(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）膜浸透性が低い薬物、
（ｂ）式Ｉの酸官能基化合物からなる分岐鎖を有する浸透促進剤であって、酸官能基の総数のうちの少なくとも５０％は塩基と反応しており、
【化１】
0004489356.tif 000009
式Ｉ中、Ｑは部分的にまたは完全に中和された−ＣＯＯＨ官能基であり、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｃ４〜Ｃ１０の直鎖アルキル基、またはＣ６〜Ｃ１２の直鎖アルキル基であり、
前記浸透促進剤は、前記薬物の患者に対する経粘膜または経皮経路による生物学的利用率を向上させるために充分な量だけ存在する浸透促進剤、および
（ｃ）医薬として許容可能な担体
を含む組成物。
【請求項２】
前記浸透促進剤が式Ｉの化合物であって、式中、
Ｑが‐ＣＯＯＮａ、
Ｒ１が‐Ｃ６直鎖アルキル、および
Ｒ２が‐Ｃ８直鎖アルキル
である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記浸透促進剤が式Ｉの化合物であって、式中、
Ｑが‐ＣＯＯＮａ、
Ｒ１が‐Ｃ８直鎖アルキル、および
Ｒ２が‐Ｃ１０直鎖アルキル
である請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記浸透促進剤が、酸官能基の総数のうちの少なくとも５０％は塩基と反応しているヘキシルデカン酸またはオクチルドデカン酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
医薬として有効な量の前記薬物、および促進効果を有する量の式Ｉの前記浸透促進剤を含む、患者を治療するための請求項１に記載の組成物を製造する方法。
【請求項６】
Ｑが‐ＣＯＯＮａ、Ｒ１が‐Ｃ６直鎖アルキル、およびＲ２が‐Ｃ８直鎖アルキルである請求項５に記載の方法。
【請求項７】
Ｑが‐ＣＯＯＮａ、Ｒ１が‐Ｃ８直鎖アルキル、およびＲ２が‐Ｃ１０直鎖アルキルである請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記薬物が、タンパク質、ペプチド、および抗原からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記薬物がヘパリンである、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物の投与の際有用な浸透促進剤に関する。
薬物送達系は、一般に浸透の段階とそれに続く循環系中への吸収を含む。たとえば、薬物およびフィルムもしくは布からなり、患者の外皮に接着される経皮パッチの使用により、皮膚を通して薬物を施用し得る。薬物はまた、たとえば、（Ａ）鼻または肺への薬物のエアロゾル送達、（Ｂ）薬物の経口摂取とそれに続く胃腸管壁を通した浸透、および（Ｃ）頬と歯茎の間、または舌の下に保持されたトローチ剤または丸薬の溶解、それに続く口腔膜を通した輸送により、粘膜またはその他の細胞膜を通して（総称して「経粘膜」）送達される。
【０００２】
初期の経皮送達系の開発中に、研究者は、皮膚の油性、疎水性の性質が、水性の薬物溶液または分散系の吸収速度を有意に低下させることを発見した。すなわち、外部の物質の侵入に対して身体を保護する、皮膚の生来の障壁特性がまた、施用した薬物への障壁として作用し、それによって該薬物の浸透速度を、最終的にはそれらの生物学的利用率を低下させる。経粘膜の手段により満足できるように薬物を送達する場合にも問題に遭遇する。対象とする膜での薬物の生物学的利用率、および医薬として有用な濃度を実現するためには、薬物の浸透速度が重要な要因である。皮膚を通して、または経粘膜の手段により、薬物の浸透速度を促進するという目的に対して、かなりの努力がささげられてきたことは驚くにあたらない。こうした努力の例を以下に要約する。
【背景技術】
【０００３】
本出願は、２００１年５月１１日に出願した米国仮出願第６０／２９０，４３６号に関し、優先権を主張するものである。
ウエカマ（Ｕｅｋａｍａ）らの特許文献１には、プロスタグランジンの経皮浸透性を促進するために、直鎖脂肪酸、これらの塩およびエステルを使用することが教示されている。フェンカテシュワラン（Ｖｅｎｋａｔｅｓｈｗａｒａｎ）らの特許文献２および３には、それぞれ乳酸（またはその塩）の脂肪酸エステル、およびグリコール酸の脂肪酸エステル（またはその塩）の存在により促進される薬物送達系が開示されている。生物学的に活性なペルゴリドの皮膚浸透を促進するために脂肪酸のグリセリドを使用することが開示されている（たとえば、ユン（Ｙｕｍ）らの特許文献４参照）。特許文献５には、プロピレングリコールなどの溶媒中の飽和または不飽和脂肪酸により、皮膚を通した薬物浸透の促進が教示されている。特許文献６には、薬剤として、またはその他の生物学的に活性な物質の経口送達系が開示されており、該送達系では薬剤またはその他の活性物質が胃を通過して腸内で吸収されるように、同物質がカルボン酸により被覆または複合体化される。コーティングまたは複合体化は活性物質の酸性溶液およびカルボン酸から共沈によって達成され、カルボン酸は直鎖または分枝鎖状の９〜３０個の炭素原子を有し、飽和または不飽和で、非環式または環式構造であり、ステロイド環、フェニル基などの官能基でさらに置換されている、または非置換であると記載されている。特許文献６には、直鎖の飽和または不飽和またはステロイド性のカルボン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、オレイン酸、パルミトレイン酸、リシノール酸、およびフシジン酸から生成された複合体の具体例が開示されている。
【特許文献１】米国特許第５，８５４，２８１号
【特許文献２】米国特許第５，９５２，０００号
【特許文献３】米国特許第５，９１２，００９号
【特許文献４】米国特許第６，００１，３９０号
【特許文献５】米国特許第４，７８９，５４７号
【特許文献６】国際公開第００／２２９０９号
【特許文献７】米国特許第６，３７９，９６０号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
研究者は、経粘膜または経皮経路により薬物を安全かつ効果的に投与する方法を探索し続けている。これらの目標に対する障害としては、様々な種類の膜および皮膚の特性における複雑さおよび変動性がある。さらに、候補薬物は、広範な分子サイズ、形状、および化学的特性を持つ。薬物、ならびに皮膚および粘膜両方の構造および化学的性質の変動は、薬物送達の予測不可能な性質の原因となる。薬物の生物学的利用率達成において、生体の膜および皮膚の生来の障壁特性を克服するという世間に認められた要求に照らして、本発明は、患者への送達のために薬物の浸透を促進する種類の化合物を供給することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明によって、薬物、ならびに、前記薬物の生物学的利用率を促進するのに有効な化合物であって、官能基と、１個または複数の炭素原子および任意選択で１個または複数の官能基を有する１個または複数の側鎖とをさらに有する多炭素骨格からなる化合物、を含む組成物が提供される。好ましい種類の生物学的利用率を促進する化合物は、以下の式Ｉの化合物からなる。
【０００６】
【化１】
0004489356.tif 000002
（式中、Ｑは、
（１）部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ、または
（２）部分的にもしくは完全に中和された‐ＳＯ３Ｈ、または
（３）部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ、または部分的にもしくは完全に中和された‐ＳＯ３Ｈである置換基で一置換または二置換されている、１〜約１２個の炭素原子を有するアルキルまたはアルケニル基であって、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に
（１）１〜約１２個の炭素原子を有する非置換アルキルまたはアルケニル基、または
（２）１〜約１２個の炭素原子を有する置換アルキルまたはアルケニル基であって、その置換基が
（ｉ）部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ、
（ｉｉ）部分的にもしくは完全に中和された‐ＳＯ３Ｈ、
（ｉｉｉ）‐ＮＨ２、
（ｉｖ）‐ＣＯＮＨ２、および
（ｖ）‐ＯＨ
からなる群から選択される。）
本発明の他の態様は、患者の症状を治療するのに医薬として有効な量の薬物、および促進効果を有する量の式Ｉの浸透促進剤からなる組成物を患者に投与することからなる、患者の症状を治療する方法からなる。
【０００７】
以下に説明するように、本発明の際立った利点は、前記薬物が対象者の腸の障壁中に浸透し障壁を通過するのを促進し、広く異なる親水性／疎水性特性を有する種類の化合物を、医学および薬学の専門家に提供することである。このことは、選択した薬物の浸透特性を増大させるのに特に有効な親水性／疎水性特性を有する促進剤化合物を、ユーザーが目
的に応じて作製することを可能にする。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
上記のように、本発明の組成物は、薬物、本明細書で浸透促進剤として特徴づけられる化合物、および任意選択で媒体からなる。式Ｉで表される化合物中から浸透促進剤を選択する際は、使用する薬物と、対象とする膜または皮膚の薬物を吸収する性質とが共に考慮に入れられる。以下の考察から明らかになるように、広範な疎水性／親水性特性を有し、分枝鎖化合物として表現されうる化合物は、本発明の促進剤化合物の種類に含まれる。
【０００９】
式Ｉの化合物は、官能基と、１個または複数の炭素原子および任意選択で１個または複数の官能基を有する（１個または複数の）側鎖とをさらに有する多炭素骨格からなる。したがってこの化合物は、文献中に浸透促進剤特性を有すると報告された直鎖カルボン酸からは区別される。式ＩのＲ１およびＲ２はそれぞれ、１〜約１２個の炭素原子を有する非置換アルキル基もしくは非置換アルケニル基、または１〜約１２個の炭素原子を有する置換アルキルもしくは置換アルケニル基を表すが、あるいはＲ１またはＲ２の一方が１〜約１２個の炭素原子を有する置換アルキル基もしくは置換アルケニル基で、他方が非置換アルキル基または非置換アルケニル基であり得る。式ＩのＲ１およびＲ２はそれぞれ、直鎖、分枝、または環式の脂肪族基でもよい。
【００１０】
さらに、Ｒ１またはＲ２の一方がアルキル基で他方がアルケニル基であることもあり得る。アルキル基の例としては、メチル、エチル、イソプロピル、ヘキシル、オクチル、デシル、およびドデシルがある。アルキル基は少なくとも約４〜約１２個の炭素原子を有することが好ましい。アルケニル基の例には、オクテニル、ペンテニル、およびドデセニルがある。アルケニル基は、少なくとも約４〜約１２個の炭素原子を有することが好ましい。
【００１１】
さらに、好ましい形態では、Ｒ１およびＲ２中の炭素原子の合計が、少なくとも約１６である。本発明の特に好ましい形態では、Ｒ１がアルキルであり、Ｒ２がアルキルである。Ｒ１および／またはＲ２が置換アルキル基または置換アルケニル基を含む促進剤については、これらの置換基がヒドロキシル基であることが好ましい。
【００１２】
式Ｉで述べたように、本発明で有用な促進剤化合物は、部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ基、または‐ＳＯ３Ｈ基を含み得る。本明細書では、「中和された」という用語は、カルボン酸またはスルホン酸の、酸の全量と反応するのに十分な量で存在する塩基との反応生成物を意味する。本明細書では、「部分的に中和された」という用語は、カルボン酸またはスルホン酸の、酸の全量未満であるが少なくとも酸の約５０％と反応する量の塩基との反応生成物を意味する。使用し得る塩基の例には、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、およびトリアルキルアミンがある。式Ｉの‐Ｑは、‐ＣＯＯＨのナトリウム塩が好ましい。式Ｉの‐Ｑが置換アルキルまたは置換アルケニル基である促進剤については、こうした基の例には以下のものがある：メチル、ヘキシル、オクチル、およびドデシル。好ましくはアルキル基またはアルケニル基の炭素原子の総数は約１〜約１２個であり、アルキル基であることが好ましい。
【００１３】
式Ｉの化合物の好ましい基は、Ｒ１がＣ６〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ２がＣ４〜Ｃ１０アルキルであり、‐Ｑが中和された‐ＣＯＯＨである。特に好ましい浸透促進剤は、Ｒ１がＣ６〜８アルキルであり、Ｒ２がＣ８−１０アルキルであり、‐Ｑが‐ＣＯＯＮａである、式Ｉで表される化合物である。
【００１４】
本発明において有用な好ましい促進剤化合物は、Ｒ１が８個の炭素原子を有するアルキ
ル基（Ｃ８Ｈ１７）であり、Ｒ２が６個の炭素原子を有するアルキル基（Ｃ６Ｈ１３）である、式Ｉのカルボン酸のナトリウム塩を含む。さらに好ましい促進剤化合物は、Ｒ１が１０個の炭素原子を有するアルキル基（Ｃ１０Ｈ２１）であり、Ｒ２が８個の炭素原子を有するアルキル基（Ｃ８Ｈ１７）である、式Ｉのカルボン酸のナトリウム塩を含む。
【００１５】
本発明において有用な促進剤化合物は、少なくとも１個のキラル中心を含み得る。促進剤化合物がキラル中心を含む場合は、それは光学異性体のラセミ混合物として、または任意選択で実質上純粋な促進剤化合物のＤまたはＬ異性体として使用し得る。
【００１６】
本発明の範囲内の促進剤化合物は既知である。促進剤化合物の調製は当技術分野では通常の技術の１つの範囲内に十分入ることは理解されよう。一般的にいえば、本発明において有用なカルボン酸促進剤は、既知の調製方法に従って調製し得る。調製方法の非限定的な例としては、適度に不飽和な炭化水素の強い酸化剤による酸化的切断、およびそれに対応するエステルのけん化がある。代表的なエステルの非限定的な例は、所望の酸のグリセリドである。
【００１７】
カルボン酸またはスルホン酸の水酸化ナトリウムなどのアルカリによる中和は、通常水または水とアルコールの混合物中に溶解し、攪拌中の酸溶液にアルカリを加えることにより行う。中和度を通常の手段により測定したｐＨの変化によりモニターする。
【００１８】
式Ｉの促進剤は、単官能性または多官能性であり得る。官能性の程度および炭素鎖の長さは、促進剤化合物の親水性／疎水性（親油性）の性質に関連する。一般に、官能性の程度が高くなると、化合物はより親水性になる。同様に、一般には、化合物中の炭素原子数が多くなると、化合物はより疎水性になる。促進剤の疎水性／親水性のバランスが薬物および対象とする組織に適合する場合は、薬物送達の改善が達成され得る。比較的長い炭素鎖を有する‐Ｒ１、‐Ｒ２、および‐Ｑを選択すると、比較的疎水性の高い促進剤が提供される。反対に、比較的短い炭素鎖および多官能基を有する促進剤では、比較的親水性が高くなる。
【００１９】
本発明の組成物は、式Ｉの促進剤化合物、または複数の前記化合物の混合物を含み得る。さらに、本発明の組成物は、１種または複数の式Ｉの促進剤化合物を、１種または複数のその他の促進剤、たとえば直鎖脂肪酸、これらのエステルもしくは塩、またはリポソームもしくはマイクロエマルジョンの形成を促進するその他の化合物との混合物として含んでもよい。他の促進剤化合物を使用する場合は、式Ｉの促進剤の各部に対して、追加の促進剤が重量比で最高約９９部まで存在してもよく、たとえば、追加促進剤：式Ｉの促進剤の重量比が約９９：１〜約１：９９である。好ましい形態では、１種または複数の本発明の促進剤化合物（式Ｉの化合物）と他の促進剤化合物との混合物を含む組成物において、式Ｉの促進剤化合物が、存在する促進剤化合物の少なくとも約５０重量％を占め、より好ましくは式Ｉの促進剤化合物が、存在する促進剤化合物の約７０重量％を占める。
【００２０】
オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドからなる薬物の送達に関して使用される配合物中で、本発明の促進剤化合物が他の促進剤化合物と混合される場合、通常、式Ｉの促進剤化合物は配合物中に存在する促進剤化合物の少なくとも約１０重量％を占める。
【００２１】
本発明の組成物はまた、薬物、たとえば予防上、治療上、または診断上の特性を有し、ヒトまたはその他の動物の治療に使用される化学物質も含む。組成物は複数の薬物の混合物を含み得る。
【００２２】
本発明は、その生物学的利用率および／または吸収特性が、本発明の浸透促進剤の使用により促進し得る薬物とともに、非常に広く使用されるものと考えられる。本発明はさら
に、本発明の浸透促進剤を、経口摂取されるが消化管（「ＧＩＴ」）中で比較的吸収され難い薬物と組み合わせることにより、特に優れた効果を得るために使用し得るとものと考えられる。こうした薬物の例は、たとえばクラスＩＩＩおよびクラスＩＶの薬物などの、比較的遅い膜浸透速度を有すると知られている薬物である。クラスＩＩＩの薬物は、水性媒体中の可溶性が高く、膜浸透性が劣る。クラスＩＶ薬物は、水への溶解度が低く、浸透性が低い。
【００２３】
これらの分類に入る代表的な薬物としては、たとえば最高で４００ダルトンの範囲（いわゆる「小分子」薬物と呼ばれる）の、タンパク質、ペプチド、ワクチン、抗原、あるいは、天然に生じる核酸塩基、糖類、および共有結合のヌクレオシド間（骨格）結合ならびに同様に機能する天然には生じない部分からなるオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドを含む、リボ核酸（ＲＮＡ）もしくはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、またはこれらの類似物のオリゴマーおよびポリマーの形の、有機および無機の治療薬が含まれる。修飾または置換オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドは、たとえば、細胞への取込みの増大、標的とする核酸に対する親和力の増大、ヌクレアーゼ存在下での安定性の増大などの望ましい特性の故に、天然の形態より好ましいことが多い。（特許文献７）は、オリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドへの種々の好適な修飾および置換を教示している。
【００２４】
薬物の具体例としては、フロセミド（ｆｕｒｏｓｅａｍｉｄｅ）のような「小分子」薬物、低分子量（ＬＭＷ）ヘパリン、ヌクレオチド、ペプチドおよびタンパク質を含み、例えばインスリン、成長ホルモン、カルシトニン、エナラプリラート（ｅｎａｌａｐｒｉｌａｔｅ）、アシクロビル、酢酸ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ  ａｃｅｔａｔｅ）、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、リボザイム、ＥＧＳ（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｇｕｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、および標的の核酸とハイブリッド形成してその発現を調節する短鎖触媒ＲＮＡまたは触媒オリゴヌクレオチドが含まれる。上記薬物リストは、親水性薬物および巨大分子薬物の例を含むことは理解されよう。
【００２５】
薬物は任意の適当な形態でよく、たとえば結晶またはアモルファスの形態で、ならびにたとえばナノ粒子およびマイクロ粒子の形態またはより大きな粒子の形態の固体、液体、またはゲルの形態であり得る。さらに、薬物は組成物中に徐放性の形態で存在し得る。
【００２６】
本発明の組成物は、医薬として有効な量、すなわち患者に所望の予防、治療または、診断上の効果をもたらすのに有効な量の薬物を含む。組成物を構成する薬物の量は、たとえば使用される個々の薬物、治療すべき症状の性質、使用される剤形、および患者の性状を含む、様々な要因によって決まることを理解されたい。
【００２７】
同様に、本発明の組成物中に含まれる促進剤化合物は、薬物の生物学的利用率、および／または吸収特性を向上させるのに有効な量で存在する。組成物中の促進剤の量は、たとえば、使用される個々の薬物、使用される薬物量、選択される剤形、使用される個々の促進剤化合物、使用される促進剤化合物の光学純度（すなわち純粋な異性体の形態で使用するか、または部分的もしくは完全にラセミ混合物として使用するか）、存在するその他の促進剤化合物のタイプおよび量を含めた、様々な要因によって決まる。ほとんどの施用では、組成物は、約１：１０００〜約９９：１の重量比の薬物：促進剤化合物からなるものと考えられる。多くの場合は、この比は約１：５〜約１：１０の間であろう。この比の範囲は、上記の様々な要因に応じてこの範囲から外れる薬物対促進剤の比を使用し得るという了解の下に、ガイドラインの目的で示されている。
【００２８】
本発明の組成物は任意選択で媒体を含むが、その性質は組成物の形態によって決まる。組成物は任意の適当な形態、たとえば顆粒、固体、半固体、溶液、懸濁液、錠剤、カプセ
ル剤、吸入剤、座薬、または浣腸の形態で使用し得る。錠剤およびカプセル剤は、たとえば遅延放出、持続放出、または即時放出系の形態であり得る。本発明の組成物は、最も広範には固体の経口剤形で使用されるものと考えられる。
【００２９】
「媒体」という用語は概して、組成物の薬物および促進剤成分以外の組成を構成し得る、様々な種類の医薬として許容可能な成分を含むものとして使用される。媒体の例としては、充填剤、希釈剤、賦形剤、および、薬物の放出特性または促進剤化合物にとって有効な材料、すなわち放出制御用の材料が含まれる。充填剤および希釈剤の例としてはラクトース、マンニトール、デキストロース、および微結晶性セルロース野菜油、およびグリセリドがある。賦形剤の例としては、リン酸塩およびクエン酸塩、ステアリン酸マグネシウム、シリカ、ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびデンプンなどの結合剤がある。放出制御用の材料の例としては、腸内ポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースが含まれる。
【００３０】
担体を構成する、様々な種類の成分の量は、所望の効果を達成するためにユーザーにより選択され得る。
以下の実施例は本発明の例示であり、本発明を従来技術の組成物と比較する。
【実施例１】
【００３１】
（２‐ヘキシルデカン酸ナトリウムを含むＬＭＷヘパリン組成物）
覚醒ラットモデルに十二指腸内カニューレにより投与した場合の低分子量（ＬＭＷ）ヘパリン（パルナパリン）の腸内吸収の研究において、分枝鎖浸透促進剤である２‐ヘキシルデカン酸ナトリウムの性能特性を、直鎖カルボン酸ナトリウムであるカプリン酸のナトリウム塩の性能と比較する。
【００３２】
非無作為化した（ｎｏｎ‐ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ）対比群を用いる実験計画により比較を実施し、使用した動物は、体重範囲２５０〜３５０ｇのオスのウイスター（Ｗｉｓｔａｒ）ラット（２５）である（各配合物につきｎ＝７）。配合物の投与用および血液採取用にそれぞれ十二指腸カニューレおよび静脈（頸静脈）カテーテルを、麻酔下で動物に外科的に埋め込む。ラットを投与前に少なくとも１日間回復させる。以下に述べるＬＭＷヘパリン［フルクサム・パルナパリン（Ｆｌｕｘｕｍ  ｐａｒｎａｐａｒｉｎ）‐平均分子量４０００〜４５００ダルトン］の配合物を、リン酸緩衝生理食塩水（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中で調製し、ボーラス（０．３ｍｌ）として十二指腸内に投与する。血液試料を頸静脈から以下の間隔で採取する：０（投与前）、５、１０、１５、３０、４５、６０、１２０、１８０、２４０、および３６０分。試料をクエン酸三ナトリウムを含むエッペンドルフチューブ（ｅｐｉｎｄｏｒｆ）中に採取し、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離することにより血漿を分離する。血漿試料を分析するまで−２０℃で保管する。試料をＣｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ  Ｃｏａｔｅｓｔ（登録商標）ヘパリン・キットを用いて分析し、結果を抗Ｘａ因子活性（ＩＵ／ｍｌ）として表す。相対的な生物学的利用率（すなわち、動物当たり２５０ＩＵのヘパリンの皮下投与量に対する）を、血漿中抗Ｘａ因子濃度／時間プロファイルから得られた曲線下面積から計算する。
【００３３】
組成物を以下の表１に示すように処置群に投与した。
【００３４】
【表１】
0004489356.tif 000003
薬物動態の測定値（平均値±ＳＤ）を、以下の表２に提示する。
【００３５】
【表２】
0004489356.tif 000004
上記データの統計的解析結果を以下に、生物学的利用率（％）に対しては表３に、観察された最大血清中濃度の差に対しては表４に示す。
【００３６】
【表３】
0004489356.tif 000005
【００３７】
【表４】
0004489356.tif 000006
表３が示すように、いずれの浸透促進剤も使わずに動物に投与したＬＭＷヘパリンの生物学的利用率は非常に低い（０．５％未満）。しかしこのことは、投与する薬物を浸透促進剤と組み合わせると有意に改善される。ヘパリンを浸透促進剤、２‐ｎ‐ヘキシルデカン酸ナトリウムとともに投与した場合、最も高い生物学的利用率が認められる。この分枝鎖化合物による生物学的利用率の増大は、直鎖カルボン酸であるカプリン酸ナトリウムにより達成される生物学的利用率より予想外に大きい。この予想外の増大は、抗Ｘａ因子の血漿中最大値の増大に関連するのみならず、ＡＵＣの差により概観される曲線下面積全体の有意の増加にも関連する。
【００３８】
より具体的には、１０００ＩＵのパルナパリン（ＩＤ）投与後の相対的な生物学的利用率は、０．３７±０．６６％である。１０００ＩＵのパルナパリンを３５ｍｇのＣ１０（カプリン酸ナトリウム）と同時投与すると、結果として得られた相対的な生物学的利用率は３．０６±３．１４％である。１０００ＩＵのパルナパリンを１７．５ｍｇの分枝鎖促進剤および１７．５ｍｇのＣ１０（カプリン酸ナトリウム）と同時投与すると、結果として得られた相対的な生物学的利用率は５．４５±１．４３％である。１０００ＩＵのパルナパリン＋３５ｍｇの分枝鎖促進剤の投与後に、最も高い相対的な生物学的利用率、すなわち７．５２±３．２７％が認められた。
【００３９】
表４より、本発明の促進剤は腸からのＬＭＷヘパリンの吸収を改善することが分かる。
結論として、分枝鎖促進剤化合物である２‐ｎ‐ヘキシルデカン酸ナトリウムは、直鎖Ｃ１０化合物（カプリン酸ナトリウム）のみをＬＭＷＨ（パルナパリン）と同時投与する
場合よりも、高くて変動の少ないＬＭＷＨ生物学的利用率をもたらす。２‐ｎ‐ヘキシルデカン酸ナトリウムおよびＣ１０（カプリン酸ナトリウム）の二成分混合物は、２‐ｎ‐ヘキシルデカン酸ナトリウムのみを含む配合物より生物学的利用率は低かったが、混合配合物で処置すると、変動が最小の生物学的利用率がもたらされる。
【実施例２】
【００４０】
（２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを含むＬＭＷヘパリン組成物）
覚醒ラットモデルに十二指腸内カニューレにより投与した場合のＬＭＷヘパリン（パルナパリン）の腸内吸収の研究において、浸透促進剤化合物である２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムの性能特性を、直鎖カルボン酸ナトリウムであるカプリン酸ナトリウムの性能と比較する。
【００４１】
非無作為化した対比群を用いる実験計画により比較を実施し、使用した動物は、体重範囲２５０〜３５０ｇのオスのウイスターラット（２５）である（各配合物につきｎ＝７）。動物に、配合物の投与用および血液採取用にそれぞれ十二指腸カニューレおよび静脈（頸静脈）カテーテルを麻酔下の間に外科的に埋め込む。ラットを投与前に少なくとも１日間回復させる。以下に述べるＬＭＷヘパリン［フルクサム・パルナパリン（Ｆｌｕｘｕｍ
ｐａｒｎａｐａｒｉｎ）‐平均分子量４０００〜４５００ダルトン］配合物を、リン酸緩衝生理食塩水（０．０１Ｍ、ｐＨ７．４）中で調製し、ボーラス（０．３ｍｌ）として十二指腸内に投与する。血液試料を頸静脈から以下の間隔で採取する：０（投与前）、５、１０、１５、３０、４５、６０、１２０、１８０、２４０、および３６０分。試料をクエン酸三ナトリウムを含むエッペンドルフチューブ（ｅｐｉｎｄｏｒｆ）中に採取し、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離することにより血漿を分離する。血漿試料を分析するまで−２０℃で保管する。試料をＣｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ  Ｃｏａｔｅｓｔ（登録商標）ヘパリン・キットを用いて分析し、結果を抗Ｘａ因子活性（ＩＵ／ｍｌ）として表す。相対的な生物学的利用率（すなわち、動物当たり２５０ＩＵのヘパリンの皮下投与量に対する）は、血漿中抗Ｘａ因子濃度／時間プロファイルから得られた曲線下面積から計算される
試験した配合物、ならびに前記配合物を投与した後のＬＭＷヘパリンの生物学的利用率および血漿中最大値の測定値を以下の表５に記載する。相対的な生物学的利用率（すなわち、動物当たり２５０ＩＵのヘパリンの皮下投与量に対する）を血漿中抗Ｘａ因子濃度／時間プロファイルから得られた曲線下面積から計算する。
【００４２】
【表５】
0004489356.tif 000007
いずれの浸透促進剤化合物も使わずに動物に投与したＬＭＷヘパリンの生物学的利用率は、非常に低い（０．４％未満）。しかしこのことは、薬物を上記配合物とともに投与すると、有意に改善される。ＬＭＷヘパリンを浸透促進剤である２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムとともに投与した場合、最も高い生物学的利用率が認められる。この促進剤
系は、リン酸緩衝生理食塩水中に完全には可溶性でない。したがって、溶解性を改善するために、該促進剤系を直鎖カルボン酸であるカプリン酸ナトリウムと組み合わせて投与する。
【実施例３】
【００４３】
（アンチセンス・オリゴヌクレオチド）
（２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを含む組成物）
巨大分子化合物、たとえばオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドの、本開発の促進剤化合物によってもたらされる生物学的利用率の促進を実証するために、カプリン酸ナトリウムおよびアンチセンス化合物を含み、本開発の促進剤化合物である２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを有する組成物、および有しない組成物を動物に投与した。組成物中の促進剤とアンチセンス化合物との比を表６に示す。
【００４４】
アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、適切に保護された出発原料（ｓｙｎｔｈｏｎ）を用いて固相有機合成により合成される。アンチセンス・オリゴヌクレオチドを精製するために逆相クロマトグラフィーを使用し、次いでそれを脱保護し、凍結乾燥した。
【００４５】
使用したアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、１０塩基の２’デオキシギャップを含む２’‐Ｏ‐（２−メトキシエチル）修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドであり、５‐１０‐５ＭＯＥギャップマーとも呼ばれ、１９のヌクレチド間結合の各々がＯ，Ｏ‐結合したホスホロチオエートであるオリゴヌクレオチドの３’および５’末端の５ヌクレチドのみに２’ＭＯＥ修飾を有している。さらに、すべてのシトシンが５‐メチルシトシンに修飾されている。２’ＭＯＥ修飾により、オリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ分解に対する抵抗性が増し、それによってそのＲＮＡ結合親和性およびその半減期が共に向上する。このアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、関節リウマチなどの炎症性障害を治療するために、ヒトＴＮＦ‐αを標的とする。このアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、次の配列、すなわち
ＧＣＴ  ＧＡＴ  ＴＡＧ  ＡＧＡ  ＧＡＧ  ＧＴＣ  ＣＣ
を有する。
【００４６】
この組成物を、それを被検対象に溶液の形態でカテーテルを通して投与することにより比較した。空腸カテーテルを、６匹のオスのアカゲザル（３〜５歳、３〜５Ｋｇ）中に麻酔下で外科的に埋め込む。このカテーテルは皮下の入り口に結合していて、その入り口を通して空腸中に薬剤投与することを可能にする。投与する前に動物を少なくとも７日間回復させる。投与する前に動物を一晩絶食させ、投与２時間後に餌を与える。試験配合物を水中に調製し、各投与の間に１週間のウオッシュ・アウト期間を設けた交差試験法（ｃｒｏｓｓ‐ｏｖｅｒ  ｓｔｕｄｙ）で、ボーラス（０．５ｍｌ／ｋｇ）として動物に投与する。大腿静脈（静脈内投与のための投与部位以外）から、以下の時間間隔で全血試料を採取する。静脈内投与については、０（投与前）、２、５、１０，２０、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０、２４０、および３６０分、ならびに空腸内投与に対しては、０（投与前）、５、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２４０、３６０、および４８０分。試料をＥＤＴＡを含む試験管中に採取し、冷却遠心分離器（２〜８℃）中で遠心分離して血漿を得、これを分析するまで−７０℃で保管する。アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、陰イオン交換クロマトグラフィーによって検出する。
【００４７】
配合物、および配合物投与後のアンチセンス・オリゴヌクレオチドの生物学的利用率、Ｔｍａｘ、および血漿中最大値の測定値を、以下の図表中に示す。生物学的利用率（すなわち、静脈内投与量に対する）を、血漿中オリゴヌクレオチド濃度／時間プロファイルの曲線下面積から計算する。
【００４８】
【表６】
0004489356.tif 000008
アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、いずれの浸透促進剤系も使わずにサルに経口でまたは腸内に投与した場合は、浸透性が劣る。この薬物を浸透促進剤と共に投与すると、生物学的利用率が有意に改善される。浸透促進剤である２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを含む組成物において最も高い生物学的利用率が認められ、この場合生物学的利用率は、５．２〜１８．２％の範囲であった。直鎖カプリン酸ナトリウム単独に対する、分枝鎖促進剤化合物による生物学的利用率の増大は、血漿中ピークの増大のみならず、曲線下面積全体の有意な増大にも関連する。直鎖カルボン酸塩であるカプリン酸ナトリウムのみを含む組成物により達成される生物学的利用率は、１．０％〜６．２％の範囲であり、浸透促進効果は有意に低い。
【００４９】
次には、ヘパリン（実施例４および５）、ならびにアンチセンス・オリゴヌクレオチド（実施例６）を含む錠剤の調製について説明する。
【実施例４】
【００５０】
（持続放出ヘパリン錠剤）
ブレンダー中で、１４．１ｇのヘパリン、１９．４７ｇの２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、４５．４３ｇのカプリン酸ナトリウム、２０．０ｇのヒドロキシプロピルメチルセルロース、ならびに各０．５ｇのシリカおよびステアリン酸マグネシウムを混合することにより、打錠するのに適した粉末を調製されるであろう。粉末を均一になるまで混合する。打錠機（ｔａｂｌｅｔ  ｐｒｅｓｓ）中で凝集性の錠剤を形成するのに十分な圧力で打錠することにより、ヘパリンを持続放出する錠剤を調製することが可能である。錠剤を、側面排気型のコーティングパンを用いて腸溶コーティング組成物を塗布することにより、腸溶コーティングしてもよい。
【００５１】
好適な腸溶コーティング組成物は、４９．８６ｇのＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ（登録商標）１２．５、１．２６ｇのフタル酸ジエチル、４３．３３ｇのイソプロピルアルコール、２．４６ｇのタルク、および３．０６ｇの水を混合することにより生成されるであろう。
【実施例５】
【００５２】
（即時放出ヘパリン錠剤）
ブレンダー中で、６．５７ｇの２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、５９．１３ｇのカプリン酸ナトリウム、１３．３ｇのヘパリン、２０ｇのマンニトール、ならびに各０
．５ｇのステアリン酸マグネシウムおよびシリカを混合することにより、打錠するのに適した粉末を調製する。粉末を均一になるまで混合する。
【００５３】
打錠機中で凝集性の錠剤を形成するのに十分な圧力で打錠することにより、ヘパリンの即時放出を可能とする錠剤を提供する。上記実施例４で策定された手順を用いて、錠剤を腸溶コーティングしてもよい。
【実施例６】
【００５４】
（アンチセンス・オリゴヌクレオチドを含む錠剤）
アンチセンス・オリゴヌクレオチド、２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、および適当な医薬賦形剤の均一な混合物からなる粉末の噴霧造粒により、錠剤に打錠するのに適した顆粒を調製する。
【００５５】
ブレンダー中で、１５ｇの実施例３のアンチセンス・オリゴヌクレオチド、５８．５ｇのカプリン酸ナトリウム、６．５ｇの２‐ｎ‐オクチルドデカン酸、１２．５ｇのＡｖｉｃｅｌ（登録商標）ｐｈ１０１、５ｇのＰＶＰ  Ｋ‐３０固体を混合することによって顆粒を調製する。粉末混合物を、５％のＰＶＰ  Ｋ‐３０固体を含む水溶液を用いて、噴霧乾燥によって均一な顆粒が得られるまで造粒する。
【００５６】
こうして得られた５３．５ｇの顆粒を、ブレンダー中で４０ｇのマンニトール、５ｇのＰｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ  ＸＬ（登録商標）、１ｇのＡｅｒｏｓｉｌ（登録商標）２００、および０．５ｇのステアリン酸と共に、均一な混合物が得られるまで混合する。
【００５７】
打錠機中で、凝集性の錠剤を形成するのに十分な圧力で打錠することにより、アンチセンス・オリゴヌクレオチドを即時放出する錠剤を調製し得る。上記実施例４で策定された手順を用いて、錠剤を腸溶コーティングしてもよい。
【００５８】
実施例７には、本発明の促進剤およびペプチド性薬物である酢酸ロイプロリドからなる半固体の調製について説明する。
【実施例７】
【００５９】
（酢酸ロイプロリドを含む半固体）
本発明の促進剤化合物、２‐ｎ‐オクチルドデカン酸および酢酸ロイプロリドからなる組成物を、半固体の形態で提供し得る。
【００６０】
この半固体は、１ｇの酢酸ロイプロリド、１ｇのコロイド状二酸化ケイ素、１０ｇの２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、６２ｇのＣａｐｍｕｌ（登録商標）ＭＣＭ  ８、４ｇのトリオレイン、３ｇのポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、および１９ｇのステアリン酸マクロゴール‐３２グリセリドを混合することにより調製し得る。
【００６１】
この半固体を、ゼラチン硬カプセル中に充填し、適当な腸溶コーティング溶液を用いてコーティングしてもよい。
以上の説明から、当然のことながら、本発明により、薬物の生物学的利用率が有意に改善され、医薬として有効な量の薬物が長期間にわたって持続可能な速度で供給され得るという方法で、体膜および皮膚の生来の障壁特性を克服する薬物送達方法が提供される。本発明の促進剤は、皮膚および様々な粘膜およびその他の細胞膜を通過する薬物送達を伴う施用に有用ではあるが、経口摂取され、次いでＧＩ管内で吸収される薬物の生物学的利用率を向上させるのに特に有効である。
【００６２】
本発明の薬物送達系が機能するメカニズムに関して、科学的な理論に縛られることは望
まないが、薬物は皮膚または膜の障壁中を、拡散および毛管作用という化学的なプロセスによって輸送されるものと考えられる。たとえば、皮膚または膜の抵抗性または障壁特性は、少なくとも一部は、角質層の非常に規則正しい細胞間脂質構造であるリン脂質二重層の膜によるものである。浸透促進剤は角質層の規則正しい構造を崩壊かつ減少させ、それによって細胞構造をより流動的にし得る。このことにより、拡散による薬物の浸透速度がより速くなる。したがって、（角質層の崩壊の結果による）拡散速度の増大により、浸透促進剤は薬物分子自体の表面活性を増大させ、それによって、薬物は皮膚の構造中をより早く移動する。
【００６３】
薬物の浸透速度は、膜および薬物自体のいずれに関連する要因によっても影響を受ける。膜に関しては、個々の細胞単位が薬物の浸透速度の制御における主要な要因である。各細胞を囲む形質膜の層は、親水性および疎水性の交互の層を有するリン脂質からなり、これは保護機能の役割を果たすが同時に多くの薬物に対して障壁の原因となる。この障壁の性質は、体の膜によって異なり得る。薬物は一般に、溶解度、極性、および分子サイズなどの化学特性において様々であり、したがって体膜を通過する拡散速度も様々である。薬物および対象とする体内の膜の各組合せによって、浸透についての環境が特有のものとなるので、十分な生物学的利用率のレベルを実現する経路は、通常複雑で予測が不可能である。本発明の促進剤は、適当な鎖長、分枝点の配置、酸性基の数、および様々な鎖上の配置を有する促進剤を選択し、かつ薬物送達のために特に有効な組成物の配合を最適化することを可能にすることによって、効率的な浸透という問題に対する改善された解決法を提供するものと考えられる。