(57)【要約】ヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体αに対して強力な転写活性化作用を有し、強力な血中脂質（コレステロール及び中性脂質）低下作用を示す置換フェニルプロピオン酸誘導体から新規な光学活性体を提供する。  式（１）2005009942.tif 000033で表される光学活性な置換フェニルプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物及びそれらの製造法を提供する。
2005009942.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
2005009942.tif 000022
で表される（Ｒ）−２−エチル−３−［４−メトキシ−３−（Ｎ−｛［４−（４−フルオロフェノキシ）フェニル］メチル｝カルバモイル）フェニル］プロピオン酸及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物。
【請求項２】
式（１）
2005009942.tif 000023
で表される光学活性置換フェニルプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物の少なくとも１種類以上を有効成分とする脂質低下薬。
【請求項３】
式（１）
2005009942.tif 000024
で表される光学活性置換フェニルプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物の少なくとも１種類以上を有効成分とするヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体（ＰＰＡＲ）αアゴニスト。
【請求項４】
式（１）
2005009942.tif 000025
で表される光学活性置換フェニルプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物の少なくとも１種類以上を有効成分とする動脈硬化治療薬。
【請求項５】
式（２）
2005009942.tif 000026
で表される化合物に
一般式（３）
2005009942.tif 000027
［式中、Ｒは（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン−３−イル基、（Ｓ）−４−イソプロピル−２−オキサゾリジノン−３−イル基、（Ｓ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノン−３−イル基等の絶対配置が（Ｓ）のキラルオキサゾリジノンやキラルイミダゾリジノン、キラル環状ラクタム、キラルスルタム等を表す］で表される化合物を反応させ、
一般式（４）
2005009942.tif 000028
［式中、Ｒは前述の通り］で表される化合物を得、ついでこれを水素化分解することにより得られる一般式（５）
2005009942.tif 000029
［式中、Ｒは前述の通り］で表される化合物に式（６）で表される化合物又はその酸との塩を
2005009942.tif 000030
反応させ、得られた一般式（７）
2005009942.tif 000031
［式中、Ｒは前述の通り］で表される化合物のＲ部を酸化分解することを特徴とする式（１）
2005009942.tif 000032
で表される請求項１記載の化合物の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明はヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体（ＰＰＡＲと略す）アゴニスト、特にヒトＰＰＡＲαアイソフォームに対するアゴニストとして脂質代謝異常の治療に有効な光学活性置換フェニルプロピオン酸誘導体とその付加塩並びにその水和物及びこれらの製造方法ならびにこれらの化合物を含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】  ペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体（ＰＰＡＲ）はステロイド受容体、レチノイド受容体やサイロイド受容体等と同様核内受容体スーパーファミリーに属するリガンド依存性の転写因子であり、これまでに組織分布を異にする三つのアイソフォーム（α型、β（又はδ）型、γ型）がヒトをはじめ種々の動物種で同定されている［非特許文献１］。この内ＰＰＡＲαは脂肪酸の異化能の高い肝臓や腎臓等に分布しており、特に肝臓において高発現が認められ［非特許文献２］、脂肪酸の代謝や細胞内輸送に関連する遺伝子（例えばアシルＣｏＡ合成酵素、脂肪酸結合タンパク質やリポ蛋白リパーゼ）及びコレステロールや中性脂質の代謝に関連するアポリポ蛋白（ＡＩ、ＡＩＩ、ＣＩＩＩ）遺伝子の発現を正や負に制御している。ＰＰＡＲβは神経細胞を中心として生体内各組織に普遍的に発現している。現時点ではＰＰＡＲβの生理的意義については不明である。ＰＰＡＲγは脂肪細胞に高発現していて脂肪細胞の分化に関与している［非特許文献３］。この様にＰＰＡＲの各アイソフォームは特定の臓器や組織において特異的な機能を果たしている。
又、ＰＰＡＲαのノックアウトマウスは加齢に伴い高中性脂肪血症を呈し、白色脂肪細胞の増加を主とした肥満になることが報告されており［非特許文献４］、ＰＰＡＲαの活性化と血中脂質（コレステロール及び中性脂質）低下作用との関連が強く示唆されている。
一方、従来から高脂血症治療薬としてはフィブラート系薬剤やスタチン系薬剤が汎用されている。しかしフィブラート系薬剤ではコレステロール低下作用が弱く、一方スタチン系薬剤では遊離脂肪酸やトリグリセライドの低下作用は弱い。またフィブラート系薬剤に関しては胃腸障害、発疹、頭痛、肝機能障害、腎機能障害や胆石等の種々の副作用が報告されていて、フィブラート系薬剤が広範な薬理作用を示すことがその原因として考えられており、特異的なメカニズムによる高脂血症治療薬の開発が望まれている。
このような従来の高脂血症治療薬の現状及びこれまでに判明したＰＰＡＲαという転写因子の脂質代謝調節機構に関する役割及び高脂血症の病態との関わりを考えると、ＰＰＡＲα特にヒトのＰＰＡＲαリガンドとして直接結合しヒトＰＰＡＲαを活性化しうる化合物を創製することができれば極めて特異的なメカニズムによる血中脂質（コレステロール及び中性脂質の双方）低下作用を示す化合物としての医薬用途が期待される。
ＰＰＡＲαのリガンドとしてＰＰＡＲαに対する親和性を有する化合物にはアラキドン酸の代謝物であるＬＴＢ４の他にシトクロームＰ−４５０による酸化を介して生じるＨＥＴＥ（ヒドロキシエイコサテトラエン酸）群のエイコサノイド、特に８−ＨＥＴＥ、８−ＨＥＰＥ等が報告されている［非特許文献５］。しかしこれらの内因性の不飽和脂肪酸誘導体は代謝的にも化学的にも不安定であり、医薬として供することはできない。このために、今日までに種々の構造様式のＰＰＡＲαリガンドが開示されている。
本願出願人はＰＰＡＲα作動作用を有する化合物として一般式（８）
2005009942.tif 000003
［式中、Ｒ１は炭素数１から４の低級アルキル基、炭素数１から３の低級アルコキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、無置換または置換基を有していても良いフェニル基、無置換または置換基を有していても良いフェノキシ基、無置換または置換基を有していても良いベンジルオキシ基を表し、Ｒ２は炭素数１から４の低級アルキル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、炭素数１から３の低級アルコキシ基、フェノキシ基、炭素数１から３の低級アルキルチオ基、フェニルチオ基、ベンジルチオ基を表し、Ｒ３はＲ２が炭素数１から４の低級アルキル基、２，２，２−トリフルオロエチル基の場合には水素原子または炭素数１から４の低級アルキル基を表し、Ｒ２が炭素数１から３の低級アルコキシ基、フェノキシ基、炭素数１から３の低級アルキルチオ基、フェニルチオ基、ベンジルチオ基の場合には水素原子を表し、Ｒ４は炭素数１から３の低級アルコキシ基を表す］で表される化合物を開示した［特許文献１］。この出願明細書で開示されている一般式（８）で表される化合物は（Ｓ）体について記載されてはいるが、式（１）で表される立体構造を有する（Ｒ）体化合物について具体的な記載は無い。
【特許文献１】特開２００１−５５３６７号公報
【非特許文献１】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，８９，４６５３．
【非特許文献２】Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９５，１３７，３５４．
【非特許文献３】Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ．，１９９６，３７，９０７．
【非特許文献４】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，２７３，２９５７７．
【非特許文献５】Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９７，９４，３１２．
高脂血症は動脈硬化の危険因子であり、動脈硬化性疾患、特に冠動脈硬化症の予防という観点から有効で安全性の高い高脂血症治療薬の開発が臨床上望まれている。
【発明の開示】
本発明者らは、高脂血症治療薬として有効性及び安全性の高い構造上新規な薬物の創製を目的としてかかるヒトＰＰＡＲαの脂質代謝に関する特異的な役割に着目し、鋭意研究を重ねた結果、式（１）
2005009942.tif 000004
で表される新規置換フェニルプロピオン酸誘導体が優れたヒトＰＰＡＲα転写活性化作用を有することを見出し、本発明を完成した。
即ち本発明は
１）式（１）
2005009942.tif 000005
で表される（Ｒ）−２−エチル−３−［４−メトキシ−３−（Ｎ−｛［４−（４−フルオロフェノキシ）フェニル］メチル｝カルバモイル）フェニル］プロピオン酸及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物、
２）上記式（１）で表される光学活性置換フェニルプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物の少なくとも１種類以上を有効成分とする脂質低下薬、
３）上記式（１）で表される光学活性置換フェニルプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物の少なくとも１種類以上を有効成分とするヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体（ＰＰＡＲ）αアゴニスト、
４）上記一般式（１）で表される光学活性置換フェニルプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物の少なくとも１種類以上を有効成分とする動脈硬化治療薬、
５）式（２）
2005009942.tif 000006
で表される化合物に
一般式（３）
2005009942.tif 000007
［式中、Ｒは（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン−３−イル基、（Ｓ）−４−イソプロピル−２−オキサゾリジノン−３−イル基、（Ｓ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノン−３−イル基等の絶対配置が（Ｓ）のキラルオキサゾリジノンやキラルイミダゾリジノン、キラル環状ラクタム、キラルスルタム等を表す］で表される化合物を反応させ、一般式（４）
2005009942.tif 000008
［式中、Ｒは前述の通り］で表される化合物を得、ついでこれを水素化分解することにより得られる一般式（５）
2005009942.tif 000009
［式中、Ｒは前述の通り］で表される化合物に式（６）で表される化合物
2005009942.tif 000010
又はその酸との塩を反応させ、得られた一般式（７）
2005009942.tif 000011
［式中、Ｒは前述の通り］で表される化合物のＲ部を酸化分解することを特徴とする上記式（１）で表される化合物の製造法、に関するものである。
式（１）
2005009942.tif 000012
で表される光学的に活性なプロピオン酸誘導体及びその薬剤上許容される塩並びにその水和物はヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体αに対して強力な転写活性化作用を有し、脂質低下薬、特に肝臓における脂質の低下薬、動脈硬化の進展に対する抑制薬として有効な化合物である。
本発明における一般式（１）で表される化合物の塩類は慣用のものであって、金属塩例えばアルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウム塩、マグネシウム塩など）、アルミニウム塩等その薬剤上許容される塩があげられる。
本発明の化合物は例えば以下の方法により製造することができる（スキーム１）。
2005009942.tif 000013
即ち式（１）
2005009942.tif 000014
で表される本化合物は、式（２）
2005009942.tif 000015
で表される化合物に一般式（３）
2005009942.tif 000016
［式中、Ｒは（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン−３−イル基、（Ｒ）−４−イソプロピル−２−オキサゾリジノン−３−イル基、（Ｒ）−４−フェニル−２−オキサゾリジノン−３−イル基等の絶対配置が（Ｒ）のキラルオキサゾリジノンやキラルイミダゾリジノン、キラル環状ラクタム、キラルスルタム等を表す］で表される化合物を塩基存在下作用させる（工程１）ことにより合成される一般式（４）
2005009942.tif 000017
で表される化合物を得、これを水素化分解（工程２）により一般式（５）
2005009942.tif 000018
を得、この化合物に式（６）で表される化合物
2005009942.tif 000019
又はその酸との塩を反応させ（工程３）、得られた一般式（７）
2005009942.tif 000020
［式中、Ｒは前述の通り］で表される化合物のＲ部位を酸化分解する（工程４）ことにより製造することができる。
工程１の反応はテトラヒドロフランやジエチルエーテル、ヘキサン等の溶媒中塩基としては例えば水素化ナトリウムのようなアルカリ金属水素化物、ブチルリチウムのような有機金属化合物、リチウムジイソプロピルアミド、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドのような金属アミドを用いることができる。反応温度としては−１００℃から室温にて、好適には−２０℃から０℃にて実施することができる。
工程２の反応はパラジウム担持活性炭、白金担持活性炭、酸化白金、ロジウム担持アルミナ等の金属触媒存在下、エタノール、メタノール、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中水素圧９８．１ｋＰａから４９１ｋＰａで実施することができる。また、パラジウム担持活性炭の存在下、酢酸エチル等の溶媒中、ギ酸アンモニウムもしくはギ酸及びトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン等のトリアルキルアミンを用い、加熱することにより、好適には４０℃から６０℃にて実施することができる。
工程３の反応はカルボキシル基をそのままで、または反応性の誘導体に変換して実施することができる。「カルボキシル基の反応性誘導基」としては酸塩化物、酸臭化物、酸無水物、カルボニルイミダゾール等が挙げられる。
反応性誘導体を用いた反応の場合には、ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、塩基として例えば水素化ナトリウムのようなアルカリ金属水素化物、水酸化ナトリウムのようなアルカリ金属水酸化物、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、又はピリジン、トリエチルアミンのような有機塩基の存在下又は非存在下に実施することができる。
カルボン酸体のままで反応を行う場合には塩化メチレン、クロロホルム、ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中縮合剤の存在下、塩基の存在下又は非存在下で更には添加剤の存在下又は非存在下実施することができる。
縮合剤としては例えばジシクロヘキシルカルボジイミド、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、シアノリン酸ジエチル、ジフェニルリン酸アジド、カルボニルジイミダゾール等が挙げられる。塩基としては例えば水酸化ナトリウムのようなアルカリ金属水酸化物、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、又はピリジン、トリエチルアミンのような有機塩基が挙げられる。添加剤としてはＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドや３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン等が挙げられる。反応温度としては−２０℃から１００℃にて、好適には０℃から５０℃にて実施することができる。
工程４の反応はアルカリ性条件下で実施することができる。アルカリ性条件としては水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化リチウムと過酸化水素の混合物等が用いられる。反応温度としては−２０℃から１００℃にて、好適には０℃から５０℃にて実施することができる。
このようにして式（１）で表される（Ｒ）−２−エチル−３−［４−メトキシ−３−（Ｎ−｛［４−（４−フルオロフェノキシ）フェニル］メチル｝カルバモイル）フェニル］プロピオン酸が得られる。
本発明の新規化合物の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、吸入剤又はシロップ剤等による経口投与或いは注射剤若しくは座剤等による非経口投与を挙げることができる。
【発明を実施するための最良の形態】  次に本発明を具体例によって説明するがこれらの例によって本発明が限定されるものではない。
＜参考例１＞
（Ｓ）−４−ベンジル−３−ブチリル−２−オキサゾリジノン
カリウムｔ−ブトキシド（３６．００ｇ，０．３２１ｍｏｌ）と脱水テトラヒドロフラン０．３５Ｌの溶液に、冷却攪拌下（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（５０．４７ｇ，０．２８５ｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン１８０ｍＬに溶解した溶液を内温８〜１０℃で滴下し、３０分間攪拌後、ブチリルクロリド（３３ｍＬ，０．３１８ｍｏｌ）を内温８〜１０℃で滴下しそのまま２時間撹拌した。反応液に飽和食塩水１６０ｍＬを１０分攪拌後、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸で中和し、有機層を分取、減圧濃縮した。得られた残留物を飽和食塩水２４０ｍＬに注ぎ、酢酸エチル４００ｍＬ（２００ｍＬｘ２）で抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。に先の濃縮残留物を加え、炭酸ナトリウム水（炭酸ナトリウム６２．１ｇと水６２１ｍＬ）、次いで塩化ナトリウム水（塩化ナトリウム１７７ｇと水５６８ｍＬの混液）で洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し減圧濃縮した。残留物は減圧蒸留（１５２〜１５６℃／８０Ｐａ）を行ない、５９．２４ｇ（８４．１％）の表題化合物を淡黄色油状物として得た。
質量分析値  ｍ／ｚ  ２４７（Ｍ＋）．
【実施例１】［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸ベンジル
（Ｓ）−４−ベンジル−３−ブチリル−２−オキサゾリジノン（５９．２４ｇ，０．２４０ｍｏｌ）と脱水テトラヒドロフラン１６０ｍＬの溶液にアルゴン雰囲気下、−４０℃以下の温度で１ｍｏｌ／Ｌのリチウムビス（トリメチルシリル）アミドのテトラヒドロフラン溶液（２８７ｍＬ，０．２８７ｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後０℃まで昇温し、１０分間撹拌した後、再度−４０℃に冷却、５−ブロモメチル−２−メトキシ安息香酸ベンジル（５３．５３ｇ，０．１６０ｍｏｌ）の脱水テトラヒドロフラン（１６０ｍＬ）溶解液を滴下した。滴下終了後、約１時間かけて０℃まで昇温した。反応液に１０％塩化アンモニウム水溶液１５０ｍＬを加え、１０分間攪拌した。１ｍｏｌ／Ｌ塩酸で中和後、有機層を分取し、水層を酢酸エチル６００ｍＬ（３００ｍＬｘ２）で抽出し、先の有機層と合一し、水４００ｍＬで洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後減圧濃縮した。残留物をシリカゲル（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）カラムクロマトグラフィーにて精製後、ジエチルエーテルで再結晶することにより５４．８０ｇ（収率６８．４％）の表題化合物を白色結晶として得た。
融点：６３〜６４℃．
旋光度：［α］Ｄ２４＝５６（ｃ＝１．０、ＭｅＣＮ）．
質量分析値  ｍ／ｚ  ５０１（Ｍ＋）．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ０．９３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），１．５３−１．６１（１Ｈ，ｍ），１．７１−１．８２（１Ｈ，ｍ），２．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３，１３．２Ｈｚ），２．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．３，１３．２Ｈｚ），２．９９−３．０８（２Ｈ，ｍ），３．８６（３Ｈ，ｓ），４．０７−４．１５（３Ｈ，ｍ），４．６１−４．６７（１Ｈ，ｍ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ），  ５．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．６Ｈｚ），６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．０２−７．０４（２Ｈ，ｍ），７．２０−７．４２（９Ｈ，ｍ），７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ）．
【実施例２】［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸
［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸ベンジル（２４．６０ｇ，４９．０ｍｍｏｌ）を酢酸エチル１７２ｍＬに溶解、これに１０％パラジウム炭素（１．６０ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温にて６時間接触還元を行った後、触媒を濾別、得られた濾液を減圧濃縮することにより表題化合物（１９．８８ｇ）を油状物として得た。
質量分析値  ｍ／ｚ  ４１１（Ｍ＋）．
【実施例３】［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸
（Ｓ）−４−ベンジル−３−ブチリル−２−オキサゾリジノン（１８７ｇ，７５６ｍｍｏｌ）と脱水テトラヒドロフラン５７０ｍＬをアルゴン雰囲気下混合し、冷却した。撹拌下内温−１９〜−１℃で１ｍｏｌ／Ｌのリチウムビス（トリメチルシリル）アミドのテトラヒドロフラン溶液（８３１ｍＬ，８３１ｍｍｏｌ）を滴下した。滴下終了後−５〜−１℃にて１０分間撹拌した後５−ブロモメチル−２−メトキシ安息香酸ベンジル（２１１ｇ，６２９ｍｍｏｌ）の脱水テトラヒドロフラン溶液（６３３ｍＬ）を滴下した。滴下終了後０〜５℃にて２時間撹拌した。反応液に塩化アンモニウム水（塩化アンモニウム５７．０ｇと水５７０ｍＬの混液）及び２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、ｐＨ７．０とした。有機層を分取し、水層を酢酸エチル６３３ｍＬで抽出し、先の有機層と合一し、減圧濃縮した。残留物と酢酸エチル２．１１Ｌを混合し、希塩酸（濃塩酸６８．５ｍＬと塩化ナトリウム８４．４ｇと水１．５１Ｌの混液）、炭酸ナトリウム水（炭酸ナトリウム８９．３ｇと塩化ナトリウム８４．４ｇと水１．５８Ｌの混液）、塩化ナトリウム水（塩化ナトリウム４４３ｇと水１．４４Ｌの混液）で順次洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し濃縮した。残留物と酢酸エチル１．４８Ｌとトリエチルアミン（１９１ｇ，１．８９ｍｏｌ）と  １０％パラジウム炭素３８．２ｇを混合し、内温４１〜５０℃で蟻酸（５８．０ｇ，１．２６ｍｏｌ）を滴下しそのまま１時間撹拌した。内温４３〜５０℃で蟻酸（５８．０ｇ，１．２６ｍｏｌ）を滴下しそのまま１時間撹拌した。反応終了後触媒を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。これを希塩酸（濃塩酸２１１ｍＬと水１．０６Ｌの混液）、水１．２７Ｌで順次洗浄した。有機層を炭酸ナトリウム水（炭酸ナトリウム７６．０ｇと水１．６９Ｌの混液）、炭酸ナトリウム水（炭酸ナトリウム５７．０ｇと水１．２７Ｌの混液）、で順次抽出した。これに塩酸（濃塩酸２６４ｍＬと水２６４ｍＬの混液）を加え、酢酸エチル１．２７Ｌ，６３３ｍＬで順次抽出した。有機層を水１．２７Ｌ、塩化ナトリウム水（塩化ナトリウム５１２ｇと水１．６９Ｌの混液）で順次洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し濃縮した。残留物と２−プロパノール６３３ｍＬを混合し、冷却し撹拌下、水１．２７Ｌを加え、内温３〜１０℃で３０分間撹拌した。析出結晶をろ取し、乾燥し、白色結晶を得た。これを２−プロパノール１．１８Ｌで精製し、１９９ｇ（収率７７％）の表題化合物を白色結晶として得た。
質量分析値  ｍ／ｚ  ４１１（Ｍ＋）．
【実施例４】（Ｒ）−（−）−２−エチル−３−（４−メトキシ−３−｛Ｎ−［（４−フルオロフェノキシフェニル）メチル］カルバモイル｝フェニル）プロピオン酸
［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸（１９８ｇ，４８１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１４６ｇ，１．４４ｍｏｌ）及び酢酸エチル１．３９Ｌを混合し氷冷撹拌下、内温３〜１０℃でクロロ炭酸エチル（５４．８ｇ，５４２ｍｍｏｌ）と酢酸エチル１９８ｍＬの混液を滴下した。１５分間撹拌後４−（４−フルオロフェノキシ）ベンジルアミン塩酸塩（１２８ｇ，５０５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。内温２〜１０℃で１時間撹拌した。反応液を水１．９８Ｌ、炭酸ナトリウム水（炭酸ナトリウム４２．０ｇと水７９２ｍＬ）、水７９２ｍＬで順次洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ジメチルスルホキシド２．９３Ｌを加え濃縮した。撹拌下３０％過酸化水素水（２１１ｇ，１．９２ｍｏｌ）を加えた。次に１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水７７０ｍＬを内温２５〜３０℃で加え、３０分撹拌下した。反応液に亜硫酸水素ナトリウム水（亜硫酸水素ナトリウム１９８ｇと水９５０ｍＬの混液）を内温１５〜３０℃で滴下した。そのまま１時間撹拌した。反応液に１ｍｏｌ／Ｌ塩酸９２４ｍＬ、水２．９４Ｌを加え、１時間撹拌した。析出固体をろ取し、水１．４７Ｌで洗浄した。これを０．５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水１．９８Ｌと混合し、酢酸エチル１．９８Ｌで洗浄した。有機層を０．５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水１．９８Ｌで抽出し、先の水層と合一し、溶存酢酸エチルを減圧濃縮した。内温２３〜２８℃で２ｍｏｌ／Ｌ塩酸を加え、そのまま３０分間撹拌した。析出固体をろ取し、水１．４７Ｌで洗浄し、乾燥し、白色固体２０５ｇを得た。これを酢酸エチル−ジイソプロピルエーテル（４：１ｖ／ｖ）１．２３Ｌついで２−プロパノール７９３ｍＬで精製し、白色固体を１７７ｇ得た。これと０．５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水９４２ｍＬと水８３３ｍＬを混合し、内温４５〜４９℃で０．５ｍｏｌ／Ｌ塩酸１．０９Ｌを加え、冷却し、内温４〜１０℃で１時間撹拌した。析出固体をろ取し、水１．７７Ｌで洗浄し、乾燥し、１７６ｇ（８１％）の表題化合物を白色結晶として得た。
融点１３２℃．
質量分析値  ｍ／ｚ  ４５１（Ｍ＋）．
元素分析値（％）  Ｃ２６Ｈ２６ＦＮＯ５（４５１．４９）：
計算値  Ｃ，６９．１７；Ｈ，５．８０；Ｎ，３．１０，
実測値  Ｃ，６９．０６；Ｈ，５．７９；Ｎ，２．９０．
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ０．８６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．４３−１．５４（２Ｈ，ｍ），２．３９−２．４６（１Ｈ，ｍ），２．６６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．７，５．９Ｈｚ），２．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．７，８．８Ｈｚ），３．８６（３Ｈ，ｓ），４．４６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），６．９４−６．９８（２Ｈ，ｍ），７．０１−７．０６（３Ｈ，ｍ），７．１８−７．２４（２Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．４Ｈｚ），７．３４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．５８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），８．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１２．１０（１Ｈ，ｂｒ  ｓ）．
比旋光度  ［α］Ｄ２５−２９°（Ｃ  １．０，ＭｅＣＮ）．
光学純度９９．４％ｅ．ｅ．（ＣＨＩＲＡＬｌ  ＰＡＫ  ＡＤ−ＲＨ，４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍｍ，溶出液；リン酸（１→１０００）水溶液：アセトニトリル＝６５：３５，検出波長；２１０ｎｍ，カラム温度；４０℃，流速；１．００ｍＬ／ｍｉｎ）．
【実施例５】（Ｒ）−（−）−２−エチル−３−（４−メトキシ−３−｛Ｎ−［（４−フルオロフェノキシフェニル）メチル］カルバモイル｝フェニル）プロピオン酸
（Ｓ）−４−ベンジル−３−ブチリル−２−オキサゾリジノン（３．３７ｇ，１３．６ｍｍｏｌ）と脱水テトラヒドロフラン７０ｍＬの溶液にアルゴン雰囲気下、−７８℃の温度でナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドのテトラヒドロフラン溶液（１５ｍＬ，１５．０ｍｍｏｌ）を滴下し、−７８℃で１時間攪拌した。次いで、５−ブロモメチル−２−メトキシ安息香酸ベンジル（５．０４ｇ，１５．０ｍｍｏｌ）の脱水テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）溶解液を滴下した。更に２０ｍＬのテトラヒドロフランで洗い込み、−７８℃で３時間攪拌後、−５０〜−４０℃の温度で３時間攪拌した。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液１００ｍＬに注ぎ込み、酢酸エチル１５０ｍＬで２回抽出した。抽出液を水次いで飽和食塩水で洗浄後減圧濃縮した。残留物をシリカゲル（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）カラムクロマトグラフィーにて精製後、２．５ｇの［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸ベンジルを得た。
［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸ベンジル（２．５ｇ）を酢酸エチル１５０ｍＬに溶解、これに１０％パラジウム炭素（０．３５ｇ）を加え、室温、水素圧３．６ｋｇｆ／ｃｍ２で４時間接触還元を行った後、触媒を濾別、得られた濾液を減圧濃縮することにより［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸（１．６０ｇ）を得た。
質量分析値  ｍ／ｚ  ４１１（Ｍ＋）．
［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−２−メトキシ−５−｛［２−（２−オキソ−４−ベンジルオキサゾリジン−３−イル）カルボニル］ブチル｝安息香酸（１．６０ｇ，３．８９ｍｍｏｌ）、４−（４−フルオロフェノキシ）ベンジルアミン（１．１０ｇ，５．０６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．２２ｍＬ，８．７５ｍｍｏｌ），及び塩化メチレン７０ｍＬの溶液に氷冷攪拌下、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリニウムクロリド（９８７ｍｇ，５．８４ｍｍｏｌ）と塩化メチレン３０ｍＬの混液を滴下した。０℃で３０分間次いで室温で４時間撹拌した。反応液を飽和アンモニア水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水次いで飽和食塩水で洗浄後減圧濃縮した。残留物をシリカゲル（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）カラムクロマトグラフィーにて精製し、１．７０ｇの［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−３−｛２−エチル−３−［４−メトキシ−３−（Ｎ−｛［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝カルバモイル）フェニル］プロピオニル｝−４−ベンジル−２−オキサゾリジノンを得た。
［５（２Ｒ，４’Ｓ）］−３−｛２−エチル−３−［４−メトキシ−３−（Ｎ−｛［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝カルバモイル）フェニル］プロピオニル｝−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（６．００ｇ，９．８３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン−水（４：１）混合液に溶解、氷冷、アルゴン雰囲気下攪拌し、３０％過酸化水素水（３．９８ｍＬ，３９．２ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで水酸化リチウム（６６０ｍｇ，１５．７ｍｍｏｌ）水溶液１８ｍＬを滴下した。氷冷下、１．５時間攪拌後反応液に亜硫酸水素ナトリウム水（亜硫酸水素ナトリウム４．０７ｇと水１８ｍＬの混液）を滴下し、氷冷下３０分攪拌した。更に、反応液中のテトラヒドロフランを減圧留去後、水に注ぎ、塩化メチレン抽出した。抽出液は、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し油状物を得た。得られた油状物を水酸化ナトリウム水溶液で５回洗浄したイソプロピルアルコール：酢酸（４：１ｖ／ｖ）混合液でシリカカラムクロマトグラフィー精製、更にヘキサン：酢酸エチルで再結晶することにより２．７２ｇの表題化合物を白色結晶として得た。
元素分析値（％）  Ｃ２６Ｈ２６ＦＮＯ５（４５１．４９）：
計算値  Ｃ，６９．１７；Ｈ，５．８０；Ｎ，３．１０，
実測値  Ｃ，６８．９５；Ｈ，５．８３；Ｎ，３．２３．
比旋光度  ［α］Ｄ２５−２９．７°（Ｃ  ０．４７６，ＭｅＣＮ）．
＜試験例＞
ヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体（ＰＰＡＲ）αに対する転写活性化試験
１０％脱脂牛血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＦＣＳ／ＤＭＥＭ）にて培養したＣＨＯ細胞に、酵母の転写因子のＤＮＡ結合領域とヒト型ＰＰＡＲαのリガンド結合領域（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３，３２，５５９８）との融合蛋白質を発現する受容体プラスミド及びそのレポータープラスミド（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社）、及び内部標準用のウミシイタケルシフェラーゼプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ社）をリポフェクトアミンにて無血清状態にてコトランスフェクションした。その後１０％ＳＦＣＳ／ＤＭＥＭ中で被検化合物及び対照化合物である（８Ｓ）−ＨＥＴＥを添加して２４時間後に両ルシフェラーゼ活性を測定し、内部標準により補正した。
結果を表１に示す。
2005009942.tif 000021
これらの結果より、本発明化合物はヒトペルオキシゾーム増殖薬活性化受容体αに対して強力な転写活性化作用を有することが示された。
産業上利用可能性
上述の結果から、本発明の光学活性な置換フェニルプロピオン酸誘導体は優れたヒトＰＰＡＲα転写活性化作用を示すことが明らかとなった。
本発明化合物は、ヒトＰＰＡＲαに対する作動活性を有することから血中脂質（コレステロール及び中性脂質）低下作用を惹起し、脂質低下薬、特に肝臓における脂質の低下薬、動脈硬化の進展に対する抑制薬として有効である。
【国際調査報告】
2005009942.tif 000034
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