(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式
【化１】
0004499208.tif 000011
で表される（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩。
【請求項２】
請求項１記載の式【化１】で表される（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含み、（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン及びその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含まない向神経薬。
【請求項３】
請求項１記載の式【化１】で表される（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含み、（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン及びその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含まない抗うつ薬。
【請求項４】
請求項１記載の式【化１】で表される（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含み、（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン及びその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含まない抗パーキンソン病薬。
【請求項５】
請求項１記載の式【化１】で表される（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含み、（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン及びその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含まない抗アルツハイマー病薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用の分野】
本発明は、新規な（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩、及びそれを有効成分として含み、その光学異性体である（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン及びその薬理学的に許容しうる酸付加塩を有効成分として含まない医薬、特に向神経薬、抗うつ薬、抗パーキンソン病薬及びアルツハイマー病薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
エチルアミン誘導体は多くの生理活性を有することが知られている。特に芳香族エチルアミン誘導体は，中枢神経系に対するカテコールアミン置換型放出促進効果を有しており向精神薬として有望である。しかしながら，シナプス小胞等の貯蔵部位からの過剰なカテコールアミン放出が起こりやすく，覚せい剤と類似の神経毒性や行動異常などの副作用が指摘されている。また，過剰なカテコールアミンの放出を促進する薬剤の連続投与は，カテコールアミン受容体の減少を誘導し患者の薬剤への応答性を低下させ，結果的に充分な治療効果が得られず満足のいくものではない。
【０００３】
一方，国際公開ＷＯ８８／２２５４号に向精神作用を持つとして新規なフェネチルアミン誘導体が開示された。このフェネチルアミン誘導体は，前記カテコールアミン置換型放出促進作用とは異なり，膜電位依存性エクソサイトーシスの増強によるカテコールアミン放出促進効果という新しい機序に基づくカテコールアミン作動系の活性増強効果（Ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅｒｇｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｅｎｈａｎｃｅｒ効果：ＣＡＥ効果）を有しており注目されている［Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，５８，９４５−９５２（１９９６）］。しかしながら，それでもなお行動異常の指標である条件回避応答に見られるシグナル間反応を増加させる作用が解決されず，さらにＣＡＥ効果への高い選択性を持つ薬剤の開発が望まれたことから，本発明者らはこのＣＡＥ効果に基づくカテコールアミン遊離促進作用を有する新規な化合物を開発し，それらが向精神薬，抗うつ薬，抗パーキンソン病薬あるいは抗アルツハイマー病薬などの薬剤として有用であることを見出した（特願平９−２４７４４５）。
【０００４】
特願平９−２４７４４５の有機アミン化合物は炭素原子において不斉中心を有しており，２種の光学異性体（エナンチオマー）の混合物のラセミ体である。
【０００５】
一般的に光学異性体の混合物であるかかるラセミ体化合物の薬理作用は（−）あるいは（＋）いずれかの作用のほうが大であることがしばしばであり、かかる光学異性体の分割にはジアステレオマーの塩や誘導体に導いて光学分割する方法が用いられている。しかし，ラセミ体である特願平９−２４７４４５記載の化合物は，フレキシブルな置換基を有していることから，予測された２種類の光学異性体をこれらの光学分割法によって分割することが容易に達成し得なかった．
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで特願平９−２４７４４５記載の有機アミン化合物を容易に光学分割し、予測される２種類の光学異性体を得ること、ならびにそれら光学異性体の薬理活性をスクリーニングし、より有効な医薬組成物を提供することが本発明目的である。さらにＣＡＥ効果の特段に優れた向精神薬，抗うつ薬，抗パーキンソン病薬あるいは抗アルツハイマー病薬などの薬剤を提供することも本発明目的である。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明に従えば、上記発明の目的は、下式
【化１】
0004499208.tif 000002
で表される光学的に純粋で、新規な（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンまたはその薬理学的に許容しうる酸付加塩の提供により達せられる。
【０００８】
本発明者らは，ラセミ体の向精神薬，抗うつ薬，抗パーキンソン病薬及び抗アルツハイマー病薬などの医薬から，光学的に純粋で有用なエナンチオマーを単離する研究を鋭意重ねていたことから，特願平９−２４７４４５の化合物の光学活性体の分離を試み，種々光学分割を検討した結果，後段実施例１記載の如き特定の光学活性カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分割できた。また，こうして得られた新規な光学活性誘導体又はその酸付加塩が優れたＣＡＥ効果に基づく向精神作用，抗うつ作用を有することを見出し，特に（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン及びその薬理学的に許容しうる酸付加塩にその作用が著しいことを見いだし本発明を完成させるに至った。
【０００９】
１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンを含めた多数の特願平９−２４７４４５記載の化合物は現時点では未公開の化合物であり、これらラセミ体有機アミン化合物の光学分割法、光学異性体の薬理作用は知られていないのであるから、それらの内，実質的に（＋）−体を含まない（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンが極めて優れたＣＡＥ効果を有することは全く予期できぬことである。
【００１０】
本発明化合物は，特願平９−２４７４４５記載化合物の内の特定化合物の（−）エナンチオマーであるが，本願明細書に於いて「実質的に（＋）−異性体を含まない」なる語は光学純度８０％ｅｅ以上のものを意味し，好ましくは９０％ｅｅ以上の光学純度のものを意図する。実質的に（＋）−異性体を含まない（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンは特願平９−２４７４４５の明細書に言及されている対応するラセミ体に比べ，極めて優れた薬理活性を有している。
【００１１】
ここで酸付加塩としては，製薬上許容されうるものが好ましく，塩酸，硫酸，臭化水素酸，硝酸，メタンスルホン酸等の如き無機，もしくは，グルコン酸，酒石酸，マレイン酸，フマル酸，コハク酸，リンゴ酸，クエン酸，マンデル酸等の有機酸との塩が具体例として挙げられる。
【００１２】
【作用】
本発明化合物及びその酸付加塩は，それらの持つ強力なカテコールアミン活性増強作用（ＣＡＥ作用）の結果として，向精神作用などの薬理作用を有し，抗パーキンソン病薬，抗うつ薬，向精神薬などの医薬として使用することができる。
【００１３】
本発明化合物はラットの脳幹をクレブス溶液に浸し，静止電位時及び電気刺激時のカテコールアミン放出量を測定すると，該化合物は静止時には放出量を変化させず，刺激時のみ有意に増加させる。本発明化合物において，この作用はＣＡＥ活性化合物として既に特願平９−２４７４４５明細書に言及されているラセミ体の化合物に比べ極めて強いものである。また，（＋）体においてはラセミ体と同等レベルの作用を示す。更に，ラットにカテコールアミン枯渇剤であるテトラベナジンを投与して学習能力を低下させた後，条件回避反応をみると，本発明化合物の異性体である（＋）体はラセミ体と同レベルでラットの学習能力を有意に回復させる。しかし，本発明化合物においては，（＋）体やラセミ体に比べ，遥かに低い用量でテトラベナジン投与ラットにおける条件回避反応，すなわち学習能力を有意に回復させる。
【００１４】
これらの実験から，本発明物質の作用は，活動電位と伝達物質放出の関連の刺激，すなわち神経細胞内Ｃａ２＋濃度の増加によるエクソサイトーシスの増強によるカテコールアミン放出促進作用であることが判明した。また，カテコール置換型遊離促進剤のような行動異常やカテコールアミン神経終末のアミン枯渇を誘導せず，生理的な作用機序を有する点が従来の化合物とは異なる。
【００１５】
本発明化合物及びその薬理学的に許容される酸付加塩を上記医薬として用いる場合，通常担体，賦形剤，希釈剤，溶解補助剤等と混合して，錠剤，散剤，顆粒剤，カプセル剤，シロップ剤，注射剤などの形態で経口的または非経口的に安全に投与され得る。投与量は患者の症状，年齢，体重等により変わり得るが，通常成人１日あたり経口投与で０．１−１００ｍｇの範囲で，１回または数回にわけて投与することができる。
【００１６】
以下に，本発明化合物について具体的に説明する。
【００１７】
【実施例１】
（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン塩酸塩の製造
（±）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン（ラセミ体）４０．８ｍｇ／ｍｌを１１５μｌ，直接ＨＰＬＣに注入し下記の条件で光学分割を行った。
ＨＰＬＣ：島津製ＬＣ−６ＡＤ型
カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＣＫ  ＡＤ  ２０ｍｍφ×２５０ｍｍ（ダイセル化学工業製）移動相：ヘキサン：イソプロパノール：トリフルオロ酢酸＝１００：２：０．１
流    量：１２．０ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：島津製ＳＰＤ−１０Ａ  型ＵＶ／ＶＩＳ  ＤＥＴＥＣＴＯＲ（２８０ｎｍ）
温    度：室温
得られた，（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンの油状物を無水エーテルに溶解し，冷却下で飽和塩化水素エーテル溶液を加えて塩酸塩へ変換し，（−）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン塩酸塩を得た。
融    点：１６５．０−１６６．０℃
Ｉ    Ｒ：３４２５，２９７０，２８７０，２７８０，２７３５，２６９０，２５２０，２４３０．１６０５，１５９０，１４７２，１４５５，１２５５，１１６７，９４２，８０５，７７０，７６０  ｃｍ−１
元素分析：Ｃ１６Ｈ２３ＮＯ・ＨＣｌとして
理論値          Ｃ：６８．１９，  Ｈ：８．５８，  Ｎ：４．９７（％）
実測値          Ｃ：６８．０７，  Ｈ：８．４８，  Ｎ：４．９８（％）
光学純度：９３％ｅｅ
0004499208.tif 000003
【００１８】
【参考例】
（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−ブロピルアミノペンタン塩酸塩（（＋）−異性体）の製造
実施例１の光学分割で得た（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタンの油状物を無水エーテルに溶解し，冷却下で飽和塩化水素エーテル溶液を加えて塩酸塩へ変換し，（＋）−１−（ベンゾフラン−２−イル）−２−プロピルアミノペンタン塩酸塩を得た。
融    点：１７０．０−１７１．０℃
Ｉ    Ｒ：３４２５，２９７０，２８７０，２７９０，２７３５，２７００，２５１５，２４２５，１６０７，１５９０，１４７２，１４５５，１２５０，１１７５，９４５，８０２，７７０，７６０  ｃｍ−１
元素分析：Ｃ１６Ｈ２３ＮＯ・ＨＣｌとして
理論値          Ｃ：６８．１９，  Ｈ：８，５８，  Ｎ：４．９７（％）
実測値          Ｃ：６７．９０，  Ｈ：８．４４，  Ｎ：４．９８（％）
光学純度：１００％ｅｅ
0004499208.tif 000004
【００１９】
次に，薬理試験の結果を示す。
【００２０】
【実施例２】
電気刺激による活動電位状態でのラット摘出脳幹からの生体アミン遊離作用
Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，５８，２１０１−２１１４（１９９６）に記載の方法を用い，体重２８０−３５０ｇの雄性ラットの後頭部を強打し気絶させ，脳幹（平均重量約８００ｍｇ）を摘出し，９５％Ｏ２／５％ＣＯ２で通気した３７℃のクレブス溶液に３０分間浸し，その後２０μｌの３Ｈ−ノルアドレナリン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  製３０−５０Ｃｉ／ｍｍｏｌ  １−［７，８−３Ｈ］ノルアドレナリン）を検体に加え，４５分放置し３Ｈ−ノルアドレナリンを取り込ませた。クレブス溶液の組成（ｍｍｏｌ／ｌ）は，Ｎａ＋１３７．４，Ｋ＋５．９，Ｃａ２＋２．５，Ｍｇ２＋１．２，Ｃｌ−１２０．２，Ｈ２ＰＯ４−１．２，ＨＣＯ３−２５．０，ＳＯ４２−１．０，グルコース１１．５，アスコルビン酸０．３，及びＥＤＴＡ−２Ｎａ  ０．０３とし，標識物質の取り込み期間中，ＭＡＯ−Ｂ活性を阻害するためにパルギリン（１２ｍｍｏｌ）をクレブス溶液に加えた。
【００２１】
３Ｈ−ノルアドレナリンを取り込ませた後，脳幹を５ｍｌのクレブス溶液（３７℃）の入ったオーガンバス中に固定した。次に脳幹を０．０３ｍｍｏｌのコカインを含む酸素で飽和されたクレブス溶液で８ｍｌ／分の流速で洗浄した。１００分後，潅流速度を４ｍｌ／分に減少させ，さらに０．０５ｍｍｏｌのコルチコステロンを含まれるものに変更し，コカインとコルチコステロンの存在下（この状態では３Ｈ−ノルアドレナリンの８６％は代謝されず，神経内にも神経外にも取り込まれない）で実験を行った。潅流液のフラクションは３分毎に行われ，３分間に放出される３Ｈ−ノルアドレナリン量が，５ｍｌのアクアセーフ３００プラス（Ｚｉｎｓｓｅｒ製）に潅流液を１ｍｌ加えシンチレーションカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎｎ  製ＬＳ−９００型）で測定した。また，セロトニンおよびドパミンについても同様に測定した。電気刺激（３Ｈｚ，１ｍｓ，６０Ｖ）は３分間与えた。実験開始時に３フラクション分の休止期間を最初の電気刺激に先立って設けた。その後，７フラクションの休止期間を刺激と刺激の間に設けた。本発明化合物は，０．５，１，２．５，５μｇ／ｍｌとなるように潅流液中に溶解した。本発明化合物を添加した潅流液は，電気刺激前に３分間潅流した。結果を図１に示す。
【００２２】
図１に示す通り，本発明化合物は神経細胞が電気刺激された場合において，ノルアドレナリン，セロトニン及びドパミンの遊離を促進し，エクソサイトーシスを増強することが確認された。また，表１に示すように，本発明化合物のその効果は，（＋）−異性体及びラセミ体よりも遥かに低い用量で発現することが示された。
【００２３】
【表１】
0004499208.tif 000005
【００２４】
【実施例３】
シャトルボックスにおけるラットの条件回避反応への作用
Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，５８，８１７−８２７（１９９６）に記載の方法を用いて，テトラベナジン処置により学習能力の低下した雌雄ラット（２００−２２０ｇ）のシャトルボックスにおける条件回避反応（ＣｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄＡｖｏｉｄａｎｃｅ  Ｒｅｆｌｅｘ：ＣＡＲｓ）への作用を検討した。装置は，Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉａ，１０，１−５（１９９６）に従って組み立てられ，体重２００−２２０ｍｇの雄雌ラットを用い，光とブザー音による条件刺激（Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  Ｓｔｉｍｕｌｕｓ：ＣＳ）を受けて，仕切りを通り抜けるよう訓練した。もし失敗すれば無条件刺激（Ｕｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  Ｓｔｉｍｕｌｕｓ：  ＵＳ）であるフットショック（１ｍＡ）を与えた。ラットがＵＳに対し，５秒以内に反応しなければ逃避不成功（Ｅｓｃａｐｅ  Ｆａｉｌｕｒｅｓ：ＥＦｓ）とした。
また，条件と無関係の行動量をシグナル間反応（Ｉｎｔｅｒｓｉｇｎａｌ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ：ＩＲｓ）とした。ラットには１日１００試行，５日間の訓練を行い，各試行は１５秒間隔で行った。テトラベナジンは生理食塩液に溶解し，試験の１時間前に１ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与し，ＣＡＲｓ，ＥＦｓ及びＩＲｓを自動的に測定した。本発明化合物は生理食塩液に溶解し，テトラベナジンと同時に１，２，２．５又は５ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与した。統計的有意性は一元配置分散分析によって解析した。結果を図２に示す。
【００２５】
図２より本発明化合物は，テトラベナジン投与により誘発された学習能の低下を有意に改善させ，表２に示す通り本発明化合物の効果は（＋）−異性体及びラセミ体よりも遥かに低い用量で発現することが示された（ＣＡＲｓ）。また，逃避不成功（ＥＦｓ）を有意に低下させることから抗うつ作用を有することが期待できる。さらに，興奮作用を示す無条件刺激時の行動異常を示す反応（ＩＲｓ）に有意差が無いことから本発明化合物には，覚醒剤のような興奮作用を有さないことが示された。
【００２６】
【表２】
0004499208.tif 000006
【００２７】
【実施例４】
脳組織から放出される生体アミンの測定
Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，５６，６１１−６２０（１９９５）に記載の方法に従い，ウィスター系ラットを断頭した後，直ちに脳組織（線条体，黒質，嗅結節，青斑核及び縫線核）を摘出し，９５％Ｏ２／５％ＣＯ２でバブリングした３７℃のクレブス溶液に浸した。クレブス溶液の組成（ｍｍｏｌ／単位）はＮａＣｌ  １１１，ＫＣｌ  ４．７，ＣａＣｌ２  ２．５，ＭｇＳＯ４  １．６４，ＮａＨＣＯ３  ２５，ＫＨ２ＰＯ４  １．２，グルコース１２，アスコルビン酸，及び２０ｍｇ／ｌ  ＥＤＴＡ−２Ｎａとした。線条体，黒質及び嗅結節は４等分，青斑核及び縫線核は８等分として恒温槽に浸した。目的の組織を２０分間インキュベートした後，クレブス溶液を取り替え，本発明化合物を溶解したクレブス溶液に組織を２０分間浸し，この時間内に放出されたモノアミンの量を測定した。本発明化合物，及び（＋）−異性体，ラセミ体の対照物質は，生理食塩液に溶解し脳摘出３０分前に皮下投与し，ノルアドレナリン及びドパミンを測定するために，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１３８，３６０−３７２（１９６２）に記載さた方法により，試料を６０ｍｇのアルミナを含んだマイクロカラム（ＢＤＨ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ製）で精製，セロトニンを測定するために，試料１５ｍｇのセファデックスＧ−１０マイクロカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）で精製した。ドパミン，ノルアドレナリン，セロトニンは電気化学検出器（Ｗａｔｅｒｓ  製４６０  型ＥＣＤ）付高速液体クロマトグラフィー（Ｗａｔｅｒｓ  製７４６  型）によって測定した。分離カラムはＷａｔｅｒｓ  Ｒｅｓｏｌｖｅ（５μ  Ｓｐｈｅｒｉｃａｌ  Ｃ１８  ３．９×１５０ｍｍ）を用い，移動相は６％アセトニトリルに２００ｍｇ／ｌオクタンスルホン酸ナトリウム，１８ｍｇ／ｌ  ＥＤＴＡ−２Ｎａを添加したｐＨ５．２のトリエチルアミン−リン酸緩衝液を使用した。それぞれのアミンの放出量は２０分間に放出されたｎｍｏｌ／ｇ（組織）として示した。平均値の差は，Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−検定によって検定し，有意レベルはｐ＜０．０５とした。結果を表３に示す。
【００２８】
【表３】
0004499208.tif 000007
【００２９】
表３に示される通り，本発明化合物，その（＋）−異性体及びラセミ体のいずれにおいても生体アミンの遊離が認められたが，本発明化合物は（＋）−異性体及びラセミ体よりも低い用量で作用が認められた。
【００３０】
【実施例５】
Ｂ型モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ−Ｂ）に対する作用
雄のマウス（Ｃ５７ＢＬ／）を断頭して，全脳を素早く摘出し，重量を測定後，１．０％  ＥＤＴＡ−２Ｎａを含む０．２Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）を加え，細胞破砕機でホモジナイズした。その後，高速冷却遠心機で２０００ｒｐｍで２０分間遠心し，その上清を分離用超遠心機で１８，０００ｒｐｍ（４０，０００  Ｇ）で３０分間遠心分離した。ペレットを再懸濁し，同様条件で超遠心分離した。得られたペレットを上記の緩衝液で再懸濁し，これを酵素液とした。全てのスッテプは４℃で行った。
【００３１】
１４Ｃラベルした基質（１４Ｃ−ｐｈｅｎｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）とマウスから得られた酵素液をチューブ  で混合し，３７℃で３０分間インキュベートした後，６Ｎ塩酸２０μｌを加えて反応を停止した。４００  μｌ  トルエン−酢酸エチル（１：１）反応生成物を抽出し，液体シンチレーションカウンターで放射能を測定して，ＭＡＯ−Ｂ活性を算出した。結果を表４に示す。
【００３２】
【表４】
0004499208.tif 000008
【００３３】
表４に示されるように１０−５Ｍでいずれの化合物においても阻害率５０％以下であった。このことは，本発明化合物にＭＡＯ−Ｂ阻害作用を示さないことが認められた。
【００３４】
【実施例６】
神経細胞受容体α１，α２，Ｄ１，Ｄ２，５−ＨＴ１及び５−ＨＴ２に対する親和性
レセプター溶液の調製は，ラットを断頭後，直ちに脳を摘出し，重量を測定した。その重量の１０倍量の氷冷０．３２Ｍスクロース溶液（ｐＨ７．４）中でホモジナイズし（モーター回転式テフロン製ペストルを備えたガラス製ホモジナイザー），ホモジネート溶液を作成し，４℃，９００×ｇで１０分間遠沈した。得られた上清は４℃，２２０００×ｇで２０分間遠沈し，沈渣に５ｍＭ  リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を加えて懸濁した。この懸濁液を３７℃で３０分間インキュベーションした後，再度４℃，２００００×ｇで２０分間遠沈し，その沈渣に５ｍＭ  リン酸緩衝液（ｐＨ８．０）１０ｍｌを加えて懸濁させ，レセプター溶液とした。
【００３５】
リガンドに３Ｈ−プラゾシンを使用し，チューブに５ｍＭ  リン酸緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した０．２５ｎＭ  ３Ｈ−プラゾシン，本発明化合物及びレセプター溶液を添加して２５℃で９０分間インキュベーションを行った。なお，０．１μＭ  プラゾシン共存下での３Ｈ−プラゾシンの結合値を非特異的結合とした。反応は，ガラスファィバーフィルター（ｐｏｒｅ  ｓｉｚｅ：０．５μｍ，Ｗｈａｔｍａｎ製  ＧＦ／Ｃ）でレセプターを結合した  ３Ｈ−プラゾシン（結合型：Ｂ）と遊離型の  ３Ｈ−プラゾシン（遊離型：Ｆ）をＢ／Ｆ分離装置（Ｂｒａｎｄｅｌ製）で分離し，結合型のみを回収した。ガラスファイバーフィルターに吸着した結合型は，氷冷生理食塩液で洗浄し，ガラスファイバーフィルターをバイアル瓶に移し，シンチレーションカクテル１０ｍｌを加えて放射能を測定し，α１受容体とそのリガンドとの結合阻害率から，本発明化合物の親和性を求めた。
【００３６】
同様に操作して，α２，Ｄ１，Ｄ２，５−ＨＴ１及び５−ＨＴ２受容体に対する親和性を，リガンド溶液として各々０．７ｎＭ  ３Ｈ−ラウボルスシン，１．４ｎＭ  ３Ｈ−ＳＣＨ−２３３９０バウンド，２．０ｎＭ  ３Ｈ−スピペロン，２ｎＭ  ３Ｈ−５−ＨＴ及び０．５ｎＭ  ３Ｈ−ケタンセリンを，リスプレサー溶液として各々１μＭヨヒンビン，１０μＭ（＋）−ブタクラモール，１０μＭハロペリドール，１０μＭ  ５−ＨＴ及び１  μＭ  ケタンセリンを使用して，それぞれの受容体における本発明化合物の親和性を求めた。受容体との親和性が高ければ，リガンドと受容体との結合を阻害する。一般的には，各々のリガンドと受容体との結合を５０％阻害するのに必要なモル濃度が１０−６Ｍの程度以下では，生理活性を発揮する程強くない化合物とされている。結果を表５に示す。
【００３７】
【表５】
0004499208.tif 000009
【００３８】
表５に示されるように，本発明化合物，その（＋）−異性体及びラセミ体のいずれの化合物においても，生理活性が示されるために必要な親和性は認められなかった。
【００３９】
以下，安全性試験の結果を示す．
【００４０】
【実施例７】
肝細胞初代培養を用いた毒性実験
ラットからコラゲナーゼ潅流法により肝細胞を採取し，５×１０５細胞／ｍｌの細胞懸濁液を調製した。２４時間培養を行い，本発明化合物が１００μＭ及び１０μＭを含むウイリアムズＥ培地（ギブコ・イー・アール・エル）に交換した。交換後２４時間目に，培地中に放出された乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の測定を行った。その結果，表６に示されるように，本発明化合物は１００μＭにおいて若干のＬＤＨの遊離が認められたものの１０μＭではＬＤＨの遊離は認められなかった。
【００４１】
【表６】
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【００４２】
【実施例８】
単回投与におけるマウスの急性毒性試験
マウスに１００ｍｇ／ｋｇの本発明化合物およびその異性体を単回経口投与した後，２週間の一般症状観察を行った。その結果，いずれの化合物おいても３例中３例とも生存した。
【図面の簡単な説明】
【図１】電気刺激によるラット摘出脳幹からのノルアドレナリン，ドーパミンおよびセロトニンの遊離に及ぼす本発明化合物の効果を示す図である．
【図２】シャトルボックス中での，テトラベナジン投与による学習能力低下ラットにおける本発明化合物の効果を示す図である．
【図１】
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【図２】
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