(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖に抗菌物質が結合した次の化学構造を有することを特徴とする抗菌剤。
Ｙ−ＯＣＨ（ＡＨ２ＮＨＲ）ｎ 又は Ｙ−ＢＨ２ＮＨＲ
［式中、Ｙは硫酸化多糖類の部分分解により調製されるオリゴ糖。ＡはＹの還元末端糖を還元後、酸化剤を用いて酸化することにより生じたアルデヒド基に由来する炭素。ＢはＹの還元末端糖のアルデヒド基に由来する炭素。Ｒは１級アミノ基を有するか又はアミノ基を導入した抗菌物質、又は抗菌物質をスペーサーを介して前記Ａ炭素又はＢ炭素に結合する抗菌物質誘導体。ｎ＝１又は２］
【請求項２】
硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖が、フコイダンを部分分解したオリゴフコース、又はカラゲナンを部分分解したカラビオースであることを特徴とする請求項１に記載された抗菌剤。
【請求項３】
請求項１に記載の抗菌剤を有効成分とするヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）菌用抗菌剤。
【請求項４】
請求項１に記載の抗菌剤を有効成分とする消化器潰瘍予防・治療剤。
【請求項５】
請求項１に記載された抗菌剤の製造法において、
硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の還元末端の糖残基のアルデヒド基を、直接又は酸化分解により開環させる工程と、
この開環されたアルデヒド基に対応する抗菌物質のアミンを作用させてシッフ塩基を生成させる工程と、
この生成されたシッフ塩基を還元する工程とを備えたことを特徴とする抗菌剤の製造法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は抗菌剤に関し、特別には胃潰瘍や胃癌の原因菌であるヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori ）の除菌に有効なフコイダンに代表される硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の誘導体およびその製造法に関するものである。
従来、胃潰瘍の治療剤としては、胃酸分泌抑制を目的としたＨ２ブロッカーやプロトンポンプ阻害剤および胃粘膜保護剤が一般に用いられている。これらの薬剤は有効な治療効果を示すものの、Helicobacter pylori の感染者の場合は再発を繰り返すことが知られている。
また、このHelicobacter pylori 菌の感染者には、統計的に胃癌の発症率が高いことも知られている。このため消化性潰瘍の根本的な治療もしくは胃癌の予防という観点から、Helicobacter pylori の除菌を含む治療が必要であることが指摘されている（浅香正博著、Helicobacter pylori と胃粘膜病変（先端医学社、1995年７月１日）；日本消化器病学会編、Helicobacter pylori 治療ガイドライン資料、Helicobacter pylori 治療検討委員会）。
これらの指摘に基づいて、抗生物質と胃酸分泌抑制剤とを併用した除菌／治療が行われている。しかしながら、この方法は除菌効果が高いものの、比較的多量の抗生物質を用いるために下痢の発症や耐性菌の出現等の問題が生じている。
一方、本発明者らはモズクや青海苔等の部分分解物から調製されたオリゴ糖の誘導体が胃潰瘍に対して治療促進作用を示すのみならず、Helicobacter pylori に対する定着阻害作用や抗菌効果をも示すことを先に見出した（特開平１１−６０５９０号公報）。しかしながら、この誘導体物質は、潰瘍の治療促進作用は強いものの、その抗菌作用は未だ満足すべきものに至っていない。
係る状況下において、本発明者らは鋭意研究を行った結果、硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を酸処理等によりオリゴ糖とし、更に過ヨウ素酸酸化、対応するアミン類（抗菌物質）との反応、及び還元処理により糖誘導体を製造し、このものがHelicobacter pylori に対して高い親和性及び優れた抗菌効果を有していることを確認し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明の目的はHelicobacter pylori に対して高い親和性を有し、Helicobacter pylori に対して特異的な抗菌効果を有する抗菌剤を得ることにある。
発明の開示
本発明に係る抗菌剤は、硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖に抗菌物質が結合した化学構造を有することを特徴とするものである。
好ましい態様としての本発明に係る抗菌剤は、次の化学構造を有することを特徴とするものである。
Ｙ−ＯＣＨ（ＡＨ２ＮＨＲ）ｎ    又は      Ｙ−ＢＨ２ＮＨＲ
［式中、Ｙは硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類の部分分解により調製されるオリゴ糖。ＡはＹの還元末端糖を還元後、酸化剤を用いて酸化することにより生じたアルデヒド基に由来する炭素。ＢはＹの還元末端糖のアルデヒド基に由来する炭素。Ｒは１級アミノ基を有するか又はアミノ基を導入した抗菌物質、又は抗菌物質をスペーサーを介して前記Ａ炭素又はＢ炭素に結合する抗菌物質誘導体。ｎ＝１又は２］
また、硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の好ましい態様としては、フコイダン又はフコイダンを部分分解したオリゴフコース、もしくはカラゲナン又はカラゲナンを部分分解したカラビオースを挙げることができる。
本発明はまた、前述の抗菌剤を有効成分とするHelicobacter pylori 菌用抗菌剤を提供する。
本発明は更に、前述の抗菌剤を有効成分とする消化器潰瘍予防・治療剤も提供する。
本発明に係る抗菌剤の製造法は、硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の還元末端の糖残基のアルデヒド基を、直接又は酸化分解により末端糖残基を開環させる工程と、
この開環されたアルデヒド基に対応する抗菌物質のアミンを作用させてシッフ塩基を生成させる工程と、
この生成されたシッフ塩基を還元する工程とを備えたことを特徴とするものである。
本発明による抗菌剤では、フコイダン、カラゲナン、ラムナン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸等の硫酸化多糖類又はその部分分解により調製されるオリゴ糖に抗菌物質が結合されているものであるため、Helicobacter pylori に対して高い親和性を呈し、Helicobacter pylori に対して特異的な抗菌効果を示す。
即ち、硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖はHelicobacter pylori に高い親和性を有し、Helicobacter pylori に特異的に吸着又は結合してHelicobacter pylori の胃壁に対して定着阻害を起こす。本発明は、この硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖のHelicobacter pylori に対する特異性を利用し、硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖に抗菌物質を結合させた抗菌剤、即ち、抗菌物質を有効的にHelicobacter pylori に作用させることのできる新規な抗菌剤を提供するものである。
本発明に係る硫酸化多糖類としては、高い抗菌効果が得られると言う観点から、フコイダン又はカラゲナン、特にフコイダンが好ましい。
また、本発明の抗菌剤は、Helicobacter pylori 以外の病原性細菌に対しても抗菌効果を有するため、これらの病原性細菌に適用してもよい。
本発明の好ましい態様による抗菌剤は、硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の還元末端に抗菌物質が結合された次の化学構造を有するものである。
Ｙ−ＯＣＨ（ＡＨ２ＮＨＲ）ｎ    又は      Ｙ−ＢＨ２ＮＨＲ
［式中、Ｙは硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類の部分分解により調製されるオリゴ糖。ＡはＹの還元末端糖を還元後、酸化剤を用いて酸化することにより生じたアルデヒド基に由来する炭素。ＢはＹの還元末端糖のアルデヒド基に由来する炭素。Ｒは１級アミノ基を有するか又はアミノ基を導入した抗菌物質、又は抗菌物質をスペーサーを介して前記Ａ炭素又はＢ炭素に結合する抗菌物質誘導体。ｎ＝１又は２］
具体的には、式中のＹはフコイダン、カラゲナン、ラムナン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸等の硫酸化多糖類又はその部分分解により調製されるオリゴ糖であって、一部の水酸基は硫酸エステル化されていてもよい。硫酸化多糖類としては、分画サイズの異なる限外濾過膜を組み合わせて分子量３００〜５０００程度に調製したオリゴ糖を用いれば、より少量の抗生物質量で高い抗菌効果が得られ、特に分子量３００〜１０００が好ましい。より詳細には、フコイダンでは分子量３００〜５０００程度、特に分子量５００〜３０００が好ましく、カラゲナンでは、分子量３００〜２０００程度、特に分子量３００〜９００が好ましい。
式中のＲは、１級アミノ基を有するか、又はアミノ基を導入したセフェム系、ペニシリン系、アミノ酸糖体系、マクロライド系、ピリドカルボン酸系、オキサフェム系、モノバクタム系、カルバペネム系、テトラサイクリン系、ペプチド系やクロラムフェニコール、サルファ剤等の抗菌物質、もしくはこれらの物質にスペーサー導入した誘導体であればよい。
具体的には、セフェム系抗菌物質としては、Cefotaxime, Cephalotin, Cephaloridine, Cephalexin, Cefradine, Cefazolin, Ceftezol, Cephapirin, Cephacetrile, Cefoxitin, Cefmetazole, Cefroxime, Cefotiam, Cephamandole, Cefsulodine, Ceftizoxime, Ceftazidime, Cefotetan, Cefmenoxime, Ceftriaxone, Cefoperazone, Cefbuperazone, Cefixime等が挙げられる。
ペニシリン系抗菌物質としては、Ampicillin, Benzyl-PC, Phenethicillin, Propicilin, Methicillin, Zxacillin, Cloxacillin, Amoxicillin, Cyclacillin, Carbenicillin, Sulbenicillin,Piperacillin等が挙げられる。
アミノ酸糖体系抗菌物質としては、Kanamycin, Bekanamycin, Tobramysin, Dibekacin, Gentamicin, Amikacin, Habekacin, Neomycin B, Paromomycin等が挙げられる。
マクロライド系抗菌物質としては、Erythromycin, Kitasamycin, Acetylkitasamycin, Oleandomycin, Josamycin, Acetylspiramycin, Midecamycin等が挙げられる。
ピリドカルボン酸系抗菌物質としては、Nalidixic acid, Oxolinic acid, Norfloxacin, Piromidic acid, Ofloxacin, Ciprofloxacin等が挙げられる。
オキサフェム系抗菌物質としては、Latamoxef等が挙げられる。
モノバクタム系抗菌物質としては、Sulfazecin, Monobactam等が挙げられる。
カルバペネム系抗菌物質としては、Thienamycin等が挙げられる。
テトラサイクリン系抗菌物質としては、Tetracycline, Chlortetracycline, Oxytetracycline, Demethl Cholrtetracycline, Doxycycline, Methacycline, Minocycline等が挙げられる。
ペプチド系抗菌物質のうち前述の各抗菌物質に含まれる以外のものとしては、Gramicidin, Penicillin, Polymyxin, Gramicidin S, Viomycin, Actinomycin等が挙げられる。
この抗菌剤は、特にHelicobacter pylori に対して高い親和性を有し、Helicobacter pylori に特異的に吸着又は結合するため、特にHelicobacter pylori 菌用抗菌剤として有効である。更に、Helicobacter pylori 菌を特異的に阻害するため、消化器潰瘍予防・治療剤として用いることができる。
この硫酸化多糖類又は硫酸化多糖類を部分分解したオリゴ糖の誘導体製造法の一実施の形態としてオリゴフコース誘導体の製造法を以下に示す。
ステップ１：フコイダンを含有する海藻類（モズク、クロメ、ヒバマタ等の褐藻類）より多糖を公知の抽出方法（例えば、松田和雄著、生物化学実験法  No.20、多糖の分離・精製法、学会出版センター等）にて抽出する。
ステップ２：得られたフコイダンを0.05Ｍ〜0.1Ｍ程度の塩酸もしくはトリフルオロ酢酸の溶液に溶解し、１００℃、１０分〜２０分加熱処理してオリゴ糖化し、水酸化ナトリウムにて中和する。このオリゴ糖化は、フコイダナーゼ（フコイダン分解酵素）を用いて行ってもよく、その際の反応条件は適宜決定すればよい。こうして得られたオリゴ糖の溶液にＮａＢＨ４を加え、室温もしくは４℃にて１６時間、還元処理を行う（特開平６−２４７８６１公報、特開平７−１３８１６６号公報参照）。
ステップ３：ステップ２の操作により得られたオリゴ糖のアルジトール体の溶液を電気透析（マイクロアシライザー、旭化成社製）にて脱塩する。
ステップ４：ステップ３の溶液にメタ過ヨウ素酸ナトリウムを加え氷温下で１時間程度反応する（反応時間は糖鎖の構造により、例えば１→３結合のオリゴ糖などの場合、より長時間反応してもよい）。反応液に過ヨウ素酸に対し過剰量のエチレングリコールを加え、更に１時間反応する。本液をステップ３と同様の方法で脱塩する。本操作により還元末端にアルデヒド基を有するオリゴ糖が得られる。
ステップ５：ステップ４で調製した試料に0.5Ｍ濃度となるように酢酸を加え、室温下で２０時間反応させる（非還元末端側の糖鎖が酸化されない条件であれば本操作を省略してもよい）。反応液を、目的とする分画分子量の限外濾過膜もしくは透析膜を用いて脱塩及びエチレングリコールやその分解物を除き、オリゴ糖を得る。またオリゴ糖画分はこれらの方法で精製する以外に、活性炭クロマトグラフィーやゲル濾過等を用いて所望の分子量サイズに調製してもよい。
ステップ６：オリゴ糖画分を水に溶解し、導入する抗菌剤を加え室温にて１時間反応し、シッフ塩基を形成させる。
ステップ７：ステップ６で得られた液にボランジメチルアミンを加え、室温下にて２０時間反応させ、シッフ塩基を還元する。還元剤には、ボランジメチルアミンの他に、本発明の目的に適合するような還元剤（例えば、ボラントリメチルアミン、ＮａＣＮＢＨ３、ＮａＢＨ４など）が適宜利用できる。
ステップ８：反応終了後、限外濾過もしくは透析により過剰の試薬を除く。過剰試薬が除去された還元液は凍結乾燥等で乾燥させるか、イオン交換クロマトグラフィー等で更に精製してもよい。この方法により得られたオリゴ糖誘導体は、消化器潰瘍の原因菌であるHelicobacter pylori に対する抗菌効果を有することが確認された。
尚、ステップ２及び３を省略し、フコイダンそのものから多糖誘導体を調製しても同様の効果を得ることができる。また、本発明の抗菌剤の投与量は、通常の医薬の場合と同様に、好ましくは医師による処方に従って任意に選ぶことができるが、例えば分子量５００〜３０００オリゴフコースより調製した誘導体を用いる場合には、成人に対し１００ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日、特に２００ｍｇ／日〜３００ｍｇ／日の投与を行えば、副作用を抑制すると共に、高い抗菌効果を得ることが可能となる。抗菌効果を得るためには、フコイダンの分子量が大きいほどその投与量も多量となるため、前記の分子量以外のものを用いる際には、適宜添加量を調節すればよい。
本発明の抗菌剤の剤形は、任意に選択することができる。しかしながら、一般的には、本剤を薬学的に許容できる液状または固体状の担体と配合し、且つ必要に応じて、溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等に製剤して使用するのが適当である。
本発明は以上説明した通り、Helicobacter pylori に対して高い親和性を有し、Helicobacter pylori に対して特異的な抗菌効果を有する抗菌剤を得ることができるという効果がある。
発明を実施するための最良の形態
実施例１．オリゴフコース誘導体の製造
(1・1)フコイダンの抽出及びオリゴフコースの製造
沖縄モズク（Cladosiphon okamuranus Tokida）を脱イオン水にて塩抜きを行った後、藻体１ｋｇ当たり１リットルの割合で脱イオン水に懸濁し、本懸濁液を塩酸でｐＨ２とした。本液を100℃、10分間加熱抽出後、ガーゼにて藻体を濾別し、濾液を更に遠心し不溶物を除いた（9000rpm、60分）。
上清をＮａＯＨにて中和後、0.2Ｍ濃度になるようにメタ過ヨウ素酸ナトリウムを加え、混入してくるアルギン酸やウロン酸成分を分解した。遮光下にて２０時間反応後、エチレングリコールにて反応を停止した。本液に水素化ホウ素ナトリウムを0.2Ｍ濃度になるように加え、室温にて16時間反応した。本液を限外濾過（分画分子量 5,000）にて濃縮後、透析した。透析内液を塩酸にてｐＨ２とし、100℃、10分間加熱処理した。処理液を透析後、凍結乾燥しフコイダンを得た（４g/１kg湿藻体）。
(1・2)オリゴフコースの調製と過ヨウ素酸酸化
フコイダンを200mg/mLの濃度に溶解し、0.075Ｍ〜0.1Ｍ濃度となるように塩酸（又はトリフルオロ酢酸でも可）を加えた。100℃にて10分、加熱後、室温まで冷却する。本液をＮａＯＨにて中和後、ＮａＢＨ４ をフコイダン１ｇにつき200mgの割合で加えた。４℃にて20時間反応した。
反応液を酢酸にてｐＨ６とし、電気透析装置（旭化成、マイクロアシライザー、AC220膜使用）にて脱塩した。脱塩後、試料溶液に0.2Ｍ濃度となるように、ＮａＩＯ４ を加え、氷温下にて１時間反応させた。反応液にエチレングリコールを過ヨウ素酸に対し２当量加え、氷温下にて更に１時間反応した。反応液を分画分子量1000の限外濾過膜（ミリポア社製）にてろ過、濃縮した。内液を凍結乾燥し、オリゴフコースのアルデヒド誘導体を得た（収率約25％）。
(1・3)抗菌物質とのカップリング反応及び還元反応
(1・2)で製造したオリゴ糖のアルデヒド誘導体（５ｇ）を水100mLに溶解し、１ｇのセファトキシナム（CTX）を加えた。0.5Ｍ、ＮａＨＣＯ３溶液（ｐＨ8.5）を１mL加え、室温下で１時間反応下。反応後、ボランジメチルアミン複合体を、１ｇ加え、室温下にて２０時間反応させた。反応液は、分画分子量1000の透析膜にて、一昼夜、透析後、凍結乾燥して目的とする試料（OF-CTX）を得た（収量1.14ｇ）。図１は得られたOF-CTXの１３Ｃ−ＮＭＲを示す線図である。得られたOF-CTXの具体的な構造は次の化学式（１）に示す通りである。
化学式（１）
【化１】
0004439119.tif 000002
(1・3)と同様に、セファトキシナムの変わりにアンピシリンと反応させ、反応液を同様に処理し、オリゴフコースアンピシリン誘導体（OF-AM）を得た。得られたOF-AMの具体的な構造は下記の化学式（２）に示す通りである。
オリゴフコース２ｇを80mLの40％エタノール水に溶解（0.05Ｍ、ＮａＣＯ３）。12-アミノラウリン酸（Ｃ１２）、350mgを加え、45℃１時間反応した。ボランジメチルアミンを300mg加え、45℃にて16時間反応した。
化学式（２）
【化２】
0004439119.tif 000003
反応後分画分子量1000カットの透析チューブにて透析した。透析物の凍結乾燥品（875mg）を10mLの水に溶解し、ＥＤＣ  500mgを加えた。室温で２時間反応後、セファトキシナムＮａを350mg加え、４時間反応した。反応後分画分子量、1000の透析膜にて２日間透析後、凍結乾燥し誘導体を得た（OF-C12-CTX、収量384mg）。得られたOF-C12-CTXの具体的な構造は下記の化学式（３）に示す通りである。
アミノラウリル酸4.5ｇを200mLの30％エタノール水に懸濁し、ＮａＯＨを適宜加え、溶解した。溶液に14.5ｇのオリゴフコースを加え、40℃、１時間反応した。ボランジメチルアミンを３ｇ加え、40℃にて20時間反応した。塩酸でｐＨ５とし、9000rpm、15分遠心後、上清を分画分子量1000カットの透析膜にて透析した。透析物をろ過後、凍結乾燥し、オリゴフコースのアミノラウリル酸誘導体を得た（収量2.67ｇ）。
得られた誘導体を40mLの水に懸濁し、メタノールを溶解するまで加えた。塩酸でｐＨ５とし、水溶性カルボジイミド3.5ｇ、Ｎ−ヒドロキシスクシイミド1.5ｇを加え、室温下20時間反応した。反応液を透析後、凍結乾燥し、乾燥物1.2ｇを水20mLに溶解した。
化学式（３）
【化３】
0004439119.tif 000004
この液に0.5ｇのアンピシリンナトリウムを加え、１Ｍ、ＮａＨＣＯ３を１mL加えた。室温下、２０時間反応後、反応液を、1000カットの透析膜にて透析する。透析内液をろ過後、凍結乾燥しオリゴフコースにスペーサを導入したアンピシリン誘導体（OF-C12-AM）を得た（収量230.6mg）。得られたOF-C12-AMの具体的な構造は下記の化学式（４）に示す通りである。
化学式（４）
【化４】
0004439119.tif 000005
実施例２．カラビオース誘導体の製造
κカラゲナン（10ｇ）を100mLの0.3Ｎ硫酸に含水した。40℃にて20時間、浸透後、100℃にて10分、加熱した。室温まで放置後、中和した。遠心分離（20000ｒｐｍ、30分）により不要物を除去後、マイクロアシライザーにて脱塩し、凍結乾燥することで9.74ｇのカラビオースが得られた。
得られたカラビオース１ｇにアンピシリン１ｇを加え20mLの脱イオン水に溶解したものと、カラビオース１ｇにセフォトキシナム１ｇを加え20mLの脱イオン水に溶解したものとを用意した。
35℃にて１時間反応後、ポランジメチルアミン複合体を各々に１ｇずつ加え、25℃にて20時間反応した。反応液に１mLの１Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ4.6）を加え、予め平衡化しておいたマイクロプレッブＨＩＧＨＱ（15mL）に供した。80mLの50ｍＭ酢酸緩衝液にて溶出させた。これにより、未反応の抗生物質及びボランが溶出する。続いて80mLの１ＭのＮａＣｌを含む同緩衝液で溶出させた。
この画分を集め、電気透析にて脱塩後、分画分子量500カットの透析膜にて透析を行った。透析物を回収し、凍結乾燥することにより、カラビオースアンピシリン誘導体（CarrabioAM）587mg、及びカラビオースセフォトキシナム誘導体（CarrabioCTX）437mgを得た。
得られたカラビオースアンピシリン誘導体（CarrabioAM）及びカラビオースセフォトキシナム誘導体（CarrabioCTX）の具体的な構造式は下記の化学式（５）及び化学式（６）に示す通りである。
化学式（５）
【化５】
0004439119.tif 000006
化学式（６）
【化６】
0004439119.tif 000007
実施例３．Helicobacter pylori に対する抗菌作用の検証１
Helicobacter pylori 増殖阻害活性は以下の方法で測定した。１mLのブルセラ培地にHelicobacter pylori 臨床分離株（1.5×10８CFU/mL）を100μＬ加え、更に１mg/mLのOF-CTX若しくはセファトキシナム（CTX）を０，３，６，９，１２μＬずつ加える。37℃にて３日間培養後、濁度（Ａ600nm）を測定し増殖率を測定した。結果を図２に示す。
図に示した通り、OF-CTXはHelicobacter pylori に対し６μｇ／ｍＬの濃度でほぼ完全に増殖を阻害した。本活性はセファトキシナムより若干弱いものの、OF-CTX分子中のセファトキシナム含有量はモル比でフコース量の約1/10であることから、OF-CTXの活性はCTX単体の活性よりも高いものであると考えられる。
実施例４．Helicobacter pylori に対する抗菌作用の検証２
Helicobacter pylori を25mLのブルセラ培地に懸濁し、各500μＬずつ分注し、本液に30μＬの培地のみ、１mg/mLのOF-CTXを加え、０℃にて０〜２５分処理する。14000rpm、７分遠心後、沈渣を１mLの培地に再懸濁し、その内100μＬずつ分注する。本液に１mLの培地を加え、３７℃にて３日間培養後、600nmにおける濁度を測定した。その結果、対照群の濁度が0.494であるのに対し、OF-CTX前処理群の濁度は0.153であり、約70％の増殖阻害効果を示したことになる。
以上のように、本発明によれば、フコイダンやオリゴフコースの誘導体はHelicobacter pylori に対し抗菌作用を有し、且つ実施例４に示したように、これら誘導体は洗浄後も効果を示すことから、Helicobacter pylori に接着し、効果を示すものと考えられた。これにより、これらの誘導体はHelicobacter pylori に指向性（特異性）を有した抗菌剤として、胃潰瘍や胃癌の治療に有益な薬剤として利用できる。
実施例５．Helicobacter pylori に対する抗菌作用の検証３
Helicobacter pylori 培養菌体を1.5×10８  CFU/mLとなるように５％ＦＣＳを含むブルセラ培地に懸濁し、200μＬずつ96穴マイクロプレートに撒いた後、実施例２で得られたカラビオースアンピシリン誘導体（CarrabioAM）、カラビオースセフォトキシナム誘導体（CarrabioCTX）（各１mg/mL）を２μＬずつ撒いた。攪拌後、37℃にて微好気下の条件で３日間培養し、600nmにおける濁度を測定した。その結果、対照群の吸光度は0.835であったのに対し、カラビオースアンピシリン誘導体（CarrabioAM）添加群では0.003、カラビオースセフォトキシナム誘導体（CarrabioCTX）添加群では0.000で完全にHelicobacter pylori の増殖を抑制した。
【図面の簡単な説明】
図１はOF-CTXの１３Ｃ−ＮＭＲを示す線図である。縦軸は計測シグナルの相対強度、横軸は周波数（Ｈｚ）である。
図２はOF-CTXとCTXとのHelicobacter pylori 増殖阻害効果を示す線図である。縦軸は濁度（600nm）、横軸は添加量（μg/mL）である。
【図１】
0004439119.tif 000008
【図２】
0004439119.tif 000009