１７８】
【化３１】
0004546923.tif 000064
【０１７９】
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の前記工程（３）で得た二箇所保護されたアルデヒド（０．７ｇ、２５３ｍｍｏＬ）の溶液に、触媒量のｐ−ＴｓＯＨを加え、室温で７時間攪拌した。反応完結の後、その反応混合物を溶媒の蒸発によって濃縮して粗生成物を得、これをカラムクロマトグラフィによって精製することにより、標題化合物（０．５ｇ）を無色オイルの形で得た。
【０１８０】
Ｒｆ：ヘキサン／ＥＡ（４／１）中で０．３３。
【０１８１】
（５）２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−５，５−ジメトキシ−ペンタン酸の製造
【０１８２】
【化３２】
0004546923.tif 000065
【０１８３】
前記工程（４）で得た二箇所保護されたアセタール（０．４５６ｇ、１．４１１ｍｍｏＬ）を、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）／１Ｎ ＮａＯＨ（１０ｍＬ）に溶解させ、室温で一晩中
攪拌した。出発物質が完全に消失した後、反応混合物を蒸発によって濃縮し、その後水／ＥＡによって希釈した。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌによって０℃で非常に注意深くｐＨ
４〜５に酸性化した後、再度ＥＡで抽出した。有機層を合わせ、濃縮することにより、標題化合物（０．３５ｇ）を無色オイルの形で得た。
【０１８４】
Ｒｆ：Ｈｅｘ．／ＥＡ（１／１）中で０．１。
【０１８５】
（６）２−アミノ−５，５−ジメトキシ−ペンタン酸の製造
【０１８６】
【化３３】
0004546923.tif 000066
【０１８７】
水素ガスバルーンを備えた反応容器に、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の前記工程（５）で得たＣｂｚ−アセタール（０．３５ｇ、１．１３ｍｍｏＬ）溶液及び触媒量１０％Ｐｄ／Ｃを仕込んで一晩中室温で攪拌した。生じた混合物を濾過し濃縮することにより、粗生成物（０．２ｇ）を無色オイルの形で得た。これはそれ以上の精製なしに次の段階に使用された。
【０１８８】
Ｒｆ：Ｈｅｘ．／ＥＡ（１／１）で０．０１。
【０１８９】
（７）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，５−ジメトキシ−ペンタン酸の製造
【０１９０】
【化３４】
0004546923.tif 000067
【０１９１】
ＴＨＦ（１００ｍＬ）／水（１００ｍＬ）中の前記工程（６）で得た粗Ｇｌｕ−ＯＨアセタールの溶液に、ＦｍｏｃＯｓｕ（０．４２ｇ、１．２４ｍｍｏＬ）／重炭酸ナトリウム（０．５ｇ、５．９ｍｍｏＬ）を加えて室温で一晩中攪拌した。溶媒を蒸発させた後、生じた反応混合物を水／ＥＡで希釈した。水層を分離し、１Ｎ ＨＣｌで０℃でｐＨ４〜
５に非常に注意深く酸性化した後、再度ＥＡで抽出した。有機層を合わせ、濃縮した。こ
れにより、標題化合物（０．１９ｇ）を無色オイルの形で得た。
【０１９２】
ＴＬＣシステム１： ＥＡのみ            Ｒｆ＝０．２５
【０１９３】
【数４】
0004546923.tif 000068
【０１９４】
製造実施例５
（１）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メトキシカルボニル−アミノ−酪酸の製造
【０１９５】
【化３５】
0004546923.tif 000069
【０１９６】
Ｈ2Ｏ（５０ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｄａｂ−ＯＨ（３ｇ、１３．７５ｍｍｏＬ）溶液に、
ＮａＯＨ（２．７５ｇ、６８．７５ｍｍｏＬ、５当量）をｐＨ＞１１となるまでゆっくり加え、ここにトルエン（５０ｍＬ）中のクロロギ酸メチル（２．６ｇ、２７．５ｍｍｏＬ、２当量）を加えた。生じた反応混合物を２時間攪拌した。ＴＬＣ確認のために、少量の水相を取り出して１Ｎ ＨＣｌによって酸性化した。ＴＬＣによって反応終結を確認した
後、有機相を分離し、水相を１０％ＨＣｌ溶液で酸性化し、ＥＡ（５ｍＬ×２）によって抽出した。有機相を合わせ、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空中で濃縮した。これにより、粗生成物（３．２７７ｇ、１１．８６ｍｍｏＬ、８６％）を無色オイルの形で得た。
【０１９７】
ＴＬＣシステム：ＥＡ        Ｒｆ：０．２
【０１９８】
【数５】
0004546923.tif 000070
【０１９９】
（２）（１−ベンジルカルバモイル−３−メトキシカルボニルアミノ−プロピル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【０２００】
【化３６】
0004546923.tif 000071
【０２０１】
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の前記工程（１）から得た２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メトキシカルボニルアミノ−酪酸（１．１ｇ、３．９８ｍｍｏＬ）溶液に、ＥＤＣＩ（７６３ｍｇ、３．９８ｍｍｏＬ、１当量）、ＨＯＢＴ（５３８ｍｇ、３．９８ｍｍｏＬ、１当量）およびＤＩＥＡ（１．４ｍＬ、７．９６ｍｍｏＬ、２当量）を５℃で加え、一晩中攪拌した。ＴＬＣ確認によって反応終結を確認した後、反応溶液を１０％ＨＣｌ溶液によって５℃で（ｐＨ〜４になるまで）酸性化させ、ＥＡ（２０ｍＬ）によって抽出した。有機相を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ3およびブラインで洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で
乾燥させ、真空中で濃縮して残留物を得た。これをＥＡおよびｎ−ヘキサンの添加で固体化し、カラムクロマトグラフィによって精製することにより、標題化合物（６２０ｍｇ、１．７ｍｍｏＬ、４３％）を白色固体の形で得た。
【０２０２】
Ｒｆ：０．７（ＥＡ）
【０２０３】
【数６】
0004546923.tif 000072
【０２０４】
（３）（３−アミノ−３−ベンジルカルボニル−プロピル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル塩酸塩の製造
【０２０５】
【化３７】
0004546923.tif 000073
【０２０６】
１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中の前記工程（２）で得た（１−ベンジルカルバモイル−３−メトキシカルボニルアミノ−プロピル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１ｇ、２．７ｍｍｏＬ）溶液に、１，４−ジオキサン（６．８ｍＬ、２７ｍｍｏＬ）中の４Ｎ ＨＣｌを加えた後、２時間攪拌した。ＴＬＣ確認によって反応終結を確認した
後、反応溶液を真空中で濃縮して乾燥させることにより、標題化合物を白色固体の形で得た。
【実施例１】
【０２０７】
１−ベンジル−７−メチル−６−チオキソ−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−Ａ］ピ
リミジン−２−オン
（Ａ）Ｎ−ベンジル−３−［３−（２−［１，３］ジオキソラン−２−イル−エチル］−３メチル−チオウレイド）−プロピオンアミドの製造
【０２０８】
【化３８】
0004546923.tif 000074
【０２０９】
ジクロロメタン中のβ−アラニンベンジルアミド塩酸塩（１．０当量）およびＮ−メチルモルホリン（２．２当量）の懸濁液を０℃で１０分間チオホスゲン（１．２当量）によって処理した。反応混合物を、室温で温め、さらに２時間攪拌した。透明な溶液を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4溶液、蒸留水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機
層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得た。
【０２１０】
この生成物をジクロロメタンに溶解させ、０℃で１０分間２−（Ｎ−メチル−２アミノエチル）−１，３−ジオキソラン（０．９当量）で処理した。その反応混合物は、室温で温め、さらに４時間攪拌した。その反応混合物を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4
溶液、蒸留水、飽和ＮａＨＣＯ3溶液、蒸留水、および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有
機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得た。この粗生成物をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝５／２）によって精製することにより、純粋な生成物を得た。
【０２１１】
【数７】
0004546923.tif 000075
【０２１２】
（Ｂ）１−ベンジル−７−メチル−６−チオキソ−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−２−オンの製造
【０２１３】
【化３９】
0004546923.tif 000076
【０２１４】
前記工程（Ａ）で得たアミドを６０℃で４日間ギ酸で処理した。ギ酸を減圧下で蒸発させた後、残留物を分取ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール＝５／１）で精製することにより、純粋な標題生成物を得た。
【０２１５】
【数８】
0004546923.tif 000077
【実施例２】
【０２１６】
１，７−ジベンジル−６−チオキソ−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−２−オン
（Ａ）Ｎ−ベンジル−３−［３−ベンジル−（３，３−ジエトキシ−プロピル）−チオウレイド］−プロピオンアミドの製造
【０２１７】
【化４０】
0004546923.tif 000078
【０２１８】
ジクロロメタン中のβ−アラニンベンジルアミド塩酸塩（１．０当量）およびＮ−メチルモルホリン（２．２当量）の懸濁液を０℃で１０分間チオホスゲン（１．２当量）によって処理した。反応混合物を室温で温め、さらに２時間攪拌した。透明溶液を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4溶液、蒸留水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層を
Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得た。この生成物をジクロロメタンに溶解させ、０℃で１０分間２−（Ｎ−ベンジル−１−アミノ−３，３−ジエトキシプロパン）（０．９当量）で処理した。その反応混合物を室温で温め、さらに６時間攪拌した。生じた反応混合物を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4溶液、蒸留水
および飽和ＮａＨＣＯ3溶液、蒸留水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得た。この粗生成物をカラ
ムクロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝２／１）によって精製することにより、純粋な生成物を得た。
【０２１９】
【数９】
0004546923.tif 000079
【０２２０】
（Ｂ）１，７−ジベンジル−６−チオキソ−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−２−オンの製造
【０２２１】
【化４１】
0004546923.tif 000080
【０２２２】
前記工程（Ａ）で得たアミドを６０℃で４日間ギ酸で処理した。ギ酸を減圧下で蒸発させた後、残留物を分取ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／メタノール＝５／１）によって精製することにより、純粋な生成物を得た。
【０２２３】
【数１０】
0004546923.tif 000081
【実施例３】
【０２２４】
１，７−ジベンジル−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−２，６−ジオン
（Ａ）Ｎ−ベンジル−３−［３−ベンジル−（３，３−ジトエキシ−プロピル）−チオウレイド］−プロピオンアミドの製造
【０２２５】
【化４２】
0004546923.tif 000082
【０２２６】
ジクロロメタン中のβ−アラニンベンジルアミド塩酸塩（１．０当量）およびＮ−メチルモルホリン（３．２当量）の懸濁液を０℃で１０分間チオホスゲン（０．７当量）によって処理した。反応混合物を室温で温め、さらに２時間攪拌した。透明溶液を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4溶液、蒸留水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層を
Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得た。この生成物を、ジクロロメタンに溶解させ、０℃で１０分間２−（Ｎ−ベンジル−１−アミノ３，３−ジエトキシプロパン（０．９当量）で処理した。その反応混合物を、室温で温め、さらに４時間攪拌した。生じた反応混合物を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4溶液、蒸留水
、飽和ＮａＨＣＯ3溶液、蒸留水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得た。この粗生成物をカラムク
ロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝２／１）によって精製することにより、純粋な生成物を得た。
【０２２７】
【数１１】
0004546923.tif 000083
【０２２８】
（Ｂ）１，７−ジベンジル−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−２，６−ジオンの製造
【０２２９】
【化４３】
0004546923.tif 000084
【０２３０】
前記工程（Ａ）で得たアミドを６０℃で４日間ギ酸で処理した。ギ酸を減圧下で蒸発させた後、残留物を分取ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル）によって精製することにより、純粋な標題生成物を得た。
【０２３１】
【数１２】
0004546923.tif 000085
【実施例４】
【０２３２】
１，７−ジベンジル−６−オキソ−オクタヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−２−オン
（Ａ）（３−ブロモ−１−メトキシプロパン−１−オキシ）連結ＡｒｇｏＧｅｌ樹脂の製造
【０２３３】
【化４４】
0004546923.tif 000086
【０２３４】
１，２−ジクロロエタン（１５ｍＬ）中の乾燥したＡｒｇｏＧｅｌ樹脂およびピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（２４０ｍｇ、０．９６ｍｍｏＬ）の懸濁液を加熱して、溶媒および微量の水を除去しながら還流した。約５ｍＬの蒸留物を除去した後、１，２−
ジクロロエタン（５ｍＬ）中の３−ブロモ−１，１−ジメトキシプロパン（７００ｍｇ、３．８４ｍｍｏＬ）溶液を加え、ＥｔＯＨ／ＥＤＣを除去し続けながら、その混合物を４時間還流し続けた。その後、樹脂をＤＭＦおよびジオキサンで洗浄し、凍結乾燥を行って所望の生成物を得た。
【０２３５】
（Ｂ）（３−ベンジルアミノ−１−メトキシプロパン−１−オキシ）連結ＡｒｇｏＧｅｌ樹脂の製造
【０２３６】
【化４５】
0004546923.tif 000087
【０２３７】
ＤＭＳＯ（４ｍＬ）中のベンジルアミン（５２０ｍｇ、４．８５ｍｍｏＬ）溶液をブロモアセタール樹脂（１ｇ、０．４８ｍｍｏＬ）に加え、その懸濁液を６０℃で１５時間振盪した。生じた樹脂を濾過し、ＤＭＳＯ、ＭｅＯＨおよびＭＣで洗浄し、真空下に一晩中乾燥させた。第二級アミンがクロルアニルテストによって検出された。
【０２３８】
（Ｃ）β−アラニンベンジルアミンウレアの製造
【０２３９】
【化４６】
0004546923.tif 000088
【０２４０】
Ｎ−メチルモルホリン（１２０μＬ）中のβ−アラニンベンジルアミドＨＣｌ（８０ｍｇ、０．３６ｍｍｏＬ）溶液にＭＣ（２ｍＬ）、トリホスゲン（０．７２ｍｍｏＬ）を室温で加えた。１０分後、生じたイソシアネート溶液を、前記工程（２）で得た第二級アミン（１００ｍｇ、０．０４８ｍｍｏＬ）の懸濁液に加え、室温で３時間振盪した。樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＭＣで洗浄し、反応の終結をクロラニルテストでチェックした。
【０２４１】
（Ｄ）１，７−ジベンジル−６−オキソ−オクタヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−２−オンの製造
【０２４２】
【化４７】
0004546923.tif 000089
【０２４３】
前記工程（Ｃ）のチオウレア基を含む樹脂をギ酸で処理し、１５時間振盪した。前記樹脂を濾過し、濾液を濃縮し、クロマトグラフィ（シリカゲル）によって精製することによ
り、標題化合物を得た。
【０２４４】
【数１３】
0004546923.tif 000090
【実施例５】
【０２４５】
１，７−ジベンジル−２−オキソ−６−チオキソ−オクタヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−４−カルボン酸ベンジルエステル
（Ａ）２−イソチオシアナト−琥珀酸１−ベンジルエステル４−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメチル）エステルの製造
【０２４６】
【化４８】
0004546923.tif 000091
【０２４７】
ＭＣ中の２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−琥珀酸１−ベンジルエステル（１ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＣ（５３２μＬ、１．１当量）、ＤＭＡＰ（１８８ｍｇ、０．５当量）およびフルオレニルメタノール（６３５ｍｇ、１．０５当量）を加えた。反応終結の後、生じた反応混合物を１Ｎ ＨＣｌおよび飽和ＮａＨＣＯ3溶液で洗浄し、カラムクロマトグラフィ（シリカゲル）で精製することにより、フルオレニルメチルエステル（４００ｍｇ）を得た。
【０２４８】
このエステルを、ジオキサン（１０ｍＬ）で希釈し、ジオキサンの４Ｎ ＨＣｌ溶液を
加えた後、２時間攪拌してＢｏｃ保護基を除去した。反応終結の後、その溶液を蒸発乾固させた。アミンのＨＣｌ塩をＭＣおよびＮ−メチルモルホリンで希釈し、チオホスゲン（１．２当量）を約０℃で加えた。反応完結の後、前記混合物を１０％ＫＨＳＯ4溶液、蒸
留水、飽和ＮａＨＣＯ3、蒸留水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得た。この粗生成物をカラムク
ロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１）で精製することにより、純粋な標題生成物を得た。
【０２４９】
（Ｂ）アスパラギン酸ベンジル、フルオレニルエステルチオウレア
【０２５０】
【化４９】
0004546923.tif 000092
【０２５１】
前記工程（Ａ）で得たイソシアネート（０．５ｍｍｏＬ）のＭＣ溶液をＮ−メチルモルホリンと共に実施例４の工程（Ｂ）で得た第二級アミン樹脂（２００ｍｇ、０．０４ｍｍｏＬ）の懸濁液に加え、室温で３時間振盪した。生じた樹脂をＤＭＳＯ、ＭｅＯＨ、およびＭＣで洗浄し、反応の完結をクロラニルテストによってチェックした。
【０２５２】
（Ｃ）アスパラギン酸チオウレアベンジルアミド
【０２５３】
【化５０】
0004546923.tif 000093
【０２５４】
前記工程（Ｂ）で得た樹脂を３０分間ＤＭＦ（４ｍＬ）で膨潤させ、２５％ピペリジン溶液を加えてフルオレニルメチル保護を開裂させた。生じた樹脂を、ＤＭＳＯ、ＭｅＯＨおよびＭＣで洗浄した。その樹脂を減圧の下に乾燥させ、再度膨潤させ、ここにＤＩＣ（８μＬ、０．０５ｍｍｏＬ）、ＨＯＢｔ（８ｍｇ、０．０５ｍｍｏＬ）およびＤＩＥＡ（１８μＬ、０．１ｍｍｏＬ）を加えて酸を活性化した。３０分間振盪した後、ベンジルアミンを加えて一晩中振盪し続けることにより、所望のベンジルアミド樹脂を得た。
【０２５５】
（Ｄ）１，７−ジベンジル−２−オキソ−６−チオキソ−オクタヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−４−カルボン酸ベンジルエステルの製造
【０２５６】
【化５１】
0004546923.tif 000094
【０２５７】
前記工程（Ｃ）で得た樹脂をＭＣ（４ｍＬ）で膨潤させ、ここにＰＰＴＳ（１０ｍｇ）を加えて４時間６０℃で加熱することにより、標題化合物を得た。
【０２５８】
ＭＳ（ｍ／ｚ、ＥＳＩ）、５００（ＭＨ+）
【実施例６】
【０２５９】
７−ベンジル−６−チオキソ−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−１−
カルボン酸ベンジルエステル
（Ａ）［３−［３−ベンジル−３−（３，３−ジエトキシ−プロピル）−チオウレイド］−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステルの製造
【０２６０】
【化５２】
0004546923.tif 000095
【０２６１】
ＭＣ中のＣｂｚ−ジアミノプロパンＨＣｌ（１．０当量）およびＮ−メチルモルホリン（２．２当量）の懸濁液をチオホスゲン（１．２当量）によって０℃で１０分間処理した。生じた溶液を室温で温め、さらに２時間攪拌した。生じた透明溶液を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4溶液、水、および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得たが、これをＭＣに溶解させ
、０℃で１０分間Ｎ−ベンジル−１−アミノ−３，３−ジエトキシプロパン（０．９当量）で処理し、その後室温まで温め、さらに６時間攪拌した。生じた反応混合物を酢酸エチルで希釈し、１０％ＫＨＳＯ4溶液、水、飽和ＮａＨＣＯ3、水、および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得たが、これをカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝２／１）で精製することにより、純粋な標題生成物を得た。
【０２６２】
【数１４】
0004546923.tif 000096
【０２６３】
（Ｂ）７ｂベンジル−６−チオキソ−ヘキサヒドロ−ピリミド［１，６−ａ］ピリミジン−１−カルボン酸ベンジルエステルの製造
【０２６４】
【化５３】
0004546923.tif 000097
【０２６５】
ＭＣ中の前記工程（Ａ）で得たアミド溶液にＰＰＴＳを加え、一晩中７０℃で攪拌した。生じた反応混合物を減圧下で濃縮して残留物を得、これを分取ＴＬＣ（酢酸エチルのみ）で精製することにより、標題化合物を得た。
【０２６６】
【数１５】
0004546923.tif 000098
【実施例７】
【０２６７】
８−アセチル−６−オキソ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボン酸ベンジルエステル
（Ａ）［アセチル−（２，２−ジメトキシ−エチル）−アミノ］−酢酸の製造
【０２６８】
【化５４】
0004546923.tif 000099
【０２６９】
ＭｅＯＨ中のベンジルグリシンＨＣｌ塩（１当量）の溶液にジメトキシアセトアルデヒド（１．０５当量）、次いで、ＮａＣＮＢＨ3（１．２当量）を室温で加えて５時間攪拌
した。生じた反応混合物を減圧下で濃縮してオイル状の残留物を得たが、これをＭＣに溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ3溶液、水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得、これをＭＣに溶解させ、
０℃でトリエチルアミン（３当量）および塩化アセチル（１．１当量）で処理した。
【０２７０】
反応完結の後、生じた反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3、水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗
浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮することにより、オイル状の残留物を得たが、これをカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル）によって精製することにより、純粋な生成物を得た。この生成物を１０％Ｐｄ／ＣおよびＨ2含有バルーンで加水
素分解して標題化合物を得、これはそれ以上の精製なしに次の工程で使用された。
【０２７１】
【数１６】
0004546923.tif 000100
【０２７２】
（Ｂ）（３−［２−［アセチル−（２，２−ジメトキシ−エチル）−アミノ］−アセチルアミノ］−プロピル）−カルバミン酸ベンジルエステルの製造
【０２７３】
【化５５】
0004546923.tif 000101
【０２７４】
ＭＣ中の前記工程（Ａ）で得た酸（１当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（１当量）、ＤＩＰＥＡ（３当量）およびＣｂｚ−ジアミノプロパンＨＣｌ（１．０当量）を加えて室温で３時間攪拌した。生じた反応混合物を減圧下で濃縮して残留物を得、これを分取ＴＬＣで精製することにより、標題化合物を得た。
【０２７５】
【数１７】
0004546923.tif 000102
【０２７６】
（Ｃ）８−アセチル−６−オキソ−ヘキサヒドロ−ピラジノ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボン酸ベンジルエステルの製造
【０２７７】
【化５６】
0004546923.tif 000103
【０２７８】
ＭＣ中の前記工程（Ｂ）で得たＣｂｚ保護アミド前駆体溶液に、ＰＰＴＳ（１当量）を室温で加えて５時間７０℃で加熱した。生じた反応混合物を濃縮することにより、残留物を得た。これは下記特性を示した。
【０２７９】
【数１８】
0004546923.tif 000104
【実施例８】
【０２８０】
７−ベンゾイルアミノ−４−ベンジルカルバモイル−６−オキソ−ヘキサヒドロ−ピロロ「１，２−ａ」ピリミジン−１−カルボン酸メチルエステル
（Ａ）［１−（１−ベンジルカルバモイル−３−メトキシカルボニルアミノ−プロピルカルバモイル）−３，３−ジメトキシ−プロピル］−カルバミン酸ベンジルエステルの製造
【０２８１】
【化５７】
0004546923.tif 000105
【０２８２】
ＭＣ中の製造実施例３（３）で得たＣｂｚ保護アミノ酸アセタール（１００ｍｇ、１．３当量）の溶液に、ＰｙＢＯＰ（酸に対して１当量）、ＤＩＰＥＡ（酸に対して６当量）およびＨＯＢｔ（１．３当量）を加えて３０分間攪拌した。前記反応混合物にアミノベンジルアミドＨＣｌ塩（７１ｍｇ、０．２７ｍｍｏＬ）を加えて７時間攪拌した。生じた反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3溶液、水および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇ
ＳＯ4で乾燥させ、濃縮させることにより、オイル状の残留物を得、これをカラムクロマ
トグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル）によって精製することにより、標題生成物を得た（５０ｍｇ、収率：３５％）。
【０２８３】
【数１９】
0004546923.tif 000106
【０２８４】
（Ｂ）４−ベンジルカルバモイル−７−ベンジルオキシカルボニルアミノ−６−オキソ−ヘキサヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボン酸メチルエステルの製造
【０２８５】
【化５８】
0004546923.tif 000107
【０２８６】
前記工程（Ａ）で得たアセタールアミド環化前駆体（５ｍｇ、０．００９ｍｍｏＬ）をギ酸（１ｍＬ）に溶解させ、一晩中攪拌した。生じた反応混合物を濃縮乾固させて、それを次の工程でそれ以上の精製なしに使用した。
【０２８７】
【数２０】
0004546923.tif 000108
【０２８８】
（Ｃ）７−ベンゾイルアミノ−４−ベンジルカルバモイル−６−オキソ−ヘキサヒドロ
−ピロロ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボン酸メチルエステルの製造
【０２８９】
【化５９】
0004546923.tif 000109
【０２９０】
水素ガスバルーンを備えた反応容器に、ＭｅＯＨ中の前記工程（Ｂ）で得たＣｂｚ二環式の環式化合物の溶液およびＰｄ／Ｃ（１ｍｇ）を室温で入れ、２時間攪拌した。反応終結の後、反応混合物をセライトフィルターで濾過してＰｄ／ｃを除去し、溶媒を減圧下に蒸発させた。生じたオイル残留物をＭＣに溶解させ、ここにＭＣ中の安息香酸（１．１当量）の溶液ならびにＰｙＢＯＰ（１．１当量）、ＨＯＢｔ（１．１当量）およびＤＩＰＥＡ（３当量）を加えて３０分間攪拌した。生じた活性化酸の溶液に、アミン溶液を加え、３時間攪拌し続けた。生じた反応混合物を減圧の下に濃縮してオイル状の残留物を得、これを分取ＴＬＣによって精製することにより、標題化合物を得た。
【０２９１】
【数２１】
0004546923.tif 000110
【実施例９】
【０２９２】
７−ベンゾイルアミノ−４−（１−カルボキシ−エチルカルバモイル）−６−オキソ−ヘキサヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボン酸メチルエステル
実施例９の方法論を示す合成スキームは図３に示した。
２−クロロトリチルクロライド樹脂（２００ｍｇ、１ｍｍｏＬ／ｇ）ならびにＤＣＥ（２ｍＬ）中のＦｍｏｃ−アラニン（１．５当量、市販で入手可能）およびＤＩＥＡ（２当量）の溶液をねじぶた付きバイアルに仕込んだ。この反応混合物を室温で１２時間振盪した。樹脂を濾過によって集め、ＤＭＦ、ＭｅＯＨによって洗浄した後、ＤＣＭで洗浄して第１成分片を得た。
【０２９３】
反応前にＤＭＦによって膨潤させた樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その後、反応混合物を室温で３０分間振盪した。前記脱保護工程を繰り返し行った。次いで、その生成物混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−メトキシカルボニルアミノ−酪酸（１．５当量、第２成分片）、ＤＩＣ（１．５当量）、ＨＯＢＴ（１．５当量）溶液を樹脂に加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪した後、その樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、その後ＤＣＭで洗浄した。
【０２９４】
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その後、その反応混合物を室温で３０分間振盪した。前記脱保護工程を繰り返し行い、その後、その生成物混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，５−ジメトキシ−ペンタン酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）、ＨＯＢＴ（１．５当量）溶液を樹脂
に加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪した後、前記樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、その後ＤＣＭで洗浄した。
【０２９５】
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その後、その反応混合物を室温で３０分間振盪した。前記脱保護工程を繰り返し行い、その後、その生成物混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の市販で入手可能な安息香酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）、ＨＯＢＴ（１．５当量）溶液を樹脂に加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪した後、その樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、その後ＤＣＭで洗浄した。
【０２９６】
前記樹脂をギ酸（各ウェル当たり１．２ｍＬ）で室温で１８時間処理した。その後、前記樹脂を濾過によって除去し、濾液を減圧の下に濃縮した。これにより、生成物をオイルの形で得た。
【０２９７】
【数２２】
0004546923.tif 000111
【実施例１０】
【０２９８】
７−ベンゾイルアミノ−４−（２−カルボキシ−プロピルカルバモイル）−６−オキソ−ヘキサヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］ピリミジン−１−カルボン酸メチルエステル
実施例１０の方法論を示す合成スキームは、図４に示した。
２−クロロトリチルクロライド樹脂（２００ｍｇ、１ｍｍｏＬ／ｇ）ならびにＤＣＥ（２ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ベータ−アラニン（１．５当量）およびＤＩＥＡ（２当量）の溶液をねじぶた付きバイアルに仕込んだ。この反応混合物を室温で１２時間振盪した。樹脂を濾過によって集め、ＤＭＦ、ＭｅＯＨによって洗浄した後、ＤＣＭで洗浄して第１成分片を得た。
【０２９９】
反応前にＤＭＦによって膨潤された樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その後、反応混合物を室温で３０分間振盪した。前記脱保護工程を繰り返し行い、次いで、その生成物混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−メトキシカルボニルアミノ−酪酸（１．５当量、第２成分片）、ＤＩＣ（１．５当量）およびＨＯＢＴ（１．５当量）溶液を樹脂に加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪した後、その樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、その後ＤＣＭで洗浄した。
【０３００】
反応前にＤＭＦによって膨潤させた樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。その後、その反応混合物を室温で３０分間振盪した。前記脱保護工程を繰り返し行い、次いで、その生成物混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−５，５−ジメトキシ−ペンタン酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）およびＨＯＢＴ（１．５当量）溶液を樹脂に加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪した後、その樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、その後ＤＣＭで洗浄した。
【０３０１】
反応前にＤＭＦによって膨潤させた樹脂に、ＤＭＦ中の２５％ピペリジンを加えた。そ
の後、その反応混合物を室温で３０分間振盪した。前記脱保護工程を繰り返し行った。次いで、その生成物混合物をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄した後、ＤＣＭで洗浄した。ＮＭＰ中の市販で入手可能な安息香酸（１．５当量）、ＤＩＣ（１．５当量）およびＨＯＢＴ（１．５当量）溶液を樹脂に加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪した後、その樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨで洗浄し、その後ＤＣＭで洗浄した。
【０３０２】
前記樹脂をギ酸（各ウェル当たり１．２ｍＬ）によって室温で１８時間処理した。その後、前記樹脂を濾過によって除去し、濾液を減圧下に濃縮した。これにより、生成物をオイルの形で得た。
【０３０３】
【数２３】
0004546923.tif 000112
【０３０４】
様々な引用がここに述べられているが、これは特定の処置、化合物および／または組成物について説明するもので、それらは全体として引用として組み込まれる。
【０３０５】
以上、本発明の特定の実施の態様が説明の目的のために記述されたが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、様々な変形が可能であることが理解されるであろう。従って、本発明は、添付した請求の範囲を除いて、限定されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【０３０６】
【図１】図１は本発明のライブラリ、および本発明の化合物を製造する一般合成図を示す。
【図２】図２は本発明のライブラリ、および本発明の化合物を製造する一般合成図を示す。
【図３】図３は実施例９にさらに詳述されるとおり、本発明のライブラリ、および本発明の化合物を製造する一般合成図を示す。
【図４】図４は実施例１０にさらに詳述されるとおり、本発明のライブラリ、および本発明の化合物を製造する一般合成図を示す。
【図１】
0004546923.tif 000114
【図２】
0004546923.tif 000115
【図３】
0004546923.tif 000116
【図４】
0004546923.tif 000117