(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセチルコリン系神経の機能不全・脱落が関連しているHIV性痴呆におけるセレギリンまたはその薬理学的に許容される塩を有効成分とするアセチルコリン系神経伝達改善剤。
【請求項２】
シグマ受容体を介することを特徴とする請求項1記載のアセチルコリン系神経伝達改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
セレギリン（（Ｒ）−（−）−Ｎ，α−ジメチル−２−プロピニルフェネチルアミン）またはその薬学的に許容される塩を有効成分とするアセチルコリン系神経伝達改善剤を提供する。
【０００２】
【従来の技術】
学習、記憶の形成には、中枢アセチルコリン作動性神経系が重要な役割を果たしていることが広く知られ、そのなかでも、ＨＩＶ性痴呆に認められる認知障害は、前頭皮質のアセチルコリン神経シナプスの起始核が存在するマイネルト基底核のアセチルコリン系神経の機能不全・脱落が関連しているとされている。
【０００３】
アセチルコリン作動性神経系は、アセチルコリンを神経伝達物質としており、中枢アセチルコリン作動性神経系のシナプス間隙のアセチルコリンを増加させることが、上記疾患を改善する治療手段の一つとなりうるという考えに基づき、現在、タクリンなどのアセチルコリン分解酵素であるアセチルコリンエステラーゼを阻害するアセチルコリンエステラーゼ阻害剤が用いられている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、アセチルコリンエステラーゼ阻害薬は、間隙のアセチルコリンは劇的に増加させるが、シナプス間隙のアセチルコリン神経伝達のターミネーターであるアセチルコリンエステラーゼを阻害してしまうため、間隙のアセチルコリン濃度をコントロールすることは難しく、間隙のアセチルコリンがある閾値以上に上昇させ、痙攣等の重篤な副作用を起こし易い。また、さらに、従来のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、肝臓に分布する解毒酵素コリンエステラーゼも阻害してしまい、副作用として肝障害を誘発してしまう。そこでアセチルコリンエステラーゼ阻害薬とは別の機序の、神経伝達系を調整的に賦活し、且つ毒性の少ない薬の創成が期待されていた。
【０００５】
【発明が解決するための手段】
本発明者らは、鋭意研究した結果、式１で示されるセレギリン（（Ｒ）−（−）−Ｎ，α−ジメチル−２−プロピニルフェネチルアミン）が、アセチルコリンエステラーゼ阻害とは別のメカニズムでシナプス間隙のアセチルコリン神経伝達を調節的に促進することができることを知見し、本発明を完成した。
【０００６】
【化１】
0004600610.tif 000002
【０００７】
セレギリンは、１９６４年にハンガリーのＪ．Ｋｎｏｌｌらによって合成された選択的ＭＡＯ−Ｂ阻害剤（Ｂ型モノアミン酸化酵素阻害剤）であり、その塩酸塩は、パーキンソン病の治療薬として現在外国において使用されている薬剤である。
これまで、セレギリンは、脳内ＭＡＯ−Ｂ阻害剤の選択的阻害により、ドパミンの分解を抑制し、シナプス間隙でのドパミン量を増加させ、後シナプスへのドパミン受容体剌激を高め、アセチルコリン遊離を抑制して、中枢運動神経回路のドパミン／アセチルコリンのバランスを是正する薬剤であるとされていた
（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１８７，ｐ３６５〜３７１，１９７３、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１８９，ｐ７３３〜７４０，１９７４、Ｊ．ｏｆ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ，４３，ｐ１７７〜１９８，１９７８、Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  Ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４６，ｐ２３７〜２６２，１９８８）。
【０００８】
それ故、これまでの知見に従えば、セレギリンはアセチルコリン遊離を抑制する薬剤であり、本発明が目的とするアセチルコリン系神経伝達改善剤、すなわち、アセチルコリン系神経の機能不全・脱落が関連しているＨＩＶ性痴呆に認められる認知障害への治療改善剤にはなりえないと考えられるものであった。
【０００９】
しかしながら、本発明者らは、セレギリンがシグマ受容体に親和性を有し、この受容体を介し、アセチルコリン神経の膜電位を誘導し、シナプスでのエクソサイトシスを促進すること、この作用はレセプターを介した二次的な膜電位依存性の反応であり、極めて調節的であるので、副作用を発揮するところまではアセチルコリンを遊離しないこと、さらに、セレギリンは認知障害を示す疾病の共通した責任病巣と考えられているマイネルト基底核−前頭皮質投射性コリン作動系に対し、より特異的に作用する理想的な薬剤であることを知見し、本発明を完成した。
【００１０】
本発明におけるセレギリンの投与量は、塩酸塩としておおよそ１〜４０ｍｇ／日、好ましくは２〜１５ｍｇ／日、より好ましくは２．５〜１０ｍｇ／日であるが、勿論、これらの量以外でも、患者各々の症例に合わせて適宜増減することは可能である。
経口投与または非経口投与は、当業者における既知の技術に従って、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、坐剤、ハップ剤、テープ剤、経皮用スプレー剤、経鼻用スプレー剤、液剤、又は注射剤とすることで、好適な種々の製剤形態を選択できるが、投与は、朝１回／日、または朝及び昼間の２回／日が好ましく、夜又は就寝前の投与は望ましくない。
【００１１】
本発明は次の諸例にて一層容易に理解されるであろうが、この例は本発明を説明するものであって、本発明の範囲を制限するものではない。
【００１２】
【実施例１】
マイネルト基底核のアセチルコリン神経が投射している前頭皮質のアセチルコリン遊離に対するセレギリンの作用を検討した。
前頭皮質のアセチルコリン遊離を検討する方法は、Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓＡｒｃｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，３４２，ｐ５２８〜５３４，１９９０記載の脳内微小透析法を用い、まず透析プローブ用のガイドカニューレを脳定位固定装置下にペントバルビタール麻酔ラット（ウイスター系  ＳＬＣ社、８〜９週齢）の前頭皮質に挿入し、デンタルセメントで固定した（Ａ，２．０ｍｍ  ａｎｄ  Ｌ，２．０ｍｍ，３０゜ａｎｇｌｅ：Ｐａｘｉｎｏｓ  Ｇ．ａｎｄＣ．Ｗａｔｓｏｎ，Ｔｈｅ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ  ｉｎ  ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  ｃｏｏｒ−ｄｉｎａｔｅｓ．，２ｎｄ  ｅｄ．，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９８６．）。その後、２４時間以上ラットを単独飼育し麻酔の影響を取り除き、透析プローブをラット頭部の固定したガイドカニューレに挿入した。透析物を集めるに先立ち酸素をバブリングした１０μＭエゼリンを添加した灌流液を２．０μｌ／分にて挿入したプローブに灌流し、その後、セレギリン投与後２時間まで透析物を２０分間ごとにフラクションを採取し、直ちにアセチルコリンの量を下記条件で、高速液体クロマトグラフィーを用いてピーク面積を解析して定量した。
【００１３】
サンプル注入          ：２０μｌ（透析物）
固定化酵素カラム      ：  アセチルコリンエステラーゼ・コリンオキシダーゼ固定化カラム  （ＢＡＳ社製）
スチレンポリマーカラム：６０×２．０ｍｍ  （ＢＡＳ社製）
測定温度              ：３０℃
移動相（ｐＨ８．５）  ：４５０μＭ  ｓｏｄｉｕｍ  ｏｃｔａｎｅ  ｓｕｌｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（イオンペア剤）を含む０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４／Ｈ３ＰＯ４
流速                  ：０．３ｍｌ／ｍｉｎ
電気化学検出器        ：  ＬＣ−４１３  （ＢＡＳ社製）
印加電圧              ：４５０ｍＶ（ｖｓ  Ａｇ／ＡｇＣｌ）
【００１４】
投与前にフラクションされた透析液の濃度を１００％とし、アセチルコリンの透析液中の濃度の経時的変化をみた。
セレギリンは前頭皮質のアセチルコリン遊離を有意（Ｐ〈０．０５）に増加させた（図１）。
【００１５】
次にその用量反応関係をペンチレンテトラゾールのものと比較した。シナプス間隙のアセチルコリン過剰な増加は副作用として、不安やさらには痙攣を惹起する。ペンチレンテトラゾールの痙攣惹起作用はシナプス間隙のアセチルコリンの過剰な増加と関連していることが分かっているので、その用量反応関係から痙攣閾値を推定した。セレギリンの用量反応関係はペンチレンテトラゾールの直線的な増加とは異なり、マイルドなものであり、セレギリンのシナプス間隙のアセチルコリン増加作用は、副作用が発現する閾値以下のものであった。（図２）
また、セレギリンは線条体よりも、認知機能低下に関する疾病の責任病巣と考えられているマイネルト基底核−前頭皮質投射性コリン作動系に対してより選択的にアセチルコリン遊離促進を奏する薬剤であると考えられた。（図２）
【００１６】
【図１】
【００１７】
【図２】
【００１８】
【実施例２】
痴呆モデルに対するセレギリンの効果を検討した。
雄性ウイスター系ラット（日本ＳＬＣ，１０週令）を用いた。実験に際し、約１週間の予備飼育後使用した。温・湿度は、２３±３℃、５０±１０％で、１２時間  （７〜１９時点灯）の明暗サイクル下で飼育された。飼料は、固型飼料ＭＦ（オリエンタル酵母）を飲料水は水道水を自由に摂取させた。
【００１９】
ムスカリン性アセチルコリン受容体拮抗薬スコポラミンによる健忘症の誘発は試行の３０分前に臭化スコポラミン１ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．を投与し、モリス水迷路実験（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｍｏｒｒｉｓ：Ｊｏｕｏｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ，１１，４７−６０，１９８４）は、以下のように行った。
【００２０】
ａ）水を迷路にいれ、プラットホームは水面下２ｃｍとし、ミルクを入れ不透明とした。試験を通じて、水迷路、プラットホームの実験室の位置は変えなかった。実験室での主な備品及び実験中の実験者の位置も変更しなかった。
【００２１】
ｂ）１日２試行を５日間連続して行い、各試行間のインターバルは６０秒とした。まず、スタート地点においてラットを壁側に向かせ、プラットホームまでの到達時間を測定した。到達後、ラットはプラットホームに１０秒間放置しておいた。９０秒以内に到達できないラットは実験者がプラットホームにおき、１０秒間放置した。
【００２２】
その結果、セレギリンは２６日間連続投与（０．２５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）により、スコポラミンにより誘発された健忘症ラットのプラットホームまでの到達潜時を有意（Ｐ＜０．０５）に短縮し、学習行動を改善した。（図３）
【００２３】
【図３】
【００２４】
【実施例３】
トリチウム（３Ｈ−）ラベルしたシグマ受容体リガンドを用い、シグマ受容体に対するセレギリンの親和性を受容体結合実験にて検討した。リガンドにはシグマ受容体のサブタイプに非選択的なＤＴＧ（１，３−ジ−０−トリル−グアニジン）とシグマ受容体サブタイブσ１に親和性の高い３−ＰＰＰ（３−（３−ヒドロキシフェニル）−Ｎ−（１−プロピル）ピペリジン）を用いた。
【００２５】
受容体結合実験は、以下のように行った。
１）レセプター溶液の調製
Ｈａｒｔｌｅｙ系雄性モルモット（日本ＳＬＣ社）の全脳を摘出し、重量を測定した。その重量の１０倍量の氷冷０．３２Ｍスクロース溶液（ｐＨ７．４）中でホモジナイズし（モーター回転式テフロン製ペストルを備えたガラス製ホモジナイザー）、懸濁物を４℃で９００×ｇ、１０分間遠心した。得られた上清は４℃で２２０００×ｇ、２０分間遠沈し、沈渣に５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．４）を加えて懸濁した。この懸濁液を３７℃、３０分間インキュベーションした後、再度４℃で２２０００×ｇ、２０分間遠沈し、その沈渣に５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ８．０）１０ｍｌを加えて懸濁させた。
【００２６】
２）結合反応
チューブに５ｍＨリン酸バッファー（ｐＨ８．０）で調製した３Ｈ−ＤＴＧ（デュポン社）５０μ１と１００μＭのハロペリドール（リプレーサー）５０μｌの非共存下あるいは共存下に、調製したレセプター溶液を各々４００μｌずつ添加して２５℃９０分間インキュベーションを行った。なお、ハロペリドール共存下での３Ｈ−ＤＴＧの結合値を非特異的結合によるものと見なし、非共存下での３Ｈ−ＤＴＧ結合値（全結合値）から差し引いた値を特異的結合値とした。反応停止後、ガラスファイバーフィルター（ボアサイズ：０．５μｍ，Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃ）でレセプターと結合した３Ｈ−ＤＴＧ（結合型：Ｂ）と遊離型の３Ｈ−ＤＴＧ（遊離型：Ｆ）をＢ／Ｆ分離装置（Ｂｒａｎｄｅｌ社）で分離し、結合型のみを回収した。ガラスファイバーフィルターに吸着した結合型は、氷冷生理食塩水で洗浄し、ガラスファイバーフィルターをバイアル瓶に移し、シンチレーションカクテル１０ｍｌを加えて放射能を測定した。
【００２７】
被験薬物および３Ｈ−ＤＴＧは、５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ８．０）で溶解して使用し、添加する３Ｈ−ＤＴＧの濃度は、８ｎＭ（最終濃度：０．８ｎＭ）、被験薬物の濃度は、１０−８〜１０−４Ｍ（最終濃度）とした。各薬物のシグマ受容体に対する結合特異性は、各濃度での３Ｈ−ＤＴＧ結合値阻害率より求めた５０％阻害濃度（ＩＣ５０）で示した。３Ｈ−３−ＰＰＰの場合も上記の方法に順じ行った。また、３Ｈ−ラベルしたフェンサイクリジン受容体リガンド（３Ｈ−ＴＣＰ（１−［１−（２−チエニル）シクロヘキシル］  ピペリジン）を用い、フェンサイクリジン受容体に対するセレギリンの親和性をも調べた。方法は上記の方法に準じて行った。
【００２８】
シグマ受容体と３Ｈ−ＤＴＧの結合に対するセレギリンのＩＣ５０は３×１０−６Ｍであった。一方、３Ｈ−３−ＰＰＰの結合に対するセレギリンのＩＣ５０は３×１０−７Ｍであった。このことから、セレギリンは、シグマ受容体サブタイプσ１により親和性の高いリガンドであると考えられる。
【００２９】
Ｎ−アリルノルメタゾシン（Ｎ−Ａｌｌｙｌｎｏｒｍｅｔａｚｏｃｉｎｅ）などのベンゾモルファン系化合物は、シグマ受容体リガンドでもあり、フェンサイクリジン受容体にも親和性を有している。フェンサイクリジン受容体は、Ｎ−アリルノルメタゾシンが引き起こす精神分裂病様症状などの副作用と関連していることが知られている。１０−５Ｍのセレギリンは、フェンサイクリジン受容体に対する３Ｈ−ＴＣＰの結合を全く阻害しなかった。このことより、セレギリンが他のベンゾモルファン系シグマリガンドとは異なり、フェンサイクリジン受容体に対しては親和性を示さない安全なシグマ受容体リガンドであることが示された。
【図面の簡単な説明】
【図１】前頭皮質アセチルコリン作動性神経からのアセチルコリン放出量に対するセレギリン（塩酸塩）の作用を示す図である。図の縦軸は、セリギリン（塩酸塩）投与前のアセチルコリン濃度を１００％としたアセチルコリンの濃度％を表し、横軸は、経過時間（分）を表す。
【図２】セレギリン（塩酸塩）及びペンチレンテトラゾールの投与量とアセチルコリン増加率との用量−反応曲線を示す図である。尚図の縦軸は、セリギリン（塩酸塩）またはペンチレンテトラゾール投与前のアセチルコリン濃度を１００％とした場合のアセチルコリンの濃度％を表し、横軸は、薬物投与量を表す。
【図３】正常ラット、生理食塩水投与のスコポラミン健忘症誘発ラット及びセレギリン（塩酸塩）投与のスコポラミン健忘症誘発ラットにおいて、モリス水迷路の水面下プラットホームに到着するまでの平均潜時（±Ｓ．Ｅ．）を比較した結果を示す図である。
【図１】
0004600610.tif 000003
【図２】
0004600610.tif 000004
【図３】
0004600610.tif 000005