(57)【要約】カルシウム放出依存性カルシウムチャンネル阻害作用及びＩＬ−２産生抑制作用活性に優れる４，６−ジメチル−４−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの結晶を得、当該化合物には２種の結晶多形が存在し、いずれの結晶も医薬組成物の製造原料として好適であることを見出した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの結晶。
【請求項２】
粉末Ｘ線回折で２θ（°）５．９４，９．９４，１５．６４，１５．８８，１８．４８，２０．０４及び２０．７６のピークを有する請求項１記載の結晶。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折で２θ（°）１０．６０，１２．９０及び１７．２４のピークを有する請求項１記載の結晶。
【請求項４】
ＤＳＣ分析で１９５〜１９８℃（ｏｎｓｅｔ）に熱吸収ピークを有する請求項１記載の結晶。
【請求項５】
ＤＳＣ分析で１９５〜１９８℃（ｏｎｓｅｔ）に熱吸収ピークを有する請求項２記載の結晶。
【請求項６】
ＤＳＣ分析で１９５〜１９８℃（ｏｎｓｅｔ）に熱吸収ピークを有する請求項３記載の結晶。
【請求項７】
請求項１記載の結晶と製薬学的に許容される担体とを含有する固形医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、カルシウム放出依存性カルシウムチャンネル阻害剤として有用な４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの新規結晶に関する。
【背景技術】  カルシウム放出依存性カルシウムチャンネル（Ｃａ２＋ｒｅｌｅａｓｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｃａ２＋ｃｈａｎｎｅｌ；以下ＣＲＡＣＣと略記する；カルシウムストア依存性カルシウムチャンネル（ｓｔｏｒｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｃａ２＋ｃｈａｎｎｅｌ）とも呼ばれる）は、肥満細胞、リンパ球、アストロサイト（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０，ｐ２９−３２（１９９５））等、殆どすべての炎症性細胞に存在することが知られており、サイトカイン産生および脂質メディエーター遊離等に深く関与している事が報告されている（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５，ｐ２８５−９６（１９９５）及びＢｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１４４，ｐ５９８−６０１（１９９５））。
また、ＣＲＡＣＣは内皮細胞（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ，，２６９，Ｃ７３３−８（１９９５））及び上皮細胞（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０，ｐ１６９−７５（１９９５））にも存在することが知られている。内皮細胞がラジカル障害を受ける際に持続的カルシウム流入が関与している事が報告されており（Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２６１，Ｃ８８９−８９６（１９９１））、ＣＲＡＣＣ阻害剤が内皮細胞の関与する組織障害に対する保護作用を有することが示唆されている。更に、カルシウム流入阻害が細胞増殖の抑制作用を有すること及びインターロイキン２（ＩＬ−２）の産生を抑制することも報告されており（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍｍａｃｏｌ．，１３３，ｐ８６１−８（１９９４））、ＣＲＡＣＣ阻害剤は悪性腫瘍等の増殖性あるいは進行性の疾患や、自己免疫疾患の予防・治療剤として有用であり、また移植時の拒絶反応の抑制剤としても有用である。
従って、ＣＲＡＣＣ阻害剤は各種炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、組織損傷、増殖性疾患等の予防又は治療に有用な薬剤となりうることが期待されている。
平滑筋細胞や神経細胞等の興奮性細胞の細胞内カルシウム調節に関与する膜電位依存性Ｃａ２＋チャンネル（以下ＶＯＣＣと略記する）とＣＲＡＣＣとの阻害選択性が高く、ＩＬ−２産生阻害活性を有するピラゾール誘導体が報告されている（例えば、特許文献１）。
2004020433.tif 000002
（式中、Ｄはハロゲノ低級アルキル等で置換されていてもよいピラゾリル、ｎは０又は１、Ｂはフェニレン等、Ｘは−ＮＲ１−ＣＲ２Ｒ３−等、Ａは１個以上の置換基を有していてもよい単環若しくは２乃至３環式縮合ヘテロアリール等をそれぞれ示す。詳細は当該公報参照。）
また、ＩＬ−２産生阻害活性を有し、自己免疫疾患治療剤として有用な他のピラゾール誘導体も報告されており（例えば、特許文献２及び３）、特許文献２には次の化合物が開示されている。
2004020433.tif 000003
（式中、Ｒ１及びＲ３は１〜１５個の炭素のペルフルオロアルキル等、Ｚは窒素又は炭素、Ｑはアリール等、Ｅは、−Ｌ３−Ｂ等を示す。詳細は当該公報参照。）
また、特許文献３には次の化合物が開示されている。
2004020433.tif 000004
（式中、Ｒ１及びＲ３はＣＦ３等、Ｌは、−ＮＨＣ（Ｏ）−等をそれぞれ示す。詳細は当該公報参照。）
４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドは、特許文献１乃至３のクレームには含まれるものの、具体的開示のない新規化合物である。
【特許文献１】            国際公開第９９／１９３０３号パンフレット
【特許文献２】            国際公開第９９／５１５８０号パンフレット
【特許文献３】            国際公開第９９／６２８８５号パンフレット
化合物を医薬品として使用する場合、一般に、その安定性の点から結晶が好ましく、またその取り扱いや品質の安定のためには結晶多形の制御が必要となる場合がある。
【発明の開示】
本発明者等は、ＣＲＡＣＣを選択的に阻害し、各種炎症性疾患、アレルギー性疾患の予防・治療に有用な新規な医薬を提供することを目的として研究を行ったところ、４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドを結晶として得、意外にも当該化合物の結晶には２種の多形が存在し、更に、いずれの多形結晶も医薬組成物の製造原料として好適であることを見出した。
即ち、本発明は、医薬組成物の製造原料として有用な４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの多形結晶に関する。
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの結晶に関する。本発明の結晶は、医薬の製造原料として使用可能な程度に安定な結晶であればよく、特に下記物性値を有するα型又はβ型の結晶が好ましい。各結晶はそれぞれ下記の粉末Ｘ線回折スペクトル［２θ（°）］で特徴付けられる。尚、粉末Ｘ線回折はデータの性質上、結晶の同一性認定においては、結晶格子間隔や全体的なパターンが重要であり、相対強度は結晶成長の方向、粒子の大きさ、測定条件によって多少変わりうるものであるから、厳密に解されるべきではない。
α型：５．９４，９．９４，１５．６４，１５．８８，１８．４８，２０．０４及び２０．７６。
β型：１０．６０，１２．９０及び１７．２４。
また、ＤＳＣ分析で、α型結晶は約１９６℃（ｏｎｓｅｔ：ピークの立ち上がり温度）に熱吸収ピークを有する。β型結晶は１７２〜１７４℃付近に相転位に伴う微小なピークを有し、更に約１９６℃（ｏｎｓｅｔ）に熱吸収ピークを有する。即ち、α型及びβ型結晶いずれも１９５〜１９８℃（ｏｎｓｅｔ）に熱吸収ピークを有する。
α型及びβ型いずれの結晶も５〜６０℃で少なくとも３ヶ月間は安定であり、再結晶による高純度化が可能であることから、医薬の製造原料として使用可能であり、特に固形製剤の原料として好適である。
例えば、４０℃、遮光下における安定性試験の結果を表１に示す。
2004020433.tif 000005
（値は，ＨＰＬＣから得られたピーク面積をもとに内部標準法によって求めた定量値を示す。）
α型結晶は、トルエン中再結晶を行うことにより得ることができる。また、α型結晶は、β型結晶を２−プロパノールと水との混合溶媒中、懸濁下、室温〜加熱下、好ましくは３０〜６０℃、より好ましくは４０〜５０℃で加温下に数時間〜数日間攪拌することによっても得ることができる。即ち、α型結晶は、その懸濁下での安定性から、大スケールでの製造に適した結晶形である。
β型結晶は、２−プロパノール溶液に、攪拌下、水（好ましくは２−プロパノールと等量）を加えて結晶を析出させることにより得ることができる。即ち、β型結晶は、トルエン等よりも毒性の低い溶媒のみを用いて直接的に製造できる点で優れている。
α型結晶及びβ型結晶いずれも、再結晶を行う際、別途得られた所望の結晶を種結晶として使用するのが好ましい。
なお、２−プロパノールと水との混合溶媒（例えば４：３の混合比）を用い、加熱溶解後、放冷して結晶を析出させることにより、ＤＳＣ分析でα型結晶と同じ熱吸収ピークを有し、粉末Ｘ線回折においても２θ＝１９．２４°のピーク以外はα型結晶と同じ回折パターンを示す結晶が得られることがある。当該結晶は室温下で安定であり、そのＤＳＣ分析や粉末Ｘ線回折の結果から、当該結晶も本発明のα型結晶に含まれる。
また、本発明は、４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの結晶と製薬学的に許容される担体とを含有する固形医薬組成物にも関する。
【産業上の利用可能性】  ４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドはＣＲＡＣＣ阻害作用、ＶＯＣＣとの阻害選択性及びＩＬ−２産生抑制作用に優れている。
更に、ＴＮＣＢ誘発接触性過敏症（ＴＮＣＢ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｃｏｎｔａｃｔ  Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）に対する抑制効果、マウスコラーゲン関節炎モデルに対する関節炎抑制作用、好酸球浸潤抑制作用（Ａｎｔｉｇｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｉｒｗａｙ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ（ｒａｔ））等の特許文献１に記載の試験においても良好な活性を示した。従って、当該化合物を含有する医薬は、ＣＲＡＣＣやＩＬ−２の関与するアレルギー性、炎症性若しくは自己免疫疾患の予防又は治療剤として有用である。ここで、アレルギー性、炎症性若しくは自己免疫疾患としては、気管支喘息、乾癬、アトピー性皮膚炎を含むアトピー性疾患、クローン病を含む炎症性大腸疾患、消化性潰瘍、腎炎、肝炎、膵炎、膠原病、関節リウマチ、変形性関節炎、移植時の拒絶反応等が包含される。上記疾患への有用性は、特許文献１に記載のＣＲＡＣＣ阻害作用及びＩＬ−２産生抑制作用等のｉｎ  ｖｉｔｒｏの試験、更に気管支喘息の代表的疾患モデルである抗原誘発気道内好酸球浸潤モデル、マウスコラーゲン関節炎モデル等を用いた各種試験により確認できる。４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドは、特許文献１に記載の方法により製造できる。
本発明の４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの結晶を有効成分として含有する固形医薬組成物は、当分野において通常用いられている薬剤用担体、賦形剤等を用いて通常使用されている方法によって調製することができる。投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、又は、関節内、静脈内、筋肉内等の注射剤、坐剤、経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤、経粘膜液剤、経粘膜貼付剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。特に、４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの結晶を製造原料とする経口投与用の錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等、及び非経口投与用の吸入剤、経鼻剤等は安定な固形製剤として有利である。
経口投与のための固形製剤においては、本発明化合物が、少なくとも一つの不活性な賦形剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えばステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤やカルボキシメチルスターチナトリウム等の崩壊剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性コーティング剤で被膜してもよい。
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な溶剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な溶剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁化剤のような補助剤、甘味剤、矯味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与のための注射剤は、無菌の水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳剤を含む。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩液が含まれる。非水性の溶剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（商品名）等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解、懸濁して使用することもできる。
吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤は固体、液体、半固体状のものが用いられ、従来公知の方法に従って製造することができる。例えば、乳糖や澱粉のような賦形剤や、更に、ｐＨ調整剤、防腐剤、界面活性剤、滑沢剤、安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。投与は、適当な吸入又は吹送のためのデバイスを使用することができる。例えば、計量投与吸入デバイス等の公知のデバイスや噴霧器を使用して、化合物を単独で又は処方された混合物の粉末として、もしくは医薬的に許容し得る担体と組み合わせて溶液又は懸濁液として投与することができる。乾燥粉末吸入器等は、単回又は複数回の投与用のものであってもよく、乾燥粉末又は粉末含有カプセルを利用することができる。あるいは、適当な噴霧剤、例えば、クロロフルオロアルカン、ヒドロフルオロアルカン又は二酸化炭素等の好適な気体を使用した加圧エアゾールスプレー等の形態であってもよい。
投与量は症状、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、経口投与の場合、成人１日当たり０．００１ｍｇ／ｋｇ乃至１０ｍｇ／ｋｇ程度であり、これを１回で、あるいは２〜４回に分けて投与する。また、吸入の場合は、通常、成人１回当たり０．０００１ｍｇ／ｋｇ乃至１ｍｇ／ｋｇの範囲で１日に１回乃至複数回投与する。
【図面の簡単な説明】図１  ４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドのα型結晶の粉末Ｘ線回折図。
図２  ４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドのα型結晶の熱分析図。
図３  ４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドのβ型結晶の粉末Ｘ線回折図。
図４  ４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドのβ型結晶の熱分析図。
【発明を実施するための最良の形態】  以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
粉末Ｘ線回折の測定は、定法に従い粉砕した試料と  ＭＡＣ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社製ＭＸＰ１８ＴＡＨＦ２２を用い、対陰極：銅、管電流：３５０ｍＡ、管電圧：４５ｋＶ、サンプリング間隔：０．０２０°、走査速度：３．０°／ｍｉｎ、波長：１．５４０５６Å、走査範囲（２θ）：５〜４０°の条件で行った。
示差走査熱量（ＤＳＣ）及び熱質量（ＴＧ）の測定は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製ＤＳＣ２９１０及びＨｉ−Ｒｅｓ  ＴＧＡ２９５０を用い、試料量：約５ｍｇ、試料容器：アルミニウムパン（開放、ＤＳＣ用）及び白金パン（開放、ＴＧ用）、加熱速度：１０℃／ｍｉｎ、測定温度範囲：室温〜２５０℃、雰囲気ガス：乾燥窒素、雰囲気ガス流量：５０ｍｌ／ｍｉｎの条件で行った。
【実施例１】  ４，６−ジメチルニコチン酸（１５．１ｇ）及びジクロロメタン（１５０ｍｌ）の混合物に、氷冷下でオキザリルクロリド（８．７ｍｌ）を加え、１５〜２０℃で１時間撹拌した。反応液に、４−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アニリン（２３．５９ｇ）及びジクロロメタン（３００ｍｌ）の混合物を加え、室温で１８時間撹拌した。反応液に２０％炭酸カリウム水溶液（約２００ｍｌ）を加え、有機層を分離した後、水層をジクロロメタン（約５０ｍｌ）で抽出した。有機層と抽出液を合わせた後、減圧下で濃縮した。得られた残渣をエタノールと水（２：１）の混合溶媒（２７０ｍｌ）から再結晶して、４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリド（２６．７０ｇ）を青白色固体として得た。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｐｏｓ．）：ｍ／ｚ４２９［（Ｍ＋Ｈ）＋］；ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．４１（３Ｈ，ｓ），２．４９（３Ｈ，ｓ），７．２４（１Ｈ，ｓ），７．６０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｓ），７．９５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），８．５８（１Ｈ，ｓ），１０．７２（１Ｈ，ｓ）。
実施例２（α型結晶の製造）
４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリド（８．０ｇ）とトルエン（１６０ｍｌ）の混合物を、溶液が沸騰するまで加熱した後、室温まで放冷しながら撹拌子にて終夜撹拌した。析出した結晶を濾取し、トルエン（１０ｍｌ）で洗浄した後、６０℃で終夜減圧乾燥して、４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドのα型結晶（６．５２ｇ）を白色固体として得た。
実施例３（β型結晶の製造）
４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリド（８．０ｇ）に２−プロパノール（１２０ｍｌ）を加え、溶液が沸騰するまで加熱して溶解させた後、室温まで放冷した。その際、結晶の析出は観察されなかった。撹拌翼にて撹拌しながら、溶液に水（１２０ｍｌ）を加え、そのまま室温で１時間３０分撹拌した。析出した結晶を濾取し、２−プロパノールと水（１：１）の混合溶媒（約５０ｍｌ）で洗浄した後、６０℃で１日間減圧乾燥して、４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドのβ型結晶（７．３２ｇ）を白色固体として得た。
本発明の４，６−ジメチル−４’−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］ニコチンアニリドの結晶、特にα型及びβ型結晶は、安定性に優れ、医薬品の製造原料として有用である。
【図１】
2004020433.tif 000006
【図２】
2004020433.tif 000007
【図３】
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【図４】
2004020433.tif 000009
【国際調査報告】
2004020433.tif 000010
2004020433.tif 000011