(57)【要約】アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の診断、アミロイドβ蛋白の特異的染色剤、ならびにアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の治療および予防のための、アミロイドβ蛋白に対する特異性の高い化合物を提供する。また、本発明は神経原線維変化に対するプローブおよび神経原線維変化の染色剤も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の診断プローブとして使用される、式Ｉ：
2005016888.tif 000040
［式中、Ａは５員環または６員環であり、下記の構造：
2005016888.tif 000041
または
2005016888.tif 000042
または
2005016888.tif 000043
を有し；
ＸおよびＹは独立してＮまたはＣＨであり；
ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ−１であり；
ＧはＮまたはＣＨであり；
ＪはＳ、Ｏ、ＣＨ２またはＮ−ＣｑＨ２ｑ−１であり；
ｐは１〜４の整数であり；
ｑは１〜４の整数であり；
Ｒ１およびＲ２は独立して水素および炭素数１〜４個のアルキルからなる群より選択され；
Ｒ３は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、
Ｒ４およびＲ５は独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキル、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル（ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフェニルからなる群より選択されるか；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキル、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル（ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフェニルからなる群より選択される１〜４個の基により置換されていてもよいベンゼン環を形成し；ただし、ｍが０であって、Ｒ４およびＲ５が一緒になってベンゼン環を形成する場合には環Ａはベンゼン環でなく；
ＤはＮＨ、Ｓ、Ｏ、またはＣＨ＝ＣＨであり；
ＥはＮまたはＣＨであり；
ｍは０〜４の整数であり、ただし、環Ａがベンゼン環である場合にはｍは２〜４の整数であり；
ｎは０〜４の整数である］
で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
老人斑および／またはびまん性老人斑に特異的に結合する請求項１記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項３】
ＢＦ−１８５、ＢＦ−１８７、ＢＦ−１８８、ＢＦ−１８９、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２１４、ＢＦ−２１５、ＢＦ−２２７およびＢＦ−２３１からなる群より選択される請求項２記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項４】
標識されている請求項１〜３のいずれか１項記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項５】
標識が放射性核種である請求項４記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項６】
標識がγ線放出核種である請求項５記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項７】
γ線放出核種が９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉおよび１３３Ｘｅからなる群より選択されるものである請求項６記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項８】
標識が陽電子放出核種である請求項５記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項９】
陽電子放出核種が１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏおよび１８Ｆからなる群より選択される請求項８記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１０】
請求項４ないし９のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含む、アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の画像診断用組成物。
【請求項１１】
請求項４ないし９のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の画像診断用キット。
【請求項１２】
請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む脳試料中のアミロイドβ蛋白の染色用組成物。
【請求項１３】
請求項２または３に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む脳試料中の老人斑および／またはびまん性老人斑の染色用組成物。
【請求項１４】
化合物がＢＦ−１８５およびＢＦ−２２７からなる群より選択されるものである請求項１３記載の染色用組成物。
【請求項１５】
請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含むアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療および／または予防用医薬組成物。
【請求項１６】
疾患がアルツハイマー病である請求項１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
神経原線維変化を検出するためのプローブあるいは神経原線維変化の染色剤として使用される、下式ＩＩ：
2005016888.tif 000044
［式中、環Ａは
2005016888.tif 000045
2005016888.tif 000046
または
2005016888.tif 000047
で示され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＧおよびＪは上記定義と同じであり；
Ｒ６はハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキル、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル（ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、またはフェニルであり；
ｋは０〜４の整数を意味する］
で示される請求項１記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１８】
ＢＦ−２２１、ＢＦ−２３９、ＢＦ−２４０およびＢＦ−２５５からなる群より選択されるものである請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
請求項１記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を投与することを特徴とするアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療および／または予防方法。
【請求項２０】
請求項１記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とするアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の診断方法。
【請求項２１】
アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療、予防、または診断するための組成物を製造するための請求項１記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２２】
請求項１７記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする神経原線維変化を検出あるいは染色する方法。
【請求項２３】
神経原線維変化を検出あるいは染色するための組成物を製造するための請求項１７記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２４】
化合物がＢＦ−２２１、ＢＦ−２３９、ＢＦ−２４０およびＢＦ−２５５からなる群より選択されるものである請求項２２または２３記載の方法または使用。
【請求項２５】
コンフォメーション病の診断用プローブとして使用される請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２６】
請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含むコンフォメーション病の画像診断用組成物またはキット。
【請求項２７】
請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含有する、コンフォメーション病の予防および／または治療用医薬組成物。
【請求項２８】
請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、コンフォメーション病の診断方法。
【請求項２９】
コンフォメーション病を診断するための、請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項３０】
請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、コンフォメーション病の予防および／または治療方法。
【請求項３１】
コンフォメーション病を予防および／または治療するための、請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項３２】
請求項１〜９、１７または１８のいずれか１項に記載の化合物を合成するための前駆体化合物。
【請求項３３】
ＢＦ−２２３、ＢＦ−２２６、ＢＦ−２４６、ＢＦ−２５１およびＢＦ−２５３からなる群より選択される請求項３２記載の前駆体化合物。
【請求項３４】
標識されている請求項３２または３３記載の前駆体化合物。
【請求項３５】
１８Ｆまたは１２３Ｉで標識されている請求項３２ないし３４のいずれか１項に記載の前駆体化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブ、詳細には陽電子放出核種により標識されたプローブ、ならびに該プローブを含む画像診断用組成物に関する。さらに本発明は、例えば、脳材料中のアミロイドβ蛋白の検出・染色、例えば、アルツハイマー病患者脳における老人斑の検出・染色、ならびに蛋白のβシート構造が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療用の医薬組成物にも関する。また、本発明は、神経原線維変化が病因または病因の一部である疾患の診断に有用な化合物、それを含む画像診断用組成物および神経原線維変化の染色用組成物にも関する。
【背景技術】
【０００２】  アミロイドが蓄積する疾患には、体内の種々の器官や組織への不溶性原線維性蛋白（アミロイド）の沈着を特徴とする種々の疾病があり、アルツハイマー病やダウン症候群等が含まれる。このうち、アルツハイマー病（ＡＤ）は現在最も治療の困難な疾病の１つとされており、正確な早期診断が望まれている。【０００３】  アルツハイマー病（ＡＤ）は現在最も治療の困難な疾病の１つとされており、正確な早期診断が望まれている疾病である。アルツハイマー病は主として初老期から老年期に起こる進行性の痴呆を特徴とする疾患である。病理学的には大脳の全体的な萎縮、神経細胞の著しい変性と脱落、神経原線維変化と老人斑の出現を特徴とする。アルツハイマー病に代表される痴呆の最大のリスクファクターは加齢であることが知られている。したがって、老齢人口の増加に伴う患者数の増加は、特に、高齢化社会となっている日本、アメリカ、ヨーロッパ諸国において顕著であり、それに対する医療コストはこれらの国の医療システムを危機におとしめている。
なお、我が国においてはアルツハイマー病患者数は約１００万人と推定され、今後人口の高齢化に伴いその患者数は増大することが確実視されている。アルツハイマー病患者にかかわる費用は介護費用を含めると年間患者１人当たり２５０万円を超えると考えられていることから、すでに我が国では２兆５千億円を超える社会経済的コストを払っていることになる。アルツハイマー病において痴呆症状が顕在化する以前ないしはできるだけ早期に治療を加えることは、大きな医療経済的効果をもたらすことはいまや世界の常識となっている。しかし現状ではこれらの段階のアルツハイマー病を正確に診断することは極めて困難である。【０００４】  現在のアルツハイマー病診断方法は各種あるが、我が国においては長谷川式、ＡＤＡＳ、ＭＭＳＥ等の、アルツハイマー病が疑われる個体の認知機能の低下を定量的に評価する方法が一般的であり、まれに画像診断法（ＭＲＩ、ＣＴ等）が補助的に用いられている。しかしこれらの診断法では病気を確定するには不十分であり、確定診断には生前における脳の生検（バイオプシー）、死後脳の病理組織学的検査が必要である。このように、アルツハイマー病の診断法についても精力的な研究が行われているにもかかわらず、それほどの進歩がみられないでいる。多くの研究の結果、最初の臨床症状が現れるかなり前（長い場合は約４０年前）にはすでにアルツハイマー病特徴的な神経変性が始まっていることが判ってきた。また同病においては患者を取り巻く家族または臨床家が最初の臨床症状に気づいた時には、すでに脳内病理像は取り返しのつかない状態まで進行していることが知られている。上述のような病状の進行特性および患者数の激増を考え合わせると、アルツハイマー病の正確な早期診断の必要性ならびに意義は極めて大きい。
アルツハイマー病の病理組織像は２つの主徴に代表される。すなわち老人斑および神経原線維変化である。前者の主構成成分はβシート構造をとったアミロイドβ（Ａβ）蛋白であり、後者のそれは過剰リン酸化されたアミロイドβ蛋白である。アルツハイマー病の確定診断はこれらの病理学的特徴が患者脳内に出現することをよりどころとしている。【０００５】  アミロイドβ蛋白はアルツハイマー病を包含するアミロイドが蓄積する疾患に特徴的であり、密接な関連性を有している。したがって、体内、特に脳内でβシート構造をとったアミロイドβ蛋白をマーカーとして検出することが、アミロイドが蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の重要な診断方法の１つとなる。アルツハイマー病をはじめとするアミロイドが蓄積する疾患の診断を目的として、体内、特に脳内アミロイドβ蛋白に特異的に結合し、これを染色する物質の検索が従来から行われている。かかる物質としてはコンゴーレッド（非特許文献１参照）およびチオフラビンＳ（非特許文献２参照）、チオフラビンＴ（非特許文献３）ならびにクリサミンＧおよびその誘導体（特許文献１および特許文献２参照）等が知られているが、アミロイドβ蛋白に対する結合特異性、血液−脳関門透過性、溶解度、毒性等の面から問題が少なくない。本発明者らは、アミロイドβ蛋白に対して特異性が高く、血液−脳関門透過性、溶解度が大きく、毒性が小さい等の特徴を有する種々の化合物化合物を見出している（特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６および特許文献７参照）。【０００６】  脳内蛋白がβシート構造をとることによって、その蛋白自身が病因となる疾患が知られている。アルツハイマー病においてはアミロイドβ蛋白およびタウ蛋白がβシート構造をとることによって、蛋白自身が病因または病因の一部となっていると考えられている。Ｙａｎｋｎｅｒらはアミロイドβ蛋白にβシート構造をとらせることにより神経細胞毒性を発揮することを初めて報告した（サイエンス、２４５巻、４１７−４２０ページ、１９８９）。その後、多くの追試が行われ、βシート構造をとったアミロイドβ蛋白が、神経細胞毒性を有することが確認された。このようにβシート構造をとったアミロイドβ蛋白、タウ蛋白に神経細胞毒性がみられることから、その細胞毒性を抑制する化合物は蛋白自身がβシート構造をとることによって病因、または病因の一部となる疾患、例えばアルツハイマー病の治療薬になりうることが示唆される。【０００７】  これまでアルツハイマー病の研究あるいは生検または剖検試料を用いた診断等には、アルツハイマー患者から脳切片を調製し、これを染色することが行われてきた。従来の染色剤は主として、コンゴーレッドまたはチオフラビンＳが用いられてきた。これらの染色剤はアルツハイマー病の２つの病理学的主徴と言われる老人斑および神経原線維変化の両者を染色するのが特徴である。【０００８】  しかしながら、これまでのコンゴーレッドまたはチオフラビンＳ等ではではびまん性老人斑は染色できない。またこれまでの多くの報告においてもびまん性老人斑を染色できる低分子有機化合物は見あたらない。アルツハイマー病における老人斑の主成分であるアミロイドβ（Ａβ）蛋白は同病が発症する（痴呆症状が��性化する）かなり以前（少なくとも１０年以上前）に蓄積が始まると考えられており、この初期の蓄積像がびまん性老人斑と考えられている。したがって、びまん性老人斑を早期に検出することにより、アルツハーマー病の早期発見・診断が可能になる。【０００９】  したがって、アルツハイマー病をはじめとするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の診断、アミロイドβ蛋白の特異的染色剤、ならびにアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の治療および予防のための、アミロイドβ蛋白に対する特異性の高い化合物に対する必要性が高まっている。【００１０】  アルツハイマー病のもう１つの病理組織学主徴は神経原繊維変化およびその主構成成分である過剰リン酸化されたタウ蛋白であるが、一般的にこれらはアミロイドβ蛋白よりは遅れて発現すると考えられている。しかし、神経原繊維変化はアミロイドβ蛋白に比し痴呆の程度とよく相関すると考えられている（Ｂｒａａｋ  Ｈ  ａｎｄ  Ｂｒａａｋ  Ｅ：Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．８２巻、２３９−２５９、１９９１年。Ｗｉｓｃｈｉｋら：Ｉｎ“Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ”，１０３−２０６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，２００１）。【００１１】  また、アルツハイマー病以外にタウ蛋白の脳内蓄積を主徴とする疾病（タウオパチイ）にはピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）などがあげられる。【００１２】  このようにタウ蛋白はアルツハイマー病を包含するタウ蛋白が蓄積する疾患に特徴的であり、密接な関連を有している。従って体内、特に脳内でβシート構造をとったタウ蛋白をマーカーとして検出することが、タウが蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の重要な診断法の１つとなる。【００１３】  アルツハイマー病をはじめとするタウが蓄積する疾患の診断を目的として、体内、特に脳脊髄液中のタウを定量する方法が２、３のグループから報告されている（非特許文献４および非特許文献５参照）。しかし、非侵襲的にインビボでのタウを定量することを目的としたプローブは世界的にみても全くみあたらない。【００１４】  したがって、アルツハイマー病をはじめとする神経原繊維変化が病因または病因の一部となる疾患の診断や治療のための、あるいは神経原繊維変化を染色するための、神経原繊維変化に対する特異性の高い化合物に対する必要性が高まっている。【００１５】  一方、これまでアルツハイマー病の研究あるいは生検または剖検試料を用いた診断等には、アルツハイマー患者から得た脳試料の切片を調製し、これを染色することが行われてきた。従来の染色剤は主として、コンゴーレッドまたはチオフラビンＳが用いられてきた。これらの染色剤はアルツハイマー病の２つの病理学的主徴と言われる老人斑および神経原線維変化の両者を染色するのが特徴である。【００１６】  しかしながら、これまでの多くの報告においても、神経原線維変化のみを染色できる低分子有機化合物は見あたらない。
【特許文献１】国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９１８明細書
【特許文献２】国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／０７８８９明細書
【特許文献３】特願平第２０００−０８００８２号明細書
【特許文献４】特願平第２０００−０８００８３号明細書
【特許文献５】特願平第２００１−０７６０７５号明細書
【特許文献６】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／０２２０４明細書
【特許文献７】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／０２２０５明細書
【非特許文献１】パチトラー（Ｐｕｃｈｔｌｅｒ）ら、ジャーナル・オブ・ヒストケミストリー・アンド・サイトケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第１０巻、３５頁、１９６２年
【非特許文献２】パチトラー（Ｐｕｃｈｔｌｅｒ）ら、ジャーナル・オブ・ヒストケミストリー・アンド・サイトケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第７７巻、４３１ページ、１９８３年
【非特許文献３】レバイン（ＬｅＶｉｎｅ）、プロテインサイエンス（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２巻、４０４−４１０ページ、１９９３年
【非特許文献４】イシグロ（Ｉｓｈｉｇｕｒｏ）ら、ニューロサイエンス・レター（Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．）、２７０巻、８１−８４ページ、１９９９年
【非特許文献５】イトウ（Ｉｔｏｈ）ら、アナルズ・オブ・ニューロロジー（Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．）、５０巻、１５０−１５６ページ、２００１年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】  本発明は、上記事情に鑑み、アミロイドβ蛋白に対する結合特異性、ならびに血液−脳関門透過性が高く、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブとして使用できる物質を提供するものである。また本発明は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブとして用いられる標識されたかかる物質、ならびにかかるプローブを含む画像診断用組成物およびキットも提供する。さらに本発明は、脳材料中のアミロイドβ蛋白、例えば、これを主成分とする老人斑の染色方法、ならびに蛋白のβシート構造が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療用の医薬組成物も提供する。また、本発明は、アルツハイマー病やタウオパチーの早期診断に有用な化合物、それを含む画像診断用組成物およびタウ蛋白染色用組成物も提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】  本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、式Ｉ（ａ）またはＩ（ｂ）に示す化合物またはその塩もしくは溶媒和物がアミロイドβ蛋白に対して高い結合特異性を有し、さらに血液−脳関門透過性も高いことを見出し、本発明を完成するに至った。特に、本発明化合物はアミロイドβ蛋白を特異的かつ鮮明に染色することから、特にアルツハイマー病、ダウン症候群などの正確な早期診断を可能にするものといえる。また、本発明化合物は血液−脳関門透過性も高いことから、生前における非侵襲性の診断が可能となる。【００１９】  すなわち、本発明は、
（１）アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の診断プローブとして使用される、式Ｉ：
2005016888.tif 000002
［式中、環Ａは５員環または６員環で、下記の構造：
2005016888.tif 000003
または
2005016888.tif 000004
2005016888.tif 000005
または
2005016888.tif 000006
を有し；
ＸおよびＹは独立してＮまたはＣＨであり；
ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ＋１であり；
ＧはＮまたはＣＨであり；
ＪはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｑＨ２ｑ＋１であり；
ｐは１〜４の整数であり；
ｑは１〜４の整数であり；
Ｒ１およびＲ２は独立して水素および炭素数１〜４個のアルキルからなる群より選択され；
Ｒ３は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、
Ｒ４およびＲ５は独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキル、〇一炭素数１〜４個のアルキルにこに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフェニルからなる群より選択されるか；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキル、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル（ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、およびフェニルからなる群より選択される１〜４個の基により置換されていてもよいベンゼン環を形成し；ただし、ｍが０であって、Ｒ４およびＲ５が一緒になってベンゼン環を形成する場合には環Ａはベンゼン環でなく；
ＤはＮＨ、Ｓ、Ｏ、またはＣＨ＝ＣＨであり；
ＥはＮまたはＣＨであり；
ｍは０〜４の整数であり、ただし、環Ａがベンゼン環である場合にはｍは２〜４の整数であり；
ｎは０〜４の整数である］
で示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（２）老人斑および／またはびまん性老人斑に特異的に結合する（１）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（３）ＢＦ−１８５、ＢＦ−１８７、ＢＦ−１８８、ＢＦ−１８９、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２１４、ＢＦ−２１５、ＢＦ−２２７およびＢＦ−２３１からなる群より選択される（２）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（４）標識されている（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（５）標識が放射性核種である（４）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（６）標識がγ線放出核種である（５）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（７）γ線放出核種が９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉおよび１３３Ｘｅからなる群より選択されるものである（６）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（８）標識が陽電子放出核種である（５）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（９）陽電子放出核種が１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏおよび１８Ｆからなる群より選択される（８）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
（１０）（４）ないし（９）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含む、アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の画像診断用組成物；
（１１）（４）ないし（９）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、アミロイドβ蛋白蓄積性疾患および／またはタウオパチーの画像診断用キット；
（１２）（１）ないし（３）のいずれかに記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む脳試料中のアミロイドβ蛋白の染色用組成物；
（１３）（２）または（３）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む脳試料中の老人斑および／またはびまん性老人斑の染色用組成物；
（１４）化合物がＢＦ−１８５およびＢＦ−２２７からなる群より選択されるものである（１３）に記載の染色用組成物；
（１５）（１）に記載の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含むアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療および／または予防用医薬組成物；ならびに
（１６）疾患がアルツハイマー病である（１５）に記載の医薬組成物
を提供するものである。【００２０】  さらに本発明は、
（１７）神経原線維変化を検出するためのプローブあるいは神経原線維変化の染色剤として使用される、下式ＩＩ：
2005016888.tif 000007
［式中、環Ａは
2005016888.tif 000008
または
2005016888.tif 000009
で示され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＧおよびＪは上記定義と同じであり；
Ｒ６はハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキル、Ｏ−炭素数１〜４個のアルキル（ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい）、またはフェニルであり；
ｋは０〜４の整数を意味する］
で示される（１）に記載の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；および
（１８）ＢＦ−２２１である（１７）に記載の化合物
も提供する。
【発明の効果】
【００２１】  本発明は、アミロイドβ蛋白に対する特異性が高く、血液−脳関門透過性が高く、しかも極めて安全性の高い化合物を提供する。さらに本発明は、神経原線維変化（およびその主構成成分であるタウ蛋白）に対する特異性が高く、血液−脳関門透過性が高く、しかも極めて安全性の高い化合物を提供する。したがって、例えば、本発明の化合物は、アルツハイマー病患者脳における老人斑および／またはびまん性老人斑の染色剤、あるいは神経原線維変化の検出剤として有用と考えられる。また、本発明によれば、本発明化合物を含む、アミロイドβ蛋白やタウ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物およびキットが提供される。かかる化合物、組成物、またはキットを用いることにより、疾病の早期における正確な診断が可能となる。さらに本発明によれば、アミロイドβ蛋白やタウ蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療用の、本発明の化合物を含有する医薬組成物、ならびに本発明の化合物を対象に投与することを特徴とする、アミロイドβ蛋白やタウ蛋白の蓄積が病因または病因の一部となる疾患の予防および／または治療方法も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２２】［図１］図１はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＳＢ（上段パネル）、チオフラビンＳ（中段パネル、上段パネルの隣接切片）およびＢＦ−１８５（下段パネル、中段パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１８５は主として老人斑（クサビ型矢印）を染色したのに対し、ＢＳＢおよびチオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（矢印）の両者を染色した。
［図２］図２はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８５（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１８５は主として老人斑（クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（矢印）の両者を染色した。
［図３］図３はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８５（左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１８５は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（クサビ型矢印）およびびまん性老人斑（破線丸印内）を染色した。
［図４］図４はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８７（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１８７はチオフラビンＳによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図５］図５はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８８（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１８８はチオフラビンＳによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図６］図６はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８９（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１８９はチオフラビンＳによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図７］図７はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９６（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１９６は主として老人斑（クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（矢印）の両者を染色した。
［図８］図８はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９６（左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１９６は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図９］図９はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９７（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１９７は主として老人斑（クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（矢印）の両者を染色した。
［図１０］図１０はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９７（左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−１９７は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図１１］図１１はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２０１（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−２０１はチオフラビンＳによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図１２］図１２はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２０１（左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−２０１は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図１３］図１３はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２１４（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−２１４はチオフラビンＳによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図１４］図１４はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２１５（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−２１５はチオフラビンＳによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
［図１５］図１５はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２７（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−２２７は主として老人斑（クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（矢印）の両者を染色した。
［図１６］図１６はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２７（左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−２２７は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（クサビ型矢印）およびびまん性老人斑（破線丸印内）を染色した。
［図１７］図１７はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２１（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）との染色性の比較を示す。ＢＦ−２２１はチオフラビンＳによって染色される神経原線維変化（矢印）を染色した。
［図１８］図１８はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２１（左パネル）と抗リン酸化タウ抗体（ｐＳｅｒ４２２）（右パネル、左パネルの隣接切片）との染色性の比較を示す。ＢＦ−２２１は抗リン酸化タウ抗体（ｐＳｅｒ４２２）によって染色される神経原線維変化（矢印）を染色した。
［図１９］図１９はアルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２３１（左パネル）とチオフラビンＳ（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。ＢＦ−２３１はチオフラビンＳによって染色される老人斑（クサビ型矢印）を染色した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】  本発明のアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブとして使用される物質は上の一般式Ｉで示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物である。式Ｉの化合物のいくつかの例を表１に示した。好ましい本発明化合物はＢＦ−１８５、ＢＦ−１８７、ＢＦ−１８８、ＢＦ−１８９、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−２０１、ＢＦ−２１４、ＢＦ−２１５、ＢＦ−２２７およびＢＦ−２３１などであり、特にＢＦ−１８５およびＢＦ−２２７はびまん性老人斑に対する特異性が高くアルツハイマー病の早期発見において有用である。さらにＢＦ−２２７は脳からのクリアランスがすみやかである点でも好ましい。【００２４】  本発明の式Ｉで示される化合物のうち、式ＩＩで示される化合物（上記（１７）参照）またはその塩もしくは溶媒和物は神経原線維変化をよく認識し、神経原線維変化を認識するプローブおよび神経原線維変化の染色剤として有用である。かかる化合物の典型例はＢＦ−２２１である。また、ＢＦ−２３９、ＢＦ−２４０およびＢＦ−２５５も神経原線維変化に対する選択性が高い。【００２５】  本発明の化合物は極めて毒性が低く、脳移行性が高いものである点からも、有用性が高い。【００２６】  なお、表１において、チオフラビンＴはβ構造をよく認識する化合物として知られており、参考として掲載した。
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【００２７】  以下、式Ｉの化合物の置換基について詳細に説明する。さらに、式Ｉの化合物の塩、溶媒和物、誘導体、および標識方法などについても説明する。当業者であれば、これらの式Ｉの化合物に関する説明を、式ＩＩの化合物について適宜あてはめることができる。【００２８】  本明細書において、「炭素数１〜４個のアルキル」という場合、メチル、エチル、プロピル、ブチル、およびこれらの構造異性体を包含するものとする。本明細書において「ハロゲン」という場合、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素をいうものとする。【００２９】  環Ａは
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または
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または
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で示される５員環または６員環であり、環Ａが５員環である本発明の化合物は脳からのクリアランスがすみやかである点で好ましい。【００３０】  ＸおよびＹは独立して窒素（Ｎ）またはＣＨである。【００３１】  Ｚは酸素（Ｏ）、イオウ（Ｓ）、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ＋１であり、ここにｐは１〜４の整数である。好ましいｐの値は１である。【００３２】  ＧはＮまたはＣＨである。【００３３】  ＪはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ＋１であり、ここにｑは１〜４の整数である。好ましいｐの値は１である。【００３４】  Ｒ１およびＲ２は独立して水素および炭素数１〜４個のアルキルからなる群より選択される。好ましいＲ１およびＲ２の例としては水素、メチルが挙げられる。Ｒ１およびＲ２は同じであってもよく、異なっていてもよい。【００３５】  Ｒ３は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキルおよびフェニルからなる群より選択され、Ｈ、ＯＨおよびメチルが好ましい。【００３６】  Ｒ４およびＲ５は同じであってもよく、異なっていてもよく、独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキル、フェニルおよびＯ−炭素数１〜４個のアルキル（ここに炭素数１〜４個のアルキルはハロゲンで置換されていてもよい）からなる群より選択されるか；あるいはＲ４およびＲ５は一緒になって、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＨ２、ＮＯ２、炭素数１〜４個のアルキルおよびフェニルからなる群より選択される１〜４個の基により置換されていてもよいベンゼン環を形成し；ただし、ｍが０であって、Ｒ４およびＲ５が一緒になってベンゼン環を形成する場合には環Ａはベンゼン環でない。好ましいＲ４およびＲ５は水素、メチルおよびＯ−ハロゲンにより置換されていてもよいメチルもしくはエチルである。また、Ｒ４およびＲ５が一緒になって上記の置換されていてもよいベンゼン環を形成する場合も好ましい。かかるベンゼン環がＯＨで置換されている場合も好ましい。【００３７】  ＤはＮＨ、Ｓ、ＯまたはＣＨである。【００３８】  ＥはＮまたはＣＨである。【００３９】  ｍは０〜４の整数であり、ただし、環Ａがベンゼン環である場合にはｍは２〜４の整数である。【００４０】  ｎは０〜４の整数である。【００４１】  好ましいｍの値は１ないし３であり、好ましいｎの値は０または１である。ｎが０以外の場合、Ｒ３置換基は結合する環のいずれの位置に存在していてもよい。２個以上のＲ３置換基が存在する場合、それぞれが同一であってもよく、また異なっていてもよい。【００４２】  また、化合物中の２つの環の間に二重結合が存在する場合には、シス、トランス双方の異性体が式Ｉの化合物に存在しうる。【００４３】  式Ｉの化合物の塩も本発明に包含される。式Ｉの化合物中の窒素原子またはいずれかの官能基とともに塩が形成されてもよい。化合物中にカルボキシル基またはスルホン酸基が存在するような場合、これと金属との間に塩が形成されてもよい。かかる塩の例としては、リチウム、ナトリウム、カリウムのごときアルカリ金属との塩、マグネシウム、カルシウム、バリウムのごときアルカリ土類金属との塩等が挙げられる。式Ｉの化合物が��酸基を含む場合、その水素がナトリウム、カリウム等の金属となっている化合物も、本発明に包含される。さらに、式Ｉの化合物と金属塩とで形成される錯体（例えば塩化マグネシウム、塩化鉄のごとき金属塩とで形成される錯体）が存在する場合には、これらも本明細書においては式Ｉの化合物の塩に含めることとする。対象の体内において式Ｉの化合物の塩を使用する場合には、それが医薬上許容される塩であることが好ましい。式Ｉの化合物の医薬上許容される塩としては、例えば、塩素、臭素、ヨウ素のごときハロゲン化物イオンとの塩、あるいはナトリウム、カリウム、カルシウムのごとき金属との塩がある。かかる塩は本発明に包含される。また、式Ｉの化合物の溶媒和物も本発明に包含される。溶媒和物としては、水和物、メタノール和物、エタノール和物、アンモニア和物等が挙げられる。対象の体内において式Ｉの化合物の溶媒和物を使用する場合には、それが医薬上許容される溶媒和物であることが好ましい。医薬上許容される溶媒和物としては、水和物、エタノール和物等が挙げられる。本明細書において、「本発明化合物」または「本発明の化合物」という場合、式Ｉ（式ＩＩの化合物を含むことはいうまでもない）の化合物、ならびにその塩および溶媒和物を包含するものとする。【００４４】  さらに本発明は、本発明の化合物、すなわち式Ｉまたは式ＩＩで示される化合物の合成のための前駆体として使用できる化合物も提供する。当業者は、かかる前駆体を、目的とする本発明の化合物の構造から容易に設計することができ、その合成をすることができる。あるいはかかる前駆体は市販されているものを修飾することによって得ることもできる。本発明の化合物の前駆体としては、ＢＦ−２２３（ＢＦ−２２４の前駆体）、ＢＦ−２２６（ＢＦ−２２７の前駆体）、ＢＦ−２４６（ＢＦ−２４７の前駆体）、ＢＦ−２５１（ＢＦ−２５２の前駆体）、ＢＦ−２５３（ＢＦ−２５４の前駆体）などが挙げられる。【００４５】  これらの前駆体に標識、好ましくは放射性標識を付しておくことが好ましく、ＰＥＴ用化合物の合成には１８Ｆにて、ＳＰＥＣＴ用化合物の合成には１２３Ｉにて標識しておくことが好ましい。例えば、ＢＦ−２２３、ＢＦ−２２６、ＢＦ−２５１、ＢＦ−２５３を１８Ｆで標識しておいてもよく、ＢＦ−２４６を１２３Ｉで標識しておいてもよい。【００４６】  したがって、本発明は、
式ＩまたはＩＩの化合物を合成するための前駆体化合物；
ＢＦ−２２３、ＢＦ−２２６、ＢＦ−２４６、ＢＦ−２５１およびＢＦ−２５３からなる群より選択される上記前駆体化合物；ならびに
標識されている、好ましくは１８Ｆまたは１２３Ｉで標識されている上記前駆体化合物も提供する。なお、標識位置や方法については式ＩまたはＩＩの化合物の標識に関する説明を参照のこと。【００４７】  本発明においては、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患における体内のアミロイドβ蛋白（本明細書において「Ａβ蛋白」または「Ａβ」ともいう）にインビボにおいて特異的に結合する式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブとして使用する。本発明化合物により老人斑が鮮明に染色される。本明細書における「Ａβが蓄積する疾患」とは、Ａβ蛋白の脳内蓄積を主徴とする疾病をいい、Ａβ蛋白、すなわち老人斑をマーカーとして診断可能な疾病としては、アルツハイマー病、ダウン症候群などがあげられる。【００４８】  アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の診断においては本発明化合物を標識したものをプローブとして使用するのが一般的である。標識には、蛍光物質、アフィニティー物質、酵素基質、放射性核種等がある。アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断には通常、放射性核種で標識したプローブを使用する。当該分野においてよく知られた方法により種々の放射性核種で本発明化合物を標識することができる。例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１３１Ｉ等は以前から使用されている放射性核種であり、インビトロでの利用例が多い。画像診断プローブおよびその検出手段に求められる一般的要件としては、インビボで診断できること、患者へのダメージが少ないこと（特に非侵襲的であること）、検出感度が高いこと、半減期が適当な長さであること（標識プローブ調製時間、診断時間が適当であること）等が挙げられる。そこで、最近では、高い検出感度と物質透過性を示すγ線を利用した陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）またはγ線放出核種によるコンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）が用いられるようになってきた。このうち、ＰＥＴは、陽電子放出核種から正反対の方向に放射される２本のγ線を１対の検出器により同時計数法により検出するので、解像力や定量性に優れた情報が得られるので好ましい。ＳＰＥＣＴ用には９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ等のγ線放出核種で本発明化合物を標識することができる。９９ｍＴｃおよび１２３ＩがＳＰＥＣＴによく用いられている。ＰＥＴ用には１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６２Ｃｕ、６８Ｇａ、７６Ｂｒ等の陽電子放出核種で本発明化合物を標識することができる。陽電子放出核種のなかでも、半減期が適当であること、標識しやすさ等の点から１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆが好ましく、１８Ｆが特に好ましい。放射性核種、例えば陽電子放出核種、γ線放出核種等の放射線放出核種での本発明化合物の標識位置は、式Ｉ中のいずれの位置であってもよい。あるいは環上の水素が陽電子放出核種、γ線放出核種等の放射線放出核種で置換されていてもよい。上述のごとく式Ｉの化合物標識位置はいずれの位置であってもよいが、好ましい標識位置は化合物中のアルキル基および／またはフェニル環上である。かかる標識された式Ｉの化合物も本発明に包含される。例えば、本発明化合物を１８Ｆで標識する場合、側鎖のいずれかが１８Ｆで標識されていてもよく、あるいは環上の水素が１８Ｆで置換されていてもよい。また例えば、Ｒ１〜Ｒ５のいずれかに含まれる水素を１８Ｆ等で置換してもよい。【００４９】  一般的には、これらの核種はサイクロトロンまたはジェネレーターと呼ばれる装置により産生される。当業者は、産生核種に応じた産生方法および装置が選択可能である。そのようにして産生された核種を用いて本発明化合物を標識することができる。【００５０】  これらの放射性核種で標識された標識化合物の製造方法は当該分野においてよく知られている。代表的な方法としては、化学合成法、同位体交換法および生合成法がある。化学合成法は従来から広く用いられており、放射性の出発物質を用いること以外は通常の化学合成法と本質的に変わらない。この方法により種々の核種が化合物に導入されている。同位体交換法は、簡単な構造の化合物中の３Ｈ、３５Ｓ、１２５Ｉ等を複雑な構造の化合物中に移して、これらの核種で標識された複雑な構造の化合物を得る方法である。生合成法は１４Ｃ、３５Ｓ等で標識した化合物を微生物等の細胞に与えてこれらの核種が導入された代謝産物を得る方法である。【００５１】  標識位置については、通常の合成と同様に合成スキームを目的に応じて設計することにより、所望位置に標識を導入することができる。かかる設計は当業者によく知られている。【００５２】  また、例えば、比較的半減期の短い１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ等の陽電子放出核種を用いる場合、病院等の施設内の設置された（超）小型サイクロトロンから所望核種を得て、上記の方法により所望化合物を所望位置で標識して、即座に診断、検査、治療等に使用することも可能となっている。【００５３】  これらの当業者に公知の方法により、本発明化合物の所望位置に所望核種を導入して標識することができる。【００５４】  本発明標識化合物の対象への投与は局所的であってもよく、あるいは全身的であってもよい。投与経路としては、皮内、腹腔内、静脈、動脈、または脊髄液への注射または輸液等があるが、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因により選択できる。本発明プローブを投与して、アミロイドβ蛋白への結合および崩壊のための十分な時間経過後、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ等の手段で検査部位を調べることができる。これらの手段は、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因に応じて適宜選択できる。【００５５】  放射性核種で標識された本発明化合物の用量は、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の年齢、身体的状態、性別、疾病の程度、検査部位等により様々である。特に、対象の被曝量については十分に注意する必要がある。例えば、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆのごとき陽電子放出核種により標識された本発明化合物の放射能量は、通常には、３．７メガベクレルないし３．７ギガベクレル、好ましくは、１８メガベクレルないし７４０メガベクレルの範囲である。【００５６】  また本発明は、本発明化合物を含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物を提供する。本発明組成物は、本発明化合物および医薬上許容される担体を含む。組成物中の本発明化合物は標識されていることが好ましい。上記のごと���標識法は様々であるが、インビボでの画像診断用途には放射性核種（特に１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆのごとき陽電子放出核種）で標識されていることが望ましい。本発明組成物の形態は、その目的からすれば注射あるいは輸液可能な形態であることが好ましい。したがって、医薬上許容される担体は液体であるものが好ましく、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、蒸留水等のごとき水性溶媒、あるいはポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、プロピレングリコール等のごとき非水性溶媒があるが、これらに限らない。担体と本発明化合物との配合比率は、適用部位、検出手段等に応じて適宜選択できるが、通常には１０万対１ないし２対１の比率であり、好ましくは１万対１ないし１０対１の比率である。また、本発明組成物はさらに公知の抗菌剤（例えば、抗生剤等）、局所麻酔剤（例えば、塩酸プロカイン、塩酸ジブカイン等）、バッファー（例えば、トリス−塩酸バッファー、ヘペスバッファー等）、浸透圧調節剤（例えば、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム等）等を含有していてもよい。【００５７】  さらに本発明は、本発明化合物を必須の構成成分として含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用キットを提供する。通常には、キットは、本発明化合物、それを溶解する溶剤、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分を別個に、あるいはいくつかを一緒にしてそれぞれの容器に入れたものをひとまとめにしたものである。本発明化合物は未標識であっても、標識されていてもよい。未標識の場合、上で説明したような通常の方法により、使用前に本発明化合物を標識することができる。また本発明化合物は凍結乾燥粉末等の固形として提供してもよく、あるいは適当な溶媒中に溶解して提供してもよい。溶剤としては上述の本発明組成物に用いる担体と同様のものであってよい。また、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分も上述の本発明組成物に使用するものと同様のものであってよい。容器は種々のものを適宜選択できるが、本発明化合物への標識導入操作に適した形状とすることもでき、化合物の性質に応じて遮光性の材質のものとしてもよく、あるいは患者への投与に便利なようにバイアル、または注射器等の形状とすることもできる。また、キットは診断に必要な器具類、例えば注射器、輸液セット、あるいはＰＥＴ装置に使用する器具類等を適宜含んでいてもよい。通常、キットには説明書を添付する。【００５８】  さらに、本発明化合物がアミロイドβ蛋白に特異的に結合することから、本発明化合物を未標識のまま、あるいは標識して、インビトロでのアミロイドβ蛋白の検出、定量等に使用することもできる。例えば、顕微鏡標本のアミロイドβ蛋白染色、試料中のアミロイドβ蛋白の比色定量、あるいはシンチレーションカウンターを用いたアミロイドβ蛋白の定量等に本発明化合物を使用してもよい。【００５９】  先にも述べたように、コンゴーレッドまたはチオフラビンＳ等ではアミロイドβ蛋白および神経原線維変化の両方を染色するが、本発明化合物はアミロイドβ蛋白に特異性が高い。したがって、本発明化合物は、例えば、アミロイドβ蛋白蓄積性���患の研究あるいは生前または死後における診断等に有用であり、例えば、アルツハイマー病患者脳の老人斑の染色剤として有用と考えられる。本発明化合物を用いた脳切片の染色は通常の方法で行うことができる。さらに、コンゴーレッドまたはチオフラビンＳ等のごとき従来の多くの化合物ではびまん性老人斑を染色できなかったが、アルツハイマー病における老人斑の主成分であるアミロイドβ（Ａβ）蛋白は同病が発症する（痴呆症状が顕性化する）かなり以前（少なくとも１０年以上前）に蓄積が始まると考えられており、この初期の蓄積像がびまん性老人斑と考えられている。したがって、びまん性老人斑を早期に検出することにより、アルツハーマー病の早期発見・診断が可能になる。その点、実施例や図面に示すように、本発明の化合物はびまん性老人斑も鮮明に染色するので、アルツハーマー病の早期発見・診断にも極めて有用である。【００６０】  したがって、本発明は、本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む脳試料中のアミロイドβ蛋白の染色用組成物、ならびに本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、脳試料中のアミロイドβ蛋白の染色用キット関する。さらに、本発明は本発明化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする脳試料中のアミロイドβ蛋白の染色方法にも関する。【００６１】  さらに上述のごとく、βシート構造をとったアミロイドβ蛋白に神経細胞毒性がみられることが判明している。かくして、本発明化合物は、蛋白自身がβシート構造をとることによって病因、または病因の一部となる疾患、例えばアルツハイマー病の治療薬になりうると考えられる。【００６２】  したがって、本発明は、
式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を投与することを特徴とするアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療および／または予防方法；
式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とするアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の診断方法；ならびに
アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療、予防、または診断するための組成物を製造するための式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用
を提供する。【００６３】  蛋白のβシート構造が病因または病因の一部となる疾患としては、例えば、アルツハイマー病やダウン症候群等が挙げられる。【００６４】  かかる医薬組成物の形態は特に限定されないが、液体処方が好ましく、特に注射用処方が好ましい。かかる注射用処方を脳内に直接注入することもでき、あるいは、実施例３にて示すように本発明化合物は血液／脳関門透過性が高いので、上記医薬組成物を静脈注射または静脈点滴用に処方して投与することもできる。かかる液体処方の調製は当該分野にて公知の方法で行うことができる。溶液の調製は、例えば、本発明化合物を適当な担体、注射用水、生理食塩水、リンゲル液等に溶解し、フィルター等で滅菌し、その後、適当な容器、例えば、バイアルまたはアンプルに充填する。また、溶液を凍結乾燥させ、使用時に適当な担体で再度溶液に復元することも可能である。懸濁液の調製は、例えば、本発明化合物を例えばエチレンオキサイドにさらすことにより滅菌し、次いで、滅菌済み液体担体懸濁することにより行うことができる。【００６５】  本発明化合物の投与量は、患者の病状、性別、年齢、体重等に左右されるが、一般的には、体重７０ｋｇの成人の場合、１日あたり０．１ｍｇないし１ｇ、好ましくは１ｍｇないし１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇないし５０ｍｇである。一定期間かかる投与量で処置を行い、結果により投与量を増減することができる。【００６６】  さらに上述のごとく、本発明化合物のうち、式ＩＩで示される化合物またはその塩もしくは溶媒和物はタウ蛋白に対する特異性が高く、神経原線維変化を認識するプローブ、あるいは神経原線維変化の染色剤として使用することができる。したがって、本発明は、神経原線維変化の画像診断プローブとして使用される式ＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を提供する。【００６７】  したがって、本発明は、
式ＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする神経原線維変化を検出あるいは染色する方法；ならびに
神経原線維変化を検出あるいは染色するための組成物を製造するための式ＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用
を提供する。【００６８】  上記の神経原線維変化の検出または染色に用いられる好ましい本発明の式ＩＩの化合物はＢＦ−２２１である。また、ＢＦ−２３９、ＢＦ−２４０およびＢＦ−２５５も神経原線維変化に対する選択性が高い。【００６９】  さらに本発明の化合物、すなわち式ＩまたはＩＩで示される化合物、その塩もしくは溶媒和物はコンフォメーション病の診断プローブとして、好ましくは、放射線放出核種にて標識された画像診断プローブとしても使用できる。さらに本発明の化合物はコンフォメーション病の治療および／または予防にも効果を有する。したがって、本発明は、
コンフォメーション病の診断用プローブとして使用される式ＩまたはＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
式ＩまたはＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含むコンフォメーション病の画像診断用組成物またはキット；
式ＩまたはＩＩの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含有する、コンフォメーション病の予防および／または治療用医薬組成物；
式ＩまたはＩＩの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、コンフォメーション病の診断方法；
コンフォメーション病を診断するための、式ＩまたはＩＩの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用；
式ＩまたはＩＩの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、コンフォメーション病の予防および／または治療方法；ならびに
コンフォメーション病を予防および／または治療するための、式ＩまたはＩＩの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用
にも関する。【００７０】  コンフォメーション病には、アルツハイマー病（老人斑、神経原線維変化）、レビー小体病、パーキンソン病、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、歯状核・淡蒼球ルイ体萎縮症、脊髄小脳変性症、Ｍａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ病、筋萎縮性側索硬化症、ダウン症候群、進行性核上性麻痺、ピック病、ＦＴＤＰ−１７（Ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  Ｌｉｎｋｅｄ  ｔｏ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １７）、ＬＮＴＤ（Ｌｉｍｂｉｃ  Ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  Ｔａｎｇｌｅ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ）、スダン好性白質萎縮症、アミロイドアンギオパチィ等が包含される。【００７１】  本発明の化合物は公知の物質、例えば市販物質から、公知の方法により合成することができる。目的とする本発明の化合物に応じて当業者は適宜、出発物質や合成方法を選択することができる。以下に本発明の化合物である、ＢＦ−１８５、ＢＦ−１９６、ＢＦ−１９７、ＢＦ−２１４、ＢＦ−２２５、ＢＦ−２２７、ＢＦ−２１５、ＢＦ−２２８の合成例を示す。【００７２】  ＢＦ−１８５（１０）の合成
2005016888.tif 000029
2005016888.tif 000030
２の合成
１（５ｇ、３０ｍｍｏｌ）および（Ｂｏｃ）２Ｏ（９．９ｇ、４５ｍｍｏｌ）にテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）を加え、６０℃で１５時間攪拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、得られた結晶を酢酸エチル／ｎ−ヘキサンより再結晶して２（７ｇ、８８％）を無色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１４９−１５１℃
３の合成
２（２．９ｇ、１１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０ｍｌ）溶液をアルゴン雰囲気下−６０℃に冷却しｔ−ブトキシカリウム（１．５ｇ、１３ｍｍｏｌ）／テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）を１５分要し滴下し、同温度で１時間攪拌した。−２０℃に昇温しヨウ化メチル（２．３７ｇ、１７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を５分要し滴下し−２０℃〜室温で１時間攪拌した。反応液に酢酸エチル、水を加え有機層を分取した。有機層は、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、３（３．１ｇ）を油状物として得た。本品は、そのまま、次工程に用いた。
４の合成
３（３．１ｇ、１１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液に水素化ホウ素ナトリウム（４．２ｇ、１１０ｍｍｏｌ）を加え５０℃に加温しメタノール（１８ｍｌ、４４０ｍｍｏｌ）を１時間要し滴下した。反応液を氷冷しアセトン（２２ｍｌ）を５分で滴下し、同温度で３０分攪拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、残渣に酢酸エチル、水を加え、有機層を分取した。有機層は、水、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４：１〜１：１）で精製し４（２．５ｇ、９５％）を油状物として得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２５５［Ｍ＋ＮＨ４］＋
５の合成
４（２．１ｇ、９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２５ｍｌ）溶液に二酸化マンガン（３．９ｇ、４５ｍｍｏｌ）を加え室温で１８時間攪拌した。不溶物をろ別し、ろ液を減圧濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４：１）で精製し５（２ｇ、９５％）を油状物として得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２５３［Ｍ＋ＮＨ４］＋
６の合成
５（１．５ｇ、６．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液にトリエチル４−フォスフォノクロトネート（２．４ｇ、９．６ｍｍｏｌ）／テトラヒドロフラン（２ｍｌ）、合成ゼオライトＡ−４ビーズ（８ｇ）、水酸化リチウム１水和物（０．４ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を加え１８時間加熱還流した。反応液を氷冷後、セライトろ過しろ液を減圧濃縮し残渣に酢酸エチル、水を加え、有機層を分取した。有機層は、水、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝６：１）で精製し６（１．８ｇ、８５％）を油状物として得た。
ＩＲ（Ｎｅａｔ）２９７７、２９３２、１７０３、１６２５ｃｍ−１
ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３４９［Ｍ＋ＮＨ４］＋
７の合成
６（１．８ｇ  ５．４ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍｌ）溶液を氷冷し、４Ｎ水酸化ナトリウム溶液（２ｍｌ、８ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間攪拌した。反応液の溶媒を減圧留去し残渣に水４０ｍｌを加え溶解しジエチルエーテル４０ｍｌにて洗浄し、水層を５％クエン酸でＰＨ４〜５に調整した。生じた固体をろ取、水洗後、減圧乾燥した。固体を酢酸エチル／ｎ−ヘキサンより再結晶して７（１．３ｇ、８２％）を黄色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１７２−１７４℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）２５６６、１７０９、１６７９ｃｍ−１
ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３０２［Ｍ−Ｈ］−
８の合成
７（０．７７ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）溶液にＷＳＣ・ＨＣｌ（０．５９ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．４ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間攪拌した。反応液に２−アミノフェノール（０．８３ｇ、７．６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５ｍｌ）溶液を加え、室温で３時間攪拌した。反応液に酢酸エチル、水を加え有機層を分取した。有機層は、水、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４：１〜２：１）で精製し８（１．０ｇ、１００％）を固体として得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３９５［Ｍ＋Ｈ］＋
９の合成
８（０．９８ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液にジイソプロピルアゾジカルボキシレート（０．６０ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．７８ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え６０℃で５時間攪拌した。反応液の溶媒を減圧留去し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１０：１〜６：１）で精製し、得られた結晶を酢酸エチル／ｎ−ヘキサンより再結晶して９（０．８１ｇ、８６％）を橙色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１２３−１２４℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６９４、１６２９ｃｍ−１
ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３７７［Ｍ＋Ｈ］＋
１０の合成
９（０．７０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１５ｍｌ）溶液を氷冷し、トリフルオロ酢酸（２．５ｍｌ）を加え、同温度で１時間攪拌した。反応液を１０％炭酸カリウム水溶液（５０ｍｌ）に注ぎ５分攪拌後、酢酸エチル５０ｍｌを加え有機層を分取した。有機層は、水、飽和食塩水で洗浄後、乾燥して、溶媒を留去し酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで再結晶して１０（０．３５ｇ、６８％）を赤色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１４３−１４４℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）３３３０、３２９２、１５８３ｃｍ−１
ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２７７［Ｍ＋Ｈ］＋【００７３】ＢＦ−１９６（１３）の合成
2005016888.tif 000031
１１（４１１ｍｇ，２．７５ｍｍｏｌ）および文献法１０により合成した１２（４３０ｍｇ，２．７５ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（３ｍｌ）溶液に、室温撹拌下５０％（ｗ／ｗ）水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液に水を加え、室温で１５分撹拌し、析出物をろ取、水洗した。粗結晶をエタノールで再結晶し、１３（５５４ｍｇ，７０％）を黄色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１５８〜１６０℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６０６，１５５９ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２８８［Ｍ＋Ｈ］＋
１）Ｂｏｇａ，Ｃ．，Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｅ．Ｄ．，Ｆｏｒｌａｎｉ，Ｌ．，Ｔｏｄｅｓｃｏ，Ｐ．Ｅ．；Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，２０００，６０１，２３３．および
Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｉ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．Ｈ，；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，１９９０，３２９．【００７４】ＢＦ−１９７（１５）の合成
2005016888.tif 000032
１４（４２６ｍｇ，３．２０ｍｍｏｌ）および文献法１）により合成した１２（５００ｍｇ，３．２０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（３ｍｌ）溶液に、室温撹拌下５０％（ｗ／ｗ）水酸化ナトリウム水溶液（１．２ｍｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液に水を加え、室温で１５分撹拌し、析出物をろ取、水洗後、減圧乾燥した。粗結晶をエタノールで再結晶し、１５（５２９ｍｇ，６１％）を黄色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１８３〜１８５℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６２９，１５８１ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２７２［Ｍ＋Ｈ］＋
１）Ｂｏｇａ，Ｃ．，Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｅ．Ｄ，，Ｆｏｒｌａｎｉ，Ｌ．，Ｔｏｄｅｓｃｏ，Ｐ．Ｅ．；Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，２０００，６０１，２３３．および
Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｉ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．Ｈ，；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，１９９０，３２９．【００７５】ＢＦ−２１４（１８）の合成
2005016888.tif 000033
１７の合成
ジイソプロピルアミン（０．６０ｍｌ，４．２３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液に、アルゴン雰囲気下、−６０℃以下で１．５Ｍ  ｎ−ブチルリチウム／ｎ−ヘキサン溶液（２．８１ｍｌ，４．２３ｍｍｏｌ）を滴下し、除々に０℃まで昇温した。次に−７０℃以下で１６（０．５２ｍｌ，４．２３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（６ｍｌ）溶液を滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。同温で、文献法１）により合成した１２（６００ｍｇ，３．８４ｍｍｏｌ））のテトラヒドロフラン（５ｍｌ）溶液を滴下し、同温で３０分、０℃で３０分、室温で１時間撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４／１〜３／１）で精製し、得られた結晶にｎ−ヘキサンを加えて粉砕し、１７（４６３ｍｇ，４６％）を淡黄色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１０７〜１１２℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）３１５０，１６４９，１５７８ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２６８［Ｍ＋Ｈ］＋
１）Ｂｏｇａ，Ｃ．，Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｅ．Ｄ，，Ｆｏｒｌａｎｉ，Ｌ．，Ｔｏｄｅｓｃｏ，Ｐ．Ｅ．；Ｊ．ＯｒｇａｎＯｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，２０００，６０１，２３３．および
Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｉ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．Ｈ．；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，１９９０，３２９．
１８の合成
１７（４６３ｍｇ，１．７３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（１．０６ｍｌ，７．６２ｍｍｏｌ）を加え、氷冷撹拌下、メタンスルホニルクロライド（０．２９ｍｌ，３．８１ｍｍｏｌ）を滴下し、同温で１０分、室温で１時間撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５／１〜２／１）で精製後、酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで再結晶し、１８（２５４ｍｇ，５９％）を黄色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１６４〜１６６℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６２３，１５７３，１５４９ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２５０［Ｍ＋Ｈ］＋【００７６】ＢＦ−２２５（１９）の合成
2005016888.tif 000034
文献法１）により合成した１２（６４０ｍｇ，４．１ｍｍｏｌ）と２−アミノフェノール（４６９ｍｇ，４．３ｍｍｏｌ）を外温１５０℃で無溶媒で１時間攪拌した。反応液を室温まで冷却後、ジオキサン４０ｍｌと二酸化マンガン（３．５６ｇ，４１ｍｍｏｌ）を加え１００℃で１時間攪拌した。反応液を熱時セライト濾過し、温テトラヒドロフランで洗浄した。濾液を減圧濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝４／６）で精製した後、酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで再結晶し、１９（３５２ｍｇ，３５％）を結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１６０〜１６１℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６２５，１５６５ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２４６［Ｍ＋Ｈ］＋
１）Ｂｏｇａ，Ｃ．，Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｅ．Ｄ．，Ｆｏｒｌａｎｉ，Ｌ．，Ｔｏｄｅｓｃｏ，Ｐ．Ｅ，；Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，２０００，６０１，２３３．および
Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｉ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．Ｈ．；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，１９９０，３２９．【００７７】ＢＦ−２２７（２４）の合成
2005016888.tif 000035
２１の合成
文献法２）により合成した２０（１４．７ｇ，９８ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（８０ｍｌ）に溶解し、氷冷撹拌下６０％水素化ナトリウム（４．７ｇ，１１８ｍｍｏｌ）を数回に分けて加え、クロロメチルメチルエーテル（１０．０ｇ，１２４ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で２時間撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さを減圧蒸留して２１（１６．７ｇ，８４％）を無色油状物として得た。
ｂ．ｐ：１３３〜１３４℃（７ｍｍＨｇ）、ＩＲ（Ｎｅａｔ）１６１９ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：１９４［Ｍ＋Ｈ］＋
２）Ｆｕｊｉｔａ，Ｓ．，Ｋｏｙａｍａ，Ｋ．Ｉｎａｇａｋｉ，Ｙ．；Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８２，６８．
２２の合成
２１（３．１８ｇ，１６．４６ｍｍｏｌ）および文献法１）により合成した１２（２．５７ｇ，１６．４６ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（１８ｍｌ）に溶解し、室温撹拌下５０％（ｗ／ｗ）水酸化ナトリウム水溶液（６．０ｍｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液（２０ｍｌ）、水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さを酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで再結晶し、２２（４．０４ｇ，７４％）を橙色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１１２〜１１３℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６２５，１５６７ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３３２［Ｍ＋Ｈ］＋
１）Ｂｏｇａ，Ｃ．，Ｖｅｃｃｈｉｏ，Ｅ．Ｄ，，Ｆｏｒｌａｎｉ，Ｌ．，Ｔｏｄｅｓｃｏ，Ｐ．Ｅ．；Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，２０００，６０１，２３３．および
Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｉ．，Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．Ｈ．；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１，１９９０，３２９．
２３の合成
３）２２（２．５３ｇ，７．６３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液に、氷冷撹拌下、トリフルオロ酢酸（１７．５ｍｌ）を滴下し、室温で４０分撹拌した。反応液を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ９とし、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製後、酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで再結晶し、２３（１．６３ｇ，７４％）を黄色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：２６３〜２６４℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６２５，１５７５ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：２８８［Ｍ＋Ｈ］＋
２４の合成
４）２３（８００ｍｇ，２．７８ｍｍｏｌ）、２−フルオロエタノール（０．３５９ｍｌ，６．１３ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（１．６０７ｇ，６．１３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）に懸濁し、室温撹拌下、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．２０６ｍｌ，６．１３ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１７時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、残さをアミンシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロマトレックス（登録商標）ＮＨ）（トルエン）で精製後、酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで再結晶し、２４（６００ｍｇ，６５％）を黄色結晶として得た。
ｍ．ｐ．：１５１〜１５３℃、ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）１６３１，１５６７ｃｍ−１、ＡＰＣＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：３３４［Ｍ＋Ｈ］＋【００７８】ＢＦ−２１５（３１）の合成
2005016888.tif 000036
２６の合成
３００ｍｌの反応容器にアルゴン気流下、ＤＣＣ１６．５ｇ（０．０８ｍｏｌ）、乾塩化メチレン１６０ｍｌを仕込み、室温でＮ−アセチルグリシン（２５）９．４ｇ（０．０８ｍｏｌ）を加えた。
１時間室温で強撹拌した後、ジメチルアミン（２Ｍ  ｉｎ  ＴＨＦ）４０ｍｌ（０．０８ｍｏｌ）を５分間で滴下した。その後、室温で２１時間撹拌させた。反応混合物をろ過し、不溶物を除去した。溶媒留去後、残渣に酢酸エチルを加えて析出した不溶物をろ過して除き、再度溶媒留去し、８．５２ｇの２−アセチルアミノ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２６）を得た。このものをこのまま次工程に用いた。
収率７３．６％
２７の合成
２００ｍｌの反応容器にアルゴン気流下、トリフェニルホスフィン１０．９ｇ（０．０４２ｍｏｌ）、乾塩化メチレン８７ｍｌを仕込み、室温で臭素２．１３ｍｌ（０．０４２ｍｏｌ）の乾塩化メチレン１８ｍｌ溶液を１０分間で滴下した。滴下後、４０分同温で撹拌させた後、Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ１４．４ｍｌ、２−Ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏ−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｅｔａｍｉｄｅ（２６）５．０ｇ（０．０３５ｍｏｌ）の乾塩化メチレン３５ｍｌ溶液を一度に加えた。その後、１時間加熱還流させ、室温に戻して３時間撹拌させた。反応混合物にｎ−ヘキサン１４０ｍｌを加え、析出した結晶をろ過して除いた。ろ液を減圧濃縮し、残渣を減圧蒸留して１．８ｇの５−ジメチルアミノ−２−メチルオキサゾール（２７）を得た。
収率４０．８％
２８の合成
５０ｍｌの反応容器にアルゴン気流下、ジイソプロピルアミン１．６ｇ（０．０１６ｍｏｌ）、乾ＴＨＦ２０ｍｌを仕込み、−６０℃に冷却した。−５０℃以下でｎ−ブチルリチウムヘキサン溶液（１．５８ｍｏｌ／Ｌ）１０．２ｍｌを１０分間で滴下した。１５分間撹拌後、−６５℃以下で５−ジメチルアミノ−２−メチルオキサゾール（２７）１．０ｇ（０．００７９ｍｏｌ）の乾ＴＨＦ６ｍｌ溶液を４５分間かけて滴下した。滴下後、２５分間撹拌し、クロロリン酸ジエチルエステル１．４．ｇ（０．００８１ｍｏｌ）を−６５℃以下で２５分かけて滴下した。その後、同温で１時間撹拌した。反応混合物に水２０ｍｌを加え、酢酸エチル抽出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、溶媒留去し、１．７２ｇの５−ジメチルアミノ−２−［（ジエトキシホスフィニル）メチル］−オキサゾール（２８）を得た。このものをこのまま次工程に用いた。
収率８３．０％
２９の合成
３００ｍｌオートクレーブに２−メチルベンゾオキサゾール（１４）５７．０ｇ（０．４２８ｍｏｌ），Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール６６．３ｇ（０．５５６ｍｏｌ）、乾ＤＭＦ６２．６ｇを仕込み、アルゴンガス充填し、７２時間１４０℃で加熱撹拌させた。反応混合物を冷却後、氷水５００ｍｌに注加し、酢酸エチル抽出、水洗、無水硫酸ナトリウム乾燥後、溶媒留去した。得られた残渣をｎ−ヘキサンにて洗浄し、５７．７ｇの（２−ベンゾオキサゾール−２−イル−エテニル）−ジメチルアミン（２９）を得た。
収率７１．６％
３０の合成
３００ｍｌ反応容器に（２−ベンゾオキサゾール−２−イル−エテニル）−ジメチルアミン（２９）６．２２ｇ（０．０３３ｍｏｌ）、ＴＨＦ８０ｍｌを仕込み、水８０ｍｌを加えた。これを１０℃以下に冷却し、過ヨウ素酸ナトリウム２１．２ｇ（０．０９９ｍｏｌ）を加えた。１０分間同温にて撹拌した後、室温に戻して２時間撹拌した。反応混合物を水３００ｍｌに注加し、不溶物をろ過して除去した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒留去した。得られた残渣をｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／１にてシリカゲルカラム精製し、０．９０ｇのベンゾオキサゾール−２−カルボアルデヒド（３０）を得た。
収率１８．５％
３１の合成
２００ｍｌ反応容器にアルゴン気流下５−ジメチルアミノ−２−［（ジエトキシ−ホスフィニル）メチル］−オキサゾール（２８）１．６１ｇ（０．００６１ｍｏｌ）、乾ＴＨＦ７０ｍｌを仕込み、６０％水素化ナトリウム（油中）０．２４５ｇ（０．００６１ｍｏｌ）を１０分間かけて添加した。３０分間撹拌した後、ベンゾオキサゾール−２−カルボアルデヒド（３０）０．９ｇ（０．００６１ｍｏｌ）を１５分間かけて添加した。その後、１２時間撹拌させた。反応混合物を氷水に注加し、酢酸エチルにて抽出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、溶媒留去した。残渣をｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／１にてシリカゲルカラム精製し、６２０ｍｇの一次精製品を得た。
収率３９．８％
これをｎ−ヘキサンにて懸濁洗浄して３５０ｍｇの２−［２−（５−ジメチルアミノオキサゾール−２−イル）−エテニル］−ベンゾオキサゾール（３１）を得た。
収率２２．５％【００７９】ＢＦ−２２８（３４）の合成
2005016888.tif 000037
３２の合成
１００ｍｌの反応容器にアルゴン気流下、ジイソプロピルアミン４．５６ｇ（０．０４５ｍｏｌ）、乾ＴＨＦ１５ｍｌを仕込み、−７０℃に冷却した。−５０℃以下でｎ−ブチルリチムヘキサン溶液（１．５８ｍｏｌ／Ｌ）２８．５ｍｌ（０．０４５ｍｏｌ）を１５分間で滴下した。８０分間撹拌後、−６５℃以下で２，４，５−トリメチルオキサゾール（１６）２．５ｇ（０．０２２ｍｏｌ）の乾ＴＨＦ５０ｍｌ溶液を３０分間かけて滴下した。滴下後、３０分間撹拌し、クロロリン酸ジエチルエステル３．９８．ｇ（０．０２３ｍｏｌ）を−６０℃以下で３０分かけて滴下した。その後、同温で１時間撹拌した。反応混合物に水２５ｍｌを加え、酢酸エチル抽出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、溶媒留去し、２．８６ｇの４，５−ジメチル−２−［（ジエトキシホスフィニル）メチル］−オキサゾール（３２）を得た。
（純度８０％）
このものをこのまま次工程に用いた。
収率４２．１％（純度換算）
３４の合成
５００ｍｌ反応容器にアルゴン気流下４，５−ジメチル−２−［（ジエトキシホスフィニル）−メチル］−オキサゾール２．５ｇ（０．００８１ｍｏｌ：純度換算）、乾ＴＨＦ７０ｍｌを仕込み、６０％水素化ナトリウム（油中）０．３２３ｇ（０．００８１ｍｏｌ）を１０分間かけて添加した。１０分間撹拌した後、４−ジメチルアミノシナムアルデヒド（３３）１．４２ｇ（０．００８１ｍｏｌ）を１０分間かけて添加した。その後、２時間撹拌させた。反応混合物を氷水に注加し、酢酸エチルにて抽出、飽和食塩水洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、溶媒留去した。残渣をｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１→５／１にてシリカゲルカラム精製し、９４０ｍｇの一次精製品を得た。
収率４３．２％
これをｎ−ヘキサンにて懸濁洗浄して５１０ｍｇの４，５−ジメチル−２−｛４−（４−ジメチルアミノフェニル）−ブタ−１，３−ジエニル｝オキサゾール（３４）を得た。
収率２３．５％【００８０】  次に本発明化合物のスクリーニング方法について説明する。本発明化合物のなかにはチオフラビンＴ法では蛍光波長がチオフラビンＴと重なるためにスクリーニングが不可能なものがあった。それらの化合物については以下の新規スクリーニングを導入した。
（１）アミロイドβ蛋白（ペプチド研より購入）はリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶解し３７℃で４日間放置した。
（２）同緩衝液に溶解したコンゴーレッド５０μｌを９６穴マイクロプレートに分注した（最終濃度０．１μＭ）。
（３）アミロイドβ蛋白１００μｌずつを添加（最終濃度５μＭ）し、３０分間放置した。
（４）同緩衝液に溶解した被験化合物を１００μｌずつ添加（最終濃度１０マイクロＭ）し、６０分間放置した。
（５）蛍光マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製、ｆｍａｘ）を用いて、あらかじめ測定してあった、最適励起および測定波長で測定した。
（６）被験化合物とアミロイドβ蛋白とコンゴーレッド共存下の蛍光度をＡ、被験化合物とコンゴーレッド共存下のそれをＢ、被験化合物とアミロイドβ蛋白共存下のそれをＣ、被験化合物単独のそれをＤとすると被験化合物のβ構造認識度は以下の式で算出した。
被験化合物β構造認識度（％）＝｛（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
（７）このβ構造認識度が大きいほど被験化合物はアミロイドβ蛋白に対する結合特異性が高いといえる。【００８１】  次に発明化合物のアルツハイマー病患者脳切片上での染色性試験について説明する。
（１）病理学的にアルツハイマー病と確定診断された患者および正常高齢者の、側頭葉または海馬における脳標本を使用した。標本は共同研究先である福祉村病院から提供を受け、患者遺族から研究目的での使用に対する承諾を得ている（ビーエフ研究所倫理委員会許可Ｎｏ．ＲＳ−９９−０２）。
（２）パラフィン包埋された脳組織は厚さ６μｍあるいは８μｍで薄切し、スライドグラス上に伸展、乾燥させた。パラフィン脳切片はキシレン１０分×２、１００％エタノール１５分×２、９５％エタノール１５分×２、流水洗１０分の順で脱パラフィン化した。
（３）本発明化合物による染色の前処理として、リポフスチンによる自己蛍光を除去する処置を行った。はじめに、脱パラフィン化した切片を１０％ホルマリン溶液に６０分間浸潰し、ＰＢＳで５分間洗浄した後、０．２５％ＫＭｎＯ４溶液に９０分間浸潰した。ＰＢＳにて２分間×２回洗浄した後、０．１％Ｋ２Ｓ２Ｏ５／シュウ酸溶液中に約３０秒間浸し、さらにＰＢＳにて２分間×３回洗浄を行った。
（４）５０％エタノールに溶解した１００μＭ本発明化合物溶液を約１５０μｌ滴下し、１０分間反応させた。水道水中に５回つけた後、５０％エタノールに３〜５回つけて速やかに分別を行い、その後ＰＢＳに６０分間浸漬した上、Ｆｌｕｏｒ  Ｓａｖｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）で封入し、蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ，Ｅｃｌｉｐｓ  Ｅ８００）を用いて鏡検した。画像はデジタルカメラ（Ｐｌａｒｏｉｄ  ＰＤＭＣＩＩ）にて撮影した。【００８２】  免疫染色は以下のように行った。
（ａ）アミロイドβ蛋白の免疫染色方法：
（１）脱パラフィン後、蒸留水中で２分×２で洗浄を行い、イムノペンにより組織を囲んだ後、蟻酸を約１５０μｌ滴下し、室温で５分間静置した。水道水で５分間洗浄した後、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０に２分間浸漬し、その後、０．０５％トリプシン溶液を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１５分間反応させた。
（２）氷浴中、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で５分間×２回洗浄した後、ブロッキング用血清を２滴滴下して、３７℃、３０分間反応させ、余分な水分を除去した後に、アミロイドβ蛋白の特異抗体である６Ｆ／３Ｄ（ＤＡＫＯ社、１：５０希釈）を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１時間反応させた。
（３）さらに冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×５回洗浄した後、抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ヤギ、ビオチン結合溶液を２滴滴下して３７℃、１時間反応させ、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した上でＡＢＣ溶液（ストレプトアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体溶液）を２滴滴下して、３０分間静置した。再び、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した後、ＤＡＢ溶液（２０ｍｌの０．０５ｍｏｌ／ｌトリス塩酸緩衝液にＤＡＢ１０ｍｇを溶解し、使用直前に３％過酸化水素水１００μｌを添加）を約１５０μｌ滴下して、十分な発色を得たのち、蒸留水で１分間洗浄し、反応を停止させ、封入後、鏡検した。【００８３】（ｂ）神経原線維変化の免疫染色方法
（１）神経原線維変化の免疫染色は以下のように行った。脱パラフィン後、蒸留水中で２分×２で洗浄を行い、イムノペンにより組織を囲んだ後、３％過酸化水素水（メタノールで希釈）を約１５０μｌ滴下し、室温で１０分間静置した。
（２）冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０に５分間×２回洗浄した後、ブロッキング用血清を２滴滴下して、３７℃、３０分間反応させた。余分な水分を除去した後に、リン酸化タウの特異抗体であるｐＳｅｒ４２２（Ｗａｋｏ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  Ｔａｕ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｓｔａｉｎ  Ｋｉｔ  ２９９−５７３０１）を２滴滴下して、４℃、１晩反応させた。
（３）翌日、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×５回洗浄した後、抗ウサギＩｇＧ，ヤギ，ビオチン結合溶液を２滴滴下して３７℃、１時間反応させ、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した上でＡＢＣ溶液（ストレプトアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体溶液）を２滴滴下し、３０分間静置した。
（４）再び、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した後、ＤＡＢ溶液（２０ｍｌの０．０５ｍｏｌ／ｌトリス塩酸緩衝液にＤＡＢ１０ｍｇを溶解し、使用直前に３％過酸化水素水１００μｌを添加）を約１５０μｌ滴下して、十分な発色を得たのち、蒸留水で１分間洗浄し、反応を停止させ、封入後、鏡検した。なおブロッキング用血清、抗ウサギＩｇＧ，ヤギ，ビオチン結合溶液、ＡＢＣ溶液はＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  Ｔａｕ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｓｔａｉｎ  Ｋｉｔ（Ｗａｋｏ  ２９９−５７３０１）に含まれるものを使用した。【００８４】  以下に本発明化合物の特性に関する試験方法を説明する。
（Ａ）急性毒性試験
本発明化合物の急性毒性をマウスを用いて静脈内投与で検討した。Ｃｒｊ：ＣＤ１系雄性マウスを一群４匹として使用した（各群の平均体重は３１〜３２ｇであった）。各化合物は１Ｎ  ＨＣｌ、ポリエチレングリコール４００、蒸留水の混合液に溶解、またはＤＭＳＯに溶解後、蒸留水にて希釈し、尾静脈を介して投与し、以後７日まで観察した。【００８５】（Ｂ）脳移行試験
脳移行性の測定は下記の手順によった。
マウスに本発明化合物を静脈内投与し、インビボにおける脳移行性を測定した。
（１）マウスは３０〜４０ｇ（７週齢、ｎ＝３）のＳｌｃ：ＩＣＲ（日本ＳＬＣ）を用いた。
（２）被験化合物は１ＮＨＣｌ、ポリエチレングリコール４００、ＤＭＳＯの混合液で溶解、ＤＭＳＯまたはエチルアルコールで溶解後、精製水にて希釈して、尾静脈より注入し、投与より２分後にエーテル麻酔下で腹部大動脈からヘパリン処理注射筒を用いての採血、脳の採材をおこなった。
（３）血液は採血後４℃、１４，０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を血漿として−８０℃で保存した。脳（小脳を含む）は採材後−８０℃で保存した。
（４）使用時には血漿は溶解後、精製水で希釈した後、コンディショニングしたＣ１８固相抽出カートリッジ（ｂｏｎｄ  ｅｌｕｔｅ  Ｃ１８、２００ｍｇ、Ｖａｒｉａｎ）に添加しメチルアルコールにて溶出した。または溶解後ジエチルエーテル／シクロヘキサン混合液を加え震盪した後、遠心し油層を分注した。
（５）脳は使用時には凍結したまま湿重量を測定し生理食塩水を加え、ホモジェナイズを行った。ホモジェネートを１０分間遠心し、上清をコンディショニングしたＣ１８固相抽出カートリッジに添加し、メチルアルコールにて溶出を行った。または湿重量を測定後ジエチルエーテル／シクロヘキサン混合液を加えホモジネートし震盪した後、遠心し油層を分注した。
（６）高速液体クロマトグラフィを用い、吸光および蛍光を検出した。
（７）血漿、脳それぞれについて、投与量に対する血漿もしくは脳内の被験化合物含有量（％ＩＤ（ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｄｏｓｅ）／ｍｌまたはｇ）を求めた。【００８６】  以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明を何ら限定するものではない。
【実施例１】
【００８７】 実施例１  本発明化合物はアミロイドβ蛋白を特異的に認識する化合物である
上記のアミロイドβ蛋白を特異的に認識する化合物のスクリーニング方法により、表１に示す化合物が見出された（チオフラビンＴは参考として掲載）。化合物の構造については表１参照。本発明の化合物のβ構造認識度はチオフラビンＴよりも高い傾向を示した（表１）。【００８８】  次に、アルツハイマー病患者脳切片におけるこれらの化合物の染色特異性について調べた。
アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＳＢ（（ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ）−１−ブロモ−２，５−ビス−（３−ヒドロキシカルボニル−４−ヒドロキシ）スチリルベンゼン）（図１上段パネル）、チオフラビンＳ（図１中段パネル、上段パネルの隣接切片）およびＢＦ−１８５（図１下段パネル、図１中段パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１に示すようにＢＦ−１８５は主として老人斑（図１クサビ型矢印）を染色したのに対し、ＢＳＢおよびチオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（図１矢印）の両者を染色することがわかった。なお、ＢＳＢ染色はＤ．Ｍ．Ｓｋｏｖｒｏｎｓｋｙ，Ｂ．Ｚｈａｎｇ，Ｍ．−Ｐ．Ｋｕｎｇ，Ｈ．Ｆ．Ｋｕｎｇ，Ｊ．Ｏ．Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋｉ，Ｖ．Ｍ．−Ｙ．Ｌｅｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｏｃ．ＵＳＡ，９７，７６０９（２０００）の方法によった。【００８９】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８５（図２左パネル）とチオフラビンＳ（図２右パネル、図２左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図２に示すようにＢＦ−１８５は主として老人斑（図２クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（図２矢印）の両者を染色することがわかった。【００９０】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８５（図３左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（図３右パネル、図３左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図３に示すようにＢＦ−１８５は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（図３クサビ型矢印）およびびまん性老人斑（図３破線丸印内）を染色することがわかった。【００９１】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８７（図４左パネル）とチオフラビンＳ（図４右パネル、図４左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図４に示すようにＢＦ−１８７はチオフラビンＳによって染色される老人斑（図４クサビ型矢印）を染色することがわかった。【００９２】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８８（図５左パネル）とチオフラビンＳ（図５右パネル、図５左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図５に示すようにＢＦ−１８８はチオフラビンＳによって染色される老人斑（図５クサビ型矢印）を染色することがわかった。【００９３】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１８９（図６左パネル）とチオフラビンＳ（図６右パネル、図６左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図６に示すようにＢＦ−１８９はチオフラビンＳによって染色される老人斑（図６クサビ型矢印）を染色することがわかった。【００９４】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９６（図７左パネル）とチオフラビンＳ（図７右パネル、図７左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図７に示すようにＢＦ−１９６は主として老人斑（図７クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（図７矢印）の両者を染色することがわかった。【００９５】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９６（図８左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（図８右パネル、図８左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図８に示すようにＢＦ−１９６は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色さ��る老人斑（図８クサビ型矢印）を染色することがわかった。【００９６】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９７（図９左パネル）とチオフラビンＳ（図９右パネル、図９左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図９からわかるようにＢＦ−１９７は主として老人斑（図９クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（図９矢印）の両者を染色することがわかった。【００９７】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−１９７（図１０左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（図１０右パネル、図１０左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１０に示すようにＢＦ−１９７は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（図１０クサビ型矢印）を染色することがわかった。【００９８】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２０１（図１１左パネル）とチオフラビンＳ（図１１右パネル、図１１左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１１に示すようにＢＦ−２０１はチオフラビンＳによって染色される老人斑（図１１クサビ型矢印）を染色することがわかった。【００９９】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２０１（図１２左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（図１２右パネル、図１２左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１２に示すようにＢＦ−２０１は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（図１２クサビ型矢印）を染色することがわかった。【０１００】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２１４（図１３左パネル）とチオフラビンＳ（図１３右パネル、図１３左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１３からわかるようにＢＦ−２１４はチオフラビンＳによって染色される老人斑（図１３クサビ型矢印）を染色することがわかった。【０１０１】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２１５（図１４左パネル）とチオフラビンＳ（図１４右パネル、図１４左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１４からわかるようにＢＦ−２１５はチオフラビンＳによって染色される老人斑（図１４クサビ型矢印）を染色することがわかった。【０１０２】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２７（図１５左パネル）とチオフラビンＳ（図１５右パネル、図１５左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１５からわかるようにＢＦ−２２７は主として老人斑（図１５クサビ型矢印）を染色したのに対し、チオフラビンＳは老人斑および神経原線維変化（図１５矢印）の両者を染色することがわかった。【０１０３】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２７（図１６左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（図１６右パネル、図１６左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。ＢＦ−２２７は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（図１６クサビ型矢印）およびびまん性老人斑（破線丸印内）を染色することがわかった。【０１０４】  アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２３１（図１９左パネル）とチオフラビンＳ（図１９右パネル、図１９左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。図１９からわかるようにＢＦ−２３１はチオフラビンＳによって染色される老人斑（図１９クサビ型矢印）を染色することがわかった。��０１０５】  これまでのアルツハイマー病患者脳切片を染色する染色剤は主として、コンゴレッドまたはチオフラビンＳが用いられてきた。これらの染色剤はアルツハイマー病の２つの病理学的主徴と言われる老人斑および神経原線維変化の両者を染色するのが特徴である。【０１０６】  本発明化合物は、図１に示したように老人斑に対する特異性が高く、老人斑およびリン酸化アミロイドβ蛋白に両者を染色するチオフラビンＳとは特異性が異なっていた。このことより、本発明化合物の１の用途として、アルツハイマー病患者脳切片おける老人斑の選択的染色剤としての使用が考えられる。【０１０７】  特に、ＢＦ−１８５およびＢＦ−２２７はびまん性老人斑にも親和性を示し、これ鮮明に染色したので、アルツハイマー病の早期診断に有用であることがわかった。
【実施例２】
【０１０８】実施例２  急性毒性試験
次に各化合物について上記方法により行った急性毒性試験の結果を表２に示す。
【表２】
2005016888.tif 000038
【０１０９】  一般にヒトでのＰＥＴ撮影にはポジトロン標識および未標識化合物の総投与量として、１×１０−１２から１×１０−５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与が用いられ、多くはの場合、１×１０−１０から１×１０−７ｍｇ／ｋｇの静脈内投与が用いられる。これらの化合物の静脈内投与時の最大耐量とＰＥＴ撮影時に必要な総化合物量をみてみると、両者の間には少なくとも１０万倍以上の開きがあることから、これらの化合物はＰＥＴ撮影用のプローブとしては極めて安全性の高い化合物と考えられる。
【実施例３】
【０１１０】実施例３  脳移行性
表３にマウスにおける被験化合物静脈内投与２分後の脳移行を示した。被験化合物投与２分後の脳内含有量は、３．９〜１９．０％ＩＤ／ｇであった。
中枢神経系を対象としたＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ用化合物の脳移行性は、０．５％ＩＤ／ｇ以上あれば十分と考えられている。その意味で被験化合物は極めての脳移行性の高い化合物である。
【表３】
2005016888.tif 000039
【実施例４】
【０１１１】実施例４  本発明化合物の神経原繊維変化染色性
図１７に示すように、本発明の式ＩＩの化合物の典型例である化合物ＢＦ−２２１は、チオフラビンＳとは異なり、タウ蛋白（矢印）に対して特異性が高いことがわかった。すなわち、チオフラビンＳではタウ蛋白以外の蛋白もよく染色されたが、ＢＦ−２２１ではタウ蛋白以外の蛋白はあまり染色されなかった。ＢＦ−２４０、ＢＦ−２５５についても同様の結果が得られた。【０１１２】  図１８に示すように、ＢＦ−２２１はリン酸化タウ蛋白の特異的抗体（ｐＳｅｒ４２２）により認識されるリン酸化タウ蛋白を染色した。すなわち本発明の式ＩＩで示される化合物は主としてタウ蛋白を認識するプローブあるいは染色剤として、すなわち神経原線維変化を認識するプローブあるいは染色剤として使用できることがわかった。ＢＦ−２３９、ＢＦ−２４０、ＢＦ−２５５についても同様の結果が得られた。
【産業上の利用可能性】
【０１１３】  本発明のＡβ蓄積性疾患診断プローブ用化合物およびそれを用いたＡβの染色、ならびにＡβ蓄積性疾患の治療および予防に使用される本発明の化合物を含む医薬組成物等は、現在最も重要な医療上の問題の１つであるアルツハイマー病等の難病の早期発見、医療および予防において極めて重要であり、医療分野における利用可能性は極めて大きい。また、本発明の化合物はアルツハイマー病やタウオパチーの早期診断に有用である。
【図１】
2005016888.tif 000048
【図２】
2005016888.tif 000049
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【国際調査報告】
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