(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
大腸菌細胞においてＭＥＰ経路のｌｙｔＢ遺伝子を欠失または不活性化または変化させることにより、遺伝子産物であるｌｙｔＢ酵素の酵素活性を低下させてγ／δＴ細胞を活性化するＬｙｔＢ酵素の基質を濃縮することを特徴とする、γ／δＴ細胞を活性化するＬｙｔＢ酵素の基質を濃縮する方法。
【請求項２】
ｌｙｔＢ遺伝子が配列番号１の配列であり、配列番号２の配列からなるポリペプチドをコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項1または2の方法により得られた、γ/δT細胞を活性化するLytB酵素の基質が濃縮された大腸菌細胞由来の抽出物の低分子画分。
【請求項４】
γ／δＴ細胞をインビトロ活性化するための、請求項３に記載の低分子画分の使用。
【請求項５】
医薬を製造するための、請求項３に記載の低分子画分の使用。
【請求項６】
請求項３に記載の低分子画分を含んでなる、薬剤。
【請求項７】
γ／δＴ細胞を活性化するための医薬を製造するための、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
選択される医薬用形態が、免疫系により異種または自己抗原として認識され得る補助物質を含有することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項９】
選択される薬剤用形態が、免疫系により異種または自己抗原として認識され得る補助物質を含有することを特徴とする、請求項６に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は遺伝子の欠失または不活性化を介してメバロネート非依存性イソプレノイド代謝経路（ＭＥＰ経路）の中間体を濃縮するための細胞および生物に関する。さらに、本発明の遺伝子が欠失または不活性化されている生物のＭＥＰ経路由来の中間体および生成物を生成するための方法、ならびにこれらの生物を生産するための遺伝子工学および従来の方法にも言及する。また、ＭＥＰ経路中間体を濃縮するための酵素阻害剤の適用にも言及する。また、本発明の遺伝子または酵素が欠失もしくは阻害されている細胞および生物の治療適用、ならびにこれらの細胞および生物からの薬剤の製造にも言及する。
【０００２】
古典的なアセテート／メバロネート経路を用いるイソプレノイドの生合成（Beytia ED, Porter JW, Annu Rev Biochem, 1976; 45: 113-42)および別法としてメバロネート非依存性生合成経路、２−メチル−Ｄ−エリトリトール経路（ＭＥＰ経路、ＤＯＸＰ経路と同義）が公知である(Rohmer M. Nat Prod Rep, 1999 Oct; 16(5):565-74)。両経路は総ての高級イソプレノイドの共通前駆体であるイソペンテニルピロホスフェート（ＩＰＰ）をもたらす。アセテート／メバロネート経路が先般来公知であり十分に理解されている一方で、現在ＭＥＰ経路の反応における生合成段階の総てが十分に理解されているわけではない。
【０００３】
これまで、ＭＥＰ経路に関する知識の適用に基いて、さまざまなバイオテクノロジー関連の方法が派生してきた：
１．ＭＥＰ経路はヒトには存在しないため、ＭＥＰ経路を介する種々の酵素の阻害薬は殺菌剤、除草剤として好適である。  
２．ＭＥＰ経路のある中間体はヒトγ／δＴ細胞に大きな刺激をもたらす。これらの中間体は免疫調節薬として好適である。  
３．ＭＥＰ経路のある遺伝子の過剰発現を介して（例、ＤＯＸＰシンターゼ、ＬｙｔＢ）、ＭＥＰ経路の結果生じた生成物として高級イソプレンの濃縮物が得られる。
【０００４】
ＭＥＰ経路の遺伝子の欠失またはＭＥＰ経路の相当する酵素の不活性化を介してＭＥＰ経路の中間体が得られることはこれまで知られていなかった。
【０００５】
ヒトγ／δＴ細胞はＭＥＰ経路の１以上の中間体を介して活性化されることは公知である。これは、末梢血リンパ球とＭＥＰ経路を有する生物の抽出物とをインキュベートすればγ／δＴ細胞集団の選択的増殖およびサイトカイン分泌が起こることを意味する(Jomaa H, Feurle J, Luhs K, Kunzmann V, Tony HP, Herderich M, Wilhelm M, FEMS Immunol Med Microbiol. 1999 Sep; 25(4): 371-8)。この活性化基質の正確な化学的組成はまだ知られていない。公開されたデータは、３−ホルミル−１−ブチルピロホスフェートがＭＥＰ経路の仮定上の中間体としてγ／δＴ細胞を活性化する役割を果たすことを示唆している(Belmant C, Espinosa E, Poupot R, Peyrat MA, Guiraud M, Poquet Y, Bonneville M, Fournte JJ, J. Biol. Chem. 1999 Nov 5; 274(45): 32079-84)。
【０００６】
このためＭＥＰ経路のさまざまな遺伝子（例、ＤＯＸＰリダクトイソメラーゼ、ｇｅｐＥ）が欠失している細菌は、もはやγ／δＴ細胞を活性化できない(Altincicek B, Moll J, Campos N, Forester G, Beck E, Hoeffler JF, Grosdemange-Billiard C, Rodriguez-Conception M, Rohmer M, Boronat A, Eberl M, Jomaa H, J Immunol. 2001 Mar. 15; 166(6):3655-8)。これらの欠失突然変異株を生成するためには遺伝子工学を用いて細菌にＭＥＰ経路の遺伝子を導入することが必要である。結果としてＭＥＰ経路がもはや機能しない場合細菌はメバロネート添加培地中で生存できる（図１）。
【０００７】
意外にも、ｌｙｔＢ遺伝子が欠失している細菌（実施例１）は典型的な細菌よりもより強くγ／δＴ細胞を活性化することが見出された（実施例２，図２）。ＭＥＰ経路におけるｌｙｔＢ遺伝子の最も重要な関与が示された（実施例３）。このようにｌｙｔＢ酵素レベルでのＭＥＰ経路の遮断はγ／δＴ細胞の活性化を担う中間体の濃縮をもたらす。
【０００８】
従って、相当する遺伝子の欠失、変異、または機能的不活性化を介してＭＥＰ経路の中間体を濃縮する方法が利用可能である。ＭＥＰ経路の中間体の濃縮はまた、相当するポリペプチドの酵素機能を阻害することによっても達成できる。
【０００９】
配列番号２に示されたアミノ酸を有するポリペプチドまたは配列番号２のポリペプチドの類似体もしくは誘導体をコードするＤＮＡ配列は、ポリペプチドの酵素学的作用が実質的に低下せずに１以上のアミノ酸が欠失、付加または他のアミノ酸により置換されている本発明の方法のプロセスを実行するのに特に好適である。
【００１０】
さらに、本発明は請求項１〜１７により定義される。本発明のさらなる特徴は従属請求項で定義される。
【００１１】
以下に付属の図を用いて本発明を説明する。
【００１２】
遺伝子およびその遺伝子産物（ポリペプチド）をその一次構造と共に一連のプロトコールに記載し、以下のように配置した：
配列番号１    ｌｙｔＢ遺伝子
配列番号２    ｌｙｔＢタンパク質
配列は大腸菌由来である。
【００１３】
配列プロトコールで指定されたＤＮＡ配列を除いて、その他の配列は遺伝コードの変性の結果別のＤＮＡコードを有するが、それは同じポリペプチドまたはそのポリペプチドの類似体もしくは誘導体をコードし、好適である。これはまた大腸菌以外の特に他の細菌、藻類、植物体および原生動物由来の配列も包含し、配列比較または機能分析に基いて配列プロトコールで指定された配列と相同であると認識される。
【００１４】
本発明は本発明の遺伝子が主として既知の方法の結果機能的に不活性化される細胞および生物ならびにその細胞および生物の生産に言及する。その遺伝子は完全に不活性化される必要はないが、その代わりにそれらの機能を低下または改変させなくてはならない。これは以下により達成される。  
・遺伝子の完全または部分的欠失
・人工ＤＮＡ配列または選択マーカーのための遺伝子を介する遺伝子の置換
・選択マーカーのための遺伝子の挿入
・コーディング配列の５’および３’領域における突然変異（プロモーター、エンハンサー、終了配列、リボゾームコンジュゲートの影響）
・アンチセンスＤＮＡをコードするＤＮＡ構築体の導入
・突然変異誘発薬、電離放射線、ＵＶ放射線の適用
・自然発生突然変異体のスクリーニング
【００１５】
本発明の配列の不活性化または修飾は、細菌、藻類、植物体および原生動物において起こり得る。安定な突然変異体を維持するために、アセテート／メバロン酸経路の遺伝子を部分的または完全に導入する必要があり、また、要すればメバロネートまたはＭＥＰ経路のもうひとつの中間体またはこれら中間体の類似体もしくは誘導体を培地に加えることが必要となり得る。代替として、または追加としてＭＥＰ経路の中間体またはこれら中間体の類似体もしくは誘導体（例、３−メチル−３−ブテン−１−オール、３−メチル−２−ブテン−１−オール）を培地に加えることができる。
【００１６】
もし遺伝工学および生体工学法を用いてＭＥＰ経路の遺伝子が導入されていれば、本来はＭＥＰ経路を持たない細胞および生物もまた使用可能である。ＭＥＰ経路の遺伝子をわずかに不完全に導入すれば、ＭＥＰ経路の中間体またはその誘導体の濃縮物を得ることも可能である。数ある中でも哺乳類および昆虫の細胞、下等および高等菌類、粘菌変形菌ならびにさまざまな原生動物がこれに好適である。
【００１７】
遺伝子学的方法以外では、本発明のポリペプチドの酵素活性の不活性化または低下は生物の培養液に添加される酵素阻害剤または生物からの細胞抽出物を介してもまた達成できる。この酵素阻害剤は、競合またはアロステリック相互作用を介してポリペプチドの機能を可逆的または不可逆的に阻害する合成または天然コンジュゲートである。
【００１８】
完全植物体および植物体の一部を含む本発明の細胞および生物は既知の方法により再生および培養できる。ＭＥＰ経路を持たない物も含む他の細胞または生物と共に培養することもまた可能である。濃縮されたＭＥＰ経路中間体またはそれらの誘導体は細胞の破壊または培養物から得られる。クロマトグラフィー、電気泳動および沈殿（例、バリウム塩として）を含む既知のさまざまな方法が中間体の精製に好適である。
【００１９】
濃縮されたＭＥＰ経路の中間体はさまざまな適用に好適である。この中間体はＧｃｐＥ酵素の生成物およびＬｙｔＢ酵素の基質を含むことが見出された。従ってこの中間体をＬｙｔＢおよびＧｃｐＥの酵素活性試験において基質として使用できる。ＧｃｐＥの活性試験においては逆反応が認められた。このタイプの酵素活性テストはＧｃｐＥおよびＬｙｔＢ阻害薬を探すのに好適である。
【００２０】
濃縮されたＭＥＰ経路の中間体はまた、医薬の製造に好適である。その物質の有効性はγ／δＴ細胞の活性化に基く。適用する領域によって、免疫性が強化されたり（例、腫瘍に対して）、自己抗原およびアレルゲンに対する免疫学的耐性を誘導できる。
【００２１】
適用の領域は免疫、自己免疫疾患、アレルギーである。例えば：アレルギー、多発性硬化症、慢性関節リウマチ、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、紅斑性狼瘡、真性糖尿病、原発性胆汁性硬変、活動性慢性肝炎、副腎炎／アジソン病、多発性筋炎、皮膚筋炎、および自己免疫溶血性貧血、心筋および心感染症、硬化性皮膚炎、ブドウ膜炎（水晶体ブドウ膜炎、交感神経性眼炎）、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、クローン病のような腸の感染症、潰瘍性大腸炎、喘息疾患および気管支炎のような肺感染症。
【００２２】
クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、喘息、慢性気管支炎、アレルギーへの適用が好ましい。
【００２３】
他の適用は骨感染症、特に骨粗鬆症である。
【００２４】
ＭＥＰ経路の中間体は医薬適用のために本発明の生物から単離できるか、または粗抽出物として使用できる。完全生物体はまた、生存していても死んでいても使用できる。本発明の中間体および生物は単独でも他の薬物治療と組合せても使用できる。免疫応答の増強または変調のためのアジュバントとしての適用もまた含まれる。好ましい適用方法は、経口、吸入および直腸適用に加えて皮膚または粘膜適用である。
【００２５】
以下は薬剤組成として好適である：錠剤、ドロップ剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、坐剤、液剤、懸濁剤および乳剤、ペースト剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、ローション剤、粉剤および噴霧剤。
【００２６】
錠剤、ドロップ剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤は有効成分と共に（ａ）充填剤および混合剤、例、デンプン、ラクトース、甘蔗糖、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、（ｂ）結合剤、例、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、（ｃ）湿潤剤、例、グリセリン、（ｄ）膨化剤、例、寒天−寒天、炭酸カルシウムおよび炭酸ナトリウム、（ｅ）乳化剤、例、パラフィンならびに（ｆ）再吸収促進剤、例、四級アンモニウムコンジュゲート、（ｇ）nets、例、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン、（ｈ）吸収剤、例、カオリンおよびベントナイトならびに（ｉ）滑沢剤、例、タルク、ステアリン酸カルシウムおよびステアリン酸マグネシウム、および固体ポリエチルグリコールまたは（ａ）〜（ｉ）に挙げた物質の混合物のような通常の担体と共に有効成分を含有できる。さらに、本発明のコンジュゲートはプラスチック類（局所適用のためのプラスチックチェーン）、コラーゲンまたは骨セメントのような他の担体にも含めることができる。
【００２７】
錠剤、ドロップ剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤は要すれば通常の不透明の外被および容器と共に製造できるが、また有効成分が腸管の特定の部分でのみ放出されるか、好ましくは遅れて放出されるように例えばポリマー材料および蝋のような包埋剤の使用も組み合わせることができる。
【００２８】
有効成分はまた上記の１以上の担体中でマイクロカプセル型とすることもできる。
【００２９】
坐剤は有効成分と共に例えばポリエチレングリコール、ココア脂のような脂肪、および高級エステル（例、Ｃ１６脂肪酸を有するＣ１４アルコール）またはそれらの混合物などの通常の水溶性または不溶性担体を包含できる。
【００３０】
軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤およびゲル剤は有効成分と共に例えば動物性および植物性脂肪、蝋、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛またはそれらの混合物などの通常の担体を包含できる。
【００３１】
粉剤および噴霧剤は有効成分と共に例えばラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウムおよびポリアミドパウダーまたはそれらの混合物などの通常の担体を包含できる。さらに噴霧剤はＣＦＣのような高圧ガスを包含できる。
【００３２】
液剤および乳剤は有効成分と共に例えば水、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油類、特に綿実油、ピーナツ油、コーン油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油、グリセリン、グリセリンホルマール、テトラフリルヒドロアルコール、ポリエチルグリコールおよびソルビトールの脂肪酸エステルまたはそれらの混合物のような溶剤、溶解剤および乳化剤といった通常の担体を包含できる。
【００３３】
特に有益なのは免疫系により異物または自己抗原として認識され得る物質も包含する医療用適用の選択である。
【実施例】
【００３４】
実施例１  ｌｙｔＢ欠失突然変異株の構築
遺伝子交換プラスミドｐＫＯ３−ΔｌｙｔＢの構築
大腸菌からｌｙｔＢ欠失突然変異株を作製するため、ｐＫＯ３ベクターを用いた（Link, A.J.; Philips, D.; Church, G.M.; J. Bacteriol 179, 6228-6237)。欠失デザインを作製するため、２つの非対称ＰＣＲ段階において２つの配列をｌｙｔＢ遺伝子の下流方向および上流方向に増幅した。プライマーは１：１０モル比（５０ｎＭおよび５００ｎＭ）で使用した。２回目のＰＣＲ増幅において１つの生成物を作製するためを両方のＰＣＲ生成物を融合させた。生成物はｐＣＲ−ＴＡ−ＴＯＰＯクローニングキット(Invitrogen)を用いてクローニングを行い、ｐＫＯ３ベクター中の制限インターフェースＢａｍＨＩおよびＳａｌＩを用いて再クロ−ニングした。以下に示すプライマーを使用した：
【表１】
0004526763.tif 000002
制限インターフェースには下線を施した。２１ｂｐ−「フレーム内」挿入を定義する重複配列は太字で示した。
【００３５】
合成メバロネートオペロンｐＳＣ−ＭＶＡの構築
ＭＥＰ経路の個々の遺伝子が欠失している突然変異株を作製するためにはまず第一にＩＰＰ合成のために培地由来のメバロネートを使用できる遺伝的に改変された大腸菌ソースを作製する。これを成すために以下に示すサッカロミセス・セレビシエ（saccharomyces cerevisiae、酵母菌）由来のメバロン酸経路の酵素の遺伝子を包含する合成オペロンを構築した：メバロネートキナーゼ（ＥＲＧ１２）、ホスホメバロネートキナーゼ（ＥＲＧ８）およびジホスホメバロネートデカルボキシラーゼ（ＥＲＧ１９）。これらの３つの遺伝子をマトリックスとしてのゲノム酵母ＤＮＡと共に、プライマーを１：１０のモル比（５０ｎＭおよび５００ｎＭ）で使用して３つの非対称ＰＣＲ段階において増幅した。リボソーム結合剤をプライマーと共に含めた。重複領域をハイブリダイズし、外部プライマーを断片として用いて増幅するように３つのＰＣＲ生成物を混合した。この生成物をｐＢＡＤ−ＴＡ−ＴＯＰＯクローニングキット(Invitrogen)を用いてｐＢＡＤベクターにクローニングし、制限分析および配列分析により確認した。以下のプライマーのセットを用いた：
【表２】
0004526763.tif 000003
【００３６】
重複配列は太字で示し、リボソームコンジュゲートを定義する配列はイタリック体で示した。
オペロンの機能性をチェックするため合成オペロンで形質転換させた細菌由来のホスミドマイシンに対する感受性をメバロネート存在下で試験した。予想通り、細菌は培地にメバロネートが含まれさえすれば、ホスミドマイシンが含有されていても生育率は低下しながらも生育した。メバロネートが無ければ細菌はホスミドマイシンにより死滅した。
【００３７】
欠失突然変異株ｗｔΔｌｙｔＢの構築
プラスミドｐＫＯ３−ＤｅｌｔａｌｙｔＢを、前もってｐＳＣ−ＭＶＡで形質転換させた大腸菌Ｋ−１２ソースＤＳＭＮｏ．４９８（ＡＴＣＣ２３７１６）中で形質転換させた。培地には１００μＭのメバロネートを添加した。３０℃で１時間インキュベートした後、組み込みプラスミドを有する細菌を４３℃への温度シフトを介して選択した。その後のスクロース耐性、クロラムフェニコール感受性試験の結果、ベクター配列を失った細菌が選択され、次いで所望の遺伝子型を求めてＰＣＲで分析した。
【００３８】
実施例２  ＭＥＰ経路の濃縮中間体を介するγ／δＴ細胞の活性化
ＭＥＰ経路の中間体の濃縮物は、これらの中間体がγ／δＴ細胞を活性化する能力から検出した。さまざまな細菌ソース（野生型、ｗｔＤｅｌｔａｇｃｐＥ、ｗｔＤｅｌｔａｌｙｔＢ）を液体培養液中で光学的厚さが約０．８になるまで培養した。記載されているように、排除限界３ｋＤａの低分子量の抽出物（低分子量、ＬＭＷ）が得られた(Jomaa H, Feurle J, Luhs K, Kunzmann V, Tony HP, Herderich M and Wilhelm M, FEMS Immunol Med Microbiol, 25:371)。リンパ球は３人の健常なドナーの末梢血をficoll−密度勾配遠心分離を行って得た。それぞれの試験について、得られた１０５個の細胞の２ロット分を２５ｍＭのＨＥＰＥＳ，２ｍＭのＬ−グルタミン、０．０２５ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシン、１００Ｕ／ｍｌのヒトインターロイキン−２（ＩＬ−２）（総てLife Technologies）、および１０％ヒトＡＢ型血清（Bavarian Red Cross）で強化した０．２ｍｌＲＰＭＩ−１６４０培地（Life Technologies)に播種した。ＬＭＶ調製物はさまざまな溶液に加えられ、最終濃度１０μＭのＩＰＰ（Sigma）を陽性対照として使用した。インキュベーションは３７℃で、インキュベーター内は５％ＣＯ２濃度で行った。７２時間後に細胞を収穫して灌流血球計算機で分析した。Beckman-Coulter Company由来のモノクローナル抗体ＣＤ２５−ＰＥ（Ｂ１．４９．９）、Ｖγ９−ＦＩＴＣ（Ｉｍｍｕ３６０）およびＣＤ３−ＰＣ５（ＵＣＨＴ１）を用いて活性化マーカーＣＤ２５の発現をＶγ９＋Ｔ細胞表面で測定した。  野生型細菌ソース由来の抽出物はγ／δＴ細胞を１：５００の濃度で活性化した（約２×１０７細菌／ｍｌに相当）。ＤｅｌｔａｇｃｐＥ欠失突然変異株由来の抽出物による活性化は有意に低下していた。それとは対照的にＤｅｌｔａｌｙｔＢ欠失突然変異株由来の抽出物による活性化は野生型ソース由来の抽出物よりもかなり強かった。有意なγ／δＴ細胞活性化はまた、１：１２５００の濃度においても測定された（約８×１０５細菌／ｍｌに相当）（図２）。
【００３９】
実施例３  ＭＥＰ経路におけるｌｙｔＢの関与
得られた総てのｌｙｔＢ欠失突然変異株は完全にメバロネートに依存して生育した。この所見をより詳しく検討するために欠失突然変異株ｗｔＤｅｌｔａｌｙｔＢを野生型ｌｙｔＢ遺伝子によりプラスミド上で補完した。ｌｙｔＢ遺伝子を大腸菌ＤＮＡゲノム由来のプライマーｅｃｌｙｔｂｆｏｒ（5'-GGATCCATGCAGATCCTGTTGGCCAAC-3'）およびｅｃｌｔｙｂｒｅｖ（5'-AAGCTTTTAATCGACTTCACGAATATCG-3'）で増幅し、ｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクターへクローニングした。挿入体は制限インターフェースＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄIIIを介して発現ベクターｐＱＥ３０へ再クローニングした。この構築体で形質転換したｗｔＤｅｌｔａｌｙｔＢソース由来の細菌はメバロネートなしで生育が可能であった。この結果はｌｙｔＢがＭＥＰ経路において絶対不可欠なものであることを確証づける。従って濃縮された中間体はＭＥＰ経路由来のものである。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１はＭＥＰ経路の遺伝子の欠失を介するＭＥＰ経路の中間体濃縮の原理を示す。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で本来起こっているＭＥＰ経路の重要なステップが酵素Ｄｘｓ，Ｄｘｒ，ＹｇｂＰ，ＹｃｈＢ，ＹｇｂＢ，Ｇｃｐｅ，ＬｙｔＢと共に示されている。ＭＥＰ経路の遺伝子の欠失を可能にするため、メバロン酸経路の遺伝子（Ｍｖｋ，Ｐｍｋ，Ｍｐｄをコードする）を遺伝子工学を用いて導入した。ＬｙｔＢの欠失を介してγ／δＴ細胞を活性化する中間体が濃縮される。
【図２】図２はさまざまな希釈段階における種々の細菌ソース由来（野生型、ｗｔＤｅｌｔａｇｃｐＥ，ｗｔＤｅｌｔａｌｙｔＢ）の抽出物が介するＣＤ２５の発現により測定された健常供与者の血液由来のγ／δＴ細胞の活性化を示す。ＩＰＰは最終濃度１０ｕＭで対照とした（ＩＰＰのγ／δＴ細胞活性化は本発明の中間体よりも実質的に弱いが、試験系の対照としては好適である）。ｗｔＤｅｌｔａｇｃｐＥ変異株はｗｔＤｅｌｔａｇｃｐＢ変異株と同様に作製した。
【図１】
0004526763.tif 000004
【図２】
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【配列表】
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