(57)【要約】本発明は、花色素生合成の遺伝を明らかにし、花きの花色遺伝と色素遺伝子型の関係を明らかにし、花きの新花色作出について実用的花色遺伝型交配法を提供するものであり、花色遺伝型が経路式（１）のフラボノイド生合成に関与し、フラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）やフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の遺伝が五つの複対立遺伝子によって制御されているという新しい法則を見出し、結果として、遺伝子組み替え、放射線等照射などによる突然変異を起こさせる方法を用いなくても、花きの色素遺伝子型からその花色を自由に創成できる、遺伝子型Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐを用い、新花色を作出する方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
花きの花色発現に関わる主要アントシアニジン色素のペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝であって、遺伝子型ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐを用い、新花色を作出する花色遺伝型交配法。
【請求項２】
花きの花色発現に関わる主要アントシアニジン色素のペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝並びに花形に関わる八重型、覆輪型の遺伝であって、遺伝子型Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐを用い、新花色を作出する花色遺伝型交配法。
【請求項３】
花色遺伝型が経路式（Ｉ）
2004103065.tif 000021
（ここで、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＺ、ＨＯは、フラボノイド生合成の前駆物質でのＢ環の水酸化に関する複対立遺伝子を表す。ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＺ、ＨＯの５つの複対立遺伝子は、フラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の、それぞれ３’位の水酸化、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、および３’位と３’、５’位の水酸化を制御する。この５つの複対立遺伝子の表記方法は、例えば、Ｔ、Ｆ、Ｄ、Ｚ、Ｏなど他の表記法でもよい。Ｐｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙおよびＤｐ／ｄｐは、Ｐｇｎ、Ｃｙｎ、Ｄｐｎの生合成に関与するジヒドロフラボノールリダクターゼ（ＤＦＲ）、あるいはアントシアニジンシンターゼ（ＡＳ）の発現に対立する遺伝子座がそれぞれに存在することを示し、Ｄ／ｄは八重の花冠形質、Ｅ／ｅは覆輪の花冠形質を示す。）
のフラボノイド生合成に関与し、遺伝する請求の範囲第１項記載の花色遺伝型交配法。
【請求項４】
花きの花色がフラボノイド生合成過程で遺伝する請求の範囲第１項に記載の花色遺伝型交配法。
【請求項５】
花きの花色がフラボノイド生合成過程で遺伝する請求の範囲第２項に記載の花色遺伝型交配法。
【請求項６】
花きの花色がフラボノイド生合成過程で遺伝する請求の範囲第３項に記載の花色遺伝型交配法。
【請求項７】
花きの花色が母性遺伝する請求の範囲第１項〜第６項のいずれか１項に記載の花色遺伝型交配法。
【請求項８】
花色を作出する花色遺伝型交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親の配偶子を行とし、種子親の配偶子を列とする、請求の範囲第１項〜第７項のいずれか１項に記載の複対立遺伝子の組み合わせ早見表。
【請求項９】
花色遺伝型交配の組み合わせから花きの花色を決定するものであって、花粉親の配偶子を行とし、種子親の配偶子を列とする、請求の範囲第１項〜第７項のいずれか１項に記載の複対立遺伝子の組み合わせから花色を知ることのできる早見表。
【請求項１０】
請求の範囲第８項に記載の複対立遺伝子の組み合わせ早見表を新花色を作出する花色遺伝型交配に使用する方法。
【請求項１１】
請求の範囲第９項に記載の複対立遺伝子の組み合わせ早見表を新花色を作出する花色遺伝型交配に使用する方法。
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、花色遺伝型を適用した花きの新花色育種法に関する。より詳しくは、開花植物、すなわち、被子植物（ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｓ）の花と、遺伝子形を改変するための処理である交配の方法とからなる新規植物またはそれらを得るための処理に関するものである。また、生殖交雑（ｓｅｘｕａｌ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）の段階を含む育種（ｂｒｅｅｄｉｎｇ）によって得られた植物やその一部を用いる方法である。また、新規植物（ｎｅｗ  ｐｌａｎｔｓ）またはそれらを得るための方法であって、被子植物（ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｓ）などの花き類（ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｐｌａｎｔｓ）、特に花（ｆｌｏｗｅｒｓ）に関する。
【背景技術】    アントシアニン類（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ）はフラボノイド化合物（ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）の一種であり、植物の花、果実、葉などに広く存在し、赤、紫、青などの呈色に関係する色素配糖体（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）である。アントシアニン類（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ）を塩酸で加水分解（ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）すると、糖部（ｓｕｇａｒｓ）とアグリコン部（ａｇｌｙｃｏｎｅ）であるアントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）に分解される（非特許文献１、村上孝夫：天然物の構造と化学、廣川書店、１９８４年９月：１７０−１７２）。
フラボノール配糖体（ｆｌａｖｏｎｏｌ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）類はフラボノイド化合物（ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）の一種であり、植物の花、果実、葉葉などに広く存在し、黄色に呈色する色素配糖体（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）である。フラボノール配糖体類（ｆｌａｖｏｎｏｌ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）を塩酸で加水分解（ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）すると、糖部（ｓｕｇａｒｓ）とアグリコン部（ａｇｌｙｃｏｎｅ）であるフラボノール（ｆｌａｖｏｎｏｌ）に分解される（非特許文献２、村上孝夫：天然物の構造と化学、廣川書店、１９８４年９月：１５５−１８５）。
アントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）類は、植物の花において、フラバノン（ｆｌａｖａｎｏｎｅ）であるナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）を出発物質として生合成される。即ち、まずフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  ３’−ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，Ｆ３’、５’ＨまたはＦ３’Ｈ）の作用によりフラバノン骨格（ｆｌａｖａｎｏｎｅ  ｓｋｅｌｅｔｏｎ）のＢ環（Ｂ−ｒｉｎｇ）に水酸基（ｈｙｄｒｏｘｙｌ  ｇｒｏｕｐ）が更に１個結合したエリオディクチオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、更に２個結合したペンタハイドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）へ酵素変換されることが知られている。また、出発物質であるナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）が、フラボノイド３−ヒドロキシラーゼ（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  ３−ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，Ｆ３Ｈ）の作用を受けジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）へ酵素変換され、これが基質となって、更にフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）の作用を受け、Ｂ環に水酸基が更に１個結合したジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、更に２個結合したジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）へ酵素変換されることが知られている。この３種のジヒドロフラボノール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ、ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ、ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）がジヒドロフラボノールリダクターゼ（ｄｉｈｙｄｒｏｆｌａｖｏｎｏｌ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＤＦＲ）およびアントシアニジンシンターゼ（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ  ｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＳ）の作用を受けて、それぞれペラルゴニジン（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ，Ｐｇｎ）、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎ，Ｃｙｎ）、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ，Ｄｐｎ）へ酵素変換されることが知られている（非特許文献２）。
アントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）類は、Ｂ環の水酸基が異なることでその呈色が決定される。例えば、一般に花色素（ｆｌｏｗｅｒ  ｐｉｇｍｅｎｔ）で化学構造（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）中、Ｂ環の４’位（４’  ｐｏｓｉｔｉｏｎ）に水酸基が一個有るものはペラルゴニジン（Ｐｇｎ）でオレンジ色〜朱赤色を呈し、Ｂ環の３’、４’位に水酸基が二個有るものはシアニジン（Ｃｙｎ）で赤色〜深紅色を呈し、Ｂ環の３’、４’、５’位に水酸基が三個有るものはデルフィニジン（Ｄｐｎ）で赤紫色〜紫色を呈し、これらが共存することによって様々な花色を発現する（非特許文献３、本多利雄他：現代化学、１９９８年５月：２５−３２）。
これらの他、種々のアシル基（ａｃｙｌａｔｅｄ  ｇｒｏｕｐｓ）の結合したアントシアニン類（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ）も多数報告され、これらが分子間で互いにスタッキングして花色が変調する現象（分子間自己会合作用、ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｔａｃｋｉｎｇ）、他の黄色フラボノイド配糖体（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）類とサンドイッチ状にスタッキングして花色が変調（青色化、ｂｌｕｅｉｎｇ）する現象（分子間コピグメント作用、ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）、金属原子と結合することによって花色が変調（青色化、ｂｌｕｅｉｎｇ）する現象（金属錯体イオン形成作用、ｍｅｔａｌ−ｃｏｍｐｌｅｘａｔｉｏｎ）、分子中のアシル基（ａｃｙｌａｔｅｄ  ｇｒｏｕｐ）等が分子内でスタッキングして花色が変調（青色化、ｂｌｕｅｉｎｇ）する現象（分子内コピグメント作用、ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）、並びに細胞液胞内ｐＨが変化する現象などで花色が決定されることが認められている（非特許文献４、Ｇｏｔｏ、Ｔ．ｅｔ  ａｌ．：Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３０：１７−３３、１９９１）。
植物の花色遺伝は、花色自体（赤、青、黄、紫など）を遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）として捉えたものが多く報告されている（非特許文献５、安田  齊：花色の生理・生化学、内田老鶴圃、１９９３年３月：Ｐ．２１９−２７２）。近年、フラボノイド色素（ｆｌａｖｏｎｏｉｄ  ｐｉｇｍｅｎｔｓ）に関する花色遺伝型の解析が試みられているが、これらはビール（Ｂｅａｌｅ、１９４５）の唱えた１遺伝子−１酵素説（ｏｎｅ  ｇｅｎｅ−ｏｎｅ  ｅｎｚｙｍｅ  ｔｈｅｏｒｙ）に基づくものである。その例として、ゼラニウム（Ｐｅｌａｒｇｏｎｉｕｍｘ  ｈｏｒｔｏｒｕｍ）花弁のアントシアニジン生合成（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）における、ジヒドロフラボノールリダクターゼ（ＤＦＲ）およびアントシアニジンシンターゼ（ＡＳ）の酵素系をそれぞれＥ１／ｅ１およびＥ２／ｅ２と表記し、遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を想定した方法がある（非特許文献６、小林加奈：育種学雑誌、４８：１６９−１７６、１９９８）。また、ツツジでは、花弁中のフラボノイド生合成前駆体レベルでの各酵素系を遺伝子型として想定した方法があるが、ツツジ以外の花きには適用できなかったなどの問題点がある（非特許文献７、Ｈｅｕｒｓｅｌ、Ｊ．とＨｏｒｎ、Ｗ．：Ｚ．Ｐｆｌａｎｚｅｎｚｕｄｉｔｇ、７９：２３  ８２  ４９、１９７７）。
また、ペチュニア（Ｐｅｔｕｎｉａ）の花では、Ｈｔ１とＨｔ２の２遺伝子（ｇｅｎｅ）がフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）を、Ｈｆ１とＨｆ２の２遺伝子がフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）を制御すると報告されている（非特許文献８、Ｈｏｌｔｏｎ、Ｔ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．：Ｔｈｅ  Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ、７：１０７１−１０８３、１９９５）。
更に、ペチュニアの花では、フラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）のＢ環の水酸化が二遺伝子支配を受けているとの記載がある（非特許文献９、Ｈｏｌｔｏｎ、Ｔ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．：Ｎａｔｕｒｅ、３６６：２７  ６２  ７９、１９９３）。本発明による花色遺伝型交配法では、一遺伝子の支配下にある五つの複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）で花色が制御されていることが特徴で、花きの花色素遺伝は、二遺伝子支配としては同定できなかった。
更にまた、ペチュニアの花では、遺伝子レベルでそれぞれの２遺伝子座が（Ｈｔ１、Ｈｔ２はフラボノイドＢ環の３’位の水酸化に関与し、Ｈｆ１、Ｈｆ２はフラボノイドＢ環の５’位の水酸化に）関与する事実を明らかにしたものの、色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）として後代にどの様な花色が遺伝するのか、必ずしも色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）と花色の遺伝に相関性が認められなかったなどの問題点がある（非特許文献１０、Ｇｒｉｅｓｂａｃｈ、Ｒ．Ｊ．：Ｊ．Ｈｅｒｅｄｉｔ．、８７：２４１−２４５、１９９６）。
花色は、光が花弁表面にあたり、花弁表皮細胞内に存在する色素類（ｐｉｇｍｅｎｔｓ）に吸収されなかった光が反射されることにより、人間の目に感知される。しかし、光、または色彩（ｃｈｒｏｍａ）に対する感受性に個人差があるために、花色を明確に表現する手法が必要であるとされてきた（非特許文献１１、Ｖｏｓｓ、Ｄ．Ｈ．：ＨｏｒｔＳｃｉ．、２７：１２５６−１２６０、１９９２）。
花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）は、色彩計、または、色差計（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ）によるＣＩＥＬａｂ表色系（ＣＩＥＬａｂ  ｃｏｌｏｒ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ）を用いた測定方法が主流となってきた。これは、色の三属性（ｃｏｌｏｒ  ａｔｔｒｉｂｕｔｅ）、すなわち、色相（ｈｕｅ）、明度（ｌｉｇｈｔｎｅｓｓ）、彩度（ｃｈｒｏｍａまたはｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）を三次元の立体空間座標系（ｔｈｒｅｅ  ｄｉｍｅｎｔｉｏｎａｌ  ｇｌｏｂａｌ  ｃｏｌｏｒ  ｃｈａｒｔ）、つまり、色立体として考えたもので、本空間中の色差（ｈｕｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）は、肉眼で感知した色の差を正確に反映する（非特許文献１２、Ｇｏｎｎｅｔ、Ｊ．Ｆ．：Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．、６３：４０９−４１５、１９９８）。したがって、花色を測定、つまり測色して、花弁などの表皮細胞中の内生色素との関係を求める場合には、花色との関係をより正確に求めることができるなどの報告がある（非特許文献１３、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｊｐｎ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、６９：４２８−４３４、２０００；非特許文献１４、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．ｅｔ  ａｌ．：Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６６：１６５２−１６５９、２００２）。
その他、特開平５−１８４３７０号（以下、特許文献１という）に、フラボノイド水酸化酵素遺伝子（特許文献１の第０００１〜０００２段落）の記載がある。「フラボノイド３’、５’−水酸化酵素活性を持つタンパク質をコードしているＤＮＡ鎖またはこのＤＮＡ鎖の任意の断片が提供される。このＤＮＡ鎖を目的植物に導入することにより、新しい色彩を有した品種を作出することができる。また本発明は、上記のＤＮＡ鎖またはこのＤＮＡ鎖の任意の断片を含有している組換えベクターにも関する」という記載がある（特許文献１の第０００４段落）。
特開平１０−１１３１８４号（以下、特許文献２という）には、フラボノイド配糖化酵素遺伝子（特許文献２の第０００１〜０００８段落）の記載がある。「リンドウの花弁よりＵＤＰ−グルコース：フラボノイド３，５−Ｏ−グルコシルトランスフェラーゼ遺伝子を単離し、その配列決定をすることに成功し」、「ゲンチオデルフィン生合成遺伝子のうち、３位，５位の２位を配糖化しうる糖転移酵素遺伝子を提供することにある。」という記載がある（特許文献２の第０００５段落）。
特開平１１−５０９７３３号（以下、特許文献３という）には、植物における遺伝子発現調節のための組成物及び方法に関する特許請求の範囲１〜１５の記載がある。
第２６回国際園芸学会議（トロント、カナダ）の講演要旨には、トルコギキョウ花弁中の３種の主要アントシアニジンの遺伝の記載がある（非特許文献１５、Ｕｄｄｉｎ、Ａ．Ｆ．Ｍ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．：ｔｈｅ  ＸＸＶＩｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ａｎｄ  Ｅｘｈｉｂｉｔｉｏｎ、Ａｕｇｕｓｔ  １  １１  ７：４７  ５４  ７６、２００２）。この内容を、特願２００  ３０  ２６５９８号（以下、特許文献４という）として出願し、トルコギキョウの花色遺伝型交配法（特許文献４の第０００１〜００１９段落）と記載した。「トルコギキョウの主要花色素である、３つのアントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）：ペラルゴニジン（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ、Ｐｇｎ）、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎ、Ｃｙｎ）、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ、Ｄｐｎ）の遺伝に着目し、自殖（ｓｅｌｆ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）や正逆交雑を行い検討した結果、Ｆ１〜Ｆ３世代（ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の分離から、新しい遺伝の法則を見出した。」、「色素前駆体のＢ環の水酸化に関与するフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の酵素反応系には、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＯの４つの複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）が存在し、これらが３’位の水酸化、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、および３’位と３’、５’位の水酸化を制御し、」という記載がある。
ＵＳ６０８０９２０号（以下、特許文献５という）には、花色変異（ａｌｔｅｒｅｄ  ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）を起こさせた植物とその作出方法の記載がある。「本発明は、遺伝子改変植物（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｐｌａｎｔｓ）を作出する新しい方法であって、花色変異（ａｌｔｅｒｅｄ  ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）を起こさせるものである。より詳しくは、遺伝子改変カーネーション（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｃａｒｎａｔｉｏｎ  ｐｌａｎｔｓ）を作出する方法であって、自然のカーネーションにはない花色を表現できる方法である。」という記載がある。
ＤＥ１９９１８３６５号（以下、特許文献６という）には、フラボン生合成酵素ＩＩ（ｆｌａｖｏｎｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ＩＩ、ＦＮＳＩＩ）をコードする核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）を用いて花色変異（ａｌｔｅｒｅｄ  ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）させた遺伝子改変植物（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｐｌａｎｔｓ）の作出方法の記載がある。「フラボン生合成酵素ＩＩ（ｆｌａｖｏｎｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ＩＩ、ＦＮＳＩＩ）をコードする核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）であって、（ｉ）１６９７塩基配列（ｂａｓｅ  ｐａｉｒ  （ｂｐ）  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（１）であるもの、あるいは、その断片（ｆｒａｇｍｅｎｔｓ）、（ｉｉ）配列（ｓｅｑｕｅｎｃｅ）が（１）へ混成（ｈｙｂｒｉｄｉｚｅ）するもの、または、あるいは、それと少なくとも４０％の相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）を有するもので、かつ、ＦＮＳＩＩ活性を有するタンパク（ｐｒｏｔｅｉｎ）或いはポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）をコードし、または（ｉｉｉ）（ｉ）あるいは（ｉｉ）と遺伝的に同等（ｇｅｎｅｔｉｃ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）である核酸。」、「（５）（Ｉ）または（Ｉａ）を含む遺伝子改変植物（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｐｌａｎｔｓ）であって、さらに、花色変異（ａｌｔｅｒｅｄ  ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）を起こした遺伝子改変植物（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｐｌａｎｔｓ）の作出方法に関する。」という記載がある）。
このように、複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）については、その全容がまだ解明される必要があった。また、四つの複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）の存在を明らかにできたものの、遺伝される花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）との関係についての記載はなく、複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）の存在をすべて明らかにすると共に、花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）との関係をも明らかにする必要があった。
しかしながら、花色自体の遺伝子型育種法では後代花色の分離に曖昧なところが多く、実用化することに沢山の問題点を残した。また、非特許文献６に記載のある、Ｅ１／ｅ１およびＥ２／ｅ２で表されたゼラニウム（Ｐｅｌａｒｇｏｎｉｕｍｘ  ｈｏｒｔｏｒｕｍ）花色素の遺伝についても、後代の分離比に疑問点が有り、実用化には至らなかった。特許文献においては、遺伝子組み替え、照射などによる突然変異を起こさせなければ、新花色を作出することができないという問題がある。
さらに、遺伝した個体がどの様な花色を有するか予測することが困難であって、その花色も肉眼による曖昧な色であり、問題がある。また、トルコギキョウではできたもののすべての花きに適用できるかどうか、ＣＩＥＬａｂ表色系（ＣＩＥＬａｂ  ｃｏｌｏｒ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ）などを用いて花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）を正確に測色・数値化し、遺伝させることが十分ではなかったという問題点もある。
本発明は、花色素生合成の遺伝を明らかにし、花きの花色をＣＩＥＬａｂ表色系（ＣＩＥＬａｂ  ｃｏｌｏｒ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ）などを用いて花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）を正確に測色・数値化した上で、その色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）と花色遺伝の関係を明らかにし、花きの新花色作出について実用的花色遺伝型交配法を提供するものである。
なお、全ての非特許文献及び非特許文献（すなわち、非特許文献１〜１５及び特許文献１〜６）は、参考文献として本明細書に組み込まれる。
【発明の開示】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、フラボノイド生合成のＢ環の水酸化に関するフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）やフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）、などの遺伝に着目し、その遺伝の分離を調べた結果、ペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の生合成に関与するジヒドロフラボノールリダクターゼ（ＤＦＲ）およびアントシアニジンシンターゼ（ＡＳ）の酵素系の遺伝が、それぞれＰｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙ、Ｄｐ／ｄｐの遺伝子（ｇｅｎｅ）によって制御されていることと併せて、フラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）やフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の遺伝が五つの複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）によって制御されているという新しい法則を見出し、結果として、遺伝子組み替え、放射線等照射などによる突然変異を起こさせる方法を用いなくても、花きの色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）からその花色を自由に創成できる。
すなわち、本発明は、花きの主要花色素である、３つのアントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ）：ペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝に着目し、自殖や正逆交雑を行い検討した結果、Ｆ１〜Ｆ４世代の色素表現型の分離から、遺伝の新しい法則を見出した。また、ＰｇｎとＤｐｎ色素型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）について、ＰｇｎとＤｐｎ色素は共存しないで、両者はそれぞれ単独型として認められるか、または、Ｃｙｎ色素を伴うことで遺伝することを見出した。後代実生（ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ）の分離とカイ二乗検定の結果、Ｐｇｎ、Ｃｙｎ、およびＤｐｎ色素の遺伝にはフラボノイド生合成におけるアントシアニジン生合成レベルで、Ｐｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙ、Ｄｐ／ｄｐとして示される遺伝子座（ｇｅｎｅ  ｌｏｃｉ）が、それぞれに存在することを見出した。
さらに、色素前駆体のＢ環の水酸化に関与するフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の酵素反応系には、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＺ、ＨＯの５つの複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）が存在し、これらが３’位の水酸化、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、および３’位と３’、５’位の水酸化を制御し、これらの組合せによって色素表現型と花色表現型が決定されることを見出し、本発明を完成した。
本発明の花色遺伝型交配法は、花きの花色発現に関わる主要アントシアニジン色素のペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝であって、遺伝子型ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐを用い、新花色を作出するものである。
本発明の花色遺伝型交配法は、花きの花色、植物の果色、葉の色がフラボノイド生合成過程で遺伝するものに適用することができる。即ち、花きの花色発現に関わる主要アントシアニジン色素のペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝並びに花形に関わる八重型、覆輪型の遺伝であって、遺伝子型Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐを用い、新花色を作出する花色遺伝型交配法である。花きの花色発現に関わる主要アントシアニジン色素のペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝について、Ｐｇｎ、Ｃｙｎ、Ｄｐｎ色素の遺伝子座をそれぞれＰｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙ、Ｄｐ／ｄｐとして示し、フラボノイド色素前駆体のＢ環の水酸化に関与するフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の酵素反応系の遺伝子型を、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＺ、ＨＯの５つの複対立遺伝子で示し、Ｐｇ／ｐｇの記号の内二つを選択し（ＰｇＰｇ、Ｐｇｐｇ、ｐｇｐｇの組合せ記号の内一つを選択し）、Ｃｙ／ｃｙの記号の内二つを選択し（Ｃｙｃｙ、Ｃｙｃｙ、ｃｙｃｙの組合せ記号の内一つを選択し）、Ｄｐ／ｄｐの記号の内二つを選択し（ＤｐＤｐ、Ｄｐｄｐ、ｄｐｄｐの組合せ記号の内一つを選択し）、また、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＺ、ＨＯの記号の内二つを選択し（ＨＴＨＴ、ＨＴＨＦ、ＨＴＨＤ、ＨＴＨＺ、ＨＴＨＯ、ＨＦＨＦ、ＨＤＨＦ、ＨＺＨＦ、ＨＯＨＦ、ＨＤＨＤ、ＨＤＨＺ、ＨＤＨＯ、ＨＺＨＺ、ＨＺＨＯ、ＨＯＨＯの組合せ記号の内一つを選択し）、すなわち、遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐである方法を用いた新花色を創成する花色遺伝型交配法である。
本発明の花色遺伝型交配法は、花色遺伝型が経路式（Ｉ）：
2004103065.tif 000002
（ここで、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＺ、ＨＯは、フラボノイド生合成の前駆物質でのＢ環の水酸化に関する複対立遺伝子を表す。ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＺ、ＨＯの５つの複対立遺伝子は、フラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の、それぞれ３’位の水酸化、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、および３’位と３’、５’位の水酸化を制御する。この５つの複対立遺伝子の表記方法は、例えば、Ｔ、Ｆ、Ｄ、Ｚ、Ｏなど他の表記法でもよい。Ｐｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙおよびＤｐ／ｄｐは、Ｐｇｎ、Ｃｙｎ、Ｄｐｎの生合成に関与するジヒドロフラボノールリダクターゼ（ＤＦＲ）、あるいはアントシアニジンシンターゼ（ＡＳ）の発現に対立する遺伝子座（ｇｅｎｅ  ｌｏｃｉ）がそれぞれに存在することを示し、Ｄ／ｄは八重の花冠形質、Ｅ／ｅは覆輪の花冠形質を示す。）
のフラボノイド生合成に関与し、遺伝するものも含まれる。
本発明の花色遺伝型交配法は、花きの花色が母性遺伝する前記の方法である。より詳しくは、本発明の花色遺伝型交配法は、花きの花色が母性遺伝し、花きの花色発現に関わる主要アントシアニジン色素のペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝並びに花形に関わる八重型、覆輪型の遺伝であって、遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐを用い、新花色を作出する花色遺伝型交配法である。
本発明の早見表は、花色を作出する花色遺伝型交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親の配偶子を行とし、種子親の配偶子を列とする、上記に記載の複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）の組み合わせを表示するものである。
本発明の早見表は、複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）の組合せに対応する色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）をも表示するものである。
また、本発明の早見表は、花色遺伝型交配の組み合わせから花きの花色を決定するものであって、花粉親の配偶子を行とし、種子親の配偶子を列とする、上記に記載の複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）の組み合わせから花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）を表示するものである。
本発明の花きとは、フラボノイド（ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）を含む花、果実、種子、葉、すなわち、フラボノイド（ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）を含む花弁、萼片、苞、花被、果皮、種皮、葉柄などを有する顕花植物門（Ａｎｔｈｏｐｈｙｔａ）の被子植物門（Ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍａｅ）であり、被子植物門として双子葉植物綱（Ｄｉｃｏｔｙｌｅｄｏｎｅａｅ）、単子葉植物綱（Ｍｏｎｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎｅａｅ）に関する。
双子葉植物綱の合弁花亜網（Ｓｙｍｐｅｔａｌａｅ）の花きとして、限定されるものではないが、例えば、キキョウ目（Ｃａｍｐａｎｕｌａｔａｅ）（キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）、スティリディウム科（Ｓｔｙｌｉｄｉａｃｅａｅ）、クサトベラ科（Ｇｏｏｄｅｎｉａｃｅａｅ）、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃａｅ））、ウリ目（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｌｅｓ）（ウリ科（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ））、アカネ目（Ｒｕｂｉａｌｅｓ）（マツムシソウ科（Ｄｉｐｓａｃａｃｅａｅ）、オミナエシ科（Ｖａｌｅｒｉａｎａｃｅａｅ）、スイカズラ科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）、アカネ科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ））、シソ目（Ｔｕｂｉｆｌｏｒａｅ）（キツネノマゴ科（Ａｃａｎｔｈａｃｅａｅ）、タヌキモ科（Ｌｅｎｔｉｂｕｌａｒｉａｃｅａｅ）、イワタバコ科（Ｇｅｓｎｅｒｉａｃｅａｅ）、ツノゴマ科（Ｍａｒｔｙｎｉａｃｅａｅ）、ゴマ科（Ｐｅｄａｌｉａｃｅａｅ）、ノウゼンカズラ科（Ｂｉｇｎｏｎｉａｃｅａｅ）、ゴマノハグサ科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）、ナス科（Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）、シソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）、クマツヅラ科（Ｖｅｒｂｅｎａｃｅａｅ）、ムラサキ科（Ｂｏｒａｇｉｎａｃｅａｅ）、ハゼリソウ科（Ｈｙｄｒｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）、ハナシノブ科（Ｐｏｌｅｍｏｎｉａｃｅａｅ）、ヒルガオ科（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ））、モクセイ目（Ｃｏｎｔｏｒｔａｅ）（ガガイモ科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）、キョウチクトウ科（Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ）、リンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）、フジウツギ科（Ｌｏｇａｎｉａｃｅａｅ）、モクセイ科（Ｏｌｅａｃｅａｅ））、イソマツ目（Ｐｌｕｍｂａｇｉｎａｌｅｓ）（イソマツ科（Ｐｌｕｍｂａｇｉｎａｃｅａｅ））、サクラソウ目（Ｐｒｉｍｕｌａｌｅｓ）（サクラソウ科（Ｐｒｉｍｕｌａｃｅａｅ）、ヤブコウジ科（Ｍｙｒｓｉｎａｃｅａｅ））、ツツジ目（Ｅｒｉｃａｌｅｓ）（ツツジ科（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）、イチヤクソウ科（Ｐｙｒｏｌａｃｅａｅ））、イワウメ目（Ｄｉａｐｅｎｓｉａｌｅｓ）（イワウメ科（Ｄｉａｐｅｎｓｉａｃｅａｅ））が挙げられる。
双子葉植物綱の離弁花亜網（Ａｒｃｈｉｃｈｌａｍｙｄｅａｅ）の花きとして、例えば、限定されるものではないが、テンニンカ目（Ｍｙｒｔｉｆｌｏｒａｅ）（アカバナ科（Ｏｎａｇｒａｃｅａｅ）、ノボタン科（Ｍｅｌａｓｔｏｍａｔａｃｅａｅ）、フトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｒ）、シクンシ科（Ｃｏｍｂｒｅｔａｃｅａｅ）、ザクロ科（Ｐｕｎｉｃａｃｅａｅ）、ミソハギ科（Ｌｙｔｈｒａｃｅａｅ）、グミ科（Ｅｌａｅｇｎａｃｅａｅ）、ジンチョウゲ科（Ｔｈｙｍｅｌａｅａｃｅａｅ））、ツバキ目（Ｐａｒｉｅｔａｌｅｓ）（シュウカイドウ科（Ｂｅｇｏｎｉａｃｅａｅ）、トケイソウ科（Ｐａｓｓｉｆｌｏｒａｃｅａｅ）、ハンニチバナ科（Ｃｉｓｔａｃｅａｅ）、スミレ科（Ｖｉｏｌａｃｅａｅ）、ツバキ科（Ｃａｍｅｌｌｉａｃｅａｅ））、アオイ目（Ｍａｌｖａｌｅｓ）（アオイ科（Ｍａｌｖａｃａｅａｅ）、ホルトノキ科（Ｅｌａｅｏｃａｒｐａｃｅａｅ））、クロウメモドキ目（Ｒｈａｍｎａｌｅｓ）（ブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）、クロウメモドキ科（Ｒｈａｍｎａｃｅａｅ））、ムクロジ目（Ｓａｐｉｎｄａｌｅｓ）（ツリフネソウ科（Ｂａｌｓａｍｉｎａｃｅａｅ）、トチノキ科（Ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎａｃｅａｅ）、カエデ科（Ａｃｅｒａｃｅａｅ）、ニシキギ科（Ｃｅｌａｓｔｒａｃｅａｅ）、モチノキ科（Ａｑｕｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）、ウルシ科（Ａｎａｃａｒｄｉａｃｅａｅ））、フウロソウ目（Ｇｅｒａｎｉａｌｅｓ）（トウダイグサ科（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｃｅａｅ）、ヒメハギ科（Ｐｏｌｙｇａｌａｃｅａｅ）、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）、アマ科（Ｌｉｎａｃｅａｅ）、フウロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）、カタバミ科（Ｏｘａｌｉｄａｃｅａｅ））、バラ目（Ｒｏｓａｌｅｓ）（マメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）、マンサク科（Ｈａｍａｍｅｌｉｄａｃｅａｅ）、トベラ科（Ｐｉｔｔｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）、ベンケイソウ科（Ｃｒａｓｓｕｌａｃｅａｅ））、サラセニア目（Ｓａｒｒａｃｅｎｉａｌｅｓ）（サラセニア科（Ｓａｒｒａｃｅｎｉａｃｅａｅ）、ウツボカズラ科（Ｎｅｐｅｎｔｈａｃｅａｅ）、モウセンゴケ科（Ｄｒｏｓｅｒａｃｅａｅ））、ケシ目（Ｐａｐａｖｅｒａｌｅｓ）（アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｓｅａｅ）、フウチョウソウ科（Ｃａｐｐａｒｉｄａｃｅａｅ）、ケシ科（Ｐａｐａｖｅｒａｃｅａｅ））、キンポウゲ目（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｌｅｓ）（クスノキ科（Ｌａｕｒａｃｅａｅ）、メギ科（Ｂｅｒｂｅｒｉｄａｃｅａｅ）、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）、アケビ科（Ｌａｒｄｉｚａｂａｌａｃｅａｅ）、スイレン科（Ｎｙｍｐｈａｅａｃｅａｅ）、バンレイシ科（Ａｎｎｏｎａｃｅａｅ）、モクレン科（Ｍａｇｎｏｌｉａｃｅａｅ））、アカザ目（Ｃｅｎｔｒｏｓｐｅｒｍａｅ）（ナデシコ科（Ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）、オシロイバナ科（Ｎｙｃｔａｇｉｎａｃｅａｅ））、タデ目（Ｐｏｌｙｇｏｎａｌｅｓ）（タデ科（Ｐｏｌｙｇｏｎａｃｅａｅ））、イラクサ目（Ｕｒｔｉｃａｌｅｓ）（クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ））、ヤマモモ目（Ｍｙｒｉｃａｌｅｓ）（ヤマモモ科（Ｍｙｒｉｃａｃｅａｅ））が挙げられる。
単子葉植物網の花きとして、限定されるものではないが、例えば、ラン目（Ｏｒｃｈｉｄａｌｅｓ）（ラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ））、ショウガ目（Ｓｃｉｔａｍｉｎｅａ）（カンナ科（Ｃａｎｎａｃｅａｅ）、ショウガ科（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）、バショウ科（Ｍｕｓａｃｅａｅ））、ユリ目（Ｌｉｌｉｉｆｌｏｒａｅ）（アヤメ科（Ｉｒｉｄａｃｅａｅ）、ヒガンバナ科（Ａｍａｒｙｌｌｉｄａｃｅａｅ）、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ））、ツユクサ目（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａｌｅｓ）（ミズアオイ科（Ｐｏｎｔｅｄｅｒｉａｃｅａｅ）、ツユクサ科（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａｃｅａｅ）、パイナップル科（Ｂｒｏｍｅｌｉａｃｅａｅ）、サトイモ目（Ａｒａｌｅｓ）（サトイモ科（Ａｒａｃｅａｅ））が挙げられる。
花色自体の遺伝子型育種法では後代（ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ）花色の分離に曖昧なところが多く、実用化することに沢山の問題点を残した。また、非特許文献６に記載のある、Ｅ１／ｅ１およびＥ２／ｅ２で表されたゼラニウム（Ｐｅｌａｒｇｏｎｉｕｍ  ｘ  ｈｏｒｔｏｒｕｍ）色素の遺伝についても、後代の分離比に疑問点が有り、実用化には至らなかった。特許文献においては、遺伝子組み替え、照射などによる突然変異を起こさせなければ、新花色を作出することができないという問題がある。さらに、遺伝した個体がどの様な花色を有するか予測することが困難であって、その花色も肉眼による曖昧な色であり、問題がある。また、トルコギキョウではできたもののすべての花きに適用できるかどうか、ＣＩＥＬａｂ表色系（ＣＩＥＬａｂ  ｃｏｌｏｒ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ）などを用いて花色を正確に測色・数値化し、遺伝させることが十分ではなかったという問題点もある。本発明は、花色素生合成の遺伝を明らかにし、花きの花色をＣＩＥＬａｂ表色系などを用いて花色を正確に測色・数値化した上で、その色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）と花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）の関係を明らかにし、花きの新花色作出について実用的花色遺伝型交配法を提供するものである。
本発明により、花きの色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を明らかにできる。たとえば、遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐであって、Ｐｇｎ、Ｃｙｎ、Ｄｐｎの色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を帰属した花色遺伝型交配法を用い、花きの花色をＣＩＥＬａｂ表色系を用いて正確に測色・数値化することにより、優れた新花色を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の花色遺伝型交配法とは、該アントシアニジン類（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ）に関する遺伝子型育種法であって、かつフラボノイド生合成（ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）における前駆化合物のＢ環の水酸化に五つの複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）で表記することのできる花色遺伝型交配法である。
本発明において、花きのアントシアニジン生合成の前駆化合物生成について、複対立遺伝子（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｌｅｌｅ）の組合せが、ＨＴＨＦ、ＨＴＨＤ、ＨＴＨＺとＨＯ−の場合、Ｂ環（Ｂ−ｒｉｎｇ）の水酸基（ｈｙｄｒｏｘｙｌ  ｇｒｏｕｐｓ）が１〜３個有する六種の前駆化合物（ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）、エリオディクチオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、ペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）、ジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）、ジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、ジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ））を生成し、ＨＴＨＴの場合、Ｂ環の水酸基が１個と２個を有する四種の前駆化合物（ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ、エリオディクチオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、ジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）、ジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ））を生成し、ＨＦＨＦの場合、Ｂ環の水酸基を１個有する二種の前駆化合物（ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）、ジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ））を生成し、ＨＤＨＦとＨＤＨＤの場合、Ｂ環の水酸基を３個有する二種の前駆化合物（ペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）、ジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ））を生成し、ＨＤＨＺ、ＨＺＨＺの場合、Ｂ環の水酸基が３個有する二種の前駆化合物（ペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）、ジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ））を生成する。更に、アントシアニジン生合成酵素（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）レベルにあるＰｇ／ｐｇの遺伝子座（ｇｅｎｅ  ｌｏｃｕｓ）のため、劣性ホモ型（ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ）（ｐｇｐｇ）を形成した場合には、前駆化合物として、ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）およびジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）を生成してもＰｇｎを生合成しない。ＨＺＨＦの場合、Ｂ環の水酸基を２〜３個有する四種の前駆化合物（エリオディクチオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、ペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）、ジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、ジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ））を生成する。
すなわち、ＨＴの対立遺伝子（ａｌｌｅｌｅ）は、ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）からエリオディクティオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）並びにジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）からジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）への生化学的変換（ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を制御し、ＨＦの対立遺伝子は、エリオディクティオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）からペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）並びにジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）から  ジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）への生化学的変換を制御する。従って、ＨＦの対立遺伝子は、エリオディクティオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）やジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）の前駆化合物が存在しなければ生化学的変換は行われない。一方、ＨＤの対立遺伝子は、ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）からペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）並びにジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）からジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）への生化学的変換を制御するが、この対立遺伝子は、基質を完全にペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）またはジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）へ変換することが特徴である。更に、ＨＺの対立遺伝子は、ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）からペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）並びにジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）からジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）への生化学的変換を制御するが、この対立遺伝子は、一旦基質を完全にエリオディクティオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）および、ジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）へ変換し、更にこれらをペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）および、ジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）へ変換することが特徴である。従って、ＨＦの対立遺伝子と対を組んだ場合、中間体であるエリオディクティオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）および、ジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）が基質として奪われ、ＨＺＨＦの遺伝子型では、結果としてＢ環の水酸基を２〜３個有する四種の前駆化合物（エリオディクチオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）、ペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）、ジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、ジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ））を生成する。
従って、ＨＤＨＤ型、ＨＤＨＦ型、ＨＤＨＺ型、ＨＺＨＦ型、ＨＺＨＺ型の場合、Ｐｇ／ｐｇが優性型（ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）（ＰｇＰｇまたはＰｇｐｇ）であっても、Ｐｇｎは生成されない。ＨＯの対立遺伝子（ａｌｌｅｌｅ）は、ナリンゲニン（ｎａｒｉｎｇｅｎｉｎ）からエリオディクティオール（ｅｒｉｏｄｉｃｔｙｏｌ）とペンタヒドロキシフラバノン（ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）並びにジヒドロケンフェロール（ｄｉｈｙｄｒｏｋａｅｍｐｈｅｒｏｌ）からジヒドロクエルセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）とジヒドロミリセチン（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）への全ての生化学的変換を制御する。
本発明において、例えば、トルコギキョウ花弁の色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）について、ＨＴＨＦＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＴＨＤＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＴＨＺＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐとＨＯ−Ｐｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐの遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）でＰｇｎＣｙｎＤｐｎ型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＴＨＴＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐでＰｇｎＣｙｎ型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＴＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＴＨＤｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＴＨＺｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐとＨＯ−ｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐでＣｙｎＤｐｎ（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）型を得ることができる。ＨＦＨＦＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐでＰｇ型（Ｐｇｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐでＣｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＤＨＦ−−ＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＤＨＺ−−ＣｙＣｙＤｐＤｐとＨＤＨＤ−−ＣｙＣｙＤｐＤｐでＤｐｎ型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐで白花を得ることができる。また、Ｄｐｎ型の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）にはメチル化アントシアニジン（ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ）であるマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ，Ｍｖ）とペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ，Ｐｔ）を含む。更に、Ｃｙｎ型の色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ，Ｐｎ）を含む。ここで「白花」とは、アントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）を全く含まない花のことを指す。なお、本発明では、ＰｇｎＤｐｎ型は得られない。また、″−″と表記されているのは、その一つ前に表記された遺伝子（ｇｅｎｅ  ａｎｄ／ｏｒ  ａｌｌｅｌｅ）に優性的に支配されていることを示し、いずれの遺伝子（ｇｅｎｅ  ａｎｄ／ｏｒ  ａｌｌｅｌｅ）でも用いることができることを意味する。更にまた、″−−″と表記されているのは、いずれの遺伝子（ｇｅｎｅ  ａｎｄ／ｏｒ  ａｌｌｅｌｅ）も用いることができることを意味する。
本発明において、例えば、トルコギキョウ花弁の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）について、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で、赤紫色、赤色、紫赤色、淡赤色、ピンク色の花を得ることができる。ＰｇｎＣｙｎ型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で、赤色、深赤色、淡赤色、ピンク色の花を得ることができる。ＣｙｎＤｐｎ型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で、淡紫色、紫赤色、紫色、青紫色の花を得ることができる。Ｐｇｎ型（Ｐｇｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で、赤色、淡赤色、ピンク色、白赤色、クリーム色、白色の花を得ることができる。Ｃｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で、赤色、淡赤色、ピンク色、白赤色の花を得ることができる。Ｄｐｎ型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で、紫色を得ることができる。Ｎｏｎｅ型（ＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの遺伝子型、ＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）で白花を得ることができる。
本発明において、例えば、スイートピー（ｓｗｅｅｔ  ｐｅａ、Ｌａｔｈｙｒｕｓ  ｏｄｏｒａｔｕｓ）花弁の色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）について、ＨＴＨＴＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐでＰｇｎＣｙｎ型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＴＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＴＨＤｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐとＨＯ−ｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐでＣｙｎＤｐｎ型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐでＣｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＤＨＦ−−ＣｙＣｙＤｐＤｐとＨＤＨＤ−−ＣｙＣｙＤｐＤｐでＤｐｎ型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐで白花を得ることができる。ここで「白花」とは、アントシアニジンを全く含まない花のことを指す。なお、本発明では、ＰｇｎＤｐｎ型（ＰｇｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）は得られない。また、″−″と表記されているのは、その一つ前に表記された遺伝子（ｇｅｎｅ  ａｎｄ／ｏｒ  ａｌｌｅｌｅ）に優性的に支配されていることを示し、いずれの遺伝子（ｇｅｎｅ  ａｎｄ／ｏｒ  ａｌｌｅｌｅ）でも用いることができることを意味する。更にまた、″−−″と表記されているのは、いずれの遺伝子（ｇｅｎｅ  ａｎｄ／ｏｒ  ａｌｌｅｌｅ）も用いることができることを意味する。
Ｄｐｎ型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）にはメチル化アントシアニジン（ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）であるマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ、Ｍｖ）とペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ、Ｐｔ）を含むが、これらは、いずれもＤｐｎ型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）に包含される。更に、Ｃｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）にはメチル化アントシアニジン（ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）であるペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ、Ｐｎ）を含むが、これはＣｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）に包含される。
本発明において、例えば、ツツジおよびシャクナゲ花弁の色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）について、ＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐでＣｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＴＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＴＨＯｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ、ＨＯＨＯｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ、でＣｙｎＤｐｎ型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を得ることができる。ＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐで白花を得ることができる。ここで「白花」とは、アントシアニジンを全く含まない花のことを指す。なお、本発明では、ＰｇｎＤｐｎ型（ＰｇｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）は得られない。ツツジ花弁の色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）の特徴として、Ｐｇｎ色素（Ｐｇｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の生合成（ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）に関与するジヒドロフラボノールリダクターゼ（ＤＦＲ）、あるいはアントシアニジンシンターゼ（ＡＳ）の発現に関する遺伝子座（ｇｅｎｅ  ｌｏｃｕｓ）が劣性のホモ型（ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ）（ｐｇｐｇ）になっているために、Ｐｇｎ色素（Ｐｇｎ  ｐｉｇｍｅｎｔ）が生成されない。
Ｄｐｎ型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）にはメチル化アントシアニジン（ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）であるマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ、Ｍｖ）とペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ、Ｐｔ）を含むが、これらは、いずれもＤｐｎ型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）に包含される。更に、Ｃｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）にはメチル化アントシアニジン（ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ  ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）であるペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ、Ｐｎ）を含むが、これらはＣｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）に包含される。
本発明の花色遺伝型交配法は、花きの花弁または萼片、花被、苞、果皮などの有色部分から、５０％酢酸水溶液（ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、または５０％酢酸メタノール（ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃ−ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）を用いてアントシアニン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ）を抽出（ｅｘｔｒａｃｔ）し（酢酸の濃度（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）は１０〜５０％でも可能で、酢酸の代わりに０．５〜２規定塩酸（ｎｏｒｍａｌ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を用いても良い）、これを塩酸加水分解して、アントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）を含む加水分解物（ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ）を高速液体クロマトグラフィー（Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＬＣ）などを用いて各種アントシアニジンを分析する。自殖（ｓｅｌｆ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）や交雑を繰り返して得られた後代（ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ）の遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）について、優性ホモ型（ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ）、優性ヘテロ型（ｄｏｍｉｎａｎｔ  ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅ）、劣性ホモ型（ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ  ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ）を決定し、各花色をその遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）より様々な花色を自由自在に作出することのできる交配方法である。
【実施例】  以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】  花きの花弁、果皮、葉を採集し、花弁および萼片等については、全色系または覆輪系（八重花を含む）の着色した部分、同色の部分、並びに白色の部分などを切除し、精秤後、試験管（ｔｅｓｔ  ｔｕｂｅ）中にて０．５〜２規定塩酸水溶液（０．５〜２Ｎ  ＨＣｌ）などの酸性溶媒（ａｃｉｄｉｃ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を加え、アントシアニン色素（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ）を抽出（ｅｘｔｒａｃｔ）した。抽出は、文献記載の方法（Ｕｄｄｉｎ、ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｊｐｎ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、７１：４０−４７、２００２；Ｗａｎｇ、ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｐｌａｎｔ  Ｒｅｓ．、１１４：２１３−２２１、２００１；松添直隆、ほか５名：園学雑、６８：１３８−１４５、１９９９）を用いた。抽出液を綿栓濾過（ｃｏｔｔｏｎ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）後、濾液（ｆｉｌｔｒａｔｅ）について９５〜１００℃で加熱し加水分解（ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）を行い、１〜６種のアントシアニジンを含む溶液を得た。加水分解は、文献記載の方法（Ｕｄｄｉｎ、ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｊｐｎ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、７１：４０−４７、２００２）を用いた。反応後、溶液（ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｉｘｔｕｒｅ）をメンブランフィルター（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ）で濾過後、濾液（ｆｉｌｔｒａｔｅ）についてＨＰＬＣ装置にて分析した。ＨＰＬＣの分析条件および分析装置は、文献記載の方法（Ｕｄｄｉｎ、ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｊｐｎ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、７１：４０−４７、２００２）を用いた。
ＨＰＬＣクロマトチャート（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ  ｃｈａｒｔ）から、３種のアントシアニジン（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）、すなわち、それぞれのアントシアニジンのピークを占有面積として算出し、ペラルゴニジン（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ、Ｐｇｎ）、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎ、Ｃｙｎ）、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ、Ｄｐｎ）、並びに３種のメチル化アントシアニジン、すなわち、ペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ、Ｐｎ）、ペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ、Ｐｔ）およびマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ、Ｍｖ）の全ピーク面積（ｐｅａｋ  ａｒｅａ）を１００％とした。得られた固有ピークからアントシアニジンについて、その花の色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を決定した。
花きの花弁、果皮、葉を採集し、花弁および萼片等については、全色系または覆輪系（いずれも八重花を含む）の着色した部分、同色の部分、並びに白色の部分などを切除し、色彩計（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ）を用いて花色を測定した。表色系は、ＣＩＥＬａｂ表色系を用い、測定条件および測定装置は、文献記載の方法（Ｗａｎｇ、ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｐｌａｎｔ  Ｒｅｓ．、１１４：３３−４３、２００１）を用いた。
トルコギキョウ（ｌｉｓｉａｎｔｈｕｓ；Ｅｕｓｔｏｍａ属）（リンドウ科、Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）のロイヤルバイオレット（Ｒｏｙａｌ  Ｖｉｏｌｅｔ）（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型、ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、ミッキーローズ（Ｍｉｃｋｙ  Ｒｏｓｅ）（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、および、あすかの紅（Ａｓｕｋａ  ｎｏ  Ｋｕｒｅｎａｉ）（ＰｇｎＣｙｎ色素表現型、ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の３品種（Ｆ１世代、Ｆ１−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）を用いて、自殖（ｓｅｌｆ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）によるＳ１世代（Ｓ１−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）の分離を調べ、その結果を表１（Ｔａｂｌｅ  １）に示した。また同様に、ロイヤルバイオレット（Ｒｏｙａｌ  Ｖｉｏｌｅｔ）（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型、ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、ミッキーローズ（Ｍｉｃｋｙ  Ｒｏｓｅ）（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、およびあすかの紅（Ａｓｕｋａ  ｎｏ  Ｋｕｒｅｎａｉ）（ＰｇｎＣｙｎ色素表現型、ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の３品種（Ｆ１世代、Ｆ１−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）を用いて、２品種間の正逆交雑（ｃｒｏｓｓ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）によるＦ１世代（Ｆ１−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）の分離を調べ、その結果を表２に示した。その結果、ロイヤルバイオレット（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型）、ミッキーローズ（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型）、および、あすかの紅（ＰｇｎＣｙｎ色素表現型）の、色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を決定した。
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表１および表２から、ロイヤルバイオレット（Ｒｏｙａｌ  Ｖｉｏｌｅｔ）はｄｄｅｅＨＯＨＤｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）であり、ミッキーローズ（Ｍｉｃｋｙ  Ｒｏｓｅ）はｄｄｅｅＨＴＨＦＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）であり、あすかの紅（Ａｓｕｋａ  ｎｏ  Ｋｕｒｅｎａｉ）はｄｄｅｅＨＴＨＴＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）であることがわかる。また、花色は、ロイヤルバイオレットは紫色、ミッキーローズは赤紫色、あすかの紅は赤色であった。なお、表１中ｎｏｎｅ色素表現型（ｎｏｎｅ−ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）は、白花を示す。
【実施例３】  トルコギキョウ（ｌｉｓｉａｎｔｈｕｓ）の表３に示すＳ１世代（Ｓ１−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）を親株として、これらを自殖（ｓｅｌｆ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）し、分離したＳ２世代（Ｓ２−ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）を調べ、各種系統（ｌｉｎｅｓ）の色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を決定した。その結果を表３に示した。
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表３から分かるように、ｄｄｅｅＨＦＨＦＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）からＰｇｎ色素（Ｐｇｎ−ｐｉｇｍｅｎｔ）のみを有する色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）として、Ｇ２Ｄ３Ｂ２５Ｆ系統（ｌｉｎｅ）（白色、赤白色、クリーム色、またはピンク色の花）を得た。ｄｄｅｅＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）からＣｙｎ色素（Ｃｙｎ−ｐｉｇｍｅｎｔ）のみを有する色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）として、Ｇ２Ｄ３Ｂ２７Ｙ系統（ｌｉｎｅ）（赤白色、またはピンク色の花）を得た。ｄｄｅｅＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）から色素を全く有しないｎｏｎｅ型（ｎｏｎｅ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）として、Ｇ２Ｄ３Ｂ２６Ｂ系統（白花）を得た。ｄｄｅｅＨＯＨＯｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）からＣｙｎＤｐｎ色素（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｉｇｍｅｎｔ）を有する色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）として、Ｊ５Ａ２Ｈ１６Ｂ系統（赤紫色の花）を得た。ｄｄｅｅＨＤＨＤｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）からＤｐｎ色素（Ｄｐｎ−ｐｉｇｍｅｎｔ）のみを有する色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）として、Ｊ５Ａ２Ｈ１１０Ｃ１Ａ系統（紫色の花）を得た。ｄｄｅｅＨＴＨＴＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）からＰｇｎＣｙｎ色素（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｉｇｍｅｎｔ）を有する色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）として、Ｗ１Ｃ３Ｂ１１１Ｙ系統（ｌｉｎｅ）（赤色の花）を得た。これらは、いずれも純系（ｐｕｒｅ  ｌｉｎｅ）（優性または劣性のホモ型）であることがわかる。
【実施例４】  Ｐｇｎ型（Ｐｇｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で赤白色の花（Ｇ２Ｄ３Ｂ２５Ｆ系統（ｌｉｎｅ）、ｄｄｅｅＨＦＨＦＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ））とＣｙｎ型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で赤白色の花（Ｇ２Ｄ３Ｂ２７Ｙ系統（ｌｉｎｅ）、ｄｄｅｅＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ））を正逆交雑（ｃｒｏｓｓ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）したところ、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の赤紫色の花（ｄｄｅｅＨＴＨＦＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ））が得られた。色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ−ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を想定した非特許文献６（小林加奈：育種学雑誌、４８：１６９−１７６、１９９８）の方法では、ＰｇｎＣｙｎ型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の花が得られると記載されてあり、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の赤紫色の花が分離したことは説明が付かない。
【実施例５】  ＰｇｎＣｙｎ型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）で赤色の花（Ｗ１Ｃ３Ｂ１１１Ｙ系統（ｌｉｎｅ）、ｄｄｅｅＨＴＨＴＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ））と白花（ｎｏｎｅ型（ｎｏｎｅ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、ｄｄｅｅＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ））を正逆交雑（ｃｒｏｓｓ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）したところ、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の赤紫色の花が得られた。色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ−ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を想定した非特許文献６（小林加奈：育種学雑誌、４８：１６９−１７６、１９９８）の方法では、ＰｇｎＣｙｎ型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の花が得られると記載されてあり、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）の赤紫色の花が分離したことは説明が付かない。
【実施例６】  トルコギキョウ（ｌｉｓｉａｎｔｈｕｓ）の品種（ｃｕｌｔｉｖａｒ）、ブライダルバイオレット（Ｂｒｉｄａｌ  Ｖｉｏｌｅｔ）（覆輪花、Ｆ１系統（Ｆ１  ｌｉｎｅ））を自殖（ｓｅｌｆ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）し、その花色分離を調査した。その結果、表４に示すように、全て覆輪の優性型として後代が得られ、色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）と花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ）を決定した。系統Ｆ３Ｉ１Ａ２Ｄ１Ｄは覆輪の優性形質の遺伝子型（ホモ型）を有する白花である。
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実施例５Ａ
トルコギキョウ（ｌｉｓｉａｎｔｈｕｓ）のＧ４Ｉ５Ａ３Ｉ１Ｆ４（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤紫色の花）、Ａ１３Ｂ１Ｂ３Ｉ４（ＰｇｎＣｙｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３３（ＰｇｎＣｙｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３Ａ（Ｃｙｎ色素表現型（Ｃｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤色の花）、Ｉ５Ａ２１Ｉ３Ｆ１２（Ｄｐｎ色素表現型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、紫赤色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３６（Ｐｇｎ色素表現型（Ｐｇｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、白黄色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３７（ｎｏｎｅ色素表現型（ｎｏｎｅ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、白花）の７系統について、自殖（ｓｅｌｆ−ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ）による後代１８０個体の分離を調べ、その結果を表５に示した。
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表５のように、それぞれの系統（ｌｉｎｅｓ）は親株と同一の色素組成（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ−ｇｅｎｏｔｙｐｅ）、花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒ）であった。なお、各系統の個体数を除いた各数値は、系統毎の個体数に対する平均値である。色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ−ｇｅｎｏｔｙｐｅ）は、いずれもホモ型であった。Ｇ４Ｉ５Ａ３Ｉ１Ｆ４とＩ５Ａ２１Ｉ３Ｆ１２の２系統は、色素組成（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）と遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）が違うにも関わらず、色相角（ｈ、ｈｕｅ  ａｎｇｌｅ）は、−３１．０と−２８．８度で同様な値を示し、その花色は赤紫色方向の色であった。Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３Ｉ４とＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３３の２系統は、系統が違ったにも関わらず、同様な色相角（ｈ、ｈｕｅ  ａｎｇｌｅ）（−４．７と−４．３度）を与え、その花色は、赤色方向の色であった。しかし、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３Ｉ４系統は、鮮やかさ（ｃｈｒｏｍａ）を示すＣ＊の値がＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３３系統に比べ、ほぼ２倍の５６．４の値を与え、濃い赤色の花であった。
一方、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３３系統は淡い赤色の花であった。Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３６（Ｐｇｎ色素型）の色相角（ｈ、ｈｕｅ  ａｎｇｌｅ）は、８８．３度を示し、黄色方向の色であった。このＣ＊の値は６．５と低い値を示し、鮮やかさ（ｃｈｒｏｍａ）は小さい値であった。したがって、花弁にアントシアニン色素（ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ）が含まれているにも関わらず、肉眼ではクリーム色の花として確認された。白花であるＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３７系統の色相角は１１４．２度を与え、緑黄色方向の色であった。このＣ＊の値は１０．７と低い値を示したため、肉眼では、非常に白色の花に近い、しかし、淡い緑黄色の花として確認された。
実施例６Ａ
トルコギキョウ（ｌｉｓｉａｎｔｈｕｓ）のＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３１（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤紫色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３２（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３４（ＰｇｎＣｙｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤橙色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３５（Ｐｇｎ色素表現型（Ｐｇｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、白赤色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３８（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、白色の花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３９（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤紫色の花）、Ｉ５Ａ２１Ｉ３Ｆ１１（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、紫赤色の花）、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＭＡ（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤紫色の花）、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＭＢ（ＰｇｎＣｙｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、赤色の花）、Ｉ５Ａ２１Ｉ３ＦＭＡ（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、紫色の花）、Ｉ５Ａ２１Ｉ３ＦＭＢ（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型（ＣｙｎＤｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、紫色の花）、Ｉ５Ａ２１Ｉ３ＦＭＣ（Ｄｐｎ色素表現型（Ｄｐｎ−ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）、紫色の花）の１２系統（ｌｉｎｅｓ）２９８個体について、色素組成（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ−ｇｅｎｏｔｙｐｅ）、花色（ｆｌｏｗｅｒ  ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ）を調べ、その結果を表６に示した。
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表６のように、それぞれの系統の色素遺伝子型は、いずれもヘテロ型であった。なお、各系統の個体数を除いた各数値は、系統毎の個体数に対する平均値である。Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３１（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素型、赤紫色の花），Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＭＡ（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素型、赤紫色の花）の２系統のアントシアニジン色素組成、花色は、共に同様の値を示し、色素遺伝子型は同じであった。一方、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３２（ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型、赤色の花）の系統は、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３１、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＭＡ系統と同様な色素遺伝子型と色素組成を示したにも関わらず、色相角が２８．６度を与え、赤橙色の方向の色を示した。しかし、このＣ＊の値は６．５と低い値であったことから、肉眼による花色は薄い赤色がかった白色の花であった。ＰｇｎＣｙｎ色素表現型を有するＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３４とＡ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＭＢの２系統は同一の色素遺伝子型を有していたが、色素組成と花色は全く異なっていた。すなわち、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３４は色相角が５５．８度で橙色方向の色（肉眼では白色に近いオレンジ色の花）を示したのに対して、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＭＢは色相角が８．０度の赤色方向の色（肉眼では赤色の花）であった。ＣｙｎＤｐｎ色素表現型を有するＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３８とＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３９の２系統は同一の色素遺伝子型を有していたが、色素組成と花色は全く異なっていた。すなわち、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３８は色相角が９７．５度で黄色方向の色（肉眼では白色に近い黄色の花）を示したのに対して、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３９は色相角が−２２．１度の赤色方向の色（肉眼では赤色の花）であった。ＨＯ、またはＨＤの複対立遺伝子を含むＩ５Ａ２Ｈ１Ｉ３Ｆ１１、Ｉ５Ａ２Ｈ１Ｉ３ＦＭＡ、Ｉ５Ａ２Ｈ１Ｉ３ＦＭＢ、Ｉ５Ａ２Ｈ１Ｉ３ＦＭＣの４系統は、いずれも色相角が−２０度を下回り、紫赤色方向の色を示し、肉眼では紫色の花であった。
【実施例７】  以下、トルコギキョウＦ１種子の交配作出法を具体的に説明する。
Ｃｙｎ色素表現型の一重全色ピンク色の花（ｄｄｅｅＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ホモ型）とＰｇｎ色素表現型の一重全色白色の花（ｄｄｅｅＨＦＨＦＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ホモ型）を交配し、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型の一重全色赤紫色の花（ｄｄｅｅＨＴＨＦＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ヘテロ型）を得た。
ＣｙｎＤｐｎ色素表現型の一重全色赤紫色の花（ｄｄｅｅＨＯＨＯｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ホモ型）とＰｇｎ色素表現型の一重全色白色の花（ｄｄｅｅＨＦＨＦＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ホモ型）を交配し、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型の一重全色赤紫中間色の花（ｄｄｅｅＨＯＨＦＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ヘテロ型）を得た。
ＰｇｎＣｙｎ色素表現型の一重全色赤色の花（ｄｄｅｅＨＴＨＴＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ホモ型）とＰｇｎ色素表現型の一重全色白色の花（ｄｄｅｅＨＦＨＦＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ホモ型）を交配し、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型の一重全色ピンク中間色の花（ｄｄｅｅＨＴＨＦＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、ヘテロ型）を得た。
トルコギキョウのＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３６（Ｐｇｎ色素表現型、ｄｄｅｅＨＦＨＦＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、白黄色の花）とＧ４Ｉ５Ａ３Ｉ１Ｆ４（ＣｙｎＤｐｎ色素表現型、ｄｄｅｅＨＯＨＯｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ色素遺伝子型、赤紫色の花）（表５）を用いて正逆交雑することにより、より赤い花を作出する計画により交配を行った。この交配より、Ｆ１種子の花としてＧ２Ｄ３Ｇ４Ｉ５系統（１６個体）を得た。この色素表現型は全て、ＰｇｎＣｙｎＤｐｎ色素表現型（Ｐｇ  ２４．７％、Ｃｙ  ７２．４％、Ｄｐ  ２．９％）で、ｄｄｅｅＨＯＨＦＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型であった。また、花色は肉眼では赤紫色であった。花色は、色相角（ｈ）が−１８．５度で赤紫色方向の色であった。明度Ｌ＊値は６１．９の値でＧ４Ｉ５Ａ３Ｉ１Ｆ４系統と同様に花色は明るく、彩度Ｃ＊値は４０．７の値で、やや鮮やかな赤紫色の花であった。したがって、Ｇ４Ｉ５Ａ３Ｉ１Ｆ４系統にはないＰｇｎ色素表現型をＧ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５Ｃ３６系統を用いて、それにＰｇｎ色素を組みことができ、Ｇ４Ｉ５Ａ３Ｉ１Ｆ４系統よりも、より赤い花を計画の通り作出することができた。
【実施例８】  トルコギキョウのＰｇｎＣｙｎ色素表現型のＡ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３Ｉ系統（色素遺伝子型はｄｄｅｅＨＴＨＴＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐ）とＣｙｎＤｐｎ色素表現型Ｉ５Ａ２Ｈ１Ｉ３Ｆ系統（色素遺伝子型はｄｄｅｅＨＯＨＤｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐ）を用いて、正逆交雑による後代の分離を調べ、その結果を表７に示した。その結果、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３Ｉ系統を種子親、Ｉ５Ａ２Ｈ１Ｉ３Ｆ系統を花粉親として交配した場合、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＲＡ系統とＡ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＲＢ系統を１：１の分離比で得、これらの色素遺伝子型と花色を決定した。Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＲＡ系統はＰｇｎ色素を主体とし、色相角は−８．０度を与え、花色は赤色方向の色であった。彩度を示すＣ＊値が３３．３で、淡い赤色の花であった。また、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３ＩＲＢ系統はＣｙｎ色素を主体とし、色相角は−１８．９度を与え、花色は赤色の紫がかる方向の色であった。彩度を示すＣ＊値が４７．１で、赤色の花であった。
一方、Ｉ５Ａ２Ｈ１Ｉ３Ｆ系統を種子親、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３Ｉ系統を花粉親として交配した場合、Ｉ５Ａ２Ｈ１Ｉ３ＦＡＳ系統を７９個体得、その色素遺伝子型と花色を決定した。色相角は−３０．２度を与え、花色は紫赤色方向の色であった。
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表７の結果から、Ａ１Ｃ３Ｂ１Ｂ３Ｉ系統とＩ５Ａ２Ｈ１Ｉ３Ｆ系統の間には、色素生合成が核遺伝する他に、細胞質遺伝（特に、母性遺伝）による花色遺伝があることがわかる。この遺伝を利用することにより、色素の核遺伝子型を損なうことなく、母親株に近い花色を出すことができた。
【実施例９】  トルコギキョウのＡ４Ｂ３Ｆ２Ｋ２（Ｆ２、八重花）、Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５９Ａ（Ｆ３）、Ｇ４Ｈ５Ｇ２Ｄ３９Ａ（Ｆ２）の各系統を自殖した結果を表８に示す。Ａ４Ｂ３Ｆ２Ｋ２（Ｆ２）系統は、色素遺伝子型はホモ型であり、花色はほぼ３：１で分離した。Ｇ２Ｄ３Ｂ２Ｉ５９Ａ（Ｆ３）系統とＧ４Ｈ５Ｇ２Ｄ３９Ａ（Ｆ２）からは、色素遺伝子型に従い、花色が分離した。この結果、Ａ４Ｂ３Ｆ２Ｋ２（Ｆ２）の自殖系統のように、同一の遺伝子型からも違った花色が分離することがわかる。
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【実施例１０】  八重花（多弁花）のトルコギキョウを自殖し、八重花と一重花が８４個体：３０個体（３：１）で分離した。その結果、八重花の遺伝子型を、Ｄ／ｄで示すことができる。Ｄ／ｄは英語の八重花（ｄｏｕｂｌｅ  ｆｌｏｗｅｒ）の頭文字を取り、それぞれ優性型／劣性型を示す。表記方法は他の頭文字を取っても、同一である。従って、ＤＤとＤｄ遺伝子型では八重花が得られ、ｄｄ遺伝子型では一重の花が得られた。八重花には、バラ咲き（ｒｏｓｅ）八重花とフリル咲き（ｆｒｉｌｌ）八重花があり、遺伝子型Ｄｒ／ｄおよびＤｆ／ｄでそれぞれが得られた。
【実施例１１】  覆輪花（花弁の先端のみが着色した花）のトルコギキョウを自殖し、覆輪花と全色花（花弁全てが着色した花）が２２９個体：７７個体（３：１）で分離した。その結果、覆輪の遺伝子型を、Ｅ／ｅで示すことができる。Ｅ／ｅは英語の覆輪花（ｅｄｇｅ  ｃｏｌｏｒｅｄ）の頭文字を取り、それぞれ優性型／劣性型を示す。表記方法は他の頭文字を取っても、同一である。従って、ＥＥとＥｅ遺伝子型では覆輪花が得られ、ｅｅ遺伝子型では全色の花が得られた。
【実施例１２】  スイートピー（マメ科）花弁色素の分析を行い、各品種系統の花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、表９に示すように、各品種系統の花弁色素遺伝子型を明らかにした。Ｄｐｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ、Ｍｖ）とペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ、Ｐｔ）を含み、これらは、いずれもＤｐｎを生成する色素遺伝子型に包含される。更に、Ｃｙｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ、Ｐｎ）を含み、Ｃｙｎを生成する色素遺伝子型に包含した。
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【実施例１３】  シャクナゲ（ツツジ科）花弁の色素の分析を行い、各品種系統の花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、表１０に示すように、各品種系統の花弁色素遺伝子型を明らかにした。Ｄｐｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ、Ｍｖ）とペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ、Ｐｔ）を含み、これらは、いずれもＤｐｎを生成する色素遺伝子型に包含される。更に、Ｃｙｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ、Ｐｎ）を含み、Ｃｙｎを生成する色素遺伝子型に包含した。
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【実施例１４】  ツツジ（ツツジ科）花弁の色素の分析を行い、各品種の花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、表１１に示すように、各品種系統の花弁色素遺伝子型と花色を明らかにした。Ｄｐｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ、Ｍｖ）とペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ、Ｐｔ）を含む場合があり、これらは、いずれもＤｐｎを生成する色素遺伝子型に包含される。更に、Ｃｙｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ、Ｐｎ）を含む場合があり、Ｃｙｎを生成する色素遺伝子型に包含した。
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【実施例１５】  キンモウツツジを種子親に、ヒラドツツジを花粉親として交配を行い、Ｆ１ツツジを作出し、それらの花弁色素の分析を行い、種子親と花粉親、各雑種の色素遺伝子型と花色遺伝を調べた。その結果、表１２に示すように、各雑種個体群における色素遺伝子型と花色を明らかにした。Ｄｐｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるマルヴィジン（ｍａｌｖｉｄｉｎ、Ｍｖ）とペチュニジン（ｐｅｔｕｎｉｄｉｎ、Ｐｔ）を含む場合があり、これらは、いずれもＤｐｎを生成する色素遺伝子型に包含される。更に、Ｃｙｎの色素表現型にはメチル化アントシアニジンであるペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ、Ｐｎ）を含み、Ｃｙｎを生成する色素遺伝子型に包含した。
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【実施例１６】  二重咲き花（ホーズインホーズ；ｈｏｓｅ−ｉｎ−ｈｏｓｅ）の久留米ツツジと一重花サツキを交配し、二重咲き花雑種と一重花雑種が１４４個体：１２３個体（１：１）で分離した。その結果、二重咲き花久留米ツツジおよび二重咲き花雑種の、二重咲き形質に関する遺伝子型をＤｈｄ（ヘテロ型）と明らかにし、一重花サツキおよび一重花雑種の遺伝子型がｄｄ（劣性ホモ型）で有ることがわかる。
【実施例１７】  ツバキ（ツバキ科）について、花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、表１３に示すように、各品種の花弁色素遺伝子型と花色がわかる。
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【実施例１８】  バラ（バラ科）の品種‘フレンシャム’について、花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、アントシアニジンはＣｙｎ色素表現型であり、Ｄ−ｅｅＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型であることがわかる。
【実施例１９】  デルフィニウム（キンポウゲ科）の品種‘ブルーミラー’について、萼片色素遺伝子型を調べた。その結果、アントシアニジンはＤｐｎ色素表現型であり、ｄｄｅｅＨＤＨＤｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型であることがわかる。
【実施例２０】  カーネーション（ナデシコ科）の品種‘クラレットエレガンス’、‘サリスローヤレッド’、‘ソルビックスシドニー’、‘ミス小倉’、‘福岡７８号’について、花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、これら品種のアントシアニジンは全てＰｇｎＣｙｎ色素表現型であり、Ｄ−ｅｅＨＴＨＴＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型であることがわかる。
【実施例２１】  グラジオラス（アヤメ科）の品種‘紅雀’、‘アーリーレッド’、‘レッドラジアンス’、‘美園’、‘バンドワゴン’について、花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、これら品種のアントシアニジンは全てＰｇｎ色素表現型であり、ｄｄｅｅＨＦＨＦＰｇ−ＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型であることがわかる。
【実施例２２】  赤色系品種のキク（キク科）について、花弁色素遺伝子型を調べた。その結果、本品種のアントシアニジンはＣｙｎ色素表現型であり、ｄｄｅｅＨＴＨＴｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型であることがわかる。
【実施例２３】  各複対立遺伝子の組合せ早見表を、表１４および表１５に示す。行には花粉親の配偶子を示し、列には種子親の配偶子を示す。表１４は、Ｐｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙおよびＤｐ／ｄｐで示される遺伝子座がＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐまたはＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐで表される場合の組合せ表であり、表１５は、Ｐｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙおよびＤｐ／ｄｐで示される遺伝子座がｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐで表される場合の組合せ表である。例えば、遺伝子座がＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐであり、一つの複対立遺伝子ＨＯともう一つの複対立遺伝子ＨＯが受精し、その組合せがＨＯＨＯとなった場合は、表１４からその色素表現型がＰｇｎＣｙｎＤｐｎであることが、この早見表より速やかに知ることができる。
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【実施例２４】  色素表現型と色素遺伝子型との対応を示す、早見表を表１６に示す。例えば、ＰｇｎＣｙｎ色素型のＨＴＨＴＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型と、白花（ｎｏｎｅ色素型）のＨＦＨＦｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型とを交配すると、ＨＴＨＦＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐの色素遺伝子型を有するＦ１交配種を作出することができ、その色素表現型がＰｇｎＣｙｎＤｐｎであることが、この早見表より速やかに知ることができる。
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【実施例２５】  各複対立遺伝子の組合せから花色を知ることのできる早見表を、表１７および表１８に示す。行には花粉親の配偶子を示し、列には種子親の配偶子を示す。表１７は、Ｐｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙおよびＤｐ／ｄｐで示される遺伝子座がＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐまたはＰｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐで表される場合の組合せ表であり、表１８は、Ｐｇ／ｐｇ、Ｃｙ／ｃｙおよびＤｐ／ｄｐで示される遺伝子座がｐｇｐｇＣｙＣｙＤｐＤｐで表される場合の組合せ表である。例えば、遺伝子座がＰｇＰｇＣｙＣｙＤｐＤｐであり、一つの複対立遺伝子ＨＯともう一つの複対立遺伝子ＨＯが受精し、その組合せがＨＯＨＯとなった場合は、表１７からその色素表現型はＰｇｎＣｙｎＤｐｎであり、したがって、その花色が赤紫色であることをこの早見表より速やかに知ることができる。
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これらの実施例から、本発明の遺伝子型ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐまたは遺伝子型Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐでＰｇｎ、Ｃｙｎ、Ｄｐｎの色素表現型を帰属した花色および／または花形育種法が優れた花色遺伝型交配法であることは明らかである。
【産業上の利用可能性】  本発明により、花きの色素遺伝子型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｇｅｎｏｔｙｐｅ）を明らかにできる。たとえば、遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）Ｄ／ｄ・Ｅ／ｅ・ＨＸＨＸ・Ｐｇ／ｐｇ・Ｃｙ／ｃｙ・Ｄｐ／ｄｐであって、Ｐｇｎ、Ｃｙｎ、Ｄｐｎの色素表現型（ｐｉｇｍｅｎｔ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）を帰属した花色遺伝型交配法を用い、花きの花色をＣＩＥＬａｂ表色系を用いて正確に測色・数値化することにより、優れた新花色を提供できる。
【国際調査報告】
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