(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)：
【化１】
0004488621.tif 000102
[式中、ＲXは、シアノまたはブロモ；Ｒ1は、ハロ；Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ3アルキルである]
で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｒ1がフルオロである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ2がエチルである請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
少なくとも６０％の１Ｓ,２Ｓエナンチオマー体を含む請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項５】
少なくとも９０％の１Ｓ,２Ｓエナンチオマー体を含む請求項４記載の化合物。
【請求項６】
ＲXがシアノである請求項１〜５のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項７】
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；および（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレアから選ばれる請求項１記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項８】
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレアである請求項７記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１つに記載の化合物およびその医薬的に許容しうる担体または希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
さらに１から３種の追加の抗レトロウイルス剤を含む、ＨＩＶの治療または予防用の請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
追加の抗レトロウイルス剤が、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、Ｄ４Ｔ、３ＴＣ、アデフォビル、アデフォビルジピボキシル、アバカビル、ビス−ＰＯＣ−ＰＭＰＡ、ヒドロキシウレア、エファビレンツ、トロビリジン、ネビラピン、デラビリジン、フォスカルネット、オマシクロビル、バロマシクロビル、リトナビル、サキナビル、インジナビル、アンプレナビル（ベルテックスＶＸ４７８）、ミツビシＭＫＣ−４４２およびネルフィナビルからなるグループから選ばれる請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
治療に用いる請求項１から８のいずれか１つに記載の化合物。
【請求項１３】
ＨＩＶの治療または予防用医薬の製造における請求項１〜８のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、抗ウイルス剤の分野、特にＨＩＶ逆転写酵素インヒビターに関する。本発明は、新規化合物、これらの化合物を含む医薬組成物およびそれらを用いるＨＩＶの阻害方法を提供する。
【０００２】
（背景技術）
ＨＩＶ治療において臨床的にＨＩＶ逆転写酵素の阻害に関連する活性を示す医薬のうち、大部分がＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣおよびＤ４Ｔといったようなヌクレオシド類縁体である。これらのヌクレオシド類縁体は、望ましい程度の特異性をもたないため。比較的高い用量レベルで投与しなければならない。これらの用量レベルにおいては、ヌクレオシド類縁体は、むしろ毒性を示す傾向にあり、その長期使用が制限される。
この特異性および毒性という問題を克服するために、数多くのＨＩＶ逆転写酵素の非ヌクレオシドインヒビターが開発されている。たとえば、Janssenの逆転写酵素であるＴＩＢＯは、ナノモル濃度でＨＩＶを阻害し、臨床的に有意な毒性を示さない。ＴＩＢＯおよび非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターであるネビラピンの両者について、すぐさま患者による第ＩＩ相臨床試験が行われた。しかし、まもなく、これらの非ヌクレオシドインヒビターは、通常用量のインヒビターに耐性があるＨＩＶ突然変異体をインビボにおいて迅速に選び出すことが明らかになった。たとえばネビラピンの場合、わずか４週間のみの治療後、患者の血清から単離されたウイルス該薬物に対する感受性は、非治療の患者から単離されたウイルスと比べて１００分の１であった（Drug Design & Discovery、１９９２、８、２５５−２６３）。臨床試験が行われたMerckのＬ−６９７６６１およびUpjohnのデラビルジン（delavirdine）（Ｕ−８７２０１）といった他の非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターにおいても類似したパターンが明らかにされている。すなわち、インビトロ活性においては期待できるものであったが、患者に投与すると、耐性ＨＩＶ突然変異体がすぐさま出現したのである。耐性の発達を阻止するための特殊な併用方法に限定されてはいるが、この欠点にもかかわらず、最近ネビラピンおよびデラビルジンは臨床用途用として登録されている。
【０００３】
国際特許出願ＷＯ９５／０６０３４には、ＨＩＶ逆転写酵素に対する良好なインビトロ活性および細胞培養物における良好なＨＩＶ複製阻止を示す一連の新規尿素誘導体が記載されている。しかし、ＷＯ９５／０６０３４の化合物の薬物動態学的行動が不良であるため、それらの実用的発達が阻まれている。したがって、多くの非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターと同様に、ＷＯ９５／０６０３４の化合物は、耐性発達の遅延化という重要なパラメーターおよび他の抗ウイルス養生法によって生成されたＨＩＶ突然変異体に対抗する活性という好ましいパターンにおいて改良の余地を残したままである。
【０００４】
１９９５年にサンタフェで開催されたＩＣＡＲにおけるObergらのポスターには、上記ＷＯ９５／０６０３４とわずかに重なり、式：
【化７】
0004488621.tif 000002
で示されるラセミ化合物が開示された。その時点では、上記化合物は、メトキシ／アセチル含有フェニル環をもつチオウレア変異体に対するよりも低い興味しかもたれなかった。しかし、いまや我々は、別の置換パターンの化合物が、良好な薬物動態学的行動をとり、ウイルス耐性発達を遅延化するという、先行技術化合物と比較して改良された耐性パターンを現すことを見出した。したがって、本発明は、非ヌクレオシドインヒビターの優れた特異性およびすべての先行技術にはなかった臨床的実用性を合わせもつインヒビターを提供する。
【０００５】
（発明の簡単な説明）
本発明は、式(Ｉ)：
【化８】
0004488621.tif 000003
[式中、Ｒ1は、ハロ；Ｒ2は、Ｃ1−Ｃ3アルキル；ＲXは、シアノまたはブロモである]
で示される化合物およびその医薬的に許容しうる塩ならびにプロドラッグを提供する。
さらに本発明は、化合物（Ｉ）および医薬的に許容しうる担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。本発明のさらなる態様は、ＨＩＶに苦悩する患者に化合物（Ｉ）を投与することを特徴とするＨＩＶの阻害方法を提供する。また本発明は、ＨＩＶ感染の治療用医薬の調製といったような治療における化合物（Ｉ）の使用も提供する。
ＨＩＶによって引き起こされた身体状態の治療においては、化合物（Ｉ）を血漿レベルが約１０〜１０００ｍＭに達する量で投与するのが好ましく、１００〜５００ｍＭがさらに好ましい。これは、製剤のバイオアベイラビリティーに応じた投与速度に対応し、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ／日である。通常の成人に対する代表的な投与速度は、約０．０５〜５ｇ／日、好ましくは５００〜７５０ｍｇなどの約０．１〜２ｇ／日であり、１日当たり１〜４回用量単位を投与する。
【０００６】
請求項１に含まれる化合物のうち、特に薬物動態学に関して好ましいサブセットおよびその医薬的に許容しうる塩ならびにプロドラッグは、式(ＩＡ)：
【化９】
0004488621.tif 000004
[式中、Ｒ1およびＲ2は前記と同意義である]
で示される構造をもつ。
プロドラッグの製造の容易さに関して好ましい化合物（Ｉ）のサブセットは、ＲXがブロモである化合物である。
Ｒ1は、クロロが好ましく、フルオロがさらに好ましい。Ｒ2は、メチル、イソプロピル、ｎ−プロピルおよび好ましくはエチルである。
上述のようにシクロプロピル環は、シス配置にあり、１Ｓ,２Ｓおよび１Ｒ,２Ｒという下記の２つのエナンチオマーが存在する（それぞれ、ＳＥ９８００１６−７およびＳＥ９８００１１３−４においては、２Ｒ,１Ｓおよび２Ｓ,１Ｒと表示した）。
【化１０】
0004488621.tif 000005
これらのエナンチオマーは、生理学的特性において僅かな相異を示すが、それぞれ強力な抗ウイルス剤である。たとえば、１Ｓ,２Ｓおよび１Ｒ,２Ｒエナンチオマーは、Ｐ４５０システムにおいて異なるパターンの代謝を示す。Ｐ４５０システムの重要化合物を回避することができる点において独特であることから、ＲXがシアノである１Ｓ,２Ｓエナンチオマーが特に好ましい。ＨＩＶプロテアーゼインヒビターであるリトナビルなどの他のレトロウイルス剤は、Ｐ４５０システムと広範に相互作用し、他の併用薬の代謝が広範に変更されるといったような望ましくない一連の生理学的応答を引き起こす。これは特に、患者が、何十年とは言わないまでも長年にわたって大量の医薬を摂取することが予測される慢性感染に対して投与された医薬に関係する。
【０００７】
化合物（Ｉ）の適当なプロドラッグとして、式(ＩＩ)：
【化１１】
0004488621.tif 000006
[式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲXは前記と同意義；
Ｒ3は、Ｈ、（ＣＨm）nＮＲ5Ｒ6；
Ｒ4は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル、（ＣＨm）nＮＲ5Ｒ6、（ＣＨm）nＣ（＝Ｏ）Ｒ5、（ＣＨm）nＯＨ、ＯＲ7、ハロ、ＣＦ3またはＣＮ；もしくは
Ｒ3とＲ4は一緒になって、０〜２個のヘテロ原子および／または０〜２個の不飽和結合および／または０〜２個の置換基を含む５または６員の縮合環を形成する；
Ｒ5は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7または１〜４個のアミノ酸からなるペプチド；
Ｒ6は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ3アルキル；もしくは
Ｒ5とＲ6は一緒になって、０または１個のさらなるヘテロ原子および／または０〜２個の不飽和結合および／または０〜２個の置換基を含む５または６員環を形成する；
Ｒ7は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキル、（ＣＨm）nＮＲ5Ｒ6；
Ｘおよびその周囲の円は、０〜３個の不飽和結合および／またはＳ、ＯおよびＮから選ばれる０〜３個のヘテロ原子を含む５または６員環を意味する；
ｍは、独立して１または２；
ｎは、独立して０、１または２；
ｐは、０または１である]
で示される化合物およびその医薬的に許容しうる塩が挙げられる。
【０００８】
本発明のさらなる態様は、ＲXがクロロである化合物の対応するプロドラッグである。
Ｘを含む環構造(以降、Ｘ−環と称する)は、飽和環または１〜３個の不飽和結合を有する環もしくは芳香環である。好ましいＸ−環は、シクロヘキサニルまたはシクロヘキセニル環、より好ましくは、フェニル環である。その他の好ましいＸ−環は、モルホリノであり、ピリジル環がさらに好ましい。また、Ｘ−環は、ペンテニルまたはピロリルなどの５員環であってもよい。
Ｒ3とＲ4が結合して必要に応じてヘテロ含有環を形成する場合のＸ−環に適した縮合環系としては、ナフチル、キノリル、テトラヒドロイソキノリル、インドリルまたはベンズイミダゾール環系が挙げられる。Ｒ4とＲ5が結合して環を形成する場合のＸ−環に適した置換環は、モルホリノおよびピペリジノである。これらの縮合または置換環は、必要に応じて、ハロ、ハロメチル、（ＣＨm）nＮＲ5Ｒ6、Ｃ（＝Ｏ）Ｒ5Ｒ6などのアミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、カルボキシ、カルボキシメチル、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3アルコキシなどで置換される。
【０００９】
Ｘ−環は、必要に応じて、ハロ、ハロメチル、アミノ、アミノメチル、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル、カルボキシ、カルボキシメチル、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3アルコキシなどで置換されるメチレンまたはエチレン基によって、隣接するカルボニル部位から離れてもよい。Ｘ−環がカルボニルに隣接するのが好ましい。
Ｘ−環系、Ｒ3、Ｒ4および、もし存在すればＲ5−Ｒ7によって表される部位が、幾らか塩基性であるのが好ましい。このことは、Ｘ−環として、ピリジルまたはベンゾピリジルといったような適当に塩基性のヘテロ環を選択することによって達成される。二者択一的または付加的に、１つまたはそれ以上のＲ3〜Ｒ7が、第一、第二または第三アミン、アミノ酸などの塩基性置換基を含んでもよい。好ましいＲ3および／またはＲ4は、ＮＨ2、Ｎ（ＣＨ3）2、およびＮＨＣＨ3またはＮＨＣＨ2ＣＨ3などのＮＨＣ1−Ｃ3アルキルである。特にＸ−含有環がフェニルである場合、Ｒ3はカルボニルおよびそのスペーサーに対してメタ位にあるのが好ましく、Ｘ−含有環がピリジ−３−イルといったようなヘテロ芳香環である場合、Ｒ3はパラ位であるのが好ましい。ｐおよび／またはｎにとって一般に好ましい値は、各基がそれぞれ存在しないことになるゼロである。
【００１０】
好ましい本発明化合物を以下に示す。
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；およびその医薬的に許容しうる塩。
他の好ましい化合物を以下に示す。
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；およびその医薬的に許容しうる塩。
本発明の他の便利な化合物を以下に示す。
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；およびその医薬的に許容しうる塩。
他の便利な化合物を以下に示す。
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア；およびその医薬的に許容しうる塩。
本発明の好ましい化合物を以下に示す。
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ,２−ヒドロキシ,３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；およびその医薬的に許容しうる塩。
他の好ましい化合物を以下に示す。
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−ブチリルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−アセチルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア；およびその医薬的に許容しうる塩。
【００１１】
化合物（Ｉ）の適当な医薬的に許容しうる塩としては、酢酸、乳酸、グルコン酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、リンゴ酸、パントテン酸、イセチオン酸、蓚酸、ラクトビオン酸、およびコハク酸といったような有機カルボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸といったような有機スルホン酸、および塩酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸およびスルファミン酸といったような無機酸が挙げられる。
ＨＩＶインヒビターを用いる通常の実施の継続に際し、１〜３種のさらなる抗ウイルス剤を併用して相乗的応答を提供し、相補的耐性パターンを確実にすることが有利である。このような抗ウイルス剤としては、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、Ｄ４Ｔ、３ＴＣ、アバカビル、アデフォビル、アデフォビルジピボキシル、ビス−ＰＯＣ−ＰＭＰＡ、フォスカルネット、ヒドロキシウレア、ヘキスト−バイエルＨＢＹ０９７、エファビレンツ、トロビリジン、ネビラピン、デラビリジン、ＰＦＡ、Ｈ２Ｇ、ＡＢＴ６０６、ＤＭＰ−４５０、ロビリド、リトナビル、サキナビル、インジナビル、アンプレナビル（ベルテックスＶＸ４７８）、ネルフィナビルなどが挙げられ、代表的には、それぞれの活性およびバイオアベイラビリティーを反映するモル比率で使用する。一般にこのような比率は、化合物(Ｉ）に対して２５：１〜１：２５である。
【００１２】
活性剤を単独で投与することも可能であるが、医薬製剤の一部分として配合するのが好ましい。このような製剤には、上記活性剤および１種またはそれ以上の許容しうる担体、ならびに必要に応じて他の治療成分が含まれる。担体は製剤の他の成分と適合性である必要があり、レシピエントにとって有害であってはならない。
該製剤としては、経口、経腸、経鼻、局所（バッカル剤および舌下錠など）、経膣または非経口（皮下、筋肉内、経静脈および皮内注射など）投与に適した製剤が挙げられる。製剤は、錠剤、徐放性カプセルなどの単位用量形体にて製造することができ、製薬業界で公知のどのような方法によって製造してもよい。このような方法には、上記活性剤と担体を混合する段階が含まれる。一般に、製剤は、活性剤と液体担体または微細に分割された固体担体あるいはその両方とを均質および完全に混合し、必要に応じて成形することによって製造される。
【００１３】
本発明の経口投与用製剤は、予め決定された量の活性剤を含むカプセル剤、カシェ剤または錠剤などの分離単位製剤、粉末または顆粒剤、活性成分が水性液体または非水性液体に溶解または懸濁した液剤、水中油型または油中水型のエマルション、もしくは巨丸剤として製造することができる。
経口投与用組成物（錠剤またはカプセル剤など）に関し、期間に適した担体としては、シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴム、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロースおよびスターチなどの結合剤；コーンスターチ、ゼラチン、ラクトース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸ジカルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸などの増量剤または担体；ステアリン酸マグネシウムおよび他のステアリン酸塩、ステアリン酸、シリコン液、タルクワックスおよびコロイダルシリカなどの滑沢剤といったような通例の賦形剤などのビヒクルが挙げられる。ペパーミント、冬緑油、チェリーフレーバーなどの香味剤を用いてもよい。投与剤形を容易に確認できるようにするために、着色剤を加えることが望ましい。錠剤は、当業界で公知の方法によりコーティングをほどこしてもよい。
【００１４】
経口投与用の便利な担体剤としては、溶液、懸濁液またはエマルションの形態である液体製剤が挙げられ、必要に応じてカプセルに封入するか常套の方法により単位投与剤形に製剤する。好ましい配合成分は、アカシア／ＴＷＥＥＮ／水、ＴＷＥＥＮ／水、プロピレングリコール、植物油（ピーナツ、サフラワー、オリーブなど）および１０〜２０％エタノール、植物油／カンファーＭＧＭ、カンファーＭＣＭ／プロピレングリコール、メチルセルロース／水、植物油／グリセロールのステアロイルモノエステル、植物油／グリセロールのモノ不飽和脂肪酸エステルである。
【００１５】
錠剤は、打錠または鋳型成形により、必要に応じて１種またはそれ以上の補助成分とともに製造する。打錠錠剤は、粉末または顆粒などの自由流体形中に存在する活性剤を、必要に応じて結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、界面活性剤または分散剤と混合して適当な機械で打錠することによって製造する。鋳型成形錠剤は、湿らせた粉末化合物と不活性液体希釈剤の混合物を適当な機械で鋳型成形することによって製造する。錠剤は、必要に応じてコーティングまたは刻み目をいれ、活性剤が徐々に放出されるかまたは調節放出される製剤として製造する。
局所投与用製剤としては、通常スクロースまたはトラガカントゴムなどの香味付けした基材に活性剤を含むトローチ剤；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアゴムなどの不活性基材に活性剤を含む香錠；および適当な液体担体中に活性剤を含む含嗽剤が挙げられる。
【００１６】
皮膚への局所投与に適した製剤は、活性剤と医薬的に活性のある担体を含む軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤およびペースト剤である。局所デリバリーシステムの例としては、活性剤を含む経皮パッチ剤がある。他の局所製剤としては、注射または毛管血液サンプリングなどの侵入操作の前に、活性剤を皮膚に放出する滅菌綿棒が挙げられる。このような滅菌綿棒は、侵入操作から放出される血液または血清中のＨＩＶを中和し、不慮の針事故によってＨＩＶが医療従事者に移るのを防止する補助となる。このような滅菌綿棒は、活性剤を含む揮発性溶液（エタノールなど）に浸した滅菌外科用ガーゼパッドからなり、１つずつ密封された袋に入れる。
経腸または経膣投与用製剤は、カカオバターまたはサリチル酸塩などを含む適当な基材からなる座剤またはペッサリーである。他の経膣剤としては、活性剤ならびに当業界で適当であることがわかっている担体などを含む、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡状剤またはスプレー製剤が挙げられる。
【００１７】
担体が液体である経鼻投与用製剤としては、たとえば粒子径２０〜５０ミクロンの粗粉末が挙げられ、吸入、すなわち粉末の容器を鼻に近づけてすばやく吸い込むことによって投与される。担体が液体である経鼻スプレーまたは点鼻剤としての投与に適した製剤は、活性剤の水性または油性溶液である。
非経口投与に適した製剤は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤およびレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含む水性または非水性滅菌注射液；および懸濁剤および濃化剤を含む水性または非水性滅菌懸濁液である。該製剤は、アンプルおよびバイアルなどの単位用量または複数用量コンテナにすることができ、使用直前に注射用水などの滅菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で保存する。即時調合注射液および懸濁液は、これまでに述べた滅菌粉末、顆粒および錠剤から製造することもできる。
【００１８】
本発明の別の態様は、式：
【化１２】
0004488621.tif 000007
のクルツィウス転位および式：
【化１３】
0004488621.tif 000008
のカップリング、次いで脱保護
[式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲXは前記と同意義；およびＰＧはヒドロキシ保護基である]
を特徴とする、化合物(Ｉ）の製造方法、特に、cisエナンチオマーの製造方法を提供する。
【００１９】
本発明方法はさらに、式(ＩＩＩ)：
【化１４】
0004488621.tif 000009
[式中、Ｒ3、Ｒ4、Ｘおよびｎは前記と同意義であるが、必要に応じて保護される；Ｒ8は水素または通例の活性基である]
の活性化合物によるアシル化のステップを含むことができる。別法として、本発明方法はさらに、式(ＩＩＩａ)：
【化１５】
0004488621.tif 000010
[式中、Ｒ3、Ｒ4、Ｘおよびｎは前記と同意義であるが、未保護アミン、ヒドロキシその他の置換基は通例の保護基で保護される]
の化合物によるアルキル化のステップを含むことができる。
【００２０】
したがって、エナンチオマー化合物（Ｉ）は、以下の反応工程式によって製造される。
【化１６】
0004488621.tif 000011
上記工程式は、ＲXがシアノ、Ｒ1がＦおよびＲ2がエチルである（１Ｓ,２Ｓ）化合物を説明するが、対応する方法諭は、他のＲX、Ｒ1およびＲ2変化体に適用可能である。第４ステップのためのキラルリガンドは、たとえば、式：
【化１７】
0004488621.tif 000012
の化合物を特徴とする。１Ｒ,２Ｒエナンチオマーを製造するには、鏡像キラルリガンドを用いる。別法として、ラセミ体を形成するには、キラルリガンドを省略する。
【００２１】
ｐが０である化合物（ＩＩ）のプロドラッグは、化合物(Ｉ）を活性化合物(ＩＩＩ）：
【化１８】
0004488621.tif 000013
[式中、Ｒ3、Ｒ4、Ｘおよびｎは前記と同意義であるが、必要に応じて保護される；Ｒ8は水素または通例の活性基である]
でアシル化することによって合成することができる。
活性化合物（ＩＩＩ）は、酸ハライド、酸無水物、活性酸エステルまたはジシクロヘキシルカルボジイミドなどのカップリング試薬の存在下の酸を包含する。代表的な活性酸誘導体としては、塩酸、ギ酸および酢酸誘導混合酸無水物、イソブチルオキシカルボニルクロリドなどのアルコキシカルボニルハライドから誘導された無水物、Ｎ−ヒドロキシスルシンアミド誘導エステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド誘導エステル、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキサミド誘導エステル、２,４,５−トリクロロフェノール誘導エステルなどが挙げられる。化合物（ＩＩＩ）、特に構成要素アミンのための適当な任意の保護基は、アミノ酸またはペプチドのＮ−末端を保護する基または合成手順中の望ましくない反応からアミンを保護する基である。通例用いられるＮ−保護基は、本発明の参考文献である、Greeneの“有機合成における保護基”（John Wiley＆Sons、ニューヨーク、１９８１）に開示されている。Ｎ−保護基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルといったようなアシル基；ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルといったようなスルホニル基；ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−プロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニロロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルといったようなカルバメート基；ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルといったようなアルキル基；およびトリメチルシリルといったようなシリル基が挙げられる。好ましいＮ−保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。
【００２２】
アシル化は、ジメチルホルムアミドまたはピリジンなどの溶媒中のＤＭＡＰおよびＤＣＣといったような通例のエステル化条件下で行う。触媒の存在下、ＴＦＡ、ＨＣｌ（水性）／ジオキサンまたは水素添加といったような、上記Greeneに包括的に記載されている通例の技術で任意の保護基を除去して、化合物（ＩＩ）を得ることができる。
ｐが１である化合物（ＩＩ）は、通例のアルキル化条件下、化合物(ＩＩＩ）をヨードクロロメタンまたは混合ジクロロ／ヨードクロロメタンと反応させて化合物（ＩＩＩａ）：
【化１９】
0004488621.tif 000014
[式中、Ｒ3、Ｒ4、Ｘおよびｎは前記と同意義であるが、未保護アミン、ヒドロキシその他の置換基は通例の保護基で保護される]
を形成することにより製造することができる。次いで、化合物（ＩＩＩａ）を、代表的には水素化ナトリウムを含有する有機溶媒などの塩基性条件下、ＮａＩと反応させ、次いで化合物(Ｉ）にカップリングさせることによって、好ましくは対応するヨウ素誘導体に転換する。
【００２３】
（詳細な説明）
次に、以下に示す例示のみを目的とする非制限的実施例および後記図面に基き、本発明を詳細に説明する。
【００２４】
（中間体の調製）
実施例１
３−[１,１−（エチレンジオキシ）プロピル]−６−フルオロ−２−メトキシベンズアルデヒド
３−フルオロフェノール(２２．４ｇ、０．２モル)、ピリジン（２４ｍｌ、０．３モル）およびジクロロメタン(２００ｍｌ）の溶液に、室温にて塩化プロピオニル（２００ｍｌ、０．２２５モル）を５分間にわたって加える。反応は発熱を伴う。溶液を３０分攪拌する。ジクロロメタンの添加後、有機相を飽和ＮａＨＣＯ3溶液および水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮する。３−フルオロ−１−プロピオニルオキシベンゼン(３３．８ｇ、１００％）を得る。この化合物を１５０℃にて１０分間ＡｌＣｌ3(３３．３ｇ、０．２５モル）と反応させる。水で注意深く反応を停止した後、反応混合物をエーテルで３回抽出する。エーテル相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発して転位化合物(２９．５ｇ、０．１７６モル、８８％）を得る。この中間体をアセトン(２００ｍｌ）に溶解し、Ｋ2ＣＯ3(４２、０．３モル）およびＭｅＩ（２５ｍｌ、０．４モル）を加える。反応混合物を４０℃で１２時間加熱する。反応混合物を濾過し、アセトンを蒸発させる。残渣をエーテルに溶解し、エーテル相を０．５ＭのＮａＯＨ溶液および水で洗浄する。乾燥(ＭｇＳＯ4）および蒸発して、４−フルオロ−２−メトキシプロピオフェノン(３１．２ｇ、０．１７モル、３ステップの収率８６％）を得る。ベンゼン(３００ｍｌ）中の４−フルオロ−２−メトキシプロピオフェノン(３１．２ｇ、０．１７１モル）、エチレングリコール（１０．５ｍｌ、０．１８８モル）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸(１ｇ）を加える。反応混合物をディーン−スターク装置で約１２時間還流する。冷却後、有機相を１ＭのＮａＯＨ用駅で数回洗浄し、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4、Ｋ2ＣＯ3）する。溶媒を蒸発し、約３８ｇのアセタールを得る。キャピラリーガスクロマトグラフィー（ＧＣ）による純度は８８％であり、不純物は基本的に未反応のケトンである。ＴＨＦ(４５０ｍｌ）中のアセタールの溶液に、窒素下、−６５℃にて２．５Ｍのｎ−ＢｕＬｉ（１２８ｍｌ、０．３２モル）を滴下する。温度を約−６５℃に維持しながら、ＴＨＦ(５０ｍｌ）中のＤＭＦ（２５ｍｌ、０．３２モル）の溶液を加える。反応混合物をゆっくりと室温に戻し、ＧＣを行うと約３０分後には出発物質は残っていない。さらに１時間後、反応混合物に飽和ＮＨ4Ｃｌを加えて反応を停止し、エーテルで３回抽出する。乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）後、残渣をシリカゲルカラム（メルク製シリカゲル６０、粒子径０．０４〜０．０６３ｍｍ）にてＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：９）で溶離して精製し、標記化合物(１０ｇ、２５％）を得る。
0004488621.tif 000015
【００２５】
実施例２
３−[１,１−（エチレンジオキシ）プロピル]−６−フルオロ−２−メトキシスチレン
ＴＨＦ(２５０ｍｌ）中のメチルトリフェニルホスホニウムブロミド(１４．３ｇ、４０ミリモル）の懸濁液に、窒素下、室温にて２．５Ｍのｎ−ＢｕＬｉ(１６ｍｌ、４０ミリモル）を加える。次いで、得られた溶液のほとんどに、ＴＨＦ(３０ｍｌ）中の３−[１,１−（エチレンジオキシ）プロピル]−６−フルオロ−２−メトキシベンズアルデヒド(１０ｇ、３９．５ミリモル）を加える。次いで、反応混合物を室温で２時間攪拌し、ヘキサンと食塩水の混合液に注ぐ。有機相を食塩水で２回、水で１回洗浄する。溶媒を蒸発し、形成されたトリフェニルホスホニウムオキシドを除去するために、残渣をアルミナ（メルク製酸化アルミニウム９０acc.ブロックマン）充填ロートで濾過し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：９）で溶離する。有機溶媒を蒸発して得られる残渣を、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：９）で溶離するシリカゲルで最終的に精製して、標記化合物(６．９ｇ、７０％）をキャピラリーＧＣによる純度９４．５％で得る。
0004488621.tif 000016
【００２６】
実施例３
（１Ｓ,２Ｒ）−cis−２−（６−フルオロ−２−メトキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピルカルボン酸
（１Ｓ,２Ｒ）−cis−２−[３−（１,１−（エチレンジオキシ）エチル]−６−フルオロ−（２−メトキシフェニル）シクロプロピルカルボン酸のエチルエステルを、EvansらのJ.Am.Chem.Soc.、１９９１、１１３、７２６−７２８に概ね記載されているように、Ｃｕ（Ｉ）トリフレート(６７９ｍｇ、１．３５ミリモル）およびキラルリガンド[（２,２'−イソプロピリデンビス（（４Ｒ）−４−tert−ブチル−２−オキサゾリン）](７９４ｍｇ、２．７ミリモル）によって触媒される非対称シクロプロパン化反応を用いて３−[１,１−（エチレンジオキシ）プロピル]−６−フルオロ−２−メトキシスチレン(１９．４ｇ、６９ミリモル）およびジアゾ酢酸エチル(２９ｍｌ、２７５ミリモル）から調製する。シリカゲルクロマトグラフィー後、エチルエステル(９．４ｇ、４０．５％）を得る。キラルカラムを用いるＨＰＬＣによるエナンチオマー過剰は９９％である。エステルをジオキサン(１５０ｍｌ）に溶解し、６Ｍの塩酸(３０ｍｌ）を加える。反応混合物を一夜攪拌し、エーテルと食塩水に分配する。溶媒を蒸発して粗生成物(１９ｇ）を得る。この生成物をメタノール(２５０ｍｌ）および水(７５ｍｌ）に溶解し、ＬｉＯＨ(６ｇ、２５０ミリモル）を加える。反応混合物を９０℃で２４時間加熱し、溶媒の大部分を蒸発する。残る混合物を酸性化し、ジクロロメタンで３回抽出する。溶媒を蒸発して標記化合物(１１．２ｇ）を得る。
0004488621.tif 000017
【００２７】
実施例４
（１Ｒ,２Ｓ）−cis−２−（６−フルオロ−２−メトキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピルカルボン酸
実施例３の記載にしたがって、３−[１,１−（エチレンジオキシ）プロピル]−６−フルオロ−２−メトキシスチレンから、この化合物を調製する。用いるキラルリガンドは、２,２'−イソプロピリデンビス[（４Ｓ）−４−tert−ブチル−２−オキサゾリン］である。
0004488621.tif 000018
【００２８】
（化合物（Ｉ）および（ＩＩ）の調製）
実施例５
（±）Ｎ−[cis−２−（２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
ジクロロメタン(２００ｍｌ）中の３−[１,１−（エチレンジオキシ）プロピル]−６−フルオロ−２−メトキシスチレン(３２．４ｇ、実施例２）および臭化銅−ジメチルスルフィド複合体(０．３０ｇ）を窒素下、８０℃に加熱する。ジクロロメタン(６００ｍｌ）中のジアゾ酢酸エチル(５４ｍｌ）を７時間にわたって加える。添加完了後、加熱を停止する。１６時間後、溶媒を蒸発し、酢酸エチルとヘキサンで溶離するシリカゲルにて残渣を精製し、cis−エステル(６．５ｇ）を得る。
cis−エステル(３．７ｇ、１０．９ミリモル）をエタノール(２０ｍｌ）に溶解し、ＫＯＨ(１．８ｇ、３２．７ミリモル）を水(１０ｍｌ）に溶解する。溶液を合わせ、３時間加熱還流する。水(３０ｍｌ）を加え、溶液をヘキサン(２０ｍｌ）で３回洗浄する。水相を氷浴で冷却し、希ＨＣｌで酸性化する。溶液をトルエンで３回抽出する。トルエン相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発して、（±）−cis−２−[３−（１,１−（エチレンジオキシプロピル）−６−フルオロ−２−メトキシフェニル］シクロプロピルカルボン酸(１．９ｇ）を得る。
無水トルエン中の該酸(１２０ｍｇ、０．３９ミリモル）の溶液にトリエチルアミン(５９μｌ、０．４３ミリモル）およびジフェニルホスホリルアジド(９２μｌ、０．４３ミリモル）を加える。溶液を室温で１時間攪拌し、次いで１２０℃に加熱する。１時間後、２−アミノ−５−シアノピリジン(５１ｍｇ、０．４３ミリモル）を加える。さらに３時間加熱を継続する。１６時間後、溶媒を蒸発し、残渣をジクロロメタン(３０ｍｌ）に溶解し、希ＨＣｌで洗浄し、乾燥(ＭｇＳＯ4）し、蒸発して１５２ｍｇを得る。この生成物をジオキサンに溶解し、ＨＣｌ（６Ｎ、１ｍｌ）を加える。２時間後、混合物を蒸発し、ジクロロメタン(２５ｍｌ）に溶解し、水（１０＋１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥(ＭｇＳＯ4）し、蒸発して１１７ｍｇを得る。酢酸エチルとヘキサンで溶離するシリカゲルにて残渣を精製し、２−メトキシフェニル中間体生成物(３７ｍｇ）を得る。
ジクロロメタン中の三臭化ホウ素の１Ｍ溶液(１９４μｌ、０．１９４ミリモル）をジクロロメタン中の２−メトキシフェニル中間体(３７ｍｇ、０．０９７ミリモル）の溶液に−６０℃にて加える。１０分後、冷却浴を取りはずし、２時間攪拌する。溶液をジクロロメタンで希釈し、希ＮａＨＣＯ3および水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発する。残渣をＭｅＣＮから再結晶して、標記生成物(１７ｍｇ）を得る。
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【００２９】
実施例６
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
無水トルエン(１５ｍｌ）中の実施例で調製した酸(１．４７ｇ、６．１ミリモル）の溶液に、トリエチルアミン(０．８５ｍｌ、６．１ミリモル）を加える。溶液をアルゴン下、室温で３０分攪拌し、次いで１２０℃に加熱する。１５分後、ＤＭＦ(３ｍｌ）中の２−アミノ−５−シアノピリジン(０．９９ｇ、８．９ミリモル）の溶液を加え、加熱を４時間継続する。トルエンを蒸発し、混合物をジエチルエーテル(１００ｍｌ）および酢酸エチル(５０ｍｌ）で希釈し、１ＭのＨＣｌ、水および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、濃縮する。酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１０〜１：１）で溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにて残渣を精製し、２−メトキシフェニル中間体(１．６ｇ、６６％）を得る。
塩化メチレン(８０ｍｌ）中の２−メトキシフェニル中間体(１．４０ｇ、３．６６ミリモル）の溶液に、塩化メチレン中の三塩化ホウ素の１Ｍ溶液(１１．０ｍｌ、１１．０ミリモル）をアルゴン下、−７２℃にて加える。１０分後、冷却浴を取りはずし、１時間１５分攪拌する。溶液を塩化メチレンで希釈し、ＮａＨＣＯ3の水溶液、水および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、濃縮する。アセトニトリル／Ｈ2Ｏ（１：１）から沈澱させて、純粋な標記化合物(０．６２ｇ）を得る。残渣を濃縮し、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１０〜１：１）および酢酸エチルで溶離するクロマトグラフィーに付し、アセトニトリルから結晶化して、標記生成物(０．２ｇ）を得る。収量０．８２ｇ（６１％）。キラルカラムを用いるＨＰＬＣによるｅｅは、９５％である。[α]d22−１７１．２?（ｃ＝０．５０、塩化メチレン）。
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【００３０】
実施例７
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
ジクロロメタン(２０ｍｌ）およびＤＭＦ(１０ｍｌ）中の実施例６記載の化合物(１．６４ｇ、４．４ミリモル）、ＢＯＣ−保護３−アミノ安息香酸(１．６ｇ、６．６ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン(２６９ｍｇ、２．２ミリモル）の溶液に、ＤＣＣ(１．３６ｇ、６．６ミリモル）をアルゴン下、室温にて加える。反応混合物を２４時間攪拌する。溶媒を注意深く蒸発させ、残渣を、溶媒としてヘキサン／酢酸エチル（１：１）を用いるシリカゲルで精製して、ＢＯＣ−保護標記化合物(２．６ｇ）を得る。この生成物に０℃にてトリフルオロ酢酸(７５ｍｌ）を加える。次いで、混合物を０℃で１時間攪拌する。溶媒を注意深く減圧除去する。残渣を酢酸エチルと飽和炭酸カリウムに分配する。有機相を乾燥し、蒸発する。残渣を、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（４：１）を用いるシリカゲルカラムで精製して、標記化合物の遊離塩基(１．０３ｇ）を得る。この中間体を１ＭのＨＣｌのエーテル溶液(３ｍｌ）で処理して、標記化合物(０．８４ｇ）を得る。
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【００３１】
実施例８
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
トリエチルアミン(６７０μｌ、４．８ミリモル）およびジフェニルホスホリルアジド(１．０５ｍｌ、４．９ミリモル）を、無水トルエン(１０ｍｌ）中の実施例３で調製した酸(１．２ｇ、４．５ミリモル）の溶液に、窒素下で加える。溶液を室温にて３０分間攪拌し、次いで、１２０℃に加熱する。１５分後、ジメチルホルムアミド(１．５ｍｌ）中の２−アミノ−５−シアノピリジン(０．８０ｇ、６．７ミリモル）の溶液を加え、加熱を４時間継続する。溶液をジエチルエーテルで希釈し、１ＭのＨＣｌで洗浄する。有機層を乾燥(ＭｇＳＯ4）し、濃縮する。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（溶離勾配：開始時ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１、終了時：純酢酸エチル）によって精製し、わずかに不純な２−メトキシフェニル誘導体(０．９３ｇ）を得る。上述のクロマトグラフィーを繰り返し、純粋な２−メトキシフェニル誘導体(０．７０ｇ、４１％）を得る。
塩化メチレン中の２−メトキシフェニル中間体(７００ｍｇ、１．８ミリモル）の溶液に、塩化メチレン中の三塩化ホウ素の１Ｍ溶液(５．５ｍｌ、５．５ミリモル）を−６０℃にて加える。１０分後、冷却浴を取りはずし、２時間攪拌する。溶液を塩化メチレンで希釈し、ＮａＨＣＯ3の水溶液で洗浄する。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濃縮し、残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（溶離勾配：開始時ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝２：１、１：１、１：２、酢酸エチル：メタノール＝８：１）によって精製し、標記化合物(５００ｍｇ、７４％）を得る。 [α]D22＋１６５．０?（ｃ＝０．５０、塩化メチレン）。
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【００３２】
実施例９
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
実施例６で述べた化合物から出発し、実施例７で述べた方法を用い、標記生成物を塩酸塩として得る。
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【００３３】
実施例１０
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
（１Ｓ,２Ｒ）−cis−２−（６−フルオロ−２−メトキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピルカルボン酸(３．０ｇ、１１．３ミリモル）、トリエチルアミン(１．５８ｍｌ、１１．３ミリモル）およびジフェニルホスホリルアジド(２．４４ｍｌ、１１．３ミリモル）を、アルゴン下、室温にて無水トルエン(８ｍｌ）に溶解する。反応混合物を室温で３０分攪拌し、その後、温度を１２０℃に上昇し、さらに１５分間その温度で維持する。次いで、２−アミノ−５−ブロモピリジン(２．０８ｇ、１２ミリモル）を加え、反応混合物を１２０℃で２．５時間攪拌する。ベンゼンおよび１Ｍの塩酸溶液を加え、有機相を蒸発する。残渣を、溶離液としてヘキサン：酢酸エチル（１：１）を用いるシリカゲルにて精製する。適当な画分を集め、５．０ｇの（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−メトキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレアを得る。この化合物をジクロロメタン(１００ｍｌ）に溶解し、溶液をアルゴン下に維持し、−６５℃に冷却する。三塩化ホウ素（１Ｍジクロロメタン溶液３０ｍｌ、３０ミリモル）を加え、反応混合物を一夜放置して室温にする。ジクロロメタンおよび飽和重炭酸ナトリウムを加える。有機相を蒸発し、残渣を、溶離液として酢酸エチル：メタノール（９：１）を用いるシリカゲルにて精製する。標記化合物(１．９６ｇ、４１％）を得る。
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【００３４】
実施例１１
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例３の記載にしたがって、実施例２に記載した化合物において、キラルリガンド２,２'−イソプロピリデンビス（４Ｓ）−４−tert−ブチル−２−オキサゾリン（アルドリッチから市販されている）を用いて、非対称シクロプロパン化反応を行う。次いで、実施例１０の記載と類似の方法にしたがって、得られる（１Ｒ,２Ｓ）−cis−２−（６−フルオロ−２−メトキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピルカルボン酸を処理して標記化合物を得る。
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【００３５】
実施例１２
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
ジクロロメタン：ＤＭＦ（１：１）(２０ｍｌ）中の実施例１０記載の化合物(６３３ｍｇ、１．５ミリモル）、ＢＯＣ−保護３−アミノ安息香酸(４７５ｍｇ、２ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン(１２３ｍｇ、１ミリモル）の溶液に、ＤＣＣ(４１５ｍｇ、２ミリモル）をアルゴン下、室温にて加える。反応混合物を３６時間攪拌する。溶媒を注意深く蒸発させ、残渣を、溶媒としてヘキサン／酢酸エチル（１：１）を用いるシリカゲルで精製して、ＢＯＣ−保護標記化合物(８１１ｍｇ）を得る。この生成物をジオキサン(２０ｍｌ）に溶解し、６ＭのＨＣｌ(１０ｍｌ）を加え、混合物を一夜攪拌する。溶媒を注意深く減圧除去する。残渣をエタノールおよびエーテルで処理し、標記化合物をＨＣｌ塩として得る（２２５ｍｇ）。ＨＰＬＣ純度は約９３％である。
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【００３６】
実施例１３
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−Ｌ−アラニルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
Bodanszkyの“The Practice of Peptide Synthesis”、第２版、スプリンガーなどを参照して標準の化学的手法を用い、ＴＣＥ−保護３−アミノ安息香酸から出発物質ＢＯＣ−保護３−Ｌ−アラニルアミノ安息香酸を調製する。実施例１２の記載にしたがって、この化合物を実施例１０の化合物と反応させて標記化合物を得る。
0004488621.tif 000027
【００３７】
実施例１４
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（４−ピリジルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の記載に類似の方法にしたがって、実施例１０の生成物をイソニコチン酸と縮合させて、標記化合物をＨＣｌ塩で得る。
0004488621.tif 000028
【００３８】
実施例１５
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の記載に類似の方法にしたがって、実施例１０の生成物を３−ジメチルアミノ安息香酸と縮合させて、標記化合物をＨＣｌ塩で得る。
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【００３９】
実施例１６
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−アミノメチルベンゾイルメチルオキシ）−５−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
３−ｔ−ブトキシカルボニルアミドメチル安息香酸を水酸化テトラブチルアンモニウムの溶液（１Ｍ、ＭｅＯＨ）でｐＨ９にし、蒸発する。残渣をジクロロメタンに溶解し、クロロヨードメタンで一夜処理する。溶液を水で洗浄し、蒸発して粗３−ｔ−ブトキシカルボニルアミドメチルベンゾイルオキシメチルクロリドを得る。この物質を実施例１０のナトリウム塩（ＤＭＦ中の水素化ナトリウムで調製）および触媒としての少量のヨウ化ナトリウムと反応させる。２時間反応させた後、溶液に酢酸を加えて反応を停止し、ジクロロメタンで希釈し、水で洗浄し、蒸発する。粗生成物を、酢酸エチル／へキサン（１：２）で溶離するシリカゲルにて精製し、純粋な物質をトリフルオロ酢酸で処理し、蒸発して、標記化合物のトリフルオロ酢酸塩を固体で得る。
0004488621.tif 000030
【００４０】
実施例１７
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（２−（３−アミノ−４−メチルベンゾイルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の記載にしたがって、実施例１０の（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレアを３−ｔ−ブトキシカルボニルアミド−４−メチル安息香酸と縮合させる。生成物をトリフルオロ酢酸で処理し、蒸発して標記化合物のトリフルオロ酢酸塩を固体で得る。
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【００４１】
実施例１８
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（２−（３−エチルアミノベンゾイルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の手順にしたがって、実施例１０の化合物を３−（Ｎ−エチル−１−ブトキシカルボニルアミド）安息香酸と縮合させ、生成物をトリフルオロ酢酸で処理し、蒸発して標記化合物のトリフルオロ酢酸塩を固体で得る。
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【００４２】
実施例１９
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（２−キノロ−４−イルオキシ−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の手順にしたがって、実施例１０の化合物を４−キノリン酸と縮合させ、生成物をトリフルオロ酢酸で処理し、蒸発して標記化合物の酢酸塩を固体で得る。
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【００４３】
実施例２０
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（２−（３−アミノメチル−２−メチルベンゾイルオキシ）−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の手順にしたがって、実施例１０の化合物を３−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミド−２−メチル安息香酸と縮合させ、生成物をトリフルオロ酢酸で処理し、蒸発して標記化合物を固体で得る。
0004488621.tif 000034
【００４４】
実施例２１
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−（４−アミノメチルフェニルカルボニルオキシ）−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
ＭｅＯＨ(２００ｍｌ）中の４−シアノ安息香酸(４ｇ）の溶液に、ＤＣＣ（６．５ｇ）を加えることにより、４−（tert−ブチルオキシカルボニルアミドメチル）安息香酸を調製する。混合物を室温で７０時間攪拌し、濾過して沈澱したジシクロヘキシルウレアを除去し、濾液を減圧濃縮して粗生成物(７ｇ）を得る。メチルエステルをＭｅＯＨ(５００ｍｌ）に溶解し、ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ(９．６ｇ）を加える。混合物をＮａＢＨ4で少しずつ処理する。５時間反応させた後、混合物を濃縮し、沈澱を除去する。１ＭのＨＣｌ（水溶液）(１５０ｍｌ）で濾液を酸性化し、ＣＨ2Ｃｌ2(２×１００ｍｌ）で抽出する。酸性の水相を２５％ＮＨ3（水溶液）(１００ｍｌ）で処理し、ＣＨ2Ｃｌ2(３×１００ｍｌ）で抽出し、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、濃縮して茶色がかった油状物(２．６４ｇ）を得る。
油状物をジオキサン／水（２：１）混合液 (３０ｍｌ）に溶解し、ＮａＯＨ(１．５ｇ）で２０時間しょりする。溶媒を除去し、ｔ−ブタノール／水（１：１）混合液(４０ｍｌ）を加える。カルボン酸ジ−tert-ブチル(３．７ｇ）を加えた後、溶液を２４時間攪拌し、次いで、さらに水を加え、混合物をヘキサン(２×５０ｍｌ）で抽出する。水相をＮａＨＳＯ4で酸性化（ｐＨ〜１.５−２.０）し、エーテル(３×７５ｍｌ）で抽出する。集めた抽出物を食塩水(５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、蒸発して中間体４−（tert−ブチルオキシカルボニルアミドメチル）安息香酸を白色固体で得る。
実施例１２の手順にしたがって、実施例１０の化合物（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレアを４−（tert−ブチルオキシカルボニルアミドメチル）安息香酸と縮合させ、ＢＯＣ−保護基を除去して標記生成物を塩酸塩で得る。
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【００４５】
実施例２２
（１Ｓ,２ＳＲ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−（Ｎ−メチルインドール−５−カルボニルオキシ）−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
ｉ）Ｎ−メチルインドール−５−カルボン酸の調製
インドール−５−カルボン酸(０．１ｇ）をＤＭＦ(１ｍｌ）中のスルホン酸メチルトリフルオロメタン（２当量）と室温にて混合する。５時間後、溶媒を蒸発して1Ｈ−ＮＭＲを記録する。
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ｉｉ）標記化合物の調製
実施例１２の手順にしたがって、実施例１０の化合物（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレアをＮ−メチルインドール−５−カルボン酸と縮合させ、標記生成物を塩酸塩で得る。
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【００４６】
実施例２３
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−（インドール−４−カルボニルオキシ）−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の手順にしたがって、実施例１０の化合物（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレアをインドール−４−カルボン酸と縮合させ、標記生成物を塩酸塩で得る。
0004488621.tif 000038
【００４７】
実施例２４
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−（３−アミノ−４−クロロフェニルカルボニルオキシ）−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレア
実施例１２の手順にしたがって、実施例１０の化合物（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−ブロモピリド−２−イル）ウレアを３−アミノ−４−クロロフェニル安息香酸と縮合させ、標記生成物を塩酸塩で得る。
0004488621.tif 000039
【００４８】
実施例２５
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−（ピリド−３−イルカルボニルオキシ）−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２０】
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実施例８の化合物(５０ｇ、０．６８ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．１６８ｇ、０．８１ミリモル）、ニコチン酸(０．１ｇ、０．８１ミリモル）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン(０．０４１ｇ、０．３４ミリモル）の無水混合物をＣＨ2Ｃｌ2(５ｍｌ）およびＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）(２．５ｍｌ）に溶解する。次いで、混合物を室温で攪拌する。２０時間後、混合物を濾過し、減圧乾燥し、次いで、最小量のジクロロメタンに再溶解し、濾過する。透明な溶液をシリカ上で蒸発し、クロマトグラフィー（酢酸エチル）によって精製し、標記化合物(０．１６８ｇ、５０％）を得る。クロロホルム−ヘキサンから再結晶して分析用サンプルを得る。
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【００４９】
実施例２６
（１Ｒ,２Ｒ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−（ピリド−３−イルカルボニルオキシ）−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２１】
0004488621.tif 000042
実施例６の化合物(０．１ｇ、０．２７ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．０６７ｇ、０．３３ミリモル）およびニコチン酸(０．０３７ｇ、０．３ミリモル）の無水混合物をジクロロメタン(２ｍｌ）に懸濁する。最小量のＤＭＦを滴下して適当に透明な溶液を得る。次いで、４−（ジメチルアミノ）ピリジン(０．０１６ｇ、０．１４ミリモル）を加える。反応混合物を室温で攪拌する。２０時間後、溶媒を減圧蒸発し、粗残渣を水性塩酸（ｐＨ１−２）に溶解し、濾過する。次いで、透明な溶液を炭酸水素ナトリウムにて僅かにアルカリ性にし、沈澱した生成物を濾過する。クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１５：１）によって精製し、標記化合物(０．０７２ｇ、５６％）を得る。
0004488621.tif 000043
【００５０】
実施例２７
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（３−（Ｎ−エチル，Ｎ−Ｂｏｃ−アミノ）フェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２２】
0004488621.tif 000044
実施例８の化合物(０．３７ｇ、１．０ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．２５ｇ、１．２ミリモル）、４−ジメチルアミノピリジン(０．０６ｇ、０．５ミリモル）および３−（Ｎ−エチル−Ｎ−ブトキシカルボニル）アミノ安息香酸(０．３２０ｇ、１．２ミリモル）（３−アミノ安息香酸の還元的アミノ化およびアミノ基の保護によって調製）をジクロロメタン(８ｍｌ）およびＤＭＦ(３ｍｌ）に溶解する。次いで、混合物を室温で攪拌する。１８時間後、溶媒を減圧除去し、粗生成物をジクロロメタンに溶解し、濾過する。透明な溶液をシリカ上で蒸発し、クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝３：２）によって精製し、十分に純粋な標記化合物(０．２４ｇ、３９％）を得る。
0004488621.tif 000045
【００５１】
実施例２８
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−エチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２３】
0004488621.tif 000046
ジクロロメタン(１０ｍｌ）中の実施例２７の化合物(０．１２０ｍｇ、０．１９ミリモル）の攪拌溶液に、トリフルオロ酢酸(５ｍｌ）を加える。混合物を室温で１−２時間放置し、次いで蒸発乾固する。粗生成物をＨＰＬＣ（プレパラティブ、Ｃ−１８カラム、４０％水／アセトニトリル）にて精製し、標記化合物(０．０４５ｇ、３０％）をトリフルオロ酢酸塩で得る。
0004488621.tif 000047
【００５２】
実施例２９
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−ジメチルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２４】
0004488621.tif 000048
実施例８の化合物(０．１ｇ、０．２７ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．０６７ｇ、０．３３ミリモル）、４−ジメチルアミノピリジン(０．０１６ｇ、０．１４ミリモル）および３−ジメチルアミノ安息香酸(０．０５４ｇ、０．３９ミリモル）をジクロロメタン(３ｍｌ）およびＤＭＦ(１ｍｌ）に溶解する。反応物を室温で１６時間放置する。次いで、溶媒を減圧除去し、固体をジクロロメタンに再溶解し、濾過する。クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）、次いでＨＰＬＣ（Ｃ−１８カラム、０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル）によって精製し、標記化合物(０．１ｇ、５８％）をトリフルオロ酢酸塩で得る。
0004488621.tif 000049
【００５３】
実施例３０
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−Ｌ−バリニルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２５】
0004488621.tif 000050
ａ）３−（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−バリル）アミノメチルベンゾエート
【化２６】
0004488621.tif 000051
Villaneuve＆Chan、Tetrahedron Letters、１９９７、vol３７、６４８９−６４９２と同様にしてこの中間体を調製する。ジクロロメタン(２０ｍｌ）中のＮ−tert−ブトキシカルボニル−Ｌ−バリン(２．１７ｇ、１０ミリモル）およびヘキサクロロアセトン(１．３２ｇ、５ミリモル）の混合物を窒素下で攪拌し、−７８℃まで冷却する。ジクロロメタン(１０ｍｌ）中のトリフェニルホスフィン(２．６ｇ、１０ミリモル）を滴下し、混合物を３０分攪拌する。次いで、ジクロロメタン(１０ｍｌ）中のメチル３−アミノベンゾエート(１．５ｇ、１０ミリモル）を滴下し、次いで、ジクロロメタン中のトリエチルアミン(１ｇ、１０ミリモル）を滴下する。次いで、溶媒を減圧蒸発した後、反応物を室温にする。残渣をシリカクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）によって精製し、次いで、酢酸エチル−ヘキサンから再結晶して、純粋な上記中間体(０．７ｇ、２８％）を得る。
0004488621.tif 000052
ｂ）３−（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−バリル）アミノ安息香酸
【化２７】
0004488621.tif 000053
ステップａの中間体(０．６５ｍｇ、１．８ミリモル）をメタノール(６ｍｌ）および水(２ｍｌ）に懸濁する。水酸化リチウム(０．１１ｇ、３．９ミリモル）を加え、混合物を室温で２４時間攪拌する。次いで、水(１０ｍｌ）を加え、体積を半分に減らす。水性溶液を酢酸エチル(１０−２０ｍｌ）で洗浄し、次いで水性塩酸で酸性化する。酢酸エチル(２×２０ｍｌ）で抽出し、乾燥し、減圧蒸発し、純粋な上記中間体(０．５２４ｇ、８４％）を得る。
0004488621.tif 000054
ｃ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−バリニルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２８】
0004488621.tif 000055
実施例８の化合物(０．２３ｇ、０．６２ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．１５３ｇ、０．７４ミリモル）、４−ジメチルアミノピリジン(０．０３８ｇ、０．３ミリモル）およびステップｂの中間体(０．２５ｇ、０．７４ミリモル）をジクロロメタン(９ｍｌ）およびＤＭＦ(３ｍｌ）に溶解する。反応物を室温で１９時間放置する。次いで、溶媒を減圧除去し、固体をジクロロメタンに再溶解し、濾過する。クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）によって精製し、純粋なＮ−保護標記化合物(０．２９ｇ、６７％）を得る。
0004488621.tif 000056
ｄ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（２−（３−Ｌ−バリニルアミノフェニルカルボニルオキシ）−６−フルオロ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化２９】
0004488621.tif 000057
ステップｃのＮ−保護化合物(０．１６ｇ、０．２３ミリモル）およびチオフェノール(０．０５４ｇ、０．４６ミリモル）をジクロロメタン(６ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却する。トリフルオロ酢酸(６ｍｌ）を加え、混合物を室温にして、１時間放置する。蒸発乾固し、クロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１．５）によって精製し、標記化合物(０．１５０ｇ、９０％）をＴＦＡ塩で得る。
0004488621.tif 000058
【００５４】
実施例３１
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−エチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化３０】
0004488621.tif 000059
ａ）６−エチルアミノニコチン酸
【化３１】
0004488621.tif 000060
実施例３５のａのステップに記載の手順にしたがって、６−クロロニコチン酸とエチルアミンからこの中間体を調製する。抽出操作において、酢酸エチルの代わりに１−ブタノールを用いる。再結晶（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ3）して０．５３ｇ（５０％）を得る。
0004488621.tif 000061
ｂ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−エチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化３２】
0004488621.tif 000062
実施例８の化合物(０．１ｇ、０．２７ミリモル）、６−エチルアミノニコチン酸(０．０８４ｇ、０．５４ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．１２７ｇ、０．６２ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン(０．０１６ｇ、０．１３ミリモル）をＤＭＦ(３ｍｌ）に溶解し、室温で放置する。１９時間後、溶媒を減圧除去し、残渣をジクロロメタンに懸濁し、濾過する。溶媒を除去し、粗生成物をクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）によって精製し、標記化合物(０．０６３ｇ、４５％）を得る。
0004488621.tif 000063
【００５５】
実施例３２
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（５−ブロモピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化３３】
0004488621.tif 000064
５−ブロモニコチン酸(０．０６５ｇ、０．３３ミリモル）、実施例８の化合物(０．１ｇ、０．２７ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．１２７ｇ、０．６２ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン(０．０１６ｇ、０．１３ミリモル）をジクロロメタン(４ｍｌ）に溶解し、室温で放置する。１９時間後、混合物を濾過し、溶媒を減圧除去する。粗生成物をクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）によって精製し、標記化合物(０．０４０ｇ、２７％）を得る。
0004488621.tif 000065
【００５６】
実施例３３
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化３４】
0004488621.tif 000066
ａ）６−アミノニコチン酸メチルエステル
【化３５】
0004488621.tif 000067
６−アミノニコチン酸(２ｇ、２２ミリモル）をメタノール(１０ｍｌ）および硫酸(０．５ｍｌ）に溶解する。溶液を一夜還流し、溶媒を減圧蒸発する。粗生成物を水−ＥｔＯＡｃに溶解し、水性炭酸水素ナトリウムにてアルカリ性にする。ＥｔＯＡｃによって抽出し、純粋な中間体(２．３ｇ、７０％）を得る。
0004488621.tif 000068
ｂ）６−ブトキシカルボニルアミノニコチン酸メチル
【化３６】
0004488621.tif 000069
ステップａの中間体(０．７５ｇ、４．９ミリモル）をＴＨＦ(５ｍｌ）に溶解する。ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド(５ｍｌ、２ＭのＴＨＦ溶液）を滴下する。室温で３０分攪拌後、ＴＨＦ(８ｍｌ）中のジ−tert−ブチルカーボネート(１．１ｇ、５ミリモル）を加える。反応混合物を一夜窒素雰囲気下で放置する。次いで、溶液を減圧蒸発し、ＥｔＯＡｃ(４０ｍｌ）と０．１Ｍの塩酸(１００ｍｌ）に溶解する。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで２回抽出し、次いで、水性炭酸水素ナトリウムで僅かにアルカリ性にし、再びＥｔＯＡｃ(２０ｍｌ）で１回抽出する。有機画分を集め、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：４）によって精製し、純粋な標記中間体(０．５ｇ、４０％）を得る。
0004488621.tif 000070
ｃ）６−ブトキシカルボニルアミノニコチン酸
【化３７】
0004488621.tif 000071
ステップｃの中間体(０．４ｇ、１．６ミリモル）をメタノール(４ｍｌ）および水(１．２５ｍｌ）に懸濁する。水酸化リチウム(０．１ｇ、４ミリモル）を加える。スラリーを室温にて４８時間放置する。次いで、透明な溶液を減圧濃縮し、水に溶解し、酢酸で酸性化（ｐＨ４−５）する。ＥｔＯＡｃで抽出して、純粋な標記中間体(０．２７ｇ、７０％）を得る。
0004488621.tif 000072
ｄ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−tert−ブトキシカルボニルアミノ−ピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化３８】
0004488621.tif 000073
実施例８の化合物(０．１５０ｇ、０．４１ミリモル）、ステップｃの中間体(０．１７ｇ、０．４９ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．１ｇ、０．４９ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン(０．０６ｇ、０．４９ミリモル）をＤＭＦ(２ｍｌ）に溶解する。混合物を室温で一夜攪拌し、次いで、５０℃の油浴上に２時間置く。シリカゲルで蒸発し、クロマトグラフィーによって精製し、Ｎ−保護標記化合物(０．０４８ｇ、２０％）を得る。
0004488621.tif 000074
ｅ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−アミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化３９】
0004488621.tif 000075
ステップｄの中間体(０．０４８ｇ、０．０８ミリモル）をジクロロメタン(２ｍｌ）に溶解する。トリフルオロ酢酸(１ｍｌ）を加え、混合物を１時間攪拌する。減圧蒸発して粗標記化合物を得る。この生成物をエーテル(２ｍｌ）に溶解し、一夜静置する。形成した白色沈澱を濾過して純粋な標記化合物をトリフルオロ酢酸塩で得る(０．０３２ｇ、６５％）。
0004488621.tif 000076
【００５７】
実施例３４
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−クロロピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化４０】
0004488621.tif 000077
実施例８の化合物(０．１５ｇ、０．４ミリモル）、６−クロロニコチン酸(０．０７６ｇ、０．４９ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．１ｇ、０．４９ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン(０．０２４ｇ、０．２ミリモル）をジクロロメタン(４ｍｌ）に溶解する。混合物を一夜放置する。減圧蒸発し、クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２）によって精製し、標記化合物(０．０６７ｇ、３２％）を得る。
0004488621.tif 000078
【００５８】
実施例３５
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−ジメチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化４１】
0004488621.tif 000079
ａ）６−ジメチルアミノニコチン酸
【化４２】
0004488621.tif 000080
６−クロロニコチン酸(０．５ｇ、３．１７ミリモル）およびジメチルアミン(１０ｍｌ、４０％水溶液）を密閉した圧力容器に入れ、１３０℃で６時間加熱する。次いで、溶媒を除去し、残渣に水に溶解し、ｐＨを４−５に調節する。ジクロロメタンで抽出し、純粋な上記中間体を得る(０．１ｇ、２０％）。
0004488621.tif 000081
ｂ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−ジメチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
実施例８の化合物(０．１３ｇ、０．３ミリモル）、ステップａの中間体(０．０５ｇ、０．３ミリモル）、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド(０．０９ｇ、０．４ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジン(０．０２ｇ、０．１８ミリモル）をジクロロメタン(３ｍｌ）およびＤＭＦ(１ｍｌ）に溶解する。混合物を一夜放置する。減圧蒸発し、クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝２：１）によって精製し、標記化合物(０．０６ｇ、３９％）を得る。
0004488621.tif 000082
【００５９】
実施例３６
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア−Ｏ−４−ヒドロキシベンゾエート
ａ）４−ベンジルオキシ安息香酸
ＤＭＦ(１５０ｍｌ）中の４−ヒドロキシ安息香酸(６．９ｇ、５０ミリモル）の溶液に、カリウムtert−ブトキシド(１２．３４ｇ、１１０ミリモル）を加え、混合物を室温で１時間攪拌する。臭化ベンジル(２０．５ｇ、１２０ミリモル）を加え、混合物を室温で２日間攪拌する。混合物を減圧蒸発し、１,４−ジオキサン(１００ｍｌ）および水(５０ｍｌ）中の水酸化ナトリウム(６．０ｇ、１５０ミリモル）の溶液を加える。混合物を２時間還流し、冷却し、減圧蒸発する。水を加え、混合物を酢酸で酸性化する。生成物を濾過し、冷水で洗浄し、乾燥する。収量：１０．２ｇ、８９％。
ｂ）塩化４−ベンジルオキシベンゾイル
無水ジクロロメタン(２０ｍｌ）中の４−ベンジルオキシ安息香酸(２．２８ｇ、１０ミリモル）の溶液に、５滴のＤＭＦおよび塩化チオニル(２．５ｍｌ）を加える。混合物を３時間還流し、減圧蒸発する。収量：２．４５ｇ、１００％。ｃ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−[２−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア−Ｏ−４−ベンジルオキシベンゾエート
ＤＭＦ(３ｍｌ）中の（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア(１８４ｍｇ、０．５ミリモル）の溶液に、カリウムtert−ブトキシド(７８．５ｍｇ、０．７ミリモル）を加え、混合物を室温で１時間攪拌する。ＤＭＦ(１ｍｌ）中の塩化４−ベンジルオキシベンゾイル(１８５ｍｇ、０．７５ミリモル）の溶液を加え、混合物を室温で一夜攪拌する。酢酸エチル(４０ｍｌ）を加え、有機相を水で４回洗浄する。溶液を乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、減圧蒸発する。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって生成物を単離する。収量：１８０ｍｇ、６２％。
0004488621.tif 000083
ｄ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア−Ｏ−４−ヒドロキシベンゾエート
酢酸エチル(１５ｍｌ）およびメタノール(１５ｍｌ）中の（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア−Ｏ−４−ベンジルオキシベンゾエート(１７０ｍｇ、０．２９ミリモル）の溶液を、１０％パラジウム／炭素（３０％）を用いて、室温、常圧にて３回水素添加する。触媒を濾過し、酢酸エチルおよびメタノールで洗浄し、溶液を減圧蒸発する。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって生成物を単離する。収量：１００ｍｇ、７０％。
0004488621.tif 000084
【００６０】
実施例３７
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−[２−（５−シアノピリジル）］ウレア−Ｏ−メチレン−４−ヒドロキシベンゾエート
ａ）メチル−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンゾエート
ＤＭＦ(８０ｍｌ）中の４−ヒドロキシ安息香酸メチル(６．８５ｇ、４５ミリモル）の溶液に、カリウムtert−ブトキシド(５．８ｇ、４５ミリモル）を加え、混合物を室温で１時間攪拌する。ＤＭＦ(１ｍｌ）中の塩化４−メトキシベンジル(８．３ｇ、５２ミリモル）を加え、混合物を室温で一夜攪拌する。混合物を減圧蒸発し、酢酸エチル(２００ｍｌ）を加える。有機相を水で４回洗浄し、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、減圧蒸発する。収量：１２．３ｇ、１００％。
0004488621.tif 000085
ｂ）４−（４−メトキシベンジルオキシ）安息香酸
１,４−ジオキサン(５０ｍｌ）中のメチル−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンゾエート(１２．２ｇ、４４．８ミリモル）の溶液に、水酸化リチウム(２．１５ｇ、８９．６ミリモル）の溶液を加え、混合物を６０℃で一夜攪拌する。混合物を減圧蒸発し、５％酢酸を加える。生成物を濾過し、水で洗浄し、乾燥する。収量：１０．１ｇ、８７％。
0004488621.tif 000086
ｃ）４−（４−メトキシベンジルオキシ）安息香酸クロロメチル
１,４−ジオキサン(１００ｍｌ）中の４−（４−メトキシベンジルオキシ）安息香酸(５．１６ｇ、２０ミリモル）の溶液に、水酸化テトラブチルアンモニウム(１４．２７ｇ、２２ミリモル）の４０％溶液を加え、混合物を室温で２時間攪拌する。混合物を減圧蒸発し、１,４−ジオキサンとともに２回、トルエンとともに２回共蒸発する。無水生成物をジクロロメタン(６０ｍｌ）に溶解し、ヨードクロロメタン(３５．３ｇ、２００ミリモル）を加える。溶液を室温で２日間攪拌し、減圧蒸発する。酢酸エチル(約１００ｍｌ）を加え、有機相を水で２回洗浄し、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、減圧蒸発する。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって生成物を単離する。収量：４．４８ｇ、７３％。
0004488621.tif 000087
ｄ）インドメチル−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンゾエート
無水アセトン(１５ｍｌ）中の４−（４−メトキシベンジルオキシ）安息香酸クロロメチル(０．７７ｇ、２．５ミリモル）の溶液に、ヨウ化ナトリウム(１．８７ｇ、１２．５ミリモル）を加え、混合物を室温で一夜攪拌する。混合物を減圧蒸発し、酢酸エチル／水で抽出する。有機相を５％チオ硫酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、減圧蒸発する。収量：０．８６ｇ、８６％。
0004488621.tif 000088
ｅ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−[２−（５−シアノピリジル）ウレア−Ｏ−メチレン−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンゾエート
ＤＭＦ(５ｍｌ）中の（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−[２−（５−シアノピリジル）]ウレア(３６８ｍｇ、１ミリモル）の溶液に、水酸化ナトリウムの４０％鉱物油懸濁液(４４ｍｇ、１．１ミリモル）を加え、混合物を室温で１時間攪拌する。ＴＨＦ(２ｍｌ）中のインドメチル−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンゾエート(０．８４ｇ、２．１ミリモル）の溶液を加え、混合物を室温で一夜攪拌する。酢酸エチル(５０ｍｌ）を加え、有機相を水で４回洗浄し、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4）し、減圧蒸発する。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって生成物を単離する。収量：５２５ｍｇ、８２％。
0004488621.tif 000089
ｆ）（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−[２−（５−シアノピリジル）］ウレア−Ｏ−メチレン−４−ヒドロキシベンゾエート
ジクロロメタン(４ｍｌ）中の（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−[cis−２−（６−フルオロ−２−Ｏ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル]−Ｎ'−[２−（５−シアノピリジル）ウレア−Ｏ−メチレン−４−（４−メトキシベンジルオキシ）ベンゾエート(１００ｍｇ、０．１５６ミリモル）に、ＴＦＡ(０．５ｍｌ）を加え、溶液を室温で１時間攪拌する。溶液を減圧蒸発し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって生成物を単離する。収量：４５ｍｇ、５５％。
0004488621.tif 000090
【００６１】
実施例３９
（１Ｓ,２Ｓ）−Ｎ−｛cis−２−[６−フルオロ−３−プロピオニル−２−（６−メチルアミノピリド−３−イルカルボニルオキシ）フェニル]シクロプロピル｝−Ｎ'−（５−シアノピリド−２−イル）ウレア
【化４３】
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実施例３１の手順と同様にして、６−メチルアミノニコチン酸(０．０５０ｇ、０．３３ミリモル）および実施例８の化合物(０．１ｇ、０．２７ミリモル）から、標記化合物を調製する。粗生成物（標記化合物および未反応の出発物質を含む）をクロマトグラフィー（酢酸エチル）によって精製し、標記化合物(０．０３０ｇ、２２％）を得る。
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【００６２】
生物実施例１
耐性パターン
野生型ＨＩＶおよびSchinaziらのレビュー“International Antiviral News”、VOL４、No６、９５−１０７（１９９６）に記載されているように、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビターの使用から発生する公知の突然変異体ＨＩＶなどの多数のＨＩＶ菌株に対する抗ウイルス活性について、本発明化合物を試験する。結果を表１に示す。
【表１】
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このアッセイは、ＭＴ−４細胞においてＸＴＴを用いる多様な測定を含み（Weinslowら、J.Nat.Cancer Inst.、１９８９、vol．８、５７７〜）、タンパク質結合の寄与を示すための５０％ヒト血清の存在下における測定を含む。ＥＤ50は、μｇ／ｍｌで示す。対応するＨＩＶフリーの細胞において５０％毒性を生み出す用量／ＥＤ50として定義される、計算された治療指数（ＳＩ）の初期データも示す。１９９５ＩＣＡＲサンタフェからの先行技術化合物を上記に示す。
本発明化合物、特にエナンチオマーが、従来の公知化合物よりも明らかに低いＥＤ50値をもつことは明らかであり、公知の問題のある突然変異体Ｋ１０３ＮおよびＹ１８１Ｃ、ならびにＬ１００Ｉおよびダブル変異体Ｌ１００Ｉ，Ｙ１８１Ｃに対する値が含まれる。さらに、エナンチオマーの治療指数は、先行技術化合物よりも５〜１０倍大きい。これらの結果は、悪名高い耐性傾向をもつウイルスであるＨＩＶに対する彼らの余命期間という観点からではなくとも、患者が長年にわたって薬物療法を受けることが予想されるＨＩＶ療法の情況において望ましいものである。したがって、治療効力を維持し、多様に耐性のあるＨＩＶウイルス菌株の自然発生を防止するための適切な投与を同時に行いつつ、累積毒性を回避するためには、大きなＳＩが必要である。
【００６３】
生物実施例２
耐性への時間
マイクロタイタープレートのウエル当たり２×１０4個のＭＴ４細胞を、５−１０ＴＣＩＤ50のＨＩＶ−１IIIBに感染させる。１つの濃度につき８個の複製物を用いて、試験する化合物をＥＤ50付近の濃度で加える。６日間インキュベーションを行った後、上清１０μＬにおけるＲＴ活性を測定する。
以下の手順を、培養のその後の経過に続いて１週当たり１回行う：非処理感染細胞のＲＴ活性の＞５０％を示す試験化合物の濃度（ＳＩＣ、出発阻害濃度）で生じたウイルスを新鮮なＭＴ４細胞に移動させる。８つの複製物のそれぞれからの上清１５μＬを、試験化合物なしの細胞（対照）およびＳＩＣと同じ濃度、およびさらに２つのそれぞれ５倍高い濃度で試験化合物を含む細胞に移す（以下の表２参照）。
最も高い非毒性濃度（５−４０μＭ）でウイルスの成長が許容されるとき、２−４個の同時進行ウエルを集め、配列分析および交差耐性のための材料を与えるために展開する。
許容されたウイルスの成長
阻害されたウイルス生産
【表２】
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図１は、本発明化合物のウイルス耐性の成長を時間に対してプロットしたものである（実施例８）。最も近いサンタフェ化合物についての対応する曲線もプロットされている。本発明化合物が有意に低い耐性進行速度を示していることは明らかである。
【００６４】
生物実施例３
Ｐ４５０の代謝
ヒトシトクロムＰ４５０ｃＤＮＡ（スーパーソーム）Gentest Corp. ウォーバーン、ＵＳＡでトランスフェクトされたバキュロウイルス感染昆虫細胞において、ヒトシトクロム系Ｐ４５０のイソ体を経る本発明化合物の代謝を測定する。
ＣＹＰ１Ａ２＋Ｐ４５０レダクターゼ、ＣＹＰ２Ａ６＋Ｐ４５０レダクターゼ、ＣＹＰ２Ｃ９−Ａｒｇ１４４＋Ｐ４５０レダクターゼ、ＣＹＰ２Ｃ１９＋Ｐ４５０レダクターゼ、ＣＹＰ２Ｄ６−Ｖａｌ３７４＋Ｐ４５０レダクターゼおよびＣＹＰ３Ａ４＋Ｐ４５０レダクターゼといったような種々のシトクロムＰ４５０イソ体を過剰発現しているスーパーソームの存在下、濃度０.５、５および５０μＭの試験化合物をそれぞれ２組ずつインキュベートする。インキュベート物は、固定濃度のシトクロムＰ４５０（５０ピコモルなど）を含み、１時間以上インキュベートする。親化合物の消滅をクロマトグラフィー的に測定するＵＶ ＨＰＬＣによって、試験化合物の代謝における既知のイソ体の関与を測定する。
３種類の濃度で７．５分間試験した後、残留量のパーセントから、ＣＹＰ３Ａ４、１Ａ２、２Ｃ１９および２Ａ６が実施例７の化合物の代謝に関与することが示唆される。Ｐ４５０イソ体の類似した配置は、先行技術であるサンタフェ  ハロピリジニル化合物の代謝にも関与する。
驚くべきことに、実施例８の化合物については、いずれのイソ体においても有意なＰ４５０代謝は記録されなかったが、このことは、該化合物がインビボで安定であること、および共投与された薬物の代謝の妨害の可能性が、対応して低いことを意味する。
【００６５】
生物実施例４
薬物動態
経口投与されたプロドラッグ（ＩＩ）からの化合物（Ｉ）の放出をラットでモニターする。実施例７の化合物をプロピレングリコールビヒクルに配合し、０.０２７ミリモル／ｋｇに対応する投与量で、１対の絶食させた雄性スプラーグ−ドーリーラットに投与する。指示された間隔で、イヌの頚静脈に埋めこんだカテーテルから血液０.２ｍｌを集め、遠心分離し、後に行う分析用に冷凍する。放出された化合物（Ｉ）（実施例６）をＨＰＬＣによってアッセイする。それぞれ４０−１００μＬの血漿サンプルを含むアリコートを等体積のアセトニトリルと混合する（１０秒、Vibrofex）。サンプルを遠心分離（２分、１４０００ＲＰＭ）し、上清３０μＬを下記のＨＰＬＣシステムに注入する。
プレカラム：ＲＰ−１８、７μｍ、１５×３.２ｍｍ
カラム：ＹＭＣベーシック、３μｍ、１５０×３ｍｍ
移動相：６０％アセトニトリル／３ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ６.４
流速：０.４ｍｌ／分
検出：ＵＶ、２５０ｎｍ
【表３】
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表３中、プロドラッグ（ＩＩ）の経口投与によって、臨床的に有意な量の化合物（Ｉ）がインビボにて放出されることは明らかである。
【００６６】
生物実施例５−８
ｉ）準備
薬物動態実施例で用いたラットは、体重約２００−２５０ｇの雄性スプラーグ−ドーリーラットである。該ラットは、実験前の少なくとも１６時間、絶食させるが、水分は自由に摂取させる。実験の前日、笑気および酸素の混合物であるEfrane（登録商標）でラットを麻酔する。カテーテルを頚静脈に導入する。実験当日、ラットの体重を記録しておく。実験動物に軽く麻酔を施した後、経口投与もしくは首後部への静脈内注射による投与を行う。各物質は、それぞれ２匹のラットに投与する。
サルは、実験前の１２時間絶食させるが、水分は自由に摂取させる。鼻腔胃栄養補給管を通して試験化合物を与える。６時間後、サルにリンゴを与える。
ii）投与剤の調製
以下の実施例に記載した活性成分の適当な量を、経口投与用として、ポリエチレングリコールの溶液または１０％アラビアゴムおよび１％Tween水溶液に溶解／懸濁する。静脈内投与用には、化合物をＤＭＳＯに溶解する。
iii）血液サンプリング
薬物投与前および薬物投与後は、プロットされている指定された間隔の時点において、血液サンプル（代表的には、ラットの場合０.６ｍｌ、サルの場合２ｍｌ）を取る。サルの大腿静脈から、ＥＤＴＡ含有管へ穿刺する。血液サンプルを遠心分離し、感染剤を１％ＳＤＳ／６４度／２０分で中和し、血漿を−２０℃で貯蔵する。
iv）生物学的分析
以下のように血漿サンプルを調製する。血漿４０−１００μＬを等体積のアセトニトリルと混合する（１０秒、Vibrofex）。サンプルを遠心分離（２分、１４０００ＲＰＭ）し、上清３０μＬを下記のＨＰＬＣシステムに注入する。
プレカラム：ＲＰ−１８、７μｍ、１５×３.２ｍｍ
カラム：ＹＭＣベーシック、３μｍ、１５０×３ｍｍ
移動相：６０％アセトニトリル／３ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ６.４
流速：０.４ｍｌ／分
検出：ＵＶ、２５０ｎｍ
【００６７】
生物実験５
最も近い先行技術化合物との比較
０．０２４ミリモル／ｋｇ用量の各化合物をＤＭＳＯビヒクルにて投与することによって、化合物（Ｉ）の生体安定性と有効性を、最も近いサンタフェ化合物、すなわち（±）−Ｎ−（cis−２−（６−フルオロ−２−ヒドロキシ−３−プロピオニルフェニル）シクロプロピル）−Ｎ'−（５−クロロピリジル−２−イル）ウレアと比較する。図２は、各化合物の血漿レベルの経時変化のプロットである（各ケースにおいてｎ＝２）。それぞれの曲線は共通のパターンに沿っているが、本発明化合物のＡＵＣ（０−４時間）が、最も近い先行技術化合物のＡＵＣ（０−４時間）よりも１．５倍過剰であることは明らかである。換言すれば、本発明化合物がこれまでに記載された誘導体よりもインビボで５０％多い曝露を提供するということである。ただし、このことが本発明化合物のクリアランスがより遅いことによるか、組織結合が先行技術化合物の組織結合の程度よりも大きいことによるかはまだ決定されてはいない。
【００６８】
生物実施例６
プロドラッグおよび母化合物の生体等価性
種々の化合物（ＩＩ）（化合物（Ｉ）のプロドラッグ）をラットに投与し、本発明の母化合物（この実施例では、実施例１０の化合物）の血漿レベルの経時変化をモニターする。ビヒクルは、１０％アラビアゴムおよび１％Tween水溶液またはプロピレングリコール（＊）である。表４における血漿レベルの数字は、個々の動物に帰する。
【表４】
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【表４（続き）】
0004488621.tif 000097
プロドラッグ（ＩＩ）が、インビボで臨床的に意味のある量の化合物（Ｉ）を血漿中へ放出することは明らかである。確実な経口バイオアベイラビリティは、実施例３７の化合物では２８−３３％であり、実施例２７の化合物を用いた評価しうる動物では２７％である。
【００６９】
生物実施例７
異なる種におけるバイオアベイラビリティ
本発明のプロドラッグ（ＩＩ）（実施例１２）を同じ用量（０．０２６ミリモル／ｋｇ）および同じビヒクル（１０％アラビアゴムおよび１％Tween水溶液）にてラットおよびカニクイザルに投与する。母化合物（Ｉ）（実施例１０）の血漿レベルを時間の関数として測定する。
【表５】
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プロドラッグ（ＩＩ）が、インビボで臨床的に意味のある量の化合物（Ｉ）を血漿中へ放出することは明らかである。放出は、げっ歯類および霊長類の両方において起こる。
実施例２８の化合物のデータ（ラット：アラビアゴム／Tween、サル：プロピレングリコール）を表５Ａに示す。
【表５Ａ】
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【００７０】
生物実施例８
抗ウイルス活性
ＭＴ４細胞を用いて細胞毒性効果の阻害をアッセイするＸＴＴ−ホルマザンアッセイにおいて、５０％ヒト血清の存在あるいは不在下、野生型ＨＩＶIIIBおよび突然変異体に対するＨＩＶ−１活性について化合物（Ｉ）を試験する。各ケースにおいて、ＥＤ50（μＭ）を示す。
【表６】
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したがって、化合物（Ｉ）は、インビボで達成し得る濃度において、ＨＩＶの種々の菌株に対する活性が高い。
【００７１】
生物実施例９
抗ウイルス活性
また、本発明化合物を、一般的細胞培養アッセイを用いて最も近い先行技術化合物と比較を行い、１０％ウシ胎児血清、ペニシリンおよびストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ１６４０培地にて、９６ウエルのマイクロプレートに入れた（２・１０4細胞／ウエル）、ウエル当たり１０−２０ＴＣＩＤ50の野生型ＨＩＶ−１IIIBまたはＲＴ Ｉｌｅ１００，Ｃｙｓ１８１またはＡｓｎ１０３変異をもつ突然変異体ウイルスに感染させたヒトＴ細胞系ＭＴ４細胞を成長させる。連続希釈した試験化合物を各ウエルに加え、培養物をＣＯ2を多く含む雰囲気下、３７℃でインキュベートし、第５日または第６日にＸＴＴ生体染色によって細胞の生存能力を測定する。下記の結果は多数の測定の平均値である。結果は、ＥＤ50（μＭ）で表す。
【表８】
0004488621.tif 000101
本発明化合物は、野生型に対して、および特にＮＮＲＴＩでの処理により発生する臨床上重要な突然変異に対して有意に改良された能力をもつ。
【００７２】
生物実施例１０
結合動態
標的酵素へのＮＮＲＴＩの会合および解離速度は、チップの表面に逆転写酵素を固定し、チップの質量における相伴う増加または減少によって引き起こされた屈折率の変化を観察することによって推定のインヒビターの結合または解離をモニターする表面プラスモン共鳴法によって直接アッセイすることができる。この方法を用いて、本発明化合物（実施例８）をサンタフェからの最も近い先行技術化合物と比較する。実験は、データ評価用BIAevaluationソフトウェア（バージョン３.０）を用い、Biacore２０００（Biacore AB、ウプサラ、スェーデン）で行う。小さい分析物（ＮＮＲＴＩ）が非常に大きい酵素に結合することによって、１０−２０ＲＵの範囲の結合応答が得られる。駆動緩衝液とサンプルの間にバルク屈折率の相異があると、サンプル注入中に得られたデータを評価することが難しくなる。解離相の間は、バルク屈折率に有意な変化が存在せず、したがって、異なる物質の結合を、この相の間に評価する。
固定化：ＣＭ５チップ上の第１アミンへの直接カップリングによって、酵素および参照タンパク質を固定化する（Markgrenら、１９９８）。Ｆｃｇに対する抗体（BiacoreＢＲ−１０００−５７）を参照タンパク質として用い、使用説明書にしたがって固定化する。Nanocept Centrifugal concentrator１０Ｋ（Pall Filtron、マサチューセッツ、ＵＳＡ）を用いて、ＨＩＶ逆転写酵素（Urgeら、１９９０）を３Ｍ（ＮＨ4）2ＳＯ4から４ｍＭ ＭｇＣｌ2を含む５ｍＭ Hepes,ｐＨ７.６へ移す。６８００−９７００ＲＵに対応する量の逆転写酵素をセンサーチップに固定化する。３５ｍｌの０．５Ｍトリス,ｐＨ７.６；の４ｍＭ ＭｇＣｌ2；０．５Ｍ ＫＣｌの注入によってセンサーの表面を不活性化する。固定化手順は、３３℃で行う。
インヒビターとの相互作用：インヒビターのストック溶液（ＤＭＳＯ中、１ｍｇ／ｍｌ）を、濃度が１０ｍＭとなるように、逆転写酵素駆動緩衝液（１０ｍＭ Hepes,ｐＨ７.６；４ｍＭ ＭｇＣｌ2；０.２５Ｍスペルミン；４０ｍＭ ＫＣｌ；０.５％トリトンＸ−１００；３％ＤＭＳＯ；０.５％ウシ胎児血清）に溶解する。２００ｍｌの希釈した物質を注入することにより、該物質の逆転写酵素への結合を分析する。流速は２０ｍｌ／分であり、温度は２５℃である。物質を注入する毎に、１０％ＤＭＳＯ／逆転写酵素駆動緩衝液１２０ｍｌを注入してシステムを洗浄する。
結果を図３に示す。本発明化合物と先行技術化合物が、異なる相互作用動態を示すことは明らかである。本発明化合物は、最も遅い速度で解離しており、酵素に対する結合効率がよいことが示される。
【００７３】
参考文献：
Unge T、Ahola H、Bhikhabhai R、Backbro K、Lovgren S、Fenyo EM、Honigman A、Panet A、Gonowitz JS、Strandberg B、「ＨＩＶ−１逆転写酵素の発現、精製および結晶化」、Aids Res Hum Retroviruses、１９９０、Nov.；６（１１）：１２９７−３０３
Markgren P-O、Hamalainen M、Danielson UH、「光学バイオセンサーテクノロジーを用いるＨＩＶ−１プロテイナーゼと相互作用する化合物のスクリーニング」、Analytical Biochemistry、１９９８、vol２６５、印刷中
【００７４】
上記具体実施例、比較実施例および図面に関し、本発明の種々の態様および具体例を説明してきたが、本発明はこれらの具体例に限定されるものではなく、請求の範囲を通して拡張することが理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【図１】  生物実施例２に記載した、時間に対する耐性の発達速度に関する、本発明化合物と先行技術化合物との比較を示す。
【図２】  生物実施例５に記載した、本発明化合物または先行技術化合物をラットに経口投与した後の時間ｖｓ血漿レベルを示す。
【図３】  生物実施例１０に記載した、表面プラスモン共鳴方法によってアッセイを行った、逆転写酵素への結合動態に関する、本発明化合物と先行技術化合物との比較を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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