(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で示されるオキシルアミノ基含有化合物：
Ｒ1−Ｂ−Ａ−Ｂ−Ｒ2    （１）
（式中、Ｒ1は不飽和カルボン酸由来の重合性基を表し、Ｒ2はオキシルアミノ基含有基またはオキシルアミノ誘導体含有基を表し、Ｂはエステル基またはアミド基を表し、Ａは、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数２〜１２のアルキレン基を表し、さらにＲ5は水素原子を表す）。
【請求項２】
請求項１に記載のオキシルアミノ基含有化合物において、
前記Ｒ2のオキシルアミノ誘導体含有基は、オキシルアミノ基にアミノ基を保護する保護基が結合したものであることを特徴とするオキシルアミノ基含有化合物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のオキシルアミノ基含有化合物において、
下記式（２）で示されることを特徴とするオキシルアミノ基含有化合物：
【化１】
0005289707.tif 000009
（式中、Ａは上述したとおりであり、Ｒ3は水素原子またはアミノ基の保護基を表し、Ｒ4は、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数１〜５のアルキレン基を表し、Ｘは−ＮＨ−または−Ｏ−を表し、さらにＲ5は水素原子を表す）。
【請求項４】
活性化された不飽和カルボン酸誘導体または縮合剤の存在下で不飽和カルボン酸と、Ｈ−Ｘ−Ａ−Ｘ−Ｈ（式中Ａは、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数２〜１２のアルキレン基を表し、Ｘは−ＮＨ−または−Ｏ−を表し、さらにＲ5は水素原子を表す）で表される化合物と反応させる第１工程と、
前記第１工程で得られる生成物と、Ｒ2−ＣＯＯＨ（式中Ｒ2はオキシルアミノ基含有基またはその誘導体含有基を表す）で表される化合物と反応させる第２工程と
を含むオキシルアミノ基含有化合物の製造方法。
【請求項５】
請求項４に記載のオキシルアミノ基含有化合物の製造方法において、
前記第１工程で用いられる不飽和カルボン酸誘導体は、酸無水物、酸ハロゲン化物、活性エステル、活性アミドから選択されることを特徴とするオキシルアミノ基含有化合物の製造方法。
【請求項６】
請求項４又は５に記載のオキシルアミノ基含有化合物の製造方法において、
前記第２工程で用いられるＲ2−ＣＯＯＨは、Ｒ3−ＮＨ−Ｏ−Ｒ4−ＣＯＯＨ（式中Ｒ3は水素原子またはアミノ基の保護基を表し、Ｒ4は、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数１〜５のアルキレン基を表し、さらにＲ5は水素原子を表す）で表される化合物であることを特徴とするオキシルアミノ基含有化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オキシルアミノ基含有化合物およびその誘導体に関し、特に糖鎖と特異的に反応するオキシルアミノ基含有化合物に関する。また、本発明は、このようなオキシルアミノ基含有化合物を製造する方法に関する。本発明は、オキシルアミノ基含有化合物を用いて得られるポリマーに関する。
【背景技術】
【０００２】
糖鎖とは、グルコース，ガラクトース，マンノース，フコース，キシロース，Ｎ−アセチルグルコサミン，Ｎ−アセチルガラクトサミン，シアル酸などの単糖およびこれらの誘導体がグリコシド結合によって鎖状に結合した分子の総称である。【０００３】
糖鎖は、非常に多様性に富んでおり、天然に存在する生物が有する様々な機能に関与する物質である。糖鎖は生体内でタンパク質や脂質などに結合した複合糖質として存在することが多く、生体内の重要な構成成分の一つである。生体内の糖鎖は細胞間情報伝達，タンパク質の機能や相互作用の調整などに深く関わっていることが明らかになりつつある。【０００４】
例えば、糖鎖を有する生体高分子としては、細胞の安定化に寄与する植物細胞の細胞壁のプロテオグリカン、細胞の分化、増殖、接着、移動等に影響を与える糖脂質、及び細胞間相互作用や細胞認識に関与している糖タンパク質等が挙げられる。これらの生体高分子に含まれる糖鎖が、この生体高分子と互いに機能を代行、補助、増幅、調節、あるいは阻害しあいながら高度で精密な生体反応を制御する機構が次第に明らかにされつつある。さらに、このような糖鎖と細胞の分化増殖、細胞接着、免疫、及び細胞の癌化との関係が明確にされれば、この糖鎖工学と、医学、細胞工学、あるいは臓器工学とを密接に関連させて新たな展開を図ることが期待できる。【０００５】
特許文献１には、このような糖鎖と特異的に反応しうる物質が記載されており、これらの物質を用いて糖鎖を分離する方法などが併せて記載されている。
【特許文献１】ＷＯ２００４／０５８６８７号公報
【発明の開示】
【０００６】
ところで、特許文献１に記載された物質はリポソームを形成して使用されるものであり、一般に安定性にかけることが問題となっている。
【０００７】
そこで、本発明は、糖鎖と特異的に反応し、かつ、安定性の高い糖鎖捕捉物質を提供するためのオキシルアミノ基含有化合物およびこれを用いたポリマー、ならびにこれらの製造方法を提供することを目的としている。
【０００８】
本発明に係るオキシルアミノ基含有化合物は、下記式（１）で示されるものである：
Ｒ1−Ｂ−Ａ−Ｂ−Ｒ2    （１）
（式中、Ｒ1は重合性基を表し、Ｒ2はオキシルアミノ基含有基またはオキシルアミノ誘導体含有基を表し、Ｂはエステル基またはアミド基を表し、Ａは、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数２〜１２のアルキレン基を表し、さらにＲ5は水素原子を表す）。
【０００９】
また、このオキシルアミノ基含有化合物において、Ｒ1は不飽和カルボン酸由来の基である。
【００１１】
また、このオキシルアミノ基含有化合物において、
前記Ｒ2のオキシルアミノ誘導体含有基は、オキシルアミノ基にアミノ基を保護する保護基が結合したものとすることができる。
【００１２】
また、このオキシルアミノ基含有化合物において、
下記式（２）で示されるものを用いることができる：
【００１３】
（化１）
0005289707.tif 000002
【００１４】
（式中、Ａは上述したとおりであり、Ｒ3は水素原子またはアミノ基の保護基を表し、Ｒ4は置換基を有してもよい炭素数１〜５のアルキレン基を表し、Ｘは−ＮＨ−または−Ｏ−を表す）。
【００１５】
本発明に係るオキシルアミノ基含有化合物の製造方法は、
活性化された不飽和カルボン酸誘導体または縮合剤の存在下で不飽和カルボン酸と、Ｈ−Ｘ−Ａ−Ｘ−Ｈ（式中Ａは、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数２〜１２のアルキレン基を表し、Ｘは−ＮＨ−または−Ｏ−を表し、さらにＲ5は水素原子を表す）で表される化合物と反応させる第１工程と、
前記第１工程で得られる生成物と、Ｒ2−ＣＯＯＨ（式中Ｒ2はオキシルアミノ基含有基またはその誘導体含有基を表す）で表される化合物と反応させる第２工程とを含む。
【００１６】
また、このオキシルアミノ基含有化合物の製造方法において、
前記第１工程で用いられる不飽和カルボン酸誘導体は、酸無水物、酸ハロゲン化物、活性エステル、活性アミドから選択することができる。
【００１８】
また、このオキシルアミノ基含有化合物の製造方法において、
前記第２工程で用いられるＲ2−ＣＯＯＨは、Ｒ3−ＮＨ−Ｏ−Ｒ4−ＣＯＯＨ（式中Ｒ3は水素原子またはアミノ基の保護基を表し、Ｒ4は、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数１〜５のアルキレン基を表し、さらにＲ5は水素原子を表す）で表される化合物とすることができる。
【００１９】
本発明は、上記のいずれかに記載のオキシルアミノ基含有化合物を用いた重合反応により得られたポリマーであってもよい。
【００２０】
また、このポリマーにおいて、
前記重合反応をさらに架橋剤を追加した系で行って得られたポリマーであってもよい。
【００２１】
また、このポリマーにおいて、
前記重合反応を前記オキシルアミノ基含有化合物および場合によっては前記架橋剤以外の重合性化合物を少なくとも一種類さらに追加した系で行って得られたポリマーであってもよい。
【００２２】
本発明によれば、糖鎖と特異的に反応し、かつ、安定性の高い糖鎖捕捉物質を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下に、本発明のオキシルアミノ基含有化合物およびポリマー、ならびにこれらの物質の製造方法について詳細に説明する。【００２４】
本発明に係るオキシルアミノ基含有化合物は、下記式（１）で示されるものである：
Ｒ1−Ｂ−Ａ−Ｂ−Ｒ2    （１）
（式中、Ｒ1は重合性基を表し、Ｒ2はオキシルアミノ基含有基またはオキシルアミノ誘導体含有基を表し、Ｂはエステル基またはアミド基を表し、Ａは置換基を有していてもよい炭素数２〜１２のアルキレン基を表す）。【００２５】
Ｒ1は、炭素−炭素の二重結合（Ｃ＝Ｃ）を含む重合性基であり、例えば不飽和カルボン酸由来の基が挙げられ、後述する本発明のポリマーを製造する際の重合部分となる。例えば、CH2=C(CH3)-，CH2=CH-などが挙げられる。【００２６】
また、Ｂはエステル基またはアミド基であり、Ｒ1と一緒になって、例えばCH2=C(CH3)CONH-，CH2=CHCONH-，CH2=CHCOO-，CH2=C(CH3)COO- などを形成するようになっている。【００２７】
Ａは、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数２〜１２のアルキレン基を表し、さらにＲ5は水素原子または置換基を有してもよい炭素数１〜８のアルキレン基であり、Ａとしては、例えば、-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-，-CH2CH2-S-CH2CH2-S-CH2CH2-，-CH2CH2-NH-CH2CH2-NH-CH2CH2-，-CH2CH2-O-CH2CH2-，-CH2CH2-S-CH2CH2-，-CH2CH2-などが挙げられる。【００２８】
Ｒ2は、オキシルアミノ基（-Ｏ-ＮＨ2）含有基またはその誘導体含有基を表す。この誘導体は、オキシルアミノ基の窒素に結合する原子または原子団として、水素以外のもの、例えばアミノ基の保護基であるｔ−ブトキシカルボニル基（Boc）などがアミン基の窒素原子に結合したものである。【００２９】
このオキシルアミノ基が、糖鎖より水溶液などの溶液中で形成される環状のヘミアセタール型と非環状のアルデヒド型との平衡において、アルデヒド基と反応して特異的、かつ、安定な結合を形成して、糖鎖を捕捉することができるようになる。【００３０】
このようなオキシルアミノ基含有化合物としては、より具体的には、下記式（２）で示される化合物が挙げられる。【００３１】
（化２）
0005289707.tif 000003
【００３２】
（式中、Ａは上述したとおりであり、Ｒ3は水素原子またはアミノ基の保護基を表し、Ｒ4は置換基を有してもよい炭素数１〜５のアルキレン基を表し、Ｘは−ＮＨ−または−Ｏ−を表す）。【００３３】
ここで、Ｒ4は、上述のＡと同様に、分岐を有してもよく、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在してもよい炭素数１〜５のアルキレン基を表し、さらにＲ5は水素原子または置換基を有してもよい炭素数１〜８のアルキレン基である。例えば、−ＣＨ2−，−ＣＨ2ＣＨ2−などが挙げられる。【００３４】
このような化合物において、不飽和カルボン酸由来の基に含まれる二重結合は重合反応に用いられる一方で、オキシルアミノ基は糖鎖のアルデヒド基と特異的に反応する。【００３５】
また、このようなオキシルアミノ基含有化合物の製造方法の実施形態は、活性化された不飽和カルボン酸誘導体または縮合剤の存在下で不飽和カルボン酸と、Ｈ−Ｘ−Ａ−Ｘ−Ｈ（式中Ａは置換基を有していてもよい炭素数２〜１２のアルキレン基を表し、Ｘは−ＮＨ−または−Ｏ−を表す）で表される化合物と反応させる第１工程と、第１工程で得られる生成物と、Ｒ2−ＣＯＯＨ（式中Ｒ2はオキシルアミノ基含有基またはその誘導体含有基を表す）で表される化合物と反応させる第２工程とを含む。【００３６】
ここで、第１工程で用いられる不飽和カルボン酸誘導体は、不飽和カルボン酸のカルボキシル基が活性化されたものであり、不飽和カルボン酸であるアクリル酸、メタクリル酸、クロトン酸、マレイン酸、フマル酸などのカルボキシル基が、酸無水物、酸ハロゲン化物、活性化エステル、活性化アミドに変換された化合物が挙げられる。具体的には、下記に示すような化合物が挙げられる。【００３７】
（化３）
0005289707.tif 000004
【００３８】
また、第１工程で使用可能な縮合剤とともに用いる不飽和カルボン酸としては、アクリル酸、メタクリル酸、クロトン酸、マレイン酸、フマル酸などが挙げられる。縮合剤としては、1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などが挙げられる。【００３９】
また、第１工程で用いられるＨ−Ｘ−Ａ−Ｘ−Ｈで表される化合物は、不飽和カルボン酸またはその誘導体と反応する化合物であり、Ａは炭素数２〜１２、好ましくは４〜１０であるアルキレン基を表し、このアルキレン基は分岐を有していてもよい。また、このアルキレン基は、鎖の途中で−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＲ5−が介在していてもよい。Ｘは、−ＮＨ−または−Ｏ−を表す。具体的には、下記のような化合物が挙げられる。【００４０】
（化４）
0005289707.tif 000005
【００４１】
また、この第１工程での反応は、−１０〜４０℃、好ましくは氷浴上で行われる。また、この反応は、不活性ガス、例えば窒素、アルゴンの雰囲気下で行うこともできる。【００４２】
第２工程で用いられる化合物は、Ｒ2−ＣＯＯＨ（式中Ｒ2は、上述したようなオキシルアミノ基含有基またはその誘導体含有基を表す）で表される化合物である。具体的には、Ｒ3−ＮＨ−Ｏ−Ｒ4−ＣＯＯＨ（式中Ｒ3は水素原子またはアミノ基の保護基を表し、Ｒ4は、上述したような置換基を有してもよい炭素数１〜５のアルキレン基を表す）が挙げられる。具体的には、下記のような化合物が挙げられる。【００４３】
（化５）
0005289707.tif 000006
【００４４】
また、第２工程で、第１工程で得られた化合物と上記の化合物Ｒ2−ＣＯＯＨとを反応させるために好適に用いられる縮合剤としては、水溶性のカルボジイミド、例えば1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドが挙げられるが、水溶性ではないカルボジイミド、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）も用いることができる。【００４５】
また、この第２工程での反応は、−１０〜４０℃、好ましくは氷浴上で行われる。また、この反応は、不活性ガス、例えば窒素、アルゴンの雰囲気下で行うこともできる。【００４６】
なお、第１工程、第２工程とも、得られた化合物を、カラムクロマトグラフィを用いて精製してもよい。【００４７】
また、本発明に係るポリマーは、上述のオキシルアミノ化合物を用いた通常の重合反応、例えば懸濁重合反応により得られるものである。また、この重合反応は、オキシルアミノ化合物を重合させるための架橋剤として、多官能の化合物の存在下で行うようにすることができる。【００４８】
このような化合物としては、例えば（１）ポリオールのジまたはトリ（メタ）アクリル酸エステル類、例えばポリオールがエチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチロールプロパン、グリセリン、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリン等であるもの、（２）上記（１）において、不飽和酸が（メタ）アクリル酸以外のもの、例えばマレイン酸、フマル酸などであるもの、（３）ビスアクリルアミド類、例えばＮ，Ｎ'−メチレンビスアクリルアミドなど、（４）ポリエポキシドと（メタ）アクリル酸を反応させて得られるジまたはトリ（メタ）アクリル酸エステル類、（５）ポリイソシアネートと（メタ）アクリル酸ヒドロキシエステルを反応させて得られるジ（メタ）アクリル酸カルバミルエステル類、例えばポリイソシアネートがトリレンジイソシアネート、ヘキサメチレンジイソシアネートなどであるもの、（６）多価アリル化合物、例えばアリル化デンプン、アリル化セルロース、ジアリルフタレート、テトラアリロキシエタン、ペンタエリストールトリアリルエーテル、トリメチロールプロパントリアリルエーテル、ジエチレングリコールジアリルエーテル、トリアリルトリメリテート等が挙げられる。これらの中でも本発明では、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、プロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ'−メチレンビス（メタ）アクリルアミド等が好ましい。【００４９】
すなわち、本発明に係るポリマーは、下記のような構造をとるものである。
−(オキシルアミノ基含有化合物成分)m−(架橋剤成分)n−【００５０】
特に、オキシルアミノ基含有化合物として、式（２）の化合物を用いて、架橋剤として、エチレングリコールジメタクリレートを用いた場合には、下記式のように表すことができる。【００５１】
（化６）
0005289707.tif 000007
【００５２】
なお、これらいずれの式においても、ポリマーは、モノマーであるオキシルアミノ化合物および架橋剤の各成分由来の部分が、それぞれブロックになった状態のブロック共重合体であるように示されているが、各モノマーがランダムに重合したものであってもよい。【００５３】
また、このポリマー中には、オキシルアミノ化合物および架橋剤の他に、さらに別の重合性化合物の成分由来の部分が含まれていてもよい。このような化合物としては、アクリル酸およびその誘導体、メタクリル酸およびその誘導体などが挙げられる。このような化合物をモノマーとして含ませることで、ポリマー中のオキシルアミノ基の密度やその他の所定の物性を制御することができる。【００５４】
このようなポリマーの融点は、上限が２５０℃、好ましくは１００℃であり、下限が０℃、好ましくは２０℃である。また、ガラス転移点は、観測されるならば、上限が２５０℃、好ましくは１００℃であり、下限が−２０℃、好ましくは０℃であることが好ましい。このような範囲の融点および場合によってはガラス転移点を有するポリマーは、水溶液を取り扱う温度である０〜１００℃で，分子鎖の運動性が高い状態になる。糖鎖は通常，水または水性緩衝液に溶解していることが多く，ポリマーと糖鎖を反応させる際の温度は０〜１００℃，通常は室温〜９０℃である。このため，上記のような融点およびガラス転移点を有するポリマーは，糖鎖と反応する際に分子鎖がフレキシブルな状態であるために，糖鎖溶液との濡れ性（親和性）が高くなり，反応性が高くなる。【００５５】
また、このポリマーを粒子にした場合における粒子の形状は、球であることが好ましく、その粒径は、上限が２００μｍ、好ましくは１５０μｍであり、下限が２０μｍ、好ましくは５０μｍである。また、粒子の平均径は８０〜１００μｍである。このような範囲の粒径を有するポリマー粒子は、遠心分離，フィルターなどによる回収が容易であり，かつ，充分な表面積を有しているために糖鎖との反応効率も高いと考えられる。粒径が上記の範囲よりも大幅に大きい場合，表面積が小さくなるために糖鎖との反応効率が低くなることがある。また，粒径が上記の範囲よりも大幅に小さい場合，特にフィルターによる粒子の回収が難しくなることがある。さらに，粒子をカラムに充填して用いる場合，粒径が過小であると通液の際の圧力損失が大きくなってしまうことがある。【００５６】
このようなポリマーは、オキシルアミノ化合物と架橋剤とを、クロロホルムなどの溶媒に溶解したのち、懸濁重合を行う場合には原料の液滴を安定化させるために分散安定剤を用いて水などの分散媒に分散させた状態で、重合開始剤を導入し、重合反応を行うことで得ることができる。こうして得られるポリマーは、遠心分離などの技術により回収することができる。【００５７】
さらに、オキシルアミノ基に保護基が結合している場合には、この保護基を通常の脱保護反応、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いた反応により、取り除いてもよい。また、こうして得られるポリマーは水中で安定なため、水に分散させた状態で保存することができる。【００５８】
このようにして得られるポリマーは、オキシルアミノ基の部分で糖鎖と特異的に反応するため糖鎖を捕捉することができる。これにより、上述のポリマーは生体高分子の糖鎖成分の単離に利用することができる。例えば、粒子の形にして粒子を充填させたカラムや流路などを作り、ここに試料を流したり、試料の溶液に直接ポリマーを入れて糖鎖捕捉の反応を行うことで、この試料から糖鎖の単離を行うことができるようになる。また、粒子にしたときに、水に分散させた状態で安定であり、また、遠心分離などによる回収が容易なため、従来のようなリポソームで利用する場合よりも取り扱いが簡単になる。
（実施例）【００５９】
以下、本発明を実施例により説明する。しかし、本発明は実施例に限定されるものではない。【００６０】
（実験例１）
（モノマーの合成）
下記のスキームでオキシルアミノ基含有化合物である化合物（ｂ）を合成した。【００６１】
（化７）
0005289707.tif 000008
【００６２】
（Ａ）化合物（ａ）の合成
５ｇの無水メタクリル酸（ＭＡＨ：０．０３ｍｏｌ）を１００ｍｌのクロロホルムに溶解させた溶液を、２５ｇの（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（ＥＤＢＥＡ：０．１７ｍｏｌ）を１００ｍｌのクロロホルムに溶解させた溶液に氷浴上で滴下投入した。そこへ窒素を封入し、終夜攪拌させた。得られた反応溶液から溶媒を蒸発させて得た残留物を、シリカゲルカラム（展開溶媒：クロロホルム９０容／メタノール１０容の混合溶媒）にかけて所定のフラクションを分取して、このフラクションから溶媒を蒸発させて化合物（ａ）を得た（収量５.０ｇ，収率７１％）。【００６３】
（Ｂ）化合物（ｂ）の合成
５ｇの化合物（ａ）（０．０２３ｍｏｌ）を１００ｍｌのクロロホルムに溶解させた溶液に、１．５当量のＢｏｃ−アミノオキシ酢酸（ＢＯＣ−ＡＯＡＡ）および１．５当量の水溶性カルボジイミド化合物（ＷＳＣ）である1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドを加えて、密栓した。そこへ窒素を封入し、終夜攪拌させた。得られた反応溶液から溶媒を蒸発させて得た残留物を、シリカゲルカラム（展開溶媒：クロロホルム９０容／メタノール１０容の混合溶媒）にかけて所定のフラクションを分取して、このフラクションから溶媒を蒸発させて化合物（ｂ）を得た（収量４．６ｇ，収率５０％）。【００６４】
また、得られた物質は、ＮＭＲ、マトリックス支援レーザイオン化−飛行時間型質量分析器（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ）により化合物（ｂ）であることを確認した。【００６５】
（ポリマーの合成）
三口フラスコに２５ｍｌの５％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液を装入し、そこへ窒素をパージした。１ｇの化合物（ｂ）（２．６ｍｍｏｌ）、エチレングリコールジメタクリレート（ＥＧＤＭＡ：５ｍｏｌ％）および１ｍｌのクロロホルムからなる混合物を、前記三口フラスコに導入し、６０℃に保ちながら攪拌して、混合物に含まれるモノマーとしての化合物（ｂ）およびＥＧＤＭＡをＰＶＡ水溶液中に分散させた。続いて、化合物（ｂ）に対して３重量％の重合開始剤としてのアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）を加えて重合を開始させた。６０℃で１６時間反応させた後、生成したポリマー粒子を遠心分離により回収し、メタノールと水とで洗浄した。【００６６】
洗浄後、ポリマー粒子に２０ｍｌのメタノールおよび１０ｍｌのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を加えて、４０℃で１６時間振とうして、保護基としてのＢＯＣ基の脱保護反応を行った。得られたポリマー粒子を遠心分離により回収して、メタノールと水とで洗浄した。なお、得られたポリマー粒子は、適量の水に分散させて安定に保存することができた。【００６７】
ここで、得られたポリマーの粒径は２０〜２００μｍに分布し、平均粒径は８０μｍであった。また、示唆走査熱分析（ＤＳＣ）の結果、融点は５０．９℃であり、ガラス転移点は確認されなかった。