(57)【要約】優れた免疫賦活作用等を有する新規なきのこ類であるバシディオマイセテス及びバシディオマイセテス抽出組成物並びにこれを用いた健康食品及び免疫賦活剤を提供する。担子器形成能を有しないバシディオマイセテスであり、特に、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であり、これらから水及び親水性溶媒から選択される少なくとも一種を含む抽出溶媒で抽出してバシディオマイセテス抽出組成物とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
担子器形成能を有しないことを特徴とするバシディオマイセテス。
【請求項２】
請求の範囲１において、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とするバシディオマイセテス。
【請求項３】
担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから水及び親水性溶媒から選択される少なくとも一種を含む抽出溶媒で抽出したことを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物。
【請求項４】
請求の範囲３において、前記バシディオマイセテスが、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物。
【請求項５】
請求の範囲３又は４において、加熱して抽出したものであることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物。
【請求項６】
請求の範囲３〜５の何れかにおいて、加圧して抽出したものであることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物。
【請求項７】
担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから抽出したバシディオマイセテス抽出組成物を有効成分とすることを特徴とする健康食品。
【請求項８】
請求の範囲７において、前記バシディオマイセテスが、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とする健康食品。
【請求項９】
請求の範囲７又は８において、ドリンク状、スナック状、濃縮エキス状、粉末、顆粒、錠剤、及びカプセルから選択される形態であることを特徴とする健康食品。
【請求項１０】
担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから抽出したバシディオマイセテス抽出組成物を有効成分とすることを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項１１】
請求の範囲１０において、前記バシディオマイセテスが、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項１２】
請求の範囲１又は２のバシディオマイセテスを培養した菌糸塊からなることを特徴とする食用バシディオマイセテス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、新規なきのこで免疫調整効果などの特性を有するバシディオマイセテス及びバシディオマイセテス抽出組成物並びにこれを用いた健康食品及び免疫賦活剤に関する。
【背景技術】  古来より、きのこ類は独特の風味や香りを有する食材として汎用されると共に、免疫力の向上、抗菌、体調リズムの調節、老化防止などの生理機能活性化作用などを有するとして漢方薬又はある種の疾患の民間薬としても用いられてきた。また、きのこに関する薬効成分の研究も進歩してきており、抗菌・抗ウイルス作用、強心作用、血糖降下作用、コレステロール低下作用、抗血栓作用、血圧降下作用を示す成分が見いだされている。
そして、担子菌類のうち食用茸類、特に、椎茸［Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ（Ｂｅｒｋ．）Ｓｉｎｇ．］、ヒラタケ［Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ（Ｊａｃｑ．ｅｘＦｒ．）Ｑｕｅｌ．］、ナメコ［Ｐｈｏｌｉｏｔａｎａｍｅｋｏ（Ｔ．Ｉｔｏ）Ｓ．Ｉｔｏ  ｅｔ  Ｉｍａｉ］、マイタケ［Ｇｒｉｆｏｌａ  ｆｒｏｎｄｏｓａ］、エノキタケ［Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ  ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ（Ｃｕｒｔ．ｅｘ  Ｆｒ．）Ｓｉｎｇ．］及びブナシメジ［Ｈｙｐｓｉｚｉｇｕｓ  ｍａｒｍｏｒｅｕｓ］から選ばれる２種以上の茸の乾燥物またはそれらの抽出物を混合したものを含有してなる、医薬や健康食品等として利用可能な組成物が提案されている（特開平１１−１５２２３０号公報参照）。
また、近年、アガリクス茸やメシマコブなどが抗ガン作用などを有するとして注目を集めている。
例えば、メシマコブなどのキコブタケ属きのこの高収量栽培方法（特開平１１−２６２３２９号公報参照）や、メシマコブの菌糸体を大量に得るためのメシマコブ菌糸体の培養方法（特開２００１−１７８４４８号公報参照）、また、アガリクス茸に含まれる成分を超音波を利用して効率よく抽出する方法（特開２００１−２７８８０５号公報参照）などが提案されている。
上述したように、種々のきのこが抗ガン作用などを有するとして注目を集めているが、決定的に効果を示すものではなく、さらに優れた効果を有するきのこの出現が要望されている。
【発明の開示】
そこで、本発明はこのような事情に鑑み、優れた免疫賦活作用等を有する新規なきのこ類であるバシディオマイセテス及びバシディオマイセテス抽出組成物並びにこれを用いた健康食品及び免疫賦活剤を提供することを課題とする。
前記課題を解決する本発明の第１の態様は、担子器形成能を有しないことを特徴とするバシディオマイセテスにある。
本発明の第２の態様は、第１の態様において、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とするバシディオマイセテスにある。
本発明の第３の態様は、担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから水及び親水性溶媒から選択される少なくとも一種を含む抽出溶媒で抽出したことを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物にある。
本発明の第４の態様は、第３の態様において、前記バシディオマイセテスが、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物にある。
本発明の第５の態様は、第３又は４の態様において、加熱して抽出したものであることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物にある。
本発明の第６の態様は、第３〜５の何れかの態様において、加圧して抽出したものであることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物にある。
本発明の第７の態様は、担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから抽出したバシディオマイセテス抽出組成物を有効成分とすることを特徴とする健康食品にある。
本発明の第８の態様は、第７の態様において、前記バシディオマイセテスが、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とする健康食品にある。
本発明の第９の態様は、第７又は８の態様において、ドリンク状、スナック状、濃縮エキス状、粉末、顆粒、錠剤、及びカプセルから選択される形態であることを特徴とする健康食品にある。
本発明の第１０の態様は、担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから抽出したバシディオマイセテス抽出組成物を有効成分とすることを特徴とする免疫賦活剤にある。
本発明の第１１の態様は、第１０の態様において、前記バシディオマイセテスが、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であることを特徴とする免疫賦活剤にある。
本発明の第１２の態様は、第１又は２の態様のバシディオマイセテスを培養した菌糸塊からなることを特徴とする食用バシディオマイセテスにある。
かかる本発明のバシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）は、多量の多糖類（β−Ｄ−グルカン）が含まれており、抗酸化力が高く、ＯＨラジカル消去活性を有し、免疫調整効果を有するものであり、老化防止などの効能が期待できる健康食品、免疫賦活剤として用いて好適なものである。
【図面の簡単な説明】  第１図は、試験例１の測定結果を示す図である。
第２図は、試験例２の測定結果を示す図である。
第３図は、試験例３の測定結果を示す図である。
第４図は、試験例４の投与方法を示す模式図である。
第５図は、試験例４の測定結果を示す図である。
本発明を実施するための最良の形態
本発明でいうバシディオマイセテスは、担子菌であり、嘴状突起（クランプ）は観察されるが、担子器形成能を有しないという特性を有しており、他の担子菌と区別される。すなわち、培養しても、担子器を形成せずに、菌核（菌糸塊）を形成するだけである。
かかるバシディオマイセテスは、菌を自然界から探索した結果得たものであり、単離し、バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）として独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託した（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１）。
本発明に係る菌は、分生子を形成しない、すなわち、無性世代を有しないものである。
すなわち、例えば、ポテトグルコース寒天培地で培養すると、培養菌糸は、クランプを有し、平滑であるが、分生子を形成せず、子実体を形成しない。コロニー表面の形状色調を観察すると、コロニー内に淡桃色菌糸塊を形成しており、植菌部位から同心円状に生長したコロニー内に複数の菌糸塊を形成した場合、菌糸塊相互は菌糸束により連結される。なお、コロニーの裏面の色調は淡桃色である。
また、グルコース・ドライイースト寒天培地で培養すると、培養菌糸はクランプを有し、平滑であるが、分生子を形成せず、子実体を形成しない。コロニー表面の形状色調を観察すると、コロニー内に淡桃〜白色の菌糸塊を形成し、植菌部位を中心とするように厚さ５〜６ｍｍの菌糸塊を形成している。なお、コロニーの裏面の色調は、淡桃〜白色である。
本発明の菌の最適生育条件は、例えば、ｐＨ５．０〜６．０で、温度２２〜２６℃である。また、生育範囲は、例えば、ｐＨ４．０〜７．５で、温度５〜３０℃である。
本発明に係る菌であるバシディオマイセテスは、一般的な方法により培養でき、培養方法は特に限定されるものではない。
また、本発明のバシディオマイセテス抽出組成物は、バシディオマイセテスを培養して得られた菌糸塊から細胞内容物を抽出したものであれば、その抽出方法等は特に限定されない。菌糸塊から細胞内容物を効率よく抽出するには、好適には、必要に応じて菌糸塊を凍結するなどして細胞壁に損傷を与えて解凍した後、ミキサーなどにより破砕し、エキスを抽出する。エキスの抽出も特に限定されないが、水、低級アルコールなど、さらには、酸、アルカリ、その他の添加剤を添加した抽出液を用いて常温又は加熱条件下、又は加圧下にて抽出する。一般的には、熱水で煮出して抽出するか、あるいは、水又はアルコールやアルカリを添加した水と破砕物を混合した状態で、例えば、１００ＭＰａ〜７００ＭＰａ程度、好ましくは、３００ＭＰａ〜６００ＭＰａ程度加圧して抽出するのがよい。
ここで、熱水抽出の一例を説明する。まず、例えば、凍結しているＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊を常温解凍し、ミキサーを用いて破砕し、破砕したＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊と抽出溶媒である水との割合を、例えば、１：５程度とし、例えば、破砕Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊５０ｇをガラス瓶に入れ、水２５０ｍｌを加えて蓋を締め、これを鍋の底にタオルを敷いた上に水を注ぎ、破砕菌糸塊の入ったガラス瓶を置いて加熱・沸騰させる。沸騰してから９０分間加熱を継続し、冷却後固液分離し、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出液を得る。抽出液のｐＨは例えば、６．３〜６．５を示す。
このように得た抽出液は、必要に応じて濃縮し、バシディオマイセテス抽出組成物とする。エキスの濃縮は特に限定されないが、例えば、以下のように行う。
得られたＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出液をビーカーに移し、加熱・蒸発させて濃縮する。このとき、抽出液は淡いベージュ色から褐色を呈するようになり、盛んに発泡をはじめるようになるが、更に蒸発・濃縮を継続し、例えば、ｐＨ４．９、密度１．２５ｇ／ｃｍ３のタール状となった時点で、濃縮を終了させる。この濃縮エキスは、醤油様の芳香を発する。なお、この時点における、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊からの濃縮エキスの収率は平均１２％である。
このように得た濃縮エキスは冷却するに従い、粘性が非常に高まるため、濃縮終了と同時に保存容器に移す必要がある。また、保存容器に移した濃縮エキスは、そのまま冷却後、冷凍・凍結保存とするのが好ましい。
また、本発明のバシディオマイセテス抽出組成物は、ドリンク状、スナック状、濃縮エキス状、粉末、顆粒、錠剤、又はカプセルなどの形態で健康食品や免疫賦活剤などの医薬品として用いることができる。なお、バシディオマイセテス抽出組成物添加量は、用途に合わせて適宜設定すればよく、特に限定されない。
さらに、本発明に係る菌であるバシディオマイセテスを培養して得られる菌糸塊は、食用に供することができるものであり、食感、食味が優れたものである。
本発明のバシディオマイセテスは、培養すると培養した環境に応じて菌糸塊を形成する、すなわち、例えば、所定の形状の器の中で培養すると、その器の形状の菌糸塊が得られるので、食用として利用しやすい食用バシディオマイセテスが得られる。また、このように得られた食用バシディオマイセテスは、生のまま食用材料としてもよいし、冷凍又は乾燥して食用材料としてもよいが、生の材料又は冷凍材料とするのが好ましい。
ここで、培養方法は上述したように一般的な方法により培養でき、培養方法は特に限定されるものではないが、例えば、適当な栄養源を添加して滅菌した寒天培地、おがくず培地、液体培地などに、培養済の菌株あるいは種菌を無菌的に植菌し、適温条件下で培養することにより、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘの菌糸塊を得ることができる。
また、食用バシディオマイセテスの食材とした場合の料理方法も特に限定されないが、煮る、炒める、焼く、揚げるなど、一般的なキノコ類と同様な方法での各種方法で料理することができ、特に限定されるものではない。なお、食用バシディオマイセテスは、食感に優れ、食味に癖がないので、各種料理に幅広く利用することができる。
このように食用バシディオマイセテスを食した場合にも、当然、バシディオマイセテス抽出組成物を食した場合と同様な効果が得られると推測される。
【実施例】  以下、本発明を実施例を参照しながらさらに具体的に説明する。なお、実施例１〜４でＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘの栽培例を、実施例５〜９で抽出例を示す。
（実施例１）  菌糸塊からの分離
（１）培地の調製
下記表１の配合で、ＰＳＡ及びＰＤＡ培地を調製し、試験管又は三角フラスコに分注した後、シリコセン（または綿栓）を施しオートクレーブにより１２１℃２０分高圧蒸気滅菌した。その後、試験管の場合は、滅菌後熱いうちに傾斜させてスラント（斜面）培地とし、三角フラスコの場合は、そのまま静置してプレート（平面）培地とした。
【表１】
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（２）菌糸塊からの分離
大きめのＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊を手で割り、火炎滅菌したメスを冷却させてからＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ断面より切片を切断し、火炎滅菌冷却後のピンセットで、（１）のＰＤＡ及びＰＳＡ培地スラントにＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ切片を植菌した。なお操作は、無菌箱又はクリーンベンチ内の、無菌処理済み条件下で行った。
（３）培養
２４℃条件下でインキュベーターにおいて培養させたところ、２４〜４８時間後には発菌した。発菌後、２４℃条件下で培養を継続すると、１４日間でＡｇａｒ培地上に菌糸が生育した。
（実施例２）  菌糸塊生産のためのおがくず培地による培養
（１）種菌の培養
おがくず１Ｌ、脱脂ぬか１５ｇ、ふすま１５ｇ及びサンパール（菌糸活性剤・日本製紙製）５ｇに、水を加えて十分に攪拌し、培地を強く握って水がにじむ程度（湿式含水率７０％程度）として、おがくず培地を調製した。この培地を三角フラスコに入れ、シリコセンを施した後、オートクレーブにより１２１℃４０分高圧蒸気滅菌した。滅菌後２４時間後に、実施例１のスラントにて培養中のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸を無菌箱内にて無菌操作によっておがくず培地に植菌した。なお、植菌は滅菌三角刀でスラントの一部を切除するようにし、菌糸にダメージを与えないよう行った。また、植菌の密度は、おがくず培地表面積の２０〜３０％とした。２４℃条件下で培養したところ３日後（遅くとも５日後）に発菌し、３０日後には三角フラスコおがくず培地に充満した。
（２）菌糸塊の発生
（１）と同様にしたおがくず培地を調製し、この培地をポリプロピレン製ビンに入れ、フタをして、オートクレーブにより１２１℃４０分高圧蒸気滅菌した。滅菌後２４時間後、無菌処理済みの無菌箱内において無菌操作により、（１）で培養した種菌をポリプロピレン製ビンのおがくず培地に植菌した。なお、植菌の密度は、おがくず培地表面積がほぼ覆われる程度とした。２４℃条件下で培養したところ、４８時間後に発菌し、６０日後にはポリプロピレン製ビン内のおがくず培地全体に菌糸が充満した。更に４０〜５０日経過すると、ポリプロピレン製ビン内壁に菌糸が展開し、菌糸束を形成、更に培養を継続すると菌糸塊を形成した。
（実施例３）  菌糸塊生産のための液体培地による培養
１ｃｍ角としたジャガイモ２００ｇを精製水を用いて煮沸後２０分継続、冷却後、固液分離したジャガイモ浸出液、スクロース２０ｇに蒸留水を全量１Ｌとなるように加え液体培地を調製した。この液体培地を試験管に各５ｍｌに分注し、シリコセンを施し滅菌（１２１℃２０分高圧蒸気滅菌あるいは１００℃８時間常圧蒸気滅菌）した。その後、無菌処理済の無菌箱内において無菌操作により、実施例１のスラントにおいて培養中のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ切片の下端が接するよう植菌した。２４℃条件下で培養したところ、４８時間で発菌し、更に培養を継続すると、液体培地に接するように菌糸塊を形成した。
（実施例４）  菌糸塊生産のためのＡｇａｒ培地による培養
１ｃｍ角としたジャガイモ２００ｇを精製水を用いて煮沸後２０分継続、冷却後、固液分離したジャガイモ浸出液、スクロース２０ｇ及びＡｇａｒ１ｇ（０．１％）に蒸留水を全量１Ｌとなるように加えて、Ａｇａｒ培地を調整した。なお、通常Ａｇａｒ培地は１．５〜２．０（培地１Ｌに対し、１５〜２０ｇ）のＡｇａｒ添加するが、培養後の菌糸塊と、Ａｇａｒ培地の分離を容易にするため、また液体培地ではＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘの切片が沈降しやすいため物理的強度を維持する目的で、０．１％添加する事とした。この０．１％Ａｇａｒ培地を試験管に各５ｍｌに分注し、シリコセンを施した後オートクレーブにより１２１℃２０分間高圧蒸気滅菌した。その後、無菌処理済みの無菌箱内において、実施例１のスラントにおいて培養中のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊から切片を切除し、０．１％Ａｇａｒ培地に無菌操作により植菌した。２４℃条件下で培養すると、４８時間で発菌し更に培養を継続することにより、菌糸塊を形成した。
（実施例５）  濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の煮出しによる製造
菌糸の細胞壁に損傷を与え、細胞内容物が浸出することを容易にするため、生鮮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊を冷凍・凍結させ、凍結しているＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊を常温解凍し、ミキサーを用いて破砕した。破砕Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊５０ｇをガラス瓶に入れ、水２５０ｍｌを加えて蓋を締め、鍋の底にタオルを敷いた上に水を注ぎ、破砕菌糸塊の入ったガラス瓶を置いて加熱・沸騰させ、沸騰してから９０分間加熱を継続した。冷却後固液分離し、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物を得た。なお、抽出液のｐＨは６．３〜６．５であった。
得られたＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物をビーカーに移し、加熱・蒸発させて濃縮した。抽出組成物は淡いベージュ色から褐色を呈するようになり、盛んに発泡をはじめるようになったが、更に蒸発・濃縮を継続した。ｐＨ４．９、密度１．２５ｇ／ｃｍ３のタール状となった時点で、濃縮を終了させた。この濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物は、醤油様の芳香を発した。なお、この時点における、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊からの濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の収率は１２％であった。Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物は冷却するに従い、粘性が非常に高まるため、濃縮終了と同時に保存容器に移し、そのまま冷却後、冷凍・凍結保存した。
（実施例６）  Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の煮出しによる製造
菌糸の細胞壁に損傷を与え、細胞内容物が浸出することを容易にするため、生鮮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊を冷凍・凍結させた後、凍結しているＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊を常温解凍した。
この解凍後のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊（湿重量２０ｇ）を計りとり、０．５ｃｍ角に刻んだものをビーカーに入れ、水１００ｍｌを加えてから、９０℃で弱く煮沸し、溶液が最初の量の１／２になるまで煮詰めた。その後水を加えて元の用量に戻し、ガーゼでろ過して固形物を除いた後に密封、冷蔵庫に保存したものを実施例６のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物とした。
（実施例７）  Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の高圧処理による製造
実施例６と同様に処理したＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ菌糸塊（湿重量２０ｇ）をビニール袋にとり、水１００ｍｌを加えた後、減圧脱気して封入した。これを超高圧装置（神戸製鋼製７００ＭＰａ処理可能タイプ）にセットして、静水圧４００ＭＰａで１０分間処理し、ガーゼろ過し、冷蔵保存したものを実施例７のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物とした。
（実施例８）  Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の高圧処理による製造
静水圧６００ＭＰａで処理した以外は、実施例７と同様にして製造した組成物を実施例８のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物とした。
（実施例９）  Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の高圧処理による製造
水１００ｍｌの代わりに０．１％ＫＣｌ水溶液１００ｍｌを用いた以外は、実施例８と同様にして製造した組成物を実施例９のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物とした。
（試験例１）活性酸素（ヒドロキシラジカル）消去活性の測定
Ｈｙｄｏｒｏｘｙｒａｄｉｃａｌ（ヒドロキシラジカル）消去活性は、Ｈ２Ｏ２／ＵＶをヒドロキシラジカル発生源として用い、ジメチルピロリン−Ｎ−オキシド（ＤＭＰＯ）をスピン捕捉剤とするＥＳＲ（電子スピン共鳴法）で測定した。
実施例６〜９のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物一定量に、ＤＭＰＯ４０ｍＭ、過酸化水素２０ｍＭを加え、精製水で全量３００μｌとなるようにした。波長２４５ｎｍのＵＶ（バンド幅２０ｎｍ）で５分間照射し、生成するＤＭＰＯのヒドロキシラジカル付加体のＥＳＲシグナルを観察し、その強度変化から抽出組成物の消去活性を求めた。この結果を図１に示す。
図１に示すようにＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の添加量が多いほどヒドロキシラジカルの消去率は高かった。また、水溶媒で４００ＭＰａの高圧処理抽出した実施例７が、最もヒドロキシラジカル消去率が高かった。
（試験例２）活性酸素（スーパーオキシドラジカル）消去活性の測定
Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ａｎｉｏｎ  ｒａｄｉｃａｌ（スーパーオキシドラジカル）消去活性はキサンチン・キサンチンオキシダーゼ系をスーパーオキシドラジカル発生系として用い、ＤＭＰＯをスピン捕捉剤とするスピン捕捉法によりＥＳＲ（電子スピン共鳴法）で測定した。
実施例６〜９のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物一定量に、ＤＭＰＯ０．３ｍＭ、ヒポキサンチン０．５ｍＭ、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）１ｍＭを加え、０．２ＭＰＢＳで全量３００μｌとなるようにした。キサンチンオキシダーゼを０．１ユニット／ｍｌ濃度で加え、生じるＤＭＰＯ−ＯＯＨ（ＤＭＰＯのスーパーオキシドラジカル付加体）のＥＳＲシグナルを観察し、シグナル強度の変化から、抽出物組成物の消去活性を求めた。この結果を図２に示す。
図２に示すように、試験例１と同様抽出組成物の添加量が多いほどスーパーオキシドラジカルの消去率は高く、また、水溶媒で４００ＭＰａの高圧処理抽出した実施例７が、最もスーパーオキシドラジカル消去率が高かった。
（試験例３）活性酸素（ヒドロキシラジカル）の消去活性の測定
Ｈｙｄｏｒｏｘｙｒａｄｉｃａｌ（ヒドロキシラジカル）消去活性は、Ｆｅｎｔｏｎ反応をヒドロキシラジカル発生源として用い、ＤＭＰＯをスピン捕捉剤とするＥＳＲスピン捕捉法で測定した。
アガリクス乾燥物（トリフジャパン製）を実施例６と同条件で煮出し抽出した抽出液、霊芝乾燥物（トリフジャパン製）を実施例６と同条件で煮出し抽出した抽出液及び実施例６〜９のＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物各一定量（１０又は２０μｌ）に、ジメチルピロリンＮオキシド（ＤＭＰＯ）２０ｍＭ、過酸化水素１０ｍＭ、及びＦｅＳＯ４０．１ｍＭを加え、精製水で全量３００μｌとなるようにしたものを測定資料とした。ＦｅＳＯ４添加１分後のＤＭＰＯ−ＯＨ（ＤＭＰＯのヒドロキシラジカル付加体）のシグナル強度の変化から消去活性を求めた。この結果は図３に示す。
図３に示すように、煮出しにより抽出した実施例６は、霊芝抽出液と同じように低濃度では鉄イオンと相互作用をするためにＤＭＰＯ−ＯＨシグナルの消失ではなく、増加を引き起こすために詳細な消去活性が見積もれなかったが、その影響の少ない高濃度で比較した場合にはアガリクスと同程度の消去活性を示した。また、高圧処理により抽出した実施例７〜９は、アガリクス、霊芝と比較して、消去活性が高かった。
（試験例４）免疫調節効果の測定
マウスは、日本クレア製のＣ３Ｈ／ＨｅＪマウスを用いた。なお、Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスは、老齢で免疫低下が認められるが、本試験では、老齢マウスとしてリタイヤ（２０〜３０週歳）を使用した。また、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘとしては、実施例５の濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物を用いた。なお、この測定には、聖マリアンナ医科大学難病治療研究センター第三部門応用薬理研究室柳川明助教授に無償で協力していただいた。
上記のリタイヤのマウスを１群１０匹とし、それぞれに、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物を１日１回０．２ｍｌ投与したＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ投与群と、生理食塩水を１日１回０．２ｍｌ投与した対照群を設けた。投与は、胃ゾンテを用いた経口投与を１４日間連続で行った。
投与開始から１０日目に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で希釈した１０％ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）、０．１ｍｌ（細胞数２×１０８）をマウス腹腔内に投与した。４．５日後、マウス脾細胞を摘出し、Ｊｅｒｎｅの方法により溶血斑（Ｐｌａｐｕｅ）形成細胞（ＰＦＣ）数をカウントし、対照群との比較を行った。対照群のＰＦＣ数の測定結果を表２に、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ投与群ＰＦＣ数の測定結果を表３に示す。また、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ又は生理食塩水、及びＳＲＢＣの投与方法の模式図を図４に、測定結果を図５に示す。
【表２】
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【表３】
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表２及び表３に示すように、対照群のＰＦＣ平均値７５．３９９、ＳＤ値６２．９８０７５に対して、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ投与群ではＰＦＣ値１３４５．９、ＳＤ値１４９５．３２４と約２０倍のＰＦＣ値を示していた。Ｓｔｕｄｅｎｔ  Ｔ  ｔｅｓｔの等分布による両側検定では、Ｐ＝０．０２３３６３でＢａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘがｐ＜０．０５で有意にＰＦＣ数を増加させることが判明した。
今回の実験により、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物には対照群の生理食塩検体に対して有意にＰＦＣ数を増加させることが明らかになった。なお、Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスを使用したＰＦＣ実験法は、免疫調節力を検定する標準的なスクリーニング法として一般的に用いられている方法である。今回老齢マウスにおいてＰＦＣ数の増加が得られた事により、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物は低下した免疫力を向上させることが判明した。
（試験例５）癌患者の免疫能パラメータの推移
実施例５の濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物を用いて、（ｃａｓｅ１）〜（ｃａｓｅ６）の癌患者の免疫能パラメータの推移を測定し、免疫能賦活効果を検討した。
た。なお、この測定には、聖マリアンナ医科大学難病治療研究センター第三部門応用薬理研究室柳川明助教授に無償で協力していただいた。
具体的には、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物１ｍｌに精製水１ｍｌを加え、１日３回食後に服用してもらった。服用期間は３週間とした。
免疫能パラメータとしては、投与前・後で以下の項目をＢＭＬ（株式会社ビー・エム・エル）に依頼し、Ｂｌｉｎｄで測定した。結果を表４〜１５に示す。なお、６例の癌患者は全て癌原発巣が異なるため、６例の平均値を取る事は意味がないので個々の症例ごとに列記した。
ＮＫ細胞として
Ｔｗｏ  ｃｏｌｏｒ（ＮＫ細胞の活性度判定として）
ＣＤ５７＋ＣＤ１６＋（％）ＮＫ活性中等度
ＣＤ５７＋ＣＤ１６−（％）ＮＫ活性弱い
ＣＤ５７−ＣＤ１６＋（％）ＮＫ活性強い
ＣＤ５７−ＣＤ１６−（％）
Ｔｏｔａｌな活性化ＮＫ細胞数として
ＣＤ３＋ＨＬＡ−ＤＲ＋（％）活性化ＣＤ３細胞
加えて、白血球数、白血球分画中のリンパ数％・数等も測定した。また、協力の得られた患者において食用中における症状の変化等を日記に記載してもらった。
（Ｃａｓｅ１）  平成１２年７月にＳ状結腸癌にてＳ状結腸全摘出手術施行。平成１４年腸壁瘢痕ヘルニアにて手術時癌再発確認。その後、腸閉塞をしばしば起こしている例。
【表４】
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【表５】
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Ｃａｓｅ１においては、投与前に比較してＮＫ細胞活性中等度ならびに弱い活性を有するリンパ球は著明に増加していた。また、強いＮＫ活性を有するＣＤ５７−ＣＤ１６＋細胞は％表示では４．１％と％表示では低下しているように見えたが、実数では１０４から１２８に増加していた。さらにＮＫ細胞全体を測定対象とするＣＤ３＋ＨＬＡ−ＤＲ＋細胞に関しても、前値の９．９％（２２３）から１０．６％（３３１）と増加していた。
（Ｃａｓｅ２）  １９９９年１０月左乳癌全摘出術施行。その後再発し、現在肺、骨、脳及び髄膜転移。髄膜播種にて放射線治療後においても、脳神経麻痺にて寝たきり状態。また、脊髄転移により進行性右上肢麻痺に陥っている。全身状態は末期癌でもかなり悪い状況である。
【表６】
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【表７】
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本例においては、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物のＮＫ細胞への影響は認めなかった。
（Ｃａｓｅ３）  ２００１年８月尿膜管腫瘍（ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｃｙｓｔａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）及び両側転移性卵巣腫瘍にて摘出術施行。その後、癌腹膜播種ならびに癌性炎にて多量の腹水貯留。現在末期癌にて寝たきりの状態にある。
【表８】
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【表９】
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本例においては、中等度ＮＫ活性を有するＣＤ５７＋ＣＤ１６＋リンパ球の軽度増加を認めた。
（Ｃａｓｅ４）  平成１３年肺癌（扁平上皮癌、Ｔ２Ｎ３Ｍ０）にて化学療法ならびに放射線療法施行。その後、左肺全摘出手術施行。平成１４年転移性脳腫瘍（肺癌脳転移）にて転移性脳腫瘍摘出術施行。しかしながら、同年多発性脳転移を合併。
【表１０】
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【表１１】
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本例においては、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物のＮＫ細胞増加効果は認めなかった。
（Ｃａｓｅ５）  平成１３年１０月に肺癌（腺癌）。診断時右頸部リンパ節に転移を認め、加えて肺門リンパ節への転移から上大静脈症候群を合併。治療としては、右頸部の６０Ｇｙの放射線照射とともに化学療法（ＣＢＤＣＡ＋ＴＡｙ４クール）施行。上大静脈は完全に閉塞した状態のままで、癌性胸膜炎も併発。肺空内に頻回に投与するも軽度減少している状態である。加えて、最近ＣＴにて脳転移を確認している。
【表１２】
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【表１３】
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本例においては、全てのＮＫ細胞パラメータが上昇し濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物を飲用する事によりＮＫ細胞活性ならびにＮＫ細胞数が増加した。本例は著効例と考えられる。
（Ｃａｓｅ６）  平成１４年７月に胃ガン（Ｂｏｒｒｍａｎ  Ｉ型胃癌が胃前庭部）に発見される。しかしながら本人が手術を希望せず、そのまま末期癌状態になる。
【表１４】
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【表１５】
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本例においては、ＣＤ５７−ＣＤ１６＋（％）（ＮＫ活性強い）とＣＤ５７＋ＣＤ１６＋（％）（ＮＫ活性中等度）のリンパ球が増加していた。
末期癌患者においても、日常生活が今だ通常通り出来る例と末期で寝たきり状態の２種類が存在する。濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物は前者の末期癌でも日常生活が可能な例に食用してもらうと著明な免疫増加効果（ＮＫ細胞の増加）が得られるのではないかと考えられた。一方、癌の病理学的所見と濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物は何らかの関係があるように思われた。Ｃａｓｅ１の大腸癌（腺癌）、Ｃａｓｅ３の尿膜管腫瘍（ｍｕｃｉｎｏｕｓ  ｃｙｓｔａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ腺癌の一種）、Ｃａｓｅ５肺癌（腺癌）、Ｃａｓｅ６胃癌（腺癌）と腺癌の症例に対しては投与後何らかのＮＫ細胞パラメータの動きがあった。しかしながら、Ｃａｓｅ４は同じ肺癌であったが、病理学的診断は扁平上皮癌であった。この例においては、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物は何らかのＮＫ動態パラメータに影響を与えなかった。
（試験例６）癌患者の免疫能パラメータの推移（服用８ヶ月）
試験例５の（ｃａｓｅ３）及び（ｃａｓｅ１）について、さらに継続して、濃縮Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物１ｍｌに精製水１ｍｌを加えたものを１日３回食後に服用してもらった。服用後６ヵ月以上を経過した免疫学的パラメータの推移を表１６及び表１７に示す。
（ｃａｓｅ３）
【表１６】
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本例においては、末期癌の進行に伴って中等度ならびに強いＮＫ活性を有する。
また、リンパ球は徐々に減少している。一方活性化リンパ球は、服用後３週間では著変は認めなかったが、８ヵ月後には、３１．６％と上昇し、ＬＡＫ（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｅ  Ｋｉｌｌｅｒ，リンホカイン活性化キラー細胞）療法後と同様なリンパ球（活性化）の増加が認められた。
（Ｃａｓｅ１）
【表１７】
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本例においては、中等度ＮＫ活性のあるＣＤ５７＋ＣＤ１６＋が服用後３週間で上昇した。又、弱いＮＫ活性を有するＣＤ５７＋ＣＤ１６−細胞が服用８ヵ月に増加した。加えて、活性化ＣＤ３細胞が服用３週間目には１０．６％、８ヵ月目には２２．７％と増加していた。
服用前と比較し、服用後においてはＮＫ活性については若干の上昇が認められた。
特筆すべき事は、（ｃａｓｅ３）及び（ｃａｓｅ１）の２例において、服用後活性化Ｔリンパ球のマーカーであるＣＤ３＋ＨＬＡ−ＤＲ＋細胞が著しく増加する点である。この結果は、通常ＬＡＫ療法を行った後に認められるものであり、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の驚くべき結果と考えてもおかしくない。
未だ２例の結果ではあるが、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物の長期服用例において、ＬＡＫ療法後と同様な活性化リンパ球の著しい増加を認めた。以上により、今後症例数を増やして更なる検討が必要と思われるが、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ抽出組成物には末期癌例において、活性化Ｔリンパ球を増加させ癌排除の方向に免疫系を向かわせている可能性が示唆された。
【実施例１０】  食用バシディオマイセテスを用いて下記のレシピに従って料理を作ったところ、何れも食用バシディオマイセテスの食感がよく、味も料理に馴染んでおいしいものであった。
１．パスタ
茹でたてのパスタと、スライスした食用バシディオマイセテスとをオリーブオイルで軽く炒める。次いで、塩、コショウ等の調味料でお好みの味付けをする。食用バシディオマイセテスに熱が通れば、できあがりである。
２．ピザ
スライスした生の食用バシディオマイセテスをピザ生地の上に並べ、チーズをかけて、オーブンで焼き上げる。満遍なく、チーズが溶ければできあがりである。
３．竜田揚げ
鶏肉や魚肉に醤油、みりん等で下味をつける。片栗粉をまぶして、軽く溶き卵につけてからスライスした生の食用バシディオマイセテスを満遍なく押し付け、これを油で揚げる。食用バシディオマイセテスがカリカリになればできあがりである。
４．オムレツ
卵を溶いて、塩、コショウ等の調味料で、お好みの味付けをする。みじん切りにした生の食用バシディオマイセテスを加えて、さらにかき混ぜる。次いで、油から軽く煙が出るほどに熱したフライパンに、具を入れた上記卵を入れ、固まらないようにかき混ぜて、火を消す。フライパンの余熱で表面を固まらせながら、卵を回転させ、表面がきつね色で、中が半熟くらいになればできあがりである。
【産業上の利用可能性】  以上説明したように、本発明によると、優れた免疫賦活作用等を有する新規なきのこ類であるバシディオマイセテス及びバシディオマイセテス抽出組成物並びにこれを用いた健康食品，免疫賦活剤及び食用バシディオマイセテスを提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年8月12日(2004.8.12)
【手続補正００１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（補正後）バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であり、担子器形成能を有しないことを特徴とするバシディオマイセテス。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（補正後）バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であり、担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから水及び親水性溶媒から選択される少なくとも一種を含む抽出溶媒で抽出したことを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物。
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
（補正後）請求の範囲３において、加熱して抽出したものであることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物。
【請求項６】
（補正後）請求の範囲３又は５において、加圧して抽出したものであることを特徴とするバシディオマイセテス抽出組成物。
【請求項７】
（補正後）バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であり、担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから抽出したバシディオマイセテス抽出組成物を有効成分とすることを特徴とする健康食品。
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（補正後）請求の範囲７において、ドリンク状、スナック状、濃縮エキス状、粉末、顆粒、錠剤、及びカプセルから選択される形態であることを特徴とする健康食品。
【請求項１０】
（補正後）バシディオマイセテスＸ（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ−Ｘ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００１１であり、担子器形成能を有しないバシディオマイセテスから抽出したバシディオマイセテス抽出組成物を有効成分とすることを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項１１】
（削除）
【請求項１２】
（補正後）請求の範囲１のバシディオマイセテスを培養した菌糸塊からなることを特徴とする食用バシディオマイセテス。
【国際調査報告】
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