(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐＨ６〜７であるグルコキナーゼまたはヘキソキナーゼと、４−アミノアンチピリンまたはアニリン系発色基質とを含む液状グルコース消去試薬と、ｐＨ７〜８．５である１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体をピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼを用いて酸化して定量する１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬からなる安定性良好な１，５−アンヒドログルシトール測定用キット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は液状のグルコース消去試薬とその保存方法、１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬、それらを含む１，５−アンヒドログルシトール（以下１，５ＡＧと略す）測定用液状試薬、および１，５ＡＧ測定用液状キットに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来、血清等の被検液中の測定物質を定量検査する際に、被検液中に大量に存在するグルコースを消去してから測定しなければならない検査項目としては、１，５ＡＧの他にもマルトース、α−グルコシダーゼ、グルコース法アミラーゼあるいはその他血中糖類、糖類加水分解酵素等の測定がある。これらを短時間に効率良く測定するには、グルコースの消去反応が重要であり、種々の方法が提案されている。しかしながら、そこに使用する多彩な酵素、基質、試薬の水溶液の長期間に渡る保存安定性を確保することは難しく、例えば測定試薬を凍結乾燥し溶解復元液と分けるとともに、酵素あるいは基質を失活させる組み合わせを避けた試薬構成にして長期保存安定性を確保している。一方、１，５ＡＧを測定する方法としては、（１）内因性のグルコースをイオン交換樹脂で吸着する方法や、（２）内因性のグルコースをヘキソキナーゼまたはグルコキナーゼでリン酸化して消去し、１，５ＡＧをピラノースオキシダーゼ（以下ＰＲＯＤと略す）で酸化し生成する過酸化水素をロイコ系発色基質で検出する方法による１，５ＡＧ測定キットが開発され上市されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、前記１，５ＡＧを測定する際に使用する（１）による方法は、操作が煩雑であり、（２）の方法は、試薬の安定性を保証するために、凍結乾燥試薬とその溶解復元液から構成され、使い勝手が悪いものであった。そこで、長期間安定で、使用時の調製のいらない１，５ＡＧ測定用液状試薬が望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、被検液中に大量に含まれるグルコースを消去する第１試薬と１，５ＡＧのようにグルコースによって測定値が影響を受ける測定検査項目を検出する第２試薬のそれぞれの酵素および試薬の構成とｐＨおよび発色基質の組み合わせを検討した結果、長期間安定な液状のグルコース消去試薬とグルコースによって測定値が影響を受ける測定検査項目用試薬、例えば１，５ＡＧ測定試薬、更にそのキットを完成した。
即ち本発明は、
【０００５】
（１）ｐＨ６〜８．５で保存されたグルコキナーゼまたはヘキソキナーゼを含む液状グルコース消去試薬
（２）ｐＨ６〜８．５で保存されたグルコキナーゼまたはヘキソキナーゼ、４−アミノアンチピリンまたはアニリン系発色基質、およびアデノシン三リン酸を含む液状グルコース消去試薬
（３）ｐＨ６〜８．５で保存されたグルコキナーゼまたはヘキソキナーゼ、４−アミノアンチピリンまたはアニリン系発色基質、およびアデノシン三リン酸、ピルビン酸キナーゼ、ホスホエノールピルビン酸を含む液状グルコース消去試薬
【０００６】
（４）上記（１）乃至（３）のいづれかに記載のグルコース消去試薬を含むことを特徴とする１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体を酸化発色して定量する１，５−アンヒドログルシトール測定用液状試薬
（５）１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体の酸化をピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼを用いて行う上記（４）記載の１，５−アンヒドログルシトール測定用液状試薬
（６）ｐＨ６〜８．５に調整することを特徴とするグルコキナーゼまたはヘキソキナーゼを含む液状グルコース消去試薬の保存方法
（７）ｐＨ６〜８．５に調整することを特徴とする、グルコキナーゼまたはヘキソキナーゼ、４−アミノアンチピリンまたはアニリン系発色基質、およびアデノシン三リン酸を含む液状グルコース消去試薬の保存方法
（８）ｐＨ６〜８．５に調整することを特徴とする、グルコキナーゼまたはヘキソキナーゼ、４−アミノアンチピリンまたはアニリン系発色基質、およびアデノシン三リン酸、ピルビン酸キナーゼ、ホスホエノールピルビン酸を含む液状グルコース消去試薬の保存方法
【０００７】
（９）グルコキナーゼまたはヘキソキナーゼを含む液状グルコース消去試薬と、１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体を酸化して定量する１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬からなる安定性良好な１，５−アンヒドログルシトール測定用キット
（１０）グルコキナーゼまたはヘキソキナーゼ、および４−アミノアンチピリンまたはアニリン系発色基質を含む液状グルコース消去試薬と、１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体を酸化して定量する１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬からなる安定性良好な１，５−アンヒドログルシトール測定用キット
（１１）液状グルコース消去試薬のｐＨが６〜８．５である上記（９）または（１０）に記載の１，５−アンヒドログルシトール測定用キット
（１２）液状グルコース消去試薬のｐＨが６〜７であり、１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬のｐＨが７〜８．５である上記（９）または（１０）に記載の１，５−アンヒドログルシトール測定用キット
（１３）１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体の酸化をピラノースオキシダーゼまたはＬ−ソルボースオキシダーゼを用いて行う上記（９）乃至（１２）のいづれかに記載の１，５−アンヒドログルシトール測定用キット
に関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、グルコキナーゼまたはヘキソキナーゼ、必要により更に４−アミノアンチピリン（以下４ＡＡＰと略す）またはアニリン系発色基質、およびアデノシン三リン酸（以下ＡＴＰと略す）、更に必要に応じピルビン酸キナーゼ、ホスホエノールピルビン酸を含む液状グルコース消去試薬は、ｐＨ６〜ｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６〜８、より好ましくはｐＨ６〜７に調節する。特に、保存した血清中では蛋白質とグルコースが可逆的に結合しているが、酸性にすることによりグルコースを蛋白質から遊離させ、完全なグルコースの消去が可能となる。即ち、この場合１，５ＡＧを正確に定量するためにはｐＨ７未満が望ましい。この液状グルコース消去試薬を用いて、例えば血清、血漿等の検体中の１，５ＡＧを定量する場合には、例えばＰＲＯＤまたはＬ−ソルボースオキシダーゼ、およびペルオキシダーゼ等を含みｐＨが好ましくは６〜８．５、より好ましくはｐＨ７〜８．５である１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬（第２試薬）と組み合わせて用いる。酵素の安定性と活性の面から溶液のｐＨは中性付近が好ましいが、前記のように液状グルコース消去試薬は酸性がより好ましいため、第２試薬は弱アルカリ性が好ましい。第２試薬は更に４ＡＡＰまたはアニリン系発色基質等を含んでいてもよい。この様に、液状グルコース消去試薬（第１試薬）および１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬（第２試薬）ともに液状とすることができる。
本発明の、酵素を用いた液状グルコース消去試薬および１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬は、１５℃以下で試薬が氷結しない温度で長期間安定に保存することができる。
【０００９】
アニリン系発色基質を用いた場合、フェノール系発色基質と比較して共存する酵素の活性低下の程度が少ない。アニリン系発色基質としては、ニュートリンダー試薬と呼ばれるスルフォアルキル基等を導入して水溶性を増したアニリン誘導体を使うことができる。例えば、Ｎ−スルフォプロピルアニリン、Ｎ−スルフォプロピル−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルフォプロピルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルフォプロピルアニシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルフォプロピル−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−ｍ−アニシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−ｍ−トルイジン（以下ＴＯＯＳと略す）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ，Ｎ−ビススルフォプロピルアニリン、Ｎ，Ｎ−ビススルフォプロピル−ｍ−トルイジン、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）アニリン、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−サクシニルアミノエチル）−ｍ−トルイジン等が挙げられる。
【００１０】
好ましくはモル吸光係数の大きいアニリン系、ｍ−トルイジン系であり、ＴＯＯＳ、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）アニリン、Ｎ，Ｎ−ビススルフォプロピルアニリン、Ｎ，Ｎ−ビススルフォプロピル−ｍ−トルイジン、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−サクシニルアミノエチル）−ｍ−トルイジン等が挙げられる。
被検液としては、種々のものが使用でき、例えば、ヒトを含む各種動物の髄液、血漿、血清、尿等の体液や組織抽出物、および植物の抽出液、食品等があげられる。
【００１１】
本発明で使用される１，５ＡＧ誘導体としては、酸化発色により１，５ＡＧを測定できるものであれば特に限定されないが、例えば１，５ＡＧのリン酸エステル、１，５ＡＧの有機カルボン酸エステル等が挙げられ、特に１，５ＡＧ−６−リン酸、１，５ＡＧ−６−アセテートが好ましい。
本発明における１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体を酸化発色して定量するとは、１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体を基質として酵素により酸化し、生成する物質またはその変換物を発色基質の発色により１，５ＡＧを定量することである。
【００１２】
本発明に使用するグルコキナーゼ、ヘキソキナーゼとしては、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの命名法で、グルコキナーゼ：ＥＣ２．７．１．２、ヘキソキナーゼ：ＥＣ２．７．１．１に分類し得るものであれば、特に制限はなく、市販のものを使用し得る。また、本発明に使用する１，５ＡＧまたはその誘導体を酸化発色する際の酸化酵素としては、特に限定されないが、例えばピラノースオキシダーゼ、Ｌ−ソルボースオキシダーゼ、１，５−アンヒドログルシトール脱水素酵素、１，５−アンヒドログルシトール６リン酸脱水素酵素等が挙げられ、ピラノースオキシダーゼ、Ｌ−ソルボースオキシダーゼとしてはピラノースオキシダーゼ：ＥＣ１．１．３．１０、Ｌ−ソルボースオキシダーゼ：ＥＣ１．１．３．１１に分類し得るものであれば、特に制限はなく、市販のものを使用し得る。また、本発明で使用するピルビン酸キナーゼ、ペルオキシダーゼとしては、ピルビン酸キナーゼ：ＥＣ２．７．１．４０、ペルオキシダーゼ：ＥＣ１．１１．１．７に分類し得るものであれば、特に制限はなく、市販のものを使用し得る。
【００１３】
グルコキナーゼおよびヘキソキナーゼの使用量は、被検液中のグルコース量等により異なるが、通常は、次のとおりである。
グルコキナーゼ（以下ＧＫと略す）    ：
０．１Ｕ／ｍＬ〜５００Ｕ／ｍＬ、好ましくは１Ｕ／ｍＬ〜２０Ｕ／ｍＬ
ヘキソキナーゼ                      ：
０．１Ｕ／ｍＬ〜５００Ｕ／ｍＬ、好ましくは１Ｕ／ｍＬ〜２０Ｕ／ｍＬ
また、他の酵素および基質の使用量は、測定の対象等により異なるが、通常は次の通りである。
ピルビン酸キナーゼ（以下ＰＫと略す）      ：１Ｕ／ｍＬ〜１０Ｕ／ｍＬ
ＰＲＯＤ                                ：５Ｕ／ｍＬ〜１００Ｕ／ｍＬ
Ｌ−ソルボースオキシダーゼ              ：５Ｕ／ｍＬ〜１００Ｕ／ｍＬ
ペルオキシダーゼ（以下ＰＯＤと略す）  ：０．５Ｕ／ｍＬ〜２０Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                          ：０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜３ｍｍｏｌ／Ｌ
フォスフォエノールピルビン酸（以下ＰＥＰと略す）：２ｍｍｏｌ／Ｌ〜１２ｍｍｏｌ／Ｌ
４ＡＡＰ                      ：０．１ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｍｏｌ／Ｌ
アニリン系発色基質            ：０．２ｍｍｏｌ／Ｌ〜１０ｍｍｏｌ／Ｌ
【００１４】
本発明の測定試薬を用いた測定は、通常、ｐＨ６．０〜８．５、１０〜２００ｍＭのバッファー中で、１０〜５５℃で１〜５０分程度で行われる。バッファーとしては、トリス塩酸バッファー、グッドのバッファー等が好ましく、塩類としては、塩化カリウム１〜２００ｍＭ、塩化マグネシウム０．５〜５０ｍＭ程度が好ましいが、特に限定はされない。
【００１５】
本発明の安定性良好な１，５ＡＧ測定用キットは、ＧＫまたはヘキソキナーゼを含む液状グルコース消去試薬と、１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体を酸化して定量する１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬の少なくとも２液剤からなる。これら液剤は保存安定性が良く、１０℃以下で１年間以上安定に保存可能である。液状グルコース消去試薬は、前記のＧＫまたはヘキソキナーゼを含む液状グルコース消去試薬を用いることができ、 具体的にはＧＫまたはヘキソキナーゼ、必要により更に４ＡＡＰまたはアニリン系発色基質、およびＡＴＰ、更に必要に応じＰＫ、ＰＥＰを含み、ｐＨ６〜ｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６〜８、より好ましくはｐＨ６〜７である。１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬は、前記の１，５−アンヒドログルシトールまたはその誘導体を酸化して定量する１，５−アンヒドログルシトール定量用液状試薬を用いることができ、具体的にはＰＲＯＤまたはＬ−ソルボースオキシダーゼ、およびＰＯＤを含み、ｐＨが好ましくは６〜８．５、より好ましくはｐＨ７〜８．５である。本キットにおける酵素および試薬は、前記濃度で使用する。また、本キットは各種の自動分析装置に適用可能であり、例えば後記実施例１に示すパラメーターにより１，５ＡＧ測定に使用可能である。このキットを用い得る検体も前記のものと同じものを用い得る。
【００１６】
【実施例】
以下、比較例および実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１７】
参考例１  液状のグルコース消去試薬
下記組成からなる試薬を調製し被検液としてグルコース１０００ｍｇ／ｄＬ水溶液を測定した結果を表１に示す。測定は、自動分析装置７１５０形（（株）日立製作所製）を用い、以下のパラメーターで行った。残存グルコース量は、生理食塩液およびグルコース５０ｍｇ／ｄＬの検量線から求めた。
分析法                ２ポイントエンド
測定ポイント                ２７−５０
検体量                          ６μＬ
第１試薬                    １８０μＬ
第２試薬                      ９０μＬ
温度                            ３７℃
測定波長（副／正）  ７００／５４６ｎｍ
試薬組成
第１試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
塩化カリウム                        ５０ｍＭ
塩化マグネシウム                      ５ｍＭ
ＴＯＯＳ                          ３．０ｍＭ
ＧＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＰＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                            １．０ｍＭ
ＰＥＰ                            ８．０ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
第２試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
ホースラディッシュペルオキシダーゼ
（以下ＨＲＰと略す）          ５Ｕ／ｍＬ
グルコースオキシダーゼ          ４０Ｕ／ｍＬ
４ＡＡＰ                          １．５ｍＭ
【００１８】
0004544598.tif 000002
以上のように液状のままで長期間安定であり、特に１５℃以下では１年間以上安定であった。
【００１９】
実施例２  本発明による液状のグルコース消去試薬
下記組成からなる試薬を調整し被検液としてグルコース１０００mg/dL水溶液を測定した結果を表２に示す。測定は、自動分析装置７１５０形（（株）日立製作所製）を用い、参考例１と同様のパラメーターで行った。残存グルコース量は、生理食塩液およびグルコース５００μｇ／ｍＬの検量線から求めた。
試薬組成
第１試薬  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．２）        １００ｍＭ
塩化カリウム                        ５０ｍＭ
塩化マグネシウム                      ５ｍＭ
４ＡＡＰ                          １．５ｍＭ
ＧＫ                              ８Ｕ／ｍＬ
ＰＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                            １．０ｍＭ
ＰＥＰ                            ８．０ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
第２試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
ＨＲＰ                            ５Ｕ／ｍＬ
グルコースオキシダーゼ          ４０Ｕ／ｍＬ
ＴＯＯＳ                          ６．０ｍＭ
【００２０】
0004544598.tif 000003
以上のように液状のまま１０℃以下では１年間安定であった。
【００２１】
参考例３  液状のグルコース消去試薬
下記組成からなる試薬を調整し被検液としてグルコース１０００mg/dL水溶液を測定した結果を表３に示す。測定は、自動分析装置７１５０形（（株）日立製作所製）を用い、参考例１と同様のパラメーターで行った。残存グルコース量は、生理食塩液およびグルコース５００μｇ／ｍＬの検量線から求めた。
試薬組成
第１試薬  トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．４）    １００ｍＭ
塩化カリウム                        ５０ｍＭ
塩化マグネシウム                      ５ｍＭ
４ＡＡＰ                          １．５ｍＭ
ＧＫ                              ８Ｕ／ｍＬ
ＰＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                            １．０ｍＭ
ＰＥＰ                            ８．０ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
第２試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
ＨＲＰ                            ５Ｕ／ｍｌ
グルコースオキシダーゼ          ４０Ｕ／ｍｌ
ＴＯＯＳ                          ６．０ｍＭ
【００２２】
0004544598.tif 000004
以上のように液状のまま１０℃以下では１年間安定であった。
【００２３】
実施例４  本発明による液状のグルコース消去試薬
下記組成からなる試薬を調整し被検液としてグルコース１０００mg/dL水溶液を測定した結果を表４に示す。測定は、自動分析装置７１５０形（（株）日立製作所製）を用い、参考例１と同様のパラメーターで行った。残存グルコース量は、生理食塩液およびグルコース５００μｇ／ｍＬの検量線から求めた。
試薬組成
第１試薬  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．２）        １００ｍＭ
塩化カリウム                        ５０ｍＭ
塩化マグネシウム                      ５ｍＭ
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルフォプロピル）
アニリン                          ６．０ｍＭ
ＧＫ                              ８Ｕ／ｍＬ
ＰＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                            １．０ｍＭ
ＰＥＰ                            ８．０ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
第２試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
ＨＲＰ                            ５Ｕ／ｍｌ
グルコースオキシダーゼ          ４０Ｕ／ｍｌ
４ＡＡＰ                          １．５ｍＭ
【００２４】
0004544598.tif 000005
以上のように液状のまま１５℃以下では１年間安定であった。
【００２５】
参考例５  １，５ＡＧ測定試薬
下記組成からなる試薬を調製し、被検液として血清を用い、１，５ＡＧ濃度を測定した結果を表５に示す。測定は、自動分析装置７１５０形（（株）日立製作所製）を用い、以下のパラメーターで行った１，５ＡＧの測定値は、１，５ＡＧ濃度０μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬの検量線から求めた。
分析法                ２ポイントエンド
測定ポイント                ２７−５０
検体量                          ６μＬ
第１試薬                    １８０μＬ
第２試薬                      ９０μＬ
温度                            ３７℃
測定波長（副／正）  ７００／５４６ｎｍ
なお、測定に用いた被検血清の１，５ＡＧおよびグルコースの濃度は以下の通りであった。
１，５ＡＧ（μｇ／ｍＬ）      グルコース（ｍｇ／ｄＬ）
血清Ａ          ４．５                        ２５６
血清Ｂ        １４．６                        １１１
血清Ｃ        ２３．８                        １０９
試薬組成
第１試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
塩化カリウム                        ５０ｍＭ
塩化マグネシウム                      ５ｍＭ
４ＡＡＰ                          １．５ｍＭ
ＧＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＰＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                            １．０ｍＭ
ＰＥＰ                            ８．０ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
第２試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
ＨＲＰ                            ５Ｕ／ｍＬ
ＰＲＯＤ                        ４０Ｕ／ｍＬ
ＴＯＯＳ                          ６．０ｍＭ
【００２６】
0004544598.tif 000006
以上のように液状のままで長期間安定であり、特に１５℃以下では１年間以上安定であった。
【００２７】
比較例１
下記組成からなる試薬を調整し被検液としてグルコース１０００mg/dL水溶液を測定した結果を表６に示す。測定は、自動分析装置７１５０形（（株）日立製作所製）を用い、参考例１と同様のパラメーターで行った。残存グルコース量は、生理食塩液およびグルコース５００μｇ／ｍＬの検量線から求めた。
試薬組成
第１試薬  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ５．８）        １００ｍＭ
塩化カリウム                        ５０ｍＭ
塩化マグネシウム                      ５ｍＭ
４ＡＡＰ                          １．５ｍＭ
ＧＫ                              ８Ｕ／ｍＬ
ＰＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                            １．０ｍＭ
ＰＥＰ                            ８．０ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
第２試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
ＨＲＰ                            ５Ｕ／ｍｌ
グルコースオキシダーゼ          ４０Ｕ／ｍｌ
ＴＯＯＳ                          ６．０ｍＭ
【００２８】
0004544598.tif 000007
以上のように１０℃でさえ７か月後にはグルコース１０００ｍｇ／ｄＬの完全な消去能はなくなっていた。
【００２９】
比較例２
下記組成からなる試薬を調整し被検液としてグルコース１０００mg/dL水溶液を測定した結果を表７に示す。測定は、自動分析装置７１５０形（（株）日立製作所製）を用い、参考例１と同様のパラメーターで行った。残存グルコース量は、生理食塩液およびグルコース５００μｇ／ｍＬの検量線から求めた。
試薬組成
第１試薬  トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．８）    １００ｍＭ
塩化カリウム                        ５０ｍＭ
塩化マグネシウム                      ５ｍＭ
４ＡＡＰ                          １．５ｍＭ
ＧＫ                              ８Ｕ／ｍＬ
ＰＫ                              ４Ｕ／ｍＬ
ＡＴＰ                            １．０ｍＭ
ＰＥＰ                            ８．０ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
第２試薬  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）    １００ｍＭ
ＮａＮ３                          ０．０２％
ＨＲＰ                            ５Ｕ／ｍｌ
グルコースオキシダーゼ          ４０Ｕ／ｍｌ
ＴＯＯＳ                          ６．０ｍＭ
【００３０】
0004544598.tif 000008
以上のように１０℃でさえ７か月後にはグルコース１０００ｍｇ／ｄＬの完全な消去能はなくなっていた。
【００３１】
【発明の効果】
本発明の長期間安定で使用時の調製のいらない液状のグルコース消去試薬は、検体中のグルコースを除去しなければならない場合に煩雑な操作が不必要であり、使い勝手がよい。更に、このグルコース消去試薬を用いた用事溶解不要な１，５−アンヒドログルシトール測定用の液状試薬およびそれらよりなる安定性良好な１，５ＡＧ測定用キットの提供が可能となった。