(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２θ値６．５、１３．３、１６．８及び２０．１（タイプＩ）を有する５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩であって、該結晶性塩が５−メチルテトラヒドロ葉酸１当量あたり水少なくとも１当量の結晶水含量を有する、上記結晶性カルシウム塩。
【請求項２】
５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸塩を、水又は、水及び水と混和しうる有機溶剤との混合物中で、６０℃以上の温度で熱処理し、その後、得られる熱せられた溶液から上記塩を結晶化させる、５−メチルテトラヒドロ葉酸１当量あたり水少なくとも１当量の結晶水含量を有する、請求項１記載の５−メチル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩の製造方法。
【請求項３】
８５℃以上の温度で熱処理した後に結晶化を行う、請求項２記載の方法。
【請求項４】
溶液から結晶化を行う、請求項２記載の方法。
【請求項５】
懸濁液から結晶化を行う、請求項２記載の方法。
【請求項６】
水から又は水及び水と混和しうる有機溶剤との混合物から結晶化を行う、請求項５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、結晶性Ｎ- 〔４- 〔〔（２- アミノ -１，４，５，６，７，８- ヘキサヒドロ -４- オキソ -５- メチル-(６Ｓ)-、-(６Ｒ)-及び-(６Ｒ，Ｓ)-プテリジニル) メチル〕アミノ〕ベンゾイル〕 -Ｌ- グルタミン酸塩（以下５- メチルテトラヒドロ葉酸塩と呼称する。）、その使用方法並びにその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
テトラヒドロ葉酸塩は主に５- ホルミルテトラヒドロ葉酸及びその塩（ロイコボリン）又は５- メチルテトラヒドロ葉酸及びその塩として巨大赤芽球葉酸- 貧血の処置に、解毒薬として葉酸- 拮抗剤、特に癌治療に於けるアミノプテリン及びメソトレキサートの相容性の増加に("抗葉酸塩救剤")、フッ素化されたピリミジンの治療上の効果の増加に及び自動免疫疾患、たとえば乾癬及びリュウマチ性関節炎の処置に、特定の駆虫剤、たとえばトリメトプリム- スルファメトキサゾールの相容性の増加に並びに化学療法に於けるジデアザテトラヒドロ葉酸塩の毒性の減少に使用される。５- メチルテトラヒドロ葉酸は特に薬剤として及び栄養剤補助物質、たとえばビタミン調合物として、神経管欠損を予防するために、うつ病疾患を処置するために及びホモシステインレベルに影響を与えるために使用される。
【０００３】
５- メチルテトラヒドロ葉酸及びその塩は著しく不安定であって、この場合特にその高い酸化敏感性が注目され〔A.L.Fitzhugh, Pteridines  ４（４），１８７−１９１（１９９３）参照〕、したがって上記葉酸及びその塩を薬学的有効物質又は栄養剤補助物質として容認できる純度で製造するのは困難である。
【０００４】
５- メチルテトラヒドロ葉酸の不安定性を克服するために、種々の方法、たとえば可能な限り完全な酸素の除去又は酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸又は還元されたＬ- グルタチオンの添加が行われる。しかし完全な酸素除去はこの使用において極めて多くの費用を用いてさえもほとんど実現できず、酸化防止剤の添加は同様にいつもできるとは限らない。したがって従来まだ高純度で、十分に安定な５- メチルテトラヒドロ葉酸の製造に適する工業的に実施可能な方法を見い出すことができなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
今や、驚くべきことに本発明者は、化学的高純度で、かつ十分な安定性を有する５- メチルテトラヒドロ葉酸塩が、対応する塩を、６０℃以上での溶液の熱処理後に、極性媒体から結晶化させることによって得られることを見い出した。このようにして得られた結晶性の高い５- メチルテトラヒドロ葉酸塩は、室温で実質上無制限に安定である。これらは薬剤形又は栄養剤補助物質を製造するための成分として又は出発化合物として適当である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
したがって本発明の対象は結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩である。結晶化のための５- メチルテトラヒドロ葉酸塩として、アルカリ土類金属塩、特にカルシウム塩を使用するのが好ましい。大気下で２５0C及び相対大気湿度６０％で６ケ月保存後、結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩は従来決して得られなかった純度＞９８％（出発値に対して）を従来決して得られなかった安定性＞９８％（出発値に対して）と共に有する。結晶性５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸- カルシウム塩は４つの異なる結晶変態で存在し（タイプＩ、タイプＩＩ、タイプＩＩＩ、タイプＩＶ）、かつ粉末Ｘ線回折測定で鮮明なバンドを示す（図１〜４及び表１〜４参照）。種々の結晶変態に関して選択された２θ値は、６．５、１３．３、１６．８及び２０．１（タイプＩ）；又は５．３、６．９、１８．７及び２１．１（タイプＩＩ）；又は６．８、１０．２、１５．４及び２２．５（タイプＩＩＩ）又は６．６、１５．９、２０．２及び２２．５（タイプＩＶ）である。結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸カルシウム塩は、５- メチルテトラヒドロ葉酸１当量に対して水少なくとも１当量の結晶水含量を示す。したがって変態−タイプＩは一般に≧３当量の水を、変態−タイプＩＩは一般に≦２当量の水を及び変態−タイプＩＩＩ及びＩＶは一般に≦３当量の水を含有する。
【０００７】
５- メチル-(６Ｒ)-テトラヒドロ葉酸塩及び５- メチル-(６Ｒ，Ｓ)-テトラヒドロ葉酸塩も同様に高い結晶性形で得ることができる。
【０００８】
更に、本発明の対象は５- メチルテトラヒドロ葉酸塩の高い結晶性塩を製造する方法に於て、５- メチルテトラヒドロ葉酸の対応する塩を結晶化させることを特徴とする、上記方法である。その際この５- メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶化は、６０℃以上、特に８５℃以上での熱処理後に、極性媒体から行われる。
【０００９】
極性媒体として、特に水又は水及び水と混和しうる有機溶剤、たとえば水溶性アルコール、たとえばメタノール、エタノール、ｎ- プロパノール、イソ- プロパノール、エチレングリコール、低級脂肪族水溶性カルボン酸、たとえばギ酸、酢酸、乳酸又は水溶性アミド、たとえばホルムアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、１- メチルピロリドン、２- メチルピロリドン、２- ピペリジノンから成る混合物が適当である。使用される溶剤の種類及び混合割合に関して特別の制限はない。というのは結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩が一般に対応する非晶質形に比してより低い溶解度を示すからである。
【００１０】
結晶化は溶液から行われるのが好ましい。しかし懸濁液からの結晶化も同様に可能である。
【００１１】
大気湿度の調節下に６０℃以上での更なる熱処理によって、種々の結晶変態を相互に変化させることができる。したがって６０℃以上での熱処理の後に極性媒体から結晶化させて製造されるタイプＩは、７０℃以上で減圧下に乾燥してタイプＩＩに、９０℃以上で熱処理してタイプＩＩＩに、そして９５℃以上で熱処理してタイプＩＶに変化させることができる。タイプＩＩを９０℃で湿室中で水処理して再びタイプＩに戻すことができる。
【００１２】
５- メチルテトラヒドロ葉酸塩の結晶化は、自然発生で又は対応する結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩を結晶種として入れて行われる。
【００１３】
結晶化の出発化合物として非晶質の又は結晶性の純粋な５- メチル-(６Ｓ)-又は-(６Ｒ)-テトラヒドロ葉酸が適するが、ラセミ性５- メチル-(６Ｒ，Ｓ)-テトラヒドロ葉酸及び濃厚な５- メチル-(６Ｓ)-、-(６Ｒ)-又は-(６Ｒ，Ｓ)-テトラヒドロ葉酸を使用することができる。
【００１４】
結晶化のために出発化合物として、非晶質の又は一部結晶性の光学的に純粋な５- メチルテトラヒドロ葉酸又はその塩の使用によって、従来決して得られなかった純度及び従来同様に決して得られなかった安定性の実質上結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩が本法によって得られる。
【００１５】
本発明は、結晶性の高い５- メチルテトラヒドロ葉酸塩を薬剤又は栄養剤補助物質の製造のための成分として又は他のテトラヒドロ葉酸- 誘導体の製造のための成分として使用することに関する。というのは結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩が固形でのその優れた安定性に基づき、時間的に実質上制限されない、一定の極めて良好な品質を所持するからである。同様に、本発明は結晶性の高い５- メチルテトラヒドロ葉酸塩を含有する製剤にも関する。製剤の製造は、公知方法によって行われる。その使用は、テトラヒドロホラート、たとえば５- ホルミルテトラヒドロ葉酸（ロイコボリン）の領域から公知物質の使用と同様に行われる。
【００１６】
【実施例】
上記説明から、当業者は十分に本発明を実施することができる。したがって本発明を下記例によって具体的に説明するが、本発明はこの例によって限定されない。
【００１７】
下記例中に記載される温度は "0C" である。その他に明記しない限り含有量の記載は重量％を意味する。
本発明を説明するための例
例中に記載される５- メチルテトラヒドロ葉酸塩の含有量は、それぞれＨＰＬＣによって測定され、そして％−表面で記載される。水分含有量はカールフィシャー法で測定される。
〔例１〕（安定性）
結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩の安定性測定のために、この物質を比較試料と一緒に２５0C及び相対湿度６０％で大気下に保存する。周期的間隔で５- メチルテトラヒドロ葉酸塩の残存含有量を測定し、出発値と比較して記載する。
【００１８】
0005202774.tif 000002
結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩は、比較的長い負荷期間後、まだ極めて淡い色である。これに反して非晶質の試料は速やかに極めて強く着色する。
〔例２〕（粉末Ｘ線図）
結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩の構造性質（結晶度）を調べるために、これらの物質による粉末Ｘ線図（回折スペクトル）を採用する。
【００１９】
結晶性５- メチルテトラヒドロ葉酸塩は鮮明なバンド及び低い基底を有する十分に分割されたスペクトルを生じる。このスペクトルは、高い結晶性部分を示す。
【００２０】
スペクトルの例は、図１（タイプＩ）、図２（タイプＩＩ）、図３（タイプＩＩＩ）及び図４（タイプＩＶ）に並びに表１（タイプＩ）、表２（タイプＩＩ）、表３（タイプＩＩＩ）及び表４（タイプＩＶ）に示される。比較として同一条件下で非晶質の試料から同様にスペクトルを取り、図５（非晶質）として記載する。
〔表１〕
5-メチル-(6S)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプＩ）
回折メーター：透過
モノクロメーター：Curved Ge (111)
波長：1.54098 Cu
検出器：ライナーPSD
スキャンモード：Debye-Scherrer／Moving PSD／Fixed omega
2 θスキャン
! ピーク  サーチ  パラメーター：期待半値幅： .150
！                              有意水準  ：  2.5
！                              ピーク高さ水準： 10
ピークリスト〔範囲１：２θ＝5.000 34.980 .020 Imax=765〕
【００２１】
【数１】
0005202774.tif 000003
【００２２】
〔表２〕
5-メチル-(6S)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプII)
回折メーター：透過
モノクロメーター：Curved Ge (111)
波長：1.54098 Cu
検出器：ライナーPSD
スキャンモード：Debye-Scherrer／Moving PSD／Fixed omega
2 θスキャン
！ピーク  サーチ  パラメーター：期待半値幅：.150
！                              有意水準  ： 2.5
！                              ピーク高さ水準： 10
ピークリスト〔範囲１：２θ＝5.000 34.980 .020 Imax=526〕
【００２３】
【数２】
0005202774.tif 000004
【００２４】
〔表３〕
5-メチル-(6S)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプIII)
回折メーター：透過
モノクロメーター：Curved Ge (111)
波長：1.540598 Cu
検出器：ライナーPSD
スキャンモード：Debye-Scherrer／Moving PSD／Fixed omega
2 θスキャン
！ピーク  サーチ  パラメーター：期待半値幅：.150
！                              有意水準  ： 2.5
！                              ピーク高さ水準： 10
ピークリスト〔範囲１：２θ＝5.000 34.980 .020 Imax=817〕
【００２５】
【数３】
0005202774.tif 000005
【００２６】
〔表４〕
5-メチル-(6S)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプIV)
回折メーター：透過
モノクロメーター：Curved Ge (111)
波長：1.540598 Cu
検出器：ライナーPSD
スキャンモード：Debye-Scherrer／Moving PSD／Fixed omega
2 θスキャン
！ピーク  サーチ  パラメーター：期待半値幅：.150
！                              有意水準  ： 2.5
！                              ピーク高さ水準： 10
ピークリスト〔範囲１：２θ＝5.000 34.980 .020 Imax=473〕
【００２７】
【数４】
0005202774.tif 000006
【００２８】
以下に、結晶性５- メチル（６Ｓ）- テトラヒドロ葉酸カルシウム塩の種々の結晶変態に関して選択された２θ値を記載する。
【００２９】
タイプ                                  選択された２θ値
タイプＩ                    ６．５、１３．３、１６．８及び２０．１
タイプＩＩ                  ５．３、６．９、１８．７及び２１．１
タイプＩＩＩ                ６．８、１０．２、１５．４及び２２．５
タイプＩＶ                  ６．６、１５．９、２０．２及び２２．５
〔例３〕（溶解度）
結晶性５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩の溶解度を次の表に記載する。
【００３０】
0005202774.tif 000007
〔例４〕（非晶質５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩)
Ｎ2 の導入下に室温で水７５ｍｌに５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸７．５ｇを添加して、３０％水酸化ナトリウム溶液でｐＨ１２に調整する。得られた澄明な溶液を３７％塩酸でｐＨ７．５に調整し、これに水１１．７ｍｌ中に塩化カルシウム６Ｈ2 Ｏ  ７．１５ｇを含有する溶液を加える。得られた白色懸濁液を５時間攪拌して室温で吸引濾取し、水で十分に洗滌して、４５0Cで減圧乾燥する。
【００３１】
含有率９８．０％及び６Ｓ−割合９９．６％の白色非晶質５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩５．８ｇが得られる。
【００３２】
また湿室中で６０0Cでこの物質を処理した後、分極マイクロスコープで及びＸ線回折測定で結晶性割合を測定することができる。
〔例５〕（結晶性５- メチル-(６Ｒ，Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩)
５- メチル-(６Ｒ，Ｓ)-テトラヒドロ葉酸７０ｇを水７８０ｍｌ中に入れ、３０％ＮａＯＨ  ４５．２ｇでｐＨ７．５に調整する。澄明な淡い赤色溶液を水１４０ｍｌ中に塩化カルシウム６Ｈ2 Ｏ  ６２．７ｇを含有する溶液を加え、濾過して、少量の水で十分に洗滌する。得られた粗精製物を水中に懸濁させて、９０0Cで湿室中で２４時間処理する。
【００３３】
含有率９９．１％の白色結晶性５- メチル-(６Ｒ，Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩７４．０ｇが得られる。
〔例６〕（結晶性５- メチル-(６Ｒ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩)
５- メチル-(６Ｒ)-テトラヒドロ葉酸１６．５ｇを９２0Cの水１００ｍｌ及び塩化カルシウム６Ｈ2 Ｏ  ５０ｇ中に入れる。澄明な淡い黄色懸濁液を１０分間、９１0Cで攪拌し、濾過し、少量の水で十分に洗滌して、３５0Cで減圧乾燥する。
【００３４】
含有率９７．９％及び水分含有率７．８％の淡いベージュ色の結晶性５- メチル-(６Ｒ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩１５．４ｇが得られる。
〔例７〕（タイプＩ）
水１３０ｋｇを予め入れ、ついで５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸１２．８ｋｇを添加する。３０％ＮａＯＨ約９．１ｋｇでｐＨ−値１１．６に調整し、ついで３７％塩酸約１．９ｋｇで７．６に調整する。澄明な溶液に炭０．３ｋｇ及びセルフロック（cellflock)０．３ｋｇを含有する懸濁液を添加し、濾過して、水１３Ｌで十分に洗滌する。濾液に塩化カルシウム・２Ｈ2 Ｏ  ８．３ｋｇを含有する溶液を添加し、９０0Cに加熱して、３０分間攪拌する。生成物を熱い状態で濾過して、水２×２０ｋｇで十分に洗滌する。得られた湿性粗生成物を水１１５Ｌ中に懸濁させ、９０0Cに加熱して、直ちに熱いうちに濾過し、水２×２０ｋｇで十分に洗滌して、４０0Cで減圧乾燥させる。
【００３５】
純度９９．０％及び水分含有率１４．５％の白色結晶性５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩（タイプＩ）１１．６Ｋｇが得られる。
〔例８〕（タイプＩ）
水１６００ｍｌを予め入れ、ついで５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸１９４ｋｇを添加する。３０％ＮａＯＨ約８０ｍｌでｐＨ−値７．０に調整する。澄明な溶液に、水１９０ｍｌ中に炭２０ｋｇ及びセルフロック２０ｇを含有する懸濁液を添加し、濾過して、水で十分に洗滌する。濾液に５．５Ｍ塩化カルシウム溶液９５０ｍｌを添加し、９０0Cに加熱して、６０分間攪拌する。生成物を熱い状態で濾過して、水で十分に洗滌し、ついで４５0Cで減圧乾燥させる。
【００３６】
純度９９．７％及び６Ｓ−割合９９．９％の白色結晶性５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩（タイプＩ）１５６．２ｇが得られる。
〔例９〕（タイプＩ、及びタイプＩＩへの変化）
水５５４ｇを予め入れ、ついで５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸５３．１ｋｇを添加する。３０％ＮａＯＨでｐＨ値を７．５に調整する。澄明な溶液に炭１．３ｇ、セルフロック１．３ｇ及び水１９．５ｇを添加する。懸濁液を濾過して、水５５ｍｌで十分に洗滌する。濾液に水８４．６ｇ中に塩化カルシウム・６Ｈ２ Ｏ  ５２．０ｇを含有する溶液を添加し、９０℃に加熱して、結晶性５- メチルテトラヒドロ葉カルシウム塩１００ｍｇを結晶種として入れる。結晶化させた後に、生成物を９０℃の熱い状態で濾過して、水２×１０３ｇで十分に洗滌する。得られた湿性粗生成物を９０℃で水４８０ｍｌ中に懸濁させ、９０℃に加熱して、直ちに熱いうちに濾過し、上述のように十分に洗滌して、４５℃で減圧乾燥させる。
【００３７】
純度９８．８％及び水分含有率１２．２％の白色結晶性５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩（タイプＩ）４７．５ｇが得られる。
【００３８】
３０分間７０0Cで減圧乾燥することによって、この変態タイプＩを水分含有率５．０％の変態タイプＩＩに変えることができる。
〔例１０〕（タイプＩＩＩ）
５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩１５．８ｇを水１４０ｍｌ中でＮ2 の導入下に９５0Cに加熱して、９５0Cで３０分後、白色懸濁液を熱い状態で吸引濾取し、水で十分に洗滌して、３５0Cで減圧乾燥する。
【００３９】
含有率９８．９％及び６Ｓ−割合９９．９％の白色結晶性５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩（タイプＩＩＩ）１４．０ｇが得られる。
〔例１１〕（タイプＩＶ）
５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩２０．０ｇを水１８０ｍｌ中でＮ２の導入下に１００℃に加熱して、１００℃で３０分後、白色懸濁液を熱い状態で吸引濾取し、水で十分に洗滌して、２５℃で減圧乾燥する。
【００４０】
含有率９８．３％及び水分含有率９．９％の白色結晶性５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸カルシウム塩（タイプＩＶ）１６．９ｇが得られる。
【００４１】
６５0Cで減圧乾燥して、その他の結晶変態を得ることなく、この生成物の水分含有率を５．５％に減少させることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明の５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプＩ）の粉末回折図である。
【図２】図２は、本発明の５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプＩＩ）の粉末回折図である。
【図３】図３は、本発明の５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプＩＩＩ）の粉末回折図である。
【図４】図４は、本発明の５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸の結晶性カルシウム塩（タイプＩＶ）の粉末回折図である。
【図５】図５は、５- メチル-(６Ｓ)-テトラヒドロ葉酸の非晶質カルシウム塩の粉末回折図である。
【図１】
0005202774.tif 000008
【図２】
0005202774.tif 000009
【図３】
0005202774.tif 000010
【図４】
0005202774.tif 000011
【図５】
0005202774.tif 000012