(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
0005327839.tif 000024
［但し、式中、Ｒ１が以下の置換基
【化２】
0005327839.tif 000025
又は、以下の置換基
【化３】
0005327839.tif 000026
（ただし、ｎは１〜８の整数）であり、Ｒ２又はＲ３の一方がカルボキシル基で、他方が以下の置換基
【化４】
0005327839.tif 000027
（ただし、ｍは１〜１５の整数）を示す］で表されるシアル酸誘導体化合物、及びその薬理学上許容される塩又は水和物。
【請求項２】
ｍが１１である請求項１に記載のシアル酸誘導体化合物、及びその薬理学上許容される塩又は水和物。
【請求項３】
ｎが５である請求項１に記載のシアル酸誘導体化合物、及びその薬理学上許容される塩又は水和物。
【請求項４】
一般式（Ｉ）
【化５】
0005327839.tif 000028
（但し、式中、Ｒ１が以下の置換基
【化６】
0005327839.tif 000029
であり、Ｒ２及びＲ３の一方がカルボキシル基で他方が水酸基を示す）で表されるシアル酸誘導体化合物、及びその薬理学上許容される塩又は水和物。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載のシアル酸誘導体化合物、その薬理学上許容される塩及びそれらの水和物、並びに薬理学上許容される担体を含有することを特徴とするインフルエンザによる感染症の予防及び／又は治療のための抗インフルエンザウィルス剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シアル酸誘導体化合物、該化合物の製造方法、及び該化合物を有効成分として含む医薬及び治療方法に関する。より詳細には、シアル酸誘導体化合物を有効成分して含む抗インフルエンザウィルス剤、並びに、これらの化合物を含むインフルエンザの予防及び／又は治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザウィルスは、その内部に存在する８本の一本鎖ＲＮＡに変異が導入されやすく、その結果、従来効果を示していたワクチン等に対する耐性ウィルスが生じやすい。このようなインフルエンザウィルスの性質から、毎年のようにインフルエンザウィルスによる感染症が流行し、これによる死者も少なからず生じている。インフルエンザウィルスによる感染には、宿主細胞に対する接着と脱離が重要であり、それには異なる２種類の糖タンパク（ヘマグルチニンとシアリダーゼ（ノイラミニダーゼ））が作用している。
【０００３】
インフルエンザウィルスの表面に存在する糖タンパク質のヘマグルチニンは、感染対象である細胞表面に存在する糖タンパク質のシアル酸残基を結合する性質を持っており、この性質を利用して、インフルエンザウィルスが細胞へ感染することが知られている。従って、インフルエンザウィルス表面上のヘマグルチニンと感染対象細胞表面上のシアル酸残基との結合を阻害することができれば、インフルエンザウィルスの感染初期段階を阻止することが可能となるため、そのような阻害活性を持つ化合物はインフルエンザによる感染症の予防的手段において有効である。
一方、ノイラミニダーゼはインフルエンザウィルスが、感染した細胞から脱離する上で必須の酵素である。従って、ノイラミニダーゼの活性を有効に阻害することができれば、インフルエンザウィルスによる他の細胞への感染を抑えることができるため、インフルエンザウィルスによる感染後の治療的手段に応用することができる。
【０００４】
現在市販されている抗インフルエンザ治療薬の多くは、ノイラミニダーゼ阻害物を有効成分としたものであり、例えば、タミフルR(リン酸オセルタミビル)やリレンザR(ザナミビル)などを挙げることができる。しかしながら、これらの特効薬の有効成分は何れも天然物ではないため、その耐性ウィルスの出現が危惧されており、近年、シンメトレルRやタミフルRに対する耐性ウィルスが出現したとの報告もある（非特許文献１）。そのため、変異性の高いインフルエンザウィルスによる感染症に対して、効果を持続し得る医薬の開発が望まれている。
【０００５】
これまでに、発明者らは、チオグリコシド型シアル酸誘導体を種々のカルボシランデンドリマー骨格に導入（特許文献１）、あるいは、ポリマー化（特許文献２）し、インフルエンザウィルスＡ型由来のシアリダーゼ活性を有効に阻害する化合物の合成を行っており、有効な抗インフルエンザ治療剤の開発に努めてきた。
【０００６】
【非特許文献１】Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３５３：２６６７−２６７２  ２００５
【特許文献１】特開２００８−５０２８３
【特許文献２】特開２００８−８１４１１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
以上のように、これまでにも抗インフルエンザ治療剤の有効成分として効果を発揮する化合物がいくつか報告されている。しかし、ヘマグルチニンとノイラミニダーゼの両方を阻害し、細胞への侵入及び細胞からの脱離を同時に抑制する低分子化合物は知られていない。
そこで、本発明は、ヒトインフルエンザウィルスの感染対象細胞への侵入及び該細胞からの脱離の両過程を阻害する化合物の提供、及び該化合物を含有する抗インフルエンザ予防薬及び／又は治療薬、さらには、インフルエンザ感染の予防手段等の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記事情に鑑み、鋭意研究を行った結果、いくつかのシアル酸誘導体が、インフルエンザウィルスのヘマグルチニンとシアル酸との結合活性及びノイラミニダーゼ活性の両方を阻害することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、一般式（Ｉ）
【化６】
0005327839.tif 000002
（但し、式中、Ｒ１は、炭素数２から１２のアルキル基、二重結合を含むアルケニル基、三重結合を含むアルキニル基であり、何れも１〜２個のアミド結合を含んでも良いことを示し、Ｒ２は、カルボキシル基、あるいは水酸基かスルフィドを介した炭素数１〜１５のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基を示し、Ｒ３はＲ２と入れ替わった場合であり、水酸基かスルフィドを介した炭素数１〜１５のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、あるいはカルボキシル基を示す）で表されるシアル酸誘導体化合物、及びその薬理学上許容される塩又は水和物、並びに該化合物及びその薬理学上許容される塩又はそれらの水和物に加えて薬理学上許容される担体を含有することを特徴とする、インフルエンザウィルスによる感染症の予防及び／又は治療のための抗ウィルス剤、あるいは、予防又は治療のための用途を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のシアル酸誘導体結合化合物は、インフルエンザウィルス（特にＡ型）の細胞への感染を有効に阻害し、さらに、インフルエンザウィルス（特にＡ型）が感染細胞から遊離するのに必要なノイラミニダーゼ活性を有効に阻害することから、インフルエンザ感染症の予防及び／又は治療を目的として抗インフルエンザウィルス剤の有効成分として利用することができる。
【００１１】
本発明の抗インフルエンザウィルス剤は、インフルエンザによる感染症の予防及び／又は治療の用途に用いることができる。用途としては、例えば、医薬としての点鼻薬の他、インフルエンザ感染に対する衛生用品として口腔又は喉に塗布又はスプレーするための、塗布剤又はスプレーの有効成分として使用することができる。あるいは、空気清浄機のフィルター又はマスクのカーゼ等に、活性を保持するような形態で塗布又は充填することにより、空気中のウィルスを捕獲し、人体等への感染の事前予防に使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
式（Ｉ）中、Ｒ１は、１〜２個のアミド結合を含んでも良い炭素数２から１２のアルキル基、二重結合を含むアルケニル基、三重結合を含むアルキニル基のいずれかであり、下記の式で示される置換基のいずれかであることが好ましい（ｎは特に５が好ましい）。
【化７】
0005327839.tif 000003
【００１３】
Ｒ２は、カルボキシル基、あるいは水酸基かスルフィドを介した炭素数１〜１５のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基のいずれかであり、特に、カルボキシル基又は水酸基が好ましい。
【００１４】
Ｒ３はＲ２と入れ替わった場合であり、水酸基かスルフィドを介した炭素数１〜１５のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、あるいはカルボキシル基のいずれかであり、特に、カルボキシル基又は下記の置換基が好ましい（ｍは特に１１が好ましい）。
【化８】
0005327839.tif 000004
【００１５】
式（Ｉ）において、Ｒ１がＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯ−であり、Ｒ２及びＲ３の一方がカルボキシル基であり、他方が水酸基である化合物（Ｉａ）は、例えば、以下のような過程により合成することができる。
【化９】
0005327839.tif 000005
まず、Ｎ−アセチルノイラミン酸1をピリジン溶媒に溶解し、無水酢酸を用いてアセチル化を行い、次いで、ジアゾメタンを用いてメチル化を行い、シアル酸メチル完全アセチル化体2を得る。次に、シアル酸メチル完全アセチル化体2をジクロロメタンに溶解し、１−ドデカンチオールを加え、氷冷後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体を加え、反応を行う。その後、反応生成物の抽出及び精製を行うことにより、シアル酸チオラウリルグリコシド体3を得ることができる（α体及びβ体混合物）。
【化１０】
0005327839.tif 000006
【００１６】
次に、シアル酸チオラウリルグリコシド体3からβ−シアル酸チオラウリルグリコシド体4を単離精製し、メタノール中、ナトリウムメトキシドを用いてＺｅｍｐｌｅｎ条件下で処理することにより、β−脱Ｏ−アセチル化体5を得、得られた化合物5をメタノール中、メタンスルホン酸を用いて６０℃で一晩加熱還流し、アミンのメタンスルホン酸塩6を得る。次に、得られたアミンのメタンスルホン酸塩6をメタノールに溶解し、氷冷後、トリエチルアミン、続いて、塩化アクリロイルをゆっくりと滴下し、Ｓｃｈｏｔｔｅｎ−Ｂａｕｍａｎｎ反応を行う。化合物6の中和には、８当量のトリエチルアミンが必要で、その後、４当量の塩化アクリロイルを添加することで、良好に、Ｎ−アクリロイル体7と塩の混合物を得ることができる。次に、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を加え（０．１当量）、アセチル化を行い、完全保護されたＮ−アクリロイル体8を得る。
【化１１】
0005327839.tif 000007
【００１７】
得られたＮ−アクリロイル体8をアセトン−蒸留水（９：１）混合溶液に溶解し、Ｎ−ヨードサクシンイミドを反応させ、反応産物を抽出精製、Ｏ−アセチルシアル酸誘導体11を得る。次に化合物11の脱Ｏ−アセチル化を行い、塩基条件下でメチルエステルの加水分解を行うことにより、シアル酸誘導体（Ｉａ）を取得することができる。
【化１２】
0005327839.tif 000008
【００１８】
また、式（Ｉ）において、Ｒ１がＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯ−であり、Ｒ２がカルボキシル基であり、Ｒ３が−Ｓ（ＣＨ２）１１ＣＨ３である化合物（Ｉｂ）は、例えば、以下のように合成することができる。
【化１３】
0005327839.tif 000009
シアル酸チオラウリルグリコシド体3からα−シアル酸チオラウリルグリコシド体を単離精製し、上記と同様な方法でα−Ｎ−アクリロイル体12（化合物8のα体）を合成する。
【化１４】
0005327839.tif 000010
得られたα−Ｎ−アクリロイル体12をメタノールに溶解し、ナトリウムメトキシドの存在下で反応させ、脱保護を行いシアル酸誘導体化合物（Ｉｂ）を合成することができる。
【００１９】
さらに、式（Ｉ）において、Ｒ１がＣＨ２＝ＣＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＣＯ−であり、Ｒ２がカルボキシル基であり、Ｒ３が−Ｓ（ＣＨ２）１１ＣＨ３である化合物（Ｉｃ）は、例えば、以下のように合成することができる。
【化１５】
0005327839.tif 000011
シアル酸チオラウリルグリコシド体3からα−シアル酸チオラウリルグリコシド体を単離精製し、上記と同様な方法でアミンのメタンスルホン酸塩（α体）13を合成する。次に13をメタノールに溶解し、トリエチルアミンと６−ブロモヘキサノイルクロライドを用いてＳｃｈｏｔｔｅｎ−Ｂａｕｍａｎｎ反応を行い、末端のブロモがクロライドに置換されたクロライド体14とブロマイド体15を得る。この反応は、−１５℃で行うことにより、クロライド体の生成を減少させることができる。
【化１６】
0005327839.tif 000012
続いて、化合物14及び15の混合物をＤＭＦに溶解し、アジ化ナトリウムを用いて６０℃で反応させて末端にアジド基を持つシアル酸誘導体16へ変換し、さらに、メタノール中ナトリウムメトキシドを用いたＺｅｍｐｌeｎ条件下、脱Ｏ−アセチル化を行うことにより、シアル酸誘導体17を得ることができる。17を水素置換下、メタノール中、５％水酸化パラジウム存在下でアミン体18へ変換し、炭酸ナトリウム、アクリル酸クロリドによるアクリロイル化を行い、次いで、アセチル化によりヘキシル基をリンカーとして持つシアル酸誘導体19を合成する。
【化１７】
0005327839.tif 000013
【００２０】
得られたＯ−アセチルシアル酸誘導体19をメタノールに溶解し、ナトリウムメトキシドの存在下で反応させ、脱保護を行いシアル酸誘導体化合物（Ｉｃ）を合成することができる。
【００２１】
本発明の化合物を有効成分として含有せしめることにより、ウィルス感染、特に、インフルエンザウィルス感染の予防及び治療のための抗ウィルス剤を調製することができる。
上記薬剤は、本発明の化合物、その薬剤上許容される塩又はそれらの水和物のうち、１又は複数の種類を含有してもよい。また、一般式（Ｉ）で示される本発明の化合物を製剤化する場合には、製剤中、通常、０．１〜５０質量％、好ましくは、０．５〜２０質量％となるように含有される。
【００２２】
本発明の化合物は、生体に対して悪影響を及ぼさない医薬組成物の形態で特定の疾患の治療薬として使用することができる。通常、そのような組成物には、本発明の化合物の他、薬剤上許容される担体が含まれる。
「薬剤上許容される担体」は、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、アイソトニックに作用して吸着を遅らせる薬剤及びその類似物を含み、薬剤的投与に適するもののことである。該担体及び該担体を希釈するために好ましいものの例には、限定はしないが、水、生理食塩水、フィンガー溶液、デキストロース溶液、コラーゲン、ヒト血清アルブミン、有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース等などが含まれる。また、リポソーム及び不揮発性油などの非水溶性媒体も用いられる。さらに、本発明の化合物の活性を保護又は促進するような特定の化合物が、該組成物中に包含されていてもよい。
【００２３】
本発明に係る薬剤は、皮内、皮下、経口（例えば、吸入なども含む）、経皮及び経粘膜への投与を含み、治療上適切な投与経路に適合するように製剤化される。非経口、皮内、又は皮下への適用に使用される溶液又は懸濁液には、限定はしないが、注射用の水などの滅菌的希釈液、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒、ベンジルアルコール又は他のメチルパラベンなどの保存剤、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなどの無痛化剤、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩などの緩衝剤、塩化ナトリウム又はデキストロースなど浸透圧調製のための薬剤を含んでもよい。
ｐＨは塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調製することができる。非経口的標品はアンプル、ガラスもしくはプラスチック製の使い捨てシリンジ又は複数回投与用バイアル中に収納される。
【００２４】
点鼻用薬剤として使用する場合、液剤、ゲル状剤、エアゾール剤等として使用することができ、この場合、担体として、高級アルコール（例えば、オクチルドデカノール等）、脂肪酸エステル（例えば、ミリスチン酸イソプロピル）、懸濁化剤（例えば、ポリソルベート８０）の他グリセリンプロパーノールなどの安定化剤などを使用することができる。
また、軟膏剤、クリーム剤として使用する場合には、担体として、ワセリン、流動パラフィン、スクワラン、セタノール、ステアリルアルコール等、当業者によって容易に選択可能な物質を使用することができる。
【００２５】
経口組成物には、不活性な希釈剤又は体内に取り込んでも害を及ぼさない担体が含まれる。経口組成物には、例えば、ゼラチンのカプセル剤に包含されるか、加圧されて錠剤化される。経口的治療のためには、活性化合物は賦形剤と共に取り込まれ、錠剤、トローチ又はカプセル剤の形態で使用される。また、経口組成物は、流動性担体を用いて調製することも可能であり、流動性担体中の該組成物は経口的に適用される。さらに、薬剤的に適合する結合剤、及び／又はアジュバント物質などが包含されてもよい。
錠剤、丸薬、カプセル剤、トローチ及びその類似物は以下の成分又は類似の性質を持つ化合物の何れかを含み得る：微結晶性セルロースのような賦形剤、アラビアゴム、トラガント又はゼラチンなどの結合剤；スターチ又はラクトースなどの、アルギン酸、ＰＲＩＭＯＧＥＬ、又はコーンスターチなどの膨化剤；ステアリン酸マグネシウム又はＳＴＲＲＯＴＥＳなどの潤滑剤；コロイド性シリコン二酸化物などの滑剤；スクロース又はサッカリンなどの甘味剤；又はペパーミント、メチルサリチル酸又はオレンジフレイバーなどの香料添加剤。
【００２６】
本発明の化合物によるウィルス感染症の予防又は治療において、適切な投与量レベルは、投与される患者の状態、投与方法等に依存するが、当業者であれば、容易に最適化することが可能である。
注射投与の場合は、例えば、一日に患者の体重あたり約０．１μｇ／ｋｇから約５００ｍｇ／ｋｇを投与するのが好ましく、一般に一回又は複数回に分けて投与され得るであろう。好ましくは、投与量レベルは、一日に約０．１μｇ／ｋｇから約２５０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは一日に約０．５μｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇである。
経口投与の場合は、組成物は、好ましくは１．０から１０００ｍｇの活性成分を含む錠剤の形態で提供され、好ましくは活性成分が１．０，５．０，１０．０，１５．０，２０．０，２５．０，５０．０，７５．０，１００．０，１５０．０，２００．０，２５０．０，３００．０，４００．０，５００．０，６００．０，７５０．０，８００．０，９００．０及び１０００．０ｍｇである。化合物は一日に１〜４回の投与計画で、好ましくは一日に一回又は二回投与される。
また、点鼻、粘膜への塗布の場合には、適宜、適量を点鼻又は塗布することで投与量を調節することができる。
【００２７】
さらに、本発明には、ウィルス感染、特に、インフルエンザウィルスに感染した、又は感染する危険性のある哺乳動物の該感染症に関する予防又は治療方法も含まれる。
ここで「治療」とは、ウィルスに感染するおそれがあるか又は感染した哺乳動物において、該感染症の病態の進行を阻止又は緩和することを意味し、治療的処置のみならず予防的処置をも含む広い意味として使用される。
【００２８】
さらに、本発明の抗ウィルス剤をウィルスによる感染症の予防又は治療の用途に用いる場合において、例えば、衛生用品としてのスプレー剤としての用途に関しては、医薬製剤として、点鼻薬、軟膏等の製剤化に準じて製造することができる。また、本発明の抗ウィルス剤を空気清浄機のフィルター又はマスクへの充填に利用する場合には、本発明の化合物の活性を損なうことなく、シート又は繊維等に塗布又は担持させることで使用することができる。
【００２９】
以下に実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００３０】
〔合成例１〕５−アクリルアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノソ酸（Ｉａ）の合成
メチル−５−アセトアミド−２，４，７，８，９−ペンタ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノソネート（２）
Ｎ−アセチルノイラミン酸１（１．７５ｇ，５．６６ｍｍｏｌ）をピリジン（１８ｍＬ）に溶解し、攪拌氷冷した。無水酢酸（１３ｍＬ，１４１．５０ｍｍｏｌ）を滴下後、反応液を室温に戻して一晩攪拌した。反応液を濃縮し、メタノール−ジエチルエーテル（１０ｍＬ−１０ｍＬ）に溶解した。氷冷後、ジアゾメタンエーテル溶液を滴下した。ＴＬＣで反応が完全に進行したのを確認後、酢酸を加え余剰量のジアゾメタンの処理を行った。反応液を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー［酢酸エチル］で精製し、シアル酸メチル完全アセチル化体２（２．６７ｇ，８８．２５％）を得た。
【表１】
0005327839.tif 000014
【００３１】
メチル（ドデシル−５−アセトアミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−２−チオ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）オネート（３）
シアル酸アセテート２（０．５０ｇ，０．９４ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解し、１−ドデカンチオール（８９８μＬ，３．７５ｍｍｏｌ）を加え氷冷後、ボロントリフルオリドエチルエーテル錯体（３６７μＬ，２．９２ｍｍｏｌ）を加え室温に戻し、３時間攪拌した。反応液を冷飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順にクロロホルムを用いて抽出を行い、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。この有機層をろ過し、ろ液を濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー［トルエン−酢酸エチル  １：２  （ｖ／ｖ）］で精製し、チオラウリルグリコシド３（０．５２ｇ，８１．３３％）を得た。     
【表２】
0005327839.tif 000015
【００３２】
メチル（ドデシル−５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−２−チオ−β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）オネート（５）
β−チオラウリルグリコシド体４（０．２０ｇ，０．３０ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（６．５０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和後、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮後、残査に目的とするβ−脱−Ｏ−アセチル化メチルエステル体５（ｑｕａｎｔ．）を得た。
Ｒｆ  ０．６９［２：１（ｖ／ｖ）クロロホルム−メタノール］
【００３３】
［メチル（ドデシル−５−アミノ−３，５−ジデオキシ−２−チオ−β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロシド）オネート］メタンサルフェート（６）
β−脱−Ｏ−アセチル化メチルエステル体５（０．１５ｇ，０．２９ｍｍｏｌ）をメタノール（１．４ｍＬ）に溶解し、メタンスルホン酸塩（３８μＬ，０．５８ｍｍｏｌ）を加え、反応液を一晩加熱還流した。室温まで冷却後、陰イオン交換樹脂ＩＲＡ−９３ＺＵ（ＯＨ−  型）で中和を行い、イオン交換樹脂を除去した。ろ液を濃縮後、残査に目的とするβ−アミンのメタンスルホン酸塩６（ｑｕａｎｔ．）を得た。
Ｒｆ  ０．４１［６５：２５：４（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−メタノール−水］
【００３４】
メチル（ドデシル−Ｎ−アクリルアミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−２−チオ−β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）オネート（８）
β−アミンメタンスルホン酸塩７（０．２７ｇ，０．４８ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、メタノールに溶解し、トリエチルアミン（５３５μＬ，３．８４ｍｍｏｌ）を滴下後、アクリル酸クロリド（１５６μＬ，１．９２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応終了後、濃縮し、ピリジン（２．５ｍＬ）、ジメチルアミノピリジン（２３ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）、無水酢酸（９０６μＬ，９．６０ｍｍｏｌ）を加え，一晩攪拌した。濃縮し、氷水を加え、１Ｍ  硫酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順にクロロホルムを用いて抽出を行った。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶液をろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン−酢エチ  ５：６  （ｖ／ｖ）］で精製し、β−Ｎ−アクリロイル体８（２６３ｍｇ，７９．７０％）を得た。
【表３】
0005327839.tif 000016
【００３５】
メチル−Ｎ−アクリルアミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロサミネート（１１）
Ｎ−アクリロイル体８（３．００ｇ，４．３６ｍｍｏｌ）を水−アセトン［１：９（ｖ／ｖ）］混合溶媒（１５ｍＬ）に溶かし、氷冷後、Ｎ−ヨードサクシンイミド（１．９６ｇ，８．７２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。氷水を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順にクロロホルムを用いて抽出を行った。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶液をろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［トルエン−酢酸エチル  １：２  （ｖ／ｖ）］で精製し、重合性Ｏ−アセチルシアル酸誘導体１１（ｑｕａｎｔ．）を得た。
【表４】
0005327839.tif 000017
【００３６】
５−アクリルアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノソ酸（Ｉａ）
重合性Ｏ−アセチルシアル酸誘導体１１（１．３６ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をメタノール（１４ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（４３ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１晩攪拌した。強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和後、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮した。残渣に０．０５Ｍ  ＮａＯＨ水溶液を加え、ＴＬＣにより反応の終了を確認後、強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮し、目的とする水溶性シアル酸誘導体（Ｉａ）を定量的に得た。
【表５】
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【００３７】
〔合成例２〕ドデシル−５−アクリルアミド−３，５−ジデオキシ−２−チオ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシドン酸（Ｉｂ）の合成
メチル（ドデシル−５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−２−チオ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）オネート
α−チオラウリルグリコシド体（１．３６ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をメタノール（１４ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（４３ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１晩攪拌した。強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和後、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮後、残査に目的とするα−脱−Ｏ−アセチル化メチルエステル体（ｑｕａｎｔ．）を得た。
Ｒｆ    ０．７３［６５：２５：４（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−メタノール−水］
【００３８】
［メチル（ドデシル−５−アミノ−３，５−ジデオキシ−２−チオ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロシド）オネート］メタンサルフェート
α−脱−Ｏ−アセチル化メチルエステル体（１．０２ｇ，２．００ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、メタンスルホン酸塩（２６０μＬ，４．００ｍｍｏｌ）を加え、反応液を二晩加熱還流した。室温まで冷却後、陰イオン交換樹脂ＩＲＡ−９３ＺＵ（ＯＨ−型）で中和を行い、イオン交換樹脂を除去した。ろ液を濃縮後、残査に目的とするα−アミンのメタンスルホン酸塩（９９０ｍｇ，８８．０８％）を得た。
Ｒｆ    ０．５２［６５：２５：４（ｖ／ｖ／ｖ）クロロホルム−メタノール−水］
【００３９】
メチル（ドデシル−Ｎ−アクリルアミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−２−チオ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）オネート（１２）
α−アミンメタンスルホン酸塩（９９０ｍｇ，１．７６ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、メタノール（１０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１．９６ｍＬ，１４．０８ｍｍｏｌ）を滴下後、アクリル酸クロリド（５７２μＬ，７．０４ｍｍｏｌ）を滴下した。さらに、トリエチルアミン（１．９６ｍＬ，１４．０８ｍｍｏｌ）とアクリル酸クロリド（５７２μＬ，７．０４ｍｍｏｌ）の滴下を２回ほど繰り返した。反応終了後、濃縮し、ピリジン（９  ｍＬ）、ジメチルアミノピリジン（８６ｍｇ，０．７０ｍｍｏｌ）、無水酢酸（３ｍＬ，３５．２０ｍｍｏｌ）を加え，一晩攪拌した。濃縮し、氷水を加え、１Ｍ  硫酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順にクロロホルムを用いて抽出を行った。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶液をろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン−酢酸エチル  ５：６  （ｖ／ｖ）］で精製し、α−Ｎ−アクリロイル体１２（７４２ｍｇ，６１．３２％）を得た。
【表６】
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【００４０】
ドデシル−５−アクリルアミド−３，５−ジデオキシ−２−チオ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシドン酸（Ｉｂ）
重合性Ｏ−アセチルシアル酸誘導体１２（６０  ｍｇ，８７．２μｍｏｌ）をメタノール（０．６ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（２ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応終了後、強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮した。残渣に０．２Ｍ  ＮａＯＨ水溶液を加え、ＴＬＣにより反応の終了を確認後、強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮し、目的とする水溶性シアル酸誘導体（Ｉｂ）（４４ｍｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。
【表７】
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【００４１】
〔合成例３〕５−（６−アクリルアミドヘキシルアミド）−３，５−ジデオキシ−２−チオ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシドン酸（Ｉｃ）
メチル（ドデシル−Ｎ−６−アジデヘキシルアミノ−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−２−チオ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）  オネート（１６）
α−アミンメタンスルホン酸塩１３（４．２６ｇ，７．６ｍｍｏｌ）をメタノール（３０ｍＬ）に溶解する。アルゴン雰囲気下、−１５℃で、トリエチルアミン（２．１ｍＬ，１５．１ｍｍｏｌ）を滴下後、ジエチルエーテル（４．８ｍＬ）で希釈した６−ブロモヘキサノイルクロリド（１．２ｍＬ，７．８ｍｍｏｌ）を滴下した。反応終了後、濃縮し、ピリジン（４９ｍＬ）、無水酢酸（１４．３ｍＬ，１５１．６ｍｍｏｌ）を加え，一晩攪拌した。濃縮し、氷水を加え、１Ｍ  硫酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順にクロロホルムを用いて抽出を行った。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶液をろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン−酢エチ  １：１  （ｖ／ｖ）］で精製し、ブロマイド体１４とクロライド体１５（２．４８ｇ，４０．２８％）を得た。得られた化合物をＤＭＦ（２４ｍＬ）に溶解する。アルゴン雰囲気下、アジ化ナトリウム（５９７ｍｇ，９．２ｍｍｏｌ）を加え、６０℃で一時間撹拌した。氷水を加え、飽和食塩水とクロロホルムを用いて抽出を行った。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶液をろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン−酢エチ  １：１  （ｖ／ｖ）］で精製し、アジド体１６（２．３７ｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。
【表８】
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【００４２】
メチル（ドデシル−Ｎ−６−アジデヘキシルアミノ−３，５−ジデオキシ−２−チオ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）  オネート（１７）
α−アジド体１６（１．７１ｇ，２．２ｍｍｏｌ）をメタノール（１７ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（４８ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１晩攪拌した。強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和後、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮後、残査に目的とするα−シアル酸誘導体１７（１．３３ｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。
Ｒｆ    ０．５２［８：１（ｖ／ｖ）クロロホルム−メタノール］
【００４３】
メチル（ドデシル−Ｎ−６−アクリロイルアミノヘキシルアミノ−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−２−チオ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシド）  オネート（１９）
α−シアル酸誘導体１７（１．３４ｇ，２．２１ｍｍｏｌ）をメタノール（１３ｍＬ）に溶解し、水酸化パラジウムカーボン（２３５ｍｇ，２．２１ｍｍｏｌ）を加え、水素置換下、室温で１晩攪拌した。溶液は活性炭ろ過して濃縮し、メタノール（８ｍＬ）に溶解する。アルゴン雰囲気下、トリエチルアミン（１．２ｍＬ，８．８４ｍｍｏｌ）を加え、１，４−ジオキサン（１．４ｍＬ）で希釈したアクリル酸クロリド（３５９μＬ，４．４２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応終了後、セライトろ過して濃縮し、ピリジン（１７ｍＬ）、無水酢酸（４．２ｍＬ，４４．５１ｍｍｏｌ）を加え，一晩攪拌した。濃縮し、氷水を加え、１Ｍ  硫酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順にクロロホルムを用いて抽出を行った。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶液をろ過して濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー［酢酸エチル］で精製し、ヘキシル基をリンカーとして持つシアル酸誘導体１９（６１０ｍｇ，３４．４６％）を得た。
【表９】
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【００４４】
５−（６−アクリルアミドヘキシルアミド）−３，５−ジデオキシ−２−チオ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−２−ノニュロピラノシドン酸（Ｉｃ）
重合性Ｏ−アセチルシアル酸誘導体１９（５０ｍｇ，６２．４μｍｏｌ）をメタノール（０．５ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１．３ｍｇ，０．８ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温下、１０時間攪拌した。反応終了後、強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮した。残渣に０．２Ｍ  ＮａＯＨ水溶液を加え、ＴＬＣにより反応の終了を確認後、強酸性陽イオン交換樹脂ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ＋型）で中和、イオン交換樹脂を除去し、ろ液を濃縮し、目的とする水溶性シアル酸誘導体（Ｉｃ）（２７ｍｇ，６９．２％）を得た。
【表１０】
0005327839.tif 000023
【００４５】
〔実験１〕赤血球凝集素阻害活性試験
本発明の化合物がインフルエンザウィルスの感染（対象細胞への侵入過程）を阻害する可能性について検討するため、ヘマグルチニンによる赤血球凝集効果に対する本発明の化合物の影響を検討した。ここでは、化合物（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）について確認を行った。
ヘマグルチニンとしては、ヒト型（Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）及びＡ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２））、トリ型（Ａ／Ｄｕｃｋ／ＨＫ／３１３／７８（Ｈ５Ｎ３））を使用した。
用いた化合物の濃度は、それぞれ１ｍＭに調整したものを順次希釈して評価した。また、ポジティブコントロールとして用いたフェツインも１ｍＭに調整したものを順次希釈して評価した。本発明の化合物のうち、化合物（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）において、有意な赤血球凝集効果の阻害活性が見出された（図１）。
【００４６】
〔実験２〕ノイラミニダーゼ活性阻害試験
次に、インフルエンザウィルスが感染細胞から遊離する際に必要なノイラミニダーゼ活性を本化合物が阻害するかどうか検討した。本実験においても、化合物（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）について確認を行った。また、ノイラミニダーゼは、ヒト型（Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）及びＡ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２））、トリ型（Ａ／Ｄｕｃｋ／ＨＫ／３１３／７８（Ｈ５Ｎ３））由来のものを用いた。用いた化合物の濃度は、それぞれ１ｍＭに調整したものを順次希釈して評価した。
その結果、いずれの化合物もヒト型（Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）及びＡ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２））、トリ型（Ａ／Ｄｕｃｋ／ＨＫ／３１３／７８（Ｈ５Ｎ３））由来のノイラミニダーゼ活性を有意に阻害することが確認された（図２）。ポジティブコントロールとして用いたオセルタミビルは、市販品を用いた。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明の化合物は、インフルエンザウィルスの細胞への感染及び感染細胞からの遊離を効果的に阻害することから、インフルエンザ感染症の予防及び／又は治療を目的とした抗インフルエンザウィルス剤の開発、並びにインフルエンザ感染症の予防及び／又は治療に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は化合物（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）の赤血球凝集阻止活性試験の結果を示す。
【図２】図２は、化合物（Ｉａ）、（Ｉｂ）及び（Ｉｃ）によるインフルエンザノイラミニダーゼ活性の阻害効果を示す。
【図１】
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【図２】
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