(57)【要約】本発明の目的は、心筋症の悪化による非虚血性心不全を治療するための医薬組成物を提供することである。コロニー刺激因子を長期投与することにより、進行性の心筋線維化、左室リモデリング及び心不全が改善される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コロニー刺激因子を有効成分として含有する非虚血性心不全治療用医薬組成物。
【請求項２】
非虚血性心不全が心筋症の悪化によるものである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
心筋症が特発性心筋症である請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
特発性心筋症が拡張型心筋症である請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
コロニー刺激因子が顆粒球コロニー刺激因子である請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
非虚血性心不全の治療に有効な量のコロニー刺激因子を、それを必要とする患者に有効成分として投与することを含む、非虚血性心不全の治療方法。
【請求項７】
非虚血性心不全治療用医薬組成物を製造するためのコロニー刺激因子の使用。
【請求項８】
非虚血性心不全の治療に有効な量のコロニー刺激因子及び使用説明書を含む、非虚血性心不全治療用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、コロニー刺激因子を有効成分として含有する非虚血性心不全治療用医薬組成物に関する。また、本発明は、コロニー刺激因子を投与することを含む非虚血性心不全の治療方法に関する。
【背景技術】  心不全は、心機能が低下することにより、全身の組織代謝に必要な血液量を駆出できない状態、あるいは、それが心室充満圧の上昇によってのみ可能な状態である（新臨床内科学、医学書院）。虚血性心不全は、代謝に必要な血液を受け取ることができずに酸素不足に陥ることに起因する心不全であり、非虚血性心不全は虚血性心不全以外の心不全である。非虚血性心不全には心筋症の悪化によるものなどがあり、心筋症の例としては、特発性心筋症、２次性心筋症などを挙げることができる。
ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）は顆粒球系造血前駆細胞の分化増殖因子として発見された造血因子であり、生体内では好中球の造血を促進することから、骨髄移植や癌化学療法後の好中球減少症治療剤として臨床応用されている。また、上記作用のほかにもヒトＧ−ＣＳＦは造血幹細胞に作用してその増殖分化を刺激する作用がある。さらに、本発明者らは最近、Ｇ−ＣＳＦが骨髄中の造血幹細胞を末梢血中に動員し、心筋梗塞巣への移動、心筋細胞への分化を促進させることにより、心筋梗塞後の左室リモデリング及び心不全を軽減させることを報告している（Ｍｉｎａｔｏｇｕｃｈｉ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００４（ｉｎ  ｐｒｅｓｓ））。
しかしながら、拡張型心筋症などの心筋症による非虚血性心不全に対し、Ｇ−ＣＳＦが有効か否かは不明であった。
【発明の開示】
本発明は、心筋症の悪化による非虚血性心不全の治療用医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明者らは、心筋症モデル動物における進行性の心筋線維化、左室リモデリング及び心不全がＧ−ＣＳＦの長期投与により改善されることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、コロニー刺激因子を有効成分として含有する非虚血性心不全治療用医薬組成物を提供する。
また、本発明は、非虚血性心不全の治療に有効な量のコロニー刺激因子を、それを必要とする患者に有効成分として投与することを含む、非虚血性心不全の治療方法を提供する。
さらに、本発明は、非虚血性心不全治療用医薬組成物を製造するためのコロニー刺激因子の使用に関するものである。
さらに、本発明は、非虚血性心不全の治療に有効な量のコロニー刺激因子及び使用説明書を含む、非虚血性心不全治療用キットを提供する。
【図面の簡単な説明】  図１は、心室輪切り切片をマッソン・トリクローム染色した標本の顕微鏡写真である。（Ａ）はコントロール群、（Ｂ）はＧ−ＣＳＦ群を示す。青に染色された領域（矢印）が線維化領域である。
図２は、共焦点レーザー顕微鏡で観察した骨髄細胞由来心筋細胞の顕微鏡写真である。（Ａ）はＤｉＩ標識した骨髄細胞を示し（赤、矢印）、（Ｂ）は核染色（青、太矢印）、（Ｃ）はα−ｓａｒｃｏｍｅｒｉｃ  ａｃｔｉｎ染色された心筋細胞（緑）を示す。（Ｄ）は（Ａ）〜（Ｃ）をまとめて示している。スケールは２０μｍである。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明は、コロニー刺激因子を有効成分として含有する非虚血性心不全治療用医薬組成物に関するものである。非虚血性心不全には、例えば心筋症の悪化によるものがあり、心筋症の例としては、拡張型心筋症、肥大型心筋症及び拘束型心筋症のような特発性心筋症、並びに心筋炎及びサルコイドーシスのような２次性心筋症などが挙げられる。本発明は例えば拡張型心筋症に用いることができる。
コロニー刺激因子には、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、単球コロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）などがある。本発明においては、例えばＧ−ＣＳＦを用いることができる。
本発明の医薬組成物の有効成分としてＧ−ＣＳＦを用いる場合は、どのようなＧ−ＣＳＦでも用いることができるが、高度に精製されたＧ−ＣＳＦが好ましい。具体的には、哺乳動物Ｇ−ＣＳＦ、特にヒトＧ−ＣＳＦ又はこれらと実質的に同様の生物学的活性を有するものが挙げられる。Ｇ−ＣＳＦの由来は特に限定されず、天然由来のＧ−ＣＳＦ、遺伝子組換え法により得られたＧ−ＣＳＦなどを用いることができる。遺伝子組換え法により得られるＧ−ＣＳＦは、天然由来のＧ−ＣＳＦとアミノ酸配列が同一のもの（例えば、特公平２−５３９５号、特開昭６２−２３６４８８号など）、あるいは該アミノ酸配列中の１又は複数のアミノ酸を欠失、置換及び／又は付加したもので、天然由来のＧ−ＣＳＦと同様の生物学的活性を有するもの等であってもよい。例えば、部位特異的変異誘発法（Ｇｏｔｏｈ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ  １５２，２７１−２７５；Ｚｏｌｌｅｒ，Ｍ．Ｊ．Ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１００，４６８−５００；Ｋｒａｍｅｒ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２，９４４１−９４５６；Ｋｒａｍｅｒ，Ｗ．ａｎｄ  Ｆｒｉｔｚ  Ｈ．Ｊ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４，３５０−３６７；Ｋｕｎｋｅｌ，Ｔ．Ａ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２，４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８８）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．８５，２７６３−２７６６）などを用いて、Ｇ−ＣＳＦのアミノ酸配列に適宜変異を導入することにより、Ｇ−ＣＳＦと機能的に同等なポリペプチドを調製することができる。また、アミノ酸の変異は自然界においても生じうる。あるアミノ酸配列に対する１又は複数個のアミノ酸残基の欠失、付加及び／又は他のアミノ酸による置換により修飾されたアミノ酸配列を有するポリペプチドがその生物学的活性を維持することはすでに知られている（Ｍａｒｋ，Ｄ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８４）８１，５６６２−５６６６；Ｚｏｌｌｅｒ，Ｍ．Ｌ．＆  Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９８２）１０，６４８７−６５００；Ｗａｎｇ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８４）２２４，１４３１−１４３３；Ｄａｌｂａｄｉｅ−ＭｃＦａｒｌａｎｄ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８２）７９，６４０９−６４１３）。
したがって、Ｇ−ＣＳＦのアミノ酸配列において１又は複数のアミノ酸が変異したアミノ酸配列からなり、Ｇ−ＣＳＦと機能的に同等なポリペプチドもまた本発明の医薬組成物に用いることができる。このようなポリペプチドにおけるアミノ酸の変異数は、通常、３０アミノ酸以内であり、好ましくは１５アミノ酸以内であり、さらに好ましくは５アミノ酸以内（例えば、３アミノ酸以内）である。
置換変異体においては、アミノ酸側鎖の性質が保存された他のアミノ酸に置換されていることが望ましい。アミノ酸側鎖の性質が保存されたアミノ酸とは例えば、疎水性アミノ酸（Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ、Ｖ）、親水性アミノ酸（Ｒ、Ｄ、Ｎ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｓ、Ｔ）、脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ）、水酸基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｓ、Ｔ、Ｙ）、硫黄原子含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃ、Ｍ）、カルボン酸又はアミド含有側鎖を有するアミノ酸（Ｄ、Ｎ、Ｅ、Ｑ）、塩基含有側鎖を有するアミノ離（Ｒ、Ｋ、Ｈ）、芳香族含有側鎖を有するアミノ酸（Ｈ、Ｆ、Ｙ、Ｗ）を挙げることができる（括弧内はいずれもアミノ酸の一文字標記を表す）。
Ｇ−ＣＳＦのアミノ酸配列に複数個のアミノ酸残基が付加されたポリペプチドには、Ｇ−ＣＳＦを含む融合ポリペプチドが含まれる。融合ポリペプチドは、Ｇ−ＣＳＦと他のポリペプチドとが融合したものであり、このようなポリペプチドも本発明に用いることができる。融合ポリペプチドを作製するには、例えば、Ｇ−ＣＳＦをコードするＤＮＡと他のポリペプチドをコードするＤＮＡをフレームが一致するように連結してこれを好適な発現ベクターに導入し、好適な宿主で発現させればよい。Ｇ−ＣＳＦとの融合に付される他のポリペプチドとしては、融合ポリペプチドがＧ−ＣＳＦと同等の生物学的活性を保持する限り特に限定されるものではない。
Ｇ−ＣＳＦのアミノ酸配列を変化させたＧ−ＣＳＦ誘導体については既に数多くの報告があるので、これら公知のＧ−ＣＳＦ誘導体を用いることも可能である（例えば、ＵＳＰ５，５８１，４７６号、ＵＳＰ５，２１４，１３２号、ＵＳＰ５，３６２，８５３号、ＵＳＰ４，９０４，５８４号など）。
さらに、化学修飾したＧ−ＣＳＦを用いることも可能である。化学修飾したＧ−ＣＳＦの例としては、例えば、糖鎖の構造変換・付加・欠失操作を行ったＧ−ＣＳＦや、ポリエチレングリコール等の化合物を結合させたＧ−ＣＳＦなどを挙げることができる（例えば、ＵＳＰ５，８２４，７７８号、ＵＳＰ５，８２４，７８４号、ＷＯ９６／１１９５３号、ＷＯ９５／２１６２９号、ＷＯ９４／２００６９号、ＵＳＰ５，２１８，０９２号、特開平４−１６４０９８号など）。
本発明におけるＧ−ＣＳＦは、いかなる方法で製造されたものでもよく、例えば、ヒト腫瘍細胞の細胞株を培養し、これから種々の方法で抽出し分離精製したＧ−ＣＳＦ、あるいは遺伝子工学的手法により大腸菌；酵母；チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、Ｃ１２７細胞、ＣＯＳ細胞、ミエローマ細胞、ＢＨＫ細胞などの哺乳類細胞；昆虫細胞などに産生せしめ、種々の方法で抽出し分離精製したＧ−ＣＳＦなどを用いることができる（例えば、特公平１−４４２００号公報、特公平２−５３９５号公報、特開昭６２−１２９２９８号公報、特開昭６２−１３２８９９号公報、特開昭６２−２３６４８８号公報、特開昭６４−８５０９８号公報）。
本発明の非虚血性心不全治療用医薬組成物には、その投与方法や剤形に応じて必要により、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、保存剤、吸着防止剤、界面活性化剤、希釈剤、賦形剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤、緩衝剤、含硫還元剤、酸化防止剤等を適宜添加することができる。
懸濁剤の例としては、メチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート等を挙げることができる。
溶液補助剤としては、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マグロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステル等を挙げることができる。
安定化剤としては、デキストラン４０、メチルセルロース、ゼラチン、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウム等を挙げることができる。
等張化剤としては例えば、Ｄ−マンニトール、ソルビート等を挙げることができる。
保存剤としては例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾール等を挙げることができる。
吸着防止剤としては例えば、ヒト血清アルブミン、レシチン、デキストラン、エチレンオキサイド・プロピレンオキサイド共重合体、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール等を挙げることができる。
含硫還元剤としては例えば、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−アセチルホモシステイン、チオクト酸、チオジグリコール、チオエタノールアミン、チオグリセロール、チオソルビトール、チオグリコール酸及びその塩、チオ硫酸ナトリウム、グルタチオン、炭素原子数１〜７のチオアルカン酸等のスルフヒドリル基を有するもの等が挙げられる。
酸化防止剤としては例えば、エリソルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、α−トコフェロール、酢酸トコフェロール、Ｌ−アスコルビン酸及びその塩、Ｌ−アスコルビン酸パルミテート、Ｌ−アスコルビン酸ステアレート、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリアミル、没食子酸プロピルあるいはエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、ピロリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム等のキレート剤が挙げられる。
さらには、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、炭酸水素ナトリウムなどの無機塩；クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、酢酸ナトリウムなどの有機塩などの通常添加される成分を含んでいてもよい。
本発明の非虚血性心不全治療用医薬組成物は、注射剤（皮下、皮内、筋肉内、静脈内、腹腔内など）として、または経皮、経粘膜、経鼻などの投与に適した剤形、又は経口投与に適した剤形（錠剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤、懸濁剤など）として投与することが可能であるが、これらに限定されるものではない。
本発明の医薬組成物の投与量、投与回数は対象の疾患患者の病状を配慮して当業者が適宜決定することができ、特に限定されるものではないが、Ｇ−ＣＳＦの１回の投与量は通常、成人１人当たり０．１〜１００μｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１０μｇ／ｋｇである。投与回数は通常、１週間に１〜７日間、１日１回〜３回である。
本発明のコロニー刺激因子を有効成分として含有する非虚血性心不全治療用医薬組成物は、非虚血性心不全の治療や予防に有効である。
また、本発明のキットは、コロニー刺激因子、および適宜医薬的に許容できる１種類以上の適当な担体等、並びに使用説明書等を含む。
以下の実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【実施例】  心筋症モデル動物を用いて、Ｇ−ＣＳＦ投与が心筋症による心不全の進行を予防するか否かの検討を行った。
（１）実験方法
心不全モデル動物：
ＵＭ−Ｘ７．１心筋症ハムスターはδ−ｓａｒｃｏｇｌｙｃａｎ遺伝子欠損動物であり（Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９７，９４：１３８７３−１３８７８）、生後４週令より心筋細胞の脱落が始まる（Ｊａｓｍｉｎ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｓｃｌｅ  Ｎｅｒｖｅ  １９８２，５：２０−２５）。その後、進行性に多発性の脱落巣が形成され線維化が著明となり、心拡大、心収縮力の低下をきたして心不全死に至る。自然経過では３０週令での生存率は約５０％である。
Ｇ−ＣＳＦ投与方法：
実験１  生後１５週令の雄ＵＭ−Ｘ７．１心筋症ハムスター１６匹に、１０μｇ／ｋｇ／ｄａｙのＧ−ＣＳＦを連続５日間皮下注射し、２日間休薬するという投与パターンを３０週令まで１５週間継続した。コントロールとして同週令の雄ＵＭ−Ｘ７．１ハムスター１５匹に蒸留水を同様に皮下注射した。両群にて生存率を比較し、３０週令時に血行動態、組織学的及び生化学的評価を行った。
実験２  また、Ｇ−ＣＳＦまたは蒸留水（各ｎ＝６）を上記投与パターンで２週間投与した後、Ｅｖａｎｓ  ｂｌｕｅ色素を腹腔内に注射し、同色素の心筋細胞への取り込みを調べた。
実験３  さらに心筋への骨髄細胞の動員及びその心筋細胞への分化の有無をみるために以下の実験を行った。生後１５週令の雄ＵＭ−Ｘ７．１ハムスターの大腿骨から骨髄細胞を採取し、これをＤｉＩ色素で標識した後、骨髄腔に再移植した。Ｇ−ＣＳＦまたは蒸留水（各ｎ＝６）を上記投与パターンで投与した後、２週間後に心筋の組織学的検討を行った。
血行動態評価：
超音波診断装置ＳＳＤ−２０００（Ａｌｏｋａ社製）を用いて心エコーにて評価した。
組織学的評価：
実験１において、１０％ホルマリン固定・パラフィン包埋された心室の輪切り切片（４μｍ）をマッソン・トリクローム染色して心筋の線維化領域を同定し、イメージアナライザーＬｕｚｅｘ−Ｆ（ＮＩＲＥＣＯ社製）で定量解析した。また、心の一部を電顕固定し、電子顕微鏡で観察した。
実験２及び実験３の心は凍結標本を作製した。
生化学的評価：
ゼラチンザイモ電気泳動法にて心筋組織のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の活性を調べた。
共焦点レーザー顕微鏡：
ＤｉＩ標識骨髄細胞の再移植を受けた動物の心筋凍結切片（６μｍ）に、α−ｓａｒｃｏｍｅｒｉｃ  ａｃｔｉｎにて蛍光免疫染色を施し、共焦点レーザー顕微鏡（Ｚｗｅｉｓｓ社製）で観察した。
免疫組織科学：
心筋組織の４μｍパラフィン切片上で、ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ社製）を用いて抗δ−ｓａｒｃｏｇｌｙｃａｎ抗体による免疫染色を行った。
統計：
数値は平均±標準誤差で表示した。２群間数値の比較はＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔで、生存率比較はＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ法で行った。ｐ＜０．０５を統計学的有意とした。
（２）結果
生存率：
３０週令におけるＧ−ＣＳＦ投与群の生存率は１００％、コントロール群では５３％であり、Ｇ−ＣＳＦ投与は有意な生存率の改善をもたらした（ｐ＜０．０００１）。
血行動態並びに左室リモデリング：
心エコー評価により、Ｇ−ＣＳＦ投与群において左室駆出率（ｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＥＦ）、左室内径短縮率（％ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ，％ＦＳ）の有意な改善が認められ、左室収縮能の改善がみられた。また、左室拡張末期径（ＬＶＥＤＤ）、左室収縮末期径（ＬＶＥＳＤ）ともに、コントロール群に比しＧ−ＣＳＦ投与群において有意に縮小しており、左室リモデリングの抑制がみとめられた（表１）。
剖検時の臓器重量測定により、両群で体重の差はなかったが、心・体重比、肺・体重比はＧ−ＣＳＦ投与群において有意に小さかった（表１）。
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左室線維化：
左室における線維化面積率は、コントロール群（２０．２±６．５％）に比しＧ−ＣＳＦ投与群（８．６±４．０％）において有意に縮小していた（ｐ＜０．０００１）（図１）。
ゼラチンザイモ電気泳動法により、コントロール群に比しＧ−ＣＳＦ群の心筋組織においてＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９の活性の上昇が認められた（データは示していない）。
心筋細胞の超微形態：
３０週令ハムスターのコントロール群では、心に変性したミトコンドリアを含む自己貪食性空胞変性（ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）を有する心筋細胞が多数見られたが、Ｇ−ＣＳＦ群ではその頻度が減少していた。
心筋細胞の細胞膜透過性（脆弱性）：
実験２において、コントロール群ではＥｖａｎｓ  ｂｌｕｅを取り込んだ、すなわち細胞膜の透過性が亢進した心筋細胞が多く見られたが（０．７５±０．１１％）、Ｇ−ＣＳＦ群ではその頻度が有意に減少していた（０．０７１±０．００４％）。
骨髄細胞の心筋細胞への分化：
共焦点レーザー顕微鏡下、Ｇ−ＣＳＦ群の心筋組織においてＤｉＩ陽性かつα−ｓａｒｃｏｍｅｒｉｃ  ａｃｔｉｎ陽性細胞、すなわち、骨髄細胞由来の心筋細胞が認められた（図２）。
δ−ｓａｒｃｏｇｌｙｃａｎ：
心筋組織におけるδ−ｓａｒｃｏｇｌｙｃａｎの発現は両群ともに認められなかった（データは示していない）。
（３）考察
上記のように、心筋症モデル動物にＧ−ＣＳＦを長期投与することにより、進行性の心筋線維化、左室リモデリング及び心不全が改善された。このようなＧ−ＣＳＦの有効性の機序として、少なくとも以下の４点の可能性が考えられる。
１）骨髄細胞の心筋組織への動員・心筋細胞への分化による心筋再生作用
２）心筋細胞脱落抑制作用
３）心筋の線維化抑制作用
４）抗サイトカイン作用
１）  Ｇ−ＣＳＦによる心筋再生の可能性は、共焦点レーザー顕微鏡下に、ＤｉＩ色素標識された骨髄細胞由来の細胞でα−ｓａｒｃｏｍｅｒｉｃ  ａｃｔｉｎ陽性の細胞（すなわち心筋細胞）がＧ−ＣＳＦ群の心筋組織にみられたことから明らかである。
２）  超微形態観察及びＥｖａｎｓ  ｂｌｕｅ染色より、Ｇ−ＣＳＦは心筋細胞に対し抗ａｕｔｏｐｈａｇｉｃ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ／ｄｅａｔｈ作用を有している可能性が示唆された。心筋細胞脱落抑制作用すなわち心筋細胞保護作用は、左室線維化面積率の縮小から明らかなように、Ｇ−ＣＳＦ群で心筋細胞脱落巣が小さいことから十分に推測される。
３）  Ｇ−ＣＳＦによる抗線維化作用は図１から明らかである。さらにＧ−ＣＳＦ群の心筋におけるＭＭＰの活性が上昇していたことから、Ｇ−ＣＳＦはＭＭＰ活性の上昇を介してコラーゲン線維の分解を促進し、抗線維化作用を呈している可能性が考えられる。
４）  心不全においては腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）やインターロイキン６（ＩＬ−６）などのサイトカインの血中濃度が上昇することが知られているが、特にＴＮＦ−αは心機能抑制作用を有することが明らかである（Ｍｅｌｄｒｕｍ  ＤＲ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９８，２７４：Ｒ５７７−Ｒ５９５）。Ｇ−ＣＳＦはこれらのサイトカインを抑制し、心機能を改善している可能性が推察される。
したがって、Ｇ−ＣＳＦがヒトの拡張型心筋症に有効であることを示している。
【産業上の利用の可能性】
コロニー刺激因子を長期投与することにより、心筋症の悪化による非虚血性心不全を治療することが可能である。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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