(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記４つの遺伝子多型に基づき、
メタンフェタミン、メチレンジオキシメタンフェタミン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミンからなる群から選択される少なくとも１つの薬物に対する個体の感受性を評価することを特徴とする、薬物感受性の評価方法。
配列番号１５のＡ１１８Ｇ、配列番号２４のＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ、配列番号２８のＩＶＳ３＋Ａ６１５１Ｇ、配列番号３０のＩＶＳ３＋Ｃ８４９７Ｔ
【請求項２】
メタンフェタミンに対する個体の感受性を評価する、請求項１に記載の薬物感受性の評価方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の種類及び／又は量を決定する方法。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の副作用を予測する方法。
【請求項５】
下記４つのオリゴヌクレオチド、又はこれらと相補的なオリゴヌクレオチドが支持体に固定されたマイクロアレイ。
配列番号１５の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド、配列番号２４の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド、配列番号２８の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド、配列番号３０の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチドが１４〜４５塩基の長さを有する請求項５に記載のマイクロアレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、ミュー（μ）オピオイド受容体遺伝子解析による薬物感受性の評価方法に関する。
【背景技術】
【０００１】
メタンフェタミンなどの覚醒剤は、モノアミン神経伝達を活性化することでその作用を発現しており、その中でもドパミンが最も直接的に覚醒剤の強化作用に関与していると考えられている（文献１）。ドパミン神経系とオピオイド神経系が相互に作用することは、一般的に良く知られている。これまでに、オピオイド受容体アゴニストが、神経終末でのドパミン代謝を調節し、シナプス間隙へのドパミン放出を惹起すること（文献２）や、メタンフェタミン誘発ドパミン神経伝達の変化を減弱させること（文献３，４）が報告されている。さらに、近年の遺伝子欠損動物を用いた実験などからも、両神経系の密接な相互作用の存在が示されている（文献５〜７）。それ故、オピオイド受容体の機能的変化によって、覚醒剤依存及び覚醒剤精神病様症状の形成され易さに個人差を生じる可能性が考えられる。
ところで、μオピオイド受容体は、内因性のオピオイドペプチドや麻薬性鎮痛薬が、鎮痛作用並びに依存形成、耐性形成、禁断症状といった様々な副作用を発現する上で、非常に重要な役割を担っていることが明らかにされてきた。さらに最近では、麻薬性鎮痛薬以外の薬物やアルコールに対する依存や精神疾患の一部にもその関与が知られてきている（文献８〜１１）。
とくに、オピオイドや非オピオイドの薬物による依存形成の促進ないし抑制に、μオピオイド受容体遺伝子多型が影響する可能性が考えられている。これまでに、μオピオイド受容体遺伝子の多型研究において、主に欧米人（Ｃａｕｃａｓｉａｎ  Ａｆｒｉｃａｎ−Ａｍｅｒｉｃａｎ）の遺伝子を用いて、翻訳領域や５’ＵＴＲ  並びにｉｎｔｒｏｎ  の一部を中心に多型の存在が示されている（文献１２〜１４）。中でもアミノ酸変異を引き起こす一塩基多型Ａ１１８Ｇ  に関しては、培養細胞系で発現させた変異型受容体において、内因性リガンドの一つであるβエンドルフィンの結合親和性が上昇するとの報告があり、注目を集めている。さらに様々な人種において、Ａ１１８Ｇ  を中心に麻薬・アルコール依存に関して調べられてきたが、関連性の有無は研究者によって異なっており、統一した結論には至っていないのが現状である（文献１５〜２１）。一方で、現在までに数多くの疾患・病態の遺伝的要因とヒト遺伝子多型の関係が研究されてきた。しかしながら、その多くは欧米人のゲノムを用いた解析であり、人種によって遺伝子多型の有無並びに発生頻度は大きく異なることが知られているので、日本人の疾患・病態と遺伝的要因を研究する上で、日本人のゲノムを用いた解析は必須である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００２】
【非特許文献１】
Ｕｈｌ  ＧＲ，  Ｈａｌｌ  ＦＳ，  Ｓｏｒａ  Ｉ．  Ｃｏｃａｉｎｅ，  ｒｅｗａｒｄ，  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ７，  ２１−６，  （２００２）
【非特許文献２】
Ｗｏｏｄ  ＰＬ．  Ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＮＳ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｐａｔｈｗａｙｓ：  ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅｓ，  ｒｅｇｉｏｎａｌ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ．  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，  ４，  ５９５−６０１，  （１９８３）
【非特許文献３】
Ｅｌ  Ｄａｌｙ  Ｅ，  Ｃｈｅｆｅｒ  Ｖ，  Ｓａｎｄｉｌｌ  Ｓ，  Ｓｈｉｐｐｅｎｂｅｒｇ  ＴＳ．  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｅｔｈａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｋａｐｐａ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  Ｕ６９５９３．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，  ７４，  １５５３−６２，
（２０００）
【非特許文献４】
Ｈａｙａｓｈｉ  Ｔ，  Ｔｓａｏ  ＬＩ，  Ｃａｄｅｔ  ＪＬ，  Ｓｕ  ＴＰ．  ［Ｄ−Ａｌａ２，  Ｄ−Ｌｅｕ５］ｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ  ｂｌｏｃｋｓ  ｔｈｅ  ｍｅｔｈａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄ  ｃ−ｆｏｓ  ｍＲＮＡ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｓｔｒｉａｔｕｍ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  ３６６，  Ｒ７−８，  （１９９９）
【非特許文献５】
Ｓｍｉｔｈ  ＪＷ，  Ｆｅｔｓｋｏ  ＬＡ，  Ｘｕ  Ｒ，  Ｗａｎｇ  Ｙ．  Ｄｏｐａｍｉｎｅ  Ｄ２Ｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｄｅｆｉｃｉｔｓ  ｉｎ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｉｎｆｏｒｃｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｍｏｒｐｈｉｎｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ａｖｏｉｄａｎｃｅ  ｌｅａｒｎｉｎｇ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  １１３，  ７５５−６５，  （２００２）
【非特許文献６】
Ｓｐｉｅｌｅｗｏｙ  Ｃ，  Ｇｏｎｏｎ  Ｆ，  Ｒｏｕｂｅｒｔ  Ｃ，  Ｆａｕｃｈｅｙ  Ｖ，  Ｊａｂｅｒ  Ｍ，  Ｃａｒｏｎ  ＭＧ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｒｅｗａｒｄｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｍｏｒｐｈｉｎｅ  ｉｎ  ｄｏｐａｍｉｎｅ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，  １２，  １８２７−３７，  （２０００）
【非特許文献７】
Ｃｈｅｆｅｒ  ＶＩ，  Ｋｉｅｆｆｅｒ  ＢＬ，  Ｓｈｉｐｐｅｎｂｅｒｇ  ＴＳ．  Ｂａｓａｌ  ａｎｄ  ｍｏｒｐｈｉｎｅ−ｅｖｏｋｅｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ａｃｃｕｍｂｅｎｓ  ｏｆ  ＭＯＲ−  ａｎｄ  ＤＯＲ−ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，  １８，  １９１５−２２，  （２００３）
【非特許文献８】
Ｌｉｃｈｔｍａｎ  ＡＨ，  Ｓｈｅｉｋｈ  ＳＭ，  Ｌｏｈ  ＨＨ，  Ｍａｒｔｉｎ  ＢＲ．  Ｏｐｉｏｉｄ  ａｎｄ  ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ  ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  ｉｎ  ｄｅｌｔａ（９）−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃａｎｎａｂｉｎｏｌ  ａｎｄ  ｍｏｒｐｈｉｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ，  ２９８，  １００７−１４，  （２００１）
【非特許文献９】
Ｂｅｃｋｅｒ  Ａ，  Ｇｒｅｃｋｓｃｈ  Ｇ，  Ｋｒａｕｓ  Ｊ，  Ｌｏｈ  ＨＨ，  Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ  Ｈ，  Ｈｏｌｌｔ  Ｖ．  Ｒｅｗａｒｄｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｔｈａｎｏｌ  ａｎｄ  ｃｏｃａｉｎｅ  ｉｎ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｎａｕｎｙｎ  Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ  Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  ３６５，  ２９６−３０２，  （２００２）
【非特許文献１０】
Ｂｅｒｒｅｎｄｅｒｏ  Ｆ，  Ｋｉｅｆｆｅｒ  ＢＬ，  Ｍａｌｄｏｎａｄｏ  Ｒ．  Ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｃｏｔｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ，  ｒｅｗａｒｄｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ，  ａｎｄ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｉｎ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｋｎｏｃｋ−ｏｕｔ  ｍｉｃｅ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，  ２２，  １０９３５−４０，  （２００２）
【非特許文献１１】
Ｃｏｎｔａｒｉｎｏ  Ａ，  Ｐｉｃｅｔｔｉ  Ｒ，  Ｍａｔｔｈｅｓ  ＨＷ，  Ｋｏｏｂ  ＧＦ，  Ｋｉｅｆｆｅｒ  ＢＬ，  Ｇｏｌｄ  ＬＨ．  Ｌａｃｋ  ｏｆ  ｒｅｗａｒｄ  ａｎｄ  ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｈｅｒｏｉｎ  ｉｎ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  ４４６，  １０３−９，  （２００２）
【非特許文献１２】
Ｕｈｌ  ＧＲ，  Ｓｏｒａ  Ｉ，  Ｗａｎｇ  Ｚ．  Ｔｈｅ  ｍｕ  ｏｐｉａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ａ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｇｅｎｅ  ｆｏｒ  ｐａｉｎ：  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｏｐｉａｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，  ９６，  ７７５２−５，  （１９９９）
【非特許文献１３】
Ｈｏｅｈｅ  ＭＲ，  Ｋｏｐｋｅ  Ｋ，  Ｗｅｎｄｅｌ  Ｂ，  Ｒｏｈｄｅ  Ｋ，  Ｆｌａｃｈｍｅｉｅｒ  Ｃ，  Ｋｉｄｄ  ＫＫ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｇｅｎｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ，  ９，  ２８９５−９０８，  （２０００）
【非特許文献１４】
Ｍａｙｅｒ  Ｐ，  Ｈｏｌｌｔ  Ｖ．  Ａｌｌｅｌｉｃ  ａｎｄ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｏｐｉｏｉｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  ｈｕｍａｎｓ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ，  ９１，  １６７−７７，  （２００１）
【非特許文献１５】
Ｂｏｎｄ  Ｃ，  ＬａＦｏｒｇｅ  ＫＳ，  Ｔｉａｎ  Ｍ，  Ｍｅｌｉａ  Ｄ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｂｏｒｇ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｉｎｇｌｅ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ａｌｔｅｒｓ  ｂｅｔａ−ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ：  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｏｐｉａｔｅ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，  ９５，  ９６０８−１３，  （１９９８）
【非特許文献１６】
Ｂｅｒｇｅｎ  ＡＷ，  Ｋｏｋｏｓｚｋａ  Ｊ，  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  Ｒ，  Ｌｏｎｇ  ＪＣ，  Ｖｉｒｋｋｕｎｅｎ  Ｍ，  Ｌｉｎｎｏｉｌａ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｖａｒｉａｎｔｓ：  ｌａｃｋ  ｏｆ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ２，  ４９０−４，  （１９９７）
【非特許文献１７】
Ｓａｎｄｅｒ  Ｔ，  Ｇｓｃｈｅｉｄｅｌ  Ｎ，  Ｗｅｎｄｅｌ  Ｂ，  Ｓａｍｏｃｈｏｗｉｅｃ  Ｊ，  Ｓｍｏｌｋａ  Ｍ，  Ｒｏｍｍｅｌｓｐａｃｈｅｒ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ａｌｃｏｈｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｅｓ，  ２２，  ２１０８−１０，  （１９９８）
【非特許文献１８】
Ｇｅｌｅｒｎｔｅｒ  Ｊ，  Ｋｒａｎｚｌｅｒ  Ｈ，  Ｃｕｂｅｌｌｓ  Ｊ．  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  （ＯＰＲＭ１）  ｅｘｏｎ  Ｉ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ：  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ，  ａｎｄ  ａｌｌｅｌｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ  ｉｎ  ａｌｃｏｈｏｌ−  ａｎｄ  ｄｒｕｇ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ４，  ４７６−８３，  （１９９９）
【非特許文献１９】
Ｆｒａｎｋｅ  Ｐ，  Ｗａｎｇ  Ｔ，  Ｎｏｔｈｅｎ  ＭＭ，  Ｋｎａｐｐ  Ｍ，  Ｎｅｉｄｔ  Ｈ，  Ａｌｂｒｅｃｈｔ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｏｎｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  （ＯＰＲＭ１）  Ａ１１８Ｇ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ａｎｄ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ，  １０５，  １１４−９，  （２００１）
【非特許文献２０】
Ｓｈｉ  Ｊ，  Ｈｕｉ  Ｌ，  Ｘｕ  Ｙ，  Ｗａｎｇ  Ｆ，  Ｈｕａｎｇ  Ｗ，  Ｈｕ  Ｇ．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  （ＯＰＲＭ１）  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｈｅｒｏｉｎ．  Ｈｕｍ  Ｍｕｔａｔ，  １９，  ４５９−６０，  （２００２）
【非特許文献２１】
Ｓｃｈｉｎｋａ  ＪＡ，  Ｔｏｗｎ  Ｔ，  Ａｂｄｕｌｌａｈ  Ｌ，  Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ＦＣ，  Ｏｒｄｏｒｉｃａ  ＰＩ，  Ｆｒａｎｃｉｓ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ａｂｕｓｅ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ７，  ２２４−８，  （２００２）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、覚醒剤依存の中でも依存患者が多いメタンフェタミン依存及び覚醒剤精神病様症状の形成され易さに対する個人差を、μオピオイド受容体遺伝子多型を用いて予測する方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発明者は、鋭意研究を行った結果、いくつかの新たなμオピオイド受容体遺伝子多型を見出し、メタンフェタミン依存性患者と健常人との間で有する当該遺伝子多型が異なることを明らかにし、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は以下の通りである。
１．  下記４つの遺伝子多型に基づき、
メタンフェタミン、メチレンジオキシメタンフェタミン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミンからなる群から選択される少なくとも１つの薬物に対する個体の感受性を評価することを特徴とする、薬物感受性の評価方法。
配列番号１５のＡ１１８Ｇ、配列番号２４のＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ、配列番号２８のＩＶＳ３＋Ａ６１５１Ｇ、配列番号３０のＩＶＳ３＋Ｃ８４９７Ｔ
２．
メタンフェタミンに対する個体の感受性を評価する、上記１に記載の薬物感受性の評価方法。
３．
上記１又は２に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の種類及び／又は量を決定する方法。
４．
上記１又は２に記載の方法により評価された結果を指標として、個体に投与する薬物の副作用を予測する方法。
５．  下記４つのオリゴヌクレオチド、又はこれらと相補的なオリゴヌクレオチドが支持体に固定されたマイクロアレイ。
配列番号１５の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド、配列番号２４の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド、配列番号２８の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド、配列番号３０の第５１番塩基を含む少なくとも１４塩基のオリゴヌクレオチド
６．
前記オリゴヌクレオチドが１４〜４５塩基の長さを有する請求項５に記載のマイクロアレイ。
【０００６】
本発明により、μオピオイド受容体遺伝子の新規多型が提供される。本発明の多型を用いることで、薬物に対する個人の感受性の差を評価することができる。この感受性評価方法により、モルヒネ等の麻薬性薬物の処方適正量を知ることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、ミューオピオイド受容体遺伝子の概略図（解析範囲並びに主要多型間の連鎖不平衡解析結果）である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
尚、本発明は特許請求の範囲に記載の構成を有するが、以下、その他についても参考のため記載した。
【０００９】
１．本発明の概要
本発明者は、健常人を対象としたμオピオイド受容体遺伝子多型解析により、多くの新規遺伝子多型を同定した。ヒトμオピオイド受容体のｍＲＮＡは、エクソン１〜４にコードされており、エクソン１の前方には５’非翻訳領域が存在し、エクソン１〜４の間にはそれぞれイントロン１〜３が、そしてエクソン４の後方には３’非翻訳領域が存在している。そして、本発明の遺伝子多型は、これらのイントロン、エクソン等の中に既報の多型とは異なった新規のものが多数含まれていた。また、本発明の新規遺伝子多型のうち、イントロン３、及び３’非翻訳領域に見られるＳＮＰの多くは、完全連鎖不平衡の関係にあった。ここで、連鎖平衡とは二つの多型間の染色体上の関係が独立な場合をいい、連鎖不平衡とは多型と多型が連鎖しているためにメンデルの独立の法則による平衡状態から逸脱している場合をいう。
また、本発明者は、上記ＳＮＰ情報を利用して、一群のＳＮＰの情報をハプロタイプ別に組織化した。ハプロタイプとは、一組の対立遺伝子のうちの一方（片方の親に由来する遺伝子）において、相互に近隣する遺伝子やＳＮＰなどの遺伝的構成を意味する。ゲノム上近接するＳＮＰは、連鎖不平衡の強いブロック（ハプロタイプブロック）で遺伝する。言い換えれば、ハプロタイプはこのハプロタイプブロック内の、同一遺伝子の並び方の組み合わせであるとも言える。そして、いくつかのＳＮＰが、ある表現（例えば疾患の発生）に関連して出現する場合には、個々のＳＮＰを全てタイピングしなくても、ハプロタイプを構成するいくつかのＳＮＰを解析することによって、患者の遺伝子型と表現型との関連を明らかにすることができる。本発明者は、ハプロタイプ解析の結果から、４つのハプロタイプブロックを推定することができた。
疾患の発症、あるいは薬物感受性は、ひとつの多型のみについて関連するのではなく、多くの場合ハプロタイプ単位で関連する。また、非翻訳領域外に存在する未知の多型を明らかにするのは非常に困難である。従って、ハプロタイプは、多型と疾患や薬物感受性との関連性を見出すために使用される。そこで、本発明は、薬物の感受性を評価するのに用いる遺伝子多型として、上記のＳＮＰだけでなく、ハプロタイプを利用した方法も提供する。
本発明者は、ハプロタイプ解析の結果から明らかとなった４つの推定ハプロタイプブロックを代表するＳＮＰの頻度を、健常人とメタンフェタミン依存患者において比較したところ、両者の出現頻度に差が存在し、特に、覚醒剤精神病様症状に分類して比較したときに、両者の差はより顕著であることを明らかにした。
従って、本発明で明らかとしたＳＮＰ又はハプロタイプを解析することによって、個々人の薬物感受性を評価することが可能となる。この薬物感受性は、薬物の種類や量を決定する上で重要な情報となる。特に、覚醒剤やモルヒネなどは、使用方法によっては社会的な大きな問題を生じる可能性もあるため、各個人に適切な投薬量を投薬前にあらかじめ知ることは極めて有用である。
【００１０】
２．μオピオイド受容体遺伝子多型
本発明のヒトμオピオイド受容体遺伝子多型は、主に一塩基多型（ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，  ＳＮＰ）、インサーション／デリーション型多型、及び塩基配列の繰り返し数が異なっていることにより生じる多型を含む。
ＳＮＰ（ＳＮＰｓ）とは、遺伝子の特定の１塩基が他の塩基に置換することによる多型を意味する。インサーション／デリーション型多型とは、１以上の塩基が欠失／挿入することによる多型を意味する。また、塩基配列の繰り返し数の異なることにより生じる多型（塩基繰り返し多型）には、繰り返す塩基数の違いによりマイクロサテライト多型（塩基数：２〜４塩基程度）とＶＮＴＲ  （ｖａｒｉａｂｌｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔａｎｄｅｍ  ｒｅｐｅａｔ）多型（繰り返し塩基：数〜数十塩基）があり、その繰り返し数が個々人によって異なっている多型を意味する。
本発明によって明らかにされたヒトμオピオイド受容体遺伝子多型の情報を後述の表１、表２及び表３に示す。これらの表には、１塩基多型、インサーション／デリーション型多型及び塩基配列の繰り返し数が異なっていることにより生じる多型が含まれる。
本発明は、ミューオピオイド受容体遺伝子のうち、表１、表２及び表３に示される遺伝子多型を含むオリゴヌクレオチドを提供する。本発明において表１、２及び３に表される遺伝子多型情報を得る方法は、以下の通りである。
ヒトから採取した血液検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｂｌｏｏｄ  ＤＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。次に、得られたゲノムＤＮＡを鋳型として、ＰＣＲ法によりゲノムＤＮＡをいくつかに分けて増幅し、シークエンス用の鋳型ＤＮＡとする。本発明は、遺伝子の多型を対象とするため、ＰＣＲ法に用いる酵素はなるべくｆｉｄｅｌｉｔｙの高いものを用いることが望ましい。μオピオイド受容体の５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ  及び５’ｆｌａｎｋｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）は、開始コドンよりも上流６０００ｂｐまでの領域、好ましくは５８００ｂｐまでの領域を２〜４つにわけてＰＣＲ増幅を行う。エクソン１、エクソン２−イントロン２−エクソン３、エクソン４、さらにイントロン１又は３の一部は、それぞれの箇所毎にＰＣＲ法により全域を増幅する。エクソン４は終止コドンより下流の約３０００ｂｐを含んでもよい。３’非翻訳領域は終止コドンよりも下流に１４０００ｂｐ、好ましくは１３９００ｂｐまでの領域を４〜６つのＰＣＲにより増幅を行う。これらのＰＣＲ断片の全領域の塩基配列を、ＧｅｎＢａｎｋに公開されている配列情報に基づいて設計したプライマーを用いて約５００ｂｐずつシークエンス法により解読し、目的の遺伝子多型を得ることができる。このようにして得られた多型情報を表１に示す。
【００１１】
【表１】
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【００１２】
表１において、「Ｐｏｓｉｔｉｏｎ」はミューオピオイド遺伝子のゲノム上の位置を意味し、５’又は３’非翻訳領域、エクソン、イントロンを表す。「ＳＮＰ  ｎａｍｅ」は、ゲノム上の位置におけるＳＮＰの名称であり、発明者が付与したものである。基本的に、３〜４桁の数字及び記号の前と後にそれぞれＡ、Ｇ、Ｃ又はＴのアルファベットが付与され、どの塩基のＳＮＰであるかが識別されている。例えば「Ａ−５５８０Ｇ」は、開始コドンから５５８０  ｂｐ上流（５’側）の塩基がＡとＧとの多型であることを示している。「Ｉｎｔｒｏｎ−１」欄の「ＩＶＳ１−Ａ４９８０Ｇ」は、イントロン１の中の多型で、エクソン２に接するイントロン１の塩基を１として４９８０ｂｐ上流の塩基がＡからＧになった多型であることを示している。同様に、「３’ＵＴＲ」欄中の「ＴＡＡ＋Ｇ８８６Ａ」は、終止コドンであるＴＡＡから３’側に８８６ｂｐの塩基がＧからＡになった多型であることを示している。
【００１３】
【表２】
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【００１４】
表２のＳＮＰは、３’非翻訳領域における多型を示す。「ＴＡＡ＋」の列は、μオピオイド受容体の終止コドンであるＴＡＡからの塩基数を示している。「ｒｅｐｏｒｔｅｄ」は、ＧｅｎＢａｎｋ中に登録されている配列での遺伝子型を、「ｍａｊｏｒ  ａｌｌｅｌｅ」、「ｍｉｎｏｒ  ａｌｌｅｌｅ」は、それぞれ日本人ゲノム上で多数派と少数派の遺伝子型を表す。かっこ内の値は前の塩基の繰り返し数を表し、例えば「Ａ（６）」は、Ａが６つ続いていることを意味する。「−」は欠失（デリーション）又は挿入（インサーション）を意味する。「ＬＤ」（Ｌｉｎｋａｇｅ  ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ：連鎖不平衡）の列の「＊」は、有意かつ完全連鎖不平衡（Ｄ’＝１．０００、ｒ２＝１．０００）であることを意味する。
表３は、健常人におけるμオピオイド受容体遺伝子の塩基繰り返し多型の例を示す。
【００１５】
【表３】
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【００１６】
表３において、「ＩＶＳ３＋６１１３（ＧＴ）ｎ」とは、イントロン３において、エクソン３に接するイントロン３の塩基を１として６１１３、６１１４ｂｐ下流に位置するＧＴをｎ回繰り返す多型を意味する。また、「ＩＶＳ３＋８７６１（３２ｂｐ）ｎ」とは、イントロン３において同様に８７６１ｂｐ下流に位置する２３ｂｐを一単位としてｎ回繰り返す多型を意味する。
【００１７】
表１、２及び３に示される多型は、本発明のμオピオイド受容体遺伝子多型に含まれる。また、本発明の遺伝子多型を含むオリゴヌクレオチドを表４に示す。例えば、本発明のオリゴヌクレオチドは、前記の多型を含有する配列番号１〜９８に示す塩基配列又はこれに相補的な塩基配列から選択されるオリゴヌクレオチドである（表４）。
【００１８】
【表４】
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【００１９】
【表５】
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【００２０】
【表６】
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【００２１】
表４（配列番号１〜９８）には１０１塩基が表示されており、その５１番目に多型部位を表示してある。「ａ／ｇ」と表示したものは「ａ」と「ｇ」の多型であることを意味し、「ｃ／ｔ」は「ｃ」と「ｔ」の多型であることを意味する。また、「（ａｃ）ｎ」は「ａｃ」がｎ回繰り返されている多型を意味し、「ｄｅｌ（ａ）」は「ａ」のデリーション型多型であり、「ｉｎｓ（ｔｔｔｃ）」は「ｔｔｔｃ」のインサーション型多型であることを意味する。他の塩基についても同様に表示してある。このうち、本発明においては、表４に示す塩基配列（配列番号１〜９８）の多型部位（第５１番目の塩基）を含む少なくとも１０塩基、好ましくは１０〜１００塩基、より好ましくは１０〜４５塩基、さらに好ましくは１４〜２５塩基を有するオリゴヌクレオチド及びこれに相補的なオリゴヌクレオチドを提供する。ここで、「５１番目の塩基」は多型部位の塩基を意味し、当該塩基が必ずしも１個の塩基であるとは限らない。従って、デリーション型の多型では塩基は存在しないため塩基数としては算入しないこととし、また、複数の塩基が繰り返されていても「第５１番目の塩基」として数えることとする。
なお、表４において、「ＴＡＡ＋７０７５ｄｅｌ（３２２ｂｐ）」と表示した遺伝子多型（配列番号５８）に含まれる３２２ｂｐの配列を、表の枠外下に示す。
【００２２】
３．ハプロタイプ解析
本発明においては、上記遺伝子多型のうちＳＮＰを用いてハプロタイプを構築することができる。ハプロタイプ解析の対象となるＳＮＰは、その多型頻度が０．５％以上のものであればよく、好ましくは１％、より好ましくは５％以上のものを選択することができる。また、ハプロタイプ解析の対象となるＳＮＰは、全部であってもその一部であってもよい。
ハプロタイプ解析は種々のコンピュータープログラムで解析することが可能であり、例えば、Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ｐｒｏｇｒａｍ（ｈｔｔｐ：／／ａｎｔｈｒｏ．ｕｎｉｇｅ．ｃｈ／ａｒｌｅｑｕｉｎで入手）（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｓ，  Ｒｏｅｓｓｌｉ  Ｄ，  Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ  Ｌ．  Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ２０００：  ａ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｆｏｒ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｖｅｒ  ２．０００．  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｔｒｙ  Ｌａｂ，  Ｄｅｐｔ  ｏｆ  Ａｎｔｈｒｏｐｏｌｏｇｙ  Ｕｎｉｖ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｖａ．）を用いることができる。
ハプロタイプ解析の例として、前記２．においてのように見出した多型のうち、多型頻度が５％以上であった１０箇所のＳＮＰに関して、Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ｐｒｏｇｒａｍを用いてハプロタイプを推定する。この際、イントロン３から３’非翻訳領域にかけて存在する完全連鎖平衡を示すＳＮＰ群に関しては、そのうちの１つ、例えば「ＴＡＡ＋Ａ２１０９Ｇ」を代表とすることができる。推定したハプロタイプを表５に示す。
【００２３】
【表７】
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【００２４】
健常人におけるミューオピオイド受容体遺伝子多型のハプロタイプは３４ハプロタイプが推定され、そのうち３％の高頻度でみられるものは７ハプロタイプあり、３％以下の頻度で起こることが推定される２７のハプロタイプについて、表５のＮｏ．８にまとめて表記している。
【００２５】
次に、上記ハプロタイプ頻度をもとにして、連鎖不平衡解析を行う。連鎖不平衡の尺度を示す値であるＤ’値及びｒ２値は、以下の定義に基づき算出することができる。
【００２６】
定義：
ＳＮＰ  ＡとＳＮＰ  Ｂとがあり、それぞれのａｌｌｅｌｅをＡ，ａとＢ，ｂとする。ＳＮＰ  ＡとＳＮＰ  Ｂとが作る４  ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓをＡＢ，  Ａｂ，  ａＢ，  ａｂとし、それぞれのｈａｐｌｏｔｙｐｅ頻度をＰＡＢ，  ＰＡｂ，  ＰａＢ，  Ｐａｂとすると、
Ｄ＝ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ
（Ｄ＞０のとき）
Ｄ’＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）／Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）），（（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））
（Ｄ＜０のとき）
Ｄ’＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）／Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）），（（ＰａＢ＋Ｐａｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））
ｒ２＝（ＰＡＢ×Ｐａｂ−ＰＡｂ×ＰａＢ）２／｛（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）（ＰＡＢ＋ＰａＢ）（ＰａＢ＋Ｐａｂ）（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）｝
［但し、Ｍｉｎｉｍｕｍ（（（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）），（（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）））は、（ＰＡＢ＋ＰａＢ）×（ＰａＢ＋Ｐａｂ）と（ＰＡＢ＋ＰＡｂ）×（ＰＡｂ＋Ｐａｂ）との内、値の小さい方をとることを意味する。］
【００２７】
表６は、健常人におけるミューオピオイド受容体遺伝子多型間の連鎖不平衡を示す一例である。
【００２８】
【表８】
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【００２９】
表６において、上から順にＡ１１８Ｇを「ＳＮＰ１」、ＩＶＳ＋Ｇ６９１Ｃを「ＳＮＰ２」、・・・、ＴＡＡ＋Ｇ２２８７Ａを「ＳＮＰ１０」とすると、ＳＮＰ１とＳＮＰ２との連鎖不平衡を計算し、その値をＳＮＰ１の行とＳＮＰ２の列の交わったセル（表右上側）に記している。連鎖不平衡の指標Ｄ’＞０．７以上の値を下線で示している。また、連鎖不平衡のより厳しい指標であるｒ２値においても同様に計算し、ＳＮＰ１の行とＳＮＰ２の列の交わったセル（表左下側）に記す。
表６のＤ’に着目すると、ＩＶＳ３＋Ｇ５９５３ＡとＴＡＡ＋Ａ２２７４Ｇを除き、全てのＳＮＰの組み合わせにおいて、有意な連鎖不平衡が確認されている。また、ｒ２値に着目すると、イントロン３と３’非翻訳領域の３つのＳＮＰにおいて有意な連鎖不平衡が確認でき、そのうちの１つはＴＡＡ＋Ａ２１０９Ｇである。
また、本発明においては、繰り返し多型と各ＳＮＰの連鎖不平衡を解析することもできる。例えば表３に示す繰り返し多型は多様性を示すが、表６に示す１０ＳＮＰの全てとの間で有意な連鎖不平衡を確認することができた（Ｐ＜０．０５）。
さらに、本発明においては、連鎖不平衡解析を行った結果（表６）から４つのハプロタイプブロックを推定することができる。ハプロタイプブロックは、ハプロタイプ解析の結果から、例えば、ＨａｐｌｏＢｌｏｃｋＦｉｎｄｅｒ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ０．６を用いて連鎖ブロックを推定することができる（ｈｔｔｐ：／／ｃｇｉ．ｕｃ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｋｚｈａｎｇ／ｈａｐｌｏＢｌｏｃｋＦｉｎｄｅｒ．ｃｇｉ）。
この推定により、表６のＳＮＰは、Ａ１１８Ｇを含むブロック、ＩＶＳ２＋Ｇ６９１ＣとＩＶＳ３＋Ｇ５８０７Ａを含むブロック、ＩＶＳ３＋Ｇ５９５３Ａを含むブロック及びＩＶＳ３＋Ａ６１５１Ｇ以降のＳＮＰからなるブロックの４つのハプロタイプブロックに分類することができる。
推定されたハプロタイプブロック中の特定のＳＮＰを調べると、間接的に同一ブロック内で連鎖しているＳＮＰの情報を知ることができる。つまり、μオピオイド受容体の遺伝子多型を調べる際に、すべてのＳＮＰを解析する必要はなく、特定のいくつかのＳＮＰについてのみタイピングを行えばよい。
【００３０】
４．μオピオイド受容体遺伝子多型と薬物感受性との相関
μオピオイド受容体の遺伝子に多型が生じると、μオピオイド受容体発現量や機能が変化すると考えられる。従って、μオピオイド受容体遺伝子多型と、μオピオイド受容体に関するさまざまな表現型とは相関関係にある場合がある。ここで、表現型とは、疾患の発症に関する表現型と、薬物の感受性に関する表現型とを挙げることができる。疾患の発症に関する表現型としては、疼痛感受性、薬物依存への脆弱性等が挙げられ、薬物の感受性に関する表現型としては、薬物の有効性、薬物の副作用、薬物の有効持続期間等が挙げられる。
μオピオイド受容体遺伝子多型と、表現系との相関は以下のように調べることができる。μオピオイド受容体遺伝子多型は、健常人における連鎖不平衡解析・ハプロタイプ解析の結果、推定された連鎖ブロック内の代表的な多型、例えばＳＮＰを選択する。次に、被験（患者）個体におけるこの多型（例えばＳＮＰ）についての多型頻度を解析し、健常人の多型頻度との比較を行う。比較においてはχ２乗検定などの統計手法を用いることが有効である。
表現系又は症状が覚醒剤精神病様症状の場合、例えば、覚醒剤の使用開始から妄想・幻覚を発症するまでの期間、使用停止後に妄想・幻覚が持続する期間、再燃性の有無、多剤乱用の有無で分類できる。そして、各分類毎に、健常人と対象者の多型頻度や遺伝子型を比較する。その結果、対照群と多型頻度に有意差のあった多型は、疾患へのかかりやすさや、薬物感受性の差を評価するのに用いることができる。ただし、遺伝子多型の傾向は、人種や出身地等に影響されることが示唆されているため、関連する多型（例えばＳＮＰ）を見出すのに用いた母集団と同様な遺伝子多型を示す集団おいて、当該多型を用いる上記評価を行うことが望ましい。
【００３１】
５．解析結果の利用
上記のように解析された結果は、μオピオイド受容体に関するさまざまな薬物の感受性を予測する方法、μオピオイド受容体に関する疾患の治療又は予防法を選択する方法、又は治療用の薬物の適正投与量を決定する方法、副作用を予測する方法などの指標として利用することができる。なお、本発明のオリゴヌクレオチド又はマイクロアレイを用いて個々人の遺伝子型を判定することにより、薬物感受性を予測評価することが可能となる。
μオピオイド受容体に関する薬物（機能修飾薬）としては、メタンフェタミン等の覚醒剤、ドパミン受容体作動薬、ドパミン受容体拮抗薬、μ、κ、δオピオイド受容体作動薬、μ、κ、δオピオイド受容体拮抗薬、アルコール等を挙げることができる。例えば、メタンフェタミン、メチレンジオキシメタンフェタミン、アンフェタミン、デキストロアンフェタミン、ドパミン、モルヒネ、ＤＡＭＧＯ、コデイン、メサドン、カルフェンタニール、フェンタニール、ヘロイン、コカイン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナロルフィン、レバロルファン、ペンタゾシン、ブプレノルフィン、オキシコドン、ヒドロコドン、レボルファノール、エトルフィン、ジヒドロエトルフィン、ヒドロモルホン、オキシモルホン、エタノール、メタノール、ジエチルエーテル及びトラマドール等を挙げることができる。
また、本発明の遺伝子多型又は方法を用いて、人種の違いによる薬物の感受性等を評価することが可能である。対象者は特に限定されるものではく、日本人、欧米人などが挙げられるが、本発明においては日本人又は日本人と同様の遺伝子多型傾向を有する者であることが好ましい。
【００３２】
ところで、モルヒネは鎮痛薬として用いられるが、呼吸抑制作用も有するために、その投与用量の決定は、慎重に行う必要がある。本発明により明らかとなった新規遺伝子多型とモルヒネ感受性との相関を解析し、どの多型を有する個体がどのようなモルヒネ感受性を有するのかを予め定めておくと、モルヒネ投与対象患者のμオピオイド受容体遺伝子多型を調べることで、当該患者のモルヒネ感受性を明らかにして投与量を決定することができる。
被験対象者からのゲノムサンプルは、血液、唾液、皮膚等から抽出することができるが、ゲノムサンプルを採取できるものであれば、これに限定されるものではない。ゲノムＤＮＡの抽出及び精製法は周知である。例えば、ヒトから採取した血液、唾液、皮膚等の検体から、フェノール法等を用いてゲノムＤＮＡを精製する。その際、ＧＦＸ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｂｌｏｏｄ  ＤＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ等の市販のゲノムＤＮＡ抽出キットや装置を用いてもよい。調査するＳＮＰがオープンリーディングフレーム中にある場合は、ゲノムＤＮＡの代わりにｍＲＮＡやｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出してもよい。以下、上記の被験サンプルの遺伝子多型検出法の一例を示す。
【００３３】
（１）ＰＣＲ法を用いた検出
ＰＣＲにより被験サンプルを増幅するには、Ｆｉｄｅｌｉｔｙの高いＤＮＡポリメラーゼ、例えば、ＫＯＤ  Ｄａｓｈポリメラーゼ（ＴＯＹＯＢＯ社）を用いることが好ましい。用いるプライマーは、被験サンプル中の対象ＳＮＰを増幅できるようにプライマーの任意の位置に遺伝子多型が含まれるように設計し合成する。
増幅反応終了後は、増幅産物の検出を行い、多型の有無を判定する。
（２）塩基配列決定法による検出
本発明においては、ジデオキシ法に基づく塩基配列決定法により本発明の多型を検出することもできる。塩基配列決定に用いるシークエンサーには、市販のＡＢＩシリーズ（アマシャムバイオサイエンス）を用いる。
（３）ＤＮＡマイクロアレイによる検出
ＤＮＡマイクロアレイは、支持体上にヌクレオチドプローブが固定されたものであり、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅ  チップ、マイクロチップ、ビーズアレイなどを含む。
まず、被験サンプルのポリヌクレオチドを単離し、ＰＣＲにより増幅し、蛍光レポーター基により標識する。続いて、標識化ＤＮＡ／ｍＲＮＡ，  ｔｏｔａｌ  ＲＮＡをアレイと共にインキュベートする。次にこのアレイをスキャナーに差し込み、ハイブリダイゼーションパターンを検出する。ハイブリダイゼーションのデータは、プローブアレイに結合した（すなわち標的配列に取り込まれた）蛍光レポーター基からの発光として採集する。標的配列と完全に一致したプローブは、標的配列と一致していない部分を有するものよりも強いシグナルを生じる。アレイ上の各プローブの配列及び位置は分かっているため、相補性によって、プローブアレイと反応させた標的ポリヌクレオチドの配列を決定することができる。
（４）ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲ法による検出
ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲ法は、蛍光標識したアレル特異的オリゴとＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲ反応とを利用した方法である。ＴａｑＭａｎ  ＰＣＲ法で用いるアレル特異的オリゴ（ＴａｑＭａｎプローブという）は、前記遺伝子多型情報に基づいて設計することができる。
（５）インベーダー法による遺伝子多型の検出
インベーダー法は、アレル特異的オリゴと鋳型とをハイブリダイゼーションすることにより遺伝子多型を検出する方法である。インベーダー法を行うためのキットは市販されており、この方法により容易に遺伝子多型を検出することが可能である。
【００３４】
６．キット
本発明において、ミューオピオイド受容体遺伝子多型（例えばＳＮＰ）部位を含むオリゴヌクレオチドは、遺伝子多型検出用キットに含めることができる。
本発明の遺伝子多型検出用キットは、本発明を実施するために必要な１種以上の成分を含むものである。例えば、本発明のキットは、酵素を保存若しくは供給するためのもの、及び／又は遺伝子多型検出を実施するために必要な反応成分を含むものである。そのような成分としては、限定されるものではないが、本発明のオリゴヌクレオチド、酵素緩衝液、ｄＮＴＰ、コントロール用試薬（例えば、組織サンプル、ポジティブ及びネガティブコントロール用標的オリゴヌクレオチドなど）、標識用及び／又は検出用試薬、固相支持体、説明書などが挙げられる。また本発明のキットは、必要な成分のうちの一部のみを含む部分的キットであってもよく、その場合には、ユーザーが他の成分を用意することができる。
本発明のキットは、上記オリゴヌクレオチドを支持体に固定したマイクロアレイとして提供することもできる。マイクロアレイは、支持体上に本発明のオリゴヌクレオチドが固定されたものであり、ＤＮＡチップ、Ｇｅｎｅチップ、マイクロチップ、ビーズアレイなどを含む。
本発明のキットは、本発明において見出された遺伝子多型を含むオリゴヌクレオチドを含む。従って、薬物を患者等に使用する前（例えば手術前、癌性疼痛時等）に採血してミューオピオイド受容体遺伝子を単離し、この遺伝子をキット中のオリゴヌクレオチドと反応させて遺伝子型を判定する。判定された遺伝子型から薬物の種類又は用量などの投与計画が作成される。その結果、個人に合った薬物効果を得ることができ、オーダーメイド医療に有用となる。例えばモルヒネを使用する場合は、個人に合った鎮痛効果を得、また副作用を最低限に抑えることができる。
【実施例】
【００３５】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
〔実施例１〕      ＳＮＰ解析及びハプロタイプ構築
（１）対象
本実施例は、薬物依存ゲノム解析研究グループ（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ａｂｕｓｅ（ＪＧＩＤＡ））に所属する日本国内の精神病院（精神科）に入院中及び退院した、ＷＨＯの診断基準ＩＣＤ−１０  ＤＣＲでＦ１５．２及びＦ１５．５を示す、メタンフェタミン依存患者１２８名（男性９９名、女性２９名、平均年齢３５．９±１．０歳）、並びに、主に医療従事者で過去及び家族に薬物依存歴がなく、また精神疾患を患っていない、健常人１７９名（男性１３９名、女性４０名、平均年齢３４．６±１．５歳）を対象に行った。
また、健常人での多型頻度の解析の結果、エクソン１及びイントロン２において、これまでに報告されてきた多型頻度と非常に異なる頻度でＳＮＰが観察されたため、この２領域に関しては、健常人サンプルをそれぞれ３４名並びに５３名追加して、解析を行った。
診断は、２人の精神科医による問診と、病院の記録を含めた入手可能な全ての情報を基に行われた。また、依存患者のうち、統合失調症、器質精神症候群、並びに他の精神性疾患を患った経歴のある患者は除外した。
被験者は全て日本人であり、その出生及び居住地域は、北九州、瀬戸内、東海及び関東地方であった。
本実施例は、ＪＧＩＤＡに所属する各機関での倫理審査にて承認を得た後、全ての対象者に、ゲノムサンプルを今回の研究に用いることに対しての、文書による同意を得て行った。
【００３６】
（２）覚醒剤精神病様症状における症例分類解析
臨床情報を基にメタンフェタミン依存患者を分類して行った解析では、患者を以下の４項目に関してグループに分け、解析を行った。
（Ａ）Ｌａｔｅｎｃｙ  ｏｆ  ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ    （使用開始から妄想・幻覚が発症するまでの期間）
・３年以内に発症  （ｎ＝５４，  平均年数-＝０．８３年）
・３年以上経過後に発症  （ｎ＝５３，  平均年数＝９．９８年）
（Ｂ）  Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ  （使用停止後、妄想・幻覚が持続する期間）
・ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  （ｎ＝７２，  １ヶ月以内に消失）
・ｍｉｄｄｌｅ  （ｎ＝１７，  １ヶ月から６ヶ月で消失）
・ｐｒｏｌｏｎｇ  （ｎ＝２６，  ６ヶ月以上持続）
（Ｃ）  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  ｒｅｌａｐｓｅ  （再燃性の有（ｎ＝８６）無（ｎ＝４２））
（Ｄ）  Ｐｏｌｙ  ｄｒｕｇ  ａｂｕｓｅ  （多剤乱用）
・ｎｏｎｅ  （ｎ＝３６，  メタンフェタミンの単独乱用）
・ｅａｓｉｌｙ  ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ  ｄｒｕｇ  ｏｎｌｙ  （ｎ＝４９，  アルコール、シンナーに乱用歴）
・ｈｅａｖｙ  （ｎ＝４３，  モルヒネ、ヘロイン、大麻などに乱用歴）
また、メタンフェタミン依存患者のうち、各項目に関して臨床情報が得られなかった患者は、本解析から除外した。
【００３７】
（３）Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ
ゲノムサンプルは、各対象者より採取した血液検体から、通常のフェノール抽出法を用いて精製した。すなわち、全血に対して３  倍量の溶血試薬（０．１  ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５５  ｍＭ  ＮＨ４Ｃｌ２）を加え、室温で１０分間放置した後、遠心し、沈殿を再懸濁させた後に、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  Ｋ処理、ＲＮａｓｅ処理を行い、遠心して得られた上清から、フェノール・クロロホルム抽出をし、さらにエタノール沈殿を経て、ゲノムＤＮＡを調整した。ゲノムＤＮＡを鋳型として、ＫＯＤ  Ｄａｓｈ（ＴＯＹＯＢＯ、東京）を用いてＰＣＲ法を行い、エタノール沈殿にて精製後、シークエンス用の鋳型ＤＮＡとした。
μオピオイド受容体遺伝子の５’側非翻訳領域（５’ＵＴＲ  並びに５’ｆｌａｎｋｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）は、開始コドンより上流５７６５  ｂｐまでの領域を２つのＰＣＲ増幅（−５７６５〜−２２７２、−２６１２〜４２１）を行うことで、目的とする全域を増幅した。エクソン１、エクソン２−３（イントロン２を含む）、エクソン４（終止コドンより下流２９５２  ｂｐを含む）、さらにイントロン１及び３の一部は、それぞれの箇所別にＰＣＲ法によりＤＮＡ断片の増幅を行った（増幅領域は図１参照）。３’側非翻訳領域（３’ＵＴＲ及び３’ｆｌａｎｋｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）は、終止コドンより下流１３８３０  ｂｐまでの領域を、４つのＰＣＲ増幅（ＴＡＡ＋２００４〜６２８８、４９８０〜１０３７６、８２９２〜１２１２０、１１２６０〜１４６７７）を行うことで、目的とする全域を増幅した。これらのＰＣＲ産物を鋳型として、Ｂｉｇ  Ｄｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  Ｖ３．１  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｒｅａｄｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（アプライドバイオシステム、東京）を用いたシークエンス法により塩基配列を解読し、遺伝子多型の解析を行った。
まず初めに、健常人のゲノムサンプル４４例を使用し、増幅したＰＣＲ断片の全領域を、計１５２本のプライマーを用いて、μオピオイド受容体遺伝子上に高頻度で見られる多型を見いだした。次に全エクソン領域と、高い頻度（Ａｌｌｅｌｉｃ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ＞  ５％）で観察される多型を含む領域に関して、残りの健常人サンプル及びメタンフェタミン依存患者サンプルのゲノムＤＮＡを用いて、μオピオイド受容体遺伝子の多型解析を行った。プライマーは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ  ｎｏ．  ＮＴ−０２３４５１）にて公開されている遺伝子配列を参照にして、設計を行った。
【００３８】
（４）統計解析
健常人とメタンフェタミン依存患者のサンプル間での多型頻度の有意差検定は、カイ二乗検定を用いて行った（有意水準α＝０．０５）。また、全ての多型に関して、サンプルの偏りを確認するために、カイ二乗検定を用いてＨａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ（ＨＷ）平衡の検討を行った。連鎖不平衡解析及びハプロタイプ解析においては、健常人１７９例とメタンフェタミン依存患者１２８例の遺伝子型情報を、Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ｐｒｏｇｒａｍ（ｈｔｔｐ：／／ａｎｔｈｒｏ．ｕｎｉｇｅ．ｃｈ／ａｒｌｅｑｕｉｎで入手）（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｓ，  Ｒｏｅｓｓｌｉ  Ｄ，  Ｅｘｃｏｆｆｉｅｒ  Ｌ．  Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ２０００：  ａ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｆｏｒ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｖｅｒ  ２．０００．  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｔｒｙ  Ｌａｂ，  Ｄｅｐｔ  ｏｆ  Ａｎｔｈｒｏｐｏｌｏｇｙ  Ｕｎｉｖ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｖａ．）を用いて解析した。そして、連鎖不平衡の尺度を示す値であるＤ’値及びｒ２値を、前記の定義に基づき算出した。
繰り返し多型における、健常人とメタンフェタミン依存患者サンプルの多型頻度の有意差は、モンテカルロ法を基に作製されたＣＬＵＭＰ  ｐｒｏｇｒａｍ  （Ｓｈａｍ  ＰＣ，  Ｃｕｒｔｉｓ  Ｄ．  Ｍｏｎｔｅ  Ｃａｒｌｏ  ｔｅｓｔｓ  ｆｏｒ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ａｌｌｅｌｅｓ  ａｔ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｌｙ  ｍｏｒｐｈｉｃ  ｌｏｃｉ．  Ａｎｎ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ，  ５９，  ９７−１０５，  （１９９５））を用いて行った。
ハプロタイプ解析の結果から、ＨａｐｌｏＢｌｏｃｋＦｉｎｄｅｒ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ０．６を用いて連鎖ブロックを推定した。
【００３９】
〔実施例２〕    日本人ゲノムにおけるμオピオイド受容体遺伝子多型の解析
μオピオイド受容体遺伝子多型を同定するため、日本人健常人のゲノムＤＮＡを用いて、全エクソン領域、イントロン領域の一部、さらに３’及び５’の非翻訳領域に関して、ＰＣＲ増幅の後、配列の解読を行った。全エクソン領域及びイントロン領域の一部については、図１のゲノム模式図下の７本の線で示した領域に関して多型解析を行った。また、１１８Ｇ、ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ、ｉｎｔｒｏｎ３から３’ＵＴＲ下流約４  ｋｂｐ付近まで広範囲で見られる完全連鎖不平衡を示すＳＮＰ群、並びに二塩基繰り返し多型ＩＶＳ３＋６１１３  （ＧＴ）１１−１５（実施例３）と３２塩基繰り返し多型のＩＶＳ３＋８７６１  （３２ｂｐ）２−１７（実施例３）に関して、健常人サンプルの多型頻度から連鎖不平衡解析を行い、有意に連鎖不平衡の関係にある多型間でのＤ’値を図１中に示した（Ｐ＜０．０５）。
解読を行った領域において、表１の３６個、表３の２個の計３８の新規遺伝子多型と、既に他人種を用いた研究にて報告されている３つのＳＮＰ（Ａ１１８Ｇ，  ＩＶＳ２＋Ｇ３１Ａ，  ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ）を、日本人ゲノム上に見いだした（前述の表１）。
日本人で見られた表１の３９のＳＮＰのうち、ｔｒａｎｓｖｅｒｓｉｏｎ変異が３７で大半を占め、ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ変異は２箇所（ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ，  ＴＡＡ＋Ｇ２３９５Ｃ）であった。また、これら全ての多型は、ＨＷ平衡にあったことから、集めたサンプルに偏りがないことも確認された。本実施例の日本人のゲノム上では、５’非翻訳領域にて１４のＳＮＰが確認されたが、これまでに同じ領域で報告されていた２４のＳＮＰは見られなかった。
さらに、Ａ１１８ＧとＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃの二つのＳＮＰに関しては、その多型頻度（表１「Ａｌｌｅｌｉｃ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ」）は、日本人ゲノムではそれぞれ４５．３％と８１．９％であり、これまで欧米人のゲノムを中心に報告されてきた多型頻度（表１「Ｒｅｐｏｒｔｅｄ  Ａｌｌｅｌｉｃ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ」）ではそれぞれ７．５−２５．８％と４２．５−５３．３％であり、日本人ゲノムにおいて著明に高い頻度で観察された（Ｈｏｅｈｅ  ＭＲ，  Ｋｏｐｋｅ  Ｋ，  Ｗｅｎｄｅｌ  Ｂ，  Ｒｏｈｄｅ  Ｋ，  Ｆｌａｃｈｍｅｉｅｒ  Ｃ，  Ｋｉｄｄ  ＫＫ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｇｅｎｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ，  ９，  ２８９５−９０８，  （２０００））。
また、他人種を用いた研究で以前に高い多型頻度で報告されていた、Ｃ１７Ｔなどのその他の翻訳領域に存在するＳＮＰも観察されなかった（Ｈｏｅｈｅ  ＭＲ，  Ｋｏｐｋｅ  Ｋ，  Ｗｅｎｄｅｌ  Ｂ，  Ｒｏｈｄｅ  Ｋ，  Ｆｌａｃｈｍｅｉｅｒ  Ｃ，  Ｋｉｄｄ  ＫＫ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｇｅｎｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ｈｕｍ  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ，  ９，  ２８９５−９０８，  （２０００）、Ｂｏｎｄ  Ｃ，  ＬａＦｏｒｇｅ  ＫＳ，  Ｔｉａｎ  Ｍ，  Ｍｅｌｉａ  Ｄ，  Ｚｈａｎｇ  Ｓ，  Ｂｏｒｇ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｉｎｇｌｅ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ａｌｔｅｒｓ  ｂｅｔａ−ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ：  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｏｐｉａｔｅ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，  ９５，  ９６０８−１３，  （１９９８）、Ｂｅｒｇｅｎ  ＡＷ，  Ｋｏｋｏｓｚｋａ  Ｊ，  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  Ｒ，  Ｌｏｎｇ  ＪＣ，  Ｖｉｒｋｋｕｎｅｎ  Ｍ，  Ｌｉｎｎｏｉｌａ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｖａｒｉａｎｔｓ：  ｌａｃｋ  ｏｆ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ２，  ４９０−４，  （１９９７）、Ｓａｎｄｅｒ  Ｔ，  Ｇｓｃｈｅｉｄｅｌ  Ｎ，  Ｗｅｎｄｅｌ  Ｂ，  Ｓａｍｏｃｈｏｗｉｅｃ  Ｊ，  Ｓｍｏｌｋａ  Ｍ，  Ｒｏｍｍｅｌｓｐａｃｈｅｒ  Ｈ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｕｍａｎ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ａｌｃｏｈｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｅｓ，  ２２，  ２１０８−１０，  （１９９８）、Ｇｅｌｅｒｎｔｅｒ  Ｊ，  Ｋｒａｎｚｌｅｒ  Ｈ，  Ｃｕｂｅｌｌｓ  Ｊ．  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｍｕ  ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  （ＯＰＲＭ１）  ｅｘｏｎ  Ｉ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ：  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ，  ａｎｄ  ａｌｌｅｌｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ  ｉｎ  ａｌｃｏｈｏｌ−  ａｎｄ  ｄｒｕｇ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ４，  ４７６−８３，  （１９９９）、Ｆｒａｎｋｅ  Ｐ，  Ｗａｎｇ  Ｔ，  Ｎｏｔｈｅｎ  ＭＭ，  Ｋｎａｐｐ  Ｍ，  Ｎｅｉｄｔ  Ｈ，  Ａｌｂｒｅｃｈｔ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｏｎｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  （ＯＰＲＭ１）  Ａ１１８Ｇ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ａｎｄ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｇｅｎｅｔ，  １０５，  １１４−９，  （２００１）、Ｓｈｉ  Ｊ，  Ｈｕｉ  Ｌ，  Ｘｕ  Ｙ，  Ｗａｎｇ  Ｆ，  Ｈｕａｎｇ  Ｗ，  Ｈｕ  Ｇ．  Ｓｅｑｕｅｎ���ｅ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  （ＯＰＲＭ１）  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｈｅｒｏｉｎ．  Ｈｕｍ  Ｍｕｔａｔ，  １９，  ４５９−６０，  （２００２）、Ｓｃｈｉｎｋａ  ＪＡ，  Ｔｏｗｎ  Ｔ，  Ａｂｄｕｌｌａｈ  Ｌ，  Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ＦＣ，  Ｏｒｄｏｒｉｃａ  ＰＩ，  Ｆｒａｎｃｉｓ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｍｕ−ｏｐｉｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ａｎｄ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ａｂｕｓｅ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ７，  ２２４−８，  （２００２））。
また興味深いことに、イントロン３及び３’非翻訳領域に見られたＳＮＰのうち、一部において多型がほぼ同時に観察され、連鎖不平衡解析においてＤ’値１．０００を示した。そこで、この連鎖不平衡ブロックのサイズを検討するため、例数を減らし（３  ｇｅｎｏｔｙｐｅに関して各５例ずつ）、終止コドン（ＴＡＡ）より下流約１４  ｋｂｐまで解析範囲を広げたところ、さらに新たに５７の遺伝子多型を見いだした。μオピオイド受容体遺伝子３’非翻訳領域で見出した多型とその連鎖不平衡を前記表２に示した。
新たに見出した５７遺伝子多型のうち２４の遺伝子多型は、上述の連鎖不平衡にある多型群と同時に確認され、連鎖不平衡解析においてＤ’値並びにｒ２値が共に１．０００を示す完全連鎖不平衡の関係にあった（表２中、「＊」印）。
【００４０】
〔実施例３〕  μオピオイド受容体遺伝子多型におけるハプロタイプ解析と連鎖不平衡解析
実施例２で見いだした多型のうち、多型頻度が５％以上であった１０箇所のＳＮＰに関して、Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ｐｒｏｇｒａｍを用いてハプロタイプを推定した（前記表５）。ハプロタイプを推定する際、多型頻度が５％以上であるＳＮＰのうち、ｉｎｔｒｏｎ  ３から３’非翻訳領域にかけて存在する完全連鎖不平衡を示すＳＮＰ群に関しては、そのうちの一つＴＡＡ＋Ａ２１０９Ｇを代表とした。Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ｐｒｏｇｒａｍにより、３４のハプロタイプが推定され、そのうち３％以上の高頻度でみられるものは７ハプロタイプあった（表５、Ｎｏ．１〜７）。頻度が３％以下（残りの２７ハプロタイプ、全体の１６．１％に相当）に関しては、Ｎ０．８にまとめて示した。
上述のＴＡＡ＋Ａ２１０９ＧのＧ  ａｌｌｅｌｅは、５番のハプロタイプでのみ見られ、他のいくつかのＳＮＰも同様の傾向があった。
次に、得られたハプロタイプ頻度を基に連鎖不平衡解析を行った（前記表６）。
表６では、連鎖不平衡解析の結果、Ｄ’値（表右上）が有意且つ０．７以上を示す多型の組み合わせを下線で表し、さらにｒ２値（表左下）も有意且つ０．５以上である組み合わせに関しては太斜字で表した。上で定義したようにＤ’値を算出したところ、ＩＶＳ３＋Ｇ５９５３Ａ又はＴＡＡ＋Ａ２２７４Ｇに関わるいくつかの組み合わせを除き、全てのＳＮＰの組み合わせにおいて、有意な連鎖不平衡が確認された（表６）。
また、より厳しい指標であるｒ２値において、ｉｎｔｒｏｎと３’非翻訳領域の３つのＳＮＰにおいて有意な連鎖不平衡が観察され、その３つのＳＮＰのうちの１つは上述した完全連鎖不平衡を示す多型群の一つであるＴＡＡ＋Ａ２１０９Ｇであった（表６）。
また、ハプロタイプ解析の結果から、４つの連鎖ブロックが推定された。
さらに、μオピオイド受容体遺伝子上において、ＳＮＰ以外のいくつかの塩基繰り返し多型を新たに見いだした。イントロン３内で、二塩基繰り返し多型ＩＶＳ３＋６１１３（ＧＴ）１１−１５、及び３２塩基の繰り返し多型ＩＶＳ３＋８７６１（３２ｂｐ）２−１７が観察された（前記表３）。
これらの繰り返し多型は非常に多様性があったものの、表６に示す１０個のＳＮＰ全てとの間で有意な連鎖不平衡が確認された（Ｐ  ＜  ０．０５）。
【００４１】
〔実施例４〕  μオピオイド受容体遺伝子多型とメタンフェタミン依存・覚醒剤精神病様症状との相関
μオピオイド受容体遺伝子多型と、メタンフェタミン依存・覚醒剤精神病様症状との相関を検討するため、健常人における連鎖不平衡解析・ハプロタイプ解析の結果（実施例３）より、５％以上の多型頻度で、推定された連鎖ブロック内のＳＮＰを代表する４箇所のＳＮＰ（Ａ１１８Ｇ，  ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ，  ＩＶＳ３＋Ａ６１５１Ｇ，  ＩＶＳ３＋Ｇ８４９７Ｔ）を選択した。
まず、全メタンフェタミン依存患者における多型頻度を解析し、健常人の多型頻度との比較を行った（表７）。
【００４２】
【表９】
0004580924.tif 000010
【００４３】
表７は、健常人との比較で、有意に多型頻度が異なっていたもののみを記載した。メタンフェタミン依存患者において、ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃの多型頻度は７３．８％であり、健常人の８１．９％と比較してその頻度は低く、遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）は有意に異なっており（Ｐ＝０．０２３  カイ二乗検定）、Ａｌｌｅｌｅ頻度の比較においてもＣ  ａｌｌｅｌｅが多く、有意に健常人と異なっている（Ｐ＝０．０２３  カイ二乗検定）ことが明らかとなった。
また、ＩＶＳ３＋Ａ８４９７Ｇにおいても、メタンフェタミン依存患者において健常人よりもＧ  ａｌｌｅｌｅの割合が高い傾向が確認された。
次に、上記の４ＳＮＰについて、メタンフェタミン依存患者の遺伝子多型情報から、Ａｒｌｅｑｕｉｎ  ｐｒｏｇｒａｍを用いてハプロタイプを推定し（表８）、そのハプロタイプ頻度を基に連鎖不平衡解析を行い、健常人と比較した（表９）。
【００４４】
【表１０】
0004580924.tif 000011
【００４５】
【表１１】
0004580924.tif 000012
【００４６】
表９において、連鎖不平衡解析の結果、Ｄ’値（表右上）が有意且つ０．７以上を示す多型の組み合わせを、下線で表している。表の各組み合わせの、上の数値が健常人、下の数値がメタンフェタミン依存患者のゲノムにおける、連鎖不平衡解析の結果を表す。
表９は、健常人とメタンフェタミン依存患者におけるμオピオイド受容体遺伝子多型間の連鎖不平衡解析の結果を示し、Ｄ’値（表右上）が有意且つ０．７以上を示す多型の組み合わせを暗灰色で示す。表９の各組み合わせの上の数値が健常人、下の数値がメタンフェタミン依存患者のゲノムにおける結果を示す。また、４  ＳＮＰにおける連鎖不平衡解析では全ての組み合わせでＤ’値は有意な値を示していたが、ｒ２値はいずれも有意な値を示さなかった（図９）。
健常人とメタンフェタミン依存患者間でハプロタイプ頻度に関して有意な差は見られなかった（Ｐ＝０．４０）ものの、表８のハプロタイプ５番及び６番において、健常人と比較してメタンフェタミン依存患者の多型頻度が高い傾向を示した。この５番と６番の両ハプロタイプの違いは、ｉｎｔｒｏｎ  ３から３’非翻訳領域にかけて存在する完全連鎖不平衡を示すＳＮＰ群のうちの一つであるＩＶＳ３＋Ａ６１５１Ｇのａｌｌｅｌｅタイプのみの違いであった。
従って、他の薬物に対する依存並びに疼痛治療等においてさらなるハプロタイプ解析が有用な差を示す可能性があると言える。
【００４７】
〔実施例５〕  覚醒剤精神病様症状における症例分類解析
本実施例では、健常人と、覚醒剤精神病様症状により分類したメタンフェタミン依存患者との間でのμオピオイド受容体遺伝子多型の多型頻度を比較した。
メタンフェタミン依存患者を、臨床情報を基に、覚醒剤精神病様症状の症例によって実施例１に記載したように分類し、解析を行った。解析は、実施例３の連鎖不平衡解析から推定される連鎖ブロックを代表する４箇所のＳＮＰ（Ａ１１８Ｇ，  ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ，  ＩＶＳ３＋Ａ６１５１Ｇ，  ＩＶＳ３＋Ｇ８４９７Ｔ）全てで行った。そのうち、有意に健常人と多型頻度が異なっている群が存在した多型のみを表１０に記載した。
【００４８】
【表１２】
0004580924.tif 000013
【００４９】
（１）覚醒剤の使用開始から妄想・幻覚を発症するまでの期間で分類したところ、３年以内に発症した群において、健常人と比較して、３箇所のＳＮＰ（Ａ１１８Ｇ、ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ、ＩＶＳ３＋Ａ６１５１Ｇ）の多型頻度が低い値を示し、遺伝子型が有意に異なっていた（それぞれ、Ｐ＝０．０４０、Ｐ＝０．００８５、Ｐ＝０．０２７）。ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃに関しては、メタンフェタミン使用開始から３年以上経過した後に、妄想・幻覚が発症した群においても同様に、健常人と比較して有意に遺伝子型が異なっていた（Ｐ＝０．０３９）が、発症までの期間が短い群の方が、より大きく異なる傾向を示した。
（２）覚醒剤の使用停止から妄想・幻覚が消失するまでの期間で分類したところ、１ヶ月以内に比較的速やかに消失した群において、ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃの多型頻度が低い値を示し、健常人と比較して有意に遺伝子型が異なっていた（Ｐ＝０．００３４）。
（３）再燃性の有無に関して分類した場合も、再燃性が見られた群において、同様にＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃの多型頻度が低い値を示し、健常人と比較して有意に遺伝子型が異なっていた（Ｐ  ＝  ０．０１４）。
（４）多剤乱用を指標として分類し、解析を行ったところ、メタンフェタミンにのみ乱用歴があった群において、２箇所のＳＮＰ（ＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃ、ＩＶＳ３＋Ｃ８４９７Ｔ）の多型頻度が低い値を示し、健常人と比較して有意に遺伝子型が異なっていた（Ｐ＝０．００５９、Ｐ＝０．０１４）。
日本人サンプルにおいて、翻訳領域に存在する多型は、エクソン１に存在し、アスパラギンがアスパラギン酸に変化するＡ１１８Ｇのみであった。このアスパラギンは、７回膜貫通型受容体であるμオピオイド受容体のＮ末端に存在する５箇所のｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ部位のうちの１箇所と考えられている。
本実施例において、Ａ１１８Ｇの多型頻度は、健常人とメタンフェタミン依存患者との比較では、これまでの報告と同様に有意な差は見られなかったが（表７）、メタンフェタミン依存患者を覚醒剤精神病様症状により分類した際に、いくつかの群で健常人と比較し有意に多型頻度が異なっていた（表１０）。
メタンフェタミン依存患者を臨床情報を基に分類し解析したところ、妄想・幻覚の発現時期、持続期間並びに再現性の有無において、いくつかのＳＮＰで健常人と比較して有意に多型頻度が低い群が見られた。このことは、メジャーａｌｌｅｌｅを持つ群の方が、メタンフェタミンによる覚醒剤精神病を発症し易いことを示している（表１０）。
本発明は、μオピオイド受容体の遺伝子多型、特にＩＶＳ２＋Ｇ６９１Ｃが、メタンフェタミン依存並びに覚醒剤精神病における脆弱性に関する有用な遺伝子マーカーの１つと考えられることを示している。また、μオピオイド受容体を介した作用における様々な個人差には、翻訳領域以外の遺伝子多型によるμオピオイド受容体発現に対する何らかの調節機構の違いが大きく寄与していることを示すものである。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明により、μオピオイド受容体遺伝子の新規多型が提供される。本発明の多型を用いることで、薬物に対する個人の感受性の差を評価することができる。この感受性評価方法により、モルヒネ等の麻薬性薬物の処方適正量を知ることが可能となる。
【配列表フリーテキスト】
【００５１】
配列番号１８：ｎはａｃのｍ回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
配列番号２７：ｎはｇｔの１１〜１５回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
配列番号３１：ｎはａｔｔａｔｃａｔａｔｔａｔｇａｃａｔａｔａｔｃａｔａａｔａｔａｔの２〜１７回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
配列番号５２：ｎはａのｍ回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
配列番号５８：ｎは３２２ｂｐの配列又は欠失を示す（存在位置５１）。
配列番号６０：ｎはａ又は欠失を示す（存在位置５１）。
配列番号６６：ｎはａのｍ回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
配列番号７４：ｎはａのｍ回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
配列番号８１：ｎはｃａのｍ回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
配列番号８３：ｎはｔｃｔｃ又は欠失を示す（存在位置５１）。
配列番号８６：ｎはｔｔｔｃの挿入を示す又は何も表さない（存在位置５１）。
配列番号９７：ｎはｔのｍ回の繰り返しを示す（存在位置５１）。
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110>  Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
<120>  A method of evaluating drug sensitivity with analyses of mu
opioid receptor gene
<130>  PCT05-0031
<150>  JP2004-106136
<151>  2004-03-31
<160>  98
<170>  PatentIn version 3.2
<210>  1
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  1
gttcaactgc taatacctta gcaggaatcg aaacagtgac cccatggcat rctaagagtc     60
actgtactct tcacagacgt gcactcacag aagaaaaaca c                        101
<210>  2
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  2
actaaagtag aatgcttgtc ccaaagaaaa gcgcatgttg cctgtttgag ytgtgaacta     60
aattaaccac tttttccgtg gatcactatt tttatttaaa g                        101
<210>  3
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  3
atgttgcctg tttgagctgt gaactaaatt aaccactttt tccgtggatc rctattttta     60
tttaaagaat gactgaggcc gggcgcggtg gctcacgcct g                        101
<210>  4
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  4
ctgaggccgg gcgcggtggc tcacgcctgt aatcccagca ctttgggagg ytgaggcagg     60
cagatgacga ggtcaggaga tcgagaccat cctggctaac a                        101
<210>  5
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  5
actcgggagg tggagcttgc agcgagctga gatcgcgcca ctgcactcca rcctgggcga     60
cagagtgaga ctctgtttta aaataaataa ataaataaaa t                        101
<210>  6
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  6
ataaataaaa taaaatataa tgataaagaa atgtttttat agagctctca rttttaattt     60
ctgaagtgat agactgtgat aaagataacc taaataagaa a                        101
<210>  7
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  7
taattcttct tgctaatttc taggccacat acaacaggat ataaaaagcc maacaacaaa     60
ggataaattc tttcatatgt gtgtaatcct ataaaccctc t                        101
<210>  8
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  8
taaaatatat gctaatcatt ttttcaactg aattcaaata ttatgcacat kaatattcat     60
atatgtttaa tatagaaaga aacacagaga gtgagggagg g                        101
<210>  9
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  9
aaaatatatg ctaatcattt tttcaactga attcaaatat tatgcacatt matattcata     60
tatgtttaat atagaaagaa acacagagag tgagggaggg a                        101
<210>  10
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  10
ctaatcattt tttcaactga attcaaatat tatgcacatt aatattcata yatgtttaat     60
atagaaagaa acacagagag tgagggaggg agtccactat g                        101
<210>  11
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  11
aaaaatctat agtgttgtac tgagctccct ccaaagcaac tataaattta yaggagatga     60
aacatatgat tcaccaggca taagaagaaa gtttccgtaa t                        101
<210>  12
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  12
tccacatgaa ctaagcacaa aggaactgaa tgcaggcaga cagatttcag ytcaatataa     60
gagaattgtt acattagttc atggaagaat atgttttaag g                        101
<210>  13
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  13
tgtttctcat ttctttttca gaaaataaag gatcgctgtt gttcccaaca kgtttgtagg     60
gaagaaaatt ggagaaacat tattaccttt tcttagatgt t                        101
<210>  14
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  14
tagggtttca tcaagccaat gtattccctg ccagatttta aggagaaaaa kgcgctggaa     60
aattgagtga tgttagcccc ctttcttatt tttcactgct a                        101
<210>  15
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  15
ccccagcacc cagccccggt tcctgggtca acttgtccca cttagatggc racctgtccg     60
acccatgcgg tccgaaccgc accgacctgg gcgggagaga c                        101
<210>  16
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  16
aatgaaaagg cagaaaaatt agccccaaaa gagatgaaac tcttccgtcc rtcaccattg     60
actctattgt gaacttatga aaaaggtagt tgagcaatat g                        101
<210>  17
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  17
gaacttatga aaaaggtagt tgagcaatat gaaggccatg atgtggaatt raacacacac     60
acacacacac acacacacac acacacatgc tggattctaa a                        101
<210>  18
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents m repeats of ac
<400>  18
acttatgaaa aaggtagttg agcaatatga aggccatgat gtggaattaa natgctggat     60
tctaaaatgt gtccttcctc ctctcactct cttgatcagt t                        101
<210>  19
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  19
acagaggtaa tttatttagt ctggcttcac ttaacacaaa taggtcaaaa rcaatcacat     60
tttgtaagta gtaatagttg gagaaatgtg tgaagaatag g                        101
<210>  20
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  20
ggtcaaaaga taaataagaa ttattttata accataagaa aggaagaaca kctataaaca     60
aaagtcatat atgcaacata aaagaatagg tgagctgcca g                        101
<210>  21
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  21
ttctggaagt tccataaaaa tcactctaat gggtcaaaca tcgatggttc kcagaagaac     60
acaatttttt tcaaaaacga atagcattgt aaattcattt g                        101
<210>  22
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  22
tacaacaaaa tacaggcaag gtgagtgatg ttaccagcct gagggaagga rggttcacag     60
cctgatatgt tggtgatgtc ataagcaaag cagtatttat g                        101
<210>  23
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  23
tttatatcaa tatagacctc atggaggatc tagctcatgt tgagaggttc rtttttgttc     60
cctgaacgaa agcttaatgt gatcgaagtg gactgcaaaa t                        101
<210>  24
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  24
ttccacaatt tctttatagc cttaagttag ctctggtcaa ggctaaaaat saatgagcaa     60
aatggcagta ttaacacctt atgacataat taaatgttgc t                        101
<210>  25
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  25
ctctaattac tattattaaa gcactttctt gacattttaa tcaaaatagc rggtcaagaa     60
gttaggagat gctctgtatt tggtttaact gtgaactata t                        101
<210>  26
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  26
acatcactct caaaagttga tctcagtttt ttttacaaga catctgtgga ragttaattt     60
gggaaagtaa ttgtttcaat tcaatgggaa aaaaaactca a                        101
<210>  27
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents 11 to 15 repeats of gt
<400>  27
atcaaaatgg ctattctttc agttctacag tttaaaaaga aaatggttcc ngcgtgtgat     60
ataggcatgt ctctttttgc atgtatggaa ttagagtaaa t                        101
<210>  28
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  28
aaagaaaatg gttccgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgcg tgtgatatag rcatgtctct     60
ttttgcatgt atggaattag agtaaatgta ggtttaaaat t                        101
<210>  29
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  29
tgatatatat cataacatat tatatattat attatgatat atatcataac rtgtattatc     60
atattatgat atatatcata acatatatat tatcatatta c                        101
<210>  30
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  30
acatgtatta tcatattatg atatatatca taacatatat attatcatat yacgatatat     60
atcataacat attatatatt atcatattat gatatatatc a                        101
<210>  31
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents 2 to 17 repeats of attatcatattatgacatatatcataatatat
<400>  31
tatgacatat cataatatat attatcatat tatgacatat cgtaatatat natcaaaaag     60
tcacagagct catgcaagcc cagtcatccc cattgccagt g                        101
<210>  32
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  32
aatatatatt atcatattat gacatatatc ataatatata ttatcatatt rtgacatata     60
tcataatata tatcaaaaag tcacagagct catgcaagcc c                        101
<210>  33
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  33
taaaatgtac tctttatttc tcactggttt ctccatactg caggctcccc rcatattatt     60
ttcttttttt aactcagctc agaatcctta tgccttttga a                        101
<210>  34
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  34
atctaggtag acagccaagt cagatggccc atgcctagaa gctctccatt ytgaactttt     60
gtcagcattg attaaaagaa tcaaatacct tgtagttatc t                        101
<210>  35
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  35
cagccaagtc agatggccca tgcctagaag ctctccattt tgaacttttg ycagcattga     60
ttaaaagaat caaatacctt gtagttatct atgatgatac a                        101
<210>  36
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  36
ttatgtggac tcaacccacg tatccagtag atgggaaaaa acaaaagcca raataagttt     60
tttagtgttt ccttctgatg aagtttcatg tttgcttgta a                        101
<210>  37
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  37
aacaaaagcc aaaataagtt ttttagtgtt tccttctgat gaagtttcat rtttgcttgt     60
aataatctcc atttctcaaa tattatgttc cataatagac a                        101
<210>  38
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  38
atgcttttca tgggctagga tggtttctcc caagagatga catagtattg yttttgctca     60
tcaggctgtt tctcagcaat cattgtttct gcttaatacc a                        101
<210>  39
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  39
gctcctagta cgaattatct ggcatgttga gagcaacttt gtcttcaagt rggacctgat     60
ctatcttttt ccacaaatgt catgtgtgtg aacaagtttc t                        101
<210>  40
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  40
attctaaagt aaataataaa taaggtcatt gtcaacgttt ttcattcaaa rccatttttt     60
aacgtaaatt tgctagaacc accttccaat tccaaggcaa g                        101
<210>  41
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  41
taataaataa ggtcattgtc aacgtttttc attcaaaacc attttttaac rtaaatttgc     60
tagaaccacc ttccaattcc aaggcaagga gagacattac a                        101
<210>  42
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  42
ctcaactgga tgggctaagg tttctgataa aatctgaaga taaagaaaat sgaatattct     60
gcttttttct tccttctaat ttcacccttg cctaaggatg a                        101
<210>  43
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  43
tttttcttcc ttctaatttc acccttgcct aaggatgaga tttcttccca sgttggtatc     60
ccagaaatgc agactgtagc tatggggcgg aagctttgtt t                        101
<210>  44
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  44
ttgcctaagg atgagatttc ttcccaggtt ggtatcccag aaatgcagac ygtagctatg     60
gggcggaagc tttgtttctt tacctgatca cttgctgtgg a                        101
<210>  45
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  45
atttcttccc aggttggtat cccagaaatg cagactgtag ctatggggcg raagctttgt     60
ttctttacct gatcacttgc tgtggaaatt ctagcttatt g                        101
<210>  46
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  46
tccctctttc cttgccaatc attagaaagg aaagaagagg aaagagactc kctggagcac     60
tggtgagtct ctaggaccct gctatcctat cccaacaggg c                        101
<210>  47
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  47
actggtgagt ctctaggacc ctgctatcct atcccaacag ggctgtcaga mggagaactc     60
ctaatgtggc catttgaaac acttctcaac attgaaatag a                        101
<210>  48
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  48
gaagttttaa aataacctct tctaagacac ggctatgagt aggtaagaga kcattcattc     60
ccttcaataa tatgactgtg ttgataaaac tgataaccat t                        101
<210>  49
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  49
aactgataac cattcacttg caaatgttat tattgaataa gtctcactta kctcatttaa     60
tattacccaa aagatgctaa caaattctgt ttcccacatt g                        101
<210>  50
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  50
gccaaagcaa cctaagaata ggacatggta gcttaagttt ttcagcttct yaactggcca     60
cacacacaca agttgtgttt gtacaattct tgaggtcaat c                        101
<210>  51
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  51
caaacaatat tactgtgttc taagcgcttc tgttactcga aaggggtctg rtccagaccc     60
caaaagaggg ttcttggacc tcatgcaaga aagaattcag g                        101
<210>  52
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents m repeats of a
<400>  52
ggtttgtttt aagtaagcca ctttcctccc tgcaagttcc cacggagcag nggaggaaac     60
tttttcctgg gagcccacta atcacacagt gaacaaaagg c                        101
<210>  53
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  53
taagaaagca aaggaataaa gaatggctac tccataggca gcgtagcccc magggctgct     60
ggttggctat ttttgtggtt atttcttgat tatatgctaa a                        101
<210>  54
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  54
gtcgctctgg ttcaaacacc tctgacactt gaattacaaa tataaggacc rttgacactg     60
agattttaag ggaggaaaaa cagattgaca gtggactaaa g                        101
<210>  55
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  55
gcaaggtaag aatcaagtag aaatgataaa gggcaaggaa aaaagatgaa mgcttactca     60
tattaaccat tctaccattg gaattatttg ccaacacacc t                        101
<210>  56
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  56
gacagtgggg aaaattcatc ttcatattgt cacatgcact gtaataggaa kgtttagcaa     60
aaaaaacctt ccagagaaag gtggtttcca atattaccta c                        101
<210>  57
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  57
gcaaaaaaaa ccttccagag aaaggtggtt tccaatatta cctacaactt sctttgcaat     60
ttgatttttg aaaggaccta aaagttgaaa acaggctatc a                        101
<210>  58
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents a sequence having 322bp or deletion
<400>  58
taaatgtttt atttaagttt gcattgccca ctaaggctag acattttttt ngataaattc     60
acagggttac aaaataccaa acggaaatga gataagtggt a                        101
<210>  59
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  59
ggcccggcta gacatttttt gataaattca cagggttaca aaataccaaa yggaaatgag     60
ataagtggta taaaccacag aagatatagg agaagagaaa a                        101
<210>  60
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents a or deletion
<400>  60
tgagataagt ggtataaacc acagaagata taggagaaga gaaaaaaaaa ngaggaaata     60
aagaagacaa ctcttttcct aagagtctgg gtaaaattga a                        101
<210>  61
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  61
ggaaataaag aagacaactc ttttcctaag agtctgggta aaattgaaca yagccatatt     60
cactgaacaa catgagtgag cttcattaat ttaagcacag c                        101
<210>  62
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  62
ccatattcac tgaacaacat gagtgagctt cattaattta agcacagcaa ractgcttta     60
attaacaaga ccagagagaa gggagaggag actacatttg t                        101
<210>  63
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  63
gtgacatatt agacttctta ctttccccaa ataaaaaagt gcctgctggg ygcggtggct     60
cacgcctgta attccagcac tttgggaggc cgaggcgggc g                        101
<210>  64
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  64
gcgcggtggc tcacgcctgt aattccagca ctttgggagg ccgaggcggg yggaacacaa     60
ggtcaggaga tcaagaccat cctggccaat atggtaaaac c                        101
<210>  65
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  65
atacaaaatt aggaaggcgt ggtggtgcac gcctgtaatc ccagctagtc rggaggctga     60
ggcaggagaa ttgcttgaac tggggaggcg gaagttgcag t                        101
<210>  66
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents m repeats of a
<400>  66
caagatcgca gcattgcact ccagcctggg caacagaatg agattgtctc ngtgccacat     60
gccatgctat gtgcccaaag tttccttcac acaacacagc c                        101
<210>  67
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  67
ttagagccag tcagaattca atctccaata tcctgactag cacaagaaat ycataggttg     60
attcttgttc tcctgcatct ctgcaggtgg caaacctgat t                        101
<210>  68
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  68
ttgtgtgttt tcttaataaa ctttacccac ttattaaaag aataaaatga rggtggagtt     60
aattctgact acgggattcc tttttcactt ttataatgaa c                        101
<210>  69
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  69
tccttctaac taaatcttat cataagcaaa tctatgcacc aaattattta rtacaattcc     60
taataacagc tgaaggacca tttatttgaa gcaatgttca c                        101
<210>  70
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  70
ttagtacaat tcctaataac agctgaagga ccatttattt gaagcaatgt wcaccatagc     60
aaaattccag tgaagtctaa gaactgggac agtccgttga g                        101
<210>  71
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  71
ttgccccatg aatgtgcaca tgcatattaa aatatgggca cctcttttaa ktcttttttt     60
tctcataata agtttgaaac tcacagtagg aaattgagag a                        101
<210>  72
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  72
tggttgttct cgaactagct ggtttcccag agacagctgg agactgagca mataaagaca     60
tcattgagga aaaaggctac cttgtacctc atggagagct g                        101
<210>  73
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  73
catggagagc tgaaggtctg ataaatggga actgccaggt aatagctatg mtatttctga     60
cataaattta aaaactagta ttgtttcttc tagctctgtt t                        101
<210>  74
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents m repeats of a
<400>  74
taatgttaaa ttggatctat aaacataagt caatttggct ctattatgtc ngagaatagg     60
agttttaact tatatctgtg ttttattaat attttgaagt a                        101
<210>  75
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  75
ataagtcaat ttggctctat tatgtcaaaa gagaatagga gttttaactt wtatctgtgt     60
tttattaata ttttgaagta taggaacctc atggtgtagc a                        101
<210>  76
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  76
gtatgtgaca ggggctgcat gcaccggtgg tctgggagga acagaacagg rcagggagtt     60
cttctataca atagagaaca gaacaatgtt cttctataca a                        101
<210>  77
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  77
aggcgggccc aggcctggtt tcgggcctgg cgctgagctg cctgtatttg rttttacttc     60
cttgttgttt ttactgaata tgaaacaata taaaacaatg t                        101
<210>  78
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  78
tggttttact tccttgttgt ttttactgaa tatgaaacaa tataaaacaa kgtgagaggg     60
tctttctctc ctctcaatgt caacatcata tatgattgga g                        101
<210>  79
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  79
gctggtttgg ttgaagtttc tcttatcagt caggcacttt gcattttaag ygtactttac     60
caccgacacc ctcccccccc agcacacaca cacacacaca c                        101
<210>  80
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  80
tcaggcactt tgcattttaa gcgtacttta ccaccgacac cctccccccc magcacacac     60
acacacacac acacacacac acacacaaca tagtgaaatg g                        101
<210>  81
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents m repeats of ca
<400>  81
ggcactttgc attttaagcg tactttacca ccgacaccct ccccccccag nacatagtga     60
aatggacccg tgggaattat atgatagttg taatcaaaat a                        101
<210>  82
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  82
gcactttgca ttttaagcgt actttaccac cgacaccctc cccccccagc rcacacacac     60
acacacacac acacacacac acaacatagt gaaatggacc c                        101
<210>  83
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents tctc or deletion
<400>  83
tctggaagta aacttaaaat gaaaattaga atttgctttc aattatacta ntatctaaat     60
cttaatttga aatttaaatt attttgtctc tacccaaacc a                        101
<210>  84
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  84
tatactatct ctatctaaat cttaatttga aatttaaatt attttgtctc yacccaaacc     60
atcgatttca tggaaatgtt taaattttct tttttttttt t                        101
<210>  85
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  85
cttaatttga aatttaaatt attttgtctc tacccaaacc atcgatttca yggaaatgtt     60
taaattttct tttttttttt tttttttgat ggagtctcac t                        101
<210>  86
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents insertion of tttc or none
<400>  86
tattttgtct ctacccaaac catcgatttc atggaaatgt ttaaattttc nttttttttt     60
tttttttttg atggagtctc actctgtcgc ccaggctgga g                        101
<210>  87
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  87
aggctggagt gcagtggctc aatcttggct cactgcaacc tctgcctccc rggttcacac     60
cattctcctg cttcagcctc ctgagtagct gggactacag g                        101
<210>  88
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  88
attctcctgc ttcagcctcc tgagtagctg ggactacagg tgcccgccac macacctggc     60
taattttttg tatttttagt agagatgggg tttcaccacg t                        101
<210>  89
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  89
acaacacctg gctaattttt tgtattttta gtagagatgg ggtttcacca ygttagccag     60
gatggtttcg atctcctgac ctcgtgatct gcctgcctcg g                        101
<210>  90
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  90
atccccatca atttaatagg aattaagtta gaaatactag tatatatatt ycctttatat     60
actaattgta tatccatata aaagcattag taccattata t                        101
<210>  91
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  91
agtatatata ttccctttat atactaattg tatatccata taaaagcatt mgtaccatta     60
tatgaaagta tatatgccat tccataaaaa tatatctacc a                        101
<210>  92
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  92
ggaattaaag aaaaaatgcc tgttttcact aagtcatcct tcccctggca rtacatttcc     60
tgaactttta catacttaaa tagccagtta tgaaaatgta a                        101
<210>  93
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  93
acattttaaa cagactcctg cccacaaact atttttcctc tccaggaata rgaatggcaa     60
ctgaattgtt ccttctttat tctatagctt taagtcaaac c                        101
<210>  94
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  94
gaatggcaac tgaattgttc cttctttatt ctatagcttt aagtcaaacc yaacataagc     60
aatcaaccct tccacccatt gtcctctttc tagctgctta t                        101
<210>  95
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  95
ttgggggtga aataaaagat agacccctgc tgctctgcac gtagattcag yttgtatgcc     60
agggtgacat tttaatttac agtagtccag acacctaaac a                        101
<210>  96
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  96
ggggtgaaat aaaagataga cccctgctgc tctgcacgta gattcagttt statgccagg     60
gtgacatttt aatttacagt agtccagaca cctaaacagg a                        101
<210>  97
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (51)..(51)
<223>  n represents m repeats of t
<400>  97
caacattgtt ttccttttga tggtctggga gtttttctat aagtttttgg nctcttcatt     60
agtgtgttag ttccatcatc atgtctgttt actattgaaa a                        101
<210>  98
<211>  101
<212>  DNA
<213>  Homo Sapiens
<400>  98
ttgaaaatat aggcagctaa atccactgat agtctacttt ttttaaaaat ktgttcttga     60
tgttttgagc aggaaaatta tttgcaagaa acaaagagtt t                        101
【図１】
0004580924.tif 000014