(57)【要約】親水性スペーサーを組み込んだモノマー成分を重合してなる樹脂、および当該樹脂にリガンドを固定化することによって得られるリガンド固定化固相担体は、試料中に混在する、当該リガンドに対するターゲット分子以外の物質の樹脂および／またはリガンドへの非特異的な吸着を低減することができるので、よりノイズの少ないターゲット分子の探索、同定等が可能となる。
2005037881.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
原料となるモノマーを重合して得られる樹脂であって、該モノマーには親水性スペーサーが組み込まれていることを特徴とする樹脂。
【請求項２】
モノマーが（メタ）アクリル系モノマーである、請求項１記載の樹脂。
【請求項３】
親水性スペーサーが下記式（Ｉａ）〜（Ｉｅ）からなる群より選択されるいずれか１つの式で表される部分構造を少なくとも１つ有するものである、請求項１または２記載の樹脂。
2005037881.tif 000081
（式（Ｉａ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、Ａ３は適当な連結基であり、
Ｘ１〜Ｘ３はそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ１〜Ｒ７はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｍは０〜２の整数であり、ｍ’は０〜１０の整数であり、ｍ”は０〜２の整数であり、
Ｒ３〜Ｒ７が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ３が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）；
2005037881.tif 000082
（式（Ｉｂ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ４は低級アルキレン基であり、
ｎおよびｎ’はそれぞれ同一または異なって１〜１０の整数である）；
2005037881.tif 000083
（式（Ｉｃ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ４は低級アルキレン基であり、
ｐ、ｐ’およびｐ”はそれぞれ同一または異なって１〜１０の整数である）；
2005037881.tif 000084
（式（Ｉｄ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、
Ｘ４は単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ８〜Ｒ１０はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｑは１〜７の整数であり、
Ｒ８が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ４が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）；
2005037881.tif 000085
（式（Ｉｅ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、
ｒは１〜１０の整数である）
【請求項４】
親水性スペーサーが下記式（Ｉｄ）で表される部分構造を少なくとも１つ有するものである、請求項３記載の樹脂。
2005037881.tif 000086
（式（Ｉｄ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、
Ｘ４は単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ８〜Ｒ１０はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｑは１〜７の整数であり、
Ｒ８が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ４が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）
【請求項５】
式（Ｉｄ）において、Ａ１が−Ｏ−であり、Ａ２がメチレン基であり、Ｘ４が単結合であり、ｑが４であり、複数個存在するＲ８が同一で水素原子であり、Ｒ９およびＲ１０が水素原子である、請求項４記載の樹脂。
【請求項６】
親水性スペーサーが、下記式で表される化合物である、請求項１記載の樹脂。
2005037881.tif 000087
（式中Ｙａは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項７】
下記式で表される化合物の共重合体を含む、請求項５記載の樹脂。
2005037881.tif 000088
（式中Ｙａは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項８】
下記式で表される化合物。
2005037881.tif 000089
（式中Ｙａは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項９】
親水性スペーサーが下記式（Ｉｅ）で表される部分構造を少なくとも１つ有するものである、請求項３記載の樹脂。
2005037881.tif 000090
（式（Ｉｅ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、
ｒは１〜１０の整数である）
【請求項１０】
式（Ｉｅ）において、Ａ１が−Ｏ−である、請求項６記載の樹脂。
【請求項１１】
親水性スペーサーが、下記式で表される化合物である、請求項１記載の樹脂。
2005037881.tif 000091
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項１２】
下記式で表される化合物の共重合体を含む、請求項１０記載の樹脂。
2005037881.tif 000092
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項１３】
下記式で表される化合物。
2005037881.tif 000093
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項１４】
式（Ｉｅ）において、Ａ１が−ＮＨ−である、請求項９記載の樹脂。
【請求項１５】
親水性スペーサーが、下記式で表される化合物である、請求項１記載の樹脂。
2005037881.tif 000094
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項１６】
下記式で表される化合物の共重合体を含む、請求項１４記載の樹脂。
2005037881.tif 000095
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項１７】
下記式で表される化合物。
2005037881.tif 000096
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
【請求項１８】
請求項１〜７、９〜１２および１４〜１６のいずれか１項に記載の樹脂にリガンドを固定化してなる、アフィニティークロマトグラフィー用固相担体。
【請求項１９】
該リガンドのターゲット分子探索用である、請求項１８記載の固相担体。
【請求項２０】
リガンドに対して特異的な相互作用を有するターゲット分子のスクリーニング方法であって、少なくとも以下の工程を含む方法：
（ｉ）リガンドを請求項１〜７、９〜１２および１４〜１６のいずれか１項に記載の樹脂に固定化する工程、
（ｉｉ）ターゲット分子を含むかまたは含まない試料を上記（ｉ）で得られたリガンドが固定化された樹脂に接触させる工程、
（ｉｉｉ）リガンドに特異的な相互作用を示したか、または示さなかった分子を同定し、解析する工程、および
（ｉｖ）上記（ｉｉｉ）で得られた解析結果に基づいてリガンドに対して特異的な相互作用を有する分子をターゲット分子と判断する工程。
【請求項２１】
試料中の、リガンドに対して特異的な相互作用を有するターゲット分子を測定する方法であって、少なくとも以下の工程を含む方法：
（ｉ）リガンドを請求項１〜７、９〜１２および１４〜１６のいずれか１項に記載の樹脂に固定化する工程、
（ｉｉ）試料を上記（ｉ）で得られたリガンドが固定化された樹脂に接触させる工程、
（ｉｉｉ）リガンドに特異的な相互作用を示したか、または示さなかった分子を測定し、解析する工程、および
（ｉｖ）上記（ｉｉｉ）で得られた解析結果に基づいてリガンドに対して特異的な相互作用を有するターゲット分子を測定する工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、アフィニティークロマトグラフィー用の固相担体として有用な樹脂（以下、単にアフィニティー用樹脂ともいう）および当該樹脂を調製するのに好適なモノマーに関する。より詳しくは、非特異的タンパク質の吸着が少なく、且つ安定性の高いアフィニティー用樹脂に関する。
【背景技術】  近年、特異的分子間相互作用を基盤とした手法を用い、ある特定の分子に特異的な相互作用を有する分子を探索する試みが盛んに行われている。この中で、注目に値する生理活性を示す医薬品のような低分子化合物を適当な固相担体に固定化し、ターゲットを探索する方法が注目を集めている。このいわゆるアフィニティー樹脂と呼ばれる手法を用いたターゲット探索研究は着目する生理活性を示す低分子化合物のターゲットを効率的に同定することが可能であることから多くの研究が行われ、具体的な成果もいくつか報告されている。これらの研究例としては、１）１９８９年のシュライバー教授による免疫抑制剤ＦＫ５０６の結合タンパク質ＦＫＢＰ（ＦＫ５０６  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）の発見（ＦＫ５０６の細胞内結合タンパク質としてのＦＫＢＰ１２の発見、「Ｎａｔｕｒｅ，英国，１９８９年１０月２６日，第３４１巻，ｐ．７５８−７６０」参照）や、２）抗癌剤Ｔｒａｐｏｘｉｎのターゲットタンパク質としてのＨＤＡＣ発見（「Ｓｃｉｅｎｃｅ，米国，１９９６年４月１９日，第２７２巻，ｐ．４０８−４１１」参照）、３）半田等によるＥ３３３０のターゲットタンパクとしてのＲｅｆ−１の発見（「Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，英国，２０００年８月，第１８巻，第８号，ｐ．８７７−８８１」参照）が有名である。
また、診断薬の領域においても、出来るだけ病気早期に病巣の存在を非侵襲的に確認できれば治療の効果がアップすることから、例えば特定の癌に特異的に発現する微量タンパク質等のマーカーと呼ばれる物質を、採取した患者の血液等から同定する研究も盛んに行われている。
しかし、これまでに上記手法において、固定化したリガンド分子と特異的な分子間相互作用を行うタンパク質以外の非特異的タンパク質の存在が問題となってきた。本発明者らは、リガンドをアフィニティー樹脂に結合させる際に親水性スペーサーを介在させることによって、固定化したリガンド分子および／またはアフィニティー樹脂自身と、該リガンドに対して特異的でない分子との非特異的な相互作用を低減させることを既に見出している（特願２００２−２２２２２６（ＷＯ２００４／０２５２９７））。しかしながら、非特異的な相互作用の低減化という点のみ考えた場合には、アガロース系アフィニティー樹脂（例えばＡｆｆｉＧｅｌ）のように固相担体自身が高い親水性を有する方がアフィニティー樹脂としては優れていることになる。しかしながらアガロース系樹脂はその構成成分の化学的特性から通常合成で用いる多くの系で不可逆的な変性を引き起こし、広範なリガンドの研究には必ずしも適しているとは言えない欠点を有している。安定性という観点からは、メタクリレート系の樹脂（例えばＴＯＹＯＰＥＡＲＬ）が、化学的にも安定で多くの有機溶媒内での反応に十分な耐性を有している。
分子間の非特異的な相互作用がアガロース系アフィニティー樹脂に匹敵する程低減化され、且つメタクリレート系樹脂に匹敵する程の安定性を有する樹脂の開発が求められていた。
本発明は、分子間の非特異的相互作用が低減化され得る、且つ安定性に優れた樹脂、特にアフィニティー樹脂を提供することを目的とする。
【発明の開示】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究し、これまでに開発してきた親水性スペーサー（特願２００２−２２２２２６（ＷＯ２００４／０２５２９７））が組み込まれたメタクリレートモノマーを樹脂原料とし、それを重合反応に付すことにより、メタクリレート系の樹脂ではあるが、アガロース系樹脂に匹敵する親水的特性を有するアフィニティー用樹脂の合成を試み、それに成功して本発明を完成するに至った。
即ち本発明は下記の通りである。
〔１〕原料となるモノマーを重合して得られる樹脂であって、該モノマーには親水性スペーサーが組み込まれていることを特徴とする樹脂。
〔２〕モノマーが（メタ）アクリル系モノマーである、上記〔１〕記載の樹脂。
〔３〕親水性スペーサーが下記式（Ｉａ）〜（Ｉｅ）からなる群より選択されるいずれか１つの式で表される部分構造を少なくとも１つ有するものである、上記〔１〕または〔２〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000003
（式（Ｉａ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、Ａ３は適当な連結基であり、
Ｘ１〜Ｘ３はそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ１〜Ｒ７はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｍは０〜２の整数であり、ｍ’は０〜１０の整数であり、ｍ”は０〜２の整数であり、
Ｒ３〜Ｒ７が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ３が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）；
2005037881.tif 000004
（式（Ｉｂ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ４は低級アルキレン基であり、
ｎおよびｎ’はそれぞれ同一または異なって１〜１０の整数である）；
2005037881.tif 000005
（式（Ｉｃ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ４は低級アルキレン基であり、
ｐ，ｐ’およびｐ”）はそれぞれ同一または異なって１〜１０の整数である）；
2005037881.tif 000006
（式（Ｉｄ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、
Ｘ４は単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ８〜Ｒ１０はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｑは１〜７の整数であり、
Ｒ８が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ４が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）；
2005037881.tif 000007
（式（Ｉｅ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、
ｒは１〜１０の整数である）
〔４〕親水性スペーサーが下記式（Ｉｄ）で表される部分構造を少なくとも１つ有するものである、上記〔３〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000008
（式（Ｉｄ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、
Ｘ４は単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ８〜Ｒ１０はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｑは１〜７の整数であり、
Ｒ８が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ４が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）
〔５〕式（Ｉｄ）において、Ａ１が−Ｏ−であり、Ａ２がメチレン基であり、Ｘ４が単結合であり、ｑが４であり、複数個存在するＲ８が同一で水素原子であり、Ｒ９およびＲ１０が水素原子である、上記〔４〕記載の樹脂。
〔６〕親水性スペーサーが、下記式で表される化合物である、上記〔１〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000009
（式中Ｙａは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔７〕下記式で表される化合物の共重合体を含む、上記〔５〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000010
（式中Ｙａは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔８〕下記式で表される化合物。
2005037881.tif 000011
（式中Ｙａは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔９〕親水性スペーサーが下記式（Ｉｅ）で表される部分構造を少なくとも１つ有するものである、上記〔３〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000012
（式（Ｉｅ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、
ｒは１〜１０の整数である）
〔１０〕式（Ｉｅ）において、Ａ１が−Ｏ−である、上記〔９〕記載の樹脂。
〔１１〕親水性スペーサーが、下記式で表される化合物である、上記〔１〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000013
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔１２〕下記式で表される化合物の共重合体を含む、上記〔１０〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000014
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔１３〕下記式で表される化合物。
2005037881.tif 000015
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔１４〕式（Ｉｅ）において、Ａ１が−ＮＨ−である、上記〔９〕記載の樹脂。
〔１５〕親水性スペーサーが、下記式で表される化合物である、上記〔１〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000016
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔１６〕下記式で表される化合物の共重合体を含む、上記〔１４〕記載の樹脂。
2005037881.tif 000017
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔１７〕下記式で表される化合物。
2005037881.tif 000018
（式中Ｙｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
〔１８〕上記〔１〕〜〔７〕、〔９〕〜〔１２〕および〔１４〕〜〔１６〕のいずれか１つに記載の樹脂にリガンドを固定化してなる、アフィニティークロマトグラフィー用固相担体。
〔１９〕該リガンドのターゲット分子探索用である、上記〔１８〕記載の固相担体。
〔２０〕リガンドに対して特異的な相互作用を有するターゲット分子のスクリーニング方法であって、少なくとも以下の工程を含む方法：
（ｉ）リガンドを上記〔１〕〜〔７〕、〔９〕〜〔１２〕および〔１４〕〜〔１６〕のいずれか１つに記載の樹脂に固定化する工程、
（ｉｉ）ターゲット分子を含むかまたは含まない試料を上記（ｉ）で得られたリガンドが固定化された樹脂に接触させる工程、
（ｉｉｉ）リガンドに特異的な相互作用を示したか、または示さなかった分子を同定し、解析する工程、および
（ｉｖ）上記（ｉｉｉ）で得られた解析結果に基づいてリガンドに対して特異的な相互作用を有する分子をターゲット分子と判断する工程。
〔２１〕試料中の、リガンドに対して特異的な相互作用を有するターゲット分子を測定する方法であって、少なくとも以下の工程を含む方法：
（ｉ）リガンドを上記〔１〕〜〔７〕、〔９〕〜〔１２〕および〔１４〕〜〔１６〕のいずれか１つに記載の樹脂に固定化する工程、
（ｉｉ）試料を上記（ｉ）で得られたリガンドが固定化された樹脂に接触させる工程、
（ｉｉｉ）リガンドに特異的な相互作用を示したか、または示さなかった分子を測定し、解析する工程、および
（ｉｖ）上記（ｉｉｉ）で得られた解析結果に基づいてリガンドに対して特異的な相互作用を有するターゲット分子を測定する工程。
【図面の簡単な説明】  図１は、親水性スペーサーを組み込んだモノマー成分を重合してなる樹脂にリガンド（ＦＫ５０６）を固定化することによって得られるＦＫ５０６固定化固相担体上へのタンパク質の非特異的な吸着の程度を示す図である。ＦＫ５０６のターゲット分子であるＦＫＢＰ１２の値を１とした場合の各非特異的タンパク質の吸着の程度を相対的に表した。
発明の詳細な説明
本発明の樹脂を合成するにあたって使用されるモノマーは、親水性スペーサーが組み込まれていて、且つ化学的、物理的に安定な重合体を形成することができるものであればベースとなる構造は特に限定されないが、好ましくは（メタ）アクリル酸のエステルあるいはアミドである。便宜上、親水性スペーサーが導入されているモノマーを親水性モノマーと称する。
本発明において「樹脂」とは、上記したモノマーの重合体を含むものであって、通常、当分野で使用し得る程度の形状や物理化学的性質を有するものであれば特に限定されない。例えばアフィニティークロマトグラフィー操作において、カラム等に充填し得る形状や物理化学的性質、あるいは遠心操作により溶液と分離できるような形状や物理的性質を有するものが好ましく使用される。
本発明において、「親水性スペーサー」とは、樹脂と、当該樹脂に固定化されるリガンド分子との間に介在する基となる物質であって、親水性である。親水性の程度については後述する。ここで「介在する」とは、該親水性スペーサーが、樹脂の構成成分であるモノマー中に存在する官能基からリガンド内に存在する官能基までの間に存在することを意味する。該親水性スペーサーは、その一端をモノマー中の官能基と結合し、他端をリガンド内の官能基と結合する。また当該親水性スペーサーは、結果的に樹脂と固定化されるリガンドとの間に介在する基として機能し得るものであれば２以上の化合物を順次、結合、重合させることによって得られるものであっても構わない。モノマー中への親水性スペーサーの組み込みは、例えば親水性モノマーとして親水性スペーサーが組み込まれた（メタ）アクリル系モノマーを調製する場合には、アクリル酸あるいはメタクリル酸の酸ハライドと対応する親水性スペーサーとの反応あるいはアクリル酸あるいはメタクリル酸と通常のアミド結合あるいはエステル形成反応等によって合成されるアミド、エステル等の共有結合あるいは非共有結合であり、いずれも当分野で公知の材料ならびに反応によって行なわれる。
本発明において使用する親水性スペーサーとしては、得られ得る樹脂の表面の疎水的な性質を変化させ、非特異的な分子間相互作用を排除するかあるいは抑制するようなものであれば特に限定されないが、好ましくは樹脂（より詳しくは樹脂を構成するモノマー）およびリガンドと結合した状態（以下、この様な状態にある親水性スペーサーを便宜上「親水性スペーサー部分」と称する）で水素結合アクセプター（ＨＢＡ；ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｏｎｄ  ａｃｃｅｐｔｏｒ）数が２以上、水素結合ドナー（ＨＢＤ；ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｏｎｄ  ｄｏｎｏｒ）数が１以上であり、通常、ＨＢＡ数が２〜１２程度、ＨＢＤ数が１〜１２程度のものである。より好ましくは樹脂およびリガンドと結合した状態でＨＢＡ数が６以上であるか、ＨＢＤ数が５以上であるか、あるいは該スペーサー１分子あたりのＨＢＡ数およびＨＢＤ数の総計が９以上となるような化合物である。またこれらの条件を２つもしくは全て満たすような化合物であってもよい。
ここで、水素結合アクセプター数（ＨＢＡ数）とは、含まれる窒素原子（Ｎ）と酸素原子（Ｏ）の総数であり、水素結合ドナー数（ＨＢＤ数）とは、含まれるＮＨとＯＨの総数である（Ｃ．Ａ．Ｌｉｐｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２３（１９９７）３−２５）。本発明においては、樹脂とリガンドとの間に介在する基であっても、メタクリル酸クロライド等のモノマー合成の出発原料としての化合物に由来するＮやＯ、あるいはＮＨやＯＨはそれぞれＨＢＡ数やＨＢＤ数に含めない。さらに親水性スペーサーに由来するものであってもメタクリル酸クロライド等との結合に直接利用されるアミノ基や水酸基に由来するＮやＯ、あるいはＮＨやＯＨもそれぞれＨＢＡ数やＨＢＤ数に含めない。リガンドと親水性スペーサーとの結合をより容易にする為にリガンドと親水性スペーサーの間に任意の基を固定化の前にあらかじめリガンドに結合あるいは導入することができる（当該基をリンカーともいう）が、これらはリガンドに応じて適宜選択されるものであって、固相担体の疎水的な性質の緩和への寄与が少ないと考えられるので、当該基に含まれるＮやＯ、あるいはＮＨやＯＨも本発明におけるＨＢＤ数やＨＢＡ数には含めない。尚、リンカーの導入には、アミド結合や縮合、シッフ塩基、Ｃ−Ｃ結合、エステル結合、水素結合、疎水相互作用等の種々の共有結合あるいは非共有結合が利用され、いずれも当分野で公知の材料ならびに反応により実施される。
本願発明の状況下では親水性スペーサーのＨＢＡ数は２以上（通常２〜１２）、ＨＢＤ数は１以上（通常１〜１２）である。非特異的な相互作用を十分に抑制するためには（ｉ）ＨＢＡ数が６以上、（ｉｉ）ＨＢＤ数が５以上、（ｉｉｉ）ＨＢＡ数とＨＢＤ数の総計が９以上、というこれらの条件を少なくとも１つ、好ましくは２つ以上満たすことが好ましい。本発明において親水性スペーサーのＨＢＤ数あるいはＨＢＡ数の上限は、最終的に当該親水性スペーサーが組み込まれたモノマーを重合して樹脂が合成できれば特に制限されるものではなく、通常、上記したようにそれぞれ１２程度である。
さらに本発明において使用する親水性スペーサーは、それ自体非特異的な相互作用（例えば該スペーサーへのタンパク質の吸着等）を生じるものでないことが好ましい。具体的には、該スペーサーが水溶液中で電荷的に陽性あるいは陰性になるような官能基を有さないことであり、当該官能基としてはアミノ基（ただし、該アミノ基に該アミノ基の塩基性を減弱させる官能基（例えばカルボニル基、スルホニル基）が結合している場合は除く）、カルボキシル基、硫酸基、硝酸基、ヒドロキサム酸基等が挙げられる。ここで水溶液中とは、具体的には、固相上でのリガンドとターゲット分子との相互作用を解析する過程、ターゲット分子を選別する過程、あるいはターゲット分子をスクリーニングする為に実施されるリガンドとターゲット分子との結合反応（特異的な相互作用に基づいた反応）が行われる環境下であって、親水性スペーサーが電荷的に陽性あるいは陰性になるような官能基を有する場合にはイオン化するような条件下である。かかる条件は、例えば水溶液中、ｐＨ１〜１１、温度０〜１００℃であり、好ましくはｐＨ中性付近（ｐＨ６〜８）、約４℃〜約４０℃程度である。
例えば、本発明の親水性スペーサーは、下記式（Ｉａ）〜（Ｉｅ）からなる群より選択されるいずれか１つの式で表される部分構造を少なくとも１つ有する化合物である。
2005037881.tif 000019
（式（Ｉａ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、Ａ３は適当な連結基であり、
Ｘ１〜Ｘ３はそれぞれ同一または異なって単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ１〜Ｒ７はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｍは０〜２の整数であり、ｍ’は０〜１０の整数であり、ｍ”は０〜２の整数であり、
Ｒ３〜Ｒ７が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ３が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）；
2005037881.tif 000020
（式（Ｉｂ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ４は低級アルキレン基であり、
ｎおよびｎ’はそれぞれ同一または異なって１〜１０の整数である）；
2005037881.tif 000021
（式（Ｉｃ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ４は低級アルキレン基であり、
ｐ，ｐ’およびｐ”はそれぞれ同一または異なって１〜１０の整数である）；
2005037881.tif 000022
（式（Ｉｄ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、Ａ２は単結合または低級アルキレン基であり、
Ｘ４は単結合あるいは炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基であり、
Ｒ８〜Ｒ１０はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、
ｑは１〜７の整数であり、
Ｒ８が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｘ４が複数個存在する場合にはそれぞれ同一でも異なっていてもよい）；
2005037881.tif 000023
（式（Ｉｅ）中、
Ａ１は−Ｏ−または−ＮＨ−であり、
ｒは１〜１０の整数である）。
本明細書において各基の定義中「低級アルキレン基」とは、炭素数１〜６の直鎖または分枝状のアルキレン基を意味し、具体的にはメチレン基、エチレン基、プロピレン基、イソプロピレン基、ブチレン基、イソブチレン基、ｓｅｃ−ブチレン基、ｔｅｒｔ−ブチレン基、ペンチレン基、イソペンチレン基、ネオペンチレン基、ｔｅｒｔ−ペンチレン基、ヘキシレン基、イソヘキシレン基等が挙げられる。
「炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基」としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基等が挙げられる。
本明細書において、「炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基」とは無置換のメチレン基ならびに上記した炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基で１または２置換されたメチレン基を意味する。
「適当な連結基」とは隣接する各々の部位を連結することができる基であれば特に限定されないが、具体的には以下の基が用いられる。
2005037881.tif 000024
（式中、Ｒ１１は水素原子または炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基であり、Ｒ１２〜Ｒ１５はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基、−ＣＨ２ＯＨあるいは水酸基であり、Ｒ１６〜Ｒ２０はそれぞれ同一または異なって水素原子、炭素数１〜３の直鎖状または分枝状のアルキル基（該アルキル基は水酸基、カルボン酸基、アミノ基等の親水性置換基で置換されていてもよい）である）
以下に本発明においてモノマーに組み込み得る親水性スペーサーの一般的製法について記載するが、記載される以外の通常当分野で実施される方法、あるいはそれらの方法を組み合わせた方法によっても又製造し得ることは当業者には明らかである。
尚、本明細書で使用する略語は下記の通りである。
略語                  正式名称
Ａｃ                  アセチル基
ＡＥＴ                アミノエチルタータリックジアミド
ＡＩＢＮ              アゾビスイソブチロニトリル
ＡＭＴ                アミノメチルタータリックジアミド
Ｂｏｃ                ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｏｃ２Ｏ            ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート
Ｂｎ                  ベンジル基
Ｂｕ３Ｐ              トリブチルフォスフィン
ＣＤＩ                １，１’−カルボニルジイミダゾール
ＤＡＢＴ              ジハイドロキシアミノブチルタータリックアシッド
ＤＢＵ                １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン
ＤＭＡＰ              ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ                １，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ                ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ                １−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジ
イミド
Ｅｔ                  エチル基
Ｆｍｏｃ              ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基
Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ      ９−フルオレニルメチルスクシンイミジルカーボネート
ＨＯＢｔ              １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨｙＴ                ヒドラジノタータリックアミド
Ｍｅ                  メチル基
ＮＭＰ                Ｎ−メチル−２−ピロリドン
ＰＥＧ                ポリエチレングリコール
Ｐｈ３Ｐ              トリフェニルフォスフィン
ＰｙＢＯＰ            ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−
ホスホニウム  ヘキサフルオロホスフェート
ＴＢＡＦ              フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＤＭＳ            ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基
ＴＢＤＭＳＯＴｆ      トリフルオロメタンスルホン酸  ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリ
ル基
ＴＢＤＰＳ            ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基
ＴＢＳ                ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基
ｔＢｕ                ｔｅｒｔ−ブチル基
ＴＦＡ                トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ                テトラヒドロフラン
ＴＭＡＤ              Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルアゾジカルボキサミド
ＴＯＹＯ−
Ｐｅａｒｌ
ｒｅｓｉｎ            ＴＯＹＯパール樹脂
Ｔｒ                  トリチル基
ＴＳ                  トシル基（トルエンスルホニル基）
ＷＳＣ                水溶性カルボジイミド（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３’−ジメチルア
ミノプロピル）カルボジイミド）
製法１：一般式（Ｉａ）で表される部分構造を有する親水性スペーサーの製造方法
（１）（ｍ＝１，ｍ’＝２，ｍ”＝１）
2005037881.tif 000025
2005037881.tif 000026
式中、Ｗ１〜Ｗ５は水酸基の保護基であり、Ｙ１はアミノ基の保護基である。Ｘ３’はＸ３と同義であり、またＸ３”もＸ３と同義である。Ｒ５’はＲ５と同義であり、またＲ５”もＲ５と同義である。またそれ以外の各記号の定義は上述の通りである。
水酸基の保護基としては、当分野で通常用いられている任意の各基が用いられるが、具体的には、ｔｅｒｔ−ブチル基等のアルキル基；アセチル基、プロピオニル基、ピバロイル基、ベンゾイル基等のアシル基；メトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル基等のアラルキルオキシカルボニル基；ベンジル基、ナフチルメチル基等のアリールメチル基；トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基等のシリル基；エトキシメチル基、メトキシメチル基等の低級アルコキシメチル基などが例示され、好ましくは、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、メトキシメチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基が挙げられる。アミノ基の保護基としては、当分野で通常用いられている任意の各基が用いられるが、具体的には、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、メトキシカルボニル基等の低級アルコキシカルボニル基；ベンジルオキシカルボニル基等のアラルキルオキシカルボニル基；ベンジル基等のアラルキル基：ベンゼンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基、メタンスルホニル基等の置換スルホニル基などが例示され、好ましくは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基が挙げられる。
アミノ基の保護および脱保護、ならびに水酸基の保護および脱保護は使用する保護基に応じて適宜公知の方法および試薬によって実施される。
化合物（ａ−４）（カルボン酸）および化合物（ａ−２）（アミノ体）をアミド化によって脱水縮合する反応は、通常、等量のアミノ体とカルボン酸の存在下、１．１当量程度のＮ−エチル−Ｎ’−ジメチルアミノカルボジイミド、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール等の縮合剤を用いて、ＤＭＦや塩化メチレン等の溶媒中で、室温下１時間から１０時間程度反応させることによって行われる。
製法２：一般式（Ｉａ）で表される部分構造を有する親水性スペーサーの製造方法
（２）（ｍ＝２，ｍ’＝０，ｍ”＝２）
2005037881.tif 000027
2005037881.tif 000028
式中、Ｙ２はアミノ基の保護基である。Ｗ６は水酸基の保護基である。Ｒ３’はＲ３と同義であり、またＲ３”もＲ３と同義である。Ｒ４’はＲ４と同義であり、またＲ４”もＲ４と同義である。Ｒ６’はＲ６と同義であり、またＲ６”もＲ６と同義である。Ｒ７’はＲ７と同義であり、またＲ７”もＲ７と同義である。それ以外の各記号の定義は上述の通りである。アミノ基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。アミノ基の脱保護は使用する保護基によって適宜公知の方法および試薬によって実施される。
化合物（ａ−９）（カルボン酸）および化合物（ａ−１０）（アミノ体）をアミド化によって脱水縮合する反応は、通常、等量のアミノ体とカルボン酸の存在下、１．１当量程度のＮ−エチル−Ｎ’−ジメチルアミノカルボジイミド、およびＮ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール等の縮合剤を用いて、ＤＭＦや塩化メチレン等の溶媒中で、室温下１時間から１０時間程度反応させることによって行われる。
製法３：一般式（Ｉａ）で表される部分構造を有する親水性スペーサーの製造方法
（３）（ｍ＝１，ｍ’＝０，ｍ”＝０）
2005037881.tif 000029
式中、Ｙ３はアミノ基の保護基であり、それ以外の各記号の定義は上述の通りである。アミノ基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。
化合物（ａ−１４）（アミノ体）および化合物（ａ−１５）（カルボン酸）をアミド化によって脱水縮合する反応は、通常、等量のアミノ体とカルボン酸の存在下、１．１当量程度のＮ−エチル−Ｎ’−ジメチルアミノカルボジイミド、およびＮ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール等の縮合剤を用いて、ＤＭＦや塩化メチレン等の溶媒中で、室温下１時間から１０時間程度反応させることによって行われる。
製法４：一般式（Ｉｂ）で表される部分構造を有する親水性スペーサーの製造方法
（ｎ−１＝ｎ’−１＝ｎ２）
2005037881.tif 000030
2005037881.tif 000031
式中、Ｗ７〜Ｗ９は水酸基の保護基であり、Ｈａｌはハロゲン原子（塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、フッ素原子）を表し、それ以外の各記号の定義は上述の通りである。水酸基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。尚ｎ２は、ｎ−１あるいはｎ’−１である（ｎ、ｎ’は上述のとおり）。
水酸基の保護、脱保護は使用する保護基によって適宜公知の方法および試薬によって実施される。
化合物（ｂ−４）（アルコール体）の化合物（ｂ−５）へのハロゲン置換反応は、通常、１当量のアルコール体に２〜３当量の四臭化炭素、および１〜２当量のトリフェニルホスフィンを塩化メチレン等の溶媒中で、０℃〜室温で、１時間から数時間反応させることによって行われる。
化合物（ｂ−６）（アルコール体）と化合物（ｂ−２）（フェノール体）との脱水縮合反応は、通常、１当量のアルコール体と１当量のトリブチルホスフィンをトルエン溶媒中室温で１時間程度反応を行い、ここに１当量のフェノール体および１，１’−アゾビス（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）等の縮合剤を加え、０〜５０℃で数時間から終夜で反応させることによって行われる。
化合物（ｂ−８）（フェノール体）と化合物（ｂ−５）（ハロゲン体）との縮合反応は、通常、０〜１０℃において、１当量のフェノール体と約１０倍当量の過剰の水素化ナトリウムのような強塩基をＴＨＦ等の溶媒中で、１０〜６０分程度反応させ、そこに２当量程度のハロゲン体を加え、室温下１〜１０時間程度反応させることによって行われる。
2005037881.tif 000032
式中、Ｙ４はアミノ基の保護基であり、それ以外の各記号の定義は上述の通りである。水酸基の保護基およびアミノ基の保護基としては、上記したものと同様のものが例示される。
水酸基あるいはアミノ基の脱保護は使用する保護基によって適宜公知の方法および試薬によって実施される。
化合物（ｂ−１０）（アルコール体）の化合物（ｂ−１１）へのアジド化は、通常、１当量のアルコール体と１．５当量程度のｐ−トルエンスルホニルクロライドおよび０．２当量程度の４−ジメチルアミノピリジンのような塩基をピリジン等の溶媒中で、３０〜５０℃で、数時間反応させることによって得られるＯ−トシル体を単離し、それに約１０倍当量程度の過剰のアジ化ナトリウムを加え、ＤＭＦ等の溶媒中で、５０〜９０℃で数時間反応させることにより行われる。
化合物（ｂ−１１）（アジド体）の化合物（ｂ−１２）へのアミノ化は、通常、１当量のアジド体を、０．１当量程度の水酸化パラジウムのような触媒を用いてメタノール等の溶媒存在下、１〜数気圧の水素存在下、室温で数時間反応させることによって得られる。
製法５：一般式（Ｉｃ）で表される部分構造を有する親水性スペーサーの製造方法
各構造式中、特定の基、特定の化合物を記載する場合があるが、それらは一例であって、特に限定されるものではない。同等の働きを有するものであれば適宜変更し得る。
2005037881.tif 000033
2005037881.tif 000034
式中、各記号の定義は上述の通りである。式中の水酸基の保護基、アミノ基の保護基、カルボキシル基の保護基はその一例を示したものであって、それ以外にも通常当分野で用いられる任意の各基が用いられる。具体的には上記したものと同様なものが例示される。アミノ基の保護、カルボキシル基の脱保護、および水酸基の保護ならびに脱保護の方法は、本明細書に記載する以外にも、使用する保護基に応じて適宜公知の方法および試薬によって実施され得ることは当業者には明らかであろう。
化合物（ｃ−１）（フェノール体）の化合物（ｃ−２）への水酸基の保護は、例えば保護基としてＴＢＳを使用する場合には、通常、１当量のフェノール体、３当量程度の塩基（例えばイミダゾール）および２当量程度のシリルクロライドを、ＤＭＦ等の溶媒中で、室温で１０時間程度反応させることによって行われる。
化合物（ｃ−２）（フェノール体）と化合物（ｃ−４）（アルコール体）との脱水縮合反応は、通常、１当量のアルコール体と１当量のトリブチルホスフィンとをトルエン溶媒中室温で１時間程度反応を行い、ここに１．３当量のフェノール体および１．３当量の１，１’−アゾビス（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）等の縮合剤を加え、室温で数時間から終夜反応させることによって行われる。
化合物（ｃ−７）（フェノール保護体）の化合物（ｃ−８）への水酸基の脱保護は、通常、１当量のフェノールの保護体（例えばシリル保護体）、１．２当量程度のテトラブチルアンモニウムフルオライドをＴＨＦ等の溶媒中で、室温で１時間程度反応させることによって行う。
化合物（ｃ−８）（フェノール体）と化合物（ｃ−６）（ハロゲン化物）との縮合反応は、通常、室温で１当量のフェノール体と約５．２当量の過剰の水素化ナトリウムのような強塩基をＴＨＦやＤＭＦ等の溶媒中で、１０〜６０分程度反応させ、そこに４当量程度のハロゲン化物（例えばアルキルブロマイド）を加え、室温で約４時間程度反応させることによって行われる。この縮合反応によって化合物（ｃ−９）が得られる。
化合物（ｃ−９）（フェノール保護体）の化合物（ｃ−１０）（アルコール体）への水酸基の脱保護は、通常、１当量のフェノール保護体（例えばトリチル保護体）を、ＴＦＡを含む塩化メチレン等の溶媒中で、室温で約１時間程度反応させることによって行われる。
化合物（ｃ−１０）（アルコール体）の化合物（ｃ−１１）への水酸基のトシル化反応は、例えば保護基としてＴｓを使用する場合には、通常、１当量のアルコール体、触媒量のＤＭＡＰ等の塩基、約６当量のトシルクロライドを、ピリジン等の溶媒中で、室温〜４０℃で約２時間程度反応させることによって行われる。
化合物（ｃ−１１）（トシル体）の化合物（ｃ−１２）へのアジド化は、１当量のトシル体、約１５当量のアジ化ナトリウムを、ＤＭＦ等の溶媒中で、約６０℃、約２時間程度反応させることによって行われる。
化合物（ｃ−１２）（フェノール保護体）の化合物（ｃ−１３）へのアミノ化および、化合物（ｃ−１４）へのアミノ基の保護基の導入は、通常、１当量のフェノール保護体（ベンジル保護体）、触媒量の水酸化パラジウムを水素ガス雰囲気下、メタノール等の溶媒中で、室温で約１時間程度反応させることによって得られるアミン体（ｃ−１３）に、約０．８４当量の炭酸９−フルオレニルメチルスクシンイミジル、約１．５当量のトリエチルアミンのような塩基を加え、ＴＨＦ等の溶媒中で、室温で約１時間程度反応させることによって行われる。
化合物（ｃ−１４）（水酸基保護体）の化合物（ｃ−１５）への水酸基の脱保護は、通常、１当量の水酸基保護体（例えばベンジル保護体）を０．１当量程度の水酸化パラジウムのような触媒を用いてメタノール等の溶媒存在下、１〜数気圧の水素存在下、室温で数時間反応させることによって得られる。
製法６：一般式（Ｉｄ）で表される部分構造を有する親水性スペーサーの製造方法（Ｒ１０＝Ｒ９＝水素原子，Ｒ８＝水素原子，Ｘ４＝単結合）
2005037881.tif 000035
各構造式中、特定の基、特定の化合物を記載する場合があるが、それらは一例であって、特に限定されるものではない。同等の働きを有するものであれば適宜変更し得る。尚、下記式（ｄ−１）は商業的に入手可能である。
2005037881.tif 000036
式中、各記号の定義は上述の通りである。式中のアミノ基の保護基はその一例を示したものであって、それ以外にも通常当分野で用いられる任意の各基が用いられる。具体的には上記したものと同様なものが例示される。アミノ基の保護の方法は、使用する保護基に応じて適宜公知の方法および試薬によって実施され得る。
製法７：一般式（Ｉｅ）で表される部分構造を有する親水性スペーサーの製造方法
各構造式中、特定の基、特定の化合物を記載する場合があるが、それらは一例であって、特に限定されるものではない。同等の働きを有するものであれば適宜変更し得る。尚、下記式（ｅ−１）および（ｅ−１）’は商業的に入手可能である。
2005037881.tif 000037
式中、各記号の定義は上述の通りである。式中のアミノ基の保護基はその一例を示したものであって、それ以外にも通常当分野で用いられる任意の各基が用いられる。具体的には上記したものと同様なものが例示される。アミノ基の保護の方法は、使用する保護基に応じて適宜公知の方法および試薬によって実施され得る。
本発明の樹脂を製造するにあたり使用される親水性スペーサーとして好ましくは、式（Ｉｄ）または式（Ｉｅ）で表される部分構造を少なくとも１つ有するものであって、特に式（Ｉｄ）においては、Ａ１が−Ｏ−であり、Ａ２が低級アルキレン基（特にメチレン基）であり、複数個存在するＸ４が同一で単結合であり、ｑが４であり、複数個存在するＲ８が同一で水素原子であり、Ｒ９およびＲ１０が水素原子である親水性スペーサーが好適である。より具体的には下記式
2005037881.tif 000038
（式中、ＹａおよびＹｂは水素原子またはアミノ保護基である）で表される化合物を上記したモノマー（好ましくは（メタ）アクリル系モノマー）に組み込んでなる親水性モノマーの重合体を含む樹脂が本発明において好適に使用される。
親水性スペーサーを組み込んだモノマー（すなわち親水性モノマー）としては、例えば以下のような化合物が例示される。
2005037881.tif 000039
（式中ＹａおよびＹｂは水素原子またはアミノ基の保護基である）
本発明の樹脂は本発明の親水性モノマーを重合することによって得られる、重合方法としては、例えば、溶液重合、エマルジョン重合、分散重合、懸濁重合、固相重合（高分子学会編、「高分子科学実験法」東京化学同人、ＩＳＢＮ  ４−８０７９−０１８０）などが挙げられる。これらの重合方法においては、通常知られる添加剤を用いてもよい。例えば、重合開始剤として、過酸化ベンゾイルおよびｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド等の有機過酸化物、ならびにアゾビスイソブチロニトリル等のアゾ化合物などが挙げられる。エマルジョン重合の場合は、さらに界面活性剤が必要となり、例えば、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン誘導体、ポリオキシエチレンアルキルアミン、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル等）、陰イオン界面活性剤（例えば、脂肪酸塩、アルキルリン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキルナフタレンスルホン酸塩、アルキルジフェニルエーテルジスルホン酸塩等）等が挙げられ、これらを併用しても良い。懸濁重合の場合にはさらに分散安定剤を添加してもよいが、分散安定剤の例としてはポリビニルアルコールおよびポリアクリル酸塩のような水溶性高分子化合物が挙げられる。又、必要に応じてグリセロール  ジメタクリレート（ＣＡＳ＝［１８３０−７８−０］）、トリエチレングリコール  ジメタクリレート（ＣＡＳ＝［１０９−１７−１］）やパラジビニルベンゼン（ＣＡＳ＝［１３２１−７４−０］）等の架橋剤を添加する。
懸濁重合や分散重合等、通常有機相と水相等の多相状態で重合を行う場合、使用する親水性モノマーの種類、特にあらかじめ導入している親水スペーサーの種類に応じて有機溶媒を適宜検討・選択する必要があるが、以下の要件を満たす有機溶媒を用いることが好ましい。
・水不溶性である。
・親水性モノマーを溶かし得る。
・沸点が７０℃以上である。
重合反応に付す各成分として親水性モノマーの他に、例えば重合開始剤および架橋剤を用いる場合には、その割合は、親水性モノマー１００重量部に対して、重合開始剤を通常０．１％〜１０％重量部、好ましくは１％〜３％重量部、架橋剤を通常１％〜２０％重量部、好ましくは１％〜５％重量部混ぜる。また２０％以上の架橋剤の添加も好ましく、通常９０％程度迄の架橋剤を添加し得る。重合反応の諸条件は、利用する重合反応の種類等によっても異なるが、いずれも当分野で公知であり、例えば窒素ガス等の不活性ガスでパージした後、上記各成分の混合物を、温度を７０〜１００℃に加熱して、通常３〜１０時間かけて実施する（高分子学会編、「高分子科学実験法」東京化学同人、ＩＳＢＮ  ４−８０７９−０１８０）。
親水性モノマー、重合開始剤および架橋剤に加え、必要に応じて、着色剤、紫外線吸収剤、熱安定剤、重合禁止剤、帯電防止剤、充てん剤等の添加剤を添加することができる。
又、親水性モノマーの重合により得られる樹脂について、その表面の過剰な遊離アミノ基により生じる過剰なリガンド結合が結果的に樹脂の物性を変えてしまうような場合、リガンドとの結合性を低減させるために、遊離のアミノ基に対してアセチルキャッピング等の処理を施してもよい。
本発明の樹脂は、親水性モノマーの重合体のみで構成されるものであってもよいが、上記した通り、過剰なリガンド結合を防ぐ目的で、遊離アミノ基を有さないモノマーを一定量混合させて得られるモノマー混合物の重合体であってもよい。そのようなモノマーとしては、当分野で通常使用されている樹脂原料となる種々のモノマー化合物が挙げられる。好ましくは、化学的安定性ならびに物理的安定性に優れた樹脂を合成し得る（メタ）アクリル系のモノマーである。（メタ）アクリル系のモノマーの例としては、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、プロピル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−プロピル（メタ）アクリレート、クロロ−２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールモノ（メタ）アクリレート、メトキシエチル（メタ）アクリレート、グリシジル（メタ）アクリレート、ジシクロペンタニル（メタ）アクリレート、ジシクロペンテニル（メタ）アクリレートおよびイソボルニル（メタ）アクリレート等を挙げることができる。
さらに親水性モノマーについても同じ種類の親水性モノマー（すなわち導入されている親水性スペーサーが同じ）であってもよいし、異なる種類の複数の親水性モノマーの混合物（すなわち導入された親水スペーサーが異なるモノマーの混合物）であってもよい。
本発明の樹脂は、親水性スペーサーの導入により、樹脂表面（以下固相表面ともいう）の疎水性の程度が低減化されている。従って、タンパク質等の当該樹脂への非特異的な吸着が極めて抑制されている。このような効果は、本発明の樹脂を、分子間の特異的相互作用の解析やリガンドのターゲット分子の同定等への利用に好適なものとしている。すなわち、本発明の樹脂はアフィニティークロマトグラフィー用の担体として有用である。アフィニティークロマトグラフィーにおいては、本発明の樹脂、すなわち本発明の担体にそのターゲット分子を同定することを所望とする、あるいはそのターゲット分子との特異的相互作用を解析することを所望とする分子（以下、リガンドともいう）を固定化する。尚、本明細書中、リガンドならびにターゲット分子という用語は、互いに特異的な分子間相互作用を有する組み合わせを意図するものであって、当該組み合わせのうち、片方をリガンドとして固相に固定化すれば他方がターゲット分子となり、すなわちどちらを固相に固定化するかによって、それらの呼称は変更され得る。
「特異的な相互作用」とは、特定のリガンド（特定のターゲット分子）のみを特異的に認識して結合するような特性を発揮する作用であり、アゴニストあるいはアンタゴニストに対する特異的受容体、基質に対する酵素、そして例えばＦＫ５０６（リガンド）に対するＦＫ５０６結合タンパク質（ターゲット分子）や、ステロイドホルモンに対するステロイドホルモン受容体（例＝ｄｅｘａｍａｔｈａｓｏｎとｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、抗癌剤ｔｒａｐｏｘｉｎに対するＨＤＡＣ等の関係が「特異的な相互作用」に該当する。一方、「非特異的な相互作用」とは、それによる結合の対象が広範にわたり且つ特定分子に限定されず、反応条件によって種々変化するような状況を生じる作用をいい、本発明においては、担体上のリガンドや担体表面に、結合・吸着するような不特定の分子との間の作用を意味する。「非特異的な相互作用」は、「特異的な相互作用」に基づくリガンドとターゲット分子の結合の障害となるか、あるいは混同されることにより「特異的な相互作用」による結合を見落としてしまう危険性がある。
本発明において「特異的な相互作用を解析する」とは、リガンドとターゲット分子との間の相互作用の特異性の程度を、相互作用情報として得ることであって、例えばＫｄ、Ｋａ等の数値として得ることができる。本発明において「選別」とは、上記相互作用情報に基づき、リガンドと特異的な相互作用を有するか否かを判定し、ターゲット分子を同定することを意味する。
リガンドの樹脂への固定化は、リガンドと樹脂表面に存在する親水性スペーサーとの結合による。固定化するリガンドによっては、あらかじめ親水性スペーサーとの結合を容易にするためのリンカーを導入しておくこともまた好適である。リガンドが担体に固定化されたか否かは、リガンド、あるいはリガンドに予め結合・導入された任意の基に含まれるある特定の構造乃至置換基等に基づく呈色反応等を利用して確認することができる。例えばアミノ基を認識するニンヒドリン反応等が利用できる。結合は、通常当分野で実施される反応を利用して実施される。簡便且つ確実な手段としてアミド結合形成反応を利用する方法が挙げられる。本反応は、例えば「ペプチド合成の基礎と実験」（ＩＳＢＮ  ４−６２１−０２９６２−２、丸善、昭和６０年初版）に従って実施できる。各反応に用いられる試薬や溶媒については当分野で通常用いられるものが利用でき、採用する結合反応によって適宜選択される。
本発明において樹脂表面に固定化されるリガンドは特に限定されず、公知の化合物であっても今後開発される新規な化合物であってもよい。また、低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。ここで低分子化合物とは分子量１０００未満程度の化合物であって、例えば医薬品として通常使用し得る有機化合物およびその誘導体や無機化合物が挙げられ、有機合成法等を駆使して製造される化合物やその誘導体、天然由来の化合物やその誘導体、プロモーター等の小さな核酸分子や各種の金属等であり、望ましくは医薬品として使用し得る有機化合物およびその誘導体、核酸分子をいう。また、高分子化合物としては分子量１０００以上程度の化合物であって、タンパク質、ポリ核酸類、多糖類、およびこれらを組み合わせたものなどが挙げられ、望ましくはタンパク質である。これらの低分子化合物あるいは高分子化合物は、公知のものであれば商業的に入手可能であるか、各報告文献に従って採取、製造、精製等の工程を経て得ることができる。これらは、天然由来であっても、また遺伝子工学的に調製されるものであってもよく、また半合成等によっても得ることができる。
本発明の樹脂は、アフィニティークロマトグラフィー用の固相担体としてリガンドを固定化した固相担体上で該リガンドとの特異的な相互作用に基づいてターゲット分子を選別する為に使用することが可能であり、また有用である（以下、当該アフィニティークロマトグラフィー用の固相担体を本発明の固相担体ともいう）。従ってターゲット分子は、リガンドと特異的に相互作用するものであれば特に限定されるものではなく、公知化合物である場合もあれば新規物質である場合も予想される。ターゲット分子としては低分子化合物であっても高分子化合物であってもかまわない。
リガンドとターゲット分子との相互作用の解析、ならびにターゲット分子の選別は簡便には本発明の固相担体上で行う。ターゲット分子として予め候補物質が予測される場合には、候補物質を単独で固相担体上のリガンドと接触させ両者の相互作用を測定し、候補物質が該リガンドのターゲット分子であるか否かを判断すればよいが、通常、複数の物質（高分子化合物および／または低分子化合物）を含む試料をリガンドと接触させ、複数の物質（高分子化合物および／または低分子化合物）の各々とリガンドとの相互作用の有無ならびにその相互作用の程度を測定することによりターゲット分子であるか否かを判断し、選別する。ここで複数の物質を含む試料としては、全て公知化合物から構成されるものであっても、一部新規な化合物を含むものであっても、さらには全て新規な化合物から構成されるものであってもよい。しかしながら、リガンドのターゲット分子の探索、あるいは昨今のプロテオーム解析の進歩によれば、全てその構造が公知な化合物の混合物であることが望ましい。全て公知な化合物から構成される試料としては、大腸菌等によって遺伝子工学的に調製された精製タンパク質の混合物等であり、一部新規な化合物を含むものとしては、細胞や組織の抽出物（Ｌｙｓａｔｅ）であり、また全て新規な化合物から構成されるものとしては、まだその機能や構造が知られていない新規なタンパク質や新しく合成された化合物等の混合物が挙げられる。試料が混合物の場合、特に公知化合物を含む場合には、任意にこれらの化合物の試料中の含有量を所望の値に設定しておくこともできる。リガンドのターゲット分子の探索という見地にたてば、選別すべき分子は、低分子化合物ならびに高分子化合物であるのが好ましく、ヒト等の動物体内でのターゲット分子の探索についていえば高分子化合物であることが好ましい。
本発明の固相担体はまた、当該固相担体上に固定化されているリガンドに特異的な相互作用を有するターゲット分子をスクリーニングする為に使用することが可能であり、また有用である。該スクリーニング方法は具体的には以下の工程を少なくとも含む。
（１）試料を、本発明の固相担体と接触させる工程。
本工程において用いる試料は、上記同様、複数の物質を含み得るものである。その態様は特に限定されず、固相担体との接触や後の工程（２）で実施する同定あるいは解析にどのような原理や手段、方法を用いるかによって適宜変更し得る。例えば本発明の樹脂（固相担体）を充填したカラムを用いる場合には試料は液状とするのが好ましい。該試料と本発明のリガンド固定化固相担体とを接触させる方法は、ターゲット分子が試料中に存在する場合にリガンド固定化固相担体上でリガンドとターゲット分子が特異的相互作用によって結合することができれば特に限定されず、後の工程（２）でどのような原理や手段、方法を用いるかによって適宜変更し得る。例えばリガンド固定化固相担体としてリガンドが固定化された本発明の樹脂を充填したカラムを用いる場合には、液状にした試料をカラムに添加しカラム内を通すことにより簡便に実施される（カラム法）。また、簡便には当該樹脂と試料とを一定時間混合することによって実施できる（バッチ法）。カラムへのアプライ量、流速、溶出処理、混合時間等はアフィニティークロマトグラフィーで通常行われている条件に基づいて実施する。
（２）リガンドに特異的な相互作用を示したか、または示さなかった分子を同定し、解析する工程。
かかる工程は、固定化したリガンドの種類等によって適宜変更し得るが、通常当分野で実施されている低分子化合物あるいは高分子化合物を同定する為の各種方法により行う。また、今後開発されるであろう方法によっても実施可能であろう。例えばリガンド固定化固相担体としてリガンドが固定化された本発明の樹脂を充填してなるカラムを用いた場合、固相担体上のリガンドに結合したターゲット分子を緩衝液の極性を変える、あるいは過剰のリガンドをさらに加える等の処理によって固相担体上のリガンドから解離させ、その後同定したり、あるいは固相上のリガンドと結合した状態でそのまま界面活性剤等によって抽出して同定したりすることもできる。同定方法としては具体的には電気泳動法、免疫学的反応を用いたイムノブロッティングや免疫沈降法、クロマトグラフィー、マススペクトラム、アミノ酸シーケンス、ＮＭＲ（低分子のときに特に）等の公知の手法により、またこれらの方法を組み合わせて実施する。リガンドに結合しない分子を同定する工程も上記リガンドに結合する分子を同定する方法に準じて行うことができるが、カラムの素通り画分に含まれる分子を同定の対象とするので、同定工程に入る前に予め濃縮や粗精製等の処理を行うことが好ましい。得られたデータならびに既存の報告をもとに各分子を同定し、ターゲット分子であるか否かを判断する。
また、本工程は自動化されていてもよい。例えば２次元電気泳動で得られた種々の分子のデータを直接読み取り、既存のデータベースに基づいて分子の同定を行うことも可能である。
上記したスクリーニング方法と同様な原理で、試料中のターゲット分子を測定することができる。ここで「測定」とは、試料中に存在するか否か、存在する場合にはその量、あるいはその性状の変化等、種々の操作が包含される。かかる測定により、当該ターゲット分子あるいはリガンドが関与すると考えられている疾患の診断が可能になる。かかる診断としては、癌マーカーの検出等が例示される。本発明の方法を用いることにより、特定のタンパク質（試料中のターゲット分子）が濃縮され、結果、ノイズが低減されるので、より正確な微量なターゲット分子の検出が可能である。本発明は親水性スペーサーが組み込まれたモノマーを重合してなる樹脂の任意の用途を包含する。
【実施例】  以下、製造例及び実験例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によりなんら限定されるものではない。また、用いる各化合物や試薬等は特に言及しない限り、商業的に入手可能であるか、また既知の報告等に基づいて調製することができる。
本製造例中の架橋剤の濃度は下記式から算出されるものである。
架橋剤濃度（％）＝架橋剤のモル数／モノマーのモル数×１００
製造例１：１７−アリル−１４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−１−ヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ−カルボニル）ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオンの合成
2005037881.tif 000040
１７−アリル−１４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−１−ヒドロキシ−１２−［２−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ−シクロヘキシル）−１−メチル−ビニル］−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオン（１３８ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、Ｏ−モノ（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニル）オクタン二酸（８６．７ｍｇ，０．２１８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ；１６．５ｍｇ，０．０９８ｍｍｏｌ）、１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ／ＨＣｌ；６９．１ｍｇ，０．２６１ｍｍｏｌ）および塩化メチレン（ＣＨ２Ｃｌ２；１ｍｌ）の混合物を室温で１．５時間撹拌した。反応物を酢酸エチル−水混合液に注ぎ、抽出した。得られた有機層を水、食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥した。ＭｇＳＯ４を濾別後、減圧下濃縮した。こうして得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（２０％ＡｃＯＥｔ（ｎ−ヘキサン中）で溶出）、目的とする１７−アリル−１４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−１−ヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ−カルボニル）ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオン（４４ｍｇ，２４．６％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：−０．１−０．１（１２Ｈ，ｍ），０．７−２．６（４７Ｈ，ｍ），０．８５  ａｎｄ  ０．８６（１８Ｈ，ｓ），１．５０（３Ｈ，ｓ），１．６３（３Ｈ，ｓ），２．７５（１Ｈ，ｍ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．３５（３Ｈ，ｓ），３．３９（３Ｈ，ｓ），４．０５（１Ｈ，ｍ），３．０−４．４（６Ｈ），４．５−５．８（９Ｈ，ｍ）．
製造例２：１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−カルボキシ−ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオンの合成≪
2005037881.tif 000041
製造例１で調製した１７−アリル−１４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−１−ヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ−カルボニル）ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオン（４４ｍｇ，０．０３７ｍｍｏｌ）とアセトニトリル（０．８８ｍｌ）の混合物に４６−４８％のフッ化水素（ＨＦ）水（０．１２ｍｌ）を静かに加え室温にて終夜撹拌した。反応物を酢酸エチル−水混合液に注ぎ、抽出した。得られた有機層を水、食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥した。ＭｇＳＯ４を濾別後、減圧下濃縮した。こうして得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（５％メタノール（クロロホルム中））、目的とする１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−カルボキシ−ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオン（１４．２ｍｇ，４０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．７−２．６（４７Ｈ，ｍ），１．５０（３Ｈ，ｓ），１．６３（３Ｈ，ｓ），２．７５（１Ｈ，ｍ），３．３１（３Ｈ，ｓ），３．３５（３Ｈ，ｓ），３．３９（３Ｈ，ｓ），４．０５（１Ｈ，ｍ），３．０−４．４（６Ｈ），４．５−５．８（１１Ｈ，ｍ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）：９６０（Ｍ＋）
製造例３：ＦＫ５０６付ＴＯＹＯパール樹脂（ＴＳＫｇｅｌ  ＡＦ−ａｍｉｎｏ）の合成
2005037881.tif 000042
製造例２で調製した１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−カルボキシ−ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオン（３８．４ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）、ＴＯＹＯパール樹脂（ＴＳＫｇｅｌ  ＡＦ−ａｍｉｎｏ，１００μｌ，遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は０．０１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ／ＨＣｌ（９．２ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ；６．５ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ；１ｍｌ）の混合物を室温で６時間撹拌した。反応の終点はニンヒドリン反応で残存アミノ基が肉眼で観測できなくなることで確認した。この時の反応率を換算すると約８２％であった。反応終了確認後、ＤＭＦで樹脂を５回洗浄した。ここに無水酢酸（１００μｌ）およびＤＭＦ（４００μｌ）を加え１時間室温で撹拌した。その後ＤＭＦで十分洗浄し、得られたＦＫ５０６付ＴＯＹＯパール樹脂は後述する結合実験に用いた。ＴＯＹＯパール樹脂とＦＫ５０６の間に介在する基のＨＢＡ数は４、ＨＢＤ数は３である（但し、ＦＫ５０６にあらかじめ導入された基に由来する分は数に入れない）。
製造例４：ＦＫ５０６付ＡｆｆｉＧｅｌ樹脂の合成
2005037881.tif 000043
ＴＯＹＯパール樹脂の代わりにＡｆｆｉＧｅｌ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）を用いる以外は製造例３と同様な手法によりＦＫ５０６付ＡｆｆｉＧｅｌ樹脂を合成した。得られたＦＫ５０６付ＡｆｆｉＧｅｌ樹脂は後述する結合実験に用いた。ＡｆｆｉＧｅｌ樹脂とＦＫ５０６の間に介在する基のＨＢＡ数は３、ＨＢＤ数は２である（但し、ＦＫ５０６にあらかじめ導入された基に由来する分は数に入れない）。
製造例５：親水性モノマーの合成：メタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステルの合成
2005037881.tif 000044
Ｄ−グルカミン（５．０ｇ，２７．６ｍｍｏｌ）に、水（１００ｍｌ）とジオキサン（１００ｍｌ）を加え、溶解させた。次いで、氷冷下ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（Ｂｏｃ２Ｏ）（７．２３ｍｌ，３３．１ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で終夜攪拌した。反応液を濃縮し、メタノールに溶解させ不溶物をろ過した後、ろ液を濃縮した。残渣を無水ピリジン（２００ｍｌ）に溶かし、氷冷下メタクリル酸クロライド（３．７４ｍｌ，３８．６ｍｍｏｌ）を滴下した。終夜攪拌後、濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え、得られた有機層を２Ｎ硫酸水素カリウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水、次いで飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（クロロホルム：メタノール＝１００：７で溶出）、目的とするメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（３．３２ｇ，３４．４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．３８（９Ｈ，ｓ），１．９８（３Ｈ，ｓ），２．９１−２．９７（１Ｈ，ｍ），３．１０−３．１６（１Ｈ，ｍ），３．４５（１Ｈ，ｔ），３．５７−３．６１（２Ｈ，ｍ），３．７２−３．７７（１Ｈ，ｍ），４．０４（２Ｈ，ｄｄ），４．２６−４．３０（２Ｈ，ｍ），４．５３（１Ｈ，ｄ），４．７３（１Ｈ，ｄ），４．９０（１Ｈ，ｄ），５．６６（１Ｈ，ｔ），６．０８（１Ｈ，ｓ），６．５２（１Ｈ，ｔ）．
製造例６：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）型親水性モノマーの合成：Ｏ−（２−メタクリロイルアミノエチル）−Ｏ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）ヘキサエチレングリコールの合成
2005037881.tif 000045
Ｏ−（２−アミノエチル）−Ｏ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）ヘキサエチレングリコール（１００ｍｇ，２１３μｍｏｌ）にジクロロメタン（１．０ｍｌ）とジイソプロピルアミン（５５．８μｌ，３２０μｍｏｌ）を加えた後、氷冷下メタクリル酸クロライド（３１．０μｌ，３２０μｍｏｌ）を滴下した。氷冷下２時間攪拌した後、酢酸エチルを加え得られた有機層を２Ｎ硫酸水素カリウム水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄、硫酸マグネシウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（酢酸エチル：アセトン＝３：１で溶出）、目的とするＯ−（２−メタクリロイルアミノエチル）−Ｏ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）ヘキサエチレングリコール（６９．３ｍｇ，６１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．９７（３Ｈ，ｓ），３．３１−３．３３（２Ｈ，ｍ），３．５０−３．５５（４Ｈ，ｍ），３．５７−３．６９（２６Ｈ，ｍ），５．０６（１Ｈ，ｂｓ），５．３２（１Ｈ，ｔ），５．７１（１Ｈ，ｓ），６．４４（１Ｈ，ｂｓ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３７．４（ＭＨ＋）
製造例７：親水性モノマーの合成
（１）（２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシ−ヘキシル）−カルバミン酸  ９Ｈ−フルオレン−９−イル  メチルエステル（Ｆｍｏｃ−Ｄ−グルカミン）の合成
2005037881.tif 000046
Ｄ−グルカミン（９．０ｇ，４９．７ｍｍｏｌ）を１０％炭酸ナトリウム水溶液２００ｍｌと混ぜ、氷冷下攪拌した。Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（１６．７ｇ，４９．７ｍｍｏｌ）をＤＭＥ２００ｍｌに溶かし、反応系中に加え、氷冷下３０分間攪拌した。析出した結晶をろ取し、結晶をＨ２Ｏ×３、メタノール×３にて洗浄した。減圧下乾燥し、目的のＦｍｏｃ体（２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシ−ヘキシル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イル  メチルエステル（２０ｇ）を定量的に得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．９９−３．０５（ｍ，１Ｈ），３．１７−３．２０（ｍ，１Ｈ），３．３７−３．４８（ｍ，３Ｈ），３．５６−３．６３（ｍ，３Ｈ），４．１９−４．２７（ｍ，４Ｈ），４．３０−４．３３（ｍ，１Ｈ），４．３９−４．４０（ｍ，１Ｈ），４．４８−４．４９（ｍ，１Ｈ），４．７３（ｍ，１Ｈ），７．０９−７．１３（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｔ，Ｊ＝７，２Ｈｚ，２Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．８８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）４０４（ＭＨ＋）．
（２）｛６−［ビス−（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］−２，３，４，５−テトラヒドロキシ−ヘキシル｝−カルバミン酸  ９Ｈ−フルオレン−９−イル  メチルエステルの合成
2005037881.tif 000047
Ｆｍｏｃ−Ｄ−グルカミン（５．０ｇ，１２．４ｍｍｏｌ）をピリジン１００ｍｌに溶かし共沸した。この操作を２回行った後、乾燥ピリジン１００ｍｌに溶かし、窒素気流下氷冷した。４，４’−ジメトキシトリチルクロライド（５．０ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１．５ｇ，１２．４ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下から室温にゆっくりと昇温し、室温にて１７時間攪拌した。ピリジンを減圧留去した後、酢酸エチル５００ｍｌにて希釈した。水を加えた後、有機層を分離後、再び水層を酢酸エチルにて抽出した。酢酸エチル層は飽和食塩水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１０：１）にて精製し、目的の化合物（５．０６ｇ）を収率５７．９％にて得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ−アセトン）δ：３．２３−３．３８（ｍ，４Ｈ），３．６７−３．９５（ｍ，６Ｈ），３．７７（ｓ，６Ｈ），４．０５（ｄ，１Ｈ），４．１８−４．２４（ｍ，２Ｈ），４．３１−４．３３（ｍ，２Ｈ），６．５１（ｍ，１Ｈ），６．８６（ｄ，４Ｈ），７．１７−７．４２（ｍ，１Ｈ），７．５１（ｄ，２Ｈ），７．７０（ｄ，２Ｈ），７．８６（ｄ，２Ｈ）．
（３）［６−［ビス−（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］−２，３，４，５−テトラキス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ヘキシル］−カルバミン酸  ９Ｈ−フルオレン−９イル  メチルエステルの合成
2005037881.tif 000048
｛６−［ビス−（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］−２，３，４，５−テトラヒドロキシ−ヘキシル｝−カルバミン酸  ９Ｈ−フルオレン−９−イル  メチルエステル（２．４６ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）を２，６−ルチジン（１５ｇ、１４０ｍｍｏｌ）に溶かし、氷冷下攪拌した。ＴＢＤＭＳ−ＯＴｆ（１８．４ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。氷冷下から室温へ戻し、一昼夜攪拌した。ジクロロメタン２００ｍｌ、水２００ｍｌを加え、室温にて２時間攪拌した。有機層を分離後、水層をさらにジクロロメタン２００ｍｌにて抽出した。ジクロロメタン層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、減圧濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）にて精製し、目的の化合物（３．５ｇ）を収率８６．４％にて得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：−０．１−０．２（ｍ，２４Ｈ），０．７２（ｓ，９Ｈ），０．７５（ｓ，９Ｈ），０．９１−０．９６（ｍ，１８Ｈ），３．２５（ｄ，１Ｈ），３．３５−３．５０（ｍ，３Ｈ），３．５９（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，６Ｈ），３．８０（ｍ，１Ｈ），４．０３−４．１９（ｍ，３Ｈ），４．２９−４．４１（ｍ，２Ｈ），５．１８（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，４Ｈ），７．１５−７．２１（ｍ，９Ｈ），７．２７−７．３４（ｍ，４Ｈ），７．４７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）．
（４）［２，３，４，５−テトラキス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシル］−カルバミン酸  ９Ｈ−フルオレン−９−イル  メチルエステルの合成
2005037881.tif 000049
［６−［ビス−（４−メトキシ−フェニル）−フェニル−メトキシ］−２，３，４，５−テトラキス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ヘキシル］−カルバミン酸  ９Ｈ−フルオレン−９−イル  メチルエステル（１．１６ｇ，１ｍｍｏｌ）を（ギ酸：ジクロロメタン＝１：１０）溶液１０ｍｌに溶かし、室温にて２時間攪拌した。飽和重曹水に反応液を注ぎ込み、ジクロロメタン１００ｍｌにて抽出した。ジクロロメタン層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１〜５：１）にて精製し、目的のアルコール体（６００ｍｇ）を収率６９．８％にて得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：−０．５０−０．１０（ｍ，２４Ｈ），０．７７−０．８７（ｍ，３６Ｈ），２．１０（ｍ，１Ｈ），３．２９−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．５６（ｍ，２Ｈ），３．５７−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．６５−３．７１（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｍ，１Ｈ），４．２７−４．３２（ｍ，２Ｈ），４．９０（ｍ，１Ｈ），７．１７−７．２１（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）８６０（ＭＨ＋）．
（５）２−メチル−アクリル酸  ２，３，４，５−テトラキス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−６−（９Ｈ−フルオレン−９−イル  メトキシカルボニルアミノ）−ヘキシル  エステルの合成
2005037881.tif 000050
［２，３，４，５−テトラキス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−６−ヒドロキシヘキシル］−カルバミン酸  ９Ｈ−フルオレン−９−イル  メチルエステル（４６０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）に、ジクロロメタン（１０ｍｌ）を加え、窒素気流下、５℃にて攪拌した。次いで、メタクリル酸クロライド（５６０ｍｇ，５．４ｍｍｏｌ）を滴下した。氷冷下３０分攪拌し後、室温にて３０分間攪拌した。反応系中に水を加え、酢酸エチルにて２回抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、目的とする２−メチル−アクリル酸  ２，３，４，５−テトラキス−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−６−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−ヘキシル  エステル（２００ｍｇ，３９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ−アセトン）δ：０．０−０．１０（２４Ｈ，ｍ），０．９１（３６Ｈ，ｍ），１．９５（３Ｈ，ｓ），３．４５（１Ｈ，ｍ），３．５５（１Ｈ，ｍ），３．６０（１Ｈ，ｍ），３．９０−４．９５（７Ｈ，ｍ），５．００（１Ｈ，ｍ），５．５５（１Ｈ，ｍ），６．１０（１Ｈ，ｓ），７．２９（２Ｈ，ｍ），７．３９（２Ｈ，ｔ），７．５８（２Ｈ，ｔ），７．７５（２Ｈ，ｄ）．
製造例８：樹脂Ａの合成
2005037881.tif 000051
製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（３００ｍｇ，８５９μｍｏｌ）に、１，４−ジオキサン（７５０μｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（３．５０μｌ，１７μｍｏｌ；架橋剤濃度約２．０％）およびアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：１．６５ｍｇ）を加え、窒素気流下１００℃で２時間反応させた。得られた不溶物をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール、ジエチルエーテルで十分に洗浄した後、減圧下乾燥させた。得られた樹脂２５７ｍｇ（８４．６％）のうち、２００ｍｇにトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン：１，４−ジオキサン＝２：１：１混合溶液  ４０ｍｌを加え、室温で１時間攪拌した。反応終了後、樹脂を１，４−ジオキサン、メタノール、ジエチルエーテル、ＤＭＦで十分洗浄した後、５％ジイソプロピルエチルアミン／Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）溶液中、室温で終夜攪拌した。次いで、ＮＭＰ、メタノール、ジエチルエーテル、ＤＭＦ、メタノールで十分に洗浄した後、減圧下乾燥し、目的とする樹脂Ａ（１４１ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約４．９μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例９：ＦＫ５０６付樹脂Ａ：樹脂Ａ−ＦＫの合成
2005037881.tif 000052
製造例８で調製した樹脂Ａ（２０．０ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は９８μｍｏｌ）、１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−カルボキシ−ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオン（９．４ｍｇ，９．８μｍｏｌ）、ＥＤＣ／ＨＣｌ（４．５ｍｇ，２３μｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ；３．２ｍｇ，２４μｍｏｌ）およびＮ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ；０．５ｍｌ）の混合物を室温で終夜撹拌した。反応の終点はＨＰＬＣにて１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−カルボキシ−ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオンがほぼ消失することで確認した。この時の反応率を換算すると約９％であった。反応終了確認後、ＤＭＦ、メタノール、ジエチルエーテル、ＤＭＦ：Ｈ２Ｏ＝１：１で樹脂を十分洗浄した。ここに無水酢酸：ＤＭＦ＝１：９（１．５ｍｌ）を加え１時間室温で撹拌した。メタノールで洗浄後、ニンヒドリン反応による反応確認を行い、残存アミノ基が肉眼で観測できなくなるまで無水酢酸：ＤＭＦ＝１：９混合溶液による反応を繰り返した。反応終了確認後、ＤＭＦ、メタノール、ジエチルエーテルで十分洗浄後、得られたＦＫ５０６付樹脂Ａ（樹脂Ａ−ＦＫ）は後述する結合実験に用いた。
製造例１０：メタクリル酸エチルとの共重合による樹脂Ｂの合成
2005037881.tif 000053
製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（３０ｍｇ，８６μｍｏｌ）に、１，４−ジオキサン（７５０μｌ）、メタクリル酸エチル（９６．２μｌ，７７３μｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（２０．６μｌ，８６μｍｏｌ；架橋剤濃度約１０．０％）およびアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：１．４ｍｇ）を加え、窒素気流下１００℃で２４時間反応させた。得られた不溶物をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール、ジエチルエーテルで十分に洗浄した後、減圧下乾燥させた。得られた樹脂１０１ｍｇ（７２％）にトリフルオロ酢酸：ジクロロメタン＝ｌ：１混合溶液  ８ｍｌを加え、室温で１時間攪拌した。反応終了後、樹脂をＤＭＦで十分洗浄した後、５％ジイソプロピルエチルアミン／ＤＭＦ溶液中、室温で終夜攪拌した。次いで、ＤＭＦ、ジエチルエーテルで十分に洗浄した後、減圧下乾燥し、目的とする共重合体（８５ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約０．６３μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例１１：ＦＫ５０６付樹脂Ｂ：樹脂Ｂ−ＦＫの合成
2005037881.tif 000054
製造例１０で調製した樹脂Ｂ（１６ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）、１７−アリル−１，１４−ジヒドロキシ−１２−｛２−［４−（７−カルボキシ−ヘプタノイル−オキシ）−３−メトキシ−シクロヘキシル］−１−メチル−ビニル｝−２３，２５−ジメトキシ−１３，１９，２１，２７−テトラメチル−１１，２８−ジオキサ−４−アザ−トリシクロ［２２．３．１．０４，９］オクタコス−１８−エン−２，３，１０，１６−テトラオン（３８．４ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ／ＨＣｌ（９．２ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ；６．５ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ；０．５ｍｌ）の混合物を室温で終夜撹拌した。反応の終点はニンヒドリン反応で残存アミノ基が肉眼で観測できなくなることで確認した。この時の反応率を換算すると１００％であった。反応終了確認後、ＤＭＦ、メタノール、ジエチルエーテルで樹脂を十分洗浄した。ここに無水酢酸：メタノール：Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）＝１：１：８混合溶液（１．０ｍｌ）を加え１時間室温で撹拌した。その後ＤＭＦ、メタノール、ジエチルエーテルで十分洗浄し、ＦＫ５０６付樹脂Ｂ（樹脂Ｂ−ＦＫ）を得た。
製造例１２：メタクリル酸エチルとの共重合による樹脂Ｃの合成
2005037881.tif 000055
製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（９０ｍｇ，２５８μｍｏｌ）、メタクリル酸エチル（２８９μｌ，２．３２ｍｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（１０．５μｌ，４３．８μｍｏｌ；架橋剤濃度約１．７％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：４．２ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｃ（１４１ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約１．５μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例１３：ＦＫ５０６付樹脂Ｃ：樹脂Ｃ−ＦＫの合成
2005037881.tif 000056
製造例１２で調製した樹脂Ｃ（６．７ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）より、製造例１１と同様にしてＦＫ５０６付樹脂Ｃ（樹脂Ｃ−ＦＫ）を得た。
製造例１４：メタクリル酸エチルとの共重合による樹脂Ｄの合成
2005037881.tif 000057
製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（１５０ｍｇ，４２９μｍｏｌ）、メタクリル酸エチル（４４１μｌ，３．８６ｍｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（１７．５μｌ，７３．０μｍｏｌ；架橋剤濃度約１．７％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：７．１ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｄ（１１７ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約１．３μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例１５：ＦＫ５０６付樹脂Ｄ：樹脂Ｄ−ＦＫの合成
2005037881.tif 000058
製造例１４で調製した樹脂Ｄ（７．７ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）より、製造例１１と同様にしてＦＫ５０６付樹脂Ｄ（樹脂Ｄ−ＦＫ）を得た。
製造例１６：メタクリル酸メチルとの共重合による樹脂Ｅの合成
2005037881.tif 000059
製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（３０ｍｇ，８５．９μｍｏｌ）、メタクリル酸メチル（８２．７μｌ，７７３μｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（２０．６μｌ，８５．９μｍｏｌ；架橋剤濃度約１０％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：１．４ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｅ（５９ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約０．８９μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例１７：ＦＫ５０６付樹脂Ｅ：樹脂Ｅ−ＦＫの合成
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製造例１６で調製した樹脂Ｅ（１１ｍｇ，遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）より、製造例１１と同様にしてＦＫ５０６付樹脂Ｅ（樹脂Ｅ−ＦＫ）を得た。
製造例１８：メタクリル酸メチルとの共重合による樹脂Ｆの合成
2005037881.tif 000061
製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（９０ｍｇ，２５８μｍｏｌ）、メタクリル酸メチル（２４８μｌ，２．３２ｍｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（１０．５μｌ，４３．８μｍｏｌ；架橋剤濃度約１．７％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：４．２ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｆ（１７１ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約０．８４μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例１９：ＦＫ５０６付樹脂Ｆ：樹脂Ｆ−ＦＫの合成
2005037881.tif 000062
製造例１８で調製した樹脂Ｆ（１２ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）より、製造例１１と同様にしてＦＫ５０６付樹脂Ｆ（樹脂Ｆ−ＦＫ）を得た。
製造例２０：メタクリル酸メチルとの共重合による樹脂Ｇの合成
2005037881.tif 000063
製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（１５０ｍｇ，４２９μｍｏｌ）、メタクリル酸メチル（４１３μｌ，３．８６ｍｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（１７．５μｌ，７３．０μｍｏｌ；架橋剤濃度約１．７％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：７．１ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｇ（２４３ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約１．５μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例２１：ＦＫ５０６付樹脂Ｇ：樹脂Ｇ−ＦＫの合成
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製造例２０で調製した樹脂Ｇ（６．５ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）より、製造例１１と同様にしてＦＫ５０６付樹脂Ｇ（樹脂Ｇ−ＦＫ）を得た。
製造例２２：メタクリルアミドとの共重合による樹脂Ｈの合成
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製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（３０ｍｇ，８５．９μｍｏｌ）、メタクリルアミド（６５．８ｍｇ，７７３μｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（２０．６μｌ，８５．９μｍｏｌ；架橋剤濃度約１０．０％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：１．４ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｈ（９．７ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約０．７２μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例２３：ＦＫ５０６付樹脂Ｈ：樹脂Ｈ−ＦＫの合成
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製造例２２で調製した樹脂Ｈ（４．２ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は３．０μｍｏｌ）より製造例１１に述べた方法に準じ、目的とするＦＫ５０６付樹脂Ｈ（樹脂Ｈ−ＦＫ）を得た。
製造例２４：メタクリルアミドとの共重合による樹脂Ｉの合成
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製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（９０ｍｇ，２５８μｍｏｌ）、メタクリルアミド（１９７ｍｇ，２．３２ｍｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（１０．５μｌ，４３．８μｍｏｌ；架橋剤濃度約１．７％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：４．２ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｉ（９９ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約０．７９μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例２５：ＦＫ５０６付樹脂Ｉ：樹脂Ｉ−ＦＫの合成
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製造例２４で調製した樹脂Ｉ（１３ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）より製造例１１に述べた方法に準じ、目的とするＦＫ５０６付樹脂Ｉ（樹脂Ｉ−ＦＫ）を得た。
製造例２６：メタクリルアミドとの共重合による樹脂Ｊの合成
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製造例８と同様にして、製造例５で調製したメタクリル酸  ６−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（１５０ｍｇ，４２９μｍｏｌ）、メタクリルアミド（３２９ｍｇ，３．８６ｍｍｏｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（１７．５μｌ，７３．０μｍｏｌ；架橋剤濃度約１．７％）、アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：７．１ｍｇ）および１，４−ジオキサン（７５０μｌ）を用いて、樹脂Ｊ（６２ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約１．２μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例２７：ＦＫ５０６付樹脂Ｊ：樹脂Ｊ−ＦＫの合成
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製造例２６で調製した樹脂Ｊ（８．３ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は１０μｍｏｌ）より製造例１１に述べた方法に準じ、目的とするＦＫ５０６付樹脂Ｊ（樹脂Ｊ−ＦＫ）を得た。
製造例２８：ＰＥＧ型親水性モノマーの合成
（１）Ｏ−（２−フタルイミドエチル）ペンタエチレングリコールの合成
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フタルイミド（３１．３ｇ，２１３ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（６００ｍｌ）、ヘキサエチレングリコール（５０ｇ，１７７ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（５５．７ｇ，２１３ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（４０％トルエン溶液，９８．５ｍｌ，１９５ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温で終夜攪拌した。反応液を濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え不溶物をろ過した。ろ液に飽和食塩水を加え、二層分離後、水層を酢酸エチルで抽出し、有機層をまとめた。得られた有機層は無水硫酸ナトリウムで乾燥した。固形物をろ過、減圧濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（酢酸エチル：アセトン＝４：１で溶出）、目的とするＯ−（２−フタルイミドエチル）ペンタエチレングリコール（３２．７ｇ，４５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：３．５８−３．６９（１８Ｈ，ｍ），３．７１−３．７５（４Ｈ，ｍ），３．９０（２Ｈ，ｔ），７．７１（２Ｈ，ｄｄ），７．８５（２Ｈ，ｄｄ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１２．２（ＭＨ＋）
（２）Ｏ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）ペンタエチレングリコールの合成
2005037881.tif 000072
上記（１）で調製したＯ−（２−フタルイミドエチル）ペンタエチレングリコール（８．１３ｇ，１９．８ｍｍｏｌ）に８Ｎ塩酸水（２５ｍｌ）を加え、５時間加熱還流させた。放冷後、不溶物をろ過し、得られた水溶液をクロロホルム及び酢酸エチルで洗浄した。得られた水層にジオキサン（８０ｍｌ）を加えた後、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ９〜１０に調整しながら、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（５．１９ｇ，２３．８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応液を減圧濃縮しジオキサンを留去した。残った水溶液は酢酸エチルで抽出し、得られた有機層をまとめ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。固形物をろ過、減圧濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（酢酸エチル：アセトン＝１：０〜１：１で溶出）、目的とするＯ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）ペンタエチレングリコール（４．６６ｇ，６２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），３．３２（２Ｈ，ｔ），３．５４（２Ｈ，ｔ），３．６０−３．６９（１８Ｈ，ｍ），３．７３（２Ｈ，ｔ），５．２２（１Ｈ，ｂｓ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８２．２（ＭＨ＋）
（３）Ｏ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−Ｏ−（２−メタクリロイルオキシエチル）テトラエチレングリコールの合成
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上記（２）で調製したＯ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）ペンタエチレングリコール（４．６６ｇ，１２．２ｍｍｏｌ）にジエチルエーテル（１５０ｍｌ）を加えた。次いで、ピリジン（３．７ｍｌ）及びメタクリル酸クロライド（２．３７ｍｌ、２４．５ｍｍｏｌ）を加え、約１日攪拌した。ハイドロキノン（０．８ｇ）と酢酸エチルを加えた後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、２Ｎクエン酸水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。固形物をろ過、減圧濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムで精製し（酢酸エチルで溶出）、目的とするＯ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−Ｏ−（２−メタクリロイルオキシエチル）テトラエチレングリコール（４．４６ｇ，８１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．４４（９Ｈ，ｓ），１．９５（１Ｈ，ｔ），３．３０（２Ｈ，ｔ），３．５４（２Ｈ，ｔ），３．６０−３．６８（１６Ｈ，ｍ），３．７５（２Ｈ，ｔ），４．３０（２Ｈ，ｔ），５．０６（１Ｈ，ｂｓ），５．５７（１Ｈ，ｔ），６．１３（１Ｈ，ｂｓ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６７．３（ＭＮａ＋）
製造例２９：樹脂Ｋの合成
2005037881.tif 000074
製造例２８で調製したＯ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−Ｏ−（２−メタクリロイルオキシエチル）テトラエチレングリコール（２１２ｍｇ，０．４８４ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（４２４μｌ）、グリセロール  ジメタクリレート（１１．６μｌ，０．０４８ｍｍｏｌ；架橋剤濃度１０％）およびアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ：０．８ｍｇ）より、製造例８と同様にして、目的とする樹脂Ｋ（１２２ｍｇ）を得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約３．８μｍｏｌ／ｍｇのアミノ基が存在することを確認した。
製造例３０：ＦＫ５０６付樹脂Ｋ：樹脂Ｋ−ＦＫの合成（溶液重合）
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製造例２９で調製した樹脂Ｋ（２．６ｍｇ、遊離アミノ基（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｍｉｎｏ  ｇｒｏｕｐ）は３．８μｍｏｌ）より製造例１１に述べた方法に準じ、目的とするＦＫ５０６付樹脂Ｋ（樹脂Ｋ−ＦＫ）を得た。
製造例３１：樹脂Ｌの合成（乳化重合）
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製造例２８で調製したＯ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−Ｏ−（２−メタクリロイルオキシエチル）テトラエチレングリコール（１８８ｍｇ，０．４１８ｍｍｏｌ）の酢酸ブチル溶液（９８ｍｇ）に、グリセロール  ジメタクリレート（２．０１μｌ，０．００８ｍｍｏｌ；架橋剤濃度約１．９％）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（５４ｍｇ）−過硫酸アンモニウム（１ｍｇ）水溶液（５．４ｍｌ）を加えた後、良く攪拌し乳化状態とした。７０℃で終夜攪拌後、水、ＤＭＦ、ジオキサンでよく洗浄した。次いで、トリフルオロ酢酸：１，４−ジオキサン＝２：１混合溶液４０ｍｌを加え、室温で終夜攪拌した。反応終了後、樹脂を１，４−ジオキサン、ＤＭＦで十分洗浄し、さらに炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、水、ＤＭＦで十分に洗浄した後、樹脂Ｌを得た。
製造例３２：樹脂Ｍの合成（懸濁重合）
2005037881.tif 000077
製造例２８で調製したＯ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−Ｏ−（２−メタクリロイルオキシエチル）テトラエチレングリコール（１８８ｍｇ，０．４１８ｍｍｏｌ）の酢酸ブチル溶液（９８ｍｇ）に、グリセロール  ジメタクリレート（２．０１μｌ，０．００８ｍｍｏｌ；架橋剤濃度約１．９％）、ポリビニルアルコール［１０００、完全けん化型］水溶液（５１ｍｇ／２．６ｍｌ）及び炭酸カルシウム（１４ｍｇ）を加えた。激しく攪拌しながら、７０℃で１．５時間、さらに８０℃で１．５時間反応させた。次いで、水、ＤＭＦ、ジオキサンでよく洗浄した後、トリフルオロ酢酸：ジクロロメタン：１，４−ジオキサン＝２：１：１混合溶液４０ｍｌを加え、室温で１．５時間攪拌した。反応終了後、樹脂を１，４−ジオキサン、ＤＭＦで十分洗浄した後、５％ジイソプロピルエチルアミン／ＤＭＦ溶液中、室温で終夜攪拌した。次いで、ＤＭＦ、メタノールで十分に洗浄した後、樹脂Ｍを得た。
製造例３３：親水性モノマーの合成：メタクリル酸  ６−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステルの合成
2005037881.tif 000078
製造例７で調製したＦｍｏｃ−Ｄ−グルカミン（１０ｇ，２４．９ｍｍｏｌ）に無水ピリジン（３００ｍｌ）を加え、氷冷下メタクリル酸クロライド（３．８ｍｌ，４０．０ｍｍｏｌ）を滴下した後、室温で終夜攪拌した。氷冷下、メタノール（１００ｍｌ）を加えた後、濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、飽和食塩水で洗浄した後、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させた。固形物をろ過、減圧濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムで精製後（クロロホルム：メタノール＝１０：１で溶出）、メタノール−ジエチルエーテルより結晶化を行い、目的とするメタクリル酸  ６−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロキシヘキシル  エステル（２．２９ｇ，２２．１％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．９５（３Ｈ，ｓ），３．１６（１Ｈ，ｂｓ），３．３５−３．４０（３Ｈ，ｍ），３．６８−３．７２（３Ｈ，ｍ），３．８２（１Ｈ，ｂｓ），３．８８（１Ｈ，ｍ），３．９７（１Ｈ，ｍ），４．１７（１Ｈ，ｔ），４．４０（２Ｈ，ｍ），５．３７（１Ｈ，ｂｓ），５．６１（１Ｈ，ｓ），６．１６（１Ｈ，ｓ），７．３０（２Ｈ，ｔ），７．３９（２Ｈ，ｔ），７．５６（２Ｈ，ｄ），７．７５（２Ｈ，ｄ）．
ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７２．２（ＭＨ＋）
製造例３４：樹脂Ｎの合成（乳化重合）
2005037881.tif 000079
製造例２８で調製したＯ−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−Ｏ−（２−メタクリロイルオキシエチル）テトラエチレングリコール（１９３ｍｇ，０．４２９ｍｍｏｌ）に酢酸ブチル（１６６μｌ）、トリエチレングリコール  ジメタクリレート（４９．２μｌ，０．１８４ｍｍｏｌ；架橋剤濃度約４３％）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート水溶液（７９ｍｇ／７９ｍｌ）を加えた後、良く撹拌し乳化状態とした。過硫酸アンモニウム（０．７ｍｇ）を加え７０℃で終夜撹拌後、水、ＤＭＦ、ジオキサンでよく洗浄した。次いで、トリフルオロ酢酸：１，４−ジオキサン：ジクロロメタン：水＝５０：３５：１０：５混合溶液１４ｍｌを加え、室温で終夜撹拌した。反応終了後、樹脂を１，４−ジオキサン、ＤＭＦで十分洗浄し、さらに炭酸水素ナトリウム水溶液−ＤＭＦ混合液で洗浄した後、水−ＤＭＦ混合液、ＤＭＦで十分に洗浄し樹脂Ｎを得た。なお、ニンヒドリン反応により樹脂中に約０．３５０ｍｍｏｌ／ｍｌのアミノ基が存在することを確認した。
製造例３５：ＦＫ５０６付樹脂Ｎ：樹脂Ｎ−ＦＫの合成
2005037881.tif 000080
製造例３４で調製した樹脂Ｎ（遊離アミノ基：５０μｍｏｌ相当懸濁液）より製造例９（樹脂Ａ−ＦＫ）に述べた方法に準じ、目的とするＦＫ５０６付樹脂Ｎ（樹脂Ｎ−ＦＫ）を得た。
実験例１：結合実験
（１）ｌｙｓａｔｅの調製
ラットの脳（２．２ｇ）を混合液Ａ（０．２５Ｍシュクロース，２５ｍＭ  Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ７．４），２２ｍｌ）に混ぜ、ホモジネートを作成後、９０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。遠心分離上清を取り、５００００ｒｐｍでさらに１５分間遠心分離した。こうして得られた上清をｌｙｓａｔｅとして使用した。なお、実験はすべて４℃あるいは氷上で行った。
（２）結合実験
上記したＦＫ５０６を結合した各種アフィニティー樹脂を用いて以下の手順でｌｙｓａｔｅとの結合実験を行った。なお、ｌｙｓａｔｅは混合液Ａで１／２に希釈して使用した。ＦＫ５０６付ＴＯＹＯパール樹脂、ＦＫ５０６付ＡｆｆｉＧｅｌ樹脂はそれぞれ１０μｌ、樹脂Ａ−ＦＫは０．１μｍｏｌ相当分、並びに樹脂Ｂ−ＦＫ〜樹脂Ｊ−ＦＫは１．０μｍｏｌ相当分を使用した。また、樹脂Ｎ−ＦＫは１．０μｍｏｌ相当分を使用した。
ＦＫ５０６結合アフィニティー樹脂とｌｙｓａｔｅ（１ｍｌ）を４℃で終夜、静かに振とうした。その後、上清を除き、残ったＦＫ５０６結合アフィニティー樹脂を混合液Ａで４回十分に洗浄してＦＫ５０６結合アフィニティー樹脂表面を十分に洗浄した。
こうして得られたＦＫ５０６結合アフィニティー樹脂に２０μｌのＳＤＳ用ｌｏａｄｉｎｇ  ｂｕｆｆｅｒ（ｎａｋａｌａｉ  ｃａｔ．ＮＯ＝３０５６６−２２、電気泳動用ｓａｍｐｌｅ  ｂｕｆｆｅｒ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ２−ＭＥ（２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）（２ｘ）ｆｏｒ  ＳＤＳ  ＰＡＧＥ）を加え、２５℃で１０分間加熱した。こうして得られたサンプル液を市販のＳＤＳゲル（ＢｉｏＲａｄ  ｒｅａｄｙＧｅｌ  Ｊ，１５％ＳＤＳ，ｃａｔ．ＮＯ＝１６１−Ｊ３４１）で分離し、そのＳＤＳゲルを解析した。解析にはＳＣＡＮＮＥＲ  ＪＸ３３０（ＳＨＡＲＰ）およびＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒｖｅｒｓｉｏｎ２．０１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用い、比較例である製造例３のＦＫ５０６付ＴＯＹＯパール樹脂に結合（吸着）した分子の内、ＦＫＢＰ１２（バンド４）を含む代表的な４種類のバンド（バンド１〜バンド４）を選択し、そのピークの量を各製造例および比較例の樹脂について測定し、バンド４での値を基凖値（１．０）として相対的に定量化した（樹脂Ａ−ＦＫ〜樹脂Ｊ−ＦＫについては結果を図１に示す）。別に行ったウエスタンブロットによりバンド４がＦＫ５０６のターゲット分子、ＦＫＢＰ１２であることを確認した。
ＦＫＢＰ１２以外の残りの３つのバンドはそれぞれチューブリン（バンド１）、アクチン（バンド２）、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（バンド３）に相当し、ＦＫ５０６付ＴＯＹＯパール樹脂に非特異的に結合（吸着）している。樹脂Ａ−ＦＫ〜樹脂Ｊ−ＦＫについては図１から示されるようにいずれのタンパク質も本発明の樹脂を使用することにより顕著にその非特異的な固相表面への結合（吸着）が抑制され、ＦＫ５０６付ＡｆｆｉＧｅｌ樹脂を用いた場合と同程度にまで非特異的吸着が低減化されている。また樹脂Ｎ−ＦＫについても非特異的吸着が顕著に抑制されていた。
【産業上の利用可能性】  本発明の、親水性スペーサーを組み込んだモノマー成分を重合してなる樹脂、および当該樹脂にリガンドを固定化することによって得られるリガンド固定化固相担体は、試料中に混在する、当該リガンドに対するターゲット分子以外の物質の樹脂および／またはリガンドへの非特異的な吸着を低減化することができる。したがってよりノイズの少ないターゲット分子の探索、同定等が可能になる。
本出願は、日本で出願された特願２００３−３５７１４４及び特願２００４−１７８８０８を基礎としておりそれらの内容は本明細書に全て包含されるものである。
【図１】
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【国際調査報告】
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