(57)【要約】本発明は、下記一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩からなるメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤及びそれを有効成分とする皮膚外用剤である。2004050054.tif 000011一般式（１）（但し、式中Ｒ１〜Ｒ６はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を表す。）
2004050054.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩からなるメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤。
2004050054.tif 000009
一般式（１）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４個のアルキル基を表す。）
【請求項２】
一般式（１）で表される化合物が下記式で表されるセンタウレイジン（Ｃｅｎｔａｕｒｅｉｄｉｎ）であることを特徴とする、請求項１に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤。
2004050054.tif 000010
センタウレイジン
【請求項３】
請求項１又は２に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤を有効成分として含有する、メラノサイトのデンドライト伸長抑制用の皮膚外用剤。
【請求項４】
チロシナーゼ阻害剤の効果が充分ではない色素異常の改善用に用いることを特徴とする、請求項３に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制用の皮膚外用剤。
【請求項５】
化粧料であることを特徴とする、請求項３又は４に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制用の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤及びそれを有効成分とする皮膚外用剤に関する。
【背景技術】  肌を白く美しく保つことは、多くの女性が願うことであり、この為多くの美白化粧料が開発されている。例えば、アスコルビン酸やその誘導体、コウジ酸やその誘導体、トラネキサム酸やその誘導体、ハイドロキノン配糖体などを含有する化粧料が例示できる。しかしながら、これらの多くはチロシナーゼを阻害し、メラニンの生合成を阻害する作用を機序とするものであり、自ずとその効果には限度があると言わざるを得なかった。即ち、これらの成分を有効成分とする美白化粧料においては、メラニン産生の異常昂進に起因するシミ、そばかす、色黒などの症状に対しては有効であっても、メラニン産生量があまり寄与しない色素異常に対しては今ひとつの効果と言わざるを得ない面があった。言い換えれば、チロシナーゼ阻害剤では有効ではない、或いは、有効性の低い色素異常症が存在し、その様な色素異常症を改善するような手段の開発が求められていた。
一方、メラニン産生量があまり寄与しない、色素異常としては、例えば、メラノサイトのデンドライトからのメラニン顆粒の移動昂進に起因するものが挙げられる。この様な、色素異常に関しては、メラノサイトがメラニン顆粒を移動させる時に伸長させるデンドライトの伸長を抑制することが考えられるが、この様なメカニズムを機序とする美白剤は、そう多くは知られていない。即ち、この様なメカニズムを機序とする、美白剤の開発が望まれているといえる。
本発明者らが、一般式（１）で表される化合物であるセンタウレイジン（Ｃｅｎｔａｕｒｅｉｄｉｎ；５，７−ジヒドロキシ−３，６−ジメトキシ−２−（５−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン；以下、「化合物１」ということがある。）を見出した基源植物である、セイヨウノコギリソウについては、そのエキスが化粧料用の保湿剤として有益なこと（特開平０２−１７２９０７）、化粧料に於いてコウジ酸の安定化に有益であること（特開平０７−１７８４８）、チロシナーゼを阻害する作用を有すること（特開平０８−１０４６４６）、活性酸素を消去する作用を有すること（特開平１１−２４６３３６）、α−ＭＳＨを阻害する作用を有すること（特開平１１−３４９４３５）等が既に知られているが、メラノサイトのデンドライトの伸長を抑制することも、かかる作用により、通常のチロシナーゼ阻害作用に起因するメラニン産生抑制剤が有効ではない、或いは、あまり効果を奏さない色素異常症の改善に有用であることも全く知られていなかった。
又、センタウレイジン等の一般式（１）で表される化合物については、以下のことが既に知られている。
１）ヨモギ属の植物に含まれ、アレルギー性疾患の治療に有用であること。（ＷＯ  ２００２０４１９０９）
２）抗癌作用を有すること。（ＵＳ４９３５４０）
３）ヤグルマギク属の植物に含まれていること。（Ｆｌａｍｉｎｉ  Ｇｕｉｄｏ  ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５８（８），１２２９−１２３３，２００１）
しかしながら、かかる物質が、キク科セイヨウノコギリソウ（Ａｃｈｉｌｌｅａ  ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍ  Ｌ．）に含有されていることも全く知られていなかったし、メラノサイトのデンドライトの伸長を抑制することも、かかる作用により、通常のチロシナーゼ阻害作用に起因するメラニン産生抑制剤が有効ではない、或いは、あまり効果を奏さない色素異常症の改善に有用であることも全く知られていなかった。
【発明の開示】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、メラノサイトのデンドライトの伸長を抑制し、かかる作用により、通常のチロシナーゼ阻害作用に起因するメラニン産生抑制剤が有効ではない、或いは、あまり効果を奏さない色素異常症の改善に有用な成分を提供することを課題とする。
本発明者らは、この様な状況に鑑みて、メラノサイトのデンドライトの伸長を抑制し、かかる作用により、通常のチロシナーゼ阻害作用に起因するメラニン産生抑制剤が有効ではない、或いは、あまり効果を奏さない色素異常症の改善に有用な成分を求めて鋭意研究努力を重ねた結果、キク科セイヨウノコギリソウに含まれる一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩がかかる作用を有していることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示す技術に関するものである。
（１）下記一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩からなるメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤。
2004050054.tif 000003
一般式（１）
（但し、式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に水素原子又は炭素数１〜４個のアルキル基を表す。）
（２）一般式（１）で表される化合物が下記式で表されるセンタウレイジン（Ｃｅｎｔａｕｒｅｉｄｉｎ）であることを特徴とする、請求項１に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤。
2004050054.tif 000004
センタウレイジン
（３）（１）又は（２）に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤を有効成分として含有する、メラノサイトのデンドライト伸長抑制用の皮膚外用剤。
（４）チロシナーゼ阻害剤の効果が充分ではない色素異常の改善用に用いることを特徴とする、（３）に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制用の皮膚外用剤。
（５）化粧料であることを特徴とする、（３）又は（４）に記載のメラノサイトのデンドライト伸長抑制用の皮膚外用剤。
【発明を実施するための最良の形態】（１）本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤
本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤は、前記一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩からなる。
前記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立に水素原子又はアルキル基を表す。
アルキル基としては、炭素数１〜４個のアルキル基であることが好ましく、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、１−メチルエチル基、ｎ−ブチル基、１−メチルプロピル基、２−メチルプロピル基、１，１−ジメチルエチル基等が挙げられる。この内、特に好ましくは、メチル基である。
一般式（１）で表される化合物としては、センタウレイジン（Ｃｅｎｔａｕｒｅｉｄｉｎ）が好ましく例示できる。
かかる一般式（１）で表される化合物は、そのまま使用することも出来るし、アルカリとともに処理して、塩と為して使用することも出来る。
塩としては、生理的に許容されるものであれば特段の限定は受けず適用でき、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、トリエタノールアミン塩、トリエチルアミン塩等の有機アミン塩類、リジン塩、アルギニン塩等の塩基性アミノ酸塩等が好ましく例示できる。特に好ましいものは調製が容易なアルカリ金属塩である。
本発明の皮膚外用剤において、一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩は単独で含有させることもできるし、２種以上を組み合わせて含有させることもできる。
かかる一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩は精製されたものであってもよいが、一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩を有効量含む植物のエキスもしくはその分画物等であってもよい。
このような植物としては、キク科ノコギリソウ属（Ａｃｈｉｌｌｅａ  ｓｐ．）に属する植物、好ましくはキク科セイヨウノコギリソウ（Ａｃｈｉｌｌｅａ  ｍｉｌｌｅｆｏｌｉｕｍ  Ｌ．）を用いることができる。一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩の抽出に用いる植物としては、植物体全体であってもよく、一般式（１）で表される化合及び／又はその塩物を含む一部であってもよく、また、これらの加工物であってもよい。例えば、キク科セイヨウノコギリソウの地上部の抽出物を精製分画することにより得ることが出来る。一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩の同定は、Ｘ線解析等により行うことができる。
抽出物としては、極性の高い溶剤によって抽出された抽出物が特に好ましく例示できる。極性の高い溶剤としては、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチル、蟻酸メチルなどのエステル類、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類、アセトニトリルなどのニトリル類、１，３−ブタンジオール、エタノール、イソプロピルアルコールなどのアルコール類、水などが好ましく例示できる。これらの内では、アルコール類が特に好ましい。なお、上記溶剤は、１種又は２種以上の混合物であってもよい。
抽出は、通常、植物体又はその一部に対して１〜１０重量倍の溶剤を加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。抽出後は、必要に応じて、減圧濃縮などをして溶剤を除去することができる。溶剤除去した抽出物は、酢酸エチルと水などで液液抽出したり、クロロホルム−メタノールなどを溶出溶媒とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー等で精製したりすることにより、前記の一般式（１）で表される化合物を単離することが出来る。
一般式（１）で表される化合物及び／又はその塩の本発明の皮膚外用剤に於ける、好ましい含有量は、皮膚外用剤全量に対して、０．００１〜１０重量％であり、更に好ましくは、０．００５〜５重量％である。これは、少なすぎるとメラノサイトのデンドライト伸長抑制効果を発揮しない場合があり、多すぎても効果が頭打ちになり、いたずらに処方の自由度を阻害する場合があるからである。
＜製造例＞
キク科セイヨウノコギリソウの地上部の乾燥物１０Ｋｇを細切し、エタノール５０１を加えて、３時間加熱還流した。室温まで冷却した後、減圧濃縮し、これに１１の酢酸エチルと水を加え、液液抽出を行い、酢酸エチル相をとり、減圧濃縮し、エキスを得た。残渣をクロロホルムにとかし、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにチャージし、溶出溶媒クロロホルム：メタノール＝１００：１→７０：３０で精製し、化合物１を２１１．５ｍｇ得た。この構造はＸ線解析により決定した。
（２）本発明の皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は、上記本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤を含有することを特徴とする。本発明に言う、皮膚外用剤とは、皮膚に外用で適用される組成物の総称を意味し、医薬部外品を含む化粧料、皮膚外用医薬、皮膚外用雑貨等が例示できる。これらの内、特に好ましいものは化粧料である。これは、前記本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤が優れた安全性を有しているため、化粧料のように連日、習慣的に使用することができ、その様な使用形態で美白作用をより遺憾なく発揮するためである。
化粧料の剤形としては、特に限定されないが、本発明のデンドライト伸長抑制剤が極性の極めて高い物性を有しているため、クリームや乳液などの乳化剤形のみならず化粧水やエッセンスなどの溶液剤形でも使用できる。
本発明の皮膚外用剤には、前記メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤以外に、通常皮膚外用剤で使用される任意成分を含有することができる。かかる任意成分としては、例えば、スクワラン、流動パラフィン、軽質流動イソパラフィン、重質流動イソパラフィン、マイクロクリスタリンワックス、固形パラフィンなどの炭化水素類、ジメチコン、フェメチコン、シクロメチコン、アモジメチコン、ポリエーテル変性シリコーンなどのシリコーン類、ホホバ油、カルナウバワックス、モクロウ、ミツロウ、ゲイロウ、オレイン酸オクチルドデシル、イソプロピルミリステート、ネオペンチルグリコールジイソステアレート、リンゴ酸ジイソステアレートなどのエステル類、ステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、イソステアリン酸、イソパルミチン酸、ベヘン酸、オレイン酸などの脂肪酸類、ベヘニルアルコール、セタノール、オレイルアルコール、オクタデシルアルコールなどの高級アルコール類、ヒマシ油、椰子油、水添椰子油、椿油、小麦胚芽油、イソステアリン酸トリグリセライド、イソオクタン酸トリグリセライド、オリーブオイル等のトリグリセライド類、１，３−ブタンジオール、グリセリン、ジグリセリン、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、１，２−ヘキシレングリコール、イソプレングリコールなどの多価アルコール類、
ソルビタンセスキオレート、ソルビタンモノオレート、ソルビタントリオレート、ソルビタンセスキステアレート、ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンステアレート、ポリオキシエチレンオレート、ポリオキシエチレングリセリル脂肪酸エステル、ポリエキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤類、ソジウムラウリルステアレート、ポリオキシエチレンアルキル硫酸塩、スルホコハク酸エステル塩などのアニオン界面活性剤類、４級アルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類、アルキルベタイン等の両性界面活性剤類、
結晶セルロースや架橋型メチルポリシロキサン、ポリエチレン粉末、アクリル樹脂粉体等の有機粉体類、タルク、マイカ、セリサイト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、二酸化チタン、酸化鉄、紺青、群青、チタンマイカ、チタンセリサイト、シリカ等の表面処理されていても良い粉体類、
アクリル酸・メタクリル酸アルキルコポリマー及び／又はその塩、カルボキシビニルポリマー及び／又はその塩、キサンタンガムやヒドロキシプロピルセルロースなどの増粘剤、
レチノール、レチノイン酸、トコフェロール、リボフラビン、ピリドキシン、アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステル塩などのビタミンやグリチルリチン酸塩、グリチルレチン、ウルソール酸、オレアノール酸などのテルペン類、エストラジオール、エチニルエストラジオール、エストリオールなどのステロイド類などの有効成分、
フェノキシエタノール、パラベン類、ヒビテングルコネート、塩化ベンザルコニウム等の防腐剤、ジメチルアミノ安息香酸エステル類、桂皮酸エステル類、ベンゾフェノン類などの紫外線吸収剤などが好ましく例示できる。
勿論、本発明のデンドライト伸長抑制剤と異なる機序の美白剤、例えば、アスコルビン酸やその誘導体、コウジ酸やその誘導体、トラネキサム酸やその誘導体、ハイドロキノン配糖体などを含有することもでき、この様なものを含有した場合においては、少なくとも相加効果は得られるので好ましい。かかるデンドライト伸長抑制剤と異なる機序の美白剤の好ましい含有量は、総量で、皮膚外用剤全量に対して総量で０．０１〜５重量％である。
本発明の皮膚外用剤の適用症としては、チロシナーゼ阻害剤の効果が充分ではない色素異常症も好適に例示できる。本明細書において「チロシナーゼ阻害剤の効果が充分ではない色素異常症」とは、チロシナーゼ阻害剤（例えば、アルブチンなど）を用いて実施例２に記載の方法などにより試験した場合に、７０％以上のパネラーが「色素異常が改善しない」と判断する色素異常症を意味する。
本発明の皮膚外用剤は、前記必須の成分と任意の成分を常法に従って処理することにより、製造することができる。
【実施例】  以下に実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限定を受けないことは言うまでもない。
【実施例１】  以下に示す方法に従って、ヒトメラノサイトを用いて、デンドライトの伸長抑制作用を調べた。
（試薬類）細胞・基礎培地・増殖添加剤は倉敷紡績（株）より購入した。
（細胞）正常ヒトメラノサイト
（培地）基礎培地（Ｍｅｄｉｕｍ  １５４Ｓ）に下記の試薬を添加したもの。
（試薬）増殖添加剤：ウシ脳下垂体抽出液（ＢＰＥ）（培地中の最終濃度０．４％ｖ／ｖ）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（培地中の最終濃度０．５％ｖ／ｖ）、ヒト組換え型塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｒＦＧＦ−Ｂ）（培地中の最終濃度３ｎｇ／ｍｌ）、ハイドロコーチゾン（培地中の最終濃度０．１８μｇ／ｍｌ）、インスリン（培地中の最終濃度５μｇ／ｍｌ）、トランスフェリン（培地中の最終濃度５μｇ／ｍｌ）、ホルボール  １２−ミリスタート  １３−アセタート（ＰＭＡ）（培地中の最終濃度１０ｎｇ／ｍｌ）、ヘパリン（培地中の最終濃度３μｇ／ｍｌ）、ＰＳＡ溶液（ペニシリン濃度５０，０００Ｕｎｉｔ／ｍｌ、ストレプトマイシン濃度５０μｇ／ｍｌ、アンフォテリシンＢ濃度１２．５μｇ／ｍｌの混合溶液。培地５００ｍｌに対して１ｍｌ添加。）
（方法）
・前記製造例で得たセイヨウノコギリソウエキスおよび化合物１（センタウレイジン）を、センタウレイジンの濃度として１００μｇ／ｍｌとなるように基礎培地で希釈しサンプル溶液を作製した。なお、コントロールは基礎培地のみの溶液である。
・正常ヒトメラノサイトを４８穴マイクロプレートに播種し（３０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ，２００μｌ培地）、３７℃で培養した。
・２４時間後にサンプル溶液５０μｌを添加した。
・サンプル添加２４時間後にデンドライト伸長抑制を観察した。
（結果）
結果を、デンドライトの長さとして、表１に示す。コントロールでは増殖因子の添加効果によってデンドライトが伸長しているが、センタウレイジン添加群では伸長が抑制されていることがわかる。
2004050054.tif 000005
【実施例２】  下記に示す処方に従って、本発明の皮膚外用剤である化粧料を作製した。即ち、イ、ロ、ハの成分をそれぞれ７０℃に加熱し、ロをハで中和し、攪拌しながらイを徐々に加えて乳化し、ホモジナイザーで均質化した後、攪拌冷却して乳液を得た。このものの化合物１をスクワランに置換した比較例１を作製し、通常のメラニン産生抑制用の化粧料では改善しない色黒に悩む人１０人１群、計２０名を用いて、朝晩２回、連日３０日使用の使用テストで色黒の改善度を調べた。改善度は、３０日使用後に、スコア５：著しい改善、スコア４：明らかな改善、スコア３：改善、スコア２：やや改善、スコア１：改善せずのスコアで評価してもらった。結果を表２に示す。これより、本発明の皮膚外用剤である化粧料は、優れた美白効果を有することがわかる。
イ
スクワラン                                                １０      重量部
ソルビタンセスキステアレート                                ２      重量部
化合物１                                                    ０．０５重量部
ブチルパラベン                                              ０．１  重量部
ロ
１，３−ブタンジオール                                      ５      重量部
キサンタンガム                                              ０．１  重量部
アクリル酸・メタクリル酸アルキル（Ｃ１０〜３０）            ０．４  重量部
メチルパラベン                                              ０．１  重量部
水                                                        ５０      重量部
ハ
水酸化カリウム                                              ０．２  重量部
水                                                        ３２．０５重量部
2004050054.tif 000006
【実施例３】  実施例２と同様に化合物１の量を変えて皮膚外用剤（化粧料）を作製し、１０名の同様のパネラーを用い、同様に評価した。この皮膚外用剤においても同様な効果が認められた。
イ
スクワラン                                                １０    重量部
ソルビタンセスキステアレート                                ２    重量部
化合物１                                                    ０．１重量部
ブチルパラベン                                              ０．１重量部
ロ
１，３−ブタンジオール                                      ５    重量部
キサンタンガム                                              ０．１重量部
アクリル酸・メタクリル酸アルキル（Ｃ１０〜３０）            ０．４重量部
メチルパラベン                                              ０．１重量部
水                                                        ５０    重量部
ハ
水酸化カリウム                                              ０．２重量部
水                                                        ３２．０重量部
2004050054.tif 000007
【実施例４】  下記に示す処方に従って、実施例２、３同様に皮膚外用剤（化粧料）を作製し、同様のパネラーを用いて、同様に評価を行った。比較例２として、化合物１をアルブチンに置換したものを作製し、同様に評価した。結果を表４に示す。これより、パネラーにおいてチロシナーゼ阻害剤の美白効果があまり認められないこと、その様なパネラーでも本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤は有効に作用することが認められた。
イ
スクワラン                                                １０    重量部
ソルビタンセスキステアレート                                ２    重量部
化合物１                                                    １    重量部
ブチルパラベン                                              ０．１重量部
ロ
１，３−ブタンジオール                                      ５    重量部
キサンタンガム                                              ０．１重量部
アクリル酸・メタクリル酸アルキル（Ｃ１０〜３０）            ０．４重量部
メチルパラベン                                              ０．１重量部
水                                                        ５０    重量部
ハ
水酸化カリウム                                              ０．２重量部
水                                                        ３１．１重量部
2004050054.tif 000008
【産業上の利用の可能性】
本発明によれば、メラノサイトのデンドライトの伸長を抑制し、かかる作用により、通常のチロシナーゼ阻害作用に起因するメラニン産生抑制剤が有効ではない、或いは、あまり効果を奏さない色素異常症の改善に有用な成分を提供することができる。
【国際調査報告】
2004050054.tif 000012
2004050054.tif 000013
2004050054.tif 000014