(57)【要約】プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断、予防および／または治療に、あるいは試料中のプリオン蛋白の特異的染色に使用される、式（Ｉ）または（ＩＩ）：2004035522.tif 000056で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
2004035522.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断プローブとして使用される、式（Ｉ）または（ＩＩ）：
2004035522.tif 000050
［式中、ＤはＮＲ’、Ｓ、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＨ２であり；
Ｒ’はＨ、炭素数１〜４個のアルキル、またはフェニルであり；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ＥはＮ、またはＣＨであり；
Ｒａは各々独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ＱはＮまたはＣＲｂであり；
ＲｂはＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ｍは０〜４の整数であり；
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、ＮＨ２、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
あるいはＲ１およびＲ２は一緒になって、１〜４個のＲ４で置換されていてもよいベンゼン環またはナフタレン環を形成し；
Ｒ３はＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、および下記（ａ）〜（ｅ）で示されるいずれかの基からなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
2004035522.tif 000051
ここに各Ｒｘは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、Ｎ＝ＣＨ−アリル、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ４は独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、および下記（ｆ）〜（ｌ）で示されるいずれかの基からなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；隣接する炭素に結合した２個のＲ４がメチレンジオキシ基を形成してもよく；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
2004035522.tif 000052
2004035522.tif 000053
ここに各Ｒｙは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
Ａは下記（ｉ）〜（ｉｘ）で示されるいずれかの環であり；
2004035522.tif 000054
2004035522.tif 000055
ここに各Ｒｚは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、フェニル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ＸはＮまたはＣＨであり；
ＹはＮまたはＣＨであり；
ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ＋１であり；
ｐは０〜４の整数である］
で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
ＢＦ−１２４、ＢＦ−１２５、ＢＦ−１２６、ＢＦ−１３３、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４２、ＢＦ−１４３、ＢＦ−１４７、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５１、ＢＦ−１５４、ＢＦ−１６０、ＢＦ−１６２、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１７２、ＢＦ−１８０、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２５、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２２７、Ｎ−２２８、Ｎ−２７６、Ｎ−２８２、Ｎ−２８３、Ｎ−４０７からなる群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＢＦ−１２４、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２７６、Ｎ−２７７、Ｎ−３１３からなる群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
標識されている請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項５】
放射性核種で標識されている請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項６】
γ線放出核種で標識されている請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項７】
９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉおよび１３３Ｘｅからなる群より選択されるγ線放出核種で標識されている請求項１ないし３のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項８】
９９ｍＴｃおよび１２３Ｉからなる群より選択されるγ線放出核種で標識されている請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項９】
陽電子放出核種で標識されている請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１０】
１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏおよび１８Ｆからなる群より選択される陽電子放出核種で標識されている請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１１】
１８Ｆで標識されている請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１２】
請求項１ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断用組成物。
【請求項１３】
請求項１ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断用キット。
【請求項１４】
請求項１ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断方法。
【請求項１５】
該化合物が請求項２に記載の化合物である、請求項１２記載の組成物、請求項１３記載のキット、または請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
請求項５ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物。
【請求項１７】
請求項８に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
請求項５ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断用キット。
【請求項２０】
請求項８に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
請求項１１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む請求項１９に記載のキット。
【請求項２２】
請求項５ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断方法。
【請求項２３】
該化合物がγ線放出核種または陽電子放出核種で標識された請求項３に記載の化合物であり、該画像診断がＰＥＴまたはＳＰＥＣＴによるものである、請求項１６ないし１８のいずれかに記載の組成物、請求項１９ないし２１のいずれかに記載のキット、または請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１ないし１１のいずいれかに記載の化合物またはその塩もくは溶媒和物を含む試料中のプリオン蛋白の染色用組成物。
【請求項２５】
請求項１ないし１１のいずいれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須構成成分として含む試料中のプリオン蛋白の染色用キット。
【請求項２６】
請求項１ないし１１のいずいれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、試料中のプリオン蛋白の染色方法。
【請求項２７】
該化合物が請求項２に記載の化合物である、請求項２４に記載の組成物、請求項２５に記載のキット、または請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の体外診断のための、請求項１ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む組成物。
【請求項２９】
生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の体外診断のための、請求項１ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須構成成分として含むキット。
【請求項３０】
被験動物から試料を得て、該試料に請求項１ないし１１のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を接触させることを特徴とする、生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の体外診断方法。
【請求項３１】
該化合物がＢＦ−１６８、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２７８からなる群より選択されるものである、請求項２８に記載の組成物、請求項２９に記載のキット、または請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含有する、生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療用医薬組成物。
【請求項３３】
疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
請求項１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療方法。
【請求項３５】
疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療のための、請求項１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項３７】
疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療のための医薬の製造のための本発明化合物の使用。
【請求項３９】
疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
該化合物がＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４１、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５３、ＢＦ−１６８、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４、Ｎ−２３２、Ｎ−２４３、Ｎ−２４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１からなる群より選択されるものである、請求項３２または３３に記載の組成物、請求項３４または３５に記載のキット、請求項３６または３７に記載の方法、あるいは請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
該化合物がＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４からなる群より選択されるものである、請求項３２または３３に記載の組成物、請求項３４または３５に記載のキット、請求項３６または３７に記載の方法、あるいは請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４２】
請求項１に記載の化合物の標識化前駆体。
【請求項４３】
トシレート誘導体であるＢＦ−１６８、ＢＦ−２２４またはＮ−２２７の標識化前駆体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブ、特に、陽電子放出核種により標識されたプローブ、ならびに該プローブを含む診断用組成物に関する。本発明は、プリオン蛋白が脳に蓄積する疾患の予防／治療用組成物、ならびに試料中のプリオン蛋白の特異的染色剤にも関する。さらに本発明は、プリオン蛋白が脳に蓄積する疾患の診断、予防／治療方法、ならびに試料中のプリオン蛋白の検出方法にも関する。
【背景技術】  いわゆるプリオン蛋白が脳に蓄積する疾患には、ヒトではクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖ−ＣＪＤ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、クルー、ヒト以外の動物ではヒツジスクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、伝達性ミンク脳症、ネコ海綿状脳症などが知られており、いずれも致死性の感染性神経難病である。
これらの疾患においては、罹患した個体の脳をすりつぶして他の健常な個体に投与すると、疾病を伝播させることが可能であり、さらに罹患した脳では海綿状の病変がおこることから、これらの疾病は、伝達性海綿状脳症（ｔｒａｎｓｍｉｓｉｂｌｅ  ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ；ＴＳＥ）と呼ばれている。
プリオンという概念は伝達性海綿状脳症の原因因子として感染性蛋白質粒子（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｐａｒｔｉｃｌｅ）、すなわちプリオン（ｐｒｉｏｎ）として１９８２年スタンレー・プルシナーによって初めて提唱された。プリオンとは病気の伝達に必要不可欠な病原体の本体が蛋白のみであり、自己複製に必要な核酸をそれ自身に含まない病原体の総称である。最近では伝達性海綿状脳症の病原体として異常プリオン蛋白が見出され、また伝達性海綿状脳症においてはプリオン蛋白が蓄積することから、同脳症はプリオン病と呼ばれるのが一般的になってきている。
ヒトプリオン蛋白は２５３アミノ酸からなる塩基性蛋白で、第２０番染色体短腕にコードされている。正常プリオン蛋白はそのなかに３％以下のβシート構造しかもっていないが、異常プリオン蛋白では４０％以上の同シート構造をもつことが知られている。すなわち、伝達性海綿状脳症ないしはプリオン病の病因因子、すなわち異常プリオン蛋白の本体とはその蛋白の高次構造の変化、すなわちβシート構造を豊富にもつことによって感染性を獲得した蛋白であり、また、異常プリオン蛋白はそれ自身鋳型となり、正常プリオン蛋白を自己と同じものに変えることが知られている。
正常プリオン蛋白はプロテアーゼにより容易に分解され、界面活性剤で溶解されるが、これに対して異常プリオン蛋白はプロテアーゼ抵抗性で界面活性剤に不溶であり、通常の滅菌ではその感染性は失われない。
クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）はヒトにおける代表的なプリオン病である。これにはその原因が不明とされる弧発性、遺伝子の変異に基づく家族性、医療行為（硬膜移植、角膜移植、等）に基づく医原性が含まれる。
ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）はプリオン遺伝子の変異に基づく遺伝性疾患である。
変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖ−ＣＪＤ）はウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）に罹患したウシの神経組織を摂取したことが原因と推測されている。
クルーはパプアニューギニアのフォア（Ｆｏｒｅ）族の間で食人儀式により伝達していたことが知られている。
プリオン病患者数は日本においては年間１１０から１２０例の新規患者が発生する。そのなかの約９０％が弧発性クロイツフェルト・ヤコブ病、約５％が遺伝性、残りの５％が後天性でそのなかには医原性および変異型クロイツフェルト・ヤコブ病が含まれる。
プリオン病のいくつかは、近年、重大な社会問題として浮かび上がっている。
まず、日本におけるヒト乾燥硬膜移植歴のある患者の医原性クロイツフェルト・ヤコブ病の問題である。日本においては１９７３年から年間１００００枚を超えるヒト乾燥硬膜が脳外科手術時の硬膜の補填に使用されたが、不幸にも異常プリオン蛋白に汚染された硬膜を使用したことによると思われる患者が多発しており、また潜在的に危険な硬膜を使用された疑いのある、およびそのことを完全に否定できない移植歴をもつ患者は２０万人にも達すると考えられている。
次に変異型クロイツフェルト・ヤコブ病の問題である。変異型クロイツフェルト・ヤコブ病は前述したようにウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）に罹患したウシの神経組織を摂取したことが原因と推測されているが、欧州、特に英国では１８万頭を超えるウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）が報告されており（Ｏｆｆｉｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓ  Ｅｐｉｚｏｏｔｉｅｓ，２００３年５月８日付けデータ）、また確定あるいは擬似変異型クロイツフェルト・ヤコブ病患者の死者数は１３２例、生存中の患者を含めると１３６例に及ぶことから（英国Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、２００３年７月１１日付けデータ）、今後の推測では数千から数万の患者が発生することが危惧されている。
プリオン病の診断には現時点では、１）進行性痴呆を示すこと、２）脳波検査で周期性同期性放電（ＰＳＤ）を示すこと、３）ＣＴ、ＭＲＩで脳萎縮が進行していること、４）脳脊髄液中１４−３−３蛋白が増加すること、などを指標に評価する方法が一般的である。しかし、これらの診断法ではこの疾患を確定するには不十分であり、確定診断には、中枢神経系における異常プリオン蛋白の検出が最も確かな方法である。
多くの研究の結果、最初の臨床症状が現れるかなり前に、既にプリオン病特有の神経変性が始まっていることが判ってきた。また同病においては患者を取り巻く家族または臨床家が最初の臨床症状に気づいた時には、中枢神経系の病理像はすでに取り返しのつかない状態まで進行していることが知られている。
プリオン病の病理像は２つの主徴に代表される。すなわち中枢神経系におけるプリオン蛋白の蓄積と海綿状変性である。異常プリオン蛋白はプリオン病において特徴的であり、したがって特に脳内でこの蛋白をマーカーとして検出することが、同病の重要な診断法の１つとなりうる。
プリオン病の診断を目的として、脳内異常プリオン蛋白に特異的に結合する低分子有機化合物の探索が試みられている。しかしこれまでに異常プリオン蛋白に対して特異的に結合し、高い血液−脳関門透過性を有し、さらに毒性等に問題のない低分子有機化合物は未だ見いだされていない。
プリオン病の治療には現時点では特異的な治療法はなく、対症療法が主体である。近年、キナクリン、クロロキン、クロールプロジンなどがプリオン病の治療薬として注目されているが（Ｄｏｈ−ｕｒａら、ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、７４巻、４８９４−４８９７、２０００年およびＫｏｒｔｈら、プロシーディングス  オブ  ザ  ナショナル  アカデミイ  オブ  サイエンセス  ＵＳＡ、９８巻、９８３６−９８４１、２００１年）、その中で最も有望とされたキナクリンにおいても必ずしも期待通りの臨床効果は得られていない。
本発明は、上記事情に鑑み、異常プリオン蛋白に対する結合特異性、ならびに血液−脳関門透過性が高く、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断プローブとして使用できる化合物ならびにかかる化合物を含む診断用組成物およびキットを提供することを課題とする。また本発明は、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断プロープとして用いられる標識されたかかる化合物、ならびにかかるプローブを含む画像診断用組成物およびキットも提供する。かかる化合物、組成物およびキットはプリオン蛋白を鮮明に染色するものである。さらにプリオン蛋白が脳に蓄積する疾患、例えば、ヒトではクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖ−ＣＪＤ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、クルー、ヒト以外の動物ではヒツジスクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、伝達性ミンク脳症、ネコ海綿状脳症などの予防および／または治療用の、かかる化合物を含む組成物を提供すること等も課題とする。さらなる本発明の課題は、上記化合物を用いる、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断方法（画像診断方法を包含）、治療および／または予防方法、ならびにプリオン蛋白の染色方法を提供することである。
【発明の開示】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、式（Ｉ）または（ＩＩ）に示す化合物またはその塩もしくは溶媒和物が異常プリオン蛋白に対して非常に高い結合特異性を有し、さらに血液−脳関門透過性も高いことを見出し、本発明を完成するに至った。したがって、本発明化合物は、プリオン蛋白が蓄積する疾患の正確な早期診断・発見を可能にするものといえる。また、本発明化合物は血液−脳関門透過性も高いことから、生前における非侵襲性の診断が可能となる。さらに本発明化合物は、プリオン蛋白産生細胞による異常プリオン産生を抑制することが見出され、プリオン蛋白が蓄積する疾患の予防および／または治療に有用であることが示された。したがって、本発明は、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断用プローブ、ならびにそれを含む組成物およびキット、ならびにプリオン蛋白が蓄積する疾患の予防および／または治療用組成物、ならびに本発明化合物を用いる、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断方法（画像診断方法を包含）、治療および／または予防方法、ならびにプリオン蛋白の染色方法を提供するものである。
すなわち、本発明は、
（１）プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断プローブとして使用される、式（Ｉ）または（ＩＩ）：
2004035522.tif 000003
［式中、ＤはＮＲ’、Ｓ、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＨ２であり；
Ｒ’はＨ、炭素数１〜４個のアルキル、またはフェニルであり；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ＥはＮ、またはＣＨであり；
Ｒａは各々独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ＱはＮまたはＣＲｂであり；
ＲｂはＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ｍは０〜４の整数であり；
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、ＮＨ２、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
あるいはＲ１およびＲ２は一緒になって、１〜４個のＲ４で置換されていてもよいベンゼン環またはナフタレン環を形成し；
Ｒ３はＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、および下記（ａ）〜（ｅ）で示されるいずれかの基からなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
2004035522.tif 000004
2004035522.tif 000005
ここに各Ｒｘは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、Ｎ＝ＣＨ−アリル、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
各Ｒ４は独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、および下記（ｆ）〜（ｌ）で示されるいずれかの基からなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；隣接する炭素に結合した２個のＲ４がメチレンジオキシ基を形成してもよく；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
2004035522.tif 000006
2004035522.tif 000007
ここに各Ｒｙは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
Ａは下記（ｉ）〜（ｉｘ）で示されるいずれかの環であり；
2004035522.tif 000008
2004035522.tif 000009
ここに各Ｒｚは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、フェニル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され；ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
ＸはＮまたはＣＨであり；
ＹはＮまたはＣＨであり；
ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ＋１であり；
ｐは０〜４の整数である］
で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（２）ＢＦ−１２４、ＢＦ−１２５、ＢＦ−１２６、ＢＦ−１３３、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４２、ＢＦ−１４３、ＢＦ−１４７、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５１、ＢＦ−１５４、ＢＦ−１６０、ＢＦ−１６２、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１７２、ＢＦ−１８０、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２５、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２２７、Ｎ−２２８、Ｎ−２７６、Ｎ−２８２、Ｎ−２８３、およびＮ−４０７からなる群より選択される（１）に記載の化合物；
（３）ＢＦ−１２４、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２７６、Ｎ−２７７、およびＮ−３１３からなる群より選択される（１）に記載の化合物；
（４）標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（５）放射性核種で標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（６）γ線放出核種で標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（７）９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉおよび１３３Ｘｅからなる群より選択されるγ線放出核種で標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（８）９９ｍＴｃおよび１２３Ｉからなる群より選択されるγ線放出核種で標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（９）陽電子放出核種で標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（１０）１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏおよび１８Ｆからなる群より選択される陽電子放出核種で標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（１１）１８Ｆで標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（１２）（１）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断用組成物；
（１３）（１）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断用キット；
（１４）（１）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断方法；
（１５）該化合物が（２）に記載の化合物である、（１２）に記載の組成物、（１３）に記載のキット、または（１４）に記載の方法；
（１６）（５）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物；
（１７）（８）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む（１６）に記載の組成物；
（１８）（１１）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む（１６）に記載の組成物；
（１９）（５）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断用キット；
（２０）（８）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む（１９）に記載のキット；
（２１）（１１）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む（１９）に記載のキット；
（２２）（５）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断方法；
（２３）該化合物がγ線放出核種または陽電子放出核種で標識された（３）に記載の化合物であり、該画像診断がＰＥＴまたはＳＰＥＣＴによるものである、（１６）〜（１８）のいずれかに記載の組成物、（１９）〜（２１）のいずれかに記載のキット、または（２２）に記載の方法；
（２４）（１）ないし（１１）のいずいれかに記載の化合物またはその塩もくは溶媒和物を含む試料中のプリオン蛋白の染色用組成物；
（２５）（１）ないし（１１）のいずいれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須構成成分として含む試料中のプリオン蛋白の染色用キット；
（２６）（１）ないし（１１）のいずいれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、試料中のプリオン蛋白の染色方法；
（２７）該化合物が（２）に記載の化合物である、（２４）に記載の組成物、（２５）に記載のキット、または（２６）に記載の方法；
（２８）生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の体外診断のための、（１）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む組成物；
（２９）生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の体外診断のための、（１）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須構成成分として含むキット；
（３０）被験動物から試料を得て、該試料に（１）ないし（１１）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を接触させることを特徴とする、生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の体外診断方法；
（３１）該化合物がＢＦ−１６８、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２７８からなる群より選択されるものである、（２８）に記載の組成物、（２９）に記載のキット、または（３０）に記載の方法；
（３２）（１）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含有する、生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療用医薬組成物；
（３３）疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される（３２）に記載の医薬組成物；
（３４）（１）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療方法；
（３５）疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される（３４）に記載の方法；
（３６）生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療のための、（１）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用；
（３７）疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される（３６）に記載の使用；
（３８）生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療のための医薬の製造のための本発明化合物の使用；
（３９）疾患が伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病からなる群より選択される（３８）に記載の使用；
（４０）該化合物がＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４１、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５３、ＢＦ−１６８、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４、Ｎ−２３２、Ｎ−２４３、Ｎ−２４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１からなる群より選択されるものである、（３２）または（３３）に記載の組成物、（３４）または（３５）に記載のキット、（３６）または（３７）に記載の方法、あるいは（３８）または（３９）に記載の方法；
（４１）該化合物がＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４からなる群より選択されるものである、（３２）または（３３）に記載の組成物、（３４）または（３５）に記載のキット、（３６）または（３７）に記載の方法、あるいは（３８）または（３９）に記載の方法；
（４２）（１）に記載の式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）の化合物の標識化前駆体；ならびに
（４３）トシレート誘導体であるＢＦ−１６８、ＢＦ−２２４またはＮ−２２７の標識化前駆体
を提供するものである。
【図面の簡単な説明】  図１は本発明化合物（ＢＦ−１２４、Ｎ−２７６、Ｎ−２７７、ＢＦ−２８３、ＢＦ−１６２）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図２は本発明化合物（ＢＦ−１２５、Ｎ−２８２、ＢＦ−１３３、ＢＦ−１４５、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１６５）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図３は本発明化合物（ＢＦ−１６８、ＢＦ−１６９）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図４は本発明化合物（ＢＦ−１２６、ＢＦ−１６６、Ｎ−３９８）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図５は本発明化合物（ＢＦ−１３６）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図６は本発明化合物（ＢＦ−１４２）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図７は本発明化合物（ＢＦ−１５１）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図８は本発明化合物（ＢＦ−１５４）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図９は本発明化合物（Ｎ−３１０、Ｎ−３１３）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図１０は本発明化合物（ＢＦ−２２７）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図１１は本発明化合物（Ｎ−２７７）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図１２は本発明化合物（Ｎ−４０７）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図１３は本発明化合物（Ｎ−４０８、Ｎ−４３８、Ｎ−４４０、Ｎ−４４１、Ｎ−４５４）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図１４は本発明化合物（ＳＡ−２７１）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図１５は本発明化合物（ＢＦ−１７９）によるＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑：図中の矢印）の検出を示す（スケールバーは１００μｍ）。
図１６（ＰｒＰ  ＧＳＳ）はＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の免疫染色を示す。
図１７は本発明化合物（ＢＦ−１２４、Ｎ−２７６、Ｎ−２７７、ＢＦ−２８３、ＢＦ−１６２）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図１８は本発明化合物（ＢＦ−１２５、Ｎ−２８２、ＢＦ−１３３、ＢＦ−１３５）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図１９は本発明化合物（ＢＦ−１４０、ＢＦ−１４５、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２０は本発明化合物（ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１６９、ＢＦ−１７３、ＢＦ−１８０）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２１は本発明化合物（ＢＦ−１２６、ＢＦ−１６６、Ｎ−３９８、Ｎ−４０４、Ｎ−４４２）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２２は本発明化合物（ＢＦ−１３６）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２３は本発明化合物（ＢＦ−１３７、ＢＦ−１３８、ＢＦ−１３９、ＢＦ−１４１、ＢＦ−１４２）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２４は本発明化合物（ＢＦ−１５１、ＢＦ−１６１）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２５は本発明化合物（ＢＦ−１５３、ＳＡ−２７２）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２６は本発明化合物（Ｎ−４１１）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２７は本発明化合物（ＢＦ−１５８、ＢＦ−１７０、Ｎ−３１０、Ｎ−３１３）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２８は本発明化合物（ＢＦ−１８７、ＢＦ−１８９）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図２９は本発明化合物（Ｎ−４０２、Ｎ−４５７、Ｎ−４９１）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図３０は本発明化合物（Ｎ−４０７）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図３１は本発明化合物（Ｎ−４０８、Ｎ−４３８、Ｎ−４３９、Ｎ−４４０、Ｎ−４４１）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図３２は本発明化合物（Ｎ−４５２、Ｎ−４５３、Ｎ−４５４、Ｎ−４５５）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図３３は本発明化合物（Ｎ−４３７、Ｎ−４６３、Ｎ−４６４、Ｎ−４６５、Ｎ−４６７、Ｎ−４６８）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図３４は本発明化合物（Ｎ−４６９、Ｎ−４７１、Ｎ−４７２、Ｎ−４７３、Ｎ−４７５）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図３５は本発明化合物（ＳＡ−２７１）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
図３６は本発明化合物（ＢＦ−１７８、ＢＦ−１７９）による異常型プリオン蛋白持続感染培養細胞ＳｃＮａ２細胞における異常型プリオン蛋白（図中３つの矢印）の産生阻害効果を示す。
発明の詳細な説明
本発明の化合物は一般式（Ｉ）または（ＩＩ）：
2004035522.tif 000010
で示されるものであり、プリオン蛋白に対する特異性が高い。したがって、それらの化合物（その塩もしくは溶媒和物を包含）を、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断、予防および／または治療に使用することができる。また、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物をプリオン蛋白の染色剤として使用することもできる。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は標識されていてもよく、特に、放射性標識された式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物はプリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断に適している。
本発明の診断プローブとして使用される物質は上の一般式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物である。特に断らない限り、本明細書において診断という場合には画像診断を含むものとする。
以下、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の構造および各置換基について説明する。
本明細書において、「炭素数１〜４個のアルキル」という場合、メチル、エチル、プロピル、ブチル、およびそれらの構造異性体を包含するものとする。
「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
ＤはＮＲ’、Ｓ、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、またはＣＨ２である。Ｒ’はＨ、炭素数１〜４個のアルキル、またはフェニルであり、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。好ましくは、ＤはＳ、Ｏ、ＣＨであり、好ましくは、Ｒ’はＨである。
ＥはＮまたはＣＨである。
各Ｒａは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。好ましいＲａは水素、炭素数１〜４個のアルキル、およびハロゲンである。
ＱはＮまたはＣＲｂである。
ＲｂはＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。
好ましいＲｂは水素、および炭素数１〜４個のアルキルである。
ｍは０〜４の整数であり、好ましくは、ｍは０または１である。ｍが１以上の場合、本発明の化合物にはシス、トランス異性体が存在しうるが、いずれであってもかまわない。
Ｒ１およびＲ２は独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。あるいはＲ１およびＲ２は一緒になって、１〜４個のＲ４で置換されていてもよいベンゼン環またはナフタレン環を形成してもよい。好ましいＲ１およびＲ２は水素およびメチルである。Ｒ１およびＲ２が一緒になって置換されていてもよいベンゼン環を形成する場合も好ましい。
Ｒ３はＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、および下記（ａ）〜（ｅ）で示されるいずれかの基からなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。
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ここに各Ｒｘは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、Ｎ＝ＣＨ−アリル、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。
好ましいＲ３はＨ、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２である。好ましいＲｘはＨ、ハロゲン、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２であり、またＲｘは（ａ）〜（ｅ）のいずれかであってもよい。
各Ｒ４は独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、および下記（ｆ）〜（ｌ）で示されるいずれかの基からなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよく、隣接する炭素に結合した２個のＲ４がメチレンジオキシ基を形成してもよく、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。
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ここに各Ｒｙは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。
Ｒ１およびＲ２が一緒になってベンゼン環またはナフタレン環を形成する場合、それらに対する好ましい置換基Ｒ４はＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、置換されていてもよい炭素数１〜４個のアルキルであり、上記（ｆ）〜（ｌ）のいずれかであってもよい。好ましいＲｙはＨ、ハロゲン、ＮＨ２である。Ａは下記（ｉ）〜（ｉｘ）で示されるいずれかの環であり、
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ここに各Ｒｚは独立してＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−ＯＨ、炭素数１〜４個のアルキル−Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、ＮＨ２、ＮＨ（炭素数１〜４個のアルキル）、Ｎ（炭素数１〜４個のアルキル）２、ＮＯ２、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル、フェニル、ＣＯＯＨ、およびＳＯ３Ｈからなる群より選択され、ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい。
好ましい環Ａはベンゼン環およびナフタレン環である。好ましいＲｚはＨ、炭素数１〜４個のアルキル、ハロゲン、ＯＨである。
ＸはＮまたはＣＨである。ＹはＮまたはＣＨである。ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ＋１であり、ｐは０ないし４の整数である。好ましくは、ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２、Ｎ−ＣＨ３である。
式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の塩も本発明に包含される。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物中の窒素原子またはいずれかの官能基とともに塩が形成されてもよい。例えば、化合物中にカルボキシル基またはスルホン酸基が存在するような場合、これと金属との間に塩が形成されてもよい。かかる塩の例としては、リチウム、ナトリウム、カリウムのごときアルカリ金属との塩、マグネシウム、カルシウム、バリウムのごときアルカリ土類金属との塩等が挙げられる。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物が水酸基を含む場合、その水素がナトリウム、カリウム等の金属となっている化合物も、本発明に包含される。さらに、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物と金属塩とで形成される錯体（例えば塩化マグネシウム、塩化鉄のごとき金属塩とで形成される錯体）も本明細書においては式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の塩に含めることとする。対象の体内に適用される組成物またはキットまたは方法に本発明化合物の塩を使用する場合、それは医薬上許容される塩であることが好ましい。また、本発明化合物（Ｉ）はその置換基の種類によっては陰イオンとともにオニウム塩を形成してもよく、かかる陰イオンとしてはハロゲン化物イオン、有機酸イオン、スルホン酸イオン、過塩素酸イオン等が挙げられる。かかるオニウム塩も医薬上許容されるものであることが好ましい。式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の医薬上許容される塩としては、例えば、塩素、臭素、ヨウ素のごときハロゲン化物イオンとの塩、あるいはナトリウム、カリウム、カルシウムのごとき金属との塩などがある。かかる塩は本発明に包含される。さらに本発明化合物は塩化鉄、塩化コバルトのごとき金属塩とで錯体を形成する場合もあり、かかる錯体も本発明に包含される。また、式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物の溶媒和物も本発明に包含される。溶媒和物としては、水和物、メタノール和物、エタノール和物、アンモニア和物等が挙げられる。対象の体内に適用される組成物またはキットまたは方法に本発明化合物の溶媒和物を使用する場合、それは医薬上許容される溶媒和物であることが好ましい。医薬上許容される溶媒和物としては、水和物、エタノール和物等が挙げられる。
本明細書において、「本発明化合物」、「本発明の化合物」という場合には式（Ｉ）または式（ＩＩ）で示される化合物をいい、それらは未標識であっても標識されていてもよい。また、存在する場合にはそれらの塩および溶媒和物を包含するものとする。例えば、「Ｎ−４３７」という場合、未標識または標識された化合物Ｎ−４３７を包含し、さらにその塩（例えば、臭化水素酸塩）または溶媒和物（存在する場合には）を包含するものとする。
本発明の化合物の例を表１に示した。上述のごとく、これらの化合物はプリオン蛋白に対する特異性が高いので、プリオン蛋白蓄積性疾患の診断プローブ、プリオン蛋白の特異的染色剤、あるいはプリオン蛋白蓄積性疾患の治療薬等としての用途がある。
プリオン蛋白の染色の鮮明さの点からみると、好ましい本発明の化合物としては、ＢＦ−１２４、ＢＦ−１２５、ＢＦ−１２６、ＢＦ−１３３、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４２、ＢＦ−１４３、ＢＦ−１４７、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５１、ＢＦ−１５４、ＢＦ−１６０、ＢＦ−１６２、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１７２、ＢＦ−１８０、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２５、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２２７、Ｎ−２２８、Ｎ−２７６、Ｎ−２８２、Ｎ−２８３、Ｎ−４０７などが挙げられる（実施例３、図１〜図４参照）
抗プリオン作用の点からみると（実施例４、図１７〜３６参照）、好ましい本発明の化合物としては、ＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４１、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５３、ＢＦ−１６８、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４、Ｎ−２３２、Ｎ−２４３、Ｎ−２４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１などが挙げられる。さらに、脳移行性、急性毒性等のデータを加えて勘案すると（実施例のセクション参照）、本発明の抗プリオン作用化合物のなかでも、ＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４などがさらに好ましい。これらの化合物は抗プリオン作用が高いことから、プリオン蛋白に対する特異性が高いと考えられるので、上記のようなプリオン蛋白の染色にも有用と考えられる。このような化合物の例としては、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１６８が挙げられる（実施例３、図１〜図１５、実施例４、表４、図１７〜３６参照）。
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本発明においては、プリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体において、インビボで特異的に異常プリオン蛋白に結合する、標識された式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブとして使用する。あとで、実施例にて示すように、本発明化合物により生体内の異常プリオン蛋白が鮮明に染色される。本明細書における「プリオン蛋白が蓄積する疾患」とは、プリオン蛋白の脳内蓄積を主徴とする疾病をいい、プリオン蛋白をマーカーとして診断可能な疾病としては、例えば、ヒトではクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖ−ＣＪＤ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、クルー、ヒト以外の動物ではヒツジスクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、伝達性ミンク脳症、ネコ海綿状脳症などがあげられる。本明細書においてこれらの疾病をまとめて、プリオン病ということがある。
上述のごとく、最初の臨床症状が現れるかなり前に、既にプリオン病に特徴的な神経変性特有の神経変性が始まっていることが判ってきた。プリオン病が発症するかなり以前にプリオン蛋白の蓄積が始まると考えられる。したがって、プリオン蛋白を早期に検出することにより、プリオン病の早期発見・診断が可能になる。
よって、式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む本発明のプリオン病診断用組成物は、その早期発見・診断に有用である。
さらに本発明は、被験動物から試料を得て、これに本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を接触させることを特徴とする、生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の検出方法にも関する。被験動物は哺乳動物、例えばウシ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、サル等が挙げられ、ヒトも被験動物に包含される。被験動物から得られる生体試料はいずれの種類のものであってもよく、生検試料、剖検試料を問わない。試料としては脳試料および脊髄試料が一般的であるが、尿や血液等の体液であってもよい。得られた生体試料を本発明の化合物と接触させ、次いで、試料中のプリオン蛋白と本発明化合物との結合を、適当な手段、例えば顕微鏡観察により検出、観察あるいは同定するのが一般的である。試料の種類、試料の取得方法、試料と本発明の化合物との接触方法等は、当業者が目的に応じて容易に選択することができるものである。あるいは化合物が標識されている場合には適当な手段、例えば、蛍光計、酵素反応の測定、シンチレーションカウンター等により同定を行なうこともできる。標識には、蛍光物質、アフィニティー物質、酵素基質、放射性核種等があり、これらの標識、化合物への結合方法、ならびに検出手段・方法は当該分野においてよく知られている。
したがって、本発明化合物はプリオン病の体外診断薬として使用することができる。本発明化合物は異常プリオン蛋白に結合することから、ヒトおよび動物のプリオン病の染色剤および体外診断薬としても応用できる。これまで免疫染色およびウェスタン  ブロットで異常プリオン蛋白を確認することによって確定診断してきたプリオン病を、本発明化合物を用いることにより、より容易に診断することができる。
例えば、これまでの技術ではウシ海綿状脳症の異常プリオン蛋白を確認するには同プリオン蛋白を１次検査および１次検査の再検査としてエライザ法、２次検査の確認検査の１つとしてウエスタン  ブロット法、２次検査のもう１つの確認検査として組織切片の免疫組織学的検査により確認しているが、脳切片または脳ホモジネートを、本発明化合物を用いて染色または定量することにより、より容易かつ短時間で異常プリオン蛋白を確認し、プリオン病を診断することができる。またリンパ組織、尿、血液中のプリオン蛋白を、本発明化合物を用いて確認することにより、プリオン病を診断することができる。さらにウシ由来食品、ウシ由来医療用製剤（例えばゼラチンカプセル）、ウシ由来化粧品（例えばコラーゲン）等中の異常プリオン蛋白を、本発明化合物を用いて確認することができる。
したがって、本発明は、被験動物から得た試料あるいはプリオン病（例えば、ウシ海綿状脳症）に罹病している疑いのある動物由来の製品に本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を接触させることを特徴とする、生体内にプリオン蛋白が蓄積する疾患を有する個体の体外診断方法、ならびにかかる体外診断方法に使用される、本発明の化合物を含む体外診断用組成物および本発明の化合物を必須構成成分として含む体外診断用キットを提供する。これらの場合、本発明化合物は標識されていなくても、あるいは標識されていてもよく、試料を対象から取り出してから染色するので、塩もしくは溶媒和物は医薬上許容されるものでなくてもよい。かかる体外診断に使用するのに好ましい本発明化合物としては、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２７８などが挙げられる。
さらに本発明は、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒物を用いることを特徴とする、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断方法に関する。該方法は、対象から試料（例えば、脳試料）を取得し、これに本発明の化合物を接触させて、試料中のプリオン蛋白と本発明の化合物との結合を適当な手段（例えば、顕微鏡観察）により検出することにより行なわれる。さらに本発明は、放射性標識された本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断方法にも関する。本発明の化合物を対象体内に投与し、一定時間後に上述のごとくＰＥＴ等の装置にて非侵襲的に画像を得てもよい。これらの方法における試料の種類、取得方法、本発明の化合物との接触方法、プリオン蛋白と本発明の化合物との結合の検出方法等、あるいは本発明化合物の対象への投与方法、投与量、画像診断装置および方法等は当業者が適宜選択して本発明を実施することができる。
プリオン蛋白が蓄積する疾患のインビボでの診断においては本発明化合物を標識したものを診断プローブとして使用するのが一般的である。プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断には通常、放射性核種で標識したプローブを使用する。当該分野においてよく知られた方法により種々の放射性核種で本発明化合物を標識することができる。例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１３１Ｉ等は以前から使用されている放射性核種であり、インビトロでの利用例が多い。画像診断プローブおよびその検出手段に求められる一般的要件としては、インビボで診断できること、患者へのダメージが少ないこと（特に非侵襲的であること）、検出感度が高いこと、半減期が適当な長さであること（標識プローブ調製時間、診断時間が適当であること）等が挙げられる。そこで、最近では、高い検出感度と物質透過性を示すγ線を利用した陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）またはγ線放出核種によるコンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）が用いられるようになってきた。このうち、ＰＥＴは、陽電子放出核種から正反対の方向に放射される２本のγ線を１対の検出器により同時計数法により検出するので、解像力や定量性に優れた情報が得られるので好ましい。ＳＰＥＣＴ用には９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ等のγ線放出核種で本発明化合物を標識することができる。９９ｍＴｃおよび１２３ＩがＳＰＥＣによく用いられている。ＰＥＴ用には１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６２Ｃｕ、６８Ｇａ、７６Ｂｒ等の陽電子放出核種で本発明化合物を標識することができる。陽電子放出核種のなかでも、半減期が適当であること、標識しやすさ等の点から１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆが好ましく、１８Ｆが特に好ましい。陽電子放出核種、γ線放出核種等の放射線放出核種での本発明化合物の標識位置は、式（Ｉ）または（ＩＩ）中のいずれの位置であってもよい。例えば、本発明化合物中のベンゼン環上の水素が、１８Ｆのごとき陽電子放出核種で置換されていてもよく、本発明化合物の骨格を構成する炭素原子が１１Ｃであってもよい。また例えば、本発明化合物を１８Ｆで標識する場合、側鎖のいずれかに１８Ｆが含まれていてもよく、あるいは化合物中の環上の置換基が１８Ｆ自体であってもよい。例えば、オキサゾリン環のベンゼン環部分の置換基Ｒ１が１８Ｆであってもよい。いずれの位置に標識を結合させるかは当業者が適宜決定でき、そのような標識化合物を容易に合成することができる。かかる標識された式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物も本発明に包含される。
また、式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される化合物の標識体を得るための前駆体（本明細書において「標識化前駆体」という）も本発明に包含される。標識化前駆体は、標識化すべき化合物の構造、使用標識等により種々のものある。例えば、１８Ｆにて標識される好ましい本発明化合物としてはＢＦ−１６８、ＢＦ−２２４およびＮ−２２７等が挙げられ、その場合の標識化前駆体はトシレート誘導体が好ましい。ＢＦ−１６８、ＢＦ−２２４およびＮ−２２７の好ましいトシレート誘導体としてはＢＦ−１６７、ＢＦ−２２３およびＢＦ−２２６が挙げられる（表１参照）。
一般的には、これらの核種はサイクロトロンまたはジェネレーターと呼ばれる装置により産生される。当業者は、産生核種に応じた産生方法および装置が選択可能である。そのようにして産生された核種を用いて本発明化合物を標識することができる。
これらの放射性核種で標識された標識化合物の製造方法は当該分野においてよく知られている。代表的な方法としては、化学合成法、同位体交換法および生合成法がある。化学合成法は従来から広く用いられており、放射性の出発物質を用いること以外は通常の化学合成法と本質的に変わらない。この方法により種々の核種が化合物に導入されている。同位体交換法は、簡単な構造の化合物中の３Ｈ、３５Ｓ、１２５Ｉ等を複雑な構造の化合物中に移して、これらの核種で標識された複雑な構造の化合物を得る方法である。生合成法は１４Ｃ、３５Ｓ等で標識した化合物を微生物等の細胞に与えてこれらの核種が導入された代謝産物を得る方法である。
標識位置については、通常の合成と同様に合成スキームを目的に応じて設計することにより、所望位置に標識を導入することができる。かかる設計は当業者によく知られている。
また、例えば、比較的半減期の短い１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ等の陽電子放出核種を用いる場合、病院等の施設内の設置された（超）小型サイクロトロンから所望核種を得て、上記の方法により所望化合物を所望位置で標識して、即座に診断、検査、治療等に使用することも可能となっている。
これらの当業者に公知の方法により、本発明化合物の所望位置に所望核種を導入して標識することができる。
画像診断の際の本発明標識化合物の対象への投与は局所的であってもよく、あるいは全身的であってもよい。投与経路としては、皮内、腹腔内、静脈、動脈、または脊髄液への注射または輸液等があるが、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因により選択できる。本発明プローブを投与して、プリオン蛋白への結合および崩壊のための十分な時間経過後、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ等の手段で検査部位を調べることができる。これらの手段は、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因に応じて適宜選択できる。
放射性核種で標識された本発明化合物の用量は、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の年齢、身体的状態、性別、疾病の程度、検査部位等により様々である。特に、対象の被曝量については十分に注意する必要がある。例えば、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆのごとき陽電子放出核種により標識された本発明化合物の放射能量は、通常には、３．７メガベクレルないし３．７ギガベクレル、好ましくは、１８メガベクレルないし７４０メガベクレルの範囲である。
また本発明は、本発明化合物を含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物を提供する。本発明組成物は、本発明化合物および医薬上許容される担体を含む。組成物中の本発明化合物は標識されていることが好ましい。上記のごとき標識法は様々であるが、インビボでの画像診断用途には放射性核種（特に１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆのごとき陽電子放出核種）で標識されていることが望ましい。本発明組成物の形態は、その目的からすれば注射あるいは輸液可能な形態であることが好ましい。したがって、医薬上許容される担体は液体であるものが好ましく、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、蒸留水等のごとき水性溶媒、あるいはポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、プロピレングリコール等のごとき非水性溶媒があるが、これらに限らない。担体と本発明化合物との配合比率は、適用部位、検出手段等に応じて適宜選択できるが、通常には１０万対１ないし２対１の比率であり、好ましくは１万対１ないし１０対１の比率である。また、本発明組成物はさらに公知の抗菌剤（例えば、抗生剤等）、局所麻酔剤（例えば、塩酸プロカイン、塩酸ジブカイン等）、バッファー（例えば、トリス−塩酸バッファー、ヘペスバッファー等）、浸透圧調節剤（例えば、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム等）等を含有していてもよい。
さらに本発明は、本発明化合物を必須の構成成分として含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断用キットを提供する。通常には、キットは、本発明化合物、それを溶解する溶剤、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分を別個に、あるいはいくつかを一緒にしてそれぞれの容器に入れたものをひとまとめにしたものである。本発明化合物は未標識であっても、標識されていてもよい。未標識の場合、上で説明したような通常の方法により、使用前に本発明化合物を標識することができる。また本発明化合物は凍結乾燥粉末等の固形として提供してもよく、あるいは適当な溶媒中に溶解して提供してもよい。溶剤としては上述の本発明組成物に用いる担体と同様のものであってよい。また、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分も上述の本発明組成物に使用するものと同様のものであってよい。容器は種々のものを適宜選択できるが、本発明化合物への標識導入操作に適した形状とすることもでき、化合物の性質に応じて遮光性の材質のものとしてもよく、あるいは患者への投与に便利なようにバイアル、または注射器等の形状とすることもできる。また、キットは診断に必要な器具類、例えば注射器、輸液セット、あるいは例えば陽電子放出核種にて標識された本発明化合物の場合にはＰＥＴ装置に使用する器具類等を適宜含んでいてもよい。通常、キットには説明書を添付する。
上述のようなＰＥＴやＳＰＥＣＴのプローブとして使用するのに好ましい本発明化合物としては、ＢＦ−１２４、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２７６、Ｎ−２７７、Ｎ−３１３などの標識体、一般的には放射性標識体、好ましくはγ線放出核種（例えば、９９ｍＴｃ、１２３Ｉ）または陽電子放出核種（例えば、１８Ｆ）で標識された上記化合物が挙げられる（化合物の標識法および標識位置等については上で説明したとおりである）。
さらに本発明化合物は、プリオン蛋白に特異的に結合する性質を有しているので、脳試料のごとき試料中に含まれるプリオン蛋白の特異的染色剤としても使用することができる。したがって、本発明は、本発明化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含有する、試料中のプリオン蛋白を特異的に染色するための組成物を提供する。さらに本発明は、本発明化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須構成成分として含有する、試料中のプリオン蛋白を特異的に染色するためのキットを提供する。これらの場合、本発明化合物は標識されていなくても、あるいは標識されていてもよく、試料を対象から取り出してから染色するので、塩もしくは溶媒和物は医薬上許容されるものでなくてもよい。また、キットには取扱説明書を添付するのが通常である。本発明は、本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、試料中のプリオン蛋白の特異的染色方法にも関する。これらの本発明の染色用組成物、キット、あるいは染色方法を用いて試料中のプリオン蛋白を染色する際の条件は、当業者が適宜選択することができ、容易に染色を行なうことができるものである。かかる染色剤として使用される好ましい本発明化合物としては、ＢＦ−１２４、ＢＦ−１２５、ＢＦ−１２６、ＢＦ−１３３、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４２、ＢＦ−１４３、ＢＦ−１４７、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５１、ＢＦ−１５４、ＢＦ−１６０、ＢＦ−１６２、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１７２、ＢＦ−１８０、ＢＦ−１９１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−１９８、ＢＦ−２００、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２５、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２２８、Ｎ−２２７、Ｎ−２２８、Ｎ−２７６、Ｎ−２８２、Ｎ−２８３、Ｎ−４０７などが挙げられる。
さらに上述のごとく、本発明化合物は異常プリオン蛋白に特異的であることから、異常プリオン蛋白の細胞毒性を抑制し、あるいは細胞による異常プリオン産生を抑制するものと考えられる。
したがって、本発明は、本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含有する、プリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患、例えば、ヒトではクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病（ＧＳＳ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖ−ＣＪＤ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）、クルー、ヒト以外の動物ではヒツジスクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、伝達性ミンク脳症、ネコ海綿状脳症等のプリオン病の予防および／または治療用医薬組成物に関する。
かかる医薬組成物の処方形態は様々であるが、液体処方が好ましく、特に注射用処方が好ましい。かかる注射用処方を脳内に直接注入することもでき、あるいは、後で実施例にて示すように本発明化合物は血液／脳関門透過性が高いので、上記医薬組成物を静脈注射または静脈点滴用に処方して投与することもできる。かかる液体処方の調製は当該分野にて公知の方法で行うことができる。溶液の調製は、本発明化合物を適当な担体、注射用水、生理食塩水、リンゲル液等に溶解し、フィルター等で滅菌し、その後、適当な容器、例えば、バイアルまたはアンプルに充填する。また、溶液を凍結乾燥させ、使用時に適当な担体で再度溶液を調製することも可能である。本発明化合物を例えばエチレンオキサイドにさらすことにより滅菌し、次いで、滅菌済み液体担体懸濁することにより懸濁液の調製を行うことができる。かかる処方の調製法および他の調製法は当該分野で公知である。
本発明化合物の投与量は、患者の病状、性別、年齢、体重等に左右されるが、一般的には、体重７０ｋｇの成人の場合、１日あたり０．１ｍｇないし１ｇ、好ましくは１ｍｇないし１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇないし５０ｍｇである。一定期間かかる投与量で処置を行い、結果により投与量を増減することができる。
さらに本発明は、本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療方法、ならびにかかる疾病の治療および／または予防のための本発明化合物の使用にも関する。かかる疾病としては上記のものが挙げられ、本発明の方法にて治療および／または予防される好ましい疾病としては伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病が挙げられる。
かかる治療および／または予防方法における本発明化合物の投与量、投与方法などは、プリオン蛋白が蓄積する疾患の治療および／または予防用医薬組成物に関して上で述べたとおりである。かかる治療および／または予防に用いる本発明化合物は標識されていなくてもよいが、例えば、治療すべき部位へのデリバリーの確認を容易化するために放射性標識されていてもよい。また、かかる治療および／または予防の対象はプリオン蛋白に汚染あるいは感染されうる動物であり、特にウシおよびヒトが挙げられる。
さらに本発明は、生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患、特に伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病の予防および／または治療のための、本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用、ならびに生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患、特に伝達性海綿状脳症あるいはプリオン病の予防および／または治療のための医薬の製造のための本発明化合物の使用にも関する。
上記のような生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の治療および／または予防に好ましい本発明化合物としては、ＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４１、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５３、ＢＦ−１６８、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４、Ｎ−２３２、Ｎ−２４３、Ｎ−２４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１などが挙げられる。抗プリオン作用、ＴＣおよび安全濃度域あるいは変異原性等を勘案すると、上記のような生体内のプリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の治療および／または予防に関し、さらに好ましい本発明化合物は、ＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４３７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２３１、ＢＦ−１９２、ＢＦ−１９３、ＢＦ−１９８、ＢＦ−１９９、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２０３、ＢＦ−２０４、ＢＦ−２０６、ＢＦ−２０８、ＢＦ−２１１、ＢＦ−２１３、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２３、Ｎ−２２４などである。
【実施例】  以下に実施例を示して本発明をさらに具体的かつ詳細に説明する。しかしながら、本発明はこれらの実施例に限定されるものと解してはならない。
実施例１：本発明化合物の脳内移行性
マウスに本発明化合物を静脈内投与し、インビボにおける脳移行性を測定した。試験は下記手順によった。
（１）マウスは３０−４０ｇ（７週齢、ｎ＝３）のＳｌｃ：ＩＣＲ（日本ＳＬＣ）を用いた。
（２）被験化合物は１Ｎ  ＨＣｌ、ポリエチレングリコール４００、ＤＭＳＯの混合液で溶解、ＤＭＳＯまたはエチルアルコールで八日以後、精製水にて希釈して、尾静脈より注入し、投与より２分後にエーテル麻酔下で腹部大動脈からヘパリン処理注射筒を用いての採血、脳の採材をおこなった。
（３）血液は採血後４℃、１４，０００ｒｐｍで１０分間遠心し上清を血漿として−８０℃で保存した。脳（小脳を含む）は採材後−８０℃で保存した。
（４）使用時には血漿は溶解後、精製水で希釈した後、コンディショニングしたＣ１８固相抽出カートリッジ（ｂｏｎｄ  ｅｌｕｔｅ  Ｃ１８、２００ｍｇ、Ｖａｒｉａｎ）に添加しメチルアルコールにて溶出した。または溶解後ジエチルエーテル／シクロヘキサン混合液を加え震盪した後、遠心し油層を分注した。
（５）脳は使用時には凍結したまま湿重量を測定し生理食塩水を加え、ホモジェナイズを行った。ホモジェネートを１０分間遠心し、上清をコンディショニングしたＣ１８固相抽出カートリッジに添加し、メチルアルコールにて溶出を行った。または湿重量を測定後ジエチルエーテル／シクロヘキサン混合液を加えホモジネートし震盪した後、遠心し油層を分注した。
（６）高速液体クロマトグラフィを用い、吸光および蛍光を検出した。
（７）血漿、脳それぞれについて、投与量に対する血漿もしくは脳内の被験化合物含有量（％ＩＤ（注射量）／ｍｌまたはｇ）を求めた。
（８）被験化合物は高速液体クロマトグラフィを用い、吸光および蛍光（を検出した。
（９）血漿、脳それぞれについて、投与量に対する血漿もしくは脳内の被験化合物含有量（％ＩＤ（注射量）／ｍｌまたはｇ）を求めた。
表２にマウスにおける被験化合物静脈内投与２分後の脳移行を示した。
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試験した本発明化合物の投与２分後の脳内含有量は、いずれも１％ＩＤ／ｇ以上であった。中枢神経系を対象としたＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ用化合物の脳移行性は、０．５％ＩＤ／ｇ以上あれば十分と考えられている。その意味でこれらの本発明化合物は極めての脳移行性の高い化合物である。
実施例２：本発明化合物の急性毒性
本発明化合物の急性毒性をマウスを用いて静脈内投与で検討した。Ｃｒｊ：ＣＤｌ系雄性マウスを一群４匹として使用した（各群の平均体重は３１−３２ｇであった）。各化合物はＨＣｌ、ポリエチレングリコール４００、蒸留水の混合液、またはＤＭＳＯに溶解後、蒸留水にて希釈し、尾静脈を介して投与し、以後７日まで観察した。本発明化合物について上記方法により行った急性毒性試験の結果を表３に示す。
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試験したほとんどの本発明化合物の静脈内投与時の最大耐量はほとんど１０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上であった。一般にヒトでのＰＥＴ撮影にはポジトロン標識および未標識化合物の総投与量として、１×１０−１２から１×１０−５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与が用いられ、多くの場合、１×１０−１０から１×１０−７ｍｇ／ｋｇの静脈内投与が用いられる。本発明化合物で得られた値をＰＥＴ撮影時に必要な総化合物量と比較してみると、両者の間には少なくとも１０万倍以上の開きがあることから、これらの化合物のはＰＥＴ撮影用のプローブとしては極めて安全性の高い化合物と考えられる。
実施例３：剖検脳切片における異常プリオン蛋白の描出
病理学的に確定診断されたゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）および弧発性クロイツフェルト・ヤコブ病（ｓＣＪＤ）患者の剖検脳ホルマリン固定切片（７μｍ厚）を脱パラフィン・脱脂処理し、５０％エタノールに溶解した被験化合物溶液（１０−２００μＭ）で３０分間染色した。５０％エタノールにて分別を行った後に水洗し、コンフォーカル・レイザー顕微鏡（ライカ社、ＤＭＲＸＡ）にてＦＩＴＣフィルターあるいはＵＶフィルターを用いて切片上の蛍光シグナルを観察した。組織切片中の異常プリオン蛋白の検出は、Ｄｏｈ−ｕｒａらの方法（ジャーナル  オブ  ニューロパソロジイ  アンド  エクスペリメンタル  ニューロロジイ、５９巻、７７４−７８５ページ、２０００年）に従い、脱パラフィン・脱脂処理した組織切片を希塩酸（１−２ｍＭ）中でオートクレーブ１０分間処理を行い、抗ヒトプリオン蛋白抗体３Ｆ４（Ｓｅｎｅｔｅｃ社、５００倍希釈）を一次抗体、ホースラディシュペルオキシダーゼ標識抗マウスＩｇＧ抗体を２次抗体として免疫反応を行い、呈色反応はディアミノベンチジンを用いた。
本発明化合物の例としてＢＦ−１２４、Ｎ−２７６、Ｎ−２２７、ＢＦ−２８３、ＢＦ−１６２（以上図１）、ＢＦ−１２５、Ｎ−２８２、ＢＦ−１３３、ＢＦ−１４５、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１６５（以上図２）、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１６９（以上図３）、ＢＦ−１２６、ＢＦ−１６６、Ｎ−３９８（以上図４）、ＢＦ−１３６（図５）、ＢＦ−１４２（図６）、ＢＦ−１５１（図７）、ＢＦ−１５４（図８）、Ｎ−３１０、Ｎ−３１３（以上図９）、ＢＦ−２２７（図１０）、Ｎ−２２７（図１１）、Ｎ−４０７（図１２）、Ｎ−４０８、Ｎ−４３８、Ｎ−４４０、Ｎ−４４１、Ｎ−４５４（以上図１３）、ＳＡ−２７１（図１４）、ＢＦ−１７９（図１５）を用いて試験した。いずれの化合物を用いてもＧＳＳ患者脳において、小脳皮質を中心に斑状の蛍光シグナルが見られた。これらの斑状構造物は、連続する切片におけるプリオン蛋白の免疫染色で確認された異常プリオン蛋白の斑状沈着物（クルー斑）に一致していた。図１６にはＧＳＳ患者脳切片における異常型プリオン蛋白の免疫染色を示す。
いずれの化合物も特異的にプリオン蛋白アミロイド斑が描出され、非特異的な染色像（例えば血管や結合織）は認められなかった（図１〜図１５）。このように、本発明化合物は試料中のプリオン蛋白の描出性に優れ、プリオン蛋白に特異的な染色剤として使用できることがわかった。
実施例４：異常プリオン持続培養細胞モデルにおける抗プリオン作用の検討
ヒツジプリオン病であるスクレイピーの感染因子が持続感染したマウス神経芽細胞腫細胞（ＳｃＮ２ａ）（Ｒａｃｅら、ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、６２巻、２８４５−２８４９、１９９８年）を使用して、被験化合物（表４に掲載）の異常（蛋白分解酵素抵抗性）プリオン蛋白の産生阻害効果をＤｏｈ−ｕｒａらの方法（ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、７４巻、４８９４−４８９７、２０００年）に従い検討した。細胞（培養フラスコにコンフルエント状態の細胞数の十分の一の細胞数）を継代する際に培養液（１０％牛胎児血清加ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ社））中に１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した被験化合物溶液を種々の濃度（１ｎＭ−１μＭ）で加えた。ＤＭＳＯ単独を培地中に加えたものをコントロールとした。４日後にコントロールの細胞がコンフルエントとなった状態で、化合物投与群の細胞増殖障害の有無を細胞数計測により評価した後に細胞をリン酸バッファーで洗い、溶解液（０．５％デオキシコール酸、０．５％Ｎｏｎｉｄａｔｅ  Ｐ４０、リン酸バッファー）で細胞を溶解した。細胞溶解液を軽遠心して核酸成分を除き、上清にプロテイナーゼＫ（最終濃度１０μｇ／ｍｌ）を加え，３７℃３０分間反応させた。次にセリンプロテアーゼ阻害剤ＰＭＳＦ（最終濃度１０μｇ／ｍｌ，４℃）を加えて反応を止め、反応液を超遠心（３７１，０００ｇ、３０分、室温）した。その沈渣を１×ＳＤＳサンプルバッファーに懸濁し熱変性後に１５％Ｔｒｉｓ−グリシン−ＳＤＳポリアクリルアミドゲルで電気泳動した。泳動蛋白はＰＶＤＦメンブレンに転写し、抗プリオン蛋白抗体（ＰｒＰ２Ｂ（プリオン蛋白アミノ酸残基８９−１０３のペプチドに対するウサギ・ポリクローナル抗体）、５０００倍希釈）を一次抗体、アルカリフォスファターゼ標識抗ウサギＩｇＧ抗体を二次抗体としたウェスタンブロット法を行い、ＣＤＰ−Ｓｔａｒ反応液（アマーシャム社）にてシグナルを可視化した。かかるブロッティングによる試験には、本発明化合物ＢＦ−１２４、Ｎ−２７６、Ｎ−２７７、ＢＦ−２８３、ＢＦ−１６２（以上図１７）、ＢＦ−１２５、Ｎ−２８２、ＢＦ−１３５（以上図１８）、ＢＦ−１４０、ＢＦ−１４５、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８（以上図１９）、ＢＦ−１６５、ＢＦ−１６８、ＢＦ−１６９、ＢＦ−１７３、ＢＦ−１８０（以上図２０）、ＢＦ−１２６、ＢＦ−１６６、Ｎ−３９８、Ｎ−４０４、Ｎ−４４２（以上図２１）、ＢＦ−１３６（図２２）、ＢＦ−１３７、ＢＦ−１３８、ＢＦ−１３９、ＢＦ−１４１、ＢＦ−１４２（以上図２３）、ＢＦ−１５１、ＢＦ−１６１（以上図２４）、ＢＦ−１５３、ＳＡ−２７２（以上図２５）、Ｎ−４１１（図２６）、ＢＦ−１５８、ＢＦ−１７０、Ｎ−３１０、Ｎ−３１３（以上図２７）、ＢＦ−１８７、ＢＦ−１８９（図２８）、Ｎ−４０２、Ｎ−４５７、Ｎ−４９１（以上図２９）、Ｎ−４０７（図３０）、Ｎ−４０８、Ｎ−４３８、Ｎ−４３９、Ｎ−４４０、Ｎ−４４１（以上図３１）、Ｎ−４５２、Ｎ−４５３、Ｎ−４５４、Ｎ−４５５（以上図３２）、Ｎ−４３７、Ｎ−４６３、Ｎ−４６４、Ｎ−４６５、Ｎ−４６７、Ｎ−４６８（以上図３３）、Ｎ−４６９、Ｎ−４７１、Ｎ−４７���、Ｎ−４７３、Ｎ−４７５（以上図３４）、ＡＳ−２７１（図３５）、ＢＦ−１７８、ＢＦ−１７９（以上図３６）を用いた。
いずれの化合物においてもＳｃＮ２ａにおける異常プリオン蛋白の産生阻害効果を認めた（表４、図５〜８）。異常プリオン蛋白産生を５０％に抑える化合物濃度（ＩＣ５０（５０％阻害濃度））は０．８〜１０００ｎＭであり、また細胞増殖を障害する濃度（ＴＣ；毒性濃度）はほとんどの化合物において１０〜１００μＭであった。また、被験化合物の安全濃度域（ＴＣ／ＩＣ５０）は１００から１０００００の間と考えられた（表４）。
なかでも、ＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１３６、ＢＦ−１４１、ＢＦ−１４６、ＢＦ−１４８、ＢＦ−１５０、ＢＦ−１５３、ＢＦ−１６８、Ｎ−２２０、Ｎ−２２１、Ｎ−２２４、Ｎ−２３２、Ｎ−２４３、Ｎ−２４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７はＩＣ５０が小さく、以上プリオン蛋白産生阻害効果が大きいことがわかった。このうちＢＦ−１３０、ＢＦ−１３５、ＢＦ−１４６、Ｎ−４０７、Ｎ−４４１、Ｎ−４５３、Ｎ−４５７はＴＣが高く、したがって安全濃度域も高く、優れた効果を有する化合物であることがわかった。
一方、キナクリンの安全濃度域は５であった（Ｄｏｈ−ｕｒａら、ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、７４巻、４８９４−４８９７、２０００年より引用）。
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以上の実施例に示したように、本発明化合物が斑状の異常プリオン蛋白沈着を容易に描出し、感染細胞で病原因子である異常プリオン蛋白の産生を阻害することが明かとなった。この結果は、これらの化合物がプリオン病患者において異常プリオン蛋白を描出するためのプリオン・バイオイメージング・プローブに応用できるだけでなく、プリオン病の治療薬や予防薬として応用できる可能性があることを示している。
プリオン病の標的臓器は中枢神経系であり、感染因子プリオンすなわち異常プリオン蛋白は中枢神経系内に蓄積して神経変性をきたす。プリオン病の確定診断には脳内に沈着した異常プリオン蛋白を証明することであるが、生存中は脳外科手術による脳組織の生検を行わない限り診断を確定することは出来ない。また、動物実験では発症以前の段階から既に異常プリオン蛋白の脳内蓄積が始まっており、病気が進行するに従ってその沈着量が増加することが判明している（Ｄｏｈ−ｕｒａら、ジャーナル  オブ  ジェネティック  ウイロロジイ、８０巻、１５５１−１５５６、１９９９年）。組織切片上でアミロイドである異常プリオン蛋白を描出する試薬としてはコンゴーレッドやチオフラビンなどが知られているが、今回検討した化合物はいずれもこれらの試薬よりも、より高感度かつ特異的に異常プリオン蛋白の斑状沈着物を描出した。したがって、脳移行性が高いこれらの化合物を放射性同位元素で標識し、プリオン病が疑われる患者の末梢より投与することにより、ＰＥＴやＳＰＥＣＴといった核医学的方法にて脳内に沈着した異常プリオン蛋白を描出し、プリオン病の早期診断や病気の進行状況把握に利用できる。
一方、プリオン病の感染因子プリオンの増殖を阻害する化合物は予防薬・治療薬として期待される。プリオンの増殖とは、異常プリオン蛋白の産生であることから、この産生を阻害・抑制する化合物がプリオン病治療薬である。本発明化合物は異常プリオン蛋白の産生を阻害しており、それらの安全濃度域も１，０００から１００，０００の間と推測された。
これまで、異常プリオン蛋白産生阻害剤として有効であることが報告されている化合物にはコンゴーレッドや硫酸多糖体（Ｃａｕｇｈｅｙ  ａｎｄ  Ｒｏｙｍｏｎｄ、ジャーナル  オブ  ニューロケミストリイ、５９巻、７６８−７７１、１９９２年、Ｃａｕｇｈｅｙ  ａｎｄ  Ｒｏｙｍｏｎｄ、ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、６７巻、６４３−６５０、１９９３年）、環状テトラピロール（ポルフィリン化合物やフタロシアニン化合物）（Ｃａｕｇｈｅｙら、プロシーディングス  オブ  ザ  ナショナル  アカデミイ  オブ  サイエンセス  ＵＳＡ、９５巻、１２１１７−１２１２２、１９９８年）、分枝ポリアミン（ポリアミドアミンやポリプロピレンイミンデンドリマー）（Ｓｕｐａｔｔａｐｏｎｅら、ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、７５巻、３４５３−３４６１、２００１年）、キナクリンやクロロキンなどのリソゾーム蓄積性薬剤やＥ−６４ｄシステインプロテアーゼ阻害剤（Ｄｏｈ−ｕｒａら、ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、７４巻、４８９４−４８９７、２０００年）などがあげられる。これらの化合物は脳移行性に問題があり、また脳移行性に優れていてもその安全濃度域が極めて狭く実用化には向かないものが大半である。例えば、上述の化合物はキナクリンを除いて脳移行性は極めて低い。また最近、話題を集めているキナクリンは安全濃度域が極めて狭い（１０以下）ことが報告されている（Ｄｏｈ−ｕｒａら、ジャーナル  オブ  ウイロロジイ、７４巻、４８９４−４８９７、２０００年）。これらの従来の薬剤とは異なり、本発明の化合物は異常プリオン蛋白産生阻害剤として有効である上に、脳移行性が極めて高く、安全性も極めて高い。
次に本発明化合物の体外診断薬としての利用可能性について述べる。本発明化合物は異常プリオン蛋白に結合することから、ヒトおよび動物のプリオン病の染色剤および体外診断薬としても応用できる。エライザ法、ウエスタン  ブロット、免疫染色で異常プリオン蛋白を確認することによって確定診断してきたプリオン病を、本発明化合物を用いることにより、より容易に診断することができる。
例えば、これまでの技術ではウシ海綿状脳症の異常プリオン蛋白を確認するには同プリオン蛋白をエライザ法、ウエスタン  ブロット法、または免疫染色により確認しているが、脳切片または脳ホモジネートを本発明化合物を用いて染色または定量することにより、より容易かつ短時間で異常プリオン蛋白を確認し、プリオン病を診断することができる。またリンパ組織、尿、血液中の異常プリオン蛋白を本発明化合物を用いて確認することにより、プリオン病を診断することができる。さらにウシ由来食品、ウシ由来医療用製剤（例えばゼラチンカプセル）、ウシ由来化粧品（例えばコラーゲン）等中の異常プリオン蛋白を本発明化合物を用いて確認することができる。
以上説明したように、本発明化合物は、異常プリオン蛋白に対する特異性が高く、血液−脳関門透過性が高く、しかも極めて安全性の高いものである。したがって、本発明化合物はプリオン病の早期診断・発見に極めて有用である。本発明によれば、本発明化合物を含む、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断用組成物およびキットが提供される。本発明化合物を用いる、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断方法も提供される。さらに本発明によれば、本発明化合物を含有する、プリオン蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療用の組成物も提供される。本発明の化合物を対象に投与することを特徴とする、プリオン蛋白が蓄積する疾患の治療および／または予防方法も提供される。本発明により、プリオン蛋白が蓄積する疾患の診断の早期診断・発見と組み合わせて、プリオン病の早期有効治療が可能となる。さらに本発明によれば、本発明化合物含む、試料中のプリオン蛋白の染色用組成物およびキット、本発明化合物を用いる、試料中のプリオン蛋白の染色方法も提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【国際調査報告】
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