(57)【要約】本発明は新規な脳卒中再発抑制剤の提供および簡易な脳卒中再発抑制剤の評価方法に関する。  本発明者らにより確立された脳卒中易発症性高血圧自然発症（ＳＨＲ−ＳＰ）ラットを用いた簡易な評価方法により、アトルバスタチンは脳卒中再発抑制効果及び再発した脳卒中による神経症状の軽減効果、及び脳卒中発症後の生存率改善効果を有することを確認した。従って、アトルバスタチンは、脳卒中再発抑制剤として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アトルバスタチン又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中再発抑制剤。
【請求項２】
基礎疾患に虚血性心疾患を有さない哺乳動物用の脳卒中再発抑制剤である請求哺乳動物の範囲１記載の剤。
【請求項３】
高血圧を有する哺乳動物用の脳卒中再発抑制剤である請求哺乳動物の範囲１又は２記載の剤。
【請求項４】
アトルバスタチン又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中再発に伴う神経症状軽減剤。
【請求項５】
アトルバスタチン又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中発症後の生存率改善剤。
【請求項６】
下記のステップ；
ａ）被検物質投与前に脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットの体重変化及び／又は神経症状を観察し
ｂ）ａ）の観察中、体重変化の異常及び／又は神経症状がみられた前記ラットを選択し、
ｃ）被検物質をｂ）で選択されたラットに投与し、一定期間観察すること
を含む、被検物質の脳卒中再発抑制作用、脳卒中再発に伴う神経症状軽減作用、または脳卒中発症後の生存率改善作用の評価方法。
【請求項７】
脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与し、体重変化及び／又は神経症状の変化を指標とすることによる、被検物質の脳卒中再発抑制作用を評価する方法。
【請求項８】
脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与し、体重変化の程度をスコア化することによる、被検物質の脳卒中再発抑制作用を評価する方法。
【請求項９】
脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与することによる、被検物質の脳卒中再発に伴う神経症状軽減作用を評価する方法。
【請求項１０】
脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与し、神経症状の程度をスコア化することによる、被検物質の脳卒中再発に伴う神経症状軽減作用を評価する方法。
【請求項１１】
脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与することによる、被検物質の脳卒中発症後の生存率改善作用を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、アトルバスタチン又はその塩を有効成分とする脳卒中再発抑制剤または脳卒中再発に伴う神経症状軽減剤若しくは脳卒中発症後の生存率改善剤、及び脳卒中再発に関連する作用の評価方法に関する。
【背景技術】  脳卒中は、脳内の血管の破綻による脳出血、或いは血栓により脳内血管が閉塞する脳梗塞の総称であり、脳血管イベントの一つに挙げられている。
脳卒中は、先進国での死因の大きな割合を占めており、再発の危険性が高い疾患である。日本での調査によれば、高血圧のある脳卒中患者の人−年当たりの再発率は７．５％という報告や、米国のＦｒａｍｉｎｇｈａｍ  ｓｔｕｄｙでは、脳梗塞の５年累積再発率が男性４２％、女性２４％という報告がある（非特許文献１）。
脳卒中の再発では，初回発作よりも予後が不良となることが多い。初回発作では単純な片麻痺にとどまるケースが多いが、再発では、両側性の障害，体幹障害，嚥下障害，コミュニケーション障害，排尿障害，痴呆，認知障害など，障害が複雑化・重度化することが多く、その予防は医療上・社会上の大きな課題となっている。
脳卒中の再発予防としては、抗血小板薬（特にアスピリン）投与や、ヘパリン、ワルファリンカリウムなどの抗凝固薬による薬物療法が中心であるが、長期間の投与が必要であり、また病型による使い分けの必要性や、出血が生じるなど副作用の問題点があり、更に有効な薬剤が求められている。
アトルバスタチンは、強力なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害作用を有し、優れたコレステロール低下剤として、世界中で広く用いられており、種々の動物実験、或いは大規模臨床試験により、コレステロール低下作用以外にも、その多様な効果が明らかにされてきている。
アトルバスタチンによる、脳卒中を含む心血管イベントに関する大規模臨床試験としては、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）既往がなく、ＣＨＤ危険因子を３つ以上有する高血圧患者を対象とした心血管イベントの１次予防の評価を目的とするＡｎｇｌｏ−Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｃａｒｄｉａｃ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  Ｔｒｉａｌ−Ｌｉｐｉｄ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ  Ａｒｍ（ＡＳＣＯＴ−ＬＬＡ）試験（非特許文献２）、冠動脈イベント発症後のアトルバスタチン急性期投与による心血管イベントの２次予防の評価を目的とするＭｙｏｃａｒｄｉａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ  Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｌｏｗｅｒｉｎｇ（ＭＩＲＡＣＬ）試験（非特許文献３）、ＣＨＤを有する患者のＣＨＤ２次予防効果を通常の治療効果と比較したＧｒｅｅｋ  Ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ  ａｎｄ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ−ｈｅａｒｔ−ｄｉｓｅａｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（ＧＲＥＡＣＥ）試験（非特許文献４）の結果が報告されている。
これらの大規模臨床試験の結果から、アトルバスタチンは、高血圧患者或いはＣＨＤを有する患者における初発の脳卒中の発症抑制効果、即ち脳卒中の１次予防効果を有することが明らかになっている。
なお、現在１−６ヶ月以内のＴＩＡまたは脳卒中発症患者に対するアトルバスタチンの２次予防効果を評価すべく、大規模臨床試験が実施されている（非特許文献５）が、結果は得られておらず、アトルバスタチンの脳卒中再発抑制効果は明らかにされていない。
一方、脳梗塞モデル動物を用いた実験において、アトルバスタチンは脳梗塞発症前３日間の投与により脳梗塞体積を縮小させる効果を示すことが知られている。また、アトルバスタチンはｅＮＯＳ活性を上昇させることが確認されている。ｅＮＯＳ活性の上昇は、血管の拡張による血流改善効果により、予防投与による脳梗塞体積の縮小効果に寄与するものと考えられている（特許文献１）。しかしながら、ｅＮＯＳ活性と脳卒中再発抑制との関連性はこれまでに明らかになっていない。
また、本発明の評価方法で用いた、脳卒中易発症性高血圧自然発症（ＳＨＲ−ＳＰ）ラットを用いた報告例としては、アトルバスタチンによるＮＯシンセターゼ活性化に基づく交感神経抑制効果の報告（非特許文献６）があるが、脳卒中については検討されていない。
一方、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン）であるセリバスタチンは、ＳＨＲ−ＳＰラットを用い、脳卒中の発症抑制効果、生存率延長効果、及び脳梗塞体積の減少効果が報告されている（非特許文献７）が、これらは全て脳卒中の発症前の投与であり、脳卒中発症後の検討は行っていない。
他のスタチンによる大規模臨床試験としては、虚血性心疾患を有する高コレステロール患者にシンバスタチンを投与したＳｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  Ｓｔｕｄｙ（４Ｓ）において、スタチン製剤が初めて脳卒中の１次予防効果を有することが示された（非特許文献８）。また、ＬＤＬ−コレステロール値が正常な冠動脈疾患、閉塞性動脈疾患或いは糖尿病患者に投与したＭＲＣ／ＢＨＦ  Ｈｅａｒｔ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ試験においては、正常なコレステロール値を有する患者に対しても脳卒中の１次予防効果を有することが示されている（非特許文献９）。さらに、Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ  Ｐｏｏｌｉｎｇ（ＰＰＰ）Ｐｒｏｊｅｃｔでは、これまでの大規模臨床試験による脳卒中予防効果をまとめ、プラバスタチンは脂質値にかかわらず、非出血性脳卒中に対する発症抑制効果（１次予防）を示すが、出血性、不明型に対しては差がないことが示された（非特許文献１０）。
一方、プラバスタチンを、３−３６ヶ月以内に心筋梗塞または不安定狭心症を発症し、高コレステロール血症を有する患者に投与したＬｏｎｇ  ｔｅｒｍ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ  ｉｎ  Ｉｓｃｈｅｍｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ（ＬＩＰＩＤ）試験（非特許文献１１）、或いは心筋梗塞後の脳卒中発症抑制とコレステロール低下作用との関係を評価することを目的としたＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ａｎｄ  Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＡＲＥ）試験（非特許文献１２）において、プラバスタチンは脳卒中または一過性脳虚血発作（ＴＩＡ）の再発リスクの抑制効果を有することが示されている。
しかしながら、これらの脳卒中再発抑制効果は、虚血性心疾患を有する患者を対象としたものであり、そのような基礎疾患を有さない患者に対する抑制効果はこれまでに報告されていない。
また、虚血性心疾患患者が血管性事故を生じる場合は、再度心疾患であることが多く、これまでの報告から虚血性心疾患を有さない脳卒中既往患者の再発抑制効果を論じる妥当性に疑問を呈している（非特許文献１６）。
虚血性心疾患の有無が脳卒中の発症に影響を与えることは、以下の事実からも推測することが出来る。即ち、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）の１次予防を評価することを目的としたＷｅｓｔ  ｏｆ  Ｓｃｏｔｌａｎｄ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（ＷＯＳＣＯＰ）試験では、これまでの報告とは異なり、脳卒中１次予防率は低値であった。その理由としてＢｌａｕｗらは、ＷＯＳＣＯＰ試験ではＬＩＰＩＤやＣＡＲＥ試験と異なり、虚血性心疾患を有さない患者を対象としたためであると考察している（非特許文献１３）。
また、プラバスタチンによる７０歳以上の高齢者で心血管疾患または脳卒中のハイリスク患者を対象としたＰＲＯｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｅｌｄｅｒｌｙ  ａｔ  Ｒｉｓｋ（ＰＲＯＳＰＥＲ）試験等において、プラバスタチンはＴＩＡ再発の危険率を抑制したものの、脳卒中の再発抑制には効果がないことが報告されている（非特許文献１４）。
以上の知見により、虚血性心疾患を有さない患者に対しては、スタチンは脳卒中再発抑制効果を有さないことが報告されており、アトルバスタチンによる該抑制効果は開示も示唆もない。また、スタチンの高血圧患者を対象とする脳卒中再発抑制効果は、これまで報告がない。
なお、脳卒中の１次予防の要因の改善は、必ずしも再発予防の要因と一致するものではないと考えられている（非特許文献１）。脳卒中再発の危険因子として現在明らかになっているのは糖尿病と心房細動だけであり、脳卒中再発には多数の要因が複雑に影響していることが示唆されているにとどまり、再発のメカニズムは未だ明らかになっていない（非特許文献１５）。
また、前出のＬＩＰＩＤ試験（非特許文献１１）において、脳卒中発症後の生存率及び障害の程度において、プラバスタチンの投与はプラセボと差がないことが示されている。
従って、スタチンによる脳卒中発症後の生存率及び障害の程度の改善効果についてもこれを示唆する報告はなされていない。
【非特許文献１】  ＥＢＭジャーナル（２００３）４（１），６４−６９
【非特許文献２】  Ｌａｎｃｅｔ（２００３）３６１，１１４９−１１５８
【非特許文献３】  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００２）１０６，１６９０−１６９５
【非特許文献４】  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｏｐｉｎｉｏｎ，（２００２）１８／４（２２０−２２８）
【非特許文献５】  Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）１６，３８９−３９５
【非特許文献６】  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，（２００３）Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．２，ｐｐ．３７９−３８６
【非特許文献７】  Ｓｔｒｏｋｅ（２００３），３４，１５７−１６３
【非特許文献８】  Ｌａｎｃｅｔ（１９９４），３４４，１３８３−１３８９
【非特許文献９】  Ｌａｎｃｅｔ（２００２），３６０，７−２２
【非特許文献１０】  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（２００１）１０３，３８７−３９２
【非特許文献１１】  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２０００；３４３（５）：３１７−３２６．
【非特許文献１２】  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（１９９９）９９，２１６−２２３
【非特許文献１３】  Ｓｔｒｏｋｅ（１９９７）２８，９４６−９５０
【非特許文献１４】  Ｌａｎｃｅｔ（２００２）３６０，１６２３−１６３０
【非特許文献１５】  Ｓｔｒｏｋｅ（２００３），３４，１４５７−１４６３
【非特許文献１６】  医学のあゆみ（２００３），２０４（６）４２４−４２８
【特許文献１】  特開２００３−７３２７２号公報
【発明の開示】
本発明の目的は新規な脳卒中再発抑制剤、脳卒中再発に伴う神経症状軽減剤若しくは生存率改善剤を提供することである。
本発明者らは上記の課題を達成すべく鋭意研究を行ったところ、脳卒中再発を再現した動物モデルによる簡易な新規試験方法を確立し、これを用いることによって、アトルバスタチンが、脳卒中の再発抑制効果、脳卒中再発に伴う神経症状の軽減作用、及び脳卒中発症後の生存率を改善することを確認し、以下に示す本発明を完成した。
（１）アトルバスタチン又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中再発抑制剤。
（２）基礎疾患に虚血性心疾患を有さない哺乳動物用の脳卒中再発抑制剤である上記（１）記載の剤。
（３）高血圧を有する哺乳動物用の脳卒中再発抑制剤である上記（１）又は（２）記載の剤。
（４）アトルバスタチン又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中再発に伴う神経症状軽減剤。
（５）アトルバスタチン又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中発症後の生存率改善剤。
（６）哺乳動物に脳卒中再発抑制量のアトルバスタチンまたはその製薬学的に許容される塩を投与することによる脳卒中再発抑制方法。
（７）虚血性心疾患を有さない哺乳動物に脳卒中再発抑制量のアトルバスタチンまたはその製薬学的に許容される塩を投与することによる上記（６）記載の方法。
（８）高血圧を有する哺乳動物に脳卒中再発抑制量のアトルバスタチンまたはその製薬学的に許容される塩を投与することによる上記（６）または（７）記載の方法。
（９）哺乳動物に有効量のアトルバスタチンまたはその製薬学的に許容される塩を投与することによる脳卒中再発に伴う神経症状の軽減方法。
（１０）哺乳動物に有効量のアトルバスタチンまたはその製薬学的に許容される塩を投与することによる脳卒中発症後の生存率改善方法。
（１１）ピタバスタチン及びロスバスタチンから選択される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中再発抑制剤。
（１２）高血圧を有する哺乳動物用の脳卒中再発抑制剤である上記（１１）記載の剤。
（１３）ピタバスタチン及びロスバスタチンから選択される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする再発した脳卒中の神経症状軽減剤。
（１４）ピタバスタチン及びロスバスタチンから選択される化合物又はその製薬学的に許容される塩を有効成分とする脳卒中発症後の生存率改善剤。
また、本発明は、化合物の脳卒中再発抑制作用、脳卒中再発に伴う神経症状軽減作用若しくは脳卒中発症後の生存率改善作用を評価する方法に関する。具体的には以下の通りである。
（１５）下記のステップ；
ａ）被検物質投与前に脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット（ＳＨＲ−ＳＰ）の体重変化及び／又は神経症状を観察し
ｂ）ａ）の観察中、体重変化の異常及び／又は神経症状がみられた前記ラットを選択し、
ｃ）被検物質をｂ）で選択されたラットに投与し、一定期間観察すること
を含む、被検物質の脳卒中再発抑制作用、脳卒中再発に伴う神経症状軽減作用、または脳卒中発症後の生存率改善作用の評価方法。
（１６）脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与し、体重変化及び／又は神経症状の変化を指標とすることによる、被検物質の脳卒中再発抑制作用を評価する方法。
（１７）脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与し、体重変化の程度をスコア化することによる、被検物質の脳卒中再発抑制作用を評価する方法。
（１８）脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与することによる、被検物質の脳卒中再発に伴う神経症状軽減作用を評価する方法。
（１９）脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与し、神経症状の程度をスコア化することによる、被検物質の脳卒中再発に伴う神経症状軽減作用を評価する方法。
（２０）脳卒中発症後の脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットに被検物質を投与することによる、被検物質の脳卒中発症後の生存率改善作用を評価する方法。
【図面の簡単な説明】  第１図  アトルバスタチンによる脳卒中発症後７日、１４日の脳卒中再発スコアを示すグラフ。
第２図  アトルバスタチンによる脳卒中発症後０，７，１４日の神経症状スコアを示すグラフ。
第３図  アトルバスタチン投与による脳卒中発症後の生存率の経時変化を示すグラフ。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明について更に説明すると、次の通りである。
「アトルバスタチン」とは、（−）−（３Ｒ、５Ｒ）−７−［２−（４−フルオロフェニル）−５−イソプロピル−３−フェニル−４−フェニルカルバモイル−１Ｈ−ピロール−１−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を意味する。
「製薬学的に許容される塩」とは、具体的にはリチウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、第一鉄もしくは第二鉄の塩であり、好ましくはカルシウム塩である。
更に好ましくは、アトルバスタチンカルシウム水和物、即ち（−）−モノカルシウムビス｛（３Ｒ、５Ｒ）−７−［２−（４−フルオロフェニル）−５−イソプロピル−３−フェニル−４−フェニルカルバモイル−１Ｈ−ピロール−１−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプタン酸｝−カルシウム  三水和物であり、かかる物質を単独の有効成分として含有する製剤はリピトール（登録商標）として販売されている。
アトルバスタチンカルシウム水和物には無定型（ＷＯ９７／０３９６０）や結晶多形（ＷＯ９７／０３９５９，ＷＯ９７／０３９５８等）が存在し、本発明の用途には、それらの混合物或いは単離された１種の結晶形（Ｆｏｒｍ  Ｉ，ＩＩ，ＩＩＩ，ＩＶ，又はＶ〜ＶＩＩ等）或いは無定型を用いることもできる。
ピタバスタチン及びロスバスタチンは、強力なＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤である。
ピタバスタチン又はその製薬学的に許容される塩としては、ピタバスタチンカルシウム、即ち、（＋）−モノカルシウム  ビス｛（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプタン酸｝が好ましい。
ロスバスタチン又はその製薬学的に許容される塩としては、ロスバスタチンカルシウム、即ち、モノカルシウム  ビス［（Ｅ）−７−［４−（４−フルオロフェニル）−６イソプロピル−２−［メチル（メチル−スルフォニル）アミノ］ピリミジン−５−イル］（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸］が好ましい。
「脳卒中」とは、出血性及び非出血性に分けられ、出血性としては、脳出血、くも膜下出血、脳動脈奇形に伴う頭蓋内出血、非出血性としては脳梗塞が挙げられる。特に、脳出血及び／または脳梗塞を意味する。
「脳梗塞」は、血栓の由来により血栓性（脳血栓）、塞栓性（脳塞栓）、更に血行力学性に分類される。また、臨床病型による分類としては、アテローム血栓性脳梗塞、心原性脳塞栓症、ラクナ梗塞、又はその他に分類される。
「脳卒中再発抑制」とは、過去に脳卒中発作のあった哺乳動物（脳卒中既往動物）、好ましくはヒト（脳卒中既往患者）が、再度脳卒中発作を起こすのを抑制すること、或いは再発した脳卒中を軽症化することを意味する。好ましくは、ヒトにおいては前回の脳卒中発作から３年以内、更に好ましくは１年以内、最も好ましくは６ヶ月以内（急性期）の脳卒中既往患者の再発作の抑制を意味する。特に好ましくは、前回の脳卒中発作が最初のものである脳卒中既往患者の再発抑制を意味する。
「虚血性心疾患」とは、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）とも言い、心筋梗塞、狭心症（好ましくは不安定狭心症）を意味する。
「高血圧」とは、哺乳動物においては、血圧がその種における正常域をこえて高い状態をいう。ヒトにおいては、１）収縮期血圧が１６０ｍｍＨｇ以上、または拡張期血圧が１００ｍｍＨｇ以上、或いはその両方を示す者、または２）収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上、または拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上、或いはその両方を示す治療された高血圧患者を意味する。
「神経症状」とは、脳卒中により脳に障害を受けた部位が司る神経機能の障害による症状を意味し、具体的には運動障害、言語障害、感覚障害、眼科的障害等を意味する。
「神経症状軽減」とは、前記神経症状の程度が薬剤非投与時の程度よりも薬剤投与後の症状の程度が改善することを意味する。具体的には、動物または患者の麻痺及び活動性を重症度の高低に対応してスコア化し、薬剤投与前よりも薬剤投与後のスコアが低い場合を言う。好ましくは薬剤投与前よりも薬剤投与後のスコアが有意に低い場合である。
「運動障害」とは、脳卒中による脳の障害により、随意運動が困難又は不能、或いは円滑に行えない状態を意味し、運動麻痺及び運動失調が挙げられる。特に運動麻痺を意味する。
「運動麻痺」とは、脳卒中により運動中枢が傷害されたために、随意運動が困難又は不能になった状態を意味する。運動麻痺には痙性或いは弛緩性麻痺がある片麻痺、対麻痺、四肢麻痺、単麻痺等が含まれる。
「運動失調」は筋力低下や麻痺がないのに筋群相互間のバランスや協調運動の障害により随意運動を円滑に行えない状態を意味する。
「意識障害」とは、主に意識レベルの低下を意味し、外界からの刺激を正しく認知し、判断した結果に基づいて反応できない状態を意味する。意識障害には、意識清明度の変化として、失神、傾眠、昏迷、半昏睡、昏睡があり、意識内容の変化として、譫妄、朦朧状態などがある。
「言語障害」には、構音障害、失語症がある。
「構音障害」とは、構音に関係する筋群或いはそれを支配する神経系の障害により生じるものであり、一般に「ろれつが回らない」或いは「舌がもつれる」などと表現される。構音障害には麻痺性、小脳、錐体外路系の障害によるものがあり、脳卒中による障害では錐体路と脳神経の障害によるものである。
「失語症」は、大脳の言語領域の障害のために言葉を正しく話すこと、理解することが障害された状態であり、構音器官の運動障害の有無とは無関係に起こる。殆どの場合は、左大脳の障害によって起こる。失語にはＢｒｏｃａ失語、Ｗｅｒｎｉｃｋｅ失語、全失語、伝導失語などがある。
感覚には、触覚、圧覚、温覚等の表在感覚、位置感覚、振動覚などの深部感覚、２点識別覚や皮膚書字覚等の複合感覚がある。
「感覚障害」とは、脳の障害により、これらの感覚が正常に認識されない状態をいい、その程度により、感覚消失（脱失）、感覚鈍麻（減退）、感覚過敏、感覚異常（錯感覚）がある。また、半身感覚障害、表在感覚障害、全感覚障害などの感覚障害の生じている部位によっても分類される。
「生存率改善」とは、本発明に用いる化合物を既に脳卒中を発症した哺乳動物に投与した際の生存率が、非投与の場合に比べて有意に延長することを言う。好ましくは、ヒトに投与したときの１ヶ月乃至１２ヶ月間、１年乃至５年間、或いは５年以上の生存率が、該疾患に適用される各種治療の処置或いは無処置の生存率より上昇する効果を意味する。
「脳卒中発症後」とは被検物質投与前に既に脳卒中を発症していることを意味する。特に、初発の脳卒中の発症後であることが好ましい。脳卒中の発症の有無は、体重変化及び／又は神経症状の観察により判断する。観察期間中、体重変化の異常及び／又は神経症状が観察された場合、好ましくは、体重変化の異常及び神経症状が観察された場合を、脳卒中が発症したものと認定する。
「体重変化の異常」とは、体重が増加しないこと及び体重減少を意味する。「体重減少」とは、２４時間以内に体重が減少することを意味し、特に、急激な体重減少を指標とすることが好ましい。「神経症状」は、前記の定義と同様であるが、具体的には運動麻痺や運動失調を示す。
「脳卒中易発症性高血圧自然発症ラット」は、血圧が１０週齢で平均１８７ｍｍＨｇに達し、病理学的にヒトと極めて類似した脳卒中（脳出血と脳梗塞の両方）を発症する。現在までに、ＳＨＲＳＰ／Ｈｏｓ［（株）星野試験動物飼育所、日本エスエルシー株式会社］、ＳＨＲＳＰ／Ｉｚｍ［清水実験材料株式会社、（株）船橋農場、日本エスエルシー株式会社］、ＳＨＲＳＰ／Ｎ  Ｉｃｏ［日本チャールス・リバー株式会社］、ＳＨＲＳＰ／Ｓｅａ［セアック吉富（株）］の４系統が知られており、表記の機関から入手可能である。好ましくは、ＳＨＲＳＰ／Ｉｚｍである。
「スコア化」とは、体重変化の程度、或いは神経症状の程度に応じてスコアリングすることである。
体重変化については、体重増加を異常なし、体重の変化なし及び体重減少を脳卒中が発症したものとしてスコア化する。具体的には、０〜５ｇの体重減少を軽度な脳卒中再発（スコア１）、２０ｇ以上の体重減少を重度の脳卒中再発（スコア３）とスコア化し、５ｇより大乃至２０ｇ未満の体重減少を中度の脳卒中再発（スコア２）とする。各個体の発症後７日間のスコアの合計をその週の最終的なスコアとし，最大スコアは２１とする。なお、状況に応じて観察期間を適宜変更して評価することができる。
神経症状については、両前肢及び両後肢の麻痺及び活動性の低下を神経症状の項目として、症状の程度に応じスコア化する。具体的には、文献（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９２，１６５−１６７，１９９１）に準じ、異常なし（スコア０）、軽度（スコア１）、中度（スコア２）、重度（スコア３）とし、最終的な個体の値はこれらの項目のスコアを個体ごとに合計したものとし最大スコアは１５とする。
「被検物質」としては、特に限定されるものではないが、例えば、新規合成化合物、市販の化合物（ペプチドを含む）、ケミカルファイルに登録されている種々の公知化合物（ペプチドを含む）、コンビナトリアル・ケミストリー技術（Ｎ．Ｋ．Ｔｅｒｒｅｔｔ．Ｍ．Ｇａｒｄｎｅｒ，Ｄ．Ｗ．Ｇｏｒｄｏｎ，Ｒ．Ｊ．Ｋｏｂｙｌｅｃｋｉ，Ｊ．Ｓｔｅｅｌｅ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５１，８１３５−７３（１９９５））によって得られた化合物群、微生物の培養上清、植物や海洋生物由来の天然成分、動物組織抽出物を挙げることができる。
本発明に使用する化合物は、広範囲の種々な経口的および非経口的投与形態で製剤化そして投与することができる。すなわち、本発明に使用する化合物は、注射によって静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内または腹腔内に投与することができる。また、本発明に使用する化合物は、吸入によって、例えば鼻内に投与することができる。さらに、本発明に使用する化合物は、経皮的に投与することができる。当該技術に精通する者に明らかであるように、以下の投与形態は、活性成分として、発明に使用する化合物又はその相当する医薬的に許容し得る塩を含有することができる。
本発明に使用する化合物から医薬組成物を製造するに際しては、医薬的に許容し得る担体は、固体または液体であることができる。
固体形態の製剤としては、粉末、錠剤、ピル、カプセル、カシエー、坐剤および分散性顆粒が含まれる。固体の担体は、希釈剤、風味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、防腐剤、錠剤崩壊剤または封入物質として作用することもできる１種以上の物質であることができる。粉末においては、担体は、微細な活性成分と混合される微細な固体である。錠剤においては、活性成分を適当な割合で必要な結合性を有する担体と混合し、そして所望の形状および大きさに圧縮する。
粉末および錠剤は、好ましくは約２％または１０％〜約７０％の活性化合物を含有する。適当な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターなどである。
製剤とは、他の担体を有しているかまたは有していない活性成分が担体によって囲まれたもの、或いは活性成分が該担体と共にカプセルに封入されたものなど、担体としての封入物質と活性化合物との剤形を包含することを意味する。同様に、カシエーおよびロゼンジも包含される。錠剤、粉末、カプセル、ピル、カシエーおよびロゼンジは、経口投与に適した固体の投与形態として使用することができる。
坐剤の製造に際しては、低融点のワックス、例えば脂肪酸グリセリドの混合物またはココアバターをはじめに融解し、そして活性成分を例えば撹拌によってその中に一様に分散する。それから、融解した均質な混合物を都合のよい大きさの型に注入し、冷却しそしてそれによって固化させる。液状の製剤は、溶液、懸濁液、保持浣腸およびエマルジョン、例えば水またはプロピレングリコール水溶液を包含する。
非経口的注射に際しては、液状製剤は、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液として処方することができる。経口的使用に適した水溶液は、活性成分を水に溶解しそして必要に応じて適当な着色剤、風味剤、安定剤および増粘剤を加えることによって製造することができる。経口的使用に適した水性懸濁液は、微細な活性成分を、粘稠物質、例えば天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび他の公知の懸濁剤と一緒に、水に分散することによって製造することができる。
また、使用直前に経口的投与用の液状の製剤に変換すべく企図された固体の形態の製剤も包含される。このような液状の形態としては溶液、懸濁液およびエマルジョンが含まれる。これらの製剤は、活性成分に加えて、着色料、風味料、安定剤、緩衝剤、人工および天然甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有することができる。
医薬製剤は、好ましくは単位使用形態にある。このような形態においては、製剤は、活性成分の適当な量を含有する単位投与量に小分けされる。単位使用形態は、包装された錠剤、カプセル、およびバイアルまたはアンプル中の粉末のような、分離した量の製剤を含有する包装された製剤であることができる。また単位使用形態は、カプセル、錠剤、カシエーまたはロゼンジそれ自体であることができ、またはそれは、これらの何れかが適当な数で包装された形態であることができる。  単位投与製剤中の活性成分の量は、特定の適用および活性成分の力価によって、０．５〜１００ｍｇ、好ましくは２．５〜８０ｍｇに変化または調節することができる。必要に応じて、組成物は、更に併用可能な他の活性成分を含有することもできる。
本発明の用途に利用されるアトルバスタチンは、１日につき約２．５ｍｇ〜約１００ｍｇの初期使用量で反復投与される。約１０ｍｇ〜約８０ｍｇの１日当たりの投与量範囲が好ましい。しかしながら、使用量は、患者の必要条件、処置される疾患の程度、および使用される化合物によって変えることができる。特定の情況に対する適当な使用量は、当該技術の熟練度の範囲内で決定される。一般に、治療は、化合物の最適の投与量より低い使用量で開始される。その後、使用量は、情況下における最適の作用に達するまで少量ずつ増加される。便宜上、必要に応じて、１日当たりの全使用量を分割しそして１日のうち数回投与することができる。
【実施例】  次に，実施例により本発明をさらに詳細に説明するが，本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
本発明の効果および評価方法は、以下の実験方法により確認された。
［実施例１］
（１）被験物質
アトルバスタチンとしてアトルバスタチンカルシウム水和物（ファイザー製薬株式会社）を０．５％メチルセルロースに懸濁し５ｍＬ／ｋｇの用量で投与した。投与量は３及び３０ｍｇ／ｋｇとし一日一回経口反復投与を行った。本試験の用量は下記文献を参考に決定した（Ｎａｍｕｒａ  Ｓ．他Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ  ｐｏｔｅｃｔｓ  ｂｒａｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｅｒｍａｎｅｎｔ  ｆｏｃａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．６０ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｊａｐａｎ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｔｙ．Ｏｋａｙａｍａ，Ｊａｐａｎ，Ｏｃｔ２４−２６，２００１．，Ｓａｓａｍａｔａ  Ｍ．他  Ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ３−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｙｇｌｕｔａｒｙｌｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｂｒａｉｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｅｒｍａｎｅｎｔ  ｆｏｃａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．７５ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ．Ｋｕｍａｍｏｔｏ，Ｊａｐａｎ，Ｍａｒｃｈ  １３−１５，２００２）。
（２）再発率、神経症状及び生存率の解析
ＳＨＲ−ＳＰ系雄性ラット（入荷時９週齢，日本エスエルシー株式会社）を恒温・恒湿条件下で飼育した。飼料はＳＨＲ−ＳＰ飼育用固型飼料であるＳＰ飼料を、飲料水は水道水を自動給水により各々自由に摂取させた。ラットの体重を毎日測定し脳卒中発症による症状の有無を観察した（Ｓｔｒｏｋｅ．Ｖｏｌ  ２０（９）（ｐｐ  １２１２−１２１８），１９８９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｖｏｌ  ２９１（２）（ｐｐ  ５６９−５７５），１９９９）。この系での脳卒中の発症は麻痺や半身不随といった神経症状（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ  １９２（１）（ｐｐ  １６５−１６７），１９９１）や急激な体重減少等の体重変化の異常を伴う。この体重変化の異常は脳卒中発症による飲水や摂食の抑制によるものだと考えられる（Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｖｏｌ  ４５２（１−２）（ｐｐ  ３２３−３２８）１９８８．，Ｓｔｒｏｋｅ．Ｖｏｌ  ２０（８）（ｐｐ  １０８９−１０９１），１９８９．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ  １９２（１）（ｐｐ  １６５−１６７），１９９１）。従ってこれらの神経症状や体重変化の異常が最初に確認された日を脳卒中発症日とした。
１）脳卒中再発抑制作用
脳卒中の再発のスコア化のために，発症後のラットの体重を発症後１４日間まで毎日測定した。脳卒中の発症は体重変化の異常を伴うことから（Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｖｏｌ  ４５２（１−２）（ｐｐ  ３２３−３２８），１９８８．，Ｓｔｒｏｋｅ．Ｖｏｌ  ２０（８）（ｐｐ  １０８９−１０９１），１９８９．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ  １９２（１）（ｐｐ  １６５−１６７），１９９１），脳卒中の再発を毎日の体重変化によりスコア化した。体重変化は５ｇ単位で測定し，スコア０，異常なし（体重増加）；スコア１，軽度（５ｇ以下の体重減少）；スコア２，中度（１０−１５ｇの体重減少）；スコア３，重度（２０ｇ以上の体重減少）とスコア化した。各個体の発症後７日間のスコアの合計をその週の最終的なスコアとし，最大スコアは２１とした。
２）脳卒中再発に伴う神経症状改善作用
神経症状の観察は脳卒中発症日及び発症後７及び１４日に山本ら（Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｖｏｌ  ４５２（１−２）（ｐｐ  ３２３−３２８），１９８８．，Ｓｔｒｏｋｅ．Ｖｏｌ  ２０（８）（ｐｐ  １０８９−１０９１），１９８９．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ  １９２（１）（ｐｐ  １６５−１６７），１９９１）の方法を改変した方法で行った。両前肢及び両後肢の麻痺及び活動性の低下を神経症状の項目として観察した。これらの項目を文献（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９２，１６５−１６７，１９９１）に準じ、スコア０，異常なし；スコア１，軽度；スコア２，中度；スコア３，重度とスコア化した。最終的な個体の値はこれらの項目のスコアを個体ごとに合計したものとし最大スコアは１５とした。
３）脳卒中発症後の生存率
脳卒中を発症したラットを溶媒投与（コントロール）群及びアトルバスタチン３及び３０ｍｇ／ｋｇ投与群に無作為に分配した（各群３３例）。溶媒もしくはアトルバスタチンは脳卒中発症後からその個体が死亡するまで毎日１日１回経口投与を行った。
（３）統計
神経症状及び再発スコアにはＳｔｅｅｌ検定を用い，生存率にはＬｏｇ−ｒａｎｋ検定を使用し，ｐ値が０．０５未満を有意な差とした。
（４）結果
９９匹のＳＨＲ−ＳＰのうち，１１匹（１１．１％）が投与開始前に死亡し，７匹（７．０％）が生後１４週までに脳卒中を発症しなかったのでこれらの個体は実験に使用せず，生後１０週から１３週のうちに脳卒中を発症した残りのラット（８１．８％）を実験に使用した。
なお、脳卒中発症後２週間における被験動物の拡張期血圧、収縮期血圧、平均血圧、心拍数、総コレステロール値は、各投与群ともコントロール群と有意な差は見られなかった。
１）脳卒中の再発抑制作用
一回目の脳卒中発症後，脳卒中再発を示さないラットの体重は増加したが，発症後７日又は１４日以内に更なる体重変化の異常及び両肢の麻痺，活動性の低下，攻撃性の増強といった脳卒中の悪化及び再発の症状を示すラットが観察された。コントロール群は発症後７日及び１４日以内に脳卒中の再発による有意な症状の悪化を示した。３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群は，発症後７日の症状に対する改善傾向を示し，発症後１４日では３及び３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群共に有意な改善作用を示した（第２図）。
これらの結果から、アトルバスタチンは脳卒中再発の抑制効果を有することが確認された。
２）脳卒中再発に伴う神経症状に対する作用
脳卒中を発症したラットは体重変化の異常と共に両肢の麻痺，活動性の低下，攻撃性の増強などの症状を示した。コントロール群では脳卒中発症後１４日の時点で，脳卒中発症初日に比べて有意に神経症状が悪化していた。アトルバスタチン（３及び３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ，ｐ．ｏ．）は発症後７日において神経症状改善傾向を示した（第１図）。両群とも発症後１４日には有意な改善作用を示し，３０ｍｇ／ｋｇ投与群はほぼ正常に近いレベルまでの神経症状の回復を示した。
これらの結果から、アトルバスタチンは脳卒中再発に伴う神経症状改善効果を有することが確認された。
３）脳卒中発症後の生存率
脳卒中発症３５日後のコントロール群の生存率は３／２８（１０．７％）であった。アトルバスタチン３及び３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与群は用量依存的に生存率改善作用を示し，その生存率は６／２９（２０．７％）及び８／２４（３３．３％）であった（第３図）。３０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ投与による改善作用はＬｏｇ−ｒａｎｋ検定により有意な差であった。
これらの結果から、アトルバスタチンは脳卒中発症後の生存率改善効果を有することが確認された。
また、神経症状改善効果及び生存率改善効果の結果からも、アトルバスタチンは脳卒中再発抑制作用を有することが確認された。
同様に、上記評価方法を用いることによってピタバスタチン、ロスバスタチンについても脳卒中再発の抑制効果、脳卒中再発に伴う神経症状改善効果及び脳卒中発症後の生存率改善効果を確認することができる。
更に、本発明の脳卒中再発抑制作用の評価方法は、高度な技術を必要とする脳組織の観察を行うことなく容易に脳卒中の再発の有無及びその程度を評価することができる優れた方法であることが確認できた。また、脳卒中再発に伴う神経症状改善作用及び脳卒中発症後の生存率改善作用の評価方法についても、脳卒中再発を容易に判定できる指標を利用した簡便で有用な方法であることが確認できた。
【産業上の利用可能性】  本発明によれば、アトルバスタチンは、脳卒中易発症性高血圧自然発症（ＳＨＲ−ＳＰ）ラットを用いることにより、脳卒中再発抑制効果及び再発した脳卒中による神経症状の軽減効果、及び脳卒中発症後の生存率改善効果を確認したことから、脳卒中再発抑制剤、脳卒中再発に伴う諸症状の軽減剤、及び再発後の生存率改善剤として有用である。
また、本発明の評価方法は、化合物の脳卒中再発抑制作用、神経症状軽減作用または生存率改善作用の簡易な評価方法として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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