(57)【要約】第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドとを、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応して中鎖脂肪酸及び長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセリドを含有する反応物を得て、第二反応として、該反応物と中鎖脂肪酸のアルコールモノエステルとを、ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換反応し、次いで第二反応で得られた反応物から中鎖脂肪酸のアルコールモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコールモノエステルを取り出し、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることを特徴とする対称型トリグリセリドの製造方法。この製造方法によると、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを、工業的に効率良く、高純度で製造することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドとを、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応して中鎖脂肪酸及び長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセリドを含有する反応物を得て、第二反応として、該反応物と中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとを、ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換反応し、次いで第二反応で得られた反応物から中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出し、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることを特徴とする対称型トリグリセリドの製造方法。
【請求項２】
第一反応後に、中鎖脂肪酸トリグリセリドを取り出す請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
第二反応で得られた反応物から中鎖脂肪酸トリグリセリド、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出し、第一及び／又は第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリドを第一反応の原料として再利用し、第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを第二反応の原料として再利用する請求項２記載の製造方法。
【請求項４】
第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとを、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応して、中鎖脂肪酸及び長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセリドを含有する反応物を得、該反応物から中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、長鎖脂肪酸のアルコールモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドを取り出したトリグリセリド含有物を得、第二反応として、該トリグリセリド含有物と中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとを、ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換反応し、次いで第二反応で得られた反応物から中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出し、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることを特徴とする対称型トリグリセリドの製造方法。
【請求項５】
第二反応後に、中鎖脂肪酸トリグリセリドを取り出す請求項１又は４記載の製造方法。
【請求項６】
第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリドを、第一反応の原料として再利用する請求項１又は４記載の製造方法。
【請求項７】
第二反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、第一反応の原料として再利用する請求項４〜６のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項８】
第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、（第二反応の原料として再利用する請求項１、４〜７のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項９】
第一反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリドを、第一反応の原料として再利用する請求項１、４〜８のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１０】
第一反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、第一反応の原料として再利用する請求項４〜９のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１１】
第一反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、第二反応の原料として再利用する請求項４〜１０のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１２】
第一反応後及び／又は第二反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドを第一反応の原料として再利用し、第一反応後及び／又は第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを第二反応の原料として再利用する請求項４記載の製造方法。
【請求項１３】
第一反応において、（ａ）中鎖脂肪酸トリグリセリドと、（ｂ）長鎖脂肪酸トリグリセリド、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、及び長鎖脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも１種を、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応して、中鎖脂肪酸と長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とする第１のトリグリセリドを含有する反応物を得、第二反応として、該反応物中の第１のトリグリセリドと、（ｃ）中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも１種を、ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換反応して、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることを特徴とする対称型トリグリセリドの製造方法。
【請求項１４】
前記長鎖脂肪酸が、長鎖不飽和脂肪酸である請求項１〜１３のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１５】
前記長鎖不飽和脂肪酸が、炭素数１８の脂肪酸、ＥＰＡエイコサペンタエン酸）、及びＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）からなる群から選ばれる１種又は２種以上の脂肪酸である請求項１４記載の製造方法。
【請求項１６】
第一反応及び／又は第二反応に用いる酵素が、粉末状であり、９０質量％以上が１〜１００μｍの粒子径であるリパ−ゼであって、酵素反応を無溶剤かつ無水系で行う請求項１〜１５のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１７】
第一反応及び／又は第二反応の酵素反応を、粉末状リパーゼをろ過助剤とともにろ過機内に封入し、該ろ過機へ反応原料を通液する方法により行う請求項１６記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、ｓｎ（ｓｔｅｒｅｏ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドの製造方法に関するものである。特には、高純度なｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを工業的に効率良く製造できるようにしたものである。
ｓｎ−１，３位の脂肪酸がＡ、ｓｎ−２位の脂肪酸がＢである対称型トリグリセリドの製造方法については、基礎研究分野において多くの報告がなされている。長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とする対称型トリグリセリドの製造方法として、例えば、ｓｎ−２位にオレイン酸が結合したトリグリセリドにｓｎ−１，３位特異性リパ−ゼを作用させて、ｓｎ−２位の位置にオレイン酸が結合したトリグリセリドを製造する方法、すなわちカカオ代用脂の製造方法が挙げられる（例えば、特公平０７−８３７１８号公報、特公昭５７−２７１５９号公報及び特公平１１−２４３９８２号公報参照。）。また、ｓｎ−２位に多価不飽和脂肪酸を有する対称型トリグリセリドの製造方法として、例えば、多価不飽和脂肪酸を多量に含む多価不飽和脂肪酸含有油脂と飽和脂肪酸及び／又は飽和脂肪酸アルコ−ルエステルとをｓｎ−１，３位特異性リパ−ゼを用いて反応させる方法が挙げられる（例えば、特公平０７−８９９４４号公報参照。）。しかしながら、これらの方法では、高純度のｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることはできない。
ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリド（以下、ＭＬＭ型トリグリセリドという。Ｍ：中鎖脂肪酸、Ｌ：長鎖脂肪酸）の製造方法として、例えば、岩崎雄吾、山根恒夫「オレオサイエンス」、２００１、第一巻、８号、８２５−８３３に、以下の方法が記載されている。
（１）中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドをｓｎ−１，３位特異性リパ−ゼの存在下でエステル交換する方法。
（２）長鎖脂肪酸トリグリセリドと過剰量の中鎖脂肪酸のアシドリシス反応による方法、又は長鎖脂肪酸トリグリセリドと過剰量の中鎖脂肪酸のエチルエステルとエステル交換する方法。
また、二段階の反応によって、例えば、特開２０００−２７０８８５号公報に記載されているように、以下のようにＭＬＭ型トリグリセリドを製造する方法もある。
（３）第一反応として、グリセリン及び高度不飽和脂肪酸あるいはその低級アルコ−ルエステルに、位置特異性のないリパ−ゼを作用させ、脱水しながら高度不飽和脂肪酸トリグリセリドを合成する。ついで、第二反応として、その高度不飽和脂肪酸トリグリセリドおよび炭素数１２以下の脂肪酸あるいはその低級アルコ−ルエステルに、ｓｎ−１，３位に特異的に作用するリパ−ゼを作用させて、目的物であるｓｎ−１位及びｓｎ−３位に結合する脂肪酸の炭素数が１２以下であり、かつ、ｓｎ−２位に結合する脂肪酸の組成の９０質量％以上が高度不飽和脂肪酸である構造油脂の製造方法。
しかしながら、（１）の方法によると、ＭＬＭ型トリグリセリド以外に種々のトリグリセリド（ＬＭＬ、ＭＬＬ、ＬＭＭ、ＭＭＭ、及びＬＬＬ型トリグリセリド）も同時に合成されるため、ＭＬＭ型トリグリセリドの含有量の高い油脂を得ることは難しい。ここで、ＬＭＬ型トリグリセリドとは、ｓｎ−１，３位が長鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が中鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドのことをいい、ＭＬＬ型トリグリセリドとは、ｓｎ−１位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２，３位が長鎖脂肪酸である非対称型トリグリセリドのことをいい、ＬＭＭ型トリグリセリドとは、ｓｎ−１位が長鎖脂肪酸、ｓｎ−２，３位が中鎖脂肪酸である非対称型トリグリセリドのことをいい、ＭＭＭ型トリグリセリドとは、ｓｎ−１，２，３位のすべてが中鎖脂肪酸であるトリグリセリドのことをいい、ＬＬＬ型トリグリセリドとは、ｓｎ−１，２，３位のすべてが長鎖脂肪酸であるトリグリセリドのことをいう。
そして、（２）の方法によると、反応後に脂肪酸や脂肪酸エチルエステルを取り出すことで、ＭＬＭ型トリグリセリドの含量を高めることができても、取り出した物質を有効に再利用することはできず、実製造を考えると大きなコスト負荷となり、いまだに対称型トリグリセリドが汎用的に実用生産されていないのが現状である。
また、（２）の方法においては、反応後ＭＬＭ型トリグリセリドとＭＬＬ型トリグリセリドが得られるが、この２種類のトリグリセリドはともに高沸点油脂であり事実上分別は不可能である。分別処理を避けて高純度のＭＬＭ型トリグリセリドを得るには、アシドリシス反応において大量の中鎖脂肪酸のエチルエステルを反応に用いなければならず、生産性が低下し、さらにコストアップの大きな原因となってしまう。
（３）の方法によると、第一反応は、脱水反応であるためカラムなどに酵素を充填できず連続化は困難である。また、高純度の対称型トリグリセリドを製造するために、第二反応において、大過剰の低級アルコ−ルエステルを反応に用いなければならないなどの欠点を有する。
【発明の開示】
したがって、本発明は、ＭＬＭ型トリグリセリドを高純度で製造することができる方法を提供することを目的とする。
また、本発明の他の目的は、製造時に発生する廃棄物量を減少させ、ＭＬＭ型トリグリセリドを工業的に効率良く、かつ高純度で製造する方法を提供することにある。
上記課題を解決するために鋭意検討した結果、第一反応で特定の原料を用いてランダムエステル交換反応を行い、第二反応でｓｎ−１，３位特異的エステル交換反応を行えば、高純度なＭＬＭ型トリグリセリドが製造できることを見出した。
上記課題を解決するために鋭意検討した結果、第一反応でランダムエステル交換反応を行い、第二反応でｓｎ−１，３位特異的エステル交換反応を行えば、高純度なＭＬＭ型トリグリセリドが製造できることを見出した。
すなわち、本発明は、第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドとを、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応して中鎖脂肪酸及び長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセリドを含有する反応物を得て、第二反応として、該反応物と中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとを、ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換反応し、次いで第二反応で得られた反応物から中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出し（一部又は全部取り出し）、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることを特徴とする対称型トリグリセリドの製造方法を提供する。
また、本発明は、第一反応後に、中鎖脂肪酸トリグリセリドを取り出す（一部又は全部取り出す）上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第二反応で得られた反応物から中鎖脂肪酸トリグリセリド、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出し（一部又は全部取り出し）、第一及び／又は第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリドを第一反応の原料として再利用し、第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを第二反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとを、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応して、中鎖脂肪酸及び長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセリドを含有する反応物を得、該反応物から中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドを取り出した（一部又は全部取り出した）トリグリセリド含有物を得、第二反応として、該トリグリセリド含有物と中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとを、ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換反応し、次いで第二反応で得られた反応物から中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出し（一部又は全部取り出し）、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることを特徴とする対称型トリグリセリドの製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第二反応後に、中鎖脂肪酸トリグリセリドを取り出す（一部又は全部取り出す）上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリドを、第一反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第二反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、第一反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、第二反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリドを、第一反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、第一反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、第二反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応後及び／又は第二反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドを第一反応の原料として再利用し、第一反応後及び／又は第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを第二反応の原料として再利用する上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応において、（ａ）中鎖脂肪酸トリグリセリドと、（ｂ）長鎖脂肪酸トリグリセリド、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、及び長鎖脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも１種を、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応して、中鎖脂肪酸と長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とする第１のトリグリセリドを含有する反応物を得、第二反応として、該反応物中の第１のトリグリセリドと、（ｃ）中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸からなる群から選ばれる少なくとも１種を、ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換反応して、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることを特徴とする対称型トリグリセリドの製造方法を提供する。
さらに、本発明は、前記長鎖脂肪酸が、長鎖不飽和脂肪酸である上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、前記長鎖不飽和脂肪酸が、炭素数１８の脂肪酸、ＥＰＡエイコサペンタエン酸）、及びＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）からなる群から選ばれる１種又は２種以上の脂肪酸である上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応及び／又は第二反応に用いる酵素が、粉末状であり、９０質量％以上が１〜１００μｍの粒子径であるリパ−ゼであって、酵素反応を無溶剤かつ無水系で行う上記製造方法を提供する。
さらに、本発明は、第一反応及び／又は第二反応の酵素反応を、粉末状リパ−ゼをろ過助剤とともにろ過機内に封入し、該ろ過機へ反応原料を通液する方法により行う上記製造方法を提供する。
【図面の簡単な説明】  図１は、本発明の中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセドを用いた対称型（ＭＬＭ型）トリグリセリドの製造方法を模式的に示したフロ−チャ−トである。
図２は、本発明の中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを用いた対称型（ＭＬＭ型）トリグリセリドの製造方法を模式的に示したフロ−チャ−トである。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明に使用される中鎖脂肪酸トリグリセリドとは、構成脂肪酸が炭素数２〜１２、好ましくは８〜１０の中鎖脂肪酸からなるトリグリセリドである。この中鎖脂肪酸トリグリセリドは、例えば、グリセリンと一種又は複数種の中鎖脂肪酸を無触媒で脱水合成反応を行ったり、グリセリンと、一種又は複数種の中鎖脂肪酸のアルコ−ルエステルとをエステル交換反応したりすることにより得られる。また、前記脱水合成反応又はエステル交換反応の際、リパーゼなどの酵素を触媒に用いても同様に合成できる。
中鎖脂肪酸は、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸のいずれでも良い。具体的には、例えば、デカン酸、オクタン酸等が挙げられる。
このような中鎖脂肪酸を構成脂肪酸とする中鎖脂肪酸トリグリセリドは、市販品を容易に入手することができ、市販されているものとしてＯＤＯ（日清オイリオ（株）社製）等が挙げられる。
本発明に使用される長鎖脂肪酸トリグリセリドとは、構成脂肪酸が炭素数１４〜２８、好ましくは炭素数１６〜２２、より好ましくは１６〜１８の長鎖脂肪酸からなるトリグリセリドである。この長鎖脂肪酸トリグリセリドは、例えば、グリセリンと一種又は複数種の長鎖脂肪酸を無触媒で脱水合成反応を行ったり、グリセリンと一種又は複数種の長鎖脂肪酸のアルコ−ルエステルとをエステル交換反応したりすることにより得られる。また、前記脱水合成反応又はエステル交換反応の際、酵素を触媒に用いても同様に合成できる。
長鎖脂肪酸は、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸のいずれでも良い。炭素数が１４〜２８である長鎖脂肪酸の例として、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、ミリストレイン酸、ペンタデセン酸、パルミトレイン酸、ヘキサデカトリエン酸、ヘプタデセン酸、オレイン酸、リノ−ル酸、リノレン酸、γ−リノレン酸、オクタデカテトラエン酸、エイコセン酸、エイコサジエン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコセン酸、ドコサジエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）等が挙げられる。これらのうち、炭素数１６〜２２の長鎖脂肪酸が好ましい。
長鎖脂肪酸は、融点が低く操作性の点で長鎖不飽和脂肪酸であることが好ましく、さらに、汎用性、機能性の点で、炭素数１８の不飽和脂肪酸、ＥＰＡ及びＤＨＡから選ばれる１種又は２種以上の脂肪酸であることが好ましい。
上記長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とする長鎖脂肪酸トリグリセリドは、市販品を容易に入手することができ、市販されているものとして大豆油、菜種油、高オレイン酸菜種油、ゴマ油、コ−ン油、綿実油、紅花油、高オレイン酸紅花油、ヒマワリ油、高オレイン酸ヒマワリ油、カカオ油、米糠油、落花生油、オリ−ブ油、シソ油、エゴマ油、亜麻仁油、ブドウ種子油、マカデミアナッツ油、ヘ−ゼルナッツ油、カボチャ種子油、クルミ油、椿油、茶実油、ボラ−ジ油、綿実油、小麦胚芽油、藻類油、牛脂、豚脂、鶏油、魚油、ラ−ド、アザラシ油、品種改良によって低飽和化されたこれらの油脂およびこれらの水素添加油脂等が挙げられる。これらのうち、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡを多く含むものとして、魚油等が挙げられる。
本発明に使用される長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとは、炭素数１４〜２８、好ましくは炭素数１６〜２２、より好ましくは２０〜２２の長鎖脂肪酸と、炭素数１〜２８、好ましくは炭素数１〜４のアルコ−ルのエステルである。長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを構成するアルコ−ルは、水酸基の数が１であるモノアルコ−ルである。また、アルコ−ルは１級、２級、３級アルコ−ルのいずれでも良く、さらに、飽和脂肪族アルコ−ルや不飽和脂肪族アルコ−ルでも良い。長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを構成するアルコ−ルの例として、メタノ−ル、エタノ−ル、プロパン−ル、イソプロピルアルコ−ル、ブタノ−ル等が挙げられるが、炭素数１〜４のアルコ−ルが好ましく、特に安全性の点でエタノ−ルが好ましい。炭素数１４〜２８の長鎖脂肪酸としては、前述したものを挙げることができる。
長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルは、例えば動植物油をエタノ−ル中で酸やアルカリ触媒を用いてアルコリシス反応を行うことで得ることができる。また、市販品を容易に入手することができ、市販されているものとして日本化学飼料社製のＤＨＡ−９０Ｅ（ドコサヘキサエン酸エチルエステル）や日本化学飼料社製のＥＰＡ−９０Ｅ（エイコサペンタエン酸エチルエステル）等が挙げられる。
本発明に使用される長鎖脂肪酸及び中鎖脂肪酸としては、長鎖脂肪酸トリグリセリド及び中鎖脂肪酸トリグリセリドの項で説明したものがあげられる。
本発明で行うランダムエステル交換反応は、酵素又は化学触媒を用いて行われる。反応原料を構成する脂肪酸が高度不飽和脂肪酸である場合、化学触媒を用いて反応すると副反応を引き起こすため、酵素を用いて反応するのが望ましい。
酵素を用いて前記ランダムエステル交換反応を行う場合、用いる酵素は非特異性リパ−ゼが好ましい。非特異性リパ−ゼとしては動物、植物、および微生物いずれの起源のものでもよく、例えばキャンディダ  シリンドラセ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）、アルカリゲネス  エスピ−（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｓｐ．）、アルカリゲネス  ファエカリス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）など由来のリパ−ゼを挙げることができる。
前記酵素、好ましくはリパ−ゼは、粉末のまま、又は固定化したものを使用することができるが、反応効率をより高めるために、粉末粒子の９０％以上が１〜１００μｍの粒子径である粉末状リパ−ゼであることが最も好ましい。
酵素粉末粒子の粒子径測定は、例えば、ＨＯＲＩＢＡ社製のレ−ザ−型粒度分布測定装置ＬＡ−５００を用いて行うことができる。粉末粒子の９０％の粒子径が１〜１００μｍである粉末酵素としては、例えば、リパ−ゼＱＬＭ（名糖産業社製）等が挙げられる。
ランダムエステル交換反応に使用する酵素の量は、反応原料の全質量に対して、好ましくは０．０１〜２０質量％、より好ましくは０．１〜５質量％である。
酵素を用いる場合の反応温度は、耐久性の点から好ましくは２０〜１００℃、より好ましくは４０〜８０℃である。
ランダムエステル交換反応において化学触媒を用いる場合、ナトリウムメチラ−ト等のアルカリ性化学触媒や硫酸等の酸性化学触媒等を使用することができる。これらは、市販品として容易に入手することができ、例えば、市販されているナトリウムメチラートとして、ソジウムメチラート（日本曹達社製）、ナトリウムメトキシド（和光純薬工業株式会社）等が挙げられる。また、反応に使用する化学触媒の量は、反応原料の全質量に対して、好ましくは０．０１〜５質量％、より好ましくは０．１〜２質量％である。
化学触媒を用いた場合の反応時間は、好ましくは０．５〜２０時間、より好ましくは２〜５時間である。
本発明で行うｓｎ−１，３位特異性酵素を用いたエステル交換反応は、トリグリセリドのｓｎ−１，３位に特異性を有するエステル交換反応である。前記ｓｎ−１，３位特異性酵素として、例えば、ブタ膵臓リパ−ゼ、大豆、米ヌカ、ヒマ種子など由来のリパ−ゼ、アスペルギルス  ニガ−（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、リゾプス  デレマ−（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｄｅｌｅｍａｒ）、リゾプス  ジャバニカス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、ムコ−ル  ミ−ハイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ）、シュ−ドモナス  フルオレッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）等が挙げられる。
前記ｓｎ−１，３位特異性酵素、好ましくはリパーゼは、粉末状のもの、又は固定化したもののいずれをも用いることができる。これら酵素として、例えば、リパーゼＰＬ（名糖産業社製）、リポザイムＴＬ（ノボ社製）、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ由来の酵素粉末等が挙げられる。粉末状の酵素としては、粉末粒子の９０％以上が１〜１００μｍの粒子径である粉末状リパーゼを使用することができる。酵素粉末粒子の粒子径は、前述した方法により測定することができる。
ｓｎ−１，３位特異性酵素の量は、反応原料の全質量に対して、好ましくは０．０１〜１０質量％、より好ましくは０．１〜５質量％である。
ｓｎ−１，３位特異性酵素を用いる場合の反応温度は、耐久性の点から好ましくは２０〜９０℃、より好ましくは３０〜６０℃である。
酵素を用いたランダムエステル交換反応及びｓｎ−１，３位特異性酵素を用いたエステル交換反応は、作業性の点から無溶剤かつ無水系で行うことが好ましい。また、効率の点で、酵素反応は、粉末状リパ−ゼをろ過助剤とともにろ過機内に封入し、該ろ過機へ反応原料を通液することにより行うことが好ましい。このようにすることで、反応後の残存酵素と反応物を分離するなどの効果がある。酵素を用いてバッチ式でランダムエステル交換反応又はｓｎ−１，３位特異的エステル交換反応を行う際の反応時間については、後段で詳しく述べる。
以下、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドを用いてＭＬＭ型トリグリセリドを製造する本発明の対称型トリグリセリドの製造方法を、順を追って説明する。なお、図１は、該対称型トリグリセリドの製造方法を模式的に示したフローチャートである。
前記対称型トリグリセリドの製造方法において、第一反応として、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドを、酵素又は化学触媒を用いてランダムエステル交換反応を行う。酵素を用いてバッチ式で行う場合の反応時間は、好ましくは１〜５０時間、より好ましくは１５〜２５時間である。
第一反応の原料として用いる中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドの混合質量比は、特に限定されないが、反応物中の長鎖脂肪酸トリグリセリドの比率を抑え、反応効率等を考慮すると、好ましくは１：９〜９：１、より好ましくは１：４〜１：１である。
第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドをランダムエステル交換反応させると、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸であるＭＬＭ型トリグリセリドの外に、ＬＭＬ、ＭＬＬ、ＬＭＭ、ＭＭＭ、及びＬＬＬ型トリグリセリドが得られる。
第一反応において、反応原料の中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドの比率が上記範囲を逸脱すると、第一反応後の反応物中に多量のＬＬＬ型トリグリセリドが存在するようになる。すると、後述する第二反応において、目的とするＭＬＭ型トリグリセリドを得るには、多量の中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルが必要となってしまい、反応効率が低下するという問題が生じる。
第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドをランダムエステル交換反応させた後、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＭＭ型）を反応物から取り出す（一部又は全部取り出す）ことが好ましい。この際、取り出し処理後のトリグリセリド含有物中、中鎖脂肪酸トリグリセリド含有率が好ましくは０〜１０質量％、さらに好ましくは０〜６質量％、最も好ましくは０〜３質量％になるようにするのが良い。中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＭＭ型）とその他のトリグリセリドを分別するには、蒸留法を用い、例えば、２００℃、３０Ｐａで留出する成分（中鎖脂肪酸トリグリセリド含量が多いもの）と残留成分（その他のトリグリセリド含量が多いもの）に分けることができる。前記蒸留法としては、バッチ式、連続式、薄膜式、及び流下膜式等が挙げられる。
蒸留法によって取り出された中鎖脂肪酸トリグリセリドは、第一反応における反応原料として再利用することができ、効率的である。
つぎに、第一反応後の反応物、又は該反応物から中鎖脂肪酸トリグリセリドを取り出した（一部又は全部取り出した）トリグリセリド含有物を、第二反応において、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルとｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換する。このエステル交換反応をバッチ式で行う場合の反応時間は、好ましくは１〜５０時間、より好ましくは１５〜３０時間である。
ここで、第二反応における中鎖脂肪酸と長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とする（第１の）トリグリセリドと、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び／又は中鎖脂肪酸の使用比率（質量）を１：０．５〜１：２０とするのが好ましく、より好ましくは１：２〜１：７である。
この第二反応後に、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出すことで、最終的に得られる製品中のＭＬＭ型トリグリセリドの純度を高めることができる。さらには、中鎖脂肪酸トリグリセリドも取り出すのが好ましい。これらの物質の取り出しは、バッチ式などの蒸留処理により行うことができる。
第二反応で得られた反応物からの中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、及び中鎖脂肪酸トリグリセリドの取り出しは、最終製品中の対称型トリグリセリド含量を高めるために、取り出し処理後に得られるトリグリセリド含有物中の前記各物質含有量が少なくなるように行うのが好ましい。
具体的には、取り出し処理後に得られるトリグリセリド含有物中の中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量は０〜５質量％が好ましく、０〜３質量％がさらに好ましく、０〜１質量％が最も好ましい。また、取り出し処理後に得られるトリグリセリド含有物中の長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量は、０〜５質量％が好ましく、０〜３質量％がさらに好ましく、０〜１質量％が最も好ましい。取り出し処理後に得られるトリグリセリド含有物中の中鎖脂肪酸トリグリセリド含量は、０〜１５質量％が好ましく、０〜１０質量％がさらに好ましく、０〜８質量％が最も好ましい。
ただし、対称型トリグリセリドと中鎖脂肪酸トリグリセリドの混合物を最終品として得ようとする場合には、取り出し処理後に得られるトリグリセリド含有物中の中鎖脂肪酸トリグリセリドは先に説明した含量にまで取り除く必要はなく、取り出し処理後に得られるトリグリセリド含有物中の中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルのみを先に説明した含量となるように取り出せば良い。
第二反応後の中鎖脂肪酸のアルコールモノエステル、長鎖脂肪酸のアルコールモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドの取り出しは、それらの反応原料への再利用を考えると、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多い成分と、中鎖脂肪酸トリグリセリド及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多い成分の２つに分別して取り出すことが好ましい。この分別は、蒸留の温度、減圧度、及び蒸留時間を調整することで行うことができ、例えば、蒸留前半工程（５０℃、１００Ｐａ）に留出する成分（中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量が多いもの）と蒸留後半工程（２３０℃、１Ｐａ）に留出する成分（中鎖脂肪酸トリグリセリド及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量が多いもの）に分けることができる。
また、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多い成分、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多い成分、及び中鎖脂肪酸トリグリセリド含量の多い成分の３つに分別して取り出すこともできる。この分別は、蒸留の温度、減圧度、及び蒸留時間を調整することで行うことができ、例えば、蒸留前半工程（２５℃、３０Ｐａ）に留出する成分（中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多いもの）、蒸留中盤工程（１８０℃、１Ｐａ）に留出する成分（長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多いもの）と蒸留後半工程（２３０℃、１Ｐａ）に留出する成分（中鎖脂肪酸トリグリセリド含量の多いもの）に分けることができる。
第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリドは、第一反応の原料として再利用することができる。同様に、第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルは、第二反応の原料として再利用することができる。また、第二反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルは、後述する本発明の中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを用いた対称型トリグリセリドの製造方法における第一反応の原料として利用することができる。
このように、本発明の中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドを用いた対称型（ＭＬＭ型）トリグリセリドの製造方法は、目的とする生成物ＭＬＭ型トリグリセリド以外の副生物を全て活用することができ、効率的である。
次に、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを用いてＭＬＭ型トリグリセリドを製造する本発明の対称型トリグリセリドの製造方法を、順を追って説明する。なお、図２は、該対称型トリグリセリドの製造方法を模式的に示したフローチャートである。
前記対称型トリグリセリドの製造方法において、第一反応として、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを、酵素又は化学触媒を用いたランダムエステル交換反応を行う。なお、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルは、前述した中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドを用いた対称型トリグリセリドの副生物である長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを用いることもできる。また、前記ランダムエステル交換反応を酵素を用いてバッチ式で行う場合の反応時間は、好ましくは１〜１００時間、より好ましくは１５〜８０時間である。
第一反応の原料として用いる中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルの混合質量比は、特に限定されないが、反応物中の長鎖脂肪酸トリグリセリドの比率を抑え、反応効率等を考慮すると、好ましくは８：１〜１：８、より好ましくは２：１〜１：５である。長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルの代わりに、長鎖脂肪酸を用いる場合も同様である。
第一反応において、中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルをランダムエステル交換反応させると、反応物として、１，３位が中鎖脂肪酸、２位が長鎖脂肪酸であるＭＬＭ型トリグリセリドの外に、ＬＭＬ、ＭＬＬ、ＬＭＭ、ＭＭＭ、及びＬＬＬ型トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルが得られる。
第一反応において、反応原料の中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルの比率が上記範囲を逸脱すると、第一反応後の反応物中に多量のＬＬＬ型トリグリセリドが存在するようになる。すると、後述する第二反応において、目的とするＭＬＭ型トリグリセリドを得るには、大量の中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルが必要となってしまい、反応効率が低下するという問題が生じる。
ここで、後述する第二反応の反応効率を高めるために、第一反応で得られた上記反応物から中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、及び中鎖脂肪酸トリグリセリドを一部又は全部バッチ式などの蒸留処理によって取り出す。この際、第二反応での反応率を高めるために、取り出し処理後に得られるトリグリセリド含有物中の前記各物質含量が少なくなるように行うのが好ましい。
具体的には、取り出し処理後のトリグリセリド含有物中の中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量は０〜５質量％が好ましく、０〜３質量％がさらに好ましく、０〜２質量％が最も好ましい。また、取り出し処理後のトリグリセリド含有物中の長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量は、０〜５質量％が好ましく、０〜３質量％がさらに好ましく、０〜２質量％が最も好ましい。取り出し処理後のトリグリセリド含有物中の中鎖脂肪酸トリグリセリド含量は、０〜１５質量％が好ましく、０〜１０質量％がさらに好ましく、０〜８質量％が最も好ましい。
第一反応後の中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドの取り出しは、それらの反応原料への再利用を考えると、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多い成分と、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリド含量の多い成分の２つに分別して取り出すことが好ましい。この分別は、蒸留の温度、減圧度、及び蒸留時間を調整することで行うことができ、例えば、蒸留前半工程（５０℃、１００Ｐａ）に留出する成分（中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量が多いもの）と蒸留後半工程（２３０℃、１Ｐａ）に留出する成分（長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量及び中鎖脂肪酸トリグリセリド含量が多いもの）に分けることができる。
また、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多い成分、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多い成分、及び中鎖脂肪酸トリグリセリド含量の多い成分の３つに分別して取り出すことも可能である。この分別は、蒸留の温度、減圧度、及び蒸留時間を調整することで行うことができ、例えば、蒸留前半工程（２５℃、３０Ｐａ）に留出する成分（中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多いもの）、蒸留中盤工程（１８０℃、１Ｐａ）に留出する成分（長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル含量の多いもの）と蒸留後半工程（２３０℃、１Ｐａ）に留出する成分（中鎖脂肪酸トリグリセリド含量の多いもの）に分けることができる。
第一反応後に取り出した長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドは、第一反応の原料として再利用することができる。また、第一反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルは、第二反応の原料として再利用することができ、効率的である。
つぎに、中鎖脂肪酸トリグリセリド、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出した（一部又は全部取り出した）トリグリセリド含有物を、第二反応において、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルと前述したｓｎ−１，３位特異性酵素を用いてエステル交換する。バッチ式で該エステル交換を行う場合の反応時間は、好ましくは１〜１００時間、より好ましくは１５〜８０時間である。
ここで、第二反応における中鎖脂肪酸と長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とする（第１の）トリグリセリドと中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び／又は中鎖脂肪酸の使用比率（質量）を１：０．５〜１：２０とするのが好ましく、より好ましくは１：２〜１：７である。
この第二反応後に、前述した中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸トリグリセリドを用いた対称型トリグリセリドの製造方法における第二反応後と同様にして、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを取り出すことで、最終的に得られる製品中のＭＬＭ型トリグリセリドの純度を高めることができる。さらには、中鎖脂肪酸トリグリセリドも取り出すことによってＭＬＭ型トリグリセリドの純度を高めることができる。これらの取り出し方法は、前述した通りである。また、ＭＬＭ型トリグリセリドと中鎖脂肪酸トリグリセリドの混合物を最終品として得ることも可能である。
第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリド及び長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルは、第一反応の原料として再利用することができる。同様に、第二反応後に取り出した中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルは、第二反応の原料として再利用することができる。
このように、本発明の中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを用いた対称型（ＭＬＭ型）トリグリセリドの製造方法は、目的とする生成物ＭＬＭ型トリグリセリド以外の副生物を全て活用することができ、効率的である。
中鎖脂肪酸トリグリセリドと長鎖脂肪酸を用いてＭＬＭ型トリグリセリドを製造する本発明の対称型トリグリセリドの製造方法において、第一反応終了後、中鎖脂肪酸及び長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセリド、及び長鎖脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセリド以外の成分を取り出し、第二反応後、目的物であるｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリド以外の成分を取り出すことにより、高純度の対称型トリグリセリドを効率良く製造することができる。
さらに、第一反応後に取り出した成分の中で、第一反応原料と同じ成分については第一反応原料として再利用することができ、第二反応原料と同じ成分については第二反応原料として再利用することができる。また、第二反応後に取り出した成分の中で、第一反応原料と同じ成分については第一反応原料として再利用することができ、第二反応原料と同じ成分については第二反応原料として再利用することができる。
例えば、中鎖脂肪酸トリグリセリド及び長鎖脂肪酸を出発原料として、対称トリグリセリドを製造した場合について説明をする。
又、第一反応終了後、反応物から中鎖脂肪酸トリグリセリド、長鎖脂肪酸、及び中鎖脂肪酸を取り出し、トリグリセリド含有物を得る。該トリグリセリド含有物と中鎖脂肪酸を原料として第二反応を行い、第二反応終了後、反応物から中鎖脂肪酸トリグリセリド、長鎖脂肪酸、及び中鎖脂肪酸を取り出し、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が長鎖脂肪酸である対称型トリグリセリドを得ることができる。このとき、第一反応終了後、及び第二反応終了後に取り出した中鎖脂肪酸トリグリセリド、及び長鎖脂肪酸は、第一反応原料として再利用することができ、第一反応終了後、及び第二反応終了後に取り出した中鎖脂肪酸は、第二反応原料として再利用することができる。
さらに、先にも説明したが、融点が低く、操作性の点から原料として長鎖脂肪酸トリグリセリド、長鎖脂肪酸のモノエステル、及び長鎖脂肪酸は、不飽和のものを用いることが好ましい。しかし、これらを原料としても、水添処理をさらに実施することで、長鎖飽和脂肪酸を構成脂肪酸とする対称型トリグリセリドを得ることができる。
すなわち、本発明の製造により得られた不飽和脂肪酸を構成脂肪酸とする対称型トリグリセリドを、さらに水添処理することで、長鎖飽和脂肪酸を構成脂肪酸とする対称型トリグリセリドを得ることができる。このようにして製造すれば、反応及び精製の段階で、融点の高い長鎖飽和脂肪酸トリグリセリド、長鎖飽和脂肪酸のモノエステル、及び長鎖飽和脂肪酸を原料として使用しないため、その操作が容易となる。
具体的には、本発明により製造されたｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸である対称型トリグリセリドを、水添処理することにより、ｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がステアリン酸である飽和脂肪酸を構成脂肪酸とする対称型トリグリセリドを得ることができる。水添処理は、公知の方法を用いることができる。
このようにして得られたｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がステアリン酸である対称型トリグリセリドは、チョコレート用代用脂として好適に使用することができる。
【実施例】  以下に本発明の実施例を説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されるものではない。なお、実施例において、ＤＨＡエチルエステルはドコサヘキサエン酸エチルエステルのことであり、ＥＰＡエチルエステルはエイコサペンタエン酸エチルエステルのことである。
［実施例１］
ｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＤＨＡの対称型トリグリセリドの製造
＜第一反応＞
トリカプリリン（商品名：トリカプリリン、シグマ−アルドリッチジャパン株式会社製）５００ｇ、ＤＨＡエチルエステル（商品名：ＤＨＡ−９０Ｅ、日本化学飼料株式会社製）５００ｇ、及び非特異性リパ−ゼ（商品名：リパ−ゼＱＬＭ、名糖産業社製）２０ｇを２０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物９８０ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物３５０ｇを得た。薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（１）  蒸留前半工程：２５℃、３０Ｐａ；成分（Ａ）１５０ｇ
（２）  蒸留中盤工程：１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｂ）２７０ｇ
（３）  蒸留後半工程：２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｃ）２００ｇ
また、各成分（Ａ）〜（Ｃ）をＧＬＣ（アジレント製、６８９０  Ｓｅｒｉｅｓ  ＧＣ  Ｓｙｓｔｅｍ）で分析したところ、以下のような主成分が判明した。
（Ａ）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｂ）ＤＨＡエチルエステル含量；９３質量％
（Ｃ）トリカプリリン含量；９８質量％
＜第二反応＞
上記トリグリセリド含有物３５０ｇ、オクタン酸エチルエステル（商品名：オクタン酸エチル、井上香料株式会社製）１７５０ｇ、及びｓｎ−１，３位特異性リパ−ゼ（商品名：リポザイムＴＬ、ノボ社製）４０ｇを５０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物２０００ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、反応物からオクタン酸エチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物１３０ｇを得た。薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（４）  蒸留前半工程：２５℃、３０Ｐａ；成分（Ａ’）１５００ｇ
（５）  蒸留中盤工程：１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｂ’）１２０ｇ
（６）  蒸留後半工程：２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｃ’）１００ｇ
次に、各成分（Ａ’）〜（Ｃ’）をＧＬＣで分析したところ、以下のような主成分が確認された。
（Ａ’）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｂ’）ＤＨＡエチルエステル含量；９０質量％
（Ｃ’）トリカプリリン含量；９９質量％
また、第二反応後、オクタン酸エチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出したトリグリセリド含有物をＧＬＣ及びＨＰＬＣ（島津製作所社製、ＬＣ−９Ａ  ＬＩＱＵＩＤ  ＣＨＯＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨ）で分析すると、ｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＤＨＡである対称型トリグリセリドの含量は９３質量％であった。
［実施例２］
取り出したオクタン酸エチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、及びトリカプリリンを反応原料に用いることによるｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＤＨＡの対称型トリグリセリドの製造
＜第一反応＞
実施例１で得られた取り出し成分（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｂ’）、（Ｃ’）、トリカプリリン（商品名：トリカプリリン、シグマ−アルドリッチジャパン株式会社製）及びＤＨＡエチルエステル（商品名：ＤＨＡ−９０Ｅ、日本化学飼料株式会社製）を用いて、ＤＨＡエチルエステル含量が約５０質量％、トリカプリリン含量が約５０質量％となるように混合したもの１０００ｇ、及びリパ−ゼＱＬＭ（名糖産業社製）２０ｇを２０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物９８０ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物３５０ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（１）  蒸留前半工程：２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｄ）１５０ｇ
（２）  蒸留中盤工程：１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｅ）２７０ｇ
（３）  蒸留後半工程：２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｆ）２００ｇ
各成分（Ｄ）〜（Ｆ）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果になった。
（Ｄ）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｅ）ＤＨＡエチルエステル含量；９３質量％
（Ｆ）トリカプリリン含量；９８質量％
＜第二反応＞
上記トリグリセリド含有物３５０ｇ、実施例１で得られた取り出し成分（Ａ）、（Ａ’）、及びオクタン酸エチルエステル（商品名：オクタン酸エチル、井上香料株式会社製）の混合物１７５０ｇ、及びｓｎ−１，３位特異性リパ−ゼ（商品名：リポザイムＴＬ、ノボ社製）４０ｇを５０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物２０００ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物１３０ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（４）  蒸留前半工程：２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｄ’）１５００ｇ
（５）  蒸留中盤工程：１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｅ’）１２０ｇ
（６）  蒸留後半工程：２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｆ’）１００ｇ
各成分（Ｄ’）〜（Ｆ’）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果になった。
（Ｄ’）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｅ’）ＤＨＡエチルエステル含量；９０質量％
（Ｆ’）トリカプリリン含量；９９質量％
また、第二反応後オクタン酸エチルエステル、ＤＨＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出したトリグリセリド含有物をＧＬＣ及びＨＰＬＣで分析すると、ｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＤＨＡである対称型トリグリセリドの含量は９１質量％であった。
［実施例３］
ｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＥＰＡの対称型トリグリセリドの製造
＜第一反応＞
トリカプリリン（商品名：トリカプリリン、シグマ−アルドリッチジャパン株式会社製）５００ｇ、ＥＰＡエチルエステル（商品名：ＥＰＡ−９０Ｅ、日本化学飼料株式会社製）５００ｇ、リパ−ゼＱＬＭ（名糖産業社製）２０ｇを２０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物９８０ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物３５０ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（１）  蒸留前半工程：２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｇ）１５０ｇ
（２）  蒸留中盤工程：１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｈ）２６０ｇ
（３）  蒸留後半工程；２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｉ）２００ｇ
各成分（Ｇ）〜（Ｉ）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果になった。
（Ｇ）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｈ）ＥＰＡエチルエステル含量；９３質量％
（Ｉ）トリカプリリン含量；９８質量％
＜第二反応＞
上記トリグリセリド含有物３４０ｇ、オクタン酸エチルエステル（商品名：オクタン酸エチル、井上香料株式会社製）１７５０ｇ、及びｓｎ−１，３位特異性リパ−ゼ（商品名：リポザイムＴＬ、ノボ社製）４０ｇを５０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物２０００ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物１２０ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（４）  蒸留前半工程：２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｇ’）１６００ｇ
（５）  蒸留中盤工程：１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｈ’）１１０ｇ
（６）  蒸留後半工程：２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｉ’）１００ｇ
次に、各成分（Ｇ’）〜（Ｉ’）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果になった。
（Ｇ’）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｈ’）ＥＰＡエチルエステル含量；９０質量％
（Ｉ’）トリカプリリン含量；９９質量％
また、第二反応後、オクタン酸エチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出したトリグリセリド含有物をＧＬＣ及びＨＰＬＣで分析すると、ｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＥＰＡである対称型トリグリセリドの含量は９３質量％であった。
［実施例４］
取り出したオクタン酸エチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、及びトリカプリリンを反応原料に用いることによるｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＥＰＡの対称型トリグリセリドの製造
＜第一反応＞
実施例３で得られた取り出し成分（Ｈ）、（Ｉ）、（Ｈ’）、（Ｉ’）、トリカプリリン（商品名：トリカプリリン、シグマ−アルドリッチジャパン株式会社製）及びＥＰＡエチルエステル（商品名：ＥＰＡ−９０Ｅ、日本化学飼料株式会社製）をトリカプリリン含量が約５０質量％、ＥＰＡエチルエステル含量が約５０質量％となるように混合したもの１０００ｇ、及びリパ−ゼＱＬＭ（名糖産業社製）２０ｇを２０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物９８０ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物３５０ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（１）  蒸留前半工程；２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｊ）１５０ｇ
（２）  蒸留中盤工程；１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｋ）２６０ｇ
（３）  蒸留後半工程；２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｌ）２００ｇ
次に、各成分（Ｊ）〜（Ｌ）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果となった。
（Ｊ）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｋ）ＥＰＡエチルエステル含量；９３質量％
（Ｌ）トリカプリリン含量；９８質量％
＜第二反応＞
上記トリグリセリド含有物３４０ｇ、実施例３で得られた取り出し成分（Ｇ）、（Ｇ’）、及びオクタン酸エチルエステル（商品名：オクタン酸エチル、井上香料株式会社製）の混合物１７５０ｇ、及びｓｎ−１，３位特異性リパ−ゼ（商品名：リポザイムＴＬ、ノボ社製）２００ｇを５０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で７２時間酵素反応を行い、反応物２０００ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、反応物からオクタン酸エチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物１２０ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（４）  蒸留前半工程；２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｊ’）１５００ｇ
（５）  蒸留中盤工程；１８０℃、１Ｐａ；成分（Ｋ’）１２０ｇ
（６）  蒸留後半工程；２３０℃、１Ｐａ；成分（Ｌ’）１００ｇ
次に、各成分（Ｊ’）〜（Ｌ’）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果となった。
（Ｊ’）オクタン酸エチルエステル含量；９９質量％
（Ｋ’）ＥＰＡエチルエステル含量；９０質量％
（Ｌ’）トリカプリリン含量；９９質量％
また、第二反応後、オクタン酸エチルエステル、ＥＰＡエチルエステル、及びトリカプリリンをそれぞれ取り出したトリグリセリド含有物をＧＬＣ及びＨＰＬＣで分析すると、ｓｎ−１，３位がオクタン酸、ｓｎ−２位がＥＰＡである対称型トリグリセリドの含量は９１質量％であった。
［実施例５］
ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が炭素数１８の不飽和脂肪酸である対称型トリグリセリドの製造
＜第一反応＞
ハイオレイックひまわり油（商品名：オレインリッチ、昭和産業（株）製）７００ｇと中鎖脂肪酸トリグリセリド（商品名：ＯＤＯ、日清オイリオ（株）製）３００ｇにリパ−ゼＱＬＭ（名糖産業社製）１０ｇを２０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で１７時間酵素反応を行い、濾過処理することにより残存酵素を除去し、反応物９８０ｇを得た。
＜第二反応＞
前記反応物９８０ｇに、オクタン酸エチルエステル（商品名：オクタン酸エチル、井上香料株式会社製）３６７５ｇ、デカン酸エチル（商品名：ｎ−カプリックアシッドエチルエステル、東京化成（株）製）１２２５ｇ及びリポザイムＴＬ（ノボ社製）１２０ｇを１０１反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら４０℃で２６時間酵素反応を行い、反応物５６００ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両株式会社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、デカン酸エチル、オレイン酸エチルエステル、中鎖脂肪酸トリグリセリドをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物３００ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（１）蒸留前半工程；２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｍ）４６００ｇ
（２）蒸留中盤工程；１５０℃、１Ｐａ；成分（Ｎ）３７０ｇ
（３）  蒸留後半工程；２００℃、１Ｐａ；成分（Ｏ）１６０ｇ
次に、各成分（Ｍ）〜（Ｏ）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果となった。
（Ｍ）オクタン酸エチルエステル含量；７５質量％
デカン酸エチル含量；２５質量％
（Ｎ）オレイン酸エチルエステル含量；９３質量％
（Ｏ）中鎖脂肪酸トリグリセリド含量；７０質量％
（構成脂肪酸：オクタン酸；７５質量％、デカン酸；２５質量％）
また、第二反応後、オクタン酸エチルエステル、デカン酸エチル、オレイン酸エチルエステル、中鎖脂肪酸トリグリセリドをそれぞれ取り出したトリグリセリド含有物をＧＬＣ及びＨＰＬＣで確認したところ、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位がオレイン酸である対称型トリグリセリドの含量は９５質量％であった。なお、構成脂肪酸組成は、オクタン酸５０質量％、デカン酸１７質量％、オレイン酸３３質量％であった。
［実施例６］
ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位が炭素数１８の不飽和脂肪酸である対称型トリグリセリドの製造
＜第一反応＞
ハイオレイックひまわり油（商品名：オレインリッチ、昭和産業（株）製）７００ｇと中鎖脂肪酸トリグリセリド（商品名：ＯＤＯ、日清オイリオ（株）製）３００ｇにナトリウムメチラ−ト（商品名：ナトリウムメトキシド、和光純薬工業株式会社製）１０ｇを２０００ｍｌ反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら５０℃で２時間反応を行い、水洗することにより残存ナトリウムメチラ−トを除去し、反応物９７０ｇを得た。
＜第二反応＞
前記反応物９７０ｇに、オクタン酸エチルエステル（商品名：オクタン酸エチル、井上香料株式会社製）３６７５ｇ、デカン酸エチル（商品名：ｎ−カプリックアシッドエチルエステル、東京化成（株）製）１２２５ｇ及びリポザイムＴＬ（ノボ社製）１２０ｇを１０１反応フラスコに加えて、プロペラ攪拌を行いながら４０℃で２６時間酵素反応を行い、反応物５６００ｇを得た。反応後、遠心式分子蒸留装置（日本車両社製）を用いて、前記反応物からオクタン酸エチルエステル、デカン酸エチル、オレイン酸エチルエステル、中鎖脂肪酸トリグリセリドをそれぞれ取り出し、トリグリセリド含有物３００ｇを得た。
薄膜蒸留では、以下の条件で各成分を取り出した。
（１）蒸留前半工程；２５℃、３０Ｐａ；成分（Ｐ）４６００ｇ
（２）  蒸留中盤工程；１５０℃、１Ｐａ；成分（Ｑ）３７０ｇ
（３）  蒸留後半工程；２００℃、１Ｐａ；成分（Ｒ）１６０ｇ
次に、各成分（Ｐ）〜（Ｒ）をＧＬＣで分析したところ、以下の結果となった。
（Ｐ）オクタン酸エチルエステル含量；７５質量％
デカン酸エチル含量；２５質量％
（Ｑ）オレイン酸エチルエステル含量；９３質量％
（Ｒ）中鎖脂肪酸トリグリセリド含量；７０質量％
（構成脂肪酸：オクタン酸；７５質量％、デカン酸；２５質量％）
また、第二反応後、オクタン酸エチルエステル、デカン酸エチル、オレイン酸エチルエステル、中鎖脂肪酸トリグリセリドをそれぞれ取り出したトリグリセリド含有物をＧＬＣ及びＨＰＬＣで確認したところ、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位がオレイン酸である対称型トリグリセリドの含量は９５質量％であった。なお、構成脂肪酸組成は、オクタン酸５０質量％、デカン酸１７質量％、オレイン酸３３質量％であった。
このようにして得られた対称型トリグリセリド３００ｇを耐圧反応タンクに入れ、Ｎｉ触媒９００ｍｇ加え、水素圧０．３ＭＰａにして、１８０℃に加温し、５時間撹拌後、触媒を除去し、生成物３００ｇを得る。この生成物をＧＬＣ及びＨＰＬＣで分析を行うと、ｓｎ−１，３位が中鎖脂肪酸、ｓｎ−２位がステアリン酸である対称型トリグリセリドの含量は９５質量％であり、構成脂肪酸は、オクタン酸５０質量％、デカン酸１７質量％、ステアリン酸３３質量％である。
［実施例７］
第二反応で用いるリポザイムＴＬ（ノボ社製）１２０ｇの代わりに、
Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ由来の酵素粉末１２ｇを用いて、実施例５及び６を行ったところ、同様の結果が得られた。
以上説明したように、本発明の対称型（ＭＬＭ型）トリグリセリドの製造方法は、高純度のＭＬＭ型トリグリセリドが製造できる。また、目的とする対称型トリグリセリド以外の副生物、すなわち中鎖脂肪酸トリグリセリド、中鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステル、長鎖脂肪酸のアルコ−ルモノエステルを反応原料として有効に再利用することで廃棄物量を減少させ、工業的に効率良く、高純度のＭＬＭ型トリグリセリドが製造できる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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