(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
「亀山１号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジの子実体が水抽出された抽出物を活性成分とする血圧調節剤であって、該活性成分が、次の性質：
（イ）色と形態：黄褐色の粉末
（ロ）化学成分：糖含量６０〜８０％、蛋白質含量５〜１５％
（ハ）溶解性：水溶性を有する抽出物であることを特徴とする血圧調節剤。
【請求項２】
「亀山１号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジ抽出物を活性成分とする血圧調節剤の製造方法において、該活性成分が、次の性質：
（イ）色と形態：黄褐色の粉末
（ロ）化学成分：糖含量６０〜８０％、蛋白質含量５〜１５％
（ハ）溶解性：水溶性を有する抽出物であり、
ハタケシメジの子実体を水抽出して該抽出物を得ることを特徴とする血圧調節剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はハタケシメジ（Lyophyllum decastes (Fr.) Sing. ）抽出物を主成分とした血圧調節剤及びその製造方法に係り、さらに詳しくは、ハタケシメジ抽出物がアンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥと称する）の活性を１００％阻害する物質である血圧調節剤及びその製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
担子菌の抽出物の中には血圧降下作用を持つ物質がいくつか報告されている。（水野  卓編、キノコの化学・生化学、学会出版センター）。霊芝からは、熱水抽出エキス中の分子量１０万以上の高分子化合物やフコフルクトグルカン、メタノール抽出物中のガノデリン酸が報告されている。ツガサルノコシカケの水抽出物からは、分子量６０万以上のアニオン性官能基を含む多糖ないしはプロテオグリカンの混合物が報告されている。ツエタケの培養物からはウデノンが、キカイガラタケからはオオスポノールが単離されている。
【０００３】
食用キノコでは、シイタケ（Lentinus edodes 、特開昭５８−２６８２０公報）、ヒラタケ（Pleurotus ostreatus   、特開平２−７２１２１公報）、マイタケ（Grifora frondosa  、特開平８−２９１０７８公報）、エノキタケ（Flammulina velutipes 、特開平８−２９１０７８公報、特開平８−９９８９５公報）、ブナシメジ（Lyophyllum ulmarium 、特開平８−９９８９５公報）、ホウビタケ（Pleurotus sajor-caju (Fr.) Sing.、特開平７−２３８０３２公報）が報告されている。
【０００４】
この中で、高い効果を有するＡＣＥ阻害物質として、特開平７−２３８０３２公報に示されたホウビタケを代表とする担子菌類の子実体または菌糸体の蛋白質から得られるＡＣＥ阻害物質や、特開平８−９９８９５公報に記載されたブナシメジの子実体または菌糸体から得られるＡＣＥ阻害物質が報告されている。
【０００５】
前者のホウビタケから得られる物質のＡＣＥ阻害活性は、およそ１６．９％〜２７．５％になることが示されており、一方、後者のブナシメジから得られる物質のＡＣＥ阻害活性は、およそ３６．１％〜４１．３％になることが示されている。
【０００６】
ＡＣＥは、既に知られているように、不活性型のアンジオテンシンＩを活性型のアンジオテンシンＩＩに変換する酵素である。変換された活性型のアンジオテンシンＩＩは、副腎皮質ホルモンを介し、或いは末梢血管を直接収縮させて血圧を上昇せしめ、血圧の上昇が過ぎると腎臓が関知して不活性型のアンジオテンシンＩを抑制し、血圧の恒常性が保たれている。そこで、ＡＣＥの活性を阻害する割合が高くなるほど血圧の上昇を抑制することが可能になる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
ところが、従来の食用担子菌類の研究では、前述の如く、シイタケ、ヒラタケ、マイタケ、エノキタケ、マンネンタケ、ホウビタケ、ブナシメジ等についての研究が進められているが、これらの中には、ＡＣＥの活性を１００％阻害するＡＣＥ阻害物質は未だ報告されておらず、他の食用担子菌類にその可能性が期待されていた。また、同じ食用担子菌類でも、人工栽培品の担子菌の場合、培地成分や培養方法によって担子菌中の成分が大きく変わることが知られており、天然物品と栽培方法の違った人工栽培品とが同様の生理活性効果になるとは限らない。そこで、本発明者らは、これまで研究対象とされていなかったハタケシメジに注目し、特に、人工栽培品である「亀山１号」のハタケシメジを種菌とする抽出物について鋭意研究を進めてきたものである。
【０００８】
ハタケシメジの高収穫かつ効率的な人工栽培方法は、王子製紙（株）森林資源研究所により、既に確立されており（特公平５−１５４０４号公報、特許１９６９５３４号）、本法を用いてハタケシメジの「亀山１号」を種菌とする人工栽培品を安価に供給できるようになっている。
【０００９】
高齢化社会を迎え、生活習慣病の予防について多くの関心が寄せられている。高血圧症はその中でも、脳溢血、脳血栓症、高血圧脳症、腎臓障害の原因となり、問題となっている。食生活を見なおすことによって生活習慣病の予防や改善が行われるようになって、新規で天然物由来の食品で強力な血圧降下作用のあるものが求められていた。実際の使用にあたっては従来の抗高血圧剤のような急性毒性や変異原性などの副作用が無く、安価なものが求められていた。食用担子菌由来では、コストの面から栽培期間が短く、大量に人工栽培できる品種で高い血圧降下作用を持ったものが求められていた。
【００１０】
本発明は上述の課題を解消すべく創出されたもので、食用担子菌類からＡＣＥの活性を１００％阻害する物質を抽出し、安全性が高く、血圧の上昇を確実に抑制することが可能な血圧調節剤及びその製造方法の提供を目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、食用として長年親しまれてきたハタケシメジ、特に、大量かつ効率的に人工栽培可能なハタケシメジの「亀山１号」を種菌とする人工栽培品の抽出物に強力な血圧降下作用があることを見出し発明を完成した。従って本発明は、ハタケシメジ抽出物を活性成分とする血圧調節剤を提供する。本発明は、好ましい態様において、前記ハタケシメジが「亀山１号」を種菌とする人工栽培品である血液調節剤を提供する。
【００１２】
本発明は、「亀山１号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジの子実体が水抽出された抽出物を活性成分とする血圧調節剤であって、該活性成分が、次の性質：
（イ）色と形態：黄褐色の粉末
（ロ）化学成分：糖含量６０〜８０％、蛋白質含量５〜１５％
（ハ）溶解性：水溶性を有する抽出物である血圧調節剤を提供する。
【００１３】
本発明はさらに、「亀山１号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジ抽出物を活性成分とする血圧調節剤の製造方法において、該活性成分が、次の性質：
（イ）色と形態：黄褐色の粉末
（ロ）化学成分：糖含量６０〜８０％、蛋白質含量５〜１５％
（ハ）溶解性：水溶性を有する抽出物であり、ハタケシメジの子実体を水抽出して該抽出物を得ることを特徴とする血圧調節剤の製造方法に関する。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明の実施の形態を詳細に説明する。
ハタケシメジ（Lyophyllum decastes(Fr.) Sing.）はキシメジ科シメジ属のキノコで、マツタケより味が良いといわれるホンシメジに最も近縁のキノコであり、ホンシメジと同様に歯ごたえが良く美味である。天然品は、庭先や畑などの比較的身近な場所に株状に発生する（今関六也、本郷次雄：原色日本菌類図鑑（１）、保育社、１９８７年）。また、免疫賦活作用による抗腫瘍効果も高いことが報告されている（特願平１０−１０９８１２明細書）。
【００１５】
本発明に使用されるハタケシメジは、人工栽培可能なハタケシメジの「亀山１号」（種苗法品種登録出願番号６８１１号、農林水産植物の種類：はたけしめじ、出願品種の名称：亀山１号）を種菌として使用することが最適である。さらに、栽培用培地成分としてＢＲＭ様効果が報告されているキチン質（カニ殻）、ビール酵母粕等を用いたものが良い。ハタケシメジは王子製紙（株）森林資源研究所が確立した栽培方法（特公平５−１５４０４号公報、特許１９６９５３４号）で「亀山１号」を種菌として使用することがのぞましい。または、同方法で栽培し、市販している登録商標「しゃきんこ」のハタケシメジを原料として利用することも出来る。
【００１６】
本発明の抽出物は、ハタケシメジ子実体を水抽出することにより得られる。子実体は生のまま水抽出しても、乾燥させて保存可能とした物を水抽出しても良い。また、子実体は株状のまま水抽出しても、予め粉砕して細かくしたものを水抽出しても良い。加熱する場合は、減圧下、常圧下、加圧下のいずれでも良いが、抽出効率は加圧下で高温処理する方が良い。加熱温度は、６０〜２６０℃の範囲で実施可能である。抽出時間は水抽出の場合は、腐敗しないように低温室で５〜２０時間必要であるが、加熱、常圧抽出の場合２〜４時間で良く、高温加圧下で実施すれば１５分〜２時間の処理時間で良い。抽出処理後、ハタケシメジ抽出物は、固形分が０．５％〜１０％の抽出エキスとして得られる。
【００１７】
本発明のハタケシメジ抽出物は上記抽出エキスを濃縮・乾燥することにより得ることが出来る。抽出エキスの濃縮は加熱濃縮法、減圧加熱濃縮法、エタノール沈殿による濃縮方法のいずれの方法でも良い。濃縮された抽出物エキスの乾燥は、風乾法、加熱乾燥法、スプレードライ法、凍結乾燥法のいずれでも良い。
【００１８】
本発明のハタケシメジ抽出物は、疾患の症状に応じて薬効を得るのに都合のよい形状で使用でき、単独または製薬上許容し得る希釈剤および他の薬剤との混合物として使用できる。また、ハタケシメジ抽出物は投薬単位形で提供することが出来る。有効薬量の有効成分が含有され、その形態としては経口用として散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤などである。非経口用として注射液のアンプル、ビン形態などにすることが出来る。また、座薬とすることも出来る。
【００１９】
希釈剤としては固体、液体、半固体でもよく、たとえば次のものがあげられる。すなわち、賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、香料、保存料、溶解補助剤、溶剤等である。具体的には、乳糖、ショ糖、ソルビット、マンニット、澱粉、沈降性炭酸カルシウム、重質酸化マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、セルロースまたはその誘導体、アミロペクチン、ポリビニルアルコール、ゼラチン、界面活性剤、水、生理食塩水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、カカオ脂、ラウリン脂、ワセリン、パラフィン、高級アルコール等である。
【００２０】
本発明の血圧調節剤の組成物中に用いられるハタケシメジの抽出物の割合は、一般に１〜１００ｗｔ％であり、５〜８０ｗｔ％含むことが望ましい。ハタケシメジの抽出物は、人間ならびに動物に経口的または非経口的に投与されるが、経口投与が好ましい。経口投与は、舌下投与を包含し、非経口投与（例えば皮下、筋肉、静脈注射、点滴）、直腸投与によって行われる。ハタケシメジの抽出物の投与量は、動物か人間により、また、年齢、個人差、病状などに影響されるので、下記の範囲外の量を投与する場合もあるが、一般に人間を対象にする場合には、体重１ｋｇ、１日あたり１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは、１０ｍｇ〜１００ｍｇを１回〜４回に分けて投与する。
【００２１】
本発明のハタケシメジの抽出物は、急性毒性、変異原性が無く、血圧降下作用を有するので医薬品として有用である。本発明のハタケシメジの抽出物は、そのまま使用しても良く、また、賦形剤あるいはその他の医薬品と混合しても良い。混合する場合は、３０〜９０ｗｔ％の割合で混合することが好ましい。
【００２２】
【実施例】
実施例１．ハタケシメジの人工栽培と抽出物の製造：
バーク堆肥（中日本農産（株）社製）：米ぬか：カニ殻を絶乾重量比100 ：20：4 の割合で混合した後、含水率を６２％にした培養基を850 ｍｌ容のポリプロピレン製栽培ビンに６２０ｇ充填した。ビン内の培養基全体に空気を補給し、菌糸の生育を良好にするために、ビン開口部から底部まで直径２ｃｍの大きさの穴をあけ、高圧殺菌釜（１２０℃、１時間）で殺菌した。培養基の温度を２５℃以下に冷却した後、クリーンルーム内でハタケシメジ「亀山１号」を植菌した。
【００２３】
室温２３℃、湿度８０％（RH）に調整した室内で５０日培養し、培養基に菌糸を充分に蔓延させた。菌掻きを行い、水分を補給した後、前記のバーク堆肥で開口部を１〜２ｃｍの厚さになるように被覆した。さらに被覆した培養ビンを室温２１℃、湿度８０％（RH）の室内で７日培養した。次に菌糸が侵入していない表層部の被覆部を除去し、室温１７℃、湿度９５％（RH）、照度１５０ルックスの条件に調整した室内で栽培を継続し、種菌接種後７５日の培養で１ビン当り１２０ｇの子実体を収穫した。
【００２４】
前記収穫した人工栽培のハタケシメジの子実体８０g をビーカーに入れ、２５０ｍｌの水を加え、ミキサーで破砕後、２０時間、４℃の低温室で振盪ながら抽出し、ハタケシメジ残渣をろ別することにより、淡褐色のハタケシメジ水抽出エキスを得た。次に水抽出エキスを凍結乾燥することにより黄褐色の抽出エキス粉末３．５ｇを得た。抽出エキス粉末の物理化学的特性は、キノコの状態により若干のばらつきがあるが概ね下記のごとくである。
（イ）色と形態：黄褐色の粉末
（ロ）化学成分：糖含量６０〜８０％、蛋白質含量５〜１５％
（ハ）溶解性：水溶性
同様に市販のブナシメジ、エノキタケ、マイタケ、ヒラタケ、エリンギ、ヒメマツタケ、生シイタケ、マッシュルーム、ナメコ、各８０ｇを水抽出し、凍結乾燥した。
その結果、ブナシメジ（抽出物量：２．１５ｇ）、エノキタケ（３．３４ｇ）、マイタケ（１．６２ｇ）、ヒラタケ（５．７８ｇ）、エリンギ（２．０８ｇ）、ヒメマツタケ（０．６６ｇ）、生シイタケ（１．５１ｇ）、マッシュルーム（１．４４ｇ）、ナメコ（０．９４ｇ）の抽出エキス粉末を得た。各担子菌の抽出エキス粉末を滅菌蒸留水に溶解し、不溶物を簡易濾過（０．２２μｍミリポアフィルター）で除いたものをＡＣＥ阻害活性の測定用サンプルとした。
【００２５】
実施例２．血圧調整作用：
血圧調整作用は、ＡＣＥ阻害活性を指標に測定した。ＡＣＥ阻害活性が強いもの程、血圧降下作用が強いとされている。ＡＣＥ阻害活性の測定方法は、山本らのＣｕｓｈｍａｎ法の改良法（日胸疾会誌, １８（５），297-303 ，（1980））に準じた。実施例１の測定用サンプル（３０μｌ）、ＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素、１５μｌ）、反応液（１５μｌ）を３７℃、３０分間反応させる。反応液には、基質であるヒプリルヒスチジルロイシン（６．５ｍＭ）、塩化ナトリウム（５００ｍＭ）、硼酸バッファー｛１Ｍ／２０Ｎａ2 Ｂ4 Ｏ7 （４．５量）＋１Ｍ／５Ｈ3 ＢＯ3 （５．５量）｝が含まれる。１Ｎの塩酸（０．２５ｍｌ）を加え、反応を停止させ、反応成生物である馬尿酸を酢酸エチル（２ｍｌ）で抽出し、蒸発乾固させる。馬尿酸を蒸留水に溶解し、馬尿酸の吸収波長である２２８ｎｍの吸光度を測定する。ＡＣＥ阻害活性（％）は、測定サンプルによる測定値を（Ｓ）、測定サンプルの代わりに蒸留水を用いた場合を（Ｃ）、測定サンプル及び蒸留水にあらかじめ反応停止液（１Ｎ塩酸）を加えたものをそれぞれ（Ｂ）、（ＢＣ）として、次式から算出した。
【００２６】
【数１】
ＡＣＥ阻害活性＝［｛（Ｃ−ＢＣ）−（Ｓ−Ｂ）｝／（Ｃ−ＢＣ）］ｘ１００（％）
測定結果：以下の結果から、他のサンプルではヒラタケの７９．６％が最高の値であったのに対し、本発明のハタケシメジのＡＣＥ阻害活性が１００％であることが明らかになった。
0004487349.tif 000002
【００２７】
実施例３．ハタケシメジの水抽出物の粉末製剤：
ハタケシメジの水抽出物は、濃縮し、乾燥することにより水溶性高分子多糖体が主成分の粉体となるが、吸湿性が非常に高く、室内に放置するだけで吸湿し、べとついたり、表面が固化する問題点がある。そこで賦型剤としてデキストリン（松谷化学社製パインデックス）を３３％添加した後、スプレードライで噴霧乾燥することにより、吸湿による劣化を押さえたハタケシメジ水抽出物の粉末製剤を製造した。
【００２８】
【発明の効果】
上述の如く本発明血圧調節剤は、食用担子菌類を使用してＡＣＥの活性を１００％阻害することに成功し、安全性が高く、血圧の上昇を確実に抑制することが可能になった。
【００２９】
また、本発明製造方法は、ハタケシメジの子実体を水抽出する簡単な方法であるので、確実な抑制効果を有する本発明血圧調節剤を容易に製造することができる。
【００３０】
本発明のハタケシメジの水抽出物は、高いＡＣＥ阻害活性を持っており、血圧調節剤として有用である。また、食品として常用されているハタケシメジの水抽出物は、従来の抗高血圧剤と比べ毒性がなく安全である。さらに、人工栽培品は、安価で安定した品質の原料としてハタケシメジ抽出物の製造に利用できる。