(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【化１】
0004417548.tif 000014
(ここで、R1は、-(CH2)nCR5＝CR6R7；-(CH2)mC(X)NR8R9；又は
【化２】
0004417548.tif 000015
であり、
R2は、H、-CH3、-OH、又は-OCH3であり；
R3は、-CH3、-OH、又は-OCH3であり；
R4は、-CH3、又は-CH2CH3であり；
R5とR6は、独立に、H、又は-C1-4アルキルであり；
R7は、-CN、-C1-4アルキル-OH、-C(O)NR10R11、-C(O)NR12R13、-C1-4アルキル-NR10R11、-C(O)OR12、-C(NH2)(NOR12)、又はメチルで置換されたオキサジゾールであり；
R8とR9は、独立に、水素、又は-C1-7アルキルであり；
R10とR11は、独立に、メチル若しくはエチルであるか、又は両者でその窒素原子を介して結合されたモルホリノ基を形成しており；
R12及びR13は、独立に、H、-C1-12アルキル、-C2-12アルケニル、-C2-12アルキニル、-O-C1-12アルキル、-O-C2-12アルケニル、-O-C2-12アルキニル、-C3-7シクロアルキル、-C3-7シクロアルケニル、２−ジメチルアミノ−エチル、単環または二環アリール、又は-Yであり；
Xは、酸素又は硫黄であり；
Yは、ハロゲンであり；
nは、0,1,又は2から選択される整数であり；
mは、1又は2の整数であり；
pは、1〜4から選択される整数である）
【請求項２】
式(I)の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【化３】
0004417548.tif 000016
(ここで、R1は、-(CH2)nCR5＝CR6R7；-(CH2)mC(X)NR8R9；又は
【化４】
0004417548.tif 000017
であり、
R2は、-CH3、-OH、又は-OCH3であり；
R3は、H、-CH3、-OH、又は-OCH3であり；
R4は、-CH3、又は-CH2CH3であり；
R5とR6は、独立に、H、又は-C1-4アルキルであり；
R7は、-CN、-C1-4アルキル-OH、-C(O)NR10R11、-C(O)NR12R13、-C1-4アルキル-NR10R11、-C(O)OR12、-C(NH2)(NOR12)、又はメチルで置換されたオキサジゾールであり；
R8とR9は、独立に、水素、又は-C1-7アルキルであり；
R10とR11は、独立に、メチル若しくはエチルであるか、又は両者でその窒素原子を介して結合されたモルホリノ基を形成しており；
R12及びR13は、独立に、H、-C1-12アルキル、-C2-12アルケニル、-C2-12アルキニル、-O-C1-12アルキル、-O-C2-12アルケニル、-O-C2-12アルキニル、-C3-7シクロアルキル、-C3-7シクロアルケニル、２−ジメチルアミノ−エチル、単環または二環アリール、又は-Yであり；
Xは、酸素又は硫黄であり；
Yは、ハロゲンであり；
nは、0,1,又は2から選択される整数であり；
mは、1又は2の整数であり；
pは、1〜4から選択される整数である）
【請求項３】
式(I)の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【化５】
0004417548.tif 000018
(ここで、R1は、-(CH2)nCR5＝CR6R7；-(CH2)mC(X)NR8R9；又は
【化６】
0004417548.tif 000019
であり、
R2とR3は、独立に、H、-CH3、-OH、又は-OCH3であり；
R4は、-CH3であり；
R5とR6は、独立に、H、又は-C1-4アルキルであり；
R7は、-CN、-C1-4アルキル-OH、-C(O)NR10R11、-C(O)NR12R13、-C1-4アルキル-NR10R11、-C(O)OR12、-C(NH2)(NOR12)、又はメチルで置換されたオキサジゾールであり；
R8とR9は、独立に、水素、又は-C1-7アルキルであり；
R10とR11は、独立に、メチル若しくはエチルであるか、又は両者でその窒素原子を介して結合されたモルホリノ基を形成しており；
R12及びR13は、独立に、H、-C1-12アルキル、-C2-12アルケニル、-C2-12アルキニル、-O-C1-12アルキル、-O-C2-12アルケニル、-O-C2-12アルキニル、-C3-7シクロアルキル、-C3-7シクロアルケニル、２−ジメチルアミノ−エチル、単環または二環アリール、又は-Yであり；
Xは、酸素又は硫黄であり；
Yは、ハロゲンであり；
nは、0,1,又は2から選択される整数であり；
mは、1又は2の整数であり；
pは、1〜4から選択される整数である）
【請求項４】
XがOである請求項１から３の何れか１項に記載の化合物、塩または溶媒和物。
【請求項５】
R1が-(CH2)nCR5=CR6R7である請求項１から３の何れか１項に記載の化合物、塩または溶媒和物。
【請求項６】
R2とR3が、独立に、H、-OH、又は-OCH3から選択される請求項３に記載の化合物、塩または溶媒和物。
【請求項７】
R2とR3がHである請求項６に記載の化合物、塩または溶媒和物。
【請求項８】
R7が、-C(O)NR10R11、-C(O)NR12R13、-C(O)OR12、又は-C(NH2)(NOR12)である請求項１から３の何れか１項に記載の化合物、塩または溶媒和物。
【請求項９】
R12及びR13が、独立に、H、-C1-12アルキル、-C2-12アルケニルである請求項１から８の何れか１項に記載の化合物、塩または溶媒和物。
【請求項１０】
請求項１から９の何れか１項に記載の化合物、塩または溶媒和物と、薬学的に許容可能な担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
骨粗鬆症の治療または予防のための医薬の製造における、請求項１から９の何れかに１項に記載の化合物、塩または溶媒和物の使用。
【請求項１２】
関節炎疾患、乳癌または心血管疾患の治療または予防のための医薬の製造における、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の使用。
【化７】
0004417548.tif 000020
(ここで、R1は、-(CH2)nCR5＝CR6R7；-(CH2)mC(X)NR8R9；又は
【化８】
0004417548.tif 000021
であり、
R2とR3は、独立に、H、-CH3、-OH、又は-OCH3であり；
R4は、-CH3、又は-CH2CH3であり；
R5とR6は、独立に、H、又は-C1-4アルキルであり；
R7は、-CN、-C1-4アルキル-OH、-C(O)NR10R11、-C(O)NR12R13、-C1-4アルキル-NR10R11、-C(O)OR12、-C(NH2)(NOR12)又はメチルで置換されたオキサジゾールであり；
R8とR9は、独立に、水素、又は-C1-7アルキルであり；
R10とR11は、独立に、メチル若しくはエチルであるか、又は両者でその窒素原子を介して結合されたモルホリノ基を形成しており；
R12及びR13は、独立に、H、-C1-12アルキル、-C2-12アルケニル、-C2-12アルキニル、-O-C1-12アルキル、-O-C2-12アルケニル、-O-C2-12アルキニル、-C3-7シクロアルキル、-C3-7シクロアルケニル、２−ジメチルアミノ−エチル、単環または二環アリール、又は-Yであり；
Xは、酸素又は硫黄であり；
Yは、ハロゲンであり；
nは、0,1,又は2から選択される整数であり；
mは、1又は2の整数であり；
pは、1〜4から選択される整数である）
【請求項１３】
前記医薬が関節炎疾患の治療のための医薬である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記医薬が乳癌の治療のための医薬である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記医薬が心血管疾患の治療のための医薬である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１６】
前記医薬が関節炎疾患の予防のための医薬である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１７】
前記医薬が乳癌の予防のための医薬である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１８】
前記医薬が心血管疾患の予防のための医薬である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１９】
式(II)の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物。
【化９】
0004417548.tif 000022
【請求項２０】
請求項１９に記載の化合物、塩または溶媒和物と、薬学的に許容可能な担体とを含む、乳癌の治療または予防のための薬学的組成物。
【請求項２１】
乳癌の治療または予防のための医薬の製造における、請求項１９に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２２】
式(III)の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容可能な担体とを含む、乳癌の治療または予防のための薬学的組成物。
【化１０】
0004417548.tif 000023
【請求項２３】
乳癌の治療または予防のための医薬の製造における、式(III)の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の使用。
【化１１】
0004417548.tif 000024
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、組織依存的なエストロゲン様活性及び抗エストロゲン活性を有するエストロゲン受容体に対する新規非ステロイド系リガンド、該リガンドの製造方法、並びに種々の病状の治療におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
エストロゲンは、ヒトにおける基礎的な性的特性の発達及び維持を刺激するステロイドホルモンの重要なクラスである。過去、エストロゲンは、ある種の医学的症状及び疾病の治療に有用であることが見出されてきた。例えば、卵巣によって産生されるステロイドホルモンであるエストラジオールは、骨粗鬆症、心血管疾患、月経前症候群、閉経に伴う血管運動症状、萎縮性膣炎、外陰萎縮症、雌性生殖機能不全、原発性卵巣不全、毛髪過成長、及び前立腺癌の治療に有用である。不幸にも、このようなステロイド類の投与は、心筋梗塞、血栓塞栓症、脳血管疾患、及び子宮内膜癌を含む多くの副作用を伴う。
【０００３】
例えば、エストロゲンによるホルモン置換療法(HRT；hormone replacement therapy)は、閉経後の女性の骨粗鬆症に対して、臨床的に有効な治療であることが決定されており、臨床試験によって、股関節骨折が50%減少し、心血管疾患が30%減少することが実証されているにもかかわらず、現在、HRT療法に適した女性の15%未満がHRT療法を受けているにすぎない。HRTの拒否は、エストロゲンのみを用いたHRTでは子宮内膜癌のリスクが2倍増大するという観察、及びエストロゲン療法と乳癌との関連に対する患者と医師の不安に起因するものである。臨床的に証明されたわけではないが、乳癌のリスクに対するこのような疑念のため、相当なパーセンテージの閉経後の女性に対してHRTが禁忌となっている。プロゲスチン類を用いた併用療法は、エストロゲンの骨防御効果を維持しつつ、子宮癌に対する保護を与えることが示されているが、プロゲスチンは、使用停止による出血(withdrawal bleeding)、胸痛、及び気分変動等の他の副作用を引き起こす。
【０００４】
エストロゲン療法に伴う諸問題を考慮して、有効な非ステロイド系エストロゲン・抗エストロゲン化合物を同定するために、相当量の研究が行われてきた。一般的に、このような化合物は全て、エストロゲン受容体に結合し、受容体の部位に応じてエストロゲン作用又は抗エストロゲン作用を引き起こし得るので、エストロゲン様作用及び抗エストロゲン作用を有するものとして特徴づけ得る。過去、様々な非ステロイド系エストロゲン化合物及び抗エストロゲン化合物のエストロゲン受容体に対する結合は、これらの化合物の化学構造に繰り返して見受けられる共通の薬理部分(pharmacophore)（以下のスキームAに示されている）の存在によるものと推測されてきた。
【化３】
0004417548.tif 000002
【０００５】
該薬理部分は、後に構造的な骨格となり、該骨格の周囲に非ステロイド系のエストロゲン・抗エストロゲン化合物が構築された。ヘキセストロール、タモキシフェン、クロマン、トリフェニルエチレン、DES、クロミフェン、セントクロマン、ナフォキシデン、トリオキシフェン、トレミフェン、ジンドキシフェン、ラロキシフェン、ドゥロロキシフェン、DABP、TAT-59、及び他の構造的に関連した化合物のような様々な化合物の構造体中に前記部分が存在することは、エストロゲン受容体結合特異性に対する分子的な鍵であることが、本分野で認められるに至っている。
【０００６】
非ステロイド系抗エストロゲンの注目すべき一例は、タモキシフェン(TAM)、(Z)-1,2-ジフェニル-1-[4-[2-(ジメチルアミノ)エトキシ]フェニル]-1-ブテンであり、これはトリフェニルエチレン誘導体である。タモキシフェンは、胸及び卵のような一次標的組織でのエストロゲンの増殖促進効果を効果的に拮抗する。
【０００７】
現在、該非ステロイド系エストロゲン及びラロキシフェンとして知られる構造的に類似の化合物が、骨粗鬆症、心血管疾患、及び乳癌の治療及び／又は予防のために、さらに他の様々な病状を治療及び／又は予防するために開発されている。両化合物は、骨の無機質密度に対する骨防御効果とともに、血清コレステロールレベルに対する正の効果、及び乳癌と子宮癌の発生を顕著に減少せしめることが示されている。不幸にも、タモキシフェンとラロキシフェンは、何れも、子宮内膜癌及び肝細胞癌のような生命に脅威を与える、許容し得ないレベルの副作用を有している。
【０００８】
従って、全ての望ましくない副作用を最小限に抑えながら、骨防御活性のような有益な特性を保持する一連の非ステロイド系化合物を開発することが有用であろう。上記薬理部分骨格がエストロゲン受容体結合特異性に必須であることは現在受け入れられているが、今、本明細書に記載の如く、このような薬理部分をベースとする化合物の上にある部分を取り込むことによって、癌のリスクの増大等の望ましくない特性を最小限に抑えながら、骨防御機能のような有益な特性が最大となるようなある種の新規エストロゲン結合リガンドを構築することができることが発見された。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明には、式(I)：
【化４】
0004417548.tif 000003
【００１０】
（ここで、R1-R4は、以下で定義される。）
で表される化合物群が含まれる。式(I)の化合物を一以上含む薬学的組成物、及びそれらの使用、それらの製造方法、その合成に含まれる中間体も本発明の一部である。
【００１１】
本発明には、式(I)：
【化５】
0004417548.tif 000004
【００１２】
(ここで、R1は、-(CH2)nCR5＝CR6R7；-(CH2)mC(X)NR8R9；又は
【化６】
0004417548.tif 000005
【００１３】
であり、
R2とR3は、独立に、-H、-CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、又はCH2(CH3)2であり；
R4は、-CN、-NO2、-CH3、-CH2CH3、CH2CH2-Y又は-Yであり；
R5とR6は、独立に、H、-C1-4アルキル、-C2-4アルケニル、-C2-4アルキニル、-X-C1-3アルキル、-X-C2-4アルケニル、-X-C2-4アルキニル、又は-Yであり；
R7は、-CN、-C1-4アルキル-OH、-C(O)O(CH3)3、-C(O)NR10R11、-C(O)NR12R13、-C1-4アルキル-NR10R11、-C(O)R12、-C(O)OR12、-C(O)NR12OR13、-C(O)NHC(O)R12、-C(O)NHCH2R12、-C(NH2)(NOR12)、-S(O)R12、-S(O)(O)(OR12)、-S(O)(O)(NHCO2R12)、PO3R12、-P(O)(NR12R13)(NR12R13)、-P(O)(NR12R13)(OR14)、-CONR12(CH2)qOCH3、-CONR12(CH2)qNR8R9、又はメチルで置換されたオキサジゾール(oxadizole)であり；
R8とR9は、独立に、水素、-C1-7アルキル、-C3-7シクロアルキル、-O-C1-7アルキル、C1-7アルキル-Y、又はフェニルであり；
R10とR11は、独立に、メチル又はエチルであるか、又は両者でその窒素原子を介して結合されたモルホリノ基を形成しており；
R12、R13、及びR14は、独立に、-H、-C1-12アルキル、-C2-12アルケニル、-C2-12アルキニル、-O-C1-12アルキル、-O-C2-12アルケニル、-O-C2-12アルキニル、-C3-7シクロアルキル、-C3-7シクロアルケニル、直鎖及び環状ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール、又は-Yであり；
Xは、酸素又は硫黄であり；
Yは、ハロゲンであり；
nは、0,1,又は2から選択される整数であり；
mは、1又は2の整数であり；
pは、1〜4から選択される整数であり；
qは、1〜12の整数である）
で表される化合物群が含まれる。
【００１４】
本明細書において単独で、又は組み合わせて使用される「アルキル」なる語は、他の鎖長表示が後置されていなければ、C1〜C7の直鎖又は分枝鎖飽和炭化水素基と定義される。本明細書において、「低級アルキル」なる語は、他の鎖長表示が後置されていなければ、C1〜C4として定義される。例えば、アルキル基には、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、イソブチル、n-ブチル、n-ヘキシル等が含まれる。
【００１５】
本明細書において、「ハロアルキル」なる語は、１以上のハロゲンで置換されたアルキルとして定義される。本明細書において、「シクロアルキル」なる語は、C3〜C7の環状炭化水素基(radical)を含むものとして定義される。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロブチル、及びシクロペンチルが含まれる。
【００１６】
本明細書において、単独の、又は組み合わされた「アリール」なる語は、単環又は多環基、好ましくは単環又は二環基、すなわち、置換されていなくてもよく、あるいは、例えばハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、及びアルキルスルフォニルから選択される1以上の置換基、とりわけ1〜3つの置換基で置換されていてもよいフェニル又はナフチルとして定義される。アリール基の例には、フェニル、2-クロロフェニル、3-クロロフェニル、4-クロロフェニル、2-メチルフェニル、4-メトキシフェニル、3-トリフルオロメチルフェニル、4-ニトロフェニル等が含まれる。
【００１７】
本明細書において、「ヘテロアリール」なる語は、必要に応じて融合したベンゼン環を有することができ、置換されていなくてもよく、あるいは、例えばハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、及びアルキルスルフォニルから選択される1以上の置換基、とりわけ1〜3つの置換基で置換されていてもよい5員環又は6員環の複素環式芳香基として定義される。
【００１８】
本明細書において、「ハロゲン」なる語には、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を含むものとして定義される。
【００１９】
「直鎖及び環状ヘテロアルキル」なる語は、化学的に安定な種を与え得る窒素又は硫黄のような他の原子で炭素原子が適切に置換された「アルキル」という語同じものとして定義される。
【００２０】
さらに、上記官能基は、分子構造又は結合スキームを明らかにすることが望ましいと思われる場合には、ある種の原子又は原子群を囲む括弧”()”を用いて記載されている。特に、「O」のような単一原子又は「NH2」のような原子群は、上記官能基の１つの式の中で、括弧内に入れて表示され得る[例えば、R7が、…-C(O)R12、-C(O)OR12、-C(O)NR12OR13、-C(NH2)(NOR12)等である場合を参照]。このような場合、該括弧は、その中に含まれる原子又は原子群が、括弧に囲まれてない化学的に適切な直前の原子に結合していることを表すことを意図している。
【００２１】
より具体的には、例えば、-C(O)R12は、酸素が、括弧に囲まれておらず、古典的な軌道電子結合理論に従って、化学的に結合に適した直前の原子である炭素に結合された官能基を表すことを意図している。あるいは、-C(NH2)(NOR12)は、NH2とNOR12に存在する窒素が何れも、括弧に囲まれていない直前の原子である炭素に結合した官能基を表すことを意図している。これらの例は、以下の(a)及び(b)に示されている。当業者であれば、適切な結合スキーム(例えば、一重、二重等)は、軌道結合の規則から明白であることが理解できよう。
【化７】
0004417548.tif 000006
【００２２】
さらに、上記官能基の幾つかは、ある原子又は原子群を囲む括弧の表示”()”であって、直後に下付きのアルファベット又は数字が表記された括弧と共に記載されている[例えば、R7が…-CONR12(CH2)qOCH3]。このような場合、その中に含まれる原子又は原子群が、下付き数字に相当する数だけ、その官能基の中に存在することを表している。例えば、R7が-CONR12(CH2)qOCH3のときq=2であれば、R7=-CONR12CH2CH2OCH3である。
【００２３】
当業者は、式(I)の化合物には、立体中心が存在することに気付くであろう。従って、本発明は、式(I)の全ての可能な立体異性体及び幾何異性体を含み、ラセミ化合物のみならず、光学活性な異性体をも含む。式(I)化合物を単一の鏡像異性体として所望する場合には、最終産物の分割又は異性体として純粋な初発物質若しくは任意の都合のよい中間体からの立体特異的合成の何れかによって取得し得る。最終産物、中間体、又は初発物質の分割は、本分野で公知の任意の適切な方法によって実施し得る。例えば、「Stereochemistry of Carbon Compounds by E. L. Eliel (Mcgraw Hill, 1962)」及び「Tables of Resolving Agents by S.H. Wilen」を参照されたい。さらに、式(I)の化合物の互変異性があり得る場合には、本発明は、該化合物の全ての互変異性形態を含むものとする。
【００２４】
式(I)の具体的な化合物の幾つかを以下に掲載する。その合成は、以下に示されている例の部のごとく行った。
化合物番号
1. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルアクリルアミド；
2. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルプロピオンアミド；
3. 2-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミ
ド；
4. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチル-2-メチル-アクリルアミ
ド；
5. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-ブタ-2-エノン酸ジエチルアミド；
6. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸メチルエステル；
7. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリロ二トリル；
8. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸tert-ブチルエステル；
9. 3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸；
10.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-1-モルフォリン-4-イル-プロパ-2-エン-
1-オン；
11.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-(3-メトキシ-プロピル)アクリルアミ
ド；
12.N,N-ジシクロヘキシル-3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]アクリルアミド；
13.N-(2-ジメチルアミノ-エチル)-3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-エチル
アクリルアミド；
14.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-メチル-N-オクチルアクリルアミド；
15.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]アクリルアミド；
16.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-エチルアクリルアミド；
17.1-アミノ-3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-プロパ-2-エン-1-オンオキシ
ム；
18.3-{2-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-ビニル}-5-メチル-[1,2,4]-オキサジ
アゾール；
19.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-プロパ-2-エン-1-オール；
20.{3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アリル}-ジメチルアミン；
21.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルチオアクリルアミド；
22.3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-(3-ヒドロキシ-プロピル)-アクリルア
ミド
一般的に、式(I)の化合物は、以下の合成スキームに従って調製することができる。以下に記載した全てのスキームでは、必要な場合には、一般的な化学原理に従って保護基を利用しなければならないことが、当業者であれば十分理解できるであろう。これらの保護基は、塩基性、酸性、又は水素化分解条件下での合成のの最終ステップで除去される。これは当業者にとって極めて明白であろう。適切な操作と任意の化学的感応性の保護を利用することにより、以下のスキームB〜Gに記された方法と類似の方法及び例の部に記載された方法によって、本明細書に具体的に明記されていない、式(I)で示される任意の化合物を合成することが可能となる。
【００２５】
一般的に、本発明の化合物を産生するのに用いた合成は、四置換されたE配置の中心二重結合を有するB環の類縁体にアクセスを与えるようにデザインした。式(I)を有する化合物を調製する１つの方法は、臭化物(B)[例えば、(E)-1-ブロモ-2-フェニル-1-(トリメチルシリル)-1ブテン]のような適切な臭化物が、ミラーの方法（Miller, R.B.: Al-Hassan, M.I. Stereospecific Synthesis of (Z)-Tamoxifen via Carbometalation of Alkynylsilanes, J. Org. Chem. 1985, 50, 2121-2123参照）を用いてアセチレン(a)からグラム単位の量で合成される以下のスキームBを取り込む。臭化物(b)は、所望のアルデヒド(d)を産生するためのパラジウム触媒下において、単一の異性体として、(c)のような適切なアリールホウ酸に結合される。臭化物(b)とアルデヒド(d)は、B環タモキシフェン類縁体を合成するための用途の広い中間体である。
【化８】
0004417548.tif 000007
【００２６】
以下のスキームCに記載されているように、臭化物(b)とアリールホウ酸(e)との結合は、上掲した化合物１であり、以下の例２で例示されているa,b-不飽和ジエチルアミド(g)を与える。このようなルートによる該ジエチルアミドの合成は、おそらくは、アリールホウ酸(e)の熱的不安定性のために、低収率であると思われることを銘記すべきである。本発明の化合物の開発の間に、ジエチルアミド(g)が興味深い化合物として同定されたことにより(すなわち、化合物1：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルアクリルアミド)、類縁体を調製するためのより効率的な合成に対する必要が生じた。このために、アルデヒド(d)とホスホネート(f)のホーナー・エモンス反応(Horner-Emmons)は、有意に高い収率でジエチルアミド(g)を与えることを見出した。
【化９】
0004417548.tif 000008
【００２７】
さらに、上記スキームCは、a,b-不飽和ジエチルアミド(g)が、
(a)ラウエッソンの試薬を用いて、チオアミド(h)、[化合物21：3-[4-(1,2-ジフェ
ニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルチオアクリルアミド]に；
(b)水素添加により飽和アミド(i)、[化合物2：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ
-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルプロピオンアミド]に；又は
(c)コーレイイリドを用いて、シクロプロピルアミド(j)、［化合物3：2-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド］に、
転換することができる。
【００２８】
以下のスキームDを参照しながら、三置換されたa,b-不飽和二重結合を取り込むジエチルアミド(g)の類縁体は、(d)のような適切なアルデヒド、又は(n)のような適切なケトンから合成し得る。より具体的には、メチルホスホネート(k)のアルデヒド(d)とのホーナー・エモンス反応は、a-メチルアミド(I)[化合物4：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチル-2-メチル-アクリルアミド]を単一の異性体として与えるために利用でき、ホスホネート(f)とケトン(n)との反応は、b-メチルアミドのEとZの混合物(o,p)[化合物5：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-ブタ-2-エノン酸ジエチルアミド−(Z)及び(E)異性体]を得るために利用できる。b-メチルアミドのEとZの混合物(o,p)は、その後の1H NMR NOE研究によって割り振られたそれらの相対立体化学を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより、分離することができる。
【化１０】
0004417548.tif 000009
【００２９】
以下のスキームEを参照しながら、カルボン酸(r)[化合物9：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸]は、メチルエステル(q)[化合物6：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸メチルエステル]の鹸化によって誘導し得る。これは、順に、スキームDに例示されているように、トリメチルホスホノアセテートとアルデヒド(d)の縮合から合成される。スキームEは、一連の直鎖及び環状アルキル及び複素アルキルアミンに結合して、多様な一連のa,b不飽和アミドを合成するためのキーとなる中間体として、カルボン酸(r)を利用する方法も示している。
【化１１】
0004417548.tif 000010
【００３０】
以下のスキームFを参照しながら、オキサジアゾール(v)[化合物18：3-{2-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-ビニル}-5-メチル-[1,2,4]-オキサジアゾール]は、ニトリル(t)[化合物7：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリロ二トリル]をヒドロキシルアミンと反応させて、アミドオキシム(u)[化合物18：3-{2-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-ビニル}-5-メチル-[1,2,4]-オキサジアゾール]を得た後、無水酢酸で環状化することによって合成し得る。
【化１２】
0004417548.tif 000011
【００３１】
以下のスキームGを参照しながら、アルコール(x)[化合物19：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-プロパ-2-エン-1-オール]とジメチルアミン(y)[化合物20：{3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アリル}-ジメチルアミン]は、水素化物還元後、メシル化、及びジメチルアミンによるアルキル化によって、t-ブチルエステル(w)[化合物8：3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸tert-ブチルエステル]から合成し得る。
【化１３】
0004417548.tif 000012
【００３２】
一般的な操作
特に断らなければ、全ての初発物質は製造業者から購入して、さらなる精製を行わずに使用した。融点は、Mel-Temp装置上の細管チューブの中で決定し、補正していない。1H NMRと13C NMRスペクトルは、CDCl3中のTMSを内部標準として、ヴァリアン・ユニティー-300とヴァリアン・XRL-300分光光度計を用いて得た。化学シフトは、ppm(s)で表されており、多重度は、s(シングレット)、d(ダブレット)、t(トリプレット)、q（カルテット）、m（マルチプレット）、br(ブロード)はで示される。カップリング定数(J)は、Hzで記載されている。微量分析は、アトランティック・マイクロラブズ(Atlantic Microlabs)社で行い、全ての値は、理論値の±0.4%以内であった。質量分析は、高速原子衝撃イオン化によるJEOL JMS-AX505HA質量分析で記録した。赤外線スペクトルは、パーキンエルマー1280赤外分光光度計で記録した。分析用薄層クロマトグラフィーは、EMサイエンスのシリカ60 F254ガラスコートプレート上で行い、紫外光、ヨウ素、又はモリブデン酸アンモニウムによって可視化した。フラッシュクロマトグラフィーは、EMサイエンスの230〜400メッシュのシリカゲルを用いて行った。MPLCは、ライニン・ダイナマックス(Rainin Dynamax)UV-C検出器とメルック・ローバーSi60(40〜63mm)シリカゲルカラムを用いて、ファルマシアLKBシリーズシステムで行った。HPLCは、ライニン・ダイナマックスC18PRカラム又はライニン・ダイナマックス・シリカカラムの何れかを用いて、島津LC-6AシリーズHPLCで行った。全ての溶媒は試薬グレードであり、さらに精製せずに使用した。(E)-1-ブロモ-2-フェニル-1-(トリメチルシリル)-1-ブテン[(b)、スキームB、上記参照]は、前出のミラーの方法によって調製し、4ホルミルホウ酸は、ノース(Noth)の方法(Feulner, H.；Linti, G.；Noth, H. Preparation and Structural Characterization of p-Formylbenzeneboronic Acid. Chem.Ber, 1990, 123, 1841-1843参照)によって調製した。ホウ酸[それぞれ(e)と(m)、スキームC及びD、上記参照]は、それぞれ、ギルマン(Gilman)の方法(Gilman, H.；Santucci, L.；Swayampati, D. R.；Ranck, R.O. Hydroxybenzeneboronic Acids and Anhydrides. J. Am. Chem. Soc. 1957, 79, 3077-3082)を用いて、グラクソグループリサーチ社、ハートフォード、イギリスにおいて、それぞれ、3-(4-ブロモフェニル)-N,N-ジエチルアクリルアミドと4-ブロモアセトフェノンから調製した。
例
以下の化合物は上記の一般的合成操作に従って調製され、本発明の様々な化合物の製造方法をよりよく説明するために、ここに示されている。以下の例は例示であり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
例１
(Z)-1,2-ジフェニル-1-(4-フォルミルフェニル)-1-ブテン
10mLのDME中の、 (E)-1-ブロモ-2-フェニル-1-(トリメチルシリル)-1-ブテン1.0g(3.5mmol)、ホウ酸625mg(4.2mmol、1.2当量) [(c)、スキームB参照]、及びPd(PPh3)4400mg(0.35mmol、0.1当量)の溶液を、2mLの2N Na2CO3で処理した後、6時間還流した。該溶液を室温まで冷却し、NaHCO3(40mL)中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し(2×40mL)、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。溶出液として20/1のヘキサン/酢酸エチルを使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによる精製によって、上に名前を記した所望の化合物700mg(69%)が黄色固体として得られた：1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 9.82(s, 1H), 7.55-7.00(m, 14H), 2.48(q, 2H), 0.97(t, 3H); 低分解能 MS m/e 313(MH+). [上記参照：例えばスキーム B (d)]
例２
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルアクリルアミド
操作A  5mLのDME中の、 (E)-1-ブロモ-2-フェニル-1-(トリメチルシリル)-1-ブテン51mg(0.18mmol、1.1当量)、アリールホウ酸40mg(0.16mmol) [(e)、スキームC参照]、及びPd(PPh3)420mg(16.2mmol、0.1当量)の溶液を、0.5mLの2N Na2CO3で処理した後、2時間還流した。該溶液を室温まで冷却し、NaHCO3(20mL)中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し(2×20mL)、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。溶出液として3/1のヘキサン/酢酸エチルを使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによる精製によって、上に名前を記した所望の化合物10mg(15%)が白色固体として得られた：融点 138-140℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.53(d, 1H, J = 15.4), 7.38-7.11(m, 12H), 6.86(d, 2H, J = 8.3), 6.66(d, 1H, J = 15.4), 3.40(m, 4H), 2.47(q, 2H, J = 7.3), 1.19(m, 6H), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 高分解能 MS 計算値 410.2483, 実測値 410.2484
操作B  一般的操作の中で記載したように、アルデヒド、(Z)-1,2-ジフェニル-1-(4-フォルミルフェニル)-1ブテンとのホーナーエモンスカップリング(例７、下記参照)にジエチルジエチルカルバモイルメチレンホスホネート[(f)、スキームC参照]を使用した後、溶出液として、20/1〜2/1のヘキサン/酢酸エチルのグラジエントを用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを使用して精製することによって、上に名前を記した所望の化合物110mg(42%)が白色固体として得られた：融点 137-138℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.53(d, 1H, J = 15.4), 7.36-7.11(m, 12H), 6.86(d, 2H, J = 8.3), 6.66(d, 1H, J = 15.4), 3.42(m, 4H), 2.47(q, 2H, J = 7.3), 1.19(m, 6H), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 元素分析(C29H31NO) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム C(g)]
例３
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルチオアクリルアミド
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルアクリルアミド(例２参照)65mg(0.16mmol)とラウエッソンの試薬39mg(95.2mmol、0.6当量)の混合物を、2mLのドライトルエン中で、2時間85℃で加熱した。該溶液を室温まで冷却し、直接シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーカラムにかけた。10/1のヘキサン/酢酸エチルでの溶出による精製によって、上に名前を記した所望の化合物のチオアミド54mg(83%)が黄色の泡として得られた：融点 43-61℃: 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.85(d, 0.5H), 7.75(d, 0.5H), 7.65(d, 0.5H), 7.40-6.80(m, 13.5H), 4.05(m, 2H), 3.70(m, 2H), 2.45(m, 2H), 1.30(m, 6H), 0.95(m, 3H); 13C NMR(CDCl3, 75 MHz) s 193.83, 144.56, 143.96, 143.18, 143.11, 141.92, 138.26, 133.00, 131.22, 130.83, 129.66, 128.28, 128.01 , 127.91 , 127.86, 127.70, 127.48, 127.02, 126.83, 126.45, 124.04, 48.54, 46.40, 29.19, 13.86, 13.67, 13.62, 11.66; IR(CHCl3) 3050, 1520, 1210, 950, 750; 元素分析(C29H31NS) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム C(h)]
例４
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルプロピオンアミド
1mLのドライトルエン中の、3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチルアクリルアミド(例２参照)50mg(0.12mmol)とトリス(トリフェニルホスフィン)-ロジウム(I)クロライド(ウィルキンソンの触媒)3mgの溶液を、16時間50℃で、H2ガス雰囲気下において攪拌した。該溶液を室温まで冷却して真空下でトルエンを除去した。溶出液として、2/1のヘキサン/酢酸エチルを使用し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで残留物を精製することによって、上に名前を記した所望の上に名前を記した所望の化合物48mg(95%)が無色透明なオイルとして得られた：1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.37-7.11(m, 10H), 6.85(d, 2H, J = 8.3), 6.78(d, 2H, J = 8.3), 3.31(q, 2 H. J = 7.1), 3.08(q, 2H, J = 7.3), 2.81(t, 2H, J = 8.3), 2.44(m, 4H), 1.03(m. 6H), 0.91(t, 3H, J = 7.3): 低分解能 MS m/e 412(MH+); 元素分析(C29H33NO) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム C(i)]
例５
2-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド
2mLのドライジメチルスルフォキシド中の、水素化ナトリウム(オイル中、50%)12mg(0.24mmol、2.0当量)とヨウ化トリメチルオキソスルフォニウム54mg(0.24mmol、2.0当量)の溶液を、室温で30分（この時点で気体の発生は止まった）攪拌した。続いて、0.5mLのジメチルスルフォキシド中の例２で調製したアミド50mg(0.12mmol)の溶液を加え、得られた溶液を50℃にして16時間加熱した。該反応混合物を室温まで冷却し、20mLのH2Oを注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出した。有機層を集めて、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。溶出液として4/1のヘキサン/酢酸エチルを使用して、シリカゲルMPLCで残留物を精製することによって、上に名前を記した所望の化合物32mg(62%)が白色固体として得られた：融点 42-44℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.37-7.10(m, 10H), 6.76(m, 4H), 3.38(q, 4H, J = 7.1), 2.45(q, 2H, J = 7.4), 2.30(m, 1H), 1.79(m, 1H), 1.55(m, 1H), 1.11(m, 7H), 0.92(t, 3H, J = 7.4); 低分解能 MS m/e 424(MH+): 元素分析(C30H33NO) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム C (j)]
例６
(メチル)ジエチルジエチルカルバモイルメチレンホスホネート
KN(TMS)24.4mL(2.2mmol、1.1当量)（トルエン中、0.5M）の溶液を、5mLのドライTHF中のジエチルジエチルカルバモイルメチレンホスホネート500mg(2.0mmol)の冷溶液(-78℃)に添加した。得られた溶液を10分攪拌した後、ヨウ化メチル0.15mL(2.4mmol、1.2当量)を素早く加えた。得られた溶液を室温まで暖めて、1時間攪拌した後、濃塩水(70mL)中に注ぎ、酢酸エチル(2×60mL)で抽出した。有機層を集めて、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。キューゲルロール(Kugelrohr)蒸留で黄色の残留物を精製することによって、上に名前を記した所望の化合物525mg(100%)が無色透明のオイルとして得られた： 0.15 torrでb.p.155℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 4.18(m, 4H), 3.60(m, 1H), 3.22(m, 4H), 1.37(m, 9H), 1.18(m, 6H). [上記参照：例えばスキーム C(k)]
例７
(Z)-1,2-ジフェニル-1-(4-フォルミルフェニル)-1ブテンを用いたホーナーエモンス反応の一般的操作
ドライTHF中の適切なホスホネート1.2当量の攪拌されている0℃の溶液に、KN(TMS)21.2当量（トルエン中、0.5M）の溶液を添加した。得られた溶液を0℃で15分攪拌した後、-78℃に冷却し、THF中の(Z)-1,2-ジフェニル-1-(4-フォルミルフェニル)-1ブテンの溶液を滴下させて加えた。得られた溶液を室温まで暖めて、4時間攪拌した後、反応を確実に完結させるために50℃にして2時間暖めた。該反応混合物を室温に冷却し、濃塩水中に注ぎ、酢酸エチルで2回抽出した。有機層を集めて、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって残留物を精製した。
例８
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N,N-ジエチル-2-メチル-アクリルアミド
上で利用したように、(メチル)ジエチルジエチルカルバモイルメチレンホスホネートを使用した後、溶出液として、3/1のヘキサン/酢酸エチルを使用し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって、上に名前を記した所望の上に名前を記した所望の化合物36mg(53%)が無色透明なオイルとして得られた：1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.39-7.11(m, 10H), 6.97(d, 2H, J = 8.0), 6.85(d, 2H, J = 7.3), 6.32(s, 1H), 3.38(m, 4H), 2.47(q, 2H, J = 7.3), 2.00(s, 3H), 1.14(t, 6H, J = 7.1), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 424; 元素分析(C30H33NO) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム D(l)]
例９
(Z)及び(E)の3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-ブタ-2-エノン酸ジエチルアミド
上で利用したように、ジエチルジエチルカルバモイルメチレンホスホネートを使用し、5/2のヘキサン/酢酸エチルを用いて、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって、上に名前を記した所望の化合物の(Z)異性体95mg(49%)が白色固体として、(E)異性体11mg(6%)が無色のオイルとして得られた：(Z)-isomerの元素分析データ：融点 109-111℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.39-7.09(m, 12H), 6.85(d, 2H, J = 8.3), 6.20(d, 1H, J = 1.0), 3.44(q, 2H, J = 7.1), 3.33(q, 2H, J = 7.1), 2.47(q, 2H, J = 7.5), 2.16(d, 3H, J = 1.0), 1.13(m, 6H), 0.93(t, 3 H. J = 7.6); 低分解能 MS m/e 424; 元素分析(C30H33NO) C, H, N；(E)-isomerの元素分析:1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.36-7.09(m, 10H), 7.00(d, 2H, J = 8.3), 6.81(d, 2H, J = 8.2), 5.80(d, 1H, J = 1.0), 3.22(q, 2H, J = 7.2), 2.91(q, 2H, J = 7.1), 2.45(q, 2H, J = 7.6), 2.04(d, 3H, J = 1.0), 0.89(m, 6H), 0.74(t, 3H, J = 7.6); 低分解能 MS m/e 424. [上記参照：例えばスキーム D(o,p)].
例１０
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸メチルエステル
上記したトリメチルホスホノアセテートの使用の後、溶出液として20/1のヘキサン/酢酸エチルを用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを使用して精製することによって、上に名前を記した所望の化合物2.33g(100%)が白色固体として得られた：融点 133-135℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.53(d, 1H, J = 16.0), 7.39-7.10 (m, 12H), 6.88(d, 2 H. J = 8.3), 6.27(d, 1H, J = 16.0), 3.76(s, 3H), 2.48(q, 2H, J = 7.3), 0.93(t, 3H, J = 7.3): 低分解能 MS m/e 369; 元素分析(C26H24O2) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム E (q)]
例１１
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]−アクリロニトリル
上記ジエチルシアノメチルホスホネートを使用し、溶出液として10/1のヘキサン/酢酸エチルを用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって、上に名前を記した所望の化合物125mg(93%)が無色透明のオイルとして得られ、これは放置すると固化する：融点 101-102℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.40-7.07(m, 13H), 6.90(d, 2H, J = 8.6), 5,79(d, 1H, J = 16.6), 2.48(q, 2H, J = 7.3), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 元素分析(C25H21N) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム F、(t)]
例１２
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]−アクリル酸tertブチルエステル
上記t-ブチルジエチルホスホノアセテートを使用し、溶出液として20/1のヘキサン/酢酸エチルを用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製した後、加熱したヘキサンから再結晶することによって、上に名前を記した所望の化合物52mg(95%)が白色固体として得られた：融点 139-140℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.44-7.09(m ,13H), 6.86(d, 2H, J = 8.3), 6.20(d, 1H, J = 16.1), 2.47(q, 2H, J = 7.4), 1.49(s, 9H), 0.93(t, 3H, J = 7.4); 低分解能 MS m/e 373, MH+なし; 元素分析(C29H30O2) C, H. [上記参照：例えば(w), スキーム G].
例１３
1-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル-エタノン
8mLのDME中の、 (E)-1-ブロモ-2-フェニル-1-(トリメチルシリル)-1-ブテン172mg(0.60mmol)[(b)、スキームB、上記]、ホウ酸125mg(0.60mmol、1.0当量) [(m)、スキームD参照]、及びPd(PPh3)470mg(0.06mmol、0.1当量)の溶液を、0.4mLの2N Na2CO3で処理した後、18時間還流した。該溶液を室温まで冷却し、濃塩水(20mL)中に注ぎ、酢酸エチルで抽出し(2×20mL)、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。溶出液として20/1のヘキサン/酢酸エチルを使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによる精製によって、上に名前を記した所望の化合物152mg(78%)が黄色固体として得られた：1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.6(d, 2H), 7.45-7.10(m, 10H), 6.98(d, 2H), 2.48(m, 3H), 0.94(t, 3H). [上記参照：例えばスキーム D(n)].
例１４
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸
1/2のメタノール/THF、90mL中の例10で調製したエステル600mg(1.6mmol、1.0当量)の溶液に、2分にわたって、滴下させながら、50mL(16mmol、10.0当量)の0.2M KOHの溶液を加えた。得られた溶液を室温で18時間攪拌し、真空下で溶媒を除去した。残留物を30mLの1M HClに溶かして、酢酸エチルで抽出した(2×60mL)。有機層を集めて、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。溶出液として95/5の塩化メチレン/メタノールを使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで残留物を精製することによって、上に名前を記した所望の化合物370mg(63%)が白色固体として得られた：融点 148-150℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.60(d, 1H, J = 15.9), 7.39-7.10(m, 12H), 6.89(d, 2H, J = 8.1), 6.27(d, 1H, J = 15.9), 2.48(q, 2H, J = 7.3), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 355; 元素分析(C25H22O2) C, H. [上記参照：例えばスキーム E、(r)]
例１５
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリル酸を用いたカップリング反応の一般的操作
ドライ塩化メチレン中の1.0当量の酸(20)の溶液に、1.0当量のEDC、1.3当量のHOBT、及び1.0当量のEt3Nを加えた後、1.2当量の適切なアミンを加えた。得られた溶液を室温で18時間攪拌した後、20mLのH2Oを注ぎ、酢酸エチル(2×60mL)で2回抽出した。有機層を集めて、H2O(1×20mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去し、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー、シリカゲルMPLC、又は再結晶によって、残留物を精製した。
例１６
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-1モルフォリン-4-イル-プロパ-2-エン-1-オン
モルフォリンの使用後、溶出液として2/1のヘキサン/酢酸エチルを用いたシリカゲルMPLCで精製した後、加熱したヘキサンから再結晶することによって、上に名前を記した所望の化合物12mg(14%)が白色固体として得られた：融点 150-154℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.53(d, 1H, J = 15.4), 7.39-7.10(m, 12H), 6.87(d, 2H, J = 8.3), 6.67(d, 1H, J = 15.4), 3.65(m, 8H), 2,48(q, 2H, J = 7.3), 1.26(broad, 8H), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 424; 元素分析(C29H29NO2) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム E(s)]
例１７
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-(3-メトキシ-プロピル)-アクリルアミド
3-メトキシプロピルアミンの使用の後、加熱した2/1のヘキサン/酢酸エチルから再結晶により精製し、続いて、溶出液として1/2のヘキサン/酢酸エチルを用いたシリカゲルMPLCによって、上に名前を記した所望の化合物20mg(30%)が白色固体として得られた：融点 132-135℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.43(d, 1H, J =15.7), 7.36-7.10(m,12H), 7.86(d, 2H, J = 8.3), 6.20(d, 1H, J = 15.7), 3.46(m, 4H), 3.34(s,1H), 2.48(q, 2H, J = 7.5), 1.80(m, 2H), 0.92(t, 3H, J = 7.5); 低分解能 MS m/e 426; 元素分析(C29H31NO2) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム E(s)]
例１８
N,N-ジシクロヘキシル-3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アクリルアミド
ジシクロヘキシルアミンの使用の後、加熱した2/1のヘキサン/酢酸エチルから再結晶で精製して、上に名前を記した所望の化合物29mg(28%)が白色固体として得られた：融点 194-200℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.43-7.11(m, 13H), 6.86(d, 2 H, J = 8.3), 6.69(d, 1H, J = 15.4), 3.50(m, 2H), 2.48(q, 2H, J = 1.3), 2.25(m, 2H), 1.77-1.62(2 m, 12H), 1.30-1.10(m, 8H). 0.93(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 518; 元素分析(C37H43NO) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム E(s)]
例１９
N-(2-ジメチルアミノ-エチル)-3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-エチル-アクリルアミド
2-ジメチルアミノエチルアミンの使用の後、溶出液として15/1の塩化メチレン/メタノールを用いたシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、続いてEt2O中の1.1当量の蓚酸を用いて蓚酸水素塩を形成させることにより、上に名前を記した所望の化合物58mg(53%)が白色固体として得られた：融点 145-147℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.51(d, 1H, J =15.1), 7.38-7.10(m, 12H), 6.88(d, 2H), 6.60(d, 1H, J = 15.1), 6.12(m, 2H), 3.70(m, 2H), 3.47(m, 3H), 3.35(m, 2H). 2.90(m, 4H), 2.48(q, 2H, J = 7.4), 1.20(m, 2H), 0.93(t, 3H, J = 7.4); 低分解能 MS m/e 453; 元素分析(C31H36N2O C2H2O4) C, H, N. [上記参照：例えば スキーム E (s)]
例２０
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-(3-ヒドロキシ-プロピル)-アクリルアミド
3-ヒドロキシプロピルアミンの使用の後、溶出液として2/1のヘキサン/酢酸エチルから100%の酢酸エチルへのグラジエントを用いたシリカゲルMPLCで精製した後、加熱したヘキサンから再結晶することにより、上に名前を記した所望の化合物14mg(15%)が白色固体として得られた：融点 144-146℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.47(d, 1H, J =15.6), 7.36-7.10(m, 12H), 7.86(d, 2H, J = 8.3), 6.22(d, 1H, J = 15.6), 3.62(m, 2H), 3.51(m, 2H), 3.25(t, 1H), 2.47(q, 2H, J = 7.3), 1.71(m, 2H), 0.94(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 412; 元素分析(C28H29NO2) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム E (s)]
例２１
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-メチル-N-オクチル-アクリルアミド
N-メチル-N-オクチルアミンの使用の後、溶出液として3/1のヘキサン/酢酸エチルを用いたシリカゲルMPLCで精製することによって、上に名前を記した所望の化合物56mg(41%)が白色固体として得られた：融点 108-109℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.52(d, 1H, J = 15.4), 7.38-7.14(m, 12H), 6.86(d, 2H, J = 7.8), 6.68(dd, 1H, J = 15.4), 3.00(d, 4H), 2.48(q, 2H, J = 7.3), 1.26(m, 8H), 0.93(t, 3H, J = 7.3), 0.86(m, 6H); 低分解能 MS m/e 480; 元素分析(C34H41NO) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム E (s)]
例２２
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]アクリルアミド
CH2Cl2中の飽和アンモニア溶液の使用の後、溶出液として2/1のヘキサン/酢酸エチルを用いたシリカゲルMPLCで精製することによって、上に名前を記した所望の化合物39mg(39%)が白色固体として得られた：融点 200-202℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.47(d, 1H, J = 15.6), 7.39-7.10(m, 12H), 6.87(d, 2H, J = 8.3), 6.27(d, 1H, J = 15.6), 2.48(q, 2H, J = 7.3), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 354; 元素分析(C25H23NO) C, H, N
例２３
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-N-エチルアクリルアミド
2mLのドライ塩化メチレン中の例14で調製した酸120mg(0.3mmol)の攪拌されている0℃の溶液に、塩化オキサリル(CH2Cl2中、2M)の0.2mL(0.4mmol、1.2当量)の溶液を加えた。得られた溶液を室温まで暖めて、一晩攪拌した。真空下で溶媒を除去し、残留物を2mLのエーテルに溶かした後、素早く攪拌されている、2mLの1M NaOH中のエチルアミン23mL(H2O中、70重量%)(0.4mmol、1.2当量)の溶液に加えた。得られた溶液を室温で2時間攪拌した。該反応混合物を酢酸エチル中に注ぎ、抽出した；酢酸エチル(3×10mL)で水層を洗浄した。有機層を集めて、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去し、残留物を加熱した酢酸エチルから再結晶することによって、上に名前を記した所望の化合物45mg(35%)が白色固体として得られた：融点 192-193℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.45(d, 1H, J = 15.6), 7.39-7.10(m, 12H), 6.86(d, 2H, J = 8.1), 6.20(d, 1H, J = 15.6), 3.38(m, 2H, J = 7.3), 2.48(q, 2H, J = 7.3), I.17(t, 3H, J = 7.3), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 382: 元素分析(C27H27NO) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム E (s)]
例２４
1-アミノ-3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-プロパ-2-エン-1-オン-オキシム
4mLのドライメタノール中のヒドロキシルアミン塩酸塩78mg(1.12mmol、3.0当量)の溶液に、メタノール中のナトリウムメトキシド1.16mL(1.16mmol、3.1当量)(1.0M)の溶液を加えた。得られた溶液を15分間還流した後、室温まで冷却した。2mLのドライメタノール/THF(2/1)中の例11で調製したニトリル125mg(0.37mmol)の溶液を加え、反応混合物を16時間還流した。反応物を冷却し、20mLの濃塩水中に注ぎ、酢酸エチル(2×20mL)で抽出し、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製することによって、上に名前を記した所望の化合物61mg(47%)が白色固体として得られた：融点 182-185℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.38-7.07(m, 12H), 6.85(d, 2H, J = 8.0), 6.68(d, 1H, J = 16.7), 6.32(d, 1H, J = 16.7), 4.60(s, br, 2H), 2.47(q, 2H, J = 7.6), 2.17(s, 1H), 0.93(t, 3H, J = 7.6); 低分解能 MS m/e 369;元素分析(C25H24N2O) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム F(u)].
例２５
3-{2-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-ビニル}-5-メチル-[1,2,4]-オキサジアゾール
5mLの無水酢酸中の例24で調製しアミドオキシム60mg(0.16mmol)の溶液を80℃で18時間加熱し、室温まで冷却し、10mLの4N NaOH中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した(2×20mL)。有機層を集めて、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。溶出液として10/1のヘキサン／酢酸エチルを用いたフラッシュクロマトグラフィーで未精製物を精製することによって、僅かに不純な産物21mgが得られ、これを加熱した10/1のメタノール/酢酸エチルから再結晶することにより、上に名前を記した所望の化合物13mg(20%)が白色結晶固体として得られた：融点 158-59℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.50(d, 1H, J = 16.4), 7.37-7.12(m, 13H), 6.87(m, 2H), 2.58(s, 3H), 2.47(q, 2H, J = 7.3), 0.93(t, 3H, J = 7.3); 低分解能 MS m/e 392; 元素分析(C27H24N2O) C, H, N. [上記参照：例えばスキーム F (v)]
例２６
3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-プロパ-2-エン-1-オール
3mLのTHF中の例12で調製した上記エステルの-78℃溶液に、滴下させながら、THF中の1.0M DIBAL-H、1.35mL(1.35mmol、2.5当量)の溶液を加えた。得られた溶液を-78℃で30分攪拌した後、室温まで加熱し、16時間攪拌した。過剰のDIBAL-Hを1NのHClで除いて、反応混合物を20mLの1N HCl中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した(2×20mL)。有機層を集めて、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去した。溶出液として5/1のヘキサン/酢酸エチルを使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで残留物を精製することによって、上に名前を記した所望の化合物94mg(60%)が白色固体として得られた：融点 80-83℃; 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.41-7.02(m, 12H), 6.82(d, 2H, J = 8.3), 6.45(d, 1H, J = 15.8), 6.23(dt, 1H, J = 5.8, 15.9), 4.24(m, 2H), 2.47(q, 2H, J = 7.6), 1.31 e, 1H, J = 5.9), 0.93(t, 3H, J = 7.6); 低分解能 MS m/e 340; 元素分析(C25H24O) C, H. [上記参照：例えばスキーム G (x)].                                例２７
{3-[4-(1,2-ジフェニル-ブタ-1-エニル)-フェニル]-アリル}-ジメチルアミン
ドライジクロロメタン2mL中の、例26で調製した上記アルコール90mg(0.27mmol)と、ジイソプロピルエチルアミン41mg(0.32mmol、1.2当量)を、メタンスルフォニルクロライド33mg(0.29mmol、1.1当量)で処理し、得られた溶液を室温で3時間攪拌した。次に、酢酸エチル10mL中に該溶液を注ぎ、10mLの濃塩水で抽出し、乾燥させ(MgSO4)、真空下で溶媒を除去することにより、108mg(97%)の濃い黄金色のオイルが得られた。すぐに該物質を3mLのドライメタノール中に溶かした後、1mLのジメチルアミンを加えた。得られた溶液を室温で16時間攪拌した後、溶媒を真空下で除去した。残留物を10mLの酢酸エチルに溶かし、1NのHClで抽出した。水層を分離し、3NのNaOHを添加することによって塩基性にした後、酢酸エチルで抽出した(2×10mL)。該塩基性の抽出物を集めて、乾燥し(MgSO4)、溶媒を真空下で除去した。溶出液として、15/1のジクロロメタン／メタノールを用いたシリカゲルMPLCによる残留物を精製することによって、上に名前を記した所望の化合物37mg(40%)が無色透明のオイルとして得られた：1H NMR(CDCl3, 300 MHz) s 7.37-7.09(m, 10H), 7.02(d, 2H, J = 8.5), 6.81(d, 2H, J = 8.1), 6.34(d, 1H, J = 15.9), 6.14(dt, 1H, J = 6.6, 15.9), 3.17(d, 2H, J = 6.6), 2.59-2.42(m, 6H), 1.01(t, 6H, J = 7.3), 0.92(t, 3H, J = 7.4); 低分解能MS m/e 396; 元素分析(C29H33N) C, H, N. [上記参照：例えば(y), スキーム G]
酸性部分を含有する式(I)の化合物は、適切な陽イオンと共に薬学的に許容される塩を形成し得る。薬学的に許容される適切な陽イオンには、アルカリ金属(例えば、ナトリウム又はカリウム)、アルカリ土類金属(例えば、カルシウム又はマグネシウム)陽イオンが含まれる。上記記載に照らせば、本明細書に表記されている本発明の化合物の引用は、式(I)の化合物に加えて、薬学的に許容可能な塩とその溶媒和物をも含むことを意図している。
【００３３】
上述したように、本発明の化合物は、心血管疾患、乳癌、骨粗鬆症、及び関節炎症状のような様々なの治療及び／又は予防に有用である。本発明の化合物が治療及び／又は予防にも有用である疾患又は症状の他の幾つかの例は、月経前症候群、閉経に伴う血管運動症状、萎縮性膣炎、外陰萎縮症、雌性生殖機能不全、原発性卵巣不全、毛髪過成長、及び前立腺癌が含まれる。
【００３４】
当業者であれば、本明細書における治療に関しての言及は、確立された疾病又は症状の治療のみならず予防にも拡張し得ることが理解できるであろう。さらに、治療に使用するのに必要とされる本発明の化合物の量は、治療される症状の性質、患者の年齢及び症状に応じて変わり得ること、及び最終的には担当医又は獣医の判断によることが理解できよう。しかしながら、一般的には、成人のヒトを治療するのに利用される用量は、0.001mg/kg〜約100mg/kg/日の範囲にある。所望の用量は、簡便には、単回投与で与えられるか、又は適切な間隔をおいて、例えば1日に2、3、4又それ以上のサブ投与などのように、分割して投与される。
【００３５】
本発明は、式(I)の化合物の新規薬学的組成物も提供する。本発明の化合物は、未精製の原化学物質として治療的に投与することもできるが、活性成分を薬学的調合物として与えることが好ましい。従って、本発明は、さらに、式(I)の化合物又は薬学的に許容可能なその塩と共に、1以上の薬学的に許容可能な担体、及び必要に応じて他の治療的及び/又は予防的成分を含む薬学的調合物を提供する。該担体は、調合物の他の成分とコンパチブルであり、且つそのレシピエントに対して有害でないという意味で「許容可能」でなければならない。
【００３６】
本発明の調合物は、経口、非経口、舌下、経皮、直腸、吸入、又は口腔投与のよな、表記した疾病の治療に対する標準的な態様で投与し得る。口腔投与の場合、組成物は、通常の態様で調合された錠剤又は糖錠の形態で服用することができる。例えば、経口投与用の錠剤及びカプセルは、結着剤（例えば、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、粘着性デンプン、ポリビニルピロリドン）、賦形剤(例えば、ラクトース、糖、微晶質デンプン、トウモロコシデンプン、リンサンカルシウム、又はソルビトール、潤滑剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、又はシリカ)、崩壊剤(例えば、ポテトデンプン、又はデンプングリコレートナトリウム(sodium starch glycollate))、又はラウリル硫酸ナトリウムのような湿潤剤等の慣用的な賦形剤を含有し得る。錠剤は、本分野において周知の方法によってコートしてもよい。
【００３７】
あるいは、本発明の化合物は、例えば、水性又は油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ、又はエリキシル剤のような経口用液状調製物中に取り込ませもよい。さらに、これらの化合物を含有する調合物は、使用前に、水又は他の適切なビークルで構成するための乾燥産物として提供してもよ。このような液状調製物は、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、又は水素化された食用脂肪のような懸濁化剤；レシチン、ソルビタンモノオレイン酸エステル、又はアラビアゴムのような乳化剤、アーモンドオイル、破砕ココナツのオイル、オイル状エステル、プロピレングリコール、又はエチルアルコールのような非水性担体(食用油を含み得る)；及びメチル又はプロピルp-ヒドロキシベンゾエート、又はソルビン酸のような防腐剤等の慣用添加物を含有してもよい。
【００３８】
このような調製物は、例えば、ココアバター又は他のグリセリドのような慣用的座剤用基剤を含有する座薬として調合してもよい。吸入用の組成物は、典型的には、乾燥したパウダーとして、又はジクロロジフルオロメタン若しくはトリクロロフルオロメタンのような慣用的噴射剤を用いたエアロゾルの形態で投与し得る溶液、懸濁液、又はエマルジョンの形態で与えることができる。典型的な経皮調合物は、クリーム、軟膏、ローション、又はペーストのような慣用的水性ビークル又は非水性ビークルを含み、あるいは医療用硬膏展付器、パッチ、又は膜の形態である。
【００３９】
さらに、本発明の組成物は、注射又は連続的注入による非経口投与用に調合し得る。注射用の調合は、懸濁液、溶液、又は油性若しくは水性ビークル中のエマルジョンのごとき形態で服用することができ、懸濁剤、安定化剤及び/又は分散剤のような処方剤(formulatory agent)を含有してもよい。あるいは、活性成分は、使用前に、適切なビークル(例えば、滅菌された、発熱物質のない水)で構成するための粉末形態であり得る。
【００４０】
本発明の組成物は、デポ剤調製物として調合してもよい。このような長期作用調合物は、インプランテーション（例えば、皮下又は筋肉内）によって、又は筋肉内注射によって投与し得る。従って、本発明の化合物は、適切なポリマー若しくは疎水性物質(例えば、許容可能なオイル中のエマルジョンとして)、イオン交換油脂と共に、又は例えば微溶性塩のような微溶性誘導体として調合し得る。
【００４１】
式(I)の化合物の生物活性は、以下に示されている適切な結果のデータを与えた、以下のプロトコールに従って評価した。以下のプロトコールに明記されている方法を用いて、特に、式(I)の化合物の骨防御活性、及び抗子宮作用(uterotrophic)プロフィールを評価し得る。
【００４２】
当業者であれば、受容可能な幾つかの様々なラットエストロゲン受容体結合アッセイが知られており、本発明の化合物が適切な受容体に結合し得る能力について初期スクリーニングを行うのに利用できることが理解できよう。まず、以下のラットエストロゲン受容体結合アッセイに明記されているように、化合物が[3H]-エストラジオールの結合を阻害する能力について調べた。IC50<10μMを示した化合物については、以下に示されているように、イシカワヒト子宮内膜細胞株でのエストレオゲン活性のインビトロ機能アッセイに進んだ。
【００４３】
維持増殖状態から周密状態に至らないイシカワ-ヴァールI細胞を取り出して、木炭精製した5%のFBS、及び2mMグルタミンを含有するフェノールレッドフリーのDMEM-F12中に、58,500細胞/mLの濃度で再懸濁した。13,000細胞/cm2の密度で細胞を播種し、3日間インキュベーター中に入れた(37℃、5%CO2)。細胞を採取して、木炭精製した1%のFBS、2mMグルタミン、100ユニット/mLのペニシリン、100μg/mLのストレプトマイシンを含有するフェノールレッドフリーのDMEM-F12中に、83,000細胞/mLの濃度になるように再懸濁した。96ウェルのプレート中に、8300細胞/ウェルの密度で細胞を播種し、一晩接着させた。×2濃度での適切な薬物処理を加えて、0.2% DMSOを含有する0.1mLの培地中に添加した。2日間プレートをインキュベートして、培地を吸引し、300μLの0.9%無菌生理的食塩水で一度プレートを洗浄した。-70℃でプレートを凍結させた後、室温まで加温した。0.1%(w/v)TritonX -100を含有する1MジエタノールアミンpH10.4の中に、5mMのp-ニトロフェニルホスフェンート200μLを加え、37℃で30分間インキュベートし、モルキュラー・デバイシズ・サーモマックスプレートリーダー上にて、405nmの吸光度を測定することによって、接着した細胞のアルカリホスファターゼ活性をアッセイした。
【００４４】
アルカリホスファターゼの発現を誘導する能力（ラットにおけるエストロゲンアゴニストのインビボ子宮作用応答と相関することが示されているエストロゲンアゴニストに特異的なインビトロ応答）を評価するために、本発明の化合物を上記のごとくアッセイした。下表１を参照する場合、結果は、最大アルカリホスファターゼ活性(Emax)の50%を誘導する本発明の様々な代表的化合物の濃度として表されており、前記最大活性は飽和濃度のエストラジオールによって誘導されるアルカリフォスファターゼ活性のパーセントして表されている。さらなる実験では、Emaxが20%未満である全ての化合物が、それらの受容体結合親和性を反映する濃度において、エストラジオールのアンタゴニストとして機能した。
【表１】
0004417548.tif 000013
【００４５】
化合物１は、タモキシフェンに比べて約10倍高い親和性でエストロゲン受容体に結合すること（イシカワ細胞機能アッセイでより低いEC50に翻訳されている）が見出された（表１参照）。さらに、化合物１は、タモキシフェンに比べて有意に低いアゴニスト活性(Emax)を有していた。イシカワ細胞機能アッセイにおけるより低いEC50に対する構造的な要件を確立し、Emaxを最少にするために、化合物１の一連のアミド類縁体は調べた。データは、該分子の該領域内で、広範な構造的多様性(親油性、立体的な巨大さ、水素結合供与体及び受容体)が許容され、巨大な化合物12のみが減少した受容体親和性を示した。化合物１は、受容体結合アッセイで最高の親和性を示し、機能アッセイで最少のEC50を有していたが、Emaxデータを分析すると、化合物9、14、及び15が最少の残余アゴニスト活性を示した。上記化合物を評価するために、インビボでの抗子宮作用活性について、21日齢の5匹の雌SDラット群(30〜35g)を秤量し、図１に記載されているように、各処理群の平均重量を記録した。0.5%のメチルセルロースで。エタノール中のトリフェニルエチレン類縁体のストック溶液(10×)を希釈し、経胃管供給により、10μmol/kgを動物に投与した。エストラジオールはごま油に溶かし、皮下注射により100nmol/kgを投与した。3日間動物に投与し、CO2での窒息によって、4日目に屠殺した。体重を測定し、子宮を摘出して、ブロッティングし、秤量した。データは、子宮重量/体重±平均誤差で表されている。黒いバーは、試験化合物のみを投与した動物から得たデータを表している。白抜きのバーは、エストラジオール投与の6時間前に試験化合物を投与した動物から得たデータを表している。化合物9と15は、タモキシフェンに比べて低い残余アゴニスト活性を示した。
【００４６】
骨でのこれらの化合物の機能的プロフィールの例として、卵巣摘出した90日齢のエストロジェン欠乏ラットにおいて、化合物９が骨無機質密度の喪失を阻害する能力を調べた。90日齢のSDラットを６つの群に分けた。3つの群は、外科的に卵巣摘出術を施した。卵巣摘出から2日後に、0.5%メチルセルロース中の10μmol/kg化合物9か、又はビークルの何れかを、経胃管供給によって、1日1回、28日間動物に投与した。１つの群の動物はシャム手術を施し、卵巣摘出術から2日後に、1日1回28日間、ビークルを投与した。0、14、及び28日目に、イソフルランでラットを麻酔し、それらの脊椎が密度計テーブルの長軸に平行なるような脊椎位置に置いた。骨盤骨をランドマークとして使用して、腰棘をスキャンした。右脛骨をスキャンするために、テーブルの長軸に平行な位置で、脚をテープで接着し、大腿骨との合流部までスキャンした。腰棘の分析は、一般的な分析ソフトウェアを用いて、脊椎と椎間腔(inter-bertebral space)に分け、対象となる全領域の中で標的脊椎のみが含まれるようにして達成した。右脛骨は、卵巣摘出による加速的な骨喪失領域として予め同した成長板(growth plate)から3〜5mm遠位に焦点を当て、サブ領域高分解能ソフトウェアを用いて分析した。14及び28日目のデータは、有意に相違していなかった。28日目のデータは図2に示してある。
【００４７】
図２に示されているように、経口投与された10μmol/kgの化合物9の投与は、28日の研究期間中、シャム手術したラットのレベルでBMDを維持しながら、完全なアゴニスト活性を有することが実証された。生化学的なデータによって、骨でのエストロゲンアゴニストとしての活性と一致して、作用機序が骨吸収の阻害によるものであることが実証された。BMDは、ホロジックQDR-2000骨密度計使用し、それぞれ、２、0.75、0.01、及び0.005インチのデフォルトスキャン長、幅、ラインスペース、及びポイント解像度の高解像度領域ソフトウェアパッケージを用いて、デュアルエネルギーX線吸収装置により測定した。
【図面の簡単な説明】
【図１】  未成熟ラットにおける本発明の化合物の子宮に対する活性の代表的データを示す図。
【図２】  卵巣摘出ラットの腰棘と脛骨における骨無機質密度の変化の代表的なデータを示す図。
【図１】
0004417548.tif 000025
【図２】
0004417548.tif 000026