(57)【要約】サイレージ発酵を改善し、併せて家畜の栄養補強と低廉なコストのサイレージ添加剤が提供される。本発明はｐＨ３．０〜６．０の酸性領域に調整されたアミノ酸発酵副生液からなるサイレージ添加剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐＨ３．０〜６．０の酸性領域に調整されたアミノ酸発酵副生液からなるサイレージ添加剤。
【請求項２】
アミノ酸発酵副生液が、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン又はＬ−フエニルアラニン発酵副生液である請求の範囲１項記載のサイレージ添加剤。
【請求項３】
サイレージ原料に、ｐＨ３．０〜６．０の酸性領域に調整されたアミノ酸発酵副生液を原料新鮮重当たり１．０〜１０．０％添加して嫌気的に発酵させることを特徴とするサイレージの製造法。
【請求項４】
更に乳酸菌および糖類を添加してなる請求の範囲３項記載のサイレージの製造法。
【請求項５】
アミノ酸発酵副生液が、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン又はＬ−フエニルアラニン発酵副生液である請求の範囲３又は４項記載のサイレージの製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、サイレージ発酵における乳酸菌を増殖させ、サイレージ原料の品質を損なわずに長期間の保存を可能とし、２次発酵（好気的変敗）を抑制し、消化性を改善し、窒素成分の付与も兼ね備えた家畜に有効なサイレージ添加剤およびこれを用いてなるサイレージの製造法に関する。
【背景技術】  各種牧草等の粗飼料及び麦類、トウモロコシ類、キビ類・飼料用イネ等の飼料作物、豆腐粕、サツマイモ又はジャガイモ澱粉粕、焼酎粕等の食品製造副産物及び、外食産業や食品流通業界から排出される残渣等の貯蔵・保存方法としてのサイレージ製造は、空気を遮断して嫌気状態にし、乳酸発酵によってそのｐＨを急激に下げてサイレージ発酵初期段階での好気性菌の生育や、続いて起こる嫌気化初期の酪酸発酵の抑制を図ることにより、飼料の栄養性及び嗜好性を保存する方法である。従来、反芻家畜・豚及び家禽の飼料原料の貯蔵・保存及び品質改善法として一般に畜産現場で行われている。サイレージ初期発酵のトラブル防止策として、蟻酸、蟻酸アンモニュウム、クエン酸などの酸性化剤添加による不良発酵抑制が行われている。サイレージは初期発酵に続く本発酵である嫌気発酵促進のために、原料に付着した乳酸菌の増殖促進とそれに伴うｐＨの低下のため、種々の乳酸菌製剤を増殖のスターターとして、又糖蜜・グルコース等が糖源として添加されている。乳酸菌発酵終了後、またはサイレージ開封後の２次発酵（好気的変敗）がサイレージ品質を劣化するのを防止するためにプロピオン酸などの防腐剤が添加されている。一方、サイレージ乳酸発酵は植物原料に多く含有されている繊維成分の分解能はほとんどなく、原料の消化性を改善する目的で、酵素剤、尿素、アンモニア等が単独にまたは混合して添加されている。
サイレージ品質において最も重要なプロセスである乳酸発酵は、高価な乳酸菌製剤を添加しなくても、通常天然原料には乳酸菌が１０３程度付着しているため、本来これによって行われる。しかし、サイレージ調製中の条件はさまざまであり、乳酸菌叢並びに、乳酸菌叢と不良発酵菌叢との優先関係もまちまちであり、どのような調製条件でも乳酸発酵を強力に促進する方法が求められている。
サイレージ調製の対象となる各種牧草等の粗飼料及び麦類、トウモロコシ類、キビ類・飼料用イネ等の飼料作物、豆腐粕、サツマイモ又はジャガイモ澱粉粕、焼酎粕等の食品製造副産物及び、外食産業や食品流通業界から排出される残渣等は、繊維質で消化性に乏しいことも多く、繊維成分の消化性改善は栄養性の観点から極めて重要である。このためにアンモニア・尿素、高価な繊維分解酵素などが市販されているが、前者の処理では危険作業を伴う。サイレージ品質と消化性の改善効果を有し、安価で操作上容易且つ危険性のない添加物の開発が求められている。
豆腐粕、サツマイモ又はジャガイモ澱粉粕、焼酎粕等の水分が高く、糖分に富む食品製造副産物及び、外食産業や食品流通業界から排出される残渣は、生産後数時間以内で腐敗が進み、豊富な家畜栄養源を含有しているにもかかわらず、産業廃棄物として処理されている。これらの食品製造残渣を安価で操作が簡単な保存処理により飼料原料として使用されることが求められる。
【発明の開示】
本発明の目的は、サイレージ発酵における乳酸菌を増殖させ、保存性に富み、高乳酸含量で２次発酵（好気的変敗）しない且つ高消化性で、窒素成分量にも優れた家畜に有効なサイレージ調製のためのサイレージ品質改善用添加剤を提供することにある。
本発明の他の目的は、当該サイレージ添加剤を用いて消化率の向上した飼料価値の高いサイレージを製造する方法を提供することにある。
本発明者らは、上記した課題を達成すべく鋭意研究した結果、工業的に安価に且つ大量に入手し得るアミノ酸発酵副生液が本目的に合致し、サイレージ添加剤として有用であることを見出し、本発明をなすに至った。
すなわち、本発明の第１は、ｐＨ３．０〜６．０の酸性領域に調整されたアミノ酸発酵副生液からなるサイレージ添加剤である。
本発明の第２は、アミノ酸発酵副生液が、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン又はＬ−フエニルアラニン発酵副生液であるサイレージ添加剤である。
本発明の第３は、サイレージ原料に、ｐＨ３．０〜６．０の酸性領域に調整されたアミノ酸発酵副生液を原料新鮮重当たり１．０〜１０．０％添加して嫌気的に発酵させることを特徴とするサイレージの製造法である。
本発明の第４は、更に乳酸菌および糖類を添加してなるサイレージの製造法である。
本発明の第５は、アミノ酸発酵副生液が、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン又はＬ−フエニルアラニン発酵副生液であるサイレージの製造法である。
本発明において使用するアミノ酸発酵副生液は、糖蜜、タピオカ・トウモロコシ等の各種炭水化物原料を糖源とし、窒素源としてアンモニア、硫酸アンモニウム等の各種アンモニア態窒素原料を含有する培地にアミノ酸生産菌を培養して得られるアミノ酸発酵液からアミノ酸を分離除去した際に発生する副生液である。
具体的に、ここにいう副生液とは、
▲１▼  グルタミン酸等の酸性アミノ酸、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン等の中性アミノ酸の各種アミノ酸発酵液を硫酸、塩酸等の鉱酸をもってｐＨを等電点に調整し、析出した当該アミノ酸を固液分離したときに得られる母液およびその濃縮液、およびそれを脱塩濃縮したときに生じた液。また、母液を除菌した液およびその濃縮液、およびそれを脱塩濃縮したときに生じた液。これらに含まれるものとして、国際飼料として登録されているＧｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ  ｂｙ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ  ｌｉｑｕｉｄ）、国際飼料番号（ＩＦＮ）５−０１−５９５がある。
▲２▼  リジン等の塩基性アミノ酸発酵液を硫酸、塩酸等の鉱酸をもってｐＨ調整した後、強酸性陽イオン交換樹脂を通じ、当該アミノ酸を吸着せしめた後の貫流液およびその濃縮液、およびそれを脱塩濃縮したときに生じた液。また、母液を除菌した液およびその濃縮液、およびそれを脱塩濃縮したときに生じた液。
これらのアミノ酸発酵副生液は、すべてｐＨは３．０〜６．０の酸性側にある。成分はアミノ酸の他、窒素として揮発性塩基態窒素、アミノ酸有機態窒素および発酵菌体由来の窒素に富んでいる。また、ミネラルとしてはアミノ酸発酵液のｐＨ調整に使用した鉱酸由来の硫黄、塩素に富んでいる。その他、微量成分として上記以外のミネラル、ビタミン、糖類、有機酸、発酵菌体等を含有する。以上の成分はサイレージ発酵微生物およびルーメン微生物の栄養分である。
サイレージ原料として各種牧草、稲ワラ等の粗飼料及び麦類、トウモロコシ類、キビ類・飼料用イネ等濃厚飼料、豆腐粕、サツマイモ又はジャガイモ澱粉粕、焼酎粕等の食品製造副産物及び、外食産業や食品流通業界から排出される残渣等が挙げられる。アミノ酸発酵副生液を原料新鮮重当たり１．０〜１０．０％加え、望ましくは水分含有率６０〜７０重量％に調整し、場合により糖類および乳酸菌を含有させる。均一に混合撹拌した後、固定式或いは可動式サイロまたはポリエチレン、ポリプロピレン等の合成樹脂性サイレージバックに封入して、４０日間程度嫌気的に発酵させるという簡単な操作でサイレージ化し、長期間貯蔵することができる。
開封後、好気条件下に置いた場合も酵母、カビ発生等の二次変敗が殆ど起こらず、サイレージ品質の向上および安定化に大きく寄与する。
糖類として糖蜜、還元糖（例えば、マルトース、ラクトース、ショ糖、トレハロース、グルコース等）が用いられる。糖類の添加量は、原料の糖含量を踏まえて、新鮮重当たり２％以上になるように使用するのが適正である。
必要により乳酸菌製剤をスターターとして添加してもよい。適当な乳酸菌製剤として利用される菌種は、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）等が挙げられる。添加量は原料の糖含量により、原料新鮮重当たり０．０５〜１．０％が適正である。
糖類として糖蜜を利用する場合、あらかじめアミノ酸発酵副生液と１０〜８０％の混合割合（重量比）で調整しておくのが望ましい。
【図面の簡単な説明】  図１はサイレージ調製用添加剤として母液単独、糖蜜単独、母液−糖蜜混合液又はグルコース単独を用い、サイレージ乳酸菌ラクトバチルス・プランタラムを培養したときの培養時間による吸光度の変化を示す図面である。
図２はサイレージ調製用添加剤として母液の添加量の異なる母液−糖蜜混合液を用いて大麦ホールクロップボトルのサイレージ試験を実施したときの調製サイレージの総有機酸に占める乳酸、酢酸、酪酸の割合を示す図面である。
図３はサイレージ調製用添加剤として母液の添加量の異なる母液−糖蜜混合液を用いて大麦ホールクロップボトルのサイレージ試験を実施したときの母液添加割合によるサイレージの粗蛋白含量の変化を示す図面である。
図４はサイレージ調製用添加剤として母液単独、糖蜜単独、母液−糖蜜混合液又はグルコース単独を用い、サイレージ酵母を培養したときの培養時間による吸光度の変化を示す図面である。
図５は対照区及び母液添加処理区でのサイレージ開封直後と８日後のエタノール含量を示す図面である。
図６は対照区及び母液添加処理区でのエタノール含量増加率（８日後／開封直後）を示す図面である。
図７は対照区及び母液添加処理区でのサイレージ開封直後と８日後の有機酸含量を示す図面である。
図８は対照区及び母液添加処理区での有機酸含量増加率（８日後／開封直後）を示す図面である。
図９は対照区及び母液添加処理区での各サイレージの茎葉部のＮＤＦ含量を示す図面である。
図１０は対照区及び母液添加処理区でのｉｎ  ｓｉｔｕルーメン消化試験として牛の第１胃内に２４時間浸漬後の乾物消失率及びＮＤＦ消化率を示す図面である。
図１１はサイレージ調製用添加剤として３種類のアミノ酸発酵副生液をそれぞれ用いてイタリアンライグラスボトルのサイレージ試験を行ったときのｐＨを示す図面である。
図１２は対照区及び３種類のアミノ酸発酵副生液添加試験区での総有機酸濃度を示す図面である。
図１３は対照区及び３種類のアミノ酸発酵副生液添加試験区での総有機酸中に占める乳酸、酢酸の割合を示す図面である。
図１４はサツマイモ澱粉粕バッグサイレージ試験を行ったときに得られた対照区及び母液添加処理区サイレージの夫々のｐＨを示す図面である。
図１５はサツマイモ澱粉粕バッグサイレージ試験を行ったときの対照区及び母液添加処理区調製サイレージそれぞれの総有機酸に占める個々の有機酸の割合を示す図面である。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、実施例１〜９によって本発明を具体的に説明する。尚、実施例１〜７及び９で用いたアミノ酸発酵副生液は、液体副産窒素肥料（ＰＡＬ）として登録されており（登録番号：生第７４２２０号）、ｐＨ４．５、窒素全量５．０重量％（内アンモニア性窒素３．５重量％）、フェニルアラニン発酵副生液である（以下、単に「母液」と略称する）。
実施例１：代表的サイレージ乳酸菌を用いての単離菌培養試験
糖源として母液と糖蜜の混合液を１００：０〜０：１００の混合割合（重量比）で作成し、この混合液を８０４液体培地（酵母エキス５ｇ、ペプトン５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．１ｇ、蒸留水１０００ｍｌ、ｐＨ７．０）に還元糖濃度として０．５重量％相当になる量を添加し、乳酸菌ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）を３０℃で液体静置培養を行った。ここで用いた糖蜜は、製糖工場副生物で水分２５〜３０重量％、糖含量約５０重量％である。
対照区としてグルコース濃度０．５重量％の８０４液体培地を設定した。混合比と略称の詳細は表１に示した。
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培養方法は、乳酸菌ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）を８０４液体培地（１０ｍｌ）で２４時間培養し、種菌を作成した（ｐＨ４．８７）。
次に本培養として、８０４ベース液体培地（１０ｍｌ）に前培養した菌ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔｒｕｍ）２００μｌずつ植菌（１６φ試験管使用）し、３０℃恒温水槽で液体静置培養を行った。
そして、この培地より３時間おきに４８時間迄２００μｌサンプリングし、１５，０００ｒｐｍ、５分間の条件で遠心分離した。その後、上清液を傾しゃによって除去し、滅菌蒸留水２００μｌを加えて洗浄し、再度遠心分離した。最後に再度上清液を傾しゃによって除去し、波長６００ｎｍで測定できるよう滅菌蒸留水で希釈し、波長６００ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定した。図１は培養時間による吸光度の変化を示した。尚、吸光度の増加はラクトバチルス・プランタラム菌が増殖したことを表す。
図１に示す結果から、母液の添加によりサイレージ乳酸菌が急激に増殖し、特にサイレージ発酵初期に見られる乳酸菌の増殖は５時間〜９時間の間に行われることが分かる。
母液は同時にクロストリジウム・ブチリカム（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｕｔｙｌｉｃｕｍ）等のサイレージ発酵を改悪させる不良発酵菌の単離菌培養でも同様の増殖効果が確認された。しかし、増殖開始は１２時間〜１６時間と乳酸菌の増殖開始より遅い。乳酸菌との増殖促進作用の差異は明白であり、実際の場ではこれら不良発酵菌は母液添加を行っても発現しにくいことが、次に示す大麦ホールクロップ実験で確認された。
実施例２：大麦ホールクロップボトルサイレージ試験
母液と糖蜜の混合液を８０：２０〜２０：８０の混合割合（重量比）で作成し、材料の大麦ホールクロップの新鮮重当たり３％となるように添加し、これを１Ｌボトルに詰めこみ（詰めこみ密度５００ｇＦＷ／Ｌ）サイレージ試験を実施した。
対照区として母液無添加のサイレージを調製した。混合比と略称の詳細は表２に示した。
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サイレージを調製後４０日目に開封し、試料を採取、１０倍量の蒸留水を加えミキサーで粉砕し、ガーゼ濾過した。濾液を１５，０００ｒｐｍ、５分間、５℃の条件で遠心分離した。上清液に２倍量の６％過塩素酸を添加し撹拌後、再度同条件で遠心分離した。上清液を０．４５μｍフィルターで濾過し、液体クロマトグラフィー法によって乳酸と揮発性脂肪酸（以下、これら酸を「有機酸」と総称する）を測定した。
表３に有機酸生成量と乾物損失率結果を、図２に総有機酸に占める乳酸、酢酸、酪酸の割合をそれぞれ示した。
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表３及び図２から明らかなように、総有機酸に占める乳酸の割合は、母液添加区の方が、対照区に比べ高い。これは乳酸菌による嫌気発酵が不良発酵菌に優先して進行したことを示している。その結果、乾物損失率を低める効果も示された。
又、総有機酸に占める酢酸の割合は、母液添加区の方が対照区に比べ低い。このことは、糖を乳酸にのみ分解するホモ型乳酸菌が、糖を乳酸、酢酸、炭酸及び水に分解するヘテロ型乳酸菌に優先して増殖していることを示唆している。この結果も乾物損失率を低める効果になっている。
更に、総有機酸に占める酪酸の割合は、母液割合が５０重量％以上の母液添加処理区では対照区に比べ低い。この結果も不良発酵を抑制し、乾物損失率を低める効果になっている。
また、母液添加により窒素成分が付与され、サイレージの粗蛋白含量は母液添加割合の増加に伴って増加する。この結果を図３に示した。
実施例３：サイレージから単離した酵母の培養試験
母液と糖蜜の混合液を１００：０〜０：１００の混合割合（重量比）で作成し、この混合液をＰＹＧ液体培地（ペプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、蒸留水１０００ｍｌ、ｐＨ６．７〜６．８）に還元糖濃度として０．５重量％相当になる量を添加し、サイレージ酵母を３０℃で液体静置培養を行った。
対照区としてグルコース濃度０．５重量％のＰＹＧ液体培地を設定した。混合比と略称の詳細は表４に示した。
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培養方法は、まず前培養としてサイレージ酵母をＰＹＧ液体培地（１０ｍｌ）２４時間培養し、種菌を作成した（ｐＨ６．７〜６．８）。
次に本培養として、ＰＹＧ液体培地（１０ｍｌ）に前培養したサイレージ酵母菌２００μｌずつ植菌（１６φ試験管使用）し、３０℃（インキュベータ）振とう培養（２００往復／分）を行った。
そして、この培地より４時間おきに１６時間迄１００μｌサンプリングし、１５，０００ｒｐｍ，５分間の条件で遠心分離した。その後、上清液を傾しゃによって除去し、滅菌蒸留水１００μｌを加えて洗浄し、再度遠心分離した。最後に再度上清液を傾しゃによって除去し、波長６００ｎｍで測定できるよう滅菌蒸留水で希釈し、波長６００ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定した。図４に培養時間による吸光度の変化を示した。尚、吸光度の増加はサイレージ酵母菌が増殖したことを表す。
図４に示す結果から、サイレージ初期発酵で問題となる酵母生育については単離培養で母液の添加比率を上げるに伴い、顕著に抑制されることが確認された。
また、本試験は酵母の適正な培養試験であり、その状況はサイレージ開封後の好気、適度の湿度・温度・養分（乳酸、残糖等）とほぼ類似する。したがって、この結果はサイレージ開封後第一に活動を開始する酵母の活動を抑制する実証データの一つになる。
実施例４：開封後の２次発酵（好気的変敗）によるサイレージ品質評価試験（エタノール含量の測定）
大麦ホールクロップボトルサイレージ試験でサイレージ調製、調製後４０日目に開封し、開封直後と８日後のエタノール含量を測定した。母液と糖蜜の混合液を８０：２０〜２０：８０の混合割合（重量比）で作成し、材料の大麦ホールクロップの新鮮重当たり３％となるように添加し、これを１Ｌボトルに詰めこみ（詰めこみ密度５００ｇＦＷ／Ｌ）、大麦ホールクロップサイレージを調製した。
対照区として母液無添加のサイレージを調製した。混合比と略称の詳細は表５に示した。
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調製後４０日目のサイレージを、毎日１時間程度撹拌して空気と混合処理を施した。開封直後と８日後にサンプリングしエタノール含量を測定した。対照区及び母液添加処理区でのサイレージ開封直後と８日後のエタノール含量の測定結果を図５に示した。また、対照区及び処理区でのエタノール含量増加率（８日後／開封直後）を図６に示した。
図５及び６から、サイレージ開封後のエタノール含量は母液割合の高い母液添加処理区ほど低いことが分かる。
エタノールは本来サイレージでは酵母または、ヘテロ型乳酸菌によって生成されるものである。両者は共に通性嫌気性菌である。開封後は好気状態ではあるが、本実験のように糖が残りやすい材料（穀実部分が糖分として残る場合がある）をサイレージにしたとき、上記微生物の活動はしばらく継続される。本実験の結果から母液の添加比率が上がるに伴い、これら微生物の活動は抑制される。
実施例５：開封後の２次発酵（好気的変敗）によるサイレージ品質評価試験（有機酸含量の測定）
実施例２によって行った大麦ホールクロップボトルサイレージ試験でサイレージ調製、調製後４０日目に開封し、開封直後と８日後の有機酸含量を測定した。
対照区として母液無添加のサイレージを調製した。混合比と略称の詳細は表６に示した。
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調製後４０日目のサイレージを、毎日１時間程度撹拌して空気と混合処理を施した。開封直後と８日後にサンプリングし有機酸含量を測定した。対照区及び母液添加処理区でのサイレージ開封直後と８日後の有機酸含量の測定結果を図７に示した。また、対照区及び処理区での有機酸含量増加率（８日後／開封直後）を図８に示した。
図７及び８から、サイレージ開封後の乳酸及び酢酸含量は母液割合の高い母液添加処理区ほど、その含量増加率が減少することが分かる。
本実験のように可溶性糖の多い材料（サイレージ開封後も穀実部分が糖分として残る場合がある）をサイレージ調製したとき、サイレージ開封後も乳酸菌をはじめとする通性嫌気性微生物の活動はしばらく継続される。乳酸はホモ型及びヘテロ型乳酸菌により、酢酸はヘテロ型乳酸菌及び好気的微生物によって生成される。また、サイレージ開封後は、酵母の活動に誘導され、好気的微生物は活動を開始する。ここでも酵母によって酢酸は生成される。
すなわち、本実験の結果から母液の添加比率が上がるに伴い、乳酸菌をはじめとする通性嫌気性菌、酵母及び好気性微生物の活動は抑制される。
酪酸菌に関しては好気状態では全ての試験区で抑制されている。
実施例６：サイレージ開封後の２次発酵（好気的変敗）によるサイレージ品質評価試験（２次発酵過程におけるカビコロニーの消長）
母液と糖蜜の混合液を８０：２０〜２０：８０の混合割合（重量比）で作成し、材料の大麦ホールクロップの新鮮重当たり３％となるように添加し、これを１Ｌボトルに詰めこみ（詰めこみ密度５００ｇＦＷ／Ｌ）大麦ホールクロップボトルサイレージ試験を実施した。
対照区として母液無添加のサイレージを調製した。混合比と略称の詳細は表７に示した。
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大麦ホールクロップボトルサイレージ試験で得られたサイレージ微生物の生育状況を評価するために、開封直後、２日後及び６日後に採取したサイレージサンプル２０ｇに蒸留水２００ｍｌを加え、ミキサーで１分間撹拌後、ガーゼ２枚で濾過して得た濾液を用い、栄養寒天培地（ペプトン５ｇ、肉エキス３ｇ、寒天１５ｇ、蒸留水１０００ｍｌ、ｐＨ６．８）にて培養した。毎日カビコロニー数を数え、平衡になった数を以ってカビコロニー測定数とした。その結果を表８に示した。
表８に示した結果から明らかなように、母液の混合割合５０％以上では、開封６日後迄カビコロニーが検出されなかった。
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これは、母液添加により２次発酵に関与するカビの生育が抑制されていると示唆している。
実施例７：大麦ホールクロップサイレージのｉｎ  ｓｉｔｕルーメン消化率の改善効果試験
母液と糖蜜の混合液を８０：２０〜２０：８０の混合割合（重量比）で作成し、材料の大麦ホールクロップの新鮮重当たり３％となるように添加し、これを１Ｌボトルに詰めこみ（詰めこみ密度５００ｇＦＷ／Ｌ）大麦ホールクロップボトルサイレージを調製した。
対照区として母液無添加のサイレージを調製した。混合比と略称の詳細は表９に示した。
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第１に、各母液添加処理区の調製サイレージについてそれぞれ大麦ホールクロップ全体のうち、消化率の良い殻実部を除き、難消化性（繊維分の多い）の茎葉部の中性デタージェント繊維（ＮＤＦ＊１）含量について調査した。ｉｎ  ｓｉｔｕルーメン消化率＊２はルーメンフィステル装着牛の第１胃内に２４時間浸漬し、乾物消失率及びＮＤＦ消化率を調査した。その結果を図９及び１０に示した。
＊１：中性デタージェント繊維、中性デタージェント処理残渣から灰分を除いた繊維成分、主に細胞壁を構成するセルロース、ヘミセルロース、リグニンからなる。
＊２：実際の動物を用いて消化率を測定する試験法の一つ。
まず、母液添加処理区では対照区に比べ、サイレージ貯蔵中に大麦ホールクロップ茎葉部の繊維成分含量の著しい低下が確認された。このことは、図９から中性デタージェント繊維（ＮＤＦ）が母液添加により減少していることによって明らかである。
更に、乾物消化率とＮＤＦ消化率の改善効果が確認された（図１０参照）。
粗飼料原料のセルローズ、ヘミセルローズはリグニンと結合して難消化性マトリックス構造を形成し反芻胃内微生物に利用されにくい。即ち、これらの繊維が反芻家畜のエネルギー源として利用されないまま排泄されてしまう。しかし、母液を粗飼料に１〜１０重量％の範囲で添加することで、繊維構造の著しい崩壊が引き起こされることを電子顕微鏡で観察した。このことは、消化率の著しい改善に強く寄与している。
実施例８：イタリアンライグラスボトルサイレージ試験
本実施例で用いたアミノ酸発酵副生液は、
▲１▼  グルタミン酸発酵液を硫酸にてｐＨを等電点に調整し、析出した当該アミノ酸を固液分離したときに得られる母液を、アンモニアでｐＨを５程度に調整し、脱塩濃縮したときに生じた、ｐＨ４．７、窒素全量６．２重量％（内アンモニア性窒素４．３重量％）のグルタミン酸発酵副生液（以下、単に「Ｇｌｕ母液」と略称する）、
▲２▼  リジン発酵液を硫酸にてｐＨを３程度に調整した後、強酸性陽イオン交換樹脂に当該アミノ酸を吸着せしめた後の貫流液を、遠心分離により菌体と上澄み液の２画分に分ける。そして、上澄み液を水酸化ナトリウム溶液でｐＨを５程度に調整し、脱塩濃縮したときに生じた液に前述の菌体を混合した、ｐＨ４．２、窒素全量５．９重量％（内アンモニア性窒素４．７重量％）のリジン発酵副生液（以下、単に「Ｌｙｓ母液」と略称する）、および
▲３▼  実施例１〜７で用いたフェニルアラニン発酵副生液（以下、単に「Ｐｈｅ母液」と略称する）である。
これらＧｌｕ母液、Ｌｙｓ母液及びＰｈｅ母液を、材料のイタリアンライグラスの新鮮重当たり３％となるようにそれぞれ添加し、これを１Ｌボトルに詰めこみ（詰めこみ密度７６０ｇＦＷ／Ｌ）サイレージ試験を実施した。対照区として母液無添加のサイレージを調製した。
サイレージを調製後４０日目に開封し、試料を採取、１０倍量の蒸留水を加えミキサーで粉砕し、ガーゼ濾過した。濾液を１５，０００ｒｐｍ、５分間、５℃の条件で遠心分離した。上澄み液に２倍量の６％過塩素酸を添加し撹拌後、再度同条件で遠心分離した。上澄み液を０．４５μｍフィルターで濾過し、ｐＨおよび液体クロマトグラフィーでの揮発性脂肪酸を測定した。
図１１に対照区およびＧｌｕ母液、Ｌｙｓ母液及びＰｈｅ母液添加処理区サイレージのｐＨをそれぞれ示した。
図１２に対照区およびＧｌｕ母液、Ｌｙｓ母液及びＰｈｅ母液添加処理区における総有機酸濃度をそれぞれ示した。
図１３に対照区およびＧｌｕ母液、Ｌｙｓ母液及びＰｈｅ母液添加処理区における総有機酸に占める乳酸、酢酸の割合をそれぞれ示した。
図１１、１２、１３から明らかなように、総有機酸生成量及び、総有機酸に占める乳酸の割合は、Ｇｌｕ母液、Ｌｙｓ母液及び、Ｐｈｅ母液添加処理区が、対照区に比べて高い。これは、これらの母液がサイレージ乳酸発酵を促進し、サイレージ品質を著しく改善する効果のあることを示している。
実施例９：サツマイモ澱粉粕バッグサイレージ試験
鹿児島、宮崎県を中心に生産されている、糖化原料であるサツマイモ澱粉の副生物であるサツマイモ澱粉粕を用いてサイレージを調製した。
本実施例で用いたサツマイモ澱粉粕の一般的な特徴を表１０に示した。
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材料の澱粉粕の新鮮重当り１０％となるようにフスマを添加し、水分調整した。これに５％となるようにＰｈｅ母液を添加し、ポリエチレンのサイレージバッグに２０ｋｇ詰め込み、真空吸引、密閉しサイレージ試験を実施した。また、乳酸菌を水分調整した材料に１０５ｃ．ｆ．ｕ／ｇＦＷとなるように添加した処理区と母液無添加の対照区を設け、サイレージを調製した。
また、各試験区および対照区を表１１に示した。
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サイレージを調整後約４０日後に開封し、試料を採取し、１０倍量の蒸留水を加えミキサーで粉砕し、ガーゼ濾過した。濾液を１５，０００ｒｐｍ、５分間、５℃の条件で遠心分離した。上清液に２倍量の６％過塩素酸を添加し撹拌後、再度同条件で遠心分離した。上清液を０．４５μｍフィルターで濾過し、ｐＨ及び液体クロマトグラフィー法によって有機酸を測定した。その結果を図１４及び１５に示した。
図１４から明らかなように、全ての区でｐＨが４以下と低く、良好なサイレージであった。しかし、図１５から明らかなように総有機酸に占める乳酸の割合は処理区１と処理区２との間でほぼ同等であり、対照区１、対照区２、処理区２及び処理区１の順に高くなっている。これは、添加した乳酸菌の効果だけでなく添加した母液がサイレージ乳酸発酵を促進し、サイレージ品質を著しく改善する効果があることを示している。
【産業上の利用可能性】  本発明はサイレージ原料にアミノ酸発酵副生液を添加することにより、サイレージ発酵における乳酸菌発酵の促進効果および強固な原料中繊維構造の崩壊、即ち、飼料原料中のリグニンからのセルロース及びヘミセルロースの分離促進が図られ、長期の保存性に富み、高乳酸含量で且つ高消化性で、窒素成分量にも優れたサイレージを調製することができる。又、本発明はアミノ酸発酵副生液中の窒素源を有効に利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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