(57)【要約】β−コングリシニンを有効成分とするインスリン抵抗性改善用組成物を提供する。該組成物は、インスリン抵抗性を軽減することで、動脈硬化の予防、ＩＩ型糖尿病の予防を図ることができ、かつ従来の薬剤のような副作用や禁忌のない組成物である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−コングリシニンを有効成分とすることを特徴とするインスリン抵抗性改善用組成物。
【請求項２】
β−コングリシニンが大豆由来である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである請求項１記載の組成物。
【請求項４】
飲食品である請求項１記載の組成物。
【請求項５】
医薬である請求項１記載の組成物。
【請求項６】
β−コングリシニンの、インスリン抵抗性改善用組成物製造における使用。
【請求項７】
β−コングリシニンが大豆由来である請求項６記載の使用。
【請求項８】
用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである請求項６記載の使用。
【請求項９】
組成物が飲食品である請求項６記載の使用。
【請求項１０】
組成物が医薬である請求項６記載の使用。
【請求項１１】
インスリン抵抗性改善有効量のβ−コングリシニンをインスリン抵抗性改善の必要な哺乳動物に与えることを特徴とするインスリン抵抗性改善方法。
【請求項１２】
β−コングリシニンが大豆由来である請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
β−コングリシニンを有効成分とすることを特徴とするシンドロームＸの予防・治療用組成物。
【請求項１５】
β−コングリシニンが大豆由来である請求項１４記載の組成物。
【請求項１６】
用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである請求項１４記載の組成物。
【請求項１７】
β−コングリシニンの、シンドロームＸの予防・治療用組成物製造における使用。
【請求項１８】
β−コングリシニンが大豆由来である請求項１７記載の使用。
【請求項１９】
用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである請求項１７記載の使用。
【請求項２０】
シンドロームＸ予防・治療有効量のβ−コングリシニンをその予防・治療の必要な哺乳動物に与えることを特徴とするシンドロームＸの予防・治療方法。
【請求項２１】
β−コングリシニンが大豆由来である請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである請求項２０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、インスリン抵抗性を改善する組成物に関する。
【背景技術】  わが国において、心臓病疾患、脳血管疾患は双方合わせると悪性新生物（癌）を抜いて死因の第一位を占める。これらの疾患の原因となっているのは動脈硬化であり、糖尿病，高血圧，高脂血症，肥満などの生活習慣病が基盤となる。これら生活習慣病は戦後の日本経済の発展に伴う食生活の過食化，高脂肪・高カロリー化、運動不足、日常生活の不規則化等の環境因子に起因することが大きい。
これらの生活習慣病は単独でも動脈硬化に結びつくが、実際は複数が合併して動脈硬化になることが多い。つまり生活習慣病の合併が、先の心臓病疾患、脳血管疾患の発症に重要な役割をしていると考えられ、シンドロームＸ（例えば、Ｒｅａｖｅｎ  Ｇ、Ｃｕｒｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ．Ａｕｇ；３（４）：３２３−３３２，２００１参照）と呼ばれる。このシンドロームＸのひきがねとなるのは、インスリン抵抗性（インスリン作用不全）であるといわれている。
インスリン抵抗性とは、インスリンの標的である筋肉，肝臓，脂肪組織でのインスリン感受性が低下することにより、インスリンの作用が低下する現象である。インスリンは血糖を下げるための膵臓β細胞より分泌されるホルモンであるが、この過分泌が長期間続くことで、標的細胞の抵抗性が増し、膵臓β細胞が疲労しインスリン分泌不全になりＩＩ型糖尿病発症に至る。
インスリン抵抗性は遺伝因子、肥満、過食化、運動不足、ストレス、妊娠、加齢、ステロイドの長期使用などの環境因子が関与している。インスリン抵抗性改善にはこれらの因子を改善することが望まれ、食事療法と運動療法は内因性インスリンの節約に効果的である。効果が不十分な場合は薬事療法として、インスリン抵抗性改善剤である（ａ）チアゾリジンジオン剤や、（ｂ）ビグアナイド剤を投与する。しかし、これらの薬剤は副作用がある為、使用する際の制限を厳守しなければならない。特に、（ａ）チアゾリジンジオン剤では重篤な肝障害，腎機能障害の患者には禁忌であり、副作用の発現も報告されている。（ｂ）ビグアナイド剤では腎機能障害，乳酸アシドーシスの患者へは禁忌とされている。
上記のような状況を鑑み、摂取しても副作用のないインスリン抵抗性改善剤の開発が望まれている。
【発明の開示】
本発明の目的の１つは、インスリン抵抗性を軽減することで、動脈硬化の予防、２型糖尿病の予防を図ることができ、かつ従来の薬剤のような副作用や禁忌のない飲食品として有用な組成物を提供することである。
本発明のもう１つの目的は、シンドロームＸの予防・治療に有用な組成物を提供することである。
本発明のこれらの目的および他の目的ならびに利点を、以下の記載により明らかにする。
本発明者らは大豆タンパク質のうち、β−コングリシニンを分画、精製し、これを含有する組成物を調製し、脂質代謝，糖代謝への影響を種々検討する中で、β−コングリシニンを含有する組成物が血糖変化、インスリン分泌への調整効果に優れることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、
（１）β−コングリシニンを有効成分とすることを特徴とするインスリン抵抗性改善用組成物、
（２）β−コングリシニンが大豆由来である上記（１）記載の組成物、
（３）用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである上記（１）記載の組成物、
（４）飲食品である上記（１）記載の組成物、
（５）医薬である上記（１）記載の組成物、
（６）β−コングリシニンの、インスリン抵抗性改善用組成物製造における使用、
（７）β−コングリシニンが大豆由来である上記（６）記載の使用、
（８）用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである上記（６）記載の使用、
（９）組成物が飲食品である上記（６）記載の使用、
（１０）組成物が医薬である上記（６）記載の使用、
（１１）インスリン抵抗性改善有効量のβ−コングリシニンをインスリン抵抗性改善の必要な哺乳動物に与えることを特徴とするインスリン抵抗性改善方法、
（１２）β−コングリシニンが大豆由来である上記（１１）記載の方法、および
（１３）用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである上記（１１）記載の方法を提供するものである。
また、本発明は、
（１４）β−コングリシニンを有効成分とすることを特徴とするシンドロームＸの予防・治療用組成物、
（１５）β−コングリシニンが大豆由来である上記（１４）記載の組成物、
（１６）用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである上記（１４）記載の組成物、
（１７）β−コングリシニンの、シンドロームＸの予防・治療用組成物製造における使用、
（１８）β−コングリシニンが大豆由来である上記（１７）記載の使用、
（１９）用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである上記（１７）記載の使用、
（２０）シンドロームＸ予防・治療有効量のβ−コングリシニンをその予防・治療の必要な哺乳動物に与えることを特徴とするシンドロームＸの予防・治療方法、
（２１）β−コングリシニンが大豆由来である上記（２０）記載の方法、および
（２２）用いるβ−コングリシニンが、粗タンパク当りの大豆β−コングリシニンが４０重量％以上のβ−コングリシニンタンパクである上記２０記載の方法も提供する。
本発明の組成物は、インスリン抵抗性を軽減することで、動脈硬化の予防、ＩＩ型糖尿病の予防を図ることができ、かつ従来の薬剤のような副作用や禁忌のないインスリン抵抗性改善用組成物であり、かつシンドロームＸ予防・治療用組成物である。
【図面の簡単な説明】  図１は、試験例１における血糖の変化を示すグラフである。
図２は、試験例１における血中インスリン濃度（以下、ＩＲＩと略記する）変化を示すグラフである。
図３は、試験例１におけるＨＯＭＡ−ＩＲ（ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ−ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）の変化を示すグラフである。
図４は、試験例２における試験食およびプラセボの２週間摂取後のＨＯＭＡ−ＩＲを示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】  大豆中の可溶性球状タンパク質の総称であるグロブリンには、２Ｓ、７Ｓ、１１Ｓ、１５Ｓが存在するが、本発明におけるβ−コングリシニンはこの７Ｓに相当する。７Ｓグロブリンとも呼ばれ、一方の１１Ｓはグリシニンと呼ばれる。β−コングリシニンはα、α’、βの３種類のサブユニットからなり、β−コングリシニンの量をいうときはそれらα、α’、βサブユニットの総量を指す。
大豆タンパク質からβ−コングリシニンタンパクを得るには、タン・シバサキの方法（例えば、Ｔｈａｈｎ，Ｖ．Ｈ．，ａｎｄ  Ｓｈｉｂａｓａｋｉ，Ｋ．，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，２４１１７，１９７６参照）、クリオプレシピテーションによる冷却不溶区分（例えば、Ｂｒｉｇｇｓ，Ｄ．Ｒ．，ａｎｄ  Ｍａｎｎ，Ｒ．Ｌ．，Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍ，２７，２４３，１９５０参照）、０．１Ｎ塩化カルシウム添加による分画法（例えば、Ｗｏｌｆ，Ｗ．Ｊ．，ａｎｄ  Ｓｌｙ，Ｄ．Ａ．，Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍ，４４，６５３，１９６７参照）の他、育種によるβ−コングリシニンに富む大豆から得た（例えば、Ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，５０，１０．１．２０００および米国特許６，１７１，６４０号参照）タンパクを用いることもできる。
上記いずれかの方法によりグリシニンを除去した後、β−コングリシニンを通常の分離大豆タンパク質の作製方法によって調製する。こうして、タンパク質当りβ−コングリシニンとして４０重量％以上を含む大豆β−コングリシニンタンパクが得られる。このような、タンパク質当りβ−コングリシニンとして４０重量％以上含む大豆β−コングリシニンタンパクを用いることで、より効率的にβ−コングリシニン含量を設定することができる。ただし、この際、還元剤は用いずとも十分使用に耐えうる純度のβ−コングリシニンが分画できる方法によるほうが、より広い範囲の用途が期待できる。
さらにβ−コングリシニンを多く含む大豆β−コングリシニンタンパクを得るには、得られたβ−コングリシニンを主成分とする画分にフィチン酸分解活性を有するフィターゼやフォスファターゼのような酵素または酵素剤を作用させ、フィチン酸を分解、除去する。このようにしてフィチン酸をタンパク質当り１．２重量％以下、好ましくは、０．２重量％以下、より好ましくは０．１重量％以下まで分解、除去する。さらに、脂質会合タンパク質を１０重量％以下に除去する方法として、脂質会合タンパク質が不溶化しやすい微酸性領域で加温を行い、沈殿画分として除去することが可能である（ＷＯ  ０２／２８１９８  Ａ１参照）。この処理により、タンパク質当りβ−コングリシニンとして８０重量％以上含む大豆β−コングリシニンタンパクを得ることができ、さらに効率的にβ−コングリシニン含量を設定することが可能となる。
また、これ以外に、フィターゼを用い脱脂大豆からβ−コングリシニンとグリシニンを分離する手法に準じ調製したものも、β−コングリシニン含量が高く好ましい（例えば、ＳＡＩＴＯ，Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅ  Ｖｏｌ．６５，Ｎｏ４  Ｐａｇｅ  ８８４−８８７，２００１参照）。
本発明のβ−コングリシニンを有効成分とする組成物におけるβ−コングリシニンの配合量は特に限定するものではないが、β−コングリシニンの配合量が少なすぎると、多量に摂取しなければならないので、通常、組成物当りのβ−コングリシニンは配合量は通常２〜１００重量％、好ましくは５〜９５重量％の範囲で配合される。
本発明の組成物には、必要により、賦形剤、担体、希釈剤、界面活性剤、甘味料、酸味料、香料、保存剤、酸化防止剤等を適宜配合してもよい。
本発明のβ−コングリシニンを含有する組成物は、常法に従って、粉末状、顆粒状、固形状、流動物状、液状等の剤形の飲食品または医薬品とすることができる。また、摂取方法は、経口、経管等、特に限定されるものではないが、本発明の組成物は必要な摂取量から、飲食品とすることが好ましい。例えば、健康食品等とすることができ、また、せんべい、パン、焼き菓子、ベーカリー食品、チーズ様食品、ヨーグルト状食品、豆腐状食品などの一般的な飲食品とすることもできる。
β−コングリシニンは、大豆を分画、精製したものであることから、非常に安全であり、インスリン抵抗性の改善や、シンドロームＸの予防・治療の必要な哺乳動物（例、ヒト、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ等）に、例えば、経口的に摂取させることができる。通常、β−コングリシニンが成人（体重６０ｋｇ）１日当り、２〜１０ｇ以上摂取される量の組成物を１日１〜数回に分けて与えることが好ましく、β−コングリシニンの安全性の観点からは摂取量の上限は特に限定するものではない。この摂取により、インスリン抵抗性が改善され、シンドロームＸの予防、治療効果が発揮される。
以下に、製造例および試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。以下の例において、％は特に断らない限り、重量％を意味する。
本明細書におけるインスリン抵抗性の評価法は、免疫学的研究で用いられるＨＯＭＡ−ＩＲに準じる。その算出式は、［空腹時血糖値ｍｇ／ｄｌ×空腹時ＩＲＩμＵ／ｄｌ÷４０５］であり、この値が２以上の場合、インスリン抵抗性があると判断される。ただし、この際の空腹時血糖値はインスリン抵抗性を反映し易いため、１４０ｍｇ以下で測定する。
製造例、試験例における主な分析方法は以下のとおりである。
粗タンパク質
ケールダール法に基づき窒素含量を求め、係数６．２５を掛けて粗タンパク質に換算した。
ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動
Ｌａｅｍｍｌｉ（例えば、Ｎａｔｕｒｅ、２２７、６８０，１９７０参照）の方法に基づきゲル濃度１０−１２％のグラディエントゲルで分析した。アプライ量は１０μｇとした。
フィチン酸
Ａｌｉｉ  Ｍｏｈａｍｅｄの方法（例えば、Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６３，４７５−４７８，１９８６参照）に準拠して測定した。
クロメタ油分
乾物試料に対してクロロホルム・メタノールの混合液（容量比、２：１）を５０倍加え、１６０℃にて抽出される画分を秤量しクロメタ油分とした。
純度（ＳＰＥ基準）
上記のＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動で得られた泳動パターンをデンシトメーターで面積として測定し、該当画分の全面積に対する面積比率を純度（ＳＰＥ基準）とした。ここにβ−コングリシニン含量はα、α’、βサブユニットの総量を指し、グリシニン含量は酸性ポリペプチド（Ａ）と塩基性ポリペプチド（Ｂ）の総量を指す。
純度測定方法は、これ以外に下記に示すように、混在する脂質会合タンパクの量も考慮した補正純度で求める場合もあるが、本明細書ではＳＰＥ基準に準じた。
補正純度
試料の純度（ＳＰＥ基準）の値をＡ％として、当該試料中には７Ｓグロブリン以外にクロメタ油分の１０重量倍に相当する脂質会合タンパク質も存在するので（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅ．，Ｖｏｌ．６２  ＮＯ．５  ９３５−９４０，１９９８参照）、ＳＰＥから脂質会合タンパク質の量を差引いた合計タンパクに対する純度として算出する。
補正純度（％）＝（１００（％）−クロメタ油分（％）×１０）×Ａ（％）／１００
製造例１
低フィチンβ−コングリシニンタンパクの調製
脱脂大豆に１：１０の重量割合で水を加え、随時ｐＨを７．０に調整しながら１時間撹拌後遠心分離（４０００ｒ．ｐ．ｍ．、２０℃で１分間）し上澄液を得た。得られた上澄液をｐＨ６．４に調整して、４℃にて一晩放置して、遠心分離（４０００ｒ．ｐ．ｍ．、４℃で１０分間）して沈殿を除去した。得られた上澄液を、ｐＨ４．５に調整し、遠心分離（４０００ｒ．ｐ．ｍ、４℃で１０分間）して得られた沈殿物を回収してβ−コングリシニンカードとした。
このβ−コングリシニンカードに４倍量の水を加え、ｐＨ６．０に調整後、フィターゼ（フィターゼノボＬ：ノボインダストリー社製）をタンパク質当たり０．２％添加後、４０℃で１時間反応させた。この反応液をｐＨ５．０に調整後、遠心分離（４０００ｒ．ｐ．ｍ．、２０℃で１０分間）してホエー画分を除き、低フィチンβ−コングリシニンカードを得た。β−コングリシニンカード、低フィチンβ−コングリシニンカードはともに加水後、ｐＨ７．０に中和して殺菌し、噴霧乾燥してβ−コングリシニンタンパクおよび低フィチンβ−コングリシニンタンパクを得た。このようにして得られた各β−コングリシニンタンパクをＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、その後染色されたタンパク質のバンドの染色度の測定から、純度として８０％であることが示された。また両者のフィチン酸含量はタンパク質当たり各々１．８％と０．０５％であり、フィターゼ処理によりフィチン酸がほぼ完全に分解、除去されていることを確認した。また低フィチンβ−コングリシニンタンパクのクロメタ油分含量は０．８％であった。一方、シスチンとメチオニンの含硫アミノ酸の合計は２５ｍｇ／ｇタンパク質で、本来５ｍｇ／ｇタンパク質である精製β−コングリシニンタンパクに比べて高い値を示し、まだ不純物の多いことが示唆された。
製造例２
高純度低フィチンタンパクの調製
低変性脱脂大豆１重量部に、１０重量部の４０℃の抽出水を加え、塩酸にてｐＨ５．３に調整した。この溶液にタンパク重量あたり８ｕｎｉｔ  相当のフィターゼ（フィターゼノボＬ：ノボインダストリー社製）を加え、４０℃にてタンパクの抽出と酵素反応を併せた３０分間の処理を行い、酵素処理した抽出スラリーを得た。この酵素処理抽出スラリーを２５℃付近まで冷却し、塩酸にてｐＨ６．１に調整し、バッチ式遠心分離機（１，２００Ｇ）で遠心分離した。このとき可溶性画分と不溶性画分は明確な分離をした。なお、この遠心分離時の溶液温度は２５℃付近であった。次に、可溶性画分を塩酸にてｐＨ４．９に調整後、遠心分離して沈澱カード得た。沈澱カードは加水（４倍重量）し、１０倍量の水で水洗後、苛性ソーダで中和し、１４０℃１５秒間殺菌を行ったのち直ちに噴霧乾燥してフィターゼ処理した大豆β−コングリシニンタンパクを得た。
このようにして得られた低フィチンβ−コングリシニンタンパクをＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、その後染色されたタンパク質のバンドの染色度の測定から、純度として９０％であることが示された。また、フィチン酸含量がタンパク質当たり０．０５％であり、フィチン酸がほぼ完全に分解、除去されていることを確認した。一方、本品のクロメタ油分含量は０．５％であり製造例１に比較して大きく低下していることが確認された。さらに、シスチンとメチオニンの含硫アミノ酸の合計は１．２ｍｇ／ｇタンパク質で本来５ｍｇ／ｇタンパク質である精製β−コングリシニンタンパクに比べてかなり不純物の少ない高純度の大豆β−コングリシニンタンパクであることが示唆された。
本発明に用いたβ−コングリシニンタンパクの組成を表１に記す。
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試験例１
健常男性６名に、水以外は摂取せず１１時間後に、β−コングリシニンタンパク顆粒１２．５ｇを負荷検査食品（オフト・クリーム：上毛食品工業（株）製）１７０ｇと同時に摂取してもらい、摂取前、摂取１時間後、摂取２時間後の血糖、血中インスリン濃度を測定した。この際β−コングリシニンとして１０ｇ摂取したことになる。また、乳タンパク顆粒をプラセボとして同様の試験を行った。被験者のプロフィールを表２に示す。また、試験食およびプラセボ食の配合を表３に、負荷検査食品の組成について表４に示す。
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図１に血糖変化、図２にＩＲＩ変化を記す。血糖およびＩＲＩは共に摂取１時間後においてプラセボが上昇するのに対し、試験食では上昇が抑制された。血糖とＩＲＩよりインスリン抵抗性の指標とされるＨＯＭＡ−ＩＲの算出式（血糖ｍｇ／ｄｌ  ×  ＩＲＩμＵ／ｄｌ  ÷４０５）を用いた図を図３に示す。
この結果、摂取１時間後においてプラセボが上昇するのに対し、試験食では上昇が抑制された。
試験例２
入院により食事管理されている男性４名に２重盲検比較試験により、試験食としてβ−コングリシニン錠剤、またはプラセボとして乳タンパク錠剤を各試験期間２週間、朝食時および夕食時に各６ｇ、１日当り１２ｇを毎日摂取する試験を行った。この際β−コングリシニンとして１日当り４．８ｇを毎日摂取することになる。被験者のプロフィールを表５に示す。試験食、およびプラセボの配合を表６に示す。採血は各期間の区切りに行った。
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図４に試験食およびプラセボの２週間摂取後のＨＯＭＡ−ＩＲを示す。ＨＯＭＡ−ＩＲ  ２以上はインスリン抵抗性があると判断される。結果、プラセボが２以上にあるのに比し試験食では２以下にあり、インスリン抵抗性が改善された。
【産業上の利用の可能性】
以上記載したごとく、本発明によれば、β−コングリシニンを有効成分とする、インスリン抵抗性を改善し、シンドロームＸ、動脈硬化予防、さらにＩＩ型糖尿病予防に有効な飲食品または医薬としての組成物が提供できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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