(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ia）で表されるフラボノイド化合物と、薬学的に許容される担体を含有する不安治療用製剤。
0004584362.tif 000023
（式中、Ｒ1は、Ｂｒ、ＣｌまたはＦから選択され、Ｒ8は、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ又はＦから選択される。）
【請求項２】
一般式（Ia）で表されるフラボノイド化合物が下記のとおりである請求項１記載の不安治療用製剤。
0004584362.tif 000024
【請求項３】
一般式（Ia）で表されるフラボノイド化合物が下記のとおりである請求項１記載の不安治療用製剤。
0004584362.tif 000025
【請求項４】
下記の一般式（Ia）で表されるフラボノイド化合物。
0004584362.tif 000026
（式中、Ｒ1は、Ｂｒ、ＣｌまたはＦから選択され、Ｒ8は、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ又はＦから選択される。）
【請求項５】
一般式（Ia）のフラボノイド化合物が下記のとおりである請求項４記載のフラボノイド化合物。
0004584362.tif 000027
【請求項６】
一般式（Ia）のフラボノイド化合物が下記のとおりである請求項４記載のフラボノイド化合物。
0004584362.tif 000028
【請求項７】
不安治療剤製造のための一般式（Ia）で表されるフラボノイド化合物の使用。
0004584362.tif 000029
（式中、Ｒ1は、Ｂｒ、ＣｌまたはＦから選択され、Ｒ8は、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ又はＦから選択される。）
【請求項８】
不安治療剤製造のための６，３’−ジブロモフラボン及び６−ニトロ−３’−ブロモフラボンの一方又は両方の使用。
【請求項９】
不安治療剤製造のための６，３’−ジブロモフラボンの使用。
【請求項１０】
不安治療剤製造のための６−ニトロ−３’−ブロモフラボンの使用。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、ベンゾジアゼピンなどの周知の鎮静剤において一般的に認められる、不安除去に伴う中枢神経系の抑制を生じることのない抗不安特性（すなわち、不安減少：anxiety reducing）を有することが明らかになってきたフラボノイドに関する。より具体的には、本発明は、フェニル環及び／又はフラボン核及びその類似体に位置するニトロ基及び／又はハロ基からなるフラボノイドに関する。
発明の背景
同時係属出願の国際特許出願公開第９５／０５１６９号（ストラスクライド  ユニバーシティ：Ｓｔｒａｔｈｃｌｙｄｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）は、フラボノイド及びこれを患者の不安の治療方法に用いることに関するものである。同国際特許出願公開第９５／０５１６９号のフラボノイドは、ベンゾジアゼピンでは通常認められる、不安減少に伴う中枢神経系の抑制（例えば、沈静作用及び筋弛緩作用など）を生じることのなく達成される抗不安特性を有するものであると記載されている。同国際特許出願公開第９５／０５１６９号の化合物を、以下の一般式で示す：
0004584362.tif 000002
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4、Ｒ5およびＲ8は、Ｈ、ＯＨ、Ｒ、ＮＯ2、ハロ、ＯＲ、ＮＨ2、ＮＨＲ、ＮＲ2、ＣＯＯＲ、ＣＯＯＨ、ＣＮまたは糖類から独立して選択され；Ｒ6およびＲ7はともにＨであるか、またはＲ6およびＲ7の組合せで一重結合を形成し；Ｒは炭素数１〜６のアルキルまたはアルケニル；もしくはこれらのダイマーである。
国際特許出願公開第９５／０５１６９号の好ましい化合物は、特にＲ5が上記の一般式における２’位がハロで置換されたハロ誘導体であると記載されている。
国際特許出願公開第９５／０５１６９号の一般式に包括される特定の化合物では、フラボン核及び／又はフェニル環を、ニトロ化及び／又はハロゲン化すると、ベンゾジアゼピンでは一般的である不安減少に伴う中枢神経系の抑制（例えば、鎮静作用および筋弛緩作用）を生じることなく、予想外に良好な抗不安活性を呈することが明らかになっている。このため、鎮静や筋弛緩といった副作用を誘発することなく患者の不安を治療することができる。
また、本発明による化合物は、ベンゾジアゼピンでは一般的に認められる抗痙攣作用が実質的に軽減するかあるいは全く見られず、記憶に悪影響を及ぼすこともないのが明らかである。
発明の開示
本発明によれば、一般式（Ｉ）
0004584362.tif 000003
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ及びＨから独立して選択され；Ｒ6はＨで；Ｒ7、Ｒ9及びＲ10はＨ、−ＯＨ、−Ｒ、−ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＲ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲ2、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮまたは糖類から独立して選択され；Ｒ8はＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ及びＦから選択され；Ｒは炭素数１〜６のアルキルまはたアルケニルであり；但し、Ｒ1がＨの場合、Ｒ8はＮＯ2であり、Ｒ1がＣｌ、Ｂｒ及びＦから選択される場合、Ｒ8はＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ及びＦから選択される）で表されるフラボノイドを無毒有効量で患者に投与するか、または、一般式（Ｉ）の化合物のダイマーであって、Ｒ1〜Ｒ10及びＲが一般式（Ｉ）で定義したものと同様であるバイフラボノイドを無毒有効量で投与することから成る患者の不安治療方法が提供される。
糖類は、単糖、二糖及び多糖を含む周知の糖類のいずれかであり、特にグリコシル、ガラクトピラノシルまたはマンノピラノシルである。
患者の不安治療法に使用される式（Ｉ）の好ましい化合物としては、Ｒ1がＨ、Ｃｌ及びＢｒから選択され；Ｒ2〜Ｒ7及び、Ｒ9とＲ10が全てＨで；Ｒ8がＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ及びＦから選択され；但し、Ｒ1がＨの場合、Ｒ8はＮＯ2であり、Ｒ1がＣｌ、Ｂｒ及びＦから選択される場合、Ｒ8がＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ及びＦから選択される化合物が挙げられる。
式（Ｉ）の化合物としてさらに好ましいものとしては、Ｒ1がＨ及びＢｒから選択され；Ｒ2〜Ｒ7及び、Ｒ9とＲ10が全てＨで；Ｒ8がＢｒ、ＮＯ2、及びＨから選択され；但し、Ｒ１がＨの場合、Ｒ8はＮＯ2である化合物が挙げられる。
式（Ｉ）の化合物として最も好ましいものとしては、Ｒ1がＢｒで；Ｒ2〜Ｒ7及び、Ｒ9とＲ10が全てＨで；Ｒ8がＢｒ及びＮＯ2から選択される化合物が挙げられる。
患者の不安を治療するのに用いられる、式（Ｉ）の好ましい化合物の例としては、以下のものが挙げられる：
６，ニトロフラボン
0004584362.tif 000004
３’クロロブラボン
0004584362.tif 000005
３’ブロモフラボン
0004584362.tif 000006
６，３’ジブロモフラボン
0004584362.tif 000007
６，ニトロ，３’ブロモフラボン
0004584362.tif 000008
特に好ましいのは、上記の化合物（Ｖ）と（VI）である。
Ｒ6及びＲ7の組合せで一重結合を形成する化合物はフラボン誘導体である。
バイフラボノイドは、各々が上記一般式（Ｉ）で表される二つの部分が共有結合したダイマーである。二つの部分間の共有結合は、一般に、一方の部分の３’位及び他方の部分の８位に発生する。好ましいバイフラボノイドは、一般式（VII）
0004584362.tif 000009
で表され、式中、Ｒ1〜Ｒ10及びＲは一般式（Ｉ）に定義した通りである。
患者の不安治療法に用いられる一般式（VII）の好ましい化合物としては、一般式（Ｉ）のダイマー部分の各々におけるＲ1が少なくともＨ、Ｃｌ及びＢｒから選択され；Ｒ8がＣｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｈ及びＮＯ2から選択され；上記以外の官能基Ｒが全て式（Ｉ）の化合物であり、但し、Ｒ1がＨである場合、Ｒ8はＮＯ2で、Ｒ1がＣｌ、Ｂｒ及びＦから選択される場合、Ｒ8はＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ及びＦから選択される化合物が挙げられる。
一般式（VII）の化合物としては、３’ハロ（すなわち、Ｂｒ、ＣｌまたはＦ）含有化合物であり；Ｒ8がＮＯ2、Ｃｌ及びＢｒから選択され；上記以外の官能基Ｒが全て水素である化合物がより好ましい。
製剤の剤形（formulation）としては、一般式（Ｉ）及び／又は（VII）の化合物の少なくとも１種と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む。本発明の製剤において用いられる化合物が、本来、本明細書に定義したようなＲ1〜Ｒ10及びＲをＲ基として有していることは、当業者であれば理解しよう。各担体は、製剤の他の成分と適合し、かつ、患者に対して害が無いという意味で、『薬学的に許容される』ものでなければならない。
本発明のフラボノイド化合物が、薬学的に許容される塩またはそのエステルとして投与可能であることは理解されよう。塩は通常、酸添加塩（例えば、ヒドロハロゲン酸を添加）または認容される金属塩（例えば、Ｎａ、Ｃａ、Ｍｇなど）である。
剤形としては、経口投与、直腸投与、経鼻投与、膣投与および非経口投与（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与用の剤形も含む。剤形は、便宜上、単位ごとの剤形にし、薬学の技術分野において周知の任意の方法で調製することができる。このような方法は、１種又は複数の補助成分を構成する担体と、活性成分とを会合させるステップを含む。一般に、このような製剤は、液体担体または微粉砕した固体担体の何れか一方または両方と、活性成分とを均一かつ本質的に会合させ、必要な場合は、成形して調製される。
経口投与に適した本発明による製剤は、各々予め定められた量の活性成分を含有するカプセル、サシェまたは錠剤などの別個のユニット；粉末または顆粒；水性あるいは非水性の液体である溶液または懸濁液；あるいは水中油型液状乳剤または油中水型液状乳剤として提供することも可能である。活性成分を丸薬、舐剤、糊状剤として調製しても良い。
錠剤は、任意に一種または複数の補助成分を用いて圧縮または成形によって形成できる。圧縮錠剤は、結合剤（ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、分解剤（ソジウムスターチグリコレート、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムなど）、界面活性剤、分散剤を任意に混合した、粉末または顆粒などの流動自在な形態の活性成分を適当な装置で圧縮することによって調製される。成形錠剤は、不活性希釈液で湿らせた粉末状化合物の混合物を適当な装置で成形することによって調製される。この錠剤に、任意にコーティングを施したり、刻み目をつけたりしても良い。また、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを様々な比率で用いて所望の徐放特性を持たせ、含有している活性成分を制御しながら徐放するよう処方しても良い。
直腸投与用の製剤については、例えばカカオバターまたはサリチル塩などから成る適当な基剤を用いた座薬として提供することもできる。
膣投与用の製剤については、活性成分に加えて、従来技術において適当であるとされている担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム，ゼリー、ペースト、泡沫またはスプレー剤形として提供できる。
非経口投与用の製剤形態としては、治療対象となるレシピエントの血液と製剤とを等張にする酸化防止剤、緩衝液、静菌および溶質を含有しても良い水性および非水性の注射用無菌等張液と；懸濁剤および増粘剤を含有しても良い水性および非水生の無菌懸濁液とが挙げられる。これらの製剤は、例えばアンプルまたはバイアルなどの単位容量気密容器または多容量気密容器に入れて提供したり、あるいは使用する直前に注射水などの無菌担体を添加するだけで良いフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存することができる。上述した種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から即時注射（extemporaneous injection）溶液および懸濁液を調製することができる。
用量は、状態の重篤度、レシピエントのアイデンティティ、一般式（Ｉ）に示される特定の投与化合物の効率および毒性など、熟練した医師らに周知な様々な因子によって変わる。一般的には、体重１ｋｇ当たり０．１〜１００ｍｇ、特に１〜１０ｍｇの範囲で用いられる。投与頻度は、代謝率または投与化合物の排出率によって異なるが、毎日繰り返し投与することができ、任意に一日量を２回以上に分けて投与しても良い。単位用量としては２０〜５００ｍｇ、好ましくは、１００〜４００ｍｇを用いることができる。
本発明の他の態様として、一般式（Ｉ）の化合物が得られる。
0004584362.tif 000010
式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＨから独立に選択され；Ｒ6はＨで；Ｒ7、Ｒ9およびＲ10は、Ｈ、−Ｒ、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＲ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲ2、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮまたは糖類から独立に選択され；Ｒ8は、Ｈ、ＮＯ2、Ｂｒ、ＣｌおよびＦから選択され；Ｒは炭素数１〜６のアルキルまたはアルケニルであり；但し、Ｒ1がＨの場合、Ｒ8はＮＯ2であり、Ｒ1がＣｌ、ＢｒおよびＦから選択される場合、Ｒ8はＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、ＣｌおよびＦから選択されるか、または一般式（Ｉ）の化合物のダイマーであるバイフラボノイドであって、Ｒ1〜Ｒ10及びＲは、一般式（Ｉ）で定義したものと同様である。
一般式（Ｉ）の好ましい化合物としては、Ｒ1がＨ、ＣｌおよびＢｒから選択され；Ｒ2〜Ｒ7，及びＲ9とＲ10とが全てＨであり；Ｒ8がＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、Ｃｌ及びＦから選択され；但し，Ｒ1がＨの場合、Ｒ8はＮＯ2であり、Ｒ1がＣｌ、ＢｒおよびＦから選択される場合、Ｒ8はＨ、ＮＯ2、Ｂｒ、ＣｌおよびＦから選択される化合物が挙げられる。
一般式（Ｉ）のさらに好ましい化合物としては、Ｒ1がＨおよびＢｒから選択され；Ｒ2〜Ｒ7、及びＲ9とＲ10とが全てＨであり；Ｒ8がＨ、ＮＯ2およびＢｒから選択され；但し、Ｒ1がＨの場合、Ｒ8はＮＯ2である化合物が挙げられる。
一般式（Ｉ）の最も好ましい化合物としては、Ｒ1がＢｒであり；Ｒ2〜Ｒ7、及びＲ9とＲ10とが全てＨであり；Ｒ8がＢｒおよびＮＯ2から選択される化合物が挙げられる。
また、本発明の好ましい化合物は下記の」ものが含まれる。
６，ニトロフラボン
0004584362.tif 000011
３’クロロフラボン
0004584362.tif 000012
３’ブロモフラボン
0004584362.tif 000013
６，３’ジブロモフラボン
0004584362.tif 000014
６，ニトロ、３’ブロモフラボン
0004584362.tif 000015
本発明の最も好ましい化合物は、（Ｖ）及び（VI）である。
本発明のさらに他の態様においては、患者の不安を値蝶するための薬物の調製に式（Ｉ）の化合物を利用する方法が得られる。好ましくは、患者の不安を治療するための薬物の調製に式（II）〜（VII）の何れか一つまたは２つ以上に該当する化合物を利用する方法が得られる。より好ましくは、患者の不安を治療するための薬物の調製に化合物（Ｖ）および（VI）から選択される化合物またはその混合物を利用する方法が得られる。本発明の化合物は、以下の図式によって得られる概要に沿って調製できる。
0004584362.tif 000016
例えば、ベーカー，ダブリュー（Baker,W.）の「０−アシルオキシンアセトフェノンの分子内転移および３アシルクロモンの生産メカニズム」J.Chem.Soc.（1933）,1381-1388頁；マール，エイチ．エス，ベンカタマラン，ケイ．（Mahal,H.S,Venkataraman,K.）の（クロモン類第１４部の合成実験）「1−アシルオキシン−２アセトナフトンにおけるソーダアミンの作用」J.Chem.Soc.（1934）,1767-1769頁；ウィール，テイ．エス（Wheeler,T.S.）「フラボンの有機合成」；Wiley New York,1963,Colleer Vol IV,478〜481頁に記載されているようなベーカー・ベンカタラマンの（Baker-Venkataraman）形質転換が本発明のフラボン分子を合成する方法として使用できる。
一般に、式（Ｉ）のＲ7、Ｒ8、Ｒ9およびＲ10として定義されているような置換基Ｒからなる適切に置換されたヒドロキシアセトフェノン（１）は式（２）のベンゾイルエステルに変換できる。これは、式（Ｉ）のＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5として定義されているような置換基Ｒからなる適切に置換されたベンゾイルハロゲン化物（Ｂ）との反応によるものである。適切なベンゾイルハロゲン化物は、上記Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5として定義されているようなＲグループを有する塩化ベンゾイル、臭化ベンゾイルまたは弗化ベンゾイルを含む。そして、ベンゾイルエステル（２）がＲ1〜Ｒ5及びＲ7〜Ｒ10として上記に定義されたＲおよび任意のＲ置換基を含む式（３）のジケトンを形成する、例えばＫＯＨ／ピリジンなどの塩基で処理される。そして、アリス  ジェイ．ジェイ（Ares J.J.）他著のA.J.Med Chem.（1995）38 4937〜4943頁の教示によって式（４）関連のフラボンの生成をもたらす酸によりジケトンが処理される。
カシマン  エム（Cushman M）ほか著のA.J.Med.Chem.（1994）第37巻第3353〜3362頁に概説されたニトロ化法を用いて、Ｒ＝Ｈの場合、式（４）関連のフラボンをＨＮＯ3 in Ｈ2ＳＯ4で処理することによってニトロ置換のフラボン（５）を得ることができる。
以下、図面および実施例を参照して本発明について説明する。
図１：ラットの大脳皮質から採取した洗浄した粗シナプトソーム膜への６ニトロ３’ブロモフラボンによる［3Ｈ］ＦＮＺ（0.5ｎＭ）結合の置換曲線を示す。
図２：ラットの大脳皮質から採取した洗浄した粗シナプトソーム膜への６，３’ジブロモフラボンによる［3Ｈ］ＦＮＺ（0.5ｎＭ）結合の置換曲線を示す。
図３：ラットの大脳皮質から採取した洗浄した粗シナプトソーム膜への３’ブロモフラボンによる［3Ｈ］ＦＮＺ（0.5ｎＭ）結合の置換曲線を示す。
図４：ラットの大脳皮質から採取した洗浄した粗シナプトソーム膜への６ニトロフラボンによる［3Ｈ］ＦＮＺ（0.5ｎＭ）結合の置換曲線を示す。
図５：ラットの大脳皮質から採取した洗浄した粗シナプトソーム膜への３’クロロフラボンによる［3Ｈ］ＦＮＺ（0.5ｎＭ）結合の置換曲線を示す。
〔実施例１〕Ａ１：−６’ニトロフラボン
スキームIIIを参照：
0004584362.tif 000017
氷酢酸（７０ｍＬ）において２ヒドロキシアセトフェノン（1）（６０ｍｍｏｌ）の溶液に硝酸（発煙性、４ｍＬ）を添加し、この混合液を乾燥チューブ付きの丸底フラスコ内で室温にて４０分間、その後４５〜５０度にて１６時間撹拌した。減圧下にて酢酸を除去し、水（１００ｍＬ）を加えた。黄色の混濁溶液をＮａ2ＣＯ3を用いてＰＨ６に中和した後、黄色の沈殿物を収集し、いくつかの群（crop）においてＥｔＯＨから注意深く再結晶させ、（7）とした。
５０ｍＬのＥｔＯＨに対して化合物７を５ｇおよび化合物（9）を６ｇとした溶液を水５０ｍＬに対してＫＯＨ５０ｇで処理し、室温にて１日放置した。その後、塩酸で酸性化させ、中間体（10）を次ぎのステップで使用した。
１２ｍＬのＡｃＯＨに対して１０％の臭素溶液を、１０ｍＬのＡｃＯＨに対して化合物（10）を１ｇとした熱い溶液（a hot solution）に加え、この混合液を一晩室温にて放置し、ＡｃＯＨから結晶化させた生成物を化合物（11）とした。ピリジン（１０ｍＬ）に対して、（11）を１ｇとした溶液を室温で３０分間撹拌した。次に、これを強く撹拌しながら３％塩酸水溶液／氷溶液に注ぎ入れた。
こうして得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄した。エタノールから粗物質を再結晶化し、６ニトロフラボンを得た。
６ニトロフラボン：
1Ｈ−ＮＭＲ（２００Ｍｈｚ、ＣＤＣＩ3）：δ９、１０（ｄ、Ｊ＝２．１）Ｈｚ、ｈ−５）、８．５３（ｄｄ、Ｊ−２．０Ｈｚ、８．１Ｈｚ、Ｈ−７）、７．９６−７．９１（ｍ、Ｈ−２、Ｈ−６’）、７．７３（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、Ｈ−８）、７．６２−７．５３（ｍ、Ｈ−３’、Ｈ−４’、Ｈ−５’）、６．６７（Ｓ、Ｈ−３）。
〔実施例２〕Ａ２：−３’クロロフラボン
スキームIIを参照：
0004584362.tif 000018
ステップ１
ピリジン（１０ｍｌ）中の酸塩化物２の溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）（１５ｍｍｏｌ）に、０℃にて、固体２ヒドロキシアセトフェノン  １（９ｍｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ）を撹拌しながら添加した。反応混合物を０℃にて１５分間撹拌した後、室温にて３０分間撹拌した。次に、これを強く撹拌しながら３％水溶液／氷溶液に注いだ。こうして得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄した。粗物質をメタノールから再結晶化し、化合物３を得た。
ステップ２
ピリジン（１０ｍｌ）中の化合物３の溶液（１０ｍｍｏｌ）に、５０℃にて、微粉砕した水酸化カリウム（１５ｍｍｏｌ）を添加した。混合液を１５分間撹拌し、冷却した後、１０％酢酸水溶液を添加した。こうして得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄した。ジケトン４を含有する粗物質を精製せずに次のステップで用いた。
ステップ３
ステップ２で得られた粗物質の混合液（化合物４の１０ｍｍｏｌに相当）を濃縮硫酸（０．５ｍｌ）および氷酢酸（１３ｍｌ）を用いて還流で１時間加熱し、室温まで冷ました。次に、混合液を砕氷（７５ｇ）上に注ぎ、得られた沈殿物を濾過した。アセトンを再結晶化した生成物として、３’クロロフラボンを得た。
３’クロロフラボン：
1Ｈ−ＮＭＲ（２００Ｍｈｚ、ＣＤＣＩ3）：δ８．２４（ｄｄ、Ｊ＝２．０．Ｈｚ、８．２Ｈｚ、１１−５）、７．９３（ｔ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、Ｈ−２’）、７．８１−７．６８（ｍ、Ｈ−４’、Ｈ−６’）、７．６０−７．４０（ｍ、Ｈ―６、Ｈ−７、Ｈ−８、Ｈ−５’）、６．８１（Ｓ、Ｈ−３）。
〔実施例３〕Ａ３：−３’ブロモフラボン
スキームII（実施例２）を参照。
ステップ１、２および３と同一条件（スキームII）であるが、化合物５（Ａｌｄｒｉｃｈ）および２ヒドロキシアセトフェノン  １を開始材料として用いた。
化合物５：
0004584362.tif 000019
３’ブロモフラボン：
1Ｈ−ＮＭＲ（２００Ｍｈｚ、ＣＤＣＩ3）：δ８．２４（ｄｄ、Ｊ＝２．１、８．５Ｈｚ、Ｈ−５）、８．１０（ｔ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、Ｈ−２’）、７．８４（ｄｑ、Ｊ＝２．０、８．４Ｈｚ、Ｈ−４’）、７．６６（ｍ、Ｈ−６’、Ｈ―６、Ｈ−７）、７．４２（ｍ、Ｈ−５’、Ｈ−８）、６．８１（Ｓ、Ｈ−３）。
〔実施例４〕Ａ４：−６．３’ジブロモフラボン
ステップ１、２および３、同一条件（実施例２のスキームII）であるが、化合物５および６（Ａｌｄｒｉｃｈ）を開始材料として用いた。
0004584362.tif 000020
６、３’ジブロモフラボン：
1Ｈ−ＮＭＲ（２００Ｍｈｚ、ＣＤＣＩ3）：δ８．３４（ｓ、Ｈ−２’）、８．１３（ｍ、Ｈ−４’、Ｈ−５）、８．０２（ｄｄ、Ｊ＝２．０、８．２Ｈｚ、Ｈ−７）、７．８６（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、Ｈ−８）、７．８０（ｍ、Ｈ−６’）、７．５５（ｔ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、Ｈ−５’）、７．２０（Ｓ、Ｈ−３）。
〔実施例５〕Ａ５：−６、ニトロ−３’ブロモフラボン
スキームIII（実施例１）を参照。
スキームIIIと同じ手順であるが、化合物５および７を開始材料として用いた。
６、ニトロ−３’ブロモフラボン：
1Ｈ−ＮＭＲ（２００Ｍｈｚ、ＣＤＣＩ3）：δ９．１１（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、Ｈ＝５）、８．５６（ｄｄ、Ｊ＝２．４、８．５Ｈｚ、Ｈ−７）、８．１０（ｔ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−２’）、７．８５（ｍ、Ｈ−４’）、７．７４（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、Ｈ−５’）、７．７３（ｍ、Ｈ−６’）、７．４４（ｔ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、Ｈ−５’）、６．８７（ｓ、Ｈ−３）。
〔実施例６〕ベンゾジアゼピン受容体（ＢＤＺ−Ｒｓ）へのフラボン誘導体の結合親和性
【動物】
体重２５０ｇのオスのウイスターラットの成体を用いて生化学実験を行った。調節した環境に動物を収容し、飼料および水へは自由に往来できるようにして、昼夜１２時間ずつのサイクルが保たれた。
【膜の調製】
メジナ（Medina）他（１９９０年）の方法に従って、膜を準備した。簡単に説明すると、脳を氷上で速やかに解剖し、０．３２Ｍスクロース１０容量中にて異なる構造体を均質化し、９００×ｇで１０分間遠心分離した。こうして得られた上澄みを１００，０００×ｇで３０分間遠心分離し、ペレットを３０分間かけてｐＨ７．４の２５ｍＭトリス塩酸緩衝液で２回洗浄し、使用するまで−２０℃で保存した。
Levi de Stein,M.他著のMol.Brain Res（1989年）、５、９〜１５頁に記載されている方法に従って、徹底的に洗浄したラットの大脳皮質膜に対する化合物のホフマン−ラ  ロッシュ  3Ｈフルニトラゼパン（Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  3Ｈ−ｆｌｕｎｉｔｒａｚｅｐａｍ：3Ｈ−ＦＮＺ）結合を抑制する能力によってＢＤＺ−Ｒｓへの結合親和性を求めた。
簡単に言えば、各アッセイについて、０．２〜０．４ｍｇのタンパク質を含有している膜３枚を一組にした試料を、ｐＨ７．３の０．２５ｍＭトリス塩酸緩衝液を最終容量１ｍＬにしたものに懸濁させた。
０．５ｎＭ3Ｈ−ＦＮＺを用いて、４℃で６０分間保温した。結合飽和を検討するために、０．３〜１０ｎＭの範囲で3Ｈ−ＦＮＺを用いた。３μＭのＦＮＺ存在下にて並行培養し、非特異的結合を求めたところ、全体の５〜１５％が典型的なものであった。ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＧＦ／Ａガラスファイバフィルタを用いて真空下で濾過してアッセイを終了し、各々３ｍＬの培養液で３回洗浄した。フィルタを乾燥させ、２、５ジフェニルオキサゾル／キシレンをシンチレーション液として５ｍＬ添加後に計数した。
結果を下記の表１に示す。
【表  １】
ラット大脳皮質膜のベンゾジアゼピン受容体（ＢＤＺ−Ｒｓ）へのフラボン誘導体Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５の結合親和性：
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Ｋib±ＳＥＭ値は３〜５回独立して測定した平均値である。０．００１〜４．５の範囲にある値においては、ＳＥＭは上記の値の６〜１３％の間で様々であった。重複測定の結果、親和性を示す値は低かった。
【生化学的データ】
ラットシナプトソーム膜への［3Ｈ］フルニトラゼパン結合の置換曲線から得た異なる化合物のＫｉ値における平均±ＳＥＭを表２に示す。比較曲線は、グラフパッドプリズム（Ｇｒａｐｈ−Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ）ソフトウエアを用いて解析された。
【表２】
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ｎは行った実験の回数を示す。
図１〜５は、異なるフラボンによる、ラットの大脳皮質の洗浄粗シナプトソーム膜への［3Ｈ］フルニトラゼパン結合の典型的な置換曲線を示す。各ケースにおいて得られたＫｉ値は以下のとおりである：
化    合    物                    Ｋｉ（ｎＭ）
６ニトロ−３’ブロモフラボン      ２１．８
６，３’ジブロモフラボン          ２２．７
３’ブロモフラボン                ４２７
６ニトロフラボン                  ３１５
３’クロロフラボン                ６６５
【結果および考察】
表１から収集された情報を解析して下記のような構造活性関係が得られた。これは、雌親化合物（フラボン６）の結合親和性において、以下のような変化を生じさせるフラボン置換として発現される：
（Ａ）多大な増加（４００〜１０００倍）：
●炭素６上の臭素原子またはニトロ群および炭素３’上のハロゲン群（Ａ４、Ａ５）。炭素６上の異なる置換基の有効性は以下の通り：Ｂｒ＞ＮＯ2。
（Ｂ）適度な増加（３．６〜１３倍）：
●炭素６上のニトロ群（Ａ１）。この置換基の有効性については前述の通りである。
●炭素３’上の臭素または塩素原子（Ａ２、Ａ３）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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