(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも３のアミノ酸によってなるペプチド骨格を含む多抗原性グリコペプチド：
【化１】
0005111705.tif 000087
であって、
ここで二以上の前記アミノ酸において、下記の構造のｎ−アルキルグリコシド部分：
【化２】
0005111705.tif 000088
が、アミノ酸残基のα炭素にメチレン基を介して結合しており、
Ａの各存在が、下記の構造：
【化３】
0005111705.tif 000089
[式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ０は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は各々独立に、水素、ＯＨ、ＯＲｉ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＲｉ、Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＲｉ、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒｉは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造：
【化４】
0005111705.tif 000090
（式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、及びＲ１５は各々独立に、水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ２、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ１６は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基である）
を有する糖部分である]
を有する炭水化物であり、
ｎの各存在が、独立に１乃至８であり；Ａの存在の少なくとも一が他のＡの存在とは異なる構造を有し；Ａの少なくとも一の存在が、下記の構造：
【化５】
0005111705.tif 000091
[式中、Ｒ’の各存在が、独立に、水素、または、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）からなる群より独立に選択される保護基であり；及び
式中、Ｒ”が水素または、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、及び−ＳＯ２Ｐｈからなる群より選択される保護基である]
を有する炭水化物である、多抗原性グリコペプチド。
【請求項２】
前記グリコペプチドが、下記の構造：
【化６】
0005111705.tif 000092
[式中、リンカーは、遊離のカルボン酸、（カルボキサミド）アルキルカルボキサミド、ＭＢＳ、第一級カルボキサミド、モノ-またはジ-アルキルカルボキサミド、モノ-またはジ-アリールカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（カルボキシ）アルキルカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（アルコキシカルボニル）アルキル-カルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（カルボキシ）アリールアルキルカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（アルコキシカルボニル）アルキルカルボキサミド、２乃至約２０のヒドロキシアシル残基を含むオリゴエステルフラグメント、２乃至約２０のアミノアシル残基を含むペプチドフラグメント、または直鎖状または分枝鎖状アルキルまたはアリールカルボン酸エステルのいずれかであり、式中、キャリアーはタンパク質または脂質であり；式中、ｍは１、２、または３であり；式中、ＲＡ、ＲＢ、及びＲＣはＨであり；更にＲＤ、ＲＥ、及びＲＦは、各々独立に、下記の構造：
【化７】
0005111705.tif 000093
{式中、Ａの各存在が、下記の構造：
【化８】
0005111705.tif 000094
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、炭水化物は、ＯＨ、ＣＯＯＨ、及びＮＨ２からなる群より選択される側鎖置換基の置換によって各々のアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基に結合しており；式中、Ｒ０は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は各々独立に、水素、ＯＨ、ＯＲｉ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＲｉ、Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＲｉ、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒｉは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造：
【化９】
0005111705.tif 000095
〈式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、及びＲ１５は各々独立に、水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ２、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ１６は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基である〉
を有する糖部分である）
を有する炭水化物から独立に選択される}
を有するアルキルグリコシド部分であり、式中、ｎの各存在が、独立に１乃至８である]
を有する構成物である、請求項１のグリコペプチド。
【請求項３】
キャリアータンパク質または脂質に接合している、請求項１のグリコペプチド。
【請求項４】
キャリアーがKLHである、請求項２または３のグリコペプチド。
【請求項５】
Ａの各存在が、独立にGlobo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、Ｌｅｙ、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、（２，３）ＳＴ、ＴＦ、またはＳＴＮである、請求項１の化合物または請求項２の構成物。
【請求項６】
前記化合物が、Ｔｎ、Globo-Ｈ、及びＬｅｙを含む、Ａの３つの存在を有する、請求項２の構成物。
【請求項７】
Ａの少なくとも一の存在が、下記の構造：
【化１０】
0005111705.tif 000096
[式中、Ｒ’の各存在が、独立に、水素、または、t-ブチル2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）からなる群より独立に選択される保護基であり；及び
式中、Ｒ”の各存在が、独立に、水素または、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、及び−ＳＯ２Ｐｈからなる群より選択される保護基である]
を有する炭水化物である、請求項１の化合物または請求項２の構成物。
【請求項８】
下記の構造：
【化１１】
0005111705.tif 000097
を有する複合多糖の合成方法であって、
（ａ）還元末端アルケニル基を有する糖質受容体を準備する工程；
（ｂ）適切な供与体化合物を準備する工程；及び
（ｃ）前記供与体及び受容体を、アルケニルグリコシドを生成させる条件下においてカップリングさせる工程；
を含み、
還元末端アルケニル基を有する糖質受容体を準備する工程が、下記の構造：
【化１２】
0005111705.tif 000098
[式中、Ｐは、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）からなる群より独立に選択される保護基であり、ｎは０乃至８である]
を有する受容体を準備する工程を含み、適切な供与体化合物を準備する工程が、下記の構造：
【化１３】
0005111705.tif 000099
[式中、ｎは０乃至８であり、式中、Ｐは、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）からなる群より独立に選択される保護基である]
を有する供与体を準備する工程を含む、複合多糖の合成方法。
【請求項９】
（ａ）下記の構造：
【化１４】
0005111705.tif 000100
を有するアルケニルグリコシドを提供し、前記アルケニルグリコシドを、下記の構造：
【化１５】
0005111705.tif 000101
を有するエナミドエステルを生成させる適切な条件下で反応させる工程；
（ｂ）前記エナミドエステルを、下記の構造：
【化１６】
0005111705.tif 000102
[式中、上記構造の各々について、ｎは０乃至８であり、式中、Ａは下記の構造：
【化１７】
0005111705.tif 000103
{式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ０は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９は各々独立に、水素、ＯＨ、ＯＲｉ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＲｉ、Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＲｉ、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒｉは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造：
【化１８】
0005111705.tif 000104
（式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、及びＲ１５は各々独立に、水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ２、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ１６は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基である）
を有する糖部分である}
を有する炭水化物であり、また、式中、該グリコアミノ酸構造については、Ｒ’及びＲ”は各々独立に、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）からなる群より独立に選択される保護基または水素である]
を有するグリコアミノ酸を生成させる適切な条件下で反応させる工程；
を含み、
Ａが、下記の構造：
【化１９】
0005111705.tif 000105
[式中、Ｒ’の各存在が、独立に、水素、または、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）からなる群より独立に選択される保護基であり；及び
式中、Ｒ”が水素または、t-ブチル、2-(トリメチルシリルエチル)（ＴＳＥ）、アセチル（Ａｃ）、t-ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及び9-フルオロエニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、及びトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）及び−ＳＯ２Ｐｈからなる群より選択される保護基である]
を有する炭水化物である、グリコアミノ酸の合成方法。
【請求項１０】
炭水化物が、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｌｅｙ、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、及びＴＦからなる群より選択される、請求項９の方法。
【請求項１１】
エナミドエステルを生成させる適切な条件下でアルケニルグリコシドを反応させる工程が、アルケニルグリコシドを第一に酸化開裂条件下において、第二に塩基及びホスホネートの存在下でのオレフィン化条件下において反応させてエナミドエステルを生成させる工程を含む、請求項９の方法。
【請求項１２】
前記酸化開裂条件がオゾン分解を含み、ここで塩基がテトラメチルグアニジンである、請求項１１の方法。
【請求項１３】
前記酸化開裂条件が、ＯｓＯ４及び過ヨウ素酸塩、またはＯｓＯ４及びＰｂ（ＯＡｃ）４であり、ここで塩基がリチウムt-ブトキシドまたはリチウムヘキサメチルジシリラジドである、請求項１１の方法。
【請求項１４】
グリコアミノ酸を生成させる適切な条件下で前記エナミドエステルを反応させる工程が、前記エナミドエステルを水素化条件下で反応させる工程、及び脱保護条件下における次なる反応によりグリコアミノ酸を生成させる工程を含む、請求項９の方法。
【請求項１５】
前記水素化が、非対称水素化を経て達成される、請求項１４の方法。
【請求項１６】
前記非対称水素化が、エチルＤｕＰＨＯＳ触媒前駆体を利用することによって達成される、請求項１５の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
（優先権情報）
本発明は、ここにその全体を参照のために取り込むこととする、「腫瘍関連抗原フコシルＧＭ１のｎ-ペンテニルグリコシドの合成及び生体接合」と題して１９９９年８月２０日に出願された仮出願６０／１５０，０８８に、米国連邦法規類集の§１１９（ｅ）の下に優先権を主張するものである。
【０００２】
（政府支援）
本発明は、合衆国国立衛生研究所認可番号：ＡＩ１６９４３及びＣＡ２８８２４によって支援されていた。したがって、政府は、本発明に所定の権利を有する。
【０００３】
【従来の技術】
（発明の背景）
癌患者の治療及び／または生存の延長のための、既存の治療剤の改善及び新規な治療剤の開発は、科学界において継続して研究されている主題である。これらの努力は、或る程度までは、悪性の癌細胞を殺すことにより作用する、より「伝統的な」化学療法（例えばパクリタキセル及び他の小分子及び／または天然産物に基づく療法）に向けられてきたが、抗癌反応を誘発させるための抗癌ワクチンを開発するという長期間存続している目標もあった（Lanzavechis, Science, 260, 937-944; Pardoll et al., Curr. Opin. Immunol. 1993, 5, 719-725; Livingston et al., Curr. Opin. Immunol. 1992, 4, 2; Dranoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci, USA 1993, 90, 3539; M. H. Taoet et al., Nature, 1993, 362, 755; T. Boon, Int. J. Cancer 1993, 54, 177）。癌ワクチンは、疾患の検出に続く治療の形態（例えば、免疫反応を強化することによる）として認知されるにほど遠かったが、腫瘍荷重が手術、放射線、または他の化学療法処置によって最少化された場合に、腫瘍再発及び転移に対して強化した保護を提供することのできる選択的合成ワクチンを開発することが非常に望ましい。
【０００４】
一般的に腫瘍免疫療法は、腫瘍が、適切に訓練された免疫機構により対処または処理された場合に認識可能な、特定の抗原を有しているとの理論に基づいている。有効な抗癌ワクチンの開発の目標は、主に腫瘍によってまたは腫瘍のみによって発現するこれらの抗原に対して免疫機構が有する耐性を、免疫刺激抗原の変形として複合多糖を提供して有効な免疫反応を誘発することによって打破することである。この目標を達成する試みとして、ＴＦ、Ｔｎ、ｓＴＮ、ＫＨ-１、Ｌｅy及びGlobo-Ｈ等の同定された癌糖質抗原が、様々な癌（乳癌、結腸癌、前立腺癌、卵巣癌、肝臓癌、小細胞癌、肺癌、及び腺癌）における悪性細胞の表面に過剰発現するものとして、注意深く特性付けされてきた。さらに、これらはモノクローナル抗体によって免疫特性付けされており、然るに免疫研究に利用可能な適切な血清学的マーカーを有する。こうした研究により、糖質ベースのワクチンを用いたアジュバント設定で免疫化された患者が、ヒトの癌細胞と反応性である抗体を生産すること、及びこうした抗体の生産が癌の再発を妨げ、より有利な診断に関係することが示唆されている（Livingston, et al., J. Cancer Res. 1989, 49, 7045; Ragupathi, G. Cancer Immunol. Immunother. 1996, 43, 152参照のこと）。更に、癌細胞中において過剰発現した特定の糖質抗原の単離及び慎重な構造同定は、糖質ベースの腫瘍免疫療法を利用する攻撃についての構想を提供している（(a)Hakomori, S.; Zhang, Y. Chem. Biol. 1997, 4, 97; (b) Toyokuni, T.; Singhal, A. K. Chem. Soc. Rev. 1995, 24, 23及びこれらに記載の文献を参照及び検討のこと）。
【０００５】
しかしながら、糖質エピトープの使用における主要な欠点は、これらが一般的には天然源からの単離によって容易には入手できないことである。例えば、天然源からの精製に伴う非常な困難性により、これらは臨床プログラムのための均質な出発物質としては、実質的に入手不可能となっている。したがって、これらの天然に産生するエピトープを、治療上有用な免疫反応を引き出すために接合によって、キャリアータンパク質またはあらゆる適当な分子内容物に導入することは、よくても低効率であり、しばしば実質的に不可能である。したがって、これらのワクチンを治療剤として効果的に研究するために、満足な材料は全化学合成によってのみ入手可能である。
【０００６】
この問題を改善するための試みとして、継続的研究努力の一つは、完全に合成の糖質部分を組み入れる抗癌ワクチンの開発である（Danishefsky, S. J.; Allen, J. R. Angew Chem. Int. Ed. 2000, 39, 836-863を参照及び検討のこと）。合成抗癌ワクチンの開発のための戦略の一つは、糖質エピトープの全合成及びこれに続くキャリアータンパク質への共有結合形生体接合を含む。その後ワクチン構成物を、最終目標をヒトの臨床試行に進展させることとして、適切なマウス免疫化研究に用いる。この戦略は、結果として、前臨床または臨床処置の様々な段階にある、幾つかの完全に合成で、腫瘍に関連する糖質ベースワクチンを生じた。実際、Globo-Ｈワクチンは、II相レベルにおける前立腺癌及び乳癌の治療のための臨床評価を経ており（例えば、Ragupathi et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997, 36, 125を参照のこと）、一方では既に卵巣癌において試験済みのLewisy抗原ベースのワクチンがより広範な追跡評価を待っている（Kudryashov et al., Cancer Immunol. Immunother. 1998, 45, 281参照のこと）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上述の通り、またここに記載した他の参考文献に既述の通り、近年幾つかの合成構成物が開発されてきたが、より持続性または有効な（及び好ましくは選択的な）免疫反応を誘発することのできる、新規な構成物を開発するための更なる調査が、依然必要とされている。明らかに、この目標を達成するための試みとして、従来は合成によって入手不可能であった抗原成分（例えば、フコシルＧＭ１、クラスター化エピトープ、及び類似構造物等のより複雑な抗原成分）を入手する、または更なる免疫及び治療法研究のために天然に産生する構造物から誘導される非天然構造物を入手するための、改良された及び／または新規な合成方法の開発が有用であろう。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
（本発明の概要）
新規な構成物及び改良合成方法を更に開発する必要性を認識した上で、本発明は、一つの態様において、新規なｎ-アルケニルグリコシド及び複合多糖、ｎ-アルキルグリコアミノ酸、及びこれらの合成方法を提供する。別の態様において、本発明は、新規なクラスター化グリコペプチド及びその合成方法を提供する。更に別の態様においては、本発明は、癌の治療方法、好ましくは癌の再発防止方法、及び、ここに開示した本発明の複合多糖のいずれかの有効量を、これを必要とする患者に投与する工程を含む、患者において抗体を誘発する方法を提供する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
ここに開示される一般的な合成方法は、糖質受容体の還元末端におけるｎ-アルケニルグリコシド保護基の導入により、カップリング効率及び複合多糖の入手可能性の改善が可能となるとの認識を伴う。こうして、本発明はまた、所定の保護された糖質について、ｎ-アルケニル部分が、複合多糖の合成のために究極的に利用可能な、有用な前駆体として作用しうるとの認識を提供する。
【００１０】
したがって、一つの態様においては、本発明は、（１）還元末端アルケニル基を有する糖質受容体を準備する工程；（２）適切な供与体化合物を準備する工程；及び（３）前記供与体及び受容体を、アルケニルグリコシドを生成させる条件下においてカップリングさせる工程を含む、複合多糖の合成のための、新規な合成方法を提供する。この方法を利用して、上述の通り複合抗原性アルケニルグリコシドが提供されるが、その多くはこれまでは提供されていないものであり、これらをここに記載した通り接合または更に反応させて、複合多糖及びグリコペプチドを産生することが可能である。
【００１１】
一般的に、本発明は、下記の構造：
【化３２】
0005111705.tif 000002
[式中、Ｒは水素；置換又は無置換のアルキル；アルケニル；アリール；-ＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2Ｒ’）（ＮＨＲ”）（式中、Ｒ’またはＲ”は、各々独立に水素、保護基、置換または無置換のアルキル、リンカー、アリール、ペプチド、タンパク質または脂質である）；またはＮＨＲ'''（式中、Ｒ'''はタンパク質、ペプチド、または、直接もしくはクロスリンカーを介してＮに結合した脂質である）であり；式中、ｎは０乃至８であり；更に、式中、Ａは下記の構造：
【化３３】
0005111705.tif 000003
{式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造：
【化３４】
0005111705.tif 000004
（式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキルまたはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基である（ＡがＫＨ-１、Ｎ３、Globo-Ｈ、グリコホリン、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６-ＳＴｎ、またはＬｅyであってＡがα-Ｏ-結合しているならば、ｎは少なくとも１であることを前提とする））
を有する糖部分である}
を有する糖質領域である]
を有する新規な化合物及び／または接合物を提供する。
【００１２】
本発明の好ましい所定の実施態様においては、Ｒがアリルであり、ｎが２であり、従って本発明の化合物がｎ-ペンテニル部分である。本発明の別の所定の実施態様においては、ＲがＮＨＲ'''であり、タンパク質Ｒ'''がＫＬＨまたはウシセリン（serine）アルブミンである。本発明の更に別の実施態様においては、ＲがＮＨＲ'''であり、脂質Ｒ'''がＰａｍＣｙｓである。タンパク質または脂質が直接またはクロスリンカーを介してＮに結合可能であることが好ましく、然るにＲ'''がタンパク質、ペプチド、及び脂質、並びに（クロスリンカー-タンパク質）、（クロスリンカー-ペプチド）及び（クロスリンカー-脂質）部分を組み込むものである。好ましい所定の実施態様においては、クロスリンカーはＭＭＣＣＨ（４-（マレイミドメチル）シクロヘキサン-１-カルボキシルヒドラジド）である。
【００１３】
別の実施態様においては、本発明の化合物はグリコアミノ酸であり、然るにＲはＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2Ｒ’）（ＮＨＲ”）であり、この化合物は下記の構造を有する。
【化３５】
0005111705.tif 000005
【００１４】
好ましい所定の実施態様においては、本発明のグリコアミノ酸はｎ-ペンテニルグリコシドから誘導され、然るにｎは３である。別の所定の実施態様においては、Ｒ’及びＲ”が、各々、t-ブチル、ＴＳＥ（２-（トリメチルシリルエチル））、Ａｃ（アセチル）、Ｂｏｃ（t-ブトキシカルボニル）、及びＦｍｏｃ（９-フルオロエニルメトキシカルボニル）からなる群より独立に選択される保護基である。
【００１５】
上記の化合物各々について、所定の好ましい実施態様において、糖質決定基は、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、Ｎ３、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６-ＳＴｎ、及びＬｅyからなる群より選択される。別の好ましい実施態様においては、該化合物の糖質決定基は、糖質決定基Ａの全体もしくは一部としてGlobo-Ｈ決定基またはフコシルＧＭ１決定基を含む。
【００１６】
さらにまた、本発明は、新規なｎ-アルキルグリコアミノ酸の合成方法を提供するが、以下に、Globo-Ｈ及びフコシルＧＭ１及び引き続き新規なグリコペプチドを産生するためのこれらの使用及びこれらの合成構成物について、より詳細に記載する。
【００１７】
一般的に、これらの新規なグリコアミノ酸の製造のための本発明の方法には、１）ここに記載のようにアルケニルグリコシド部分を準備する工程；２）前記アルケニルグリコシド部分を酸化条件下におき、アルデヒドを産生する工程；３）前記アルデヒドをオレンフィン化条件下におき、エナミドエステルを産生する工程；４）生成するエナミドエステルを、前記エナミドエステルを水素化するに十分な条件下におき、保護されたグリコアミノ酸を産生する工程；５）前記の保護されたグリコアミノ酸を適切な条件下で脱保護して所望のグリコアミノ酸を産生する工程が含まれる。
【００１８】
特に、ここにその構造を明示したグリコアミノ酸の合成方法が提供され、これは以下の工程：
（ａ）下記の構造：
【化３６】
0005111705.tif 000006
を有するアルケニルグリコシドを準備する工程；
（ｂ）前記アルケニルグリコシドを適切な条件下で反応させて、下記の構造：
【化３７】
0005111705.tif 000007
を有するエナミドエステルを産生する工程；
（ｂ）前記エナミドエステルを適切な条件下で反応させて、下記の構造：
【化３８】
0005111705.tif 000008
を有するグリコアミノ酸を産生する工程；を含み、
ここで、上記の各構造について、ｎは０乃至８であり、式中、Ａは下記の構造を有する糖質領域である。
【００１９】
【化３９】
0005111705.tif 000009
【００２０】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【００２１】
【化４０】
0005111705.tif 000010
【００２２】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；
更に式中、グリコアミノ酸構造Ｒ’及びＲ”は、各々独立に水素、保護基、置換または無置換のアルキル、リンカー、アリール、ペプチド、タンパク質、または脂質；あるいはＮＨＲ'''であり、ここではＲ'''は、タンパク質、ペプチド、または脂質であって、直接又はクロスリンカーを介してＮに結合している。好ましい実施態様においては、Ｒ’及びＲ”は、各々独立に水素または保護基である。特に好ましい実施態様においては、Ｒ”は窒素保護基であり、これらに限定されるものではないが、アセチル、Ｆｍｏｃ、またはＢｏｃであり、Ｒ’はt-ブチルまたはＴＳＥ等の酸保護基である。所定の好ましい実施態様においては、糖質決定基は、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｌｅy、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、及びＴＦからなる群より選択される。別の好ましい所定の実施態様においては、該化合物の糖質決定基は、ここに記載の通り、糖質決定基の全体もしくは一部としてGlobo-Ｈ決定基またはフコシルＧＭ１決定基Ａを含む。
【００２３】
一般的に、好ましい実施態様においては、ｎ-アルケニルグリコシドを適切な条件下で反応させてエナミドエステルを産生する工程には、ｎ-アルケニルグリコシドを第一に酸化開裂条件下において、第二に塩基（例えばテトラメチルグアニジン）及びホスホネートの存在下でのオレフィン化条件下において反応させて、エナミドエステルを産生する工程が含まれる。
【００２４】
さらにまた、前記エナミドエステルを適切な条件下で反応させてグリコアミノ酸を産生する工程には、前記エナミドエステルを水素化条件下で反応させる工程が含まれる。
【００２５】
本発明の別の態様においては、多抗原性グリコペプチドが、少なくとも３のアミノ酸によってなるペプチド骨格を含むように提供され、ここでは一以上の前記アミノ酸が、下記の構造を有するｎ-アルキルグリコシド部分で置換されている。
【化４１】
0005111705.tif 000011
式中、Ａの各存在が、下記の構造を有する炭化水素決定基である。
【００２６】
【化４２】
0005111705.tif 000012
【００２７】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【００２８】
：
【化４３】
0005111705.tif 000013
【００２９】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基である。
【００３０】
ここで、式中、ｎの各存在が、独立に０乃至８であり、従ってｎの各存在についてｎ＝０であるならば、Ａの存在の少なくとも一が他のＡの存在とは異なる構造を有し；更にｎ-アルキルグリコシド部分が骨格のアミノ酸残基にα-またはβ-結合している。これらの本発明のクラスター化グリコペプチドは、ｎ-アルキルに限定されず、ここでｎは１以上であり；それどころか多抗原性クラスター化グリコペプチドは伝統的な直接結合（ｎ＝０）またはｎ-アルキル（例えばペンチル等）またはこれらのあらゆる組み合わせを介して結合可能である。別の実施態様においては、Ａの各存在は同一であるが、ｎ-アルケニル（ｎは１より大）結合が用いられる。好ましい実施態様においては、Ａの各存在は、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｌｅy、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、及びＴＦからなる群より独立に選択される。
【００３１】
所定の実施態様においては、三量体抗原性クラスターが望ましく、然るに、本発明はまた、下記の構造を有するキャリアータンパク質を介してリンカーに結合した構成物を提供する。
【００３２】
【化４４】
0005111705.tif 000014
【００３３】
式中、リンカーは、遊離のカルボン酸、（カルボキサミド）アルキルカルボキサミド、ＭＢＳ、第一級カルボキサミド、モノ-またはジ-アルキルカルボキサミド、モノ-またはジ-アリールカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（カルボキシ）アルキルカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（アルコキシカルボニル）アルキル-カルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（カルボキシ）アリールアルキルカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（アルコキシカルボニル）アルキルカルボキサミド、２乃至約２０のヒドロキシアシル残基を含むオリゴエステルフラグメント、２乃至約２０のアミノアシル残基を含むペプチドフラグメント、または直鎖状または分枝鎖状アルキルまたはアリールカルボン酸エステルのいずれかであり、式中、キャリアーはタンパク質または脂質であり；式中、ｍは１、２、または３であり；式中、ＲA、ＲB、及びＲCは、各々独立にＨまたはメチルであり；更にＲD、ＲE、及びＲFは、各々独立に、下記の構造を有するアルキルグリコシド部分である。
【００３４】
【化４５】
0005111705.tif 000015
【００３５】
式中、Ａの各存在は、下記の構造を有する糖質領域から独立に選択される。
【００３６】
【化４６】
0005111705.tif 000016
【００３７】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、糖質領域は、ＯＨ、ＣＯＯＨ、及びＮＨ2からなる群より選択される側鎖置換基の置換によって各々のアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基に結合しており；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【００３８】
【化４７】
0005111705.tif 000017
【００３９】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；ここでは、ｎの各存在が、独立に０乃至８であり、従ってｎの各存在についてｎ＝０であるならば、Ａの存在の少なくとも一が他のＡの存在とは異なる構造を有し；更にｎ-アルキルグリコシド部分がアミノ酸にα-またはβ-結合している。
【００４０】
好ましい実施態様においては、Ａの各存在が、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｌｅy、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、及びＴＦからなる群より選択される。好ましい実施態様においては、本発明は  globo-Ｈ、Ｌｅy、及びＴｎを組み入れて新規な三量体抗原性化合物を産生する、新規な三量体抗原性グリコペプチドを提供する。
【００４１】
ここに記載の通り、本発明の別の態様においては、本発明の化合物のいかなるものも接合されて複合多糖を産生することができ、単独もしくは癌の再発の治療のための免疫アジュバントと共に投与することができ、または単独もしくは免疫アジュバントと共に、患者において抗体を誘発するために投与することができる。
【００４２】
（定義）
本発明の所定の化合物、及び特定の官能基の定義を、以下により詳細に記載する。本発明の目的のためには、化学元素は元素の周期表、ＣＡＳ編、化学及び物理のハンドブック、第７５版の内表紙にしたがって同定され、特定の官能基はここに記載の通り定義される。更に、有機化学の一般原理並びに特定の官能部分及び反応性は、"Organic Chemistry", Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999に記載されており、ここにその前内容を参照のために取り込むこととする。
【００４３】
ここに記載の通り、化合物はいかなる数の置換基または官能部分で置換されていても良いことが認識されるであろう。一般的に、「置換」なる語（「任意に」との語が先に立つか否かによらない）及び本発明の式中に含まれる置換基は、与えられた構造中の水素基を特定の置換基で置き換えることを意味する。与えられたあらゆる構造中において、一以上の位置が特定の基から選択される置換基で置換されていて良く、該置換基は位置毎に相違しても同一でも良い。ここで使用されるように、「置換」なる語は、有機化合物として差し支えない全ての置換基を含むことを意図している。広い見地においては、差し支えない置換基には、有機化合物の、非環式及び環式の、分枝状または非分枝状の、炭素環または複素環の、芳香族及び非芳香族の、置換基が含まれる。本発明の目的のためには、窒素などのヘテロ原子が水素置換基及び／または、ヘテロ原子の原子価に見合う、ここに記載の有機化合物として差し支えないあらゆる置換基を有して良い。さらにまた、本発明は、有機化合物として差し支えない置換基によって、いかなる方法においても限定を意図するものではない。置換基の組み合わせ及び本発明によって企図される変形は、好ましくは、ここに記載のように癌の治療において有用な安定化合物を生成させる、または抗体を誘発させるようなものである。ここに使用される「安定」なる語は、好ましくは、製造が可能な程十分な安定性を有し、またここに詳説した目的のために有用であるような十分な期間に亘って化合物の完全性を維持する化合物を意味する。
【００４４】
「脂肪族」なる語は、飽和及び不飽和の、直鎖状（すなわち非分枝状）、分枝状、環式、または多環式脂肪族炭化水素をいずれも含み、これらは任意に一以上の官能基で置換されたものである。当業者によれば認識されるであろうが、「脂肪族」とは、ここでは以下に限定されるものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、及びシクロアルキニル部分を含むことを意図する。ここで使用の通り、「アルキル」には、直鎖状、分枝状、及び環式アルキル基がいずれも含まれる。類似の規定が、「アルケニル」、「アルキニル」等の別の包括的用語にも適用される。さらに、ここに使用されているとおり、「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」等は置換及び無置換の基をいずれも包含する。
【００４５】
「アルキルアミノ」なる語は、構造-ＮＨＲ’（ここに定義されるとおり、Ｒ’はアルキルである）を有する基を意味する。アルキルアミノの例には、以下に限定されるものではないが、メチルアミノ、エチルアミノ、イソ-プロピルアミノなどが含まれる。
【００４６】
本発明の化合物の上記脂肪族（及び他の）部分の置換基の数例には、以下に限定されるものではないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、Ｃ（Ｏ）-アリール、Ｃ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＣＯ2-アルキル、ＣＯ2-アリール、ＣＯ2-ヘテロアリール、ＣＯ2ＮＨ、ＣＯＮＨ-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＣＯＮＨ-アリール、ＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＯＣ（Ｏ）-アリール、ＯＣ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＯＣＯ2-アルキル、ＯＣＯ2-アリール、ＯＣＯ2-ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ2、ＯＣＯＮＨ-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＯＣＯＮＨ-アリール、ＯＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）-アリール、ＮＨＣ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＮＨＣＯ2-アルキル、ＮＨＣＯ2-アリール、ＮＨＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＳＯ2-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＳＯ2-アリール、Ｃ3-Ｃ6-シクロアルキル、ＣＦ3、ＣＨ2ＣＦ3、ＣＨＣｌ2、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＮＨ2、ＣＨ2ＳＯ2ＣＨ3、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ1-Ｃ6-アルコキシ、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、Ｃ1-Ｃ3-アルキル-アミノ、チオ、アリール-チオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、Ｃ1-Ｃ6-アルキル-チオ、またはメチルチオメチルが含まれる。一般的に応用可能な置換基の更なる例は、ここに記載の実施例中に示された特定の実施態様によって例示される。
【００４７】
一般的に、ここに使用される「アリール」及び「ヘテロアリール」は、安定な単-または多-環式、複素環式、多環式、及び多複素環式の不飽和部分であって、好ましくは３乃至１４の炭素原子を有するものであり、その各々が置換又は無置換であってよい。置換基には、以下に限定されるものではないが、上述の置換基のあらゆるもの、すなわち、脂肪族部分について記載した置換基またはここに開示した他の部分であって、安定な化合物を生成するものが含まれる。本発明の所定の実施態様においては、「アリール」は単-または二-環式の炭素環系を意味し、一又は二の芳香環を有するものであり、以下に限定されるものではないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル等を含む。本発明の所定の実施態様においては、ここに使用される「ヘテロアリール」なる語は、環元素の一つがＳ、Ｏ、及びＮから選択され；０、１、または２の環元素がＳ、Ｏ、及びＮから独立に選択される更なるヘテロ原子であり；更に残りの環元素が炭素である、５乃至１０の環元素を有する環式芳香族基を意味し、該基はあらゆる環元素を介して分子の残部に結合しており、例えば、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル等がある。
【００４８】
アリール及びヘテロアリール基（二環式アリール基を含む）は無置換または置換であって良く、ここで置換には、以下に限定されるものではないが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、Ｃ（Ｏ）-アリール、Ｃ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＣＯ2-アルキル、ＣＯ2-アリール、ＣＯ2-ヘテロアリール、ＣＯ2ＮＨ、ＣＯＮＨ-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＣＯＮＨ-アリール、ＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＯＣ（Ｏ）-アリール、ＯＣ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＯＣＯ2-アルキル、ＯＣＯ2-アリール、ＯＣＯ2-ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ2、ＯＣＯＮＨ-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＯＣＯＮＨ-アリール、ＯＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）-アリール、ＮＨＣ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＮＨＣＯ2-アルキル、ＮＨＣＯ2-アリール、ＮＨＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＳＯ2-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＳＯ2-アリール、Ｃ3-Ｃ6-シクロアルキル、ＣＦ3、ＣＨ2ＣＦ3、ＣＨＣｌ2、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＮＨ2、ＣＨ2ＳＯ2ＣＨ3、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ1-Ｃ6-アルコキシ、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、Ｃ1-Ｃ3-アルキル-アミノ、チオ、アリール-チオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、Ｃ1-Ｃ6-アルキル-チオ、またはメチルチオメチルを含むあらゆる一以上の部分による、前記基上の１、２、または３の水素原子の置き換えが含まれる。一般的に応用可能な置換基の更なる例は、ここに記載の実施例中に示された特定の実施態様によって例示される。
【００４９】
ここに使用される「シクロアルキル」なる語は、３乃至７、好ましくは３乃至１０の炭素原子を意味する。好適なシクロアルキルには、以下に限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチル等が含まれるが、別の脂肪族、ヘテロ脂肪族またはヘテロ環部分の場合同様、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、Ｃ（Ｏ）-アリール、Ｃ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＣＯ2-アルキル、ＣＯ2-アリール、ＣＯ2-ヘテロアリール、ＣＯ2ＮＨ、ＣＯＮＨ-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＣＯＮＨ-アリール、ＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＯＣ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＯＣ（Ｏ）-アリール、ＯＣ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＯＣＯ2-アルキル、ＯＣＯ2-アリール、ＯＣＯ2-ヘテロアリール、ＯＣＯＮＨ2、ＯＣＯＮＨ-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＯＣＯＮＨ-アリール、ＯＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＮＨＣ（Ｏ）-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）-アリール、ＮＨＣ（Ｏ）-ヘテロアリール、ＮＨＣＯ2-アルキル、ＮＨＣＯ2-アリール、ＮＨＣＯＮＨ-ヘテロアリール、ＳＯ2-Ｃ1-Ｃ6-アルキル、ＳＯ2-アリール、Ｃ3-Ｃ6-シクロアルキル、ＣＦ3、ＣＨ2ＣＦ3、ＣＨＣｌ2、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＮＨ2、ＣＨ2ＳＯ2ＣＨ3、アリール、ヘテロアリール、ベンジル、ベンジルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ1-Ｃ6-アルコキシ、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、アミノ、ベンジルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、Ｃ1-Ｃ3-アルキル-アミノ、チオ、アリール-チオ、ヘテロアリールチオ、ベンジルチオ、Ｃ1-Ｃ6-アルキル-チオ、またはメチルチオメチルにより任意に置換されて良い。一般的に応用可能な置換基の更なる例は、ここに記載の実施例中に示された特定の実施態様によって例示される。
【００５０】
ここに使用される「ハロ」及び「ハロゲン」なる語は、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素から選択される元素を意味する。
【００５１】
一般的に適用可能な置換基の更なる例は、ここに記載される実施例中に示した特定の実施態様によって詳説されるが、これらの実施例に限定されるものではないと認識されるであろう。
【００５２】
（発明の詳細な説明）
上述の通り、完全に合成性のワクチンの調製のための改良方法を開発しようとの要望は、天然に産生する複合糖質抗原、並びにこれらの抗原性構造物を接合する新規な複合体構造物（例えばグリコペプチド）の合成に向けた研究努力を増大させてきた。このようなあらゆる大型の合成過程中にしばしばあることだが、改良合成方法がしばしば開発され、これらは普遍的に応用可能である。特に、天然に産生する抗原性構造物の合成研究により、これまで入手できなかった合成の糖質ベースのワクチンの開発を可能にする新規な方法論が発展してきた。Danishefsky, S. J.; Allen, J. R. Angew Chem. Int. Ed. 2000, 39, 836-863及びここに挙げられた参考文献を参照及び検討のこと。
【００５３】
本発明は、複合糖質及び関連の治療化合物（例えば複合多糖及び／またはグリコペプチド）の合成のための改良方法論を提供する。特に、フコシルＧＭ１及びGlobo-Ｈのｎ-ペンテニルグリコシドの全合成のために開発された合成研究の内容においては、複合糖質構造物の改良合成のために、一般化された方法論が発展してきた。この一般的な合成方法は、糖質受容体の還元末端にｎ-アルケニルグリコシド保護基を接合することによる、カップリング効率及び複合多糖の入手可能性の改善が可能であるとの認識に関連する。さらに別の態様においては、本発明はまた、所定の保護された糖質について、ｎ-アルケニル部分が、複合多糖の合成用に究極的に利用可能な、有用な前駆体としての役割を果たしうるとの認識を提供する。
【００５４】
更に、本発明はまた、接合前駆体のより効率の良い合成が調製可能であり（そして最終的には接合される）、ここに記載の通り、ｎ-アルケニル糖質もまた新規なｎ-アルキルグリコアミノ酸の合成のための前駆体として作用することから、ｎ-アルケニル部分の存在は、抗原性ｎ-ペンテニルグリコシドまたはグリコペプチド内にあるか否かによらずに、改良糖質ベースの治療剤（例えば完全に合成のワクチン）の開発のために有利であるとの認識を提供する。これらのグリコアミノ酸が容易に入手可能であることによって、複合クラスカー化グリコペプチドの究極的な合成が可能になる。とりわけ、上述され、ここにより詳説される本発明によって提供される方法論によれば、一以上のタイプの糖質決定基を有する複合グリコペプチド構造物の効率の良い調製が可能となる。
【００５５】
特定の例を、特にフコシルＧＭ１の全合成及びGlobo-Ｈのｎ-ペンテニルグリコシドの合成のための新規な合成スキームに関して、以下に、この合成の過程中で発展させた所定の一般的方法論と共により詳細に説明する。当業者によれば、これらの実施例が限定を意図するものではなく、むしろ全ての等価物を本発明の範疇に導入することを意図するものであることが認識されるであろう。
【００５６】
（本発明の化合物及びその合成方法）
既述の通り、複合抗原性構造物の全合成により、複合糖質合成のための方法論が著しく発展してきた。特に最近の関心は、天然に産生する抗原性構造物であり、これまで合成されたことのない、図１（１ａ）に示されるフコシル化ＧＭ１ガングリオシドである。Nilssonらは、フコシルＧＭ１を、小肺癌細胞（SCLC）に関連した特定のマーカーとして同定した（Nilsson et al., Glycoconjugate J. 1984, 1, 43; Brezicka et al., Cancer Res. 1989, 49, 1300）。これらの研究者は、グリコスフィンゴ脂質フコシルＧＭ１（１ａ）を、ヒトＳＣＬＣ組織中に含まれる主要なガングリオシド成分として単離した。さらにまた、抗原に対するモノクローナル抗体（Ｆ１２）は、ＳＣＬＣ患者の組織及び血清中におけるフコシルＧＭ１の検出に役立つ（Nilsson et al., Cancer Res. 1986, 46, 1403; Vangsted et al., Cancer Res. 1991, 51, 2897）。免疫組織化学研究により、正常組織中における高度に制限された分布のため、フコシルＧＭ１はＳＣＬＣに対する免疫攻撃のための比類ないターゲットとなりうることを示唆している。明らかに、フコシルＧＭ１は、他のいかなるヒト癌細胞系にも発見されておらず、これが非常にＳＣＬＣ腫瘍特異的であることを示している（Zhang et al., Int. J. Ccancer 1997, 73, 42）。
【００５７】
ＳＣＬＣ抗原の糖質部分の構造割り当ては、酵素的及び化学的分解のコンビネーションに基づく（Nilsson et al., Glycoconjugate J. 1984, 1, 43）。この割り当てを問題にする理由は特にない一方で、ＳＣＬＣ上での糖質ベースの攻撃の発展は、各グリコシド結合における立体化学を含む、様々な単糖類の結合方式の正確な割り当てから恩恵を受けうる。さらにまた、この糖質セクターの合成は、文献には開示されていない。好ましい実施態様においては、合成スキームによってセラミドとは独立のヘキササッカライドエピトープの表示がＦ１２ｍＡｂになされ、糖質セクターに全ての特異性が指示されることを保証している。別の好ましい実施態様においては、有効な抗腫瘍ワクチンの構築を見越して、該構成物は、そのキャリアータンパク質への接合のための必要性を予測して前もって官能化されているべきである。ここに詳説されるように、ｎ-アルケニルグリコシドを産生する能力により、このエピトープの効率の良い合成が行え、その有効な修飾及び／または接合が可能となって有効な抗腫瘍ワクチンが構築される。
【００５８】
したがって、本発明の一つの態様においては、複合フコシルＧＭ１糖質セクターの合成が達成され、以下に示される構造を有する化合物が提供される。
【００５９】
【化４８】
0005111705.tif 000018
【００６０】
式中、Ｒ’の各存在が、独立に水素または保護基であり；式中、Ｒ”の各存在が、独立に水素または窒素保護基であり；式中、Ｒは水素、置換又は無置換のアルキル、アルケニル、-ＮＨＲ'''（式中、Ｒ'''はタンパク質、ペプチド、または、直接もしくはクロスリンカーを介してＮに結合した脂質である）、アミノアシル部分、ペプチドのアミノアシル残基、タンパク質のアミノアシル残基、ここでアミノアシル部分または残基、あるいは-ＮＨＲ'''は構造-（ＣＨ2）r（式中、ｒは１乃至９の整数である）を有するポリメチレン鎖を介してＯに結合しており、あるいは式中Ｒは下記の構造を有する部分で置換されている。
【００６１】
【化４９】
0005111705.tif 000019
【００６２】
所定の好ましい実施態様においては、Ｒ’の各存在が水素である。本発明の別の所定の実施態様においては、Ｒは、これらに限定されないがアリール、プロペニル、ブテニル、及びペンテニルを含むｎ-アルケニルである。特に好ましい実施態様においては、Ｒはｎ-ペンテニルである。別の所定の好ましい実施態様においては、Ｒは上述のように-ＮＨＲ'''、アミノアシル部分、ペプチドのアミノアシル残基、またはタンパク質のアミノアシル残基であり、ここでｒは好ましくは４である。更に別の好ましい実施態様においては、上述の化合物が提供され、該化合物はグリコスフィンゴ脂質構造ではないことを前提とする。
【００６３】
本発明の別の態様においては、フコシルＧＭ１の合成方法が提供され、前記方法には、下記の工程が含まれる。
（ａ）下記の構造を有するチオエチル供与体を準備する工程：
【化５０】
0005111705.tif 000020
[式中、Ｐは保護基である]；
（ｂ）下記の構造を有するトリサッカライド受容体を準備する工程：
【化５１】
0005111705.tif 000021
[式中、ｎは０乃至８であり、Ｐは保護基である]；及び
（ｃ）前記チオエチル供与体及び前記トリサッカライド受容体を、保護されたヘキササッカライドを産生する条件下で反応させ、次いで保護されたヘキササッカライドを、ｎ-アルケニルフコシルＧＭ１グリコシドを産生する条件下で脱保護する工程。
【００６４】
本発明のさらに別の態様においては、Globo-Ｈの新規な誘導体、及びその合成のための、新規な一般的合成方法論が提供される。Globo-Ｈの誘導体を以下に示す。
【００６５】
【化５２】
0005111705.tif 000022
【００６６】
式中、Ｒ’の各存在は水素または保護基であり；式中、Ｒ”は水素または窒素保護基であり；式中、Ｒは水素、置換又は無置換のアルキルまたはアルケニル（式中、アルケニル部分は４以上の炭素を有する）；-ＮＨＲ'''（式中、Ｒ'''はタンパク質、ペプチド、または、直接もしくはクロスリンカーを介してＮに結合した脂質である）、アミノアシル部分；ペプチドのアミノアシル残基；タンパク質のアミノアシル残基；ここでアミノアシル部分または残基、あるいは-ＮＨＲ'''は構造-（ＣＨ2）rを有するポリメチレン鎖を介してＯに結合しており、ここで、前記炭化水素部分がα-結合を介してＯに結合しているならばｒは２乃至９の整数であり、あるいはまた前記糖質部分がβ-結合を介してＯに結合しているならばｒは１乃至９の整数であり；あるいは、式中Ｒが下記の構造を有する部分で置換されている。
【００６７】
【化５３】
0005111705.tif 000023
【００６８】
好ましい実施態様においては、Ｒ’の各存在が水素である。本発明の別の所定の好ましい実施態様においては、Ｒはｎ-アルケニルであり、これには、以下に限定されないが、アリール、プロペニル、ブテニル、及びペンテニルが含まれる。特に好ましい実施態様においては、Ｒはｎ-ペンテニルである。別の所定の好ましい実施態様においては、Ｒは上述のようにアミノアシル部分、ペプチドのアミノアシル残基、またはタンパク質のアミノアシル残基であり、ここでｒは好ましくは４である。更に別の好ましい実施態様においては、上述の化合物が提供されるが、該化合物はグリコスフィンゴ脂質構造ではないことを前提とする。
【００６９】
ここで実施例２により詳細に記載したように、フコシルＧＭ１について記載したのと同様の方法論が、Globo-Ｈ及びその誘導体の合成に利用される。こうして、本発明の別の態様においては、Globo-Ｈ及びその誘導体の改良合成方法が提供され、前記方法には、下記の工程が含まれる。
（ａ）下記の構造を有するチオエチル供与体を準備する工程：
【化５４】
0005111705.tif 000024
[式中、Ｐは保護基である]；
（ｂ）下記の構造を有するトリサッカライド受容体を準備する工程：
【化５５】
0005111705.tif 000025
[式中、ｎは０乃至８であり、Ｐは適切な保護基である]；及び
（ｃ）前記チオエチル供与体及び前記トリサッカライド受容体を、保護されたヘキササッカライドを産生する条件下で反応させ、次いで保護されたヘキササッカライドを、ｎ-アルケニルGlobo-Ｈを産生する適当な条件下で脱保護する工程。
【００７０】
ここに詳説した各方法について、有機合成の分野において既知の全保護基が利用可能であることが認識され、例えば"Activating Agents and Protecting Groups: Handbook of Reagents for Organic Synthesis" Roush, W. R. and Pearson, A. J. Eds., John Wiley & Sons: 1999;及び"Protective Groups in Organic Synthesis" Greene, T. W. and Wuts, P. G., John Wiley & Sons, New York: 1999に記載されているとおりであり、これらの内容はその全体を参照のためにここに取り込むこととする。数例において、ここに使用される適当な保護基には、以下に限定されるものではないが、Ｂｎ（ベンジル）、ＴＩＰＳ（トリイソプロピルシリル）、及びＡｃ（アセテート）が含まれる。本発明の好ましい実施態様においては、前記チオエチル供与体及び前記トリサッカライド受容体は、ここに記載のようにＭｅＯＴｆの助触媒作用下で反応する。しかしながら、当業者によれば、有機合成の分野において既知の様々な条件が、これらの部分のカップリングを引き起こすために使用可能であることが認識されるであろう。
【００７１】
ここに提供される新規なｎ-アルケニル部分が、引き続き変性されて有用な化合物（例えばアルキル誘導体及びグリコアミノ酸）またはその構成物（例えばグリコペプチド及び接合誘導体）を産生することができることもまた認識されるであろう。
【００７２】
上述の、フコシルＧＭ１の一次合成及びGlobo-Ｈについての改良合成方法論を提供することに加えて、より一般的な態様においては、本発明は、（１）還元末端アルケニル基を有する糖質受容体を準備する工程；（２）適切な供与体化合物を準備する工程；及び（３）前記供与体及び受容体を、アルケニルグリコシドを生成させる条件下においてカップリングさせる工程を含む複合多糖の合成のための新規な合成方法論を提供する。この方法を使用して、上述のように複合抗原性アルケニルグリコシドが提供されるが、その多くはこれまで提供されたことがなく、ここに記載のように、接合または更に反応させて複合多糖を生成させることのできるものである。
【００７３】
したがって、一般的に、本発明は、下記の一般構造を有する新規な化合物及び／または接合物を提供する。
【００７４】
【化５６】
0005111705.tif 000026
【００７５】
式中、Ｒは水素；置換又は無置換のアルキル；アルケニル；アリール；-ＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2Ｒ’）（ＮＨＲ”）（式中、Ｒ’またはＲ”は、各々独立に水素、保護基、置換または無置換のアルキル、リンカー、アリール、ペプチド、タンパク質または脂質である）；またはＮＨＲ'''（式中、Ｒ'''はタンパク質、ペプチド、または、直接もしくはクロスリンカーを介してＮに結合した脂質である）であり；式中、ｎは０乃至８であり；更に、式中、Ａは下記の構造を有する糖質領域である。
【００７６】
【化５７】
0005111705.tif 000027
【００７７】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【００７８】
【化５８】
0005111705.tif 000028
【００７９】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキルまたはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；
但し、ＡがＫＨ-１、Ｎ３、Globo-Ｈ、グリコホリン、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６-ＳＴｎ、またはＬｅyであってＡがα-Ｏ-結合しているならば、ｎは少なくとも１であることを前提とする。
【００８０】
本発明の好ましい所定の実施態様においては、Ｒがアリルであり、ｎが２であり、従って本発明の化合物がｎ-ペンテニル部分である。本発明の別の所定の実施態様においては、ＲがＮＨＲ'''であり、タンパク質Ｒ'''がＫＬＨまたはウシセリン（serine）アルブミンである。本発明の更に別の実施態様においては、ＲがＮＨＲ'''であり、脂質Ｒ'''がＰａｍＣｙｓである。タンパク質または脂質が直接またはクロスリンカーを介してＮに結合可能であることが好ましく、然るにＲ'''がタンパク質、ペプチド、及び脂質、並びに（クロスリンカー-タンパク質）、（クロスリンカー-ペプチド）及び（クロスリンカー-脂質）部分を組み込むものである。好ましい所定の実施態様においては、クロスリンカーはＭＭＣＣＨ（４-（マレイミドメチル）シクロヘキサン-１-カルボキシルヒドラジド）である。
【００８１】
更に別の実施態様においては、本発明の化合物はグリコアミノ酸であり、然るにＲはＣＨ2ＣＨ（ＣＯ2Ｒ’）（ＮＨＲ”）であり、この化合物は下記の構造を有する。
【化５９】
0005111705.tif 000029
【００８２】
好ましい所定の実施態様においては、本発明のグリコアミノ酸はｎ-ペンテニルグリコシドから誘導され、然るにｎは３である。別の所定の実施態様においては、Ｒ’及びＲ”が、各々、t-ブチル、ＴＳＥ、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、及びアセチルからなる群より独立に選択される保護基である。
【００８３】
上述の各化合物について、所定の好ましい実施態様において、糖質決定基は、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、Ｎ３、グリコホリン、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６-ＳＴｎ、及びＬｅyからなる群より選択される。別の好ましい実施態様においては、該化合物の糖質決定基は、糖質決定基Ａの全体もしくは一部としてGlobo-Ｈ決定基またはフコシルＧＭ１決定基を含む。
【００８４】
上述の通り、ＭＢｒ１抗原（GloboＨ）の二次発生合成及びＧＭ１のフコシル化ガングリオシド（フコシルＧＭ１）の全合成の状況においては、還元末端ｎ-アルケニル部分（とりわけｎ-ペンテニル）の導入はかなりの利点をもたらす。まず、アノマー性ｎ-ペンテニルグリコシド結合は、キャリアータンパク質ＫＬＨへの免疫接合のための有効なリンカーとしての役割を果たし、更に合成の収束性の点でもいくつかの利点を提供する。保護された糖質の状況においては、ｎ-アルケニル部分はまた、グリコシル化のための供与体として作用することができる（例えば、Fraser-Reid et al., SynLett, 1992, 927参照のこと）。
【００８５】
この関係において、本発明はさらに、以下にGlobo-Ｈ及びフコシルＧＭ１、及びこれらの引き続く使用であって、グリコペプチド及びその合成構成物を産生するための使用についてより詳細に説明するように、ｎ-アルキルグリコアミノ酸の合成方法を提供する。
【００８６】
一般的に、これらのグリコアミノ酸の本発明による製造方法は、１）ここに記載のようにアルケニルグリコシド部分を準備する工程；２）前記アルケニルグリコシド部分を酸化条件下におき、アルデヒドを産生する工程；３）前記アルデヒドをオレンフィン化条件下におき、エナミドエステルを産生する工程；４）生成するエナミドエステルを、前記エナミドエステルを水素化するに十分な条件下におき、保護されたグリコアミノ酸を産生する工程；５）前記の保護されたグリコアミノ酸を適切な条件下で脱保護して所望のグリコアミノ酸を産生する工程が含む。
【００８７】
特に、ここにその構造を明示したグリコアミノ酸の新規な合成方法が提供され、これは以下の工程：
（ａ）下記の構造：
【化６０】
0005111705.tif 000030
を有するアルケニルグリコシドを準備する工程；
（ｂ）前記アルケニルグリコシドを適切な条件下で反応させて、下記の構造：
【化６１】
0005111705.tif 000031
を有するエナミドエステルを産生する工程；
（ｂ）前記エナミドエステルを適切な条件下で反応させて、下記の構造：
【化６２】
0005111705.tif 000032
を有するグリコアミノ酸を産生する工程；を含み、
ここで、上記の各構造について、ｎは０乃至８であり、式中、Ａは下記の構造を有する糖質領域である。
【００８８】
【化６３】
0005111705.tif 000033
【００８９】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【００９０】
【化６４】
0005111705.tif 000034
【００９１】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；
更に式中、グリコアミノ酸構造Ｒ’及びＲ”は、各々独立に水素、保護基、置換または無置換のアルキル、リンカー、アリール、ペプチド、タンパク質、または脂質；あるいはＮＨＲ'''であり、ここではＲ'''は、タンパク質、ペプチド、または脂質であって、直接又はクロスリンカーを介してＮに結合している。好ましい実施態様においては、Ｒ’及びＲ”は、各々独立に水素または保護基である。特に好ましい実施態様においては、Ｒ”は窒素保護基であり、これらに限定されるものではないが、アセチル、Ｆｍｏｃ、またはＢｏｃであり、Ｒ’はt-ブチルまたはＴＳＥ等の酸保護基である。しかしながら、ここで参照されるように、有機合成の分野において既知の様々な保護基が使用可能である。
【００９２】
所定の好ましい実施態様においては、糖質決定基は、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｌｅy、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、及びＴＦからなる群より選択される。別の好ましい所定の実施態様においては、該化合物の糖質決定基は、糖質決定基の全体もしくは一部としてGlobo-Ｈ決定基またはフコシルＧＭ１決定基を含む。
【００９３】
一般的に、好ましい実施態様においては、ｎ-アルケニルグリコシドを適切な条件下で反応させてエナミドエステルを産生する工程には、ｎ-アルケニルグリコシドを第一に酸化条件下において、第二に塩基（例えばテトラメチルグアニジン）及びホスホネートの存在下でのオレフィン化条件下において反応させてエナミドエステルを産生する工程が含まれる。有機合成の分野において既知の他の酸化条件が利用可能であることが認識されるが、これらは以下に限定されるものではないがＯｓＯ4及び過ヨウ素酸塩、またはＯｓＯ4及びＰｂ（ＯＡｃ）4が含まれる。更に、別の周知の塩基が本発明において使用可能であり、以下に限定されるものではないがリチウム t-ブトキシドまたはリチウムヘキサメチルジシリルアジドが含まれる。
【００９４】
好ましい実施態様においては、前記エナミドエステルを適切な条件下で反応させてグリコアミノ酸を産生する工程が、前記エナミドエステルを水素化条件下で反応させる工程、及び脱保護条件下における次なる反応によりグリコアミノ酸を産生する工程を含む。特に好ましいのは、使用する水素化条件が非対称性水素化条件であることである。好ましい実施態様においては、非対称性水素化は、ここにより詳細に記載したように、エチルＤｕＰＨＯＳ触媒前駆体を利用することによって達成可能である（Burk et al., Accts. Chem. Res. 2000, 33, 3631; Burk et al. Pure & Appl. Chem. 1996, 68, 37参照）。
【００９５】
グリコアミノ酸を産生する性能は、ここに記載のように、究極的には新規なクラスター化グリコペプチド、抗癌ワクチンとしてここに記載の使用のために望ましい、癌細胞（ムチン様構造）の表面上に一般的に見いだされるモチーフの合成を可能にすることが認識されるであろう。例えば、免疫研究は、一般的に、グリコペプチド中における抗原のクラスター化が、単独にグリコシル化されたペプチドを用いた場合よりもより治療的な免疫反応を生じることを示している（Lo-Man, R. et al., Cancer Res., 1999, 59, 1520; Reddish et al., Glycoconjugate J. 1997, 14, 549参照）。
【００９６】
今日まで、α-Ｏ-結合抗原のクラスター化は、ここにその全体を参照のために取り込むこととする、出願中の米国特許０９／０８３，７７６及び０９／２７６，５９５に記載のように、従来のアリル結合を介し、ペプチド骨格の反対側に同様の抗原をもって達成されてきた。しかしながら、本発明はクラスター化した形式で異なる抗原を同時に有するペプチドを有効に提供する。したがって、一つの態様においては、本発明は、少なくとも３つのアミノ酸によってなるペプチド骨格を含む多抗原性グリコペプチドを提供するものであり、ここでは前記アミノ酸の一以上が下記の構造を有するｎ-アルキルグリコシド部分で置換されている。
【００９７】
【化６５】
0005111705.tif 000035
【００９８】
式中、Ａの各存在が、独立に下記の構造を有する糖質決定基である。
【００９９】
【化６６】
0005111705.tif 000036
【０１００】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【０１０１】
【化６７】
0005111705.tif 000037
【０１０２】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基である。
【０１０３】
ここで、式中、ｎの各存在が、独立に０乃至８であり、従ってｎの各存在についてｎ＝０であるならば、Ａの存在の少なくとも一が他のＡの存在とは異なる構造を有し；更にｎ-アルキルグリコシド部分が骨格のアミノ酸残基にα-またはβ-結合している。これらの本発明のクラスター化グリコペプチドは、ｎ-アルキルに限定されず、ここでｎは１以上であり；それどころか多抗原性クラスター化グリコペプチドは伝統的な直接結合（ｎ＝０）またはｎ-アルキル（例えばペンチル等）またはこれらのあらゆる組み合わせを介して結合可能である。好ましい実施態様においては、Ａの各存在は、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｌｅy、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、及びＴＦからなる群より独立に選択される。
【０１０４】
上述の構造から、多抗原性構造の提供に加えて、本発明がさらにｎ-アルキル結合を有するクラスター化構造を提供することが認識されるであろう。このように、本発明の更に別の態様によれば、ｎ-アルキル結合した（ｎが１以上である）クラスター化グリコペプチドが提供され、ここではグリコペプチドが多抗原性構造を導入するか、または更に同一の抗原構造全てを導入しても良い。
【０１０５】
一般的に、本発明のグリコペプチドの産生には、第一のグリコアミノ酸を脱保護剤で処理して対応のカルボン酸を産生する工程、及びその後前記カルボン酸を適当な条件下でスペーサー部分及び保護基とカップリングさせて保護されたアミドを産生する工程が含まれる。第二のグリコアミノ酸を、その後標準条件下（例えばＢＯＰ助触媒またはペプチドカップリングの分野において既知の別の既知のカップリング剤）でカップリングさせるが、これらのカップリングは、所望の長さのペプチドが得られるまで継続可能である。当業者に既知のペプチド合成の固相法もまた、本発明の方法において使用可能であって、本発明のグリコペプチドを産生することが認識されるであろう。
【０１０６】
本発明のグリコペプチドには、サイズにおける限定が意図されない一方で、所定の好ましい実施態様においては、三量体抗原性クラスターが望ましく、よって本発明はまた、下記の構造を有するキャリアータンパク質を介してリンカーに結合した構成物を提供する。
【０１０７】
【化６８】
0005111705.tif 000038
【０１０８】
式中、リンカーは、遊離のカルボン酸、（カルボキサミド）アルキルカルボキサミド、ＭＢＳ、第一級カルボキサミド、モノ-またはジ-アルキルカルボキサミド、モノ-またはジ-アリールカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（カルボキシ）アルキルカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（アルコキシカルボニル）アルキル-カルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（カルボキシ）アリールアルキルカルボキサミド、直鎖状または分枝鎖状（アルコキシカルボニル）アルキルカルボキサミド、２乃至約２０のヒドロキシアシル残基を含むオリゴエステルフラグメント、２乃至約２０のアミノアシル残基を含むペプチドフラグメント、または直鎖状または分枝鎖状アルキルまたはアリールカルボン酸エステルのいずれかであり、式中、キャリアーはタンパク質または脂質であり；式中、ｍは１、２、または３であり；式中、ＲA、ＲB、及びＲCは、各々独立にＨまたはメチルであり；更にＲD、ＲE、及びＲFは、各々独立に、下記の構造を有するアルキルグリコシド部分である。
【０１０９】
【化６９】
0005111705.tif 000039
【０１１０】
式中、Ａの各存在は、下記の構造を有する糖質領域から独立に選択される。
【０１１１】
【化７０】
0005111705.tif 000040
【０１１２】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、糖質領域は、ＯＨ、ＣＯＯＨ、及びＮＨ2からなる群より選択される側鎖置換基の置換によって各々のアミノアシルまたはヒドロキシアシル残基に結合しており；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【０１１３】
【化７１】
0005111705.tif 000041
【０１１４】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；更に式中、Ｒii及びＲivは各々独立にＨ、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；
ここでは、ｎの各存在が、独立に０乃至８であり、従ってｎの各存在についてｎ＝０であるならば、Ａの存在の少なくとも一が他のＡの存在とは異なる構造を有し；更にｎ-アルキルグリコシド部分がアミノ酸にα-またはβ-結合している。
【０１１５】
所定の実施態様においては、Ａの各存在が、Globo-Ｈ、フコシルＧＭ１、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｌｅy、Ｎ３、Ｔｎ、２，６-ＳＴｎ、及びＴＦからなる群より独立に選択される。好ましい実施態様においては、本発明は、実施例３により詳細に記載の通り、globo-Ｈ、Ｌｅy、及びＴｎを組み入れて新規な三量体抗原性化合物を産生する、新規な三量体抗原性グリコペプチドを提供する。
【０１１６】
（製薬組成物、構成物、及びその使用）
上述のように、本発明は、治療剤、特に完全に合成の癌ワクチンの開発に有用な化合物及び合成方法を提供する。一般的に、ここに開示されるように調製される化合物及びグリコペプチドは、タンパク質キャリアーまたは脂質に接合されて、癌を患う患者における癌の治療及び予防（好ましくは再発の予防）のために有用な複合多糖を産生することができる。さらにまた、ここに開示された方法によって調製される複合多糖は、様々な腫瘍細胞に免疫反応性の抗体を誘発することのできるワクチンとして、アジュバント療法において有用な抗原である。こうしたアジュバント療法は、所定の癌の再発率を低減し、手術後の生存率を向上させうる。癌の外科処置を受け、その後細胞表面分化抗原から調製されたワクチンで治療された患者への臨床試験により、患者には、免疫化前に抗体が欠乏していることが判明しており、疾患のない間欠期間のかなり著しい増大が観察できる。P. O. Livingston, et al., J. Clin. Oncol., 1994, 12, 1036参照のこと。
【０１１７】
このように、本発明は、ここに開示された本発明の化合物のあらゆるものを活性成分として、任意にとはいえ典型的に製薬品として許容されるキャリアーとのコンビネーションとして含む、癌の治療のため、好ましくは癌の再発を予防するための製薬組成物を提供する。本発明の製薬組成物は、他の治療用活性成分をさらに含んでも良い。
【０１１８】
この治療方法は、ここに開示された複合多糖のあらゆるものの、治療上の有効量を、任意に製薬品として許容されるキャリアーとのコンビネーションとして患者に投与する工程を含む。該方法は、癌が固形腫瘍または上皮腫瘍である場合に適用してもよい。上述のように、癌の治療（好ましくは癌の再発防止のための）方法、並びにヒトの患者において抗体を誘発する方法が提供され、ここでは抗体はヒトの腫瘍細胞に特異的に結合可能であり、該方法は、患者に、上述の複合多糖のいかなるものでも、抗体を誘発するために有効な量で投与する工程を含む。所定の実施態様においては、糖質抗原は、直接またはクロスリンカーを介して有効なキャリアーに結合しており、ここでキャリアーはタンパク質または脂質である。所定の実施態様においては、キャリアータンパク質はウシセリンアルブミン、ポリリシン、またはＫＬＨである。別の所定の実施態様においては、脂質はＰａｍＣｙｓである。
【０１１９】
更に、本発明は、関連の、免疫アジュバント、または免疫アジュバントのコンビネーションを共投与する工程を更に含む抗体の誘発方法を提供する。所定の実施態様においては、アジュバントはサポニンアジュバントである（参照のためにこれらの全体をここに取り込むこととする、Marcini et al., Vaccine, 2000, 18, 3141, 米国特許第６，０８０，７２５号及び第５，９７７，０８１号を参照のこと）。好ましいサポニンアジュバントの一例には、以下に限定されるものではないが、選択された天然のサポニンを変性させることによって誘導される半合成アジュバントである、ＧＰＩ-０１００（Galenica Pharmaceuticals, Inc., Frederick, MD）が含まれる。別の所定の実施態様においては、アジュバントは細菌又はリポソームである。所定の実施態様においては、アジュバントには、以下に限定されるものではないが、Salmonella minnesota細胞、bacille Calmette-Guerin、またはＱＳ２１が含まれる。
【０１２０】
本発明の化合物の治療用量の大小は、治療しようとする症状の性質及び深刻さによって、また特定の化合物及びその投与経路によって、変化する。一般的に、抗癌活性のための日用量範囲は、哺乳類において体重１kg当たり０．０００１乃至１．０mgの範囲内であるが、本発明はこの範囲によって限定されることを企図するものではない。
【０１２１】
哺乳類、特にヒトに、ここに開示した化合物の有効量を与えるため、投与のあらゆる好適な経路を用いて良い。例えば、経口、直腸、局所、非経口、眼、肺、鼻等の経路を使用して良い。投与形態には、錠剤、トローチ、分散剤、懸濁液、溶液、カプセル、クリーム、軟膏、エアロゾル等が含まれる。好ましい実施態様においては、有効な用量決定はシリンジ注射を用いて行われる。
【０１２２】
本発明の組成物は、経口、直腸、局所（経皮装置、エアロゾル、クリーム、軟膏、ローション、及びはたき粉（dusting powder）を含む）、非経口（皮下、筋内、及び静脈内を含む）、眼（眼動脈）、肺（鼻または口腔吸入）、または鼻からの投与に適したものを含む。ありうる全ての場合において、最適な経路は、治療しようとする症状の性質及び深刻さ、及び活性成分の性質に大部分依存する。これらは薬品の分野において周知のあらゆる方法により、簡便に単位投与形態として調製されて良い。
【０１２３】
経口投与形態の調製において、経口液体調剤（例えば懸濁液、エリキシル、及び溶液）の場合には、通常でないあらゆる製薬媒質、例えば水、グリコール、オイル、アルコール、風味剤、保存料、着色時等を使用して良く；粉末、カプセル、及び錠剤などの、経口固形調剤が経口液体調剤よりも好ましい場合には、デンプン、糖、ミクロクリスタリンセルロース、希釈剤、粒化剤、滑剤、結合剤、崩壊剤等のキャリアーを使用して良い。所望であれば、カプセルは標準の水性または非水性技術によって被覆して良い。上述の投薬形態に加え、本発明の化合物は、コントロールリリース手段及び装置によって投与されて良い。
【０１２４】
経口投与に好適な本発明の製薬組成物は、粉末または粒子形態で活性成分の規定量を含むカプセル、薬包、または錠剤等の個別単位として、あるいは水性もしくは非水性液体中の溶液または懸濁液として、あるいは水中油型もしくは油中水型のエマルジョンとして調製して良い。こうした組成物は、薬品の分野において既知のあらゆる方法によって調製されて良い。一般的に、組成物は、活性成分と液体キャリアー、細かく分離させた固形キャリアー、または両方とを均一且つ緊密に混合する工程により、及びその後必要ならば該生成物を所望の形態に成形する工程によって調製される。例えば、錠剤は、任意に一以上の補助的成分と共に圧縮または成型する工程によって調製されてよい。圧縮錠剤は、粉末または粒子等のフリーフロー形態の活性成分を、任意に結合剤、滑剤、不活性希釈剤、または表面活性もしくは分散剤と共に適当な機械において圧縮する工程によって調製されて良い。成型錠剤は、不活性の液体希釈剤で加湿した粉末化合物の混合物を適当な機械において成型する工程によって製造してよい。
【０１２５】
しかしながら、当業者によれば、投与に最適な経路は、治療しようとする症状の性質及び深刻さ、及び活性成分の性質に大部分依存する。上述のように、本発明の治療剤は、簡便に単位投与形態とされ、また薬品の分野において周知のあらゆる方法によって調製されて良い。
【０１２６】
上述のように、本発明の一つの態様においては、本発明のｎ-アルケニルグリコシドは好適なキャリアー（例えばＫＬＨ）に直接またはクロスリンカーを介して接合可能であり、合成腫瘍抗原を産生する。一般的に、使用可能な典型的な接合戦略には、グリコアルデヒドに終端するグリコシドの、意図するタンパク質キャリアー、または脂質との、おそらくは露出したリシンのε-アミノ酸残基における還元カップリングが含まれる。（M. A. Bernstein; L. D. Hall, Carbohydr. Res. 1980, 78, C1; R. V. Lemieux Chem. Soc. Rev. 1978, 7, 423）
【０１２７】
したがって、別の態様において、本発明は合成構成物を提供し、したがって、ここに記載のように、新規な抗原構造はキャリアータンパク質、ペプチド、または脂質に接合される。当業者によれば、合成構成物の産生において、一以上のｎ-アルケニル部分またはグリコペプチド部分が、究極的にキャリアータンパク質に接合して合成ワクチンを産生可能であることが認識されるであろう。したがって、ここに提供される接合グリコペプチド構造に加えて、以下に示される一般構造を有する構成物もまた提供され、式中、Ａは下記の構造を有する糖質領域である。
【０１２８】
【化７２】
0005111705.tif 000042
【０１２９】
【化７３】
0005111705.tif 000043
【０１３０】
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、ｘ、ｙ、及びｚは、独立に０、１、２、または３であり（ｘ、ｙ、及びｚが同時に０ではないことを前提とする）；式中、Ｒ0は、水素、直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アシル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲi、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲi、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲi、置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲii、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基、あるいは、下式の構造を有する糖部分である。
【０１３１】
【化７４】
0005111705.tif 000044
【０１３２】
式中、Ｙ及びＺは独立にＮＨまたはＯであり；式中、ｋ、ｌ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ｖ、及びｗは、各々独立に０、１、または２であり；式中、Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13、Ｒ14、及びＲ15は各々独立に水素、ＯＨ、ＯＲiii、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲiii、Ｆ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ2ＯＲiii、あるいは置換または無置換の直鎖状又は分枝鎖状のアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ）ヒドロキシアルキル、（モノ-、ジ-、またはトリ-）アシルオキシアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒ16は水素、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲii、ＣＯＮＨＲii、置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、またはアリール基であり；式中、Ｒiiiは水素、ＣＨＯ、ＣＯＯＲiv、または置換または無置換の直鎖状または分枝鎖状のアルキル、アリールアルキル、またはアリール基であり；
更に式中、ｎは０乃至８であり、ここでキャリアーは、以下に限定されるものではないが、ウシセリンアルブミン、ＫＬＨ、及びＰａｍＣｙｓを含むタンパク質または脂質であり、前記タンパク質または脂質は直接またはクロスリンカーを介して結合しており；ここでｍは２０乃至６００の範囲内である。好ましい所定の実施態様においては、ｎは４である。別の所定の実施態様においては、ｍは２００乃至６００の範囲内である。更に別の好ましい実施態様においては、糖質決定基は、Globo-Ｈ、ＫＨ-１、グリコホリン、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、Ｎ３、Ｔｎ、ＴＦ、２，６-ＳＴｎ、及びＬｅyからなる群より選択される。更に別の実施態様においては、糖質決定基は、フコシルＧＭ１であって、これは図１に示される通り上記の構造を有する。
【０１３３】
本発明による典型的なプロトコルにおいては、製造された本発明の化合物の幾つかはアルケニル結合で終端するため、アルデヒドへの転化がまず必要であることが認識されるであろう。したがって、例示実施態様においては、本発明の合成globo-Ｈ腫瘍抗原はｎ-アルケニルglobo-Ｈグリコシドから調製される。実施例２に記載のように、この操作には、ｎ-アルケニルglobo-Ｈグリコシドを酸化条件に曝す工程に次いで、オゾン分解の場合には、還元処理を施してアルデヒド中間体を産生させ、ワクチン複合多糖を生成させる工程が含まれる。続く加水分解糖質分析により、実施例２に記載のようにキャリアータンパク質のおよそ３５０の糖質残基／分子が明らかになる。
【０１３４】
更に別の例において、実施例１に記載のように、フコシルＧＭ１-ＫＬＨ複合多糖が、本発明の方法によって産生される。とりわけ、接合研究に先立ち、ELISA及び免疫薄層クロマトグラフィーアッセイにおいて、合成ｎ-ペンテニルフコシルＧＭ１がモノクローナル抗体Ｆ１２に結合することが判明した。抑制研究により、Ｆ１２を抗体と共に前保温すれば、天然のフコシルＧＭ１の抗体との反応性が完全に抑制されることが判明した。明らかに、合成フコシルＧＭ１ペンテニルグリコシドは、ＳＣＬＣ細胞上でＦ１２と反応する抗原性エピトープを提供する。
【０１３５】
更に、いったん合成ワクチンが誘導されて特徴付けされれば、実施例４に記載の様に、マウス免疫研究を実行して新規な腫瘍ワクチンの効能及び／または特異性を検定することが可能である。
【０１３６】
（等価物）
以下の代表例は、本発明の詳説を補助する意図によるものであり、本発明の範囲の限定を意図するものでも、そのように解釈されるべきでもない。実際、ここに例示及び説明したものに加えて、以下の実施例及びここに挙げた科学及び特許の文献を含めて、本明細書の全内容から、本発明の様々な変形及び多数の更なる実施態様が、当業者には明白となるであろう。例示のための実施例において、ここに記載のように、保護基は糖質領域の合成及び合成接合において重要な役割を果たす；しかしながら、当業者は、本発明が、当業者には既知の様々な代替的保護基の使用を含むことを認識するであろう。以下の実施例を含む開示中において使用したこれらの保護基は単に例示のためのものである。
【０１３７】
引用した参考文献の内容は、技術水準の詳説を助けるために、ここに参照用に取り込まれるものであることが更に認識されるべきである。以下の実施例には、本発明を様々な実施態様及びその等価物として実施するために適合させることの可能な、重要な付加的情報、例示、及び指示が含まれる。
【０１３８】
【実施例】
（Ａ．実施例１：フコシルＧＭ１ペンテニルグリコシドの合成）
１）合成の検討：
上述のように、本発明の一つの態様においては、フコシルＧＭ１ペンテニルグリコシドの合成を提供する。本発明の一つの実施態様においては、これは、ＭＢｒ１抗原、Globo-Ｈの合成において使用した方法と同様に達成された（Park et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11488参照）。例えば、図２に示されるように、既知の保護されたラクタル誘導体２から出発するＡＢＣトリサッカライドの合成を最初に行った（Kwon, O.; Danishefsky. S. J. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 1588）。２のＣ３’エカトリアルヒドロキシルの選択的シアリル化が、ホスフィン供与体３を用いて順調に進行し（Sim et al., J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 2260; Chappell et al., Tetrahedron 1997, 53, 11109）、唯一の観察可能な異性体としてグリカール４を７５％の収率で生成した。更に、低温での反応を行うための必要性から、プロピオニトリルを溶媒として使用した。溶媒としてアセトニトリル中において高温にすると、アノマー選択性及び位置選択性が減少し、更に化学的収率が低下した。キーとなるＤＥＦトリサッカライドを、Globo-Ｈ合成において前述したように合成した（Park et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11488）。必要なチオエチル供与体５を図２に示した。これまでの経験に基づき、この特定の供与体が、「近位のヒドロキシル」の方向付け作用（星印参照）の緊密な誘導の下でのスルホアミド関与を経てβ-グリコシド化を促進することが予期され（Park et al., J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11488；Kwon et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 1588を参照のこと）、該結果によりこの予測が確認された。「原理の証明」のための実験においては、４の存在下における、５．０当量のＭｅＯＴｆとの５の反応（Lonn, H. Carbo. Res. 1985, 134, 105; Lonn, H. J. Carbohydr. Chem. 1987, 6, 301）から、図３
に示すように所望のヘキササッカライド６が収率２３％で得られた。この化合物の直接の脱保護が達成されて所望の化合物を得ることにはならないが、全体的な脱保護のために好適なヘキササッカライドを見いだすための試みとして、還元末端グリカールの置換が考慮された。こうした置換はまた、変性されてタンパク質キャリアーまたは脂質への接合を可能にするようなリンカーとして潜在的に利用可能であろう。
【０１３９】
一実施例において、ｎ-ペンテニルグリコシドの使用が考慮された（ｎ-ペンテニルグリコシドの確認のためには、Fraser-Reid et al., Synlett, 1992, 927; Udodong et al., J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 7886; Merritt et al. J. Am. Chem. Soc. 1994, 116, 8334; Fraser-Reid et al. 1990, 55, 6068; Mootoo et al. J. Am. Chem. Soc. 1988, 110, 2662; Mootoo et al. J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 8540及びここに含まれる参考文献を参照のこと）。Ｎ-ペンテニルグリコシドは、反応条件及び試薬の範囲までは安定であるが、ハロゲンオキシダントを用いた処理によって、グリコシド化反応のために容易に活性化される。これらの安定性と前記活性化に必要とされる中性条件との結果として、ペンテニルグリコシドは、機構上及び合成上の研究のために価値ある結合であることが判明している。更に、末端ペンテニル基、より一般的には末端アルケニル基もまた、生体接合のためのハンドルを提供しうる。したがって、一つの実施態様においては、グリカール６ａを、３，３-ジメチルジオキシランを用いて標準操作の下にエポキシド化させた（図３）。ペンテニルアルコール及び無水塩化亜鉛との反応（Gordon et al. Carbohydrate Res. 1990, 206, 361）により、グリコシド７が６５％の収率で得られた。実際、ペンテニルグリコシドが適所にあれば、７の全体的な脱保護が可能であった。図３に示したシークエンスは、過アセチル化ヘキササッカライドラクトン８を４６％の収率で与える（５工程）。ナトリウムメトキシドを用いるアセテートの除去、次いで、生じるメチルエステルのけん化により、ターゲットのフコシルＧＭ１ペンテニルグリコシド１ｂが得られた。構造１ｂの同定は、１ｂの1Ｈ及び13Ｃ ＮＭＲ分析と、併せて最終構造への途中の中間体の特徴付けに基づいており、高分解能マススペクトルによって支持されている。
【０１４０】
更に別の実施態様においては、前臨床、及びやがては臨床の評価のために、このエピトープの著しい量を産生する試みにおいて、グリカールではなくグリコシドを受容体の還元末端に用いる、より有効な合成経路が開発された。図４に示されるように、ペンテニルラクトシドをまず調査した。この目的のために、ラクトースオクタアセテートを既知のブロミド９に転化させた（Reithal, Y. J. Am. Chem. Soc. 1952, 74, 4210; Dasgupta et al. Carbohydr. Res. 1994, 264, 155）。炭酸銀による助触媒作用下での、この化合物のペンテニルアルコールとの反応により、所望のペンテニルグリコシド１０が１００gスケールで誘導された（Rodriguez, et al. Aust. J. Chem. 1990, 43, 665）。９の産生のために銀トリフレートを助触媒として使用する類似のカップリングは、所望の生成物を１７％のみの収率で生じた。アセテートの除去によりラクトシド１１が得られた。再度、Ｃ３’及びＣ４’ヒドロキシル基が、今度はジメチルケタール１２として寄与した。この反応は、現行では、少量の４，６-アセトニドの生成を伴う（Catelani et al. Carb. Res. 1988, 182, 297）。１２の過ベンジル化により１３が産生し、続く水性酢酸を用いたアセトニドの除去により、所望のＡＢ受容体１４を生成した。ホスフィン供与体３（図２）を使用したシアリル化がかなりの収率で進行し、トリサッカライド受容体１５を生成した。
【０１４１】
最後に、所望のフコシルＧＭ１に戻り、供与体５の、ペンテニルリンカーを含む２．０モル過剰の受容体１５とのカップリングを、ＭｅＯＴｆ助触媒（１．５等量×２）により進行させ、比類ない収量（７０％、図５を参照のこと）を得た。図４に示される、同様の条件下での全体的な脱保護により、特徴付けされたヘキササッカライド１ｂが得られた。
【０１４２】
そこで複合多糖を産生するとの最終目標のために努めた。合成１ｂを、図６に示したように、キャリアータンパク質ＫＬＨに接合させた。該プロトコルは、オゾン分解から出発し、これによって特徴付けされていないアルデヒド誘導体を産生した。この工程に次いで、ナトリウムシアノボロハイドライドの作用下での還元アミノ化を利用してＫＬＨへのカップリングを行った。おそらくは、ＫＬＨ中のリシン残基のε-アミノ基と糖質とのカップリングが起こった。加水分解糖質分析により、ＫＬＨ分子毎におよそ３３１の糖質残基が明らかになり、１ｃが生成した。
【０１４３】
２）実験
・ペルアセチルペンテニル-β-Ｄ-ラクトシド（１０）
ラクトースオクタアセテート（１００．０g、１４７．７mmol）、氷酢酸（３０mL）、及び無水酢酸（３０mL）の冷却した（アイスバス）懸濁液に、ＡｃＯＨ中３０％のＨＢｒ１００mLを６０分間に亘り滴々と添加した。反応混合物を１時間撹拌してアイスバスを除去した。更に２時間室温にて撹拌したところ、反応物は均一な黄色溶液となった。溶液をＨ2Ｏ（１０００mL）で希釈し、ＣＨＣｌ3（３×４００mL）で抽出した。有機抽出物をＨ2Ｏ（２×１０００mL）、飽和ＮａＨＣＯ3（３×５００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させて濃縮した。α-ブロモ生成物９を無水ベンゼンと共沸させて高度真空下で乾燥させ、９８．８g（９６％）のラクトシルブロミドを得、これを更に精製せずに使用した。Ａｇ2ＣＯ3（１００g、３６２．６mmol）、新たに活性化させたモレキュラーシーブ（１５g）、及びＩ2の結晶の、４００mLのＣＨ2Ｃｌ2中とした懸濁液に、ペンテニルアルコール（５．０等量、７３．４mL）を添加し、後に４００mLのＣＨ2Ｃｌ2中としたラクトシルブロミド９（９８．８g、１４１．４mmol）を添加した。室温下、暗所にて１６時間撹拌した後、反応物を、更なるＣＨ2Ｃｌ2と共にセライトの栓を通して濾過し、濃縮して黄色オイルを得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製したところ、白色泡沫として７４．７g（７５％）のペンテニルラクトシド１０が得られた。
【０１４４】
【数１】
0005111705.tif 000045
【０１４５】
・ペント-４-エニル３’，４’-Ｏ-アセトニド-β-Ｄ-ラクトシド（１２）
ペルアセチル化ペンテニルラクトシド、１０（１８．２g、２５．８mmol）を３００mLの無水ＭｅＯＨ中に溶解させ、２．０mLのＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中２５％）を添加した。反応物を室温にて１６時間撹拌し、Dowex-Ｈ+（ｐＨ５−６）で中和した。反応物を更なるＭｅＯＨと共に濾過して濃縮し、白色固体（１０．６g、定量的）を得、これを更に精製せずに使用した。ペンテニル-β-Ｄ-ラクトシド１１：
【０１４６】
【数２】
0005111705.tif 000046
【０１４７】
ペンテニルラクトシド１１（１０．６g、２５．８mmol）に、２００mLのアセトン、２６mLのジメトキシプロパン、及びｐ-トルエンスルホン酸（４９１mg、０．１等量）を添加した。懸濁液を室温で一晩撹拌したところ、この時点で反応物は均一であった。その後反応物を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃ→ＥｔＯＡｃ中２％のＭｅＯＨ）で精製したところ、５．１g（４４％）の３，４-アセトニドが白色固体として、１．２７gの４，６-アセトニドが白色固体として得られた。３，４-アセトニド、１２：
【０１４８】
【数３】
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【０１４９】
４，６-アセトニド：
【数４】
0005111705.tif 000048
【０１５０】
・ペント-４-エニル２，３，６，２’，６’-ペンタ-Ｏ-ベンジル-３’，４’-Ｏ-アセトニド-β-Ｄ-ラクトシド（１３）
アセトニド１２（３．４０g、７．５４mmol）を無水ベンゼンと共沸させ、無水ＤＭＦ（６０mL、０．１２M）中に溶解させて０℃に冷却した。ベンジルブロミド（塩基性アルミナを通したもの、１０．０等量、８．９７mL）を添加し、次いで固体ＮａＨ（９５％、７．５等量、１．７６g）を一度に添加した。反応物を室温に一晩温めた後、氷温のＨ2Ｏ（５００mL）に注入してＣＨＣｌ3（２００mL、２×１００mL）で抽出した。有機抽出物を塩水（５００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮したところ黄色オイルを得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製したところ、５．７０g（８４％）の生成物が粘性のオイルとして得られた。
【０１５１】
【数５】
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【０１５２】
・ペント-４-エニル２，３，６，２’，６’-ペンタ-Ｏ-ベンジル-β-Ｄ-ラクトシド（１４）
アセトニド１３（５．７g、６．３２mmol）をＨ2Ｏ中８０％のＡｃＯＨ（６０mL）に溶解させ、３時間に亘り７５℃に加熱した。反応物を室温に冷却し、Ｈ2Ｏ（５００mL）で希釈してＣＨＣｌ3（２００mL、２×１００mL）で抽出した。有機抽出物をＨ2Ｏ（５００mL）、飽和ＮａＨＣＯ3（３×３００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させて濃縮したところ、オイルが得られ、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、５．２１g（９６％）の白色固体を得た。
【０１５３】
【数６】
0005111705.tif 000050
【０１５４】
・トリサッカライド１５
ホスフィン供与体３（１．０g、１．３５mmol）及びラクトシル受容体１４（２．５g、２．９０mmol）を混合し、無水ベンゼンと共沸させて高度減圧下に２時間おいた。混合物を、無水ＣＨ3ＣＨ2ＣＮ（ＣａＨ2から蒸留）に溶解させ、新たに活性化させたモレキュラーシーブを添加し、反応物を−４０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆ（０．１等量、２７μl）の少量を添加して反応物を−４０℃にて一晩撹拌しておいた。その後反応物を−３０℃に加温し、更に０．１等量のＴＭＳＯＴｆを添加した。更に２時間に亘って−３０℃にて撹拌したところで、固体ＮａＨＣＯ3の添加により反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃで補助しつつセライトの栓を通して濾過した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ3（２×４００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。有機相の蒸発により、懸濁したオイルが得られ、これを注意深く傾斜溶離を利用してフラッシュカラムクロマトグラフィーにかけ、受容体及び生成物のトリサッカライドを回収した（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。生成物（１．３５g、７５％）が白色泡沫として得られ、０．９５gの出発受容体が回収された。
【０１５５】
【数７】
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【０１５６】
・ヘキササッカライド７（Ｒ＝Ｂｒ）
チオエチル供与体５（３１１mg、０．２４３mmol）及び受容体１５（６２７mg、０．４８７mmol）を混合し、無水ベンゼン（５×５mL）と共沸させて高度減圧下に５時間おいた。混合物を、１．６mLのＣＨ2Ｃｌ2及び３．２mLのＥｔ2Ｏ（合計０．０５M）に溶解させ、新たに活性化させたモレキュラーシーブで処理し、０℃に冷却した。メチルトリフレート（１．５等量、４１μl）を一度に添加して反応物を０℃にて一晩撹拌した。朝に、更に２０μLのＭｅＯＴｆを添加し、反応物を更に２時間、５℃にて撹拌した。固体ＮａＨＣＯ3の添加により反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃで補助しつつセライトを通して濾過し、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィー（傾斜溶離２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→５０％→７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製したところ、４３７mg（７０％）のヘキササッカライドが白色泡沫として得られ、３００mgのトリサッカライド受容体が回収された。
【０１５７】
【数８】
0005111705.tif 000052
【０１５８】
・化合物１ｂ
ヘキササッカライド（１３０mg、０．０５０９mmol）のＴＨＦ（２．０mL）中の溶液に、氷酢酸（１０．０等量、２９μl）及びＴＢＡＦ（１．０MのＴＨＦ、１０．０等量、０．５０９mL）を添加した。反応物を室温にて一晩撹拌し、氷水に注入してＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ3（５０mL）及び塩水（５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮してオイルを得た。これをＥｔＯＡｃを用いてシリカゲルの短栓を通して精製した。得られたトリオールを無水ＭｅＯＨ（２．５mL）に溶解させ、ナトリウムメトキシドを添加した（ＭｅＯＨ中の２５％溶液０．２５０mL）。反応物を室温にて１８時間撹拌した後、０．５mLのＴＨＦ及び０．５mLのＨ2Ｏを添加した。室温にて更に２４時間撹拌し、次いでDowex-Ｈ+で中和し、ＭｅＯＨ洗浄しつつ濾過して濃縮した。粗製生成物を高度真空下で１日乾燥させた。得られた白色固体に、−７８℃にてＴＨＦ（０．５mL）及び凝集ＮＨ3（〜１０mL）を添加した。ナトリウム（〜５０mg）を添加して得られた青色溶液を−７８℃にて１．５時間撹拌した。反応を無水ＭｅＯＨ（〜５mL）でクエンチし、室温にして２mLまでの乾燥Ｎ2を流しつつ濃縮した。反応物をDowex-Ｈ+（ｐＨ５−６）で中和し、ＭｅＯＨ洗浄しつつ濾過して濃縮したところ白色固体を得た。白色固体を１．０mLのピリジン及び１．０mLのＣＨ2Ｃｌ2に溶解させ、０℃に冷却した。ＤＭＡＰの結晶、次いで無水酢酸（１．０mL）を添加した。アイスバスを除去し、反応物を室温にて一晩撹拌した。濃縮に次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（傾斜溶離７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→１００％ＥｔＯＡｃ→５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により精製し、４４mg（４６％）の８が白色固体として得られた。
【０１５９】
【数９】
0005111705.tif 000053
【０１６０】
ペルアセテート（４０mg）を無水ＭｅＯＨ（２．０mL）に溶解させ、１５０μlのナトリウムメトキシドを添加した（ＭｅＯＨ中、２５％溶液）。反応物を室温にて１８時間撹拌した後０．５mLのＴＨＦ及び０．５mLのＨ2Ｏ添加した。反応物を更に２４時間室温にて撹拌した。Dowex-Ｈ+（〜ｐＨ６−７）を用いる中和に次いで、ＭｅＯＨ洗浄しつつ濾過を行い、濃縮及びＰ−２ゲルを用いた精製（Ｈ2Ｏ溶離）を行ったところ２４mg（９６％）の白色固体を得た。
【０１６１】
【数１０】
0005111705.tif 000054
【０１６２】
・グリカールヘキササッカライド６ａ
チオエチル供与体５（１２０mg、０．０９３８mmol）及び受容体４（１２２mg、０．１０８mmol）を混合し、無水ベンゼン（５×５mL）と共沸させて高度減圧下に一晩おいた。混合物を、Ｅｔ2Ｏ：ＣＨ2Ｃｌ2の２：１混合物（合計２．７mL）に溶解させ、モレキュラーシーブを添加して混合物を室温にて１時間撹拌した。反応物を０℃に冷却し、１．０等量のＭｅＯＴｆ（０．０２０mL）を添加した。４時間後、０℃にて更に等量のＭｅＯＴｆ（０．０２０mL）を添加し、更に４時間１０℃にて撹拌して反応を継続させた。固体ＮａＨＣＯ3の添加により反応をクエンチし、ＥｔＯＡｃ（１００ml）を加えつつセライトを通して濾過し、濃縮した。得られた混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、５０mg（２３％）のヘキササッカライドグリカール６が得られ、８５mgの出発類受容体４が回収された。Ｒｆ０．３５（６６％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；
【０１６３】
【数１１】
0005111705.tif 000055
【０１６４】
・イミド-ヘキササッカライド６ｂ
上述の反応を、１０等量のＭｅＯＴｆを一度に加え、それ以外は同一の条件下にて行い、２８％の下記の化合物を得たが、これは親Ｎ-アセチル化ヘキササッカライド６ａよりもずっと極性が低かった。Ｒｆ０．３５（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；
【０１６５】
【数１２】
0005111705.tif 000056
【０１６６】
３）接合研究：
ここに記載され、図６に示されるように、ＦｕｃＧＭ１中のペンテニル基をオゾン分解によりアルデヒド基に転化し、globoＨについて記載のようにナトリウムシアノボロハイドライドの存在下における還元アミノ化方法によってＫＬＨの-ＮＨ2基に結合させる（Ragupathi G, Park TK, Zhang S, Kim IJ, Graeber L, Adluri S, Lloyd KO, Danishefsky SJ and Livingston POを参照。全合成ヘキササッカライドgloboＨの接合物を用いたマウスの免疫化の結果、ヒトの癌細胞に対する抗体が生じる：抗癌ワクチンの造成のための、化学的免疫学的な混合アプローチ。Angewandte Chem. Int. Ed Engl. 36:125-128, 1997）。クロスリンカー法の場合には、オゾン分解によって得られたアルデヒド基を、まずＭＭＣＣＨのヒドラジド（４-（マレイミドメチル）シクロヘキサン-１-カルボキシルヒドラジド）と反応させ、チオール化ＫＬＨと反応させた（Ragupathi G, Koganty RR, Qiu D, Lloyd KO and Livingston PO参照）。合成糖質接合ワクチン調製の新規且つ効率の良い方法：４-（４-Ｎ-マレイミドメチル）シクロヘキサン-１-カルボキシルヒドラジド（ＭＭＣＣＨ）リンカーアームを使用するシアリルＴｎ-ＫＬＨ接合物の合成（Glycoconjugate J., 15: 217-221, 1998）。例えば、メタノール中４mgのＦｕｃＧＭ１ペンテニルグリコシドを、ドライアイス／エタノールバス中において−７８℃にて撹拌し、激しく撹拌しつつ該溶液にオゾンガスを１０分間通気した。その後、過剰のオゾンを、５分間に亘って窒素を用いて除去した。メチルスルフィド（１００μl）を添加し、反応混合物を室温にて２時間撹拌し、二つのバイアルに同等に配分した。溶媒を窒素気流の下で除去した。生じた白色固体を、次なる接合工程に直接使用した。
【０１６７】
ａ）ＦｕｃＧＭ１-アルデヒドのＫＬＨとの直接接合：
２mgのＦｕｃＧＭ１-アルデヒドを、１mlの０．１Mのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．２及びＰＢＳ中４mgのＫＬＨに溶解させた。２mgのナトリウムシアノボロハイドライドを添加し、混合物を、穏やかに撹拌しつつ３７℃にて４８時間インキュベートした。１６時間後、更に１．０mgのナトリウムシアノボロハイドライドを添加し、インキュベーションを続けた。未反応のＦｕｃＧＭ１アルデヒドを、分子量カットオフが３００００ダルトンであるAmicon Centriprepを使用して多数回洗浄し、４℃にてＰＢＳを６−７変えて完全に除去した。
【０１６８】
ｂ）ＭＭＣＣＨを経るチオール化ＫＬＨへのＦｕｃＧＭ１-アルデヒドの接合：ＦｕｃＧＭ１-ＭＭＣＣＨの調製
２mgのＦｕｃＧＭ１-アルデヒドを、１mlの０．１Mの酢酸ナトリウムバッファーｐＨ５．５に溶解させ、１００μlのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中４mgのＭＭＣＣＨを添加した。反応混合物を、穏やかに撹拌しつつ室温にて１５分間インキュベートした。１５分間の終了時には、２mgのナトリウムシアノボロハイドライドを添加し、室温にて２時間に亘りインキュべーションを継続した。未反応のＭＭＣＣＨを、予め５mMのＥＤＴＡを含む０．１Ｍのナトリウムリン酸塩バッファーｐＨ６．０を用いて平衡させたSephadex G10カラムで除去し、同様のバッファーで溶離した。ＴＬＣによるＦｕｃＧＭ１についてポジティブであるフラクションを併合した。
【０１６９】
（ＫＬＨへのスルフヒドリル基の添加）
チオランバッファー（５０ｍＭのトリエタノールアミン、０．１５ＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）中に溶解させた２-イミノチオラン（２mg）を、４mgのＫＬＨに添加し、室温にて撹拌しつつ２時間インキュベートした。未反応の２-イミノチオランを、予め５mMのＥＤＴＡを含む０．１Ｍのナトリウムリン酸塩バッファーｐＨ７．２を用いて平衡させたSephadex G15カラムにより除去し、同様のバッファーで溶離した。BioRadタンパク質アッセイ染料試薬でＫＬＨについてポジティブであるフラクションを併合した。少量を、既に記載（Riddles PW, blackeley RL, Zerner B Ellman's reagent: 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid）--a reexamination, Anal Biochem 94: 75-81, 1979.)の通り、標準としてシステイン及びエルマン試薬を利用して、チオール化ＫＬＨ中のスルフヒドリル基を見積もるために使用した。ＫＬＨを、製造者の指示に従い、BioRad染料試薬を使用する染色方法によって見積もった。
【０１７０】
（ＦｕｃＧＭ１-ＭＭＣＣＨのチオール化ＫＬＨへの接合）
ＦｕｃＧＭ１-ＭＭＣＣＨ生成物及びチオール化ＫＬＨを混合し、０．１Mのナトリウムリン酸バッファーｐＨ８．０を用いてｐＨ７．２に調整した。その後反応混合物を室温にて一晩インキュベートした。ＦｕｃＧＭ１-ＭＭＣＣＨ-ＫＬＨ反応バイアルの内容物をCentriprep concentrator 30（Amicon: molecular cut-off 30000 Dalton）に移し、未反応のＦｕｃＧＭ１-ＭＭＣＣＨを多数回洗浄して完全に除去した。接合物に、未反応のＦｕｃＧＭ１がないことを、上記のようにＨＰＴＬＣによってチェックした。接合物の二つのバッチのエピトープ比を、BioRad染料結合タンパク質アッセイによりタンパク質含量を、ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤアッセイにより糖質を、見積もることによって決定した。ＦｕｃＧＭ１-ＫＬＨ（直接法による）とＦｕｃＧＭ１-ＭＭＣＣＨ-ＫＬＨとのエピトープ比は、それぞれ１４９／１及び１５２７／１であった。
【０１７１】
Ｂ．実施例２：Globo-Ｈ及びその接合物の合成：
１）合成の検討：
本発明の更に別の実施態様においては、ここに標記のように新規な合成方法論を利用してGlobo-Ｈの改良合成が提供される。本発明者らによって記載された、globo-Ｈの従来の合成（Park et al. J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11488; Bilodeau et al. J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 7840; Kim et al. J. Org. Chem. 1995, 60, 7716）は、この複合オリゴ糖類の迅速な構築のために全てのグリカールビルディングブロックを利用していた（Danishefsky et al. Angew. Chem. 1996, 108, 1482; Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1996, 35, 1380）。これらの調査は高度に収束性のカップリング[３＋３]に依存しており、最終ターゲット中に含まれたヘキササッカライド核を産生する。このアプローチにおいては、フレキシブルな末端グリカールがヘキササッカライド構築の間中維持された。その後グリカールを、globo-Ｈ糖脂質１６ａまたはそのアリルグリコシド１６ｂへの途中に存在するセラミド側鎖を設けるために使用した。１６ａの合成は、globo-Ｈの構造の証明及び免疫特徴付けを容易にする役割を果たした。アリルグリコシド１６ｂを、生体キャリアータンパク質への免疫接合のために用いた。従来のプロトコルは、構造の証明、免疫特徴付け、接合、マウス種痘、及びＩ相のヒトの臨床試行のための、「適当な」量の合成物質の製造に効果的であった。しかしながら、効率の良い生体接合を可能にするため、及び更に臨床目的のために適当な物質を提供するために、合成方法には改善が望まれていた。
【０１７２】
アリルグリコシドアプローチに付随する困難性は、代わりの解決策を必要としたが、これは一般的に言って、ここに記載されており、とりわけフコシルＧＭ１について上記され、更にGlobo-Ｈについては下記の通りである（図７）。このように、ヘキササッカライドが、キャリアータンパク質に結合可能なグリコシドを、既にあるべき場所に含んで構築可能であることが想定された（図８）。実際、この基は、[３＋３]カップリング工程において受容体の還元末端に既に導入されているであろう。このglobo-Ｈ合成（及び他の複合腫瘍関連抗原）の顕著な新変形の実施を成功させるためには、１）グリコシド構成物を含むトリサッカライド受容体が容易に合成可能であり；２）グリコシド構成物が[３＋３]カップリングと適合性であり；３）構成物が、アリルグリコシドと対照的に、全体的な脱保護によっても残存し；さらに４）効率の良い接合が実施可能であることが好ましい。
【０１７３】
最初のレトロ合成分析を図９に示す。最大の収束性のために、既述のペンテニルグリコシドリンカーを含むＡＢＣ受容体を企画した。更に、これまでに記載されているように、同様のＤＥＦトリサッカライド供与体セクターを利用する。そして、スルホンアミドグリコシド化プロトコルを利用し、収束性[３＋３]のＡＢＣ＋ＤＥＦカップリング反応を経て、ヘキササッカライド核を構成する（Griffith et al. J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 5811; Griffith et al. J. Am. Chem. Soc. 1991, 113, 5863）。これまでの結果により、スルホンアミドグリコシド化における必要なβ-結合の形成を導くためには、ＤＥＦ供与体中の還元末端ガラクトースのＣ４に、遊離ヒドロキシルの存在が必要である（図９、星印参照）ことが判明した（Park et al. J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11488; Kwon et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 1588）。受容体中のエカトリアルＣ３ヒドロキシル基の反応性が、供与体トリサッカライド中の必須のアキシアルＣ４ヒドロキシル基と比較してより高いことにより（太字参照）、図示のように、[３＋３]カップリングのシークエンスが起こることが予測された。ここに記載された戦略に重要なのは、いったんヘキササッカライドが構成されると、プロワクチン抗原に到達するために必要とされるのは保護基操作のみであることである。
【０１７４】
一般的に、ＤＥＦトリサッカライドセクターの合成はかなり簡潔であって、６-Ｏ-ＴＩＰＳガラクタルとtri-Ｏ-ベンジルフルオロフコースとから出発する６変形を要する（Park et al. J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 11488; Bilodeau et al. J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 7840; Kim et al. J. Org. Chem. 1995, 60, 7716）。二次発生アプローチの目的のためには、受容体トリサッカライド成分は、分化されたヒドロキシルをＣ４’に担持する所望のＮＰＧを含むラクトース誘導体と適当なＣ-環供与体に分裂可能である（図９）。ガラクトース供与体単糖類はまた、いずれＡＢＣ＋ＤＥＦカップリングをするために特異保護をＣ３に要し、ＡＢ＋Ｃ領域を結合させる、必要なβ-グリコシド結合を効率よく可能にするための注意を要する。
【０１７５】
図１０に示されるように、必須のＡＢＣ受容体の合成を、ラクトースオクタアセテート１７が容易に入手可能であるとの利点を利用して行った。１７を既知のα-ブロモ供与体１８に転化させ（Reithal, Y. J. Am. Chem. Soc. 1952, 74, 4210; Dasgupet et al. Carbohydr. Res. 1994, 264, 155）、次いで受容体としてペンテニルアルコールを用い、炭酸銀仲介によるグリコシル化を行って、１００gスケールにおいて収率７５％にて１９（Pent＝ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ2）が得られた（Rodriguez et al. Aust. J. Chem. 1990, 43, 665）。助触媒として銀トリフレートを用いた、１８の同様の処理によって所望の生成物が１７％収率で生成した。したがって、合成の初期段階において１９が生成すると共にリンカーがうまく設けられ、これは以降の段階の生体接合に使用できた。
【０１７６】
後続の工程は、いずれＡＢ＋Ｃのカップリングをさせるため、１９のＣ４’にて遊離の受容体部位を産生させてＡＢＣトリサッカライドを与えるために設計したものである（図１０）。１９のエステル保護基を除去してペンテニルラクトシドが得られ、次いでスタンナン仲介モノベンジル化によって選択的にＣ３’ベンジルエーテルが得られた（David et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 1981, 1797; Maranduba et al. Carbohydr. Res. 1986, 151, 105）。第二工程において、Ｃ４’及びＣ６’ヒドロキシルをベンジリデンアセタールとして利用して、化合物２０を唯一観察可能な生成物として準備した（Jannson et al. J. Org. Chem. 1998, 53, 5629; Koeman et al. Tetrahedron 1993, 49, 5291; Qiu et al. Liebigs Ann. 1992, 217）。最終的に、２０の残りのヒドロキシル基の過ベンジル化及びナトリウムシアノボロハイドライドと無水ＨＣｌとを用いたベンジリデンの位置選択的還元開裂により、Ｃ４’アルコール２１が得られた（Garegg, P. J. Pure Appl. Chem. 1984, 56, 845）。このように、ラクトースオクタアセテート１７から出発して、ＡＢペンテニルグリコシド受容体２１が、７工程により全２０％の収率で得られた。
【０１７７】
保護されたペンテニルグリコシド２１が大量に入手できたところで、ＡＢ＋Ｃカップリングに注意を向けてトリサッカライド受容体２４を生成させた。これまでのグリカール２７（図１０）の合成にはグリカール２２から高度に活性化されたβ-フルオロ供与体２３の注意深い調製が必要であった。２２中に含まれるＣ３ ＰＭＢエーテルを戦略的に組み入れて、この基の選択的脱保護に際していずれはＡＢＣ＋ＤＥＦカップリングを起こさせた。この作業の過程で、α-２３を、簡便に、高収率且つ大スケールで生成させることができた。したがって、α-供与体２３が、特異的に保護されたグリカール２２からエポキシド化によって調製され、ＨＦ：ピリジンへの曝露によりcisフルオロ-ヒドリン誘導体が得られ、生じたＣ２-ヒドロキシルを引き続き転化させてそのベンジルエーテルとした。アノマーα：β選択性は、１０：１と示され、２２を２３に変換させた全収率は７６％であった。
【０１７８】
先に調製されたβ-２３及び新たに調製されたα-２３を、ＡＢ受容体２１と共に使用するＡＢ＋Ｃカップリングの有効性を、その後調査した。モデルケースとしてのグリカールトリサッカライド２７の合成最適化法（２３＋２６→２７）もまた、過度に求カップリング性の助触媒に対しておそらくは感受性であるため、試験した。これらの調査において、α-フルオロ供与体の還元反応性は、表１にまとめた通り思慮深く選択された溶媒中において、高度な求フッ素性助触媒を用いてカップリングを行うことにより低減可能である旨が判明している。主としてβ-フルオロ供与体２３及びグリカール２６を使用し、Muykiyamaカップリング条件を利用して、これまでのカップリング操作により、グリカールトリサッカライド２７が得られ（Mukaiyama et al. Chem. Lett. 1981, 431; Nicolaou et al. J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 3693; Nicolaou et al. J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1991, 870）、適度のアノマー選択性を備えて５４％の収率を得た（表１のエントリー１）。他の助触媒をα-２３と共に使用した調査を、エントリー２及び３に示したが、全体的な有効性としてほとんど満足のいくものではなかった。しかしながら、グリカール２７の調製が、強度に求フッ素性のＣｐ2Ｚｒ（ＯＴｆ）2助触媒を使用する既述のα-供与体２３を包含するようにうまく拡張された（７３％収率、エントリー４）。満足なこととして、２７の生成のために最適化されたこれらのグリコシド化条件は、ペンテニルグリコシド２１を利用するＡＢ＋Ｃカップリングにうまく応用でき、トリサッカライド２４が、親反応に匹敵する収率（収率８０％、エントリー６）で得られた。β-２３の２１とのMuykiyamaカップリングは、４２％のトリサッカライド２４を生じた（エントリー５）。大量の２４を問題なく生成させる事象に満足して、[３＋３]カップリングを調査した。孤立ＰＭＢ基の放出を、この上ない収率で行うことができ（９２％）、こうして所望のＡＢＣペンテニル受容体２５の組み立てが完了した。
【０１７９】
【表１】
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【０１８０】
１６ｃの合成を完了させるためのキー工程及び最終変換を、図１１に示した。既知のＤＥＦ供与体２８（図１０参照）の受容体２５の存在下におけるＭｅＯＴｆを用いた処理（Lonn, H. Carbohydr. Res. 1985, 134, 105; Lonn, H. J. Carbohydr. Chem. 1987, 6, 301）により、問題なくヘキササッカライド２９が６０％の収率で得られた。２９の新たなアノマー中心の配向は、β-配置であることが確認された。トリサッカライド受容体２５を使用する[３＋３]カップリング収率は、２７に相当するグリカールベースの受容体を使用する[３＋３]操作に匹敵していた。しかしながら、１５を使用することの多大な利点が、以下の工程において明らかになった。
【０１８１】
全体的な脱保護が、２９をＴＢＡＦに曝してシリルエーテル及び環状カーボネートを除去することによって開始された。得られたペンタ-オール上のベンジル及びスルホンアミド保護基を、その後、金属還元を解消させる作用の下で開裂させた。このプロトコルに次いでペルアセチル化を行い単離可能なヘキササッカライドペルアセテート３０を得た。より初期の工程同様に、記載の脱保護条件下で、ペンテニル結合は高度に信頼性であることが判明した。対応する（最終的に１６ｂを生じる）アリルグリコシドが、全体的な脱保護に必要な還元金属条件に安定ではなく、したがって脱保護の後に組み入れねばならないことは、対照によってもまた顕著である。メトキシドを用いた３０の脱アセチル化により、globo-Ｈの完全に脱保護されたペンテニルグリコシド１６ｃが得られ、これは生体接合のために著しく適していた。重要な点としては、接合を可能にする更なる官能性が必要でなくなったため、二次生成変形において、ヘキササッカライド構成物２９から１６ｄへの経過が非常に単純化された。
【０１８２】
合成globo-Ｈの臨床評価を容易にする目標に向けて、官能性ワクチンを造成する目的で、１６ｃをキャリアータンパク質ＫＬＨに接合した。この操作の一次工程には、ペンダントオレフィンのオゾン分解、次いで還元処理が含まれ、図１２に示したように、特徴付けされていないアルデヒド中間体３１が得られた。リン酸塩バッファー中におけるＫＬＨ及びナトリウウムシアノボロハイドライドを用いた還元アミノ化により、ワクチン複合多糖１６ｄ（ｎ＝３）が得られた。糖質のタンパク質への共有結合は、おそらくはＫＬＨの露出したリシン残基上のε-アミノ基を経て起こる。１６ｄの加水分解糖質分析により、キャリアータンパク質の１分子当たり、およそ３５０の糖質残基が明らかになった。
【０１８３】
２）実験：
・ペルアセチルペンテニル-β-Ｄ-ラクトシド（１９）
ラクトースオクタアセテート（１００．０g、１４７．７mmol）、氷酢酸（３０mL）、及び無水酢酸（３０mL）の冷却した（アイスバス）懸濁液に、ＡｃＯＨ中３０％のＨＢｒ１００mLを６０分間に亘り滴々と添加した。反応混合物を１時間撹拌してアイスバスを除去した。更に２時間室温にて撹拌したところ、混合物は均一な黄色溶液となった。溶液をＨ2Ｏ（１０００mL）で希釈し、ＣＨＣｌ3（３×４００mL）で抽出した。有機抽出物をＨ2Ｏ（２×１０００mL）、飽和ＮａＨＣＯ3（３×５００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させて濃縮した。生成物を無水ベンゼンと共沸させて高度真空下で乾燥させ、９８．８g（９６％）のラクトシルブロミドを得、これを更に精製せずに使用した。Ａｇ2ＣＯ3（１００g、３６２．６mmol）、新たに活性化させたモレキュラーシーブ（１５g）、及びＩ2の結晶の、４００mLのＣＨ2Ｃｌ2中の懸濁液に、ペンテニルアルコール（５．０等量、７３．４mL）を添加し、後に４００mLのＣＨ2Ｃｌ2中としたラクトシルブロミド（９８．８g、１４１．４mmol）を添加した。室温下、暗所にて１６時間撹拌した後、反応物を、更なるＣＨ2Ｃｌ2と共にセライトの栓を通して濾過し、濃縮して黄色オイルを得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製したところ、白色泡沫として７４．７g（７５％）のペンテニルラクトシドが得られた。
【０１８４】
【数１３】
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【０１８５】
・ペント-４-エニル３’-Ｏ-ベンジル-４’，６’-Ｏ-ベンジリデニルβ-Ｄ-ラクトシド（２０）
ペルアセチル化ペンテニルラクトシド、８（１８．２g、２５．８mmol）を３００mLの無水ＭｅＯＨ中に溶解させ、２．０mLのＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中２５％）を添加した。反応物を室温にて１６時間撹拌し、Dowex-Ｈ+（ｐＨ５−６）で中和した。反応物を更なるＭｅＯＨと共に濾過して濃縮し、白色固体、１９ａ（１０．６g、定量的）を得、これを更に精製せずに使用した。
【０１８６】
【数１４】
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【０１８７】
ヘプタ-オール１９ａ（１．１４g、２．８mmol）及びジブチルチンオキシド（０．７６g、３．１mmol）をベンゼン（７０ｍL）中で加熱還流させ、同時に水の共沸除去を１５時間行った。混合物の濃度を二倍にし、室温に冷却し、ベンジルブロミド（０．６９ml、５．８mmol）及びＢｕ4ＮＩ（１．０３g、２．８mmol）を添加した。混合物を３．５時間加熱還流し、冷却し、シリカゲルをフラスコに添加し、溶媒を蒸発させた。残渣をシリカゲルのカラムにかけスズ複生成物をヘキサンで流して除去し、溶離（ＣＨ2Ｃｌ2中５％のＭｅＯＨ）により純粋３’-Ｏ-ベンジルエーテル（０．７６g、５４％）が白色泡沫として得られた。
【０１８８】
【数１５】
0005111705.tif 000060
【０１８９】
３’-Ｏ-ベンジルエーテル（０．６g、１．２０mmol）をアセトニトリル及びＤＭＦ（５：２、７mL）中に溶解させ、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（０．４７mL、３．１mmol）及びＣＳＡ（１４mg、６０μmol）を添加した。１６時間室温にて撹拌した後、混合物をＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄した。有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、蒸発させ、得られた残渣へのエーテル（１００mL）の添加に次いで、純粋な２０が濾過によって回収された（０．５１g、７２％）。
【０１９０】
【数１６】
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【０１９１】
・ペント-４-エニル２，２’，３，３，６，６’-ヘキサ-Ｏ-ベンジル-β-Ｄ-ラクトシド（２１）
テトラオール２０（０．５１g、０．８７mmol）及びＥｔ4ＮＩ（０．１２g、０．４３mmol）を乾燥（無水ベンゼンと共沸）させ、ＤＭＦ（５mL）中に溶解させ、０℃に冷却した。ベンジルブロミド（０．８３mL、７．０mmol）を添加し、次いでＮａＨ（０．２２g、６０％、５．６mmol）を添加し、混合物を１４時間に亘り室温に温めた。混合物を、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）させて蒸発させた。残渣の精製をシリカゲルクロマトグラフィー（４：１→２：１  ヘキサン：酢酸エチル）で行い、純粋なペンタベンジルラクトシドを白色泡沫（０．８０g、９７％）として得た。
【０１９２】
【数１７】
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【０１９３】
ベンジリデン（０．６３g、０．６６mmol）をＴＨＦ（６．６mL）中に溶解させ、新たに活性化させた４ÅのＭＳ（０．２５g）と共に１０分間室温にて撹拌した。ＮａＣＮＢＨ3（０．２１g、３．３mmol）を一度に加え、次いで無水ＨＣｌ（２．０MのＥｔ2Ｏ）を、混合物が起泡しなくなるまで滴々と添加した（およそ２mL）。更に１０分間撹拌した後、混合物を更に１０分間撹拌した後、混合物を酢酸エチルで洗浄しつつセライトの栓を通して濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ3及び塩水で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、有機相を蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（９：１ ヘキサン：酢酸エチル）で精製し、白色固体として純粋２１を得た（０．４９g、７９％）。
【０１９４】
【数１８】
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【０１９５】
・α-フルオロ供与体（２３）
Ｎ2下及び０℃の、３-Ｏ-ＰＭＢ-４，６-ジ-Ｏ-ベンジル-ガラクタル（２．２４g、５．０２mmol）の無水ＣＨ2Ｃｌ2（５ml）中の溶液を、ジメチルジオキシラン（０．１１Ｍ、４７ml）で処理し、混合物を、全てのグリカールが消費されるまで（〜１時間、ヘキサン中３０％のＥｔＯＡｃでのＴＬＣ）撹拌した。注：高温及び／または過剰のＤＭＤＯは、ＰＭＢ基の酸化及び反応収率の低下を促す。溶媒を真空下０℃にて蒸発させ、残渣を高度真空下に維持した。ガラクタルエポキシドを収容したフラスコに、新たに調製した４Ａのモレキュラーシーブ（２g）、無水ＴＨＦ（５０ml）を仕込み、０℃に冷却した。ＨＦ／Ｐｒｙ複合物（０．７９ml、〜５等量）をシリンジから滴々と添加した。反応混合物を一晩静置してゆっくりと室温に到達させ、Ｅｔ3Ｎ（１．２７g、〜２．５等量）でクエンチしてｐＨを〜７とした。混合物を、無水ＭｇＳＯ4のパッドを通して濾過し、５０mlのＥｔＯＡｃで３度濯いだ。濾液を水（５０ml）及び飽和ＮａＨＣＯ3溶液（５０ml）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮乾燥させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２／１）により、２．０６g（収率８５％）のフルオロヒドリンがアノマーα：β＝１０：１の混合物として得られた。19Ｆ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、３７６ＭＨｚ、外標準はＣ6Ｆ6）
【０１９６】
【数１９】
0005111705.tif 000064
【０１９７】
上記混合物（８．２９g、１７．２mmol）を、Ｎ2下及び０℃にて新たに活性化させた４Ａモレキュラーシーブ（３g）を含む無水ＤＭＦ（１００ml）に溶解させ、ベンジルブロミド（４．４１g、２５．８mmol、１．５等量）で処理し、最後にＮａＨ（１．２４g、オイル中６０％の分散物、３０．８６mmol、１．８等量）で処理し、室温にて一晩撹拌した。反応を氷酢酸（０．９３g、０．９等量）でクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃ（４×５０ml）と共に無水ＭｇＳＯ4のパッドを通して濾過した。有機溶液を水（４×５０ml）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、真空下で濃縮した。残渣のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、４／１）により、９．３６g（９５％）の表題化合物が、出発フルオロヒドリンと同じアノマーの比α：β＝１０：１にて、無色の液体として得られた。19Ｆ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、３７６ＭＨｚ、外標準はＣ6Ｆ6）δ11.5(dd, α, J＝53.7, 25.2Hz), 22.8(dd,β,J＝53.4, 13.0Hz)。分析の目的のため、予備ＨＰＬＣを用いて５０mgの純粋αアノマーを得た。
【０１９８】
【数２０】
0005111705.tif 000065
【０１９９】
・ＰＭＢトリサッカライド（２４）
ラクトシド（２１）（４０２mg、０．４２３mmol）及びフルオロ供与体（２３）（４８５mg、０．８４６mmol、２等量）を、無水ベンゼン（３×１０ml）と共沸させ、更に高度真空下にて３時間乾燥させた。上記混合物をトルエン（３．８ml）中に溶解させ、カニューラを経由して、新たに活性化させた４Åモレキュラーシーブ（０．６８g）をＮ2下に収容するフラスコに移して２，６-ジ-tert-ブチルピリジン（１４３μl）で処理し、−２０℃に冷却した。（Ｃｐ）2Ｚｒ（ＯＴｆ）2（２２５mg、０．３８１mmol、０．９等量）をＴＨＦ（０．３８ml）中に懸濁させ、カニューラを経由して反応混合物に添加した。反応物を暗所にて、７２時間７℃にて撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（１０ml）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ml）と共に無水ＭｇＳＯ4のパッドを通して濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２×１０ml）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮乾燥させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（２％Ｅｔ2Ｏ／ＣＨ2Ｃｌ2）により５０９mg（８０％）の所望のα-生成物（２４）及び５１mg（８％）のβ-生成物が得られた。
【０２００】
【数２１】
0005111705.tif 000066
【０２０１】
・トリサッカライド受容体（２５）
塩化メチレン（１０ml）中、ＰＭＢトリサッカライド（２４）（４４５mg、０．２９６mmol）の、０℃における溶液を、リン酸塩バッファー（１．５ml。ｐＨ＝７．４）及びＤＤＱ（８９mg、１．３等量）で処理し、０℃にて５時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ml）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液（２×２０ml）及び水（２０ml）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮乾燥させた。粗製の生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン中４％のエーテル）により３４４mg（８４％）の脱保護されたトリサッカライド（２５）が無色のオイルとして得られた。
【０２０２】
【数２２】
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【０２０３】
・ヘキササッカライド受容体（２９）
チオエチル共用体２８（５４３mg、０．４２５mmol）及び受容体２５（５８７mg、０．４２５mmol）を混合し、無水ベンゼン（５×５mL）と共沸させ、高度真空下にて５時間乾燥させた。その後混合物を３．５mlのＣＨ2Ｃｌ2と７．０mLのＥｔ2Ｏ中に溶解させ、新たに活性化させたモレキュラーシーブで処理して０℃に冷却した。メチルトリフレート（３．０等量、１４４μL）を一度に添加し、反応物を０℃にて３時間撹拌した。更に１４４μLのＭｅＯＴｆを添加して反応物を更に２時間５℃にて撹拌した。反応物を固体ＮａＨＣＯ3でクエンチし、ＥｔＯＡｃと共にセライトを通して濾過して濃縮し、ＨＰＬＣ（１７％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、６６３mg（６０％）のヘキササッカライドを白色泡沫として得た。
【０２０４】
【数２３】
0005111705.tif 000068
【０２０５】
・globo-Ｈペンテニルグリコシドのペルアセテート（３０）
ＴＨＦ（１０mL）中ヘキササッカライド（５８５mg、０．２２４mmol）の溶液にＴＢＡＦ（１．０MのＴＨＦ、１０等量、２．２４mL）を添加した。反応物を室温にて３日間撹拌し、氷水に注入してＥｔＯＡｃ（３×５０mL）で抽出した。有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ3（５０mL）及び塩水（５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮してオイルを得、ＥｔＯＡｃと共にシリカゲルの短栓を通して精製した。生じるトリオールを無水ＭｅＯＨ（８mL）に溶解し、ナトリウムメトキシド（ＭｅＯＨ中２５％溶液、０．２５mL）を添加した。反応物を室温にて１８時間撹拌し、Dowex-Ｈ+で中和し、ＭｅＯＨ洗浄しつつ濾過して濃縮した。得られた白色固体に−７８℃にてＴＨＦ（２．０mL）及び凝集ＮＨ3（〜２５mL）を添加した。ナトリウム（〜５００mg）を添加して得られた青色溶液を−７８℃にて２時間撹拌した。反応を無水ＭｅＯＨ（〜１０mL）でクエンチし、室温にして乾燥Ｎ2を５mLまで流しつつ濃縮した。反応物をDowex-Ｈ+で中和し、ＭｅＯＨ洗浄しつつ濾過して濃縮したところ白色固体を得た。白色固体を５．０mLのピリジン及び５．０mLのＣＨ2Ｃｌ2に溶解させ、０℃に冷却した。ＤＭＡＰの結晶、次いで無水酢酸（５．０mL）を添加した。アイスバスを除去し、反応物を室温にて一晩撹拌した。濃縮に次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（傾斜溶離７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→１００％ＥｔＯＡｃ→５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）により精製し、１６８mg（４２％）の３０が白色固体として得られた。
【０２０６】
【数２４】
0005111705.tif 000069
【０２０７】
・Globo-Ｈ、ペンテニルグリコシド（１６ｃ）
ペルアセテート（２０mg、０．０１１mmol）を無水ＭｅＯＨ（２．０mL）に溶解させ、１００μLのナトリウムメトキシド（ＭｅＯＨ中２５％の溶液）を添加した。反応物を室温にて１８時間撹拌し、Dowex-Ｈ+（〜ｐＨ６−７）で中和し、ＭｅＯＨ洗浄しつつ濾過して濃縮し、ＲＰシリカゲル（Ｈ2Ｏ→１％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ）、その後Ｐ−２ゲル（Ｈ2Ｏ溶離）を使用して精製し、１２mg（９９％）の白色固体を得た。
【０２０８】
【数２５】
0005111705.tif 000070
【０２０９】
Ｃ．実施例３：グリコアミノ酸及び本発明の複合多糖の調製：
１）合成方法の検討：
一般的に、上述の二つの抗原、フコシルＧＭ１及びglobo-Ｈをグリコペプチドに組み入れることが望ましい。図１３に示したように、グリコシル化アミドエステルの触媒非対称水素化を利用する変換を考察した。新たなアプローチは、好適に保護されたグリシン誘導ホスホネートを用いて保護されたアルデヒドのHomer-Emmonsオレフィン化を行うことにより、エナミドエステルを得ることを予期したものであった。続く触媒非対称水素化により、望ましくはジアステレオマーとして純粋なグリコアミノ酸が得られる。
【０２１０】
一つの実施例において、ペルアセチル化ラクトース誘導体に基づく本発明のグリコアミノ酸を調製した。特に、必要とされるラクトース誘導エナミドエステル基質を調製した。必要とされるラクトース誘導エナミドエステルは基質は、図１４にしたがって調製した。ＮＰＧ３２（Allen et al., Chem. Eur. J. 2000, 6, 1366）のオゾン分解に次ぐ還元処理により、対応するアルデヒド誘導体が得られた。粗製のアルデヒドに、テトラメチルグアニジン及びホスホネート３３を用いてHomer-Emmonsオレフィン化を行った。ホスホネート３３は、Ｎ-Ｂｏｃ及び２-（トリメチルシリル）エチルエステル（ＴＳＥ）保護（Schmidt et al., Synthesis 1984, 53; Kawai et al., Chem. Lett. 1990, 577）を有し、生じるグリコアミノ酸を、アセテート糖質保護基の存在下におけるペプチドカップリングのために、直交性が適切なものとするために選択されたものである。エナミドエステル３４は、単一のジアステレオマーとして、２工程操作について８８％の収率で得られた。
【０２１１】
一つの好ましい実施態様においては、エナミドエステル３４の非対称水素化のための条件を詳説する。エチルＤｕＰＨＯＳ触媒前駆体の（Ｓ，Ｓ）配位子異性体を使用したが、これは、これらのタイプの系においてアミノ酸生成物の（Ｓ）異性体を与えるとして十分特徴付けされたものである。保護されたグリコアミノ酸は９８％の収率で得られ、２０：１より大なるジアステレオマー比（dr）をもって生成されると判明した。注目すべきことに、t-Ｂｏｃプロトンは、ほぼ限界の分解度であり、非対称反応においては、より少量の異性体は検出不可能であった。13Ｃ分析もまた、より少量の異性体がＮＭＲ検出の限界内においては形成されないとの結論を支持した。アキラル触媒（Pd/C、MeOH）を用いた水素化は、Ｒ及びＳ配置の１：１混合物３５を産生し、ジアステレオマー比決定のための比較を提供した。この反応もまた、キラリティ転写により３５が生じるのは、キラル配位子により、糖質由来の基質制御によるのではないことを示す。腫瘍抗原の合成及び組み立てに移る前に行うべき最終工程は、アミノ酸側鎖中に含まれるブロック基の脱保護性能を示す工程である。結局、３５のＴＢＡＦとの反応により酸３６が生じ、これはペプチドカップリングのために好適に調製された。収率９３％。
【０２１２】
ラクトースモデルに示した一般的な方法論により、別の好ましい実施態様において、改良ヘキササッカライド３７及び３８、並びに興味深い他の抗原を調査した。表２に示したように、図１４に使用したのと同様の条件下における、Globo-Ｈのペルアセチル化ｎ-ペンテニルグリコシド３７のオレフィン化により、対応するエナミドエステル４１が７２％の収率で、単一の異性体として得られ、フコシルＧＭ１ヘキササッカライド１６が１０−２２％の収率で得られた。とりわけ、（Ｓ，Ｓ）-Ｅｔ-ＤｕＰＨＯＳ-Ｒｈ+触媒系を使用して、４１及び４２の水素化がこの上ない収率で進行し、1Ｈ ＮＭＲ分析による単一のジアステレオマーとして、４５及び４６を産生した。化合物４５及び４６は、複合オリゴ糖類Globo-Ｈ及びフコシルＧＭ1を含む合成グリコアミノ酸の最初の例を代表する。
【０２１３】
別の二つの臨床的に見込みのある抗原に同様の変換を行い、これらの対応するグリコアミノ酸を産生することもまた、別の所定の実施態様において行った。既述のように、Ｌｅｗｉｓy（Ｌｅy）オリゴ糖が、結腸、肝臓、前立腺、及び卵巣の癌に対する抗体を誘発させるための重要な抗原として認識されている（Lloyd et al., Am. J. Clin. Path. 1987, 87, 129; Lloyd et al., Cancer Biol. 1991, 2, 421; Yin et al., Int J. Cancer, 1996, 65, 406）。これまでに、Ｌｅy-ＫＬＨ接合ワクチン（Danishefsky et al. J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5701）と、糖脂質またはＫＬＨのいずれかに結合した、クラスター化Ｌｅyグリコペプチド（天然のα-Ｏ-結合配置のもの）複合多糖の両方が調製され、これらのワクチンを用いた卵巣癌に対するヒトの臨床試用が開始された（Kudryashov et al., Cancer Immunol. Immunother. 1998, 45, 281; Sabbatini et al., Int. J. Cancer 2000, 87, 79）。
【０２１４】
Ｌｅyｎ-ペンテニルグリコシド３９とＴｎ抗原のα-結合ｎ-ペンテニルグリコシド４０（ＧａｌＮＡｃ）の両方から出発した結果を、表２に示す。ヘキササッカライド３９は、Ｌｅyグリコペプチドクラスターの合成における中間体として入手可能であり、したがってこの戦略の潜在的有利性を示す。このように、免疫原性が人口構成物中に保持されるならば、これらのＮＰＧ誘発グリコアミノ酸は、ワクチン複合多糖に、本来の経路よりもずっと短い合成経路を与える。表２に示されるように、３９及び４０のオレフィン化は無事に行われてエナミドエステル４３及び４４がそれぞれ８５％及び７５％の収率で得られ、これらも単一の異性体としてであった。非対称水素化もまた、前記のように、ジアステレオマーとして純粋なグリコアミノ酸４７及び４８を、この上ない収率で産生した。
【０２１５】
【表２】
0005111705.tif 000071
【０２１６】
上にまとめたグリコアミノ酸を用いることは、新規なグリコペプチドを産生するために望ましいであろう。とりわけ、一つの実施態様においては、globo-Ｈ、Ｌｅy、及びＴｎを組み込む新規なグリコペプチドを調製した。とりわけ、キャリアータンパク質ＫＬＨのための接合ハンドルを備えるために、Ｃ-末端を変性させた。メルカプトアセトアミド単位が、この目的に効果的であることが判明している。図１５に示されるように、Ｔｎグリコアミノ酸４８をＴＢＡＦで処理し、対応のカルボン酸が生じた。保護されたメルカプトアセタミド（ＡｃＳＣＨ2Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）3ＮＨ2）に終端するジ-アミノスペーサーとの、ＢＯＰ試薬（ベンゾトリアゾール-１-オキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）の作用下におけるカップリングにより、対応するアミドを、２工程について５０％の収率で得た。Ｎ-末端Ｂｏｃ基の除去によりアミン４９がトリフルオロ酢酸塩として得られた。次の抗原Ｌｅyを、カップリングのため、４７のＴＢＡＦとの反応によって調製し、酸５０を得た。アミン４９のＬｅy酸５０とのカップリングは、ここでもＢＯＰ助触媒を用いて、Ｔｎ-Ｌｅyジ−ペプチド５１を８６％収率で生じた。最後に、GloboＨグリコアミノ酸４５をＴＢＡＦで処理し、対応する酸５２を生じた。５１のＢｏｃ保護基の除去に次ぐ酸５２とのカップリングにより、Ｔｎ-Ｌｅy−Globo-Ｈトリペプチドが６４％の収率で得られた。最後に、Ｎ-末端Ｂｏｃ基を除去し、生じたアミンを酢酸塩としてキャップしてトリペプチド５３が９５％の収率で得られた。全ての成分を所定の位置として、エステル保護基を脱ガスメタノール中ヒドラジンを用いて除去し、完全に脱保護したグリコペプチド５４をこの上ない収率で得た（図１６）。以下に説明するとおり、ここに詳説する通り調製した本発明の複合多糖はまた、適当なキャリアータンパク質または脂質に接合可能である。
【０２１７】
２）実験一般
ＤｕＰＨＯＳ-Ｒｈ+触媒をStrem Chemical Co., Newburyport, MAより購入した。他の全ての市販の原料（Aldrich-Sigmaより購入）を、更なる精製をせずに使用した。以下の溶媒を、乾燥溶媒システム（アルミナカラムを通す）から得た：ＴＨＦ、ジエチルエーテル（Ｅｔ2Ｏ）、ＣＨ2Ｃｌ2、トルエン、及びベンゼン。全ての反応は、特記のない限り乾燥Ｎ2下で行った。ＮＭＲ（1Ｈ及び13Ｃ）スペクトルを、Bruker AMX-400MHzまたはBruker Advance DRX-500MHzで記録し、特記のない限り残留溶媒を基準とした。ＩＲスペクトルは、Perkin-Elmer 1600 series-FTIRスペクトロメーターを用いて記録し、旋光度を経路長１０cmのセルを使用してJasco DIP-370デジタル旋光計で測定した。低分解能マススペクトル分析を、JOEL JMS-DX-303 HFマススペクトロメーターで行った。分析ＴＬＣは、E. Merckシリカゲル６０Ｆ２５４プレートで行い、フラッシュカラムクロマトグラフィーは規定の溶媒を用いて、E. Merckシリカゲル６０（４０−６３mm）またはSigma Hタイプのシリカゲル（１０−４０mm）上で行った。
【０２１８】
４０の合成手順（図１７に図示）
・トリクロロアセチミデート供与体
図１７に示したアジドニトレートの混合物（１．６６g、４．４１mmol）をＣＨ3ＣＮ（１５mL）に溶解させ、０℃に冷却した。撹拌されている溶液にHunigの塩基（１．２等量、０．９２５mL）及びベンゼンチオール（３．０等量、１．３５mL）を添加した。反応混合物を０℃にて１時間撹拌し、アイスバスを取り除いた。更に１時間室温においた後、反応物を乾燥窒素を流しつつ濃縮した。生じた物質を最少量のＣＨＣｌ3に溶解させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけてヘミアセタールを得た（１．４１、９７％）。（注１：このフラッシュはフード中で行うこと、注２：両方のアノマーを単離すること（これらはＴＬＣ／フラッシュにて分離する））。ヘミアセタールの混合物（１．４１g mg、４．２５mmol）をＣＨ2Ｃｌ2（８．５mL）に溶解し、トリクロロアセトニトリル（４．２５mL）を添加し、次いでＫ2ＣＯ3（５．０等量、２．９３g）を添加した。反応物を室温で一晩撹拌し、塩化メチレンを添加しつつセライトの栓を通して濾過した。有機相を濃縮し、次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（１０→２５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によりβ-トリクロロアセチミデート（１．３０mg、７７％）を黄色オイルとして得た（注：α-アノマーがまず溶離し、次いでβ-アノマーが溶離した）。
【０２１９】
・α-Ｔｎのペンテニルグリコシド
図１７に示したＴＣＡ供与体（１．３０g、２．７２mmol）をＴＨＦ（０．２M、１３．６mL）及びペンテニルアルコール（５．０等量、１．２mL）中に溶解させ、−１０℃に冷却した（アセトン−アイスバス）。ＴＭＳＯＴｆ（０．１等量、０．０４９mL）を一度に加え、反応物を１時間撹拌した。固体ＮａＨＣＯ3を添加し、反応物をセライトを通して濾過し、濃縮してフラッシュカラムクロマトグラフィー（２５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけた。（注１：ジアステレオマーとしてのアノマーは分離しない。これらの比率は、1Ｈ ＮＭＲで決定すること。注２：出発物質及び生成物をＴＬＣによって共溶離する−傾斜ＴＬＣ（最初１０％、その後５０％）を利用して反応の進行を視覚化可能である））単離したグリコシドを１０mLのＡｃＳＨ中に取り出し、室温にて２時間撹拌した。乾燥窒素の通気による溶媒の蒸発に次いで、フラッシュカラムクロマトグラフィー（５％アセトン／トルエン→１０％アセトン／トルエン）を行い、６２０mgのα-グリコシド（５５％）及び未決定量のβ-グリコシドを得た。（注：酢酸エチル／ヘキサン混合物もまたアノマーを分離するであろうが、アセトン／トルエンの方が優れていると判明している。）
【０２２０】
オレフィン化、４１のための一般操作
エナミド４１（Globo-Ｈ）の調製が、この操作の代表である。ｎ-ペンテニルグリコシド３７（５８mg、０．３２２mmol）を１０：１０：１のＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2：ピリジン（３mL、典型的に０．０５M−０．０１M）に溶解させ、−７８℃に冷却した。乾燥オゾンを、反応混合物に、暗青色が持続するようになるまで通気した。オゾン源を取り除き、反応物を−７８℃にて更に１５分間撹拌したところで乾燥窒素の気流を適用して過剰のオゾンを除去した。ジメチルスルフィド（５０等量、０．１１８mL）を冷却した混合物に添加し、アイスバスを取り除き、反応物を室温にて４時間撹拌した。反応物をＣＨ2Ｃｌ2（１０mL）で希釈し、水（５０mL）で洗浄し、更なるＣＨ2Ｃｌ2（２×１０mL）で逆抽出した。混合有機相を無水ＭｇＳＯ4で乾燥させて濃縮した。粗製のアルデヒドは典型的には精製せず、無水ベンゼン（３×３mL）と共沸させて乾燥させ、直接次の工程に用いた。
【０２２１】
ホスホネート３３（１．２０等量、１４mg）を無水ＴＨＦ（０．３mL）に溶解させ、−７８℃に冷却し、テトラメチルグアニジン（ＴＭＧ）（１．２５等量、０．００５mL）を滴々と添加した。反応物を−７８℃にて３０分間撹拌し、次いで、さらなるＴＨＦ（２×０．３mL、典型的には０．１−０．０１Ｍ全反応体積）中の粗製アルデヒド（０．０３２２mmol）を添加した。反応物を室温にて一晩（１０−１５時間）撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１０mL）で抽出し、０．０５Ｍ水性ＨＣｌ（５０mL）で洗浄し、更にＥｔＯＡｃ（２×１０mL）で逆抽出した。（注：全てのＴＭＧは非対称水素化の前に除去せねばならない。）混合有機相を無水ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン→１００％ＥｔＯＡｃ）により精製し、所望のエナミドエステル４１を単一の異性体として得た。７２％、白色泡沫；
【０２２２】
【数２６】
0005111705.tif 000072
【０２２３】
・ラクトースエナミド３４
８８％、白色泡沫；Ｒｆ０．４５（６６％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；
【数２７】
0005111705.tif 000073
【０２２４】
・Ｌｅｗｉｓyエナミド４３
８５％、白色泡沫；Ｒｆ０．４５（７５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；
【数２８】
0005111705.tif 000074
【０２２５】
・Ｔｎエナミド４４
７５％、白色泡沫；Ｒｆ０．８０（１００％ＥｔＯＡｃ）；
【数２９】
0005111705.tif 000075
【０２２６】
・フコシルＧＭ1エナミド４２
１０−２２％；Ｒｆ０．２５（１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）；
【数３０】
0005111705.tif 000076
【０２２７】
・非対称水素化のための一般操作
不活性の脱酸素環境下にて、[（ＣＯＤ）Ｒｈ-（（Ｓ，Ｓ）-Ｅｔ-ＤｕＰＨＯＳ）]+ＯＴｆ（０．００５mmol、５mol％）及び所望のエナミドエステル（０．１００mmol）を、Fishcer-Porter管中にて脱酸素無水ＴＨＦ（１０mL、０．０１M）に溶解させた。反応容器を、三度の真空／Ｈ2サイクルの後、５０psiのＨ2で加圧し、２５℃にて２４乃至３６時間、または反応物が明橙色から褐色に変色するまで撹拌した。容器を減圧し、混合物を濃縮し、シリカゲルの短栓を通して精製したところ、グリコアミノ酸を生じた。
【０２２８】
・ラクトースグリコアミノ酸３５
９８％；Ｒｆ０．４５（６６％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；
【数３１】
0005111705.tif 000077
【０２２９】
・Globo-Ｈグリコアミノ酸４５
【数３２】
0005111705.tif 000078
【０２３０】
・Ｌｅｗｉｓyグリコアミノ酸４２
９９％；ＩＲ（ＣＤＣｌ3フィルム）cm-1；
【数３３】
0005111705.tif 000079
【０２３１】
・Ｔｎグリコアミノ酸４３
９９％；ＩＲ（ＣＤＣｌ3フィルム）
【数３４】
0005111705.tif 000080
【０２３２】
Ｎ-Ｂｏｃ脱保護のための一般操作
所望のグリコアミノ酸（０．１００mmol）を、ＣＨ2Ｃｌ2（３．０mL）に撹拌しつつ溶解させた。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（３．０mL）を滴々と添加して反応物を室温にて１時間撹拌した。その後混合物を、乾燥Ｎ2の気流で濃縮し、無水ベンゼン（２×５mL）と共沸させて粗製のアミンをそのＴＦＡ塩として得、これは典型的には更なる精製無しに使用した。
【０２３３】
ＴＳＥエステル脱保護のための一般操作
所望のグリコアミノ酸（０．１００mmol）をＴＨＦ（１．０−３．０mL）に溶解させ、０℃に冷却した。ＴＨＦ（０．２５０mmol、２．５等量）中ＴＢＡＦの１．０M溶液を滴々と添加し、アイスバスを取り除いて反応物を室温にて１−２時間撹拌し、ＴＬＣで判定した。（注：反応時間の延長、すなわち１０時間を超えると、脱アセチル化を起こしうる）反応混合物を、ＣＨ2Ｃｌ2（１０mL）で希釈し、０．０５Mの水性ＨＣｌ（５０mL）で洗浄し、更なるＣＨ2Ｃｌ2（２×１０mL）で逆抽出した。混合有機相は無水ＭｇＳＯ4で乾燥させて濃縮した。粗製のアルデヒドは典型的には精製せずに使用した。酸３６：
【０２３４】
【数３５】
0005111705.tif 000081
【０２３５】
ＢＯＰ試薬助触媒ペプチドカップリングのための一般操作
所望のアミン及び酸（等モル量）を、無水ベンゼンと共沸させて高度真空下で乾燥させた。混合物を、ＣＨ2Ｃｌ2（０．１−０．０５M）中に溶解させ、ＢＯＰ試薬（１．２５等量）を添加し、溶液を０℃に１５分間に亘り冷却した。Hunigの塩基（１５等量）を滴々と添加し、アイスバスを取り除いた。反応物を室温にて２乃至４時間撹拌し、ＴＬＣにより判定した。反応混合物の濃縮に次いで、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。複生成物ＨＭＰＡの除去が困難である場合には、ペプチドをセファデックス精製にかけた（ＬＨ−２０、ＭｅＯＨ）。
【０２３６】
・メルカプトアセタミドスペーサーを有するＮ-Ｂｏｃ Ｔｎ
５４％、無色のオイル；
【数３６】
0005111705.tif 000082
【０２３７】
・ＬｅY／Ｔｎジペプチド５１
８６％、白色フィルム；Ｒｆ０．６５（２０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）；
【数３７】
0005111705.tif 000083
【０２３８】
・Ｎ-Ｂｏｃ Globo-Ｈ／ＬｅY／Ｔｎトリペプチド
６４％、白色フィルム；Ｒｆ０．４５（１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）；
【数３８】
0005111705.tif 000084
【０２３９】
・Ｎ−ＡｃキャップしたGlobo-Ｈ／ＬｅY／Ｔｎトリペプチド５３
９５％、白色フィルム；Ｒｆ０．３５（１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）；
【数３９】
0005111705.tif 000085
【０２４０】
・完全に脱保護されたGlobo-Ｈ／ＬｅY／Ｔｎトリペプチド５４
９８％、白色フィルム；
【数４０】
0005111705.tif 000086
【０２４１】
３）二官能性クロスリンカー法を用いたポリカーボネート（globo Ｈ、ＬｅY、Ｔｎ）クラスター-ＫＬＨ接合物の調製：
ポリカーボネート（globo Ｈ、ＬｅY、Ｔｎ）クラスターを、ヘテロ二官能性試薬である、マレイミドベンゾイル-Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）を用いて下記のように接合した。中性のｐＨにて、これはアミノ基をスクシンイミドと架橋させ、その後チオール基をマレイミドと架橋させる。チオール基は、クラスターのペプチド骨格のシステイン残基によって提供され、アミノ基はＫＬＨのリシン側鎖及びＮ末端によって提供される。ＫＬＨへのＭＢＳの結合の後、未反応のＭＢＳをカラムによって精製し、合成ポリカーボネートクラスター上でシステインに結合させた。未結合の抗原を、反応混合物を分子量カットオフが３０，０００であるCentriPrep 30フィルターを通過させることにより除去した。その後、エピトープ比を標準的方法によるタンパク質含量の概算により算出し、パルス電流検出法を用いた高ｐＨ陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ）によって糖質を算出した。
【０２４２】
Ｄ．実施例４：免疫研究
本発明の複合多糖及びグリコペプチドは、ここに記載の通り、癌の治療に有用であり、患者において抗体反応を誘発するために有用である。こうした複合多糖及びグリコペプチドの使用のための典型的なプロトコルを、以下により詳細に記載するが、ここに取り込むこととした所定の参考文献中にも詳説されている。
【０２４３】
１）マウスの免疫化
Jackson Laboratory, Bar Harbor, MEより入手したマウス（ＣＢ６Ｆ１メス；週齢、６週間）を、糖質のみの合計が３μgと同等であり（ＫＬＨの量はエピトープ密度に依存する）、これを１０μgの免疫アジュバントＱＳ−２１と混合して含有する、ポリカーボハイドレートクラスター-ＫＬＨ（globo Ｈ、ＬｅY、Ｔｎ）、Quillaja saponaria Molina treeの樹皮由来のサポニン誘導体（Ragupathi et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997, 36, 125）（Aquila, Worcester, MA）を用いて、０、１、及び２週の時点で皮下より免疫化し、第三の免疫化の１０日後に採血した。抗体の存在を、これまでに記載されているように（Ragupathi et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997, 36, 125）、好適なターゲット抗原（例えば、ターゲット抗原として、globo Ｈ-セラミド、Ｌｅy、セラミド及び／またはＴｎ（ｃ）-pamcys）を使用し、酵素結合イムノソルベント検定法（ELISA）によって検定した。その後細胞表面反応性が試験可能であり、例えばanti-globo Ｈ、ＬｅY、Ｔｎ抗体の細胞表面反応性を、globo Ｈ、ＬｅY、Ｔｎの正細胞系においてフローサイトメトリー検定によって試験した。
【０２４４】
２）血清学的分析：
ＥＬＩＳＡ：酵素結合イムノソルベント検定法（ELISAs）を、既述のように行った（Ragupathi G, Park TK, Zhang S, Kim I-J, Graber L, Adluri S, Lloyd KO, Danishefsky, SJ, Livingston PO. 完全合成globo Ｈ抗原でのマウスの免疫化は、ヒトの癌細胞に対する抗体を生じる；抗癌ワクチンを産生するための化学的免疫学的アプ混合ローチ Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997, 36, 125）。連続的に希釈した抗血清を、抗原（０．１μg）で覆い１時間室温にてインキュベートしたウェルに添加した。ヤギの抗マウスＩｇＭまたはＩｇＧであってアルカリホスファターゼが接合したものは、二次抗体の役割を果たす。吸収を４１４nmにて測定した。抗体滴定により、最高度の血清希釈によれば正常なマウス血清の０．１以上の吸収を呈することが明示された。
【０２４５】
３）フローサイトメトリー：
適当な細胞（例えば、globo Ｈ細胞及びＬｅy-陽性乳癌細胞系ＭＣＦ-７及び結腸癌細胞系ＬＳ-Ｃ）をターゲットとして使用した。２×１０5細胞／管の単一細胞懸濁液を、ウシ胎児血清が３％及びＮａＮ3が０．０１ＭであるＰＢＳ中で洗浄し、１：２０希釈した抗血清またはｍＡｂ ＶＫ−９を２０μl用いて氷上で３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳ中３％のＦＣＳで二度洗浄した後、１：１５のヤギ抗マウスＩｇＭまたはＩｇＧであってフルオレセイン-イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識したもの２０μlを添加し、混合し、３０分間インキュベートした。洗浄後、陽性の対象物及び染色された細胞の平均蛍光強度を、フローサイトメトリーで分析した（ＥＰＩＣＳ-プロファイルII）。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、フコシルＧＭ１、その誘導体及び構成物を示す図である。
【図２】  図２は、ＡＢＣトリサッカライド４を示し、チオエチル供与体５を示す図である。
【図３】  図３は、ヘキササッカライド６ａの合成及びフコシルＧＭ1ペンテニルグリコシド１ｂの合成を示す図である。試薬：（ａ）ＭｅＯＴｆ、ＣＨ2Ｃｌ2：Ｅｔ2Ｏ（２：１）、０℃、２３％；（ｂ）（ｉ）ＤＭＤＯ、ＣＨ2Ｃｌ2：（ii）ＰｎＯＨ、ＺｎＣｌ2、−７８℃、６５％；（ｃ）ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；（ｄ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ；（ｅ）ＮａＯＨ、ＴＨＦ；（ｆ）Ｎａ／ＮＨ3、ＴＨＦ−７８℃、その後ＭｅＯＨ；（ｇ）Ａｃ2Ｏ、ピリジン、ＤＭＡＰ、ＣＨ2Ｃｌ2、４６％、５工程。
【図４】  図４は、トリサッカライド受容体１５を示す。試薬：（ａ）Ａｇ2ＣＯ3、cat.Ｉ2、ＰｎＯＨ、ＣＨ2Ｃｌ2、７５％；（ｂ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ；（ｃ）アセトン、cat.ＰＰＴＳ、４４％、２工程；（ｄ）ＢｎＢｒ、ＮａＨ、ＤＭＦ；８４％；（ｅ）８０％ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ、９０％；（ｆ）３、ＴＭＳＯＴｆ、ＥｔＣＮ、モレキュラーシーブ、−４０℃、７７％。
【図５】  図５は、フコシルＧＭ1ペンテニルグリコシドの合成を示す。試薬：（ａ）ＭｅＯＴｆ、ＣＨ2Ｃｌ2：Ｅｔ2Ｏ、０℃、７０％；（ｂ）ＴＢＡＦ、ＡｃＯＨ、ＴＨＦ；（ｃ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ；（ｄ）ＮａＯＨ、ＴＨＦ；（ｅ）Ｎａ／ＮＨ3、ＴＨＦ−７８℃、その後ＭｅＯＨ；（ｆ）Ａｃ2Ｏ、ピリジン、ＤＭＡＰ、ＣＨ2Ｃｌ2、４５％、５工程、（ｇ）ｃ−ｄ工程、９６％。
【図６】  図６は、フコシルＧＭ1ＫＬＨ接合物１ｃの合成を示す図である。
【図７】  図７は、Globo-Ｈ、その誘導体及び構成物を示す図である。
【図８】  図８は、Globo-Ｈ及びその構成物の二次発生合成のための合成スキームを示す図である。
【図９】  図９は、Globo-Ｈ及びその接合物のレトロ合成分析を示す図である。
【図１０】図１０は、グリコシド２５及びチオエニル供与体２８の合成を示す図である。試薬：（ａ）ＨＢｒ、Ａｃ2Ｏ、ＡｃＯＨ、９６％；（ｂ）PentＯＨ、Ａｇ2ＣＯ3、ＣＨ2Ｃｌ2、４Åモレキュラーシーブ、７５％；（ｃ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ；その後Dowex-Ｈ+；（ｄ）ＢｎＢｒ、Ｂｕ2ＳｎＯ、Ｂｕ4ＮＩ、Ｃ6Ｈ6、５４％、２工程；（ｅ）ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）2、ＣＳＡ、ＣＨ3ＣＮ、７２％；（ｆ）ＢｎＢｒ、ＮａＨ、ＤＭＦ、Ｅｔ4ＮＩ、９７％；（ｇ）ＮａＣＮＢＨ3、ＨＣｌ、Ｅｔ2Ｏ、ＴＨＦ、７９％；（ｈ）ＤＭＤＯ、ＣＨ2Ｃｌ2：（i）ＨＦ／ピリジン、８５％、２工程；（ｊ）ＢｎＢｒ、ＮａＨ、ＤＭＦ、９５％；（ｋ）Ｃｐ2Ｚｒ（ＯＴｆ）2、トルエン／ＴＨＦ５：１、８０％（α）、α：β １０：１；（ｌ）ＤＤＱ、ＣＨ3ＣＮ、Ｈ２Ｏ、８４％。
【図１１】  図１１は、Globo-Ｈペンテニルグリコシド（１６ｃ）の合成を示す図である。
【図１２】  図１２は、Globo-Ｈのキャリアータンパク質ＫＬＨへの接合を示す図である。
【図１３】  図１３は、腫瘍抗原Globo-Ｈ及びフコシルＧＭ1の免疫接合及び発展させたグリコアミノ酸配列を示す図である。
【図１４】  図１４は、ペルアセチル化ラクトースアミノ酸誘導体の合成を示す図である。
【図１５】  図１５は、Ｔｎ抗原、Lewisy抗原、及びＭＢｒ１抗原を含むペプチドの合成を示す図である。試薬：（ａ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ；（ｂ）ＡｃＳＣＨ2Ｃ（Ｏ）（ＣＨ2）3ＮＨ2、ＢＯＰ試薬、iＰｒ2ＮＥｔ、５４％、２工程；（ｃ）ＴＦＡ、ＣＨ2Ｃｌ2；（ｄ）ＢＯＰ試薬、iＰｒ2ＮＥｔ、８６％、２工程；（ｅ）５２、ＢＯＰ試薬、iＰｒ2ＮＥｔ、６４％、２工程；（ｆ）Ａｃ2Ｏ、Ｅｔ3Ｎ、cat.ＤＭＡＰ、９５％、２工程。
【図１６】  図１６は、完全に脱保護されたグリコペプチド５４の調製を示す図である。
【図１７】  α-Ｔｎペンテニルグリコシド４０の合成を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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