(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２種類の溶離液Ａ，Ｂを用いた液体クロマトグラフ装置であって、
カラムと、
前記カラムの下流に配置されており、測定対象成分を検出するための検出器と、
前記カラムの上流に配置された流路切換え部材と、
試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを一時的に保持するための第１の保持流路と、溶離液Ａまたは溶離液Ｂを一時的に保持するための第２の保持流路とを備え、
前記流路切換え部材が、
溶離液Ａを導入するための溶離液Ａ導入ポートと、溶離液Ｂを導入するための溶離液Ｂ導入ポートと、試料または洗浄液を導入するための試料等導入ポートと、試料もしくは洗浄液を排出する試料等排出ポートと、溶離液Ａまたは溶離液Ｂを排出する溶離液排出ポートと、前記溶離液Ａ，Ｂまたは試料をカラムに流出させるカラム接続ポートと、前記第１の保持流路の一端に接続されており、第１の保持流路に試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを流出する第１の流出ポートと、第１の保持流路の他端に接続されており、第１の保持流路から試料もしくは洗浄液または溶離液Ａが流入される第１の流入ポートと、前記第２の保持流路の一端に接続されており、第２の保持流路に溶離液Ａまたは溶離液Ｂを流出する第２の流出ポートと、前記第２の保持流路の他端に接続されており、第２の保持流路から溶離液Ａまたは溶離液Ｂが流入される第２の流入ポートとを有し、
前記流路切換え部材は、第２の保持流路が、カラム接続ポートに接続される第１の状態と、第１の保持流路がカラム接続ポートに接続される第２の状態との間で切換えられるように構成されている液体クロマトグラフ装置。
【請求項２】
前記流路切換え部材が十方バルブである請求項１に記載の液体クロマトグラフ装置。
【請求項３】
前記試料が測定対象成分としてのヘモグロビン類を含有する試料である請求項１または２に記載の液体クロマトグラフ装置。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の液体クロマトグラフ装置を用いた測定方法であって、前記溶離液Ｂの溶出力が溶離液Ａの溶出力よりも大きく、前記流路切換え部材を第２の状態として前記カラム接続ポートに溶離液Ａを送液しつつ、試料をカラムに導入した後、前記流路切換え部材を第１の状態に切換えてカラムに溶離液Ｂを導入することを特徴とする、液体クロマトグラフ装置を用いた測定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体クロマトグラフ装置及び該液体クロマトグラフ装置を用いた測定方法に関し、より詳細には、例えばヘモグロビン類などの測定に好適に用いられる、ステップグラジュエント方式を用いた液体クロマトグラフ装置及び測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、液体クロマトグラフィーにおいて、複数の移動相を使用して測定する方法として、移動相を所定のタイミングで切換えるステップグラジュエント方式（段階溶出法）が広く用いられている。
【０００３】
上記ステップグラジュエント方式で測定するための液体クロマトグラフ装置としては、低圧グラジュエント方式のもの及び高圧グラジュエント方式のものが知られている。
【０００４】
しかしながら、低圧グラジュエント方式では、送液ポンプが一台でよいものの、移動相の切換えをステップ的に速やかに行うことができないという問題があった。
【０００５】
他方、高圧グラジュエント方式では、移動相を速やかにステップ的に切換えることができるものの、移動相の種類に応じた送液ポンプを用意しなければならなかった。従って、クロマトグラフ装置の小型化及び低価格化を進めることができないという問題があった。
【０００６】
そこで、特開平７−２８０７８９号公報には、グラジュエント式の液体クロマトグラフ装置であって、測定時間の短縮化、測定器の小型化及び低価格化を図り得る構造が開示されている。
【０００７】
この先行技術に記載の液体クロマトグラフ装置では、第１の移動相を送液する送液ポンプと分離カラムとを連結してなる流路において、送液ポンプと分離カラムとの間に試料及び第２の移動相を上記流路に導くためのインジェクターが接続されている。このインジェクターは、試料または第２の移動相を吸引するサンプリングノズルと、サンプリングノズルに連結された切換え弁と、試料または第２の移動相を保持する液体保持流路とを有する。切換え弁を切換えることにより、第１の移動相が流路に流され、試料または第２の移動相が上記液体保持流路に導かれる第１の切換え状態と、第１の移動相を液体保持流路に導入し、かつ試料または第２の移動相を液体保持流路から流路に導く第２の切換え状態とが実現される。
【０００８】
従って、高圧グラジュエント方式を用いているため、複数の移動相をステップ的に速やかに切換えることができ、測定時間の短縮が果たされるとされている。また、上記液体保持流路を用いることにより、送液ポンプの台数を少なくすることができ、装置の小型化及び低価格化が図られるとされている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、特開平７−２８０７８９号公報に記載の液体クロマトグラフ装置では、液体保持流路に試料や第２の移動相を交互に導く動作、並びに試料導入後の洗浄動作を順に実施する必要があった。従って、総動作時間が測定時間内に収まるように測定条件を設定する必要があった。よって、測定時間を短縮しようとした場合、測定条件に制約があった。
【００１０】
また、上記先行技術に記載の液体クロマトグラフ装置では、上記液体保持流路に試料や第２の移動相が交互に導かれるため、液体保持流路に至る流路部分に存在していた移動相が、次の洗浄工程において洗浄液に置換される。すなわち、置換される移動相が測定に使用されないことになる。従って、移動相の無駄が多かった。
【００１１】
加えて、注入される試料の量と第２の移動相の量が異なる場合には、注入量の多い方を満たすように上記液体保持流路が構成されていなければならない。上記先行技術の実施例の欄では、試料が１０μＬ、第２の移動相が１５０μＬとされているが、この場合には液体保持流路の容量は最低でも１５０μＬとしなければならない。他方、試料の注入に際し、気泡が注入されてはならない。従って、試料の先端部が洗浄液で希釈されることになるので、上記のような小さな容量の液体保持流路の該容量よりも少ない量の試料を高精度に注入することは非常に困難であった。そのため、試料の注入量のばらつきが大きくならざるを得なかった。
【００１２】
本発明の目的は、上述した従来技術の欠点を解消し、移動相をステップ的に速やかに切換えることができ、装置の小型化及び低コスト化を果たし得るだけでなく、測定時間の短縮に際しての測定条件の制限が少なく、移動相の無駄が少なく、かつ試料を高精度に注入することができ、従って高精度に測定を行うことを可能とする液体クロマトグラフ装置及び該液体クロマトグラフ装置を用いた測定方法を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明の広い局面によれば、少なくとも２種類の溶離液Ａ，Ｂを用いた液体クロマトグラフ装置であって、カラムと、前記カラムの下流に配置されており、測定対象成分を検出するための検出器と、前記カラムの上流に配置された流路切換え部材と、試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを一時的に保持するための第１の保持流路と、溶離液Ａまたは溶離液Ｂを一時的に保持するための第２の保持流路とを備え、前記流路切換え部材が、溶離液Ａを導入するための溶離液Ａ導入ポートと、溶離液Ｂを導入するための溶離液Ｂ導入ポートと、試料または洗浄液を導入するための試料等導入ポートと、試料もしくは洗浄液を排出する試料等排出ポートと、溶離液Ａまたは溶離液Ｂを排出する溶離液排出ポートと、前記溶離液Ａ，Ｂまたは試料をカラムに流出させるカラム接続ポートと、前記第１の保持流路の一端に接続されており、第１の保持流路に試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを流出する第１の流出ポートと、第１の保持流路の他端に接続されており、第１の保持流路から試料もしくは洗浄液または溶離液Ａが流入される第１の流入ポートと、前記第２の保持流路の一端に接続されており、第２の保持流路に溶離液Ａまたは溶離液Ｂを流出する第２の流出ポートと、前記第２の保持流路の他端に接続されており、第２の保持流路から溶離液Ａまたは溶離液Ｂが流入される第２の流入ポートとを有し、前記流路切換え部材は、第２の保持流路が、カラム接続ポートに接続される第１の状態と、第１の保持流路がカラム接続ポートに接続される第２の状態との間で切換えられるように構成されている液体クロマトグラフ装置が提供される。
【００１４】
上記流路切換え部材としては、特に限定されるわけではないが、本発明の特定の局面では十方バルブが用いられ、すなわち市販されている十方バルブを上記流路切換え部材として用いることができる。
【００１５】
本発明に係る液体クロマトグラフ装置は様々な試料の分析に用いられ得るが、特に、測定対象成分としてのヘモグロビン類を含む試料の測定に好適に用いられる。
【００１６】
本発明に係る測定方法は、本発明に従って構成された液体クロマトグラフ装置を用いた測定方法であり、前記溶離液Ｂの溶出力が溶離液Ａの溶出力よりも大きく、前記流路切換え部材を第２の状態として前記カラム接続ポートに溶離液Ａを送液しつつ、試料をカラムに導入した後、前記流路切換え部材を第１の状態に切換えてカラムに溶離液Ｂを導入することを特徴とする。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の具体的な実施形態を説明することにより、本発明をより詳細に説明する。
【００１８】
図１は、本発明の一実施例に係る液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。本実施例の液体クロマトグラフ装置では、分離カラム１の下流側に検出器２が配置されている。分離カラム１としては、試料及び測定目的成分に応じた充填剤が充填されたものが用いられる。また、検出器２としては、分離カラム１から流出してきた移動相中の目的成分を検出するための適宜の検出装置が用いられる。
【００１９】
分離カラム１の上流側には、流路切換え部材３が配置されている。流路切換え部材３は、本実施形態では、十方バルブを用いて構成されている。従って、流路切換え部材３は１０個のポートを有する。１０個のポートの詳細は以下の通りである。
【００２０】
まず、洗浄液または試料が導入される試料等導入ポートａ、後述の第１の保持流路ｃ１の一端に接続され、試料もしくは洗浄液または溶離液Ａを第１の保持流路ｃ１に流出する第１の流出ポートｂ、溶離液Ａを導入するための溶離液Ａ導入ポートｃ、第２の保持流路ｃ２の一端に接続されており、第２の保持流路に溶離液を流出する第２の流出ポートｄ、溶離液Ｂを導入するための溶離液Ｂ導入ポートｅ、溶離液を排出するための溶離液排出ポートｆ、第２の保持流路ｃ２の端部に接続されており、第２の保持流路ｃ２から溶離液を流入させる第２の流入ポートｇ、前述した分離カラム１に接続されており、分離カラム１に移動相溶離液Ａ，Ｂまたは試料を与えるカラム接続ポートｈ、第１の保持流路ｃ１の端部に接続されており、第１の保持流路ｃ１から試料もしくは洗浄液または溶離液Ａが流入される第１の流入ポートｉ、洗浄液または試料を排出する試料等排出ポートｊとを備える。
【００２１】
本実施形態の液体クロマトグラフ装置では、溶離液Ａ導入ポートｃに、送液部材４が接続されており、該送液部材４により、溶離液Ａが溶離液Ａ導入ポートｃに送液されるように構成されている。送液部材４としては、例えば、プランジャー式ポンプなどの適宜の液体移送手段を用いることができる。
【００２２】
切換え部材３に溶離液Ａを供給する流路と、切換え部材３から分離カラム１及び検出器２に至る流路とが、この液体クロマトグラフ装置の主流路を構成している。
【００２３】
他方、試料等排出ポートｊには、試料等導入部材５が接続されている。試料等導入部材５は、ポンプなどの適宜の液体移送手段により構成されており、陰圧により、試料または洗浄液等を切換え部材３に導入し、かつ試料等排出ポートｊから外部に排出し得るように構成されている。また、溶離液排出ポートｆには、同様に、溶離液導入部材６が接続されている。溶離液導入部材６は、同じくポンプなどにより構成されており、陰圧により、溶離液Ｂを切換え部材３に導入し、かつ溶離液Ａまたは溶離液Ｂを外部に排出するように構成されている。
【００２４】
試料等導入ポートａには切換え弁７が接続されている。切換え弁７は、サンプリングノズル８に接続されており、サンプリングノズル８の先端が試料Ｘ内に浸漬した状態または洗浄液Ｙ内に浸漬した状態とを切換え得るように構成されている。切換え弁７の上記切換えは、モータや電磁弁などを用いて行われ得る。
【００２５】
試料Ｘ及び洗浄液Ｙ内にそれぞれ浸漬された複数のサンプリングノズル８が設けられており、切換え弁７によって接続が切換えられるように構成されてもよい。
【００２６】
他方、溶離液Ｂ導入ポートｅには、切換え弁９が接続されている。切換え弁９は、ノズル１０に連結されている。図１では、ノズル１０の先端は溶離液Ｂに浸漬されているが、切換え弁９を切換えることにより、溶離液Ｂを溶離液Ｂ導入ポートｅに供給し得る図示の状態及び供給しない状態を実現することができる。
【００２７】
第１の保持流路ｃ１は、前述した第１の流出ポートｂ及び第１の流入ポートｉ間に接続されている。また、第２の保持流路ｃ２は、第２の流出ポートｄ及び第２の流入ポートｇに接続されている。
【００２８】
切換え部材３を構成する十方バルブは、第１の保持流路ｃ１を、前述した主流路に接続した第２の状態ＩＩと、第２の保持流路ｃ２が前述した主流路に接続される第１の状態Ｉとで切換えられるように構成されている。また、第１の状態Ｉでは、溶離液Ｂ導入ポートｅと、溶離液排出ポートｆとを結ぶ流路ｐ３が切換え部材３内において構成され、溶離液Ｂは外部に排出されるように構成されている。また、第２の状態ＩＩでは、試料等導入ポートａと、試料等排出ポートｊとが後述の流路ｐ１により接続され、試料または洗浄液等が外部に排出されるように構成される。
【００２９】
第１の状態Ｉ及び第２の状態ＩＩにおける切換え部材３内での状態及び各ポート内で構成される内部の流路は後述の通りである。
また、第１の保持流路ｃ１への試料の導入は、第２の状態ＩＩにおいて、切換え弁７を切換え、試料Ｘをサンプリングノズル８が吸入する状態とし、試料等導入部材５の陰圧を利用して行われる。また、第１の保持流路ｃ１の洗浄は、サンプリングノズル８から洗浄液Ｙを吸入し得るように切換え弁７を切換え、同様に試料等導入部材５の陰圧を利用して洗浄液が第１の保持流路ｃ１に流される。
【００３０】
他方、第２の保持流路ｃ２への溶離液Ｂの導入は、上記第１の状態Ｉにおいて、溶離液導入部材６の陰圧を利用して行われる。
なお、本実施例では、試料等導入部材５及び溶離液導入部材６は、切換え部材３の下流側に配置されており、上記のように陰圧を利用して試料等または溶離液が流されるように構成されているが、吸引及び吐出機能を有するピストンポンプなどを用いることにより、切換え部材３の上流側に、試料等導入部材５及び溶離液導入部材６を配置してもよい。すなわち、切換え弁７と試料等導入ポートａとの間にピストンポンプなどからなる試料等導入部材５を接続してもよく、切換え弁９と溶離液Ｂ導入ポートｅとの間に同様にピストンポンプなどからなる溶離液導入部材６を配置してもよい。
【００３１】
なお、本実施形態の液体クロマトグラフ装置を構成する上記送液部材、試料等導入部材５及び溶離液導入部材６を構成するポンプなどは市販のポンプを用いて構成することができ、切換え部材３を構成する十方バルブ、切換え弁７，９及び検出器２なども、市販されている十方バルブ、切換え弁及び液体クロマトグラフ用検出器により構成され得る。
【００３２】
また、自動測定を行うには、これらの各ユニットを制御するコントローラーにより、以下の測定方法における各切換え部材や切換え弁等の切換えのタイミングを制御すればよい。
【００３３】
次に、図２〜図１０を参照して本実施形態の液体クロマトグラフ装置の測定方法を説明することにより、上記切換え部材３の構造の詳細も明らかにする。
なお、図２〜図９は、この測定に際しての各動作ステップにおける切換え部材３の状態と試料Ｘ、洗浄液Ｙ、溶離液Ａ，Ｂの流れる状態を示す図であり、試料Ｘ、洗浄液Ｙ、溶離液Ａ及び溶離液Ｂは、それぞれ、細い破線、太い破線、実線及び二点鎖線で示されている。図１０は、これらの各動作ステップにおける主流路における送液内容を、切換え部材３の切換え状態、及び検出器により得られるクロマトグラムの時間的変化を示す図である。
【００３４】
まず、図２に示すステップＳ１では、切換え部材３は第１の状態Ｉとされている。図２においては、切換え部材３の中央に、第１の状態であることを示すＩが記されているが、以下の図３〜図９においても同様に切換え部材３の切換え状態を切換え部材３の中央に示すこととする。
【００３５】
ステップＳ１においては、切換え部材３が第１の状態に切換えられており、第２の保持流路ｃ２が溶離液Ａ導入ポートｃと、カラム接続ポートｈに接続されている。すなわち、第１の状態Ｉでは、切換え部材３内において、第２の流出ポートｄと溶離液Ａ導入ポートｃとが接続されており、第２の流入ポートｇとカラム接続ポートｈとが接続されている。従って、溶離液Ａは、主流路の途中で第２の保持流路ｃ２を流れ、カラム１に与えられる。従って、第２の保持流路ｃ２には溶離液Ａが満たされる。他方、ステップＳ１においては、第１の保持流路ｃ１には、破線で示すように試料Ｘが満たされている。この第１の保持流路ｃ１への試料Ｘの充填は後述のステップＳ６〜８と同様にして行われるため、後ほど詳細に説明する。
【００３６】
ステップＳ１においては、試料等導入ポートａと、第１の流出ポートｂとが接続されており、第１の流入ポートｉと試料等排出ポートｊとが接続されている。そして、試料導入部材５を駆動することにより、試料Ｘまたは洗浄液Ｙが搬送されるが、ステップＳ１においては、上記のように第１の保持流路ｃ１に試料Ｘが満たされており、試料Ｘの後ろに、洗浄液Ｙが配置されている。この場合、サンプリングノズル８は、洗浄液Ｙに浸漬されるように切換え弁７が切換えられている。従って、図２にＹで示すように、試料Ｘの後ろから洗浄液Ｙが移送される。
【００３７】
なお、第１の状態Ｉにおいては、溶離液Ｂ導入ポートｅは、溶離液排出ポートｆと接続されており、従って、溶離液Ｂは、溶離液導入部材６の陰圧により、第２の保持流路ｃ２に満たされる。
【００３８】
次に、ステップＳ２において、切換え部材３が第１の状態Ｉから第２の状態ＩＩに切換えられる。図３に示すように、第２の状態ＩＩでは、溶離液Ａ導入ポートｃが第１の流出ポートｂに接続され、第１の流入ポートｉがカラム接続ポートｈに接続される。従って、溶離液Ａが第１の保持流路ｃ１側に向かって流れることになり、該溶離液Ａに押されて、試料Ｘが分離カラム１側に移動する。
【００３９】
他方、試料等導入ポートａと、試料等排出ポートｊとが接続され、試料または洗浄液は、試料排出部材５の陰圧により外部に排出される。また、溶離液Ｂ導入ポートは、第２の流出ポートｄに接続され、第２の流入ポートｇが溶離液排出ポートｆに接続される。従って、溶離液Ｂが、第２の保持流路ｃ２内に導入される。
【００４０】
よって、ステップＳ３において、試料Ｘが溶離液Ａに押されることにより、分離カラム１側に押し出されていく。すなわち、図４に示すように、溶離液Ａが第１の保持流路ｃ１内に侵入するにつれて、試料Ｘが分離カラム１側に流される。
【００４１】
また、第２の保持流路ｃ２には、溶離液Ｂが流されるが、第２の保持流路ｃ２には、前回の測定に際し溶離液Ａが満たされていたため、溶離液Ａと溶離液Ｂとの混入を防止するために、空気を介在させて、溶離液Ｂが流される。
【００４２】
また、ステップＳ４では、流路ｐ１の試料Ｘを置換して洗浄するために、切換え弁７が切換えられ、サンプリングノズル８が洗浄液８に浸漬され、洗浄液８が流路ｐ１に向かって流される。この場合においても、空気を送った後に、洗浄液Ｙが流される。動作が進行するにつれて、図５に示すように、ステップ４において、第１の保持流路ｃ１に溶離液Ａが満たされ、さらに溶離液Ａが分離カラム１に向かって流れる。他方、第２の保持流路ｃ２は溶離液Ｂで満たされる。なお、第２の保持流路ｃ１に溶離液Ｂが満たされた後に、溶離液Ｂの後に空気が位置するように、切換え弁９が切換えられ、サンプリングノズル１０が溶離液Ｂに浸漬された状態から空気を吸引する状態に切換えられる。
【００４３】
このようにして、第２の保持流路ｃ２に溶離液Ｂが充填される。
【００４４】
次に、図６に示すように、ステップＳ５において、切換え部材３が第２の状態ＩＩから、第１の状態Ｉに切換えられる。ステップＳ５においては、第２の保持流路ｃ２が、再度溶離液Ａが供給されるように、第２の保持流路ｃ２が分離カラム１に接続される。従って、送液部材の駆動により溶離液Ａが第２の保持流路ｃ２に向かって流されることになるため、溶離液Ａにより溶離液Ｂが押し出され、第２の保持流路ｃ２から分離カラム１側に向かって流れる。このステップＳ５においては、溶離液導入部材６はその駆動が停止されている。
【００４５】
次に、図７に示すように、ステップＳ６において、試料等導入部材５を駆動し、かつ切換え弁７を切換え、サンプリングノズル８を洗浄液Ｙを吸引する状態から試料Ｘを吸引する状態へ移動させる。この場合、洗浄液Ｙから一旦引き出されたサンプリングノズル８は、空気を吸引し、しかる後試料Ｘに浸漬された後に、試料Ｘを吸引する。従って、図７に示すように、空気を介在させた後、試料Ｘが第１の保持流路ｃ１に供給される。
【００４６】
このようにして、第１の保持流路ｃ１に、試料Ｘが充填されていく。この間、第２の保持流路ｃ２には、溶離液Ａが順次満たされていき、溶離液Ｂは第２の保持流路ｃ２から分離カラム１側に向かって押し出されていく。
【００４７】
次に、ステップＳ７では、図８に示すように、上記のようにして試料Ｘが第１の保持流路ｃ１に満たされている。しかる後、ステップＳ７において、切換え弁７が切換えられ、サンプリングノズル８が洗浄液Ｙに再度浸漬される。この切換えに際し、サンプリングノズル８は、試料Ｘから引き出された際に空気を吸入し、しかる後洗浄液Ｙに浸漬される。従って、試料Ｘの後に空気が吸引される（図８参照）。
【００４８】
次に、図９に示すように、ステップＳ８において、切換え部材３が第１の状態Ｉから第２の状態ＩＩに切換えられる。その結果、第１の保持流路ｃ１に溶離液Ａが流れ、再度試料Ｘが分離カラム１側に流される。他方、洗浄液Ｙが流路ｐ１を洗浄するように切換え部材３の試料等導入ポートに向かって流れる。
【００４９】
図１０から明らかなように、上記ステップＳ１〜Ｓ８に従って液体クロマトグラフ装置を駆動することにより、試料Ｘを分離カラムに導いた後、溶離液Ａ及び溶離液Ｂを順に用いて、目的成分の溶出を行うことができる。また、図１０から明らかなように、本実施形態の液体クロマトグラフ装置では、上記のように第１，第２の保持流路ｃ１，ｃ２を用い、試料あるいは溶離液Ａ，Ｂの分離カラム１への供給のタイミングが切換えられるので、図１０から明らかなように、溶離液Ａと溶離液Ｂとを高精度に階段状に供給することができ、溶離液Ａ及び溶離液Ｂの溶出力を利用して目的とする成分を高精度に検出することができる。
【００５０】
しかも、本実施形態では、２つの保持流路ｃ１，ｃ２を用いているため、第２の移動相を測定前に置換する必要のないことがわかる。加えて、試料と溶離液Ｂとが、異なる保持流路ｃ１，ｃ２を用いて供給されるので、試料の量が少ない場合であっても、試料注入を高精度に行うことができ、試料注入精度のばらつきを低減することができる。
【００５１】
なお、上記実施形態では、溶離液Ｂの溶出力が溶離液Ａの溶出力よりも高くされている。もっとも、本発明では、３種以上の溶離液を用いてもよく、その場合には、溶離液Ａ，溶離液Ｂよりも溶出力の小さい溶離液を溶離液Ａの前に流せばよく、溶離液Ａ，溶離液Ｂよりも溶出の大きい溶離液は溶離液Ｂの後に流せばよい。
【００５２】
さらに、上記実施形態では、ヘモグロビン類の分離及び測定に用いた例を示したが、他の様々な成分の分離及び測定に本発明に係る液体クロマトグラフ装置を用いることができる。
【００５３】
【発明の効果】
以上のように、本発明に係る液体クロマトグラフ装置では、カラム及び検出器の上流に流路切換え部材が配置されており、該流路切換え部材を第２の状態ＩＩとすることにより、第１の保持流路がカラムに接続され、第１の状態Ｉとすることにより、第２の保持流路をカラムに接続された状態とすることができる。従って、本発明の測定方法に従って、第１の保持流路により試料及び溶離液Ａをカラムに与えるように、かつ第２の流路ｃ２により溶離液Ａ，Ｂの供給を行うことにより、測定時間の短縮、測定前に溶離液を置き換える作業の省略、並びに試料の注入量のばらつきの低減を果たすことができる。よって、安価であり、かつ比較的短時間に、目的とする成分を高精度に測定することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の一実施形態に係る液体クロマトグラフ装置の概略構成図。
【図２】本発明の一実施形態において、ステップＳ１において、試料Ｘが第１の液体保持流路に充填されている状態を示す概略構成図。
【図３】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ２において、試料が分離カラムに溶離液Ａにより押されて移動する状態を示す概略構成図。
【図４】本発明の一実施形態に係る測定方法のステップＳ３において、第１の保持流路ｃ１に洗浄液が注入される工程を説明するための概略構成図。
【図５】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ４において、第２の保持流路ｃ２が溶離液Ｂで満たされる工程及び第１の保持流路ｃ１が洗浄される工程を説明するための概略構成図。
【図６】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ５において、溶離液Ｂが分離カラムに与えられる工程を説明するための概略構成図。
【図７】本発明の一実施形態に係る測定方法のステップＳ６において、第１の保持流路ｃ１に試料を導入する工程及び第２の保持流路ｃ２に溶離液Ａを供給する工程を示す概略構成図。
【図８】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ７において、第１の保持流路ｃ１が試料により満たされている状態及び第２の保持流路ｃ２が溶離液Ａにより満たされている状態を示す概略構成図。
【図９】本発明の一実施形態の測定方法のステップＳ８において、切換え部材が第２の状態に切換えられ、試料がカラムに与えられる工程、及び流路ｐ３から試料が排出される工程を説明するための概略構成図。
【図１０】本発明の一実施形態の測定方法における各動作ステップと、切換え部材切換え状態と、主流量における送液内容と、検出されたクロマトグラムとの各時間変化を示す図。
【符号の説明】
１…分離カラム
２…検出器
３…切換え部材
４…送液部材
５…試料等導入部材
６…溶離液導入部材
７…切換え弁
８…サンプリングノズル
９…切換え弁
１０…ノズル
ａ…試料等導入ポート
ｂ…第１の流出ポート
ｃ…溶離液Ａ導入ポート
ｃ１…第１の保持流路
ｃ２…第２の保持流路
ｄ…第２の流出ポート
ｅ…溶離液Ｂ導入ポート
ｆ…溶離液排出ポート
ｇ…第２の流入ポート
ｈ…カラム接続ポート
ｉ…第１の流入ポート
ｊ…試料等排出ポート
【図１】
0004603203.tif 000002
【図２】
0004603203.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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