(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−ラパコンの合成方法であって、以下：
ａ．ヨウ化ナトリウム、ジメチルスルホキシド、およびアミン塩基の存在下で、２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンを１−ブロモ−３−メチル−２−ブテンで処理し、ラパコールを形成させる工程；および
ｂ．該ラパコールを硫酸と反応させて、β−ラパコンを得る工程、
を包含する、方法。
【請求項２】
前記アミン塩基が、トリエチルアミン、ピリジン、トリメチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、または２，６−ルチジンからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アミン塩基が、トリエチルアミンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記β−ラパコンをエタノールを用いて再結晶化することにより精製する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記再結晶化が、前記β−ラパコンの純度を増大させるために反復され得る、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ヨウ化ナトリウム、ジメチルスルホキシド、およびアミン塩基の存在下で、２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンと１−ブロモ−３−メチル−２−ブテンとを反応させる工程を包含する、ラパコールの合成方法。
【請求項７】
前記アミン塩基が、トリエチルアミンまたはピリジンからなる群より選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記アミン塩基が、トリエチルアミンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
β−ラパコンの合成方法であって、以下：
ａ．請求項６の方法に従ってラパコールを合成する工程；
ｂ．該ラパコールを硫酸と反応させることにより、該ラパコールをβ−ラパコン産物に変換する工程；および
ｃ．該β−ラパコン産物を結晶化により精製する工程、
を包含する、方法。
【請求項１０】
前記アミン塩基が、トリエチルアミンまたはピリジンからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記アミン塩基が、トリエチルアミンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
β−ラパコンの合成方法であって、以下：
ａ．以下の構造：
【化１】
0004434585.tif 000008
を有するβ−ラパコン中間体を合成する工程であって、該β−ラパコン中間体を、ヨウ化ナトリウム、ジメチルスルホキシド、およびトリエチルアミンの存在下で、以下の構造：
【化２】
0004434585.tif 000009
を有する２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンと、１−ブロモ−３−メチル−２−ブテンとを反応させることにより合成する、工程；
ｂ．該β−ラパコン中間体と硫酸とを反応させることにより、該β−ラパコン中間体をβ−ラパコンに変換する工程；および
ｃ．該β−ラパコンを、エタノール中での結晶化および減圧下での乾燥により精製する工程、
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、β−ラパコン（ベータ−ラパコン）およびラパコール（これは、β−ラパコン（ベータ−ラパコン）中間体である）の合成のためのプロセスに関する。これらの化合物は、癌化学療法において重要な薬剤である。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
１２２万を超える新たな癌の症例が、米国において２００１年だけでも診断される。年間５６３，０００人を超える死亡例があり、癌は、心臓疾患に続いて二番目に主要な死亡原因である（ＵＢＳ  Ｗａｒｂｕｒｇ  「Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ：Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｒｋｅｔ」，２０００年１１月８日）。この疾患が早期に発見された場合、手術および放射線療法が治効性であり得るが、転移疾患のための現在の薬物療法は、主に待機的であり、長期治癒を滅多に提供しない。新規な化学療法が市場に入ってもなお、患者生存における改善は、年ではなくむしろ月において評価され、耐性腫瘍の治療において、第一のラインの治療法としての既存の薬剤と組み合わせて、および第二および第三のラインの治療法としての両方で有効な新規な薬物に対する必要性が継続している。
【０００３】
単独の薬剤として、β−ラパコンは、代表的には１〜１０μＭ（ＩＣ５０）の範囲の濃度で、ヒト癌細胞株に対して有意な抗腫瘍活性を示した。細胞傷害性は、以下を伴う患者に由来する転換細胞株において示された：前骨髄球白血病（Ｐｌａｎｃｈｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（１９９６）３７０６）、前立腺癌（Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５（１９９５）３７１２）、悪性神経膠腫（Ｗｅｌｌｅｒ，Ｍ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７３（１９９７）７０７）、肝細胞癌（Ｌａｉ，Ｃ．Ｃ．ら、Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ，１３（１９９８）８），、結腸癌（Ｈｕａｎｇ，Ｌ．ら、Ｍｏｌ  Ｍｅｄ，５，（１９９９）７１１）、乳癌（Ｗｕｅｒｔｚｂｅｒｇｅｒ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５８（１９９８）１８７６）、卵巣癌（Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６（２３）（１９９９）１３３６９−７４）、膵臓癌（Ｌｉ，Ｙ．ら、Ｍｏｌ  Ｍｅｄ，６（２０００）１００８；Ｌｉ，Ｙ．Ｚ．，Ｍｏｌ  Ｍｅｄ，５（１９９９）２３２）、および多発性骨髄腫細胞株（薬物耐性株を含む）（Ｌｉ，Ｙ．，Ｍｏｌ  Ｍｅｄ，６（２０００）１００８）。正常な初期のヒトＰＢＭＣまたはヒト増殖ＰＢＭＣにおいては、いかなる細胞傷害効果も観察されなかった（Ｌｉ，Ｙ．，Ｍｏｌ  Ｍｅｄ，６（２０００）１００８）。
【０００４】
β−ラパコンは、放射線照射を含むＤＮＡ損傷因子に対して細胞を感作するＤＮＡ修復阻害剤であることが示されている（Ｂｏｏｔｈｍａｎ，Ｄ．Ａ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，４７（１９８７）５３６１；Ｂｏｏｒｓｔｅｉｎ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１１７（１９８３）３０）。β−ラパコンはまた、ＤＮＡ複製を破壊し、Ｇ１および／またはＳ期における細胞周期の遅延を引き起こし、ＤＮＡの損傷なくかつｐ５３の状態とは無関係に、広範な種々のヒト癌細胞株においてアポトーシス細胞死または壊死性細胞死のいずれかを誘導することが示されている（Ｌｉ，Ｙ．Ｚ．ら、（１９９９）；Ｈｕａｎｇ，Ｌ．ら）。トポイソメラーゼＩは、染色体を構成するＤＮＡを巻き戻す酵素である。染色体は、細胞がタンパク質を合成するために遺伝子情報を使用するために巻き戻されなければならない；β−ラパコンは、染色体を強く巻きつけられた状態を保持し、これにより細胞がタンパク質を作製し得ないようにする。結果として、細胞は、増殖を停止する。癌細胞は絶えず複製しており、正常細胞において複製を制限する多くの機構を回避するので、この癌細胞は、正常細胞よりもトポイソメラーゼ阻害に対して無防備である。
【０００５】
β−ラパコン（３，４−ジヒドロ−２，２−ジメチル−２Ｈ−ナフト［１，２−ｂ］ピラン−５，６−ジオン）（これは、キノンである）は、ラパコール（ナフトキノン）（これは、紫イペ（ｌａｐａｃｈｏ  ｔｒｅｅ）（Ｔａｂｅｂｕｉａ  ａｖｅｌｌａｎｅｄａｅ）（ノウゼンカズラ科（Ｂｉｇｎｏｎｉａｃｅａｅ）のメンバー）から単離され得る）から誘導される。ラパコールおよびβ−ラパコンは、以下の化学構造を有する：
【０００６】
【化３】
0004434585.tif 000002
しかし、紫イペから天然に必要なだけ大量のβ−ラパコンを得ることは、困難であり、かつ時間がかかる。紫イペは、パクリタキセル（タキソール（登録商標））が由来する太平洋常緑針葉樹とほぼ同等に希少でしかなく、天然供給源から十分な質および量のβ−ラパコンを確保することは、問題の多いことであり得る。β−ラパコンを合成するための多数の方法が当該分野で公知である。ラパコール（β−ラパコンが合成され得る中間体）を生成するための２つの関連した公知の方法をスキーム１に示す。
【０００７】
【化４】
0004434585.tif 000003
方法（１）は、Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ，Ｋ．ら、β−Ｌａｐａｃｈｏｎｅ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｏｄｅｌｓ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２７，（１９８４）９９０−９９４に記載され、カリウム塩法として知られる。方法（２）は、Ｓｕｎ，Ｊ．Ｓ．ら、Ａ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｌａｐａｃｈｏｌ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３９（１９９８）８２２１−８２２４）に記載され、リチウム塩法として知られる。これらの方法は両方とも、金属塩の形成を必要とする。Ａｍａｒａｌ，Ａ．ら、Ｔｈｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  β−ｌａｐａｃｈｏｎｅ，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．，２９（１９９２）１４５７−１４６０は、８工程でのβ−ラパコンα−ナフトールの合成を記載するが、これは、全収率がわずか２３％でしかない。さらに、米国特許第５，７６３，６２５では、ラパコールがまず３−ブロモラパコンに変換され、次いでこれが２工程順序において３−ヒドロキシ−β−ラパコンに変換される。
【０００８】
しかし、これらの公知の方法は、代表的には、低収率で生成物を提供するか、冗長な手順を必要とするか、合成において爆発性の化学物質を使用する。従って、安全かつ簡易であり、そして高収率かつ高品質でβ−ラパコンおよびその中間体、アナログ、および誘導体を生成する、β−ラパコンおよびその誘導体を合成するためのプロセスに対する必要性がある。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、一般に、β−ラパコンおよびその中間体であるラパコールを合成するためのプロセスに関する。より詳細には、本発明は、安全かつ簡易であり、そして高収率かつ高品質でβ−ラパコンを生成するプロセスにより、β−ラパコンおよびその中間体、誘導体、およびアナログを合成するプロセスに関する。
【００１０】
本発明のプロセスは、β−ラパコン中間体であるラパコールの合成のための新規な方法を教示する。ラパコールは、次いで、定量的にβ−ラパコンに変換され、そして精製される。報告された方法（第一工程としてキノン溶液に水素化リチウムを添加し、または別に水酸化カリウムを添加し、次いでこの金属塩と臭化化合物とを反応させてラパコールを形成させることにより、２−ヒドロキシ−１，４ナフトキノンの金属（リチウムまたはカリウム）塩がインサイチュで調製された）とは異なり、本発明のプロセスは、この第一工程を排除し、直接２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンで始まり、ヨウ化ナトリウムおよび弱塩基（例えば、トリエチルアミン、ピリジン、トリメチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２，６−ルチジン、好ましくは、トリエチルアミンまたはピリジン、最も好ましくはトリエチルアミン）の存在下で１−ブロモ−３−メチル−２−ブテンと反応させて、ラパコール（β−ラパコン中間体）を形成させ、それから続いてβ−ラパコンが合成される。
【００１１】
上記説明は、続くそれらの詳細な説明が理解され得、そして当該分野に対する本発明の寄与がより良く理解され得るために、本発明のより重要な特徴をやや広範に記載する。本発明の他の目的および特徴は、添付の図面とともに考慮される以下の詳細な説明から明らかになる。しかし、図面は、例示の目的のために単独に描画されており、本発明の制限を定義するものとしてではなく、その制限は添付の特許請求の範囲で言及されるべきであることが理解されるべきである。
【００１２】
（発明の詳細な説明）
β−ラパコン、ならびにその中間体、誘導体およびアナログ（本明細書中において、「活性化合物」ともまた称される）は、Ｌｉ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９３に記載されている。スキーム１に示されるような先行技術のβ−ラパコン合成とは異なり、本発明に従う、スキーム２に一般的に示されるβ−ラパコンの合成は、２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンと１−ブロモ−３−メチル−２−ブテンとの、ヨウ化ナトリウムおよびトリエチルアミン（弱塩基）の存在下での、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での反応で開始し、ラパコールを、精製後４０％までの収率で生成する（２０ｇ、全体の収率４０％まで）。次いで、ラパコールは、硫酸での処理によって、β−ラパコンに定量的に転換される。このベータ−ラパコンは、エタノールからの再結晶によって精製される。
【００１３】
【化５】
0004434585.tif 000004
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、核磁気共鳴スペクトル法（ＮＭＲ）またはＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）により検出される任意の不純物は、繰り返し結晶化工程の付加により除去され得る。
【００１４】
図１を参照し、そして以下の実施例のセクションでより詳細に論議されるように、βラパコーン中間体ラパコールを調製するための合成プロセスは、２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン、１−ブロモ−３−メチル−２−ブテン、トリエチルアミン（ＴＥＡ）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）でなる反応混合物の調製で開始する。最初、この混合物を、希ガス雰囲気下、室温で約１時間攪拌する。次いで、この反応混合物を加熱し、そして次に冷却して反応を停止する。次いで、この混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出し（例えば、５００ｍｌ、３００ｍｌ、２００ｍｌ）、そして有機相をプールし、そして連続的に水で洗浄し、次に、５％重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）で２回の洗浄、および１％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）で１回洗浄する。次いで、この有機相を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥し、そして濾過後、濾液をＲｏｔｏｖａｐにより蒸発させる。次いで、残渣を水浴中５０℃に加熱されたトルエン中に溶解し、そして任意の存在する不溶性物質を濾過により取り除く。次いで、得られるトルエン溶液を、２Ｎ  ＮａＯＨで３回抽出する（例えば、８００ｍｌ、３００ｍｌ、２００ｍｌ）。次いで、得られる水相を合わせ、２２０ｍｌの濃塩酸（ＨＣｌ）で中和し、そしてこの混合物を、トルエンで３回抽出する（例えば、５００ｍｌ、３００ｍｌ、３００ｍｌ）。次いで、有機相をプールし、そしてこの有機相中に存在する任意の（黒色）固形分を濾過により取り除く。一旦濾過したならば、次いで、合わせた有機相を、１％ＮａＣｌ、５％重炭酸ナトリウム水溶液および１％塩化ナトリウム水溶液で連続的に洗浄し、次に、得られる有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、そして得られる濾液をＲｏｔｏｖａｐにより乾燥するまで蒸発させ、次いで、残存トルエンを完全に除去するための共蒸発（ｃｏ−ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）のためにイソプロパノールを添加する。次いで、この残渣を、イソプロパノール中に溶解し、加熱し、次いで冷却する。濾過、冷イソプロパノールを用いた洗浄および真空下の乾燥後、純粋なラパコールが得られる。
【００１５】
図２を参照し、そして以下の実施例のセクションでより詳細に論議されるように、ラパコールからのβラパコーンの合成は、３００ｍｌ硫酸中の純粋なラパコール（３０ｇ）でなる反応混合物の調製で開始する。この反応混合物を室温で３０分間攪拌し、そして手動で攪拌して氷水中に注ぐ。次いで、この混合物をトルエンで２回（例えば、６００ｍｌと４００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相を得、次いで、これを８００ｍｌの１％ＮａＣｌ、４００ｍｌの１％ＮａＨＣＯ３および８００ｍｌの１％ＮａＣｌで連続的に洗浄する。次いで、得られる有機相を、５０ｇのＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして固形分を濾過で取り除く。次いで、残存する濾液中のトルエンをＲｏｔｏｖａｐにより蒸発させ、そしてエタノールを添加して共蒸発させ、残存トルエンを完全に除去する。次いで、残渣を７５％エタノールまたは無水エタノールのいずれか、好ましくは無水エタノールに溶解し、８０℃の水浴中で加熱し、次いで濾過し、そして４℃まで冷却する。次いで、純粋なβラパコーンを濾過により単離し、そして冷７５％エタノール（４℃、１００ｍｌ）で洗浄し、真空下で乾燥し、アルゴン雰囲気下でパックし、そして２０℃で暗所に貯蔵する。
【００１６】
本発明を、以下の実施例を参照してさらに規定する。本発明の目的および利益から逸脱することなく、材料および方法の両方について多くの改変が実施され得ることは当業者に明らかである。
【実施例】
【００１７】
１．ラパコールの調製的合成
乾燥した２，０００ｍｌの丸底フラスコに、２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（６９．７ｇ、０．４０モル）、１−ブロモ−３−メチル−２−ブテン（６６ｇ、０．４４モル）、ヨウ化ナトリウム（６０ｇ、０．４モル）、トリエチルアミン（５８．５５ｍｌ、０．４２モル）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、５００ｍｌを添加した。この混合物を、アルゴン雰囲気下、室温で１時間激しく攪拌し、次いで、加熱マントルで４５℃に加熱した。４５℃で激しく攪拌して３−６時間後、この混合物を、氷浴中で冷却し、そして８００ｍｌの水を添加して反応を停止した。次いで、この混合物を、２，０００ｍｌの分離漏斗中に移し、そして塩化メチレンで３回（５００ｍｌ、３００ｍｌおよび２００ｍｌ）抽出した。有機相をプールし、そして水（８００ｍｌ）、５％重炭酸ナトリウム水溶液（２×８００ｍｌ）＊および１％塩化ナトリウム水溶液（８００ｍｌ）で連続的に洗浄し、次いで硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥した。濾過後、濾液を乾燥するまでＲｏｔｏｖａｐにより蒸発させた。残渣を、トルエン（１，０００ｍｌ）中に、５０℃の水浴中で加熱して溶解し、そして存在する任意の不溶性物質を濾過により取り除いた。温トルエン溶液を、新たに調製した温２Ｎ水酸化ナトリウムで３回（８００ｍｌ、３００ｍｌおよび２００ｍｌ）抽出した。水相をプールし、そして激しく手で攪拌しながら塩酸（２２０ｍｌ）を添加して中和し、次いで、トルエンで３回（５００ｍｌ、３００ｍｌおよび３００ｍｌ）抽出した。有機相をプールし、そして有機相中に存在する任意の黒色固体を濾過により取り除いた。合わせた有機相を、１％塩化ナトリウム水溶液（８００ｍｌ）、５％重炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍｌ）および１％塩化ナトリウム水溶液（８００ｍｌ）で連続的に洗浄し、次いで硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥した。濾過後、濾液をＲｏｔｏｖａｐにより乾燥するまで蒸発させ、次いで、共蒸発のためにイソプロパノール（３００ｍｌ）を添加し、残存するトルエンを完全に取り除いた。残渣を８０℃の水浴中で加熱しながらイソプロパノール（３００ｍｌ）中に溶解し、次いで４℃までゆっくりと冷却した。純粋なラパコールを、濾過、冷イソプロパノールを用いた洗浄（４℃、５０−１００ｍｌ）および真空下の乾燥の後得た。
【００１８】
５％重炭酸ナトリウム水溶液による抽出の間、水相と有機相との間に、顕著な量の沈殿物（２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン）が出現した。有機相にともなう沈殿物は、第１回目の抽出の間に水相から分離されたが、第２回目の抽出の間に水相および有機相の両方から沈殿物が分離され、そして５００ｍｌの分離漏斗中に移した；５％重炭酸ナトリウム水溶液（１５０ｍｌ）および塩化メチレン（１５０ｍｌ）を５０ｍｌの分離漏斗中に添加した。振盪後、有機相を分離し、そして１％塩化ナトリウム水溶液を用いる抽出の前に、主要有機相とともにプールした。
【００１９】
２．βラパコーンの調製的合成
硫酸（３００ｍｌ）を含む、１，０００ｍｌビーカー中に、ラパコール（３０ｇ、０．１２４モル）を、激しく攪拌しながら、室温で５分間に亘りゆっくりと一部ずつ添加した。添加後、暗黒色の混合物をさらに３０分間攪拌し、次いで、２，０００ｍｌビーカー中、手で攪拌しながら氷水（８００ｇ）中に注いだ。この混合物を、２，０００ｍｌの分離漏斗中に移し、そしてトルエンで２回抽出した（６００ｍｌおよび４００ｍｌ）。トルエン相をプールし、そして、１％塩化ナトリウム水溶液（８００ｍｌ）、１％重炭酸ナトリウム水溶液（４００ｍｌ）および１％塩化ナトリウム水溶液（８００ｍｌ）で連続的に洗浄し、次いで硫酸ナトリウム（５０ｇ）で乾燥した。濾過後、濾液をＲｏｔｏｖａｐにより乾燥するまで蒸発させ、次いで、共蒸発のためにエタノール（３００ｍｌ）を添加し、残存するトルエンを完全に取り除いた。残渣を８０℃の水浴中で加熱しながら７５％エタノールまたは無水エタノール中に、好ましく無水エタノール中に溶解し（エタノール／水、３：１、３００ｍｌ）、次いで濾過し、４℃までゆっくりと冷却した。純粋なβラパコーンを、濾過により単離し、次いで７５％冷エタノールを用いて洗浄し（４℃、１００ｍｌ）、真空下の乾燥し、そしてアルゴン雰囲気下でパックし、そして−２０℃で暗所保存した。
【００２０】
３．ラパコールおよびβラパコーンの分析
慣用的な手順を用いて、融点測定、ＨＰＬＣ分析およびＮＭＲ分析を行った。文献で報告されている融点およびＮＭＲデータを、得られたデータとの比較に用いた（以下の表２および３を参照のこと）。ＨＰＬＣ分析には、１ｍｌ／分の流速で１０分間に２５％〜７５％緩衝液（メタノール／アセトニトリル／０．１％リン酸（２５：５５：２０））の直線勾配を適用し、そしてサンプルは、２ｍｇ／ｍｌの濃度でメタノール中にラパコールまたはβラパコーンを溶解し、次いで、１０〜１００μｌ注入のために、メタノール／アセトニトリル／０．１％リン酸（２５：２０：５５））中に１０μｇ／ｍｌに希釈することにより調製した。メタノールは、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ４５２−４であった。アセトニトリルは、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ａ９９８ｓｋ−４であった。リン酸は、Ｂａｋｅｒカタログ番号０２６０−０３であった。用いたＨＰＬＣカラムは、Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  Ｃ１８（５ミクロン）、３．９×１５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓパーツ番号ＷＡＴ０８６３４４）であり、そして用いたＨＰＬＣシステムは、Ｂｅｃｋｍａｎ  １２６Ｎ  Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｍｏｄｕｌｅ／１６８ＮＭ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ／Ｓｙｓｔｅｍ  Ｇｏｌｄであった。
【００２１】
ラパコール合成では、キノンと臭素化合物との間の反応から生成する酸を捕捉するために先行技術のラパコール合成で用いられている（Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ−Ｓａｂｂａ、Ｋ．ら、βラパコーン：誘導体の合成と腫瘍モデルにおける活性、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２７（１９８４）９９０−９９４；Ｓｕｎ、Ｊ．Ｓ．ら、ラパコールおよび関連ナフトキノン類の調製的合成、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、３９（１９９８）８２２１−８２２４を参照のこと）、水酸化カリウムまたは水酸化リチウムのような強無機塩基の代わりに、弱有機塩基であるトリエチルアミン（ＴＥＡ）を用いた（ピリジンもまた使用し得る）。
【００２２】
観察すると、弱有機塩基の使用は、手順を簡略にし、そして収率を高め（上記のスキーム１および下記の表１を参照のこと）、それ故生産コストを低減することが示された。合成の第２番目のステップは、ラパコールのβラパコーンへの変換であり、相対的に簡略であり、そして高収率（９０％以上）であることが示された。表２（ラパコールおよびβラパコーンの融点データ）および表３（βラパコーンのＮＭＲデータ）中に示された分析データは、合成された化合物の同一性を確認した。出発物質（２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン）、本発明の方法に従って調製されたラパコールおよびβラパコーンのＨＰＬＣ分析は、９９％以上純粋である。図３Ａ−３Ｅを参照のこと。
【００２３】
【表１】
0004434585.tif 000005
【００２４】
【表２】
0004434585.tif 000006
【００２５】
【表３】
0004434585.tif 000007
（等価物）
本発明の基礎的な新規の特徴を、その好適な実施形態に適用して示し、そして記載し、そして指摘しているが、開示された発明の形態および詳細における種々の省略および置換および改変が、本発明の思想から逸脱することなく当業者によってなされ得ることが理解される。従って、本明細書に添付の請求項の範囲により示されるように限定されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、ラパコールの生成のための本発明の合成プロセスを一般的に示す、概略図である。
【図２】図２は、β−ラパコンの生成のための本発明の合成プロセスを一般的に示す、概略図である。
【図３Ａ】図３Ａは、２５２ｎｍにおける、２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（９６．５６％）のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、本発明の合成に従って調製したラパコール（１００％）の、２５２ｎｍにおけるＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３Ｃ】図３Ｃは、１％２−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンを含むラパコールサンプルの、ＨＰＬＣクロマトグラムである（出発物質、０．９６％；第二の不純物ピーク、０．５５％；ラパコールピーク、９８．４９％）。
【図３Ｄ】図３Ｄは、β−ラパコンの、２５８ｎｍにおけるＨＰＬＣクロマトグラムである（９９．３６％  β−ラパコン、０．１７％未知のピーク、０．４７％ラパコール）。
【図３Ｅ】図３Ｅは、１％のラパコールを含むβ−ラパコンサンプルの、２５８ｎｍにおけるＨＰＬＣクロマトグラムである（９８．７０％  β−ラパコン、０．３７％未知の物質、０．９３％ラパコール）。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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