(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）：
【化１】
0004514330.tif 000025
〔式中、Ｒ1は、ＮＲ3Ｒ4、ＯＲ3またはＳＲ3[ここで、Ｒ3およびＲ4は、相互に独立に、同一または異なり、Ｈ；または、ＣnＨ2n+1（ここで、ｎは、１−１２の整数に等しい。）である。]に等しく；そして、ここで、Ｒ1は、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群より選ばれる保護基で保護されていてもよく；
Ｒ2は、ＣmＨ2m−Ｃ（Ｘ）−Ｙ[ここで、Ｘは、＝Ｏ、または＝Ｓに等しく、Ｙは、ＯＲ3、ＮＲ3Ｒ4またはＳＲ3（ここで、Ｒ3およびＲ4は、上記した意味を有する。）に等しく；ｍは、１−４の整数である。]に等しく；または、
Ｒ2は、ＣmＨ2m−Ｚ−Ｙ’[ここで、Ｚは、スルホニル、ホスホニル、エーテルまたはアミノ基に等しく、ここで、Ｚがスルホニルまたはホスホニル基に等しい場合、Ｙ’は、Ｈ；ＣnＨ2n+1、ＯＲ3、ＮＲ3Ｒ4またはＳＲ3（ここで、ｎ、Ｒ3およびＲ4は、上記した意味を有する。）であり、Ｚがエーテルまたはアミン基に等しい場合、Ｙ’は、ＣnＨ2n+1に等しい。]に等しく；
Ａ、ＢおよびＤは、相互に独立に、同一または異なり、ＣＲ5Ｒ6[ここで、Ｒ5、Ｒ6は、相互に独立に、Ｈ；または、ＣnＨ2n+1（ここで、ｎは、上記した意味を有する。）である。]であり；
Ｃは、ＣＲ8[ここで、Ｒ8は、独立に、Ｒ5の意味を表す。]に等しく；
核酸塩基は、チミン、ウラシル、アデニン、シトシン、グアニン、イソシトシン、イソグアニン、キサンチンまたはヒポキサンチンを表す。〕
で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ1がＮＲ3Ｒ4またはＯＲ3に等しく、ここで、Ｒ1が、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群より選ばれる保護基で保護されていてもよく；Ｒ2がＣmＨ2m−Ｃ（Ｘ）−Ｙ〔ここで、Ｙは、ＯＲ3またはＮＲ3Ｒ4に等しい。〕に等しいことを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1がＮＨ2に等しく、ここで、このＮＨ2基が、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群より選ばれる保護基で保護されていてもよく；Ｒ2がＣＨ2−ＣＯＯＨに等しいことを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
化合物が〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕核酸塩基から選択され、ここで、２−アミノ基が、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群より選ばれる保護基で保護されていてもよいことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
化合物が、１−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕チミン、１−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕ウラシル、１−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕シトシン、９−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕アデニンまたは９−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕グアニンから選択され、ここで、２−アミノ基が、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群より選ばれる保護基で保護されていてもよいことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
化合物がエナンチオマー的に純粋であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
核酸塩基またはＲ1が、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群より選ばれる保護基を有することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
核酸塩基がエカトリアルに配列していることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
請求項３に従う化合物を製造するための方法において、
（ａ）  ヨードラクタムを、保護した核酸塩基とカップリングさせ；
（ｂ）  先の工程（ａ）からのラクタムを活性化し；
（ｃ）  そのラクタム環を、ついで、求核的に開環する；
ことを特徴とする、上記方法。
【請求項１０】
ヨードラクタムがエナンチオマー的に純粋な形で存在することを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ヨードラクタムをヒドリドの存在で保護された核酸塩基とカップリングすることを特徴とする、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
ラクタムが、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）および９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群より選ばれる保護基の導入によって活性化されることを特徴とする、請求項９〜請求項１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ラクタム環が、工程（ｃ）に従い、ヒドロパーオキシドにより、求核的に開環されることを特徴とする、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物を含むオリゴマー。
【請求項１５】
オリゴマーが、さらに、少なくとも１種のリンカーを含有することを特徴とする、請求項１４に記載のオリゴマー。
【請求項１６】
リンカーが、リシンリンカーであることを特徴とする、請求項１５に記載のオリゴマー。
【請求項１７】
オリゴマーが活性化されたリンカーで誘導されることを特徴とする、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載のオリゴマー。
【請求項１８】
活性化されたリンカーが、ヨードアセチルスクシンイミドおよび／またはビス（ヒドロキシスクシニミジル）グルタレートであることを特徴とする、請求項１７に記載のオリゴマー。
【請求項１９】
オリゴマーがリン酸化されていることを特徴とする、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載のオリゴマー。
【請求項２０】
請求項１４〜１９のいずれか１項に記載のオリゴマーと生体分子とを含む共役体。
【請求項２１】
生体分子がペプチド、ペプトイド、蛋白質、細胞構成成分、フィラメント構成成分または核酸、および、それらの誘導体であることを特徴とする、請求項２０に記載の共役体。
【請求項２２】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の少なくとも１種の化合物、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の少なくとも１種のオリゴマーおよび／または請求項２０または請求項２１に記載の少なくとも１種の共役体がその上に固定化されることを特徴とするキャリヤー。
【請求項２３】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載のオリゴマー、請求項２０または請求項２１に記載の共役体および／または請求項２２に記載のキャリヤーのペアリングシステムおよび／または試験システムにおける使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、式（Ｉ）：
【０００２】
【化２】
0004514330.tif 000002
【０００３】
で表される化合物、その製造方法およびペアリングシステムおよび／または試験システムにおける使用に関する。
ペアリングシステムは、非共有結合相互作用の超分子システムであり、これらは、選択性、安定性および可逆性によって識別され、それらの性質は、好ましくは、熱力学的に、すなわち、温度、ｐＨおよび濃度によって影響を受ける。ＤＮＡおよびＲＮＡが、遺伝形質のキャリヤーとして、ここでは、基本的な役割を演ずる。このようなペアリングシステムは、例えば、それらの選択性の結果として、また、異なる金属クラスターを結びつけて、潜在的に新規な性質を有するクラスター会合を生じさせる“分子接着剤”として使用することができる〔Ｒ．Ｌ．Ｌｅｓｔｉｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３８２，６０７−９；Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３８２，６０９−１１〕。
【０００４】
したがって、強力かつ熱力学的に調節可能なペアリングシステムは、ナノテクノロジーの領域における使用のために、新規物質、診断薬、治療薬、ミクロ電子工学、フォトニックおよび光電子工学コンポーネントの製造のために、および、分子種をコントロールしつつ、結びつけて、超分子単位、例えば、蛋白質アセンブリの（組み合わせ）合成を生ずるためにますます重要な役割を演ずる〔例えば、Ａ．Ｌｏｍｂａｒｄｉ，Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙｓｏｎ，Ｗ．Ｆ．ＤｅＧｒａｄｏ，Ｂｉｏｍｏｌｅｋｕｌｓ（Ｒｅｐｔ．Ｓｃｉ．）  １９９７，４０，４９５―５０４参照。〕
しかし、このタイプのペアリングシステムを製造するためには、ＤＮＡおよびＲＮＡ単位は、以下の欠点を有する：
（ａ）  互いに、２本のストランドを保持する力、特に、水素結合およびスタッキング効果(ｓｔａｃｋｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）は、天然には非常に低い。したがって、このような二重構造は、安定性が低い。これは、いわゆる遷移曲線の記録および遷移点の測定により容易に決定される。したがって、ペアリングシステムを製造するためには、比較的長い個々のストランドを必要とし、超分子単位上のペアリングシステムの部分が優勢である、すなわち、“ヌクレオチド負荷”が高い結果を有する。
（ｂ）  フーグスチーン（Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ）ペアリング（これとは別に、ワトソン−クリックペアリングについても可能であるが、）の形成により、選択性はは低下する。並列二重構造または不可逆的なペアリングプロセスは、かくして、組合せられることが多い。
（ｃ）  糖リン酸塩骨格が非常に柔軟であることにより、螺旋配座が形成され、その結果として、超分子単位における空間的な配列は、容易に調節することができない。
（ｄ）  骨格におけるホスホジエステル結合の化学的不安定性は、超分子単位の使用のための物理的条件、例えば、ｐＨまたは温度において極わずかしか変動しない。
（ｅ）  生成物のヌクレアーゼ感受性は、迅速な酵素分解を生じ、これは回避することが困難であるのみで、かくして、超分子単位は破壊される。
（ｆ）  超分子単位が生物系で使用される場合、すなわち、ペアリングプロセスのオルソゴナリティ（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｉｔｙ）が存在しない場合、生物系の遺伝物質により起こり得る妨害は、除外するべきではない。
（ｇ）  例えば、ペプチド合成と比較して、慣用的に使用される固相の負荷能力が低いことにより、比較的多量のオリゴヌクレオチドの製造は困難である。
（ｈ）  適当な配置の糖単位が接近しにくいことにより、非天然のＬエナンチオマー形を製造することが難しい。
【０００５】
かくして、生理学的媒体中で、例えば、相補的に結合した２次元および３次元の超分子構造体（例えば、ＷＯ９６／１３５２２参照）におけるＤＮＡまたはＲＮＡ単位の使用は、特に、上記（ｅ）項、（ｆ）項および（ｇ）項の点で実現が非常に難しい。
【０００６】
ＤＮＡおよびＲＮＡ単位とは別に、いわゆるピラノシル−ＲＮＡ（ｐ−ＲＮＡ）が存在する。ｐＲＮＡは、リボフラノースの代わりに、糖単位としてリボピラノースを含有し、したがって、専ら、ワトソン−クリック対をなす逆平行の可逆的に“溶解する”準直鎖かつ安定な二重構造を形成するオリゴヌクレオチドである。また、キラリティの反対の意味を有するホモキラルなｐ−ＲＮＡストランドもまた存在し、これは、同様に、調節可能な対をなし、形成される二重構造において厳密には螺旋状ではない。超分子単位合成のためのこの貴重な特異性は、リボピラノースホスフェート骨格の相対的に低い柔軟性および塩基平面のストランド軸に対する強い傾斜と関連し、これによって生ずる傾向は、インターカテナリー塩基（ｉｎｔｅｒｃａｔｅｎａｒｙ  ｂａｓｅ）が生成する二重構造において列をなし、最終的に、骨格の合成における２’，４’−ｃｉｓ−ニ置換リボピラノース環の関与であると考えることができる。かくして、ｐ−ＲＮＡは、ＤＮＡおよびＲＮＡの上記欠点の幾つかを解決するが、（ｄ）項、（ｅ）項、（ｇ）項および（ｈ）項に従う欠点を解決することはできない。
【０００７】
さらにこれとは別に、アミド結合によるモノマー単位の結合、すなわち、オリゴマーペプチド、いわゆる、ペプチド核酸（ＰＮＡｓ）の合成も存在する。
それらの開鎖構造により、ＰＮＡｓは、高度の柔軟性を有し、かくして、それらの配座前組織化の点で、超分子システムの合成の調節には適していない。
【０００８】
したがって、本発明の目的は、上記した欠点を有しない利用可能な化合物を製造することである。
したがって、本発明の１つの主題は、式（Ｉ）：
【０００９】
【化３】
0004514330.tif 000003
【００１０】
〔式中、Ｒ1は、ＮＲ3Ｒ4、ＯＲ3またはＳＲ3[ここで、Ｒ3およびＲ4は、相互に独立に、同一または異なり、Ｈ；または、ＣnＨ2n+1であり、ｎは、１−１２の整数、好ましくは、１−８の整数であり、特に、１−４の整数である。]に等しく、好ましくは、Ｒ1は、ＮＲ3Ｒ4またはＯＲ3であり、特に、ＮＲ3Ｒ4であり、とりわけ、ＮＨ2であり；
Ｒ2は、ＣmＨ2m−Ｃ（Ｘ）−Ｙ[ここで、Ｘは、＝Ｏ、＝Ｓまたは＝Ｎに等しく；Ｙは、ＯＲ3、ＮＲ3Ｒ4またはＳＲ3（ここで、Ｒ3およびＲ4は、上記した意味を有する。）に等しく；ｎは、１−４の整数、特に、１−３の整数、とりわけ、１−２の整数であり、好ましくは、Ｘは、ＮＲ3Ｒ4またはＯＲ3、特に、ＮＲ3Ｒ4、とりわけ、ＮＨ2に等しく、Ｙは、好ましくは、ＯＲ3またはＮＲ3Ｒ4に等しい。]であるか；または、
Ｒ2は、ＣmＨ2m−Ｚ−Ｙ’[ここで、Ｚは、スルホニル、ホスホニル、エーテルまたはアミン基に等しく、Ｚがスルホニルまたはホスホニル基に等しい場合、Ｙ’は、Ｈ；ＣnＨ2n+1、ＯＲ3、ＮＲ3Ｒ4またはＳＲ3（ここで、ｎ、Ｒ3およびＲ4は、上記した意味を有する。）に等しく、Ｚがエーテルまたはアミン基に等しい場合、Ｙ’は、ＣnＨ2n+1に等しい。]に等しく；
Ａ、ＢおよびＤは、相互に独立に、同一または異なり、ＣＲ5Ｒ6、Ｏ、ＮＲ7またはＳ[ここで、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、相互に独立であり、Ｈ；または、ＣnＨ2n+1（ここで、ｎは、上記した意味を有する。）である。]であり；
Ｃは、ＣＲ8またはＮ[ここで、Ｒ8は、独立に、Ｒ5の意味を表す。]に等しく；
Ａ−Ｂ、Ｂ−ＣまたはＣ−Ｄは、２つの同一のヘテロ原子ではなく；
本発明の意味の範囲内でヌクレオ塩基という用語は、チミン、ウラシル、アデニン、シトシン、グアニン、イソシトシン、イソグアニン、キサンチンまたはヒポキサンチンを表し、好ましくは、チミン、ウラシル、アデニン、シトシンまたはグアニンを表す。〕
で表される化合物である。
【００１１】
Ｒ1がＮＨ2に等しく、Ｒ2がＣＨ2−ＣＯＯＨに等しい化合物が特に好ましく、とりわけ、〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕ヌクレオ塩基、例えば、１−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕チミン、１−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕ウラシル、１−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕シトシン、９−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕アデニンまたは９−〔２−アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕グアニンが好ましい。
【００１２】
本発明に従う化合物がエナンチオマー的に純粋である場合に、さらに有益である。
合成のためには、Ｒ1が保護基を有する場合、例えば、Ｒ1がＮＨ2に等しい場合に、ｔ−ブトキシカルボニル基（ＢＯＣ）または９−フルオレニルメトキシカルボニル基（ＦＭＯＣ）を有する場合、Ｒ1がＯＨに等しい場合に、エーテルまたはアセタール保護基を有する場合がさらに有益である。保護基は、概して、所望されない反応から化合物の反応性基を保護し、容易に除去可能な基を意味すると理解される。このタイプの基は、例えば、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ＢＯＣ、ＦＭＯＣ、エーテルまたはアセタール基である。
【００１３】
また、Ｙは、活性化試薬と反応させると、反応性中間体、例えば、混合酸無水物を与える。
好ましくは、本発明に従う化合物は、１’−位に、ヌクレオ塩基を、２’−位に、求核剤、例えば、４’−位の反応性基と、または、その活性化後、カルボニル官能基と反応することができ、かくして、このプロセスを繰り返すことによって、オリゴマー構造を形成することのできる窒素原子を有するシクロヘキサノン誘導体である。立体化学的な観点から、６員環に全ての置換基がエカトリアル位を有する誘導体が好ましく、特に、１’−および２’−位の置換基がエカトリアル位を有する誘導体が好ましく、とりわけ、ヌクレオ塩基がエカトリアル位を有する誘導体が好ましい。
【００１４】
本発明に従う化合物は、例えば、以下のようにして製造することができる。
開始時に、例えば、１，３−ブタジエン１と、例えば、３−（２−プロペノイル）１，３−オキサゾリジン−２−オン２とを、キラルな非ラセミの促進剤、例えば、ゼーバッハのＴＡＤＤＯＬ３（Ｄ．Ｓｅｅｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９５，６０，１７８８）の存在で、キロジェニックな（ｃｈｉｒｏｇｅｎｉｃ）ディールス−アルダー反応を行う。３−（２−プロペノイル）−１，３−オキサゾリジン−２−オンは、例えば、オキサゾリジン−２−オンの、銅および塩化第１銅（Ｉ）の存在における、アクリロイルクロライドとの反応によって製造することができる。化合物５は、例えば、化合物４から、マグネシウム削り屑および無水メタノールの存在で、製造することができる。ついで、例えば、リチウムアルミニウムハイドライドで反応生成物を還元すると、化合物６を与える。アセトニトリル７は、６から、例えば、メタノイルクロライドと反応させて、メチルメタノエートを生成させ、ついで、シアニドと反応させることによって製造することができる。反応生成物をアルカリ加水分解すると、酢酸誘導体を形成し、これは、ＳＯＣｌ2と反応させることができ、アセチルクロライドを与え、アンモニア水溶液の存在で、アセトアミド８を生ずる。これのヨードラクタム化を、ついで、実施すると（Ｓ．Ｋｎａｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．１９９１，７０，１０１）、ヨードラクタム９を与える。
【００１５】
その後、ヨードラクタム９は、ハイドライドの存在で、ニ環系を破壊することなく、ヌクレオ塩基とカップリングさせることができる。
このためには、ヌクレオ塩基の反応性基を多分適当な保護基、例えば、ＢＯＣ、ＦＭＯＣ、アセタール等によって保護する場合が有益であろう。ヌクレオ塩基としてジアミノプリンの場合においてのみ、保護基は、不要である。しかし、ヌクレオ塩基としてのジアミノプリンの場合には、ラクタム環を開くことがもはや可能ではない。これとは関係なく、ジアミノプリンは、生物系において何の役割も演じない。
【００１６】
合成されるべきオリゴマーは、ペアリングシステムであることを意図するものであり、１つの立体化学的系列にのみ属する必要があるので、ヨードラクタムは、ラセミ形で存在するのではなく、エナンチオマー的に純粋な形で存在する場合がなおさらに好ましい。ラセミ単位からのペアリングシステムの合成は、概して、不可能である。
【００１７】
本発明に従えば、カップリング可能なピリミジン単位、例えば、チミン単位は、ヨードラクタム９から出発して、５段階の合成順序で、全工程にわたる収率２７％で製造される（図２）：
第１の工程において、ヌクレオ塩基の立体選択的導入は、置換反応（１３ａ）、続いて、チミン（１３ｂ）の酸性イミドプロトンのマスキングによって行われる。ついで、ラクタムは、保護基、例えば、Ｂｏｃ基（１３ｃ）を導入することによって活性化され、環は、例えば、ＬｉＯＯＨ（１４ａ）によって求核的に開環される。例えば、存在するＢＯＭ保護基を除去した後、接触水素化によって、所望される単位（１４ｂ）を生ずる。
【００１８】
エナンチオモルフィック（Ｒ）単位ｅｎｔ−１４ｂは、（Ｒ）ヨードラクタムｅｎｔ−９から類似の処方によって得ることが可能である。同様に、カップリング可能なウラシル、シトシンおよびイソシトシン単位は、類似して得ることが可能である。
【００１９】
カップリング可能なプリン単位、例えば、アデニン単位は、ヨードラクタム９から出発して、７段階の合成順序で、全工程にわたる収率１９％で達成可能である（図３）：
例えば、Ｎ（６）−ベンゾイル化したアデニンの保持（１５ａ）しての（Ｓ）−ヨードラクタム９への導入後、例えば、Ｎ（６）−ホルムアミジンアデニンラクタム（１５ｃ）を与える再保護化を行う。例えば、ｔ−ブトキシカルボニル化（１５ｄ）によるラクタムの活性化、例えば、Ｎ（６）−アニソイル保護ラクタム（１５ｆ）を与える新しい再保護化、および、所望される単位１６を生成する例えば、ＬｉＯＨによる続くラクタムの開裂をついで行う。
【００２０】
エナンチオモルフィック（Ｒ）単位ｅｎｔ−１６は、（Ｒ）−ヨードラクタムｅｎｔ−９から類似の処方によって得ることが可能である。同様に、カップリング可能なグアニン、イソグアニン、キサンチンおよびヒポキサンチン単位を類似的に得ることが可能である。
【００２１】
本発明に従うヘテロ原子含有６員環およびその他の誘導体の製造は、例えば、ヘテロ−ディールス−アルダー反応によって、または、適当な出発化合物でのディールス−アルダー反応によって、類似的に、可能である。
【００２２】
したがって、本発明のもう１つの主題は、本発明に従う化合物を製造するための方法であって、以下の工程：
（ａ)  適当なヨードシクロアルカン、例えば、ヨードラクタム、好ましくは、エナンチオマー的に純粋なヨードラクタムの保護されたヌクレオ塩基との、好ましくは、ハイドライド、例えば、ＮａＨの存在におけるカップリング；および、ヨードラクタムの場合においては、
（ｂ）  例えば、保護基、例えば、ＢＯＣ基の導入によるラクタムの活性化；および、
（ｃ）  例えば、ヒドロパーオキシド、例えば、ＬｉＯＯＨによる求核的な開環；
を有する方法である。
【００２３】
オリゴマーを製造するためには、本発明に従う化合物は、ついで、好ましくは、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄのペプチド合成に従い、固相で合成され、オリゴマー構造体を与える。この方法において、必要とされる試薬は、好ましくは、過剰に加えられ、未反応の量は、単純洗浄工程によって再度除去される〔Ｒ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３，８５，２１４９〕。一時的な保護基の除去；および、例えば、対称無水物法に従う、保護されたモノマー単位のカップリングからなる繰り返しサイクルは、樹脂上にオリゴマーを生ずる。合成の終わりに、末端保護基を除去し、樹脂からそのオリゴマーを開裂させ、好ましくは、クロマトグラフィー法を使用し、精製する。分析ＨＰＬＣを使用し、合成生成物の単離されたＨＰＬＣ画分をそれらの純度についてチェックし、エレクトロスプレー質量分析法を使用して、明瞭に特性決定した。
【００２４】
したがって、本発明のさらなる主題は、本発明に従う少なくとも１種の化合物を含み、それらが、概して、２’−−＞４’結合するＣＡＮ（シクロヘキシルヌクレオオリゴアミド）と称されるオリゴマーである。
【００２５】
分子種、例えば、ペプチド、蛋白質、レセプター、レドックス中心、抗体、核酸部分（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）を記載したペアリングシステムの助けをかりて、結びつけるためには、概して、適当なリンカーが結合される。好ましくは、オリゴマーペアリングシステムにおけるいずれかの所望される位置にリシンが組込まれるが、リシンに限定されるものではなく、末端に組込むのが非常に好ましい。その遊離アミノ基により、リシンは、非常に多くの結合可能性を有する。本発明に従うオリゴマーへの組込みは、例えば、Ｂｏｃ−リシン（Ｆｍｏｃ）によって行われ、そのＦＭＯＣ基は、ＤＭＦ中、ピペリジンを使用して除去することができる。
【００２６】
したがって、本発明は、また、さらに、少なくとも１種のリンカー、好ましくは、リシンリンカー、とりわけ、末端リシンリンカーを含有するオリゴマーに係る。
【００２７】
例えば、アミノ官能化されたオリゴマーは、また、好ましくは、活性化されたリンカー、例えば、ヨードアセチルスクシンイミド（Ａ）またはビス（ヒドロキシスクシニミジル）グルタレート（Ｂ）によって誘導することができ、これらは、ついで、好ましくは、生理学的媒体、特に、所望により、有機可溶化剤の添加された水性緩衝溶液中で、分子種のＨＳ基、例えば、ペプチドまたは蛋白質のシステイン基と（Ａ）を介して、または、分子種のアミノ基と、（Ｂ）を介して反応させ、化学的に安定な供給結合形を形成する。
【００２８】
したがって、本発明は、また、活性化されたリンカー、例えば、ヨードアセチルスクシンイミドおよび／またはビス（ヒドロキシスクシニミジル）グルタレートで誘導されるオリゴマーを含む。
【００２９】
遊離のＮおよびＣ末端を有する本発明に従うオリゴマーは、概して、ｐＨ７で、水にわずかに溶解するのみである。テトラマーの場合、１００マイクロモルの濃度、ペンタマーの場合、１０マイクロモルの濃度、ヘキサマーの場合、ほぼ１マイクロモルの濃度範囲が達成される。これらは、おおよその値であり、配列により、甚だしく上回ったり、少なすぎたりする。ＡＡＡＴＴの溶解度は、例えば、１マイクロモルであり、ＡＡＴＡＴについての溶解度は、５０マイクロモルである。
【００３０】
Ｎ末端をヒドロキシカルボン酸誘導体でアシル化することによって、例えば、ホスホリル化することのできるヒドロキシル官能基を導入することが可能である。かくして得られるリン酸化したオリゴマーは、慣用的に、約ｐＨ７で、水に、少なくとも１０００倍より多く溶解可能である。溶解度は、概して、ＵＶ分光法によって検出される。したがって、本発明は、また、リン酸化されたオリゴマーに係る。
【００３１】
本発明のもう１つの主題は、また、本発明に従うオリゴマーと生体分子との共役体である。
生体分子は、本発明に従えば、例えば、ペプチド、ペプトイドまたは蛋白質、例えば、レセプター、抗体またはその官能性部分または酵素、および、核酸、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ、もしくは、細胞構成成分、例えば、脂質、グリコ蛋白質、フィラメント構成成分、または、ウイルス、ウイルス構成成分、例えば、カプシド、ウィロイド、ならびに、それらの誘導体、例えば、アセテートを意味すると理解される。
【００３２】
抗体の官能性部分は、例えば、Ｆｖフラグメント（Ｓｋｅｒｒａ  ＆  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  （１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，１０３８）、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ；  Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ  （１９８８），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２，４２３；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５，５８７９）またはＦａｂフラグメント（Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０，  １０４１）である。エフェクター分子；および、好ましくは、ペプチドの本発明に従う共役体は、ＰＮＡとは対照的に、選択的であり、可逆的に、超分子アセンブリを合成する場合には、調節可能なペアリングシステムが有益であり、その作用、例えば、結合、抑制、生理学的効果の誘発は、個々のエフェクター分子の作用とは異なる。
【００３３】
かくして、例えば、ＷＯ９６／１３６１３は、最初に、試験により、蛋白質と結合する物質Ｉを決定し、ついで、第２の蛋白質と結合する第２の物質ＩＩを決定し、ついで、２つの蛋白質のニ量化を誘発するように、リンカーにより、２つの物質ＩおよびＩＩを共有結合させることによって、蛋白質の多重結合（ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）による生物学的作用を誘発する物質を見出すための方法を記載している。このニ量化は、ついで、所望される生物学的な効果を生ずる。このような方法は、２つの物質ＩおよびＩＩの結合が非共有結合的に生ずるが、本発明に従うオリゴマーまたは共役体のようなペアリングシステムによる場合に、より大きな柔軟性を達成することができる。例えば、温度またはｐＨによるこのペアリングの調節可能性により、蛋白質のニ量化プロセスを観測することができ、その度合いを調節することができる。本発明に従うペアリングシステムは、それらがヌクレアーゼ安定である点で、例えば、ＷＯ９６／１３５２２からのシステムと比較して、利点を有する。
【００３４】
ホモ−またはヘテロ−ニ量化アセンブリの形成のためにペプチド“接着”単位を使用する試みは、例えば、ＷＯ９４／２８１７３に記載されている：
固定された配列の会合ペプチドは、（ヘキサ−またはヘプタペプチド）は、エフェクター単位、例えば、蛋白質を結びつけて、超分子単位を与える。このような方法は、この会合プロセスの調節可能性により、より高い柔軟性を達成することができ、これは、概して、会合ペプチドでは実現することはできないが、本発明のペアリングシステムでは有益である。
【００３５】
したがって、本発明は、また、本発明に従う化合物、本発明に従うオリゴマー、ペアリングシステムおよび／または試験システムにおける本発明に従う共役体の使用に関し、例えば、ＷＯ９４／２８１７３、ＷＯ９６／１３５２２、ＷＯ９６／１３６１３、Ｒ．Ｌ．Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，  １９９６，３８２，６０７−９；Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ  ｅｔ．ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３８２，６０９−１１またはＡ．Ｌｏｍｂａｒｄｉ，Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙｓｏｎ，Ｗ．Ｆ．ＤｅＧｒａｎｏ，Ｂｉｏｍｏｌｅｋｕｌｓ(Ｐｅｐ．Ｓｃｉ）１９９７，４０，４９５−５０４に詳細に記載されており、概して、上記説明した。
【００３６】
本発明の特定の実施態様は、本発明に従う化合物、本発明に従うオリゴマーおよび／または本発明に従う共役体を固定するキャリヤーであり、特に、上記詳細に記載したように、ペアリングシステムおよび／または試験システムに使用されるキャリヤーである。
【００３７】
“固定化する”という用語は、本発明の意味内において、２種以上の分子種、例えば、直鎖構造の分子、特に、ペプチド、ペプトイド、蛋白質、直鎖オリゴ−またはポリサッカライド、核酸およびそれらの類縁体；または、モノマー、例えば、ヘテロ環、特に、窒素ヘテロ環；あるいは、非直鎖構造の分子、例えば、分岐したオリゴ−またはポリサッカロイド；または、抗体およびそれらの官能性部分、例えば、Ｆｖフラグメント、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）またはＦａｂフラグメントの会合によって、共有結合、準共有結合または超分子結合を形成することを意味すると理解される。
【００３８】
適したキャリヤー物質は、例えば、セラミック、金属、特に、貴金属、ガラス、プラスチックス、結晶質物質；または、キャリヤーの薄層であり、特に、列挙した物質の薄層、または、（生体）分子フィラメント、例えば、セルロース、構造蛋白質である。
【００３９】
要約すると、本発明は、慣用的なペアリングシステムおよび試験システムと比較して、以下の利点を有する：
本発明に従うオリゴマーまたは共役体の２重構造は、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびｐ−ＲＮＡのそれらよりも有意により安定である。オリゴマー物質は、化学的および酵素による分解に対して有意により安定であり、ＤＮＡまたはＲＮＡと対を形成せず、単純な方法において比較的大量に製造することができる。両エナンチオマーは、合成的キロジェニック（ｃｈｉｒｏｇｅｎｉｃ）工程によって容易に到達可能である。本発明に従う化合物は、したがって、従来公知のペアリングシステムより、選択的な“分子接着剤”として優れている。
【００４０】
以下の図および実施例は、本発明をさらに詳細に、説明することを意図するもので、本発明を何ら限定するものではない。
実施例
実施例  １
カップリング可能なチミン単位の合成
１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−３−〔（ベンジルオキシ）メチル〕チミン（１３ｂ）の製造
１．  処方
６５％強のＮａＨ懸濁液１４８ｍｇ（４．００ｍｍｏｌ）を保護ガスでフラッシュし、各５ｍｌの無水ペンタンで２回洗浄した５０ｍｌ乾燥レーベンタールフラスコに導入し、２０ｍｌのＤＭＦで懸濁させた。３−（ベンジルオキシ）メチルチミン４９３ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）を最初に小分けして加え、ガスの発生が鎮まった後、５３０ｍｇ（２．００ｍｍｏｌ）の化合物９を加えた。室温で２０分間攪拌した後、淡黄色の反応溶液が形成され、これを室温で一晩攪拌した。
【００４１】
反応溶液を１ｍｌのＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液で処理し、丸底フラスコに移し、ＭｅＯＨで再度濯いだ。続いて、溶剤を、最初に、ロータリーエバポレーター中、減圧で、注意深く除去し、ついで、バルブ−チューブ蒸留（ｂｕｌｂ−ｔｕｂｅ  ｄｅｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ）（７０℃／０．５ｔｏｒｒ）によって除去した。１．７１ｇの黄色−オレンジ色に着色したオイルが得られ、１５０ｇのシリカゲル６０上ＭＰＬクロマトグラフィーによってこれを精製した（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ３０：１）。かくして得られた固体を少量のＥｔ2Ｏで温浸し、濾去し、細かく砕き、オイルポンプ減圧で乾燥した。これにより、無色の粉末ｍ．ｐ．１６０−１６２℃として、４０５ｍｇ（５３％）の化合物１３ｂを生成した（ｅｎｔ−１３ｂ：５０％；ｒａｃ−１３：５１％）。ＴＨＦ／シクロヘキサンから結晶させることによって、分析試料が得られた。
【００４２】
２．  分析データ
１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−３−〔（ベンジルオキシ）メチル〕チミン（１３ｂ）：
【００４３】
【化４】
0004514330.tif 000004
【００４４】
1Ｈ，1Ｈ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００４５】
【化５】
0004514330.tif 000005
【００４６】
1Ｈ，13Ｃ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００４７】
【化６】
0004514330.tif 000006
【００４８】
１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−アザ−８−（ｔ−ブトキシカルボニル）ビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−３−〔（ベンジルオキシ）メチル〕チミン（１３ｃ）の製造
１．  処方
７．１８ｇ（１８．７ｍｍｏｌ）の化合物１３を２５０リットルの丸底フラスコ中で溶解し、２．５９ｍｌ(１８．７ｍｍｏｌ，１当量）のＮＥｔ3および８．００ｍｌ（３７．４ｍｍｏｌ，２当量）のＢｏｃ2Ｏで連続して処理した。続いて、２．２８ｇ（１８．７ｍｍｏｌ，１当量）のＤＭＡＰをスパチュラによって加え、黄色の反応溶液を室温で４時間攪拌した。３．８９ｍｌ（２８．１ｍｍｏｌ，１．５当量）のＮＥｔ3、１２．０ｍｌ（５６．１ｍｍｏｌ，３当量）のＢｏｃ2Ｏおよび３．４３ｇ（２８．１ｍｍｏｌ，１．５当量）のＤＭＡＰを、再度、連続して加えた。水を除去しつつ、一晩攪拌した後、痕跡の出発物質が、ＴＬＣチェック（シリカゲル６０；ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ１５：１）に従い、なお存在した。したがって、４時間の間隔で、各２．００ｍｌ（９．３５ｍｍｏｌ）のＢｏｃ2Ｏを再度加えた。水を除去しつつ、混合物を再度攪拌し、続いて、ロータリーエバポレータ中、減圧で、溶剤および試薬を除去した。これにより、１９．５ｇのオイル状の黄色の固体を生成し、これを２７５ｇのシリカゲル６０（ＡｃＯＥｔ／ｎ−ヘプタン２：１）上でクロマトグラフィーにかけた。８．５０ｇの幾分黄色に着色した固体が得られた。５０ｍｌのＴＨＦおよび１００ｍｌのシクロヘキサンから再結晶すると、ｍ．ｐ．１２４−１２６℃の無色の小さな結晶として、７．８１ｇ（８６％）の化合物１３ｃを生成した（ｅｎｔ−１３ｃ：８７％，ｒａｃ−１３ｃ：８５％）。
【００４９】
２．  分析データ
１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−アザ−８−（ｔ−ブトキシカルボニル）ビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−３−〔（ベンジルオキシ）メチル〕チミン（１３ｃ）：
【００５０】
【化７】
0004514330.tif 000007
【００５１】
1Ｈ，1Ｈ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００５２】
【化８】
0004514330.tif 000008
【００５３】
1Ｈ，13Ｃ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００５４】
【化９】
0004514330.tif 000009
【００５５】
３−〔（ベンジルオキシ）メチル〕−１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−２（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕チミン（１４ａ）の製造
１．  処方
７．８１ｇ（１６．２ｍｍｏｌ）の化合物１３ｃを５００ｍｌの丸底フラスコ中、２２５ｍｌのＴＨＦに溶解し、５０ｍｌの水で処理し、氷浴により０℃まで冷却した。７．３３ｇ（６４．８ｍｍｏｌ）の３０％強の過酸化水素、続いて、１．３６ｇ（３２．３ｍｍｏｌ）のＬｉＯＨ・１水和物の２５ｍｌの水溶液を加えると、その後、溶液は、濁った。氷浴を除去し、反応混合物を４５分間攪拌した。反応溶液を１．５ＭのＮａ2ＳＯ3水溶液２５ｍｌおよびＮａＨＣＯ3飽和溶液７５ｍｌで処理した。続いて、ロータリーエバポレータ中、減圧で、ＴＨＦを大部分除去した。溶液を３５０ｍｌの水に注ぎ、少量の２Ｎの水酸化ナトリウム溶液を使用して、ｐＨ＞１２に調整した。ミルク状の懸濁液を各回３５０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2で３回抽出し、ＭｇＳＯ4を使用して、合わせた有機相を乾燥させた。ロータリーエバポレータ中、減圧で、溶剤を除去した後、２．００ｇの不純な化合物１３ｂを得、これを３０ｍｌのＴＨＦおよび６０ｍｌのシクロヘキサンから再結晶した。かくして、１．５５ｇ（２５％）の化合物１３ｂ（ｅｎｔ−１３ｂ：２７％；ｒａｃ−１３ｂ：３０％）を回収することが可能であった。
【００５６】
塩基性の水相を半分に濃縮した塩酸でｐＨ１−２に注意深く調整し、各回３５０ｍｌのＡｃＯＥｔで３回抽出した。Ｎａ2ＳＯ4を使用して乾燥後、ロータリーエバポレータ中、減圧で、溶剤を除去し、５０ｍｌのＥｔ2Ｏで温浸し、濾過し、オイルポンプ減圧で乾燥し、５．０９ｇ（６３％）の化合物１４ａ（ｅｎｔ−１４ａ：６０％；ｒａｃ−１４ａ：６５％）を、ｍ．ｐ．８９−９１℃の微細な結晶質固体として得た。
【００５７】
２．  分析データ
３−〔（ベンジルオキシ）メチル〕−１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−２（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕チミン（１４ａ）：
【００５８】
【化１０】
0004514330.tif 000010
【００５９】
1Ｈ，1Ｈ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００６０】
【化１１】
0004514330.tif 000011
【００６１】
1Ｈ，13Ｃ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００６２】
【化１２】
0004514330.tif 000012
【００６３】
１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕チミン（１４ｂ）の製造
１．  処方
５００ｍｌの３径フラスコ中、６０ｍｌの無水ＴＨＦに３００ｍｇのＰｄ−Ｃを懸濁させ、混合物を水素で４５分間飽和させた。続いて、２．０１ｇ（４．００ｍｍｏｌ）の化合物１４ａの３０ｍｌＴＨＦ溶液を加え、水素雰囲気下で、９０分間、混合物を激しく攪拌した（ＴＬＣチェッキング；ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ１５：１）。
【００６４】
Ｃｅｌｉｔｅを介して、触媒を濾去し、ロータリーエバポレータ中、減圧で、溶剤を除去した。１．９６ｇの無色の発泡体が得られ、これを９０ｍｌの無水ＭｅＯＨに溶解させ、４５４ｍｇ（８．４０ｍｍｏｌ）のＮａＯＭｅで処理した。水を排除しつつ、混合物を室温で一晩攪拌した。それを６ｍｌのＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液で処理し、ロータリーエバポレータ中、減圧で、溶剤を大部分除去した。残渣を５０ｍｌの水に注ぎ、２Ｎの塩酸を使用して、水相のｐＨを１−２に調整し、水相を各回５０ｍｌのＡｃＯＥｔで４回抽出した。Ｎａ2ＳＯ4を使用して乾燥後、ロータリーエバポレータ中、減圧で、溶剤を除去し、得られる発泡体を２０ｍｌのＥｔ2Ｏで温浸した。沈殿を濾過し、オイルポンプ減圧で乾燥後、１．４３ｇ（９４％）の化合物１４ｂ（ｅｎｔ−１４ｂ；９０％；ｒａｃ−１４ｂ：８８％）がｍ．ｐ．２３１−２３３℃の無色の固体として得られた。ＭｅＯＨ/水から再結晶することによって、分析試料が得られた。
【００６５】
２．  分析データ
１−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕チミン（１４ｂ）：
【００６６】
【化１３】
0004514330.tif 000013
【００６７】
６．００−１０．０ｐｐｍの領域に、多数の小さなシグナルを検出することができ、これは、ＮＭＲ試料を加熱すると、消える。
1Ｈ，1Ｈ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００６８】
【化１４】
0004514330.tif 000014
【００６９】
1Ｈ，13Ｃ−ＣＯＳＹスペクトルの助けを借りて、シグナルのアサインメントを行った。
【００７０】
【化１５】
0004514330.tif 000015
【００７１】
実施例  ２
カップリング可能なアデニン単位の合成
９−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−６−Ｎ−ベンゾイルアデニン（１５ａ）の製造
１．  処方
５００ｍｌの２径丸底フラスコに、１８０ｍｌの乾燥ＤＭＦおよび２．２５ｇのＮａＨ（６０ｍｍｏｌ）懸濁液を入れた。７．１８ｇの６−Ｎ−ベンゾイルアデニン（３０ｍｍｏｌ）を小分けして加え、ガスの発生が鎮まるまで、混合物を供給した。１５分後、７．９５ｇのヨードラクタム９（３０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を暗闇で２２時間攪拌した。ついで、溶液を０℃まで冷却し、１ＭのＨＣｌ水溶液（２４ｍｌ）を加えることによって、中和した。減圧（０．３ミリバール、浴温６０℃）下、溶剤を除去した。生じた残渣を１００ｍｌのＭｅＯＨに溶解させ、１５ｇのシリカゲル上に予め吸着させた。ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ（１２：１）を使用して７×１５ｃｍのシリカゲル上でクロマトグラフィーにかけると、１７ｇの黄色のオイルを与え、これを１５ｍｌのＭｅＯＨ中で再結晶すると、無色の固体として８．２ｇの化合物１５ａ（２２ｍｍｏｌ；７３％）を与え、これは、さらなる反応のために十分な純度であった。分析試料は、ＭｅＯＨ／Ｅｔ2Ｏから再結晶することによって得られた。
【００７２】
２．  分析データ
【００７３】
【化１６】
0004514330.tif 000016
【００７４】
９−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕アデニン（１５ｂ）の製造
１．  処方
５００ｍｌの丸底フラスコに、８．２ｇのベンゾイル−Ａラクタム１５ａ（２２ｍｌ)および２５０ｍｌの乾燥メタノールを入れた。１５ａが完全に溶解するまで、懸濁液を加熱した。１．６２ｇのＮａＯＭｅの５．５リットルＭｅＯＨ溶液をついで加え、混合物を室温で１９時間攪拌した。生成する懸濁液を濾過し、沈殿をＥｔ2Ｏで洗浄した。イオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ−１２０，Ｈ+形）を加えることによって、濾液を中和した。樹脂を濾去し、減圧下で溶剤を除去した。残渣を４ｍｌのＭｅＯＨに溶解させ、３０ｍｌのＥｔ2Ｏを加えることによって、沈殿させた。沈殿を濾過し、合わせた沈殿を減圧で乾燥させると、５．８ｇの化合物１５ｂ（２１ｍｍｏｌ，９７％）を与え、これは、さらなる反応のために十分な純度であった。分析試料は、ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏから結晶させることによって得られた。
【００７５】
２．  分析データ
【００７６】
【化１７】
0004514330.tif 000017
【００７７】
９−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−６−Ｎ−ジメチルアミノメチリデンアデニン（１５ｃ）の製造
１．  処方
５００ｍｌの丸底フラスコに、５．５８ｇのＡラクタム１５ｂ（２０ｍｍｏｌ）、２００ｍｌの乾燥ＤＭＦおよび１７．１ｍｌのジメチルホルムアミドジエチルアセタール（１００ｍｍｏｌ）を入れた。混合物を８０℃に３時間加熱した。生ずる透明な溶液を減圧（０．４ミリバール、６０℃浴温）下で濃縮すると、６．９ｇの粗製の化合物１５ｃを与え、これは、さらに精製することなく使用した。
【００７８】
２．  分析データ
【００７９】
【化１８】
0004514330.tif 000018
【００８０】
９−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−６−Ｎ−ジメチルアミノメチリデンアデニン（１５ｄ）の製造
１．  処方
２５０ｍｌの丸底フラスコに、６．９ｇの粗製のアミジンＡラクタム１５ｃ（２０ｍｍｏｌ）と１００ｍｌの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2とを入れた。攪拌しつつ、２．８ｍｌのトリエチルアミン（２０ｍｍｏｌ）を加え、続いて、８．７ｇのＢｏｃ2Ｏ（４０ｍｍｏｌ）と２．４４ｇのＤＭＡＰ（２０ｍｍｏｌ）とを加えた。全ての出発物質が消費されるまで、溶液を室温で16時間攪拌した。減圧下、溶剤を除去し、生ずる残渣をクロマトグラフィー（７×１６ｃｍシリカゲル、溶離液ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ２０：１）によって精製すると、８．２ｇの黄色の固体を与え、これを１００ｍｌの丸底フラスコに移した。ついで、５０ｍｌのＥｔ2Ｏを加え、還流下、混合物を２時間超音波処理した。室温まで冷却後、混合物を濾過し、Ｅｔ2Ｏで沈殿を処理し、超音波でもう１回処理した。濾過すると、６．６６ｇの幾分黄色がかった固体の化合物１５ｄ（７８％）を与え、これは、さらなる反応のために十分な純度であった。
【００８１】
２．  分析データ
【００８２】
【化１９】
0004514330.tif 000019
【００８３】
９−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕アデニン（１５ｅ）の製造
１．  処方
２５０ｍｌの丸底フラスコに、６．６４ｇのアミジンＡラクタム１５ｄ（１５．５ｍｍｏｌ）と１５０ｍｌの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2とを入れた。１１．５５ｇのｐ−トルエンスルホン酸ヒドラジド（６２．０ｍｍｏｌ）をついで加え、続いて、１．４７ｇのＴｓＯＨ（７．７５ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で４４時間攪拌した。１５０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2を加えた後、溶液を水で３回洗浄し、２ＭのＮａＯＨを加えることによって、ｐＨ＞１２に調整した。合わせた洗浄溶液を１００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2で抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ4上で乾燥させた。濾過後、減圧下で溶剤を除去し、生ずる残渣をクロマトグラフィー（５．２×２０ｃｍシリカゲル、溶離液：ＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ３０：１）によって精製すると、４．９６ｇの化合物１５ｅ（８６％）を与え、これは、さらなる反応のために十分な純度であった。分析試料は、ＴＨＦ／シクロヘキサンから結晶させることによって得られた。
【００８４】
２．  分析データ
【００８５】
【化２０】
0004514330.tif 000020
【００８６】
９−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−８−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−８−アザビシクロ〔３．３．１〕ノナン−７−オン−２−イル〕−６−Ｎ−ｐ−メトキシベンゾイルアデニン（１５ｆ）の製造
１．  処方
１００ｍｌの２径丸底フラスコに、４．９６ｇのＢｏｃ−Ａラクタム１５ｅ（１３．３ｍｍｏｌ）と６０ｍｌの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2とを入れた。５．３５ｍｌの乾燥ピリジン（６６．５ｍｍｏｌ）をついで加え、続いて、１．５９ｇのＤＭＡＰ（１．３ｍｍｏｌ）を加えた。０℃まで冷却後、５．４ｍｌの４−メトキシベンゾイルクロライド（３９．９ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を０℃で１５分間攪拌した。氷浴を除去し、反応混合物を室温で２２時間攪拌した。ついで、反応混合物を０℃まで再度冷却し、３５ｍｌのＭｅＯＨを滴下した。０℃で３０分後、８０ｍｌのＮＨ3飽和ＭｅＯＨ溶液を滴下した。白色の沈殿が形成され、これは、溶液を完全に加えた後、溶解した。３０分後、氷浴を除去し、反応物を室温でさらに２時間攪拌した。ついで、減圧下、溶剤を除去し、生ずる残渣を２００ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2に溶解させた。ＮａＨＣＯ3飽和溶液およびクエン酸水溶液（２０％，２×１００ｍｌ）で連続して溶液を洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥し、濾過し、減圧で濃縮した。生ずる残渣をクロマトグラフィー（５．２×１８ｃｍシリカゲル；溶離液：ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ４０：３）により精製すると、５．９３ｇの化合物１５ｆ（８８％）を与えた。
【００８７】
２．  分析データ
【００８８】
【化２１】
0004514330.tif 000021
【００８９】
９−〔（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−２（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−４−（カルボキシメチル）シクロヘキシル〕−６−Ｎ−ｐ−メトキシベンゾイルアデニン（１６）の製造
１．  処方
５００ｍｌの２径丸底フラスコに、５．２５ｇのＰＭＢｚＢｏｃ−Ａラクタム１５ｆ（１０．３６ｍｍｏｌ）と２００ｍｌのＴＨＦとを入れた。０℃まで冷却した後、５０ｍｌ水中２．１７ｇのＬｉＯＨ×Ｈ2Ｏ（５１．８ｍｍｏｌ）溶液を２０分間かけて滴下した。ついで、３０ｍｌのＭｅＯＨを加え、氷浴を除去し、反応混合物を室温で１時間攪拌した。イオン交換樹脂（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ−１２０，Ｈ+形）をついで加え、ｐＨ７に到達させた。濾過によって、樹脂を除去し、溶液を減圧下で濃縮し、体積１００ｍｌとした。２００ｍｌのＨ2Ｏをついで加え、１ＭのＨＣｌ水溶液を加えることによって、ｐＨを２に調節した。溶液をＥｔＯＡｃ（３×２００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧で濃縮した。生ずる残渣を２５ｍｌの高温ＭｅＯＨに溶解させた。ついで、１０ｍｌのＨ2Ｏを加えることによって、生成物を沈殿させた。沈殿を濾過し、Ｈ2Ｏで洗浄し、Ｐ4Ｏ10上で乾燥させると、１．９５ｇの化合物１６を与えた。母液および洗浄溶液からさらに０．５７ｇを得ることができ、合計収率４６％を与えた。
【００９０】
２．  分析データ
【００９１】
【化２２】
0004514330.tif 000022
【００９２】
実施例  ３
配列ＡＴＡＴＡを有するオリゴマーの合成
使用する高分子キャリヤーは、ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）／ポリスチレンコポリマー（Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＨＭＢ，０．２３ｍｍｏｌ／ｇ）であり、これは、水溶液中でも有機溶剤中でも良好な膨潤性を有する。ポリマーのアミノエチル官能基は、ヒドロキシメチルベンジル（ＨＭＢ）リンカーで誘導され；第１のＡ単位での負荷は、対称無水物法（ＤＩＣの２．５当量およびＤＭＡＰの２．５当量の添加）に従い５倍量使用し、ＤＣＭ中２０時間の過程で行う。
【００９３】
オリゴマー鎖を段階的に長くするには、一時的なＢｏｃ保護基の除去とＢｏｃ保護されたモノマー単位のカップリングとからなる繰り返しサイクルによって行う。合成の終了時において、Ｎ−末端Ｂｏｃ保護基は、５０％のＴＦＡ／ＤＣＭを使用して除去し、オリゴマーは、２ＮのＨＣｌ／ＭｅＯＨを使用してＨＭＢリンカーから開裂させ、さらなる変換実験のためにＨＰＬＣによって精製される。
【００９４】
標準カップリングサイクルは、表に記載する：アミノ官能基のＢｏｃ保護基は、５０％ＴＦＡ/ＤＣＭ(３０分）を使用して除去され、ついで、樹脂は、ＤＣＭで洗浄され、１ＭのＤＩＥＡ／ＤＭＦで中和され、アミンがなくなるまでＤＭＦで洗浄される。カップリングは、各々、ＤＭＦ中、ＨＡＴＵ（３当量）でモノマー単位（３当量）の予備活性化後に１ＭのＤＩＥＡ／ＤＭＦ（６当量）と２Ｍのルチジン／ＤＭＦ（１２当量）の添加で行われる。カップリング時間は、室温で３時間である。カップリングサイクルの完了後、未反応のアミノ官能基は、ピリジン（１０当量）を添加した無水酢酸（２０当量）を使用してキャップされる。ＨＰＬＣによって反応をモニターするためには、各カップリング工程後、数個の樹脂ビーズを取りだし、Ｂｏｃ保護基の除去のために、５０％ＴＦＡ／ＤＣＭで処理した。ついで、それぞれのオリゴマーを、２ＮのＮａＯＨ／ＭｅＯＨ(１５分間、室温）を使用して除去し、取り出した溶液は、ＨＣｌを使用して中和し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。
【００９５】
合成の完了後、２ＮのＮａＯＨ／ＭｅＯＨ(１５分、室温）を使用して、Ｂｏｃ脱保護したオリゴマーのＨＭＢ樹脂からの取りだしを通常通り行う。（ＡPMBz）−含有オリゴマー中のｐ−メトキシベンゾイル保護基の除去は、除去溶液を５５℃に２．５時間保つことによって達成される。精製は、除去溶液のＨＣｌでの中和後にＲＰ−ＨＰＬＣによって行われる。合成生成物の単離したＨＰＬＣ画分は、分析ＨＰＬＣを使用して、それらの純度についてチェックし、エレクトロスプレー（ＥＳＩ）質量分光法を使用して、明瞭に特性決定し、可逆的なＵＶ遷移曲線は、２６５ｎｍ（５ｍＭのトリス/ＨＣｌ中ｃATATA＝２７．９μＭ；ｐＨ７．０）で記録し(図４）、それにより、ペアリングシステムとしての適性が立証される。
【００９６】
ＡＴＡＴＡ：
Ｍ計算値＝１３６１，０；  （Ｍ＋Ｈ）測定値＝１３６２．０
ｔＲ＝１４．１分（水中０．１％強のＴＦＡ中１０〜４０％のアセトニトリルで３０分）
吸収極大：２６３ｎｍ
【００９７】
【表１】
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【００９８】
実施例  ４
ホモダイマーペプチドの可逆的な形成
実施例３と同様にして、固相で配列ＡＡＴＡＴを合成し、このペアリング部分とＢｏｃ−リシン（Ｆｍｏｃ）単位とをカップリングさせる。ＤＭＦ中４０％のピペリジンを使用して、Ｆｍｏｃ基を除去し、固相をＤＭＦで洗浄し、ついで、ＤＭＦ中ヨード酢酸（２０当量）およびＤＩＣ（２０当量）で処理する。室温で１５時間後、溶液を濾去し、樹脂をＤＭＦで洗浄し、ＤＭＦ中ペプチドＣＹＳＫＶＧで処理する。それを室温で１５時間放置し、溶液を濾去し、樹脂をＤＭＦおよびＭｅＯＨで洗浄する。樹脂からの除去は、２ＭのＮａＯＨ水溶液とＭｅＯＨ（１：１）とを使用して行い、除去溶液を５５℃に２．５時間加熱する。冷却後、それを２Ｍの塩酸で中和し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．１％強のＴＦＡ水中１０〜４０％のアセトニトリルで３０分）を使用して、生成物を単離する。減圧でアセトニトリル画分から生成物画分を遊離させ、５００μｌの水溶液に濃縮する。この溶液をＳｅｐＰａｋ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ）により脱塩し、１ｍｌの水溶液に調整する。オリゴマーの濃度は、ｃ＝１４０μｍｏｌ／ｌ（２６５ｎｍでのＥ＝１．００４、７０℃で測定した）であった。
【００９９】
１０マイクロモルの溶液のＵＶ遷移曲線は、室温以下で、その物質が均一なホモダイマーとして存在し、他方、４０℃以上では、ホモダイマーは、検出することができないことを示す。この平衡は、可逆的であり、ホモダイマーの画分は、温度および濃度の選択によって調整することができる。
【０１００】
実施例  ５
自己相補性ＣＮＡオリゴマーの熱力学的データのまとめ
【０１０１】
【表２】
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【０１０２】
実施例  ６
限られたペプチドまたはペプチドライブラリーとの共役
ＣＮＡ上での限られたペプチドおよびペプチドライブラリーの共役を同一の実験条件下で行った。ＣＮＡ  Ａｃ−ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）−Ｌｙｓ−ＯＨ（１）のペプチドＨ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨ（３）との共役を以下に記載する。
【０１０３】
６．１  リシンのε−アミノ官能基のヨードアセチル化
化合物１を０．１Ｍの炭酸水素塩溶液８００μｌに溶解させ、４００μｌのジメチルスルホキシド中１５０当量のＮ−スクシニミジルヨードアセテート（１０２μｍｏｌ，２８．９ｍｇ）と、遮光して２時間振盪した。生成物Ａｃ−ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）−Ｌｙｓ（Ｎε-ヨードアセチル）−ＯＨ（２）は、分取用ＲＰ−ＨＰＬＣにより、直接、精製し、ＲＰ−Ｃ１８カートリッジ上で脱塩した。
分析ＲＰ−ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１７．９３分
ＥＳＩ−ＭＳ：ＭI（計算値）＝１６９９．７，ＭI（測定値）＝１６９９．４
６．２  化合物２のＨ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＨ（３）との共役
化合物３（１２７ｎｍｏｌ，８３μｇ，含量約７０％）の０．５Ｍリン酸塩緩衝液、２０ｍＭのＥＤＴＡ  ｐＨ６．０の３０μｌ溶液を化合物２（１０６ｎｍｏｌ）の２０μｌの水／ジメチルホルムアミド（１：１）溶液に加え、混合物を、遮光しながら、振盪した。１時間後、ペプチドは、実際、完全に反応したが、ＣＮＡは、約５０％反応したのみであった。同じ量のペプチドを緩衝液に再度加え、遮光しつつ１時間振盪することにより、化合物２は、完全に反応した。ＣＮＡ−ペプチド共役体は、ＲＰ−ＨＰＬＣにより、直接、精製し、ＲＰ−Ｃ１８カートリッジ上で脱塩した。
分析ＲＰ−ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１６．９３分
ＥＳＩ−ＭＳ：ＭI（計算値）＝２２２７．６，ＭI（測定値）＝２２２７．４
実施例  ７
リン酸化による溶解度の改良
７．１．１．  ＤＭＴ−保護−４−ヒドロキシ酪酸（Ｈｂａ）のＡＡＴＡＴ−ＨＭＢ樹脂へのカップリング
０．１５ｍｍｏｌ／ｇの樹脂（０．０１５ｍｍｏｌ）の塗膜を有するＡＡＴＡＴ−ＨＭＢ樹脂１００ｍｇを、最後のＢｏｃ保護基の除去後、ＤＭＦ中１ＭのＤＩＰＥＡ溶液５ｍｌを使用して、フリットを有する５ｍｌのシリンジ内で中和し、ＤＭＦで４回洗浄した。０．１５ｍｍｏｌ（６１ｍｇ）のＤＭＴ−Ｈｂａ（Ｍ＝４０６．４８）と０．１５ｍｍｏｌ（５７ｍｇ）のＨＡＴＵ（Ｍ＝３８０．２）とを２ｍｌのＮＭＰに溶解させ、振盪した。１０分後、０．９ｍｍｏｌのＤＩＰＥＡ（ＤＭＦ中１Ｍ溶液９００μｌ）を加え、振盪した。カップリング溶液を樹脂に加え、樹脂を有するシリンジを（約０．５回転／秒で）短いシリンジ軸の周りに４時間回転させて、良好な混合を生じさせた。溶液をシリンジから押出し、樹脂を４ｍｌのＤＭＦで４回および４ｍｌのＤＣＭで２回洗浄した。
【０１０４】
７．１．２  デトリチレーション（Ｄｅｔｒｉｔｙｌａｔｉｏｎ）
樹脂を２分ごとにＤＣＭ中６％のＤＣＡ４ｍｌで５回デトリチレートし、ＤＣＭで４回洗浄し、乾燥アクリロニトリル（ＡＣＮ）で３回洗浄した。樹脂をデシケーター中、Ｐ2Ｏ5上で乾燥させた。
【０１０５】
７．１．３  ホスフィチレーション（Ｐｈｏｓｐｈｉｔｙｌａｔｉｏｎ）および酸化
乾燥ＡＣＮ中、０．５Ｍのピリジニウム塩酸塩２ｍｌを使用して、アルゴン下、樹脂を膨潤させた。１０当量（０．１５ｍｍｏｌ，４１ｍｇ）のビス（２−シアノエチル）Ｎ，Ｎ，−ジイソプロピルアミノホスホルアミダイト（Ｍ＝２７１．３）を加え、混合物を２０分間回転させた。樹脂を４ｍｌの乾燥ＡＣＮで４回洗浄し、デカリン中６Ｍのｔ−ＢｕＯＯＨ０．５ｍｌおよびＡＣＮ１ｍｌで３０分間酸化した。ついで、それを乾燥ＡＣＮで４回洗浄した。
【０１０６】
７．１．４  シアノエチル保護基の除去
樹脂をピリジン中２ＭのＤＢＵ溶液４ｍｌで処理し、１５時間回転させた。ついで、それをＡＣＮで６回洗浄した。
【０１０７】
７．１．５  樹脂からの除去およびｐＭＢｚ脱保護
２ＭのＮａＯＨ水溶液を使用し、１０分間かけて樹脂から物質を除去した。それをさらに２ｍｌの水酸化ナトリウム溶液で洗浄し、生ずる溶液を５５℃に３時間保った。２ＭのＨＣｌで中和後、化合物をＲＰ−ＨＰＬＣ（溶離液：０．１％のＴＦＡを含む水／アセトニトリル）で精製した。
【０１０８】
７．１．６
最終的に、物質は、ＳＥＰ  ＰＡＫカートリッジ（ＲＰ）上で、既に記載したようにして、脱塩し、室温および減圧で濃縮乾固させた。
【０１０９】
Ｈ2ＰＯ3−Ｈｂａ−ＡＡＴＡＴの質量スペクトル（Ｍexact＝１５２６．７）
明らかに、分子イオンは、Ｎａクラスターで一重および二重に帯電する。
遷移曲線を図５に示す。Ｔm値は、４５．４℃である。ＡＡＴＡＴ（４５μｍ）のＴm値は、対照的に、４９．４℃である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ヨードラクタム９の合成を概略的に示す。
【図２】  カップリング可能なチミン単位の合成を概略的に示す。
【図３】  カップリング可能なアデニン単位の合成を概略的に示す。
【図４】  オリゴマーＡＴＡＴＡの可逆的なＵＶ遷移曲線を例示する。
【図５】  リン酸化したＨｂａ−ＡＡＴＡＴの遷移曲線を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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