(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケールおよび／又はケール抽出物を含有することを特徴とするインターロイキン４産生抑制用剤。
【請求項２】
経口用である請求項1記載のインターロイキン４産生抑制用剤。
【請求項３】
皮膚外用である請求項1記載のインターロイキン４産生抑制用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、インターロイキン４（ＩＬ−４）産生抑制用剤、それを含有する抗アレルギー、抗炎症組成物、及びその経口用組成物、皮膚外用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、花粉症や食物アレルギー、気管支喘息といった種々のアレルギーが問題になっている。一般に薬理効果の高いホルモン剤が使用されているが、副腎皮質機能不全や消化管潰瘍といった副作用が大きいという問題がある。また、非ステロイド性のヒスタミン、ロイコトリエンの遊離抑制剤やＩｇＥ抗体産生抑制剤なども使用されているが、効果が十分ではない。
【０００３】
ＩＬ−４は、抗原で刺激されたＴリンパ球によって産生される糖蛋白質である。Ｂリンパ球に作用してＩｇＥなどの抗体産生を増強し、炎症部位への炎症細胞浸潤促進作用を有することが知られている。近年では、このアレルギー性疾患に関連するＩＬ−４の産生を抑制することができれば、従来の治療法および予防法と異なった点で、アレルギー疾患や炎症を治療できるのではないかと考えられている。
【０００４】
ＩＬ−４産生抑制剤としては、スルホニウム誘導体（Japan. J. Pharmacol. ,６１巻，２７−３０頁，１９９３）が知られており、ＩＬ−４産生抑制作用を有する植物としては、イラクサやタイム、セイヨウノコギリソウなどの抽出物（特開平10−279491）やインチンコウ抽出物（特開平10−298090）が報告されているが、これらの効果は十分ではない。そこで、安定性、安全性に優れ、価格においても問題のないＩＬ−４産生抑制剤が求められている。
【０００５】
これまでに、ブロッコリー、カリフラワー、なずな、すずしろ、キャベツ、りんごなどにＩｇＥ増加抑制作用は報告されている（特開2000−169382）が、野菜類でのＩＬ−４産生抑制作用は知られていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、安定性、安全性、価格面において優れたＩＬ−４産生抑制剤、それらを含有する抗アレルギー用組成物、抗炎症用組成物あるいはその経口用組成物、皮膚外用組成物を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ケール及びその抽出物にアレルギー疾患の原因の一つと考えられているＩＬ−４の産生抑制作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち、本発明は、
ケールおよび／又はケール抽出物を含有することを特徴とするインターロイキン４産生抑制用剤、
経口用である1記載のインターロイキン４産生抑制用剤、
皮膚外用である1記載のインターロイキン４産生抑制用剤、
に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明で使用されるケール（Brassicca Oleracea L. var. acephala DC.）には、キッチンケール、マローケール、ブッシュケール、ツリーケール、コラード、緑藻カンランなどがある。ケールは、アブラナ科の植物でもともと南ヨーロッパ原産の野菜であり、キャベツの原種といわれている。葉など通常食用として供されているもので構わないし、その栽培方法や栽培地も特に限定されるものでもない。
【００１０】
ケール、その抽出物としては、ケール自身を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、圧搾汁、水あるいはアルコール、エーテル、アセトンなどの有機溶媒による粗抽出物、および粗抽出物を分配、カラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで段階的に精製して得られた抽出物画分など、全てを使用することができる。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
【００１１】
例えば、ケールの葉、茎、花や根などの乾燥物１Ｋｇに９９．５％エタノール抽出液３Ｌを加え、室温で一晩浸漬することにより得た抽出液を、そのままＩＬ−４産生抑制剤あるいは抗アレルギー用組成物、抗炎症用組成物として使用しても良いし、その抽出液を各種クロマトグラフィーを組み合わせて、精製したものを使用しても良い。
【００１２】
ケール又はその抽出物は、ＩＬ−４産生抑制作用を有している。ＩＬ−４は、ＩｇＥやＩｇＧ４という抗体の産生を増強する作用を有すると共に、炎症部位への炎症性細胞浸潤を促進する作用を有している。さらに、ＩＬ−４は、未成熟なＴリンパ球を成熟Ｔリンパ球に分化させる機能をも有しており、成熟Ｔリンパ球は、未成熟Ｔリンパ球よりＩＬ−４の産生量が多い。しかも、ＩＬ−４は、皮膚のトラブルにも関与し、特に皮膚の炎症に関与している。したがって、ＩＬ−４産生抑制剤は、アトピー性皮膚炎のようなアレルギー性疾患の予防、治療に有効である。さらに、ＩＬ−４の関与する皮膚のトラブルである、しわ、たるみ、かゆみ等の抑制に使用することもできる。
【００１３】
本発明のケール、その抽出物を含有するＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー用組成物、抗炎症用組成物は、経口用の食品、医薬として製造することができる。皮膚外用の化粧料、医薬として製造することもできる。
【００１４】
医薬としての適用方法は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００１５】
食品としては、ケール乾燥物又は抽出物などをそのまま、又は種々の栄養成分を加えて、又は飲食品中に含有せしめて、アレルギー症状の治療及び予防に有用な保健用食品又は食品素材として使用できる。例えば、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、経口用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。本発明の配合量は、当該食用組成物の種類や状態等により適宜設定される。
【００１６】
本発明のケールの有効適用量は、摂取者の年齢、体重、症状、適用経路、適用スケジュール、製剤形態などにより、適宜決定することができ、例えば、経口投与の場合、乾燥重量として、通常成人換算で０．０００１〜０．５ g/kg程度、より好ましくは０．００１〜０．２g/kg程度である。１日に数回に分けて投与してもよい。
【００１７】
また、本発明のケール、その抽出物を含有するＩＬ−４産生抑制剤、抗アレルギー用組成物、抗炎症用組成物として、それらを配合した化粧料素材、化粧料の形態で製造することができる。例えば、ケールの乾燥物又は抽出物などを小麦胚芽油あるいはオリーブ油に添加して、これを化粧料素材として使用することができる。
【００１８】
また、ケール乾燥物又は抽出物などを直接、化粧料成分として使用し、化粧料を製造することができる。化粧料には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤、乾燥剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、抗癌剤、美白剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。
【００１９】
化粧料としては、化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップクリーム、乳液状又はクリーム状あるいは軟膏型のファンデーション、口紅、アイカラー、チークカラーといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料等、入浴剤、口腔化粧料、毛髪化粧料とすることができる。本発明の方法で得られるＩＬ−４産生抑制作用含有組成物を含有せしめた化粧料としては、機能面からは、例えば乳液、化粧液、フェイスクリーム、ハンドクリーム、ローション、エッセンスなどが好ましい。
【００２０】
このような化粧料は、常法に従って製造することができる。化粧料における本発明の植物の乾燥物または抽出物の添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、乾燥重量で、化粧料全重量の０．０１〜２０重量％程度が適当である。
【００２１】
本発明の植物は、天然物であるためその毒性は低く、有害な副作用など報告されていない。また、ケールは栽培により入手できる野菜類であるから、ケール、ケール抽出物を有効成分とする本発明の組成物は、安全であるとともに、価格面においても問題のない優れたものである。
【００２２】
［製造例］ケールの葉を９０℃で乾燥させ、苦みの渋味成分となる酵素を失活させた。その粉砕物４ｋｇを電熱式水浴機で加熱還流しながら、９９．５％エタノール（和光純薬工業）２０Ｌを用いて抽出を行い、ケール抽出物８０ｇを得た。
【００２３】
［試験例］ＩＬ−４産生抑制能試験は、Endoらの方法を参考にした（Int arch Allergy Immunol 1993;101:425-430）。喘息患者と健常者の抹消血単核球（ＰＢＭＣ）を用いて、ＩＬ−４の産生量を測定した。ＰＢＭＣは、静脈血から密度勾配遠心により分離した。得られたPBMCを10％FCSと20 μg/ml ＰＨＡ(phytohemagglutinin)を 添加したＲＰＭＩ１６４０培地で懸濁し、９６ウェルプレートにまいた（２x 105 細胞／２００ μl）。その際、製造例で得られたケール抽出物を添加した。また、ポジティブコントロールとしてデキサメタゾンを用いた。培養は、３７℃、５％CO2存在下で５日間行った。その後、培養上清を４℃、４００x gで遠心分離し、上清画分をＥＬＩＳＡ法による定量に供した。プレートのウェルに、１０μg/mlマウス抗ヒトＩＬ−４モノクローナル抗体を加えて、４℃で一晩インキュベートした。それから室温にて３０分間、１％ＢＳＡでブロッキング後、デキサメタゾン画分とケール抽出物画分をウェルに添加し、室温で一晩インキュベートした。その後、うさぎ抗ヒトＩＬ−４ポリクローナル抗体を用い、室温で４時間インキュベートした。さらに、やぎ抗うさぎＩｇＧ抗体で４時間インキュベート後、テトラメチルベンジジンを加え４５０nmで吸光度を測定した。
【００２４】
結果を表１に示す。ケール抽出物におけるＩＬ−４の産生抑制率［１００−（ケール抽出物を添加した時のＩＬ−４産生量／培養液のみのコントロールのＩＬ−４産生量）× １００］を算出し、これからＩＣ50値（ＩＬ−４産生量を５０％阻害する濃度）を求めた。なお、本実験系でのポジティブコントロールであるデキサメタゾンのＩＣ50値は、１．４６μg/mlであった。
【００２５】
【表１】
0004410451.tif 000002
【００２６】
表１の結果より、ケール抽出物は、優れたＩＬ−４の産生抑制作用を有することが示される。
【００２７】
（処方例１）
[錠剤の製造]
製造例で得られたケールのエタノール抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
（組  成）                    （配合：重量％）
ケール抽出物                        ２４
乳糖                                ６３
コーンスターチ                      １２
グァーガム                            １
【００２８】
この錠剤を用いて、二重盲検を実施することにより、花粉症の予防、緩和効果を検討する。スギ花粉症患者を対象に被験品摂取群とプラセボ摂取群に分け、１０週間錠剤の投与を行う。摂取量は、各群とも５粒／日とし、プラセボの成分としては、乳糖を増量して、錠剤全体を１００％とした。試験期間中、対象者にはアレルギー日誌を記入させ、その症状を日本アレルギー学会の「アレルギー性鼻炎重症度分類成案」に基づいて評価することにより、効果を確認する。
【００２９】
（処方例２）
[ジュースの製造]
製造例で得られたケールのエタノール抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
（組  成）                  （配合：重量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁              ５．０
果糖ブドウ糖液糖                  １１．０
クエン酸                            ０．２
Ｌ−アスコルビン酸                  ０．０２
香料                                ０．２
色素                                ０．１
ケール抽出物                        ０．２
水                                ８３．２８
【００３０】
このジュースを被験品として、二重盲検を実施し、花粉症の予防、緩和効果を検討する。スギ花粉症患者を対象に被験品摂取群とプラセボ摂取群に分け、１０週間投与を行う。ジュースの摂取量は、各群とも３００ｍｌ／日とし、プラセボの成分としては、水を増量して、ジュース全体を１００％とした。試験期間中、対象者にはアレルギー日誌を記入させ、その症状を日本アレルギー学会の「アレルギー性鼻炎重症度分類成案」に基づいて評価することにより、花粉症の症状改善、緩和効果を確認する。
【００３１】
（処方例３）
[フェイスクリームの製造]
製造例で得られたケールのエタノール抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のフェイスクリームを製造した。
（組  成）                      （配合：重量％）
イソステアリン酸イソプロピル          ８．０
ホホバ油                              ６．０
セタノール                            ８．０
ステアリルアルコール                  ２．０
ポリオキシエチレンラウリルエーテル    １．５
プロピレングリコール                  ６．０
ソルビトール                          １．０
パラベン                              ０．４
ケール抽出物                          ０．５
ビタミンＥ                            ０．５
香料                                  ０．１
精製水                              ６６．０
【００３２】
このフェースクリームを被験品として、二重盲検を実施して、アトピー性皮膚炎の改善効果を検討する。アトピー性皮膚炎患者を対象に被験品摂取群とプラセボ摂取群に分け、１０週間試験を行う。クリームの使用量は、各群とも５ｇ程度／日とし、プラセボの成分としては、精製水を増量して、クリーム全体を１００％とした。皮疹は「最重症 ４、重症 ３、中等症 ２、軽症 １、なし 0 」の ５段階にスコア化し、痒みの程度は１０段階で評価する。これらの評価を分析することにより、フェースクリームについてのアトピー性皮膚炎の改善効果を確認する。
【００３３】
【発明の効果】
本発明により炎症性サイトカインの一つであるインターロイキン−４の産生を抑制する作用を有するインターロイキン産生抑制剤を提供することができ、アレルギー性鼻炎、花粉症などのアレルギーや炎症に対して優れた効果を有する、抗アレルギー用、抗炎症用として有用な組成物を提供することができる。