(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カカオハスクを５０〜８０℃で１〜５時間、エタノールまたは含水エタノールで抽出した抽出物を有効成分とすることを特徴とするビフィズス菌増殖促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、人に有益な腸内細菌であるビフィドバクテリウム属細菌（ビフィズス菌）の増殖を選択的に促進するビフィズス菌増殖促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人の腸内には数多くの細菌が棲息し、いわゆる腸内フローラ（腸内菌叢）を形成している。これらの細菌を人に与える影響の面からみてみると、ビフィドバクテリウム属及びラクトバチルス属等の乳酸菌群は、ビタミンの合成、外来病原菌の感染防御、免疫機能の増強、抗変異原作用、抗アレルギー作用等、人において有益である。一方、大腸菌やクロストリジウム属等の腐敗菌は、アンモニア、インドール、フェノール等の腐敗産物や、細菌毒素、発癌性物質を産生し、下痢症、大腸癌、動脈硬化、高血圧、肝臓障害、老化の原因となっていると考えられている。
【０００３】
また、腸内フローラは加齢とともに変動する。一般に乳児の大腸内はビフィドバクテリウム属が優勢であるが、青年期から壮年期にかけてビフィドバクテリウム属は減少し、クロストリジウム属並びに大腸菌等の腐敗菌が顕著に増加する。その結果、腸内環境が悪化し、宿主（人）の健康に悪影響がもたらされる。従って、人が健康を維持していくためには、腸内フローラをビフィズス菌に代表される有益菌が優勢な状態に維持することが極めて重要である。
【０００４】
ビフィズス菌の増殖促進作用を有するものは、ビフィズス（増殖）因子と呼ばれ、現在までに様々なものが報告されている。現在、一般的に知られているビフィズス因子としては、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖等のオリゴ糖類があげられる。しかしながら、これらはビフィズス菌以外の腸内細菌にも利用され得ることから、ビフィズス菌の選択的な増殖促進作用という点では不十分である。
【０００５】
他のビフィズス因子としては、ヘミセルロースを有効成分とする水溶性多糖類（特開昭６３−１６５３２５号公報）、フスマから抽出して得られる水溶性難消化性多糖類（特開平４−２１８５０１号公報）、イネ科植物より得られる水溶性アラビノキシラン（特開平６−２１７７６１号公報）、アロエより得られる食物繊維（特開平７−３２７６３５号）コーヒーノキ属植物の葉の抽出物（特開平６−１２５７７１号公報）、夕顔果実から抽出されたシラップ状物質（特開平２−１３５０８８号公報）、ウコギ科植物の溶媒抽出物（特開平２−２４９４８２号公報）等が報告されている。しかし、これらの物質は効果が不十分であったり、ビフィズス菌に対する選択的な増殖性に乏しいなどの問題がある。
【０００６】
また、既にカカオ豆及びその種皮部であるカカオハスクについては、その溶媒抽出残渣または該残渣の水抽出物（特開平８−１９６２６８号公報）が乳酸菌増殖促進物質として特許出願されているが、カカオ豆及びカカオハスクを直接有機溶剤または水で抽出して得られる抽出物については、ビフィズス菌を増殖させることができなかった旨報告されている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上記に鑑み、本発明は、ビフィズス菌に対して炭素源（エネルギー源）としてではなく、微量でその増殖を選択的に促進する増殖促進因子を提供することを目的とする。即ち、本発明は、安全性の高い天然の植物から上記の作用を有する物質を見出してこれを利用することによって、加齢とともに人の腸内で減少するビフィズス菌に対して、その増殖を選択的に促進することにより腸内フローラを改善する効果を有するビフィズス菌増殖促進剤を提供するものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は前記課題を解決するために、副作用がなく安全性が高く古来より利用されている生薬及びハーブ等の天然物抽出物に注目し、有用なビフィズス菌に対して微量でその増殖を選択的に促進する増殖因子を見出すため、炭素源の存在下における増殖促進因子のスクリーニング用の培地を用いて、種々の生薬並びにハーブ等についてスクリーニングを実施した。その結果、カカオハスクを５０〜８０℃で１〜５時間、エタノールまたは含水エタノールで抽出した抽出物が、炭素源存在下においてビフィズス菌増殖促進活性を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
即ち、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、上記の植物の抽出物を有効成分とするものである。
【００１０】
本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、ビフィズス菌の増殖を選択的に促進することにより腸内フローラ（菌叢）の改善作用を有する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明において、カカオハスクを５０〜８０℃で１〜５時間、エタノールまたは含水エタノールで抽出した抽出物を使用する。
【００１２】
上記植物から本発明の抽出物を得る方法については特に限定しないが、水、メタノール、エタノール並びにブタノール等の低級アルコール、エーテル、酢酸エチル、グリセリン、プロピレングリコール等の有機溶剤、またはこれらを適宜混合した溶剤を用いて抽出する。しかし、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、経口摂取され、大腸内で作用することを考慮すると、安全性の面から水及び／またはエタノールを用いて抽出することが好ましい。
【００１３】
抽出条件としては、高温、室温、低温のいずれの温度で抽出することができるが、５０〜８０℃で１〜５時間程度が好ましい。抽出液は更に濾過し、抽出溶剤を留去した後、減圧下において濃縮または凍結乾燥したものを使用することができる。また、これらの抽出物を有機溶剤、カラムクロマトグラフィー等により分画精製したものも使用に供することができる。
【００１４】
更に、上記抽出物は、適当な液体担体中に溶解または分散させ、或いは適当な粉末担体と混合もしくはこれに吸着させ、場合により乳化剤、分散剤、懸濁剤、展着剤、浸透剤、湿潤剤または安定剤等を添加して、乳剤、水和剤、粉剤または錠剤に製剤化して使用に供することができる。
【００１５】
この場合、抽出物の添加量としては、その形態によって異なるが、０．００１重量％以上の添加が好ましく、安全性に問題ないことから特に上限は規定しない。
【００１６】
また、本発明の飲食物としては、チューインガム、キャンディ、錠菓、グミゼリー、チョコレート、ビスケット、スナック等の菓子、アイスクリーム、シャーベット、氷菓等の冷菓、飲料、パン、ホットケーキ、乳製品、ハム、ソーセージ等の畜肉製品類、カマボコ、チクワ等の魚肉製品、惣菜類、プリン、スープ並びにジャム等があげられる。
【００１７】
これら飲食物への本発明のビフィズス菌増殖促進剤の添加量としては、最終製品の形態によって異なるが、効果の面から０．００１重量％以上の添加が好ましく、また嗜好性の面から５重量％以下の添加が好ましい。
【００１８】
本発明品の原料となる植物は、いずれも生薬、食品素材、ハーブティー並びに天然添加物として古くより用いられているものであり、これらの抽出物の安全性については全く問題はない。
【００１９】
【実施例】
［実施例１及び比較例１］
植物抽出物の調製
破砕したキッピ（橘皮）１００ｇに５倍量の水を添加し、３時間還流しながら抽出した。この抽出物を濾過することにより得られた抽出液を凍結乾燥し、本発明品である植物抽出物を１９．２ｇ得た。更に、水の代わりにエタノール、含水エタノール（５０％エタノール）を用いて同様に抽出し、それぞれ１６．５ｇ、１９．７ｇの抽出物を得た。
【００２０】
同様にして、チンピ（陳皮）、大根種子、カカオハスクの各々について、水、含水エタノールまたはエタノールを用いて抽出し、抽出液を濃縮または凍結乾燥することにより抽出物を調製し、これらの結果を収率として表１に示す。
【００２１】
尚、カカオハスクからの抽出に使用した含水エタノールは、６０％、３０％並びに１０％アルコールである。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
また、ガジュツ（莪朮）、キジツ（枳実）、キンギンカ（金銀花）、ソヨウ（蘇葉）、トウヨウ（桃葉）、ミツモウカ（蜜蒙花）、アイブライト、カキネガラシ、カモマイル、カルダモン、キャットニップ、サフラワー、スウィートバイオレット、チャイブ、ヒソップ、ペニーロイヤル、ペパーミント、ホワイトホウルファンド、マグワート、マザーワート、マリーゴールド、ヤロー、レモンバーム、ローズヒップ、ローズマリー、桑樹皮、棕櫚葉、パセリ、ヨモギ、ミカン科植物の果実及び果皮、並びにカカオ豆について、同様に抽出物を調製し、本発明品又は比較品である抽出物を５〜３０％の収率で得ることができた。
【００２４】
［増殖促進効果試験］
実施例１において調製した本発明のビフィズス菌増殖促進剤又は比較品並びにフラクトオリゴ糖を試料として、ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ＪＣＭ１２１７並びにＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ  ＪＣＭ１２２２）、腸内腐敗菌であるクロストリジウム・パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ  ＡＴＣＣ１３１２４）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＩＦＯ３３０１）に対する増殖促進効果を試験した。試験菌株を、ブリックスリバーブロス１０ｍｌ中で３７℃にて４８時間前培養した後、生理食塩水で菌体を洗浄し、５ｍｌの生理食塩水中に懸濁した。この菌体懸濁液５０μｌを、被験物質（ビフィズス菌増殖促進剤）を０．１、０．０１、０．００１重量％の濃度となるように添加した試験培地５ｍｌ中に接種した。次いで、３７℃にて４８時間嫌気的に培養した後、培養液のｐＨを測定することにより菌の増殖を調べた。増殖促進効果の判定は、ｐＨ４．５〜５．０を強い効果あり（＋＋）、ｐＨ５．１〜５．５を効果あり（＋）、ｐＨ５．６〜６．０を弱い効果あり（±）、ｐＨ６．１以上を効果無し（−）とした。
【００２５】
試験培地の組成は、Ｋ２ＨＰＯ４  ２．５ｇ、乳糖３５．０ｇ、酢酸ナトリウム２５．０ｇ、バクトカザミノ酸（ビタミンフリー）５．０ｇ、アラニン２００ｍｇ、Ｌ−システイン２００ｍｇ、トリプトファン２００ｍｇ、アスパラギン１００ｍｇ、アデニン１０ｍｇ、グアニン１０ｍｇ、ウラシル１０ｍｇ、キサンチン１０ｍｇ、ニコチン酸６００μｇ、チアミン塩酸塩２００μｇ、リボフラビン２００μｇ、ピリドキシン酸塩１２００μｇ、葉酸１２．５μｇ、ビオチン１２．５μｇ、ｐ−アミノ安息香酸１２．５μｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ２００ｍｇ、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  １０ｍｇ、ＮａＣｌ  １０ｍｇ、ＭｎＳＯ４・５Ｈ２Ｏ  １０ｍｇ及び精製水１リットルであり、ｐＨを６．８に調整した。
【００２６】
上記試験結果について、ビフィズス菌に対する試験結果を表２及び表３に、腸内腐敗菌であるクロストリジウム・パーフリンゲンス、大腸菌に対する試験結果を表４及び表５に示す。実施例１において得られた本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ  ＪＣＭ１２１７並びにＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ  ＪＣＭ１２２２）の増殖を強く促進したが、腸内腐敗菌であるクロストリジウム・パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ  ＡＴＣＣ１３１２４）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ＩＦＯ３３０１）に対してはほとんど増殖促進作用を示さなかった。本試験に用いた培地は、炭素源存在下における増殖因子を検索するための培地であり、代表的オリゴ糖であるフラクトオリゴ糖は本試験の系においてはビフィズス菌に対して増殖促進効果を示さない。従って、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、オリゴ糖のように細菌のエネルギー源となっているのではなく、細菌の増殖因子として作用していることが示された。
【００２７】
【表２】
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【００２８】
【表３】
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【００２９】
【表４】
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【００３０】
【表５】
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【００３１】
［実施例２］
以下の処方により、散剤、錠剤、チューインガム、キャンディ、錠菓、飲料を製造した。
【００３２】
実施例２−１  散剤の処方
乳糖                                  ７０．０％
馬鈴薯デンプン                        ２０．０
カカオハスク１０％エタノール抽出物      ５．０
パセリ５０％エタノール抽出物            ５．０  
１００．０％
【００３３】
実施例２−２  錠剤の処方
Ｄ−マンニトール                      ４０．０％
乳糖                                  ３５．０
結晶セルロース                        １０．０
ヒドロキシプロピルセルロース            ５．０
ソヨウ水抽出物                          ５．０
チンピエタノール抽出物                  ５．０  
１００．０％
【００３４】
実施例２−３  チューインガムの処方
ガムベース                            ２０．０％
砂糖                                  ５４．３
グルコース                            １５．０
水飴                                    ９．３
ペパーミントオイル                      ０．４
カキネガラシ３０％エタノール抽出物      １．０  
１００．０％
【００３５】
実施例２−４  キャンディの処方
砂糖                                ５０．０％
水飴                                ３３．０
クエン酸                              １．０
ペパーミントオイル                    ０．２
ヒソップエタノール抽出物              ０．５
ペニーロイヤルエタノール抽出物        ０．５
水                                  １４．８  
１００．０％
【００３６】
実施例２−５  錠菓の処方
砂糖                                ７５．６％
グルコース                          １９．０
ショ糖脂肪酸エステル                  ０．２
マグワートエタノール抽出物            ０．５
マザーワート水抽出物                  ０．５
水                                    ４．２  
１００．０％
【００３７】
実施例２−６  飲料の処方
オレンジ果汁                        ３０．０％
異性化糖                            １５．１５
クエン酸                              ０．１
ビタミンＣ                            ０．０４
香料                                  ０．１
マリーゴールドエタノール抽出物        ０．０５
レモンバーム水抽出物                  ０．０５
ローズマリー水抽出物                  ０．０５
水                                  ５４．４６
１００．０％
【００３８】
【発明の効果】
本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、微量の添加でビフィズス菌の増殖を選択的に促進する作用を有する。従って、これを製剤並びに飲食物に使用して経口的に摂取することにより、加齢とともに人の腸内において減少するビフィズス菌に対してその増殖を促進し、腸内フローラを改善することが可能である。また、本発明のビフィズス菌増殖促進剤の原料となる植物は、いずれも食品素材やハーブティー、天然添加物として古くより用いられているものであり、その安全性については全く問題はない。