(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸を有効成分として含有する、癌の溶骨型又は混合型の骨転移を造骨型又は骨梁間型の骨転移と鑑別して診断するための画像診断用薬剤。
【請求項２】
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸を有効成分として含有する、破骨細胞を骨芽細胞と鑑別して撮像するための画像診断用薬剤であって、９９ｍＴｃ−ＢＰを含有する診断剤と併用して、骨芽細胞の撮像と対比できるようにした、画像診断用薬剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、骨シンチグラフィによる癌の溶骨型又は混合型骨転移の検出と治療法の選択を目的とした９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
癌の骨転移の有無は予後を左右する大きな要因であり、原発巣の治療方針にも影響を与える。また、骨転移及び随伴症状に対する治療の選択肢も広がりつつあるので、骨転移の有無や広がりの診断は治療方針決定の中で重要な位置を占める。骨転移は頻度の高低を問わなければあらゆる癌に見られるが、一般に骨転移の頻度が高いとされる乳癌、前立腺癌、肺癌、甲状腺癌、腎癌などでは他の癌に比べ骨転移診断の重要性が高いと言えるであろう。
【０００３】
一口に骨転移といっても病理学的には造骨型、溶骨型、両者の混在する混合型、造骨も溶骨も見ない骨梁間型の４類型に分類され、骨転移の頻度が高い癌のうち、前立腺癌は造骨型、腎癌、甲状腺癌は溶骨型、肺癌は溶骨型か混合型、乳癌は混合型の比率が高いと言われている。先の４類型のうち、破骨細胞の出現を条件とする骨吸収が特徴的な溶骨型は骨破壊に至りやすく、その分骨転移による疼痛出現も他型に比べ有意に高いといわれている。また、乳癌では骨転移の見られた患者のうち造骨型の患者の生存期間が最も長く、混合型、溶骨型の順に生存日数が短くなると言われており、転移のタイプの把握も重要と考えられる。
【０００４】
骨シンチグラフィは、癌患者の骨転移の有無を検索するために一般的に使用されている。通常は、９９ｍＴｃ−ＭＤＰ（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）、９９ｍＴｃ−ＥＨＤＰ（ｅｔｈａｎｅ  ｈｙｄｒｏｘｙ−ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）、９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）などの９９ｍＴｃ標識ビスフォスフォネート（９９ｍＴｃ−ＢＰ）を画像診断剤として静注し、シンチグラムを撮像する。かかる９９ｍＴｃ−ＢＰの骨集積については、その機序は明確でないが、造骨部位への高い集積が認められており、造骨型の骨転移検出には優れている。しかしながら、９９ｍＴｃ−ＢＰは、溶骨型骨転移部位を陽性描出しないと言われており、この点が問題である。
【０００５】
これに対し、９９ｍＴｃ−ジメルカプトコハク酸（９９ｍＴｃ−ＤＭＳ）は、３価の９９ｍＴｃ−ＤＭＳが腎臓の画像診断剤として良く知られている一方で、５価の９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳについては、甲状腺癌（ＭＴＣ）、骨肉腫、各種軟部組織の良性及び悪性腫瘍などの腫瘍部位へ集積することが報告されており、特開昭５６−７７２５号公報では、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを腫瘍スキャニング剤として用いることが提案されている。また、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳは、各種癌に起因する骨転移部位を陽性描出することも報告されている。
【０００６】
このように、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳは、癌集積性と共に骨集積性を持つ多核錯体であり、癌集積性についてはｐＨ感受性の関与が推測されているが、骨集積については溶骨性転移部位へ集積しているであろうとの臨床報告があるものの、その集積機序は現在のところ不明である。
【０００７】
ところで、腫瘍の骨転移に伴う骨破壊は、腫瘍細胞からの蛋白分解酵素による直接的な破壊と活性化された破骨細胞を介した破壊によると考えられている。近年、パミドロネート、クロドロネート、エチドロネート、チルドロネート、アレンドロネートなどのビスフォスフォネート化合物が、骨吸収を抑制することが明らかとなり、骨粗鬆症や腫瘍骨転移などに伴う骨破壊の防止に有効とされている。この骨吸収抑制作用の機序は十分に解明されているわけではないが、ビスフォスフォネート化合物が破骨細胞に直接又は間接的に作用し、破骨細胞を不活性化又は減少させた結果であると言われている。したがって、破骨細胞に特異的に取り込まれる化合物を利用した診断法が確立されれば、近年開発されているビスフォスフォネート化合物など破骨細胞を標的とする治療法の適応となる患者の的確な選択が可能となる。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上述の如き状況を鑑み、破骨細胞に特異的に取り込まれる化合物により癌の溶骨型又は混合型骨転移の的確な画像診断を可能にし、さらにそれに基づく治療法の選択を可能にすることを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
上述の、目的を達成するために、発明者らは、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの骨転移部位への集積機序について鋭意研究した結果、従来画像診断剤として用いられている９９ｍＴｃ−ＢＰが骨芽細胞に多く取り込まれる一方で破骨細胞にはほとんど取り込まれないのに対し、（１）９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳは９９ｍＴｃ−ＢＰよりも骨芽細胞への取り込みが低い一方で特に大量に破骨細胞に取り込まれること、（２）この９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込み量は低ｐＨ下において著しく増大すること、（３）上記（２）の現象が酸性環境下における破骨細胞機能の活性化に関与していると考えられること、（４）９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳは破骨細胞への取り込みにおいてリン酸と同様の挙動を取り、破骨細胞の無機リン酸輸送に関係するＮａ＋依存性リン酸トランスポータを介して破骨細胞に取り込まれること、（５）９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳは生体内においても破骨細胞の分布に一致した分布をすることを見出し、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳが骨芽細胞よりも破骨細胞に優先的に取り込まれることについての確証を得るに至り、本発明を完成した。
【００１０】
即ち、本発明によれば、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸を有効成分として含有する癌の骨転移治療法選択のための画像診断用薬剤が提供される。癌の骨転移には、破骨細胞の局在と活性亢進が見られる溶骨型又は混合型の骨転移と破骨細胞の寄与がない又は低いと考えられている造骨型又は骨梁間型の骨転移とがある。９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸は破骨細胞に特異性が高いので、溶骨型又は混合型の骨転移が正確に鑑別されるようになり、破骨細胞を標的とする治療法の適用可否を決定できる。
【００１１】
破骨細胞を標的とする治療法としては、破骨細胞に直接又は間接に作用して骨吸収を抑制する又は骨疼痛を軽減・除去するなどの治療効果が期待できるものであれば種類は問わないが、ビスフォスフォネート化合物による治療が代表例として挙げられる。
【００１２】
ビスフォスフォネート化合物とはＰ−Ｃ−Ｐ骨格を有するジェミナルビスフォスフォネートを指すが、治療薬としてはエチドロネート、クロドロネート、パミドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、インカドロネート、オルパドロネート、ゾレドロネート、チルドロネート、ネリドロネート、リセドロネート、ＹＨ５９２、ＥＢ−１０５３など多くのものが市販ないし臨床開発の段階にある。
【００１３】
これ以外に、骨親和性のある８９ＳｒＣｌ２などを静脈内投与し癌骨転移部位を生体内照射することにより骨転移に伴う疼痛を効率的に除去する治療も行われている。８９ＳｒＣｌ２は造骨型の骨転移部位への集積性が高いが、同様の目的で臨床応用が試みられている１８６Ｒｅ又は１８８Ｒｅ標識ジメルカプトコハク酸は破骨細胞の局在する溶骨型又は混合型の骨転移への集積性が高いと予測される。これらの骨疼痛除去製剤の選択にあたっても９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを用いた画像診断は有用である。
【００１４】
本発明の他の局面によれば、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸を有効成分として含有する画像診断用薬剤を患者に投与してシンチグラムを撮像することからなる破骨細胞の局在性診断方法が提供される。
【００１５】
破骨細胞の局在を精査する診断は、破骨細胞による骨吸収が亢進する疾患が対象となり得るが、骨粗鬆症や溶骨型又は混合型の癌骨転移が代表的な対象疾患となる。
【００１６】
治療法選択の場合においても、局在性診断の場合においても、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸を有効成分として含有する画像診断用薬剤を単独で用いても目的は達せられるが、９９ｍＴｃ−ＢＰを含有する診断剤と併用して破骨細胞の関与をより正確に評価してもよい。
【００１７】
本発明で用いる９９ｍＴｃ（Ｖ）−ジメルカプトコハク酸は、ジメルカプトコハク酸と塩化第一スズなどの還元剤を含み、炭酸水素ナトリウム緩衝液などでアルカリ性に調整した溶液に、９９ｍＴｃ過テクネチウム酸溶液を混合することにより得られる。例えば、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｎｕｃ  Ｍｅｄ  ２２：  ５５９−５６２  （１９９５）に開示されているように市販の腎シンチグラフィー製剤（９９ｍＴｃ（ＩＩＩ）−ＤＭＳ）調整用キットに炭酸水素ナトリウム緩衝液を加えてアルカリ性に調整した後９９ｍＴｃ過テクネチウム酸溶液を混合することにより容易に製造することができる。この時、少量の酸素を作用させ９９ｍＴｃ（ＩＩＩ）−ＤＭＳ及び過剰の第一スズを酸化することにより放射化学的純度を向上させることが可能である。しかしながら、医薬の調製は本来専用のキットでなされるべきであり、この目的でＹｏｍｏｄａＩ  ｅｔ  ａｌ．  核医学  ２４：  ７７−８２  （１９８７）に開示されている９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ専用の標識用キットがある。このキットはジメルカプトコハク酸と塩化第一スズなどを凍結乾燥された状態でバイアル中に封入しており、これに少量の炭酸水素ナトリウム緩衝液を混合した９９ｍＴｃ過テクネチウム酸溶液を添加することによって９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを調製できる。
【００１８】
このようにして調製された９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ製剤を通常は静脈内に１００ＭＢｑから１５００ＭＢｑ、好ましくは２００ＭＢｑから１０００ＭＢｑ、より好ましくは３５０ＭＢｑから７５０ＭＢｑ投与する。投与量は患者体重等を勘案して適宜増減される。
【００１９】
投与後３０分から５時間、好ましくは１時間から４時間、より好ましくは２時間から３時間の間に全身の前面及び後面像又は全身の分割像、必要に応じて特定部位のスポット像や断層像（ＳＰＥＣＴ像）などのシンチグラムを撮像する。こうして得られたシンチグラムに基づき目的とする診断と治療法の選択を行う。
【００２０】
【発明の効果】
本発明により活性な破骨細胞の有無や局在部位が特定可能となり、破骨細胞を標的とする治療法の適用可否を確実に決定できるようになる。これにより無駄な治療を減ずることが可能となり、医療経済上のメリットも大である。また、患者にとっても有効な治療法を選択できる確率が上がる一方で、効かない治療を継続することによって有効な治療を受ける機会を逸するリスクを低減できる。
【００２１】
【実施例】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定されるものではない。
【００２２】
実施例１
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの調製
ジメルカプトコハク酸１．３６ｍｇを含む水溶液にテクネチウムジェネレータから溶出した９９ｍＴｃ過テクネチウム酸溶液（１８．５〜３７０ＭＢｑ）を加え、さらに７％炭酸水素ナトリウム溶液０．２８５ｍＬを加えて全液量を２．５ｍＬとした後、０．１Ｍの塩酸溶液で調製した０．０１Ｍの塩化第一スズ溶液０．０２ｍＬを加えて１５分間室温放置した。一連の操作は全て窒素ガス雰囲気下で行った。こうして得た９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの放射化学的純度はｎ−ブタノール・酢酸・水混液（３：２：３）又はアセトンを展開溶媒としシリカゲル薄層板を用いる薄層クロマトグラフ法により測定した。放射化学的純度は９３〜９５％であった。
【００２３】
なお、以下の実験で比較に用いた９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰは市販の標識キットにテクネチウムジェネレータから溶出した９９ｍＴｃ過テクネチウム酸溶液を加えることにより調製した。
【００２４】
実施例２
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞、骨芽細胞への取り込み
細胞培養  骨芽細胞は、高橋らの方法（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １２３：  ２６００−２６０２  （１９８８））に従い、マウス新生仔頭頂骨より酵素による段階消化を行うことにより単離し、α−ＭＥＭ（１０％牛胎児血清）で６〜８日間培養したものを実験に用いた。また、破骨細胞は、高橋らの方法（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １２２：  １３７３−１３８２  （１９８８））に従い、コラーゲンコーティングしたディッシュ上にて骨芽細胞様細胞と骨髄細胞を６〜８日間、α−ＭＥＭ（１０％牛胎児血清、１０−８ＭビタミンＤ３、ｐＨ６．２）を用いて共存培養することにより得た。破骨細胞は酒石酸抵抗性酸性フォスファターゼ染色により同定した。
【００２５】
細胞への取り込み実験  骨芽細胞、もしくは共存培養により得られた破骨細胞を３５％Ｐｅｒｃｏｌｌを用いて分離し、３時間３７℃、５％ＣＯ２／９５％Ａｉｒ条件下でα−ＭＥＭ（１０％牛胎児血清）を用いてインキュベーションしたものを、ｐＨ７．４のインキュベーションバッファー（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ，  ５ｍＭ  ｇｌｕｃｏｓｅ，  １５０ｍＭ  ＮａＣｌ，  ５ｍＭ  ＫＣｌ，  １．８ｍＭ  ＭｇＳＯ４，  １ｍＭ  ＣａＣｌ２）で３回洗浄し、さらに同バッファーで３７℃、３０分間プレインキュベーションした。その後、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを１２９．５ｋＢｑ／ｍＬの濃度で含むインキュベーションバッファーを浸透させ、５分、１０分、３０分及び６０分後に氷冷したインキュベーションバッファーで３回洗浄し、０．２Ｎ  ＮａＯＨで細胞を融解して細胞内に取り込まれた放射能をガンマカウンターで測定した。放射能測定後、細胞融解液に含まれる蛋白量をＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ社製）を用いて測定し、単位蛋白質量あたりの９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込み量（％ｄｏｓｅ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を求めた。９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰについても同様の実験を行い、比較した。結果を図１及び図２に示した。
【００２６】
図１と図２の対比から、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳは９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰよりも骨芽細胞への取り込みが低い（図１）一方で、特に大量に破骨細胞に取り込まれる（図２）ことがわかる。
【００２７】
実施例３
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞、骨芽細胞への取り込みに対するｐＨの影響
実施例２に示した方法において、インキュベーションバッファーのｐＨを６．２、６．６、７．０、７．４、７．８、８．２とし、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込みのインキュベーション時間を１０分間として９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞、骨芽細胞への取り込みに対するｐＨの影響を検討した。９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰについても同様の実験を行い、比較した。結果を図３及び図４に示した。
【００２８】
図３と図４の対比から、骨芽細胞への取り込み量については何れのｐＨにおいても９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳと９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰの間に有意差は認められない（図３）が、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込み量は低ｐＨ下において著しく増大する（図４）ことがわかる。
【００２９】
実施例４
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対する細胞外ｐＨの影響
実施例２に示した方法において、プレインキュベーション（ｐｒｅ−ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ）にｐＨ７．４のインキュベーションバッファーを用い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを添加するバッファーにはｐＨ６．２のインキュベーションバッファーを用い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込み（ｕｐｔａｋｅ）のインキュベーション時間を１０分間として９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みを測定した。
【００３０】
実施例３で得られた、プレインキュベーション及び９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込み時のｐＨが共に６．２である場合、７．４である場合と比較し、取り込みに対する外部ｐＨ（ｐＨｅ）の影響を検討した。結果を図５に示した。
【００３１】
図５から、破骨細胞においてプレインキュベーション、取り込みともｐＨ６．２のバッファで行った場合、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの取り込みが上昇することがわかる。さらに、取り込みが上昇するためにはある程度の時間破骨細胞が酸性環境に置かれることも必要であることがわかる。一般に破骨細胞は酸性環境において活性化することが報告されている（Ｔａｍｕｒａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．  ＪＢｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ  ８：  ９５３−９６０  （１９９３））ことから、低ｐＨにおける取り込みの増加には、破骨細胞の活性化が関与していると考えられる。
【００３２】
実施例５
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対するナトリウムイオン依存性リン酸トランスポータの関与
実施例２に示した方法において、プレインキュベーションにｐＨ７．４のインキュベーションバッファーを用い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを添加するバッファーにはリン酸濃度（［Ｐｉ］）を０ｍＭ、０．０５ｍＭ、０．１ｍＭ、０．５ｍＭ、１．０ｍＭ又は５．０ｍＭに調節したｐＨ７．４のインキュベーションバッファーを用い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込みのインキュベーション時間を５分間として９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みを測定した。
【００３３】
また、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを添加するバッファーにナトリウムイオン依存性リン酸トランスポーター阻害剤であるｐｈｏｓｐｈｏｎｏｆｏｒｍｉｃ  ａｃｉｄ（ＰＦＡ）を１ｍＭ又は５ｍＭ含むｐＨ７．４のインキュベーションバッファーを用いて同様の測定を行った。結果を図６及び図７に示した。
【００３４】
さらに、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを添加するバッファーにはナトリウムイオン濃度（［Ｎａ＋］）を０．１ｍＭから１５０ｍＭに調節したｐＨ７．４のインキュベーションバッファーを用い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込みのインキュベーション時間を３０秒間として９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みを測定した。結果を図８に示した。
【００３５】
実施例６
９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込み；Ｋ２Ｈ３２ＰＯ４との比較ｐＨの影響  実施例２に示した方法において、インキュベーションバッファーのｐＨを６．２、６．６、７．０、７．４、７．８、８．２とし、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込みのインキュベーション時間を３０秒間として９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対するｐＨの影響を検討した。Ｋ２Ｈ３２ＰＯ４についても同様の実験を行い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳとＫ２Ｈ３２ＰＯ４の挙動を比較した。結果を図９に示した。
【００３６】
陽イオンの影響  実施例２に示した方法において、プレインキュベーションにｐＨ７．４のインキュベーションバッファーを用い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳを添加するバッファーにはナトリウムイオン（Ｎａ＋）１５０ｍＭ、カリウムイオン（Ｋ＋）１５０ｍＭ又はコリン（Ｃｈｏｌｉｎｅ）１５０ｍＭ含むｐＨ７．４のインキュベーションバッファーを用い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ取り込みのインキュベーション時間を３０秒間として９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みを測定した。
【００３７】
Ｋ２Ｈ３２ＰＯ４についても同様の実験を行い、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳと
Ｋ２Ｈ３２ＰＯ４の挙動を比較した。結果を図１０に示した。
【００３８】
なお、図１０においては、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ、ナトリウムイオン１５０ｍＭの結果を対照として他の結果を相対値で表示した。
【００３９】
図６〜１０から、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳは破骨細胞への取り込みにおいてリン酸と同様の挙動を取り、破骨細胞の無機リン酸輸送に関係するＮａ＋依存性リン酸トランスポータを介して破骨細胞に取り込まれることが示唆された。
【００４０】
実施例７
１８６Ｒｅ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込み；
９９ｍＴｃは半減期が６時間でかつガンマ線放出核種であるためオートラジオグラフィには不向きである。この点を考慮し、Ｔｃの同属元素であるＲｅの放射性同位体を用いて生体内における９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への集積性を評価した。
【００４１】
Ｈｏｒｉｕｃｈｉらの方法（Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ  ２６：  ７７１−７７９（１９９９））に従い調製した１８６Ｒｅ（Ｖ）−ＤＭＳをＷｉｓｔａｒ系雄性ラットに１匹あたり３７０ｋＢｑ投与し、３時間後に屠殺した。膝関節を摘出した後、厚さ３０μｍの標本を作製しオートラジオグラフィに供した。さらに同部位から厚さ２０μｍの標本を作製し、破骨細胞マーカーの酒石酸抵抗性酸性フォスファターゼ又は骨芽細胞マーカーのアルカリフォスファターゼを染色により検出した。オートラジオグラフィと染色の結果を比較し、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への集積性を評価した。結果を図１１〜図１３に示した。
【００４２】
図１１〜図１３から、１８６Ｒｅ（Ｖ）−ＤＭＳの分布（図１１）は破骨細胞の分布（図１２）と良く一致することがわかり、９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への集積性が特異的であることが示された。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ（▲）と９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰ（◆）の骨芽細胞への取り込み量を経時的に示すグラフ。
【図２】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ（▲）と９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰ（◆）の破骨細胞への取り込み量を経時的に示すグラフ。
【図３】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ（▲）と９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰ（◆）の骨芽細胞への取り込み量とｐＨとの関係を示すグラフ。
【図４】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ（▲）と９９ｍＴｃ−ＨＭＤＰ（◆）の破骨細胞への取り込み量とｐＨとの関係を示すグラフ。
【図５】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対する細胞外ｐＨの影響を示すグラフ。
【図６】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対するリン酸濃度の影響を示すグラフ。
【図７】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対するナトリウムイオン依存性リン酸トランスポーター阻害剤の影響を示すグラフ。
【図８】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対するナトリウムイオン濃度の影響を示すグラフ。
【図９】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳ（●）とＫ２Ｈ３２ＰＯ４（○）の破骨細胞への取り込み量とｐＨとの関係を示すグラフ。
【図１０】  ９９ｍＴｃ（Ｖ）−ＤＭＳの破骨細胞への取り込みに対する陽イオンの影響を示すグラフ。
【図１１】  実施例７において１８６Ｒｅ（Ｖ）−ＤＭＳを投与したラットから得られた標本（膝関節）のオートラジオグラフィ写真（生物の形態）。
【図１２】  実施例７において１８６Ｒｅ（Ｖ）−ＤＭＳを投与したラットから得られた標本（膝関節）の酒石酸抵抗性酸性フォスファターゼ染色写真（生物の形態）。
【図１３】  実施例７において１８６Ｒｅ（Ｖ）−ＤＭＳを投与したラットから得られた標本（膝関節）のアルカリフォスファターゼ染色写真（生物の形態）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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