(57)【要約】
2004043959.tif 000056（式中、Ｒ１はＨ、ハロゲン、ＯＨ、アミノ、１〜５個のハロゲンで置換されてもよいＣ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシ、ｎは０〜２、Ｒ２とＲ３はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−４アルケニル、−Ｌ−Ａｒ（Ｌは結合、Ｃ１−６のアルキレン、ＡｒはＮ・Ｓ・Ｏの１〜３個を含んでいてもよい飽和または不飽和の５〜６員環基、飽和又は不飽和の縮合２環式８〜１２員環炭化水素基。）、これらの基はＡ群［ハロゲン、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＨ、オキソ、非置換又は置換アミノ等］で置換されてもよい。Ｘは−（ＣＨＲ４）−、−（Ｃ＝ＮＯＲ５）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｒ４は−ＮＲ６Ｒ７（Ｒ６、Ｒ７はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルカルボニル等）、Ｒ５はＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｙは−ＮＨ−、メチレン、Ｚはメチレン、エチレン、ビニレン、ＹとＺのＨは、ハロゲン、ＮＯ２、アルキル等で置換されてもよい。）で表される化合物またはその塩、これらを有効成分とする医薬組成物。  本発明化合物はポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ阻害作用を有し、安全性が高く、かつ製剤的に優れている。
2004043959.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で示される化合物、およびその医薬として許容される塩。
2004043959.tif 000055
（式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、１〜５個のハロゲン原子で置換されていてもよい直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４アルキル基、または、１〜５個のハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜４アルコキシ基を表し、
ｎは０〜２の整数であり、
Ｒ２およびＲ３は、各々独立に、水素原子、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜６アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２〜４アルケニル基、または、−Ｌ−Ａｒで表される基（Ｌは結合もしくはＣ１〜６のアルキレンであり、Ａｒは窒素原子・硫黄原子・酸素原子から任意に選択されるヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい飽和もしくは不飽和の５〜６員環基または飽和もしくは不飽和の縮合２環式８〜１２員環炭化水素基を表す。）であり、これらの基はさらにＡ群より任意に選ばれる置換基で１〜３個置換されていても良い。
［Ａ群：ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、オキソ基、Ｃ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基、或いは、Ａａ群より任意に選ばれる置換基で１〜５個置換されていても良い直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜６アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜５アルコキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜５アルキルチオ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２〜４アルケニル基、または飽和もしくは不飽和の含窒素５〜６員環基である。
Ａａ群：ハロゲン原子、ニトロ基、ヒドロキシ基、Ｃ１〜３のアルコキシ基、シアノ基、Ｃ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基、カルボキシル基、Ｃ１〜３のアルコキシカルボニル基］
Ｘは−（ＣＨＲ４）−、−（Ｃ＝ＮＯＲ５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−を表し、
Ｒ４は−ＮＲ６Ｒ７（Ｒ６、Ｒ７は各々独立に、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基またはＣ１〜６アルキルカルボニル基であり、ここで当該アルキル基およびアルキルカルボニル基の水素原子は、フェニル基、ピペリジニル基もしくはＣ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていてもよいアミノ基で置換されていてもよく、さらに、当該フェニル基およびピペリジニル基の水素原子は、Ｃ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基で置換されていてもよい。）、水酸基、Ｃ１〜６アルコキシ基または水素原子を表し、
Ｒ５は水素原子またはＣ１〜６アルキル基を表し、
Ｙはイミノ基（−ＮＨ−）またはメチレン基を表し、
Ｚはメチレン基、エチレン基またはビニレン基（−ＣＨ＝ＣＨ−）を表し、これらＹおよびＺにおける水素原子は、ハロゲン原子、ニトロ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルコキシ基、シアノ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基もしくは直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルコキシ基で１ないし２個置換されていても良いフェニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基で置換されていてもよい。）
【請求項２】
ＹおよびＺがメチレン基を表し、かつＸがＣＨＲ４（Ｒ４は請求項１に記載の意味を示す。）である請求項１に記載の化合物、およびその医薬として許容される塩。
【請求項３】
Ｒ２が水素原子を示し、Ｒ３がＡ群より任意に選ばれる置換基で１〜３個置換されていても良い、ヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい飽和もしくは不飽和の５〜６員環基または飽和もしくは不飽和の縮合２環式８〜１２員環炭化水素基である請求項１または２に記載の化合物、およびその医薬として許容される塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物およびその医薬として許容される塩の少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物およびその医薬として許容される塩の少なくとも１つを含有することを特徴とするポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ阻害剤。
【請求項６】
格子定数がａ＝６７Å±５Å  ｂ＝９２Å±５Å  ｃ＝６４Å±５Åであり、空間群がＰ２１２１２の斜方晶系であることを特徴とするポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ触媒フラグメント結晶。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物およびその医薬として許容される塩とヒトポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ触媒フラグメントとの複合体結晶。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物およびその医薬として許容される塩が（＋）−（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１（２Ｈ）−オンである請求項７記載のヒトポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ触媒フラグメントとの複合体結晶。
【請求項９】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物およびその医薬として許容される塩が７−アミノ−３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）オンである請求項７記載のヒトポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ触媒フラグメントとの複合体結晶。
【請求項１０】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物およびその医薬として許容される塩が７−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）メチルアミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンである請求項７記載のヒトポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼとの複合体結晶。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は式（Ｉ）で示される化合物、それを有効成分として含有する医薬組成物、およびヒトポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼの該化合物との複合体もしくは該ポリメラーゼの単独の結晶に関する。
【背景技術】  ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（以下ＰＡＲＰと略す）（ＥＣ２．４．２．３０、別名ポリ（ＡＤＰ−リボース）シンターゼ（ＰＡＲＳ）、ポリ（ＡＤＰ−リボース）トランスフェラーゼ（ｐＡＤＰＲＴ））はペルオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）等の活性酸素種や放射線等によるＤＮＡ損傷に依存して活性化される特異的な核内酵素であり、ＤＮＡが損傷を受けると、ＤＮＡ上の単鎖切断部位を認識し、そのＮ末に存在するＺｎフィンガードメインがＤＮＡと結合することにより活性化され、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以下、ＮＡＤと略す。）を基質としてそのＡＤＰ−リボース部分をヒストン、ＤＮＡ−ポリメラーゼ、ＤＮＡ−トポイソメラーゼ等の近傍の蛋白質への転移反応を触媒する。したがって、ＰＡＲＰはこのＤＮＡ単鎖切断のシグナルを出すと同時にＤＮＡ修復過程に関与していると考えられている。
またＰＡＲＰの異常な活性化が起こると、その基質であるＮＡＤの消費、枯渇により、ＡＴＰが減少してエネルギー産生系が破綻し、細胞死が起こると考えられている。従って、ＰＡＲＰ阻害剤は虚血性疾患、虚血再灌流傷害の予防、治療剤として有用であると考えられる。
ＰＡＲＰはアポトーシスの発現機構を構成するプロテアーゼの一つであるカスパーゼ−３（インターロイキン−１β変換酵素様システインプロテアーゼファミリーの１つ）の基質として限定分解をうけることからアポトーシスに関連しているとも考えられている。
さらにＰＡＲＰ阻害剤として一般的に知られている３−アミノベンズアミドやニコチンアミド等を用いた検討やＰＡＲＰノックアウトマウスを用いた実験より、ＰＡＲＰ阻害剤は脳、心臓、消化管、骨格筋および網膜等の虚血性疾患、関節炎、炎症性腸疾患および多発性脳硬化症等の炎症性疾患（例えば非特許文献５参照）、糖尿病、ショック、錐体外路系障害、痛覚過敏（例えば非特許文献８参照）、毛細血管拡張性運動失調症といった種々の病態において、細胞死抑制作用ならびに病態の改善作用を有することが示されている。また、ＰＡＲＰ阻害剤はＨＩＶを含む抗レトロウイルス剤（例えば非特許文献１０参照）や癌の放射線治療、化学療法の増感剤、シスプラスチン毒性等の抗癌剤治療における副作用の軽減剤としても有用であることが報告されている。
現在知られているＰＡＲＰ阻害剤としては前述の３−アミノベンズアミドのような単環構造のもの以外に、ベンズアミド骨格を含む多環系の母核を有するものが報告されている（例えば特許文献１：国際公開番号ＷＯ０１／４２２１９号）。
しかしこれらは、溶解性、組織移行性、安全性、作用強度等、解決すべき問題点を有しており、有用な化合物の更なる探索が望まれている。
これら問題点を解決すべく、ニワトリＰＡＲＰ触媒フラグメント結晶、ニワトリＰＡＲＰ触媒フラグメントとインヒビターとの複合体結晶を用いた解析等、ＰＡＲＰ触媒フラグメントと基質ＮＡＤ、ＰＡＲＰ阻害剤との結合についていくつかの報告がされているが（例えば非特許文献１：ラフ，Ａ（Ｒｕｆ，Ａ）ら「バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，１９９８年，第３７巻，ｐ．３８９３−３９００参照）、ヒト由来のＰＡＲＰについては結晶化はなされておらず、医薬品開発するためのドラッグデザインするに十分な情報は得られていない。
【発明の開示】
本発明は、有用な薬理作用を示し、安全性が高いＰＡＲＰ阻害作用を有する化合物、およびそれらを有効成分とする医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行なった結果、式（Ｉ）で示される化合物が優れたＰＡＲＰ阻害作用を有し、かつ安全性が高く、製剤的にすぐれた化合物であることを見出し、本発明を完成した。また、本発明の化合物とヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとの複合体の結晶を得ることに成功し、本発明を完成した。
本発明は、（１）式（Ｉ）で示される化合物およびその医薬として許容される塩、（２）それを有効成分として含有する医薬、（３）式（Ｉ）で示される化合物およびその塩とヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとの複合体結晶に関する。
本発明化合物について以下に説明する。
〔１〕本発明の態様１は下記一般式（Ｉ）で示される化合物、およびその医薬として許容される塩である。
2004043959.tif 000003
（式中、Ｒ１は水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、１〜５個のハロゲン原子で置換されていてもよい直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４アルキル基、または、１〜５個のハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１〜４アルコキシ基を表し、
ｎは０〜２の整数であり、
Ｒ２およびＲ３は、各々独立に、水素原子、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜６アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２〜４アルケニル基、または、−Ｌ−Ａｒで表される基（Ｌは結合もしくはＣ１〜６のアルキレンであり、Ａｒは窒素原子・硫黄原子・酸素原子から任意に選択されるヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい飽和もしくは不飽和の５〜６員環基または飽和もしくは不飽和の縮合２環式８〜１２員環炭化水素基を表す。）であり、これらの基はさらにＡ群より任意に選ばれる置換基で１〜３個置換されていても良い。
［Ａ群：ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、オキソ基、Ｃ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基、或いは、Ａａ群より任意に選ばれる置換基で１〜５個置換されていても良い直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜６アルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜５アルコキシ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜５アルキルチオ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ２〜４アルケニル基、または飽和もしくは不飽和の含窒素５〜６員環基（Ａａ群：ハロゲン原子、ニトロ基、ヒドロキシ基、Ｃ１〜３のアルコキシ基、シアノ基、Ｃ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基、カルボキシル基、Ｃ１〜３のアルコキシカルボニル基）］
Ｘは−（ＣＨＲ４）−、−（Ｃ＝ＮＯＲ５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−を表し、
Ｒ４は−ＮＲ６Ｒ７（Ｒ６、Ｒ７は各々独立に、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基またはＣ１〜６アルキルカルボニル基であり、ここで当該アルキル基およびアルキルカルボニル基の水素原子は、フェニル基、ピペリジニル基もしくはＣ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていてもよいアミノ基で置換されていてもよく、さらに、当該フェニル基およびピペリジニル基の水素原子は、Ｃ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていてもよいアミノ基で置換されていてもよい。）、水酸基、Ｃ１〜６アルコキシ基または水素原子を表し、
Ｒ５は水素原子またはＣ１〜６アルキル基を表し、
Ｙはイミノ基（−ＮＨ−）またはメチレン基を表し、
Ｚはメチレン基、エチレン基またはビニレン基（−ＣＨ＝ＣＨ−）を表し、これらＹおよびＺにおける水素原子は、ハロゲン原子、ニトロ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルコキシ基、シアノ基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基もしくは直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルコキシ基で１ないし２個置換されていても良いフェニル基、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基で置換されていてもよい。）
本明細書の定義において、「Ｃ□〜□」の記載は炭素原子の数を示し、「Ｃ１〜４」は「炭素原子数１ないし４」を示し、例えば「Ｃ１〜４のアルキル基」はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等の炭素原子数１ないし４のアルキル基を表すものとする。
上記式（Ｉ）中の各基について具体的に説明する。
〔１−１〕  式中Ｒ１の定義におけるハロゲン原子としてはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられ、好ましくはフッ素原子、塩素原子である。「直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４アルキル基」としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルを挙げることができ、好ましくはメチルである。「Ｃ１〜６アルコキシ基」としては、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、アリルオキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシを挙げることができ、好ましくはメトキシである。
Ｒ２およびＲ３の定義における「直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜６アルキル基」としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、１，２−ジメチルプロピルを挙げることができ、好ましくはメチルである。「直鎖もしくは分枝鎖のＣ２〜４アルケニル基」としては、例えばビニル、アリル、イソプロペニル、２−メチルアリル、ブテニル等を挙げることができる。
「ヘテロ原子を０〜３個含んでいてもよい、飽和もしくは不飽和の５〜６員環基」としては、例えばフェニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニル、ピラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チエニル、フリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジニル、チアジアジニル、チアジアゾリル、トリアゾリル、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロペンテン−１−イル、２−シクロペンテン−１−イル、３−シクロペンテン−１−イル、１−シクロヘキセン−１−イル、ピロリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルフォリニル、などが挙げられ、
「飽和もしくは不飽和の縮合２環式８〜１２員環炭化水素基」としては、例えばナフチル、インデン−２−イル、インダン−１−イル、インダン−２−イル、インダン−５−イル、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフチル、５，６，７，８−テトラヒドロ−５−ナフチル、５，６，７，８−テトラヒドロ−６−ナフチル、などが挙げられ、そのうち好ましいものは８員〜１２員の縮合２環式芳香族炭化水素基であり、具体的には、例えばナフチル、インデン−２−イルなどが挙げられる。
Ｌの定義における「置換されていてもよいＣ１〜６アルキレン」としてはメチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、ｎ−ブチレン、ｓｅｃ−ブチレン、ｎ−ペンチレン、ｎ−ヘキシレン等を挙げることができ、好ましくはＣ１〜４アルキレンであり、また、そのアルキレンの水素原子の置換基は前記Ａ群から選ばれるが、好ましくはヒドロキシ、オキソ、アミノである。
Ａ群の「置換基」の定義における「Ｃ１〜６アルコキシ基」としては、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、アリルオキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシを挙げることができ、好ましくはメトキシである。
「アルキルチオ基」としては、例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオを挙げることができ、好ましくはメチルチオである。
「ハロゲン原子」としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられ、好ましくは臭素原子である。「Ｃ２〜４アルケニル基」としては例えばビニル、２−ブテニル、２−プロペニル、３−ブテニルが挙げられる。
「飽和もしくは不飽和の含窒素５〜６員環基」としては例えばピリジル、イミダゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルフォリニルが挙げられる。「アルコキシカルボニル基」としては例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニルが挙げられる。
〔１−１−ａ〕  好ましくはＲ２が水素原子、Ｒ３が−Ｌ−Ａｒで表される基（Ｌは結合もしくはＣ１〜６のアルキレンであり、Ａｒは窒素原子・硫黄原子・酸素原子から任意に選択されるヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい飽和もしくは不飽和の５〜６員環基または飽和もしくは不飽和の縮合２環式８〜１２員環炭化水素基を表す。）である。
〔１−１−ｂ〕  −Ｌ−Ａｒ基において、より好ましくはＡｒが、窒素原子、硫黄原子、酸素原子から任意に選択されるヘテロ原子を１〜３個含んでいてもよい飽和もしくは不飽和の５〜６員環基であり、
〔１−１−ｃ〕  更に好ましくはＡｒが５〜６員の芳香環基であり、具体的には、例えばフェニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニル、ピラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チエニル、フリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾリン、チアジン、チアジアジニル、チアジアゾリル、トリアゾリルなどを挙げることができる。好ましくはフェニル、ピリジルであり、より好ましくは、フェニルである。
〔１−１−ｄ〕  更に好ましくはＬが結合である。
〔１−２〕  式（Ｉ）において、Ｚは、
〔１−２−ａ〕  メチレン基、エチレン基またはビニレン基（−ＣＨ＝ＣＨ−）を表し、
これらの基における水素原子は、ハロゲン原子、ニトロ基、Ｃ１〜４のアルコキシ基、シアノ基、フェニル基もしくはアミノ基で置換されていてもよく、さらに「フェニル基」の水素原子は、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基もしくは直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルコキシ基で１ないし２個置換されていてもよく、「アミノ基」の水素原子は、直鎖もしくは分枝鎖のＣ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていてもよく、
〔１−２−ｂ〕  好ましくはメチレン基である。
〔１−３〕  式（Ｉ）において、Ｙは、
〔１−３−ａ〕  イミノ基（−ＮＨ−）またはメチレン基（−ＣＨ２−）を表し
〔１−３−ｂ〕  好ましくはメチレン基である。
〔１−４〕  式（Ｉ）において、Ｘは、
〔１−４−ａ〕  −（ＣＨＲ４）−、−（Ｃ＝ＮＯＲ５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−を表し、
Ｒ４は−ＮＲ６Ｒ７（Ｒ６、Ｒ７は各々独立に、水素原子、Ｃ１〜６アルキル基またはＣ１〜６アルキルカルボニル基であり、ここで当該アルキル基およびアルキルカルボニル基は、フェニル基で置換されていてもよく、さらに、当該フェニル基はＣ１〜４のアルキル基で１ないし２個置換されていても良いアミノ基で置換されていてもよい。）、水酸基、Ｃ１〜６アルコキシ基または水素原子を表し、
Ｒ５は水素原子またはＣ１〜６アルキル基を表し、
〔１−４−ｂ〕  好ましくは−（ＣＨＲ４）−であり、
〔１−４−ｃ〕  より好ましくはＲ４がアミノ基である。
〔２〕  本発明の態様２は、式（Ｉ）で示される化合物およびその医薬として許容される塩から選ばれる少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする医薬用組成物である。
〔３〕  本発明の態様３は、式（Ｉ）で示される化合物、およびその医薬として許容される塩を含有することを特徴とするＰＡＲＰ阻害剤である。
好ましくは該阻害剤中の化合物の酵素阻害活性が、ＩＣ５０が１μＭ未満であり、更に好ましくは０．１μＭ未満である。ここで、ＩＣ５０とは、５０％の抑制率を示す阻害剤の濃度を表す。
〔４〕  本発明の態様４は、式（Ｉ）で示される化合物、およびその医薬として許容される塩を含有することを特徴とするＰＡＲＰ活性が亢進しているとみられる疾患の予防および治療剤である。
該ＰＡＲＰの活性が亢進しているとみられる疾患とは、ペルオキシナイトライト、ヒドロキシラジカル等の活性酸素種の産生により、ＤＮＡ損傷が生じてＰＡＲＰが活性化されている可能性の高い疾患であり、例えば、脳虚血障害、虚血性心疾患、虚血再灌流による臓器障害等種々の虚血性疾患、炎症性疾患、多発性脳硬化症、関節炎、慢性関節リウマチ、ショック、敗血症、神経変性疾患、免疫系疾患、アレルギー性疾患、生活習慣病、パーキンソン病、アルツハイマー病、エイズ、ハンチントン舞踏病、糖尿病、癌、腎不全、骨粗鬆症、痛覚過敏等の疾患である。これらの疾患において、酸化窒素（ＮＯ）もしくはヒドロキシラジカルが病態に関与しており、また、ＮＯは虚血等により発生したヒドロキシラジカルにより、細胞傷害性の活性酸素種ペルオキシナイトライトに変換されることはよく知られている。
〔５〕  本発明の態様５は、式（Ｉ）で示される化合物、およびその医薬として許容される塩を含有することを特徴とする組成物を用いたＰＡＲＰ活性が亢進しているとみられる疾患の予防および治療方法である。
〔６〕  本発明の態様６は天然またはリコンビナントヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントの結晶化方法である。ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとは、１０１４個のアミノ酸からなるヒトＰＡＲＰペプチドのうち、基質であるＮＡＤの結合部位、活性中心からなる触媒ドメインを形成するフラグメントであり、具体的にはＣ末端側のＬｙｓ６５４からＴｒｐ１０１４までの３６１個のアミノ酸からなるフラグメント（配列番号１）である。なお、本発明におけるヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントは、後述する方法により、触媒部位に結合する化合物との複合体結晶を得ることができる。更には、その複合体結晶の立体構造情報等を解析することにより、ヒトＰＡＲＰの触媒活性を調節する化合物に必要なファルマコフォアを導いたり、薬物設計に役立てることが出来る。蛋白質の結晶化方法には、静置バッチ法、自由界面拡散法、透析法または蒸気拡散法（Ａ．Ｄｕｃｒｕｉｘ  ａｎｄ  Ｒ．Ｇｉｅｇｅ：Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  ＰＲＥＳＳ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９１）ｐ．１２１−１４６）等の方法がある。これらの方法はいずれも沈殿剤によって蛋白質溶液の蛋白質の溶解度を徐々に下げることで単結晶の析出を行う方法である。本明細書に記載の単結晶とは、前述の結晶化方法を用いた結晶化の過程で引き起こされる蛋白質の溶解度低下に伴ない析出した一つの結晶核から成長した結晶をいう。蛋白質の３次元構造解析には単結晶が必要であり、複数の核から成長した結晶から成る多結晶では解析することができない。
本発明の製造方法における結晶化する工程は、これらいずれの方法を用いてもよく、またこれらに限定されない。好ましくは、蒸気拡散法を用いる工程である。
蒸気拡散法には、沈殿剤を含む大過剰のリザーバー溶液に対する蛋白質を含むドロップの置き方の違いで、ハンギングドロップ、シッティングドロップおよびサンドイッチドロップ蒸気拡散法がある。これらは、いずれの方法も、密閉容器中にてリザーバー溶液とドロップの間の蒸気拡散を利用して、ドロップ中の沈殿剤濃度を上昇させて、蛋白質の溶解度を下げることで単結晶の析出を促す原理である。より好ましくはハンギングドロップ蒸気拡散法を用いることで良質な単結晶を得ることができる。
この方法は、密閉容器に入れられた沈殿剤を含む大過剰のリザーバー溶液、とリザーバー溶液に直接触れることのないように設置される結晶化する蛋白質の溶液に沈殿剤を混ぜたドロップからなる。ドロップは例えばシリコナイズ処理したカバーグラスなどを支持体として設置され、ハンギングの場合はこれを裏返してドロップが重力方向に垂れ下がる状態に保つ。リザーバー溶液とドロップ中の平衡化に伴い、ドロップ中の沈殿剤濃度が増すため、ドロップ中の蛋白質の単結晶が析出するものである。
ドロップは、ヒトＰＡＲＰ、低濃度の沈殿剤、無機塩及び緩衝溶液で調製する。リザーバー溶液は、高濃度の沈殿剤及び緩衝溶液で調整する。沈殿剤としては無機塩やポリオールを用いることができる。好ましくはポリオールではポリエチレングリコールを用いることができる。またポリエチレングリコールの中でも平均分子量が６００〜８０００のものを用いるのがより好ましい。沈殿剤と共にイオン強度を上昇させ蛋白質同士の不要な相互作用を緩衝するために、リザーバー溶液には適当な無機塩を含ませることが好ましい。好ましい無機塩としては、酢酸アンモニウム、塩化リチウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化カリウム、塩化アンモニウム、酢酸カルシウム、酢酸カリウム、酢酸マグネシウム、酢酸亜鉛、酢酸ナトリウムなどが挙げられる。結晶を析出させるためのｐＨは弱酸性〜中性付近のｐＨが好ましい。より好ましくはｐＨ４．４〜６．０、特に好ましくはｐＨ５．２付近である。
ドロップには、ヒトＰＡＲＰを１〜１０ｍｇ／ｍＬに濃縮して含ませることが好ましい。より好ましくは１〜７ｍｇ／ｍＬ、さらに好ましくは３〜５ｍｇ／ｍＬに濃縮して含ませる。さらにドロップにはリザーバー溶液に含まれる、例えば沈殿剤、無機塩等を低濃度で添加することが好ましい。より好ましくは、リザーバー溶液の１／２の濃度で添加する。結晶化する工程は、温度を一様にする。好ましい結晶化温度は４℃〜３０℃であり、より好ましくは１０〜２５℃、さらに好ましくは２０℃である。
以上の条件で結晶化する工程を行えば、通常１週間〜２ヶ月以内で（幅が０．１ｍｍ以上の大きさの）結晶化ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントを製造することができる。
また、本発明の結晶の製造方法は、ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントのみからなる結晶の製造方法に限定されず、ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとアフィニティを持つ物質との複合体結晶の製造方法を含む。複合体結晶の製造方法は、ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントと該物質とを結合させる工程を含む。ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとアフィニティを持つ物質とは、例えば、ヒトＰＡＲＰ活性を阻害する化合物が挙げられる。
結合させる工程は前処理を行う工程と結晶化する工程の間に行われる。この製造方法による複合体の結晶化は一般に共結晶化法と言われる。
〔７〕  本発明の態様７は斜方晶系に属し、空間群がＰ２１２１２であることを特徴とするヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントの結晶である。ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントの結晶の製造方法は本発明の態様６の説明の通りである。
〔８〕  本発明の態様８は格子定数がａ＝６７Å±５Å  ｂ＝９２Å±５Å  ｃ＝６４Å±５Åであり、好ましくはａ＝６７Å±２Å  ｂ＝９２Å±２Å  ｃ＝６４Å±２Åであり、さらに好ましくはａ＝６７Å±１Å  ｂ＝９２Å±１Å  ｃ＝６４Å±１Åであることを特徴とする態様７記載のヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントの結晶である。
〔９〕  本発明の態様９は精製ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントと、該ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントにアフィニティを有する化合物との複合体結晶である。該ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントにアフィニティを有する化合物は、ヒトＰＡＲＰ活性を阻害する化合物であることが好ましい。
〔１０〕  本発明の態様１０は、精製ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントと、態様１〜３のいずれかに記載の少なくとも１つの化合物もしくはその医薬として許容される塩との複合体結晶である。
〔１１〕  本発明の態様１１は精製ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントと特定の新規なヒトＰＡＲＰ活性を阻害する化合物（＋）−（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１（２Ｈ）−オン塩酸塩（実施例９）との複合体結晶である。その複合体結晶の製造方法は、その一例を《Ｘ線結晶構造解析の実施例》に記載している。
〔１２〕  本発明の態様１２は精製ヒトＰＡＲＰと特定の新規なヒトＰＡＲＰ活性を阻害する化合物７−アミノ−３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）オン（実施例１１）との複合体結晶である。
〔１３〕  本発明の態様１３は精製ヒトＰＡＲＰと特定の新規なヒトＰＡＲＰ活性を阻害する化合物７−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）メチルアミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン（実施例１３）との複合体結晶である。
上記の複合体結晶から、後述する本発明の態様に記載の構造解析を行うことにより、複合体の立体構造座標を得ることができる。得られる構造解析座標を解析することによって、ヒトＰＡＲＰを選択的に阻害する化合物とヒトＰＡＲＰが相互作用するアミノ酸残基を特定することが可能である。また、既存の分子設計ソフトウエア（トライポス社ＳＹＢＹＬ，アクセルリス社Ｉｎｓｉｇｈｔ  ＩＩ等）によって複合体分子の座標を表示させ相互作用に関わるアミノ酸残基を抽出することで、特に産業での応用に重要な性質や情報を抽出することも可能である。たとえば、複合体の結晶構造において、化合物と、数オングストローム以内の距離に存在するヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントのアミノ酸残基を抽出すれば、直接的な相互作用を有しているヒトＰＡＲＰ触媒フラグメント上のアミノ酸残基が抽出若しくは特定可能である。このように得られる立体構造座標を用いることにより、ヒトＰＡＲＰを選択的に阻害する化合物のファルマコフォア抽出をすることができる。
以上の全ての態様において、「化合物」の文言を用いるとき、「その医薬として許容される塩」についても言及するものとする。
本発明で「その医薬として許容される塩」とは、親化合物の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的にまたは他の点で望ましくないということはない塩をいう。具体的には、本発明の化合物と、この分野で常用される塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸などの無機酸との塩；酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、安息香酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸などの有機酸との塩（モノ塩、ジ塩、トリ塩を含む）ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等の無機塩、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン等の有機塩；或いは本発明の化合物およびその塩の水和物；本発明の化合物およびその塩の医薬として許容される各種溶媒和物；本発明の化合物の医薬として許容される結晶多形をもこうした塩の定義に含まれる。
また、前記一般式（Ｉ）で表される本発明化合物において、異性体はこれをすべて包含する。例えば、不斉炭素を有する場合は、異なった立体異性形態またはラセミ形態を含む立体異性形態の混合物の形態で存在することができる。すなわち、本発明はこのように規定した種々の形態をも包含するが、これらも同様に有効成分化合物として用いることができる。かかる立体異性体は優先晶出やカラムクロマトグラフィーを用いた光学分割あるいは不斉合成を通じて当業者が通常の技術により、単離、精製することができる。
また、本発明の化合物を合成する際に得られる、新規物質としての中間体も本発明に含まれる。これらの中間体の一部について、第６表にその１Ｈ−ＮＭＲデータを示すが、本発明の中間体はこれらに限定されない。
【図面の簡単な説明】  図１は実施例化合物９とヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとの複合体結晶構造解析から得られた結晶構造を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】［本発明化合物の製造方法］
本発明化合物は、以下の方法または後述する実施例に記載した方法で製造できる。
一般的製造工程を反応式１に示す。
本発明の３環系ピリドキナゾリノン化合物〔Ｉ〕はアニリン誘導体「ＩＩＩ」（後述）より出発しテトラヒドロキノリン誘導体〔Ｖ〕、〔ＶＩ〕をへて、あるいはさらにピリドキナゾリノン誘導体〔ＶＩＩ〕をへて製造される。
2004043959.tif 000004
（反応式１中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは前記と同じ意味を表し、Ｘ’は−（ＣＨＲ４）−または−（Ｃ＝ＮＯＲ５）−（Ｒ４、Ｒ５は前記に同じ。）を表す。）
より詳細には、反応式２に示すように本発明化合物〔Ｉ〕のうち、オキソ体〔Ｉａ〕以外のもの〔Ｉ’〕は〔Ｉａ〕からＸを種々の基に変換することにより製造されるが、〔Ｉ’〕はＸを種々の基に変換する工程をテトラヒドロキノリノン誘導体〔Ｖ〕の段階でおこなっても製造することができる。
2004043959.tif 000005
（反応式２中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｎおよびＸ’は前記と同じ意味を表す。）
以下に各反応工程をより詳細に説明する。
工程１
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（工程１式中、Ｒ１およびｎは前記と同一であり、Ｑは塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基またはシアノ基を表す。）
アニリン誘導体（ＩＩＩ）にアクリル酸を付加反応させてあるいはアクリル酸エステルに付加反応後加水分解し、置換されたフェニルアミノプロパン酸誘導体（ＩＶ）を得る。この反応は等量あるいは過剰のアクリル酸、またはアクリル酸エステルを室温から１２０℃程度の温度で無溶媒、あるいは必要により水、アルコールまたはアセトニトリルなどを用いて反応できる。
工程２
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（工程２式中、Ｒ１、ｎおよびＱは前記と同じ意味を表す。）
一般式（ＩＶ）で表される置換されたフェニルアミノプロパン酸誘導体をポリ燐酸、五酸化二リンまたはポリホスフェートエステルなどの脱水縮合剤を無溶媒あるいは必要により適当な溶媒を用い、室温から１２０℃程度の温度でテトラヒドロキノリノン誘導体（Ｖ）を得る。
工程３
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（工程３式中、Ｒ１、ｎおよびＱは前記と同じ意味を表す。）
一般式（Ｖ）で表される置換されたテトラヒドロキノリノン誘導体からカルボン酸アミド誘導体（ＶＩ）を得る。Ｑが塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子の場合は、パラジウム触媒によりシアノ誘導体を得、これを加水分解してカルボン酸アミド誘導体（ＶＩ）を得ることができる。Ｑがアルコキシカルボニル基の場合は、アンモニアによりカルボン酸アミド誘導体（ＶＩ）とする。あるいは加水分解後ＢＯＰ試薬（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム  ヘキサフルオロホスフェート）などの脱水縮合剤を用いアンモニアと縮合しカルボン酸アミド誘導体（ＶＩ）を得る。
工程４
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（工程４式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは前記と同じ意味を表す。）
テトラヒドロキノリノンカルボン酸アミド（ＶＩ）に、式（ＶＩＩＩ）で表されるケトンあるいはアルデヒドを酸触媒存在下で反応させ、一般式（Ｉａ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体を得る。この反応はエタノール、メタノールまたは酢酸などのようなプロトン性溶媒を用い、酸触媒は濃塩酸、硝酸などのような鉱酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸または硫酸などのような酸が好ましい。反応温度は室温から用いる溶媒の沸点の範囲で、好ましくは還流条件である。
工程５
2004043959.tif 000010
（工程５式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは前記と同じ意味を表す。）
一般式（Ｉａ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体に水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化アルミニウムリチウムなどの還元剤を反応させ一般式（Ｉｅ）で表されるピリドキナゾリン誘導体を得る。この反応は氷冷下から室温で進行する。氷冷で行うことが好ましい。溶媒はホウ素系還元剤ではメタノールなどのアルコール系溶媒がアルミニウム系還元剤ではテトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒がよい。
工程６
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（工程６式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびｎは前記と同じ意味を表す。）
一般式（Ｉａ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体にヒドロキシルアミン誘導体を反応させ、一般式（Ｉｂ）で表されるピリドキナゾリノンオキシム誘導体を得る。この反応はエタノールまたはイソプロパノールなどのアルコール系溶媒を用いヒドロキシルアミン誘導体を作用させる。反応温度は室温から溶媒の沸点まで可能であり、好ましくは還流条件である。
工程７
2004043959.tif 000012
（工程７式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびｎは前記と同じ意味を表す。）
一般式（Ｉｂ）で表されるピリドキナゾリノンオキシム誘導体を触媒存在下に水素添加するか、あるいは酸性条件下に亜鉛、鉄などあるいはシアノ水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元し、一般式（Ｉｃ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体とする。触媒はパラジウム、酸化白金、ニッケルなどを用い、溶媒はメタノールまたはエタノールなどのアルコール系溶媒、蟻酸または酢酸などの有機酸、ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリジンなどのアミド系溶媒、テトラヒドロフランまたはジオキサンなどのエーテル系溶媒がよい。反応は室温から使用される溶媒の沸点程度までの温度で進行する。亜鉛、鉄または錫を用いて還元反応を行う場合、溶媒は希塩酸、希硫酸または蟻酸などがよい。
工程８
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（工程８式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびｎは前記と同じ意味を表す。）
一般式（Ｉｃ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体に還元的アミノ化やアシル化反応をし、一般式（Ｉｄ）で表される化合物を得る。還元的アミノ化反応では反応は氷冷から室温までの温度で進行する。溶媒は塩化メチレンまたはクロロホルムなどの塩素系溶媒がよい。アシル化反応では氷冷から室温で反応は進行する。溶媒は塩化メチレンまたはクロロホルムなどのハロゲン系溶媒、テトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、ジメチルホルムアミドなどのアミド系溶媒がよい。
工程９
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（工程９式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６およびｎは前記と同じ意味を表す。）
式（Ｉａ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体にアミン誘導体Ｒ６ＮＨ２をシアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤の共存下で作用させて一般式（Ｉｄ）で表される化合物を得る。還元的アミノ化反応では反応は氷冷から室温までの温度で進行する。溶媒は塩化メチレンまたはクロロホルムなどのハロゲン系溶媒がよい。
工程１０
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（工程１０式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは前記と同じ意味を表す。）
一般式（Ｉｅ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体に塩基存在下メタンスルホニルクロリドまたはｐ−トルエンスルホニルなどを反応させ、次いで水素化アルミニウムリチウムなどの還元剤を反応させ一般式（Ｉｆ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体を得る。この反応は氷冷から室温までの間で進行する。溶媒はテトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒がよい。また、工程７で副生成物として誘導体（Ｉｆ）を得ることもある。
工程１１
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（工程１１式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびｎは前記と同じ意味を表す。）
一般式（Ｉａ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体にアジ化ナトリウムを反応させ環拡大した一般式（Ｉｇ）で表されるピリミドベンゾジアゼピン誘導体を得る。この反応は氷冷から室温で行えるが氷冷が好ましい。溶媒はメタンスルホン酸、硫酸または塩酸などが好ましい。工程６で得られる一般式（Ｉｂ）の化合物（Ｒ５が水素原子。）を酸性条件下で転移反応させて得ることもできる。
工程１２
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（工程１２式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｎ、Ｘ、ＹおよびＺは前記と同じ意味を表す。）
一般式（ＶＩａ）で表されるテトラヒドロキノリンカルボン酸アミドに、酸クロリドＲ３ＣＯＣｌを作用させピリドキナゾリノン誘導体（Ｉｈ）を得る。これに水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を作用させ一般式（Ｉ）で表されるピリドキナゾリノン誘導体を得る。酸クロリドを作用させる時に用いる溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはＮ−メチルピロリドンなどのアミド系の溶媒がよく、氷冷下から１００℃程度の温度で反応は進行する。
次の還元反応では水素化アルミニウムリチウムを用いる場合はテトラヒドロフランなどのエーテル系溶媒がよく、水素化ホウ素ナトリウムではメタノール、エタノールなどのアルコール系溶媒がよい。反応温度は氷冷から用いる溶媒の沸点程度までの温度である。
次に本発明化合物の作用および本発明の医薬組成物について説明する。
本発明化合物およびその医薬として許容される塩の１種または２種以上を有効成分として含有する医薬組成物は、単独あるいは通常用いられる製剤用の担体や賦形剤、その他の添加剤を用いて、カプセル剤、丸剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤の他、懸濁剤、乳剤、リモナーデ剤、エリキシル剤、シロップ剤などの内用液剤、注射剤、経鼻吸収剤、坐剤、軟膏、貼付剤などに調製され、人間その他の動物に対して経口的または非経口的に投与される。
通常用いられる製剤用の担体としては、特に限定されず、例えば滅菌水や生理食塩水、植物油、鉱油、高級アルコール、高級脂肪酸、無害性有機溶媒など、さらには必要に応じて賦形剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、溶解補助剤、吸着防止剤、安定化剤、保存剤、保湿剤、酸化防止剤、緩衝剤、張化剤、無痛化剤などが挙げられる。
本発明による経口投与のための固体組成物としては、カプセル剤、丸剤、錠剤、散剤、顆粒剤などが用いられる。このような固体組成物においては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な担体と組み合わせてつくられる。より詳細には、賦形剤（例えば乳糖、白糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、メタケイ酸）、結合剤（例えば結晶セルロース、糖類、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク）、崩壊剤（例えばトウモロコシデンプン、カルボキシメチルセルロース、繊維素グリコール酸カルシウム）、安定化剤（例えばラクトースなどの糖アルコールや糖）、可溶化ないしは溶解補助剤（例えばコレステロール、トリエタノールアミン、グルタミン酸、アスパラギン酸）、着色剤、香味剤、防腐剤、張化剤、分散剤、酸化防止剤（例えばアスコルビン酸、ブチルヒドロキシアニソール）、緩衝剤、保存剤（例えばパラベン、ベンジルアルコール）である。なお、錠剤、丸剤、顆粒剤などは、必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの胃溶性あるいは腸溶性のフィルムコーティングを施しても良い。
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性または非水性の溶解剤、懸濁剤、乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤の担体としては、例えば注射用蒸留水、生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤の担体としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エチルアルコールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（ＴＭ）などがある。こうした組成物は、さらに前記の張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、可溶化剤または溶解補助剤などの添加剤である。これらは例えばメンブランフィルターによる濾過、殺菌剤の配合または紫外線照射などによって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、用時溶解、乳濁または懸濁して用いる注射剤とすることもできる。本発明化合物の溶解性が低い場合には、可溶化処理を施してもよい。当該処理としては、医薬製剤に適用できる公知の方法、例えば界面活性剤（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類、ポリオキシエチレンソルビタン高級脂肪酸エステル類、ショ糖脂肪酸エステル類など）を添加する方法、薬物と可溶化剤、例えば高分子（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの水溶性高分子、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、メタアクリル酸メチル−メタアクリル酸共重合体（オイドラギットＬ，Ｓ（ＴＭ）；ローム、アンド、ハース社製）などの腸溶性高分子）との固体分散体を形成する方法が挙げられる。さらに必要により、α−、β−あるいはγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルシクロデキストリンなどを用いて包接化合物を形成させる方法も挙げられる。また、「薬学モノグラフＮｏ．１，生物化学利用能」永井恒司ら、ソフトサイエンス社、７８〜８２頁、１９８８年または「最近の製剤技術とその応用」、内海勇ら、医薬ジャーナル、１５７〜１５９頁、１９８３年などを参考に、目的とする薬物に応じて、可溶化の手法を適宜変更することも可能である。これらのうち、好ましくは薬物と可溶化剤との固体分散体を形成させ溶解性を改善する方法が採用され得る（特開昭５６−４９３１４号、ＦＲ２４６０６６７号）。
本発明化合物のヒトに対する臨床投与量は適用される患者の症状、体重、年齢や性別等を考慮して適宜決定されるが、通常成人１日当たり経口で０．１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜３００ｍｇ、非経口で０．０１ｍｇ〜３００ｍｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜１００ｍｇであり、これを１回あるいは数回に分けて投与する。投与量は種々の条件で変動するので、上記投与量範囲より少ない量で十分な場合もある。
なお、本発明の前記一般式（Ｉ）で表される化合物およびその塩は、薬理学的に効果を示す投与量において毒性を示さない。本発明化合物は、ＰＡＲＰ阻害剤および前項に例示した疾患の予防、治療剤として、単独で、または他の薬理活性成分と併用して投与することができる。かかる薬理活性成分とは、例えば公知の他の虚血性心疾患治療薬、例えば、カルシウム拮抗薬、亜硝酸薬、ベータ遮断薬、抗血小板薬などが挙げられる。
ここで併用とは、本発明化合物と当該薬理活性成分とをともに含む合剤を投与する他、本発明化合物と当該薬理活性成分とがそれぞれ別個の製剤として一時期にもしくは時間をずらして投与される場合をも含み、患者の血中において同時に存在する限りにおいて投与の形態は問われない。
次に本発明の医薬が有効な疾患について説明する。
本発明の医薬が有効な疾患は、ＰＡＲＰの活性が亢進しているとみられる疾患であり、ペルオキシナイトライト、ヒドロキシラジカル等の活性酸素種の産生、放射線の照射等により、ＤＮＡ損傷が生じてＰＡＲＰが活性化されている疾患、あるいはレトロウイルス感染症（ウイルスＲＮＡのＤＮＡへの転写過程等にＰＡＲＰの関与が示唆されている）である。例えば、心筋梗塞、狭心症、不整脈、心不全、心筋虚血再灌流障害、その他虚血性心疾患、心臓移植、肺高血圧、脳虚血障害、脳梗塞、脳卒中、脳卒中後の後遺症、脳浮腫、虚血もしくは虚血再灌流による臓器障害（消化管、骨格筋、腎臓、網膜、蝸牛等）、腎不全、多臓器不全、敗血症、ショック、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎、クローン病）、毛細血管拡張性運動失調症、多発性脳硬化症、神経変性疾患、アレルギー性疾患（喘息、アトピー性皮膚炎等）、免疫系疾患（全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）等）、脳挫傷、頭部外傷、脳・脊髄損傷、パーキンソン病、アルツハイマー病、間質性肺炎、肝炎（急性肝炎、劇症肝炎等）、ブドウ膜炎、ハンチントン舞踏病、筋ジストロフィー、関節炎、慢性関節リウマチ、乾癬、エイズ、成人Ｔ細胞白血病、有毛細胞白血病、Ｓｅｚａｒｙ症候群、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ型肝炎、サイトメガロウイルス感染症、ヘルペスウイルス感染症、ＡＲＤＳ（急性呼吸促迫症候群）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、動脈硬化症、糖尿病、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、癌、骨粗鬆症、痛風、痛覚過敏、シスプラチン毒性等の抗癌剤治療における副作用等が挙げられ、これらの疾患の予防、治療剤として有用であることが期待される。また、癌の放射線療法、化学療法の増感剤としても有用であることが期待される。
【実施例】次に実施例、参考例を挙げて本発明を詳しく説明するが本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
《薬理実施例》
具体的な薬理作用について実験例として代表化合物の作用を示すが本発明はこれらによって限定されるものではない。
１）ＰＡＲＰ活性阻害作用の測定
測定キット「ＰＡＲＰ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ」（Ｔｒａｖｉｇｅｎ社製：カタログ番号４６６９−９６−Ｋ）のアッセイマニュアルに従ってアッセイプレートにコーティングされたヒストン蛋白が、ＡＤＰリボシル化された量を以下のように測定することによりＰＡＲＰ活性を測定した。すなわち、予めヒストン蛋白でコーティングしたアッセイプレート（９６ウェルマルチプレート）の各ウェルに「２×ＰＡＲＰ  ｃｏｃｋｔａｉｌ」（８００μＭのＮＡＤ、５０μＭのビオチン化ＮＡＤ、変性ＤＮＡを含む）２５μＬ／ウェル、さらに「ＰＡＲＰ  Ｂｕｆｆｅｒ」（２５ｍＭのＭｇＣｌ２を含むｐＨ８．０の５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液）にて希釈した被検化合物を１２．５μＬ／ウェル、「ＰＡＲＰ  Ｂｕｆｆｅｒ」にて希釈した「ＨＳＡ  ＰＡＲＰ  Ｅｎｚｙｍｅ」を１２．５μＬ／ウェル（終濃度０．３ユニット／５０μＬ／ウェル）の順に添加して室温で３０分反応させ、反応液を捨て、リン酸緩衝液で洗浄することにより、ＰＡＲＰの酵素反応を停止させた。さらに「Ｓｔｒｅｐ−ＨＲＰ」（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎを結合させたｈｏｒｓｅ  ｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）を５０μＬ／ウェル添加して３７℃で２０〜３０分反応させ、ＡＤＰリボシル化ヒストンに結合したビオチンに結合させた後、反応液を捨て、リン酸緩衝液で洗浄し、発色性の基質ＴＡＣＳ−ＳａｐｐｈｉｒｅＴＭを５０μＬ／ウェル添加して室温、遮光下で５−１０分反応させた。
反応は、０．２Ｎの塩酸を５０μＬ／ウェル添加することにより停止させ、４５０ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーにて測定した。
上記方法によりヒトＰＡＲＰ阻害活性を測定した結果、本発明化合物は、ＩＣ５０で１ｎＭ〜１μＭ程度の強度を示した。具体例を表１に示す。
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２）Ｕ９３７細胞を用いた活性酸素誘発細胞障害に対する抑制効果の測定
Ｕ９３７細胞を血清を含まないＲＰＭＩ１６４０に懸濁し、１×１０４個／５０μＬ／ウェルの濃度でソリッドアッセイプレート（コーニング社製：黒  細胞表面処理済  型番３９１６）に播種し、被験化合物のＤＭＳＯ水溶液を１μＬ／ウェル添加後、２０ｍＭの過酸化水素水を５０μＬ／ウェル添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で３時間インキュベートした。１．５ｍＭのヨウ化プロピジウムを２μＬ／ウェル添加し、さらに３７℃で１時間インキュベートした後、蛍光プレートリーダーＡＲＶＯで蛍光を測定し（励起波長５３０ｎｍ、蛍光波長６２０ｎｍ）、過酸化水素水により誘導されるネクローシスの阻害作用を検討した。本試験において、本発明化合物は表２に示す通り、活性酸素誘発細胞障害に対する抑制効果を示した。
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《製剤実施例》
以下に本発明の医薬組成物の例を挙げる。ここで、化合物Ｍとは、式（Ｉ）で示される本発明化合物およびその医薬として許容される塩（製薬学的に許容される塩）であり、詳細には実施例化合物から選択されるいずれかの化合物である。（ａ）錠剤（有効成分含量１ｍｇ）
化合物Ｍ１．０ｇ、乳糖９０．０ｇ、カルボキシメチルセルロースナトリウム５．０ｇ、コーンスターチペースト（５％Ｗ／Ｖペースト）１．０ｇおよびステアリン酸マグネシウム１．０ｇをそれぞれ秤量し、常法により打錠し、１００ｍｇの錠剤とした。
（ｂ）錠剤（有効成分含量１０ｍｇ）
化合物Ｍ１０ｇ、乳糖１５０ｇ、クロスカルメロースナトリウム６．０ｇ、コーンスターチペースト（５％Ｗ／Ｖペースト）２８．５ｇ、ポリビニルピロリドン２．５ｇおよびステアリン酸マグネシウム３ｇをそれぞれ秤量し、常法により打錠し、２００ｍｇの錠剤とした後、酢酸フタル酸セルロースで被覆し腸溶剤とした。
（ｃ）カプセル剤（有効成分含量５０ｍｇ）
化合物Ｍ１００ｇ、ラクトース３９５．５ｇおよびステアリン酸マグネシウム４．５ｇをそれぞれ秤量した後均一に混合し、混合粉体を日本薬局方Ｎｏ．１のハードカプセルに２５０ｍｇずつ封入した。
（ｄ）注射剤（有効成分含量０．１ｍｇ／ｍＬ）
化合物Ｍ  ０．１％Ｗ／Ｖ、リン酸ナトリウム緩衝液２．３％Ｗ／Ｖ、クエン酸０．４％Ｗ／Ｖ、マクロゴール４００  ３．５％Ｗ／Ｖ、および注射用蒸留水を混合して溶液となし、１ｍＬずつ注射用アンプルに封入して注射剤を作成した。
（ｅ）注射剤（有効成分含量１ｍｇ／ｍＬ）
化合物Ｍ  ０．１％Ｗ／Ｖ、リン酸ナトリウム緩衝液２．３％Ｗ／Ｖ、クエン酸０．４％Ｗ／Ｖ、マクロゴール４００  ３．５％Ｗ／Ｖ、および注射用蒸留水を混合して溶液となし、１ｍＬずつ注射用アンプルに封入して注射剤を作成した。
《合成実施例》
次に、本発明をさらに詳しく説明するために合成実施例、参考例を挙げるが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】  ３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオンの合成
＜第１工程＞  ３−（２−ブロモフェニルアミノ）プロピオン酸の合成
２−ブロモアニリン２７５ｇ、アクリル酸２２０ｍＬを水４４０ｍＬに加え１００℃で４時間加熱した。室温まで冷却し析出した結晶を濾取、水洗した。薄黄色結晶３２３ｇを得た。
＜第２工程＞  ８−ブロモテトラヒドロキノリノンの合成
ポリ燐酸３．５ｋｇを加え外温を６０℃とした。ここに＜第１工程＞で得た化合物３５２ｇを徐々に加えた。内温を１００℃として１０時間加熱攪拌した。得られた赤色の粘った溶液を氷水に加えた。この溶液を酢酸エチルで抽出した。
この酢酸エチル溶液を飽和重曹水、水、飽和食塩水で洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた赤褐色残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し薄赤黄色の表記化合物２３１ｇを得た。
＜第３工程＞  ８−シアノテトラヒドロキノリノンの合成
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）３ｇ、ジフェニルフォスフィノフェロセン８ｇ、シアン化亜鉛８５．２ｇおよび金属亜鉛１ｇをＮ，Ｎ−ジメチルアセタミド７００ｍｌに懸濁し、１時間室温で攪拌した。これに、＜第２工程＞で得た化合物２２０ｇをＮ，Ｎ−ジメチルアセタミド８００ｍｌに溶かした溶液を加えた。窒素置換し９０℃で２時間加熱攪拌した。
室温まで冷却後反応液に酢酸エチルを加え、析出した結晶物をセライトで濾過した。黒色のろ液に１０％アンモニア水を加えこの溶液を酢酸エチルで抽出した。あわせた酢酸エチル層を水，飽和食塩水で洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣にテトラヒドロフランを加えて加熱溶解し、再結晶させた。再結晶を行い黄褐色結晶１２３ｇを得た。
＜第４工程＞  テトラヒドロキノリノン−８−カルボン酸アミドの合成
９０％硫酸３３０ｇに室温で激しく撹拌しながら＜第３工程＞で得たシアノ体１２６．８ｇを加えた。内温６０℃で２０時間撹拌した。室温まで冷却した後、この赤橙色混合液に氷水を少しずつ加えていき結晶を析出させこの橙色結晶を濾別した。この結晶を水で十分に洗浄した後、減圧下乾燥し１１１ｇの橙色の結晶を得た。
＜第５工程＞  ３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオンの合成
＜第４工程＞で得たアミド体５０ｇ、及びパラアニスアルデヒド５２．７ｇ、無水エタノール１５０ｍＬ混液に濃硫酸０．５ｍＬを加え９０℃で４．５時間加熱還流した。放冷後この混合液を濃縮し、残渣を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液を合わせて水および飽和食塩水で順に洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去して褐色の粗製の液体８５ｇを得た。この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、薄赤黄色液体の表記化合物３８．７ｇを得た。
【実施例２】  ７−ヒドロキシ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３、２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの合成
実施例１で得られた化合物０．２ｇをメタノール３０ｍＬに室温で溶解した。これに氷冷下に水素化ホウ素ナトリウム０．０３ｇを加えた。１時間室温で攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し残渣を酢酸エチルに溶解し、水、飽和食塩水で洗浄し無水硫酸ナトリウムで乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し０．１ｇの表記化合物を得た。
【実施例３】  ７−ヒドロキシイミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１（２Ｈ）の合成
実施例１＜第５工程＞で得た化合物３２ｇ、ヒドロキシルアミン塩酸塩１４．４ｇをピリジン３２ｍＬ、エタノール３００ｍＬに懸濁させ、この溶液を８０℃で３時間撹拌した。この溶液を室温まで冷却した後、析出した結晶を濾取した。この結晶を十分に水洗した後、減圧下乾燥させ薄黄色結晶である表記化合物３４．１ｇを得た。
【実施例４】  ７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリノン−１（２Ｈ）−オンの合成
１０％パラジウム−炭素１．７ｇをジメチルホルムアミド３４０ｍＬに加え、水素雰囲気下に室温で１時間撹拌した。この混合液に実施例３で得た化合物３４ｇ、２．５Ｍ塩化水素・メタノール６０ｍＬを加え、水素雰囲気下に５０℃で１２時間攪拌した。触媒を濾別し、濾液に１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨ８として十分撹拌した。析出した結晶を濾取し、濾液を減圧下濃縮し得られた残渣を酢酸エチルで抽出した。合わせた酢酸エチル層を水、飽和食塩水で順次洗浄した後無水炭酸カリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣（１４ｇの赤褐色溶液）と濾取した結晶３９ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。得られた結晶を少量のメタノールに溶解させクロロホルムをゆっくりと加え再結晶し薄茶色の結晶１４．７ｇを得た。結晶を濾取した後の母液とカラムで分離できなかったフラクションを濃縮し、再びカラム精製をした。同様に再結晶をおこない薄黄色の結晶２．０ｇ、を得た。これらの結晶を合わせ標記化合物１６．７ｇを得た。本還元反応はｓｙｎ選択的であり、得られる生成物は（３Ｓ，７Ｓ）体と（３Ｒ，７Ｒ）体の混合物となる。
【実施例５】  ７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリノン−１（２Ｈ）−オンの塩酸塩の合成
実施例４で得た化合物０．３ｇをメタノール２ｍＬに溶解した。これに１Ｎ塩酸０．９６ｍＬを加えメチルｔ−ブチルエーテルで結晶化し０．２ｇの１塩酸塩を薄黄色の結晶として得た。
実施例６および実施例７
（−）−（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１（２Ｈ）−オン（実施例６）および（＋）−（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１（２Ｈ）−オン（実施例７）の合成
実施例４で得られたアミノ体１６．７ｇをキラルセルＡＤ２（１０×５０ｃｍ）、ｎ−ヘキサン：エタノール：ジエチルアミン＝８５：１５：０．１（１４０ｍＬ／分）で分取した。
短時間保持部分６．６ｇ（９９．３％ｅｅ、実施例６）、長時間保持部分６．７ｇ（９９．１％ｅｅ、実施例７）、混じり部分１．１ｇを得た。
実施例７で得た化合物については、さらに結晶回折により、構造決定を行った。すなわち、得られた化合物０．１ｇを塩化メチレン、テトラヒドロフランで再結晶し柱状の単結晶を得た。これを理学電気Ｒ−ＡＸＩＳ  ＩＶを用い線源ＣｕＫα１．５４１７８Å、４０ｋＶ、５０ｍＡで回折した結果、得られた化合物は（３Ｒ，７Ｒ）−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリン−１（２Ｈ）−オンであることが確認された。（３Ｓ，７Ｓ）体と（３Ｒ，７Ｒ）体の混合物である実施例化合物４を光学分割したものが実施例化合物６と実施例化合物７であることから、実施例６で得られる化合物は（３Ｓ，７Ｓ）体である。
以下に結晶構造データを示す。
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【実施例８】  実施例６で得られた化合物６．６ｇをメタノール５ｍＬに溶解し氷冷下濃塩酸１．８ｍＬ加え、イソプロパノール５０ｍＬで結晶化して、７．３ｇの塩酸塩を得た。
旋光度〔α〕Ｄ２０℃（２０℃：メタノール）−２３０度
【実施例９】  実施例７で得られた高極性部分６．７ｇをメタノール２５ｍＬに溶解し氷冷下濃塩酸１．８ｍＬを加え、イソプロパノール５０ｍＬで結晶化して６．８ｇの塩酸塩を得た。
旋光度〔α〕Ｄ２０℃（２０℃：メタノール）２２０度
【実施例１０】  ３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−１Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７−（２Ｈ）−ジオンの合成
実施例１＜第４工程＞で得られたアミド体３ｇ、４−メトキシ−３−ニトロベンズアルデヒド２．９ｇを無水エタノール２０ｍＬに加えた。この混合液に濃塩酸０．１ｍＬを加え９０℃で３時間加熱還流した。室温まで冷却後、析出した結晶を濾取し、この結晶を水、ジエチルエーテルで洗浄した。薄黄色の結晶４．２ｇを得た。
実施例１１および実施例１２
７−アミノ−３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）オンの合成
実施例１０で得たケトン２．５ｇに、酢酸アンモニウム５．５ｇ、シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．４ｇ、無水クロロホルム２５ｍＬ，無水メタノール２５ｍＬを加えた。この混合液を５０℃で１８時間加熱攪拌した。室温まで冷却後この混合液を０．５Ｎ水酸化ナトリウムで塩基性とし，水を加え分配した。水層をクロロホルムで抽出した。有機層を合わせて水、飽和食塩水で洗浄し無水炭酸カリウムで乾燥した。乾燥剤濾去後の液体を減圧濃縮し３ｇの黄色結晶を得た。このものをシリカゲルを用いて精製し、低極性部（（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）オンおよび（３Ｒ，７ＲＲ）−７−アミノ−３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）オン：実施例１１）０．５５ｇ、高極性部（（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）オンおよび（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−メトキシ−３−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）オン：実施例１２）０．３２ｇ、混じり部０．３５ｇを得た。本反応はｓｙｎ−ａｎｔｉ選択性に乏しく、生成物として（３Ｓ，７Ｓ）体と（３Ｒ，７Ｒ）体の混合物（低極性）および（３Ｒ，７Ｓ）体と（３Ｓ，７Ｒ）体の混合物（高極性）の極性の異なる２種の混合物が得られる。
【実施例１３】  ７−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）メチルアミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの合成
４，４−ジメチルアミノベンズアルデヒド０．１１ｇ、実施例４で得られた化合物０．１５ｇをクロロホルム３ｍＬ、メタノール１ｍＬに溶解した。この溶液に２．５Ｍ塩化水素メタノール溶液１ｍＬを加え室温で１時間攪拌した。その後シアノ水素化ホウ素ナトリウム０．０３ｇを加えた。この溶液を７０℃で３日間加熱還流した。冷却後１Ｎ水酸化ナトリウム水でｐＨを８とした。水層をクロロホルムで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し表記化合物０．０７５ｇを無色結晶として得た。
【実施例１４】  ３−（４−メトキシフェニル）−５，６−ジヒドロ−３Ｈ−ピリミド〔５，６，１−ｊｋ〕〔１，４〕ベンツジアゼピン−１，８（２Ｈ，７Ｈ）−ジオンの合成
メタンスルホン酸３．５ｍＬに実施例１＜第５工程＞で得られた化合物０．１５ｇを溶解し、氷冷攪拌下にアジ化ナトリウム０．０５ｇを徐々に加えた。発泡し緑色溶液となる。室温にして１時間攪拌した後、飽和重曹水で中和し、酢酸エチルで抽出した。飽和食塩水で洗浄後無水硫酸ナトリウムで乾燥した。生成物をシリカゲルの薄層クロマトグラフィーで精製し０．０１ｇの表記化合物を得た。
合成中間体であるカルボン酸アミド誘導体（表４）は実施例１＜第１、２、３、４工程＞の方法に従って合成した。
実施例１５〜４９の化合物は実施例１＜第５工程＞の方法に従って合成した。
実施例５０〜７９の化合物は実施例３の方法に従って合成した。
実施例８０〜１３５の化合物は実施例４、１０、１１、１２の方法に従って合成した。
【実施例１５】３−（フェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例１６】３−（４−シアノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例１７】３−（４−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例１８】３−（４−メチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例１９】３−（４−フルオロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２０】３−（３、４−ジフルオロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２１】３−（４−ブロモフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２２】３−（４−カルボキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン【００７７】
【実施例２３】３−（４−メトキシフェニル）−９−トリフルオロメトキシ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２４】９−フルオロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２５】８−クロロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２６】３−〔４−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル〕−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２７】３−（３−ブロモ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２８】３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例２９】３−（３−ブロモ−４，５−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３０】３−（４−メトキシ−３−メチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン【００７９】
【実施例３１】３−〔４−（イミダゾール−１−イル）フェニル〕−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３２】３−（４−エトキシカルボニルメチルオキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３３】３−（４−ヒドロキシエチルオキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３４】３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３５】３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３６】３−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３７】３−（４−イソプロポキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例３８】３−（３、４−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン【００８１】
【実施例３９】３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４０】３−（３−ピリジル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４１】３−（４−メトキシフェニル）メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７−ジオン
【実施例４２】３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４３】３−（２−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４４】３−（３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４５】３−（４−トリフルオロメチルチオフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４６】３−（３−チエニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４７】３−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４８】３−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例４９】３−（２−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１，７（２Ｈ）−ジオン
【実施例５０】７−ヒドロキシイミノ−３−（４−メトキシフェニル）−９−トリフルオロメトキシ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５１】９−フルオロ−７−メトキシイミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５２】８−クロロ−７−ヒドロキシイミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５３】７−メトキシイミノ−３−〔４−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル〕−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５４】（３−ブロモ−４−メトキシフェニル）−７−メトキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５５】３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−７−メトキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５６】３−（３−ブロモ−４、５−ジメトキシフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５７】７−ヒドロキシイミノ−３−（３−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５８】３−〔４−（イミダゾール１−イル）フェニル〕−７−メトキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例５９】３−（４−エトキシカルボニルメトキシフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６０】７−ヒドロキシイミノ−３−（４−ヒドロキシエトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６１】７−ヒドロキシイミノ−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６２】７−メトキシイミノ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６３】３−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６４】３−（４−イソプロポキシフェニル）−７−メトキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６５】３−（３、４−ジメトキシフェニル）−７−メトキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６６】３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６７】７−メトキシイミノ−３−（３−ピリジル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６８】７−メトキシイミノ−３−（４−メトキシフェニル）メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例６９】７−メトキシイミノ−３−（４−メトキシフェニル）メチル−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７０】３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−３−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７１】７−メトキシイミノ−３−（４−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７２】７−ヒドロキシイミノ−３−フェニル−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７３】７−ヒドロキシイミノ−３−（４−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７４】３−（４−シアノフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７５】３−（３、４−ジフルオロフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７６】３−（４−フルオロフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７７】７−ヒドロキシイミノ−３−（４−メチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７８】３−（４−クロロフェニル）−７−ヒドロキシイミノ）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例７９】３−（４−ブロモフェニル）−７−ヒドロキシイミノ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例８０】（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−９−トリフルオロメトキシ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−９−トリフルオロメトキシ−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８１】（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−９−フルオロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−９−フルオロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８２】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−８−クロロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−８−クロロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８３】（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−８−クロロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−８−クロロ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８４】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−〔４−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル〕−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−〔４−（３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロポキシ）フェニル〕−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８５】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８６】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８７】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８８】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４、５−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４、５−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例８９】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４、５−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−ブロモ−４、５−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９０】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９１】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−〔４−（イミダゾール−１−イル）フェニル〕−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−〔４−（イミダゾール−１−イル）フェニル〕−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９２】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−エトキシカルボニルメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−エトキシカルボニルメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９３】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−ヒドロキシエトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−ヒドロキシエトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９４】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９５】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９６】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈおよび５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９７】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−イソプロポキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−イソプロポキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９８】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈおよび５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４、５−ジメトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈの５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例９９】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１、（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１００】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−ピリジル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−ピリジル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０１】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）メチル−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）メチル−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０２】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０３】３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例１０４】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（２−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（２−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０５】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（２−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（２−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０６】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０７】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０８】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルチオフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルチオフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１０９】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルチオフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−トリフルオロメチルチオフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１０】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−チエニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−チエニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１１】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３−チエニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３−チエニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１２】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１３】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈおよび５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（６−メトキシナフタレン−２−イル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１４】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−フェニル−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−フェニル−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１５】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−アミノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−アミノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１６】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１７】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−ニトロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１８】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−メチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−メチルフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１１９】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２０】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−シアノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−シアノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２１】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−シアノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−シアノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２２】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（３、４−ジフルオロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（３、４−ジフルオロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２３】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−ブロモフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−ブロモフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２４】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−ブロモフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−ブロモフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２５】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−クロロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−クロロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２６】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−クロロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−クロロフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２７】７−アミノ−３−（４−カルボキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド［３，２，１−ｉｊ］キナゾリノン−１−（２Ｈ）−オン
【実施例１２８】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１２９】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１３０】（３Ｓ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（２−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｒ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（２−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１３１】（３Ｒ，７Ｓ）−７−アミノ−３−（２−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンおよび（３Ｓ，７Ｒ）−７−アミノ−３−（２−メチル−４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オンの混合物
【実施例１３２】７−（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ベンゾイルアミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例１３３】７−〔３−（ピペリジン−１−イル）プロパノイル〕アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例１３４】７−（１−メチルピペリジン−４−イル）カルボニルアミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例１３５】７−ジメチルアミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
【実施例１３６】７−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノアセチル）アミノ−３−（４−メトキシフェニル）−６，７−ジヒドロ−３Ｈ，５Ｈ−ピリド〔３，２，１−ｉｊ〕キナゾリン−１（２Ｈ）−オン
実施例化合物の構造を表３に、合成中間体の構造を表４に、また、これら実施例化合物の物性データを表５に、合成中間体の物性データを表６に示した。
《Ｘ線結晶構造解析の実施例》
具体的な代表化合物とヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとの複合体結晶の取得方法および構造解析の例を示すが本発明はこれらによって限定されるものではない。
［ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントを発現する大腸菌プラスミドの構築］
ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントのクローニングはＰＣＲ法によって行う。センスプライマー（５’−ＡＡＡＡＡＧＣＴＴＡＡＡＡＡＡＧＧＧＴＡＴＡＡＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＡＧＣＴＣＡＣＡＧＴＡＡＡＴＣＣＴＧＧＣＡＣＣ−３’）とアンチセンスプライマー（５’−ＡＡＡＧＴＣＧＡＣＴＴＡＣＣＡＣＡＧＧＧＡＧＧＴＣＴＴＡＡＡＡＴＴＧ−３’）を用いヒト結腸由来ｃＤＮＡライブラリ（クロンテック社）を鋳型にしてＰｙｒｏｂｅｓｔ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（タカラバイオ）により９８℃で１０秒、５５℃で３０秒、７２℃で１分のサイクルを３０回繰り返しＰＣＲを行う。得られるＰＣＲ産物を制限酵素Ｈｉｎｄ  ＩＩＩおよびＳａｌＩで消化しアガロースゲル電気泳動で約１１００ｂｐのバンドを回収する。またｐＭ７１０（特開平０６−２５２８９号公報実施例１０参照）をＨｉｎｄ  ＩＩＩおよびＳａｌＩで消化したものをアガロースゲル電気泳動で回収しベクター断片とする。このベクター断片と先のＰＣＲ増幅ＤＮＡ断片を定法に従いライゲーションし、ＪＭ１０９コンピテント細胞を形質転換する。得られたコロニーをＰＣＲで解析し、目的のプラスミドを持つ形質転換株を得る。
［大腸菌による発現と精製］
上記の組換え株を５０μｇ／ｍＬアンピシリン含有Ｌ−ブロース５ｍＬにて３７℃で終夜培養後、アンピシリン５０μｇ／ｍＬ含有Ｌ−ブロース５０倍量に、この培養液を植菌し、３７℃にて約１時間培養する。培地に終濃度１０μｇ／ｍＬの３β−インドールアクリル酸（和光純薬工業）を添加することで発現を誘導し、３７℃でさらに５時間培養する。得られた培養混合物を遠心分離し、大腸菌を集菌する。回収した菌体から発現蛋白質を含む封入体の回収および洗浄はＬｉｎらの方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２１４，１９５−２２４，１９９４）に従って行う。封入体はＬｉｎらの方法（ＰｒｏＮＡＳ，９７，１４５６−１４６０，２０００）に従い、８Ｍ尿素、１０ｍＭジチオスレイトール、１ｍＭ還元型グルタチオン、０．１ｍＭ酸化型グルタチオンに溶解し、２０ｍＭトリスを添加して速やかにｐＨ９．０の溶液に調製する。１Ｍの塩酸を徐々に添加してｐＨを２４時間で０．２ずつ下げ、８．０に調製して、リフォールディングを行う。リフォールディングによって可溶化したヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントはセファクリルＳ−３００（アマシャムバイオサイエンス社、東京）によって正しくフォールドした蛋白質のみを分離する。このように調製されるヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントは５０ｍＭ塩化ナトリウム、１４ｍＭメルカプトエタノールを含む２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液、ｐＨ８．０、に対して透析することで緩衝液置換を行う。
［結晶化用サンプルの物性分析］
上述した方法により調製されるヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントを用い、さらに結晶化用のサンプルとして適切であるか否かを判断するため以下の分析を行った。
まずサンプルのＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った結果、クマーシーブリリアントブルー染色で単一バンドであることが示された。続いてサンプルの脱塩および純度検定を兼ねて、カラムにＹＭＣ−ＰＡＣＫ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−ＲＰＳ５（２５０ｍｍＸ４．６ｍｍＩＤ、ＹＭＣ社）を、ＨＰＬＣにＨＰ１１００（横河アナリティカルシステムズ社）を用いた逆相ＨＰＬＣ分析を行った。移動相Ａとして０．０８％ＴＦＡ／純水を、移動相Ｂとして０．０５％ＴＦＡ／アセトニトリルを使用した。約１ｍｇ／ｍＬのサンプル１１０μＬを９５％移動相Ａ、５％移動相Ｂで平衡化したカラムにアプライし、５０分間かけて１０％移動相Ａ、９０％移動相Ｂまでグラジエント溶出を行った。ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントはシンメトリピークとして溶出時間３３分付近に溶出された。この脱塩されたサンプル３０μＬを用いて、高感度Ｎ末端アミノ酸配列分析機Ｐｒｏｃｉｓｅ４９４ｃＬｃ（アプライドバイオシステムズ社）によるＮ末端分析を１０サイクル行ったところ、単一のアミノ酸配列が同定され設計どおりのＮ末端を有していることが判明した。さらにＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳによる質量分析を行った。シナピン酸を１０ｍｇ／ｍＬとなるように５０％アセトニトリル／０．１％ＴＦＡに溶解させマトリックスとして用いた。逆相ＨＰＬＣで分取したピーク０．５μＬとマトリックス溶液０．５μＬをプレート上で混合し、スポットを作成した。スポットが乾燥した後に逆相ＨＰＬＣ分取ピークをさらに０．５μＬ添加した。分析はＶｏｙａｇｅｒＤＥＲＰ（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）によって行い、ほぼ理論分子量に近いスペクトルを得た。
サンプルの結晶化能は動的光散乱分子サイズ測定装置ＤｙｎａＰｒｏ−ＭＳ／Ｘ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ社）によって測定した。透析後のサンプルを４℃で１００００ｒｐｍ、１０分間遠心して除塵した。上清をキュベットに入れて連続２０回の測定を行った。本サンプルは単一の分散を示し、％Ｐｏｌｙｄの値は２０％台であったことから結晶化の可能性が高いことが示された。
以上の分析結果よりヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントは結晶化用サンプルとして用いることができる純度および物性を有していることが確認された。
［結晶化］
ニワトリＰＡＲＰ触媒フラグメントの結晶化方法、すなわち、ユング，Ｓ（Ｊｕｎｇ，Ｓ）らの方法（ジャーナル  オブ  モレキュラー  バイオロジー（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ），１９９４年，第２４４巻，ｐ．１１４−１１６）に従ってヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントの結晶化を試みたが結晶は得られなかった。使用するＰＥＧの種類、ＰＥＧの濃度、塩濃度、塩の種類を換える等、通常考え得る条件検討を繰り返したが、やはり結晶は得られなかった。しかし、本発明者らは、驚くべきことにリザーバー溶液としてｐＨ８．５のトリス−塩酸緩衝液を用いて塩基性条件下で行なうところをｐＨ５．２という酸性条件にすることにより、結晶化することをみいだした。以下にその詳細を記載する。
ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメント結晶化用サンプルをセントリコン１０（ミリポア社）によって濃縮し１６ｍｇ／ｍＬ  ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメント／２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０，５０ｍＭのＮａＣｌおよび１４ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）の組成の標品を得た。この標品５０μＬに対して２０ｍＭの被験化合物（純水または２０ｍＭ塩酸で溶解）を１０μＬ、２０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０、５０ｍＭのＮａＣｌおよび１４ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）を４０μＬ添加して、８ｍｇ／ｍＬのヒトＰＡＲＰ触媒フラグメント被験化合物複合体を調製した。
結晶化はハンギングドロップ蒸気拡散法を用いて行った。結晶化用プレートは２４穴リンブロプレート（大日本製薬）を用いた。リザーバー溶液は１５％のＰＥＧ４０００、０．５Ｍ酢酸アンモニウムを含む０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．２）を用い、８００μＬを各ウェルに入れた。ドロップはシリコン処理した２２ｍｍ径の丸型カバーグラス上に作成した後反転させ、シリコングリースを用いてこのカバーグラスでリザーバーの入ったプレートのウェルを密閉させた。ドロップはサンプル：リザーバー＝１：１の割合で混合して２μＬとした。セットアップ後、２０℃で静置して結晶を析出させた。
［Ｘ線回折実験および解析］
Ｘ線回折実験は、上記で作成した複合体結晶を用いて大型放射光施設ＳＰｒｉｎｇ−８の創薬産業ビームライン（ＢＬ３２Ｂ２）で行った。データ収集にはＣＣＤ検出器Ｊｕｐｉｔｅｒ２１０（Ｒｉｇａｋｕ）を利用し、振動写真法によって振動角１度で１８０度の範囲を測定した。測定の結果１．７〜１．８Å分解能のデータセットを得た。データの積分および強度の算出はプログラムＭＯＳＦＬＭ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｎｕｍｂｅｒ  ４．１９９４．″Ｔｈｅ  ＣＣＰ４  Ｓｕｉｔｅ：Ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ″．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０，７６０−７６３））で実施し、スケーリングをプログラムＳＣＡＬＡ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｎｕｍｂｅｒ  ４．１９９４．″Ｔｈｅ  ＣＣＰ４  Ｓｕｉｔｅ：Ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ″．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０，７６０−７６３）で行った。また、構造因子の算出はプログラムＴＲＵＮＣＡＴＥ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｎｕｍｂｅｒ  ４．１９９４．″Ｔｈｅ  ＣＣＰ４  Ｓｕｉｔｅ：Ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ″．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０，７６０−７６３）で行った。位相の推定はプログラムＡＭｏＲｅ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｊｅｃｔ，Ｎｕｍｂｅｒ  ４．１９９４．″Ｔｈｅ  ＣＣＰ４  Ｓｕｉｔｅ：Ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ″．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．Ｄ５０，７６０−７６３）を用いた分子置換法によって行った。サーチモデルにはＰｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋの２ＰＡＷの蛋白質部分を用いた。モデルの構築にはプログラムＱｕａｎｔａ２０００（アクセルリス社）を用いた。構造の精密化はプログラムＣＮＸ（アクセルリス社）を用いたシミュレーテッドアニーリングによって行った。複合体結晶構造の作図にはプログラムＭＯＬＳＣＲＩＰＴおよびＲａｓｔｅｒ３Ｄを用いた。
得られた結晶は、既知のニワトリＰＡＲＰ触媒フラグメント結晶と同様の斜方晶系に属していたが、空間群はＰ２１２１２であり、ニワトリＰＡＲＰ触媒フラグメントのＰ２１２１２１とは異なることが示された。
下記表７に実験の結果得られたヒトＰＡＲＰ触媒フラグメント結晶の結晶パラメーター（結晶系、空間群および格子定数）を示す。また、図１に実施例化合物９とヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントとの複合体結晶構造解析から得られた結晶構造を示す。図中、ヒトＰＡＲＰ触媒フラグメントはリボンモデルで、実施例化合物９はボールアンドスティックモデルで示した。
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以下に実施例化合物の構造を表３に、合成中間体の構造を表４に、また、これら実施例化合物の物性データを表５に、合成中間体の物性データを表６に示した。表４および表６において、実施例番号１−１とは実施例１の工程１を表す。また、表５および表６において、ＩＲ（赤外線吸収）は臭化カリウムによる錠剤により測定しｃｍ−１で表示し、ＮＭＲ（核磁気共鳴吸収）は２７０、３００ＭＨｚ室温で測定しＴＭＳ（テトラメチルシラン）を内部標準として測定しｐｐｍで表示した。
また使用溶媒は以下のように、ＣＤＣｌ３は重クロロホルム、ＤＭＳＯ−ｄ６は重ジメチルスルホキシド、ＣＤ３ＯＤは重メタノール、ＣＦ３ＣＯ２Ｄは重トリフルオロ酢酸を表し、各吸収線の多重度は、ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線、ｄｄは二重線の二重線、ｄｄｄは二重線の二重線の二重線、ｍは多重線、ｂｒｓは幅広い一重線を示し、また、結合定数（Ｊ）をＨｚで表示した。
【産業上の利用可能性】  本発明化合物は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼを阻害し、種々の虚血性疾患（脳、心臓、消化管、骨格筋、網膜等）、炎症性疾患（炎症性腸疾患、多発性脳硬化症、関節炎、慢性関節リウマチ等）、神経変性疾患（錐体外路系障害、アルツハイマー病、筋ジストロフィー等）、免疫系疾患（全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）等）、アレルギー性疾患（喘息、アトピー性皮膚炎等）、生活習慣病（糖尿病、動脈硬化症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）等）、ショック、頭部外傷、腎不全、痛覚過敏等の予防および／または治療剤として、また抗レトロウイルス剤（ＨＩＶ等）や抗癌療法の増感剤として有用である。
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【図１】
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【国際調査報告】
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