(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
メチルメタクリレート、スチレン、エチレン、ビニルアルコールおよびテトラフルオロエチレン、の単独重合体、共重合体およびこれらの誘導体、ならびに、ポリスルホン、セルロース、コラーゲン、キチン、キトサンおよびこれらの誘導体、を単独あるいはブレンドした材料の内から選ばれる基材上に、尿素結合とアミノ基、尿素結合とアミド結合とアミノ基、または、アミド結合とアミノ基と水酸基、を導入することを特徴とする、インターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項２】
該アミノ基が２級あるいは３級であることを特徴とする請求項１記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項３】
該アミノ基がポリアミンであることを特徴とする請求項１記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項４】
芳香族環を有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項５】
該芳香族環がベンゼン環であることを特徴とする請求項４に記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項６】
メチルメタクリレート、スチレン、エチレン、ビニルアルコールおよびテトラフルオロエチレン、の単独重合体、共重合体およびこれらの誘導体、ならびに、ポリスルホン、セルロース、コラーゲン、キチン、キトサンおよびこれらの誘導体、を単独あるいはブレンドした材料の内から選ばれる基材上に、４，４’ジフェニルメタンジイソシアネートが導入されたことを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項７】
メチルメタクリレート、スチレン、エチレン、ビニルアルコールおよびテトラフルオロエチレン、の単独重合体、共重合体およびこれらの誘導体、ならびに、ポリスルホン、セルロース、コラーゲン、キチン、キトサンおよびこれらの誘導体、を単独あるいはブレンドした材料の内から選ばれる基材上に、Ｎ−メチロール−α−クロロアセトアミドに加えてテトラエチレンペンタミン、トリエチレンテトラミン、ジエチレントリアミン、ジアミノエタン、ジアミノプロパンから選ばれる化合物、さらにクロロフェニルイソシアネート、４−クロロフェニルイソシアネートから選ばれる化合物が導入されたことを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項８】
メチルメタクリレート、スチレン、エチレン、ビニルアルコールおよびテトラフルオロエチレン、の単独重合体、共重合体およびこれらの誘導体、ならびに、ポリスルホン、セルロース、コラーゲン、キチン、キトサンおよびこれらの誘導体、を単独あるいはブレンドした材料の内から選ばれる基材上に、Ｎ−メチロール−α−クロロアセトアミドに加えて２−エタノールアミン、３−プロパノールアミン、２−（２−アミノエトキシ）エタノール、２−（２−アミノエチルアミノ）エタノールから選ばれる化合物が導入されたことを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項９】
該基材が繊維であることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項１０】
該繊維が海島型の繊維であることを特徴とする請求項９記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項１１】
水不溶性であることを特徴とする請求項１〜１０のいずれかに記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項１２】
高サイトカイン血症治療用であることを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載のインターロイキン−１β、インターロイキン−６、インターロイキン−８および単球走化活性化因子から選ばれるサイトカインの除去用あるいは不活化用の材料。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかに記載の材料を用いた体液浄化カラム。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、サイトカインを不活化あるいは除去する材料に関するものである。特にヒト血液中等の高濃度の蛋白質溶液中に存在するサイトカインと結合することによってサイトカインの活性を失わせる（不活化）薬剤として、炎症性サイトカインを除去する浄化カラムあるいは被覆材料として好適に用いられる。
【０００２】
【従来の技術】
サイトカインとは、感染、外傷などの刺激により免疫担当細胞を始めとする各種の細胞から産生され細胞外に放出されて作用する一群のタンパク質であり、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキンー１〜インターロイキンー１５、腫瘍壊死因子α、腫瘍壊死β、エリスロポエチン、単球走化因子名など、数多く知られている。サイトカインは、本来は生体が、生体防御のために産生する物質と考えられるが、炎症性サイトカインとして分類される腫瘍壊死因子、インターロイキン−６、インターロイキン−８、単球走化活性化因子（以下、ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１という）などの一群のタンパクは、その過剰な産生が各種炎症性疾患における組織障害、病態に関与することが明らかになっている。例えば、腫瘍壊死因子の動物への投与は敗血症性のショックを誘起し、このサイトカインの作用を阻害することが病態改善に有用であることが報告されているこれらサトイトカインが高濃度で血中に遊離している、高サイトカイン血症、例えば、ヒトの敗血症などにおいては、インターロイキン−６、インターロイキン−８、ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１などの血液中濃度が顕著な上昇を示し、これらの濃度は、病態や予後と相関することが認められている。また、リウマチ性関節炎などの自己免疫疾患、アレルギー性疾患などでもその過剰産生と病態との関連が指摘されている。
【０００３】
従来、炎症性サイトカインの作用を抑えることにより上記のような炎症性の疾患を治療する試みには、抗体や可溶性受容体に代表されるような特異的に標的サイトカインと結合してその作用を阻害するタンパク質、あるいは、受容体アンタゴニストのようにサイトカインと競合的にその受容体に結合するタンパク質を生体内に投与することが試みられてきた。しかし、生体投与のための多量のタンパク質の調製には多大な費用がかかること、また投与するタンパクが生体にとって異物である場合には、患者にとって不都合な免疫反応を誘起する場合があり、これらにより投与可能な量、回数が制限される場合が多かった。
【０００４】
【本発明が解決しようとする課題】
本発明は、血液のような多量の共存タンパクを含む溶液中においても過剰のサイトカインを高効率で迅速に不活化あるいは除去でき、かつ安価であるような材料を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは鋭意検討した結果、水素結合形成可能な基を有する材料がサイトカインと親和性を有することを見出し、本発明に至った。すなわち本発明の第一の要件は尿素結合、チオ尿素結合、アミド結合およびアミノ基から選ばれる二つ以上の異なる水素結合形成可能な官能基を含むことを特徴とするサイトカインを除去あるいは不活化するための材料である。また、本発明の第二の要件は上述した材料を用いた体液浄化カラムである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明において、水素結合形成可能な官能基としては、例えば、尿素結合、チオ尿素結合、アミド基、アミノ基、水酸基、カルボキシル基、アルデヒド基、メルカプト基などが挙げられるが、尿素結合、チオ尿素結合あるいはアミド結合またはアミノ基を少なくとも二つ有することがよい。水素結合形成可能な基に続く構造としては特に限定はなく、プロパン、ヘキサン、オクタン、ドデカンなどの脂肪族化合物やシクロヘキサン、シクロペンタンのような脂環族化合物を用いることができるが、親和性の高さを考慮するとベンゼン、ナフタレン、アントラセン等の芳香族化合物がより好ましく用いられる。ブロモヘプタン、クロロシクロヘキサン、メチルベンゼン、クロロベンゼン、ニトロベンゼン、ジフェニルメタン、クロロナフタレン等の誘導体も好適に用いられる。また、尿素結合、チオ尿素結合、アミド結合およびアミノ基から選ばれる二つ以上の異なる水素結合形成可能な官能基であることがよい。特に尿素結合、チオ尿素結合あるいはアミド結合またはアミノ基に続く構造として例えば、水酸基、カルボキシル基等の水素結合形成可能な官能基をさらに有する構造が好ましく用いられる。例えばアミノ基を有する構造としては、アミノヘキサン、モノメチルアミノヘキサン、ジメチルアミノヘキサン、アミノオクタン、アミノドデカン、アミノジフェニルメタン、１−（３−アミノプロピル）イミダゾール、３−アミノ−１−プロペン、アミノピリジン、アミノベンゼンスルホン酸、トリス（２−アミノエチル）アミン等や、より好ましくは、ジアミノエタン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ジプロピレントリアミン、ポリエチレンイミン、Ｎ−メチル−２, ２’−ジアミノジエチルアミン、Ｎ−アセチルエチレンジアミン、１, ２−ビス（２−アミノエトキシエタン）等のようなアミノ基を複数有する化合物（ポリアミン）が用いられる。また、水酸基を有する構造としては、ヒドロキシプロパン、２−エタノールアミン、１, ３−ジアミノ- ２- ヒドロキシプロパン、ヒドロキシブタノン、ヒドロキシ酪酸、ヒドロキシピリジン等や、グルコース、グルコサミン、ガラクトサミン、マルトース、セルビオース、スクロース、アガロース、セルロース、キチン、キトサン等の単糖、オリゴ糖、多糖等の糖質あるいはそれらの誘導体を用いることができる。さらに、カルボキシル基を有する構造としては例えば、β−アラニン、ｎ−カプロン酸、イソ酪酸、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸等を用いることができる。最も好ましくは、本発明材料は尿素、チオ尿素、アミド基あるいはアミノ基に続く構造として芳香族化合物と水素結合形成可能な化合物の両方を有することができる。
【０００７】
さらに、尿素結合、チオ尿素結合、アミド結合を分子構造内に複数個有するような、ポリ尿素、ポリチオ尿素、ポリアミドも本発明材料として用いることができる。この場合にも、尿素結合、チオ尿素結合、アミド結合に続く構造として上記構造のいずれをも用いることができるが、最も好ましくは、水酸基、アミノ基やカルボキシル基を有する化合物（糖質あるいはその誘導体を含む）のような水素結合形成可能な基と芳香族化合物の両方を用いることができる。
【０００８】
また、本発明材料としては、モノマ、オリゴマ、ポリマのいずれでも良いため、上記構造あるいはその一部が重合されているものも本発明材料に含まれる。すなわち、上記構造あるいはその一部として、ナイロン、ポリメチルメタクリレート、ポリスルホン、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリビニルアルコール、ポリテトラフルオロエチレンなどの合成高分子や、セルロース、コラーゲン、キチン、キトサンおよびそれらの誘導体を含む天然高分子などが好適に用いられる。つまり、単独重合、共重合あるいはブレンドされたこれら合成高分子や天然高分子などに、水素結合形成可能な基を導入することが好適に行われる。さらに、金属、セラミック、ガラスなどの無機材料を基材として適当な高分子で被覆したり、表面を直接修飾したものも好適に用いられる。特にポリスチレン、ポリスルホン、ポリメチルメタクリレート等は、表面修飾が容易に行えるため、好ましく用いられる。また、ポリスチレン／ポリプロピレン海島繊維は、ポリスチレンの修飾のしやすさと、ポリプロピレンによる強度補強による扱い易さを持つためより好ましい。
【０００９】
本発明材料は一般に公知の方法で合成することができる。例えば脂肪族化合物や芳香族化合物に尿素結合あるいはチオ尿素結合を導入する場合には、イソシアネート誘導体あるいはイソチオシアネート誘導体とアミノ化合物とを反応させる方法を用いることができる。また、脂肪族化合物や芳香族化合物にアミド基を導入する場合には、例えば酸、酸塩化物あるいは酸無水物とアミノ化合物とを反応させる方法を用いることができる。アミノ化合物とイソシアネート、イソチオシアネート、酸、酸塩化物あるいは酸無水物の混合比は任意に選択でき、通常、イソシアネート、イソチオシアネート、酸、酸塩化物あるいは酸無水物１モルに対して０．１〜５モルのアミノ化合物が好ましく用いられる。イソシアネートあるいはイソチオシアネートとしては例えば、エチルイソシアネート、ステアリルイソシアネート、n-ブチルイソシアネート、ｉｓｏ−ブチルイソシアネート、n-プロピルイソシアネート、メチルイソチオシアネート、エチルイソチオシアネート、n-ブチルイソチオシアネート、ベンジルイソチオシアネート、ヘキサメチレンジイソシアネート、シクロヘキシルイソシアネート、シクロヘキシルイソチオシアネート、シクロヘキシルジイソシアネート等の脂肪族イソシアネートあるいはイソチオシアネートのいずれをも用いることができるが、より好ましくはフェニルイソシアネート、クロロフェニルイソシアネート、フルオロフェニルイソシアネート、ブロモフェニルイソシアネート、ニトロフェニルイソシアネート、トリルイソシアネート、メトキシフェニルイソシアネート、1-ナフチルイソシアネート、4,4'ジフェニルメタンジイソシアネート、3,3',5,5' テトラエチル4,4'ジイソシアナトジフェニルメタン、フェニルイソチオシアネート、クロロフェニルイソチオシアネート、フルオロフェニルイソチオシアネート、ニトロフェニルイソチオシアネート、トリルイソチオシアネート、メトキシフェニルイソチオシアネート、1-ナフチルイソチオシアネート等の芳香族イソシアネートあるいはイソチオシアネートが用いられる。酸塩化物としては例えば、塩化イソバレリル、塩化ステアロイル、シクロヘキサンクロライド、６−クロロニコチニルクロライド等の脂肪族酸塩化物のいずれをも用いることができるが、より好ましくは塩化ベンゾイル、塩化３, ４−ジクロロベンゾイル、ニトロベンゾイル、塩化４−クロロベンゾイル、塩化４−トリオイル、ベンゾ−［ｂ］チオフェン−２−カルボニルクロライド等の芳香族酸塩化物を用いることができる。また、酸無水物としては例えば、無水酢酸、無水コハク酸、無水フタル酸、無水安息香酸等を好ましく用いることができる。また、本発明に用いるアミノ化合物のアミノ基としては１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基のいずれでも良く、アミノ化合物としては例えば、アンモニア、ｓｅｃ−オクチルアミン、１−（３−アミノプロピル）イミダゾール、３−アミノ−１−プロペン、アミノピリジン、アミノベンゼンスルホン酸、トリス（２−アミノエチル）アミン等を好ましく用いることができる。また、尿素結合、チオ尿素結合あるいはアミド結合に加えて水素結合形成可能な基を導入できるような、ポリアミノ化合物や水酸基あるいはカルボキシル基を有するアミノ化合物も好ましく用いることができる。ポリアミノ化合物としては例えば、ジアミノエタン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ジプロピレントリアミン、Ｎ−メチル−２，２' −ジアミノジエチルアミン、ポリエチレンイミン、Ｎ−アセチルエチレンジアミン、１、 ２−ビス（２−アミノエトキシ）エタン等のいずれをも用いることができる。水酸基を有するアミノ化合物としては、2-エタノールアミン、3-プロパノールアミン、6-ヘキサノールアミン、1,3 −ジアミノ-2- ヒドロキシプロパン、２−（２−アミノエトキシ）エタノール、２−（２−アミノエチルアミノ）エタノール、グルカミン、N-メチル−1,3-ジアミノプロパノール等の脂肪族アミン、あるいは、4-アミノフェノール、ジアミノフェノール、アミノヒドロキシピリミジン、ジアミノヒドロキシピリミジン、ジアミノヒドロキシピラゾール等の芳香族アミン、あるいはセリン、チロシン等のアミノ酸類が用いられる。また、エピクロロヒドリンおよびアミノ化合物、あるいは1,3 −ジブロモ-2- ヒドロキシプロパンを反応させることによって水酸基のみを有する化合物あるいはアミノ基のみを有する化合物から水酸基を有するアミノ化合物を合成することも可能である。また、糖質に水素結合形成可能な基を導入する場合も上記と同様な方法を用いることができる。すなわち、キトサンやグルコサミンのようなアミノ基を有する糖質の場合には、上述したようなイソシアネート、イソチオシアネート、酸、酸塩化物あるいは酸無水物を反応させることができる。セルロースのようなアミノ基を有さない糖質の場合には、糖質の水酸基をエピクロルヒドリン、トレシルクロライドなどを用いて活性化させた後に、アンモニアやジアミノエタンなどと反応させてアミノ基を導入し、このアミノ基を利用して、糖質に尿素結合、チオ尿素結合、アミド結合等の水素結合形成可能な基を導入することができる。カルボキシル基を有するアミノ化合物としては例えば、β−アラニン、４−アミノ−ｎ−酪酸、γ−アミノ−β−ヒドロキシ−ｎ−酪酸、６−アミノ−ｎ−カプロン酸等を用いることができる。
【００１０】
さらに、本発明材料がオリゴマあるいはポリマの場合には、例えば、イソシアネート基、カルボキシル基あるいはスクシンイミド基等のカルボン酸の活性エステル基を有するオリゴマあるいはポリマに、水素結合形成可能な基を有する化合物のアミノ基を反応させる方法が好ましく用いられる。また、アミノ基を有するオリゴマ、ポリマ、あるいはアンモニア、ジアミノエタン、1,3 −ジアミノプロパン、1,3 −ジアミノ-2- ヒドロキシプロパン、１, ２−ビス（２−アミノエトキシ）エタン、トリス（２−アミノエチル）アミン、２−（２−アミノエチルアミノ）エタノールなどによりアミノ基を導入したオリゴマ、ポリマに上述したようなイソシアネート誘導体、イソチオシアネート誘導体、酸、酸塩化物あるいは酸無水物を反応させることも好ましい方法である。また、酸塩化物やイソシアネート誘導体がアミノ基以外の水素結合形成可能な基に反応しないように、反応時間や反応温度を制御したり、保護基を用いることが好ましい。アミノ基、イソシアネート基、カルボキシル基あるいはスクシンイミド基等のカルボン酸の活性エステル基、酸塩化物基、酸無水物基などの官能基は、必要に応じてオリゴマ、ポリマに導入することができる。
【００１１】
さらに本発明材料がポリ尿素あるいはポリチオ尿素の場合には、例えばポリイソシアネート誘導体あるいはポリイソチオシアネート誘導体とポリアミノ化合物とを反応させる方法を用いることができる。通常、試薬の量はポリイソシアネートあるいはポリイソチオシアネート１モルに対して、０．１〜５モルのポリアミンが好ましく用いられる。ポリイソシアネートあるいはポリイソチオシアネートとしてはヘキサメチレンジイソシアネート、シクロヘキシルジイソシアネート、トリレンジイソシアネート、4,4'- ジフェニルメタンジイソシアネート、3,3',5,5' テトラエチル-4,4'-ジイソシアナトジフェニルメタン、キシレンジイソシアネート、メチレンビス（４−フェニルイソチオシアネート）等が好適に用いられる。また、ポリアミノ化合物としてはジアミノエタン、ジアミノプロパン、1,3-ジアミノ-2- ヒドロキシプロパン、Ｎ−メチル-1,3  −ジアミノ-2- プロパノール、ジアミノフェノール、Ｎ，Ｎ’−ジアミノピペラジン、ジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ポリエチレンイミン、ジプロピレントリアミン、Ｎ−メチルジアミノエチルアミンなどを好ましく用いることができる。さらに、本発明材料がポリアミドの場合には、例えばポリカルボン酸とポリアミンを重縮合させる方法を用いることができる。また、ポリ尿素、ポリチオ尿素、ポリアミドのいずれにおいても、ポリイソシアネート、ポリイソチオシアネート、ポリカルボン酸などを用いずに、各々の官能基を一つずつ順次導入することによって最終的にポリ尿素、ポリチオ尿素、ポリアミドを得る方法も好ましく行われる。
【００１２】
上記すべての反応条件は限定されるものではないが、標準的には、反応温度は例えば０〜１５０℃、反応時間は例えば０．１〜２４時間で行われる。また、反応溶媒は必ずしも必要ではないが、一般的には溶媒の存在下に行われる。使用しうる溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ- ブタノール、ヘキサン、アセトン、Ｎ，Ｎ- ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の脂肪族炭化水素類、ベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン等のハロゲン化炭化水素類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類等が挙げられる。反応終了後の反応液は、必要に応じ、ろ過、濃縮などの通常の後処理の後、カラムクロマトグラフィー、再結晶などの操作により、精製されることができる。また、水不溶性の材料の場合、ガラスフィルター等を用いて洗浄することも好ましい方法である。
【００１３】
本発明材料の中で水不溶性のものは、サイトカイン除去カラムあるいは被覆材料などとして好ましく用いられる。その形状としては特に限定はないが、カラムとして用いる場合には、ビーズ、繊維、中空繊維、糸束、ヤーン、ネット、編み地、織物等が用いられるが、表面積か瀬大きく、流路抵抗の小ささを考慮すると、繊維、編み地、織物や中空糸が好ましく用いられる。被覆材料の場合は、織物あるいはフィルム等の形状が好ましい。また、本材料は単独での使用のみならず、適当な基材にさらに固定化したり、他材料と混合して一つのカラムあるいは被覆材料として用いることもできる。固定化あるいは混合などの操作は、前記形状に加工する前に行っても良いし、加工した後に行っても良い。本発明の材料を用いたカラムを体外循環用カラムとして用いる場合には、体外に導出した血液を直接カラムに通しても良いし、血漿分離膜などと組み合わせて使用しても良い。
【００１４】
本発明の材料は、炎症性サイトカインを除去あるいは不活化するが、炎症性サイトカインとしては、特に限定されるものではなく、一般に分類される腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン−６、インターロイキン−８、単球走化活性化因子（ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１）などの一群のタンパクなどを好適に除去あるいは不活化する。中でも、高サイトカイン血症治療用に好適に用いられる。
【００１５】
以下に実施例を用いて詳細に説明を加えるが、発明の内容が実施例に限定されるものではない。
【００１６】
【実施例】
実施例１、比較例１  修飾キトサンビーズを用いた吸着実験
市販の未修飾キトサンビーズ（構造式［１］、商品名「キトパールＡＬ−０１」）、尿素結合基を含まない修飾キトサンビーズ２種（  構造式［２］、商品名「キトパールＢＣＷ２５０３」および構造式［３］、商品名「キトパールＣ−０１」）、および尿素結合基を含む修飾キトサンビーズ（構造式［４］、商品名「キトパールＢＣＷ３５０１」）を用いて吸着実験を行った。
【００１７】
ビーズ５０μｌをポリプロピレン性の小型チューブに入れ、１ｍｌの０．５％ウシ血清アルブミンリン酸生理緩衝液溶液中で１時間振盪反応させることにより、ビーズ表面の非特異な吸着部位をブロックした。遠心によりビーズを回収した後、１ｎｇ／ｍｌのヒトインターロイキン−８またはＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１を含むウサギ熱非働化血漿１ｍｌ中に懸濁して室温で１時間振盪反応を行った。反応後の溶液（遠心上清）を回収し残存しているインターロイキン−８およびＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１の濃度を酵素免疫測定法により定量した。その結果を表１に示す。
【００１８】
【化１】
0004591974.tif 000002
【表１】
0004591974.tif 000003
結果に示すとおり、尿素結合を含まない［１］，［２］、［３］は、インターロイキン−８およびＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１をほとんど吸着しないのに対して、尿素結合を含む［４］は、９５％以上の吸着率を示した。
【００１９】
実施例２  修飾ポリスチレン繊維の作製
５０重量比の海成分（４６重量比のポリスチレンと４重量比のポリプロピレンの混合物）と５０重量比の島成分（ポリプロピレン）とからなるアメリカ特許4,661,260 記載の海島型複合繊維（厚さ：２．６デニール、島の数：１６）を５０ｇのＮ−メチロール−α−クロロアセトアミド、４００ｇのニトロベンゼン、４００ｇの９８％硫酸、０．８５ｇのパラホルムアルデヒドの混合溶液と２０℃で１時間反応させた。そして、繊維をニトロベンゼンで洗浄し、水中に入れて反応を停止させた。その後、繊維を温水で再び洗浄することによって、クロロアセトアミドメチル化架橋ポリスチレン繊維（以下ＡＭＰＳｔ繊維と略す）を得た。
【００２０】
テトラエチレンペンタミン０．９ｇをＤＭＦ５０ｍｌに溶解し、この溶液に１ｇのＡＭＰＳｔ繊維（クロロ含量２ｍｍｏｌ相当）を攪拌しつつ加えた。反応は２５℃で６時間行った。その後、ＡＭＰＳｔ繊維をＤＭＦ２００ｍｌを用いてガラスフィルター上で洗浄し、４−クロルフェニルイソシアネート１ｇを溶解したＤＭＦ５０ｍｌの溶液中に加えて、２５℃で１時間、反応させた。その後、ガラスフィルター上で２００ｍｌのＤＭＦおよび２００ｍｌの蒸留水により洗浄した。
【００２１】
得られたＡＭＰＳｔ繊維（尿素結合およびアミド結合を含む）を［５］とする。
テトラエチレンペンタミンの代わりにエタノールアミン０．３ｇを加えて同様に反応させることにより活性クロル基をブロックした繊維も作製した。得られた繊維（尿素結合は含まずアミド結合を含む）を［６］とする。
【００２２】
【化２】
0004591974.tif 000004
実施例３
実施例２で得られた繊維［５］，［６］をそれぞれ約５ｍｍ角に細断し、０．１３ｇを秤量してポリプロピレンチューブに入れた。０．５％ウシ血清アルブミンＰＢＳ溶液１ｍｌを加えて室温で１時間振盪反応することにより非特異反応部位をブロックした。布を別のチューブに移した後、ヒトインターロイキン−６、インターロイキン−８およびＭＣＡＦ／ＭＣＰー１を含むウサギ熱非働化血漿１ｍｌと１時間反応させた。反応前後の各サイトカインの濃度を表２に示す。
【００２３】
【表２】
0004591974.tif 000005
結果の示すとおり、尿素結合を含む材料［５］は炎症性サイトカイン特にインターロイキン−８およびＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１の顕著な吸着（吸着率９８％以上）を示した。また、尿素結合を含まないがアミド結合を含む材料［６］も、インターロイキン−８およびＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１に対しては５０％の吸着を示した。
【００２４】
実施例４
実施例２で得られた繊維［５］，［６］をそれぞれ約５ｍｍ角に細断し、０．１３ｇを秤量してポリプロピレンチューブに入れた。０．５％ウシ血清アルブミンＰＢＳ溶液１ｍｌを加えて室温で１時間振盪反応することにより非特異反応部位をブロックした。布を別のチューブに移した後、ヒトインターロイキン−１βおよび非特異吸着を防ぐ目的で添加した０．０５％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ溶液１ｍｌと１時間反応させた。反応前後のサイトカインの濃度を表３に示す。
【００２５】
【表３】
0004591974.tif 000006
結果が示すように尿素結合を側鎖に有するポリスチレン繊維［５］は、尿素結合持たない［６］と比べてインターロイキン−１βの吸着能が高いことが示された。
【００２６】
実施例５  修飾ＡＭＰＳｔ繊維による炎症性サイトカイン除去試験−循環法
実施例２の修飾ＡＭＰＳｔ繊維［５］１ｇをカラムに充填し、これに１ｎｇ／ｍｌのインターロイキン−８を含むウサギ血漿１０ｍｌを３７℃において１ｍｌ／ｍｉｎで６０分間循環させたときのインターロイキン−８の濃度変化を表４に示す。
【００２７】
【表４】
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この結果より、体外循環のような流動条件下においても、炎症性サイトカインの吸着が認められることが確認できた。
【００２８】
【発明の効果】
本発明により、ヒト血液、血漿等の高濃度タンパク溶液中において炎症性サイトカインと高効率でかつ選択的に結合し、滅菌操作に対して安定で、かつ安価に合成できる材料が提供された。また、本発明の材料は生体適合性に優れており臨床における使用に十分耐えうるものである。本発明材料は、血液、血漿中から炎症性サイトカイン効率よく除去できるので、これにより炎症性サイトカイン除去カラムや被覆材料を構成することで、過剰な炎症性サイトカインによりもたらされる種々疾患を治療または予防することが可能になる。