(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤマブシタケ、マッシュルーム、シイタケ、エリンギ、エノキタケおよびブナシメジからなる群より選ばれる少なくとも１種の子実体の水抽出物を有効成分として含有することを特徴とする、アルツハイマー病を含む老人痴呆症、薬剤障害性末梢神経障害又は糖尿病性末梢神経障害を含む末梢神経障害、脳血管障害、脳腫瘍、脳尖、頭部外傷変性疾患、麻酔薬物中毒、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、感覚神経障害、色素性網膜症、及び黄斑変性症からなる群より選ばれる、治療又は予防に神経成長因子産生増強を要する疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項２】
ヤマブシタケ、マッシュルーム、シイタケ、エリンギ、エノキタケおよびブナシメジからなる群より選ばれる少なくとも１種の子実体の水抽出物を有効成分として含有することを特徴とする神経成長因子産生増強剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、きのこ類の水性抽出物を有効成分として含有する神経成長因子産生増強用医薬、食品、飲料又は飼料に関する。
背景技術
近年、きのこ類の有する生理活性についてはさまざまな報告がある。中でも神経成長因子（Ｎｅｒｖｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ、以下ＮＧＦと略する場合がある）産生増強作用については、ヤマブシタケ、ブナハリタケ、キヌガサタケ、ケロウジの子実体の抽出物中にＮＧＦ産生増強物質の存在が報告されている（特開平９−３０８４５８号、特開平９−１２４５４１号、特開平９−２０７１４号、特開平１１−２６９１２５号等）。しかし、これらのＮＧＦ産生増強物質またはＮＧＦ産生増強活性を有する抽出物の抽出操作では、抽出溶媒として非極性溶媒のみを用いており、しかもその活性についても満足できるものではない。また、きのこ類の水性抽出物のＮＧＦ産生増強活性についてはこれまでに報告は無い。
ヒトの知的機能、記憶、感情、行動などの精神活動の維持には神経細胞が主要な役割を担っている。これら精神活動の基になっている神経細胞の分化、生存、機能発現には、それぞれの神経細胞に特異的な神経性栄養因子が必要であると考えられている。神経性栄養因子のうち最初にその存在および機能が明らかにされたのがＮＧＦであり、現在では脳由来神経栄養因子（Ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ−ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｆａｃｔｏｒ）、ニューロトロフィン（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ）−３、ニューロトロフィン−４／５などが見出されている。
ＮＧＦは前脳基底部の大細胞性コリン作動性神経細胞の神経性栄養因子であることから、アルツハイマー型痴呆症との関連が注目されている〔ファルマシア、Ｖｏｌ．２２、Ｎｏ．２、１４７〜１５１（１９８６）、老年精神医学、Ｖｏｌ．３、Ｎｏ．６、７５１〜７５８（１９８６）〕。
アルツハイマー型痴呆症とは発育障害、躁症状、下肢の強直拘攣、てんかん様発作などの臨床を伴い、老人性プラーク、アルツハイマー原線維変化などの病理学的所見を見る疾患であり、老人性痴呆の一病型である。近年の高齢化社会で増加の傾向が見られ、重大な社会的関心が払われているが、これといった症状の改善法、治療法が見つかっていない。また、若年性アルツハイマーについても症状の改善法、治療法が見つかっていない。
アルツハイマー型痴呆症患者脳には、マイネルト基底核を中心とする前脳基底部に顕著な変性、コリンアセチル基転位酵素（ＣＡＴ）活性の著しい低下が認められている〔Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，Ｖｏｌ．３，７７（１９８０）〕。１９８５年にラット脳を用いた研究で、ＮＧＦが脳のこの部位での神経性栄養因子であることが明らかにされ〔ＥＭＢＯ  Ｊ．，Ｖｏｌ．４，１３８９（１９８５）〕、ＮＧＦと本疾患との関連が注目された。またハンチントン舞踏疾患者の脳の線条体では、ＧＡＢＡ作動性神経細胞の脱落と共にコリン作動性神経細胞の脱落が著しく、ＮＧＦが線条体の内在性コリン作動性神経細胞にも作用することが明らかにされ〔Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２３４，１３４１（１９８６）〕、本疾患がＮＧＦと関連している可能性が指摘されている。各種の神経疾患のモデルとなり得るラットなどの動物でＮＧＦの効果が研究され、ラットでは神経細胞の変性が顕著になる以前にＮＧＦを脳内投与すれば、変性を食い止めることができ、ＣＡＴ活性の低下も防げることが報告されている〔Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，Ｖｏｌ．６，２１５５（１９８６）、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．２９３，３０５（１９８５）、Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２３５，２１４（１９８６）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．８３，９２３１（１９８６）〕。末梢の交感神経支配組織および脳でＮＧＦが生合成されていること、このＮＧＦの生合成に末梢組織あるいは脳組織の間質細胞である線維芽細胞あるいはアストログリア細胞が各々重要な役割を担っていることも証明されている〔Ｊ．Ｂｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２５９，１２５９（１９８４）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，Ｖｏｌ．１３６，５７（１９８６）〕。また、この線維芽細胞やアストログリア細胞の産生するＮＧＦの抗原性、分子量、等電点、生物活性は、従来よく研究されていた顎下腺ＮＧＦと同一であることが明らかにされるとともに、線維芽細胞（Ｌ−Ｍ細胞）およびアストログリア細胞の培養液に種々の神経伝達物質を加える実験によって、カテコールアミン（ノルエピネフリン、エピネフリン、ドーパミン）がＮＧＦ合成促進効果を示すことが見出されている〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２０１，６０３９（１９８６）〕。
このように、ＮＧＦが神経性栄養因子として作用する部位が変性するこれらの神経疾患において、ＮＧＦは変性を食い止める治療薬として用いることができるのではないかと期待される。また脳血管障害、脳腫瘍、脳尖、頭部外傷変性疾患、麻酔薬物中毒などで脳神経細胞が一旦変性に陥れば、生涯回復することがなく、その結果、知的機能低下、記憶障害のみならず、感情障害、行動異常など様々な障害を引き起こすが、神経線維には可塑性があり、損傷を受けると、その付近の健常な線維から発芽が起こり、障害されたシナプスに変わって新しいシナプスが形成されるので、この時ＮＧＦを神経機能の修復再生を促す治療剤として用いることができるのではないかと期待される。
しかしながら、ＮＧＦを各種神経疾患の治療に応用しようとした場合、ＮＧＦはＮＧＦを必要とする神経細胞の極く近傍に達していなければならないし、中枢神経疾患の場合も脳細胞の患部にＮＧＦを送り届けなければならないが、血管系を通してＮＧＦを脳内に送り込むことはできない。なぜならば、脳内の血管内皮細胞は、互いに密着結合で結合しており（脳血液関門という）、水、ガス、脂溶性物質以外の物質の血液から脳組織への移行は制限を受けているからであり、高分子物質であるタンパク質（ＮＧＦも含む）はまったく脳血管関門を通ることができないからである。このＮＧＦを直接脳内に外科的手法を用いて投入することは、現在の技術をもってしても危険が大き過ぎる。
一方、直接、ＮＧＦを投与するのでは無く、ＮＧＦの産生を増強する物質の開発も行われているが、その多くは、強い毒性を有するか、毒性が出る濃度と有効な濃度が非常に接近した物質、または神経興奮作用など神経系に対して重大な副作用を生じる物質であるなど、多くの問題点を抱えており、いまだ実用化には至っていない。
発明の開示
本発明の目的は、神経成長因子産生増強作用を有するきのこ類の水性抽出物を有効成分とする医薬、食品、飲料または飼料を提供することにある。
本発明者らは鋭意努力の結果、従来のきのこ類由来の非極性溶媒抽出物に比べ、当該抽出物の抽出に使用される非極性溶媒とは物質溶解性の点で全く異なる性質を有する極性溶媒、中でも水性溶媒を用いて得られるきのこ類の水性抽出物に、意外にも明らかに強いＮＧＦ産生増強活性を見いだした。
すなわち、本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は、きのこ類の水性抽出物を有効成分として含有することを特徴とする治療又は予防に神経成長因子産生増強を要する疾患の治療剤又は予防剤に関する。
本発明の第２の発明は、きのこ類の水性抽出物を有効成分として含有することを特徴とする神経成長因子産生増強剤に関する。
本発明の第３の発明は、きのこ類の水性抽出物を含有することを特徴とする神経成長因子産生増強用食品、飲料又は飼料に関する。
本発明の第１〜３の発明において、きのこ類としてはヒダナシタケ目きのこ又はヒラタケ目きのこが例示され、特に好適にはヤマブシタケ、マイタケ、マッシュルーム、シイタケ、エリンギ、エノキタケおよびブナシメジからなる群より選ばれる少なくとも１種が例示される。
発明を実施するための最良の形態
本明細書において、「ＮＧＦ産生増強作用」および「ＮＧＦ産生増強活性」はそれぞれＮＧＦ産生増強をもたらすことおよびＮＧＦ産生を増強する機能をいうが、その意味において特に厳密に区別するものではない。「増強」には、本発明に係る有効成分の作用前に比し、作用後において目的物質の量が増加するという態様と共に、本発明に係る有効成分を作用させることにより目的物質を生起せしめるという態様（誘導）を含む。また本明細書において、有効成分として挙げるいずれの物質も単独で、もしくは２種以上混合して本発明において用いることができる。
本発明で使用されるきのこ類としては、担子菌類、子のう菌類のきのこ類が利用できる。担子菌類のきのこ類としてはハラタケ目きのこ、ヒダナシタケ目きのこ、スッポンタケ目きのこ、ショウロ目きのこ、ホコリタケ目きのこ、チャダイゴケ目きのこ、ニセショウロ目きのこ、キクラゲ目きのこ、シロキクラゲ目きのこ、アカキクラゲ目きのこ、クロボキン目きのこ、サビキン目きのこ等のきのこ類が利用できる。より具体的には、例えば、ハラタケ目きのことしてはハタケシメジ、ブナシメジ、エノキタケ、シイタケ、エリンギ、ホンシメジ、ヒラタケ、マッシュルーム、ナメコ、ヒメマツタケ、マツタケ等が、ヒダナシタケ目きのことしてはヤマブシタケ、マイタケ、ケロウジ、ブナハリタケ、レイシ等が、スッポンタケ目きのことしてはキヌガサタケ等が利用できる。特に好適にはヒダナシタケ目サンゴハリタケ科のヤマブシタケ、ヒダナシタケ目多孔菌科ツヤウチワタケ属のマイタケ、ハラタケ目キシメジ科シメジ属のブナシメジ又はハタケシメジ、ハラタケ目キシメジ科エノキタケ属のエノキタケ、ハラタケ目ヒラタケ科マツオウジ属のシイタケ、ハラタケ目ヒラタケ科ヒラタケ属のエリンギ、ハラタケ目ハラタケ科ハラタケ属のマッシュルームが利用できる。また、子のう菌類のきのこ類としてはチャワンタケ目きのこ、ビョウタケ目きのこ、セイヨウショウロ目きのこ、球果菌目きのこ等のきのこ類が利用できる。より具体的には、例えば、冬虫夏草、アミガサタケ、セイヨウショウロ等が利用できる。
本発明においては以上のような種々のきのこ類が利用可能であるが、きのこ類としては、好ましくは担子菌類のきのこ類、より好ましくはヒダナシタケ目きのこ及び／又はハラタケ目きのこ、さらに好ましくはヤマブシタケ（ヒダナシタケ目）、マイタケ（ヒダナシタケ目）、マッシュルーム（ハラタケ目）、シイタケ（ハラタケ目）、エリンギ（ハラタケ目）、エノキタケ（ハラタケ目）およびブナシメジ（ハラタケ目）からなる群より選ばれる少なくとも１種が利用される。
本発明においてきのこ類としては、例えば、天然で得られるきのこ類の子実体、人工栽培により得られる子実体、人工培養により得られる培養菌糸体等を利用することができる。
本発明において有効成分として使用されるきのこ類の水性抽出物（以下、抽出物という場合がある）の抽出方法は、次のような公知の方法で行うことができる。なお、本明細書において「有効成分」の語は有効成分そのものを意味する。具体的に説明すると、例えば、有効成分としての水性抽出物は、実際の使用においては抽出溶媒との混合物として用いられる場合がある。しかしながら、当該「水性抽出物」とは該混合物を意味するのではなく、水性抽出物そのものを意味し、従って、有効成分としての水性抽出物とは水性抽出物そのもの（すなわち、水性抽出物そのものの乾燥物）を意味する。
例えば原料であるきのこ類の子実体、例えばヤマブシタケの子実体を、適当な時期に採取した後に、そのままか、通常、空気乾燥等の乾燥工程を行った後、所望により粉砕し、抽出原料とすることができる。また、原料が菌糸体である場合は、例えば、菌糸体培養物を公知の方法で乾燥させ、粉末化したものを用いることができる。例えば、ブナシメジの菌糸体培養物をスプレードライ法により乾燥させて得られた粉末を原料として使用できる。また種々の条件で原料の熟成を行い、熟成後の原料を使用しても良い。原料が、市販されているきのこ類の粉砕物の場合は、そのまま抽出原料として用いることもできる。抽出は、水性溶媒を用いてバッチ式もしくは連続式で行うことができる。なお、本発明において水性抽出物とは、水性溶媒を用いて抽出操作を行う工程を経て得られるきのこ類から抽出される物質のことをいう。また、本発明において抽出溶媒として用いられる水性溶媒とは、少なくとも水を含む、極性溶媒として機能しうる溶媒をいう。水性溶媒としては、水、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、炭酸アンモニウム等の水性塩の水溶液、リン酸−リン酸ナトリウム、酢酸−酢酸ナトリウム、トリス−塩酸、炭酸−炭酸ナトリウム等の緩衝液、塩酸、炭酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸の水溶液、酢酸、クエン酸、乳酸、コハク酸、アスコルビン酸、フマル酸、リンゴ酸等の有機酸の水溶液、サポニン、レシチン等の界面活性剤の水溶液等が例示される。また、エタノール、メタノール等のアルコール類等の親水性の有機溶媒と水との混合液を水性溶媒として用いることもできる。これらは各々単独で、もしくは２種以上混合して用いることができる。
抽出溶媒の量は適宜決定すればよいが、通常、原料に対し、好ましくは１〜１００倍量の抽出溶媒を使用すればよい。抽出温度も適宜、目的に応じて決定すればよい。例えば、水抽出の場合、通常、好ましくは４〜１３０℃、より好ましくは２５〜１００℃である。抽出時間も、抽出効率を考慮し決定すればよいが、通常、好ましくは数分〜数日間、より好ましくは５分〜３時間の範囲となるように、原料、抽出溶媒、抽出温度を設定するのが好適である。抽出操作は、たとえば、攪拌しながら又は静置して行えばよく、また、所望により数回繰り返してもよい。抽出物に対し、所望により、ろ過、遠心分離、濃縮、限外ろ過、分子ふるい等の処理を行ってもよい。なお、当該抽出物のＮＧＦ産生増強活性は、後述の実施例１−（２）の方法により簡便に評価することができる。
当該抽出物は、抽出後、公知の加工処理を行い、粉状、固形状、粘状、液状のいずれの形状にすることもできる。得られた当該抽出物は、例えば、公知の方法で造粒して粒状の固形物とし、本発明に使用することができる。造粒方法としては、特に限定はないが、転動造粒、攪拌造粒、流動層造粒、気流造粒、押出し造粒、圧縮成型造粒、解砕造粒、噴射造粒又は噴霧造粒等が例示される。また、粉状の当該抽出物を液体、例えば水やアルコール等に溶解もしくは懸濁して液状とし、本発明に使用することもできる。
また、当該抽出物を公知の方法にて分画した画分も、本発明のＮＧＦ産生増強作用を有していれば、本発明の抽出物として使用することができる。分画手段としては抽出、分別沈殿、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等が挙げられる。得られた画分の精製を、ＮＧＦ産生増強活性を指標として、さらに進めることにより、ＮＧＦ産生増強物質を単離することもできる。これらの抽出物はそれぞれ単独で、もしくは２種以上混合して使用することができる。また、本発明では同じきのこ類から異なった抽出法で得られた抽出物をそれぞれ単独で、もしくは２種以上混合して使用することもできる。
以上のようにして得られる抽出物は、医薬、食品、飲料または飼料の有効成分として使用することができる。
本発明に係る有効成分には、後述するように特に毒性は認められない。また、副作用の発生の心配もない。それゆえ、安全かつ適切にＮＧＦの産生増強を行うことができる。従って、当該有効成分を含んでなる本発明の医薬、食品、飲料または飼料は、治療又は予防にＮＧＦ産生増強を必要とする疾患の治療または予防に有効である。
ＮＧＦは神経細胞の生存や機能を維持したり、ＮＧＦの濃度勾配に従って神経細胞を伸長させたりする内因性の成長因子である。従って、ＮＧＦの産生を増強することにより、アルツハイマー病等の老人痴呆症や末梢神経障害、脳血管障害、脳腫瘍、脳尖、頭部外傷変性疾患、麻酔薬物中毒等の神経機能の修復・再生を要する疾患の治療または予防を行うことができる。また、筋萎縮性側索硬化症、薬剤障害性末梢神経障害、糖尿病性末梢神経障害、パーキンソン病、感覚神経障害、色素性網膜症、黄斑変性症等の治療または予防にも有用である。
本発明におけるＮＧＦの産生増強を必要とする疾患としては、前記有効成分を含有してなる治療剤、予防剤等によりＮＧＦの産生増強を行うことで治療または予防が可能な疾患であれば特に限定されるものではない。中でも、本発明の医薬である治療剤又は予防剤は前記例示したＮＧＦを産生増強することにより治療または予防することができる各種疾患に対し特に有効である。
本発明のＮＧＦ産生増強を必要とする疾患の治療剤または予防剤としては、本発明に係る前記有効成分を公知の医薬用担体と組み合わせて製剤化したものが挙げられる。
本発明の治療剤または予防剤の製造は、通常、前記有効成分を薬理学的に許容できる液状または固体状の担体と配合することにより行われる。また、所望により溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤とすることができる。また、使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品や、その他、外用剤とすることもできる。
医薬用担体は、治療剤または予防剤の投与形態および剤型に応じて選択することができる。固体組成物からなる経口剤とする場合は、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤等とすることができる。たとえば、担体としてデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩などが利用される。また経口剤の調製に当っては、更に結合剤、崩壊剤、界面活性剤、潤沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料などを配合することもできる。たとえば、錠剤または丸剤とする場合は、所望によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロースなどの糖衣または胃溶性もしくは腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。液体組成物からなる経口剤とする場合は、薬理学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤などとすることができる。たとえば、精製水、エタノールなどが担体として利用される。また、さらに所望により湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、防腐剤などを添加してもよい。
一方、非経口剤とする場合は、常法に従い本発明の前記有効成分を希釈剤としての注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、落花生油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどに溶解ないし懸濁させ、所望により、殺菌剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤などを加えることにより調製することができる。また、固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
外用剤としては、経皮投与用または経粘膜（口腔内、鼻腔内）投与用の、固体、半固体状または液状の製剤が含まれる。また、座剤なども含まれる。たとえば、乳剤、ローション剤などの乳濁剤、外用チンキ剤、経粘膜投与用液剤などの液状製剤、油性軟膏、親水性軟膏などの軟膏剤、フィルム剤、テープ剤、パップ剤などの経皮投与用または経粘膜投与用の貼付剤などとすることができる。
以上の各種製剤は、それぞれ公知の医薬用担体などを利用して、適宜、常法により製造することができる。また、かかる製剤における有効成分の含有量は、その投与形態、投与方法などを考慮し、好ましくは後述の投与量範囲で当該有効成分を投与できるような量であれば特に限定されるものではない。
本発明の治療剤および予防剤は、製剤形態に応じた適当な投与経路で投与される。投与方法も特に限定はなく、内用、外用および注射によることができる。注射剤は、たとえば静脈内、筋肉内、皮下、皮内などに投与し得、外用剤では、たとえば、座剤をその適する投与方法により投与すればよい。
本発明の治療剤または予防剤としての投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的および当該治療剤または予防剤の投与対象である患者の年齢、体重、症状によって適宜設定され一定ではない。一般には、製剤中に含有される前記有効成分の投与量で、好ましくは成人１日当り０．１μｇ〜２００ｍｇ／ｋｇである。もちろん投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、あるいは範囲を超えて必要な場合もある。投与は、所望の投与量範囲内において、１日内において単回で、または数回に分けて行ってもよい。投与期間も任意である。また、本発明の治療剤または予防剤はそのまま経口投与するほか、任意の飲食品に添加して日常的に摂取させることもできる。
また、本発明は前記有効成分を含むＮＧＦ産生増強剤を提供することもできる。当該増強剤としては、前記有効成分そのものであってもよく、また、前記有効成分を含む組成物であってもよい。ＮＧＦ産生増強剤は、たとえば、前記有効成分を当該有効成分と同じ用途に使用可能な他の成分などと配合し、上記治療剤または予防剤の製造方法に準じて通常使用される試薬の形態に製造すればよい。かかる増強剤における前記有効成分の含有量は、当該増強剤の投与方法、使用目的などを考慮し、本発明の所望の効果の発現が得られ得るような量であればよく、特に限定されるものではない。また、該増強剤の使用量も、本発明の所望の効果の発現が得られ得るようであれば特に限定されるものではない。特に、生体に投与して使用する場合には、好ましくは前記治療剤または予防剤における有効成分の投与量範囲内で有効成分を投与できるような量で使用すればよい。ＮＧＦ産生増強剤は、ＮＧＦ産生増強を必要とする疾患における当該成長因子の増強に有用である。また、当該増強剤はＮＧＦに関連する疾患に対する薬物のスクリーニングにも有用である。さらに当該増強剤は、ＮＧＦ又は神経細胞の物理的変化に関する機能研究にも有用である。
また、本発明は、前記有効成分を含有、添加および／または希釈してなるＮＧＦ産生増強用の食品、飲料または飼料を提供する。本発明の食品、飲料または飼料は、そのＮＧＦ産生増強作用により、ＮＧＦ産生増強を必要とする疾患の症状改善、予防に極めて有用である。
本発明の食品、飲料または飼料の製造法に特に限定はない。たとえば、配合、調理、加工などは一般の食品、飲料または飼料のものに従えばよく、それらの製造法により製造することができる。得られた食品、飲料または飼料にＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に係る前記有効成分が含有されていれば良い。
本発明の食品または飲料としては特に限定はないが、たとえば、本発明に係る前記有効成分が含有されてなる、穀物加工品（小麦粉加工品、デンプン類加工品、プレミックス加工品、麺類、マカロニ類、パン類、あん類、そば類、麩、ビーフン、はるさめ、包装餅など）、油脂加工品（可塑性油脂、てんぷら油、サラダ油、マヨネーズ類、ドレッシングなど）、大豆加工品（豆腐類、味噌、納豆など）、食肉加工品（ハム、ベーコン、プレスハム、ソーセージなど）、水産製品（冷凍すりみ、かまぼこ、ちくわ、はんぺん、さつま揚げ、つみれ、すじ、魚肉ハム、ソーセージ、かつお節、魚卵加工品、水産缶詰、つくだ煮など）、乳製品（原料乳、クリーム、ヨーグルト、バター、チーズ、練乳、粉乳、アイスクリームなど）、野菜・果実加工品（ペースト類、ジャム類、漬け物類、果実飲料、野菜飲料、ミックス飲料など）、菓子類（チョコレート、ビスケット類、菓子パン類、ケーキ、餅菓子、米菓類など）、アルコール飲料（日本酒、中国酒、ワイン、ウイスキー、焼酎、ウオッカ、ブランデー、ジン、ラム酒、ビール、清涼アルコール飲料、果実酒、リキュールなど）、嗜好飲料（緑茶、紅茶、ウーロン茶、コーヒー、清涼飲料、乳酸飲料など）、調味料（しょうゆ、ソース、酢、みりんなど）、缶詰・瓶詰め・袋詰め食品（牛飯、釜飯、赤飯、カレー、その他の各種調理済み食品）、半乾燥または濃縮食品（レバーペースト、その他のスプレッド、そば・うどんの汁、濃縮スープ類）、乾燥食品（即席麺類、即席カレー、インスタントコーヒー、粉末ジュース、粉末スープ、即席味噌汁、調理済み食品、調理済み飲料、調理済みスープなど）、冷凍食品（すき焼き、茶碗蒸し、うなぎかば焼き、ハンバーグステーキ、シュウマイ、餃子、各種スティック、フルーツカクテルなど）、固形食品、液体食品（スープなど）、香辛料類などの農産・林産加工品、畜産加工品、水産加工品などが挙げられる。
本発明の食品または飲料には前記有効成分が含有、添加および／または希釈されており、そのＮＧＦ産生増強作用を発現するための必要量が含まれていれば特にその形状に限定はなく、タブレット状、顆粒状、カプセル状等の形状の経口的に摂取可能な形状物も包含する。
本発明の食品又は飲料中の前記有効成分の含有量は特に限定されず、その官能と活性発現の観点から適宜選択できるが、例えば食品中に好ましくは０．００００１重量％以上、より好ましくは０．０００１〜１００重量％、更に好適には０．０００６〜９０重量％であり、例えば、飲料中に好ましくは０．００００１重量％以上、より好ましくは０．０００１〜１０重量％、更に好適には０．０００６〜６重量％である。また本発明の食品又は飲料は、好ましくは、それらに含有される有効成分を、例えば成人１日当たり好ましくは０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇで摂取しうるように摂取すればよい。
また、本発明は、前記有効成分を含有、添加および／または希釈してなる、ＮＧＦ産生増強作用を有する生物用の飼料を提供するものであり、さらに、別の一態様として、前記有効成分を生物に投与することを特徴とする生物の飼育方法をも提供する。また、本発明の別の一態様として、前記有効成分を含有することを特徴とする生物飼育用剤が提供される。
これらの発明において、生物とはたとえば養殖動物、ペット動物などであり、養殖動物としては家畜、実験動物、家禽、魚類、甲殻類または貝類などが例示される。飼料としては体調の維持および／または改善用飼料などが例示される。生物飼育用剤としては浸漬用剤、飼料添加剤、飲料用添加剤などが例示される。
これらの発明によれば、それらを適用する生物において、本発明に使用される前記有効成分のＮＧＦ産生増強作用に基づき、本発明の前記治療剤または予防剤によるのと同様の効果の発現が期待できる。すなわち、本発明の飼料等は、当該生物におけるＮＧＦ産生増強作用を要する疾患の治療または予防効果を有する。
本発明に使用される前記有効成分は通常、対象生物の体重１ｋｇ、１日当たり好ましくは０．０１〜２０００ｍｇ投与される。投与は、たとえば、対象生物に供する人工配合飼料の原料中に本発明の有効成分を添加混合して得られた本発明の飼料や、人工配合飼料の粉末原料と本発明の有効成分とを混合して得られた生物飼育用剤を、その他の原料にさらに添加混合することで飼料を調製し、当該飼料を用いて行うことができる。また、前記有効成分の飼料中の含有量は特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定すれば良いが、０．００１〜１５重量％の割合が好適である。
人工配合飼料としては、魚粉、カゼイン、イカミールなどの動物性原料、大豆粕、小麦粉、デンプンなどの植物性原料、飼料用酵母などの微生物原料、タラ肝油、イカ肝油などの動物性油脂、大豆油、菜種油などの植物性油脂、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸、抗酸化剤などを原料とする人工配合飼料が挙げられる。また魚肉ミンチなどの魚類用飼料が挙げられる。
本発明の飼料の製造法に特に限定はなく、また配合も一般の飼料に準ずるものであればよく、製造された飼料中にＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に係る前記有効成分が含まれていればよい。
また、ＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に係る前記有効成分をプール、水槽、保持タンクまたは飼育領域の水、海水などに直接、添加し、対象生物を浸漬することにより、投与することもできる。この浸漬方法は対象生物の飼料摂取量が低下したときに特に有効である。水または海水中のＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に係る有効成分の濃度は特に限定はなく、目的に応じて使用すれば良いが、好ましくは０．００００１〜１重量％の割合が適当である。
また、ＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に係る前記有効成分を含有する飲料を飼育用飲料として対象生物に摂取させても良い。該飲料中のＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に使用される有効成分の濃度は特に限定はなく、目的に応じて使用すれば良いが、０．０００１〜２０重量％の割合が適当である。ＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に係る前記有効成分を含んでなる生物飼育用剤、たとえば浸漬用剤、飼料添加剤、飲料用添加剤はそれ自体公知の配合および製造法で製造すれば良い。該生物飼育用剤における有効成分の含有量は、本発明の所望の効果が得られ得る限り特に限定されるものではない。
本発明が適用できる生物としては限定はないが、養殖動物としては、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ラマなどの家畜、マウス、ラット、モルモット、ウサギなどの実験動物、ニワトリ、アヒル、七面鳥、駝鳥などの家禽、マダイ、イシダイ、ヒラメ、カレイ、ブリ、ハマチ、ヒラマサ、マグロ、シマアジ、アユ、サケ・マス類、トラフグ、ウナギ、ドジョウ、ナマズなどの魚類、クルマエビ、ブラックタイガー、タイショウエビ、ガザミなどの甲殻類など、アワビ、サザエ、ホタテ貝、カキなどの貝類、ペット動物としてはイヌ、ネコなどが挙げられ、陸上・水中動物に広く適用できる。
ＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に使用される前記有効成分を含んでなる飼料を摂取させること、またはＮＧＦ産生増強作用を有する本発明に使用される前記有効成分の含有液に対象生物を浸漬することにより、家畜、実験動物、家禽、魚類、甲殻類、貝類、ペット動物などの体調を良好に維持し、または、改善させたりすることができる。
さらに、本発明の別の態様として、ＮＧＦ産生増強を必要とする疾患の治療剤もしくは予防剤、ＮＧＦ産生増強剤、またはＮＧＦ産生増強用の食品、飲料もしくは飼料の製造における本発明に係る前記有効成分の使用を提供する。かかる使用の態様としては、本発明の前記治療剤もしくは予防剤、ＮＧＦ産生増強剤、またはＮＧＦ産生増強用の食品、飲料もしくは飼料の製造における前記有効成分の使用の態様を挙げることができる。たとえば、ＮＧＦ産生増強を必要とする疾患の治療剤もしくは予防剤、またはＮＧＦ産生増強剤の製造における、前記有効成分の使用としては、前記のような錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤などの固形剤、通常液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、また、使用前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品の製造においての使用が例示される。
さらに、本発明の別の態様として、本発明に係る前記有効成分を動物に投与するＮＧＦ産生の増強方法を提供することもできる。かかる方法は、ＮＧＦ産生の増強が必要であると予想される、または、その必要のある動物に対し、前記有効成分を、好ましくは、前記ＮＧＦ産生増強剤として投与することにより行うことができ、かかる投与により、ＮＧＦの産生を増強せしめる。有効成分の投与方法、投与量などは、前記ＮＧＦ産生増強剤の場合と同様とすればよい。なお、ＮＧＦ産生の増強方法では、本発明の治療剤または予防剤、食品、飲料または飼料を用いることもできる。また、「動物」としては、たとえば、哺乳動物であるヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ウマ等を挙げることができ、中でも、ヒトに対し好適に用いられる。かかるＮＧＦ産生の増強方法は、たとえば、ＮＧＦ産生増強を必要とする疾患の治療または予防におけるＮＧＦ産生増強に有用である。また、該増強方法はＮＧＦに関連する疾患に対する薬物のスクリーニングに有用である。また、該増強方法はＮＧＦ又は神経細胞の物理的変化に関する機能研究にも有用である。
本発明で使用される前記有効成分は、その作用発現にとっての有効量の投与を行っても毒性は認められない。例えばヤマブシタケ、マイタケ、マッシュルーム、シイタケ、エリンギ、エノキタケ、又はブナシメジの水抽出物を１ｇ／ｋｇでマウスに単回投与しても副作用の発生はなく、また、死亡例は認められない。
実施例
以下、実施例を挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら限定されるものではない。なお、特段の事情がない限り、実施例における％は重量％を意味する。
実施例１
（１）ヤマブシタケ乾燥品（ワタベ薬品株式会社製）を粉砕したもの２ｇに対し、４０ｍｌの各種溶媒で抽出し、ヤマブシタケ抽出物を得た。抽出溶媒には水（６０℃）、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、エタノールをそれぞれ用いた。抽出は１時間攪拌することにより行なった。水以外の抽出溶媒を用いた抽出物については、溶媒を除去し、５００μｌのＤＭＳＯに置き換え８０倍に濃縮した。また水抽出物については、５ｍｌまで濃縮し、８倍濃縮液とした。
（２）０．５％のバクトペプトン（ギブコ社製）を含むＭ１９９培地（ＩＣＮ社製）でマウス線維芽細胞Ｌ−Ｍ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１．２）を１．５×１０５細胞／ｍｌとなるように懸濁し、９６穴プレートに０．１ｍｌずつまき無菌的に培養した。３日間培養後、培地を取り除き、０．５％のウシ血清アルブミン（シグマ社製）を含むＭ１９９培地に置き換えた。これに実施例１−（１）で得られたヤマブシタケの各種溶媒抽出物を添加し、２０時間培養した。培養終了後、培養液中の神経増殖因子の濃度をエンザイムイムノアッセイ法（ＮＧＦ  Ｅｍａｘ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ：プロメガ社製）にて測定した。対照は試料無添加とし、この細胞培養液中のＮＧＦ濃度（細胞のＮＧＦ産生量）を１００％として、ＮＧＦ産生増強活性を表した。各種溶媒抽出物の添加量は細胞培養液中の各種溶媒抽出物の割合として表１に示す通りとした。実験は２連で行い、その平均値を採用した。その結果、ヤマブシタケ水抽出物のみに強いＮＧＦ産生増強活性があることが明らかになった。表１〜５にその結果を示す。
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実施例２
（１）マッシュルーム、シイタケ、エリンギ、エノキタケ、ブナシメジ、マイタケ（いずれも子実体）の凍結乾燥物を粉砕したもの、並びにブナシメジ菌糸体乾燥物に対し、実施例１と同様の方法で水抽出を行い、各種きのこ水抽出物を得た。
（２）実施例２−（１）で得られた各種きのこ水抽出物のＮＧＦ産生増強活性を実施例１−（２）と同様の方法で調べた。その結果、マッシュルーム、シイタケ、エリンギ、エノキタケ、ブナシメジ、マイタケ（いずれも子実体）並びにブナシメジ菌子体の水抽出物にＮＧＦ産生増強活性があることが明らかになった。表６にその結果を示す。なお、対照のＮＧＦ産生量はマッシュルームおよびシイタケの試験では０．１６０ｎｇ／ｍｌ、エリンギおよびエノキタケの試験では０．１４７ｎｇ／ｍｌ、ブナシメジ（子実体）およびマイタケの試験では０．１３４ｎｇ／ｍｌ、ブナシメジ（菌糸体）の試験では０．３００ｎｇ／ｍｌであった。
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産業上の利用の可能性
本発明により、きのこ類の水性抽出物を有効成分として含有する治療又は予防に神経成長因子産生増強を必要とする疾患に有効な医薬、食品、飲料又は飼料が提供される。
該医薬は痴呆症又は神経障害等の神経成長因子産生増強を必要とする疾患の治療剤又は予防剤として有用である。該食品又は飲料によれば、日常の飲食品として摂取することにより、神経成長因子産生増強を要する疾患の症状改善等が可能となる。また、該飼料はその神経成長因子産生増強作用により、生体の恒常性の維持に有用である。