(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬理学的調製物であって、
薬剤と、水と、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％であるアルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％である薬理学的に許容されるエデテートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％である少なくとも一種のアルカリ金属サリシレートと、少なくとも一種の吸収促進化合物とを含んでおり、吸収促進化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、ルリヂサ油、マツヨイグサ油、メントール、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン及びそれの薬理学的に許容される塩、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、ポリドカノルアルキルエーテル、トリオレイン及びその混合物からなる群から選択され、各々の吸収促進化合物は、調製物全体の１−１０wt./wt.％の濃度で存在しており、アルカリ金属サリシレート、アルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェート、エデテート及び吸収促進化合物の合計濃度は、調製物の５０wt./wt.％よりも少なく、前記薬剤は調製物の中でミセル形態で存在する薬理学的調製物。
【請求項２】
レシチンを含んでいる請求項１に記載の薬理学的調製物。
【請求項３】
アルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェートは、ラウリル硫酸ナトリウムであり、アルカリ金属サリシレートは、サリチル酸ナトリウムである請求項１又は２に記載の薬理学的調製物。
【請求項４】
レシチンは、飽和リン脂質、不飽和リン脂質、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリン、リゾレシチン、及びその混合物からなる群から選択される請求項１、２又は３に記載の薬理学的調製物調製物。
【請求項５】
ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩及びその混合物からなる群から選択される第２の吸収促進化合物を含んでおり、該吸収促進化合物の濃度は、調製物全体の約１−約５wt./wt.％である請求項２乃至４の何れかに記載の薬理学的調製物。
【請求項６】
ｉ)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質及びヒアルロン酸ナトリウム、ii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、レシチン及びヒアルロン酸ナトリウム、iii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム及びマツヨイグサ油、iv)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質及びバシトラシン、ｖ)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質、ヒアルロン酸ナトリウム及びバシトラシン、vi)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、オレイン酸及びガンマリノレン酸、vii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質及びグリコール酸、viii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質、グリコール酸及び乳酸、からなる群から選択された組合せを含んでいる請求項１に記載の薬理学的調製物。
【請求項７】
薬剤は、インシュリン、ヘパリン、低分子量型ヘパリン、ヒルログ、ヒルゲン、ヒルジン、インターフェロン、インターロイキン、サイトカイン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、化学治療剤、ワクチン、糖蛋白、細菌トキソイド、ホルモン、カルシトニン、インシュリン様成長因子(ＩＧＦ)、グルカゴン様ペプチド(ＧＬＰ−１)、大分子抗生物質、蛋白質基の血栓溶解化合物、血小板阻害剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、遺伝子治療剤アンチセンスオリゴヌクレオチド、オピオイド、麻酔薬、鎮痛薬、ＮＳＡＩＤＳ、ステロイド、睡眠薬、慢性疼痛の処置用薬剤及びモルヒネからなる群から選択される請求項１乃至６の何れかに記載の薬理学的調製物。
【請求項８】
薬剤は、インシュリンである請求項７に記載の薬理学的調製物。
【請求項９】
調製物は更に、フェノール、メチルフェノール、その混合物からなる群から選択されるフェノール化合物を含んでいる請求項１乃至８の何れかに記載の薬理学的調製物。
【請求項１０】
調製物は、エアゾール容器に収容され、該容器には噴射剤が充填される請求項９に記載の薬理学的調製物。
【請求項１１】
噴射剤は、テトラフルオロエタン、テトラフルオロプロパン、ジメチルフルオロプロパン、ヘプタフルオロプロパン、ジメチルエーテル、ｎ−ブタン及びイソブタンからなる群から選択される請求項１０に記載の薬理学的調製物。
【請求項１２】
口腔粘膜を通じて調製剤を吸収させるために、患者の口腔へ調製剤をスプレーすることを含む投与方法において使用される請求項１乃至１１の何れかに記載の薬理学的調製物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ペプチド薬剤、ワクチンやホルモンなどの高分子薬剤を投与するための移送システム(delivery system)の改良に関する。本発明は、特に、口又は鼻の膜を通じて投与される薬剤に関する。
【０００２】
発明の背景
経口ペプチド及び蛋白質調製物については、大学や企業の研究所において多大な努力が払われているにも拘わらず、大きな躍進は成し遂げられていない。ペプチド及び蛋白質に関して、安全で効果的な経口調製物を得るという目標については、相対的にほとんど前進は認められない。蛋白質及びペプチドに関する経口調製物を発展させる上で大きな障壁となっているものに、固有浸透性(intrinsic permeability)の不足、ルーメン及び細胞の酵素分解、クリアランスの速さ及び、胃腸(gastrointestinal: GI)管の化学的安定性などがある。これらの障壁に取り組むための薬学的アプローチは、従来の小さな有機薬剤分子に対しては成功しているが、有効ペプチドや蛋白質調製物では成功していない。挑戦することは有意味であるけれども、特にインシュリンを使用する糖尿病治療の分野において、潜在的な治療的利益は依然として大きい。
【０００３】
科学者らは、蛋白質やペプチドについては、注射よりも他の様々な投与ルートを研究してきた。大分子を効果的に移送させるための投与ルートとして、口、鼻孔、直腸、膣などがある。これら４つのルートの中で、科学者にとって大いに関心のある箇所は口と鼻孔である。口膜と鼻膜は両方とも、その他の投与ルートと比べて利点がある。例えば、これらの膜を通じて投与された薬剤は、作用の発現が速く、治療的血漿レベルをもたらし、肝代謝の第１パス効果を回避し、薬剤が好ましくないＧＩ環境へさらされないようにすることができる。また、膜部位へ近づくことは容易なので、薬剤の適用、位置決め、取出しを容易に行なえる追加の利点がある。さらに、大分子は時間をかけてこれらの膜を移送するので、薬の効き目も良好である。
【０００４】
経口ルートは、その他のルートよりも多く注目されてきた。舌下粘膜には、舌下面の膜と、口腔底部があり、頬粘膜は頬のライニングを構成している。舌下粘膜は比較的浸透性を有しているから、多くの薬剤に関して吸収が速く、生物学的利用能(bioavailability)についても許容される。さらに、薬剤を舌下粘膜の所へもっていくことが容易であるので、都合が良い。このルートは、大量の薬剤を移送させるために、臨床的に研究されてきた。
【０００５】
分子が口粘膜を浸透する能力は、分子の大きさ、脂質溶解性及びペプチド蛋白質のイオン化と関係があると考えられる。１０００ダルトンより小さい分子は、粘膜を速やかに通過すると考えられる。分子サイズが増すにつれて、浸透性は急激に低下する。脂質溶解性化合物は、脂質非溶解性分子よりも浸透しやすい。吸収が最大となるのは、イオン化されていないか、電荷がニュートラルのときである。それゆえ、荷電分子は、口粘膜を通じて吸収する際の最大の課題となる。
【０００６】
多くの蛋白質含有薬剤(proteinic drug)は、分子量が６０００ダルトンを越える非常に大きな分子である。これらの大分子は、脂質溶解性が大変乏しく、事実上、不浸透性である。大分子(＞２０００ダルトン)の生体膜への吸収又は運搬を容易にする物質は、エンハンサー(enhancers)として知られている [Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic drug Carrier Systems, 8, 115, 1991, 1992]。エンハンサーは、キレート化剤、胆汁酸塩、脂肪酸、合成親水性化合物、合成疎水性化合物、及び生物分解性の重合体化合物として特徴づけられる。
【０００７】
エンハンサーの作用に関しては、様々なメカニズムが提案されている。作用のこれらメカニズムには、少なくとも蛋白質及びペプチド薬剤については、(１)粘膜層の粘性及び／又は弾性を低下させること、(２)膜の脂質二重層の流動性を増すことにより、経細胞輸送(transcellular transport)を容易にすること、(３)薬剤の熱力学的活性を高めること、が挙げられる [Critical Rev, 117-125, 1991, 1992]。
【０００８】
これまでにも、多くのエンハンサーが試験されてきた。その中には、大分子の薬剤の粘膜投与を容易にすることに効果的なものもあることがわかった。しかしながら、浸透促進効果が市場要求レベルに達したものは殆んどなかった。この理由として、刺激(irritation)に関して満足し得る安全プロファイルの欠如、バリヤー機能の低下、粘膜毛様体クリアランス保護メカニズムの欠陥などが挙げられる。特に、エンハンサーの使用、特に胆汁酸塩及び幾つかの蛋白質溶解剤を使用するときに考えられる主要因は、極端に苦いことと、味が不快なことである。このため、ヒトが毎日それらを摂取することは殆ど不可能である。胆汁酸塩ベースの移送システムの味を改良するために、幾つかの方法が行われたが、どれもが、ヒトに摂取させる上で商業的に満足し得るものではなかった。これまでの方法では、頬粘膜用パッチ、二層タブレット、制御放出タブレット、プロテアーゼ阻害剤が用いられたり、頬投与用フィルムパッチ装置及び種々のポリマーマトリックスが使用されている。
【０００９】
上記技術に関する基本的な問題は、大分子の膜移動を促進させるのに、パッチやタブレットを使用する局部移送システムの形態で、大量の胆汁酸及びその塩を使用していることである。プロテアーゼ阻害剤及びポリマーコーティングを使用しているけれども、これまでの技術では、所望される治療濃度の蛋白質含有薬剤を移送させることはできなかった。さらにまた、パッチが局部的に適用される結果、口内に重度の組織損傷が生じた。これまでは、１種類の胆汁酸又はエンハンサーを、プロテアーゼ阻害剤及び生体分解性ポリマー物質と組み合わせて使用し、大分子を口、鼻、直腸及び膣のルートを経て移送しようとするものが殆んどであった。しかしながら、これら調製物を用いて、蛋白質含有薬剤の治療レベルに到達させることは極めて難しい。１種類のエンハンサーでは、大分子がさらなる分解を起こさずに粘膜を通過できるようにするため、所定の時間内にて、口、鼻、直腸及び膣などの腔内で強固な細胞結合を分離させることはできない。この問題があるため、上記システムの商業的目的での使用を不可能にしている。
【００１０】
大分子を舌下、頬及び胃腸(ＧＩ)管膜の粘膜ライニングを浸透させる際、味が苦いことや刺激を与えるといった前記の問題を解消するために、現在では、例えば卵黄蛋白質(レシチン)のようなエンハンサーとの組合せから成る混合ミセル(mixed micelles)の中に蛋白質薬剤が詰め込まれたシステムが用いられている。このシステムは、プロテアーゼ活性が高度に保存されたｇＩ運動性移動(motility movement)によるＧＩ管の場合と同様に、口膜のパラ細胞結合(強固結合)を解除させることができ、酸性で蛋白分解性の不適ＧＩ環境における早期分解から分子を保護する。
【００１１】
混合ミセルは、高能率(被包は＞９０％)で、分子を被包する(encapsulate)ものと考えられている。これらの混合ミセルは、サイズが極めて小さく(１ｎｍ−１０ｎｍ)、口腔又はＧＩ管内の膜の孔より小さい。このように、混合ミセルのサイズが極めて小さくなると、被包された分子が口腔の粘膜を効率良く透過させるはたらきがあると考えられている。
【００１２】
蛋白質とペプチドの吸収は、混合ミセル形態で取り込まれた大分子が、水性ポア(aqueous pores)の中を拡散することにより、また、強固なパラ細胞結合の細胞構造の攪乱により、促進されると考えられている。
【００１３】
本発明の組成物における生理学的活性ペプチド又は蛋白質の量は、一般的には、投与されるペプチド又は蛋白質が生理学的活性(治療的血漿レベル)を作り出すのに有効な薬剤量である。どんな活性物質も生物学的利用能が１００％になることはあり得ず、服用した活性薬剤が完全に吸収されるわけではないことを考慮すると、必要量より若干多くの量を含めることが望ましい。服用形態が、スプレー(エアゾール)のように、同じ容器から繰り返して投与される場合、単位服用量は必要量よりも少し多くなるようにすることが望ましい。服用量は、ヒト、家畜などの温血動物の種や、それら動物の体重によって異なることは理解されるべきである。この発明の組成物は、用いられるエンハンサー化合物の特性を適当な組み合わせた調製方法により、超微細な液滴(１−１０ｎｍより小さい)として調製される。薬剤がうまく吸収され特定部位に達するように、鼻孔又は口腔から効果的な吸入を行なうには、粒子サイズを十分に小さなものとする必要があり、そのためには、アトマイザー又はエアゾールスプレー器具(薬剤の計量付き吸入器又は噴霧器)が有用である。
【００１４】
本発明の治療組成物は、室温又は低温で保存される。蛋白質含有薬剤は、薬剤の分解を防止し、それらの寿命向上のために、低温で保存することが望ましい。本発明の混合ミセル状治療組成物は、粘膜へ適用されるので、投与部位は、通常の粘膜治療調製物に対して投与される部位と同じであってよい。投与される部位としては、一般的には、口、皮膚又は鼻が好ましいが、直腸又は膣の粘膜へ施すこともできる。使用される生理学的活性ペプチド又は蛋白質、服用形態及び投与部位により、それに応じた特定の投与方法を選択することができる。
この明細書で用いられる「エデテート」なる語は、エチレンジアミン四酢酸の薬理学的に許容される塩を意味している。
【００１５】
混合ミセル調製物の浸透及び吸収の改良は、混合ミセル調製物を噴射剤(propellant)と混合することによって達成される。この噴射剤として、例えばテトラフルオロエタン、ヘプタフルオロエタン、ジメチルフルオロプロパン、テトラフルオロプロパン、ブタン、イソブタン、ジメチルエーテルの他、非ＣＦＣ及びＣＦＣ噴射剤が挙げられる。これらの服用は、計量付きスプレー器具によって行われることが望ましい。計量付き吸入器は知られており、肺病用薬剤を投与するのに用いられるものが一般的である。噴射剤を含む本発明の調製物は、多くの調製物の吸収、安定性及び性能の品質を改良することを企図している。組成物は、ポアを通る浸透を促進すると共に、血漿が治療レベルに達するように薬剤の吸収を容易ならしめるために選択されてきた。本発明の調製物は、頬から吸収されるようにしているので、調製物がスプレーされるとき、ヒトが調製物を吸入することはない。また器具自体は自己収納式であるので、アトマイザー又は吸入器を使用することの利点の１つとして、汚染の可能性は最少に抑えられることを挙げることができる。
【００１６】
発明の要旨
本発明は、混合ミセル状薬理学的調製物(mixed micellar pharmaceutical formulation)を提供するもので、該調製物は、ミセル形態の薬剤(pharmaceutical agent)と、水と、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％であるアルカリ金属ラウリルスルフェートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％である薬理学的に許容されるエデテートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％である少なくとも一種のアルカリ金属サリシレートと、少なくとも一種の吸収促進化合物とを含んでおり、該化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、ルリヂサ油(borage oil)、マツヨイグサ油(evening primrose oil)、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、トリオレイン及びその混合物からなる群から選択され、各々の吸収促進化合物は、調製物全体の１−１０wt./wt.％の濃度で存在しており、吸収促進化合物の合計濃度は、調製物の５０wt./wt.％よりも少ない。
【００１７】
一実施例において、アルカリ金属ラウリルスルフェート、エデテート及びアルカリ金属サリシレートは、夫々、濃度が調節物全体の２−５wt./wt.％である。  一実施例において、エデテートは、アルカリ金属エデテートである。アルカリ金属エデテートは、エデト酸２ナトリウム、エデト酸２カリウム及びその組合せからなる群から選択されることが望ましい。
【００１８】
他の実施例において、アルカリ金属ラウリルスルフェートは、ラウリル硫酸ナトリウムである。
さらなる実施例において、アルカリ金属サリシレートは、サリチル酸ナトリウムである。
他の実施例において、レシチンは、例えばPhospholipon-H(ホスホリポン−Ｈ)商標名)の如き飽和リン脂質、例えばPhospholipon-G(ホスホリポン−Ｇ)(商標名)の如き不飽和リン脂質、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリン及びリゾレシチンからなる群から選択される。
【００１９】
一実施例において、吸収促進化合物の１つは、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩及びその混合物からなる群から選択され、吸収促進化合物の濃度は、調製物全体の約１−約５wt./wt.％の濃度である。
他の実施例において、混合されたミセル状薬理学的調製物は、鼻通路を刺激しないように適当に希釈され、鼻通路を経て移送するのに適している。
【００２０】
本発明の他の目的は、エアゾールを用いて移送させるのに好適な混合ミセル状薬理学的調製物を提供するもので、該調製物は、ミセル形態の薬剤と、水と、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％であるアルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％である薬理学的に許容されるエデテートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％である少なくとも一種のアルカリ金属サリシレートと、少なくとも一種の吸収促進化合物とを含んでおり、該化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、ルリヂサ油、マツヨイグサ油、メントール、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン及びそれの薬理学的に許容される塩、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、ポリドカノルアルキルエーテル及びそのアナローグ、トリオレイン及びその混合物からなる群から選択され、吸収促進化合物は各々が、調製物全体の１−１０wt./wt.％の濃度で存在しており、吸収促進化合物の合計濃度は、調製物の５０wt./wt.％よりも少ない。
【００２１】
本発明のさらに他の目的は、混合されたミセル状エアゾール薬理学的調製物を提供するもので、該調製物は、i)フェノール化合物と、ii)噴射剤と、をさらに含んでおり、i)のフェノール化合物は、フェノール及びメチルフェノールからなる群から選択され、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％であり、ii)の噴射剤は、Ｃ１−Ｃ２ジアルキルエーテル、ブタン、フルオロカーボン噴射剤、水素含有フルオロカーボン噴射剤、クロロフルオロカーボン噴射剤、水素含有クロロフルオロカーボン噴射剤及びその混合物からなる群から選択される。
【００２２】
一実施例において、アルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェートは、濃度が調製物全体の２−５wt./wt.％である。
他の実施例において、アルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェートは、ラウリル硫酸ナトリウムである。
他の実施例において、レシチンは、飽和又は不飽和であり、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリン及びリゾレシチンからなる群から選択されることが望ましい。
【００２３】
さらに他の実施例において、吸収促進化合物の一種は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、ポリドカノルアルキルエーテル、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン、ポリオキシエチレンエーテル及びその混合物からなる群から選択され、吸収促進化合物の濃度は、調製物全体の約１−約５wt./wt.％である。
さらなる他の実施例において、調製物は、ｉ)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質及びヒアルロン酸ナトリウム、ii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、レシチン及びヒアルロン酸ナトリウム、iii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム及びマツヨイグサ油、iv)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質及びバシトラシン、ｖ)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質、ヒアルロン酸ナトリウム及びバシトラシン、vi)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、オレイン酸及びガンマリノレン酸、vii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質及びグリコール酸、viii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、飽和リン脂質、グリコール酸及び乳酸、からなる群から選択された組合せを含んでいる。
【００２４】
例えばインシュリン等の薬剤と噴射剤の比は、１：１９乃至１：３であることが望ましい。
他の実施例において、噴射剤は、テトラフルオロエタン、テトラフルオロプロパン、ジメチルフルオロプロパン、ヘプタフルオロプロパン、ジメチルエーテル、ｎ−ブタン及びイソブタンからなる群から選択される。
【００２５】
さらに他の実施例において、混合されたミセル状薬理学的調製物は、エアゾールディスペンサーの中に収容される。
インシュリンを含有するその他調製物については、調製物は、胃腸管のチャネルを開く作用を有する少なくとも一種の無機塩を含んでもよく、インシュリンを放出するために追加の刺激を与えることもできる。無機塩の例として、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及び亜鉛塩などを挙げることができ、より具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化亜鉛及び炭酸水素ナトリウムなどを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。
【００２６】
当該分野の専門家であれば、多くの薬理学的調製物について、薬理学的活性成分の分解と酸化を防止するために、少なくとも一種の酸化防止剤を加えてもよいことは理解されるであろう。当該分野の専門家であれば、着色剤、着香剤、及びその他の化合物でも治療的作用をもたらさない量であれば、調製物の中に含まれてもよいことは理解されるであろう。代表的な着香剤として、メントール、ソルビトールを挙げることができる。
【００２７】
一実施例において、酸化防止剤は、トコフェロール、デターオキシムメシレート(deteroxime mesylate)、メチルパラベン、エチルパラベン、アスコルビン酸及びその混合物からなる群から選択される。望ましい酸化防止剤はトコフェロールである。
望ましい実施例において、蛋白質分解酵素の作用による薬剤の分解を抑えるため、少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤が調製物に加えられる。公知のプロテアーゼ抑制剤の中で、調製物の１−３wt./wr.％の濃度が最も効果的である。
【００２８】
有効なプロテアーゼ阻害剤の例として、バシトラシン、大豆トリプシン、アプロチニン、及び例えばバシトラシンメチレンジサリシレートなどのバシトラシン誘導体を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。これらの中でバシトラシンが、濃度１.５−２wt./wt.％で用いられるときに、最も有効である。大豆トリプシンとアプロチニンは、調製物の約１−２wt./wt.％濃度で使用される。
口粘膜を通じて移送させるのに適当な調製物として、チューイング形態のものであってよく、その場合には、そのような形態をするのに適した成分を添加することが必要であろう。そのような成分として、グアーガム、粉末アカシア、カラゲニン、密ろう、ザンサンガムなどを挙げることができる。
【００２９】
薬剤は、処置されるべき疾患に応じて、多種多様にわたる高分子剤、一般的には、分子量が約１０００よりも大きく、一般的には約１０００乃至２００００００の高分子剤から選択することができる。薬剤は、インシュリン、ヘパリン、低分子量型ヘパリン、ヒルログ、ヒルゲン、フリジン、インターフェロン、インターロイキン、サイトカイン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、化学治療剤、ワクチン、糖蛋白、細菌トキソイド、ホルモン、カルシトニン、インシュリン様成長因子(ＩＧＦ)、グルカゴン様ペプチド(ＧＬＰ−１)、大分子抗生物質、蛋白質基の血栓溶解化合物、血小板阻害剤、ＤＮＡ、ＲＮＡ、遺伝子治療剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、オピオイド、麻酔薬、鎮痛薬、ＮＳＡＩＤＳ、ステロイド、睡眠薬、慢性疼痛の処置用薬剤及びモルヒネからなる群から選択される。
【００３０】
本発明はまた、経皮膜を通して移送させるのに適した薬理学的調製物を調製する方法を提供するものであり、該方法は、ａ）水性媒体中でミセル形態の薬剤組成物を調製するステップを有しており、薬剤組成物中には、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％のアルカリ金属サリシレートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％のアルカリ金属ラウリルスルフェートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％で薬理学的に許容されるエデテートとを含んでおり、ｂ）ミセル状薬剤組成物を、激しく混合しながら、少なくとも１種の吸収促進化合物に、ゆっくりと加えて混合ミセル調製物を生成するステップを有しており、吸収促進化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、ルリヂサ油、マツヨイグサ油、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、トリオレイン及びその混合物からなる群から選択されるものであり、吸収促進化合物は各々が、調製物全体の１−１０wt./wt.％の濃度で存在しており、アルカリ金属サリシレート、アルカリ金属ラウリルスルフェート、エデテート及び吸収促進化合物の合計濃度は、調製物の５０wt./wt.％よりも少ない。
【００３１】
本発明の方法の一実施例において、激しい混合を継続しながら、ステップｂ)で加えたものとは異なる吸収促進化合物を少なくとも一種加える追加のステップを有しており、該吸収促進化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、ルリヂサ油、マツヨイグサ油、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、トリオレイン及びその混合物からなる群から選択される。
【００３２】
一実施例において、アルカリ金属ラウリルスルフェートはラウリル硫酸ナトリウムである。
他の実施例において、アルカリ金属サリシレートはサリチル酸ナトリウムである。
さらなる実施例において、アルカリ金属エデテートは、エデト酸２ナトリウム及びエデト酸２カリウムからなる群から選択される。
本発明のさらに他の実施例において、調製物は、ｉ)飽和リン脂質及びヒアルロン酸ナトリウム、ii)飽和リン脂質及びグリコール酸、iii)レシチン及びヒアルロン酸ナトリウム、iv)飽和リン脂質、グリコール酸及び乳酸、v)ヒアルロン酸ナトリウム及びマツヨイグサ油、vi)飽和リン脂質及びバシトラシン、vii)飽和リン脂質、ヒアルロン酸ナトリウム及びバシトラシン、viii)ヒアルロン酸ナトリウム、オレイン酸及びガンマリノレン酸、からなる群から選択される組合せを含んでいる。
【００３３】
本発明は、エアゾールを用いて移送させるのに適した混合ミセル薬理学的組成
物を調製する方法を提供するものであり、該方法は、
ａ）水性媒体中でミセル形態の薬剤組成物を調製するステップを有しており、薬剤組成物中には、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％のアルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％で薬理学的に許容されるエデテートと、濃度が調製物全体の１−１０wt./wt.％の少なくとも一種のアルカリ金属サリシレートとを含んでおり、
ｂ）ミセル状薬剤組成物を、激しく混合しながら、少なくとも１種の吸収促進化合物に、ゆっくりと加えて混合ミセル調製物を生成するステップを有しており、吸収促進化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、ルリヂサ油、マツヨイグサ油、メントール、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン及びそれの薬理学的に許容される塩、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、ポリドカノルアルキルエーテル及びそのアナローグ、トリオレイン及びその混合物からなる群から選択されるものであり、必要に応じて、さらに、
ｃ）激しい混合を継続しながら、ステップｂ）で加えたものとは異なるミセル形成化合物を少なくとも一種加える追加のステップを有しており、該化合物は、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬理学的に許容される塩、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、モノオレイン、ルリヂサ油、マツヨイグサ油、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、トリオレイン、ポリオキシエチレンエーテル及びそのアナローグ、ポリドカノルアルキルエーテル及びそのアナローグ、及びその混合物からなる群から選択されるものであり、
ｄ）前記ａ）乃至ｃ）のステップで得られた混合ミセル調製物を、フェノール、ｍ−クレゾール及びその混合物からなる群から選択されたフェノール化合物と混合するステップを有しており、次に、
ｅ）調製物をエアゾールディスペンサーの中に入れ、該ディスペンサーに噴射剤を充填するステップを有しており、
ここで、各々の吸収促進化合物は、調製物全体の１−１０wt./wt.％の濃度で存在しており、アルカリ金属サリシレート、アルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェート、エデテート及び吸収促進化合物の合計濃度は、調製物の５０wt./wt.％よりも少ない。
【００３４】
激しい混合は、例えば、磁気攪拌機又はプロペラ攪拌機などの高速攪拌機や、音波処理によって行なうことができる。
一実施例において、混合ミセル状調製物は、レシチンの存在下で、水性ミセル薬剤組成物を音波処理することにより形成される。
【００３５】
【望ましい実施例の詳細な説明】
本発明は、高分子(高分子量)薬剤を、特に、鼻、口、膣又は直腸の粘膜を通じて移送するための改良された方法を提供するものである。移送は、口腔及び鼻孔を通じて行なうことが望ましい。薬剤には、蛋白質、ペプチド、ホルモン、ワクチン及び薬剤を含む幅広い薬剤が含まれる。高分子薬剤の分子量は、１０００以上、特に１０００〜２００００００の範囲が望ましい。
【００３６】
例えば、本発明において投与できるホルモンとして、チロイド(甲状腺剤)、アンドロゲン、エストロゲン、プロスタグランジン、ソマトトロピン、ゴナドトロピン、エリトロポイエティン、インターフェロン、インターロイキン、ステロイド及びサイトカインを挙げることができる。本発明において投与できるワクチンには、細菌性ワクチン及びウイルス性ワクチンがあり、例えば、肝炎、インフルエンザ、結核、カナリア痘、水疱瘡、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、肺炎、ＢＣＧ、ＨＩＶ及びＡＩＤＳに対するワクチンがある。本発明において投与できる細菌トキソイドには、ジフテリア、破傷風、シュードモナス(pseudonomas)及びミコバクテリウム結核が挙げられる。特定の心臓血管又は血栓溶解剤として、ヘパリン、ヒルゲン、ヒルロス(hirulos)及びヒルジンを挙げることができる。本発明において有効に投与される大分子には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体及び免疫グロビンがある。
【００３７】
薬剤の濃度は、疾病の治療又は予防に効果があり、また、動物又はヒトの生理学的状態を調整するのに十分な量であればよいことは、理解されるべきである。投与される薬剤の濃度又は量は、薬剤の種類と、例えば経口や鼻孔等の投与方法に対して決定されるパラメータに依存する。例えば、鼻から投与される調製物では、鼻孔の刺激は炎症を回避するため、成分によってはかなり低い濃度を要求される傾向がある。鼻から投与される好適な調製物を供給するために、経口用調製物を１０〜１００倍に希釈することが望まれる場合もある。
【００３８】
混合ミセル調製物は、まず、薬理学的に活性な薬剤、アルカリ金属Ｃ８−Ｃ２２アルキルスルフェート、エデテート及びアルカリ金属スルフェートを含む第１ミセル組成物により調製される。これら組成物を、鼻、口、膣又は直腸の腔を通じて投与するために、第１ミセル組成物は次に、少なくとも一種の吸収促進化合物に添加され、混合ミセル組成物を生成する。引き続いて、少なくとも一種の他の吸収促進化合物を添加してもよい。第１吸収促進化合物はレシチンであることが望ましい。
【００３９】
エアゾール調製物を作る場合には、フェノール及び／又はｍ−クレゾール及び／又は等張剤(isotonic agent)を添加する。調製物は、エアゾールディスペンサーの中に入れて、ディスペンサーに噴射剤を充填する。
望ましい噴射剤は、水素含有クロロフルオロカーボン、水素含有フルオロカーボン、ジメチルエーテル及びジエチルエーテルである。さらに望ましくは、ヒドロフルオロアルカン(ＨＦＡ)１３４ａ(１,１,１,２テトラフルオロエタン)である。
【００４０】
本発明は幅広い適用が可能であるが、以下では、糖尿病治療に使用されるインシュリンとそのアナローグについて説明する。
前述したように、本発明の組成物にあっては、薬剤調製物は混合ミセルの形態であることを必要とする。
【００４１】
インシュリンの場合、これは鼻又は口腔を通じて投与されるものであるが、第１ミセル溶液は、粉末状のインシュリンに緩衝溶液を添加し、粉末が溶けて、透明な溶液が得られるまで撹拌することによって作ることができる。一般的な緩衝溶液は、サリチル酸ナトリウムとラウリル硫酸ナトリウムとエデト酸２ナトリウムの水溶液である。水溶液中のサリチル酸ナトリウムとラウリル硫酸ナトリウムの一般的な濃度は、溶液中、化合物各々について夫々約１〜１０wt./wt.％である。一般的に、インシュリンは、最終的な調製物の約２〜４wt./wt.％となる量でミセル溶液中に存在する。一般的な濃度は、第１ミセル組成物の約１０wt./wt.％である。
【００４２】
ミセル溶液を次に、例えば超音波処理を用いて強く混合しながら、レシチンのような第１吸収促進化合物に徐々に添加し、混合ミセル状リポソーム溶液(mixed micelle liposomal solution)を生成する。その後、レシチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、グリコール酸、乳酸、カモミール抽出物、キュウリ抽出物、オレイン酸、リノレン酸、ルリヂサ油、マツヨイグサ油、トリヒドロキシオキソコラニルグリシン、グリセリン、ポリグリセリン、リジン、ポリリジン、トリオレインよりなる群から選択される少なくとも１つの他の吸収促進化合物を添加する。高速ミキサー又は音波処理機(sonicator)を用いて混合を行なうと、調製物中で、均一なミセル粒子サイズの分布を確実に得ることができる。
【００４３】
吸収促進化合物の各々は、存在する場合には、調製物全体の濃度の１〜１０wt./wt.％である。
ヒアルロン酸の望ましい塩は、アルカリ金属ヒアルロネート、アルカリ土類ヒアルロネート及びヒアルロン酸アルミニウムである。望ましい塩は、ヒアルロン酸ナトリウムである。ヒアルロン酸又はヒアルロン酸の薬学的に許容される塩の濃度は、調製物全体の１〜５wt./wt.％である。より望ましい範囲は、調製物全体の１.５〜３.５wt./wt.％である。
【００４４】
混合ミセル溶液には、その他の成分を添加してもよい。例えば、着香料、酸化防止剤、塩、プロテアーゼ阻害剤又は他の薬学的に許容される化合物を添加することができる。
一般的に、溶液中のミセル粒子のサイズは約１〜１０ｎｍ、望ましくは１〜５ｎｍである。このようなサイズ分布としているので、調製物及び薬剤は、口腔や鼻孔内の膜を通じて、効果的に確実に吸収される。
【００４５】
必須成分の具体的な濃度は、比較的簡単な実験によって決定できる。鼻孔又は口腔を通じて吸収させる場合には、注射又は胃腸管を通じて投与するのに通常必要とされる服用量を、例えば２倍や３倍に増すことが通常望まれる。
【００４６】
調製物の各成分の量は、薬剤及び適用部位によって異なることは理解されるべきである。口又は鼻に適用される望ましい調製物は、以下の化合物の組合せである：ｉ)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ホスホリポン−Ｈ及びヒアルロン酸ナトリウム；ii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、レシチン及びヒアルロン酸ナトリウム； iii)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム及びマツヨイグサ油；iv)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ホスホリポン−Ｈ及びバシトラシン；ｖ)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ホスホリポン−Ｈ、ヒアルロン酸ナトリウム及びバシトラシン；vi)ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデト酸２ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、オレイン酸及びガンマリノレン酸。
【００４７】
エアゾール調製物については、フェノールとｍ−クレゾールの混合物を添加することが望ましい。エアゾール調製物は、エアゾールディスペンサーに入れて、ディスペンサーに噴射剤を充填する。噴射剤は、非ＣＦＣ噴射剤が望ましい。
本発明の治療用組成物は、室温又は低温で保存することができる。蛋白質含有薬剤は、薬剤の劣化を防止し、貯蔵寿命を延ばすために、低温で保存することが望ましい。
【００４８】
前述したように、一般的に、口膜や鼻膜は投与に最適な部位であるが、組成物は直腸又は膣の粘膜へ投与することもできる。具体的な投与方法は、投与されるのが薬理学的活性なペプチドであるか又は蛋白質であるかにより、また、服用形態や投与箇所によって選択することができる。
この発明の調製物は、一般的に、適用される調整方法及び吸収促進剤の特性の適当な組合せにより、超微細(microfinｅ)なミセル粒子(１〜１０ｎｍ又はそれより小さい)として調製される。
【００４９】
口や鼻に適用する場合、スプレーが望ましいが、ドロップ、チューイングタブレット、チューイングガムや、その他の適当な形態としてもよい。鼻孔又は口腔から効果的に吸収するために、粒子サイズを更に小さくすると、アトマイザー又はエアゾールスプレー器具(計量付き吸入器又は噴霧器)を使用することができ、薬剤は、特定の部位までうまく到達して吸収される。ゼラチンカプセルに溶腸性コーティングを施して、ミセルが十二指腸又は大腸の辺りだけで放出され、胃の中では放出されないような薬剤移送システムを使用することもできる。
下記の実施例を参照して、本発明を説明する。
【００５０】
実験１
第１の実験は、比較目的のデータを得るために実施した。この実験例は、本発明の範囲に含まれない。
溶液は、０.５ｇのラウリル硫酸ナトリウム、０.５ｇのサリチル酸ナトリウム及び０.２５ｇのエデト酸２ナトリウムを溶解して調製した。この溶液に、４０ｍｇ(１０００ユニット)のインシュリンを添加して、攪拌しながら完全に溶かし、約１００ユニット／ｍＬのインシュリン溶液とした。
【００５１】
試験は、健康で糖尿病ではない５人のボランティアに、インシュリンを注射した。別の試験は、同じボランティアにインシュリンを経口投与した。ボランティアは、試験前の深夜から絶食し、４時間の調査の間、食事を採らなかった。
【００５２】
第１日目、ボランティアに１０ユニットのインシュリン(エリ・リリー(Eli Lilly)が市販する定速作用インシュリン)を注射した。第２日目、上記のように調製した経口インシュリンを、ボランティアに１００ユニット(１滴１ｍＬ、およそ２０滴)与えた(注射による投与量の１０倍である)。両試験において、バヤーのグルコメーター・エリート(Bayer's Glucometer Elite)を用いて、血液グルコース量を１５分毎にモニターした。
第１日目の試験(１０ユニットを皮下注射)を行なった５人のボランティアの平均結果は、下記の通りである。
【００５３】
【表１】
0004499282.tif 000002
【００５４】
第２日目の試験(１０ユニットを経口投与)を行なった５人のボランティアの平均結果は、下記の通りである。
【表２】
0004499282.tif 000003
【００５５】
これらの試験によれば、注射方法による場合に比べて、経口インシュリンは、効き始めが速く、低血糖症を起こすことなく血液グルコース量をより低くできることがわかる。肝性グルコースが生成されたために、リバウンド効果が生じていた。これは、インシュリンの吸収が不完全であったためと考えられる。
【００５６】
実験２
別の実験を比較目的のために実施した。この実験は、本発明の範囲には含まれない。
ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、エデテート及び吸収促進剤を用いることなく、(１０ｍｇのホスホリポン−Ｈ)中で経口インシュリン(１００ユニット)を調製し、健康なボランティアを絶食状態にして、経口インシュリンの血液中グルコースの下降効果を評価した。
【００５７】
ボランティアには、投薬前夜と朝の絶食を求めた。ボランティアに、この経口インシュリン調製物を口に入れて飲み込んでもらった。血液グルコース量は、バヤールのグルコメーター・エリートを用いて、１５分毎に３時間モニターした。５人のボランティアの平均結果を表３に示している。
【００５８】
【表３】
0004499282.tif 000004
これは、レシチンだけを含むインシュリンを経口投与しても、血液グルコースの下降効果が認められないことを示している。
【００５９】
実験３
次の実験は、本発明の範囲に含まれないものであって、比較目的のために実施した。
サリチル酸ナトリウム及びアルカリ金属エデテート(共に５重量％)を用いて、経口インシュリン(１００ユニット)を調合し、健康なボランティアを絶食状態にして、血液グルコース低下の効果を評価した。
【００６０】
ボランティアには、投薬前夜と朝の絶食を求めた。ボランティアに、この経口インシュリン調製物を口に入れて飲み込んでもらった。血液グルコース量は、バヤールのグルコメーター・エリートを用いて、１５分毎に３時間モニターした。５人のボランティアの平均結果を表４に示している。
【表４】
0004499282.tif 000005
【００６１】
これは、サリチル酸ナトリウムとアルカリ金属エデテートだけを含むインシュリンを経口投与しても、血液グルコースの低下に効果がないことを示している。さらに、この調製物は、刺激(irritation)や炎症を引き起こし、これは数時間続いた。
【００６２】
実験４
次の実験は、本発明の範囲に含まれないものであって、比較目的のために実施した。
１０ｍｇのホスホリポン−Ｈと共に、アルカリ金属エデテートとサリチル酸ナトリウム(共に５重量％)を用いて、経口インシュリン(１００ユニット)を調製し、健康な被験者に試験を行なった。血液グルコース量は、バヤールのグルコメーター・エリートを用いて、１５分毎に３時間モニターした。５人のボランティアの平均結果を表５に示している。
【００６３】
【表５】
0004499282.tif 000006
これは、サリチル酸ナトリウム、アルカリ金属エデテート及びホスホリポン−Ｈだけを含むインシュリンを経口投与しても、血液中のグルコース減少に効果がないことを示している。
【００６４】
実験５
次の実験は、本発明の範囲に含まれないものであって、比較目的のために実施した。
ウリル硫酸アルカリ金属(５重量％)だけを用いて、経口インシュリン(５０ユニット)を調合した。血液グルコース量は、バヤールのグルコメーター・エリートを用いて、１５分毎に３時間モニターした。ボランティアの平均結果を表６に示している。
【００６５】
【表６】
0004499282.tif 000007
このデータは、ラウリル硫酸アルカリ金属をだけを含むインシュリンを経口投与しても、健康な被験者の血液中のグルコース減少に殆んど代謝効果がないことを示している。この調製物は、被験者にかなりの刺激と炎症を引き起こし、これは２日間継続した。
【００６６】
実験６
次の実験は、本発明の範囲に含まれるものである。
ラウリル硫酸アルカリ金属とサリチル酸ナトリウム(共に４.４重量％)と、アルカリ金属エデテート(２.２重量％)を、ホスホリポン−Ｈ(１０ｍｇ)と共に用いて、ミセル経口インシュリン(５０ユニット)を調製し、健康なボランティアに試験した。
【００６７】
この方法は、ビーカーの中で、磁気撹拌具を用いて、ラウリル硫酸アルカリ金属、サリチル酸ナトリウム及びアルカリ金属エデテートを、水と共に成分が溶解するまで中速で混合し、緩衝溶液を生成することを含んでいる。インシュリン粉末を別のビーカーの中に入れて、この粉末に緩衝溶液を添加した。すべてのインシュリン粉末が溶解して透明な溶液が得られるまで、溶液を磁気攪拌棒を用いて連続的に攪拌した。このようにして生成されたミセル溶液は、清潔なガラス瓶に入れて冷蔵保存した。
【００６８】
次に、混合されたミセル状リポソームインシュリンを、ホスホリポン−Ｈと少量のイソプロピルアルコールを入れたガラスビーカーで調製した。ホスホリポン−Ｈを完全に溶解させるために、混合物を高速(１０００ｒｐｍ)で１０分間攪拌した。この溶液に、高速で連続的に攪拌しながら、ガラススポイトを用いて、ミセルインシュリン溶液を非常にゆっくり、慎重に滴下して添加した。溶液は、さらに３０分高速で撹拌して、均一なミセル粒子サイズの分布が確実に得られるようにした。
【００６９】
混合されたミセル溶液の試料をボランティアに経口投与した。
血液グルコース量は、バヤールのグルコメーター・エリートを用いて、１５分毎に３時間モニターした。５人のボランティアの平均結果を表７に示している。
【００７０】
【表７】
0004499282.tif 000008
このデータは、サリチル酸ナトリウム及びアルカリ金属エデテートと化合したラウリル硫酸アルカリ金属を含むインシュリンを、ホスホリポン−Ｈと共に経口投与することによって、健康なボランティアの血液中のグルコース量が少なくなり、代謝効果があったことを示している。
【００７１】
実験７
本発明の範囲に含まれる実験を行った。この実験例中、調製物は経口投与するためのものである。
ラウリル硫酸アルカリ金属とサリチル酸ナトリウム(共に４.４重量％)と、アルカリ金属エデテート(２.２重量％)を、ホスホリポン−Ｈ(１０ｍｇ)及びヒアルロン酸ナトリウムと共に用いて、経口インシュリン(５０ユニット)を調合した。この調製物を、絶食している健康な被験者に試験した。
【００７２】
この方法は、ビーカーの中で、磁気撹拌具を用いて、ラウリル硫酸アルカリ金属、サリチル酸ナトリウム及びアルカリ金属エデテートを、水と共に成分が溶解するまで中速で混合し、緩衝溶液を生成することを含んでいる。インシュリン粉末を別のビーカーの中に入れて、この粉末に緩衝溶液を添加した。すべてのインシュリン粉末が溶解して透明な溶液が得られるまで、溶液を磁気攪拌棒を用いて連続的に攪拌した。このようにして生成したミセル溶液は、清潔なガラス瓶に入れて冷蔵保存した。
【００７３】
次に、混合されたミセル状リポソームインシュリンを、ホスホリポン−Ｈと少量のイソプロピルアルコールを入れたガラスビーカーで調製した。ホスホリポン−Ｈを完全に溶解させるために、混合物を高速(１０００ｒｐｍ)で１０分間攪拌した。この溶液に、高速で連続的に攪拌しながら、ガラススポイトを用いて、ミセルインシュリン溶液を非常にゆっくり、慎重に滴下して添加した。溶液は、さらに３０分高速で撹拌して、均一なミセル粒子の分布が確実に得られるようにした。その後、撹拌を続けながら、ヒアルロネートと、少量のメントール及びソルビトールを添加した。
【００７４】
混合されたミセル溶液の試料をボランティアに経口投与した。
血液グルコース量は、バヤールのグルコメーター・エリートを用いて、１５分毎に３時間モニターした。５人のボランティアの平均結果を表８に示している。
【表８】
0004499282.tif 000009
【００７５】
このデータは、ラウリル硫酸アルカリ金属、サリチル酸ナトリウム、アルカリ金属エデテート、ホスホリポン−Ｈ及びヒアルロン酸ナトリウムと共にインシュリンを経口投与することによって、健康な被験者に、上述の調製物よりも、血液グルコース量を少なくすることができたことを示している。
【００７６】
実験８
本発明の範囲に含まれる実験をさらに行なった。この実験例中、調製物は経口投与するためのものである。
１０ｍＬの水に溶かした０.５ｇのラウリル硫酸ナトリウム、０.５ｇのサリチル酸ナトリウム及び０.２５ｇのエデト酸２ナトリウムを使用して、緩衝溶液を調製した。溶液には、インシュリンに添加して混合し、ミセルインシュリンを作成した。
【００７７】
これとは別に、１００ｍｇの粉末状のホスファチジルコリン−Ｈをガラスビーカーに加え、この粉末に１０ｍＬの５０％エタノールを添加した。粉末は、完全に溶解させた。この溶液に、１ｍＬのインシュリン溶液当たり３０ユニットとなるように、緩衝溶液３ｍＬに溶かした１６ｍｇ(４００ユニット)のミセルインシュリン溶液を、強く撹拌しながらゆっくりと添加し、混合ミセル溶液を作成した。これに、ヒアルロン酸ナトリウムを０.６ｍＬと、３％ソルビトールを含有する２％メントール溶液０.２ｍＬを添加した。
【００７８】
試験は、インシュリンを投与しているII型糖尿病患者１０人のボランティアを対象とし、１日３回注射を行なった。別の試験は、ボランティアに、インシュリンを経口投与して試験した。ボランティアは、試験前の深夜から絶食し、４時間の調査の間、食糧を採らなかった。
【００７９】
第１日目、ボランティアに１０ユニットのインシュリン(エリ・リリーから入手可能な定速で作用するインシュリン)を注射した。第２日目、上記のように調製した経口インシュリンを、ボランティアに３０ユニット(１滴１ｍＬ、およそ２０滴)与えた(注射による服用量の３倍である)。両試験において、バヤーのグルコメーター・エリートを用いて、血液グルコース量を１５分毎にモニターした。
第１日目の試験(１０ユニットを皮下注射)を行なった５人のボランティアの平均結果は、下記の通りである。
【００８０】
１０人のボランティアの平均を示す結果は、次の通りである。
【表９】
0004499282.tif 000010
この結果によれば、本発明の経口インシュリン調製物は、注射した量の３倍の服用量で、注射によるインシュリンと同等であることがわかる。
【００８１】
実験９
この実験例は、本発明に従って混合ミセル調製物を作る方法を示している。
２５０ｍＬ容量のガラスビーカーに、ラウリル硫酸ナトリウム５ｇ、サリチル酸ナトリウム５ｇ及びエデテート塩２.５ｇを添加した。ビーカーを磁気攪拌具とともにホットプレート上に置いた。この乾燥粉末混合物に、１００ｍＬの蒸留水を添加し、全粉末が溶解するまで磁気攪拌棒を用いて混合物を中速で攪拌した。緩衝溶液を、清潔なガラス瓶に入れて室温で保存した(ｐＨ６.５)。
【００８２】
次に、５０ｍＬ容量のガラスビーカーにミセルインシュリン溶液を調製し、ビーカーの中には、１１.５４ｍｇのインシュリン粉末を入れておいた。この粉末に１０ｍＬの緩衝溶液を添加した。すべてのインシュリン粉末が溶解して透明な溶液が得られるまで、溶液を磁気攪拌棒を用いて連続的に攪拌した。このようにして生成したミセル溶液は、清潔なガラス瓶に入れて冷蔵保存した。
【００８３】
次に、１００ｍｇのメントール結晶を５ｍＬのエタノールに溶解して２％メタノール溶液を調製した。この溶液に、５ｍｇのＦＤ＆Ｃ青色染料(FD & C blue dye)を添加した。溶液を１０分間攪拌し、ガラス瓶に入れて室温で保存した。
【００８４】
次に、混合されたミセル状リポソームインシュリンを５０ｍＬのガラスビーカーの中で調製し、ビーカーの中には、１００ｍｇのホスファチジルコリン(シグマ、タイプＩ＝ＥＨ、水素結合)を入れておいた。この粉末に１０ｍＬのイソプロピルアルコールを添加した。ホスファチジルコリンを確実に全て溶解させるために、混合物を約１０分間高速(１０００ｒｐｍ)で攪拌した。この溶液に、高速攪拌を行ないながら、ガラススポイトを用いてミセルインシュリン溶液を非常にゆっくり、慎重に滴下して加えた。均一なミセル粒子サイズの分布を得るために、溶液をさらに３０分間高速で連続的に攪拌した。この溶液に、２％メントール１ｍＬ及びナトリウムヒアルロナート５０ｍｇを添加した。半透明でライトブルー色のリポソームインシュリンが混合されたミセル溶液(最終的な量１５ｍＬ)を清潔なガラス瓶に入れて冷蔵した。溶液のｐＨは６.５であった。
【００８５】
ホスファチジルコリンが完全に溶解しない場合は、例えばウオーターバスを利用して、約４５℃までの加熱が必要となることがある。
ミセルインシュリン組成物をゆっくりと添加しなければ、混合ミセル調製物は生成されず、調製物はゼリー質及び粘着性となることが判った。
【００８６】
実験１０
本発明の調製物を鼻から投与したこと以外は、実験例８と同様な方法で、実験例９の調製物の試験を行なった。
第１日目、１０ユニットのインシュリン(エリ・リリーが市販する定速作用のもの)を１０人のボランティアに夫々投与した。第２日目、実施例９の「経口」インシュリン(注射投薬量の２倍)をボランティアに２０ユニット投与した。「経口」インシュリンは滴下して投与した(１滴０.４ｍＬの量、合計約４滴、即ち各鼻孔に２滴ずつ)。
【００８７】
１０人のボランティアの平均を示す結果は、下記の通りである。
【表１０】
0004499282.tif 000011
鼻から投与した本発明のインシュリン調製物は、注射した量の２倍の服用量で、注射によるインシュリンと同等であることがわかる。
【００８８】
実験１１
実施例９の調製物を用いて、食事後のグルコース(meal glucose)に対するインシュリン作用を測定する試験を健康なボランティアに実施した。
注射されたインシュリンは効果を生じるまで時間が掛かるので、通常は、糖尿病患者は食事の３０分前にインシュリン注射を行なう。注射されたインシュリンは、６０分以内にゆっくりと血流に吸収され、食事後のグルコース量に代謝効果を奏する。
【００８９】
実施例９の混合ミセル調製物を、管理状況下で健康なボランティアに試験し、注射したインシュリンと比較した場合の食事後のグルコースについて、経口インシュリンの効果を測定した。
試験は、健康で糖尿病でない１０人のボランティアに、インシュリンを注射した。別の試験は、同じボランティアにインシュリンを経口投与して試験を行なった。ボランティアは、試験前の深夜から絶食し、投薬後３０分後に食事を摂った。食事は、糖尿病協会(Diabetic Society)により承認された４００カロリーの標準的なサスタカル(Sastacal)２４０ｍＬ入りの流動食であった。
【００９０】
第１日目、ボランティアに１０ユニットのインシュリン(エリ・リリーが市販する定速作用インシュリン)を注射した。第２日目、上記のように調製した経口インシュリンを、ボランティアに３０ユニット与えた(注射による服用量の３倍である)。両試験において、バヤーのグルコメーター・エリートを用いて、血液グルコース量を１５分毎にモニターした。結果は、下記に示す通りである。
【００９１】
【表１１】
0004499282.tif 000012
この結果によれば、注射によるインシュリンと比較すると、経口インシュリンは健康なボランティアの食事後のグルコース量の制御に役立つことを示している。
【００９２】
実験１２
実施例９の混合ミセル調製物を、管理状況下で糖尿病であるボランティアに試験し、注射したインシュリンと比較した場合の食事時のグルコースについて、経口インシュリンの効果を測定した。
試験は、インシュリンを投与しているII型糖尿病患者１０人のボランティアを対象とし、１日３回注射を行なった。別の試験は、ボランティアに、インシュリンを経口投与して試験した。ボランティアは、試験前の深夜から絶食し、投薬後３０分後に食事を摂った。食事は、糖尿病協会により承認された４００カロリーの標準的なサスタカル２４０ｍＬ入りの流動食であった。
【００９３】
第１日目、ボランティアに１０ユニットのインシュリン(エリ・リリーが市販する定速作用インシュリン)を注射した。第２日目、上記のように調製した経口インシュリンを、ボランティアに３０ユニット与えた(注射による服用量の３倍である)。両試験において、バヤーのグルコメーター・エリートを用いて、血液グルコース量を１５分毎にモニターした。
【００９４】
１０人のボランティアの平均を示す結果は、次の通りである。
【表１２】
0004499282.tif 000013
この結果によれば、注射によるインシュリンと比較すると、経口インシュリンは糖尿病患者の食事後のグルコース量の制御に役立つことを示している。
【００９５】
実験１３
実施例９のリポソームインシュリン混合ミセル溶液に、グアルゴム、蜜ロウ、粉末アカシア、オレイン酸、ガンマ−リノレン酸及びソルビトールを加えながら、強く攪拌して、チューイングガムのインシュリン調製物を調製した。各３０ユニットのインシュリンについて、混合物は、エタノール溶液中に、１００ｍｇのグアルゴム、５０ｍｇの蜜ロウ、５０ｍｇの粉末アカシア、１００ｍｇのオレイン酸、１００ｍｇのガンマ−リノレン酸及び、３％のソルビトールを１ｍＬ含んでいた。混合物を、厚さ１０ｍｍになるまで、ポリエチレンテトラフルオロエチレンで被覆されたた平らなトレーに注いだ。混合物が凝固すると、凝固物を１ｃｍ×３ｃｍのスティック状に切断した。各スティックは約３０ユニットのインシュリンを含んでいた。
【００９６】
チューイングスティック形の混合ミセル調製物を、管理状況下で糖尿病であるボランティアに試験し、注射したインシュリンと比較した場合の食事後のグルコースについて、経口インシュリンの効果を測定した。
試験は、インシュリンを投与しているII型糖尿病患者５人のボランティアを対象とし、１日３回注射を行なった。別の試験は、ボランティアに、チューイングガムのインシュリンを経口投与して試験した。ボランティアは、試験前の深夜から絶食し、投薬後３０分後に食事を摂った。食事は、糖尿病協会により承認された４００カロリーの標準的なサスタカル２４０ｍＬ入りの流動食であった。
【００９７】
第１日目、ボランティアに１０ユニットのインシュリン(エリ・リリーから入手可能な定速で作用するインシュリン)を注射した。第２日目、上記のように調製したチューイングガムの経口インシュリンを、ボランティアに３０ユニット与えた(注射による服用量の３倍である)。両試験において、バヤーのグルコメーター・エリートを用いて、血液グルコース量を１５分毎にモニターした。
【００９８】
５人のボランティアの平均を示す結果は、次の通りである。
【表１３】
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【００９９】
実験１４
本発明の範囲に含まれる別の実験を行なった。この実施例中、調製物は経口投与するためのものである。
１０ｍＬの水に溶かした０.５ｇのラウリル硫酸ナトリウム、０.５ｇのサリチル酸ナトリウム及び０.２５ｇのエデト酸２ナトリウムを使用して、緩衝溶液を調製した。溶液を８ｍｇ(２００ユニット)のインシュリンに添加して混合し、ミセルインシュリンを作成した。
【０１００】
このミセル溶液に、０.２ｇのバシトラシンと０.５ｇのマツヨイグサ油を添加し、溶液を強く混合して、混合ミセルインシュリン溶液(約２００ユニット／ｍＬ)を生成した。
６人のボランティアを対象とした。ボランティアは、試験前の深夜から絶食し、４時間の調査の間、食糧を採らなかった。
【０１０１】
第１日目、ボランティアに１０ユニットのインシュリン(エリ・リリーから入手可能な定速で作用するインシュリン)を注射した。第２日目、上記のように調製した経口インシュリン(注射による服用量の２倍)を、ボランティアに２０ユニット与えた。両試験において、バヤーのグルコメーター・エリートを用いて、血液グルコース量を間隔をあけてモニターした。
【０１０２】
５人のボランティアの平均を示す結果は、次の通りである。
【表１４】
0004499282.tif 000015
この結果によれば、本発明の経口インシュリン調製物は、注射量の２倍の服用量で、注射によるインシュリンと同等であることがわかる。
【０１０３】
実験１５
さらに異なる実験を行なって、本発明の混合ミセル調製物を作成する別の方法を示した。
【０１０４】
２５０ｍＬ容量の丸底フラスコに、アメリカンレシチンカンパニー(American Lecithin Co.)から購入した飽和レシチン粉末(ホスホリポン−９０Ｈ)を１００ｍｇ添加した。この粉末に、５ｍＬの無水エタノール(ＵＳＰグレード)を添加した。次に、フラスコを回転式蒸発器に取り付けた。この蒸発器は、レシチンの酸化を最小限にするために、不活性雰囲気状態にする真空ポンプ及び窒素インレットを具えている。フラスコを真空下で１００〜１５０ｒｐｍで回転させた。フラスコ中の溶液をウオーターバスによって６０℃に加熱し、粉末を完全に溶解させた。粉末が完全に溶解した後、加熱を止め、減圧下の窒素雰囲気中で、回転速度を３００ｒｐｍに上げると、アルコールが完全に蒸発し、フラスコの側面に均一な薄膜が残った。内壁へ均一な被膜を確実に形成し、溶媒を完全に取り除くために、回転は少なくとも３０分以上続けた。３０分後、回転を止めて、減圧状態を解除した。
【０１０５】
このフラスコに、インシュリン水溶液、ラウリル硫酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム及び０.２５ｇのエデト酸２ナトリウムから調製したミセルインシュリン溶液を添加した。フラスコを、シェーカープレートを使って振り混ぜた。振り混ぜを少なくとも３０分間続けた後、溶液に高周波超音波処理プローブを用いて、さらに６０分間超音波処理を行ない、小さく均一な混合ミセルを生成した。得られた混合ミセルを、レーザー光散乱装置を具えるMalvern Zeta(商標名)粒子サイズ分布計測装置で解析した。この方法により得られた混合ミセルの粒子サイズは、２〜９ｎｍの間であった。この溶液に２％メタノール溶液１ｍＬとヒアルロン酸ナトリウム５０ｍｇを添加した。半透明、透明、ライトブルー色の溶液(最終的な量は１０ｍＬ)を、清潔なガラス瓶に保存して冷蔵した。溶液のｐＨは６.４であった。
【０１０６】
実験１６
本発明の範囲内に含まれる別の実験を行った。
１０ｍＬの水に溶かした０.５ｇのラウリル硫酸ナトリウム、０.５ｇのサリチル酸ナトリウム及び０.２５ｇのエデト酸２ナトリウムを使って緩衝溶液を調製した。この溶液に８ｍｇ(２００ユニット)のインシュリンを添加して混合し、ミセルインシュリンを生成した。
【０１０７】
このミセル溶液に０.５のルリヂサ油を添加し、該溶液を強く混合して、混合ミセルインシュリン溶液(約２０ユニット／ｍＬ)を生成した。