(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0004398517.tif 000042
の化合物またはその生理学的に許容し得る塩。
上記式において、
ａは、０〜２０の数であり；
ｂは、０〜２０の数であり；
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ2〜Ｃ18−アルケニル、Ｃ3〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルカルボニル、Ｃ2〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルまたは式III
【化３】
0004398517.tif 000043
の基であり；
Ｒ2は、水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ2であり；
Ｂは、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシルおよびチミンから選択される天然塩基またはプリン、２,６−ジアミノプリン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ4，Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6，Ｎ6−エタノ−２,６−ジアミノプリン、プソイドイソシトシン、５−プロピンウラシル、５−プロピンシトシン、５−フルオロシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシルおよび５−ブロモシトシンから選択される非天然塩基であり；
ｎは、１〜１００の整数であり；
ｎ′は、０〜５０の整数であり；
ｍは、０であり；
式Ｉにおけるｍ′は、０であり；
Ａは、オキシ、チオキシまたはメチレンであり；
Ｗは、オキソ、チオキソまたはセレノキソであり；
Ｖは、オキシまたはチオであり；
Ｔは、オキシ、チオまたはイミノであり；
Ｙは、オキシ、チオ、イミノまたはメチレンであり；
Ｘは、ヒドロキシルまたはメルカプトであり；
Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、ＢＨ3、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4または式IV
(ＯＣＨ2ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ2Ｒ5      (IV)
の基であり；
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、−（ＣＨ2)c−〔ＮＨ（ＣＨ2)c〕d−ＮＲ6Ｒ6（式中、ｃは２〜６の整数でありそしてｄは０〜６の整数でありそしてＲ6は相互に独立して水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルまたはＣ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである）であり；
Ｒ4は、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜Ｃ10−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルであるか、またはＮＲ3Ｒ4の場合において、Ｒ3およびこれらが結合している窒素原子と一緒になって、５〜６員の複素環式環（この環は、追加的に、Ｏ、ＳおよびＮからなる系からの他の異種原子を含有していてもよい）であり；
ｐは、１〜１００の整数であり；
ｑは、０〜２２の整数であり；
Ｒ5は、水素またはヒドロキシル、アミノ、ＮＨＲ7、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、ＣＯＯＲ8またはハロゲン（Ｒ7はＣ1〜Ｃ6−アルキルでありそしてＲ8はＣ1〜Ｃ4−アルキルである）であり；
Ｚ、Ｚ′は、相互に独立して、ヒドロキシル、メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ22−アルコキシ、−Ｏ−（ＣＨ2)b−ＮＲ7Ｒ8（式中、ｂは１〜６の整数でありそしてＲ7はＣ1〜Ｃ6−アルキルでありそしてＲ8はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、またはＲ7およびＲ8は、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜６員の環を形成する）、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルコキシ（この場合において、アリールは、また、ヘテロアリールを意味しそしてアリールは、場合によっては、カルボキシル、アミノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、ヒドロキシル、ハロゲンおよびシアノからなる系からの１、２または３個の同一または異なる基によって置換されていてもよい）またはＣ1〜Ｃ18−アルキルメルカプト、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4（式中、Ｒ3およびＲ4は上述した通りである）、または細胞内取込みを有利にするかまたはＤＮＡプローブの標識として作用するかまたは標的核酸に対するオリゴヌクレオチド類似体のハイブリダイゼーションに際して標的核酸と結合、架橋形成または開裂により相互作用する基、または５′または３′末端を経て結合したヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドであり；
屈曲した記号は、Ｒ2および隣接ホスホリル基が２′および３′−位にまたは反対に３′および２′−位に位置することができることを示し、それぞれのヌクレオチドはそのＤまたはＬ配置にあることができそして塩基Ｂはαまたはβ−位に位置することができる。
【請求項２】
塩基Ｂがβ−位に位置し、ヌクレオチドがＤ配置にありそしてＲ2が２′位に位置する請求項１記載の式Ｉの化合物またはその生理学的に許容し得る塩。
【請求項３】
ａは、０〜１０の数であり；
ｂは、０〜１０の数であり；
Ｒ1は、水素または式III
【化４】
0004398517.tif 000044
の基であり；
Ｒ2は、水素またはヒドロキシルであり；
ｎは、５〜４０の整数であり；
ｎ′は、０〜３０の整数であり；
Ａは、オキシであり；
Ｗは、オキソまたはチオキソであり；
Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ＮＲ3Ｒ4またはＮＨＲ3〔式中、Ｒ3はＣ1〜Ｃ18−アルキルであり；そしてＲ4はＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜Ｃ10−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルであるか、またはＮＲ3Ｒ4の場合において、Ｒ3およびこれらが結合している窒素原子と一緒になって、５〜６員の複素環式環（この環は、追加的にＯ、Ｓ、Ｎからなる系からの他の異種原子を含有していてもよい）を形成する〕である請求項１または２記載の式Ｉの化合物またはその生理学的に許容し得る塩。
【請求項４】
ａは、０〜４の数であり；
ｂは、０の数であり；
Ｒ1は、水素であり；
Ｒ2は、水素であり；
Ｂは、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミン、５−プロピンウラシルまたは５−プロピンシトシンであり；
ｎは、７〜２５の整数であり；
ｎ′は、０〜２５の整数であり；
ｍは、０であり；
式Ｉにおけるｍ′は、０であり；
Ｔは、オキシであり；
Ｙは、オキシであり；
Ｕは、ヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−アルキルである、請求項１〜３のいずれかに記載の式Ｉの化合物またはその生理学的に許容し得る塩。
【請求項５】
ａ）  既知の方法によって、式Ｖ
【化５】
0004398517.tif 000045
（式中、ａ、ｂ、Ｖ、Ｔは、式Ｉにおいて上述した通りでありそしてＶ′はＶでありそして官能基Ｖ、Ｖ′およびＴは、一時的に保護された形態にあることもできる）の化合物を、保護基Ｓ１（この基は、他の保護基または固体の支持体に対する結合を開裂することなしに、完全に保護されたそして支持体に結合されたオリゴヌクレオチドから除去することができる）および保護基Ｓ２（この基は、式VIIにおけるリンカーアームＬ
ｉを開裂することなしにそして保護基Ｓ１を開裂することなしに、除去することができる）と反応させて式VI
【化６】
0004398517.tif 000046
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは、上述した通りである）の化合物を得、
ｂ）  次に、式VIの化合物を、既知の方法によって、適当な有機溶剤中でリンカーＬｉ １〜１０当量と反応させて式VII
【化７】
0004398517.tif 000047
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは、上述した通りでありそしてＬｉは、化学的結合によって式VIの化合物を固体の支持体に結合させることのできるリンカーアームである）の化合物を得、そしてその後既知方法によって処理し、
ｃ）  式VIIの化合物を、既知方法によって、固体の支持体ＳＳにカップリングさせて式VIII
【化８】
0004398517.tif 000048
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、Ｌｉ、ａおよびｂは上述した通りでありそしてＳＳは固体の支持体である）の化合物を得、
ｄ）  既知方法によって保護基Ｓ２を除去するかまたはその代わりに前もって既知方法によって保護基Ｓ１を除去し、反応工程ｌ）およびｍ）を実施し、それから反応工程ｅ）〜ｉ）を実施しそしてその後反応工程ｎ）を実施するか、または、
その代わりに、保護基Ｓ２の除去後に反応工程ｌ）およびｍ）を実施し、それから既知方法によって保護基Ｓ１を除去し、それから反応工程ｌ）〜ｉ）を実施しそして最後に反応工程ｎ）を実施し、
ｅ）  その後、ｍが１〜５である場合は、式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ｅ(-)（式中、Ｒ14、Ｒ15およびＲ16は相互に同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ4−アルキル基でありそしてＥは弗素、塩素、臭素である）の化合物の存在下またはテトラゾールまたは置換されたテトラゾールの存在下で、適当な有機溶剤中で、ｄ）で得られた化合物を、式IX
【化９】
0004398517.tif 000049
〔式中Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは上述した通りであり、そして
Ｒ9およびＲ10は、同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ8−アルキルまたはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキル、ベンジルまたはフェニルであるかまたはこれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によってはさらに追加的な異種原子および置換分を有していてもよい飽和または不飽和の複素環式環であり、
Ｒ12は、ＯＲ13またはＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルであり、
Ｒ13は、式
【化１０】
0004398517.tif 000050
の基またはベンジル基（これは置換されていないかまたは１〜４個の置換分により環置換されておりそしてこの場合において、置換分は、相互に独立して、弗素、塩素、臭素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボキシル基である）である〕の化合物と反応させ、
得られた化合物を既知方法によって酸化し、普通の方法でキャッピングを実施し、保護基Ｓ２を除去しそれからそしてこの反応工程を（ｍ−１）回反復してよく、式Ｘ
【化１１】
0004398517.tif 000051
（式中、Ｌｉ、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、ａ、ｂおよびｍは上述した通りである）の化合物を得、
ｆ）  ｍが、０である場合は、ｄ）で得られた化合物を、ホスホルアミダイト法によって、式XI
【化１２】
0004398517.tif 000052
（式中、Ｂ′はＢとして定義されそしてＲ2′はＲ2として定義されそしてこれらは、また保護された形態にあることができそしてＲ9、Ｒ10、Ｒ12、Ｓ２およびＶは上述した通りである）のヌクレオシドホスホルアミダイトと反応させ、
得られた化合物を既知方法によって酸化し、普通の方法でキャッピングを実施し、保護基Ｓ２を既知方法によって除去しそしてそれからこの反応工程を（ｎ−１）回反復してよく、式XII
【化１３】
0004398517.tif 000053
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍ
およびｎは上述した通りである）の化合物を得、
ｇ）  ｍ′が１〜５である場合は、反応工程ｅ）（これは（ｍ′−１）回反復してよい）を実施して式XIII
【化１４】
0004398517.tif 000054
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍ、ｍ′およびｎは上述した通りである）の化合物を得、
ｈ）  ｍ′が０でありそしてｎ′が、１〜５０である場合は、反応工程ｆ）を実施し、それから（ｎ′−１）回反復してよく、式XIV
【化１５】
0004398517.tif 000055
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍ、ｍ′、ｎおよびｎ′は上述した通りである）の化合物を得、
ｉ）式ＩにおいてＲ1≠Ｈである場合は、既知方法によって、基Ｒ1〔Ｒ1はＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ2〜Ｃ18−アルケニル、Ｃ3〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルカルボニル、Ｃ2〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルまたは式III
【化１６】
0004398517.tif 000056
（式中、Ｗ、ＺおよびＺ′は上述した通りである）の基である〕をｆ）、ｇ）またはｈ）において得られた化合物に導入してよく、
ｊ）  式ＩにおいてＲ1＝Ｈである場合は、既知方法によってキャッピングし、
ｋ）  次に、分子中に存在する固体の支持体に対するリンカーおよび他の保護基が保持されるようにして、この方法で得られそして支持体に結合されそして保護されているオリゴヌクレオチドから保護基Ｓ１を既知方法により除去し、
ｌ）  式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ｅ(-)（式中、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16およびＥは上述した通りである）の化合物の存在下またはテトラゾールまたは置換されたテトラゾールの存在下で、適当な有機溶剤中でこの方法で得られた化合物を式XV
【化１７】
0004398517.tif 000057
（式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ12は上述した意義を有しそしてＺ″は上述したＺの意義を有するかまたはさもなければ既知方法により保護されたＺである）の化合物と反応させ、
ｍ）  得られた化合物を既知方法により酸化し、
ｎ）  オリゴヌクレオチドを、既知方法によって支持体から除去し、そして
ホスフェートおよびヌクレオチド塩基上の残りの保護基を、既知方法によって除去することからなる請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の製法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、価値ある物理学的、生物学的および薬理学的性質を有する新規なオリゴヌクレオチド類似体およびこれらの化合物を製造する方法に関するものである。また、本発明は、遺伝子発明の阻害剤（アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、センスオリゴヌクレオチドおよびトリプレックス形成オリゴヌクレオチド）として、核酸を検出するプローブとしておよび分子生物学における補助剤としてのこれらの化合物の使用に関するものである。
【０００２】
オリゴヌクレオチドは遺伝子発現の阻害剤として現在ますます使用されることの多い物質である〔J. F. Milligan, M. D. MatteucciおよびJ. C. Martin, J. Med. Chem. 36(1993)1923；E. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕。
【０００３】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、塩基配列が、阻害されるｍＲＮＡと相補的である、核酸フラグメントである。この標的ｍＲＮＡは、細胞、ウイルスまたは他の病原からのものである。適当な細胞標的配列の例は、受容体、酵素、増殖因子、免疫調節剤、イオンチャンネルまたは腫瘍遺伝子の配列である。アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用してウイルス複製の阻害は、例えばＲＳＶ（ラウス肉腫ウイルス）、ＨＳＶ−１および−２（単純ヘルペスウイルスＩ型およびII型）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）およびインフルエンザウイルスに関して説明されている。これは、ウイルス核酸と相補的であるオリゴヌクレオチドの使用を必要とする。
【０００４】
対称的に、センスオリゴヌクレオチドは、これらが核酸結合蛋白質または核酸プロセシング酵素と結合（“トラップ”）しそしてその結果、その生物学的活性を阻害するように配列において設計されている〔C. HeleneおよびJ. J. Toulme, Biochim, Biophys, Acta 1049(1990)99〕。これに関連してあげることのできるウイルス標的の例は、逆転写酵素、ＤＮＡポリメラーゼおよびトランス作用因子蛋白質である。トリプレックス形成オリゴヌクレオチドは、一般に標的としてＤＮＡを有しそしてこれに結合した後、三重らせん構造を形成する。
【０００５】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、一般に、ｍＲＮＡのプロセシング（スプライシングなど）または蛋白質へのその翻訳を阻害するために使用されるのに反して、トリプレックス形成オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡの転写または複製を阻害する〔N. T. ThuongおよびC. Helene, Angew. Chem. 105(1933)697；UhlmannおよびPeyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕。しかしながら、最初のハイブリダイゼーションにおいてアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して一本鎖核酸と結合させて二本鎖を形成し、それから第二のハイブリダイゼーションにおいてトリプレックス形成オリゴヌクレオチドを使用して三本鎖構造を形成することもできる。さらに、アンチセンスおよびトリプレックス結合領域は、分離した二つのオリゴヌクレオチドまたは一つのオリゴヌクレオチドのどちらかに位置することができる。
【０００６】
さらに、合成オリゴヌクレオチドは、リボヌクレアーゼ活性の結果として標的ＲＮＡを破壊する、いわゆるリボザイムに適用される〔D. Castanotto, J. J. Rossi, J. O. Deshler, Critical Rev. Eukar, Gene Expr. 2(1992)331〕。
【０００７】
ＤＮＡ診断において、適当に標識された核酸フラグメントが、検出される核酸に対する特異的ハイブリダイゼーションのいわゆる、ＤＮＡプローブとして使用される。この場合に新規な二本鎖の特異的形成は、好ましくは放射性でない標識手段を伴う。この方法において、遺伝性、悪性またはウイルス性疾患または他の病原体により起る疾患を検出することができる。
【０００８】
天然に存在する形態のオリゴヌクレオチドは上記適用の大部分に対してほとんど適さないかまたは完全に不適当である。これらのオリゴヌクレオチドは、特異的必要条件を満たすために化学的に変性しなければならない。オリゴヌクレオチドが生体系に、例えばウイルス複製の阻害に使用され得るためには、これらは、次の条件に合わなければならない。
【０００９】
１．オリゴヌクレオチドは、生体内条件下、すなわち、血清および内部細胞の両方において、十分に高い安定性を有していなければならない。
【００１０】
２．オリゴヌクレオチドの性質は、これらが形質膜および核膜を通過できるようなものでなければならない。
【００１１】
３．オリゴヌクレオチドは、生理学的条件下において、阻害作用を示すために、塩基−特異的な方法で標識核酸に結合しなければならない。
【００１２】
これらの条件は、ＤＮＡプローブについては絶対必要なものではない。しかしながら、これらのオリゴヌクレオチドは、例えば蛍光、化学発光、比色定量または特異的染色による検出が可能であるような方法で誘導化しなければならない〔BeckおよびKoester, Anal. Chem. 62(1990)2258〕。
【００１３】
オリゴヌクレオチドの化学的変性は、普通、ホスフェート主鎖、リボース単位またはヌクレオチド塩基の適当な変性によって行われる〔UhlmannおよびPeyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕。他のしばしば使用される方法は、５′−ヒドロキシル基を適当なホスホリル化試薬と反応させることによってオリゴヌクレオチド５′−コンジュゲートを製造することである。５′末端においてのみ変性されたオリゴヌクレオチドは、これらが血清内において分解されるという難点を有している。他方において、すべてのヌクレオチド間のホスフェート基が変性される場合は、しばしばオリゴヌクレオチドの性質の激烈な変化がある。例えば、水性媒質中のメチル−ホスホネートオリゴヌクレオチドの溶解度が減少されそしてハイブリダイゼーション能力が減少される。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは非特異的作用を有しており、例えばホモオリゴマー〔UhlmannおよびPeyman, Chemical Reviews 90(1990）543〕でさえもウイルスに対して活性である。
【００１４】
３′−核分解活性（３′−nucleolytic activity)によるオリゴヌクレオチドの分解は、一般に、血清におけるヌクレアーゼによる有力な分解としてみなされる。それ故に、本発明の目的は、特異的な活性、増加された血清安定性および良好な溶解性を有する３′−誘導化オリゴヌクレオチド類似体を提供することである。
【００１５】
それ故に、本発明は、式Ｉまたは式II
【化２７】
0004398517.tif 000002
【００１６】
【化２８】
0004398517.tif 000003
の化合物およびその生理学的に許容し得る塩に関するものである。
【００１７】
上記式において、
ａは、０〜２０、好ましくは０〜１０、特に好ましくは０〜６、特に非常に好ましくは０〜４の数であり；
ｂは、０〜２０、好ましくは０〜１０、特に好ましくは０〜４、特に非常に好ましくは０の数であり；
Ｒ1は、水素、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、特にメチル、Ｃ2〜Ｃ18−アルケニル、Ｃ3〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルカルボニル、Ｃ2〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルまたは式III
【化２９】
0004398517.tif 000004
の基、好ましくは水素または式IIIの基、特に非常に好ましくは水素であり；
Ｒ2は、水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ2、好ましくは水素、ヒドロキシル、Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ、弗素またはＮＨ2、特に好ましくは水素またはヒドロキシル、特に非常に好ましくは水素であり；
Ｄは、ヒドロキシル、Ｏ−ＰＯ32-、特に非常に好ましくはヒドロキシルであり；
Ｂはヌクレオチド化学において慣用の塩基、例えばアデニン、シトシン、グアニン、ウラシルおよびチミンのような天然塩基または例えば、プリン、２,６−ジアミノプリン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ4,Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6,Ｎ6−エタノ−２,６−ジアミノプリン、プソイドイソシトシン、５−プロピンウラシル、５−プロピンシトシン、５−フルオロシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルウラシルおよび５−ブロモシトシンのような非天然塩基、そして特に非常に好ましくはアデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミン、５−プロピンウラシルおよび５−プロピンシトシンであり;ｎは、１〜１００、好ましくは５〜４０、特に好ましくは６〜３０、特に非常に好ましくは７〜２５の整数であり；
ｎ′は、０〜５０、好ましくは０〜４０、特に好ましくは０〜３０、特に非常に好ましくは０〜２５の整数であり；
ｍは、０〜５、特に非常に好ましくは０の整数であり；
式Ｉにおけるｍ′は、０〜５、特に非常に好ましくは０または１の整数であり；
式IIにおけるｍ′は、１〜５、特に非常に好ましくは１の整数であり；
【００１８】
Ａは、オキシ、チオキシまたはメチレン特にオキシであり；
Ｗは、オキソ、チオキソまたはセレノキソ、好ましくはオキソまたはチオキソ、特に好ましくはオキソであり；
Ｖは、オキシまたはチオ、特に非常に好ましくはオキシであり；
Ｔは、オキシ、チオまたはイミノ、特に非常に好ましくはオキシであり；
Ｙは、オキシ、チオ、イミノまたはメチレン、特に非常に好ましくはオキシであり；
Ｘは、ヒドロキシルまたはメルカプトであり；
Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、ＢＨ3、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4または式IV
(ＯＣＨ2ＣＨ2)pＯ(ＣＨ2)qＣＨ2Ｒ5      (IV)
の基、好ましくはヒドロキシル、メルカプト、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、ＮＲ3Ｒ4またはＮＨＲ3そして特に好ましくはヒドロキシルまたはＣ1〜Ｃ6−アルキルであり；
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、−（ＣＨ2)c〔ＮＨ（ＣＨ2)c〕d−ＮＲ6Ｒ6（式中、ｃは２〜６の整数でありそしてｄは０〜６の整数でありそしてＲ6は相互に独立して水素、Ｃ1〜Ｃ6−アルキルまたはＣ1〜Ｃ4−アルコキシ−Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、好ましくはメトキシメチルである）、好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、特にＣ1〜Ｃ4−アルキルであり；
Ｒ4は、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜Ｃ10−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、特にＣ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリールまたはＣ6〜Ｃ10−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルであるかまたはＮＲ3Ｒ4の場合において、Ｒ3およびこれらが結合している窒素原子と一緒になって、５〜６員の複素環式環（この環は、追加的に、Ｏ、ＳおよびＮからなる系からの他の異種原子を含有していてもよい）であり；
ｐは、１〜１００、好ましくは３〜２０そして特に好ましくは３〜８の整数であり；
ｑは、０〜２２、好ましくは０〜１５の整数であり；
【００１９】
Ｒ5は、水素または官能基、例えばヒドロキシル、アミノ、ＮＨＲ7、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ2、ＣＯＯＲ8またはハロゲン（Ｒ7はＣ1〜Ｃ6−アルキルでありそしてＲ8はＣ1〜Ｃ4−アルキル好ましくはメチルである）であり；
Ｚ、Ｚ′は、相互に独立して、ヒドロキシル、メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ1〜Ｃ22−アルコキシ、好ましくはＣ6〜Ｃ18−アルコキシ、−Ｏ−（ＣＨ2)b−ＮＲ7Ｒ8（式中、ｂは１〜６の整数でありそしてＲ7はＣ1〜Ｃ6−アルキルでありそしてＲ8はＣ1〜Ｃ4−アルキルであり、またはＲ7およびＲ8は、これらが結合している窒素原子と一緒になって３〜６員の環を形成する）、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ8−アルキル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＣ6〜Ｃ10−アリール−Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルコキシ、好ましくはＣ6〜Ｃ10−アリール−Ｃ1〜Ｃ4−アルコキシ（この場合において、アリールは、また、ヘテロアリールを意味しそしてアリールは、場合によっては、カルボキシル、アミノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4−アルキルアミノ、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、ヒドロキシル、ハロゲンおよびシアノからなる系からの１、２または３個の同一または異なる基によって置換されていてもよい）またはＣ1〜Ｃ18−アルキルメルカプト、ＮＨＲ3、ＮＲ3Ｒ4（式中、Ｒ3およびＲ4は上述した通りである）、または細胞内取込みを有利にするかまたはＤＮＡプローブの標識として作用するかまたは標的核酸に対するオリゴヌクレオチド類似体のハイブリダイゼーションに際して標的核酸と結合、架橋形成または開裂により相互作用する基、または５′または３′末端を経て結合したヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドであり；
屈曲した記号(curved parenthesis)は、Ｒ2および隣接ホスホリル基が２′および３′−位にまたは反対に３′および２′−位に位置することができることを示し、それぞれのヌクレオチドはそのＤまたはＬ配置にあることができそして塩基Ｂはαまたはβ−位に位置することができる。
【００２０】
塩基Ｂがβ−位に位置し、ヌクレオチドがＤ配置にありそしてＲ2が２′−位に位置している式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体およびその生理学的に許容し得る塩が好ましい。
【００２１】
ＶおよびＹがオキシである式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体が特に好ましい。
【００２２】
また、Ｖ、ＹおよびＷがそれぞれオキシおよびオキソである式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体が、特に好ましい。
【００２３】
Ｖ、Ｙ、ＷおよびＵがそれぞれオキシ、オキソおよびヒドロキシルである式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体が、特に非常に好ましい。
【００２４】
さらにＲ1が水素である式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体が好ましい。
【００２５】
Ｕ、Ｖ、Ｗ、ＸおよびＹがそれぞれオキシ、オキソおよびヒドロキシルでありそしてＲ1が水素である式Ｉのオリゴヌクレオチド類似体が、特に好ましい。
【００２６】
反復して存在する基、例えばＲ2、Ｂ、Ａ、Ｗ、Ｖ、Ｙ、Ｕ、Ｒ3、Ｒ4、Ｔ、ａ、ｂ、ｐ、ｑおよびＺは、相互に独立して同一または異なっている。すなわち、例えばＶは相互に独立してオキシ、チオまたはイミノである。
【００２７】
ハロゲンは、好ましくは弗素、塩素または臭素である。
【００２８】
ヘテロアリール基は、特に、１個または２個以上のＣＨ基が、Ｎにより置換されておりそして（または）少なくとも２個の隣接ＣＨ基がＳ、ＮＨまたはＯにより置換されている（５−員の芳香族環を形成）フェニルまたはナフチルから誘導された基を意味する。さらに、二環式基の縮合の点における１個または両方の原子は窒素原子であることができる（例えばインドリジニル）。ヘテロアリールは、特に、フラニル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、フタラジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニルである。
【００２９】
細胞内取込みを有利にする基の例は、種々な親油性基、例えば−Ｏ−（ＣＨ2)x−ＣＨ3（式中、ｘは６〜１８の整数である）、−Ｏ−（ＣＨ2)e−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2)f−ＣＨ3（式中、ｅおよびｆは、相互に独立して６〜１２の整数である）、−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)4−（ＣＨ2)9−ＣＨ3、−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)8−（ＣＨ2)13−ＣＨ3および−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)7−（ＣＨ2)15−ＣＨ3、さらにまた、コレステリルのようなステロイド残基および天然の担体系、例えば胆汁酸、葉酸、２−（Ｎ−アルキル−Ｎ−アルコキシ）アミノアントラキノンを利用したコンジュゲートおよびＥＧＦ（上皮成長因子）、ブラジキニンおよびＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）のようなオリゴヌクレオチドの受容体−仲介細胞内取込み（endocytosis）を招く適当な受容体のペプチドおよびマンノースのコンジュゲートである。標識基は、例えばダンシル（＝Ｎ−ジメチル−１−アミノナフチル−５−スルホニル）、フルオレスセインまたはクマリン誘導体の蛍光基、または、例えばアクリジン誘導体の化学発光基、およびＥＬＩＳＡにより検出できるジゴキシゲニン系、ビオチン／アビジン系により検出できるビオチン基、またはさもなければ、検出できるレポーター基による誘導化を可能にする官能基を有するリンカーアーム、例えばアクリジニウム活性エステルと反応して化学発光サンプルを与えるアミノアルキルリンカーを意味する。典型的な標識基は、次の通りである：
【００３０】
【化３０】
0004398517.tif 000005
【００３１】
【化３１】
0004398517.tif 000006
【００３２】
核酸に結合または挿入（intercalate）および（または）開裂または架橋形成するオリゴヌクレオチド類似体は、例えばアクリジン、ソラレン、フェナントロリン、ナフトキノン、ダウノマイシンまたはクロロエチルアミノアリールコンジュゲートを含有する。典型的な挿入および架橋形成基は、次の通りである。
【００３３】
【化３２】
0004398517.tif 000007
【００３４】
【化３３】
0004398517.tif 000008
【００３５】
本発明は、α−およびβ−Ｄ−またはＬ−リボフラノシド、α−およびβ−Ｄ−またはＬ−デオキシリボフラノシドおよび相当する炭素環式５−員環類似体に限定されず、異なる糖構成ブロック、例えば環−拡大された糖および環縮小された糖、非環式または適当な他の型の糖誘導体から集成されるオリゴヌクレオチド類似体にも適用される。さらに、本発明は、式Ｉおよび式IIに例としてあげたホスフェート基の誘導体に限定されず、既知のデホスホ誘導体〔E. UhlmannおよびA. Peyman, “Methods in Molecular Biology", Vol. 20, Protocols for Oligonucleotides and Analogs. S. Agarwal, Ed., Humana Press, Ottowa 1993〕にも関するものである。本発明は、また、オリゴヌクレオチド類似体の化学において知られている他の変性、例えば、式IIの場合におけるホスフェート基、塩基および３′末端における既知のコンジュゲート変性に関する。さらにまた、本発明は、新規な構成ブロックが、式Ｉおよび式IIの化合物のほかの位置において追加的に存在することのできるオリゴヌクレオチドに関するものである。
【００３６】
式Ｉおよび式IIの化合物の生理学的に許容し得る塩は、Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publ. Co., Easton, PA, 17th edition(1985)1418)に記載されているような無機および有機の両方の塩を意味する。物理的および化学的安定性のために、なかんづく、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびアンモニウム塩が、酸性基に対して好ましい。
【００３７】
式Ｉおよび式IIのオリゴヌクレオチド類似体は、生物学的オリゴヌクレオチドの合成と同様な既知方法によって、必要に応じ自動合成器の助けにより、溶液または好ましくは固相合成によって製造される。
【００３８】
オリゴヌクレオチドの３′末端においてコンジュゲート分子を導入する種々な方法がある。しかしながら、これらは、式Ｉの化合物を与えない。従来の技術の評論は、M. Manoharan, Antisense Research and Applications, CrookおよびLebleu, Eds., Chapter 17, 303頁以下、CRC Press Boca Raton 1993, およびEP-A 0 552 766(HOE 92/F 012)およびEP-A 0 552 767(HOE 92/F 013)によってなされている。オリゴヌクレオチドの５′末端における誘導化が、例えば標準オリゴヌクレオチド合成サイクルを使用して適当なコンジュゲート分子のホスホルアミダイトとの反応によって比較的簡単に行われるのに反して、３′末端に対するこのような普遍的に適用できる方法はない。３′−コンジュゲーションは、後合成的に換言すれば、支持体からの除去後および保護基の除去後に、または特別なコンジュゲート分子のために特別に製造される支持体物質を経て行われる。P. S. Nelson等〔Nucl. Acids Res. 20 (1992) 6253〕は、３′−リンカーを報告している。合成が固体の支持体上で行われた後に、すべての保護基を除去しそしてそれからコンジュゲート分子を遊離アミノ基に後合成的にカップリングさせる。Gamper等〔Nucl. Acids Res. 21 (1993) 145〕は、導入されるコンジュゲート分子で誘導化された支持体物質を使用する固相合成を報告している。支持体は、すべてのコンジュゲート分子について手の込んだ方法で誘導化しなければならない。EP-A 0 552 766およびEP-A 0 552 767は、普通のシアノエチル保護基の代りに適当なコンジュゲート分子を有するヌクレオシドホスホルアミダイトをカップリングさせるβ−除去可能なリンカーを記載している。それから、オリゴヌクレオチド合成を行う。これは、コンジュゲート分子が、合成サイクル中に除去される酸−不安定な保護基を有していてはならないということを意味する。さらに、ヌクレオシドコンジュゲート単量体の構成ブロック合成が非常に工夫されている。
【００３９】
それ故に、本発明は、固体の支持体上におけるオリゴヌクレオチドの３′変性に対して普遍的に使用することができ、固相合成中のホスホルアミダイト（phosphoramidite）化学によるコンジュゲート分子の導入を可能にする方法に関するものである。コンジュゲーションのために、５′誘導化に対して知られている容易に入手できるコンジュゲートホスホルアミダイトを使用することができる。この目的に対して使用される適当な保護基を有するリンカー分子は、ホスホルアミダイト化学を使用してオリゴヌクレオチドの３′末端においてだけでなくオリゴヌクレオチド内において１回または２回以上導入することができる。
【００４０】
式Ｉの化合物を製造する方法は、
ａ）  式Ｖ
【化３４】
0004398517.tif 000009
〔式中、ａ、ｂ、Ｖ、Ｔは式Ｉにおいて上述した通りでありそしてＶ′はＶでありそして官能基Ｖ、Ｖ′およびＴは必要に応じて一時的に保護された形態（好ましくは、Ｖ＝Ｖ′＝Ｔ＝オキシでありそしてｂ＝０である場合は、アセトンとＦｅIII触媒との反応により得られそして保護基Ｓ１の導入後に再び酢酸により除去される環状アセタールのような）にあることができる〕の化合物と、保護基Ｓ１〔この基は、他の保護基または固体の支持体に対する結合を開裂することなしに、完全に保護されそして支持体に結合されたオリゴヌクレオチドから除去することができる、例えばレブロイル保護基およびオルト−、メタ−またはパラ−Ｒ−Ｏ−アリール（Ｒは、Ｃ1〜Ｃ20−アルキル、Ｃ2〜Ｃ20−アルケニル、Ｃ3〜Ｃ20−アルキニル、Ｃ6〜Ｃ12−アリール−Ｃ1〜Ｃ6−アルキルである）、好ましくはレブロイル保護基およびパラ−メトキシフェニル保護基である〕および保護基Ｓ２〔この基は、式VIIにおけるリンカーアームＬｉを開裂することなしにそして保護基Ｓ１を開裂することなしに除去することができる、好ましくはジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、トリチル、ピキシル、４−メトキシテトラヒドロキシピラニル、特に好ましくはモノメトキシトリチルおよびジメトキシトリチルである〕とを、既知方法〔例えばM. J. Gait, “Oligonucleotide Synthesis-a practical approach", IRL Press 1984〕によって反応させて、例えば還流下適当な溶剤、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中でパラメトキシフェノール、ジフェニルアゾジカルボキシレートおよびトリフェニルホスフィンと反応させることによりパラ−メトキシフェニル基を導入し、それからアセタールを酸、例えば酢酸で再び除去しそしてその後、ピリジン中でモノメトキシトリチルクロライドと反応させることによりモノメトキシトリチル保護基を導入して、式VI
【化３５】
0004398517.tif 000010
（式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは、上述した通りである）の化合物を得、
【００４１】
ｂ）  次に、式VIの化合物を、既知の方法によって、必要に応じて触媒例えば４−ジメチルアミノピリジンの添加後、適当な有機溶剤、例えば塩化メチレン中でリンカーＬｉ、例えば無水コハク酸１〜１０当量、好ましくは１〜２当量と反応させて式VII
【化３６】
0004398517.tif 000011
〔式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは上述した通りであり、そしてＬｉは、化学的結合（とりわけ、アミド、エステル）によって式VIの化合物を固体の支持体(Damka等、Nucleic Acids Res. 18(1990)3813, Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274）に結合させることのできるリンカーアーム、好ましくはコハク酸基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ(Ｏ)−）、蓚酸基（Ｏ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ(Ｏ)−）、アルキルアミン、好ましくはＬＣＡＡ（長鎖アルキルアミン）またはポリエチレングリコール、特に好ましくはコハク酸基であり、そしてある場合においては、長い時間のアンモニア処理に耐えることのできない置換分と組み合わされた、より不安定なリンカー例えばオキザリルリンカーが有利である〕の化合物を得そしてその後既知の方法、例えば抽出、結晶化、クロマトグラフィーにより処理し、
【００４２】
ｃ）  式VIIの化合物を、既知の方法によって、例えば適当な溶剤中におけるＤＣＣおよびｐ−ニトロフェノールとの反応または例えばＤＭＦのような適当な溶剤中におけるＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）および塩基例えばＮ−エチルモルホリンとの反応によって（例えば、M. J. Gait, Oligonucleotide Synthesis-a practical approach, IRL Press, 1984)、固体の支持体ＳＳ、例えばアミノプロピル−ＣＰＧ（ＣＰＧ＝調節された細孔性ガラス）またはテンタゲル(Tentagel)R (ドイツのRappから）にカップリングさせて式VIII
【化３７】
0004398517.tif 000012
〔式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、Ｌｉ、ａおよびｂは上述した通りでありそしてＳＳは、例えばＣＰＧ（調節された細孔性ガラス）、シリカゲルまたは有機樹脂、例えばポリスチレン（ＰＳ）またはＰＳおよびポリエチレングリコール（ＰＯＥ）のグラフト共重合体のような物質の固体支持体でありそして側鎖におけるヒドロキシル、アミノ、ハロゲンまたはＣＯＯＨのような官能基により変性されている〕の化合物を得、
【００４３】
ｄ）  既知の方法によって、例えばジクロロメタンまたはクロロホルム中の１〜４％ジクロロ酢酸で処理することによって保護基Ｓ２を除去するかまたはその代りに前もって既知の方法によって保護基Ｓ１を除去し、例えばヒドラジンによってレブロイル保護基を除去し、反応工程ｌ）およびｍ）を実施し、それから反応工程ｅ）〜ｉ）を実施しそしてその後反応工程ｎ）を実施するか、または
その代りに、保護基Ｓ２の除去後反応工程ｌ）およびｍ）を実施し、それから既知方法によって保護基Ｓ１を除去し、例えば、ヒドラジンによる処理によりレブロイル保護基をまたはＣｅIVによる処理によりパラ−メトキシフェニル保護基を除去し、それから反応工程ｅ）〜ｉ）を実施しそして最後に反応工程（ｎ）を実施し、
【００４４】
ｅ）  その後、ｍが１〜５である場合は、式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ｅ(-)（式中、Ｒ14、Ｒ15およびＲ16は相互に同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ4−アルキル基でありそしてＥは弗素、塩素、臭素、特に塩素である）の化合物の存在下またはテトラゾールまたは置換されたテトラゾール例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、または好ましくは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、特に好ましくは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下で、適当な有機溶剤、好ましくはアセトニトリル中でｄ）で得られた化合物を、式IX
【化３８】
0004398517.tif 000013
〔式中Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは上述した通りであり、そして
Ｒ9およびＲ10は、同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはイソプロピルまたはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキル、好ましくはＣ8までのシクロアルキル、ベンジルまたはフェニルであるかまたはこれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によってはさらに追加的なモルホリンのような異種原子および置換分例えばＯＣ(Ｏ)Ｏ−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルエステルを有していてもよい飽和または不飽和の複素環式環であり、
Ｒ12は、ＯＲ13またはＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、特に好ましくはＯＲ13またはＣ1〜Ｃ6−アルキルであり、
Ｒ13は、式
【化３９】
0004398517.tif 000014
の基またはベンジル基（これは置換されていないかまたは１〜４個の置換分により環置換されておりそしてこの場合において、置換分は、相互に独立して、弗素、塩素、臭素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボキシル基である）である〕の化合物と反応させ、
得られた化合物を例えば反応工程ｍ）に記載したような既知方法によって酸化し、普通の方法でキャッピング(capping)を実施し、保護基Ｓ２を除去し〔例えば、BeaucageおよびIyer, Tetrahedron 49(1933)1925 & 2223 & 6123；E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274；E. UhlmannおよびPeyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕そしてそれから必要に応じて、この反応工程を（ｍ−１）回反復して式Ｘ
【化４０】
0004398517.tif 000015
（式中、Ｌｉ、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、ａ、ｂおよびｍは上述した通りである）の化合物を得、
【００４５】
ｆ）  ｍが、０である場合は、ｄ）で得られた化合物を、ホスホルアミダイト法〔E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274〕によって、式XI
【化４１】
0004398517.tif 000016
（式中、Ｂ′はＢとして定義されそしてＲ2′はＲ2として定義されそして必要に応じて、これらは、また保護された形態にあることができ、例えばＲ2は第３−ブチルジメチルシリルにより保護されたヒドロキシルであることができそしてＲ9、Ｒ10、Ｒ12、Ｓ２およびＶは上述した通りである）のヌクレオシドホスホルアミダイトと反応させ、
得られた化合物を既知方法によって酸化し、普通の方法でキャッピングを実施し、保護基Ｓ２、好ましくはジメトキシトリチルまたはモノメトキシトリチルを既知方法〔例えば、BeaucageおよびIyer，Tetrahedron 49(1993)1925 & 2223 & 6123；E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274；E. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕によって除去しそしてそれから必要に応じてこの反応工程を（ｎ−１）回反復して、式XII
【化４２】
0004398517.tif 000017
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍおよびｎは上述した通りである）の化合物を得、
【００４６】
ｇ）  ｍ′が１〜５である場合は、反応工程ｅ）（これは必要に応じて（ｍ′−１）回反復される）を実施して式XIII
【化４３】
0004398517.tif 000018
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍ、ｍ′およびｎは上述した通りである）の化合物を得、
【００４７】
ｈ）  ｍ′が０でありそしてｎ′が１〜５０である場合は、反応工程ｆ）を実施し、それからこの反応工程を必要に応じ（ｎ′−１）回反復して、式XIV
【化４４】
0004398517.tif 000019
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍ、ｍ′、ｎおよびｎ′は上述した通りである）の化合物を得、
【００４８】
ｉ）  必要に応じて、式ＩにおいてＲ1≠Ｈである場合は、既知方法によって、好ましくは反応工程ｌ）およびｍ）と同様な適当な反応によって、基Ｒ1〔Ｒ1はＣ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、特にメチル、Ｃ2〜Ｃ18−アルケニル、Ｃ3〜Ｃ8−アルキニル、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルカルボニル、Ｃ2〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルまたは式III
【化４５】
0004398517.tif 000020
（式中、Ｗ、ＺおよびＺ′は上述した通りである）の基である〕、好ましくは式IIIの基をｆ）、ｇ）またはｈ）において得られた化合物を導入し、
【００４９】
ｊ）  式ＩにおいてＲ1＝Ｈである場合は、既知方法、例えば無水酢酸およびＮ−メチルイミダゾールとの反応によってキャッピングし、
【００５０】
ｋ）  次に、分子中に存在する固体の支持体に対するリンカーおよび他の保護基が保持されるようにして、この方法で得られそして支持体に結合されそして保護されているオリゴヌクレオチドから保護基Ｓ１を既知方法（例えばGreene, Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis", J. Wiley, New York 1991)により除去し、例えばＳ１＝レブロイルは、ヒドラジンによる処理により除去し、そしてＳ１＝パラメトキシフェニルは、好ましくはＣｅIVによる処理により、例えば−１０〜１００℃で０.２〜５００分アセトニトリル／Ｈ2Ｏ中のＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6の０.０５〜１Ｍ溶液、好ましくは０〜５０℃、特に２０〜３０℃で１〜３０分、特に２〜１０分アセトニトリル／Ｈ2Ｏ（２：１〜８：１、特に４：１）中のＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6の０.０５〜０.５Ｍ、特に０.１Ｍ溶液で処理することにより除去し、
【００５１】
ｌ）  式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ｅ(-)（式中、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16およびＥは上述した通りである）の化合物の存在下またはテトラゾールまたは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたはエチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、好ましくは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、特に好ましくは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下で、適当な有機溶剤、好ましくはアセトニトリル中で、この方法で得られた化合物を式XV
【化４６】
0004398517.tif 000021
〔式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ12は上述した意義を有しそしてＺ″は上述したＺの意義を有するかまたはさもなければ既知方法により保護されたＺであり、そして好ましく使用される保護基はオリゴヌクレオチド合成における保護基の除去に使用される条件下で除去できる基、例えば−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＮ、Ｏ−ＣＨ3、Ｓ−ＣＨ2ＣＨ2ＣＮまたは
【化４７】
0004398517.tif 000022
のような保護された誘導体の形態にあらねばならないヒドロキシル、メルカプトおよびＳｅＨである〕の化合物と反応させ、
【００５２】
ｍ）  得られた化合物を既知方法によって、例えば水性ピリジン、ルチジンまたはコリジンの存在下そしてまた必要に応じて例えばテトラヒドロフランのような他の有機溶剤の存在下で沃素と反応させることによってまたは例えばアセトニトリル中でＮ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラエチルチウラムジスルフィドと反応させることによってまたは例えばアルキルアミンまたはアリールアミンの存在下で沃素と反応させることによって酸化し〔当業者に知られそして天然のおよび変性されたオリゴヌクレオチドを製造するために使用される種々な酸化方法が、例えばBeaucageおよびIyer, Tetrahedron 49(1993)1925 & 2223 & 6123；E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274およびE. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90(1990)543に要約されており、そして酸化は、好ましくは水性ピリジン、ルチジンまたはコリジンの存在下でそしてまた必要に応じテトラヒドロフランのような他の有機溶剤の存在下でも沃素と反応させることにより実施される〕、
【００５３】
ｎ）  オリゴヌクレオチドを、既知方法、例えば５０〜６０℃でＮＨ3によって、支持体から除去し、そしてホスフェートおよびヌクレオチド塩基上の残りの保護基を、同様に既知方法によって除去することからなる。
【００５４】
式IIの化合物を製造する方法は、
ａ）  式XVI
【化４８】
0004398517.tif 000023
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ２、ＳＳおよびＶは上述した通りでありそしてＬｉは、さらに３′−ホスフェート基の導入を可能にするリンカー〔例えば、EP-A 0 552 766, BeaucageおよびIyer, Tetrahedron 49(1993)2223 & 6123参照〕であることができる）の化合物において、既知の方法例えばジクロロメタンまたはクロロホルム中の１〜４％ジクロロ酢酸による処理によって保護基Ｓ２を除去し、
【００５５】
ｂ）  次に、得られた化合物をホスホルアミダイト法〔E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274〕によって、式XI
【化４９】
0004398517.tif 000024
（式中、Ｂ′はＢとして定義されそしてＲ2′はＲ2として定義されそしてこれらはまた必要に応じて保護された形態にあることができ、例えば、Ｒ2は第３−ブチルジメチルシリルにより保護されたヒドロキシルであることができそしてＲ9、Ｒ10、Ｒ12、Ｓ２およびＶは上述した通りである）のヌクレオシドホスホルアミダイトと反応させ、
得られた化合物を既知方法により酸化し、普通の方法でキャッピングを実施し、保護基Ｓ２、好ましくはジメトキシトリチルまたはモノメトキシトリチルを既知方法〔例えば、BeaucageおよびIyer, Tetrahedron 49(1993)1925 & 2223 & 6123；E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274；E. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕によって除去し、そしてそれから必要に応じてこの反応工程を（ｎ−１）回反復して、式XVII
【化５０】
0004398517.tif 000025
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、ＳＳ、Ｕ、Ｖ、Ｗ、Ｙおよびｎは上述した通りである）の化合物を得、
【００５６】
ｃ）  次に式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ｅ(-)（式中、Ｒ14、Ｒ15およびＲ16は、相互に同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ4−アルキル基でありそしてＥは弗素、塩素、臭素、特に塩素である）の化合物の存在下またはテトラゾールまたは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、好ましくは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、特に好ましくは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下で適当な溶剤、好ましくはアセトニトリル中で、得られた化合物を式IX
【化５１】
0004398517.tif 000026
〔式中、Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは上述した通りであり、
Ｒ9およびＲ10は、同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはイソプロピルまたはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキル、好ましくはＣ8までのシクロアルキル、ベンジルまたはフェニルであるかまたはこれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によってはさらに追加的な例えばモルホリンのような異種原子およびＯＣ(Ｏ)Ｏ−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルエステルのような置換分を有していてもよい飽和または不飽和の複素環式環であり、
Ｒ12は、ＯＲ13またはＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、特に好ましくはＯＲ13またはＣ1〜Ｃ6−アルキルであり、
【００５７】
Ｒ13は、式
【化５２】
0004398517.tif 000027
の基またはベンジル基（これは置換されていないかまたは１〜４個の置換分により環置換されており、好ましくは置換されておらずそしてこの場合において、置換分は、相互に独立して、弗素、塩素、臭素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボキシル基である）である〕の化合物と反応させ、
得られた化合物を例えば反応工程ｍ）に記載されているような既知方法によって酸化し、普通の方法でキャッピングを実施し、保護基Ｓ２を除去し〔例えば、BeaucageおよびIyer，Tetrahedron 49(1993)1925 & 2223 & 6123；E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274；E. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕そしてそれから必要に応じて、この反応工程を（ｍ′−１）回反復して式XVIII
【化５３】
0004398517.tif 000028
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍ′およびｎは上述した通りである）の化合物を得、
【００５８】
ｄ）  ｎ′が１〜５０である場合は、反応工程ｂ）を実施し、それから必要に応じてこの反応工程を（ｎ′−１）回反復して、式XIX
【化５４】
0004398517.tif 000029
（式中、Ａ、Ｂ′、Ｌｉ、Ｒ2′、Ｓ１、ＳＳ、Ｕ、Ｖ、Ｖ′、Ｗ、Ｙ、ａ、ｂ、ｍ′、ｎおよびｎ′は上述した通りである）の化合物を得、
【００５９】
ｅ）  必要に応じて、式IIにおいてＲ1≠Ｈである場合は、既知の方法によって、好ましくは反応工程ｈ）およびｉ）と同様な適当な反応によって、基Ｒ1〔Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ18−アルキル、好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、特にメチル、Ｃ2〜Ｃ18−アルケニル、Ｃ3〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ1〜Ｃ18−アルキルカルボニル、Ｃ2〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ3〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキルまたは式III
【化５５】
0004398517.tif 000030
（式中、Ｗ、ＺおよびＺ′は上述した通りである）の基、好ましくは式IIIの基である〕をｃ）またはｄ）において得られた化合物に導入し、
【００６０】
ｆ）  式IIにおいてＲ1＝Ｈである場合は、既知方法によって、例えば無水酢酸およびＮ−メチルイミダゾールとの反応によってキャッピングし、
【００６１】
ｇ）  次に、分子中に存在する固体の支持体に対するリンカーおよび他の保護基が保持されるようにして、この方法で得られそして支持体上に結合されそして保護されているオリゴヌクレオチドから保護基Ｓ１を既知方法（例えば、Greene, Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis", J. Wiley, New York 1991)により除去し、例えば、Ｓ１＝レブロイルは、ヒドラジンによる処理により除去しそしてＳ１＝パラメトキシフェニルは、好ましくはＣｅIVによる処理による除去、例えば−１０〜１００℃で０.２〜５００分のアセトニトリル／Ｈ2Ｏ中のＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6の０.０５〜１Ｍ溶液による処理、好ましくは０〜５０℃、特に２０〜３０℃で１〜３０分、特に２〜１０分のアセトニトリル／Ｈ2Ｏ（２：１〜８：１、特に４：１）中のＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6の０.０５〜０.５Ｍ、特に０.１Ｍ溶液による処理により除去し、
【００６２】
ｈ）  そして、式〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ｅ(-)（式中、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16およびＥは上述した通りである）の化合物の存在下またはテトラゾールまたは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、好ましくは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下で、特に好ましくは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下で、適当な有機溶剤、好ましくはアセトニトリル中で、この方法で得られた化合物を式XV
【化５６】
0004398517.tif 000031
〔式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ12は上述した意義を有しそしてＺ″は上述したＺの意義を有するかまたはさもなければ既知方法により保護されたＺでありそして好ましく使用される保護基はオリゴヌクレオチド合成において保護基を除去するために使用されている条件下で除去される基、例えばＯ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＮ、Ｏ−ＣＨ3、Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＮまたは
【化５７】
0004398517.tif 000032
のような保護された誘導体にあらねばならない例えばヒドロキシル、メルカプトおよびＳｅＨである〕の化合物と反応させ、
【００６３】
ｉ）  得られた化合物を既知方法により、例えば水性ピリジン、ルチジンまたはコリジンの存在下そして必要に応じて他の有機溶剤、例えばテトラヒドロフランの存在下で沃素と反応させることにより、または例えばアセトニトリル中でＮ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラエチルチウラムジスルフィドと反応させることにより、または例えばアルキルアミンまたはアリールアミンの存在下で沃素と反応させることにより酸化し〔当業者に知られそして天然のおよび変性したオリゴヌクレオチドを製造するために使用される種々な酸化方法は、例えばBeaucageおよびIyer, Tetrahedron 49(1993)1925 & 2223 & 6123；E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274およびE. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90(1990)543に要約されておりそして酸化は、好ましくは水性ピリジン、ルチジンまたはコリジンの存在下そしてまた必要に応じてまた他の有機溶剤、例えばテトラヒドロフランの存在下で沃素と反応させることによって実施される〕、
【００６４】
ｊ）  オリゴヌクレオチドを既知方法によって、例えば５０〜６０℃でＮＨ3によって支持体から除去し、そして同様にホスフェートおよびヌクレオチド塩基上の残った保護基を既知方法によって除去することからなる。
【００６５】
塩基上のアミノ保護基の性質およびリンカーＬｉの性質は、それぞれの場合において、置換分Ｚの性質に依存する。というのは、合成が完了した後問題なく後者を除去することが可能でなければならないからである。例えばイソプロピルオリゴヌクレオチド−３′−ホスフェート（Ｚ＝Ｏ−ｉ−Ｃ3Ｈ7）の製造においては、保護基として、Ｂ＝ＡｄｅおよびＣｙｔに対してはベンゾイル（Ｂｚ）をそしてＢ＝Ｇｕａに対してはイソブチル（ｉ−Ｂｕ）を使用することができる。他方、オリゴヌクレオチド−３′−メチルホスホネート（Ｚ＝ＣＨ3）またはエチルエステル（Ｚ＝Ｏ−Ｃ2Ｈ5）を製造するためには、使用される保護基は、好ましくはＢ＝ＡｄｅおよびＧｕａに対してはより不安定なフェノキシアセチル（ＰＡＣ）そしてＢ＝Ｃｙｔに対してはイソブチリルである。
【００６６】
式IX
【化５８】
0004398517.tif 000033
〔式中Ｓ１、Ｓ２、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａおよびｂは上述した通りであり、そして
Ｒ9およびＲ10は、同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはイソプロピルまたはＣ5〜Ｃ12−シクロアルキル、好ましくはＣ8までのシクロアルキル、ベンジルまたはフェニルであるかまたはこれらが結合している窒素原子と一緒になって、場合によってはさらに追加的な例えばモルホリンのような異種原子およびＯＣ(Ｏ)Ｏ−Ｃ1〜Ｃ4−アルキルエステルのような置換分を有していてもよい飽和または不飽和の複素環式環であり、
Ｒ12は、ＯＲ13またはＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、好ましくはＯＲ13、Ｃ1〜Ｃ6−アルキル、Ｃ1〜Ｃ6−アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ20−アリール、Ｃ6〜Ｃ14−アリール−Ｃ1〜Ｃ8−アルキル、特に好ましくはＯＲ13またはＣ1〜Ｃ6−アルキルであり、
【００６７】
Ｒ13は、式
【化５９】
0004398517.tif 000034
の基またはベンジル基（これは置換されていないかまたは１〜４個の置換分により環置換されておりそしてこの場合において、置換分は、相互に独立して、弗素、塩素、臭素、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボキシル基である）である〕の化合物は、塩基、好ましくはピリジンの存在下またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、クロロホルムおよび（または）アセトニトリルとＣ1〜Ｃ4−トリアルキルアミン、好ましくはトリメチルアミン、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンとの混合物の存在下において、またはＲ11が式ＮＲ9Ｒ10の基である場合は、式
〔ＨＮＲ14Ｒ15Ｒ16〕(+)Ｅ(-)
（式中、Ｒ14、Ｒ15、Ｒ16は、相互に同一または異なりそしてＣ1〜Ｃ4−アルキル基でありそしてＥは、弗素、塩素、臭素特に塩素である）の化合物の存在下またはテトラゾールまたは置換されたテトラゾール、例えば５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾールまたは５−メチルチオ−１Ｈ−テトラゾールまたは５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾールの存在下、好ましくはテトラゾールの存在下において、式VI
【化６０】
0004398517.tif 000035
の化合物を式XX
【化６１】
0004398517.tif 000036
〔式中、Ｒ9、Ｒ10およびＲ12は上述した通りでありそしてＲ11は、塩素または臭素または式ＮＲ9Ｒ10（式中、Ｒ9およびＲ10は上述した通りである）の基である〕の化合物と反応させることによって得ることができる。
【００６８】
ホスホルアミダイト法の代りに、Ｈ−ホスホネート法またはホスホトリエステル法による固相合成〔E. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90(1990)543〕によって、式Ｉおよび式IIの化合物を得ることができる。
【００６９】
Ｈ−ホスホネート法を使用する場合は、反応工程ａ）（式Ｉの化合物の製造）後に得られた式VIの化合物を、既知方法〔例えば、B. Froehler, Tetrahedron Lett. 27(1986)5575〕によって、式XXI
【化６２】
0004398517.tif 000037
（式中、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａ、ｂおよびＷは上述した意義を有する）の化合物に変換する。例としては、適当な有機溶剤、例えばジクロロメタン中における
【化６３】
0004398517.tif 000038
との反応およびその後の加水分解があげられる。Ｈ−ホスホネート法における基Ｚの導入〔式Ｉの化合物に対する反応工程ｉ）および式IIの化合物に対する反応工程ｅ）〕に際しては、塩化ピバロイルまたは塩化アダマントイルのような縮合剤およびピリジンのような塩基の存在下における式XXII
【化６４】
0004398517.tif 000039
(式中、Ｚ″およびＷは上述した意義を有する）の化合物との反応がある。形成されたＨ−ホスホネートジエステルを次に酸化ホスホルアミデーション（oxidative phosphoramidation）(B. Froehler, Tetrahedron Lett. 27, (1986) 5575〕または沃素水、硫黄またはセレニウムによる酸化に付す。この方法で例えば、テトラクロロメタンの存在下でコレステリルオキシカルボニルアミノアルキルアミンを使用して３′−末端コレステリル基を有するオリゴヌクレオチドを製造することができる。２−メトキシエチルアミンによる酸化アミノ化では、例えば、３′−Ｏ−（２−メトキシエチル）ホスホルアミデート基を有するオリゴヌクレオチドが得られる。
【００７０】
トリエステル法においては、反応工程ａ）（式Ｉの化合物の製造）後に得られた式VIの化合物を、既知方法〔例えば、Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274〕によって、式XXIII
【化６５】
0004398517.tif 000040
〔式中、Ｖ、Ｖ′、Ｔ、ａ、ｂおよびＷは上述した意義を有し、そしてＲ17は、トリエステル法において使用されそして当業者に知られている保護基の１種、例えば２,４−ジクロロフェニル(E. Sonveaux, Bioorg. Chem. 14(1986)274)である〕の化合物に変換する。トリエステル法による基Ｚの導入〔式Ｉの化合物に対する反応工程ｉ）および式IIの化合物に対する反応工程ｅ）〕に際しては、縮合剤の存在下における式XXIV
【化６６】
0004398517.tif 000041
（式中、Ｚ、ＷおよびＲ17は上述した通りである）の化合物との反応がある。好ましい縮合試薬は、求核性触媒、例えばイミダゾール、トリアゾールまたはテトラゾールまたはこれらの置換された誘導体、例えばＮ−メチルイミダゾール、３−ニトロトリアゾールまたは５−（ｐ−ニトロフェニル）テトラゾールの存在下におけるアリールスルホニルクロライド、例えばメシチレン−、２,４,６−トリイソプロピルベンゼン−または８−キノリンスルホニルクロライドである。特に好ましい縮合剤は、ピリジンＮ−オキシドまたはキノリンＮ−オキシドの４−置換された誘導体である〔Efimov等、Nucleic Acids Research 13(1985)3651〕。
【００７１】
式Ｉまたは式IIのオリゴヌクレオチド類似体は、遺伝子発現の阻害剤として使用される。
【００７２】
本発明の化合物は、例えばウイルス（ＨＩＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、インフルエンザ、ＶＳＶ、Ｂ型肝炎または乳頭腫ウイルス）により起る疾患の治療用医薬として使用することができる。
【００７３】
本発明により変性されたそしてこのような標的に対して有効であるアンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、例えば次の通りである。
【００７４】
ａ）  ＨＩＶに対して、例えば
5′-ACACCCAATTCTGAAAATGG-3′                  (Ｉ)または
5′-AGGTCCCTGTTCGGGCGCCA-3′                  (II)または
5′-GTCGACACCCAATTCTGAAAATGGATAA-3′          (III)または
5′-GCTATGTCGACACCCAATTCTGAAA-3′             (IV)または
5′-TCGTCGCTGTCTCCGCTTCTTCTTCCTGCCA           (Ｖ)または
5′-CTGTCTCCGCTTCTTCTTCCTGCCATAGGAG-3′       (VI)または
ｂ）  ＨＳＶ−１に対して、例えば
5′-GCGGGGCTCCATGGGGGTCG-3′                  (VII)
【００７５】
本発明の化合物は、また、例えば癌の治療にも適している。この目的に使用することのできるオリゴヌクレオチド配列の例は、癌の発現または癌の増殖の原因である標的に指向するものである。さらに、本発明の医薬は、例えば再狭窄の予防にも適している。この目的に使用することのできるオリゴヌクレオチド配列の例は、増殖または移動の原因である標的に指向するものである。このような標的の例は、次の通りである。
【００７６】
１）  核腫瘍蛋白質、例えばｃ−ｍｙｃ、Ｎ−ｍｙｃ、ｃ−ｍｙｂ、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｆｏｓ／ｊｕｍ、ＰＣＮＡ、ｐ１２０
２）  細胞質／膜−関連腫瘍蛋白質、例えばＥＪ−ｒａｓ、ｃ−Ｈａ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、ｒｒｇ、ｂｃｌ−２、ｃｄｃ−２、ｃ−ｒａｆ−１、ｃ−ｍｏｓ、ｃ−ｓｒｃ、ｃ−ａｂｌ
３）  細胞受容体、例えばＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、ｃ−ｅｒｂＡ、レチノイド受容体、プロテインキナーゼ調節サブユニット、ｃ−ｆｍｓ、ｃｄｃ２キナーゼ
４）  サイトキン、成長因子、細胞外マトリックス、例えばＣＳＦ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ｂＦＧＦ、ＩＧＦ、ミエロブラスチン、フィブロネクチン
【００７７】
本発明により変性されたそしてこのような標的に対して活性であるアンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、例えば次の通りである。
【００７８】
ａ）  ｃ−Ｈａ−ｒａｓに対して、例えば
５′−ＣＡＧＣＴＧＣＡＡＣＣＣＡＧＣ−３′              (VIII)または
ｃ）  ｃ−ｍｙｃ、例えば
５′−ＧＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＧＧＧＧＣＡＣＡＣ−３′  (IX)または
５′−ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ−３′              (Ｘ)または
ｄ）ｃ−ｍｙｂ、例えば
５′−ＧＴＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴＴＣＧＧＧＣ−３′        (XI)または
【００７９】
ｅ）  ｃ−ｆｏｓ、例えば
５′−ＧＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＴＧＧＴＣＧＡＡＡＧ−３′  (XII)または
５′−ＣＣＣＧＡＧＡＡＣＡＴＣＡＴＧＧＴＣＧＡＡＧ−３′(XIII)または
５′−ＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＧＧ−３′    (XIV)または
ｆ）  ｐ１２０、例えば
５′−ＣＡＣＣＣＧＣＣＴＴＧＧＣＣＴＣＣＣＡＣ−３′    (XV)または
ｇ）  ＥＧＦ受容体、例えば
５′−ＧＧＧＡＣＴＣＣＧＧＣＧＣＡＧＣＧＣ−３′        (XVI)または
５′−ＧＧＣＡＡＡＣＴＴＴＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣ−３′    (XVII)または
ｈ）  ｐ５３ tumor suppressor、例えば
５′−ＧＧＧＡＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧ−３′      (XVIII)または
５′−ＧＧＣＡＧＴＣＡＴＣＣＡＧＣＴＴＣＧＧＡＧ−３′  (XIX)
【００８０】
さらに、本発明の化合物は、インテグリンまたは細胞−細胞接着受容体、例えばＶＬＡ−４、ＶＬＡ−２、ＩＣＡＭまたはＥＬＡＭに影響される疾患の治療に適している。
【００８１】
本発明により変性されたそしてこのような標的に対して活性であるアンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、例えば次の通りである。
ａ）  ＶＬＡ−４、例えば
５′−ＧＣＡＧＴＡＡＧＣＡＴＣＣＡＴＡＴＣ−３′        (XX)または
ｂ）  ＩＣＡＭ、例えば
５′−ＣＣＣＣＣＡＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＴＣＴＣ−３′    (XXI)または
５′−ＣＴＣＣＣＣＣＡＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＴＣ−３′    (XXII)または
５′−ＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＡＴＡＧＣＧＡＧＧ−３′      (XXIII)または
ｃ）  ＥＬＡＭ−１、例えば
５′−ＡＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＴＧＴＣＴＣＡＧＧ−３′  (XXIV)
【００８２】
さらに、式Ｉまたは式IIのオリゴヌクレオチド類似体は、核酸を検出するプローブとしてまたは分子生物学における補助剤として使用することができる。
【００８３】
さらに、本発明は、必要に応じて生理学的に許容し得る補助物質および（または）ベヒクルと一緒にそして（または）他の既知の活性物質と一緒に、式Ｉまたは式IIのオリゴヌクレオチド類似体の１種または２種以上を含有する医薬組成物およびその製法に関するものである。
【００８４】
【実施例】
(１)  ４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルエーテルの合成
(１ａ)  ２,２−ジメチル−４−ヒドロキシブチル−１,３−ジオキソラン
１,２,６−ヘキサントリオール１５ｇ（１１２ミリモル）を、ＦｅＣｌ3 ０.５ｇと一緒に、アセトン１リットルに溶解し７時間還流下で沸騰した。混合物を濾過し、過剰のアセトンを蒸留によって除去して、純粋な形態で生成物を得た。収量：１８.８ｇ（９６％）
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.35(s, 3H, CH3); 1.40(s, 3H, CH3); 1.30-1.40(m, 6H, -(CH2)3-); 3.52(t, 1H, C4-H); 3.68(t, 2H, CH2-OH); 4.00-4.20(m, 2H, -C5H2-);
MS(EI): m/e=175(M+H+, 50％); 159(30％)
【００８５】
(１ｂ)  ４−メトキシフェニル４−（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）ブチルエーテル
実施例(１ａ)からの２,２−ジメチル−４−ヒドロキシブチル−１,３−ジオキソラン１.７４ｇ（１０ミリモル）、トリフェニルホスフィン３.４１ｇ（１３ミリモル）、アゾジカルボン酸ジエチル２.２６ｇ(１３ミリモル）および４−メトキシフェノール３.７２ｇ（３０ミリモル）を、無水のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）３０mlに溶解し１時間還流下で沸騰した。溶剤を蒸留により除去し残留物を、酢酸エチル（ＥＡ）／ｎ−ヘプタン（１：４）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理した。
収量：２.１ｇ（７４％）
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.35(s, 3H, CH3); 1.41(s, 3H, CH3); 1.45-1.90(m, 6H, -(CH2)3-); 3.53(t, 1H, C4′-H); 3.77(s, 3H, O-CH3); 3.92(t, 2H, CH2-OAr); 3.99-4.21(m, 2H, -C5′H2-); 6.84(s, 4H, Ar-H);
MS(EI): m/e=280(M+H+, 90％); 265(50％); 223(100％)
【００８６】
(１c)  ４−メトキシフェニル５,６−ジヒドロキシヘキシルエーテル
実施例(１ｂ)からの４−メトキシフェニル４−（２,２−ジメチルジオキソラン−４−イル）ブチルエーテル２.０８ｇを、８０％酢酸１６５mlに溶解し室温で４時間撹拌した。酢酸を真空中で分離し、混合物をトルエン／メタノールを使用して２回共蒸発した。これによって、結晶性生成物を得た。
収量：１.１５ｇ（６５％）、融点６９℃
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.40-1.91(m, 6H, -(CH2)3-); 3.39-3.52(m, 1H, C5-H); 3.42-3.74(m, 2H, C6H2); 3.77(s, 3H, O-CH3); 3.93(t, 2H, CH2-OAr); 6.82(s, 4H, Ar-H);
MS(EI): m/e=241(M+H+, 60％); 240(M+, 100％); 223(30％), 205(30％)
【００８７】
(１ｄ)  ４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−ヒドロキシヘキシルエーテル
実施例(１ｃ)からの４−メトキシフェニル５,６−ジヒドロキシヘキシルエーテル１.９６ｇ（８.２ミリモル）および４−メトキシトリフェニルメチルクロライド２.７８ｇ（９.０ミリモル）を、無水のピリジン３０mlに溶解し室温で３時間撹拌した。ピリジンを真空中で蒸発し、残留物をジクロロメタン（ＤＣＭ）４０mlにとり、はじめに５％ＮａＨＣＯ3溶液４０ml、それから飽和ＮａＣｌ溶液４０mlで抽出し、水で２回洗浄した。溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶剤を蒸留により除去し、残留物を、ＥＡ／ｎ−ヘプタン（１：２）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理した。
収量：３.１０ｇ（７４％）
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.37-1.80(m, 6H, -(CH2)3-); 2.30(d, J=5Hz, 1H, C5-H); 3.00-3.23(m, 2H, CH2-OMMTr); 3.73(s, 3H, O-CH3); 3.80(s, 3H, O-CH3); 3.88(t, 2H, CH2-OAr); 6.80(s, 4H, Ar-H); 7.15-7.47(m, 14H, Ar-H);
MS(ES+, + LiCl): m/e=519(M+Li+, 100％)
【００８８】
(１ｅ)  ４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルエーテル
実施例(１ｄ)からの４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−ヒドロキシヘキシルエーテル３.１ｇ（６.０５ミリモル）を、無水コハク酸０.８５ｇ（８.４７ミリモル）およびＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）１.０４ｇ（８.４７ミリモル）と一緒に、無水のピリジン２０mlに溶解し、室温で１９時間撹拌した。溶剤を、真空中で蒸発した。それから、それをトルエン／メタノールを使用して２回共蒸発し、残留物をＤＣＭ ２８０mlにとり、１０％クエン酸１４０mlでそして２回水で洗浄しそして硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を蒸留により除去し、残留物を、ＥＡ／ｎ−ヘプタン（２：１）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理した。
収量：２.５５ｇ（６９％）
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.27-1.49(m, 2H, C2H2); 1.60-1.82(m, 4H, C1H2 & C3H2); 2.66(s, 4H, CO-(CH2)2-CO); 3.15(d, 2H, CH2-OMMTr); 3.75(s, 3H, O-CH3); 3.78(s, 3H, O-CH3); 3.89(t, 2H, CH2-OAr); 5.12(dt, 1H, CH-Osucc); 6.80(s, 4H, Ar-H); 7.11-7.52(m, 14H, Ar-H);
MS(FAB+LiCl): m/e=625.3(M+2Li+-H+, 100％); 619.2(M+Li+, 70％); 612.2(M+, 100％)
【００８９】
(２)  ４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−ジイソプロピルアミノ−β−シアノエトキシホスフィノヘキシルエーテルの合成
実施例(１ｄ)からの４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−ヒドロキシヘキシルエーテル５１２mg(１.０ミリモル）を、無水のアセトニトリルを使用して、ジイソプロピルエチルアミン３９０mg(３.０ミリモル)と一緒に共蒸発し無水のＴＨＦ ４mlに溶解した。保護ガス下において、シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホルアミダイト３３０mg（１.４ミリモル）を、徐々に滴加した。混合物を室温で２時間撹拌した。溶剤を蒸発し、残留物をＥＡ ２０mlにとり、飽和ＮａＣｌ溶液４０mlで抽出した。それから、有機相を水で２回洗浄し、次に硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を蒸留により除去し、残留物を、ＤＣＭ／エタノール／トリエチルアミン(ＴＥＡ)(１００：４：２）を使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理した。
収量：５２０mg
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.00-1.93(m, 18H, -(CH2)3- & 4×CH3); 2.38 & 2.57(それぞれ：t, 1H, CH2-CN); 2.92-3.26(m, 2H, P-O-CH2); 3.45-4.20(m, 13H, 2×OCH3 & 2×CH(CH3)2 & CH2-OAr & CH2-O-MMTr & C5H); 6.70-6.87(s, 4H, Ar-H); 7.14-7.32(m, 14H, Ar-H);
MS(FAB, LiCl; NBA): m/e=735.5(M+Na+, 100％); 719.5(M+Li+, 50％)
【００９０】
(３)  ４−メトキシフェニル３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−Ｏ−サクシニルプロピルエーテルの合成
(３ａ)  ４−メトキシフェニル（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）メチルエーテル
実施例(１ｂ)と同様にして、２,２−ジメチル−４−ヒドロキシメチル−１,３−ジオキソランから合成を行なった。
収率：５６％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.40(s, 3H, CH3); 1.44(s, 3H, CH3); 3.78(s, 3H, O-CH3); 3.89(dd, 2H, CH2-OAr); 3.97-4.21(m, 2H, -C3H2-); 4.45(dt, 1H, C2H); 6.83(s, 4H, Ar-H);
MS(EI): m/e=239(M+H+, 40％); 238(M+, 50％)
【００９１】
(３ｂ)  ４−メトキシフェニル２,３−ジヒドロキシプロピルエーテル
実施例(１ｃ)と同様にして、４−メトキシフェニル（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）メチルエーテル（実施例(３ａ)）から合成を行なった。
収率：９８％
MS(EI): m/e=199(M+H+, 100％); 198(M+, 80％); 181(40％); 163(70％)
(３ｃ)  ４−メトキシフェニル３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−ヒドロキシプロピルエーテル
実施例(１ｄ)と同様にして、４−メトキシフェニル２,３−ジヒドロキシプロピル−エーテル（実施例(３ｂ)）から合成を行なった。
収率：４６％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=3.3.31(d, 2H, CH2-OMMTr); 3.77(s, 3H, O-CH3); 3.79(s, 3H, O-CH3); 3.96-4.20(m, 3H, O-CH2-CH); 6.76-6.90(m, 4H, Ar-H); 7.15-7.55(m, 14H, Ar-H);
MS(FAB+LiCl): m/e=477.2(M+Li+, 20％); 470.2(M+, 10％)
【００９２】
(３ｄ)  ４−メトキシフェニル３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−Ｏ−サクシニルプロピルエーテル
実施例(１ｅ)と同様にして、４−メトキシフェニル３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−ヒドロキシプロピルエーテル（実施例(３ｃ)）から合成を行なった。
収率：９８％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=2.63(s, 4H, CO-(CH2)2-CO); 3.31-3.40(m, 2H, CH2-OMMTr); 3.76(s, 3H, O-CH3); 3.79(s, 3H, O-CH3); 4.04-4.10(m, 2H, CH2-O-MOP); 5.35(dt, 1H, CH-Osucc); 6.79(s, 4H, Ar-H); 7.15-7.47(m, 14H, Ar-H);
MS(FAB+LiCl): m/e=583.3(M+2Li+-H+, 40％); 577.3(M+Li+, 100％)
【００９３】
(４)  ６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルレブリネートの合成
(４ａ)  ４−（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）ブチルレブリネート
(１ａ)からの２,２−ジメチル−４−ヒドロキシブチル−１,３−ジオキソラン０.８１ｇ(５ミリモル）を無水のアセトニトリルとともに２回共蒸発し、無水レブリン酸１.５ｇ（７ミリモル）およびジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）０.８６ｇ（７ミリモル）と一緒に、無水のピリジンに溶解し、室温で１５時間撹拌した。溶剤を真空中で蒸発し、トルエンとの３回の共蒸発を実施した。残留物をＥＡにとり有機相を飽和ＮａＣｌ溶液および水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を蒸発し、残留物をＥＡを使用してシリカゲル上でクロマトグラフィー処理した。
収量：０.６５ｇ（４８％）
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.37(s, 3H, CH3); 1.41(s, 3H, CH3); 1.42-1.75(m, 6H, -(CH2)3-); 2.19(s, 3H, CH3-CO); 2.49-2.82(m, 4H, COCH2CH2CO); 3.45-3.58(m, 1H, C4′-H); 3.97-4.16(m, 4H, -C5′H2- & CH2-OCO);
MS(EI): m/e=273(M+H+, 45％); 257(35％)
【００９４】
(４ｂ)  ５,６−ジヒドロキシヘキシルレブリネート
実施例(１ｃ)と同様にして、４−（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）ブチルレブリネート（実施例(４ａ)）から合成を行なった。
収率：９０％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.37-1.75(m, 6H, -(CH2)3-); 2.20(s, 3H, CH3-CO); 2.47-2.82(m, 4H, COCH2CH2CO); 3.39-3.52(dd, 1H, CH-OH); 3.60-3.79(m, 2H, CH2-OH); 4.11(t, 2H, CH2-OLev);
MS(EI): m/e=233(M+H+, 20％); 215(15％)
【００９５】
(４ｃ)  ６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−ヒドロキシヘキシルレブリネート
実施例(１ｄ)と同様にして、５,６−ジヒドロキシヘキシルレブリネート（実施例(４ｂ)）から合成を行なった。
収率：４０％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.22-1.70(m, 6H, -(CH2)3-); 2.19(s, 3H, CH3-CO); 2.48-2.79(m, 4H, COCH2CH2CO); 2.97-3.21(m, 2H, CH2-OMMTr); 3.79(s, 3H, OCH3); 3.68-3.82(m, 1H, CH-OH); 4.03(t, 2H, CH2-OLev); 6.80-7.48(m, Ar-H, 14H);
MS(ES++LiCl): m/e=511(M+Li+, 100％)
【００９６】
(４ｄ)  ６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルレブリネート
実施例(１ｅ)と同様にして、６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−ヒドロキシヘキシルレブリネート（実施例(４ｃ)）から合成を行なった。
収率：８０％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): d=1.20-1.72(m, 6H, -(CH2)3-); 2.19(s, 3H, CH3-CO); 2.49-2.80(m, 8H, 2×COCH2CH2CO); 3.15(d, 2H, CH2-OMMTr); 3.79(s, 3H, OCH3); 4.03(t, 2H, CH2-OLev); 5.15(m, 1H, CH-OSucc); 6.79-7.50(m, Ar-H, 14H);
MS(ES++LiCl): m/e=627(M+Na+, 20％); 611(M+Li+, 50％)
【００９７】
(５)  アミノプロピル−ＣＰＧに４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルエーテルを負荷することによる式VIII−１の支持体の製造
４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルエーテル（実施例１から）１２３mg（２０ミリモル）を、無水アセトニトリルとともに２回共蒸発し、Ｏ−（１−ベンゾトリアゾリル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）７.１mg（２２ミリモル）およびＮ−エチルモルホリン３.２mg（２８ミリモル）と一緒に、無水のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）０.７５mlに溶解した。Flukaにより供給されたアミノプロピル−ＣＰＧ（０.１ミリモル／ｇ，５５０Ａ）１００mgを、この溶液に加え、懸濁液を室温で７時間振盪した。誘導化された支持体を吸引濾去し、メタノール、ＤＭＦ、ＴＨＦ、アセトニトリル、再びメタノールおよび塩化メチレンで洗浄し、真空中４０℃で１時間乾燥した。モノメトキシトリチル−含有成分による支持体の負荷は、１２.２ミリモル／ｇであった。反応性基は、キャッピング試薬（無水酢酸／２,６−ルチジン／１−メチルイミダゾール；それぞれＴＨＦ中０.２５Ｍ）を使用してＤＮＡ合成器中でキャッピングし次いでアセトニトリルで洗浄した。
【００９８】
(６)  アミノプロピル−ＣＰＧに４−メトキシフェニル（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）メチルエーテルを負荷することによる式VIII−２の支持体の製造
実施例（５）と同様にして、４−メトキシフェニル（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）メチルエーテル（実施例３から）を使用して製造した。モノメトキシトリチル−含有成分による支持体の負荷は、３６.７ミリモル／ｇであった。
【００９９】
(７)  アミノプロピル−ＣＰＧに６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルレブリネートを負荷することによる式VIII−３の支持体の製造
実施例５と同様にして、６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルレブリネート（実施例４から）を使用して製造した。モノメトキシトリチル−含有成分による支持体の負荷は、１４.３ミリモル／ｇであった。
【０１００】
(８)  テンタゲル（TentagelR）に４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルエーテルを負荷することによる式VIII−４の支持体の製造
４−メトキシフェニル６−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−５−Ｏ−サクシニルヘキシルエーテル（実施例１から）３０６mg（０.５ミリモル）を、無水のアセトニトリルとともに２回共蒸発し、無水のＴＨＦ １.２５mlおよび無水のピリジン６５mlの混合物に溶解した。それから、無水のＴＨＦ ０.３５ml中の４−ニトロフェノール７０mg（０.５ミリモル）およびジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ）１１５mg（０.５５ミリモル）の溶液を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応が完了した後、沈殿したジシクロヘキシル尿素を遠心分離により除去した。沈殿物を、エーテル１mlに再懸濁し再び遠心分離した。テンタゲル樹脂（１７５ミリモル／ｇのアミノ官能性を有するＰＳ／ＰＯＥ共重合体）２００mgを、無水のＤＭＦ ０.７mlおよびＴＥＡ ０.１４mlの混合物に懸濁し、上述したようにして得られた４−ニトロフェニルサクシネート溶液を加え、混合物を室温で１７時間振盪した。吸引濾過し次いで実施例（５）に記載したように処理した。モノメトキシトリチル−含有成分による支持体の負荷は、２８.７ミリモル／ｇであった。
【０１０１】
オリゴヌクレオチド合成：オリゴヌクレオチドは、初期にブタノール沈殿（Sawadogo, Van Dyke, Nucl. Acids Res. 19 (1991) 674)により精製する。次に、エタノール２.５容量部を使用して０.５Ｍ ＮａＣｌ溶液から沈殿することによってナトリウム塩を得る。
【０１０２】
オリゴヌクレオチドは、
(ａ)  ２０％アクリルアミド中の分析用ゲル電気泳動、８Ｍ尿素、４５４Ｍトリス−ボレート緩衝液（pH７.０）および（または）
(ｂ)  ＨＰＬＣ分析：Waters GenPak FAX、勾配ＣＨ3ＣＮ（４００ml）、Ｈ2Ｏ（１.６リットル）、ＮａＨ2ＰＯ4（３.１ｇ）、ＮａＣｌ（１１.７ｇ）、pH６.８（ＮａＣｌにおいて０.１Ｍ）〜ＣＨ3ＣＮ（４００ml）、Ｈ2Ｏ（１.６リットル）、ＮａＨ2ＰＯ4（３.１ｇ）、ＮａＣｌ（１７５.３ｇ）、pH６.８（ＮａＣｌにおいて１.５Ｍ）および（または）
(ｃ)  毛管ゲル電気泳動、Beckmann ｅＣＡＰTMキャピラリー、Ｕ１００Ｐゲルカラム、長さ６５cm、内径１００mm、窓−末端から１５cm、緩衝液１４０μＭトリス、３６０mMホウ酸、７Ｍ尿素および（または）
(ｄ)  エレクトロスプレー質量分光法
によって分析する。
【０１０３】
(９)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−（Ｏ−メトキシフェニル）
の製造
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−（４−メトキシフェニル）；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(８)からの支持体VIII−４ ０.２ミクロモルを、順次次の試薬で処理する：
１. 無水のアセトニトリル
２. ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸
３. 無水のアセトニトリル
４. 無水のアセトニトリル０.１５ml中の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−３′−亜燐酸β−シアノエチルエステルジイソプロピルアミド４ミクロモルおよびテトラゾール２５ミクロモル
５. アセトニトリル
６. ４０％のルチジンおよび１０％のジメチルアミノピリジンを有するＴＨＦ中の２０％無水酢酸
７. アセトニトリル
８. 沃素（ｖ：ｖ：ｖで７０：２０：５のＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2）
以下一反応サイクルと称する工程１〜８を７回反復してオクタチミジレート誘導体を組み立てる。
(ｂ)  合成が完了した後、ジメトキシトリチル基を、工程１〜３に記載したようにして除去する。
(ｃ)  アンモニアで１.５時間処理して、オリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。オリゴヌクレオチドはアミノ保護基を含有していないので、さらにアンモニア処理は必要でない。
【０１０４】
(１０)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
ＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐＴｐ−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−(ＯＨ)
の製造
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝ＯＨ；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして、製造を行う。
(ｂ)  合成が完了した後、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ基）を、工程１〜３に記載したようにして除去する。次に、４−メトキシフェニル基（ＭＯＰ基）を、アセトニトリル／Ｈ2Ｏ（４：１）中の０.１Ｍ ＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6で室温で５分処理することにより除去する。
(ｃ)  アンモニアで１.５時間処理して、オリゴヌクレオチドを支持体から開裂しそして同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１０５】
(１１)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−(Ｏ−(ＣＨ2)4−ピレン)
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−（−(ＣＨ2)4−ピレン）；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  合成が完了した後、ジメトキシトリチル基を、工程１〜３に記載したようにして除去する。次に、得られた遊離の５′−ヒドロキシル基を、工程６および７に記載したようにしてキャッピングする。次に４−メトキシフェニル基を、アセトニトリル／Ｈ2Ｏ（４：１）中の０.１Ｍ ＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6で室温で５分処理することにより除去する。
【０１０６】
(ｃ)  ３′末端における４−（１−ピレニル）ブチルホスホジエステルの導入は、J.S. Mann等、Bioconj. Chem. 3 (1992) 554に記載されているように、無水のアセトニトリル０.１５ml中の４−（１−ピレニル）ブチル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理し、その後アセトニトリルで洗浄することによって行う。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化する。
(ｅ)  アンモニアで１.５時間処理して、オリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１０７】
(１２)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−(Ｏ−(ＣＨ2)4−ピレン）
の製造、支持体VIII−１から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ（−(ＣＨ2)4−ピレン）；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
製造は、支持体VIII−１を使用する以外は、実施例(９ａ)と同様にして行う。
【０１０８】
(１３)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−(Ｏ−(ＣＨ2)11ＣＨ3）
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−(ＣＨ2)11ＣＨ3)；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したようにして＜ＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングしそしてＭＯＰ基を除去する。
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中のドデシル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理し次にアセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化する。
(ｅ)  アンモニアで１.５時間処理してオリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１０９】
(１４)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−(Ｏ−(ＣＨ2)13ＣＨ3）
の製造、支持体VIII−１から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−(ＣＨ2)13ＣＨ3)；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したようにして、ＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングしそしてＭＯＰを除去する。
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中のテトラデシル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ＝ｖ＝ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化する
(ｅ)  アンモニアで１.５時間処理して、オリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１１０】
(１５)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)−(Ｏ−３′−Ｔ−ＯＤＭＴｒ)
の製造、支持体VIII−２から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−３′−Ｔ−ＯＤＭＴｒ；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝０
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したようにＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングしＭＯＰ基を除去する。
【０１１１】
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−３′−亜燐酸β−シアノエチルエステルジイソプロピルアミド４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミリモルで処理しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化する。
(ｅ)  アンモニアで１.５時間処理してオリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１１２】
(１６)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−(ＣＨ2)4−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)−(Ｏ−(ＣＨ2)13ＣＨ3)
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合においてβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−（４−メトキシフェニル）；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ａ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ｂ＝３
(ａ)  実施例(８)からの支持体VIII−４ ０.２ミクロモルを順次、次の試薬で処理する。
【０１１３】
１. 無水のアセトニトリル
２. ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸
３. 無水のアセトニトリル
４. 無水のアセトニトリル０.１５ml中のテトラデシル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモル
５. アセトニトリル
６. 室温で５分のアセトニトリル／Ｈ2Ｏ（４：１）中の０.１Ｍ ＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6
【０１１４】
７. アセトニトリル
８. 無水のアセトニトリル０.１５ml中の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−３′−亜燐酸β−シアノエチルエステルジイソプロピルアミド４ミクロモルおよびテトラゾール２５ミクロモル
９. アセトニトリル
１０. ４０％のルチジンおよび１０％のジメチルアミノピリジンを有するＴＨＦ中の２０％無水酢酸
１１. アセトニトリル
１２. 沃素（７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中１.３ｇ）
１３. アセトニトリル
１４. ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸
以下一反応サイクルと称する工程７〜１４を７回反復してオクタチミジレート誘導体を組み立てる。
(ｂ)  ６０℃でアンモニアで１２時間処理してオリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１１５】
(１７)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
GpGpApCpCpGpApApGpGp-(ＣＨ2)4-ＣＨ(ＯＨ)-ＣＨ2-(Ｏ-(ＣＨ2)13-ＣＨ3)
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合においてβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−（４−メトキシフェニル）；ｎ＝１０；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ａ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ｂ＝３
適当な塩基の関係する３′−亜燐酸β−シアノエチルエステルジイソプロピルアミドを工程８において使用する以外は、実施例(１６)と同様にして合成を行う。
【０１１６】
(１８)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−(ＣＨ2)4−ＣＨ(ＯＨ)ＣＨ2−(Ｏ−(ＣＨ2)13ＣＨ3)
の製造、支持体VIII−３から出発
単量体は、それぞれの場合においてβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−（４−メトキシフェニル）；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ａ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ｂ＝３
工程６を、３０分の酢酸／ピリジン（２：３）中の０.５Ｍヒドラジン水和物による処理によって置換する以外は、実施例(１６)と同様にして合成を行う。
【０１１７】
(１９)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−（Ｏ−アクリジン）
の合成、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合においてβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝アクリジン；この場合、アクリジンは、６−（２−メトキシ−６−クロロ−９−アクリジニルアミノ）−２−ヒドロキシメチルヘクスオキシである；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したようにしてＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングし、ＭＯＰ基を除去する。
【０１１８】
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中の６−（２−メトキシ−６−クロロ−９−アクリジニルアミノ）−２−ジメトキシトリチルオキシメチル−１−（２−シアノエトキシ−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィノ）ヘキサン（Glen Researchから）４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｅ)  ＤＭＴｒ基を除去する。
(ｆ)  アンモニアで１.５時間処理してオリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１１９】
(２０)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−（Ｏ−ビオチン）
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合においてβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝ビオチン；この場合において、ビオチンは、６−ビオチンアミド−５−ヒドロキシメチルヘクスオキシである；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したようにしてＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングし、そしてＭＯＰ基を除去する。
【０１２０】
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中の６−ビオチンアミド−５−ジメトキシトリチルオキシメチルヘキシル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（Glen Researchから）４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理し次にアセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化しそしてアセトニトリルで洗浄する。
(ｅ)  ＤＭＴｒ基を除去する。
(ｆ)  アンモニアで１.５時間処理してオリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１２１】
(２１)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−（Ｏ−ＴＥＧビオチン）
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合においてβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝ＴＥＧビオチン；この場合において、ＴＥＧビオチンは、１６−ビオチン−アミド−４,７,１０,１３−テトラオキシ−１−ヒドロキシ−２−ヘキサデクオキシである；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したようにしてＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングし、ＭＯＰ基を除去する。
【０１２２】
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中の１６−ビオチンアミド−４,７,１０,１３−テトラオキシ−１−ジメチルトリチルオキシ−２−ヘキサデシル２−シアノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（Glen Researchから）４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理しそし後アセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｅ)  ＤＭＴｒ基を除去する。
(ｆ)  アンモニアで１.５時間処理してオリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１２３】
(２２)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−（Ｏ−コレステロール）
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝コレステロール；この場合において、コレステロールは、１６−コレステリルアミノ−４,７,１０,１３−テトラオキシ−１−ヒドロキシ−２−ヘキサデクオキシである；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したようにしてＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングし、ＭＯＰ基を除去する。
【０１２４】
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中の１６−コレステリルアミノ−４,７,１０,１３−テトラオキシ−１−ジメトキシトリチルオキシ−２−ヘキサデシル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（Glen Researchから）４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｅ)  ＤＭＴｒを除去する。
(ｆ)  アンモニアで１.５時間処理してオリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１２５】
(２３)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)4−（Ｏ−プソラレン）
の製造、支持体VIII−４から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝プソラレン；この場合において、プソラレンは、２−〔４′−（ヒドロキシメチル）−４,５′,８−トリメチルプソラレン〕エチルである；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝３
(ａ)  実施例(９ａ)と同様にして製造を行う。
(ｂ)  実施例(１１ｂ)に記載したように、ＤＭＴｒ基を除去し、キャッピングし、ＭＯＰ基を除去する。
【０１２６】
(ｃ)  無水のアセトニトリル０.１５ml中の２−〔４′−（ヒドロキシメチル）−４,５′,８−トリメチルプソラレニル〕エチル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（Glen Researchから）４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモルで処理しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｄ)  ７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2で酸化しその後アセトニトリルで洗浄する。
(ｅ)  アンモニアで１.５時間処理して、オリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。
【０１２７】
(２４)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
TpTpTpTpTpTpTpTp−ＣＨ2−ＣＨ(ＯＨ)(ＣＨ2)−（Ｏ−(ＣＨ2)13ＣＨ3）
の製造、支持体VIII−２から出発
単量体はそれぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−(ＣＨ2)13ＣＨ3；ｎ＝８；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝０
【０１２８】
(ａ)  実施例(６)からの支持体VIII−２ ０.２ミクロモルを順次に次の試薬で処理する。
１. 無水のアセトニトリル
２. ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸
３. 無水のアセトニトリル
４. 無水のアセトニトリル０.１５ml中のテトラデシル２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト４ミクロモルおよびメチルチオ−１Ｈ−テトラゾール２５ミクロモル
５. アセトニトリル
６. ４０％のルチジンおよび１０％のジメチルアミノピリジンを有するＴＨＦ中の２０％無水酢酸
７. アセトニトリル
８. 沃素（７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中０.１Ｍ Ｉ2）
９. アセトニトリル／Ｈ2Ｏ（４：１）中の０.１Ｍ ＣｅIV(ＮＨ4)2(ＮＯ3)6（実施例(１１ｂ)参照）
１０. アセトニトリル
【０１２９】
(ｂ)  そしてその後、次の試薬で処理する。
１. 無水のアセトニトリル０.１５ml中の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−３−亜燐酸β−シアノエチルエステルジイソプロピルアミド ４ミクロモルおよびテトラゾール ２５ミクロモル
２. アセトニトリル
３. ４０％のルチジンおよび１０％のジメチルアミノピリジンを有するＴＨＦ中の２０％無水酢酸
４. アセトニトリル
５. 沃素（７０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖのＴＨＦ／水／ピリジン中の０.１Ｍ Ｉ2）
６. 無水のアセトニトリル
７. ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸
８. 無水のアセトニトリル
以下一反応サイクルと称する工程１〜８を７回反復して、オクタチミジレート誘導体を組み立てる。
【０１３０】
(ｃ)  アンモニアで１.５時間処理して、オリゴヌクレオチドを支持体から開裂し同時にβ−シアノエチル基を除去する。オリゴヌクレオチドはアミノ保護基を含有していないので、さらにアミノ処理は必要でない。
【０１３１】
(２５)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
CpApCpGpTpTpGpApGpGpGpGpCpApTp-CH2-CH(OH)(CH2)-(O-(CH2)13CH3)
の製造、支持体VIII−２から出発
単量体は、それぞれの場合においてβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2−Ｈ；Ｚ＝Ｏ−(ＣＨ2)13ＣＨ3；ｎ＝１５；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝０
工程ｂ１において適当な標準の５′−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン−保護された３′−（２−シアノエチル）−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトヌクレオシドを使用する以外は、実施例２４と同様にして合成を行う。アンモニアで１.５時間処理して、オリゴヌクレオチドを支持体から開裂し脱保護を６０℃で１６時間のアンモニアによる処理により行なった。
【０１３２】
(２６)  式Ｉのオリゴヌクレオチド：
CpApCpGpTpTpGpApGpGpGpGpCpApTp-CH2-CH(OH)(CH2)-（Ｏ−ビタミンＥ）
の製造、支持体VIII−２から出発
単量体は、それぞれの場合において、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである；Ｒ1＝Ｒ2＝Ｈ；Ｚ＝Ｏ−ビタミンＥ；ｎ＝１５；ｍ＝ｍ′＝ｎ′＝ｂ＝０；Ａ＝Ｖ＝Ｗ＝Ｕ＝Ｘ＝Ｙ＝Ｔ＝オキシ；ａ＝０
工程ａ４においてビタミンＥ ２−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトを使用する以外は、実施例２４と同様に合成を行う。
【０１３３】
(２７)  ３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−Ｏ−サクシニルプロピルレブリネートの合成
(２７ａ)  （２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）メチルレブリネート
実施例(４ａ)と同様にして２,２−ジメチル−４−ヒドロキシメチル−１,３−ジオキソランから合成する。収率：７１％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): δ=1.38(s, 3H, CH3); 1.42(s, 3H, CH3); 2.19(s, 3H, CH3-CO); 2.51-2.82(m, 4H, COCH2CH2CO); 3.75(dd, 1H, C4′-H); 4.01-4.39(m, 4H, -C5′H2- & CH2-OCO)
【０１３４】
(２７ｂ)  ２,３−ジヒドロキシプロピルレブリネート
(１ｃ)と同様にして、（２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４−イル）メチルレブリネート(２７ａ)から合成する。収率：９０％
1H-NMR(200 MHz, CDCl3/TMS): δ=2.20(s, 3H, CH3-CO); 2.60, 2.28(それぞれt, 4H, COCH2CH2CO); 3.54-3.80(m, 2H, CH2-OH); 3.80(t, 1H, OH); 3.95(m, 1H, CH-OH); 4.21(d, 2H, CH2-OLev)
【０１３５】
(２７ｃ)  ３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−ヒドロキシプロピルレブリネート
(１ｄ)と同様にして、２,３−ジヒドロキシプロピルレブリネート(２４ｂ)から合成する。収率：２０％
(２７ｄ)  ３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−Ｏ−サクシニルプロピルレブリネート
(１ｅ)と同様にして、３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−ヒドロキシプロピルレブリネート(２７ｃ)から合成する。収率：５１％
MS(FAB/LiCl): m/e=599.3(M+Li+)
【０１３６】
(２８)  アミノプロピル−ＣＰＧに３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−Ｏ−サクシニルプロピルレブリネートを負荷することによる式VIII−５の支持体の製造
３−Ｏ−（４−メトキシトリフェニルメチル）−２−Ｏ−サクシニルプロピルレブリネート（実施例(２７)から）を使用して、実施例(５)と同様にして製造する。モノメトキシトリチル−含有成分による支持体の負荷は、２４.７ミクロモル／ｇであった。