(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0004590268.tif 000025
［式中、ＡはＯであり、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は水素であり、そしてＲ１、Ｒ２およびＺは次の表：
【表１】
0004590268.tif 000026
から選択される。］
で示されるエポシロン、または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
請求項１に記載のエポシロン、またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体物質を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、Ｃ４−デメチル−エポシロンまたはＣ４−ビスノル(bisnor)−エポシロンおよびそれらの薬学的使用、それらを含む医薬組成物およびそれらの製造法に関する。
【０００２】
多くの異なるタイプの腫瘍の処置におけるタキソール(登録商標)およびタキソテール(登録商標)の広範囲の使用にもかかわらず、タキサンの患者生存に対する影響は大きくなく、転移性固形腫瘍の圧倒的大多数は不治のままである。タキサン処置には多くの重大な副作用が伴い、タキサンの効果は、薬剤耐性機構の早い出現により厳しく制限され得る。標準併用療法で一般的に観察されるこれらの制限および副作用を考慮すれば、抗腫瘍活性のスペクトル、多剤耐性腫瘍に対する効果、安全性および耐容性を含む、全体的プロフィールが改善された新しい細胞毒性抗癌剤を見出す明らかな必要性がある。
【０００３】
エポシロンの微小管安定化効果は、最初にBollag et al., Cancer Research 55, 1995, 2325-33により記載された。エポシロン、特にエポシロンＡまたはＢを使用した、異なるタイプの腫瘍、とりわけ、他の化学療法剤、特にタキソールTMで難治性の腫瘍の処置に適した処置スケジュールは、ＷＯ９９／４３３２０に記載されている。D. Su, A. Balog et al. は、Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997, 36, 2093から2096頁で、エポシロンのクラスの構造−活性相関を記載している。該文献の２０９４頁で、彼らは、天然化合物の、とりわけＣ１からＣ８として示される炭素原子での構造修飾が、細胞毒性の非常な損失と、チューブリン／微小管系における活性の損失をもたらすと結論付けている。驚くべきことに、本発明により、式ＩのＣ４−(デメチルまたはビスノル)−エポシロンが、優れた薬理学的特性を有し、増殖性疾患の処置に使用できることが判明した。
【０００４】
それ故、本発明は、式Ｉ
【化１】
0004590268.tif 000002
〔式中、ＡはＯまたはＮＲ７であり、
Ｒ１は水素または、非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、遊離もしくは保護された形の低級アルカノイル、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノもしくは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、
Ｒ２は少なくとも１個の窒素原子を有する非置換または置換ヘテロアリールであり、
Ｒ３は水素または低級アルキル、好ましくはメチルであり、
Ｒ５およびＲ６は水素であり、そして
Ｒ７は水素または低級アルキルであり、
ＺはＯまたは結合である。
ただし、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺがＯであるとき、Ｒ１は非置換または、ヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノまたは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、そして
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺが結合であるとき、Ｒ１はヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノまたは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルである。〕
のＣ４−(デメチルまたはビスノル)−エポシロンおよびその塩に関する。
【０００５】
前記および後記で使用する一般的用語は、本明細書に記載の範囲内で、特記しない限り、好ましくは以下の意味を有する：
化合物、塩などに関して複数形を使用する場合、一つの化合物、塩なども意味すると取るべきである。
【０００６】
どの不斉炭素原子も、(Ｒ)−、(Ｓ)−または(Ｒ,Ｓ)−立体配置、好ましくは(Ｒ)−または(Ｓ)−立体配置で存在し得る。本化合物は、したがって、異性体の混合物または純粋な異性体として、好ましくはエナンチオマー−純粋ジアステレオマーとして存在し得る。
【０００７】
式Ｉの化合物を、２個の立体異性体で表す。本発明は、式ＩａおよびＩｂ
【化２】
0004590268.tif 000003
〔式中、記号および基は上記式Ｉに関して定義の意味を有する。〕
により示される両方のこのような立体異性体、好ましくは式Ｉａの化合物に関する。
【０００８】
接頭語“低級”は、最大７個(７を含む)、とりわけ最大４個(４を含む)の炭素原子を含む基を意味し、当該基は直鎖または一箇所もしくは複数分枝している分枝鎖のいずれかである。
【０００９】
“ハロゲン”はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。
“アルキル”は好ましくは低級アルキルである。
【００１０】
“低級アルキル”は直鎖または分枝鎖である；例えばそれはｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルのようなブチル、ｎ−プロピルもしくはイソプロピルのようなプロピル、エチルまたはメチルである。好ましくは低級アルキルはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。
【００１１】
“アルコキシ”は好ましくは低級アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、イソプロポキシまたはｔｅｒｔ−ブトキシである。
“アシル”は好ましくは低級アシル、例えばアセチルである。
【００１２】
“低級アルカノール”は好ましくはメタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノールまたは２−ブタノールである。
“低級アルカン”は特にペンタン、ヘキサンまたはヘプタンである。
【００１３】
“少なくとも１個の窒素原子を有するヘテロアリール”は、少なくとも１個、２個または３個の環窒素原子と、０または１個の酸素原子および０または１個の硫黄原子を含む単−または二環式基であり、この基はこのヘテロアリール基を、式Ｉの残りの部分と結合している環において不飽和であり、この結合している環は好ましくは５から１２、より好ましくは５または６環原子を有する；そしてそれは、非置換または好ましくはハロゲン、アルコキシ、アルキルチオ、ヒドロキシ、アルカノイルまたは、最も好ましくは、アルキルから選択される１個またはそれ以上、とりわけ１個または２個の置換基で置換され得る。好ましくは本単−または二環式ヘテロアリール基は、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、インダゾリル、プリニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、キノリニル、プテリジニル、３Ｈ−インドリル、インドリル、イソインドリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾ[ｂ]チアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ベンゾ[ｂ]オキサゾリルおよびベンゾ[ｄ]ピラゾリルからなる群から選択される。
【００１４】
負に荷電したラジカル、例えば、カルボキシまたはスルホの存在下、塩基と塩を形成でき、例えば金属塩またはアンモニウム塩、例えばアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩またはカルシウム塩、またはアンモニアまたは適当な有機アミン、例えば、３級モノアミン、例えばトリエチルアミンまたはトリ(２−ヒドロキシエチル)アミンと、またはヘテロ環式塩基、例えばＮ−エチル−ピペリジンまたはＮ,Ｎ'−ジメチルピペラジンとアンモニウム塩が可能である。
【００１５】
塩基性基と酸性基が同じ分子内に存在するときは、式Ｉの化合物はまた分子内塩を形成できる。
【００１６】
単離または精製目的で、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩を使用することも可能である。治療的使用のためには、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみ(適用できるならば医薬製剤の形で)が使用され、したがって、これらが好ましい。
【００１７】
遊離形の新規化合物と、例えば、新規化合物の精製または同定において中間体として使用できる塩を含む塩の形の新規化合物の間の密接な関係を考慮して、前記および後記の遊離化合物に関する任意の言及は、また、適当であり、予期される限り、その対応する塩も言及すると理解されるべきである。
【００１８】
式Ｉの化合物は、前記および後記のような、薬理学的特性を有する。
【００１９】
微小管脱重合化の阻害剤としての式Ｉの化合物の効果は、下記のように証明し得る：
試験化合物のストック溶液(１０mM)をＤＭＳＯ中に調製し、−２０℃で貯蔵する。微小管タンパク質(すなわちチューブリンと微小管−関連タンパク質)を、既知のような温度−依存性脱重合化／重合化の２サイクルにより、ブタ脳から抽出する(Weingarten et al., Biochemistry 1974; 13: 5529-37参照)。ブタ微小管タンパク質の作業用ストック溶液を次いで−７０℃で貯蔵する。ブタ微小管タンパク質の試験化合物誘導重合化の程度を、基本的に既知のように測定する(Lin et al., Cancer Chem. Pharm. 1996; 38: 136-140参照)。要約すると、ブタ微小管タンパク質の作用業アリコートを急速融解し、次いで、氷冷２×ＭＥＭ緩衝液(２００ml  ＭＥＳ、２mM  ＥＧＴＡ、２mM  ＭｇＣｌ２、ｐＨ６.７)[ＭＥＳ＝２−モルホリノエタンスルホン酸、ＥＧＴＡ＝エチレングリコール−ビス−２(２−アミノエチル)−テトラ酢酸]中、所望の最終濃度の２倍に希釈する。薬剤または媒体(ＤＭＳＯ、最終濃度５％)を、水中、室温で所望の最終濃度の２倍に、０.５mlエッペンドルフ試験管中で希釈し、次いでそれを氷上に置く。当量(５０μｌ)の微小管タンパク質(２×ＭＥＭ緩衝液中、所望の最終濃度の２倍)の添加後、重合化反応を、本インキュベーション混合物を室温の水浴に５分移すことにより開始させる。本反応混合物を次いでEppendorf微小遠心分離器(モデル５４１５Ｃ)に入れ、さらに１５分、室温でインキュベートする。本サンプルを次いで１５分、１４,０００rpmで室温で遠心する。微小管タンパク質重合化の間接的測定として、上清中のタンパク質濃度(非重合化、可溶性微小管タンパク質を含む)を、Lowry法(DC Assay Kit, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)で測定し、着色反応の光学密度を７５０nmでSpectraMax 340光度計(Molecular Devices, Sunnydale, CA)で測定する。試験薬による光学密度の減少を、２５μＭ  エポシロンＢ(ポジティブ・コントロール、１００％重合化)と比較する。媒体−処置サンプルは、ネガティブ・コントロール(０％重合化)として働く。試験薬の重合化活性を、ポジティブ・コントロール(１００％重合化)に対するパーセントとして示す。
【００２０】
腫瘍細胞に対する効果を、下記の方法で証明し得る：
本試験化合物のストック溶液(１０mM)をＤＭＳＯ中に調製し、−２０℃で貯蔵する。ヒトＫＢ−３１および(多剤耐性、Ｐ−ｇｐ１７０過剰発現)ＫＢ−８５１１類表皮癌細胞は、Dr. M. Baker, Roswell Park Memorial Instituteが創作した(Buffalo, NY, USA)(description: see also Akiyama et al., Somat. Cell. Mol. Genetics 11, 117-126 (1985)and Fojo A., et al., Cancer Res. 45, 3002-3007 (1985)−ＫＢ−３１およびＫＢ−８５１１は、両方ともＫＢ細胞系の誘導体である(ＡＴＣＣ)。ＫＢ−３１細胞は、１０％ウシ胎児血清(Amimed, BioConcept, Allschwil, Switzerland)、Ｌ−グルタミン(Amimed, BioConcept, Allschwil, Switzerland)、ペニシリン(５０単位／ml)およびストレプトマイシン(５０μｇ／ml(Amimed, BioConcept, Allschwil, Switzerland)を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地(Amimed, BioConcept, Allschwil, Switzerland)を使用し、単層中で培養する。ＫＢ−８５１１は、コルヒチン処置サイクルを使用して得たＫＢ−３１細胞系由来の変異株であり、ＫＢ−３１細胞と比較して、コルヒチンに対して約４０倍の相対的耐性を有する(Akiyama et al., Somat. Cell. Mol. Genetics 11, 117-126 (1985)and Fojo A., et al., Cancer Res. 45, 3002-3007 (1985))。この細胞を３７℃で、インキュベーター中、５％ｖ／ｖ  ＣＯ２かつ８０％相対湿度で、上記のように添加したＲＰＭＩ−１６４０培地でインキュベートする。この細胞を１.５×１０３細胞／ウェルの量で９６−ウェルマイクロタイタープレートに撒き、一晩インキュベートする。培養培地中の試験化合物の連続希釈を１日目に添加する。そのプレートを次いでさらに４日間インキュベートし、その後細胞を３.３％ｖ／ｖ  グルタールアルデヒドで固定し、水で洗浄し、０.０５％ｗ／ｖ  メチレンブルーで染色する。洗浄後、色素を３％ＨＣｌで溶出し、光学密度をSpectraMax 340(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)で６６５nmで測定する。ＩＣ５０値を、SoftProprogramme(Version 2.0以降; Molecular Devices, Sunnyvale, CA)を使用して数学上の曲線に適合させ、そして、式[(ＯＤ処置)−(ＯＤ開始時)]／[(ＯＤコントロール)−(ＯＤ開始時)]×１００を使用して決定する。本ＩＣ５０は、インキュベーション時間の最後に、コントロール培養と比較して細胞塊の正味の増殖を５０％阻害する、化合物濃度として定義する。式Ｉの化合物は、それ故、好ましくは０.１５から１５nM、好ましくは０.２５から５nMの間のＩＣ５０を示す。
【００２１】
インビボ効果は以下のように証明し得る：使用するモデルは、マウスにおける、腫瘍、例えばＫＢ−３１またはＫＢ−８５１１類表皮腫瘍の異種移植である。試験化合物の腫瘍効果を、雌BLB/c nu/nuマウスで、例えば、対応する移植細胞系に対して測定し得る。この目的のために、約２５mgの腫瘍片を各マウスの左側に移植する(例えば１投与量あたり６匹)。試験化合物を、例えば移植後１１日目に、異なる投与量(例えば０.１；０.５；１；５および１０mg／kg)で投与し、その後２日から２週間の間、所望により投与を、必要であれば数回繰り返す。その腫瘍容積を、例えば約２から４週間後(例えば処置開始２週間後)に決定する。本腫瘍容積は、２個の垂直に配置した軸に沿った腫瘍直径を測定して、文献法にしたがい計算する(Evans et al., Brit. J. Cancer 45, 466-8 (1982)参照)。本抗腫瘍効果は、処置動物の腫瘍容積の平均増加を非処置動物(コントロール)の腫瘍容積の平均増加で割ったものとして決定し、それに１００を掛けたものをＴ／Ｃ％として示す。腫瘍緩解(％で示す)を、処置開始時の平均腫瘍容積(Ｖｏ)に対する最小の平均腫瘍容積(Ｖｔ)として、式
％緩解＝[１−(Ｖｔ／Ｖｏ)]×１００
にしたがい計算する。
【００２２】
この場合また他の細胞系、例えば、腫瘍細胞に対する効果の証明において上記で挙げたものも使用できる。
【００２３】
チューブリン解重合化の阻害剤としてのそれらの効果に基づき、式ＩのＣ４−デスメチルエポシロンは、固形腫瘍疾患、(白血病のような)液体腫瘍疾患または乾癬のような多くの増殖性疾患に対して有効である。
【００２４】
“固形腫瘍疾患”なる用語は、とりわけ乳癌、結腸および広くＧＩ管の癌(胃癌を含む)、肝癌；肺癌、特に小細胞肺癌および非小細胞肺癌、腎臓癌、中皮腫、神経膠腫、皮膚の扁平上皮細胞癌、頭頸部癌、泌尿生殖器癌、例えば子宮頚、子宮、卵巣、精巣、前立腺または膀胱癌；ホジキン病、カルチノイド症候群またはカポジ肉腫を意味する。本発明の好ましい態様において、処置すべき固形腫瘍疾患は、乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、腎臓癌、肺癌、とりわけ非小細胞肺癌および神経膠腫から選択される。本明細書に記載の式ＩのＣ４−デスメチルエポシロンはまた、特に、その抗血管形成活性のために、腫瘍の転移性拡散ならびに微小転移の増殖または発生の予防に適する。
【００２５】
式ＩのＣ４−デスメチルエポシロンは単独でまたは１個もしくはそれ以上の他の治療剤と投与でき、可能性のある組み合わせ治療は固定された組み合わせ剤の形を取るか、または、本発明の化合物と１個またはそれ以上の他の治療剤を交互にまたは互いに独立して投与するか、固定された組み合わせと１個またはそれ以上の他の治療剤の組み合わせ投与である。式ＩのＣ４−デスメチルエポシロンは、とりわけ腫瘍治療のために、化学療法、放射線療法、免疫療法、外科的介入、またはこれらの組み合わせと組み合わせて投与できる。長期治療は、上記の他の治療戦略との関連で、アジュバント療法として等しく可能である。他の可能性のある処置は、例えばリスク患者における、腫瘍緩解後の患者の状態を維持するための治療、または、さらに化学予防療法である。
【００２６】
可能性のある組み合わせのための治療剤は、とりわけ１個またはそれ以上の抗増殖性、細胞増殖抑制性または細胞毒性化合物、例えば、ポリアミン生合成の阻害剤、タンパク質キナーゼの、とりわけタンパク質キナーゼＣのようなセリン／スレオニンタンパク質キナーゼの、またはＥＧＦレセプターチロシンキナーゼのようなチロシンタンパク質キナーゼの阻害剤、例えばＰＫＩ１６６、ＶＥＧＦレセプターチロシンキナーゼの阻害剤、例えばＰＴＫ７８７、またはＰＤＧＦレセプターチロシンキナーゼの阻害剤、例えばＳＴＩ５７１、サイトカイン、ＴＧＦ−βまたはＩＦＮ−βのような負の増殖レギュレーター、アロマターゼ阻害剤、例えばレトロゾールまたはアナストロゾール、ＳＨ２ドメインとリン酸化タンパク質の相互作用の阻害剤、抗エストロゲン、イリノテカンのようなトポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼII阻害剤、他の微小管作用剤、例えばパクリタキセル、または(＋)−ジスコデルモライド、アルキル化剤、ゲムシタビンまたはセパシタビンのような抗新生物抗生物質、カルボプラチンまたはシスプラチンのようなプラチン化合物、抗血管形成化合物、ゴナドレリンアゴニスト、抗アンドロゲン、ビスホスホネート、例えばAREDIA(登録商標)またはZOMETA(登録商標)およびトラツズマブを含むが、これらに限定されない、一つのまたは複数の化学療法剤である。コード番号、一般名または商品名により特定した活性剤の構造は、標準概論“The Merck Index”またはコンピューターデータベース、例えばPatents International(例えばIMS World Publications)から得られ得る。それらの対応する内容は、出典明示により本明細書に包含させる。
【００２７】
一般に、本発明はまたインビトロまたはインビボのいずれかにおける、微小管細胞骨格の安定化のための、式ＩのＣ４−デスメチルエポシロンまたはその塩の使用にも関する。
【００２８】
後記の好ましい式ＩのＣ４−デスメチルエポシロンおよびその塩のグループに関して、前記の置換基の一般的な定義からの定義を合理的に使用し、例えば、より一般的な定義をより具体的な定義または特に好ましいとして特徴付けたものに置き換え得る。
【００２９】
特に、本発明は、式ＩａまたはＩｂ
【化３】
0004590268.tif 000004
〔式中、ＡはＯまたはＮＲ７であり、
Ｒ１は水素または、非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、遊離もしくは保護された形の低級アルカノイル、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノもしくは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、
Ｒ２は少なくとも１個の窒素原子を有する非置換または置換ヘテロアリールであり、
Ｒ３は水素または低級アルキル、好ましくは低級アルキルであり、
Ｒ５およびＲ６は水素であり、そして
Ｒ７は水素または低級アルキルであり、
ＺはＯまたは結合である。
ただし、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺがＯであるとき、Ｒ１は非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノもしくは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、そして、Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺが結合であるとき、Ｒ１はヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノまたは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルである。〕
のＣ４−デスメチル−エポシロンおよびその塩に関する。
【００３０】
とりわけ、本発明は、
ＡがＯまたはＮＲ７であり、
Ｒ１が水素または、非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、遊離もしくは保護された形の低級アルカノイル、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノもしくは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、
Ｒ２がチアゾリル、オキサゾリル、ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリルまたはベンゾイミダゾリルであり、これらはいずれの場合も置換されまたは非置換であり、
Ｒ３が水素または低級アルキル、好ましくは低級アルキルであり、
Ｒ５およびＲ６が水素であり、そして
Ｒ７が水素または低級アルキルであり、
ＺがＯまたは結合である、
式Ｉの、または式ＩａもしくはＩｂのＣ４−(デメチルまたはビスノル)−エポシロンおよびそれらの塩に関する。
ただし、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺがＯであるとき、Ｒ１は、非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノまたは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、そして
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺが結合であるとき、Ｒ１はヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノまたは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルである、
ものとする。
【００３１】
好ましいのは、
ＡがＯまたはＮＲ７であり、
Ｒ１が水素または、非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノもしくは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、
Ｒ２がチアゾリル、オキサゾリル、ピリジル、ベンゾチアゾリルであり、これらはいずれの場合も置換されまたは非置換であり、
Ｒ３が水素または低級アルキル、好ましくは低級アルキルであり、
Ｒ５およびＲ６が水素であり、そして
Ｒ７が水素または低級アルキルであり、
ＺがＯまたは結合である、
式Ｉの、または式ＩａもしくはＩｂのＣ４−(デメチルまたはビスノル)−エポシロンおよびそれらの塩である。
ただし、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺがＯであるとき、Ｒ１は非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノもしくは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、そして
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルでありかつＺが結合であるとき、Ｒ１はヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノまたは低級アシルアミノで置換されている低級アルキルである、
ものとする。
【００３２】
より好ましいのは、
ＡがＯであり、
Ｒ１が水素または低級アルキルであり、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリル、２−エチル−チアゾリル、２−メチルチオ−チアゾリル、２−アミノメチル−チアゾリル、２−ジメチルアミノ−チアゾリル、２−フルオロメチル−チアゾリル、２−メチル−オキサゾリル、３−メチル−ピリジニル、２−メチル−ベンゾチアゾリルであり、
Ｒ３が水素、低級アルキル、好ましくは低級アルキルであり、
Ｒ５およびＲ６が水素であり、そして
ＺがＯまたは結合である、
式Ｉの、または式ＩａもしくはＩｂのＣ４−(デメチルまたはビスノル)−エポシロンおよびそれらの塩である。
ただし、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルであるとき、ＺがＯでありかつＲ１が低級アルキルである、
ものとする。
【００３３】
よりさらに好ましいのは、
ＡがＯであり、
Ｒ１が水素または低級アルキルであり、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリル、２−エチル−チアゾリル、２−メチルチオ−チアゾリル、２−アミノメチル−チアゾリル、２−ジメチルアミノ−チアゾリル、２−フルオロメチル−チアゾリル、２−メチル−オキサゾリル、３−メチル−ピリジニル、２−メチル−ベンゾチアゾリルであり、
Ｒ３がメチルであり、
Ｒ５およびＲ６が水素であり、そして
ＺがＯまたは結合である、
式Ｉの、または式ＩａもしくはＩｂのＣ４−(デメチルまたはビスノル)−エポシロンおよびそれらの塩である。
ただし、
Ｒ２が２−メチル−チアゾリルであるとき、ＺがＯでありかつＲ１が低級アルキルである、
ものとする。
【００３４】
さらに、本発明は、式Ｉの、または式ＩａもしくはＩｂのＣ４−デスメチル−エポシロンまたはそれらの薬学的に許容される塩の、腫瘍疾患の処置および腫瘍疾患処置用医薬製品の製造のための使用に関する。
【００３５】
その上、本発明は、ヒトを含む温血動物の処置法であり、治療的有効量の式Ｉの、または式ＩａもしくはＩｂのＣ４−デスメチル−エポシロンまたはこのような化合物の薬学的に許容される塩を、腫瘍疾患を有する温血動物に投与することを含む、方法を提供する。
【００３６】
ＡがＯまたはＮＲ７であり、Ｒ１が水素または、非置換もしくはヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、Ｒ２が非置換または置換ヘテロアリールであり、Ｒ７が水素または低級アルキルであり、Ｒ５およびＲ６が水素であり、そしてＺがＯまたは結合である、式Ｉのエポシロンは、例えば、式II
【化４】
0004590268.tif 000005
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、そしてＲ４は保護基である。〕
のアルデヒドを、第一段階で、式III
【化５】
0004590268.tif 000006
〔式中、Ｒ５はＨまたはＲ４と異なるまたは同一の保護基であり、そしてＲ３は式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有する。〕
のエチルケトント反応させ、式IV
【化６】
0004590268.tif 000007
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、Ｒ４は保護基であり、Ｒ５はＨまたはＲ４と異なるまたは同一の保護基であり、そしてＲ６は水素である。〕
のアルドールを得て、
【００３７】
その式IVのアルドールを、第二段階で、Ｒ４と異なるまたは同一の保護基を挿入できる試薬と反応させて、式IV(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、Ｒ４は保護基であり、そしてＲ５はＨであるか、またはＲ５とＲ６はＲ４と異なるまたは同一の保護基である)のカルボン酸を得て、
その式IVのカルボン酸を、第三段階で、保護基Ｒ５およびＲ６を除去しない条件下で保護基Ｒ４を除去できる試薬と反応させて、式IV(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、Ｒ４は水素であり、そしてＲ５はＨであるか、またはＲ５とＲ６は保護基である)のカルボン酸を得て、
【００３８】
その式IVのカルボン酸を、第四段階で、マクロラクトン化反応に付し、式Ｉ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、ＡはＯであり、そしてＲ５はＨであるか、またはＲ５とＲ６は保護基である)のエポシロンを得て、
その式Ｉのエポシロンを、第五段階で、保護基Ｒ５(存在するならば)およびＲ６を除去できる試薬と反応させて、式Ｉ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、そしてＡはＯである)のエポシロンを得て、
その式Ｉのエポシロンを、所望により、さらに、式Ｉ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、そしてＡはＮＲ７であり、ここで、Ｒ７は水素または低級アルキルである)のエポシロンに変換する
ことを含む、方法により製造できる。
【００３９】
ＡがＯまたはＮＲ７であり、Ｒ１が水素または、非置換もしくはヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、Ｒ２が非置換または置換ヘテロアリールであり、Ｒ７が水素または低級アルキルであり、Ｒ５およびＲ６が水素であり、そしてＺがＯまたは結合である、式ＩａまたはＩｂのエポシロンは、例えば、式II
【化７】
0004590268.tif 000008
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、そしてＲ４は保護基である。〕
のアルデヒドを、第一段階で、各々式IIIａまたはIIIｂ
【化８】
0004590268.tif 000009
〔式中、Ｒ５はＨまたはＲ４と異なるまたは同一の保護基であり、そしてＲ３は式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有する。〕
のエチルケトンと反応させて、各々式IVａまたはIVｂ
【化９】
0004590268.tif 000010
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、Ｒ４は保護基であり、Ｒ５はＨまたはＲ４と異なるまたは同一の保護基であり、そしてＲ６は水素である。〕
のアルドールを得て、
【００４０】
その式IVａまたはIVｂのアルドールを、第二段階で、Ｒ４と異なるまたは同一の保護基を導入できる試薬と反応させて、式IVａまたはIVｂ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、Ｒ４は保護基であり、そしてＲ５はＨであるか、またはＲ５とＲ６はＲ４と異なるまたは同一の保護基である)のカルボン酸を得て、
その式IVａまたはIVｂのカルボン酸を、第三段階で、保護基Ｒ５およびＲ６を除去しない条件下で保護基Ｒ４を除去できる試薬と反応させて、式IVａまたはIVｂ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、Ｒ４は水素であり、そしてＲ５はＨであるか、またはＲ５とＲ６は保護基である)のカルボン酸を得て、
【００４１】
その式IVａまたはIVｂのカルボン酸を、第四段階で、マクロラクトン化反応に付し、式ＩａまたはＩｂ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、ＡはＯであり、そしてＲ５はＨであるか、またはＲ５とＲ６は保護基である)のエポシロンを得て、
その式ＩａまたはＩｂのエポシロンを、第五段階で、保護基Ｒ５およびＲ６を除去できる試薬と反応させて、式Ｉ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、そしてＡはＯである)のエポシロンを得て、
その式ＩａまたはＩｂのエポシロンを、所望により、さらに、式ＩａまたはＩｂ(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＺは式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有し、そしてＡはＮＲ７であり、ここで、Ｒ７は水素または低級アルキルである)のエポシロンに変換する
ことを含む、方法により製造できる。
【００４２】
保護基
本明細書に記載の化合物において、１個またはそれ以上の他の官能基、例えばカルボキシ、ヒドロキシ、アミノまたはメルカプトを、それらが反応に関与すべきでないため、保護すべきであるか、保護する必要があるとき、保護基は、ペプチド化合物の、およびまたセファロスポリンおよびペニシリンの、ならびに核酸誘導体および糖の合成において通常使用される、保護基である。
【００４３】
この保護基は、前駆体にすでに存在していてもよく、官能基をアシル化、エーテル化、エステル化、酸化、加溶媒分解および類似の反応のような望ましくない二次反応に対して、関係する官能基を保護しなければならない。それら自体容易に、すなわち、望ましくない二次反応なしに、典型的に、加溶媒和解、還元、光分解により、または、例えば、また生理学的条件と類似の条件下での酵素活性により、除去でき、最終生成物に存在しないのが、保護基の特徴である。専門家は、どの保護機が前記および後記の反応に適しているか知っており、または容易に確立できる。
【００４４】
このような保護基によるかかる官能基の保護、保護基それ自体、およびそれらの除去反応は、例えば、J. F. W. McOmie, “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York 1973, in T. W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Wiley, New York 1981, in “The Peptides”; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, in “Methoden der organischen Chemie” (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jescheit, “Aminosaeuren, Peptide, Proteine” (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, and in Jochen Lehmann, “Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate” (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974のような、標準的参考資料に記載されている。
【００４５】
Ｒ５は、Ｒ４と異なるまたは同一の保護基であり得る。両方の保護基が同一である場合は、このような基は、式Ｉの化合物から連続して除去できる保護基を意味すべきであり、すなわち、このような基に関して、保護基Ｒ５を式Ｉの化合物に残したままＲ４を水素または他の保護基に変えることを可能とする反応条件が存在しなければならない。
【００４６】
エポシロンＢの対応するラクタムへの変換は、ＷＯ９９／０２５１４のスキーム２１(３１、３２頁)および実施例３(４８−５０頁)に記載されている。エポシロンＢと異なる式Ｉの化合物の対応するラクタムへの変換は、これに準じて達成できる。Ｒ４が低級アルキルである式Ｉのエポシロン誘導体は、Ｒ４が水素であるエポシロン誘導体から出発した、還元的アルキル化のような当分野で既知の方法により製造できる。
【００４７】
付加的工程段階
所望によって実施される付加的工程段階において、反応に関与すべきでない出発化合物の官能基は、保護されていない形で存在していてもよく、または、例えば、上記“保護基”の抗で記載した１個またはそれ以上の保護基で保護されていてもよい。この保護基は、次いで、そこに記載の方法のひとつにしたがい、完全にまたは部分的に除去する。
【００４８】
塩形成基を有する式Ｉの化合物の塩は、それ自体既知の方法で製造できる。式Ｉの化合物の酸付加塩は、したがって、酸または適当なアニオン交換試薬での処理により得ることができる。
【００４９】
塩は通常遊離化合物に、例えば、適当な塩基性試薬、例えばアルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩、またはアルカリ金属水酸化物、典型的に炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理することにより変換できる。
【００５０】
立体異性体混合物、例えばジアステレオマーの混合物を、適当な分割方法の手段により、それ自体既知の方法で対応する異性体に分割できる。ジアステレオマー混合物は、例えばその個々のジアステレオマーに、分画結晶化、クロマトグラフィー、溶媒分配および類似の方法の手段により、分割できる。この分割は、出発化合物の段階で、または、式Ｉの化合物それ自体のいずれでも可能である。エナンチオマーを、ジアステレオマー塩の形成を介して、例えば、エナンチオマー純粋キラル酸との塩形成により、または、キラルリガンドのクロマトグラフィー支持体を使用した、クロマトグラフィーの手段により、例えばＨＰＬＣにより分割できる。
【００５１】
この章に記載の変換と類似の反応も、適当な中間体の段階で行い得ることは強調すべきである。
【００５２】
一般的方法条件
本明細書に記載の全ての工程段階は、既知の反応条件下で、好ましくは特記した条件下で、溶媒または希釈剤(好ましくは使用する試薬に不活性であり、それらを溶解できる)の非存在下または通常存在下、触媒、縮合剤または中和剤、例えばイオン交換体、典型的に、例えばＨ＋形のカチオン交換体の非存在下または存在下、反応のタイプおよび／または反応物に依存して、常温、低温または高温で、例えば−１００℃から約１９０℃、好ましくは約−８０℃から約１５０℃、例えば−８０から−６０℃で、室温で、−２０から４０℃でまたは使用する溶媒の沸点で、大気圧下、または密閉容器中、適当であるならば加圧下に、および／または、不活性雰囲気下に、例えば、アルゴンまたは窒素雰囲気下に、行うことができる。
【００５３】
塩は全ての出発化合物および遷移中間体に、これらが塩形成基を有するならば、存在できる。塩はまたこのような化合物の反応中も、反応がそれにより妨害されない限り、存在できる。
【００５４】
全ての反応段階で、発生する異性体混合物を、個々の異性体に、例えばジアステレオマーまたはエナンチオマーに、または、任意の異性体の混合物、例えば、ラセミ体またはジアステレオマー混合物に、典型的には“付加的工程段階”で記載のように分割できる。
【００５５】
当該反応に好ましい溶媒は、各工程の説明においてこれと異なる記載がない限り、例えば水、エステル、典型的に低級アルキル−低級アルカノエート、例えばジ酢酸エチル、エーテル、典型的に脂肪族エーテル、例えばジエチルエーテル、または環状エーテル、例えばテトラヒドロフラン、液体芳香族性炭化水素、典型的にベンゼンまたはトルエン、アルコール、典型的にメタノール、エタノールまたは１−または２−プロパノール、ニトリル、典型的にアセトニトリル、ハロゲン加炭化水素、典型的にジクロロメタン、酸アミド、典型的にジメチルホルムアミド、塩基、典型的にヘテロ環式窒素塩基、例えばピリジン、カルボン酸、典型的に低級アルカンカルボン酸、例えば酢酸、カルボン酸無水物、典型的に低級アルカン酸無水物、例えば酢酸無水物、環状、直鎖状、または分枝鎖炭化水素、典型的にシクロヘキサン、ヘキサン、またはイソペンタン、またはこれらの溶媒の混合物、例えば水性溶液から、選択できる。このような溶媒混合物は、例えば、クロマトグラフィーまたは分布を介した処理中にも使用できる。
【００５６】
本発明はまた遷移中間体として任意の段階で得られる化合物から出発して残りの段階を行うか、または、途中の任意の段階で工程を中止する、または、反応条件下で出発物質を形成するか、該出発物質を反応性誘導体または塩の形で使用するか、本発明の工程の手段により得られる化合物を製造し、該化合物をその場で加工するような工程の形にも関する。好ましい態様において、上記に好ましい、とりわけ、特に好ましい、最高に好ましい、および／または何よりも好ましいとして示す化合物をもたらす出発物質から出発する。
【００５７】
好ましい態様において、式Ｉの化合物は、実施例に示す工程または工程段階にしたがって、またはそれに準じて製造する。
【００５８】
その塩を含む式Ｉの化合物は、水和物の形で得ることができ、または結晶は例えば結晶化に使用した他の溶媒を含むことができる(溶媒和物として存在)。
【００５９】
医薬製剤、方法および使用
本発明は、また、式Ｉの化合物を活性剤として含み、特に、本明細書に記載の疾患の処置に使用できる医薬組成物に関する。温血動物、とりわけヒトへの経腸投与、例えば経鼻、口腔、直腸またはとりわけ経口投与用の、および、非経腸投与、例えば、静脈内、筋肉内または皮下投与のための組成物が好ましい。本組成物は、活性成分を単独で、または、好ましくは、薬学的に許容される担体と共に含む。活性成分の投与量は処置すべき疾患および種、年齢、体重および個々の状態、個々の薬物動態データ、および投与の形態に依存する。
【００６０】
本発明はまたヒトまたは動物の予防的または特に治療的管理に使用するための医薬組成物、その製造法(とりわけ腫瘍の処置のための組成物の形への)、および腫瘍疾患、とりわけ上記のものの処置法に関する。
【００６１】
医薬製剤は、約０.０００００１％から９５％の活性成分を含み、その中で、非経腸投与製剤の場合は、単回投与形は好ましくは約０.００００１％から９０％および複数回投与形は好ましくは約０.０００１から０.５％を含み、経腸投与製剤の場合は、１％から２０％活性成分を含む。単位投与形は、例えば、被覆および非被覆錠、アンプル、バイアル、坐薬またはカプセルである。別の投与形は、例えば、軟膏、クリーム、ペースト、フォーム、チンキ、口紅型、ドロップ、スプレー、分散剤などである。被覆錠、錠剤またはカプセルのような単位投与形は、約０.００２５ｇから約０.１ｇの活性成分を含む。
【００６２】
本発明の医薬製剤は、それ自体既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、被覆、溶解または凍結乾燥工程の手段により製造する。
【００６３】
活性成分の溶液およびまた懸濁液または分散剤、特に、等張水溶液、分散剤または懸濁液の使用が好ましく、これらは例えば活性成分を単独でまたは担体と共に含む凍結乾燥製剤の場合、使用前に作ることもある。本医薬製剤は滅菌してもよく、それに加えてまたはそれとは別に、賦形剤、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝液を含んでいてもよく、それ自体既知の方法で、例えば慣用の溶解または凍結乾燥工程の手段により製造する。該溶液または懸濁液は増粘剤または可溶化剤も含み得る。
【００６４】
油中の懸濁液は、油成分として、注射目的に慣用の植物油、合成油、半合成油を含む。この点で、酸成分として８個から２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸を含む液体脂肪酸エステルを特記することができる。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子を有し、１個のまたは多くの水酸基を有する、例えば１個、２個または３個の水酸基を有するアルコール、とりわけグリコールおよびグリセロールである。
【００６５】
経口投与用医薬組成物は、例えば、活性成分と１個またはそれ以上の固体担体を混合し、必要に応じて得られた混合物を造粒し、必要に応じてこの混合物または顆粒を錠剤または錠剤コアに、必要に応じてさらに賦形剤を包含させることにより加工することにより、得ることができる。
【００６６】
経口投与可能医薬組成物はまたゼラチンから成る硬カプセル、および、ゼラチンと、グリセロールまたはソルビトールのような可塑剤から成る、軟密封カプセルを含む。軟カプセルにおいて、活性成分は好ましくは適当な液体賦形剤に溶解または懸濁し、それに安定化剤および界面活性剤も添加してもよい。
【００６７】
適当な直腸投与可能医薬製剤は、例えば、活性成分と坐薬基剤の組み合わせから成る、坐薬である。
【００６８】
非経腸投与用製剤は第一に、水−可溶性形、例えば水−可溶性塩の活性成分のポリエチレングリコール溶液の希釈により得られる(例えば、生理食塩水中の)水溶液、または、増粘剤および適当であれば安定化剤を含む水性注射用懸濁液である。必要であれば賦形剤と一緒である活性成分をまた凍結乾燥物の形にできる。溶液、例えば、非経腸投与に使用するものはまた輸液としても使用できる。
【００６９】
本発明は、同様に、上記の病理学的状態の１個、とりわけ、対応する新生物疾患を処置するための工程または方法に関する。式Ｉの化合物はそれ自体、または、とりわけ医薬組成物の形で、予防的にまたは治療的に、好ましくは、該疾患に対する有効量で、このような処置を必要とする温血動物、例えば、ヒトに投与できる。約７０kgの体重の個体の場合、一日投与量は、本発明の化合物約０.００１ｇから約０.５ｇ、好ましくは約０.００５ｇから約０.２５ｇである。
【００７０】
出発物質
新規出発物質および／または中間体、ならびにそれらの製造工程は同様に本発明の対象である。好ましい態様において、このような出発物質を使用し、好ましい化合物を得ることができるように、反応条件を選択する。
【００７１】
式IIおよびIIIの出発物質は既知であり、市販されているか、または、当分野で既知の方法に準じてまたはそれにしたがい合成できる。
【００７２】
Ｒ１が水素または、非置換またはヒドロキシ、低級アシルオキシ、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アシルアミノで置換されている低級アルキルであり、Ｒ２が非置換または置換ヘテロアリールであり、ＺがＯまたは結合である式IIのアルデヒドは、例えば、式Ｖ
【化１０】
0004590268.tif 000011
〔式中、基Ｒ１、Ｒ２およびＺは、上記式IIの化合物に関して上記で定義の意味を有する。〕
のエポシロンを、最初にレトロ−アルドール反応を行うための試薬と反応させ、式VI
【化１１】
0004590268.tif 000012
〔式中、基Ｒ１、Ｒ２およびＺは、上記式IIの化合物に関して上記で定義の意味を有する。〕
のエステルを得て、そのエステルを、第二段階でその構造成分である４,４−ジメチル−３−ヒドロキシ−５−オキソ−ヘプタン酸と、上記式IIのアルデヒドに加水分解することを含む方法により得ることができる。
【００７３】
式IIのアルデヒド(上記参照)の製造のための出発物質として適した式Ｖのエポシロンは、J. Org. Chem. 2002, 67, 7730-7736、ＷＯ９３／１０１２１、ＷＯ９７／１９０８６、ＷＯ９８／３８１９２、ＷＯ９８／０８８４９、ＷＯ９８／２５９２９、ＷＯ９８／２２４６１、ＷＯ９９／６５０１３、ＷＯ９９／０２５１４、ＷＯ９９／０１１２４、ＷＯ９９／４３６５３、ＷＯ９９／０７６９２、ＷＯ９９／６７２５２、ＷＯ９９／６７２５３、ＷＯ００／３７４７３、ＷＯ００／３１２４７およびＵＳ６,１９４,１８１に、いずれの場合も、とりわけ特許請求の範囲の化合物および作業実施例の最終生成物に記載されている。実施例の最終生成物および特許請求の範囲の対象を、これらの刊行物の出典明示により本明細書に包含させる。同様にそれらに記載の対応する立体異性体および対応する結晶変形、例えば、溶媒和物および多形体も包含する。
【００７４】
式III
【化１２】
0004590268.tif 000013
〔式中、Ｒ５は保護基であり、そしてＲ３は式Ｉの化合物に関して上記で定義の意味を有する。〕
のエチルケトンは、例えば、ＷＯ９９／０７６９２の２０から２６頁または日本特許公開平03-048641に記載のように製造できる。
【００７５】
Ｒ３がメチルであり、Ｒ５がＴＢＤＭＳであり、そして４位の立体中心が(Ｓ)−立体配置を有する式IIIのエチルケトンは、式VII
【化１３】
0004590268.tif 000014
〔式中、Ｒ５はＴＢＤＭＳである。〕
のカルボン酸エステル(製造法はS. AliおよびG. Georg in Tetrahedron Letters 38, 10, 1997, 1703-1706, Scheme 2に記載)から出発して製造できる。
【００７６】
第一段階で、Ｒ５がＴＢＤＭＳである式VIIのカルボン酸エステルを、式VIII
【化１４】
0004590268.tif 000015
〔式中、Ｒ５はＴＢＤＭＳである。〕
のアミドに、トルエンまたはベンゼンのような適当な溶媒中の、Ｎ,Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩との当量のトリメチルアルミニウム存在下の、−１０℃から＋１０℃、例えば約０℃の間の温度での反応により変換する。
【００７７】
得られた、Ｒ５がＴＢＤＭＳである式VIIIのアミドを、第二段階で、臭化エチルマグネシウムまたはエチルリチウムを用いた、それ自体既知の条件下、グリニャール反応に付し、例えばグリニャール試薬のジエチルエーテルまたはテトラヒドロフラン溶液を、同じ溶媒中の式VIIIのアミドに約０℃の温度で滴下し、この工程において、反応を開始させるために反応混合物を時間通りに暖めるか、またはヨウ素を添加することもある。約０.５から３時間後、例えば約１時間後にこのグリニャール反応を停止し、式IX
【化１５】
0004590268.tif 000016
〔式中、Ｒ５はＴＢＤＭＳである。〕
のケトンを得る。
【００７８】
得られた式IXのケトンを、次いで、既知の方法にしたがい(J. Mulzer et al, J. Org. Chem. 1996, 61, 566-572参照)、適当な溶媒、例えばアセトン中、約−５℃から＋５℃の間の温度で、例えば、０℃でJones試薬で酸化させて所望の、Ｒ３がメチルであり、Ｒ５がＴＢＤＭＳであり、そして、４位の立体中心が(Ｓ)−立体配置である式IIIのエチルケトンを得る。
【００７９】
式VIIIの中間体に至る他の合成経路は、第一段階で、Oppolzer−Ｎ−プロピオニル−スルタムでの抗アルドールタイプ反応で開始し、式Ｘ
【化１６】
0004590268.tif 000017
のスルタムを得て(Oppolzer et al, THF 34, 4321 (1993)により記載の製造)、それをWeinrebアミド化および続くエチルリチウムまたは臭化エチルマグネシウム添加により、式VIIIの中間体に変換できる。
【００８０】
さらに、本発明は、Ｃ４−デスメチル−エポシロンＢをエポシロンＧ２から分離する方法に関し、これはChiralpak−ＡＤカラム上の、低級アルカン、とりわけヘキサンおよび低級アルカノール、とりわけ２−プロパノールを含む溶離剤でのクロマトグラフィーを特徴とする。
【００８１】
加えて、本発明は、Ｃ４−デスメチル−エポシロンＢの製造法であり
ａ)エポシロンの生物工学的製造のための培養培地(この培地は、エポシロンの製造に適した微生物、水および他の適当な培養培地の通常の構成成分を含む)中のエポシロンを、シクロデキストリンまたはシクロデキストリン誘導体、または２個またはそれ以上のこれらの化合物の混合物を培地に添加することにより、濃縮し；
ｂ)逆相カラム上で低級アルキルシアニドを含む溶離剤でクロマトグラフィーを行うことを特徴する方法でエポシロンを他のものから分離し(ここで、クロマトグラフィーは炭化水素鎖を充填したカラム材料上で行い、そして低級アルキルニトリルを含む溶離剤を使用する；かつ、望ましいならば、さらなる後処理および精製段階が可能である)；そして
ｃ)最後にChiralpak−ＡＤカラム上で、低級アルカン、とりわけヘキサンおよび低級アルカノール、とりわけ２−プロパノールを含む溶離剤でクロマトグラフィーを行うことにより、Ｃ４−デスメチル−エポシロンＢをエポシロンＧ２から分離する
段階を含む、方法に関する。
【００８２】
実施例
以下の実施例は、本発明を、その範囲内に本発明を限定することなく説明するために記載する。温度は摂氏(℃)で測定する。特記しない限り、反応は室温で行う。
【００８３】
略語
【表１】
0004590268.tif 000018
【００８４】
一般法：フラッシュクロマトグラフィーに関してはKieselgel 60(４０−６３μｍ)および薄層クロマトグラフィーに関してはE. Merck (Darmstadt, Germany)のDC 60 F254−プレートを使用する。全ての試薬はFluka(Buchs, Switzerland)から購入する。
【００８５】
実施例１：発酵によるＣ４−デスメチル−エポシロンＢの製造
ＷＯ９９／４２６０２の実施例２Ｄに記載の５００リットルの主培養からの４５０リットルの容量を、Westfalia clarifying separator Type SA-20-06 (rpm=6500)を使用して液相(遠心分離液＋洗液＝６５０リットル)および固相(細胞＝約１５kg)に分離する。本エポシロンの大部分は遠心分離液中に見られる。遠心した細胞パルプは、測定したエポシロン部分の＜１５％を含み、さらに処理はしない。この６５０リットル遠心分離液を次いで４０００リットル撹拌容器に移し、１０リットルのAmberlite XAD-16と混合して(遠心分離液：樹脂容量＝６５：１)、撹拌する。約２時間の接触時間の後、この樹脂をHeine overflow遠心機(バスケット含量４０リットル；rpm＝２８００)で遠心して除く。この樹脂を遠心機から取り出し、１０−１５リットルの脱イオン水で洗浄する。５９１.７kgの負荷樹脂(培養培地からのエポシロンを負荷したスチレン／ジビニルベンゼンコポリマー樹脂ＸＡＤ−１６)の脱着を、その樹脂を、各７２０リットルの２分割のトルエンで、４回、約８時間撹拌することにより行う。このトルエン相の樹脂からの分離は、吸引濾過を使用して行う。合わせたトルエン相を各２５０ｌの水で２回洗浄する。相分離後、トルエン抽出物を１０００リットル反応器中、約２０−４０リットルに濃縮し、その後、真空下ロータリーエバポレーターで濃縮乾固する。本トルエン抽出物を１６.５リットルのメタノールおよび２４.５リットルのシクロヘキサンに溶解する。０.８リットルの水を添加後、相分離が直ぐに起こる。メタノールフラクションをロータリーエバポレーター中、真空下、蒸発乾固する。本メタノール抽出物を、その後、２.０５リットルイソプロパノールと１０.２５リットルシクロヘキサンから成る溶媒混合物中で結晶化させ、０.４kg結晶化物質を得る。本結晶を３.２リットルアセトニトリル／水＝２／３(ｖ／ｖ)に溶解し、得られた負荷用溶液を分取逆相カラム(２５kg  ＲＰ−１８球状シリカゲル、YMC-Gel ODS-A 120; 5-15μm; Waters Corp., Milford, Massachusetts, USA)上で３回別々に流す。溶出を、アセトニトリル／水＝２／３(ｖ／ｖ)を移動相として、２.７リットル／分の流速で行う；Ｃ４−デスメチル−エポシロンＢおよびエポシロンＧ２の保持時間は５８−６５分である。フラクションをＵＶ検出器で２５０nmでモニターする。５８−６５分の間の保持時間を有する、(３回流して)合わせたフラクション中のアセトニトリルを留去し、Ｃ４−デスメチル−エポシロンＢおよびエポシロンＧ２の混合物を得る。このような混合物の３ｇを、シリカゲル(Chiralpak−ＡＤ(登録商標))上にコーティングした２.０kg  アミローストリス−(３,５−ジメチルフェニルカルバメートを含む、分取カラム(４０cm×１０cm  Ｉ.Ｄ.)上で、３回流して各成分に分離する(各回１ｇ；混合物を２０ml  ヘキサンおよび２０ml  ２−プロパノールに溶解する)。溶出を、ヘキサン／２−プロパノール  ９／１  (ｖ／ｖ)移動相で、４００ml／分の流速で室温で行う。ＵＶ−検出を２４９nmで行う。Ｃ４−デスメチル−エポシロンＢは９０から１１０分の間に溶出する。この対応するフラクションを併せ、４０℃で真空下蒸発乾固し、得られた蒸発残渣を同じ条件下で２回、再クロマトグラフィーし、少なくとも７１mg  Ｃ４−デスメチル−エポシロンＢを＞９７％で得る；1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6; δ/ppm)7.31 (s, 1H, H19), 6.51 (s, 1H, H17), 5.26 (d, 9.5 Hz, 1H, H15), 5.02 (d, 4.8 Hz, 1H, 3-OH), 4.42 (d, 6.6 Hz, 1H, 7-OH), 4.31 (m, 1H, H3), 3.47 (dd, 9.7 Hz, 6.8 Hz, 1H, H7), 3.14 (m, 1H, H4), 2.89 (m, 1H, H6), 2.84 (dd, 9.9 Hz, 3.3 Hz, 1H, H13), 2.63 (s, 3H, 21-Me), 2.25 (dd, 14.9 Hz, 10.5 Hz, 1H, H2), 2.10 (dd, 14.9 Hz, 2.6 Hz, 1H, H2), 2.08 (s, 3H, 16-Me), 2.05 (m, 1H, H14), 1.76 (m, 1H, H14), 1.50 (m, 1H, H11), 1.40 (m, 1H, H10), 1.34 (m, 1H, H11), 1.32 (m, 1H, H9), 1.29 (m, 1H, H8), 1.16 (s, 3H, 12-Me), 1.13 (m, 1H, H10), 1.11 (d, 7.0 Hz, 3H, 6-Me), 1.05 (m, 1H, H9), 0.93 (d, 6.60 Hz, 3H, 8-Me), 0.89 (d, 7.0 Hz, 3H, 4-Me); ESI+MS: [M+H]+: 494 D; [M+Na]+: 516 D。
【００８６】
実施例２：(２Ｓ,６Ｒ,７Ｓ,９Ｓ)−６,７−エポキシ−９−ヒドロキシ−２,６,１０−トリメチル−１１−(２−メチル−４−チアゾリル)−ウンデカ−１０−エン−１−アール
Eupergit C(Fluka；８３９Ｕ／ｇ)上に固定した３００mg(０.６mmol)のステージ２.１由来の化合物および０.５ｇのブタ肝臓エステラーゼを、２００mLの１Ｎ  リン酸緩衝液(ｐＨ＝７)に懸濁し、３日間撹拌する。この生成物を酢酸エチルで抽出し、ＦＣ(１５０ｇのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２→ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４：１)の手段で精製して、所望のアルデヒドを無色油状物として得る：Rf (CH2Cl2／アセトン＝ 85: 15): 0.36; M+H=338; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6; δ/ppm): 9.55 (d, 1.5 Hz, 1H, CHO), 7.29 (s, 1H, H19), 6.44 (1s, 1H, H17), 5.1 (d, 5.5 Hz, 1H, 15-OH), 4.10 (m, 1H, H15), 2.81 (m, 1H, H13), 2.63 (s, 3H, 20-Me), 2.36 (m, 1H, H8), 1.18 (s, 3H, 12-Me), 0.99 (d, 6Hz, 3H, H9)。
【００８７】
ステージ２.１：(３Ｓ)−４,４−ジメチル−３−ヒドロキシ−５−オキソ−ヘプタン酸((２Ｓ,６Ｒ,７Ｓ,９Ｓ)−６,７−エポキシ−２,６,１０−トリメチル−１１−(２−メチル−４−チアゾリル)−ウンデカ−１０−エン−１−アール−９−イル)エステル
０.５ｇ(０.９９mmol)のエポシロンＢを８４mLのＣＨ２Ｃｌ２に溶解する。４３μＬ(０.４４mmol)のピペリジンおよび１２７μＬ(０.４４mmol)の四イソプロピル酸チタンを添加後、この反応溶液を、１６時間、ＲＴで撹拌する。真空で濃縮後、本生成物をＦＣ(１５０ｇのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２→ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４：１)で精製し、無色油状物を得る：Rf (CH2Cl2／アセトン＝85: 15): 0.57; M+H=508; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6; δ/ppm): 9.56 (d, 1.5 Hz, 1H CHO), 7.37 (s, 1H, H19), 6.45 (s, 1H, H17), 5.31 (m, 1H, H15), 5.10 (d, 5.5 Hz, 1H, 3-OH), 4.13 (m, 1H, H3), 2.74 (m, 1H, H13), 2.64 (s, 3H, 20-Me), 2.53 (t, 7.5 Hz, 2H, H6), 2.36 (m, 1H, H8), 2.4/2.21 (m/m, 2H, H2), 2.06 (s, 3H, 16-Me), 1.98/1.77 (m/m, 2H, H14), 1.67/1.34 (m/m, 2H, H9), 1.45 (m, 2H, H10), 1.18 (s, 3H, 4-Me), 1 (s/s/s, 9H, 4-Me, 8-Me, 12-Me), 0.87 (t, 7.5 Hz, 3H, 6-Me)。
【００８８】
実施例３：(２Ｓ,６Ｒ,７Ｓ,９Ｓ)−６,７−エポキシ−９−ヒドロキシ−２,１０−ジメチル−１１−(２−メチル−４−チアゾリル)−ウンデカ−１０−エン−１−アール
５５０mg(１.１２mmol)のステージ３.１の化合物を、２００mLのアセトニトリルおよび２mLの２Ｎ  ＮａＯＨの混合物に溶解し、３日間撹拌する。本生成物を酢酸エチルで抽出し、ＦＣ(１５０ｇのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２→ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４：１)で精製し、所望のアルデヒドを無色油状物として得る：Rf (CH2Cl2／アセトン＝85: 15): 0.27; M+H=324; 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6; δ/ppm): 9.56 (d, 1.5 Hz, 1H, CHO), 7.29 (1s, 1H, H19), 6.45 (s, 1H, H17), 5.11 (d, 5.5 Hz, 15-OH), 4.13 (m, 1H, H15), 3.0 (m, 1H, H13), 2.87 (m, 1H, H12), 2.63 (s, 3H, 20-Me), 2.36 (m, 1H, H8), 1.69 (m, 2H, H14), 0.99 (d, 6 Hz, 3H, H9)。
【００８９】
ステージ３.１：(３Ｓ)−４,４−ジメチル−３−ヒドロキシ−５−オキソ−ヘプタン酸((２Ｓ,６Ｒ,７Ｓ,９Ｓ)−６,７−エポキシ−２,１０−ジメチル−１１−(２−メチル−４−チアゾリル)−ウンデカ−１０−エン−１−アール−９−イル)エステル
１ｇ(２.０３mmol)のエポシロンＡを１６８mLのＣＨ２Ｃｌ２に溶解する。８６μｌ(０.８８mmol)のピペリジンおよび２５４μｌ(０.８８mmol)の四イソプロピル酸チタンを添加後、この反応溶液を１６時間、ＲＴで撹拌する。真空で濃縮後、本生成物をＦＣ(２００ｇのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２→ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン＝４：１)で精製し、無色油状物を得る：Rf (CH2Cl2／アセトン＝85: 15): 0.55; M+H=494。
【００９０】
実施例４：
下記の、Ｒ４がＨである式IIのアルデヒドを、実施例２および３に記載の方法を使用して、エポシロンＡまたはＢの代わりに、表１に列記の式Ｖの化合物を出発物質として使用して、製造できる。
【００９１】
【表２】
0004590268.tif 000019
【００９２】
実施例５：ＴＢＤＭＳ−エーテル
Ｒ４がＴＢＳである式IIのアルデヒドを、ＷＯ００／３７４７３の実施例１ｃに記載の方法にしたがい、出発物質として実施例４の式IIのアルデヒドを使用して、製造できる。
【００９３】
【表３】
0004590268.tif 000020
【００９４】
実施例６：(３Ｓ,４Ｓ)−３−Ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルオキシ−４−メチル−５−オキソ−ヘプタン酸
表題化合物を、実施例２.１に記載の方法を使用して、実施例１の表題化合物を出発物質として使用して得ることができる。このファースト・ステージでの生成物のヒドロキシ基を、対応するＴＢＤＭＳエーテルに、実施例５に記載の反応により変換できる。１Ｎ  リン酸緩衝液(ｐＨ＝７)中、Eupergit C(Fluka；８３９Ｕ／ｇ)上に固定したブタ肝臓エステラーゼとの反応後、後処理をアルデヒドの代わりに表題化合物を得るために修飾する。
【００９５】
実施例７：４,８−ジヒドロキシ−５,５,７,９,１３−ペンタメチル−１６−(２−メチル−ベンゾチアゾール−５−イル)−オキサシクロヘキサデカ−１３−エン−２,６−ジオン(参考例)
０.０４１ｇのステージ７.３の保護されたラクトンの０.７mlのＣＨ２Ｃｌ２溶液に、０.１７５mlのトリフルオロ酢酸を、５分にわたり、２０℃で滴下し、この溶液を続いて１時間、０℃で撹拌する。本溶液を次いで蒸発により濃縮し、得られた残渣をＣＨ２Ｃｌ２／メタノール１００／１→１００／２のＦＣで精製する。表題化合物を無色樹脂として得る；ESI-MS: 502 (M+H)+. 1H-NMR (CDCl3, 300MHz), δ(ppm vs. TMS): 7.99 (s, 1H); 7.80 (d, 1H); 7.36 (d, 1H); 5.92 (d,d, 1H); 5.15-5.26 (m, 1H); 4.21 (d,d, 1H); 3.75 (t, 1H); 3.1-3.23 (m, 1H); 2.84 (s, 3H); 1.70 (s, ~3H). [α]D=-77.39° (c=0.115、CHCl3中)。
【００９６】
ステージ７.１：カルボン酸
ＴＨＦ中の３.４１mlのｎ−ブチルリチウムの１.６Ｍ溶液を、０℃で１５分にわたり、０.７７１mlのＮ,Ｎ−ジイソプロピル−エチルアミンの６mlのＴＨＦ溶液に滴下する。この溶液を、１０分、−４℃／−５℃で撹拌し、−７８℃に冷却する。この温度で、０.６６０ｇの４,４−ジメチル−３−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルオキシ)−５−オキソ−ヘプタン酸を添加し、次いで溶液を−４０℃で１５分暖め、それを再び−７８℃に冷却する。０.６０８ｇの実施例５.２１のアルデヒドのＴＨＦ溶液３mlを続いて添加し、３０分、−７８℃で撹拌する。この反応を、７mlの飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液に添加することにより停止し、ＲＴに暖めた後、この溶液を０.５１３mlの酢酸と混合し、ＥＡで抽出する。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を蒸発し、残った油状残渣をトルエン／ＥＡ  １／１のＦＣで精製する。この得られたアルドール生成物を４０mlのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、この溶液を０.４３５mlの２,６−ルチジンと混合する。０℃に冷却後、０.７２０mlのＴＢＳトリフラートを添加し、この混合物を２.５時間、０℃で撹拌する。８mlの２０％クエン酸を添加後、有機相を分離し、水性溶液をＣＨ２Ｃｌ２で逆抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を蒸発させる。残った油状物を２０mlのメタノールに取り込み、この溶液を２.０ｇのＫ２ＣＯ３および１mlの水と混合し、本混合物を９０分、ＲＴで撹拌する。不溶性成分を濾取し、濾液のｐＨ値をDowex 50Wx8イオン交換体樹脂(スルホン酸基を活性基として有する非常に酸性のカチオン交換体、架橋剤としての８％ＤＶＢを含むスチレンのマトリックス、Dowex(登録商標)は、Dow Chemical Co.の商標である)で４.５に調節し、この樹脂を濾取し、新しい濾液を蒸発により濃縮する。残渣を２０mlのＣＨ２Ｃｌ２と２０mlの飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液に分配し、有機相を分離し、水性溶液をＣＨ２Ｃｌ２で逆抽出し、合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発により濃縮する。このようにして得た油状物を、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９９／１→９９／２のＦＣで精製する。この得られた物質を上記のシリル化／脱シリル化連続反応に、２回付す。最後に、純粋表題化合物を油状物として得る；ESI-MS: 862,4 (M+H)+。
【００９７】
ステージ７.２：ヒドロキシ酸
１.８５mlのテトラブチルアンモニウムフルオリドの１Ｍ溶液を、０.２６５ｇのステージ７.１のカルボン酸の６mlのＴＨＦ溶液に添加し、６時間、ＲＴで撹拌する。続いて、８mlのＥＡおよび７mlの２０％クエン酸を添加し、有機相を分離し、水性溶液をＥＡで逆抽出する。合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を蒸発した後に得られる油状残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール  ９８／２→９７／３でＦＣで精製する。１７を油状物として得る。
ESI-MS: 748.3 (M+H)+. 1H-NMR (CDCl3, 200MHz), δ(ppm vs. TMS): 8.23 (d, 1H); 7.76 (d, 1H); 7.40 (d,d, 1H); 5.24 (t, 1H); 4.73-4.84 (m, 1H); 4.45 (t, 1H); 3.67-3.74 (m, 1H); 3.10-3.22 (m, 1H); 2.82 (s, 3H); 1.75 (s, 3H); 1.14 (d, 3H); 1.08 (d, 3H); 0.80-0.95 (m, 約24H); 0.10 (s, 3H); 0.05 (s, 3H); 0.04 (s, 3H); 0.01 (s, 3H)。
【００９８】
ステージ７.３：４,８−ビス−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルオキシ)−５,５,７,９,１３−ペンタメチル−１６−(２−メチル−ベンゾチアゾール−５−イル)−オキサシクロヘキサデカ−１３−エン−２,６−ジオン
０.０８６６mlのトリエチルアミンおよび０.０６７７mlの２,４,６−トリクロロベンゾイルクロライド(Aldrich, Buchs, Switzerland)を、０℃に冷却した０.２１６ｇのステージ７.１のカルボン酸の３mlのＴＨＦ溶液に添加し、その溶液を１時間、０℃で撹拌する。本溶液を続いて、ＲＴで５分にわたり、０.３５４ｇのＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジンのトルエン溶液に滴下し、１５時間、ＲＴで撹拌する。懸濁液を３５℃で濃縮した後に得た固体残渣を３０mlのヘキサン／エーテル  ３／２に懸濁し、濾過し、濾過残渣を各々１５mlの同じ溶媒混合物で２回洗浄する。合わせた濾液を蒸発乾固し、固体残渣を、トルエン／アセトン１００／１.２５→１００／５または１００／１→１００／４のＦＣで２回精製し、表題化合物を無色樹脂として得る；ESI-MS: 730 (M+H)+. 1H-NMR (CDCl3, 200MHz), δ(ppm vs. TMS): 7.97 (s, 1H); 7.79 (d, 1H); 7.37 (d, 1H); 5.59 (d, 1H); 5.25 (t, 1H); 3.93-4.0 (m, 1H); 3.90 (d, 1H); 2.85 (s, 3H); 1.71 (s, 3H). [α]D=-60.72° (c=0.415、CHCl3中)。
【００９９】
実施例８−３０：Ｃ４−デスメチル−エポシロン
式ＩのＣ４−デスメチル−エポシロンは、実施例７に記載の方法にしたがい、実施例５のアルデヒドおよび実施例６のヘプタン酸を使用して、製造できる。
【０１００】
【表４】
0004590268.tif 000021
【０１０１】
実施例３１：(アルドール化段階：Ｃ４−ビスノル−ＥＰＯ−Ｂの製造)
酵母還元により得た(三菱化成株式会社、日本特許公開平03-048641, 1991-03-03)、インサイチュでＴＭＳ−ジシリル化した３−(Ｒ)−ヒドロキシ−５−オキソ−ヘプタン酸(２mmol)の４mlの乾燥ＴＨＦ溶液を−１０℃に冷却し、２.２mmolのＬＤＡのＴＨＦ溶液で処理する。この溶液を２０分撹拌し、次いで−４０℃に冷却する。このリチウムエノレートに、実施例５.２２の保護されたアルデヒド(２.５mmol)の乾燥ＴＨＦ溶液を添加する。本反応混合物を−３０℃に暖め、その温度で２−３時間保つ。最後に、反応混合物を水性クエン酸溶液でクエンチする。有機相を分離し、水性相をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機相を注意深く真空で濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、水および塩水で洗浄する。このＥｔＯＡｃ相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、最後に蒸発乾固してアルドール生成物の粘性油状物を得る。
【０１０２】
この生成物を、さらに、実施例７に記載のものと類似の条件下、ＯＲ４での選択的脱保護および所望のビス−ノル−エポシロン誘導体へのマクロラクトン化により、変換する。
【０１０３】
実施例３２：Ｃ４−ビスノル−エポシロン
式ＩのＣ４−ビスノル−エポシロンを、実施例３１に記載の方法にしたがい、実施例５の保護されたアルデヒドおよび実施例３１のヘプタン酸を使用して製造できる。
【０１０４】
【表５】
0004590268.tif 000022
【０１０５】
実施例５５：乾燥カプセル
上記実施例に記載の式ＩのＣ４−デスメチル−エポシロンの１個を活性成分として各々０.００５ｇ含む３０００カプセルを、下記のように製造する：
組成
活性成分                  １.５０ｇ
ラクトース            ７５０.００ｇ
Avicel PH 102         ３００.００ｇ
(微結晶性セルロース)
Polyplasdone XL         ３０.００ｇ
(ポリビニルピロリドン)
ステアリン酸マグネシウム  ９.００ｇ
製造法：活性成分を３０番手動式篩いを通す。活性成分、ラクトース、Avicel PH 102およびPolyplasdone XLを、１５分、ミキサー中で混合する。この混合物を十分な水(約５００mL)と造粒し、３５℃のオーブンで一晩乾燥し、２０番篩いを通す。ステアリン酸マグネシウムを２０番篩いを通し、造粒混合物に添加し、この混合物を５分、ミキサーで混合する。この混合物を０番硬カプセルに封入し、各々２５mgの活性成分に相当する混合物の量を含む。
【０１０６】
実施例５６：ＰＥＧ溶液
５mgの式ＩのＣ４−デスメチル−エポシロンを９８−１００％プロピレングリコール(１.０ml)に溶解する。この溶液を０.２２ミクロン孔サイズフィルターを通して濾過し、１mlアンプルに充填する。この充填したアンプルを貯蔵および輸送に使用する。静脈内投与前に、アンプルの内容物を２５０から１０００mlの注射用水中５％グルコース溶液に添加する。
【０１０７】
実施例５７：
微小管解重合化の阻害剤としての式ＩのＣ４−デスメチル−エポシロンの有効性を、上記の試験法により決定できる。試験化合物およびブタ微小管タンパク質(バッチ・ナンバー９)の最終アッセイ濃度は、各々４μＭおよび０.８mg／mlであった。
【表６】
0004590268.tif 000023
【０１０８】
実施例５８
腫瘍細胞に対する有効性を、上記の方法により証明できる。
【表７】
0004590268.tif 000024