(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書中の配列番号１〜８２で表されるそれぞれの塩基配列またはその一部を有するプローブを全部含むプローブ群または配列番号８３〜１６４で表されるそれぞれの塩基配列またはその一部を有するプローブを全部含むプローブ群からなり、
前記２つのプローブ群の各プローブは、大文字で表記された塩基が欠落することがない範囲で明細書中の配列番号１６５〜２４０で表される塩基配列からなるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルリスト中から選択された１５〜３０塩基の連続した塩基からなり、検体中に含まれるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルの同定に利用し得るプローブセット。
【請求項２】
明細書中の配列番号１〜８２で表される塩基配列を有するプローブを全部含むプローブ群または配列番号８３〜１６４で表される塩基配列を有するプローブを全部含むプローブ群であって、前記プローブ群がＨＬＡ−ＤＱ遺伝子に由来する３０塩基以下の塩基からなる、検体中に含まれるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルの同定に利用し得るプローブセット。
【請求項３】
検体からの試料中に含まれるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルをプローブセットを用いて同定する方法であって、
該プローブセットが請求項１または２に記載のプローブセットであって、明細書中の表３Ａ及び表３Ｂ−１〜表３Ｂ−２又は表４Ａ及び表４Ｂ−１〜表４Ｂ−２に記載されるアレル−プローブ対応リストに基づいて、検体中のアレルを同定することを特徴とする、ＨＬＡ−ＤＱ型のアリルを同定する方法。
【請求項４】
前記検体中のＨＬＡ−ＤＱ領域をプライマーＰＣＲ法により増幅する工程と、
前記増幅後の検体を、前記プローブセットが固定されたプローブアレイとハイブリダイゼーション反応させる工程と、
各アレルに対応するプローブの組み合わせを示す、明細書中の表３Ａ及び表３Ｂ−１〜表３Ｂ−２又は表４Ａ及び表４Ｂ−１〜表４Ｂ−２に記載されるアレル−プローブ対応リストに基づいて、検体中のアレルを同定する工程と、
を有する請求項３に記載の方法。
【請求項５】
請求項１または２に記載のプローブセットが基板表面上に固定されている、検体中に含まれるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルの同定に利用し得るプローブアレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人のＨＬＡ−ＤＱアレルを同定するためのプローブセット及び特定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
人白血球のＨＬＡ−ＤＱ型の各アレルについては、従来から血清学的レベルのタイピングが行われてきた。この場合、特別なサンプル処理を必要とせず、抗原抗体反応で容易にタイピングが可能である反面、同定できる内容はアミノ酸配列の違いを区別できるレベルを４桁以上の数字での命名法における３、４桁目とした場合、最初の２桁の数字が血清学的レベルのタイピングで同定可能なレベルである（日本組織適合性学会ＨＬＡ標準化委員会「アリル表記法と結果報告の原則について２０００」http://jshi.umin.ac.jp/standarization/hyoki.html参照）。
【０００３】
その他のゲノム抽出を伴うタイプの市販キットの多くは、各アレルを個別に同定可能な精度のものではなく、複数のアリルをセットとして区別しているのが現状である。また最も詳細な多型解析を可能とするSBT（Sequencing Based Typing） 法に基づくキットにしても、たいていのサンプルはヘテロ接合体であるため、ambiguityの問題を一度に解決できず、再検査を必要とすることが多い。こうした問題を伴うアレルは、IHWG学会のhttp://www.ihwg.org/protocols/sbt/ambiguities2.pdfにまとめて紹介されている。
【非特許文献１】（日本組織適合性学会ＨＬＡ標準化委員会「アリル表記法と結果報告の原則について２０００」（http://jshi.umin.ac.jp/standarization/hyoki.htmlのサイト）
【非特許文献２】http://www.ihwg.org/protocols/sbt/ambiguities2.pdf
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
一方、近年は高度医療の発達に伴い、臓器移植などの際に詳細なタイピングが要求されるほか、糖尿病や癌、その他多因子病においても、薬剤投与との関連が示唆され、医療行為に対するエヴィデンスが求められている。こうした背景から、各アリルを個別に同定可能な試験方法が望まれており、本発明はかかる要望に対してＨＬＡ−ＤＱの各アリルを個別に同定するために有用であるプローブセット及びそれを用いたＨＬＡ−ＤＱのアリルの同定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明にかかるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルを同定するためのプローブセットは、明細書中の配列番号１〜８２で表されるそれぞれの塩基配列またはその一部を有するプローブを全部含むプローブ群または配列番号８３〜１６４で表されるそれぞれの塩基配列またはその一部を有するプローブを全部含むプローブ群からなり、
前記２つのプローブ群の各プローブは、大文字で表記された塩基が欠落することがない範囲で明細書中の配列番号１６５〜２４０で表される塩基配列からなるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルリスト中から選択された１５〜３０塩基の連続した塩基からなり、検体中に含まれるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルの同定に利用し得るプローブセットである。
【０００６】
また、本発明にかかるＨＬＡ−ＤＱアリルの同定方法は、検体からの試料中に含まれるＨＬＡ−ＤＱ型のアリルをプローブセットを用いて同定する方法であって、
該プローブセットが請求項１または２に記載のプローブセットであって、明細書中の表３Ａ及び表３Ｂ−１〜表３Ｂ−２又は表４Ａ及び表４Ｂ−１〜表４−２に記載されるアレル−プローブ対応リストに基づいて、検体中のアレルを同定することを特徴とする、ＨＬＡ−ＤＱ型のアリルを同定する方法である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明にかかるプローブセット及びそれを用いたＨＬＡ−ＤＱアレルの同定によって、臓器移植、癌、糖尿病、その他多因子病において必要とされる体質判定、テーラーメイド医療に貢献することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明のプローブセットを構成する各プローブは後述するアレルリストの各アレルにおける大文字表記の塩基を含む部分配列をそれぞれが有するものである。大文字の塩基を含む１５〜３０個の連続した塩基からなる部分を選択し得られた部分塩基配列からなるプローブを用いてプローブセットを構成する。具体例としては、後述の表１Ａおよび表１Ｂ−１〜１Ｂ−２のプローブリスト１、または表２Ａおよび表２Ｂ−１〜２Ｂ−２のプローブリスト２に挙げられた各プローブ群からプローブセットを構成することができる。例えば、プローブリスト１における０番のプローブは、DQA1*010101の最初の大文字（Ｇ）が含まれている部分「tgaatttgatggagatgagG」の２０塩基配列からなるものであり、プローブリスト２におけるプローブ０番もまた同じアリルの最初の大文字のＧを含む部分「ggagatgagGagttctacg」の１９塩基配列からなるものである。
【０００９】
なお、後述のアリルリストにおける「ＤＱＡ１＊」で示されている番号は、各アリルに付された固有の番号であり、日本組織適合性学会ＨＬＡ標準化委員会による「アリル表記法」に従ったものである。
【００１０】
本発明にかかるアリルの同定方法におけるプローブによるアリルの検出には、例えば、２つの方法が可能である。一つはハイブリダイゼーション法によって検出する場合と、もう一つはＰＣＲ法によってハイブリダイゼーションをすることなしに直接検出する場合である。いずれの場合も、大文字の塩基を含む１５〜３０個の連続した長さのオリゴヌクレオチドに、大文字で表した塩基を含むようにプローブが設計される。
【００１１】
また、本発明において提供されるプローブアレイは、各アリルを個別に同定するための変異塩基の組をプローブとして選択する位置で提示しているともいえる。この変異塩基を検出するための方法にもハイブリダイゼーション法による検出方法と、ＰＣＲ法によってハイブリダイゼーションをすることなしに直接検出する方法が好適に利用できる。これらの場合にも、大文字の塩基を含む１５〜３０個の連続した長さのオリゴヌクレオチドに、大文字で表した塩基を含むようにプローブが設計される。
【００１２】
ハイブリダイゼーションによって変異を検出する場合は、プローブの中心付近にミスマッチが（即ち大文字で表した変異塩基が）来るようにプローブを設計したほうが、フルマッチとミスマッチの配列間でＴｍに差がつきやすく、ハイブリダイゼーションの反応温度を調節することによって、両者を分離しやすい。
【００１３】
一方PCR法によって直接変異を検出する場合は、酵素がアニールした二本鎖を認識して伸長しないよう、むしろ3’末端側にミスマッチを配置することが行われる。またAllel  Spcific  Primerのように、3’末端から2つ目にミスマッチを配置し、3個目に人為的にミスマッチを追加したり（東洋紡（株））、3’末端側にミスマッチを配置するがライゲーションによって、プローブの環状化を行う方法（アマシャムバイオサイエンス（株））、TaqMan-MGB法（ABI社）LNAを使った3’末端ミスマッチ（プロリゴ・ジャパン（株））など、いくつかのバリエーションが可能である。
【実施例】
【００１４】
以下実施例により本発明を更に説明する。
【００１５】
(実施例１)
アマシャムバイオサイエンスのGFX Genomic Blood DNA Purification Kitを使って、人の血液1mlからDNAの抽出を行った。以下にプロトコールを示す。
血液1ml
↓＋RBC Lysis Solution（溶血）
↓＋血液サンプル（穏やかに混和）
↓室温、5分間
↓12,000〜16,000×g、20秒間遠心
↓上清を20〜50 μl残して捨てる
↓沈殿物を再懸濁
↓＋Extraction Solution（激しくボルテックス）
↓室温、5分間（DNAの抽出）
↓Collection TubeにGFX Columnをセット
↓溶出バッファーを70℃に加温
↓＋サンプル
↓5,000×g、1分間遠心（DNAの結合）
↓＋Extraction Solution（洗浄）
↓5,000×g、1分間遠心
↓＋Wash Solution（洗浄）
↓12,000×g、3分間遠心
↓GFX Columnを遠心チューブにセット
↓＋純水で溶出
↓室温、1分間
↓5,000〜8,000×g、1分間遠心
230μlに濃縮調整………溶液（１）
次にキアゲン社のQuantiTect SYBR Green PCR Kit、ABI社のGeneAmp5700を使って、定量PCRを行った。反応組成およびプロトコールを以下に示す。
【００１６】
1）反応組成/well（96wellマイクロプレート）
QuantiTect SYBR Green  2×プレミクス：10μｌ
溶液（１）：1μｌ
プローブリスト１Ａおよび１Ｂの各プローブ(10 pmol/μｌ)：1μｌ
ミックスプライマ(10 pmol/μｌ)注）：4μｌ
超純水：4μｌ
（合計：20μｌ）
注）以下の配列を持つ各10 pmol/μｌの水溶液各１μｌ
GGTGAGGTAACTGATCTTG
TCCTTCTGGCTGTTCCAGTACTC
2）PCRプログラム
94℃：180secの後に（94℃：10sec＋66℃：10sec＋72℃：20sec）の30 cyclesを行った。5700ソフトウエア画面上のAmp PlotおよびDissociationカーブおよびアレル−プローブ対応リスト１（表３Ａおよび表３Ｂ−１〜表３Ｂ−２）を参照して、DQA1*0103とDQB1*060101であると同定された。
【００１７】
（実施例2）
人の血液1ｍｌからのDNA抽出は、実施例1と同様に行った。次にタカラバイオ（株）のEx Taq、ABI社のPCR装置9700を使って、人HLA-ＤＱのPCRを行った。反応組成およびプロトコールを以下に示す。
【００１８】
1）反応組成/tube
Ex Taq  2×プレミクス：20μｌ
溶液（１）：3μｌ
Cy-3 dUTP (1mM)：2μｌ
ミックスプライマ(10 pmol/μｌ)注）：6μｌ
超純水：9μｌ
（合計：：40μｌ）
注）以下の配列を持つ各10 pmol/μｌの水溶液各１μｌ
GGTGAGGTAACTGATCTTG
ATGATCCTAAACAAAGCTCTG
TGTGCTACTTCACCAACGGGACG
2）PCRプログラム
94℃：180secの後に、（94℃：10sec＋66℃：10sec＋72℃  20sec）の30cyclesを行った。反応終了後、精製用カラム（QIAGEN  QIAquick PCR Purification Kit）を用いて未反応のdＮＴＰs等のClean Upを行った。
【００１９】
一方上述の検体に対して、アレルを同定するためのDNAマイクロアレイを作製した。作製の方法は、特開平11-187900号公報の実施例に従った。固相化のための官能基はSH基とし、ガラス基板上にシランカップリング処理を行い、2価性試薬のEMCS（N-(6-Maleimidocaproyloxy)succinimide）介してSH基と架橋した。各ドットのプローブは、プローブリスト２の各プローブを用いた。
【００２０】
次に先ほどの検体と作製したDNAマイクロアレイを用いて、ハイブリダイゼーションを行った。DNAマイクロアレイは予めBSA（牛血清アルブミン）1wt％加PBSで2時間ブロッキングした。検体はその塩濃度がPBSと等しくなるように、また0.1wt％SDS（ドデシル硫酸ナトリウム）、25% Form amideとなるように調整し、その50μｌを、先ほどのブロッキング済みDNAマイクロアレイと６０℃で2時間反応させ、未反応物を２×SSC溶液（NaCl 300mM 、Sodium Citrate (trisodium citrate dihyDQate, C6H5Na3・2H2O) 30mM、p.H. 7.0）で３回、続いて0.1×SSC溶液で2回洗浄した後風乾させ、Axon社製、GenePix 4000Bを用いで蛍光測定を行った。アレル−プローブ対応リスト２（表４Ａおよび表４Ｂ−１〜４Ｂ−２）を参照してDQA1*0103とDQB1*060101であることが同定された。
【００２１】
アレルリスト
DQA1*010101    atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagGagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga  （配列番号：１６５）
DQA1*010102    atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaGgggccattgtga  （配列番号：１６６）
DQA1*010201    atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcAtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga  （配列番号：１６７）
DQA1*010202    atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatCtgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcAtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga  （配列番号：１６８）
DQA1*0103      atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagttcacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaagaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcacGcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga  （配列番号：１６９）
DQA1*010401    atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccatgatgagcccttgtggaggtgaaggcattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcAccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccattgtga  （配列番号：１７０）
DQA1*010402    atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccatgatgagcccttgtggaggtgaagGcattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacCtggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactggg  （配列番号：１７１）
DQA1*0105      atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggccctcgctctgaccaccatgatgagcccctgtggaggtgaagGcattgtggctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgaggagttctacgtggacctggagaggaaggagactgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatttgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcagtcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggaccagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccaaggcctgcgttcagttggtgcttccaga  （配列番号：１７２）
DQA1*0106      ctgaccacgttgcctcttgtggtgtaaacttgtaccagttttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagatgagcagttctacgtggacctggagaggaaggagGctgcctggcggtggcctgagttcagcaaatttggaggttttgacccgcagggtgcactgagaaacatggctgtggcaaaacacaacttgaacatcatgattaaacgctacaactctaccgctgctaccaatg  （配列番号：１７３）
DQA1*0201      atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggccctcgccctgaccaccgtgatgagcccttgtggaggtgaagacattgtggctgaccacgttgcctcttacggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagttcacccatgaatttgatggagacgaggagttctatgtggacctggagaggaaggagactgtctggaagttgcctctgttccacagaCttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgctaaaacataacttgaacatcctgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacctggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggatgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcacctatgtcagagctcacagagactgtggtctgtgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtggggaccgtcttgatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga  （配列番号：１７４）
DQA1*030101    atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggccctcgccctgaccaccgtgatgagcccttgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttacggtgtaaacttgtaccagtcttatggtccctctgggcagtacagccatgaatttgatggagacgaggagttctatgtggacctggagaggaaggagactgtctggcagttgcctctgttccgcagatttagaagatttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgctaaaacataacttgaacatcgtgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacctggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggatgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccaAcacctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtggggaccgtcttgatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga  （配列番号：１７５）
DQA1*0302      atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggccctcgccctgaccaccgtgaCgagcccttgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttacggtgtaaacttgtaccagtcttatggtccctctgggcagtacagccatgaatttgatggagacgaggagttctatgtggacctggagaggaaggagactgtctggcagttgcctctgttccgcagatttagaagatttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgctaaaacataacttgaacatcgtgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacctggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgatgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggatgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccaacacctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtggggaccgtcttgatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga  （配列番号：１７６）
DQA1*0303      atgatcctaaacaaagctctgatgctgggggccctcgccctgaccaccgtgatgagcccttgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttacggtgtaaacttgtaccagtcttatggtccctctgggcagtacagccatgaatttgatggagacgaggagttctatgtggacctggagaggaaggagactgtctggcagttgcctctgttccgcagatttagaagatttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgctaaaacataacttgaacatcgtgattaaacgctccaactctaccgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacactgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacctggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgAtgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggatgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccaacacctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctggggttgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtggggaccgtcttgatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggcccttgtga  （配列番号：１７７）
DQA1*040101    atgatcctaaacaaagctctgctgctgggggcccttgccctgaccaccgtgatgagcccctgtggaggtgaagacattgtggctgaccatgttgcctcttatggtgtaaacttgtaccagtcttacggtccctctggccagtacacccatgaatttgatggagacgagcagttctacgtggacctggggaggaaggagactgtctggtgtttgcctgttctcagacaatttaga...tttgacccgcaatttgcactgacaaacatcgctgtgacaaaacacaacttgaacatcctgattaaacgctccaactctacTgctgctaccaatgaggttcctgaggtcacagtgttttccaagtctcccgtgacgctgggtcagcccaacaccctcatctgtcttgtggacaacatctttcctcctgtggtcaacatcacatggctgagcaatgggcactcagtcacagaaggtgtttctgagaccagcttcctctccaagagtgatcattccttcttcaagatcagttacctcaccttcctcccttctgctgatgagatttatgactgcaaggtggagcactggggcctggacgagcctcttctgaaacactgggagcctgagattccagcccctatgtcagagctcacagagactgtggtctgcgccctgggattgtctgtgggcctcgtgggcattgtggtgggcactgtcttcatcatccgaggcctgcgttcagttggtgcttccagacaccaagggccCttgtga  （配列番号：１７８）
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DQB1*0310      ggccatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgttatgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcacgcttcgacagcgacgtgggggtgtaTcgggcggtgacgccgctggggccgcctgAcgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagaggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactaccagttggagctccgcacgaccttgcagcggcgagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcagtgacagatttctatccagcccagatcaaagtccggtggtttcggaatgaccaggaggagacaaccggcgttgtgtccaccccccttattaggaacggtgactggaccttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcAtggagaCgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagaAccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２１０）
DQB1*0311      gggcctgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcAcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaTcgggcggtgacgccgctggggccgcctgCcgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggacccgggcggagttggacaCggtgtgcagacacaactaccagttggagctccgcacgaccttgcagcggcgag  （配列番号：２１１）
DQB1*0312      ggccatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcTtgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcAcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaTcgggcggtgacgccgctggggccgcctgAcgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggacccgggcggagTtggacacggtgtgcagacacaactaccagttggagctccgcacgaccttgcagcggcgag  （配列番号：２１２）
DQB1*0313      ggccatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgttatgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcacgcttcgacagcgacgtggaggtgtaccgggcggtgacgccgctggggccgcctgacgccgagtactggaacagccagaaggaagAcctggagaggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactaccagttggagctccgcacgaccttgcagcggcgag  （配列番号：２１３）
DQB1*0401      gggcatgtgctacttcaccaacgggaccgagcTcgtgcggggtgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtatcgggcggtgacgccgctggggcggcttgacgccgagtactggaatagccagaaggacatcctggaggaggaccgggcgtcggtggacaccgtatgcagacacaactaccagttggagctccgcacgaccttgcagcggcgagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcagtgacagatttctatccagcccagatcaaagtccggtggtttcggaatgaccaggaggagacaactggcgttgtgtccaccccccttattaggaacggtgactggaccttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagacgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagaaccccatcatcgtggagtgg  （配列番号：２１４）
DQB1*0402      gggcatgtgctacttcaccaacgggaccgagcgcgtgcggggtgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtatcgggcggtgacgccgctggggcggcTtgacgccgagtactggaatagccagaaggacatcctggaggaggaccgggcgtcggtggacaccgtatgcagacacaactaccagttggagctccgcacgaccttgcagcggcgagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcagtgacagatttctatccagcccagatcaaagtccggtggtttcggaatgaccaggaggagacaactggcgttgtgtccaccccccttattaggaacggtgactggaccttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagacgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagaaccccatcatcgtggagtgg  （配列番号：２１５）
DQB1*060101    ggccatgtgctacttcaccaaTgggacggagcgcgtgcgttatgtgaccagatacatctataaccgagaggaggacgtgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtatcgggcggtgacgccgcaggggcggcctgacgccgagtactggaacagccagaaggacatcctggagaggacccgagcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcttgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccggtggtttcggaatgaccaggaggagacagctggcgttgtgtccaccccccttattaggaacggtgactggaccttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcatggagacgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２１６）
DQB1*060102    gccatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgttatgtgaccagatacatctataaccgagaggaggacgtgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtatcgggcggtgacCccgcaggggcggcctgacgccgagtactggaacagccagaaggacatcctggagaggacccgagcggagttggacacggtgtgcaga  （配列番号：２１７）
DQB1*060103    ggccatgtgctacttcaccaatgggacggagcgcgtgcgttatgtgaccagatacatctataaccgagaggaggacgtgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtatcgggcggtgacgccgcaggggcggcctgacgccgagtactggaacagccagaaggacatcctggagaggacccgagcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcttgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccggtggtttcggaatgaccaggaAgagacagctggcgttgtgtccaccccccttattaggaacggtgactggaccttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcatggagacgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２１８）
DQB1*0602      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctgatgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccggtggtttcggaatgatcaggaggagacagccggcgttgtgtccaccccccttattaggaatggtgactggacTttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagatgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２１９）
DQB1*0603      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctgatgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccggtggtttcggaatgatcaggaggagacagccggcgttgtgtccaccccccttattaggaatggtgactggacTttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagatgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２２０）
DQB1*060401    gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtaaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggggtaccgcgggatcctgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccAgtggtttcggaatgatcaggaggagacagccggcgttgtgtccaccccccttattaggaatggtgactggactttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagatgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２２１）
DQB1*060402    gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggAcccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggGgtaccgcgggatcctgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggcc  （配列番号：２２２）
DQB1*060501    gggcctgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggAcccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggGgtaccgcgggatcctgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggcc  （配列番号：２２３）
DQB1*060502    ggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgtCgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggAcccgggcggagttggacaCg  （配列番号：２２４）
DQB1*0606      ggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggAcccgggcggcggtggacagggtg  （配列番号：２２５）
DQB1*0607      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggAcccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggGgtaccgcgggatcc  （配列番号：２２６）
DQB1*0608      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcT  （配列番号：２２７）
DQB1*0609      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtaaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggggtaccgcgggatcctgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccAgtggtttcggaatgatcaggaggagacagccggcgttgtgtccaccccccttattaggaatggtgactggactttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagatgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２２８）
DQB1*0610      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctaGcgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag  （配列番号：２２９）
DQB1*061101    gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagagg  （配列番号：２３０）
DQB1*061102    gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag  （配列番号：２３１）
DQB1*0612      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtaaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggggtaccgcgggatcctgcagaggagagtggagcccacagtgaccatctccccatccaggacagaggccctcaaccaccacaacctgctggtctgctcggtgacagatttctatccaggccagatcaaagtccAgtggtttcggaatgatcaggaggagacagccggcgttgtgtccaccccccttattaggaatggtgactggactttccagatcctggtgatgctggaaatgactccccagcgtggagatgtctacacctgccacgtggagcaccccagcctccagagccccatcaccgtggagtgg  （配列番号：２３２）
DQB1*0613      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgtTccgcgggat  （配列番号：２３３）
DQB1*0614      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag  （配列番号：２３４）
DQB1*0615      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggAcccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggGgtaccgcgggatcctgcagaggagag  （配列番号：２３５）
DQB1*0616      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgcgcggtgacgccgcaggggcggcctgatgccgagAactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcttgcagaggagag  （配列番号：２３６）
DQB1*0617      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagacacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagggggcccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggGgtaccgc  （配列番号：２３７）
DQB1*0618      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtAaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgggcggtgacgccgcaggggcggcctgttgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggagAggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggag  （配列番号：２３８）
DQB1*0619      gggcatgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcTtgtgaccagatacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaTcgggcggtgacgccgcTggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagTtggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgttccgcgggatcTtgcagaggagag  （配列番号：２３９）
DQB1*0620      gggcctgtgctacttcaccaacgggacggagcgcgtgcgtcttgtgaccagaTacatctataaccgagaggagtacgcgcgcttcgacagcgacgtgggggtgtaccgCgcggtgacgccgcaggggcggcctgAtgccgagtactggaacagccagaaggaagtcctggaggggacccgggcggagttggacacggtgtgcagacacaactacgaggtggcgtTccgc。  （配列番号：２４０）
【００２２】
以下、表１Ａおよび表１Ｂ−１〜１Ｂ−２にプローブリスト１を、表２Ａおよび表２Ｂ−１〜２Ｂ−２にプローブリスト２を示す。
【００２３】
【表１】
0004416494.tif 000002
【００２４】
【表２】
0004416494.tif 000003
【００２５】
【表３】
0004416494.tif 000004
【００２６】
【表４】
0004416494.tif 000005
【００２７】
【表５】
0004416494.tif 000006
【００２８】
【表６】
0004416494.tif 000007
【００２９】
【表７】
0004416494.tif 000008
【００３０】
【表８】
0004416494.tif 000009
【００３１】
【表９】
0004416494.tif 000010
【００３２】
【表１０】
0004416494.tif 000011
【００３３】
【表１１】
0004416494.tif 000012
【００３４】
【表１２】
0004416494.tif 000013