(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するための、4,7,10,13,16−ドコサペンタエン酸（DPA）含有物質を含んでなる医薬組成物。
【請求項２】
前記DPA含有物質が、DPAの低級アルキルエステルおよびDPAを含むグリセリンエステルからなる群から選択される１種または２種以上のDPA含有脂質である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
アラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するための医薬組成物であって、単位用量当たり、該アラキドン酸を増加させるために有効な量の4,7,10,13,16−ドコサペンタエン酸（DPA）含有物質を含有する、医薬組成物。
【請求項４】
前記DPA含有物質が、DPAの低級アルキルエステルおよびDPAを含むグリセリンエステルからなる群から選択される１種または２種以上のDPA含有脂質である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記DPA含有脂質が微生物由来である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記微生物が、スラウストキトリウム（Thraustochytrium）属、シゾキトリウム（Schizochytrium）属、ジャポノキトリウム（Japonochytrium）属、およびウルケニア（Ulkenia）属からなる群から選択される、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための、4,7,10,13,16−ドコサペンタエン酸（DPA）含有物質の医薬組成物。
【請求項８】
前記DPA含有物質が、DPAの低級アルキルエステルおよびDPAを含むグリセリンエステルからなる群から選択される１種または２種以上のDPA含有脂質である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記DPA含有脂質が微生物由来である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記微生物が、スラウストキトリウム（Thraustochytrium）属、シゾキトリウム（Schizochytrium）属、ジャポノキトリウム（Japonochytrium）属、およびウルケニア（Ulkenia）属からなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜10のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる、ヒト以外の哺乳動物においてアラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持する方法。
【請求項１２】
ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための組成物の製造方法であって：
対象体における単位期間当たりのω３系不飽和脂肪酸の平均摂取量を特定する工程；
該ω３系不飽和脂肪酸の摂取によって該対象体にもたらされるアラキドン酸の低下を推定する工程；および
該アラキドン酸の低下を防ぐために有効な量の4,7,10,13,16−ドコサペンタエン酸（DPA）含有物質を含有する、単位用量の該組成物を調製する工程、
を包含する、方法。
【請求項１３】
ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための組成物の製造方法であって：
該組成物に含有させるべき、単位用量当たりのω３系不飽和脂肪酸の含有量を特定する工程；
該ω３系不飽和脂肪酸の摂取によって対象体にもたらされるアラキドン酸の低下を推定する工程；および
該アラキドン酸の低下を防ぐために有効な量の4,7,10,13,16−ドコサペンタエン酸（DPA）含有物質、およびω３系不飽和脂肪酸含有物質を含有する、単位用量の該組成物を調製する工程、
を包含する、方法。
【請求項１４】
前記DPA含有物質およびω３系不飽和脂肪酸含有物質がDPAおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質であり、そして前記組成物中の全脂肪酸に対して、DPAが0.1％以上である、請求13に記載の方法。
【請求項１５】
前記DPA含有物質およびω３系不飽和脂肪酸含有物質がDPAおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質であり、そして前記組成物中の全脂肪酸に対して、DPAが0.1％以上、かつ4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸（DHA）が0.1％以上である、請求項13に記載の方法。
【請求項１６】
前記DPA含有物質およびω３系不飽和脂肪酸含有物質がDPAおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質であり、そして前記組成物中の全脂肪酸に対して、DPAが0.1％以上、DHAが0.1％以上、かつ5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸（EPA）が20％以下である、請求項13に記載の方法。
【請求項１７】
前記DPAおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質が、DPAの低級アルキルエステル、ω３系不飽和脂肪酸の低級アルキルエステル、ならびにDPAおよび／またはω３系不飽和脂肪酸を構成成分として含むグリセリンエステルからなる群から選択される１種または２種以上を含む、請求項14〜16のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
アラキドン酸（ARA）、4,7,10,13,16−ドコサペンタエン酸（DPA）および4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸（DHA）を含有する脂質であって、ARA／DHA（重量比）が0.03〜0.4であり、DPA／DHA（重量比）が0.07以上であり、かつ5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸（EPA）／DHA（重量比）が0.05以下である、脂質。
【請求項１９】
前記DPA／DHA（重量比）が0.07〜5.0である、請求項18に記載の脂質。
【請求項２０】
前記脂質が、１種の微生物を培養して得られる脂質、または異なる複数種の微生物をそれぞれ培養して得られる脂質の混合物である、請求項18または19に記載の脂質。
【請求項２１】
前記脂質が、ARA、DPAおよび／またはDHAを構成成分として含むグリセリンエステルを含む、請求項18〜20のいずれか１項に記載の脂質。
【請求項２２】
前記脂質が、ARA、DPAおよび／またはDHAを構成成分として含むトリグリセリドを含む、請求項18〜21のいずれか１項に記載の脂質。
【請求項２３】
請求項18〜22のいずれかに記載の脂質を含有する、栄養補助食品。
【請求項２４】
乳児用調製乳、未熟児用調製乳、幼児用食品、妊産婦用食品、老人用食品、または成人用食品である、請求項23に記載の栄養補助食品。
【請求項２５】
請求項18〜22のいずれか１項に記載の脂質を含有する、動物用飼料。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、アラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するための４、７、１０、１３、１６−ドコサペンタエン酸（以下「ＤＰＡ」ともいう）含有物質の使用に関し、特に、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための４、７、１０、１３、１６−ドコサペンタエン酸含有物質の使用に関する。
背景技術
不飽和脂肪酸には代表的な２つの系列、ω３系とω６系とがある。ここでωとは、脂肪酸のメチル基末端から数えて最初の二重結合がある炭素までの数を示す。最近では、ω６系不飽和脂肪酸とω３系不飽和脂肪酸との比率が重要視されるようになった。
ω６系のリノール酸、ジホモ−γ−リノレン酸およびアラキドン酸などと、ω３系のα−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などの各種脂肪酸は、それぞれ異なった生理作用を呈することが確認されている。同時に重要なことに、これら２系列の不飽和脂肪酸は、お互いに相手の生理作用に対して強い影響力を与える。これらの不飽和脂肪酸は、ヒトの体内で生合成ができず、しかも両系列間での相互交換がない。従って、生体内におけるω３系およびω６系不飽和脂肪酸の比率は、その摂取源（たとえば食物）における比率を反映し得る。
このような中、日本人の栄養調査の結果から、１９９４年の日本人の栄養所要量の改定（厚生省  第５次改訂日本人の栄養所要量、５６〜５８頁、１９９４）において、摂取するω６系不飽和脂肪酸とω３系不飽和脂肪酸との比率を４：１程度にするのが望ましいとされた。
また、最近の日本人の食生活は欧米化が進み、肉類を中心とした食事の機会が大幅に増え、ω３系に比べてω６系の不飽和脂肪酸の摂取が増加し、それに伴って動脈硬化性疾患である心筋梗塞や脳血栓などの死亡率が急激に増加している。この状態を改善するために、５、８、１１、１４、１７−エイコサペンタエン酸（以下「ＥＰＡ」ともいう）および４、７、１０、１３、１６、１９−ドコサヘキサエン酸（以下「ＤＨＡ」ともいう）などの、ω３系不飽和脂肪酸を高濃度に濃縮して添加した栄養補助食品などが開発されている。
ω３系不飽和脂肪酸ではＥＰＡから、そしてω６系不飽和脂肪酸ではジホモ−γ−リノレン酸およびアラキドン酸から、エイコサノイド（プロスタグランジン、ロイコトリエン、トロンボキサンなど）が生合成され、それぞれが異なった生理作用を示す。それだけでなく、ω３系およびω６系の不飽和脂肪酸は、それ自体が、他の系列の脂肪酸生合成経路を抑制する。例えば、ＥＰＡを摂取すれば、ω６系の脂肪酸生合成の出発脂肪酸であるリノール酸からγ−リノレン酸への変換をつかさどるΔ６不飽和化酵素、γ−リノレン酸からジホモ−γ−リノレン酸への変換をつかさどる鎖長延長酵素、および、ジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への変換をつかさどるΔ５不飽和化酵素がそれぞれ抑制され、結果として最終産物であるアラキドン酸（以下「ＡＲＡ」ともいう）が著しく低下する。これを補うには、ＡＲＡの前駆体となる脂肪酸（例えば、リノール酸、γ−リノレン酸など）を摂取しても効果が少なく、直接、ＡＲＡを摂取する必要があるとされてきた。
さらに、近年、マグロの眼窩脂肪などのＤＨＡを高濃度に含有する魚原料の発見、および脂肪酸を高度に精製する技術の発達から、ＤＨＡの生理活性機能の解明、およびその実用化が進められている。ＤＨＡの生理活性機能としてコレステロール低下作用、抗血液凝固作用、および制癌作用などが明らかになってきた。また、脳代謝系に関して、ＤＨＡが、記憶学習能力の向上、老人性痴呆症の予防、およびアルツハイマー病の治療に効果があることが明らかになってきている。さらに、ＤＨＡは、稚魚の成長に必須の脂肪酸であることも明らかとなっている。以上の理由から、ＤＨＡは各種食品、飼料、および餌料に使用されている。ＤＨＡもまた、ＡＲＡへ至るω６系不飽和脂肪酸の生合成系を抑制し、その抑制はむしろＥＰＡより強いことが知られている。従って、ＤＨＡ単独投与による副次的効果としての、ＡＲＡの低下が問題となっている。
ω３系不飽和脂肪酸を医薬品として、特定の疾患に対して、限られた期間だけ投与する場合、またはω３系不飽和脂肪酸が低下あるいは完全に不足している状態を補う場合であれば、ＤＨＡなどの単独投与でも、ほとんど問題ないといえる。しかし、疾病の予防として、ω３系不飽和脂肪酸を摂取する場合には、ω６系とω３系との脂肪酸のバランスを考慮する必要がある。ω３系不飽和脂肪酸の摂取によるＡＲＡの低下を抑制するために、従来はＡＲＡを直接摂取する必要があった。しかし、ＡＲＡは、２シリーズのプロスタグランジンや４シリーズのロイコトリエンなどのエイコサノイドの直接の前駆物質であるため、摂取量のコントロールが難しい。
ＡＲＡの不足状態は、ω３系不飽和脂肪酸の摂取によって生じるものに限られない。例えば、乳幼児、老人、ならびに肝臓病などの成人病患者およびその予備軍では、リノール酸からアラキドン酸への生合成系が弱く、明らかに体内のアラキドン酸が不足しがちである。病気の状態においては、体内における中心的防御および修復機構のために、プロスタグランジンおよびその前駆体としてのアラキドン酸の高需要が存在する。従って、病人はしばしば、その回復と生存とに寄与し得るアラキドン酸の不足に苦しむ。また、年齢に関係なく、不適当な栄養によってアラキドン酸不足に陥りがちである。さらに、脂肪の摂取が制限されている人（例えば、高脂血症、糖尿病、肥満など）においても、アラキドン酸が不足しがちである。
従って、ＡＲＡの不足状態を改善し、生体内の脂肪酸バランスを維持するための技術、特に、ω３系不飽和脂肪酸の摂取によるアラキドン酸の低下を防ぐための、アラキドン酸の直接摂取にかわるより安全な代替技術が強く望まれていた。発明の開示
本発明は、上記課題の解決を意図するものであり、アラキドン酸の不足状態を改善し、生体内の脂肪酸バランスを維持するための新規な技術、特に、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための新規な技術を提供するものである。
本発明者らは、上記の目的を達成するため種々研究した結果、ω６系のドコサペンタエン酸（４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸、以下「ＤＰＡ」ともいう）が、アラキドン酸が不足した状態の生体内、特にω３系不飽和脂肪酸の摂取によりアラキドン酸が低下した状態においてアラキドン酸（ＡＲＡ）に変換されること、およびその結果として、生体内の脂肪酸バランスに影響し得るレベルでＡＲＡを増加させ、脂肪酸バランスを維持する作用を示すことを見いだし、この知見に基づいて本発明を完成した。
本発明は１つの局面において、アラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するためのＤＰＡ含有物質の使用を提供する。本発明はまた別の局面において、アラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するための組成物であって、単位用量当たり、アラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するために有効な量のＤＰＡ含有物質を含有する組成物を提供する。
本発明は他の局面において、上記いずれかの組成物を投与する工程を包含する、ヒト以外の哺乳動物のアラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持する方法を提供する。
本発明の適用により、アラキドン酸が不足している状態の生体内、例えば、肝臓および／または血清中において、アラキドン酸の有意な増加が得られ、脂肪酸バランスが維持される。
本発明は他の局面において、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐためのＤＰＡ含有物質の使用を提供する。本発明はまた別の局面において、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための組成物であって、単位用量当たり、アラキドン酸の低下を防ぐために有効な量のＤＰＡ含有物質を含有する組成物を提供する。
上記いずれかの使用および組成物において、ＤＰＡ含有物質は、ＤＰＡの低級アルキルエステルおよびＤＰＡを構成物質として含むグリセリンエステルからなる群から選択される１種または２種以上のＤＰＡ含有脂質であり得る。このＤＰＡ含有脂質は、微生物由来であり得る。微生物は、スラウストキトリウム属、シゾキトリウム属、ジャポノキトリウム属、およびウルケニア属からなる群から選択され得る。
上記いずれかの組成物は、食品、食品添加剤、医薬品、医薬品添加剤、飼料、または餌料であり得る。
本発明は他の局面において、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための組成物の製造方法であって：対象体における単位期間当たりのω３系不飽和脂肪酸の平均摂取量を特定する工程；ω３系不飽和脂肪酸の摂取によって対象体にもたらされるアラキドン酸の低下を推定する工程；およびアラキドン酸の低下を防ぐために有効な量の４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）含有物質を含有する、単位用量の組成物を調製する工程、を包含する方法を提供する。
本発明は他の局面において、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐための組成物の製造方法であって：組成物に含有させるべき、単位用量当たりのω３系不飽和脂肪酸の含有量を特定する工程；ω３系不飽和脂肪酸の摂取によって対象体にもたらされるアラキドン酸の低下を推定する工程；およびアラキドン酸の低下を防ぐために有効な量の４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）含有物質、およびω３系不飽和脂肪酸含有物質を含有する、単位用量の該組成物を調製する工程、を包含する方法を提供する。
上記ＤＰＡ含有物質およびω３系不飽和脂肪酸含有物質はＤＰＡおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質であり得る。そして、上記組成物中の全脂肪酸に対して、ＤＰＡが０．１％以上であるか、ＤＰＡが０．１％以上、かつ４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が０．１％以上であるか、または、ＤＰＡが０．１％以上、ＤＨＡが０．１％以上、かつ５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）が２０％以下であり得る。
上記ＤＰＡおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質は、ＤＰＡの低級アルキルエステル、ω３系不飽和脂肪酸の低級アルキルエステル、ならびにＤＰＡおよび／またはω３系不飽和脂肪酸を構成成分として含むグリセリンエステルからなる群から選択される１種または２種以上を含み得る。
特に、上記ＤＰＡおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質は、ＤＰＡエチルエステルおよびω３系不飽和脂肪酸エチルエステルを含むか、または、ＤＰＡおよび／またはω３系不飽和脂肪酸を構成成分として含むトリグリセリドを含み得る。
本発明は他の局面において、アラキドン酸（ＡＲＡ）、４，７，１０，１３，１６−ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）および４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有する脂質であって、ＡＲＡ／ＤＨＡ（重量比）が０．０３〜０．４であり、ＤＰＡ／ＤＨＡ（重量比）が０．０７以上であり、かつ５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）／ＤＨＡ（重量比）が０．０５以下である脂質を提供する。特に、ＤＰＡ／ＤＨＡ（重量比）は、０．０７〜５．０であり得る。
上記脂質は、１種の微生物を培養して得られる脂質、または異なる複数種の微生物をそれぞれ培養して得られる脂質の混合物であり得る。
上記いずれかの脂質は、ＡＲＡ、ＤＰＡおよび／またはＤＨＡを構成成分として含むグリセリンエステルを含み得、特に、ＡＲＡ、ＤＰＡおよび／またはＤＨＡを構成成分として含むトリグリセリドを含み得る。
本発明は他の局面において、上記いずれかの脂質を含有する栄養補助食品を提供する。この栄養補助食品は、乳児用調製乳、未熟児用調製乳、幼児用食品、妊産婦用食品、老人用食品または病人用食品であり得る。
本発明は他の局面において、上記いずれかの脂質を含有する動物用飼料を提供する。
ＤＰＡがレトロコンバージョンによりアラキドン酸に変換され得ることは、以前に報告されている（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ４３１：１−６（１９９８）；Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ，  １３７：４２０−４２６（１９６７）；Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ，  ２１８：２９−３５（１９７０）；Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、８３：２３４−２３８（１９６４））。しかし、これらの報告では、必須脂肪酸欠乏食で飼育して極端に組織中のアラキドン酸を低下させたラットに、ＤＰＡを投与した場合に起こるアラキドン酸への変換、さらに、正常動物への投与実験でも、ＤＰＡが特異的に高い睾丸中で起こるアラキドン酸への変換を開示するに止まる。しかしながら以前の報告により示されるＤＰＡのアラキドン酸への変換は、必須脂肪酸欠乏食という特殊な環境で飼育された動物での変化、あるいは特異的な組織中での短時間の変化のみである。一般栄養状態でＤＰＡを飼料などとして長期間投与したとき、肝臓、血清中などで、不足しているアラキドン酸を有意に高め、脂肪酸バランスを維持するか否かは、明らかにされていない。また、ω３系不飽和脂肪酸の摂取に伴うアラキドン酸の低下を、ＤＰＡが抑制することについては、従来何ら示されていない。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明をより詳細に説明する。
（ＡＲＡの不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持させるためのＤＰＡ含有物質の利用）
本発明は、不足している生体内のＡＲＡを増加させ、脂肪酸のバランスを維持させるためのＤＰＡ含有物質の使用を教示する。この使用において有用な組成物は、単位用量当たり、ＡＲＡの不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するために有効な量のＤＰＡ含有物質を含有する。
本明細書において「ＤＰＡ含有物質」とは、ＤＰＡを生体に摂取させるために適切な任意の化学的および物理的形態で含有する物質を意味する。ＤＰＡ含有物質の例としては、遊離のＤＰＡの他に、ＤＰＡの無機塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、およびカルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩を含む無毒性の金属塩）および有機塩（例えば、アンモニウム塩）、ＤＰＡを含有する脂質以外の誘導体（例えば、ＤＰＡのアミドおよびそのアルキル置換体）、およびＤＰＡを含有する脂質（単に「ＤＰＡ含有脂質」ともいう）が挙げられる。ＤＰＡ含有脂質は、物理的安定性、生体吸収性、生体の主要構成形態などの点で、好ましいＤＰＡ含有物質である。
本明細書において「脂質」とは、その分子内で、高級脂肪酸が何らかの化学結合、代表的にはエステル結合を形成した、水に不溶でかつエーテル、クロロホルム、ベンゼンなどの有機溶媒に可溶な物質をいう。ＤＰＡ含有脂質の例としては、ＤＰＡの低級アルキルエステルおよびＤＰＡを構成成分として含むグリセリンエステルが挙げられる。
本明細書において「ＤＰＡの低級アルキルエステル」とは、炭素数１〜６個、好ましくは炭素数１〜４個、より好ましくは炭素数１〜３個の低級アルコールと、ＤＰＡとのエステルをいう。生体受容性、生体内でエステル結合が加水分解を受けて遊離するアルコールの安全性の面などの点で、特にエチルエステルが好ましい。また、「ＤＰＡを含むグリセリンエステル」または「ＤＰＡを構成成分として含むグリセリンエステル」とは、グリセリン（グリセロール）１分子に対して、少なくとも１分子のＤＰＡがエステル結合した物質をいう。その例として、モノアシルグリセリド、ジアシルグリセリド、トリアシルグリセリド、グリセロリン脂質、およびグリセロ糖脂質などが挙げられる。食品への適用を考慮した場合、食用油脂形態などの点で、トリアシルグリセリド（単に「トリグリセリド」ともいう）が好ましい。
当業者には明かなように、ＤＰＡ含有脂質は以上の例に限定されず、スフィンゴリン脂質および他のリン脂質、ならびにスフィンゴ糖脂質および他の糖脂質など、上記の定義に包含される任意のＤＰＡ含有物質を含む。
組成物の単位用量、ならびにＡＲＡの不足状態を改善し、生体内の脂肪酸バランスを維持するために有効な単位用量当りのＤＰＡ含有物質の含有量は、対象となる生体（ヒトまたは他の哺乳動物）の種類、性別、年齢、体重、健康状態もしくは疾患の状態などに応じて、当業者が適宜設定し得る。「ＡＲＡの不足状態を改善し、生体内の脂肪酸バランスを維持するために有効」とは、当該ＤＰＡ含有物質の摂取によって、生体内におけるＡＲＡの有意な増加をもたらし、正常値よりも低下した生体内のＡＲＡを正常値に戻し維持するのに十分であることをいう。生体内におけるＡＲＡの増加の有無は、当業者に公知の任意の生化学的および／または分析化学的手法によって測定し得る。限定的でない例として、ヒト成人の生体内においてＡＲＡの不足状態を改善し脂肪酸バランスを維持するには、一日一回摂取するための単位用量中に、遊離のＤＰＡに換算して０．０００１ｍｇ〜１００ｇ、好ましくは０．００１ｍｇ〜１０ｇ、より好ましくは０．５ｍｇ〜５ｇの範囲のＤＰＡ含有物質を含有する組成物が好ましい。
本発明によるＤＰＡ含有物質の利用、およびＤＰＡ含有物質を含有する組成物の投与は、本明細書による出願に対して適用される特許法が要求する限りにおいて、医師によって、および医師の処方箋に従って行われる利用および投与を除外する。従って、上記の組成物を投与する工程を含む、ＡＲＡの不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持する方法の実施にあたって、その対象体はヒト以外の哺乳動物に限定され得る。
（ＡＲＡの低下を防ぐためのＤＰＡ含有物質の利用）
ＤＰＡ含有物質は、特に、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うＡＲＡの低下を防ぐ目的で利用し得る。有用な組成物は、単位用量当たり、ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うＡＲＡの低下を防ぐために有効な量のＤＰＡ含有物質を含有する。ここで「アラキドン酸（ＡＲＡ）の低下を防ぐために有効」とは、ω３系不飽和脂肪酸を摂取する対象体の生体内において、ＡＲＡの低下の程度を有意に減少させるに十分であること、好ましくは、ＡＲＡの量をω３系不飽和脂肪酸の摂取がなかった場合と同等のレベルにするに十分であることをいう。
ω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うＡＲＡの低下を防ぐための組成物の製造方法には、２つの態様が含まれる。一つは、当該組成物とは別にω３系不飽和脂肪酸の摂取源がある場合であり、もう一つは、当該組成物がω３系不飽和脂肪酸の摂取源を兼ねる場合である。
前者の場合には、まず、ω３系不飽和脂肪酸を摂取する対象体における単位期間当たりのω３系不飽和脂肪酸の平均摂取量が特定される。特定された平均摂取量に基づいて、ω３系不飽和脂肪酸の摂取によって対象体にもたらされるＡＲＡの低下が推定される。他方、後者の場合には、まず、組成物中に併せて含有させるべき、単位用量当たりのω３系不飽和脂肪酸の含有量が特定される。これは、ω３系不飽和脂肪酸（例えば、ＤＨＡおよび／またはＥＰＡ）の、本来意図される用途に応じて決定し得る。次に、特定された含有量のω３系不飽和脂肪酸を摂取することによって、対象体にもたらされるＡＲＡの低下が推定される。いずれの場合も、推定された低下のレベルに応じて、ＡＲＡの低下を防ぐために有効なＤＰＡの量が設定される。以上のプロセスに必要とされる具体的操作を、当業者は容易に理解し得、個々の対象体およびＤＰＡ含有物質などに応じて適宜行い得る。このようにして、有効量のＤＰＡ含有物質を含有し、任意にω３系不飽和脂肪酸含有物質をも含有する、単位用量の組成物を調製することができる。
上記組成物において、ＤＰＡ含有物質およびω３系不飽和脂肪酸含有物質は、好ましくはＤＰＡおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質である。ＤＰＡおよびω３系不飽和脂肪酸を含有する脂質の例としては、ＤＰＡの低級アルキルエステルとω３系不飽和脂肪酸の低級アルキルエステルとの混合物、あるいはＤＰＡおよび／またはω３系不飽和脂肪酸を構成成分として含むグリセリンエステルが挙げられる。ω３系不飽和脂肪酸含有脂質は、好ましくは、ＤＨＡおよび／またはＥＰＡである。組成物の一つの例は、組成物中の全脂肪酸に対して、ＤＰＡが０．１％以上、好ましくは、１．０％以上、より好ましくは、３．５％以上であることを特徴とし得る。組成物の別の例は、組成物中の全脂肪酸に対して、ＤＰＡが０．１％以上、好ましくは、１．０％以上、より好ましくは、３．５％以上であり、かつ、ＤＨＡが０．１％以上、好ましくは、１．０％以上、より好ましくは、５．０％以上であることを特徴とし得る。組成物のさらに別の例は、組成物中の全脂肪酸に対して、ＤＰＡが０．１％以上、好ましくは、１．０％以上、より好ましくは、３．５％以上であり、ＤＨＡが０．１％以上、好ましくは、１．０％以上、より好ましくは、５．０％以上であり、かつ、ＥＰＡが２０％以下、好ましくは、５．０％以下、より好ましくは、１．０％以下であることを特徴とし得る。
生体内のアラキドン酸の低下を防ぐ方法として、アラキドン酸を直接投与するのが簡単であるが、生体の必要量を考慮して投与したとしても、その量には個体差があるため、場合によっては過剰摂取となり得る。アラキドン酸がエイコサノイドの直接の前駆物質であるのに対し、本発明の場合、投与したＤＰＡを生体が必要に応じて、すなわちアラキドン酸の低下に応じてレトロコンバージョンすることによりアラキドン酸が供給され、アラキドン酸が正常値に戻ればレトロバージョンは停止する。アラキドン酸の正常値は各組織においてまちまちであるが、ＤＰＡのレトロコンバージョンは各組織の正常値に合わせて制御される。そしてＤＰＡのアラキドン酸へのレトロコンバージョンが停止すれば、余剰としてＤＰＡが残るが、ＤＰＡはエイコサノイドの直接の前駆物質ではないため、また前述の通りＤＰＡにはＡＲＡの量を必要以上に増加させるという効果はなく、有効なＡＲＡ供給源として生体内にストックされるため、ＡＲＡを直接投与するよりも生体に及ぼす影響は間接的で穏やかである。
（ＤＰＡ含有物質を含む食品／医薬品）
本発明による上記いずれかの組成物は、その使用形態について特に限定されるものではない。代表的な使用形態は、食品、食品添加剤、医薬品、医薬品添加剤、飼料、および餌料を含む。
例えば、食品組成物の例としては、一般食品の他、機能性食品、栄養補助食品、未熟児用調製乳、乳児用調製乳、乳児用食品、妊産婦食品または老人用食品などを挙げることができる。油脂を含む食品例として、肉、魚、またはナッツなどの本来油脂を含む天然食品、スープなどの調理時に油脂を加える食品、ドーナッツなどの熱媒体として油脂を用いる食品、バターなどの油脂食品、クッキーなどの加工時に油脂を加える加工食品、あるいはハードビスケットなどの加工仕上げ時に油脂を噴霧または塗布する食品などが挙げられる。さらに、通常は油脂を含まない、農産食品、醗酵食品、畜産食品、水産食品、または飲料などに添加することもできる。食品添加剤とは、これらの任意の食品の調製に使用し得る中間製品を総称していう。食品の定義には、機能性食品も含まれる。機能性食品および医薬品は、例えば、経腸栄養剤、粉末、顆粒、トローチ、内服液、懸濁液、乳濁液、シロップ、カプセル剤などの加工形態で提供され得る。医薬品添加剤とは、任意の医薬品の調製に使用し得る中間製品を総称していう。本発明の組成物はまた、家畜など動物の飼育のための飼料、ならびに魚貝類、甲殻類、稚仔魚などの養殖のための餌料としても利用され得る。
（ＤＰＡ含有物質の調製および精製）
本発明におけるＤＰＡ含有物質は、合成および天然の任意の供給源に由来し、例えば、化学的に合成されたもの、および動植物源から得られたものであり得る。動植物源の例として、魚油、魚粉、魚粕、魚油エキスなどが挙げられる。魚油としては、イワシ油、ニシン油、マグロ油、カツオ油、サンマ油、メンハーデン油などが挙げられる。
ＤＰＡ含有物質は、好ましくは、ＤＰＡ生産能を有する微生物を培養して得られる菌体由来のＤＰＡ含有脂質であり得る。微生物由来のＤＰＡ含有脂質  は、菌体自体、菌体から抽出した抽出脂質、抽出脂質をさらに精製した精製脂質、および、抽出脂質または抽出脂質をさらに化学反応（例えば、エステル化）により改変した改変脂質を含む、種々の形態で使用することができる。
ＤＰＡ生産能を有する微生物の例として、以下のいずれかの分類に属する微生物を挙げることができる：
スラウストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、
シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、
ジャポノキトリウム（Ｊａｐｏｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、
ウルケニア（Ｕｌｋｅｎｉａ）属、
ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属、
シクロテラ（Ｃｙｃｌｏｔｅｌｌａ）属、
エミリアニア（Ｅｍｉｌｉａｎｉａ）属、
イソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）属、
ナノクロロプシス（Ｎａｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）属、
カエトセロス（Ｃｈａｅｔｏｃｅｒｏｓ）属、
ファエオダクチルム（Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ）属、
アンフィディニウム（Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ）属、
ゴニアウラクス（Ｇｏｎｙａｕｌａｘ）属、
ペリディミウム（Ｐｅｒｉｄｉｍｉｕｍ）属、
クロオモナス（Ｃｈｒｏｏｍｏｎａｓ）属、
クリプトモナス（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ）属、
ヘミセルミス（ｈｅｍｉｓｅｌｍｉｓ）属、
キロモナス（Ｃｈｉｌｏｍｏｎａｓ）属、
クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）属、
ヒスチオブランクス（Ｈｉｓｔｉｏｂｒａｎｃｈｕｓ）属、
コリフェエノイデス（Ｃｏｒｙｐｈｅｎｏｉｄｅｓ）属、
コニディオボラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属、および
エントモフトラ（Ｅｎｔｏｍｏｒｐｈｔｈｏｒａ）属。
上記のなかでも、特に、全脂肪酸に対して高い割合でＤＰＡを産生し得る微生物として、スラウストキトリウム属、シゾキトリウム属、ジャポノキトリウム属、ウルケニア属、ビブリオ属、シクロテラ属、およびエミリアニア属のいずれかに属する微生物を挙げることができる。
上記微生物のより具体的な例としては、以下のものを挙げることができる：深海から分離された細菌ビブリオ・マリナス（Ｖｉｂｒｉｏ  ｍａｒｉｎｕｓ）ＡＴＣＣ  １５３８１；深海魚の腸内から分離されたビブリオ属細菌；鞭毛細菌（例えば、スラウトキトリウム・アウレウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ａｕｒｅｕｍ）ＡＴＣＣ  ３４３０３；スラウトキトリウム・エスピー（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２８２１１、ＡＴＣＣ  ２０８９０およびＡＴＣＣ  ２０８９１；シゾキトリウム・エスピー（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２０８８８およびＡＴＣＣ  ２０８８９（米国特許第５，３４０，７４２号）；スラウトキトリウム属ＳＲ２１（日本農芸化学会誌、第６９号、臨時増刊号、１９９５年７月５日；工業技術院生命工学工業技術研究所  受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５０３４）；ジャポノキトリウム・エスピー（Ｊａｐｏｎｏｃｈｙｔｒｉｕｍ  ｓｐ．）ＡＴＣＣ  ２８２０７（特開平１−１９９５８８号（１９８９））；微細藻類（例えば、シクロテラ・クリプティカ（Ｃｙｃｌｏｔｅｌｌａ  ｃｒｙｐｔｉｃａ）；およびエミリアニア・エスピー（Ｅｍｉｌｌａｎｉａ  ｓｐ．）（特開平５−３０８９７６号（１９９３））。これら菌株は、例えばアメリカン  タイプ  カルチャー  コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）から、なんら制限なく入手することができる。
ＤＰＡ生産能を有する微生物としては、さらに、本発明者らが海水から分離したウルケニア（Ｕｌｋｅｎｉａ）属に属するＳＡＭ２１８０株およびＳＡＭ２１７９株を、好適に使用することができる。ＳＡＭ２１７９株は、工業技術院生命工学工業技術研究所（住所：日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号）に１９９６年７月２３日付けで寄託され、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−５６０１号を取得している。
ＤＰＡ生産能を有する微生物は、常法に従って培養することができる。例えば、その菌株の１白金耳を、胞子、もしくは菌糸を、または予め培養して得られた前培養を、液体培地または固体培地に接種して培養することができる。培養によって、菌体内にＤＰＡを含有した脂質が蓄積される。
培養終了後、培養液から、遠心分離および濾過などの常用の固液分離手段により培養菌体を得る。培養菌体を十分水洗して、湿菌体を得る。これを乾燥することにより、乾燥菌体を得ることができる。乾燥は、凍結乾燥、風乾などによって行うことができる。このようにして得られた湿菌体または乾燥菌体は、ＤＰＡ含有脂質を含むので、直接、本発明の目的のために使用することができる。好ましくは、さらに乾燥菌体を窒素気流下で有機溶媒によって抽出処理することにより、ＤＰＡ含有脂質を抽出する。有機溶剤としては、エーテル、ヘキサン、メタノール、エタノール、クロロホルム、ジクロロメタン、石油エーテルなどを用いることができる。メタノールと石油エーテルとの交互抽出、およびクロロホルム−メタノール−水の一層系の溶媒を用いた抽出によっても良好な結果を得ることができる。抽出物から減圧下で有機溶剤を留去することにより、抽出物としてのＤＰＡ含有脂質が得られ、本発明の目的のために使用することができる。
上記のようにして得られた抽出脂質中には、各種の高度不飽和脂肪酸が脂質の構成成分として含まれている。これらを直接、適切な精製工程（例えば、クロマトグラフィー）に付して、種類の異なる脂肪ごとに分離することも可能である。より好ましくは、抽出脂質中の高度不飽和脂肪酸を低級アルコールとのエステルに変換した後に、（例えば、ＤＰＡエチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、ＥＰＡエチルエステルなどとして）精製することが好ましい。このようなエステル化により、ＤＰＡ含有脂質としてのＤＰＡエステルを、ＤＰＡを含有しない他の脂質成分から容易に分離することができる。微生物の培養中に生成し得る他の脂肪酸、例えばパルミチン酸、オレイン酸など（これらも、高度不飽和脂肪酸のエステル化に際してエステル化される）からの分離も容易になる。
高度不飽和脂肪酸のエステル化は、周知の条件に従って行うことができる。例えば、エチルエステルを得るには、上記の抽出脂質を、無水エタノール−塩酸５〜１０％溶液、ＢＦ３−エタノール１０〜５０％溶液などの試薬により、室温にて１〜２４時間処理することが好ましい。
上記処理液から高度不飽和脂肪酸エチルエステルを回収するには、ヘキサン、エーテル、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出することが好ましい。次に、この抽出液を無水硫酸ナトリウムなどの乾燥剤により乾燥した後、有機溶媒を好ましくは減圧下で留去することにより、脂肪酸エステルを主成分として含む混合物が得られる。この混合物には、目的とするＤＰＡエチルエステルの他に、各種脂肪酸のエチルエステルが含まれている。この混合物はそのまま、本発明の目的のために使用することができる。必要であれば、混合物からＤＰＡエチルエステルを単離するために、カラムクロマトグラフィー、低温結晶化法、尿素包接法、液々向流分配クロマトグラフィーなどを単独で、または組み合わせて使用することができる。得られた精製ＤＰＡエチルエステルは、本発明の目的のために特に好適に使用することができる。
以上のように単離された精製ＤＰＡエチルエステルから、遊離のＤＰＡを得るためには、エステルをアルカリで加水分解した後、エーテル、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出すればよい。得られた遊離のＤＰＡおよびその塩もまた、本発明の目的のために使用することができる。遊離のＤＰＡをそのエステル化物を経ないで調製するためには、上記の抽出脂質を適切な条件（例えば、５％水酸化ナトリウムにより室温にて２〜３時間）でアルカリ加水分解する。分解反応液から、脂肪酸の抽出、精製のための常法に従って、遊離のＤＰＡを得ることができる。（ＤＰＡを含有する新規な脂質）
本発明はまた、ＤＰＡ含有脂質として好適に利用し得る新規な脂質を教示する。この脂質は、ＡＲＡ、ＤＰＡ、およびＤＨＡ（および任意にＥＰＡ）を含有し、ＡＲＡ／ＤＨＡ、ＤＰＡ／ＤＨＡ、およびＥＰＡ／ＤＨＡの３つの比率（それぞれ重量比で表される）の組合せによって特徴付けられる。ＡＲＡ／ＤＨＡは、代表的には０．０３〜０．４、好ましくは０．０５〜０．４、より好ましくは０．１〜０．４である。ＤＰＡ／ＤＨＡは、代表的には０．０７以上、好ましくは０．０７〜５．０、より好ましくは０．０７〜３．０、さらに好ましくは０．０７〜０．５である。ＥＰＡ／ＤＨＡは、代表的には０．０５以下、好ましくは０．０４％以下、より好ましくは０．０３％以下である。一般に、３つの比率がこれらの範囲内にあるとき、ＤＰＡの量は、ω３系不飽和脂肪酸（すなわち、ＤＨＡ、および存在する場合はＥＰＡの）摂取に伴うＡＲＡの低下を防ぐために有効であり得る。
上記脂質は、好ましくは１種の微生物を培養して得られる脂質（すなわち、ある微生物の単一または複数バッチの培養により得られる菌体由来の脂質）、または異なる複数種の微生物をそれぞれ培養して得られる脂質（すなわち、異なる２種以上の微生物のそれぞれの単一または複数バッチの培養により得られる菌体由来の脂質）の混合物である。本発明の脂質は、例えば、スラウストキトリウム属、シゾキトリウム属、ジャポノキトリウム属またはウルケニア属に属する微生物のようにＤＰＡおよびＤＨＡを産生でき、しかもＥＰＡをほとんど産生しない微生物を培養して得られる脂質と、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属のモルティエレラ亜属に属するアルピナ（ａｌｐｉｎａ）、バイニエリ（ｂａｎｉｅｒｉ）、エロンガタ（ｅｌｏｎｇａｔａ）、エキシグア（ｅｘｉｇｕａ）、ミネッティシマ（ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍａ）、バーデイシラタ（ｖｅｒｔｉｃｉｌｌａｔａ）、フイクロフィラ（ｈｙｇｒｏｐｈｉｌａ）、ポリセファラ（ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌａ）、およびシュマッカリ（ｓｃｈｍｕｃｋｅｒｉ）種などの、ＡＲＡを産生でき、しかもＥＰＡをほとんど産生しない微生物を培養して得られる脂質とを組み合わせることによって、得ることができる。この脂質において、ＡＲＡ、ＤＰＡ、およびＤＨＡ（および任意にＥＰＡ）のそれぞれは、グリセリンエステル中に含まれて存在し得、特に、トリグリセリド中に含まれて存在し得る。
上記の新規な脂質は、ＡＲＡの不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持するか、またはＡＲＡの低下を防ぐ作用を示しつつ、かつ、ＡＲＡ自体の含量が比較的少ないために、生体に対してＡＲＡ本来の強い生理作用を与えることが少なく、生体への影響が穏やかである点で有用である。従って、この脂質は、ＡＲＡおよびＤＨＡの強化が求められている乳児用調製乳、未熟児用調製乳、幼児用食品、妊産婦用食品、老人用食品および病人用食品を含む栄養補助食品の成分として、あるいは、動物用飼料として好適に利用され得る。
実施例
以下に、実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。これらの実施例は、本発明を限定するものではない。
（実施例１；ＤＰＡ生産能を有する微生物を用いた、ＤＰＡ含有脂質ならびにＤＰＡエチルエステルの製造方法）
ウルケニア属ＳＡＭ２１７９株を、以下の組成を有する培地１２０Ｌを含む容量２００Ｌの培養槽（ジャーファーメンター型）中で、以下の培養条件下で培養した。
（１）培地組成
１）グルコース（ｇ／Ｌ）：                    ６０
２）リン酸カリウム（ｇ／Ｌ）：                  ３
３）硫酸アンモニウム（ｇ／Ｌ）：                ２
４）塩化マグネシウム（ｇ／Ｌ）：                １．３
５）硫酸ナトリウム（ｇ／Ｌ）：                  １
６）塩化カルシウム（ｇ／Ｌ）：                  ０．３
７）コーンスティープリカー（ｇ／Ｌ）：          ０．７
８）ｐＨ：                                      ４．０
（２）培養条件
１）培養温度（℃）：                          ２８
２）通気量（ｖｖｍ）：                          ０．５
３）撹拌速度（ｒｐｍ）：                    ３００
４）ｐＨ調製：１０％（Ｗ／Ｖ）水酸化ナトリウムおよび１Ｍ硫酸によりｐＨ４に保持した。
培養後、遠心分離により菌体を集め、凍結乾燥により乾燥菌体を調製した。その結果、脂質中の全脂肪酸に対してＤＰＡを１２．１％を含有する脂質を５８％含む、乾燥菌体２．４ｋｇを取得した。
次に、得られた乾燥菌体２ｋｇから、ヘキサンを使ってＤＰＡ含有脂質を抽出し、溶媒を除去して得られた抽出油を、脱臭、脱酸、脱ガム、脱色の食品油の精製工程で食品グレードに精製することで、精製油中の全脂肪酸に対しＤＰＡを１２．８％含有する精製油８１５ｇを取得した。さらに、精製油の一部をエチルエステル化し、高速液体クロマトグラフィーにより高純度精製を実施し、９９％ＤＰＡエチルエステル１０ｇを取得した。
（実施例２；ＤＨＡ摂取に伴うＡＲＡの低下の実証）
４週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラットを用い、１週間予備飼育後、以下の２群に分けた。
１）コントロール群
シソ油：サフラワー油＝７：３
２）ＤＨＡ群
菜種油：ＤＨＡエチルエステル＝３：２
各群で記載の油を標準飼料の５％量添加した調製飼料を与え、４週間飼育した。各群に添加した油の脂肪酸組成を、第１表に示す。
0004518674.tif 000002
飼育後、各群のラットから肝臓を摘出し、Ｆｏｌｃｈ法にて脂質を抽出し、メチルエステル化した後、各脂肪酸量をガスクロマトグラフィーで分析した。各群の肝臓中の脂肪酸組成を、第２表に示す。
0004518674.tif 000003
コントロール群とＤＨＡ群とは、ＡＲＡの前駆体であるリノール酸を同程度含む。ＤＨＡ投与によって、有意にＡＲＡの割合が低下したことが理解される。さらに、コントロール群とＤＨＡ群の添加脂質に占めるω３不飽和脂肪酸の割合は、それぞれ４０．３％、４６．５％とほとんど差がないものの、ＤＨＡ添加によるＡＲＡの低下が著しいことが示された。
（実施例３；ＤＨＡ摂取に伴うＡＲＡの低下をＤＰＡ摂取により防ぐ効果−その１）
４週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラットを用い、１週間予備飼育後、以下の２群に分けた。
１）コントロール群
大豆油
２）ＤＰＡ群
実施例１で得た精製油：オリブ油＝４：１
各群で記載の油を標準飼料の５％量添加した調製飼料を与え、４週間飼育した。各群に添加した油の脂肪酸組成を、第３表に示す。
0004518674.tif 000004
飼育後、各群のラットから肝臓を摘出し、Ｆｏｌｃｈ法にて脂質を抽出し、メチルエステル化した後、各脂肪酸量をガスクロマトグラフィーで分析した。各群の肝臓中の脂肪酸組成を、第４表に示す。
0004518674.tif 000005
本実施例のコントロール群（大豆油）は、普通に生活した場合に摂取されるω３系不飽和脂肪酸とω６系不飽和脂肪酸との比率に近い比率を有する。実施例２のＤＨＡ群と比較して、本実施例のＤＰＡ群にはＤＨＡが３４．９％含まれているにかかわらず、ＡＲＡの低下を防ぐことができた。すなわち、本実施例のコントロール群よりもやや低いものの、それに近いＡＲＡの値が示された。その効果は、ＤＨＡに比べて少ない絶対量のＤＰＡによっても十分に奏されることが認められた。
（実施例４；ＤＨＡ摂取に伴うＡＲＡの低下をＤＰＡ摂取により防ぐ効果−その２）
４週齢のＷｉｓｔａｒ系雄ラットを用い、１週間予備飼育後、以下の４群に分けた。
１）リノール酸１５−ＤＰＡ１０群（ＬＡ１５ＤＰＡ１０）
実施例１で得た精製油：サフラワー油＝４：１
２）リノール酸１０−アラキドン酸５−ＤＰＡ１０群（ＬＡ１０ＡＡ５ＤＰＡ１０）
菜種油：アラキドン酸エチルエステル：実施例１で得た精製油
＝１５：５：８０
３）リノール酸１５群（ＬＡ１５）
菜種油：ＤＨＡエチルエステル＝６５：３５
４）リノール酸２５群（ＬＡ２５）
（菜種油：大豆油＝１：１）：ＤＨＡエチルエステル＝６５：３５
各群で記載の油を標準飼料の５％量添加した調製飼料を与え、４週間飼育した。各群に添加した油の脂肪酸組成を、第５表に示す。ＤＨＡ量をほぼ一定（３０〜３５％）にし、ω６系のリノール酸、ＡＲＡ、およびＤＰＡの量をそれぞれ変化させた。
0004518674.tif 000006
飼育後、各群のラットから採血し、肝臓を摘出し、Ｆｏｌｃｈ法にて脂質を抽出し、メチルエステル化した後、各脂肪酸量をガスクロマトグラフィーで分析した。各群の肝臓中の脂肪酸組成を、第６表に示す。
0004518674.tif 000007
各群の血清中の脂肪酸組成を、第７表に示す。
0004518674.tif 000008
第６表の肝臓中の脂肪酸組成の結果より、ＤＰＡを与えていない３群（ＬＡ１５）と４群（ＬＡ２５）とでは、ＤＰＡを与えた１群（ＬＡ１５ＤＰＡ１０）と２群（ＬＡ１０ＡＡ５ＤＰＡ１０）に比べるとアラキドン量が有意に低下した。ＡＲＡの前駆体となるリノール酸を多く与えても（４群）、ＤＨＡの摂取によるＡＲＡの低下は十分に抑制できなかった。第７表の血清中の脂肪酸組成においても、肝臓中の脂肪酸組成の場合と同様の結果が得られた。
（実施例５；ＤＰＡ含有カプセル剤の調製）
ゼラチン１００重量部および食添グリセリン３５重量部に水を加え、５０〜６０℃で溶解し、粘度２００００ｃｐｓのゼラチン皮膜を調製した。次に実施例１で得た精製油９７％、ビタミンＥ油３％を混合し、内容物を調製した。これらを用いて、常法によりカプセル成型および乾燥を行い、１粒あたり１８０ｍｇの内容物を含有するソフトカプセルを製造した。
（実施例６；ＤＰＡ、ＤＨＡ、ＡＲＡ含有油脂の調製）
実施例１で得たＤＰＡ含有精製油と、モルティエレラ・アルピナの培養物より常法によって精製したアラキドン酸含有精製油とを（４：１）で混合した油脂を調製した。得られた混合油脂の脂肪酸組成を、第８表に示す。
0004518674.tif 000009
（実施例７；ＤＰＡ、ＤＨＡ、ＡＲＡ含有カプセル剤の調製）
実施例５と同様の方法でゼラチン皮膜を調製した。次に実施例７で得た油脂９７％と、ビタミンＥ３％とを混合し、内容物を調製した。これらを用いて、常法によりカプセル成型および乾燥を行い、１粒あたり１８０ｍｇの内容物を含有するソフトカプセルを製造した。
産業上の利用可能性
本発明によるＤＰＡ含有物質の使用およびＤＰＡ含有物質を含有する組成物により、アラキドン酸の不足状態を改善し生体内の脂肪酸バランスを維持すること、およびω３系不飽和脂肪酸摂取に伴うアラキドン酸の低下を防ぐことが可能になる。ＤＰＡは、生体内でＡＲＡに変換され、かつＡＲＡとは異なりエイコサノイドの直接の前駆物質ではない。そのため、ＡＲＡの直接投与に代わる、生体に及ぼす影響がより小さい技術が提供される。