(57)【要約】【課題】Ｔｈ１型免疫疾患の予防又は治療用医薬組成物の提供。      【解決手段】樹状細胞に発現するＮＰ受容体であるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し、樹状細胞のサイトカイン産生を調節することによりＴ細胞をＴｈ２型細胞に分化し得る物質を有効成分として含有するＴｈ１型免疫疾患の予防又は治療に供する医薬組成物を得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質を有効成分とするＴｈ１型免疫疾患の予防又は治療用医薬組成物。
【請求項２】
Ｔｈ１型免疫疾患が、移植に伴う拒絶反応に起因する疾患、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病及び自己免疫疾患から選ばれる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
自己免疫疾患が、自己免疫性肝炎、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、乾癬、強皮症、重症筋無力症、多発性筋炎・皮膚筋炎、橋本病、自己免疫血球減少症（赤芽球癆、再生不良性貧血等）、シェーグレン症候群、血管炎症候群及び全身性エリテマトーデスから選ばれる請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
自己免疫疾患が、クローン病又は多発性硬化症である請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである請求項５記載の医薬組成物。
【請求項７】
心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質を投与することを特徴とするＴｈ１型免疫疾患の治療方法。
【請求項９】
Ｔｈ１型免疫疾患が、移植に伴う拒絶反応に起因する疾患、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病及び自己免疫疾患から選ばれる請求項８記載の治療方法。
【請求項１０】
自己免疫疾患が、自己免疫性肝炎、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、乾癬、強皮症、重症筋無力症、多発性筋炎・皮膚筋炎、橋本病、自己免疫血球減少症（赤芽球癆、再生不良性貧血等）、シェーグレン症候群、血管炎症候群及び全身性エリテマトーデスから選ばれる請求項９記載の治療方法。
【請求項１１】
自己免疫疾患が、クローン病又は多発性硬化症である請求項１０記載の治療方法。
【請求項１２】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである請求項８記載の治療方法。
【請求項１３】
ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである請求項１２記載の治療方法。
【請求項１４】
心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である請求項１３記載の治療方法。
【請求項１５】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質の、Ｔｈ１型免疫疾患の予防又は治療用医薬組成物の製造のための使用。
【請求項１６】
Ｔｈ１型免疫疾患が、移植に伴う拒絶反応に起因する疾患、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病及び自己免疫疾患から選ばれる請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
自己免疫疾患が、自己免疫性肝炎、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、乾癬、強皮症、重症筋無力症、多発性筋炎・皮膚筋炎、橋本病、自己免疫血球減少症（赤芽球癆、再生不良性貧血等）、シェーグレン症候群、血管炎症候群及び全身性エリテマトーデスから選ばれる請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
自己免疫疾患が、クローン病又は多発性硬化症である請求項１７記載の使用。
【請求項１９】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである請求項１５記載の使用。
【請求項２０】
ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である請求項２０記載の使用。
【請求項２２】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質を樹状細胞に作用させて、Ｔ細胞に対するＴｈ２偏向性を誘導することを特長とする免疫系におけるＴｈ１／Ｔｈ２バランスを調節する方法。
【請求項２３】
ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である請求項２４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、樹状細胞に発現するナトリウム利尿ペプチド（ＮＰ）受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡ（ＧＣ−Ａ）に作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート（ｃＧＭＰ）産生を亢進し得る物質を有効成分とするＴｈ１型免疫疾患の予防又は治療に供する医薬組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  免疫系は本来、外来の異物（微生物等）を認識し排除するための防御機構として進化してきた。そのためには、生体は自己の細胞や組織と外来の異物（非自己）を区別し、自己に対しては反応しないか、反応しても機能を発揮できない状態（免疫寛容）を保持しつつ、非自己を速やかにかつ効率的に排除すべく獲得免疫を発達させてきた。その中心的な役割を担っているのはＴ細胞である。未分化な末梢ナイーブＴ細胞（Ｔｈｐ）は、抗原刺激により増殖、分化を開始する。その際、Ｔｈｐは表面上のＴ細胞レセプターを介して、マクロファージや樹状細胞等の抗原提示細胞から抗原の提示を受けると同時に活性化関連分子群からのシグナルにより活性化され、ＩＬ−２を分泌して増殖する。その後、殆ど全てのサイトカインを産生しうるＴｈ０に分化し、抗原刺激の種類や強さ、抗原提示細胞による刺激シグナル等により最終的な分化の方向が決定され、Ｔｈ１又はＴｈ２へと成熟して機能が分かれ、それぞれ特異的なサイトカインの産生、さらなる細胞増殖、細胞傷害活性などが誘導される。即ち、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は細胞性免疫に関与するＴｈ１細胞への分化を誘導し、分化したＴｈ１細胞はインターロイキン−２（ＩＬ−２）やインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）等のサイトカインを産生し、一方、インターロイキン−４（ＩＬ−４）は体液性免疫に関与するＴｈ２細胞への分化を誘導し、インターロイキン−４、１０（ＩＬ−４、１０）等のサイトカインを産生する。両細胞が産生したサイトカインは、Ｔｈ１又はＴｈ２細胞への分化や両細胞が産生するサイトカインの働きを互いに負に制御し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの均衡が保たれている。【０００３】  近年、これらＴｈ１／Ｔｈ２バランスの不均衡が免疫病発症の原因になると考えられている。Ｔｈ１を中心とした免疫応答（Ｔｈ１型免疫）に偏った場合、細胞性免疫が増強され癌や感染症に対する免疫反応は亢進されるが、自己の組織傷害が引き起こされ自己免疫疾患発症の原因となる。組織の損傷や感染は引き続き炎症反応、更に組織の線維化、臓器の機能障害をもたらす。【０００４】  また、正常な免疫応答でも臓器移植に伴う拒絶反応や骨髄（造血幹細胞）移植に伴う移植片対宿主病を抑制することが治療上待望されている。これらで誘導される免疫応答は基本的に同一で、Ｔｈ１型免疫が主体をなしている。【０００５】  Ｔｈ１型免疫に起因する免疫異常により発症するＴｈ１型免疫疾患としては、例えば移植に対する拒絶反応、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病、及び自己免疫性肝炎、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、乾癬、強皮症、重症筋無力症、多発性筋炎・皮膚筋炎、橋本病、自己免疫血球減少症（赤芽球癆、再生不良性貧血等）、シェーグレン症候群、血管炎症候群、全身性エリテマトーデスなどを含む自己免疫疾患、更にこれらの疾患に起因する組織の損傷や感染に伴って起こる炎症反応、線維化、臓器機能障害等が挙げられる。【０００６】  Ｔｈ１型免疫に起因する自己免疫疾患や移植免疫、更にそれらに伴う慢性活動性の免疫学的な炎症反応に対する治療にはＴｈ１型免疫の選択的な抑制が望まれてい���。このような状況下において、現在、Ｔ細胞活性化機構のメディエーターの制御による治療が期待されており、シクロスポリンやＦＫ５０６によるＴ細胞に対する強力な免疫抑制効果、抗サイトカイン療法、抗接着分子（活性化関連分子）療法、モノクローナル抗体療法等が注目されている。【０００７】  しかし、これらの療法も、従来からのステロイド剤、核酸合成系に作用するある種の免疫抑制剤又はインターフェロン製剤による療法と同様に、Ｔｈ１型免疫選択的とは言い難く、感染症増悪、糖尿病、血栓、満月様顔貌、腎症、発熱など種々の副作用等の問題が解決されている訳ではなく、より安全性、有効性に優れた薬剤の開発が望まれている。【０００８】  自己免疫疾患は全身性に加えて、ほとんどの臓器においても認められる疾患である。また今後、臓器移植手術や造血幹細胞移植がますます発展するのに伴い、拒絶反応や移植片対宿主病の問題も増大してくる。このように、Ｔｈ１型免疫が中心的な役割を担っている疾患は多岐に渡るものであり、有効な治療薬の開発が期待されている。実際、Ｔｈ１型免疫抑制作用を有する薬剤としては、ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  １Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５３：４８９−４９８，１９９４）、ｐｅｎｔｏｘｉｆｙｌｌｉｎ（Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２５  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ７５−７９，１９９５）、ｂｅｔａ２−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８：４２００−４２１０，１９９７、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １００：１５１３−１５１９，１９９７）、アデニル酸シクラーゼ活性化剤であるｉｌｏｐｒｏｓｔ（Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  １０：５１９−５２９，１９９７）、Ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ阻害剤であるｐｙｒｉｄｉｎｙｌ  ｉｍｉｄａｚｏｌｅ化合物やＳＢ２０３５８０（ＥＭＢＯ  Ｊ  １７：２８１７−２８２９，１９９８、Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２：２５３−２６１，２０００）、ｌｉｓｏｆｙｌｌｉｎｅ（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６３：６５６７−６５７４，１９９９）、ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ａ２ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔであるＣＧＳ−２１６８０（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：４３６−４４２，２０００）、ＮＯ−ａｓｐｉｒｉｎ（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １１８：４０４−４２１，２０００）及び１，２５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ（３）（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０：４９８−５０８，２０００）等が報告されている。しかし、Ｔｈ１型免疫を選択的に抑制し、副作用が軽減できるような臨床使用可能な医薬品は開発されていない。【０００９】  クローン病は近年Ｔｈ１型疾患であることが解明され、ＩＬ−１２やＪＬ−１０が治療標的として注目されている（最新医学９０：１０７６−１０８１，２００４）。即ち、ＩＬ−１２は活性化マクロファージや樹状細胞から分泌され、ナイーブＴ細胞のＴｈ１細胞への分化における中心的な役割を担っている。モデル動物にて抗ＩＬ−１２抗体が治療効果を示すことが報告されており、ヒトクローン病の治療標的になりうると考えられている。また、ＩＬ−１０はＴｈ１細胞からのサイトカイン生成を抑制する分子であり、その��ックアウトマウスではＴｈ１応答が増強され、腸炎を自然発症することから（Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｍｅｄ  ２００１；２４：２５０−２５７）、ＩＬ−１０もクローン病の治療標的分子として期待されている。実際に、クローン病に対する遺伝子組み換えヒトＩＬ−１０の効果が検討され、改善効果が見られたが、その効力は十分なものではなく、また頭痛、発熱、貧血などの副作用が認められた（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０００；１１９：１４７３−１４８２）。高濃度のＩＬ−１０が血中に持続すると、免疫活性化作用を発現することが示唆されており、より病態局所で、生理的にＩＬ−１０産生を亢進させる治療法が望まれている。最近、中等度から重度のクローン病に対してＴＮＦα抗体であるｉｎｆｌｉｘｉｍａｂが適用され、有効性が確認されているが、高頻度の副作用が報告されており、その使用は制限されている。【００１０】  また、多発性硬化症は自己免疫疾患の中でも特にＴｈ１型免疫優位な疾患であり、再発−寛解型でも寛解時にＴｈ２偏倚が指摘されているなどＴｈ２偏向作用が病態治療につながることが期待されている。現在用いられている多発性硬化症治療薬としては、急性期にはステロイド剤、再発−寛解型にはインターフェロンβ１ｂ、一次進行型には各種免疫抑制剤などがある。これらの薬剤には様々な副作用が指摘されており、また有効性も十分なものではないことから、病状の確実な好転、進行の防止、副作用の軽減が未充足ニーズとなっている。【００１１】  従って、両疾患に対して、Ｔｈ１型免疫をより選択的に抑制し、副作用が軽減できるような医薬品の開発が期待されるが、現在臨床使用可能なものは存在しない。【００１２】  樹状細胞はリンパ器官Ｔ領域においてナイーブＴ細胞を最も強力に活性化できる唯一の抗原提示細胞であり、生体防御の恒常性の維持において重要な役割を担うことが知られている（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３９２，ｐ２４５，１９９８）。樹状細胞は通常組織でＴ細胞の活性化能の低い未熟な状態で存在するが、病原体や損傷した組織から放出される炎症性メディエーターにより成熟・活性化刺激を受けると、抗原由来のペプチドをＭＨＣ複合体に結合させてナイーブＴ細胞へ提示する。同時に共刺激分子の発現を増強させ、種々のサイトカインを産生させ、Ｔ細胞を呼び寄せ、抗原特異的な細胞を活性化して免疫応答を誘導する（伊豫田智典，稲葉カヨ，蛋白質核酸  酵素，Ｖｏｌ．４７，ｐ２１３３，２００２）。また、ヒト樹状細胞には少なくとも２種の前駆細胞が存在する。単球系前駆細胞はＧＭ−ＣＦＳとＩＬ−４の刺激で分化し、更に、ＣＤ４０Ｌの刺激により産生したＩＬ−１２により、ナイーブＴ細胞をＴｈ１細胞に分化させる。形質細胞系前駆細胞はウイルスやＣｐＧオリゴヌクレオチド、更にはＩＬ−３とＣＤ４０Ｌの刺激によりＩＬ−１２を殆ど産生しない樹状細胞に分化し、ナイーブＴ細胞をＴｈ２細胞に分化させる（樗木俊聡、医学のあゆみ、Ｖｏｌ．２０５，ｐ５７，２００３）。即ち、樹状細胞は免疫系におけるＴｈ１／Ｔｈ２バランス制御の重要な役割を担う細胞である。従って、樹状細胞に特異的に作用し、その活性又はサイトカイン発現を調節して、ナイーブＴ細胞のＴｈ１細胞への分化増殖を抑制し、Ｔｈ２型に偏向させうる薬剤を開発できれば、Ｔｈ１型免疫に起因する免疫異常（特にクローン病又は多発性硬化症）に対してより根源的な治療又は予防薬となりうると期待できる。しかし現在までにそのような作用を持つ有力な薬剤は存在しない。【００１３】  一方、ＧＣ−Ａに作用して、セカンドメッセンジャーであるｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質としてペプチド性物質、特にナトリウム利尿ペプチドが挙げられるが、当該ペプチドにはＡＮＰ（心房性ナトリウム利尿ペプチド）、ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）及びＣＮＰ（Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド）の３種類があり、当該ペプチドに対するＮＰ受容体としては、ＧＣ−Ａ、ＧＣ−Ｂ（グアニリル・サイクラーゼＢ）及びＮＰＲ−Ｃ（ＮＰ受容体−Ｃ）の３種類がある。ＧＣ−Ａ及びＧＣ−Ｂは膜結合型グアニリル・サイクラーゼ構造をとること、ＡＮＰ及びＢＮＰはＧＣ−Ａの特異的リガンドであること、ＣＮＰはＧＣ−Ｂの特異的リガンドであること、並びにこれらは各々の受容体結合後、細胞内のｃＧＭＰを上昇させることにより利尿作用及び血管拡張作用等の生理作用を発現することが判明している。また、ＮＰＲ−ＣはｃＧＭＰ産生と共役せず、これらのホルモンの代謝、クリアランスに関与すると言われている（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．５１，ｐ４８９，２００１）。
ＡＮＰは心臓より分泌され、水電解質代謝及び血圧の調節に重要な役割を果たすペプチドホルモンである。ヒト及びモデル動物において、心肥大及び心不全の重症度に伴い、血中ＡＮＰ濃度が上昇することが知られており、心不全の病態に代償的に作用すると考えられている。実際に心不全患者においてＡＮＰ投与により血管拡張作用及び利尿作用が発現し、心臓の前負荷、後負荷が軽減され、血行動態改善効果が認められている（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．Ｖｏｌ．５１，ｐ４８９，２００１）。【００１４】  ＡＮＰの受容体であるＧＣ−Ａは心血管系のみならず、白血球にも発現し、ＡＮＰが血球系細胞に対して生理機能を担う可能性が示唆されている。即ち、ＡＮＰが好中球の遊走を促進すること（Ｉｚｕｍｉ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｖｏｌ．１０８，ｐ２０３，２００１）、ラット胸腺細胞の増殖を抑制すること（Ｖｏｌｌｍａｒ，Ａ．Ｍ．，Ｋ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．１３７，１７０６，１９９６）、ヒトＮａｔｕｒａｌ  Ｋｉｌｌｅｒ（ＮＫ）細胞の細胞障害性を増強すること（Ｍｏｓｓ，Ｒ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｍ．Ｇ．Ｇｏｌｉｇｈｔｌｙ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｖｏｌ．２，ｐ８５１，１９９１）、マウスマクロファージからのＮＯやＴＮＦα産生を抑制すること（Ｋｉｅｍｅｒ，Ａ．Ｋ．，ａｎｄ  Ａ．Ｍ．Ｖｏｌｌｍａｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．２７３，ｐ１３４４４，１９９８）等が報告されている。【００１５】  しかしながら、マウス単球由来マクロファージへの作用の場合と異なり、ヒト単球にはＡＮＰの受容体が発現せず、ＡＮＰは単球でｃＧＭＰ産生などの生理活性を発現しないことが報告されており（Ｓｐｒｅｎｇｅｒ  Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．１８３，ｐ９４，１９９１）、免疫系に関与するヒト単球由来の樹状細胞におけるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質の生理機能や病態生理的意義、若しくは免疫調節作用については全く報告がなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】  従って、本発明は、上記した現状に鑑み、Ｔｈ１型免疫疾患である、自己免疫疾患、臓器移植の拒絶反応、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病、及び自己免疫疾患や類縁疾患に起因する組織の損傷や感染に伴って起こる炎症反応、更に組織の線維化及び臓器機能障害に対して、Ｔｈ１型サイトカイン産生抑制、Ｔｈ１細胞の増殖・機能抑制を機序とする副作用のない、臨床的に適応し得る、Ｔｈ１型免疫選択的抑制剤を提供することを課題とする。更に詳しくは、樹状細胞に発現するＮＰ受容体であるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し、樹状細胞のサイトカイン産生を調節しＴ細胞をＴｈ２に分化し得る物質を有効成分とするＴｈ１型免疫疾患（特にクローン病又は多発性硬化症）の予防又は治療に供する医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】  本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質は、ＮＰ受容体であるＧＣ−Ａを介してｃＧＭＰ産生を亢進し得る特性を有する物質であればよく、ペプチド性物質が好ましいが、特に特定されるものではないため、ペプチド性物質以外でもＮＰ受容体であるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰを亢進し得る化合物を用いることができる。【００１８】  ペプチド性物質としては、ナトリウム利尿ペプチドが好ましく、例えば心房性ナトリウム利尿ペプチド（以下、ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（以下、ＢＮＰ）等が挙げられる。【００１９】  ＡＮＰとしては２８個のアミノ酸よりなるヒト由来α−ｈＡＮＰ（配列番号：１）やラット由来α−ｒＡＮＰ（配列番号：２）を用いることができるが、本発明に係る有効成分のペプチドとしては、ＡＮＰのリング構造（Ｃｙｓに基づくジスルフィド結合の形成）及びリング構造に続くＣ末端部を有するペプチドであればよい。当該ペプチドとしてはα−ｈＡＮＰの７−２８位のアミノ酸残基を有するペプチド（配列番号：３）が挙げられる。ＡＮＰとしては特にヒト由来のα−ｈＡＮＰが望ましい。【００２０】  ＢＮＰとしては３２個のアミノ酸よりなるヒトＢＮＰ（配列番号：４）等が挙げられる。【００２１】  更に、本発明に係るＮＰ受容体であるＧＣ−Ａを介してｃＧＭＰ産生を亢進し得る特性を有する物質としては、天然から純粋に単離、精製されたもの、又は化学合成法若しくは遺伝子組換え法により製造されたものであってもよく、例えば上記物質（α−ｈＡＮＰ等）に係るアミノ酸配列に基づき、当業者であれば適宜公知の方法により、当該配列中のアミノ酸残基を欠失、置換、付加、挿入等の修飾を施すことにより得ることができ、何れかの方法により得られた物質がＮＰ受容体であるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質であれば何れも用いることができる。当該物質としては、前記の他に、カエルＡＮＰ（配列番号：５）、ブタＢＮＰ（配列番号：６）、ラットＢＮＰ（配列番号：７）、ニワトリＮＰ（配列番号：８）等が挙げられる。【００２２】  本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質は、無機酸、例えば塩酸、硫酸、リン酸、又は有機酸、例えばギ酸、酢酸、酪酸、コハク酸、クエン酸等の酸付加塩として用いることができる。ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム等の金属塩、有機塩基による塩の形態であってもよい。また、本発明に係る医薬組成物は、その有効成分に係る物質の遊離形としても、又はその医薬的に許容し得る塩であってもよい。【００２３】  本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質又はその薬理学的に許容し得る塩は、公知の薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤などと混合して医薬に一般に使用されている投与方法、即ち経口投与方法、又は静脈内投与、筋肉内投与若しくは皮下投与等の非経口投与方法によって投与するのが好ましい。【００２４】  有効成分がペプチド性物質の場合、消化管内で分解を受けにくい製剤、例えば活性成分であるペプチドをリボゾーム中に包容したマイクロカプセル剤として経口投与することも可能である。また、直腸、鼻内、舌下などの消化管以外の粘膜から吸収せしめる投与方法も可能である。この場合は坐剤���点鼻スプレー、舌下錠といった形態で投与することができる。【００２５】  本発明に係る医薬組成物の有効成分として用い得る物質の投与量は、疾患の種類、患者の年齢、体重、症状の程度及び投与経路などによっても異なるが、一般的に０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲で投与することができ、０．５μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇで投与するのが好ましい。【００２６】  本発明により、ナトリウム利尿ペプチド受容体であるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質を有効成分とする組成物が、樹状細胞に特異的に作用してそのサイトカイン産生を調節し、ナイーブＴ細胞のＴｈ２偏向性を誘導することによりＴｈ１型免疫反応を抑制するため、Ｔｈ１型免疫疾患に有効であることが明らかとなった。特に、有効成分としてＡＮＰを用いた場合、ＡＮＰ単独では樹状細胞からのサイトカイン産生やＴ細胞の増殖反応に影響せず、ＬＰＳ（リポ多糖）刺激時の反応のみを調節する作用を示したことは、正常時の免疫機能には大きな影響を及ぼすことなく、刺激時の過剰反応のみを抑制すること、即ち、副作用が小さく、安全に使用できることを示し、有用である。【００２７】  尚、ＬＰＳはグラム陰性菌の外膜の主要構成成分であり、病原体固有の構成成分の認識に極めて重要であって樹状細胞に発現するＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ファミリーと呼ばれる膜タンパク受容体群のうちＴＬＲ４により認識され、樹状細胞を成熟、活性化させて刺激し、サイトカイン及びＣＤ４０等の補助機能分子の発現を誘導する物質である。【００２８】  本発明により、ヒト由来の樹状細胞及びナイーブＴ細胞を用いた一連の実験から、ヒト樹状細胞におけるＧＣ−Ａの発現、ＮＰ受容体であるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質の樹状細胞におけるサイトカイン産生調節作用及びＴ細胞に対するＴｈ２偏向性作用が明らかにされたことは、臨床上有用である。【００２９】  これらのことから、ＮＰ受容体であるＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質が樹状細胞に発現するＧＣ−Ａに作用して、ナイーブＴ細胞をＴｈ２型に偏向させる作用が示され、免疫系におけるＴ細胞に係るＴｈ１／Ｔｈ２バランスを調節し得ることから、当該物質を投与してＴｈ１型免疫疾患（特にクローン病又は多発性硬化症）を改善し得ること、及びＴｈ１型免疫疾患以前の状態においてもＴｈ１及びＴｈ２の割合を常法により測定し、Ｔｈ１の割合が高い場合は当該物質を投与して免疫系におけるＴｈ１／Ｔｈ２バランスを調節することによりＴｈ１型免疫疾患の発症を予防し得る。【００３０】  以上のことから、本発明は以下の事項を含む。
（１）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質を有効成分とするＴｈ１型免疫疾患の予防又は治療用医薬組成物。
（２）Ｔｈ１型免疫疾患が、移植に伴う拒絶反応に起因する疾患、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病及び自己免疫疾患から選ばれる上記（１）記載の医薬組成物。
（３）自己免疫疾患が、自己免疫性肝炎、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、乾癬、強皮症、重症筋無力症、多発性筋炎・皮膚筋炎、橋本病、自己免疫血球減少症（赤芽球癆、再生不良性貧血等）、シェーグレン症候群、血管炎症候群及び全身性エリテマトーデスから選ばれる上記（２）記載の医薬組成物。
（４）自己免疫疾患が、クローン病又は多発性硬化症である上記（３）記載の医薬組成物。
（５）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質を有効成分とする、Ｔｈ１型免疫疾患に起因する組織の損傷や感染に伴って起こる炎症反応、線維化又は臓器機能障害の予防又は治療用医薬組成物。
（６）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである上記（１）又は（５）記載の医薬組成物。
（７）ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである上記（６）記載の医薬組成物。
（８）心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である上記（７）記載の医薬組成物。
（９）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質を投与することを特徴とするＴｈ１型免疫疾患の治療方法。
（１０）Ｔｈ１型免疫疾患が、移植に伴う拒絶反応に起因する疾患、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病及び自己免疫疾患から選ばれる上記（９）記載の治療方法。
（１１）自己免疫疾患が、自己免疫性肝炎、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、乾癬、強皮症、重症筋無力症、多発性筋炎・皮膚筋炎、橋本病、自己免疫血球減少症（赤芽球癆、再生不良性貧血等）、シェーグレン症候群、血管炎症候群及び全身性エリテマトーデスから選ばれる上記（１０）記載の治療方法。
（１２）自己免疫疾患が、クローン病又は多発性硬化症である上記（１１）記載の治療方法。
（１３）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである上記（９）記載の治療方法。
（１４）ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである上記（１３）記載の治療方法。
（１５）心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である上記（１４）記載の治療方法。
（１６）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質の、Ｔｈ１型免疫疾患の予防又は治療用医薬組成物の製造のための使用。
（１７）Ｔｈ１型免疫疾患が、移植に伴う拒絶反応に起因する疾患、骨髄（造血幹細胞）移植による移植片対宿主病及び自己免疫疾患から選ばれる上記（１６）記載の使用。
（１８）自己免疫疾患が、自己免疫性肝炎、慢性関節リウマチ、インスリン依存性糖尿病、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、自己免疫性心筋炎、乾癬、強皮症、重症筋無力症、多発性筋炎・皮膚筋炎、橋本病、自己免疫血球減少症（赤芽球癆、再生不良性貧血等）、シェーグレン症候群、血管炎症候群及び全身性エリテマトーデスから選ばれる上記（１７）記載の使用。
（１９）自己免疫疾患が、クローン病又は多発性硬化症である上記（１８）記載の使用。
（２０）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである上記（１６）記載の使用。
（２１）ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである上記（２０）記載の使用。
（２２）心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である上記（２１）記載の使用。
（２３）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質を樹状細胞に作用させて、Ｔ細胞に対するＴｈ２偏向性を誘導することを特長とする免疫系におけるＴｈ１／Ｔｈ２バランスを調節する方法。
（２４）ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質がナトリウム利尿ペプチドである上記（２３）記載の方法。
（２５）ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチド又は脳性ナトリウム利尿ペプチドである上記（２４）記載の方法。
（２６）心房性ナトリウム利尿ペプチドがヒト由来である上記（２５）記載の方法。
【発明の効果】
【００３１】  本発明により、ナトリウム利尿ペプチド受容体であるグアニリル・サイクラーゼＡに作用してサイクリックグアノシンモノフォスフェート産生を亢進し得る物質が、樹状細胞に作用してＴｈ２偏向性を誘導し、Ｔ細胞をＴｈ２型細胞に分化させることにより、ＩＬ−１２及びＴＮＦα産生を抑制し、ＩＬ−１０産生を増強させることにより、Ｔｈ１型免疫反応を抑制する作用を有することから、当該物質を有効成分とする医薬組成物が、免疫系におけるＴｈ１／Ｔｈ２バランスを調節することによりＴｈ１型免疫疾患（特にクローン病又は多発性硬化症）の予防又は治療用医薬組成物として非常に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３２】［図１］図１は、ヒト単球（ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ）及び未成熟樹状細胞（ｉｍｍａｔｕｒｅ  ＤＣｓ）における３種のＮＰ受容体、即ちＧＣ−Ａ、ＧＣ−Ｂ及びＮＰＲ−ＣのｍＲＮＡ発現をＲＴ−ＰＣＲ法で解析した図である。各受容体ｍＲＮＡの陽性対照として胎盤を用いた。また、ＲＮＡの純度、ｃＤＮＡ合成の妥当性をβ−ａｃｔｉｎ  ｃＤＮＡの増幅により確認した。未成熟樹状細胞においてのみＧＣ−Ａ  ｍＲＮＡが特異的に発現することを示す。
［図２］図２は、ヒト単球（ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ、黒四角印）及び未成熟樹状細胞（ｉｍｍａｔｕｒｅ  ＤＣｓ、白四角印）におけるＡＮＰ（上図）及びＣＮＰ（下図）のｃＧＭＰ産生亢進活性を示した図である。各値は１ｘ１０５ｃｅｌｌｓあたりのｃＧＭＰ量を示す。ＡＮＰは樹状細胞できわめて低濃度よりｃＧＭＰ産生を亢進することを示す。
［図３］図３は、ＬＰＳ刺激した樹状細胞による同種ナイーブＴ細胞の増殖反応に対するＡＮＰの効果を示す。樹状細胞はＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）、ＡＮＰ（１０−７Ｍ）、ＬＰＳ＋ＡＮＰ又はこれらの非存在下で２４時間培養し、ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ後、ナイーブＴ細胞と共に６日間培養した。このときのナイーブＴ細胞の細胞増殖能を［３Ｈ］−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ取り込み能により評価した。白丸印：無処置，黒丸印：ＡＮＰ１０−７Ｍ処置，白四角印：ＬＰＳ１μｇ／ｍＬ処置，黒四角印：ＡＮＰ＋ＬＰＳ処置。各値は５例の平均値±標準誤差を示す。＊はｐ＜０．０５でその他の群との間に有意差があることを示す。有意差はＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定にて検定した。
［図４］図４は、ＬＰＳ刺激した樹状細胞からのサイトカイン産生に及ぼすＡＮＰ及びＣＮＰの影響を示す。１ｘ１０５ｃｅｌｌｓ／ｔｕｂｅの樹状細胞をＡＮＰ（１０−８〜１０−６Ｍ）若しくはＣＮＰ（１０−６Ｍ）の存在下又は非存在下でＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）と２４時間インキュベーションした後の、メディウム中のＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０免疫活性を示す。
［図５］図５は、ＬＰＳ又はＬＰＳ＋ＡＮＰで前処置した樹状細胞とナイーブＴ細胞を共培養した後、更にＩＬ−２含有培養液で増殖させたＴ細胞の細胞内ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４産生をフローサイトメトリーで解析した結果を示す。図中の数字は、各分画における白血球の割合を百分率で示す。Ｓａｍｐｌｅ＃１、Ｓａｍｐｌｅ＃２は、それぞれ異なる提供者由来の樹状細胞を用いた結果を表す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】  本発明者は、ヒト末梢血より単離、培養した樹状細胞におけるＡＮＰ受容体（ＧＣ−Ａ）発現と、ＡＮＰのｃＧＭＰ産生亢進活性を検討し、また、樹状細胞におけるＡＮＰの生理機能を明らかにするために、樹状細胞の分化、リンパ球増殖作用、サイトカイン発現、Ｔｈ１／Ｔｈ２偏向性に対する作用を検討した結果、ＧＣ−Ａに作用してｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質がＴｈ１型免疫疾患の予防又は治療に有用であることを見出した。
Ａ．ヒト樹状細胞の単離、及び、ＮＰ受容体発現、ｃＧＭＰ産生亢進作用の実験方法
１．ヒト末梢血由来樹状細胞の単離と培養
実験には健常人ボランティアより得た末梢血（京都府赤十字センターより供与）の白血球層（ｂｕｆｆｙ  ｃｏａｔｓ）を用いた。末梢血単球画分をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅによる密度勾配遠心により分離した後、ＭＡＣＳ  ＣＤ１４を用いた磁気ビーズカラムにより、又は細胞培養用フラスコにて３７℃で１時間培養して接着細胞を選抜することにより単球を分離した。未成熟樹状細胞は、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの単球を１０％ウシ胎児血清、５０ｎｇ／ｍＬヒトＧＭ−ＣＳＦ、２０ｎｇ／ｍＬヒトＩＬ−４存在下、７日間３７℃で培養することにより得た。【００３４】  ２．ＮＰ受容体のＲＴ−ＰＣＲ
ＲＮＡ単離用キットを用いて単球及び樹状細胞よりトータルＲＮＡを抽出した後、１μｇのトータルＲＮＡとｏｌｉｇｏ（ｄＴ）ｐｒｉｍｅｒを用いてトリ骨髄芽球症ウイルス由来逆転写酵素により１本鎖ｃＤＮＡを合成した。Ｐｒｉｍｅｒとして以下を使用した。【００３５】
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ＰＣＲはＮＰ受容体については３５サイクル、β−ａｃｔｉｎについて２５サイクル実施した。ＰＣＲ産物は１．５〜２％のアガロースゲルで分離し、エチジウムブロマイドで染色した後、ＵＶ透視装置で検出した。【００３６】  ３．ｃＧＭＰ産生亢進活性の測定
１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｓａｍｐｌｅの細胞を５００μＬの培養液、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．５ｍＭ  ３−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ、１μＭ  ｐｈｏｓｐｈｏｌａｍｉｄｏｎ存在下で３７℃にて１０分間インキュベーションした後、ＡＮＰ又はＣＮＰを最終濃度１０−１２〜１０−６Ｍになるように添加し、更に１５分間インキュベーションした。細胞を洗浄、破壊後、細胞内ｃＧＭＰ濃度をＥＬＩＳＡ法で測定した。
Ｂ．樹状細胞によるナイーブＴ細胞増殖反応、サイトカイン産生、ナイーブＴ細胞分化の実験方法
１．活性化樹状細胞によるＴ細胞の増殖反応
ナイーブＴ細胞（ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞）は、新生児臍帯血由来の単球画分より、ＭＡＣＳ  ＣＤ４＋Ｔ細胞単離用磁気ビーズを用いて単離した。樹状細胞をＡＮＰ（１０−７Ｍ）の存在下又は非存在下でリポ多糖（ＬＰＳ、１μｇ／ｍＬ）と２４時間培養し、活性化した。細胞を洗浄、放射線照射（３０Ｇｙ）して増殖能を失わせた後、ナイーブＴ細胞（１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）と共に６日間培養した。０．５μＣｉ／ｗｅｌｌの［ｍｅｔｈｙｌ−３Ｈ］−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅを８時間取り込ませることにより、Ｔ細胞の増殖能を評価した。【００３７】  ２．樹状細胞からのサイトカイン産生の測定
樹状細胞を、ＡＮＰ（１０−８Ｍ〜１０−６Ｍ）若しくはＣＮＰ（１０−６Ｍ）の存在下又は非存在下でＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）と２４時間インキュベーションし、培養清中のＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＴＮＦα量をＥＬＩＳＡ法で測定した。【００３８】  ３．ナイーブＴ細胞の細胞内サイトカイン発現解析（樹状細胞のＴｈ１／Ｔｈ２偏向性の検討）
樹状細胞は予めＡＮＰ（１０−７Ｍ）の存在下又は非存在下でＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）と２４時間インキュベーションして活性化した後、放射線照射（３０Ｇｙ）により増殖能を失わせた。この樹状細胞（１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）と、臍帯血より分離したナイーブＴ細胞（１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）を６日間共培養した。ＩＬ−２（５０Ｕ／ｍＬ）存在下でＴ細胞を更に８日間増殖させた後、Ｔ細胞を回収し、５０ｎｇ／ｍＬのホルボールエステル（ＰＭＡ）と５００ｎｇ／ｍＬのイオノマイシンで４時間刺激した。インキュベーション終了２時間前にＢｒｅｆｅｌｄｉｎ  Ａ（１０μｇ／ｍＬ）を添加した。細胞を２％ホルマリンで固定した後に、２％ＦＢＳ、０．５％サポニンを含む溶媒で細胞膜を障害し、細胞内サイトカインをＦＩＴＣ標識した抗ＩＦＮ−γモノクローナル抗体及び、ＰＥ標識した抗ＩＬ−４モノクローナル抗体で染色し、フローサイトメトリー法で解析した。ＩＦＮ−γ陽性細胞をＴｈ１型細胞、ＩＬ−４陽性細胞をＴｈ２型細胞とみなした。
【実施例】
【００３９】  以下に、本発明を実施例により更に具体的に説明する。
実施例１  未成熟樹状細胞でのＧＣ−Ａ遺伝子の発現及びＡＮＰによるｃＧＭＰ産生亢進活性
本発明者らはまず３種のＮＰ受容体遺伝子が樹状細胞、単球に発現するかについて検討した。健常人末梢血より得た単球、及び未成熟樹状細胞よりＲＮＡを調製し、ＲＴ−ＰＣＲ法でＮＰ受容体であるＧＣ−Ａ、ＧＣ−Ｂ、ＮＰＲ−Ｃの遺伝子の発現を検討した。結果を図１に示す。【００４０】  陽性対照とした胎盤由来ＲＮＡでは３種類全てのＮＰ受容体遺伝子の発現が認められた。単球では何れの受容体遺伝子の発現も見られなかったのに対し、未成熟樹状細胞ではＧＣ−Ａ遺伝子の発現のみが明確に認められた。このことから、単球にはＮＰ受容体遺伝子は発現しないが、単球由来の樹状細胞ではＧＣ−Ａ遺伝子が特異的に発現することが確認された。【００４１】  次に、樹状細胞に発現するＧＣ−Ａが生理機能と共役するかを明らかにするために、単球、樹状細胞それぞれにおけるＡＮＰのｃＧＭＰ産生亢進活性を検討した。対照として、ＧＣ−Ｂの特異的リガンドであるＣＮＰを用いた。結果を図２に示す。【００４２】  ＡＮＰは１０−１２Ｍという低濃度より濃度依存的に樹状細胞内のｃＧＭＰを上昇させたが、単球では何れの濃度でもｃＧＭＰをほとんど上昇させなかった。また、ＣＮＰは単球、樹状細胞の何れにおいても細胞内ｃＧＭＰ濃度に影響しなかった。この結果は、図１に示したＧＣ−Ａ遺伝子発現の結果を裏付けるものであり、樹状細胞特異的にＧＣ−Ａが発現し、かつ、本受容体がＡＮＰに反応して、生理活性を担う可能性を強く示唆するものである。
実施例２  ＡＮＰの樹状細胞サイトカイン発現に対する作用、及びＴｈ２偏向性に関する検討
実施例１の結果から、ＡＮＰが樹状細胞に作用し、免疫反応を調節しうることが判明した。【００４３】  樹状細胞の重要な機能は、ナイーブＴ細胞に抗原特異的な免疫反応を惹起することである。そこでまず、樹状細胞を成熟・活性化させることが知られているＬＰＳの存在下又は非存在下で、ＡＮＰを樹状細胞に添加して、ナイーブＴ細胞の活性化・増殖反応に及ぼす影響を検討した。結果を図３に示す。【００４４】  ＡＮＰは単独ではナイーブＴ細胞の増殖反応に影響しなかったが、ＬＰＳを樹状細胞に添加すると、著明なＴ細胞の増殖反応を惹起した。【００４５】  一方、ＡＮＰをＬＰＳと同時に添加すると、ＬＰＳ処理した樹状細胞で誘導されたＴ細胞の増殖反応が、ほぼ完全に抑制されることが判明した。【００４６】  従って、ＡＮＰはＬＰＳによる樹状細胞の活性化シグナル又は樹状細胞の機能に影響しうることが示された。【００４７】  樹状細胞が産生するサイトカインは樹状細胞とＴ細胞の相互作用発現に非常に重要な作用を果たすことが知られている。そこで次に、樹状細胞からのサイトカイン発現に対するＡＮＰの効果を検討した。結果を図４に示す。【００４８】  ＬＰＳは樹状細胞からのＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０の産生を亢進させたが、これに対してＡＮＰは濃度依存的にＩＬ−１２とＴＮＦαを低下させ、一方、ＩＬ−１０の産生を増強させた。なお、ＬＰＳ未刺激時には樹状細胞からのＩｌ−１２、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０産生能は低く、ＡＮＰは単独ではこれらに影響しなかった。【００４９】  また、ＧＣ−ＢのリガンドであるＣＮＰはサイトカイン発現に影響しなかったことから、ＬＰＳ刺激時におけるＡＮＰの作用は樹状細胞に発現するＧＣ−Ａを介したものであることが確認された。【００５０】  樹状細胞から産生されるサイトカインの中でＩＬ−１２は代表的なＴｈ１型サイトカインであり、一方でＩＬ−１０はＴｈ１細胞、活性化した単球及びＮＫ細胞によって産生されるＩＬ−１２を始めとするサイトカインの活性をブロックすることが知られている。ＡＮＰがＬＰＳで誘導された樹状細胞からのＩＬ−１２産生を抑制するが、ＩＬ−１０産生を増強したことから、ＡＮＰは樹状細胞をＴｈ２偏向性に誘導する可能性が示された。【００５１】  そこで、ＡＮＰが樹状細胞のＴｈ２偏向性を誘導しうるかについて、樹状細胞をＬＰＳで刺激時にＡＮＰを共存させ、ナイーブＴ細胞がＴｈ１、Ｔｈ２何れのタイプに分化、増殖するかを解析した。ＬＰＳは樹状細胞のＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ４に作用し、ＩＬ−１２発現を亢進させ、ナイーブＴ細胞を高いＩＬ−１２産生能を持ったＴｈ１型細胞に偏向させることが知られている（Ａｋｉｒａ  Ｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．２，ｐ６７５，２００１）。【００５２】  ＬＰＳ単独、又はＬＰＳ及びＡＮＰの共存下で刺激した樹状細胞と、ナイーブＴ細胞を相互作用させた後に、Ｔ細胞をＩＬ−２を含む培養液中で増殖させ、Ｔｈ１型細胞が発現するサイトカインとしてＩＦＮ−γ、Ｔｈ２型細胞が発現するサイトカインとしてＩＬ−４を、フローサイトメトリーを用いて解析した。図５に２例のＴ細胞標本の解析結果を示す。図５において、ＩＦＮ−γ陽性、ＩＬ−４陰性細胞はＴｈ１型、ＩＬ−４陽性、ＩＦＮ−γ陰性細胞はＴｈ２型のヘルパーＴ細胞に分化し、増殖したことを示す。【００５３】  Ｓａｍｐｌｅ＃１、Ｓａｍｐｌｅ＃２の何れにおいても、ＬＰＳ単独処置群に比べ、ＡＮＰ共処置群では、明らかにＩＬ−４産生細胞が増加し、ＩＦＮ−γ産生細胞が減少することが示された。更に別の３標本についても検討し、同様の結果を得た。【００５４】  本実施例により、ＡＮＰが樹状細胞のＩＬ−１０産生を亢進させ、ＩＬ−１２産生を低下させることによりＬＰＳの作用に拮抗し、樹状細胞をＴｈ２偏向性に誘導してＴ細胞をＴｈ２型ヘルパーＴ細胞に分化させることにより、Ｔｈ１型免疫反応を抑制することを明らかにした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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