(57)【要約】ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度を指標とした、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法や、その選択のための臨床検査薬などを提供する。  （ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、および（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、を含む、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法等。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法。
【請求項２】
ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、請求項１記載の選択方法。
【請求項３】
ＨＬＡテトラマー法により測定する、請求項２記載の選択方法。
【請求項４】
以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、請求項３記載の選択方法。
【請求項５】
請求項４に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ前駆細胞中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、請求項４記載の選択方法。
【請求項６】
ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項４または５記載の選択方法。
【請求項７】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項４〜６いずれか記載の選択方法。
【請求項８】
フローサイトメトリーを用いて行われる請求項１〜７いずれか記載の選択方法。
【請求項９】
ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量が、健常人の値と比較して１．５倍以上高いことを指標としてＷＴ１ワクチン応答性を判断する、請求項１〜８いずれか記載の選択方法。
【請求項１０】
ＣＴＬ前駆細胞がエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞である、請求項１記載の選択方法。
【請求項１１】
ＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量の測定に、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法を利用する、請求項１０記載の選択方法。
【請求項１２】
ＨＬＡテトラマー法を利用する、請求項１１記載の選択方法。
【請求項１３】
以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体および抗ＣＤ２７抗体と、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性であり、かつＨＬＡテトラマー結合陽性のＣＴＬ前駆細胞中での、ＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性のエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の割合を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、請求項１２記載の選択方法。
【請求項１４】
ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項１３記載の選択方法。
【請求項１５】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）および  Ａｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項１３または１４記載の選択方法。
【請求項１６】
フローサイトメトリーを用いて行われる請求項１０〜１５いずれか記載の選択方法。
【請求項１７】
以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、癌の罹患を判断する工程、
を含む、癌の診断方法。
【請求項１８】
ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、請求項１７記載の診断方法。
【請求項１９】
ＨＬＡテトラマー法により測定する、請求項１８記載の診断方法。
【請求項２０】
以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、癌の罹患を判断する工程、
を含む、請求項１９記載の診断方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ前駆細胞中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、請求項２０記載の診断方法。
【請求項２２】
ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項２０または２１記載の診断方法。
【請求項２３】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項２０〜２２いずれか記載の診断方法。
【請求項２４】
フローサイトメトリーを用いて行われる請求項１７〜２３いずれか記載の診断方法。
【請求項２５】
ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量が、健常人の値と比較して１．５倍以上高いことを指標として癌の罹患を判断する、請求項１７〜２４いずれか記載の診断方法。
【請求項２６】
ＣＴＬ前駆細胞がエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞である、請求項１７記載の診断方法。
【請求項２７】
ＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量の測定に、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法を利用する、請求項２６記載の診断方法。
【請求項２８】
ＨＬＡテトラマー法を利用する、請求項２７記載の診断方法。
【請求項２９】
以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体および抗ＣＤ２７抗体と、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性であり、かつＨＬＡテトラマー結合陽性のＣＴＬ前駆細胞中での、ＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性のエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の割合を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、癌の罹患を判断する工程、
を含む、請求項２８記載の診断方法。
【請求項３０】
ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項２９記載の診断方法。
【請求項３１】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項２９または３０記載の診断方法。
【請求項３２】
フローサイトメトリーを用いて行われる請求項２６〜３１いずれか記載の診断方法。
【請求項３３】
以下の工程（ａ）−（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料に複数のＷＴ１ワクチンの標的分子をそれぞれ適用し、
（ｃ）前記（ｂ）の生体試料中それぞれに存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定し、それぞれ比較する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果に基づいて、その患者に有効なＷＴ１ワクチンの標的分子を同定する工程、
を含む、患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法。
【請求項３４】
ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、請求項３３記載の同定方法。
【請求項３５】
ＨＬＡテトラマー法により測定する、請求項３４記載の同定方法。
【請求項３６】
以下の工程（ａ）−（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の複数の癌抗原ペプチドを含有する複数のＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とをそれぞれ接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量をそれぞれ測定し、比較する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果に基づいて、その患者に有効なＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを同定する工程、
を含む、請求項３５記載の同定方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ前駆細胞中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、請求項３６記載の同定方法。
【請求項３８】
ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項３６または３７記載の同定方法。
【請求項３９】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項３６〜３８いずれか記載の同定方法。
【請求項４０】
フローサイトメトリーにより行われる請求項３３〜３９いずれか記載の同定方法。
【請求項４１】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択のための臨床検査薬。
【請求項４２】
ＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項４１記載の臨床検査薬。
【請求項４３】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項４１または４２に記載の臨床検査薬。
【請求項４４】
請求項４１〜４３いずれか記載の臨床検査薬を含有するキット。
【請求項４５】
請求項３３〜４０いずれか記載の患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法により同定された標的分子を含有する、患者固有の癌を処置するための当該患者用の医薬組成物。
【請求項４６】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、癌の診断薬。
【請求項４７】
ＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項４６記載の診断薬。
【請求項４８】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項４６または４７に記載の診断薬。
【請求項４９】
請求項４６〜４８いずれか記載の診断薬を含有するキット。
【請求項５０】
以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬを含む生体試料をＷＴ１ワクチン投与後の患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果をＷＴ１ワクチン投与前のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチンによる治療の適合性を判断する工程、
を含む、該患者における該ＷＴ１ワクチンの適合性を判定する方法。
【請求項５１】
ＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、請求項５０記載の判定方法。
【請求項５２】
ＨＬＡテトラマー法により測定する、請求項５１記載の判定方法。
【請求項５３】
以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬを含む生体試料をＷＴ１ワクチン投与後の患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果をＷＴ１ワクチン投与前のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチンによる治療の適合性を判断する工程、
を含む、請求項５２記載の判定方法。
【請求項５４】
請求項５３に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、請求項５３記載の判定方法。
【請求項５５】
ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項５３または５４記載の判定方法。
【請求項５６】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項５３〜５５いずれか記載の判定方法。
【請求項５７】
フローサイトメトリーを用いて行われる請求項５０〜５６いずれか記載の判定方法。
【請求項５８】
ＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量が、ＷＴ１ワクチン投与前の値と比較して１．５倍以上高いことを指標としてＷＴ１ワクチンによる治療が適しているか否かを判断する、請求項５０〜５７いずれか記載の判定方法。
【請求項５９】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、ＷＴ１ワクチンの適合性の判定のための臨床検査薬。
【請求項６０】
ＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、請求項５９記載の臨床検査薬。
【請求項６１】
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、請求項５９または６０に記載の臨床検査薬。
【請求項６２】
請求項５９〜６１いずれか記載の臨床検査薬を含有するキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法およびそれを包含する癌の処置方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度を指標とした、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法などに関する。
【背景技術】  ＷＴ１遺伝子（Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒ  ｇｅｎｅ  １）は、小児の腎腫瘍であるＷｉｌｍｓ腫瘍の原因遺伝子の１つとして同定された（Ｃｅｌｌ  ６０：５０９，１９９０、Ｎａｔｕｒｅ  ３４３：７７４，１９９０）。ＷＴ１遺伝子は転写因子ＷＴ１をコードしており、ＷＴ１は細胞の増殖・分化・アポトーシス及び臓器の形成などに関する重要な働きをする（Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｃｙｔｏｌ．１８１：１５１，１９９８）。当初、ＷＴ１遺伝子は、癌抑制遺伝子と位置付けられていたが、その後の研究により白血病及び肺癌や乳癌を含む種々の固形癌で発現が認められ、むしろ癌の増殖を促進する癌遺伝子としての作用を有することが示された。また、ＷＴ１由来のペプチドでＨＬＡ−Ａ＊０２０１陽性またはＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性の末梢血単核球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激することにより、ペプチド特異的な細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）が誘導され、これらのＣＴＬは、内因性にＷＴ１を発現する白血病や固形癌の癌細胞を傷害することが示された。これらの結果より、ＷＴ１は癌免疫療法の有望な標的分子であることが示された（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ  ７６：１２７，２００２）。
抗原ペプチド特異的なＣＴＬをｉｎ  ｖｉｔｒｏで定量する方法としては、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４，１９９６）、ＨＬＡペンタマー法、ＥＬＩＳＰＯＴ法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１０：２９，１９８８）、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２１０：１９５，１９９７）、限界希釈法（Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７７：１９０７，１９９８）などが知られている。ＨＬＡ−テトラマーは、ＨＬＡα鎖とβ２ミクログロブリンをペプチドと会合させた複合体（ＨＬＡモノマー）をビオチン化し、蛍光標識したアビジンに結合させることにより４量体化して作製する。ＨＬＡテトラマーでペプチド特異的ＣＴＬを染色し、フローサイトメーターで解析することによりＣＴＬの頻度を測定することができる。ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡタイマー法及びＨＬＡペンタマー法も同様の原理に基づきＣＴＬの頻度を測定することができる。
ワクチンによる刺激前のＣＴＬをＣＴＬ前駆細胞（プリカーサー）と称している。特定の癌抗原に対するＣＴＬ前駆細胞の存在頻度が高ければ、癌ワクチンとしてその抗原を投与した場合に効率良く特異的なＣＴＬが誘導され、癌ワクチン療法による奏効が得られやすいと考えられる。すなわち、特定の癌抗原に特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度の高い患者をワクチン投与前に選択することが可能であれば、その癌抗原を用いたより効果的な治療を行うことが可能となる。
しかしながら、メラノーマ患者の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を用いたＨＬＡテトラマーによるＣＴＬ前駆細胞の頻度測定についてはいくつかの報告がなされているが、癌抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度は低値であることが示されている（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２４：６６，２００１、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．１３：５６９，２００２）。このようなことから、抗原に対するＣＴＬ前駆細胞の存在頻度は一般的に低いと考えられており、ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度を指標として癌ワクチンの適応患者を選択することは困難であると考えられていた。
【発明の開示】
本発明の目的は、ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度を指標とした、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法などを提供することにある。
本発明者は、ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを用いてＨＬＡテトラマーを作製し、造血器悪性腫瘍及び肺癌の患者のワクチン投与前のＣＴＬ前駆細胞の頻度を測定したところ、驚くべきことに、健常人に比べて、従来にない高い頻度でＣＴＬ前駆細胞（ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞）が存在していることを見出した。このことから癌抗原ＷＴ１に関しては、ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の頻度を指標として、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択やＷＴ１ワクチンの標的分子の同定を行えることが明らかとなった。また前記の如き種々の癌患者においてＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度が高かったことから、ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度を指標として、癌の診断を行えることも明らかとなった。
本発明者はさらに、ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞を機能的に細分類したところ、ＣＴＬ前駆細胞の中でも、特にエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞（以下、単にエフェクター細胞とも称する）の占める割合が高いことを見出した。従ってＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度を指標として、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択や癌の診断が行えることも明らかとなった。
さらに本発明者は、ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドによる治療実施中の患者におけるＷＴ１特異的ＣＴＬの頻度を測定したところ、ペプチド投与前に対するペプチド投与後のＣＴＬ頻度の増加と治療効果とが相関していることを見出した。
本発明は、以上のような知見に基づき完成するに至ったものである。
すなわち本発明は、
（１）  以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法；
（２）  ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、前記（１）記載の選択方法；
（３）  ＨＬＡテトラマー法により測定する、前記（２）記載の選択方法；
（４）  以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、前記（３）記載の選択方法；
（５）  前記（４）に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ前駆細胞中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、前記（４）記載の選択方法；
（６）  ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（４）または（５）記載の選択方法；
（７）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（４）〜（６）いずれか記載の選択方法；
（８）  フローサイトメトリーを用いて行われる前記（１）〜（７）いずれか記載の選択方法；
（９）  ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量が、健常人の値と比較して１．５倍以上高いことを指標としてＷＴ１ワクチン応答性を判断する、前記（１）〜（８）いずれか記載の選択方法；
（１０）  ＣＴＬ前駆細胞がエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞である、前記（１）記載の選択方法；
（１１）  ＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量の測定に、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法を利用する、前記（１０）記載の選択方法；
（１２）  ＨＬＡテトラマー法を利用する、前記（１１）記載の選択方法；
（１３）  以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体および抗ＣＤ２７抗体と、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性であり、かつＨＬＡテトラマー結合陽性のＣＴＬ前駆細胞中での、ＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性のエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の割合を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、前記（１２）記載の選択方法；
（１４）  ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（１３）記載の選択方法；
（１５）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（１３）または（１４）記載の選択方法；
（１６）  フローサイトメトリーを用いて行われる前記（１０）〜（１５）いずれか記載の選択方法；
（１７）  以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、癌の罹患を判断する工程、
を含む、癌の診断方法；
（１８）  ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、前記（１７）記載の診断方法；
（１９）  ＨＬＡテトラマー法により測定する、前記（１８）記載の診断方法；
（２０）  以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被険者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有ナるＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、癌の罹患を判断する工程、
を含む、前記（１９）記載の診断方法；
（２１）  前記（２０）に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ前駆細胞中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、前記（２０）記載の診断方法；
（２２）  ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（２０）または（２１）記載の診断方法；
（２３）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（２０）〜（２２）いずれか記載の診断方法；
（２４）  フローサイトメトリーを用いて行われる前記（１７）〜（２３）いずれか記載の診断方法；
（２５）  ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量が、健常人の値と比較して１．５倍以上高いことを指標として癌の罹患を判断する、前記（１７）〜（２４）いずれか記載の診断方法；
（２６）  ＣＴＬ前駆細胞がエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞である、前記（１７）記載の診断方法；
（２７）  ＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量の測定に、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法を利用する、前記（２６）記載の診断方法；
（２８）  ＨＬＡテトラマー法を利用する、前記（２７）記載の診断方法；
（２９）  以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体および抗ＣＤ２７抗体と、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性であり、かつＨＬＡテトラマー結合陽性のＣＴＬ前駆細胞中での、ＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性のエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の割合を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、癌の罹患を判断する工程、
を含む、前記（２８）記載の診断方法；
（３０）  ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（２９）記載の診断方法；
（３１）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（２９）または（３０）記載の診断方法；
（３２）  フローサイトメトリーを用いて行われる前記（２６）〜（３１）いずれか記載の診断方法；
（３３）  以下の工程（ａ）−（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料に複数のＷＴ１ワクチンの標的分子をそれぞれ適用し、
（ｃ）前記（ｂ）の生体試料中それぞれに存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定し、それぞれ比較する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果に基づいて、その患者に有効なＷＴ１ワクチンの標的分子を同定する工程、
を含む、患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法；
（３４）  ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、前記（３３）記載の同定方法；
（３５）  ＨＬＡテトラマー法により測定する、前記（３４）記載の同定方法；
（３６）  以下の工程（ａ）−（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の複数の癌抗原ペプチドを含有する複数のＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とをそれぞれ接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量をそれぞれ測定し、比較する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果に基づいて、その患者に有効なＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを同定する工程、
を含む、前記（３５）記載の同定方法；
（３７）  前記（３６）に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ前駆細胞中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、前記（３６）記載の同定方法；
（３８）  ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（３６）または（３７）記載の同定方法；
（３９）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（３６）〜（３８）いずれか記載の同定方法；
（４０）  フローサイトメトリーにより行われる前記（３３）〜（３９）いずれか記載の同定方法；
（４１）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択のための臨床検査薬；
（４２）  ＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（４１）記載の臨床検査薬；
（４３）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（４１）または（４２）に記載の臨床検査薬；
（４４）  前記（４１）〜（４３）いずれか記載の臨床検査薬を含有するキット；
（４５）  前記（３３）〜（４０）いずれか記載の患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法により同定された標的分子を含有する、患者固有の癌を処置するための当該患者用の医薬組成物；
（４６）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、癌の診断薬；
（４７）  ＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（４６）記載の診断薬；
（４８）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（４６）または（４７）に記載の診断薬；
（４９）  前記（４６）〜（４８）いずれか記載の診断薬を含有するキット；
（５０）  以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬを含む生体試料をＷＴ１ワクチン投与後の患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果をＷＴ１ワクチン投与前のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチンによる治療の適合性を判断する工程、
を含む、該患者における該ＷＴ１ワクチンの適合性を判定する方法；
（５１）  ＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法および限界希釈法のいずれかの方法により測定する、前記（５０）記載の判定方法；
（５２）  ＨＬＡテトラマー法により測定する、前記（５１）記載の判定方法；
（５３）  以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬを含む生体試料をＷＴ１ワクチン投与後の患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果をＷＴ１ワクチン投与前のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチンによる治療の適合性を判断する工程、
を含む、前記（５２）記載の判定方法；
（５４）  前記（５３）に記載の工程（ｃ）が、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ中でのＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われる、前記（５３）記載の判定方法；
（５５）  ＨＬＡテトラマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（５３）または（５４）記載の判定方法；
（５６）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（５３）〜（５５）いずれか記載の判定方法；
（５７）  フローサイトメトリーを用いて行われる前記（５０）〜（５６）いずれか記載の判定方法；
（５８）  ＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量が、ＷＴ１ワクチン投与前の値と比較して１．５倍以上高いことを指標としてＷＴ１ワクチンによる治療が適しているか否かを判断する、前記（５０）〜（５７）いずれか記載の判定方法；
（５９）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、ＷＴ１ワクチンの適合性の判定のための臨床検査薬；
（６０）  ＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーの構成成分であるＨＬＡ抗原がＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原である、前記（５９）記載の臨床検査薬；
（６１）  ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドが、Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）およびＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）より選択される、前記（５９）または（６０）に記載の臨床検査薬；ならびに
（６２）  前記（５９）〜（６１）いずれか記載の臨床検査薬を含有するキット、に関する。
さらに、本発明は、
（６３）  前記（１）に関連し、以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、により、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者を選択し、該選択された患者をＷＴ１またはＷＴ１由来の癌抗原ペプチドにより処置する、該患者における癌を処置する方法、および前記（２）〜（１６）いずれか記載の選択方法により選択された患者における癌を処置する方法；
（６４）  前記（３３）に関連し、以下の工程（ａ）−（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料に複数のＷＴ１ワクチンの標的分子をそれぞれ適用し、
（ｃ）前記（ｂ）の生体試料中それぞれに存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定し、それぞれ比較する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果に基づいて、その患者に有効なＷＴ１ワクチンの標的分子を同定する工程、
を含む、患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法により同定された標的分子を投与する、当該患者固有の癌を処置する方法、および前記（３４）〜（４０）いずれか記載の患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法により同定された標的分子を投与する、当該患者固有の癌を処置する方法；
（６５）  前記（５０）に関連し、以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬを含む生体試料をＷＴ１ワクチン投与後の患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果をＷＴ１ワクチン投与前のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチンによる治療の適合性を判断する工程、
を含む、該患者における該ＷＴ１ワクチンの適合性を判定する方法により適合性ありと判定された患者を、ＷＴ１またはＷＴ１由来の癌抗原ペプチドにより処置する、該患者における癌を処置する方法、および前記（５１）〜（５８）いずれか記載の判定方法により、適合性ありと判定された患者における癌を処置する方法；
に関する。
【図面の簡単な説明】  図１は、癌患者と健常人におけるＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度を示すグラフである。図中、縦軸はＣＴＬ前駆体（前駆細胞）の頻度を示す。また図中、血液癌はＨＬＡ−Ａ２４０２陽性の造血器悪性腫瘍患者の結果を、肺癌はＨＬＡ−Ａ２４０２陽性の肺癌患者の結果を、健常人はＨＬＡ−Ａ２４０２陽性の健常人の結果をそれぞれ示す。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明は、以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法、および該方法により選択された患者における癌を処置する方法を提供する。
本発明においては、ワクチン投与前の癌患者において、従来にない高い頻度でＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞が存在していることを見出した。従ってＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の量や頻度を指標として、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択を行うことができる。
工程（ａ）における被験患者とは、癌の疑われる患者、若しくは癌患者を指す。具体的には、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫などの血液性の癌や、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌等の固形癌が疑われる患者、若しくはこれらの癌に罹患した患者が例示される。好ましくは白血病、骨髄異形成症候群および肺癌が疑われる患者、若しくはこれらの癌に罹患した患者が挙げられる。
工程（ａ）において被験患者より単離される生体試料は、ＣＴＬ前駆細胞を含む限り特に制限はないが、血液、リンパ液またはこれらの培養物、血液から単離した末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、若しくはＴ細胞が浸潤した組織などが例示される。生体試料は、そのまま使用することもできるし、希釈または濃縮して使用することもできる。好ましくはＰＢＭＣが用いられ、当該ＰＢＭＣは通常のＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅの密度勾配遠心法などにより単離することができる。
工程（ｂ）において生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する手法は、ＣＴＬの存在頻度または量を測定できる従来公知の如何なる手法を用いても良い。具体的には、例えばＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法または限界希釈法などを用いることができる。
ここでＨＬＡテトラマー法とは、ＨＬＡ抗原α鎖とβ２ミクログロブリンを目的抗原ペプチドと会合させた複合体（ＨＬＡモノマー）をビオチン化し、蛍光標識したアビジンに結合させることにより４量体化して作製したＨＬＡテトラマーを用いて、抗原ペプチド特異的ＣＴＬを検出する方法である。具体的には、当該ＨＬＡテトラマーで抗原ペプチド特異的なＣＴＬを染色し、フローサイトメーターで解析することにより当該ＣＴＬを定量することができる。このようなＨＬＡテトラマーの製造方法およびそれを用いたＣＴＬの検出方法は公知であり、例えば文献（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４，１９９６）に記載の方法に準じて行うことができる。
ＨＬＡモノマー法とは前記ＨＬＡテトラマーの製造において用いられるＨＬＡモノマー（ＨＬＡ抗原α鎖、β２ミクログロブリン、抗原ペプチドの会合体をビオチン化したもの）を用いて抗原ペプチド特異的ＣＴＬを検出する方法である。
ＨＬＡダイマー法とはＨＬＡ抗原α鎖とＩｇ（イムノグロブリン、例えばＩｇＧ１）とを融合させ、これにβ２ミクログロブリン、抗原ペプチドを結合させたＨＬＡダイマーを用いて、抗原ペプチド特異的ＣＴＬを検出する方法である（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６６７１−６６７５（１９９３））。ＨＬＡダイマーに結合した抗原ペプチド特異的ＣＴＬは、例えば標識抗ＩｇＧ１抗体をＩｇＧ１に結合させることなどにより、検出することができる。
ＨＬＡペンタマー法とは近年開発された手法であり、ＨＬＡ抗原と抗原ペプチドとの複合体５分子がＣｏｉｌｅｄ−Ｃｏｉｌドメインを介して重合した５量体により、抗原ペプチド特異的ＣＴＬを検出する方法である。ＨＬＡ抗原−抗原ペプチドの複合体を蛍光色素等で標識することができるため、ＨＬＡテトラマー法と同様にフローサイトメーター等で解析することができる（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｉｍｍｕｎｅ．ｃｏ．ｕｋ／参照）。
以上に述べたＨＬＡモノマー、ダイマー、テトラマーおよびペンタマーはいずれも受託合成可能であり、例えばＰｒｏＩｍｍｕｎｅ社やＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社などに委託することにより合成することができる。
エリスポット法とは、活性化ＣＴＬが産生するＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ等のサイトカインに対する抗体をプレート上に固相化し、目的抗原若しくは目的抗原ペプチドで刺激した生体試料をプレートに添加し、前記固相化抗体に結合した生体試料中の活性化ＣＴＬが分泌したサイトカインを抗サイトカイン抗体でスポットとして検出することにより、生体試料中のＣＴＬを検出する方法である。当該エリスポット法を用いたＣＴＬの定量法は公知であり、例えば文献（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １１０：２９，１９８８）に記載の方法に準じて行うことができる。
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法とは、活性化ＣＴＬが産生するＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ等のサイトカインの遺伝子量をＲＴ−ＰＣＲにより測定することにより、間接的に、目的抗原若しくは目的抗原ペプチド反応性のＣＴＬ頻度を測定する方法である。当該リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法を用いたＣＴＬの定量法は公知であり、例えば文献（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２１０：１９５，１９９７）に記載の方法に準じて行うことができる。
限界希釈法とは、ＣＴＬを含む生体試料を細胞密度を変えてプレートに播種し、目的抗原若しくは目的抗原ペプチドで刺激しながら培養して、活性化ＣＴＬが産生するサイトカイン量や細胞傷害性を測定し、陽性ウェル数からＣＴＬ頻度を測定する方法である。当該限界希釈法を用いたＣＴＬの定量法は公知であり、例えば文献（Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７７：１９０７，１９９８）に記載の方法に準じて行うことができる。
以上のような公知のＣＴＬ定量法を用いることにより、ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定することができる。
工程（ｃ）におけるＷＴ１ワクチン応答性の判断は、工程（ｂ）で得られた被験患者におけるＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量（以下被験患者値という）を、健常人のそれ（健常人値）と比較し、両者の違いを判定することによって行うことができる。この場合、健常人から単離・調製した生体試料（血液、リンパ液、ＰＢＭＣ等）が必要であるが、これらは癌に罹患していない人の生体試料を採取することによって、取得することができる。なお、ここでいう「健常人」とは、癌と診断されていない人をいう。
被験者値と健常人値との比較は、被験者の生体試料と健常人の生体試料を対象とした測定を並行して行うことで実施できる。並行して行わない場合は、複数（少なくとも２つ、好ましくは３以上、より好ましくは５以上）の健常人の生体試料を用いて均一な測定条件で測定して得られた健常人値の平均値または統計的中間値を比較に用いることができる。
被験患者においてＷＴ１ワクチン応答性が高いか否かの判断は、被験者値が健常人値と比較して１．５倍以上、好ましくは２倍以上多いことを指標として行うことができる。すなわち、被験者値が健常人値と比較して１．５倍以上、好ましくは２倍以上多ければ、ＷＴ１ワクチン応答性が高いと判断する。ＷＴ１ワクチン応答性が高いと判断された患者は、ＷＴ１ワクチンが適用可能、即ちＷＴ１ワクチンによる治療を良好に適用できると判断される。
前記ＣＴＬの測定法のうち、手法の容易さおよび精度の観点から最も好ましいのはＨＬＡテトラマー法である。すなわち好ましい形態として、本発明は、ＨＬＡテトラマー法を用いることを特徴とするＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法および処置方法を提供する。なお前述のように、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法およびＨＬＡペンタマー法も原理的にはＨＬＡテトラマー法と同様の手法であり、好ましいＣＴＬの測定法であるが、ここではＨＬＡテトラマー法を例にとり説明する。
当該ＨＬＡテトラマーを用いたＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法および処置方法は、具体的には以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含むものである。
ここで工程（ａ）における「生体試料」および「被験患者」は、前記した通りである。
工程（ｂ）において用いられる「ＨＬＡテトラマー」とは、ＨＬＡ抗原のα鎖とβ２ミクログロブリンをペプチド（抗原ペプチド）と会合させた複合体（ＨＬＡモノマー）をビオチン化し、アビジンに結合させることにより４量体化したものを指す（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７９：２１０３−２１０６（１９９８）、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４−９６（１９９６））。当該ＨＬＡテトラマーは、フローサイトメトリー、蛍光顕微鏡等の公知の検出手段により結合したＣＴＬ前駆細胞を容易に選別または検出することが出来るように、蛍光標識されていることが好ましい。具体的には、例えばフィコエリスリン（ＰＥ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ペリジニンクロロフィルプロテイン（ＰｅｒＣＰ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、フィコエリスリン−テキサスレッド（ＥＣＤとも称する）、フィコエリスリン−シアニン５．１（ＰＣ５とも称する）などにより標識されたＨＬＡテトラマーが挙げられる。
前記ＨＬＡテトラマーの成分として用いられるＷＴ１由来の癌抗原ペプチドは、ヒトＷＴ１（Ｃｅｌｌ，６０：５０９，１９９０、ＮＣＢＩデータベースＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＸＰ＿０３４４１８、配列番号：１）に由来し、ＨＬＡ抗原と複合体を形成してＨＬＡ拘束性の細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の誘導活性（免疫原性）を有するものである。
ＨＬＡ分子には多くのサブタイプが存在し、結合できる癌抗原ペプチドのアミノ酸配列にはそれぞれのタイプについて規則性（結合モチーフ）が存在することが知られている（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，４１，ｐ１７８，１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：ｐ４７４９，１９９５）。例えばＨＬＡ−Ａ２４の場合、８〜１１アミノ酸からなるペプチドのうちの第２位のアミノ酸がチロシン（Ｔｙｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、メチオニン（Ｍｅｔ）またはトリプトファン（Ｔｒｐ）であり、Ｃ末端のアミノ酸がフェニルアラニン（Ｐｈｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）またはメチオニン（Ｍｅｔ）となることが知られている（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２，ｐ３９１３，１９９４、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，４１，ｐ１７８，１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５，ｐ４３０７，１９９４）。
またＨＬＡ−Ａ２のモチーフについては、以下の表１に示したモチーフが知られている（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，４１，ｐ１７８，１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：ｐ４７４９，１９９５）。
2005001117.tif 000002
さらに近年、ＨＬＡ抗原に結合可能と予想されるペプチド配列を、インターネット上、ＮＩＨのＢＩＭＡＳのソフトを使用することにより検索することができる（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｍａｓ．ｄｃｒｔ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｍｏｌｂｉｏ／ｈｌａ＿ｂｉｎｄ／  ）。またＢＩＭＡＳ  ＨＬＡ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２，１６３，１９９４）を用いて検索することも可能である。このようにして検索・同定されたＷＴ１由来ペプチドの具体例としては、例えば国際公開第２０００／１８７９５号パンフレットのＴａｂｌｅＩＩ〜ＴａｂｌｅＸＬＶＩに列挙されたペプチドが挙げられる。
以上のようなＷＴ１由来のペプチドは、そのアミノ酸残基の一部に改変（置換、欠失、及び／又は付加（ペプチドのＮ末端、Ｃ末端へのアミノ酸の付加も含む））を有していても良く、好ましくはアミノ酸残基の置換が挙げられる。当該置換は前記モチーフ上とり得るアミノ酸残基への置換が望ましい。
以上のようなＷＴ１由来のペプチド（改変体も含む）を、公知の癌抗原ペプチドのアッセイ法（例えばＷＯ  ０２／４７４７４号公報、Ｉｎｔ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ：１００，５６５−５７０（２００２）等参照）に供することにより、ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを選択することができる。
ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドの具体例としては、例えば以下のペプチドが例示される：
2005001117.tif 000003
2005001117.tif 000004
（ここでＡｂｕはα−アミノ酪酸である）
このうち配列番号：２および配列番号：４に記載のペプチドはＨＬＡ−Ａ２４抗原およびＨＬＡ−Ａ２抗原に結合性のペプチドであり、またそれ以外のペプチド（配列番号：３、５、６〜１８）はＨＬＡ−Ａ２４抗原に結合性のペプチドである。
好ましくは、前記配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４および配列番号：５のいずれかに記載の癌抗原ペプチドが挙げられる。
前記ペプチドは、１つのＨＬＡテトラマー中に２種以上含有されていてもよい。
前記ペプチドは、通常のペプチド化学において用いられる方法に準じて合成することができる。合成方法としては、文献（ペプタイド・シンセシス（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６６；ザ・プロテインズ（Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ），Ｖｏｌ  ２，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７６；ペプチド合成，丸善（株），１９７５；ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株），１９８５；医薬品の開発  続  第１４巻・ペプチド合成，広川書店，１９９１）などに記載されている方法が挙げられる。
前記ペプチドは、そのＮ末端アミノ酸のアミノ基またはＣ末端アミノ酸のカルボキシル基を修飾したペプチドであってもよい。
ここでＮ末端アミノ酸のアミノ基の修飾基としては、例えば１〜３個の炭素数１から６のアルキル基、フェニル基、シクロアルキル基、アシル基が挙げられ、具体的には炭素数１から６のアルカノイル基、フェニル基で置換された炭素数１から６のアルカノイル基、炭素数５から７のシクロアルキル基で置換されたカルボニル基、炭素数１から６のアルキルスルホニル基、フェニルスルホニル基、炭素数２から６のアルコキシカルボニル基、フェニル基で置換されたアルコキシカルボニル基、炭素数５から７のシクロアルコキシで置換されたカルボニル基、フェノキシカルボニル基等が挙げられる。
Ｃ末端アミノ酸のカルボキシル基の修飾基としては、例えばエステル基およびアミド基が挙げられ、エステル基の具体例としては、炭素数１から６のアルキルエステル基、フェニル基で置換された炭素数０から６のアルキルエステル基、炭素数５から７のシクロアルキルエステル基等が挙げられ、アミド基の具体例としては、アミド基、炭素数１から６のアルキル基１つまたは２つで置換されたアミド基、フェニル基で置換された炭素数０から６のアルキル基１つまたは２つで置換されたアミド基、アミド基の窒素原子を含んで５から７員環のアザシクロアルカンを形成するアミド基等が挙げられる。
ＨＬＡテトラマーの成分であるＨＬＡ抗原（ＨＬＡ抗原のα鎖）は、如何なるサブタイプのＨＬＡ抗原であっても用いることができるが、診断または選択対象のサブタイプと同じサブタイプを用いる必要がある。ＨＬＡ抗原としては、例えばＨＬＡ−Ａ＊２４０２等のＨＬＡ−Ａ２４抗原、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１，−Ａ＊０２０４，−Ａ＊０２０５，−Ａ＊０２０６等のＨＬＡ−Ａ２抗原、ＨＬＡ−Ａ＊２６０１等のＨＬＡ−Ａ２６抗原、またＨＬＡ−Ａ＊３１０１、ＨＬＡ−Ａ＊３３０３、ＨＬＡ−Ａ＊１１０１などが挙げられる。具体的には、例えばＨＬＡ−Ａ２４抗原、ＨＬＡ−Ａ２抗原またはＨＬＡ−Ａ２６抗原が挙げられる。これらＨＬＡ抗原の塩基配列およびアミノ酸配列は公知であり、例えばＨＬＡ−Ａ２４抗原についてはＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５５：４２４８−４２５２（１９９５）およびＧｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｍ６４７４０に開示されている。またＨＬＡ−Ａ２抗原についてはＧｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｍ８４３７９に開示されている。またＨＬＡ−Ａ２６抗原についてはＧｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｄ１４３５０に開示されている。従ってこれら公知の塩基配列の情報に基づき、ＰＣＲ法等の常法により、容易にＨＬＡ抗原のα鎖をクローニングすることができる。
当該ＨＬＡ抗原のα鎖は、ＣＴＬの結合性や選別性を容易にするために可溶性断片であることが好ましい。さらに、ビオチン−アビジン結合により４量体化するために、当該ＨＬＡ抗原α鎖のＣ末端はビオチン化可能な構造を有していること、すなわちビオチン結合部位が付加されていることが好ましい。
具体的には、例えばＨＬＡ−Ａ２４０２（ＨＬＡ−Ａ２４の１種）の場合は、正プライマー：５’−ＣＣＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＡＴＴＣＴＡＴＧＣＧＣＴＡＴＴＴＴＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＴ−３’（配列番号：１９）および逆向きプライマー：５’−ＧＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＴＣＴＣＡＧＧＧＴＧＡＧＧＧＧＣＴＴＧＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＣ−３’（配列番号：２０）を用いて、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｍ６４７４０）発現プラスミドを鋳型とし、ＰＣＲ反応を行うことにより、Ｃ末端タグ中の特異的リジン残基をＢｉｒＡ酵素でビオチニル化可能なように設計された組換え可溶性ＨＬＡ−Ａ＊２４０２α鎖のｃＤＮＡを得ることができる。
ＨＬＡテトラマーの成分であるβ２ミクログロブリンは、ヒト由来のβ２ミクログロブリンが好ましい。当該ヒト由来のβ２ミクログロブリンのｃＤＮＡは、正プライマー：５’−ＣＡＴＡＴＧＡＴＣＣＡＧＣＧＴＡＣＣＣＣＧＡＡＡＡＴＴＣＡＧ−３’（配列番号：２１）および逆向きプライマー：５’−ＧＧＡＴＣＣＴＴＡＣＡＴＧＴＣＴＣＧＡＴＣＣＣＡＣＴＴＡＡＣ−３’（配列番号：２２）を用いて、ヒトβ２ミクログロブリン（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＡＢ０２１２８８）発現プラスミドを鋳型とし、ＰＣＲ反応を行うことなどにより得ることができる。
ＨＬＡテトラマーの成分であるアビジンは、従来公知の如何なるアビジンであっても使用することができるが、フローサイトメトリーや蛍光顕微鏡等による検出を容易にするために、蛍光標識されていることが好ましい。蛍光色素は、公知のものを制限なく使用することができ、例えばフィコエリスリン（ＰＥ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ペリジニンクロロフィルプロテイン（ＰｅｒＣＰ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、フィコエリスリン−テキサスレッド（ＥＣＤとも称する）、フィコエリスリン−シアニン５．１（ＰＣ５とも称する）などが挙げられる。
以上のＨＬＡテトラマーの成分を含有するＨＬＡテトラマーの作製法については、文献（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７９：２１０３−２１０６（１９９８）、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４−９６（１９９６）等）により周知であるが、簡単に述べると以下のようになる。
まずタンパク質を発現可能な大腸菌や哺乳動物細胞に、ＨＬＡα鎖発現ベクターおよびβ２ミクログロブリン発現ベクターを導入し発現させる。ここでは大腸菌（例えばＢＬ２１）を用いることが好ましい。得られた単量体ＨＬＡ複合体と抗原ペプチド（ＷＴ１由来の癌抗原ペプチド）とを混合し、可溶性のＨＬＡ−ペプチド複合体を形成させる。次にＨＬＡ−ペプチド複合体におけるＨＬＡα鎖のＣ末端部位の配列をＢｉｒＡ酵素によりビオチン化する。このビオチン化されたＨＬＡ−ペプチド複合体と蛍光標識されたアビジンとを４：１のモル比で混合することにより、ＨＬＡテトラマーを調製することができる。なお、前記各ステップにおいて、ゲルろ過等によるタンパク精製を行うことが好ましい。
前記工程（ｂ）は、以上のようにして作製されたＨＬＡテトラマーと、生体試料（被験患者より単離されたＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料）とを接触させることにより行われる。当該接触は３７℃で行うことが好ましい。また接触は、通常の生理的緩衝液、例えば血清を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中において行うことが好ましい。
なお、ＨＬＡテトラマーの代わりに蛍光標識したストレプトアビジンを添加して同様の処理を行った陰性対照も、併せて作製しておくことが好ましい。
工程（ｂ）の後、ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する（工程ｃ）。当該測定は、従来公知の如何なる手法を用いて行っても良い。ＨＬＡテトラマーが蛍光標識されている場合、このＨＬＡテトラマーに結合したＣＴＬ前駆細胞は蛍光標識されていることになるので、フローサイトメーター、蛍光顕微鏡などを用いて標識されたＣＴＬを検出若しくは単離することができる。
ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度は、例えば、ＣＤ８陽性細胞（ＣＤ８陽性のＣＴＬ前駆細胞）、またはＣＤ８／ＣＤ３陽性細胞（ＣＤ８／ＣＤ３陽性のＣＴＬ前駆細胞）に対する前記ＨＬＡテトラマー結合細胞の割合（頻度）を測定することにより求めることができる。
ここでＣＤ８陽性細胞は、例えば蛍光標識したマウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体を用いて標識・検出することができる。またＣＤ３陽性細胞は蛍光標識したマウス抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体を用いて標識・検出することができる。
ここで用いる蛍光色素は、ＨＬＡテトラマーにおいて用いられる蛍光色素と異なるものを用いる必要がある。すなわち、ＰＥ標識したＨＬＡテトラマーを用いる場合は、ＦＩＴＣ標識したマウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体、およびＰｅｒＣＰ標識したマウス抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体を用いるというように、蛍光色素を区別する必要がある。
具体的な操作は、ＣＤ８陽性細胞に対するＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定する場合は、例えばＰＥ標識ＨＬＡテトラマーと生体試料とを接触させた後、ＦＩＴＣ標識マウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体をさらに添加して反応させ、染色された細胞をフローサイトメーターや蛍光顕微鏡で解析する。ＣＤ８陽性細胞（ＣＤ８＋）を選択し、その中のテトラマー陽性細胞（ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋）の割合から陰性対照のアビジン陽性細胞（ＣＤ８＋ａｖｉｄｉｎ＋）の割合を差し引いた数値を、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞の割合とすることができる（以下）：
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞（％）＝
［（ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋細胞数／ＣＤ８＋細胞数）−
（ＣＤ８＋ａｖｉｄｉｎ＋細胞数／ＣＤ８＋細胞数）］×１００。
また、ＣＤ３陽性・ＣＤ８陽性細胞に対するＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定する場合は、例えばＰＥ標識ＨＬＡテトラマーと生体試料とを接触させた後、ＦＩＴＣ標識マウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体及びＰｅｒＣＰ標識マウス抗ヒトＣＤ３抗体をさらに添加して反応させ、染色された細胞をフローサイトメーターや蛍光顕微鏡で解析する。ＣＤ３陽性およびＣＤ８陽性細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）を選択し、その中のテトラマー陽性細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋）の割合から陰性対照のアビジン陽性細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ａｖｉｄｉｎ＋）の割合を差し引いた数値を、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞の割合とすることができる（以下）：
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞（％）＝
［（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋細胞数／ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞数）−
（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ａｖｉｄｉｎ＋細胞数／ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞数）］×１００。
以上の測定結果に基づき、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する。具体的には、工程（ｂ）で得られた被験患者におけるＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量（以下被験患者値という）を、健常人のそれ（健常人値）と比較し、両者の違いを判定することによって行うことができる。この場合、健常人から単離・調製した生体試料（血夜、リンパ液、ＰＢＭＣ等）が必要であるが、これらは癌に罹患していない人の生体試料を採取することによって、取得することができる。なお、ここでいう「健常人」とは、癌と診断されていない人をいう。
被験者値と健常人値との比較は、被験者の生体試料と健常人の生体試料を対象とした測定を並行して行うことで実施できる。並行して行わない場合は、複数（少なくとも２つ、好ましくは３以上、より好ましくは５以上）の健常人の生体試料を用いて均一な測定条件で測定して得られた健常人値の平均値または統計的中間値を比較に用いることができる。
被験患者においてＷＴ１ワクチン応答性が高いか否かの判断は、被験者値が健常人値と比較して１．５倍以上、好ましくは２倍以上多いことを指標として行うことができる。すなわち、被験者値が健常人値と比較して１．５倍以上、好ましくは２倍以上多ければ、ＷＴ１ワクチン応答性が高いと判断する。ＷＴ１ワクチン応答性が高いと判断された患者は、ＷＴ１ワクチンが適用可能、即ちＷＴ１ワクチンによる治療を良好に適用できると判断される。
以上のような本発明の患者の選択方法は、ワクチン投与前の患者の診断のみならず、ワクチン治療後の診断や効能の確認にも使用することができる。
本発明はまた、以下の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法、および該方法により選択された患者における癌を処置する方法を提供する。
本発明においては、ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の機能的細分類を行った結果、健常人に比して特にエフェクター細胞の占める割合が高いことを見出した。従ってＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の量や頻度（割合）を指標として、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択を行うことができる。当該エフェクター型ＣＴＬ前駆細胞を指標とした選択方法は、前述したＣＴＬ前駆細胞全体の存在頻度や量を指標とした選択方法において健常人との差が明確でなかった場合等においても、さらに詳細な解析手法として用いることができる。
具体的には以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体および抗ＣＤ２７抗体と、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性であり、かつＨＬＡテトラマー結合陽性のＣＴＬ前駆細胞中での、ＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性のエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の割合を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果を健常人のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチン応答性を判断する工程、
を含む選択方法、および該方法により選択された患者における癌を処置する方法が例示される。
ここで「エフェクター細胞」とはＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性であるＣＴＬ前駆細胞を指す。当該エフェクター細胞の頻度は、ＣＴＬ前駆細胞中でのＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性細胞の割合を測定することにより、求めることができる。具体的には、被験サンプルをＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体および抗ＣＤ２７抗体と接触させ、ＣＤ８陽性またはＣＤ８／ＣＤ３陽性であり、かつＨＬＡテトラマー陽性のＣＴＬ前駆細胞（ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞）中でのＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性細胞の割合を測定することにより、求めることができる。
ここでＣＤ４５ＲＡ陽性細胞は、例えば蛍光標識したマウス抗ヒトＣＤ４５ＲＡモノクローナル抗体を用いて標識・検出することができる。またＣＤ２７陽性細胞は、例えば蛍光標識したマウス抗ヒトＣＤ２７モノクローナル抗体を用いて標識・検出することができる。ここで用いる蛍光色素は、ＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、あるいは抗ＣＤ３抗体において用いられている蛍光色素とは異なるものを用いる必要がある。具体的には、例えばＰＥ標識したＨＬＡテトラマー、ＦＩＴＣ標識した抗ＣＤ８モノクローナル抗体、Ｐｅｒ標識した抗ＣＤ３モノクローナル抗体を用いる場合は、ＥＣＤ標識マウス抗ヒトＣＤ４５ＲＡモノクローナル抗体およびＰＣ５標識マウス抗ヒトＣＤ２７モノクローナル抗体を用いるというように、蛍光色素を区別する必要がある。これら標識抗体等は、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ等から購入することができる。
当該前駆細胞の具体的な測定法等については、前述のＣＴＬ前駆細胞の存在頻度や量を指標とした選択方法と同様にして行うことができる。
以上のようなＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法はまた、癌の診断にも適応することができる。すなわち本発明においては、造血器悪性腫瘍や肺癌患者等の患者において、健常人に比してＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度が高いことを見出した。従ってＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度、またはＷＴ１特異的なエフェクター型ＣＴＬ前駆細胞の頻度を指標として、癌の診断を行うことができる。ここで診断可能な癌としては、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫などの血液性の癌や、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌等の固形癌が挙げられる。好ましくは白血病、骨髄異形成症候群および肺癌が挙げられる。
本発明はまた、以下の工程（ａ）−（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料に複数のＷＴ１ワクチンの標的分子をそれぞれ適用し、
（ｃ）前記（ｂ）の生体試料中それぞれに存在するＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定し、それぞれ比較する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果に基づいて、その患者に有効なＷＴ１ワクチンの標的分子を同定する工程、
を含む、患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法を提共する。
本発明においては、ワクチン投与前の癌患者において、従来にない高い頻度でＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞が存在していることを見出した。従ってＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の量や頻度を指標として、患者固有のＷＴ１ワクチンの標的分子（治療用の標的分子）の同定を行うことができる。
すなわち前記標的分子の同定方法は、ＷＴ１ワクチン応答性が高いと判断された患者に対して治療上最適の標的分子（抗原ペプチド）を同定するために、有効に用いられる。
具体的には、前記ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法と同様に、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法または限界希釈法等により、ＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定することにより行われる。好ましくはＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法が用いられる。以下ＨＬＡテトラマー法を例にとり具体的に説明する。
ＨＬＡテトラマー法は、以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬ前駆細胞を含む生体試料を被験患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の複数の癌抗原ペプチドを含有する複数のＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とをそれぞれ接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量をそれぞれ測定し、比較する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果に基づいて、その患者に有効なＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを同定する工程、
を含んで行われる。
具体的にはまず、候補となるＷＴ１由来癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーを複数作製する。そして、それぞれのＨＬＡテトラマーと被験患者より単離した生体試料とを接触させ、ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬ前駆細胞の存在頻度または量を測定する。各ＨＬＡテトラマーについての測定結果を比較し、最も高い値を示したＨＬＡテトラマーが含有する癌抗原ペプチド（すなわち、最もＣＴＬに認識されやすい癌抗原ペプチド）を、その患者に対するＷＴ１ワクチン治療のための標的分子、即ち患者固有の標的分子として同定する。
ここで用いる癌抗原ペプチドは、ＷＴ１に由来する癌抗原ペプチドであれば如何なるものであっても良いが、例えば配列番号：２〜１８に記載の癌抗原ペプチドが挙げられる。好ましくは配列番号：２〜５のいずれかに記載の癌抗原ペプチドが挙げられる。
なお、各工程の具体的な手法や成分の調製法などについては、前述のＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法の項を参照されたい。
本発明のＷＴ１ワクチン標的分子の同定方法によれば、患者固有の癌を処置できる標的分子が同定される。よって、本発明は別の態様として、本発明の同定方法により同定された患者固有のＷＴ１ワクチン標的分子を含有する、患者固有の癌を処置するための当該患者用の医薬組成物、および該同定方法により同定された標的分子を投与する、患者固有の癌を処置する方法を提供する。本発明の医薬組成物には癌ワクチンが含まれ、当業者に周知のアジュバント等を含有することができる。
本発明はまた、ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択のための臨床検査薬を提供する。以下ＨＬＡテトラマーを例にとり本発明の臨床検査薬につき説明する。
本発明の臨床検査薬の成分となるＨＬＡテトラマーは、前述のようにＨＬＡ抗原のα鎖とβ２ミクログロブリンをＷＴ１由来の癌抗原ペプチドと会合させた複合体（ＨＬＡモノマー）をビオチン化し、アビジンに結合させることにより４量体化したものを指す（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７９：２１０３−２１０６（１９９８）、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４−９６（１９９６））。
ここで用いる癌抗原ペプチドは、ＷＴ１に由来する癌抗原ペプチドであれば如何なるものであっても良いが、例えば配列番号：２〜１８に記載の癌抗原ペプチドが挙げられる。好ましくは配列番号：２〜５のいずれかに記載の癌抗原ペプチドが挙げられる。
当該ＨＬＡテトラマーの各成分の調製法やＨＬＡテトラマーの作製法については、前述のＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法の項に記載したとおりである。
本発明の臨床検査薬は、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択のためのキットの１成分とすることができる。当該キットは、前記本発明の臨床検査薬のみからなるキットであっても、また本発明の臨床検査薬と他の成分とを含むキットであっても良い。当該キット中の他の成分としては、蛍光標識ストレプトアビジン、蛍光標識マウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体、蛍光標識マウス抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体などが挙げられる。またエフェクター細胞を検出する場合は、蛍光標識マウス抗ヒトＣＤ４５ＲＡモノクローナル抗体、蛍光標識マウス抗ヒトＣＤ２７モノクローナル抗体を含むこともできる。
ここで蛍光色素としては、フィコエリスリン（ＰＥ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ペリジニンクロロフィルプロテイン（ＰｅｒＣＰ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、フィコエリスリン−テキサスレッド（ＥＣＤとも称する）、フィコエリスリン−シアニン５．１（ＰＣ５とも称する）などが挙げられる。
本発明の臨床検査薬およびキットは、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択に使用できる他、ＷＴ１ワクチンの標的分子（治療用の標的分子）の選択にも使用することができる。また同様の成分にて癌の診断薬として使用することもできる。
本発明はまた、以下の工程（ａ）−（ｃ）：
（ａ）ＣＴＬを含む生体試料をＷＴ１ワクチン投与後の患者より単離する工程、
（ｂ）前記（ａ）の生体試料中に存在するＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定する工程、
（ｃ）前記（ｂ）の測定結果をＷＴ１ワクチン投与前のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチンによる治療の適合性を判断する工程、
を含む、該患者における該ＷＴ１ワクチンの適合性を判定する方法、および該判定方法により適合性ありと判定された患者を、ＷＴ１またはＷＴ１由来の癌抗原ペプチドにより処置する、該患者における癌を処置する方法を提供する。
後述の実施例に示したように、ＷＴ１由来の癌抗原ペプチド（ＷＴ１ワクチン）による治療を実施中の患者におけるＷＴ１特異的ＣＴＬの頻度を測定したところ、ペプチド投与前に対する投与後のＣＴＬ頻度の増加と治療効果とが相関していることを見出した。すなわち、ＷＴ１ペプチド投与後のＷＴ１特異的ＣＴＬの頻度が、ペプチド投与前のＣＴＬ頻度に比して１．５倍以上増加した場合を「免疫反応陽性」と定義し、この免疫反応性と治療効果との関連性について評価した。その結果、免疫反応性と治療効果の間には正の相関関係が認められた。この結果から、前記免疫反応性（ＣＴＬの頻度や量の増加）を指標として、対象患者においてＷＴ１ワクチンによる治療が適しているかどうかを判断できることが明らかとなった。
すなわち本発明の判定方法は、ＷＴ１ワクチン投与を実施中の患者において、ペプチド投与による治療を続行するか否かといった治療の適合性を判定するために、有効に用いられる。
本発明の判定方法における工程（ａ）および（ｂ）の具体的な操作については、前記「ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法」の項に記載した通りであり、具体的には、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法または限界希釈法等により、ＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定することにより行われる。
工程（ｃ）におけるＷＴ１ワクチンによる治療が適しているか否かの判断は、ＷＴ１ワクチン投与後の患者におけるＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量（以下、投与後値という）を、ＷＴ１ワクチン投与前のそれ（以下、投与前値という）と比較し、両者の違いを判定することによって行うことができる。
ここで「ワクチン投与後」とは、ＷＴ１ワクチンを１回以上投与した後のどのタイミングであっても良いが、２週間間隔でのペプチド投与スケジュールの場合、１回目〜５回目のＷＴ１ワクチン投与後、より好ましくは１回目〜３回目のペプチド投与後のタイミングが挙げられる。
ＷＴ１ワクチンによる治療が適しているか否かの判断は、ＷＴ１ワクチン投与後値が投与前値に比して１．５倍以上高いことを指標として行うことができる。すなわち、投与後値が投与前値と比較して１．５倍以上高ければ、ＷＴ１ワクチンによる治療が適していると判断する。この知見に基づき、本発明は、患者における該ＷＴ１ワクチンの適合性を判定する本発明方法により適合性ありと判定された患者を、ＷＴ１またはＷＴ１由来の癌抗原ペプチドにより処置する、該患者における癌を処置する方法をも提供する。
前記ＣＴＬの測定法のうち、手法の容易さおよび精度の観点から最も好ましいのはＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法、ＨＬＡペンタマー法である。以下ＨＬＡテトラマー法を例にとり説明する。
ＨＬＡテトラマー法は、以下の工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）：
（ａ）ＣＴＬを含む生体試料をＷＴ１ワクチン投与後の患者より単離する工程、
（ｂ）ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡテトラマーと、前記（ａ）の生体試料とを接触させる工程、
（ｃ）ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１特異的なＣＴＬの存在頻度または量を測定する工程、
（ｄ）前記（ｃ）の測定結果をＷＴ１ワクチン投与前のそれと比較して高いか否かを判定し、ＷＴ１ワクチンによる治療の適合性を判断する工程、
を含んで行われる。
ここでＨＬＡテトラマーの成分とされるＨＬＡ抗原としては、ＨＬＡ−Ａ２４抗原またはＨＬＡ−Ａ２抗原が挙げられる。またＨＬＡテトラマーの成分とされる癌抗原ペプチドとしては、例えばＣｙｓ  Ｍｅｔ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：２）、Ｃｙｓ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｒｐ  Ａｓｎ  Ｇｌｎ  Ｍｅｔ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ（配列番号：３）、Ａｒｇ  Ｍｅｔ  Ｐｈｅ  Ｐｒｏ  Ａｓｎ  Ａｌａ  Ｐｒｏ  Ｔｙｒ  Ｌｅｕ（配列番号：４）またはＡｒｇ  Ｔｙｒ  Ｐｒｏ  Ｓｅｒ  Ｃｙｓ  Ｇｌｎ  Ｌｙｓ  Ｌｙｓ  Ｐｈｅ（配列番号：５）が挙げられる。これら配列番号２〜５に記載のペプチドは全てＨＬＡ−Ａ２４結合性のペプチドであるため、前記本発明の判定法において用いられるＨＬＡテトラマーとしては、配列番号：２〜５に記載のいずれかのペプチドとＨＬＡ−Ａ２４抗原とを含有するＨＬＡテトラマーが挙げられる。さらに配列番号：２および４に記載のペプチドはＨＬＡ−Ａ２抗原に結合性のペプチドでもあるため、配列番号：２または４記載のペプチドとＨＬＡ−Ａ２抗原とを含有するＨＬＡテトラマーも挙げることができる。
前記本発明の判定方法および処置方法においては、治療に用いたペプチドと同じペプチド、若しくは治療に用いたペプチドにより誘導されるＣＴＬが交差反応性を示すペプチド、を含有するＨＬＡテトラマーを用いることが好ましい。例えば患者の治療において配列番号：３に記載のペプチドを用いた場合は、配列番号：２または３に記載のペプチドとＨＬＡ−Ａ２４抗原とを含有するＨＬＡテトラマーが有効に用いられる。
本発明のＨＬＡテトラマーを用いた判定方法および処置方法における工程（ａ）〜（ｃ）の具体的な操作については、前記「ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法」の項に記載した通りである。また工程（ｄ）については前述のように投与前値と投与後値との比較に基づいて判断される。
以下、本発明の定方法および処置方法の具体例を示す。
まず、ＷＴ１由来の癌抗原ペプチド投与前の癌患者から血液を採取し、ＰＢＭＣを分離する（投与前試料）。次に、ペプチド投与による治療を実施した患者の血液を採取してＰＢＭＣを分離する（投与後試料）。これら投与前試料、投与後試料に対してＨＬＡテトラマーを添加し、前記「ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法」の項および実施例３に記載の解析手法を用いてペプチド特異的ＣＴＬの頻度を測定・算出する。投与前試料におけるＣＴＬ頻度に比して、投与後試料におけるＣＴＬ頻度が１．５倍以上高い場合に、ＷＴ１ワクチンによる治療が適している（ＷＴ１ワクチンによる治療効果があがると期待される）と判断する。
本発明はまた、ＷＴ１由来の癌抗原ペプチドを含有するＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマーまたはＨＬＡペンタマーを成分とする、ＷＴ１ワクチンの適合性の判定のための臨床検査薬、および当該臨床検査薬を含有するキットを提供する。当該臨床検査薬およびキットの成分については前記「ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択のための臨床検査薬」の項に記述した通りである。
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるものではない。
【実施例１】末梢血単核球の調製
ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性の癌患者とＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性の健常人からインフォームドコンセントを取得した後、採血をおこなった。造血器悪性腫瘍患者は１８名で、その内訳は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者１１名、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）患者２名、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）患者１名、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者４名であった。肺癌患者は７名、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性の健常人は１０名であった。
造血器悪性腫瘍患者は、診断時または治療経過において、骨髄および末梢血検体についてＷＴ１遺伝子の有意な高発現が１回以上確認されている。また肺癌患者は、生体検体または摘出標本でＷＴ１遺伝子の高発現が確認されている。
採取した血液からＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅの密度勾配遠心法により末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を分離し、液体窒素中で凍結保存した。
【実施例２】ＨＬＡテトラマーの調製
ＷＴ１タンパク質の２３５番目から２４３番目の９アミノ酸から成るペプチド（配列番号：２）を用い、文献（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ：１００，５６５−５７０，２００２）に記載の方法により蛍光色素Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）で標識したＨＬＡ−Ａ＊２４０２のテトラマーを作製した。
まず、組換え可溶性ＨＬＡ−Ａ＊２４０２のｃＤＮＡを増幅するため、下記正プライマー：５’−ＣＣＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＡＴＴＣＴＡＴＧＣＧＣＴＡＴＴＴＴＴＣＴＡＣＣＴＣＣＧＴ−３’（配列番号：１９）および逆向きプライマー：５’−ＧＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＴＣＴＣＡＧＧＧＴＧＡＧＧＧＧＣＴＴＧＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＣ−３’（配列番号：２０）を用いて、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｍ６４７４０）発現プラスミドを鋳型とし、ＰＣＲを行った。逆向きプライマーは、Ｃ末端でフレームが一致するようにＢｉｒＡ認識配列をコードしている。増幅した断片を制限酵素ＮｃｏＩおよびＢａｍＨ１で切断し、ｐＥＴ１１ｄベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ社）にクローニングした。
次に、組換えヒトβ２ミクログロブリンのｃＤＮＡを増幅するため、下記正プライマー：５’−ＣＡＴＡＴＧＡＴＣＣＡＧＣＧＴＡＣＣＣＣＧＡＡＡＡＴＴＣＡＧ−３’（配列番号：２１）および逆向きプライマー：５’−ＧＧＡＴＣＣＴＴＡＣＡＴＧＴＣＴＣＧＡＴＣＣＣＡＣＴＴＡＡＣ−３’（配列番号：２２）を用いて、ヒトβ２ミクログロブリン（ＧｅｎＢａｎｋ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＡＢ０２１２８８）発現プラスミドを鋳型とし、ＰＣＲを行った。増幅した断片を制限酵素ＮｄｅＩおよびＢａｍＨ１で切断し、ｐＥＴ１１ａベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ社）にクローニングした。
前記２種類のベクターを大腸菌ＢＬ２１で発現させ、インクルージョンボディーの不溶画分として回収した。それぞれのインクルージョンボディーは８Ｍ尿素溶液で溶解後、リフォールディングバッファーで希釈し、更にペプチド（配列番号：２）を添加して可溶性のＨＬＡ−ペプチド複合体を形成させた。次にＨＬＡ−ペプチド複合体のＣ末端部位の配列をＢｉｒＡ酵素によりビオチン化し、ゲルろ過法でビオチン化されたＨＬＡ−ペプチド複合体を精製した。ビオチン化されたＨＬＡ−ペプチド複合体とＰＥ標識されたアビジン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ社）を４：１のモル比で混合して、ＨＬＡテトラマーを調製した。
【実施例３】ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞のＨＬＡテトラマーによる解析
実施例１の凍結したＰＢＭＣを解凍した直後に０．５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に１×１０６個／ｍｌで再浮遊し、実施例２で調製したテトラマー溶液（５００μｇ／μｌ）２μｌを加え、３７℃で３０分間インキュベートした。陰性対照として、テトラマーの代わりにＰＥ標識したストレプトアビジン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）を添加し、同様に処理をした検体も用意した。その後氷中で急冷し、ＦＩＴＣ標識マウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ社）及びＰｅｒＣＰ標識マウス抗ヒトＣＤ３抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｇｅｎ社）を各１５μｌ添加して、４℃で３０分間インキュベートした。染色した細胞は、０．５％ＦＣＳを含むＰＢＳで２回遠心洗浄した後、フローサイトメーターＦＡＣＳｏｒｔ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）で解析した。ＣＤ３陽性及びＣＤ８陽性の細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）を選択し、その選択した細胞中のテトラマー陽性細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋）の割合（頻度）から陰性対照のＰＥ標識ストレプトアビジン陽性細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ａｖｉｄｉｎ＋）の割合を差し引いた数値をＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞の割合とした：
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞（％）＝
［（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋細胞数／ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞数）−
（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ａｖｉｄｉｎ＋細胞数／ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞数）］×１００
癌患者と健常人ＰＢＭＣを解析した結果を表２に示す。また、この結果を疾患別にプロットしたものを図１に示す。この結果から、ＣＤ３／ＣＤ８陽性細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞の割合は、健常人では０．４７〜１．３０％で平均が０．８２％であったが、造血器悪性腫瘍患者では、１．０４〜２９．４５％で平均が５．２４％、肺癌患者では０．３３〜５．９７％で平均が２．４４％であり、統計解析により健常人に比べて造血器悪性腫瘍患者及び肺癌患者では有意に増加していることが明らかとなった（ｐ＜０．０５）。
2005001117.tif 000005
2005001117.tif 000006
【実施例４】ペプチド投与におけるＷＴ１特異的ＣＴＬの頻度解析
以下の試験は、大阪大学医学部の倫理委員会の承認を受け、癌患者のインフォームドコンセントを得た上で実施された。
ＷＴ１の２３５番目から２４３番目までの配列のペプチド（配列番号：２）または、このペプチドのＮ末端から２番目のメチオニンをチロシンに置換した改変ペプチド（配列番号：３）を癌患者に１回当たり、０．３ｍｇ、１ｍｇまたは３ｍｇ投与した。投与するペプチドはＭｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ５１（ＳＥＰＰＩＣ社）を用いてエマルション化して、１回若しくは２週間間隔で複数回皮内投与した。患者としては、ＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性およびＷＴ１陽性である肺癌、乳癌、または白血病の患者を対象とした。
投与ペプチドに対する免疫反応は、実施例３と同様のＨＬＡテトラマー法でペプチド特異的ＣＴＬ頻度を測定して評価した。ペプチド投与後のいずれかの段階でのペプチド特異的ＣＴＬ頻度がペプチド投与前の１．５倍以上増加した場合を「免疫反応陽性」と定義した。また、ペプチド投与後に腫瘍マーカー値の低下、腫瘍細胞や腫瘍容積の減少が認められた場合を「治療効果有り」と判定した。ペプチド投与による免疫反応と治療効果がともに評価可能であった１９名の癌患者について、免疫反応と治療効果の相関をカイ２乗検定により評価した。その結果、治療効果が認められた１１名の患者の内、８名（７３％）で免疫反応陽性であったが、治療効果の認められなかった８名の内、免疫反応陽性であったのはわずか２名（２５％）のみであり、治療効果と免疫反応には有意な正の相関（Ｐ＝０．０３９７）が認められた。この結果より、投与ペプチド特異的なＣＴＬの誘導は、治療効果にとって重要なファクターであることが示された。またペプチド投与による治療が順調に進んでいることの確認や、ペプチド投与による治療を続行するか否かの判断において、前記免疫反応性が１つの指標となることが示された。
【実施例５】ＷＴ１特異的ＣＴＬの機能解析
ＨＬＡテトラマー染色陽性およびＣＤ８陽性の抗原ペプチド特異的ＣＴＬは、更に抗ＣＤ４５ＲＡ抗体と抗ＣＤ２７抗体で染色することにより、機能的に細分類できることが報告されている（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８６，ｐ１４０７，１９９７）。ＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陽性はナイーブ型、ＣＤ４５ＲＡ陰性かつＣＤ２７陽性、およびＣＤ４５ＲＡ陰性かつＣＤ２７陰性はメモリー型、そしてＣＤ４５ＲＡ陽性かつＣＤ２７陰性はエフェクター型に分類される。エフェクター型が、強いＣＴＬ活性を示す細胞集団である。
実施例４の臨床研究に参加したＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性の癌患者２４名（血液癌１４名、固形癌１０名）のペプチド投与前のＰＢＭＣ及びインフォームドコンセントを取得して採取したＨＬＡ−Ａ＊２４０２陽性の健常人のＰＢＭＣを用いて、ＨＬＡテトラマー染色陽性およびＣＤ８陽性のＷＴ１ペプチド特異的ＣＴＬ前駆細胞の機能分析を行った。フローサイトメーター解析用に実施例３と同様な方法で細胞をＨＬＡテトラマー、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体、抗ＣＤ２７抗体で染色した。ＨＬＡテトラマー陽性かつＣＤ８陽性の細胞集団における、ＣＤ４５ＲＡ陽性／ＣＤ２７陽性のナイーブ型、ＣＤ４５ＲＡ陰性のメモリー型、ＣＤ４５ＲＡ陽性／ＣＤ２７陰性のエフェクター型の割合（％）を、それぞれ算出した。ナイーブ型、メモリー型、エフェクター型の比率はそれぞれ、癌患者で２３．７％、４５．５％、３０．８％であった。一方健常人ではそれぞれ、３５．９％、５３．８％、８．９％であった。癌患者と健常人で比較すると、エフェクター型については、癌患者で有意に比率が高かったが（ｐ＜０．０５）、ナイーブ型、メモリー型については有意な差は認められなかった。実施例３で癌患者ではＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞が増加していることを示したが、それらの内で癌患者ではエフェクター型の機能を持ったＣＴＬの割合が増加していることが明らかとなった。この結果より、エフェクター型のＣＴＬ前駆細胞の存在頻度を１つの指標として癌患者を診断できることが示された。
【産業上の利用可能性】  本発明により、ＷＴ１特異的ＣＴＬ前駆細胞の頻度を指標とした、ＷＴ１ワクチン応答性が高い患者の選択方法およびそれを利用する癌の処置方法や、その選択のための臨床検査薬などが提供される。本発明の選択方法により、よりＷＴ１ワクチン療法による効果の期待される患者を選択することができ、癌に対する適切な処置を施すことが可能となる。
【配列表】
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【図１】
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【国際調査報告】
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