(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（１）で示される化合物；
0004550738.tif 000022
（１）
式中、R11, R21, R31は水素を示し；R22, R32, R43は水素を示し；
R23は、置換基を有することもあるフェニル基が結合した炭素数1〜6の直鎖アルキル基を示し；
R33は炭素数1〜6の直鎖アルキル基を示し；
R41とR42とは、鎖長炭素数3又は4の直鎖アルキレン基を介して結合した環構造を示し；
ｎは４〜６の整数を示し；
Ｘが以下の構造式で示す置換基のいずれかである：
0004550738.tif 000023
【請求項２】
R23が、４−メトキシ−ベンジル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
R33が、１−メチルプロピル基である、請求項1または2に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有する、チューブリン脱アセチル化酵素阻害剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素に起因したがんの治療または予防のための薬剤。
【請求項７】
一般式（２）
0004550738.tif 000024
（式中、ｎ,R11,Xは請求項１で定義したものと同様であり、P1 はアミノ基の保護基を表す）で示される化合物を、一般式（３）
0004550738.tif 000025
（式中、R11, R21, R22, R23, R31, R32, R33, R41, R42, 及びR43は、請求項１の一般式（１）で定義したものと同様であり、P2 はカルボキシル基の保護基を表す）で示される化合物とペプチド結合剤の存在下で反応させ、一般式（４）
0004550738.tif 000026
（式中、n, R11, R21, R22, R23, R31, R32, R33, R41, R42, R43, P1, P2, 及びX は、前記で定義したものと同様である）で示される化合物を得、次いで前記一般式（４）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、もしくは加水分解により、P1 及び P2 を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させるか、または一般式（５）
0004550738.tif 000027
（式中、R21, R22, R23, R31, R32, R33, R41, R42, R43, 及びP1 は、前記で定義したと同様である）で示される化合物を、一般式（６）
0004550738.tif 000028
（式中、n, R11, P2, 及びXは、前記で定義したものと同様である）で示される化合物とペプチド結合剤存在下で反応させ、一般式（７）
0004550738.tif 000029
（式中、n, R11, R21, R22, R23, R31, R32, R33, R41, R42, R43, P1, P2, 及びX は、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得、次いで一般式（７）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、 フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解によりP1 及び P2 を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応するか、または一般式（１）の環状テトラペプチドのＸがカルボキシル基またはスルフィドリル基であるものを、それぞれ無水トリフルオロ酢酸もしくは無水ペンタフルオロプロパン酸または 1,1,1-トリフルオロ-3-ブロモアセトンと反応させて別種の置換基Ｘとなすことを含む、請求項１記載の化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明はヒストン脱アセチル化酵素（Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ：ＨＤＡＣ）阻害剤およびその製造方法に関する。
【背景技術】  真核生物のクロマチン構造と遺伝子の発現は、ヒストンアセチル化酵素（ＨＡＴ）によるヒストンのアセチル化と、ヒストン脱アセチル化酵素（ＨＤＡＣ）による脱アセチル化によって調節されている。ＨＤＡＣの阻害剤ががん細胞の分化や、アポトーシスを誘導することが以前から知られ、制がん剤としての応用が期待されている（非特許文献１〜３）。実際、米国では動物実験で制がん剤としての有効性を示すいくつかのＨＤＡＣ阻害剤（非特許文献４及び５）の臨床研究が開始されている。
ＨＤＡＣ特異的阻害剤としてはトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）が有名である（非特許文献６）。実際、ＴＳＡは白血病細胞、神経細胞、乳癌細胞などの分化を誘導することが知られている（非特許文献７〜１４）。さらにＨＤＡＣ阻害剤とは異なる機構で遺伝子発現を活性化する薬物との併用によって、その分化誘導作用やアポトーシス誘導作用は相乗的に増大することも知られている。例えば、核内受容体であるレチノイン酸受容体を活性化し、分化に関する遺伝子発現を引き起こすレチノイン酸とＨＤＡＣ阻害剤との併用でがん細胞の分化が促進される（非特許文献９、１３、１５及び１６）。また、多くのがん細胞ではがん抑制遺伝子の発現が低下しているが、その原因として知られるＤＮＡのメチル化を阻害する５−アザデオキシシチジンとの併用によってがん抑制遺伝子の発現の回復とがん細胞のアポトーシスが促進される（非特許文献１７〜２１）。
ＨＤＡＣ阻害剤は、制がん剤としてのみならず、がん予防薬としても期待されている。ＴＳＡやＳＡＨＡ等は、動物の化学発がんモデルにおいて乳癌の発生を顕著に抑制した。また、バルプロ酸を用いた研究から、ＨＤＡＣ阻害剤は転移を抑制することも示されている（非特許文献１４）。
ＨＤＡＣ阻害剤は制がん剤以外にも、例えば自己免疫疾患、ポリグルタミン病等の神経変性疾患（非特許文献２２及び２３）、皮膚病、感染症（非特許文献２４）などの治療・改善薬、さらには遺伝子治療におけるベクター導入の効率化（非特許文献２５）、導入遺伝子の発現亢進（非特許文献２６）など様々な応用も試みられている。また、ＨＤＡＣ阻害剤は血管新生阻害作用を有すると考えられている（非特許文献２７及び２８）。
ＨＤＡＣには１０種類以上のサブタイプが存在するが、近年、特定のＨＤＡＣサブタイプとがんとの密接な関係がわかってきた。例えば、発がんの抑制に極めて重要な役割を果たすがん抑制遺伝子ｐ５３の機能発現にｐ５３自身のアセチル化が重要であり（非特許文献２９）、その機能阻害にＨＤＡＣ１やＨＤＡＣ２が関わること（非特許文献３０）、前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）の発症に関わる蛋白質ＰＭＬ−ＲＡＲやＰＬＺＦ−ＲＡＲ、リンパ腫の発症に関わるＢｃｌ−６等のがん遺伝子が、核内コリプレッサーを介してＨＤＡＣ４などをリクルートし、正常な分化に必要な遺伝子群の発現を抑制することで発がんに至ることなどが示されている（非特許文献３１〜３４）。その一方で、組織特異的に発現するＨＤＡＣサブタイプの中には、正常な組織の発生や分化に重要な役割を果たすものが存在することが知られている（非特許文献３５及び３６）。
ＨＤＡＣ６は核外輸送によって核−細胞質間をシャトルし、通常は細胞質に局在する酵素である（非特許文献３７）。ＨＤＡＣ６は精巣などで発現が高く、正常な組織の分化に関わると推定される。また、ＨＤＡＣ６は微小管の脱アセチル化に関与し、微小管の安定性を制御することが知られている（非特許文献３８）。さらに、ＨＤＡＣ６は微小管に結合する脱アセチル化酵素で、細胞の運動性に関与する（非特許文献３９）。よってＨＤＡＣ６の阻害剤は転移抑制剤となる可能性がある。ＴＳＡは各ＨＤＡＣサブタイプをほぼ同等に強く阻害するが、環状テトラペプチド構造を有し、活性基としてエポキシケトンを持つトラポキシンはＨＤＡＣ６を阻害することができない（非特許文献４０）。酵素の立体構造の情報から、環状テトラペプチドはあまり保存されていない酵素の活性中心の外側と相互作用するため、環状テトラペプチド部分の構造によってＨＤＡＣ６との結合性が低いと推定される。このことは環状テトラペプチド部分の改変によって様々なＨＤＡＣに選択的な阻害剤を創製できる可能性があることを示している。
ＴＳＡはヒドロキサム酸基がＨＤＡＣ活性ポケット内で亜鉛に配位することで阻害活性を示す（非特許文献４１）。ヒドロキサム酸を有するＨＤＡＣ阻害剤としては、Ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ（非特許文献４２）、ＣＨＡＰ（非特許文献４０及び４３）なども知られている。しかし、ＴＳＡは血中で不安定である上にヒドロキサム酸のキレート作用が強力なために他の必須な金属イオンとキレートを形成してしまうなどの理由で、ヒドロキサム酸を有するＨＤＡＣ阻害剤はこれまでのところ抗がん剤として実際の使用には至っていない。これに対し、最近になってＦＫ２２８のジスルフィド結合の還元により生じるチオール基が、ＨＤＡＣ活性ポケット内の亜鉛と配位する活性基となり、ＨＤＡＣを阻害し得ることが示された。このようにＦＫ２２８は、細胞内の還元力で還元されて活性化するプロドラッグである（非特許文献４４）。
また、天然界から環状テトラペプチド構造を有し、活性基としてエポキシケトンを持つＨＤＡＣ阻害剤が複数単離されている。このような知見から、酵素認識に対する環状テトラペプチド構造の有用性が示唆されているが（前掲Ｙｏｓｈｉｄａら，１９９５）、これまでの阻害剤は安定性などの種々の点で医薬品として十分に満足できるレベルには達したものはない。そこでそれらの問題点を解決した薬剤の開発が強く望まれている。
尚、本出願の発明に関連する先行技術文献情報を以下に示す。
【非特許文献１】Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．（２０００）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｉｎｄｕｃｅｒｓ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｒ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２，１２１０−１２１６
【非特許文献２】Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９９５）Ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｔｒａｐｏｘｉｎ：ｎｏｖｅｌ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｂｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ  １７，４２３−４３０
【非特許文献３】Ｂｅｒｎｈａｒｄ，Ｄ．，Ｌｏｆｆｌｅｒ，Ｍ．，Ｈａｒｔｍａｎｎ，Ｂ．Ｌ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｋｏｆｌｅｒ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｃｓｏｒｄａｓ，Ａ．（１９９９）Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ａｎｄ  ｂｕｔｙｒａｔｅ  ｉｎ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ：ｎｏｎ−ａｄｄｉｔｉｖｅ  ｉｎ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ｉｎ  ａ  Ｔ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｉｆｆ．６，６０９−６１７
【非特許文献４】Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｔｅｒａｎｏ，Ｈ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．（１９９８）ＦＲ９０１２２８，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ，ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．２４１，１６−１３３
【非特許文献５】Ｓａｉｔｏ，Ａ．，Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ｍａｒｉｋｏ，Ｙ．，Ｎｏｓａｋａ，Ｙ．，Ｔｓｕｃｈｉｙａ，Ｋ．，Ａｎｄｏ，Ｔ．，Ｓｕｚｕｋｉ，Ｔ．，Ｔｓｕｒｕｏ，Ｔ．，ａｎｄ  Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｏ．（１９９９）Ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ，ＭＳ−２７−２７５，ｗｉｔｈ  ｍａｒｋｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６，４５９２−４５９７
【非特許文献６】Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｋｉｊｉｍａ，Ｍ．，Ａｋｉｔａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９９０）Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｂｏｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１７１７４−１７１７９
【非特許文献７】Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９８７）Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎｓ  ｏｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３６８８−３６９１
【非特許文献８】Ｈｏｓｈｉｋａｗａ，Ｙ．，Ｋｉｊｉｍａ，Ｍ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９９１）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｈｙｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．５５：１４９１−１４９５
【非特許文献９】Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｈｏｒｎ，Ｖ．，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ，Ｎ．，Ｒｕｓｓａｎｏｖａ，Ｖ．，Ｏｇｒｙｚｋｏ，Ｖ．Ｖ．，Ｇａｂｒｉｅｌｅ，Ｌ．，Ｈｏｗａｒｄ，Ｂ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｏｚａｔｏ，Ｋ．（１９９７）Ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１１２９５−１１３００
【非特許文献１０】Ｉｎｏｋｏｓｈｉ，Ｊ．，Ｋａｔａｇｉｒｉ，Ｍ．，Ａｒｉｍａ，Ｓ．，Ｔａｎａｋａ，Ｈ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｏｍｕｒａ，Ｓ．（１９９９）Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏ  ２ａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ  Ｉ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５６，３７２−３７６
【非特許文献１１】Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｓａｕｎｔｈａｒａｒａｊａｈ，Ｙ．，Ｒｅｄｎｅｒ，Ｒ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍ．（１９９９）Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｒｅｌｉｅｖｅ  ＥＴＯ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＡＭＬ１−ＥＴＯ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：２７６６−２７６９
【非特許文献１２】Ｍｕｎｓｔｅｒ，Ｐ．Ｎ．，Ｔｒｏｓｏ−Ｓａｎｄｏｖａｌ，Ｔ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｎ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，ａｎｄ  Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．（２００１）Ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎｉｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：８４９２−８４９７
【非特許文献１３】Ｆｅｒｒａｒａ，Ｆ．Ｆ．，Ｆａｚｉ，Ｆ．，Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ，Ａ．，Ｐａｄｕｌａ，Ｆ．，Ｇｅｌｍｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｍａｎｃｉｎｉ，Ｍ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．（２００１）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：２−７
【非特許文献１４】Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｚｈｕ，Ｐ．，Ｋｒａｍｅｒ，Ｏ．Ｈ．，Ｓｃｈｉｍｐｆ，Ａ．，Ｇｉａｖａｒａ，Ｓ．，Ｓｌｅｅｍａｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｈｅｉｎｚｅｌ，Ｔ．（２００１）Ｖａｌｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ＨＤＡＣ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．ＥＭＢＯ  Ｊ．２０：６９６９−６９７８
【非特許文献１５】Ｃｏｆｆｅｙ，Ｄ．Ｃ．，Ｋｕｔｋｏ，Ｍ．Ｃ．，Ｇｌｉｃｋ，Ｒ．Ｄ．，Ｂｕｔｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．，Ｈｅｌｌｅｒ，Ｇ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｌａ  Ｑｕａｇｌｉａ，Ｍ．Ｐ．（２００１）Ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＣＢＨＡ，ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，ａｌｏｎｅ  ａｎｄ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ  ｗｉｔｈ  ａｌｌ−ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：３５９１−３５９４
【非特許文献１６】Ｐｅｔｔｉ，Ｍ．Ｃ．，Ｆａｚｉ，Ｆ．，Ｇｅｎｔｉｌｅ，Ｍ．，Ｄｉｖｅｒｉｏ，Ｄ．，Ｄｅ  Ｆａｂｒｉｔｉｉｓ，Ｐ．，Ｄｅ  Ｐｒｏｐｒｉｓ，Ｍ．Ｓ．，Ｆｉｏｒｉｎｉ，Ｒ．，Ｓｐｉｒｉｔｉ，Ｍ．Ａ．，Ｐａｄｕｌａ，Ｆ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，ａｎｄ  Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．（２００２）Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＰＬＺＦ／ＲＡＲａｌｐｈａ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｂｌｏｏｄ  １００：１０６５−１０６７
【非特許文献１７】Ｎａｎ，Ｘ．，Ｎｇ，Ｈ．Ｈ．，Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｃ．Ａ．，Ｌａｈｅｒｔｙ，Ｃ．Ｄ．，Ｔｕｒｎｅｒ，Ｂ．Ｍ．，Ｅｉｓｅｎｍａｎ，Ｒ．Ｎ．，ａｎｄ  Ｂｉｒｄ，Ａ．（１９９８）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｍｅｔｈｙｌ−ＣｐＧ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭｅＣＰ２  ｉｎｖｏｌｖｅｓ  ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：３８６−３８９
【非特許文献１８】Ｃａｍｅｒｏｎ，Ｅ．Ｅ．，Ｂａｃｈｍａｎ，Ｋ．Ｅ．，Ｍｙｏｈａｎｅｎ，Ｓ．，Ｈｅｒｍａｎ，Ｊ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｂａｙｌｉｎ，Ｓ．Ｂ．（１９９９）Ｓｙｎｅｒｇｙ  ｏｆ  ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｅｓ  ｓｉｌｅｎｃｅｄ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．２１：１０３−１０７
【非特許文献１９】Ｌｉ，Ｑ．Ｌ．，Ｉｔｏ，Ｋ．，Ｓａｋａｋｕｒａ，Ｃ．，Ｆｕｋａｍａｃｈｉ，Ｈ．，Ｉｎｏｕｅ，Ｋ．，Ｃｈｉ，Ｘ．Ｚ．，Ｌｅｅ，Ｋ．Ｙ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｓ．，Ｌｅｅ，Ｃ．Ｗ．，Ｈａｎ，Ｓ．Ｂ．，Ｋｉｍ，Ｈ．Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｗ．Ｊ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｈ．，Ｙａｍａｓｈｉｔａ，Ｎ．，Ｙａｎｏ，Ｔ．，Ｉｋｅｄａ，Ｔ．，Ｉｔｏｈａｒａ，Ｓ．，Ｉｎａｚａｗａ，Ｊ．，Ａｂｅ，Ｔ．，Ｈａｇｉｗａｒａ，Ａ．，Ｙａｍａｇｉｓｈｉ，Ｈ．，Ｏｏｅ，Ａ．，Ｋａｎｅｄａ，Ａ．，Ｓｕｇｉｍｕｒａ，Ｔ．，Ｕｓｈｉｊｉｍａ，Ｔ．，Ｂａｅ，Ｓ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｉｔｏ，Ｙ．（２００２）Ｃａｕｓａｌ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＲＵＮＸ３  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｅｌｌ  １０９：１１３−１２４
【非特許文献２０】Ｂｏｉｖｉｎ，Ａ．Ｊ．，Ｍｏｍｐａｒｌｅｒ，Ｌ．Ｆ．，Ｈｕｒｔｕｂｉｓｅ，Ａ．，ａｎｄ  Ｍｏｍｐａｒｌｅｒ，Ｒ．Ｌ．（２００２）Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ５−ａｚａ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ｐｈｅｎｙｌｂｕｔｙｒａｔｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  １３：８６９−８７４
【非特許文献２１】Ｐｒｉｍｅａｕ，Ｍ．，Ｇａｇｎｏｎ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｍｏｍｐａｒｌｅｒ，Ｒ．Ｌ．（２００３）Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ５−ＡＺＡ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １０３：１７７−１８４
【非特許文献２２】Ｄａｒｋｉｎ−Ｒａｔｔｒａｙ  ＳＪ，Ｇｕｒｎｅｔｔ  ＡＭ，Ｍｙｅｒｓ  ＲＷ，Ｄｕｌｓｋｉ  ＰＭ，Ｃｒｕｍｌｅｙ  ＴＭ，Ａｌｌｏｃｃｏ  ＪＪ，Ｃａｎｎｏｖａ  Ｃ，Ｍｅｉｎｋｅ  ＰＴ，Ｃｏｌｌｅｔｔｉ  ＳＬ，Ｂｅｄｎａｒｅｋ  ＭＡ，Ｓｉｎｇｈ  ＳＢ，Ｇｏｅｔｚ  ＭＡ，Ｄｏｍｂｒｏｗｓｋｉ  ＡＷ，Ｐｏｌｉｓｈｏｏｋ  ＪＤ，Ｓｃｈｍａｔｚ  ＤＭ．（１９９６）ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｐｒｏｔｏｚｏａｌ  ａｇｅｎｔ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｐａｒａｓｉｔｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３，１３１４３−１３１４７
【非特許文献２３】Ｓｔｅｆｆａｎ  ＪＳ，Ｂｏｄａｉ  Ｌ，Ｐａｌｌｏｓ  Ｊ，Ｐｏｅｌｍａｎ  Ｍ，ＭｃＣａｍｐｂｅｌｌ  Ａ，Ａｐｏｓｔｏｌ  ＢＬ，Ｋａｚａｎｔｓｅｖ  Ａ，Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｅ，Ｚｈｕ  ＹＺ，Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  Ｍ，Ｋｕｒｏｋａｗａ  Ｒ，Ｈｏｕｓｍａｎ  ＤＥ，Ｊａｃｋｓｏｎ  ＧＲ，Ｍａｒｓｈ  ＪＬ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＬＭ．（２００１）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｒｒｅｓｔ  ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍｉｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ．Ｎａｔｕｒｅ．４１３  ７３９−４３
【非特許文献２４】ＭｃＣａｍｐｂｅｌｌ  Ａ，Ｔａｙｅ  ＡＡ，Ｗｈｉｔｔｙ  Ｌ，Ｐｅｎｎｅｙ  Ｅ，Ｓｔｅｆｆａｎ  ＪＳ，Ｆｉｓｃｈｂｅｃｋ  ＫＨ．（２００１）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｒｅｄｕｃｅ  ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．：９８  １５１７９−１５１８４
【非特許文献２５】Ｄｉｏｎ  ＬＤ，Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ  ＫＴ，Ｔａｎｇ  ＤＣ，Ｅｎｇｌｅｒ  ＪＡ，Ｙｏｓｈｉｄａ  Ｍ，Ｇａｒｖｅｒ  ＲＩ  Ｊｒ．（１９９７）Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｏｃｃｕｒｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２３１，２０１−２０９
【非特許文献２６】Ｃｈｅｎ  ＷＹ，Ｂａｉｌｅｙ  ＥＣ，ＭｃＣｕｎｅ  ＳＬ，Ｄｏｎｇ  ＪＹ，Ｔｏｗｎｅｓ  ＴＭ．（１９９７）Ｒｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｌｅｎｃｅｄ，ｖｉｒａｌｌｙ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４，５７９８−５８０３
【非特許文献２７】Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｙ．Ｍ．，Ｂａｅｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｊａｎｇ，Ｊ．Ｅ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｍｏｏｎ，Ｅ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｈ．Ｓ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｋ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｈ．Ｙ．，Ｋｉｍ，Ｃ．Ｗ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００１）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．７，４３７−４４３
【非特許文献２８】Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｊ．，Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００２）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＦＫ２２８  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９７，２９０−２９６
【非特許文献２９】Ｉｔｏ，Ａ．，Ｌａｉ，Ｃ．Ｈ．，Ｚｈａｏ，Ｘ．，Ｓａｉｔｏ，Ｓ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍ．Ｈ．，Ａｐｐｅｌｌａ，Ｅ．，ａｎｄ  Ｙａｏ，Ｔ．Ｐ．（２００１）ｐ３００／ＣＢＰ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐ５３  ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｃｏｍｍｏｎｌｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｐ５３−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ＭＤＭ２．ＥＭＢＯＪ．２０，１３３１−１３４０
【非特許文献３０】Ｊｕａｎ，Ｌ．Ｊ．，Ｓｈｉａ，Ｗ．Ｊ．，Ｃｈｅｎ，Ｍ．Ｈ．，Ｙａｎｇ，Ｗ．Ｍ．，Ｓｅｔｏ，Ｅ．，Ｌｉｎ，Ｙ．Ｓ．，ａｎｄ  Ｗｕ，Ｃ．Ｗ．（２０００）Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  Ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｐ５３−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｇｅｎｅ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５，２０４３６−２０４４３
【非特許文献３１】Ｄｈｏｒｄａｉｎ  Ｐ．，Ａｌｂａｇｌｉ，Ｏ．，Ｌｉｎ，Ｒ．Ｊ．，Ａｎｓｉｅａｕ，Ｓ．，Ｑｕｉｅｆ，Ｓ．，Ｌｅｕｔｚ，Ａ．，Ｋｅｒｃｋａｅｒｔ，Ｊ．Ｐ．，Ｅｖａｎｓ，Ｒ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｌｅｐｒｉｎｃｅ，Ｄ．（１９９７）Ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  ＳＭＲＴ  ｂｉｎｄｓ  ｔｈｅ  ＢＴＢ／ＰＯＺ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＬＡＺ３／ＢＣＬ６  ｏｎ  ｃｏｐｒｏｔｅｉｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４，１０７６２−１０７６７
【非特許文献３２】Ｇｒｉｇｎａｎｉ，Ｆ．，Ｄｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，Ｔｏｍａｓｓｏｎｉ，Ｌ．，Ｇｅｌｍｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｃｉｏｃｅ，Ｍ．，Ｆａｎｅｌｌｉ，Ｍ．，Ｒｕｔｈａｒｄｔ，Ｍ．，Ｆｅｒｒａｒａ，Ｆ．Ｆ．，Ｚａｍｉｒ，Ｉ．，Ｓｅｉｓｅｒ，Ｃ．，Ｇｒｉｇｎａｎｉ，Ｆ．，Ｌａｚａｒ，Ｍ．Ａ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．（１９９８）Ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｌｐｈａ  ｒｅｃｒｕｉｔ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９１，８１５−８１８
【非特許文献３３】Ｈｅ，Ｌ．Ｚ．，Ｇｕｉｄｅｚ，Ｆ．，Ｔｒｉｂｉｏｌｉ，Ｃ．，Ｐｅｒｕｚｚｉ，Ｄ．，Ｒｕｔｈａｒｄｔ，Ｍ．，Ｚｅｌｅｎｔ，Ａ．，ａｎｄ  Ｐａｎｄｏｌｆｉ，Ｐ．Ｐ．（１９９８）Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ＰＭＬ−ＲＡＲａｌｐｈａ  ａｎｄ  ＰＬＺＦ−ＲＡＲａｌｐｈａ  ｗｉｔｈ  ｃｏ−ｒｅｐｒｅｓｓｏｒｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ＲＡ  ｉｎ  ＡＰＬ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１８，１２６−１３５
【非特許文献３４】Ｌｉｎ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｇｙ，Ｌ．，Ｉｎｏｕｅ，Ｓ．，Ｓｈａｏ，Ｗ．，Ｍｉｌｌｅｒ，Ｗ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｅｖａｎｓ，Ｒ．Ｍ．（１９９８）Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋａｅｍｉａ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９１，８１１−８１４
【非特許文献３５】ＭｃＫｉｎｓｅｙ，Ｔ．Ａ．，Ｚｈａｎｇ，Ｃ．Ｌ．，Ｌｕ，Ｊ．，ａｎｄ  Ｏｌｓｏｎ，Ｅ．Ｎ．（２０００）Ｓｉｇｎａｌ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｘｐｏｒｔ  ｏｆ  ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｍｕｓｃｌｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０８，１０６−１１１
【非特許文献３６】Ｖｅｒｄｅｌ，Ａ．，ａｎｄ  Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．（１９９９）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｈｉｇｈｅｒ  ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，２４４０−２４４５
【非特許文献３７】Ｖｅｒｄｅｌ，Ａ．，Ｃｕｒｔｅｔ，Ｓ．，Ｂｒｏｃａｒｄ，Ｍ．−Ｐ．，Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｓ．，Ｌｅｍｅｒｃｉｅｒ，Ｃ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．（２０００）Ａｃｔｉｖｅ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  ｍＨＤＡ２／ｍＨＤＡＣ６  ｈｉｓｔｏｎｅ−ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍ．Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１０，７４７−７４９
【非特許文献３８】Ｍａｔｓｕｙａｍａ，Ａ．，Ｓｈｉｍａｚｕ，Ｔ．，Ｓｕｍｉｄａ，Ｙ．，Ｓａｉｔｏ，Ａ．，Ｙｏｓｈｉｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｓｅｉｇｎｅｕｒｉｎ−Ｂｅｒｎｙ，Ｄ．，Ｏｓａｄａ，Ｈ．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．（２００２）Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｙｎａｍｉｃ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ  ｂｙ  ＨＤＡＣ６−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ．ＥＭＢＯ  Ｊ．２１，６８２０−６８３１
【非特許文献３９】Ｈｕｂｂｅｒｔ，Ｃ．，Ｇｕａｒｄｉｏｌａ，Ａ．，Ｓｈａｏ，Ｒ．，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ｙ．，Ｉｔｏ，Ａ．，Ｎｉｘｏｎ，Ａ．Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｗａｎｇ，Ｘ．−Ｆ．，ａｎｄ  Ｙａｏ，Ｔ．−Ｐ．（２００２）ＨＤＡＣ６  ｉｓ  ａ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ  ４１７，４５５−４５８
【非特許文献４０】Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．（２００１）Ｐｏｔｅｎｔ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｂｕｉｌｔ  ｆｒｏｍ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｉｃ  ｔｅｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｔｒａｐｏｘｉｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：８７−９２
【非特許文献４１】Ｆｉｎｎｉｎ，Ｍ．Ｓ．，Ｄｏｎｉｇｉａｎ，Ｊ．Ｒ．，Ｃｏｈｅｎ，Ａ．，Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．Ａ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，Ｂｒｅｓｌｏｗ，Ｒ．，ａｎｄ  Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ，Ｎ．Ｐ．（１９９９）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＴＳＡ  ａｎｄ  ＳＡＨＡ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０１：１８８−１９３
【非特許文献４２】Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｌｅｅ，Ｋ．−Ｈ．，Ｓｕｇｉｔａ，Ｋ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．（１９９９）Ｏｘａｍｆｌａｔｉｎ  ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２４６１−２４７０
【非特許文献４３】Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｔｏｍｉｚａｋｉ，Ｋ．−ｙ．，Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｍ．，Ｋａｔｏ，Ｔ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｓａｔｏ，Ｓ．，Ｙａｍｏｒｉ，Ｔ．，Ｔｓｕｒｕｏ，Ｔ．，Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｈａｙａｓｈｉ，Ｈ．（２００１）Ｃｙｃｌｉｃ  Ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ−ａｃｉｄ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ３１，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４４５９−４４６６
【非特許文献４４】Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｍａｔｓｕｙａｍａ，Ａ．，Ｋｏｂａｓｈｉ，Ｎ．，Ｌｅｅ，Ｋ．−Ｈ．，Ｎｉｓｈｉｙａｍａ，Ｍ．，Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，Ｔａｎａｋａ，Ａ．，Ｋｏｍａｔｓｕ，Ｙ．，Ｎｉｓｈｉｎｏ，Ｎ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．（２００２）ＦＫ２２８（ｄｅｐｓｉｐｅｐｔｉｄｅ）ａｓ  ａ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２，４９１６−４９２１
【発明の開示】
本願発明者らは、環状テトラペプチド構造を有する新規なＨＤＡＣ阻害剤およびその製造方法を提供することを目的とする。
上記課題に鑑み、本願発明者らは、ヒストン脱アセチル化酵素の活性中心部に位置する亜鉛に配位することのできる、様々な官能基を有する環状テトラペプチド構造を有する化合物を合成し、そのＨＤＡＣ阻害活性を解析した。その結果、カルボニル基を有する化合物および、フルオロ基を有する化合物、レトロヒドロキサム酸基を有する化合物はｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏどちらの系においても強いＨＤＡＣ阻害活性を示すことが確認された。さらに、細胞レベルでのこれらの化合物の活性を解析したところ、ＨＤＡＣ阻害剤として知られているトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）と同様の強い活性が観察された。また、これらの化合物はヒストンの脱アセチル化を阻害するだけでなく、チューブリンの脱アセチル化についても阻害することが観察された。すなわち、これらの化合物は細胞内で強い活性を示すことから、ＨＤＡＣ阻害剤として有用であることが示された。
即ち、本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤およびその製造方法に関し、以下の〔１〕〜〔１１〕を提供するものである。
〔１〕  以下の一般式（１）で示される化合物。
0004550738.tif 000002
式中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ３１，Ｒ４１はそれぞれ独立して水素またはメチル基を示す。Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，Ｒ４３はそれぞれ独立して水素、炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基、または非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した非芳香族環状アルキル基のいずれかを示す。また、Ｒ２１とＲ２２，Ｒ２２とＲ２３，Ｒ３１とＲ３２，Ｒ３２とＲ３３，Ｒ４１とＲ４２，Ｒ４２とＲ４３は、それぞれ結合を持たず非環状構造を示すか、または鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、炭素数１〜６の分岐鎖を有する鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、もしくは、炭素数１〜６の環構造を備えた鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基を介して結合した環構造を示す。ｎはＨＤＡＣ阻害活性を有する範囲で選択することができる。Ｘは、ヒストン脱アセチル化酵素の活性中心部に位置する亜鉛に配位することのできる構造を持つ任意の構造体を示す。
〔２〕  Ｘ部位の構造が以下の構造式で示す置換基のいずれかである、〔１〕に記載の化合物。
0004550738.tif 000003
0004550738.tif 000004
〔３〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤。
〔４〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、チューブリン脱アセチル化酵素阻害剤。
〔５〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、アポトーシス誘導剤。
〔６〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、分化誘導剤。
〔７〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、血管新生阻害剤。
〔８〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、がん転移抑制剤。
〔９〕  〔１〕記載の化合物を有効成分として含有する、ヒストン脱アセチル化酵素１、４または６に起因した疾患の治療または予防のための薬剤。
〔１０〕  ヒストン脱アセチル化酵素１、４または６に起因した疾患が、がん、自己免疫疾患、神経変性疾患、皮膚病、または感染症である、〔９〕記載の治療または予防のための薬剤。
〔１１〕  一般式（２）
0004550738.tif 000005
（式中、Ｘは請求項１、２で定義したものと同様であり、Ｐ１はアミノ基の保護基を表す）で示される化合物を、一般式（３）
0004550738.tif 000006
（式中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，及びＲ４３は、一般式（１）で定義したものと同様であり、Ｐ２はカルボキシル基の保護基を表す）で示される化合物とペプチド結合剤の存在下で反応させ、一般式（４）
0004550738.tif 000007
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＸは、前記で定義したものと同様である）で示される化合物を得、次いで前記一般式（４）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、もしくは加水分解により、Ｐ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させるか、または一般式（５）
0004550738.tif 000008
（式中、Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，及びＰ１は、前記で定義したと同様である）で示される化合物を、一般式（６）
0004550738.tif 000009
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｐ２，及びＸは、前記で定義したものと同様である）で示される化合物とペプチド結合剤存在下で反応させ、一般式（７）
0004550738.tif 000010
（式中、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２，及びＸは、前記で定義したと同様である）で示される化合物を得、次いで一般式（７）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解によりＰ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応するか、または一般式（１）の環状テトラペプチドのＸがカルボキシル基またはスルフィドリル基であるものを、それぞれ無水トリフルオロ酢酸や無水ペンタフルオロプロパン酸または１，１，１−トリフルオロ−３−ブロモアセトンと反応させて別種の置換基Ｘとなすことを含む、〔１〕記載の化合物の製造方法。
以下、本発明の実施の形態について図面に基づき詳細に説明する。
本発明の化合物は、上記の一般式（１）で示すことができる。このような化合物はＨＤＡＣ阻害剤として使用できる。
上記式（１）中、Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ３１，Ｒ４１はそれぞれ独立して水素またはメチル基を示す。Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４２，Ｒ４３はそれぞれ独立して水素、炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した炭素数１〜６の直鎖アルキル基、非芳香族環状アルキル基、または非芳香族環状アルキル基もしくは置換基を有することもある芳香環が結合した非芳香族環状アルキル基のいずれかを示す。また、Ｒ２１とＲ２２，Ｒ２２とＲ２３，Ｒ３１とＲ３２，Ｒ３２とＲ３３，Ｒ４１とＲ４２，Ｒ４２とＲ４３は、それぞれ結合を持たず非環状構造を示すか、または鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、炭素数１〜６の分岐鎖を有する鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基、もしくは、炭素数１〜６の環構造を備えた鎖長炭素数１〜５の直鎖アルキレン基を介して結合した環構造を形成してもよい。この環状テトラペプチド構造部分はＨＤＡＣのポケットをふさぐキャップとして機能し得ると考えられるため、このキャップ構造として機能し得る範囲で、上記炭素数１〜６の直鎖アルキル基、芳香族環状アルキル基、これらの置換基となり得る芳香族を任意に選択することができる。
また、式（１）中Ｘは、ヒストン脱アセチル化酵素の活性中心部に位置する亜鉛に配位することのできる構造を持つ任意の構造体を示す。Ｘに反応性の高い官能基を置換した場合には、生体内で不安定となる。そのため、Ｘが反応性の高い官能基である場合には、ドラッグデリバリーシステムなどのように所望の部位まで安定に輸送し得る手段と組み合わせることが好ましい。また、ＨＤＡＣ阻害活性を有する官能基の安定性を高めるために、生体内で代謝され、生体に有害でない置換基を用いることが好ましい。このような置換基としては、側鎖にケトン型のＺｎ配位子を有する置換基が好ましく、置換基自身で何らかの効能を示すものであってもよく、また、単に保護基としての機能を備えているものであってもよい。
置換基Ｘの好ましい構造の例を次に示す。
0004550738.tif 000011
0004550738.tif 000012
また、本発明において式（１）中、ｎはＨＤＡＣ阻害活性を有する範囲で選択することができ、例えば、ｎは好ましくは４〜６、最も好ましくは５である。この環状テトラペプチド構造から伸び、炭素数ｎからなる炭素鎖は、ＨＤＡＣの活性ポケット部分に侵入し、この炭素鎖先端の様々な官能基をＨＤＡＣのポケット内の亜鉛分子に接触させＨＤＡＣを阻害する機能を有すると考えられる。
また、以下に本発明の化合物の製造方法について説明する。本実施形態の化合物は、一般式（２）もしくは（６）で示された化合物を原料として以下の通り製造することができる。なお、ｎ，Ｒ１１，Ｒ２１，Ｒ２２，Ｒ２３，Ｒ３１，Ｒ３２，Ｒ３３，Ｒ４１，Ｒ４２，Ｒ４３，Ｐ１，Ｐ２およびＸなどの定義は上述の説明で述べた定義と同一であるので、ここではその説明を省略する。
本発明における化合物の製造方法の第一の態様は、以下の一般式（２）で示された化合物を原料として製造する方法である。具体的には、一般式（２）
0004550738.tif 000013
で示される化合物（Ｘにおける置換基の特定の部位が以後の化学反応によって何らかの修飾および置換を受ける場合は、修飾および置換を受ける部位に保護基を結合させてもよい）と、一般式（３）
0004550738.tif 000014
で示される化合物をペプチド結合剤の存在下で反応させ、一般式（４）
0004550738.tif 000015
で示される化合物を得る。これら式中、Ｘは図２に記載の置換基、Ｐ２はアミノ基の保護基を表す。
次いで前記一般式（４）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解により、Ｐ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させ、一般式（１）で示される化合物を得る。始めに一般式（２）のＸの特定の部位において保護基を結合させた場合、最後の過程において、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解により保護基を取り除く工程を含んでもよい。
本発明の化合物の製造方法の第二の態様は、以下の一般式（６）で示された化合物を原料として製造する方法である。具体的には、一般式（５）
0004550738.tif 000016
で示される化合物を、一般式（６）
0004550738.tif 000017
で示される化合物（Ｘにおける置換基の特定の部位が以後の化学反応によって何らかの修飾および置換を受ける場合は、修飾および置換を受ける部位に保護基を結合させてもよい）とペプチド結合剤存在下で反応させ、一般式（７）
0004550738.tif 000018
で示される化合物を得る。次いで一般式（７）で示される化合物を、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解によりＰ１及びＰ２を除去した後に、ペプチド結合剤の存在下で環化反応させて、一般式（１）で示される化合物を得る。始めに一般式（２）のＸの特定の部位において保護基を結合させた場合、最後の過程において、触媒的水素化、酸処理、フルオリドアニオン処理、もしくは加水分解により保護基を取り除く工程を含んでもよい。また、一般式（１）の環状テトラペプチドのＸがカルボキシル基またはスルフィドリル基であるものを、それぞれ無水トリフルオロ酢酸や無水ペンタフルオロプロパン酸または１，１，１−トリフルオロ−３−ブロモアセトンと反応させて別種の置換基Ｘとなす一般式（１）で示される化合物を得る。
ＨＤＡＣを阻害する化合物が、がん細胞、白血病細胞、および神経細胞などの分化を誘導すること、アポトーシスを誘導すること、また、がんの転移を抑制することが以前から知られている（Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９８７）Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎｓ  ｏｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３６８８−３６９１；Ｈｏｓｈｉｋａｗａ，Ｙ．，Ｋｉｊｉｍａ，Ｍ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，ａｎｄ  Ｂｅｐｐｕ，Ｔ．（１９９１）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｈｙｐｅｒａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．５５：１４９１−１４９５；Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｈｏｒｎ，Ｖ．，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ，Ｎ．，Ｒｕｓｓａｎｏｖａ，Ｖ．，Ｏｇｒｙｚｋｏ，Ｖ．Ｖ．，Ｇａｂｒｉｅｌｅ，Ｌ．，Ｈｏｗａｒｄ，Ｂ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｏｚａｔｏ，Ｋ．（１９９７）Ａ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１１２９５−１１３００；Ｉｎｏｋｏｓｈｉ，Ｊ．，Ｋａｔａｇｉｒｉ，Ｍ．，Ａｒｉｍａ，Ｓ．，Ｔａｎａｋａ，Ｈ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｙ．Ｂ．，Ｆｕｒｕｍａｉ，Ｒ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｈｏｒｉｎｏｕｃｈｉ，Ｓ．，ａｎｄ  Ｏｍｕｒａ，Ｓ．（１９９９）．Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏ  ２ａ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ  ａｎｄ  ｂｕｔｙｒｏｌａｃｔｏｎｅ  Ｉ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５６，３７２−３７６；Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｓａｕｎｔｈａｒａｒａｊａｈ，Ｙ．，Ｒｅｄｎｅｒ，Ｒ．Ｌ．，ａｎｄ  Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍ．（１９９９）Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｒｅｌｉｅｖｅ  ＥＴＯ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＡＭＬ１−ＥＴＯ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：２７６６−２７６９；Ｍｕｎｓｔｅｒ，Ｐ．Ｎ．，Ｔｒｏｓｏ−Ｓａｎｄｏｖａｌ，Ｔ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｎ．，Ｒｉｆｋｉｎｄ，Ｒ．，Ｍａｒｋｓ，Ｐ．Ａ．，ａｎｄ  Ｒｉｃｈｏｎ，Ｖ．Ｍ．（２００１）Ｔｈｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｓｕｂｅｒｏｙｌａ  ｎｉｌｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：８４９２−８４９７；Ｆｅｒｒａｒａ，Ｆ．Ｆ．，Ｆａｚｉ，Ｆ．，Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ，Ａ���，Ｐａｄｕｌａ，Ｆ．，Ｇｅｌｍｅｔｔｉ，Ｖ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｍａｎｃｉｎｉ，Ｍ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，ａｎｄ  Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．（２００１）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：２−７；Ｇｏｔｔｌｉｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｍｉｎｕｃｃｉ，Ｓ．，Ｚｈｕ，Ｐ．，Ｋｒａｍｅｒ，Ｏ．Ｈ．，Ｓｃｈｉｍｐｆ，Ａ．，Ｇｉａｖａｒａ，Ｓ．，Ｓｌｅｅｍａｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｌｏ  Ｃｏｃｏ，Ｆ．，Ｎｅｒｖｉ，Ｃ．，Ｐｅｌｉｃｃｉ，Ｐ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｈｅｉｎｚｅｌ，Ｔ．（２００１）Ｖａｌｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｆｉｎｅｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ＨＤＡＣ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ．ＥＭＢＯ  Ｊ．２０：６９６９−６９７８）。よって、本発明の化合物は、アポトーシス誘導剤、分化誘導剤、およびがん転移抑制剤として利用できる。
また、ＨＤＡＣを阻害する化合物は、血管新生を阻害すると予想されている（Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｌｅｅ，Ｙ．Ｍ．，Ｂａｅｋ，Ｊ．Ｈ．，Ｊａｎｇ，Ｊ．Ｅ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｗ．，Ｍｏｏｎ，Ｅ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｈ．Ｓ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｋ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｈ．Ｙ．，Ｋｉｍ，Ｃ．Ｗ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００１）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．７，４３７−４４３；Ｋｗｏｎ，Ｈ．Ｊ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｓ．，Ｋｉｍ，Ｍ．Ｊ．，Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｋ．Ｗ．（２００２）Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＦＫ２２８  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９７，２９０−２９６）。よって、本発明の化合物は、血管新生阻害剤としても利用できる。
また、本発明の化合物は、種々のＨＤＡＣのうち、ＨＤＡＣ１，４または６に対して強い阻害活性を示す。そのため、本発明の化合物は、ＨＤＡＣ１，４または６に起因した疾患の治療または予防のための薬剤として有用になる。この疾患としては、がん以外にも、ＨＤＡＣ１，４または６が関与した自己免疫疾患、神経変性疾患、皮膚病、感染症などを含めることができる。また、本発明の化合物は、上記疾患の治療または予防のための薬剤への応用だけでなく、遺伝子治療におけるベクター導入の効率化、導入遺伝子の発現亢進などのような遺伝子治療の補助剤あるいは促進剤として応用してもよい。
また、本発明の化合物はレチノイン酸やＤＮＡメチル化阻害剤と併用することができる。本発明は、このような併用剤もまた提供するものである。
本発明の化合物を製剤化する場合には、必要に応じて充填剤、増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは賦形剤を用いることができる。また、この医薬製剤中に着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を医薬製剤中に含有させてもよい。この医薬製剤としては各種の形態が治療目的または予防目的に応じて選択でき、例えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤、坐剤等が挙げられる。
錠剤、カプセル剤に混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖又はサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油又はチェリーのような香味剤が用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記の材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。
また、注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ−５０と併用してもよい。
油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
患者への投与は、経口、非経口投与のいずれでも可能である。非経口投与の剤型としては、例えば、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型などが挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などにより全身または局部的に投与することができる。また、鼻腔内的、経気管支的、筋内的、経皮的、または経口的に当業者に公知の方法により投与しうる。
本発明の化合物を非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法によっても異なるが、例えば注射剤の形では通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、通常、１日当り約０．０１から３０ｍｇ、好ましくは約０．１から２０ｍｇ、より好ましくは約０．１から１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であると考えられる。他の動物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量、あるいは体表面積あたりに換算した量を投与することができる。
また、本発明の化合物を経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法によっても異なるが、例えば通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、１日あたり約１００μｇから２０ｍｇであると考えられる。
なお、本明細書において引用されたすべての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
【図面の簡単な説明】  図１は、一般式（１）の化合物を示した図である。
図２は、一般式（１）の化合物における置換基Ｘの代表的な例を示した図である。
図３は、天然のＣｙｌ−１，Ｃｙｌ−２は立体コンフォメーションを示す図である。
図４は、細胞内でのチューブリン及びヒストンアセチル化レベルを、抗アセチル化リジン抗体を用いたウェスタンにより測定した結果を示す写真である。図中Ｒ４，Ｒ５，Ｒ６は各々Ｎ（ＯＨ）ＣＯＨ（ｎ＝４），Ｎ（ＯＨ）ＣＯＨ（ｎ＝５），Ｎ（ＯＨ）ＣＯＨ（ｎ＝６）を示す。
図５は、Ｏ−ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ（ＯＰＤ）、Ｏ−ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌのアミド（ＯＡＰＯＨ）、Ｏ−ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌのエステル（ＯＡＰＮＨ）、Ｏ−ａｍｉｎｏｔｈｉｏｐｈｅｎｏｌ（ＯＡＴＰ）の構造式を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、本発明を実施例により、さらに具体的に説明するが本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
本発明の各化合物の合成工程について以下に詳細に説明する。なお、ここでは２−ａｍｉｎｏ−６−ｂｒｏｍｏｈｅｘａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｂ６」と、２−ａｍｉｎｏ−６−ａｃｅｔｙｌｔｈｉｏｈｅｘａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ６（Ａｃ）」、２−ａｍｉｎｏ−６−（３’，３’，３’−ｔｒｉｆｌｕｏｒａｃｅｔｏｎｙｌｔｈｉｏ）−ｈｅｘａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｍ６（Ｔｆａｃｅｔ）」、２，８−ｄｉａｍｉｎｏｏｃｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａ２ｏｃ」、２−ａｍｉｎｏ−７−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎｙｌｈｅｐｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｐｈ」、α−ａｍｉｎｏｓｕｂｅｒｉｃ  ａｃｉｄを「Ａｓｕ」、ｆｏｒｍｙｌ基を「Ｆｏｒ」、ｈｏｍｏｌｙｓｉｎｅを「Ｈｌｙ」、２−ａｍｉｎｏ−８−ｏｘｏ−９，９，９−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｎｏｎａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ｔｆｍ」、Ｏ−ｍｅｔｈｙｌｔｙｒｏｓｉｎｅは「Ｔｙｒ（Ｍｅ）」、２−ａｍｉｎｏ−８−ｏｘｏ−９，９，１０，１０，１０−ｐｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｄｅｃａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを「Ｐｆｅ」、ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄを「Ｐｉｐ」と略す。また、Ｏ−ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅを「ＯＰＤ」、Ｏ−ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌのアミドを「ＯＡＰＯＨ」、Ｏ−ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌのエステルを「ＯＡＰＮＨ」、Ｏ−ａｍｉｎｏｔｈｉｏｐｈｅｎｏｌを「ＯＡＴＰ」と略す。
実施例１．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｓｕ（ＯＭｅ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
既存の方法で合成したｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｓｕ（ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（０．１５０ｍｍｏｌ，１００ｍｇ）をＭｅＯＨ（１ｍｌ）に溶解した。４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（５０μｌ）を加え、室温で８時間放置した。反応液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｋｇｅｌ  ６０  Φ１．５ｘ１５ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。収量６５ｍｇ（０．１１３ｍｍｏｌ，７６％）。
実施例２．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）およびｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
（１）Ａｃ−ＤＬ−Ａｂ６−ＯｔＢｕの合成
Ａｃ−ＤＬ−Ａｂ６−ＯＨ（１．２６ｇ，５０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍｌ）に溶解し、濃硫酸（１ｍｌ）を加えた。氷冷下、イソブチレンガス（５０ｍｌ）を吹き込み、室温で１１日間放置した。４％炭酸水素ナトリウム水溶液（８０ｍｌ）を加えた後、放置してイソブチレンガスを揮発させた。ＤＣＭ溶液を１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、ＤＣＭを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、シロップ状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ５．０ｘ１０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．８（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量９．２５ｇ（３０．１ｍｍｏｌ，６０％）。
（２）Ａｃ−ＤＬ−Ｌｙｓ（ＯＢｚｌ）−ＯｔＢｕの合成
Ａｃ−ＤＬ−Ａｂ６−ＯｔＢｕ（９．２５ｇ，３０ｍｍｏｌ）をメタノール（１２０ｍｌ）に溶解し、Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩（９．５８ｇ，６０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２０．９ｍｌ，１２０ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で４日間還流を行った。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出した。４％炭酸水素ナトリウム水溶液、蒸留水で１回ずつ洗浄した後、炭酸ナトリウムで乾燥し、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し、シロップ状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ５．０ｘ２２ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．３（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量５．１３ｇ（１４．６ｍｍｏｌ，４９％）。
（３）Ａｃ−ＤＬ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯｔＢｕの合成
氷冷下Ａｃ−ＤＬ−Ｌｙｓ（ＯＢｚｌ）−ＯｔＢｕ（４．０１ｇ，１１．５ｍｍｏｌ）にギ酸（５８ｍｌ）および無水酢酸（５．４ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出した。３回水洗後、硫酸マグネシウムで乾燥し、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、シロップ状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ２０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．４５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９  １）。収量３．２７ｇ（８．５３ｍｍｏｌ，７５％）。
（４）Ａｃ−ＤＬ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成
Ａｃ−ＤＬ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯｔＢｕ（３．２７ｇ，８．５３ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（９ｍｌ）を加え、室温で２時間放置した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出した。３回水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。
（５）Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成
Ａｃ−ＤＬ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨ（８．５３ｍｍｏｌ）を蒸留水（２ｍｌ）に溶解し、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いて溶液のｐＨを７に調整した。塩化コバルト６水和物（７ｍｇ）およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｇｅｎｕｓアミノアシラーゼ（２６０ｍｇ）を加え、４０℃で一晩放置した。反応液を５ｍｌまで濃縮し、ジオキサン（５ｍｌ）を加えた。氷冷下Ｂｏｃ２Ｏ（１．８６ｇ，８．５２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．７９ｍｌ，１２．８ｍｍｏｌ）を加え、６時間攪拌した。ジオキサンを留去し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液および水で各３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去して油状の目的物を得た。収量２．３４ｇ（６．１５ｍｍｏｌ，１００％）。
（６）Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨ（２．３４ｇ，６．１５ｍｍｏｌ）およびＴｍｓｅ−ＯＨ（１．７６ｍｌ，１２．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍｌ）に溶解し，氷冷下ＤＭＡＰ（１５ｍｇ，０．６２ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１．５２ｇ，７．３８ｍｍｏｌ）を加え、１０時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回ずつ洗浄し、硫酸マグネシウム乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ２．４ｘ２０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＡｃＯＥｔ／ｈｅｘａｎｅ，１／４）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。収量３３８ｍｇ（０．７ｍｍｏｌ，１１％）。
（７）Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ（２．８８ｇ，１２ｍｍｏｌ）、ＨＣｌ・Ｈ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ（２．５５ｇ，１０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（２．３０ｇ，１５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷下Ｅｔ３Ｎ（１．４ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（３．１０ｇ，１５ｍｍｏｌ）を加えた。一晩攪拌し、不溶物を濾過し反応液を濃縮した。残渣を酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、および飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去してフォーム状の目的物を得た。収量３．７９ｇ（９．１ｍｍｏｌ，９１％）。
（８）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ（２．６４ｇ，６．１ｍｍｏｌ）に氷冷下ＴＦＡ（４ｍｌ）を加え、３０分間放置した。ＴＦＡを留去した後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−ＯＨ（２．１６ｇ，７．３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１．４０ｇ，９．１５ｍｍｏｌ）を加え、ＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解した。氷冷下ＨＢＴＵ（３．４７ｇ，９．１５ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（３．５１ｍｌ，２５ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製してフォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ５．０ｘ１２ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．７５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量２．４５ｇ（４．０２ｍｍｏｌ，６６％）。
（９）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−ＩＬｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＢｚｌ（２．４５ｇ，４．０２ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−Ｃ（５００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で３時間攪拌した。反応確認後Ｐｄ−Ｃを濾過し、メタノールを留去してフォーム状の目的物を得た。収量１．９８ｇ（３．８１ｍｍｏｌ，９５％）。
（１０）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
氷冷下Ｂｏｃ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（３３８ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（１ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡを留去した後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨ（３６３ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１６０ｍｇ，１．０５ｍｍｏｌ）を加え、ＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解した。氷冷下ＨＢＴＵ（３９８ｍｇ，１．０５ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．４１ｍｌ，２．９ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ１．５ｘ１２ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．３（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量４８５ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ，７９％）。
（１１）ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（４８５ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．５ｍｌ）に溶解し、１Ｍ  ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（２．２ｍｌ，２．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分放置した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、蒸留水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して酢酸エチルを留去した。これに、氷冷下ＴＦＡ（２ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡを留去した後、ジエチルエーテルおよび石油エーテルを加えて白色の粉末を得た。収量４８９ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ，１００％）。
（１２）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）およびｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨ（４８９ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。ＤＭＦ（２７５ｍｌ）中に、上記テトラペプチド／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）、ＨＡＴＵ（６３ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）および０．０７６Ｍ  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。これを５回繰り返した後、反応液を濃縮して、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ジアステレオマー（ＬＤＬＬ−体およびＬＤＬＤ−体）の分離を行い、それぞれフォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ１．５ｘ３５ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＬＤＬＬ−体：収量８８ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ，２４％）、ＴＬＣ：Ｒｆ，０．８（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２２．４４ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＬＤＬＤ−体：収量９２ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ，２５％）、ＴＬＣ：Ｒｆ，０．９（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２４．５９ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。
（１３）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）（８８ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−Ｃ（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃを濾過し、メタノールを留去した。凍結乾燥を行い、白色粉末を得た。収量７６ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ，１００％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：１７．７８ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，５７４．３２２８［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，５７３．３１６３，Ｃ２９Ｈ４３Ｏ７Ｎ５）。
（１４）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｌｙｓ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）（９２ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶解した。Ｐｄ−Ｃ（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１時間攪拌した。ＨＰＬＣにて反応確認後、Ｐｄ−Ｃを濾過し、メタノールを留去した。凍結乾燥を行い、白色粉末を得た。収量７５ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ，９３％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：１９．５７ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，５７４．３２３０［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，５７３．３１６３，Ｃ２９Ｈ４３Ｏ７Ｎ５）。
実施例３．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）およびｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
（１）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ（２．７ｇ，８．３ｍｍｏｌ）およびＴｍｓｅ−ＯＨ（２．３７ｍｌ，１６．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４ｍｌ）に溶解し、氷冷下ＤＭＡＰ（１０１ｍｇ，０．８３ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（２．０５ｇ，９．９６ｍｍｏｌ）を加え、６時間攪拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出を行った。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウム乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ２０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＡｃＯＥｔ／ｈｅｘａｎｅ，１／８）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．８５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量１．９２ｍｇ（４．５４ｍｍｏｌ，５５％）。
（２）ギ酸Ｏ−ベンジルヒドロキシアミドの合成
Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩（３．１９ｇ，２０ｍｍｏｌ）をクロロホルムに溶解し、４％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、炭酸ナトリウムで乾燥後、クロロホルムを留去した。これをギ酸（２０ｍｌ）に溶解した。一方氷冷下で無水酢酸（７．５ｍｌ，８０ｍｍｏｌ）をギ酸（４０ｍｌ）に加え３０分間放置した。これに、上記Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミンのギ酸溶液を加え、２４時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、炭酸ナトリウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、シロップ状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ５．０ｘ１２ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＡｃＯＥｔ／ｈｅｘａｎｅ，１／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．３（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量１．６９ｇ（１１．２ｍｍｏｌ，５６％）。
（３）Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＴｍｓｅ（８４６ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）、ギ酸Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミド（４５３ｍｇ，３．０ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（１６６ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．２０ｇ，８．０ｍｍｏｌ）を無水アセトン（４０ｍｌ）に溶解し、９０℃で４日間還流を行った。反応液を濾過後、濃縮した。ジエチルエーテルで抽出し、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で１回、蒸留水で２回洗浄した後、無水炭酸ナトリウムで乾燥し、ジエチルエーテルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ２．４ｘ１５ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＡｃＯＥｔ／ｈｅｘａｎｅ，１／３）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量２３５ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ，２４％）。
（４）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
氷冷下Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（２３５ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（１ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡを留去した後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨ（２３３ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１１０ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）を加え、ＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解した。氷冷下ＨＢＴＵ（２７３ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．２７ｍｌ，１．９ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウム乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ２．４ｘ２０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．６５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量２８９ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ，７１％）。
（５）ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（２８９ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解させ、１Ｍ  ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（０．７ｍｌ，０．７ｍｍｏｌ）を加え、３０分放置した。反応液を濃縮後、酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、蒸留水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。これに、氷冷下ＴＦＡ（３ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡを留去した後、ジエチルエーテルおよび石油エーテルを加えて白色の粉末を得た。収量２６１ｍｇ（０．３２ｍｍｏｌ，１００％）。
（６）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）およびｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨ（２６１ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解した。ＤＭＦ（２７０ｍｌ）中に、上記テトラペプチド／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）、ＨＡＴＵ（６２ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）および０．０７５Ｍ  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）を加え、室温で４５分間攪拌した。これを３回繰り返した後、反応液を濃縮した。酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウム乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ジアステレオマー（ＬＤＬＬ−体およびＬＤＬＤ−体）の分離を行った（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ１．５ｘ３６ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＬＤＬＬ−体：収量６１ｍｇ（０．０９０ｍｍｏｌ，２８％）、ＴＬＣ：Ｒｆ，０．５５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２２．４０ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｃ８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＬＤＬＤ−体：収量６０ｍｇ（０．０８９ｍｍｏｌ，２８％）、ＴＬＣ：Ｒｆ，０．６５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２４．２９ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｃ８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。
（７）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）（６１ｍｇ，０．０９０ｍｍｏｌ）を酢酸（２ｍｌ）に溶解した。Ｐｄ−Ｃ（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃを濾過し、酢酸を留去した。凍結乾燥を行い、白色粉末を得た。収量４８ｍｇ（０．０８２ｍｍｏｌ，９１％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：１６．０２ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｏｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，５８８．３３７９［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，５８７．３３１９，Ｃ３０Ｈ４５Ｏ７Ｎ５）。
（８）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）（６０ｍｇ，０．０８９ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−Ｃ（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃを濾過し、メタノールを留去した。凍結乾燥を行い、白色粉末を得た。収量３８ｍｇ（０．０６５ｍｍｏｌ，７３％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：１８．６８ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，５８８．３３８８［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，５８７．３３１９，Ｃ３０Ｈ４５Ｏ７Ｎ５）。
実施例４．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）の合成
（１）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＨ（１．４６ｇ，４．５ｍｍｏｌ）およびＴｍｓｅ−ＯＨ（０．７７ｍｌ，５．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷下でＤＭＡＰ（５５ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１．１ｇ，５．４ｍｍｏｌ）を加え、１６時間撹拌した。溶媒を留去し、酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．９５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量１．２５ｇ（３．０ｍｍｏｌ，６７％）。
（２）Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＴｍｓｅ（２．３ｇ，５．５ｍｍｏｌ）、ギ酸Ｏ−ベンジルヒドルキシルアミド（１．４５ｇ，９．６ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（４６５ｍｇ，２．８ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３．０４ｇ，２２ｍｍｏｌ）を無水アセトン（５０ｍｌ）に溶解させ、９０℃で３６時間還流を行った。反応液を濾過後、濃縮した。ジエチルエーテルで抽出し、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で１回、蒸留水で２回洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥し、ジエチルエーテルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．４（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量１．３３ｇ（２．７ｍｍｏｌ，４９％）。
（３）Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ（１．１９ｇ，５．０ｍｍｏｌ）およびＨＣｌ・Ｈ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．０２ｇ，５．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷下ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（７６５ｍｇ，５．０ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（１．２４ｇ，６．０ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．７ｍｌ，５．０ｍｍｏｌ）を加え１６時間撹拌した。溶媒を留去し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．８（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，１９／１）。収量１．００ｇ（２．６ｍｍｏｌ，５２％）。
（４）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
氷冷下Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．００ｇ，２．６ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（４ｍｌ）を加え、３０分間放置した。ＴＦＡを留去し、減圧下で乾燥した。これをＤＭＦ（６ｍｌ）に溶解し、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−ＯＨ（７７０ｍｇ，２．６ｍｍｏｌ）を加え、続いて氷冷下ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（５９７ｍｇ，３．９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１．５０ｇ，３．９ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．８８ｍｌ，６．３ｍｍｏｌ）を加え１６時間撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．４５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，１９／１）。収量１．１７ｇ（２．０６ｍｍｏｌ，７９％）。
（５）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（５９５ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−Ｃ（２００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下で３時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃを濾過し、メタノールを留去し、フォーム状の目的物を得た。収量３８０ｍｇ（０．８ｍｍｏｌ，８０％）
（６）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
氷冷下Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（３９４ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（２ｍｌ）を加え、３０分間放置した。ＴＦＡを留去し、減圧乾燥した。これをＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ（３８０ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１８３ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（４６１ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．２３ｍｌ，１．６ｍｍｏｌ）を加え１６時間撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．６（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，１９／１）。収量４７０ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ，６９％）。
（７）ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（４７０ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解させ、１Ｍ  ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（１．９ｍｌ，１．９ｍｍｏｌ）を加え室温で２時間放置した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、蒸留水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。これに氷冷下ＴＦＡ（２ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡ留去後、ジエチルエーテルを加えて白色粉末を得た。収量４３７ｍｇ（０．５５ｍｍｏｌ，１００％）。
（８）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）の合成
ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨ（４３７ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解した。ＤＭＦ（１６０ｍｌ）中に上記テトラペプチド／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）、ＨＡＴＵ（６３ｍｇ，０．０１７ｍｍｏｌ）および０．０５７Ｍ  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ，０．３３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分攪拌した。これを３回繰り返した後、反応液を濃縮した。酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色粉末を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ１．５ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．５５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，１９／１）。収量１６０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ，４４％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：７．２ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ−１８ｅ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：２ｍｌ／ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６６４．３７３５［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，６６３．３６３２，Ｃ３６Ｈ５０Ｏ７Ｎ５）。
（９）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｒｏ−）（１６０ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を酢酸（３ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−硫酸バリウム（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で５時間攪拌した。Ｐｄ−硫酸バリウムを濾過し、溶媒を留去し、ジエチルエーテルで結晶化した。収量６８ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ，５０％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：６．２ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ−１８ｅ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：２ｍｌ／ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，５７４．３２５９［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，５７３．３１６３，Ｃ２９Ｈ４４Ｏ７Ｎ５）。
実施例５．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
（１）Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−ＯＨ・１／２Ｈ２Ｏ（１．３９ｇ，６．０ｍｍｏｌ）およびＨＣｌ・Ｈ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（９５６ｍｇ，４．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解し、氷冷下ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（６１３ｍｇ，４．０ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（１．２４ｇ，６．０ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．７０ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）を加え８時間撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９  １）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．９２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量１．６３ｇ（３．３８ｍｍｏｌ，８５％）。
（２）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
氷冷下Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．６３ｇ，３．３８ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（５ｍｌ）を加え、３０分間放置した。ＴＦＡを留去し、減圧乾燥した。これをＤＭＦ（８ｍｌ）に溶解し、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−ＯＨ（１．５０ｇ，５．０７ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（５１８ｍｇ，３．３８ｍｍｏｌ），ＨＢＴＵ（１．９２ｇ，５．０７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２．３７ｍｌ，１６．９ｍｍｏｌ）を加え３時間撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．８９（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量１．４４ｇ（２．４２ｍｍｏｌ，７２％）。
（３）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（１．４４ｇ，２．４２ｍｍｏｌ）をメタノール（１２ｍｌ）に溶解させ、Ｐｄ−Ｃ（１５０ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で５時間攪拌を行った。Ｐｄ−Ｃを濾過し、メタノールを留去し、フォーム状の目的物を得た。収量１．２１ｇ（２．４ｍｍｏｌ，９９％）。
（４）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
氷冷下Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（５９３ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（５ｍｌ）を加え、３０分間放置した。ＴＦＡを留去し、減圧乾燥した。これをＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解し、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（６６０ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（２３０ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（７６０ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．５６ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）を加え１６時間撹拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．７（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量８３０ｍｇ（０．９４ｍｍｏｌ，８３％）。
（５）ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（８３０ｍｇ，０．９４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、１Ｍ  ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（１．９ｍｌ，１．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間放置した。反応液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、蒸留水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。これに氷冷下ＴＦＡ（２ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡ留去後、ジエチルエーテルを加えて、白色粉末を得た。収量４３７ｍｇ（０．７８ｍｍｏｌ，９３％）。
（６）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨ（４３７ｍｇ，０．７８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＭＦ（１６０ｍｌ）中に上記テトラペプチド／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）、ＨＡＴＵ（８９ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）および０．０８Ｍ  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ，０．４７ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分攪拌した。同様の操作を５回繰り返した後、反応液を濃縮した。酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、白色粉末を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ１．５ｘ３０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．６５（ＣＨＣｌ／ＭｅＯＨ，９／１）。収量３４０ｍｇ（０．５１ｍｍｏｌ，６６％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：８．２ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ−１８ｅ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：２ｍｌ／ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６６４．３７００［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，６６３．３６３２，Ｃ３６Ｈ５０Ｏ７Ｎ５）。
（７）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｈｌｙ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（２００ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）をメタノール（３ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ−硫酸バリウム（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１５時間攪拌した。Ｐｄ−硫酸バリウム触媒を濾過した後、溶媒を留去した。凍結乾燥で白色粉末を得た。収量１１９ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ，７０％）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｒｉｏｎ  ｔｉｍｅ：７．０ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ＲＰ−１８ｅ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：２ｍｌ／ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，５７４．３２２９［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，５７３．３１６３，Ｃ２９Ｈ４４Ｏ７Ｎ５）。
実施例６．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）およびｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
（１）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ８−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ８−ＯＨ（３．３７ｇ，１０ｍｍｏｌ）およびＴｍｓｅ−ＯＨ（２．８６ｍｌ，２０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解させ、氷冷下、ＤＭＡＰ（１２２ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（２．４８ｇ，１２ｍｍｏｌ）を加え、６時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。
１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４×１５ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＡｃＯＥｔ／ｈｅｘａｎｅ，１／８）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．９（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量４．２０ｍｇ（９．６０ｍｍｏｌ，９６％）。
（２）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ８−ＯＴｍｓｅ（２．３９ｇ，５．５０ｍｍｏｌ）、ギ酸Ｏ−ベンジルヒドロキシルアミド（１．２４ｇ，８．２ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（４５６ｍｇ，２．７５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３．３０ｇ，２２ｍｍｏｌ）を無水アセトン（１１０ｍｌ）に溶解し、９０℃で６日間還流した。反応液を濾過後、濃縮した。ジエチルエーテルで抽出し、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で１回、蒸留水で３回洗浄した後、炭酸ナトリウムで乾燥後、ジエチルエーテルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、油状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ３．４ｘ２０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＡｃＯＥｔ／ｈｅｘａｎｅ，１／４）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，４９／１）。収量８１４ｍｇ（１．６０ｍｍｏｌ，２９％）。
（３）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅの合成
氷冷下Ｂｏｃ−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（４８７ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）にＴＦＡ（２ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡを留去した後、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−ＯＨ（８４１ｍｇ，１．６１ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（２３０ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）を加え、ＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解した。氷冷下ＨＢＴＵ（５６９ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．６０ｍｌ，４．３０ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ２．４ｘ１３ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．６５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。収量２１３ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ，２４％）。
（４）ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＴｍｓｅ（２１３ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．５ｍｌ）に溶解させ、１Ｍ  ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（０．５ｍｌ，０．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分放置した。反応液を濃縮後、酢酸エチルで抽出した。１０％クエン酸水溶液および蒸留水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。残った油状物に、氷冷下ＴＦＡ（２ｍｌ）を加え、３０分放置した。ＴＦＡを留去後、ジエチルエーテルおよび石油エーテルを加え、白色粉末を得た。収量１８６ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ，１００％）。
（５）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−）の合成
ＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−ＯＨ（２６１ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解した。ＤＭＦ（２００ｍｌ）中に、上記テトラペプチド／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）、ＨＡＴＵ（４４ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）および０．０５３Ｍ  ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液（１ｍｌ）を加え、室温で４０分間攪拌した。これを３回繰り返した後、反応液を濃縮した。酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製し、フォーム状の目的物を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ１．５ｘ３５ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）。収量４７ｍｇ（０．０６８ｍｍｏｌ，２１％）。ＬＤＬＬ−体：ＴＬＣ：Ｒｆ，０．６（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２４．０２ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＬＤＬＤ−体：ＴＬＣ：Ｒｆ，０．６５（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２６．５６ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。
（６）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｐｉｐ−）およびｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｉｐ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａ２ｏｃ（Ｆｏｒ，ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−ＤＬ−Ｐｉｐ−）（４７ｍｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）を酢酸（１ｍｌ）に溶解した。Ｐｄ−Ｃ（１００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃを濾過し、酢酸を留去した。ＨＰＬＣ分取により、ジアステレオマー（ＬＤＬＬ−体およびＬＤＬＤ−体）の分離、精製を行った。凍結乾燥により、それぞれ白色の粉末を得た（ｃｏｌｕｍｎ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｃ８  Φ１０ｘ２５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  ４４−５３％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ２０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：３ｍｌ／ｍｉｎ）。ＬＤＬＬ−体：収量１０ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ，２５％）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２０．１４ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：Ｗａｋｏ  Ｐａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６０２．３５２１［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，６０１．３４７６，Ｃ３１Ｈ４７Ｏ７Ｎ５）。ＬＤＬＤ−体：収量６ｍｇ（０．０１０ｍｍｏｌ，１５％）、ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ：２２．４３ｍｉｎ（ｃｏｌｕｍｎ：ＷａｋｏＰａｋ  Ｃ１８  Φ４．６ｘ１５０ｍｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨ３ＣＮ  １０−１００％／０．１％  ＴＦＡ  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｏｖｅｒ  ３０ｍｉｎ，ｆｌｏｗ  ｒａｔｅ：１ｍｌ／ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６０２．３５２６［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，６０１．３４７６，Ｃ３１Ｈ４７Ｏ７Ｎ５）。
実施例７．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ６（Ｔｆａｃｅｔ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
（１）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨ（６２２ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）およびベンジルアルコール（０．２６ｍｌ，２．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８ｍｌ）に溶解させ、氷冷下でＤＭＡＰ（２４ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（４５３ｍｇ，２．２ｍｍｏｌ）を加え一夜撹拌した。ＤＣＭを留去し、残渣に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。真空乾燥後、フラッシュクロマトグラフィー（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ２．５ｘ１５ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）で精製し、フォームを得た。収量６２６ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ，７８％）。
ＴＬＣ：Ｒｆ，０．９４（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。
（２）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＢｚｌ（６２６ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）に氷冷下ＴＦＡ（２ｍｌ）を加え、３０分間０℃で放置し、Ｂｏｃ基を除去した。ＴＦＡ留去後、減圧下乾燥しＨ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＢｚｌ・ＴＦＡの油状物を得た。これにＢｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（８７０ｍｇ，１．７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解し、氷冷下でＨＡＴＵ（７１２ｍｇ，１．９ｍｍｏｌ）、およびＥｔ３Ｎ（０．７ｍｌ，４．８ｍｍｏｌ）を加え３時間攪拌した。ＤＭＦを留去し、残渣に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去した。真空乾燥後、フラッシュクロマトグラフィー（ｃｏｌｕｍｎ：Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Φ２．５ｘ２０ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９９／１）で精製し、フォームを得た。収量１．１ｇ（１．４ｍｍｏｌ，８９％）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．９２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。
（３）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＢｚｌ（１．１ｇ，１．４ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（８０ｍｇ）を加えてＨ２ガスと６時間反応させた。メタノールを留去し、真空乾燥してフォームを得た。収量９２５ｍｇ（１．３ｍｍｏｌ，９６％）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．５２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。
（４）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ６−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨ（９２５ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）に氷冷下ＴＦＡ（３ｍＬ）を加え、３０分間０℃で放置しＢｏｃ基を除去した。ＴＦＡを留去し、エーテル−石油エーテルを加えて白色粉末を得た。Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｌ−Ａｂ６−ＯＨ・ＴＦＡ，ＨＢＴＵ（７５９ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ），ＨＯＢｔ（３０６ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．４６ｍｌ）を５分割して３０分毎にＤＭＦ（２４０ｍｌ）に加えて、環化反応を行った。２時間後溶媒を留去して残渣を酢酸エチルに取り、１０％クエン酸水溶液、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、および食塩水で３回洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを留去し、残った油状物をシリカゲルカラムで精製して、フォームを得た。収量２６７ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ，３２％）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．８２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。ＲＰ−ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ，９．０４ｍｉｎ．ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，５７９．２１９７［Ｍ＋Ｈ］＋，（Ｃａｌｃｄ．，５７８．２１３２，Ｃ２７Ｈ４０Ｏ５Ｎ４Ｓ７９Ｂｒ）。
（５）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ６（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｂ６−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（２３０ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）、およびチオ酢酸カリウム（６９ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍｌ）溶液にを加えて３時間反応させた。ＤＭＦを留去し、残渣を酢酸エチルに抽出し、１０％クエン酸水溶液および飽和食塩水でそれぞれ３回洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを留去し、フォームを得た。収量２３０ｍｇ（＞１００％）。ＴＬＣ：Ｒｆ，０．８２（ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ，９／１）。
（６）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ６（Ｔｆａｃｅｔ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｍ６（Ａｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（１１４ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液にメタノール性アンモニア（１．０ｍｌ）を作用させてアセチル基を除去した。溶媒留去後ＤＭＦ（１．５ｍｌ）に溶かし、３−Ｂｒｏｍｏ−１．１．１−ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｏｎｅ（０．０６２ｍｌ，０．６０ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．０８５ｍｌ，０．６０ｍｍｏｌ）を加え、一夜反応させた。ＤＭＦを留去し、残渣を酢酸エチルに抽出し、１０％クエン酸水溶液および食塩水でそれぞれ３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを留去して残った油状物をＨＰＬＣで精製し、白色粉末１５ｍｇ（１２％）を得た。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６４３．２７６８［Ｍ＋Ｈ］＋，（Ｃａｌｃｄ．，６４２．２７０７，Ｃ３０Ｈ４２Ｏ６Ｎ４Ｆ３Ｓ）。
実施例８．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｔｆｍ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
（１）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｓｕ（Ｏ−・Ｌｉ＋）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｓｕ（ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（４１０ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）をＬｉＯＨ（５３ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）と共にＴＨＦ（２ｍＬ）および水（２ｍｌ）に溶解し、氷温で一夜撹拌した。溶媒を留去し、エーテルを加えて固化した。収量３５５ｍｇ（１００％）。ＨＰＬＣ：９．７ｍｉｎ（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ，１０−１００％  ＣＨ３ＣＮ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ０．１％  ＴＦＡ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ）。
（２）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｔｆｍ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成：
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｓｕ（Ｏ−・Ｌｉ＋）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（３５５ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）に溶解し、氷温で（ＣＦ３ＣＯ）２Ｏ（０．６ｍｌ，３．８ｍｍｏｌ）を加え、次いでピリジン（０．４１ｍｌ，５ｍｍｏｌ）を加えて室温で４時間撹拌した。反応液に水（１０ｍｌ）を加えて振った後、目的化合物をＣＨ２Ｃｌ２に抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後留去し、残渣から目的化合物をＨＰＬＣで分離精製した。収量１５５ｍｇ（４０％）。ＨＰＬＣ：８．０ｍｉｎ（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ，１０−１００％  ＣＨ３ＣＮ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ０．１％  ＴＦＡ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６１１．３０４１［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，６１０．２９６６，Ｃ３０Ｈ４２Ｏ６Ｎ４Ｆ３）。
実施例９．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ｐｆｅ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｓｕ（Ｏ−・Ｌｉ＋）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）（３５５ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）に溶解し、氷温で（ＣＦ３ＣＦ２ＣＯ）２Ｏ（０．７５ｍｌ，３．８ｍｍｏｌ）を加え、次いでピリジン（０．４１ｍｌ，５ｍｍｏｌ）を加えて室温で４時間撹拌した。反応液に水（１０ｍｌ）を加えて振った後、目的化合物をＣＨ２Ｃｌ２に抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後留去し、残渣から目的化合物をＨＰＬＣで分離精製した。収量１６ｍｇ（５％）。ＨＰＬＣ：８．８ｍｉｎ（ｈｙｄｒａｔｅ）ａｎｄ  １０．５（ｋｅｔｏ）（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ，１０−１００％  ＣＨ３ＣＮ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ０．１％  ＴＦＡ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６６１．３０５０［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ．，６６０．２９５５，Ｃ３１Ｈ４２Ｆ５Ｏ６Ｎ４）。
実施例１０．  ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｐｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
（１）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−ＯＴｍｓｅの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｂ７−ＯＴｍｓｅ（４２５ｍｇ，１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍｌ）溶液に、ＮａＩ（１５０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）およびＰ（ＯＭｅ）３（５００ｍｇ，４ｍｍｏｌ）を加え７０℃で２０時間攪拌した。アセトニトリルを留去し、残渣を酢酸エチルに抽出して水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥後、酢酸エチルを留去してＢｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−ＯＴｍｓｅ（４４０ｍｇ，９８％）を得た。ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，３５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
（２）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−ＯＨの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−ＯＴｍｓｅ（４４０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液に、１Ｍ  ＴＢＡＦ／ＴＨＦ（２ｍｌ）を加え、２時間室温で攪拌した。ＤＭＦを留去した後残渣を酢酸エチルに溶解し、１０％クエン酸水溶液および食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを留去してＢｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−ＯＨ（２５０ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ，７０％）を得た。
（３）Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌの合成
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（４１６ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３ｍｌ）で３０分処理し、ＴＦＡを留去してＴＦＡ・Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌを得た。これにＢｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−ＯＨ（２５０ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）溶液、ＨＢＴＵ（４００ｍｇ，１．０５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ  １０７ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．５ｍｌ，３．５ｍｍｏｌ）を加えて０℃で終夜攪拌した。ＤＭＦを留去した後、残渣を酢酸エチルに抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％  ＮａＨＣＯ３水溶液、および飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを留去し、カラムクロマトグラフィーで精製して、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（２００ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ，３５％）を得た。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ：ｍ／ｚ，８５４［Ｍ＋Ｎａ］＋。
（４）ｃｙｃｌｏ（−Ｌ−Ａｐｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−）の合成
Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＢｚｌ（２００ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）をメタノール中５％  Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）存在下水素添加し、Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｐｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１６０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ，９２％）を得た。Ｂｏｃ基を氷冷下３０分のＴＦＡ（２ｍｌ）処理で除去し、ついでＴＦＡを留去後、エーテルによって固化した。得られたテトラペプチドＴＦＡ塩（１４０ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７５ｍｌ）溶液に、ＨＡＴＵ（１１４ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．１２ｍｌ，０．７ｍｍｏｌ）を加え室温で攪拌した。３時間後、減圧下ＤＭＦを留去し、残渣を酢酸エチルに抽出し、１０％クエン酸水溶液、４％  ＮａＨＣＯ３水溶液、および飽和食塩水でそれぞれ３回洗浄した後硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを留去し、残った油状物をカラムクロマトグラフィーで精製し、目的物（１５ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ，１１％）を得た。ＨＰＬＣ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ，７．０ｍｉｎ（Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ，１０−１００％  ＣＨ３ＣＮ  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ０．１％  ＴＦＡ  ｏｖｅｒ  １５ｍｉｎ）。ＨＲ−ＦＡＢＭＳ（ｍａｔｒｉｘ：２，２’−ｄｉｔｈｉｏｄｉｅｔｈａｎｏｌ）：ｍ／ｚ，６２３．３１７７［Ｍ＋Ｈ］＋（Ｃａｌｃｄ，６２３．３２１０，Ｃ３０Ｈ４７Ｏ８Ｎ４Ｐ）。
実施例１１．  ＨＤＡＣ酵素阻害活性の測定
本実施例では様々な官能基を置換基Ｘに有する環状テトラペプチド構造の化合物であるＮ（ＯＨ）ＣＯＨ（ｎ＝４），Ｎ（ＯＨ）ＣＯＨ（ｎ＝５），Ｎ（ＯＨ）ＣＯＨ（ｎ＝６），ＣＯＯＨ，ＣＯＯＭｅ，ＣＯＯＢｚｌ，Ｔｆｋ，Ｐｆｅｋ，Ｍｔｆｋ，Ｓｔｆｋ，ＳＭｅ，ＳＯ２Ｍｅ，Ａｐｈの酵素阻害活性の測定を行った。
活性を測定した化合物の置換基の構造の一覧を図２に示す。天然のＨＤＡＣ阻害剤である図３に示すようなＣｙｌ−１，Ｃｙｌ−２（Ｆｕｒｕｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，９８，８７−９２．）を元に環状テトラペプチド構造のコンフォメーション及び活性基までの炭素鎖数を検討した。天然のＣｙｌ−１，Ｃｙｌ−２は立体コンフォメーションがＬＤＬＬ体であるが、本実施例ではＬＤＬＬ体およびＬＤＬＤのコンフォメーションを持つものについても検討した。
ＨＤＡＣ阻害活性測定を行うにあたり、次の通りＨＤＡＣ溶液を調製した。１００ｍｍディッシュに１×１０７個の２９３Ｔ細胞をまき、２４時間後にヒトＨＤＡＣ１、４またはマウスＨＤＡＣ６を発現するベクター（１μｇ）をＬｉｐｏｆｅｃｔＡｍｉｎｅ  ２０００  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いてトランスフェクションした。なお、上記ヒトＨＤＡＣ１発現ベクターはｐｃＤＮＡ３−ＨＤ１（Ｙａｎｇ，Ｗ．  Ｍ．，Ｙａｏ，Ｙ．  Ｌ．，Ｓｕｎ，Ｊ．  Ｍ．，Ｄａｖｉｅ，Ｊ．  Ｒ．  ＆  Ｓｅｔｏ，Ｅ．（１９９７）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２，２８００１−２８００７．）、ヒトＨＤＡＣ４発現ベクターはｐｃＤＮＡ３．１（＋）−ＨＤ４（Ｆｉｓｃｈｌｅ，Ｗ．，Ｅｍｉｌｉａｎｉ，Ｓ．，Ｈｅｎｄｚｅｌ，Ｍ．  Ｊ．，Ｎａｇａｓｅ，Ｔ．，Ｎｏｍｕｒａ，Ｎ．，Ｖｏｅｌｔｅｒ，Ｗ．  ＆  Ｖｅｒｄｉｎ，Ｅ．（１９９９）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７４，１１７１３−１１７２０．）、マウスＨＤＡＣ６発現ベクターはｐｃＤＮＡ−ｍＨＤＡ２／ＨＤＡＣ６（Ｖｅｒｄｅｌ，Ａ．  ＆  Ｋｈｏｃｈｂｉｎ，Ｓ．（１９９９）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７４，２４４０−２４４５．）を用いた。
ＯＰＴＩ−ＭＥＭ中で５時間ベクターを取り込ませた後、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）に培地を交換して１９時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗った後、ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），１２０ｍＭ  ＮａＣｌ，５ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．５％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０）に懸濁し、ソニケーションした。上清を遠心分離により集め、ＰｒｏｔｅｉｎＡ／Ｇ  ｐｌｕｓ  ａｇａｒｏｓｅ  ｂｅａｄｓ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、非特異的タンパクを除いた。その後、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ４を発現させた細胞上清には、ａｎｔｉ−ＦＬＡＧ  Ｍ２抗体（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉｎｃ．）を加え、ＨＤＡＣ６を発現させた細胞上清にはａｎｔｉ−ＨＡ抗体（ｃｌｏｎｅ  ３Ｆ１０，Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を加えて４℃で１時間反応させた。
これにアガロースビーズを加えて４℃で１時間反応させた後、ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒでアガロースビーズを３回洗い、ＨＤ  ｂｕｆｆｅｒ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０），１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１０％グリセロール，ａ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ））で１回洗った。ＨＤ  ｂｕｆｆｅｒ（２００μｌ）中ＦＬＡＧペプチド（４０μｇ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉｎｃ．）またはＨＡペプチド（１００μｇ）で４℃、１時間インキュベートしてアガロースビーズから結合したタンパクを回収し、ＨＤＡＣ反応溶液とし、以下のＨＤＡＣ阻害活性測定に用いた。
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ系のＨＤＡＣ阻害活性を以下のように評価した。被験化合物をＤＭＳＯに溶解して、濃度１０ｍＭの原溶液を調製し、これを阻害剤の原溶液とした。アッセイは被験化合物存在下ＨＤＡＣ溶液とクマリンで標識したアセチル化ヒストンペプチド溶液を３７℃で３０分間インキュベートすることで行った（反応容積２０μｌ）。反応液に３０μｌのトリプシンを添加して、酵素反応で切り放されたアミノメチルクマリンを蛍光プレートリーダーで測定した。なお陰性コントロールとして、阻害剤を反応系に添加せず、同じ操作を行った。阻害活性は、陰性コントロールにおけるＨＤＡＣ活性の５０％阻害濃度（「ＩＣ５０（μＭ）」）で表した（表１）。
また、ｉｎ  ｖｉｖｏ系のＨＤＡＣ阻害活性はｐ２１プロモーター誘導活性を指標に次の通り測定した。実験に用いたＭＦＬＬ−９細胞はヒト野生型ｐ２１プロモーターとルシフェラーゼの融合遺伝子（Ｄｒ．  Ｂ．  Ｖｏｇｅｌｓｔａｅｉｎ）を安定に保持した細胞であり、１０％ＦＢＳを添加したフェノールレッド不含ＤＭＥＭ培地を用い、３７℃、５％二酸化炭素存在下、水蒸気飽和したインキュベーターを用いて培養を行った。このＭＦＬＬ−９細胞を８５０００個／ｗｅｌｌの細胞密度で９６穴マイクロプレートに播種し、各ｗｅｌｌ当たり上記の培地９９μｌ中で、６時間培養した後、被験化合物溶液１μｌを添加し、引き続き１８時間培養した。また、ここでもＴＳＡをＨＤＡＣ阻害活性に起因するｐ２１プロモーター誘導活性の陽性コントロール化合物とした。
Ｌｕｃ  Ｌｉｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｓｉｅｎｃｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を用い、細胞内に発現しているルシフェラーゼの酵素反応の生成物に起因する発光強度を測定した。被験化合物の活性強度はＴＳＡによる最大活性値の５０％の値を示す時の濃度（「ＥＣ５０（μＭ）」）を用いて比較した（表１）。
0004550738.tif 000019
表中ｙ（Ｍｅ）はＤ−Ｔｙｒ（Ｍｅ），Ｔｙｒ（Ｍｅ）はＯ−ｍｅｔｈｙｌｔｙｒｏｓｉｎｅ，ＩはＬ−Ｉｌｅ，ｐｉｐはＤ−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ，ＰｉｐはＬ−ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄを示す（アミノ酸は一文字表記で示しており、大文字はＬ体アミノ酸、小文字はＤ体アミノ酸を示す）。また、ＮＴはテストしていないことを示す。
以上の結果より、Ｘ部位の構造が違うと各酵素サブタイプに対する阻害活性が大きく異なるという、酵素サブタイプ選択的な阻害活性を持つことが示された。
本発明の化合物はＨＤＡＣ１，４および６に対して強い阻害活性を示した。環状テトラペプチド構造を有する化合物はＨＤＡＣ６を阻害することができないとされてきたが、本発明のようにテトラペプチド骨格の構造を変化させることでＨＤＡＣ６に対しても阻害能を持たせることが可能となった。また、Ｘ部位の構造が違うと各酵素サブタイプに対する阻害活性が大きく異なり、本発明の化合物が酵素サブタイプ選択的な阻害活性を持つことが示された。
本発明の化合物の製造方法によりテトラペプチド骨格の構造を容易に変えることで、化合物の標的酵素に対する選択性を容易に変化させることが出来ると期待される。
実施例１２．  細胞レベルでのＨＤＡＣ阻害活性の測定
チューブリンおよびヒストンのアセチル化レベルの測定は、ＨｅＬａ細胞に対して被験化合物を作用させ、抗アセチル化リジン抗体を使用してチューブリンおよびヒストンのアセチル化レベルをウェスタンで確認することにより行った。詳細には、ヒト子宮がん細胞（ＨｅＬａ）は１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地を用い、３７℃、５％二酸化炭素存在下、水蒸気飽和したインキュベーターを用いて培養を行った。この細胞を１５０００個／ｍｌの細胞密度で６穴プレートに２ｍｌ播種し、１８時間培養した後、被験化合物溶液を添加し、引き続き６時間培養した。細胞をＰＢＳで洗った後、ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１２０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０）に懸濁し、ソニケーションした。上清を遠心分離により集め、ＳＤＳ  ｂｕｆｆｅｒと混合し、１００℃で５分間処理したサンプルを１５％ＳＤＳゲルで電気泳動後、メンブレンフィルムにトランスファーした。１次抗体としてＡＫＬ５Ｃ１（ジャパンエナジー）、２次抗体：ａｎｔｉ−マウス（ＬＩＦＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ）で処理後ＥＣＬ（ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ）処理し、アセチル化バンドの検出を行った（図４）。なお、図４において記載している化合物の濃度の単位はμＭである。
図４に示す通り、ｐ２１プロモーター誘導活性測定の結果（ＥＣ５０）と一致した阻害傾向が示された。また、ＴｆｋおよびＮ（ＯＨ）ＣＯＨ（ｎ＝５）は細胞内でチューブリン脱アセチル化酵素を阻害し、チューブリンの高度なアセチル化を誘導した。このような酵素選択性は他の環状テトラペプチド構造を有するＨＤＡＣ阻害剤にはなかった性質である。
実施例１３．  細胞毒性テスト
Ｔｆｋ，Ｐｆｅｋ，ＭｔｆｋおよびＡｐｈの細胞毒性テストをヒト肺正常細胞（ＴＩＧ−３）、ヒト子宮がん細胞（ＨｅＬａ）を用いて行った。これらＴＩＧ−３細胞、ＨｅＬａ細胞を１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ培地を用い、３７℃、５％二酸化炭素存在下、水蒸気飽和したインキュベーターを用いて培養を行った。ＴＩＧ−３は１５０００個／ｗｅｌｌ、ＨｅＬａは５０００個／ｗｅｌｌの細胞密度で９６穴マイクロプレートに播種し、各ｗｅｌｌ当たり上記の培地１００μｌ中で１８時間培養した後、培地に希釈した被験化合物溶液を添加し、引き続き４８時間培養した。
各ｗｅｌｌにＣｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ＩＩ（ＸＴＴ）（ロシュ・ダイアグノスティックス）の基質混合溶液を５０μｌずつ入れ、十分時間インキュベートして呈色反応をさせた。十分な呈色反応が進んだら、ＯＤ４９５ｎｍの発色強度をマイクロプレートリーダーで測定した。阻害活性は、遊離ＸＴＴ率５０％となるときの濃度をＩＣ５０として示した。なお、がん細胞選択的細胞傷害活性の値（正常細胞ＴＩＧ  ＩＣ５０／がん細胞ＨｅＬａＩＣ５０）が高いほど、がん細胞選択的に細胞死を誘導していることを示す。
0004550738.tif 000020
上記表２に示されている通り、本発明における化合物はＴＳＡとほぼ同程度のがん細胞選択的に強い細胞傷害活性を有することが示された。
実施例１４．  ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＰＤ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）の合成
（１）ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）の合成
既存の方法で合成したｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＢｚｌ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）（３６０ｍｇ，０．５６ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を加えて５時間接触水素還元した。触媒を濾去し、メタノールを留去してｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）を得た。収量３１０ｍｇ（０．５６ｍｍｏｌ，１００％）。
（２）ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＰＤ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）の合成
ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）（１５０ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（４１ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１５４ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）、ｏ−ｐｈｅｎｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ（５８ｍｇ，０．５４ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１２ｍｌ，０．８ｍｍｏｌ）を０℃で加え３時間撹拌した。ゲル濾過クロマトグラフィーで精製し、ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＰＤ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  Φ２．０ｘ１００ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＤＭＦ）。収量１４０ｍｇ（０．２１６ｍｍｏｌ，８０％）。
実施例１５．  ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＡＰＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）およびｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＡＰＮＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）の合成
実施例１と同様の方法で合成したｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）（１５０ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（４１ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ試薬（１７９ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）、ｏ−ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌ（３５ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１２ｍｌ，０．８ｍｍｏｌ）を０℃で加え３時間撹拌した。ゲル濾過クロマトグラフィーで精製し、まずｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＡＰＯＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  Φ２．０ｘ１００ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＤＭＦ）。収量７０ｍｇ（０．１０８ｍｍｏｌ，４０％）さらに溶出を続けｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＡＰＮＨ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）を得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  Φ２．０ｘ１００ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＤＭＦ）。収量５０ｍｇ（０．０８ｍｍｏｌ，３０％）。
実施例１６．  ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＡＴＰ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）ｄｉｍｅｒの合成
実施例１と同様の方法で合成したｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）（１２５ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し、ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（３４ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ試薬（１４６ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）、ｏ−ａｍｉｎｏｔｈｉｏｐｈｅｎｏｌ（３３ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．１２ｍｌ，０．８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、３時間撹拌した。ゲル濾過クロマトグラフィーで精製し、ｃｙｃｌｏ（Ｌ−Ａｓｕ（ＯＡＴＰ）−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｍｅ）−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ｐｒｏ）のＳＳ−ｄｉｍｅｒを得た（ｃｏｌｕｍｎ：Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  Φ２．０ｘ１００ｃｍ，ｅｌｕｅｎｔ：ＤＭＦ）。収量１２０ｍｇ（０．０９ｍｍｏｌ，８０％）。このＳＳ−ｄｉｍｅｒはジチオスレイトールで還元すると、容易にＨＳ−体を与えた。
実施例１７．  ＨＤＡＣ酵素阻害活性の測定
ＯＰＤ、ＯＡＰＯＨ、ＯＡＰＮＨ、ＯＡＴＰについて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ系のＨＤＡＣ阻害活性を評価した。実験方法は実施例１１に準じた。活性を測定した化合物の構造の一覧を図５に示す。阻害活性は、陰性コントロールにおけるＨＤＡＣ活性の５０％阻害濃度（「ＩＣ５０（μＭ）」）で表した（表３）。
また、ｉｎ  ｖｉｖｏ系のＨＤＡＣ阻害活性はｐ２１プロモーター誘導活性を指標に測定した。実験方法は実施例１１に準じた。被験化合物の活性強度はＴＳＡによる最大活性値の５０％の値を示す時の濃度（「ＥＣ５０（μＭ）」）を用いて比較した（表３）。
0004550738.tif 000021
産業上の利用の可能性
本発明の化合物は、様々なサブタイプのＨＤＡＣに対して強い阻害活性を示す。本発明の化合物は、ＨＤＡＣ１，４および６に関与している疾患の治療または予防のための薬剤として、利用し得る。また、本発明の化合物の製造方法により、種々のタイプの化合物を簡便に合成することができる。そのため、本発明の製造方法を用いることにより、テトラペプチド骨格の構造を様々な様態に変化させ、化合物の標的酵素に対する選択性を容易に変化させることが出来る。すなわち、本発明の化合物の製造方法は、新たな性質を持ったＨＤＡＣ阻害剤などの開発に寄与することが期待される。
【図１】
0004550738.tif 000030
【図２】
0004550738.tif 000031
【図３】
0004550738.tif 000032
【図４】
0004550738.tif 000033
【図５】
0004550738.tif 000034