(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−フェニルアラニンエステルの鏡像異性体混合物を、プロテアーゼに接触させることを特徴とする、式（Ｉ）及び（ＩＩ）：
【化１】
0004553485.tif 000009
〔式中、Ａｌｋは炭素原子数１〜６の直鎖状または分枝状アルキル基を表す〕で示される鏡像体過剰率が８０％以上であるα−フェニルアラニンエステルの製造方法。
【請求項２】
“Ａｌｋ”がメチル基を表すことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
“Ａｌｋ”がエチル基を表すことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
鏡像体過剰率が８０％以上であるエステルがＳ配置を有しており、使用される酵素がプロテアーゼであることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
プロテアーゼが、バイオフィード、プロザイム、ズブチリシン、ズブチリシンＡ、トリプシン、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ由来のプロテアーゼ及びＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｅｕｓ由来のプロテアーゼから選択されることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
プロテアーゼが、アスペルギルスのプロテアーゼ即ちプロザイムもしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｅｕｓ由来のプロテアーゼ、またはズブチリシン、またはバイオフィードまたはトリプシンであることを特徴とする請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
プロテアーゼがプロザイムであることを特徴とする請求項４から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
鏡像体過剰率が９０％を上回る値であることを特徴とする請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
使用される酵素が未精製であるかまたは部分精製もしくは完全精製されていることを特徴とする請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
反応媒体が均質相であることを特徴とする請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
反応媒体が不均質相であることを特徴とする請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
酵素が反応媒体中で遊離していることを特徴とする請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
酵素が支持体に固定されていることを特徴とする請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
反応媒体が５〜１０の範囲のｐＨを有することを特徴とする請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
反応温度が４℃から７０℃の範囲であることを特徴とする請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
反応時間が１時間から１２０時間の範囲であることを特徴とする請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
反応時間が１０時間から６０時間の範囲であることを特徴とする請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
反応媒体が１種または複数の芳香族溶媒を含むことを特徴とする請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
溶媒がトルエンまたはモノクロロベンゼンであることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の式（Ｉ）のエステルのＳ形鏡像異性体を得るための完全精製または部分精製されたプロテアーゼ型酵素の使用。
【請求項２１】
請求項１に記載の式（Ｉ）のエステルのＳ形鏡像異性体を得るための、プロテアーゼであるプロザイムの使用。
【請求項２２】
反応スキーム：
【化２】
0004553485.tif 000010
によって示される式（Ｆ）の化合物の製造方法であって、
スキーム中の、
・Ｒ１はフェニル基を表し、Ｒ２はメチル基を表し；
・Ｗは酸素原子を表し；
・Ｍは酸素原子もしくはイオウ原子を表し；
・ｐは１の整数を表し；
・Ｒ３はメチルを表し：
・Ｒ４はフェニルであって、これらはＲ６から選択された１−３個の基で置換されていてもよく；
・Ｒ５は水素を表し：
・Ｒ６は：
−ハロゲン原子；
−炭素原子数１〜６のアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキルチオまたはアルキルスルホニル基；
−炭素原子数３〜６のシクロアルキル、ハロシクロアルキル、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルケニルチオ、アルキニルチオ基；
−ニトロまたはシアノ基；
−炭素原子数１〜６のアルキルもしくはアシル基または炭素原子数２〜６のアルコキシカルボニル基でモノ置換またはジ置換されていてもよいアミノ基；または、
−Ｒ７から選択された同じまたは異なる１〜３個の基で置換されていてもよいフェニル、フェノキシまたピリジルオキシ基を表し；
・Ｒ７は：
−フッ素、塩素、臭素、ヨウ素から選択されたハロゲン原子；
−炭素原子数１〜６のアルキル基；
−炭素原子数１〜６のアルコキシまたはアルキルチオ基；
−炭素原子数１〜６のハロアルコキシまたハロアルキルチオ基；または、
−ニトリルまたはニトロ基を表し；
・Ｒは、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜６のアルコキシ基、ベンジルオキシ基、アミノ、アルキルアミノもしくはジアルキルアミノ基、または、炭素原子数１〜６のアルキルアミノ基を表し；
・Ｘは、塩素、臭素及びヨウ素から選択されたハロゲン原子、または、スルフェート、アルキルスルホニルオキシもしくはアリールスルホニルオキシ基のような離脱基を表し；
・Ａｌｋは請求項１と同義であり、
スキーム中の、
−段階（ｉ）は請求項１から１９のいずれか一項に記載の式（Ｉ）及び（ＩＩ）のα−フェニルアラニンエステルの製造方法であり；
−段階（ａ）は従来の鹸化段階であり；
−段階（ｂ）は従来のエステル化反応であり、
−段階（ｃ）は塩基性媒体中で二硫化炭素を添加する当業者に公知の環化反応であり、
−段階（ｄ）は触媒の存在下で式Ｎ（Ｒ４Ｒ５）−ＮＨ２のアミンを添加する段階であり、
−最終段階（ｅ）は、式Ｒ３−Ｘの化合物の添加によって対応する−Ｓ−Ｒ３を含む化合物を生成し、次いで任意に従来技術によって酸化してイオウ原子を種々の酸化度に酸化させるかまたは式Ｒ３−ＯＨの化合物で処理して対応する−Ｏ−Ｒ３を含む化合物を得る段階を表すことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、化合物の製造に使用される光学活性合成中間体の新規な製造方法に関する。より特定的には本発明は、α−フェニルアラニン誘導体の鏡像異性的富化方法に関する。
【０００２】
（従来技術）
例えば医学及び農芸化学のような多くの分野で活性化合物は益々複雑になっており、１つまたは複数の非対称中心を含むものも極めて多い。これらの市販物質は大抵の場合にラセミ混合物の形態である。即ち、活性物質中に全ての形態の鏡像異性体及び／またはジアステレオ異性体が存在している。しかしながら極めて多くの場合、１つの光学活性形態だけは所望の活性を有しているが、残りの光学異性体は不活性であったり、もっと悪くすると所望の効果を妨害したり哺乳動物及び／または環境に危険を生じたりする。従って、所望の異性体だけが得られるような化学的または生化学的（例えば酵素的）合成方法の開発が極めて重要である。このような方法としては例えば非対称合成があり、また、出発物質が鏡像異性体の混合物であるときは、いわゆる鏡像異性的富化方法がある。
【０００３】
酵素触媒作用による鏡像異性的富化方法は文献で公知である。これらの文献としては例えば、Ｂ．Ｋａｐｔｅｉｎら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ａｓｙｍｅｔｒｙ，４（６），（１９９３），１１１３−１１１６）があり、この文献には、ブタの肝リパーゼによるエチルエステルの加水分解が記載されている。しかしながら方法の選択性は極めて悪い。即ち、生成物の鏡像体過剰率が十分でない。
【０００４】
国際特許公開ＷＯ−Ａ−９６／１２０３５は、高い鏡像体過剰率を有するカルボン酸エステルを製造するために酵素触媒作用を利用した方法を開示している。使用する触媒は、バクテリア、リパーゼ、プロテアーゼから選択される。この場合にも、比較的低い鏡像体過剰率が観察され、Ｓ形鏡像異性体の場合には特に低い鏡像体過剰率が観察される。米国特許ＵＳ５，５５２，３１８は、酵素を利用したＤＬ−ホモフェニルアラニンのエチルエステルの富化方法を記載しているが、観察された鏡像体過剰率に極めてばらつきがある。最後に、欧州特許出願ＥＰ１７８５５３は、α−キモトリプシンの作用によるアミノ酸の鏡像異性的富化方法を記載している
【０００５】
本発明の目的は、高い鏡像体過剰率を有する化合物を得るために酵素触媒作用を利用する鏡像異性的富化方法を提供することである。
【０００６】
本発明の目的は、酵素触媒作用を利用して鏡像異性的に実質的に純粋な化合物を製造する方法を提供することである。
【０００７】
本発明の別の目的は、酵素触媒作用を利用して鏡像異性体混合物から実質的に純粋なＳ形鏡像異性体または実質的に純粋なＲ形鏡像異性体を製造する方法を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、エステルの鏡像異性体混合物を出発材料とし酵素触媒作用を利用して鏡像異性体を富化する方法を提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的は、エステルの鏡像異性体混合物から鏡像異性的に実質的に純粋な化合物が高収率で得られるような酵素触媒作用を利用した鏡像異性的富化方法を提供することである。
【００１０】
これらのすべての目的は以下に記載の本発明方法によって全面的または部分的に達成され得ることがここに知見された。
【００１１】
（発明の概要）
本発明は、α−フェニルアラニンエステルの鏡像異性体混合物を未精製または部分精製もしくは完全精製された酵素から成る酵素触媒に接触させることを特徴とする、α−フェニルアラニンエステルの鏡像異性体の新規な富化方法を提供する。これらの酵素は遊離状態でまたは有機もしくは無機の支持体に吸収もしくは固定させた状態で当業者に公知の方法によって使用され得る。
【００１２】
本発明によって得られる鏡像異性的に実質的に純粋な化合物は治療または農業に有用なキラル活性物質を製造するための合成中間体として使用され得る。例えば、α−フェニルアラニンエステルの鏡像異性体は、欧州特許公開ＥＰ−Ａ−０６２９６１６に記載された幾つかの２−イミダゾリン−５−オン及び２−イミダゾリン−５−チオン殺真菌剤を製造するための中間体として使用される。
【００１３】
（詳細な説明）
従って本発明は、式（Ｉ）及び（ＩＩ）：
【００１４】
【化３】
0004553485.tif 000002
〔式中、Ａｌｋは、炭素原子数１−６の直鎖状または分枝状アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、イソ−プロピル、イソ−ブチル、イソ−ペンチル、イソ−ヘキシル、ｔｅｒｔｉｏ−ブチル、ｔｅｒｔｉｏ−ペンチル、ｔｅｒｔｉｏ−ヘキシル、ネオ−ペンチルまたはネオ−ヘキシルを表す〕で示される鏡像異性的に実質的に純粋なα−フェニルアラニンエステルの新規な製造方法であって、α−フェニルアラニンエステルの鏡像異性体混合物を、遊離形態または吸収もしくは固定された形態のＰＬＥ酵素（ブタ肝エステラーゼ）以外のリパーゼ、エステラーゼまたはプロテアーゼに接触させることを特徴とする方法に関する。
【００１５】
鏡像異性体混合物なる用語は、式（Ａ）：
【００１６】
【化４】
0004553485.tif 000003
〔式中、Ａｌｋは、式（Ｉ）及び（ＩＩ）と同義の炭素原子数１−６の直鎖状または分枝状アルキル基を表し、＊記号はエステルの非対称中心を表す〕で示されるα−フェニルアラニンエステルの式（Ｉ）のＳ形異性体と式（ＩＩ）のＲ形異性体とを等しい割合または等しくない割合で含む混合物を意味する。
【００１７】
本発明方法によって、Ｓ配置（式（Ｉ）のエステル）またはＲ配置（式（ＩＩ）のエステル）をもつ実質的に純粋な鏡像異性体が得られる。
【００１８】
“実質的に純粋な”という表現は、考察される鏡像異性体の鏡像体過剰率が８０％を上回る値、より特定的には９０％を上回る値であることを意味する。本発明方法に使用される幾つかの酵素はまた、１００％の鏡像体過剰率を達成し得る。この場合には、得られた鏡像異性体が純粋であり、他方の形態の鏡像異性体は検出されない。
【００１９】
鏡像体過剰率なる用語は、所望されない鏡像異性体に対する所望の鏡像異性体の割合を意味する。
【００２０】
この比は以下の等式：
【００２１】
【数１】
0004553485.tif 000004
〔式中、
％ｅ．ｅ．（Ｓ）はＳ形鏡像異性体の鏡像体過剰率を表し、
％ｅ．ｅ．（Ｒ）はＲ形鏡像異性体の鏡像体過剰率を表し、
〔Ｓ〕はＳ形異性体の濃度を表し、
〔Ｒ〕はＲ形異性体の濃度を表す〕によって計算される。
【００２２】
本発明方法では、酵素、特にリパーゼ、エステラーゼ及びプロテアーゼを使用する。
【００２３】
プロテアーゼを使用した場合には上記に定義の式（Ｉ）のＳ形鏡像異性体が得られる。リパーゼまたはエステラーゼを使用した場合には上記に定義の式（ＩＩ）のＲ形鏡像異性体が得られる。
【００２４】
本発明方法に好適な酵素は特に市場で入手可能な以下の酵素から選択される：
【００２５】
【表１】
0004553485.tif 000005
【００２６】
プロテアーゼとしては、アスペルギルス（ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）のプロテアーゼ（例えば、ＡｍａｎｏのプロザイムまたはＳｉｇｍａのプロテアーゼＰ４０３２（商標））、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒまたはＮｏｖｏのズブチリシン、Ｎｏｖｏのバイオフィード（Ｂｉｏｆｅｅｄ）及びトリプシンが好ましい。
【００２７】
リパーゼ及びエステラーゼとしては、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒのキラザイムＬ２、Ｌ５、Ｌ７及びＥ１のようなリパーゼが特に好ましい。
【００２８】
本発明方法には、鏡像異性体の２つの形態の各々にそれぞれ特異的なアスペルギルスのプロテアーゼまたはブタのリパーゼもしくはエステラーゼの使用が特に好ましい。
【００２９】
アスペルギルスのプロテアーゼは上記の定義の式（Ｉ）のＳ形異性体に特異的であり、そのうちでも本発明方法に特に好ましいプロテアーゼはＡｍａｎｏ社のプロザイムである。
【００３０】
ブタのリパーゼ及びエステラーゼは上記に定義の式（ＩＩ）のＲ形鏡像異性体に特異的である。
【００３１】
従って、本発明の鏡像異性体富化方法は上記に定義の式（Ａ）のエステル混合物を触媒量の酵素に接触させる処理から成る。上記に定義の式（Ｉ）のＳ形鏡像異性体が所望されるときは酵素をプロテアーゼから選択し、上記に定義の式（ＩＩ）のＲ形鏡像異性体を所望する場合には酵素をリパーゼまたはエステラーゼから選択する。
【００３２】
この反応は、生体触媒反応を専門とする当業者に公知であり、特に“Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ”のような文献及びコンピューターのデータベースから周知の種々の多様な条件下で行うことができる。
【００３３】
方法は一般には５−１０の範囲のｐＨを有する媒体中で行う。好ましいｐＨは、酵素の提供業者によって規定された最適ｐＨである。
【００３４】
反応温度は一般には４℃から７０℃の範囲の温度である。好ましい温度は、酵素の提供業者によって規定された最適温度である。
【００３５】
反応持続時間は変換率に直接の影響を与える。反応温度及び使用酵素の種類次第で反応時間は一般には１−１２０時間、好ましくは１０−６０時間である。
【００３６】
本文に示したｐＨ、温度及び反応持続時間の値は一般的に定められた値であり、勿論、特定反応の各々に応じて適当な処理条件が選択される。
【００３７】
本発明方法は、水の存在下または非存在下、１種または複数の溶媒の存在下または非存在下、水と１種または複数の溶媒との存在下、のいずれの条件下で行われてもよい。一般的にこれらの溶媒は、酵素活性に相容性でありかつ式（Ａ）のエステルを可溶化する溶媒から選択される。本発明によれば、これらの溶媒が芳香族溶媒から選択されるのが好ましい。より好ましくは、溶媒が例えばトルエンまたはモノクロロベンゼンである。
【００３８】
水の量に対する溶媒の使用量の容量比は一般には５％−９０％、好ましくは２０％−８０％である。
【００３９】
上記に記載の方法においては一般的に、酵素と鏡像異性体混合物とが均質相または不均質相のいずれでもよい。
【００４０】
本発明方法の変形実施態様では、例えばＫ．Ｈ．Ｌｅｅら，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５４，（１９９２），３７５−３８２に記載の方法のような当業者に公知の方法に従って支持体に固定された酵素を対応する適正量で使用する。
【００４１】
本発明方法によって得られる上記に定義の式（Ｉ）及び（ＩＩ）のエステルの特に重要な用途は、治療または農業に特に有用なキラル活性物質を製造するための合成中間体として使用することである。
【００４２】
例えば、式（Ｉ）及び（ＩＩ）のエステルを、欧州特許公開ＥＰ−Ａ−０６２９６１６に記載された式（Ｆ）：
【００４３】
【化５】
0004553485.tif 000006
で示される幾つかの２−イミダゾリン−５−オン及び２−イミダゾリン−５−チオン殺真菌剤を製造するための中間体として使用する。
【００４４】
式Ｆ中の、
・Ｒ１はフェニル基を表し、Ｒ２はメチル基を表し；
・Ｗは酸素原子もしくはイオウ原子または基Ｓ＝Ｏを表し；
・Ｍは酸素原子もしくはイオウ原子または任意にハロゲン化されたＣＨ２基を表し；
・ｐは０または１の整数を表し；
・Ｒ３は：
−ｐが０または（Ｍ）ｐがＣＨ２基のときは、水素または任意にハロゲン化されたＣ１−Ｃ２アルキル基を表し；
−（Ｍ）ｐが酸素原子もしくはイオウ原子を表すときは、任意にハロゲン化されたＣ１−Ｃ２アルキル基を表し；
・Ｒ４は：
−水素原子；
−炭素原子数１−６のアルキル基；
−炭素原子数２−６のアルコキシアルキル、アルキルチオアルキル、ハロアルキル、シアノアルキル、チオシアナトアルキル、アルケニルまたはアルキニル基；
−炭素原子数３−６のジアルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアルキルまたはＮ−アルキルカルバモイルアルキル；
−炭素原子数４−８のＮ，Ｎ−ジアルキルカルバモイルアルキル基；
−Ｒ６から選択された１−３個の基で任意に置換されたアリール基、例えばフェニル、ナフチル、チエニル、フリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、ベンゾチエニル、ベンゾフリル、キノリニル、イソキノリニルまたはメチレンジオキシフェニル；
−アリールアルキル、アリールオキシアルキル、アリールチオアルキルまたはアリールスルホニルアルキルを表し、ここにアリール及びアルキルなる用語は前記の定義と同義であり；
・Ｒ５は：
−水素、または、炭素原子数１−６のアルキル、ハロアルキル、アルキルスルホニル、ハロアルキルスルホニル基；
−炭素原子数２−６のアルコキシアルキル、アルキルチオアルキル、アシル、アルケニル、アルキニル、ハロアシル、アルコキシカルボニル、ハロアルコキシカルボニル、アルコキシアルキルスルホニル、シアノアルキルスルホニル基；
−炭素原子数３−６のアルコキシアルコキシカルボニル、アルキルチオアルコキシカルボニル、シアノアルコキシカルボニル基；
−ホルミル基、または、炭素原子数３−６のシクロアルキル、アルコキシアシル、アルキルチオアシル、シアノアシル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル基；
−炭素原子数４−８のシクロアルキルカルボニル基；
−Ｒ６から選択された１−３個の基で任意に置換されたフェニル；アリールアルキルカルボニル基特にフェニルアセチル及びフェニルプロピオニル、アリールカルボニル特にベンゾイル、チエニルカルボニル、フリルカルボニル、ピリジルカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、フルフリルオキシカルボニル、テトラヒドロフルフリルオキシカルボニル、チエニルメトキシカルボニル、ピリジルメトキシカルボニル、フェニル基がＲ６から選択された１−３個の基で任意に置換されたフェノキシカルボニル若しくはフェニルチオールカルボニル、アルキルチオールカルボニル、ハロアルキルチルカルボニル、アルコキシアルキルチオールカルボニル、シアノアルキルチオールカルボニル、ベンジルチオールカルボニル、フルフリルチオールカルボニル、テトラヒドロフルフリルチオールカルボニル、チエニルメチルチオールカルボニル、ピリジルメチルチオールカルボニルまたはアリールスルホニル；
−以下の置換基によって任意にモノまたはジ置換されたカルバモイル基：
−炭素原子数１−６のアルキルまたはハロアルキル基；
−炭素原子数３−６のシクロアルキル、アルケニルまたはアルキニル基；
−炭素原子数２−６のアルコキシアルキル、アルキルチオアルキルまたはシアノアルキル基；または
−１−３個の基Ｒ６によって任意に置換されたフェニル；
−以下の置換基によって任意にモノまたはジ置換されたスルファモイル基：
−炭素原子数１−６のアルキルまたはハロアルキル基；
−炭素原子数３−６のシクロアルキル、アルケニルまたはアルキニル基；
−炭素原子数２−６のアルコキシアルキル、アルキルチオアルキルまたはシアノアルキル基；または
−１−３個の基Ｒ６によって任意に置換されたフェニル；
−炭素原子数３−８のアルキルチオアルキルスルホニル基または炭素原子数３−７のシクロアルキルスルホニル基を表すか；または、
−Ｒ４とＲ５とが結合窒素原子と共に、炭素原子数１−３のアルキル基で任意に置換されたピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノまたはピペラジノ基を形成しており；
・Ｒ６は：
−ハロゲン原子；
−炭素原子数１−６のアルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキルチオまたはアルキルスルホニル基；
−炭素原子数３−６のシクロアルキル、ハロシクロアルキル、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アルケニルチオ、アルキニルチオ基；
−ニトロまたはシアノ基；
−炭素原子数１−６のアルキルもしくはアシル基または炭素原子数２−６のアルコキシカルボニル基で任意にモノ置換またはジ置換されたアミノ基；または、
−Ｒ７から選択された同じまたは異なる１−３個の基で任意に置換されたフェニル、フェノキシまたピリジルオキシ基を表し；
・Ｒ７は：
−フッ素、塩素、臭素、ヨウ素から選択されたハロゲン原子；
−炭素原子数１−６のアルキル基；
−炭素原子数１−６のアルコキシまたはアルキルチオ基；
−炭素原子数１−６のハロアルコキシまたハロアルキルチオ基；または、
−ニトリルまたはニトロ基を表す。
【００４５】
式（Ｆ）の化合物の製造方法は例えば以下のスキームによって示される：
【００４６】
【化３】
0004553485.tif 000007
【００４７】
上記のスキーム中の、基Ａｌｋ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｍ、ｐ及びＷは前記と同義であり、Ｒはヒドロキシ基、炭素原子数１−６のアルコキシ基、ベンジルオキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基もしくはジアルキルアミノ基、炭素原子数１−６のアルキルアミノ基を表し、Ｘは、塩素、臭素及びヨウ素から選択されたハロゲン原子またはスルフェートもしくはアルキルスルホニルオキシもしくはアリールスルホニルオキシ基のような離脱基を表す。
【００４８】
前出のスキーム中の、
−段階（ｉ）は以下の記載に例示された本発明の方法であり、
−段階（ａ）は従来の鹸化段階であり、
−段階（ｂ）は従来のエステル化反応であり、
−段階（ｃ）は、例えば国際特許出願ＷＯ９８／０３４９０に記載されているような、塩基性媒体中で二硫化炭素を添加する当業者に公知の環化反応であり、
−段階（ｄ）は、例えば国際特許出願ＷＯ９８／０３４９０に記載されているような、触媒（例えば第三アミン）の存在下で式Ｎ（Ｒ４Ｒ５）−ＮＨ２のアミンを添加する段階であり、
−最終段階（ｅ）は、式Ｒ３−Ｘの化合物の添加によって対応する−Ｓ−Ｒ３を含む化合物を生成し、次いで任意に従来技術によって酸化してイオウ原子を種々の酸化度に酸化させるかまたは式Ｒ３−ＯＨの化合物で処理して対応する−Ｏ−Ｒ３を含む化合物を得る段階を表す。これらの種々の反応は、当業者に公知であり、例えば欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ−０６２９６１６に記載されている。
【００４９】
勿論、基Ｒが基Ｏａｌｋを表すときは、段階（ａ）及び（ｂ）は不要であり、全体的合成スキームでは利用され得ない。
【００５０】
式（Ｉ）及び（ＩＩ）の中間体を利用して式（Ａ）のアミノ酸から式（Ｆ）の化合物を得る全体的合成方法は新規であり、従って本発明の範囲に包含される。
【００５１】
本発明による鏡像異性的富化方法の使用を以下の代表的実施例によって説明するが、本発明の特徴はこれらの実施例に全く限定されない。
【００５２】
実施例１
磁気撹拌している材料計量管に、２５０ｍｇのアスペルギルスのプロテアーゼ（Ａｍａｎｏのプロザイム６）、及び、５０ｍＭのα−フェニルアラニンメチルエステルのラセミ混合物を含有する５ｍｌの１００ｍＭのリン酸塩バッファを順次導入する。
【００５３】
３０℃で１７時間の反応後、残留エステルの鏡像体過剰率をキラルＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定する。残留エステルのＳ配置鏡像体過剰率は９９．４％である。
【００５４】
実施例２−５
Ａｍａｎｏのプロザイム６の代わりに別の酵素をプロテアーゼとして使用して上記の実施例１の手順で処理すると以下の結果が得られる。
【００５５】
【表２】
0004553485.tif 000008
【００５６】
実施例６
磁気撹拌している材料計量管に、０．２ｇのプロテアーゼ（プロザイム）、２．５ｍｌの１００ｍＭ（ｐＨ７）のリン酸塩バッファ、２．５ｍｌのトルエン、及び、０．２２３ｇのα−フェニルアラニンメチルエステルのラセミ混合物を順次導入する。
【００５７】
３０℃で１２０時間の反応後、有機相を回収して蒸発させる。残留メチルエステルをキラルＨＰＬＣの溶出剤に入れ、次いでＡＧＰカラム（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ）に注入する。残留エステルのＳ配置鏡像体過剰率は８０％である。