(57)【要約】肝臓中のグリコーゲンの血糖への変換を阻害する効果を有する、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質及びそれを含有する食品又は食品配合剤は、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、組成物が肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させる。肝臓内糖新生阻害作用を有する物質を含有する食品または食品配合剤は、この組成物を含有する。組成物は、植物サラシアレティキュラータの木部を粉砕して得られる木質粉末、有機溶媒による抽出処理、または、温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、濾過によって得られる水溶液または水中懸濁液、またはこれら水溶液または水中懸濁液から水分を乾燥除去して得られる固形分などである。
2005030236.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、該組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項２】
前記律速酵素は、フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼであることを特徴とする、請求項１に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項３】
前記組成物は、植物サラシアレティキュラータの木部を粉砕して得られる木質粉末であることを特徴とする、請求項１に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項４】
前記組成物が、植物サラシアレティキュラータの木部から抽出処理によって得られることを特徴とする、請求項１に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項５】
前記組成物は、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、濾過して得られる水溶液または水中懸濁液であることを特徴とする、請求項１又は４に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項６】
前記組成物は、前記水溶液または前記水中懸濁液から水分を乾燥除去した後に残る固形分であることを特徴とする、請求項５に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項７】
植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、該組成物が、上記植物サラシアレティキュラータの木部へ有機溶剤を加えて抽出処理を行なった後、濾過によって得られる有機溶剤溶液から上記有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有し、
該固体組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることを特徴とするすることを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項８】
前記律速酵素は、フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼであることを特徴とする、請求項７に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項９】
前記有機溶剤は、炭化水素、アルコール、エーテル、ケトン及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物であることを特徴とする、請求項７に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１０】
前記アルコールはエチルアルコールであり、前記ケトンはアセトンであり、前記エステルは酢酸アルキルエステルであることを特徴とする、請求項９に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１１】
前記酢酸アルキルエステルは、酢酸エチルエステルであることを特徴とする、請求項１０に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１２】
植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、該組成物が、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、得られる水溶液または水中懸濁液に低沸点で水不溶性の有機溶剤を混合し、
該有機溶剤及び上記有機溶剤の溶解物である液体を上記水溶液または水中懸濁液から分離し、
該液体から上記有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有し、該固体組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１３】
前記律速酵素は、フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼであることを特徴とする、請求項１２記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１４】
前記有機溶剤は、炭化水素、エーテル及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物であることを特徴とする、請求項１２に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１５】
前記エステルは、酢酸アルキルエステルであることを特徴とする、請求項１４に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１６】
前記酢酸アルキルエステルは、酢酸エチルエステルであることを特徴とする、請求項１５に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１７】
請求項１乃至１６の何れかに記載の植物サラシアレティキュラータの木部から抽出処理によって得られる組成物を含有することを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質を含有する食品または食品配合剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質及びそれを含有する食品又は食品配合剤に関する。
【背景技術】  ヒトをはじめとしてほ乳類などの動物は、生命活動のエネルギー源として食物から摂取される栄養分を起源とする血糖（血液中のグルコース）を用いている。
図１１は、グルコースの代謝の経路を模式的に説明する図である。グルコースの代謝の経路は以下に記す３経路である。
（１）血液から筋肉中に移行し、燃焼（酸化）してヒトの運動のエネルギー源となる。
（２）血液から体脂肪組織中に移行し、脂肪に変換されて貯蔵される。あるいは、逆経路として脂肪からグルコースに変換されて血液中に移行する。
（３）肝臓中に移行してグリコーゲンに変換され、肝臓中に貯蔵される。あるいは、逆経路としてグリコーゲンからグルコースに変換されて、血液中に移行する。
このように、血糖は上記３経路によって消費補給され、筋肉組織に移行してその活動エネルギー源となったり、体脂肪に変換されて備蓄されたりする。
何らかの原因によってヒトの血糖制御機能が阻害され、血糖値（血液中のグルコース濃度、正常な日本人の場合には、１００±２０ｍｇ／１００ｃｍ３）が異常に増加すると様々な障害が現われる。これが糖尿病であり、近年この症状に苦しむ人が著しく増加し、社会問題のひとつにさえなっている。
この症状に対処するには、基本的にはエネルギー源摂取量を相対的に制限し、運動などによってグルコースの消費を促すことにあるが、それだけで不十分の場合には血糖降下剤などの薬剤によって対処する。
しかしながら、α−グルコシターゼ阻害剤、スルホニルウレア系薬剤、ビグアナイト系薬剤など既存の薬剤はそれぞれ服用に伴う副作用があることが知られている。例えば、血糖降下剤の服用量、服用時期を誤ると血糖値が正常値以下に低下し、動悸、冷や汗、頭痛、悪心、昏睡などの低血糖症状を起こす。このため、血糖降下剤などの服用には細心の注意が要求されるとともに、万一発生するかも知れない低血糖症に備えて、緊急服用のためのグルコースなどを準備しておかなければならない煩わしさを伴う。したがって、このような副作用を示さずに血糖値を低下させる、安心して服用できる有効な薬剤が望まれている。
一方、糖尿病は世界中において普遍的で重大な病気であるため、これに対処するさまざまな療法、民間医薬、食品などが知られている。そのひとつとして、スリランカ民主社会主義共和国特産の植物サラシアレティキュラータ（学名：Ｓａｌａｃｉａ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ）の木部を粉砕した粉末、あるいはそれを煎じた抽出液が血糖降下に有効であることは現地では古くから知られていたが、その薬効、作用機序について詳細が不明であったため、使用方法は不明確であった（北村博一監修、サラシア研究所編著、「神秘のサラシアダイエット」、史輝出版、１９９９年  参照）。なお、国際貿易機関（ＷＴＯ）では、植物サラシアレティキュラータを、「Ｋｏｔｈａｌａｈｉｍｂｕｔｕ」と表記している。
例えば、特開平９−３０１８８２号公報においては、サラシアレティキュラータの糖尿病に対する効果が開示されているが、その薬効は腸管に存在する炭水化物消化酵素であるα−グルコシターゼ阻害効果にあるとしている。
従来の糖尿病用医薬品、食品配合物などは、すべて血糖値低下をめざす点では一致しているが、血糖値低下の経路として、消化管内における糖質の消化吸収抑制、細胞内へのグルコースの取り込みの促進、解糖系の亢進を促す機能が主であり、服用に際してはこれに伴う副作用に細心の注意を払う必要があった。
また、サラシアレティキュラータの糖尿病に対する薬効作用としては、含有される水溶性成分によるα−グルコシターゼ阻害効果以外は、詳細に調べられているとは言えないという課題がある。
本発明者らは、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物の血糖への作用を詳細に研究した結果、血糖と肝臓中のグリコーゲンとの相互変換も一経路として重要な役割を果たし、この変換の制御に有効な組成物を見出し、本発明に想到したものである。本発明者らは、前記組成物がこれまで知られている薬剤の作用機作とは異なり、肝臓中の糖新生阻害作用により血糖値を低下させることができる、新規の物質であることを見出したのである。
【発明の開示】
本発明は、上記課題に鑑み、肝臓中のグリコーゲンの血糖への変換を阻害する効果を有する、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質およびそれを含有する食品または食品配合剤を提供することを目的としている。
上記目的を達成するため、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質は、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることを特徴とする。上記構成において、律速酵素は、フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼである。
上記組成物は、好ましくは、植物サラシアレティキュラータの木部を粉砕して得られる木質粉末であるか、植物サラシアレティキュラータの木部から抽出処理によって得られる組成物であるか、または、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、濾過によって得られる水溶液または水中懸濁液である。或いは、上記組成物は、水溶液または水中懸濁液から水分を乾燥除去した後に残る固形分であってもよい。
上記構成によれば、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物により、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることができる。
また、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質は、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、組成物が、植物サラシアレティキュラータの木部へ有機溶剤を加えて抽出処理を行なった後、濾過によって得られる有機溶剤溶液から有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有し、組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることを特徴とする。上記構成において、律速酵素は、フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼである。有機溶剤は、好ましくは、炭化水素、アルコール、エーテル、ケトン及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物である。好ましくは、アルコールはエチルアルコールであり、ケトンはアセトンであり、エステルは酢酸アルキルエステルである。また、酢酸アルキルエステルは、好ましくは、酢酸エチルエステルである。
上記構成によれば、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物により、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることができる。
また、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質は、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、組成物が、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、得られる水溶液または水中懸濁液に低沸点で水不溶性の有機溶剤を混合し、有機溶剤及び有機溶剤の溶解物である液体を水溶液または水中懸濁液から分離し、液体から有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有し、固体組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることを特徴とする。上記構成において、律速酵素は、フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼである。有機溶剤は、好ましくは、炭化水素、エーテル及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物である。また、エステルは、好ましくは、酢酸アルキルエステルである。また、酢酸アルキルエステルは、好ましくは、酢酸エチルエステルである。
上記構成によれば、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物により、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することにより血糖濃度を低下させることができる。
また、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質を含有する食品または食品配合剤は、植物サラシアレティキュラータの木部から抽出処理によって得られる組成物を含有することを特徴とする。
この構成によれば、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を食品または食品配合剤に添加することにより、食品から摂取することができるので、摂取が容易となる。
【図面の簡単な説明】  本発明は、以下の詳細な発明及び本発明の幾つかの実施の形態を示す添付図面に基づいて、より良く理解されるものとなろう。なお、添付図面に示す種々の実施例は本発明を特定または限定することを意図するものではなく、単に本発明の説明及び理解を容易とするためだけのものである。
図１は、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質の作用を説明する模式図である。
図２は、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質を摂取したときの肝臓の糖代謝を説明する模式図である。
図３は、マウスの肝臓における差動表示法の測定結果の拡大写真を示す図である。
図４は、実施例１の肝臓における逆転写遺伝子増幅装置の測定結果の拡大写真を示す図である。
図５は、図４の逆転写遺伝子増幅装置におけるＦＢＰ１の信号強度を示す図である。
図６は、筋肉における逆転写遺伝子増幅装置の測定結果の拡大写真を示す図である。
図７は、実施例２の肝臓における逆転写遺伝子増幅装置による測定結果の拡大写真の図である。
図８は、図７の逆転写遺伝子増幅装置による遺伝子信号のＦＢＰ１／ＧＡＰを示す図である。
図９は、実施例３の肝臓における逆転写遺伝子増幅装置による測定結果の拡大写真を示す図である。
図１０は、図９の逆転写遺伝子増幅装置による遺伝子信号のＦＢＰ１／ＧＡＰを示す図である。
図１１は、グルコースの代謝の経路を模式的に説明する図である。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、図面に基づいて本発明の実施の形態を詳細に説明する。
先ず、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質について説明する。本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質は、スリランカ民主社会主義共和国原産の植物サラシアレティキュラータの木部を粉砕して得られる木質粉末、または、その木部から抽出処理によって得られる組成物を主成分とする。
上記抽出処理は、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、濾過によって得られる水溶液または水中懸濁液である。なお、水中懸濁液とは、濾過によりゴミなどを除去した後に、固形物が分散した水溶液のことである。
さらに、組成物は、上記の水溶液、または、水中懸濁液から水分を乾燥除去した後に残る固形分であってもよい。
また、抽出処理によって得られる組成物は、植物サラシアレティキュラータの木部へ有機溶剤を加えて抽出処理を行なった後、濾過によって得られる有機溶剤溶液から有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有する。この組成物を食品などの用途に用いる場合には、低沸点で、かつ、毒性のない有機溶媒が好ましい。
ここで、有機溶媒は、炭化水素、アルコール、エーテル、ケトン及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物であればよい。
炭化水素は、ノルマルペンタン、ノルマルヘキサン、トルエンの何れかでよい。また、アルコールとしてはエチルアルコール、エーテルとしてはジエチルエーテル、ケトンとしてはアセトンをそれぞれ用いてもよい。エステルは酢酸アルキルエステルを用いることができ、特に、酢酸エチルエステルが好適である。
さらに、抽出処理によって得られる組成物は、植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、該組成物が、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、得られる水溶液または水中懸濁液に低沸点で水不溶性の有機溶剤を混合し、有機溶剤及び有機溶剤の溶解物である液体を水溶液または水中懸濁液から分離し、液体から有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有する。この組成物を食品などの用途に用いる場合には、水に溶解しないで、低沸点で、かつ、毒性のない有機溶媒が好ましい。
ここで、有機溶剤は、炭化水素、エーテル及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物であればよい。炭化水素としてはノルマルペンタン、ノルマルヘキサン、トルエンの何れかでよい。また、エーテルとしてはジエチルエーテルを用いることができる。また、酢酸アルキルエステルを用いてもよい。この酢酸アルキルエステルとしては、酢酸エチルエステルが好適である。
また、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質を含有する食品または食品配合剤は、上記スリランカ民主社会主義共和国原産の植物サラシアレティキュラータの木部を粉砕して得られる木質粉末、または、上記の各種の抽出処理方法によって得られる組成物を含有している。この組成物の食品または食品配合剤への含有率は、例えば食味を損なわない程度とすれば、食品から摂取することができるので、摂取が容易となる。
これらの植物サラシアレティキュラータの木部から得られる上記組成物は、肝臓内糖新生阻害作用を有しており、本出願においては、以下、単に肝臓内糖新生阻害作用を有する物質あるいは組成物と呼ぶ。
図１は、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質の作用機序を説明する模式図である。図１において、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１の主成分が、肝臓２と筋肉３とにおける糖新生に対する遺伝子調節に及ぼす影響を示している。糖新生に関係する律速酵素は、図示するように、肝臓型フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼ酵素４（以下、適宜ＦＢＰ１と呼ぶ。）と、筋肉型フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼ酵素５（以下、適宜ＦＢＰ２と呼ぶ。）などである。
本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１の主成分は、肝臓型フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼ酵素４（ＦＢＰ１）の遺伝子発現を抑制することにより（図中の肝臓２における白抜き矢印↓参照）、肝臓のグルコース生成を抑圧し、血糖値を低下させる（図中の白抜き⊥印参照）ことができる。
しかしながら、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１の主成分は、筋肉型フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼ酵素５の遺伝子発現を抑制しない（図中の筋肉３における×印参照）。
つぎに、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質の作用機序をさらに詳しく説明する。
通常、摂食により血中のグルコース濃度が上昇すると、膵臓から分泌されるインシュリンの働きにより肝臓、筋肉、そして脂肪組織などへのグルコースの取り込みが促進される。また、血中のグルコース濃度が低下すると、グルカゴンの働きにより肝臓は糖新生によりグルコースを放出する。
図２は、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を摂取したときの肝臓の糖代謝を説明する模式図である。図２に示すように、グリコーゲンからグルコース−１−リン酸、グルコース−６−リン酸、フルクトース−６−リン酸、フルクトース−１，６−二リン酸、ホスホエノールピルビン酸、アセチルＣｏＡ（アセチルコエンチームＡ）を経て、ＴＣＡ（トリカルボン酸）サイクルで、最終的に、水と二酸化炭素になる。図中の黒く塗られた矢印は糖尿病時に促進される糖新生を表している。糖尿病時には、白い矢印で示したグリコーゲンの合成とグルコースの代謝などが抑制されるので、逆にグリコーゲンの分解と糖新生などが促進されることにより、血中へのグルコースの放出が増加する。図２において、グルコース−６−フォスファターゼ、フルクトース−１，６−ビスフォスファターゼ、フォスフォエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼは、糖新生の律速酵素（Ｋｅｙ  ｅｎｚｙｍｅ）である。
本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１は、糖新生の律速酵素であるＦＢＰ１の遺伝子発現を抑制する。図２に示すように、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１は、ＦＢＰ１の遺伝子発現を抑制することで、フルクトース−６−リン酸がフルクトース−１，６−二リン酸に代謝する反応ならびに糖新生反応としてのフルクトース−１，６−二リン酸をフルクトース−６−リン酸に代謝する反応１０を停止させる。このように、糖新生の律速段階を抑制することによって、糖尿病時における糖新生代謝亢進を改善し、結果的に、肝臓へのグルコースの取り込みを促進させることで、血糖値を低下させる。この際、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１は、筋肉型の律速酵素であるＦＢＰ２には作用しない。
これにより、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１は、肝臓において、糖新生の律速酵素のひとつであるＦＢＰ１のメッセンジャーＲＮＡ（以下、ｍＲＮＡと呼ぶ）の発現量を減少させ、肝臓の糖新生を抑制する。
【実施例１】  最初に、実施例１の本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物の抽出方法について説明する。
植物サラシアレティキュラータの木部粉末１２ｇに水２０００ｃｍ３を加え、９０〜１００℃で全量が１５００ｃｍ３になるまで煮沸抽出した後に、冷却し、濾過で固形分を除去した熱水抽出液である本発明の組成物ａを得た。
この組成物ａを、実験動物としてＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス４週齢）を使用し、１週間の予備飼育後、実施例１のマウスには上記熱水抽出液（以下、Ａ群と呼ぶ）と、飼料として、実験動物用固形飼料（オリエンタル酵母株式会社、商品名ＭＦ）を自由摂取させた。比較例のマウス（以下、Ｃ１群と呼ぶ）には純水を自由摂取させた以外は、実施例のマウスと同じ飼料を与えた。３週間飼育の後、屠殺、肝臓および筋肉を摘出した。
次に、本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物ａの肝臓及び筋肉への作用を、遺伝子により測定した結果について説明する。
ＲＮＡ抽出試薬（インビトロ社製、商品名ＴＲＩＺＯＬ）を用いて、肝臓及び筋肉の総ＲＮＡを抽出した。次に、アンカードオリゴｄＴプライマーを用いて逆転写装置（インビトロ社、モデルＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ  ＩＩ）で逆転写した後、遺伝子増幅装置（アプライドバイオシステム社製、モデルＧｅｎｅＡｍｐ９７００）を用い、差動表示法（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｄｉｓｐｌａｙ）で、任意遺伝子の発現パターンの解析と遺伝子同定を行った。また、逆転写遺伝子増幅装置により、ＦＢＰ１及びＦＢＰ２のｍＲＮＡの発現量を測定した。
図３は、マウスの肝臓における差動表示法の測定結果を示す拡大写真の図である。図において、Ａが実施例１のサラシアレティキュラータ熱水抽出液を摂取させた群であり、Ｃ１が純水を摂取させた比較例である。拡大写真は、差動表示法の測定結果を示す。これは、電気泳動装置を用いて得られた泳動ゲルを、エチジュウムブロマイド染色したものである。
図３から明らかなように、実施例１の組成物ａを摂取させたマウスの肝臓においては、遺伝子分子量（図３のＭＭ参照）が６００〜２６００ベースフェア（以下、ｂｐと呼ぶ）において、増減するいくつかの遺伝子が見出された。比較例では、このような遺伝子が見出されなかった。これにより、何らかの遺伝子が、組成物ａによって制御を受けていることが明らかとなった。
次に、上記の結果から組成物ａの投与によって、いかなる遺伝子が制御されているか、の解明を試みた。
図４は、実施例１の肝臓における逆転写遺伝子増幅装置による測定結果を示す拡大写真である。図において、Ａが実施例１のサラシアレティキュラータ熱水抽出液を摂取させた群であり、Ｃが純水を摂取させた比較例である。
ＦＢＰ１について、グリセロアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰ）を対照として、ｍＲＮＡの発現量を測定した。
図５は、図４の逆転写遺伝子増幅装置によるＦＢＰ１の信号強度を示す図である。図５は、実施例１のサラシアレティキュラータ熱水抽出液を摂取させたＡ群及び比較例であるＣ１群のＦＢＰ１の相対信号強度を示している。
図４及び図５から明らかなように、実施例１のサラシアレティキュラータ熱水抽出液を摂取させたＡ群において、遺伝子分子量が１０２０ｂｐのＦＢＰ１は、比較例のＣ群に比べて、ｍＲＮＡの発現量が減少した。
これにより、実施例１の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を摂取させたマウスの肝臓においては、肝臓中での糖新生の律速酵素のひとつであるＦＢＰ１のｍＲＮＡの発現量を減少させ、肝臓の糖新生を抑制するということが明らかになった。
次に、組成物ａの投与によるＦＢＰ２に対する効果について説明する。図６は筋肉における逆転写遺伝子増幅装置の測定結果を示す拡大写真の図である。図において、Ａが実施例１のサラシアレティキュラータ熱水抽出液を摂取させた群であり、Ｃ１が純水を摂取させた比較例である。律速酵素のＦＢＰ２について、ＧＡＰを対照として、ｍＲＮＡの発現量を測定した。
図から明らかなように、実施例１のサラシアレティキュラータ熱水抽出液を摂取させた群Ａと比較例のＣ１群において、ＦＢＰ２でのｍＲＮＡの発現量が同じであり、組成物ａはＦＢＰ２に作用しない。
以上の実施例１から、実施例１のサラシアレティキュラータ熱水抽出液を摂取させたＡ群では、糖新生の律速酵素であるＦＢＰ１の遺伝子発現量が減少し、組成物ａは糖新生を抑制し、肝臓からのグルコースの放出を抑制することが理解される。
【実施例２】  次に、実施例２の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物の第２の抽出方法について説明する。
最初に植物サラシアレティキュラータの木部粉末の熱水抽出し、次に、酢酸エチル抽出を行った。植物サラシアレティキュラータの木部粉末１００ｇに水１０００ｃｍ３を加え、９０℃〜１００℃で１．５時間煮沸抽出した後に冷却し、濾過で固形分を除去した後、得られた水溶液のうち５００ｃｍ３を分液ロートに入れ、これに酢酸エチル１５００ｃｍ３を加えて抽出を行なった。酢酸エチル相を分離後、酢酸エチルを蒸発除去し、残分として本発明の組成物である固体成分約０．４１５ｇを得た。この熱水−酢酸エチル抽出による組成物を、組成物ｂと呼ぶ。
実施例２の組成物ｂに関するマウス投与試験を、実施例１と同様に行った。この組成物ｂを、実施例２のマウスには上記組成物ｂの含有水（以下、Ｄ群と呼ぶ）及び飼料を自由摂取させた。また、実施例２の熱水抽出液と、純水とを自由摂取させたマウス（以下、Ｄ群及びＣ２群と呼ぶ）には、実施例２のマウスと同じ飼料を与えた。単回投与後、４時間飼育した後、屠殺、肝臓および筋肉を摘出した。なお、実施例２の熱水抽出液の濃度は、実施例１の熱水抽出液の濃度と同じになるようにした。
次に、実施例２の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物ｂの肝臓への作用を、遺伝子により測定した結果について説明する。
図７は、実施例２の肝臓における逆転写遺伝子増幅装置による測定結果を示す拡大写真の図である。図において、Ｂが実施例２のサラシアレティキュラータの熱水−酢酸エチル抽出による組成物ｂの含有水を摂取させた群であり、Ｄ及びＣ２が、それぞれ、サラシアレティキュラータ熱水抽出液、純水を摂取させた群の比較例である。ＦＢＰ１について、グリセロアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰ）を対照として、ｍＲＮＡの発現量を測定した。
図８は、図７の逆転写遺伝子増幅装置による遺伝子信号のＦＢＰ１／ＧＡＰを示す図である。図８の縦軸は、Ｃ２のＦＢＰ１／ＧＡＰを１とした場合に、Ｂ及びＤのＦＢＰ１／ＧＡＰは、それぞれ、０．９、０．６７となる。これから、Ｂ群におけるＦＢＰ１の遺伝子発現量が最も小さいことが分かる。
図７及び図８から明らかなように、遺伝子分子量が１０２０ｂｐのＦＢＰ１は、比較例のＣ２群に比べて、Ｂ群及びＤ群共にｍＲＮＡの発現量が減少し、Ｂ群が最も減少する。
これにより、実施例２のＦＢＰ１の遺伝子発現量が減少し、その減少の程度は実施例１より顕著だった。すなわち、サラシアレティキュラータの熱水−酢酸エチル抽出による組成物ｂが特に有効な成分であることが判明した。
【実施例３】  次に、実施例３の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物の第３の抽出方法について説明する。
実施例２からサラシアレティキュラータの成分のうち、酢酸エチル抽出成分が特に有効な成分であることが判明したので、サラシアレティキュラータの木部粉末の有効成分を直接、酢酸エチルにより抽出した。
植物サラシアシアレティキュラータの木部粉末１００ｇに酢酸エチル１０００ｃｍ３を加え、還流管をつけて１．５時間煮沸沸騰させた後に冷却し、濾過で固形分を除去した後、得られた酢酸エチル相から酢酸エチルを蒸発除去して、残分として固体成分約２．８５〜３ｇを得た。この酢酸エチル抽出による組成物を、組成物ｃと呼ぶ。
実施例３の組成物ｃに関するマウス投与試験を、実施例１と同様に行った。この組成物ｃを、実施例３のマウスには上記組成物ｃの含有水（以下、Ｆ群と呼ぶ）及び飼料を自由摂取させた。また、実施例２の熱水抽出液と、純水とを自由摂取させたマウス（以下、Ｅ群及びＣ３群と呼ぶ）には、実施例３のマウスと同じ飼料を与えた。２週間の連続飼育の後、屠殺、肝臓および筋肉を摘出した。なお、実施例３の熱水抽出液の濃度は、実施例１の熱水抽出液の濃度と同じになるようにした。
次に、実施例３の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物ｃの肝臓への作用を、遺伝子により測定した結果について説明する。
図９は、実施例３の肝臓における逆転写遺伝子増幅装置による測定結果を示す拡大写真の図である。図において、Ｆが実施例２のサラシアレティキュラータの酢酸エチル抽出による組成物ｃの含有水を摂取させた群であり、Ｅ及びＣ３が、それぞれ、サラシアレティキュラータ熱水抽出液、純水を摂取させた群の比較例である。ＦＢＰ１について、グリセロアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰ）を対照として、ｍＲＮＡの発現量を測定した。
図１０は、図９の逆転写遺伝子増幅装置による遺伝子信号のＦＢＰ１／ＧＡＰを示す図である。図１０の縦軸は、Ｃ３のＦＢＰ１／ＧＡＰを１とした場合に、Ｅ及びＦのＦＢＰ１／ＧＡＰは、それぞれ、０．６、０．５となる。これから、Ｆ群におけるＦＢＰ１の遺伝子発現量が最も小さいことが分かる。
図９及び図１０から明らかなように、遺伝子分子量が１０２０ｂｐのＦＢＰ１は、比較例のＣ３群に比べて、Ｅ群及びＦ群共にｍＲＮＡの発現量が減少し、Ｆ群が最も減少する。
これにより、実施例３のＦＢＰ１の遺伝子発現量が減少し、その減少の程度は実施例２より顕著だった。すなわち、サラシアレティキュラータの酢酸エチル抽出による組成物ｃが特に有効な成分であることが判明した。
【実施例４】  有機溶剤として、エチルアルコールを用いた以外は、実施例３と同じ方法で本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物ｄを抽出した。この組成物ｄのマウス投与効果は、実施例３とほぼ同じであった。
【実施例５】  有機溶剤として、アセトンを用いた以外は、実施例３と同じ方法で本発明の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質１を含有する組成物ｅを抽出した。この組成物ｅのマウス投与効果は、実施例３とほぼ同じであった。
本発明は、上記実施例に限定されることなく、特許請求の範囲に記載した発明の範囲内で、種々の変形が可能であり、それらも本発明の範囲内に含まれることは明らかである。例えば、本発明のサラシアレティキュラータの抽出方法などは上記実施例に限らないことはいうまでもない。
【産業上の利用可能性】  本発明の植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物またはそれを含有する食品または食品配合剤により、肝臓中のグリコーゲンの血糖への変換が阻害されるので、血糖値の増加を防止することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年4月21日(2006.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、該組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項２】
前記律速酵素は、フルクトース−1 ，６−ビスフォスファターゼであることを特徴とする、請求項１に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項３】
前記組成物は、植物サラシアレティキュラータの木部を粉砕して得られる木質粉末であることを特徴とする、請求項１に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項４】
前記組成物が、植物サラシアレティキュラータの木部から抽出処理によって得られることを特徴とする、請求項１に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項５】
前記組成物は、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、濾過して得られる水溶液または水中懸濁液であることを特徴とする、請求項１又は４に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項６】
前記組成物は、前記水溶液または前記水中懸濁液から水分を乾燥除去した後に残る固形分であることを特徴とする、請求項５に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項７】
植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、該組成物が、上記植物サラシアレティキュラータの木部へ有機溶剤を加えて抽出処理を行なった後、濾過によって得られる有機溶剤溶液から上記有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有し、
該固体組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することを特徴とするすることを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項８】
前記律速酵素は、フルクトース−1 ，６−ビスフォスファターゼであることを特徴とする、請求項７に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項９】
前記有機溶剤は、炭化水素、アルコール、エーテル、ケトン及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物であることを特徴とする、請求項７に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１０】
前記アルコールはエチルアルコールであり、前記ケトンはアセトンであり、前記エステルは酢酸アルキルエステルであることを特徴とする、請求項９に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１１】
前記酢酸アルキルエステルは、酢酸エチルエステルであることを特徴とする、請求項１０に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１２】
植物サラシアレティキュラータの木部に由来する組成物を主成分として含有し、該組成物が、植物サラシアレティキュラータの木部を温度８０℃以上の熱水で煮沸処理した後、得られる水溶液または水中懸濁液に低沸点で水不溶性の有機溶剤を混合し、
該有機溶剤及び上記有機溶剤の溶解物である液体を上記水溶液または水中懸濁液から分離し、
該液体から上記有機溶剤を蒸発除去して得られる固体組成物を主成分として含有し、該固体組成物が、肝臓内で糖新生律速酵素の遺伝子発現を抑制することを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１３】
前記律速酵素は、フルクトース−1 ，６−ビスフォスファターゼであることを特徴とする、請求項１２記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１４】
前記有機溶剤は、炭化水素、エーテル及びエステルのうちから選ばれる１種または２種以上の混合物であることを特徴とする、請求項１２に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１５】
前記エステルは、酢酸アルキルエステルであることを特徴とする、請求項１４に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１６】
前記酢酸アルキルエステルは、酢酸エチルエステルであることを特徴とする、請求項１５に記載の肝臓内糖新生阻害作用を有する物質。
【請求項１７】
請求項１乃至１６の何れかに記載の植物サラシアレティキュラータの木部から抽出処理によって得られる組成物を含有することを特徴とする、肝臓内糖新生阻害作用を有する物質を含有する食品または食品配合剤。
【国際調査報告】
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