(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における全身性エリテマトーデスを同定することを支援するための方法であって、該方法は、以下：
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量する工程；および
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較する工程
を包含し、
ここで、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較して、該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄ量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
方法。
【請求項２】
前記個体から得られた血小板と結合したＣＤ４２ｂを定量する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、ここで、
補体Ｃ４ｄの定量が、該Ｃ４ｄを、第１の標識された部分と補体Ｃ４ｄに特異的な抗体との結合体に結合させる工程、および
該第１の標識された部分を定量する工程
を包含する、方法によって実施される、方法。
【請求項４】
前記第１の標識された部分は、蛍光発光部分である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記第１の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
請求項３に記載の方法であって、該方法は、
前記第１の標識された部分とは検出可能に異なっている第２の標識された部分とＣＤ４２ｂに対して特異的な抗体の結合体に、ＣＤ４２ｂを結合させる工程；および
該第２の標識された部分を定量する工程
をさらに包含する、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、ここで、前記第２の標識された部分が、蛍光発光部分である、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、ここで、前記第２の蛍光発光部分がフローサイトメトリー分析によって定量される、方法。
【請求項９】
個体における全身性エリテマトーデスの疾患活動性をモニタリングすることを支援する方法であって、該方法は、以下：
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量する工程；および
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれかから得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を比較する工程
を包含し、
ここで、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較して該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
方法。
【請求項１０】
方法であって、以下：
個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量する工程；および
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれかから得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を比較する工程
を包含し、
ここで、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較して該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
方法。
【請求項１１】
個体における全身性エリテマトーデスを同定するために使用するキットであって、該キットは、
以下：
第１の標識部分と、補体Ｃ４ｄに特異的な抗体との結合体を含むパッケージ；および
血小板と結合した補体Ｃ４ｄを同定するための該結合体の使用に関する指示書
を備える、キット。
【請求項１２】
請求項１１に記載のキットであって、ここで、前記第１の標識部分が、蛍光発光部分である、キット。
【請求項１３】
請求項１１に記載のキットであって、前記第１の標識部分とは検出可能に異なる第２の標識部分とＣＤ４２ｂに特異的な抗体との結合体を備える、キット。
【請求項１４】
請求項１３に記載のキットであって、前記第２の標識部分が、蛍光発光部分である、キット。
【請求項１５】
方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、以下：
血小板の表面に沈着した補体成分Ｃ４ｄの決定に対応するデータを受信する工程；
個体の血小板の表面に沈着した補体成分Ｃ４ｄに関する参照値を引き出す工程；および
該データと該参照値とを比較する工程
を包含する、
コンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項１６】
個体において全身性エリテマトーデスを同定するための方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、以下：
該個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量する工程；および
該個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するＣ４ｄとの量を比較する工程；
を包含し、
該全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するＣ４ｄの量と比較して該個体から得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄの量が多いことが、該患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関している、コンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項１７】
前記個体から得られた血小板と結合するＣＤ４２ｂを定量する実行可能命令をさらに含む、請求項１６に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項１８】
請求項１６に記載のコンピュータ読み取り可能媒体であって、第１の標識された部分と、補体Ｃ４ｄに対して特異的な抗体の結合体に、Ｃ４ｄを結合し、該第1の標識された部分
を定量することによって、補体Ｃ４ｄの定量を実行するための実行可能な命令をさらに含む、コンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項１９】
前記第１の標識された部分が、蛍光部分である、請求項１８に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項２０】
前記第１の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項１９に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項２１】
請求項１８に記載のコンピュータ読み取り可能媒体であって、
以下：
前記第１の標識部位とは検出可能に異なっている第２の標識部位と、ＣＤ４２ｂに特異的な抗体との結合体に、ＣＤ４２ｂを結合させる工程；
該第２の標識された標識部分を定量する工程
のための実行可能な命令をさらに含む、コンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項２２】
前記第２の蛍光標識された部分が、蛍光発光部分である、請求項２１に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項２３】
前記第２の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項２２に記載のコンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項２４】
全身性エリテマトーデスの疾患活動性をモニタリングするための方法を実行するための実行可能な命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、
以下：
該個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量する工程；
該個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄの量を比較する工程；
を包含し、
１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するＣ４ｄの量と比較して、該個体から得られた血小板と結合するＣ４ｄの量が多いことが、該患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関する、
コンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項２５】
方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、該方法は、以下：
個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量する工程；
個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄの量を比較する工程；
を包含し、
１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄの量と比較して、該個体から得られた血小板と結合するＣ４ｄの量が多いことが、該患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関する、
コンピュータ読み取り可能媒体。
【請求項２６】
個体における全身性エリテマトーデスを同定するためのシステムであって、該システムは、以下：
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量するための手段；および
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較するための手段
を備え、
ここで、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較して、該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄ量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
システム。
【請求項２７】
前記個体から得られた血小板と結合したＣＤ４２ｂを定量するための手段をさらに備える、請求項２６に記載のシステム。
【請求項２８】
請求項２６に記載のシステムであって、ここで、
前記補体Ｃ４ｄを定量するための手段が、第１の標識された部分と補体Ｃ４ｄに特異的な抗体との結合体に結合したＣ４ｄ、および該第１の標識された部分を定量するための手段を備える、システム。
【請求項２９】
前記第１の標識された部分は、蛍光発光部分である、請求項２８に記載のシステム。
【請求項３０】
前記第１の蛍光発光部分が、フローサイトメトリー分析によって定量される、請求項２９に記載のシステム。
【請求項３１】
請求項２８に記載のシステムであって、該システムは、
前記第１の標識された部分とは検出可能に異なっている第２の標識された部分とＣＤ４２ｂに対して特異的な抗体の結合体に結合したＣＤ４２ｂ、および該第２の標識された部分を定量するための手段をさらに備える、システム。
【請求項３２】
請求項３１に記載のシステムであって、ここで、前記第２の標識された部分が、蛍光発光部分である、システム。
【請求項３３】
請求項３２に記載のシステムであって、ここで、前記第２の蛍光発光部分がフローサイトメトリー分析によって定量される、システム。
【請求項３４】
個体における全身性エリテマトーデスの疾患活動性をモニタリングするシステムであって、該システムは、以下：
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量するための手段；および
該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれかから得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量を比較するための手段
を備え、
ここで、１以上の異なる時点での該個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較して該個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある、
システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の分野）
全身性エリテマトーデスを有する患者の同定および／またはモニタリングであり、この活動を実行するための方法およびキット。
【背景技術】
【０００２】
（本発明の背景）
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）または狼瘡は、多くの器官が関与するようになる始原的な自己免疫疾患である。ＳＬＥ患者における抗自己反応は、種々の核構成成分および細胞質性構成成分に対する自己免疫抗体によって特徴づけられる。これらの自己抗体は、それらのそれぞれの抗原に結合して、循環してそして最終的には組織において沈着する免疫複合体を形成する。この免疫複合体の沈着は、慢性的な炎症および組織損傷を引き起こす。
【０００３】
疾患活動性を診断することおよび疾患活動性をモニタリングすることは、ＳＬＥを有する患者において困難なものである。診断は、困難である。なぜならば、疾患のスペクトルは広く、つまり、その疾患のスペクトルは、微細またはあいまいな症状から生命を危うくする多器官不全にまで至る。これらは、ＳＬＥとして取り違え得る多器官におよび関与する他の疾患が存在し、そして、他の疾患と取り違え得るＳＬＥも存在する。１９７１年に、疾患の分類を目的とした基準（Ｃｏｈｅｎ，ＡＳ，ｅｔ  ａｌ、１９７１，Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｂｕｌｌ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ２１：６４３〜６４８）が開発され、１９８２年に更新され（Ｔａｎ，ＥＭ，ｅｔ  ａｌ，１９８２．Ｔｈｅ  １９８２  ｒｅｖｉｓｅｄ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ２５：１２７１〜１２７７）、そして、１９９７年にも更新された（Ｈｏｃｈｂｅｒｇ，ＭＣ．１９９７．Ｕｐｄａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ｒｅｖｉｓｅｄ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ４０：１７２５）。これらの基準は、様々な地理的な位置の患者が比較され得ることを確認したことを意味する。これらの１１の基準のうち、連続的または同時に、そのいずれかで、４以上のものが存在すると、ＳＬＥを有する患者として分類するのに十分である。これらの基準は、他の関連する自己免疫疾患から狼瘡を区別するそれらの特徴の有用な合図の役割を果たしてきたものの、これらは、回避不能である誤認を伴うものである。これらの基準の有無を決定することはしばしば、解釈を要する。大雑把な基準を、兆候または症状の有無の判断のために適用すると、実際はＳＬＥを有さない患者をＳＬＥ患者として診断しがちである。同様に、ＳＬＥの臨床的な発現の範囲は、１１の基準によって既述されるＳＬＥの臨床的な発現の範囲よりもずっと広く、そして、発現の各々は、患者ごとにその活動性および重篤度が変化し得る。困難な診断をさらに複雑にしていることは、ＳＬＥの症状は、その疾患の経過にそって漸進的に変化していくのであるということである。これまでに罹患していなかった器官における新たな症状が、経時的に生じる。ＳＬＥに対する決定的な試験方法は存在せず、ＳＬＥは、しばしば、誤診されている。
【０００４】
疾患活動性をモニタリングすることも、ＳＬＥを患う患者を看護する際には困難なものである。狼瘡は、一連の発赤または急性疾患に進行し、その後、寛解が続く。発赤の症状は、患者ごとに相当に変化し、そして、同一の患者においてもさえも大きく変化する。この発赤の症状としては、倦怠感、発熱、全身性の関節痛、および羞明（太陽光に対する短期の曝露のあとの発疹の発生）が挙げられる。狼瘡の他の症状としては、脱毛、粘膜の潰瘍、ならびに心臓および肺の内側の炎症が挙げられ、この炎症によって、胸の痛みが生じる。赤血球、血小板、および白血球は、狼瘡において標的化され、貧血および出血の問題が生じる。より重篤であると、免疫複合体沈着および血管における慢性炎症は、腎臓を巻き込む結果となり、場合によって、腎不全に至り得る。この腎不全は、透析または腎臓移植を必要とする。血管は、狼瘡における自己免疫反応の主要な標的であるので、早発性の発作および心疾患は、珍しいものではない。しかし、時間が経過すると、これらの発赤は、不可逆的な器官損傷に至り得る。このような損傷を最小化するために、疾患の発赤の早期のより正確な検出が、適切な処置を促進させるばかりでなく、不必要な介入の頻度を低減することになるだろう。研究上視点から、個々の器官系における「炎症の範囲」または疾患活動性を一様に既述する能力または一般的な指標としての能力は、非常に貴重な研究手段である。さらに、疾患活動性の程度は、治験における反応変数として使用され得る。
【０００５】
ＳＬＥ診断のための最も一般的に使用される手段のうちの２つは、全身性エリテマトーデス疾患活動性指数（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ；ＳＬＥＤＡＩ）（Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒ，Ｃ．，Ｄ．Ｄ．Ｇｌａｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）．Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＬＥＤＡＩ．Ａ  ｄｉｅｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ  ｆｏｒ  ｌｕｐｕｓ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ＳＬＥ．Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ３５：６３０−４０）、および全身性エリテマトーデス活動性指標（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｍｅａｓｕｒｅ；ＳＬＡＭ；Ｌｉａｎｇ，Ｍ．Ｈ．，Ｓ．Ａ．Ｓｏｃｈｅｒ，ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄｉｔｙ  ｏｆ  ｓｉｘ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｓｓｅｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ３２：１１０７〜１８）である。このＳＬＥＤＡＩは、９つの器官系を表す２４項目を備える。これらの変数は、履歴、身体検査および臨床検査による評価によって得られる。項目の各々は、関連する器官の重要に基づいて１〜８で重み付けされる。例えば、口の中の潰瘍は、２として評点づけされるが、他方、発作は、８として評点づけされる。ＳＬＥＤＡＩに含まれる臨床パラメータとしては、白血球数、血小板数、検尿、血清Ｃ３、Ｃ４および抗ｄｓＤＮＡが挙げられる。総合計最高点は、１０５である。上述のＳＬＡＭは、１１の器官系を示す３２項目を備える。これらの項目は、存在／非存在としてのみ、評点づけされるが、重篤度に応じて１〜３の階級で分類わけされる。ＳＬＡＭにおける総合計最高点は、８６である。ＳＬＥＤＡＩおよびＳＬＡＭの両方は、経時変化に対して妥当性、信頼性、および感受性があることが示されており（Ｌｉａｎｇ，Ｍ．Ｈ．，Ｓ．Ａ．Ｓｏｃｈｅｒ．ｅｔ  ａｌ（１９８９）Ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄｉｔｙ  ｏｆ  ｓｉｘ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ３２：１１０７−１８）、研究プロトコルおよび臨床試験において広範に使用されている。これらの指標は、ＳＬＥにおける疾患活動性の新たに提案された血清学的マーカーまたは炎症マーカーの値を調べるときに特に有用である。
【０００６】
これらの手段の明らかな有用性にかかわらず、いくつかの欠点が存在する。第一に、同じセットの患者におけるそのＳＬＡＭとそのＳＬＥＤＡＩとの間の完全な一致は、常に存在しているわけではない。これらの不一致に対するいくつかの考えら得る理由が存在する。ＳＬＥＤＡＩとは異なり、ＳＬＡＭとしては、疲労および発熱のような全身にわたる症状が挙げられるが、これらは、活動性ＳＬＥに起因する場合もあり得るが、そうでない場合もあり得；この活動性指数は、医師の解釈に依存する。さらに、ＳＬＥＤＡＩは、いくつかの器官における軽度の活動性をとらえず、そして溶血性貧血のようないくつかのタイプの活動性に対する指標（ｄｅｓｃｒｉｐｔｏｒ）を有さない。これらの理由および他の理由のために、殆どの研究は、疾患活動性に対して一つ以上の指標を組み込む。この分野の状態の一般評論は、Ｒａｍｓｅｙ−Ｇｏｌｄｍａｎ，Ｒ．ａｎｄ  Ｍａｎｚｉ，Ｓ．Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｉｎ：Ｇｏｌｄｎａｍ  ａｎｄ  Ｈａｔｃｈ，Ｅｄ．Ｗｏｍａｎ  ａｎｄ  Ｈｅａｌｔｈ．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ  ２０００：７０４−７２３に見出され得る。
【０００７】
補体系は、細菌および菌類の感染に対する主要な防御メカニズムとして働くことによって、体液性免疫および炎症のエフェクター機能の多くを提供する高度に制御された様式で相互作用する３０以上の機能的に関連したタンパク質の複合体ネットワークからなる。このタンパク質のシステムは、３つの異なる経路（古典的経路（抗体の存在下）または第二経路（抗体の非存在下）およびレクチン経路）を介して、異質生物による侵入に対して作用する。いったん活性化されると、各経路中のタンパク質は、この反応を始めた異質抗原を撲滅することを目的とした様々な機能を果たす多分子複合体への一連の自己組織化に関わるカスケードを形成する。
【０００８】
古典的経路は、通常、異質分子に結合する抗体によって引き起こされる。この古典的経路は、古典的経路に特異的で、（経路中の順序で）Ｃ１、Ｃ４、Ｃ２と呼ばれるいくつかの構成成分からなる。
【０００９】
古典的経路において、第一の構成成分Ｃ１ｑは、抗原抗体複合体に結合し、経路を活性化する。この事象は、２つのセリンプロテアーゼＣ１ｒおよびＣ１ｓの一連の活性化に続く。活性化されたＣ１ｓは、古典的経路の最終的な２つのタンパク質、すなわちＣ４およびＣ２である２つの基質を有する。タンパク質Ｃ４は、Ｃ４ａおよびＣ４ｂに開裂する。タンパク質Ｃ２は、Ｃ２ａおよびＣ２ｂを形成するように開裂する。断片Ｃ４ｂおよび断片Ｃ２ａは、Ｃ４ｂ２ａを形成するように会合し、このＣ４ｂ２ａは、タンパク質Ｃ３をＣ３ａおよびＣ３ｂに開裂し、古典的経路の活性化を完成する。
【００１０】
断片Ｃ４ｂおよび断片Ｃ３ｂは、第Ｉ因子によるさらなる分解をうける。この因子は、Ｃ４ｂを開裂させて、Ｃ４ｄを生じ、またＣ３ｂを開裂させて、Ｃ３ｄに続くｉＣ３ｂを生じる。このように、補体の古典的経路の活性化は、免疫複合体のまたは他の活性化した表面上のＣ４ｄおよびｉＣ３ｂを含む、多くの断片の沈着を導き得る。これらの断片は、成熟赤血球または赤血球上の補体レセプタータイプ１（ＣＲ１）に対するリガンドである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（本発明の簡潔な要約）
健康な（健常な）個体から得られる血小板と比較して、全身性エリテマトーデスを有する個体の血小板の表面上に補体Ｃ４ｄ量の増加が見られることが見出されている。本明細書中に示されるように、血小板に結合した高レベルの補体Ｃ４ｄは、個体における全身性エリテマトーデスの存在と強い相関があり、そしてその個体における全身性エリテマトーデスの診断およびモニタリングに使用され得る。本発明は、全身性エリテマトーデスであると推測される患者から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄのレベルを決定する工程およびその患者の補体Ｃ４ｄのレベルと健康な（健常な）個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄのレベルを比較する工程を含む。一つの実施形態において、血小板に結合するＣ４ｄ量は、フローサイトメトリーによる蛍光検出によって計測される。
【００１２】
一つの局面において、１つの方法は、その個体における全身性エリテマトーデスを同定するために提供される。その方法は、個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄを定量する工程およびその個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄの量と全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄの量を比較する工程を含み、ここで全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄの量と比較してその個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある。
【００１３】
別の局面において、１つの方法は、個体における全身性エリテマトーデスの疾患活動性をモニタリングするために提供される。この方法は、その個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄを定量する工程およびその個体から得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄの量を１以上の異なる時点でのその個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれかから得られる血小板に結合する補体Ｃ４ｄの量と比較する工程を含み、ここで１以上の異なる時点でのその個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいづれかから得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較して、その個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄ量が多いと、その患者における活動性の全身性エリテマトーデスの存在と相関がある。
【００１４】
別の局面において、個体から得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄを定量する工程およびその患者から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と、１以上の異なる時点での個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体のいずれから得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄの量を比較する工程を包含する、方法が提供され、１以上の異なる時点でのその個体または全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量と比較してその個体から得た血小板と結合した補体Ｃ４ｄの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関がある。
【００１５】
別の実施形態において、個体における全身性エリテマトーデスを同定するためのキットは、第１の標識された部分と補体Ｃ４ｄに特異的な抗体との結合体およびその結合体を使用して血小板に結合する補体Ｃ４ｄを同定することに関する指示書を備えるパッケージを備える。
【００１６】
さらに別の実施形態において、方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体であって、この方法は、以下：血小板の表面に沈着した補体成分Ｃ４ｄの決定に対応するデータを受信する工程；個体の血小板の表面に沈着した補体成分Ｃ４ｄに関する参照値を受信する工程；およびそのデータとその参照値とを比較する工程を包含する。
【００１７】
個体において全身性エリテマトーデスを同定するための方法を実行するための実行可能命令を具体的に実装するコンピュータ読み取り可能媒体が提供され、その方法は、個体から得られた血小板と結合した補体Ｃ４ｄを定量する工程；およびその個体から得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄの量と、全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するＣ４ｄとの量を比較する工程を包含し、その全身性エリテマトーデスを有さない個体から得られた血小板と結合するＣ４ｄの量と比較してその個体から得られた血小板と結合する補体Ｃ４ｄの量が多いことが、その患者における全身性エリテマトーデスの存在と相関している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明の方法は、ＳＬＥの同定および／またはモニタリングを可能にする。この状態が、重篤な健康上の問題であるので、この状態に対する相対的に正確であり早期の診断の必要性が存在する。同様に、この疾患の活性をモニタリングする能力が、非常に重要である。最も一般的な意味において、本発明の方法は、患者の血小板の表面上に沈着したＣ４ｄを決定することが、ＳＬＥに関する診断マーカーとしての役割を果たすという発明者らの発見に基づく。
【００１９】
ＳＬＥの発症またはそれまでの発症を診断する際に、サンプル中の血小板の表面に沈着した補体Ｃ４ｄが、定量される。次いで、その血小板上のＣ４ｄの量は、ＳＬＥを有していない個体の血小板の表面上に通常見出されるＣ４ｄの量と比較される。正確には、本明細書中で記載される方法は、血小板「と結合している」Ｃ４ｄを測定する。いくつかの方法（例えば、フローサイトメトリー）によって、インタクトな血小板の表面上のＣ４ｄが直接的測定されるが、他方、他の方法では、破砕された血小板のサンプル中において間接的にＣ４ｄが定量され、文字通りに血小板の表面上でＣ４ｄを測定しない。結果として、本明細書中で使用される場合、Ｃ４ｄは、血小板「と結合している」という場合、それは、Ｃ４ｄが血小板の表面上に存在するか、または、そのＣ４ｄが、破砕された血小板サンプル中に存在することを意味するが、いずれの場合においても、血小板の表面上に沈着したＣ４ｄの、直接的または間接的な測定である。
【００２０】
ＳＬＥを有する患者における疾患活動性のモニタリングにおいて、患者の血液サンプルにおいて、上記と同じ決定がなされ、次いで、過去におけるその同一の患者から得られたサンプル中の血小板と結合したＣ４ｄの量で決定した量と比較される。
【００２１】
一般的に、血液のサンプルは、その患者から得られると、ＥＤＴＡ（エチレンジアミントテトラアセテート）で処理して、補体活性化を阻害する。これらのサンプルは、室温または冷却状態で維持され得る。アッセイは、４８時間以内に完全に行われる。
【００２２】
補体Ｃ４ｄは、多くの方法によって定量され得る。この方法としては、フローサイトメトリー、血小板溶解物を用いたＥＬＩＳＡ、そして、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が挙げられる。１つの実施形態において、Ｃ４ｄは、フローサイトメトリー法によって定量され、測定が、Ｃ４ｄに対して特異的な、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を使用する、直接免疫蛍光法または間接免疫蛍光法によって行われる。代表的には、血小板Ｃ４ｄについての平均蛍光チャネル（ｍｅａｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｃｈａｎｎｅｌ；ＭＦＣ）が、決定される。フローサイトメトリーはまた、ＳＬＥを有していることが知られている患者における疾患活動性をモニタリングするために使用され得る。この方法において、第１の蛍光部分と結合化された抗Ｃ４ｄ抗体が、血液サンプルに添加される。好ましい血小板特異的抗体は、上述の第１の蛍光部分とは検出可能に異なる第２の蛍光部分と結合体化しており、この抗体はまた、血小板上に沈着しておりかつ血液成分上に沈着していないＣ４ｄの細胞分取によって定量を容易にするために添加される。
【００２３】
疾患の診断および疾患活動性のモニタリングの両方のためのフローサイトメトリーを実施する用途のためのキットもまた、提供される。キットは、パッケージ中に、本明細書中に記載の方法を実施するために必要な種々の試薬のいずれかを備える。例えば、免疫蛍光アッセイのために、それらのキットは、一般的に、標識した部分（例えば、蛍光部分）との、補体成分Ｃ４ｄに特異的な抗体の結合体を備え、そして、好ましくは、異なる蛍光部位との血小板特異的抗体の結合体（例えば、血小板性ＣＤ４２ｂに特異的なモノクローナル抗体が挙げられるがこれらに限定されない）を備える。この抗体またはこれらの抗体類は、代表的には、モノクローナル性である。さらに、これらのキットは、この型のアッセイを実施する際に必要となり得る他の物質および血小板上のＣ４レベルを定量するために、このキットの抗Ｃ４ｄ抗体および／または他の成分を使用するための指示書を備え、これらの物質としては、以下が挙げられる：緩衝液；ＥＬＩＳＡまたはＲＩＡアッセイのような場合には、放射性同位体標識抗体、二次抗体（これは、標識部位または他のタグ（例えば、アビジンまたはビオチン）と結合体化し、さらに、蛍光色素（ｆｌｕｏｒｏｃｈｒｏｍｅ）または酵素（例えば、アルカリホスファターゼまたはペルオキシダーゼ）とさらに結合体化される））；比色計用試薬（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ  ｒｅａｇｅｎｔ）。
【００２４】
記載される方法およびキットにおいて有用な抗体は、公知である。抗ＣＤ４２ｂ抗体を分泌するハイブリドーマが、利用可能であり、このようなハイブリドーマとしては、例えば、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｏｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）のハイブリドーマが挙げられる。抗Ｃ４ｄ抗体は、Ｑｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）製のもの（＃Ａ２１３）であり、Ｒｏｇｅｒｓ，Ｊ．Ｎ．Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌに記載されている。アルツハイマー病におけるβアミロイドによる補体活性化は、ＰＮＡＳ  ８９：１００１６−１００２０，１９９２；Ｓｃｈｗａｂ，Ｃ．ｅｔ  ａｌに記載されている。グアム島でのパーキンソン痴呆（Ｇｕａｍ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）は、反応性（ｒｅａｃｔｉｖｅ）小グリア細胞および補体タンパク質に関連する（Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ７０７（２）：１９６  １９９６；Ｇｅｍｍｅｌｌ，Ｃ．Ａ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｔｏ  ｑｕａｎｔｉｆｙ  ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｏｎ  ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｓｕｒｆａｃｅｓ．Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｍａｔｅｒ  Ｒｅｓ  ３７：４７４−４８０，１９９７；およびＳｔｏｌｔｚｎｅｒ，Ｓ．Ｅ．  ｅｔ  ａｌ  Ｔｅｍｐｏｒａｌ  ａｃｃｒｕａｌ  ｏｆ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｌａｑｕｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｏｗｎ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｗｉｔｈ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈ  １５６：４８９−４９９，２０００）。Ｃ４ｄおよび／またはＣＤ４２ｂに特異的な結合試薬（例えば、Ｆｖフラグメント、単鎖Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメントまたは多価結合試薬が挙げられるがこれらに限定されない）は、「抗体類」または「抗体」と同義である。
【００２５】
Ｃ４ｄおよびＣＤ４２ｂの値の決定が、代替的には、ＥＬＩＳＡまたＲＩＡのような多くの標準的な測定技術を使用して実施され得る。フローサイトメトリーに使用される、蛍光標識の代わりに、他の型の標識（例えば、放射性標識または色素標識（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｌａｂｅｌ））が使用される。アッセイためのこのような試薬が使用されなければならない場合、これらのキットは、Ｃ４ｄに特異的な抗体（代表的には、モノクローナル抗体）および適切な標識（例えば、放射性同位体ヨウ素、アビジン、ビオチンまたは抗体（例えば、アルカリホスファターゼまたはペルオキシダーゼ））と結合体化した、ＣＤ４２ｂを備え得る。
【００２６】
ＳＬＥを有する患者の診断は、正常な個体における血小板の表面上に代表的に存在するＣ４ｄの量についてのベース値または範囲と、決定したＣ４ｄの値とを比較することによって実施される。正常な個体において、Ｃ４ｄは、検出可能なレベルで存在しない。間接免疫蛍光法を利用するフローサイトメトリー測定を使用する場合、健常な抗体の血小板におけるＣ４ｄのＭＦＣは、−１．１７〜０．８７（平均−０．３９）の範囲である（表Ｉおよび表ＩＶ）。ＳＬＥを有する患者における血小板性Ｃ４ｄのＭＦＣは、健常な患者のＭＦＣよりも高く、−０．８５〜３１．６７（平均２．６５）の範囲である（表ＩＩおよび表ＩＶ）。
【００２７】
本発明の方法の具体的な特徴は、それまでの数週間または数ヶ月の間に、その患者において生じたＳＬＥ活性を示すかまたはそれを反映することである。この手順を使用して、それまでの数週間、または場合によっては、血小板の表面上に沈着したＣ４ｄの持続性に起因して数ヶ月の間にわたって、ＳＬＥの再発の存在を同定することは可能である。
【００２８】
（自動化およびコンピュータソフトウェア）
上述のように記載される、Ｃ４ｄの決定およびその診断方法および疾患活動性モニタリング方法は、手動で実施され得るが、しばしば、必要な決定（または複数の決定）ならびに基底値または参照値との比較をなすために血液サンプルが自動的に分析される自動化システムおよび／または装置を使用して、都合よく実施され得る。
【００２９】
したがって、一局面において、本発明は、個体における全身性エリテマトーデスを診断するかまたはモニタリングするための方法を包含して、その方法は、（ａ）血小板を含む個体からの血液サンプル中において、そのサンプルの血小板の表面上に沈着した補体成分Ｃ４ｄを自動的に決定する工程；および（ｂ）血小板の表面上の補体Ｃ４ｄについて参照値と上述の決定した値を自動的に比較する工程を包含する。
【００３０】
図１を参照すると、本発明の１つの実施形態は、システム１００を包含し、このシステム１００は、コントローラ１０４の命令によって作動するデバイス１０２を備え得る。その破線は、いくつかの実装において、そのコントローラ１０４、または集合的に考慮されるそれらの一部分は、上述のデバイス１０２における１以上の要素が記載されるように作動するための命令を出し得る。したがって、本明細書中で記載された機能は、上述のシステム１００においてソフトウェアが動作して、そのシステムの１以上の要素を制御するように実装される。本発明の１つの実施形態に従うデバイス１０２の例は、規定された様式で命令に対して応答し動作することができる汎用コンピュータである。他の例は、専用コンピュータが挙げられ、このようなコンピュータとしては、例えば、パーソナルコンピュータ（ＰＣ）、ワークステーション、サーバ、ノート型コンピュータ、インターネット対応型電話、インターネット対応型携帯情報端末（ＰＤＡ）、マイクロプロセッサ、集積回路、特定用途集積回路、マイクロプロセッサ、マイクロコントローラ、ネットワークサーバ、Ｊａｖａ（登録商標）仮想マシン、論理アレイ（ｌｏｇｉｃ  ａｒｒａｙ）、プログラム可能論理アレイ（ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ  ｌｏｇｉｃ  ａｒｒａｙ）、マイクロコンピュータ、ミニコンピュータ、または大型コンピュータ（ｌａｒｇｅ  ｆｒａｍｅ  ｃｏｍｐｕｔｅｒ）、またはいずれかの他のコンポーネント、マシン、ツール、装置または、命令に応答してそれを実行することができる上述のものの組合せが挙げられる。さらに、上述のシステム１００は、ベースラインプロセッサを備える中央処理エンジン、メモリ、および通信機能を備え得る。このシステム１００はまた、通信システムを備え、複数のプロセッサが互いに通信することを可能にする。さらに、このシステム１００は、ディスクドライブ、着脱可能ドライブおよび新規ソフトウェアをロードするための制御要素の形態でストレージ１０６を備え得る。本方法の実施形態において、１以上の参照値が、デバイス１０２に接続されているメモリに記憶され得る。補体Ｃ４ｄの決定に対応するデータを（例えば、適切な分析装置から）取得した後に、そのデバイス１０２は、Ｃ４ｄのデータを１以上の適切な参照データと比較し得る。この比較工程が起動すると、上述のデバイス１０２は、補体Ｃ４ｄの決定に対応するデータがＳＬＥに関連付けられるか否かを自動的に決定し得る。
【００３１】
コントロール１０４の実施形態は、上述のデバイス１０３がプログラムされるように相互作用し、作動するように独立して、または集合的に命令するための、例えば、そのデバイス１０２によって実行可能な、プログラム、コード、命令のセット、またはそれらの組合せを備え得る。コントローラ１０４の１つの例は、命令の実行を指示するためにデバイス１０２にインストールされた、ソフトウェアアプリケーション（例えば、基本ソフト（ＯＳ）、ブラウザアプリケーション、クライアントアプリケーション、サーバアプリケーション、プロキシアプリケーション、オンラインサービスプロバイダアプリケーションおよび／または専用線ネットワークアプリケーション）である。１つの実施形態において、そのコントローラ１０４は、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）系の基本ソフトであり得る。このコントローラ１０４は、適切なコンピュータ言語（例えば、Ｃ／Ｃ＋＋、ＵＮＩＸ（登録商標）  ＳＨＥＬＬ  ＳＣＲＩＰＴ、ＰＥＲＬ、ＪＡＶＡ（登録商標）、ＪＡＶＡＳＣＲＩＰＴ、ＨＴＭＬ／ＤＨＴＭＬ／ＸＭＬ、ＦＬＡＳＨ、ＷＩＮＤＯＷＳ（登録商標）ＮＴ、ＵＮＩＸ（登録商標）／ＬＩＮＵＸ、ＡＰＡＣＨＥ、リレーションナルデータベース管理システム（例えば、ＯＲＡＣＬＥ、ＩＮＦＯＲＭＩＸおよびＭｙＳＱＬが挙げられる）およびオブジェクト指向技術を利用して実装され得る。
【００３２】
１つの実施形態において、このコントローラ１０４は、マシン、コンポーネント、物理的装置または仮想装置、記憶媒体、またはデバイス１０２への命令を送達することできる伝搬信号（ｐｒｏｐａｇａｔｅｄ  ｓｉｇｎａｌ）のいずれかの型で、永続的または一時的に具現化される。具体的には、コントローラ１０４（例えば、ソフトウェアアプリケーションおよび／またはコンピュータプログラム）は、任意の適切なコンピュータ読み取り可能媒体（例えば、ディスク、デバイスまたは伝搬信号）のいずれかで記憶されており、これらの読み取可能媒体は、デバイス１０２によって読み取り可能であり、その結果、そのデバイス１０２が、記憶媒体を読み込むと、本明細書中で記載された機能が、実行される。例えば、１つの実施形態において、そのコントローラ１０４は、以下の機能を実行するための種々のコンピュータ読み取り可能媒体において実施され得る：
（ａ）血小板の表面に沈着した補体成分Ｃ４ｄの決定に対応するデータを受信する工程；
（ｂ）個体の血小板の表面に沈着した補体成分Ｃ４ｄに関する参照値を受信する工程；および
（ｃ）（ａ）のデータと（ｂ）の参照値とを比較する工程。
【００３３】
本明細書中で引用された、刊行物および特許出願の全ては、個々の刊行物および特許出願が、具体的にかつ個々に参考として援用されるように示されたがごとく、参考として援用される。
【実施例】
【００３４】
（実施例および実験データ）
以下の実施例は、例示として提供されるのであって、限定的に提供されるのではない。当業者は、本質的に類似の結果が得られるように変化または改変され得る種々の非臨界的パラメータを用意に認識する。
【００３５】
（実施例１）
（健常なコントロールにおける血小板のＣ４ｄのアッセイ：ネガティブ）
２５名の健常な個体について研究した。表Ｉにおいて示されるように、Ｃ４ｄは、２５名の健常な個体の各々の血小板上に検出されなかった。１ｍＬのＥＤＴＡ抗凝集化末梢血のサンプルを、個体の各々から採取して、血小板の供給源として使用した。これらの血小板を、洗浄して、蛍光活性化細胞分類（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｒｔｅｒ；ＦＡＣＳ）用緩衝液に再懸濁した。Ｃ４ｄおよびＣＤ４２ｂのレベルを、Ｃ４ｄおよびＣＤ４２ｂにそれぞれ、特異的なモノクローナル抗体を使用する２色の間接的免疫蛍光法によって測定した。Ｃ４ｄおよびＣＤ４２ｂのレベルを、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用してフローサイトメトリーによって定量した。これらの血小板を、前方散乱および側方散乱によって同定して、ＣＤ４２ｂ蛍光および平均蛍光チャネル（ｍｅａｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｃｈｎｎｅｌ；ＭＦＣ）を、Ｃ４ｄについて決定した。
【００３６】
より具体的には、血液を、７．２ｍｇのＥＤＴＡ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｈｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を抗凝集剤として入れたＶａｃｕｔａｉｎｅｒ試験管に注入し、２時間以内に処理した。全血を、リン酸緩衝化塩水（ＰＢＳ）で１／１０に希釈した。その希釈した全血の１０μｌのアリコートを、血小板を同定するためのフローサイトメトリーのために０．２５μｇのＰＥ標識した抗ＣＤ４２ｂモノクローナル抗体、および、、０．２５μｇの、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）結合体化させた以下のモノクローナル抗体のうちの１つを免疫蛍光的な標識した：抗Ｃ４ｄ（Ｑｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）またはアイソタイプコントロールＭＯＰＣ２１。サンプルを、１０分間
に亘って室温でインキュベートして、次いで、０．５ｍｌの冷ＰＢＳで希釈して、そして，ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。血小板を、前方散乱の特性およびＣＤ４２ｂの発現、血小板特異的マーカーによって電子装置的に開閉、通過させた。血小板に対する免疫グロブリンの非特異的な結合を、アイソタイプコントロール抗体ＭＯＰＣ２１（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａ，Ｖｉｒｇｉｎｉａより入手可能）を使用して並列的に同じアッセイを実施することによって決定した。抗Ｃ４ｄおよび抗ＣＤ４２ｂの特異的結合を、それぞれ、抗Ｃ４ｄおよび抗ＣＤ４２ｂで、得られたＭＦＣから、ＭＯＰＣ２１で得られたＭＦＣを差し引くことによって決定した。
【００３７】
（実施例２：）
（健常コントロールからＳＬＥを有する患者を区別するための血小板性Ｃ４ｄのアッセイ）
この実施例は、全身性エリテマトーデスを診断するために、補体Ｃ４ｄに対する参照値または参照範囲を確立するための、アッセイの実施を説明する。
【００３８】
この目的のために、発明者らは、外来患者診療所から、狼瘡を患う１１５名の患者を募集した。血小板のＣ４ｄの単一決定を、ＳＬＥの診断に関するＡＣＲ基準を満たした１１５名および３５名の健常なコントロールに関して、実施した（表Ｉ）。ＳＬＥを有する患者および健常コントロールにおけるＣＲ１およびＣ４ｄの平均値および中央値を、表ＩＶにおいて示す。健常個体におけるＣ４ｄに関する平均値が、−０．３９であったのに対して、ＳＬＥを有する患者におけるＣ４ｄは、ＳＬＥを有する患者に対する平均値は、２．６５であった（ｐ＝０．０００１）。
【００３９】
【表１】
0004550051.tif 000002
【００４０】
【表２】
0004550051.tif 000003
【００４１】
健常なコントロールに対して比較するＳＬＥ患者において、これらの測定の感受性および特異性は、それぞれ、３９％および１００％であった（表Ｖ）。
【００４２】
（実施例３：）
（他の疾患を有する患者とＳＬＥを有する患者とを区別するための血小板性Ｃ４ｄのアッセイ）
ＳＬＥを有する患者  対  健常なコントロールとのこれらの研究の後に、ＳＬＥ以外の他の疾患を有すると診断された患者（ｎ＝１０３）とＳＬＥを有する患者とを比較する研究を続けた。この比較のために、発明者らは、全身性硬化症を有する患者（ｎ＝１３）、慢性関節リウマチ（ｎ＝１７）、変形関節症（ｎ＝２）、Ｃ型肝炎ウイルス感染（ｎ＝１４）、多発性筋炎／皮膚筋炎（ｎ＝１８）、シューグレン症候群（ｎ＝２）、じんま疹様血管炎（ｎ＝１）、鎌状(赤)血球貧血（ｎ＝８）、重複症候群（ｏｖｅｒｌａｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）／未分化結合組織性疾患（ｎ＝１２）、白血病／リンパ腫（ｎ＝９）、原発性レイノー病（ｎ＝３）、血友病（ｎ＝２）、および乾癬（ｎ＝２）を有する疾患を研究する。血小板性Ｃ４ｄの単一の決定を、同じアッセイを使用しておこなった。ＳＬＥを有する患者についてのＣ４ｄの平均値および中央値は、他の疾患を有する患者と比較して、表ＩＶに示す。他の疾患を有する患者におけるＣ４ｄについての平均値は、０．５３であり、ＳＬＥを有する患者におけるＣ４ｄについての平均値は、２．５９である（ｐ＝０．０００１）。他の疾患に比べると、ＳＬＥに患者においては、これら測定の感受性および特異性は、それぞれ、３９％および９４％である（表Ｖ）。
【００４３】
【表３】
0004550051.tif 000004
【００４４】
（実施例４）
次いで、発明者らは、ＳＬＥ疾患活動性指数（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ；ＳＬＥＤＡＩ）によって規定されるような疾患活動性を測定する際の血小板性Ｃ４ｄレベルの有用性を調べた。発明者らは、この研究に記録された１１５名の狼瘡患者の結果を提示する。一変量の線形回帰モデルを用いると、血小板性Ｃ４ｄは、疾患活動性の最も有意な予測因子（Ｐ＝０．００２）であった。
【００４５】
【表４】
0004550051.tif 000005
【００４６】
上述の発明は、理解の明瞭のために、例示および実施例によってその詳細を記載してきたが、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなく、変更および改変がなされ得るということは、本発明の技術において、当業者にとって難なく明瞭なことである。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】記載なし。
【図１】
0004550051.tif 000006