(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式１、２、４、若しくは５で表されるリノール酸誘導体若しくは下記の式３で表されるオレイン酸誘導体、又はそれらの２種類以上の組み合わせを有効成分として含有する肝障害抑制剤。
【化１】
0004406503.tif 000015
【化２】
0004406503.tif 000016
【化３】
0004406503.tif 000017
【化４】
0004406503.tif 000018
【化５】
0004406503.tif 000019
【請求項２】
前記請求項１に記載の肝障害抑制剤を含有する、肝障害抑制用医薬用組成物。
【請求項３】
前記請求項１に記載の肝障害抑制剤を含有する、肝障害抑制用食品用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、肝障害抑制剤および、肝障害抑制剤の有効成分として使用できる新規化合物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
肝障害のうち急性肝障害についてはある程度研究も進み種々の治療が行われているが、慢性肝障害については原因等、不明な点が多く効果的な治療方法は確立されていない。この慢性肝障害は免疫系を介する肝障害であると考えられている。
【０００３】
このような慢性肝障害に対しては漢方薬を用いた治療が行われている。この漢方療法においては、大柴胡湯、小柴胡湯、柴胡桂枝湯、柴胡桂姜湯、四逆散等が用いられている（「一般用漢方処方（漢方２１０処方）」日本製薬団体連合会漢方専門委員会（１９７５）、「漢方概論」藤平健、小倉重成著、創元社（１９７９）」）。これらの漢方薬に含まれている生薬の有効成分については不明な点が多いが、例えば三七人参については、その成分に肝保護作用が認められている（特願平８−４６１５４）。また、これらの生薬は、副作用が少ないというメリットが知られている。
【０００４】
しかし、これらの生薬は、海外に原料を依存するものが多いため入手が困難であり、且つ野生のものを採取するものもあり作用が一定ではない（「生薬学第４版」北川勲ら著（廣川書店）ｐ．３８４−３８７（１９９２））、「漢方薬の評価と開発技術」東京生薬研究会編（（株）シーエムシー）ｐ．３５３−３５４（１９８３））という問題がある。このため、漢方薬は一般的に高価であり、日常的な摂取が困難であるというデメリットがある。
【０００５】
また、野菜を原料に、肝障害抑制作用を有する有効成分の抽出も試みられている。野菜では、ニンニク(Kagawa, K. et al. Japan. J. Pharmacol.,Vol. 42, p.19-26(1986), Nakagawa, S. et al. Hiroshima J. Med. Sci., Vol. 34, p.303-309(1985))、人参(Bishayee, A. et al. J. Ethnopharmacl., Vol.47, p.69-74(1995)、オオヒジキ(САРТИКОВ, А.С.et al. Khim. Farm. Zh., Vol. 24, p.38-40(1990)）が急性肝障害抑制効果を示す事が知られているが、慢性肝障害抑制効果を示すものは知られていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、肝障害抑制剤および、肝障害抑制剤の有効成分として使用できる新規化合物を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記課題を解決するため精鋭探索したところ、アボガド植物中のリノール酸誘導体及びオレイン酸誘導体に優れた肝障害抑制作用があることを見出し、肝障害抑制作用を示す化合物を単離、精製したところ、新規な化合物が含まれることを同定し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下に示すものである。
（１）下記の式１、２、４、若しくは５で表されるリノール酸誘導体若しくは下記の式３で表されるオレイン酸誘導体、又はそれらの２種類以上の組み合わせを有効成分として含有する肝障害抑制剤。
【０００９】
【化６】
0004406503.tif 000002
【００１０】
【化７】
0004406503.tif 000003
【００１１】
【化８】
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【００１２】
【化９】
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【００１３】
【化１０】
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（２）前記（１）の肝障害抑制剤を含有する、肝障害抑制用医薬用組成物。
（３）前記（１）の肝障害抑制剤を含有する、肝障害抑制用食品用組成物。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明は、肝障害抑制剤および、肝障害抑制剤の有効成分として使用できる新規化合物に関するものである。
【００１６】
本発明の肝障害抑制剤の有効成分として使用できる化合物には、式１または２で表される新規リノール酸誘導体、式３で表される新規オレイン酸誘導体および、式４または５で表されるリノール酸誘導体が含まれ、式１〜３の化合物を「新規不飽和脂肪酸誘導体」、式１〜５の化合物を「不飽和脂肪酸誘導体」呼び、以下説明する。
【００１７】
＜１＞本発明の肝障害抑制剤
まず、肝障害抑制剤の有効成分として使用できる新規不飽和脂肪酸誘導体について説明する。本発明の新規不飽和脂肪酸誘導体は、上記の式１〜３の構造を有する化合物である。すなわち、式１で表される化合物１（分子量３１８：Ｃ21Ｈ34Ｏ2）は、（２Ｅ，５Ｅ，１２Ｚ，１５Ｚ）−１−ヒドロキシヘンイコサ−２，５，１２，１５−テトラエン−４−オンであり、式２で表される化合物２（分子量３２０：Ｃ21Ｈ36Ｏ2）は、（２Ｅ，１２Ｚ，１５Ｚ）−１−ヒドロキシヘンイコサ−２，１２，１５−トリエン−４−オンであり、式３で表される化合物３（分子量３８０：Ｃ23Ｈ40Ｏ4）は、（５Ｅ，１２Ｚ）−１−（アセチルオキシ）−２−ヒドロキシヘンイコサ−５，１２−ジエン−４−オンである。式１〜３の不飽和脂肪酸誘導体は、本発明により初めて単離精製、同定された新規化合物であり、優れた肝障害抑制作用、特に慢性肝障害抑制作用を有する。
【００１８】
また、式４の化合物４及び式５の化合物５で表される不飽和脂肪酸誘導体は、アボガドから単離された既知物質であるが、上記式１〜３で表される化合物と一緒に、肝障害抑制作用を示す化合物として、単離精製された。
【００１９】
式４の化合物４については、ＮＯ，Ｏ2-の産生抑制作用があることが報告がされている(BIO INDUSTRY,Vol.15,No8,p.34-40(1998))。また、式５の化合物５は、別名ｐｅｒｓｉｎとも呼ばれ、ＮＯ，Ｏ2-の産生抑制作用の他、各種の成長阻害作用が認められ、その生理的作用が研究されている(Journal of Natural Products,Vol.61,No.9,p.1168-1170(1998), Natural Toxins,3,p.344-349(1995), BIO INDUSTRY,Vol.15,No8,p.34-40(1998),WO 95/22696)。しかしながら、式４及び５の化合物の肝障害抑制作用については報告はなく、本発明において初めて、これらの化合物が優れた肝障害抑制作用、特に慢性肝障害抑制作用を有することが明らかになった。
【００２０】
このように上記の式１〜５で表される不飽和脂肪酸誘導体は、いずれも肝障害抑制作用が認められる分子量が３００〜４００の常温で無色油状の化合物であり、ヘキサンや酢酸エチル等の各種の溶媒に溶解するため、例えば、常温で液体の各種脂肪酸等の脂溶性の物質と適宜混合して使用することができる。
【００２１】
上記の式１〜５の不飽和脂肪酸誘導体は、アボガド植物から下記に示す方法により、溶媒抽出して単離精製することにより得てもよいし、化学的に合成してもよい。
【００２２】
化学的合成方法としては、例えば、Natural Toxins,3,p.344-349(1995)に記載されているように、アルデヒド誘導体とメチルケトンをアルドール縮合することにより（Paterson I,Goodman JM, Lister MA, Schumann RC, McClure CK, Norcross RD,Tetrahedron 46,p.4663-4684(1990)）、また、適宜、公知の方法を組み合わせることにより合成することができる。また、国際公開ＷＯ９５／２２９６９に記載の方法又はその方法に適宜変更を加えて合成してもよい。
【００２３】
また、本発明の肝障害抑制作用を有する式１〜５の不飽和脂肪酸誘導体は、例えば、アボガド植物から以下のような方法を経て、単離精製することができる。
【００２４】
本発明において用いるアボガド植物はクスノキ科ワニナシ、アボガド属（M. shearei, Persea）に属する植物である。ワニナシ、アボガド属としては、アメリカナ（P. americana）、メキシコ系（Mexican race）、ガテマラ系（Guatemalan race）、西インド諸島系（Indian race）等が挙げられ、特にアメリカナ（P. americana）が好ましい。
【００２５】
本発明の肝障害抑制作用を有する不飽和脂肪酸誘導体は、アボガド植物の果肉、果皮、種子、葉、葉柄、枝等、並びにそれらを粉砕、乾燥、濃縮等を行った処理物に含まれているが、特に該物質は果肉、果皮に多く含まれているため、それら組織およびそれら組織の処理物から抽出することが好ましい。
【００２６】
アボガド植物の抽出処理は、連続式、バッチ式等の方法で、常法により冷浸または温浸にて任意の時間行う。例えば、アボガド植物の乾燥粉末を、細かく粉砕し、抽出溶媒に、室温で１〜４８時間、浸漬及び又は振とうして行う。その後、抽出液から抽出残渣を除いて、減圧または限外濾過を行い抽出物を濃縮する。さらに、必要に応じて溶媒を留去する。
【００２７】
このような抽出に用いる溶媒としては、有機溶媒が好ましく、より好ましくは無極性有機溶媒であり、具体的には、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、四塩化炭素等が挙げられ、中でもｎ−ヘキサンが好ましい。
【００２８】
本発明の肝障害抑制作用を有する物質の抽出例を以下に例示するが、本発明はこの抽出例に限定されるものではない。まず、アボガド植物を凍結乾燥し、この乾燥粉末に非水溶性の無極性有機溶媒であるｎ−ヘキサンを加え、この溶媒に可溶性の成分を抽出する。アボガド植物に加える溶媒の量は、乾燥粉末１ｇ当たり、１〜２００ｍｌであるのが好ましく、５〜５０ｍｌであるのが更に好ましい。操作はアボガド植物にこの溶媒を加えた後、スターラー等でよく攪拌し、無極性有機溶媒に可溶性の画分を抽出する。この操作は、通常２回〜５回繰り返すのが好ましい。この様にして得られた抽出画分の溶媒を除去することにより油状の抽出物が得られる。溶媒の除去方法としては、常圧または減圧条件下で溶媒を蒸発させる等の、通常に用いられる各種の除去方法により行うことができる。
【００２９】
さらに、上述した抽出物を吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィーを単独あるいは組み合わせて使用してクロマトグラフ分画することによりさらに分離・精製を行い、かかる分画により得られた肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物から、本発明の肝障害抑制剤に含有させる式１〜５の不飽和脂肪酸誘導体を単離精製することが好ましい。ここで、肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物（すなわち、不飽和脂肪酸誘導体を含む画分）は、薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル６０、展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）におけるＲｆ値が０．１９〜０．２５の範囲内の値であるといった特徴を有しているため、これを指標として分画物の選別を行うことができる。
【００３０】
本発明の肝障害抑制作用を有する物質のクロマトグラフ分画の例を以下に例示するが、これらに限定されるものではない。
【００３１】
上述した抽出物を溶出力の低い溶出液に溶解し、吸着クロマトグラフィーとしてシリカゲルカラムに供する。溶出力を段階的に高くした溶出液で溶出させ、経時的に溶出液を採取することにより分画して分離・精製する。この分画した画分中の溶媒を除去し、肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物を得ることができる。溶媒の除去方法としては、常圧または減圧条件下で溶媒を蒸発させる等の、通常に用いられる各種の除去方法により行うことができる。また、分画物の選別は上述した方法により行うことができる。
【００３２】
また、上述した抽出物および分画物に肝障害抑制作用を有する物質が含まれているか否かを判断する方法としては、公知の肝障害作用を検定する方法を用いることができる。例えば、マウス等のモデル動物に、かかる抽出物または分画物を一定期間投与した群と、投与しなかった群とを作製し、これら各群にＤ−ガラクトサミン等の肝障害を誘発する物質を投与し、各群のモデル動物におけるＧＴＰ、ＧＯＰ等を測定する。かかる測定値を肝障害の指標として効果の有無を判別し、肝障害抑制作用を有する物質が含まれているか否かを判断することができる。
【００３３】
そして、肝障害抑制作用を有する物質を含む分画物を、例えば、溶出液の組成を適宜変更させた条件で、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、更に分画して、本願発明の新規化合物１〜３および、肝障害抑制作用を有する化合物４及び５を得ることができる。分画により単離精製した化合物の同定は、1Ｈ-ＮＭＲ、13Ｃ-ＮＭＲ、ＩＲスペクトル、ＵＶスペクトル等の定法に従って測定した値により確認すればよい。
【００３４】
本発明の肝障害抑制剤は、上記の式１〜５の化合物を肝障害を抑制する有効成分として含有することを特徴とするが、これらの式１〜５の化合物は単独で配合しても良いし、２種類以上を組み合わせて使用してもよい。
【００３５】
＜２＞本発明の肝障害抑制剤を含有する肝障害抑制用医薬用組成物
本発明の医薬用組成物は、上記の肝障害抑制剤を、常法にしたがって配合したものであり、肝障害抑制作用が期待できるものであれば特に限定されるものではない。
【００３６】
本発明の医薬組成物の剤型は、特に限定されないが、一般に製剤上許容される１または２種類以上の担体、賦形剤、統合剤、防腐剤、安定剤、香味剤等と共に混合して、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、水薬、ドリンク剤等の内服剤型とすることが好ましい。このような製剤化は、通常、医薬の製造に用いられる方法にしたがって製剤化することができる。
【００３７】
上記医薬用組成物の投与量としては、疾患の種類、症状、患者の年齢、体重等に異なるが、成人１日当たり、１〜１００ｍｇを、１回ないし数回に分けて経口投与するのが好ましい。
【００３８】
＜３＞本発明の肝障害抑制剤を含有する肝障害抑制用食品用組成物
本発明の食品用組成物は、上記の肝障害抑制剤を、常法にしたがって配合したものである。
【００３９】
本発明の食品用組成物としては、上記の肝障害抑制剤を含有するものであれば特に限定されるものではないが、種々の食品に、食品として通常用いられている任意成分とともに、食品原料に抽出物を所要量配合することができる。この抽出物を配合する際に特に留意するすることはなく、通常の製造方法により加工製造することにより、健康食品、機能性食品を製造することができる。配合量は、食品の種類のより異なるが、食品の味を損なわず、且つ十分な肝障害抑制効果を得るためには、食品全量に対して、０．００１〜１重量％の割合で配合するのが好ましい。
【００４０】
【実施例】
以下実施例により、本発明を更に具体的に説明する。
【００４１】
【実施例１】
＜本発明の不飽和脂肪酸誘導体の単離精製＞
アボガドの果肉部分を凍結乾燥し、乾燥粉末を得た。この乾燥粉末を、以下の図１に示す流れに従って分画し、後の評価に使用した。
【００４２】
（ａ）ヘキサンによる分画
アボガドの果肉部分を凍結乾燥して得た乾燥粉末１００ｇに１Ｌのｎ−ヘキサンを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清をヘキサン抽出液として得た。この操作を更に２回繰り返し、計３回の操作により、３０００ｍｌのヘキサン抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮させることにより、５８．６ｇの油状濃縮物がヘキサン画分から得られた。
【００４３】
（ｂ）酢酸エチルによる分画
次に上記の操作（ａ）の残渣４１．４ｇに酢酸エチル１Ｌを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清を酢酸エチル抽出液として得た。この操作を更に２回繰り返し、計３回の操作により、３０００ｍｌの酢酸エチル抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより、０．８ｇの固形物が酢酸エチル画分から得られた。
【００４４】
（ｃ）７０％エタノールによる分画
次に上記の操作（ｂ）の残渣４０．６ｇに７０％エタノール１Ｌを加え十分に攪拌後、残渣を取り除いた上清を７０％エタノール抽出液として得た。この操作を更に４回繰り返し、計５回の操作により、５０００ｍｌの７０％エタノール抽出液を得た。この抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより１６．０ｇの固形物が７０％エタノール画分から得られた。また、操作（ｃ）により、２４．６ｇのエタノール残渣が得られた。
【００４５】
（ｄ）ブチルアルコール（ブタノール）による分画
次に上記の操作（ｃ）による濃縮乾固物１６．０ｇを５００ｍｌの蒸留水に溶解させた。そして、この溶液に５００ｍｌのｎ−ブタノールを加え十分に攪拌後、分液ロートを用いた向流分配によりブタノール層を抽出した。残った水層には、更に５００ｍｌのｎ−ブチルアルコールを加え十分に攪拌後、ｎ−ブチルアルコールによる抽出を行った。この抽出を更に３回繰り返し、計５回の抽出操作により、２５００ｍｌのブチルアルコール抽出液を得た。このブチルアルコール抽出液をエバポレーターを用いて濃縮乾固させることにより２．８ｇの固形物がブチルアルコール画分から得られた。
【００４６】
また、操作（ｄ）で水層部分の溶液を凍結乾燥装置を用いて濃縮乾固させることにより１３．２ｇの固形物が水溶性画分から得られた。
【００４７】
上記の操作による分画により得られた各分画への分配率（重量％）を表１に示す。ここで、分配率とは、各分画から得られた固形物の重量を、分画開始前の重量（１００ｇ）で除した値に１００を乗じて％表示したものである。
【００４８】
【表１】
0004406503.tif 000007
【００４９】
（ｅ）ヘキサン画分のシリカゲルカラムによる分画
再び操作（ａ）と同様の操作を規模拡大して行い、ヘキサン画分の油状濃縮物を得た。得られた乾燥固形物１００ｇを、ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒（５／１）５００ｍｌに再溶解し、シリカゲルカラム（メルク社製シリカゲル６０、  ８×７３ｃｍ）に供し、組成を変化させた溶媒をにより溶出させた。ここで使用した溶出溶媒は、ヘキサン/酢酸エチル（5/1）、ヘキサン/酢酸エチル（4/1）、ヘキサン/酢酸エチル（3/2）、ヘキサン/酢酸エチル（2/3）、酢酸エチル、メタノールであり、この順にカラムに供し、溶出液を経時的に採取することにより分画した。これらの抽出物について薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル６０、展開溶媒；ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）を行い、紫外吸収を有するバンドが確認できなくなった時点で、次の溶出溶媒に変更した。これら分画された溶出液の分画物について薄層クロマトグラフィー（メルク社製シリカゲル６０、展開溶媒；ヘキサン/酢酸エチル＝4/1）を行い、このＲｆ値の結果を指標として、最終的に７画分に分けた。それぞれの画分の収量は、画分▲１▼は８４．１ｇ、画分▲２▼は１．２ｇ、画分▲３▼は１．８ｇ、画分▲４▼は７．１ｇ、画分▲５▼は１．９ｇ、画分▲６▼は１．５ｇ、画分▲７▼は２．４ｇであった。各画分の薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値、分配率および溶出溶媒の組成は表２に示す通りである。
【００５０】
【表２】
0004406503.tif 000008
次に、上記の分画の後、画分▲４▼をアセトニトリル：水混合溶媒（９８：２）に再溶解し、ＯＤＳカラム（Wakosil-II 5C18HG Prep,和光純薬工業（株）製）を用いた高速液体クロマトグラフィー（アセトニトリル：水＝９８：２、UV/VIS検出器:220nm）に供し、５つの化合物を得た。
【００５１】
これらの各化合物の収量は以下の表３の通りである。
【００５２】
【表３】
0004406503.tif 000009
ここで、収率とは、得られた各化合物の重量を、分画開始前の重量（ＯＤＳカラムへの供試重量：１０．４５ｇ）で除した値に１００を乗じて％表示したものである。そして、上記の化合物１〜５について、物質の同定を行ったところ、それぞれ以下のような結果を得た。
【００５３】
（１）化合物１
▲１▼分子量３１８（Ｃ21Ｈ34Ｏ2）
▲２▼赤外線吸収スペクトル：3420, 1740, 1667, 1616 cm-1
▲３▼核磁気共鳴スペクトル(1H-NMR,δ)：0.87(3H,t,J=6.9), 1.27(4H,m), 1.34(6H,m), 1.47(2H,m), 2.05(4H,m), 2.23(2H,dt,J=7.0,6.4), 2.75(2H,dd,J=6.1,6.1),4.38(2H,br,s), 5.30(2H,m), 5.34(2H,m), 6.29(1H,dt,J=14.3,1.2), 6.62(1H,dt,J=15.4,2.1), 6.91(1H,m), 6.93(1H,m)
▲４▼核磁気共鳴スペクトル(13C-NMR,δ)：14.0, 22.5, 25.6, 27.1, 27.2, 28.0, 28.8, 29.3, 29.4, 31.5, 32.7, 62.2, 126.3, 127.8, 128.3, 129.2, 129.8, 130.3, 144.8, 148.7, 189.2.
▲５▼色および性状：無色油状
以上の分析結果から、化合物１は下記の式１の構造式を有する新規リノール酸誘導体と同定した。
【００５４】
【化１１】
0004406503.tif 000010
【００５５】
（２）化合物２
▲１▼分子量３２０（Ｃ21Ｈ36Ｏ2）
▲２▼赤外線吸収スペクトル：3430, 1668cm-1
▲３▼核磁気共鳴スペクトル(1H-NMR,δ)：0.86(3H,t,J=6.8), 1.27(14H,m), 1.57(2H,m), 2.02(4H,m), 2.51(2H,t,J=7.5), 2.78(2H,t,J=6.6), 4.3(2H,m), 5.32(4H,m), 6.33(1H,ddd,J=15.9,3.1,2.1), 6.85(1H,dt,J=15.9,4.0)
▲４▼核磁気共鳴スペクトル(13C-NMR,δ)：13.9, 22.4, 24.0, 25.5, 27.0, 29.0, 29.1, 29.2, 29.5, 31.4, 40.0, 61.6, 127.76, 127.84, 127.9, 129.8, 130.0,145.1, 201.0, 189,2
▲５▼色および性状：無色油状
以上の分析結果から、化合物２は下記の式２の構造式を有する新規リノール酸誘導体と同定した。
【００５６】
【化１２】
0004406503.tif 000011
【００５７】
（３）化合物３
▲１▼分子量３８０（Ｃ23Ｈ40Ｏ4）
▲２▼赤外線吸収スペクトル：3454, 1741, 1667cm-1
▲３▼核磁気共鳴スペクトル(1H-NMR,δ)：0.84(3H,t,J=6.9), 1.22(16H,m), 1.43(2H,m), 2.00(4H,m), 2.06(3H,s), 2.19(2H,m), 2.73(2H,d,J=6.1), 4.05(1H,dd,J=11.3,6.1), 4.10(1H,dd,J=11.3,4.1), 4.30(1H,ddt,J=4.1,6.1,6.1), 5.31(2H,m), 6.07(1H,d,J=15.9), 6.85(1H,dt,J=15.9,7.0)
▲４▼核磁気共鳴スペクトル(13C-NMR,δ)：14.0, 22.6, 27.1, 27.9, 29.1, 29.28,29.31, 29.4, 29.56, 29.58, 29.6, 31.9, 32.5, 42.3, 66.1, 67.3, 130.2, 149.5, 171.0, 199.6
▲５▼色および性状：無色油状
以上の分析結果から、化合物３は下記の式３の構造式を有する新規オレイン酸誘導体と同定した。
【００５８】
【化１３】
0004406503.tif 000012
【００５９】
（４）化合物４
ＩＲ、ＮＭＲにより化合物１〜３と同様に化合物４を同定したところ、下記の式４の構造式を有する、リノール酸誘導体（分子量３７８（Ｃ23Ｈ38Ｏ4）、無色液状物質、Bio Industry,15,8.p.34-40(1998)に記載）であることを確認した。
【００６０】
【化１４】
0004406503.tif 000013
【００６１】
（５）化合物５
ＩＲ、ＮＭＲにより化合物１〜３と同様に化合物５を同定したところ、下記の式４の構造式を有する、リノール酸誘導体（分子量３８０（Ｃ23Ｈ40Ｏ4）、無色液状物質、Natural Toxins,3,p.344-349(1995)に記載）であることを確認した。
【００６２】
【化１５】
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【００６３】
【実施例２】
次に、上記の化合物１〜５の慢性肝炎に対する肝保護作用を、ラットを用いたＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害モデルにより評価した。
＜肝障害抑制効果の評価＞
四塩化炭素誘導性の肝障害モデルが急性毒性的な肝障害モデルであるのに対して、このＤ−ガラクトサミン誘導性の肝障害モデルは、免疫系を介しての肝障害作用が示唆される慢性肝炎のモデルとされており、臨床試験での評価結果と相関性が高い。
【００６４】
評価には、６週齢の雄性ウィスター系ラットを用いた。１０日間の予備飼育の後、各群の平均体重がほぼ等しくなるように各群７匹として群分けを行った。そして、上記の各化合物１〜５をアボガド油（アボガド果肉部をヘキサンで抽出し、抽出物をシリカゲルクロマトグラフィーに供し、トリグリセライド画分を回収したもの）に溶解させ（濃度：１００ｍｇ／０．３ｍｌ）、ラット体重１ｋｇあたり１００ｍｇとなるように、カテーテルを用いてラットの胃の中へ注入した。
【００６５】
なお、偽薬処理群およびコントロール群には、アボガド油のみを、カテーテルを用いてラットの胃の中へ注入した。
【００６６】
上記の化合物投与の４時間後に、肝障害を誘発するＤ−ガラクトサミンを、ラットの体重１ｋｇあたり３５０ｍｇとなるように腹膜内投与し、その２２時間後に採血を行った。なお、偽薬処理群では、生理食塩水をを腹内投与した後、同様の条件で採血を行った。
【００６７】
次に、この採血した血液を用いて、肝細胞の脱落により血中濃度が上昇することが知られている酵素、すなわち、ＡＬＴ：アラニン アミノトランスフェラーゼ（ＧＰＴ）活性と、ＡＳＴ：アスパラギン酸 アミノトランスフェラーゼ（ＧＯＴ）活性を市販の測定キット（和光純薬工業（株）製）により測定した。そして、この酵素活性の増減を肝障害の指標とした。酵素活性の増減の結果を図２および３にそれぞれ示す。
【００６８】
図２に示したとおり、コントロールでは顕著に両酵素の活性値が上昇しており、肝細胞の壊死がおきていることが示唆された。一方、化合物１〜５を投与した群では、全ての群で明かな肝障害抑制作用が観察された。
【００６９】
尚、図２中に示しているアルファベット（ａ，ｂ，ｃ，ｄ）は、共通するアルファベットを有していない群間で、危険率５％未満で、統計的に有意な差があることを示す（分散分析後、事後検定法としてＤｕｎｃａｎ法で検定）。
【００７０】
【発明の効果】
本発明の新規不飽和脂肪酸誘導体は優れた肝障害抑制効果を有するため、肝障害抑制剤の有効成分として使用することができる。また、本発明の不飽和脂肪酸誘導体を有効成分として含有する肝障害抑制剤は、優れた肝障害抑制効果、特に慢性肝障害抑制効果を有する。更に、本発明の肝障害抑制剤は植物由来であるため安全であり、且つその抽出が容易であるため、処方が容易な、該肝障害抑制剤を含む医薬用または食品用組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  アボガドから肝障害抑制作用を有する、不飽和脂肪酸誘導体を抽出する一例を示す図である。
【図２】  薬物投与２２時間後のＡＬＴ（ＧＰＴ）活性及びＡＳＴ（ＧＯＴ）活性値を示す図である。
【図１】
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【図２】
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