(57)【要約】下記式2004044214.tif 000014で表されるＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物中にＦＫＩ−１０３３物質を蓄積せしめ、該培養物からＦＫＩ−１０３３物質を採取するものであって、得られたＦＫＩ−１０３３物質はリアノジン拮抗活性、殺虫活性および抗蠕虫活性を有し、有効性、毒性などの面で満足し得る農薬、動物薬、医薬品として有効な薬剤であると期待される。
2004044214.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式
2004044214.tif 000013
で表される新規ＦＫＩ−１０３３物質。
【請求項２】
糸状菌に属し、ＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物中にＦＫＩ−１０３３物質を蓄積せしめ、該培養物からＦＫＩ−１０３３物質を採取することを特徴とする新規ＦＫＩ−１０３３物質の製造法。
【請求項３】
糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９）である微生物。
【請求項４】
請求の範囲１記載のＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物が糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３であるＦＫＩ−１０３３物質。
【請求項５】
微生物が糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９）である請求の範囲４記載のＦＫＩ−１０３３物質。
【請求項６】
ＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物が糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９）または上記物質を生産する能力を有するそれの変異株である請求の範囲２記載の製造法。
【請求項７】
リアノジン拮抗活性を有する請求の範囲１記載のＦＫＩ−１０３３物質。
【請求項８】
殺虫活性及び抗蠕虫活性を有する請求の範囲１記載のＦＫＩ−１０３３物質。
【請求項９】
ＦＫＩ−１０３３物質を有効成分とするリアノジン拮抗剤。
【請求項１０】
ＦＫＩ−１０３３物質を有効成分とする殺虫剤及び抗蠕虫剤。
【請求項１１】
ＦＫＩ−１０３３物質を有効成分とするリアノジン拮抗剤、殺虫剤及び抗蠕虫剤。
【請求項１２】
リアノジンレセプターに対してリアノジンと拮抗する物質の中で殺虫活性および抗蠕虫活性を有する農薬、動物薬、医薬製造のためのＦＫＩ−１０３３物質の使用。
【請求項１３】
リアノジンレセプターに対してリアノジンと拮抗する物質の中で殺虫活性および抗蠕虫活性を有する農薬、動物薬、医薬製造のためのＦＫＩ−１０３３物質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】    本発明はリアノジン拮抗活性、殺虫活性及び蠕虫活性を有することから農薬、動物薬及び医薬品として有効な新規ＦＫＩ−１０３３物質およびその製造法に関する。
【背景技術】    殺虫剤が食糧資源の増産や安定した供給に多大な貢献を果してきたことは確かであるが、一方では残留毒性や生態系の破壊など大きな問題も引き起こしてきたことは周知の通りである。このような事情を考慮して安全性の高い殺虫剤の開発が進められ、今日では毒性などの面でもかなり配慮された殺虫剤が利用されるようになってきている。
また、寄生虫症は衛生環境の改善、駆虫薬の進歩などにより減少してきたが、近年になって輸入寄生虫症、人獣共通寄生虫症、日和見寄生虫症、生鮮食品に由来する寄生虫症などが目立つようになり、改めて多種にわたる寄生虫症が問題となっている。さらに寄生虫症は、牧畜や農業においても多大な経済的負担をもたらしている。寄生虫の中で蠕虫の感染症については、現在、イベルメクチン、メベンダゾール及びプラジカンテルなどの化合物が高頻度で使用されている。
しかし、現在使用されている殺虫剤や抗蠕虫剤がその有効性、毒性などの面ですべて満足できるとはいい難く、新しい薬剤の開発が強く要望されている。
【発明の開示】
リアノジンレセプターは、細胞質のＣａ２＋濃度上昇により細胞内ストアから細胞質にＣａ２＋を動員するイオンチャンネルであり、植物アルカロイドで殺虫活性を示すリアノジンのレセプターとして発見された。哺乳類においては、遺伝子クローニングの成果から別々の遺伝子にコードされる１型（骨格筋型）、２型（心筋型）及び３型（脳型）の３種類のリアノジンレセプターが知られ、それぞれの一次構造も既に明らかとなっているが（Ｔａｋｅｓｈｉｍａ，Ｈ．：Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７０７，１６５−１７７（１９９３）、昆虫や蠕虫においては上記３種類のいずれにも属さないリアノジンレセプターとして同定されている（竹島浩：蛋白質  核酸  酵素、第４３巻、１６０３−１６０９頁、１９９８年）。
したがって、リアノジンレセプターに対してリアノジンと拮抗する物質の中で昆虫や蠕虫に対する選択性の高いものは、殺虫剤や抗蠕虫剤として期待されることが報告された（Ｍ．Ｓｃｈｍｉｔｔら：Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ  Ｓｃｉ．第４８巻、３７５−３８５頁、１９９６年）。
そこで、本発明者らはこのリアノジンレセプターに着目し、薬剤の有効性、毒性などの面において満足できる新しい薬剤を得るため、微生物培養物中からリアノジン拮抗剤の探索を続けた結果、糸状菌ＦＫＩ−１０３３株の生産する新規化合物のＦＫＩ−１０３３物質がリアノジン拮抗活性を有すること、さらに殺虫活性や抗蠕虫活性を有することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
本発明はリアノジン拮抗活性、殺虫活性および抗蠕虫活性を有し、有効性、毒性などの面で満足し得る農薬、動物薬、医薬品として有効な新規ＦＫＩ−１０３３物質およびその製造法を提供することを目的とするものである。
本発明のＦＫＩ−１０３３物質は糸状菌に属するＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物中にＦＫＩ−１０３３物質を蓄積せしめ、該培養物からＦＫＩ−１０３３物質を採取するものである。
すなわち本発明は、下記式
2004044214.tif 000003
で表される新規ＦＫＩ−１０３３物質を提供するものである。
更に本発明は、糸状菌に属し、ＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物中にＦＫＩ−１０３３物質を蓄積せしめ、該培養物からＦＫＩ−１０３３物質を採取することを特徴とする新規ＦＫＩ−１０３３物質の製造法を提供するものである。
更に本発明は、糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９）である微生物を提供するものである。
更に本発明は、ＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物が糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３であるＦＫＩ−１０３３物質を提供するものである。
更に本発明は、微生物が糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９）であるＦＫＩ−１０３３物質を提供するものである。
更に本発明は、ＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物が糸状菌に属するバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９）または上記物質を生産する能力を有するそれの変異株である製造法を提供するものである。
更に本発明は、リアノジン拮抗活性を有するＦＫＩ−１０３３物質、及び殺虫活性及び抗蠕虫活性を有するＦＫＩ−１０３３物質を提供するものである。
更に本発明は、ＦＫＩ−１０３３物質を有効成分とするリアノジン拮抗剤、殺虫剤及び抗蠕虫剤を提供するものである。
更に本発明は、リアノジンレセプターに対してリアノジンと拮抗する物質の中で殺虫活性および抗蠕虫活性を有する農薬、動物薬、医薬製造のためのＦＫＩ−１０３３物質の使用を提供するものである。
最後に本発明は、リアノジンレセプターに対してリアノジンと拮抗する物質の中で殺虫活性および抗蠕虫活性を有する農薬、動物薬、医薬製造のためのＦＫＩ−１０３３物質を提供するものである。
前記の式で表される新規ＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物（以下「ＦＫＩ−１０３３物質生産菌」と称する）は糸状菌であるが、本発明のＦＫＩ−１０３３物質生産能を有するものであればよく、特に制限されることはない。本発明のＦＫＩ−１０３３物質を生産するために使用される菌株の好ましい一例としては、本発明者らによって例えば鹿児島県の土壌より新たに分離されたＶｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．ＦＫＩ−１０３３株が挙げられる。本菌株の菌学的性状を示すと以下の通りである。
（１）形態的特徴
本菌株は、バレイショ・ブドウ糖寒天培地、コーン・ミール寒天培地、三浦寒天培地、麦芽汁寒天培地、オートミール寒天培地などで中程度に生育し、各種寒天培地で分生子の着性は良好であった。
麦芽汁寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡で観察すると、菌糸は隔壁を有しており、分生子柄は気菌糸より直立し、ときに分岐することがある。フィアライドは、気菌糸から直接あるいは分生子柄の途中および先端に単独あるいは２〜４本輪生して生じる。その長さは２５〜８０μｍ、基部はわずかに膨らみ（２．０〜２．８μｍ）、先端は錐形に細くなる。フィアライドの先端からは亜球形から広楕円形（２．５〜４．０×２．０〜３．０μｍ）の分生子を生じ、粘性球形を形成する。
（２）各種寒天培地上での培養性状
本菌株を各種寒天培地上で、２５℃、７日間培養した場合の肉眼的観察結果を下記の第１表に示した。
2004044214.tif 000004
2004044214.tif 000005
（３）生理的性状
（１）最適生育条件
本菌株の最適生育条件は、ｐＨ５〜７、温度１８．５〜２９．０℃である。
（２）生育の範囲
本菌株の生育範囲は、ｐＨ４〜１０、温度６．５〜３１．０℃である。
（３）好気性、嫌気性の区別
好気性
上記ＦＫＩ−１０３３株の形態的特徴、培養性状および生理的性状に基づき、既知菌種との比較を試みた結果、本菌株はバーチシリウム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）属に属する一菌株と同定し、バーチシリウム  エスピー  ＦＫＩ−１０３３と命名した。本菌株は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約に基づき国際寄託した。本菌株はバーチシリウム  エスピー  ＦＫＩ−１０３３（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．ＦＫＩ−１０３３）として、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６（郵便番号３０５−８５６６）［ＡＩＳＴ  Ｔｓｕｋｕｂａ  Ｃｅｎｔｒａｌ  ６，１−１，Ｈｉｇａｓｈｉ  １−Ｃｈｏｍｅ  Ｔｓｕｋｕｂａ−ｓｈｉ，Ｉｂａｒａｋｉ−ｋｅｎ  ３０５−８５６６  Ｊａｐａｎ］に所在する独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｏｒｇａｎｉｓｍ  Ｄｅｐｏｓｉｔａｒｙ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）に寄託され、寄託日は平成１４年（２００２）１０月２１日、受託番号はＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９である。
本発明のＦＫＩ−１０３３物質を製造するに当たっては、先ず糸状菌に属するＦＫＩ−１０３３物質生産菌を培地で培養し、その培養物から分離・精製すればよい。菌は一般的性状として菌学上の性状は極めて変異し易く、一定したものではなく、自然的にあるいは通常行われる紫外線照射または変異誘導体、例えばＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホネート等を用いる人工変異株は勿論、自然的変異株も含め、糸状菌に属し前記式で表されるＦＫＩ−１０３３物質生産菌のすべてが使用できる。
上記ＦＫＩ−１０３３物質生産に適した栄養源としては、糸状菌の栄養源として使用し得るものであればよい。例えば、市販のペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−アミン、カゼインの水和物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の窒素源、グリセリン、澱粉、グルコース、ガラクトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等の炭素源、及び食塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を単独あるいは組み合わせて使用できる。
その他必要に応じて微量の金属塩、消泡剤として動・植・鉱物油等を添加することもできる。これらのものは生産菌が利用しＦＫＩ−１０３３物質の生産に役だつものであればよく、公知の糸状菌の培養材料は、すべて用いることができる。またＦＫＩ−１０３３物質の大量培養には液体培養が好ましく、培養温度は生産菌が発育し、ＦＫＩ−１０３３物質を生産できる範囲で適用できる。培養は以上に述べた条件を使用するＦＫＩ−１０３３物質生産菌の性質に応じて適宜選択して行なうことができる。
ＦＫＩ−１０３３物質は、培養液よりクロロホルム、酢酸エチル等の水不混和性の有機溶媒で抽出することができる。上述の抽出法に加え、脂溶性物質の採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組合わせあるいは繰返すことによって純粋に採取することができる。
本発明によるＦＫＩ−１０３３物質の理化学的性状は次の通りである。
（１）性状  ：無色油状、
（２）分子量：８７５．５３９７（Ｍ＋Ｎａ、高分解能高速原子衝撃質量分析による）、
（３）分子式：Ｃ４４Ｈ７６Ｎ４Ｏ１２、
（４）比旋光度：［α］Ｄ２５＝−５３．０°（ｃ＝０．２、メタノール）、
（５）紫外部吸収スペクトル：メタノール中で測定した紫外部吸収スペクトルは、２０２ｎｍ（ε＝１９７００）に極大吸収を有する、
（６）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤法で測定した赤外部吸収スペクトルは、３４６７、２９５６、２９３３、２８６２、１７４３、１６６２、１４６４、１４１６、１２０５、１０８４ｃｍ−１に極大吸収を有する、
（７）１Ｈプロトン核磁気共鳴スペクトル（重メタノール中）の測定には、米国バリアン社製ユニティ・イノバ６００核磁気共鳴スペクトルメータを用いて測定した。その化学シフト（ｐｐｍ）およびスピン結合定数（Ｈｚ）を第２表に示す、
（８）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（重メタノール中）の測定には、米国バリアン社製ユニティ・イノバ６００核磁気共鳴スペクトルメータを用いて測定した。その化学シフト（ｐｐｍ）を第２表に示す、
（９）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルムに可溶、水、ｎ−ヘキサンに難溶、
（１０）呈色反応：硫酸に陽性。
2004044214.tif 000006
2004044214.tif 000007
ただし、表中の記号、ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数、Ｊはスピン結合定数（Ｈｚ）を示す。
以上、本発明のＦＫＩ−１０３３物質の各種理化学的性状やスペクトルデータを詳細に検討した結果、本ＦＫＩ−１０３３物質は下記式で表される化学構造であることが決定された。なお、ＦＫＩ−１０３３物質はプロトン及び１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルにおいて、分子式の１．７５倍のシグナル強度を示した。これはＦＫＩ−１０３３物質がおよそ３：４の割合で２種類の配座異性体として存在しているためと考えられる。なお片方の配座異性体については、シグナルの数が４分の１しか観測されず、４回回転対称性をもつ立体配座をとっていることが示唆された。
2004044214.tif 000008
以上のとおり、ＦＫＩ−１０３３物質の各種理化学的性状について詳述したが、このような性質に一致する化合物はこれまで報告されておらず、ＦＫＩ−１０３３物質は新規物質であると決定した。
次に、本発明ＦＫＩ−１０３３物質のリアノジン拮抗活性について詳しく説明する。
（１）昆虫粗リアノジンレセプター画分の調製は以下のように行った。
ワモンゴキブリ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）成虫１０匹の胸と脚を液体窒素で凍らせ細かく細断し、４μｇ／ｍｌロイペプチン、３μｇ／ｍｌペプタチンを含む１５ｍｌの５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．４）中でナイフホモジナイザーを用い、０℃、２４，０００ｒｐｍで３０秒間×３回ホモジナイズした。これを二重にした綿布で濾過し、得られた濾液を４℃、３，０００ｒｐｍで２０分間遠心した。得られた上清を４℃、３０，０００ｒｐｍで３０分間遠心し、得られた沈殿を０．３Ｍショ糖、５００μＭ塩化カルシウム、１．５Ｍ塩化カリウムを含む１ｍｌの２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）中で懸濁してガラスポッターでホモジナイズし、粗リアノジンレセプター画分を得た。この粗リアノジンレセプター画分は使用する直前に緩衝液Ａ［４μｇ／ｍｌアプロチニン、４μｇ／ｍｌロイペプチン、０．３Ｍショ糖、５００μＭ塩化カルシウムを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）］で約７倍に希釈して用いた。
（２）哺乳類粗リアノジンレセプター画分の調製は以下のように行った。
ＩＣＲマウス１匹の後脚筋肉を細かく細断し、その３．０ｇを１５ｍｌの緩衝液Ｂ［４μｇ／ｍｌアプロチニン、４μｇ／ｍｌロイペプチンを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）］中でガラスホモジナイザーを用い、０℃、１０００ｒｐｍで３０秒間×３回ホモジナイズした。これをマイクロテストチューブに移し、更にガラスホモジナイザーを７．５ｍｌの緩衝液Ｂで洗浄し、その洗浄液もマイクロテストチューブに加えた。これを攪拌後、４℃に保冷した超遠心分離機により２５，０００ｇで４０分間遠心した。得られた沈殿に２．４ｍｌの緩衝液Ｂを加えて懸濁し、マウス由来の粗リアノジンレセプター画分を得た。
（３）ワモンゴキブリ粗リアノジンレセプター結合活性の測定は以下のように行った。
９６穴マイクロプレート（米国、コーニング社製）に緩衝液Ａ  ７０μｌ、０．１ｎＭリアノジンのエタノール溶液１０μｌ、２０ｎＭ［９，２１−３Ｈ］（Ｎ）］リアノジン１０μｌを加えた。次に、１０μｌのワモンゴキブリ粗リアノジンレセプター画分を加えて反応を開始させ、室温で９０分間、マイクロプレートミキサーにより振とうした。次に、その反応液をトムテック社製ハーベスタ−９６ＭａｃｈＩＩＩ  Ｍを用いてグラスファイバーフィルター（米国、ワラック社製、プリンテッド・フィルターマットＢ）で濾過後、低温の２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）３００μｌで３回洗浄した。そのフィルターを電子レンジを用いて乾燥後、シンチレーターシート（米国、ワラック社製、ＭｅｌｔｉＬｅｘ  Ｂ／ＨＳ）を載せてホットプレート上でシートを溶融させた。放射活性は、シンチレーションカウンター（米国、ワラック社製、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘ）を用いてフィルターの蛍光強度を測定することにより測定した。
ＦＫＩ−１０３３物質のリアノジン拮抗活性は、リアノジンレセプター結合活性測定においてはじめにマイクロプレートにＦＫＩ−１０３３物質を添加しておくことで、コントロールのリアノジンレセプター結合活性と比較して以下の式により算出した。
2004044214.tif 000009
上記式からの算出結果によれば、ＦＫＩ−１０３３物質はワモンゴキブリ由来リアノジンレセプターに対してＩＣ５０＝４．２μＭのリアノジン拮抗活性を示した。
（４）哺乳類リアノジンレセプター結合活性の測定は以下のように行った。
９６穴マイクロプレート（米国、コーニング社製）に緩衝液Ａ  ７０μｌ、０．１ｎＭリアノジンのエタノール溶液１０μｌ、２０ｎＭ［９，２１−３Ｈ］（Ｎ）］リアノジン１０μｌを加えた。次に、１０μｌのマウス由来粗リアノジンレセプター画分を加えて反応を開始させ、室温で９０分間、マイクロプレートミキサーにより振とうした。次にその反応液をトムテック社製ハーベスター９６ＭａｃｈＩＩＩ  Ｍを用いてグラスファイバーフィルター（米国、ワラック社製、プリンテッド・フィルターマットＢ）で濾過後、低温の２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）３００μｌで３回洗浄した。そのフィルターを電子レンジを用いて乾燥後、シンチレーターシート（米国、ワラック社製、ＭｅｌｔｉＬｅｘ  Ｂ／ＨＳ）を載せてホットプレート上でシートを溶融させた。放射活性はシンチレーションカウンター（米国、ワラック社製、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  ＴｒｉＬｕｘ）を用いてフィルターの蛍光強度を測定することにより測定した。ＦＫＩ−１０３３物質のリアノジン拮抗活性は、リアノジンレセプター結合活性測定においてはじめにマイクロプレートにＦＫＩ−１０３３物質を添加しておくことで、コントロールのリアノジンレセプター結合活性と比較して以下の式により算出した。
2004044214.tif 000010
上記式からの算出結果によれば、ＦＫＩ−１０３３物質はマウス由来リアノジンレセプターに対してＩＣ５０＝５３．９μＭのリアノジン拮抗活性を示した。
したがって、上記の測定結果から、ＦＫＩ−１０３３物質は昆虫リアノジンレセプターに対して哺乳類リアノジンレセプターより１０倍以上、強いリアノジン拮抗活性を示すことが確認された。
（５）本発明のＦＫＩ−１０３３物質の抗菌活性は以下の通りである。
濾紙円板（日本国、アドバンテック社製、直径６ｍｍ）にＦＫＩ−１０３３物質の１ｍｇ／ｍｌのメタノール溶液をそれぞれ１０μｌ浸漬し、一定時間風乾して溶媒を除去後、各試験菌含菌寒天平板に張り付け、３５℃で２４時間培養後、濾紙円板の周りにできた生育阻止円の直径を測定した。その測定結果を下記の第３表に示した。
2004044214.tif 000011
2004044214.tif 000012
上記第３表に示すとおり、本発明のＦＫＩ−１０３３物質は各種微生物に対して抗菌活性を示さないことが確認された。
（６）本発明のＦＫＩ−１０３３物質の抗線虫及び抗節足動物活性について以下に詳しく説明する。
９６穴プレート（米国、コーニング社製）に本ＦＫＩ−１０３３物質のメタノール溶液を加え、真空ポンプ下でメタノールを留去した後、検定用培地（レシチン０．０１％、炭酸水素ナトリウム７．５ｍＭ、塩化カリウム７．５ｍＭ、塩化カルシウム二水和物７．５ｍＭ、硫酸マグネシウム七水和物７．５ｍＭ）２５０μｌを加え、１５分間振とうした。
そこに、緩衝液中で孵化させた節足動物Ａｒｔｅｍｉａ  ｓａｌｉｎａのノープリウス幼生を数匹含む緩衝液を５０μｌ加え、また、線虫増殖用寒天培地上で飼育した線虫Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓを１０匹程度加えた。これらの生物の様子を２日後に顕微鏡下で観察したところ、節足動物および線虫に対していずれも２０μｇ／ｍｌの濃度で生育を阻害した。
したがって、本発明のＦＫＩ−１０３３物質はリアノジン拮抗剤あるいは殺虫剤や抗蠕虫剤などの薬剤として使用し得る。
【発明を実施するための最良の形態】    次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれのみに限定されるものではない。
寒天斜面培地で培養したバーチシリウム  エスピー（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐ．）ＦＫＩ−１０３３株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２１９）より、グルコース２．０％、ポリペプトン（日本国、日本製薬社製）０．５％、酵母エキス（日本国、オリエンタル酵母工業社製）０．２％、寒天０．１％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネシウム七水和物０．０５％からなる液体培地（ｐＨ６．０）が１００ｍｌ入った５００ｍｌ容三角フラスコに１白金耳接種し、２７℃で３日間振盪培養した。得られた種培養液を滅菌精製水８０ｍｌが入った５００ｍｌ容三角フラスコ４本に各２０ｍｌずつ加えて希釈した。次に、その種培養希釈液を２４０ｇの生産培地［イタリア米１５０ｇ、水道水９０ｍｌ、硫酸鉄（ＩＩ）七水和物０．９ｍｇ、塩化マンガン四水和物０．９ｍｇ、塩化亜鉛七水和物０．９ｍｇ、硫酸銅（ＩＩ）五水和物０．９ｍｇ、塩化コバルト六水和物０．９ｍｇ］が入った１Ｌ容ルーフラスコ２４本に各１０ｍｌずつ植菌し、２７℃で１３日間静置培養した。
培養の終了した１Ｌ容ルーフラスコ２４本にそれぞれ２００ｍｌのメタノール：水＝２：１の混液３００ｍｌを加えて激しく攪拌した後、３時間放置した。次にその抽出液中のメタノールを減圧留去し、得られた水溶液を等量の酢酸エチルで２回抽出し、無水硫酸ナトリウムで脱水後、濃縮乾固し、２．５３ｇの茶褐色油状物質を得た。これをヘキサンで充填したシリカゲルカラム（φ２．８×１４．０ｃｍ）にのせ、ヘキサン−酢酸エチル（１００：７５）で洗浄後、ヘキサン−酢酸エチル（１００：１５０）で溶出し、減圧濃縮により１８３ｍｇの茶褐色油状物質を得た。これをさらにセファデックスＬＨ−２０カラム（φ２．７×９２ｃｍ）にかけ、メタノールにより溶出を行うことで、ＦＫＩ−１０３３物質８６．５ｍｇを無色油状物質として得た。
産業上の利用分野
以上説明したように、糸状菌に属するＦＫＩ−１０３３物質を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物中にＦＫＩ−１０３３物質を蓄積せしめ、該培養物から本ＦＫＩ−１０３３物質を採取することにより製造され、得られたＦＫＩ−１０３３物質はリアノジン拮抗活性、殺虫活性および抗蠕虫活性を有することから、有効性、毒性などの面で満足し得る農薬、動物薬、医薬品として有効な新規ＦＫＩ−１０３３物質であると期待される。
【国際調査報告】
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