(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形分濃度１０〜８０％の植物エキスの水溶液に水混和性有機溶媒を添加し、生成する沈殿物を除去することを特徴とする植物エキスの除菌方法。
【請求項２】
水混和性有機溶媒がエタノールであることを特徴とする、請求項１に記載の植物エキスの除菌方法。  
【請求項３】
植物エキスの水溶液中に含まれる水分１００重量部に対して水混和性有機溶媒を１００〜９００重量部添加すること特徴とする請求項１または２に記載の植物エキスの除菌方法。
【請求項４】
植物エキスの水溶液のｐＨが１〜７の範囲であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の植物エキスの除菌方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、飲食品や香粧品の原料として用いる植物エキスの除菌方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物エキスはさまざまな飲食品素材、飲食品の風味付け、香粧品の原料、飲食品や香粧品への機能性素材など幅広く使用されている。しかしながら、原料となる植物は土壌の上や土壌の中で生育または栽培されるため、その性質上、土壌などからの付着物による微生物汚染がしばしば見られ、耐熱性菌の芽胞が検出されることも多い。このような、原料由来の微生物は抽出によりエキス中に移行するため、植物エキス製品となるまでの工程のいずれかの段階で殺菌または除菌する必要がある。植物エキスを製造するに際し、原料またはエキスを殺菌または除菌する方法としては、加熱殺菌の他、洗浄による除菌（非特許文献１）、ガンマ線、電子線、紫外線などの照射による殺菌（非特許文献２）、マイクロ波照射による殺菌（非特許文献３）、オゾン水殺菌（特許文献１）、ガス加圧法による殺菌（非特許文献４）、高圧殺菌（特許文献２）、除菌フィルターやＵＦ膜による除菌（特許文献３）などがあげられる。しかしながら、洗浄による除菌は完全ではなく、照射による殺菌、オゾン水による殺菌、ガス加圧法殺菌、高圧殺菌などは特別な装置が必要である。また、除菌フィルターやＵＦ膜による除菌ではエキスの粘度、不溶物などの影響により、目詰まり、濾過速度の低下などの可能性があり、それを避けるためにエキス中の微細な不溶物をある程度除去する前濾過などを行う必要があり、その場合、作業性が著しく低下するという問題がある。加熱殺菌は最も一般的に行われている方法であるが、例えば、液体の加熱殺菌において、特に耐熱性菌の殺菌を目的とした場合、一般に温度１１０〜１４０℃の高温にて実施される。しかし、このような高温での加熱殺菌の条件下では、変色、風味の劣化、成分の変性などの品質変化が起こる場合が多く、製品の品質が低下する等の問題点があった。また、このような、高温での変質を避けるため、１００℃以下での加熱で、殺菌作用を高める物質を併存させる方法も提案されており、例えば、補助的な物質としてエタノールを使用した報告もある（非特許文献５）。しかしながら、非特許文献５に記載の方法では殺菌効率は上がるものの、耐熱性菌の芽胞を完全に殺菌できるものではなかった。
【０００３】
【非特許文献１】食品と容器，３３（９），４８９−５０５，（１９９２）
【非特許文献２】フードケミカル，１３（３），６９−７４，（１９９７）
【非特許文献３】フードケミカル，８（７）、４９−５９，（１９９２）
【非特許文献４】食品工業，３７（１６），４７−５７，（１９９４）
【非特許文献５】Ｎｅｗ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，４１（６），１−８，（１９９９）
【特許文献１】特開平１−３０９６７１号公報
【特許文献２】特開昭５９−２１０８７３号公報
【特許文献３】特開昭６０−１１０２７１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって本発明の目的は、特別の装置を必要とせず、加熱による風味の劣化、成分の変性などの品質変化が無く、簡便な方法で、耐熱性菌の芽胞も含めた微生物が実質的に除去された植物エキスの製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者等は、前記課題を解決すべく鋭意研究を行っていたところ、植物原料の抽出物の水溶液にエタノール等の水混和性有機溶媒を添加して沈殿物を生成させたところ、微生物が沈殿物の生成と共に沈殿物に抱き込まれ、沈殿物を除去することにより微生物も同時に除去されることを見出した。また、この際、耐熱性菌の芽胞も含めて除去されることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
かくして、本発明は、固形分濃度１０〜８０％の植物エキスの水溶液に水混和性有機溶媒を添加し、生成する沈殿物を除去することを特徴とする植物エキスの除菌方法を提供するものである。
【０００７】
さらに、本発明では、水混和性有機溶媒がエタノールであることを特徴とする、前記のの植物エキスの除菌方法を提供するものである。  
また、本発明では、植物エキスの水溶液に含まれる水分１００重量部に対して水混和性有機溶媒を１００〜９００重量部添加すること特徴とする前記の植物エキスの除菌方法が提供される。
【０００８】
さらに、また、本発明では、植物エキスの水溶液のｐＨが１〜７の範囲であることを特徴とする、前記の植物エキスの除菌方法を提供することができる。
【発明の効果】
【０００９】
本発明では特別な装置等を用いることなく、除菌された植物エキスを効率よく、簡便な方法で製造することができる。また、通常は除菌しにくい耐熱性菌の芽胞も除去することができる。また、加熱殺菌を行わなくても除菌できるため、変色、風味の劣化、成分の変性などの品質変化が起こらない。さらにまた、得られたエキス自体が微生物的に安定であるため、さまざまな飲食品素材、飲食品の風味付け、香粧品の原料、飲食品や香粧品への機能性素材などに使用しても、最終製品中で微生物由来の問題が起こりにくいという優れた効果が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明でいう植物エキスの水溶液とは植物原料の抽出物の水溶液をさし、例えば、以下の方法で得ることができる。使用することのできる植物原料としては、いかなる植物でもよく、また、その部位についても特に限定されず、その植物の一般的に使用される部位を使用することができる。使用することのできる植物原料としては、例えば、コーヒー（生および焙煎）、ココア、マテ茶、紅茶、緑茶、ウーロン茶、ほうじ茶、プーアール茶などの嗜好飲料原料類、キャベツ、セロリ、レタス、ブロッコリー、カリフラワー、サラダナ、チンゲンサイ、ほうれん草、小松菜、春菊、菜の花、ミツバ、パセリ、トマト、ナス、キュウリ、カボチャ、ゴーヤ、ピーマン、パプリカ、トウガラシ、人参、大根、ゴボウ、レンコン、ジャガイモ、サツマイモ、サトイモ、ナガイモ、ヤマイモ、ヤマトイモ、ラッキョウ、ニンニク、タマネギ、ネギ、ニラ、ワケギ、シメジ、シイタケ、マツタケ、ナメコ、エノキ、マイタケ、エリンギなどの野菜類、オレンジ、レモン、グレープフルーツ、バナナ、リンゴ、パインアップル、ライチ、ブルーベリー、エルダーベリー、スイカ、メロン、ナシ、カキ、ウメ、モモ、アンズ、アプリコット、ブドウ、マンゴー、キウイフルーツ、イチゴなどの果実類、セージ、タイム、マジョラム、オレガノ、バジル、ペパーミント、シソ、レモンバーム、ベルベナ、セーボリー、ローズマリー、レモングラス、ブルーベリーリーフ、ベイリーフ、ユーカリリーフ、サッサフラス、サンダルウッド、ニガヨモギ、センブリ、レッドペッパー、ゴマ、シンナモン、カッシャ、スターアニス、ワサビ、西洋ワサビ、ホースラディッシュ、ミズガラシ、マスタード、トンカ豆、フェネグリーク、サンショウ、ブラックペッパー、ホワイトペッパー、オールスパイス、ナツメグ、メース、クローブ、セリ、アンゲリカ、チャービル、アニス、フェンネル、タラゴン、コリアンダー、クミン、ディル、キャラウェー、ガランガ、カルダモン、ジンジャー、ガジュツ、ターメリック、バニラ、ジュニパーベリー、ウインターグリーン、ジャーマンカモミール、ローマンカモミール、菊花、ラベンダー、ハイビスカスフラワー、サフラン、マリーゴールド、オレンジフラワー、マローフラワー、ローズヒップ、サンザシ、リュウガン、クコシ、サンデュー、オレンジピール、レモンピール、マシュマロールート、チョウセンニンジン、デンシチニンジン、エゾウコギ、ギムネマ、ルイボスティー、トチュウなどのハーブまたはスパイス類、コンブ、ワカメ、アオサ、ノリ、アオノリ、テングサなどの海草類、ピーナッツ、アーモンド、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、マカダミアナッツ、ピーカンナッツなどのなどのナッツ類などを例示することができる。
【００１１】
本発明でいうエキスとは、これらの植物原料の抽出物を意味し、抽出時において使用する溶媒、方法、温度、時間などは特に限定されない。
【００１２】
抽出に使用する溶媒としては含水親水混和性有機溶媒、例えば、含水率５重量％以上、好ましくは含水率約５〜約９０重量％のメタノール、エタノール、２−メチルエチルケトン、２−プロパノール、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはこれらの任意の混合物を用いることが好ましい。これらのうち、水、エタノールまたは水とエタノールの混液が特に好ましい。
【００１３】
これらの水または含水水混和性有機溶媒は通常植物原料１重量部に対して約２〜約５０重量部を使用し、抽出操作はバッチ式またはカラムによる連続式等の従来既知の抽出方法をそのまま採用することができる。
【００１４】
抽出温度および時間も特に限定されないが、抽出温度としては約１０〜１００℃、好ましくは、約２０〜９０℃、より好ましくは、３０〜８０℃程度とすることができる。また、抽出時間としては、約５分〜２４時間、好ましくは、約３０分〜１０時間、より好ましくは約１〜５時間とすることができる。
【００１５】
抽出後は約１０〜４０℃に冷却し、遠心分離、濾過等により不溶の固形物を除去し、抽出液とする。また、抽出において溶媒として水以外の有機溶媒を使用した場合は、抽出液から有機溶媒を除去する必要がある。溶媒を除去する方法としては、いかなる濃縮、乾燥などの方法を採用しても良く例えば、常圧濃縮、減圧濃縮、噴霧乾燥、真空乾燥、凍結乾燥等を例示することができるが、減圧濃縮により有機溶媒を除去する方法が好ましい。
【００１６】
また、果実や野菜などでは、単に圧搾して得た、いわゆる果汁や野菜汁を原料とすることもできる。
【００１７】
かくして、得られた植物原料の抽出物は、そのまま、あるいは水に溶解または希釈または濃縮などの方法により適当な濃度の水溶液とした後に、水混和性有機溶媒を添加して沈殿を生成せしめる。このとき、微生物が沈殿物の生成と共に沈殿物に抱き込まれ、沈殿物を除去することにより微生物も同時に除去される。また、この際、耐熱性菌の芽胞も含めて除去される。
【００１８】
植物エキスの水溶液の固形分濃度としては、濃度が低すぎる場合、必要な水混和性有機溶媒の量が多くなりすぎ、また、除菌の効果が充分得られない可能性があるため、ある程度高濃度とすることが好ましい。しかしながら、あまり濃度が高すぎる場合、流動性が悪く、取り扱いが困難となる。固形分濃度の範囲としては、約１０〜８０％、好ましくは約２０〜７５％、特に好ましくは約３０〜７０％の範囲内を例示することができる。
【００１９】
沈殿の生成に使用することのできる水混和性有機溶媒としてはメタノール、エタノール、２−メチルエチルケトン、２−プロパノール、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルなどを例示することができる。これらのうち、特に好ましい溶媒はエタノールである。
【００２０】
植物エキスの水溶液に添加する水混和性有機溶媒重量の好ましい範囲としては植物エキスの水溶液に含まれる水分１００重量部に対して水混和性有機溶媒を約１００〜９００重量部、好ましくは約１５０〜８００重量部、より好ましくは約２００〜７００重量部を挙げることができる。水混和性有機溶媒の添加量がこの範囲より少ない場合は、沈殿が充分生成せず、そのため除菌の効果が充分でない。また、水混和性有機溶媒の添加量があまり多すぎた場合、製造コストが高くなってしまう。
【００２１】
また、植物エキスの水溶液は、酸性とすることにより除菌の効果が高まる。酸性であるためのｐＨの範囲としては、例えばｐＨ１〜７の範囲内、好ましくはｐＨ２〜６の範囲内、より好ましくはｐＨ２．５〜５．５の範囲内を例示することができる。ｐＨの調整が必要な場合に使用することのできる酸としてはクエン酸、酒石酸、リンゴ酸などの有機酸、塩酸、硫酸、リン酸などの鉱酸などを挙げることができる。
【００２２】
また、植物エキスの水溶液に、水混和性有機溶媒を添加した後、抽出液から不溶解物を除去するに際して濾過助剤を使用することで、耐熱性菌の芽胞の除菌効率をさらに高めることができる。濾過助剤としては、ケイソウ土、酸性白土、活性白土、タルク類、粘土、ゼオライト、粉末セルロースなどを例示することができる。
【００２３】
植物エキスの水溶液に対する水混和性有機溶媒添加は以下の様な態様で行うことができる。植物エキスの水溶液を約１０〜３０℃とし、攪拌しながら水混和性有機溶媒を徐々に添加していき、沈殿を生成せしめる。必要な量の水混和性有機溶媒添加を添加した後にさらに濾過助剤を添加し、濾紙等で濾過し、植物エキスを得る。
【００２４】
このようにして得られた植物エキスは、一般生菌、カビ、酵母のみならず、耐熱性菌の芽胞も除去される。一方、沈殿物にはこれらの微生物が濃縮されており、微生物が死滅したのではなく、沈殿物に抱き込まれていることが確認できる。
【００２５】
かくして得られた除菌された植物エキスは、減圧または常圧にて濃縮し、濃縮物とすることもできる。該濃縮物は濃縮の途中あるいは濃縮後にグリセリン、プロピレングリコール、エタノールなどの保留剤を添加することにより、状態の安定化をはかり、また、エキス分濃度の調整を行うこともできる。また、該濃縮液はそのまま、あるいはデキストリン類、デンプン類、天然ガム類、糖類その他の賦形剤を添加して、既知の方法により乾燥して、粉末状、顆粒状その他任意の固体形態の製剤とすることもできる。
【００２６】
かくして得られた除菌された植物エキスまたはその製剤は例えば、炭酸飲料、果汁飲料、果実酒飲料類、乳飲料などの飲料類；アイスクリーム類、シャーベット類、アイスキャンディー類などの冷菓類；和・洋菓子、チューインガム類、パン類、コーヒー、紅茶、緑茶、タバコなどの嗜好品類；和風スープ類、洋風スープ類などのスープ類；ハム、ソーセージなどの畜肉加工品；風味調味料、各種インスタント飲料ないし食品類；各種のスナック類；シャンプー類、ヘアクリーム類、その他の毛髪化粧料基剤；オシロイ、口紅、その他の化粧用基剤や化粧用洗剤類基剤；洗濯用洗剤類、消毒用洗剤類、防臭洗剤類、その他各種の保健・衛生用洗剤類；歯磨き、ティシュー、トイレットペーパーなどの各種保健・衛生材料類；医薬品類などといった各種の飲食品や香粧品類に適当量を配合することができる。  
以下、実施例により本発明の好ましい態様をさらに詳しく説明する。
【実施例】
【００２７】
実施例１
生コーヒー豆の粉砕物１０００ｇをカラムに充填し（カラム内径７ｃｍ、長さ２５ｃｍ、１本につきコーヒー豆２００ｇを充填し、５本連結）、９５℃に加温した軟水を流速２５００ｍｌ／ｈｒでカラム上部から下部へ送り込み、カラム下部から抜き取った抽出液は、次のカラムの上部へ順次送り込み５本目のカラムより最終的な抽出液を抜き取る方法にて連続抽出を行い、抜き取り液がＢｘ１．０°を下回った時点で抽出終了（所要時間約３時間）とし、Ｂｘ６．０°のコーヒーエキス５３００ｇを得た。得られたコーヒーエキスは２０℃に冷却後、Ｎｏ．２６（２１０ｍｍ）（東洋濾紙株式会社製）にセルロースパウダー５０ｇをプレコートしたヌッチェにて吸引濾過し、濾液５２５０g（以下、コーヒー抽出液１とする）を得た。コーヒー抽出液１をロータリーエバポレーターにて濃縮し、Ｂｘ７８．０°（参考品１、水分含量３７．３％、固形分含量６２．７％：ｋｅｔｔ赤外線水分計にて測定、ｐＨ５．７）の濃縮コーヒーエキス４１９．８ｇを得た。
参考品１の２０gに４規定塩酸１．２ｇおよび水１．１gを加えｐＨ４．５、Ｂx７０°、液量２２．３gとした後、室温下（２３℃）で攪拌しながら９５％エタノール３３．５gを１０分間かけて滴下した。その後、同温度で６０分間攪拌した後、濾過助剤として活性白土（ガレオンアース：水澤化学工業（株））８．０gを加えてさらに３０分間攪拌した後、Ｎｏ．５Ａ（４０ｍｍ）（東洋濾紙株式会社製）を使用し、桐山ロートにて吸引濾過し、濾液４９．５ｇ（本発明品１）を得た。
参考品１、本発明品１およびヌッチェ上の沈殿物について微生物検査を行った結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
0004584287.tif 000002
【００２９】
表１に示したとおり、参考品１には一般生菌、嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌が存在していたが、本発明品１では完全に除菌されており、一方、ヌッチェ上の沈殿物には多量の嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌が含まれていた。したがって、本発明の除菌方法では微生物が沈殿物の生成と共に沈殿物に抱き込まれ、沈殿物を除去することにより微生物も同時に除去されていると認められた。
【００３０】
実施例２
緑茶抽出物であるポリフェノンＨＧ（東京フードテクノ社製：非重合体カテキン類含有量３３．７重量％）を水に溶解し４１．８重量％水溶液９０ｇを調整した（ｐＨ５．４１）。このものの微生物検査を行ったところ、一般生菌数、嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌はいずれも０個／ｇであった。そこで、この水溶液９０ｇに、嫌気性耐熱性菌としてＤｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｎｉｇｒｉｆｉｃａｎｓ  ＮＣＩＭＢ８３９５を２×１０６個／ｍｌおよび好気性耐熱性菌としてＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ＩＭＡ１０３５を８×１０５個／ｍｌ含有する水溶液１０ｇを添加し、よく混合し参考品２とした。
参考品２の２０gを室温下（２３℃）で攪拌しながら９５％エタノール（日本アルコール販売（株）、エタノール濃度９２重量％）３０．０gを１０分間かけて滴下した。その後、同温度で６０分間攪拌した後、濾過助剤として活性白土（ガレオンアース：水澤化学工業（株））８．０gを加えてさらに３０分間攪拌した後、Ｎｏ．５Ａ（４０ｍｍ）（東洋濾紙株式会社製）を使用し、桐山ロートにて吸引濾過し、濾液４５．３ｇ（本発明品２）を得た。
参考品２、本発明品２およびヌッチェ上の沈殿物について微生物検査を行った結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
0004584287.tif 000003
【００３２】
表２に示したとおり、微生物を添加した参考品２には嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌が存在していたが、本発明品２では完全に除菌されており、一方、ヌッチェ上の沈殿物には多量の嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌が含まれていた。したがって、緑茶抽出物においても、本発明の除菌方法では微生物が沈殿物の生成と共に沈殿物に抱き込まれ、沈殿物を除去することにより微生物も同時に除去されることが認められた。
【００３３】
実施例３
エルダーベリー濃縮果汁（ＳＶＺ社製；固形分５４．４％）９０ｇを用意した（ｐＨ３．４９）。このものの微生物検査を行ったところ、一般生菌数は６５個／ｇであったが、嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌はいずれも０個／ｇであった。そこで、この果汁９０ｇに、嫌気性耐熱性菌としてＤｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｎｉｇｒｉｆｉｃａｎｓ  ＮＣＩＭＢ８３９５を２×１０５個／ｍｌおよび好気性耐熱性菌としてＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ＩＭＡ１０３５を８×１０５個／ｍｌ含有する水溶液１０ｇを添加し、よく混合し参考品３とした。
参考品３の２０gを室温下（２３℃）で攪拌しながら９５％エタノール（日本アルコール販売（株）、エタノール濃度９２重量％）３０．０gを１０分間かけて滴下した。その後、同温度で６０分間攪拌した後、ガレオンアース（水澤化学社製の活性白土）８．０gを加えてさらに３０分間攪拌した後、Ｎｏ．５Ａ（４０ｍｍ）（東洋濾紙株式会社製）を使用し、桐山ロートにて吸引濾過し、濾液４４．２ｇ（本発明品３）を得た。
参考品３、本発明品３およびヌッチェ上の沈殿物について微生物検査を行った結果を表３に示す。
【００３４】
【表３】
0004584287.tif 000004
【００３５】
表３に示したとおり、微生物を添加した参考品３には嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌が存在していたが、本発明品３では完全に除菌されており、一方、ヌッチェ上の沈殿物には多量の嫌気性耐熱性菌および好気性耐熱性菌が含まれていた。したがって、エルダーベリー果汁においても、本発明の除菌方法では微生物が沈殿物の生成と共に沈殿物に抱き込まれ、沈殿物を除去することにより微生物も同時に除去されることが認められた。
【００３６】
実施例４
Ｌ値５１．５の極浅く焙煎したコーヒー豆の粉砕物１０００ｇをカラムに充填し（カラム内径７ｃｍ、長さ２５ｃｍ、１本につきコーヒー豆２００ｇを充填し、５本連結）、９５℃に加温した軟水を流速２５００ｍｌ／ｈｒでカラム上部から下部へ送り込み、カラム下部から抜き取った抽出液は、次のカラムの上部へ順次送り込み５本目のカラムより最終的な抽出液を抜き取る方法にて連続抽出を行い、抜き取り液がＢｘ１．０°を下回った時点で抽出終了（所要時間約３時間）とし、Ｂｘ５．７°のコーヒーエキス（以下、コーヒー抽出液２とする）５９８９ｇを得た。コーヒー抽出液２をロータリーエバポレーターにて濃縮し、Ｂｘ７８．０°の濃縮コーヒーエキス（参考品４、水分含量３７．３％、固形分含量６２．７％：ｋｅｔｔ赤外線水分計にて測定、ｐＨ５．７）を得た。参考品４の微生物検査を行ったところ、一般生菌数８．５×１０２個／ｇ、嫌気性耐熱性菌１．０×１０２個／ｇ、好気性耐熱性菌３．０×１０２個／ｇであった。
参考品４の４００ｇに、さらに、嫌気性耐熱性菌としてＤｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｎｉｇｒｉｆｉｃａｎｓ  ＮＣＩＭＢ８３９５を２×１０６個／ｍｌおよび好気性耐熱性菌としてＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ  ＩＭＡ１０３５を８×１０５個／ｍｌ含有する水溶液４０ｇを添加し、よく混合し参考品５とした。参考品５に４規定塩酸３３．７ｇを添加し、ｐＨを４．５とし、参考品６（固形分５６．２％、水分４３．８％）とした。参考品６を２０ｇずつ採取し、各々に室温下（２３℃）で攪拌しながら９５％エタノール（日本アルコール販売（株）、エタノール濃度９２重量％）を８ｇ、１０ｇ、２０ｇ、３０ｇ、６０ｇまたは９０ｇを１０分間かけて滴下した。その後、さらに、同温度で６０分間攪拌した後、それぞれに濾過助剤として活性白土（ガレオンアース：水澤化学工業（株））８．０gを加えてさらに３０分間攪拌した後、Ｎｏ．５Ａ（４０ｍｍ）（東洋濾紙株式会社製）を使用し、桐山ロートにて吸引濾過し、濾液を得た。
参考品４、参考品５、参考品６およびそれぞれの濾過液およびヌッチェ上の沈殿物について微生物検査を行った結果を表４に示す。
【００３７】
【表４】
0004584287.tif 000005
【００３８】
表４に示したとおり、エタノール濃度が、エタノール／（水＋エタノール）（重量％）として４４％および４９％では濾液側に微生物が漏れだしていたが、６４％、７１％、８０％、８４％では完全に除菌されていた。したがって、エタノール濃度としてエタノール／（水＋エタノール）が約５０％以上であれば、除菌が効果があると考えられる。
【００３９】
実施例５
参考品５を２０ｇずつ採取し、各々を３０％水酸化ナトリウムまたは４規定塩酸にてｐＨを８．１、６．９、５．７（未調整）、４．５、３．３に調製した。各々のｐＨ調製液２０ｇそれぞれ室温下（２３℃）で攪拌しながら９５％エタノール（日本アルコール販売（株）、エタノール濃度９２重量％）３０gを１０分間かけて滴下した。その後、同温度で６０分間攪拌した後、活性白土（ガレオンアース：水澤化工業（株））８．０gを加えてさらに３０分間攪拌した後、Ｎｏ．５Ａ（４０ｍｍ）（東洋濾紙株式会社製）を使用し、桐山ロートにて吸引濾過し、濾液を得た。
ｐＨ調製液、濾液およびヌッチェ上の沈殿物について微生物検査を行った結果を表５に示す。
【００４０】
【表５】
0004584287.tif 000006
【００４１】
表５に示したとおり、ｐＨ８．１では濾液側に微生物が僅かに漏れだしていたが、６．９以下では完全に除菌されていた。したがって、処理時のｐＨは約７以下であれば、十分な除菌効果が発揮されると考えられる。
【００４２】
実施例６
実施例４で使用した参考品６の各々２０ｇずつ採取し、各々に室温下（２３℃）で攪拌しながらそれぞれに９５％エタノール（日本アルコール販売（株）、エタノール濃度９２重量％）を３０ｇずつ１０分間かけて滴下した。その後、さらに、同温度で６０分間攪拌した後、それぞれに、セルロースパウダー（ＫＣフロック：日本製紙ケミカル（株））、ケイソウ土（スーパーライト：今野商会）、活性白土（ガレオンアース：水澤化学工業（株））、酸性白土（ミズカエース：水澤化学工業（株））を各８．０gずつ加えてさらに３０分間攪拌した後、Ｎｏ．５Ａ（４０ｍｍ）（東洋濾紙株式会社製）を使用し、桐山ロートにて吸引濾過し、濾液を得た。また、濾過助剤を全く使用しないものも同時に行った。
参考品６およびそれぞれの濾過液およびヌッチェ上の沈殿物について微生物検査を行った結果を表６に示す。
【００４３】
【表６】
0004584287.tif 000007
【００４４】
表６に示したとおり、濾過助剤を全く用いない場合は濾液側に微生物が漏れだしていたが、濾過助剤を用いた場合は、どの濾過助剤でも完全に除菌されていた。