(57)【要約】生活習慣病をはじめとする様々な病態の予防もしくは改善するために、アディポネクチンの発現を促進し上昇させる作用を有する物質並びにその用途を提供する。シアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１つのシアニジン化合物を有効成分とするアディポネクチン発現促進剤を、アディポネクチンの薬理作用を利用した用途に用いられる医薬または食品組成物に利用する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
シアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１つのシアニジン化合物を有効成分とするアディポネクチン発現促進剤。
【請求項２】
シアニジン配糖体が、下記一般式（１）：
2004078741.tif 000028
（式中、Ｒ１は有機酸が結合していてもよい糖であり、Ｒ２及びＲ３は、同一または異なって、水素原子または有機酸が結合していてもよい糖である。）
で示されるシアニジン化合物である請求項１に記載のアディポネクチン発現促進剤。
【請求項３】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、β−Ｄ−グルコース、β−Ｄ−ガラクトース、α−Ｌ−ラムノース、β−Ｄ−キシロース、β−Ｄ−アラビノース、β−Ｄ−グルクロン酸、ルチノース、ソフォロース、ゲンチオビオース、ザンブビオース、ラムロース、ラミナリビオノース、ゲンチオトリオース、ロビノビオース、２Ｇ−グルコシルルチノース、または２Ｇ−キシロシルルチノースを含有するものである請求項２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
【請求項４】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、ｐ−クマル酸、カフェ酸、フェルラ酸、シナピン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、没食子酸、酢酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、及びリンゴ酸より選択される少なくとも１種の有機酸を結合してなる糖を含有するものである請求項２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
【請求項５】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、３位に酸素原子を介して直接β−Ｄ−グルコース（但し、当該β−Ｄ−グルコースは、有機酸が結合したものであっても、またさらに糖が結合してなるものであってもよい）が結合してなるシアニジン化合物である請求項２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
【請求項６】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、シアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドである請求項２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
【請求項７】
シアニジン化合物が、植物に由来するものである請求項１に記載のアディポネクチン発現促進剤。
【請求項８】
植物が紫イモ、赤キャベツ、紫トウモロコシ、エルダーベリー、ストロベリー、ボイセンベリー、ラズベリー、クランベリー、ブラックベリー、ブルーベリー、シソ、赤米、黒米、黒豆、ブドウ、またはハイビスカスである請求項７に記載のアディポネクチン発現促進剤。
【請求項９】
シアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１つのシアニジン化合物を有効成分とする、アディポネクチンの薬理作用を利用した用途に用いられる医薬または食品組成物（但し、シアニジン化合物がシアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドである場合は、抗肥満または抗糖尿病の用途で用いられる組成物を除く）。
【請求項１０】
シアニジン配糖体が、下記一般式（１）：
2004078741.tif 000029
（式中、Ｒ１は有機酸が結合していてもよい糖であり、Ｒ２及びＲ３は、同一または異なって、水素原子または有機酸が結合していてもよい糖である。）
で示されるシアニジン化合物である請求項９に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１１】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、β−Ｄ−グルコース、β−Ｄ−ガラクトース、α−Ｌ−ラムノース、β−Ｄ−キシロース、β−Ｄ−アラビノース、β−Ｄ−グルクロン酸、ルチノース、ソフォロース、ゲンチオビオース、ザンブビオース、ラムロース、ラミナリビオノース、ゲンチオトリオース、ロビノビオース、２Ｇ−グルコシルルチノース、または２Ｇ−キシロシルルチノースを含有するものである請求項１０に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１２】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、ｐ−クマル酸、カフェ酸、フェルラ酸、シナピン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、没食子酸、酢酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、及びリンゴ酸より選択される少なくとも１種の有機酸を結合してなる糖を含有するものである請求項１０に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１３】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、３位に酸素原子を介して直接β−Ｄ−グルコース（但し、当該β−Ｄ−グルコースは、有機酸が結合したものであっても、またさらに糖が結合してなるものであってもよい）が結合してなるシアニジン化合物である請求項１０に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１４】
一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、シアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドである請求項１０に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１５】
シアニジン化合物が、植物に由来するものである請求項９に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１６】
植物が紫イモ、赤キャベツ、紫トウモロコシ、エルダーベリー、ストロベリー、ボイセンベリー、ラズベリー、クランベリー、ブラックベリー、ブルーベリー、シソ、赤米、黒米、黒豆、ブドウ、またはハイビスカスである請求項１５に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１７】
アディポネクチンの薬理作用が生活習慣病の改善作用であって、生活習慣病の予防または改善のために用いられる請求項９に記載の医薬または食品組成物。
【請求項１８】
アディポネクチンの薬理作用が、抗肥満作用、抗糖尿病作用、抗動脈硬化作用、及び活性酸素生成抑制作用よりなる群から選択される少なくとも１つの薬理作用であって、肥満、糖尿病、動脈硬化症、高血圧症、または活性酸素に起因する病態の予防または改善のために用いられる請求項９に記載の医薬または食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、アディポネクチンの発現を促進する作用を有する組成物に関する。より詳細には、本発明は被験物（被験者）のアディポネクチン遺伝子の発現を促進若しくは増強することによって、アディポネクチンが有する各種病態に対する予防もしくは改善効果を発揮することのできる組成物に関する。
【背景技術】  高脂肪食や運動不足など、近年の生活習慣の欧米化に伴い、糖尿病、高血圧症、高脂血症、または動脈硬化症などといったいわゆる生活習慣病の増加が大きな社会問題のひとつとなっている。近年の精力的な研究の結果、かかる生活習慣病は患者固有の遺伝的な体質に基づいているものの、その病態の発現には様々な内分泌因子の産生が関与していることが解明されている。
アディポネクチンは当該内分泌因子のひとつである。アディポネクチンは、１９９６年前田らによってヒト脂肪組織から新たに分離された、動物脂肪組織に特異的に発現する分子量約３０ＫＤａ、２４４個のアミノ酸残基からなる分泌タンパクである（Ｋ．Ｍａｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２１，２８６−２８９（１９９６））。これまでにいくつかのグループの研究により、アディポネクチンの作用が明らかにされつつある。具体的には、抗肥満作用、抗糖尿病作用、抗動脈硬化作用、及び活性酸素生成の抑制作用等が知られている（Ａ．Ｈ．Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，７，９４７−９５３（２００１）；Ｔ．Ｙａｍａｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，８，１２８８−１２９５（２００２）；下村伊一郎ら，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｉｇｅｓｔ，２８（１２），１７−２０（２００２）；山内敏正，門脇孝，実験医学，２０（１２）（８月号），１７６２−１７６７（２００２）；Ｈ．Ｍｏｔｏｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３１５（２００４）２６４−２７１）。
上記文献（実験医学）には、抗動脈硬化作用は、脂肪組織から分泌されたアディポネクチンが単球の血管内皮細胞への接着を抑制し、マクロファージの脂質蓄積・泡沫化を抑制し、さらに平滑筋細胞の増殖・遊送を抑制することにより生じることが記載されている。
またアディポネクチンは、食後に脂肪細胞から分泌されＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰＫ）を活性化することにより脂肪酸酸化を促進し、食事によって過剰となった脂肪や糖分を燃やして血糖値を下げるものの、肥満によって筋肉や肝臓などに脂肪が蓄積されるとアディポネクチンを分泌する脂肪細胞の働きが弱くなり、血液中の糖分の取り込みが弱くなり、その結果糖尿病につながることが知られている。すなわち、肥満や高脂血症などの脂肪過多症と糖尿病とは、アディポネクチンの作用を介して、密接に関係している。
このようにアディポネクチンの薬理作用は徐々に解明されつつあり、それに伴って、アディポネクチンの優れた薬理作用を医薬用途に利用すべく、アディポネクチンそのもの、またはその遺伝子を医薬品として応用する試みも進んでいる。
一方、シアニジン及びその配糖体は、植物から抽出されるアントシアニン系色素の含有成分として知られている。アントシアニンには、従来より、抗酸化作用、抗変異原性作用、抗腫瘍作用、抗潰瘍作用、血流増加作用、視機能改善作用、高血圧抑制作用、肝機能障害低減作用があることが知られている（例えば「アントシアニン−食品の色と健康−」平成１２年５月１０日発行、健帛社）。
またシアニジン配糖体に関しては、特開２０００−１７８２９５号公報にシアニジン配糖体が抗腫瘍作用を有することが記載されている。当該公報には、高脂血症、動脈硬化症、糖尿病、脂肪肝または心筋梗塞などの疾患を予防したり改善するためには、シアニジン配糖体を有効成分とする食品を摂取することが望ましいことが記載されている。しかし、薬理効果が実験データで客観的に示されているのは抗腫瘍効果のみであり、肥満や抗糖尿病作用については薬理データが一切示されていない。また医学的知見に基づいても、抗腫瘍作用が肥満や上記各種疾患の改善につながるとは考えられない。
【図面の簡単な説明】  図１は、実験例１において、シアニジン化合物〔シアニジン（Ｃｙ）またはシアニジン配糖体（シアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、以下、単に「シアニジン３−グルコシド」（Ｃ３Ｇ）または「シアニジン３−Ｏ−グルコシド」ともいう〕を添加して培養した副睾丸脂肪細胞におけるアディポネクチンｍＲＮＡレベルを、シアニジン化合物に代えてＤＭＳＯのみを添加して培養した副睾丸脂肪細胞（ｃｏｎｔｒｏｌ）におけるアディポネクチンｍＲＮＡレベルと対比した図である。
【発明の開示】
前述するように、近年、脂肪組織に特異的に存在するアディポネクチンについては、高脂血症、動脈硬化症及び糖尿病等の生活習慣病の予防や改善に有効に働くことをはじめとして、優れた薬理作用が徐々に解明されつつある。ゆえに、アディポネクチンそのものだけでなく、アディポネクチンの作用を増強したり、体内におけるアディポネクチンの発現や分泌を促進する作用を有する物質は、アディポネクチンの薬理作用に基づいて生活習慣病をはじめとする様々な病態の予防もしくは改善に有効に利用できるものと考える。
本発明は、かかる考えに基づいて、アディポネクチンの発現を促進し上昇させる作用を有する物質並びにその用途を提供することを目的とするものである。
かかる状況の下で、本発明者らは鋭意研究を重ねていたところ、シアニジン及びシアニジン配糖体がアディポネクチンのｍＲＮＡの発現を促進する作用を有し、これらを用いることにより上記目的が達成できることを見いだした。本発明はかかる知見に基づくものである。
すなわち、本発明は下記の態様を含むものである。
１．シアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１つのシアニジン化合物を有効成分とするアディポネクチン発現促進剤。
２．シアニジン配糖体が、下記一般式（１）：
2004078741.tif 000002
（式中、Ｒ１は有機酸が結合していてもよい糖であり、Ｒ２及びＲ３は、同一または異なって、水素原子または有機酸が結合していてもよい糖である。）
で示されるシアニジン化合物である上記１に記載のアディポネクチン発現促進剤。
３．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、β−Ｄ−グルコース、β−Ｄ−ガラクトース、α−Ｌ−ラムノース、β−Ｄ−キシロース、β−Ｄ−アラビノース、β−Ｄ−グルクロン酸、ルチノース、ソフォロース、ゲンチオビオース、ザンブビオース、ラムロース、ラミナリビオノース、ゲンチオトリオース、ロビノビオース、２Ｇ−グルコシルルチノース、または２Ｇ−キシロシルルチノースを含有するものである上記２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
４．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、ｐ−クマル酸、カフェ酸、フェルラ酸、シナピン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、没食子酸、酢酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、及びリンゴ酸より選択される少なくとも１種の有機酸を結合してなる糖を含有するものである上記２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
５．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、３位に酸素原子を介して直接β−Ｄ−グルコース（但し、当該β−Ｄ−グルコースは、有機酸が結合したものであっても、またさらに糖が結合してなるものであってもよい）が結合してなるシアニジン化合物である上記２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
６．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、シアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドである上記２に記載のアディポネクチン発現促進剤。
７．シアニジン化合物が、植物に由来するものである上記１に記載のアディポネクチン発現促進剤。
８．植物が紫イモ、赤キャベツ、紫トウモロコシ、エルダーベリー、ストロベリー、ボイセンベリー、ラズベリー、クランベリー、ブラックベリー、ブルーベリー、シソ、赤米、黒米、黒豆、ブドウ、またはハイビスカスである上記７に記載のアディポネクチン発現促進剤。
９．シアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１つのシアニジン化合物を有効成分とする、アディポネクチンの薬理作用を利用した用途に用いられる医薬または食品組成物（但し、シアニジン化合物がシアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドである場合は、抗肥満または抗糖尿病の用途で用いられる組成物を除く）。
１０．シアニジン配糖体が、下記一般式（１）：
2004078741.tif 000003
（式中、Ｒ１は有機酸が結合していてもよい糖であり、Ｒ２及びＲ３は、同一または異なって、水素原子または有機酸が結合していてもよい糖である。）
で示されるシアニジン化合物である上記９に記載の医薬または食品組成物。
１１．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、β−Ｄ−グルコース、β−Ｄ−ガラクトース、α−Ｌ−ラムノース、β−Ｄ−キシロース、β−Ｄ−アラビノース、β−Ｄ−グルクロン酸、ルチノース、ソフォロース、ゲンチオビオース、ザンブビオース、ラムロース、ラミナリビオノース、ゲンチオトリオース、ロビノビオース、２Ｇ−グルコシルルチノース、または２Ｇ−キシロシルルチノースを含有するものである上記１０に記載の医薬または食品組成物。
１２．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、糖として、ｐ−クマル酸、カフェ酸、フェルラ酸、シナピン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、没食子酸、酢酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、及びリンゴ酸より選択される少なくとも１種の有機酸を結合してなる糖を含有するものである上記１０に記載の医薬または食品組成物。
１３．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、３位に酸素原子を介して直接β−Ｄ−グルコース（但し、当該β−Ｄ−グルコースは、有機酸が結合したものであっても、またさらに糖が結合してなるものであってもよい）が結合してなるシアニジン化合物である上記１０に記載の医薬または食品組成物。
１４．一般式（１）で示されるシアニジン配糖体が、シアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドである上記１０に記載の医薬または食品組成物。
１５．シアニジン化合物が、植物に由来するものである上記９に記載の医薬または食品組成物。
１６．植物が紫イモ、赤キャベツ、紫トウモロコシ、エルダーベリー、ストロベリー、ボイセンベリー、ラズベリー、クランベリー、ブラックベリー、ブルーベリー、シソ、赤米、黒米、黒豆、ブドウ、またはハイビスカスである上記１５に記載の医薬または食品組成物。
１７．アディポネクチンの薬理作用が生活習慣病の改善作用であって、生活習慣病の予防または改善のために用いられる上記９に記載の医薬または食品組成物。
１８．アディポネクチンの薬理作用が、抗肥満作用、抗糖尿病作用、抗動脈硬化作用、及び活性酸素生成抑制作用よりなる群から選択される少なくとも１つの薬理作用であって、肥満、糖尿病、動脈硬化症、高血圧症、または活性酸素に起因する病態の予防または改善のために用いられる上記９に記載の医薬または食品組成物。
以下、本発明について説明する。
（１）アディポネクチン発現促進剤
本発明は、シアニジンまたはシアニジン配糖体（以下、本明細書ではこれらを総称して「シアニジン化合物」ともいう）を有効成分とするアディポネクチン発現促進剤である。
本発明においてアディポネクチン発現促進剤とは、アディポネクチンの遺伝子の発現量（ｍＲＮＡの発現量）を増加させる作用を有するものである。なお、アディポネクチンは本来的に動物の脂肪組織（脂肪細胞）に特異的に発現するタンパク質である。ゆえに、本発明のアディポネクチン発現促進剤は脂肪組織（脂肪細胞）でのアディポネクチンの発現を促進し増加させる作用を有するものであることが好ましいが、脂肪組織（脂肪細胞）における発現に限定されることなく、アディポネクチンの遺伝子の発現を促進し増加させる目的で用いられるものは本発明のアディポネクチン発現促進剤の範疇に含まれる。また、その限りにおいて本発明のアディポネクチン発現促進剤は、シアニジンまたはその配糖体からなるものであってもよいし、またこれらを含む組成物からなるものであってもよい。また剤の形状、使用目的や用途を何ら制限するものではない。
当該アディポネクチン発現促進剤の有効成分として用いられるシアニジンは、下式：
2004078741.tif 000004
で示される化合物であり、アントシアニジン配糖体色素（アントシアニン系色素）のアグリコン部分として、広く植物中に存在している。
また、シアニジンと同様にアディポネクチン発現促進剤の有効成分として用いられるシアニジン配糖体は、上記シアニジンの少なくとも３位の水酸基に糖が結合してなる構造を有するものであり、アントシアニン系色素の色素成分として、シアニジンと同様、広く植物中に存在している。
シアニジン配糖体としては、具体的には下記の一般式（１）で示される化合物を挙げることができる。
2004078741.tif 000005
ここで、シアニジンの３位に、酸素原子を介して結合したＲ１基は、糖を意味する。またシアニジンの５位及び７位に酸素原子を介して結合したＲ２基及びＲ３基は、いずれもが同時に水素原子または糖であるか、または一方が水素原子であって他方が糖である。
ここで酸素原子を介してシアニジンと結合する糖は、単糖であっても、また２糖または３糖であってもよい。単糖として、具体的にはβ−Ｄ−グルコース、β−Ｄ−ガラクトース、α−Ｌ−ラムノース、β−Ｄ−キシロース、β−Ｄ−アラビノース、及びβ−Ｄ−グルクロン酸を；２糖としてはルチノース、ソフォロース、ゲンチオビオース、ザンブビオース、ラムロース、及びラミナリビオノースを；３糖としてはゲンチオトリオース、ロビノビオース、２Ｇ−グルコシルルチノース、及び２Ｇ−キシロシルルチノースを挙げることができる。
シアニジンの３位に酸素原子を介して結合する糖は、好ましくはβ−Ｄ−グルコースである。例えば、シアニジンの３位に酸素原子を介して単糖（グルコース）が単独でグルコシド結合してなるシアニジン配糖体としては下式：
2004078741.tif 000006
で示されるシアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドを挙げることができる。
また、シアニジンの３位に酸素原子を介して２糖がグルコシド結合してなるシアニジン配糖体としては、例えば下式：
2004078741.tif 000007
で示されるシアニジン３−ソフォロシド
〔３−Ｏ−（２−Ｏ−（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）ｃｙａｎｉｄｉｎ〕、下式：
2004078741.tif 000008
で示されるシアニジン３−サンブビオシド
〔３−Ｏ−（２−Ｏ−（β−Ｄ−ｘｙｌｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）ｃｙａｎｉｄｉｎ〕、及び下式：
2004078741.tif 000009
で示されるシアニジン３−Ｏ−ルチノシド
〔３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）ｃｙａｎｉｄｉｎ〕を挙げることができる。
なお、シアニジンに結合する糖は、上記に種々掲げる糖の主として６位の水酸基に有機酸が単独または複数個エステル結合したものであってもよい。かかる有機酸としては、ｐ−クマル酸、カフェ酸、フェルラ酸及びシナピン酸等のヒドロキシケイ皮酸類；ｐ−ヒドロキシ安息香酸や没食子酸などのヒドロキシ安息香酸類：などの芳香族有機酸；ならびに酢酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、及びリンゴ酸等の脂肪族有機酸を例示することができる。
具体的には、下式で示される、マロン酸が６位にエステル結合したグルコースが単独でシアニジンの３位に酸素を介してグルコシド結合してなるシアニジン配糖体〔３−Ｏ−（６−Ｏ−ｍａｌｏｎｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）ｃｙａｎｉｄｉｎ〕を例示することができる；
2004078741.tif 000010
また、糖の結合部位はシアニジンの３位に限らず、３位以外の１乃至複数箇所であってもよい。例えば結合部位として、シアニジンの５位、７位、３位と５位、３位と７位、５位と７位、または３位と５位と７位を挙げることができる。このようにシアニジンの複数箇所に糖が結合してなるシアニジン配糖体の具体例として、下式：
2004078741.tif 000011
で示されるシアニジン化合物を挙げることができる。
ここでＲ４及びＲ５はいずれも同時に水素原子（この場合のシアニジン化合物は、シアニジン３−ソフォロシド−５−グルコシドである）または有機酸部であってもよいし、また少なくとも一方が水素原子であって、他方が有機酸部であってもよい。例えば、Ｒ４及びＲ５の両方が有機酸部である場合の具体例として、下式：
2004078741.tif 000012
で示される、Ｒ４がカフェ酸部であって、Ｒ５がフェルラ酸部であるシアニジン化合物
〔３−Ｏ−（２−Ｏ−（６−Ｏ−（Ｅ）−ｆｅｒｕｌｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−６−Ｏ−（Ｅ）−ｃａｆｆｅｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−５−Ｏ−（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）ｃｙａｎｉｄｉｎ〕を挙げることができる。
なお、これらのシアニジン化合物は、例えば、紫イモ（Ｉｐｏｍｏｅａ  ｂａｔａｔａｓ  Ｐｏｉｒ）；赤キャベツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  Ｌ．ｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ  Ｌ．）；紫トウモロコシ（Ｚｅａｍａｙｓ  Ｌ．）；エルダーベリー（Ｓａｍｂｕｃｕｓ  ｃａｅｒｕｌｅａ  Ｒａｆｉｎ．，Ｓ．ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ  Ｌ．，Ｓ．ｎｉｇｒａ  Ｌ．）、ストロベリー（Ｆｒａｇａｒｉａ  Ｘ  ａｎａｎａｓｓａ  Ｄｕｃｈｅｓｎｅ）、ボイセンベリー（Ｒｕｂｕｓ  ｓｔｒｉｇｏｏｓｕｓ  Ｍｉｃｈｘ．）、ラズベリー〔Ｒｕｂｕｓ  ｉｄａｅｕｓ  Ｌ．（レッドラズベリー）、Ｒ．ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ  Ｌ．（ブラックベリー）〕、クランベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍａｃｒｏｃａｒｐｏｎ  Ａｉｔ．）、及びブルーベリー〔例えば、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｃｏｒｙｍｂｏｓｕｍ  Ｌ．（ハイブッシュブルーベリー）、Ｖ．ａｓｈｅｉ  Ｒｅａｄｅ（ラビットアイブルーベリー）、Ｖ．ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ  Ｌ．（ホワートルベリー）等が含まれる〕等のベリー類；シソ（Ｐｅｒｉｌｌａ  ｏｃｉｍｏｉｄｅｓ（ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｃｅ）Ｌ．ｖａｒ  ｃｒｉｓｐａ）；赤米（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ  Ｌ．）；黒米（Ｏｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａ  Ｌ．）及び黒豆〔例えば、大豆（Ｇｌｕｃｉｎｅ  ｍａｘ  Ｍｅｒｒｉｌｌ）、インゲン豆（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｖｕｌａｇａｒｉｓ  Ｌ．）、エンドウ豆（Ｐｉｓｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ  Ｌ．）、小豆（Ｐｉｓｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ  Ｌ．）、ササゲ（Ｖｉｇｎａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｓａｖｉ）等が含まれる〕などの穀類；ブドウ〔Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ  Ｌ．（ヨーロッパ種）、Ｖ．ｌａｂｒｕｓｃａ  Ｌ．（アメリカ種）〕；並びにハイビスカス（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  ｓａｂｄａｒｉｆｆａ  Ｌ．ｖａｒ  ｓａｂｄａｒｉｆｆａ）などの植物に含まれていることが知られている。
例えば、紫イモの塊根には、下式及び表１に示されるシアニジン化合物が含まれている。
2004078741.tif 000013
2004078741.tif 000014
表中、「Ｈ」とは水素原子、「Ｃａｆ」とはカフェ酸、「ｐＨＢ」とはｐ−ヒドロキシ安息香酸、「Ｆｅｒ」とはフェルラ酸を意味する。また、表の「ＰＳＰ」は「Ｐｕｒｐｌｅ  Ｓｗｅｅｔ  Ｐｏｔａｔｏ（紫イモ）」の略であり、便宜上、本発明者が付けた符号である。
また、赤キャベツの葉には、下式及び表２に示されるシアニジン化合物が含まれている。
2004078741.tif 000015
2004078741.tif 000016
表中、「Ｈ」とは水素原子、「Ｓｉｎ」とはシナピン酸、「ｐＣ」とはｐ−クマル酸、「Ｆｅｒ」とはフェルラ酸、及び「Ｓｉｎ−Ｇｌｃ」とはシナピン酸が結合したグルコースを意味する。また、表の「ＲＣ」は「Ｒｅｄ  Ｃａｂｂａｇｅ（赤キャベツ）」の略であり、便宜上、本発明者が付けた符号である。
また、シソの葉には、下式及び表３に示されるシアニジン化合物が含まれている。
2004078741.tif 000017
2004078741.tif 000018
表中、「Ｈ」とは水素原子、「Ｍａ」とはマロン酸を意味する。また、表の「Ｓｈｉｓｏｎｉｎ」及び「Ｍａｌｏｎｙｌｓｈｉｓｏｎｉｎ」は、いずれもシソに含まれる主要なアントシアニンの名称（「シソニン」「マロニルシソニン」）である。
さらにエルダーベリーの果実には下式及び表４に示されるシアニジン化合物が含まれている。
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表中、「Ｈ」とは水素原子、「Ｇｌｃ」とはグルコース、「Ｘｙｌ」はキシロースを意味する。また、表の「ＥＢ」は「Ｅｌｄｅｒｂｅｒｒｙ（エルダーベリー）」の略であり、便宜上、本発明者が付けた符号である。
また、紫トウモロコシの種子、芯、ブドウの果皮、ハイビスカスの花弁及びガク部には、３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ  ｃｙａｎｉｄｉｎが含まれている。
本発明のアディポネクチン発現促進剤は、有効成分として前述するシアニジン及びシアニジン配糖体を１種単独で含有していてもよいし、また２種以上を任意に組み合わせて含むものであってもよい。特に制限されないが、シアニジン配糖体として好ましくはシアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド（ｃｙａｎｉｄｉｎ３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）である。
これらのシアニジン並びにシアニジン配糖体の中には、当該分野で公知の方法に従って半合成法または合成法によって得ることができるものもあるが、通常は、植物を材料として得ることもできる。なお、シアニジン、シアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、シアニジン３，５−ジ−Ｏ−グルコシド、シアニジン３−Ｏ−ルチノシドは商業的に入手が可能である。
植物からシアニジン並びにシアニジン配糖体を得る場合、その材料となる植物としてはシアニジンまたはシアニジン配糖体を含むものであれば特に制限されない。例えば、前述する紫イモ；赤キャベツ；紫トウモロコシ；エルダーベリー、ストロベリー、ボイセンベリー、ラズベリー、クランベリー、ブラックベリー及びブルーベリー等のベリー類；シソ；赤米；黒米及び黒豆などの穀類；ブドウ；並びにハイビスカスなどを挙げることができる。
シアニジン並びにシアニジン配糖体を得るために、これらの植物は、通常シアニジンまたはシアニジン配糖体を含む各部位、例えば塊根、茎、葉、根、花弁、果実または種子などの部分が用いられるが、植物体全部を用いてもよい。また、シアニジンまたはシアニジン配糖体を含む組織の培養細胞を用いることもできる。シアニジンまたはシアニジン配糖体を含む植物部位としては、例えば紫トウモロコシでは種子や芯、赤キャベツやシソでは葉、紫イモでは塊根、ベリー類では果実、ブドウでは果皮や果汁、米や豆類では種子、及びハイビスカスでは花弁やがく部を好適に例示することができる。
植物からシアニジンまたはシアニジン配糖体（シアニジン化合物）を得る方法は、特に限定されないが、通常シアニジン化合物を含有する植物抽出液に対して、吸着処理、イオン交換処理、ｐＨ調整処理、抽出処理、膜分離処理、または塩析出処理等の慣用の精製処理を１種または２種以上、適宜組み合わせて行うことによって実施することができる。
シアニジン化合物を含有する植物抽出液は、具体的には、上記原料植物を、例えば硫酸、塩酸、リン酸、硝酸等の無機酸又はクエン酸、リンゴ酸、酢酸、乳酸等の有機酸を用いてｐＨが約１〜５、好ましくはｐＨ約１〜４の範囲になるように調整した酸性の水性溶媒中に浸漬して、シアニジン化合物を含有する画分を抽出する方法を挙げることができる。この際、植物は、そのまま用いてもよいし、適当な大きさに切断もしくは破砕して用いてもよい。また植物はこれらの種々の形態の乾燥物として用いることもできる。
抽出に用いる水性溶媒としては、水、または水と水と相溶性のある有機溶媒との混合液を挙げることができる。かかる有機溶媒として好適にはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ヘキサノール及びヘプタノール等の炭素数１〜６、好ましくは１〜４の低級アルコールを挙げることができる。好ましくは水または水とエタノールとの混合液（含水エタノール）である。
抽出方法は特に制限されないが、原料植物を上記水性溶媒に、一晩または数〜数十時間（例えば４〜１２時間）、冷浸又は温浸して抽出する方法、パーコレーション法を例示することができる。
斯くして得られる抽出物は、次いで濾過、共沈または遠心分離等の慣用の固液分離法に供して固形物を除去した後、濾液（上清）をシアニジン化合物含有植物抽出液（水溶性抽出物）として回収する。
このようにして得られる植物抽出液は、シアニジン化合物（シアニジン、シアニジン配糖体）のほか、その他の夾雑物を含んでいる。このため、次いで必要に応じて濃縮した後、例えば吸着処理、イオン交換処理、膜分離処理、ｐＨ調整処理、抽出処理、または塩析出処理等の慣用の精製処理に供される。これらの精製処理は任意に組み合わせて行うことができ、また一つの処理を同一もしくは異なる条件で繰り返し実施することもできる。
吸着処理としては、活性炭、シリカゲルまたは多孔質セラミックなどによる吸着処理、及び非イオン性吸着樹脂等の各種の合成樹脂による吸着処理を挙げることができる。
非イオン性吸着樹脂により抽出物を精製する場合は、例えばスチレン系のデュオライトＳ−８６１（商標Ｄｕｏｌｉｔｅ，Ｕ．Ｓ．Ａ．ダイヤモンド・シャムロック社製、以下同じ）、デュオライトＳ−８６２、デュオライトＳ−８６３又はデュオライトＳ−８６６；芳香族系のセパビーズＳＰ７０（商標、三菱化学（株）製、以下同じ）、セパビーズＳＰ７００、セパビーズＳＰ８２５、セパビーズＳＰ２０７；ダイヤイオンＨＰ１０（商標、三菱化学（株）製、以下同じ）、ダイヤイオンＨＰ２０、ダイヤイオンＨＰ２１、ダイヤイオンＨＰ４０、及びダイヤイオンＨＰ５０；あるいはアンバーライトＸＡＤ−４（商標、オルガノ製、以下同じ）、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−２０００を用いることができる。
イオン交換処理は、陽イオン交換樹脂または陰イオン交換樹脂などの慣用の樹脂を用いて常法に従って実施することができる。例えば、陽イオン交換樹脂としては、ダイヤイオンＳＫ１Ｂ（商標、三菱化学（株）製、以下同じ）、ダイヤイオンＳＫ１０２、ダイヤイオンＳＫ１１６、ダイヤイオンＰＫ２０８、ダイヤイオンＷＫ１０、ダイヤイオンＷＫ２０などを、また陰イオン交換樹脂として、ダイヤイオンＳＡ１０Ａ（商標、三菱化学（株）製、以下同じ）、ダイヤイオンＳＡ１２Ａ、ダイヤイオンＳＡ２０Ａ、ダイヤイオンＰＡ３０６、ダイヤイオンＷＡ１０、ダイヤイオンＷＡ２０などを例示することができる。
膜分離処理とは、膜による濾過方法を広く意味するものであり、例えばメンブランフィルター膜、限外濾過膜、逆浸透膜、及び電気透析膜などの機能性高分子膜を用いた濾過処理を挙げることができる。
ｐＨ調整処理は、植物抽出液または上記各種処理が施された処理液を所望のｐＨ条件下に曝すことによって実施することができる。好ましくは抽出液または処理液をｐＨ１〜４、好ましくはｐＨ１〜３の酸性条件下に曝す酸処理である。
また抽出処理としては、炭酸ガス、エチレン、プロパン等を植物抽出液または上記各種処理が施された処理液に臨界点以上の温度、圧力下の密閉系装置内で接触させる方法を挙げることができる。
なお、植物中に含まれるシアニジン化合物の分析方法、並びに単離したシアニジン化合物の構造決定方法は既に確立されている（例えば、「新版・食用天然色素」第９７−１２８頁、平成１３年３月２２日発行、発行元：光琳参照こと）。よって、上記植物からのシアニジン化合物の精製単離は、かかる公知の分析方法を利用して、さらに質量分析（ＭＳ）、ＮＭＲ及び加水分解後の糖分析法を組み合わせて進めることができ、また確認することができる。またシアニジン化合物のうち、前述するようにシアニジン、シアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、シアニジン３，５−ジ−Ｏ−グルコシド、シアニジン３−Ｏ−ルチノシドは、単品製品として商業的に入手可能であるから、該製品を対照標品若しくは指標として、精製単離を進めることもできる。
本発明のアディポネクチン発現促進剤の有効成分は、必ずしも精製されたシアニジン化合物である必要はなく、本発明の効果を損なわないことを限度として、粗精製のシアニジン化合物であってもよい。かかる粗精製のシアニジン化合物としては、シアニジン化合物を含有する上記植物抽出液またはその精製処理画分を挙げることができる。
本発明のアディポネクチン発現促進剤は、有効成分として上記のシアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１種を含有するものであればよく、その形状や用途によって限定されるものではない。好ましくはヒトや動物に経口的または非経口的に投与する目的で用いられ、投与経路に応じた形態に調製されてなるものである。なお、製剤中に含まれるシアニジン化合物の割合（総量として）は、用途や投与経路に応じてアディポネクチン発現促進剤１００重量％中、０．０２〜１００重量％の範囲から適宜選択調整することができる。
製剤の具体的な形態としては、被験物（被験者）が取り込むことのできる（摂取できる）形態であればよく、散剤、錠剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、チュアブル、液剤、シロップ剤等の経口投与用の形態、または注射剤、点滴剤、坐剤、貼付剤、クリーム、軟膏、ローション（液剤）等の非経口投与用の形態を挙げることができる。これらの形態には、当該分野で公知の固体又は液体の賦形剤を用いて常法により製造することができる。固体の賦形剤としては、例えば、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ゼラチン、澱粉、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成ならびに天然のケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母が挙げられる。また、液体の賦形剤としては水、グリセリン、プロピレングリコール、単シロップ、エタノール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトールが挙げられる。
また、本発明のアディポネクチン発現促進剤は、所望によりクエン酸、リン酸、リンゴ酸又はそれらの塩などの安定化剤；スクラロース、アセスルファムカリウムなどの高甘味度甘味料やショ糖、果糖などの甘味剤；アルコール類、グリセリンなどの防腐剤；粘滑剤、希釈剤、緩衝剤、着香剤及び着色剤のような通常の添加剤を配合することができる。
（２）アディポネクチンの薬理作用を利用した医薬または食品組成物
また、本発明は上記シアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１つのシアニジン化合物を有効成分とする、アディポネクチンの薬理作用を利用した医薬または食品組成物を提供する。
当該医薬または食品組成物は、前述するシアニジン化合物（シアニジン、シアニジン配糖体）のアディポネクチン発現促進作用を利用したものである。すなわち、シアニジン化合物によりヒトまたは動物（ヒト以外）の脂肪組織内でのアディポネクチンの発現を促進させ、それに伴って上昇（活性化）したアディポネクチンの薬理作用を医薬用途または健康維持・増進等を主目的とした食品用途に応用しようとするものである。
有効成分として用いるシアニジン化合物としては、（１）の項で前述したものを挙げることができ、精製されたものであっても粗精製物であってもよい。粗精製物としてはシアニジン化合物を含有する植物抽出液またはその精製処理画分を挙げることができる。
アディポネクチンの薬理作用としては、従来、抗肥満作用、抗糖尿病作用、抗動脈硬化作用、及び活性酸素生成の抑制作用等が知られている（Ａ．Ｈ．Ｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，７，９４７−９５３（２００１）；Ｔ．Ｙａｍａｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，８，１２８８−１２９５（２００２）；下村伊一郎ら，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｉｇｅｓｔ，２８（１２），１７−２０（２００２）；山内敏正，門脇孝，実験医学，２０（１２）（８月号），１７６２−１７６７（２００２）；Ｈ．Ｍｏｔｏｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３１５（２００４）２６４−２７１）。ここで肥満、糖尿病、動脈硬化症、及びこれに基づく高血圧症は生活習慣病の病態の例である。ゆえにアディポネクチンの好適な薬理作用として、生活習慣病の予防・改善作用を挙げることができる。さらに本発明が対象とするアディポネクチンの薬理作用には、上記の従来公知の薬理作用だけでなく、将来解明される薬理作用が含まれる。
本発明が対象とする医薬組成物は、有効成分として上記のシアニジン及びシアニジン配糖体よりなる群から選択される少なくとも１種のシアニジン化合物を含有するものであればよく、その形状や用途によって限定されるものではない。好ましくはヒトや動物に経口的または非経口的に投与する目的で用いられ、投与経路に応じた形態に有するものである。製剤の具体的な形態としては、散剤、錠剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、チュアブル、液剤、シロップ剤等の経口投与用の形態、または注射剤、点滴剤、坐剤、貼付剤、クリーム、軟膏、ローション（液剤）等の非経口投与用の形態を挙げることができる。これらの形態には、当該分野で公知の固体又は液体の賦形剤を用いて常法により製造することができる。
本発明が対象とする食品組成物は、通常の食品より積極的な意味での保健、健康維持・増進等の目的をもった食品組成物をいい、好適には肥満、糖尿病、動脈硬化症、高血圧症などの生活習慣病の予防、治療もしくは改善、または活性酸素に起因する各種病態の予防、治療もしくは改善を目的とした健康食品として用いることができる。
例えば、食品として、澱粉、小麦粉、糖、及びシロップなどを原料とする、それ自体食品として使用可能な固体、液体又は半固形の製品、例えば食パン、フランスパン、ロールパン、蒸しパン、及びベーカリー焼成品等のパン類；うどん、冷麦、そうめん、ソバ、中華そば、スパゲッティ、マカロニ、ビーフン、はるさめ、及びワンタン等の麺類；ハードキャンディ（ボンボン、マーブル等を含む）、ソフトキャンディ（キャラメル、ヌガー、グミキャンディ、マシュマロ等を含む）、ドロップ、及びタフィー等のキャラメル類；ハードビスケット、クッキー、おかき、及び煎餅等の焼菓子類；果汁入りアイスクリーム、及びアイスキャンディ等の冷菓類；チューインガムや風船ガム等のガム類（板ガム、糖衣状粒ガム）；その他の固形製品；セパレートドレッシング、ノンオイルドレッシング、及びソース等の風味調味料；清涼飲料、炭酸飲料、果汁飲料、野菜飲料、野菜・果実飲料、アルコール飲料、粉末飲料、栄養飲料等の飲料類；コンソメスープ、ポタージュスープ等のスープ類；その他の液体製品；ゼリーやヨーグルト等のデザート類；ストロベリージャム、ブルーベリージャム、及びプレザーブ等のジャム類；その他の半固形製品を挙げることができる。本発明が対象とする食品は、上記するようなそれ自体食品として使用できるものに限らず、未加工品や半加工品も含まれる。これらの食品は、各食品の製造工程又は最終的に得られる食品にシアニジン化合物又はこれを含有する植物抽出液もしくはその精製処理画分を混合又は噴霧等することによって、上記のような目的に用いられる健康食品として調製することができる。また、本発明が対象とする食品には、粉末状、顆粒状、錠剤状、カプセル剤状及びドリンクなどの各種の形態のサプリメント食品が含まれる。
シアニジン化合物の用量は、服用する人の健康状態、投与方法及び他の剤との組み合わせなどの種々の因子により変動し得るが、体重６０ｋｇの成人に一日当たり、例えば１０〜５００ｍｇの範囲で用いることが好ましい。本発明の医薬組成物または食品組成物は、当該一日当たりの投与用量を目安としてシアニジン化合物を配合調整することができる。
【実施例】  以下、実施例を挙げて説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１：
ウイスター系雄ラット（体重１６０ｇ）を屠殺後、副睾丸脂肪組織を取り出した。これを直ちにコラゲナーゼ（シグマ社ｔｙｐｅ  ＩＩ）１１７６ｕｎｉｔ／ｍＬを含む０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／２００ｎＭアデノシン／Ｋｒｅｂｓ  Ｒｉｎｇｅｒ  ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ（ＢＳＡ−ＫＲＢＨ）の中に入れて、３７℃で９０分間保持した（以降、０．５％ＢＳＡ／３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ／２００ｎＭアデノシン／Ｋｒｅｂｓ  Ｒｉｎｇｅｒ  ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒをＢＳＡ−ＫＲＢＨと略す）。この操作により脂肪細胞を結合組織から遊離させた。その後、これをＢＳＡ−ＫＲＢＨで４回洗浄し、得られた脂肪細胞をＢＳＡ−ＫＲＢＨ培地に懸濁させた。
次いで、これにシアニジン（Ｃｙ；フナコシ株式会社）またはシアニジン３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド（以下、「シアニジン３−グルコシド」という）（Ｃ３Ｇ；フナコシ株式会社）をＤＭＳＯに溶解したものを、シアニジンまたはシアニジン３−グルコシドの最終濃度が１００μＭまたは２５０μＭとなるように、それぞれ添加した。これを５％ＣＯ２、３７℃の条件下で２４時間培養し、次いで脂肪細胞を回収した。
得られた脂肪細胞から、ＲＮＡ抽出試薬、ＩＳＯＧＥＮ（株式会社ニッポンジーン製）を用いて、その指導書（マニュアル）に記載されている方法に従って、総ＲＮＡを抽出した
（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｉｐｐｏｎｇｅｎｅ．ｊｐ／ｐａｇｅｓ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ／ｉｓｏｇｅｎ／ｇｅｎ０１．ｈｔｍｌ）。これを鋳型として、３７℃、１２０分間逆転写反応を行い、２０サイクルのＰＣＲで増幅した（ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）法）。具体的には、２．５μｇの総ＲＮＡをｏｌｉｇｏ  ｄＴプライマーと１．３ｍＭ  ｄＮＴＰ（ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ、ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）、１０ｍＭ  ＤＴＴ（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ、ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）、２００Ｕ  ＲＮａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）を含む緩衝液中で、２００Ｕ  Ｍｏｌｏｎｅｙｍｕｒｉｎｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）を用い３７℃、１２０分間の逆転写反応を行い、９４℃、２分間処理し反応を停止させた。生成したｃＤＮＡを１μＭの５’−プライマー（ＣＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＧＡＡＡＣＴＴＧＴ）および３’−プライマー（ＣＴＧＧＴＣＣＡＣＡＴＴＴＴＴＴＴＣＣＴ）を含む０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０／０．２ｍＭ  ｄＮＴＰ／２ｍＭ  ＭｇＣｌ２／７５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ８．８）中で１．５ＵのＴａｑ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（ＭＢＩ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、Ｌｉｔｈｕａｎｉａ）を用いてＰＣＲサイクル〔９４℃、３０秒（変性工程）→５８℃、３０秒（アニーリング工程）→７２℃、３０秒（伸長反応工程）のサイクル〕を２０回繰り返し、増幅させ、最後、７２℃、１０分間処理した。
ＲＴ−ＰＣＲ産物（５０２ｂｐ）を、ＤＮＡサイズマーカーとともに、１％アガロースゲルにアプライし、Ｔｒｉｓ−Ａｃｅｔａｔｅ−ＥＤＴＡ  ｂｕｆｆｅｒ中で１００Ｖ、約３０分間で電気泳動した。泳動後、ゲルを臭化エチジウム溶液に浸し、１５分間振盪し、染色した後、ゲル解析プログラムＡＴＴＯ  Ｌａｎｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  １０Ｈ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｄｅｎｓｉｔｏｇｒａｐｈ（アトー社）を用いて、蛍光強度を測定した。
結果を図１に示す。なお、図１中、コントール（ｃｏｎｔｒｏｌ）はＤＭＳＯのみを添加した副睾丸脂肪細胞のものである。また、図１のコントロールのレベルを１とした時の、Ｃｙ（シアニジン）またはＣ３Ｇ（シアニジン３−グルコシド）添加時のアディポネクチンｍＲＮＡレベルを数値化したものを表５に示す。
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図１および表５の結果から、シアニジン及びシアニジンの配糖体であるシアニジン３−グルコシドを脂肪組織に加えることにより、脂肪組織中のアディポネクチンのｍＲＮＡレベルが上昇し、アディポネクチンの発現が促進されることが確認された。
アディポネクチンは、抗肥満作用、抗糖尿病作用、及び抗動脈硬化作用などの生活習慣病に対する改善作用、並びに活性酸素生成の抑制作用があることが知られている。このことから、シアニジン及びシアニジンの配糖体は、体内でのアディポネクチンの発現を促進することにより、間接的に上記病態並びに活性酸素に起因して生じる各種病態の予防または改善に有効に用いることができると考えられる。
実施例２    アディポネクチン発現促進剤（１）
水１００Ｌと硫酸４５０ｇの混合液（ｐＨ２．３）に紫トウモロコシの芯と種子の乾燥物１０ｋｇを投入し、室温下に一夜放置して色素を抽出した。抽出後、得られた抽出物を６０メッシュ金網にて濾過（固液分離）して得られた濾液に、濾過助剤（昭和化学工業製ラヂオライト７００）を２％の割合で配合し、再度濾過して、紫トウモロコシ粗抽出液約１００Ｌを得た。
この粗抽出液を、吸着樹脂（スチレンビニルベンゼン共重合体：ダイヤイオンＨＰ２０、三菱化学（株）製）１０ＬにＳＶ＝１、温度２０℃の条件で通液し、樹脂を水３０Ｌ（ＳＶ＝１）で洗浄した。さらに、該樹脂に、３０ｖ／ｖ％エタノール／０．２ｗｔ／ｖ％クエン酸水溶液１５Ｌを通液し（ＳＶ＝１、温度２０℃）、脱離液を回収した。得られた脱離液を４０℃以下、減圧下で濃縮して、紫トウモロコシ抽出液を得た。
得られた紫トウモロコシ抽出液を、次いで、吸着樹脂セパビーズＳＰ２０７（三菱化学（株）製）１０ＬにＳＶ＝１、温度２０℃の条件下で通液し、得られた樹脂を水３０Ｌ（ＳＶ＝１）、次いで１５ｖ／ｖ％エタノール／０．２ｗｔ／ｖ％クエン酸水溶液１０Ｌ（ＳＶ＝１）で洗浄した。さらに、樹脂に２５ｖ／ｖ％エタノール／０．２ｗｔ／ｖ％クエン酸水溶液２０Ｌを通液し（ＳＶ＝１、温度２０℃）、脱離液を回収した。この脱離液を４０℃以下、減圧下で濃縮した後、噴霧乾燥し、暗赤色の粉末（紫トウモロコシ抽出物）７０ｇを得た。
当該粉末（紫トウモロコシ抽出物）に含まれるシアニジン化合物の種類及びその含有量を常法の分析手法（ＨＰＬＣ、ＭＳ、ＮＭＲ、及び加水分解後の糖分析）に従って（Ｈ．Ａｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｏｏｄｓ  ＆  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｇｒｅｄ．Ｊ．Ｊｐｎ．，１９９，４１−４５（２００２）、Ｍ．Ｍ．Ｇｉｕｓｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，４７，４６３１−４６３７（１９９９）、及び「新版・食用天然色素」（前述）参照）、分析したところ、この粉末中には、シアニジン３−グルコシドが１８．５ｗｔ／ｗｔ％、シアニジン３−（６−マロニル−グルコシド）が３．５ｗｔ／ｗｔ％、計２２．０ｗｔ／ｗｔ％のシアニジン化合物が含まれていた。
当該粉末は、そのままの状態で、またはさらにシアニジン３−グルコシド及びシアニジン３−（６−マロニル−グルコシド）の含有量を高めるように精製するか、若しくは該粉末からシアニジン３−グルコシド及びシアニジン３−（６−マロニル−グルコシド）をそれぞれ単離して、本発明のアディポネクチン発現促進剤として提供することができる。
実施例３    アディポネクチン発現促進剤（２）
実施例２において、紫トウモロコシの芯と種子の乾燥物１０ｋｇに代えて赤米１０ｋｇを用いて、実施例２と同様の方法にて、赤米よりシアニジン化合物（シアニジン３−グルコシド及びシアニジン３−（６−マロニル−グルコシド））を単離する。斯くして得られるシアニジン化合物は、本発明のアディポネクチン発現促進剤として提供することができる。
実施例４    食品組成物（１）
実施例２で調製した暗赤色の粉末（紫トウモロコシ抽出物）をアディポネクチン発現促進剤として用いて、グレープ果汁２０％入り飲料を調製した。具体的には下記の処方に従って材料を混合し、ろ過した後、２５０ｍｌのビンに充填して、８０℃で１０分間殺菌してグレープ果汁２０％入り飲料を調製した。なお、下記飲料２５０ｍｌ中には、約５０ｍｇのシアニジン化合物〔シアニジン３−グルコシド：シアニジン３−（６−マロニル−グルコシド）＝３７：７ｗｔ／ｗｔ〕が含まれている。
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実施例５    食品組成物（２）
実施例２で調製した暗赤色の粉末（紫トウモロコシ抽出物）をアディポネクチン発現促進剤として用いて、ノンシュガーキャンディを調製した。具体的には下記の処方に従って材料を混合し、加熱溶解した後、成型してノンシュガーキャンディを調製した。なお、下記キャンディ５ｇ中には、約５０ｍｇのシアニジン化合物〔シアニジン３−グルコシド：シアニジン３−（６−マロニル−グルコシド）＝３７：７ｗｔ／ｗｔ〕が含まれている。
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実施例６    食品組成物（３）
実施例２で調製した暗赤色の粉末（紫トウモロコシ抽出物）をアディポネクチン発現促進剤として用いて、ドリンクゼリーを調製した。具体的には下記の処方に従って材料を混合し、加熱溶解した後、容器に充填して、８５℃３０分間殺菌してドリンクゼリーを調製した。なお、下記ドリンクゼリー１５０ｇ中には、約１００ｍｇのシアニジン化合物〔シアニジン３−グルコシド：シアニジン３−（６−マロニル−グルコシド）＝３７：７ｗｔ／ｗｔ〕が含まれている。
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実施例７    医薬組成物
実施例２で調製した暗赤色の粉末（紫トウモロコシ抽出物）をアディポネクチン発現促進剤として用いて、下記の処方で材料を混合し、打錠機により錠剤を調製した。なお、下記錠剤１ｇ中には、約５０ｍｇのシアニジン化合物〔シアニジン３−グルコシド：シアニジン３−（６−マロニル−グルコシド）＝３７：７ｗｔ／ｗｔ〕が含まれている。
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【産業上の利用可能性】  本発明によれば、アディポネクチンの発現、特に体内でのアディポネクチンの発現を促進し上昇することによって、生体が本来もっているアディポネクチンの薬理作用を有効に利用することができる。具体的には、本発明はアディポネクチンの薬理作用に基づいて肥満、糖尿病、動脈硬化症、及びこれに基づく高血圧症などの生活習慣病、並びに活性酸素に起因する各種病態など、様々な病態の予防もしくは改善に有用である。
【配列表】
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【図１】
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【国際調査報告】
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