(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨粗しょう症の治療または予防用医薬の製造における、タマネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ）、熊ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ）、イタリアンパセリ（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｕｍ）及びブロッコリ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）の抽出物及び濃縮物、またはその混合物からなる群から選択される植物抽出物もしくは濃縮物の使用。
【請求項２】
固体形態のタマネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ）、熊ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ）、イタリアンパセリ（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｕｍ）及び／またはブロッコリ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）の抽出物もしくは濃縮物を使用する請求の範囲第１項に記載の使用。
【請求項３】
医薬が、１日あたり非溶媒基準で０．１〜２０ｇのタマネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ）、熊ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ）、イタリアンパセリ（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｕｍ）及び／またはブロッコリ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）の抽出物もしくは濃縮物を投与するように処方される請求の範囲第１項または第２項に記載の使用。
【請求項４】
（ａ）タマネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ）、熊ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ）、イタリアンパセリ（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｕｍ）及びブロッコリ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）の抽出物もしくは濃縮物からなる群から選択される少なくとも１つの植物抽出物もしくは濃縮物、
（ｂ）カルシウム源、
（ｃ）炭水化物源、脂肪源及び窒素源からなる群から選択される少なくとも１つのエネルギー源、及び任意に
（ｄ）ビタミンＤ
を含む、骨粗しょう症の治療または予防用医薬組成物。
【請求項５】
カルシウム源（ｂ）が有機カルシウム塩である請求の範囲第４項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
成分（ｃ）の炭水化物源が、マルトデキストリン、スターチ、ラクトース、グルコース、スクロース、フルクトース、キシリット及びソルビットからなる群から選択される請求の範囲第４項または第５項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
成分（ｃ）の脂肪源が、ω−６−ポリ不飽和脂肪酸源、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸源、モノ不飽和脂肪酸源、Ｃ6−Ｃ12脂肪酸源及びその混合物からなる群から選択される請求の範囲第４項〜第６項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
成分（ｃ）の窒素源が、大豆由来タンパク質、乳タンパク質、タンパク質加水分解物、必須アミノ酸混合物及びアルギニンからなる群から選択される請求の範囲第４項〜第７項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
炭水化物源が組成物の総エネルギー供給量の３０〜７０％、窒素源が組成物の総エネルギー供給量の５〜４５％、脂肪源が組成物の総エネルギー供給量の０．１〜１５％を与える請求の範囲第４項〜第８項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
３〜２５重量％の成分（ａ）、５〜５０重量％の成分（ｂ）及び１〜９５重量％の成分（ｃ）を含む請求の範囲第４項〜第９項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
更に、０．２〜１０重量％のビタミン、ミネラル、微量元素、繊維、フレーバー、保存料、着色剤、甘味料及び乳化剤からなる群から選択される他の薬学的に許容され得る成分を含む請求の範囲第４項〜第１０項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
５０〜１５００ｋｃａｌ／日の栄養補助剤の形態である請求の範囲第４項〜第１１項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
液体形態である請求の範囲第４項〜第１２項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
顆粒または粉末形態から選択される固体形態である請求の範囲第４項〜第１２項のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
（ａ）タマネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ）、熊ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ）、イタリアンパセリ（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｕｍ）及びブロッコリ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）の抽出物及び濃縮物からなる群から選択される少なくとも１つの植物抽出物もしくは濃縮物、及び
（ｂ）薬学的に許容され得る担体
を含む、骨粗しょう症の治療または予防のための、１回服用量単位形態の医薬組成物。
【請求項１６】
糖衣錠、錠剤、カプセル剤、サッシェまたは座薬の形態の経腸投与のための請求の範囲第１５項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、特定植物の抽出物もしくは濃縮物を含む栄養補給または医薬組成物並びにその骨吸収の抑制剤としての使用に関する。
最も一般的な代謝性骨疾患は骨粗しょう症である。骨粗しょう症は通常、骨幹組織量の減少を招く骨形成の減少または骨吸収の蓄積のいずれかに起因する骨量の減少として規定される。破骨細胞（骨吸収細胞）は、吸収過程での骨の一部の陥凹に関与する。吸収後、骨芽細胞（骨形成細胞）が現れ、その後吸収された部分が新しい骨で満たされる。
若い健康な大人では、破骨細胞及び骨芽細胞が形成され、両者が機能する割合により骨吸収と骨形成のバランスが保たれている。しかしながら、老化の正常な結果として、この再構築過程のバランスが崩れ、その結果として骨が損失する。バランスが崩れた状態が長く続くと、骨質量、よって骨強度が減少して骨折が起こる。
骨粗しょう症を治療するための多くの組成物及び方法が医学文献に記載されている。例えば、エストロゲン、カルシトニン及びビスホスホネートが骨吸収に対する有効な抑制剤であることは公知である。
今や驚くべきことに、例えばユリ科、セリ科及びアブラナ科の植物種に属する特定の植物または野菜から誘導される物質が骨吸収に対して強力な抑制効果を有することが知見された。
従って、本発明は、パジェット病、腫瘍起因の骨疾患、または特に骨粗しょう症のような増加した骨吸収を特徴とする病気または症状の治療または予防用医薬または栄養補給製剤の製造におけるマメ科及びホップ由来の抽出物もしくは濃縮物を除く、骨吸収に対して抑制効果を有する野菜抽出物もしくは濃縮物の使用に関する。
マメ科とは、大豆、ビーン、ヒナマメまたはヒラマメのような植物種マメ科（ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）を意味する。ホップとは、植物種Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓを意味する。
本明細書中、骨粗しょう症は、ホルモン欠乏（例えば、閉経期後）及び加齢に起因する骨粗しょう症、並びにステロイド治療に付随するまたは神経性食欲不振による栄養不良に不随する骨粗しょう症のような続発性骨粗しょう症を含む。
本発明は更に、パジェット病、腫瘍起因の骨疾患、または特に骨粗しょう症のような増加した骨吸収を特徴とする病気または症状の治療または予防方法を提供し、その方法はヒトまたは他の哺乳動物に対してマメ科及びホップ由来の抽出物もしくは濃縮物を除く野菜抽出物もしくは濃縮物を含む医薬または栄養補給製剤を骨吸収を抑制するのに有効な量投与することを含む。
本発明はまた、ネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及びキバナスズシロ属の抽出物及び濃縮物からなる群から選択される植物の抽出物もしくは濃縮物の、パジェット病、腫瘍起因の骨疾患、または特に骨粗しょう症のような増加した骨吸収を特徴とする病気または症状の治療または予防用医薬または栄養補給製剤の製造における使用をも見越している。
本発明はまた、パジェット病、腫瘍起因の骨疾患、または特に骨粗しょう症のような増加した骨吸収を特徴とする病気または症状の治療または予防方法を提供し、その方法はヒトまたは他の哺乳動物に対してネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及びキバナスズシロ属の抽出物及び濃縮物からなる群から選択される植物の抽出物もしくは濃縮物を含む医薬または栄養補給組成物を骨吸収を抑制するのに有効な量投与することを含む。
ネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及び／またはキバナスズシロ属の抽出物及び濃縮物が好ましい野菜抽出物もしくは濃縮物である。
本明細書中、野菜は、ヒトが生または調理した形態で消費する食用部分を有する草本植物を指す。食用部分は、カブカンラン、ビート、ニンジン及びサツマイモのような根、ジャガイモ及びタロイモのような塊茎または貯蔵茎、アスパラガス及びコールラビのような茎、芽キャベツのような芽、タマネギ及びニンニクのような球根、セロリ及びダイオウのような葉柄、キャベツ、レタス、パセリ及びほうれん草のような葉、カリフラワー、ブロッコリ及びアーティチョークのような幼若花、種、ナス、キュウリ及びトウモロコシのような幼若実、またはトマト及びコショウのような成熟実であり得る。
本明細書中、用語「ネギ属」は属ａｌｌｉｕｍ（タマネギ科のメンバーであるニンニクのラテン語）を指し、例えば植物種Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ（タマネギ）、Ａｌｌｉｕｍ  ａｓｃａｌｏｎｉｃｕｍ（シャロット）、Ａｌｌｉｕｍ  ａｍｐｅｌｏｐｒａｓｕｍ（リーキ／巨頭ニンニク）、Ａｌｌｉｕｍ  ｐｏｒｒｕｍ（リーキ）、Ａｌｌｉｕｍ  ｓｃｈｏｅｎｏｐｒａｓｕｍ（エゾネギ）、Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ（熊ニンニク(bear’s garlic)）、Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ（ニンニク）またはＡｌｌｉｕｍ  ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ（バンチングオニオン(bunching onion)）が含まれる。好ましい種は、Ａｌｌｉｕｍ  ａｓｃａｌｏｎｉｃｕｍ（シャロット）、Ａｌｌｉｕｍ  ｐｏｒｒｕｍ（リーキ）、Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ（タマネギ）及びＡｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ（熊ニンニク、熊の爪ニンニク(bear paw garlic)としても公知）であり、後者の２つが特に好ましく、Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａが更に好ましい。種Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａのメンバーには一般的なタマネギ（赤色、白色または黄色の皮を有する）またはシャロットが含まれ、レッドまたはホワイトオニオンが好ましい。
タマネギ抽出物及び濃縮物は、例えば野菜の全食用部分から調製される。適当なエゾネギ抽出物及び濃縮物は、例えばエゾネギハーブから得られる。適当な熊ニンニク抽出物及び濃縮物は、熊ニンニクの球茎、新鮮なハーブまたは全開花植物から得られ、好ましくは新鮮なハーブから得られる。
本明細書中、用語「オランダゼリ属」は、属ｐｅｔｒｏｓｅｌｌｉｕｍ（一般名パセリ）を指し、例えば植物種Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍのメンバーが含まれる。縮れた葉を持つ一般的なパセリであるＰｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍが例示される。Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｓｒｉｓｐｕｍ  ｒａｄｉｏｓｕｍまたはＰｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｕｍも平らな葉を持つイタリアンパセリとして知られている。
適当なパセリ抽出物もしくは濃縮物は、根、実または種から、また特にハーブから調製され得る。
本明細書中、用語「アブラナ属」は、属ｂｒａｓｓｉｃａ（キャベツのラテン語）を指し、例えばＢｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ（キャベツ）、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｒａｐａ（アブラナ）、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ａｌｂｏｇｌａｂｒａ、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｊｕｎｃｅａ（カラシナ）、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｐｅｒｖｉｒｉｄｉｓ、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ａｌｂａ（シロガラシ）及びＢｒａｓｓｉｃａ  ｎｉｇｒａ（クロガラシ）のメンバーである。
Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａは好ましい種であり、この種の好ましいメンバーはＢｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ、すなわちブロッコリ、またはＢｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｇｅｍｍｉｆｅｒａ、すなわち芽キャベツである。ブロッコリ抽出物及び濃縮物がアブラナ科抽出物もしくは濃縮物として特に好ましい。キャベツ種の適当な抽出物及び濃縮物は、有利には野菜の全食用部分または発芽したばかりの芽または若芽から調製される。
本明細書中、用語「キバナスズシロ属」は属ｅｒｕｃａを指し、特に一般名がキバナスズシロである植物種Ｅｒｕｃａ  ｓａｔｉｖａ（野生種）またはＥｒｕｃａ  ｖｅｓｉｃａｎｉａ  ｓｕｂｓｐ．ｓａｔｉｖａ（栽培種）のメンバーが含まれる。
本発明の植物／野菜抽出物及び濃縮物を植物または野菜の食用部分から得ることが好ましい。食用部分とは、ヒトが生のまままたは調理して消費する部分を指す。
本発明の植物／野菜抽出物及び濃縮物の好ましいグループは、植物種Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ、Ａｌｌｉｕｍ  ａｓｃａｌｏｎｉｃｕｍ、Ａｌｌｉｕｍ  ｕｒｓｉｎｕｍ、Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａまたはＥｒｕｃａ  ｓａｔｉｖａのメンバー由来の濃縮物もしくは抽出物を含む。本発明の植物／野菜抽出物及び濃縮物のより好ましいグループは、植物種Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ、Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ（特に、Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ及びＰｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｕｍ）及びＢｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ（特に、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）のメンバーの抽出物及び濃縮物、特にタマネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ）、イタリアンパセリ（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｃｒｉｓｐｕｍ  ｖａｒ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎｉｕｍ）、またはブロッコリ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  ｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）の抽出物及び濃縮物を含む。タマネギ抽出物（特に、ホワイトオニオン抽出物）の使用が特に好ましい。
上記した植物または野菜の抽出物及び濃縮物は、液体または固体、例えば顆粒または粉末の形態をとり得る。
適当な植物または野菜の濃縮物は、カットしたばかりの植物または野菜、その根、実または種を乾燥または凍結乾燥し、その後場合により乾燥材料を粉砕または顆粒化することにより、またはカットしたばかりの植物または野菜、その根、実または種を絞り、液体部分を集め、場合により乾燥することにより得られる。上記した植物または野菜の濃縮物を固体形態、特に粉末形態で使用することが好ましい。
上記した植物または野菜の抽出物を得るための適当な方法は当業界で公知である。植物または野菜の抽出物は、例えばカットまたは乾燥したばかりの植物または野菜、その根、実または種を例えば水、１つまたはそれ以上の食品用グレード溶媒、または水と１つまたはそれ以上の食品用グレード溶媒の混合物を用いて抽出することにより得ることができる。適当な食品用グレード溶媒として、プロパン、ブタン、酢酸ブチル、酢酸エチル、エタノール、二酸化炭素、アセトン、亜酸化窒素、メタノール及びプロパン−２−オールが挙げられ、エタノール及び二酸化炭素が好ましく、エタノールが特に好ましい食品用グレード溶媒である。抽出ステップ後、液相を濃縮したり、蒸発または凍結乾燥により乾燥させてもよい。カットまたは乾燥したばかりの植物または野菜材料を、冷たくてもよいが好ましくは熱い水及び／または溶媒、好ましくは水、または水と１つ以上の溶媒の混合物の中に特定の期間投入する。この期間は植物または野菜材料の種類または使用する溶媒の種類に依存して広範囲で変更可能であるが、通常、水抽出の場合には例えば１〜３０分、好ましくは２〜１５分、最も好ましくは５〜１０分、エタノール／水抽出の場合には例えば３０〜９０分、好ましくは６０分である。水抽出の場合の好ましい温度範囲は８５〜９５℃であり、アルコール／水抽出の場合の好ましい温度範囲は５５〜６５℃である。二酸化炭素抽出の場合、抽出を０〜４０℃、臨界圧（例えば、８０〜２００バール）下で行うことが好ましい。抽出後、液相を分離し、有利には公知の方法に従って濃縮または蒸発乾固させる。濃縮抽出物を得るためには、上記した抽出ステップの２つ以上を組み合わせてもよい。更に、植物または野菜抽出物は、カットまたは乾燥したばかりの植物または野菜を水に投入し、混合物を蒸気蒸留にかけることにより得ることができる。留出物を回収し、その後有利には濃縮または蒸発乾固させる。
抽出物を、液体（特に、水溶液）形態、または固体（特に、顆粒または粉末）形態で使用してもよい。抽出物が液体形態のとき、その固体含量は例えば１〜２５重量％、好ましくは２〜２０重量％、最も好ましくは２〜１５重量％である。
供給すべき本発明の植物／野菜抽出物もしくは濃縮物の量は、所望の治療、治療対象者、その対象者のニーズに応じて広範囲で変更可能である。治療対象者が（通常、約６０〜７５ｋｇの体重を有する）成人の場合には、通常１日あたり（無溶媒基準で）０．１〜２０ｇ、好ましくは０．２〜１５ｇ、最も好ましくは０．４−１０ｇのネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及び／またはキバナスズシロ属の抽出物もしくは濃縮物が投与されるように処方された組成物で骨吸収に対して満足できる抑制効果が得られる。
上記した植物／野菜抽出物もしくは濃縮物を含む適当な栄養補給組成物も本発明の要旨である。この組成物は、
（ａ）ネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及びキバナスズシロ属の抽出物及び濃縮物からなる群から選択される少なくとも１つの植物抽出物もしくは濃縮物、
（ｂ）カルシウム源、
（ｃ）炭水化物源、脂肪源及び窒素源からなる群から選択される少なくとも１つのエネルギー源、及び任意に
（ｄ）ビタミンＤ
を含むことを特徴とする。
成分（ａ）に関して、ネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及びキバナスズシロ属の抽出物及び濃縮物について上記した定義、選択及び量が適用される。成分（ａ）が２つ以上の当該植物／野菜抽出物及び濃縮物の混合物であってもよい。本発明の栄養補給組成物は、有利には例えば約０．１〜４０重量％、好ましくは約３〜２５重量％、好ましくは５〜１５重量％の植物／野菜抽出物もしくは濃縮物成分（ａ）を含む。
カルシウム源（ｂ）は、生理学的に許容され得る無機または有機のカルシウム含有塩からなり得る。例えば、塩化カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、酸化カルシウム、水酸化カルシウムまたは炭酸カルシウムのような無機カルシウム塩、全乳または脱脂乳粉末、卵殻カルシウム、カルシウムカゼイン塩または有機酸のカルシウム塩（例えば、クエン酸カルシウム、マレイン酸カルシウム、またはその混合物）のような有機カルシウム成分である。カルシウム源（ｂ）として、有機カルシウム化合物、特に脱脂乳粉末、卵殻カルシウム、カルシウムカゼイン塩またはその混合物を使用することが好ましい。供給すべきカルシウム成分の量は広範囲で変更可能である。通常、本発明組成物は１回服用量単位形態で（元素基準で）約１００〜１０００ｍｇ、好ましくは２００〜７００ｍｇ、最も好ましくは３００〜６００ｍｇのカルシウムを含む。
本発明の栄養補給組成物は、有利には例えば約１〜６０重量％、好ましくは約５〜５０重量％、最も好ましくは１０〜４０重量％のカルシウム成分（ｂ）を含む。
適当な炭水化物源として、例えばマルトデキストリン、スターチ、ラクトース、グルコース、スクロース、フルクトース、キシリット及び／またはソルビットが挙げられる。これらの形態で、炭水化物はエネルギー供給源及び甘味料である。本発明組成物は、１つまた２つ以上の異種炭水化物源を含み得る。
適当な脂肪源として、ω−６−ポリ不飽和脂肪酸源、ω−３−ポリ不飽和脂肪酸源、モノ不飽和脂肪酸源、中鎖（Ｃ6−Ｃ12）脂肪酸源またはその混合物が挙げられる。上記した脂肪酸は、遊離酸の形態、モノ−、ジ−または特にトリグリセリドの形態、または薬学的または栄養学的に許容され得る天然源の形態で使用され得る。
ω−６−ポリ不飽和脂肪酸の適当な天然源には、サフラワー油、ヒマワリ油、大豆油、綿実油及びコーン油が含まれる。ω−３−ポリ不飽和脂肪酸の適当な天然源には、アマニ油及び魚油、例えばニシン油、サーモン油、サバ油、ツナ油、タラ油及びアンチョビー油が含まれる。モノ不飽和脂肪酸の適当な天然源は、特にω−９−モノ不飽和脂肪酸、例えばオリーブ、カノラ、サフラワー（ハイブリッド）及びヒマワリ（ハイブリッド）である。
好ましい脂肪源は、所望量のω−６−ポリ不飽和脂肪酸及びω−３−ポリ不飽和脂肪酸を供給し、中鎖脂肪酸残基（すなわち、Ｃ6−Ｃ12脂肪酸の残基）及び／またはモノ不飽和脂肪酸残基に富むトリグリセリド油からなる。本発明組成物は、１つまたはそれ以上の異種脂肪酸源を含み得る。
本発明の栄養補給組成物の適当な窒素源の例として、大豆由来タンパク質、ホエイタンパク質またはカゼイン塩のような乳タンパク質及び／またはタンパク質加水分解物のような栄養学的に許容され得るタンパク質；及び／または遊離アミノ酸形態または塩形態の必須アミノ酸混合物；及び／または遊離アミノ酸形態または塩形態のアルギニン、アルギニン前駆体、オルニチン等のポリアミンの合成に関連する化合物が挙げられる。
栄養補給組成物の好ましい窒素源は、
(i)大豆の形態、または大豆粉末、乾燥大豆新芽、大豆ミルクなどのいずれかの適当な抽出物または濃縮物の形態または大豆からの乾燥水性抽出物として使用され得る大豆由来タンパク質、または
(ii)乳タンパク質、例えばホエイ粉末の形態で使用されるホエイ由来タンパク質またはカゼイン塩、カルシウムカゼイン塩のようなカゼイン塩、及び／または全乳または好ましくは脱脂乳粉末の形態で使用され得るホエイ由来タンパク質またはカゼイン塩、及び／または
(iii)必須アミノ酸混合物、及び／または
(iv)窒素源としてのアルギニン
である。
ホエイ粉末、カゼイン塩（特にカルシウムカゼイン塩）及び／または脱脂乳粉末のような乳タンパク質も、本発明の栄養補給組成物の特に好ましい窒素源である。本発明組成物は１つまたはそれ以上の異種窒素源を含み得る。
栄養補給組成物は、例えば約０．１〜９８．９重量％、好ましくは約１〜約９５重量％、最も好ましくは１０〜９０重量％のエネルギー源成分（ｃ）を含む。
本発明の栄養補給組成物のカロリーに対する窒素源、炭水化物源及び脂肪源の分配は広範囲で変更可能である。例えば、炭水化物源は組成物の全エネルギー供給量の３０〜７０％、窒素源は組成物の全エネルギー供給量の５〜４５％、及び脂肪源は組成物の全エネルギー供給量の１〜１５％を与える。本発明の好ましい組成物において、炭水化物源は組成物の全エネルギー供給量の４０〜５０％、窒素源は組成物の全エネルギー供給量の２０〜３５％、及び脂肪源は組成物の全エネルギー供給量の３〜１２％を与える。或いは、炭水化物源は組成物の全エネルギー供給量の３０〜７０％、窒素源は組成物の全エネルギー供給量の５〜４０％、及び脂肪源は組成物の全エネルギー供給量の０．０１〜５％を与える。
本発明組成物の好ましいエネルギー源（ｃ）は、
全エネルギー供給量の３０〜７０％の、マルトデキストリン、スターチ、ラクトース、グルコース、スクロース、フルクトース、キシリット及びソルビットからなる群から選択される１つ以上の炭水化物源、
全エネルギー供給量の５〜４５％の、大豆由来タンパク質、乳タンパク質、必須アミノ酸混合物及びアルギニンからなる群から選択される１つ以上の窒素源、及び
全エネルギー供給量の０．１〜１５％の、ω−３−及びω−６−ポリ不飽和脂肪酸からなる１つ以上の脂肪源
を含む。
本発明組成物の特に好ましいエネルギー源（ｃ）は、
全エネルギー供給量の４０〜６０％の、マルトデキストリン、スターチ、ラクトース、グルコース、スクロース、フルクトース、キシリット及びソルビットからなる群から選択される１つ以上の炭水化物源、
全エネルギー供給量の２０〜３５％の、大豆由来タンパク質、脱脂乳粉末及びカゼイン塩からなる群から選択される１つ以上の窒素源、及び
全エネルギー供給量の３〜１２％の、ω−３−及びω−６−ポリ不飽和脂肪酸からなる１つ以上の脂肪源
を含む。
供給すべきビタミンＤ（任意成分（ｄ））の量は広範囲で変更可能である。通常、本発明組成物は１回服用量単位形態で約４００〜１０００ＩＵ、好ましくは約５００ＩＵを含む。
本発明の栄養補給製剤は、他の栄養学的に許容され得る成分、例えばビタミン、ミネラル、微量成分、繊維（好ましくは、可溶性繊維）、フレーバー、保存料、着色剤、甘味料、乳化剤等を含み得る。
本発明組成物に配合するのに適したビタミンの例として、薬学的または栄養学的に許容され得る形態のビタミンＡ、ビタミン、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、ビタミンＣ、葉酸、チアミン、リボフラビン、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12、ナイアシン、ビオチン及びパントテン酸が挙げられる。
本発明組成物に配合するのに適したミネラル元素及び微量元素の例として、薬学的または栄養学的に許容され得る形態のナトリウム、カリウム、リン、マグネシウム、銅、亜鉛、鉄、セレン、クロム及びモリブデンが挙げられる。
本明細書中、用語「可溶性繊維」は、結腸において実質的な発酵を受けて短鎖脂肪酸を生成し得る繊維を指す。適当な可溶性繊維の例として、寒天−寒天、アルギン酸塩、カルビン(carubin)、カラゲーニン、アラビアゴム、グアーガム、カラヤガム、ローカストビーンガム、ペクチン、トラガカントまたはキサンタンガムが挙げられる。これらは加水分解されていてもいなくてもよい。
適当なフレーバーとして、天然または人工フレーバー、例えばバナナ、オレンジ、ピーチ、パイナップルまたはラズベリーのようなフルーツフレーバー、ベジタブルフレーバー、またはバニラ、カカオ、チョコレート、コーヒー等が挙げられる。
本発明の栄養補給組成物の好ましい成分には、前記した成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）に加えて、薬学的または栄養学的に許容され得る形態のβ−カロチン（ビタミンＡ）、ビタミンＥ、ビタミンＣ、チアミン、ビタミンＢ1、Ｂ6及び／またはＢ12、カリウム、マグネシウム、セレン、亜鉛、リン及び可溶性繊維が含まれる。
前記した成分（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び任意である（ｄ）に加えて、栄養補給製剤は、例えばこれらの追加成分を約０．１〜１５重量％、好ましくは約０．２〜約１０重量％、最も好ましくは０．５〜５重量％含み得る。
本発明の栄養補給製剤は、経腸投与、例えば経口投与または経管栄養（例えば、鼻腔投与）に適した任意の形態に製剤化され、投与される。有利には、前記製剤は水性液体の形態で投与される。従って、経腸投与に適した製剤は、好ましくは水性液体、または使用前に有利には水に添加される粉末または顆粒の形態である。経管栄養として使用する場合、添加すべき水の量は、患者の流体要求及び状態にとりわけ依存する。
本発明の栄養補給組成物は、単一の栄養源として使用したときに本質的に１日のカロリー、窒素、脂肪酸、ビタミン、ミネラル及び微量元素要件すべてを満たすような（液体または粉末形態の）完全栄養食の形態であってもよい。一般的に、成人に与えるべき１日量は７５０〜３５００ｋｃａｌ／日、特に１０００〜２０００ｋｃａｌ／日である。しかしながら、好ましくは、本発明の栄養補給組成物は栄養補助食品として使用される。補助食品により供給されるエネルギー量は、患者の食欲が不必要に抑えられないように過度であってはならない。補助食品は５０〜１５００ｋｃａｌ／日、好ましくは１００〜９００ｋｃａｌ／日、最も好ましくは１５０〜７００ｋｃａｌ／日を供給する量のエネルギー源を含むことが有利である。
液体形態（例えば、ドリンク形態）、または好ましくは固体形態（例えば、顆粒または粉末形態）である本発明の栄養補給組成物はそれ自体公知の方法により、例えば成分を混合し、場合により水を添加することにより得ることができる。
本発明は更に、
（ａ）ネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及びキバナスズシロ属の抽出物及び濃縮物からなる群から選択される少なくとも１つの植物抽出物もしくは濃縮物、及び
（ｂ）薬学的に許容され得る担体
を含む１回服用量単位形態の医薬組成物に関する。
前記医薬組成物は、経腸投与、例えば経口、経鼻または直腸投与のための組成物である。適当な医薬組成物は、液体形態または好ましくは固体形態であり得、活性成分（ａ）を例えば約０．００１〜１００重量％、好ましくは約０．１〜約５０重量％含む。
活性成分（ａ）は、上記した定義及び選好が適用されるネギ属、オランダゼリ属、アブラナ属及びキバナスズシロ属の抽出物及び濃縮物からなる群から選択される植物／野菜の抽出物もしくは濃縮物である。（ａ）が２つ以上の前記植物／野菜の抽出物及び濃縮物の混合物であってもよい。
経腸投与のための医薬組成物は、例えば糖衣錠、錠剤、カプセル剤またはサッシェのような１回服用量単位形態を有する。前記医薬組成物は、それ自体公知の方法、例えば慣用の混合、造粒、糖衣化、溶解または凍結乾燥方法により製造される。
例えば、経口投与のための医薬組成物は、活性成分を固体担体と混合し、場合により生じた混合物を顆粒化し、所望または所要により適当な賦形剤を添加した後混合物または顆粒を加工して錠剤または糖衣錠とすることにより得ることができる。
適当な担体は、特に充填剤、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトールのような糖類、セルロース類及び／またはリン酸トリカルシウムまたはリン酸水素カルシウムのようなリン酸カルシウム；及び結合剤、例えばトウモロコシ、小麦、コメまたはジャガイモデンプンを使用するスターチペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース及び／またはポリビニルピロリドンであり、並びに所望により上記スターチ、カルボキシメチルスターチ、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）のような崩壊剤である。賦形剤は、特に流動調節剤及び滑沢剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはカルシウム）、及び／またはポリエチレングリコールである。糖衣錠のコアには、適当な、任意に腸溶性のコーティングが設けられており、コーテイングには特にアラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール及び／または二酸化チタンを含み得る濃厚糖溶液、または適当な有機溶媒またはその混合物中のコーティング溶液、または腸溶コーティングを製造するためには適当なセルロース物質（例えば、フタル酸アセチルセルロースまたはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース）溶液が使用される。錠剤または糖衣錠コーティングに、例えば同定目的でまたは活性成分の用量の違いを示すために色素または顔料を添加してもよい。
他の経口投与され得る医薬組成物は、硬質ゼラチンカプセル、及びゼラチンとグリセロールまたはソルビトールのような可塑剤からなる軟質密封カプセルである。硬質ゼラチンカプセルは、例えば充填剤（例えば、ラクトース）、結合剤（例えば、スターチ）及び／または滑沢剤(glidants)（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウム）、及び所望により安定剤と混合して活性剤を顆粒形態で含み得る。軟質カプセルの場合、活性成分を脂肪油、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールのような適当な液体に溶解または懸濁させることが好ましく、同様に安定剤を添加することもできる。
適当な直腸投与される医薬組成物は、例えば活性成分と座薬基剤からなる座薬である。適当な座薬基剤は、例えば天然または合成トリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコールまたは高級アルカノールである。活性成分と基剤からなるゼラチン直腸カプセルを使用することもできる。適当な基剤は、例えば液体トリグリセリド、ポリエチレングリコールまたはパラフィン炭化水素である。
本発明の植物または野菜抽出物及び濃縮物の骨吸収に対する抑制効果は、
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及びＨ．Ｆｌｅｉｓｃｈ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２５８，Ｒ６７９−Ｒ６８９（１９９０）に記載されているように予め長期にわたり標識したラットからの［3Ｈ］−テトラサイクリンの尿排泄を測定することにより評価され得る。この方法は、（ｉ）［3Ｈ］−標識テトラサイクリンは硬質組織の形成中その組織に沈着すること、及び（ｉｉ）骨が吸収されると、［3Ｈ］−テトラサイクリンが遊離し、血液中を循環し、尿に排泄され、尿中の［3Ｈ］を計数することにより評価され得ることに基づく。これは多分、骨からの［3Ｈ］−テトラサイクリンがヒドロキシアパタイトに弱く結合した形態で循環し、よって骨から一旦遊離した［3Ｈ］−テトラサイクリンは骨代謝回転中、有効な腎排泄のためにほんの少ししか再利用されないからである。この方法は以下のようにして実施され得る。生後直ぐから約６週齢までラットに１週間に２回漸増容量の［3Ｈ］−テトラサイクリン含有溶液を皮下注射する。約５０日後、動物を個別の代謝ゲージに移し、各ラットに約３週間同一量の標準餌を与える。その後、１群のラットには精製餌を与え、他群には更に特定量の本発明の植物または野菜濃縮物もしくは抽出物を含む精製餌を与える。実験中、動物には自由に脱イオン水を摂取させる。
ラットが約６０日齢のとき、２４時間蓄尿を開始し、尿中の［3Ｈ］含量を液体シンチレーション計数により測定する。次いで、２つのラット群の尿中の［3Ｈ］−テトラサイクリン含量を時間（日）に対してプロットした図を作成する。
適切な実験で、本発明の植物または野菜抽出物もしくは濃縮物が無傷の雄ラット及び卵巣除去した雌ラットの尿中の累積［3Ｈ］−テトラサイクリン排泄量をかなり減少させ得ることが示され、このことから骨吸収に対する高い抑制効果が明らかである。従って、本発明の栄養補給及び医薬組成物は、パジェット病、腫瘍起因の骨疾患、または特に骨粗しょう症のような増加した骨吸収を特徴とする病気または症状の予防及び治療のために有用である。
植物または野菜抽出物もしくは濃縮物の骨吸収に対する抑制効果は、単離したばかりの破骨細胞を定着させた象牙スライスを被検抽出物もしくは濃縮物を含む培地とインキュベートするインビトロアッセイ（実施例３に記載されている）によっても評価され得る。破骨細胞に対する抑制効果は、象牙スライス上の破骨細胞吸収ピットを数えることにより評価される。
本発明を説明する下記実施例において、特記しない限り％は重量部であり、温度は℃で示す。
実施例１
本発明の粉末状サプリメントの適当な組成物を例示する。
粉末状補助食品（１回分）
内容量                                    ６５．０ｇ
本発明抽出物／濃縮物1)                    １４．５ｇ
炭水化物、タンパク質及び繊維を含む
タンパク質                                ２０．０ｇ
以下の物質を含む：
Ｃａカゼイン塩タンパク質                    ８．７ｇ
粉末脱脂乳                                １１．０ｇ
脂肪                                        ２．８ｇ
以下の物質を含む：
ω−６−ポリ不飽和酸                        １．３ｇ
ω−３−ポリ不飽和酸                        ０．０３ｇ
炭水化物（本発明抽出物を含む）            ３１．０ｇ
以下の物質を含む：
ラクトース                                １６．５ｇ
マルトデキストリン                          ３．５ｇ
繊維（可溶性）                              ５．０ｇ
別の成分                                    ３．０ｇ
以下の成分を含む：
Ｎａ                                    ２３０ｍｇ
Ｋ                                      ５００ｍｇ
Ｃａ                                    ６００ｍｇ
Ｍｇ                                      ９０ｍｇ
Ｐ                                      ４３０ｍｇ
Ｃｌ                                    ３５０ｍｇ
Ｚｎ                                    １５０ｍｇ
レチノール（ビタミンＡ）                    ０．３ｍｇ
カルシフェロール（ビタミンＤ）              ５．０μｇ
トコフェルール（ビタミンＥ）                ３．０ｍｇ
フィロキノン（ビタミンＫ1）               ３０．０μｇ
チアミン（ビタミンＢ1）                     ０．４ｍｇ
リボフラビン（ビタミンＢ1）                 ０．５ｍｇ
ピリドキシン（ビタミンＢ6）                 ０．８ｍｇ
シアノコバラミン（ビタミンＢ12）            ０．８μｇ
アスコルビン酸（ビタミンＣ）              ２０．０ｍｇ
ビオチン                                  ５０．０μｇ
葉酸                                    １２０．０μｇ
ナイアシンアミド                            ５．０ｍｇ
パントテン酸                                ２．０ｍｇ
エネルギー値                            ２２９ｋｃａｌ
＊1)
ａ）乾燥ブロッコリ４８．３ｇを蒸留水４８３ｍｌを用いて８９±３℃で１０分間抽出し、その後抽出物を蒸発乾固させて得た抽出物１；
ｂ）乾燥イタリアンパセリ４８．３ｇを蒸留水４８３ｍｌを用いて８９±３℃で１０分間抽出し、その後抽出物を蒸発乾固させて得た抽出物２；
ｃ）乾燥タマネギ２６．４ｇを蒸留水２６４ｍｌを用いて８９±３℃で１０分間抽出し、その後抽出物を蒸発乾固させて得た抽出物３；
ｄ）乾燥タマネギ５８．９ｇを蒸留水５８９ｍｌを用いて８９±３℃で１０分間抽出し、その後抽出物を蒸発乾固させ、更に乾燥させた水抽出物を８５％エノール／１５％水３２４ｍｌを用いて６０℃で１時間抽出し、室温に冷却し、−２０℃で一晩保持し、上清をデカントし、アルコールを蒸発させ、抽出物を凍結乾燥して得た抽出物４；
ｅ）乾燥タマネギ４５．３ｇを８５％エタノール／１５％水４５３ｍｌを用いて６０℃で１時間抽出し、濾過し、アルコールを蒸発させ、抽出物を凍結乾燥して得た抽出物５；
ｆ）新鮮な熊ニンニクを乾燥し、微細粉末に粉砕して得た抽出物６。
上記サプルメントを水と混合し、食事の間に適当な濃度で摂取する。
実施例２：ブロッコリ、ドッグパセリ及びタマネギのＨ2Ｏ抽出物の骨吸収に対する影響
本発明の植物または野菜抽出物及び濃縮物の骨吸収に対する影響は、
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及びＨ．Ｆｌｅｉｓｃｈ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５９，Ｒ６７９−Ｒ６８９（１９９０）に記載されている方法に基づく。骨吸収は、上記文献に記載されているように誕生から６週間［3Ｈ］−テトラサイクリンで予め標識したウィスターラットにおける3Ｈの尿排泄によりモニターする。その後、ラットを個別の代謝ケージに収容し、餌１００ｇ当たりＣａ１．０ｇ、Ｐ０．７ｇ及びビタミンＤ3８０ＩＵを含有する標準実験餌
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を１０日間与える。この順応期間後、すべてのラットに乾燥重量１００ｇ当たりＣａ１．０ｇ、Ｐ１．２ｇ及びビタミンＤ3８０ＩＵを含有する食餌を与えた。このためには、基本となる粉末状の低カルシウム・低ホスフェート食餌
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に適当量のグルコン酸Ｃａ塩及び中性リン酸塩を添加したものを更に１０日間与え、この間に採尿した。その後、ラットをペアにして１日あたり２８ｇの湿潤餌(wet food)を与えた。１群（ｎ＝６）には精製餌（“Ｄｉｅｔ  Ｐ”，Ｓｏｄｉ  ２１６０，スイス国Ｋａｉｓｅｒａｕｇｓｔに所在の
0004447661.tif 000006
乾燥重量１００ｇ当たりＣａ１．０ｇ、Ｐ１．２ｇ及びビタミンＤ3８０ＩＵを含有する、含水量４５±２％の湿潤餌として与える）を与える。第２群（ｎ＝５）には、更に１日あたり３００ｍｇのブロッコリ由来抽出物（蒸留水１０ｍｌを用いて８９±３℃で１０分間抽出した乾燥ブロッコリ１．０ｇに対応）を含む精製餌を与える。第３群（ｎ＝５）には、更に１日あたり３００ｍｇのイタリアンパセリ由来抽出物（蒸留水１０ｍｌを用いて８９±３℃で１０分間抽出した乾燥イタリアンパセリ１．０ｇに対応）を含む精製餌を与える。第４群（ｎ＝５）には、更に１日あたり５５０ｍｇのタマネギ由来抽出物（蒸留水１０ｍｌを用いて８９±３℃で１０分間抽出した乾燥タマネギ１．０ｇに対応）を含む精製餌を与える。
採尿しない１０日の順応期間及び採尿する更なる１０日間後、ラットをそれぞれの処理群に割り当てた。選択基準として基線２４時間［3Ｈ］−テトラサイクリン排泄量を用い、各群につき同等の平均初期値が得られるように特別の注意を払う。その後、ラットを本発明の抽出物を含むか含まない精製餌に切り替え、１４日間にわたり２４時間蓄尿を実施し、尿中の累積［3Ｈ］−テトラサイクリン排泄量を液体シンチレーション計数により測定した。
治療の１４日後の累積骨吸収は、それぞれブロッコリ、イタリアンパセリ及びタマネギの抽出物を毎日与えたラットでは対照群に比して９．２％、９．５％及び１７．５％（ｐ＜０．０５）低かった。
実施例３：熊ニンニク濃縮物の骨吸収に対する影響
処置を６日間のみ続け、試験群（ｎ＝５）に熊ニンニク由来濃縮物（新鮮な熊ニンニクを乾燥し、粉砕して得る）１ｇを更に含む精製餌を与える以外は、実施例２に記載したと同じ方法を使用する。雄ラットにおいて熊ニンニクは骨吸収を１３．５％（ｐ＜０．０５）抑制することが判明した。
実施例４：タマネギ抽出物のインビトロ吸収に対する影響
タマネギ抽出物のインビトロ吸収に対する影響を、（Ａｒｎｅｔｔ  ＴＲ，Ｓｐｏｗａｇｅ  Ｍ，１９９６，“Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｒａｔ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ  ｂｙ  ｓｍａｓｌｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐＨ  ｎｅａｒ  ｔｈｅ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒａｎｇｅ（生理学的範囲に近い細胞外ｐＨの小変化によるラット破骨細胞の吸収活性の調節）”，Ｂｏｎｅ  １８：２７７−２７９に記載されている）破骨細胞仲介吸収について調べた。ただし、骨ウェハーを使用する代わりに、鉱物基質として象牙質スライスを使用して破骨細胞吸収ピットを評価し、このピットは金スポッタリング後接線照射下で計数される（Ｖｉｔｔｅ  Ｃ，Ｆｌｅｉｓｃｈ  Ｈ，Ｇｕｅｎｔｈｅｒ  ＨＬ，１９９６，“Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎｄｕｅｃｅ  ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ  ｔｏ  ｓｅｃｒｅｔｅ  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ（ビスホスホネートは破骨細胞仲介吸収の抑制剤を分泌するように骨芽細胞を誘導する）”，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３７：２３２４−２４３３）。本アッセイでは、予め新鮮な単離破骨細胞を定着させた４×４ｍｍ象牙質スライスを４８ウェルプレートの各ウェルあたり被検抽出物を含有する培地２５０μｌにおいて３７℃、５％ＣＯ2／空気雰囲気下で２４時間インキュベートする。各用量につき８枚のスライスを使用する。破骨細胞は、軟骨端部を除去後半分に分割し、横方向に細かく切り刻んだ新生ラットの大腿骨から採取する。この方法により、骨芽細胞のような他の細胞を多く含む細胞懸濁物が生ずる。こうすると、広範囲の条件の影響、すなわち破骨細胞に対する直接的影響及び骨芽細胞のような他の細胞により媒介される破骨細胞に対する間接的影響をテストすることができる。
オニオン抽出物は、オニオン微粉末を蒸留水（１００ｇ／ｌ）中９０℃で１０分間抽出し、濾過し、濾液を凍結乾燥し、その後乾燥させた水抽出物を８５％エタノール／１５％水中６０℃で１時間抽出し、室温に冷却し、−２０℃で一晩保持して望ましくない材料を沈殿させ、上清をデカントし、アルコールを蒸発させ、こうして得られた残渣を凍結乾燥して得る。こうして、乾燥全タマネギ１ｇにつき２５０ｍｇの凍結乾燥したタマネギ抽出物が得られる。
タマネギ抽出物（０．０１７、０．１７、１．７ｍｇタマネギ抽出物／ｍｌ−培地）は、用量依存的に象牙質の破骨細胞仲介吸収を抑制し、タータレート耐性アルカリホスファターゼ陽性（ＴＲＡＰ+）多核細胞（ＭＮＣ）の数は有意に減少しなかった。よって、ピット／ＴＲＡＰ+ＭＮＣの比率は有意に減少した（ｐ＜０．００１）。このことから、タマネギ抽出物の添加にかかわらず、培養物中に多数のＴＲＡＰ+ＭＮＣが存在することは、タマネギ抽出物は前記細胞に対して有毒でなく、むしろ破骨細胞の活性を抑制することを意味する。