(57)【要約】植物体の抽出物または搾汁を塩および／またはアルカロイドで処理した後に、合成樹脂系吸着剤で処理する、あるいは植物体の抽出物または搾汁を合成樹脂系吸着剤で処理した後に、塩および／またはアルカロイドで処理することによって、効率的に生理活性の高いＯＰＣを多く含むプロアントシアニジン含有物を容易に得ることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物体の抽出物または搾汁から得られるプロアントシアニジン含有物の製造方法であって、
塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理する工程、および
合成樹脂系吸着剤で処理する工程
の組み合わせを包含する、方法。
【請求項２】
前記塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理する工程の前および後の少なくとも一方に、合成樹脂系吸着剤による処理以外の濃縮処理を行う工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
植物体の抽出物または搾汁を濃縮処理して濃縮物を得る工程；該濃縮物を塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理して、粗プロアントシアニジン含有物を得る工程；および該粗プロアントシアニジン含有物を合成樹脂系吸着剤で処理する工程を包含する、プロアントシアニジン含有物の製造方法。
【請求項４】
前記塩が、一価のアルカリ金属、二価のアルカリ金属塩、および硫安からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１から３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項５】
前記アルカロイドが、ベタイン、カフェイン、およびこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１から３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかの項に記載のプロアントシアニジン含有物の製造方法であって、
該プロアントシアニジン含有物が、オリゴメリック・プロアントシアニジンを乾燥質量換算で２０質量％以上含有する、方法。
【請求項７】
請求項１から６のいずれかの項に記載の方法によって得られるプロアントシアニジン含有物であって、
該プロアントシアニジン含有物が、オリゴメリック・プロアントシアニジンを乾燥質量換算で２０質量％以上含有する、含有物。
【請求項８】
前記プロアントシアニジン含有物が、さらにカテキン類を乾燥質量換算で５〜１５質量％の割合で含有する、請求項７に記載の含有物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、生理活性の高いＯＰＣを多く含むプロアントシアニジン含有物を、効率よく製造する方法に関する。
【背景技術】  プロアントシアニジンは、各種植物中に存在する縮合または重合（以下、縮重合という）したタンニンであり、フラバン−３−オールまたはフラバン−３，４−ジオールを構成単位として縮重合した化合物群である。これらは、酸処理によりシアニジン、デルフィニジン、ペラルゴニジンなどのアントシアニジンを生成することから、その名称が与えられている。
プロアントシアニジンは、ポリフェノール類の一種で、植物が作り出す強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮もしくは種の部分に集中的に含まれている。プロアントシアニジンは、具体的には、ブドウの種、松の樹皮、ピーナッツの皮、イチョウ葉、ニセアカシアの果実、コケモモの果実などに含まれている。また、西アフリカのコーラナッツ、ペルーのラタニアの根、日本の緑茶にも、プロアントシアニジンが含まれることが知られている。プロアントシアニジンは、ヒトの体内では、生成することのできない物質である。
プロアントシアニジンは、一般的には植物体からの抽出によって得られる。抽出に用いる溶媒としては、水；メタノール、エタノール、アセトン、ヘキサン、酢酸エチルなどの有機溶媒；またはこれらの混合物が挙げられる（特開平１１−８０１４８号公報）。しかし、単に溶媒による抽出のみでは、プロアントシアニジンの回収量は低く、純度も低い。したがって、健康食品、化粧品および医薬品原料として使用するためには、純度を上げるために、さらなる濃縮、精製などの工程が必要であり、コストおよび時間がかかる。
プロアントシアニジンを含むポリフェノール類を回収する方法が報告されている。例えば、特開平５−２７９２６４号公報および特開平６−５６６８９号公報には、ポリフェノール類をキチンに吸着させ、ポリフェノール類が吸着したキチンをポリフェノール製品として利用することが記載されている。特開２００２−９７１８７号公報には、植物抽出液にアスコルビン酸およびアルカリ金属またはその塩を添加して、ｐＨを６〜１１としてポリフェノール類の金属塩を沈殿させ、この沈殿物をイオン交換樹脂などで脱塩することによって遊離ポリフェノールを回収する方法が記載されている。
ところで、近年、プロアントシアニジンの中でも、重合度が低いプロアントシアニジン、特に重合度が２〜４の縮重合体（２〜４量体）が、抗酸化作用に優れていることが報告されている。本明細書では、この重合度が２〜４の縮重合体を、オリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ：ＯＰＣ）という。ＯＰＣは、さらに抗酸化作用のほか、口腔内のバクテリア増殖を抑制してプラーク（歯こう）を減少させる効果；血管の弾力性を回復させる効果；血液中でのリポタンパク質が活性酸素によりダメージを受けるのを防止することによって、損傷したリポタンパク質が血管の内壁に凝集することを回避し、コレステロールが付着することを防止する効果；活性酸素によって分解されたビタミンＥを再生させる効果；ビタミンＥの増強剤としての効果などを有することが知られている。
しかし、上記の方法で回収されるプロアントシアニジンは、重合度が高いものがほとんどであり、生理活性が高い２〜４量体のＯＰＣの含有量は極めて低い。
特開平４−１９０７７４号公報、特開平１０−２１８７６９号公報、特開２００１−１３１０２７号公報、およびＥｂｅｒｈａｒｄ  Ｓｃｈｏｌｚら，Ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ  ｆｒｏｍ  Ｋｒａｍｅｒｉａ  ｔｒｉａｎｄｒａ  Ｒｏｏｔ，Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ，５５（１９８９），３７９−３８４頁には、植物体からＯＰＣを抽出する方法および／またはＯＰＣを合成する方法が記載されている。しかし、上記抽出方法においては、植物体の抽出液を吸着体に接触させて、吸着した成分を溶出させ、得られた画分を回収した後、この画分を用いてさらに同じ工程を繰り返さなければ、ＯＰＣ含有量を高めることができず、効率的ではない。合成方法についても、工程数が多く、コストおよび時間がかかる問題、廃液処理の問題などがある。
そこで、ＯＰＣを多く含有するプロアントシアニジンの精製方法が求められている。
【発明の開示】
本発明者らは、有用な生理活性を有するＯＰＣを高い割合で含有するプロアントシアニジン含有物を効率よく得る方法について鋭意検討した。その結果、植物体の抽出物または搾汁を塩および／またはアルカロイドで処理した後に、合成樹脂系吸着剤で処理することによって、あるいは植物体の抽出物または搾汁を合成樹脂系吸着剤で処理した後に、塩および／またはアルカロイドで処理することによって、生理活性の高いＯＰＣを高い割合で含有するプロアントシアニジン含有物が効率良く得られることを見出して本発明を完成させた。
本発明のプロアントシアニジン含有物の製造方法は、植物体の抽出物または搾汁から得られ、塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理する工程、および合成樹脂系吸着剤で処理する工程の組み合わせを包含する。
好ましい実施態様においては、上記塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理する工程の前および後の少なくとも一方に、合成樹脂系吸着剤による処理以外の濃縮処理を行う工程を包含する。
本発明のプロアントシアニジン含有物の製造方法はまた、植物体の抽出物または搾汁を濃縮処理して濃縮物を得る工程；該濃縮物を塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理し、粗プロアントシアニジン含有物を得る工程；および該粗プロアントシアニジン含有物を合成樹脂系吸着剤で処理する工程を包含する。
好ましい実施態様においては、上記塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方を添加して不溶物を生じさせる工程の前および上記不溶物を除去する工程の後の少なくとも一方に、合成樹脂系吸着剤による処理以外の濃縮処理を行う工程を包含する。
好ましい実施態様においては、上記塩は、一価のアルカリ金属、二価のアルカリ金属塩、および硫安からなる群より選択される少なくとも１種である。
好ましい実施態様においては、上記アルカロイドは、ベタイン、カフェイン、およびこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種である。
好ましい実施態様においては、上記プロアントシアニジン含有物は、オリゴメリック・プロアントシアニジンを乾燥質量換算で２０質量％以上含有する。
本発明はまた、プロアントシアニジン含有物を提供し、該プロアントシアニジン含有物は、オリゴメリック・プロアントシアニジンを乾燥質量換算で２０質量％以上の割合で含有する。
好ましい実施態様においては、上記プロアントシアニジン含有物は、さらにカテキン類を乾燥質量換算で５〜１５質量％の割合で含有する。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明のプロアントシアニジン含有物の製造方法は、植物体の抽出物または搾汁を、塩および／またはアルカロイドで処理した後に、合成樹脂系吸着剤で処理する、あるいは植物体の抽出物または搾汁を合成樹脂系吸着剤で処理した後に、塩および／またはアルカロイドで処理することによって行われる。好ましくは、上記塩および／またはアルカロイド処理の前および後の少なくとも一方で濃縮処理することによって行われる。
（植物体の抽出物または搾汁）
まず、植物体の抽出物または搾汁を得る。
本発明に用いられる植物体は、プロアントシアニジンを含有する植物体であればその種類に特に制限はない。杉、檜、松などの樹皮；ブドウ、ブルーベリー、イチゴ、アボガド、ニセアカシア、コケモモ、エルダーベリーなどの植物の果実、果皮、および種子；大麦；小麦；大豆；黒大豆；カカオ；小豆；トチの実の殻；ピーナッツの薄皮；イチョウ葉；茶葉および茶抽出液；モロコシキビ；リンゴ果実；クマザサ；フコイダン；ヤーコン葉；コーラナッツ（例えば、西アフリカのコーラナッツ）；ラタニア（例えば、ペルーのラタニア）の根などが挙げられる。これらの中で、特に松樹皮、ブドウ種子および果皮、ピーナッツの薄皮などが好適に用いられる。
植物体の抽出物を得る場合には、植物体に抽出溶媒を添加し、必要に応じて所定温度で保持する。
抽出を行う場合には、抽出効率の点から、好ましくは植物体を適当な大きさに破砕し、体積当たりの表面積を大きくする。破砕方法は、特に限定されない。例えば、カッター、スライサーなどで処理した破砕物；ミキサー、ジューサー、ブレンダー、マスコロイダーなどで処理した粉砕物などでもよい。破砕物または粉砕物の大きさは、０．１〜１０ｃｍ、好ましくは０．１〜５ｃｍの細片である。破砕効率を上げるために、破砕時に水、あるいはエタノール、メタノール、酢酸エチルなどの有機溶媒を加えてもよい。
抽出溶媒としては、水または有機溶媒が用いられる。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、および１，１，２−トリクロロエテンが挙げられる。さらに、水−有機溶媒の混合溶媒も好ましく用いられる。これらの有機溶媒は単独で用いてもよいし、組合わせて用いてもよい。なお、製造時の廃液処理の観点、あるいは後述する塩および／またはアルカロイドを添加する処理または合成樹脂系吸着剤による処理を行う観点から、水またはエタノールが好適に用いられる。
上記抽出溶媒のうち、植物の抽出物をさらに濃縮する場合に、濃縮を比較的低い温度で短時間に行う観点から、抽出溶媒として、水よりも沸点の低いエタノールなどの有機溶媒か、これらの有機溶媒と水との混合溶液を用いることが好ましい。このような有機溶媒は、濃縮時に容易に除去することができる。中でも、食品、医薬品などとして用いる場合の安全性を考慮すると、エタノールまたはエタノールと水との混合溶液が特に好適である。
植物体に添加する抽出溶媒の量は、目的とするプロアントシアニジン濃度および抽出効率を考慮して設定し得る。例えば、水を抽出溶媒として使用する場合、植物体と水との比が質量比で１：５〜１：１００、好ましくは１：１０〜１：５０である。水および／または有機溶媒を添加して破砕した場合は、破砕に使用した量を考慮し、添加する抽出溶媒の量を調製すればよい。
抽出温度は、抽出効率を高めるためには高い方が好ましい。例えば、水を用いる場合、５０〜１２０℃、好ましくは７０〜１００℃で熱水抽出する。植物体に熱水を加えてもよく、植物体に水を加えた後、加熱してもよい。抽出時間は、一般的には１０分〜２４時間であるが、抽出温度により適宜決定され得る。
有機溶媒を用いる抽出方法としては、加温抽出法あるいは超臨界流体抽出法が好適である。加温抽出法としては、植物体に加温した溶媒を加える方法、または植物体に溶媒を添加して加温する方法が用いられる。例えば、粉砕した植物体に対して、抽出溶媒として、水とエタノールとの比が、質量比で１：１〜１：９である水−エタノール混合溶媒を植物体の１倍〜２０倍量使用して、７０〜７５℃で還流させながら、０．５時間〜６時間攪拌する方法が挙げられる。還流をしない場合は、一度上記混合溶媒を用いて、加温抽出し、濾過などにより上清を回収し、残渣について、再度上記混合溶媒を加えて加温することによっても、抽出効率を上げることが可能である。
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて目的成分を抽出する方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、二酸化炭素が好ましく用いられる。
超臨界流体抽出法は、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程からなる。分離工程では、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤・吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエン、その他の脂肪族低級アルコール類、脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、またはケトン類を２〜２０Ｗ／Ｖ％程度添加し、得られた抽出流体で超臨界流体抽出を行うことによって、ＯＰＣ、カテキン類（後述）などの目的とする被抽出物の抽出流体に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、プロアントシアニジンを効率的に抽出する方法である。
抽出には、例えば、回分式、半連続式、または連続式などのいずれの抽出装置を用いてもよい。
植物体の搾汁を得る場合には、植物体を直接圧搾し、あるいは適宜切断または破砕した後に圧搾する。この方法は、水分含量の高い植物体を使用する場合に好適に採用される。例えば、ブドウ果実の場合には、圧搾によりプロアントシアニジンを含む搾汁が得られる。植物体を破砕して得られる植物体由来の固形分を含む植物体破砕物（例えば、上記ブドウ果実破砕物）もまた搾汁と同様に用いられ、本明細書中では、この植物体由来の固形分を含む植物体破砕物も搾汁に包含される。
（濃縮処理工程）
植物体の抽出物または搾汁（以下、抽出物等という）は、塩および／またはアルカロイド処理を行う前に、予め濃縮処理することが好ましい。濃縮処理することによって、少量の塩またはアルカロイドで処理することが可能になり、重合度の高いプロアントシアニジンを効率よく除去することができる。濃縮処理する場合は、予め濾過などを行い、溶液中の不溶物を除去しておくことが、濃縮を均一に行うことができ、濃縮物の濃縮率の調整が容易になる点から好ましい。
濃縮方法としては、加熱濃縮、減圧濃縮、凍結乾燥、合成樹脂系吸着剤処理による濃縮、限外濾過膜による濃縮、透析膜による濃縮などの当業者が通常用いる濃縮方法が利用される。好ましい濃縮方法は、プロアントシアニジンの熱変性が少ない減圧濃縮、凍結乾燥、および合成樹脂系吸着剤処理による濃縮であり、より好ましい濃縮方法は、減圧濃縮および合成樹脂系吸着剤処理による濃縮である。これらの濃縮方法は、単独で行ってもよいし、複数を組み合わせて行ってもよい。
加熱濃縮を行う場合は、加熱によるプロアントシアニジンの熱変性を防ぐために、通常、４０℃〜１００℃の温度で行われる。
合成樹脂系吸着剤処理による濃縮は、後述するＯＰＣを優先的に吸着し得る合成樹脂系吸着剤で吸着処理し、吸着したＯＰＣを溶媒で脱離させて、該成分を当初の濃度より高い濃度で含有する溶液（濃縮物）を得ることにより行われる。上記合成樹脂系吸着剤処理による濃縮においては、さらに、抽出に使用した抽出溶媒を、濃縮し易い揮発性の高い有機溶媒に置換することができ、例えば、水を抽出溶媒とした抽出物に比べて、減圧濃縮などで容易に濃縮率の高い濃縮物を得ることが可能である。例えば、抽出溶媒が水（例えば、熱水）の場合は、吸着剤からの脱離時に、有機溶媒（例えば、エタノール）または有機溶媒と水との混合溶媒を用いることにより、この有機溶媒または混合溶媒の溶液とし、次いで、有機溶媒を必要な程度に除去する、あるいは完全に除去した後、適切な溶媒を必要量だけ加えることにより、濃縮を行うことができる。特に、後述のダイアイオンＨＰ−２０などの芳香族系樹脂を用いた場合は、合成樹脂吸着剤へプロアントシアニジン等を吸着させた後に、無水エタノールなどでカラムから吸着物全てを回収するだけで、合成樹脂吸着剤によるプロアントシアニジンの濃縮と共に、簡単に減圧濃縮などでエタノールを完全に除去でき、より濃縮率の高い濃縮物を得ることが可能である。
得られた濃縮物の濃縮率に特に制限はない。濃縮物の体積が、濃縮前の抽出物等の体積に比べて、好ましくは１／２〜１／１００容量、より好ましくは１／５〜１／７０容量、さらに好ましくは１／１０〜１／５０容量となるように濃縮が行われる。
濃縮処理は、上記塩および／またはアルカロイド処理を行う前に限られず、各処理を行う上で好ましくない溶媒を除去する目的で、必要に応じて行われ得る。好ましくは、塩および／またはアルカロイド処理工程の前後、より好ましくは、塩および／またはアルカロイド処理工程の前に行われる。
濃縮処理（透析、減圧濃縮など）は、さらに、抽出物等の被処理物が有機溶媒を含む場合に、有機溶媒を除去して水に置換することが可能である。水に置換することによって、塩および／またはアルカロイドの溶液中の電離がよくなり、重合度の高いプロアントシアニジンを効率よく不溶化し得る。水置換は、容積が抽出物等の倍以上にならないことが好ましい。
（塩および／またはアルカロイド処理工程）
この工程は、植物体の抽出物または搾汁、その濃縮物あるいは合成樹脂系吸着剤処理液に、塩および／またはアルカロイドを添加することを包含し得る。すなわち、得られた抽出物等、その濃縮物、または合成樹脂系吸着剤処理液に、塩および／またはアルカロイドを添加することによって、重合度の高いプロアントシアニジンを、例えば、沈殿物などの不溶物として生じさせる、あるいは合成樹脂系吸着剤に吸着し難い性質（以下、非吸着プロアントシアニジンという）にする。上記不溶物は、濾過などにより容易に除去され得、非吸着プロアントシアニジンは、その後の合成樹脂系吸着剤処理で除去されるため、ＯＰＣ含量の高いプロアントシアニジン含有物を得ることができる。これらの塩およびアルカロイドは、単独で用いてもよく、組み合わせて用いてもよい。
本発明に用いられる塩は、溶液中で電離するものであればよい。塩としては、例えば、一価の金属塩、二価の金属塩、および非金属性の塩が挙げられる。一価の金属塩および非金属性の塩は、重合度の高いプロアントシアニジンを不溶物として生じさせる点、二価の金属塩は、重合度の高いプロアントシアニジンを非吸着プロアントシアニジンにする点で特に優れる。
一価の金属塩としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、セシウム、フランシウムなどのアルカリ金属の塩、例えば、ハロゲン化物塩（塩化物塩、臭化物塩など）、リン酸塩、炭酸塩、有機酸塩（酢酸塩などのカルボン酸塩、スルホン酸塩など）などが挙げられる。具体的には、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、酢酸ナトリウムなどが挙げられる。特に塩析に好ましく用いられる硫酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、および塩化ナトリウムが好ましい。
二価の金属塩としては、ベリリウム、マグネシウム、アルカリ土類金属（カルシウム、ストロンチウム、バリウム、ラジウム）などの金属塩が挙げられる。好ましくはマグネシウムの塩およびカルシウムの塩、特には、硫酸マグネシウムである。なお、二価の金属塩は、酸化剤として用いられる金属（例えば、銅など）を含む塩を用いると、プロアントシアニジンが酸化される恐れがあるため注意を要する。
二価の金属塩は、特にプロアントシアニジンに対して吸着力が強いため、少ない塩の量で重合度の高いプロアントシアニジンを、不溶物または非吸着プロアントシアニジンとすることができる。
金属塩による処理に際しては、酸性側で処理を行うことが好ましい。弱〜強アルカリ性ではプロアントシアニジンの安定性が悪くなり分解する恐れがある。そのため、溶液中のｐＨを好ましくは７．５未満、より好ましくは６未満、さらに好ましくは５．５以下となるように調整することが好ましい。特に、二価の金属塩を添加する場合、溶液中のｐＨが上がりやすいため注意を要する。ｐＨの調整は、例えば、プロアントシアニジンを安定化するための助剤（アスコルビン酸などのｐＨ調整剤）、陽イオン交換樹脂などで処理した低ｐＨの水（低ｐＨ水）などを用いることによって行われる。特に、低ｐＨ水は、ｐＨ調整剤を添加する場合に比べて、除去工程が必要ない点および全体的なコスト面から好ましい。具体的には、予め金属塩濃度が塩処理時の最終濃度の２〜１０倍濃度となるように低ｐＨ水に添加して、金属塩溶液を調製する。この溶液は、ｐＨが４〜６、好ましくは４〜５．５、より好ましくは４〜５であることが好ましい。この溶液を抽出物等に加えて処理することによって、プロアントシアニジンの分解を回避することができる。
非金属性の塩としては、例えば、硫安などが好適に用いられる。
上記塩の中で、特に重合度の高いプロアントシアニジンの沈澱を選択的に生じさせ、ＯＰＣの精製効率を高める点では、一価のアルカリ金属塩または硫安が好ましい。塩の使用量を少なくする点では、重合度の高いプロアントシアニジンを非吸着プロアントシアニジンにして精製効率を高める２価の金属塩が好ましい。使用量が少ない点では、後述のアルカロイドも好ましい。
上記塩の添加量は、特に制限されず、その種類に応じて適宜設定される。例えば、抽出物等、合成樹脂系吸着剤処理液、または濃縮物中に０．０００１質量／容量％〜５０質量／容量％添加され得る。
一価の金属塩を用いる場合は、好ましくは抽出物等、合成樹脂系吸着剤処理液、または濃縮物中に０．１質量／容量％〜５０質量／容量％、より好ましくは３質量／容量％〜５０質量／容量％、さらに好ましくは５質量／容量％〜４５質量／容量％、最も好ましくは８質量／容量％〜４５質量／容量％となるように添加し得る。特に、２５℃の水における塩の最大溶解量（例えば、塩化ナトリウムの場合、３５．８質量／容量％）を１００％（飽和濃度）とした場合に、塩の飽和濃度の１０〜７５％、好ましくは２０〜６０％となるように抽出物等、合成樹脂系吸着剤処理液、または濃縮物に添加することが好ましい。
カルシウム塩、マグネシウム塩などの二価の金属塩を用いる場合は、好ましくは抽出物等、合成樹脂系吸着剤処理液、または濃縮物中に０．０００１質量／容量％〜３０質量／容量％、より好ましくは０．００１質量／容量％〜１０質量／容量％となるように添加する。上記二価の金属塩は、さらに、植物（例えば、松樹皮）の抽出物等の乾燥質量１００質量部に対して、０．００２質量部〜４質量部程度となるように添加することが好ましい。
非金属性の塩を用いる場合は、好ましくは抽出物等、合成樹脂系吸着剤処理液、または濃縮物中に８質量／容量％以上、より好ましくは８質量／容量％〜８０質量／容量％となるように添加する。
本発明に用いられるアルカロイドは、一般的にアルカロイドに分類されている含窒素有機化合物をいう。アルカロイドは、重合度の高いプロアントシアニジンを、不溶物または非吸着プロアントシアニジン、特に非吸着プロアントシアニジンにする点で優れる。
上記アルカロイドとしては、カフェインなどのキサンチン誘導体、簡単なアミン類からなるもの（ベタインなど）、ピロールおよびピロリジンアルカロイド、ピリジンおよびピペリジンアルカロイド、トロパンアルカロイド、イミダゾールアルカロイド、プリンアルカロイド、キノリンアルカロイド、イソキノリンアルカロイド、キナゾリンアルカロイド、ピロリジジンアルカロイド、キノリジジンアルカロイド、インドリジンアルカロイド、フェナントレンアルカロイド、エリトリナンアルカロイド、インドールアルカロイド、トロポロン環を含むアルカロイド、ジテルペンアルカロイド、ステロイドアルカロイド、トリテルペンアルカロイド、コルヒチンなどが該当する。本発明においては、この中でも、簡単なアミン類からなるものまたはプリンアルカロイドが好ましく用いられ、特にベタインなどのアミン類、カフェインなどのキサンチン誘導体が好ましく用いられる。重合度の高いプロアントシアニジンを非吸着プロアントシアニジンにする効果および不溶物にする効果のいずれも優れる点から、カフェインが特に好ましい。
上記アルカロイドは、好ましくは抽出物等、合成樹脂系吸着剤処理液、または濃縮物中に０．００００５質量／容量％〜５質量／容量％、より好ましくは０．０００１質量／容量％〜３質量／容量％、さらに好ましくは０．０００１質量／容量％〜１質量／容量％となるように添加され得る。上記アルカロイドは、さらに、植物（例えば、松樹皮）の抽出物等の乾燥質量１００質量部に対して、０．０００２質量部〜０．５質量部程度となるように添加することが好ましい。
抽出物等の濃縮物を使用する場合、塩および／またはアルカロイドの使用量は、上記の量の好ましくは１／２〜１／１００、より好ましくは１／５〜１／５０である。
塩および／またはアルカロイド処理の温度に特に制限はない。好ましくは１〜４０℃である。処理時間についても特に制限はなく、処理温度に応じて適宜設定され得る。例えば、塩および／またはアルカロイドを添加後、１℃〜４０℃で３０分〜４８時間静置し、十分に沈殿物などの不溶物を生じさせる。なお、静置時間は、４８時間以上でもよいが、ＯＰＣが自動酸化し、赤褐色が濃い褐色に変色する前に次工程に移ることが好ましい。
次いで、生じた沈殿物などの不溶物を除去してもよい。不溶物を除去することによって、その後の合成樹脂系吸着剤処理を短時間で行うことができる。不溶物を除去する方法としては、当業者が通常用いる方法、例えば、濾過や遠心分離などが挙げられる。処理時間の点から、濾過が好適に用いられる。濾過は、好ましくは１〜４０℃で行われ得る。低温であるほど、より多くの重合度の高いプロアントシアニジンを除去することができ、好ましくは３０℃以下、より好ましくは２５℃以下で行われる。濾過による損失を最小限に抑えるために、ろ過後の残渣を、塩および／またはアルカロイド処理に用いた溶媒と同じ溶媒を用いて洗浄し、洗浄液を回収してもよい。なお、塩および／またはアルカロイド処理において、特に、二価の金属塩またはアルカロイドを用いた場合、重合度の高いプロアントシアニジンは、主に非吸着プロアントシアニジンとなり、不溶物は比較的少ない。このように不溶物が比較的少ない場合は、コスト削減の点から、不溶物を除去せずに合成樹脂系吸着剤処理を行ってもよい。
このようにして得られた粗プロアントシアニジン含有物の上清に含有される５量体以上のプロアントシアニジンの量は、塩および／またはアルカロイド処理前の濃縮物に比べて１／２以下、好ましくは１／３以下、より好ましくは１／５以下、さらに好ましくは１／６以下の量になる。
（合成樹脂系吸着剤で処理する工程）
この工程は、上記塩および／またはアルカロイド処理することにより得られた粗プロアントシアニジン含有物に対して行われる、あるいは植物の抽出物または搾汁もしくは濃縮物に対して、塩および／またはアルカロイド処理する前に行われる。合成樹脂系吸着剤で処理することにより、糖類、有機酸などの夾雑物が除去される。例えば、抽出物等を合成樹脂系吸着剤で処理する場合、上記の夾雑物が除去されるため、次の塩処理を効率よく行うことができる。具体的には、抽出物等または粗プロアントシアニジン含有物を合成樹脂系吸着剤と接触させて、プロアントシアニジンを合成樹脂系吸着剤に吸着させた後、所定の溶媒で溶出することにより行われる。なお、抽出物等または粗プロアントシアニジン含有物を合成樹脂系吸着剤で処理する場合、予め不溶物を除去することが効率的な処理を行う点から好ましい。
上記処理に用いられる合成樹脂系吸着剤としては、有機系樹脂、イオン交換樹脂、シリカゲル、逆相シリカゲルなどが挙げられる。
有機系樹脂としては、例えば、スチレン−ジビニルベンゼン系樹脂などの芳香族系樹脂、アクリル酸系メタクリル樹脂、アクリロニトリル脂肪族系樹脂などが使用できる。好ましくは、芳香族系樹脂である。芳香族樹脂としては、疎水性置換基を有する芳香族系樹脂、無置換基型の芳香族系樹脂、無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂が挙げられ、無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂がより好適である。これらの樹脂は、多孔性であることが好ましい。このような合成樹脂は市販されており、例えば、次のものが挙げられる：アクリル酸系メタクリル樹脂としては、ダイアイオン（登録商標）ＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（以上、三菱化学株式会社製）；芳香族系樹脂としては、ＳＰ−９００（三菱化学株式会社製）、アンバーライト（登録商標）ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−１６、ＸＡＤ−２０００（以上、株式会社オルガノ製）；疎水性置換基を有する芳香族系樹脂としては、ダイアイオン（登録商標）ＳＰ−２０５、ＳＰ−２０６、ＳＰ−２０７、ＨＰ−２ＭＧ、ＥＸ−００２１（以上、三菱化学株式会社製）、アンバーライト（登録商標）ＸＡＤ−７、ＸＡＤ−８（以上、株式会社オルガノ製）；無置換基型の芳香族系樹脂としては、ダイアイオン（登録商標）ＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＨＰ−２１、ＨＰ−３０、ＨＰ−４０、ＨＰ−５０（以上、三菱化学株式会社製）；無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂としては、ＳＰ−８２５、ＳＰ−８００、ＳＰ−８５０、ＳＰ−８７５（以上、三菱化学株式会社製）；架橋デキストランの誘導体としては、セファデックス（登録商標）ＬＨ２０、ＬＨ６０（以上、ファルマシアバイオテク株式会社製）などが挙げられる。中でも芳香族系樹脂（ダイアイオンまたはアンバーライト）または架橋デキストランの誘導体（セファデックスＬＨ２０など）が好ましい。
イオン交換樹脂としては、陽イオン交換樹脂および陰イオン交換樹脂のいずれも使用できる。市販されている陽イオン交換樹脂としては、例えば、官能基としてスルホン酸塩基を有する樹脂である、アンバーライト（登録商標）ＣＧ−４０００、ＣＧ−５０００、ＣＧ−６０００、ＣＧ−８０００、ＩＲ−１１６、ＩＲ−１１８、ＩＲ−１２０Ｂ、ＩＲ−１２２、ＩＲ−１２４、ＸＴ−１００７、ＸＴ−１００９、ＸＴ−１００２（以上、株式会社オルガノ製）などが挙げられる。弱塩基性陰イオン交換樹脂としては、例えば、官能基として４級アミンを有する樹脂である、ＯＰＴＩＰＯＲＥ−ＸＵＳ４０２８５．００、ＯＰＴＩＰＯＲＥ−ＸＵＳ４０３９０．００（以上、ダウケミカル株式会社製）などが挙げられる。イオン交換樹脂を用いる際の溶出溶媒は、水が好ましく、カラム温度は１０〜１２０℃、カラム内は常圧または加圧された状態であることが好ましい。
合成樹脂系吸着剤の量は、溶媒の種類、合成樹脂系吸着剤の種類等によって適宜設定すればよい。例えば、処理する液の乾燥質量に対して、０．０１〜３０倍質量、好ましくは０．１〜１０倍質量の合成樹脂系吸着剤を使用することが好ましい。合成樹脂系吸着剤の量が、処理する液の乾燥質量に対して０．０１倍質量より少なすぎると、プロアントシアニジンの回収率が下がるため、好ましくない。
合成樹脂系吸着剤の中でも、プロアントシアニジンの吸着効率が高い合成樹脂系吸着剤、例えば、芳香族系樹脂のダイアイオン、芳香族系樹脂のアンバーライト、架橋デキストラン誘導体のセファデックスなどを用いる場合は、吸着効率がよい点から、上記のような処理する液の乾燥質量を考慮することなく、処理する液の容量を基準として、より簡便に操作を行うことができる。処理する液の容量に対して水や有機溶媒などで膨潤した合成樹脂吸着剤の体積が０．０１倍〜５０倍量、好ましくは０．１〜２０倍量の上記合成樹脂吸着剤を用いることで、処理する液と合成樹脂吸着剤との接触が十分に行われ、効率よく吸着させることができる。
抽出物等または粗プロアントシアニジン含有物と合成樹脂系吸着剤との接触は、いかなる方法で行ってもよい。例えば、簡易な方法としては、合成樹脂系吸着剤をカラムに充填し、抽出物等または粗プロアントシアニジン含有物を通過させるカラム法、合成樹脂系吸着剤を抽出物等または粗プロアントシアニジン含有物に加え、一定時間後、合成樹脂系吸着剤を除去するバッチ法などが挙げられる。
カラム法を用いて処理するには、例えば、まず、合成樹脂系吸着剤をカラムに充填し、そのカラムに抽出物等または粗プロアントシアニジン含有物を通液し、次いで合成樹脂系吸着剤の体積に対して、５倍から１０倍の体積の水を通液させる。これにより、不純物である糖類および有機酸が除去される。その後、適切な溶媒によりプロアントシアニジンを溶出する。溶媒としては、水、メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、およびこれらの混合溶媒が挙げられる。安全性の面から好ましくは水とエタノールとの混合溶媒が用いられる。水とエタノールとの混合比は、合成樹脂系吸着剤によって異なるが、例えば、ダイアイオンＨＰ−２０等の芳香族系樹脂の場合、５〜５０容量％、好ましくは１０〜４０容量％、さらに好ましくは１０〜３０容量％のエタノール水溶液を用いる。
バッチ法を用いて処理するには、上記カラム法と同様の質量比の合成樹脂系吸着剤を抽出物等または粗プロアントシアニジン含有物に加え、攪拌しながら１〜３時間接触させた後に、濾過または遠心分離により吸着剤を回収する。プロアントシアニジンが吸着された合成樹脂系吸着剤を、さらに上記カラム法の場合と同様な組成の溶媒に加えて１時間〜３時間攪拌し、プロアントシアニジンを溶出させ、次いで濾過または遠心分離して上清を回収することにより、合成樹脂系吸着剤処理物、あるいはプロアントシアニジンまたはＯＰＣをより多く含むプロアントシアニジン含有物を得ることができる。
本発明の方法によって得られるプロアントシアニジン含有物の収率は、例えば、塩および／またはアルカロイド処理工程において、アルカロイドや二価の金属塩を用いた場合、好ましくは松樹皮の乾燥質量１００質量部あたり、０．４〜３質量部、好ましくは０．５質量部〜２質量部である。
（製造工程）
上記の通り、本発明の製造方法において、抽出物等に塩および／またはアルカロイドで処理する工程と、合成樹脂系吸着剤で処理する工程との順序は、特に制限されず、どちらを先に行ってもよい。すなわち、まず、抽出物等を塩および／またはアルカロイドで処理し、次に合成樹脂系吸着剤処理してもよく、抽出物等を合成樹脂系吸着剤処理し、次に塩および／またはアルカロイドで処理してもよい。前者の工程の順序で行う方が、溶液中の塩および／またはアルカロイドを除去するために、浸透膜、吸着剤などの処理工程を設ける必要がなくなる点や、合成樹脂系吸着剤での処理効率が高まり、ＯＰＣの含有量を高められる点から好ましい。また、塩および／またはアルカロイド処理の前後に濃縮工程や不溶物の除去工程を必要に応じて加えてもよい。
本発明の製造方法は、好ましくは、植物体の抽出物または搾汁を濃縮処理して濃縮物を得る工程；該濃縮物を塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理し、粗プロアントシアニジン含有物を得る工程；および該粗プロアントシアニジン含有物を合成樹脂系吸着剤で処理する工程の順で行われ、より好ましくは、上記方法の濃縮処理を合成樹脂系吸着剤により濃縮すること、すなわち、植物体の抽出物または搾汁を、合成樹脂系吸着剤で処理する工程、塩および／またはアルカロイドで処理する工程、および合成樹脂系吸着剤処理する工程の順で行われる。なお、これらの工程の後でさらなる精製工程（例えば、上記の浸透膜、吸着剤などによる脱塩処理など）を行ってよいことはいうまでもない。
（プロアントシアニジン含有物）
このようにして得られたプロアントシアニジン含有物は、プロアントシアニジンを高い割合で含有する。ここで、プロアントシアニジン含有物には、その後、当業者が通常用いる方法によって得られる濃縮物、希釈物、粉末なども含まれる。プロアントシアニジンは、生理活性の点から重合度が低いプロアントシアニジンが好ましく用いられる。重合度の低い縮重合体としては、重合度が２〜３０の縮重合体（２〜３０量体）が好ましく、重合度が２〜１０の縮重合体（２〜１０量体）がより好ましく、重合度が２〜４の縮重合体（２〜４量体）がさらに好ましい。本発明の製造方法によって得られるプロアントシアニジン含有物は、この２〜４量体（オリゴメリック・プロアントシアニジン；ＯＰＣ）を豊富に含む。このプロアントシアニジン含有物は、好ましくはＯＰＣを乾燥質量換算で２０質量％、好ましくは３０質量％以上より好ましくは３５質量％以上、好ましくは５０質量％以上含有する。
特に、本発明の方法が、塩および／またはアルカロイド処理工程の前後に濃縮処理工程を包含する場合には、該方法によって得られるプロアントシアニジン含有物は、ＯＰＣを乾燥質量換算で、好ましくは３５質量％以上、より好ましくは４０質量％以上、さらに好ましくは４０質量％〜８０質量％含有する。このプロアントシアニジン含有物のＯＰＣ含有量は、抽出物等を、濃縮処理ならびに塩および／またはアルカロイド処理せずに、合成樹脂系吸着剤処理のみ行った処理物に比べて、好ましくは２倍以上、より好ましくは２倍〜４倍である。また、濃縮しなかった場合に比べ、好ましくは１．３倍以上、より好ましくは１．３倍〜２倍である。
さらに、プロアントシアニジン含有物に含有される全プロアントシアニジン中に占めるＯＰＣの割合は、上述の処理によって、好ましくは２０％以上、より好ましくは３０％以上、さらに好ましくは４０％以上である。さらに、本発明の方法が、塩および／またはアルカロイド処理工程の前後に濃縮処理工程を包含する場合には、好ましくは３５％以上、より好ましくは４０％以上、さらに好ましくは４５％〜９５％、最も好ましくは５０％〜８０％である。特に、抽出物等の濃縮後に塩および／またはアルカロイド処理および合成樹脂系吸着剤処理を行うことによって得られたプロアントシアニジン含有物は、抽出物等、あるいは抽出物等を濃縮せずに塩および／またはアルカロイド処理または合成樹脂系吸着剤処理のみ行うことによって得られた処理物に比べて、全プロアントシアニジン中に占めるＯＰＣの割合が高く、好ましくは２倍以上、より好ましくは２倍〜５倍、さらに好ましくは２倍〜４倍である。全プロアントシアニジン中に占めるＯＰＣの割合が高いほど、プロアントシアニジン含有物の生理活性および水への溶解性が高くなる。
得られたプロアントシアニジン含有物は、さらに、乾燥質量換算でカテキン類を好ましくは１０〜１５質量％含有し得る。カテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類は、単独では水溶性が乏しく、その生理活性が低いが、ＯＰＣは、カテキン類と共存すると、カテキン類の水溶性を増加させると同時に、カテキン類の作用を活性化する性質を有する。したがって、ＯＰＣとカテキン類とを含有するプロアントシアニジン含有物は、特に有用である。
カテキン類とは、ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称である。カテキン類としては、（＋）−カテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレートなどが挙げられる。さらに、天然物由来のアフゼレキン、ならびに（＋）−カテキンまたはガロカテキンの３−ガロイル誘導体も含む。
カテキン類は、ツバキ科の植物（例えば、緑茶、紅茶、ウーロン茶などの茶葉）、麻黄などに含有される。例えば、これらの植物の抽出物等を上記のプロアントシアニジン含有物に加えもよいし、プロアントシアニジンとカテキン類との両者を含む植物抽出物等（例えば、松樹皮抽出物）を利用してもよい。
カテキン類の作用としては、発癌抑制作用、動脈硬化予防作用、脂肪代謝異常の抑制作用、血圧上昇抑制作用、血小板凝集抑制作用、抗アレルギー作用、抗ウイルス作用、抗菌作用、虫歯予防作用、口臭防止作用、腸内細菌叢正常化作用、活性酸素やフリーラジカルの消去作用、抗酸化作用、血糖の上昇を抑制する抗糖尿病作用などが挙げられる。
本発明のプロアントシアニジン含有物は、濃縮して，その濃度を高めてから種々の用途に利用することもできる。濃縮には、膜濃縮、加熱濃縮、真空（減圧）濃縮、凍結濃縮などの種々の方法が用いられる。
さらに必要に応じて、これらのプロアントシアニジン含有物を殺菌処理して保存する。殺菌は、気流殺菌、高圧殺菌、加熱殺菌などの当業者が通常用いる方法により行われる。
また、これらのプロアントシアニジン含有物は、殺菌後、濃縮、乾燥、および粉末化してもよい。乾燥は、当業者が通常用いる方法によって行われる。中でも、凍結乾燥、真空乾燥、および噴霧乾燥が好ましく用いられる。
得られたプロアントシアニジン含有物は、例えば、ドリンク剤およびゲル化した飲食物などとしても利用できる。さらに、プロアントシアニジン含有物は、そのまま飲食に供するだけでなく、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、香料、食品添加物、調味料などと混合し、用途に応じて、顆粒、錠剤などの形態に成形することもできる。例えば、ローヤルゼリー、ビタミン類、プロテイン、カルシウム、キトサン、レシチン、カフェインなどと混合し、さらに糖液および調味料により味が整えられる。さらにこれらは、ハードカプセルおよびソフトカプセルなどのカプセル剤、丸剤、またはティーバッグ状などにされる。これらは、これらの形状または好みに応じて、そのまま食してもよく、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて飲んでもよい。またティーバッグ状などの場合、成分を浸出させてから飲んでもよい。
上述のように、本発明により得られたプロアントシアニジン含有物は、食品、化粧品、および医薬品の原料として広く使用することができる。
【実施例】  以下、実施例に基づいて本発明を説明するが、この実施例は本発明を制限するものではない。実施例に示す単位（Ｖ／Ｖ）は（容量／容量）を、（Ｗ／Ｗ）は（質量／質量）を、（Ｗ／Ｖ）は（質量／容量）を示す。
まず、塩処理または濃縮処理によるプロアントシアニジン含有量の変化を調べるために、以下の参考例１〜１６を行った。
（参考例１）
松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮抽出液を得た。
この抽出液１ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥質量は８ｍｇであった。上記抽出液１Ｌ（抽出物粉末乾燥質量８ｇ）を２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムが３５．８（Ｗ／Ｖ）％（飽和濃度）となるように添加してよく攪拌した。この溶液を４℃で２４時間静置後、濾過し、９１０ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ａを得た。
得られた粗プロアントシアニジン含有液Ａに含まれる５量体以上のプロアントシアニジン含有量を、以下のようにして、塩処理前の松樹皮抽出物と比較した。
まず、塩で処理する前の松樹皮抽出液１００μＬを、精製水を用いて２、４、６、および８倍に希釈した溶液を調製した。次いで、松樹皮抽出液の原液および２〜８倍希釈溶液、ならびに粗プロアントシアニジン含有液Ａについて、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、各溶液中に含まれる５量体以上のプロアントシアニジンを検出した。
ＴＬＣの展開条件および検出方法は下記の通りである。
ＴＬＣ：シリカゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ  ＆  ＣＯ．，Ｉｎｃ．製）
展開溶媒：ベンゼン／蟻酸エチル／蟻酸（２／７／１）
検出試薬：硫酸およびアニスアルデヒド硫酸
サンプル量：各１０μＬ
検出試薬にて発色後、粗プロアントシアニジン含有液Ａに含有される５量体以上のプロアントシアニジン（Ｒｆ値：０．１以下）の発色度合いを、処理前の松樹皮抽出液の原液および２〜８倍希釈溶液に含有される５量体以上のプロアントシアニジンの発色と比較して、含有液Ａ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に示す。なお、表中、粗プロアントシアニジン含有液Ａの発色が松樹皮抽出液の原液および希釈液の発色に比べて強い場合は＋を、弱い場合は−を示す。表１の粗プロアントシアニジン含有液Ａの発色が、松樹皮抽出液の原液の６倍希釈液に比べて弱く、８倍希釈液に比べて強いことから、含有液Ａ中の５量体以上のプロアントシアニジンの含有量は、原液の１／６〜１／８の間になっていると考えられる。
（参考例２）
塩化ナトリウムを２５．８（Ｗ／Ｖ）％（７０％飽和濃度）となるように添加したこと以外は、参考例１と同様にして、９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｂを得、ＴＬＣにて含有液Ｂ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例３）
塩化ナトリウムを１７．９（Ｗ／Ｖ）％（５０％飽和濃度）となるように添加したこと以外は、参考例１と同様にして、９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｃを得、ＴＬＣにて含有液Ｃ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例４）
塩化ナトリウムを１０．７（Ｗ／Ｖ）％（３０％飽和濃度）となるように添加したこと以外は、参考例１と同様にして、９２０ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｄを得、ＴＬＣにて含有液Ｄ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例５）
塩化ナトリウムの代わりに、硫安を７６．８（Ｗ／Ｖ）％（飽和濃度）となるように添加したこと以外は、参考例１と同様にして、９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｅを得、ＴＬＣにて含有液Ｅ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例６）
塩化ナトリウムの代わりに、硫安を５３．８（Ｗ／Ｖ）％（７０％飽和濃度）となるように添加したこと以外は、参考例１と同様にして、９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｆを得、ＴＬＣにて含有液Ｆ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例７）
塩化ナトリウムを１．８（Ｗ／Ｖ）％（５％飽和濃度）となるように添加したこと以外は、参考例１と同様にして、９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｇを得、ＴＬＣにて含有液Ｇ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例８）
塩化ナトリウムの代わりに、硫安を７．７（Ｗ／Ｖ）％（１０％飽和濃度）となるように添加したこと以外は、参考例１と同様にして、９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｈを得、ＴＬＣにて含有液Ｈ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例９）
松樹皮９００ｇに８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、７０℃で１時間還流させながら加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて９Ｌの松樹皮の含水エタノール抽出液を得た。
この抽出液１０ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥質量は１００ｍｇであった。上記抽出液１Ｌ（抽出物粉末乾燥質量１０ｇ）を２５℃まで放冷し、濃縮してエタノールを完全に除去した。その後、精製水を添加して容量が５０ｍＬとなるように調整して、抽出液の１／２０容量に相当する濃縮液Ｉを得た。得られた５０ｍＬの濃縮液Ｉに塩化ナトリウムを９ｇ添加してよく攪拌した（塩化ナトリウム濃度約１７．９Ｗ／Ｖ％、約５０％飽和濃度）。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、５２ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｉ１を得た。
得られた粗プロアントシアニジン含有液Ｉ１に含まれる５量体以上のプロアントシアニジン含有量を、参考例１と同様に、ＴＬＣにて含有液Ｉ１中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例１０）
参考例９で得られた５０ｍＬの濃縮液Ｉに、塩化ナトリウムを３．６ｇ添加してよく攪拌した（塩化ナトリウム濃度約７．２Ｗ／Ｖ％、約２０％飽和濃度）。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、５１ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｉ２を得た。塩処理前の溶液（濃縮液Ｉ）を指標として、参考例１と同様に、ＴＬＣにて該含有液Ｉ２中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例１１）
参考例９で得られた５０ｍＬの濃縮液Ｉに、硫安を１９．２ｇ添加してよく攪拌した（硫安濃度約３８．４Ｗ／Ｖ％、約５０％飽和濃度）。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、５１ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｉ３を得た。塩処理前の溶液（濃縮液Ｉ）を指標として、参考例１と同様に、ＴＬＣにて該含有液Ｉ３中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例１２）
参考例９と同様にして松樹皮エタノール抽出液を濃縮した後、精製水を用いて容量が１００ｍＬとなるように調整して、抽出液の１／１０容量に相当する濃縮液Ｊを得た。この１００ｍＬの濃縮液Ｊに塩化ナトリウムを１７．９ｇ添加してよく攪拌した（塩化ナトリウム濃度約１７．９Ｗ／Ｖ％、約５０％飽和濃度）。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、９６ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｊを得た。塩処理前の溶液（濃縮液Ｊ）を指標として、参考例１と同様に、ＴＬＣにて該含有液Ｊ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例１３）
松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて９Ｌの松樹皮の水抽出液を得た。
この水抽出液１０ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥質量は７３ｍｇであった。上記抽出液１Ｌ（抽出物粉末乾燥質量７．３ｇ）を２５℃まで放冷した。水で膨潤させた５００ｍＬのダイアイオンＨＰ−２０を充填したカラムに、この水抽出液を通液した。ついで、３Ｌの精製水でカラムを洗浄した後、５００ｍＬの無水エタノールで吸着成分を全て溶出させた。溶出液を減圧濃縮してエタノールを完全に除去した。その後、精製水を添加して容量が５０ｍＬとなるように調整して、抽出液の１／２０容量に相当する濃縮液Ｋを得た。参考例９と同様に塩処理し、析出した不溶物を濾過により除去し、５１ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｌを得た。塩処理前の溶液（濃縮液Ｋ）を指標として、参考例１と同様に、ＴＬＣにて該含有液Ｋ中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例１４）
参考例９と同様にして松樹皮のエタノール抽出液を濃縮した後、精製水を用いて容量が１Ｌとなるように調整して、抽出液の１／１容量に相当する濃縮液Ｌを得た。１Ｌの濃縮液Ｌに塩化ナトリウムを１７９ｇ添加してよく攪拌した（塩化ナトリウム濃度約１７．９Ｗ／Ｖ％、約５０％飽和濃度）。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、９５０ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｌ１を得た。塩処理前の溶液（濃縮液Ｌ）を指標として、参考例１と同様に、ＴＬＣにて該含有液Ｌ１中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例１５）
参考例１４で得られた１Ｌの濃縮液Ｌに、塩化ナトリウムを７２ｇ添加してよく攪拌した（塩化ナトリウム濃度約７．２Ｗ／Ｖ％、約２０％飽和濃度）。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、９３０ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｌ２を得た。塩処理前の溶液（濃縮液Ｌ）を指標として、参考例１と同様に、ＴＬＣにて該含有液Ｌ２中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
（参考例１６）
参考例１４で得られた１Ｌの濃縮液Ｌに、硫安を３８４ｇ添加してよく攪拌した（硫安濃度約３８．４Ｗ／Ｖ％、約５０％飽和濃度）。この溶液を４℃で２４時間静置後、析出した不溶物を濾過により除去し、９７０ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｌ３を得た。塩処理前の溶液（濃縮液Ｌ）を指標として、参考例１と同様に、ＴＬＣにて該含有液Ｌ３中の５量体以上のプロアントシアニジンのおよその量を求めた。結果を表１に併せて示す。
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表１の結果から、濃縮処理を行わない場合（参考例１〜８）、飽和容量７０％以上の塩化ナトリウムで、または飽和容量７０％以上の硫安で処理した粗プロアントシアニジン含有液Ａ、Ｂ、Ｅ、およびＦはいずれも、松樹皮抽出液の６倍希釈液より発色が弱かった。他方、濃縮処理を行った場合、その後希釈せずに、塩処理した粗プロアントシアニジン含有液Ｉ（Ｉ１〜Ｉ３）、Ｊ、およびＫはいずれも、塩処理前の溶液（濃縮液）の６倍希釈液より発色が弱かった（参考例９〜１２）。これらのことから、粗プロアントシアニジン含有液Ａ、Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｉ（Ｉ１〜Ｉ３）、Ｊ、およびＫは、５量体以上のプロアントシアニジンが、塩処理前の量の１／６〜１／８に減少していることがわかる。特に、濃縮処理を行った場合、塩の量を少なくできることがわかる。以下、得られた各粗プロアントシアニジン含有液を、さらなる精製に供した。
【実施例１】  粗プロアントシアニジン含有液Ａを、以下のようにしてさらに精製した。まず、９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ａを、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに通液し、プロアントシアニジンをカラムに吸着させた。このカラムを１Ｌの精製水で洗浄して、カラムに残存する糖類、有機酸などを除去した。次いで１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒でカラムからプロアントシアニジンを溶出し、２００ｍＬの精製プロアントシアニジン含有液Ａを得た。この含有液Ａを凍結乾燥し、乾燥質量を測定した。
次に、得られた精製プロアントシアニジン含有液Ａの各成分の含有量を調べるために、ＯＰＣを含む成分、５量体以上のプロアントシアニジン画分、カテキン類を含む成分、およびカテキン類以外の成分に、以下のようにして分離した。まず、水で膨潤させたセファデックスＬＨ−２０（アマシャムバイオテック株式会社製）２５ｍＬを１５×３００ｍｍのカラムに充填し、５０ｍＬのエタノールで洗浄した。１００ｍｇの上記乾燥粉末を２ｍＬのエタノールに溶解させ、この溶液をカラムに通液して吸着させた後、１００〜８０％（Ｖ／Ｖ）エタノール−水混合溶媒でグラジエント溶出し、１０ｍＬずつ分取した。分取すると同時に、２〜４量体のＯＰＣの標品（２量体：プロアントシアニジンＢ−２（Ｒｆ値：０．６）、３量体：プロアントシアニジンＣ−１（Ｒｆ値：０．４）、および４量体：シンナムタンニンＡ２（Ｒｆ値：０．２））を指標として、各画分中のＯＰＣを上記参考例１と同様にＴＬＣにより検出した。
ＴＬＣによりＯＰＣが含まれることを確認した溶出画分を合わせて、ＯＰＣ画分を得た。
次いで、ＯＰＣが検出されなくなった時点で、３００ｍＬの５０％（Ｖ／Ｖ）水−アセトン混合溶媒を通液し、カラムに吸着した残りの吸着物を溶出させた。
回収した吸着物を含む画分について、カテキン（Ｒｆ値：０．８）を指標として、ＴＬＣを行い、カテキン類を含む画分と５量体以上のプロアントシアニジン画分とに分離した。ＴＬＣの展開条件および検出方法は上記と同様に行った。
カテキン類を含む画分については、さらに、以下のようにしてカテキン類とカテキン類以外の成分とに分離した。まず、カテキン類を含む画分を凍結乾燥し、粉末を得た。この粉末を３ｍＬの水に溶解させ、この溶液を水で膨潤させた２０ｍＬのＭＣＩゲル（三菱化学株式会社製）を１５×３００ｍｍのカラムに充填したカラムに通液して吸着させた。このカラムを水で洗浄した後、１０〜１００％（Ｖ／Ｖ）エタノール−水混合溶媒でグラジエント溶出し、７ｍＬずつ分取した。溶出終了後、カテキンを指標として、各画分中のカテキン類をＴＬＣにより検出し、カテキン類画分とカテキン類以外の成分の画分とに分離した。
上記のようにして得たＯＰＣ画分、５量体以上のプロアントシアニジン画分、カテキン類画分、およびカテキン類以外の成分の画分をそれぞれ凍結乾燥により粉末化し、乾燥質量を測定した。なお、ＯＰＣ画分、５量体以上のプロアントシアニジン画分、カテキン類画分、カテキン類以外の成分の画分、およびその他の成分の画分の総和は、精製プロアントシアニジン含有液Ａの乾燥粉末１００ｍｇに対して９９．２〜９９．６ｍｇであり、ほぼ全量回収されていた。
表２に、精製プロアントシアニジン含有液Ａの乾燥質量、そして精製プロアントシアニジン含有液Ａに含まれるＯＰＣ、５量体以上のプロアントシアニジン、全プロアントシアニジン（ＯＰＣおよび５量体以上のプロアントシアニジンの合計）、およびカテキン類の乾燥質量および含有率、ならびに全プロアントシアニジン中のＯＰＣの割合を示す。表２において、ａは上記固形物質量、ｂはＯＰＣ質量、ｃは５量体以上のプロアントシアニジンの質量、ｄはカテキン類の質量を示す。
【実施例２〜８】
粗プロアントシアニジン含有液Ｂ〜Ｈについて、上記実施例１と同様にして、それぞれ精製プロアントシアニジン含有液Ｂ〜Ｈを得、精製プロアントシアニジン含有液Ｂ〜Ｈの乾燥質量、そして精製プロアントシアニジン含有液Ｂ〜Ｇに含まれるＯＰＣ、５量体以上のプロアントシアニジン、全プロアントシアニジン、およびカテキン類の乾燥質量および含有率、ならびに全プロアントシアニジン中のＯＰＣの割合をそれぞれ測定した。結果を表２に併せて示す。
【実施例９〜１４】
粗プロアントシアニジン含有液Ｉ１〜Ｉ３、Ｊ、Ｋ、およびＬ１について、溶出液として１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒の代わりに、２０％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、それぞれ精製プロアントシアニジン含有液Ｉ１〜Ｉ３、Ｊ、Ｋ、およびＬ１を得、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
【実施例１５】  松樹皮９００ｇに８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１時間還流させながら加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて７．６Ｌの松樹皮の含水エタノール抽出液を得た。
上記抽出液１Ｌを２５℃まで放冷し、減圧濃縮によりエタノールを完全に除去するとともに濃縮した。その後、精製水を添加して容量が５０ｍＬとなるように調整して、抽出液の１／２０容量に相当する濃縮液Ｍを得た。得られた５０ｍＬの濃縮液Ｍにカフェイン０．００５ｇを添加してよく攪拌した（カフェイン濃度約０．０１（Ｗ／Ｖ）％）。この溶液を４℃で２４時間静置後、粗プロアントシアニジン含有液Ｍを得た。
この９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｍについて溶出液として１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒の代わりに、２０％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶液を用いたこと以外は、実施例１と同様にして精製し、精製プロアントシアニジン含有液Ｍを得、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
【実施例１６】  カフェインの代わりに、ベタインを０．００５ｇ添加したこと（ベタイン濃度約０．０１（Ｗ／Ｖ）％）以外は、実施例１５と同様にして精製し、精製プロアントシアニジン含有液Ｎを得、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
【実施例１７】  参考例９で得られた松樹皮の含水エタノール抽出液を１／２０容量まで濃縮した濃縮液Ｉ（５０ｍＬ）に、硫酸マグネシウムを０．０２５ｇ添加してよく攪拌した（硫酸マグネシウム濃度約０．０５（Ｗ／Ｖ）％）。この溶液を４℃で２４時間静置後、粗プロアントシアニジン含有液Ｉ４を得た。この９００ｍＬの粗プロアントシアニジン含有液Ｉ４を実施例１と同様にして精製し、精製プロアントシアニジン含有液Ｉ４を得、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
（比較例１）
粗プロアントシアニジン含有液Ａの代わりに、参考例１の松樹皮の精製水抽出液を用いて、実施例１と同様に、精製し、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
（比較例２）
粗プロアントシアニジン含有液Ａの代わりに、参考例９で得られた松樹皮のエタノール抽出液を用いて、実施例１と同様に、精製し、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
（比較例３）
精製水の代わりに、８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液１Ｌに対して、ベタインを０．００５ｇとなるように添加した溶液（ベタイン含有溶液）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして松樹皮のベタイン抽出液を得た。さらに、粗プロアントシアニジン含有液Ａの代わりに、上記松樹皮のカフェイン抽出物を用いて、実施例１と同様に、精製し、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
（比較例４）
実施例１７の濃縮液Ｉ（５０ｍＬ）に、硫酸マグネシウムを添加する工程において、０．２ｇのアスコルビン酸を添加して、さらに硫酸マグネシウムを０．２ｇ添加し、さらに水酸化カルシウムを０．２ｇ添加して、不溶成分を回収した。この不溶物を塩酸を３％（Ｖ／Ｖ）含有する溶液５０ｍＬに溶解し、実施例１と同様に、精製し、表２に示す各項目について測定した。結果を表２に併せて示す。
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表２の結果からわかるように、塩および／またはアルカロイド処理および合成樹脂系吸着剤処理を行った精製プロアントシアニジン含有液は、プロアントシアニジンを高い割合で含有していた。濃縮工程を経ないで塩処理して得られる精製プロアントシアニジン含有液Ａ〜Ｆ（実施例１〜６）は、特にＯＰＣ含量が高く、乾燥質量換算で３０質量％以上含有していた。すなわち、松樹皮抽出液に最終飽和濃度が３０％以上となるように塩化ナトリウムまたは硫安を添加して得られたプロアントシアニジン含有液は、ＯＰＣおよびカテキン類を高濃度で含有することがわかる。さらに、実施例１〜６の精製プロアントシアニジン含有液Ａ〜Ｆは、５量体以上のプロアントシアニジンの乾燥質量が減少しているにもかかわらず、ＯＰＣの乾燥質量に大きな差はないため、全プロアントシアニジン中に占めるＯＰＣの割合が飛躍的に高くなった。特に、比較例１の未処理の松樹皮抽出物に比べて２倍〜３．５倍と飛躍的に高くなった。以上のことから、一価のアルカリ金属または硫安を所定量添加することによって、プロアントシアニジンを安定化するための補助剤などを添加することなく、植物体からＯＰＣを多く含むプロアントシアニジン含有物を得ることができることがわかった。
また、濃縮工程後に、塩および／またはアルカロイド処理を経て得られる精製プロアントシアニジン含有液Ｉ（Ｉ１〜Ｉ４）、Ｊ、Ｋ、Ｍ、およびＮはいずれも、乾燥質量換算で３５質量％以上のＯＰＣを含有していた（実施例９〜１３および１５〜１７）。
実施例９〜１３の精製プロアントシアニジン含有液Ｉ１〜Ｉ３、Ｊ、およびＫは、抽出液をそのまま塩処理した実施例３の精製プロアントシアニジン含有液Ｃおよび抽出液を濃縮後、もとの濃度に希釈して塩処理を行った実施例１４の精製プロアントシアニジン含有液Ｌ１に比べて、塩処理における塩の使用量が１／９〜１／２０と少ないにもかかわらず、ＯＰＣを高濃度で含有しており、コストおよび環境保全の面からも優れていた。また、カテキン類の含有率も高められていた。さらに、実施例９〜１３の精製プロアントシアニジン含有液Ｉ１〜Ｉ３、Ｊ、およびＫは、比較例１〜４の精製松樹皮抽出液および精製松樹皮の不溶物に比べて、５量体以上のプロアントシアニジン含有量（質量）が低く、ＯＰＣ含有量（質量）はそれほど低くなっていない。そのため、全プロアントシアニジン中に占めるＯＰＣの割合が５７質量％〜７１．５質量％と飛躍的に高くなっていることがわかる。特に、比較例２の濃縮処理および塩処理をしていない松樹皮の含水エタノール抽出液に比べて、固形物中のＯＰＣの含有率は２．３倍〜２．９倍、全プロアントシアニジンに対するＯＰＣの含有率は２．２〜２．８倍と飛躍的に高くなった。実施例９〜１３の精製プロアントシアニジン含有液Ｉ１〜Ｉ３、Ｊ、およびＫは、抽出液をそのまま塩処理した実施例３の精製プロアントシアニジン含有液Ｃおよび抽出液を濃縮後、もとの濃度に希釈して塩処理を行った実施例１４の精製プロアントシアニジン含有液Ｌ１に比べて、固形物中のＯＰＣの含有率は１．３倍〜１．７倍、全プロアントシアニジンに対するＯＰＣの含有率は１．３倍〜１．７倍と高くなった。以上のことから、松樹皮の抽出液を濃縮処理し、塩および／またはアルカロイド処理し、そして合成樹脂系吸着剤処理することによって、塩処理時の塩の使用量が少量で、植物体からＯＰＣを多く含むプロアントシアニジン含有物を得ることができることがわかった。
実施例１５〜１７のアルカロイドおよび二価の金属塩を用いて得られた精製プロアントシアニジン含有液Ｍ、Ｎ、およびＩ４は、アルカロイドで抽出した抽出液（比較例３）および二価の金属塩（硫酸マグネシウムおよび水酸化カルシウム）を添加した後、回収された不溶物（比較例４）に比べて、高いＯＰＣ含有量を有し、５量体以上のプロアントシアニジンが少ないことが分かる。特に、カフェインまたは二価の金属塩を用いた場合は、顕著であった。また、使用したアルカロイドの量または塩の量は、一価の金属塩または硫安を用いた場合よりもごく少量でよく、経済的にも廃液処理の観点からも優れていることが分かる。
【実施例１８】  松樹皮１００ｇに１Ｌの精製水を加え、破砕し、１００℃で１０分間加熱した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水２００ｍＬで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて１．２Ｌの抽出液を得た。この抽出液の一部（５ｍＬ）を減圧濃縮し、得られた抽出物粉末の質量を測定した（３９ｍｇ）。
次いで、上記抽出物粉末を残りの抽出液に加え、湯で全量１．２Ｌに調整した後、２５℃まで放冷し、次いで塩化カルシウムを３０質量％含有する水溶液（ｐＨ５：クエン酸で調整）を２．４Ｌ添加して攪拌した後、４℃にて２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、粗プロアントシアニジン含有液Ｏを得た。この粗プロアントシアニジン含有液Ｏを酢酸でｐＨが３となるように調整した。この溶液に３０ｇのダイアイオンＨＰ−２０を加え、３時間攪拌した後に、濾過し、プロアントシアニジンが吸着した固形分を回収した。この固形分を２５０ｍＬの精製水で洗浄し、１５０ｍＬの２０％（Ｖ／Ｖ）エタノール水溶液を加え、１時間攪拌した後に濾過し、濾液を回収し、精製プロアントシアニジン含有液Ｏとした。この精製プロアントシアニジン含有液Ｏを減圧濃縮乾固して、０．２ｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末を得た。１００ｍｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末を用いて、上記実施例１と同様にＯＰＣおよびカテキン類の含有率を測定したところ、乾燥質量換算でＯＰＣを４８．１質量％およびカテキン類を１５．２質量％含有していた。
【実施例１９】  松樹皮１００ｇに１Ｌの精製水を加え、破砕し、１００℃で１０分間加熱した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水２００ｍＬで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて１．２Ｌの抽出液を得た。この抽出液の一部（５ｍＬ）を減圧濃縮し、得られた抽出物粉末の質量を測定した（３８ｍｇ）。
次いで、上記抽出物粉末を残りの抽出液に加え、湯で全量１．２Ｌに調整した後、２５℃まで放冷し、４０ｇのダイアイオンＨＰ−２０を加え、３時間攪拌した後に濾過し、プロアントシアニジンが吸着した固形分を回収した。この固形分を２５０ｍＬの精製水で洗浄し、１５０ｍＬの２０％（Ｖ／Ｖ）エタノール水溶液を加え、１時間攪拌した後に濾過し、濾液を回収した。次いで塩化ナトリウムを飽和濃度（約３５．８（Ｗ／Ｖ）％）となるように添加して攪拌した後、４℃にて２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、プロアントシアニジン含有液Ｐを得た。このプロアントシアニジン含有液Ｐを透析して脱塩し、水に置換して塩類を除去した。このプロアントシアニジン含有液Ｐを減圧濃縮乾固して、１．３ｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末を得た。１００ｍｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末Ｐを用いて、上記実施例１と同様にＯＰＣおよびカテキン類の含有率を測定したところ、乾燥質量換算でＯＰＣを４０．１質量％以上およびカテキン類を１３．１質量％含有していた。
【実施例２０】  松樹皮１００ｇに８０（Ｖ／Ｖ）％エタノール水溶液１Ｌを加え、ブレンダーで破砕した後、８０℃で１時間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水２００ｍＬで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて１．２Ｌの抽出液を得た。この抽出液の一部（５ｍＬ）を減圧濃縮し、得られた抽出物粉末の質量を測定した（４９ｍｇ）。
次いで、上記抽出物粉末を残りの抽出液に加え、減圧濃縮してエタノールを完全に除去した。その後、精製水を加え、容量が１００ｍＬとなるように調製して、２５℃まで放冷し、抽出液の１／１２容量に相当する濃縮液を得た。得られた濃縮液１００ｍＬに塩化ナトリウムを飽和濃度（約３５．８（Ｗ／Ｖ）％）となるように添加してよく攪拌した。この溶液を４℃にて２４時間静置後、濾過し、粗プロアントシアニジン含有液Ｑを得た。この粗プロアントシアニジン含有液Ｑに９００ｍＬの精製水および１０ｇのダイアイオンＨＰ−２０を加え、３時間攪拌した。その後、濾過し、プロアントシアニジンが吸着した固形分を回収した。この固形分を２５０ｍＬの精製水で洗浄し、１５０ｍＬの２０％（Ｖ／Ｖ）エタノール水溶液を加え、１時間攪拌した後に濾過し、濾液を回収し、精製プロアントシアニジン含有液Ｑとした。この精製プロアントシアニジン含有液Ｑを減圧濃縮乾固して、０．２ｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末を得た。１００ｍｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末を用いて、上記実施例１と同様にＯＰＣおよびカテキン類の含有率を測定したところ、乾燥質量換算でＯＰＣを５１．２質量％以上およびカテキン類を１３．１質量％含有していた。
【実施例２１】  松樹皮１００ｇに精製水１Ｌを加え、ブレンダーで破砕した後、１００℃で１０分間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水２００ｍＬで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて１．２Ｌの抽出液を得た。この抽出液の一部（５ｍＬ）を減圧濃縮し、得られた抽出物粉末の質量を測定した（３６ｍｇ）。
次いで、上記抽出物粉末を残りの抽出液に加え、減圧濃縮した。その後、精製水を加え、容量が１００ｍＬとなるように調製して、２５℃まで放冷し、抽出液の１／１２容量に相当する濃縮液を得た。得られた濃縮液１００ｍＬに塩化カルシウムを５０質量％含有する水溶液（ｐＨ５：クエン酸で調整）を１００ｍＬ添加して攪拌した。この溶液を４℃にて２４時間静置後、濾過し、粗プロアントシアニジン含有液Ｒを得た。この粗プロアントシアニジン含有液Ｒに酢酸と精製水とを加えてｐＨ３の溶液１Ｌを調製した。この溶液に１０ｇのダイアイオンＨＰ−２０を加え、３時間攪拌した。その後、濾過し、プロアントシアニジンが吸着した固形分を回収した。この固形分を２５０ｍＬの精製水で洗浄し、１５０ｍＬの２０％（Ｖ／Ｖ）エタノール水溶液を加え、１時間攪拌した後に濾過し、濾液を回収し、精製プロアントシアニジン含有液Ｒとした。この精製プロアントシアニジン含有液Ｒを減圧濃縮乾固して、０．３ｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末Ｒを得た。１００ｍｇのプロアントシアニジン含有乾燥粉末Ｒを用いて、上記実施例１と同様にＯＰＣおよびカテキン類の含有率を測定したところ、乾燥質量換算でＯＰＣを４６．２質量％およびカテキン類を１０．１質量％含有していた。
【産業上の利用可能性】  本発明の方法によれば、植物体の抽出物または搾汁を塩および／またはアルカロイドで処理した後に、合成樹脂系吸着剤で処理する、あるいは植物体の抽出物または搾汁を合成樹脂系吸着剤で処理した後に、塩および／またはアルカロイドで処理することによって、効率的に生理活性が高いＯＰＣを高い割合で含有するプロアントシアニジン含有物を容易に得ることができる。この方法は、コストおよび環境保全の面から特に有用である。得られたＯＰＣ含量が高いプロアントシアニジン含有物は、カテキン類も含有する。そのため、ＯＰＣがカテキン類の作用を活性化させるという相乗効果を有する。これらのプロアントシアニジン含有物は、血管増強、高血圧、冷え性などの改善に効果があり、食品、化粧品、医薬品の製造原料として非常に有用である。
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月16日(2005.11.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物体の抽出物または搾汁から得られるプロアントシアニジン含有物の製造方法であって、
塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理し、不溶物を除去する工程、および
合成樹脂系吸着剤で処理する工程
の組み合わせを包含する、方法。
【請求項２】
前記塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理し、不溶物を除去する工程の前および後の少なくとも一方に、合成樹脂系吸着剤による処理以外の濃縮処理を行う工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
植物体の抽出物または搾汁を濃縮処理して濃縮物を得る工程；該濃縮物を塩およびアルカロイドのうちの少なくとも一方で処理し、不溶物を除去して、粗プロアントシアニジン含有物を得る工程；および該粗プロアントシアニジン含有物を合成樹脂系吸着剤で処理する工程を包含する、プロアントシアニジン含有物の製造方法。
【請求項４】
前記塩が、一価のアルカリ金属、二価のアルカリ金属塩、および硫安からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１から３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項５】
前記アルカロイドが、ベタイン、カフェイン、およびこれらの誘導体からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項１から３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項６】
請求項１から５のいずれかの項に記載のプロアントシアニジン含有物の製造方法であって、
該プロアントシアニジン含有物が、オリゴメリック・プロアントシアニジンを乾燥質量換算で２０質量％以上含有する、方法。
【国際調査報告】
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2004080995.tif 000006
2004080995.tif 000007
2004080995.tif 000008
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