(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３又は配列番号５で表される、エキソン５において２塩基の欠失を有するＳＯＤ１ゲノムＤＮＡを導入した、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）発症するトランスジェニックマウス。
【請求項２】
前記２塩基が、ＳＯＤ１遺伝子のエキソン５のコドン１２６の、２個のチミンである、請求項１に記載の家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）発症するトランスジェニックマウス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遺伝子導入非ヒト動物及びその製造方法に関し、特に、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）を自然発症する遺伝子導入非ヒト動物及びその製造方法を開示する。
に関する。
【背景技術】
【０００２】
一部の家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）の原因遺伝子として、Ｃｕ／Ｚｎ  Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ１）の遺伝子異常が報告され、すでに１００種類近くの変異が確認されている。
【０００３】
また、既に、変異ＳＯＤ１を導入したマウスが、作製されている。
【０００４】
しかしながら、大多数の家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）の原因遺伝子は、１塩基置換（ポイントミューテーション）のものである。
【非特許文献１】人間の分子遺伝学、２００３、第１２巻、Ｎｏ．２１、第２７５３頁〜第２７６４頁（Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００３，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．２１  Ｐ．２７５３−Ｐ．２７６４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）の原因遺伝子については、種々の系統があることが知られており、今般、本発明者等は、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）の大家系において、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）の原因遺伝子、即ち、ＳＯＤ１遺伝子のエキソン（ｅｘｏｎ）５において２塩基の欠失を確認するに至った。
【０００６】
この家系患者は、後索型の筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＡＬＳ、以下、単に、「ＡＬＳ」という。）に分類され、残存運動神経細胞に、レビー小体類似硝子様凝集体（Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ-ｌｉｋｅ  ｈｙａｌｉｎｅ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ（ＬＢＨＩ））を認める。
【０００７】
そして、ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎを生じる、本遺伝子異常を持つトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を作製することは本疾患の病態解明に極めて有用な情報をもたらすと考えられる。
【０００８】
即ち、本発明は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）様を発現する、新規な、ＳＯＤ１遺伝子のエキソン（ｅｘｏｎ）５において２塩基の欠失を有するトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）の大家系において、ＳＯＤ１遺伝子のエキソン（ｅｘｏｎ）５において２塩基の欠失があることを知見し、また、変異ＳＯＤ１のｃＤＮＡを導入したトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を作製したが、トランスジェニックマウス（ＴｇＭ）のＳＯＤ１蛋白の発現は極めて微量で、このトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の症状発症には至らないことを知見した。
【００１０】
そこで、本発明者等は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の発症には、ＳＯＤ１ゲノムを導入することが必要であるのではないかということに着眼し、鋭意努力した結果、本発明を完成するに至った。
【００１１】
請求項１に記載の家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）発症するトランスジェニックマウスは、配列番号３又は配列番号５で表される、エキソン５において２塩基の欠失を有するＳＯＤ１ゲノムＤＮＡを導入した。
【００１２】
請求項２に記載の家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）発症するトランスジェニックマウスは、請求項１に記載の家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）発症するトランスジェニックマウスの、２塩基が、ＳＯＤ１遺伝子のエキソン（ｅｘｏｎ）５のコドン１２６の、２個のチミン（Ｔ）である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明に係る家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）発症するトランスジェニックマウスは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）様を発症するので、これを用いることで、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）その他の筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の病態の解明や、このトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を対象として、遺伝子治療や神経幹細胞治療の研究開発をすることで、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）その他の筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の根本的な治療方法の開発ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明に係るトランスジェニックマウスの作製方法を、図面を参照しながら、更に、詳しく説明する。
【００１６】
ゲノムＤＮＡ（Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ）のトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を作製するため、Ｙ．グローナー教授（ｐｒｏｆ.Ｙ.Ｇｒｏｎｅｒ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ｔｈｅ  Ｗｅｉｚｍａｎｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｉｅｎｃｅ，Ｉｓｒａｅｌ））より、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム（Ｗ）の全長を含むプラスミド（ｐ−ＧＳＯＤ−ＳＶｎｅｏ）の供与をうけた（図１を参照）。
【００１７】
次に、図２に示すように，このヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）をもとに、ポリメラーゼ連鎖反応変異誘発（ＰＣＲ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）を行い、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）を含むコンストラクトを得た。
【００１８】
即ち、Ｂｃｌ  Ｉによって切り出されるエキソン（ｅｘｏｎ）ＩＩＩ、ＩＶ及びＶを含む領域にて、ポリメラーゼ連鎖反応変異誘発（ＰＣＲ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）を行い、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）を含むコンストラクトを得た。
【００１９】
また、ヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）をテンプレートとして、ゲノム（ｇｅｎｏｍｅ）で、２ｂｐの欠失を追加することによって、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）を作製した。
【００２０】
同様の方法により、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム野生型（Ｗ）及び２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端にフラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクトを作製した。
【００２１】
即ち、ヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）及び２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）の各々をテンプレートとして、ＦＬＡＧ配列を付加することによって、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム野生型（Ｗ）蛋白のＣ末端にＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＷＦ）と、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端に、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）を作製した。
【００２２】
図３（ａ）は、ヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）のエキソン（ｅｘｏｎ）５の塩基配列を示す図（配列表）であり、図３（ｂ）は、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）のエキソン（ｅｘｏｎ）５の塩基配列を示す図（配列表）であり、また、図３（ｃ）は、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端に、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）のエキソン（ｅｘｏｎ）５の塩基配列を示す図（配列表）である。
【００２３】
以上により作製した、４つのコンストラクト（Ｗ、Ｄ、ＷＦ及びＤＦ）をマウス胚に導入し（日本ＳＬＣ株式会社）、これらのＳＯＤ１ゲノムを有するトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を作製した。
【００２４】
尚、ヒト野生型ＳＯＤ１遺伝子の導入の有無については、マウス尾から抽出したＤＮＡをもとにポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）およびノーザンブロット法（ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｂｌｏｔ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）にて確認を行った。
【００２５】
その結果、トランスジェニックマウス（ＴｇＭ）の作製において、ヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）において１３ライン（Ｗ１〜Ｗ１３）、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）において２ライン（Ｄ１、Ｄ２）、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム野生型（Ｗ）蛋白のＣ末端にＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＷＦ）マウスにおいて、５ライン（ＷＦ１〜ＷＦ５）と、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端に、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）において８ライン（ＤＦ１〜ＤＦ８）のＦ０マウスを得た。サザンブロット，ウェスタンブロット後，最終的に、ヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）で２ライン，２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）で２ライン、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム野生型（Ｗ）蛋白のＣ末端にＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＷＦ）で２ライン、および、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端に、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）にて、３ラインのトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を確立した。
【００２６】
確立したマウスの中、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）の１ライン（Ｄ２）と、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端に、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）の２ライン（ＤＦ２、ＤＦ７）において、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に類似した表現型が得られた。
【００２７】
確立したトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）の中、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）の２ライン（ＤＦ２、ＤＦ７）には、病気の表現型に、相違が認められた。
【００２８】
即ち、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ２）マウスは、生後４ヶ月前後に、主に、後肢、ときに前肢の筋萎縮・脱力を示し，急速な経過で完全麻痺に達した。
【００２９】
一方、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ７）マウスにおいては、主に、生後５ヶ月以降に後肢の脱力を呈するものが多く，病極期に至る経過は、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ２）マウスに比して緩やかな傾向にあった。
【００３０】
また、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ７）マウスにおいては、筋萎縮や体重減少が目立たず、運動後に筋収縮（ｍｕｓｃｌｅ  ｃｌｕｍｐ）を示すものが認められた。
【００３１】
フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ２）マウスは、１年以降に緩徐に筋萎縮・脱力が進行した。
【００３２】
尚、ヘテロ接合体の、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム野生型（Ｗ）マウスや、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム野生型（Ｗ）蛋白のＣ末端にＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＷＦ）マウスにおいては、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）様の表現型を示すマウスは認めなかった。
【００３３】
次に、ウエスタンブトット（ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）について説明する。
【００３４】
４つのコンストラクト（Ｗ、Ｄ、ＷＦ及びＤＦ）及び非トランスジェニックマウス（ｎｏｎ−ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ（ＮＴＧ））の各々の脳ホモジェネート（ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｓ）より、総タンパク質の１０μｇを用い、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体、抗ヒトＳＯＤ１モノクローナル抗体及び抗ＦＬＡＧにて、ウェスタンブロット法（ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を行った。
【００３５】
更に、Ｆ２マウスの大脳，精髄，筋肉，肝臓および腎臓の各組織より、コンプリートミニ（ｃｏｍｐｌｅｔｅｍｉｎｉ）（Ｒｏｃｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社製）を含む２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．２）を用い，氷上で１分間超音波処理することにより蛋白を抽出した。
【００３６】
各ＳＯＤ１は抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体（ｓｔｒｅｓｓｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、抗ヒトＳＯＤ１モノクローナル抗体（ＭＢＬ），抗ＦＬＡＧ抗体（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を一次抗体として、ＥＣＬシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）によって検出した。
【００３７】
結果を、図４に示す。
【００３８】
図４中、図４（ａ）は、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体に対するマウス（ＮＴＧ）及びヒトＷ、ＷＦ、Ｄ、ＤＦの各ＳＯＤ１に反応の結果（写真）であり、図４（ｂ）は、抗ヒトＳＯＤ１モノクローナル抗体に対するマウス（ＮＴＧ）及びヒトＷ、ＷＦ、Ｄ、ＤＦの各ＳＯＤ１に反応の結果（写真）であり、図４（ｃ）は、抗ＦＬＡＧに対するマウス（ＮＴＧ）及びヒトＷ、ＷＦ、ＤＦの各ＳＯＤ１に対する反応の結果（写真）であり、図４中、図４（ｄ）は、Ｗ４において、大脳、脊髄、筋肉、肝臓及び腎臓のホモジェネート（ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｓ）を、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体を用いて解析した結果（写真）であり、また、図４（ｅ）は、ＤＦ７（ＤＦの後の数字「７」は、ＤＦの７番目のラインを意味している。）抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体を用いて解析した結果（写真）である。
【００３９】
抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体は、マウス（ＮＴＧ）、Ｗ、ＷＦ及びＤＦの各ＳＯＤ１に反応したが、Ｄ型ＳＯＤ１は、検出感度以下であった（図４（ａ）を参照）。
【００４０】
また、抗ヒトＳＯＤ１モノクローナル抗体は、マウス（ＮＴＧ）のＳＯＤ１とは反応を認めず、Ｗ、ＷＦ及びＤＦと反応した（図４（ｂ）を参照）。
【００４１】
また、抗ＦＬＡＧは、ＷＦ及びＤＦの各々に反応することが確認された（図４（ｃ）を参照）。
【００４２】
また、図４（ｄ）及び図４(ｅ)の解析結果から、ＳＯＤ１は、大脳、脊髄、筋肉、肝臓及び腎臓の組織において、ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓに検出されることが示された。
【００４３】
次に、神経病理学的分析方法及びその結果について説明する。
【００４４】
鳥取大学医学部動物実験のためのガイドラインに則って検討をおこなった。
【００４５】
ペントバルビタール麻酔下に，生理食塩水に続き後４％ｐａｒａ ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅを含む０．１Ｍリン酸緩衝液で経心臓潅流固定をおこない，脳および脊椎をパラフィン固定した。
【００４６】
組織は，ヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）法およびウェスタンブロットで使用したものと同様の抗ＳＯＤ１ポリクロナール抗体および抗ＦＬＡＧ抗体にて検出を行った。
【００４７】
次に、ＤＦ７マウスにおける神経病理学的解析結果について説明する。
【００４８】
図５は、非トランスジェニックマウス（ＮＴＧ）の下部脊髄をヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色した結果（写真）である。
【００４９】
図６は、ＤＦ７マウスの下部脊髄をヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色した結果（写真）である。
【００５０】
図５及び図６の対比から、非トランスジェニックマウス（ＮＴＧ）に比べ、ＤＦ７マウスでは、前角細胞の減少と反応性ｇｌｉｏｓｉｓが観察された。
【００５１】
また、図７は、ＤＦ７マウスの下部脊髄をヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色し、これを強拡大した写真である。
【００５２】
図７から、ＤＦ７マウスでは、その下部脊髄周辺部にハロを伴うｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎを残存前角細胞に認めた。
【００５３】
また、図８は、レビー小体類似硝子様凝集体（Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ-ｌｉｋｅ  ｈｙａｌｉｎｅ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ（ＬＢＨＩ））と、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体との反応結果を示す写真であり、また、図９は、レビー小体類似硝子様凝集体（Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ-ｌｉｋｅ  ｈｙａｌｉｎｅ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ（ＬＢＨＩ））と、抗ＦＬＡＧ抗体との反応結果を示す写真である。
【００５４】
図８及び図９に示すように、この凝集体は抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体（Ｄ）と抗ＦＬＡＧ抗体（Ｅ）によって顆粒状に染色された。
【００５５】
低位脊髄の解析において、非トランスジェニックマウス（ＮＴＧ）（図５を参照）と比較し、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）様を発症したＤＦ７マウス（日齢２３９日）においては、前角細胞の減少と反応性ｇｌｉｏｓｉｓを認めた（図６を参照）。
【００５６】
また、ＤＦ７マウス（日齢２３９日）においては、ヒトにおいて認められる、ＬＢＨＩに類似した、Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎが、残存神経細胞胞体内に観察された（図７を参照）。
【００５７】
さらに、この凝集体は、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体に陽性であり（図８を参照）、また、抗ＦＬＡＧ抗体に陽性であり（図９を参照）、導入したヒトＤＦ型のＳＯＤ１が凝集体の構成要素であることが示唆された。
【００５８】
以上の結果から、本発明に係る遺伝子導入非ヒト動物（マウス）は、マウス本来のＳＯＤ１を保持しながら、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）症状が認められることが明らかになった。
【００５９】
このことは、変異ＳＯＤ１が何らかの新しい運動神経細胞にとって有害な機能を獲得したという  ｇａｉｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ説を支持するものと考えられた。
【００６０】
現時点では、ヘテロ接合体のトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）の解析において、Ｄの１ライン（Ｄ２）と、ＤＦの２ライン（ＤＦ２、ＤＦ７）のみに、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）症状が確認された。
【００６１】
一方、Ｄラインにおいて症状の発現が遅いことから，ＦＬＡＧ配列を付加したことによるＳＯＤ１蛋白の安定性および凝集能の変化に関しては今後さらに評価が必要と考えられた。
【００６２】
また、アルツハイマー病のモデルとして，ＦＬＡＧ配列を含むａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＰＰ）を発現するトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）、クロイツフェルト・ヤコブ病のモデルとしてｐｒｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ（ＰｒＰ）にＦＬＡＧ配列を付加されたＴｇＭにおいては、ともに、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に類似した運動神経障害の記載は見られていないが、ＦＬＡＧ配列の付加が運動神経細胞に対して有害に働いている可能性についても今後の検討が必要である。
【００６３】
一方、Ｄラインにおいては，Ｄ型ＳＯＤ１蛋白の発現は低レベルであり，ヘテロ接合体においては、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）症状を晩期にのみ呈することが示された。
【００６４】
トランスジーンの挿入部位等により蛋白の発現が少ない可能性も否定できず、ホモ接合体の作製や、より詳細な生化学的，病理学的な解析を進める必要があると考えられた。
【００６５】
また、本発明により、ヒトＡＬＳの臨床，病理像をよく反映したトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を得ることができたので、これを用いることで、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）その他の筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の病態の解明や、このトランスジェニックマウス（ＴｇＭ）を対象として、遺伝子治療や神経幹細胞治療の研究開発をすることで、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）その他の筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の根本的な治療方法の確立につながると考えられる。
【００６６】
尚、作製した、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム野生型（Ｗ）蛋白のＣ末端にＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＷＦ）の遺伝子のアミノ酸配列は、下記の通りである。
Wild human SOD1 amino acid
Ala Thr Lys Ala Val Cys Val Leu Lys Gly Asp Gly Pro Val Gln Gly Ile IleAsn Phe
5                   10                  15                 20
Glu Gln Lys GluSer Asn Gly Pro Val Lys Val Trp GlySer Ile Lys Gly Leu Thr Glu
25                  30                  35                 40
Gly Leu His Gly PheHis Val His Glu Phe Gly Asp Asn Thr Ala Gly Cys Thr Ser Ala
45                  50                  55                 60
Gly Pro His Phe Asn Pro LeuSer Arg Lys His Gly Gly Pro Lys Asp Glu Glu Arg His
65                  70                  75                 80
Val Gly Asp Leu Gly AsnVal Thr Ala Asp Lys Asp Gly Val Ala Asp Val Ser IleGlu
85                  90                  95                 100
Asp Ser Val IleSer Leu Ser Gly Asp His Cys Ile IleGly Arg ThrLeu Val Val His
105                 110                 115                120
Glu Lys Ala Asp Asp Leu Gly LysGly Gly AsnGlu Glu Ser Thr Lys ThrGly Asn Ala
125                 130                 135                140
Gly Ser Arg Leu Ala Cys Gly Val Ile GlyIle Ala Gln ***
145                 150                 155                  
作製した、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）の遺伝子のアミノ酸配列は、下記の通りである。
D human SOD1 amino acid
Ala Thr Lys Ala Val Cys Val Leu Lys Gly Asp Gly Pro Val Gln Gly Ile IleAsn Phe
5                   10                  15                 20
Glu Gln Lys GluSer Asn Gly Pro Val Lys Val Trp GlySer Ile Lys Gly Leu Thr Glu
25                  30                  35                 40
Gly Leu His Gly PheHis Val His Glu Phe Gly Asp Asn Thr Ala Gly Cys Thr Ser Ala
45                  50                  55                 60
Gly Pro His Phe Asn Pro LeuSer Arg Lys His Gly Gly Pro Lys Asp Glu Glu Arg His
65                  70                  75                 80
Val Gly Asp Leu Gly AsnVal Thr Ala Asp Lys Asp Gly Val Ala Asp Val Ser IleGlu
85                  90                  95                 100
Asp Ser Val IleSer Leu Ser Gly Asp His Cys Ile IleGly Arg ThrLeu Val Val His
105                 110                 115                120
Glu Lys Ala Asp Asp Gly Gln ArgTrp Lys *** 
125                 130                 135                 
また、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）の全塩基配列は、下記の通りである。
D human SOD1
1 GCGCCCAATA CGCAAACCGC CTCTCCCCGC GCGTTGGCCG ATTCATTAAT GCAGCTGGCA
61 CGACAGGTTT CCCGACTGGA AAGCGGGCAG TGAGCGCAAC GCAATTAATG TGAGTTAGCT
121 CACTCATTAG GCACCCCAGG CTTTACACTT TATGCTTCCG GCTCGTATGT TGTGTGGAAT
181 TGTGAGCGGA TAACAATTTC ACACAGGAAA CAGCTATGAC CATGATTACG AATTCTGCCA
241 ACCAAATAAG AAACTCTATA CTAAGGACTA AGAAAATTGC AGGGGAAGAA AAGGTAAGTC
301 CCGGGATTGA GGTGTAGCGA CTTTCTATAC CCTCAGAAAA CTAAAAAACA AGACAAAAAA
361 ATGAAAACTA CAAAAGCATC CATCTTGGGG CGTCCCAATT GCTGAGTAAC AAATGAGACG
421 CTGTGGCCAA ACTCAGTCAT AACTAATGAC ATTTCTAGAC AAAGTGACTT CAGATTTTCA
481 AAGCGTACCC TGTTTACATC ATTTTGCCAA TTTCGCGTAC TGCAACCGGC GGGCCACGCC
541 CCCGTGAAAA GAAGGTTGTT TTCTCCACAT TTCGGGGTTC TGGACGTTTC CCGGCTGCGG
601 GGCGGGGGGA GTCTCCGGCG CACGCGGCCC CTTGGCCCCG CCCCCAGTCA TTCCCGGCCA
661 CTCGCGACCC GAGGCTGCCG CAGGGGGCGG GCTGAGCGCG TGCGAGGCGA TTGGTTTGGG
721 GCCAGAGTGG GCGAGGCGCG GAGGTCTGGC CTATAAAGTA GTCGCGGAGA CGGGGTGCTG
781 GTTTGCGTCG TAGTCTCCTG CAGCGTCTGG GGTTTCCGTT GCAGTCCTCG GAACCAGGAC
841 CTCGGCGTGG CCTAGCGAGT TATGGCGACG AAGGCCGTGT GCGTGCTGAA GGGCGACGGC
901 CCAGTGCAGG GCATCATCAA TTTCGAGCAG AAGGCAAGGG CTGGGACGGA GGCTTGTTTG
961 CGAGGCCGCT CCCACCCGCT CGTCCCCCCG CGCACCTTTG CTAGGAGCGG GTCGCCCGCC
1021 AGGCCTCGGG GCCGCCCTGG TCCAGCGCCC GGTCCCGGCC CGTGCCGCCC GGTCGGTGCC
1081 TTCGCCCCCA GCGGTGCGGT GCCCAAGTGC TGAGTCACCG GGCGGGCCCG GGCGCGGGGC
1141 GTGGGACCGA GGCCGCCGCG GGGCTGGGCC TGCGCGTGGC GGGAGCGCGG GGAGGGATTG
1201 CCGCGGGCCG GGGAGGGGCG GGGGCGGGCG TGCTGCCCTC TGTGGTCCTT GGGCCGCCGC
1261 CGCGGGTCTG TCGTGGTGCC TGGAGCGGCT GTGCTCGTCC CTTGCTTGGC CGTGTTCTCG
1321 TTCCTGAGGG TCCCGCGGAC ACCGAGTGGC GCAGTGCCAG GCCCAGCCCG GGGATGGCGA
1381 CTGCGCCTGG GCCCGCCTGG TGTCTTCGCA TCCCTCTCCG CTTTCCGGCT TCAGCGCTCT
1441 AGGTCAGGGA GTCTTCGCTT TTGTACAGCT CTAAGGCTAG GAATGGTTTT TATATTTTTA
1501 AAAGGCTTTG GAAAACAAAA ATACGCAACA GAGACCGTTT GTGTGACACT TTGCAGGGAA
1561 GTTTGCTGGC CTCTGTTCTA GGTCATGATT GGGCTGCAAG GGCAGAGAAG GTAGCCTTGA
1621 ACAGAGGTCC TTTTCCTCCT CCTAAGCTCC GGGAGCCAGA GGTTTAACTG ACCCTTTTGG
1681 GGATTTTTGA GGGCAGTGAT CTTAACTTTG GGTGCACAGT TAGCTTATTT GAAGATCTTA
1741 CTAAAAATAC ACCAGAGCCC AACCTCCGAC CAATTACATC AAAACCTGTC CTAGTGCAGG
1801 GTGAGTATTG CTGTTTTTTG AAAGTTTCCA AAAGTGATTT TGATGTGCAC CTACGATTGA
1861 GAACTGTCGT TTGAGGACAG TGGGTGGAGT TTCGTATTTG GAAATTAGAA GACCTGGAGT
1921 TTCCATTACA CCGAATTGGC ACTTAATAAC TGTTGTCGGA GCATTTCTTA AGCCACATTT
1981 TCGTAAAGTG GCTTTAAAAT TGCTCTGCCA GTAGGCAGGT TGCTAAGATG GTCAGAGACA
2041 AACTTCTGAA CGACTCTTGT AAAATATACA GAAATATTTT CAGAACTTTT ATCAGTAAAA
2101 TTACAAAACG TGTTGCAAGG AAGGTGCTTG TGATAACACT GTCCCCAGAA CCTTAGTGAA
2161 GTTACCAACT GGTGGAAAAT TTTCTCTTGC ACTCGGCTTA AAAATCATGA GGGAATATTT
2221 ACTATACGAA TGAGATTCAG TCTTTAAAGG GGTTTACAGA AACGTGAGAG GACAGGAACA
2281 GTTAGTCTGT GTAAATGTCT GAAATATATG TGAGGGAGAT AATGAGTTTA GCCTTTTTCT
2341 TTAATAGGTC TCCAGATTTT CTGGAAAAGG TTCTTTGGCA TTTGACTCCA TTTTGCTGTT
2401 TCATTTGTCA GACTTCTTTT TGTCCCTCTT TACTTCTCCC CACATAATTC ACCAGTACTA
2461 GTGTTTTGTT TTTCAGACCA AGTCTCGCTC TGTCGCCCAG GCTGGAGTGC AGTGGCGCGA
2521 TCTCAGCTCA CTGCAACCTC CGCCTCCCAG GTTCAAGCAA TTCTCCTGCC TCAGCCTCCC
2581 GGGTAGCTGG GACTACAGGC GCGCGCCGCC ACGCCTGGCT AATTTTTTAT ATTTTAGTAG
2641 AGACGGCGTT TCACCATGTT GGCCAGGATG GTCTCGATCT GTTGACGTCG TGATCCACCC
2701 GCCTCGGCCT CCCAAAGTGC TGGGATTACA GGCGTGAGCC ACCCCGCCCG GCCACCAGTG
2761 CTATTCTTAA GACGCCTCTG AGGAATCCCT TCTCCCTGGC CATTGAGAAT CCATGCATGA
2821 ACCCAGGTTT TCCACCTTCC CTGAGCAGCT TGCATAGTTC CTTCTTTTAA GCGCCTGACT
2881 TCGTTTTGTT TGGTGCCCGT TGTACCTGAG AATGAGCCTT GGATAGTGGA GCATTCCAGC
2941 TTTCCAGATA TGCAGAGATA ATACATTGGC TATCAGCTAC TTGGCTTGGC CTATTCCGTG
3001 TTTAAAATCT TGGACTCTTT GCTAGTTTTT ACAGATCAGA ATTTTTCACG TATTAATCCA
3061 GTTTTCCTAG CTTCTCTTGA AGAATTTTTG GAGATCTCTT CATACTGAGC CTTCATTAGC
3121 CCAGGACAGT ACTGCTGTAG CAGTTCATAT ATTTTTTCGC TTCCCAGGCC TGTGTTATTC
3181 ACTTAAGTTC ATAGCCTGGT CCCTGCAGGG TTGTACCCGA GCACAGCTAC TTAGATGTCC
3241 TGAATGTATT ACCGGTTAAA TGGAGGTTTC AAAGAACCTG CTGTTTTTGG CCCTGTGCTC
3301 TTGATAACAG AGTGTTTGAG GGACAACTTT CACATTTGAG TTTTTCCAAA ATTAAAGGTT
3361 GTAGAAGAGT CACAGTATCT ATTGTCAAAA AGAAAAGAAT TTAAAAAGGC AGCAATTGCC
3421 AGGATACTTC ATTTGAGCAA TGATATTTTC CAGTGGAAAG TCACATCTTA AGGGTTAATG
3481 CCCCTTAACT GTTGGCCGTA TTTGAAAACA AACCAAGCTA AAAACAAGAG ACACTGACAT
3541 GTTGTATGAC GGTGTGGTGT GGATGTTGTG TTTATTTTAG TCCTGAGATC TAGTTGTAAC
3601 TTCCTTGATT TCTGTATGTA GCCACGGAGC ACCATTACCT GTCACCATTA CCTGAATGGC
3661 TATACTGCTT GCTTTCATTT TGGTAGAGTG GAAAGGTTAC CTAGGTTTCA GTGCTTGAAA
3721 AGATTTCAGA AAGCAGTAGT ACGTCTGGTT AGACTAGAAT CAGTCCTCTC CTGGGGGCAG
3781 TGGAATATAA TATTTTCTGA CTGCTAATTA AAAATACCTG TGATAGCCGG GCGTGGTGGC
3841 TTACGCCTGT AATCCCAGCA CTTTGGGAGG CCGAGACGGG TGGATCACGA GGTCAGCAGA
3901 TGGAGACCAT CCTGGCTAAC ACGGTGAAAC CCCGTCTCTA CTAAAAATGC AAAAAAATTA
3961 GCCGGGTGTG GTGGTGGGCG CCTGTAGTCC CAGCTACTCA GGAGGCTGAG GCAGGAGAAT
4021 GGCATGAACC TGGGAGGCGG AGCTTGCAGT GAGCCGAGAT CATGTCACTG CACTCCAGCC
4081 TGGGCGACAG AGCGAGACTC GTCTCAAAAA AAAAAAGAAA AAAACTTATG ATGGACACTT
4141 AAAAACACTC ACTGAGTGGG GAGTGGAGAG CAGGGGTCCC AGGGTAGCCT GTTGGACATT
4201 TCCAGGGCGA CTTTTTCTTT TTTTTTTTTT AAAGTCAAGT GAGTATGCCA TATGGAAAAG
4261 GGTGTGCGTG GAGAAAAAGC AAGGGGCTCC AGAGTGTAGG ATGAGACATA CACCTTTTGG
4321 GTTAAAAAGG CTGAGGCAGG AGAATGGCGT GAACCCGGGA GGCGGAGCTT GCAGTGAGCT
4381 GAGATCATGC CACTGCACTC CAGCCTGGGC GACAGAGCGA GACTCTTGTC TCAAAATAAA
4441 AAACGTTTAC ATGTACATGT ATATTCAACA TGTACAAATA TAACCTATTC AAAAGTATTT
4501 ACTACATAAA TAGGTACTTA CATTACCTAT TTACTGTAAT AGTCAAAGCC TATGAAGTAT
4561 CTAACACTGA TGTGTAGGTA CTCACTTTGC TTGCCACTCT ATTAGGTGCT TTTTATGTTA
4621 TTTAATCATG AAGCCTGGCC ACAGGGTGCT TGTGCATTGA GTGTGGGAAC AAGATTACCA
4681 TCTCCCTTTT GAGGACACAG GCCTAGAGCA GTTAAGCAGC TTGCTGGAGG TTCACTGGCT
4741 AGAAAGTGGT CAGCCTGGGA TTTGGACACA GATTTTTCCA CTCCCAAGTC TGGCTGCTTT
4801 TTACTTCACT GTGAGGGGTA AAGGTAAATC AGCTGTTTTC TTTGTTCAGA AACTCTCTCC
4861 AACTTTGCAC TTTTCTTAAA GGAAAGTAAT GGACCAGTGA AGGTGTGGGG AAGCATTAAA
4921 GGACTGACTG AAGGCCTGCA TGGATTCCAT GTTCATGAGT TTGGAGATAA TACAGCAGGT
4981 GGGTGTTGTG CTGTGCTGGT GACCCATACT TGTTCACCCT AGTTAGATAA ACAGTAGAGT
5041 AGCCCCTAAA CGTTAAAACC CCTCAACTTG TTTTTGTTTT TGAGAAAGGG TCTTGCTCTG
5101 TCGCTCAGGC TGGAGTGCAG TGGCGCTGTG CGATCATGGC TGACCTTAGC CTTGACCTCC
5161 CAGGCTCCAT TGATCCTCAT GCCTTGGCCC GTAGCTGGGA CTACAGGTAC ACACCACCAC
5221 GCCTGGCTAA TTTTTGTATT TTTTTCTAGA GGTGGGGTTT CATCATGTTG CCCAGGCTGG
5281 TCTTGAACTG CTGGGCTCAA GTGGTCTATC CTCCTCGACC TCCCAAAGTG CTGGGATTAC
5341 ATGTGTGAGC CACTGTGCCT GGGAAAACCC TCAACTTTTC TTTTAAAAAA GAGGTCAACT
5401 TTATTGTATA TAAGCACTGT GCTAAAATTG CAGGAACTGG GACCATATCC TGATTTTTGT
5461 AATAATGCCA GCAGAGTACA CACAAGAAAA GTAACTGCAC TAGATTGTGA AGACTGGGGT
5521 GGACCTGCTT CTGAAGGTCC AGTGCCCTTT GTCTTAAGAT TTGGTGTAGT GTGTCTTTAG
5581 AAACCAAAAA AAGAGAAGAA GATCAACCTT AAGATTAGCC ACAAAACTGG GCTTTGATAC
5641 CTAGGTGTGG AAAAGAAAGG GAAAGAGTTG ATGTTTTGTC TTACAGCATC ATTGTAGAAG
5701 AGGGTGTTTT TTTGTTTGTT TGTTTTTTGA GACGGAGTCT TACTCTGTGG CCCAGGCTGG
5761 AGTGCAGTGG CGCGATCTCG GCTCACTGCA AGCTCCGCCT CCCGGGTTCA TGCCATTCTC
5821 CTGCCTCAGC CCCCTGAGTA GCTGGGACTA CAGGTGCCCG CCACCCCGCC TGGCTAATTT
5881 TTTGTATTTT TAGTAGAGAC GGGGTTTCAC TGTGTTAGCC AAGATGGTCT CTCTCCTGAC
5941 CTCGTGATCC GCCTGTCTCA GCCTCCCAAA GTGCTGGGAT TACAGGCATG AGCCACCGCA
6001 CCCAGCCAGA AGAGGGTGTT TTTTAAAGAA GGCAAATAGG AAATAAAAAC TTGGGCTCTT
6061 AACTTTTGTA ATGATCCCAG GTGTTTGAGC TGGGGGTTGA GGGTGGGTGC CTCGAGCAAA
6121 GGGGCTGCAT TTATTTGCAT AATGCCATGT AAGAGTAGCT CTACACCCCA AACACAGGCT
6181 TCTTAGTGGG ACCAAAGTAT GATACAAACT GAAGATGGAA TGCAGAGGAT TATTGGTACT
6241 TTGGAATATG CTTAAAAAAA ATTTTTTTAA AGTATTTTTA AAAAATCAGG CAACCCCTGA
6301 ACCAGAGTAG GTTCAGAGAA ACTGCCAAAT TTTATTTTCT TAATTTGGGA TTGGAAGCAA
6361 GTTAACAGAA GTTTATGAGT TAAGTTGCAT TTAGTGATCT TTTGCCATAT TTGAGTAATA
6421 ATCTGATTTT TTTGTTTATA GATTTCTTCT TAAATTAACT TTATTCATCT TGCTAATTTA
6481 GTTTCAAATA GTGATTTGTA ATGATCAGAT TTGATCCATT TCTGTAATTG CTGAAATTCC
6541 CCCGAGTTGC TTTTTGGCTT TACCGCCTCT GGTCTGGGAG GTGATTGCTC TGCTGCTTCC
6601 TGTAACTTGC CTGCCTTTCT CCCTGTGTGG GACTCCTGCG GGTGAGAGCG TGGCTGAAGA
6661 CAGCCGTGTT ATGAAAGGGC CTCCTGTGCT GTCGAGGTTG TGCTCTGTGA ATGTCATCCC
6721 CTGGTGCACA GCAGCACCTT CTACACAGGA TACAGTTGGA ATGCCGCCCC CTCGAGTTGT
6781 GTAAGGCAGC AGCCTTGGCC CTTGCACATA AGATGCTGTT GAATATTCTG CCTGCACCAA
6841 GTAAAGGGCA CAGATAGAAC TGCTTGGCAT ATGTTGCTGG GGAGATGAGT TTTTTGTAAA
6901 GTATACTACG TTCTTAAGAA TTTGGATCAT AACCATGGGA TTTTAATAAT AGAAAAACTG
6961 TTGAAGATCA GTCTGGTCCC TTATTTTTAC AGTGAAGAAG CCAAAGCCCA GAGAAGGGTG
7021 TTAACTTTAC AAGTGTCAGA CAGTAGTTAG AACTTGGTGG GGTTTTTTTT TTTTTTTTTT
7081 TGAGATGGAG TCTTGCTCTG TTGCCCAGGC TGGAGTGCAG TGGTGCGATC TCAGCTCACT
7141 GCAACCTCTG CCTCCCAGGT TCAAGCGATT CTCCTGCCTC AGCCTACTAA GTAGCTGGGA
7201 CTATAGGTGC GCACCACCAC GCCTAGCTAA TTTTTGTATT TTTTCAGTAG AGACAGGGTT
7261 TTGCTATGCT GGCCAGGCTG GTCTCAAACT CCTGACCTCA GATGATCCAG CCACCTCAGC
7321 TTCCCAAAGT GCTGGGGTTC CAGGTGTTAG CCACCATGCC TGGCCATAGA CTTGTTTCTG
7381 TTCCCTTCTC ACTGTGGCTG TACCAAGGTG TTGCTTATCC CAGAAGTCGT GATGCAGGTC
7441 AGCACTTTCT CCATGGGAAG TTTTAGCAGT GTTTCTTTTT AGAATGTATT TGGGAACTTT
7501 AATTCATAAT TTAGCTTTTT TTTCTTCTTC TTATAAATAG GCTGTACCAG TGCAGGTCCT
7561 CACTTTAATC CTCTATCCAG AAAACACGGT GGGCCAAAGG ATGAAGAGAG GTAACAAGAT
7621 GCTTAACTCT TGTAATAATG GCGATAGCTT TCTGGAGTTC ATATGGTATA CTACTTGTAA
7681 ATATGTGCTA AGATAATTCC GTGTTTCCCC CACCTTTGCT TTTGAACTTG CTGACTCATC
7741 TAAACCCCTG CTCCCAAATG CTGGAATGCT TTTACTTCCT GGGCTTAAAG GAATTGACAA
7801 ATGGGGACAC TTAAAACGAT TTGGTTTTGT AGCATTTATT GAATATAGAA CTAATACAAG
7861 TGCCAAAGGG GAACTAATAC AGGAAATGTC ATGAACAGTA CTGTCAACCA CTAGCAAAAT
7921 CAATCATCAT TGTGAAACAT AGGAAGCTTC TGTAGATAAA AAAAAAAATT GATACTGAAA
7981 ACTAGTCGAG ACTCCATTTA TATGTGTATG TTTTCTGAAA GCCTTTCAGA AAAATATTAA
8041 ATTTAAGGAC AAGATTTTTA TATCAGAGGC CTTGGGACAT AGCTTTGTTA GCTATGCCAG
8101 TAATTAACAG GCATAACTCA GTAACTGAGA GTTTACCCTT TGGTACTTCT GAAATCAGGT
8161 GCAGCCCCAT CTTTCTTCCC AGAGCATTAG TGTGTAGACG TGAAGCCTTG TTTGAAGAGC
8221 TGTATTTAGA ATGCCTAGCT ACTTGTTTGC AAATTTGTGT CTACTCAGTC AAGTTTTAAT
8281 TTAGCTCATG AACTACCTTG ATGTTTAGTG GCATCAGCCC TAATCCATCT GATGCTTTTT
8341 CATTATTAGG CATGTTGGAG ACTTGGGCAA TGTGACTGCT GACAAAGATG GTGTGGCCGA
8401 TGTGTCTATT GAAGATTCTG TGATCTCACT CTCAGGAGAC CATTGCATCA TTGGCCGCAC
8461 ACTGGTGGTA AGTTTTCATA AAAGGATATG CATAAAACTT CTTCTAACAT ACAGTCATGT
8521 ATCTTTTCAC TTTGATTGTT AGTCGCGGTT TCTAAAGATC CAGATAAACT GTACTTGCAG
8581 TTCAAATTAG GAAAAGCAAT TTTATTGGAC AATTACGGTG AAAATGAATT ATTTTATCTA
8641 GGTCAGTTAA GAACACTGTT CTGCTAAGAT GCAGTAAAAA GCAGGTTACA TTTGACCATA
8701 TTAGATCTGA GTTTGGAAAA CAGAAGTAGT CTTTAGTTTT AAAATGGCCA GATTTTCTTG
8761 CCAGGATTGG GTTTCTCACT TGTTAAACAG AACATTTTGT TAAGTTTAAA ACCTGGGATG
8821 GACTTAAGTA TTCATGTTCA TTCATGTTCA TTCAGGACTG CAGGTTATCA TGACTTGTTT
8881 AACTTGTGGG AAGCTGTTGT CCCAAGTTAT CCTGGGGAAC TGCATCTGGT TCTTGCAAAA
8941 CACCAAGTAG ACAGGCTCTC TTTTACCTCC CCTTGAGGGC ATTAACATTC AGTAGTCACT
9001 TCCATTCAGT TAACCCTTTA TTTTTATGGT TTTTCTTGAG CCATAGTTGT AAAGCAGAAA
9061 AATCATTTAT AAAGGTTTGT TGAACAAAAT TCAAAATACT GTTGCTTAAA GTATTAAGAT
9121 TTTTTAGGAT TATACCTTAC TTATAGGCCC GTCATTCATT TGGCATGAAA TTTTGAGTTT
9181 TATTCACTTT CACTTTCCTT TTTTTCCAAA GCAATTAAAA AAACTGCCAA AGTAAGAGTG
9241 ACTGCGGAAC TAAGGTTACT GTAACTTACC ATGGAGGATT AAGGGTAGCG TGTGGTGGTC
9301 TACAACATAG TTATTTGGGT TTTAGTATTT CATTTAGACA GCAACACTTA CCTAATGTTT
9361 AAAGGTAATG TCTTTGCAAC ACCAAGAAAA AGCTTTGAGT AGTAGTTTCT ACTTTTAAAC
9421 TACTAAATAT TAGTATATCT CTCTACTAGG ATTAATGTTA TTTTTCTAAT ATTATGAGGT
9481 TCTTAAACAT CTTTTGGGTA TTGTTGGGAG GAGGTAGTGA TTACTTGACA GCCCAAAGTT
9541 ATCTTCTTAA AATTTTTTAC AGGTCCATGA AAAAGCAGAT GACGGGCAAA GGTGGAAATG
9601 AAGAAAGTAC AAAGACAGGA AACGCTGGAA GTCGTTTGGC TTGTGGTGTA ATTGGGATCG
9661 CCCAATAAAC ATTCCCTTGG ATGTAGTCTG AGGCCCCTTA ACTCATCTGT TATCCTGCTA
9721 GCTGTAGAAA TGTATCCTGA TAAACATTAA ACACTGTAAT CTTAAAAGTG TAATTGTGTG
9781 ACTTTTTCAG AGTTGCTTTA AAGTACCTGT AGTGAGAAAC TGATTTATGA TCACTTGGAA
9841 GATTTGTATA GTTTTATAAA ACTCAGTTAA AATGTCTGTT TCAATGACCT GTATTTTGCC
9901 AGACTTAAAT CACAGATGGG TATTAAACTT GTCAGAATTT CTTTGTCATT CAAGCCTGTG
9961 AATAAAAACC CTGTATGGCA CTTATTATGA GGCTATTAAA AGAATCCAAA TTCAAACTAA
10021 ATTAGCTCTG ATACTTATTT ATATAAACAG CTTCAGTGGA ACAGATTTAG TAATACTAAC
10081 AGTGATAGCA TTTTATTTTG AAAGTGTTTT GAGACCATCA AAATGCATAC TTTAAAACAG
10141 CAGGTCTTTT AGCTAAAACT AACACAACTC TGCTTAGACA AATAGGCTGT CCTTTGAAAG
10201 CTTTAGGGAA ATGTTCCTGC TTAGTCATTT TAGCATTTTG ATTCATAAAG TACCTCCTCA
10261 TTTTAAAAAG ACATTATGAT GTAAGAGAGC CATTTGATAA CTTTTTAGTG AGCTTTGAAA
10321 GGCAAGTTAC AGCCTCAGCT AGCTAGTAAG ATTATCTACC TGCCAGAATG GCACAAATTC
10381 TACATTCAAG GGTAGACGCT GGCACAACCT ACTTACAGAT TAGCCCTTTA AAGCAATCTG
10441 TAGCATTAGA AGATGGAACC AAGGAAATGT TTGACTGTGG GTTCTGGCTG TTGAGAAATA
10501 ATTTACACAC CGAATTAGTG AAATGAGTCA CTTTCTCTTA ATGTATTTAT GTACCTGAGA
10561 GAATGCTTTT CAATGTTAAC CTAACTCAGG TTTGACTAAA TTATTCAATT GGAAATTGTA
10621 GAATATTATT TCTGATAAAC CAGAAATAAG TGAAATGCTG TTTGTTCATA AATATGTACT
10681 TTATCAAATG TAGGAGAGAT CATTTAGGAG AGGAAAAGCT AAATTGGAAG ACAAATCTGT
10741 AGTGTTTCCA AAGTTTTAAA ATTATGGTAA ACAACAGTAT GTTCACAGTA AGTGGTTAAA
10801 ACAACCATTC TTTAAATCTC AGTAGAGAAT TTTTAAAAAG CAGTATTTAA CACATTTCCC
10861 TAATGTAGTT TGTTGCCTAT GTGGAATAAC TCAATTAGAG ACTCACTTAT GCCTTTTGAA
10921 ACTTCAAATA TAATTACACT ACCAGTTTTT ACATGTGCAT ATAGGATGGT CCCAATACTT
10981 TAAATTGGAA ATACAGGCTG TAAGTCCTTC AAGTCTGGAT GTTGGGTAAT CACGTTTTCT
11041 TCCAGAAGCC ATTTGTTAGG ACTTTAAAAC TTCTCAGTGG GCCAGTGTAA AATTAAGGAC
11101 AAGTTTTATA ATTTAAATTT ACAGATAAAT ATAAAACAAT TTTCTCTCAT TTTCTAAAGG
11161 CAGGAATATA AGGACATTGC CCTAGATATA TTCTCCCCAT CAAACCAAAG GTCTTGCTGC
11221 TGAGTATTAT TTAAAAACCA GAGTAATAAA GCAGCTTCGC CTGAGGATGA AGGCAAAGAC
11281 AAAGTTAACT GCTCAGCATA CTGAAACCAG GAGTTTGAAA AAGTAATTCA AAACAACTTC
11341 AAGGCCATAA ATACTTGGAT AGTGTGACAT CAGGTCTTGG CACTGGATTT CCTGCAATTT
11401 CAGATGAAGG CTTGACTTGG CTTTAGATGT TTTCATGTGA TAATTCTTGG ATAACCTACA
11461 ACGATTTTTC CTATTTAACC CACCAACTTT AAGCAAAAGA AAGAACGTAT ATGTGGGGGA
11521 AAAGTTCGTT TACCTCTGCC CCGCAGGGGA ATTAAAACGC TGGTGAAGAA AGGCAACAGG
11581 CAAGGCTTAT ATAAGGAAAC AGTAGTAGGC TGCACTGAAG TCCTCAAACA CAACAAAAAG
11641 CTCTTAGGTT GCAAATGTTA ACCTTGATTC TTTTACCCTT TTGAAAAATT CAATGGGATG
11701 GTTGGAAAAA AAAAAAACCA CAGACACACA CACACACACA CGCAACCTTC TAACGTAATA
11761 CCCAGGCAGT CCGATAATTT ATAGTACAAC GTGTAACACT GGGATCCTCT AGAGTCGACC
11821 TGCAGGCATG CAAGCTTGGC ACTGGCCGTC GTTTTACAAC GTCGTGACTG GGAAAACCCT
11881 GGCGTTACCC AACTTAATCG CCTTGCAGCA CATCCCCCTT TCGCCAGCTG GCGTAATAGC
11941 GAAGAGGCCC GCACCGATCG CCCTTCCCAA CAGTTGCGCA GCCTGAATGG CGAATGGC
//
また、作製した２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端に、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）のアミノ酸配列は、下記の通りである。
DF human SOD1 amino acid
Ala Thr Lys Ala Val Cys Val Leu Lys Gly Asp Gly Pro Val Gln Gly Ile IleAsn Phe
5                   10                  15                 20
Glu Gln Lys GluSer Asn Gly Pro Val Lys Val Trp GlySer Ile Lys Gly Leu Thr Glu
25                  30                  35                 40
Gly Leu His Gly PheHis Val His Glu Phe Gly Asp Asn Thr Ala Gly Cys Thr Ser Ala
45                  50                  55                 60
Gly Pro His Phe Asn Pro LeuSer Arg Lys His Gly Gly Pro Lys Asp Glu Glu Arg His
65                  70                  75                 80
Val Gly Asp Leu Gly AsnVal Thr Ala Asp Lys Asp Gly Val Ala Asp Val Ser IleGlu
85                  90                  95                 100
Asp Ser Val IleSer Leu Ser Gly Asp His Cys Ile IleGly Arg ThrLeu Val Val His
105                 110                 115                120
Glu Lys Ala Asp Asp Gly Gln ArgTrp Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys ***
125                 130                 135                140
また、作製した２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）蛋白のＣ末端に、フラグ（ＦＬＡＧ）タグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したコンストラクト（ＤＦ）の塩基配列は、下記の通りである。
DF human SOD1
1 GCGCCCAATA CGCAAACCGC CTCTCCCCGC GCGTTGGCCG ATTCATTAAT GCAGCTGGCA
61 CGACAGGTTT CCCGACTGGA AAGCGGGCAG TGAGCGCAAC GCAATTAATG TGAGTTAGCT
121 CACTCATTAG GCACCCCAGG CTTTACACTT TATGCTTCCG GCTCGTATGT TGTGTGGAAT
181 TGTGAGCGGA TAACAATTTC ACACAGGAAA CAGCTATGAC CATGATTACG AATTCTGCCA
241 ACCAAATAAG AAACTCTATA CTAAGGACTA AGAAAATTGC AGGGGAAGAA AAGGTAAGTC
301 CCGGGATTGA GGTGTAGCGA CTTTCTATAC CCTCAGAAAA CTAAAAAACA AGACAAAAAA
361 ATGAAAACTA CAAAAGCATC CATCTTGGGG CGTCCCAATT GCTGAGTAAC AAATGAGACG
421 CTGTGGCCAA ACTCAGTCAT AACTAATGAC ATTTCTAGAC AAAGTGACTT CAGATTTTCA
481 AAGCGTACCC TGTTTACATC ATTTTGCCAA TTTCGCGTAC TGCAACCGGC GGGCCACGCC
541 CCCGTGAAAA GAAGGTTGTT TTCTCCACAT TTCGGGGTTC TGGACGTTTC CCGGCTGCGG
601 GGCGGGGGGA GTCTCCGGCG CACGCGGCCC CTTGGCCCCG CCCCCAGTCA TTCCCGGCCA
661 CTCGCGACCC GAGGCTGCCG CAGGGGGCGG GCTGAGCGCG TGCGAGGCGA TTGGTTTGGG
721 GCCAGAGTGG GCGAGGCGCG GAGGTCTGGC CTATAAAGTA GTCGCGGAGA CGGGGTGCTG
781 GTTTGCGTCG TAGTCTCCTG CAGCGTCTGG GGTTTCCGTT GCAGTCCTCG GAACCAGGAC
841 CTCGGCGTGG CCTAGCGAGT TATGGCGACG AAGGCCGTGT GCGTGCTGAA GGGCGACGGC
901 CCAGTGCAGG GCATCATCAA TTTCGAGCAG AAGGCAAGGG CTGGGACGGA GGCTTGTTTG
961 CGAGGCCGCT CCCACCCGCT CGTCCCCCCG CGCACCTTTG CTAGGAGCGG GTCGCCCGCC
1021 AGGCCTCGGG GCCGCCCTGG TCCAGCGCCC GGTCCCGGCC CGTGCCGCCC GGTCGGTGCC
1081 TTCGCCCCCA GCGGTGCGGT GCCCAAGTGC TGAGTCACCG GGCGGGCCCG GGCGCGGGGC
1141 GTGGGACCGA GGCCGCCGCG GGGCTGGGCC TGCGCGTGGC GGGAGCGCGG GGAGGGATTG
1201 CCGCGGGCCG GGGAGGGGCG GGGGCGGGCG TGCTGCCCTC TGTGGTCCTT GGGCCGCCGC
1261 CGCGGGTCTG TCGTGGTGCC TGGAGCGGCT GTGCTCGTCC CTTGCTTGGC CGTGTTCTCG
1321 TTCCTGAGGG TCCCGCGGAC ACCGAGTGGC GCAGTGCCAG GCCCAGCCCG GGGATGGCGA
1381 CTGCGCCTGG GCCCGCCTGG TGTCTTCGCA TCCCTCTCCG CTTTCCGGCT TCAGCGCTCT
1441 AGGTCAGGGA GTCTTCGCTT TTGTACAGCT CTAAGGCTAG GAATGGTTTT TATATTTTTA
1501 AAAGGCTTTG GAAAACAAAA ATACGCAACA GAGACCGTTT GTGTGACACT TTGCAGGGAA
1561 GTTTGCTGGC CTCTGTTCTA GGTCATGATT GGGCTGCAAG GGCAGAGAAG GTAGCCTTGA
1621 ACAGAGGTCC TTTTCCTCCT CCTAAGCTCC GGGAGCCAGA GGTTTAACTG ACCCTTTTGG
1681 GGATTTTTGA GGGCAGTGAT CTTAACTTTG GGTGCACAGT TAGCTTATTT GAAGATCTTA
1741 CTAAAAATAC ACCAGAGCCC AACCTCCGAC CAATTACATC AAAACCTGTC CTAGTGCAGG
1801 GTGAGTATTG CTGTTTTTTG AAAGTTTCCA AAAGTGATTT TGATGTGCAC CTACGATTGA
1861 GAACTGTCGT TTGAGGACAG TGGGTGGAGT TTCGTATTTG GAAATTAGAA GACCTGGAGT
1921 TTCCATTACA CCGAATTGGC ACTTAATAAC TGTTGTCGGA GCATTTCTTA AGCCACATTT
1981 TCGTAAAGTG GCTTTAAAAT TGCTCTGCCA GTAGGCAGGT TGCTAAGATG GTCAGAGACA
2041 AACTTCTGAA CGACTCTTGT AAAATATACA GAAATATTTT CAGAACTTTT ATCAGTAAAA
2101 TTACAAAACG TGTTGCAAGG AAGGTGCTTG TGATAACACT GTCCCCAGAA CCTTAGTGAA
2161 GTTACCAACT GGTGGAAAAT TTTCTCTTGC ACTCGGCTTA AAAATCATGA GGGAATATTT
2221 ACTATACGAA TGAGATTCAG TCTTTAAAGG GGTTTACAGA AACGTGAGAG GACAGGAACA
2281 GTTAGTCTGT GTAAATGTCT GAAATATATG TGAGGGAGAT AATGAGTTTA GCCTTTTTCT
2341 TTAATAGGTC TCCAGATTTT CTGGAAAAGG TTCTTTGGCA TTTGACTCCA TTTTGCTGTT
2401 TCATTTGTCA GACTTCTTTT TGTCCCTCTT TACTTCTCCC CACATAATTC ACCAGTACTA
2461 GTGTTTTGTT TTTCAGACCA AGTCTCGCTC TGTCGCCCAG GCTGGAGTGC AGTGGCGCGA
2521 TCTCAGCTCA CTGCAACCTC CGCCTCCCAG GTTCAAGCAA TTCTCCTGCC TCAGCCTCCC
2581 GGGTAGCTGG GACTACAGGC GCGCGCCGCC ACGCCTGGCT AATTTTTTAT ATTTTAGTAG
2641 AGACGGCGTT TCACCATGTT GGCCAGGATG GTCTCGATCT GTTGACGTCG TGATCCACCC
2701 GCCTCGGCCT CCCAAAGTGC TGGGATTACA GGCGTGAGCC ACCCCGCCCG GCCACCAGTG
2761 CTATTCTTAA GACGCCTCTG AGGAATCCCT TCTCCCTGGC CATTGAGAAT CCATGCATGA
2821 ACCCAGGTTT TCCACCTTCC CTGAGCAGCT TGCATAGTTC CTTCTTTTAA GCGCCTGACT
2881 TCGTTTTGTT TGGTGCCCGT TGTACCTGAG AATGAGCCTT GGATAGTGGA GCATTCCAGC
2941 TTTCCAGATA TGCAGAGATA ATACATTGGC TATCAGCTAC TTGGCTTGGC CTATTCCGTG
3001 TTTAAAATCT TGGACTCTTT GCTAGTTTTT ACAGATCAGA ATTTTTCACG TATTAATCCA
3061 GTTTTCCTAG CTTCTCTTGA AGAATTTTTG GAGATCTCTT CATACTGAGC CTTCATTAGC
3121 CCAGGACAGT ACTGCTGTAG CAGTTCATAT ATTTTTTCGC TTCCCAGGCC TGTGTTATTC
3181 ACTTAAGTTC ATAGCCTGGT CCCTGCAGGG TTGTACCCGA GCACAGCTAC TTAGATGTCC
3241 TGAATGTATT ACCGGTTAAA TGGAGGTTTC AAAGAACCTG CTGTTTTTGG CCCTGTGCTC
3301 TTGATAACAG AGTGTTTGAG GGACAACTTT CACATTTGAG TTTTTCCAAA ATTAAAGGTT
3361 GTAGAAGAGT CACAGTATCT ATTGTCAAAA AGAAAAGAAT TTAAAAAGGC AGCAATTGCC
3421 AGGATACTTC ATTTGAGCAA TGATATTTTC CAGTGGAAAG TCACATCTTA AGGGTTAATG
3481 CCCCTTAACT GTTGGCCGTA TTTGAAAACA AACCAAGCTA AAAACAAGAG ACACTGACAT
3541 GTTGTATGAC GGTGTGGTGT GGATGTTGTG TTTATTTTAG TCCTGAGATC TAGTTGTAAC
3601 TTCCTTGATT TCTGTATGTA GCCACGGAGC ACCATTACCT GTCACCATTA CCTGAATGGC
3661 TATACTGCTT GCTTTCATTT TGGTAGAGTG GAAAGGTTAC CTAGGTTTCA GTGCTTGAAA
3721 AGATTTCAGA AAGCAGTAGT ACGTCTGGTT AGACTAGAAT CAGTCCTCTC CTGGGGGCAG
3781 TGGAATATAA TATTTTCTGA CTGCTAATTA AAAATACCTG TGATAGCCGG GCGTGGTGGC
3841 TTACGCCTGT AATCCCAGCA CTTTGGGAGG CCGAGACGGG TGGATCACGA GGTCAGCAGA
3901 TGGAGACCAT CCTGGCTAAC ACGGTGAAAC CCCGTCTCTA CTAAAAATGC AAAAAAATTA
3961 GCCGGGTGTG GTGGTGGGCG CCTGTAGTCC CAGCTACTCA GGAGGCTGAG GCAGGAGAAT
4021 GGCATGAACC TGGGAGGCGG AGCTTGCAGT GAGCCGAGAT CATGTCACTG CACTCCAGCC
4081 TGGGCGACAG AGCGAGACTC GTCTCAAAAA AAAAAAGAAA AAAACTTATG ATGGACACTT
4141 AAAAACACTC ACTGAGTGGG GAGTGGAGAG CAGGGGTCCC AGGGTAGCCT GTTGGACATT
4201 TCCAGGGCGA CTTTTTCTTT TTTTTTTTTT AAAGTCAAGT GAGTATGCCA TATGGAAAAG
4261 GGTGTGCGTG GAGAAAAAGC AAGGGGCTCC AGAGTGTAGG ATGAGACATA CACCTTTTGG
4321 GTTAAAAAGG CTGAGGCAGG AGAATGGCGT GAACCCGGGA GGCGGAGCTT GCAGTGAGCT
4381 GAGATCATGC CACTGCACTC CAGCCTGGGC GACAGAGCGA GACTCTTGTC TCAAAATAAA
4441 AAACGTTTAC ATGTACATGT ATATTCAACA TGTACAAATA TAACCTATTC AAAAGTATTT
4501 ACTACATAAA TAGGTACTTA CATTACCTAT TTACTGTAAT AGTCAAAGCC TATGAAGTAT
4561 CTAACACTGA TGTGTAGGTA CTCACTTTGC TTGCCACTCT ATTAGGTGCT TTTTATGTTA
4621 TTTAATCATG AAGCCTGGCC ACAGGGTGCT TGTGCATTGA GTGTGGGAAC AAGATTACCA
4681 TCTCCCTTTT GAGGACACAG GCCTAGAGCA GTTAAGCAGC TTGCTGGAGG TTCACTGGCT
4741 AGAAAGTGGT CAGCCTGGGA TTTGGACACA GATTTTTCCA CTCCCAAGTC TGGCTGCTTT
4801 TTACTTCACT GTGAGGGGTA AAGGTAAATC AGCTGTTTTC TTTGTTCAGA AACTCTCTCC
4861 AACTTTGCAC TTTTCTTAAA GGAAAGTAAT GGACCAGTGA AGGTGTGGGG AAGCATTAAA
4921 GGACTGACTG AAGGCCTGCA TGGATTCCAT GTTCATGAGT TTGGAGATAA TACAGCAGGT
4981 GGGTGTTGTG CTGTGCTGGT GACCCATACT TGTTCACCCT AGTTAGATAA ACAGTAGAGT
5041 AGCCCCTAAA CGTTAAAACC CCTCAACTTG TTTTTGTTTT TGAGAAAGGG TCTTGCTCTG
5101 TCGCTCAGGC TGGAGTGCAG TGGCGCTGTG CGATCATGGC TGACCTTAGC CTTGACCTCC
5161 CAGGCTCCAT TGATCCTCAT GCCTTGGCCC GTAGCTGGGA CTACAGGTAC ACACCACCAC
5221 GCCTGGCTAA TTTTTGTATT TTTTTCTAGA GGTGGGGTTT CATCATGTTG CCCAGGCTGG
5281 TCTTGAACTG CTGGGCTCAA GTGGTCTATC CTCCTCGACC TCCCAAAGTG CTGGGATTAC
5341 ATGTGTGAGC CACTGTGCCT GGGAAAACCC TCAACTTTTC TTTTAAAAAA GAGGTCAACT
5401 TTATTGTATA TAAGCACTGT GCTAAAATTG CAGGAACTGG GACCATATCC TGATTTTTGT
5461 AATAATGCCA GCAGAGTACA CACAAGAAAA GTAACTGCAC TAGATTGTGA AGACTGGGGT
5521 GGACCTGCTT CTGAAGGTCC AGTGCCCTTT GTCTTAAGAT TTGGTGTAGT GTGTCTTTAG
5581 AAACCAAAAA AAGAGAAGAA GATCAACCTT AAGATTAGCC ACAAAACTGG GCTTTGATAC
5641 CTAGGTGTGG AAAAGAAAGG GAAAGAGTTG ATGTTTTGTC TTACAGCATC ATTGTAGAAG
5701 AGGGTGTTTT TTTGTTTGTT TGTTTTTTGA GACGGAGTCT TACTCTGTGG CCCAGGCTGG
5761 AGTGCAGTGG CGCGATCTCG GCTCACTGCA AGCTCCGCCT CCCGGGTTCA TGCCATTCTC
5821 CTGCCTCAGC CCCCTGAGTA GCTGGGACTA CAGGTGCCCG CCACCCCGCC TGGCTAATTT
5881 TTTGTATTTT TAGTAGAGAC GGGGTTTCAC TGTGTTAGCC AAGATGGTCT CTCTCCTGAC
5941 CTCGTGATCC GCCTGTCTCA GCCTCCCAAA GTGCTGGGAT TACAGGCATG AGCCACCGCA
6001 CCCAGCCAGA AGAGGGTGTT TTTTAAAGAA GGCAAATAGG AAATAAAAAC TTGGGCTCTT
6061 AACTTTTGTA ATGATCCCAG GTGTTTGAGC TGGGGGTTGA GGGTGGGTGC CTCGAGCAAA
6121 GGGGCTGCAT TTATTTGCAT AATGCCATGT AAGAGTAGCT CTACACCCCA AACACAGGCT
6181 TCTTAGTGGG ACCAAAGTAT GATACAAACT GAAGATGGAA TGCAGAGGAT TATTGGTACT
6241 TTGGAATATG CTTAAAAAAA ATTTTTTTAA AGTATTTTTA AAAAATCAGG CAACCCCTGA
6301 ACCAGAGTAG GTTCAGAGAA ACTGCCAAAT TTTATTTTCT TAATTTGGGA TTGGAAGCAA
6361 GTTAACAGAA GTTTATGAGT TAAGTTGCAT TTAGTGATCT TTTGCCATAT TTGAGTAATA
6421 ATCTGATTTT TTTGTTTATA GATTTCTTCT TAAATTAACT TTATTCATCT TGCTAATTTA
6481 GTTTCAAATA GTGATTTGTA ATGATCAGAT TTGATCCATT TCTGTAATTG CTGAAATTCC
6541 CCCGAGTTGC TTTTTGGCTT TACCGCCTCT GGTCTGGGAG GTGATTGCTC TGCTGCTTCC
6601 TGTAACTTGC CTGCCTTTCT CCCTGTGTGG GACTCCTGCG GGTGAGAGCG TGGCTGAAGA
6661 CAGCCGTGTT ATGAAAGGGC CTCCTGTGCT GTCGAGGTTG TGCTCTGTGA ATGTCATCCC
6721 CTGGTGCACA GCAGCACCTT CTACACAGGA TACAGTTGGA ATGCCGCCCC CTCGAGTTGT
6781 GTAAGGCAGC AGCCTTGGCC CTTGCACATA AGATGCTGTT GAATATTCTG CCTGCACCAA
6841 GTAAAGGGCA CAGATAGAAC TGCTTGGCAT ATGTTGCTGG GGAGATGAGT TTTTTGTAAA
6901 GTATACTACG TTCTTAAGAA TTTGGATCAT AACCATGGGA TTTTAATAAT AGAAAAACTG
6961 TTGAAGATCA GTCTGGTCCC TTATTTTTAC AGTGAAGAAG CCAAAGCCCA GAGAAGGGTG
7021 TTAACTTTAC AAGTGTCAGA CAGTAGTTAG AACTTGGTGG GGTTTTTTTT TTTTTTTTTT
7081 TGAGATGGAG TCTTGCTCTG TTGCCCAGGC TGGAGTGCAG TGGTGCGATC TCAGCTCACT
7141 GCAACCTCTG CCTCCCAGGT TCAAGCGATT CTCCTGCCTC AGCCTACTAA GTAGCTGGGA
7201 CTATAGGTGC GCACCACCAC GCCTAGCTAA TTTTTGTATT TTTTCAGTAG AGACAGGGTT
7261 TTGCTATGCT GGCCAGGCTG GTCTCAAACT CCTGACCTCA GATGATCCAG CCACCTCAGC
7321 TTCCCAAAGT GCTGGGGTTC CAGGTGTTAG CCACCATGCC TGGCCATAGA CTTGTTTCTG
7381 TTCCCTTCTC ACTGTGGCTG TACCAAGGTG TTGCTTATCC CAGAAGTCGT GATGCAGGTC
7441 AGCACTTTCT CCATGGGAAG TTTTAGCAGT GTTTCTTTTT AGAATGTATT TGGGAACTTT
7501 AATTCATAAT TTAGCTTTTT TTTCTTCTTC TTATAAATAG GCTGTACCAG TGCAGGTCCT
7561 CACTTTAATC CTCTATCCAG AAAACACGGT GGGCCAAAGG ATGAAGAGAG GTAACAAGAT
7621 GCTTAACTCT TGTAATAATG GCGATAGCTT TCTGGAGTTC ATATGGTATA CTACTTGTAA
7681 ATATGTGCTA AGATAATTCC GTGTTTCCCC CACCTTTGCT TTTGAACTTG CTGACTCATC
7741 TAAACCCCTG CTCCCAAATG CTGGAATGCT TTTACTTCCT GGGCTTAAAG GAATTGACAA
7801 ATGGGGACAC TTAAAACGAT TTGGTTTTGT AGCATTTATT GAATATAGAA CTAATACAAG
7861 TGCCAAAGGG GAACTAATAC AGGAAATGTC ATGAACAGTA CTGTCAACCA CTAGCAAAAT
7921 CAATCATCAT TGTGAAACAT AGGAAGCTTC TGTAGATAAA AAAAAAAATT GATACTGAAA
7981 ACTAGTCGAG ACTCCATTTA TATGTGTATG TTTTCTGAAA GCCTTTCAGA AAAATATTAA
8041 ATTTAAGGAC AAGATTTTTA TATCAGAGGC CTTGGGACAT AGCTTTGTTA GCTATGCCAG
8101 TAATTAACAG GCATAACTCA GTAACTGAGA GTTTACCCTT TGGTACTTCT GAAATCAGGT
8161 GCAGCCCCAT CTTTCTTCCC AGAGCATTAG TGTGTAGACG TGAAGCCTTG TTTGAAGAGC
8221 TGTATTTAGA ATGCCTAGCT ACTTGTTTGC AAATTTGTGT CTACTCAGTC AAGTTTTAAT
8281 TTAGCTCATG AACTACCTTG ATGTTTAGTG GCATCAGCCC TAATCCATCT GATGCTTTTT
8341 CATTATTAGG CATGTTGGAG ACTTGGGCAA TGTGACTGCT GACAAAGATG GTGTGGCCGA
8401 TGTGTCTATT GAAGATTCTG TGATCTCACT CTCAGGAGAC CATTGCATCA TTGGCCGCAC
8461 ACTGGTGGTA AGTTTTCATA AAAGGATATG CATAAAACTT CTTCTAACAT ACAGTCATGT
8521 ATCTTTTCAC TTTGATTGTT AGTCGCGGTT TCTAAAGATC CAGATAAACT GTACTTGCAG
8581 TTCAAATTAG GAAAAGCAAT TTTATTGGAC AATTACGGTG AAAATGAATT ATTTTATCTA
8641 GGTCAGTTAA GAACACTGTT CTGCTAAGAT GCAGTAAAAA GCAGGTTACA TTTGACCATA
8701 TTAGATCTGA GTTTGGAAAA CAGAAGTAGT CTTTAGTTTT AAAATGGCCA GATTTTCTTG
8761 CCAGGATTGG GTTTCTCACT TGTTAAACAG AACATTTTGT TAAGTTTAAA ACCTGGGATG
8821 GACTTAAGTA TTCATGTTCA TTCATGTTCA TTCAGGACTG CAGGTTATCA TGACTTGTTT
8881 AACTTGTGGG AAGCTGTTGT CCCAAGTTAT CCTGGGGAAC TGCATCTGGT TCTTGCAAAA
8941 CACCAAGTAG ACAGGCTCTC TTTTACCTCC CCTTGAGGGC ATTAACATTC AGTAGTCACT
9001 TCCATTCAGT TAACCCTTTA TTTTTATGGT TTTTCTTGAG CCATAGTTGT AAAGCAGAAA
9061 AATCATTTAT AAAGGTTTGT TGAACAAAAT TCAAAATACT GTTGCTTAAA GTATTAAGAT
9121 TTTTTAGGAT TATACCTTAC TTATAGGCCC GTCATTCATT TGGCATGAAA TTTTGAGTTT
9181 TATTCACTTT CACTTTCCTT TTTTTCCAAA GCAATTAAAA AAACTGCCAA AGTAAGAGTG
9241 ACTGCGGAAC TAAGGTTACT GTAACTTACC ATGGAGGATT AAGGGTAGCG TGTGGTGGTC
9301 TACAACATAG TTATTTGGGT TTTAGTATTT CATTTAGACA GCAACACTTA CCTAATGTTT
9361 AAAGGTAATG TCTTTGCAAC ACCAAGAAAA AGCTTTGAGT AGTAGTTTCT ACTTTTAAAC
9421 TACTAAATAT TAGTATATCT CTCTACTAGG ATTAATGTTA TTTTTCTAAT ATTATGAGGT
9481 TCTTAAACAT CTTTTGGGTA TTGTTGGGAG GAGGTAGTGA TTACTTGACA GCCCAAAGTT
9541 ATCTTCTTAA AATTTTTTAC AGGTCCATGA AAAAGCAGAT GACGGGCAAA GGTGGAAAGA
9601 CTACAAAGAC GATGACGACA AGTGATGGAA GTCGTTTGGC TTGTGGTGTA ATTGGGATCG
9661 CCCAATAAAC ATTCCCTTGG ATGTAGTCTG AGGCCCCTTA ACTCATCTGT TATCCTGCTA
9721 GCTGTAGAAA TGTATCCTGA TAAACATTAA ACACTGTAAT CTTAAAAGTG TAATTGTGTG
9781 ACTTTTTCAG AGTTGCTTTA AAGTACCTGT AGTGAGAAAC TGATTTATGA TCACTTGGAA
9841 GATTTGTATA GTTTTATAAA ACTCAGTTAA AATGTCTGTT TCAATGACCT GTATTTTGCC
9901 AGACTTAAAT CACAGATGGG TATTAAACTT GTCAGAATTT CTTTGTCATT CAAGCCTGTG
9961 AATAAAAACC CTGTATGGCA CTTATTATGA GGCTATTAAA AGAATCCAAA TTCAAACTAA
10021 ATTAGCTCTG ATACTTATTT ATATAAACAG CTTCAGTGGA ACAGATTTAG TAATACTAAC
10081 AGTGATAGCA TTTTATTTTG AAAGTGTTTT GAGACCATCA AAATGCATAC TTTAAAACAG
10141 CAGGTCTTTT AGCTAAAACT AACACAACTC TGCTTAGACA AATAGGCTGT CCTTTGAAAG
10201 CTTTAGGGAA ATGTTCCTGC TTAGTCATTT TAGCATTTTG ATTCATAAAG TACCTCCTCA
10261 TTTTAAAAAG ACATTATGAT GTAAGAGAGC CATTTGATAA CTTTTTAGTG AGCTTTGAAA
10321 GGCAAGTTAC AGCCTCAGCT AGCTAGTAAG ATTATCTACC TGCCAGAATG GCACAAATTC
10381 TACATTCAAG GGTAGACGCT GGCACAACCT ACTTACAGAT TAGCCCTTTA AAGCAATCTG
10441 TAGCATTAGA AGATGGAACC AAGGAAATGT TTGACTGTGG GTTCTGGCTG TTGAGAAATA
10501 ATTTACACAC CGAATTAGTG AAATGAGTCA CTTTCTCTTA ATGTATTTAT GTACCTGAGA
10561 GAATGCTTTT CAATGTTAAC CTAACTCAGG TTTGACTAAA TTATTCAATT GGAAATTGTA
10621 GAATATTATT TCTGATAAAC CAGAAATAAG TGAAATGCTG TTTGTTCATA AATATGTACT
10681 TTATCAAATG TAGGAGAGAT CATTTAGGAG AGGAAAAGCT AAATTGGAAG ACAAATCTGT
10741 AGTGTTTCCA AAGTTTTAAA ATTATGGTAA ACAACAGTAT GTTCACAGTA AGTGGTTAAA
10801 ACAACCATTC TTTAAATCTC AGTAGAGAAT TTTTAAAAAG CAGTATTTAA CACATTTCCC
10861 TAATGTAGTT TGTTGCCTAT GTGGAATAAC TCAATTAGAG ACTCACTTAT GCCTTTTGAA
10921 ACTTCAAATA TAATTACACT ACCAGTTTTT ACATGTGCAT ATAGGATGGT CCCAATACTT
10981 TAAATTGGAA ATACAGGCTG TAAGTCCTTC AAGTCTGGAT GTTGGGTAAT CACGTTTTCT
11041 TCCAGAAGCC ATTTGTTAGG ACTTTAAAAC TTCTCAGTGG GCCAGTGTAA AATTAAGGAC
11101 AAGTTTTATA ATTTAAATTT ACAGATAAAT ATAAAACAAT TTTCTCTCAT TTTCTAAAGG
11161 CAGGAATATA AGGACATTGC CCTAGATATA TTCTCCCCAT CAAACCAAAG GTCTTGCTGC
11221 TGAGTATTAT TTAAAAACCA GAGTAATAAA GCAGCTTCGC CTGAGGATGA AGGCAAAGAC
11281 AAAGTTAACT GCTCAGCATA CTGAAACCAG GAGTTTGAAA AAGTAATTCA AAACAACTTC
11341 AAGGCCATAA ATACTTGGAT AGTGTGACAT CAGGTCTTGG CACTGGATTT CCTGCAATTT
11401 CAGATGAAGG CTTGACTTGG CTTTAGATGT TTTCATGTGA TAATTCTTGG ATAACCTACA
11461 ACGATTTTTC CTATTTAACC CACCAACTTT AAGCAAAAGA AAGAACGTAT ATGTGGGGGA
11521 AAAGTTCGTT TACCTCTGCC CCGCAGGGGA ATTAAAACGC TGGTGAAGAA AGGCAACAGG
11581 CAAGGCTTAT ATAAGGAAAC AGTAGTAGGC TGCACTGAAG TCCTCAAACA CAACAAAAAG
11641 CTCTTAGGTT GCAAATGTTA ACCTTGATTC TTTTACCCTT TTGAAAAATT CAATGGGATG
11701 GTTGGAAAAA AAAAAAACCA CAGACACACA CACACACACA CGCAACCTTC TAACGTAATA
11761 CCCAGGCAGT CCGATAATTT ATAGTACAAC GTGTAACACT GGGATCCTCT AGAGTCGACC
11821 TGCAGGCATG CAAGCTTGGC ACTGGCCGTC GTTTTACAAC GTCGTGACTG GGAAAACCCT
11881 GGCGTTACCC AACTTAATCG CCTTGCAGCA CATCCCCCTT TCGCCAGCTG GCGTAATAGC
11941 GAAGAGGCCC GCACCGATCG CCCTTCCCAA CAGTTGCGCA GCCTGAATGG CGAATGGC
//
【産業上の利用可能性】
【００６７】
本発明に係る家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）発症するトランスジェニックマウスは、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｉｃ ｌａｔｅｒａｌ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＡＬＳ）症状を呈するので、これを用いれば、家族性筋萎縮性側索硬化症（ＦＡＬＳ）その他の筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の病態の解明や、治療方法の確立につながると考えられるので、産業上有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】Ｙ．グローナー教授（ｐｒｏｆ.Ｙ.Ｇｒｏｎｅｒ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，ｔｈｅ  Ｗｅｉｚｍａｎｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｉｅｎｃｅ，Ｉｓｒａｅｌ））より供与された、ヒト野生型ＳＯＤ１ゲノム（Ｗ）の全長を含むプラスミド（ｐ−ＧＳＯＤ−ＳＶｎｅｏ）の遺伝子地図である。
【図２】ヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）をもとに、ポリメラーゼ連鎖反応変異誘発（ＰＣＲ  ｍｕｔａ−ｇｅｎｅｓｉｓ）を行い、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）を含むコンストラクト及びこれらにＦＬＡＧ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）を付加したものの各々のＳＯＤ１分子のシェーマを説明する説明図である。
【図３】図３（ａ）は、ヒト野生型ＳＯＤ１（Ｗ）のエキソン（ｅｘｏｎ）５の塩基配列を示す図（配列表）であり、また、図３（ｂ）は、２塩基欠失ＳＯＤ１ゲノム（Ｄ）のエキソン（ｅｘｏｎ）５の塩基配列を示す図（配列表）である。
【図４】図４（ａ）は、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体に対するマウス（ＮＴＧ）及びヒトＷ、ＷＦ、ＤＦの各ＳＯＤ１に反応の結果（写真）であり、図４（ｂ）は、抗ヒトＳＯＤ１モノクローナル抗体に対するマウス（ＮＴＧ）及びヒトＷ、ＷＦ、ＤＦの各ＳＯＤ１に反応の結果（写真）であり、図４（ｃ）は、抗ＦＬＡＧに対するマウス（ＮＴＧ）及びヒトＷ、ＷＦ、ＤＦの各ＳＯＤ１に対する反応の結果（写真）であり、図４中、図４（ｄ）は、Ｗ４において、大脳、脊髄、筋肉、肝臓及び腎臓のホモジェネート（ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｓ）を、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体を用いて解析した結果（写真９であり、また、図４（ｅ）は、ＤＦ７（ＤＦの後の数字「７」は、ＤＦの７番目のラインを意味している。）抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体を用いて解析した結果（写真）である。
【図５】非トランスジェニックマウス（ＮＴＧ）の下部脊髄をヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色した結果（写真）である。
【図６】ＤＦ７マウスの下部脊髄をヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色した結果（写真）である。
【図７】ＤＦ７マウスの下部脊髄をヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色し、これを強拡大した写真である。
【図８】レビー小体類似硝子様凝集体（Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ-ｌｉｋｅ  ｈｙａｌｉｎｅ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ（ＬＢＨＩ））と、抗ＳＯＤ１ポリクローナル抗体との反応結果を示す写真である。
【図９】レビー小体類似硝子様凝集体（Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ-ｌｉｋｅ  ｈｙａｌｉｎｅ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ（ＬＢＨＩ））と、抗ＦＬＡＧ抗体との反応結果を示す写真である。
【図１】
0004590638.tif 000002
【図２】
0004590638.tif 000003
【図３】
0004590638.tif 000004
【図４】
0004590638.tif 000005
【図５】
0004590638.tif 000006
【図６】
0004590638.tif 000007
【図７】
0004590638.tif 000008
【図８】
0004590638.tif 000009
【図９】
0004590638.tif 000010
【配列表】
0004590638000001.app