(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液中の溶存酸素量、および測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極（１ａ）（２ａ）を用いて検出することにより薬剤感受性を測定する方法であって、
両酸素電極（１ａ）（２ａ）からの出力信号を、第１の所定時間の間、第２の時間間隔で収集し、各酸素電極（１ａ）（２ａ）からの各出力信号を、その前後の所定個数の出力信号を用いて移動平均化し、移動平均化された各出力信号の時間微分値を算出し、この両時間微分値を用いて薬剤感受性を測定することを特徴とする薬剤感受性測定方法。
【請求項２】
測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液中の溶存酸素量、および測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極（１ａ）（２ａ）を用いて検出することにより薬剤感受性を測定する装置であって、
両酸素電極（１ａ）（２ａ）からの出力信号を、第１の所定時間の間、第２の時間間隔で収集する収集手段（３）（４）と、収集された各酸素電極（１ａ）（２ａ）からの各出力信号を、その前後の所定個数の出力信号を用いて移動平均化する移動平均化手段（５）（６）と、移動平均化された各出力信号の時間微分値を算出する時間微分値算出手段（７）（８）と、算出された両時間微分値を用いて薬剤感受性を測定する感受性測定手段（９）とを含むことを特徴とする薬剤感受性測定装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は薬剤感受性測定方法およびその装置に関し、さらに詳細にいえば、測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液中の溶存酸素量、および測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極を用いて検出することにより薬剤感受性を測定する方法およびその装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来から、酸素電極を用いて溶存酸素量を検出することによって薬剤感受性を測定する方法として、次の方法が提案されている。
【０００３】
測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液と、測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液とを準備し、両溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極を用いて出力信号（電流値）として検出する。そして、例えば、検出間隔０．１ｓ×５データを２秒ごとに３０回収集し、収集した６０個のデータの平均値をその時間の平均値として記録する。
【０００４】
この分単位のデータを基にして、以下の処理を行う。
【０００５】
電流値の絶対値が酸素電極によって１０〜２０％程度違うため、絶対値でなく、電流値の時間微分値を用いることとする。絶対値は溶存酸素量（溶存酸素濃度）に比例するので、電流値の時間微分値は酸素消費速度、すなわち微生物の呼吸量に比例する。呼吸量抑制がみられたことを示す基準として、薬剤無添加、かつ測定対象微生物を含む第２溶液の５０％まで呼吸量（時間微分値）が低下した場合を用いる。また、解析に用いるデータとしては、時間微分値の違いが最も大きく出る時点が望ましいため、第２溶液で電流値が０になる（第２溶液中の酸素がなくなる）時点を用いて、その前１０分間の電流値の時間微分値を最小二乗近似で求めたものを用いる。
【０００６】
この方法を採用すれば、得られた両時間微分値から薬剤感受性を測定することができる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上記の方法を採用した場合には、電流値が０になるまで測定を行い続けなければならないので、薬剤感受性の測定を行うための所要時間が著しく長くなってしまうという不都合がある。
【０００８】
また、このような不都合を解消しようとすれば、連続解析を行い、例えば、各電流値の１０分間の時間微分値と、各薬剤濃度での時間微分値と第２溶液の時間微分値との比をデータとして用い、それぞれの変化をみるようにすることが考えられる。
【０００９】
しかし、１分ごとのデータでこのような解析を行う場合には、求められる時間微分値がデータのノイズの影響を大きく受け、正確な解析が困難である。また、第２溶液の時間微分値との比を求めると、第２溶液のノイズの影響によりさらに大きな影響を受け、解析精度が一層低下してしまう。
【００１０】
この薬剤感受性の測定は、臨床検査の目的で行われることが多く、この場合には、患者の治療のために迅速な測定、正確な測定の両立が強く要望されている。
【００１１】
【発明の目的】
この発明は上記の問題点に鑑みてなされたものであり、短時間で正確に、薬剤感受性の測定を行うことができる薬剤感受性測定方法およびその装置を提供することを目的としている。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
請求項１の薬剤感受性測定方法は、測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液中の溶存酸素量、および測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極を用いて検出することにより薬剤感受性を測定するに当たって、
両酸素電極からの出力信号を、第１の所定時間の間、第２の時間間隔で収集し、各酸素電極からの各出力信号を、その前後の所定個数の出力信号を用いて移動平均化し、移動平均化された各出力信号の時間微分値を算出し、この両時間微分値を用いて薬剤感受性を測定する方法である。
【００１３】
請求項２の薬剤感受性測定装置は、測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液中の溶存酸素量、および測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極を用いて検出することにより薬剤感受性を測定するものであって、
両酸素電極からの出力信号を、第１の所定時間の間、第２の時間間隔で収集する収集手段と、収集された各酸素電極からの各出力信号を、その前後の所定個数の出力信号を用いて移動平均化する移動平均化手段と、移動平均化された各出力信号の時間微分値を算出する時間微分値算出手段と、算出された両時間微分値を用いて薬剤感受性を測定する感受性測定手段とを含むものである。
【００１４】
【作用】
請求項１の薬剤感受性測定方法であれば、測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液中の溶存酸素量、および測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極を用いて検出することにより薬剤感受性を測定するに当たって、
両酸素電極からの出力信号を、第１の所定時間の間、第２の時間間隔で収集し、各酸素電極からの各出力信号を、その前後の所定個数の出力信号を用いて移動平均化し、移動平均化された各出力信号の時間微分値を算出し、この両時間微分値を用いて薬剤感受性を測定するのであるから、単に平均化してデータ列を作成する場合と比較してノイズの影響を小さくでき、測定精度を高めることができる。また、連続解析を行うので、所要時間を短縮することができる。この結果、測定精度の向上と所要時間の短縮とを両立させることができる。
【００１５】
請求項２の薬剤感受性測定装置であれば、測定対象微生物および所定の薬剤を含む第１溶液中の溶存酸素量、および測定対象微生物を含むとともに、薬剤を含まない第２溶液中の溶存酸素量を、それぞれ酸素電極を用いて検出することにより薬剤感受性を測定するに当たって、
収集手段によって、両酸素電極からの出力信号を、第１の所定時間の間、第２の時間間隔で収集し、移動平均化手段によって、収集された各酸素電極からの各出力信号を、その前後の所定個数の出力信号を用いて移動平均化し、時間微分値算出手段によって、移動平均化された各出力信号の時間微分値を算出し、感受性測定手段によって、算出された両時間微分値を用いて薬剤感受性を測定することができる。
【００１６】
したがって、単に平均化してデータ列を作成する場合と比較してノイズの影響を小さくでき、測定精度を高めることができる。また、連続解析を行うので、所要時間を短縮することができる。この結果、測定精度の向上と所要時間の短縮とを両立させることができる。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下、添付図面を参照して、この発明の薬剤感受性測定方法およびその装置の実施の態様を詳細に説明する。
【００１８】
図１はこの発明の薬剤感受性測定装置の一実施態様を示すブロック図である。
【００１９】
この薬剤感受性測定装置は、薬剤および微生物を添加してなる第１溶液を収容する第１セル１と、薬剤を添加せず、微生物を添加してなる第２溶液を収容する第２セル２と、第１セル１に装着されて第１溶液の溶存酸素量を検出し、測定電流値を出力する第１酸素センサ１ａと、第２セル２に装着されて第２溶液の溶存酸素量を検出し、測定電流値を出力する第２酸素センサ２ａと、第１酸素センサ１ａから出力される測定電流値を時系列的に保持する第１保持部３と、第２酸素センサ２ａから出力される測定電流値を時系列的に保持する第２保持部４と、第１保持部３に時系列的に保持されている測定電流値から移動平均値を算出し、時系列的に保持する第１移動平均値算出保持部５と、第２保持部４に時系列的に保持されている測定電流値から移動平均値を算出し、時系列的に保持する第２移動平均値算出保持部６と、第１移動平均値算出保持部５に時系列的に保持されている移動平均値から第１の時間微分値を算出する第１時間微分値算出部７と、第２移動平均値算出保持部６に時系列的に保持されている移動平均値から第２の時間微分値を算出する第２時間微分値算出部８と、第１の時間微分値と第２の時間微分値とに基づいて薬剤感受性を測定する薬剤感受性測定部９とを有している。
【００２０】
次いで、図２のフローチャートを参照して図１の薬剤感受性測定装置の作用を説明する。
【００２１】
ステップＳＰ１において、第１セル１に収容された溶液に薬剤および微生物を添加するとともに、第２セル２に収容された溶液に薬剤を添加せず、微生物を添加し、ステップＳＰ２において、第１酸素センサ１ａ、第２酸素センサ２ａによる溶存酸素量の検出を開始し、ステップＳＰ３において、第１酸素センサ１ａ、第２酸素センサ２ａから出力される測定電流値をそれぞれ時系列的に保持し、ステップＳＰ４において、それぞれ時系列的に保持されている測定電流値から移動平均値を算出し、ステップＳＰ５において、それぞれ算出された移動平均値に対から最小二乗近似で時間微分値を算出し、ステップＳＰ６において、それぞれ算出された時間微分値に基づいて薬剤感受性を測定し、そのまま一連の処理を終了する。
【００２２】
前記移動平均値の算出は、図３に示すように、該当する測定電流値（ハッチングが施された円を参照）と、この測定電流値に先行するｎ個（ｎは１以上の整数であり、好ましくは、５から１０程度の値を選択することが好ましい）の測定電流値と、この測定電流値に続くｎ個の測定電流値との平均値を算出して、該当する測定電流値の移動平均値とすることにより達成される。このように移動平均値を算出すれば、例えば、ある測定電流値がノイズの影響を大きく受けていても、移動平均値におけるノイズの影響を大幅に低減することができる。
【００２３】
したがって、薬剤感受性の測定における、所要時間の短縮、および測定精度の向上を両立させることができる。
【００２４】
微生物としてＳ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（表皮ブドウ球菌）、Ｅ．ｆｅａｃａｌｉｓ（エンテロコッカス属菌）を用い、微生物の量を１０6ｃｆｕ／ｍｌに設定して薬剤感受性を測定した結果を表１、表２に示す。なお、薬剤として、ＰＣＧ（ペニシリンＧ）、ＩＰＭ（イミペネム）、ＭＩＮＯ（ミノサイクリン）、ＥＭ（エリスロマイシン）、ＯＦＬＸ（オフロキサシン）、ＳＴ（スルファメトキサゾール・トリメトプリン）、ＶＣＭ（バンコマイシン）、ＣＭＺ（セフメタゾール）を採用した。また、（イ）は従来法で測定したＭＩＣ値（最小発育阻止濃度）（μｇ／ｍｌ）（所要時間は１８時間）、（ロ）は移動平均値を求めることなく最小二乗近似により傾きを求める方法で測定した場合のＭＩＣ値（μｇ／ｍｌ）／所要時間（分）、（ハ）は移動平均値を求め、最小二乗近似により傾きを求める方法で測定した場合のＭＩＣ値（μｇ／ｍｌ）／所要時間（分）を示している。
【００２５】
【表１】
0004415290.tif 000002
【００２６】
【表２】
0004415290.tif 000003
【００２７】
表１、表２において各方法による測定値、所要時間を比較すれば、移動平均値を求め、最小二乗近似により時間微分値を求める方法で測定することにより、測定精度の向上、および所要時間の短縮を両立できていることが分かる。
【００２８】
また、標準菌株７菌種｛Ｅ．ｃｏｌｉ：大腸菌、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：肺炎桿菌、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ：緑膿菌、Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ：（ブロテウス属菌）、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ：黄色ブドウ球菌、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ：表皮ブドウ球菌、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ：（エンテロコッカス属菌）｝と抗生剤１６薬剤（ＣＰＺ：セフォペラゾーン、ＭＩＮＯ：ミノサイクリン、ＯＦＬＸ：オフロキサシン、ＡＢＰＣ：アンビシリン、ＬＭＯＸ：ラタモキセフ、ＰＩＰＣ：ピペラシリン、ＧＭ：ゲンタマイシン、ＦＯＭ：フォスフォマイシン、ＰＣＧ：ペニシリンＧ、ＥＭ：エリスロマイシン、ＳＴ：スルファメトキサゾール・トリメトプリン、ＶＣＭ：バンコマイシン、ＩＰＭ：イミペネム、ＣＭＺ：セフメタゾール、ＡＺＴ：アズトレオナム、ＣＦＳ：セフスロジン）を用い、微生物の量を１０6ｃｆｕ／ｍｌに設定して薬剤感受性を測定した結果、従来法との一致率は、移動平均値を求めることなく最小二乗近似により電流値の時間微分値を求める方法で測定した場合には７６％、移動平均値を求め最小二乗近似により電流値の時間微分値を求める方法で測定した場合には９１％であった。
【００２９】
【発明の効果】
請求項１の発明は、単に平均化してデータ列を作成する場合と比較してノイズの影響を小さくでき、測定精度を高めることができ、また、連続解析を行うので、所要時間を短縮することができ、ひいては、測定精度の向上と所要時間の短縮とを両立させることができるという特有の効果を奏する。
【００３０】
請求項２の発明は、単に平均化してデータ列を作成する場合と比較してノイズの影響を小さくでき、測定精度を高めることができ、また、連続解析を行うので、所要時間を短縮することができ、ひいては、測定精度の向上と所要時間の短縮とを両立させることができるという特有の効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明の薬剤感受性測定装置の一実施態様を示すブロック図である。
【図２】この発明の薬剤感受性測定方法の一実施態様を示すフローチャートである。
【図３】移動平均値の算出を説明する概略図である。
【符号の説明】
１ａ  第１酸素センサ    ２ａ  第２酸素センサ
３  第１保持部    ４  第２保持部
５  第１移動平均値算出保持部    ６  第２移動平均値算出保持部
７  第１時間微分値算出部    ８  第２時間微分値算出部
９  薬剤感受性測定部
【図１】
0004415290.tif 000004
【図２】
0004415290.tif 000005
【図３】
0004415290.tif 000006