(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
0004603163.tif 000041
【化２】
0004603163.tif 000042
【化３】
0004603163.tif 000043
及び
【化４】
0004603163.tif 000044
ここにおいて、ＸはＩ、Ｂr、Ｃlから選ばれるハロゲンであり、
Ｒ１は、−ＣＨ3及び−ＣＨ2−ＣＨ3から選ばれ、
Ｃat+は、プロトンを含む有機又は無機カチオンであり、
ｎは、２から２０の整数であり、
Ｒ２は、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）、アミノ酸、    ペプチド、タンパク質、単糖、オリゴ糖、多糖、脂肪酸、単純脂質、複合脂質、葉酸    、テトラヒドロ葉酸、リン酸、イノシトール、ビタミン、コエンザイム、フラボノイ    ド、アルデヒド、エポキシド、ハロヒドリン、及び、式（１）：
【化５】
0004603163.tif 000045
から成る群から選ばれ、そして
Ｒ３は、
式：
【化６】
0004603163.tif 000046
のハロヒドリン基；
式：
【化７】
0004603163.tif 000047
のエポキシド基；
式：
【化８】
0004603163.tif 000048
のアルケン基；
から選ばれ、そして
ｍは、１から２０の整数である。
のホスホハロヒドリンから選ばれる化合物。
【請求項２】
リンパ球Ｔγ９δ２の活性化剤として有用な薬品製造のための、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項３】
リンパ球Ｔγ９δ２に感受性のある細胞を生産する病的状態の予防的又は治療的処理のための有用な薬剤製造のための、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項４】
ガン、感染症、寄生虫症、マイコバクテリア病、免疫不全症候群、ハンセン病、結核、マラリア、及び後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の病気から成る群から選ばれる病的状態の予防的又は治療的処理のための有用な薬剤製造のための、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項５】
化合物の投与量は、患者の体重１ｋｇあたり０.１μｇから１００μｇの間である、請求項２から４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項６】
免疫刺激性治療用組成物、又は霊長類用ワクチン製造のための、請求項１に記載の化合物のいずれか１つの化合物の使用。
【請求項７】
式：
【化９】
0004603163.tif 000049
【化１０】
0004603163.tif 000050
及び
【化１１】
0004603163.tif 000051
ここにおいて、ＸはＩ、Ｂr、Ｃlから選ばれるハロゲンであり、
Ｒ１は、−ＣＨ3及び−ＣＨ2−ＣＨ3から選ばれ、
Ｃat+は、プロトンを含む有機又は無機カチオンであり、
Ｒ２は、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）、アミノ酸、    ペプチド、タンパク質、単糖、オリゴ糖、多糖、脂肪酸、単純脂質、複合脂質、葉酸    、テトラヒドロ葉酸、リン酸、イノシトール、ビタミン、コエンザイム、フラボノイ    ド、アルデヒド、エポキシド、ハロヒドリン、及び、式：
【化１２】
0004603163.tif 000052
のホスホハロヒドリンから成る群から選ばれ、そして
ｎは、２から２０の整数である。
のホスホハロヒドリンから選ばれる化合物の製造方法であって、
ハロゲンＸ２を、式：
【化１３】
0004603163.tif 000053
【化１４】
0004603163.tif 000054
及び
【化１５】
0004603163.tif 000055
の化合物の群から選択される少なくとも１つのリン酸アルケンを含む出発化合物と、水の存在下において反応させることを特徴とする方法。
【請求項８】
水性媒質又はヒドロアルコール媒質中において中性pＨで、３０℃より低い温度で、ハロゲンＸ２の水溶液と、出発化合物から形成された塩とを反応させることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
大気圧下、０℃から２５℃の温度において反応を実施することを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
後の工程において、式：
【化１６】
0004603163.tif 000056
の化合物を、化合物Ｒ２−Ｏ−Ｙ（ここにおいて、Ｏ−Ｙは脱離基であり、Ｒ２は、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、単糖、オリゴ糖、多糖、脂肪酸、単純脂質、複合脂質、葉酸、テトラヒドロ葉酸、リン酸、イノシトール、ビタミン、コエンザイム、フラボノイド、アルデヒド、エポキシド、ハロヒドリン、及び、式：
【化１７】
0004603163.tif 000057
のホスホハロヒドリンからなる群から選ばれた有機又は無機置換基である。）と反応することにより式：
【化１８】
0004603163.tif 000058
の化合物を得る、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物を含むことを特徴とする体外診断用組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物を含むことを特徴とする治療用組成物。
【請求項１３】
霊長類への末梢血又は局所投与に適した量の、請求項１２に記載の化合物を含んでいることを特徴とする治療用組成物。
【請求項１４】
さらに、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２を含んでいることを特徴とする、請求項１１から１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
さらに、この組成物が投与されることになっている媒質中にリンパ球成長を引起すのに適した割合のインターロイキンを含んでいることを特徴とする、請求項１１から１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
インターロイキンは、ＩＬ‐２であることを特徴とする、請求項１５の組成物。
【請求項１７】
リンパ球Ｔγ９δ２を活性化させる特性を有する組成物の製造方法であって、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物を使用する方法。
【請求項１８】
リンパ球Ｔγ９δ２に感受性のある病原細胞を生産する病気の予防的又は治療的処理のための治療用組成物の製造方法であって、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物を使用する方法。
【請求項１９】
治療用組成物が霊長類に投与するためのものである、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
病的状態は、ガン、感染症、寄生虫症、及び免疫不全症候群の病気から成る群から選ばれることを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
生体外で、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物と、リンパ球Ｔγ９δ２を含みかつリンパ球Ｔの成長に適合性のある媒質とを、この媒質中においてこれらのリンパ球Ｔγ９δ２を活性化させるのに適した量で接触させる、請求項１７から２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記媒質が、霊長類の血液と霊長類の血液抽出物とから選ばれる１つの物質を含んでいる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
リンパ球Ｔの成長に適合性のある、リンパ球Ｔγ９δ２を含む体外媒質中において、請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物とリンパ球Ｔγ９δ２とを接触させる、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２の体外活性化方法。
【請求項２４】
請求項１に記載の化合物の少なくとも１つの化合物を、リンパ球Ｔγ９δ２のポリクローナル増殖の活性化をもたらす媒質中濃度において用いる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
媒質中においてリンパ球成長を引起こすのに適した割合のインターロイキンを媒質中に導入する、請求項２３又は２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、新規ホスホハロヒドリン化合物、これらの製造方法、及び可変領域Ｖγ９及びＶδ２を含む受容体ＴＣＲを有するリンパ球Ｔγ９δ２の刺激のためのこれらの使用に関する。
【０００２】
（背景技術）
末梢血（ヒト、サル）中に存在する霊長類のリンパ球Ｔγδは、健康な個人の場合、通常は血液のリンパ球の１から５％であり、免疫系においてある役割を果たしている。これらは、提示細胞のＭＨＣ分子による提示がなくても、抗原との直接相互作用によってこれらの抗原リガンドを認識することが証明されている。リンパ球Ｔγ９δ２（リンパ球Ｔγ２δ２と呼ばれることも多い）は、可変領域Ｖγ９及びＶδ２を含む受容体ＴＣＲを有するリンパ球Ｔγδである。これらは、ヒトの血液中のリンパ球Ｔγδの大部分である。
【０００３】
リンパ球Ｔγδは、活性化された時、ＭＨＣによって抑制されない強力な細胞毒性活性を発揮し、この活性は特に、様々な型の細胞特に病原細胞を殺すのに効果的である。ウイルスに感染した細胞（「感染中のγδＴ細胞活性化又はアネルギー：非ペプチドＴＣＲリガンド及びＨＬＡクラスＩ分子の役割（γδＴ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｒ  ａｎｅｒｇｙ  ｄｕｒｉｎｇ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｉｃ  ＴＣＲ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ＨＬＡ  ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）」、Ｆａｂｒｉｚｉｏ  ＰＯＣＣＩＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，６２，１９９７，ｐ.１−５）、あるいはその他の細胞内寄生体、例えばマイコバクテリアに感染した細胞（「抗結核性Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ＢＣＧワクチンは、ヒトγδＴ細胞のためのホスホリル化非ペプチド抗原の弱毒化マイコバクテリア生産体である（Ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ＢＣＧ  Ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｓ  ａｎ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｐｒｏｄｕｃｅｒ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  γδＴ  ｃｅｌｌｓ）」、Ｐａｔｒｉｃｉａ  ＣＯＮＳＴＡＮＴ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｖｏｌ.６３，Ｎo.１２，Ｄｅｃ．１９９５，ｐ.４６２８−４６３３）；又は原生動物（「ヒトγδＴ細胞用のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ  ｓｔｉｍｕｌｉは、マイコバクテリアのホスホリル化抗原に関連している（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ  ｓｔｉｍｕｌｉ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  γδＴ  Ｃｅｌｌｓ  ａｒｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｏｆ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）」、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ  ＥＨＲ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌ.６４，Ｎo.８，１９９６，ｐ.２８９２−２８９６）に関することもある。同様にガン細胞にも関することがある（「ＣＤ９４／ＮＫＧ２阻害受容体錯体は、ポリクローナルホスホ抗原反応性Ｖγ９Ｖδ２Ｔリンパ球の抗ウイルス及び抗腫瘍応答の両方を調節する（ＣＤ９４／ＮＫＧ２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｂｏｔｈ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  ｐｈｏｓｐｈｏａｎｔｉｇｅｎ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｖγ９Ｖδ２Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）」、Ｆａｂｒｉｚｉｏ  ＰＯＣＣＩＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５９，ｐ.６００９−６０１５；「ホスホ抗原によるγδＴ細胞の刺激（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  γδＴ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｐｈｏｓｐｈｏａｎｔｉｇｅｎｓ）」、Ｊｅａｎ−Ｊａｃｑｕｅｓ  ＦＯＵＲＮＩＥ，Ｍａｒｃ  ＢＯＮＮＥＶＩＬＬＥ，Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ.，６６ｔｈ  ＦＯＲＵＭ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ，１４７，Ｐ.３３８−３４７）。
【０００４】
ヒトリンパ球Ｔγ９δ２は、リン酸構造の４つの非ペプチド天然分子を有するマイコバクテリア感染の場合に反応することが証明された。これらは、ホスホ抗原と呼ばれ、１から５ｎＭ（ナノモル）程度の濃度の場合刺激活性を示す（第ＷＯ−９５／２０６７３号及び「非ペプチドマイコバクテリアリガンドによるヒトγδＴ細胞の刺激（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  γδ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｉｃ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｌｉｇａｎｄｓ）」、Ｐａｔｒｉｃｉａ  ＣＯＮＳＴＡＮＴ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６４，ｐ.２６７−２７０）。
【０００５】
これらの天然抗原は完全には同定されていない。ある研究者らは、これらをピロホスフェートのアルケン誘導体、特にイソペンテニルピロホスフェートＩＰＰとして示したが、これは間違いであった（第ＵＳ５,６３９,６５３号、及び「ヒトγδＴ細胞によって認識された天然及び合成非ペプチド抗原（Ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  γδＴ  ｃｅｌｌｓ）」、Ｙｏｓｈｉｍａｓａ  ＴＡＮＡＫＡ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３７５，１９９５，ｐ.１５５−１５８）。しかしながらこれらのフェニルピロホスフェートのどれも、ナノモル程度の濃度では活性でないことが今や証明されている。得られた最良の結果でも、ＩＰＰについては３μＭ未満の活性、ジメチルアリル−ＵＴＰ及び３−メチル−２−ヘキセンピロホスフェートについては０.３μＭの活性を証明するには至っていない。従ってこれらの化合物の活性の最低濃度は、よくてもせいぜい、天然のホスホ抗原の濃度の１００倍以上の程度である。
【０００６】
ＩＰＰに関した場合、特に上記の後者の出版物は、マススペクトルの分析のみから、及び何らかの生物活性の証明から、イソペンテニル基の構造を導き出すことによって誤りを犯していることに注目すべきである。実際、これらの出版物において分析された化合物は精製されていないということ、及びマススペクトルは装入されていない種を同定することはできないという事実とは別に、この同じ分子量を有することができ、かつこれらの分子中においてピロホスフェートの置換基でありうる、数千もの異なる化学構造が実際に存在することを証明することができる。
【０００７】
ＩＰＰの活性の最低濃度ははるかに高い（１０００倍程度）ということ、及び得られたリンパ球Ｔγ９δ２応答の強度が、天然のホスホ抗原のものよりもはるかに低いという事実は、ＩＰＰがこれらの天然ホスホ抗原の１つではないことを証明している（「ヒトの血液γδＴリンパ球のための新規ヌクレオチド含有抗原（Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ―ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｂｌｏｏｄ  γδＴ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）」、Ｙ．Ｐｏｑｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，２６，ｐ.２３４４−２３４９）。さらにはこのことは、次のようなその他の数多くの検証によって確認されている。すなわち、リンパ球Ｔγ９δ２を刺激するマイコバクテリア抽出物中に十分な濃度のＩＰＰは見られないこと；「ホスホリル化化合物の高いpＨアニオン交換クロマトグラフィー分析：非ペプチドマイコバクテリア抗原の単離への使用及びこれの特徴決定（Ｈｉｇｈ  ｐＨ  ａｎｉｏｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ  ａｎｔｉｇｅｎｓ）」、Ｙ．Ｐｏｑｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，２４３，Ｎo.１，１９９６，ｐ.１１９−１２６によれば、ＩＰＰは、天然のホスホ抗原と同じクロマトグラフィー的特徴（ＨＰＡＥＣ）を有していないこと；ＩＰＰ及びその他の天然イソプレノイドは、すべての生きている細胞によって生産されるが、しかしながらこれらはリンパ球Ｔγ９δ２を刺激しないということなどである。
【０００８】
さらには、１μＭ又はそれ以上の程度の生物活性を有する物質は、工業的規模の開発の収益性という制約とはめったに適合しないことは知られている。従ってこれまで提案された合成ホスホ抗原は、許容しうる経済条件下に工業的規模では開発可能でない。
【０００９】
天然のホスホ抗原について言えば、非常に少量しか生産することはできず（第ＷＯ９５／２０６７３号）、これらの正確な化学構造はまだ決定されていないので、これらを合成によって生産することは不可能である。従って治療学的に証明された大きい利点にもかかわらず、経済的条件下に工業的規模での開発を考えることも不可能である。
【００１０】
従って本発明は、１００ｎＭ以下、特に１ｎＭ程度の活性の最低濃度の場合にリンパ球Ｔγ９δ２の活性化物質である新規化合物を提案することを目的とする。
【００１１】
本発明はまた、多官能化合物を得ることができるように、多数の有機基、特に天然又は合成のペプチド基とカップリングすることができる化合物を提案することをも目的とする。
【００１２】
本発明はまた、合成が簡単であり、定量的であり、あまり費用がかからない、すなわち工業的規模での生産の経済的制約と両立しうる化合物を提案することをも目的とする。
【００１３】
本発明はまた、このような理由で、これらの化合物の有利な合成経路を提案することをも目的とする。
【００１４】
本発明はまた、本発明の化合物の製造方法を提案することをも目的とする。
【００１５】
本発明はまた、リンパ球Ｔγ９δ２の活性化物質としての本発明による化合物の使用、特に本発明による化合物の治療のための使用を提案することをも目的とする。
【００１６】
従って本発明は、式：
【化２１】
0004603163.tif 000002
ここにおいて、Ｘは、ヨウ素、臭素、及び塩素から選ばれるハロゲンであり、Ｒ１は、―ＣＨ3及び―ＣＨ2―ＣＨ3から選ばれ、
Ｃat+は、この同じ化合物において、同一又は異なる１つ（又は複数）の有機又は無機カチオン（これにはプロトンも含まれる）を表わし、
ｎは、２から２０の整数である、
少なくとも１つのホスホハロヒドリン基を含む化合物に関する。
【００１７】
本発明による化合物は、特に次の基（ＩＵＰＡＣの命名法）のエステル、又はこれらの基から成る化合物の中から選ばれる１つ又は複数のホスホハロヒドリン基を含んでいてもよい：
３−(ハロメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェート；  ３−(ハロメチル)−３−ペンタノール−１−イル−ジホスフェート；４−(ハロメチル)−４−ペンタノール−１−イル−ジホスフェート；４−(ハロメチル)−４−ヘキサノール−１−イル−ジホスフェート；５−(ハロメチル)−５−ヘキサノール−１−イル−ジホスフェート；５−(ハロメチル)−４−ヘプタノール−１−イル−ジホスフェート；６−(ハロメチル)−６−ヘプタノール−１−イル−ジホスフェート；６−(ハロメチル)−６−オクタノール−１−イル−ジホスフェート；７−(ハロメチル)−７−オクタノール−１−イル−ジホスフェート；７−(ハロメチル)−７−ノナノール−１−イル−ジホスフェート；８−(ハロメチル)−８−ノナノール−１−イル−ジホスフェート；８−(ハロメチル)−８−デカノール−１−イル−ジホスフェート；９−(ハロメチル)−９−デカノール−１−イル−ジホスフェート；９−(ハロメチル)−９−ウンデカノール−１−イル−ジホスフェート；１０−(ハロメチル)−１０−ウンデカノール−１−イル−ジホスフェート；１０−(ハロメチル)−１０−ドデカノール−１−イル−ジホスフェート；１１−(ハロメチル)−１１−ドデカノール−１−イル−ジホスフェート；１１−(ハロメチル)−１１−トリデカノール−１−イル−ジホスフェート；１２−(ハロメチル)−１２−トリデカノール−１−イル−ジホスフェート；１２−(ハロメチル)−１２−テトラデカノール−１−イル−ジホスフェート；１３−(ハロメチル)−１３−テトラデカノール−１−イル−ジホスフェート；１３−(ハロメチル)−１３−ペンタデカノール−１−イル−ジホスフェート；１４−(ハロメチル)−１４−ペンタデカノール−１−イル−ジホスフェート；１４−(ハロメチル)−１４−ヘキサデカノール−１−イル−ジホスフェート；１５−(ハロメチル)−１５−ヘキサデカノール−１−イル−ジホスフェート；１５−(ハロメチル)−１５−ヘプタデカノール−１−イル−ジホスフェート；１６−(ハロメチル)−１６−ヘプタデカノール−１−イル−ジホスフェート；１６−(ハロメチル)−１６−オクタデカノール−１−イル−ジホスフェート；１７−(ハロメチル)−１７−オクタデカノール−１−イル−ジホスフェート；１７−(ハロメチル)−１７−ノナデカノール−１−イル−ジホスフェート；１８−(ハロメチル)−１８−ノナデカノール−１−イル−ジホスフェート；１８−(ハロメチル)−１８−エイコサノール−１−イル−ジホスフェート；１９−(ハロメチル)−１９−エイコサノール−１−イル−ジホスフェート；１９−(ハロメチル)−１１−ヘンエイコサノール−１−イル−ジホスフェート；２０−(ハロメチル)−２０−ヘンエイコサノール−１−イル−ジホスフェート；２０−(ハロメチル)−２０−ドコサノール−１−イル−ジホスフェート；２１−(ハロメチル)−２１−ドコサノール−１−イル−ジホスフェート；２１−(ハロメチル)−２１−トリコサノール−１−イル−ジホスフェート。
【００１８】
本発明の化合物のうち、次の式のうちの１つに対応するホスホハロヒドリン化合物を挙げることができる：
【化２２】
0004603163.tif 000003
【化２３】
0004603163.tif 000004
【化２４】
0004603163.tif 000005
ここにおいてＲ２は、
−水の存在下においてアルケン官能基
【化２５】
0004603163.tif 000006
とハロゲンＸ2とからハロヒドリン官能基
【化２６】
0004603163.tif 000007
を形成するのを妨げない置換基と；
−  式：
【化２７】
0004603163.tif 000008
の化合物のハロヒドリン官能基に対して非反応性であり、かつＲ２―Ｏ―Ｙが、化合物（４）を得るためにこの化合物（３）の末端リン酸塩に対して反応しうるように選ばれる化合物Ｒ２―Ｏ―Ｙが存在する置換基、
とから成る群から選ばれる有機又は無機置換基である。
【００１９】
有利には、本発明による前記化合物は、ｎ＝２であり、Ｒ１はＣＨ3であることを特徴とする。
【００２０】
本発明による化合物は、有利にはさらに、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、単糖類、オリゴ糖類、多糖類、脂肪酸、単純脂質、複合脂質、葉酸、テトラヒドロ葉酸、リン酸、イノシトール、ビタミン、コエンザイム、フラボノイド、アルデヒド、ハロヒドリン、及びエポキシドの誘導体から成る群から選ばれる少なくとも１つの基を含んでいる。
【００２１】
特に本発明は、上記式（４）（ここにおいて、Ｒ２は、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸（ＲＮＡ、ＤＮＡ）、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、単糖類、オリゴ糖類、多糖類、脂肪酸、単純脂質、複合脂質、葉酸、テトラヒドロ葉酸、リン酸、イノシトール、ビタミン、コエンザイム、フラボノイド、式（１）によるホスホハロヒドリン、アルデヒド、エポキシド、及びハロヒドリンの誘導体から成る群から選ばれる）のホスホハロヒドリン化合物にも及んでいる。
【００２２】
本発明はまた、同一又は異なる、式（１）に合致する複数の基、例えばモノマー、ポリマー、オリゴマー、又はデンドリマー、あるいはより一般的には式（１）に合致した複数のリン酸分枝を有する分子を組込んでいる構造を有する化合物にも及んでいる。
【００２３】
本発明による化合物は、リン酸のエステル（モノエステル又はジエステル）であることに注目すべきである（この用語は、リンが酸化度Ｖにある酸、すなわちオルトリン酸、ピロリン酸、メタリン酸、トリリン酸、その他のポリリン酸をも包含する）。
【００２４】
本発明は、本発明の化合物の製造方法にも及んでいる。本発明によれば、水の存在下、ハロゲンＸ2と、式：
【化２８】
0004603163.tif 000009
の少なくとも１つのリン酸アルケン基を含む出発化合物とを反応させる。
【００２５】
有利には本発明によれば、水性媒質又はヒドロアルコール媒質中において、中性ｐＨで、３０℃以下の温度で、ハロゲンＸ2の水溶液との混合によって、前記出発化合物から形成された塩を反応させる。有利には本発明によれば、大気圧下、０℃から２５℃の温度において反応を実施する。
【００２６】
出発化合物自体は、アルコール：
【化２９】
0004603163.tif 000010
から得ることができる。
【００２７】
有利には本発明によれば、出発化合物は、式：
【化３０】
0004603163.tif 000011
の塩である。
【００２８】
従って式（２）のピロホスホハロヒドリン化合物が得られる。
【００２９】
アルコール（９）から化合物（２）を得るための完全な反応図式の一例は、次のとおりである：
【化３１】
0004603163.tif 000012
【化３２】
0004603163.tif 000013
【化３３】
0004603163.tif 000014
ここにおいて、ＴsＣlは塩化トシルであり、
４−ＤＭＡＰは、４−ジメチルアミノピリジンであり、
Ｂu4Ｎ+は、テトラブチルアンモニウムであり、
(Ｂu4Ｎ+)3ＨＰ2Ｏ7は、トリス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノピロホスフェートであり、
ＰＰは、ピロホスフェート基を表わす。
【００３０】
アルコール（９）から化合物（６）を得ることができるようにする反応は、次の文献に記載されているように実施することができる：ＤＡＶＩＳＳＯＮ  Ｖ．Ｊ．らの「イソプレノイドアルコールのホスホリル化（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ  Ａｌｃｏｈｏｌｓ）」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ  １９８６，５１，４７６８−４７７９、及びＤＡＶＩＳＳＯＮ  Ｖ．Ｊ．らの「アリル及びホモアリルイソプレノイドピロホスフェートの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｌｌｙｌｉｃ  ａｎｄ  Ｈｏｍｏａｌｌｙｌｉｃ  Ｉｓｏｐｒｅｎｏｉｄ  Ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ）」、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９８４，１１０，１３０−１４４。
【００３１】
有利には本発明によれば、出発化合物は、式：
【化３４】
0004603163.tif 000015
の塩である。
【００３２】
従って式（３）のトリホスホハロヒドリン化合物が得られる。
【００３３】
アルコール（９）から化合物（３）を得るための完全な反応図式の一例は、次のとおりである：
【化３５】
0004603163.tif 000016
【化３６】
0004603163.tif 000017
ここにおいてＰＰＰは、トリホスフェート基であり、
(Ｂu4Ｎ+)4ＨＰ3Ｏ10は、テトラキス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノトリホスフェートである。
【００３４】
化合物（１０）は、既に示されているようにアルコール（９）から得られる。化合物（１０）から化合物（７）を得ることができるようにする反応は、ＤＡＶＩＳＳＯＮ  Ｖ．Ｊ．らの出版物、又はＤＡＶＩＳＳＯＮ  Ｖ．Ｊ．らの「５'−Ｏ−トシルヌクレオシドからのヌクレオチド５'−ジホスフェートの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ５'−Ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ  ｆｒｏｍ  ５'−Ｏ−Ｔｏｓｙｌ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ）」、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７，５２，１７９４−１８０１に記載されているものと同様な条件下において実施することができる。
【００３５】
有利には本発明によれば、式（４）の本発明の化合物を得ることができるようにする第一変形例において、出発化合物として、式：
【化３７】
0004603163.tif 000018
ここにおいてＲ２は、水の存在下においてアルケン官能基
【化３８】
0004603163.tif 000019
とハロゲンＸ2とからハロヒドリン官能基
【化３９】
0004603163.tif 000020
を形成するのを妨げないようにするのに適合させられた有機又は無機置換基である、
の塩を用いて、上記のような本発明による製造方法（水の存在下におけるＸ２とリン酸アルケン官能基との反応）を実施することができる。
【００３６】
出発化合物（８）それ自体は、次の反応図式のうちの１つに従って調製することができる：
反応図式１：
【化４０】
0004603163.tif 000021
ここにおいてＴsはトシルである。
【００３７】
化合物（７）は、アルコール（９）と中間化合物（１０）とから、前記のように得ることができる。化合物（７）から化合物（８）を得ることができるようにする反応は、ＤＡＶＩＳＳＯＮ  Ｖ．Ｊ．らの出版物に記載されているものと同様な条件下に実施することができる。この図式は、Ｒ２―Ｏ―Ｔsが商品として入手しうる時に利用することができる。
反応図式２：
【化４１】
0004603163.tif 000022
【００３８】
中間化合物（１０）は、アルコール（９）から前記のように得ることができる。化合物（７）から化合物（８）を得ることができるようにする反応は、ＤＡＶＩＳＳＯＮ  Ｖ．Ｊ．らの出版物に記載されているものと同様な条件下に実施することができる。この図式は、Ｒ２―Ｏ―ＰＰＰが商品として入手しうる時に利用することができる。
反応図式３：
【化４２】
0004603163.tif 000023
【化４３】
0004603163.tif 000024
ここにおいて、ＤＭＦはジメチルホルムアミドであり、ＭeＯＨはメタノールである。
【００３９】
この反応図式３は、Ｄ．Ｇ．ＫＮＯＲＲＥらの「ＡＴＰガンマ誘導体の合成のための一般的方法（Ｇｅｎｅｒａｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ＡＴＰ  ｇａｍｍａ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）」、Ｆｅｂｓ  ＬＥＴＴＥＲＳ，１９７６，７０，１０５−１０８に記載されているものと同様な条件下において実施することができる。
【００４０】
この反応図式３は、Ｒ２がカルボジイミドに反応性のある官能基（カルボキシレート、トリホスフェート等）を含んでいる時には利用できない。これに対して、Ｒ２―Ｏ―ＰＰＰが商品として入手可能である時にはこれは有利である。
【００４１】
Ｒ２それ自体が、式：
【化４４】
0004603163.tif 000025
のハロヒドリン基である特別な場合、次の反応図式を用いることができる：
【化４５】
0004603163.tif 000026
【化４６】
0004603163.tif 000027
【００４２】
この化合物（４'）は、式（４）の本発明による化合物の特別なケースである。
【００４３】
これらすべての反応において、アセトニトリルは、その他のあらゆる非プロトン性双極子溶媒（ジメチルホルムアミドＤＭＦ、ジメチルスルホキシドＤＭＳＯ等）と代えてもよいことに注目すべきである。
【００４４】
化合物（２)、(３)、及び（４'）の調製のためには、かつｎ≠２である場合、中間化合物（１０）の代わりに式：
【化４７】
0004603163.tif 000028
ここにおいてＡは塩素又は臭素である、
の対応塩化物又は臭化物化合物を用いることもできることに注目すべきである。
【００４５】
アルコール（９）は、商品として入手可能であり、あるいはアルケニルの有機マグネシウム化合物とホルムアルデヒド又は酸化エチレンとの間の良く知られているグリニャール反応によって容易に得ることができる。
【００４６】
式（４）の化合物を調製するために、あるいくつかの場合に用いうる第二変形例において、後の工程において、有機媒質中に可溶な塩、例えばＢu4Ｎ+の塩からの式（３）の本発明による化合物トリホスフェートと、化合物Ｒ２―Ｏ―Ｙ（ここにおいて―Ｏ―Ｙは脱離基であり、Ｒ２は、Ｒ２―Ｏ―Ｙが化合物（３）との反応によって式：
【化４８】
0004603163.tif 000029
の本発明による化合物を形成することができるように選ばれる有機又は無機置換基である）とを反応させてもよいであろう。
【００４７】
このようにして式（４）の化合物を形成しうるためには、化合物Ｒ２―Ｏ―Ｙは特に、ハロヒドリン官能基：
【化４９】
0004603163.tif 000030
に対して反応的であってはならない。
さらにはＲ２―Ｏ―Ｙは、式（４）の化合物を形成するためには、化合物（３）の末端リン酸塩に反応しなければならない。
【００４８】
式（３）の化合物とＲ２―Ｏ―Ｙとの反応は求核置換である。この反応は、アルキルとアルケンとから成る群から選ばれたＲ２の場合に特に可能であり、かつ有利である。Ｙは、Ｒ２―Ｏ―Ｙが求核置換によって化合物（４）を生じうるように選ばれる。Ｙは、例えばトシル、ブロシル、及びトリフリルから選ばれる。
【００４９】
従って本発明による化合物は、ニ官能性又は多官能性であってもよい。１つ又は複数のホスホハロヒドリン官能基は、リンパ球Ｔγ９δ２に対して求められている特異的抗原特性をもたらし、Ｒ２又はこの化合物のその他の官能基は、その他の特性、特に治療特性を示しうる。
【００５０】
式（１）に合致する複数のホスホハロヒドリン基を有する本発明の化合物の場合、式（５）のリン酸アルケン基の対応数及び対応化学構造を有する出発化合物から出発するか、あるいは式（３）の化合物を用いて、―Ｏ―Ｙ官能基の対応数を有する中間化合物Ｒ２―Ｏ―Ｙとこれとを反応させるだけでよい。
【００５１】
本発明はまた、特に式：
【化５０】
0004603163.tif 000031
ここにおいて、Ｘは、ヨウ素、臭素、及び塩素から選ばれるハロゲンであり、Ｒ１は、―ＣＨ3及び―ＣＨ2―ＣＨ3から選ばれ、
Ｃat+は、同じ化合物において同一又は異なる１つ（又は複数）の有機又は無機カチオン（これにはプロトンも含まれる）を表わし、
ｎは、２から２０の整数であり、
Ｒ３は、
式（１２）のハロヒドリン基；
式：
【化５１】
0004603163.tif 000032
のエポキシド基；
式：
【化５２】
0004603163.tif 000033
のアルケン基；
から選ばれ、
ｍは、１から２０の整数である、
の新規化合物ホスホハロヒドリンのβ−エステルにも関する。
【００５２】
これらの化合物（１４）を得るためには、まず次の最初の工程を実施する：
【化５３】
0004603163.tif 000034
【００５３】
ついで対称化合物（１４ａ）ジホスホジハロヒドリンを得るためには、次のように操作を行なう：
【化５４】
0004603163.tif 000035
【００５４】
非対称化合物α，β  ホスホジエステルハロヒドリン−アルケン（１４ｂ）を得るためには、次のように操作を行なう：
【化５５】
0004603163.tif 000036
【００５５】
非対称化合物α，β  ホスホジエステルハロヒドリン−エポキシド（１４ｃ）を得るためには、次のように操作を行なう：
【化５６】
0004603163.tif 000037
【化５７】
0004603163.tif 000038
【００５６】
本発明はまた、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２の活性化物質として、特に可変領域Ｖγ９及びＶδ２を含む受容体ＴＣＲを有する霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２の伝達物質の増殖及び／又は細胞毒性活性及び／又は生産の活性化物質としての本発明の化合物、特に式（２）の化合物の使用にも及んでいる。
【００５７】
本発明はまた、リンパ球Ｔγ９δ２を含みうる天然又は人工媒質における、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２に感受性がある細胞の処理のための本発明の化合物の使用にも及んでいる。この媒質中において、前記細胞をこれらのリンパ球Ｔγ９δ２と接触させることができ、この媒質は、本発明の化合物と適合性があるものである（すなわち少なくともあるいくつかの処理条件下においてこれのデグラデーションを引起しやすくない）。
【００５８】
「リンパ球Ｔγ９δ２に感受性がある細胞」とは、リンパ球Ｔγ９δ２から誘導されたエフェクター作用、すなわち：細胞死（リンパ球Ｔγδによる細胞破壊）；リンパ球Ｔγ９δ２（ＴＮＦ−α、ＩＮＦ−γ等）によって塩析されたサイトカインの受容：場合によってはリンパ球Ｔγ９δ２によって誘発された細胞増殖を受けやすいあらゆる細胞のことを言う。
【００５９】
従って本発明は、リンパ球Ｔγ９δ２の活性化方法、特にリンパ球Ｔγ９δ２の増殖及び／又はリンパ球Ｔγ９δ２の細胞毒性活性及び／又はリンパ球Ｔγ９δ２による伝達物質の生産の活性化方法であって、リンパ球Ｔ成長と適合性があるリンパ球Ｔγ９δ２を含む媒質中において少なくとも１つの本発明の化合物とこれらのリンパ球Ｔγ９δ２とを接触させる方法にも及んでいる。有利には本発明によれば、この媒質中においてリンパ球成長を引起すのに適した割合のインターロイキン、特にインターロイキン２（ＩＬ２）を媒質中に導入する。実際、リンパ球成長因子ＩＬ２の存在は、リンパ球Ｔの増殖を得るのに不可欠である。これらのリンパ球のうち、リンパ球Ｔγ９δ２のみが本発明の化合物によって活性化された。従ってこの成長因子は、リンパ球Ｔγ９δ２の増殖が求められている使用のための媒質中に存在しなければならない。このリンパ球成長因子は、天然の状態で予め存在することがあり、あるいは治療用又は非治療用の同じ組成物への本発明の化合物の組込みと同時に又は同時ではなく、媒質中に誘発又は導入することもできる。それにもかかわらず、リンパ球Ｔγ９δ２の増殖を伴わない活性化が求められているようなあるいくつかの使用法（例えば誘導された細胞毒性）の場合は、この成長因子の存在は有用ではない。
【００６０】
より詳しくは本発明は、これらのリンパ球Ｔγ９δ２を含むことができ、かつこの中でこれらの細胞をリンパ球Ｔγ９δ２と接触させることができる媒質中における、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２に感受性のある細胞を生産する病気の治療的又は予防的処理を行なうための治療用としての本発明の化合物の使用にまで及んでいる。
【００６１】
有利には本発明によれば、リンパ球Ｔγ９δ２のポリクローナル増殖の活性化をもたらす媒質中のある濃度で、少なくとも１つの本発明の化合物を用いる。この媒質は、ヒトの血液、ヒトではない霊長類の血液、ヒトの血液の抽出物、ヒトではない霊長類の血液の抽出物から選ぶことができる。
【００６２】
前記媒質は体外のものであってもよく、従って本発明の前記活性化方法は、例えばリンパ球Ｔγ９δ２又はこれらの特性の研究のため、又は診断目的のために、特に研究所で用いることができる体外細胞処理である。本発明はまた、体外（生体外）診断用組成物において、少なくとも１つの本発明の化合物を含むことを特徴とする組成物にも及んでいる。
【００６３】
前記媒質はまた、体内のものであってもよく、その場合リンパ球Ｔγ９δ２の活性化は治療用としての有用性を有する。
【００６４】
より詳しくは前記媒質は、霊長類の末梢血である。従って本発明は特に、霊長類特にヒトの末梢血のリンパ球Ｔγ９δ２の活性化方法であって、少なくとも１つの本発明の化合物のリンパ球Ｔγ９δ２を活性化させるのに適した量を投与する方法にも及んでいる。従って少なくとも１つの本発明の化合物を、一般的な方法によって、特に非経口的に末梢血中に投与する。
【００６５】
前記媒質はまた、治療すべき細胞部位であってもよく、少なくとも１つの本発明の化合物を、処理すべき細胞部位と直接接触させて投与する（局所投与）。
【００６６】
このようにして本発明は特に、ガン、感染症、特にマイコバクテリア病（ハンセン病、結核等）；寄生虫症（マラリア）；免疫不全症候群の病気（エイズ等）から成る群に属する霊長類の病気の治療のための、本発明の化合物の治療用の使用にも及んでいる。本発明によれば、末梢血中及び／又は処理すべき細胞部位上に、リンパ球Ｔγ９δ２を活性化させるのに適した量の少なくとも１つの本発明の化合物を放出させるのに適した治療用組成物を投与する。実際、リンパ球Ｔγ９δ２を活性化させる特性を有する組成物が、有利にはこれらの病気の治療に用いうることが、前記先行技術において一般的に証明されている。
【００６７】
従来からすべての文献において、「治療」又は「治療用」という用語は、治療的処理又は手当てのみならず、予防的処理（予防）、例えばワクチン接種、並びに体内診断（診断を目的としての投与）をも包含する。実際、リンパ球Ｔγ９δ２を活性化させることによって、本発明は免疫刺激処理を可能にし、これは、リンパ球Ｔγ９δ２に感受性がある病原細胞の発達を妨げることによる予防的なものとしても、リンパ球Ｔγ９δ２に感受性がある病原細胞の破壊を誘発することによる治療的なものとしても有利でありうる。
【００６８】
従って本発明は、少なくとも１つの本発明の化合物を含む治療用組成物に及んでいる。より詳しくは本発明は、特に末梢血との接触によるか、あるいは少なくとも１つの本発明の化合物の局所投与により、特に上記病気の予防的又は治療的処理のために、霊長類に投与するのに適した量を含む治療用組成物に関する。本発明の組成物は、免疫刺激性組成物又はワクチンであってもよく、本発明の化合物は、リンパ球Ｔγ９δ２を活性化させる抗原である。
【００６９】
有利には本発明によれば、この治療用組成物は、この組成物が投与されることになっている媒質中に、リンパ球成長を引起すのに適した量のインターロイキン、特にインターロイキン２を含んでいることを特徴とする。
【００７０】
本発明の治療用組成物は、一般的方法によって、特に非経口的に霊長類の末梢血中に直接、リンパ球Ｔγ９δ２を活性化させるのに適した量の少なくとも１つの本発明の化合物及び１つ又は複数の適切な賦形剤と共に投与するのに適したガレノス形態で調製することができる。本発明の化合物の活性濃度の非常に低い値（１から１００ｎＭ程度）を考慮に入れると、このような投与は、毒性のリスクなしに考えることができる。
【００７１】
本発明による治療用組成物はまた、リンパ球Ｔγ９δ２に感受性のある細胞との直接接触によって、その局所投与に適切なガレノス形態で調製することもできる。
【００７２】
本発明の治療用組成物のガレノス形態は、選ばれた投与経路によって、従来のガレノス製剤技術によって製造される。本発明の化合物の量及び濃度、及び薬用量は、リンパ球Ｔγ９δ２に対する本発明の化合物の生物活性、治療される個人、関連する病気、及び求められている生物学的作用を考慮して、治療される病気の既知の化学治療学的処理を参照して決定される。
【００７３】
有利には本発明によれば、１ｎＭから１０ｎＭの濃度において生物活性な化合物の場合、患者の体重１ｋｇあたり０.１μｇから１００μｇ、特に１μｇから１０μｇの量の本発明の化合物を一般的な方法で投与する。
【００７４】
さらには本発明の化合物は、１００μＭまで、すなわち生物活性濃度の１０5倍程度であってもよい濃度についてでさえ、一般的毒性はまったく示さないことが試験管内で証明された。さらには本発明の化合物が属する分子の生化学カテゴリー（ホスホエステル）は、あらゆる生きた細胞において見出される代謝化合物の１つの族を構成することは知られている。従って本発明の化合物は、リンパ球Ｔγ９δ２に対して、これらの生物活性によって誘発されたもの以外の毒性作用は示さない。
【００７５】
さらには本発明のいくつかの化合物は、腎臓及び尿経路によるこれらの除去と適合するのに十分なほど低い分子量（特に５００以下）を示す。
【００７６】
１ｋｇの霊長類の場合、注射可能な本発明の治療用組成物の１つの配合例は次のとおりである：pＨ７で３７℃にされた、滅菌リン酸塩緩衝液０.５ｍｌ中に希釈された３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェート（ＩＨＰＰ）５μｇ。
【００７７】
このようにして、動物１ｋｇに対してＩＨＰＰ（式（２）の化合物）５μｇを投与する。これは、ＩＨＰＰの生物活性濃度よりも高くなるように適合させられた循環血中の濃度に相当する（１０ｎＭのＩＨＰＰの濃度は、約５ｎｇ／ｍｌに相当する）。
【００７８】
従来から用いられている製薬的に許容しうる賦形剤又はその他の添加剤の大部分は、本発明の化合物と化学的に適合性があるものであることに注目すべきである。
【００７９】
本発明の治療用組成物はまた有利には、特に相乗作用をもたらすために、１つ又は複数のその他の活性成分を含んでいてもよい。特に本発明の化合物は、ワクチンのアジュバントの代わりになりうる。従って本発明のワクチン治療用組成物は、リンパ球Ｔγ９δ２を活性化するのに適した量の本発明の化合物が添加された既知のワクチン組成物から構成されている。これらのリンパ球Ｔγ９δ２は、直接これらの抗感染活性を発揮しうるだけでなく、従来のワクチン応答のエフェクターリンパ球Ｔを活性化することができるものであろう。
【００８０】
本発明の治療用組成物はまたそれ自体、リンパ球Ｔ成長と適合性がある媒質中において培養されている霊長類リンパ球Ｔγ９δ２を組込んでいてもよい。この組成物は従って、霊長類、あるいはより一般的には脊椎動物の治療に用いうる。脊椎動物の場合、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２の投与は、霊長類の前記リンパ球Ｔγ９δ２に対して免疫適合性条件下に実施されてもよい。本発明によるこのような組成物は、一般的な方法で、あるいは局所的によってでさえ、霊長類の前記リンパ球Ｔγ９δ２に感受性がある病原標的細胞と接触させて投与することができる。
【００８１】
本発明はまた、本発明の治療用組成物の製造のための、少なくとも１つの本発明の化合物の使用にまで及んでいる。より詳しくは本発明は、霊長類リンパ球Ｔγ９δ２に感受性のある細胞を生産するヒト又は脊椎動物の病気、特にガン、感染症、寄生虫症、及び免疫不全症候群の病気から成る群から選ばれる病気の予防的又は治療的処理のための、少なくとも１つの本発明の化合物の使用に関する。この点に関して、本発明はまた、上記のような病気の予防的又は治療的処理のための、霊長類特にヒトに、特に末梢血との接触により又は局所的に投与するための治療用組成物の製造用の少なくとも１つの本発明の化合物の使用にも及んでいる。
【００８２】
本発明は、リンパ球Ｔγ９δ２を活性化する特性を有する本発明の組成物、特に治療用組成物の製造方法であって、少なくとも１つの本発明の化合物を用いる方法にも及んでいる。
【００８３】
本発明はまた、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２に感受性がある病原細胞を生産するヒト又は脊椎動物の病気の予防的又は治療的処理のための治療用組成物の製造方法であって、少なくとも１つの本発明の化合物を用いる方法にも関する。本発明は特に、リンパ球Ｔγ９δ２に感受性がある細胞を生産する病気、特に上記群に属する病気の予防的又は治療的処理のための、特に末梢血との接触により又は局所的に霊長類に投与するための治療用組成物の製造方法であって、少なくとも１つの本発明の化合物を使用する方法に関する。
【００８４】
有利には本発明によれば、本発明の製造方法において、少なくとも１つの本発明の化合物と、霊長類のリンパ球Ｔγ９δ２を含みかつリンパ球Ｔ成長と適合性のある媒質とを、この媒質中のこれらのリンパ球Ｔγ９δ２を活性化させるのに適した量で接触させる。有利には本発明によれば、前記媒質は、霊長類の血液と霊長類の血液の抽出物とから選ばれる物質を含んでいる。従って、細胞治療的方法を実施することを可能にするような、活性化リンパ球Ｔγ９δ２を含む治療用組成物が得られる。
【００８５】
本発明の化合物は、ハロゲン化されているものであり、従ってこの唯一の理由から、天然のホスホ抗原、特に第ＷＯ９５／２０６７３号に記載されているように得られたＴｕｂａｇ１、Ｔｕｂａｇ２、Ｔｕｂａｇ３、及びＴｕｂａｇ４と呼ばれる分子には対応しえないことに注目すべきである。それにもかかわらず、例えばこれらの天然ホスホ抗原は、本発明によるホスホブロモヒドリンの化学的製造に用いられる臭素水によって劣化することが証明されている。従って本発明の化合物は天然抗原ではなく、同程度の濃度において、天然抗原の効率と同様であるか、さらにはこれより優れていることさえある効率を有するリンパ球Ｔγ９δ２の活性化合成抗原である。
【００８６】
同様に、アルキル又はアルケン基の存在が、ヒトのリンパ球Ｔγ９δ２を活性化するのに不可欠であると考察している第ＵＳ−５６３９６５３号によって示されている技術の状態とは逆に、本発明者らは、天然の生物学的化合物には存在していない元素であるハロゲンの添加によってアルケン結合を壊し、非常に低濃度において極端に強いリンパ球Ｔγ９δ２の活性化が得られることを確認したことにも注目すべきである。特にこの作用は、天然起源のホスホ抗原の作用よりも大きいことさえあることが確認されている。
【００８７】
実施例１：３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェート（ＢrＨＰＰ）の製造：
３−メチル−３−ブテン−１−イル−トシレート（イソペンテニルトシレート）の調製：
不活性雰囲気下の操作のために装備され、かつ入念に乾燥されたガラス製反応器に、磁気攪拌下、無水ジクロロメタン５ｍｌ中の４−(Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン（２.５５ミリモル−３１２ｍｇ）及び塩化トシル（２.３２ミリモル−４４２ｍｇ）を導入する。この混合物に、注射器によって、隔膜を介して、ジクロロメタン約１ｍｌ中溶液のイソペンテノール（２.３２ミリモル−２００ｍｇ）をゆっくりと添加する。この反応を、シリカ薄層クロマトグラフィーによって続行する（シリカゲル６０Ｆ−２５４−溶離液：ペンタン／酢酸エチル８５／１５ｖ／ｖ−Ｒｆ（生成物）＝０.４及びＲｆ（ＴsＣl）＝０.５）。窒素雰囲気下約３時間の攪拌後、多量なヘキサン（約１００ｍｌ）中に反応混合物を希釈する。これによって白色沈積物の即時形成が引き起こされる。ついでこの混合物を濾過し、減圧下の蒸発によってこの濾過物を濃縮する。この溶液をジエチルエーテルで希釈し、再び濾過する。溶媒の蒸発後、黄色っぽい油が得られる。この生成物を、シリカ分取カラムクロマトグラフィーによって精製する（シリカゲル６０−溶離液：ペンタン／酢酸エチル８５／１５）。このようにして３−メチル−３−ブテン−１−イル−トシレート（１.９８ミリモル−４７５ｍｇ）（単離収率８５％）が得られる。化合物（無色油）を、＋４℃で無水媒質中に保存する。
【００８８】
トリス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノピロホスフェートの調製：
ニナトリウムジヒドロゲノピロホスフェ−ト（Ｎa2Ｈ2Ｐ2Ｏ7）の塩（４.５ミリモル−１ｇ）を、アンモニア溶液１０ｍＭによってpＨ９に予め調節された冷たい脱イオン水１０ｍｌ中に溶解する。この溶液を、カチオン性樹脂ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０−ＷＸ８−２００（Ｈ+形態）を含むカラム（１９ミリ当量−４ｇ）上に通す。この酸性溶液を、pＨ９で冷たい脱イオン水１５から２０ｍｌで溶離する。回収した溶液を、４０％水酸化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（Ｂu4ＮＯＨ）の水溶液によって、pＨ７.３で直ちに滴定する。凍結乾燥後、吸湿性白色固体形態のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウム塩４ｇが得られる。この塩を無水アセトニトリル１０ｍｌ中に溶解する。ついで溶液を濾過し、次に減圧下、溶媒の連続蒸発によって乾燥する。このようにして、純度９８％のトリス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノピロホスフェートの溶液が得られる（イオンクロマトグラフィー−ＨＰＡＥＣによる分析から導き出された結果）。０.５から１Ｍの塩濃度を得るために容積を調節する。この溶液を、−２０℃で無水媒質中に保存する。
【００８９】
３−メチル−３−ブテン−１−イル−ジホスフェート（イソペンテニルピロホスフェート）の調製：
入念に乾燥されたガラス製反応器に、窒素雰囲気下、無水アセトニトリル中０.７Ｍ（１.７５ミリモル）のトリス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノピロホスフェート溶液２.５ｍｌを導入する。反応器を氷浴で冷却し、ついで磁気攪拌下、注射器によって、最小限のアセトニトリル（０.５から１Ｍ）中溶液の３−メチル−３−ブテン−１−イル−トシレート（０.７０ミリモル−１６８ｍｇ）を添加する。トシレートの導入後、氷浴を取り去り、ついでこの反応を、攪拌下、周囲温度に放置する。ついで反応の進行を、イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）によって続行する。約３時間後、溶媒を減圧下に蒸発させ、反応媒質を、水／２−プロパノール９８／２（ｖ／ｖ）混合物３ｍｌ中に再び溶解する。この溶液を、カチオン性樹脂ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０−ＷＸ８−２００（１９ミリ当量−４ｇ）（ＮＨ4+形態）を含むカラム上に通し、ついで水（pＨ９）／２−プロパノール９８／２（ｖ／ｖ）混合物１０ｍｌで溶離する。凍結乾燥後、粗生成物を含む白色固体を回収する。
【００９０】
精製：
ピロホスフェート及びアンモニウムモノホスフェートの痕跡を、アンモニウムヒドロゲノカーボネートの存在下の共沈によって媒質から分離する。先行工程において得られた粗生成物を、０.１Ｍアンモニウムヒドロゲノカーボネート４ｍｌ中に溶解し、これを２５ｍｌの遠心分離管に移す。ついで、白色沈殿物の形成に至るまで、数分間混合物を激しく攪拌して（渦巻き攪拌）、アセトニトリル／２−プロパノール１／１（ｖ／ｖ）混合物１０ｍｌでこの溶液を処理する。ついでこの管を、１０℃で５分間、２０００回／分で遠心分離する。上澄み液（この中で有機塩が抽出される）を、＋４℃に保存する。アセトニトリル／２−プロパノール混合物７ｍｌが添加されている０.１Ｍアンモニウムヒドロゲノカーボネート３ｍｌ中に沈殿物を再び溶解して、この手順を繰返す。これら２つの上澄み液を再び集め、溶媒を真空蒸発させる。油性液体が得られ、これを＋４℃に保存する。
【００９１】
アンモニウムトシレートを、クロロホルム／メタノール１／１（ｖ／ｖ）溶媒での抽出によって、反応媒質から分離する。先行工程の油性液体を、pＨ９で４ｍｌの水中に溶解し、従来の抽出手順を３回繰返してこの溶媒１ｍｌで処理する。ついで減圧下３０℃での蒸発によって溶媒痕跡を水相から除去する。イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）による分析に基づいて、３−メチル−３−ブテン−１−イル−ジホスフェートの８３％収率（０.５８ミリモル−１７２ｍｇ）が得られる。この溶液を−２０℃で保存する。生成物は、それぞれ２０ｍＭ、４０ｍＭ、１００ｍＭ、ついで２００ｍＭのアンモニウムヒドロゲノカーボネートの水溶液で連続的に溶離された、３６０ｍｇから１０グラムのカートリッジＳｅｐ−Ｐａｋ  Ａｃｃｅｌｌ  Ｐｌｕｓ  ＱＭＡ（Ｗａｔｅｒｓ）（登録商標）上のアニオン交換クロマトグラフィーで、ついで溶離フラクションのクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）で、必要に応じてあとで精製する。精製された生成物に対応するフラクションを再び集め、ついで凍結乾燥する。
【００９２】
３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェートの調製：
中性pＨの脱イオン水２ｍｌ中溶液のイソペンテニル−ピロホスフェート（アンモニウム塩）（０.３４ミリモル−１００ｍｇ）を、排気用オイルミストセパレーター下、周囲温度で飽和水溶液（０.１８Ｍ）としての臭素１.９ｍｌ（０.３４ミリモル）によって処理する。臭素水を、臭素水の脱色に至るまで周期的に攪拌しながら漸進的に、好ましくはアンモニウム塩の冷たい溶液上に添加する。臭素がわずかな過剰で添加された場合（持続的な黄色の着色）、この溶液をガラスフラスコに移し、ついで色が消えるまで減圧下（回転蒸発器）数分間３０℃の温度にしておく。生成物３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェートが定量的に発生する（０.３３ミリモル―１３０ｍｇ）。この結果は、イオンクロマトグラフィー−ＨＰＡＥＣによる分析から導き出される。生物学的テストの実施のために、このようにして得られた水溶液を濾過し、ついでカチオン樹脂カラム上の通過によって中和する。カートリッジＯｎＧｕａｒｄ（登録商標)−Ｈ上に固定されたカートリッジＯｎＧｕａｒｄ−Ａｇから構成された装置ＤＩＯＮＥＸ（登録商標）を用いて、臭化物イオンを溶液から除去することができる。この装置によって、この溶液のハロゲン化物イオンを選択的に保持することができる。生物学的テストの実施のために、この生成物の水溶液を、０.２μｍのフィルター上の濾過によって滅菌し、−２０℃で保存する（好ましくはわずかに酸性の中性pＨを用いる）。生体内で実施されたテストの場合、これらの溶液を、脱イオン水カラム２容によって溶離されたカチオン性樹脂ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０−ＷＸ８−２００（Ｎa+形態）のカラム上に予め通過させる。
【００９３】
実施例２：３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェート（ＩＨＰＰ）の製造：
ヨウ素液の調製：
０.５から１ｍＭ程度のヨウ素液の溶液を、脱イオン水の溶液中のいくつかのヨウ素の結晶の長い（約１５分）音波処理及び濾過によって調製する。より多量なものに関する試験の場合、当初の水溶液にわずかな割合のアルコールを添加して、より濃縮されたヨウ素溶液を得ることもできる。ついで変色指示薬として澱粉を用いて、ヨウ素液をチオ硫酸ナトリウムで滴定する。
【００９４】
３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェートの調製：
中性pＨの水性媒質又はヒドロアルコール媒質中のアンモニウム塩の形態における、実施例１に従って調製されたイソペンテニルピロホスフェート１マイクロモル（ミリモル溶液１ｍｌ）を、周囲温度で水溶液としてのヨウ素１マイクロモル（０.７ｍＭのヨウ素液１.４３ｍｌ）の添加によって処理する。この溶液を３０分間周囲温度にしておき、ついで周期的に激しい攪拌を実施しながら３０分間＋４℃にしておく。ヨウ素液の脱色後、生成物３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェートが定量的に発生する（約２.５ｍｌ中の１マイクロモル）。ついでこの溶液を、生物学的テストの実施及び／又は生体内試験の実施のために実施例１のように処理し、これを−２０℃で保存する。
【００９５】
実施例３：３−(クロロメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェート（Ｃ１ＨＰＰ）の製造：
塩素水の調製：
塩素水溶液を、脱イオン水溶液中における気体塩素のバブリングによって調製する。ついでこの溶液を、過剰なヨウ化カリウムの存在下、変色指示薬として澱粉を用いて、チオ硫酸ナトリウムで滴定する。
【００９６】
３−(クロロメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェートの調製：
中性ｐＨの水性媒質又はヒドロアルコール媒質中のアンモニウム塩の形態における、実施例１に従って調製されたイソペンテニルピロホスフェート１マイクロモル（ミリモル溶液１ｍｌ）を、周囲温度で水溶液としての塩素１マイクロモル（１４ｍＭの塩素水７２μｌ）の添加によって処理する。周期的攪拌を行ないながら３０分間周囲温度にした後、生成物３−(クロロメチル)−３−ブタノール−１−イル−ジホスフェートが定量的に発生する（ここでは約１.１ｍｌ中の１マイクロモル）。ついでこの溶液を、生物学的テストの実施及び／又は生体内試験の実施のために実施例１のように処理し、これを−２０℃で保存する。
【００９７】
実施例４：３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル−トリホスフェート（ＢrＨＰＰＰ）の製造：
テトラキス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノトリホスフェートの調製：
五ナトリウムトリポリホスフェート六水和物（Ｎa5Ｐ3Ｏ10・６Ｈ2Ｏ）の塩（２.１ミリモル−１ｇ）を、１０ｍＭアンモニア溶液によってpＨ９に予め調節されている冷たい脱イオン水１０ｍｌ中に溶解する。この溶液を、カチオン性樹脂ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０−ＷＸ８（Ｈ+形態）（２１ミリ当量−４.４ｇ）を含むカラム上に通過させる。酸性溶液を、pＨ９で冷たい脱イオン水２０から２５ｍｌで溶離する。回収した溶液を、４０％水酸化テトラ−ｎ−ブチルアンモニム（Ｂu4ＮＯＨ）の水溶液によって直ちにpＨ７.０で滴定する。凍結乾燥後、吸湿性白色固体形態のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムの塩２.５ｇが得られる。この塩を無水アセトニトリル１０ｍｌ中に溶解する。ついでこの溶液を濾過し、次に減圧下溶媒の連続蒸発によって乾燥する。このようにして、純度９５％のテトラキス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノトリホスフェートの溶液が得られる（イオンクロマトグラフィー−ＨＰＡＥＣによる分析から導き出された結果）。０.５から１Ｍの塩濃度を得るために容積を調節する。この溶液を、−２０℃で無水媒質中に保存する。
【００９８】
３−メチル−３−ブテン−１−イル−トリホスフェート（イソペンテニルトリホスフェート）の調製：
３−メチル−３−ブテン−１−イル−ジホスフェートの調製のために記載された手順（実施例１）に従って、窒素雰囲気下、２４時間無水アセトニトリル４ｍｌ中の実施例１に従って調製された３−メチル−３−ブテン−１−イル−トシレート（１ミリモル−２４０ｍｇ）と、テトラキス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノトリホスフェートのモル溶液２ミリモルとを反応させる。３−メチル−３−ブテン−１−イル−ジホスフェートに用いられたものと類似した沈殿−抽出による精製手順を用いて、イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）による分析に基づいて、３−メチル−３−ブテン−１−イル−トリホスフェートの７４％収率（０.７４ミリモル−２９２ｍｇ）が得られる。本発明のホスホハロヒドリン化合物の調製のためには、生物学的テストの枠内において、この段階で得られた生成物の１つのフラクションを用い、複数のクロマトグラフィー通過を積み重ねて、これを、ＩｏｎＰａｃ（登録商標）ＡＳ１１カラム上のＨＰＡＥＣによって精製する。このようにして、アンモニウム塩形態の３−メチル−３−ブテン−１−イル−トリホスフェートの中性pＨのミリモル水溶液約２ｍｌを調製する。
【００９９】
３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル−トリホスフェートの調製：  イソペンテニルトリホスフェート３００ナノモル（ミリモル溶液３００μｌ）を、周囲温度において、飽和水溶液としての臭素３００ナノモル（１８０ｍＭ臭素水１.７μｌ）の添加によって処理する。臭素水のほぼ瞬時の脱色が観察される。この混合物の攪拌及び臭素水の脱色（ほぼ瞬時）後、生成物３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル−トリホスフェートが定量的に発生する（ミリモル溶液３００μｌ）。ついでこの溶液を、生物学的テストの実施及び／又は生体内試験の実施のために実施例１のように処理し、これを−２０℃で保存する。
【０１００】
実施例５：３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル−トリホスフェート（ＩＨＰＰＰ）の調製：
実施例４に従って調製されたイソペンテニルトリホスフェート３００ナノモル（ミリモル溶液３００μｌ）を、実施例２に従って調製された０.７ｍＭのヨウ素液４２９μｌの添加により、中性pＨの水性媒質又はヒドロアルコール媒質中で処理する。この溶液を、周期的に激しい攪拌を実施しながら３０分間周囲温度に放置する。ヨウ素液の脱色後、生成物３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル−トリホスフェートが定量的に発生する（４１１μＭ溶液７２９μｌ）。ついでこの溶液を、生物学的テストの実施及び／又は生体内試験の実施のために実施例１のように処理し、これを−２０℃で保存する。
【０１０１】
実施例６：α,γ  ジ−[３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル]−トリホスフェート（ジＢrＨＴＰ）の製造：
α,γ  ジ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル]−トリホスフェートの調製：  ３−メチル−３−ブテン−１−イル−ジホスフェートの調製について記載された手順（実施例１）に従って、窒素雰囲気下、２４時間無水アセトニトリル４ｍｌ中３−メチル−３−ブテン−１−イル−トシレート（実施例１に従って調製されたもの）（１ミリモル−２４０ｍｇ）と、テトラキス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノトリホスフェート（実施例４に従って調製されたもの）のモル溶液０.５ミリモルとを反応させる。３−メチル−３−ブテン−１−イル−ジホスフェートに用いられたものと類似の沈殿―抽出による精製手順を用いて、イオンクロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ）による分析に基づいて、α,γ  ジ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル]−トリホスフェートの８１％収率（０.４ミリモル−１７８ｍｇ）が得られる。本発明のホスホハロヒドリン化合物の調製のためには、生物学的テストの枠内において、この段階で得られた生成物の１つのフラクションを用い、複数のクロマトグラフィー通過を積み重ねて、ＩｏｎＰａｃ（登録商標）ＡＳ１１カラム上のＨＰＡＥＣによって、これを精製する。各クロマトグラフィー通過前、及びこの生成物のよりよい単離のために、精製すべきフラクションのアルカリホスファターゼ酵素処理を実施して、この反応の副生成物であるイソペンテニルトリホスフェートを劣化させる。このようにして、アンモニウム塩の形態のα,γ  ジ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル]−トリホスフェートの中性pＨのミリモル水溶液約１ｍｌを調製する。
【０１０２】
α,γ  ジ−[３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル]−トリホスフェートの調製：
α,γ  ジ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル]−トリホスフェート２５０ナノモル（ミリモル溶液２５０μｌ）を、周囲温度において、飽和水溶液としての臭素２５０ナノモル（１８０ｍＭ臭素水１.４μｌ）の添加によって処理する。混合物の攪拌及び臭素水の脱色（ほぼ瞬時）後、生成物α,γ  ジ−[３−(ブロモメチル)−３−ブタノール−１−イル]−トリホスフェートが定量的に発生する（ミリモル溶液２５０μｌ）。ついでこの溶液を、、生物学的テストの実施及び／又は生体内試験の実施のために実施例１のように処理し、これを−２０℃で保存する。
【０１０３】
実施例７：α,γ  ジ−[３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル]−トリホスフェート（ジＩＨＴＰ）の製造：
実施例６に従って調製されたα,γ  ジ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル]−トリホスフェート２５０ナノモル（ミリモル溶液２５０μｌ）を、実施例２に従って調製された０.７ｍＭのヨウ素液３５８μｌの添加によって中性pＨの水性媒質又はヒドロアルコール媒質中において処理する。周期的に激しい攪拌を実施しながら、この溶液を３０分間周囲温度に放置する。ヨウ素液の脱色後、生成物α,γ  ジ−[３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル]−トリホスフェートが定量的に発生する（４１１μＭ溶液６０８μｌ）。ついでこの溶液を、生物学的テストの実施及び／又は生体内試験の実施のために実施例１のように処理し、これを−２０℃で保存する。
【０１０４】
実施例８：ウリジン  ５'−トリホスフェート  γ−[３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル］の製造：
ウリジン  ５'−トリホスフェート  γ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル］の調製：
この生成物は、ＫＮＯＲＲＥ  Ｄ．Ｃ．らの「ＡＴＰガンマ誘導体の合成のための一般的方法」、Ｆｅｂｓ  ＬＥＴＴＥＲＳ，１９７６，７０−１，１０５−１０８に記載されている手順に従って、ウリジン−５'−トリホスフェート（ＵＴＰ）（トリエチルアンモニウム塩）４０μモルから、過剰のイソペンテノールの存在下に調製する。本発明のホスホハロヒドリン化合物の調製のためには、生物学的テストの枠内において、得られた生成物の１つのフラクションを、複数のクロマトグラフィー通過を積み重ねて、ＩｏｎＰａｃ（登録商標）ＡＳ１１カラム上のＨＰＡＥＣによって精製する。各クロマトグラフィー通過前、及びこの生成物のよりよい単離のために、精製すべきフラクションのアルカリホスファターゼ酵素処理を実施して、副生成物（ＵＤＰ及びＵＭＰ）及び反応しなかったＵＴＰを劣化させる。このようにして、アンモニウム塩形態のウリジン  ５'−トリホスフェート  γ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル］の中性pＨの３００μＭ水溶液約５００μｌを調製する。
【０１０５】
ウリジン  ５'−トリホスフェート  γ−[３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル］の調製：
アンモニウム塩形態のウリジン  ５'−トリホスフェート  γ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル］７５ナノモル（３００μＭ溶液２５０μｌ）を、実施例２に従って調製された０.７ｍＭのヨウ素液１０８μｌの添加によって中性pＨの水性媒質中で処理する。周期的に激しい攪拌を実施しながら、この溶液を、周囲温度に２０分間放置する。ヨウ素液の脱色後、生成物ウリジン  ５'−トリホスフェート  γ−[３−(ヨードメチル)−３−ブタノール−１−イル］が定量的に発生する（２００μＭ溶液約３６０μｌ）。ついでこの溶液を、生物学的テストの実施及び／又は生体内試験の実施のために実施例１のように処理し、これを−２０℃で保存する。
【０１０６】
実施例９：α,γ  ジ−[３−ブロモメチル−３−ブタノール−１−イル]−ジホスフェートの製造：
実施例６に記載されたものと類似の手順に従ってこの生成物を調製する。テトラキス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノトリホスフェートを、中間化合物：α,γ  ジ−[３−メチル−３−ブテン−１−イル]−ジホスフェートの調製のために、トリス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）ヒドロゲノピロホスフェート（実施例１に従って調製されたもの）と代える。
【０１０７】
実施例１０：培養リンパ球Ｔγ９δ２の増殖の刺激による抗原活性の測定
健康な成人のヒトドナーの血液から分離され、かつ適切な培養媒質（ＲＰＭＩ  １６４０＋１０％不活性化ヒト血清、及び５０Ｕ／ｍｌヒトインターロイキン２（ｈＩＬ−２））中の１から５％のリンパ球Ｔγ９δ２を当初から含む、１ｍｌ中１０6全リンパ球Ｔの試験管培養中に、この試験において特定されている最終濃度にされた、本発明の化合物の水溶液２０マイクロリットルを添加する。４日間の培養後、培養媒質１ミリリットルあたり５０ＵのｈＩＬ−２を添加する。８日後にこれらの細胞を数え上げ、回収し、リン酸塩緩衝液によって洗浄する。Ｔγ９δ２型の細胞は、通常の商用反応体（蛍光モノクローナル抗体）でのマーキングによって、及びフラックスサイトメトリー分析によって決定されたこれらの割合によって、この培養中において暴露される。本発明の化合物を含んでいない培養物に対する、本発明の化合物の存在下における培養物中の細胞Ｔγ９δ２の割合の変化、あるいは数的増加を考慮に入れる。培養された本発明の化合物の対数尺における濃度（図１の横座標）に応じたこれらの値（図１における縦座標）の曲線をトレースして、これらの試験の結果を表わす。
【０１０８】
図１は、実施例１（ＢｒＨＰＰ）及び実施例２（ＩＨＰＰ）において得られた本発明の化合物を用いて得られた結果を示しており、点線は、負の対照（本発明の化合物の不存在下に得られた値）を示している。
【０１０９】
次の表Ｉは、本発明による様々な化合物を用いた場合のＤＥ５０の値、すなわち上記のように得られたポリクローナルリンパ球増幅の最大効果の５０％有効用量を示している。
【０１１０】
【表１】
0004603163.tif 000039
【０１１１】
実施例１１：誘発された細胞毒性の刺激による抗原活性の測定：
誘発された細胞毒性テストに従って測定されたリンパ球Ｔγ９δ２のクローンの特異的細胞毒性活性を比較する。この活性は、第ＷＯ９５／２０６７３号によって記載されているように得られたホスホ抗原Ｔｕｂａｇ３（図２の黒い菱形で表わされた曲線）、実施例１において得られた本発明の化合物ＢｒＨＰＰ（図２の黒い四角で表わされた曲線）、実施例２において得られた本発明の化合物ＩＨＰＰ（図２の白丸で表わされた曲線）、及びイソペンテニルピロホスフェートＩＰＰ（図２の黒い三角形で表わされた曲線）の漸減する濃度でシミュレートされている。
【０１１２】
本発明の化合物は、天然ホスホ抗原Ｔｕｂａｇ３の濃度と同程度の１０ｎＭ程度の濃度において活性であるが、一方で、先行技術のＩＰＰは３μＭ程度、すなわち３００倍も高い濃度で活性であることが確認される。
【０１１３】
実施例１２：ＢrＨＰＰ（ナトリウム塩）の毒性：
３０ｇのマウス８匹に、１ｍｇのＢrＨＰＰ（ナトリウム塩）を含むＰＢＳ緩衝液３００μｌの静脈内注射（尾部静脈）を受けさせた。ショックの兆候も発熱の兆候も見られない。８匹のマウスは３０日間生存し、調査中にこれらのマウスの体重の有意な変動はまったく見られない。従って毒性は、動物１キログラムあたりＢrＨＰＰ（Ｎa+）３３.４ｍｇの用量について１２.５％よりも低い。
【０１１４】
実施例１３：ＢrＨＰＰ（ナトリウム塩）の発熱性：
この試験は、規格ＩＳＯ−１０９９３−１１（１９９３）及びＵＳＰＸＸＩＩＩによって規定されているプロトコルに従って実施する。３匹のウサギへの４００μｇ／ｍｌ（すなわち１キログラムあたり抽出物１０ｍｌ）のＢrＨＰＰ（ナトリウム塩）の静脈内投与後のウサギにおける発熱反応の評価である。注射の３０分後に開始して、３時間の間３０分毎に体温を測定する。１匹のウサギだけが、０.５℃（最小の閾値）より大きい体温上昇を示した。４００μｇ／ｍｌの溶液の注射の時、これらのウサギは副作用を示し、これは筋肉の震えとなって現れた。１：４０に希釈された同じ溶液、すなわち１０μｇ／ｍｌの溶液の注射を１９分間で受けたもう１匹のウサギは、この注射に対してまったく反応を示さなかった。
【０１１５】
実施例１４：マカークにおける生体内ＢrＨＰＰ（ナトリウム塩）の生物活性：
これらの試験は、Ｚｏｌｅｔｉｌ（ｚｏｌａｚｅｐａｍ）(登録商標）１５ｍｇ／ｋｇ−アトロピン０.０１ｍｇ／ｋｇによって麻酔されているサルＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（３から４ｋｇのオス）に対して実施される。ＢrＨＰＰ（Ｎa+形態）のロットは、予め純度が確かめられており（＞９９％）、定量化されており、実施例１２の発熱性テストによって評価されている。これらの動物に、リンゲル―ラクテート１０ｍｌ中に希釈された０.１ｍｇ／ｋｇのＢrＨＰＰ（すなわち動物１匹あたり０.３から０.４ｍｇ）を用いて迅速な静脈内注射を行なう（伏在静脈中に２から５分）。同様に、動物１匹あたり９０,０００単位のインターロイキン２（ＩＬ２）を皮下注射する。４日間１日あたり１回これらの注射を行なう。対照動物は、４日間１日あたり１回のＩＬ２皮下注射しか受けない。
【０１１６】
様々な動物の間で、次の３つの状況において、総リンパ球のうちリンパ球Ｔγ９δ２の割合を比較する：
−  動物の血液、
−  ＢrＨＰＰのみを用いた動物から採取された総リンパ球の培養中において、
−  ＢrＨＰＰ＋ＩＬ２を用いた動物から採取された総リンパ球の培養中において。
これらの結果を次の表ＩＩに示す。
【０１１７】
【表２】
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【０１１８】
ＢrＨＰＰのみの単一又は反復静脈内注射は、サルのリンパ球Ｔγ９δ２を予備活性化するが、この動物の場合、これらの成長を刺激しないことが確認される。ＢrＨＰＰのみの注射は、リンパ球Ｔγ９δ２の予備活性化状態をもたらすが、これは特にこれらの細胞表面におけるＩＬ２の成長因子の受容体の発現によって現れる。これに対して、皮下ＩＬ２の存在下におけるＢｒＨＰＰの静脈内注射は、これらの同じ細胞を予備活性化し、生体内におけるこれらの成長を引き起こす。成長因子ＩＬ２のみの注射は、リンパ球Ｔγ９δ２の特異的応答を引き起こさない。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例１０において得られた結果を示すグラフである。
【図２】  実施例１１において得られた結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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