(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
0004417551.tif 000044
［式中、Ｒ1およびＲ2は、独立してＨ、メチル、エチル、プロピル、n-ブチル、およびアセチルからなる群から選ばれ、
Ｒ3およびＲ4は、独立して、Ｈ、メチル、エチル、n-プロピル、およびn-ブチルからなる群から選ばれ、
Ｒ5はＡｒであり、
Ｒ6およびＲ8は、独立してＨおよびメチルからなる群から選ばれ、
Ｒ7は、Ｈ、および炭素数３〜６の分枝状アルキル基からなる群から選ばれ、
0004417551.tif 000045
Ｒ9は
【化２】
(ここで、Ｒ15は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群から選ばれ、Ｒ16がＨ、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、およびｓｅｃ−ブチルからなる群から選ばれる。)
であり、
ここで、Ｒは、炭素数１〜４の直鎖または分枝状の飽和または不飽和非置換アルキル基と定義され、
Ａｒは、置換されていないかＲもしくはＸで置換された、フェニルおよびナフチルからなる群から選ばれる芳香族環と定義され、
Ｘは、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−Ｎ（Ｒ）2、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2Ｒ、および−ＣＨＯからなる群から選ばれる部分と定義される。]
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ａｒがフェニルまたはナフチルである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ5が−ＯＲで置換されたフェニルである請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ5がフェニルである請求項１または２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ1およびＲ2が独立してＨ、−ＣＨ3、またはアセチルである請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1がＨであり、Ｒ2が−ＣＨ3である請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ15がイソプロピルであり、Ｒ16がメチルである請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ7が炭素数３〜６の分枝状アルキル基である請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ7が−Ｃ（ＣＨ3）3である請求項１〜８のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ6およびＲ8が独立してＨまたは−ＣＨ3である請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ6がＨであり、Ｒ8がＨまたは−ＣＨ3である請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ3およびＲ4が独立してＨまたは−ＣＨ3である請求項１〜１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ3およびＲ4が共に−ＣＨ3である請求項１〜１２のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ3およびＲ4が共にＨである請求項１〜１３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ6がＨであり、Ｒ7が−Ｃ（ＣＨ3）3であり、Ｒ8が−ＣＨ3である請求項１〜１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】
構造：
【化３】
0004417551.tif 000046
を有する請求項1記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、生物学的に活性な化合物および組成物、それらの用途、および誘導体に関する。
背景
Talpir,R.ら（1994）Tetrahedron Lett.35:4453-6、および国際特許出願PCT/GB96/00942(WO96/33211、1996年10月24日公開）に記載のごとく、化合物ヘミアスターリンは、海綿から得るか、合成することができよう。PCT/GB96/00942に記載のごとく、そのなかに記載のヘミアスターリンおよび合成類似体は、細胞毒性があり、抗有糸分裂性である。
ヘミアスターリンのインドール部分の領域がヘミアスターリンと異なる化合物は新規である。ヘミアスターリンのインドール部分が欠失または置換されているヘミアスターリン類似体は、有力な抗有糸分裂および細胞毒性活性を示すことが現在解っている。
【０００２】
発明の要約
本発明は、式：
【化１０】
0004417551.tif 000002
［式中、Ｒ1およびＲ2は、独立して、Ｈ、Ｒ、およびＡｒＲ−からなる群から選ばれ、Ｒ1およびＲ2の少なくとも１つがＲであり、両方ともＡｒＲ−でない場合は、所望によりＲ1とＲ2が一緒になって３〜７員環であってよく、
Ｒ3およびＲ4は、独立して、Ｈ、Ｒ、およびＡｒＲ−からなる群から選ばれ、Ｒ3およびＲ4の少なくとも１つがＲであり、両方ともＡｒＲ−またはＡｒでない場合は、所望によりＲ3とＲ4が一緒になって３〜７員環であってよく、
Ｒ5はＨ、Ｒ、ＡｒＲ−、およびＡｒからなる群から選ばれ、
Ｒ6はＨ、Ｒ、およびＡｒＲ−からなる群から選ばれ、
Ｒ7およびＲ8は、独立して、Ｈ、Ｒ、およびＡｒＲ−からなる群から選ばれ、
Ｒ9はＺ−Ｃ（Ｏ）−Ｙ−であり、
ここで、Ｒは、炭素数１〜１０、窒素数０〜４、酸素数０〜４、硫黄数０〜４の直鎖、分枝状、または環状骨格を有する飽和または不飽和部分と定義され、炭素原子は、所望により、＝Ｏ、＝Ｓ、−ＯＨ、−ＯＲ10、−Ｏ2ＣＲ10、−ＳＨ、−ＳＲ10、−ＳＯＣＲ10、−ＮＨ2、−ＮＨＲ10、−Ｎ（Ｒ10）2、−ＮＨＣＯＲ10、−ＮＲ10ＣＯＲ10、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2Ｒ10、−ＣＨＯ、−ＣＯＲ10、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨＲ10、−ＣＯＮ（Ｒ10）2、−ＣＯＳＨ、−ＣＯＳＲ10、−ＮＯ2、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯＲ10、−ＳＯ2Ｒ10で置換され（ここで、Ｒ10は、直鎖、分枝状、または環状の炭素数１〜１０の飽和もしくは不飽和アルキル基である）、
Ｘは、−ＯＨ、−ＯＲ、＝Ｏ、＝Ｓ、−Ｏ2ＣＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯＣＲ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−Ｎ（Ｒ）2、−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2Ｒ、−ＣＨＯ、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨＲ、−ＣＯＮ（Ｒ）2、−ＣＯＳＨ、−ＣＯＳＲ、−ＮＯ2、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯＲ、および−ＳＯ2Ｒであり、
Ａｒは、所望によりＲもしくはＸで置換された、フェニル、ナフチル、アントラシル、フェナントリル、フリル、ピロリル、チオフェニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、キノリル、イソキノリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、およびピリジルからなる群から選ばれる芳香族環と定義され、
Ｙは、所望によりＲ、ＡｒＲ−、またはＸで置換された直鎖、飽和もしくは不飽和、炭素数１〜６のアルキル基からなる群から選ばれる部分と定義され、
Ｚは、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−Ｎ（Ｒ）2、−ＮＨＣＨ（Ｒ11）ＣＯＯＨ、および−ＮＲＣＨ（Ｒ11）ＣＯＯＨからなる群から選ばれる部分と定義され、ここで、Ｒ11は式：Ｒまたは−（ＣＨ2）nＮＲ12Ｒ13で示される部分である（ここで、ｎは１〜４であり、Ｒ12およびＲ13は、独立して、Ｈ、Ｒ、および−Ｃ（ＮＨ）（ＮＨ2）からなる群から選ばれる）]
で示される化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【０００３】
本発明は、前記の式Ｉの化合物、および本明細書に記載のその前駆体の製造方法をも提供する。
本発明は、（ａ）医薬の製造、
（ｂ）該化合物の細胞毒性作用に感受性の腫瘍細胞を含む細胞を該化合物もしくはその医薬的に許容される塩で処理する方法、および
（ｃ）細胞を該化合物またはその医薬的に許容される塩で処理し、細胞の有糸分裂の停止、もしくは細胞の異常な有糸分裂紡錘体の産生をもたらす方法における、前記の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容される塩の用途も提供する。
【０００４】
発明の詳細な説明
特記しない限り、本明細書に記載の化合物は、該化合物のすべての考えられる塩に及び、幾何学的および光学的異性体を含むそのような化合物をもたらす構造式内にあると考えられるすべての考えられる異性体を示す。特記しない限り、異性体が存在する化合物を含む本明細書に記載の物質は、ラセミ体を含む個々の異性体および異性体の混合物に及ぶとみなすべきである。
上記式Ｉの化合物において、波線で示した結合は、光学中心であってよい炭素原子由来である。好ましくは、以下の絶対配置が優勢である。
【化１１】
0004417551.tif 000003
【０００５】
特記しない限り、本明細書で「アルキル」と記載しているあらゆる部分は、好ましくは炭素数８までの、より好ましくは炭素数６までの、さらにより好ましくは炭素数４までの、直鎖または可能であれば分枝状であることが好ましい。特記しない限り、所望により置換されたアルキル基は好ましくは置換されていない。メチルは最も好ましいアルキル基である。
【０００６】
本明細書では、部分の定義内にアルケンおよびアルキン基（環の内部、末端、もしくは部分のいずれかの）を含む飽和または不飽和のアルキル部分に言及する。
式Ｉの化合物において、以下の置換の単独または組合せが好ましい：
（ａ）Ｒ1およびＲ2が独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、アセチルであるか、またはＲ1とＲ2が一緒になって、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルであり、より好ましくはＲ1およびＲ2が独立してＨまたはＣＨ3であり、最も好ましくは、Ｒ1がＨであり、Ｒ2がＣＨ3である、
（ｂ）好ましくは、Ｒ3およびＲ4の１つしかＨでなく、より好ましくは、Ｒ3およびＲ4が独立して、メチル、エチル、ｎ−プロピル、もしくはｎ−ブチルであるか、またはＲ3とＲ4が一緒になってβ−シクロプロピル、β−シクロブチル、β−シクロペンチル、またはβ−シクロヘキシルであり、最も好ましくはＲ3およびＲ4がそれぞれメチルである、
（ｃ）Ｒ5：Ｒ5の定義中のＡｒが好ましくはフェニル、ナフチル、アントラシル、もしくはピロリルであり、好ましくはＲ5がフェニル、メチル、もしくはＨであり、最も好ましくはＲ5がフェニルもしくはメチルである、
（ｄ）Ｒ6およびＲ8が、独立してＨまたはメチルであり、より好ましくはＲ6がＨであり、Ｒ8がメチルである、
（ｅ）Ｒ7が炭素数３〜６の分枝状アルキルであり、より好ましくはＲ7が−Ｃ（ＣＨ3）3であり、
（ｆ）Ｒ9において、Ｚが好ましくはＯＨ、−ＯＲ14（ここで、Ｒ14は炭素数１〜６の直鎖もしくは分枝状アルキル基である）、−ＮＨＣＨ（Ｒ）11）ＣＯＯＨ、または−ＮＣＨ3ＣＨ（Ｒ11）ＣＯＯＨであるか（ここで、Ｒ11はＲもしくは−（ＣＨ2）nＮＨＣ（ＮＨ）（ＮＨ2）である）、またはＲ9が好ましくは
【化１２】
0004417551.tif 000004
であり［式中、Ｒ15はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソ−ブチル、またはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ16はＨ、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、またはｓｅｃ−ブチルであり、より好ましくはＺはＯＨである］、Ｒ9は全体として
【化１３】
0004417551.tif 000005
であり、Ｒ9が部分Ｙ中にキラル中心を有する場合は、キラル中心がメチル置換基を有する例に関して以下の絶対配置が好ましい：
【化１４】
0004417551.tif 000006
【０００７】
式Iの化合物は、ペプチド結合を介してアミノ酸をカップリングする方法を含む標準的方法を用い、以下に示す部分Ａ、Ｂ、およびＣをカップリングさせることにより製造することができよう。
【化１５】
0004417551.tif 000007
カップリング剤、例えばＰｙＢｒｏＰは該反応に適切に用いられる。該反応は、適切には、カップリング剤、４−ジメチルアミノピリジンのような塩基、および塩化メチレンのような有機溶媒の存在下でアミノ酸部分を結合することを含む。当該分野で知られた標準的反応減衰および精製法によりカップリングした化合物を得る。
上記のごとく部分ＢおよびＣの調製は、当該分野で知られた方法および出発物質を用い、例えば前述PCT/GB96/00942に記載の方法に従って行うことができよう。本明細書の実施例に記載の方法を、部分Ａ、Ｂ、およびＣの特定の置換基に応じて物質および試薬を適切に変更して用いることができよう。
【０００８】
本発明のある局面は、式：
【化１６】
0004417551.tif 000008
で示される化合物を、式：
【化１７】
0004417551.tif 000009
で示される化合物とカップリングさせる、式Ｉの化合物の製造方法である。
【０００９】
式IIIの化合物は、既知の方法（PCT/GB96/00942記載のような）、および本明細書の実施例に記載の方法により製造することができよう。
本発明のさらなる局面は、式：
【化１８】
0004417551.tif 000010
で示される化合物を、ＯＲを除去するのに充分な時間、メタノールのような溶媒中で、希水酸化ナトリウムのような塩基で処理し、次いで約ｐＨ３に酸性化する、上記式IIの化合物の製造方法である。好ましくは、式ＩＶ中のＲは、ＣＨ3のような単純なアルキル鎖であり、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）のような保護基を用いてアミン基を保護する、すなわち、Ｒ1またはＲ2をＢｏｃで置換することができよう。Ｂｏｃ基は、周囲温度で約１時間、ＴＦＡ／ＣＨ2Ｃｌ2のような反応により適切に除去される。適切な単離プロトコールによりＴＦＡ塩を得る。次に、当業者に知られた標準的技術により別の基（例えば、Ｒ1またはＲ2）を窒素上に導入し、式ＩＶの化合物が得られよう。
【００１０】
本発明のさらなる局面は、式：
【化１９】
0004417551.tif 000011
で示される化合物を、式：
【化２０】
0004417551.tif 000012
で示される化合物とカップリングさせる式ＩＶの化合物の製造方法である。
【００１１】
化合物Ｖの調製は、当業者に知られた多くの方法により達成することができる。そのような１例を下記図２に示す。式ＶＩの化合物は当業者によく知られた方法により製造することができよう。
式Ｉの化合物を製造するための本発明の好ましい方法は、部分ＢおよびＣを含むジペプチドを製造し、ジペプチドを部分Ａとカップリングさせるためのものである。本方法において、下記式：
【化２１】
0004417551.tif 000013
（ここで、ＱとＴは一緒になって置換基、Ｒ1、Ｒ2および保護基のあらゆる２つの組合せである）で示される化合物を、式：
【化２２】
0004417551.tif 000014
で示される化合物とカップリングさせる。
【００１２】
式ＶIIIの化合物は、上記のごとく式IIIの化合物を、式：
【化２３】
0004417551.tif 000015
で示される化合物とカップリングさせることにより製造することができよう。
式ＩＸの化合物は、当業者に知られた方法により製造することができよう。
本発明のさらなる局面は、式：
【化２４】
0004417551.tif 000016
で示される化合物を、塩基、次いでアジ化物化合物で処理し、上記のごとく式ＶIIの化合物を製造する方法である。そのようにして製造したアジ化物誘導体を還元してアミンを形成し、次いでこれを、水素化ナトリウムのような塩基の存在下で、Ｒ1、Ｒ1、およびＢｏｃから選ばれる基で処理する。
【００１３】
図１は、アミノ酸部分Ａを、部分ＢおよびＣを含むジペプチドとカップリングさせることを含む式Ｉの化合物を製造するための好ましい反応式を示す。図１に示す態様において、ジペプチドの置換基はヘミアスターリンのそれである。図１に示すＢｏｃ保護ジペプチドは、本明細書の実施例に記載の方法により得ることができよう。Ａ部分において、ＢｏｃをＲ2ではなくＲ1で置換するか、またはＲ1およびＲ2はカップリング前にＡ部分に存在していてよい。
図２は、図１に示す反応式を用いて部分Ａを調製するための好ましい反応式を示す。Ｂｏｃの代わりにＲ2を加えてよく、ＢｏｃをＲ1で置換してよい。
式Ｉの化合物は生物活性を有する。本発明は式Ｉの化合物の用途を含む。式Ｉの化合物は、農薬、例えば殺虫活性を有してよい。しかしながら、医学もしくは獣医学的に適用するための医薬の分野で用いるのが好ましい。
【００１４】
本明細書に記載の化合物は、特に腫瘍細胞に対する細胞毒性物質としての有用性を有しており、抗菌剤や抗ウイルス剤としての有用性を有していてもよい。したがって、本発明は、有効量の式Ｉの化合物を担体とともに含む医薬組成物を含む。
さらに本発明は、哺乳動物の癌もしくは腫瘍を治療するのに用いる医薬を製造するための式Ｉの化合物の用途を提供する。
医薬もしくは獣医学的適用のために式Ｉの化合物を用いるには、該化合物は、医薬的に許容される担体、および所望により、１またはそれ以上の他の生物活性成分をも含む医薬組成物の形で投与するのが好ましい。そのような組成物は、医薬品を投与するためのあらゆる形、例えば経口的、局所的、膣内、静脈内、皮下、非経口的、直腸内、および吸入適用に適したあらゆる形であってよい。組成物は分離した用量単位の形で提供することができよう。担体は、例えば錠剤もしくは粉末剤である組成物については微粉末、または例えば経口シロップもしくは注射用液剤または吸入適用用のエアロゾル剤については液体であってよい。
【００１５】
経口投与用には賦形剤および／または結合剤が存在してよい。例には、ショ糖、カオリン、グリセリン、デンプンデキストリン、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、およびエチルセルロースがある。着色剤および／または香味剤が存在していてよい。コーティングシェルを用いてよい。直腸内投与には油性塩基、例えばラノリンもしくはココアバターを用いてよい。注射可能製剤では、緩衝剤、安定化剤、および等張剤を含んでいてよい。
式Ｉの化合物の用量は、患者の体重と体調、病気の重症度と長さ、および用いる組成物、投与方法、および活性成分の特定の形に依存するであろう。単回もしくは１日６回までに分けた用量、または連続注入による１日用量約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重は、最も典型的に必要な有効量を含む。好ましい範囲は、約０．００１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、最も好ましくは約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重／日である。
【００１６】
化学療法における式Ｉの化合物の用途には、腫瘍細胞に該化合物を供給するのを助ける、物質と結合する化合物、例えばモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、タンパク質、またはリポソームを含むことができる。
本発明は、抗有糸分裂剤としての式Ｉの化合物の用途も含む。そのような用途は、核型分析用の有糸分裂スプレッドの調製といった、細胞の有糸分裂を阻止するのに必要な方法においてであってよい。本発明の化合物は有糸分裂細胞の微小管機能を精査するのに用いることもできる。
【００１７】
【実施例】
以下の実施例において、本発明の好ましい化合物ＳＰＡ−１１０の好ましい合成方法を詳細に説明する。また、本発明の種々の化合物の前駆体化合物および分類についても記載する。図３および４は、実施例に従ってＳＰＡ−１１０の合成法を模式的に示す。実施例中の識別番号は、図３および４中の化合物の番号および実施例中に示した化合物の番号に対応する。
３−メチル−３−フェニル酪酸（２）
【化２５】
0004417551.tif 000017
３−メチル−２−酪酸（１、５．１０ｇ、５０．９ｍｍｏｌ）およびＡｌＣｌ3（２０．４ｇ、１５３ｍｍｏｌ）を一首丸底フラスコに入れた。ベンゼン（５０ｍＬ）を加え、これを勢いよく発泡させた。発泡が完結したら、蓋をした凝縮器を取り付け（すなわち、閉鎖系）、反応混合物を攪拌し、６５℃の油浴に入れた。該系の圧を時々解放した。ＧＣにより出発物質の減少を追うことにより反応の進行を追跡した。反応が１時間以内に完結しなかったときは、少量のＡｌＣｌ3を加え、攪拌を続けた。該溶液にジエチルエーテルを加え、混合物を０℃に冷却した。すべての固形物が溶解し、ｐＨが２以下になるまで徐々に濃ＨＣｌといくらかの水を加えた。水性層をジエチルエーテルで３回抽出した。有機層を１５０ｍＬに濃縮し、次いで、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で６回抽出した。混合水性層を、ｐＨが２以下になるまで濃ＨＣｌで酸性化した。酸性水性層をジエチルエーテルで３回抽出し、蓄積した有機層を硫酸マグネシウムで乾燥した。溶液をろ過し、ジエチルエーテルを減圧下で除去して、さらに精製する必要がない白色の固体（８．５１ｇ、４７．７ｍｍｏｌ、収率９４％）を得た。
【数１】
0004417551.tif 000018
２を形成するための先駆的研究についてはF.J.Eijkman(1908)Chem.Kentr.II,p.110、またはA.Hoffman(1929)J.Am.Chem.Soc.51:2542参照。
【００１８】
（４Ｓ）−３−（３−メチル−３−フェニル−１−オキソブチル）−４−イソプロピル−２−オキサゾリジノン（３）
【化２６】
0004417551.tif 000019
３−メチル−３−フェニル酪酸（２、１．００ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ ７０ｍＬに溶解し、−７８℃に冷却した。トリエチルアミン（１．１７ｍＬ、８．４２ｍｍｏｌ）およびトリメチルアセチルクロリド（０．７６０ｍＬ、６．１７ｍｍｏｌ）を反応フラスコに加え、白色の固体を得た。得られた混合物を１時間０℃に温め、次いで−７８℃に冷却し戻した。第二フラスコにおいて、−７８℃のＴＨＦ（６０ｍＬ）中の（４Ｓ）−（−）−４−イソプロピル−２−オキサゾリジノン（１．４５ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の溶液に勢いよく攪拌しながらブチルリチウム（６．８４ｍＬ、１．６Ｍ ヘキサン中、１０．９ｍｍｏｌ）を滴加し、白色沈殿物を得た。得られたリチウム化（lithiated）オキサゾリジノン懸濁液を反応フラスコにカニューレを介して加えた。２時間攪拌を続け、水を加え、反応混合物を室温に温め、次いで、これをジエチルエーテルで３回抽出した。混合有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。ラジオクロマトグラフィで生成物を精製し（４ｍｍプレート、３：７ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）、透明無色油状の化合物３を得た（１．３７ｇ、４．７４ｍｍｏｌ、収率８４％）。
【数２】
0004417551.tif 000020
得られた旋光度は［α］25D  ＋６９．５（ｃ １．１６、ＣＨＣｌ3）であった。化合物３はD.A.Evansら、(1988)Tetrahedron 44:5525に従って製造した。
【００１９】
４−イソプロピル−２−オキサゾリジノン ４の製造
【化２７】
0004417551.tif 000021
高真空下で０．５時間乾燥したオキサゾリジノン３（４７２ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）をＴＨＦに溶解し、−７８℃に冷却した（１０ｍＬ）。新たに滴定したビス（トリメチルシリル）アミド（１５．６ｍＬ、０．１１５Ｍ ＴＨＦ中、１．７９ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を−７８℃で１時間攪拌した。−７８℃の、ＴＨＦ（５ｍＬ）中の２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルアジド（６２５ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）の溶液をカニューレを介して加え、２分間後、帯橙色反応混合物を氷酢酸（０．４２９ｍＬ、７．５０ｍｍｏｌ）で処理し、水浴中で４０℃に温め、さらに１時間攪拌した。淡黄色混合物に塩水（３５ｍＬ）、水（３５ｍＬ）を加え、水性相をジエチルエーテル８０ｍＬで３回抽出した。混合有機抽出物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。生成物をラジオクロマトグラフィで精製し（４ｍｍプレート、３：７ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル、試料をジエチルエーテルでロードした）、無色油状のアジ化物５を得た（４８２ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ、収率８９％）。
【数３】
0004417551.tif 000022
得られた旋光度は［α］25D  ＋１２１．５（ｃ １．１、ＣＨＣｌ3）であった。化合物４は、D.A.Evansら、(1990)J.Am.Chem.Soc. 112:4011の開発した方法論に従って製造された。２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルアジドは、O.C.DermerらJ.Am.Chem.Soc. 77:70の方法に従って製造した。
【００２０】
４−イソプロピル−２−オキサゾリジノン ５の製造
【化２８】
0004417551.tif 000023
アジ化物４（４１８ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム／木炭（２８０ｍｇ）、およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（６０８ｍｇ、２．７８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬフラスコに入れた。酢酸エチル（３７ｍＬ）を加え、得られた黒色懸濁液を室温で攪拌した。混合物をアルゴン、次いで水素でフラッシュし、水素バルーン下で一夜（〜１４ｈ）攪拌した。反応混合物をシリカゲルでろ過し、回収した物質を酢酸エチルで洗浄した。混合ろ液を減圧下で濃縮し、粗混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（３：７ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）で精製して粘性無色油状の化合物５を得た（４００ｍｇ、０．９８９ｍｍｏｌ、収率７８％）。
【数４】
0004417551.tif 000024
得られた旋光度は［α］24D  ＋１１８．４（ｃ ０．９３５、ＣＨＣｌ3）であった。化合物５は、D.A.Evansら(1990、上記)の開発した方法論に従って製造された。
【００２１】
メチル（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−３−メチル−３−フェニルブタノエート（６）
【化２９】
0004417551.tif 000025
オキサゾリジノン ５（２４５ｍｇ、０．６０５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ ７．１ｍＬおよび水１．８ｍＬの混合物に溶解した。この溶液を０℃に冷却し、過酸化水素（０．６１８ｍＬ、３０％水性、５．４５ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム（１．８２ｍＬ、１．０Ｍ、１．８２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で一夜（〜１５ｈ）攪拌した。過剰な過酸化物を、亜硫酸水素ナトリウム（７．１ｍＬ、１．５Ｍ、１０．７ｍｍｏｌ）を加えて減衰させ、１ｈ攪拌を続けた。水性層を１．０Ｍクエン酸で酸性化し、混合物を酢酸エチルで３回抽出した。混合酢酸エチル抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残留粗物質に、溶液が黄色になるまでジエチルエーテル中のジアゾメタンの溶液を加えた。該溶液にアルゴンを１５分間通気（bubbling)した後、残留揮発性成分を減圧下で除去して粗化合物６を得た。エステル６をラジオクロマトグラフィ（２ｍｍプレート、３：７ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル、試料はＣＨＣｌ3を用いてロードした）により精製し、透明無色油状物（１７１ｍｇ、０．５５５、収率９２％）を得た。
【数５】
0004417551.tif 000026
得られた旋光度は［α］25D  ＋３５．２（ｃ ２．９８、ＣＨＣｌ3）であった。化合物５は、D.A.Evansら(1990、上記)の開発した方法論に従って製造された。
【００２２】
（２Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチル−３−メチル−３−フェニル酪酸（７）
【化３０】
0004417551.tif 000027
乾燥ＤＭＦ ２ｍＬ中のエステル６（４３．４ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）の勢いよく攪拌している溶液に、水素化ナトリウム（１０．２ｍｇ、４．２４ｍｍｏｌ）、次いでヨウ化メチル（０．０８８ｍＬ、１．４１ｍｍｏｌ）を加え、得られた灰色懸濁液を室温で一夜（〜２０ｈ）攪拌した。過剰の水素化ナトリウムを水を注意深く加えて減衰させ、混合物を１．０Ｍクエン酸を滴加して酸性化した。酸性混合物を酢酸エチルで３回抽出し、混合有機層を塩水で３回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた淡橙色油状物を２５ｍＬフラスコ中のメタノール４ｍＬに溶解した。該溶液に水１．０ｍＬ、次いで１．０Ｍ水酸化リチウム１．１３ｍＬを加えた。反応混合物を一夜（〜１４ｈ）６０℃に加熱し、白色沈殿物を得た。得られた混合物に飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水を加え、次いで混合物を酢酸エチルで抽出した。水性層をｐＨが〜４になるまで１．０Ｍクエン酸で酸性化した。混合物を酢酸エチルで３回抽出した。混合有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。化合物７は第一酢酸エチル抽出物中にもみられたので、これも粗生成物に加えた。酸７の精製は、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（１％酢酸を含む１：２ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）で行い、透明無色油状物（２１．２ｍｇ、０．０６７０ｍｍｏｌ、収率４９％）を得た。
【数６】
0004417551.tif 000028
Ｃ17Ｈ25ＮＯ4の精密質量分析
理論値：       ３０７．１７８３
実測値（ＥＩ）：３０７．１７９３。
【００２３】
化合物９の製造
【化３１】
0004417551.tif 000029
Ｎ−Ｂｏｃ−アミノエステル８（７１．６ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）をＣＨ2Ｃｌ2 １ｍＬに溶解し、ＴＦＡ １ｍＬを加えた。反応混合物を０．５ｈ室温で攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、次いで残留物質をＣＨ2Ｃｌ2（３ｘ５ｍＬ）で反復してリンスし、次いで残留溶媒を蒸発させてアミノ酸エステルエステル８のＴＦＡ塩を得た。別のフラスコ中の、ＣＨ2Ｃｌ2 ０．５ｍＬ中のＮ−Ｂｏｃ保護アミノ酸７（５１．５ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）の溶液（もしくは懸濁液）に、ＤＩＥＡ（０．０８７５ｍＬ、０.５０３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．０３１ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、およびＰｙＢｒｏＰ（０．０７８１ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を数分間攪拌し、次いで、ＣＨ2Ｃｌ2 １ｍＬ中の８のＴＦＡ塩の溶液をカニューレを介して加えた。反応混合物を室温で１８ｈ攪拌した。混合物に水、ＣＨ2Ｃｌ2、および１０％水性ＨＣｌ １０滴を加えた。得られた二相溶液をＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍＬｘ３回）で抽出した。有機層を飽和水性を飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｍＬ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下で除去した。生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、１：１ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）で精製して透明無色油状物（０．０２７２ｇ、０．０４５４ｍｍｏｌ、収率２７％）を得た。
【数７】
0004417551.tif 000030
ＰｙＢｒｏＰは、E.Frerotら(1991) Tetrahedron 47:259に記載されている。
【００２４】
ＳＰＡ１１０−トリフルオロ酢酸塩（１０）
【化３２】
0004417551.tif 000031
ＭｅＯＨ １．１ｍＬ中のエチルエステル ９（２３．０ｍｇ、０．０３８２ｍｍｏｌ）の溶液に、水０．３０ｍＬ、および水酸化リチウム（０．３１ｍｍｏｌ）の１．０Ｍ水性溶液０．３１ｍＬを加えた。反応混合物を一夜（〜２０ｈ）室温で攪拌し、これを１．０Ｍクエン酸を滴加して酸性化し、次いでこれを酢酸エチルで３回抽出した。混合有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。アルゴンガス雰囲気下で、粗油状物をＣＨ2Ｃｌ2 １ｍＬに溶解し、該溶液をＴＦＡ（１ｍＬ）で処理し、次いで室温で０．５ｈ攪拌した。減圧下で過剰の溶媒を除去し、次いで残留物質をＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）で３回リンスし、残留溶媒を蒸発させてＴＦＡ塩を得た。Ｍａｇｎｕｍ逆相Ｃ−１８カラム（０．０５％ＴＦＡを含むＨ2Ｏ（４５）：ＭｅＯＨ（５５））を用いて粗生成物をＨＰＬＣ精製し、白色粉末状のトリペプチド１０を得た。
【数８】
0004417551.tif 000032
【００２５】
Ｎα−Ｂｏｃ−Ｎα−メチル−バリン Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド（１２）
【化３３】
0004417551.tif 000033
ＣＨ2Ｃｌ2（２２ｍＬ）中の、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−メチルバリン（１１）（５．０ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシアミン塩酸塩（２．８ｇ、２８ｍｍｏｌ）、およびＰｙＢＯＰ（登録商標）（１１．２ｇ、２２ｍｍｏｌ）の冷（０℃）溶液に、ＤＩＥＡ（８．４ｍＬ、７５ｍｍｏｌ）を加えた。１分間後、反応混合物を室温に温め、１ｈ攪拌を続けた。混合物のｐＨ値が７以下の場合は、混合物をＤＩＥＡ数滴で処理し、反応を完結させることができよう。混合物をジエチルエーテル２００ｍＬに注ぎ入れ、得られた混合物を、順次３Ｎ塩酸（３ｘ３０ｍＬ）、飽和水性炭酸水素ナトリウム溶液（３ｘ３０ｍＬ）、および飽和水性塩化ナトリウム（３ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を蒸発させ、次いで粗生成物をクロマトグラフィ（シリカゲル、１：３ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）にかけ、無色油状の１２（４．４６ｇ、収率７５％）を得た。
【数９】
0004417551.tif 000034
Ｃ13Ｈ27Ｎ2Ｏ4の精密質量分析
理論値（Ｍ＋Ｈ)+：２７５．１９７０８
実測値（ＤＣＩ) ：２７５．１９７１０。
旋光度は［α］25D  ＋１２８．３（ｃ ２．９、ＣＨＣｌ3）であった。
【００２６】
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−メチル−１−バリナル（１３）
【化３４】
0004417551.tif 000035
水素化アルミニウムリチウム（８７５ｍｇ、２３ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（８ｍＬ）中のＮα−Ｂｏｃ−Ｎα−メチル−Ｌ−バリン Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルアミド（１２）（２．０ｇ、７．７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、反応混合物を２０分間攪拌した。混合物を、水（１００ｍＬ）中の硫酸水素カリウム（３．１４ｇ、２３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に注ぎ入れた。ジエチルエーテル（７５ｍＬ）を加え、相を分離し、水性層をジエチルエーテル（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、次いで、順次３Ｎ塩酸（３ｘ５０ｍＬ）、飽和水性炭酸水素ナトリウム溶液（３ｘ３０ｍＬ）、および飽和水性塩化ナトリウム（３ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を蒸発させて、粗アルデヒド１３（１．５２ｇ、収率９２％）を得た。アルデヒド１３をさらに精製することなく用いた。注：１３はアルゴン下で〜２週間保存可能であるが、室温で有機溶媒中で保存した場合は、徐々に分解する。
【数１０】
0004417551.tif 000036
Ｃ11Ｈ22ＮＯ3の精密質量分析
理論値（Ｍ＋Ｈ)+：２１６．１５９９７
実測値（ＤＣＩ) ：２１６．１５９９６。
旋光度は［α］25D  −１０４．２（ｃ ５．５、ＣＨＣｌ3）であった。
【００２７】
エチル（２Ｅ，４Ｓ）−Ｎ−ＢＯＣ−Ｎ−メチル−４−アミノ−２，５−ジメチルヘキサ−２−エノエート（１４）
【化３５】
0004417551.tif 000037
室温およびアルゴンガス雰囲気下の、乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（９．０ｍＬ）中のアルデヒド１３（１．７５ｇ、８．７ｍｍｏｌ）の溶液に、（カルベトキシエチリデン）トリフェニルホスホラン（４．１９ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を加え、４ｈ攪拌を続けた。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を飽和水性塩化ナトリウム（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。粗油状物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、２：２３ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）で精製し、無色油状の所望のＥ−２−アルケノエート１４（２．１３ｇ、収率８２％）を得た。
【数１１】
0004417551.tif 000038
Ｃ16Ｈ30ＮＯ4の精密質量分析
理論値（Ｍ＋Ｈ)+：３００．２１７５０
実測値（ＤＣＩ) ：３００．２１７５４。
旋光度は［α］25D  ＋６１．１（ｃ ９．１、ＣＨＣｌ3）であった。
【００２８】
一般的方法１：トリフルオロ酢酸を介するＮ−Ｂｏｃ−基の開裂
Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ酸エステル（１．０当量）を、室温で０．５ｈ ＴＦＡ／ＣＨ2Ｃｌ2（０．１ｍｍｏｌ／１ｍＬ）にて処理した。減圧下で溶媒を除去し、次いで残留物質をＣＨ2Ｃｌ2（３ｘ５ｍＬ）で反復してリンスし、わずかに残った溶媒を蒸発させ、定量できる量のアミノ酸エステルのＴＦＡ塩を得た。ＴＦＡ塩はさらに精製することなく用いた。
一般的方法２：トリメチルアセチルクロリドを介するペプチドカップリング
アルゴンガス雰囲気下の、乾燥ＴＨＦ（１ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の酸（１．１当量）の冷（−７８℃）攪拌溶液に、ＤＩＥＡ（１．５当量）およびトリメチルアセチルクロリド（１．２当量）を加えた。得られた混合物を１ｈ ０℃に温め、次いで−７８℃に再冷却した。反応フラスコにＤＩＥＡ（２．２当量）をカニューレを介して加え、次いで、−７８℃の、乾燥ＴＨＦ（０．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中のアミノ酸エステルのＴＦＡ塩（１．０当量、一般的方法１により調製）をカニューレを介して加えた。１ｈ攪拌を続け、水（４０ｍＬ）を加えた。混合物を室温に温め、ジエチルエーテル（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を飽和水性塩化ナトリウム（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。粗油状物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）で精製し、無色油状の所望のジペプチドを得た。
【００２９】
ジペプチド８
【化３６】
0004417551.tif 000039
一般的方法２に従い、以下の量の試薬と溶媒を用い、ジペプチド８を製造した：Ｎ−Ｂｏｃ−ｔｅｒｔ−ロイシン（１５）１５６ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）、トリメチルアセチルクロリド６４ｍＬ（０．５２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ ９９ｍＬ（０．５７ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃ−ＭＨＶＶ−ＯＥｔ（１４） １１０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ １９８ｍＬ（１．１４ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ ７ｍＬ。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（シリカゲル、１：５ジエチルエーテル−ｐｅｔ．エーテル）で精製し、１２１ｍｇの８を得た（収率６２％）。
【数１２】
0004417551.tif 000040
Ｃ22Ｈ41Ｎ2Ｏ5の精密質量分析
理論値（Ｍ＋Ｈ)+：４１３．３０１５４
実測値（ＤＣＩ) ：４１３．３０１１９。
得られた旋光度は［α］25D  −７６．９（ｃ ２．４３、ＣＨＣｌ3）であった。
【００３０】
細胞毒性のアッセイ
ヒト乳癌ＭＣＦ−７細胞およびＡ５４９腫瘍細胞のｐ５３＋およびｐ５３−変異体に対するヘミアスターリンと比較したＳＰＡ−１１０の細胞毒性を、J.Immunol.Methods 65:55-63(1983)に記載の方法に従って測定した。図５Ａおよび５Ｂに示す結果は、ＳＰＡ−１１０が場合により天然化合物より毒性が高いことを示す。
抗有糸分裂活性のアッセイ
抗有糸分裂活性は、有糸分裂特異的抗体ＴＧ−３（Albert Einstein College of Yeshiva University, Bronx, N.Y.より、PCT出願公開公報 WO96/20218（1996年７月４日公開）参照）を用いる酵素免疫測定法により検出した。
ＭＣＦ−７ ｍｐ５３-細胞（S.Fanら（1955）Cancer Research 55:1649-1654に記載の優性−ネガティブｐ５３突然変異を発現）を、加湿５％ＣＯ2中、３７℃で、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、５０単位／ｍＬペニシリン、５０μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、ＭＥＭ非必須アミノ酸、１μｇ／ｍＬウシインスリン、１μｇ／ｍＬヒドロコーチゾン、１ｎｇ／ｍＬヒト上皮成長因子、および１ｎｇ／ｍＬ β−エストラジオールを添加したＤＭＥＭを用いて単層培養した。細胞培養液容量２００μＬの９６ウェルポリスチレン組織培養プレート（Falcon）の１ウェルあたり１００００個の細胞を接種した。細胞を２４時間増殖させ、化合物を約１μｇ／ｍＬまたは１０μｇ／ｍＬ（ジメチルスルホキシド中の１０００倍保存物から）に加え、細胞を２０時間インキュベーションした。ノコダゾール（nocodazole,Sigma）を陽性コントロールに用いた。試験すべき物質で処理し、次いで、細胞培養液を完全に除去し、６９ウェル組織培養プレートを２時間まで−７０℃で凍結した。凍結細胞を、氷冷溶解緩衝液（０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフロリド、１ｍＭエチレングリコール−ビス（β−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ’−四酢酸、ｐＨ７．４）１００μＬを加えて解凍し、１０回上下にピペッティングして溶解させた。細胞溶解物を９６ウェルPolySorp ELISAプレート（Nunc）に移し、プレートの約３フィート上からヘアードライヤーで約３７℃の温風を送って完全に乾燥させた。１ウェルあたり２００μＬの１０ｍＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ ＰＭＳＦ、３％（ｗ／ｖ）乾燥脂肪不含ミルク（Carnation）を加え、室温で１時間タンパク質結合部位をブロックした。これを除去し、０．１〜０．１５μｇ／ｍＬのＴＧ−３有糸分裂特異的モノクローナル抗体およびホースラディッシュパーオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＭ（１０２１−０５、Southern Biotechnology Associates)（１／５００希釈）を含む同じ溶液１００μＬと交換した。４℃で一夜インキュベーションした後、抗体溶液を除去し、ウェルをリンス用緩衝液（１０ｍＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、０．０２％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回リンスした。０．５ｍｇ／ｍＬの２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸）および０．０１％過酸化水素を含む１２０ｍＭ ＮａＨＰＯ4、１００ｍＭクエン酸（ｐＨ４．０）１００μＬを室温で加え（１時間）、BioTekプレートリーダーを用い４０５ｎｍでプレートを読みとった。
ヘミアスターリンとＳＰＡ−１１０の抗有糸分裂活性の比較データを図６に示す。ＳＰＡ−１１０は、天然化合物よりかなり大きな抗有糸分裂活性を示した。
【００３１】
ＳＰＡ−１１０のin vivo活性
ヒト腫瘍異種移植片の増殖阻害能を測定する標準的な薬理学的試験方法を用い、化合物ＳＰＡ−１１０のin vivo評価を行った。ヒト結腸癌ＬＯＶＯ（American Type Culture Collection, Rockville, Maryland #CCL-229）を、１０％ＦＢＳ添加ＲＰＭＩを用いる組織培養で増殖させた。無胸腺ｎｕ／ｎｕ雌マウス（Charles River,Wilmington,MA)の脇腹領域に、ＬＯＶＯ細胞７．０ｘ１０6を皮下注射した。腫瘍塊が８０〜１２０ｍｇに達したら、マウスを処置群（第０日）に無作為化した。動物を、開始（第０日）後第１、５、および９日に、生理食塩水中の２．５％エタノールを用いて調製したＳＰＡ−１１０ １ｍｇ／ｋｇ／用量、またはビークルコントロールとして生理食塩水を１日に１回静脈内投与した。動物によっては、開始後第１、５、および９日に、陽性コントロールとしてビンクリスチン１ｍｇ／ｋｇ／用量を１日１回腹腔内投与した。腫瘍塊は、開始後２８日間７日間毎に測定した（（長さｘ幅2）／２）。ＲＴＧまたは相対腫瘍増殖（第０日の平均腫瘍塊で割った第７、１４、２１、および２８日の平均腫瘍塊）を各処置群につき求めた。％Ｔ／Ｃを、ＲＴＣ（処置群）％ＲＴＣ（ビークルコントロール群）ｘ１００として計算した。ｌｏｇ相対腫瘍増殖の統計分析（Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ検定）を用い、各試験において処置群とコントロール群を比較した。相対腫瘍増殖の統計的に有意な低下を示すｐ値（ｐ≦０．０５）が各例で得られた。ＳＰＡ−１１０処置した動物５匹中５匹が第２８日に生存していた。ビンクリスチン処置した動物１０匹中９匹が第２８日に生存していた。結果を以下の表に示す。
【表１】
0004417551.tif 000041
【００３２】
本発明化合物の相対活性
種々のＳＰＡ−１１０類似体を合成し、その細胞毒性活性および抗有糸分裂活性を特徴付けた。細胞毒性と抗有糸分裂能の相関の高さは、本発明化合物の細胞毒性が化合物の抗有糸分裂活性によるものであることを示す。以下の構造は、本発明の範囲内に入る類似体を細胞毒性／抗有糸分裂活性のほぼ低くなる順に示している。
【表２ａ】
0004417551.tif 000042
【表２ｂ】
0004417551.tif 000043
本発明を実施するにあたり、本発明の精神または範囲から逸脱することなく多くの変更や修飾が可能であることは、前記の開示に照らして当業者に明らかであろう。したがって、本発明の範囲は特許請求の範囲に定義した物質に従うと解釈すべきであり、該物質には特許請求の範囲に記載の化合物および方法の明らかな化学的等価物が含まれる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明化合物を合成するための好ましい反応式を示す模式図である。
【図２】  図１に示すカップリング反応に用いるアミノ酸を合成するための好ましい反応式を示す模式図である。
【図３】  本明細書の実施例に記載の、本発明化合物の合成工程を示す模式図である。
【図４】  本明細書の実施例に記載の、図３に示すジペプチドの合成工程を示す模式図である。
【図５】  本明細書の実施例に記載の、ヘミアスターリンの細胞毒性をＳＰＡ−１１０と比較するグラフである。
【図６】  本明細書の実施例に記載の、ＳＰＡ−１１０（◆）の抗有糸分裂活性をヘミアスターリン（□）と比較したグラフである。
【図１】
0004417551.tif 000047
【図２】
0004417551.tif 000048
【図３】
0004417551.tif 000049
【図４】
0004417551.tif 000050
【図５Ａ】
0004417551.tif 000051
【図５Ｂ】
0004417551.tif 000052
【図６】
0004417551.tif 000053