(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖尿病またはＢ型肝炎の予防および治療用の組成物であって、
３，３'，４'，５−テトラヒドロキシスチルベン−４'−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、
３，３'，５−トリヒドロキシ−４'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、
３，５−ジヒドロキシ−４'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、および
３，４'，５−トリヒドロキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、並びにそれらの医薬的に許容し得る塩から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有してなる組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、取分け、糖尿病またはレトロウイルス関連疾患の予防および治療用医薬の製造におけるスチルベン化合物またはその医薬的に許容し得る塩の新規使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病はヒトにおける共通の代謝性障害である。最近、生活水準の改善および食料構造の変化とあいまって、糖尿病の発生が急激に増大しつつある。世界中で、この疾患に罹患している患者の数は１億２千万人にも及ぶ。これは人類にとって深刻な脅威である。従って、糖尿病の予防と治療は医薬の探索研究分野での差し迫った中心課題である。
【０００３】
現在臨床で使用されている抗糖尿病薬、例えば、スルファニル尿素、ビグアニジンなどは、有効ではあるがなお副作用を有している。中国の伝統的薬草由来のある種製剤は有効であり、毒性も低い。今日まで、臨床的に使用される天然植物由来の低血糖性モノマーは報告されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的はスチルベン化合物またはその医薬的に許容し得る塩の新規使用を開発することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らの研究により、式（Ｉ）で示されるスチルベン化合物またはその医薬的に許容し得る塩が実用的な低血糖作用および抗レトロウイルス作用を有し、糖尿病およびレトロウイルス関連疾患の予防および治療に有用となり得ることが見出された。
【０００６】
従って、本発明の第一の側面は、糖尿病またはレトロウイルス関連疾患の予防および治療用医薬の製造における下記式（Ｉ）で示される少なくとも１種のスチルベン化合物またはその医薬的に許容し得る塩の使用に関する：
【０００７】
【化１】
0004397688.tif 000002
【０００８】
（ただし、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、−ＯＨ、アルキル、フェニルもしくはナフタレニルなどのＣ6〜10アリール、アルキルヒドロキシル、アルコキシル、および−Ｏ−グルコシルまたは−グルコシルなどのグリコシド含有糖である）。
【０００９】
本発明の第二の側面は、糖尿病またはレトロウイルス関連疾患の予防および治療用の組成物であって、下記式（Ｉ）で示される少なくとも１種のスチルベン化合物またはその医薬的に許容し得る塩、および医薬的に許容し得る担体または添加剤を含有してなる組成物に関する：
【００１０】
【化２】
0004397688.tif 000003
【００１１】
（ただし、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、−ＯＨ、アルキル、フェニルもしくはナフタレニルなどのＣ6〜10アリール、アルキルヒドロキシル、アルコキシル、および−Ｏ−グルコシルまたは−グルコシルなどのグリコシド含有糖である）。
【００１２】
さらに、本発明は糖尿病またはレトロウイルス関連疾患の予防および治療方法であって、下記式（Ｉ）で示されるスチルベン化合物またはその医薬的に許容し得る塩の有効量を患者に投与することを特徴とする方法に関する：
【００１３】
【化３】
0004397688.tif 000004
【００１４】
（ただし、式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、−ＯＨ、アルキル、フェニルもしくはナフタレニルなどのＣ6〜10アリール、アルキルヒドロキシル、アルコキシル、および−Ｏ−グルコシルまたは−グルコシルなどのグリコシド含有糖である）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明による式（Ｉ）の化合物は天然植物から、または化学合成により入手し得る。例えば、式（Ｉ）で示される当該化合物は、ブドウ科のブドウの一種（Vitis L）、白蓮の一種 (Ampelopsis Michx)；マメ科のナンキンマメの一種（Arachis L）、エビスグサの一種（Cassia L）、エンジュの一種（Sophora L）；ユリ科のバイケイソウの一種（Veratrum L）；フトモモ科のユウカリジュの一種（Eucalyptos L'H'erit）；およびタデ科のダイオウの仲間（Rheum emodi Wall, Rheum franzenbacii Munt, Rheum hotaoense C.Y. Chang, Rheum wittrockii Lundstr）、イタドリの根茎（Rhizoma polyoni cuspidati）などの天然植物から抽出することができた。
【００１６】
本発明によると、本発明にて使用される“糖尿病”という術語は、Ｉ型およびＩＩ型の糖尿病を意味する。
本発明によると、本発明における“患者”という術語は、ヒトなどの哺乳動物を意味する。
本発明によると、“アルキル基”という術語は、炭素原子１〜６個を含む低級アルキルを意味し、“アルキルヒドロキシル基”または“アルコキシル”という術語のアルキルはこのアルキルの定義と同様に定義される。
本発明によると、レトロウイルス関連疾患とは肝炎またはＨＩＶ感染疾患をいう。
【００１７】
本発明によると、本発明における式（Ｉ）で示される好適な化合物は以下の化合物から選択される：
３，４’，５−トリヒドロキシスチルベン（化合物Ｅ）；
３，３'，４'，５−テトラヒドロキシスチルベン−４'−Ｏ−グルコシド（化合物Ｅ1）；
３，３'，５−トリヒドロキシ−４'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｏ−グルコシド（化合物Ｅ2）；
３，５−ジヒドロキシ−４'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｏ−Ｄ−グルコシド（化合物Ｅ3）；および
３，４'，５−トリヒドロキシスチルベン−３'−Ｏ−Ｄ−グルコシド（化合物Ｅ5）。
【００１８】
本発明によると、式（Ｉ）で示されるスチルベン化合物は、技術上既知の方法により、経腸または非経口投与形態、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤または注射剤などに製剤化することができる。
【００１９】
以下の実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、これの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００２０】
（実施例１）
３，４’，５−トリヒドロキシスチルベン（化合物Ｅ）の調製
９５％アルコールをヒューチャン（Huchan）スライスに８：１（ｖ／ｗ）の割合で加えて混合し、得られた混合物を３回、１回２時間ずつ抽出し、抽出液を併合して、減圧下に濃縮した。濃縮した抽出物を水に分散し、エーテルで脱脂処理し、次いで、酢酸エチル、およびｎ−ブタノールで抽出した。酢酸エチルフラクション、ｎ−ブタノールフラクション、および水フラクションをそれぞれ得た。酢酸エチルフラクションをシリカゲルカラム（６０〜１００メッシュ）上で分離し、酢酸エチル／メタノール勾配溶出により、化合物Ｅの粗製物を得て、これをアセトンで再結晶した。ｎ−ブタノールフラクションはシリカ・カラムクロマトグラフィーにより酢酸エチル勾配溶出で分離して化合物Ｅ5の生成物を得、これをアセトン−水で再結晶した。
【００２１】
同定：
化合物Ｅは、白色針状結晶、融点２５３〜２５５℃、メタノール、エタノールおよびアセトンなどに易溶である。ＦｅＣｌ3反応は緑色に発色する。ＵＶ光で励起され、青ないし紫の蛍光を発する。
ＵＶ：λmaxＭｅＯＨ（ｎｍ）：２１６、３０３。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３２４０、１８８０、１５８５、９６５。
1Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：８．７９（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、４'−ＯＨ）、８．４８（２Ｈ、Ｂｒ．ｓ、３，５−Ｈ）、７．３６（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４／８．５Ｈｚ、Ｈ−２',６'）、６．９５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．２Ｈｚ、Ｈ−β）、６．８１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．２Ｈｚ、Ｈ−α）、６．７８（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４／８．５Ｈｚ、Ｈ−３',５'）、６．７７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、Ｈ−２，６）、６．４８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、Ｈ−４）。
13Ｃ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：１５９．４７（Ｃ−３，５）、１５８．０８（Ｃ−４'）、１４０．７３（Ｃ−１）、１４０．７３（Ｃ−１）１２９．７８（Ｃ−１'）、１２８．９８（Ｃ−２'、６'）、１２８．６０（Ｃ−α）、１２６．７４（Ｃ−β）、１１６．２９（Ｃ−３'、５'）、１０５．４７（Ｃ−２，６）、１０２．５１（Ｃ−４）。
ＥＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：２２８（Ｍ+、１００）、２２７（Ｍ+−１）、２１１（Ｍ+−ＯＨ）、１８１、１５７、１１５、９１、７６。
【００２２】
従って、化合物Ｅは３，４’，５−トリヒドロキシスチルベンまたはレスベラトロール（resveratrol）と同定される。
【００２３】
【化４】
0004397688.tif 000005
【００２４】
（実施例２）
３，３'，４'，５−テトラヒドロキシスチルベン−４'−Ｏ−グルコシド（化合物Ｅ1）の調製
９５％エタノールをダイオウ属植物（Rheum emodi Wall）の根茎に８：１（ｖ／ｗ）の割合で加えて混合し、得られた混合物を３回、１回２時間ずつ抽出し、抽出液を併合して、減圧下に濃縮した。アルコール抽出物を珪藻土に分散し、乾燥した。
【００２５】
脂質可溶性フラクションをクロロホルムで洗浄し、さらに酢酸エチルにて溶出し、可溶性フラクションを得た。このフラクションをシリカゲルクロマトグラフィー（６０〜１００メッシュ）により酢酸エチルで溶出し、さらに酢酸エチル／メタノール（４：１〜２）で溶出分離して化合物Ｅ1の粗製物を得、これを水−アセトンで再結晶した。
【００２６】
同定：
化合物Ｅ1は白色の無定形粉末（希釈アセトン）である。融点１３８〜１４０℃。
ＵＶ光により励起され、青ないし紫の蛍光を発した。モーリッシュ反応は陽性であった。
1Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：７．１４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、Ｈ−５'）、７．０６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−２'）、６．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．３Ｈｚ、Ｈ−β）、６．９４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．１／８．５Ｈｚ、Ｈ−６'）、６．８９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．３Ｈｚ、Ｈ−α）、６．５２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−２，６）、６．２４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−４）、４．７９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、アノマーＨ）、３．９〜３．３（糖−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：アグリコン：１５９．５（Ｃ−３，５）、１４８．５（Ｃ−４'）、１４６．０（Ｃ−３'）、１４０．３（Ｃ−１）、１３４．２（Ｃ−１'）、１２８．６（Ｃ−α、β）、１１９．３（Ｃ−５'）、１１８．９（Ｃ−６'）、１１４．２（Ｃ−２'）、１１５．６（Ｃ−２，６）、１０４．０（Ｃ−４）；グルコシル：１０２．９（Ｃ−１"）、７７．８（Ｃ−３"）、７７．１（Ｃ−５"）、７４．４（Ｃ−２"）、７０．９（Ｃ−４"）、６２．２（Ｃ−６"）。
【００２７】
1Ｈ−ＮＭＲおよび13Ｃ−ＮＭＲデータはヨシキ・カシワダらが報告している（2 Yoshiki Kashiwada ら、”Chem. Pharm. Bull.”1988、36(4)、1545）。化合物Ｅ1は３，３'，４'，５−テトラヒドロキシスチルベン−４'−Ｏ−グルコシド（ピセアタノール−４'−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド  Piceatannol-4'-O-β-D-glucopyranoside）と同定される。
【００２８】
【化５】
0004397688.tif 000006
【００２９】
（実施例３）
３，３'，５−トリヒドロキシ−４'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｏ−グルコシド（化合物Ｅ2）の調製
化合物Ｅ2は実施例１または実施例２と同様の方法でダイオウ属（Rheum hotaoense C.Y. Chang）の根茎から入手した。
【００３０】
同定：
化合物Ｅ2は白色針状結晶（希釈メタノール）である。融点２２８〜２３０℃。
ＵＶ光により励起され、青ないし紫の蛍光を発する。モーリッシュ反応は陽性である。
1Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：７．０７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．０Ｈｚ、Ｈ−２'）、７．０２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．５Ｈｚ、Ｈ−β）、６．９６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．０／８．３Ｈｚ、Ｈ−６'）、６．９０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、Ｈ−５'）、６．８９（１Ｈ、ｄ、Ｈ＝１６．５Ｈｚ、Ｈ−α）、６．７７（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、Ｈ−２）、６．６６（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、Ｈ−２）、６．４８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−４）、４．９０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、アノマーＨ），３．８２（３Ｈ、ｓ、−ＯＣＨ3）、４．０〜３．３（糖−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：アグリコン：１６０．１（Ｃ−５）、１５９．５（Ｃ−３）、１４８．４（Ｃ−４'）、１４７．５（Ｃ−３'）、１４０．５（Ｃ−１）、１３１．５（Ｃ−１'）、１２９．５（Ｃ−β）、１２７．２（Ｃ−α）、１１９．７（Ｃ−６'）、１１３．３（Ｃ−２'）、１１２．５（Ｃ−５'）、１０８．０（Ｃ−２）、１０６．５（Ｃ−６）、１０３．８（Ｃ−４）、５６．２（−ＯＣＨ3）；グルコシル：１０１．９（Ｃ−１"）、７７．７（Ｃ−３",５"）、７４．４（Ｃ−２"）、７１．１（Ｃ−４"）、６２．５（Ｃ−６"）。
【００３１】
化合物Ｅ2は３，４'，５−トリヒドロキシ−３'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドまたはラポンチシン（rhaponticin）と同定される。
【００３２】
【化６】
0004397688.tif 000007
【００３３】
（実施例４）
３，５−ジヒドロキシ−４'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｏ−Ｄ−グルコシド（化合物Ｅ3）および３，４'，５−トリヒドロキシスチルベン−３'−Ｏ−Ｄ−グルコシド（化合物Ｅ5）の調製
化合物Ｅ3およびＥ5は実施例２と略同様の手法によりダイオウ属植物（Rheum franzenbachii Munt）の根茎またはイタドリの根茎（Rhizoma polgoni cuspidati）から得た。
【００３４】
同定：
化合物Ｅ3は無色針状結晶（アセトン）である。融点２１０℃。
ＵＶ光により励起され、青ないし紫の蛍光を発する。モーリッシュ反応は陽性である。
ＵＶ：λmaxＭｅＯＨ（ｎｍ）：２１６、２９６。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３４５５、３３２０（ＯＨ）、１５９５、１５０５、８３０、７７２、６７５。
1Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：７．５１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、Ｈ−２',６'）、７．０８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．６Ｈｚ、Ｈ−α）、６．９４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．６Ｈｚ、Ｈ−β）、６．９１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、Ｈ−３',５'）、６．７０（２Ｈ、Ｂｒ．ｓ、Ｈ−２,６）、６．３５（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、Ｈ−４）、４．８１（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、アノマーＨ）、３．７６（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ3）、３．３〜３．９（６Ｈ、ｍ、糖−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：１５９．２（Ｃ−５）、１５８．５（Ｃ−３）、１５９．０（Ｃ−４'）、１３９．０（Ｃ−１）、１２９．２（Ｃ−１'）、１２８．０（Ｃ−β）、１２７．３（Ｃ−２',６'）、１２６．０（Ｃ−α）、１１４．５（Ｃ−３',５')、１０７．２（Ｃ−６）、１０４．８（Ｃ−２）、１０３．０（Ｃ−４）、５５．２（ＯＣＨ3）；グルコシル：１０１．８（Ｃ−１"）、７４．０（Ｃ−２"）、７７．２（Ｃ−３"）、７０．８（Ｃ−４"）、７６．８（Ｃ−５"）、６１．８（Ｃ−６"）。
ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０４（Ｍ+）、２４２（Ｍ+−ｇｌｕ）。
【００３５】
上記のデータはミンらが報告している（1. Ming De ら、”Journal of Chinese traditional Medicinal herbs”、1998、23(8)、486）。従って、Ｅ3は３，５−ジヒドロキシ−４'−メチルオキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドまたはデスオキシラポンチシン（desoxyrhaponticin）と同定される：
【００３６】
【化７】
0004397688.tif 000008
【００３７】
化合物Ｅ5は白色長針結晶（アセトン−水）である。融点２２８〜２３０℃。アセトン易溶。
ＵＶ光により励起され、青ないし紫の蛍光を発する。モーリッシュ反応は陽性である。
ＵＶ：λmaxＭｅＯＨ（ｎｍ）：２２０、３０３。
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３６１０、３３１０、２９７５、２９２３、２８８０、１６１０、１５８９、１５１６、１４５０、１３６０、１３２０、１２５０、１１７０、１０７５、９６５、８４０。
1Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：８．８９（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、４'−ＯＨ）、８．８６（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、５−ＯＨ）、７．３５（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４／８．５Ｈｚ、Ｈ−２',６'）、７．２０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．２Ｈｚ、Ｈ−β）、６．８４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．２Ｈｚ、Ｈ−α）、６．７８（２Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４／８．５Ｈｚ、Ｈ−３',５'）、６．７３（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、Ｈ−６）、６．６２（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、Ｈ−２）、６．４５（１Ｈ、Ｂｒ．ｓ、Ｈ−４）、４．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、アノマーＨ）、３．８〜３．２（糖−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ6）δｐｐｍ：１６０．１０（Ｃ−３）、１５９．３３（Ｃ−５）、１５８．１９（Ｃ−４'）、１４０．７３（Ｃ−１）、１２９．６４（Ｃ−１'）、１２９．５６（Ｃ−２',６'）、１２８．７０（Ｃ−α）、１２６．３３（Ｃ−β）、１１６．３１（Ｃ−３',５'）、１０８．００（Ｃ−２）、１０６．４９（Ｃ−６）、１０３．７２（Ｃ−４）；グルコシル：１０１．９０（Ｃ−１"）、７４．５７（Ｃ−２"）、７７．７６（Ｃ−３"）、７１．２６（Ｃ−４"）、７７．６４（Ｃ−５"）、６２．４８（Ｃ−６"）。
ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８９（Ｍ+−Ｈ）、２４２（Ｍ+−ｇｌｕ）。
【００３８】
従って、Ｅ5は３，４'，５−トリヒドロキシスチルベン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドまたはプロイダチン（ploydatin）と同定される。
【００３９】
【化８】
0004397688.tif 000009
【００４０】
（実施例５）
生物活性アッセイ
実施例１〜５の化合物の作用は、正常マウスの耐糖性曲線に基づくか、またはアロキサン誘発糖尿病マウスのグルコースレベルに基づき、以下の生物試験により証明した。メトホルミンまたはミグルカンを陽性対照薬として使用した。また、低血糖作用も評価した。
【００４１】
アロキサン誘発糖尿病マウスのグルコースレベルに対するスチルベン化合物の低血糖作用
５〜８時間絶食したＫＭ系統のオスマウスを用い、アロキサン８０ｍｇ／ｋｇを静脈内注射する。７２時間後に、グルコースレベル＞１１.０ｍｍｏｌ／Ｌのマウスを糖尿病モデルマウスとして薬物評価のために選択した。化合物は１２日間経口投与した。結果を表１に示す：
【００４２】
【表１】
0004397688.tif 000010
【００４３】
表１は陽性対照薬であるメトホルミンがこの実験において有効であり、本発明化合物のＥ、Ｅ1〜Ｅ5もまた有効性に上下の違いがあるにしても、有効であることを示す。
【００４４】
正常マウスまたはラットの耐糖性曲線に対する実施例１〜５の化合物の影響
これらの実験において、実施例１〜５のスチルベン誘導体は、ＫＭオスマウスまたはウイスターオスラットにそれぞれ１２日間経口投与し、次いで、試験動物を８時間絶食し、グルコース値を調べ、試験化合物を投与した。１時間後、グルコース２ｇ／ｋｇ（１.１１ｍｏｌ／Ｌグルコース溶液）を腹腔内投与した。グルコース注射の０、１／２、１および２時間後にグルコース値を定量し、この耐糖曲線の下面積を計算した。結果を表２に示す。
【００４５】
【表２】
0004397688.tif 000011
【００４６】
表２は本発明の化合物がグルコース負荷条件で有効にインスリン分泌を刺激したことを示す。従って、これらの化合物がＩＩ型糖尿病の治療または予防に有用であることを示唆する。
本発明化合物の毒性を表３に示す。
【００４７】
【表３】
0004397688.tif 000012
【００４８】
表３は化合物Ｅ、Ｅ1、Ｅ2、Ｅ3およびＥ5の毒性が非常に低いことを示している。１９７７年のＷＨＯ提案の急性毒性分類によると、これらの化合物は低毒性または無毒性薬物とさえ分類し得る。
また、これらの化合物は現在臨床にて使用されているメトホルミンまたはミグルカンよりも遥かに低毒性である。
【００４９】
ＨＢｅＡｇ発現に対する本発明化合物の阻害
実験方法：１０％ＤＭＥＭ（３８０μｇ／ｍｌのＧ４１８含有）を使用して２．２．１５細胞を培養；
１.５ｍｌの１０5細胞／ｍｌを２４ウエルプレートに加え、翌日、培養液を新しいものに取替え、異なる量の化合物をそこに加え、各化合物濃度を３ウエルとして培養し、培養の２、４および６日目に２．２．１５細胞培養の上清２００μｌを採取凍結した。上清のＨＢｅＡｇ値をＥＬＩＳＡにより測定する。結果を表４に示す。
【００５０】
【表４】
0004397688.tif 000013
【００５１】
表４は上記の化合物がＨＢｅＡｇの発現に対して阻害作用をもつことを示す。