(57)【要約】本発明は、ＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストまたはアゴニスト、それらを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、ＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法、そのスクリーニング方法によって選択されたアンタゴニストまたはアゴニストを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、ケモカイン受容体の強結合部位に結合するアゴニストまたはアンタゴニスト、それらを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、ケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法およびそのスクリーニング方法によって選択されたアンタゴニストまたはアゴニストを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤に関する。本発明のアンタゴニストまたはアゴニストは、アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患または癌疾患の予防および／または治療剤として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストまたはアゴニスト（ただし、ＷＯ０１／４０２２７号パンフレット、ＷＯ０２／７４７６９号パンフレット、ＷＯ０２／７４７７０号パンフレットに記載された化合物およびＳＣＨ−３５１１２５は除く。）。
【請求項２】
請求の範囲１記載のアンタゴニストまたはアゴニストを含有することを特徴とするアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤。
【請求項３】
アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および癌疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、免疫抑制、癌転移、ＨＩＶ感染および後天性免疫不全症候群から選択される疾患である請求の範囲２記載の予防および／または治療剤。
【請求項４】
免疫疾患が、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群および／または移植臓器拒絶反応である請求の範囲２記載の予防および／または治療剤。
【請求項５】
ＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）細胞または膜を１〜１２回洗浄する工程、および
（ｃ）標識リガンドを加え、結合した標識リガンドの結合量を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項６】
細胞または膜を洗浄する回数が、６〜１０回である請求の範囲５記載の方法。
【請求項７】
ＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）前記（ａ）工程で調製された被験化合物と結合した細胞またはその膜画分を、標識された抗ＣＣＲ５抗体と接触させる工程、および
（ｃ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分に結合した標識された抗ＣＣＲ５抗体を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項８】
抗ＣＣＲ５抗体が、４５５３１．１１１抗体および／または４５５２３．１１１抗体である請求の範囲７記載の方法。
【請求項９】
ＣＣＲ５を発現している細胞または膜画分上に結合している化合物の占有率を測定する方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）前記（ａ）工程で調製された被験化合物と結合した細胞またはその膜画分を、標識された抗ＣＣＲ５抗体と接触させる工程、および
（ｃ）細胞または膜画分上のＣＣＲ５に結合している化合物の占有率を、化合物がＣＣＲ５と結合していない場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量を１００％とした際の、化合物がＣＣＲ５に結合している場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量の割合によって算出する工程を含むことを特徴とする測定方法。
【請求項１０】
血中のＣＣＲ５を発現している細胞上の結合部位に結合する化合物の占有率を経時的にモニターする方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物を哺乳動物に投与した後、血中のＣＣＲ５を発現している細胞含む細胞集団を分離する工程、
（ｂ）分離された細胞集団を標識された抗ＣＣＲ５抗体と接触する工程、および
（ｃ）分離された細胞上のＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の占有率を、化合物がＣＣＲ５と結合していない場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量を１００％とした際の、化合物がＣＣＲ５に結合している場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量の割合によって算出する工程を含むことを特徴とするモニター方法。
【請求項１１】
抗ＣＣＲ５抗体が、４５５３１．１１１抗体および／または４５５２３．１１１抗体である請求の範囲１０記載の方法。
【請求項１２】
ＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物を投与した際に有効性を示す投与量と投与回数を決定する方法であって、
（ａ）インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）活性測定法によりＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の阻害活性ＩＣ５０値またはＩＣ９０値を測定する工程、
（ｂ）上記（ａ）記載のＩＣ５０値またはＩＣ９０値に相当する化合物濃度でのＣＣＲ５発現細胞上のＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の占有率を請求の範囲９記載の方法により算出する工程、
（ｃ）請求の範囲１０記載のモニター方法により得られた、各投与量および各モニター時間のＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の占有率と上記（ｂ）記載の方法により得られた占有率を比較する工程を含むことを特徴とする阻害率がおよそ５０％または９０％となる投与量と投与回数を決定する方法。
【請求項１３】
インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）活性測定法が抗ＨＩＶ活性測定法である請求の範囲１２記載の方法。
【請求項１４】
請求の範囲５、７、９、１０および／または１２記載の方法によって選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物を有効成分として含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤。
【請求項１５】
免疫疾患が、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群および／または移植臓器拒絶反応である請求の範囲１４記載の予防および／または治療剤。
【請求項１６】
投与方法が、１日１回、２日１回、３日１回または数日１回、経口的または非経口的に投与することを特徴とする請求の範囲２または１４記載の予防および／または治療剤。
【請求項１７】
免疫疾患が、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群および／または移植臓器拒絶反応である請求の範囲１６記載の予防および／または治療剤。
【請求項１８】
１日１回、２日１回、３日１回または数日１回、経口的または非経口的に投与することを特徴とするＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストおよび／またはアゴニストをスクリーニングする方法。
【請求項１９】
ケモカイン受容体の強結合部位に結合するアゴニストまたはアンタゴニスト。
【請求項２０】
請求の範囲１９記載のアゴニストまたはアンタゴニストを含有することを特徴とするアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤。
【請求項２１】
アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および癌疾患が喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、免疫抑制、癌転移、ＨＩＶ感染および後天性免疫不全症候群から選択される疾患である請求の範囲２０記載の予防および／または治療剤。
【請求項２２】
ケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ケモカイン受容体発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）細胞または膜を１〜１２回洗浄する工程、および
（ｃ）標識リガンドを加え、結合した標識リガンドの結合量を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項２３】
ケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ケモカイン受容体発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）前記（ａ）工程で調製された被験化合物と結合した細胞またはその膜画分を、標識された抗ケモカイン受容体抗体と接触させる工程、および
（ｃ）ケモカイン受容体発現細胞またはその膜画分に結合した標識された抗ケモカイン受容体抗体を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法。
【請求項２４】
請求の範囲２２または２３記載の方法により選択されたケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物を有効成分として含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤。
【請求項２５】
請求の範囲１記載のアゴニストまたはアンタゴニストの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物におけるＣＣＲ５介在性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項２６】
請求の範囲１９記載のアンタゴニストまたはアゴニストの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物におけるケモカイン受容体介在性疾患の予防および／または治療方法。
【請求項２７】
請求の範囲５、７、９、１０または１２記載の方法によって選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物を有効成分として含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療方法。
【請求項２８】
ＣＣＲ５介在性疾患の予防および／または治療剤を製造するための請求の範囲１記載のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの使用。
【請求項２９】
ケモカイン受容体介在性疾患の予防および／または治療剤を製造するための請求の範囲１９記載のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの使用。
【請求項３０】
ＣＣＲ５介在性疾患の予防および／または治療剤を製造するための請求の範囲５、７、９、１０および／または１２記載の方法によって、選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、（１）ＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストおよびアゴニスト、（２）それらを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、（３）ＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法、（４）そのスクリーニング方法によって選択されたアンタゴニストおよびアゴニストを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、（５）ケモカイン受容体の強結合部位に結合するアゴニストおよびアンタゴニスト、（６）それらを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、（７）ケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法、および（８）そのスクリーニング方法によって選択されたアンタゴニストおよびアゴニストを含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤に関する。
【背景技術】  ケモカインは、内因性の白血球走化性、活性化作用を有し、ヘパリン結合性の強い塩基性蛋白質として知られている。現在では、ケモカインは、炎症、免疫反応時の特異的白血球の浸潤を制御するのみならず、発生、生理的条件下でのリンパ球のホーミング、血球前駆細胞、体細胞の移動にも関与している。
血球細胞は種々のサイトカインによって、その分化、増殖、細胞死が制御されている。生体内において炎症は局所的にみられ、リンパ球の分化、成熟等はある特定の部位で行なわれている。すなわち、必要とされる種々の細胞が、ある特定の部位に移動し、集積して、一連の炎症、免疫反応が起こる。従って、細胞の分化、増殖、死に加えて、細胞の移動も免疫系にとって必要不可欠な現象である。
生体内での血球細胞の移動は、まず、発生過程において、ＡＧＭ領域に始まる造血が胎児肝を経て、骨髄での永久造血へと移行することから始まる。更に、胎児肝、骨髄から胸腺へと、Ｔ細胞、胸腺樹状細胞の前駆細胞が移動し、胸腺環境下で細胞分化する。クローン選択を受けたＴ細胞は、二次リンパ組織へ移動し、末梢における免疫反応に関与する。抗原を捕らえて、活性化、分化した皮膚のランゲルハンス細胞は、局所リンパ節のＴ細胞領域に移動し、樹状突起細胞としてナイーブＴ細胞を活性化する。メモリーＴ細胞はリンパ管、血管を経て、再びリンパ節にホーミングする。また、Ｂ細胞、腸管上皮内Ｔ細胞、γδＴ細胞、ＮＫＴ細胞、樹状細胞は、骨髄より胸腺を経ずに移動、分化し、免疫反応に関与する。
ケモカインは、このような種々の細胞の移動に深く関与している。例えば、ＭＩＰ３β、ＳＬＣとその受容体であるＣＣＲ７は、抗原を捕らえた成熟樹状細胞が、ナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞と効率良く出会うために、これらの細胞の局所リンパ組織への移動、ホーミングにおいて重要な働きをしている。ＳＬＣの発現に欠損があるｐｌｔマウスの二次リンパ節には、抗原特異的な免疫反応を司るために必要なＴ細胞、並びに樹状細胞がほとんど観察されない（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８９（３），４５１（１９９９））。
ＭＤＣ、ＴＡＲＣとその受容体であるＣＣＲ４は、Ｔｈ２細胞の関わる免疫、炎症反応において、Ｔｈ２細胞の局所への移動に重要な働きをしている。ラット劇症肝炎モデル（Ｐ．ａｃｎｅｓ＋ＬＰＳ）において、抗ＴＡＲＣ抗体は、血中ＡＬＴ量の上昇、および肝臓中ＴＮＦα、ＦａｓＬの発現量の上昇を抑制し、更にラット致死率を改善した（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０２，１９３３（１９９８））。また、マウスＯＶＡ誘発気道過敏性モデルにおいて、抗ＭＤＣ抗体は肺間質に集積する好酸球数を減らし、気道過敏性を抑制した（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６３，４０３（１９９９））。
ＭＣＰ−１とその受容体であるＣＣＲ２は、マクロファージの炎症部位への浸潤に関与している。抗ＭＣＰ−１抗体は、ラット抗Ｔｈｙ１．１抗体腎炎モデルにおいて、糸球体への単球、マクロファージの浸潤に対する抑制効果を示した（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．，５１，７７０（１９９７））。
このように、ケモカイン受容体は、種々の特異的な細胞において、ある特定した時期に発現し、そのエフェクター細胞がケモカインの産生される個所に集積するというメカニズムを通じて、炎症、免疫反応の制御に大きく関与している。
ヒト免疫不全ウィルス（以下、ＨＩＶと略する。）感染によって引き起こされる後天性免疫不全症候群（エイズ（ＡＩＤＳ）と呼ばれている。）は、近年最もその治療法を切望されている疾患の一つである。主要な標的細胞であるＣＤ４陽性細胞にＨＩＶの感染が一度成立すると、ＨＩＶは患者の体内で増殖をくり返し、やがては免疫機能を司るＴ細胞を壊滅的に破壊する。この過程で徐々に免疫機能が低下し、発熱、下痢、リンパ節の腫脹等の様々な免疫不全状態を示すようになり、カリニ肺炎等の種々の日和見感染症を併発し易くなる。このような状態がエイズの発症であり、カボジ肉腫等の悪性腫瘍を誘発し、重篤化することはよく知られている。
現在エイズに対する各種の予防、治療方法としては、例えば、（１）逆転写酵素阻害剤やプロテアーゼ阻害剤の投与によるＨＩＶの増殖抑制、（２）免疫賦活作用のある薬物の投与による日和見感染症の予防、緩和等が試みられている。
ＨＩＶは、免疫系の中枢を司るヘルパーＴ細胞に主に感染する。その際、Ｔ細胞の膜上に発現している膜蛋白ＣＤ４を利用することは、１９８５年より知られている（Ｃｅｌｌ，５２，６３１（１９８５））。ＣＤ４分子は４３３個のアミノ酸残基からなり、成熟ヘルパーＴ細胞以外にマクロファージ、一部のＢ細胞、血管内皮細胞、皮膚組織のランゲルハンス細胞、リンパ組織にある樹状細胞、中枢神経系のグリア細胞等で発現が見られる。しかし、ＣＤ４分子のみではＨＩＶの感染が成立しないことが明らかになるにつれて、ＨＩＶが細胞に感染する際にかかわるＣＤ４分子以外の因子の存在と関与が示唆されるようになった。
１９９６年になって、ＣＤ４分子以外のＨＩＶ感染にかかわる因子としてフージン（Ｆｕｓｉｎ）という細胞膜蛋白が同定された（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２，８７２（１９９６））。このフージン（Ｆｕｓｉｎ）分子は、ストローマ細胞由来因子−１（Ｓｔｒｏｍａｌ  Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｆａｃｔｏｒ−１：ＳＤＦ−１と略する。）の受容体（すなわち、ＣＸＣＲ４である）であることが証明された。更に、インビトロでＳＤＦ−１が、Ｔ細胞指向性（Ｘ４）ＨＩＶの感染を特異的に抑制することも証明された（Ｎａｔｕｒｅ，３８２，８２９（１９９６）、Ｎａｔｕｒｅ，３８２，８３３（１９９６））。すなわち、ＳＤＦ−１がＨＩＶより先にＣＸＣＲ４に結合することによって、ＨＩＶが細胞に感染するための足掛かりを奪い、ＨＩＶの感染が阻害されたと報告された。
また同じ頃、別のケモカイン受容体であり、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１βの受容体であるＣＣＲ５も、マクロファージ指向性（Ｒ５）ＨＩＶが感染する際に利用されることが発見された（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２，１９５５（１９９６））。
従って、ＨＩＶとＣＸＣＲ４やＣＣＲ５を奪い合うことのできるもの、あるいはＨＩＶウイルスに結合し、該ウイルスがＣＸＣＲ４やＣＣＲ５に結合できない状態にさせるものは、ＨＩＶ感染阻害剤となり得るはずである。また当初、ＨＩＶ感染阻害剤として発見された低分子化合物が、実はＣＸＣＲ４のアンタゴニストであることが示された例もある（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，４，７２（１９９８））。
以上から、ケモカイン／ケモカイン受容体は、炎症、免疫疾患またはＨＩＶ感染に深く関与おり、疾患としては、例えば、各種炎症性疾患、喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー疾患（アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症等）、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、癌転移、後天性免疫不全症候群等が挙げられる。
ケモカイン／ケモカイン受容体の作用を制御する化合物として、一般式（Ａ）
2004054616.tif 000002
［式中、Ｒ１Ａは、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜１８アルキル基、
（３）Ｃ２〜１８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜１８アルキニル基、
（５）−ＣＯＲ６Ａ、
（６）−ＣＯＮＲ７ＡＲ８Ａ、
（７）−ＣＯＯＲ９Ａ、
（８）−ＳＯ２Ｒ１０Ａ、
（９）−ＣＯＣＯＯＲ１１Ａ、
（１０）−ＣＯＮＲ１２ＡＣＯＲ１３Ａ、
（１１）Ｃｙｃ１Ａ、または
（１２）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）−ＣＯＮＲ７ＡＲ８Ａ、（ｃ）−ＣＯＯＲ９Ａ、（ｄ）−ＯＲ１４Ａ、（ｅ）−ＳＲ１５Ａ、（ｆ）−ＮＲ１６ＡＲ１７Ａ、（ｇ）−ＮＲ１８ＡＣＯＲ１９Ａ、（ｈ）−ＳＯ２ＮＲ２０ＡＲ２１Ａ、（ｉ）−ＯＣＯＲ２２Ａ、（ｊ）−ＮＲ２３ＡＳＯ２Ｒ２４Ａ、（ｋ）−ＮＲ２５ＡＣＯＯＲ２６Ａ、（ｌ）−ＮＲ２７ＡＣＯＮＲ２８ＡＲ２９Ａ、（ｍ）Ｃｙｃ１Ａ、（ｎ）ケト基、および（ｏ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ２４Ａ）２から任意に選ばれる１〜５個の置換基によって置換されたＣ１〜１８アルキル基、Ｃ２〜１８アルケニル基、またはＣ２〜１８アルキニル基を表わし、
（基中、Ｒ６Ａ〜Ｒ９Ａ、Ｒ１１Ａ〜Ｒ２１Ａ、Ｒ２３Ａ、Ｒ２５ＡおよびＲ２７Ａ〜Ｒ２９Ａはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）Ｃｙｃ１、または
（６）（ａ）Ｃｙｃ１、（ｂ）ハロゲン原子、（ｃ）−ＯＲ３０Ａ、（ｄ）−ＳＲ３１Ａ、（ｅ）−ＮＲ３２ＡＲ３３Ａ、（ｆ）−ＣＯＯＲ３４Ａ、（ｇ）−ＣＯＮＲ３５ＡＲ３６Ａ、（ｈ）−ＮＲ３７ＡＣＯＲ３８Ａ、（ｉ）−ＮＲ３９ＡＳＯ２Ｒ４０Ａ、および（ｊ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ４０Ａ）２から任意に選ばれる１〜５個の置換基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、またはＣ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ７ＡとＲ８Ａ、Ｒ２０ＡとＲ２１Ａ、Ｒ２８ＡとＲ２９Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９５Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ１９５Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）、Ｒ１０Ａ、Ｒ２２Ａ、Ｒ２４ＡおよびＲ２６Ａはそれぞれ独立して、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（４）Ｃｙｃ１Ａ、または
（５）（ａ）Ｃｙｃ１、（ｂ）ハロゲン原子、（ｃ）−ＯＲ３０Ａ、（ｄ）−ＳＲ３１Ａ、（ｅ）−ＮＲ３２ＡＲ３３Ａ、（ｆ）−ＣＯＯＲ３４Ａ、（ｇ）−ＣＯＮＲ３５ＡＲ３６Ａ、（ｈ）−ＮＲ３７ＡＣＯＲ３８Ａ、（ｉ）−ＮＲ３９ＡＳＯ２Ｒ４０Ａ、および（ｊ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ４０Ａ）２から任意に選ばれる１〜５個の置換基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、またはＣ２〜８アルキニル基を表わし、
（基中、Ｒ３０Ａ〜Ｒ３７ＡおよびＲ３９Ａはそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃｙｃ１Ａ、またはＣｙｃ１Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わすか、
Ｒ３５ＡとＲ３６Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９６Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ１９６Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）、
Ｒ３８ＡおよびＲ４０Ａはそれぞれ独立して、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃｙｃ１Ａ、またはＣｙｃ１Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）
Ｃｙｃ１Ａは、Ｃ３〜１５の単環、二環、または三環式（縮合またはスピロ）炭素環、または１〜４個の窒素原子、１〜３個の酸素原子および／または１〜３個の硫黄原子を含む３〜１５員の単環、二環、または三環式（縮合またはスピロ）複素環を表わす。
ただし、Ｃｙｃ１Ａは１〜５個のＲ５１Ａによって置換されていてもよく、
Ｒ５１Ａは、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（４）ハロゲン原子、
（５）ニトロ基、
（６）トリフルオロメチル基、
（７）トリフルオロメトキシ基、
（８）ニトリル基、
（９）ケト基、
（１０）Ｃｙｃ２Ａ、
（１１）−ＯＲ５２Ａ、
（１２）−ＳＲ５３Ａ、
（１３）−ＮＲ５４ＡＲ５５Ａ、
（１４）−ＣＯＯＲ５６Ａ、
（１５）−ＣＯＮＲ５７ＡＲ５８Ａ、
（１６）−ＮＲ５９ＡＣＯＲ６０Ａ、
（１７）−ＳＯ２ＮＲ６１ＡＲ６２Ａ、
（１８）−ＯＣＯＲ６３Ａ、
（１９）−ＮＲ６４ＡＳＯ２Ｒ６５Ａ、
（２０）−ＮＲ６６ＡＣＯＯＲ６７Ａ、
（２１）−ＮＲ６８ＡＣＯＮＲ６９ＡＲ７０Ａ、
（２２）−Ｂ（ＯＲ７１Ａ）２、
（２３）−ＳＯ２Ｒ７２Ａ、
（２４）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ７２Ａ）２、または
（２５）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）Ｃｙｃ２Ａ、（ｃ）−ＯＲ５２Ａ、（ｄ）−ＳＲ５３Ａ、（ｅ）−ＮＲ５４ＡＲ５５Ａ、（ｆ）−ＣＯＯＲ５６Ａ、（ｇ）−ＣＯＮＲ５７ＡＲ５８Ａ、（ｈ）−ＮＲ５９ＡＣＯＲ６０Ａ、（ｉ）−ＳＯ２ＮＲ６１ＡＲ６２Ａ、（ｊ）−ＯＣＯＲ６３Ａ、（ｋ）−ＮＲ６４ＡＳＯ２Ｒ６５Ａ、（ｌ）−ＮＲ６６ＡＣＯＯＲ６７Ａ、（ｍ）−ＮＲ６８ＡＣＯＮＲ６９ＡＲ７０Ａ、（ｎ）−Ｂ（ＯＲ７１Ａ）２、（ｏ）−ＳＯ２Ｒ７２Ａ、および（ｐ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ７２Ａ）２から任意に選ばれる１〜５個の置換基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わす。）
（基中、Ｒ５２Ａ〜Ｒ６２Ａ、Ｒ６４Ａ、Ｒ６６ＡおよびＲ６８Ａ〜Ｒ７１Ａはそれぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜８アルキル基、（３）Ｃ２〜８アルケニル基、（４）Ｃ２〜８アルキニル基、（５）Ｃｙｃ２Ａ、または（６）Ｃｙｃ２Ａ、−ＯＲ７３Ａ、−ＣＯＯＲ７４Ａ、−ＮＲ７５ＡＲ７６Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ５７ＡとＲ５８Ａ、Ｒ６１ＡとＲ６２Ａ、Ｒ６９ＡとＲ７０Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９７Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ１９７Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）、
Ｒ６３Ａ、Ｒ６５Ａ、Ｒ６７ＡおよびＲ７２Ａはそれぞれ独立して、（１）Ｃ１〜８アルキル基、（２）Ｃ２〜８アルケニル基、（３）Ｃ２〜８アルキニル基、（４）Ｃｙｃ２Ａ、または（５）Ｃｙｃ２Ａ、−ＯＲ７３Ａ、−ＣＯＯＲ７４Ａ、−ＮＲ７５ＡＲ７６Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
（基中、Ｒ７３Ａ〜Ｒ７６Ａはそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃｙｃ２Ａ、またはＣｙｃ２Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）
Ｃｙｃ２ＡはＣｙｃ１Ａと同じ意味を表わす。
ただし、Ｃｙｃ２Ａは１〜５個のＲ７７Ａによって置換されていてもよく、
Ｒ７７Ａは、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）ハロゲン原子、
（３）ニトロ基、
（４）トリフルオロメチル基、
（５）トリフルオロメトキシ基、
（６）ニトリル基、
（７）−ＯＲ７８Ａ、
（８）−ＮＲ７９ＡＲ８０Ａ、
（９）−ＣＯＯＲ８１Ａ、
（１０）−ＳＲ８２Ａ、
（１１）−ＣＯＮＲ８３ＡＲ８４Ａ、
（１２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（１３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（１４）ケト基、
（１５）Ｃｙｃ６Ａ、
（１６）−ＮＲ１６１ＡＣＯＲ１６２Ａ、
（１７）−ＳＯ２ＮＲ１６３ＡＲ１６４Ａ、
（１８）−ＯＣＯＲ１６５Ａ、
（１９）−ＮＲ１６６ＡＳＯ２Ｒ１６７Ａ、
（２０）−ＮＲ１６８ＡＣＯＯＲ１６９Ａ、
（２１）−ＮＲ１７０ＡＣＯＮＲ１７１ＡＲ１７２Ａ、
（２２）−ＳＯ２Ｒ１７３Ａ、
（２３）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１６７Ａ）２、
（２４）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）−ＯＲ７８Ａ、（ｃ）−ＮＲ７９ＡＲ８０Ａ、（ｄ）−ＣＯＯＲ８１Ａ、（ｅ）−ＳＲ８２Ａ、（ｆ）−ＣＯＮＲ８３ＡＲ８４Ａ、（ｇ）ケト基、（ｈ）Ｃｙｃ６Ａ、（ｉ）−ＮＲ１６１ＡＣＯＲ１６２Ａ、（ｊ）−ＳＯ２ＮＲ１６３ＡＲ１６４Ａ、（ｋ）−ＯＣＯＲ１６５Ａ、（ｌ）−ＮＲ１６６ＡＳＯ２Ｒ１６７Ａ、（ｍ）−ＮＲ１６８ＡＣＯＯＲ１６９Ａ、（ｎ）−ＮＲ１７０ＡＣＯＮＲ１７１ＡＲ１７２Ａ、（ｏ）−ＳＯ２Ｒ１７３Ａ、および（ｐ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１６７Ａ）２から任意に選ばれる１〜５個の置換基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わす。）
（基中、Ｒ７８Ａ〜Ｒ８４Ａ、Ｒ１６１Ａ〜Ｒ１６４Ａ、Ｒ１６６Ａ、Ｒ１６８ＡおよびＲ１７０Ａ〜Ｒ１７２Ａはそれぞれ独立して、（ａ）水素原子、（ｂ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｃ）Ｃ２〜８アルケニル基、（ｄ）Ｃ２〜８アルキニル基、（ｅ）Ｃｙｃ６Ａ、（ｆ）Ｃｙｃ６Ａ、−ＯＲ１７４Ａ、−ＣＯＯＲ１７５Ａ、−ＮＲ１７６ＡＲ１７７Ａ、−ＣＯＮＲ１７８ＡＲ１７９Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ８３ＡとＲ８４Ａ、Ｒ１６３ＡとＲ１６４Ａ、Ｒ１７１ＡとＲ１７２Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９８Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ１９８Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）、
Ｒ１６５Ａ、Ｒ１６７Ａ、Ｒ１６９ＡおよびＲ１７３Ａはそれぞれ独立して、（ａ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｂ）Ｃ２〜８アルケニル基、（ｃ）Ｃ２〜８アルキニル基、（ｄ）Ｃｙｃ６Ａ、または（ｅ）Ｃｙｃ６Ａ、−ＯＲ１７４Ａ、−ＣＯＯＲ１７５Ａ、−ＮＲ１７６ＡＲ１７７Ａ、−ＣＯＮＲ１７８ＡＲ１７９Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わす。）
（基中、Ｒ１７４Ａ〜Ｒ１７７Ａはそれぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜８アルキル基、（３）Ｃｙｃ６Ａ、または（４）Ｃｙｃ６Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わすか、
Ｒ１７８ＡとＲ１７９Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９９Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ１９９Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）、
Ｃｙｃ６Ａは、Ｃ３〜８の単環式炭素環または１〜４個の窒素原子、１〜２個の酸素原子および／または１〜２個の硫黄原子を含む３〜８員の単環式複素環を表わす。
ただし、Ｃｙｃ６Ａは１〜５個のＲ１８０Ａによって置換されていてもよく、
Ｒ１８０Ａは、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）ハロゲン原子、
（３）ニトロ基、
（４）トリフルオロメチル基、
（５）トリフルオロメトキシ基、
（６）ニトリル基、
（７）−ＯＲ１８１Ａ、
（８）−ＮＲ１８２ＡＲ１８３Ａ、
（９）−ＣＯＯＲ１８４Ａ、
（１０）−ＳＲ１８５Ａ、または
（１１）−ＣＯＮＲ１８６ＡＲ１８７Ａを表わし
（基中、Ｒ１８１Ａ〜Ｒ１８７Ａはそれぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜８アルキル基、（３）フェニル基、または（４）フェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わすか、
Ｒ１８２ＡとＲ１８３Ａ、Ｒ１８６ＡとＲ１８７Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ２００Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わす（基中、Ｒ２００Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、フェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）。）、
Ｒ２Ａは、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）−ＯＲ９０Ａ、
（６）Ｃｙｃ３Ａ、または
（７）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）−ＯＲ９０Ａ、（ｃ）−ＳＲ９１Ａ、（ｄ）−ＮＲ９２ＡＲ９３Ａ、（ｅ）−ＣＯＯＲ９４Ａ、（ｆ）−ＣＯＮＲ９５ＡＲ９６Ａ、（ｇ）−ＮＲ９７ＡＣＯＲ９８Ａ、（ｈ）−ＳＯ２ＮＲ９９ＡＲ１００Ａ、（ｉ）−ＯＣＯＲ１０１Ａ、（ｊ）−ＮＲ１０２ＡＳＯ２Ｒ１０３Ａ、（ｋ）−ＮＲ１０４ＡＣＯＯＲ１０５Ａ、（ｌ）−ＮＲ１０６ＡＣＯＮＲ１０７ＡＲ１０８Ａ、（ｍ）Ｃｙｃ３Ａ、（ｎ）ケト基、および（ｏ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１０３Ａ）２から任意に選ばれる１〜５個の置換基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基またはＣ２〜８アルキニル基を表わし、
（基中、Ｒ９０Ａ〜Ｒ１００Ａ、Ｒ１０２Ａ、Ｒ１０４ＡおよびＲ１０６Ａ〜Ｒ１０８Ａはそれぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜８アルキル基、（３）Ｃ２〜８アルケニル基、（４）Ｃ２〜８アルキニル基、（５）Ｃｙｃ３Ａ、または（６）Ｃｙｃ３Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ９５ＡとＲ９６Ａ、Ｒ９９ＡとＲ１００Ａ、Ｒ１０７ＡとＲ１０８Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ２０１Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ２０１Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）、
Ｒ１０１Ａ、Ｒ１０３ＡおよびＲ１０５Ａはそれぞれ独立して、（１）Ｃ１〜８アルキル基、（２）Ｃ２〜８アルケニル基、（３）Ｃ２〜８アルキニル基、または（４）Ｃｙｃ３ＡまたはＣｙｃ３Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｃｙｃ３ＡはＣｙｃ１Ａと同じ意味を表わす。
ただし、Ｃｙｃ３Ａは１〜５個のＲ１０９Ａによって置換されていてもよく、
Ｒ１０９ＡはＲ５１Ａと同じ意味を表わす。）
Ｒ３ＡおよびＲ４Ａはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）−ＣＯＯＲ１２０Ａ、
（６）−ＣＯＮＲ１２１ＡＲ１２２Ａ、
（７）Ｃｙｃ４Ａ、または
（８）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）ニトリル基、（ｃ）Ｃｙｃ４Ａ、（ｄ）−ＣＯＯＲ１２０Ａ、（ｅ）−ＣＯＮＲ１２１ＡＲ１２２Ａ、（ｆ）−ＯＲ１２３Ａ、（ｇ）−ＳＲ１２４Ａ、（ｈ）−ＮＲ１２５ＡＲ１２６Ａ、（ｉ）−ＮＲ１２７ＡＣＯＲ１２８Ａ、（ｊ）−ＳＯ２ＮＲ１２９ＡＲ１３０Ａ、（ｋ）−ＯＣＯＲ１３１Ａ、（ｌ）−ＮＲ１３２ＡＳＯ２Ｒ１３３Ａ、（ｍ）−ＮＲ１３４ＡＣＯＯＲ１３５Ａ、（ｎ）−ＮＲ１３６ＡＣＯＮＲ１３７ＡＲ１３８Ａ、（ｏ）−Ｓ−ＳＲ１３９Ａ、（ｐ）−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ１４０Ａ、（ｑ）ケト基、（ｒ）−ＮＲ１４５ＡＣＯＮＲ１４６ＡＣＯＲ１４７Ａ、および（ｓ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１３３Ａ）２から任意に選ばれる１〜５個の置換基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、またはＣ２〜８アルキニル基を表わし、
（基中、Ｒ１２０Ａ〜Ｒ１３０Ａ、Ｒ１３２Ａ、Ｒ１３４Ａ、Ｒ１３６Ａ〜Ｒ１３８Ａ、Ｒ１４５ＡおよびＲ１４６Ａはそれぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜８アルキル基、（３）Ｃ２〜８アルケニル基、（４）Ｃ２〜８アルキニル基、（５）Ｃｙｃ４Ａ、または（６）Ｃｙｃ４Ａ、ハロゲン原子、−ＯＲ１４８Ａ、−ＳＲ１４９Ａ、−ＣＯＯＲ１５０Ａ、または−ＮＨＣＯＲ１４１Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ１２１ＡとＲ１２２Ａ、Ｒ１２９ＡとＲ１３０Ａ、Ｒ１３７ＡとＲ１３８Ａは一緒になって、（１）Ｃ２〜６アルキレン基、（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ２０２Ａ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ２０２Ａは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、フェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）、
Ｒ１３１Ａ、Ｒ１３３Ａ、Ｒ１３５Ａ、Ｒ１３９ＡおよびＲ１４７Ａはそれぞれ独立して、（１）Ｃ１〜８アルキル基、（２）Ｃ２〜８アルケニル基、（３）Ｃ２〜８アルキニル基、（４）Ｃｙｃ４Ａ、または（５）Ｃｙｃ４Ａ、ハロゲン原子、−ＯＲ１４８Ａ、−ＳＲ１４９Ａ、−ＣＯＯＲ１５０Ａ、または−ＮＨＣＯＲ１４１Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ１４０Ａは、水素原子、−ＣＯＯＲ１４２Ａ、または−ＳＯ２Ｒ１４３Ａを表わし、
（基中、Ｒ１４１〜Ｒ１４３はそれぞれ独立して、（１）Ｃ１〜８アルキル基、（２）Ｃ２〜８アルケニル基、（３）Ｃ２〜８アルキニル基、（４）Ｃｙｃ４Ａ、または（５）Ｃｙｃ４Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ１４８Ａ〜Ｒ１５０Ａはそれぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜８アルキル基、（３）Ｃ２〜８アルケニル基、（４）Ｃ２〜８アルキニル基、（５）Ｃｙｃ４Ａ、または（６）Ｃｙｃ４Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｃｙｃ４ＡはＣｙｃ１Ａと同じ意味を表わす。
ただし、Ｃｙｃ４Ａは１〜５個のＲ１４４Ａによって置換されていてもよく、
Ｒ１４４ＡはＲ５１Ａと同じ意味を表わす。）を表わすか
Ｒ３ＡとＲ４Ａは一緒になって、
2004054616.tif 000003
（基中、Ｒ１９０ＡおよびＲ１９１Ａはそれぞれ独立して、Ｒ３ＡまたはＲ４Ａと同じ意味を表わす。）を表わし、
Ｒ５Ａは、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃｙｃ５Ａ、または
（４）Ｃｙｃ５Ａによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。
（基中、Ｃｙｃ５ＡはＣｙｃ１Ａと同じ意味を表わす。
ただし、Ｃｙｃ５Ａは１〜５個のＲ１６０Ａによって置換されていてもよく、
Ｒ１６０ＡはＲ５１Ａと同じ意味を表わす。）］
で示されるトリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体、それらの四級アンモニウム塩、それらのＮ−オキシドまたはそれらの非毒性塩が知られている（ＷＯ０１／４０２２７号パンフレット参照）。
また、ケモカイン／ケモカイン受容体の作用を制御する化合物として、一般式（Ｂ）
2004054616.tif 000004
［式中、Ｒ１Ｂは、下記式（１）または（２）で示される基：
2004054616.tif 000005
（基中、ＧＢは、単結合、Ｃ１〜４アルキレン基、Ｃ２〜４アルケニレン基または−ＣＯ−を表わし、
ＡＢ環は、（１）Ｃ５〜１０の単環または二環式炭素環または（２）１〜２個の窒素原子および／または１〜２個の酸素原子を含む５〜１０員の単環または二環式複素環を表わし、
Ｒ６Ｂは、
（１）Ｃ１〜４アルキル基、
（２）ハロゲン原子、
（３）ニトリル基、
（４）トリフルオロメチル基、
（５）−ＯＲ８Ｂ基、
（６）−ＳＲ９Ｂ基、
（７）−ＮＲ１０ＢＲ１１Ｂ基、
（８）−ＣＯＯＲ１２Ｂ基、
（９）−ＣＯＮＲ１３ＢＲ１４Ｂ基、
（１０）−ＳＯ２ＮＲ１５ＢＲ１６Ｂ基、
（１１）−ＮＲ１７ＢＳＯ２Ｒ１８Ｂ基、
（１２）−Ｓ（Ｏ）Ｒ１９Ｂ基、
（１３）−ＳＯ２Ｒ２０Ｂ基、
（１４）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ２１Ｂ）２基、
（１５）（ａ）−ＯＲ８Ｂ基、（ｂ）−ＮＲ１０ＢＲ１１Ｂ基および（ｃ）Ｃｙｃ１Ｂから選択される１個の基によって置換されたＣ１〜４アルキル基、または
（１６）−ＮＲ２７ＢＣＯＲ２８Ｂ基を表わし、
Ｒ８Ｂ〜Ｒ１７Ｂは、それぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜４アルキル基、（３）Ｃｙｃ１Ｂ、（４）−ＯＲ２２Ｂ基、または（５）（ａ）−ＯＲ２２Ｂ基、（ｂ）−ＮＲ２３ＢＲ２４Ｂ基、（ｃ）−ＣＯＯＲ２５Ｂ基および（ｄ）Ｃｙｃ１Ｂから任意に選ばれる１個の基に置換されたＣ１〜４アルキル基を表わすか、
Ｒ１０ＢとＲ１１Ｂ、Ｒ１３ＢとＲ１４Ｂ、Ｒ１５ＢとＲ１６Ｂは、それぞれが結合する窒素原子と一緒になって、１〜２個の窒素原子および／または１個の酸素原子を含む５〜６員の単環複素環を表わし（ただし、該複素環は、Ｃ１〜４アルキル基または水酸基で置換されていてもよい。）、
Ｒ２２Ｂ〜Ｒ２５Ｂは、それぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜４アルキル基、または（３）Ｃ１〜４アルコキシ基が置換したＣ１〜４アルキル基を表わすか、Ｒ２３ＢとＲ２４Ｂは、結合する窒素原子と一緒になって、１〜２個の窒素原子および／または１個の酸素原子を含む５〜６員の単環複素環を表わし（ただし、該複素環は、Ｃ１〜４アルキル基または水酸基で置換されていてもよい。）、
Ｒ１８Ｂ〜Ｒ２１Ｂは、それぞれ独立して、Ｃ１〜４アルキル基を表わし、
Ｒ２７Ｂは、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜４アルキル基、（３）Ｃｙｃ１Ｂまたは（４）（ａ）−ＯＲ２２Ｂ基、（ｂ）−ＮＲ２３ＢＲ２４Ｂ基、（ｃ）−ＣＯＯＲ２５Ｂ基および（ｄ）Ｃｙｃ１Ｂから任意に選ばれる１個の基によって置換されたＣ１〜４アルキル基を表わし、
Ｒ２８Ｂは、（１）Ｃ１〜４アルキル基、（２）Ｃｙｃ１Ｂまたは（３）（ａ）−ＯＲ２２Ｂ基、（ｂ）−ＮＲ２３ＢＲ２４Ｂ基、（ｃ）−ＣＯＯＲ２５Ｂ基および（ｄ）Ｃｙｃ１Ｂから任意に選ばれる一個の基によって置換されたＣ１〜４アルキル基を表わし、
Ｃｙｃ１Ｂは（１）Ｃ５〜６の単環炭素環または（２）１〜２個の窒素原子および／または１個の酸素原子を含む５〜６員の単環複素環を表わし（ただし、該炭素環または複素環は、Ｃ１〜４アルコキシ基、ハロゲン原子または−ＣＯＯＲ２９Ｂ基（Ｒ２９Ｂは、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜４アルキル基、（３）Ｃｙｃ１Ｂまたは（４）（ａ）−ＯＲ２２Ｂ基、（ｂ）−ＮＲ２３ＢＲ２４Ｂ基、（ｃ）−ＣＯＯＲ２５Ｂ基および（ｄ）Ｃｙｃ１Ｂから任意に選ばれる一個の基によって置換されたＣ１〜４アルキル基を表わす。）で置換されていてもよい。）、
ＥＢは、単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＯ−または−ＣＨＯＨ−を表わし、
ＢＢ環は、（１）Ｃ５〜６の単環炭素環または（２）１〜２個の窒素原子および／または１個の酸素原子を含む５〜６員の単環複素環を表わし、
Ｒ７Ｂは、Ｃ１〜４アルキル基またはハロゲン原子を表わし、
ｎＢは、０または１〜４の整数を表わし、
ｍＢは、０または１〜４の整数を表わす。）を表わし、
Ｒ２Ｂは、
（１）Ｃ１〜４アルキル基、
（２）Ｃ２〜４アルキニル基、または
（３）（ａ）−ＯＲ３０Ｂ基、（ｂ）−ＮＲ３１ＢＲ３２Ｂ基および（ｃ）Ｃｙｃ３Ｂから選択される１個の基によって置換されたＣ１〜４アルキル基（基中、Ｒ３０Ｂ〜Ｒ３２Ｂは、それぞれ独立して、（１）水素原子、（２）Ｃ１〜４アルキル基、（３）Ｃｙｃ３Ｂまたは（４）Ｃｙｃ３Ｂによって置換されたＣ１〜４アルキル基を表わし、Ｃｙｃ３Ｂは、（１）Ｃ５〜６の単環炭素環または（２）１〜２個の窒素原子および／または１個の酸素原子を含む５〜６員の単環複素環を表わす（ただし、該炭素環または複素環は、Ｃ１〜４アルコキシ基で置換されていてもよい。）。）を表わし、
Ｒ３ＢおよびＲ４Ｂは、それぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜４アルキル基、または
（３）（ａ）Ｃｙｃ２Ｂおよび（ｂ）水酸基から任意に選択される１〜２個の基によって置換されたＣ１〜４アルキル基
（基中、Ｃｙｃ２Ｂは、（１）Ｃ５〜６の単環炭素環または（２）１〜２個の窒素原子および／または１個の酸素原子を含む５〜６員の単環複素環を表わす。）を表わすか、
Ｒ３ＢとＲ４Ｂは、一緒になって、
2004054616.tif 000006
（基中、Ｒ２６ＢはＣ１〜４アルキル基またはＣｙｃ２Ｂを表わす。）を表わし、Ｒ５Ｂは、水素原子またはＣ１〜４アルキル基を表わす。］
で示されるトリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体化合物、それらの四級アンモニウム塩、それらのＮ−オキシドまたはそれらの非毒性塩が知られている（ＷＯ０２／７４７７０号パンフレット参照）。
さらに、ヒト免疫不全ウィルス（以下、ＨＩＶと略する。）感染の予防および／または治療剤またはその感染によって引き起こされる後天性免疫不全症候群（エイズ（以下、ＡＩＤＳと略する。）と呼ばれている。）の予防および／または治療剤として、一般式（Ｃ）
2004054616.tif 000007
［式中、Ｒ１Ｃは、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜１８アルキル基、
（３）Ｃ２〜１８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜１８アルキニル基、
（５）−ＣＯＲ６Ｃ、
（６）−ＣＯＮＲ７ＣＲ８Ｃ、
（７）−ＣＯＯＲ９Ｃ、
（８）−ＳＯ２Ｒ１０Ｃ、
（９）−ＣＯＣＯＯＲ１１Ｃ、
（１０）−ＣＯＮＲ１２ＣＣＯＲ１３Ｃ、
（１１）Ｃｙｃ１Ｃ、または
（１２）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）−ＣＯＮＲ７ＣＲ８Ｃ、（ｃ）−ＣＯＯＲ９Ｃ、（ｄ）−ＯＲ１４Ｃ、（ｅ）−ＳＲ１５Ｃ、（ｆ）−ＮＲ１６ＣＲ１７Ｃ、（ｇ）−ＮＲ１８ＣＣＯＲ１９Ｃ、（ｈ）−ＳＯ２ＮＲ２０ＣＲ２１Ｃ、（ｉ）−ＯＣＯＲ２２Ｃ、（ｊ）−ＮＲ２３ＣＳＯ２Ｒ２４Ｃ、（ｋ）−ＮＲ２５ＣＣＯＯＲ２６Ｃ、（ｌ）−ＮＲ２７ＣＣＯＮＲ２８ＣＲ２９Ｃ、（ｍ）Ｃｙｃ１Ｃ、（ｎ）ケト基および（ｏ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ２４Ｃ）２から任意に選択される１〜５個の基によって置換されたＣ１〜１８アルキル基、Ｃ２〜１８アルケニル基、またはＣ２〜１８アルキニル基を表わし、
Ｒ６Ｃ〜Ｒ９Ｃ、Ｒ１１Ｃ〜Ｒ２１Ｃ、Ｒ２３Ｃ、Ｒ２５ＣおよびＲ２７Ｃ〜Ｒ２９Ｃは、それぞれ独立して
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）Ｃｙｃ１Ｃ、または
（６）（ａ）Ｃｙｃ１Ｃ、（ｂ）ハロゲン原子、（ｃ）−ＯＲ３０Ｃ、（ｄ）−ＳＲ３１Ｃ、（ｅ）−ＮＲ３２ＣＲ３３Ｃ、（ｆ）−ＣＯＯＲ３４Ｃ、（ｇ）−ＣＯＮＲ３５ＣＲ３６Ｃ、（ｈ）−ＮＲ３７ＣＣＯＲ３８Ｃ、（ｉ）−ＮＲ３９ＣＳＯ２Ｒ４０Ｃおよび（ｊ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ４０Ｃ）２から任意に選択される１〜５個の基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、またはＣ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ７ＣとＲ８Ｃ、Ｒ２０ＣとＲ２１Ｃ、Ｒ２８ＣとＲ２９Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９５Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−（基中、Ｒ１９５Ｃは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）を表わし、
Ｒ１０Ｃ、Ｒ２２Ｃ、Ｒ２４ＣおよびＲ２６Ｃはそれぞれ独立して、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（４）Ｃｙｃ１Ｃ、または
（５）（ａ）Ｃｙｃ１Ｃ、（ｂ）ハロゲン原子、（ｃ）−ＯＲ３０Ｃ、（ｄ）−ＳＲ３１Ｃ、（ｃ）−ＮＲ３２ＣＲ３３Ｃ、（ｆ）−ＣＯＯＲ３４Ｃ、（ｇ）−ＣＯＮＲ３５ＣＲ３６Ｃ、（ｈ）−ＮＲ３７ＣＣＯＲ３８Ｃ、（ｉ）−ＮＲ３９ＣＳＯ２Ｒ４０Ｃおよび（ｊ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ４０Ｃ）２から任意に選択される１〜５個の基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、またはＣ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ３０Ｃ〜Ｒ３７ＣおよびＲ３９Ｃはそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃｙｃ１Ｃ、またはＣｙｃ１Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わすか、
Ｒ３５ＣとＲ３６Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９６Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−（基中、Ｒ１９６Ｃは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）を表わし、
Ｒ３８ＣおよびＲ４０Ｃはそれぞれ独立して、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃｙｃ１Ｃ、またはＣｙｃ１Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わし、
Ｃｙｃ１Ｃは、Ｃ３〜１５の単環、二環、または三環式（縮合またはスピロ）炭素環、または１〜４個の窒素原子、１〜３個の酸素原子および／または１〜３個の硫黄原子を含む３〜１５員の単環、二環、または三環式（縮合またはスピロ）複素環を表わす。ただし、Ｃｙｃ１Ｃは１〜５個のＲ５１Ｃによって置換されていてもよく、
Ｒ５１Ｃは、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（４）ハロゲン原子、
（５）ニトロ基、
（６）トリフルオロメチル基、
（７）トリフルオロメトキシ基、
（８）ニトリル基、
（９）ケト基、
（１０）Ｃｙｃ２Ｃ、
（１１）−ＯＲ５２Ｃ、
（１２）−ＳＲ５３Ｃ、
（１３）−ＮＲ５４ＣＲ５５Ｃ、
（１４）−ＣＯＯＲ５６Ｃ、
（１５）−ＣＯＮＲ５７ＣＲ５８Ｃ、
（１６）−ＮＲ５９ＣＣＯＲ６０Ｃ、
（１７）−ＳＯ２ＮＲ６１ＣＲ６２Ｃ、
（１８）−ＯＣＯＲ６３Ｃ、
（１９）−ＮＲ６４ＣＳＯ２Ｒ６５Ｃ、
（２０）−ＮＲ６６ＣＣＯＯＲ６７Ｃ、
（２１）−ＮＲ６８ＣＣＯＮＲ６９ＣＲ７０Ｃ、
（２２）−Ｂ（ＯＲ７１Ｃ）２、
（２３）−ＳＯ２Ｒ７２Ｃ、
（２４）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ７２Ｃ）２、
（２５）−Ｓ（Ｏ）Ｒ７２Ｃ、または
（２６）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）Ｃｙｃ２Ｃ、（ｃ）−ＯＲ５２Ｃ、（ｄ）−ＳＲ５３Ｃ、（ｅ）−ＮＲ５４ＣＲ５５Ｃ、（ｆ）−ＣＯＯＲ５６Ｃ、（ｇ）−ＣＯＮＲ５７ＣＲ５８Ｃ、（ｈ）−ＮＲ５９ＣＣＯＲ６０Ｃ、（ｉ）−ＳＯ２ＮＲ６１ＣＲ６２Ｃ、（ｊ）−ＯＣＯＲ６３Ｃ、（ｋ）−ＮＲ６４ＣＳＯ２Ｒ６５Ｃ、（ｌ）−ＮＲ６６ＣＣＯＯＲ６７Ｃ、（ｍ）−ＮＲ６８ＣＣＯＮＲ６９ＣＲ７０Ｃ、（ｎ）−Ｂ（ＯＲ７１Ｃ）２、（ｏ）−ＳＯ２Ｒ７２Ｃ、（ｐ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ７２Ｃ）２、（ｑ）−Ｓ（Ｏ）Ｒ７２Ｃおよび（ｒ）ケト基から任意に選択される１〜５個の基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ５２Ｃ〜Ｒ６２Ｃ、Ｒ６４Ｃ、Ｒ６６ＣおよびＲ６８Ｃ〜Ｒ７１Ｃはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）Ｃｙｃ２Ｃ、または
（６）Ｃｙｃ２Ｃ、−ＯＲ７３Ｃ、−ＣＯＯＲ７４Ｃ、−ＮＲ７５ＣＲ７６Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ５７ＣとＲ５８Ｃ、Ｒ６１ＣとＲ６２Ｃ、Ｒ６９ＣとＲ７０Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９７Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−（基中、Ｒ１９７は、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）を表わし、
Ｒ６３Ｃ、Ｒ６５Ｃ、Ｒ６７ＣおよびＲ７２Ｃはそれぞれ独立して、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（４）Ｃｙｃ２Ｃ、または
（５）Ｃｙｃ２Ｃ、−ＯＲ７３Ｃ、−ＣＯＯＲ７４Ｃ、−ＮＲ７５ＣＲ７６Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ７３Ｃ〜Ｒ７６Ｃはそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、Ｃｙｃ２Ｃ、またはＣｙｃ２Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わし、
Ｃｙｃ２ＣはＣｙｃ１Ｃと同じ意味を表わす。ただし、Ｃｙｃ２Ｃは１〜５個のＲ７７Ｃによって置換されていてもよく、
Ｒ７７Ｃは、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）ハロゲン原子、
（３）ニトロ基、
（４）トリフルオロメチル基、
（５）トリフルオロメトキシ基、
（６）ニトリル基、
（７）−ＯＲ７８Ｃ、
（８）−ＮＲ７９ＣＲ８０Ｃ、
（９）−ＣＯＯＲ８１Ｃ、
（１０）−ＳＲ８２Ｃ、
（１１）−ＣＯＮＲ８３ＣＲ８４Ｃ、
（１２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（１３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（１４）ケト基、
（１５）Ｃｙｃ６Ｃ、
（１６）−ＮＲ１６１ＣＣＯＲ１６２Ｃ、
（１７）−ＳＯ２ＮＲ１６３ＣＲ１６４Ｃ、
（１８）−ＯＣＯＲ１６５Ｃ、
（１９）−ＮＲ１６６ＣＳＯ２Ｒ１６７Ｃ、
（２０）−ＮＲ１６８ＣＣＯＯＲ１６９Ｃ、
（２１）−ＮＲ１７０ＣＣＯＮＲ１７１ＣＲ１７２Ｃ、
（２２）−ＳＯ２Ｒ１７３Ｃ、
（２３）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１６７Ｃ）２、
（２４）−Ｓ（Ｏ）Ｒ１７３Ｃ、
（２５）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）−ＯＲ７８Ｃ、（ｃ）−ＮＲ７９ＣＲ８０Ｃ、（ｄ）−ＣＯＯＲ８１Ｃ、（ｅ）−ＳＲ８２Ｃ、（ｆ）−ＣＯＮＲ８３ＣＲ８４Ｃ、（ｇ）ケト基、（ｈ）Ｃｙｃ６Ｃ、（ｉ）−ＮＲ１６１ＣＣＯＲ１６２Ｃ、（ｊ）−ＳＯ２ＮＲ１６３ＣＲ１６４Ｃ、（ｋ）−ＯＣＯＲ１６５Ｃ、（ｌ）−ＮＲ１６６ＣＳＯ２Ｒ１６７Ｃ、（ｍ）−ＮＲ１６８ＣＣＯＯＲ１６９Ｃ、（ｎ）−ＮＲ１７０ＣＣＯＮＲ１７１ＣＲ１７２Ｃ、（ｏ）−ＳＯ２Ｒ１７３Ｃ、（ｐ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１６７Ｃ）２および（ｑ）−Ｓ（Ｏ）Ｒ１７３Ｃから選択される１〜５個の基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ７８Ｃ〜Ｒ８４Ｃ、Ｒ１６１Ｃ〜Ｒ１６４Ｃ、Ｒ１６６Ｃ、Ｒ１６８ＣおよびＲ１７０Ｃ〜Ｒ１７２Ｃは、それぞれ独立して、（ａ）水素原子、（ｂ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｃ）Ｃ２〜８アルケニル基、（ｄ）Ｃ２〜８アルキニル基、（ｅ）Ｃｙｃ６Ｃ、（ｆ）Ｃｙｃ６Ｃ、−ＯＲ１７４Ｃ、−ＣＯＯＲ１７５Ｃ、−ＮＲ１７６ＣＲ１７７Ｃ、−ＣＯＮＲ１７８ＣＲ１７９Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ８３ＣとＲ８４Ｃ、Ｒ１６３ＣとＲ１６４Ｃ、Ｒ１７１ＣとＲ１７２Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９８Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−（基中、Ｒ１９８Ｃは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）を表わし、
Ｒ１６５Ｃ、Ｒ１６７Ｃ、Ｒ１６９ＣおよびＲ１７３Ｃはそれぞれ独立して、（ａ）Ｃ１〜８アルキル基、（ｂ）Ｃ２〜８アルケニル基、（ｃ）Ｃ２〜８アルキニル基、（ｄ）Ｃｙｃ６Ｃ、または（ｅ）Ｃｙｃ６Ｃ、−ＯＲ１７４Ｃ、−ＣＯＯＲ１７５Ｃ、−ＮＲ１７６ＣＲ１７７Ｃ、−ＣＯＮＲ１７８ＣＲ１７９Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ１７４Ｃ〜Ｒ１７７Ｃはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃｙｃ６Ｃ、または
（４）Ｃｙｃ６Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わすか、
Ｒ１７８ＣとＲ１７９Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ１９９Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−（基中、Ｒ１９９Ｃは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）を表わし、
Ｃｙｃ６Ｃは、Ｃ３〜８の単環式炭素環または１〜４個の窒素原子、１〜２個の酸素原子および／または１〜２個の硫黄原子を含む３〜８員の単環式複素環を表わす。ただし、Ｃｙｃ６Ｃは１〜５個のＲ１８０Ｃによって置換されていてもよく、
Ｒ１８０Ｃは、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）ハロゲン原子、
（３）ニトロ基、
（４）トリフルオロメチル基、
（５）トリフルオロメトキシ基、
（６）ニトリル基、
（７）−ＯＲ１８１Ｃ、
（８）−ＮＲ１８２ＣＲ１８３Ｃ、
（９）−ＣＯＯＲ１８４Ｃ、
（１０）−ＳＲ１８５Ｃ、または
（１１）−ＣＯＮＲ１８６ＣＲ１８７Ｃを表わし、
Ｒ１８１Ｃ〜Ｒ１８７Ｃはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）フェニル基、または
（４）フェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わすか、
Ｒ１８２ＣとＲ１８３Ｃ、Ｒ１８６ＣとＲ１８７Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ２００Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−（基中、Ｒ２００Ｃは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、フェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。）を表わし、
Ｒ２Ｃは、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）−ＯＲ９０Ｃ、
（６）Ｃｙｃ３Ｃ、または
（７）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）−ＯＲ９０Ｃ、（ｃ）−ＳＲ９１Ｃ、（ｄ）−ＮＲ９２ＣＲ９３Ｃ、（ｅ）−ＣＯＯＲ９４Ｃ、（ｆ）−ＣＯＮＲ９５ＣＲ９６Ｃ、（ｇ）−ＮＲ９７ＣＣＯＲ９８Ｃ、（ｈ）−ＳＯ２ＮＲ９９ＣＲ１００Ｃ、（ｉ）−ＯＣＯＲ１０１Ｃ、（ｊ）−ＮＲ１０２ＣＳＯ２Ｒ１０３Ｃ、（ｋ）−ＮＲ１０４ＣＣＯＯＲ１０５Ｃ、（ｌ）−ＮＲ１０６ＣＣＯＮＲ１０７ＣＲ１０８Ｃ、（ｍ）Ｃｙｃ３Ｃ、（ｎ）ケト基および（ｏ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１０３Ｃ）２から任意に選択される１〜５個の基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基またはＣ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ９０Ｃ〜Ｒ１００Ｃ、Ｒ１０２Ｃ、Ｒ１０４ＣおよびＲ１０６Ｃ〜Ｒ１０８Ｃはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）Ｃｙｃ３Ｃ、または
（６）Ｃｙｃ３Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ９５ＣとＲ９６Ｃ、Ｒ９９ＣとＲ１００Ｃ、Ｒ１０７ＣとＲ１０８Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ２０１Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし、
Ｒ２０１Ｃは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、またはフェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わし、
Ｒ１０１Ｃ、Ｒ１０３ＣおよびＲ１０５Ｃはそれぞれ独立して、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、または
（４）Ｃｙｃ３ＣまたはＣｙｃ３Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｃｙｃ３はＣｙｃ１と同じ意味を表わす。
ただし、Ｃｙｃ３Ｃは１〜５個のＲ１０９Ｃによって置換されていてもよく、
Ｒ１０９ＣはＲ５１Ｃと同じ意味を表わし、
Ｒ３ＣおよびＲ４Ｃはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）−ＣＯＯＲ１２０Ｃ、
（６）−ＣＯＮＲ１２１ＣＲ１２２Ｃ、
（７）Ｃｙｃ４Ｃ、または
（８）（ａ）ハロゲン原子、（ｂ）ニトリル基、（ｃ）Ｃｙｃ４Ｃ、（ｄ）−ＣＯＯＲ１２０Ｃ、（ｅ）−ＣＯＮＲ１２１ＣＲ１２２Ｃ、（ｆ）−ＯＲ１２３Ｃ、（ｇ）−ＳＲ１２４Ｃ、（ｈ）−ＮＲ１２５ＣＲ１２６Ｃ、（ｉ）−ＮＲ１２７ＣＣＯＲ１２８Ｃ、（ｊ）−ＳＯ２ＮＲ１２９ＣＲ１３０Ｃ、（ｋ）−ＯＣＯＲ１３１Ｃ、（ｌ）−ＮＲ１３２ＣＳＯ２Ｒ１３３Ｃ、（ｍ）−ＮＲ１３４ＣＣＯＯＲ１３５Ｃ、（ｎ）−ＮＲ１３６ＣＣＯＮＲ１３７ＣＲ１３８Ｃ、（ｏ）−Ｓ−ＳＲ１３９Ｃ、（ｐ）−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ１４０Ｃ、（ｑ）ケト基、（ｒ）−ＮＲ１４５ＣＣＯＮＲ１４６ＣＣＯＲ１４７Ｃおよび（ｓ）−Ｎ（ＳＯ２Ｒ１３３Ｃ）２から選択された１〜５個の基によって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、またはＣ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ１２０Ｃ〜Ｒ１３０Ｃ、Ｒ１３２Ｃ、Ｒ１３４Ｃ、Ｒ１３６Ｃ〜Ｒ１３８Ｃ、Ｒ１４５ＣおよびＲ１４６Ｃはそれぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）Ｃｙｃ４Ｃ、または
（６）Ｃｙｃ４Ｃ、ハロゲン原子、−ＯＲ１４８Ｃ、−ＳＲ１４９Ｃ、−ＣＯＯＲ１５０Ｃ、または−ＮＨＣＯＲ１４１Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わすか、
Ｒ１２１ＣとＲ１２２Ｃ、Ｒ１２９ＣとＲ１３０Ｃ、Ｒ１３７ＣとＲ１３８Ｃは一緒になって、
（１）Ｃ２〜６アルキレン基、
（２）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｏ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、
（３）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−Ｓ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−、または
（４）−（Ｃ２〜６アルキレン基）−ＮＲ２０２Ｃ−（Ｃ２〜６アルキレン基）−を表わし（基中、Ｒ２０２Ｃは、水素原子、Ｃ１〜８アルキル基、フェニル基、フェニル基によって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わし、
Ｒ１３１Ｃ、Ｒ１３３Ｃ、Ｒ１３５Ｃ、Ｒ１３９ＣおよびＲ１４７Ｃは、それぞれ独立して、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（４）Ｃｙｃ４Ｃ、または
（５）Ｃｙｃ４Ｃ、ハロゲン原子、−ＯＲ１４８Ｃ、−ＳＲ１４９Ｃ、−ＣＯＯＲ１５０Ｃ、または−ＮＨＣＯＲ１４１Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ１４０Ｃは、水素原子、−ＣＯＯＲ１４２Ｃ、または−ＳＯ２Ｒ１４３Ｃを表わし、
Ｒ１４１Ｃ〜Ｒ１４３Ｃは、それぞれ独立して、
（１）Ｃ１〜８アルキル基、
（２）Ｃ２〜８アルケニル基、
（３）Ｃ２〜８アルキニル基、
（４）Ｃｙｃ４Ｃ、または
（５）Ｃｙｃ４Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｒ１４８Ｃ〜Ｒ１５０Ｃは、それぞれ独立して、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃ２〜８アルケニル基、
（４）Ｃ２〜８アルキニル基、
（５）Ｃｙｃ４Ｃ、または
（６）Ｃｙｃ４Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基、Ｃ２〜８アルケニル基、Ｃ２〜８アルキニル基を表わし、
Ｃｙｃ４ＣはＣｙｃ１Ｃと同じ意味を表わす。ただし、Ｃｙｃ４Ｃは１〜５個のＲ１４４Ｃによって置換されていてもよく、Ｒ１４４ＣはＲ５１Ｃと同じ意味を表わす。）を表わすか、
Ｒ３ＣとＲ４Ｃは一緒になって、
2004054616.tif 000008
（基中、Ｒ１９０ＣおよびＲ１９１Ｃはそれぞれ独立して、Ｒ３またはＲ４と同じ意味を表わす。）を表わし、
Ｒ５Ｃは、
（１）水素原子、
（２）Ｃ１〜８アルキル基、
（３）Ｃｙｃ５Ｃ、または
（４）Ｃｙｃ５Ｃによって置換されたＣ１〜８アルキル基を表わす。
（基中、Ｃｙｃ５ＣはＣｙｃ１Ｃと同じ意味を表わす。ただし、Ｃｙｃ５Ｃは１〜５個のＲ１６０Ｃによって置換されていてもよく、
Ｒ１６０ＣはＲ５１Ｃと同じ意味を表わす。］
で示される少なくとも一つのトリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体、それらの四級アンモニウム塩、それらのＮ−オキシドまたはそれらの非毒性塩が知られている（ＷＯ０２／７４７６９号パンフレット参照）。
また、ＣＣＲ５アンタゴニストとして、アニリド誘導体が知られており、特にＴＡＫ−７７９が臨床候補化合物であることが記載されている（「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー」，第４３巻，第１０号，ｐ．２０４９−２０６３参照）。
2004054616.tif 000009
さらに、ＣＣＲ５アンタゴニストとして、オキシミノ−ピペリジノ−ピペリジンアミド誘導体が知られており、特にＳＣＨ−３５１１２５が臨床候補化合物であることが記載されている（「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー」，第４５巻，第１４号，ｐ．３１４３−３１６０参照）。
2004054616.tif 000010
【発明の開示】
これまでにＣＣＲ５に結合するアンタゴニストおよびアゴニストが数多く見出されている。しかし、これまで見出されたＣＣＲ５に結合するアンタゴニストおよびアゴニストは、受容体との結合強度が不明であった。本発明において、受容体結合強度とは、単なる結合親和性を指すだけでなく、結合する部位との結合の様式も含めた総合的な結合に関わる強度を意味する。さらに、本発明において、強結合部位とは、ある物質がそこに結合することで、受容体からの当該物質の解離速度が遅く、従って受容体に対する高親和性という特徴を有し、または当該物質がその部位に結合することから占有する空間や受容体に与えるコンフォーメーション変化が充分なものとなる特徴を有する物質が結合する部位であることを意味する。従来のＣＣＲ５結合性物質は、受容体結合強度が弱いものであり、強結合部位に結合しないため、その薬理効果が不充分であるという問題があった。
また、通常のリガンド結合実験をスクリーニングに用いた場合、リガンド結合阻害活性が充分であるにもかかわらず、強結合部位に結合しないために、その薬理効果が不充分であり、期待通りの薬理効果を望めないアンタゴニストおよびアゴニストをふるい落とすことができないという問題があった。従って、薬理効果が充分なＣＣＲ５に結合するアンタゴニストおよびアゴニストの効率的な選択方法の開発が望まれていた。
上記特徴を有する強結合部位に結合する化合物を効率良く見出す方法を構築できれば、充分な薬理効果を期待できる特徴を持った化合物を見出すことが可能となる。
例えば、ＣＣＲ５アンタゴニストおよびアゴニストの薬理効果の１つである抗ＨＩＶ作用の場合、強結合部位に結合する特徴を有すれば、受容体ＣＣＲ５に対する高い結合親和性に加え、解離速度ができるだけ遅い、ＨＩＶのｇｐ１２０が結合に使用する部位をできるだけ大きく占有する、或いは受容体のコンフォーメーション変化がＨＩＶのｇｐ１２０の結合に適さない構造を生じさせると云った望ましい特徴が付加されることとなり、大きな利点となる。強結合部位の存在という概念の他にも、抗ＨＩＶ活性に着目した場合、ＣＣＲ５上の第２ループの存在は示唆されている（Ｌｅｅ  Ｂら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，９６１７−２６、Ｋｕｈｍａｎｎ，Ｓら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１，８６４２−８６５６、Ｒｏｓｓ，Ｔら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２，１９１８−１９２４））。
しかし、ＣＣＲ５におけるアンタゴニストおよびアゴニストの強結合部位の存在とそこに結合する化合物は発見されておらず、該化合物のスクリーニング方法は未だ知られていない。
本発明者らは、上記した問題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ＣＣＲ５に強結合部位が存在することを発見し、また、その部位に結合する化合物のスクリーニング方法を具体的に構築し、さらに、該化合物が有用であることを見出し本発明を完成した。
本発明は、
１．ＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストまたはアゴニスト（ただし、ＷＯ０１／４０２２７号パンフレット、ＷＯ０２／７４７６９号パンフレット、ＷＯ０２／７４７７０号パンフレットに記載された化合物およびＳＣＨ−３５１１２５は除く。）、
２．前記１記載のアンタゴニストまたはアゴニストを含有することを特徴とするアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、
３．アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および癌疾患が、喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、免疫抑制、癌転移、ＨＩＶ感染および後天性免疫不全症候群から選択される疾患である前記２記載の予防および／または治療剤、
４．免疫疾患が、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群および／または移植臓器拒絶反応である前記２記載の予防および／または治療剤、
５．ＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）細胞または膜を１〜１２回洗浄する工程、および
（ｃ）標識リガンドを加え、結合した標識リガンドの結合量を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法、
６．細胞または膜を洗浄する回数が、６〜１０回である前記５記載の方法、
７．ＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）前記（ａ）工程で調製された被験化合物と結合した細胞またはその膜画分を、標識された抗ＣＣＲ５抗体と接触させる工程、および
（ｃ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分に結合した標識された抗ＣＣＲ５抗体を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法、
８．抗ＣＣＲ５抗体が、４５５３１．１１１抗体および／または４５５２３．１１１抗体である前記７記載の方法、
９．ＣＣＲ５を発現している細胞または膜画分上に結合している化合物の占有率を測定する方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）前記（ａ）工程で調製された被験化合物と結合した細胞またはその膜画分を、標識された抗ＣＣＲ５抗体と接触させる工程、および
（ｃ）細胞または膜画分上のＣＣＲ５に結合している化合物の占有率を、化合物がＣＣＲ５と結合していない場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量を１００％とした際の、化合物がＣＣＲ５に結合している場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量の割合によって算出する工程を含むことを特徴とする測定方法、
１０．血中のＣＣＲ５を発現している細胞上の結合部位に結合する化合物の占有率を経時的にモニターする方法であって、
（ａ）ＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物を哺乳動物に投与した後、血中のＣＣＲ５を発現している細胞含む細胞集団を分離する工程、
（ｂ）分離された細胞集団を標識された抗ＣＣＲ５抗体と接触する工程、および
（ｃ）分離された細胞上のＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の占有率を、化合物がＣＣＲ５と結合していない場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量を１００％とした際の、化合物がＣＣＲ５に結合している場合の抗ＣＣＲ５抗体の結合量の割合によって算出する工程を含むことを特徴とするモニター方法、
１１．抗ＣＣＲ５抗体が、４５５３１．１１１抗体および／または４５５２３．１１１抗体である前記１０記載の方法、
１２．ＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物を投与した際に有効性を示す投与量と投与回数を決定する方法であって、
（ａ）インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）活性測定法によりＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の阻害活性ＩＣ５０値またはＩＣ９０値を測定する工程、
（ｂ）上記（ａ）記載のＩＣ５０値またはＩＣ９０値に相当する化合物濃度でのＣＣＲ５発現細胞上のＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の占有率を前記９記載の方法により算出する工程、
（ｃ）前記１０記載のモニター方法により得られた、各投与量および各モニター時間のＣＣＲ５の結合部位に結合する化合物の占有率と上記（ｂ）記載の方法により得られた占有率を比較する工程を含むことを特徴とする阻害率がおよそ５０％または９０％となる投与量と投与回数を決定する方法、
１３．インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）活性測定法が抗ＨＩＶ活性測定法である前記１２記載の方法、
１４．前記５、７、９、１０および／または１２記載の方法によって選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物を有効成分として含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、
１５．免疫疾患が、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群および／または移植臓器拒絶反応である前記１４記載の予防および／または治療剤、
１６．投与方法が、１日１回、２日１回、３日１回または数日１回、経口的または非経口的に投与することを特徴とする前記２または１４記載の予防および／または治療剤、
１７．免疫疾患が、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群および／または移植臓器拒絶反応である前記１６記載の予防および／または治療剤、
１８．１日１回、２日１回、３日１回または数日１回、経口的または非経口的に投与することを特徴とするＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストおよび／またはアゴニストをスクリーニングする方法、
１９．ケモカイン受容体の強結合部位に結合するアゴニストまたはアンタゴニスト、
２０．前記１９記載のアゴニストまたはアンタゴニストを含有することを特徴とするアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、
２１．アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患または癌疾患が喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、免疫抑制、癌転移、ＨＩＶ感染および後天性免疫不全症候群から選択される疾患である前記２０記載の予防および／または治療剤、
２２．ケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ケモカイン受容体発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）細胞または膜を１〜１２回洗浄する工程、および
（ｃ）標識リガンドを加え、結合した標識リガンドの結合量を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法、
２３．ケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ケモカイン受容体発現細胞またはその膜画分と被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）前記（ａ）工程で調製された被験化合物と結合した細胞またはその膜画分を、標識された抗ケモカイン受容体抗体と接触させる工程、および
（ｃ）ケモカイン受容体発現細胞またはその膜画分に結合した標識された抗ケモカイン受容体抗体を測定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法、
２４．前記２２または２３記載の方法により選択されたケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物を有効成分として含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療剤、
２５．前記１記載のアゴニストまたはアンタゴニストの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物におけるＣＣＲ５介在性疾患の予防および／または治療方法、
２６．前記１９記載のアンタゴニストまたはアゴニストの有効量を哺乳動物に投与することを特徴とする、哺乳動物におけるケモカイン受容体介在性疾患の予防および／または治療方法、
２７．前記５、７、９、１０または１２記載の方法によって選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物を有効成分として含有するアレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および／または癌疾患の予防および／または治療方法、
２８．ＣＣＲ５介在性疾患の予防および／または治療剤を製造するための前記１記載のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの使用、
２９．ケモカイン受容体介在性疾患の予防および／または治療剤を製造するための前記１９記載のアゴニストおよび／またはアンタゴニストの使用、
３０．ＣＣＲ５介在性疾患の予防および／または治療剤を製造するための前記５、７、９、１０および／または１２記載の方法によって、選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物の使用、
３１．前記５、７、９、１０または１２記載の方法によって選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物、および
３２．前記５、７、９、１０または１２記載の方法によって選択されたＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物の製造方法等に関する。
本発明において、ＣＣＲ５またはケモカイン受容体の強結合部位に結合するアンタゴニストおよびアゴニストとは、当該物質がそこに結合することで、受容体からの当該物質の解離速度が遅く、従って受容体に対する高親和性という特徴を有し、または当該物質がその部位に結合することから占有する空間や受容体に与えるコンフォーメーション変化が充分なものとなる特徴を有する物質である。
本発明において、ＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストおよびアゴニストを用いることで予防および／または治療できる疾患とは、ＣＣＲ５が起因する疾患であればよく、アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および癌疾患に限定されない。アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および癌疾患とは、例えば、喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、免疫抑制、癌転移、ＨＩＶ感染および／または後天性免疫不全症候群等である。
本発明において、ケモカイン受容体の強結合部位に結合するアゴニストおよびアンタゴニストを用いることで予防および／または治療できる疾患とは、ケモカイン受容体が起因する疾患であればよく、アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および癌疾患に限定されない。アレルギー疾患、炎症性疾患、免疫疾患および癌疾患とは、例えば、喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、免疫抑制、癌転移、ＨＩＶ感染および後天性免疫不全症候群等である。
本発明におけるＣＣＲ５の強結合部位に結合するアンタゴニストおよびアゴニストとは、現在までに見出されているもの、および今後見出されるものをすべて含む。
本発明におけるケモカイン受容体の強結合部位に結合するアンタゴニストおよびアゴニストとは、現在までに見出されているもの、および今後見出されるものをすべて含む。
本発明において、化合物とはアンタゴニストおよびアゴニストを意味する。
本発明において化合物が結合する部位は、ＣＣＲ５に限定されない。例えば、一般的なケモカイン受容体、すなわちケモカイン受容体の強結合部位に結合する化合物（アゴニストおよび／またはアンタゴニスト）にも適用できる。ケモカイン受容体としては、例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ、ＸＣＲ１等が挙げられる。
また、本発明のスクリーニングする方法については、ＣＣＲ５発現細胞の代わりに、ＣＣＲ５の膜画分を用いても実施可能である。さらに、ＣＣＲ５発現細胞またはその膜画分の代わりに、他のケモカイン受容体発現細胞またはその膜画分を用いても実施可能である。
本発明のうち、抗ＣＣＲ５抗体を用いた方法に関しては、抗ＣＣＲ５抗体の代わりに、他のケモカイン受容体抗体を用いても実施可能である。例えば、他のケモカイン受容体抗体に対する抗体であって、アンタゴニストまたはアゴニストがそのケモカイン受容体に結合している場合に、そのケモカイン受容体に結合しない性質を有するものであればよい。
本発明のスクリーニングにおける抗ＣＣＲ５抗体としては、４５５３１．１１１、４５５２３．１１１に限定されず、強結合部位に結合するアゴニストまたはアンタゴニストがＣＣＲ５に結合している場合に、ＣＣＲ５に結合しない抗体であればよい。
本発明のスクリーニングにおける標識とは、物質の結合量を同定することができればよく、例えば、放射性標識、蛍光標識や酵素標識等が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明における標識リガンドとしては、好ましくは、放射性リガンド（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓまたは１２５Ｉ等のアイソトープで標識されたリガンド）であり、より好ましくは、ＣＣＲ５またはケモカイン受容体のリガンドがヨードラベル（１２５Ｉ）されたものである。ＣＣＲ５またはケモカイン受容体のリガンドとしては、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＳＤＦ−１、ＭＤＣ、ＴＡＲＣ、ＭＩＰ−３α、ＭＩＰ−３β、ＳＬＣ、Ｅｏｔａｘｉｎ、ＣＴＡＣＫ、Ｉ−３０９、ＴＥＣＫ、ＣＣＬ２８、ＩＬ−８、ＧＲＯ、ＩＰ−１０、ＢＣＡ、ＣＸＣＬ、Ｆｒａｃｔａｌｋｉｎｅ、ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ等が挙げられる。
本発明において、哺乳動物には、ヒトやヒト以外の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サル等）が含まれる。
本発明において、数日とは、４〜１４日を意味する。
本発明のＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物は、例えば、後記した方法によってアンタゴニストであるかアゴニストであるかを判定することができる。この判定方法は、アンタゴニストであるか、アゴニストであるかを判定することができるものであればよく、後記した方法以外に、公知の方法によっても判定することができる。
上記アンタゴニストとアゴニストの判定方法は、本発明のＣＣＲ５の強結合部位に結合する化合物のスクリーニングの前に行なっても、後に行なってもよく、その順序は限定されない。
以下に、本発明のスクリーニング方法および強結合部位について詳細に証明する。
本発明者らは、ＣＣＲ５アンタゴニストを用いて、以下の３つの実験によって強結合部位が存在することを確認した。
（１）強結合部位に結合する化合物の結合解離に関する検討
ＣＣＲ５内因性リガンドのＣＣＲ５に対する結合実験の系で、ＣＣＲ５アンタゴニスト（例えば、ＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−３５１１２５、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体）の阻害効果を検討した。この実験系では一旦化合物をＣＣＲ５に結合させ、その後化合物を取り除くために洗浄を繰り返す（例えば１〜１２回、好ましくは、６〜１０回、より好ましくは、８回以上繰り返す）ことにより通常より強い洗浄を施した後、新たな平衡状態を作りだすため一定時間放置（例えば４時間以上放置）して、阻害効果を確認した。その結果、ＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９はそれぞれＩＣ５０値１６．７および１０．４ｎｍｏｌ／Ｌを示した。これに対し、（３Ｒ）−１−ブチル−２，５−ジオキソ−３−（（１Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシルメチル）−９−（４−（４−カルボキシフェニルオキシ）フェニルメチル）−１，４，９−トリアザスピロ［５．５］ウンデカン・塩酸塩（以下、化合物１と略記する。）および（３Ｒ）−１−ブチル−２，５−ジオキソ−３−（（１Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシルメチル）−９−（４−（４−メチルアミノカルボニルフェニルオキシ）フェニルメチル）−１，４，９−トリアザスピロ［５．５］ウンデカン・塩酸塩（以下、化合物２と略記する。）はそれぞれＩＣ５０値４．２および１．５ｎｍｏｌ／Ｌを示し、この操作を施した後（きびしい洗浄条件下）でもリガンド結合阻害効果が強い化合物を見出した。
（２）強結合部位に結合する化合物の結合様式に関する検討
更に、上記実験においてリガンド結合阻害効果が強い化合物の結合様式を検討するために、ＣＣＲ５アンタゴニスト（例えば、ＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−３５１１２５、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体）と抗ＣＣＲ５抗体（４５５３１．１１１（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ  Ｎｏ．ＦＡＢ１８２Ｆ，Ｌｏｔ  ＪＧ０１９０２１）、４５５２３．１１１（Ｒ＆Ｄ  Ｃａｔ  Ｎｏ．ＦＡＢ１８１Ｆ，Ｌｏｔ  ＪＦ０１９０３３）を用いた。その結果、ＴＡＫ−７７９は４５５３１．１１１と４５５２３．１１１両抗体のＣＣＲ５結合を弱くしか阻害しなかった。ＳＣＨ−３５１１２５は４５５２３．１１１抗体の結合は阻害したが、４５５３１．１１１抗体結合の阻害程度はＴＡＫ−７７９と同程度で弱いものであった。しかし、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体（例えば、化合物１または化合物２）は両抗体の結合を強く阻害した。すなわち、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体は、ＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−３５１１２５と比較してＣＣＲ５に対する結合様式が異なることを見出した。すなわち、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体（例えば、化合物１または化合物２）は、使用した抗体に対して比較すると最もＣＣＲ５に対する親和性が高いこと、ＣＣＲ５上のより広範な領域に影響を与えるという特徴を有する。
（３）強結合部位に結合する化合物の競合実験
また、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体がＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−３５１１２５と競合的に拮抗するか否かを検討したところ、例えば化合物１は、ＣＣＲ５に対してＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−３５１１２５と競合的に拮抗することが確認された。
上述の３種の、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体は、ＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−３５１１２５と競合的に拮抗することを示す実験結果から、それらとまったく異なる部位に結合しているわけではないことが明らかとなった。しかし、これらの化合物は結合部位に共通する部分はあるが、当該化合物がＣＣＲ５に結合した状態の立体構造は異なることが、抗体４５５３１．１１１や４５５２３．１１１を用いた実験で証明された。トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体は、きびしい洗浄条件下でより強いリガンド結合阻害効果を有し、抗体４５５３１．１１１や４５５２３．１１１の結合に対する阻害もより強いものであることを特徴とする。これらの事実から、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体の特徴は、抗体４５５３１．１１１や４５５２３．１１１で規定されるエピトープからなる領域に限定されず、むしろ、結合することによりＣＣＲ５にコンフォーメーション変化を誘導し、広範な領域に影響を及ぼす。このような変化によって、ＣＣＲ５と接触している部分の親和性が高くなり、または安定な結合状態から解離という状態への変遷に大きなエネルギーを必要とするため、解離速度が遅くなるのである。
本発明においては、例えば、上述したトリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体のような結合様式の特徴を有する化合物を、強結合部位に結合するアンタゴニストと定義する。
また、本発明者らは、強結合部位に結合するアンタゴニストの有用性を証明するために、ＣＣＲ５アンタゴニスト（例えば、ＴＡＫ−７７９、ＳＣＨ−３５１１２５、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体）を用いて、強結合部位に結合するアンタゴニストの特徴と細胞遊走阻害作用との関係を検討した。細胞遊走の５０％阻害率は、ＳＣＨ−３５１１２５が１４．４ｎｍｏｌ／Ｌ、ＴＡＫ−７７９が５５ｎｍｏｌ／Ｌに対して、トリアザスピロ［５．５］ウンデカン誘導体、例えば化合物１は４．３ｎｍｏｌ／Ｌであった。すなわち、きびしい洗浄条件下のリガンド結合阻害効果並びに抗ＣＣＲ５抗体（４５５３１．１１１、４５５２３．１１１）を用いた抗体結合阻害効果がより強い化合物が、ＣＣＲ５アンタゴニストの薬理活性の一つである細胞遊走に対してより強い阻害効果を示すことを見出した。更に、ＣＣＲ５のひとつのリガンドとも見なし得るＨＩＶに対する効果（抗ＨＩＶ活性）とも相関した。
従って、本発明者らは、強結合部位に結合する化合物をスクリーニングする方法が、きびしい洗浄条件下のリガンド結合阻害活性を測定し、４５５３１．１１１抗体或いは４５５２３．１１１抗体のどちらか一方（好ましくは４５５３１．１１１抗体）か、もしくは両抗体の結合阻害を測定することによって達成されることを見出した。
本発明の強結合部位に結合する化合物は、きびしい洗浄条件下のリガンド結合阻害活性を測定のスクリーニングおよび／または抗ＣＣＲ５抗体を用いたスクリーニングによって判定することができる。
更に、本発明者らはこれら強結合部位に結合する化合物が、実際循環血中で受容体に結合していることをモニターする方法を構築し、それらの化合物が長時間結合していることを確認した。本発明者らは、ＣＣＲ５を発現している細胞に当該化合物をインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で結合させ、動物、例えばマウスに移入した後、経時的にその細胞を採取してＣＣＲ５上の化合物の残留を計測した。化合物の残留の計測には、当該化合物が結合を阻害する抗体であれば良いが、望ましくは上記４５５３１．１１１抗体を用いてモニターする。その結果、強結合部位に結合する化合物が循環血中でも長時間ＣＣＲ５上に留まることを見出した。すなわち、概化合物の特徴として長時間薬理効果が持続することが挙げられる。
このように、本発明者らは、従来知られている結合部位と異なった新しいＣＣＲ５の強結合部位を見出し、また、そこに結合する化合物が、持続的に結合することを見出し、本発明を完成した。
このような強結合部位に結合する化合物は、作用が持続するため、薬剤の投与回数を減らすことができる。例えば、１日１回、２日１回、３日１回または数日１回、経口的または非経口的に投与することをよっても、ＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストの薬理効果を持続するものである。
［医薬品への適用］
本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストは、ヒトを含めた動物、特にヒトにおいて、各種炎症性疾患、喘息、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー疾患（アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性好酸球性胃腸症等）、腎炎、腎症、肝炎、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、鼻炎、結膜炎、虚血再灌流傷害、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、急性呼吸窮迫症候群、細菌感染に伴うショック、糖尿病、自己免疫疾患、移植臓器拒絶反応、免疫抑制、癌転移、後天性免疫不全症候群の予防および／または治療に有用である。
本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニスト、または本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストと他の薬剤の併用剤を上記の目的で用いるには、通常、全身的または局所的に、経口または非経口の形で投与される。
投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人一人あたり、１回につき、１ｎｇから１０００ｍｇの範囲で、数日に１回、３日に１回、２日に１回、１日１回から数回経口投与されるか、または成人一人あたり、１回につき、１ｎｇから１００ｍｇの範囲で、数日に１回、３日に１回、２日に１回、１日１回から数回非経口投与（好ましくは、静脈内投与）されるか、または１日１時間から２４時間の範囲で静脈内に持続投与される。
もちろん前記したように、投与量は種々の条件や病態により変動するので、上記投与量より少ない量で充分な場合もあるし、また範囲を越えて投与の必要な場合もある。
本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストまたは本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストと他の薬剤の併用剤を投与する際には、経口投与のための内服用固形剤、内服用液剤、および非経口投与のための注射剤、外用剤、坐剤、点眼剤、吸入剤等として用いられる。
経口投与のための内服用固形剤には、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。カプセル剤には、ハードカプセルおよびソフトカプセルが含まれる。また錠剤には舌下錠、口腔内貼付錠、口腔内速崩壊錠などが含まれる。
このような内服用固形剤においては、ひとつまたはそれ以上の活性物質はそのままか、または賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、デンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコール酸カルシウム等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸等）等と混合され、常法に従って製剤化して用いられる。また、必要によりコーティング剤（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）で被覆していてもよいし、また２以上の層で被覆していてもよい。さらにゼラチンのような吸収されうる物質のカプセルも包含される。
舌下錠は公知の方法に準じて製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質に賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、コロイダルシリカ、デンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（デンプン、Ｌ−ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、繊維素グリコール酸カルシウム等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、膨潤剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カーボポール、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、キサンタンガム、グアーガム等）、膨潤補助剤（グルコース、フルクトース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルトース、トレハロース、リン酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩、グリシン、グルタミン酸、アルギニン等）安定剤、溶解補助剤（ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グルタミン酸、アスパラギン酸等）、香味料（オレンジ、ストロベリー、ミント、レモン、バニラ等）等と混合され、常法に従って製剤化して用いられる。また、必要によりコーティング剤（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）で被覆していてもよいし、また２以上の層で被覆していてもよい。また、必要に応じて常用される防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の添加物を加えることもできる。
口腔内貼付錠は公知の方法に準じて製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質に賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、コロイダルシリカ、デンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（デンプン、Ｌ−ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、繊維素グリコール酸カルシウム等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、付着剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カーボポール、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、キサンタンガム、グアーガム等）、付着補助剤（グルコース、フルクトース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルトース、トレハロース、リン酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩、グリシン、グルタミン酸、アルギニン等）安定剤、溶解補助剤（ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グルタミン酸、アスパラギン酸等）、香味料（オレンジ、ストロベリー、ミント、レモン、バニラ等）等と混合され、常法に従って製剤化して用いられる。また、必要によりコーティング剤（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）で被覆していてもよいし、また２以上の層で被覆していてもよい。また、必要に応じて常用される防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の添加物を加えることもできる。
口腔内速崩壊錠は公知の方法に準じて製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質をそのまま、あるいは原末もしくは造粒原末粒子に適当なコーティング剤（エチルセルロース、ヒドキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アクリル酸メタクリル酸コポリマー等）、可塑剤（ポリエチレングリコール、クエン酸トリエチル等）を用いて被覆を施した活性物質に賦形剤（ラクトース、マンニトール、グルコース、微結晶セルロース、コロイダルシリカ、デンプン等）、結合剤（ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等）、崩壊剤（デンプン、Ｌ−ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、繊維素グリコール酸カルシウム等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、分散補助剤（グルコース、フルクトース、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルトース、トレハロース、リン酸塩、クエン酸塩、ケイ酸塩、グリシン、グルタミン酸、アルギニン等）安定剤、溶解補助剤（ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グルタミン酸、アスパラギン酸等）、香味料（オレンジ、ストロベリー、ミント、レモン、バニラ等）等と混合され、常法に従って製剤化して用いられる。また、必要によりコーティング剤（白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）で被覆していてもよいし、また２以上の層で被覆していてもよい。また、必要に応じて常用される防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤等の添加物を加えることもできる。
経口投与のための内服用液剤は、薬剤的に許容される水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含む。このような液剤においては、ひとつまたはそれ以上の活性物質が、一般的に用いられる希釈剤（精製水、エタノールまたはそれらの混液等）に溶解、懸濁または乳化される。さらにこの液剤は、湿潤剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、保存剤、緩衝剤等を含有していてもよい。
非経口投与のための外用剤の剤形には、例えば、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、湿布剤、貼付剤、リニメント剤、噴霧剤、吸入剤、スプレー剤、エアゾル剤、点眼剤、および点鼻剤等が含まれる。これらはひとつまたはそれ以上の活性物質を含み、公知の方法または通常使用されている処方により製造される。
軟膏剤は公知または通常使用されている処方により製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質を基剤に研和、または溶融させて調製される。軟膏基剤は公知あるいは通常使用されているものから選ばれる。例えば、高級脂肪酸または高級脂肪酸エステル（アジピン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、アジピン酸エステル、ミリスチン酸エステル、パルミチン酸エステル、ステアリン酸エステル、オレイン酸エステル等）、ロウ類（ミツロウ、鯨ロウ、セレシン等）、界面活性剤（ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸エステル等）、高級アルコール（セタノール、ステアリルアルコール、セトステアリルアルコール等）、シリコン油（ジメチルポリシロキサン等）、炭化水素類（親水ワセリン、白色ワセリン、精製ラノリン、流動パラフィン等）、グリコール類（エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、マクロゴール等）、植物油（ヒマシ油、オリーブ油、ごま油、テレピン油等）、動物油（ミンク油、卵黄油、スクワラン、スクワレン等）、水、吸収促進剤、かぶれ防止剤から選ばれるもの単独または２種以上を混合して用いられる。さらに、保湿剤、保存剤、安定化剤、抗酸化剤、着香剤等を含んでいてもよい。
ゲル剤は公知または通常使用されている処方により製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質を基剤に溶融させて調製される。ゲル基剤は公知あるいは通常使用されているものから選ばれる。例えば、低級アルコール（エタノール、イソプロピルアルコール等）、ゲル化剤（カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース等）、中和剤（トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン等）、界面活性剤（モノステアリン酸ポリエチレングリコール等）、ガム類、水、吸収促進剤、かぶれ防止剤から選ばれるもの単独または２種以上を混合して用いられる。さらに、保存剤、抗酸化剤、着香剤等を含んでいてもよい。
クリーム剤は公知または通常使用されている処方により製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質を基剤に溶融または乳化させて調製される。クリーム基剤は公知あるいは通常使用されているものから選ばれる。例えば、高級脂肪酸エステル、低級アルコール、炭化水素類、多価アルコール（プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）、高級アルコール（２−ヘキシルデカノール、セタノール等）、乳化剤（ポリオキシエチレンアルキルエーテル類、脂肪酸エステル類等）、水、吸収促進剤、かぶれ防止剤から選ばれるもの単独または２種以上を混合して用いられる。さらに、保存剤、抗酸化剤、着香剤等を含んでいてもよい。
湿布剤は公知または通常使用されている処方により製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質を基剤に溶融させ、練合物とし支持体上に展延塗布して製造される。湿布基剤は公知あるいは通常使用されているものから選ばれる。例えば、増粘剤（ポリアクリル酸、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、デンプン、ゼラチン、メチルセルロース等）、湿潤剤（尿素、グリセリン、プロピレングリコール等）、充填剤（カオリン、酸化亜鉛、タルク、カルシウム、マグネシウム等）、水、溶解補助剤、粘着付与剤、かぶれ防止剤から選ばれるもの単独または２種以上を混合して用いられる。さらに、保存剤、抗酸化剤、着香剤等を含んでいてもよい。
貼付剤は公知または通常使用されている処方により製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質を基剤に溶融させ、支持体上に展延塗布して製造される。貼付剤用基剤は公知あるいは通常使用されているものから選ばれる。例えば、高分子基剤、油脂、高級脂肪酸、粘着付与剤、かぶれ防止剤から選ばれるもの単独または２種以上を混合して用いられる。さらに、保存剤、抗酸化剤、着香剤等を含んでいてもよい。
リニメント剤は公知または通常使用されている処方により製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物を水、アルコール（エタノール、ポリエチレングリコール等）、高級脂肪酸、グリセリン、セッケン、乳化剤、懸濁化剤等から選ばれるもの単独または２種以上に溶解、懸濁または乳化させて調製される。さらに、保存剤、抗酸化剤、着香剤等を含んでいてもよい。
噴霧剤、吸入剤、およびスプレー剤は、一般的に用いられる希釈剤以外に亜硫酸水素ナトリウムのような安定剤と等張性を与えるような緩衝剤、例えば塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウムあるいはクエン酸のような等張剤を含有していてもよい。スプレー剤の製造方法は、例えば米国特許第２，８６８，６９１号および同第３，０９５，３５５号に詳しく記載されている。
非経口投与のための注射剤としては、溶液、懸濁液、乳濁液および用時溶剤に溶解または懸濁して用いる固形の注射剤を包含する。注射剤は、ひとつまたはそれ以上の活性物質を溶剤に溶解、懸濁または乳化させて用いられる。溶剤として、例えば注射用蒸留水、生理食塩水、植物油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノールのようなアルコール類等およびそれらの組み合わせが用いられる。さらにこの注射剤は、安定剤、溶解補助剤（グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリソルベート８０（登録商標）等）、懸濁化剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤、保存剤等を含んでいてもよい。これらは最終工程において滅菌するか無菌操作法によって調製される。また無菌の固形剤、例えば凍結乾燥品を製造し、その使用前に無菌化または無菌の注射用蒸留水または他の溶剤に溶解して使用することもできる。
非経口投与のための点眼剤には、点眼液、懸濁型点眼液、乳濁型点眼液、用時溶解型点眼液および眼軟膏が含まれる。
これらの点眼剤は公知の方法に準じて製造される。例えば、ひとつまたはそれ以上の活性物質を溶剤に溶解、懸濁または乳化させて用いられる。点眼剤の溶剤としては、例えば、滅菌精製水、生理食塩水、その他の水性溶剤または注射用非水性用剤（例えば、植物油等）等およびそれらの組み合わせが用いられる。点眼剤は、等張化剤（塩化ナトリウム、濃グリセリン等）、緩衝化剤（リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等）、界面活性化剤（ポリソルベート８０（商品名）、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等）、安定化剤（クエン酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム等）、防腐剤（塩化ベンザルコニウム、パラベン等）等などを必要に応じて適宜選択して含んでいてもよい。これらは最終工程において滅菌するか、無菌操作法によって調製される。また無菌の固形剤、例えば凍結乾燥品を製造し、その使用前に無菌化または無菌の滅菌精製水または他の溶剤に溶解して使用することもできる。
非経口投与のための吸入剤としては、エアロゾル剤、吸入用粉末剤又は吸入用液剤が含まれ、当該吸入用液剤は用時に水又は他の適当な媒体に溶解又は懸濁させて使用する形態であってもよい。
これらの吸入剤は公知の方法に準じて製造される。
例えば、吸入用液剤の場合には、防腐剤（塩化ベンザルコニウム、パラベン等）、着色剤、緩衝化剤（リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム等）、等張化剤（塩化ナトリウム、濃グリセリン等）、増粘剤（カリボキシビニルポリマー等）、吸収促進剤などを必要に応じて適宜選択して調製される。
吸入用粉末剤の場合には、滑沢剤（ステアリン酸およびその塩等）、結合剤（デンプン、デキストリン等）、賦形剤（乳糖、セルロース等）、着色剤、防腐剤（塩化ベンザルコニウム、パラベン等）、吸収促進剤などを必要に応じて適宜選択して調製される。
吸入用液剤を投与する際には通常噴霧器（アトマイザー、ネブライザー）が使用され、吸入用粉末剤を投与する際には通常粉末薬剤用吸入投与器が使用される。
非経口投与のためその他の組成物としては、ひとつまたはそれ以上の活性物質を含み、常法により処方される直腸内投与のための坐剤および腟内投与のためのペッサリー等が含まれる。
本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストは、他の薬剤、例えば、ＨＩＶ感染の予防および／または治療剤（特に、ＡＩＤＳの予防および／または治療剤）と組み合わせて用いてもよい。この場合、これらの薬物は、別々にあるいは同時に、薬理学的に許容されうる賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、溶解補助剤、希釈剤等と混合して製剤化し、ＨＩＶ感染の予防および／または治療のための医薬組成物として経口的にまたは非経口的に投与することができる。
本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストは、他のＨＩＶ感染の予防および／または治療剤（特に、ＡＩＤＳの予防および／または治療剤）に対して耐性を獲得したＨＩＶ−１に対して感染阻害作用を有する。従って、他のＨＩＶ感染の予防および／または治療剤が効果を示さなくなったＨＩＶ感染者に対しても用いることができる。この場合、本発明化合物を単剤で用いても良いが、感染しているＨＩＶ−１株が耐性を獲得したＨＩＶ感染の予防および／または治療剤またはそれ以外の薬剤と併用して用いても良い。
本発明には、のＣＣＲ５アンタゴニストまたはアゴニストとＨＩＶ感染を阻害しない薬物を組み合わせてなり、単剤よりもＨＩＶ感染の予防および／または治療効果が増強された薬剤組成物をも含む。
本発明のＣＣＲ５アンタゴニストおよび／またはアゴニストと組み合わせて用いられる他のＨＩＶ感染の予防および／または治療剤の例としては、逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ケモカイン拮抗剤（例えば、ＣＣＲ２拮抗剤、ＣＣＲ３拮抗剤、ＣＣＲ４拮抗剤、ＣＣＲ５拮抗剤、ＣＸＣＲ４拮抗剤等）、フュージョン阻害剤、ＨＩＶ−１の表面抗原に対する抗体、ＨＩＶ−１のワクチン等が挙げられる。
逆転写酵素阻害剤としては、具体的には、（１）核酸系逆転写酵素阻害剤のジドブジン（商品名：レトロビル）、ジダノシン（商品名：ヴァイデックス）、ザルシタビン（商品名：ハイビッド）、スタブジン（商品名：ゼリット）、ラミブジン（商品名：エピビル）、アバカビル（商品名：ザイアジェン）、アデフォビル、ジピボキシル、エントリシタビン（商品名：コビラシル）、ＰＭＰＡ（商品名：テノフォヴィル）等、（２）非核酸系逆転写酵素阻害剤のネビラピン（商品名：ビラミューン）、デラビルジン（商品名：レスクリプター）、エファビレンツ（商品名：サスティバ、ストックリン）、カプラヴィリン（ＡＧ１５４９）等が挙げられる。
プロテアーゼ阻害剤としては、具体的には、インジナビル（商品名：クリキシバン）、リトナビル（商品名：ノービア）、ネルフィナビル（商品名：ビラセプト）、サキナビル（商品名：インビラーゼ、フォートベース）、アンプリナビル（商品名：エジネラーゼ）、ロピナビル（商品名：カレトラ）、ティプラナビル等が挙げられる。
ケモカイン拮抗剤としては、ケモカインレセプターの内因性のリガンド、またはその誘導体および非ペプチド性低分子化合物、またはケモカインレセプターに対する抗体が含まれる。
ケモカインレセプターの内因性のリガンドとしては、具体的には、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＳＤＦ−１α、ＳＤＦ−１β、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−４、エオタキシン（Ｅｏｔａｘｉｎ）、ＭＤＣ等が挙げられる。
内因性リガンドの誘導体としては、具体的には、ＡＯＰ−ＲＡＮＴＥＳ、Ｍｅｔ−ＳＤＦ−１α、Ｍｅｔ−ＳＤＦ−１β等が挙げられる。
ケモカインレセプターの抗体としては、具体的には、Ｐｒｏ−１４０等が挙げられる。
ＣＣＲ２拮抗剤としては、具体的には、ＷＯ９９／０７３５１号、ＷＯ９９／４０９１３号、ＷＯ００／４６１９５号、ＷＯ００／４６１９６号、ＷＯ００／４６１９７号、ＷＯ００／４６１９８号、ＷＯ００／４６１９９号、ＷＯ００／６９４３２号、ＷＯ００／６９８１５号またはＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１０，１８０３（２０００）に記載された化合物等が挙げられる。
ＣＣＲ３拮抗剤としては、具体的には、ＤＥ１９８３７３８６号、ＷＯ９９／５５３２４号、ＷＯ９９／５５３３０号、ＷＯ００／０４００３号、ＷＯ００／２７８００号、ＷＯ００／２７８３５号、ＷＯ００／２７８４３号、ＷＯ００／２９３７７号、ＷＯ００／３１０３２号、ＷＯ００／３１０３３号、ＷＯ００／３４２７８号、ＷＯ００／３５４４９号、ＷＯ００／３５４５１号、ＷＯ００／３５４５２号、ＷＯ００／３５４５３号、ＷＯ００／３５４５４号、ＷＯ００／３５８７６号、ＷＯ００／３５８７７号、ＷＯ００／４１６８５号、ＷＯ００／５１６０７号、ＷＯ００／５１６０８号、ＷＯ００／５１６０９号、ＷＯ００／５１６１０号、ＷＯ００／５３１７２号、ＷＯ００／５３６００号、ＷＯ００／５８３０５号、ＷＯ００／５９４９７号、ＷＯ００／５９４９８号、ＷＯ００／５９５０２号、ＷＯ００／５９５０３号、ＷＯ００／６２８１４号、ＷＯ００／７３３２７号またはＷＯ０１／０９０８８号に記載された化合物等が挙げられる。
ＣＣＲ５拮抗剤としては、具体的には、ＷＯ９９／１７７７３号、ＷＯ９９／３２１００号、ＷＯ００／０６０８５号、ＷＯ００／０６１４６号、ＷＯ００／１０９６５号、ＷＯ００／０６１５３号、ＷＯ００／２１９１６号、ＷＯ００／３７４５５号、ＥＰ１０１３２７６号、ＷＯ００／３８６８０号、ＷＯ００／３９１２５号、ＷＯ００／４０２３９号、ＷＯ００／４２０４５号、ＷＯ００／５３１７５号、ＷＯ００／４２８５２号、ＷＯ００／６６５５１号、ＷＯ００／６６５５８号、ＷＯ００／６６５５９号、ＷＯ００／６６１４１号、ＷＯ００／６８２０３号、ＪＰ２０００３０９５９８号、ＷＯ００／５１６０７号、ＷＯ００／５１６０８号、ＷＯ００／５１６０９号、ＷＯ００／５１６１０号、ＷＯ００／５６７２９号、ＷＯ００／５９４９７号、ＷＯ００／５９４９８号、ＷＯ００／５９５０２号、ＷＯ００／５９５０３号、ＷＯ００／７６９３３号、ＷＯ９８／２５６０５号、ＷＯ９９／０４７９４号、ＷＯ９９／３８５１４号またはＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１０，１８０３（２０００）に記載された化合物等が挙げられる。
ＣＸＣＲ４拮抗剤としては、具体的には、ＡＭＤ−３１００、Ｔ−２２、ＫＲＨ−１１２０およびＷＯ００／６６１１２号に記載された化合物等が挙げられる。
フュージョン阻害剤としては、具体的には、Ｔ−２０（ｐｅｎｔａｆｕｓｉｄｅ）、Ｔ−１２４９等が挙げられる。
以上の併用薬剤は例示であって、本発明はこれらに限定されるものではない。
代表的な逆転写酵素阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤の通常の臨床投与量は、特に限定されないが、例えば、以下に示すとおりである。
ジドブジン：１００ｍｇカプセル、１回２００ｍｇ、１日３回；
３００ｍｇ錠剤、１回３００ｍｇ、１日２回；
ジダノシン：２５〜２００ｍｇ錠剤、１回１２５〜２００ｍｇ、１日２回；
ザルシタビン：０．３７５ｍｇ〜０．７５ｍｇ錠剤、１回０．７５ｍｇ、１日３回；
スタブジン：１５〜４０ｍｇカプセル、１回３０〜４０ｍｇ、１日２回；
ラミブジン：１５０ｍｇ錠剤、１回１５０ｍｇ、１日２回；
アバカビル：３００ｍｇ錠剤、１回３００ｍｇ、１日２回；
ネビラピン：２００ｍｇ錠剤、１回２００ｍｇ、１４日間１日１回、その後１日２回；
デラビルジン：１００ｍｇ錠剤、１回４００ｍｇ、１日３回；
エファビレンツ：５０〜２００ｍｇカプセル、１回６００ｍｇ、１日１回；
インジナビル：２００〜４００カプセル、１回８００ｍｇ、１日３回；
リトナビル：１００ｍｇカプセル、１回６００ｍｇ、１日２回；
ネルフィナビル：２５０ｍｇ錠剤、１回７５０ｍｇ、１日３回；
サキナビル：２００ｍｇカプセル、１回１，２００ｍｇ、１日３回；
アンプレナビル：５０〜１５０ｍｇ錠剤、１回１，２００ｍｇ、１日２回。
【図面の簡単な説明】  図１は、抗ｈＣＣＲ５抗体のｈＣＣＲ５結合に対する被験化合物の阻害作用（実施例２）を示す。
図２は、化合物１のマウス生体内におけるｈＣＣＲ５結合持続性（実施例５）を示す。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、実施例によって本発明を詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例１：きびしい洗浄条件下でのＣＣＲ５に対するリガンド結合阻害実験
ヒトＣＣＲ５発現細胞（ｈＣＣＲ５−ＣＨＯ細胞）を培養プレートに播種し、培地（Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  ｍｅｄｉｕｍ／１０％ＦＢＳ／Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ）で１日間（または２日間）３７℃、５％ＣＯ２のＣＯ２インキュベーターで培養して実験に用いた。各ウェル（ｗｅｌｌ）の培地を除去し、細胞をアッセイバッファー（Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  ｍｅｄｉｕｍ／０．５％ＢＳＡ／２０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ）で洗浄し、アッセイバッファーを各ウェル（ｗｅｌｌ）に添加した。各濃度の被験化合物を添加し、室温で４０分間インキュベーションした後、ＰＢＳ（１ｍＬ／ｗｅｌｌ）で細胞を８回洗浄した。さらにアッセイバッファーを加え、３７℃で４時間インキュベーションした。４時間後、アッセイバッファーを除き、放射性標識リガンドを加えた。細胞を含む培養混合物を室温で４０分間インキュベーションした後、氷冷したＰＢＳ  １ｍＬ／ｗｅｌｌで３回洗浄した、１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液で細胞を溶解し、細胞溶解液の放射活性をγカウンターで測定した。
その結果、ＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９はそれぞれＩＣ５０値１６．７および１０．４ｎｍｏｌ／Ｌを示した。（３Ｒ）−１−ブチル−２，５−ジオキソ−３−（（１Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシルメチル）−９−（４−（４−カルボキシフェニルオキシ）フェニルメチル）−１，４，９−トリアザスピロ［５．５］ウンデカン・塩酸塩（化合物１）および（３Ｒ）−１−ブチル−２，５−ジオキソ−３−（（１Ｒ）−１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシルメチル）−９−（４−（４−メチルアミノカルボニルフェニルオキシ）フェニルメチル）−１，４，９−トリアザスピロ［５．５］ウンデカン・塩酸塩（化合物２）はそれぞれＩＣ５０値４．２および１．５ｎｍｏｌ／Ｌを示した。化合物１及び化合物２はＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９に比べて、化合物１の場合それぞれ約４倍及び約２．５倍、化合物２の場合それぞれ約１１倍および約７倍の強力な阻害活性を示すことが確認された。
実施例２：抗ｈＣＣＲ５抗体結合阻害実験
ヒトＣＣＲ５発現細胞（ｈＣＣＲ５−ＣＨＯ細胞）を培養フラスコに播種し、培地（Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  ｍｅｄｉｕｍ／１０％ＦＢＳ／Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ）を用い、３７℃、５％ＣＯ２のＣＯ２インキュベーター内で２〜３日間培養し実験に用いた。培養フラスコから培地を除去したのち、１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ／ＰＢＳを加え、プレートから剥離させ回収した。回収した細胞をＰＢＳで１回洗浄後、ＰＢＳで再懸濁して細胞数を計測した。遠心し上清を吸引除去した後、アッセイバッファー（０．５％ＦＢＳ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  ｍｅｄｉｕｍ）で懸濁した。細胞懸濁液に被験化合物を加え、氷上にてインキュベーションした。さらにＦＩＴＣ標識抗ｈＣＣＲ５抗体（４５５３１．１１１あるいは４５５３２．１１１）またはＦＩＴＣ標識イソタイプコントロール抗体を添加し、氷上、遮光下にて反応させた。反応後、氷冷したＰＢＳで２回洗浄し、氷冷したＦＡＣＳバッファー（２％ＦＢＳ／ＰＢＳ）に細胞を再懸濁して結合した抗ｈＣＣＲ５抗体の量（蛍光強度）をフローサイトメーター（ＢＥＣＴＯＮ  ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ）にて測定した。
その結果、抗ｈＣＣＲ５抗体（４５５３１．１１１および４５５２３．１１１）結合に対して、化合物１、化合物２、ＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９の阻害効果を検討した。それぞれの化合物を１０μｍｏｌ／Ｌ添加しアッセイを行ない、フローサイトメーターの結果をヒストグラムで表示した結果を図１に示す。ｈＣＣＲ５発現細胞への抗ｈＣＣＲ５抗体４５５３１．１１１の結合に対して、化合物１および化合物２は強い阻害作用を示したが、ＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９による阻害は弱かった。また、化合物１、化合物２およびＳＣＨ−３５１１２５は４５５２３．１１１の結合を強く阻害するのに対して、ＴＡＫ−７７９は弱い阻害を示した。以上の結果より、両方の抗体のｈＣＣＲ５結合に対する阻害活性は化合物１＝化合物２＞ＳＣＨ−３５１１２５＞ＴＡＫ−７７９の順で強いことを見出した。
実施例３：トリチウム化した化合物１のｈＣＣＲ５結合に対するＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９の阻害作用
ヒトＣＣＲ５発現細胞（ｈＣＣＲ５−ＣＨＯ細胞）を培養プレートに播種し、培地（Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  ｍｅｄｉｕｍ／１０％ＦＢＳ／Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ）で１日間３７℃、５％ＣＯ２のＣＯ２インキュベーターで培養して実験に用いた。各ウェル（ｗｅｌｌ）の培地を除去し、細胞をアッセイバッファー（Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  ｍｅｄｉｕｍ／０．５％ＢＳＡ／２０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ）で洗浄し、アッセイバッファーを添加した。各濃度のＳＣＨ−３５１１２５またはＴＡＫ−７７９を添加し、３用量のトリチウム化した化合物１溶液を加えた。室温で２時間インキュベーションした後、１ｍＬ／ｗｅｌｌの氷冷したＤ−ＰＢＳで細胞を洗浄した。１ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＯＨで細胞を溶解し、中和させた後、シンチレータ（ＡＣＳ  ＩＩ、Ａｍｅｒｓｈａｍ）を加えた。各バイアルの放射能を液体シンチレーションカウンター（ＴＲＩ−ＣＡＲＢ  ２９００ＴＲ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。
トリチウム化した化合物１のそれぞれの濃度におけるＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９の濃度−置換曲線を作成し、作用様式を検討した。その結果、トリチウム化した化合物１のｈＣＣＲ５結合に対して、ＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９はいずれも濃度を増加させると完全な阻害を示し、トリチウム化した化合物１の濃度の増加にともない置換曲線は高濃度側に平行移動した。この結果から化合物１はＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９と競合的に拮抗し、化合物１はＳＣＨ−３５１１２５、ＴＡＫ−７７９と全く異なった部位ではなく、一部重なるような領域を認識していることが確認された。
実施例４：細胞遊走に対する阻害作用
ヒトＣＣＲ５発現細胞（ｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞）を用い、ＭＩＰ−１αに対する遊走実験を行なった。まず、２４穴トランスウェルプレートの下室（ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  ｂｏｔｔｏｍ）にＭＩＰ−１α含有培地０．５ｍＬを加えた。次に、２４穴トランスウェルプレートの上室（ｔｒａｎｓｗｅｌｌ  ｉｎｓｅｒｔ）に２倍濃度の被検化合物の化合物１、ＳＣＨ−３５１１２５またはＴＡＫ−７７９を５０μＬずつ加えた。続いて、ｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞５０μＬをトランスウェルの上室に加えた。トランスウェルプレートの上室ウェルをケモカインの入った下室のウェル上に移動させて遊走を開始させた。これらの細胞をＣＯ２インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２、湿度９５％）内で３時間培養した後、トランスウェルインサートの下部を０．５ｍＬの洗浄バッファー（ＰＢＳ、０．１％ＦＢＳ、２ｍｍｏｌ／Ｌ  ＥＤＴＡ）を用いて下室に洗いこんだ。細胞数の測定は、フローサイトメーター（ＢＥＣＴＯＮ  ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ）を用いて行ない、ゲート（ＦＳＣ×ＳＳＣ）内の細胞数をカウントした。遊走した細胞数は最初に添加した細胞をＦＡＣＳ解析したときのカウントに対する割合（％）とし、さらに、ＤＭＳＯコントロール群に対する阻害活性からＩＣ５０値を算出した。
その結果、化合物１、ＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９はＭＩＰ−１αによるｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞の遊走を阻害し、それぞれのＩＣ５０値は４．３、２１．０、５５．０ｎｍｏｌ／Ｌであった。
化合物１、ＳＣＨ−３５１１２５およびＴＡＫ−７７９はＭＩＰ−１αのｈＣＣＲ５への結合を阻害することによって細胞遊走機能を阻害した。機能的アッセイの阻害の強弱は化合物１＞ＳＣＨ−３５１１２５＞ＴＡＫ−７７９の順序であった。
実施例５：マウス生体内におけるｈＣＣＲ５結合持続性
ヒトＣＣＲ５発現細胞（ｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞）を０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳに懸濁してカルボキシフルオレセインジアセテートスクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ，終濃度１μｍｏｌ／Ｌ）を添加し、３７℃、遮光下でインキュベーションした。０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳで細胞を２回洗浄後、０．５％ＢＳＡ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２  ｍｅｄｉｕｍに懸濁した。化合物１を充分量添加し、３７℃、遮光下でインキュベーションし、化合物１をｈＣＣＲ５に結合させた。ビヒクル（Ｖｅｈｉｃｌｅ）群は０．１％ＤＭＳＯのみで同様の操作を行なった。フリーの化合物１を除去するためＰＢＳで細胞を２回洗浄し、ＰＢＳで懸濁した。この細胞懸濁液をＢａｌｂ／ｃマウスの尾静脈内に移入し、細胞移入後数時間（例えば０、０．５、１．５、３、５時間）後にエーテル麻酔下で腹部大静脈から採血および脾臓を摘出した。末梢血はＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ｍを用いて遠心分離してＰＢＭＣを調製し、脾臓は潰して溶血処理後洗浄して細胞を得た。調製した細胞をＰＥ標識抗ｈＣＣＲ５抗体（２Ｄ７及び４５５３１．１１１）にて染色した。フローサイトメーターにてＣＦＳＥ陽性ｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞を検出し、その細胞に結合したＰＥ標識抗ｈＣＣＲ５抗体の蛍光強度（Ｍｅａｎ値）を測定した占有率を以下の式により算出した。
Δｍｅａｎ値＝（（対象試料の４５５３１．１１１結合時の蛍光強度ｍｅａｎ値）−（アイソタイプコントロール用のマウスから回収した細胞をＰＥ標識アイソタイプコントロールで染色したものの蛍光強度ｍｅａｎ値）
補正値＝（対象試料の４５５３１．１１１結合時の蛍光強度Δｍｅａｎ値）／（対象試料の２Ｄ７結合時の蛍光強度Δｍｅａｎ値）
受容体占有率（Ｒ）＝｛１−（（対象試料の補正値）／（Ｖｅｈｉｃｌｅの補正値の平均値））｝×１００
補正受容体占有率＝｛受容体占有率（Ｒ）／（０時間のＶｅｈｉｃｌｅの受容体占有率（Ｒ）の平均値）｝×１００
化合物１のマウス生体内におけるｈＣＣＲ５結合持続性を検討した。図２に細胞移入後０、０．５、１．５、３、５時間における化合物１のｈＣＣＲ５占有率（％）を示した。化合物１はマウス生体内においてｈＣＣＲ５に長時間結合し、細胞移入後５時間においても６１％のｈＣＣＲ５占有率を示すことが確認された。この経時変化から半減期は１２時間であり、循環血中に化合物が存在しない場合も、長時間に渡ってｈＣＣＲ５上に化合物１が残存することが確認された。
実施例６：化合物投与後のマウス生体内におけるｈＣＣＲ５結合持続性
化合物１を３または３０ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与し、その１５分後にＣＦＳＥラベルされたｈＣＣＲ５／ＢａＦ３細胞をＢａｌｂ／ｃマウスに尾静脈内に移入して、細胞移入後数時間（０、０．５、４、８時間）後にエーテル麻酔下で腹部大静脈から採血および脾臓を摘出した。末梢血はＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ｍを用いて遠心分離してＰＢＭＣを調製し、脾臓は潰して溶血処理後洗浄して細胞を得た。調製した細胞をＰＥ標識抗ｈＣＣＲ５抗体（４５５３１．１１１）にて染色した。フローサイトメーターにてＣＦＳＥ陽性ｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞を検出し、その細胞に結合したＰＥ標識抗ｈＣＣＲ５抗体（２Ｄ７及び４５５３１．１１１）の蛍光強度（Ｍｅａｎ値）を測定した。
占有率は以下の式により算出した。
Δｍｅａｎ値＝（対象試料の４５５３１．１１１結合時の蛍光強度ｍｅａｎ値）−（アイソタイプコントロール用のマウスから回収した細胞をＰＥ標識アイソタイプコントロールで染色したものの蛍光強度ｍｅａｎ値）
補正値＝（対象試料の４５５３１．１１１結合時の蛍光強度Δｍｅａｎ値）／（対象試料の２Ｄ７に対する蛍光強度Δｍｅａｎ値）
受容体占有率（Ｒ）＝｛１−（（対象試料の補正値）／（Ｖｅｈｉｃｌｅの補正値の平均値））｝×１００
その結果、末梢血における化合物１のｈＣＣＲ５占有率は移入後０．５、４、８時間で３０ｍｇ／ｋｇではそれぞれ９６％、８５％、７０％、３ｍｇ／ｋｇではそれぞれ９３％、６８％、５４％であることが確認された。また、脾臓においても３０ｍｇ／ｋｇの０．５、４、８時間でそれぞれ９６％、６９％、５４％、３ｍｇ／ｋｇの０．５、４、８時間でそれぞれ９２％、５５％、３２％のｈＣＣＲ５が化合物１により占有されていることが明らかとなった。本実験における化合物１血漿中濃度は３０ｍｇ／ｋｇの０．５、４、８時間でそれぞれ１６１２、２２、４ｎｍｏｌ／Ｌ、３ｍｇ／ｋｇの０．５、４、８時間でそれぞれ３５２、５、１ｎｍｏｌ／Ｌであった。これらの血漿中濃度から推定されるｈＣＣＲ５占有率をインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）のマウス血漿中抗体阻害実験をもとに求めたところ、３０ｍｇ／ｋｇの０．５、４、８時間ではそれぞれ約１００％、５２％、１３％、３ｍｇ／ｋｇの０．５、４、８時間ではそれぞれ１００％、１６％、３％であることが判明した。このことから、化合物１は生体内においてｈＣＣＲ５に結合し、その結合は血漿中濃度から推定される占有率よりも高く維持されることが明らかとなった。
以上の結果より、化合物１は生体内において結合持続性を示すことが確認された。このように循環血中でも長時間ｈＣＣＲ５に結合し続ける化合物、すなわち、強結合部位に結合する化合物は作用が持続するため、経口的、非経口的に投与することによって薬理効果を持続することが明らかであり、薬剤の投与回数を減らせるメリットがある。
実施例７：ヒトＰＢＭＣへのＨＩＶ−１感染の阻害作用
ヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）はＨＩＶ陰性の健常人からＦｉｃｏｌ−Ｈｉｐａｑｕｅ密度勾配遠心で単離し、１０μｇ／ｍｌのＰＨＡ（Ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｕｌｕｔｉｎｉｎ）存在下で３日間培養した。ＰＨＡ刺激ＰＢＭＣを１０％血清を含むＲＰＭＩ１６４０に懸濁し、９６ウエルマイクロプレートにまきこんだ。さらに各種濃度のＣＣＲ５アンタゴニスト単独共存下で、Ｒ５−ＨＩＶ−１株（例えばＨＩＶ−１ＢａＬ等）を暴露した。７日間培養した後、培養上清中のＨＩＶ−１ｐ２４抗原の量をＬｕｍｉｐｕｌｓｅ  Ｆ（富士レビオ）を用いたＥＩＡ法により測定した。
実施例８：ＣＣＲ５アゴニストまたはアンタゴニストの判定法
（８−１）：ヒトＣＣＲ５発現細胞の樹立
＜８−１−Ａ＞：ヒトＣＣＲ５遺伝子の単離
ヒト胎盤ｃＤＮＡは、Ｍａｒａｔｈｏｎ  ｃＤＮＡ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて作製した。ＰＣＲプライマーであるｈＣＣＲ５ＸｂａＩ−Ｆ１：５’−ＡＧＣＴＡＧＴＣＴＡＧＡＴＣＣＧＴＴＣＣＣＣＴＡＣＡＡＧＡＡＡＣＴＣＴＣＣ−３’（配列番号１）およびｈＣＣＲ５ＸｂａＩ−Ｒ１：５’−ＡＧＣＴＡＧＴＣＴＡＧＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＴＣＴＧＡＣＴＧＧＧＴＣＡＣＣＡ−３’（配列番号２）は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｕ５４９９４の配列に基き設計した。
ヒト胎盤ｃＤＮＡを鋳型として、ＥｘＴａｑ（Ｔａｋａｒａ）を用いて、ＰＣＲ反応（９５℃で２分→［９５℃で３０秒、６０℃で４５秒、７２℃で１分］×３５回）を行なった。増幅したＰＣＲ産物を、１％アガロースゲル電気泳動後、ＱＩＡｑｕｉｃｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて精製し、制限酵素ＸｂａＩで切断した。切断した断片を、発現ベクターｐＥＦ−ＢＯＳ−ｂｓｒにＤＮＡ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  Ｖｅｒ．２（Ｔａｋａｒａ）を用いて連結し、大腸菌ＤＨ５αに形質転換した。このプラスミドｐＥＦ−ＢＯＳ−ｂｓｒ／ｈＣＣＲ５を調製し、ＤＮＡ配列を確認した。
＜８−１−Ｂ＞：ＣＨＯ細胞の培養
ＣＨＯ−ｄｈｆｒ（−）は、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２（ウシ胎児血清（１０％）、ペニシリン（５０Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（５０ｍｇ／ｍｌ）含有）を用いて炭酸ガスインキュベーター（温度：３７℃、ＣＯ２濃度：５％、湿度：９５％）内で培養した。また、形質導入した細胞は、上記にブラストサイジン（５μｇ／ｍｌ）を添加し、培養した。
＜８−１−Ｃ＞：ＣＨＯ細胞への形質導入
ＤＭＲＩＥ−Ｃ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を用いて、プラスミドｐＥＦ−ＢＯＳ−ｂｓｒ／ｈＣＣＲ５をＣＨＯ−ｄｈｆｒ（−）細胞に形質導入した。４８時間後、５μｇ／ｍｌのブラストサイジンを含む培地に交換して選択を行ない、安定過剰発現細胞を樹立した。
＜８−１−Ｄ＞：ＣＣＲ５発現解析
前記＜８−１−Ｃ＞に記載の方法によって得られたクローンにおけるヒトＣＣＲ５発現強度を、細胞をフルオレセインイソチオシアネート（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）（ＦＩＴＣ）標識抗ヒトＣＣＲ５抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって検出し、ＦＡＣＳｏｒｔ（登録商標、ベクトン・ディッキンソン社製）を用いて測定し、解析を行なった。なお、アイソタイプコントロール抗体として、ＦＩＴＣ標識マウスＩｇＧ２ａκ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用した。
（８−２）：ＣＣＲ５を介した細胞内Ｃａ濃度の上昇のモニター
＜８−２−Ａ＞：ＣＣＲ５アゴニストによる細胞内Ｃａ濃度の上昇効果及び内因性リガンドによる細胞内Ｃａ濃度の上昇に対するＣＣＲ５アンタゴニストによる阻害効果
前記（８−１）で作製したヒトＣＣＲ５安定発現ＣＨＯ細胞を３．５×１０４ｃｅｌｌｓ／１００μｌ／ウェルで播種した。翌日、培地を８０μｌ／ウェルのアッセイバッファー（Ｆｕｒａ−２ＡＭ（５μＭ）、Ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ（２．５ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ  ｐＨ７．４）含有Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２）に置き換えて１時間３７℃で培養した後、１００μｌの洗浄バッファー（Ｈａｎｋｓ（９．８ｍｇ／ｍｌ）、ＨＥＰＥＳ（２０ｍＭ）、ｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄｅ（２．５ｍＭ）含有）で２回洗い、更に１００μｌの洗浄バッファーを加え３０分室温静置した。化合物（各々０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０μＭ）を加え、３分後にＭＩＰ−１α（最終濃度３０ｎＭ）を添加した。化合物添加前３０秒前からモニターを開始し、７分３０秒間細胞内Ｃａ濃度の上昇をモニターした。細胞内Ｃａ濃度はＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｄｒｕｇ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ４０００（浜松ホトニクス社製）を用いて、励起光３４０ｎｍ／３８０ｎｍのシグナル強度を測定した。試験化合物のアゴニスト及びアンタゴニスト活性は、化合物非添加時のＭＩＰ−１αのシグナル強度を１００％として次の式により算出した。
アゴニスト活性（％）＝（Ｅａ／Ｅｃ）×１００
Ｅｃ：ＭＩＰ−１α添加時のＣａ２＋一過性上昇の測定値
Ｅａ：試験化合物を添加時のＣａ２＋一過性上昇の測定値
アンタゴニスト活性（％）＝｛（Ｅｃ−Ｅａ）／Ｅｃ｝×１００
Ｅｃ：試験化合物を含まないＶｅｈｉｃｌｅを添加した後のＭＩＰ−１α添加時のＣａ２＋一過性上昇の測定値
Ｅａ：試験化合物を添加した後のＭＩＰ−１αによるＣａ２＋一過性上昇の測定値
＜８−２−Ｂ＞：内因性リガンドによるＣＣＲ５アゴニストの作用阻害
前記＜８−２−Ａ＞と同様にして、内因性リガンドによるＣＣＲ５アゴニストの作用阻害活性を調べた。ＣＣＲ５内因性リガンドであるＭＩＰ−１α（３０ｎＭ）を加え、３分後に各アゴニスト（１０μＭ）を添加し、ＭＩＰ−１α添加開始前３０秒から７分３０秒間細胞内Ｃａ濃度（シグナル強度）をモニターした。
ＣＣＲ５アゴニストは単独でＣＣＲ５の細胞内Ｃａ濃度（シグナル強度）を上昇させたが、ＣＣＲ５の内因性リガンドであるＭＩＰ−１αを予め添加することによりＣＣＲ５の脱感作が起こり、本発明化合物による細胞内Ｃａ濃度（シグナル強度）の上昇は抑制された．したがって、これらの化合物はＣＣＲ５を特異的に活性化することが示された。
実施例９：ヒトＣＣＲ５発現細胞（ｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞）の遊走試験
（９−１）：ヒトＣＣＲ５発現細胞の樹立
＜９−１−Ａ＞：ヒトＣＣＲ５遺伝子の単離
前記＜８−１−Ａ＞ヒトＣＣＲ５遺伝子の単離に記載の方法によって行なった。
＜９−１−Ｂ＞：Ｂａ／Ｆ３細胞の培養
Ｂａ／Ｆ３細胞は抗生剤（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ａｎｔｉｍｙｏｔｉｃ）（終濃度：ペニシリンＧナトリウム（１００Ｕ／ｍｌ）、硫酸ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、アンフォテリシンＢ（０．２５μｇ／ｍｌ））（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（１０％）、インターロイキン３（ＩＬ−３）（５ｎｇ／ｍｌ）（Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ、Ｉｎｃ）含有ＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を用い、炭酸ガスインキュベーター内（温度：３７℃、ＣＯ２濃度：５％、湿度：９５％）で静置培養した。外来遺伝子安定過剰発現細胞の培養には上記培地に終濃度１０μｇ／ｍｌになるようにブラストサイジン（Ｋａｋｅｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）を添加した。
＜９−１−Ｃ＞：Ｂａ／Ｆ３細胞への形質導入
ヒトＣＣＲ５発現用プラスミド（ｐＥＦ−ＢＯＳ−ｂｓｒ／ｈＣＣＲ５）をＡａｔ  ＩＩで消化し、直鎖化した。直鎖化したプラスミドをＱＩＡ  ｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて精製した後、エレクトロポレーション（Ｇｅｎｅ  Ｐｕｌｓｅｒ（ＢＩＯ  ＲＡＤ）９６０μＦ／２５０Ｖ）によりＢａ／Ｆ３細胞に導入した。細胞は９６ウェル培養プレートに１０００、１００、１０ｃｅｌｌｓ／１００μｌ／ウェルの密度で播種し、４８時間後、終濃度１０μｇ／ｍｌになるようにブラストサイジンを添加して、ブラストサイジン耐性株をクローニングし、導入した外来遺伝子を発現する安定過剰発現クローン（ｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞）を樹立した。
＜９−１−Ｄ＞：ＣＣＲ５発現解析
前記＜８−１−Ｄ＞に記載の方法によって行なった。
（９−２）：細胞遊走試験
ＣＣＲ５アゴニストに対するヒトＣＣＲ５を発現したＢａ／Ｆ３細胞の遊走能を調べた。まず、２４穴トランスウェルプレートの下室に０．０１、０．０３、０．１、０．３、１μＭの試験化合物（０．５ｍｌ／ウェル）を加え、上室にｈＣＣＲ５−Ｂａ／Ｆ３細胞（１×１０５ｃｅｌｌｓ／０．０５ｍｌ／ウェル）を加えた。上室を下室に重ねることで試験を開始し、炭酸ガスインキュベーター（温度：３７℃、ＣＯ２濃度：５％、湿度：９５％）内で３時間インキュベーションした。また、これらの遊走細胞数を相対評価するために、最初に添加した細胞すべてが遊走した場合のスタンダードサンプル（１×１０５ｃｅｌｌｓ／０．５ｍｌ／ウェルのケモカイン含有培地）を調製し、これも同様にインキュベーションした。上室の外側下部を０．５ｍＬの洗浄バッファー（エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）（２ｍＭ）、ＦＢＳ（０．１％）含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））を用いて下室に洗い込み、下室に遊走した細胞をＦＡＣＳチューブに回収した。スタンダードについても、０．５ｍｌの洗浄バッファーを加えた。スタンダードサンプルおよび下室の細胞数を、ＦＡＣＳｏｒｔ（登録商標、ベクトン・ディッキンソン社製）を用いて測定し、３０秒間のゲート（ＦＳＣ×ＳＳＣ）内の細胞数を計数した。
各濃度の試験化合物による遊走活性は、以下の式に従って算出し、結果をｎ＝２の平均値で示した。
遊走活性（％）＝（Ｂ／Ａ）×１００
Ａ：スタンダードサンプルの測定値
Ｂ：試験化合物添加サンプルの測定値
【配列表】
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【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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