(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
学名：ピーペル  ニグラム（Piper nigrum L.）インドネシア名：ラダ  ヒタン（Ｌａｄａ  ｈｉｔａｍ）の実、
学名：リガストラム  グロマータム  ビーワン（Ligustrum glomeratum B1.）インドネシア名：ギャンティ（Ｇａｎｔｉ）の根および実、
学名：ミリスティカ  フラガンス  フット（Myristica fragans Houtt.）インドネシア名：クリット  パーラ（Ｋｕｌｉｔ  ｐａｌａ）の果肉、実、根、茎、種子および全草、
学名：アルテミシア  シナ  バーグ（Artemisia cina Berg.）インドネシア名：マングシ  アラブ（Ｍｕｎｇｓｉ  ａｒａｂ）の種子および花、
学名：シンドラ  ジャワニカ  ベッカー（Sindora javanica Backer.）インドネシア名：サパランツ（Ｓａｐａｒａｎｔｕ）の実および樹液、
学名：エレオカーパス  グランディフローラ  スミス（Elaeocarpus grandiflora Smith.）インドネシア名：アニャング（Ａｎｙａｎｇ）の実、樹皮および葉、
学名：アルティジア  エクセルサ  ノローマ（Altingia excelsa Noroma）インドネシア名：ラサマラ（Ｒａｓａｍａｌａ）の葉および樹液、
学名：ジャスミナム  プベスケンス  ウィルド（Jasminum pubescens Willd）インドネシア名：ギャンバー  ヒュータン（Ｇａｎｂｉｒ  ｈｕｔａｎ）の茎および葉、
学名：モリンガ  オレイフェラ  ラム（Moringa oleifera Lam.）インドネシア名：ケラー（Ｋｅｌｏｒ）の葉、根、根皮、樹皮、実、種子および樹液、
学名：エリィスリーナ  リソスパーマ  ビーワン  ノン  ミク（Erythrina lithosperma Bl.non Miq.）インドネシア名：ダウン  ダダップ（Ｄａｕｎ  ｄａｄａｐ）の葉および根、
学名：ゲンダルッサ  ブルガリス  ニーズ（Gendarussa vulgaris Nees.）インドネシア名：ダウンギャンダルサ（Ｄａｕｎ  ｇａｎｄａｒｕｓａ）の葉および根、
学名：ボレリア  アーティキュラリス（エルエフ）エフエヌ  ウィリアムス（Borreria articularis(L.f.)F.N.Williams.）インドネシア名：ダウン  ゲンパー（Ｄａｕｎ  ｇｅｍｐｕｒ）の葉、根、茎および全草、
学名：ソーラパス  アンドロジーナス  マート（Saurapus androgynus Mert.）インドネシア名：ダウン  カツ（Ｄａｕｎ  ｋａｔｕ）の実、根および葉、
学名：ドライモグロッサム  ヘテロフィラム  シー  チャー（Drymoglossum heterophyllum, C.Chr.）インドネシア名：ダウン  ピシサン（Ｄａｕｎ  ｐｉｃｉｓａｎ）の全草、葉および樹液、
学名：モスコスマ  ポリスタチョン（エル）バース（Moschosma polystachyon(L.)Bth.）インドネシア名：ダウン  サンケット（Ｄａｕｎ  ｓａｎｇｋｅｔ）の全草および葉、
学名：プランテーン  メジャー  エル（Plantago major L.）インドネシア名：ダウン  センドック（Ｄａｕｎ  ｓｅｎｄｏｋ）の全草、葉および根、
学名：セウスバニア  グランディフローラ（エル）（Sesbania grandiflora(L.)Pers.）インドネシア名：ダウン  チューリ（Ｄａｕｎ  ｔｕｒｉ）の全草、葉、樹皮および花、
学名：オキムム  サンタム  エル（Ocimum sanctum L.）インドネシア名：ケマンギ  ヒュータン（Ｋｅｍａｎｇｉ  ｈｕｔａｎ)  の全草、根、茎、葉および花、
学名：ユーホビア  ヒルタ  エル（Euphorbia hirta L.）インドネシア名：パチカン  ケボ（Ｐａｔｉｋａｎ  ｋｅｂｏ)  の全草および樹液、
学名：ボスウエリア  エスピー（Boswellia sp.）インドネシア名：メンヤン  アラブ（Ｍｅｎｙａｎ  ａｒａｂ）の樹液、
からなる群より選ばれる少なくとも一種以上の植物の溶媒抽出液を有効成分として含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。
【請求項２】
請求項１記載のメラニン生成抑制剤を含有する化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、特定の植物の溶媒抽出液を含有するメラニン生成抑制剤に関するものであって、より詳しくは、特定の植物の特定部位あるいは全草の溶媒抽出液を有効成分とする、化粧料、医薬品、医薬部外品あるいは食品等に配合して用いられるメラニン生成抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術および問題点】
ヒトの皮膚に現れる、シミやそばかす等の斑点を消失し、皮膚全体の美白作用を高めるための色白化粧料をはじめとするメラニン生成抑制について研究が重ねられており、それに関与するさまざまな要因が解明されてきている。
その中で正常のヒト皮膚の色調に関する因子としては、メラニン、カロチン、血流量、皮膚の厚みおよび皮膚透明度が関与しているとされ、これらの中で主としてメラニンが、ヒト皮膚の色調に影響を及ぼし、特に褐色や黒色のユウメラニン量が、色素沈着の要因であることが知られている。
【０００３】
このような、シミやそばかすの原因となるメラニンを抑制し、さらに皮膚全体の美白を目的とした各種の色白化粧料の研究も長年にわたり行われている。それらの例としては、過酸化水素や過ホウ酸亜鉛等の過酸化物、アスコルビン酸、システイン、コロイド硫黄等を化粧料に配合することが試みられている。しかしながら、これらは安定性および美白効果において満足する効果は得られていない。
【０００４】
また、健康食品、医薬品等においてシミや美白の目的に経口的にα−トコフェロール、アスコルビン酸、システイン等が使用されているが、これらも安定性、効果等で問題があり、一部の利用に留まっている。
そこで人体にとって皮膚に塗布および食しても安全で、容易に製造できるメラニン生成抑制剤の開発が望まれていた。
【０００５】
【本発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、医薬品に見られる様な副作用のない、メラニン生成抑制作用が強いメラニン生成抑制剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記目的を達成するために提案されたものであって、本発明者らの長年にわたる研究の結果として見いだされた、特定のインドネシア産薬草・薬木から抽出された抽出液が強いメラニン生成抑制効果を有するとの新知見に基づいて完成したものである。
【０００８】
すなわち、本発明によれば、
学名：ピーペル  ニグラム（Piper nigrum L.）インドネシア名：ラダ  ヒタン（Ｌａｄａ  ｈｉｔａｍ）の実、
学名：リガストラム  グロマータム  ビーワン（Ligustrum glomeratum B1.）インドネシア名：ギャンティ（Ｇａｎｔｉ）の根および実、
学名：ミリスティカ  フラガンス  フット（Myristica fragans Houtt.）インドネシア名：クリット  パーラ（Ｋｕｌｉｔ  ｐａｌａ）の果肉、実、根、茎、種子および全草、
学名：アルテミシア  シナ  バーグ（Artemisia cina Berg.）インドネシア名：マングシ  アラブ（Ｍｕｎｇｓｉ  ａｒａｂ）の種子および花、
学名：シンドラ  ジャワニカ  ベッカー（Sindora javanica Backer.）インドネシア名：サパランツ（Ｓａｐａｒａｎｔｕ）の実および樹液、
学名：エレオカーパス  グランディフローラ  スミス（Elaeocarpus grandiflora Smith.）インドネシア名：アニャング（Ａｎｙａｎｇ）の実、樹皮および葉、
学名：アルティジア  エクセルサ  ノローマ（Altingia excelsa Noroma）インドネシア名：ラサマラ（Ｒａｓａｍａｌａ）の葉および樹液、
学名：ジャスミナム  プベスケンス  ウィルド（Jasminum pubescens Willd）インドネシア名：ギャンバー  ヒュータン（Ｇａｎｂｉｒ  ｈｕｔａｎ）の茎および葉、
学名：モリンガ  オレイフェラ  ラム（Moringa oleifera Lam.）インドネシア名：ケラー（Ｋｅｌｏｒ）の葉、根、根皮、樹皮、実、種子および樹液、
学名：エリィスリーナ  リソスパーマ  ビーワン  ノン  ミク（Erythrina lithosperma Bl.non Miq.）インドネシア名：ダウン  ダダップ（Ｄａｕｎ  ｄａｄａｐ）の葉および根、
学名：ゲンダルッサ  ブルガリス  ニーズ（Gendarussa vulgaris Nees.）インドネシア名：ダウンギャンダルサ（Ｄａｕｎ  ｇａｎｄａｒｕｓａ）の葉および根、
学名：ボレリア  アーティキュラリス（エルエフ）エフエヌ  ウィリアムス（Borreria articularis(L.f.)F.N.Williams.）インドネシア名：ダウン  ゲンパー（Ｄａｕｎ  ｇｅｍｐｕｒ）の葉、根、茎および全草、
学名：ソーラパス  アンドロジーナス  マート（Saurapus androgynus Mert.）インドネシア名：ダウン  カツ（Ｄａｕｎ  ｋａｔｕ）の実、根および葉、
学名：ドライモグロッサム  ヘテロフィラム  シー  チャー（Drymoglossum heterophyllum, C.Chr.）インドネシア名：ダウン  ピシサン（Ｄａｕｎ  ｐｉｃｉｓａｎ）の全草、葉および樹液、
学名：モスコスマ  ポリスタチョン（エル）バース（Moschosma polystachyon(L.)Bth.）インドネシア名：ダウン  サンケット（Ｄａｕｎ  ｓａｎｇｋｅｔ）の全草および葉、
学名：プランテーン  メジャー  エル（Plantago major L.）インドネシア名：ダウン  センドック（Ｄａｕｎ  ｓｅｎｄｏｋ）の全草、葉および根、
学名：セウスバニア  グランディフローラ（エル）（Sesbania grandiflora(L.)Pers.）インドネシア名：ダウン  チューリ（Ｄａｕｎ  ｔｕｒｉ）の全草、葉、樹皮および花、
学名：オキムム  サンタム  エル（Ocimum sanctum L.）インドネシア名：ケマンギ  ヒュータン（Ｋｅｍａｎｇｉ  ｈｕｔａｎ)  の全草、根、茎、葉および花、
学名：ユーホビア  ヒルタ  エル（Euphorbia hirta L.）インドネシア名：パチカン  ケボ（Ｐａｔｉｋａｎ  ｋｅｂｏ)  の全草および樹液、
学名：ボスウエリア  エスピー（Boswellia sp.）インドネシア名：メンヤン  アラブ（Ｍｅｎｙａｎ  ａｒａｂ）の樹液、
からなる群より選ばれる少なくとも一種以上の植物の溶媒抽出液を有効成分として含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤が提供される。
上記メラニン生成抑制剤は、化粧料、医薬品、医薬部外品および食品等に配合して有効に用いられる。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明で使用する上記特定の植物は、インドネシアで古来生薬として、一般に複数の混合物の熱水抽出液を飲用し、腹痛、頭痛等の症状の治療に利用されている。
本発明においては、上記特定の植物の根、茎、葉、果実（種子も含む）、花蕾、樹皮、虫えい等が利用部位として用いられ、この抽出液にメラニン生成抑制作用があることを見いだしたことに重要な意義がある。
【００１０】
抽出は、溶媒によって行うが、抽出溶媒としては、低級アルコール、多価アルコール、低極性溶媒および極性溶媒を使用する。
低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロピルアルコール等が使用される。多価アルコールとしては、グリセリン、ポリエチレングリコール、低極性溶媒としては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン等の飽和炭化水素；ヘキセン、ヘプテン等の不飽和炭化水素；極性溶媒としては、水、アセトン、酢酸エチル、酢酸メチル等が使用され、これらの単独または２種以上を併用して抽出溶媒として用いられる。
【００１１】
抽出は、Elaeocarpus grandiflora Smith 等に溶媒を加えて、必要あれば撹拌しながら１ないし６０℃、好ましくは室温以下で抽出を行う。但し、水の場合沸騰した熱水で抽出してもよい。
混合溶媒の使用量に格別の限定はないが、一応の目安として乾燥植物（破砕物）１部に対して溶媒を１ないし２０部、好ましくは５ないし１０部程度とするのがよい。
このようにして得られた抽出液には、メラニン生成抑制成分が、高濃度に含まれる。
【００１２】
本発明に係わるメラニン生成抑制剤は、上記の方法で抽出した抽出液をそのまま有用成分として使用するほか、抽出液の精製物も有用成分として使用することが出来る。該処理物としては、有用成分の濃縮物、ペースト状物、乾燥物、及び／又は、希釈物が広く使用される。
【００１３】
例えば、抽出液をそのまま真空（凍結）乾燥したり、減圧濃縮した後、真空（凍結）乾燥したり、あるいは減圧濃縮した後、各種溶媒で溶媒分画を行い、メラニン生成抑制成分を精製し、真空（凍結）乾燥したり、またあるいは、抽出液をカラムに負荷した後、真空（凍結）乾燥するカラムクロマトグラフィーを利用した濃縮精製方法によって処理物を製造してもよい。尚、処理物としては、最終の乾燥工程まで行うことなく、それに至るまでの途中の上記した各工程で操作を停止し、目的に応じた形状、濃縮物のものを選択使用することも可能である。
【００１４】
本発明に係わるメラニン生成抑制剤は、化粧料、食品、医薬部外品、医薬品等に配合して用いることができる。化粧料および医薬部外品・医薬品の皮膚外用剤においては、各種任意成分（油剤、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、キレート剤、顔料、ｐＨ調整剤、薬効成分、紫外線吸収剤、香料）を適宜配合し、クリーム、ミルクローション、ローション、ファンデーション、パック、エッセンス、軟膏、ゲル剤、パウダー、リップクリーム、口紅、サンケア、バスソルト等のその目的に応じて任意の形態で製造することができる。
【００１５】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール、アミノ酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等のＮＭＦ成分、ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、フィブロネクチン、ヘパリン類似物質、キトサン等の水溶性高分子物質等を例示することができる。
【００１６】
増粘剤としては、例えばアルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、マルメロ種子抽出物、トラガントゴム、デンプン等の天然高分子物質、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、可溶性デンプン、カチオン化セルロース等の半合成高分子化合物、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルポリマー等の合成高分子物質等を例示することができる。
【００１７】
防腐剤としては、例えば安息香酸塩、サリチル酸塩、ソルビン酸塩、デヒドロ酢酸塩、パラオキシ安息香酸エステル、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル、３，４，４’−トリクロロカルバニド、塩化ベンザルコニウム、ヒノキチオール、レゾルシン、エタノール等を例示することができる。
【００１８】
酸化防止剤としては、例えばジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸等を例示することができる。
紫外線吸収剤・遮蔽剤としては、例えば４−メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベンゾエート、エチルヘキシルパラメトキシシンナメート、酸化チタン、カオリン、酸化亜鉛、タルク等を例示することができる。
【００１９】
さらに、キレート剤としては、例えばエチレンジアミン四酢酸、ピロリン酸、ヘキサメタリン酸、クエン酸、グルコン酸、酒石酸及びこれらの塩類を例示することができ、ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂、リン酸水素カリウム等をそれぞれ例示することができる。
【００２０】
【製造例】
本発明を実施例により具体的に説明するに先立ち、本発明で使用した Elaeocarpus grandiflora Smith等の抽出液の製造例を示す。
【００２２】
［製造例１］
Piper nigrum, L. 実乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００２４】
［製造例２］
リガストラム  グロマータム  ビーワン（Ligustrum glomeratum B1.）.根乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００２７】
［製造例３］
ミリスティカ  フラガンス  フット（Myristica fragans Houtt.）果肉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００２８】
［製造例４］
アルテミシア  シナ  バーグ（Artemisia cina Berg.）種子乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００２９】
［製造例５］
シンドラ  ジャワニカ  ベッカー（Sindora javanica Backer.）実乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００３０】
［製造例６］
エレオカーパス  グランディフローラ  スミス（Elaeocarpus grandiflora Smith.）.実乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００３７】
［製造例７］
アルティジア  エクセルサ  ノローマ（Altingia excelsa Noroma）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００３８】
［製造例８］
ジャスミナム  プベスケンス  ウィルド（Jasminum pubescens Willd）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００３９】
［製造例９］
モリンガ  オレイフェラ  ラム（Moringa oleifera Lam.）葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４０】
［製造例１０］
エリィスリーナ  リソスパーマ  ビーワン  ノン  ミク（Erythrina lithosperma Bl.non Miq.）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４１】
［製造例１１］
ゲンダルッサ  ブルガリス  ニーズ（Gendarussa vulgaris Nees.）葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４２】
［製造例１２］
ボレリア  アーティキュラリス（エルエフ）エフエヌ  ウィリアムス（Borreria articularis(L.f.)F.N.Williams.）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４３】
［製造例１３］
ソーラパス  アンドロジーナス  マート（Saurapus androgynus Mert.）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４５】
［製造例１４］
ドライモグロッサム  ヘテロフィラム  シー  チャー（Drymoglossum heterophyllum, C.Chr.）.全草乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４６】
［製造例１５］
モスコスマ  ポリスタチョン（エル）バース（Moschosma polystachyon(L.)Bth.）全草乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４７】
［製造例１６］
プランテーン  メジャー  エル（Plantago major L.）全草乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４８】
［製造例１７］
セウスバニア  グランディフローラ（エル）（Sesbania grandiflora(L.)Pers.）全草乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００４９】
［製造例１８］
オキムム  サンタム  エル（Ocimum sanctum L.）.全草乾燥物の破砕物１００ｇに対して、精製水１，０００ｍｌを加え、湯浴上で１時間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００５０】
［製造例１９］
ユーホビア  ヒルタ  エル（Euphorbia hirta L.）全草乾燥物の破砕物１００ｇに対して、５０ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００５１】
［製造例２０］
ソーラパス  アンドロジーナス  マート（Saurapus androgynus Mert.）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、１００ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００５２】
［製造例２１］
ソーラパス  アンドロジーナス  マート（Saurapus androgynus Mert.）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、アセトン１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００５３】
［製造例２２］
ソーラパス  アンドロジーナス  マート（Saurapus androgynus Mert.）.葉乾燥物の破砕物１００ｇに対して、グリセリン１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００５４】
［製造例２３］
ボスウエリア  エスピー（Boswellia sp.）.樹液乾燥物の破砕物１００ｇに対して、１００ｖ／ｖ％エタノール１，０００ｍｌを加え、室温暗所にて７日間攪拌抽出を行った。これを遠心分離・加圧ろ過し、抽出液を得た。
【００５５】
【実施例】
上記製造例によって得られた抽出液を用いてメラニン生成抑制効果を試験し、化粧料、医薬品、医薬部外品、食品としての適応性を検証した。
以下にその結果を詳述する。
【００５６】
〔実施例１：培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞生成メラニン生成抑制作用試験〕各製造例による抽出液の培養Ｂ１６メラノーマ細胞メラニン生成抑制試験を下記の条件にて測定した。
（１）測定方法
本発明の試料を最終濃度０．１２５％、０．２５％、０．５０％、１．０％になるように添加したウシ胎児血清イーグルＭＥＭ培地に、マウス黒色腫由来の培養Ｂ１６細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ2 条件下で５日間培養した後、細胞をかき集め、ＰＢＳに懸濁した後、１，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、沈渣ペレットの色調を目視で判定した。
なお、コントロールとして試料を添加しなかったものを用いた。結果の判定基準は、コントロールに対して細胞生存率６０％以上の試料について次の細胞白色度判定基準で評価した。
−  ：コントロール（試料無添加）と同程度
＋  ：僅かに白色化
２＋：かなり白色化
３＋：ほとんど白色化
【００５７】
（２）測定結果
各植物抽出液のメラニン生成抑制作用の結果を表１に示した。各々の抽出液は、コウジ酸１．２５ないし２．５ｍＭ濃度に相当するメラニン生成抑制作用が認められた。
【００５８】
【表１−１】
0005142113.tif 000002
【００５９】
【表１−２】
0005142113.tif 000003
【００６０】
（３）考察
各植物抽出液は、乾燥植物破砕物に対して１０％濃度で抽出しており、メラニン生成抑制作用測定時の添加濃度は、乾燥物換算すると０．１％以下となる。一方、１．２５ｍＭ濃度コウジ酸は、重量濃度換算すると約０．００９％である。この結果から各々の抽出液には、コウジ酸に相当するメラニン生成抑制作用成分が、約１０ないし２０％含有していることになり、これらの抽出液は、メラニン生成抑制作用原料として有望である。
【００６１】
〔実施例２：チロシナーゼ活性阻害試験〕
各製造例による抽出液のチロシナーゼ活性阻害作用を下記の条件にて測定した。
（１）測定方法
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）５７７μｌにマッシュルーム由来チロシナーゼ液４０μｌおよび評価試料液５０μｌを加え、３７℃で２分間インキュベートする。その後、１０ｍＭＬドーバー試液３３３μｌを加え、さらに４７５ｎｍにて吸光度を測定しながら、インキュベートし、１分間あたりの吸光度の上昇度を算出した。
尚、チロシナーゼ酵素液は、試料無添加時、４７５ｎｍの吸光度を約０．０１／分になるように調製する。
【００６２】
（２）測定結果
植物抽出液のチロシナーゼ活性阻害作用の結果を表２に示した。各々の抽出液は、上記抽出液にコウジ酸に匹敵する高いチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。
【００６３】
【表２】
0005142113.tif 000004
【００６４】
（３）考察
各植物抽出液は、乾燥植物破砕物に対して１０％濃度で抽出しており、チロシナーゼ活性阻害作用測定時の添加濃度は、乾燥物換算すると０．０５％以下となる。一方、０．３０ｍＭコウジ酸は、重量濃度換算すると約０．００４３％である。この結果から各々の抽出物には、コウジ酸に相当するチロシナーゼ活性阻害作用成分が、約９％含有している。また、チロシナーゼ活性阻害作用は、一般に阻害成分の濃度依存的に高まることから抽出液を精製することによりさらに高くなることが予想される。
これらの結果からこれらの抽出液は、メラニン生成抑制作用原料として有望である。
【００６５】
［実施例３：モルモット紫外線色素沈着抑制試験］
実施例１及び実施例２の結果からこれらの植物抽出液に色白作用が期待されたので、製造例４の抽出液についてモルモットによる紫外線色素沈着抑制試験を実施した。
(１)試験方法
黄褐モルモットの背部皮膚を用い、モルモット背部をバリカンにて刈毛し、さらに電気カミソリにて剃毛した。このモルモットの背部を４ヶ所、正方形（２．０ｃｍ×２．０ｃｍ）の穴を開けたアルミ箔で覆い、紫外線（ＳＥランプ３本、１４０ｍＪ／ｃｍ２）で１日１回９０秒、３日毎に４回照射した。照射開始日から、本発明の抽出液の１０％濃度で１日３回２０日間連続して塗布した。
尚、塗布液組成は、基剤（水：エタノール：プロピレングリコール＝５：４：１）と同じになるように調製した。塗布開始後、１３日目から２０日目の間に色素沈着抑制度を判定した。皮膚の黒色度は以下に示す判定基準にて肉眼判定を行った。また、参考データとして２％アスコルビン酸の試験も同時に行った。
判定基準
著  効  ：色素沈着をほとんど認めない。
有  効  ：わずかに色素沈着を認める。
やや有効：中程度色素沈着を認める。
無  効  ：コントロールと変わらない。
逆  転  ：コントロールよりも色素沈着を認める。
【００６６】
（２）測定結果
植物抽出液のモルモット紫外線色素沈着抑制試験の結果を表３に示した。試験に供した抽出液に高い色素沈着抑制作用が、認められた。一方、アスコルビン酸にはその作用は認められなかった。
【００６７】
【表３】
0005142113.tif 000005
【００６８】
（３）考察
培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞メラニン生成抑制作用試験で効果が認められた中から３試料任意に選び、モルモット紫外線色素沈着抑制試験を行った。その結果、いずれの抽出液においても色素沈着抑制作用が、認められた。さらにカラムクロマトグラフィー等の操作により有効成分を分離・精製することで沈着抑制作用は高くなることが予想される。これらの結果からこれらの抽出液は、メラニン生成抑制作用原料として有望である。
【００６９】
〔実施例４：皮膚外用剤の調製〕
製造例で得た抽出液を用い、下記に示す組成にて皮膚外用剤を調製した。処方例の配合中、「適量」とは、全体で１００重量％になる量を意味する。
【００７０】
＜処方例１  クリーム＞
Ａ
モノステアリン酸
ポリエチレングリコール（４０．Ｅ．Ｏ．）                ２．０
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                    ５．０
ステアリン酸                                            ５．０
ベヘニルアルコール                                      １．０
流動パラフィン                                        １０．０
トリオクタン酸グリセリル                              １０．０
Ｂ
グリセリン                                              ５．０
エチルパラベン                                          ０．１
製造例１抽出液                                          ２．０
精製水                                                  適量
Ａに属する成分を加熱溶融する。別に、Ｂに属する成分を加熱溶融する。ＡにＢを添加して攪拌、乳化後、冷却してクリームを製造した。
【００７２】
＜処方例２  乳液＞
Ａ
モノステアリン酸
ポリオキシエチレンソルビタン（２０．Ｅ．Ｏ．）          １．０
モノステアリン酸
ポリオキシエチレンソルビタン（６０．Ｅ．Ｏ．）          ０．５
親油型モノステアリン酸グリセリン                        １．０
ステアリン酸                                            ０．５
ベヘニルアルコール                                      ０．５
アボカド油                                              ４．０
トリオクタン酸グリセリル                                ４．０
Ｂ
１，３−ブチレングリコール                              ５．０
製造例４抽出液                                          ２．０
エチルパラベン                                          ０．１
精製水                                                  適量
Ａに属する成分を加熱溶融する。別に、に属する成分を加熱溶融する。ＡにＢを添加して攪拌、乳化後、冷却して乳液を製造した。
【００７４】
＜処方例３  親水性軟膏＞
Ａ
ポリオキシエチレンセチルエーテル                        ２．０
グリセリンモノステアレート                            １０．０
流動パラフィン                                        １０．０
ワセリン                                                ４．０
セタノール                                               ５．０
Ｂ
プロピレングリコール                                   １０．０
メチルパラベン                                           ０．１
製造例１１抽出液                                         １．０
精製水                                                   適量
【００７８】
【発明の効果】
本発明に係わる植物の抽出液は、優れたメラニン生成抑制作用を有し、しかも安全性も高いため、化粧料、食品、医薬品および医薬部外品等のメラニン生成抑制防止を目的とするあらゆる分野に応用してその効果を発揮することができる。