(57)【要約】ヒト肥満細胞からＲＮＡを抽出し、該ＲＮＡを用いてＤＮＡチップ解析またはＲＴ−ＰＣＲ解析を行うことにより、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを多数同定した。これらのＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニストおよび機能修飾物質、該ＧＰＣＲを特異的に認識する抗体、該ＧＰＣＲの発現を抑制するアンチセンスＤＮＡやｓｉＲＮＡは、ヒト肥満細胞の活性化抑制剤およびアレルギー性疾患の治療薬となる。これらのＧＰＣＲを発現する細胞または細胞の膜画分を用いて、ヒト肥満細胞の活性化抑制剤やアレルギー性疾患の治療薬をスクリーニングすることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、システイニルロイコトリエン受容体１（ＣｙｓＬＴＲ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体９１（ＧＰＲ９１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３４（ＧＰＲ３４）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様配列２（ＥＭＲ２）、血小板活性化因子受容体（ＰＡＦＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０５（ＧＰＲ１０５）、７回膜貫通スーパーファミリー・メンバー１（ＴＭ７ＳＦ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３７（ＧＰＲ３７）、ＣＤ９７抗原（ＣＤ９７）、メラノコルチン１受容体（ＭＣ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体ＦＩＲＥ（ＦＩＲＥ）、フォルミルペプチド受容体１（ｆＭＬＰ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体６５（ＧＰＲ６５）、プロスタグランジンＥ受容体３オルタネイティブバリアントｈ（ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ）、プリン受容体Ｐ２Ｙ８（Ｐ２Ｙ８）、ドーパミン受容体Ｄ２（Ｄ２）、内皮分化リゾホスファチジン酸Ｇ蛋白質共役型受容体２（ＥＤＧ２）、アデノシンＡ３受容体（Ａ３）、補体第５成分受容体１（Ｃ５Ｒ１）、オプシン３（ＯＰＮ３）、Ｇ蛋白質共役型受容体２７（ＧＰＲ２７）、Ｇ蛋白質共役型受容体４４（ＣＲＴＨ２）、内皮分化スフィンゴ脂質Ｇ蛋白質共役型受容体１（ＥＤＧ１）、フォルミルペプチド受容体様２（ＦＰＲＬ２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体様２（ＣＣＲＬ２）、メタボトロピックグルタミン酸受容体６（ｍｇｌｕ６）、カンナビノイド受容体２（ＣＢ２）、Ｇ蛋白質共役型受容体３９（ＧＰＲ３９）、プリン受容体Ｐ２Ｙ５（Ｐ２Ｙ５）、アデノシンＡ１受容体（Ａ１）、ピリミジン受容体Ｐ２Ｙ４（Ｐ２Ｙ４）、プロスタグランジンＥ受容体３オルタネイティブバリアントｊ（ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａ）、１型アンジオテンシン受容体（ＡＴ１Ｂ）、Ｂ型エンドセリン受容体（ＥＴＢ）、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体（ＧＮＲＨＲ）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体２（ＣＥＬＳＲ２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体７（ＣＣＲ７）、ヒスタミン受容体Ｈ４（Ｈ４）、Ｇ蛋白質共役型受容体１２（ＧＰＲ１２）、ヒスタミン受容体Ｈ１（Ｈ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３２（ＧＰＲ３２）、腫瘍内皮細胞マーカー５（ＴＥＭ５）、Ｇ蛋白質共役型受容体５８（ＧＰＲ５８）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体１（ＣＥＬＳＲ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体８５（ＧＰＲ８５）、モチリン受容体（Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ）、Ｇ蛋白質共役型受容体６４（ＨＥ６）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体３（ＣＥＬＳＲ３）、カルシトニン受容体様（ＣＡＬＣＲＬ）、網膜色素上皮由来ロドプシンホモログ（ＲＲＨ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１８（ＧＰＲ１８）、Ｇ蛋白質共役型受容体３５（ＧＰＲ３５）、プリン受容体Ｐ２Ｙ１０（Ｐ２Ｙ１０）、ＦＬＪ４０２７９（Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６）、Ｇ蛋白質共役型受容体１４１（ＧＰＲ１４１）、精巣下降関連Ｇ蛋白質共役型受容体（ｈＲＵＰ１６）、内膜肥厚関連受容体（ＩＴＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体ＭＲＧＸ２（ＭＲＧＸ２）、トレースアミン受容体１（ＳＮＯＲＦ３３）、７回膜貫通受容体ＣＢＲＣ７ＴＭ＿３７５（Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８）、アドレノ��デュリン受容体（Ｇ１０ｄ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０７（ＧＰＲ１０７）、Ｇ蛋白質共役型受容体１２６（ＧＰＲ１２６）、Ｇ蛋白質共役型受容体４１（ＧＰＲ４１）、Ｇ蛋白質共役型受容体４３（ＧＰＲ４３）、Ｇ蛋白質共役型受容体６８（ＧＰＲ６８）、ガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０１９（ＨＥＯＡＤ５４）、推定Ｇ蛋白質共役型受容体ｈＧＰＣＲ１０（ｈＲＵＰ９）、膜型プロゲスチン受容体α（ｍＰＲａ）、膜型プロゲスチン受容体γ（ｍＰＲｇ）、推定Ｇ蛋白質共役型受容体ＧＰＣＲ１（ＳＲＬ）、血小板活性化受容体ホモログＨ９６３（Ｈ９６３）、プロスタグランジンＥ受容体４（ＥＰ４）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体１（ＣＣＲ１）、ドーパミン受容体Ｄ５（Ｄ５）、ロイコトリエンＢ４受容体（ＬＴＢ４Ｒ）およびケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）受容体５（ＣＸＣＲ５）からなる群から選ばれる受容体を発現する細胞または該細胞の膜画分と試験物質とを接触させる工程を含む、該受容体に作用し、かつヒト肥満細胞に対し（ａ）アポトーシス誘導、（ｂ）活性化抑制、（ｃ）脱顆粒抑制、（ｄ）炎症性メディエーター産生抑制、（ｅ）サイトカイン産生抑制および（ｆ）ケモカイン産生抑制のうちの少なくとも１つの作用を示す物質のスクリーニング方法。
【請求項２】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ６５、Ｐ２Ｙ８、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＥＤＧ１、ＧＰＲ３９、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＥＴＢ、Ｈ４、ＣＥＬＳＲ２、ＴＥＭ５、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ４３、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、Ｈ９６３、ＥＰ４およびＬＴＢ４Ｒからなる群から選ばれる、ヒト肥満細胞をＩｇＥ受容体を介した活性化刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項３】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＰＡＦＲ、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ｃ５Ｒ１、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７およびＥＰ４からなる群から選ばれる、ヒト肥満細胞をリポポリサッカライド刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＰＡＦＲ、Ａ２ｂ、ＣＤ９７、ＥＤＧ２、ＯＰＮ３、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、Ｈ４、ＧＰＲ３２およびＣＥＬＳＲ１からなる群から選ばれる、ヒト肥満細胞をインターフェロンγ刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項５】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ａ３、ＯＰＮ３、ＥＤＧ１、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＣＣＲ７、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ１およびＥＰ４からなる群から選ばれるヒト肥満細胞をインターフェロンγおよびリポポリサッカライドで共刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項６】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、Ｈ４、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれるヒト肥満細胞をグルココルチコイド処理することによりで発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項７】
ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、補体第３成分受容体１（Ｃ３ａＲ１）、ＧＰＲ３４、β２アドレナリン受容体（β２）、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、エプスタイン−バーウイルス誘導遺伝子２（ＥＢＩ２）、スロンビン受容体（ＰＡＲ１）、Ｈ４、Ｇ蛋白質共役型受容体ＲＥ２（ＲＥ２）、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体を発現する細胞または該細胞の膜画分と試験物質とを接触させる工程を含む、該受容体に作用し、グルココルチコイド作用を制御できる物質のスクリーニング方法。
【請求項８】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
【請求項９】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＡ２ａまたはＨＥＯＡＤ５４に対するアゴニストを用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
【請求項１０】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、Ｄ２、Ｄ５、ＥＤＧ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＰ４、ＥＴＢ、Ｈ１、Ｈ４およびＧＰＲ４３からなる群から選ばれる受容体に対するアンタゴニストを用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制、（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
【請求項１１】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
【請求項１２】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＡ２ａまたはＨＥＯＡＤ５４に対するアゴニストを用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
【請求項１３】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、Ｄ２、Ｄ５、ＥＤＧ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＰ４、ＥＴＢ、Ｈ１、Ｈ４およびＧＰＲ４３からなる群から選ばれる受容体に対するアンタゴニストを用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
【請求項１４】
ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を用いて、細胞に対するグルココルチコイド作用を制御する方法。
【請求項１５】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬおよびＨ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
【請求項１６】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＡ２ａまたはＨＥＯＡＤ５４に対するアゴニストを有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
【請求項１７】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、Ｄ２、Ｄ５、ＥＤＧ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＰ４、ＥＴＢ、Ｈ１、Ｈ４およびＧＰＲ４３からなる群から選ばれる受容体に対するアンタゴニストを有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
【請求項１８】
ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、β２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ１０５、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＣＥＬＳＲ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を有効成分として含有する、グルココルチコイド作用の制御剤。
【請求項１９】
アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患の治療用の医薬組成物の製造のための、ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質の使用。
【請求項２０】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬＨ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対して特異的に反応し、かつヒト肥満細胞に対し、以下の（ａ）〜（ｆ）のうちの少なくとも１つの作用を有する抗体。
（ａ）アポトーシスの誘導
（ｂ）活性化の抑制
（ｃ）脱顆粒の抑制
（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制
（ｅ）サイトカインの産生抑制
（ｆ）ケモカインの産生抑制
【請求項２１】
ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体に対して特異的に反応し、かつグルココルチコイドの作用を制御する効果を有する抗体。
【請求項２２】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対して特異的に反応する抗体を用いて、肥満細胞の検出または単離を行う方法。
【請求項２３】
請求項２０に記載の抗体を用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
【請求項２４】
請求項２０に記載の抗体を用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
【請求項２５】
請求項２１に記載の抗体を用いて、細胞に対し、グルココルチコイドの作用を制御する方法。
【請求項２６】
請求項２０に記載の抗体を有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
【請求項２７】
請求項２１に記載の抗体を有効成分として含有する、グルココルチコイドの作用の制御剤。
【請求項２８】
アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患の治療用の医薬組成物の製造のための、請求項２０に記載の抗体の使用。
【請求項２９】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
【請求項３０】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
【請求項３１】
ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いて、ヒト肥満細胞に対するグルココルチコイドの作用を制御する方法。
【請求項３２】
ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを有効成分として含有する（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
【請求項３３】
ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遣伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを有効成分として含有する、グルココルチコイドの作用の制御剤。
【請求項３４】
アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患の治療用の医薬組成物の製造のための、ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体（以下ＧＰＣＲと略す）を標的とした薬剤およびそのスクリーニング方法に関する。
【背景技術】  肥満細胞は各種刺激により活性化され、脱顆粒を起こし、数多くの炎症性メディエーターを遊離、産生することが知られている〔黒沢元博編，「肥満細胞の臨床」，先端医学社，ｐ１４２およびｐ５５９（２００１）；Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２，１１５−１４０（２００２）〕。主なものはアミン類、アラキドン酸代謝産物、プロテアーゼ、サイトカイン、ケモカインなど多種多様である。例えば、肥満細胞に抗原が認識されると、脱顆粒によりヒスタミンやトリプターゼが速やかに放出されると共に、プロスタグランジンＤ２（ＰＧＤ２）、ロイコトリエン（ＬＴ）、血小板活性化因子（ＰＡＦ）などのケミカルメディエーター、およびマクロファージ炎症性蛋白質（ＭＩＰ）−１α等の各種のケモカインや顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）等の各種サイトカインが新たに合成され、放出されることが知られている。また、これまで好酸球が作ると考えられていた細胞障害性蛋白質である主要塩基性蛋白質（ｍａｊｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ）に関しても、ヒトの場合は肥満細胞が多量につくることが最近明らかになっている〔Ｂｌｏｏｄ，９８，１１２７−１１３４（２００１）〕。このように、肥満細胞は種々のアレルギー疾患の病態形成において主要な役割を演じていると考えられることから、肥満細胞の活性化を制御することにより、アレルギー疾患の治療が可能であると考えられる。
肥満細胞からの炎症性メディエーター遊離を抑制する作用を有する種々の既存のアレルギー治療薬が知られているが、従来はげっ歯類の肥満細胞を用いた研究が主体であり、ヒト肥満細胞に対して実際に効果があるかについては充分検討されていなかった。しかし、最近、ヒト肥満細胞の調製法が確立され、既存薬のヒト肥満細胞に対する作用を解析することが可能になり、げっ歯類肥満細胞に対する作用と比較することが可能になった。その結果、げっ歯類肥満細胞とヒト肥満細胞では、薬剤への反応性が異なることが明らかになっている〔黒沢元博編，「肥満細胞の臨床」，先端医学社，ｐ５５９（２００１）〕。例えば、炎症性メディエーター遊離抑制薬として使用されているクロモグリク酸ナトリウムは、ラット腹腔肥満細胞においてはＩｇＥ依存性の炎症性メディエーター遊離を顕著に抑制するが、ヒト肥満細胞に対する作用は強いものではなかった〔Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２８，１２２８−１２３６（１９９８）〕。塩酸アゼラスチンは、高濃度においてはヒト培養肥満細胞からのヒスタミン、ＰＧＤ２、ＬＴの遊離、ＧＭ−ＣＳＦおよびＭＩＰ−１αの産生を抑制するが、いずれの活性も強いものではなかった。また、抗サイトカイン薬として使用されているトシル酸スプラタストは、ラット肥満細胞に対して炎症性メディエーター遊離抑制作用を示したが、ヒト肥満細胞に対する作用はなかった〔Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ，２８，１２２８−１２３６（１９９８）〕。
一方、肥満細胞に発現しているＧＰＣＲに作用する薬剤が、ヒト培養肥満細胞からの炎症性メディエーターの産生を顕著に抑制することが知られている。例えば、β２アドレナリン受容体刺激薬イソプロテレノールは１０ｎｍｏｌ／ｌの低濃度で、ヒト培養肥満細胞からのヒスタミン、ＬＴ、ＰＧＤ２、ＧＭ−ＣＳＦおよびＭＩＰ−１αの遊離を８０％以上抑制する。〔Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０３，４２１−４２６（１９９９）〕。したがって、ヒト肥満細胞上に発現しているＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニストあるいは機能修飾物質は、ヒト肥満細胞からの炎症性メディエーターの産生を抑制し、肥満細胞が関与する疾患の治療に有効と考えられる。また、ヒスタミンの投与により、ヒト肥満細胞のアポトーシスが促進されること〔Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１２，５３−６０（２００３）〕およびα−メラノサイト刺激ホルモンにより、肥満細胞のアポトーシスが誘導されること〔ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，８７，８７−９３（２００３）〕などから、肥満細胞に発現しているＧＰＣＲに作用する薬剤は、ヒト肥満細胞のアポトーシスを誘導すると考えられる。
しかし、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲに関する情報は、限られていた。具体的には、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲとしては、補体第３成分受容体１、β２アドレナリン受容体、アデノシンＡ２ｂ受容体、プロスタグランジンＥ受容体２、プロスタグランジンＥ受容体３サブタイプ１ａ、プロスタグランジンＥ受容体３オルタナティブバリアントｆ（別名プロスタグランジンＥ受容体３サブタイプ１ｂ）、エプスタイン−バーウイルス誘導遺伝子１（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｅｎｅ  １）、エプスタイン−バーウイルス誘導遺伝子２（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｇｅｎｅ  ２）、Ｇ蛋白質共役型受容体ＲＥ２、Ｇ蛋白質共役型受容体３５、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン受容体３、スロンビン受容体等が知られている〔Ｂｌｏｏｄ，９８，１１２７−１１３４（２００１）；Ｂｌｏｏｄ，１００，３８６１−３８６８（２００２）；ＢＭＣ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３，５（２００２）〕。ヒト臍帯血由来培養肥満細胞とマウス骨髄由来培養肥満細胞で発現する遺伝子について比較された結果、ヒトとマウスでは発現する遺伝子が必ずしも一致しないことが明らかになった〔Ｂｌｏｏｄ，１００，３８６１−３８６８（２００２）〕。上述したように、薬剤の反応性にも種差がある。したがって、ＧＰＣＲ遺伝子に関しても、動物の肥満細胞で発現しているＧＰＣＲがヒトの肥満細胞で発現している保証はなく、ヒトの肥満細胞での発現を調べる必要があった。
【発明の開示】
本発明は、ヒト肥満細胞で発現しているＧＰＣＲを明らかにし、これらのＧＰＣＲを標的とした、ヒト肥満細胞の活性化抑制剤およびアレルギー性疾患の治療薬、ならびにこれらのスクリーニング法を提供することを目的としている。
本発明者らは、ヒト臍帯血由来培養肥満細胞およびヒト末梢血由来培養肥満細胞等の各種ヒト肥満細胞を各種条件で培養後、ＲＮＡを抽出し、該ＲＮＡを用いてＤＮＡチップ解析またはＲＴ−ＰＣＲ解析を行うことにより、これまでヒト肥満細胞で発現することが知られていなかったＧＰＣＲを同定することに成功し、該ＧＰＣＲを標的とした薬剤や抗体およびそのスクリーニング法を提供することにより、本発明を完成するに至った。
本発明は、以下の（１）〜（３４）に関する。
（１）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、システイニルロイコトリエン受容体１（ＣｙｓＬＴＲ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体９１（ＧＰＲ９１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３４（ＧＰＲ３４）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様配列２（ＥＭＲ２）、血小板活性化因子受容体（ＰＡＦＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０５（ＧＰＲ１０５）、７回膜貫通スーパーファミリー・メンバー１（ＴＭ７ＳＦ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３７（ＧＰＲ３７）、ＣＤ９７抗原（ＣＤ９７）、メラノコルチン１受容体（ＭＣ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体ＦＩＲＥ（ＦＩＲＥ）、フォルミルペプチド受容体１（ｆＭＬＰ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体６５（ＧＰＲ６５）、プロスタグランジンＥ受容体３オルタネイティブバリアントｈ（ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ）、プリン受容体Ｐ２Ｙ８（Ｐ２Ｙ８）、ドーパミン受容体Ｄ２（Ｄ２）、内皮分化リゾホスファチジン酸Ｇ蛋白質共役型受容体２（ＥＤＧ２）、アデノシンＡ３受容体（Ａ３）、補体第５成分受容体１（Ｃ５Ｒ１）、オプシン３（ＯＰＮ３）、Ｇ蛋白質共役型受容体２７（ＧＰＲ２７）、Ｇ蛋白質共役型受容体４４（ＣＲＴＨ２）、内皮分化スフィンゴ脂質Ｇ蛋白質共役型受容体１（ＥＤＧ１）、フォルミルペプチド受容体様２（ＦＰＲＬ２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体様２（ＣＣＲＬ２）、メタボトロピックグルタミン酸受容体６（ｍｇｌｕ６）、カンナビノイド受容体２（ＣＢ２）、Ｇ蛋白質共役型受容体３９（ＧＰＲ３９）、プリン受容体Ｐ２Ｙ５（Ｐ２Ｙ５）、アデノシンＡ１受容体（Ａ１）、ピリミジン受容体Ｐ２Ｙ４（Ｐ２Ｙ４）、プロスタグランジンＥ受容体３オルタネイティブバリアントｊ（ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａ）、１型アンジオテンシン受容体（ＡＴ１Ｂ）、Ｂ型エンドセリン受容体（ＥＴＢ）、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体（ＧＮＲＨＲ）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体２（ＣＥＬＳＲ２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体７（ＣＣＲ７）、ヒスタミン受容体Ｈ４（Ｈ４）、Ｇ蛋白質共役型受容体１２（ＧＰＲ１２）、ヒスタミン受容体Ｈ１（Ｈ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３２（ＧＰＲ３２）、腫瘍内皮細胞マーカー５（ＴＥＭ５）、Ｇ蛋白質共役型受容体５８（ＧＰＲ５８）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体１（ＣＥＬＳＲ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体８５（ＧＰＲ８５）、モチリン受容体（Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ）、Ｇ蛋白質共役型受容体６４（ＨＥ６）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体３（ＣＥＬＳＲ３）、カルシトニン受容体様（ＣＡＬＣＲＬ）、網膜色素上皮由来ロドプシンホモログ（ＲＲＨ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１８（ＧＰＲ１８）、Ｇ蛋白質共役型受容体３５（ＧＰＲ３５）、プリン受容体Ｐ２Ｙ１０（Ｐ２Ｙ１０）、ＦＬＪ４０２７９（Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６）、Ｇ蛋白質共役型受容体１４１（ＧＰＲ１４１）、精巣下降関連Ｇ蛋白質共役型受容体（ｈＲＵＰ１６）、内膜肥厚関連受容体（ＩＴＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体ＭＲＧＸ２（ＭＲＧＸ２）、トレースアミン受容体１（ＳＮＯＲＦ３３）、７回膜貫通受容体ＣＢＲＣ７ＴＭ＿３７５（Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８）、ア��レノメデュリン受容体（Ｇ１０ｄ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０７（ＧＰＲ１０７）、Ｇ蛋白質共役型受容体１２６（ＧＰＲ１２６）、Ｇ蛋白質共役型受容体４１（ＧＰＲ４１）、Ｇ蛋白質共役型受容体４３（ＧＰＲ４３）、Ｇ蛋白質共役型受容体６８（ＧＰＲ６８）、ガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０１９（ＨＥＯＡＤ５４）、推定Ｇ蛋白質共役型受容体ｈＧＰＣＲ１０（ｈＲＵＰ９）、膜型プロゲスチン受容体α（ｍＰＲａ）、膜型プロゲスチン受容体γ（ｍＰＲｇ）、推定Ｇ蛋白質共役型受容体ＧＰＣＲ１（ＳＲＬ）、血小板活性化受容体ホモログＨ９６３（Ｈ９６３）、プロスタグランジンＥ受容体４（ＥＰ４）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体１（ＣＣＲ１）、ドーパミン受容体Ｄ５（Ｄ５）、ロイコトリエンＢ４受容体（ＬＴＢ４Ｒ）およびケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）受容体５（ＣＸＣＲ５）からなる群から選ばれる受容体を発現する細胞または該細胞の膜画分と試験物質とを接触させる工程を含む、該受容体に作用し、かつヒト肥満細胞に対し（ａ）アポトーシス誘導、（ｂ）活性化抑制、（ｃ）脱顆粒抑制、（ｄ）炎症性メディエーター産生抑制、（ｅ）サイトカイン産生抑制および（ｆ）ケモカイン産生抑制のうちの少なくとも１つの作用を示す物質のスクリーニング方法。
（２）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ６５、Ｐ２Ｙ８、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＥＤＧ１、ＧＰＲ３９、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＥＴＢ、Ｈ４、ＣＥＬＳＲ２、ＴＥＭ５、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ４３、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、Ｈ９６３、ＥＰ４およびＬＴＢ４Ｒからなる群から選ばれる、ヒト肥満細胞をＩｇＥ受容体を介した活性化刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
（３）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＰＡＦＲ、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ｃ５Ｒ１、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７およびＥＰ４からなる群から選ばれる、ヒト肥満細胞をリポポリサッカライド刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
（４）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＰＡＦＲ、Ａ２ｂ、ＣＤ９７、ＥＤＧ２、ＯＰＮ３、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、Ｈ４、ＧＰＲ３２およびＣＥＬＳＲ１からなる群から選ばれる、ヒト肥満細胞をインターフェロンγ刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
（５）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ａ３、ＯＰＮ３、ＥＤＧ１、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＣＣＲ７、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ１およびＥＰ４からなる群から選ばれるヒト肥満細胞をインターフェロンγおよびリポポリサッカライドで共刺激することにより発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
（６）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体が、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、Ｈ４、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれるヒト肥満細胞をグルココルチコイド処理することによりで発現が変動する受容体である請求項１に記載のスクリーニング方法。
（７）ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、補体第３成分受容体１（Ｃ３ａＲ１）、ＧＰＲ３４、β２アドレナリン受容体（β２）、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、エプスタイン−バーウイルス誘導遺伝子２（ＥＢＩ２）、スロンビン受容体（ＰＡＲ１）、Ｈ４、Ｇ蛋白質共役型受容体ＲＥ２（ＲＥ２）、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体を発現する細胞または該細胞の膜画分と試験物質とを接触させる工程を含む、該受容体に作用し、グルココルチコイド作用を制御できる物質のスクリーニング方法。
（８）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
（９）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＡ２ａまたはＨＥＯＡＤ５４に対するアゴニストを用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
（１０）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、Ｄ２、Ｄ５、ＥＤＧ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＰ４、ＥＴＢ、Ｈ１、Ｈ４およびＧＰＲ４３からなる群から選ばれる受容体に対するアンタゴニストを用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制、（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
（１１）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
（１２）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＡ２ａまたはＨＥＯＡＤ５４に対するアゴニストを用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
（１３）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｄ２、ＥＤＧ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＴＢ、Ｈ１およびＧＰＲ４３からなる群から選ばれる受容体に対するアンタゴニストを用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
（１４）ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を用いて、細胞に対するグルココルチコイド作用を制御する方法。
（１５）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬおよびＨ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
（１６）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＡ２ａまたはＨＥＯＡＤ５４に対するアゴニストを有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
（１７）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体であるＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、Ｄ２、Ｄ５、ＥＤＧ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＰ４、ＥＴＢ、Ｈ１、Ｈ４およびＧＰＲ４３からなる群から選ばれる受容体に対するアンタゴニストを有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾息の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
（１８）ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、β２、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ１０５、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＣＥＬＳＲ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を有効成分として含有する、グルココルチコイド作用の制御剤。
（１９）アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患の治療用の医薬組成物の製造のための、ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対するアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質の使用。
（２０）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬＨ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対して特異的に反応し、かつヒト肥満細胞に対し、以下の（ａ）〜（ｆ）のうちの少なくとも１つの作用を有する抗体。
（ａ）アポトーシスの誘導
（ｂ）活性化の抑制
（ｃ）脱顆粒の抑制
（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制
（ｅ）サイトカインの産生抑制
（ｆ）ケモカインの産生抑制
（２１）ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体に対して特異的に反応し、かつグルココルチコイドの作用を制御する効果を有する抗体。
（２２）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体に対して特異的に反応する抗体を用いて、肥満細胞の検出または単離を行う方法。
（２３）請求項２０に記載の抗体を用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
（２４）（２０）に記載の抗体を用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
（２５）（２１）に記載の抗体を用いて、細胞に対し、グルココルチコイドの作用を制御する方法。
（２６）（２０）に記載の抗体を有効成分として含有する、（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
（２７）請求項２１に記載の抗体を有効成分として含有する、グルココルチコイドの作用の制御剤。
（２８）アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患の治療用の医薬組成物の製造のための、（２０）に記載の抗体の使用。
（２９）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いて、ヒト肥満細胞に対し、（ａ）アポトーシスの誘導、（ｂ）活性化の抑制、（ｃ）脱顆粒の抑制、（ｄ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｅ）サイトカインの産生抑制および（ｆ）ケモカインの産生抑制のうちの少なくとも１つを行う方法。
（３０）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いて、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患を治療する方法。
（３１）ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを用いて、ヒト肥満細胞に対するグルココルチコイドの作用を制御する方法。
（３２）ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを有効成分として含有する（ａ）〜（ｊ）のいずれかの医薬。
（ａ）ヒト肥満細胞のアポトーシス誘導剤
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
（３３）ヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧ蛋白質共役型受容体である、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡを有効成分として含有する、グルココルチコイドの作用の制御剤。
（３４）アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患またはアレルギー性疾患の治療用の医薬組成物の製造のための、ヒト肥満細胞で発現するＧ蛋白質共役型受容体である、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、Ｈ１、ＧＰＲ３２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬ、Ｈ９６３、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５からなる群から選ばれる受容体の発現を抑制する、該受容体をコードする遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたはアンチセンスＤＮＡの使用。
以下に本発明を詳細に説明する。
（１）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲの同定
ヒト肥満細胞は、ヒトの肺、皮膚、胎児肝臓などから公知の方法〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６９，１５３（１９９４）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３８，８６１（１９８７）；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０７，３２２（２００１）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．，２４０，１０１（２０００）〕により調製することができる。また、公知の方法〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７，３４３，（１９９６）；Ｂｌｏｏｄ，９１，１８７（１９９８）；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０６，１４１（２０００）；Ｂｌｏｏｄ，９７，１０１６（２００１）；Ｂｌｏｏｄ，９８，１１２７（２００１）；Ｂｌｏｏｄ，１００，３８６１（２００２）；Ｂｌｏｏｄ，９７，２０４５（２００１）〕に従って、ヒトの臍帯血、末梢血、骨髄、肺あるいは皮膚から調製した単核球を、幹細胞因子（以下、ＳＣＦと略す）の存在下で培養し、肥満細胞に分化させることにより、調製することができる。このようにして単核球を培養により分化させて調製した肥満細胞を培養肥満細胞ともよぶ。
上記の各種ヒト肥満細胞を培養後、ＲＮＡを抽出し、該ＲＮＡを用いてＤＮＡチップまたはＲＴ−ＰＣＲによって、各種ＧＰＣＲのｍＲＮＡの発現量を解析することにより、これまでヒト肥満細胞で発現することが知られていなかったＧＰＣＲを同定することができる。
さらに、調製したヒト肥満細胞を、肥満細胞の活性化と関係する各種条件で培養し、その条件で発現量の変動するＧＰＣＲを同定することにより、肥満細胞の活性化抑制作用を有する薬剤をスクリーニングするのにより適したＧＰＣＲを選択することができる。
各種条件での培養としては、例えば、サイトカイン、増殖因子、ケモカインの存在下での培養、肥満細胞を活性化する条件下での培養、各種薬剤存在下での培養、微生物やウイルス由来成分の存在下での培養等があげられる。サイトカインとしては、例えば、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）等があげられる。肥満細胞を活性化する条件としては、例えば、ＩｇＥ受容体を介した活性化刺激、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）刺激、カルシウムイオノフォア刺激、コンパウンド４８／８０刺激、ペプチドグリカン刺激、肥満細胞で発現しているＧＰＣＲのリガンドを用いた刺激等があげられる。薬剤としては、例えば、プレドニゾロンやデキサメタゾン等のグルココルチコイド、ＦＫ−５０６やサイクロスポリン等の免疫抑制薬、β２アドレナリン受容体刺激薬やホスホジエステラーゼ阻害薬等の炎症性メディエーター遊離抑制作用を有する薬物、等があげられる。
ＤＮＡチップ解析としては、例えば、市販のアフィメトリックス（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）社のジーンチップ（ＧｅｎｅＣｈｉｐ）を用いることができる。ＲＴ−ＰＣＲ解析には、公知の方法〔ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９０）；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７，２７２５（１９９０）；実験医学（増刊），１５，４６（１９９７）〕を用いることができる。定量的ＲＴ−ＰＣＲ法としては、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ用の宝酒造社製のキット（Ｆｏｒ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ＴａＫａＲａ  Ｅｘ  Ｔａｑ  Ｒ−ＰＣＲ  Ｖｅｒｓｉｏｎ）を用いることもできる。
本発明においてヒト肥満細胞で発現することが初めて明らかになったＧＰＣＲとしては、例えば、システイニルロイコトリエン受容体１（ＣｙｓＬＴＲ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体９１（ＧＰＲ９１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３４（ＧＰＲ３４）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様配列２（ＥＭＲ２）、血小板活性化因子受容体（ＰＡＦＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０５（ＧＰＲ１０５）、７回膜貫通スーパーファミリー・メンバー１（ＴＭ７ＳＦ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３７（ＧＰＲ３７）、ＣＤ９７抗原（ＣＤ９７）、メラノコルチン１受容体（ＭＣ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体ＦＩＲＥ（ＦＩＲＥ）、フォルミルペプチド受容体１（ｆＭＬＰ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体６５（ＧＰＲ６５）、プロスタグランジンＥ受容体３オルタネイティブバリアントｈ（ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ）、プリン受容体Ｐ２Ｙ８（Ｐ２Ｙ８）、ドーパミン受容体Ｄ２（Ｄ２）、内皮分化リゾホスファチジン酸Ｇ蛋白質共役型受容体２（ＥＤＧ２）、アデノシンＡ３受容体（Ａ３）、補体第５成分受容体１（Ｃ５Ｒ１）、オプシン３（ＯＰＮ３）、Ｇ蛋白質共役型受容体２７（ＧＰＲ２７）、Ｇ蛋白質共役型受容体４４（ＣＲＴＨ２）、内皮分化スフィンゴ脂質Ｇ蛋白質共役型受容体１（ＥＤＧ１）、フォルミルペプチド受容体様２（ＦＰＲＬ２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体様２（ＣＣＲＬ２）、メタボトロピックグルタミン酸受容体６（ｍｇｌｕ６）、カンナビノイド受容体２（ＣＢ２）、Ｇ蛋白質共役型受容体３９（ＧＰＲ３９）、プリン受容体Ｐ２Ｙ５（Ｐ２Ｙ５）、アデノシンＡ１受容体（Ａ１）、ピリミジン受容体Ｐ２Ｙ４（Ｐ２Ｙ４）、プロスタグランジンＥ受容体３オルタネイティブバリアントｊ（ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａ）、１型アンジオテンシン受容体（ＡＴ１Ｂ）、Ｂ型エンドセリン受容体（ＥＴＢ）、ゴナドトロピン放出ホルモン受容体（ＧＮＲＨＲ）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体２（ＣＥＬＳＲ２）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体７（ＣＣＲ７）、ヒスタミン受容体Ｈ４（Ｈ４）、Ｇ蛋白質共役型受容体１２（ＧＰＲ１２）、ヒスタミン受容体Ｈ１（Ｈ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体３２（ＧＰＲ３２）、腫瘍内皮細胞マーカー５（ＴＥＭ５）、Ｇ蛋白質共役型受容体５８（ＧＰＲ５８）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体１（ＣＥＬＳＲ１）、Ｇ蛋白質共役型受容体８５（ＧＰＲ８５）、モチリン受容体（Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ）、Ｇ蛋白質共役型受容体６４（ＨＥ６）、カドヘリンＥＧＦ  ＬＡＧ７回貫通Ｇ型受容体３（ＣＥＬＳＲ３）、カルシトニン受容体様（ＣＡＬＣＲＬ）、網膜色素上皮由来ロドプシンホモログ（ＲＲＨ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１８（ＧＰＲ１８）、Ｇ蛋白質共役型受容体３５（ＧＰＲ３５）、プリン受容体Ｐ２Ｙ１０（Ｐ２Ｙ１０）、ＦＬＪ４０２７９（Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６）、Ｇ蛋白質共役型受容体１４１（ＧＰＲ１４１）、精巣下降関連Ｇ蛋白質共役型受容体（ｈＲＵＰ１６）、内膜肥厚関連受容体（ＩＴＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体ＭＲＧＸ２（ＭＲＧＸ２）、トレースアミン受容体１（ＳＮＯＲＦ３３）、７回膜貫通受容体ＣＢＲＣ７ＴＭ＿３７５（Ｃ��ＴＨＹＭＵ２０１１５４８）、アドレノメデュリン受容体（Ｇ１０ｄ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０７（ＧＰＲ１０７）、Ｇ蛋白質共役型受容体１２６（ＧＰＲ１２６）、Ｇ蛋白質共役型受容体４１（ＧＰＲ４１）、Ｇ蛋白質共役型受容体４３（ＧＰＲ４３）、Ｇ蛋白質共役型受容体６８（ＧＰＲ６８）、ガストリン放出ペプチド受容体（ＧＲＰＲ）、Ｇ蛋白質共役型受容体１０１９（ＨＥＯＡＤ５４）、推定Ｇ蛋白質共役型受容体ｈＧＰＣＲ１０（ｈＲＵＰ９）、膜型プロゲスチン受容体α（ｍＰＲａ）、膜型プロゲスチン受容体γ（ｍＰＲｇ）、推定Ｇ蛋白質共役型受容体ＧＰＣＲ１（ＳＲＬ）、血小板活性化受容体ホモログＨ９６３（Ｈ９６３）、プロスタグランジンＥ受容体４（ＥＰ４）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）受容体１（ＣＣＲ１）、ドーパミン受容体Ｄ５（Ｄ５）、ロイコトリエンＢ４受容体（ＬＴＢ４Ｒ）およびケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）受容体５（ＣＸＣＲ５）をあげることができる。
本発明において、各ＧＰＣＲは、第１表、第３表、第５表および第７表に記載したデータベースの登録番号のアミノ酸配列および塩基配列により定義されるものである。ただし、アリル変異体も含まれるものとする。
上記のＧＰＣＲのうち、ＩｇＥ受容体を介した活性化刺激により発現が変動するＧＰＣＲとしてはＧＰＲ３４、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ６５、Ｐ２Ｙ８、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＥＤＧ１、ＧＰＲ３９、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＥＴＢ、Ｈ４、ＣＥＬＳＲ２、ＴＥＭ５、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ４３、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、Ｈ９６３、ＥＰ４およびＬＴＢ４Ｒをあげることができる。また、補体第３成分受容体１（Ｃ３ａＲ１）、β２アドレナリン受容体（β２）およびＧ蛋白質共役型受容体ＲＥ２（ＲＥ２）は、ヒト肥満細胞に発現していることは報告されていたが、本発明において初めてＩｇＥ処埋で発現が変動することが明らかになった。
ＬＰＳ刺激により発現が変動するＧＰＣＲとしては、Ｃ３ａＲ１、ＰＡＦＲ、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ｃ５Ｒ１、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７およびＥＰ４をあげることができ、ＩＦＮ−γ刺激により発現が変動するＧＰＣＲとしては、Ｃ３ａＲ１、ＰＡＦＲ、Ａ２ｂ、ＣＤ９７、ＥＤＧ２、ＯＰＮ３、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、プロスタグランジンＥ受容体２（ＥＰ２）、Ｈ４、ＧＰＲ３２およびＣＥＬＳＲ１をあげることができ、ＩＦＮ−γおよびＬＰＳの共刺激により発現が変動するＧＰＣＲとしては、Ｃ３ａＲ１、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ａ３、ＯＰＮ３、ＥＤＧ１、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＣＣＲ７、ＲＥ２、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ１およびＥＰ４をあげることができる。このうち、Ｃ３ａＲ１、ＥＰ２およびＲＥは、ヒト肥満細胞に発現していることは報告されていたが、本発明において初めてＩＦＮ−γまたはＬＰＳ刺激により発現が変動することが明らかになった。
グルココルチコイド処理によりで発現が変動するＧＰＣＲとしては、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、エプスタイン−バーウイルス誘導遺伝子２（ＥＢＩ２）、スロンビン受容体（ＰＡＲ１）、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４をそれぞれあげることができる。このうち、Ｃ３ａＲ１、β２、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１およびＲＥは、ヒト肥満細胞に発現していることは報告されていたが、本発明において初めてグルココルチコイド処理で発現が変動することが明らかになった。
（２）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを標的とするヒト肥満細胞の活性化等を抑制する物質のスクリーニング方法
（１）で見出されたヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲから、スクリーニングの標的とするＧＰＣＲを選択し、該ＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分を利用した公知の方法（特開２００１−２４５６６６）により、選択したＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質をスクリーニングすることができる。これらの物質は、該ＧＰＣＲを介してヒト肥満細胞に対し、（ｉ）アポトーシスの誘導、（ｉｉ）活性化の抑制、（ｉｉｉ）脱顆粒の抑制、（ｉｖ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｖ）サイトカインの産生抑制、（ｖｉ）ケモカインの産生抑制の少なくとも１つの作用を有するので、その結果、肥満細胞が病態と深く関与しているアトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー性疾患等の治療薬として用いることができる。したがって、以下に示すスクリーニング方法は、該ＧＰＣＲに作用し、ヒト肥満細胞に対し、（ｉ）アポトーシスの誘導、（ｉｉ）活性化の抑制、（ｉｉｉ）脱顆粒の抑制、（ｉｖ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｖ）サイトカインの産生抑制、（ｖｉ）ケモカインの産生抑制の少なくとも１つの作用を有するヒト肥満細胞の活性化を抑制する物質のスクリーニング方法となる。炎症性メディエーターとしては、ヒスタミン等のアミン類、トリプターゼ等のプロテアーゼ、ＰＧＤ２やＬＴ等のアラキドン酸代謝産物、ＰＡＦ等を、サイトカインとしてはＧＭ−ＣＳＦ等を、ケモカインとしてはＭＩＰ−１α等があげられる。
また、同じ方法により、（１）で見出されたヒト肥満細胞で発現し、かつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質をスクリーニングすることができる。これらの物質は、該ＧＰＣＲを介してグルココルチコイドの作用を制御する効果を有するので、グルココルチコイド作用の制御剤として用いることができる。
以下、簡単にスクリーニング方法を記載する。スクリーニングに用いる、選択したＧＰＣＲを発現する細胞としては、ヒト末梢血由来肥満細胞、ヒト臍帯血由来肥満細胞、ヒトの肺、皮膚、扁桃から調製した肥満細胞、ヒト肥満細胞から樹立した細胞株があげられ、また該ＧＰＣＲをコードするＤＮＡを含む発現ベクターを動物細胞や酵母等の宿主細胞に導入して得られる形質転換細胞を用いることもできる。該形質転換細胞は公知の方法（特開２００１−２４５６６６）により構築することができる。ヒト肥満細胞から樹立した細胞株としては、ヒト肥満細胞の性質をよく保持していることが知られているＬＡＤ２〔Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．，２７，６７１（２００３）；Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．，２７，６７７（２００３）〕等があげられる。選択したＧＰＣＲに特異的なリガンド、アゴニストまたはアンタゴニストをスクリーニングに用いない場合は、該ＧＰＣＲをコードするＤＮＡを含有する形質転換体を用いるのが好ましい。
（ａ）リガンド結合アッセイ
スクリーニングの標的として選択したＧＰＣＲのリガンド、アゴニストまたはアンタゴニストが知られている場合は、それらを放射性同位元素等で標識したものと、該ＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分を用いて、公知の方法（特開２００１−２４５６６６）によりリガンド結合アッセイを行うことにより、該ＧＰＣＲのアゴニストまたはアンタゴニストをスクリーニングすることができる。以下、標識したリガンドを用いた方法を述べるが、アゴニストまたはアンタゴニストもリガンドと同様に用いることができる。
スクリーニングは、（ｉ）標識したリガンドを該ＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合と、（ｉｉ）標識したリガンドおよび試験物質を本発明のポリペプチドまたは部分ペプチドを含有する細胞または該細胞の膜画分に接触させた場合における、標識したリガンドの該細胞または該膜画分に対する結合量を測定して比較し、試験物質が存在しない（ｉ）の場合と比較して試験物質が存在する（ｉｉ）の場合に、標識したリガンドの結合量が低下する場合に、試験物質を該ＧＰＣＲのアゴニストまたはアンタゴニストとして選択する。選択した試験物質が、該ＧＰＣＲのアゴニストであるかアンタゴニストであるかは、以下の（ｂ）〜（ｄ）の方法で確認できる。
標識したリガンドの結合量の測定は、以下のようにして行うことができる。
該ＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分を一定量含む緩衝液に、（ｉ）試験物質と放射性同位元素で標識した一定の放射能量のリガンドを添加したもの、（ｉｉ）放射性同位元素で標識した一定の放射能量のリガンドのみを添加したもの、（ｉｉｉ）放射性同位元素で標識した一定の放射能量のリガンドと大過剰の未標識のリガンドを添加したものを用意し、反応させる。反応は約０〜５０℃、好ましくは約４〜３７℃で、約２０分〜２４時間、好ましくは約３０分〜３時間行なう。（ｉ）〜（ｉｉｉ）それぞれを反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の緩衝液で洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射能量を液体シンチレーションカウンターあるいはγ−ウエルカウンター等の放射線測定装置で計測する。（ｉ）および（ｉｉ）それぞれの放射能量（全結合量：Ｂ）から（ｉｉｉ）の放射能量（非特異的結合量：ＮＳＢ）を差し引いた値を、（ｉ）および（ｉｉ）それぞれの特異的結合量として計算する。
（ｂ）ＧＴＰγＳ結合アッセイ
標識したＧＴＰγＳと、スクリーニングの標的として選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分を用いて、公知の方法（特開２００１−２４５６６６）によりＧＴＰγＳ結合アッセイを行うことにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質をスクリーニングすることができる。ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを含有する細胞としては、肥満細胞で発現するＧＰＣＲをコードするＤＮＡを含有する形質転換体を用いることもできる。該形質転換体は公知の方法（特開２００１−２４５６６６）により構築することができる。
例えば、試験物質を選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分に接触させ、ＧＴＰγＳ結合アッセイを行うことにより、該ＧＰＣＲのアゴニストを探索することができる。
ＧＰＣＲのアゴニストが知られている場合は、試験物質の存在下、アゴニストを選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分に接触させ、ＧＴＰγＳ結合アッセイを行うことにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質を探索することができる。
ＧＰＣＲが構成活性型ＧＰＣＲである場合は、試験物質を選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分に接触させ、ＧＴＰγＳ結合アッセイを行うことにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質を探索することができる。
ＧＴＰγＳのＧαへの結合量は、文献〔Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４７，８４８−８５４（１９９５）、ＷＯ９８／４６９９５〕に記載の方法に従って、標識したＧＴＰγＳを、ＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分へ添加し、ＧＴＰγＳの細胞または細胞膜画分への結合量として測定することができる。ＧＴＰγＳはＧＴＰと同様にＧαと結合するが、Ｇαによる加水分解を受けないため、結合量を正確に測定できる。標識したＧＴＰγＳとしては、例えば３５Ｓで標識したＧＴＰγＳを用いることができる。
具体的には、ＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分を一定量含む緩衝液に、（ｉ）試験物質、一定量のアゴニスト、ＧＤＰおよび放射性向位元素で標識した一定の放射能量のＧＴＰγＳを添加したもの、（ｉｉ）一定量のアゴニスト、ＧＤＰおよび放射性同位元素で標識した一定の放射能量のＧＴＰγＳを添加したもの、（ｉｉｉ）一定量のアゴニスト、ＧＤＰ、放射性同位元素で標識した一定の放射能量のＧＴＰγＳおよび大過剰の未標識のＧＴＰγＳを添加したものをそれぞれ用意し、反応させる。反応は０〜５０℃、好ましくは４〜３７℃で、２０分〜２４時間、好ましくは３０分〜３時間行なう。（ｉ）〜（ｉｉｉ）それぞれを反応後、ガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の緩衝液で洗浄した後、ガラス繊維濾紙に残存する放射能量を液体シンチレーションカウンター等の放射線測定装置で計測する。（ｉ）および（ｉｉ）それぞれの放射能量（全結合量：Ｂ）から（ｉｉｉ）の放射能量（非特異的結合量：ＮＳＢ）を差し引いた値を、（ｉ）および（ｉｉ）それぞれの特異的結合量として計算する。
（ｉｉ）の試験物質非存在下におけるＧＴＰγＳの特異的結合量と、（ｉ）の試験物質存在下におけるＧＴＰγＳの特異的結合量を比較して、（ｉ）の試験物質存在下でＧＴＰγＳの特異的結合量を減少させる物質を、選択したＧＰＣＲに対するアンタゴニストとして選択することができる。一方、ＧＴＰγＳの特異的結合量を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
上記の方法で（ｉ）〜（ｉｉｉ）の系にアゴニストを入れずに、同様の測定を行い、（ｉｉ）の試験物質非存在下におけるＧＴＰγＳの特異的結合量と、（ｉ）の試験物質存在下におけるＧＴＰγＳの特異的結合量を比較して、（ｉ）の試験物質存在下でＧＴＰγＳの特異的結合量を増加させる物質物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
選択したＧＰＣＲが構成活性型のＧＰＣＲの場合は、上記の方法で（ｉ）〜（ｉｉｉ）の系にアゴニストを入れずに、同様の測定を行い、（ｉｉ）の試験物質非存在下におけるＧＴＰγＳの特異的結合量と、（ｉ）の試験物質存在下におけるＧＴＰγＳの特異的結合量を比較して、（ｉ）の試験物質存在下でＧＴＰγＳの特異的結合量を減少させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアンタゴニストとして選択することができる。一方、ＧＴＰγＳの特異的結合量を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
また、選択された物質について、他のＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分を選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分の代わりに用いた同様のアッセイを行うことにより、選択したＧＰＣＲに特異的なアゴニストまたはアンタゴニストであるかを確認することができる。
（ｃ）ＧＴＰａｓｅ活性測定法
スクリーニングの標的として選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分を用いて、公知の方法（特開２００１−２４５６６６）によりＧＴＰａｓｅ活性測定を行うことにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質をスクリーニングすることができる。
例えば、試験物質を選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分に接触させ、ＧＴＰａｓｅ活性を測定することにより、該ＧＰＣＲのアゴニストを探索することができる。
ＧＰＣＲのアゴニストが知られている場合は、試験物質の存在下、アゴニストを選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分に接触させ、ＧＴＰａｓｅ活性を測定することにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質を探索することができる。
ＧＰＣＲが構成活性型ＧＰＣＲである場合は、試験物質を選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分に接触させ、ＧＴＰａｓｅ活性を測定することにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質を探索することができる。
ＧＴＰａｓｅ活性は、文献〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ．，２７１，１８５７−１８６０（１９９６）、ＷＯ９８／４６９９５〕に記載の方法に従って、ＧＰＣＲ４を発現する細胞または該細胞の細胞膜画分へ、γ位リン酸を放射性同位元素で標識したＧＴＰを基質として添加し、測定することができる。γ位リン酸を放射性同位元素で標識したＧＴＰとしては、例えば３２Ｐで標識した［γ−３２Ｐ］ＧＴＰを用いることができる。
具体的には、選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の膜画分を一定量含む緩衝液に、（ｉ）試験物質、一定量のアゴニストおよびγ位リン酸を放射性同位元素で標識した一定の放射能量のＧＴＰを添加したもの、（ｉｉ）一定量のアゴニストおよびγ位リン酸を放射性同位元素で標識した一定の放射能量のＧＴＰを添加したものをそれぞれ用意し、反応させる。反応は０〜５０℃、好ましくは４〜３７℃で、２０分〜２４時間、好ましくは３０分〜３時間行なう。（ｉ）および（ｉｉ）それぞれを反応後、遠心分離により反応液の上清を回収し、上清に放出された無機リン酸（Ｐｉ）の放射能量を液体シンチレーションカウンター等の放射線測定装置で計測し、ＧＴＰａｓｅ活性とする。あるいは、反応液をガラス繊維濾紙等で濾過し、適量の同バッファーで洗浄した後、濾過液を回収し、濾過液中の無機リン酸（Ｐｉ）の放射能量を液体シンチレーションカウンター等の放射線測定装置で計測してもよい。（ｉｉ）の試験物質非存在下におけるＧＴＰａｓｅ活性と、（ｉ）の試験物質存在下におけるＧＴＰａｓｅ活性とを比較して、（ｉ）の試験物質存在下でＧＴＰａｓｅ活性を減少させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアンタゴニストとして選択することができる。一方、ＧＴＰａｓｅ活性を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
上記の方法で（ｉ）および（ｉｉ）の系にアゴニストを入れずに、同様の測定を行い、（ｉｉ）の試験物質非存在下におけるＧＴＰａｓｅ活性と、（ｉ）の試験物質存在下におけるＧＴＰａｓｅ活性とを比較して、（ｉ）の試験物質存在下でＧＴＰａｓｅ活性を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
選択したＧＰＣＲが構成活性型のＧＰＣＲの場合は、上記の方法で（ｉ）および（ｉｉ）の系にアゴニストを入れずに、同様の測定を行い、（ｉｉ）の試験物質非存在下におけるＧＴＰａｓｅ活性と、（ｉ）の試験物質存在下におけるＧＴＰａｓｅ活性とを比較して、ＧＴＰａｓｅ活性を減少させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアンタゴニストとして選択することができる。一方、ＧＴＰａｓｅ活性を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
また、選択された物質について、他のＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分を選択したＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分の代わりに用いた同様のアッセイを行うことにより、選択したＧＰＣＲに特異的なアゴニストまたはアンタゴニストであるかを確認することができる。ヒト肥満細胞としては、ヒト末梢血由来肥満細胞、ヒト臍帯血由来肥満細胞、ヒトの肺、皮膚、扁桃から調製した肥満細胞、ＬＡＤ２等のヒト肥満細胞系細胞株があげられる。
（ｄ）機能アッセイ
スクリーニングの標的として選択したＧＰＣＲを発現する細胞を用いて、公知の方法（特開２００１−２４５６６６）により機能アッセイを行うことにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質をスクリーニングすることができる。
例えば、試験物質を選択したＧＰＣＲを発現する細胞に接触させ、該ＧＰＣＲを介した細胞の応答（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｐＨの低下、細胞増殖活性、メラニン色素の凝集または拡散、またはレポーター遺伝子の発現量など）を測定することにより、該ＧＰＣＲのアゴニストを探索することができる。
ＧＰＣＲのアゴニストが知られている場合は、試験物質の存在下、アゴニストを選択したＧＰＣＲを発現する細胞に接触させ、該ＧＰＣＲを介した細胞の応答（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｐＨの低下、細胞増殖活性、メラニン色素の凝集または拡散、またはレポーター遺伝子の発現量など）を測定することにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質を探索することができる。
ＧＰＣＲが構成活性型ＧＰＣＲである場合は、試験物質を選択したＧＰＣＲを発現する細胞に接触させ、該ＧＰＣＲを介した細胞の応答（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｐＨの低下、細胞増殖活性、メラニン色素の凝集または拡散、またはレポーター遺伝子の発現量など）を測定することにより、該ＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニスト、または機能修飾物質を探索することができる。
これらのＧＰＣＲを介した細胞の応答は、文献〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，１８５７（１９９６）、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６８，９８（１９９５）、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２７５，１２７４（１９９５）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，１８２２（１９９７）、Ｊ．Ｒｅｃｅｐｔ．Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．，１７，５７（１９９７）、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３８，１４００（１９９７）、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３８，１４７１（１９９７）、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６，１３３４（１９９８）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２５１，４７１（１９９８）、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１２５，１３８７（１９９８）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５，４８７（１９９７）、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２５２，１１５（１９９７）、Ｎａｔｕｒｅ，３５８，３２５（１９９２）、Ｎａｔｕｒｅ，３９３，２７２（１９９８）、Ｃｅｌｌ，９２，５７３（１９９８）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２，２７４９７（１９９７）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１８，４３０（１９９７）、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，２０，３７０（１９９９）、ＷＯ９８／４６９９５〕に記載の方法により測定することができる。
レポーター系を用いて細胞の応答をモニターする場合は、例えば、選択したＧＰＣＲを発現させた細胞に、選択したＧＰＣＲの活性化により発現が誘導される遺伝子のプロモーター配列の下流に適当なレポーター遺伝子を連結したＤＮＡを導入することにより、選択したＧＰＣＲの活性化をレポーター遺伝子の発現で測定することができる。該プロモーターとしては、例えばＩＣＡＭ−１遺伝子のプロモーター、ｃ−ｆｏｓのプロモーター、Ｋｒｏｘ−２４のプロモーター〔Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３２０，１４５（１９９６）〕などが利用できる。また、該プロモーターは、適当な転写因子の結合配列と基本プロモーターからなる人工プロモーターでもよい。転写因子の結合配列としては、Ｇｉに共役するＧＰＣＲの活性化に伴い転写を活性化するＳＲＥ（ｓｅｒｕｍ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ）やＧｓに共役するＧＰＣＲの活性化に伴い転写を活性化するＣＲＥ（ｃＡＭＰ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ）などが利用できる。また、ＧαｓのＣ末端５アミノ酸をＧαｉのＣ末端５アミノ酸に置換したキメラＧαｓを選択したＧＰＣＲの発現細胞に発現させることにより、本来Ｇｓと共役するＧＰＣＲの活性化に伴い転写を活性化するＣＲＥを含む人工プロモーターからも、Ｇｉが共役するＧＰＣＲの活性化に伴いレポーター遺伝子の発現を誘導することができる。
レポーター遺伝子としては、あらゆるレポーター遺伝子を使用することが可能であるが、例えば、ホタル・ルシフェラーゼ遺伝子、ウミシイタケ・ルシフェラーゼ遺伝子、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、β−グルクロニダーゼ遺伝子、β−ガラクトシダーゼ遺伝子、β−ラクタマーゼ遺伝子、エクオリン遺伝子およびグリーン・フルオレッセント・プロテイン遺伝子などが利用できる。
具体的には、選択したＧＰＣＲを発現する細胞をマルチウェルプレート等に培養する。必要に応じて新鮮な培地あるいは細胞に毒性を示さない適当なバッファーに交換し、（ｉ）試験物質および一定量のアゴニストを添加したもの、（ｉｉ）一定量のアゴニストのみ添加したものそれぞれを用意し、一定時間インキュベートする。インキュベート後、細胞の応答（例えば、アラキドン酸遊離、アセチルコリン遊離、細胞内Ｃａ２＋遊離、細胞内ｃＡＭＰ生成、細胞内ｃＧＭＰ生成、イノシトールリン酸産生、細胞膜電位変動、細胞内蛋白質のリン酸化、ｃ−ｆｏｓ活性化、ｐＨの低下、細胞増殖活性、メラニン色素の凝集または拡散、またはレポーター遺伝子の発現量などを促進する活性または抑制する活性など）を測定する。細胞刺激活性の指標とする物質（例えば、アラキドン酸など）の生成が、細胞が含有する分解酵素によって検定困難な場合は、該分解酵素に対する阻害剤を添加して定量してもよい。
また、ｃＡＭＰ産生抑制などの活性については、フォルスコリンなどで細胞のｃＡＭＰ産生量を増大させておいた細胞に対する産生抑制作用として検出することができる。
（ｉｉ）の試験物質非存在下における細胞の応答の程度と、（ｉ）の試験物質存在下における細胞の応答の程度を比較して、（ｉ）の試験物質存在下で細胞の応答を減少させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアンタゴニストとして選択することができる。一方、細胞の応答を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
上記の方法で（ｉ）および（ｉｉ）の系にアゴニストを入れずに、同様の測定を行い、（ｉｉ）の試験物質非存在下における細胞の応答の程度と、（ｉ）の試験物質存在下における細胞の応答の程度を比較して、（ｉ）の試験物質存在下で細胞の応答を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
選択したＧＰＣＲが構成活性型のＧＰＣＲの場合は、上記の方法で（ｉ）および（ｉｉ）の系にアゴニストを入れずに、同様の測定を行い、（ｉｉ）の試験物質非存在下における細胞の応答の程度と、（ｉ）の試験物質存在下における細胞の応答の程度を比較して、（ｉ）の試験物質存在下で細胞の応答を減少させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアンタゴニストとして選択することができる。一方、細胞の応答を増加させる物質を選択したＧＰＣＲに対するアゴニストとして選択することができる。
また、選択された物質について、他のＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分を選択されたＧＰＣＲを発現する細胞または該細胞の細胞膜画分の代わりに用いた同様のアッセイを行うことにより、選択されたＧＰＣＲに特異的なアゴニストまたはアンタゴニストであるかを確認することができる。
以上のようにして得られた、選択されたＧＰＣＲに特異的アゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質が、ヒト肥満細胞に対し、活性化抑制、脱顆粒抑制、炎症性メディエーター産生抑制、サイトカイン産生抑制およびケモカイン産生抑制のうちの少なくとも１つの作用を有していることは、例えば、得られたアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を、ヒトＩｇＥを添加して培養したヒト肥満細胞に添加してインキュベートした後、抗ヒトＩｇＥ抗体の添加等によりヒト肥満細胞を活性化し、放出された（ｉ）脱顆粒の指標となるヒスタミンやβ−ヘキソサミニダーゼ、（ｉｉ）ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、ＰＧＤ２等の炎症性メディエーター、（ｉｉｉ）ＴＮＦ−αやＧＭ−ＣＳＦ等のサイトカイン、（ｉｖ）ＩＬ−８、Ｉ−３０９、ＭＩＰ−１α等のケモカイン等を文献〔Ｂｌｏｏｄ  １００，３８６１（２００２）〕に従って測定し、アゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を添加しなかった場合と比較することにより確認できる。また、ヒト肥満細胞に、アゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を添加し、アポトーシスが誘導されることを、クロマチンＤＮＡの断片化の測定やＴＵＮＥＬ法等によって検出することより、アポトーシス誘導作用を有していることを確認できる。ヒト肥満細胞としては、ヒト末梢血由来肥満細胞、ヒト臍帯血由来肥満細胞、ヒトの肺、皮膚、扁桃から調製した肥満細胞、ＬＡＤ２等のヒト肥満細胞由来の細胞株を用いることができる。
（３）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲのアゴニスト、アンタゴニストまたは機能修飾物質を含有する医薬組成物
上記のスクリーニング方法で取得される、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲに対するアゴニスト、アンタゴニスト、機能修飾物質は、ヒト肥満細胞の機能を制御する、安全で低毒性な医薬組成物として有用である。
上記のスクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩を上記の医薬組成物として使用する場合、常法に従って製剤化することができる。例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、該化合物またはその塩を生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な容量が得られるようにするものである。錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘昧剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施にしたがって処方することができる。
注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調整された注射液は通常、適当なアンプルに充填される。このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒトや哺乳動物（例えば、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することができる。該化合物またはその塩の投与量は、投与対象、対象臓器、症状、投与方法などにより差異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、その１回投与量は投与対象、対象臓器、症状、投与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形では通常成人（６０ｋｇとして）においては、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
（４）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを特異的に認識する抗体の作製と利用法
（４−１）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを特異的に認識する抗体の作製
公知の方法（特開２００１−２４５６６６）にしたがって、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを特異的に認識するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を作製することができる。得られた抗体についてヒト肥満細胞のアポトーシス、活性化、脱顆粒、炎症性メディエーターの産生、サイトカインの産生、ケモカインの産生等に対する作用を測定することにより、（ｉ）アポトーシスの誘導、（ｉｉ）活性化の抑制、（ｉｉｉ）脱顆粒の抑制、（ｉｖ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｖ）サイトカインの産生抑制、（ｖｉ）ケモカインの産生抑制の少なくとも１つの作用を有する抗体を選択し、得ることができる。また、同様にして、ヒト肥満細胞で発現しかつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧＰＣＲを特異的に認識するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を作製することができる。得られた抗体について、グルココルチコイドの作用に与える効果を測定することにより、該ＧＰＣＲを介してグルココルチコイドの作用を制御する効果を有する抗体を選択し得ることができる。
（４−２）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを認識する抗体の利用
（ａ）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを認識する抗体を用いるヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲの免疫学的検出および定量
ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲの免疫学的検出法としては、マイクロタイタープレートを用いるＥＬＩＳＡ法、蛍光抗体法、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法〔別冊  実験医学，ザ・プロトコールシリーズ，免疫染色・ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション，羊土社（１９９７）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１５０，５，（１９９２）〕等をあげることができる。
免疫学的定量法としては、液相中でヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲと反応する抗体のうちエピトープが異なる２種類のモノクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法、１２６Ｉ等の放射性同位体で標識したヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲと該ＧＰＣＲを認識する抗体とを用いるラジオイムノアッセイ法等をあげることができる。
上記検出あるいは定量法は、ヒト肥満細胞の検出や肥満細胞が関与する疾患の診断に利用することができる。また、上記検出あるいは定量法を用いてヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを発現する細胞や細胞株を同定することができる。ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを発現する細胞や細胞株は、該ＧＰＣＲのリガンド、アゴニストまたはアンタゴニストの探索や該ＧＰＣＲの機能解析に有用である。
（ｂ）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを認識する抗体を用いるヒト肥満細胞の単離
公知の方法〔Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １６９，１５３（１９９４）；Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０７，３２２（２００１）〕に準じて、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを認識する抗体を用いて、ヒトの各種組織から肥満細胞を高純度に調製することができる。
（ｃ）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを認識する抗体を含有する医薬
（４−１）で取得される、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを特異的に認識し、かつ（ｉ）アポトーシスの誘導、（ｉｉ）活性化の抑制、（ｉｉｉ）脱顆粒の抑制、（ｉｖ）炎症性メディエーターの産生抑制、（ｖ）サイトカインの産生抑制、（ｖｉ）ケモカインの産生抑制の少なくとも１つの作用を有する抗体は、医薬、例えば、アトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、あるいはアレルギー性疾患の治療薬として用いることができる。該抗体は、肥満細胞のアポトーシス誘導作用、ヒト肥満細胞の活性化抑制作用、ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制作用、ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制作用、ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制作用、あるいはヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制作用を有する医薬として使用することもできる。（４−１）で取得される、ヒト肥満細胞で発現しかつグルココルチコイドの刺激により発現量が変動するＧＰＣＲを特異的に認識し、かつグルココルチコイドの作用を制御する効果を有する抗体は、グルココルチコイドの作用を制御する医薬として使用することができる。
ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲを特異的に認識する抗体を含有する医薬は、治療薬として該化合物単独で投与することも可能ではあるが、通常は薬理学的に許容される一つあるいはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により製造した医薬製剤として提供するのが望ましい。
投与経路は、治療に際して最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口投与、または口腔内、気道内、直腸内、皮下、筋肉内および静脈内等の非経口投与をあげることができる。投与形態としては、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、座剤、注射剤、軟膏、テープ剤等があげられる。
経口投与に適当な製剤としては、乳剤、シロップ剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤等があげられる。例えば乳剤およびシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類等を添加剤として用いて製造できる。カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤等は、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール等の賦形剤、デンプン、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を添加剤として用いて製造できる。
非経口投与に適当な製剤としては、注射剤、座剤、噴霧剤等があげられる。例えば、注射剤は、塩溶液、ブドウ糖溶液、あるいは両者の混合物からなる担体等を用いて調製する。座剤はカカオ脂、水素化脂肪またはカルボン酸等の担体を用いて調製される。また、噴霧剤は該化合物そのもの、ないしは受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ該化合物を微細な粒子として分散させ吸収を容易にさせる担体等を用いて調製する。担体として具体的には乳糖、グリセリン等が例示される。該化合物および用いる担体の性質により、エアロゾル、ドライパウダー等の製剤が可能である。また、これらの非経口剤においても経口剤で添加剤として例示した成分を添加することもできる。
投与量または投与回数は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体重等により異なるが、通常成人１日当たり１０μｇ／ｋｇ〜８ｍｇ／ｋｇである。
（５）ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲ遺伝子の発現を抑制する方法
アンチセンスＲＮＡ／ＤＮＡ技術〔バイオサイエンスとインダストリー，５０，３２２（１９９２）；化学，４６，６８１（１９９１）；Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９，３５８（１９９２）；Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１０，８７（１９９２）；Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１０，１５２（１９９２）；細胞工学，１６，１４６３（１９９７）〕、トリプル・ヘリックス技術〔Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１０，１３２（１９９２）〕、リボザイム技術〔Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，３，２７４（１９９９）；ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．，２３，２５７（１９９９）；Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４，Ｄ４９７（１９９９）；Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，６，Ｒ３３（１９９９）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２６，５２３７（１９９８）；Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６，４３８（１９９８）〕、デコイＤＮＡ法〔日本臨床，５６，５６３（１９９８）；Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．，８２，１０２３（１９９８）；Ｅｘｐ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．，５，４２９（１９９７）；日本臨床，５４，２５８３（１９９６）〕、あるいはｓｉＲＮＡ（ｓｈｏｒｔ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）を用いて任意の遺伝子の発現を抑制することができる。
ｓｉＲＮＡとは、ある標的遺伝子のｍＲＮＡの一部の配列を含む短い二本鎖ＲＮＡであり、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）により、該遺伝子の発現を抑制できるものをいう。ｓｉＲＮＡの配列は、標的とするＧＰＣＲのｍＲＮＡの塩基配列から文献［Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１３，３１９１（１９９９）］の条件に基づいて適宜設計することができる。好ましくは、ｍＲＮＡの翻訳領域中の開始コドンより５０〜１００塩基下流の領域中で、ＡＡに続く１９塩基、ＧＣ含量が３０〜７０％、より好ましくは５０％前後の配列を選択する。選択した１９塩基の配列および相補的な配列それぞれの３’端にＴＴまたはＵＵを付加した配列を有する２本のＲＮＡをＤＮＡ合成機により合成し、アニーリングすることによりｓｉＲＮＡを作製できる。また、ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ  １．０−Ｕ６（Ａｍｂｉｏｎ社製）、ｐＳＵＰＥＲ（ＯｌｉｇｏＥｎｇｉｎｅ社）等のｓｉＲＮＡ発現用ベクターに上記の選択した１９塩基の配列に相当するＤＮＡを挿入することにより、該遺伝子の発現を抑制できるｓｉＲＮＡを発現するベクターを作製することができる。
例えば、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲ遺伝子に特異的なアンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを用いて、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲ遺伝子の発現の抑制を行うことが可能である。すなわち、該ＧＰＣＲ遺伝子に特異的なアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡｉを投与することにより該ＧＰＣＲの生産を抑制し、ヒト肥満細胞の機能を制御することができる。
例えば、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲの発現増加または該ＧＰＣＲのリガンドの発現増加が原因で受容体を介した生理作用が亢進している患者がいる場合、該ＧＰＣＲの遺伝子に特異的なアンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを患者に投与することにより、ヒト肥満細胞の機能を制御し、疾患治療することができる。すなわち、該ＧＰＣＲ遺伝子に特異的なアンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡは、ヒト肥満細胞が関与する疾患の治療剤として有用である。
該ＧＰＣＲ遺伝子に特異的なアンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを上記治療剤として使用する場合は、アンチセンスＤＮＡまたはｓｉＲＮＡを単独、あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、上記（２）に記載した常法に従って製剤化、処方および投与することができる。
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【発明を実施するための最良の形態】実施例１  ヒト臍帯血由来肥満細胞を各種条件で培養した際に発現するＧＰＣＲの解析
（１）ヒト臍帯血由来肥満細胞の調製
インフォームドコンセントに基づいて取得した、ヒト臍帯血より、公知の方法〔Ｂｌｏｏｄ，９７，１０１６（２００１）；Ｂｌｏｏｄ，９８，１１２７（２００１）；Ｂｌｏｏｄ，１００，３８６１（２００２）〕に基づき、以下のようにして、ヒト肥満細胞を調製した。
ＣＤ３４＋単離キット〔ミルテニ・バイオテク（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）社製〕を用いて、ヒト臍帯血より肥満細胞の前駆細胞であるＣＤ３４陽性単核球細胞を取得後、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、および５％の牛胎児血清（以下、ＦＣＳと略す）を含むイスコフ改変ダルベッコ培地（Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ、以下、ＩＭＤＭと略す）で１２〜１８週間細胞を継代した。
（２）ＩｇＥ受容体を介した活性化処理およびグルココルチコイド処理をした肥満細胞の調製
上記（１）で調製したヒト臍帯血由来培養肥満細胞を、１μｇ／ｍｌのヒトミエローマＩｇＥ（コスモバイオ社製）の存在下、３７℃で２４時間培養した。次いで、細胞を洗浄後、１．５μｇ／ｍｌのウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体〔ダコ（Ｄａｋｏ）社製〕の存在下または非存在下、３７℃で６時間培養した。ヒトミエローマＩｇＥとウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体で処理した細胞では、ＩｇＥ受容体を介した活性化シグナルが流れる。この細胞をＩｇＥ処理細胞と呼ぶ。ヒトミエローマＩｇＥのみで処理した細胞では活性化シグナルは流れないので、この細胞をコントロールとして使用する。この細胞をコントロール細胞と呼ぶ。また、ヒトミエローマＩｇＥとウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体で処理する前に、グルココルチコイドとして１０−６ｍｏｌ／ｌのデキサメタゾン存在下で４８時間培養した細胞も同時に調製した。この細胞をＩｇＥ＋Ｄｅｘ処理細胞と呼ぶ。培養には、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、および５％のＦＣＳを含むＩＭＤＭを使用した。
（３）ジーンチップを用いた発現解析
アフィメトリックス社のジーンチップ（ヒト・ゲノムＵ１３３Ａプローブ・アレイおよびヒト・ゲノムＵ１３３Ｂプローブ・アレイ）を用いて、上記（２）で各種条件で培養し調製した肥満細胞で発現するＧＰＣＲの解析を行った。
解析の方法は、アフィメトリックス社のプロトコール（発現解析テクニカル・マニュアル）および文献〔Ｂｌｏｏｄ，９７，１０１６（２００１）、Ｂｌｏｏｄ，９８，１１２７（２００１）、Ｂｌｏｏｄ，１００，３８６１（２００２）〕に従った。以下、方法を簡単に記載する。
上記（２）で各種条件で培養し調製した肥満細胞から、ＲＮイージー・ミニ・キット〔ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔｓ、キアゲン（Ｑｉａｇｅｎ）社製〕を用いて全ＲＮＡを取得した。スーパースクリプト・チョイス・システム（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｃｈｏｉｃｅ  ｓｙｓｔｅｍインビトロジェン社製）とＴ７−（ｄＴ）２４プライマー〔アマシャム・バイオサイエンシズ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）社製〕を用いて、上記ＲＮＡから二本鎖ｃＤＮＡを調製した。バイオアレイ高収率ＲＮＡ転写物標識キット〔ＢｉｏＡｒｒａｙ  Ｈｉｇｈ−ｙｉｅｌｄ  ＲＮＡ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ、エンゾー・ダイアグノスティクス（Ｅｎｚｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）社製〕を用いて、上記ｃＤＮＡからビオチン化ｃＲＮＡを調製した。ビオチン化ｃＲＮＡをヒト・ゲノムＵ１３３Ａプローブ・アレイおよびヒト・ゲノムＵ１３３Ｂプローブ・アレイそれぞれと４５℃で１６時間ハイブリダイズした。アレイを洗浄後、ハイブリダイズしたｃＲＮＡをストレプトアビジン−フィコエリスリン〔ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ、モレキュラー・プローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）社製〕を用いて染色し、ヒューレット−パッカード・ジーン・アレイ・スキャナー（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  Ｇｅｎｅ  Ａｒｒａｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ、ヒューレット−パッカード社製）を用いて測定した。
各プローブの蛍光強度は、アフィメトリックス社製のソフトウェア  ジーンチップ・アナリシス・スイート（ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｕｉｔｅ）５．０を用いて定量した。以下このソフトウエアのアルゴリズムに従い各遺伝子の発現量を決定した。各遺伝子に対応する１０種類のプローブについて、それぞれの蛍光強度および対応する１塩基ミスマッチプローブの蛍光強度を測定し、各遺伝子の発現量として、ＡＤ（ａｖｅｒａｇｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）値（各プローブの蛍光強度と１塩基ミスマッチプローブの蛍光強度の差の平均値）を求めた。各遺伝子のＡＤ値については、アフィメトリックス社のデータ解析仕様に基づき、発現ありと判定されたものは「Ｐｒｅｓｅｎｔ」、発現があるかないかはっきりしないと判定されたものは「Ｍｅｒｇｉｎａｌ」、発現がないと判定されたものは「Ａｂｓｅｎｔ」というフラッグを示した。さらなるデータ解析は、ソフトウェア  ジーンスプリング・バージョン５．１〔ＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ５．１、シリコン・ジェネティクス（Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）社製〕を用いて行った。
コントロール細胞、ＩｇＥ処理細胞、ＩｇＥ−Ｄｅｘ処理細胞間での各遺伝子の発現量の比較においては、チップ毎のシグナル強度の分散を補正するために、全ての遺伝子について上記で求めたＡＤ値をそのチップのメディアン値で補正した。各遺伝子について、コントロール細胞に対する、ＩｇＥ処理細胞あるいはＩｇＥ−Ｄｅｘ処理細胞における発現量の比（コントロール細胞を１としたときの相対発現量）を、補正後のＡＤ値を発現量として用いて算出した。
各遺伝子については、ＡＤ値の値が１００以上でかつフラッグが「Ｐｒｅｓｅｎｔ」である場合に、「発現している」と判断した。コントロール細胞、ＩｇＥ処理細胞、ＩｇＥ−Ｄｅｘ処理細胞のいずれかで「発現している」と判断された遺伝子をヒト肥満細胞で発現している遺伝子とした。
以上の解析の結果、ヒト臍帯血由来培養肥満細胞で発現が見られたＧＰＣＲの名称、略称、蛋白質のアミノ酸配列のＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）蛋白質データベースの登録番号、ｃＤＮＡの塩基配列のＮＣＢＩ塩基配列データベースの登録番号、アフィメトリックス社のプローブＩＤ、どちらのジーンチップ上の遺伝子か（Ａ：ヒト・ゲノムＵ１３３Ａプローブ・アレイ、Ｂ：ヒト・ゲノムＵ１３３Ｂプローブ・アレイ）を第１表に示した。ＮＣＢＩの蛋白質データベースおよび塩基配列データベースはＮＣＢＩのインターネットのサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を参照した。
またこれらのＧＰＣＲの解析結果を第２表に示した。各ＧＰＣＲ遺伝子は第１表の略称で示し、遺伝子発現量としてメディアン値で補正する前のＡＤ値を示した。「Ｆ」の欄はＡＤ値のフラッグでＰは「Ｐｒｅｓｅｎｔ」、Ｍは「Ｍｅｒｇｉｎａｌ」、Ａは「Ａｂｓｅｎｔ」である。「比」の欄はコントロール細胞に対する発現量の比を示した。ヒト肥満細胞で発現していることが、本発明により初めて明らかになった遺伝子については「発現」の欄に＊で示した。また、ＩｇＥ処理細胞における、コントロール細胞に対する発現量の比が、１．８以上または０．５以下であり、かつコントロール細胞およびＩｇＥ処理細胞の少なくとも１つで「発現している」と判断された場合に、ＩｇＥ処理により発現が変動する遺伝子と判断し、「変動」の欄に１．８以上の場合には「↑」０．５以下の場合には「↓」で示した。ＩｇＥ処理細胞の発現量の比（Ａ）を１としたときのＩｇＥ−Ｄｅｘ処理細胞の発現量の比（Ｂ）の相対値（Ｂ／Ａ）を求め、Ｂ／Ａが１．８以上または０．５以下であり、かつＩｇＥ処理細胞およびＩｇＥ−Ｄｅｘ処理細胞の少なくとも１つで「発現している」と判断された場合に、グルココルチコイド処理により発現が変動する遺伝子と判断し、「変動」の欄に１．８以上の場合には「↑」０．５以下の場合には「↓」で示した。
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第１表および第２表にあげたＧＰＣＲのうち、ＣｙｓＬＴＲ１、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ３４、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＦＩＲＥ、ｆＭＬＰ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｐ２Ｙ８、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＦＰＲＬ２、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、Ｐ２Ｙ５、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＥＴＢ、ＣＥＬＳＲ２、Ｈ４、Ｈ１、ＣＥＬＳＲ１、ＧＰＲ８５、ＨＥ６、ＣＥＬＳＲ３、ＣＡＬＣＲＬ、ＲＲＨ、ＥＰ４、ＣＣＲ１およびＤ５は、ヒト肥満細胞で発現していることが今回初めて明らかになったＧＰＣＲである。
コントロール細胞とＩｇＥ処理細胞での発現量を比較することにより、ＩｇＥ受容体を介してヒト肥満細胞を活性化した際に発現が変動するＧＰＣＲを同定した。その結果、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ１０５、Ｐ２Ｙ８、ＥＤＧ１、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＥＴＢ、Ｈ４、ＲＥ２およびＥＰ４は、ＩｇＥ受容体を介した活性化により発現が変動することが今回初めて明らかになった。ＩｇＥ処理細胞で発現が変動するＧＰＣＲは、肥満細胞の活性化の制御に関与していると推定され、それらのＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として特に有用である。
ＩｇＥ処理細胞とＩｇＥ＋Ｄｅｘ処理細胞での発現量を比較することにより、デキサメタゾン処理した際に発現が変動するＧＰＣＲを同定した。その結果、Ｃ３ａＲ１、ＧＰＲ３４、β２、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ、ｆＭＬＰ１、Ｐ２Ｙ８、Ａ３、ＣＲＴＨ２、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＥＢＩ２、ＰＡＲ１、Ｈ４、ＲＥ２、ＣＡＬＣＲＬおよびＥＰ４は、デキサメタゾン処理により、発現が変動することが今回初めて明らかになった。グルココルチコイドは抗炎症効果を発揮する一方、副作用も引き起こす。デキサメタゾン処理で発現が変動するＧＰＣＲは、グルココルチコイドの薬効または副作用に関与する可能性が推定され、それらのＧＰＣＲは、グルココルチコイドの薬効または副作用を制御する薬剤の標的として有用である。
実施例２  ヒト末梢血由来肥満細胞を各種条件で培養した際に発現するＧＰＣＲの解析
（１）ヒト末梢血由来肥満細胞の調製
ヒト末梢血由来肥満細胞は、公知の方法〔Ｂｌｏｏｄ，９７，１０１６（２００１）〕によって調製した。ヒト末梢血は、インフォームドコンセントに基づいて取得した。以下、簡単に方法を記載する。
ヒト末梢血より肥満細胞の前駆細胞であるリニアージ陰性の単核球細胞を分画後、無血清のイスコフのメチルセルロース培地〔ステム・セル・テクノロジーズ社（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）製〕と、２００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、および１ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３を含むＩＭＤＭを用いて細胞を培養した。培養４２日目にメチルセルロースを溶かして細胞を回収後、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、および５％のＦＣＳを含むＩＭＤＭで培養を継代した。
（２）ＩｇＥ受容体を介した活性化処理をした肥満細胞の調製
上記（１）で調製したヒト末梢血由来培養肥満細胞を、実施例１の（２）と同様にして、ヒトミエローマＩｇＥの存在下で培養した後、ウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体存在下または非存在下で培養した。ヒトミエローマＩｇＥとウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体で処理した細胞をＩｇＥ処理細胞と呼び、ヒトＩｇＥのみで処理した細胞をコントロール細胞と呼ぶ。
（３）ジーンチップを用いた発現解析
ジーンチップ（ヒトゲノムＵ１３３Ａプローブアレイ）を用いて、上記（２）で調製した肥満細胞で発現するＧＰＣＲの解析を行った。方法は、実施例１（３）に記載した方法を用いた。
各遺伝子については、ＡＤ値の値が１００以上でかつフラッグが「Ｐｒｅｓｅｎｔ」である場合に、「発現している」と判断した。コントロール細胞またはＩｇＥ処理細胞で「発現している」と判断された遺伝子をヒト肥満細胞で発現している遺伝子とした。ヒト末梢血由来培養肥満細胞で発現が見られたＧＰＣＲの名称、略称、蛋白質のアミノ酸配列のＮＣＢＩ蛋白質データベースの登録番号、ｃＤＮＡの塩基配列のＮＣＢＩ塩基配列データベースの登録番号、アフィメトリックス社のプローブＩＤを第３表に示した。またこれらのＧＰＣＲの解析結果を第４表に示した。各ＧＰＣＲ遺伝子は第３表の略称で示し、遺伝子発現量としてメディアン値で補正する前のＡＤ値を示した。「Ｆ」の欄はＡＤ値のフラッグでＰは「Ｐｒｅｓｅｎｔ」、Ｍは「Ｍｅｒｇｉｎａｌ」、Ａは「Ａｂｓｅｎｔ」である。「比」の欄はコントロール細胞に対する発現量の比を示した。ヒト肥満細胞で発現していることが、本発明により初めて明らかになった遺伝子については「発現」の欄に＊で示した。また、ＩｇＥ処理細胞における、コントロール細胞に対する発現量の比が、１．８以上または０．５以下であり、かつコントロール細胞およびＩｇＥ処理細胞の少なくとも１つで「発現している」と判断された場合に、ＩｇＥ処理により発現が変動する遺伝子と判断し、「変動」の欄に１．８以上の場合には「↑」０．５以下の場合には「↓」で示した。
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第３表および第４表にあげたＧＰＣＲのうち、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＥＤＧ１、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＥＴＢ、ＣＥＬＳＲ２、ＴＥＭ５、ＧＰＲ５８、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５、ＬＴＢ４ＲおよびＣＸＣＲ５は、ヒト肥満細胞で発現していることが今回初めて明らかになったＧＰＣＲである。実施例１の（３）に記載したように、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として有用である。
コントロール細胞とＩｇＥ処理細胞での発現量を比較することにより、ＩｇＥ受容体を介してヒト肥満細胞を活性化した際に発現が変動するＧＰＣＲを同定した。その結果、Ｃ３ａＲ１、β２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ６５、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＥＤＧ１、ＧＰＲ３９、Ａ２ａ、ＥＴＢ、ＲＥ２、ＣＥＬＳＲ２、ＴＥＭ５、ＥＰ４およびＬＴＢ４Ｒは、ＩｇＥ受容体を介した活性化により、発現が変動することが今回初めて明らかになった。ＩｇＥ処理細胞で発現が変動するＧＰＣＲは、肥満細胞の活性化の制御に関与していると推定され、それらのＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として特に有用である。
（４）定量的ＲＴ−ＰＣＲによる発現解析
ジーンチップを用いた発現解析では、発現量が少ないＧＰＣＲの発現は検出できない可能性があるため、定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いた発現解析も実施した。また、ジーンチップにプローブが載っていないＧＰＣＲに関して、定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いた発現解析を実施した。第５表に今回ＲＴ−ＰＣＲで発現解析を行ったＧＰＣＲの名称、略称、蛋白質のアミノ酸配列のＮＣＢＩ蛋白質データベースの登録番号、ｃＤＮＡの塩基配列のＮＣＢＩ塩基配列データベースの登録番号、遺伝子特異的プライマーの配列番号を示した。
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上記（２）で調製した肥満細胞から、ＲＮイージー・ミニ・キット（キアゲン社製）を用いてＤＮａｓｅＩ処理を加えて全ＲＮＡを取得後、スーパースクリプトＲＴ−ＰＣＲ用第１鎖合成システム（インビトロジェン社製）を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成した。方法はキットの説明書にしたがって行った。プライマーとしては、オリゴ（ｄＴ）プライマーを使用した。全ＲＮＡ１μｇから調製した一本鎖ｃＤＮＡを水で希釈し、全量を２．１ｍｌとした。以下の定量的ＲＴ−ＰＣＲ解析には、さらに２０倍希釈した溶液を１０μｌ使用した。
定量的ＲＴ−ＰＣＲは下記のようにして行った。試薬は宝酒造社製のキット（Ｆｏｒ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  ＴａＫａＲａ  Ｅｘ  Ｔａｑ  Ｒ−ＰＣＲ  Ｖｅｒｓｉｏｎ）を用いた。１０μｌの上記一本鎖ｃＤＮＡ、２．０μｌの１０×Ｒ−ＰＣＲバッファー（Ｍｇ２＋  ｆｒｅｅ）、０．２μｌの２５０ｍＭ  Ｍｇ２＋  ｓｏｌｕｔｉｏｎ、０．６μｌのｄＮＴＰｓ（１０ｍｍｏｌ／ｌ）、１．０μｌのＳＹＢＲグリーンＩ（１／２５００希釈）、各１．５μｌの遺伝子特異的プライマー（４μｍｏｌ／ｌ）、０．２μｌのＥｘＴａｑ  Ｒ−ＰＣＲ  Ｖｅｒｓｉｏｎ、および３μｌの水からなる反応液を調製後、ＡＢＩ配列検出システム（ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００、アプライドバイオシステムズ社製）を用いてＰＣＲを行った。遺伝子特異的プライマーとしては、第４表に示した配列番号１〜４６の配列からなるＤＮＡを使用した。反応条件としては、最初９４℃で５分間加熱後、９４℃で３０秒、６５℃で１分間、７２℃で３０秒からなるサイクルを４５サイクル繰り返し、最後に２５℃で２分間加熱する条件を用いた。
発現量は、バックグラウンド補正後のシグナル強度が５００に達する時のサイクル数（Ｃｔ値）で表した。ネガティブコントロールとして、一本鎖ｃＤＮＡの代わりに滅菌水を用いたＰＣＲも行った。反応終了後、得られたＰＣＲ反応液より５μｌを分取し、１．５％アガロースゲル〔シーケム（ＳｅａＫｅｍ）ＧＴＧアガロース（カンブレックス（ＣＡＭＢＲＥＸ）社製）をトリス（Ｔｒｉｓ）−酢酸バッファー（４０ｍｍｏｌ／ｌ  トリス−酢酸、１ｍｍｏｌ／ｌ  エチレンジアミン４酢酸）に溶かして作製〕にて電気泳動した。ゲルをＳＹＢＲグリーンＩ１００００倍希釈液にて３０分染色し、フルオルイメージャー〔ＦｌｕｏｒＩｍａｇｅｒ、モレキュラー・ダイナミクス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）社製〕を用いて予想されるＤＮＡ断片の増幅を確認した。一本鎖ｃＤＮＡを用いた際に予想されるＤＮＡ断片のみが増幅され、滅菌水を用いた際には該断片の増幅がなく、かつ一本鎖ｃＤＮＡを用いた際のＣｔ値が３９以下の場合に、遺伝子発現があると判定した。結果を第６表に示す。滅菌水を用いた際のＣｔ値が３９以下のものに関しては、プライマーのダイマー化に由来する断片が増幅されためにＣｔ値が低くなったことを確認した。
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解析の結果、ＧＰＲ１８、ＧＰＲ３５、Ｐ２Ｙ１０、Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ｈＲＵＰ１６、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、ＳＮＯＲＦ３３、Ｃ−ＴＨＹＭＵ２０１１５４８、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ１０７、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４、ｈＲＵＰ９、ｍＰＲａ、ｍＰＲｇ、ＳＲＬおよびＨ９６３が、ヒト末梢血由来培養肥満細胞で発現していることが今回初めて明らかになった。ＧＰＲ１８、Ｐ２Ｙ１０、ＧＰＲ１２６、ＧＰＲ４１、ＧＰＲ４３、ＧＰＲ６８、およびＨ９６３は、ジーンチップでは発現が検出できなかったが、ＲＴ−ＰＣＲ解析では発現が検出された。これらのヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として有用である。
コントロール細胞とＩｇＥ処理細胞での発現量を比較することにより、ＩｇＥ受容体を介してヒト肥満細胞を活性化した際に発現が変動するＧＰＣＲを同定することができる。
Ｃ−ＴＥＳＴＩ２０２７２９６、ＧＰＲ１４１、ＩＴＲ、ＭＲＧＸ２、Ｇ１０ｄ、ＧＰＲ４３、ＧＲＰＲ、ＨＥＯＡＤ５４およびＨ９６３は、ＩｇＥ受容体を介した活性化により、発現が変動（Ｃｔ値が１以上変動）することが今回初めて明らかになった。ＩｇＥ処理細胞で発現が変動するＧＰＣＲは、肥満細胞の活性化の制御に関与していると推定され、それらのＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として特に有用である。
実施例３  ヒト末梢血由来肥満細胞を各種条件で培養した際に発現するＧＰＣＲの解析（２）
（１）各種培養条件を用いた肥満細胞の調製（ＬＰＳ受容体を介した肥満細胞の活性化）
実施例２の（１）に記載した方法で調製したヒト末梢血由来培養肥満細胞を、３０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮ−γ（Ｒ＆Ｄシステムズ社製）の存在下または非存在下、３７℃で２４時間培養した。次いで、細胞を洗浄後、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ由来、シグマ−アルドリッチ社製）の存在下または非存在下、３７℃で２時間または６時間培養した。培養には、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、および５％のＦＣＳを含むＩＭＤＭを使用した。
ＩＦＮ−γのみで処理した細胞をＩＦＮ−γ処理細胞、ＩＦＮ−γとＬＰＳで処理した細胞をＩＦＮ−γ＋ＬＰＳ処理細胞、ＬＰＳのみで処理した細胞をＬＰＳ処理細胞、ＩＦＮ−γとＬＰＳで処理していない細胞をコントロール細胞と呼ぶ。
（２）ジーンチップを用いた発現解析
ジーンチップ（ヒト・ゲノムＵ１３３Ａプローブ・アレイ）を用いて、上記（１）で調製した肥満細胞で発現するＧＰＣＲの解析を行った。方法は、実施例１（３）に記載した方法を用いた。
各遺伝子については、ＡＤ値の値が１００以上でかつフラッグが「Ｐｒｅｓｅｎｔ」である場合に、「発現している」と判断した。コントロール細胞、ＩＦＮ−γ処理細胞、ＬＰＳ処理細胞およびＩＦＮ−γ＋ＬＰＳ処理細胞のいずれかで「発現している」と判断された遺伝子をヒト肥満細胞で発現している遺伝子とした。ヒト末梢血由来培養肥満細胞で発現が見られたＧＰＣＲの名称、略称、蛋白質のアミノ酸配列のＮＣＢＩ蛋白質データベースの登録番号、ｃＤＮＡの塩基配列のＮＣＢＩ塩基配列データベースの登録番号、アフィメトリックス社のプローブＩＤを第７表に示した。またこれらのＧＰＣＲの解析結果を２時間培養した結果を第８表に、６時間培養した結果を第９表に示した。各ＧＰＣＲ遺伝子は第７表の略称で示し、遺伝子発現量としてメディアン値で補正する前のＡＤ値を示した。「Ｆ」の欄はＡＤ値のフラッグでＰは「Ｐｒｅｓｅｎｔ」、Ｍは「Ｍｅｒｇｉｎａｌ」、Ａは「Ａｂｓｅｎｔ」である。「比」の欄はコントロール細胞に対する発現量の比を示した。ヒト肥満細胞で発現していることが、本発明により初めて明らかになった遺伝子については「発現」の欄に＊で示した。また、各薬剤処理細胞における、コントロール細胞に対する発現量の比が、１．８以上または０．５以下であり、かつコントロール細胞および該薬剤処理細胞の少なくとも１つで「発現している」と判断された場合に、該薬剤処理により発現が変動する遺伝子と判断し、「変動」の欄に１．８以上の場合には「↑」０．５以下の場合には「↓」で示した。
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第７表、第８表および第９表にあげたＧＰＣＲのうち、ＥＭＲ２、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＴＭ７ＳＦ１、ＧＰＲ３７、ＣＤ９７、ＭＣ１、ＧＰＲ６５、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、Ｄ２、ＥＤＧ２、Ａ３、Ｃ５Ｒ１、ＯＰＮ３、ＧＰＲ２７、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＣＣＲＬ２、ｍｇｌｕ６、ＣＢ２、ＧＰＲ３９、Ｐ２Ｙ５、Ａ１、Ｐ２Ｙ４、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＥＴＢ、ＧＮＲＨＲ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７、Ｈ４、ＧＰＲ１２、ＧＰＲ３２、ＧＰＲ５８、ＣＥＬＳＲ１、Ｍｏｔｉｌｉｎ  Ｒ、ＣＥＬＳＲ３、ＲＲＨ、ＥＰ４、ＣＣＲ１、Ｄ５およびＣＸＣＲ５は、ヒト肥満細胞で発現していることが今回初めて明らかになったＧＰＣＲである。これらのヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として有用である。
コントロール細胞とＩＦＮ−γ処理細胞での発現量を比較することにより、ＩＦＮ−γ受容体を介してヒト肥満細胞を活性化した際に発現が変動するＧＰＣＲを同定した。その結果、Ｃ３ａＲ１、ＰＡＦＲ、Ａ２ｂ、ＣＤ９７、ＥＤＧ２、ＯＰＮ３、ＣＲＴＨ２、ＥＤＧ１、ＥＰ２、Ｈ４、ＧＰＲ３２およびＣＥＬＳＲ１は、ＩＦＮ−γ受容体を介した活性化により、発現が変動することが今回初めて明らかになった。ＩＦＮ−γ処理細胞で発現が変動するＧＰＣＲは、肥満細胞の活性化の制御に関与していると推定され、それらのＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として特に有用である。
コントロール細胞とＬＰＳ処理細胞での発現量を比較することにより、ＬＰＳ受容体を介してヒト肥満細胞を活性化した際に発現が変動するＧＰＣＲを同定した。その結果、Ｃ３ａＲ１、ＰＡＦＲ、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ｃ５Ｒ１、Ａ２ａ、ＡＴ１Ｂ、ＣＥＬＳＲ２、ＣＣＲ７およびＥＰ４は、ＬＰＳ受容体を介した活性化により、発現が変動することが今回初めて明らかになった。ＬＰＳ処理細胞で発現が変動するＧＰＣＲは、肥満細胞の活性化の制御に関与していると推定され、それらのＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として特に有用である。
コントロール細胞とＩＦＮ−γ＋ＬＰＳ処理細胞での発現量を比較することにより、ＩＦＮ−γ受容体とＬＰＳ受容体の両方を介してヒト肥満細胞を活性化した際に発現が変動するＧＰＣＲを同定した。その結果、Ｃ３ａＲ１、ＰＡＦＲ、ＧＰＲ１０５、ＣＤ９７、ＭＣ１、Ａ３、ＯＰＮ３、ＥＤＧ１、ＣＣＲＬ２、Ｐ２Ｙ５、Ａ２ａ、ＣＣＲ７、ＲＥ２、ＣＥＬＳＲ２、ＣＥＬＳＲ１およびＥＰ４は、ＩＦＮ−γ受容体とＬＰＳ受容体の両方を介した活性化により、発現が変動することが今回初めて明らかになった。ＩＦＮ−γ＋ＬＰＳ処理で発現が変動するＧＰＣＲは、肥満細胞の活性化の制御に関与していると推定され、それらのＧＰＣＲは、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として特に有用である。
ＬＰＳ処理細胞とＩＦＮ−γ＋ＬＰＳ処理細胞での発現量を比較することにより、ＬＰＳ受容体を介したヒト肥満細胞の活性化に及ぼすＩＦＮ−γの影響を調べることができる。ＣＤ９７、Ａ２ａおよびＣＣＲ７は、ＬＰＳ単独刺激でも発現が増加するが、ＩＦＮ−γで前処理しておくとさらに発現が増加することが今回初めて明らかになった。一方、ＭＣ１は、ＬＰＳ単独刺激でも発現が減少するが、ＩＦＮ−γで前処理しておくとさらに発現が減少することが今回初めて明らかになった。これらのＧＰＣＲは、肥満細胞の活性化の制御に深く関与していると推定され、肥満細胞が関与する疾患の治療薬の標的として特に有用である。
実施例４  ＩｇＥ受容体を介したヒト肥満細胞の活性化に及ぼすＨＥＯＡＤ５４のアゴニストの作用
（１）ＩｇＥ受容体を介したヒト末梢血由来肥満細胞の活性化に及ぼすＨＥＯＡＤ５４のアゴニストの作用
５−オキソ−６Ｅ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ−エイコサテトラエン酸（以下５−ｏｘｏ−ＥＴＥと略す）はＨＥＯＡＤ５４のリガンドであり、アゴニストとして作用することが最近明らかになった〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，３１４５９（２００２）；Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，６３，４７１（２００３）〕。実施例２（４）において、ＨＥＯＡＤ５４がヒト末梢血由来肥満細胞で発現していることが判明したことから、５−ｏｘｏ−ＥＴＥのヒト末梢血由来肥満細胞の活性化に及ぼす作用を検討した。ヒト末梢血由来肥満細胞の調製と培養は、実施例２に記載した方法で行った。
１μｇ／ｍｌのヒトミエローマＩｇＥ（コスモバイオ社製）、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、および５％のＦＣＳを含むＩＭＤＭ中にヒト末梢血由来肥満細胞を２．５×１０５個／ｍｌになるように調製し、９６ウェル・プレートに１ウェル当たり１００μｌずつ分注し３７℃で２４時間培養した。遠心分離により培地を除き、タイロード（Ｔｙｒｏｄｅ）緩衝液（１２６．１ｍｍｏｌ／ｌ  ＮａＣｌ、４．０ｍｍｏｌ／ｌ  ＫＣｌ、１．０ｍｍｏｌ／ｌ  ＣａＣｌ２、０．６ｍｍｏｌ／ｌ  ＭｇＣｌ２、０．６ｍｍｏｌ／ｌ  ＫＨ２ＰＯ４、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５．６ｍｍｏｌ／ｌ  Ｄ−グルコース、０．１％ウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）で洗浄後、１００μｌのタイロード緩衝液を加えて３７℃で３０分間インキュベートした。次いで最終濃度１．５μｇ／ｍｌのウザギ抗ヒトＩｇＥ抗体〔ダコ（Ｄａｋｏ）社製〕を加え、さらに３７℃で３０分間インキュベートし、脱顆粒を誘導した。遠心により上清を回収し、ヒスタミン・イムノアッセイ・キット〔イムノテック（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ）社製〕を用いて上清中のヒスタミン量を測定することにより、脱顆粒の程度を測定した。ウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体を添加しないで同様の実験を行うことにより、ＩｇＥ受容体を介した刺激がないときの自発的なヒスタミンの放出量を測定した。また、ウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体の代わりに最終濃度１％のトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００（ナカライテスク社製）を添加して同様の実験を行うことにより、ヒト末梢血由来肥満細胞中の全ヒスタミン量を測定した。
上記において、抗ヒトＩｇＥ抗体添加の前に加えるタイロード緩衝液の代わりに、各種濃度の５−ｏｘｏ−ＥＴＥ〔ケイマン（Ｃａｙｍａｎ）社製〕を含むタイロード緩衝液を用いた場合の上清中に放出されたヒスタミン量を測定することにより、脱顆粒に及ぼす５−ｏｘｏ−ＥＴＥの影響を調べた。使用した５−ｏｘｏ−ＥＴＥの濃度と脱顆粒の程度を第１０表に示した。脱顆粒の程度は、全ヒスタミン量に対する上清中に放出されたヒスタミン量の割合（％）で示した。第１０表に示すように、５−ｏｘｏ−ＥＴＥは、ＩｇＥ受容体を介した肥満細胞の脱顆粒を抑制することがわかった。
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（２）ＩｇＥ受容体を介したヒト肥満細胞株ＬＡＤ２の活性化に及ぼすＨＥＯＡＤ５４のアゴニストの作用
ＬＡＤ２は最近樹立されたヒト肥満細胞株で、ヒト肥満細胞の性質をよく保持していることが知られている〔Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．，２７，６７１（２００３）；Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．，２７，６７７（２００３）〕。そこで、５−ｏｘｏ−ＥＴＥがヒト肥満細胞株ＬＡＤ２の活性化に及ぼす作用について検討した。ＬＡＤ２は、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦを含むＳｔｅｍ  Ｐｒｏ−３４培地〔インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）社製〕で培養した。ＬＡＤ２は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ  ２０８９２−１８８１，ＵＳＡ）より入手した。
１μｇ／ｍｌのビオチン結合ヒトミエローマＩｇＥ（コスモバイオ社製）および１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦを含むＳｔｅｍ  Ｐｒｏ−３４培地中にＬＡＤ２を２．５×１０５個／ｍｌになるように調製し、９６ウェル・プレートに１ウェル当たり１００μｌずつ分注し３７℃で２４時間培養した。遠心分離により培地を除き、タイロード緩衝液で洗浄後、１００μｌのタイロード緩衝液を加えて３７℃で３０分間インキュベートした。次いで最終濃度１０μｇ／ｍｌのストレプトアビジン−フィコエリスリン〔ＢＤファーミンジェン（ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）社製、以下ストレプトアビジン−ＰＥと略す〕を加え、さらに３７℃で３０分間インキュベートし、脱顆粒を誘導した。遠心分離により上清を回収し、ヒスタミン・イムノアッセイ・キットを用いて上清中のヒスタミン量を測定することにより、脱顆粒の程度を測定した。ストレプトアビジン−ＰＥを添加しないで同様の実験を行うことにより、ＩｇＥ受容体を介した刺激がないときの自発的なヒスタミンの放出量を測定した。また、ストレプトアビジン−ＰＥの代わりに最終濃度１％のトリトンＸ−１００を添加して同様の実験を行うことにより、ＬＡＤ２中の全ヒスタミン量を測定した。
上記において、ストレプトアビジン−ＰＥ添加の前に加えるタイロード緩衝液の代わりに、各種濃度の５−ｏｘｏ−ＥＴＥを含むタイロード緩衝液を用いた場合の上清中に放出されたヒスタミン量を測定することにより、脱顆粒に及ぼす５−ｏｘｏ−ＥＴＥの影響を調べた。使用した５−ｏｘｏ−ＥＴＥの濃度と脱顆粒の程度を第１１表に示した。脱顆粒の程度は、全ヒスタミン量に対する上清中に放出されたヒスタミン量の割合（％）で示した。
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上記（１）、（２）の結果から、５−ｏｘｏ−ＥＴＥ処理により、ＩｇＥ受容体刺激によるヒト末梢血由来肥満細胞およびＬＡＤ２の脱顆粒が抑制されることが明らかになった。したがって、５−ｏｘｏ−ＥＴＥおよびＨＥＯＡＤ５４のアゴニストは、ＩｇＥ受容体刺激によるヒト肥満細胞の活性化を抑制する薬剤になると考えられる。
同様にして、他のＧＰＣＲのアゴニストの作用を測定することにより、各ＧＰＣＲのアゴニストまたはアンタゴニストが、ＩｇＥ受容体刺激によるヒト肥満細胞の活性化を抑制するかどうか調べることができる。ヒト肥満細胞の活性化は、脱顆粒の代わりに、ＴＮＦ−αやＧＭ−ＣＳＦ等のサイトカイン産生、ＩＬ−８、Ｉ−３０９、ＭＩＰ−１α等のケモカイン産生、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、ＰＧＤ２等の炎症メディエーター産生等を測定することによっても調べることができる〔Ｂｌｏｏｄ  １００，３８６１（２００２）〕。ヒト末梢血由来肥満細胞やＬＡＤ２の代わりに、ヒト臍帯血由来肥満細胞、ヒトの肺、皮膚、扁桃から調製した肥満細胞を用いることもできる。
実施例５  各種ＧＰＣＲのアゴニストがヒト肥満細胞の活性化に及ぼす作用
実施例１〜３においてヒト肥満細胞で発現することが明らかになったＧＰＣＲのアゴニストのＬＡＤ２に対する作用を検討した。
（１）ＩｇＥ受容体を介したヒト肥満細胞の活性化に及ぼす各種ＧＰＣＲのアゴニストの作用
ＬＡＤ２は実施例４に記載した方法で培養した。１μｇ／ｍｌのヒトミエローマＩｇＥと１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦを含むＳｔｅｍ  Ｐｒｏ−３４培地中にＬＡＤ２を２．５×１０５個／ｍｌになるように調製し、３７℃で２４時間培養した。遠心分離により培地を除き、タイロード緩衝液で洗浄した後、タイロード緩衝液を添加して４．０×１０５個／ｍｌになるように調製し、９６ウェル・プレートに１ウェルあたり５０μｌずつ分注した。次いで、５０μｌのタイロード緩衝液を加えて３７℃で３０分間インキュベートした後、最終濃度１０μｇ／ｍｌのウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体（ダコ社製）を加え、さらに３７℃で２０分間インキュベートし、脱顆粒を誘導した。遠心により上清を回収し、上清中のβ−ヘキソサミニダーゼ活性を測定することにより、脱顆粒の程度を測定した。β−ヘキソサミニダーゼ活性は、回収した上清５０μｌに、４０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）に溶解した４ｍｍｏｌ／ｌ  ｐ−ニトロフェニルＮ−アセチル−β−グルコサミニド（シグマ社製）を５０μｌを加え、３７℃で１時間インキュベート後、０．２ｍｏｌ／ｌグリシン（ｐＨ１０．７）を１００μｌ加えたサンプルの４０５ｎｍにおける吸光度をプレートリーダー１４２０  ＡＲＶＯｓｘ（パーキンエルマー社製）を用いて測定した。ウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体を添加しないで同様の実験を行うことにより、ＩｇＥ受容体を介した刺激がないときの自発的なβ−ヘキソサミニダーゼの放出量を測定した。また、ウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体の代わりに最終濃度１％のトリトンＸ−１００を添加して同様の実験を行うことにより、ＬＡＤ２中の全β−ヘキソサミニダーゼ活性を測定した。
上記において、抗ヒトＩｇＥ抗体添加の前に加えるタイロード緩衝液の代わりに、第１２表に示す各種濃度のＧＰＣＲのアゴニストを含むタイロード緩衝液を用いた場合の上清中に放出されたβ−ヘキソサミニダーゼ活性を測定することにより、脱顆粒に及ぼす各アゴニストの影響を調べた。ただし、ＧＰＲ３４のアゴニストとしてリゾホスファチジルセリンを使用した実験においては、アゴニストを含むタイロード試薬を加えた後のインキュベーションは１０分間、ウサギ抗ヒトＩｇＥ抗体の最終濃度は１５μｇ／ｍｌで行った。使用したＧＰＣＲアゴニストと濃度、およびそれらを用いた時の脱顆粒の程度を第１２表に示した。脱顆粒の程度は、全β−ヘキソサミニダーゼ活性に対する上清中のβ−ヘキソサミニダーゼ活性の割合（％）で示した。
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以上の結果から、Ａ２ａのアゴニスト処理により、ＩｇＥ受容体刺激によるＬＡＤ２の脱顆粒が抑制されることが明らかになった。したがって、Ａ２ａのアゴニストは、ＩｇＥ受容体刺激によるヒト肥満細胞の活性化を抑制する薬剤になると考えられる。
一方、Ｄ２、Ｄ５、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ１０５、ＧＰＲ４３、Ｈ１、Ｈ４、ＧＰＲ３４、ＥＰ３  ｖａｒａｉｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｆ、ＥＰ３  ｖａｒａｉｎｔ  ｊ、ＥＰ２またはＥＰ４のアゴニスト処理により、ＩｇＥ受容体刺激によるＬＡＤ２の脱顆粒が増強されることが明らかになった。したがって、Ｄ２、Ｄ５、ＧＰＲ９１、ＧＰＲ１０５、ＧＰＲ４３、Ｈ１、Ｈ４、ＧＰＲ３４、ＥＰ３  ｖａｒａｉｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｆ、ＥＰ３  ｖａｒａｉｎｔ  ｊ、ＥＰ２またはＥＰ４のアンタゴニストは、ＩｇＥ受容体刺激によるヒト肥満細胞の活性化を抑制する薬剤になると考えられる。
同様にして、他のＧＰＣＲのアゴニストの作用を測定することにより、各ＧＰＣＲのアゴニストまたはアンタゴニストが、ＩｇＥ受容体刺激によるヒト肥満細胞の活性化を抑制するかどうか調べることができる。ヒト肥満細胞の活性化は、脱顆粒の代わりに、ＴＮＦ−αやＧＭ−ＣＳＦ等のサイトカイン産生、ＩＬ−８、Ｉ−３０９、ＭＩＰ−１α等のケモカイン産生、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、ＰＧＤ２等の炎症メディエーター産生等を測定することによっても調べることができる〔Ｂｌｏｏｄ  １００，３８６１（２００２）〕。ＬＡＤ２の代わりに、ヒト臍帯血由来肥満細胞、ヒト末梢血由来肥満細胞、ヒトの肺、皮膚、扁桃から調製した肥満細胞を用いることもできる。
（２）ヒト肥満細胞の活性化に及ぼす各種ＧＰＣＲのアゴニストの作用
１μｇ／ｍｌのヒトミエローマＩｇＥと１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦを含むＳｔｅｍ  Ｐｒｏ−３４培地中にＬＡＤ２を２．５×１０５個／ｍｌになるように調製し、３７℃で２４時間培養した。遠心により培地を除き、タイロード緩衝液で洗浄した後、タイロード緩衝液を添加して２．０×１０５個／ｍｌになるように調製し、９６ウェル・プレートに１ウェルあたり１００μｌずつ分注した。次いで、各種濃度の第１３表に示すＧＰＣＲのアゴニストを添加したタイロード緩衝液を加えて３７℃で２０分間インキュベートした。遠心により上清を回収し、上清中のβ−ヘキソサミニダーゼ活性を測定することにより、各ＧＰＣＲのアゴニストの単独刺激による脱顆粒の程度を測定した。β−ヘキソサミニダーゼ活性は実施例５（１）と同様にして測定した。ＧＰＣＲのアゴニストを添加しないで同様の実験を行うことにより、自発的なβ−ヘキソサミニダーゼの放出量を測定した。また、ＧＰＣＲアゴニストの代わりに最終濃度１％のトリトンＸ−１００を添加して同様の実験を行うことにより、ＬＡＤ２中の全β−ヘキソサミニダーゼ活性を測定した。
使用したＧＰＣＲアゴニストと最終濃度、およびそれらを用いた時の脱顆粒の程度を第１３表に示した。脱顆粒の程度は、全β−ヘキソサミニダーゼ活性に対する上清中のβ−ヘキソサミニダーゼ活性の割合（％）で示した。
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以上の結果から、Ａ２ａのアゴニストは、ＬＡＤ２の脱顆粒を誘導しないことが明らかになった。一方、ＥＰ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｆ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＰ４、ＰＡＦＲ、ＥＴＢ、ＥＤＧ２またはＧＰＲ３４のアゴニスト処理により、ＬＡＤ２の脱顆粒が誘導されることが明らかになった。したがって、ＥＰ２、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｈ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｆ、ＥＰ３  ｖａｒｉａｎｔ  ｊ、ＥＰ４、ＰＡＦＲ、ＥＴＢ、ＥＤＧ２またはＧＰＲ３４のアンタゴニストは、ヒト肥満細胞の活性化を抑制する薬剤になると考えられる。
同様にして、他のＧＰＣＲのアゴニストの作用を測定することにより、各ＧＰＣＲのアゴニストまたはアンタゴニストが、ＩｇＥ受容体刺激によるヒト肥満細胞の活性化を抑制するかどうか調べることができる。ヒト肥満細胞の活性化は、脱顆粒の代わりに、ＴＮＦ−αやＧＭ−ＣＳＦ等のサイトカイン産生、ＩＬ−８、Ｉ−３０９、ＭＩＰ−１α等のケモカイン産生、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、ＰＧＤ２等の炎症メディエーター産生等を測定することによっても調べることができる〔Ｂｌｏｏｄ  １００，３８６１（２００２）〕。ＬＡＤ２の代わりに、ヒト臍帯血由来肥満細胞、ヒト末梢血由来肥満細胞、ヒトの肺、皮膚、扁桃から調製した肥満細胞を用いることもできる。
上記（１）、（２）および実施例４の結果から、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲに作用する化合物（アゴニスト、アンタゴニスト、機能修飾物質）や抗体、該ＧＰＣＲの発現を制御する化合物、抗体、ｓｉＲＮＡ、またはアンチセンスＤＮＡ、あるいは該ＧＰＣＲのシグナル伝達を制御する化合物、抗体、ｓｉＲＮＡ、またはアンチセンスＤＮＡは、下記の（ｂ）〜（ｊ）のいずれかの医薬として有用と考えられる。
（ｂ）ヒト肥満細胞の活性化抑制剤
（ｃ）ヒト肥満細胞の脱顆粒抑制剤
（ｄ）ヒト肥満細胞の炎症性メディエーター産生抑制剤
（ｅ）ヒト肥満細胞のサイトカイン産生抑制剤
（ｆ）ヒト肥満細胞のケモカイン産生抑制剤
（ｇ）アトピー性皮膚炎の治療薬
（ｈ）喘息の治療薬
（ｉ）慢性閉塞性肺疾患の治療薬
（ｊ）アレルギー性疾患の治療薬
【産業上の利用可能性】  本発明により、ヒト肥満細胞で発現するＧＰＣＲが同定され、これらのＧＰＣＲを標的とした、ヒト肥満細胞の活性化抑制剤およびアトピー性皮膚炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患等のアレルギー性疾患の治療薬、ならびにそのスクリーニング法が提供される。
【配列表フリーテキスト】配列番号１−発明者：斎藤博久；岡山吉道
発明者：柏倉淳一；三浦和美；大林正也
発明者：吉田哲郎；佐々木克敏
【配列表】
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【国際調査報告】
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