(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式のジスタマイシン誘導体または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法であって、
【化１】
0004574944.tif 000008
（式中、Ｒは臭素または塩素原子である）、
ａ）２−アミノ−エチルグアニジンを次式の化合物
【化２】
0004574944.tif 000009
（式中、Ｘは水酸基または適切な脱離基である）の第１の部分と塩基性条件下で反応させて
次式の化合物を得ること、
【化３】
0004574944.tif 000010
ｂ）式（ＩＩＩ）のニトロ誘導体を還元して対応するアミノ誘導体を形成し、得られたアミノ誘導体を単離することなく、式（ＩＩ）の化合物の第２の部分と塩基性条件下で反応させて次式の化合物を得ること、
【化４】
0004574944.tif 000011
および
ｃ）式（ＩＶ）のニトロ誘導体を対応するアミノ誘導体に還元し、その後、得られたアミノ誘導体を次式の化合物
【化５】
0004574944.tif 000012
（式中、Ｒは臭素または塩素原子である）と適切な縮合剤の存在下かつ塩基性条件下で反応させて式（Ｉ）の化合物を得、場合によっては式（Ｉ）の化合物を薬学的に許容されるその塩に変換することを含む方法。
【請求項２】
Ｒが臭素原子である、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を調製するための請求項１に記載の方法。
【請求項３】
どの反応中間体も単離する必要なく、１つの反応器でステップａ）〜ｃ）を実施する請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ステップａ）において２−アミノ−エチルグアニジンがその二塩化水素化物塩の形態である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ステップａ）の式（ＩＩ）の化合物中で、Ｘが水酸基、あるいは臭素、塩素、２，４，５−トリクロロフェノキシ、２，４−ジニトロフェノキシ、スクシンイミド−Ｎ−オキシ、またはイミダゾリルから選択される基である請求項１に記載の方法。
【請求項６】
Ｘが臭素または塩素原子である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ｂ）またはｃ）の還元ステップを、次亜リン酸ナトリウム、ヒドラジン、スルフィド、ポリスルフィドを含む適切な還元剤の存在下、または接触水素化反応として実施する請求項１に記載の方法。
【請求項８】
還元ステップｂ）またはｃ）を、パラジウムまたは白金水素化触媒の存在下での接触水素化反応として実施する請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ステップｃ）において、得られたアミノ誘導体と式（Ｖ）の化合物の反応を、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）または（Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド）塩酸塩（ＥＤＣ）からなる群から選択される適切な縮合剤の存在下で実施する請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
塩基性条件下で実施されるどの反応も、適切な無機または有機塩基の存在下で実施される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
塩基が、ナトリウムまたはカリウムの水酸化物、炭酸塩、または炭酸水素塩、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、またはピペリジンから選択される請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記方法のステップａ）〜ｃ）の反応を、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、水、またはこれらの混合物からなる群から選択される適切な反応溶媒の存在下でそれぞれ独立に実施する請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
反応溶媒が、ジオキサン、テトラヒドロフラン、水、またはこれらの混合物から選択される請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩が、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、マロン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸を含む薬学的に許容される酸との酸付加塩である請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
次式（ＩＶ）の化合物。
【化６】
0004574944.tif 000013
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジスタマイシン誘導体を調製する方法に関し、より詳細には、顕著な抗腫瘍活性を有することが知られているアクリロイル−ジスタマイシン−グアニジノ誘導体を調製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジスタマイシンＡは、以下の式
【０００３】
【化１】
0004574944.tif 000002
で表され、ピロールアミジン抗生物質のファミリーに属し、ＤＮＡ−ＡＴ配列と可逆的かつ選択的に相互作用し、それによって複製と転写の両方に干渉することが報告されている。参考資料としては、Ｎａｔｕｒｅ、２０３、１０６４（１９６４）；ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、７（１９７０）９０；Ｐｒｏｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５、２８５（１９７５）を参照されたい。
【０００４】
いくつかのジスタマイシン類似体が、制癌剤として当技術分野で知られている。
【０００５】
一例として、本出願人による国際特許出願公開ＷＯ第９８／０４５２４号は、ジスタマイシンのホルミル基がアクリロイル部分で置換され、アミジノ基がいくつかの含窒素末端基、とりわけグアニジノで置換されている、制癌剤として価値のある生物学的諸特性を有するジスタマイシン誘導体を開示している。
【０００６】
このクラスのアクリロイル−ジスタマイシン−グアニジノ誘導体の、場合によっては薬学的に許容される塩の形態の、例えば塩酸塩としての具体例は、
Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（内部コードＰＮＵ  １６６１９６）；および
Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−クロロアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミドである。
【０００７】
これらの誘導体は、適切に活性化されたカルボン酸誘導体と、所望の含窒素末端基、例えばグアニジノ基を有するポリピロールアミド骨格との縮合反応を本質的に含む化学的方法に従って調製される。
【０００８】
この後者のグアニジノ中間体は、かなり煩雑なステップバイステップ手順に従って調製されるが、この手順は実質的に、対応するニトロ誘導体を還元して得られる２−カルボキシ−４−アミノ−ピロールのいくつかの連続したアシル化反応を意味する。
【０００９】
アクリロイル−ジスタマイシン−グアニジノ誘導体も含めたアクリロイル−ジスタマイシン誘導体を調製するための上記方法の一般的な参考資料としては、例えば前述の国際特許出願公開ＷＯ第９８／０４５２４号を参照されたい。
【００１０】
この点で、本発明者らは、驚くべきことに、前記アクリロイル−ジスタマイシン−グアニジンを、所望の生成物を高収率、高純度、かつ限られたステップ数で得ることが可能な化学的方法によって有利に調製できることを見出した。
【００１１】
したがって、本発明の第１の目的は、次式のジスタマイシン誘導体または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法であって、
【００１２】
【化２】
0004574944.tif 000003
（式中、Ｒは臭素または塩素原子である）、
【００１３】
ａ）２−アミノ−エチルグアニジンを、次式の化合物
【００１４】
【化３】
0004574944.tif 000004
（式中、Ｘは水酸基または適切な脱離基である）と塩基性条件下で反応させて、
次式の化合物を得ること、
【００１５】
【化４】
0004574944.tif 000005
【００１６】
ｂ）式（ＩＩＩ）のニトロ誘導体を対応するアミノ誘導体に還元し、その後、得られたアミノ誘導体を式（ＩＩ）の上記化合物と塩基性条件下で反応させて次式の化合物を得ること、
【００１７】
【化５】
0004574944.tif 000006
【００１８】
ｃ）式（ＩＶ）のニトロ誘導体を対応するアミノ誘導体に還元し、その後、得られたアミノ誘導体を次式の化合物
【００１９】
【化６】
0004574944.tif 000007
（式中、Ｒは臭素または塩素原子である）と適切な縮合剤の存在下かつ塩基性条件下で反応させて式（Ｉ）の化合物を得、場合によっては式（Ｉ）の化合物を薬学的に許容されるその塩に変換することを含む方法である。
【００２０】
本発明の目的とする方法により、式（Ｉ）の化合物を温和な実施条件下で高収率かつ高純度で得ることが可能になる。
【００２１】
さらに、本方法により、多くのステップを実行する必要なしにかつ／または望ましくない副生成物を生じ得る多数の中間体を単離する必要なしに、前述の化合物を調製することが可能になる。
【００２２】
本発明のプロセスは、ＰＮＵ  １６６１９６として先に示した化合物である式（Ｉ）（式中、Ｒは臭素原子である）の化合物の調製を対象とすることが好ましい。この点で、このように調製した一般式（Ｉ）の化合物中のＲ基が臭素であるか塩素であるかは、ステップｃ）で使用する式（Ｖ）の化合物によって決定されることが、当業者には明らかである。
【００２３】
本発明の目的とする方法によれば、ステップａ）の反応を、２−アミノ−エチルグアニジン、場合によっては薬学的に許容される塩の形態、好ましくは２−アミノ−エチルグアニジン二塩化水素化物と、わずかに過剰の、例えば１〜２当量過剰の式（ＩＩ）の化合物との間で実施する。
【００２４】
式（ＩＩ）の化合物中のＸ基は、水酸基、または適切な脱離基、例えば、臭素、塩素、２，４，５−トリクロロフェノキシ、２，４−ジニトロフェノキシ、スクシンイミド−Ｎ−オキシ、またはイミダゾリルなどである。
Ｘ基は、臭素または塩素原子であることが好ましい。
【００２５】
この反応を、１〜４当量の有機または無機塩基、例えば、ナトリウムまたはカリウムの水酸化物、炭酸塩、または炭酸水素塩などを含む、あるいはトリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、ピペリジンなどの有機アミンを含む塩基性条件下で実施する。
好ましくは、炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウムが使用される。
【００２６】
この反応を、適切な溶媒、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、水、およびこれらの混合物などの存在下で行う。
【００２７】
本方法の好ましい実施形態によれば、ステップａ）を、ジオキサン、テトラヒドロフラン、水、またはこれらの混合物の存在下で実施することが好ましい。
反応温度を約０℃〜約５０℃とすることができ、時間を約１〜約２４時間とすることができる。
【００２８】
式（ＩＩＩ）のニトロ化合物中間体は、そのままで、または薬学的に許容される塩の形態で、例えば塩酸塩として単離することができ、あるいは単離せずに本方法のステップｂ）に基づく還元条件下でさらに処理することができる。
【００２９】
式（ＩＩＩ）の化合物の還元を、本方法のステップｂ）に基づく、ニトロ誘導体をアミノ誘導体に還元するよく知られた方法に従って実施する。
【００３０】
典型的な還元条件としては、従来の還元剤、例えば、次亜リン酸ナトリウム、ヒドラジン、スルフィド、ポリスルフィドなどの使用、または接触水素化が挙げられる。
【００３１】
本発明の好ましい実施形態によれば、式（ＩＩＩ）の化合物を、白金またはパラジウム触媒、例えばチャコールに担持したパラジウム（Ｐｄ／Ｃ）の存在する不均一系触媒条件のもとで水素化する。
【００３２】
水素化反応は、適切な溶媒、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、水、およびこれらの混合物の存在下、約０℃〜約５０℃の温度で、約１〜約２４時間、水素圧力約１〜約１０ｂａｒ（１ｂａｒ＝１０５Ｐａ）を用いて実施することが好ましい。
【００３３】
このようにして得られたアミノ誘導体を、単離せずに式（ＩＩ）の化合物とさらに反応させる。
【００３４】
この反応を、本方法のステップａ）に基づく上述の条件のもと、すなわち塩基および適切な溶媒の存在下で行う。
【００３５】
先に示したように、式（ＩＶ）の中間体ニトロ化合物は、そのままで、または薬学的に許容される塩の形態で、例えば塩酸塩として単離することができ、あるいは単離せずに本方法のステップｃ）でさらに処理することができる。
【００３６】
ステップｃ）においては、式（ＩＶ）の化合物の還元を、上述のように、ニトロ誘導体をアミノ誘導体に還元するよく知られた方法に従って実施する。
【００３７】
この反応を、上述のように、パラジウムまたは白金触媒の存在する接触水素化条件のもとで実施することが好ましい。
【００３８】
次いで、得られたアミノ誘導体を、単離せずに、アミノ誘導体をアシル化する従来の方法に従って式（Ｖ）の化合物と反応させる。
【００３９】
具体的には、この反応を、溶媒、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、水、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、またはこれらの混合物などの存在下、従来の縮合剤の存在下、および無機または有機塩基、例えば、ナトリウムまたはカリウムの水酸化物、炭酸塩、または炭酸水素塩、あるいは有機アミン、例えば、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、ピペリジンなどの存在下で実施する。
【００４０】
好ましい縮合剤は、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）または（Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ−エチルカルボジイミド）塩酸塩（ＥＤＣ）である。
【００４１】
反応温度を約−１０℃〜約５０℃とすることができ、時間を約１〜約２４時間とすることができる。
【００４２】
先に示したように、式（Ｉ）（式中、Ｒは臭素原子である）の化合物（ＰＮＵ  １６６１９６）の調製を、ステップｃ）のように式（Ｖ）（式中、Ｒは臭素原子である）の化合物を用いて実施する。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態によれば、本方法全体を、特別の反応溶媒、例えば、ジオキサン、テトラヒドロフラン、水、またはこれらの混合物の存在下で実施することができる。
【００４４】
したがって、本方法全体を同一反応溶媒中で実施することにより、容積、したがって多量の回収すべき溶媒が劇的に減少させられることは明白である。
【００４５】
本発明の特に好ましい実施形態によれば、ａ）〜ｃ）のすべての反応ステップを、どの中間体も単離する必要なく、１つの反応器中で実施することができる。
【００４６】
この点で、ステップａ）〜ｃ）で定義された各反応は、以下のように、まず、式（ＩＩＩ）の化合物を得るために、式（ＩＩ）の化合物を２−アミノ−エチルグアニジン二塩化水素化物と反応させ、式（ＩＩＩ）の化合物を対応するアミノ誘導体に還元し、その後、それを、式（ＩＶ）の化合物を得るために再度式（ＩＩ）の化合物と反応させ、最後に、それをアミノ誘導体に還元し、このアミノ誘導体を式（Ｖ）の化合物と反応させることによって実施する。
【００４７】
上記のことから、望むときはいつでも、前述の反応のそれぞれ、または少なくともいくつかを、任意の中間体化合物を単離することによって別法として達成できることも当業者には明白である。
【００４８】
これまでのところ、式（Ｉ）の化合物を調製する方法である前述の手法のいずれもが本発明の範囲内にある。
【００４９】
最後に、薬学的に許容される塩への式（Ｉ）のジスタマイシン誘導体の変換を、あるいはその一方で、遊離化合物へのその塩の変換を、よく知られた技術に従って実施することができる。
【００５０】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩の例は、薬学的に許容される酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、マロン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの酸付加塩である。
【００５１】
２−エチル−アミノグアニジン化合物、例えば、二塩化水素化物塩は、公知の方法に従って調製できる、公知の化合物である。例えば、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０（１６），２５５９〜２５６４（１９９０）を参照されたい。
【００５２】
式（ＩＩ）の化合物は公知である、あるいは公知の方法に従って容易に調製することができる。式（ＩＩ）（式中、Ｘは水酸基である）の化合物の調製に関する参考資料としては、例えば、米国特許第４，９４２，２２７号を参照されたい。
【００５３】
式（Ｖ）の化合物は、市販の化合物である。
【００５４】
以上のことから、本発明の方法により、限られた数の反応性誘導体を使用することによって、一連の後続反応を実施できることは注目に値する。
【００５５】
式（ＩＩ）の化合物は、実際、本方法の２つの異なる反応において、まず、ステップａ）で２−アミノエチルグアニジン二塩化水素化物と共に出発物質として、その後、ステップｂ）で反応性中間体として極めて好都合に使用される。
【００５６】
式（ＩＶ）の中間体化合物は新規であり、したがって、本発明の別の目的である。
【００５７】
先に示したように、式（Ｉ）の化合物は、制癌剤として治療に有用である。
【００５８】
式（Ｉ）の化合物の抗腫瘍活性に関する一般参考資料としては、前述の国際特許出願公開ＷＯ第９８／０４５２４号を参照されたい。
【００５９】
式（Ｉ）（式中、Ｒは臭素原子である）の化合物（ＰＮＵ  １６６１９６）を調製する本発明の方法の実用的な実施形態によれば、適切な量の２−アミノ−エチルグアニジン二塩化水素化物を、ジオキサン、テトラヒドロフラン、水、またはこれらの混合物を好ましくは含む溶媒系中で、塩基、例えば、炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウムなどの無機塩基の存在下で、適切な量の、好ましくはわずかに過剰の式（ＩＩ）の化合物と反応させる。
【００６０】
この反応は温和な実施条件下で実施され、得られた式（ＩＩＩ）のニトロ誘導体を、チャコール担持パラジウムの存在する不均一触媒反応条件下でまず水素化し、その後、適切な量の、好ましくはわずかに過剰の式（ＩＩ）の化合物と塩基性条件下で反応させる。
【００６１】
次いで、得られた式（ＩＶ）の化合物を、上述のように対応するアミノ誘導体に水素化し、これを塩基および縮合剤、例えばＥＤＣの存在下に、式（Ｖ）のα−ブロモアクリル酸とさらに反応させる。
【００６２】
次いで、こうして得られた式（Ｉ）の所望の化合物を、従来法に従って単離して高収率かつ高純度で得る。
【００６３】
本発明を説明する目的で、それにいかなる制限も加えることなく、以下の実施例を次に示す。
【実施例１】
【００６４】
ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（２−アミノエチル）カルバメートの調製
エチレンジアミン（７モル）を、ジオキサン（２．７ｌ）を入れた反応フラスコに仕込んだ。続いて、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート（１．０モル）の入ったジオキサン（２７０ｍｌ）を添加した。
この反応混合物を室温で１日攪拌し、次いで、溶媒を減圧下で除去した。
この粗生成物に水（１．８ｌ）を添加し、この混合物をジクロロメタンで抽出処理した。その有機相から有機溶媒を蒸留により除去して、標題の化合物を得た（１４５ｇ；収率９０％）。
【実施例２】
【００６５】
２−アミノエチル−グアニジン二塩化水素化物の調製
ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（２−アミノエチル）カルバメート（０．４モル）、Ｏ−メチルイソ尿素硫酸水素塩（０．８モル）、およびトリエチルアミン（２．５モル）を、メタノール：水＝１：１混合物（３ｌ）の入った反応フラスコに仕込んだ。
この反応混合物を室温で１日攪拌し、次いで、溶媒を減圧下で除去した。
この粗生成物をエタノール（２ｌ）とガス状塩酸（３．５Ｍ）を用いて２０℃で４時間処理し、その後、ろ過し、乾燥して、標題の化合物を得た（５５ｇ；収率７４％）。
【実施例３】
【００６６】
Ｎ−メチル−４−アミノピロール−２−カルボン酸の調製
Ｎ−メチル−４−ニトロピロール−２−カルボン酸（０．５８モル）、２Ｎ塩酸（３５０ｍｌ）、およびＰｄ／Ｃ（５ｇ）を、ジオキサン：水＝２：１混合物（１．２ｌ）に添加した。
この混合物を、２ｌの水素化反応器中で、室温で４時間水素化した。触媒をろ過して除去し、溶媒を減圧下で濃縮し、得られた懸濁液をろ過した。
この粗生成物を乾燥して、標題の化合物を白色粉体として得た（９４ｇ；収率９２％）。
【実施例４】
【００６７】
Ｎ−メチル−４−ニトロピロール−２−カルボン酸塩化物の調製
塩化チオニル（３．１６モル）を、トルエン（１．５ｌ）中のＮ−メチル−４−ニトロピロール−２−カルボン酸（１．１７モル）が入った反応フラスコに仕込んだ。
この反応混合物を１００℃で３時間撹拌し、冷却し、その後減圧下で濃縮した。得られた懸濁液を、シクロヘキサンを用いて室温で２時間処理し、次いで、ろ過、乾燥して、標題の化合物を得た（２００ｇ；収率９６％）。
【実施例５】
【００６８】
Ｎ−メチル−４−［（Ｎ’−メチル−４−ニトロ−ピロリル−２−イル）カルボニルアミノ］ピロール−２−カルボン酸の調製
実施例３に記載したように調製したＮ−メチル−４−アミノピロール−２−カルボン酸（０．５６モル）と、炭酸水素ナトリウム（２モル）を、ジオキサン：水＝１：１混合物（３００ｍｌ）を入れた反応フラスコに仕込んだ。
次いで、実施例４に記載したように調製したＮ−メチル−４−ニトロピロール−２−カルボン酸塩化物（０．６２モル）のジオキサン（３５０ｍｌ）溶液を、その中に添加した。
この反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、水（１００ｍｌ）を添加した。次いで、２Ｎ塩酸溶液をｐＨが３になるまで添加し、その有機溶液をジオキサンが完全に除去されるまで減圧下で濃縮した。
この懸濁液をろ過して、標題の化合物を得た（１４７ｇ；収率９０％）。
【実施例６】
【００６９】
Ｎ−メチル−４−［（Ｎ’−メチル−４−ニトロ−ピロリル−２−イル）カルボニルアミノ］ピロール−２−カルボン酸塩化物の調製
実施例５に記載したように調製したＮ−メチル−４−［（Ｎ’−メチル−４−ニトロ−ピロリル−２−イル）カルボニルアミノ］ピロール−２−カルボン酸（０．４５モル）、ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）、および塩化チオニル（２．３モル）をジクロロメタン（２．５ｌ）が入った反応フラスコに仕込んだ。
得られた懸濁液を還流温度で６時間撹拌し、次いで室温で冷却し、ろ過した。
この粗生成物をヘキサン（１ｌ）で処理し、次いでろ過、乾燥して、標題の化合物を得た（１６３ｇ；収率９０％）。
【実施例７】
【００７０】
２−［１−メチル−４−［１−メチル−４−［１−メチル−４−［１−メチル−４−ニトロピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド］ピロール−２−カルボキサミド］ピロール−２−カルボキサミド］エチルグアニジン塩酸塩の調製
実施例６に記載したように調製したＮ−メチル−４−［（Ｎ’−メチル−４−ニトロ−ピロリル−２−イル）カルボニルアミノ］ピロール−２−カルボン酸塩化物（０．０５７モル）を、ジオキサン（３００ｍｌ）を入れた反応フラスコに仕込んだ。
次いで、実施例２に記載したように調製した２−アミノエチル−グアニジン二塩化水素化物（０．０５７モル）と炭酸水素ナトリウム（０．１７モル）の水（１００ｍｌ）溶液を、その中に添加した。
この懸濁液を室温で２時間撹拌した。
その後、２Ｎ塩酸溶液（６０ｍｌ）とＰｄ／Ｃ（３ｇ）を添加した。
次いで、この混合物を２ｌ水素化反応器中で、室温で３時間水素化し、次いでろ過した。
【００７１】
得られた溶液を、Ｎ−メチル−４−［（Ｎ’−メチル−４−ニトロ−ピロリル−２−イル）カルボニルアミノ］ピロール−２−カルボン酸塩化物（０．０５７モル）のジオキサン（１２０ｍｌ）懸濁液に添加した。次いで、炭酸水素ナトリウム（０．１７モル）を添加し、この懸濁液を室温で４時間撹拌した。
次いで、この混合物を懸濁液が得られるまで減圧下で濃縮し、得られた懸濁液を室温で冷却し、ろ過した。
この湿った粗生成物をアセトンで処理して、ろ過し、乾燥して標題の化合物を得た（３０ｇ；収率８５％）。
【実施例８】
【００７２】
２−［１−メチル−４−［１−メチル−４−［１−メチル−４−［１−メチル−４−アミノピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド］ピロール−２−カルボキサミド］ピロール−２−カルボキサミド］エチルグアニジン塩酸塩の調製
実施例７の化合物（０．０６７モル）、ジオキサン（５５０ｍｌ）、水（４５０ｍｌ）、２Ｎ塩酸溶液（１２０ｍｌ）、およびＰｄ／Ｃ（１３ｇ）を水素化反応器に仕込んだ。
この懸濁液を室温で３時間水素化し、次いでこの混合物をろ過した。
得られた溶液をアセトン（１３００ｍｌ）で処理し、４℃で１晩冷却し、ろ過した。
この粗製物を乾燥して、標題の化合物を得た（４０ｇ；収率９０％）
【実施例９】
【００７３】
Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド塩酸塩（内部コードＰＮＵ  １６６１９６Ａ）の調製
ブロモアクリル酸（７．５６ミリモル）、ＥＤＣ（７．５６ミリモル）、炭酸水素ナトリウム（１４．３ミリモル）、およびジオキサン（６０ｍｌ）を反応フラスコに仕込んだ。
次いで、実施例８の化合物（２ミリモル）とジオキサン：水の２：１混合物（３０ｍｌ）を添加した。
この混合物を室温で１時間撹拌し、次いで２Ｎ塩酸溶液をｐＨが４．５になるまで添加した。
次いで、この溶媒を減圧下で濃縮し、懸濁液をろ過し、得られた粗生成物を乾燥して、標題の化合物を得た（１．３ｇ；収率８５％；ＨＰＬＣ面積＞９８％）。