(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶である、アジスロマイシンの粗結晶。
【請求項２】
前記アジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、１７９．５ppmの化学シフトを有する1つのピークを含む13C固体NMRスペクトルを有することを特徴とする、請求項１に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項３】
前記13C固体NMRスペクトルが、１７８．６ppmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項２に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項４】
前記13C固体NMRスペクトルが、５８．０ppmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項３に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項５】
前記13C固体NMRスペクトルが、１７．２ppmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項４に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項６】
前記13C固体NMRスペクトルが、１０．１ppmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項５に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項７】
前記13C固体NMRスペクトルが、９．８ppmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項６に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項８】
前記13C固体NMRスペクトルが、９．３pmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項７に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項９】
前記13C固体NMRスペクトルが、７．９ppmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項８に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項１０】
前記13C固体NMRスペクトルが、６．６ppmの化学シフトを有するピークをさらに含む、請求項９に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【請求項１１】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、８２重量％以上の純度を有する、請求項１に記載の粗結晶。
【請求項１２】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、８４重量％以上の純度を有する、請求項１１に記載の粗粗晶。
【請求項１３】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、８６重量％以上の純度を有する、請求項１２に記載の粗結晶。
【請求項１４】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、８８重量％以上の純度を有する、請求項１３に記載の粗結晶。
【請求項１５】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、９０重量％以上の純度を有する、請求項１４に記載の粗結晶。
【請求項１６】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、９２重量％以上の純度を有する、請求項１５に記載の粗結晶。
【請求項１７】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、９４重量％以上の純度を有する、請求項１６に記載の粗結晶。
【請求項１８】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、９６重量％以上の純度を有する、請求項１７に記載の粗結晶。
【請求項１９】
前記実質的に純粋なアジスロマイシン一水和物半−エタノール溶媒和物の結晶が、９８重量％以上の純度を有する、請求項１８に記載の粗結晶。
【請求項２０】
以下のステップ：
（ａ）アジスロマイシンを重量基準で１〜３容のエタノールに５０〜７０℃の温度で溶解し；
（ｂ）ステップ（ａ）のアジスロマイシンを前記エタノールに完全に溶解し；
（ｃ）上記溶液を周囲以下の温度に冷却して、沈殿を生じさせ；
（ｄ）アジスロマイシン結晶を集め；そして、
（ｅ）前記アジスロマイシン結晶を乾燥させて、請求項１に記載のアジスロマイシンの粗結晶を得る；
を含む方法により製造された、請求項１に記載のアジスロマイシンの粗結晶。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、結晶形アジスロマイシン（Ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）に関する。アジスロマイシンは、市販されており、広範な細菌感染の治療に効果的な抗生物質である。本発明による結晶形アジスロマイシンは、同様にヒトを含む哺乳動物だけなく、魚類や鳥類にも抗菌剤として有用である。
【背景技術】
【０００２】
アジスロマイシンは、以下の構造式で表される：
【化１】
0004584162.tif 000002
【０００３】
アジスロマイシンが、米国特許第４，５１７，３５９号及び第４，４７４，７６８号で記載且つ請求されている。アジスロマイシンは、また９−デオキソ−９ａ−アザ−９ａ−メチル−９ａ−ホモエリトマイシンＡとしても知られている。
【０００４】
アジスロマイシンを直接的又は間接的にカバーしている他の特許又は特許出願に、アジスロマイシン二水和物を請求しているヨーロッパ特許出願第ＥＰ２９８，６５０号；トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）種の菌株の処理方法を請求している米国特許第４，９６３，５３１号；苦みを減少させたチュアブル錠又は懸濁液医薬組成物を請求している米国特許第５，６３３，００６号；アジスロマイシンの調製に有用な中間体を請求している米国特許第５．６８６，５８７号；アジスロマイシンの投与に関連した「食物効果」を減少させる経口投与剤形を請求している米国特許第５，６０５，８８９号；アジスロマイシンを含有する制御された剤形を請求している米国特許第６，０６８，８５９号；アジスロマイシンを二価金属又は三価金属と組み合わせて含有する組成物を請求している米国特許第５，４９８，６９９号；眼感染の治療方法を請求しているＥＰ９２５，７８９；アジスロマイシンの水溶性塩に関する中国特許出願ＣＮ１１２３２７９Ａ；アジスロマイシンソジウムジヒドロジェンホスフェート複塩に関する中国特許出願ＣＮ１０４６９４５Ｃ；アジスロマイシン結晶に関する中国特許出願ＣＮ１１１４９６０Ａ；アジスロマイシン結晶に関する中国特許出願ＣＮ１１６１９７１Ａ；アジスロマイシンの水溶性塩の調製方法に関する中国特許出願ＣＮ１２０５３３８Ａ；アジスロマイシンのエタノール和物に関する国際公開ＷＯ００／３２２０３；及びアジスロマイシン一水和物イソプロパノールクラスレートに関するＥＰ９８４，０２０などがある。
【発明の開示】
【０００５】
発明の要約
【０００６】
本発明は、結晶形アジスロマイシンに関する。本明細書で使用される用語「結晶形（形態）」又は「形（形態）」は、特記のない限りは、一種以上の結晶形アジスロマイシンを意味する。
【０００７】
特に、本発明は、結晶形が、Ｃ形、Ｄ形、Ｅ形、Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形、Ｍ形、Ｎ形、Ｏ形、Ｐ形、Ｑ形及びＲ形（本明細書で定義される）から選ばれるものである結晶形アジスロマイシンに関する。Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形、Ｍ形、Ｎ形、Ｏ形及びＰ形は、ファミリーＩアジスロマイシンに属し、セル寸法がａ＝１６．３±０．３Å、ｂ＝１６．２±０．３Å、ｃ＝１８．４±０．３Å及びベータ＝１０９±２°である単斜晶系Ｐ２1空間群に属する。Ｃ形、Ｄ形、Ｅ形及びＲ形は、ファミリーＩＩアジスロマイシンに属し、セル寸法がａ＝８．９±０．４Å、ｂ＝１２．３±０．５Å及びｃ＝４５．８±０．５Åである斜方晶系Ｐ２1２1２1空間群に属する。Ｑ形は、ファミリーＩ及びファミリーＩＩとは異なる。
【０００８】
Ｆ形アジスロマイシンは、単結晶構造において式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・０．５Ｃ2Ｈ5ＯＨで表される、アジスロマイシン一水和物半エタノール溶媒和物である。Ｆ形は、さらに粉末試料において水２〜５重量％とエタノール１〜４重量％とを含有し、表９で定義するような粉末Ｘ線回折２θピークを有するものとして特徴付けられる。Ｆ形の13ＣｓｓＮＭＲ（固形核磁気共鳴）スペクトルは、約１７９±１ｐｐｍ（１７９．５±０．２ｐｐｍ及び１７８．６±０．２ｐｐｍ）で２つの化学シフトピークを有し、６．４〜１１．０ｐｐｍに一組のピーク（５つのピークからなる）を有し、５８．０±０．５ｐｐｍ及び１７．２±０．５ｐｐｍにエタノールピークを有する。溶媒ピークは、ブロードで且つ強度が比較的弱い場合がある。
【０００９】
また、本発明は、実質的に純粋なＦ形アジスロマイシン、Ｇ形アジスロマイシンを実質的に含まないＦ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＦ形アジスロマイシンに関する。
【００１０】
さらに、本発明は、アジスロマイシンをエタノールで処理して４０〜７０℃で完全に溶解し、エタノールを減少させて冷却するか、水を添加して冷却することにより結晶化させることにより、Ｆ形アジスロマイシンを調製する方法に関する。また、本発明は、実質的に純粋なＦ形アジスロマイシン、Ｇ形アジスロマイシンを実質的に含まないＦ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＦ形アジスロマイシンの製造方法をも含む。
【００１１】
Ｇ形アジスロマイシンは、単結晶構造において式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・１．５Ｈ2Ｏで表される、アジスロマイシンセスキ水和物である。Ｇ形は、さらに粉末試料において水２．５〜６重量％と有機溶媒（単一又は複数）１重量％未満とを含有し、表９で定義するような粉末Ｘ線回折２θピークを有するものとして特徴付けられる。Ｇ形の13ＣｓｓＮＭＲスペクトル約１７９±１ｐｐｍ（１７９．５±０．２ｐｐｍ；０．３ｐｐｍ未満での開裂が存在してもよい）で一つの化学シフトピークを有し、６．３〜１１．０ｐｐｍに一組のピーク（５つのピークからなる）を有する。
【００１２】
また、本発明は、実質的に純粋なＧ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＧ形アジスロマイシンに関する。
【００１３】
さらに、本発明は、アジスロマイシンを、メタノールと水との混合物又はアセトンと水との混合物で処理して４０〜６０℃で完全に溶解し、冷却して結晶化させることにより、実質的に純粋なＧ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＧ形アジスロマイシンを調製する方法に関する。
【００１４】
Ｈ形アジスロマイシンは、式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・Ｃ3Ｈ8Ｏ2で表されるアジスロマイシン一水和物半−１，２−プロパンジオール溶媒和物である。
【００１５】
Ｊ形アジスロマイシンは、単結晶構造において式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・０．５Ｃ3Ｈ7ＯＨで表される、アジスロマイシン一水和物半−ｎ−プロパノール溶媒和物である。Ｊ形は、さらに粉末試料において水２〜５重量％と１−プロパノール１〜５重量％とを含有し、表９で定義するような粉末Ｘ線回折２θピークを有するものとして特徴付けられる。Ｊ形の13ＣｓｓＮＭＲスペクトルは、約１７９±１ｐｐｍ（１７９．６±０．２ｐｐｍ及び１７８．４±０．２ｐｐｍ）で２つの化学シフトピークを有し、６．６〜１１．７ｐｐｍに一組のピーク（５つのピークからなる）を有し、２５．２±０．４ｐｐｍにｎ−プロパノールのピークを有する。溶媒ピークは、ブロードで且つ強度が比較的弱い場合がある。
【００１６】
さらに、本発明は、アジスロマイシンをｎ−プロパノールで処理して２５〜５５℃で完全に溶解し、水を添加して冷却することにより結晶化させることにより、Ｊ形を調製する方法に関する。
【００１７】
Ｍ形アジスロマイシンは、式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・０．５Ｃ3Ｈ7ＯＨで表される、アジスロマイシン一水和物半−イソプロパノール溶媒和物である。Ｍ形は、さらに粉末試料において水２〜５重量％と２−プロパノール１〜４重量％とを含有し、表９で定義するような粉末Ｘ線回折２θピークを有するものとして特徴付けられる。Ｍ形の13ＣｓｓＮＭＲスペクトルは、約１７９±１ｐｐｍ（１７９．６±０．２ｐｐｍ）で一つの化学シフトピークを有し、４１．９±０．２ｐｐｍにピークを有し、６．９〜１６．４ｐｐｍに一組のピーク（６つのピークからなる）を有し、２６．０±０．４ｐｐｍにイソプロパノールのピークを有する。溶媒ピークは、ブロードで且つ強度が比較的弱い場合がある。
【００１８】
また、本発明は、実質的に純粋なＭ形アジスロマイシン、Ｇ形アジスロマイシンを実質的に含まないＭ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＭ形アジスロマイシンに関する。
【００１９】
さらに、本発明は、アジスロマイシンを、イソプロパノールで処理して４０〜６０℃で完全に溶解し、イソプロパノールの量を減少させた後に冷却するか、冷却してから水を添加することにより結晶化させることにより、実質的に純粋なＭ形アジスロマイシン、Ｇ形アジスロマイシンを実質的に含まないＭ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＭ形アジスロマイシンを調製する方法に関する。
【００２０】
Ｎ形アジスロマイシンは、ファミリーＩの同形の混合物である。この混合物は、種々の割合（％）で同形、Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形、Ｍ形等並びに種々の量の水及び有機溶媒、例えば、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、プロピレングリコール、アセトン、アセトニトリル、ブタノール、ペンタノール等を含有してもよい。水の重量％は１〜５％の範囲であることができ、有機溶媒の総重量％は２〜５％（各溶媒含量が０．５〜４％）であることができる。Ｎ形の試料は、ファミリーＩに属するものの全ての特性ピークを種々の割合で示す。Ｎ形は、ファミリーＩ同形の「混晶」又は「結晶性固溶体」として特徴付けられることができる。
【００２１】
Ｎ形は、ファミリーＩにおける同形の組み合わせとして化学シフトを示す。ピークは、Ｎ形結晶性固溶体に含有される可変割合の同形の混合のため、化学シフトｐｐｍにおいて±０．２ｐｐｍ内で異なり、また相対強度及び幅において異なることがある。
【００２２】
Ｐ形アジスロマイシンは、式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・０．５Ｃ5Ｈ12Ｏで表されるアジスロマイシン一水和物半−ｎ−ペンタノール溶媒和物である。
【００２３】
Ｑ形アジスロマイシンは、式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・０．５Ｃ4Ｈ8Ｏで表されるアジスロマイシン一水和物半−テトラヒドロフラン溶媒和物である。
【００２４】
Ｒ形アジスロマイシンは、式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・Ｃ5Ｈ12Ｏで表されるアジスロマイシン一水和物モノ−メチルｔ−ブチルエーテル溶媒和物である。
【００２５】
Ｄ形アジスロマイシンは、その単結晶構造において式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・Ｃ6Ｈ12で表される、アジスロマイシン一水和物モノシクロヘキサン溶媒和物である。Ｄ形は、さらに粉末試料において水２〜６重量％とシクロヘキサン３〜１２重量％とを含有し、表９で定義するような代表的な粉末Ｘ線回折２θピークを有するものとして特徴付けられる。Ｄ形の13ＣｓｓＮＭＲスペクトルは、約１７９±１ｐｐｍ（１７８．１±０．２ｐｐｍ）で一つの化学シフトピークを有し、１０３．９±０．２ｐｐｍ、９５．１±０．２ｐｐｍ、８４．２±０．２ｐｐｍにピークを有し、８．４〜１１ｐｐｍに一組のピーク（３つのピークからなる）を有する。
【００２６】
さらに、本発明は、アジスロマイシン二水和物をシクロヘキサンによりスラリー化することにより、Ｄ形を調製する方法に関する。
【００２７】
Ｅ形アジスロマイシンは、式Ｃ38Ｈ72Ｎ2Ｏ12・Ｈ2Ｏ・Ｃ4Ｈ8Ｏで表されるアジスロマイシン一水和物モノ−テトラヒドロフラン溶媒和物である。
【００２８】
さらに、本発明は、非晶質アジスロマイシンに関し、さらにアジスロマイシン結晶格子から水及び/又は溶媒を除去することを含む、非晶質アジスロマイシンの調製方法に関する。非晶質アジスロマイシンについてのＸ線回折粉末パターンは、シャープな２θピークを示さないが、２つのブロードな丸いピークを有する。第一のピークは、４°〜１３°で生じる。第二ピークは、１３°〜２５°で生じる。
【００２９】
また、本発明は、治療に有効な量の上記した結晶化合物又は非晶質アジスロマイシンと、薬学的に許容される担体とを含む、哺乳動物、魚又は鳥における細菌感染又は原生動物感染の治療のための医薬組成物に関する。
【００３０】
また、本発明は、治療に有効な量の上記した結晶化合物又は非晶質アジスロマイシンを哺乳動物、魚又は鳥に投与することを含む、哺乳動物、魚又は鳥における細菌感染又は原生動物感染を治療するための方法に関する。
【００３１】
また、本発明は、適当な溶媒にアジスロマイシンをスラリー化するか、加熱した有機溶媒又は有機溶媒／水溶液にアジスロマイシンを溶解し、溶媒の容量を減少させて溶液を冷却して結晶形アジスロマイシンを沈殿させるか、又はアジスロマイシンを溶媒又は溶媒混合物に溶解し、水をこの溶液に添加して結晶形アジスロマイシンを沈殿させることを含む、結晶形アジスロマイシンの調製方法に関する。非晶質アジスロマイシンは、結晶形アジスロマイシンを真空中で加熱することにより調製する。
【００３２】
本明細書で使用される用語「治療」とは、特記のない限りは、細菌感染又は原生動物感染の症状を治したり、減少させるか、又はこのような感染の進行を遅らせることを含む、本発明の方法により提供されるような細菌感染又は原生動物感染の治療又は予防を意味する。用語「治療する」は、上記用語「治療」に準じて定義される。
【００３３】
所定の結晶形アジスロマイシンに関して使用される用語「実質的に含まない」とは、存在する所定の結晶形の２０％（重量基準）未満、より好ましくは存在する所定の結晶形の１０％（重量基準）未満、より好ましくは存在する所定の結晶形の５％（重量基準）未満、最も好ましくは存在する所定の結晶形の１％（重量基準）未満であることを意味する。例えば、アジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＦ形アジスロマイシンとは、アジスロマイシン二水和物の含有量が２０％（重量基準）以下、より好ましくは１０％（重量基準）以下、最も好ましくは１％（重量基準）であるＦ形を意味する。
【００３４】
所定の結晶形アジスロマイシンに関して使用される用語「実質的に純粋な」とは、所定の結晶形態が、別の多形又は同形結晶形アジスロマイシン等の残留成分の含量が２０％（重量基準）未満であることを意味する。実質的に純粋な形態のアジスロマイシンにおける別の多形又は同形結晶形アジスロマイシンの含量が、１０％（重量基準）未満、より好ましくは５％（重量基準）未満、最も好ましくは１％（重量基準）未満であることが、好ましい。
【００３５】
バルク結晶形アジスロマイシン又は結晶形アジスロマイシン含有組成物について用いられる用語「実質的にアジスロマイシン二水和物を含まない」とは、結晶形アジスロマイシンにおけるアジスロマイシン二水和物の含量が、約５％（重量基準）未満、より好ましくは約３％（重量基準）未満、最も好ましくは１％（重量基準）未満であることを意味する。
【００３６】
本明細書で使用される用語「細菌感染」又は「原生動物感染」とは、特記のない限りは、本発明の化合物等の抗生物質を投与することにより治療又は予防できる、哺乳動物、魚及び鳥において生じる細菌感染及び原生動物感染並びにこのような感染により生じる疾病だけでなく、細菌感染及び原生動物感染に関連した障害をも含む。このような細菌感染及び原生動物感染並びに障害には、以下のもの等があるが、これらには限定されない：肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、モラキセラ・カタラリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）又はペプトストレプトコッカス種（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）による感染に関連した肺炎、中耳炎、静脈洞炎、気管支炎、扁桃炎及び乳様突起炎；ストレプトコッカス・ピオゲンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、Ｃ群及びＧ群のレンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、クロストリジウム・ジプテリアエ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）又はアクチノバシラス・ヘモリティカム（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）による感染に関連した咽頭炎、リウマチ熱若しくは糸球体腎炎；肺炎マイコプラズマ菌（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）若しくは肺炎クラミジア菌（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に関連した気道感染症；黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌（ｃｏａｇｕｌａｓｅ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）（即ち、エス・エピデルミディス（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、エス・ヘモリティカス（Ｓ．ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）等）、ストレプトコッカス・ピオゲンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・アガラクティアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、レンサ球菌Ｃ〜Ｆ群（微小なコロニーレンサ球菌）、ビリダンス群レンサ球菌、コリネバクテリウム・マイニュウチシマム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ）、クロストリジウム種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）又はバルトネラ・ヘンセラエ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ）による感染に関連した非併発性皮膚及び軟組織感染症、膿瘍及び骨髄炎、及び産じゅく熱；スタフィロコッカス・サプロフィチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）又は腸球菌種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）による感染に関連した非併発性急性尿道感染症；クラミジア・トラコーマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ）、トレポネーマ・パリデュム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、ウレアプラズマ・ウレアリティカム（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ）又は淋菌（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ）による感染に関連した尿道炎及び子宮頚管炎及び性的伝染病；黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）（食中毒及び中毒性ショック症候群）又はＡ群、Ｂ群及びＣ群のレンサ球菌による感染に関連した毒素疾患；ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）による感染に関連した潰瘍；回帰熱ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ）による感染に関連した全身性発熱症候群；ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）による感染に関連したライム病；クラミジア・トラコーマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、肺炎レンサ球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ストレプトコッカス・ピオゲンス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）又はリステリア種（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐｐ．）による感染に関連した結膜炎、角膜炎及び涙嚢炎；マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）又はマイコバクテリウム・イントラセルラレ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）による感染に関連した散在性マイコバクテリウム・アビウム・コンプレックス（ＭＡＣ）疾患；カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ）による感染に関連した胃腸炎；クリプトスポリジウム種（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）による感染に関連した腸プロトゾア（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｐｒｏｔｏｚｏａ）；ビリダンス群レンサ球菌（ｖｉｒｉｄａｎｓ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）による感染に関連した歯原性感染症（ｏｄｏｎｔｏｇｅｎｉｃ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）；百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）による感染に関連した持続性咳；クロストリジウム・パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）又はバクテロイデス種（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）による感染に関連したガス壊疽；並びにヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）又は肺炎クラミジア菌（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に関連したアテローム硬化症。アテローム硬化症及びマラリアも含まれる。動物における治療されうる又は予防されうる、細菌感染症及び原生動物感染症並びにこのような感染症に関連した障害は下記のものも含まれるが、これらには限定されない：ピー・ヘモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍ．）、ピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、マイコプラズマ・ボヴィス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｂｏｖｉｓ）又はボルデテラ種（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｓｐｐ．）による感染に関連したウシ呼吸器疾患；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又は原生動物（即ち、コクシジア（ｃｏｃｃｉｄｉａ）、クリプトスポリジア（ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉａ）等）による感染に関連したウシ腸疾患；黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈ．��ｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス・ウベリス（Ｓｔｒｅｐ．ｕｂｅｒｉｓ）、ストレプトコッカス・アガラクチアエ（Ｓｔｒｅｐ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、ストレプトコッカス・ディスガラクチアエ（Ｓｔｒｅｐ．ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ）、クレブシェラ種（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐｐ．）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）又は腸球菌種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐｐ．）による感染に関連した乳牛乳腺炎；エイ・プロイロ（Ａ．ｐｌｅｕｒｏ．）、ピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）又はマイコプラズマ種（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｐ．）による感染に関連したブタ呼吸器疾患；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、ロウソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）、サルモネラ又はセルプリナ・ヒョーディスインテリアエ（Ｓｅｒｐｕｌｉｎａ  ｈｙｏｄｙｉｓｉｎｔｅｒｉａｅ）による感染に関連したブタ腸疾患；フソバクテリウム種（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）による感染に関連したウシ腐蹄症；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による感染に関連したウシ子宮炎；フソバクテリウム・ネクロホルム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ）又はバクテロイデス・ノドサス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｎｏｄｏｓｕｓ）による感染に関連したウシ有毛いぼ；モラキセラ・ボヴィス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｂｏｖｉｓ）による感染に関連したウシ伝染性角結膜炎；原生動物（即ち、ネオスポリウム（ｎｅｏｓｐｏｒｉｕｍ））による感染に関連したウシ早産；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による感染に関連したイヌ及びネコにおける尿道感染症；スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓｔａｐｈ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・インターメディウス（Ｓｔａｐｈ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、コアグラーゼ陰性レンサ球菌又はピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）による感染に関連したイヌ及びネコにおける皮膚及び軟組織感染症；並びにアルカリゲネス種（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｓｐｐ．）、バクテロイデス種（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐｐ．）、クロストリジウム種（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）、エンテロバクター種（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐｐ．）、オイバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ポルフィロモナス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）又はプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）による感染に関連したイヌ及びネコにおける歯又は口内感染症。本発明の方法によって治療又は予防されうる、他の細菌感染症及び原生動物感染症並びにこのような感染症に関連した障害は、Ｊ．Ｐ．Ｓａｎｆｏｒｄ等，“Ｔｈｅ  Ｓａｎｆｏｒｄ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ（サンフォードによる抗菌療法の指針”，第２６版（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｉｎｃ．，１９９６）に記載されている。
【００３７】
また、本発明は、一つ以上の原子が、通常天然で見られる原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子により置き換えられた同位体標識化合物を含む。本発明の化合物に含有させることのできる同位体としては、例えば、水素、炭素、窒素、酸素、リン、イオウ、フッ素及び塩素、例えば、2Ｈ、3Ｈ、13Ｃ、14Ｃ、15Ｎ、18Ｏ及び17Ｏなどがある。このような放射性同位体標識化合物及び安定な同位体標識化合物は、研究又は診断ツールとして有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
アジスロマイシンは、異なる結晶形態で存在することが見いだされた。二水和物であるＡ形、非化学量論的水和物であるＢ形が、それぞれヨーロッパ特許出願第ＥＰ２９８６５０号及び米国特許第４，５１２，３５９号に開示されている。１６の他の形態、すなわち、Ｃ形、Ｄ形、Ｅ形、Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｉ形、Ｊ形、Ｋ形、Ｌ形、Ｍ形、Ｎ形、Ｏ形、Ｐ形、Ｑ形及びＲ形が見いだされた。これらの形態は、アジスロマイシン遊離塩基の水和物又は水和物／溶媒和物である。Ｌ形及びＫ形は、高温で検出されるＡ形の準安定低級水和物形態である。Ａ形、Ｃ形、Ｄ形、Ｅ形、Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形及びＯ形の結晶構造が解明された。これらの結晶形の構造のデータを、以下に示す：
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【００３９】
これらの１６個の結晶形態の間で、２つの同形ファミリーがある。ファミリーＩには、Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形、Ｍ形、Ｎ形、Ｏ形及びＰ形などがある。ファミリーＩＩには、Ｃ形、Ｄ形、Ｅ形及びＲ形などがある。Ｑ形は、ファミリーＩ及びＩＩとは異なる。ファミリー内の形態は、セルパラメータがわずかに異なる同じ空間群で結晶化する同形であり、化学的に関連しているが元素組成が異なる構造を有する。この場合、同形間の化学組成の差異は、異なる水／溶媒分子の含有から生じる。その結果、同形は、類似しているが同一ではないＸ線回折パターン及び固形ＮＭＲスペクトル（ｓｓＮＭＲ）を示す。他の手法、例えば、近赤外分光分析法（ＮＩＲ）、示差走査熱量法（ＤＳＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）又は熱重量分析／赤外分光分析（ＴＧ−ＩＲ）、Ｋａｒｌ  Ｆｉｓｃｈｅｒ水分析（ＫＦ）及び分子モデル化／可視化により、同形の追試同定のためのデータが得られる。脱水／脱溶媒和温度を、ＤＳＣにより、加熱速度５℃／分の条件で求めた。
【００４０】
Ｃ形：この結晶形態は、単結晶構造（表２）−アジスロマイシンの一水和物から同定した。Ｃ形は、空間群Ｐ２1２1２1を有し、且つＤ形及びＥ形と同様なセルパラメータを有しているので、ファミリーＩＩ同形に属している。その計算された粉末パターンは、Ｄ形及びＥ形と類似している。
【００４１】
Ｄ形：Ｄ形は、シクロヘキサンから結晶化した。Ｄ形の単結晶構造は、アジスロマイシンの一水和物／モノシクロヘキサン溶媒和物の化学量論組成を示す（表３）。シクロヘキサン分子は、結晶格子において無秩序となることが分かった。単結晶データから得たＤ形の水含量及びシクロヘキサン含量の計算値は、それぞれ２．１％及び９．９％である。Ｄ形の粉末パターン及び計算による粉末パターンの両方は、Ｃ形及びＥ形のものと類似している。Ｄ形の粉末試料は、３０〜３００℃の５℃／分でのＤＳＣ分析において、開始温度約８７℃で脱溶媒和／脱水吸熱を示し、２００〜２８０℃でブロードな吸熱（分解）を示した。
【００４２】
Ｄ形は、アジスロマイシンをシクロヘキサンに２〜４日間スラリー化することにより調製する。固形のＤ形アジスロマイシンを濾取し、乾燥する。
【００４３】
Ｅ形：Ｅ形を、ＴＨＦ／水媒体から集めた単結晶として得た。Ｅ形は、単結晶分析したところ、一水和物及びモノ−ＴＨＦ溶媒和物である（表４）。この単結晶構造により、計算によるＰＸＲＤパターンは、Ｃ形及びＤ形のものと類似しており、ファミリーＩＩ同形である。
【００４４】
Ｅ形は、アジスロマイシンをＴＨＦ（テトラヒドロフラン）に溶解することにより調製する。水蒸気を時間をかけて飽和アジスロマイシンＴＨＦ溶液に拡散することにより、Ｅ形結晶が生じる。
【００４５】
Ｆ形：Ｆ形の単結晶は、モノ水和物／半エタノール和物として、２つのアジスロマイシン、２つの水及び１つのエタノールを含有する非対称単位を有する単斜晶系空間群Ｐ２1で結晶化した（表５）。Ｆ形は、同形であり、全てのファミリーＩアジスロマイシン結晶形を形成する。この形態の計算されたＰＸＲＤパターンは、他のファミリーＩ同形のものと類似している。理論水含量とエタノール含量は、それぞれ２．３％及び２．９％である。粉末試料は、１１０〜１２５℃の開始温度で脱水／脱溶媒和吸熱を示す。Ｆ形は、アジスロマイシンをエタノール（１〜３容（重量基準））に約５０〜７０℃の温度で溶解することにより、調製する。完全に溶解したら、溶液を、周囲以下の温度に冷却して沈殿を生じさせる。攪拌しながら１〜２時間真空蒸留することによりエタノールの容積を減少させて、収量を増加させることができる。別法として、約０．１〜２容の水（必要に応じて０〜２０℃に冷却）を加え、水の添加後３０分以内に固形物を集めることができる。水の添加に先立ち、アジスロマイシンのエタノール溶液を、２０℃未満、好ましくは１５℃未満、より好ましくは１０℃未満、最も好ましくは５℃に冷却することにより、実質的に純粋なＦ形アジスロマイシンが得られる。固形Ｆ形アジスロマイシンを、濾取し、乾燥する。
【００４６】
Ｇ形：Ｇ形の単結晶構造は、一つの非対称単位当たりアジスロマイシン２分子と水３分子からなっている（表６）。これは、理論水含量が３．５％である、セスキ水和物に相当する。Ｇ形の粉末試料の水含量は、約２．５〜約６％の範囲である。総残留有機溶媒は、結晶化に使用される対応の溶媒の１％未満であり、この値は溶媒和物の理論量よりもはるかに小さい。この形態は、約１１０〜１２０℃の開始温度で脱水する。
【００４７】
アジスロマイシンを予め混合した有機溶媒（メタノール、アセトン、アセトニトリル、エタノール又はイソプロパノールであることができる）／水混合物（容積比１／１）に添加することにより、  Ｇ形を調製できる。この混合物を、攪拌し、高温、例えば、４５〜５５℃で４〜６時間加熱して溶解させる。周囲温度に冷却する間に沈殿が生じる。この固形Ｇ形アジスロマイシンを、濾取し、乾燥する。
【００４８】
Ｈ形：この結晶形は、アジスロマイシン遊離塩基の一水和物／半−プロピレングリコール溶媒和物である（表７）。これを、プロピレングリコールを含有する配合溶液から単離した。Ｈ形の結晶構造は、ファミリーＩの結晶形と同形である。
【００４９】
アジスロマイシン二水和物をプロピレングリコール６容に溶解することにより、Ｈ形アジスロマイシンを調製する。得られたアジスロマイシンのプロピレングリコール溶液に、水を２容添加し、沈殿を生じさせる。スラリーを、２４時間攪拌し、固形物を濾過し、周囲温度で空気乾燥してＨ形結晶を得る。
【００５０】
Ｊ形：Ｊ形は、一水和物／半−ｎ−プロパノール溶媒和物である（表８）。溶媒含量の計算値は、ｎ−プロパノール約３．８％、水約２．３％である。実験データによれば、粉末試料については、ｎ−プロパノール約２．５〜約４．０％、水分約２．５〜約３％である。そのＰＸＲＤパターンは、その同形のＦ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｍ形及びＮ形のものに極めて類似している。Ｆ形及びＧ形のように、粉末試料は、１１５〜１２５℃で脱水／脱溶媒和吸熱を示す。
【００５１】
アジスロマイシンをｎ−プロパノール４容に約２５〜５５℃の温度で溶解することにより、Ｊ形を調製する。水約６〜７容を室温で添加し、スラリーを０．５〜２時間連続して攪拌する。固形のＪ形アジスロマイシンを、濾取し、乾燥する。
【００５２】
Ｋ形：Ｋ形のＰＸＲＤパターンから、９５℃で３時間アニーリング後、Ａ形アジスロマイシンとマイクロクリスタリンワックスとの混合物であることが分かった。Ｋ形は、Ａ形の低級水和物であり、準安定高温形態である。
【００５３】
Ｌ形：この形態は、二水和物（Ａ形）を加熱したときのみに観察された。可変温度粉末Ｘ線回折（ＶＴ−ＰＸＲＤ）実験では、Ａ形を約９０℃に加熱すると、新しい粉末Ｘ線回折パターンが現れる。Ｌ形と称するこの新しい形態は、Ａ形がＴＧＡにより９０℃で約２．５重量％を損失するので一水和物への転化に相当することから、Ａ形の低級水和物である。周囲温度に冷却すると、Ｌ形は、迅速にＡ形に戻る。
【００５４】
Ｍ形：イソプロパノール／水スラリーから単離したＭ形は、水とイソプロパノールの両方を含有する。そのＰＸＲＤパターン及びｓｓ−ＮＭＲスペクトルは、ファミリーＩ同形のものに極めて類似しており、Ｍ形がファミリーＩに属していることが明らかである。公知のファミリーＩ同形の結晶構造に類似しているので、Ｍ形の単結晶構造は、一水和物/半イソプロパノール和物であろう。Ｍ形の脱水／脱溶媒和温度は、約１１５〜１２５℃である。
【００５５】
アジスロマイシンをイソプロパノール（ＩＰＡ）２〜３容に４０〜５０℃で溶解することにより、Ｍ形を調製できる。この溶液を、１５℃未満、好ましくは１０℃未満、より好ましくは約５℃に冷却し、約５℃の冷水２〜４容を添加して沈殿させる。Ｍ形の種結晶を、結晶化の開始に添加してもよい。スラリーを、約５時間未満、好ましくは約３時間未満、より好ましくは約１時間未満、最も好ましくは約３０分以下攪拌し、固形物を濾取する。固形物を、イソプロパノールに再スラリー化してもよい。この操作により、アジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＭ形が得られる。
【００５６】
Ｎ形：Ａ形の水／エタノール／イソプロパノールスラリーから単離したＮ形結晶は、可変量の結晶化溶媒及び水を含有してもよい。その水含量は、約３．４〜約５．３重量％の範囲で異なる。ＧＣヘッドスペースによる分析から、エタノールとイソプロパノールの溶媒含量が可変であることが分かる。Ｎ形試料の総溶媒含量は、通常調製及び乾燥条件によって、約５％未満である。Ｎ形のＰＸＲＤパターンは、ファミリーＩ同形のＦ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形及びＭ形のものと類似している。Ｎ形の試料の脱水／脱溶媒和吸熱は、よりブロードで且つ１１０〜１３０℃で異なっていてよい。
【００５７】
アジスロマイシン結晶格子組み込み有機溶媒、例えば、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、アセトン、アセトニトリル等と水の混合物からアジスロマイシンを再結晶することにより、Ｎ形アジスロマイシンを調製できる。この溶媒混合物を４５〜６０℃に加熱し、アジスロマイシンを加熱した溶媒混合物に、総容積約４容まで添加する。溶解したら、４５〜６０℃で連続的に攪拌しながら水１〜３容を添加する。Ｎ形アジスロマイシンは、白色固形物として沈殿する。スラリーを、攪拌しながら周囲温度まで冷却させる。固形のＮ形アジスロマイシンを、濾過により単離し、乾燥する。
【００５８】
Ｏ形：この結晶形態は、単結晶構造データからみて、アジスロマイシン遊離塩基の半水和物半−ｎ−ブタノール溶媒和物である（表８−Ａ）。Ｏ形を、逆溶媒の拡散によりアジスロマイシンのｎ−ブタノール溶液から単離した。Ｏ形の結晶構造は、ファミリーＩの結晶形に同形である。
【００５９】
アジスロマイシンを、ｎ−ブタノールに完全に溶解する。逆溶媒、例えば、ヘキサン、水、ＩＰＥ又は他の非溶媒を拡散により添加すると、Ｏ形が沈殿する。
【００６０】
Ｐ形：これは、アジスロマイシン遊離塩基の半水和物半-ｎ−ペンタノール溶媒和物である提案結晶形である。Ｐ形は、アジスロマイシンのｎ−ペンタノール溶液から逆溶媒の拡散により単離できる。Ｐ形の結晶構造は、ファミリーＩの結晶形に同形である。
【００６１】
Ｐ形アジスロマイシンは、以下のようにして調製できる：アジスロマイシンを、ｎ−ペンタノールに完全に溶解させる；逆溶媒、例えば、ヘキサン、水、イソプロピルエーテル（ＩＰＥ）又は他の非溶媒を拡散添加することにより、Ｐ形が沈殿する。
【００６２】
Ｑ形：Ｑ形結晶は、独特の粉末Ｘ線回折パターンを示す。Ｑ形は、水約４％とＴＨＦ約４．５％を含有し、水和物半ＴＨＦ溶媒和物である。主脱水／脱溶媒和温度は、約８０〜約１１０℃である。
【００６３】
アジスロマイシン二水和物を、ＴＨＦ６容に溶解し、水２容を添加する。この溶液を、周囲条件で蒸発乾固させてＱ形結晶を得る。
【００６４】
Ｒ形：この結晶形は、非晶質アジスロマイシンをｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）２．５容に添加することにより、調製する。得られた粘ちょうな白色懸濁液を、周囲条件で３日間攪拌する。固形物を、真空濾過で集め、空気乾燥する。得られたＲ形バルクアジスロマイシンは、理論水含量２．１重量％及び理論メチルｔ−ブチルエーテル含量１０．３重量％を有する。
【００６５】
これらの構造が似ているので、同形は、「混晶」又は「結晶固溶体」と称されることもあるファミリー内の形態の混合物を形成する傾向がある。Ｎ形はこのような結晶固溶体であり、溶媒組成及び固形ＮＭＲデータからファミリーＩ同形の混合物であることが分かった。
【００６６】
ファミリーＩ同形とファミリーＩＩ同形の両方が、アジスロマイシンの水和物及び/又は溶媒和物である。キャビティ内の溶媒分子は、特定の条件下で溶媒と水との交換を生じる傾向がある。したがって、同形の溶媒／水含量は、ある程度異なっていてよい。
【００６７】
同形ファミリーＩの結晶形は、加熱したときにＡ形よりも安定である。Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形、Ｍ形及びＮ形の開始脱水温度１１０〜１２５℃は、開始脱水温度約９０〜約１１０℃であり且つ約９０℃で同時にＬ形に固体転化するＡ形よりも高かった。
【００６８】
非晶質アジスロマイシン：全てのアジスロマイシンの結晶形は、水若しくは溶媒（単一又は複数）又は水と溶媒（単一又は複数）の両方を含有する。水と溶媒を結晶固形物から除去すると、アジスロマイシンが非晶質となる。非晶質固形物は、初期溶解速度が高いという利点がある。
【００６９】
以下の実施例では、種々の結晶形態の合成の出発材料として、特記のない限りはアジスロマイシン二水和物を使用した。他の形態のアジスロマイシン、例えば、非晶質アジスロマイシン又はアジスロマイシンの他の非二水和物結晶形を、用いてもよい。
【実施例】
【００７０】
例１：Ｄ形の調製
アジスロマイシン二水和物をシクロヘキサンに高温、例えば、２５〜５０℃で２〜４日間スラリー化することにより、Ｄ形を調製した。Ｄ形結晶固形物を、濾取し、乾燥した。
【００７１】
例２：Ｆ形の調製
２Ａ：アジスロマイシン二水和物を、約７０℃の温エタノール１容にゆっくりと添加し、６５〜７０℃で完全に溶解するまで攪拌した。Ｆ形の種晶１〜２重量％を入れて結晶化を容易にしてもよい。溶液を、徐々に２〜５℃に冷却させ、冷却水１容を添加した。水を添加後短時間（好ましくは３０分未満）で真空濾過により、結晶固形物を濾取した。
【００７２】
２Ｂ：アジスロマイシン二水和物を、約７０℃の温エタノール１容にゆっくりと添加し、６５〜７０℃で完全に溶解するまで攪拌した。Ｆ形の種晶１〜２重量％を入れて結晶化を容易にしてもよい。溶液を、徐々に２〜５℃に冷却させる。エタノール容積を、真空蒸留により減少させてもよい。２時間以下攪拌した後、結晶固形物を、真空濾過で集める。結晶を単離することにより、実質的に純粋なＦ形アジスロマイシン、Ｇ形アジスロマイシンを実質的に含まないＦ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＦ形アジスロマイシンが得られる。
【００７３】
例３：Ｇ形の調製
反応容器に、Ａ形アジスロマイシンを入れた。別の容器で、メタノール１．５容と水１．５容とを混合した。溶媒混合物を、Ａ形アジスロマイシンを含有する反応容器に添加した。スラリーを、約５時間５０℃で加熱攪拌した。加熱を停止し、スラリーを攪拌しながら冷却して周囲温度とした。Ｇ形アジスロマイシンを、濾取し、約３０分間空気乾燥した。集めたＧ形アジスロマイシンを、さらに真空オーブン中で４５℃で乾燥した。この操作により、実質的に純粋なＧ形アジスロマイシンが得られ、このＧ形アジスロマイシンはアジスロマイシン二水和物を実質的に含まない。
【００７４】
例４：Ｊ形の調製
アジスロマイシンをｎ−プロパノール４容に約２５℃の温度で溶解することにより、Ｊ形を調製した。水（６．７容）を添加し、スラリーを１時間連続攪拌した後、約０℃に冷却する。固形のＪ形アジスロマイシンを、濾取し、乾燥した。
【００７５】
例５：アジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＭ形の調製
５Ａ：アジスロマイシン二水和物を、温イソプロパノール２容に４０〜５０℃で完全に溶解する。Ｍ形の種晶を、必要に応じて入れて結晶化を容易にしてもよい。次に、この溶液を０〜５℃に冷却し、逆溶媒としての冷却水４容を添加し、固形物を真空濾過により集める。固形物を、イソプロパノール１容に、４０〜４５℃で３〜５時間再スラリー化した後、０〜５℃に冷却する。水を添加後短時間（約１５分）で、真空濾過により結晶固形物を集める。得られた固形物を、イソプロパノール０．５〜１容に２５〜４０℃で再スラリー化し、約５℃に冷却した後、Ｍ形固形物を濾取する。
【００７６】
５Ｂ：アジスロマイシン二水和物（１９４０ｇ）を、温イソプロパノール（４５℃）２容に完全に溶解した。得られた透明溶液を、インライン０．２マイクロメートルフィルターにより濾過して清浄なフラスコに入れた。温度を４５℃に維持し、溶液にＭ形種晶を加えた。冷却水７．８リットルを、８分間かけて添加した。この溶液を、５℃に冷却し、粘ちょうスラリーを得た。固形物を、真空濾過で単離し、清浄なフラスコに移した。結晶アジスロマイシンを、３５℃に暖めながらイソプロパノール１容にスラリー化した。このスラリーを、次に５℃で３０分間冷却し、固形結晶物質を濾取した。
【００７７】
これらの操作により、実質的に純粋なＭ形アジスロマイシン、Ｇ形アジスロマイシンを実質的に含まないＭ形アジスロマイシン及びアジスロマイシン二水和物を実質的に含まないＭ形アジスロマイシンが得られる。
【００７８】
例６：Ｎ形の調製
エタノール２容とイソプロパノール２容を、反応容器に添加し、５０℃に加熱した。Ａ形アジスロマイシンを、加熱したエタノール／イソプロパノール混合物に攪拌しながら添加して透明溶液を得た。反応容器に、蒸留水２容（周囲温度）を入れた。５０℃で攪拌を継続したところ、約１時間後に固形のＮ形アジスロマイシンが沈殿した。水を添加して５時間後、加熱を停止した。スラリーを、周囲温度に冷却した。沈殿したＮ形アジスロマイシンを、濾取し、真空オーブン中４５℃で４時間乾燥した。
【００７９】
例７：非晶質アジスロマイシンの調製
Ａ形結晶アジスロマイシンを、オーブン中、真空下１１０〜１２０℃で一晩加熱した。非晶質固形物を、集め、必要に応じて乾燥剤を用いて保存した。
【００８０】
例８：Ｈ形の調製
アジスロマイシン二水和物又は他の結晶形を、プロピレングリコール６容に溶解した。得られたアジスロマイシンのプロピレングリコール溶液に、水２容を添加したところ、沈殿が生じた。スラリーを２４時間攪拌し、得られた固形物を、濾取し、周囲温度で空気乾燥してＨ形結晶を得た。
【００８１】
例９：Ｑ形の調製
Ａ形アジスロマイシン５００ｍｇをＴＨＦ２ｍｌに溶解することにより、結晶粉末を調製した。透明無色溶液に、水１ｍｌを室温で添加した。溶液が白濁したら、さらにＴＨＦを１ｍｌ添加してアジスロマイシンを完全に溶解させ、得られた溶液を周囲温度で攪拌した。溶媒を７日間かけて蒸発させ、その後、乾燥固形物を集め、特性付けした。
【００８２】
例１０：粉末Ｘ線回折分析
銅Ｘ線、固定スリット（１．０、１．０、０．６ｍｍ）及びＫｅｖｅｘ固体検出器を備えたＢｒｕｋｅｒＤ５０００回折計（ウィスコンシン州にあるＭａｄｉｓｏｎ社製）を用いて、粉末パターンを収集した。ステップサイズ０．０４度及びステップ時間１．０秒を用いて、２θ３．０度から４０．０度までのデータを収集した。得られた結果を、表９に示す。
【００８３】
Ａ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図２に示す。
【００８４】
Ｄ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図６に示す。
【００８５】
Ｆ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図１０に示す。
【００８６】
Ｇ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図１３に示す。
【００８７】
Ｊ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図１６に示す。
【００８８】
Ｍ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図１８に示す。
【００８９】
Ｎ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図１９に示す。
【００９０】
非晶質アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図２０に示す。
【００９１】
Ｑ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図３０に示す。
【００９２】
Ｒ形アジスロマイシンの実験ＰＸＲＤ回折パターンを、図３１に示す。
【００９３】
実験の試料間のばらつきは、２θで約±０．２°であり、同じばらつきが、単結晶構造からの粉末の計算値と実験データとの間で観察された。詳細な分析から、ファミリーＩにおける同形がＰＸＲＤにより表９に示した特性ピーク組ではっきりと認められることが分かった。
【００９４】
【表１０】
0004584162.tif 000012
【表１１】
0004584162.tif 000013
【００９５】
ファミリーＩ同形は、以下の共通の特性を有する：２θ６．２度、１１．２度、２１．０±０．１度及び２２．５±０．１度での回折ピーク。各同形は、以下の代表的な回折ピーク組を示し、各組は特徴的なピーク間距離を有する。
【００９６】
記載の回折ピーク位置の精度は、２θの±０．２度内である。
【００９７】
Ａ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図２に示す。Ａ形は、２θ９．３度、１３．０度及び１８．７度でピークを示す。
【００９８】
Ｄ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図６に示す。Ｄ形は、２θ３．９度、１０．１度、１０．６度及び２１．４度でピークを示す。
【００９９】
Ｆ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図１０に示す。Ｆ形は、ファミリーＩの特徴的なピークを示し、３組のピーク、すなわち、２θ１１．２度及び１１．５度に１組目；２θ１３．９度、１４．３度、１４．７度及び１４．８度に２組目；２θ１６．２度、１６．６度、１７．１度、１７．２度及び１７．７度に３組目を示す。
【０１００】
Ｇ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図１３に示す。Ｇ形は、ファミリーＩの特徴的なピークを示し、３組のピーク、すなわち、２θ１１．２度及び１１．６度に１組目；２θ１４．０度、１４．４度、１４．６度及び１４．９度に２組目；２θ１６．３度、１６．６度、１７．２度、１７．４度及び１７．８度に３組目を示す。
【０１０１】
Ｊ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図１６に示す。Ｊ形は、ファミリーＩの特徴的なピークを示し、３組のピーク、すなわち、２θ１１．２度及び１１．４度に１組目；２θ１３．９度、１４．２度及び１４．６度に２組目；２θ１６．０度、１６．６度、１７．０度、１７．２度及び１７．５度に３組目を示す。
【０１０２】
Ｍ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図１８に示す。Ｍ形は、ファミリーＩの特徴的なピークを示し、３組のピーク、すなわち、２θ１１．２度に１組目；２θ１４．０度及び１４．６度に２組目；２θ１５．９度、１６．６度、１７．１度及び１７．５度に３組目を示す。
【０１０３】
Ｎ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図１０に示す。Ｎ形は、ファミリーＩの特徴的なピークを示す。Ｎ形のピーク組は、Ｆ形、Ｇ形、Ｊ形及びＭ形のものと似ており、２θ１１．２度〜１１．６度に１組目；２θ１３．９度〜１５．０度に２組目；２θ１５．９度〜１７．９度に３組目を示す。ピークは、ファミリーＩにおける同形の可変割合での混合のために、位置、強度及び幅がわずかに異なることがある。
【０１０４】
Ｑ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図３０に示す。Ｑ形は、２θ６．８度、８．４度及び２０．２度にピークを示す。
【０１０５】
Ｒ形の代表的なＰＸＲＤパターンを、図３１に示す。
【０１０６】
例１１：単結晶Ｘ線分析
銅Ｘ線及び黒鉛モノクロメーターを備えたＢｒｕｋｅｒＸ線回折計を用いて、室温でデータを収集した。直接法を用いて、構造を解明した。全ての必要な結晶学的計算と分子ディスプレイを容易にするために、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ社製のＳＨＥＬＸＴＬコンピュータライブラリー（ＳＨＥＬＸＴＬ（商標）、米国ウィスコンシン州マディソンにあるＢｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ社のリファレンスマニュアル、バージョン５．１（１９９７））を用いた。
【０１０７】
例１２：単結晶データからのＰＸＲＤパターンの計算
単結晶と粉末試料との間の結果を比較するために、単結晶の結果から計算粉末パターンを得ることができる。ＳＨＥＬＸＴＬコンピュータライブラリーの一部分として提供されたＸＦＯＧ及びＸＰＯＷコンピュータプログラムを使用して、この計算をおこなった。計算粉末パターンと実験粉末パターンとを比較することにより、粉末試料が割り当てられた単結晶構造に相当するかどうかを確認する（表９−Ａ）。この操作を、Ａ形、Ｄ形、Ｆ形、Ｇ形及びＪ形結晶形態のアジスロマイシンについておこなった。
【０１０８】
Ａ形アジスロマイシンの計算ＰＸＲＤ回折パターンを、図１に示す。
【０１０９】
Ｄ形アジスロマイシンの計算ＰＸＲＤ回折パターンを、図５に示す。
【０１１０】
Ｆ形アジスロマイシンの計算ＰＸＲＤ回折パターンを、図９に示す。
【０１１１】
Ｇ形アジスロマイシンの計算ＰＸＲＤ回折パターンを、図１２に示す。
【０１１２】
Ｊ形アジスロマイシンの計算ＰＸＲＤ回折パターンを、図１５に示す。
【０１１３】
図３、図７、図１１、図１４及び図１７におけるそれぞれＡ形、Ｄ形、Ｆ形、Ｇ形及びＪ形のオーバーレイ粉末Ｘ線回折パターンに結果を示す。下の方のパターンは、計算粉末パターン（単結晶の結果から得た）に相当し、上の方のパターンは、代表的な実験粉末パターンに相当する。２つのパターンが一致している場合、粉末試料と対応する単結晶構造とが一致していた。
【０１１４】
【表１２】
0004584162.tif 000014
【０１１５】
例１３：固体ＮＭＲ分析
固体ＮＭＲ分析：
全ての13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルを、１１．７５Ｔ分光計（（マサチューセッツ州ビレリカにあるＢｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｉｎ社）１２５ＭＨｚ13Ｃ周波数に対応）により収集した。スペクトルを、交差分極マジック角スピンニング（ＣＰＭＡＳ）プローブを周囲温度及び圧力で操作して収集した。分析した試料の量に応じて、７ｍｍＢＬ又は４ｍｍＢＬ  Ｂｒｕｋｅｒプローブ(試料３００ｍｇ及び７５ｍｇにそれぞれ最大速度７ｋＨｚ及び１５ｋＨｚを適用)を用いた。データを、５．０Ｈｚの指数ライン広がり関数により処理した。６５ｋＨｚ及び１００ｋＨｚのプロトンデカップリングを、それぞれ７ｍｍプローブ及び４ｍｍプローブとともに使用した。十分な取得数を平均して、全てのピークについて適切な信号対ノイズ比を得た。典型的には、リサイクル遅延３．０秒で６００スキャン（ほぼ総獲得時間３０分間に相当）を得た。標準ＮＭＲベンダープラクティスに従ってＫＢｒ粉末を用いて、マジック角を調整した。スペクトルは、ヘキサメチルベンゼン（ＨＭＢ）のメチル共鳴（１７．３ｐｐｍ）又はアダマンタン（ＡＤＭ）のアップフィールド共鳴（２９．５ｐｐｍ）を基準とした。ＨＭＢ基準スペクトルは、ＡＤＭ基準の同じスペクトルに対して全てのピークが０．０８ｐｐｍだけ下のフィールドにシフトした化学シフトを示す。スペクトルウインドウは、極微の１９０〜０ｐｐｍのスペクトル領域を含んでいた。結果を、表１０に示す。Ｍ形、Ｈ形及びＲ形についてのＳｓ−ＮＭＲスペクトルは、ＡＤＭ基準とした。Ａ形、Ｄ形、Ｇ形、Ｆ形、Ｊ形及びＮ形のＳｓ−ＮＭＲスペクトルは、ＨＭＢ基準とした。Ｈ形とＲ形は、１５ｋＨｚの速度でスピンした。
【０１１６】
【表１３】
0004584162.tif 000015
【０１１７】
【表１４】
0004584162.tif 000016
【０１１８】
【表１５】
0004584162.tif 000017
【０１１９】
記載の化学シフトの精度は、特記のない限りは±０．２ｐｐｍ内である。
【０１２０】
Ａ形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２１に示す。Ａ形は、１７８．１ｐｐｍにピーク、さらに１０４．１ｐｐｍ、９８．４ｐｐｍ、８４．６ｐｐｍ、２６．９ｐｐｍ、１３．２ｐｐｍ、１１．３ｐｐｍ及び７．２ｐｐｍにピークを示す。
【０１２１】
Ｄ形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２２に示す。Ｄ形は、１７８．１ｐｐｍに最高化学シフトピークを示し、さらに１０３．９ｐｐｍ、９５．１ｐｐｍ、８４．２ｐｐｍ、１０．６ｐｐｍ、９．０ｐｐｍ及び８．６ｐｐｍの化学シフトにピークを示す。
【０１２２】
Ｆ形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２３に示す。Ｆ形は、約１７９．１±２ｐｐｍ（１７９．５ｐｐｍ及び１７８．６ｐｐｍ）に２つの化学シフトピークを有し、１０．１ｐｐｍ、９．８ｐｐｍ、９．３ｐｐｍ、７．９ｐｐｍ及び６．６ｐｐｍに５つのピークの組を有し、５８．０±０．５ｐｐｍ及び１７．２±０．５ｐｐｍにエタノールピークを示す。溶媒ピークは、ブロードで且つ強度が比較的弱いことがある。
【０１２３】
Ｇ形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２４に示す。Ｇ形は、１７９．５ｐｐｍの最高化学シフトピーク（＜０．３ｐｐｍの開裂を有することのある単一ピーク）を有し、１０．４ｐｐｍ、９．９ｐｐｍ、９．３ｐｐｍ、７．６ｐｐｍ及び６．５ｐｐｍに５つのピークの組を有する。
【０１２４】
Ｊ形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２５に示す。Ｊ形は、約１７９．１±２ｐｐｍ（１７９．６ｐｐｍ及び１７８．４ｐｐｍ）に２つの化学シフトピークを有し、１０．０ｐｐｍ、９．３ｐｐｍ、８．１ｐｐｍ及び６．８ｐｐｍに４つのピークの組を有し、１１．５±０．５ｐｐｍ及び２５．２±０．５ｐｐｍにｎ−プロパノールピークを有する。溶媒ピークは、ブロードで且つ強度が比較的弱いことがある。
【０１２５】
Ｍ形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２６に示す。Ｍ形は、１７９．１±1ｐｐｍ（１７９．６ｐｐｍ）に一つの化学シフトピークを有し、４１．９ｐｐｍ及び１６．３ｐｐｍにピークを有し、１０．３ｐｐｍ、９．６ｐｐｍ、９．３ｐｐｍ、７．７ｐｐｍ及び７．１ｐｐｍに５つのピークの組を有し、２６．０±０．５ｐｐｍにイソプロパノールピークを有する。溶媒ピークは、ブロードで且つ強度が比較的弱いことがある。
【０１２６】
Ｎ形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２７に示す。Ｎ形は、ファミリーＩにおける同形の組み合わせとしての化学シフトを示す。これらのピークは、Ｎ形結晶固溶体に含有される同形の可変割合での混合のため、化学シフト並びに相対強度及び幅が異なることがある。
【０１２７】
非晶質形の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２８に示す。非晶質アジスロマイシンは、ブロードな化学シフトを示す。特徴的な化学シフトのピーク位置は、１７９及び１１±０．５ｐｐｍである。
【０１２８】
Ａ形、Ｄ形、Ｆ形、Ｇ形、Ｈ形、Ｊ形、Ｍ形、Ｎ形及びＲ形アジスロマイシンについて観察されたｓｓＮＭＲピークを、まとめて表１０に示す。
【０１２９】
例１４：剤形のＮＭＲ分析
13ＣｓｓＮＭＲにより医薬剤形に含有されるアジスロマイシンの形態を同定できることを示すために、Ｇ形アジスロマイシンを含有する被覆アジスロマイシン錠剤を作製し、13ＣｓｓＮＭＲにより分析した。錠剤を、湿式顆粒化し、０．２６２”×０．５３１”ツーリングを用いてＦ−Ｐｒｅｓｓ（英国リバプールにあるＭａｎｅｓｔｙ社）により錠剤化した。錠剤は、以下に示す処方により総錠剤重量が４５０ｍｇでＧ形アジスロマイシン２５０ｍｇを含有するように配合及び錠剤化した。錠剤に、ピンク色のＯｐａｄｒｙＩＩ（登録商標）（ラクトース一水和物と、ヒドロキシプロピルメチルセルロースと、二酸化チタン、Ｄｒｕｇ＆Ｃｏｓｍｅｔｉｃレッド＃３０と、トリアセチンとの混合物）（ペンシルバニア州ウェストポイントにあるＣｏｌｏｒｃｏｎ社製）を均一に被覆した。
【０１３０】
【表１６】
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【０１３１】
【表１７】
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【０１３２】
被覆錠剤を、徐々に破砕し、得られた粉末試料を、充填ツールにより、13Ｃバックグランド含まない固体ロータに充填した。試料の分析は、例１３に概略を示す条件下で実施した。
【０１３３】
Ｇ形アジスロマイシンを含有する錠剤の代表的な13ＣｓｓＮＭＲスペクトルを、図２９に示す。
【０１３４】
例１５：抗菌活性：
細菌及び原生動物の病原体に対する本発明の結晶形の活性は、ヒト病原体（アッセイＩ）又は動物病原体（アッセイＩＩ及びＩＩＩ）の確定している菌株の増殖を阻害する化合物の能力により示される。
【０１３５】
アッセイＩ 
以下に述べるアッセイＩでは、通常の方法と判定基準を用いる。アッセイＩは、マクロライド耐性の確定している機構を回避する化合物を得ることができる化学的変性の指針が得られるように設計する。アッセイＩでは、細菌菌株のパネルを、特徴付けられたマクロライド耐性機構の代表的なものを含む、種々の標的病原体種を含むようにして作製する。このパネルを使用すると、化学構造／活性の関係を、効力、活性スペクトル、耐性機構を除去するために必要であると考えられる構造要素又は変性（修飾）とに関連して決定することができる。スクリーニングパネルを含む細菌病原体を、下表に示す。多くの場合、マクロライド感受性親菌株とそれに由来するマクロライド耐性菌株の両方が、耐性機構を回避する化合物の能力をより正確に評価するのに有効である。ｅｒｍＡ／ｅｒｍＢ／ｅｒｍＣと命名されている遺伝子を含有する菌株は、Ｅｒｍメチラーゼによる２３ＳｒＲＮＡ分子の修飾（メチル化）のため、マクロライド、リンコサミド及びストレプトグラミンＢ抗生物質に対して耐性を有するので、一般的に３種の構造の全ての結合を防止する。２種類のマクロライドエフラックスについての記載がなされている；ｍｓｒＡは、マクロライド及びストレプトグラミンの侵入を阻止するブドウ球菌のエフラックス系の成分をコードし、ｍｅｆＡ／Ｅはマクロライドのみを流出させると思われる膜貫通タンパク質をコードする。マクロライド抗生物質の不活性化が生じることがあり、これは２’−ヒドロキシル（ｍｐｈ）のリン酸化又は大環式ラクトン（エステラーゼ）の開裂のいずれかが介在することがある。これらの菌株は、通常のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法を用いて及び／又は耐性決定因子を配列決定することによって特徴付けることができる。この用途におけるＰＣＲ法の使用については、Ｊ．Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ等，“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  Ｂｙ  ＰＣＲ”，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，４０（１１），２５６２−２５６６（１９９６）に記載されている。このアッセイは、マイクロタイタートレーでおこなわれ、Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ
ｆｏｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｄｉｓｋ  Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  Ｔｅｓｔｓ−第６版；Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄ（Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ（ＮＣＣＬＳ）発行）ガイドラインによって判定される；最小阻止濃度（ＭＩＣ）を、菌株の比較に用いる。結晶化合物を、最初にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に４０ｍｇ／ｍｌ原液として溶解する。
【０１３６】
【表１８】
0004584162.tif 000020
【０１３７】
アッセイＩＩは、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）に対する活性についての試験に利用され、アッセイＩＩＩは、パスツレラ・ヘモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）に対する活性についての試験に利用される。
【０１３８】
アッセイＩＩ
このアッセイは、マイクロリットルフォーマットでの液体希釈法に基づいている。ピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）（菌株５９Ａ０６７）の単一コロニーを、ブレインハートインフージョン（ＢＨＩ）ブロス５ｍｌに接種する。化合物１ｍｇを、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１２５μｌに可溶化することによって、試験化合物を調製する。接種されないＢＨＩブロスを用いて、試験化合物の希釈物を調製する。用いた試験化合物の濃度は、二倍連続希釈法によって２００μｇ／ｍｌ〜０．０９８μｇ／ｍｌの範囲である。ピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）接種ＢＨＩを接種されないＢＨＩブロスによって希釈して、細胞懸濁液１０4／２００μｌを形成する。ＢＨＩ細胞懸濁液に試験化合物の各連続希釈物を混合して、３７℃で１８時間インキュベートする。最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、接種されない対照と比較して判定したときに、ピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）の増殖の１００％阻害を示した化合物の濃度に等しい。
【０１３９】
アッセイＩＩＩ
このアッセイは、Ｓｔｅｅｒｓ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｏｒを用いた寒天希釈法に基づいている。寒天プレートから単離した２〜５コロニーを、ＢＨＩブロスに接種して、振とうしながら（２００ｒｐｍ）、３７℃において一晩インキュベートする。翌朝、３００μｌの完全増殖ピー・ヘモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）前培養物を３ｍｌの新鮮なＢＨＩブロスに接種して、振とうしながら（２００ｒｐｍ）、３７℃においてインキュベートする。適当な量の試験化合物を、エタノール中に溶解して、一連の二倍連続希釈物を調製する。各連続希釈物２ｍｌを溶融ＢＨＩ寒天１８ｍｌと混合して、凝固させる。接種したピー・ヘモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）培養物が０．５ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準密度に達したときに、ピー・ヘモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）培養物約５μｌを、種々な濃度の試験化合物を含有するＢＨＩ寒天プレート上に、Ｓｔｅｅｒｓ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｏｒを用いて接種し、３７℃で１８時間インキュベートする。試験化合物の初期濃度は、１００〜２００μｇ／ｍｌの範囲である。ＭＩＣは、接種されない対照と比較して判定したときに、ピー・ヘモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）の増殖の１００％阻害を示した試験化合物の濃度に等しい。
【０１４０】
本発明の結晶形のインビボ活性は、マウスにおいて通常行われる、当業者に周知の通常の動物保護試験によって測定することができる。
【０１４１】
マウスを、それらの到着時に、ケージに割り当て（１０匹／ケージ）、用いる前に少なくとも４８時間順化させる。動物に、０．５ｍｌの３ｘ１０3ＣＦＵ／ｍｌ細菌懸濁液（ピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）菌株５９Ａ００６）を腹腔内接種する。各実験は、０．１Ｘチャレンジ量で感染された１群と、１Ｘチャレンジ量で感染された２群とを含めた、少なくとも３つの非薬剤投与対照群を有し；１０Ｘチャレンジデータ群も用いることができる。一般に、ある一定の試験における総てのマウスを、特に反復使用注射器（例えば、Ｃｏｒｎｗａｌｌ（登録商標）注射器）を用いて、チャレンジ投与する場合には、３０〜９０分以内にチャレンジすることができる。チャレンジを開始してから３０分後に、最初の化合物処置をする。３０分間の終了までに動物の総てがチャレンジされなかった場合には、化合物投与を開始するために、もう一人必要なことがある。投与経路は皮下投与又は経口投与である。皮下投与の場合、首の背部における緩い皮膚に投与され、経口投与の場合、栄養針を用いておこなう。両方の場合に、マウス１匹当りに０．２ｍｌの容量が用いられる。化合物はチャレンジ後３０分間目、４時間目及び２４時間目に投与される。各試験には、同じ経路で投与される既知効力の対照化合物を含める。動物を毎日観察し、各群の生存動物数を記録する。ピー・ムルトシダ（Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）モデルの監視を、チャレンジ後９６時間（４日間）続ける。
【０１４２】
ＰＤ50は、試験した化合物が薬物治療のない場合に致命的であろう細菌感染症による死亡からマウス群の５０％を保護する、計算投与量である。
【０１４３】
本発明の結晶形（以下、「活性化合物」と称する）は、細菌感染症又は原生動物感染症の治療又は予防に経口、非経口、局所又は直腸経路によって投与することができる。一般に、これらの活性化合物は、１回投与量又は分割投与量（即ち、１〜４回投与／日）として約０．２ｍｇ／ｋｇ体重／日（ｍｇ／ｋｇ／日）〜約２００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である投与量で投与するのが最も望ましいが、治療される対象の種、体重及び状態並びに選択された特定の投与経路によって変化が必然的に生じることがある。しかしながら、約２ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である投与量レベルを用いるのが、最も望ましい。それにもかかわらず、治療される哺乳動物、魚類又は鳥類の種、前記薬物に対するその個体の反応並びに選択された医薬的製剤の種類及びこのような投与が行われる時間と間隔によって、変化が生じることがある。場合によっては、上記範囲の下限未満の投与量レベルで十分であることがあり、他の場合には、さらに投与量を増やしても有害な副作用を生じることなく用いることができるが、このような大きな投与量の場合は、１日間を通して投与するために最初にいくつかの小さい投与量に分割する。
【０１４４】
活性化合物を、単独で又は薬学的に許容される担体又は希釈剤と組み合わせて、予め指定された経路によって投与することができ、このような投与は１回投与量で又は複数回投与量で行うことができる。より具体的には、活性化合物を、非常に多様な異なる投与形で投与することができる、即ち、活性化合物を、種々な薬学的に許容される不活性担体と、錠剤、カプセル、菱形剤、トローチ、硬質キャンディ、粉末、スプレー、クリーム、膏薬、座薬、ゼリー、ゲル、ペースト、ローション、軟膏、薬袋、経口投与用懸濁剤用粉末、水性懸濁液、注射可能な溶液、エリキシル剤、シロップ等の形態で組み合わせることができる。このような担体には、固体希釈剤若しくは充填剤、無菌水性媒質及び種々な非毒性有機溶媒等がある。さらに、経口医薬組成物は、適当に甘味及び／又はフレーバーをつけることができる。一般に、活性化合物はこのような投与形中に約１．０重量％〜約７０重量％の範囲の濃度レベルで存在する。
【０１４５】
経口投与の場合、例えば微結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム及びグリシンのような、種々な賦形剤を含有する錠剤を、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン及びアラビアゴムのような造粒結合剤と共に、例えば、澱粉（好ましくは、トウモロコシ澱粉、ジャガイモ澱粉若しくはタピオカ澱粉）、アルギン酸及びある一定の複合シリケートのような種々な崩壊剤とともに、用いることができる。さらに、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクのような滑剤が、錠剤形成のためにしばしば非常に有用である。同様な種類の固体組成物を、ゼラチンカプセル中の充填剤として用いることもでき；これに関連して好ましい物質には、ラクトース又は乳糖だけでなく、高分子量ポリエチレングリコールなどもある。経口投与のために水性懸濁液及び／又はエリキシル剤が望ましい場合には、活性化合物を種々な甘味剤又はフレーバー剤、着色剤又は染料と組み合わせることができ、必要に応じて、乳化剤及び／又は懸濁化剤も、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びこれらの種々な同様な組み合わせのような希釈剤と共に組み合わせることができる。
【０１４６】
非経口投与の場合、胡麻油若しくは落花生油中又は水性プロピレングリコール中の活性化合物の溶液を用いることができる。水溶液は、必要に応じて適当に緩衝化しなければならず（好ましくは、８より大きいｐＨ）、液体希釈剤は最初に等張性にしなければならない。これらの水溶液は、静脈内注射に好適である。油性溶液は、関節内、筋肉内及び皮下注射に好適である。無菌条件下での総てのこれらの溶液の製造は、当業者に周知の標準製薬技術によって容易におこなうことができる。
【０１４７】
さらに、活性化合物を、局所投与することも可能であり、これは標準的製薬法に従って、クリーム、ゼリー、ゲル、ペースト、パッチ、軟膏等によっておこなうことができる。
【０１４８】
ヒト以外の動物、例えば、家畜又は家庭内動物への投与の場合、活性化合物を、動物の飼料に含めて又は経口的にドレンチ組成物として投与することができる。
【０１４９】
また、活性化合物を、例えば小さい単ラメラ小胞、大きい単ラメラ小胞及び多重ラメラ小胞のようなリポソーム放出系として投与することもできる。リポソームは、例えばコレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリンのような、種々のリン脂質から形成することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
【図１】Ａ形のアジスロマイシンの計算粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図２】Ａ形のアジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図３】図１と図２を重ねた図であって、下の方がＡ形アジスロマイシンの計算回折パターン（図１）であり、上の方がＡ形アジスロマイシンの実験回折パターン（図２）であり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図４】Ｃ形アジスロマイシンの計算粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図５】Ｄ形アジスロマイシンの計算粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図６】Ｄ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図７】図５と図６を重ねた図であって、下の方がＤ形アジスロマイシンの計算回折パターン（図５）であり、上の方がＤ形アジスロマイシンの実験回折パターン（図６）であり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図８】Ｅ形アジスロマイシンの計算粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図９】Ｆ形アジスロマイシンの計算粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１０】Ｆ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１１】図９と図１０を重ねた図であって、下の方がＦ形アジスロマイシンの計算回折パターン（図９）であり、上の方がＦ形アジスロマイシンの実験回折パターン（図１０）であり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１２】Ｇ形アジスロマイシンの計算粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１３】Ｇ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１４】図１２と図１３を重ねた図であって、下の方がＧ形アジスロマイシンの計算回折パターン（図１２）であり、上の方がＧ形アジスロマイシンの実験回折パターン（図１３）であり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１５】Ｊ形アジスロマイシンの計算粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１６】Ｊ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１７】図１５と図１６を重ねた図であって、下の方がＪ形アジスロマイシンの計算回折パターン（図１５）であり、上の方がＪ形アジスロマイシンの実験回折パターン（図１６）であり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１８】Ｍ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図１９】Ｎ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図２０】非晶質アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図２１】Ａ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２２】Ｄ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２３】Ｆ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２４】Ｇ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２５】Ｊ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２６】Ｍ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２７】Ｎ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２８】非晶質アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図２９】Ｇ形アジスロマイシンを含有する医薬錠剤の13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図３０】Ｑ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図３１】Ｒ形アジスロマイシンの実験粉末Ｘ線回折パターンであり、横座標の目盛りの単位は、度（２シータ（２θ））であり、縦座標は強度カウント値である。
【図３２】Ｈ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図３３】Ｒ形アジスロマイシンの13Ｃ固体ＮＭＲスペクトルである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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