(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象となる１個のヒト受精卵、および胚から成体に至る各発生段階のヒト個体を除く生体を保持可能であり、
且つ２個以上の前記生体は保持できない大きさの貫通した空孔が複数配置されているシートを用いて、該シートの複数の空孔中に液体とともに前記生体をそれぞれ１個ずつ保持させることで前記生体を配置して保持する方法であって、
前記シートの厚みが、それぞれ対象とする前記生体の最大の厚さの0.2倍から1.9倍の範囲であることを特徴とする生体を配置して保持する方法。
【請求項２】
前記生体を有する液体と、前記複数の貫通した空孔を有するシートとを接触させた後、該シートから余剰の液体を除去することで、該空孔中に存在する液体とともに前記シートの空孔の各々に１つの前記生体を保持させる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ヒト受精卵、および胚から成体に至る各発生段階のヒト個体を除く生体を用いた試験方法であって、
請求項１または２に記載の方法で前記生体を前記シートに保持した後に、
前記生体の各々に対して物質を投与し、該物質の前記生体に対する作用を試験する工程を有することを特徴とする試験方法。
【請求項４】
複数のヒト受精卵、および胚から成体に至る各発生段階のヒト個体を除く生体を用いた成育方法であって、
請求項１に記載の方法で前記生体を保持した後に、
前記生体の各々に対して物質を投与し、前記シートの空孔内で前記生体を成育させることを特徴とする成育方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法で前記生体を保持したシート近傍を所定の環境に制御することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記生体が、胚の個体、孵化後の個体、または胚から成育している個体であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記生体はヒトを除くものである、請求項１乃至６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記胚の個体が、両生類または魚の卵である請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記物質の投与が、前記シートの空孔に１種類の生理活性物質もしくは複数種類の生理活性物質を含む液滴を付与することである請求項３乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記の液滴が１００ｐｌ（ピコリットル）以下の液滴を吐出する手段により付与されることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記物質の投与の後、液交換を行う工程を有する請求項３乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記空孔内の液体が、保湿剤、表面張力調整剤および増粘剤の少なくともいずれかを含む請求項１乃至１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
更に、前記シートに保持された前記生体において、選択された前記生体を前記シートの空孔から別の容器に移送する工程を有する請求項１乃至１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記移送する工程が、選択された空孔に気体を吹き付けて別の容器に吹き飛ばす工程である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記シートの空孔に、光を導入して計測もしくは観察する工程を有する請求項１乃至１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
対象とする複数の生体を配置して保持するための生体保持用シートであって、該シートは、複数の貫通した空孔を有しており、
該空孔は、空孔内に保持させた液体と、対象とする１個の前記生体を保持可能であり、且つ２個以上の前記生体は保持できない大きさの空孔であり、
前記シートの厚みが、それぞれ対象とする前記生体の最大の厚さの0.2倍から1.9倍の範囲であることを特徴とする生体保持用シート。
【請求項１７】
前記空孔の開口面積が、それぞれ対象とする前記生体の最大断面積の1.05倍から3.61倍の範囲である請求項１６に記載の生体保持用シート。
【請求項１８】
前記空孔の断面形状が、円形、または、稚魚もしくは両生類の幼生の輪郭に類似した形状を有する請求項１６または１７に記載の生体保持用シート。
【請求項１９】
前記シートにおける、空孔の配置密度が5個/ｃｍ2から70個/ｃｍ2の範囲にある請求項１６乃至１８のいずれかに記載の生体保持用シート。
【請求項２０】
少なくとも一方の表面が疎水性表面である請求項１６乃至１９のいずれかに記載の生体保持用シート。
【請求項２１】
前記生体を保持した前記空孔に連通し、かつ該空孔より面積の小さい液交換用空孔もしくは窪みで構成されている液交換部位を設けていることを特徴とする、請求項１６乃至２０のいずれかに記載の生体保持用シート。
【請求項２２】
生体を保持するシートを用いて、生体に対して処理を行う装置であって、
請求項１６乃至２１のいずれかに記載のシートを保持するための保持手段を有し、更に、以下の手段（A）から（G）の少なくとも１つを有する処理装置。
（A）前記シートの空孔に生体を配置させるための手段、
（B）前記シートの周囲環境を所定の環境にするための手段、
（C）前記シートの空孔に液滴を付与するための付与手段、
（D）前記シートの空孔に保持された生体の状態を観察するための観察手段、
（E）前記シートの空孔に保持された生体をシートから移送するための移送手段、
（F）前記シートの空孔の位置を認識する認識手段、
（G）前記シートの空孔に生体を保持した状態で空孔内の液体を液交換するための手段。
【請求項２３】
対象となる１個のヒト受精卵、および胚から成体に至る各発生段階のヒト個体を除く生体を保持可能であり、且つ２個以上の前記生体は保持できない大きさの貫通した空孔の複数が配置されているシートと、
前記空孔の夫々に含まれる液体と、
前記空孔の夫々に１個ずつ含まれる前記生体とを有し、
前記生体が、前記液体とともに前記空孔に保持されており、
前記シートの厚みが、それぞれ対象とする前記生体の最大の厚さの0.2倍から1.9倍の範囲であることを特徴とする生体保持シート。
【請求項２４】
前記生体はヒトを除くものである、請求項２３に記載の生体保持シート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞、胚や個体などの生体を配置し、効率よく分析、分取などの操作をおこなう方法及び装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、細胞、胚や個体などの生体を操作して、その機能を調べたり、ある種の化学物質や生理活性物質を作用させてその生体材料の機能及び、形態の変化を観察する重要性が増してきている。
【０００３】
たとえば日常生活で使われている化学物質や医薬品の生体に及ぼす作用を調べるための鋭敏で簡便な方法として、培養細胞、胚や成体を含む個体に化学物質を曝露したり導入したりする色々な試みが行われている。こうしたことは、病気の診断や、創薬の分野で特に有用である。
【０００４】
医薬品においては、その化学物質が主として有する作用および副作用を調べることは、その医薬品を市場に提供するための必須の試験項目である。上記のように化学物質・生理活性物質が生体に対して及ぼす作用、例えば発ガン／抗ガン作用・催奇形性作用・内分泌攪乱作用などを調べることができる。
【０００５】
したがって生体に対して、大量でかつ迅速な取り扱いを行い、また化学物質や生物活性物質等に対し、その影響を確実にバイオアッセイ評価していくシステムが求められている。また、特にこれらの生体に対し、より詳細な評価を行うために、迅速に選別し、分別することが重要になる。
【０００６】
しかしながら、上記のシステムで大量・迅速な処理を行うためには、胚などの微小な生体に対して決められた位置に配列させ、生体に対して所定の物質の付与、計測や分別など所定の操作を、効率よく行わなければならない。特に発生過程の胚などは、短時間で成育していくため処理に与えられた時間はきわめて短い。しかしながら、微小な個体を配列させ、化学物質などの投与を制御、またバイオアッセイ系で分析評価、及び分別することを実用レベルにおいて大量・迅速に行うシステムは開発されておらずこの分野の研究開発の大きな障壁となっている。
【０００７】
微小な生体の配置方法には、細胞などの生体をピペットなどの操作によってマイクロウェルプレートの凹部に一つの生体を個別に隔離して配置することは知られている。一般に、細胞や胚などの生体は非常に小さいものかつ壊れやすいものであることから、慎重でかつ正確な取り扱いが必要である。例えば、生物個体の胚を操作するには、マイクロマニピュレータを用い、マイクロピペットを操作したり、顕微鏡観察をしながら、レーザー光を使った光ピンセットで胚の位置を配置・調整することが必要となる。この操作には、熟練した技術を要し迅速で多量に配置処理することは難しい。
【０００８】
こうした生体を迅速に配列する試みとしては、特許文献１には、多孔質プレ−トに受精卵と適合する形状の凹部を複数形成した細胞固定用プレートに、卵浮遊液を供給し、裏面側から吸引して、受精卵を配置固定する方法が開示されている。
【０００９】
また、細胞、胚または、卵母細胞を取り扱う装置と方法が特許文献２に記載されている。
本方法では、ピペットを用いて生体を配置する方法のみが記載されている。
【００１０】
特許文献３では、毛細管状の貫通孔に細胞などの懸濁液を保持させて分析する方法及び装置が開示されている。また、特許文献４においても同様に毛細管状の貫通孔に細胞などの懸濁液を保持させてハイスループットのスクリーニングを行う方法が記載されている。
【特許文献１】特開平１０−１６５１６６号公報
【特許文献２】特表２００７−５０４８１６号公報
【特許文献３】特表２００２−５００３７３号公報
【特許文献４】米国特許第６０２７８７３号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかし、特許文献１に開示される配列方法では、迅速に処理できる一方で次のような点で改善が望まれる。すなわち、細胞固定用プレートは、多孔質でかつ凹部の形状が対象となる細胞の形状に適合していることが必要となること、また裏面から吸引することにより、底面に押し付けられて受精卵などの細胞にダメージを与える恐れがあること。また、特許文献２に開示されるピペットを用いて生体を配置する方法では、大量にかつ迅速に生体を配置することは困難である。また、特許文献３および４に開示される方法では、胚などの個体を効率よく一つだけ配置したり、特に特定の個体を選別して分別、分取することは不可能であった。
【００１２】
よって、本発明の目的は、細胞、胚や個体などの生体を大量にかつ迅速に一つずつ個別に配置して保持する方法、およびその保持シート及び生体を処理するための装置を提供することにある。
【００１３】
また、本発明の他の目的は、個別に配置された生体について効率よく分析もしくは分取などをおこなう操作性に優れた方法及び装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明にかかる生体を保持する方法は、
対象となる１個のヒト受精卵、および胚から成体に至る各発生段階のヒト個体を除く生体を保持可能であり、
且つ２個以上の前記生体は保持できない大きさの貫通した空孔が複数配置されているシートを用いて、該シートの複数の空孔中に液体とともに前記生体をそれぞれ１個ずつ保持させることで前記生体を配置して保持する方法であって、
前記シートの厚みが、それぞれ対象とする前記生体の最大の厚さの0.2倍から1.9倍の範囲であることを特徴とする生体を配置して保持する方法である。
【００１５】
本発明にかかる生体を保持するシートは、
対象とする複数のヒト受精卵、および胚から成体に至る各発生段階のヒト個体を除く生体を配置して保持するための生体保持用シートであって、該シートは、複数の貫通した空孔を有しており、
該空孔は、空孔内に保持させた液体と、対象とする１個の前記生体を保持可能であり、且つ２個以上の前記生体は保持できない大きさの空孔であり、
前記シートの厚みが、それぞれ対象とする前記生体の最大の厚さの0.2倍から1.9倍の範囲であることを特徴とする生体保持用シートである。
【００１６】
本発明にかかる生体を処理するための装置は、
生体を保持するシートを用いて、生体に対して処理を行う装置であって、
本発明にかかる生体保持用シートを保持するための保持手段を有し、
更に、以下の手段（A）から（G）の少なくとも１つを有する処理装置。
【００１７】
（A）前記シートの空孔に生体を配置させるための手段、
（B）前記シートの周囲環境を所定の環境にするための手段、
（C）前記シートの空孔に液滴を付与するための付与手段、
（D）前記シートの空孔に保持された生体の状態を観察するための観察手段、
（E）前記シートの空孔に保持された生体をシートから移送するための移送手段、
（F）前記シートの空孔の位置を認識する認識手段、
（G）前記シートの空孔に生体を保持した状態で空孔内の液体を液交換するための手段。
【発明の効果】
【００１８】
本発明では、細胞、胚や個体などの生体を大量にかつ迅速に個別に配置する方法、および本方法に用いる保持シート及び装置を提供する。
【００１９】
また、本発明は個別に配置された生体についての分析もしくは分取などの操作を効率よく行うための簡便化でき、操作性に優れた方法及び装置を提供するものである。また、個別に配置された生体に、生理活性物質を効率よく作用させることができる。また、生体を長期間にわたって成育させることも可能で、その機能や形態変化を簡単に調べることが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（生体の範囲）
本発明で取り扱う「生体」は、卵母細胞、あるいは胚の個体、孵化後の個体、または胚から成育している個体を含む。個体としては、脊椎動物が受精卵から成体になる過程をすべて含む。また、胚とは、卵の受精時から孵化するまでの時期にある個体を指す。よって、胚の個体として、卵（受精卵）は好適に用いることができる。また、胚から成育している個体とは、例えば、受精卵の状態から孵化するまでの胚発生が進行している個体、さらには受精卵から孵化後、魚類であれば稚魚（成体型とみなす）、両生類であれば幼生になった状態で存在する個体を含む。これらの成育過程において形態が変化する個体を対象とすることができる。
【００２１】
脊椎動物としては、ラット・マウスなどの小動物に加え、ブタ・イヌ・サル・ヒトなどの大動物も使用可能であるが、好ましくは、多産である両生類・魚類である。試験設備の維持管理の点からは、小型で多産の魚類を好適に用いることができる。また、胚が透明であることが細胞・個体の内部を直接観察できるなどの点で好ましい。また、化学物質が個体としての魚類に及ぼす影響と、ヒトに対する影響とを比較するためには、そのゲノムシークエンスが判明、或いは近い将来に判明するであろうことが分かっているものを使用することが好ましい。そのような両生類・魚類として、特に好ましいものとして、アフリカツメガエル、トラフグ、メダカ、ゼブラフィッシュを挙げることができる。
【００２２】
（生体保持用シート）
以下に、本発明で用いられる生体保持用シートを詳細に説明する。本発明の生体保持用シートの一例を図１に示す。生体保持用シートは、ベース（基体）１に複数の貫通した空孔（開口部）２を有する。該空孔は、１個の生体を保持可能であり、且つ２個以上の生体は保持できない大きさの空孔である。また生体と液体が保持可能に設計されていることが望ましい。液体は生体保持用シートの空孔の内壁に対して液体の相互作用力（付着力）で保持され、さらに生体は液体に包み込まれる状態で液体の表面張力により保持されると推測される。よって、生体保持用シートは、各空孔内に１個の生体を含む液体を保持し、該空孔は、空孔内に保持させた液体とともに１個の生体を保持可能であり、且つ２個以上の該生体は保持できない大きさの空孔であることが好ましい。つまり空孔の大きさは、１個の生体を含む液体を保持可能であり、且つ２個以上の該生体を含む液体は保持できない大きさであることが好ましい。一例として、生体がほぼ球形で、空孔2が円形である場合の生体3が空孔内に液体4とともにシートに保持される様子を模式化したシートの断面図と平面図を図2に示す。
【００２３】
該ベースの材質は、空孔を形成できる材料であれば如何なるものでも使用できる。例えば、鉄、銅、アルミニウムなどの金属類、またはそれらを含む合金類、ガラス、アルミナ、シリコンなどのセラミックス類、あるいはテフロン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリアセタール、シリコンゴム、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ナイロンなどのプラスチック樹脂、またはそれらの複合材料が使用できる。但し、ベースの材質は、基本的に水に溶解したり、その成分が溶出しないものが好ましい。また、生体保持用シートの空孔内壁は液体が保持しやすいように、親水化処理を施したり粗面化しても良い。生体保持用シート表面の素材の色は特にこだわらないが、顕微鏡観察には光の反射を抑える素材、さらに蛍光顕微鏡観察などを行う場合は自家蛍光のない素材が望ましい。
【００２４】
本発明においては、貫通した空孔２は、生体のサイズにより適当な開口面積を有し、かつ適当な厚みでなければならない。つまり、生体１個を空孔に効率よく安定に保持させるには、空孔のサイズ（大きさ）、すなわち、開口面積と厚みとが大きく影響することが見出されている。
【００２５】
また空孔の形状については、図１において例示した形状は円形であるが、四角形などの多角形、楕円形、星型などいずれの形状でも良い。ただし、空孔の開口面積は、生体１個を空孔に効率よく安定に保持させるための重要なパラメータとなる。
【００２６】
本発明のシートは有限の厚みを有しているため、実際は上記の形状が表面から裏面までその形状を保持した状態で貫通するシリンダーの構造を有している。この場合、シートの平面と垂直方向に貫通する構成が好ましい。すなわち、空孔の形状としては、円形であれば円柱構造であり、四角形であれば四角柱の構造を有していると良い。
【００２７】
さらに、実施例に示すような、稚魚や両生類の幼生の輪郭に沿った形状を有する空孔であってもよい。また、成育している個体を対象とし、受精卵から始まり、孵化後、稚魚となる場合では、卵および稚魚のいずれの形態でも保持できる形状を有することができる。具体的には、卵細胞を保持する領域であって孵化後に頭部が保持される領域（卵細胞保持エリア）と、孵化後の稚魚の胴体および尾部を保持する領域（成育エリア）とを組み合わせた形状を有することができる。卵細胞保持エリアは、受精卵と空孔内壁との距離を小さくして保持力を高くするために、円形（あるいは円形の一部を含む形状）であることが好ましい。また、成育エリアの幅は円形である卵細胞保持エリアの径と比べてより小さいほど、円形部分がより多く残る（つまり弧がより大きくなる）ことから、細胞を保持する力が相対的に大きくなるため好ましい。このような形状では、成育エリアの分だけ空孔全体の断面積が大きくなったとしても、卵細胞保持エリアの円形部分との保持力が働くため、同じ断面積を有する円形の空孔と比べて卵細胞は相対的に強く保持される。そのため、円形からなる空孔と比べて、空孔の開口面積に対する生体の断面積の割合（開口面積比）がより低い範囲においても、細胞を保持することができる。
【００２８】
１つの空孔の開口面積は、それぞれ対象とする生体の最大断面積の1.05倍から3.61倍の範囲であることが好ましい。空孔の開口面積が生体の最大断面積の1.05倍未満であれば空孔に生体が配置されにくく、また3.61倍より大きいと複数個配置する場合が多くなる。また、生体を１個ずつ空孔に保持する確率をより高めるために安定的に保持させるには、より好ましくは１つの空孔の開口面積は、生体の最大断面積の1.2倍から1.96倍の範囲であることが好ましい。生体の最大断面積とは、卵などの球及び略球体であれば、球の重心を通る切断面の面積が該当する。例えば、卵細胞の最大断面積0.79ｍｍである直径が1mm程度の卵細胞の場合は、円形である空孔の開口面積は、0.87〜2.83ｍｍの範囲であることが好ましい。また、生体として稚魚や両生類の幼生を対象とする場合は、液体を保持する空孔中において安定して取り得る体勢での最大となる断面積について求めることができる。また、生体保持シートは、生体を保持する際は通常、水平に保たれることが好ましい。
【００２９】
また、２個以上の生体が保持できない大きさとは、少なくとも空孔に対して生体の最大断面積となる断面の２つを幾何学的に配置できない大きさを示す。
【００３０】
また、同一のべース基材に異なる複数面積の空孔が設けられていてもよい。
【００３１】
ベース基材の厚みは、特に均一である必要はない。しかし、空孔部近傍の厚みは、生体粒子を一つだけ配列させる目的では、それぞれ対象とする生体の最大の厚さの0.2倍から1.9倍の厚みであることが望ましい。生体の最大の厚さは、卵などの球及び略球体であれば、最大の断面積の直径を指す。また、生体として稚魚や両生類の幼生である場合、実際に生体保持用シートの液体を保持する空孔中において安定して取り得る体勢において求めることができる。例として、直径が1mm程度の卵細胞を保持する場合、空孔の厚さは0.2ｍｍ〜1.9ｍｍの範囲であることが好ましい。生体の最大の厚さ（球体の場合は直径）の0.2倍未満であれば個体に対して液体の保持量が少ないために安定に生体を保持できない。その結果、配列の際に脱落する割合が増える。また、生体の最大の厚さ（球体の場合は直径）の1.9倍より大きいと複数の生体が保持される割合が増えて目的が達成できない。
【００３２】
また、空孔部近傍の厚みを生体の最大の厚さの1.0倍以下にすることで、孔の中心に生体を精度よく配置できる。これにより、各孔中の生体の中心を一平面に配置することができる。ＣＣＤなどのアレイセンサーで画像を取得する際に、焦点深度を複数生体に対してそろえることができるので、複数の生体を同時に焦点を合わせて観察することができるようになる。
【００３３】
また、生体保持用シート１は、ベース１に複数の貫通した空孔２を有しており、その配置は、いかなる領域でもよいが、規則的に配列されているほうが自動化をする上で好ましい。また、１つのベース１に設けられる空孔の個数や配置密度に何ら制限は無いが、操作上の観点からは、空孔の直径がおよそ１ｍｍ程度であれば、配置密度が5個/ｃｍ2〜70個/ｃｍ2の範囲にあることが好ましく、10個/ｃｍ2〜40個/ｃｍ2の範囲にあることがより好ましい。すなわち5個/ｃｍ2未満であれば、空孔以外の面積が広く、その領域に水滴が孤立しやすくなる。従って該水滴と伴に空孔以外の領域に生体が配置され、配列の効率が低下する。また、70個/ｃｍ2より大きいと、空孔間の距離が十分取れないために、その後の取り扱いで個体を保持する液体が隣の空孔の保持する液体と交じり合うなどコンタミネーションしやすくなる不具合が起こりやすい。
【００３４】
すなわち、生体保持用シートの空孔の面積比（開口率）は、7.9％〜70％の範囲に入ることが望ましい。
【００３５】
また、本発明は、生体保持用シートの複数の空孔に対象とする生体をそれぞれ１個ずつ保持することが好ましいが、必ずしもシートのすべての空孔内に生体を保持していなくても良い。但し、生体を保持させる空孔の割合が極端に低下すると、後の工程で生体を試験する際に、効率が低下する。
【００３６】
本発明の生体保持用シートは、貫通した空孔であることで特徴付けられるが、従来の底のあるウエルと比較して、次のような利点があげられる。
i) 生体を配列することが容易である
ii) 生体を取り出すことが容易である
iii) 生体が底板に接触することはないので、成育に底板からの刺激等の影響を受けない
iv) 空孔内の液体が外気と接触する面積が大きくガス交換が行われやすい
v) 観察工程において、底板がないため底板による反射光や自家蛍光などのノイズ要因がない
（生体を保持させる方法）
本発明による生体保持用シートを用いれば、胚などの生体を簡便に配置することができる。具体的には生体を分散した液体を該生体保持用シート上に接触させることで、液体とともに簡単に空孔に胚を１個ずつ配置することができる。すなわち、生体を保持させる方法は、対象となる１個の生体を保持可能であり、且つ２個以上の前記生体は保持できない大きさの貫通した空孔が複数配置されているシートを用いて、該シートの複数の空孔中に液体とともに前記生体をそれぞれ１個ずつ保持させることで生体を配置して保持する方法である。
【００３７】
本発明の大きな特徴は、貫通した空孔において生体１つを共存する液体とともに保持されることである。貫通した空孔内にその空孔の一部の断面が生体サイズより小さくなるように突起部分を形成したり、底板を組み合わせて形状で生体を支える公知の従来技術とは明確に差別される。
【００３８】
生体保持用シートに生体を含有する液体を接触させる方法として、該シートに含有液体を上方から注ぐ方法や含有液体の中に該シートを浸漬する方法などいずれの方法でも良い。含有液体を上方から注ぐ方法の一つとして、公知のスリット型塗布機を利用すれば、スリットダイから含有液体を該シート全面に均一に載せることができる。また接触後の過剰の含有液体を排除するには、該シートを傾けたり、その背面をブレードでふき取ったり、エアーを吹きつけたりすることで簡単に出来る。但し、エアーを吹き付ける場合は、空孔に保持された生体を吹き飛ばさないように、風圧や吹き付け角度を制御する必要がある。また、余剰の液体が複数の空孔部の液体を繋げるように存在すると空孔間でコンタミネーションを起こしやすくなる。また空孔部以外に生体が保持されやすくなる。そのため空孔部以外の部位には、できるだけ液滴を残さないようにすることが好ましい。含有液体としては、多数の魚卵が水中に懸濁している懸濁液が挙げられる。
【００３９】
生体保持用シートの少なくとも一方の表面が疎水性表面であることが好ましい。該シートの少なくとも一方の表面が疎水性表面であれば、空孔以外の領域で水性液体がはじかれるために容易に過剰の液体を取り除くことが出来る。その場合おおむね疎水性表面の液体に対する接触角は90度以上であればよい。
【００４０】
生体保持用シートにおいて、液体の表面張力で生体を保持するためには、おおむね２５mN/m以上の表面張力を有する液体が好ましい。２５mN/m未満であれば、生体が液体と共に空孔内に保持されにくくなり、わずかな振動で落下することも多くなる。生体とともにシートに保持させる液体は、生体と親和性が高くかつ空孔の内壁に付着しやすい水性の液体が好ましい。
【００４１】
水性の液体としては、水、あるいは、アルコール、グリコール系溶媒もしくはグリセリンなどの水溶性の液体、ならびにこれらの水溶性の液体を含む水溶液などが挙げられるが、前記水溶液の場合は、特に水が50％以上含まれていることが望ましい。さらに、シートから生体を保持する液体の蒸発を防ぐ目的あるいは、生体の保持を安定化する目的のために、保湿剤、表面張力調整剤、増粘剤の少なくともいずれかを添加することができる。
【００４２】
こうした添加物の例としては、保湿剤としては、グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコールおよびソルビットなどの多価アルコール類、ヒアルロン酸およびコンドロイチン硫酸などのムコ多糖葵質、可溶性コラーゲン、ユラスチンおよびケラチンなどのたんぱく質加水分解物など単独または複数混合して用いることができる。
【００４３】
表面張力調整剤としては、水溶性のアニオン性、カチオン性、両性もしくはノニオン性の界面活性剤を一種類または複数種を添加することが出来る。但し液体の表面張力が２５mN/m未満にならない添加量が好ましい。
【００４４】
また、増粘剤としては、例えば酸化変性澱粉、酵素変性澱粉、熱化学変性澱粉、カチオン性澱粉、両性澱粉およびエステル化澱粉等の澱粉類、
カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびエチルセルロース等のセルロース誘導体、カゼイン、ゼラチンおよび大豆蛋白等の天然又は半合成高分子類、
あるいは完全又は部分ケン化のポリビニルアルコール、アセトアセチル化ポリビニルアルコール、カルボキシ変性ポリビニルアルコール、オレフィン変性ポリビニルアルコールおよびシリル変性ポリビニルアルコール等のポリビニルアルコール類、
などの水溶性高分子化合物が挙げられ、これらの中少なくとも１種の水溶性高分子化合物を適宜選択して使用することができる。
【００４５】
本発明において、使用される液体の好ましい粘度は、０．１Ｐａ・ｓ（パスカル秒）以上であり、必要に応じて上記の増粘剤を添加すれば良い。
【００４６】
また、生体に適した塩濃度やｐHに制御することも必要であれば、塩化ナトリウムのような塩類や各種ｐH調整剤を、また、防腐剤や抗菌剤を適宜に添加することもできる。
【００４７】
（物質の投与）
本発明の方法では、生体を生体保持用シートに保持した後に、更に、シートに保持した生体の各々に対して物質を投与し、該物質との相関を試験する工程を有する試験を行うことができる。
【００４８】
生体保持用シートの空孔に液体とともに保持した生体に物質を投与して、その作用を調べる工程について詳細に説明する。
【００４９】
生体に投与する物質としては、なんら限定されるものではないが、有機、無機の化学物質、金属及びその化合物、生体の構成物質、生体由来の生理活性物質やDNA、菌、ウイルスなど、またそれら化学物質との複合体や複数の化学物質の混合物などを包含する。物質の投与は、生体保持用シートの空孔に１種類もしくは複数種類の物質を含む液体で付与することが好ましい。
【００５０】
本発明においては、生体に投与した物質が作用するか否かを調べることができる。また作用する場合には投与量変化に対する作用や経時的な作用の変化を調べることができる。物質を投与する方法としては、水や有機溶剤などの溶媒中に物質を溶解もしくは分散状態にして液体として投与する方法が好適に用いることができる。こうした液体を液滴化して吐出することで生体保持用シートの空孔に保持された生体に直接投与することができる。液体を液滴化する装置としてマイクロピペット、マイクロディスペンサーや、エネルギー発生素子を用いてノズルから液滴を吐出する装置、すなわちインクジェット法を用いた吐出装置が挙げられる。微少な液滴が吐出できる点でインクジェット法を用いた吐出装置を好適に用いることができる。さらにインクジェット法の中でも、サーマルインクジェット法とピエゾインクジェット法が好適に用いることができる。
【００５１】
本発明においては、液体１滴あたりの体積が１００ｐｌ（ピコリットル）以下の液滴で投与することが好ましい。すなわち生体保持用シートの空孔に液体とともに保持されている微細な生体に対し、液滴が１００ｐｌより大きいとその液滴の吐出圧力で生体が脱落する恐れがある。また、生体に対して局在的な投与を避けるために空孔のエリア全面に分散して微小液滴を滴下することが好ましい。その場合、一つの空孔に対して分散して１００滴以上で投与するのが望ましい。そうすることで、エリア内の生体に対し物質を再現よく作用させることが出来る。好ましい投与の液滴位置を模式的に図３に示す。図３は、生体保持用シートの模式平面図で図中に液滴の着弾位置５を表す。
【００５２】
（液交換）
本発明においては、生体に投与した物質の作用期間を制御する目的や生体から分泌する物質を除去する目的で、生体を保持した空孔内の液体を交換することができる。
【００５３】
その場合、空孔に保持された生体が、空孔から脱落しないように円滑に液交換を行うことが必要である。円滑に液交換を行うためには、生体保持用シートの生体を保持する空孔に連通した液交換部位を設けることが好ましい。
【００５４】
液交換部位を設けた生体保持用シートの一例を図１４に示す。図14においては、1個の生体を保持可能な貫通した空孔41に連通した液交換部位42が設けられている。また、液交換をより効率的に行うために空孔に対して連通した複数の液交換部位42,43を設けても良い。液交換部位は、生体を保持する空孔41より面積の小さい空孔であることが好ましい。すなわち生体を保持する空孔41と同等もしくそれ以上の大きな面積であれば、液交換部位に生体が配置されて目的の液交換が難しくなる。また、液交換部位は貫通した空孔（液交換用空孔）でなく、底のある窪み（ウエル）で構成しても良い。いずれにしても生体を保持可能な貫通した空孔41と液交換部位は自由に液体が流れる必要がある。より円滑に液交換する方法として、具体的な１例を挙げるとすると、液交換部位42に交換する目的の液体を滴下すると同時に液交換部位43から液体を吸引すると液量に大きな変動を生じさせないで液交換が円滑に行える。また液交換部位42にチューブもしくは細線を接続して余剰の液体を下方に自然に排出することも可能である。
【００５５】
（生体の観察）
本発明において観察手段は、生体の状態及び変化を画像として捉える手段である。
【００５６】
より具体的には、生体の形状については、生体保持用シートに保持されている生体に対して可視光を照射して、撮像手段で観察可能である。撮像手段は、カメラやCCDなどを使用することが出来る。また、撮像部と生体との間にレンズ系を備えて生体を拡大してより細部を観察することもできる。
【００５７】
また、本発明では生体から蛍光を観察する手段も含むことができる。蛍光観察手段は、生体保持用シートに保持されている生体に対して励起光光源にから励起光を照射して、発光している生体を撮像手段で観察する。蛍光の撮像手段は、カメラやCCD以外にスキャナーなども使用することができる。このように生体に励起光を照射することにより生体の内部において発光させた状態で、生体を撮像すれば発光部位を容易に検出することができる。また、可視光を照射して得られた明視野画像と、励起光を照射して得られた蛍光画像を画像処理手段で合わせることで、より詳細に生体を観察することもできる。
【００５８】
（生体の成育）
本発明の生体保持用シートの空孔内で生体は成育することが出来る。よって、本発明は、生体保持用シートに生体を保持した後に、更に、生体保持用シートの空孔内で生体を成育させる工程を有する複数生体を用いた成育方法を包含する。また、成育工程においては成育のために生体の各々に対して物質（例えば、生体の生存を維持するための栄養物質など）を投与することが好ましい。このような成育方法では、胚を成育することも可能で、孵化させることも可能である。
【００５９】
長期に生体の成育を行っていくためには、生体を保持したシート近傍を所定の環境に制御することが重要である。すなわち、温度をそれぞれの生体の維持成育に適した温度にすることが好ましい。
【００６０】
例えば、ゼブラフィッシュ卵の成育には、生体保持用シートの空孔内が摂氏２５度〜３０度に保たれるように周囲の温度を制御する必要がある。
【００６１】
また、生体の成育には、生体保持用シートの空孔内の液体の蒸発は、出来るだけ抑えることが重要である。従って空孔周辺の相対湿度は60％以上により好ましくは80％以上に保持する。
【００６２】
また、生体を維持成育する目的で、生体保持用シートの空孔内に水などの生体維持材料を上記の投与手段で投与することもできる。また成育途中過程において、蒸気・スプレー・ミスト・マイクロピペッティング・インクジェット吐出装置などの方法により、さらに化学物質・生体維持材料などを追加投与することができる。
【００６３】
（空孔から生体の移送）
本発明において、生体保持用シートの大きな特徴は、生体のサイズより大きい貫通した空孔中に保持されているため、容易に特定の生体保持用シートの空孔内から他の容器に生体を移送できることである。
【００６４】
すなわち、生体保持用シートの空孔は従来の底面のあるウエルと異なり、貫通した空孔に保持した生体は、ピペットなどの操作なしに容易に取り出すことができる。生体を取り出す手段としては、取り出す生体が配置された空孔内に一方の開口から力を加え、対向する開口側から取り出せばよい。
【００６５】
具体的な例としては、棒状のピンで直接押す方法や空気圧を利用してエアーを吹き付ける方法などを用いることが出来る（図5,6）。また、エアーの代わりに水圧を利用しても良い。生体に与えるダメージを少なくするには空気圧を利用する方法が好ましく、さらに生体保持用シートの下方に容器なるウエルを配置することで特定の生体を簡便に高速に特定の容器に移送することが可能になる。よって、本方法では、空孔から生体を移送する工程が、移送すべき生体を含む空孔として選択された空孔に気体を吹き付けて別の容器に吹き飛ばす工程を有することが好ましい。
【００６６】
（生体保持用シートの他の使用例）
本発明の生体保持用シートは、生体を空孔内に保持させ配列した後に、底板として平面板10を接触させた構成で使用することもできる（図7）。そうすることで、より安定的に生体を保持することが可能になり、例えば導入針を使って遺伝子、蛋白質ペプチドなどの化学物質を生体内部に直接注入することもできる。
【００６７】
（生体保持用シートを用いた応用例）
本発明の生体保持用シートを用いることで、生体自体の観察や、生体に投与された物質による影響をハイスループットで分析することができる。近年、魚卵（特にゼブラフィッシュ）を用いて、化学物質の毒性を調査する試みも為されており、本発明はこれに用いることができる。
【００６８】
また、各種薬剤の活性や、水質の調査など、対象となる試料を生体に投与し、その相互作用を分析及びスクリーニングする手段としても有用である。
【００６９】
（処理装置）
上記生体を保持するシートを用いて、生体に対して処理を行う装置は、シートを保持するための保持手段を有し、更に、以下の手段（Ａ）〜（Ｇ）の少なくとも１つを有する処理装置である。
（Ａ）前記シートの空孔に生体を配置させるための手段、
（Ｂ）前記シートの周囲環境を所定の環境にするための手段、
（Ｃ）前記シートの空孔に液滴を付与するための付与手段、
（Ｄ）前記シートの空孔に保持された生体の状態を観察するための観察手段、
（Ｅ）前記シートの空孔に保持された生体をシートから移送するための移送手段、
（Ｆ）前記シートの空孔の位置を認識する認識手段。
（Ｇ）前記シートの空孔に生体を保持した状態で空孔内の液体を液交換するための手段。
【００７０】
本発明の生体保持用シートを使用して、生体を処理する装置のシステム構成例を図8に示す。次に、この装置の動作の例について説明する。多数のゼブラフィッシュの卵細胞を保持した生体保持用シート11は、可動性ホルダー12に固定する。可動性ホルダー12は、生体保持用シートをX―Yの2軸方向に可動させることが出来る。ここで、Ｙ方向は、図８のX方向25に対して垂直な方向（紙面に垂直な方向）を示す。生体保持用シートは、常に一定の環境に維持できるようにチャンバー13に囲われている。チャンバーは、温湿度制御装置14（装置手段（Ｂ））で内部の温度、湿度がコントロールされている。本形態では、所望の温度、湿度にコントロールして水分の蒸発を防ぎかつ卵細胞が成育する環境に保持できる。化学物質を卵細胞に作用させる手段として、液滴を吐出する一軸方向（X軸）に可動性の液体吐出装置15（装置手段（C））を備えている。液体吐出装置としては、１〜数十ピコリットルの所望の液滴をオンデマンドに供給できる所謂インクジェット吐出装置を利用できる。インクジェット吐出装置は、エネルギー発生素子によって液体に吐出エネルギーを付与し、ノズルから液滴を吐出させる装置である。
【００７１】
本形態では、卵細胞に対してCycloheximide溶液（10mｇ/ｍｌ）等の化学物質を含む液体を付与する。所定量の液滴をそれぞれの卵細胞に付与する。この際に濃度を３以上の異なる濃度で、同じ濃度の化学物質を３以上の卵細胞にそれぞれ投与することが良い。また、ブランクとして化学物質を付与しない卵細胞と共にそれらの卵細胞を成育するとよい。さらに、化学物質を卵細胞に作用させた後に、完全に液交換（洗浄）する場合は、図15で示す寸法の液交換部位を設けた生体保持用シートを使用するとよい。
【００７２】
卵細胞に対して化学物質の付与後所定時間経過後に液交換部位に液体吐出装置を用いて水を100ｎＬとなるように滴下する。同時に過剰になる液体は、図16に示すように液交換手段であるキャピラリー（装置手段（Ｇ））（外径0.68mm内径0.20mm）を液交換部位に接触させて取り除く。キャピラリーは、金属やガラスで構成され、キャピラリー内の空気を吸引または排気可能なポンプ手段やシリンジに接続されていてもよい。以上の操作を複数回繰り返して液交換を行う。
【００７３】
卵細胞の観察は、照明部16から可視光（白色光：波長300〜900nm）を生体保持用シートに保持した卵細胞に照射しながら生体保持用シートの下方に具備したCCDカメラ17（装置手段（D））で明視野画像を撮影する。
【００７４】
また、照明部16から分光した波長480〜490nm励起光を照射してCCDカメラで蛍光画像を撮影してもよい。この場合、化学物質を投与してから、経時的に2時間後、4時間後、8時間後、16時間後にAcridine Orange(5mg/mL)等の蛍光性の生体染色物質を再び液体吐出装置15を用いて付与して染色できる。さらに所定時間静置した後、可視画像と蛍光画像を撮影する。撮影した画像は、モニター22で確認して制御部23に保存する。制御部は、生体保持用シートの空孔位置を認識するセンサー部24（装置手段（F））から位置情報を受け取り、可動性ホルダー12を介して生体保持用シートの空孔位置を制御する。
【００７５】
また、16時間後に化学物質を作用させた卵細胞と化学物質を作用させていない卵細胞に対して、圧縮空気供給装置19から電磁バルブ20を経由してガス噴射ノズル18（装置手段（E））から空気を噴射して、下部に設置された個々に水の入った収集容器21に卵細胞を落下させることもできる。この場合、数日後（約２日）に孵化するので、さらに稚魚を成育させることもできる。
【００７６】
また、図６には示されないが、シートの空孔に生体を配置させるための手段（装置手段（Ａ））としては、スリット型塗布機などの生体含有液体をシートに接触させる手段が挙げられる。
【実施例】
【００７７】
（実施例１）
次に、生体としてゼブラフィッシュ及びアフリカツメガエルの卵細胞を用いた場合の保持用シート、試験方法及び処理装置について実施例を示して説明する。
【００７８】
＜生体保持用シートの作成＞
種々の厚みの１００ｍｍ角のポリプロピレンシートを加工して、生体保持用シートを以下の仕様で作成した。
【００７９】
空孔の形状は、図４で示すように円形もしくは正方形で空孔が等間隔になるように、空孔径（R）と同じ寸法を離して４００個（縦２０列横２０列）の空孔を形成した。
【００８０】
平均直径約１ｍｍのゼブラフィッシュの卵細胞を保持検討する目的で作成した生体保持用シートの仕様について表１（空孔形状が円形（直径Ｄ））に示す。
【００８１】
また、空孔の形状が、正方形（１辺の長さをＬとする）の場合の仕様について表２に示す。
【００８２】
表１、と表２で生体として用いたゼブラフィッシュの卵細胞の平均直径は、ほぼ1.0ｍｍである。従って、表１と表２で記載した厚み比（Ｔｈ）は、シートの厚みをｔ  ｍｍとした場合ｔ/1より算出される。また、開口面積比は、胚の最大面積Ｓ0に対する開口面積Ｓ1の比（Ｓ1/Ｓ0）として算出される。
【００８３】
＜卵細胞の配置＞
ゼブラフィッシュの卵細胞の水懸濁液50ｍｌ（20個/ｍｌ）を上記の生体保持用シートに上部から注ぎ、接触させた後、前記シートから余剰の液体を除去することで、該空孔中に存在する液体とともに前記シートの空孔の各々に卵細胞を保持させた。生体保持用シート上の余剰の液体はシートを傾けて落とし、開口部以外の場所に水滴が残らないようにした。
【００８４】
＜配置効率の評価＞
上記の方法で得られた卵細胞を配置した生体保持用シートの各開口部（空孔）を実態顕微鏡で観察して各空孔の卵細胞の保持状態を観察した。
【００８５】
各生体保持用シートの４００個の空孔に対して卵細胞１個だけ保持している空孔を計数した。卵細胞が保持されていないものや２個以上保持されているものを除いて計数した。そして、正確に卵細胞が１個入った空孔の割合を配置効率として算出した。また、表1において、卵細胞配置の効率評価を記したが、配置効率90％以上の生体保持用シートは◎、70％〜80％は○、50％〜70％を△、50％以下を×とした。
【００８６】
【表１】
0005295733.tif 000002
【００８７】
【表２】
0005295733.tif 000003
【００８８】
＜アフリカツメガエルの卵細胞の配置＞
厚さ0.9ｍｍの100ｍｍ角のステンレスシートを打ち抜き加工して、生体保持用シートを以下の仕様で作成した。
【００８９】
空孔の形状は、同様に図4で示すように円形で空孔が等間隔になるように、空孔径(R)と同じ寸法を離して４００個（縦２０列横２０列）の空孔を形成した。平均直径約１.３ｍｍのアフリカツメガエルの卵細胞を保持検討する目的で作成した生体保持用シートの仕様について表3（空孔形状が直径Ｄの円形）に示す。アフリカツメガエルの卵細胞の水懸濁液50ｍｌ（20個/ｍｌ）を上記の生体保持用シートに上部から注ぎ、接触させた後、前記シートから余剰の液体を除去することで、該空孔中に存在する液体とともにシートの空孔の各々に卵細胞を保持させた。生体保持用シート上の余剰の液体はシートを傾けて落とし、開口部以外の場所に水滴が残らないようにした。
【００９０】
上記の方法で得られた卵細胞を配置した生体保持用シートの各開口部を実体顕微鏡で観察して各空孔の卵細胞の保持状態を観察した。配置効率の評価は、ゼブラフィッシュ卵細胞の評価法と同様の方法で評価して表3に合わせて示した。
【００９１】
【表３】
0005295733.tif 000004
【００９２】
本発明の生体保持用シートを用いて、観察する方法を以下に具体的に説明する。20個のゼブラフィッシュの卵細胞を保持した生体保持用シート（表1、Ｎｏ5）11を用いた。生体保持用シートは、常に一定の環境に維持できるようにチャンバー内に配置した。チャンバーは、内部の温度、湿度がコントロールされている。本実施例では、温度２８℃、相対湿度85％RHにコントロールして水分の蒸発を防ぎかつ卵細胞が成育する環境に保持した。化学物質を卵細胞に作用させる手段として、キヤノン製インクジェットプリンタ  商品名BJF850から取り外した4ｐｌの液滴を吐出するインクジェット装置を用いた。本実施例では、卵細胞に対してCycloheximide溶液（10mｇ/ｍｌ）をそれぞれ総量として、0.8nL、8nL,80nＬ、800nLになるように所定量の液滴をそれぞれ3個ずつ計12個の卵細胞に付与した。ブランクとしてCycloheximide溶液を付与しない卵細胞3個と共に15個の卵細胞を成育した。
【００９３】
卵細胞の観察は、可視光（白色光：波長300〜900nm）を生体保持用シートに保持した卵細胞に照射しながら生体保持用シートの下方に具備したCCDカメラで明視野画像を撮影した。撮影した明視野画像を図12-Ａに示す。また、照明部16から分光した波長480〜490nm励起光を照射してCCDカメラで蛍光画像を撮影した。化学物質を投与してから、経時的に2時間後、4時間後、8時間後、16時間後にAcridine Orange(5mg/mL)を再びインクジェット装置を用いて総量が1nＬとなるように付与し染色した。さらに30分間静置した後、可視画像と蛍光画像を撮影した。化学物質を投与してから4時間後に染色して得られた蛍光画像を図12-Ｂに示す。  また、16時間後に化学物質作用させた卵細胞と化学物質を作用させていない卵細胞に対して、市販のガス噴射ノズルから空気を噴射して、下部に設置された個々に収集容器に卵細胞を落下させた。容器には、水が入っていて2日後に孵化し、さらに稚魚を成育させた。
【００９４】
（実施例２）
＜稚魚用生体保持用シートを用いた成育＞
本実施例においては、生体保持用シートで受精卵を配置後、成育、孵化させ稚魚を配置した状態で孵化以降５日以上成育することが出来る。
【００９５】
採卵直後のゼブラフィッシュの受精卵を孵化以降５日以上成育するために適した生体保持用シートの空孔の断面形状の例を図9に示す。このような形状には、稚魚や両生類の幼生の輪郭に類似させた形状とすることができる。このような形状として、頭部を収容する頭部領域と、胴部および尾部を収容する胴体領域とを有する形状を好適に用いることができる。例えば、単純な楕円形または、頭部領域として円や略円形を有し、胴体領域として、矩形、三角形、さらには矩形と三角形などの多角形とを組み合わせた形状を有してもよい（図９）。また生体保持用シートの開口部の長軸方向の寸法は、稚魚や幼生の長さに対して1.1倍から2倍程度の長さが望ましい。例えば、長さ4ｍｍの稚魚に対して開口部の長軸方向の寸法は、4.4ｍｍ〜8ｍｍの範囲であることが好ましい。
【００９６】
実施の一例として、厚み0.7ｍｍの100ｍｍｘ150ｍｍの大きさのテフロンシートを長さ約4ｍｍの稚魚の輪郭に類似させた形状になるよう図１０に示すように打ち抜き加工した。また、開口部の形状は、卵細胞保持エリア31と、孵化後稚魚が成長した状態でも育てることができるために、稚魚の成長する部分（例えば、胴部や尾部）を保持する育成エリア32が設けられている。開口部を拡大した寸法を図１１に示す。このような卵から稚魚への成長を連続して保持できる形状として図９に示した形状を用いることもできる。
【００９７】
ゼブラフィッシュの卵細胞の懸濁液50ｍｌ（20個/ｍｌ）に増粘剤としてメチルセルロースを0.03ｗｔ％になるように添加した。懸濁液には、蒸留水にアクアリウムシステムズ社製インスタントオーシャン（最終濃度６０μg/mL）を溶解して使用した。さらに抗菌剤としてペニシリン５Unit/mL、ストレプトマイシン５μg/mLになるように添加した。上記の生体保持用シートに上部から該受精卵の懸濁液を注いだ。さらに前記シートから余剰の液体を除去した。前記シートの卵細胞保持エリアの各々に該空孔中に存在する液体とともに卵細胞を保持させた。生体保持用シート上の余剰の液体はシートを傾けて落とし、開口部以外の場所に水滴が残らないようにした。
【００９８】
このように卵細胞を保持させた生体保持用シートを上記の処理装置に取り付けて明視野観察後（図１３‐Ａ）、そのまま放置して卵細胞を孵化させた。その間、空孔内の水の蒸発を補う目的で、インクジェット装置から適宜水を吐出した。孵化してから3日後に再度明視野観察を行った。該明視野画像を図１３‐Ｂに示す。次に化学物質として稚魚に対して2-(4-(dimethylamino)styryl)-N-ethylpyridinium iodide (DASPEI) 溶液（38ｍｇ/ｍｌ）を5nlになるように所定量の液滴を付与した。付与した後、5時間経過後に撮影した蛍光画像を図１３‐Ｃに示す。
【図面の簡単な説明】
【００９９】
【図１】生体保持用シートの一例の図。
【図２】生体保持用シートに生体が保持されている様子を模式的に表した断面図と平面図。
【図３】生体を保持した空孔部に生理活性物質の溶液を均一になるようにインクジェット部から微小液滴を吐出した様子を模式的示した平面図。
【図４】実施例で使用した生体保持用シートの平面図。
【図５】特定の生体保持用シートの空孔内から生体をエアーを吹き付けることによって他の容器に生体を移送する様子を現した一例の図。
【図６】特定の生体保持用シートの空孔内から生体をピンで押しだすことによって他の容器に生体を移送する様子を現した図。
【図７】底板付の生体保持用シートの断面構成例。
【図８】実施例で使用した処理装置のシステム構成の概略図。
【図９】稚魚用生体保持用シートの形状の例。
【図１０】実施例で使用した稚魚用生体保持用シートの平面図。
【図１１】実施例で使用した稚魚用生体保持用シートの一部分の平面寸法図。
【図１２】実施例で撮影した卵細胞の画像。
【図１３】実施例で撮影した卵細胞および稚魚の画像。
【図１４】液交換部位を設けた生体保持用シートの部分拡大図。
【図１５】液交換部位を設けた生体保持用シートの一部分の平面寸法図。
【符号の説明】
【０１００】
1：ベース（基体）
2：貫通した空孔
3：生体
4：液体
5：化学物質の着弾位置
6：ノズル
7：エアー
8：ピン
9：容器
10：底板
11：生体保持用シート
12：可動性ホルダー
13：チャンバー
14：温湿度制御装置
15：インクジェット装置
16：照明部
17：ＣＣＤカメラ
18：ガス噴射ノズル
19：圧縮空気供給装置
20：電磁バルブ
21：収集容器
22：モニター
23：制御部
24：センサー部
25：Ｘ軸方向
31：卵細胞保持エリア
32：成育エリア
41：  生体保持部位
42、43：  液交換部位
【図１】
0005295733.tif 000005
【図２】
0005295733.tif 000006
【図３】
0005295733.tif 000007
【図４】
0005295733.tif 000008
【図５】
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【図６】
0005295733.tif 000010
【図７】
0005295733.tif 000011
【図８】
0005295733.tif 000012
【図９】
0005295733.tif 000013
【図１０】
0005295733.tif 000014
【図１１】
0005295733.tif 000015
【図１２】
0005295733.tif 000016
【図１３】
0005295733.tif 000017
【図１４】
0005295733.tif 000018
【図１５】
0005295733.tif 000019