(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カラヤマグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ  Ｌ．）の樹皮（但し幹、枝、葉柄の部分のものに限る）の水溶性抽出物の４０〜６０％硫安画分を有効成分とすることを特徴とする免疫賦活剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、桑の新規な薬理用途に関する。より詳細には、桑の樹皮由来の新規な免疫賦活剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
クワ科クワ属に属する桑は、日本人の他、中国人や韓国人にも古くから親しみのある植物である。その葉には、血糖値の上昇を抑える効果がある１−デオキシノジリマイシンや、カルシウム、鉄、マグネシウム、亜鉛などのミネラルが含まれていることが知られており、桑の葉のお茶は健康茶として飲用されている。また、桑の根皮（桑白皮）は、利尿作用や降圧作用を有することが知られており、漢方薬として用いられている。さらに、近年、桑の樹皮の抽出物に、ビフィズス菌増殖促進作用があることが特許文献１において報告されている。
【特許文献１】特開２０００−８３６５４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、桑に含まれる成分やその機能性の全容が解明されるには至っておらず、桑は未だ明らかにされていない薬理作用を有する可能性を秘めている。
そこで本発明は、桑の新規な薬理用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、上記に点に鑑みて鋭意研究を進めた結果、桑の樹皮の水溶性抽出物が優れた免疫賦活作用を有することを見出した。
【０００５】
上記の知見に基づいてなされた本発明の免疫賦活剤は、請求項１記載の通り、カラヤマグワ（Ｍｏｒｕｓ  ａｌｂａ  Ｌ．）の樹皮（但し幹、枝、葉柄の部分のものに限る）の水溶性抽出物の４０〜６０％硫安画分を有効成分とすることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、桑の新規な薬理用途として、桑の樹皮の水溶性抽出物を有効成分とする免疫賦活剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の免疫賦活剤は、桑の樹皮の水溶性抽出物を有効成分とすることを特徴とするものである。本発明において用いることができる桑としては、例えば、カラヤマグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｌｂａ Ｌ．）、ヤマグワ（Ｍｏｒｕｓ ｂｏｍｂｙｃｉｓ ｋｏｉｄｚ）、ログワ（Ｍｏｒｕｓ ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｐｏｉｒ．）、シマグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｃｉｄｏｓａ Ｇｒｉｆｆ．）、これらの交配種や交雑種などが挙げられる。桑の樹皮は、幹、枝、葉柄の部分のものを用いることが望ましい。樹皮は必ずしも髄を含む木心材などから分離して用いる必要はなく、幹、枝、葉柄そのものを用いてもよい。また、根の皮や根そのものを用いてもよい。
【０００８】
桑の樹皮の水溶性抽出物は、例えば、乾燥させた桑の樹皮を粉砕して粉末にした後、これを水に投入し、３℃〜１００℃で１時間〜１週間震盪させて成分抽出してからろ過することで、ろ液として得ることができる。得られたろ液は、そのまま液状抽出物として用いてもよいし、凍結乾燥を行って固形物や粉末にして用いてもよい。また、ろ液をさらにゲルろ過やイオンクロマトグラフィーや硫安分画などによって精製し、得られた画分を水溶性抽出物として用いてもよい。
【０００９】
本発明における免疫賦活剤の有効成分である桑の樹皮の水溶性抽出物は、例えば、医薬部外品、医薬品、飲食品などの形態で人体に対して経口的に投与することができる。これらの形態における製剤組成は特段限定されるものではなく、自体公知の一般的なものを採用することができる。桑の樹皮の水溶性抽出物の投与量は、適用対象者の年齢や性別、症状の程度などに基づいて適宜決定することができ、適切な投与量を投与することにより、その免疫賦活作用に基づいて、例えば、癌の予防、細菌やウイルスに対する感染防御力の改善といった効果をもたらすことができる。
【実施例】
【００１０】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１１】
実施例１：
（桑の樹皮の水溶性抽出物の調製）
日本産のカラヤマグワの樹皮（幹部と枝部のもの）１００ｇを乾燥させた後、粉砕機で粉砕し、篩にかけて粉末化した。得られた粉末を超純水（ＭＱ水）３５００ｍＬに投入し、４℃で４８時間震盪させて成分抽出してからろ紙を用いてろ過することでろ液を得た。得られたろ液を凍結乾燥することで、褐色粉末からなるカラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物を１２ｇ得た（収率１２％）。
次に、上記の方法で得たカラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物１ｇをセファデックスＧ−２５Ｍにアプライし、溶出液として水を用いてゲルろ過を行い、３０ｍＬずつ分画して合計１２の画分を得、それぞれの画分を凍結乾燥した（Ｆ１〜Ｆ１２：溶出順）。表１にそれぞれの画分の凍結乾燥後の収量と収率を示す（水溶性抽出物１ｇに対する値）。
【００１２】
【表１】
0005327661.tif 000002
【００１３】
さらに、上記の方法で得た画分の１つであるＦ２画分に対し、２０％，４０％，６０％，８０％，１００％の５種類の硫安分画を行い、それぞれの画分を凍結乾燥した。表２にそれぞれの画分の凍結乾燥後の収量と収率を示す（Ｆ２画分５０ｍｇに対する値）。
【００１４】
【表２】
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【００１５】
（免疫賦活作用の試験方法）
４週齢〜１０週齢の正常なＩＣＲ系マウス（雌）の脾臓を、ＰＢＳ中、滅菌ワイヤーメッシュ上で緩やかに摩砕することで、脾臓細胞を無菌的に組織から分離した。分離した脾臓細胞に、赤血球除去のためのTris ammonium chloride - lysis buffer（17mM Tris HCl, 0.83% NH4Cl, pH7.2）を加えて室温で５分間インキュベートした。遠心分離によって上清を取り除いた後（１１００ｒｐｍ，１１ｇ，１０分間の条件で２回）、ＰＢＳを加え、得られた細胞懸濁液を再度遠心分離して細胞の洗浄を行った（１１００ｒｐｍ，１１ｇ，５分間の条件で２回）。その後、細胞を、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０μＭの２−メルカプトエタノール、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁し、５％ＣＯ２存在下、３７℃湿潤条件でインキュベートすることで、マウス脾臓リンパ球細胞浮遊液を得た。
次に、リンパ球細胞数が５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように培地で調整し、その１００μＬを９６穴マイクロプレートの各ウェルに加えた。続いて、各ウェルに所定濃度の被検サンプルを１１μＬ加え、５％ＣＯ２存在下、３７℃湿潤条件で４８時間インキュベートした後、Ｉｓｈｉｙａｍａらの方法に従い（Chem．Pharm．Bull．41，1118−1122，1993）、ＷＳＴ−１溶液を１０μＬ加え、前述の条件でさらに４時間インキュベートしてから、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍにおける吸光度を測定し、被検サンプルを加えずにインキュベートした際の吸光度を１００とした場合の相対値でもって、被検サンプルのリンパ球細胞の増殖に対する作用（免疫賦活作用）を評価した。なお、この試験においては、ポジティブコントロールとしてＬＰＳ（リポ多糖）を用いた。
【００１６】
（免疫賦活作用の試験結果）
（１）  カラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物（Ｄｉｒｅｃｔ）、カラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物に対してゲルろ過を行うことで得た合計１２の画分の凍結乾燥物（Ｆ１〜Ｆ１２）を被検サンプルとした場合の試験結果を図１に示す（サンプル濃度：２０μｇ／ｍＬ）。図１から明らかなように、いずれの被検サンプルも免疫賦活作用を示したが、中でも、Ｆ１画分とＦ２画分の免疫賦活作用は、ＬＰＳの免疫賦活作用よりも優れていた。
（２）  カラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物（Ｄｉｒｅｃｔ）、Ｆ２画分、Ｆ２画分に対して２０％，４０％，６０％，８０％，１００％の５種類の硫安分画を行うことで得た画分の凍結乾燥物（Ｆ２（２０％）画分，Ｆ２（４０％）画分，Ｆ２（６０％）画分，Ｆ２（８０％）画分，Ｆ２（１００％）画分）を被検サンプルとした場合の試験結果を図２（サンプル濃度：５０μｇ／ｍＬ）と図３に示す（サンプル濃度：１００μｇ／ｍＬ）。図２と図３から明らかなように、いずれの被検サンプルも免疫賦活作用を示したが、中でも、Ｆ２（４０％）画分とＦ２（６０％）画分の免疫賦活作用は、ＬＰＳの免疫賦活作用よりも優れていた。
【００１７】
製剤例１：錠剤
以下の成分組成からなる免疫賦活のための錠剤を自体公知の方法で製造した。
桑の樹皮の水溶性抽出物                      １
乳糖                                      ８０
ステアリン酸マグネシウム                  １９   （単位：重量％）
【００１８】
製剤例２：ビスケット
以下の成分組成からなる免疫賦活のためのビスケットを自体公知の方法で製造した。
桑の樹皮の水溶性抽出物                      １
薄力粉                                    ３２
全卵                                      １６
バター                                    １６
砂糖                                      ２４
水                                        １０
ベーキングパウダー                          １   （単位：重量％）
【産業上の利用可能性】
【００１９】
本発明は、桑の新規な薬理用途として、桑の樹皮の水溶性抽出物を有効成分とする免疫賦活剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例における桑の樹皮の水溶性抽出物の免疫賦活作用を示すグラフである（サンプル濃度：２０μｇ／ｍＬ）。
【図２】同、別の結果を示すグラフである（サンプル濃度：５０μｇ／ｍＬ）。
【図３】同、別の結果を示すグラフである（サンプル濃度：１００μｇ／ｍＬ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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