(57)【要約】ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン、低分子医薬品等の対象物質、又は、前記対象物質及びＨＶＪエンベロープベクターと、それらを組織に保持し得るムコ多糖及びその塩等の生体適合性組成物とを含有する対象物質導入用組成物を提供する。前記組成物を組織に投与することにより、対象物質が組織に保持され、更には細胞に導入される。
2004078213.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種並びに前記ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種を組織に保持し得る生体適合性組成物を含有する、対象物質導入用組成物。
【請求項２】
導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種、ＨＶＪエンベロープベクター並びに前記ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン、低分子医薬品及びＨＶＪエンベロープベクターからなる群から選択される少なくとも一種を組織に保持し得る生体適合性組成物を含有する、対象物質導入用組成物。
【請求項３】
導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種を封入したＨＶＪエンベロープベクター並びに前記ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン又は低分子医薬品及びＨＶＪエンベロープベクターからなる群から選択される一種を組織に保持し得る生体適合性組成物を含有する、対象物質導入用組成物。
【請求項４】
生体適合性組成物は、ムコ多糖又はその塩を含有することを特徴とする、請求項１から請求項３のいずれかに記載の対象物質導入用組成物。
【請求項５】
生体適合性組成物のｐＨは、ｐＨ３．０〜９．０であることを特徴とする、請求項１から請求項４のいずれかに記載の対象物質導入用組成物。
【請求項６】
前記核酸の誘導体は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド核酸、ヌクレオチドアナログ含有核酸及びこれら核酸を組み込んだプラスミドベクターからなる群より選択された少なくとも一種である、請求項１から請求項５のいずれかに記載の対象物質導入用組成物。
【請求項７】
前記ムコ多糖は、ヒアルロン酸、キチン、コロミン酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、コンドロイチン４−硫酸やコンドロイチン６−硫酸等のコンドロイチン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸及びタイクロン酸からなる群から選択される少なくとも一種であることを特徴とする請求項４に記載の対象物質導入用組成物。
【請求項８】
前記ムコ多糖の塩は、ヒアルロン酸、キチン、コロミン酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、コンドロイチン４−硫酸やコンドロイチン６−硫酸等のコンドロイチン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸及びタイクロン酸からなる群から選択される少なくとも一種の塩であることを特徴とする請求項４に記載の対象物質導入用組成物。
【請求項９】
請求項１から請求項８のいずれかに記載の対象物質導入用組成物を投与することにより、対象物質を組織に導入することを特徴とする、対象物質導入方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン又は低分子医薬品等の対象物質を導入するための対象物質導入用組成物及びそれを用いる対象物質の導入方法に関する。詳しくは、全身性疾患等の広範囲にわたり発症する疾患等の治療、症状改善、疾患の機構の研究等に用いうる対象物質導入用組成物及び広範囲の導入対象部位に対して、効率よく対象物質を導入する対象物質導入方法に関する。
【背景技術】  対象物質を導入する場合、分子量の小さな物質であれば、対象物質そのものを溶解液に溶かす等の方法が採られている。遺伝子の場合、付着培養細胞では、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム法やＤＥＡＥデキストラン法等により、対象物質を導入することが可能であるが、浮遊細胞やｉｎ  ｖｉｖｏで個体に投与する場合には、対象物質そのものを溶解液に溶かすだけでは細胞に対象物質を導入するのが困難であるため、導入遺伝子を効率よく導入する担体が必要である。対象物質を導入するための担体として、ウイルスベクターと非ウイルスベクターが知られている。ウイルスベクターは、ウイルスゲノムの一部を発現させたい外来遺伝子に置換して細胞に導入するため、発癌の可能性がある、免疫・炎症反応を惹起する可能性がある、細胞毒性がある等の指摘がなされている。非ウイルスベクターとしては、リポソーム、ＨＶＪ人工ウイルスが知られているが、ウイルスベクターと比較して導入効率は低いものが多い。ＨＶＪ人工ウイルスは、リポソームに比較して、血清成分による活性低下が無く安全性が高いものである。また、リポソームはサイズの大きい蛋白質やＤＮＡの導入が困難であるのに対して、ＨＶＪ人工ウイルスはサイズの大きい蛋白質やＤＮＡの導入が可能であるという特徴を有する。また、極微量であれば、導入担体がなくても、対象物質を細胞内に導入することは可能であるが、細胞内に導入された対象物質が、実際に機能を果たしうる量にまで導入効率を高めるためには、化学的な脱毛を行う、超音波をかける、ｔａｐｅ  ｓｔｒｉｐｐｉｎｇを行う等の非生理的処理を施すことが必要になり、多くの場合、生体の組織や細胞に損傷を伴った。
ウイルスベクターによる経皮的遺伝子導入方法が、例えば、特開２００１−１１２４７５号公報や特開２００１−２８６２８２号公報に記載されている。また、リポソームを担体として対象物質を経皮的に導入する方法が、例えば、特表２００２−５１５８５６号公報に記載されている。また、ＨＶＪリポソームを経皮的に導入することについては、例えば、日本研究皮膚科学会第２６回年次学術大会で発表されている。しかしながら、生体適合性組成物を使用することやＨＶＪエンベロープベクターを担体とする対象物質の経組織導入については、未だ知られていない。
本発明は、対象物質と生体適合性組成物とからなる対象物質導入用組成物及び対象物質導入方法に関するものである。全身性疾患等の広範囲にわたり発症する疾患等の治療、症状改善、疾患の機構の研究等に用いうる対象物質導入用組成物及び広範囲の導入対象部位に対して、安全かつ簡便に対象物質を効率よく導入することが可能な、対象物質の導入方法に関するものである。
例えば、全身性疾患に関して、色素性乾皮症（ＸＰ）は、ヌクレオチド除去修復酵素の機能欠損等を特徴とする常染色体性劣性遺伝性疾患であり、日光過敏、色素斑・脱色素斑の増加、皮膚の萎縮、多発性日光角化症等をもたらす。また、前記色素性乾皮症においては、露光部位に高率に悪性腫瘍が発生する。
現在、前記色素性乾皮症の治療として、理論的には、欠損遺伝子を補充するのが最適であるが、現在は、かかる治療に適した方法の開発は進んでおらず、根本的な治療法といえるものはなく、遮光、生じた皮膚癌の切除等対症療法しか行われていないのが現状である。
本発明は、広範囲の領域にペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン、低分子医薬品等の導入対象物質を効率よく導入するための手段を提供することを目的とする。また、本発明は、全身性疾患等の広範囲にわたり発症する疾患等の治療、症状改善、疾患の機構の研究を可能にする手段を提供することを目的とする。具体的には、本発明の第１の目的は、全身性疾患等の広範囲にわたり発症する疾患等の治療、症状改善、疾患の機構の研究に用いうる対象物質導入用組成物を提供することにある。即ち、広範囲の導入対象部位に対して、効率よく対象物質を導入することが可能な対象物質導入用組成物、具体的には、遺伝子、酵素、抗体、サイトカイン（シグナル伝達物質）、成長因子、低分子医薬品等を含有する導入用組成物である。また、本発明の第２の目的は、広範囲の導入対象部位に対して、簡便に、効率よく対象物質を導入することができる対象物質導入方法を提供することにある。
【発明の開示】
本発明の基本は、対象物質と生体適合性組成物とからなる対象物質導入用組成物であり、対象物質の導入方法である。ここで、対象物質は、導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン又は低分子医薬品であり、対象物質導入用組成物は、前記対象物質及び生体適合性組成物からなるものである。そして、担体としてＨＶＪエンベロープベクターを含有するものであり、更に、前記対象物質を封入したＨＶＪエンベロープベクターを含有するものである。
即ち、本発明の要旨は、導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種並びに前記ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種を組織に保持し、又は保持し更に導入し得る生体適合性組成物を含有する、対象物質導入用組成物であり、導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種、ＨＶＪエンベロープベクター並びに前記ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン、低分子医薬品及びＨＶＪエンベロープベクターからなる群から選択される少なくとも一種を組織に保持し、又は保持し更に導入し得る生体適合性組成物を含有する、対象物質導入用組成物であり、
導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン及び低分子医薬品からなる群から選択される少なくとも一種を封入したＨＶＪエンベロープベクター並びに前記ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン、低分子医薬品及びＨＶＪエンベロープベクターからなる群から選択される一種を組織に保持し、又は保持し更に導入し得る生体適合性組成物を含有する、対象物質導入用組成物である。尚、「ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン、低分子医薬品」等の対象物質を説明の都合上、以下（Ｔ）と略称する。
生体適合性組成物には、ムコ多糖又はその塩類を含有させることができる。ムコ多糖は、具体的には、ヒアルロン酸、キチン、コロミン酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、コンドロイチン４−硫酸やコンドロイチン６−硫酸等のコンドロイチン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、タイクロン酸等を好適に使用することができ、ムコ多糖の塩は、具体的には、ヒアルロン酸、キチン、コロミン酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、コンドロイチン４−硫酸やコンドロイチン６−硫酸等のコンドロイチン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、タイクロン酸等の塩を好適に使用することができる。また、そのｐＨは、ｐＨ３〜９．０であることが好ましい。
核酸又は核酸の誘導体は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド核酸、ヌクレオチドアナログ含有核酸等及びこれら核酸を組み込むプラスミドベクターからなる群より選択された少なくとも一種とすることができる。
更に、以上述べた対象物質導入用組成物を投与することにより対象物質を組織や細胞に導入する対象物質導入方法である。
本発明の対象物質導入用組成物は、対象物質（Ｔ）の内少なくとも１種及び生体適合性組成物を含有してなる対象物質導入用組成物であり、対象物質（Ｔ）の内少なくとも１種、ＨＶＪエンベロープベクター等の担体及び生体適合性組成物を含有してなる対象物質導入用組成物であり、対象物質（Ｔ）の内少なくとも１種を封入したＨＶＪエンベロープベクター等の担体及び生体適合性組成物を含有してなる対象物質導入用組成物である。
そして、導入対象の「核酸又は核酸の誘導体」は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド核酸、ヌクレオチドアナログ含有核酸等及びこれら核酸を組み込んだプラスミドベクター等であり、前記「導入対象のペプチド」としては、長鎖ペプチド、非天然型アミノ酸含有ペプチド、リン酸化ペプチド、分子内Ｓ−Ｓ結合型ペプチド、多抗原性ペプチド（ＭＡＰ）、キャリアー蛋白結合ペプチド、カリクレイン、サブスタンスＰ、ブラジキニン、カリジン、コレシストキニン、ニューロペプタイド、グラミジン、コリスチン、ポリミキシン、オキシトシン、バソプレシン、セクレチン、糖の消化管ペプチド、抗菌ペプチド（ディフェンシン：Ｄｅｆｅｎｓｉｎ，ｈｅｐｃｉｄｉｎ：Ｌｉｖｅｒ−Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  １等）、細胞死拮抗因子（ヒューマニン：Ｈｕｍａｎｉｎ等）、血管収縮ペプチド（エンドセリン：Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−Ｉ，ウロテンシン：Ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ−ＩＩ等）、内因性成長ホルモン分泌促進ペプチド（活性型グレリン：Ａｃｔｉｖｅ  Ｇｈｒｅｌｉｎ等）等であり、導入対象の「蛋白質」は、ＸＰＡ遺伝子産物、種々のＤＮＡ損傷修復酵素、スーパーオキシドデイスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオン、ペルオキシダーゼ、ペルオキシレドキシン等の酵素、ｂ１２等の抗体、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２等のサイトカイン及びその抗体、ＥＧＦ、ＮＧＦ等の成長因子、トリヨードサイロニン（Ｔ３）、サイロキシン（Ｔ４）等であり、導入対象の「必須アミノ酸」は、メチオニン、スレオニン、バリン、トリプトファン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、リジン、ヒスチジン等であり、導入対象の「必須脂肪酸」は、αリノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、リノール酸、γリノレン酸（ＧＬＡ）、アラキドン酸等であり、導入対象の「ビタミン」としては、ビタミンＡ１（レチノール）、ビタミンＡ２（３−デヒドロレチノール）、ビタミンＡ３、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）、ビタミンＥ（トコフェロール）、ビタミンＦ（リノール酸、リノレン酸）、ビタミンＫ１（フィロキノン）、ビタミンＫ２（ファルノキノン）、ビタミンＵ等の脂溶性ビタミン及びその誘導体、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、パントテン酸、ビタミンＨ（ビオチン）、葉酸、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、コリン、イノシット、ビタミンＬ１、ビタミンＬ２、ビタミンＢ１３、ビタミンＢＴ（カルニチン）、リポ酸（チオクト酸）、ビタミンＢ１４、ビタミンＢ１５、パラアミノ安息香酸、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＰ等の水溶性ビタミン及びその誘導体、βカロテン、エルゴステロール、７−デヒドロコレステロール等のプロビタミン及びそれらの誘導体、ビタミン、プロビタミンの誘導体としては、メチルアルコール、エチルアルコール、リン酸、酢酸、塩酸、パルミチン酸、ロダン酸等のエステル類、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルギニン、リジン、塩酸、リン酸、硝酸、セチル硫酸、ナフタレンジスルホ���酸等の塩類等、アスコルビン酸２−グルコシド等の安定型ビタミンＣ等が挙げられる。
生体適合性組成物は、対象物質を組織に保持し、更には、細胞に導入しうるヒアルロン酸、キチン、コロミン酸、コンドロイチン、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸（コンドロイチン４−硫酸、コンドロイチン６−硫酸等）、ヘパリン、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、タイクロン酸等のムコ多糖、これらのムコ多糖の塩等を含有するものである。
本発明は、ＸＰＡ遺伝子を含むプラスミドベクターやＸＰＡ遺伝子を含むプラスミドベクターを封入したＨＶＪエンベロープベクターを含有したヒアルロン酸ナトリウム溶液を、ＸＰＡマウスの皮膚に塗布することにより、前記ＸＰＡ遺伝子がマウスの細胞に導入され、該遺伝子のもつ機能が発現する、即ち、ＵＶＢ照射下においても、サンバーン細胞の発生が抑制され、かつＤＮＡ修復能を回復し、更には紫外線誘発皮膚腫瘍の形成を抑えるという本発明者らの驚くべき知見に基づく。更に、ＸＰＡ遺伝子及びＨＶＪエンベロープベクターを含有したヒアルロン酸ナトリウム溶液についても同様の効果を得たという知見に基づく。
本発明の対象物質導入用組成物の中心物質である対象物質は、導入対象のペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン又は低分子医薬品等である。この対象物質は、ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン又は低分子医薬品そのものの形態で使用することができるし、ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン又は低分子医薬品等とＨＶＪエンベロープベクターと混合使用することもできるし、更には、ペプチド、ペプチドホルモン、蛋白質、核蛋白質、核酸、核酸の誘導体、必須アミノ酸、必須脂肪酸、ビタミン又は低分子医薬品等をＨＶＪエンベロープベクターに封入したものを使用することもできる。これらの対象物質は、適切な緩衝液等の溶液に溶解されていてもよい。
本発明の対象物質導入用組成物の導入対象部位としては、例えば、皮膚、粘膜、肝臓、腎臓、肺、膵臓、脳、消化管、血管、膀胱、子宮、卵巣、脾臓、胸腺、副甲状腺、甲状腺、唾液腺、耳下腺、顎下腺、リンパ節等が挙げられる。適用方法としては、皮膚、粘膜（口腔、眼、消化管、鼻、気道、肛門）等への外用、内服、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、カテーテル等の補助器具を用いて組織への局所投与、手術部位への適用等が挙げられる。
【図面の簡単な説明】  第１図は、対象物質を含むが担体及び生体適合性組成物を含まない組成物をマウスに皮膚塗布により投与した場合の低線量の紫外線誘発皮膚腫瘍の状況を示す図である。第２図は、対象物質、生体適合性組成物としてヒアルロン酸ナトリウム及び担体としてＨＶＪエンベロープベクターを含む組成物をマウスに皮膚塗布により投与した場合の低線量の紫外線誘発皮膚腫瘍の状況を示す図である。第３図は、対象物質及び生体適合性組成物としてヒアルロン酸ナトリウムを含むが担体を含まない組成物をマウスに皮膚塗布により投与した場合の低線量の紫外線誘発皮膚腫瘍の状況を示す図である。第４図は、対象物質、生体適合性組成物としてヒアルロン酸ナトリウム及び担体としてＨＶＪエンベロープベクターを含む組成物をマウスに皮下注射により投与した場合の低線量の紫外線誘発皮膚腫瘍の状況を示す図である。第５図は、対象物質及び生体適合性組成物としてヒアルロン酸ナトリウムを含むが担体を含まない組成物をマウスに皮膚塗布により投与した場合の中等量の紫外線誘発皮膚腫瘍の状況を示す図である。第６図は、対象物質を含むが生体適合性組成物及び担体を含まない組成物をマウスに皮膚塗布により投与した場合の中等量の紫外線誘発皮膚腫瘍の状況を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、本発明を実施の形態に基づいて説明する。但し、本発明はかかる実施形態に限定されるものではない。
前記「導入対象の核酸」としては、特に限定されないが、前記「導入対象の蛋白質」をコードする核酸、リボザイム、ｐ５３、Ｒｂ、ＰＴＣＨ等の癌抑制遺伝子、遺伝子欠損性疾患若しくは遺伝子変異を原因とする疾患の原因遺伝子、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２等のサイトカイン遺伝子等が挙げられる。
前記「遺伝子欠損性疾患若しくは遺伝子変異を原因とする疾患」及び原因遺伝子として、例えば、
栄養障害型表皮水疱症（Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｃ  ＥＢ）：ＣＯＬ７Ａ１等、
接合部型表皮水疱症（Ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＥＢ）：ＬＡＭＡ３、ＬＡＭＢ３、ＬＡＭＣ２等、
全身性萎縮性良性表皮水疱症（ＧＡＢＥＢ）：ＣＯＬ１７Ａ１等、
表皮水疱症−幽門閉鎖症（ＥＢ−ＰＡ）：ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＢ４等、
先天性幽門閉鎖症−接合部型ＥＢ症候群（ＰＡ−ＪＥＡ）：ＩＴＧα６、ＩＴＧβ４等
表皮水疱症−筋ジストロフィー（ＥＢ−ＭＤ）：ＰＬＥＣ１等、
単純型表皮水疱症（ＥＢ−ｓｉｍｐｌｅｘ）：ＫＲＴ５、ＫＲＴ１４等、
外胚葉性形成異常／皮膚脆弱症（ＥＤＡ／ｓｋｉｎ  ｆｒａｇｉｌｉｔｙ）：ＰＬＰ１等、
表皮剥離性角質増加症（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｋｅｒａｔｏｓｉｓ）：ＫＲＴ１、ＫＲＴＩＯ等、
表皮剥離性掌蹠角皮症（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｔｉｃ  ＰＰＫ）：ＫＲＴ９等、
非表皮剥離性掌蹠角皮症（Ｎｏｎｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｔｉｃ  ＰＰＫ）：ＫＲＴ１６等、
ボーヴィンケル症候群（Ｖｏｈｗｉｎｋｅｌ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＬＯＲ、ＧＪＢ２等、
魚鱗癬中毒水疱症（Ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ  ｂｕｌｌｏｓａ  Ｓｉｅｍｅｎｓ）：ＫＲＴ２ｅ等、
１型及び２型先天性硬爪症（Ｐａｃｈｏｎｙｃｈｉａ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａ  ｔｙｐｅ  １  ａｎｄ  ２）：ＫＲＴ６α、１６、１７等、
伴性魚鱗癬（Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ）：ＳＴＳ等、
葉状魚鱗癬（Ｌａｍｅｌｌａｒ  ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ）：ＴＧＭ１等、
難聴併発掌蹠角皮症（ＰＰＫ  ｗｉｔｈ  ｄｅａｆ  ｎｅｓｓ）：ＧＪＢ２等、
変異性紅斑角皮症（Ｅｒｙｔｈｒｏｋｅｒａｔｏｄｅｒｍａ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）：ＧＪＢ３等、
ダリエー病（Ｄａｒｉｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）：ＡＴＰ２Ａ２等、
横紋掌蹠角皮症（Ｓｔｒｉａｔｅ  ＰＰＫ）：ＤＳＰ等、
横紋角皮症（Ｓｔｒｉａｔｅ  ｋｅｒａｔｏｄｅｒｍａ）：ＤＳＧ１等、
先天性無毛症（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ａｔｒｉｃｈｉａ）：ＨＲ等、
連珠毛（Ｍｏｎｉｌｅｔｈｒｉｘ）：ｈＨＢ１、ｈＨＢ６等、
ワールデンブルグ症候群（Ｗａａｒｄｅｎｂｕｒｇ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＰＡＸ３等、
白皮症［Ａｌｂｉｎｉｓｍ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｆｏｒｍｓ）］：ＴＹＲ、ＴＹＲＰ−１、ＯＣＡ２、ＯＡ１等、
ティーツェ症候群（Ｔｉｅｒｚ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＭＩＴＥ等、
ヘルマンスキー−パドラック症候群（Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＨＰＳ等、
骨髄性プロトポルフィリン症（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉａ）：ＦＥＣＨ等、
先天性骨髄性ポルフィリン症（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｏｒｐｈｙｒｉａ）：ＵＲＯＳ等、
家族性晩発性皮膚ポルフィリン症（Ｆａｍｉｌｉａｌ  ｐｏｒｐｈｙｒｉａ  ｃｕｔａｎｅａ  ｔａｒｄａ）：ＵＲＯ−Ｄ等、
異型ポルフィリン症（Ｖａｒｉｅｇａｔｅ  ｐｏｒｐｈｙｒｉａ）：ＰＰＯ等、
色素性乾皮症（Ｘｅｒｏｄｅｒｍａ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓｕｍ）：ＸＰＡ、ＸＰＢ、ＸＰＣ、ＸＰＤ、ＸＰＥ、ＸＰＧ、ＸＰＦ、ＸＰＶ等、
コケイン症候群：ＣＳＡ、ＣＳＢ等
母斑性基底細胞癌症候群（Ｎｅｖｏｉｄ  ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＰＴＣＨ等、
ポイツ−イェーガーズ症候群（Ｐｅｕｔｚ−Ｊｅｇｈｅｒｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＳＴＫ１１／ＬＫＢ１等、
コーデン症候群（Ｃｏｗｄｅｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＰＴＥＮ等、
バンナヤン−ゾーナーナ症候群（Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）：ＰＴＥＮ等、
硫黄欠乏性毛髪発育異常症（Ｔｒｉｃｈｏｔｈｉｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）：ＸＰＢ、ＸＰＤ等、
ファブリー病（Ｆａｂｒｙ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）：ＧＬＡ等、
毛細血管拡張性運動失調（Ａｔａｘｉａ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）：ＡＴＭ等、
遺伝性出血性毛細血管拡張症（Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）：ＥＮＧ、ＡＬ  Ｋ−１等
が挙げられ、また、これらの遺伝子を組み込むプラスミドベクターが挙げられる。
前記「導入対象の核酸又は核酸誘導体」は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド核酸、ヌクレオチドアナログ含有核酸等及びこれら核酸を組み込むプラスミドベクターから選択される少なくとも一種である。
前記核酸を組み込むプラスミドベクターとしては、導入対象の部位等に応じて適宜選択することができ、例えば、ｐＣＡＧＧＳ、ｐｃＤＮＡ３、大腸菌用プラスミド〔例えば、ｐＵＣ１８、ＰＵＣ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ（登録商標；ストラタジーン社製）、ｐＥＴ、ｐＣＡＬ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  Ａｍｐ（登録商標；ストラタジーン社製）〕、真核細胞用ベクター（ＰＣＭＶ−Ｓｃｒｉｐｔ（登録商標；ストラタジーン社製）、ｐＣＭＶ−Ｔａｇ、ｐＢＫ−ＣＭＶ、ｐＢＫ−ＲＳＶ、ｐ１−ＲＥＤ１、ｐＥＳＰ、ｐＥＳＣ）、コスミド（ｐＡＴ５、ｐＷＥ１５）等が挙げられる。
前記「導入対象のペプチド」としては、特に限定されないが、例えば、長鎖ペプチド、非天然型アミノ酸含有ペプチド、リン酸化ペプチド、分子内Ｓ−Ｓ結合型ペプチド、多抗原性ペプチド（ＭＡＰ）、キャリアー蛋白結合ペプチド、カリクレイン、サブスタンスＰ、ブラジキニン、カリジン、コレシストキニン、ニューロペプタイド、グラミジン、コリスチン、ポリミキシン、オキシトシン、バソプレシン、セクレチン、等の消化管ペプチド、抗菌ペプチド（ディフェンシン：Ｄｅｆｅｎｓｉｎ，ｈｅｐｃｉｄｉｎ：Ｌｉｖｅｒ−Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  １等）、細胞死拮抗因子（ヒューマニン：Ｈｕｍａｎｉｎ等）、血管収縮ペプチド（エンドセリン：Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−Ｉ，ウロテンシン：Ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ−ＩＩ等）、内因性成長ホルモン分泌促進ペプチド（活性型グレリン：Ａｃｔｉｖｅ  Ｇｈｒｅｌｉｎ等）等が挙げられる。
前記「導入対象の蛋白質」としては、特に限定されないが、例えば、ＸＰＡ遺伝子産物、種々のＤＮＡ損傷修復酵素、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ、グルタチオン、ペルオキシダーゼ、ペルオキシレドキシン、ｂ１２等の抗体、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２等のサイトカイン及びその抗体、ＥＧＦ、ＮＧＦ等の成長因子が挙げられる。低分子医薬品としては、カテキン、タンニン、アントシアニン、ケルセチン、イソフラボン、ルチン等のポリフェノール、ルテイン等の抗酸化剤、グリチルレチン酸、グルチルレチン酸等の消炎剤、カイニン酸等の駆虫薬、タンニン酸等の収れん薬、アセトアミノフェノン等の鎮痛剤、カフェイン等の強心利尿剤、リドカイン等の局所麻酔薬、バルビタール等の睡眠剤、アスピリン、アンチピリン等の解熱、鎮痛剤、バンコマイシン、ｓ−ガラクトシダーゼ（ペニシリウム）、メチシリン等の抗生物質、ヒノキチオール等の抗菌剤、ラクツロース等の代謝性医薬品、シギトキシン等の強心配糖体、吉草酸ベタメサゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、酢酸プレドニゾロン等の抗炎症剤、アロプリノール等の抗痛風薬、カルビドパ等の抗パーキンソン病用配合剤、金チオリンゴ酸ナトリウム、糖質コルチコイド等の抗リウマチ薬、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２α等のプロスタグランジン、エピネフィリン等の交感神経興奮薬、硫酸キニーネ等の抗マラリヤ薬、クロロフィル等の葉緑素、トリヨードサイロニン（Ｔ３）、サイロキシン（Ｔ４）等の低分子ホルモン、γ−オリザノール等のホルモン様作用物質等が挙げられる。
また、前記「導入対象の核蛋白質」としては、特に限定されないが、例えば、ＲＮＡ核蛋白、酸性核蛋白、可溶性核蛋白、Ｆｏｓ蛋白（癌遺伝子）、ＰＱＢＰ−１（ポリグルタミン配列に結合する）、ＮＰ９５、ＰＣＮＡ、トポイソメラーゼＩ、ＲＮＡポリイソメラーゼＩ、ＵＢＦ（ｕｐｓｔｒｅａｍ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）、フィブラリン、ヌクレオン、ヌクレオホスミン等が挙げられる。
ペプチドホルモンとしては、色素細胞刺激ホルモンαＭＳＨ（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎ、メラノトロピン）が挙げられ、必須アミノ酸としては、メチオニン、スレオニン、バリン、トリプトファン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、リジン、ヒスチジン等が挙げられ、必須脂肪酸としては、αリノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、リノール酸、γリノレン酸（ＧＬＡ）、アラキドン酸等が挙げられ、「ビタミン」としては、ビタミンＡ１（レチノール）、ビタミンＡ２（３−デヒドロレチノール）、ビタミンＡ３、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）、ビタミンＥ（トコフェロール）、ビタミンＦ（リノール酸、リノレン酸）、ビタミンＫ１（フィロキノン）、ビタミンＫ２（ファルノキノン）、ビタミンＵ等の脂溶性ビタミン及びその誘導体、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、パントテン酸、ビタミンＨ（ビオチン）、葉酸、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）、コリン、イノシット、ビタミンＬ１、ビタミンＬ２、ビタミンＢ１３、ビタミンＢＴ（カルニチン）、リポ酸（チオクト酸）、ビタミンＢ１４、ビタミンＢ１５、パラアミノ安息香酸、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＰ等の水溶性ビタミン及びその誘導体、βカロテン、エルゴステロール、７−デヒドロコレステロール等のプロビタミン及びそれらの誘導体、ビタミン、プロビタミンの誘導体としては、メチルアルコール、エチルアルコール、リン酸、酢酸、塩酸、パルミチン酸、ロダン酸等のエステル類、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルギニン、リジン、塩酸、リン酸、硝酸、セチル硫酸、ナフタレンジスルホン酸等の塩類等、アスコルビン酸２−グルコシド等の安定型ビタミンＣ等が挙げられる。
本発明の対象物質導入用組成物における前記対象物質の含有量は、導入部位において、該対象物質の機能を発揮しうる範囲であればよく、例えば、対象物質が、核酸又は核酸の誘導体又は核酸又は核酸の誘導体を封入したＨＶＪエンベロープベクターである場合、例えば、前記含有量としては、使用時の濃度としては、本発明の対象物質導入用組成物中に、１．０×１０−９重量％〜９９．９重量％、好ましくは、１．０×１０−６重量％〜９９重量％、より好ましくは、１．０×１０−５重量％〜９５重量％配合するのがよい。また、対象物質が、ペプチド又はペプチドを封入したＨＶＪエンベロープベクターである場合は、本発明の対象物質導入用組成物中に、１．０×１０−９重量％〜９９．９重量％、好ましくは、１．０×１０−６重量％〜９９重量％、より好ましくは、１．０×１０−５重量％〜９５重量％配合するのがよい。また、対象物質が、蛋白質又は核蛋白質又は蛋白質又は核蛋白質を封入したＨＶＪエンベロープベクターである場合は、本発明の対象物質導入用組成物中に、１．０×１０−８重量％〜９９．９重量％、好ましくは、１．０×１０−５重量％〜９９重量％、より好ましくは、１．０×１０−５重量％〜９０重量％配合するのがよい。また、対象物質が、低分子医薬品、蛋白質又は核蛋白質を封入したＨＶＪエンベロープベクターである場合、前記含有量としては、全組成物量中、１．０×１０−８重量％〜９９．９重量％、好ましくは、１．０×１０−５重量％〜９９重量％、より好ましくは、１．０×１０−５重量％〜９０重量％配合するのがよい。また、対象物質が、上記以外の対象物質又は上記以外の対象物質を封入したＨＶＪエンベロープベクターである場合、前記含有量としては、全組成物量中、１．０×１０−９重量％〜９９．９重量％、好ましくは、１．０×１０−６重量％〜９９重量％、より好ましくは、１．０×１０−５重量％〜９５重量％配合するのがよい。また、対象物質の含有量は、前記対象物質の機能を発揮する場合、上記に例示された範囲に限定されるものではない。なお、本発明の対象物質導入用組成物は、使用時に希釈して用いてもよい。
本発明の対象物質導入用組成物に用いられる生体適合性組成物としては、前記導入対象の（Ｔ）等の対象物質を組織に保持し、又は保持し更には細胞に導入しうる生体適合性組成物であればよく、例えば、ヒアルロン酸、キチン、コロミン酸、コンドロイチン、コンドロイチン４−硫酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン６−硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、タイクロン酸等のムコ多糖及びその塩類が挙げられる。また、ムコ多糖の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、銅塩、亜鉛塩等の金属塩類等の無機塩、ジエタノールアミン塩、２−アミノ−２−エチル−１、３−プロパンジオール塩、トリエタノールアミン塩等のアルカノールアミン塩、モルホリン塩、ピペリジン塩等のヘテロ環塩、アルギニン塩、リジン塩、ヒスチジン塩等の塩基性アミノ酸塩等の有機酸塩類、硫酸、塩酸、酢酸、クエン酸、乳酸等の無機酸又は有機酸塩類等が挙げられる。生体適合性組成物において、塩を形成するムコ多糖と塩の割合は特に限定するものではなく、前記生体適合性組成物のｐＨの範囲であればどのようなものであってもよい。
また、前記「生体適合性」とは、長期間にわたって生体に悪影響も強い刺激も与えず、前記対象物質の本来の機能及び該対象物質を組織に保持し、又は保持し更に導入して貯留性を発揮しながら、生体と共存できる材料の属性を意味する。
前記「対象物質を組織に保持し、又は保持し更に導入して発揮される貯留性」は、組織に本発明の対象物質導入用組成物を投与した場合に、該対象物質が組織に留まるような性質を意味し、例えば、対象物質を皮膚上に保持し、又は保持し更に導入し得ることを意味する。
前記生体適合性組成物において、ｐＨは、特に限定されるものではない。対象物質を安定に保持できる、即ち、対象物質の生理機能を発揮しうる範囲であればよく、かかる観点から、例えば、３以上であり、好ましくは、４．０以上であり、より好ましくは、４．５以上であり、９．０以下であり、好ましくは８．５以下であり、より好ましくは、８．０以下であることが望ましい。更に、前記生体適合性組成物のｐＨは、生体に適した範囲であってもよい。
前記生体適合性組成物は、用途、使用時の条件等に応じて、選択してもよい。例えば、本発明の対象物質導入用組成物は、疾患等の治療における治療剤としても用いられうるが、この場合、投与対象の個体における使用感等の観点から、前記生体適合性組成物を選択してもよい。
本発明の対象物質導入用組成物中における前記生体適合性組成物の含有量は、用いる生体適合性組成物により異なるが、対象物質を組織に保持し更に導入して貯留性を発揮しうる範囲であればよい。例えば、本発明の対象物質導入用組成物中における前記生体適合性組成物の含有量としては、０．０００１重量％以上であり、好ましくは、０．００１重量％以上であり、より好ましくは、０．１重量％以上であり、９９．９９９重量％以下であり、好ましくは、９９．９９重量％以下であり、より好ましくは、９９．９重量％である範囲で含有量等が挙げられる。尚、本発明の生体適合性組成物は、使用時に希釈して用いてもよく、使用時に凍結乾燥粉末等の１００％純度のものを適宜緩衝液等で希釈して、前記の濃度で使用してもよい。
本発明の対象物質導入用組成物には、前記対象物質を安定に保持するための殺菌剤、金属封鎖剤、防腐剤、抗酸化剤、保湿剤、油性成分、安定化剤、慣用の緩衝剤、水等を適宜含有してもよい。例えば、前記対象物質が、（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター、（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクターである場合、本発明の対象物質導入用組成物には、（Ｔ）の分解を抑制するための薬学的に許容されうる物質を含有してもよい。本発明の対象物質導入用組成物において、前記対象物質と生体適合性組成物以外の成分は、前記殺菌剤、金属封鎖剤、防腐剤、抗酸化剤、保湿剤、油性成分、安定化剤、慣用の緩衝剤、水等であればよい。
本発明の対象物質導入用組成物において、ｐＨは、特に限定されるものではなく、用途によって異なるが、例えば、対象物質導入用組成物が外用に用いられる場合には、下限は３以上であり、好ましくは、４．０以上であり、より好ましくは、４．５以上であり、上限は９．０以下であり、好ましくは８．５以下であり、より好ましくは、８．０以下である。また、対象物質導入用組成物が内服等に用いられる場合には、下限は５以上であり、好ましくは、６．０以上であり、より好ましくは、６．５以上であり、上限は９．０以下であり、好ましくは８．５以下であり、より好ましくは、８．０以下である。また、対象物質導入用組成物が注射、点滴等に用いられる場合には、下限は３以上であり、好ましくは、４．０以上であり、より好ましくは、４．５以上であり、上限は９．０以下であり、好ましくは８．５以下であり、より好ましくは、８．０以下である。また、対象物質導入用組成物が点眼液として用いられる場合には、下限は４以上であり、好ましくは、４．３以上であり、より好ましくは、４．５以上であり、上限は９．０以下であり、好ましくは８．０以下であり、より好ましくは、７．０以下である。また、対象物質導入用組成物が前記以外の用途で用いられる場合には、下限は３以上であり、好ましくは、４．０以上であり、より好ましくは、４．５以上であり、上限は９．０以下であり、好ましくは８．５以下であり、より好ましくは、８．０以下である。また、対象物質の含有量は、前記対象物質の機能を発揮する場合、上記に例示された範囲に限定されるものではない。
この対象物質導入用組成物の適用部位としては、組織全般を対象とすることができる。例えば、皮膚、粘膜、肝臓、腎臓、肺、膵臓、脳、消化管、膀胱、子宮、卵巣、脾臓、胸腺、副甲状腺、甲状腺、唾液腺、耳下腺、顎下腺、リンパ節、血管、関節、胸腔、腹腔等である。適用方法としては、皮膚、粘膜（口腔、眼、消化管、鼻、気道、肛門）等への外用、内服、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、カテーテル等の補助器具を用いて組織への局所投与、手術部位への適用等が挙げられる。本発明の対象物質導入用組成物の投与により、遺伝子や対象物質を広範囲の部位に、簡便、かつ効率よく導入することができる。
本発明の対象物質導入用組成物の用途としては、例えば、広範囲にわたり発症する疾患等の治療又は症状改善、該疾患の機構の研究（例えば、疾患モデル動物等の作製及び治療効果の検討等）等が挙げられる。
本発明の対象物質導入用組成物を適用しうる疾患としては、例えば、栄養障害型表皮水疱症（Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｃ  ＥＢ）、接合部型表皮水疱症（Ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＥＢ）、全身性萎縮性良性表皮水疱症（ＧＡＢＥＢ）、先天性幽門閉鎖症−接合部型ＥＢ症候群（ＰＡ−ＪＥＢ）、筋ジストロフィーを伴う単純型表皮水疱症（ＥＢＳ／ＭＤ）、単純型表皮水疱症（ＥＢ−ｓｉｍｐｌｅｘ）、外胚葉性形成異常／皮膚脆弱症（ＥＤＡ／ｓｋｉｎ  ｆｒａｇｉｌｉｔｙ）、表皮剥離性角質増加症（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｋｅｒａｔｏｓｉｓ）、表皮剥離性掌蹠角皮症（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｔｉｃ  ＰＰＫ）、非表皮剥離性掌蹠角皮症（Ｎｏｎｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｔｉｃ  ＰＰＫ）、ボーヴインケル症候群（Ｖｏｈｗｉｎｋｅｌ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、魚鱗癬中毒水疱症（Ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ  ｂｕｌｌｏｓａ  Ｓｉｅｍｅｎｓ）、１型及び２型先天性硬爪症（Ｐａｃｈｏｎｙｃｈｉａ  ｃｏｎｇｅｎｉｔａ  ｔｙｐｅ  １  ａｎｄ  ２）、伴性魚鱗癬（Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ）、葉状魚鱗癬（Ｌａｍｅｌｌａｒ  ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ）、難聴併発掌蹠角皮症（ＰＰＫ  ｗｉｔｈ  ｄｅａｆｎｅｓｓ）、変異性紅斑角皮症（Ｅｒｙｔｈｒｏｋｅｒａｔｏｄｅｒｍａ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）、ダリエー病（Ｄａｒｉｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、横紋掌蹠角皮症（Ｓｔｒｉａｔｅ  ＰＰＫ）、横紋角皮症（Ｓｔｒｉａｔｅ  ｋｅｒａｔｏｄｅｒｍａ）先天性無毛症（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ａｔｒｉｃｈｉａ）、連珠毛（Ｍｏｎｉｌｅｔｈｒｉｘ）、ワールデンブルグ症候群（Ｗａａｒｄｅｎｂｕｒｇ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、白皮症［Ａｌｂｉｎｉｓｍ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｆｏｒｍｓ）］、ティーツェ症候群（Ｔｉｅｒｚ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ヘルマンスキー−パドラック症候群（Ｈｅｒｍａｎｓｋｙ−Ｐｕｄｌａｋ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、骨髄性プロトポルフィリン症（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｏｐｏｒｐｈｙｒｉａ）、先天性骨髄性ポルフィリン症（Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｏｒｐｈｙｒｉａ）、家族性晩発性皮膚ポルフィリン症（Ｆａｍｉｌｉａｌ  ｐｏｒｐｈｙｒｉａ  ｃｕｔａｎｅａ  ｔａｒｄａ）、異型ポルフィリン症（Ｖａｒｉｅｇａｔｅ  ｐｏｒｐｈｙｒｉａ）、色素性乾皮症（Ｘｅｒｏｄｅｒｍａ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓｕｍ）、コーデン症候群、母斑性基底細胞癌症候群（Ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｎｅｖｕｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポイツーイェーガーズ症候群（Ｐｅｕｔｚ−Ｊｅｇｈｅｒｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、コーデン症候群（Ｃｏｗｄｅｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、バンナヤン−ゾーナーナ症候群（Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、硫黄欠乏症毛髪発育異常症（Ｔｒｉｃｈｏｔｈｉｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、ファブリー病（Ｆａｂｒｙ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、毛細血管拡張性運動失調（Ａｔａｘｉａ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）、遺伝性出血性毛細血管拡張症（Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ）等の遺伝子疾患と悪性黒色腫、悪性血管内皮細胞腫等の悪性腫瘍等が挙げられる。
本発明の対象物質導入用組成物は、皮膚、粘膜（口腔、眼、消化管、鼻、気道、肛門）等への外用、内服、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、カテーテル等の補助器具を用いてた組織への局所投与、手術部位への適用等により使用されうる。使用時の簡便性、効率等の観点から、特に、塗布による使用が好適である。容器や製剤の形態は特に限定するものではなく、液剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、眼軟膏、バッカル錠、トローチ（舌下錠）剤、点眼剤、点鼻剤、含嗽剤、吸入剤、湿布、パップ剤、坐剤、膣坐薬、浣腸剤、噴霧剤、パック剤、泡状エアゾール剤等が挙げられる。
本発明の対象物質導入用組成物は、例えば、以下のように製造されうる。即ち、対象物質が核酸の場合、慣用の方法により導入対象の核酸を慣用のプラスミドベクターに組み込み組換えプラスミドベクターを得る。得られた組換えプラスミドベクターはそのままの形でｎａｋｅｄ−ＤＮＡとして又は慣用の手法により、例えば、ＨＶＪエンベロープベクターに封入して、組換えプラスミドベクター含有ＨＶＪエンベロープベクターとしてもよい。また、生体適合性組成物として、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１００ｍｌに５重量％濃度となるように膨潤させることにより、５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．４）を得る。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、市販のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得られる。得られた組換えプラスミドベクター含有ＨＶＪエンベロープベクター又は組換えプラスミドベクターｎａｋｅｄ−ＤＮＡからなる群より選ばれた一種と、前記ヒアルロン酸ナトリウム溶液とを、混合し、対象物質導入用組成物を得る。
本発明の遺伝子導入方法は、導入対象の（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター又は（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクター及び（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター又は（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクターを組織に保持し、又は保持し更に導入し得る生体適合性組成物を含有した対象物質導入用組成物を組織に投与し、それにより、対象物質（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター又は（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクターを組織に保持し、更に、対象物質を細胞に導入するものである。
前記遺伝子導入用組成物の皮膚への塗布面積は、（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター又は（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクターがその効果を発現するに要する部位を含む面積であればよい。また、導入用組成物の皮膚への塗布回数、タイミング等は、用途に応じて適宜選択されうる。
例えば、前記対象物質導入用組成物を皮膚上に塗布する場合、その塗布量は、特に限定されないが、例えば、対象物質として、単位面積、例えば、１ｃｍ２あたり、１ｎｇ〜１ｍｇ、好ましくは、１μｇ〜１００μｇであればよい。
前記遺伝子導入用組成物の血液中への投与は、（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター又は（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクターがその効果を発現しうる部位であればよい。また、導入用組成物の血液中への投与回数、タイミング等は、用途に応じて適宜選択されうる。
例えば、前記対象物質導入用組成物を血液中に投与する場合、その投与量は、特に限定されないが、例えば、対象物質として、１回投与量、例えば、１ｍＬあたり、１ｐｇ〜１ｍｇ、好ましくは、１ｎｇ〜１００μｇであればよい。
前記遺伝子導入用組成物の経口摂取方法は、（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター又は（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクターがその効果を発現する方法であればよい。また、導入用組成物の経口摂取の回数、タイミング等は、用途に応じて適宜選択されうる。
例えば、前記対象物質導入用組成物を食品や内服薬として経口で摂取する場合、その摂取量は、特に限定されないが、例えば、対象物質として、１日の摂取量、例えば、体重（ｋｇ）あたり、１ｎｇ〜１００ｍｇ、好ましくは、１μｇ〜１０ｍｇであればよい。
前記遺伝子導入用組成物のカテーテルを用いて又は手術等による組織への局所投与の方法は、（Ｔ）、（Ｔ）とＨＶＪエンベロープベクター又は（Ｔ）を封入したＨＶＪエンベロープベクターがその効果を発現する方法であればよい。また、導入用組成物の挿入の回数、タイミング等は、用途に応じて適宜選択されうる。
例えば、前記対象物質導入用組成物をカテーテルを用いて又は手術等による組織への局所投与する場合、その摂取量は、特に限定されないが、例えば、対象物質として、１日の摂取量、例えば、体重（ｋｇ）あたり、１ｐｇ〜１ｍｇ、好ましくは、１ｎｇ〜１００μｇであればよい。
以下、疾患の治療剤としての利用に関して、色素性乾皮症への適用について、説明する。色素性乾皮症（ｘｅｒｏｄｅｒｍａ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓｕｍ：ＸＰ）には、Ａ群、Ｂ群、Ｃ群、Ｄ群、Ｅ群、Ｆ群、Ｇ群、Ｖ群と８つのサブグループがあるが、ここでは、色素性乾皮症Ａ群（ＸＰＡ）マウスにＡ群原因遺伝子（ＸＰＡ遺伝子）を導入することについて例示的に説明する。前記核酸として、例えば、ＸＰＡ遺伝子が用いられうる。かかる核酸は、例えば、ｐＣＡＧＧＳ、ｐｃＤＮＡ３等の慣用のプラスミドベクターに組み込んだｎａｋｅｄ−ＤＮＡとしてそのまま生体適合性組成物、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムと混合してもよい。また、ＸＰＡ遺伝子をｐＣＡＧＧＳ、ｐｃＤＮＡ３等の慣用のプラスミドベクターに組み込んだ組み換えプラスミドベクターをＨＶＪエンベロープベクターに封入して得られたＸＰＡ遺伝子含有ＨＶＪエンベロープベクターを、ヒアルロン酸ナトリウムと混合してもよい。
対象物質導入用組成物として、例えば、終濃度１重量％のヒアルロン酸ナトリウム、ＸＰＡ遺伝子（核酸量として５０μｇ）含有ＨＶＪエンベロープベクターの組成物が用いられうる。前記遺伝子導入用組成物を、前記核酸が生体内に導入され、発現するに十分な時間、例えば、外出により日光を浴びる４８時間前等に皮膚全体に投与する。これにより、ＤＮＡ修復能の回復、表皮の傷害の抑制、サンバーン細胞の形成の抑制が期待されうる。
【実施例１】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの調製
サイトメガロウイルスのエンハンサーとβ−アクチンのプロモーターとを有するｐＣＡＧＧＳに、ヒトＸＰＡ遺伝子（ジーンバンクアクセッション番号：１４５３３；田中亀代次博士より供与）を組込み、ｐＣＡＧＧＳ−ＸＰＡ（田中亀代次博士（大阪大学細胞生体工学センター）より供与された）を得た。また、ｐｃＤＮＡ３（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ社製）のＥｃｏＲＩ認識部位に、前記ヒトＸＰＡ遺伝子を組み込み、標識として、ヘマグルチニンのエピトープをコードするＤＮＡを付加した、ｐｃＨＡ−ＸＰＡを得た。得られたｐＣＡＧＧＳ−ＸＰＡ及びｐｃＨＡ−ＸＰＡのそれぞれをＨＶＪエンベロープベクターに封入した。これにより、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターを得た。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１００ｍｌに５重量％濃度となるように膨潤させることにより、５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクター３００μｌと前記（２）で得られた５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液７５μｌとを混合して遺伝子導入用組成物を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、１重量％である。
試験例１  ＸＰＡマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例１で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ１）を、ＤＮＡ量として、５０μｇ／マウス（全量３７５μｌ：５重量％ヒアルロン酸ナトリウム７５μｌ＋ＨＶＪエンベロープベクター溶液３００μｌ）となるように、ＸＰＡモデルマウスの背部（約４．５ｃｍ２）に塗布した。２４時間後又は４８時間後、ＮｅｍｂｕｔａｌＲを用いて腹腔内注射で麻酔し、ＸＰＡモデルマウスの背部に、ＴＯＳＨＩＢＡ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｎｌａｍｐ  ＦＬ２０ＳＥ（ピーク波長３０５ｎｍ、２８０〜３６０ｎｍ）を用いて、ＵＶＢを４ｋＪ／ｍ２照射した。なお、紫外線量は、ＵＶＲ−３０５／３６５Ｄ紫外線線量計で測定した。対照として、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの代わりに、ＸＰＡ遺伝子を含有しないｐＣＡＧＧＳ又はｐｃＤＮＡ３を封入したＨＶＪエンベロープベクターを保持した対照遺伝子導入用組成物（Ｃ−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ−２）を塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）不定期ＤＮＡ合成（ｕｎｓｃｈｅｄｕｌｅｄ  ＤＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＵＤＳ）の検出
紫外線ＤＮＡ損傷を修復するＸＰＡ遺伝子を導入することで、修復能が改善されるかをＵＤＳを目安として検討した。前記（１）の３群のマウスにおけるＵＶＢ照射部位を舌紺子ではさみ、メチル３Ｈ−ｄＴｈｄ（１００μＣｉ／ｍｌ）含有生理的食塩水溶液０．５ｍｌを、該照射部位に皮下注射した。マウスを３５℃、６０分間インキュベータに入れた後、舌紺子をはずした。更に、３時間経過後、マウスを屠殺した。
ＵＶＢ照射部の皮膚（４．５ｃｍ２）を切除し、切除された皮膚を１０％中性ホルマリン溶液で一晩固定した。固定後の皮膚をパラフィン包埋し、パラフィン包埋試料を４〜５μｍの厚さに薄切し、得られた試料を脱パラフィン処理し５％冷却ＴＣＡで洗浄した。ついで、得られた試料を、銀粒子を含むエマルジョン（写真乳剤）に浸漬し、暗室中４℃で保存した。
１週間後、前記試料について、現像、定着、水洗を行ない、ギムザ染色した。染色後の試料について、顕微鏡下、細胞上の黒化粒子数を数えた。
その結果、表皮細胞でのＵＤＳを測定したところ、ＸＰＡ遺伝子を含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ１−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ１−２）の皮膚塗布群では、ほとんどの細胞の黒化粒子数（グレイン数）は０〜５であったのに対し、遺伝子導入用組成物（Ｅ１）の皮膚塗布群では、皮膚全体にわたって、核当たりのグレイン数が１５〜２０の細胞が多く見られ、修復能が回復していることがわかった。即ち、驚くべきことに、導入対象の核酸が、皮膚から細胞に導入されていること、更に、皮膚の広範囲にわたって、導入対象の核酸中の遺伝子が発現することがわかった。
（３）ＵＶＢ照射部の形態学的変化
前記（１）のそれぞれマウスにおける皮膚を切除し、各皮膚片を得た。得られた各皮膚片を１０％中性ホルマリン溶液で固定した。得られた試料をヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色し、ＨＥ染色標本を得た。前記ＨＥ染色標本について、形態を観察し、表皮細胞障害の指標としてサンバーン細胞（核濃縮、表皮壊死を起こした表皮細胞）について、前記（１）の３群のマウス間における差異を求めた。なお、前記サンバーン細胞の観察は、切片中の全表皮細胞数におけるサンバーン細胞数の比を指標とした。また、ｐｃＨＡ−ＸＰＡを導入した前記（１）の３群のマウスの皮膚片を凍結し、ＨＡ−ｔａｇを染色し、染色強度により、導入された遺伝子の局在を観察した。
ＨＥ染色標本の観察結果より、遺伝子導入用組成物（Ｅ１）を塗布したマウスでは、ＵＶ照射２４時間後のサンバーン細胞は２０個／１００個細胞であったのに対し、対照のヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ１−２）を塗布したマウスでは３５個／１００個細胞であり、対照のＸＰ遺伝子をコードする核酸を含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ１−１）を塗布したマウスでは５５個／１００個細胞であった。遺伝子導入用組成物の塗布群は、対象２群に比べ、表皮の傷害、サンバーン細胞の形成が抑制されていることが明らかになった。
これは、本発明の遺伝子を封入したＨＶＪエンベロープベクターにより遺伝子が効率よく導入され、生理的な条件下でその機能が発現した結果である。これらの効果は、遺伝子を封入したＨＶＪエンベロープベクターは、例えば、ムコ多糖類の存在下でＨＶＪが角層のバリアを通過して、表皮細胞又は毛包の細胞の細胞膜と融合し、その内容物が細胞内に取り込まれた結果発現したと考えられる。
【実施例２】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）導入用核酸の調製
実施例１と同様にして、ｐＣＡＧＧＳ−ＸＰＡを得た。また、実施例１と同様にして、ｐｃＨＡ−ＸＰＡを得た。ここで、ｎａｋｅｄ−ＤＮＡであるｐＣＡＧＧＳ−ＸＰＡ又はｐｃＨＡ−ＸＰＡのＤＮＡ量は、それぞれ５０μｇ／マウスとした。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１００ｍｌに２重量％濃度となるように膨潤させ、２重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られた導入用核酸１００μｌ（５０μｇＤＮＡ）と前記（２）で得られた２重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液１００μｌとを混合して遺伝子導入用組成物を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸の濃度は、１重量％である。
試験例２  ＸＰマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例２で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ２）を、前記試験例１の（１）と同様に、それぞれ３匹のＸＰＡモデルマウスの背部に塗布し、該背部にＵＶＢを０．５ｋＪ／ｍ２照射した。対照として、遺伝子導入用組成物の代わりに、ＸＰＡ遺伝子を含有しないｐＣＡＧＧＳ又はｐｃＤＮＡ３を用いた対照遺伝子導入用組成物（Ｃ２−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ２−２）をそれぞれ３匹のマウスの背部に塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）ＵＶＢ照射部の皮膚症状の観察
ＵＶＢ照射部位について、ＵＶＢ照射直後、２４時間後、１週間後に、紅斑、浮腫等の程度を、軽度、中等度、高度の３段階に分類し、対照群と比較し、評価した。長期照射試験は、１回／週の照射を１５回続け、観察した。
その結果、遺伝子導入用組成物（Ｅ２）の皮膚塗布群のマウスにおいては、ＵＶＢ照射直後、２４時間後は軽度の紅斑、１週間後ではそれぞれ１匹のマウスに軽度の紅斑、２匹のマウスに中等度の紅斑を認めるのみであった。対照のＸＰ遺伝子をコードする核酸を含有しないプラスミドベクター（ｐＣＡＧＧＳ又はｐｃＤＮＡ３）を含有する対照遺伝子導入用組成物（Ｃ２−１）の皮膚塗布群では、いずれも３匹中、３匹に高度の紅斑、浮腫を認めた。又、ヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ２−２）の皮膚塗布群では、３匹中、１匹に中等度、２匹に高度の紅斑、浮腫を認めた。長期照射試験においては、紫外線照射終了４ヶ月後の観察では、遺伝子導入用組成物（Ｅ２）の皮膚塗布群では、紫外線照射部位に皮膚の肥厚と紅色丘疹を認めるのみであったが、対照のＸＰ遺伝子をコードする核酸を含有しないプラスミドベクター（ｐＣＡＧＧＳ又はｐｃＤＮＡ３）を含有する対照遺伝子導入用組成物（Ｃ２−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ２−２）の皮膚塗布群では、紫外線誘発皮膚腫瘍が認められた。これらの結果より、修復能が回復していることがわかった。即ち、驚くべきことに、導入対象の核酸が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。また、皮膚の広範囲にわたって、導入対象の核酸中の遺伝子が発現することがわかった。
（３）ＵＶＢ照射部の形態学的変化
前記試験例２の（１）の３群のマウスにおける皮膚を切除し、各皮膚片を得、該皮膚片よりＨＥ染色標本を得た。試験例１の（３）と同様に、ＨＥ染色標本について、形態を観察し、表皮の傷害の形成、サンバーン細胞の形成の抑制を評価した。
その結果、ＨＥ染色標本の観察結果より、遺伝子導入用組成物の塗布群は、対象２群に比べ、表皮の傷害、サンバーン細胞の形成が抑制されていることが明らかになった。
【実施例３】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの調製
実施例１と同様にしてｐｃＨＡ−ＸＰＡを構築した。得られたｐｃＨＡ−ＸＰＡをＨＶＪエンベロープベクターに封入した。これにより、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターを得た。ここで、各ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターにおけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（２）コンドロイチン硫酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、コンドロイチン硫酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１ｍｌに２重量％濃度となるように膨潤させ、２重量％コンドロイチン硫酸ナトリウム（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られた導入用核酸２００μｌ（５０μｇＤＮＡ）と前記（２）で得られた２重量％コンドロイチン硫酸ナトリウム溶液５０μｌとを混合して遺伝子導入用組成物（Ｅ３）を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるコンドロイチン硫酸ナトリウムの濃度は、０．４重量％である。対照として、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの代わりに、ＸＰＡ遺伝子をコードする核酸を含有しないｐｃＤＮＡ３を封入したＨＶＪエンベロープベクターを用いた対照遺伝子導入用組成物（Ｃ３−１）又はコンドロイチン硫酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ３−２）を塗布して、同様の操作を行なった。
試験例３  ＸＰマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例３で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ３）を、前記試験例１の（１）と同様に、ＸＰＡモデルマウス５匹の背部に塗布し、該背部にＵＶＢを４ｋＪ／ｍ２照射した。対照として、遺伝子導入用組成物の代わりに、ＸＰＡ遺伝子をコードする核酸を含有しないｐｃＤＮＡ３を用いた対照遺伝子導入用組成物（Ｃ３−１）又はコンドロイチン硫酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ３−２）をそれぞれの５匹のマウスに塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）皮膚症状の観察
ＵＶＢ照射部位について、ＵＶＢ照射直後、２４時間後、１週間後に、紅斑、浮腫等の程度を、軽度、中等度、高度の３段階に分類し、対照群と比較し、評価した。
その結果、前記（１）の遺伝子導入用組成物（Ｅ３）塗布のマウスにおいては、ＵＶＢ照射直後、２４時間後、１週間後のいずれの時点でも、軽度の紅斑を認めるのみであったが、対照遺伝子導入用組成物（Ｃ３−１）の皮膚塗布群では、５匹中、５匹に高度の紅斑、浮腫を認め、対照遺伝子導入用組成物（Ｃ３−２）の皮膚塗布群では、５匹中、１匹が中等度、４匹が高度の紅斑、浮腫を認めた。遺伝子導入用組成物（Ｅ３）塗布のマウスにおいては、修復能が回復していることがわかった。
（３）ＵＶＢ照射部の形態学的変化
前記（１）のマウスにおける皮膚を切除し、各皮膚片を得、該皮膚片よりＨＥ染色標本を得た。前記試験例１の（３）と同様に、ＨＥ染色標本について、形態を観察し、表皮の傷害の形成、サンバーン細胞の形成の抑制を評価した。
その結果、ＨＥ染色標本の観察結果より、前記（１）の遺伝子導入用組成物（Ｅ３）塗布のマウスでは、ＵＶ照射２４時間後、対照の２群に比べ、表皮の傷害、サンバーン細胞の形成が抑制されていることが明らかになった。
【実施例４】  蛋白質導入用組成物の調製
（１）ｈｕｍａｎ  ＥＧＦの調製
ｈｕｍａｎ  ＥＧＦは例えば、和光純薬工業株式会社製のＥｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｅｒ，Ｈｕｍａｎ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔを購入し使用した。これをダルベッコＰＢＳ（−）溶液に３ｍｇ／ｍｌに調製した。ｈｕｍａｎ  ＥＧＦは１マウスに０．９ｍｇを使用した。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１００ｍｌに５重量％濃度となるように膨潤させることにより、５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）蛋白質導入用組成物の調製
前記（１）で得られたｈｕｍａｎ  ＥＧＦ溶液０．３ｍｌと前記（２）で得られた５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液０．０７５ｍｌとを混合して蛋白質導入用組成物を得た。なお、前記蛋白質導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、１重量％である。
試験例４  Ｃ５７マウスへのｈｕｍａｎ  ＥＧＦの導入による効果
（１）蛋白質導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例４で得られた蛋白質導入用組成物（Ｅ４）を、蛋白質量として、０．９ｍｇ／マウス（全量０．３７５ｍｌ：ヒアルロン酸ナトリウム  ０．０７５ｍｌ＋蛋白質溶液０．３ｍｌ）となるように、Ｃ５７マウスの背部（約４．５ｃｍ２）に塗布した。対照として、ｈｕｍａｎ  ＥＧＦを含有しない蛋白質導入用組成物（Ｃ４−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない蛋白質導入用組成物（Ｃ４−２）を塗布して、以下の操作を行った。
（２）ｈｕｍａｎ  ＥＧＦの検出
６時間後、前記（１）のマウスの皮膚（４．５ｃｍ２）を切除し、切除された皮膚をＯＴＣに包埋後凍結固定した。凍結切片を４〜５μｍの厚さに薄切し、得られた切片をＦＩＴＣ標識した抗ｈｕｍａｎ  ＥＧＦ抗体で染色した。
その結果、前記実施例４で作成したものを塗布した群のマウスにおいてのみ、表皮組織中に蛍光が見られた。即ち、驚くべきことに、導入対象の蛋白質が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。
比較例１
遺伝子導入用組成物の調製
（１）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの調製
実施例１と同様にしてｐｃＨＡ−ＸＰＡを得た。得られたｐｃＨＡ−ＸＰＡをＨＶＪエンベロープベクターに封入した。これにより、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターを得た。ここで、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターにおけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（２）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪリポソームの調製
実施例１と同様にしてｐｃＨＡ−ＸＰＡを構築した。得られたｐｃＨＡ−ＸＰＡをＨＶＪリポソームに封入した。これにより、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪリポソームを得た。ここで、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪリポソームにおけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（３）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１００ｍｌに２重量％濃度となるように膨潤させ、２重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（４）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターを含有する遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクター１００μｌ（５０μｇＤＮＡ）と前記（３）で得られた２重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液１００μｌとをそれぞれ混合してＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクター含有の遺伝子導入用組成物（Ｅ４）を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、１重量％である。
（５）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪリポソームを含有する対照組成物の調製
前記（２）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪリポソーム１００μｌ（５０μｇＤＮＡ）と前記（３）で得られた２重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液１００μｌとをそれぞれ混合してＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪリポソーム含有の対照組成物（Ｃ４）を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、１重量％である。
比較試験例１  ＸＰマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮膚塗布群
前記（４）で得られたＨＶＪエンベロープベクター含有の遺伝子導入用組成物（Ｅ４）を、前記試験例１の（１）と同様に、ＸＰＡモデルマウス５匹の背部に塗布し、該背部にＵＶＢを０．５ｋＪ／ｍ２照射した。対照として、前記（４）で得られたＨＶＪエンベロープベクター含有の遺伝子導入用組成物の代わりに、前記（５）で得られたＨＶＪリポソーム含有の対照遺伝子導入用組成物（Ｃ４）をＸＰＡモデルマウス５匹の背部に塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）ＵＶＢ照射部の皮膚症状の観察
ＵＶＢ照射部位について、ＵＶＢ照射直後、２４時間後、１週間後に、紅斑、浮腫等の程度を、軽度、中等度、高度の３段階に分類し、対照群と比較し、評価した。
その結果、遺伝子導入用組成物の（Ｅ４）の皮膚塗布群のマウスにおいては、ＵＶＢ照射直後、２４時間後、１週間後のいずれの時点でも、軽度の紅斑を認めるのみであったが、対照のＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪリポソーム含有の対照組成物（Ｃ４）の皮膚塗布群では５匹中、３匹が軽度、２匹が中程度の紅斑を認めた。即ち、ＨＶＪエンベロープベクターを含有する遺伝子導入用組成物の方が、ＨＶＪリポソームを含有する遺伝子導入用組成物に比べ、効果が高いことがわかった。
（３）ＵＶＢ照射部の形態学的変化
前記試験例４の（１）の２群のマウスにおける皮膚を切除し、各皮膚片を得、該皮膚片よりＨＥ染色標本を得た。試験例１の（３）と同様に、ＨＥ染色標本について、形態を観察し、表皮の傷害の形成、サンバーン細胞の形成の抑制を評価した。
その結果、ＨＥ染色標本の観察結果より、ＨＶＪエンベロープベクターを含有する遺伝子導入用組成物（Ｅ４）を塗布したマウスでは、ＵＶ照射２４時間後のサンバーン細胞は２０個／１００個細胞であったのに対し、ＨＶＪリポソーム含有する対照組成物を塗布したマウスでは３０個／１００個細胞であった。遺伝子導入用組成物の塗布群は、対照に比べ、表皮の傷害の形成、サンバーン細胞の形成が抑制されていることが明らかになった。
【実施例５】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの調製
実施例１と同様にしてｐｃＨＡ−ＸＰＡを構築した。得られたｐｃＨＡ−ＸＰＡをＨＶＪエンベロープベクターに封入した。これにより、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターを得た。ここで、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターにおけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１ｍｌに２．５重量％濃度となるように膨潤させ、２．５重量％ヒアルロン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクター２２５μｌと前記（２）で得られた２．５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液１５０μｌとを混合して遺伝子導入用組成物を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、１重量％である。
試験例５  ＸＰＡマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例５で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ５）を、前記試験例１の（１）と同様に、ＸＰＡモデルマウスの背部に塗布した。４８時間後、Ｎｅｍｂｕｔａｌ登録商標を用いて腹腔内注射で麻酔し、ＸＰＡモデルマウスの背部に、ＴＯＳＨＩＢＡ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｎｌａｍｐ  ＦＬ２０ＳＥ（ピーク波長３０５ｎｍ、２８０〜３６０ｎｍ）を用いて、ＵＶＢを４００Ｊ／ｍ２／回を週１回で、２０週照射した。なお、紫外線量は、ＵＶＲ−３０５／３６５Ｄ紫外線線量計で測定した。対照として、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの代わりに、ＸＰＡ遺伝子のみを含有し、ＨＶＪエンベロープベクター及びヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照組成物を同様に塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）皮膚症状の観察
紫外線照射終了５ヶ月後に、紫外線誘発皮膚腫瘍について肉眼で観察した。その結果、ＸＰＡ遺伝子のみを含有し、ＨＶＪエンベロープベクター及びヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照組成物の皮膚塗布群では、第１図に示したように、紫外線照射部位に一致して、増殖の速い腫瘍を認めたのに対して、実施例５の遺伝子導入用組成物（Ｅ５）の皮膚塗布群では、第２図に示したように、紫外線照射部位に皮膚の肥厚と紅色丘疹を認めるのみで、明らかな悪性腫瘍は認めなかった。即ち、驚くべきことに、導入対象の核酸が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。また、皮膚の広範囲にわたって、導入対象の核酸中の遺伝子が発現することがわかった。
【実施例６】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）遺伝子導入用核酸の調製
実施例２と同様にしてｐｃＨＡ−ＸＰＡを構築した。ここで、ＸＰＡ遺伝子導入用核酸におけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１ｍｌに５重量％濃度となるように膨潤させ、５重量％ヒアルロン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用核酸２２５μｌと前記（２）で得られた５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液１５０μｌとを混合して遺伝子導入用組成物を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、２重量％である。
試験例６  ＸＰＡマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例６で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ６）を、前記試験例１の（１）と同様に、ＸＰＡモデルマウスの背部に塗布した。４８時間後、Ｎｅｍｂｕｔａｌ登録商標を用いて腹腔内注射で麻酔し、ＸＰＡモデルマウスの背部に、ＴＯＳＨＩＢＡ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｎｌａｍｐ  ＦＬ２０ＳＥ（ピーク波長３０５ｎｍ、２８０〜３６０ｎｍ）を用いて、ＵＶＢを４００Ｊ／ｍ２／回を週１回で、２０週照射した。なお、紫外線量は、ＵＶＲ−３０５／３６５Ｄ紫外線線量計で測定した。対照として、遺伝子導入用組成物の代わりに、ＸＰＡ遺伝子を含有しないｐｃＤＮＡ３を用いた対照遺伝子導入用組成物（Ｃ６−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ６−２）を塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）皮膚症状の観察
紫外線照射終了５ヶ月後に、紫外線誘発皮膚腫瘍について肉眼で観察した。その結果、遺伝子導入用組成物（Ｅ６）の皮膚塗布群では、第３図に示したように、紫外線照射部位に皮膚の肥厚と紅色丘疹を認めるのみで、明らかな悪性腫瘍は認めなかったのに対して、ＸＰＡ遺伝子を含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ６−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ６−２）の皮膚塗布群では、紫外線照射部位に一致して、増殖の速い腫瘍を認めた。即ち、驚くべきことに、導入対象の核酸が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。また、皮膚の広範囲にわたって、導入対象の核酸中の遺伝子が発現することがわかった。
【実施例７】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの調製
実施例１と同様にしてｐＣＡＧＧＳ−ＸＰＡを構築した。得られたｐＣＡＧＧＳ−ＸＰＡをＨＶＪエンベロープベクターに封入した。これにより、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターを得た。ここで、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターにおけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１ｍｌに０．３重量％濃度となるように膨潤させ、０．３重量％ヒアルロン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクター２５０μｌと前記（２）で得られた０．３重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液５０μｌとを混合して遺伝子導入用組成物を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、０．０５重量％である。
試験例７  ＸＰＡマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮下注射群群
前記実施例７で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ７）をＸＰＡモデルマウスの背部に、４〜５ヶ所に分けて皮下注射した。２４時間後、Ｎｅｍｂｕｔａｌ登録商標を用いて腹腔内注射で麻酔し、ＸＰＡモデルマウスの背部に、ＴＯＳＨＩＢＡ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｎｌａｍｐ  ＦＬ２０ＳＥ（ピーク波長３０５ｎｍ、２８０〜３６０ｎｍ）を用いて、ＵＶＢを４００Ｊ／ｍ２／回を週１回で、２０週照射した。なお、紫外線量は、ＵＶＲ−３０５／３６５Ｄ紫外線線量計で測定した。対照として、ＸＰＡ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターの代わりに、ＸＰＡ遺伝子を含有しないｐＣＡＧＧＳを封入したＨＶＪエンベロープベクターを保持した対照遺伝子導入用組成物（Ｃ７−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ７−２）を塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）皮膚症状の観察
紫外線照射終了５ヶ月後に、紫外線誘発皮膚腫瘍について肉眼で観察した。その結果、ＸＰＡ遺伝子を含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ５−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ５−２）の皮膚塗布群では、紫外線照射部位に一致して、増殖の速い腫瘍を認めたのに対して、遺伝子導入用組成物（Ｅ７）の皮下注射群では、第４図に示したように、紫外線照射部位の皮膚に肥厚と紅色丘疹を認めるのみで、明らかな悪性腫瘍は認めなかった。即ち、驚くべきことに、導入対象の核酸が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。また、皮膚の広範囲にわたって、導入対象の核酸中の遺伝子が発現することがわかった。
【実施例８】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）遺伝子導入用核酸の調製
実施例２と同様にしてｐＣＡＧＧＳ−ＸＰＡを構築した。ここで、ＸＰＡ遺伝子導入用核酸におけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（２）コンドロイチン硫酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、コンドロイチン硫酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１ｍｌに０．５重量％濃度となるように膨潤させ、０．５重量％コンドロイチン硫酸酸ナトリウム（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用核酸２５０μｌと前記（２）で得られた０．５重量％コンドロイチン硫酸ナトリウム溶液５０μｌとを混合して遺伝子導入用組成物を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるコンドロイチン硫酸ナトリウムの濃度は、０．０８３重量％である。
試験例８  ＸＰＡマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮下注射群
前記実施例６で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ８）を、前記試験例７の（１）と同様に、ＸＰＡモデルマウスの背部に皮下注射し、背部にＵＶＢを４００Ｊ／ｍ２／回を週１回で、２０週照射した。対照として、遺伝子導入用組成物の代わりに、ＸＰＡ遺伝子を含有しないｐＣＡＧＧＳを用いた対照遺伝子導入用組成物（Ｃ８−１）又はコンドロイチン硫酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ８−２）を塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）皮膚症状の観察
紫外線照射終了５ヶ月後に、紫外線誘発皮膚腫瘍について肉眼で観察した。その結果、遺伝子導入用組成物（Ｅ８）の皮膚塗布群では、紫外線照射部位に皮膚の肥厚と紅色丘疹を認めるのみで、明らかな悪性腫瘍は認めなかったのに対して、ＸＰＡ遺伝子を含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ８−１）又はコンドロイチン硫酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ８−２）の皮膚塗布群では、紫外線照射部位に一致して、増殖の速い腫瘍を認めた。即ち、驚くべきことに、導入対象の核酸が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。また、皮膚の広範囲にわたって、導入対象の核酸中の遺伝子が発現することがわかった。
【実施例９】  遺伝子導入用組成物の調製
（１）遺伝子導入用核酸の調製
実施例２と同様にしてｐｃＨＡ−ＸＰＡを構築した。ここで、ＸＰＡ遺伝子導入用核酸におけるＤＮＡ量は、５０μｇ／マウスとした。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
前記実施例１の（２）と同様にして、ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１ｍｌに５重量％濃度となるように膨潤させ、５重量％ヒアルロン酸ナトリウム（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）遺伝子導入用組成物の調製
前記（１）で得られたＸＰＡ遺伝子導入用核酸３００μｌと前記（２）で得られた５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液７５μｌとを混合して遺伝子導入用組成物を得た。なお、前記遺伝子導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、１重量％である。
試験例９  ＸＰＡマウスへのＸＰＡ遺伝子の導入による効果
（１）遺伝子導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例６で得られた遺伝子導入用組成物（Ｅ９）を、前記試験例１の（１）と同様に、ＸＰＡモデルマウスの背部に塗布した。４８時間後、Ｎｅｍｂｕｔａｌ登録商標を用いて腹腔内注射で麻酔し、ＸＰＡモデルマウスの背部に、ＴＯＳＨＩＢＡ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｓｕｎｌａｍｐ  ＦＬ２０ＳＥ（ピーク波長３０５ｎｍ、２８０〜３６０ｎｍ）を用いて、ＵＶＢを１５００Ｊ／ｍ２／回を週３回で、５週照射した。なお、紫外線量は、ＵＶＲ−３０５／３６５Ｄ紫外線線量計で測定した。対照として、遺伝子導入用組成物の代わりに、ＸＰＡ遺伝子を含有しないｐｃＤＮＡ３を用いた対照遺伝子導入用組成物（Ｃ９−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ９−２）を塗布して、以下、同様の操作を行なった。
（２）皮膚症状の観察
紫外線照射終了１２週後に、紫外線誘発皮膚腫瘍について肉眼で観察した。その結果、遺伝子導入用組成物（Ｅ９）の皮膚塗布群では、第５図に示したように、紫外線照射部位に皮膚の肥厚と紅色丘疹を認めるのみで、紫外線照射部位の皮膚に肥厚と紅色丘疹を認めるのみで、紫外線誘発皮膚腫瘍は認めなかったのに対して、ＸＰＡ遺伝子を含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ９−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない対照遺伝子導入用組成物（Ｃ９−２）の皮膚塗布群では、第６図に示したように、紫外線照射部位に一致して、増殖の速い腫瘍を認めた。即ち、驚くべきことに、導入対象の核酸が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。また、皮膚の広範囲にわたって、導入対象の核酸中の遺伝子が発現することがわかった。
【実施例１０】  蛋白質導入用組成物の調製
（１）ｈｕｍａｎ  ＥＧＦ導入用ＨＶＪエンベロープベクターの調製
ｈｕｍａｎ  ＥＧＦは例えば、和光純薬工業株式会社製のＥｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｅｒ，Ｈｕｍａｎ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔを購入し使用した。これをＨＶＪエンベロープベクターに封入し、ｈｕｍａｎ  ＥＧＦ遺伝子導入用ＨＶＪエンベロープベクターを得た。
（２）ヒアルロン酸ナトリウム溶液の調製
ヒアルロン酸ナトリウムを、ダルベッコＰＢＳ（−）溶液１００ｍｌに５重量％濃度となるように膨潤させることにより、５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．４）を得た。なお、前記ダルベッコＰＢＳ（−）溶液は、例えば、和光純薬工業株式会社製のダルベッコＰＢＳ（−）粉末９．６ｇを蒸留水に溶解させて容量を１リットルに調製し、得られた溶液を１２１℃で１５分間高圧蒸気滅菌することにより得た。
（３）蛋白質導入用組成物の調製
前記（１）で得られたｈｕｍａｎ  ＥＧＦ溶液３００μｌ（５００μｇ  ｈｕｍａｎ  ＥＧＦ）と前記（２）で得られた５重量％ヒアルロン酸ナトリウム溶液７５μｌとを混合して蛋白質導入用組成物を得た。なお、前記蛋白質導入用組成物におけるヒアルロン酸ナトリウムの濃度は、１重量％である。
試験例１０  Ｃ５７マウスへのｈｕｍａｎ  ＥＧＦの導入による効果
（１）蛋白質導入用組成物の皮膚塗布群
前記実施例１０で得られた蛋白質導入用組成物（Ｅ１０）を、蛋白質量として、５００μｇ／マウスとなるように、Ｃ５７マウスの背部（約４．５ｃｍ２）に塗布した。対照として、ｈｕｍａｎ  ＥＧＦを含有しない蛋白質導入用組成物（Ｃ１０−１）又はヒアルロン酸ナトリウムを含有しない蛋白質導入用組成物（Ｃ１０−２）を塗布して、以下の操作を行った。
（２）ｈｕｍａｎ  ＥＧＦの検出
６時間後、前記（１）のマウスの皮膚（４．５ｃｍ２）を切除し、切除された皮膚をＯＴＣに包埋後凍結固定した。凍結切片を４〜５μｍの厚さに薄切し、得られた切片をＦＩＴＣ標識した抗ｈｕｍａｎ  ＥＧＦ抗体で染色した。
その結果、前記実施例１０で作成したものを塗布した群のマウスにおいてのみ、表皮組織中に蛍光が見られた。即ち、驚くべきことに、導入対象の蛋白質が、皮膚から細胞に導入されていることが示された。
本発明の対象物質導入用組成物は、全身性疾患等の広範囲にわたり発症する疾患等の治療、症状改善、疾患の機構の研究に際し、効率よく、対象物質を導入することができるという優れた効果を奏する。また、本発明の広範囲の遺伝子導入手段は、広範囲の導入対象部位に対して、簡便に、効率よく遺伝子を導入することができるという優れた効果を奏する。即ち、本発明は、対象物質を効果的に、しかも生理的条件下で導入することができ、導入された物質が確実に機能するという効果を奏する。
【産業上の利用可能性】  本発明の対象物質導入用組成物は、対象物質を効果的に、しかも生理的条件下で導入することができ、導入された物質が確実に機能するという優れた効果を奏するので、組織疾患等の広範囲にわたり発症する疾患等の治療、症状改善、疾患の機構の研究に有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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