(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖類物質を生成させるラクトバシラス属 (Lactobacillus sp.) BC-Y009 (KCTC-0774BP)。
【請求項２】
多糖類物質を生成させるアセトバクター属 (Acetobacter sp.) BC-Y058 (KCTC-0773BP)。
【請求項３】
腸内で増殖して腸内の低糖類物質を体内で吸収されない多糖類物質に転換させうるアセトバクター属 (Acetobacter sp.) BC-Y058 (KCTC-0773BP)及びラクトバシラス属 (Lactobacillus sp.) BC-Y009 (KCTC-0774BP)からなる群より選ばれる微生物の薬学的有効量と担体とを備えることを特徴とする肥満症予防治療用製剤。
【請求項４】
前記微生物の薬学的有効量と担体とからなる組成物を、腸溶被覆物質で被覆させたことを特徴とする請求項３記載の肥満症予防治療用製剤。
【請求項５】
腸内で増殖して腸内の低糖類物質を体内で吸収されない多糖類物質に転換させうるアセトバクター属 (Acetobacter sp.) BC-Y058 (KCTC-0773BP)及びラクトバシラス属 (Lactobacillus sp.) BC-Y009 (KCTC-0774BP)からなる群より選ばれる微生物の薬学的有効量と担体とを備えることを特徴とする糖尿病予防治療用製剤。
【請求項６】
前記微生物の薬学的有効量と担体とからなる組成物を、腸溶被覆物質で被覆させたことを特徴とする請求項５記載の糖尿病予防治療用製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は葡萄糖、蔗糖、果糖などの単糖類又は二糖類を腸内で吸収されない高分子量の物質に転換させて、体内に吸収される単糖類又は二糖類の量を減らすことにより、肥満又は糖尿病の治療又は予防の効果を奏する微生物及びその微生物を含む医薬組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
肥満は未だ原因が明らかに明かされていないいろいろの要因により複合的に発生する慢性的な疾患として知られている。肥満は、高血圧、糖尿、心血管疾患、胆石、骨関節炎、睡眠時無呼吸症（sleep apnea）、呼吸障害、子宮内膜癌、前立腺癌、乳房癌又は大腸癌などを誘発する要因となっている。
１９９９年米合衆国国立保健院（ＮＩＨ）報告書（The Evidence Report : Clinical guidelines on the identification, evaluation, and treatment of overweight and obesity in adults,1999,NIH）によると、アメリカ人のうち、約９，７００万人が肥満状態にあり、肥満に関連した疾患の一つである第２型糖尿（type 2 diabetes mellitus type）患者が約１，５７０万人に至る。また、肥満に関連した疾患により毎年全世界的に約２０万人が死亡すると知られている（Dan Ferber, Science, 283, pp 1423-1424, 1999）。
【０００３】
糖尿病は、患者及びその家族だけでなく、社会に相当な個人的及び財政的費用が要求される全世界的に最も広く広がった慢性疾患の一つである。別個の病因及び発病機構を有する相違した糖尿病類型が存在する。例えば、真性糖尿病は過血糖症及び糖尿と特徴付けられ、インシュリンの不適な生成又は利用により引き起こされる炭水化物代謝の障害である。
【０００４】
非インシュリン−依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、又は類型II糖尿病は、インシュリンが適切に生成されて用いられるが、抹消組織でインシュリンが媒介された利用及びグルコース代謝に欠点がある成人で主として表れる糖尿病である。
ＮＩＤＤＭは三つの主要な代謝的異常、インシュリンが媒介するグルコース処理に対する抵抗、栄養物により刺激されるインシュリン分泌能力の損傷及び肝でのグルコースの過生成に起因する。ＮＩＤＤＭ治療（つまり、血糖水準の調節）に失敗すると、心脈管疾患による死亡及び網膜症、腎臓病及び抹消神経病及びそのほかの糖尿性合併症を引き起こし得る。
【０００５】
ＮＩＤＤＭの治療法には、ＮＩＤＤＭ患者の血糖水準を調節する方法として、食餌療法及び運動だけでなく、スルホニル尿素及びビグアナイド治療化合物などの使用が含まれる。また、メトホルミン及びアカルボス化合物も最近にＮＩＤＤＭ患者を治療することに使用されている。しかし、ある患者においては、過血糖症が食餌療法及び運動とそのような治療化合物の使用によっても適切に調節できない。その場合には、患者に外因性インシュリンを投与しなければならない。
患者に注射でインシュリンを投与するのは高価で、苦しい点のほかにも、患者に有害な多様な状況又は合併症を引き起こし得る。例えば、インシュリン反応（低血糖症）は、インシュリン投与量の錯誤、欠食、不規則な運動によるか又は特別な原因がなくても引き起こされる。また、局所的又は全身アレルギー反応及びインシュリンに対する免疫学的抵抗性が発生することができる。
【０００６】
肥満及び糖尿の予防又は治療方法は、大別して食餌−運動療法、手術療法及び薬物療法がある。食餌−運動療法は低カロリー−低脂肪摂取と酸素を消費する肉体の活動による治療方法であるが、これは、忍耐心をもって反復的、持続的に遂行すべきであるため、大衆的な効果を得ることが難しいものと認識されている。
手術療法は、外科的手術により体脂肪を物理的に除去する方法で、短期間に効果が得られる利点があるが、手術を行うべき点、効果の持続性がないという点、費用が高くかかるという点などのため、制限的に活用されている。
【０００７】
血糖を減少させるか、血糖の吸収を阻害するか、食餌の減少を誘発する薬剤により肥満又は肥満型糖尿を治療又は予防しようとする薬物療法が現在最も活発に研究されている方法である。これまで開発された肥満及び肥満型糖尿の予防及び治療のための薬剤は多様な生理学的メカニズムを用いている。
インシュリンの作用を向上させる薬物として、スルホニル尿素、メトホルミン、ピオグリタゾーン、チアゾリジンジオン誘導体などが開発された。スルホニル尿素は膵臓のベータ細胞からのインシュリンの分泌を刺激する作用をするが、血中葡萄糖の濃度を正常以下に低める低血糖症の副作用を誘発し得る。
メトホルミンは、食餌療法又は運動療法により回復されないインシュリン−非依存性糖尿病患者に主として使用される。この薬剤は肝での糖新生（hepatic gluconeogenesis）の過程を抑制し、葡萄糖を筋肉と脂肪組織に貯蔵するようにする。しかし、嘔吐、下痢などの副作用があるものと知られている。
【０００８】
ピオグリタゾンは日本国のタケダ社が開発したもので、インシュリンの細胞に対する感受性を増加させてインシュリンの作用を強化する役目をする（Kobayashi M. et al., Diabetes, 41（4）, pp 476-483, 1992）。
体内脂肪の分解を促進する薬物としては、Beta 3-adrenoreceptor阻害剤（BRL-35135）が知られており、現在、脂肪細胞に特異的に作用して、脂肪細胞の脂肪を分解して熱として発散させるとともに血糖値降下効果を奏する。
脂肪の吸収抑制薬物としては、膵臓脂肪分解酵素妨害剤（Orlistat：スイスのRoche社）が知られている。これは、膵臓脂肪分解酵素の作用を抑制することにより、脂肪の吸収を減少させる薬剤であるが、脂溶性ビタミンの吸収を妨害し、乳房癌の誘発の可能性がある。
【０００９】
食欲を阻害する薬剤は主として脳に存在する神経伝達物質（catecholamines）に作用して食欲を低下させる。しかし、デクスフェンフルラミン、フェンフルラミンは神経毒性、板膜性心臓疾患の副作用があり、シブトラミンは心拍数と血圧を上昇させる副作用がある。
【００１０】
糖吸収抑制関連治療剤として、α−グルコシダーゼ阻害剤（Acarbose：ドイツBayer社）、アミラーゼ阻害剤、食餌繊維、高分子物質などがある。アカルボゼは胃腸管内の微細絨毛（microvilli）に存在するいろいろのα−グルコシダーゼの作用を競争的に抑制するものと知られたシュードオリゴサッカライド（擬果糖類）である。これを多量で摂取したとき、下痢を引き起こし得る（W. Puls et al., Front. Horm. Res. 2, 235, 1998）。
【００１１】
アミラーゼ阻害剤は、炭水化物を葡萄糖に転換させるアミラーゼの作用を抑制することにより、過度な栄養分の摂取により招来される代謝不均衡を防ぐために開発された（Sanchez-Monge R. et al, Eur. J. Biochem., 183, pp 37-40, 1989）。
食餌繊維の摂取は最も易しい方法の一つで、植物性繊維の多い食餌により小腸で吸収される糖分の量を減らして、肥満抑制効果を得ることになる。しかし、食餌繊維は、生産のための設備投資と人力が大きく要求され、食餌繊維の生産性もあまり高くないという問題点がある。
高分子物質としては、マルトトリオース、デキストラン及びフランが挙げられる。これら高分子物質は、糖分の摂取による血糖量の増加を抑制させるが、副作用が酷い。例えば、デキストランは血液の凝固時間（blood coagulation time）を遅延させることで、過多出血を誘発し得る。
しかし、前記のような多様な薬剤のなかで、人体の代謝均衡に損傷を与えなく、天然物質である点のため、食餌繊維が最も有用な肥満予防又は治療製剤と認められている。
微生物食餌繊維は、グルコノバクター属（Gluconobacter sp.）、 アグロバクテリウム属（Agrobacterium sp.）、アセトバクター・キシリヌム（Acetobacter xylinum）、アセトバクター・ハンセニー（A. hansenii）、アセトバクター・パスツリアヌス（A. pasteurianus）、アセトバクター・アセチ（A. aceti）、リゾビウム属（Rhizobium）、アルカリゲネス属（Alcaligenes）、アルシナ属（Sarcina）、ストレプトコカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophilus）、ラクトコカス・クレモリス（Lactococcus cremoris）、ラクトバシラス・ヘルベチカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバシラス・ブルガリクス（L. bulgaricus）、ラクトバシラス・サケ（L. sake）、ラクトバシラス・ルテリ（L. reuteri）、ラクトバシラス・ラクチス（L. lactis）、ラクトバシラス・デルブルエッキー亜種（L. delbrueckii subsp.）、ラクトバシラス・ヘルベチカスグルコースの変種（L. helveticusglucose var. jugurti）、ルコノストック・デキストラニクム（Leuconostoc dextranicum）、ブルガリクス属（Bulgaricus）、カムペストリス（Campestris）、スフィンゴモナス（Sphingomonas）など微生物により作られている。
これら微生物が生成する食餌繊維は、各種食品の安定剤、増粘剤、乳化剤、吸湿剤などと、医薬品、化粧品の材料として使用されている。現在、微生物セルロース、キサン、アセタンなどと海藻類から精製した食餌繊維であるグアールガム（Guar gum）、ローカストビーンガム（Locust bean gum）、カラゲナン（carrageenan）、アルギナート（alginate）、アガール（agar）などが商品化されている。
ラクトバシラス属の菌株は、人体の腸内に棲息する正常微生物群集（normal microbial flora）の主要構成員で、健康な消化器官と膣内環境を維持するに重要なもので、久しい前から知られてきた（Bibel, D. J., ASM News, 54:661-665, 1988; Reid, G. and A. W. Bruce, In H. Lappin-Scott （ed.）, Bacterial biofilms. Cambridge University Press, Cambridge, England, p. 274-281, 1995; Reid G., A. W. Bruce, J. A. McGroarty, K. J. Cheng, and J. W. Costerton, Clin. Microbiol. Rev., 3:335-344, 1990）。一般に、ラクトバシラス菌株の棲息処は動物の消化器官（L. acidophilus, L. intestinalis, L. johnsonii, L. reuteri など）、膣内粘膜（L. vaginalis, L. gasseri）、食品（wine - L. hilgardii）、乳酸菌飲料（L. kefir, L. kefiranofaciens; cheese - L. casei）、食酢（L. acetotolerans）、口腔（L. oris）、麹（ L. sake, L. homohiochi）、果物ジュース（L. kunkeei, L. mali, L. suebicus）、醗酵されたソーセージ又は魚類（L. farciminis, L. alimentarius）などである。
実際に、多くの人々が健康な腸を維持し、尿路膣内感染（urogenital tract infection）を防ぐために、ラクトバシラス属の菌株を含有した健康補助剤を使用している。最近には、下痢又は便秘の予防又は尿路感染の予防のほかに、ラクトバシラスの多様な生理活性機能（probiotic activity）、つまり免疫力の調節、血中コレステロール数値の調節、リューマチの治療、癌の予防、乳糖に対する敏感性緩和、アトピー性皮膚炎に対する効果などに対する重要性と関心が増加している。
【００１２】
米国の公衆健康ガイドライン（U.S. Public Health Service guidelines）によると、現在、米国菌株寄託機関（ATCC）に寄託された２６２種のラクトバシラス菌株の全てが人体又は動物に疾病を誘発し得る潜在的危険に対しては知られたものがないと認められる“安全水準（Bio-safety Level）１”と分類されている。６０種のラクトバシラス属に属する菌株のなかで、人体毒性を有するものとして知られたものはない。
【００１３】
最近のラクトバシラスが合成する細胞外食餌繊維に対する研究が活発に進行されているが、これら菌株が細胞外食餌繊維を形成するメカニズムには、多くの遺伝子が関与するため、非常に複雑であり、合成される食餌繊維の量も非常に少ないものと知られている（Int. J. Food Microbiol., Mar 3 40:1-2, 87-92, 1998; Current Opinion in Biotechnology, 10:498-504, 1999; Current Opinion in Microbiology, 2:598-603, 1999; Appl. Environ. Microbiol., Feb 64:2, 659-64, 1998; FEMS Microbiol. Rev., Apr 23:2 153-77, 1999; FEMS Microbiol. Rev., Sep 7:1-2, 113-30, 1990. 参照）。
【００１４】
また、アセトバクター（Acetobacter sp.）はセルロース食餌繊維を合成する微生物と知られており、これらのセルロース合成に対しては、多くの研究が行われている（Aloni Y., Cohen R., Benziman M., Delmer D, J Biological Chemistry, 258:4419-4423, 1983; Amikam, Benziman M., Journal of Bacteriology, 171:6649-6655, 1989; Aschner M., J Bacteriology, 33:249-252, 1937; Benziman M., Burger-Rachamimov H., J Bacteriology, 84:625-630, 1962; Brown AM, Journal of Polymer Science, 59:155-169, 1962; Brown AM, Gascoigne JA, Nature, 187:1010-1012, 1960; Colvin JR, Planta, 149:97-107, 1980; Delmer DP, Amor Y., Plant Cell, 7:987-1000, 1995; Delmer DP, Benziman M., Padan E., PNAS USA, 79:5282-5286, 1982; Delmer DP, Brown RM Jr., Cooper JB, Lin FC, Science, 230:822-825, 1985. 参照）。
【００１５】
アセトバクターは偏性好気性（strict aerobe）であるが、極微量の酸素存在条件下でも生育し得る特性を持っており、酸素が少なく存在する条件下では自らセルロース食餌繊維を合成し浮遊して酸素を受けようとする性質を持っている。アセトバクターが葡萄糖をセルロース食餌繊維に転換させる量と速度に関する研究（Brown et al.; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol73（12）, 4565-4569）によると、約４００amol/cell/hrの速度で葡萄糖をセルロースに転換させるという。これは、４×１０１５cellsが１時間に約２００ｇの葡萄糖をセルロース食餌繊維に転換させ得る速度である。
一般に、アセトバクターが蔗糖を代謝すると報告された場合は稀であるが、自然界には蔗糖を葡萄糖に転換させ得るアセトバクターが存在する（PNAS, 96: pp 14-18, 1999）。現在、米国ＦＤＡには、アセトバクター・キシリヌム（Acetobacter xylinum）が酢酸とソルボース（sorbose）を合成する用途で承認されており、一般的な安全性があるものと（GRAS, Generally Accepted As Safe）分類されている。
前記のように、現在まで肥満又は糖尿の治療に関して多様な研究と努力があったが、未だその結果は微々たる水準である。前述した種々の化合物が肥満又は糖尿病治療剤として開発されたが、副作用が発生し、これらは体内に蓄積された体脂肪、蛋白質などを強制的に排出する機能をし、肥満又は糖尿を根本的に抑制するか治療する画期的な治療剤は未だない実情である。
【００１６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、腸内で生長しながら消化酵素により分解された低糖類炭水化物を吸収して、体内に吸収されない高分子量の物質に転換させることにより、腸から体内に吸収される低糖類の量を大きく減らし得る微生物を提供することである。
本発明のほかの目的は、前記微生物の薬学的有効量を含有して、体内に吸収される低糖類の量を根本的に減少させることにより、肥満又は糖尿病を予防又は治療するための医薬組成物を提供することである。
【００１７】
【課題を解決するための手段】
本発明の微生物は、腸内で成長可能であり、人体に無害であり、低糖類を体内で吸収されない高分子量の物質に転換させるアセトバクター属、グルコノバクター属、ラクトバシラス属又はアグロバクテリウム属に属する菌株であることが好ましい。具体的な例を挙げると、アセトバクター・キシリヌム（Acetobacter xylinum）、アセトバクター・ハンセニー（A. hansenii）、アセトバクター・パスツリアヌス（A. pasteurianus）、アセトバクター・アセチ（A. aceti）、ラクトコカス・クレモリス（Lactococcus cremoris）、ラクトバシラス・ヘルベチカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバシラス・ブルカリクス（L. bulgaricus）、ラクトバシラス・サケ（L. sake）、ラクトバシラス・ルテリ（L. reuteri）、ラクトバシラス・ラクチス（L. lactis）、ラクトバシラス・デルブルエッキー亜種（L. delbrueckii subsp.）、ラクトバシラス・ヘルベチカスグルコースの変種（L. helveticusglucose var. jugurti）などが本発明の組成物に使用できる。本発明の組成物に使用される微生物はラクトバシラス属 BC-Y009（KCTC0774BP）菌株とアセトバクター属 BC-Y058（KCTC0773BP）菌株であることが特に好ましい。
本発明の微生物は、通常、投与経路によって選択される薬学的担体及び賦形剤、又は補助有効成分などとの混合により得られる錠剤又はカプセルのような単位形態で投与される。
【００１８】
本発明の組成物に適した担体、賦形剤及び希釈剤には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、燐酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカントゴム、ゼラチン、珪酸カルシウム、微細結晶質セルロース、ポリビニールピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチル及びプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム又は鉱油などが含まれる。本発明の微生物組成物は更に潤滑剤、湿潤材、乳化剤及び懸濁化剤、防腐剤、甘味剤又は香味材を含み得る。本発明の組成物は、当業界に知られた方法により、胃腸を通過した後、小腸に到達して、活性成分である微生物が迅速に腸内に放出されるように、腸溶被覆製剤として製造できる。
また、本発明の微生物組成物は通常のカプセル化方法によりカプセル形態の組成物に製造できる。例えば、標準担体を使用して凍結乾燥させた本発明の微生物を含有するペレットを製造した後、これを硬質のゼラチンカプセル内に充填させることができる。又は、本発明の微生物と任意の適切な製薬学的担体、例えば水生ガム、セルロース、珪酸塩又はオイルを使用して懸濁液、分散液を製造した後、このような分散液又は懸濁液を軟質のゼラチンカプセル内に充填させることもできる。
本発明の製剤は、特に経口用単位剤形で腸溶被覆された製剤として提供できる。本発明において、“腸溶被覆”は胃酸によっては分解されなくて被覆が維持されるが、小腸では十分に分解されて、活性成分が小腸内に放出されるようにする、製薬学上許容可能な全種類の公知の被覆を含む。
【００１９】
本発明の“腸溶被覆”はｐＨ１のＨＣｌ用液と人口胃汁を３６〜３８℃で接触させるとき、２時間以上そのまま維持され、好ましくは、以後にｐＨ６．８のＫＨ２ＰＯ４緩衝溶液のような人工腸汁で３０分以内に分解される被覆を示す。
本発明の腸溶被覆は１個のコアに約１６〜３０、好ましくは１６〜２０又は２５ｍｇ以下の量で被覆される。本発明の腸溶被覆の厚さが５〜１００μｍ、好ましくは２０〜８０μｍである場合が、腸溶被覆として満足した結果を表した。腸溶被覆の材料は公知の高分子物質のなかで適宜選択される、適当な高分子物質は文献［L. Lachman外, The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, 3版, 1986, pp. 365-373、H. Sucker外、Pharmazeutische Technologie, Thieme, 1991, pp. 355-359、Hagers Handbuch der pharmazeutischen Praxis, 4版, Vol. 7, pp. 739〜742, 及び766〜778, （SpringerVerlag, 1971）,及び Remington's Pharmaceutical Sciences, 13版, pp. 1689〜1691 （Mack Publ., Co., 1970）］に列挙されており、セルロースエステル誘導体、セルロースエーテル、アクリル樹脂のメチルアクリレート共重合体及びマレイン酸及びフタル酸誘導体の共重合体がこれらに含まれることができる。
【００２０】
本発明の好ましい腸溶被覆はセルロースアセテートフタラート及びトリメリテート、そしてメタクリル酸共重合体（例えば、メチルアクリル酸４０％以上、及び特にヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラートを含むメチルアクリル酸及びそのエステルから誘導された共重合体）から製造される。
ロームゲーエムベーハー社（Rohm GmbH, ドイツ）から市販されているエンドラジットエル（Endragit L 100-55）製品が本発明の腸溶被覆の材料として使用できる。
本発明の腸溶被覆用セルロースアセテートフタラートは、約４５〜９０ｃＰの粘度と、１７〜２６％のアセチル含量及び３０〜４０％のフタラート含量を有し、セルロースアセテートトリメリテートは約１５〜２０ｃＳの粘度と、１７〜２６％のアセチル含量、２５〜３５％のトリメリチル含量の有する。イーストマンコダックカンパニー（Eastman Kodak Company）社が市販しているセルロースアセテートトリメリテート製品が本発明の腸溶被覆材料として使用できる。
【００２１】
本発明の腸溶被覆材料として使用されるヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラートは、通常、２０，０００〜１００，０００ダルトン、好ましくは８０，０００〜１３０，０００ダルトンの分子量を有し、５〜１０％のヒドロキシプロピル含量、１８〜２４％のメトキシ含量及び２１〜３５％のフタリル含量を有する。イーストマンコダック社が市販しているセルロースアセテートフタラートが本発明の腸溶被覆の材料として使用できる。
【００２２】
本発明の腸溶被覆に使用できるヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラートは、シン−エツケミカル社（Shin-Etsu Chemical Co. Ltd., 日本国）が市販しているＨＰ５０であり、これは、６〜１０％のヒドロキシプロピル含量、２０〜２４％のメトキシ含量、２１〜２７％のフタリル含量と８４，０００ダルトンの分子量を有する製品である。また、シン−エツケミカル社がＨＰ５５として市販している、ヒドロキシプロピル含量が５〜９％、メトキシ含量が１８〜２２％、フタリル含量が２７〜３５％であり、分子量が７８，０００ダルトンである製品が本発明の腸溶被覆材料として使用できる。
【００２３】
本発明の腸溶被覆は、腸溶被覆溶液をコアに噴霧する通常の腸溶被覆法を使用して製造することができる。腸溶被覆工程に使用される好ましい溶媒としては、エタノールのようなアルコール、アセトンのようなケトン、ＣＨ２Ｃｌ２のようなハロゲン化炭化水素溶媒であり、これら溶媒の混合溶媒も使用できる。ジ−ｎ−ブチルフタラート又はトリアセチンのような軟化剤を１：約０．０５〜約０．３（コーティング材：軟化剤）の比率で被覆溶液に添加する。
【００２４】
噴霧過程を連続的に行うことが適切であり、被覆の条件を考慮して噴霧量を調節することが可能である。噴霧圧は多様に調節することができ、一般に、約１〜１．５barの噴霧圧で満足し得る結果が得られる。
【００２５】
本明細書の“薬学的有効量”とは哺乳動物の腸内で体内に吸収される低糖類の量を減少させ得る本発明の微生物の最少量を意味し、本発明の組成物により体内に投与される微生物の量は投与経路、投与対象を考慮して調整する。
【００２６】
本発明の組成物は対象個体に毎日１回以上投与できる。単位投与量は、被験人及びそのほかの哺乳動物のための単位投与に適するように物理的に分離された単位を意味し、各単位は適切な製薬学的担体を含み、治療効果を奏する本発明の微生物の予定量を含有する。
成人患者の経口投与用投与単位は本発明の微生物０．１ｇ以上を含有することが好ましく、本発明の組成物経口投与量は１回に０．１〜１０ｇ、好ましくは０．５〜５ｇである。本発明の微生物の薬学的有効量は０．１ｇ／日である。
しかし、投与量は患者の体重、肥満症状の深刻性及び使用される微生物と補助有効成分によって可変的である。また、１日総投与量を多数回に分割して必要に応じて連続的に投与することができる。したがって、前記投与量の範囲はどの方式によっても本発明の範囲を制限しない。
【００２７】
本明細書の“組成物”は必ずしも医薬品として許可されるもののみを意味するのはなく、通常の機能性食品又は健康補助食品まで含む概念である。
【００２８】
本発明の組成物を周期的に服用する場合、腸内に本発明の微生物は、菌叢をなしながら、人体が糖類を吸収することを競争的に防ぐだけでなく、微生物が生産した非消化性食餌繊維が腸内有用菌の生育条件を良くし、腸の運動を刺激することで、結果的に本発明の組成物が肥満又は糖尿病の予防及び治療剤として機能するものである。
【００２９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明をより詳細に説明する。
本発明の肥満又は糖尿の予防及び治療用微生物は、▲１▼腸内で増殖が可能であり、▲２▼低糖類を早く吸収して、繊維状物質のような非消化性又は難消化性高分子物質に転換させ、▲３▼人体又は家畜に無害であるという条件を満足させる。したがって、前記３条件を満足させる公知の微生物を各種寄託機関から分譲受けて本発明の組成物に使用することができ、新規の微生物を新しく分離して使用することもできる。
本発明者らは本発明の組成物に使用できる新規の微生物を下記のような方法で分離、同定した。
【００３０】
製糖工場の下水と、そのほかの多様な地域から採取した混合物試料をシクロヘキシミドの含有されたＭＲＳ寒天培地及びＢＨＳ寒天培地に接種して培養した。
生成されたコロニーをＭＲＳ及びＢＨＳ液体培地に接種し、定置培養して、培地の上層にマトリックス形態の膜又はカプセル形態の膜を生成する菌株を選抜した。形成された膜を分離し、分離された膜が腸内消化酵素により分解されるかを確認して、非消化性（又は難消化性）高分子物質を生成するかを判別した。このなかで、特に細胞外多糖類（食餌繊維）を多量生成する菌株BC-Y009、BC-Y058を選択した。
BC-Y009及びBC-Y058菌株を形態学的に観察し、16SrRNAの部分塩基配列の類似性を比較した結果、これらはそれぞれラクトバシラス及びアセトバクターと高い類似性を表したので、表現型（phenotype）と16SrRNA塩基配列分析を基にして菌株BC-Y009は新規のラクトバシラス属に属し、BC-Y058菌株は新規のアセトバクター属に属する菌株であると同定された。
本発明のラクトバシラスBC-Y009とアセトバクターBC-Y058を肥満と糖尿病を誘発したマウスに投与した結果、マウスの血糖値が投与前に比べて約７０％程度減少した反面、正常マウスの場合、血糖値の減少は小さかった。
【００３１】
このような結果から、本発明の微生物が血糖値を減少させることに効果があり、これにより、糖尿病の治療及び予防に効果的であり、正常の人体に適用しても、従来のほかの肥満症治療剤とは異なり、低血糖症状副作用が発生しないことが分かった。本発明による菌株 BC-Y009、BC-Y058を肥満及び糖尿が誘発されたマウスに投与すると、正常マウスに比べて飼料摂取量が１７〜２４％増加するが、飼料摂取量対比体重増加効率が大きく減少した。このことは、本発明による微生物組成物を人間が摂取する場合、食欲によって十分に飲食物を摂取しても、肥満又は糖尿の恐れが低くなることを意味する。
【００３２】
本発明による微生物を摂取する場合、血清脂質量においても、そうでない対照群より低く表れるため、本発明の微生物及び微生物組成物が肥満、糖尿及び循環器性疾病（動脈硬化、心筋梗塞など）に効果があることが分かる。ひいては、一般のマウスの場合には、本発明の微生物組成物を投与した群が食餌をもう少し摂取して、非投与対照群に比べてエネルギー効率が多少減少される結果を表したが、脂質含量の変化は殆ど見えないなど、正常マウスにおける製剤投与による副作用は発生しなかった。
【００３３】
以下、本発明を実施例に基づいてより詳細に説明する。しかし、下記の実施例は本発明を説明するためのものであるばかり、本発明の権利範囲を本実施例に限定しようとするのではない。
【００３４】
実施例１
土壌試料から細胞外多糖類を生成する微生物選別
食餌繊維を生成する微生物を分離するために、製糖工場の下水と、そのほかの多様な地域で採取した試料１０ｇずつを取り、細かく砕いた後、これらをそれぞれ生理食塩水（0.85% NaCl）９０ｍｌに分散させた。この分散液を生理食塩水で１０−２、１０−４及び１０−６に希釈した後、これら希釈液を１００ｍｌ当たり１ｍｇのシクロヘキシミドを含有するＭＲＳ［1% ペプトン、1% 牛肉抽出物、0.5% 酵母抽出物、2% 葡萄糖、0.1% ツイン−80（Tween-80）、0.2% クエン酸アンモニウム、0.5% 酢酸ナトリウム、0.01% MgSO４、0.005% MnSO４、0.2% 燐酸ナトリウム、pH6.5］寒天培地とＢＳＨ（2% 葡萄糖、0.5% ペプトン、0.5% 酵母抽出物、0.27% Na2HPO4、0.115% クエン酸、pH5.0）（Hestirin and Schramm, J. Gen. Microbiol., 11:123, 1954 参照）寒天培地に塗抹し、３０℃で７２時間培養した。
こうして収得した約２，０００コロニーを５ｍｌ ＭＲＳ液体培地とＢＳＨ液体培地に１次に接種した後、３０℃で７２時間定置培養した。液体培地の上層にマトリックス形態の膜を生成する菌株と、液体培地が透明で、カプセル形状の細胞外多糖類を形成する菌株を選抜した。これらを再度５ｍｌ ＭＲＳ液体培地とＢＳＨ液体培地に接種し、３０℃で攪拌し、６００ｎｍで吸光度を測定した。これらを、吸光度が０．２となるように、ＢＳＨ液体培地で希釈した後、ここから１０ｍｌを取り１００ｍｌのＢＳＨ液体培地に接種し、３０℃で７２時間定置培養した。
生成された細胞外食餌繊維の量を測定するために、それぞれの培養液を４℃、６，０００rpmで遠心分離して微生物沈殿物を得た。菌体に付いている膜を０．１Ｎ ＮａＯＨでアルカリ溶解させた後、８０℃で３０分間定置し、再度４℃、６，０００rpmで遠心分離する過程を数回繰り返した。白色の糸の縺れのような細胞外多糖類を分離し、凍結乾燥させて、その量を測定した。このなかで、細胞外多糖類の量を多く生成させた菌株を選別して細胞外多糖類の生成量を比較した（表１）。
【００３５】
【表１】
0004580542.tif 000002
【００３６】
実施例２
選別された菌株 BC-Y058、 BC-Y009 の形態的特定及び同定
実施例１から選別した菌株のうち、多糖類の生成量が多い BC-Y009、 BC-Y002、 BC-Y015、 BC-Y026、 BC-Y058、 BC-Y112、 BC-Y130、 BC-Y201の部分的な塩基配列を決定した結果、BC-Y009、 BC-Y002、 BC-Y015、 BC-Y026はラクトバシラス属のバクテリアであり、BC-Y058、 BC-Y112、 BC-Y130、 BC-Y201はアセトバクター属の微生物であると判断された。
このうちでも、食餌繊維の生成量が多いBC-Y009、 BC-Y058をそれぞれ ＭＲＳとＢＳＨ液体培地に接種し、３０℃で７２時間懸濁培養した。培養液を４℃、６，０００rpmで遠心分離して微生物を取得し、これから CTAB/NaCl方法を用いて核酸を抽出した。核酸抽出物を 16SrRNA交感プライマー（16SrRNA consensus primer）を用いて重合酵素連鎖反応法（PCR）により16S rRNAを増幅し、塩基配列を決定した。決定された塩基配列に対してＢＬＡＳＴ分析（NCBI、USA）を実施した結果、ラクトバシラス・ヒルガルディー（L. hilgardii）、アセトバクター・キシリヌム（A. xylinum）、グルコノバクター（Gluconobacter sp.）を含む多数のラクトバシラス種、アセトバクター種と高い塩基配列の類似性を表した（表２及び表３参照）。
【００３７】
【表２】
0004580542.tif 000003
【００３８】
【表３】
0004580542.tif 000004
【００３９】
菌株BC-Y009はグラム陽性であり、非運動性の短棒状の細菌で、大きさは０．５〜３．０μｍである。胞子を形成しなく、通性嫌気性であり、生育温度は２０℃〜３７℃、ｐＨ２．０〜８．０の範囲で育つことができ、最適ｐＨ範囲は４．０〜７．０である。牛乳凝固性、カタラーゼ陰性を表し、完全培地（complex medium）で白色コロニーを形成した。ＭＲＳ液体培地とＢＳＨ液体培地において、白色カプセル形態で液体培地下層に浸漬され、液体培地の濁度は、清くて透明な培地状態で食餌繊維を形成し、液体培地を揺り動かすと、細かく砕ける特性を表した。
【００４０】
菌株 BC-Y058はグラム陰性である桿菌状であり、０．６×０．８μｍ大きさの単一又は双をなす状態で存在した。運動性がなく、胞子を形成しなかった。生育が遅くて、５〜７日間培養すべきであり、コロニーは小さくて堅く、液体培地では、透明なセルロースペリクルを形成した。エタノール、酢酸又は乳酸を基質として使用でき、カタラーゼ陽性反応を表した。葡萄糖を用いて酸を生成し、ホイア培地では生育できなかった。
【００４１】
以上のように、表現型と 16S rRNA塩基配列分析により、菌株 BC-Y009をラクトバシラス（Lactobacillus sp.） BC-Y009と、菌株 BC-Y058をアセトバクター（Acetobacter sp.） BC-Y058とそれぞれ命名し、２０００年５月３０日国際寄託機関である遺伝子銀行付設ＫＣＴＣにそれぞれ寄託番号 KCTC BC-Y009と KCTC BC-Y058として寄託した。
【００４２】
実施例３
食餌繊維の腸内消化酵素による分解性
前記微生物により腸内で生成される食餌繊維が腸内消化酵素により分解されるかを確認するために、アミラーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼなどを含有し、３×Ｕ．Ｓ．Ｐ活性度を持っているポルシンパンクレアチン（porcine pancreatin、Sigma社製）１ｇを、食餌繊維乾量１ｇが溶解された水溶液（pH7.5）にくわえて懸濁させた。この懸濁液を４０℃で７日間培養しながら１日１回反応液を取ってＤＮＳ当たり定量を実施した結果、全然分解されなかったことを確認した。
したがって、本発明の微生物により生成された食餌繊維は腸内で分解されないことが分かった。
【００４３】
実施例４
生体内葡萄糖吸収速度
生理活性バクテリア（probiotics）として使用されている菌株であるラクトバシラス・アシドフィルス（L. acidophilus KCTC3140）、ラクトバシラス・ヒルガルディー（L. hilgardii KCTC3500）とともに、前記ラクトバシラスBC-Y009、アセトバクター BC-Y002、アセトバクター BC-Y058 及び大腸菌（E.coli）の生体内葡萄糖吸収速度を測定した。測定結果を図１及び図４に示した。
図１及び表４から分かるように、本発明の菌株はほかの乳酸菌に比べて生体内葡萄糖吸収速度が数等優秀であることが分かった。
【００４４】
【表４】
0004580542.tif 000005
【００４５】
実施例５
微生物含有試料摂取後、腸管別微生物濃度と生存性
肥満と糖尿病を誘発するマウスである C57BL/6J Lepob ob/ob （以下、“OBマウス”という）を１８時間絶食させ、ラクトバシラス BC-Y009、アセトバクター BC-Y058を１％（w/w、乾燥重量）含有した本発明の組成物を（組成物中の微生物の数は 1.0×1013 CFU/g）を７日間摂取させた後、これらマウスの十二指腸、空腸、大腸での菌密度を調査した。対照群として、前記微生物が添加されていない飼料を７日間摂取させたＯＢマウスの十二指腸、空腸、大腸での菌密度も調査した。
ラクトバシラス菌数を測定するために、ラクトバシラスを飼料に摂取させた群と対照群の十二指腸、空腸、大腸を取り外した。各器官の表面を生理食塩水で水洗した後、内容物を整理食塩水に分散させた後、ＭＲＳ寒天培地に塗抹し３７℃で定置培養した。３日後にフロック（floc）形成の有無で菌数を測定し、対照菌でのラクトバシラス菌数を差し引いて菌体増減を判断した（表５）。
アセトバクターの存在有無を測定するために、マウスの各器官を取り外し、生理食塩水で器官の外部を水洗した後、内容物を生理食塩水に分散させ、ＢＳＨ液体培地に接種し、３７℃で３日間培養した。液体培地の上層に現れた薄膜（pellicle）の形成有無で繊維素生成アセトバクター菌体の存在有無を判断した（表６）。
表５と表６の結果から前記２種の微生物共にマウスの腸内で生育可能であることが分かった。
【００４６】
【表５】
0004580542.tif 000006
【００４７】
【表６】
0004580542.tif 000007
【００４８】
実施例６
BC-Y009、 BC-Y058摂取時の血糖血変化
（株）三養社から購入したマウス飼料１００ｇに国内産米４００ｇを交ぜ合わせて、炭水化物比率を約６０％に構成した後、乾燥重量５ｇ（1%）のラクトバシラス BC-Y009又はアセトバクター BC-Y058をくわえて練りこね、マウスが摂食し得る大きさに凍結乾燥させた団子を製造した。この団子を水とともにマウスに提供して、自由に摂食し得るようにした。
【００４９】
本実施例で使用されたマウスはみんな雌性で、肥満と糖尿病が誘発されるＯＢマウスであり、菌の摂取群と非摂取対照群を区分するために、アセトバクター摂取群（OB-058）と、ラクトバシラス摂取群（OB-009）と、非摂取対照群（菌体がない飼料を供給、OB-con）とに分離飼育した。飼育環境は、１２時間の間隔で周期照明（09:00までは照明、21:00-09:00は遮光）を実施し、温度と湿度はそれぞれ２０〜２４℃と４０〜６０％を維持した。
また、前記製造した団子に腸溶被覆組成物溶液を噴霧被覆して腸溶被覆製剤を製造した。本発明の腸溶被覆の重さは、１個の団子に約１６〜３０ｍｇ以下であり、厚さ５〜１００μｍの皮膜で製造される。腸溶被覆の材料は、公知の高分子物質から適宜選択され、セルロースアセテート、セルロースフタラート、及びセルローストリメリテート又はセルロースとメタクリル酸の共重合体（メタアクリル酸40%以上、特にヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラートを含むメチルアクリル酸及びそのエステルから誘導された共重合体）の混合物を使用した。
メチルアクリレートとしては、ロームゲーエムベーハー（Rohm GmbH、ドイツ）から市販されているエンドラジットエル（Endragit L 100-55）製品を使用し、約４５〜９０ｃＰの粘度と、１７〜２６％のアセチル含量、及び３０〜４０％のフタラート含量を有するセルロースアセテートフタラートとイーストコダックカンパニー（Eastman Kodak Company）社が市販するセルロースアセテートトリメリテート製品（約15〜20 cSの粘度と、１７〜２６％のアセチル含量、２５〜３５％のトリメリチル含量を有する製品）が使用された。
こうして製造された腸溶被覆溶液をコアに噴霧する通常の被覆法を使用して製造し、エタノールとアセトン混合溶媒を使用し、軟化剤を１：約０．０５〜約０．３の比率で被覆溶液に添加した。
【００５０】
前記のような方法で製造した本発明の腸溶被覆組成物を水とともにマウスが自由に摂取し得るようにし、このような組成物が投与されたマウスの血糖値を測定した。
各群のマウスの血糖値を測定する前、それぞれのマウスを１８時間絶食させ、６０分間マウスに十分な量の飼料を再供給し、飼料を除去した後、再度６０分が経過した後、マウスの眼窩静脈叢（retroorbital venous plexus）から抗凝固剤のない毛細管を用いて血液を採取して、血清を得た。
血糖値は、酵素比色法によるトラインダーキット（Trinder kit）（Cat. 315-500, Sigma, USA）を用いて分光光度計５０５ｎｍで吸光度を測定した。標準溶液を基準として、それぞれ血清に対する血糖値を計算した。こうして得た実験結果の統計的有意性は実験群当たり平均±標準偏差で表示し、各群の平均差の統計的有意性をアノバ（ANOVA）で検証した（p<0.02）。
【００５１】
血糖値の測定結果を図２に示した。図２から、血糖値はOB-con群では約５００mg/dl程度と高く表れる反面、OB-058群の血糖値は正常C57BL/6Jマウス（以下、“Lean群”という）の血糖数値に似ている低い血糖値を表すことが分かる。また、アセトバクター BC-Y058、ラクトバシラス BC-Y009投与により、マウスの血糖値はそれぞれ約７０％、５３％程度減少されることが分かる（表７）。
【００５２】
【表７】
0004580542.tif 000008
【００５３】
実施例７
BC-Y058 及び BC-Y009 摂取時の体重と食餌量の変化及びそれによる代謝効率の変化
マウスをOB-058群、 OB-009群、 OB-con群、 Lean-009群、 Lean-058群、及び Lean-con群に分類し、群によってアセトバクター BC-Y058とラクトバシラス BC-Y009を投与しながらマウスの体重を１週日間隔で測定した。また、マウス体重変化とともにマウスが消費した飼料の重量を測定し、それによる群間の代謝効率の変化を調査した。
マウスの体重変化は、遺伝的特性の異なる異種間の体重変化が明らかであったが、遺伝的特性の同じ群での体重変化の差は表れなかった。表８から分かるように、７週間の体重変化はＯＢマウスの場合、アセトバクター BC-Y058又はラクトバシラス BC-Y009の投与有無にかかわらず、約４７％ずつ一様に増加し、Leanマウスの場合、やはり BC-Y058、 BC-Y009の投与にかかわらず、体重が約２７％増加した。しかし、表９及び表１０から分かるように、菌の投与による飼料の摂取量はＯＢマウス群で相対的に１７〜２４％程度、Leanマウス群では約１５〜２３％程度増加することが表れた。
【００５４】
すなわち、本発明による微生物添加飼料を摂取する場合、飼料をもっと多く摂食しても、微生物未添加飼料を摂取する場合と同程度の体重増加を誘発することが分かった。このような結果から、アセトバクター BC-Y058 又はラクトバシラス BC-Y009により、食後血糖値の上昇が抑制されるので、これに対する補償作用でもっと多い飼料を摂取することになったものと判断される。このような代謝効率の差は投与した BC-Y058 又は BC-Y009の葡萄糖の消耗と BC-Y058 又は BC-Y009により生成された食餌繊維の影響のためであるといえる。
下記の式により、飼料摂食によるエネルギー効率の変化を計算して表１０に示した。
【数１】
0004580542.tif 000009
表から分かるように、ＯＢマウスと正常マウス（Leanマウス）の両方に微生物を投与した場合、微生物を投与しなかった場合に比べてエネルギー代謝効率が約７５〜８５％程度であった（図３、図４）
【００５５】
【表８】
0004580542.tif 000010
【００５６】
【表９】
0004580542.tif 000011
【００５７】
【表１０】
0004580542.tif 000012
【００５８】
BC-Y058 又は BC-Y009 摂取時、肥満マウスの体重及び食餌量の変化とそれによる代謝効率を変化
アセトバクター BC-Y058 及びラクトバシラス BC-Y009を摂取させる前、マウスに肥満を誘導するため、ゴールドチオグルコース（goldthioglucose）（Cat. A-0632, Sigma, USA）を１匹当たり１g/kgずつ注射し、３〜４週間の体重変化を測定して、肥満が誘導されたマウスのみを選別した。実験の正確性のため、体重増加率が相対的に大きいか又は小さいマウスは排除した。
雌性 C57BL/6Jマウス種を対象として、飼育環境及び条件を実施例６に言及した方法と同様に適用した。摂取させる菌種によって BC-Y058群、 KCTC3140群、 KCTC3500群、 BC-Y009群に分類して実験した。
投与した菌によるマウスの体重変化を図６に示した。図６からアセトバクター BC-Y058、ラクトバシラス BC-Y009を摂取させたとき、体重増加比率が減少する様相が分かる。
【００５９】
また、表１１及び図７に示すように、摂取された糖は消耗するが、食餌繊維は生成しない KCTC3140、 KCTC3500の場合、肥満誘導マウスでのエネルギー効率が、菌体を投与しなかった対照群に比べて高いものと表れた。しかし、食餌繊維を生成する BC-Y009 及び BC-Y058を摂取させたマウス群においては、相対的に低いエネルギー効率を表し、特に、BC-Y058の場合、エネルギー効率は対照群に比べて５５％まで減少して、正常マウス水準に近接したエネルギー効率を表した（表１２参照）。
【００６０】
【表１１】
0004580542.tif 000013
【００６１】
実施例９
BC-Y058 又は BC-Y009摂取時、正常マウスの体重及び食餌量の変化とそれによる代謝効率の変化
本実験に使用されたマウスはみんな雌性 C57BL/6Jマウス種で、飼育環境及び条件は実施例６に言及した方法と同様に適用した。実験で実施したマウスを摂取させる菌種によって KCTC3500群、 KCTC3140群、 BC-Y058群、 BC-Y009群、及び菌を投与しなかった対照菌に分け、実施例６のように製造された飼料を供給した。投与した菌によるマウスの体重変化は、実施例８の場合とは異なり、アセトバクター BC-Y058 及びほかの菌株を摂取させたときは表れない。また、表１２に示すように、正常マウスを対象とした場合、食餌繊維の生成有無とはかかわらず、エネルギー効率の差は多くないことが分かった。
実施例８及び９に示すように、アセトバクター BC-Y058 及びラクトバシラス BC-Y009を摂取させたとき、体重及び食餌量の変化とそれによる代謝効率の変化は、薬物の投与で誘導された異常肥満マウスに対してだけ効果を奏するばかり、正常マウスでは変化を表していなかった。
【００６２】
【表１２】
0004580542.tif 000014
【００６３】
実施例１０
BC-Y058 又は BC-Y009摂取時、脂肪質分布とその変化
本発明による微生物を摂取する場合、血清脂質、特にコレステロールの変化を分析して、糖尿と肥満などの疾病のみならず循環器性疾病（動脈硬化、心筋梗塞など）の減少に対する効果が奏されるかを確認した。
脂肪質の分析は、実施例６と同様に、酵素比色法を使用し、TG-glycezyme-V（栄研化学製、日本国）、HDL-zyme-V（栄研化学製、日本国）、Cholestezyme-V （栄研化学製、日本国）、LDL cholesterol（ Cat. 61532, BioMeriux、フランス）などを用いて、505-570nmで標準溶液とともに吸光度を測定することにより、血清に存在する各脂肪質の量を計算した。
【００６４】
表１３に示すように、飼料投与前、脂質含量は、肥満マウス群で相違点を表していなく、かつ正常マウス群間にも相違点を表していない。しかし、アセトバクター BC-Y058、ラクトバシラス BC-Y009を摂取したときは、表１４に示すように、７週後、脂質含量の変化が発生することが分かった。
微生物を摂取した肥満マウスの場合、実験初期に似ている水準の脂質分布を維持していることが分かるが、非摂取対照群の場合、血中内に全般的な脂質含量が増加し、正常マウスの場合、微生物摂取の有無にかかわらず、大きい脂質含量の変化を表していなかった。
したがって、アセトバクター BC-Y058 及びラクトバシラス BC-Y009の摂取は正常的脂質代謝には影響を与えなく、却って異常代謝状態の脂質変化を防いで、循環器性疾病（動脈硬化、心筋梗塞など）の減少にも効果を奏し得ることを予測することができた。
【００６５】
【表１３】
0004580542.tif 000015
【００６６】
【表１４】
0004580542.tif 000016
【００６７】
以上のように、本発明の構成と好ましい実施例を本明細書に記載したが、本発明の権利範囲は記載された実施例に制限されるものと解釈さればならなく、当業者であれば、本発明の権利範囲内で本明細書に記載された内容の変形を実施することができる。
【００６８】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の微生物は、腸内に生存しながら、単糖類、二糖類などの炭素化合物を、小腸又は大腸で吸収されない高分子量の物質に転換させることにより、体内に吸収される炭素化合物の量を減らし、代謝活動に必要なエネルギーは、体内に蓄積されている体脂肪、蛋白質から供給されるようにして、肥満及び糖尿を抑制する。また、腸内で食餌繊維を生成させて、人体に有害な物質とともに体外に排出させることにより、整腸作用、コレステロール吸収抑制、大腸癌予防、盲腸炎予防の効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明による微生物の葡萄糖吸収速度を示す図表である。
【図２】本発明による微生物の摂取時、血糖値の変化を示す図表である。
【図３】本発明による微生物を摂取した肥満マウスのエネルギー代謝効率の変化を示す図表である。
【図４】本発明による微生物を摂取したマウスのエネルギー代謝効率の変化を示す図表である。
【図５】本発明による微生物を摂取したマウスの体重変化を示す図表である。
【図６】薬物投与で誘導された肥満マウスの体重変化を示す図表である。
【図７】薬物投与で誘導された肥満マウスの代謝効率変化を示す図表である。
【図８】16SrRNA塩基配列を基にしたラクトバシラス菌株BC-Y009の系統分析図である。
【図９】16SrRNA塩基配列を基にしたアセトバクター菌株BC-Y058の系統分析図である。
【図１】
0004580542.tif 000017
【図２】
0004580542.tif 000018
【図３】
0004580542.tif 000019
【図４】
0004580542.tif 000020
【図５】
0004580542.tif 000021
【図６】
0004580542.tif 000022
【図７】
0004580542.tif 000023
【図８】
0004580542.tif 000024
【図９】
0004580542.tif 000025