(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式ＩのプリンLNA類似体：
【化１】
0004413493.tif 000010
（式中、二つのジェミナルな置換基Ｊ１およびＪ２が、一緒になっている場合にはオキソまたはチオノを表し、別々の場合にはその一つがＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＳＲ１２を表し、かつもう一つがＪ３と一緒になって二重結合を表し；Ｊ１およびＪ２がオキソまたはチオノを表す場合には、Ｊ３が水素を表し；
ＷがＮＲ１Ｒ２、ＯＲ３およびＳＲ４から選択され；
Ａ１、Ａ２、Ａ３、およびＡ４が独立に−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ１３−から選択され、ただしＲ１３が水素、任意に置換されたＣ１〜６−アルキルおよび任意に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニルから選択され；
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９，Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２がそれぞれ独立に水素、任意に置換されたＣ１〜１２−アルキル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルケニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルキニル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６−アルキル）、任意に置換されたアリールカルボニル、任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）カルボニル、任意に置換されたＣ１〜１２−アルキルカルボニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルケニルカルボニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルキニルカルボニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたＣ１〜１２−アルキルスルホニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルケニルスルホニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルキニルスルホニル、Ｃ１〜１２−アルコキシカルボニル、ホルミル、テトラヒドロピラン−２−イル、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロアリールカルボニル、カルバモイル、および一般形Ｍ−Ｋの「活性／官能性」基から選択され、ここでMは、ソラレン、臭化エチジウム、アクリジン、アントラキノン、ビオチン、ローダミン、又はフルオレセインを示し、Kはポリエチレングリコール、ポリメチレン、又は当該基の「活性／官能性」部分が直接プリン間に結合される単結合を示し、；
Ｒ５が任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）、任意に置換されたアリールカルボニル、およびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ６が任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６−アルキル）、任意に置換されたテトラヒドロピラン−２−イル、任意に置換されたアリールカルボニル、任意に置換されたアリール、およびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ５およびＲ６が一緒になって−Ｓｉ（アルキル）２−Ｏ−Ｓｉ（アルキル）２を表すこともあり；かつ
ｎが1から3の整数である）
の合成法であって、
下記の一般式ＩＩの化合物：
【化２】
0004413493.tif 000011
（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１３、Ｗおよびｎが前述の定義のとおりであり；
Ａ５が−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ１３−から選択され；
Ｒ７が任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）、任意に置換されたアリールカルボニル、およびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ８が水素、任意に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニル、任意に置換されたアリールカルボニル、トリ（アルキル／アリール）シリル、およびフルオレニル（Ｃ１〜６−アルキル）オキシカルボニルから選択され；かつ
Ｘがハロゲン、ＣＮ、任意に置換されたアルキルスルホニルおよび任意に置換されたアリールスルホニルから選択される）
の求核試薬による処理の段階を含む方法。
【請求項２】
求核試薬が３−ヒドロキシプロピオニトリル、ＮＨ３、３−メルカプトプロピオニトリル、ベンジルアルコール、２−ヒドロキシ−エチルベンゼン、２−ヒドロキシ−１−ニトロエタンおよびベンジルアミンである、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
化合物ＩＩと求核試薬との間のモル比が1：2から1：10の範囲である、請求項１〜2のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
化合物ＩＩの求核試薬による処理が、非求核性強塩基存在下で実施される、請求項１〜3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
化合物ＩＩの求核試薬による処理が、ＮａＨ、ＬｉＨ、リチウムジイソプロピルアミド、およびリチウムｔｅｒｔ−ブトキシドの存在下で実施される、請求項4に記載の方法。
【請求項６】
化合物ＩＩの求核試薬による処理が、ピリジン、テトラヒドロフラン、トルエン、キシレン、ベンゼン、ジエチルエーテル、アセトニトリル、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、および１，２−ジクロロエタンから選択される溶媒存在下で実施される、請求項１〜5のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
化合物ＩＩの求核試薬による処理が、-30℃から100℃で実施される、請求項１〜6のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５がすべて酸素を表す、請求項１〜7のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
Ｒ６がベンジルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
置換基Ｒ５およびＲ７がそれぞれメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、パラ−トルエンスルホニルおよびパラ−ブロモベンゼンスルホニルから選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
置換基Ｒ５およびＲ７がいずれもメタンスルホニルである、請求項１0に記載の方法。
【請求項１２】
Ｒ８がアセチルを表す、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＷがＯＨ、ＳＨまたはＮＨ２を表す、請求項１〜１2のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＷがＮＨ２を表す、請求項13に記載の方法。
【請求項１５】
Ｘがクロロを表す、請求項１〜14のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５がすべて酸素を表し、Ｘがクロロであり、ＷがＮＨ２であり、置換基Ｒ５およびＲ７がいずれもメタンスルホニルであり、Ｒ６がベンジルを表し、Ｒ８がアセチルを表し、かつｎが１である、請求項１〜15のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
一般式ＩＩの化合物が、グリコシル化反応における下記の一般式ＩＩＩの化合物：
【化３】
0004413493.tif 000012
（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびｎが前述の定義のとおりであり；かつ
Ｒ１４が任意に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニルオキシ、任意に置換されたＣ１〜６−アルコキシ、ハロゲン、任意に置換されたアリールチオ、任意に置換されたＣ１〜６−アルキルチオ、および任意に置換されたアリールオキシから選択される）
と下記の一般式ＩＶのプリン：
【化４】
0004413493.tif 000013
（式中、ＸおよびＷが前述の定義のとおりである）
とのカップリングによって調製される、請求項１〜16のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
グリコシル化反応がルイス酸存在下で実施される、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
ルイス酸がトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートである、請求項18に記載の方法。
【請求項２０】
グリコシル化反応がシリル化剤存在下で実施される、請求項17〜19のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
シリル化剤がＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドである、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ１４がアセチルオキシ、メトキシ、エトキシ、塩化物、フッ化物、臭化物、ヨウ化物、およびＳＣ６Ｈ５から選択される、請求項17〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ１４がアセチルオキシおよびメトキシから選択される、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
（１S,3R,4R,7S）-7-ベンジルオキシ-1-メタンスルホニルオキシメチル-3-(グアニン-9-イル)-2,5-ジオキサビシクロ[2:2:1]ヘプタン。
【請求項２５】
9-(2-O-アセチル-3-O-ベンジル-5-O-メタンスルホニル-4-C-メタンスルホニルオキシメチル-β-D-エリスロ-フラノシル)-2-アミノ-6-クロロプリン。
【請求項２６】
9-(3-O-ベンジル-5-O-メタンスルホニル-4-C-メタンスルホニルオキシメチル-β-D-エリスロ-フラノシル)-2-アミノ-6-(2-シアノエトキシ)-プリン。
【請求項２７】
下記の一般式ＩＩの化合物：
【化６】
0004413493.tif 000014
（式中、ＷがＮＲ１Ｒ２、ＯＲ３およびＳＲ４から選択され；
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５が独立にＯ、Ｓおよび−ＮＲ１３からなる群より選択され、ただしＲ１３が水素、任意に置換されたＣ１〜６−アルキルおよび任意に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニルから選択され；
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９，Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２がそれぞれ独立に水素、任意に置換されたＣ１〜１２−アルキル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルケニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルキニル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６−アルキル）、任意に置換されたアリールカルボニル、任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）カルボニル、任意に置換されたＣ１〜１２−アルキルカルボニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルケニルカルボニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルキニルカルボニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたＣ１〜１２−アルキルスルホニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルケニルスルホニル、任意に置換されたＣ２〜１２−アルキニルスルホニル、任意に置換されたＣ１〜１２−アルコキシカルボニル、ホルミル、テトラヒドロピラン−２−イル、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロアリールカルボニル、カルバモイル、および一般形Ｍ−Ｋの「活性／官能性」基から選択され、ここでMは、ソラレン、臭化エチジウム、アクリジン、アントラキノン、ビオチン、ローダミン、又はフルオレセインを示し、Kはポリエチレングリコール、ポリメチレン、又は当該基の「活性／官能性」部分が直接プリン間に結合される単結合を示し、；
Ｒ５が任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）、任意に置換されたアリールカルボニル、およびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ６が任意に置換されたアリール（Ｃ１〜６−アルキル）、任意に置換されたテトラヒドロピラン−２−イル、任意に置換されたアリールカルボニル、任意に置換されたアリール、およびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ５およびＲ６が一緒になって−Ｓｉ（アルキル）２−Ｏ−Ｓｉ（アルキル）２を表すこともあり；かつ
Ｒ７が任意に置換されたアルキルスルホニル、任意に置換されたアリールスルホニル、任意に置換されたアリールカルボニル、およびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ８が水素、任意に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニル、任意に置換されたアリールカルボニル、トリ（アルキル／アリール）シリル、およびフルオレニル（Ｃ１〜６−アルキル）オキシカルボニルから選択され；かつ
Ｘがハロゲン、ＣＮ、任意に置換されたアルキルスルホニルおよび任意に置換されたアリールスルホニルから選択される）。
【請求項２８】
Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４がすべて酸素を表す、請求項27に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ６が、ベンジル、オルト−メチルベンジル、メタ−メチルベンジル、およびパラ−メチルベンジル、２−クロロベンジル、４−フェニルベンジル、テトラヒドロピラン−２−イル、ベンゾイルおよびフェニルから選択される、請求項27〜28のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ６がベンジルである、請求項29に記載の化合物。
【請求項３１】
置換基Ｒ５およびＲ７がそれぞれメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、およびオルト−トルエンスルホニル、メタ−トルエンスルホニル、パラ−トルエンスルホニルである、請求項27〜３０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３２】
置換基Ｒ５およびＲ７がいずれもメタンスルホニルである、請求項３1に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ８がアセチルを表す、請求項２７〜３2のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
ＷがＯＨ、ＳＨまたはＮＨ２を表す、請求項27〜33のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
ＷがＮＨ２を表す、請求項34に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｘがクロロを表す、請求項27〜35のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５がすべて酸素を表し、Ｘがクロロであり、ＷがＮＨ２であり、置換基Ｒ５およびＲ７がいずれもメタンスルホニルであり、Ｒ８がアセチルを表し、かつｎが１である、請求項27〜36のいずれか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、プリンLNA（固定核酸；Locked Nucleic Acid）類似体の既知の合成法に比べて全収率が高く、したがって費用効果の高い、プリンLNA類似体合成の新しい戦略に関する。
【０００２】
発明の背景
プリンLNA（固定核酸）モノマーの合成は、ウェンゲル（Wengel）ら（シン（Singh）S.K.；ニールセン（Nielsen）P.、コーシュキン（Koshkin）A.A.およびウェンゲルJ.、Chem. Commun.、1998、455；コーシュキンA.A.、シンS.K.、ニールセンP.；ラジュワンシ（Rajwanshi）V.K.；クマール（Kumar）R.；メルガード（Melgaard）M.；オルセン（Olsen）C.E.およびウェンゲルJ.、Tetrahedron、1998、54、3607）によって最初に報告された。簡便な戦略を用いて、二つのプリンLNAモノマー（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イルおよび６−Ｎ−ベンゾイルアデニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２．２．１］ヘプタンが主要中間体４−Ｃ−アセトキシメチル−１，２−ジ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−リボフラノースから五段階で合成された。主要中間体のシリル化２−Ｎ−イソブチリルグアニンおよび６−Ｎ−ベンゾイルアデニンによるグリコシル化から、それぞれ４’−Ｃ−アセトキシメチルグアニンおよびアデニンヌクレオシドが得られ、これを脱アセチルおよびモノトシル化した後、塩基による閉環を行って、対応する２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレンビシクロヌクレオシドが得られた。最後に脱ベンジルを行って、（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イルおよび６−Ｎ−ベンゾイルアデニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２．２．１］ヘプタンがそれぞれ全収率16％および14％（主要中間体から計算）で得られた。全収率が低い原因は主に、ヌクレオシド類似体の異性体混合物が約50％の収率で得られるグリコシル化反応と、その後の収率44％未満のＣ−分枝炭水化物の分子内閉環である。類似の合成法がチミン、ウラシルおよび４−Ｎ−ベンゾイルシトシンLNAヌクレオシド類似体の合成に適用された。
【０００３】
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イルおよびアデニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２．２．１］ヘプタンの類似の収束的合成が、プファンドヘラー（Pfundheller）H.M.ら（ロムホルト（Lomholt）C.、コーシュキンA.A.、フェンスホルト（Fensholdt）J.、メルドガード（Meldgaard）M.、およびプファンドラーH.M.、第XIV回国際円卓会議；ヌクレオシドおよびヌクレオチド並びにその応用（XIV International Roundtable；Nucleoside and Nucleotides and Their Biological Applications）、2000年9月10〜14日、米国サンフランシスコで発表されたポスター）によって報告されている。主要中間体１，２−ジ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−Ｄ−リボフラノースから出発して、プリンLNAモノマーが全収率50％で得られた。しかし、この戦略は、グリコシル化反応で異性体混合物を生成するという欠点があり、クロマトグラフィ法による分離が必要である。
【０００４】
前述の既知の戦略に特徴的な性質は、全収率が比較的低く、合成段階が多く、かつ異性体混合物を分離するためにクロマトグラフィ法を必要とすることである。したがって、全収率の改善および生産費用の低減をもたらす、プリンLNA類似体の、より効率的な合成戦略の開発がおおいに必要とされている。
【０００５】
発明の概要
本発明は、プリンLNA類似体合成の新規戦略であって、新規プリンLNA類似体を生成するための、位置選択的９−Ｎプリングリコシル化反応と、続くワンポットのプリン環６位置換基の求核芳香族置換反応および同時のＣ−分枝炭水化物の求核剤による分子内閉環を含む戦略を提供する。新規戦略は、新規化合物（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニル−メチル−３−（グアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２．２．１］ヘプタンを合成し、これを２−アミノプリン基のイソブチリル保護と、続く１−メタンスルホニルのベンゾエートによる置換、脱ベンゾイル、および脱ベンジル後に（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−３−（（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２．２．１］ヘプタンに容易に変換することにより示される。この新規戦略は、他の６−置換類似体を含むプリンLNAの合成に容易に拡張することができ、かつ二環の酸素以外の、窒素および硫黄などの他のヘテロ原子にもさらに拡張することができる。
【０００６】
本発明は、下記の一般式Ｉの新規プリンLNA類似体：
【化７】
0004413493.tif 000002
（式中、二つのジェミナルな置換基Ｊ１およびＪ２が一緒になっている場合にはオキソまたはチオノを表し、別々の場合にはその一つがＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＳＲ１２を表し、かつもう一つがＪ３と一緒になって二重結合を表し；
Ｊ１およびＪ２がオキソまたはチオノを表す場合には、Ｊ３が水素を表し；
ＷがＮＲ１Ｒ２、ＯＲ３およびＳＲ４から選択され；
Ａ１、Ａ２、Ａ３、およびＡ４が独立に−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ１３−から選択され、ただしＲ１３が水素、選択的に置換されたＣ１〜６−アルキルおよび選択的に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニルから選択され；
置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９，Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２がそれぞれ独立に水素、選択的に置換されたＣ１〜１２−アルキル、選択的に置換されたＣ２〜１２−アルケニル、選択的に置換されたＣ２〜１２−アルキニル、選択的に置換されたアリール、選択的に置換されたアリール（Ｃ１〜６−アルキル）、選択的に置換されたアリールカルボニル、選択的に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）カルボニル、選択的に置換されたＣ１〜１２−アルキルカルボニル、選択的に置換されたＣ２〜１２−アルケニルカルボニル、選択的に置換されたＣ２〜１２−アルキニルカルボニル、選択的に置換されたアリールスルホニル、選択的に置換されたＣ１〜１２−アルキルスルホニル、選択的に置換されたＣ２〜１２−アルケニルスルホニル、選択的に置換されたＣ２〜１２−アルキニルスルホニル、選択的に置換されたＣ１〜１２−アルコキシカルボニル、ホルミル、テトラヒドロピラン−２−イル、選択的に置換されたヘテロアリール、選択的に置換されたヘテロアリールカルボニル、カルバモイル、および一般形Ｍ−Ｋの「活性／官能性」基から選択され、ただしＭがDNA挿入基、光化学活性基、熱化学活性基、キレート基、レポーター基、および配位子からなる群より選択される該基の「活性／官能性」部分であり、Ｋがそれを通じて「活性／官能性」部分がプリン環に結合されるスペーサーであり、かつＫが1〜50個の原子を含む選択的なスペーサーであり；
Ｒ５が選択的に置換されたアルキルスルホニル、選択的に置換されたアリールスルホニル、選択的に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）、選択的に置換されたアリールカルボニルおよびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ６が選択的に置換されたアリール（Ｃ１〜６−アルキル）、選択的に置換されたテトラヒドロピラン−２−イル、選択的に置換されたアリールカルボニル、選択的に置換されたアリールおよびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ５およびＲ６が一緒になってジアルキルジシロキサニリデンを表すこともあり；かつ
ｎが1から3の整数である）
の合成法であって、
下記の一般式ＩＩの化合物（以下、「主要中間体」と呼ぶ）：
【化８】
0004413493.tif 000003
（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１３、Ｗおよびｎが前述の定義のとおりであり；
Ａ５が−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＲ１３−から選択され；
Ｒ７が選択的に置換されたアルキルスルホニル、選択的に置換されたアリールスルホニル、選択的に置換されたアリール（Ｃ１〜６アルキル）、選択的に置換されたアリールカルボニルおよびトリ（アルキル／アリール）シリルから選択され；
Ｒ８が水素、選択的に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニル、選択的に置換されたアリールカルボニル、トリ（アルキル／アリール）シリル、およびフルオレニル（Ｃ１〜６−アルキル）オキシカルボニルから選択され；かつ
Ｘがハロゲン、ＣＮ、選択的に置換されたスルホニルおよび選択的に置換されたアリールスルホニルから選択される）
の求核試薬による処理の段階を含む方法に関する。
【０００７】
本発明は、前述の定義のとおりの一般式Ｉの化合物にも関する。
【０００８】
本発明はさらに、一般式ＩＩの主要中間体の合成法であって、
グリコシル化反応における、下記の一般式ＩＩＩの化合物（以下、「出発原料」と呼ぶ）：
【化９】
0004413493.tif 000004
（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびｎが前述の定義のとおりであり；かつ
Ｒ１４が選択的に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニルオキシ、選択的に置換されたＣ１〜６−アルコキシ、ハロゲン、選択的に置換されたアリールチオ、選択的に置換されたＣ１〜６−アルキルチオ、および選択的に置換されたアリールオキシから選択される）
の下記の一般式ＩＶのプリン：
【化１０】
0004413493.tif 000005
（式中、ＸおよびＷが前述の定義のとおりである）
とのカップリングの段階を含む方法に関する。
【０００９】
本発明はさらに、前述の定義のとおりの一般式ＩＩの新規化合物にも関する。
【００１０】
本発明の主な利点は下記を含む：
・新規プリンLNA類似体を生成するための、ワンポットのプリン６−ハロゲン化物（または類似物）の求核置換反応および同時のＣ−分枝炭水化物の求核剤による分子内閉環。
・芳香族６位に様々な置換基を含むプリンLNA類似体の簡便な入手法。
・オリゴマー形成に適したプリンLNAモノマーの簡便な入手法。
・核酸異性体のクロマトグラフィによる分離の必要をなくす、一般式ＩＩＩの出発原料の位置選択的９−Ｎプリングリコシル化。
【００１１】
発明の詳細な説明
プリンLNA類似体の合成を改善しようとして、位置選択的９−Ｎプリングリコシル化および分子内閉環の新規戦略を開発した。この新規戦略を用いて、１，２−ジ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−Ｄ−リボフラノースからわずか二段階で（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルメチル−３−（グアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２．２．１］ヘプタンを高収率で合成した。１，２−ジ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−Ｄ−リボフラノースの位置選択的グリコシル化を、２−アミノ−６−クロロプリンを複素環塩基として用い、「ワンポット」フォルブリューゲン（Vorbrueggen）グリコシル化反応で行い、９−Ｎプリン核酸異性体を唯一の生成物として得た。グリコシル化反応が位置選択的に進んで９−Ｎプリン核酸異性体を生じ、続く６−クロロプリンの求核置換を、Ｃ−分枝炭水化物の求核剤による閉環と共にワンポット反応で行うことができるという事実から、この新規戦略は既知の戦略よりも簡便で、はるかに費用効果が高くなる。この新規合成戦略はさらに、６位に様々な置換基を含むプリンLNA類似体ならびにオリゴマー形成に適したプリンLNAモノマーの簡便な入手法を提供する。
【００１２】
本発明は、前述の定義のとおりの一般式ＩのプリンLNA類似体：
【化１１】
0004413493.tif 000006
の合成法に関する。
【００１３】
本発明の方法は、前述の定義のとおりの一般式ＩＩの主要中間体：
【化１２】
0004413493.tif 000007
の求核試薬による処理を含む。
【００１４】
本発明の好ましい態様において、求核試薬は選択的に置換されたヒドロキシ（Ｃ１〜６−アルカン）、選択的に置換されたフェノール、選択的に置換されたヒドロキシ（Ｃ１〜６−アルキル）ベンゼン、ＮＨ３、選択的に置換されたアミノ（Ｃ１〜６−アルカン）、選択的に置換されたアニリン、選択的に置換されたアミノ（Ｃ１〜６−アルキル）ベンゼン、選択的に置換されたチオ（Ｃ１〜６−アルカン）、選択的に置換されたベンゼンチオール、選択的に置換されたチオ（Ｃ１〜６−アルキル）ベンゼン、Ｍ−Ｋ−ＯＨ、Ｍ−Ｋ−ＮＨ２およびＭ−Ｋ−ＳＨ（例えば、Ｍが蛍光体（フロオレセイン、ピレン、アントラセンなど）、ビオチン、アントラキノニルなどであり、Ｋが下記のものなどの−（ＣＨ２）ｎ−である場合）から選択される。現在、３−ヒドロキシプロピオニトリル、ＮＨ３、３−メルカプトプロピオニトリル、ベンジルアルコール、２−ヒドロキシ−エチルベンゼン、２−ヒドロキシ−１−ニトロエタン、およびベンジルアミン、特に３−ヒドロキシプロピオニトリルが最も適当な求核剤であると考えられる。
【００１５】
化合物ＩＩと求核試薬との間のモル比は典型的には1：2から1：10の範囲、好ましくは1：2〜1：8、より好ましくは1：2〜1：6である。
【００１６】
本発明に基づき、当業者には、求核試薬は過剰に用いると、最初に生じた置換生成物のさらなる脱離反応を起こして、６−オキソおよび６−チオプリンLNA類似体を生じうるものがあることが明らかであると思われる。これらの求核試薬の特徴は、これらが３−ヒドロキシプロピオニトリル、３−メルカプトプロピオニトリル、２−ヒドロキシ−エチルベンゼン、２−ヒドロキシ−１−ニトロエタンなどの、β−脱離反応に関与しうる酸性アルキル−水素を含むことである。
【００１７】
化合物ＩＩの求核試薬による処理は、典型的には-20℃から60℃などの-30℃から100℃で実施する。
【００１８】
化合物ＩＩの求核試薬による処理は、ＮａＨ、ＬｉＨ、リチウムジイソプロピルアミド、およびリチウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの非求核性強塩基存在下で実施することができる。非求核性強塩基の存在によって、所望の求核剤が生じることになる。本発明の好ましい態様において、処理はＮａＨまたはＬｉＨ、好ましくはＮａＨ存在下で実施する。
【００１９】
当業者であれば、化合物ＩＩの求核試薬による処理は、テトラヒドロフラン、トルエン、キシレン、ベンゼン、ジエチルエーテル、アセトニトリル、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ジクロロメタン、および１，２−ジクロロエタンなどの溶媒、好ましくはテトラヒドロフラン存在下で典型的に実施することが明らかであると思われる。
【００２０】
本発明の好ましい態様において、置換基Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５はそれぞれ−Ｏ−を表す。置換基Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５の一つまたは複数が−ＮＲ１３−を表す態様において、Ｒ１３は好ましくは水素またはメチル、最も好ましくは水素を表す。
【００２１】
本発明の好ましい態様において、ＷはＯＨ、ＳＨまたはＮＨ２、好ましくはＮＨ２を表す。
【００２２】
本発明の好ましい態様において、置換基Ｊ１およびＪ２は一緒になってオキソまたはチオノ、好ましくはオキソを表し、かつＪ３は水素を表す。
【００２３】
本発明のさらなる態様において、Ｊ１はＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１、またはＳＲ１２を表し、かつＪ２はＪ３と一緒になって二重結合を表す。
【００２４】
本発明の好ましい態様において、Ｘはクロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、ＣＮ、メタンスルホニル、α−トルエンスルホニル、好ましくはクロロから選択される。
【００２５】
ｎは１、２または３などの１から３の整数であり、好ましくはｎは１である。
【００２６】
好ましくは、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９，Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２はそれぞれ独立に水素、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、オルト−メチルベンジル、メタ−メチルベンジル、およびパラ−メチルベンジル、２−クロロベンジル、４−フェニルベンジル、２−シアノエチル、ならびに「活性／官能性」基から選択され、ただしＭはソラレン、臭化エチジウム、アクリジン、アントラキノン、ビオチン、ローダミンまたはフルオレセインを示し、Ｋはポリエチレングリコール、ポリメチレンなどを示す。
【００２７】
本発明の一つの態様において、Ｋは一重結合を示し、該基の「活性／官能性」部分がプリン環に直接結合する。
【００２８】
本発明の好ましい態様において、置換基Ｒ５およびＲ７はそれぞれ独立にメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、エタンスルホニル、２，２，２−トリフルオロエタンスルホニル、プロパンスルホニル、イソ−プロパンスルホニル、ブタンスルホニル、ノナフルオロブタンスルホニル、ペンタンスルホニル、シクロペンタンスルホニル、ヘキサンスルホニル、シクロヘキサンスルホニル、α−トルエンスルホニル、２−クロロ−α−トルエンスルホニル、オルト−トルエンスルホニル、メタ−トルエンスルホニル、パラ−トルエンスルホニル、ベンゼンスルホニル、オルト−ブロモベンゼンスルホニル、メタ−ブロモベンゼンスルホニル、パラ−ブロモベンゼンスルホニル、オルト−ニトロベンゼンスルホニル、メタ−ニトロベンゼンスルホニル、パラ−ニトロベンゼンスルホニル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルヘキシルイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、トリベンジルシリル、トリ−パラ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル、トリス（トリメチルシリル）シリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブトキシジフェニルシリル、ベンジル、オルト−メチルベンジル、メタ−メチルベンジル、パラ−メチルベンジル、２−クロロベンジルおよび４−フェニルベンジルを表す。
【００２９】
本発明のさらなる態様において、Ｒ５およびＲ７はメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、エタンスルホニル、２，２，２−トリフルオロエタンスルホニル、ブタンスルホニル、ノナフルオロブタンスルホニル、α−トルエンスルホニル、パラ−トルエンスルホニル、ベンゼンスルホニル、パラ−ブロモベンゼンスルホニル、パラ−ニトロベンゼンスルホニル、トリメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリルおよびｔｅｒｔ−ブトキシジフェニルシリル、好ましくはメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、パラ−トルエンスルホニルおよびパラ−ブロモベンゼンスルホニル、より好ましくはメタンスルホニル、およびパラ−トルエンスルホニル、さらにより好ましくはメタンスルホニルを表す。
【００３０】
本発明の特に好ましい態様において、Ｒ５およびＲ７は同じで、メタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、エタンスルホニル、２，２，２−トリフルオロエタンスルホニル、ブタンスルホニル、ノナフルオロブタンスルホニル、α−トルエンスルホニル、パラ−トルエンスルホニル、ベンゼンスルホニル、パラ−ブロモベンゼンスルホニル、およびパラ−ニトロベンゼンスルホニル、好ましくはメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニル、パラ−トルエンスルホニルおよびパラ−ブロモベンゼンスルホニル、より好ましくはメタンスルホニル、およびパラ−トルエンスルホニル、さらにより好ましくはメタンスルホニルから選択される。
【００３１】
Ｒ６のいくつかの好ましい態様は、ベンジル、オルト−メチルベンジル、メタ−メチルベンジル、パラ−メチルベンジル、２−クロロベンジル、４−フェニルベンジル、テトラヒドロピラン−２−イル、ベンゾイル、フェニル、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルヘキシル、イソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、トリベンジルシリル、トリ−パラ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル、トリス（トリメチルシリル）シリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブトキシジフェニルシリルを含み、その中でもベンジルが好ましい。
【００３２】
本発明の一つの態様において、Ｒ５およびＲ６は一緒になってジ−ｔｅｒｔ−ブチルシリレン、１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピル）ジシロキサニリデンまたは１，３−（１，１，３，３−テトラ−ｔｅｒｔ−ブトキシ）ジシロキサニリデンを表す。
【００３３】
本発明の好ましい態様において、Ｒ８は水素、選択的に置換されたアルキルカルボニル（例えば、アセチルおよびトリフルオロアセチル）、選択的に置換されたアリールカルボニル（例えば、ベンゾイルおよびｍ−トリフルオロメチルベンゾイル）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、および９−フルオレニルメチルオキシカルボニルから選択され、ただしＡ４がＮＲ１３−を表す場合、Ｒ８はトリフルオロアセチルおよび９−フルオレニルメチルオキシカルボニルから選択される。
【００３４】
本発明の好ましい態様において、Ｒ８はアセチル、ベンゾイルおよびｍ−トリフルオロメチルベンゾイル、好ましくはアセチルから選択される。
【００３５】
本発明の一つの態様において、Ｒ６はベンジルを表し、Ｒ５およびＲ７はいずれもメタンスルホニルを表し、かつＲ８はアセチルを表す。
【００３６】
本発明の特に好ましい態様において、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５はすべて酸素を表し、Ｘはクロロであり、ＷはＮＨ２であり、置換基Ｒ５およびＲ７はいずれもメタンスルホニルであり、Ｒ６はベンジルを表し、Ｒ８はアセチルを表し、かつｎは１である。
【００３７】
本発明は、前述の定義のとおりの一般式Ｉの化合物にも関し、ただしＲ１は水素ではなく、かつＲ２はイソブチリルではないか、または逆にＡ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４がすべて酸素を表す場合、Ｒ５はメタンスルホニルであり、Ｒ６はベンジルであり、かつｎは１である。
【００３８】
本発明はさらに、一般式ＩＩの主要中間体の合成法であって、
グリコシル化反応における、下記の一般式ＩＩＩの出発原料：
【化１３】
0004413493.tif 000008
（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびｎが前述の定義のとおりであり；かつ
Ｒ１４がアセチルオキシ、メトキシ、エトキシ、塩化物、フッ化物、臭化物もしくはヨウ化物、またはＳＣ６Ｈ５などの、選択的に置換された（Ｃ１〜６−アルキル）カルボニルオキシ、選択的に置換されたＣ１〜６−アルコキシ、ハロゲン、選択的に置換されたアリールチオ、選択的に置換されたＣ１〜６−アルキルチオ、および選択的に置換されたアリールオキシから選択される）
の下記の一般式ＩＶのプリン：
【化１４】
0004413493.tif 000009
（式中、ＸおよびＷが前述の定義のとおりである）
とのカップリングの段階を含む方法に関する。
【００３９】
本発明の好ましい態様において、グリコシル化反応は出発原料ＩＩＩのシリル化プリンとのルイス酸存在下での反応を含むフォルブリューゲングリコシル化法に従って実施する。
【００４０】
本発明の一つの態様において、グリコシル化反応は出発原料ＩＩＩのプリンとのカップリングを含む「ワンポット」フォルブリューゲングリコシル化反応として実施する。反応はＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ）および１，１，１，３，３，３−ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）などのシリル化剤、ならびに／または塩化スズ（ＩＶ）およびトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（ＴＭＳ−トリフレート）などのシリル化剤存在下で促進することができる。
【００４１】
本発明の好ましい態様において、シリル化剤はＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドであり、ルイス酸はトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートである。
【００４２】
本発明のさらに好ましい態様において、Ｒ８はアセチル、ベンゾイルおよびｍ−トリフルオロメチルベンゾイル、好ましくはアセチルから選択され、Ｒ１４はアセチルオキシ、メトキシ、エトキシ、塩化物、フッ化物、臭化物、ヨウ化物、およびＳＣ６Ｈ５、好ましくはアセチルオキシおよびメトキシ、より好ましくはアセチルオキシから選択される。
【００４３】
本発明の最も好ましい態様において、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４およびＡ５はすべて酸素を表し、Ｒ６はベンジルを表し、Ｒ５およびＲ７はいずれもメタンスルホニルを表し、Ｒ８はアセチルを表し、かつＲ１４はアセチルオキシを表す。
【００４４】
本発明はさらに、前述の定義のとおりの一般式ＩＩの化合物に関する。
【００４５】
プリンLNA類似体の合成
本発明の方法を用いるプリンLNA合成の例として、１，２−ジ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−Ｄ−リボフラノース（３）を出発原料に用いて（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン（６）を合成した。１，２−ジクロロエタン中、シリル化剤としてのＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ）およびトリメチルシリルトリフレートを用いた、３の２−アミノ−６−クロロプリンによる「ワンポット」グリコシル化から４を得た。化合物４をそれ以上精製せずに次の段階に用いた。「ワンポット」の３−ヒドロキシプロピオニトリル（4.5当量）を用いた６−クロロプリンの求核置換および続く求核剤による閉環から５を得た。５を無水イソ酪酸と共にＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン存在下で終夜加熱することにより、２−アミノプリン基のイソブチリル保護を行い、水処理後に６を定量的収率で得た。安息香酸エステルによる置換、脱ベンゾイルおよび脱ベンジルにより、９を３段階で得た。ヌクレオシドホスホルアミダイト１１を、コーシュキンら（Tetrahedron、1998、54、3607〜3630）に従って得た。
【００４６】
定義
本文脈において、「Ｃ１〜１２−アルキル」なる用語は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、シクロブチル、ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、およびドデシルなどの、1から12個の炭素原子を有する直鎖、環状または分枝炭化水素基を意味する。同様に、「Ｃ１〜６−アルキル」なる用語は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル、特にメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルおよびシクロヘキシルなどの、1個から6個の炭素原子を有する直鎖、環状または分枝炭化水素基を意味する。
【００４７】
同様に、「Ｃ２〜１２−アルケニル」なる用語は、2個から12個の炭素原子を有し、一つの不飽和結合を含む直鎖、環状または分枝炭化水素基を意味する。アルケニル基の例はビニル、アリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ドデカエニルである。
【００４８】
同様に、「Ｃ２〜１２−アルキニル」なる用語は、2個から12個の炭素原子を有し、一つの三重結合を含む直鎖または分枝炭化水素基を意味する。その例はエチニル、プロピニル、ブチニル、オクチニル、およびドデカニルである。
【００４９】
本文脈において、すなわち「アルキル」、「アルケニル」、および「アルキニル」なる用語に関連して、「選択的に置換された」なる用語は、該基が一回または複数回、好ましくは1〜3回、ヒドロキシル、Ｃ１〜６−アルコキシ、カルボキシル、Ｃ１〜６−アルコキシカルボニル、Ｃ１〜６−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリール、アミノ、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノカルボニル、アミノ−Ｃ１〜６−アルキル−アミノカルボニル、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノ−Ｃ１〜６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ１〜６−アルキルカルボニルアミノ、シアノ、カルバミド、ハロゲンから選択される一つまたは複数の基で置換されていてもよく、ただしアリールおよびヘテロアリールは1〜5回、好ましくは1〜3回、Ｃ１〜４−アルキル、Ｃ１〜４−アルコキシ、ニトロ、シアノ、アミノまたはハロゲンで置換されていてもよいことを意味する。特に好ましい例は、ヒドロキシル、Ｃ１〜６−アルコキシ、カルボキシル、アリール、ヘテロアリール、アミノ、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノ、およびハロゲンで、ただしアリールおよびヘテロアリールは1〜3回、Ｃ１〜４−アルキル、Ｃ１〜４−アルコキシ、ニトロ、シアノ、アミノまたはハロゲンで置換されていてもよい。アリールおよびヘテロアリールは、「選択的に置換されたアリールおよびヘテロアリール」について以下に特に記載されているとおりに置換されていてもよい。
【００５０】
本文脈において、「アリール」なる用語は、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、アントラシル、フェナントラシル、ピレニル、ベンゾピレニル、フルオレニルおよびキサンテニルなどの完全または部分芳香族炭素環または環構造を意味し、その中でもフェニルが好ましい例である。
【００５１】
「ヘテロアリール」なる用語は、一つまたは複数の炭素原子がヘテロ原子、例えば、窒素（＝Ｎ−または−ＮＨ−）、硫黄、および／または酸素原子で置き換えられている、完全または部分芳香族炭素環または環構造を意味する。そのようなヘテロアリール基の例は、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピペリジニル、クマリル、フリル、キノリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾジアゾリル、ベンゾオキソゾリル、フタラジニル、フタラニル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソキノリル、アクリジニル、カルバゾリル、ジベンズアゼピニル、インドリル、ベンゾピラゾリル、フェノキサゾニルである。
【００５２】
本文脈において、すなわち「アリール」および「ヘテロアリール」なる用語に関連して、「選択的に置換された」なる用語は、該基が一回または複数回、好ましくは1〜5回、特に1〜3回、ヒドロキシル（エノール系に存在する場合、互変異性ケト型で表されることもある）、Ｃ１〜６−アルキル、Ｃ１〜６−アルコキシ、オキソ（互変異性エノール型で表されることもある）、カルボキシル、Ｃ１〜６−アルコキシカルボニル、Ｃ１〜６−アルキルカルボニル、ホルミル、アリール、アリールオキシ、アリールオキシカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリール、アミノ、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノ、カルバモイル、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノカルボニル、アミノ−Ｃ１〜６−アルキル−アミノカルボニル、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノ−Ｃ１〜６−アルキル−アミノカルボニル、Ｃ１〜６−アルキルカルボニルアミノ、シアノ、グアニジノ、カルバミド、Ｃ１〜６−アルカノイルオキシ、スルホノ、Ｃ１〜６−アルキルスルホニルオキシ、ニトロ、スルファニル、ジハロゲン−Ｃ１〜４−アルキル、トリハロゲン−Ｃ１〜４−アルキル、ハロゲンから選択される一つまたは複数の基で置換されていてもよく、ただしアリールおよびヘテロアリールが表している置換基は1〜3回、Ｃ１〜４−アルキル、Ｃ１〜４−アルコキシ、ニトロ、シアノ、アミノまたはハロゲンで置換されていてもよいことを意味する。好ましい例は、ヒドロキシル、Ｃ１〜６−アルキル、Ｃ１〜６−アルコキシ、カルボキシル、Ｃ１〜６−アルコキシカルボニル、Ｃ１〜６−アルキルカルボニル、アリール、アミノ、モノおよびジ（Ｃ１〜６−アルキル）アミノ、およびハロゲンで、ただしアリールは1〜3回、Ｃ１〜４−アルキル、Ｃ１〜４−アルコキシ、ニトロ、シアノ、アミノまたはハロゲンで置換されていてもよい。
【００５３】
本文脈において、「トリ（アルキル／アリール）シリル」なる用語は、トリメチルシリル、アリルジメチルシリル、ジメチルフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、イソプロピルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルヘキシルイソプロピルシリル、トリベンジルシリル、トリ−パラ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル、トリス（トリメチルシリル）シリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブトキシジフェンシリルから選択される、0〜3個のアルキル基および／または0〜3個のアリール基で置換されたシリル基を意味し、ただしアルキル基およびアリール基の総数は3である。
【００５４】
本文脈において、「ジアルキルジシロキサニリデン」なる用語は、１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピル）ジシロキサニリデンおよび１，３−（１，１，３，３−テトラ−ｔｅｒｔ−ブトキシ）ジシロキサニリデンから選択される、4個のアルキル基で置換されたシロキサンを意味する。
【００５５】
「ハロゲン」にはフルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードが含まれる。
【００５６】
本明細書において用いられる場合、「DNA挿入基」なる用語は、DNAらせんまたはRNAらせん、二重鎖または三重鎖の中に挿入しうる基を意味する。DNA挿入基の官能性部分の例は、アクリジン、アントラセン、アントラキノンなどのキノン、インドール、キノリン、イソキノリン、ジヒドロキノリン、アントラサイクリン、テトラサイクリン、メチレンブルー、アントラサイクリノン、ソラレン、クマリン、エチジウムハロゲン化物、ダイネミシン、１，１０−フェナントロリン−銅などの金属錯体、カルケアミシンなどのトリス（４，７−ジフェニル−１，１０−フェナントロリン）ルテニウム−コバルト−エンジイン、ポルフィリン、ジスタマイシン、ネトロプシン、ビオロゲン、ダウノマイシンである。特に興味深い例は、アクリジン、アントラキノンなどのキノン、メチレンブルー、ソラレン、クマリン、およびエチジウムハロゲン化物である。
【００５７】
本文脈において、「光化学活性基」なる用語は、光照射によって化学反応を起こすことができる化合物を意味する。その官能基の例は、キノン、特に６−メチル−１，４−ナフトキノン、アントラキノン、ナフトキノン、および１，４−ジメチル−アントラキノン、ジアジリン、芳香族アジド、ベンゾフェノン、ソラレン、ジアゾ化合物、ならびにジアジリノ化合物である。
【００５８】
本文脈において、「熱化学反応性基」は、他の基と熱化学的に誘導された共有結合形成を行うことができる官能基と定義される。官能性部分熱化学反応性基の例は、カルボン酸、活性エステルなどのカルボン酸エステル、酸フッ化物、酸塩化物、酸臭化物、および酸ヨウ化物などのカルボン酸ハロゲン化物、カルボン酸アジド、カルボン酸ヒドラジド、スルホン酸、スルホン酸エステル、スルホン酸ハロゲン化物、セミカルバジド、チオセミカルバジド、アルデヒド、ケトン、一級アルコール、二級アルコール、三級アルコール、フェノール、ハロゲン化アルキル、チオール、ジスルフィド、一級アミン、二級アミン、三級アミン、ヒドラジン、エポキシド、マレイミド、ならびにボロン酸誘導体である。
【００５９】
本文脈において、「キレート基」なる用語は、複数の結合部位を含み、同時に複数の結合部位を通じて他の分子、原子またはイオンと高頻度で結合する分子を意味する。キレート基の官能性部分の例は、イミノ二酢酸、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、アミノホスホン酸などである。
【００６０】
本文脈において、「レポーター基」なる用語は、それ自体で、または検出系の一部として検出可能な基を意味する。レポーター基の官能性部分の例は、ビオチン、ジゴキシゲニン、蛍光基（特定の波長の電磁放射線、例えば光線またはX線を吸収することができ、続いて吸収したエネルギーをより長い波長の放射線として再吸収する基；例はダンシル（５−ジメチルアミノ）−１−ナフタレンスルホニル）、ドキシル（ＤＯＸＹＬ）（Ｎ−オキシル−４，４−ジメチルオキサゾリジン）、プロキシル（ＰＲＯＸＹＬ）（Ｎ−オキシル−２，２，５，５−テトラメチルピロリジン）、テンポ（ＴＥＭＰＯ）（Ｎ−オキシル−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン）、ジニトロフェニル、アクリジン、クマリン、Ｃｙ３およびＣｙ５（Biological Detection Systems, Inc.の商標）、エリトロシン、クマル酸、ウンベリフェロン、テキサスレッド、ローダミン、テトラメチルローダミン、Ｒｏｘ、７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１−ジアゾール（ＮＢＤ）、ピレン、フルオレセイン、ユーロピウム、ルテニウム、サマリウム、ならびに他の希土類金属）、放射性同位体標識、化学発光標識（化学反応中の光の放出によって検出可能な標識）、スピン標識（電子スピン共鳴分光法の使用によって検出可能な生体分子に結合されたフリーラジカル（例えば、置換有機窒素酸化物）または他の常磁性プローブ（例えば、Ｃｕ２＋、Ｍｇ２＋））、酵素（ペルオキシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、およびグルコースオキシダーゼなど）、抗原、抗体、ハプテン（ペプチドおよびステロイドホルモンなどの、抗体と結合することができるが、それ自体では免疫応答を開始することができない基）、脂肪酸残基、ステロイド部分（コレステリル）、ビタミンA、ビタミンD、ビタミンE、特定の受容体に対する葉酸ペプチド、エンドサイトースを仲介する基、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ブラジキニン、および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）などの細胞膜透過のための担体系である。特に興味深い例は、ビオチン、フルオレセイン、テキサスレッド、ローダミン、ジニトロフェニル、ジゴキシゲニン、ルテニウム、ユーロピウム、Ｃｙ５、Ｃｙ３などである。
【００６１】
本文脈において、「配位子」とは結合するものを意味する。配位子は、芳香族基（ベンゼン、ピリジン、ナフタレン、アントラセン、およびフェナントレンなど）、芳香族複素環基（チオフェン、フラン、テトラヒドロフラン、ピリジン、ジオキサン、およびピリミジンなど）、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸ハロゲン化物、カルボン酸アジド、カルボン酸ヒドラジド、スルホン酸、スルホン酸エステル、スルホン酸ハロゲン化物、セミカルバジド、チオセミカルバジド、アルデヒド、ケトン、一級アルコール、二級アルコール、三級アルコール、フェノール、ハロゲン化アルキル、チオール、ジスルフィド、一級アミン、二級アミン、三級アミン、ヒドラジン、エポキシド、マレイミド、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子などの一つまたは複数のヘテロ原子が中間または末端に選択的に存在し、芳香族または一／多不飽和炭化水素、ポリエチレングリコールなどのポリオキシエチレン、ポリ−β−アラニン、ポリグリシン、ポリリシン、ペプチドなどのオリゴ／ポリアミド、オリゴ／多糖、オリゴ／ポリホスフェート、毒素、抗生物質、細胞毒、ならびにステロイドを選択的に含むＣ１〜Ｃ２０アルキル基などの官能基を含んでいてもよく、また「親和性配位子」、すなわち特定の蛋白質、抗体、多糖およびオリゴ糖、ならびに他の生体分子上の部位に特異的な親和性を有する官能基または生体分子も含んでいてもよい。
【００６２】
本文脈において、「スペーサー」なる用語は、熱化学的および光化学的に不活性の、距離を作るための基を意味し、前述のとおり定義された型の2つまたはそれ以上の異なる部分を連結するために用いられる。スペーサーは、疎水性、親水性、分子の柔軟性および長さを含む、様々な特徴に基づいて選択される（例えば、ハーマンソン（Hermanson）ら、「固定化親和性配位子法（Immobilised Affinity Ligand Techniques）」、Academic Press、カリフォルニア州サンディエゴ（1992）、p.137〜ff参照）。一般に、スペーサーの長さは約400Å以下で、適用によっては100Å未満であることが好ましいこともある。したがって、スペーサーは、酸素原子、窒素原子、および／または硫黄原子などの一つまたは複数のヘテロ原子が中間または末端に選択的に存在する、炭素原子の鎖を含む。したがって、スペーサーＫは一つまたは複数のアミド、エステル、アミノ、エーテル、および／またはチオエーテル官能基、ならびに選択的に芳香族または一／多不飽和炭化水素、ポリエチレングリコールなどのポリオキシエチレン、ポリ−β−アラニン、ポリグリシン、ポリリシン、および一般にはペプチドなどのオリゴ／ポリアミド、オリゴ糖、オリゴ／ポリホスフェートを含んでいてもよい。さらに、スペーサーはその組み合わせ単位からなることもある。特に興味深い態様において、スペーサーは化学的に切断可能な基を含む。そのような化学的に切断可能な基の例には、還元的条件下で切断可能なジスルフィド基、ペプチダーゼにより切断可能なペプチド断片、または酸化的条件下で切断可能なセレン化物などが含まれる。
【００６３】
本文脈において、「ヌクレオシド」なる用語は、複素環塩基の配糖体を意味する。「ヌクレオシド」なる用語は広く用いられ、非天然ヌクレオシド、天然ヌクレオシド、ならびに他のヌクレオシド類似体が含まれる。ヌクレオシドの例は、リボース部分を含むリボヌクレオシドならびにデオキシリボース部分を含むデオキシリボヌクレオシドである。そのようなヌクレオシドの塩基に関して、これは例えば、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルなどの任意の天然の塩基であってもよく、同様にその任意の修飾変種または任意の可能な非天然の塩基であってもよいことが理解されるべきである。
【００６４】
以下の実施例は本発明を例示するために行われたものである。
【００６５】
実施例
実施例１
３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホンオキシメチル−５−メタンスルホニル−１，２−Ｏ−イソプロピリデン−β−Ｄ−リボフラノース（２）
３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−ヒドロキシメチル−１，２−Ｏ−イソプロピリデン−  −Ｄ−リボフラノース（１、11.1g、40mmol）（ユーセフィエ（Youssefyeh）R.D.；ベルハイデン（Verheyden）J.P.H.；モファット（Moffatt）J.G.、J. Org. Chem. 1979、44、1301）の無水ピリジン（30mL）溶液を氷浴中で冷却した。次いで、塩化メタンスルホニル（8.3mL、108mmol）を撹拌しながら加えた。混合物を室温に戻し、1時間撹拌した。エーテル（200mL）を加え、溶液を水（3×200mL）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮して、化合物（２）を淡黄色固体で得た（16.4g、98％）。
【００６６】
実施例２
１，２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ（メタンスルホニルオキシメチル）−５−Ｏ−メタンスルホニルオキシメチル−）−β−Ｄ−リボフラノース（３）
１，２−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルオキシメチル−５−Ｏ−メタンスルホニルオキシメチル−β−Ｄ−リボフラノース（２、20g、43mmol）を酢酸（175ml）に溶解し、無水酢酸（28ml）を加え、最後に濃硫酸（320μl）を加える。溶液を終夜撹拌する。次いで、溶液を水浴温度35℃で半量まで蒸発させる。次いで、水（300ml）を加える。得られた乳濁液をエーテル（150ml）で3回とＤＣＭで二回抽出する（この時点で乳濁液が生成する）。有機相を合わせ、水および飽和ＨＣＯ３−で二回洗浄する（激しいＣＯ２放出）。有機相をシロップ状になるまで蒸発させ、ＤＣＭ（200ml）に再度溶解し、ＤＣＭおよび飽和ＨＣＯ３−（150ml）の二相系で激しく振盪することにより、残留無水酢酸を消滅させる。水相が酸性に変わる場合は、追加のＨＣＯ３−（固体）を加えてもよい。3時間後、気体の発生はなく、水相はまだ塩基性（pH＝8）で、相を分離して水相をＤＣＭ（2×100ml）で二回抽出する。有機相を集め、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ＤＣＭを蒸発させて、粘稠シロップを得る。α／β比はHPLCで見ることができるが、出発原料と比べてRf（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝5：95）に実際の相違はない。TLCを20％硫酸＋熱で展開する。
【００６７】
この生成物をそれ以上精製せずに用いる。
【００６８】
実施例３
１−（２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルオキシメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−アミノ−６−クロロプリン（４）
１，２−ジクロロエタン（シーブスで乾燥、450ml）中、（３）（30g、58.8mmol）および２−アミノ−６−クロロプリン（12g、70mmol）のスラリーを撹拌したＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（29.6g、35ml）を加え、混合物を40分間還流して均質な溶液を得た。次いで、混合物の加熱を止め、トリメチルシリルトリフレート（22ml、118mmol）を滴加した。反応混合物をさらに2時間還流した。反応混合物を室温まで冷却し、重炭酸塩飽和水溶液（400ml）を加えた。スラリーを15分間撹拌し、氷酢酸を用いてpHを7〜8に調節し、混合物をクロロホルムで抽出した。水相をＥｔＯＡｃおよびクロロホルムで抽出して、有機相を合わせた。有機相を食塩水（2×250ml）および重炭酸塩（2×250ml）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、化合物（４）を帯黄色の泡で得、これは減圧乾燥中に膨張する。
収量：35.4g、97％
【００６９】
実施例４
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルオキシメチル−３−（グアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（５）
水素化ナトリウム（14g、鉱油中60％懸濁液）の無水ＴＨＦ（250ml）懸濁液を撹拌し、３−ヒドロキシプロピオニトリル（22.6g、21.7ml）の無水ＴＨＦ（75ml）溶液を15分かけて加え、混合物を室温で30分間撹拌した。無水ＴＨＦ（300ml）に溶解した１−（２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルオキシメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−アミノ−６−クロロプリン（４）（35.4g、57mmol）を10分間で滴加し、反応混合物をHPLCで４から５への完全な変換が認められるまで、さらに30分間撹拌した。反応混合物に水（600ml）を加え、氷酢酸を用いてpHを7〜8に調節した。得られたスラリーを続いてＥｔＯＡｃ（4×300ml）で抽出して、有機相を合わせた。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。得られたオイルを続いてＭｅＯＨで処理し、激しく撹拌しながら還流するまで加熱してスラリーを得、これを熱ろ過して化合物（５）を淡黄色結晶で得た（16g）。最後に母液を蒸発させて、さらに8gを粗帯褐色固体で得た。
合計収率：90％
【００７０】
実施例５
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルオキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（６）
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルオキシメチル−３−（グアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（５）（16g、34.6mmol）をＤＭＦ（シーブス、200ml）に溶解し、無水イソ酪酸（3.5当量、20ml）をＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（0.2当量、0.84g）と共に加え、反応物を60℃で終夜撹拌する。反応混合物の体積は20％に減少し、これを飽和重炭酸塩水溶液（200ml）に注ぎ、混合物を30分間撹拌する。標的分子をＥｔＯＡｃ中に抽出し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発により除去して、化合物（６）を淡黄色の泡で得（19.9g）、これをそれ以上精製せずに次の段階で用いる。
【００７１】
実施例６
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−ベンゾイルオキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（７）
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルオキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（６）（実施例５から19.9g、約34mmol）をＤＭＦ（シーブスで乾燥、300ml）に溶解し、安息香酸ナトリウム（15g、104mmol、3当量）を触媒量の炭酸セシウムと共に加える。混合物を90℃に加熱し、終夜反応させる。溶液をろ過し、ろ液にＥｔＯＡｃを加えて、安息香酸ナトリウムを沈殿させる。混合物を再度ろ過し、洗浄（水、2×250ml）し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧濃縮して、化合物（７）をオイルで得、これをそれ以上精製せずに次の段階で用いる。
【００７２】
実施例７
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−ヒドロキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（８）
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−ベンゾイルオキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（７、8.2g、14.7mmol）をピリジン／エタノール（1：8、450ml）に溶解し、水酸化ナトリウム（2M、15.5ml）を加える。混合物を室温で30分間撹拌し、続いて酢酸（25ml）を用いて反応停止させる。反応混合物を減圧濃縮し、生成物を20％水性エタノールから結晶化し、ろ過し、乾燥して化合物（８）を得る（5.8g、87％）。
【００７３】
実施例８
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（９）
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−ヒドロキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（８）（5.8g、12.7mmol）をメタノール（50ml）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（10％、2g）をギ酸（3ml）と共に加えた。混合物を5時間還流し、室温まで冷却し、シリカゲルカラムを通してろ過した。カラムをメタノール（50ml）で洗浄し、全ろ液を減圧濃縮して、化合物（９）をガラス様固体で得た（4.55g、98％）。
【００７４】
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−１−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシメチル）−７−ヒドロキシ−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（１０）および（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−（２−シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィンオキシ）−１−（４，４’−ジメトキシトリチルオキシメチル）−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（１１）を、コーシュキンら（Tetrahedron 54（1998）3607〜3630）に従って合成する。
【００７５】
実施例９〜１２は代替実験法を例示する。
【００７６】
実施例９
１，２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ（メタンスルホニルオキシメチル）−５−Ｏ−メタンスルホニルオキシメチル−）−β−Ｄ−リボフラノース（３）
１，２−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルオキシメチル−５−Ｏ−メタンスルホニルオキシメチル−β−Ｄ−リボフラノース（23.0g、49.3mmol）を18℃、Ｎ２雰囲気下で酢酸（99％、82ml）に懸濁し、淡黄色懸濁液を得る。10分間撹拌後、物質はまだ溶解していない。その後、酢酸（99％、2ml）に溶解した硫酸（98％、247mg）を反応混合物に加える。１，２−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルオキシメチル−５−Ｏ−メタンスルホニルオキシメチル−β−Ｄ−リボフラノースの白色沈降物を伴う澄明な淡黄色溶液。続いて、無水酢酸を10分かけて加える（18℃、11.2ml）が、目に見える発熱反応は起こらない。反応混合物を室温、不活性雰囲気下で終夜放置する。基質が完全に変換された澄明な淡黄色溶液。水道水（80ml）を反応混合物に滴加し、これを次いで室温で15分間撹拌する。アセトニトリル（80ml）を黄色溶液に加え、これをさらに60分間撹拌した後、黄色反応混合物を分液漏斗に注ぐと良好に相分離する。下部の混濁した有機相（132ml）を分離し、生成物を含む上部の不透明な水相（150ml）をさらに25mlの塩化メチレンで抽出する。合わせた有機相(110ml）を水道水（50ml）で洗浄する。水相のpHは2〜3である。有機相をもう一度水道水（47ml）で抽出する。水相のpHは2〜3である。有機相を１Ｍ  Ｋ２ＳＯ４（50ml）で二回洗浄する。得られた不透明有機相を丸底フラスコに移し、新鮮１Ｍ  Ｋ２ＳＯ４（25ml）と共に30分間撹拌した後、澄明な有機相を分液漏斗中で分離し、ＭｇＳＯ４（6g）で乾燥する。乾燥した溶液をＧ３フィルターでろ過し、フィルターを続いて塩化メチレン（50ml）で洗浄する。得られた淡黄色溶液を蒸発させる（Rotavapor、53℃、100〜20mbar）。得られた淡黄色オイルを徹底的に乾燥する（1mbar、50℃）。収量は27.6g（残留溶媒を含めて102％）で、TLC（ＣＨ２Ｃｌ２／ＴＢＭＥ／Ｅｔ３Ｎ 9.5：0.5：0.1）により純粋である；展開液：ＭｅＯＨ／硫酸1：1。
【００７７】
実施例１０
１−（２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルオキシメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−アミノ−６−クロロプリン（４）
１，２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ（メタンスルホニルオキシメチル）−５−Ｏ−メタンスルホニルオキシメチル）−β−Ｄ−リボフラノース（３）（25.7g、50.4mmol）をＭｅＣＮ（HPLC等級、242ml）中、緩やかに加熱することにより溶解し、Ｎ２パージし、機械的に撹拌中の、気泡チューブを備えた１ｌの三頚フラスコに移す。クロログアニン（9.33g）を加える。ＢＳＡ（24.5ml）を黄色懸濁液に5分かけて滴加する。発熱により温度が1℃上昇する。反応混合物を還流により加熱し（80℃）、その後懸濁液は澄明な黄色になる。Ｎ２雰囲気下、ＴＭＳ−ＯＴｆ（18.2ml）をシリンジから10分かけて滴加する。得られた澄明な赤橙色溶液を90分間還流する。反応混合物を水浴中で室温まで冷却し、その後溶液をＨ２Ｏ（2.5ml）／ＭｅＣＮ（8ml）で反応停止し、発熱により温度が上昇する：T＝20から24℃。水道水（96ml）を赤色溶液に加えるが、発熱による温度上昇はなく、pH＝0.63。pH＝8になるまで３Ｍ  ＮａＯＨを滴加する。反応混合物を水（100ml）およびＣＨ２Ｃｌ２（120ml）と共に振盪する。これらの相は乳化する傾向がある。相分離：上部の澄明な黄色水相および下部の黄色有機相。水相を塩化メチレン（100ml）で抽出する。合わせた有機相を１Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４（100ml）で洗浄する。黄色乳濁液をＧ３フィルターでろ過し、ろ過ケーク（過剰のクロログアニン）を塩化メチレン（20ml）で洗浄する。上部有機相の体積：400ml；下部水相の体積40ml、pH＝6〜7。水相を塩化メチレン（100ml）で洗浄する。有機相を１Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４（100ml）で洗浄する；相分離。有機相を合わせ、さらに１Ｍ  Ｋ２ＨＰＯ４（100ml）で洗浄する。相を分離して620mlの不透明な黄色溶液を得、これをＭｇＳＯ４（26g）で乾燥する。ろ過後、澄明な黄色溶液を蒸発させ（Rotavapor、53℃、100〜1mbar）て、黄色の泡を得る（28.7g、91％）。TLC：生成物のみ認められる。HPLC：純度97％。
【００７８】
注意：相変換：塩化メチレンの量が多いにも関わらず、有機相は黄色の相として上部にある。
【００７９】
実施例１１
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルオキシメチル−３−（グアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（５）
３−ヒドロキシプロピオニトリル（14.84g、新しく蒸留したもの）を１ｌの三頚フラスコ中、Ｎ２気流下、機械的に撹拌しながら、ＴＨＦ（HPLC等級、257ml）に溶解する。溶液を氷浴中で5℃未満に冷却した後、ＮａＨ（12.2g、51％）を10分かけて少量ずつ溶液中にばらまく；わずかに発熱性反応、ガス発生。帯灰色懸濁液を5〜10℃で30分間撹拌する。無水ＴＨＦ（81ml）に溶解した１−（２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−４−Ｃ−メタンスルホニルオキシメチル−５−Ｏ−メタンスルホニル−β−Ｄ−リボフラノシル）−２−アミノ−６−クロロプリン（４）（28.5g、46.0mmol）を反応混合物に30分かけて滴加して赤褐色の澄明溶液を得、これを次いで5℃で3時間撹拌する。イオン交換水（100ml）を25分かけて滴加（冷却しながら）する；わずかに発熱性反応、ガス発生。反応混合物のpHは13である。３Ｍ  ＨＣｌ（58ml）を用いてpHを7に調節する。混合物を分液漏斗に移す。相分離（水相が最下部）。水相をＴＨＦ（50ml）で抽出する。合わせた有機相をＮａＣｌ（100ml、25％）＋Ｋ２ＨＰＯ４（25ml、１Ｍ）で二回抽出する。pH（得られた水相）7。得られた有機相（440ml）を蒸発させてほぼ乾固させる。ＴＨＦ（250ml）に再度溶解し、再度蒸発させる。ＴＨＦ（50ml）を二回加え、蒸発乾固させる。残渣を塩化メチレン（146ml）に懸濁し、懸濁液をＧ３でろ過する。塩化メチレン（53ml）で洗浄する。得られた溶液を蒸発乾固させ、残渣を塩化メチレン（145ml）に再度溶解し、5mlのＣＨ２Ｃｌ２で三頚フラスコに移す。赤色溶液を激しく撹拌（300rpm）しながら、ＴＢＭＥ（163ml）を非常にゆっくり滴加する。ＭＴＢＥ（20ml）を加えた後、黄色結晶がフラスコ側面に沈殿する。結晶を以前のバッチからの種結晶と共に溶液中にかき落とす。90分かけてＭＴＢＥ（60ml）を加えると、沈殿が開始するため、溶液が不透明になる。80ml添加−軽い結晶の澄明な沈殿。溶液に再度種を加える。2.5時間後、ＭＴＢＥをすべて加え、溶液をさらに30分間撹拌する。溶液を5℃に冷却し、Ｇ３でろ過する。黄色のろ過ケークをＣＨ２Ｃｌ２／ＭＴＢＥ（1：4）（100ml）で洗浄し、吸引乾燥する。収率は90.7％である（HPLCを用いて純度89％）。
【００８０】
未精製生成物の再沈殿：ろ過ケーク（17.8g）を撹拌機を備えたフラスコ中、ＤＭＳＯ（50ml）に懸濁する。懸濁液を90℃（接触温度計）に加熱し、イオン交換水（150ml）を85〜90℃で撹拌しながら、30分かけてゆっくり滴加する。30ml添加後、フラスコの側面に物質の沈殿が観察され、60ml添加後、1滴加える毎に沈殿が生じる。最後の添加後、加熱器を止め、さらに40mlの水を加える。フラスコを撹拌し、20℃まで冷却する。50℃で種を加える。フラスコを氷浴中で5℃まで冷却し、生成物をＧ３フィルターでろ過する。水（20ml）およびＭＴＢＥ（30ml）で二回洗浄し、高温キャビネット内で乾燥する。収量は15.0g（66.7％）である（HPLCにより純度94％）。
【００８１】
実施例１２
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルオキシメチル−３−（２−Ｎ−イソブチリルグアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（６）
（１Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，７Ｓ）−７−ベンジルオキシ−１−メタンスルホニルオキシメチル−３−（グアニン−９−イル）−２，５−ジオキサビシクロ［２：２：１］ヘプタン（５）（14.0g、30.2mmol）をＮ２を用いてピリジン（70ml）に溶解する。ＤＭＡＰ（0.50g）を加える。続いて、無水イソ酪酸（16.70g）を加え、反応混合物を60℃で4時間加熱する（HPLCを用いて反応混合物中96％の生成物）。温かい反応混合物にイオン交換水（50ml）およびＣＨ２Ｃｌ２（50ml）を加え、溶液を60分間撹拌する（過剰の無水物を消失させるため）。ＣＨ２Ｃｌ２（20ml）を加え、分液漏斗を用いて相を分離する。水相（50ml）をＣＨ２Ｃｌ２（40ml）で抽出する。有機相を合わせ、イオン交換水（60ml）で洗浄する。飽和ＮａＣｌ（5ml）を用いて相分離を助ける。澄明な赤色有機相を蒸発させる（Rotavapor、50℃、200〜10mbar）。収量は赤色オイル35.2gである。このオイルは次の段階で直接用いることができる。
【００８２】
注意：残留ピリジンは、必要に応じて、トルエンとの共沸蒸留により除去することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明を用いたG-LNAの全合成を示す図である。
【図２】  本発明の新規戦略であって、グアニン−９−イルLNAを生成するための位置選択的９−Ｎプリングリコシル化反応と、続くワンポットのプリン環６−クロロの求核芳香族置換反応およびＣ−分枝炭水化物の求核剤による分子内閉環を含む戦略を示す図である。
【図１】
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【図２】
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