(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス由来の抗原に対する抗体を含むヒト由来の血漿又は血清と、コントロール試薬容量当たり０．５〜５０ｇ／Ｌのポリビニルアルコールを含んでなる、抗体含有溶液コントロール試薬。
【請求項２】
抗体がＣ型肝炎ウイルス由来の抗原に対する抗体である請求項１に記載の抗体含有溶液コントロール試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス由来の抗原に対する抗体を含有した溶液中での該抗体の失活を防止し、安定して保存することができる抗体含有溶液コントロール試薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
検体（患者血清等）中の抗原又は抗体を免疫測定する際には、抗原又は抗体を含有したコントロール試薬を同時に測定し、精度管理を行うことが一般的に行われている。さらに、ウイルス由来の抗原に対する抗体を免疫測定する際には、ウイルス抗体を含有したコントロール試薬を測定し、その測定結果と比較してウイルス抗体の有無を判定、またはウイルス抗体量を定量する等の標準品（キャリブレーター）としての使用も行われる。これらのコントロール試薬は、検体と同様の物理的性質を持つことが望ましいため、ヒト由来の血漿又は血清から調製されることが一般的である。
【０００３】
ヒト由来の血漿又は血清は、蛋白質分解酵素、脂質等を含んでいるため、溶液状態のコントロール試薬は保存安定性が悪く、不溶物の発生、測定される抗原又は抗体の失活等が生じていた。また、ウイルス抗体を含む血漿又は血清は、感染性のウイルスを含む可能性が高いため、ウイルスの不活化処理が必要であり、この処理でコントロール試薬中のウイルス抗体がさらに失活する場合があった。これらの問題点に対して、不溶性物質をあらかじめ除去する方法（特許文献１）、特殊な添加剤を用いる方法（特許文献２）、失活の生じにくいウイルスの不活法によるコントロール試薬の調製法（非特許文献１、特許文献３）等が提案されている。
【特許文献１】特開平９−８００４９号公報
【特許文献２】特開平７−２０９２９８号公報
【特許文献３】特開２００１−１３１３７号公報
【非特許文献１】機器・試薬，３４９−３５３頁，２２（５）,１９９９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら従来の方法では、溶液状コントロール試薬として、冷蔵状態（２〜１０℃）での保存安定性は良いが、保存温度が高い場合（例えば、２０〜４０℃）の安定性は良くない。コントロール試薬は通常室温で使用されるため、冷蔵保存で安定性が良好でも、頻回の室温での使用で失活が生じ、結果として間違った測定結果となることがある。すなわち本発明の目的は、室温でも安定なウイルス抗体を含有した溶液状コントロール試薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の抗体含有コントロール試薬の特徴は、ウイルス由来の抗原に対する抗体を含むヒト由来の血漿又は血清と、コントロール試薬容量当たり０．５〜５０ｇ／Ｌのポリビニルアルコールを含んでなるものであることを要旨とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の抗体含有溶液コントロール試薬は、冷蔵保存のみならず室温保存でもウイルス抗体が失活しない。従って、本発明の抗体含有溶液コントロール試薬は、間違った測定結果になることがない、という効果がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明のウイルス由来の抗原に対する抗体（以後、ウイルス抗体と記載する）は従来公知のものが使用できる。例えば、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原に対する抗体（ＨＢｓ抗体）、Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原に対する抗体（ＨＢｃ抗体）、Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原｛コア抗原、ＮＳ３抗原、ＮＳ４抗原、ＮＳ５抗原等｝に対する抗体（ＨＣＶ抗体）、トレポネーマ パリダム由来の抗原に対する抗体（ＴＰ抗体）、ヒト免疫不全ウイルス由来の抗原に対する抗体（ＨＩＶ抗体）、成人Ｔ細胞性白血病ウイルス由来の抗原に対する抗体（ＡＴＬ抗体）、サイトメガロウイルス由来の抗原に対する抗体（ＣＭＶ抗体）およびパルボＢ１９ウイルス由来の抗原に対する抗体（ＰＢ１９抗体）等が挙げられる。これらのうち好ましいのは、臨床的に測定頻度が高く、より安定性の高いコントロール試薬の必要性の観点から、ＨＢｓ抗体、ＨＢｃ抗体、Ｃ型肝炎ウイルス由来の抗原に対する抗体（ＨＣＶ抗体）、ＴＰ抗体、ＨＩＶ抗体であり、より好ましいのはＨＢｓ抗体、ＨＣＶ抗体であり、特に好ましいのはＨＣＶ抗体である。
【０００８】
ウイルス抗体を含むヒト由来の血漿又は血清は、ウイルス感染者から得た血漿又は血清が使用でき、例えば、ゴールデンウエストバイオロジカルズ社（Golden West Biologicals,Inc.）、プロメデクス社（ProMedDx, LLC.）等から入手することができる。個別のウイルス感染者からの血漿又は血清に含まれるウイルス抗体は、感染者個人によりウイルス由来の抗原に対する反応性が異なる場合がある。従って、反応性の均一化のため、複数のウイルス感染者からの血漿又は血清をプールして用いることが好ましい。
【０００９】
ウイルス感染者から得た血漿又は血清中のウイルス抗体量は種々の量を示すが、一般にはコントロール試薬として必要な抗体量を大きく上回る。従って、必要に応じて健常人（ウイルスに感染していない人）から得た、血漿又は血清で希釈することが行われる。健常人の血漿又は血清も同様に入手可能である。
【００１０】
これらの血漿又は血清は、溶液コントロール試薬の保存安定性、特に不溶物の発生を防止する観点で、脱脂等の処理がなされていることが好ましい。脱脂等の処理としては、例えば、血清または血漿を数カ月間低温で保存し、析出した不溶化成分を遠心分離して除去する方法や、不溶化成分が析出しなくなるまで凍結融解を繰り返す方法、有機溶媒の混合物と振盪することによる抽出で除去する方法｛例えば、Clin. Chem. 29, 120−125 (1983)に記載の方法｝等が知られている。
【００１１】
本発明において、ウイルス抗体を含むヒト由来の血漿又は血清は、ウイルスを不活化する処理を行い用いることが好ましい。ウイルスの不活化処理法は、以下の文献において公知である。液状加熱処理（Ｙ． Ｕｅｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｖｏｘ Ｓａｎｇ５７（１）１〜３，１９８９）、乾燥加熱処理（Ｍ． Ｓａｖａｇｅ ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ２６（２）１１６〜１２４，１９９８）、界面活性剤処理｛（Ｙ． Ｕｅｍｕｒａ ｅｔ ａｌ、Ｖｏｘ Ｓａｎｇ ６７（３）２４６〜２５４，１９９４）、（Ｂ． Ｈｏｒｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ２５（６）５１６〜５２２，１９８５）｝、酸処理（Ｐｒｏｋｕｄｉｎａ ＥＮ ｅｔ ａｌ．，Ｖｏｐｒ Ｖｉｒｕｓｏｌ ３４（３）２８０〜２８３，１９８９）、アルカリ処理（Ｅｓｔｅｓ ＭＫ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ４３（２）４０３〜４０９，１９７９）、アルキル化剤処理（Ｂ． Ｈｏｒｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ２５（６）５１６〜５２２，１９８５）及びウイルス除去膜処理（Ｓ． Ｍａｎａｂｅ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ． ８８ ８１〜９０，１９９６）。
【００１２】
上記ウイルスの不活化処理法において、本発明に最も好ましいのは、アルキル化剤処理、界面活性剤処理および液状加熱処理を組み合わせて実施するものである。
具体的には、ウイルス抗体を含むヒト血漿又は血清に、アルキル化剤処理の一つとしてトリ（ｎ−ブチル）リン酸の０．１％〜２％（容量／血漿又は血清の容量）、好ましくは０．３％〜０．５％（容量／血漿又は血清の容量）と、界面活性剤処理の一つとして、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートの０．１％〜３％（容量／血漿又は血清の容量）、好ましくは０．５％〜２％（容量／血漿又は血清の容量）を加え、１５〜３７℃で４〜２４時間処理した後、５０〜７０℃好ましくは約５６〜６０℃で、１〜１０時間の液状加熱処理を行うことで、実施できる。
【００１３】
さらに必要に応じて、ウイルスの不活化処理した血漿又は血清を吸着用樹脂カラムを通過させ、添加した不活化剤を実質的に除くことが行われる。例えば、アンバーライトＸＡＤ−２樹脂カラムを通すことにより添加した不活化剤を吸着除去できる。不活化剤の除去は、これらの物質がコントロール試薬の安定性に影響をおよぼす程度を軽減させることを目的としているが、本発明によれば不活化剤を除去しなくても安定性を維持できるというメリットがある。
【００１４】
本発明において、ポリビニルアルコールは従来公知のものが使用できるが、入手の容易さ及びコントロール試薬調製時の溶解性の観点から、ケン化度が７０〜９０％、重合度が１００〜１０，０００のものが好ましく、重合度が３００〜４，０００のものがより好ましい。
【００１５】
ポリビニルアルコールは、コントロール試薬の保存安定性及び粘度の上昇抑制の観点から、コントロール試薬容量当たり０．５〜５０ｇ／Ｌ含有されることが好ましく、より好ましくは１〜４０ｇ／Ｌ、さらに好ましくは５〜２０ｇ／Ｌで含有されることである。
【００１６】
本発明において、抗体含有溶液コントロール試薬は、ウイルス抗体を含むヒト由来の血漿又は血清、ポリビニルアルコール以外に、必要に応じて、上述の健常人由来の血漿又は血清、さらに界面活性剤、防腐剤等を含むことができる。例えば、界面活性剤としては、不活化剤としても使用されるポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを０．１〜３％（容量／コントロール試薬の容量）含むことなどが挙げられ、防腐剤としてはアジ化ナトリウムを０．０５〜０．０８％（重量／コントロール試薬の容量）含むことなどが挙げられる。
【００１７】
本発明において、抗体含有溶液コントロール試薬中のウイルス抗体量は、コントロール試薬の使用目的により適宜設定できる。具体的には不活化処理したウイルス抗体を含む血漿又は血清を、適当な溶液（通常は健常人由来の血漿又は血清）で希釈することでウイルス抗体量を調整する。ウイルス抗体量は、市販のウイルス抗体測定用又は検出用キット、例えばＨＣＶ抗体は「スフィアライト  ＨＣＶ抗体」［三洋化成工業（株）製］、ＨＢｓ抗体は「スフィアライト  ＨＢｓ抗体」［和光純薬工業（株）製］で測定することができる。
【００１８】
本発明の抗体含有溶液コントロール試薬の製造方法は、当業者公知の方法を組み合わせて適宜設定できる。例えば、以下の工程（１）〜（６）を経て製造できる。
（１）ウイルス抗体を含む血清をプールし、不活化処理及び脱脂処理する工程
（２）健常人血清（ウイルス抗体を含まない血清）をプールし、脱脂処理する工程（未知のウイルスを含む可能性があるため、不活化処理を実施してもよい）
（３）工程（１）、（２）で処理した血清を混合し、ウイルス抗体量を目的の量に調整する工程
（４）工程（３）で得たものに、ポリビニルアルコールを溶解する工程（必要に応じて防腐剤等も添加する）
（５）ろ過、小分け分注、ラベリング等の工程
（６）最終的な品質を検査する工程
【００１９】
本発明の抗体含有溶液コントロール試薬は、ウイルスの感染をウイルス抗体の検出又は定量によって診断する臨床検査の分野において、酵素免疫測定法、放射線免疫測定法、或いは免疫比濁法等の免疫測定を行う時に、比較対照用のコントロールとして用いることができる。具体的に使用法としては、次の例が挙げられる。
（１）検量線用標準液として使用する場合
ウイルス抗体量が異なる複数の抗体含有溶液コントロール試薬を免疫測定に供し、測定の結果得られるシグナルとウイルス抗体量から検量線を作成し、未知試料の測定シグナルから濃度値を求めるために用いる。
（２）カットオフコントロールとして使用する場合
カットオフ（測定シグナルがそれ以上であればウイルス抗体を持つと判断する値）を示す抗体含有溶液コントロール試薬を調製し、未知試料と同時に測定し、未知試料のシグナルとコントロール試薬のシグナルを比較してウイルス抗体の有無を判断するために用いる。
（３）精度管理用コントロールとして使用する場合
免疫測定を実施する際に、経時的な分析装置や試薬ロット等の変動を把握するため、同一の抗体含有溶液コントロール試薬を測定し、結果の変動から精度管理を行うために用いる。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例により、本発明を更に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。尚、以下における実施例８及び９は参考例である。
＜実施例１＞
ａ）ＨＣＶ抗体含有血清の不活化
ゴールデンウエストバイオロジカルズ社（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｗｅｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）から入手したＨＣＶ抗体陽性ヒト血清を１０名分（各１０ｍＬ）をプールし、ＨＣＶ抗体含有血清１００ｍＬを得た。これに、トリ（ｎ−ブチル）リン酸を０．３ｍＬ、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを１ｍＬを加え、均一に混合溶解後、２５℃で８時間放置した。さらに、５６℃の水浴中で血清の温度が５６℃に達してから２時間放置することで、不活化ＨＣＶ抗体含有血清を得た。
ｂ）ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬の調製
上記で得た不活化ＨＣＶ抗体含有血清１００ｍＬと脱脂ヒト正常プール血清（ＨＣＶ抗体陰性、ゴールデンウエストバイオロジカルズ社から入手）９００ｍＬを混合し、希釈ＨＣＶ抗体含有血清を得た。希釈ＨＣＶ抗体含有血清１００ｍＬにポリビニルアルコール（ケン化度８０％、重合度約５００）［和光純薬工業（株）製］１ｇ、アジ化ナトリウム［和光純薬工業（株）製］０．０８ｇを加え、撹拌し均一溶解した。この溶液を、ポアサイズ０．２５μｍのメンブレンフィルターでろ過し、ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬（１）を得た。
ｃ）ＨＣＶ抗体価（抗体量）の確認
ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬（１）のＨＣＶ抗体価は、臨床検査薬キット「スフィアライト  ＨＣＶ抗体」［三洋化成工業（株）製］で分析装置「ＳｐｈｅｒｅＬｉｇｈｔ１８０」［オリンパス光学工業（株）製］を用いて測定した。測定操作はキット添付の説明書に従い実施した。測定の結果、ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬（１）のＨＣＶ抗体価は、カットオフインデックス（以下、ＣＯＩと略記する）３．６０であった。
ｄ）保存安定性の評価
ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬（１）を５ｍＬ容量のポリエチレンビンに２ｍＬ分注し密栓した後、８℃、２５℃、４０℃で２ヶ月間保存し、上記と同様にＨＣＶ抗体価を測定した。結果を表１に示した。
【００２１】
＜実施例２〜９及び比較例１＞
実施例１において、ポリビニルアルコールの濃度を表１に示す値にした以外は実施例１と同様にして、ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬（２）〜（９）及び比較ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬（１）を得た。これらについて、実施例１と同様に評価し、その結果を表１に示した。
【００２２】
＜比較例２＞
比較例１において、不活化ＨＣＶ抗体含有血清を、さらにアンバーライトＸＡＤ−２樹脂カラムを通すことより、添加したトリ（ｎ−ブチル）リン酸、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートを吸着除去したこと以外は比較例１と同様にして、比較ＨＣＶ抗体含有コントロール試薬（２）を得た。これについて、実施例１と同様に評価し、その結果を表１に示した。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
本発明のＨＣＶ抗体含有コントロール試薬は、比較用のＨＣＶ抗体含有コントロール試薬に比べて、粘度上昇等による反応性の低下も少なく、２５℃、４０℃保存での安定性が著しく向上していることが判った。特に実施例１、４、５においては、免疫反応性の抑制もほとんど認められず、保存安定性も４０℃、２ヶ月保存後のＣＯＩが調製時の９０％以上であり良好であった。
【産業上の利用可能性】
【００２５】
本発明の抗体含有溶液コントロール試薬は、ウイルス由来の抗原に対する抗体を、溶液状態で室温でも安定して保存することができる。従って、頻回使用による失活の問題が無く、間違った測定が無いという効果がある。
よって、本発明の抗体含有溶液コントロール試薬は、ウイルスの感染をウイルス抗体の検出によって診断する臨床検査の分野において、酵素免疫測定法、放射線免疫測定法、或いは免疫比濁法等の免疫測定を行う時に、比較対照用のコントロールとして用いることができる。