(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（Ｉ）
0004521145.tif 000019
［式中、ＲはカプラザマイシンＡではトリデシル基であり、カプラザマイシンＢでは１１−メチル−ドデシル基であり、カプラザマイシンＣではドデシル基であり、カプラザマイシンＥではウンデシル基であり、そしてカプラザマイシンＦでは９−メチル−デシル基である］で示される化合物である、抗生物質カプラザマイシンＡ、カプラザマイシンＢ、カプラザマイシンＣ、カプラザマイシンＥまたはカプラザマイシンＦ、あるいはそれらの製薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
次式（Ｉａ）
0004521145.tif 000020
で示されるカプラザマイシンＡ［請求の範囲１に示される一般式（Ｉ）の化合物でＲがトリデシル基−（ＣＨ２）１２−ＣＨ３である場合の化合物］である請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項３】
次式（Ｉｂ）
0004521145.tif 000021
で示されるカプラザマイシンＢ［請求の範囲１に示される一般式（Ｉ）の化合物でＲが１１−メチル−ドデシル基
0004521145.tif 000022
である場合の化合物］である請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項４】
次式（Ｉｃ）
0004521145.tif 000023
で示されるカプラザマイシンＣ［請求の範囲１に示される一般式（Ｉ）の化合物でＲがドデシル基−（ＣＨ２）１１−ＣＨ３である場合の化合物］である請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項５】
次式（Ｉｅ）
0004521145.tif 000024
で示されるカプラザマイシンＥ［請求の範囲１に示される一般式（Ｉ）の化合物でＲがウンデシル基−（ＣＨ２）１０−ＣＨ３である場合の化合物］である請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項６】
次式（Ｉｆ）
0004521145.tif 000025
で示されるカプラザマイシンＦ［請求の範囲１に示される一般式（Ｉ）の化合物でＲが９−メチル−デシル基
0004521145.tif 000026
である場合の化合物］である請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項７】
ストレプトミセス属に属して、請求の範囲１に記載の一般式（Ｉ）で示される抗生物質カプラザマイシンＡ、カプラザマイシンＢ、カプラザマイシンＣ、カプラザマイシンＥおよびカプラザマイシンＦの少くとも一つを生産する生産菌を培養し、その培養物から、カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの少くとも一つを採取することを特徴とする、請求の範囲１に記載の抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅおよび（または）Ｆの製造方法。
【請求項８】
カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの少くとも一つを生産する菌として、工業技術院生命工学工業技術研究所にブダペスト条約の規約下にＦＥＲＭ  ＢＰ−７２１８の受託番号で寄託されてあるストレブトミセス・エスピーＭＫ７３０−６２Ｆ２を使用する、請求の範囲７に記載の方法。
【請求項９】
請求の範囲１に記載の一般式（Ｉ）で示される抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの少なくとも一つ、あるいはその製薬学的に許容できる塩を有効成分として含有し、また製薬学的に許容される担体を、有効成分と混和して含有する医薬組成物。
【請求項１０】
抗細菌性組成物である請求の範囲９に記載の組成物。
【請求項１１】
請求の範囲１に記載の一般式（Ｉ）で示される抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦを生産する特性を持ち且つ工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ  ＢＰ−７２１８の受託番号で寄託されたストレプトミセス・エスピーＭＫ７３０−６２Ｆ２。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はすぐれた抗菌活性を有する新規な抗生物質であるカプラザマイシン（ｃａｐｒａｚａｍｙｃｉｎ）Ａ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦまたはその製薬学的に許容される塩に関する。また本発明はこれらカプラザマイシン類の製造法に関する。さらに本発明は、それらカプラザマイシン類あるいはそれらの塩を有効成分とする医薬組成物、特に抗菌性組成物に関する。さらにまた、本発明は、それらカプラザマイシン類を生産できる特性を持つ新規な微生物としてストレプトミセス・エスピーＭＫ７３０−６２Ｆ２に関する。
背景技術
細菌感染症の化学療法、特に抗酸性菌の感染症の化学療法においてリファンピシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、バイオマイシン、カプレオマイシン、サイクロセリン等の抗生物質が抗菌剤として使用されている。
細菌感染症の化学療法において、感染症の原因となる細菌が薬剤耐性になることは重大な問題である。特に抗酸性菌の感染症の化学療法においてリファンピシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、バイオマイシン、カプレオマイシン、サイクロセリン等に耐性を有する抗酸性菌が出現し社会的問題となっている。薬剤耐性抗酸性菌の感染症に有効な新しい化学療法剤が強く望まれている。また、化学療法が確立していない非定型抗酸性菌の感染症に有効な新しい化学療法剤も強く望まれている。そのため、従来使用されている既知の抗生物質とは異なり、新規な化学構造を有し且つ優れた抗菌作用などの良い性質を示す新規化合物の発見または創製が強く望まれている。本発明は、上記の要望に応え得る優れた抗菌活性を持つ新規な抗生物質を提供することを目的とする。
発明の開示
本発明者らは有用な抗生物質を発見する目的で研究を行った。その結果、本発明者らによって分離されたストレプトミセス属に属する新しい菌株が新しい構造骨格を有する複数の抗生物質を産生することを見い出した。それらの一群の抗生物質を総括してカプラザマイシン類と称することにした。そしてカプラザマイシン類が各種の抗酸性菌、グラム陽性細菌およびそれらの薬剤耐性菌に強い抗菌活性を示すことを見い出した。さらに研究を続けて、カプラザマイシン類を分析することにより、今回得られたカプラザマイシン類には、５種の化合物が包括されていることを見出し、カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦとそれぞれ命名してそれらの化学構造を決定した。そしてカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦが新規化合物であることを確認し、そしてそれらを総括的に次の一般式（Ｉ）により表せることを知見した。なお、カプラザマイシン類は一般式（Ｉ）に示されるように一つの共通な基本骨格を有するが、側鎖であるＲは相異なる炭素数１１〜１３の直鎖のアルキル基、ないし分岐したアルキル基である。
従って、第１の本発明においては、次の一般式（Ｉ）
0004521145.tif 000002
［式中、ＲはカプラザマイシンＡではトリデシル基であり、カプラザマイシンＢでは１１−メチル−ドデシル基であり、カプラザマイシンＣではドデシル基であり、カプラザマイシンＥではウンデシル基であり、そしてカプラザマイシンＦでは９−メチル−デシル基である］で示される化合物である、抗生物質カプラザマイシンＡ、カプラザマイシンＢ、カプラザマイシンＣ、カプラザマイシンＥおよびカプラザマイシンＦ、あるいはそれらの製薬学的に許容できる塩が提供される。
第１の本発明による新規な抗生物質カプラザマイシン類には、下記の式（Ｉａ）のカプラザマイシンＡ、式（Ｉｂ）のカプラザマイシンＢ、式（Ｉｃ）のカプラザマイシンＣ、式（Ｉｅ）のカプラザマイシンＥおよび式（Ｉｆ）のカプラザマイシンＦが包含される。
（１）次式（Ｉａ）
0004521145.tif 000003
で示されるカプラザマイシンＡ［一般式（Ｉ）でＲがトリデシル基−（ＣＨ２）１２−ＣＨ３である場合の化合物］。
（２）次式（Ｉｂ）
0004521145.tif 000004
で示されるカプラザマイシンＢ［一般式（Ｉ）でＲが１１−メチル−ドデシル基
0004521145.tif 000005
である場合の化合物］。
（３）次式（Ｉｃ）
0004521145.tif 000006
で示されるカプラザマイシンＣ［一般式（Ｉ）でＲがドデシル基−（ＣＨ２）１１−ＣＨ３である場合の化合物］。
（４）次式（Ｉｅ）
0004521145.tif 000007
で示されるカプラザマイシンＥ［一般式（Ｉ）でＲがウンデシル基−（ＣＨ２）１０−ＣＨ３である場合の化合物］。
（５）次式（Ｉｆ）
0004521145.tif 000008
で示されるカプラザマイシンＦ［一般式（Ｉ）でＲが９−メチル−デシル基
0004521145.tif 000009
である場合の化合物］。
第１の本発明による式（Ｉａ）のカプラザマイシンＡの理化学的性状は、次の通りである。
（１）外観
無色粉末
（２）分子式
Ｃ５３Ｈ８７Ｎ５Ｏ２２
（３）高分解能質量分析（ＨＲＦＡＢＭＳ：陽イオンモード）
実験値：１１４６．５９３３（Ｍ＋Ｈ）＋
計算値：１１４６．５９２１
（４）比旋光度
［α］Ｄ２３  −１．４°（ｃ  ０．８３、ＤＭＳＯ）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２６１（７，４００）
添付図面の図１に示す。
（６）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図２に示す。
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトル添付図面の図３に示す。
（８）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図４に示す。
（９）溶解性
メタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、水に可溶でありアセトン、酢酸エチルに不溶である。
（１０）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール：メタノール：水（４：１：２）の溶媒で展開したときのＲｆ値は０．４４である。
第１の本発明のカプラザマイシンＡは両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような無機酸との付加塩があげられる。
第１の本発明による式（Ｉｂ）のカプラザマイシンＢの理化学的性状は、次の通りである。
（１）外観
無色粉末
（２）分子式
Ｃ５３Ｈ８７Ｎ５Ｏ２２
（３）高分解能質量分析（ＨＲＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１４４．５７５０（Ｍ−Ｈ）−
計算値：１１４４．５７６４
（４）比旋光度
［α］Ｄ２３  −２．６°（ｃ  ０．９１、ＤＭＳＯ）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２６１（８，０００）
添付図面の図５に示す。
（６）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図６に示す。
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド：重水（＝１０：１）の混合溶媒中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図７に示す。
（８）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド：重水（＝１０：１）の混合溶媒中で室温にて測定した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図８に示す。
（９）溶解性
メタノール、ＤＭＳＯ、水に可溶でありアセトン、酢酸エチルに不溶である。
（１０）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール：メタノール：水（４：１：２）の溶媒で展開したときのＲｆ値は０．４４である。
本発明のカプラザマイシンＢは両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような各種無機酸との付加塩があげられる。
本発明による式（Ｉｃ）のカプラザマイシンＣの理化学的性状は、次の通りである。
（１）外観
無色粉末
（２）分子式
Ｃ５２Ｈ８５Ｎ５Ｏ２２
（３）高分解能質量分析（ＨＲＦＡＢＭＳ：陽イオンモード）
実験値  １１３２．５７４７（Ｍ＋Ｈ）＋
計算値  １１３２．５７６４
（４）比旋光度
［α］Ｄ２５−１．１°（ｃ  １．３３、ＤＭＳＯ）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２６１（８，３００）
添付図面の図９に示す。
（６）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１０に示す。
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１１に示す。
（８）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１２に示す。
（９）溶解性
メタノール、ＤＭＳＯ、水に可溶でありアセトン、酢酸エチルに不溶である。
（１０）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール：メタノール：水（４：１：２）の溶媒で展開したときのＲｆ値は０．４４である。
本発明のカプラザマイシンＣは両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような各種無機酸との付加塩があげられる。
本発明による式（Ｉｅ）のカプラザマイシンＥの理化学的性状は、次の通りである。
（１）外観
無色粉末
（２）分子式
Ｃ５０Ｈ８３Ｎ５Ｏ２２
（３）高分解能質量分析（ＨＲＦＡＢＭＳ：陽イオンモード）
実験値  １１１８．５６１３（Ｍ＋Ｈ）＋
計算値  １１１８．５６０８
（４）比旋光度
［α］Ｄ２５  −５．１°（ｃ  ０．８３、ＤＭＳＯ）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２６２（７，７００）
添付図面の図１３に示す。
（６）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１４に示す。
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１５に示す。
（８）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１６に示す。
（９）溶解性
メタノール、ＤＭＳＯ、水に可溶でありアセトン、酢酸エチルに不溶である。
（１０）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール：メタノール：水（４：１：２）の溶媒で展開したときのＲｆ値は０．４４である。
本発明のカプラザマイシンＥは両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような各種無機酸との付加塩があげられる。
本発明による式（Ｉｆ）のカプラザマイシンＦの理化学的性状は、次の通りである。
（１）外観
無色粉末
（２）分子式
Ｃ５１Ｈ８３Ｎ５Ｏ２２
（３）高分解能質量分析（ＨＲＦＡＢＭＳ：陽イオンモード）
実験値  １１１８．５６１５（Ｍ＋Ｈ）＋
計算値  １１１８．５６０８
（４）比旋光度
［α］Ｄ２５  −４．７°（ｃ  ０．９０、ＤＭＳＯ）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２６２（７，６００）
添付図面の図１７に示す。
（６）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１８に示す。
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１９に示す。
（８）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重ジメチルスルホキシド中で室温にて測定した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図２０に示す。
（９）溶解性
メタノール、ＤＭＳＯ、水に可溶でありアセトン、酢酸エチルに不溶である。
（１０）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール：メタノール：水（４：１：２）の溶媒で展開したときのＲｆ値は０．４４である。
本発明のカプラザマイシンＦは両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような各種無機酸との付加塩があげられる。
なお、本明細書では、カプラザマイシンＡ、カプラザマイシンＢ、カプラザマイシンＣ、カプラザマイシンＥ、カプラザマイシンＦのうちの一つ、あるいは二つまたはそれ以上の混合物、  もしくは、すべての混合物を、単にカプラザマイシン類と称することがある。
本発明による前記の一般式（Ｉ）で表せるカプラザマイシン類は後記の生物学的性質を有する。
すなわち、カプラザマイシンＡ、カプラザマイシンＢ、カプラザマイシンＣ、カプラザマイシンＥおよびカプラザマイシンＦは、薬剤耐性菌を含む抗酸性菌および薬剤耐性菌（メチシリン耐性菌等）を含むグラム陽性の細菌に対して抗菌活性を示す。これらの細菌に対するカプラザマイシン類の抗菌活性を次のとおり試験した。
試験例１
各種の微生物に対するカプラザマイシンＡの抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表１に示す。
0004521145.tif 000010
試験例２
各種の微生物に対するカプラザマイシンＢの抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表２に示す。
0004521145.tif 000011
試験例３
表２に示されたもの以外の各種の微生物に対するカプラザマイシンＢの抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラ・ヒントン寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表３に示す。
0004521145.tif 000012
試験例４
各種の微生物に対するカプラザマイシンＣの抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表４に示す。
0004521145.tif 000013
試験例５
各種の微生物に対するカプラザマイシンＥの抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表５に示す。
0004521145.tif 000014
試験例６
各種の微生物に対するカプラザマイシンＦの抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法によって測定した。その結果を表６に示す。
0004521145.tif 000015
試験例７
結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ならびに非定型抗酸性菌であるマイコバクテリウム・アビウム・キルヒベルグ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ  ｋｉｒｃｈｂｅｒｇ）およびマイコバクテリウム・イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）に対するカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの抗菌スペクトルを、Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ  ７Ｈ９液体培地中で倍数希釈法により測定した。また、前記の細菌に対するリファンピシン（ＲＦＰ）およびイソニコチン酸ヒドラジド（ＩＮＨ）（比較薬剤として）の抗菌スペクトルを、同じ倍数希釈法により測定した。得られた結果を次の表７に示す。
0004521145.tif 000016
さらに、第２の本発明によると、ストレプトミセス属に属して、前記の一般式（Ｉ）で表されるカプラザマイシンＡ、カプラザマイシンＢ、カプラザマイシンＣ、カプラザマイシンＥおよびカプラザマイシンＦの少くとも一つを生産する生産菌を培養し、その培養物から、カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの少くとも一つを採取することを特徴とする、一般式（Ｉ）で表される抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅおよび（または）Ｆの製造方法が提供される。
第２の本発明の方法で使用する抗生物質カプラザマイシン類の生産菌は、前述した理化学的性質および生物学的性質を有する抗生物質を生産する能力を有するものであれば、その種を問わず使用できて、広範な微生物から選ぶことができる。かかる微生物のうち、抗生物質カプラザマイシン類の生産菌の具体的な好適の一例には、本発明者らにより平成９年３月、微生物化学研究所において、ハワイ、オアフ島の土壌より分離された放線菌で、ＭＫ７３０−６２Ｆ２の菌株番号が付された菌株がある。
以下にＭＫ７３０−６２Ｆ２株の菌学的諸性質について記載する。
１．形態
ＭＫ７３０−６２Ｆ２株は、分枝した基生菌糸より、比較的長い気菌糸を伸長し、その先端に５〜１０回転のらせんを形成する。成熟した胞子鎖は１０〜５０個の卵円形の胞子を連鎖し、胞子の大きさは約０．５〜０．６×０．８〜１．０ミクロンである。なお、胞子の表面は平滑である。輪生枝、菌束糸、胞子のう、および運動性胞子は認められない。
２．各種培地における生育状態
色の記載について［］内に示す色の標準は、コンティナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａのｃｏｌｏｒ  ｈａｒｍｏｎｙ  ｍａｎｕａｌ）を用いた。
（１）スクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）
うす黄［２  ｅａ，Ｌｔ  Ｗｈｅａｔ］の発育上に、白の気菌糸を、うっすらと着生し、溶解性色素は認められない。
（２）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養）
うす黄［２  ｅａ，Ｌｔ  Ｗｈｅａｔ］〜うす黄茶［２  ｎｇ，Ｄｕｌｌ  Ｇｏｌｄ］の発育上に、灰白［３  ｄｃ，Ｎａｔｕｒａｌ］〜明るい灰［ｄ］の気菌糸を着生する。溶解性色素は認められない。
（３）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
うす黄［２  ｅａ，Ｌｔ  Ｗｈｅａｔ］〜うす黄茶［２  ｌｇ，Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｔａｎ］の発育上に、白〜明るい灰［ｄ］の気菌糸を着生する。溶解性色素は認められない。
（４）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７、２７℃培養）
うす黄茶［２  ｌｅ，Ｍｕｓｔａｒｄ〜２  ｎｇ，Ｄｕｌｌ  Ｇｏｌｄ］の発育上に、灰白［ｂ，Ｏｙｓｔｅｒ  Ｗｈｉｔｅ〜３  ｄｃ，Ｎａｔｕｒａｌ］の気菌糸を着生し、暗い茶の溶解性色素を産生する。
（５）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７℃培養）
うす黄茶［２  ｉｅ，Ｌｔ  Ｍｕｓｔａｒｄ  Ｔａｎ〜３  ｉｃ，Ｌｔ  Ａｍｂｅｒ］の発育上に、灰白［ｂ，Ｏｙｓｔｅｒ  Ｗｈｉｔｅ］〜明るい灰［ｄ］の気菌糸を着生する。溶解性色素は認められない。
（６）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７℃培養）
うす黄［２  ｅａ，Ｌｔ  Ｗｈｅａｔ］の発育上に、灰白［３  ｄｃ，Ｎａｔｕｒａｌ］〜明るい灰［ｄ］の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。
３．生理学的性質
（１）生育温度範囲
グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース  １．０％、アスパラギン  ０．０５％、リン酸二カリウム０．０５％、ひも寒天  ２．５％、ｐＨ７．０）を用い、１０℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、４５℃および５０℃の各温度で試験した結果、本菌株は１０℃、４５℃および５０℃を除き、２０℃から３７℃の範囲で生育した。生育至適温度は、３０〜３７℃付近である。
（２）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地、ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
培養後３日目頃よりスターチの加水分解を認め、その作用は中等度である。
（３）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・ブロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−培地７；いずれも２７℃培養）
いずれの培地でも陽性である。
（４）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９、２７℃培養）
Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、スクロース、イノシトール、ラムノース、ラフィノースおよびＤ−マンニトールを利用して発育し、Ｄ−キシロースもおそらく利用する。
（５）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）
陰性である。
（６）ゼラチンの液化（単純ゼラチン、２０℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン、２７℃培養）
単純ゼラチンは、培養後４０日間の観察で液化を認めなかった。グルコース・ペプトン・ゼラチンの場合、培養後４０日頃に弱い液化を示した。
（７）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（１０％スキムミルク、３７℃培養）
凝固することなく、培養後７日目頃よりペプトン化が始まり、１４日目には完了した。
以上の性状を要約すると、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株は、分枝した基生菌糸より、らせん形成を有する気菌糸を伸長する。胞子の表面は平滑である。種々の培地で、うす黄〜うす黄茶の発育上に、灰白〜明るい灰の気菌糸を着生する。溶解性色素は、メラニン様色素以外は認められない。生育至適温度は３０〜３７℃付近である。メラニン様色素の生成は陽性、スターチの水解性は中等度である。なお、細胞壁に含まれる２，６−ジアミノピメリン酸はＬＬ−型であり、菌体中の主要なメナキノンはＭＫ−９（Ｈ８）およびＭＫ−９（Ｈ６）であった。
これらの性状よりＭＫ７３０−６２Ｆ２株は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると考えられる。そこで、近縁の既知菌種を検索した結果、ストレプトミセス・ディアスタトクロモゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｄｉａｓｔａｔｏｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ、文献、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、２２巻、２９０頁、１９７２年）、ストレプトミセス・レジストマイシフィクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｅｓｉｓｔｏｍｙｃｉｆｉｃｕｓ、文献、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、１８巻、１６５頁、１９６８年）、ストレプトミセス・コリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｏｌｌｉｎｕｓ、文献、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、１８巻、１００頁、１９６８年）およびストレプトミセス・アウランティオグリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｕｒａｎｔｉｏｇｒｉｓｅｕｓ、文献、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、１８巻、２９７頁、１９６８年）があげられた。次に上記４種の本研究所保存菌株とＭＫ７３０−６２Ｆ２株を実地に比較検討した。その成績を表８に示す。
0004521145.tif 000017
0004521145.tif 000018
以上の表８から明らかなように、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株は表８で比較されたいずれの種とも類似した性状を示した。しかし、ストレプトミセス・レジストマイシフィクスは発育の色調がうす黄茶〜茶黒を呈し、溶解性色素が茶を帯び、脱脂牛乳をペプトン化しない点で、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株と相違していた。また、ストレプトミセス・コリヌスは気菌糸の形態が直状〜ループ状を示し、脱脂牛乳をペプトン化しない点で、またストレプトミセス・アウランティオグリセウスは溶解性色素が茶を帯び、単純ゼラチンを液化し、硝酸塩を還元する点で、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株と区別された。一方、ストレプトミセス・ディアスタトクロモゲネスは単純ゼラチンの液化が陽性を示すほかは、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株とよく類似していた。  しかし、現時点ではＭＫ７３０−６２Ｆ２株をストレプトミセス・ディアスタトクロモゲネスの一菌株であると同定できない。そこで、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株をストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）ＭＫ７３０−６２Ｆ２とした。
なお、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株を日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号に在る工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託申請し、１９９８年１１月２７日、ＦＥＲＭ  Ｐ−１７０６７として受託された。また、２０００年７月１２日の受託日でブダペスト条約の規約下にＭＫ７３０−６２Ｆ２株はＦＥＲＭ  ＢＰ−７２１８の受託番号で前記の研究所に寄託された。
第２の本発明の方法においては、抗生物質カプラザマイシン類の製造は次の通り行われる。
すなわち、抗生物質カプラザマイシン類の製造は、抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの少なくとも一つを生産する生産菌（単にカプラザマイシン生産菌という）を栄養培地中に接種し、抗生物質カプラザマイシン類の生産に良好な温度で培養することによって行われ、抗生物質カプラザマイシン類を含む培養物が得られる。このような目的に用いる栄養培地としては、放線菌の培養に利用しうるものが使用される。栄養源として、例えば市販されている大豆粉、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、硫酸アンモニウム等の窒素源が使用できる。また、トマトペースト、グリセリン、でん粉、グルコース、ガラクトース、デキストリン等の炭水化物あるいは脂肪などの炭素源が使用できる。さらに食塩、炭酸カルシウム等の無機塩を添加して使用できる。その他必要に応じて微量の金属塩を添加することができる。これらのものは、カプラザマイシン生産菌が利用し、抗生物質カプラザマイシン類の生産に役に立つものであればよく、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。
抗生物質カプラザマイシン類の生産は、トレプトミセス属に属する抗生物質カプラザマイシン類の生産能を有する微生物が使用される。具体的には、本発明者らの分離したストレプトミセス・エスピーＭＫ７３０−６２Ｆ２が抗生物質カプラザマイシン類を生産することは、本発明者らによって明らかにされているが、その他の菌株については、抗生物質生産菌の単離の常法によって自然界より分離することが可能である。また、ストレプトミセス・エスピーＭＫ７３０−６２Ｆ２を含めて、カプラザマイシン生産菌を放射線照射その他、変異処理により抗生物質カプラザマイシン類の生産能を高める余地も残っている。さらに遺伝子工学的手法によって抗生物質カプラザマイシン類の生産も可能である。
カプラザマイシン類の生産のための種母培地としては、寒天培地上、ＭＫ７３０−６２Ｆ２株の斜面培養から得た生育物を使用する。
抗生物質カプラザマイシン類の製造に当たっては、ストレプトミセス属に属するカプラザマイシン生産菌を適当な培地で好気的に培養するのが好ましく、その培養液から目的のカプラザマイシンを採取するのには常用の手段を用いることができる。培養温度は、カプラザマイシン生産菌の発育が実質的に阻害されずにこれらの抗生物質を生産しうる範囲であれば、特に制約されるものでない。培養温度は、使用するカプラザマイシン生産菌に応じて適当に選択できるが、好ましくは、２５〜３０℃の範囲内の温度を挙げることができる。
この  ＭＫ７３０−６２Ｆ２株によるカプラザマイシン類の生産は、通常は３ないし９日間で最高に達するが、一般に充分な抗菌活性が培地に付与されるまで続ける。この培養液中のカプラザマイシン類の力価の経時変化は、ＨＰＬＣ法またはマイコバクテリウム・スメグマティスあるいはマイコバクテリウム・バケを被検菌とする円筒平板法により測定できる。
第２の本発明の方法においては、上記のようにして得られた培養物からカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの少くとも一つを採取するが、採取法としては微生物の生産する代謝物を採取するのに用いられる手段を適宜利用することができる。例えば、水と混ざらない有機溶媒による抽出の手段、各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する手段、ゲルろ過、向流分配を利用したクロマトグラフィー等を単独または組み合わせて利用しカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦをそれぞれ単独にまたは何れかの混合物として採取できる。また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や菌体破砕による溶出法によりカプラザマイシンを抽出し、上記と同様にカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦを単離して採取することができる。かくして、前記した抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦが別々にまたは混合物として得られる。なおカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの相互の分離は、後記の実施例で例示されるように、適当な展開溶媒を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって行うことができる。
さらに、第３の本発明では、一般式（Ｉ）で示されるカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの少なくとも一つ、またはそれの塩を有効成分として含有し、また製薬学的に許容される担体を、有効成分と混和して含有する医薬組成物が提供される。
第３の本発明による医薬組成物においては、有効成分としての一般式（Ｉ）の化合物を、製薬学的に許容できる常用の固体または液状担体、例えばエタノール、水、生理食塩水、でん粉等と混和して含有する組成物の形であることができる。
第３の本発明の医薬組成物で用いる有効成分である一般式（Ｉ）のカプラザマイシンまたはその塩は、経口的に投与でき、あるいは静脈内または筋肉内注射もしくは腹腔内投与などにより非経口的にも投与することができる。
経口投与用の場合には、第３の本発明の医薬組成物では、有効成分としての一般式（Ｉ）のカプラザマイシンまたはその塩を薬学的に許容できる慣用の固体または液体状の担体と混和して、その混合物を散剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、シロップ剤等の形で製剤とすることができる。
第３の本発明の医薬組成物における有効成分としての一般式（Ｉ）の化合物の含量割合は、剤形によって異なるが、例えば、好都合な含量割合は投与単位物の重量の約２〜９０％の範囲にあるのがよい。
第３の本発明の組成物を注射用に製剤する場合には、望ましい製剤形態としては、有効成分としての前記の化合物を含む無菌の水溶液あるいは無菌の凍結乾燥剤がある。ここに用いる液体担体としては例えば水、含水エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、植物油などが好ましい。
本発明の組成物において有効成分として用いられる一般式（Ｉ）のカプラザマイシンまたはその塩の投与量は、治療すべき細菌感染症の種類、治療の目的および症状の程度などによって異なるが、最適な投与量は専門家による適当な予備試験で決定できる。なお、カプラザマイシンＢは、マウス（ＩＣＲ系、４週令、雌）に対して静脈注射時に７５ｍｇ／ｋｇの投与量で毒性を示さなかった。
また、第４の本発明では、前記の一般式（Ｉ）のカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦを生産する特性を持ち且つ工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ  ＢＰ−７２１８の受託番号で寄託されたストレプトミセス・エスピーＭＫ７３０−６２Ｆ２株が新規な微生物として提供される。
発明を実施するための最良の方法
以下に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦの製造
寒天斜面培地に培養したストレプトミセス・エスピーＭＫ７３０−６２Ｆ２（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７２１８で寄託）を、ガラクトース２％、デキストリン２％、グリセリン１％、バクトソイトン（ディフコ社製）１％、コーン・スティープ・リカー０．５％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％を含む液体培地（ｐＨ７．４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｌ容）に１１０ｍｌずつ分注して常法により１２０℃で２０分滅菌した培地に接種した。その後に３０℃で２日間にわたり回転振とう培養し、種母培養液を得た。
トマトペースト（カゴメ社製）２．４％、デキストリン２．４％、酵母エキス（オリエンタル社製）１．２％、塩化コバルト０．０００６％（ｐＨ７．４に調整）の組成の培地１５リットルをタンク培養槽（３０リットル容）中に調製し、滅菌後に生産培地として用いた。この生産培地に、上記の種母培養液の２％量を接種し、２７℃、１分間あたり通気量１５リットル、２００ｒｐｍの撹拌速度を用いる培養条件で６日間タンク培養した。
このようにして得られた培養液を遠心分離して培養ろ液１２リットルと菌体を分離した。つづいて、菌体に６リットルのメタノールを加えてよく撹拌し、菌体からカプラザマイシン類をメタノールで抽出した。培養ろ液と菌体抽出液（メタノール抽出液）を合わせて、得られた混合液１８リットルを芳香族系合成吸着剤ダイヤイオンＨＰ−２０（日本、三菱化学株式会社製）のカラム７５０ｍｌに通過させ、カプラザマイシン類を吸着させた。このダイヤイオンＨＰ−２０に脱イオン水、５０％メタノール水、８０％メタノール水、８０％アセトン水、アセトンを各２．２５リットル順次通過させた。カプラザマイシン類は、８０％アセトン水での溶出画分中に多く溶出された。また、５０％メタノール水溶出画分および８０％メタノール水溶出画分にもカプラザマイシン類が含まれていたので、両者を合わせて再度、ダイヤイオンＨＰ−２０カラム（７５０ｍｌ）に通過させ、これによりカプラザマイシン類をカラムの吸着剤に吸着させ、次いでカラムに８０％メタノール水２．２５リットルを通過させた。その後、カラムから８０％アセトン水２．２５リットルで溶出させた。この８０％アセトン水での溶出液を先の８０％アセトン水溶出画分に合わせ、減圧下で濃縮乾固してカプラザマイシン類を含む粗精製物１０．１ｇを得た。
このカプラザマイシン類を含む粗精製物の１０．１ｇをクロロホルム−メタノール（＝１：２）の混合溶媒の５０ｍｌに溶解して、その溶液にキーゼルグール（メルク社製、Ａｒｔ．１０６０１）５０ｍｌを加え溶媒を減圧下で濃縮乾固した。このようにカプラザマイシン類をキーゼルグールに吸着させたものを、シリカゲルカラム（内径５４ｍｍ×長さ２００ｍｍ）の上にのせ、クロマトグラフィーを行った。この際には、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール−水（＝４：１：０．１）、クロロホルム−メタノール−水（＝２：１：０．２）、クロロホルム−メタノール−水（＝１：１：０．２）の各混合液の各１．３５リットルを用い、順次に展開を行った。フラクシヨンコレクターによって、シリカゲルカラムからの溶出液を、フラクシヨンＮｏ．１〜５３では２０ｇづつ分画し、フラクシヨンＮｏ．５４〜１１７では１９ｇづつ分画して集めると、カプラザマイシン類を含む活性画分は、フラクシヨンＮｏ．６６〜８３に溶出された。これら活性画分を集めて減圧下で濃縮乾固し、６２５．３ｍｇのカプラザマイシン類を含む粗精製物を得た。
このカプラザマイシン類を含む粗精製物にメタノール５ｍｌを加えて溶解した。得られた溶液を５℃の冷暗下に静置すると、カプラザマイシン類を含む析出沈殿画分の５３７．３ｍｇを得た。
つづいて、このカプラザマイシン類を含む析出沈殿をＨＰＬＣ（ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  φ２０×２５０ｍｍ、資生堂製）を用い精製した。このＨＰＬＣでは、展開溶媒として５０％アセトニトリル水−０．０５％ぎ酸（流速：１２０ｍｌ／ｍｉｎ）により展開すると、６１〜６８分後にカプラザマイシンＡが溶出され、５２〜６０分後にカプラザマイシンＢが溶出され、３９〜４１分後にカプラザマイシンＣが溶出され、２５〜２８分後ににカプラザマイシンＥが溶出され、また２２〜２５分後にカプラザマイシンＦが溶出された。それぞれの活性分画を集めて、減圧下で濃縮乾固することにより、カプラザマイシンＡを５６．９ｍｇ、カプラザマイシンＢを９０．３ｍｇ、カプラザマイシンＣを１９．７ｍｇ、カプラザマイシンＥを３０．３ｍｇ、およびカプラザマイシンＦを２５．５ｍｇ得た。
産業上の利用可能性
以上に説明したとおり、本発明により新規な抗生物質として一般式（Ｉ）で表されるカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦは、それぞれに、各種の抗酸性菌、細菌およびそれらの薬剤耐性菌株に対してすぐれた抗菌活性を有する。従って、本発明のカプラザマイシン類は抗酸性菌および細菌の感染症を治療するのに有効であって有用である。
【図面の簡単な説明】
図１はカプラザマイシンＡのメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
図２はカプラザマイシンＡのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図３はカプラザマイシンＡの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図４はカプラザマイシンＡの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図５はカプラザマイシンＢのメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
図６はカプラザマイシンＢのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図７はカプラザマイシンＢの重ジメチルスルホキシド：重水（＝１０：１）の混合溶媒中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図８はカプラザマイシンＢの重ジメチルスルホキシド：重水（＝１０：１）の混合溶媒中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図９はカプラザマイシンＣのメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
図１０はカプラザマイシンＣのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図１１はカプラザマイシＣの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図１２はカプラザマイシンＣの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図１３はカプラザマイシンＥのメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
図１４はカプラザマイシンＥのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図１５はカプラザマイシンＥの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図１６はカプラザマイシンＥの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図１７はカプラザマイシンＦのメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
図１８はカプラザマイシンＦのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図１９はカプラザマイシンＦの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図２０はカプラザマイシンＦの重ジメチルスルホキシド溶液中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【図１】
0004521145.tif 000027
【図２】
0004521145.tif 000028
【図３】
0004521145.tif 000029
【図４】
0004521145.tif 000030
【図５】
0004521145.tif 000031
【図６】
0004521145.tif 000032
【図７】
0004521145.tif 000033
【図８】
0004521145.tif 000034
【図９】
0004521145.tif 000035
【図１０】
0004521145.tif 000036
【図１１】
0004521145.tif 000037
【図１２】
0004521145.tif 000038
【図１３】
0004521145.tif 000039
【図１４】
0004521145.tif 000040
【図１５】
0004521145.tif 000041
【図１６】
0004521145.tif 000042
【図１７】
0004521145.tif 000043
【図１８】
0004521145.tif 000044
【図１９】
0004521145.tif 000045
【図２０】
0004521145.tif 000046