(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ライチ果皮もしくは乾燥ライチ果皮またはこれらの粉砕物を水もしくは極性有機溶媒またはこれらの混合物で抽出して得た粗抽出物の水可溶画分と、水不溶画分を低級アルコールまたは低級アルコールと水との混合液で処理して得られた画分とを、逆相カラムに供し、濃度３０〜５０％の含水アルコールで溶出することを特徴とするライチ果皮由来のポリフェノールを７０％以上の濃度で含有する組成物の製造方法。
【請求項２】
含水アルコールが含水エタノールである請求項１に記載のライチ果皮由来のポリフェノールを主成分として含有する組成物の製造方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の製造方法で得られるライチ果皮由来のポリフェノールを７０％以上の濃度で含有する組成物。
【請求項４】
ポリフェノール含有量が９０％以上である請求項３に記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物。
【請求項５】
抗酸化作用を有する請求項３または４に記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物。
【請求項６】
請求項３乃至５のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする健康食品。
【請求項７】
請求項３乃至５のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする医療用食品。
【請求項８】
請求項３乃至５のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項９】
請求項３乃至５のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする機能性食品。
【請求項１０】
請求項３乃至５のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は健康食品、医療用食品、機能性食品、医薬品、化粧品、医薬部外品などに適用されるライチ果皮ポリフェノール含有組成物、その製造方法及びその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
ライチは茘枝ともいい、中国の福建省や広東省、台湾などで産生されるムクロジ科（Sapindaceae）レイシ属の常緑小高木植物で、学名をLitchi chinensis Sonn.という。ライチの果実は直径３〜４ｃｍ程度の赤茶色の球形をしており、うろこ状の硬い果皮に覆われている。皮をむくと乳白色半透明の滑らかな柔らかい果肉に覆われており、楊貴妃の時代から食用として珍重され、現在では世界中で食用に供されている。生では鮮度が落ちやすく、鮮やかな赤色の果皮が赤褐色に変色してしまうので、主に冷凍あるいは缶詰加工されたものが流通している。
【０００３】
ライチの果実は主に果皮を取り除いて種のまわりの果肉を食用にしており、果皮及び種子は廃棄物として扱われている。ライチの果実はその種子にポリフェノール類の成分を多く含むことが知られており（食品と開発，３７巻，６号，2002，p. ４２〜４６；非特許文献１）、美肌用組成物（特開2005-281318号公報，特開2003-63926号公報；特許文献１、２）や抗アレルギー組成物（特開2005-179308号公報；特許文献３）としての利用方法が開示されている。しかし、果皮については、果皮に含まれるアントシアニンをはじめとするポリフェノール成分が酸化することにより、収穫後の果皮が褐変し、果実としてのライチの価値を低下させるとして研究が盛んに行われているが、この果皮の食品や医薬品等への利用は未だ知られていない。
【０００４】
ライチの果皮にポリフェノールが含まれることはこれまでにも知られており、Ａ−タイプのプロアントシアニジンが含まれることが報告されている（ファイトケミストリー（Phytochemistry）, ４８巻, 7号, 1998, p. 1251〜1258；非特許文献２）。しかし、一方ライチの果皮にはポリフェノールの他に多様な成分が含まれており、特に食品に応用可能な抽出エキスの中にはポリフェノール以外のさまざまな成分が混在するため、ライチの果皮に含まれるポリフェノールの精製は困難であることが知られている。こうした成分はポリフェノールの精製過程で不溶性の成分として沈殿するため、食品などへの加工上の障害となり、これまでのところ、有効な精製方法は見出されていない。本発明者らは本発明において、これまで廃棄されていたライチの果皮に含まれるポリフェノール類の有効な精製方法について極めて有用な方法を見出し、ライチ果皮由来ポリフェノールに優れた抗酸化作用があることを世界で初めて見出した。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−２８１３１８号公報
【特許文献２】特開２００３−６３９２６号公報
【特許文献３】特開２００５−１７９３０８号公報
【非特許文献１】食品と開発, ３７巻, ６号, 2002, p. ４２〜４６
【非特許文献２】ファイトケミストリー（Phytochemistry）, ４８巻, 7号, 1998, p. 1251〜1258
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ライチ果皮の粗抽出エキスにはポリフェノール以外の不溶性の未知成分が多く含まれ、目的とするポリフェノールの純度が低下するという問題があった。そのため、加工上の障害になる上に、得られた組成物の抗酸化活性は低くなり利用上も大きな問題となっていた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、生体利用性の高いフラバノール及びプロアントシアニジン類が水に可溶であり、かつアルコールに易溶である物理的性質を有することに着目し、ライチ果皮に含まれる粗抽出エキスを濃縮して水溶液として静置保管し、生じた沈殿を遠心分離またはそれに代わる方法で分離する。さらに、沈殿に含まれるポリフェノール成分をさらに抽出して元の抽出物に加え、それを精製することでポリフェノールの濃度を９０％以上にする。こうして得られたポリフェノール含有量が９０％以上のライチ果皮由来ポリフェノール含有組成物は不溶性の不純物が除去され、抗酸化活性も著しく向上する。
【０００８】
本発明は以下のライチ果皮由来のポリフェノール含有組成物、その製造方法及びその用途に関する。
１．ライチ果皮もしくは乾燥ライチ果皮またはこれらの粉砕物を水もしくは極性有機溶媒またはこれらの混合物で抽出して得た粗抽出物の水可溶画分と、水不溶画分を溶媒で処理して得られた画分とを、逆相カラムに供し、低濃度の含水アルコールで溶出することを特徴とするライチ果皮由来のポリフェノールを主成分として含有する組成物の製造方法。
２．前記水不溶性画分を処理する溶媒が低級アルコールまたは低級アルコールと水との混合液であり、低濃度の含水アルコールの濃度が、３０〜５０％である前記１に記載のライチ果皮由来のポリフェノールを主成分として含有する組成物の製造方法。
３．含水アルコールが含水エタノールである前記１または２に記載のライチ果皮由来のポリフェノールを主成分として含有する組成物の製造方法。
４．前記１乃至３のいずれかに記載の製造方法で得られるライチ果皮由来のポリフェノールを主成分として含有する組成物。
５．ポリフェノール含有量が７０％以上である前記４に記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物。
６．ポリフェノール含有量が９０％以上である前記５に記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物。
７．抗酸化作用を有する前記４乃至６のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物。
８．前記４乃至７のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする健康食品。
９．前記４乃至７のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする医療用食品。
１０．前記４乃至７のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする医薬品。
１１．前記４乃至７のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする機能性食品。
１２．前記４乃至７のいずれかに記載のライチ果皮ポリフェノール含有組成物を含有することを特徴とする化粧品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のライチ果皮由来のポリフェノール含有組成物の製造方法によれば、ポリフェノール含有量が９０％以上のライチ果皮由来ポリフェノール含有組成物が製造できる。また、この方法によって得られるポリフェノール含有組成物は抗酸化活性も著しく向上するため、活性酸素種の生成が原因となる生活習慣病、脳疾患の治療あるいは予防、または老化の予防のための健康食品、医療用食品、医薬品、機能性食品、及び化粧品等に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の抗酸化組成物はこれまで廃棄物として扱われていたライチの果皮から高純度にポリフェノール成分を抽出したものである。ライチ果皮は生果皮も使用できるが、乾燥果皮またはこれらの粉砕物が好ましい。粗抽出物の抽出の方法は特に限定されないが、水もしくは極性有機溶媒またはこれらの混合物を用いるのがより良い方法である。用いられる溶媒としては水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸、酢酸エチル、エーテル、ヘキサンなどが挙げられる。これらをそのまま単一の溶媒として用いるか、あるいは二種類以上を任意に混合して用いることができる。食品への応用を考慮すれば、好適には水、エタノール、またはこれらの混合物が用いられる。
【００１１】
本発明の抗酸化組成物を抽出する際にはライチ果皮の２倍量から２０倍量、より好適には１０倍量の溶媒を用い、必要に応じて４０〜１００℃程度に加熱したり、超音波処理あるいはマイクロ波処理をしても良い。抽出は１〜２４時間程度で行えばよく、好適には３時間程度を１〜３回繰り返すのが良い。
【００１２】
得られた粗抽出物は減圧濃縮などの方法で濃縮して、抽出に用いた有機溶媒を除去し、静置して、水可溶部と水不溶部に分画し、水不溶部を除去することでポリフェノールの純度を上げることができる。静置するのは室温で１２時間以上おけば良いが、必要に応じて凍結しない程度の低温下に静置してもよい。澱（水不溶部）を除去する方法は様々あり、濾紙や濾布で濾過したり、遠心分離することができる。
【００１３】
濾別した残渣（水不溶部）にもポリフェノール成分が含まれているので、この不溶成分に溶媒、好ましくは低級アルコールまたは低級アルコールと水との混合液、より好ましくはエタノールまたは水−エタノールを加えてさらに抽出した物を濾液に加えることでポリフェノール含有量が増加する。
得られた粗抽出液は濃縮、乾燥し、あるいは、分画処理してポリフェノール成分を常法により精製しても良い。例えば、粗抽出液を減圧濃縮した後、膜処理（限外濾過、逆浸透等）、吸着剤で処理する等によりポリフェノールを分離濃縮し、精製することができる。
【００１４】
吸着剤としては、スチレン−ビニルベンゼン系吸着剤、メタクリル酸系吸着剤、親水性ビニルポリマー、修飾デキストランゲル、ポリアクリルアミドゲル、逆相系シリカゲル、イオン交換樹脂、芳香族系合成吸着剤等が用いられる。これらの吸着剤で調製したカラムに粗抽出液をチャージし、低濃度の含水アルコール、好ましくは１０〜６０％、より好ましくは３０〜４０％の水−エタノールで溶出する。
【００１５】
こうして得られたライチ果皮由来のポリフェノール組成物は、ポリフェノール含有量が７０％以上、さらには９０％以上の高純度で、抗酸化活性も著しく高いものである。
【実施例】
【００１６】
以下に実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００１７】
実施例１：
ライチの果皮を天日乾燥し、粉砕器で粉砕し粉末状にした。このライチ果皮粉末５００gに対して水３Ｌ及び99.5％エタノール２Ｌを加え、緩やかに撹拌・混和し約２５℃で２４時間静置抽出した。得られた抽出液を濾過して残渣を除去し、濾液を減圧濃縮してエタノールを溜去し、これをライチ果皮粗抽出液とした。
ライチ果皮粗抽出液に２Ｌ加水し、４℃の条件下で１２時間静置して生じた沈殿を瀘別し、水可溶画分と水不溶画分に分離した。水不溶画分をさらに99.5％エタノールを５倍量加えて溶解し、エタノール可溶性画分を水可溶画分に加えた。
得られた溶液をＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０で調製したカラム（内径5.0ｃｍ、長さ25.0ｃｍ、容積約５００ｍＬ）にチャージして４０％エタノールで溶出して得た画分を濃縮、凍結乾燥してライチ果皮ポリフェノール抽出物（以下、発明物質Ａと略す）１６ｇを得た。
【００１８】
比較例１：
実施例１と同様にして得られたライチ果皮粗抽出液を濃縮、凍結乾燥して粉末（以下、比較物質Ａと略す）を得た。
発明物質Ａ及び比較物質Ａのポリフェノール含有量をフォリン−デニス法で測定した。即ち、それぞれの物質を含む試料溶液１ｍＬにフォリン試薬（2.5％タングステン酸ナトリウム、0.5％リンモリブデン酸及び1.25％リン酸を含む溶液）１ｍＬを加えて混合し、３分後に１０％炭酸ナトリウム１ｍＬを加えて撹拌した。１時間室温に放置後、分光光度計により７５０ｎｍの吸光度を測定した。市販のＤ−カテキンを用いて検量線を作成し、ブランクには蒸留水を使用した。その結果を表１に示す。
【表１】
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表１に示したように、水不溶画分を処理して加えることで発明物質Ａでは格段にポリフェノール濃度が増加した。
【００１９】
比較例２：
実施例１における４０％エタノールの代わりに、水で溶出して得られる画分（以下、比較物質Ｂと略す）、２０％エタノールで溶出して得られる画分（以下、比較物質Ｃと略す）、６０％エタノールで溶出して得られる画分（以下、比較物質Ｄと略す）、８０％エタノールで溶出して得られる画分（以下、比較物質Ｅと略す）、99.5％エタノールで溶出して得られる画分（以下、比較物質Ｆと略す）を調整した。
上記と同様にポリフェノール濃度を比較した。その結果を表２に示す。
【表２】
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表２に示したように、ライチ果皮ポリフェノールの場合、カラムから溶出する際のエタノール濃度によって、得られるポリフェノール濃度に大きな差が出る。４０％エタノールで処理した場合が最もポリフェノール濃度が高くなった。
【００２０】
試験例：
得られたライチ果皮由来ポリフェノール組成物の抗酸化能を測定するためｉｎ  ｖｉｔｒｏのＵＶ保護効果試験及びｉｎ  ｖｉｖｏの血清中ＬＰＯを指標とした抗酸化能評価試験により評価した。
【００２１】
［ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験］
試験方法：ＮＩＨ３Ｔ３細胞を９６穴プレートに播種し、３７℃で一晩培養する。翌日無血清培地に交換し、発明物質Ａを添加し、さらに１時間培養後、２０分間ＵＶ照射した。血清入りの培地に交換して３７℃で一晩培養しＭＴＴ法により細胞生存率を測定した。無添加を対照群（Ｃ）とした。
結果を図１に示す。対照群ではＵＶ照射に対する細胞の生存率は２０％程度であるのに対して発明物質Ａでは生存率が高く、対照群と比較して有意に細胞死が抑制され、発明物質ＡのＵＶ保護作用が示された。
【００２２】
［ｉｎ  ｖｉｖｏ試験］
試験方法：９週齢の雄性Ｓｌｃ：ｄｄＹマウスに発明物質Ａを５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で３週間連日強制経口投与した。対照群（Ｃ）には同用量の水道水を投与した。最終日の被検物質投与から２時間後にエーテル麻酔下で心臓採血を行い血清の過酸化脂質量を測定した。過酸化脂質は市販のキット（過酸化脂質−テストワコー，和光純薬株式会社製）を用いて硫酸酸性化でのリンタングステン酸溶液中での過酸化脂質の沈殿と２−チオバルビツール酸試薬との反応を励起波長５１５ｎｍ、蛍光波長５５３ｎｍの蛍光を測定することにより測定した。
結果を図２に示す。血清中の過酸化脂質は発明物質Ａにおいて対照群に比べ有意に低値を示した。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】発明物質ＡについてＵＶ保護効果試験結果を示す。
【図２】発明物質Ａについて抗酸化能評価試験における血清中ＬＰＯの測定結果を示す。
【図１】
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【図２】
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