(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）：
【化１】
0005326350.tif 000006
（一般式（１）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に炭素数１〜３のアルコキシ基を示す。）で表されるフタリド誘導体を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤。
【請求項２】
前記一般式（１）中、Ｒ１及びＲ２が共にメトキシ基である請求項１に記載の内臓脂肪蓄積抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なフタリド誘導体及びこのフタリド誘導体を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化に伴い高カロリーな飲食物を摂取する機会が増加しているが、摂取エネルギー量が消費エネルギー量を上回ると過剰なエネルギーが脂肪として体内に蓄積し、この状態が持続すると肥満となる。そして肥満は、皮下脂肪型肥満と内臓型肥満に大別されるが、なかでも内臓型肥満が、メタボリックシンドローム等の生活習慣病の一因と考えられていることから、早急な対策が求められている。
【０００３】
このような社会的背景において、実用的な内臓脂肪の蓄積抑制剤についての研究が進められており、例えばオリーブ葉又はその抽出物を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤が公知である（特許文献１を参照）。
この公知技術によれば、オリーブ葉の抽出物をマウスに５週間給餌することで、精巣及び腸管膜における内臓脂肪の蓄積を抑制することができる（特許文献１の段落［００２７］及び［００２８］を参照）。
【特許文献１】特開２００８−８１４２５号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら上記公知技術は効果が表れるのが思いのほか遅く、所望の内臓脂肪の蓄積作用を奏するために比較的長期間の継続摂取が必要であった。もっとも抽出物中の有効成分（化合物）を単離して用いれば比較的短期で効果を奏する可能性もあるが、有効成分の特定が困難であるとともに、単離された化合物が単独で内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏するとはかぎらない。
本発明は上述の点に鑑みて創案されたものであり、本発明が解決しようとする第一の課題は、内臓脂肪の蓄積抑制作用を有する新規な化合物を提供することにある。また本発明が解決しようとする第二の課題は、比較的短期間の摂取で、内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏する内臓脂肪蓄積抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、内臓脂肪の蓄積抑制作用を有する新規なフタリド誘導体の合成に成功し、本発明を完成するに至った。
なお従来、血液粘度の低下作用を有するフタリド誘導体の報告（特公平７−９８８１５号公報）や、抗糖尿病作用を有するフタリド誘導体の報告（徳島文理大、國土ら）がある。一方、内臓脂肪の蓄積抑制作用を有するフタリド誘導体及びその具体的構造の報告は皆無である。
【０００６】
すなわち上記課題を解決するための手段として、第１発明は、内臓脂肪の蓄積抑制作用を有する下記一般式（１）：
【化１】
0005326350.tif 000002
（一般式（１）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に炭素数１〜３のアルコキシ基を示す。）で表される
フタリド誘導体を有効成分として含有することにより、比較的短期間の摂取で、好適な内臓脂肪の
蓄積抑制作用を奏する。
【０００８】
第２発明は、第１発明に記載の内臓脂肪蓄積抑制剤であって前記一般式（１）中、Ｒ１及びＲ２が共にメトキシ基である。
本発明のフタリド誘導体は、内臓脂肪の蓄積抑制作用と、褐色脂肪組織の増加作用を有する。さらに本発明のフタリド誘導体を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤は、より短期間の摂取で、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用と、褐色脂肪組織の増加作用を奏する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の第１発明によれば、内臓脂肪の蓄積抑制作用を有する新規なフタリド誘導体を提供することができる。
また第２発明によれば、比較的短期間の摂取で、内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏する実用的な内臓脂肪蓄積抑制剤を提供することができる。
そして第３発明によれば、内臓脂肪の蓄積抑制作用と、褐色脂肪組織の増加作用を有する新規なフタリド誘導体又はより実用的な内臓脂肪蓄積抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明を実施するための最良の形態を説明する。
本実施形態のフタリド誘導体は、内臓脂肪の蓄積抑制作用を有する上記一般式（１）で表される新規なフタリド誘導体（その医薬的に許容し得る塩又は溶媒和物を含む）である。
そして一般式（１）中、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立に、比較的低分子である炭素数１〜３のアルコキシ基（メトキシ基、エトキシ基、ノルマルプロポキシ基又はイソプロポキシ基）である。これらＲ１及びＲ２は、同種のアルコキシ基であってもよく、また異なるアルコキシ基であってもよいが、好ましくはＲ１及びＲ２の少なくとも一の置換基がメトキシ基である。
【００１１】
そして本実施形態のフタリド誘導体は、一般式（１）中、Ｒ１及びＲ２が共にメトキシ基であることが好ましい。すなわち本実施形態のフタリド誘導体が、下記化学式（２）：
【化２】
0005326350.tif 000003
で表されるフタリド誘導体（５,７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｔｈａｌｉｄｅ、ＩＵＰＡＣ名：５，７−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）であることが好ましい。
上述の化学式（２）で表わされるフタリド誘導体は、内臓脂肪の蓄積抑制作用と、褐色脂肪組織の増加作用を有する。
【００１２】
（用途）
上述の一般式（１）のフタリド誘導体は、内臓脂肪蓄積抑制剤、内臓脂肪低減剤又は抗肥満剤などの各種用途に用いることができるものであり、とりわけ内臓脂肪蓄積抑制剤として好適に使用することができる。すなわち一般式（１）のフタリド誘導体を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤は、比較的短期間（例えば５週間未満）の摂取で、内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏する。
【００１３】
そして化学式（２）のフタリド誘導体を有効成分として含有する内臓脂肪蓄積抑制剤は、より短期間（例えば２週間）の摂取で、内臓脂肪の蓄積抑制作用と、褐色脂肪組織の増加作用を奏する。
ここで褐色脂肪組織はミトコンドリアが豊富であり、ミトコンドリアの熱産生を通じて消費エネルギー量を増大させることが知られている。このため化学式（２）のフタリド誘導体は、生体の消費エネルギー量を増大させて基礎代謝率を向上させる代謝促進剤としての用途を有する。
【００１４】
そして本実施形態のフタリド誘導体は、内臓脂肪蓄積抑制剤として、各種の飲食物に混合又は添加して使用することができる。
飲食物は、食用又は飲用に供されるものであればよくその種類は特に限定しない。例えば飲食物として、獣鳥肉類，乳類，卵類などの畜産食品、穀類，豆類，蔬菜類，果実類などの農産食品、魚介類，鯨類，海藻類などの水産食品、キノコ類，山菜類などの林産食品、調味料、香辛料、油脂類、菓子類、醸造食品、水，清涼飲料，酒類などの飲料類又は調味液類を例示することができる。なお上述の飲食物は、その製造段階の適当な工程において、本実施形態のフタリド誘導体（有効成分）を所定量添加する以外は常法に準じて調製することができる。
【００１５】
ここで本実施形態のフタリド誘導体は、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を有することから、特に脂肪成分を比較的多量に含有する飲食物に添加又は混合して使用することができる。
上述の脂肪成分の種類は特に限定しないが、例えば、ラード，牛脂，魚油，ミルク脂肪，バター，チーズ，ショートニング，マーガリン，細菌類油，菌類油などの動物性脂肪（脂質）、植物油、微小藻類油などの植物性脂肪（脂質）を例示することができる。
なお脂肪成分は、飲食物全重量に対して３重量％〜５０重量％の範囲で含有されておればよく、好ましくは５％重量％〜４０重量％である。
【００１６】
そして本実施形態のフタリド誘導体を、飲食物全重量に対して０.０５重量％〜５０重量％の範囲で混合又は添加することで好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏する。フタリド誘導体の含有量が０.０５重量％未満であると所望の内臓脂肪の蓄積抑制作用が得られない傾向にある。なおフタリド誘導体の含有量は５０重量％より多くてもよいが、内臓脂肪の蓄積抑制作用の極端な上昇は見込めず、含有量の増加に比例してコスト高となる。
そして本実施形態のフタリド誘導体を飲食物全重量に対して０．１重量％〜１０重量％の範囲で添加することで、実用的な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏することができる。特に化学式（２）のフタリド誘導体は、飲食物全重量に対して０．１〜１.０重量％の範囲で添加されることで、実用的な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏する（［表１］を参照）。
【００１７】
そして本実施形態のフタリド誘導体（内臓脂肪蓄積抑制剤）の食摂又は投与期間は特に限定しないが、典型的には２週間以上５週間未満で好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏する。特に化学式（２）のフタリド誘導体（内臓脂肪蓄積抑制剤）は、２週間程度の比較的短期間の食摂又は投与期間であっても、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏することができる（［表１］を参照）。
【００１８】
（医薬）
そして本実施形態のフタリド誘導体は、内臓脂肪蓄積抑制剤としての医薬又は医薬部外品として使用することができる。
例えば医薬として使用する場合、本実施形態のフタリド誘導体の配合量は、医薬の種類、製品形態などに応じて適宜選択される。典型的には、一回の摂取（投与）で１０ｍｇ〜１０００ｍｇ摂取（投与）すればよく、好ましくは一回の摂取で５０ｍｇ〜２００ｍｇ摂取（投与）する。
【００１９】
そして本実施形態の医薬（薬剤）は、経口摂取や注射投与などの各種投与形態を適用することができ、その投与経路や投与部位は特に限定されない。
また本実施形態の医薬の製剤形態は、その使用目的に応じて適宜決定されるものであり、例えば、錠剤，顆粒剤，粉末剤，丸剤又はカプセル錠剤などの固剤や、液剤，懸濁剤又は乳剤などの液剤を例示することができる。なお製剤化に際しては、医薬の使用形態や製剤形態に応じて、充填剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、表面活性剤、不湿剤、賦形剤及び希釈剤を担体として使用することができる。
【００２０】
そして本実施形態のフタリド誘導体は、比較的低分子の化合物（ＭＷ１９０〜２６０程度）であることから、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）にて容易に定量することが可能である（図１を参照）。
なお従来技術の抗肥満に関する薬剤として、例えば天然由来のβグルカンを含有する錠剤（特開２００７−３３２３３６号公報）が公知である。そしてこのβグルカンは、１，３−β−グルカンと１，６−β−グルカンに大別されるが、いずれも単糖が重合した高分子（多糖類）であることから互いを区別することは困難である。このため、総β−グルカン量（１，３−β−グルカンと１，６−β−グルカンの総量）は酵素法などである程度測定することは出来るものの、実質的な有効成分と考えられている１，３−β−グルカン量のみを正確に測定できる技術は未だ開発されていない。
【００２１】
［試験例］
以下、本実施の形態を試験例に基づいて説明するが、本発明は試験例に限定されるものではない。
（１）実施例１のフタリド誘導体の製造方法（図１を参照）
実施例１として、上記化学式２で表わされるフタリド誘導体（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ３：５,７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｔｈａｌｉｄｅ）を下記（ａ）〜（ｄ）の手順により製造した。出発物質として、ＩＵＰＡＣ名：Ｍｅｔｈｙｌ ３，５−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏａｔｅ（ＷＡＫＯ社製又はＡＬＤ社製）を用いた。
【００２２】
（ａ）還元反応{中間体１（ＩＵＰＡＣ名：Ｍｅｔｈｙｌ ３，５−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ ｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌ）の合成}
窒素雰囲気下、１００ｇ（５０９．６８ｍｍｏｌ）の出発物質を２Ｌ３口フラスコに秤量してテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１Ｌに溶解した。加熱還流した状態に、５時間かけて滴下ロートからメタノール２００ｍｌを加えた。反応は１００ｍｌ ２Ｍ−ＨＣｌで停止させ、水素の発生がなくなるまで撹拌した。その後、有機溶媒を留去して、酢酸エチルで抽出して、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濃縮を経て中間体１を８６．３５ｇ ｑｕａｎｔで得た。
【００２３】
（ｂ）保護基導入反応{中間体２（ＩＵＰＡＣ名：Ｍｅｔｈｙｌ ３，５−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ ｂｅｎｚｙｌａｃｅｔａｔｅの合成）
窒素雰囲気下、７５．００ｇ（４４５．９２ｍｍｏｌ）の中間体１を２Ｌ３口フラスコに秤量し、ピリジン２００ｍｌに溶解した。０℃に冷却し、滴下ロートから無水酢酸５０．０８ｇ（４９０．５２ｍｍｏｌ）を滴下して、自然昇温しながら終夜で撹拌した。反応溶液は、０℃で１Ｌ２Ｍ−ＨＣｌに投入し２時間撹拌した。得られた固体を吸引ろ過して濾取して、洗浄、乾燥を経て中間体２を９２．５５ｇ得た（収率９８．７％）。
【００２４】
（ｃ）ホルミル化反応{中間体３（ＩＵＰＡＣ名：Ｍｅｔｈｙｌ ３，５−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−２−ｆｏｒｍｙｌ ｂｅｎｚｙｌａｃｅｔａｔｅ）の合成}
窒素雰囲気下、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）７３．９９ｇ（１００１ｍｍｏｌ）を５００ｍｌＬ３口フラスコに秤量したのち−２０℃まで冷却した。滴下ロートからゆっくりと塩化ホスホリル（ＰＯＣｌ３）１００．１２ｇ（６５２．９７ｍｍｏｌ）を反応温度が５℃を決して超えないように加えた。そして滴下終了後、１０４．９６ｇ（４９９．２６ｍｍｏｌ）の中間体２を投入し室温まで自然昇温させた。スラリー状のまま室温で１時間撹拌しつつ、８０℃まで加熱して終夜撹拌した。ＤＭＦ２０．０ｇ、ＰＯＣｌ３２３．４５ｇより調製した溶液を反応系内に投入した。５Ｌ３角フラスコ内で調製した飽和ＮａＯＡｃ水溶液５００ｍｌを−１０℃に冷却して、３０℃から４０℃の反応溶液をゆっくりと投入した。２時間激しく撹拌した後、吸引ろ過で固体を濾取したのち２Ｌのイオン交換水で洗浄した。得られた固体を４０℃の真空乾燥機で３日間乾燥し、中間体３を１０１．０３ｇ得た（収率８４．９％）。
【００２５】
（ｄ）還元的縮合反応（実施例１のフタリド誘導体の合成）
窒素雰囲気下、７６．１３ｇ（２５６．９６ｍｍｏｌ）の中間体３を２Ｌ３口フラスコに秤量し、１，４−ジオキサン３００ｍｌに溶解した。７０℃に加熱して滴下ロートから、８７．２７ｇ（５５１．２９ｍｍｏｌ）の過マンガン酸カリウム（ＫＭｎＯ４）水溶液１．５Ｌを加え終夜で撹拌した。反応温度を下げることなく反応溶液中に２Ｍ−ＮａＯＨ水溶液を加えアルカリ性にした後、５０℃以上で吸引ろ過をし、８０℃のイオン交換水で洗浄、７０℃のジオキサンで洗浄した。ろ液は再び加熱して、８０℃に保ち、濃硫酸を加えて酸性にして３時間撹拌した。得られた赤褐色固体を吸引ろ過で濾取して、イオン交換水で洗浄した。ケーキ状の固体をメタノールに溶解し、ゆっくりイオン交換水を加えて細かく分散したスラリー溶液を調製し、吸引ろ過で濾取したのち、洗浄、乾燥を経て実施例１のフタリド誘導体（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ３）を６５．０５ｇ得た（収率６８．４％）。
【００２６】
（２）参考例１のフタリド誘導体の製造方法
参考例１として、下記化学式３で表わされるフタリド誘導体（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２：ＩＵＰＡＣ名：５,７−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−６−ｈｙｄｒｏｘｙ−１（３Ｈ）−ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｏｎｅ）を、下記（ａ）〜（ｄ）の手順により製造した。出発物質として、シリンガアルデヒド（Ｓｙｒｉｎｇａｌｄｅｈｙｄｅ、ＷＡＫＯ社製）を用いた。
【化３】
0005326350.tif 000004
【００２７】
（ａ）還元反応{中間体１（ＩＵＰＡＣ名：３，５−Ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ ｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌ）の合成}
窒素雰囲気下、５０．００ｇ（２７４．４７ｍｍｏｌ）の出発物質を２Ｌ３口フラスコに秤量し、メタノール１Ｌに溶解した。０℃で水素化ホウ素ナトリウム３１．１５ｇ（８２３．４１ｍｍｏｌ）を投入し、室温まで自然昇温させて終夜で撹拌した。反応は１００ｍｌ２Ｍ−ＨＣｌで停止させ、水素の発生がなくなるまで撹拌した。その後、イオン交換水を２Ｌ加えスラリーを吸引ろ過で濾取、洗浄、乾燥を経て、中間体１を４４．５５ｇ得た（収率８８%）。
【００２８】
（ｂ）保護基導入反応{中間体２（ＩＵＰＡＣ名：４−Ａｃｅｔｏｘｙ−３,５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ ｂｅｎｚｙｌａｃｅｔａｔｅ）の合成}
窒素雰囲気下、４４．５５ｇ（２４１．８７ｍｍｏｌ）の中間体１を２Ｌ３口フラスコに秤量し、ピリジン２００ｇに溶解した。０℃に冷却し、滴下ロートから無水酢酸６１．７３ｇ（６０４．６７ｍｍｏｌ）を滴下して、自然昇温しながら終夜で撹拌した。反応溶液は、０℃で１Ｌ２Ｍ−ＨＣｌに投入し２時間撹拌した。得られた固体を吸引ろ過して濾取したのち、洗浄、乾燥して中間体２を５８．０２ｇ得た（収率８１．０％）。
【００２９】
（ｃ）ホルミル化反応{中間体３（ＩＵＰＡＣ名：４−Ａｃｅｔｏｘｙ−３,５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−６−ｆｏｒｍｙｌｂｅｎｚｙｌａｃｅｔａｔｅ）の合成}
窒素雰囲気下、１Ｌ３口フラスコにＤＭＦ４９．６６ｇを秤量し、−２０℃まで冷却した。滴下ロートからゆっくりと塩化ホスホリル（ＰＯＣｌ３）６３．８１ｇ（４１６．１６ｍｍｏｌ）を反応温度が５℃を決して超えないように加えた。滴下終了後、２５０ｇ（２５４．８１ｍｍｏｌ）の中間体２を投入し室温まで自然昇温させた。スラリー状のまま室温で１時間撹拌しつつ、８０℃まで加熱して終夜撹拌した。ＤＭＦ２０．０ｇ、ＰＯＣｌ３２３．４５ｇより調製した溶液を反応系内に投入した。
５Ｌ３角フラスコ内で調製した飽和ＮａＯＡｃ水溶液５００ｍｌを−１０℃に冷却して、３０℃から４０℃の反応溶液をゆっくりと投入した。２時間激しく撹拌した後、吸引ろ過で固体を濾取したのち２Ｌのイオン交換水で洗浄した。得られた固体は４０℃の真空乾燥機で３日間乾燥し、淡緑色の中間体３を７６．１３ｇ得た（収率８０．８％）。
【００３０】
（ｄ）還元的縮合反応（参考例１のフタリド誘導体の合成）
窒素雰囲気下、７６．１３ｇ（２５６．９６ｍｍｏｌ）の中間体３を２Ｌ３口フラスコに秤量し、１，４−ジオキサン５００ｍｌに溶解した。７０℃に加熱して滴下ロートからＫＭｎＯ４５２．８８ｇ（３３４．０５ｍｍｏｌ）の水溶液１．５Ｌを加え終夜で撹拌した。反応温度を下げることなく反応溶液中に２Ｍ−ＮａＯＨ水溶液を加えアルカリ性にした後、５０℃以上で吸引ろ過をし、８０℃のイオン交換水で洗浄、７０℃のジオキサンで洗浄した。ろ液は再び加熱して、８０℃に保ち、濃硫酸を加えて酸性にして３時間撹拌した。得られた赤褐色固体を吸引ろ過で濾取して、イオン交換水で洗浄した。
ケーキ状の固体をメタノールに溶解し、ゆっくりイオン交換水を加えて細かく分散したスラリー溶液を調製し、吸引ろ過で濾取したのち、洗浄、乾燥を経て参考例１のフタリド誘導体（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ２）を３０．２５ｇ得た（収率５６．０％）。
【００３１】
（３）摂食試験
（実施例１）
市販のＭＳ粉末（含５％ラード、オリエンタル酵母株式会社）を基礎飼料として用いた。そして基礎飼料中に実施例１のフタリド誘導体を０．１重量％の濃度で混入して実施例１に係るラットの飼料とした。
そして本試験では、４週令ＳＤ系雄性ラット（４匹）を１週間予備飼育したのち、実施例１の飼料を付与しつつ、２３±２℃条件下で２週間飼育した。そして２週間の飼育試験終了後、ラットの体重及び呼吸商（ＲＱ＝ＶＣＯ２/ＶＯ２）を測定した。
そして各ラットを断頭したのち、その精巣と腎臓周辺の白色脂肪及び背中の褐色脂肪を採取した。血液は、後述するＴｏｔａｌＲＮＡ抽出及び成分分析用に分けて採取した。
【００３２】
そして各ラットの「腎臓周辺の白色脂肪組織の重量割合（ＷＡＴｒ/ＢＷ）」を、両側の副腎周囲の脂肪組織を奇麗に剥離し、この白色脂肪組織重量を測定後、ラット体重で割ることで算出した。
また「精巣周辺の白色脂肪組織の重量割合（ＷＡＴｔ/ＢＷ）」を、精巣周囲の脂肪組織を奇麗に剥離し、この白色脂肪組織重量を測定後、ラット体重で割ることで算出した。
また「褐色脂肪組織の重量割合（ＢＡＴ/ＢＷ）」を、背中周囲の褐色脂肪組織を奇麗に剥離し、この褐色脂肪組織重量を測定後、ラット体重で割ることで算出した。
【００３３】
（参考例１）
基礎飼料中に参考例１のフタリド誘導体を０．１重量％の濃度で混入して、参考例１に係るラットの飼料とした。そして実施例１と同一の飼育条件のもと、参考例１に係るラット（４週令ＳＤ系雄性ラット４匹）を２週間飼育したのち、体重、ＷＡＴｒ/ＢＷ及びＷＡＴｔ/ＢＷを測定した。
【００３４】
（比較例１）
上記基礎飼料を比較例１に係るラットの飼料とした。そして実施例１と同一の飼育条件のもと、比較例１に係るラット（４週令ＳＤ系雄性ラット４匹）を２週間飼育したのち、体重、呼吸商、ＷＡＴｒ/ＢＷ、ＷＡＴｔ/ＢＷ及びＢＡＴ/ＢＷを測定した。
【００３５】
（４）機能性成分の効能メカニズムの解析
（ａ）ＲＮＡサンプルの調整
常法に従って、ロッシュのＴｒｉＰｕｒｅＩｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて、白色脂肪組織からＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。Ｔｏｔａｌ ＲＮＡは２６０/２８０比において、２以上のものを使用した。
【００３６】
（ｂ）アレイ解析
ラット（Ｗｈｏｌｅ ＲａｔＧｅｎｏｍｅ） ４×４４Ｋ  ＤＮＡチップ（一枚のスライドに４４，０００遺伝子セットが４つのっているもの、アジレント社）を使用し、ＬｏｗＲＮＡＬｉｎｅａｒ Ａｍｐ. Ｋｉｔを用いて、Ｔｏｔａｌ ＲＮＡへのＣｙａｎｉｎｅ−３（Ｃｙ３）及びＣｙａｎｉｎｅ−５（Ｃｙ５）のラベリングを行った。また一部は、ＴｏｔａｌＲＮＡの増幅を行った後に、本キット等を用いて、Ｔｏｔａｌ ＲＮＡへのラベリングを行った。ラベリングの精製等を行い、単位ヌクレオチドあたりの色素の取込み率を一定にした。その後、常法に従ってＧＥＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて、６０℃の条件下で２４時間、Ｃｙ３とＣｙ５による競合ハイブリダイゼーションを行った。常に、Ｃｙ３は対照群、Ｃｙ５は化合物投与群とした。
【００３７】
（ｃ）スキャンニングおよび解析
そして４×４４Ｋアレイスライドは、ハイブリダイゼーション後、不要な色素を洗浄し、乾燥を行った。その後、マイクロアレイスキャナ(Ａｇｉｌｅｎｔ Ｇ２５６５ＢＡ)を使用し、遺伝子発現のデータの取込みを行った。データの取込み後、Ｆｅａｔｕｒｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｖｅｒ.９．１（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用し、Ｃｙ５（化合物投与群）/Ｃｙ３（対象群）遺伝子発現比のＬｏｇスケールでの数値化を行った。数値化したものをエクセルにて、発現の増減を分類した。
【００３８】
（５）試験結果及び考察
各種試験の結果を下記の表１に示す。
【表１】
0005326350.tif 000005
【００３９】
（ａ）腎臓周囲の白色脂肪組織量の重量割合（ＷＡＴｒ／ＢＷ）の測定結果
実施例１にかかるラットの腎臓周囲の白色脂肪組織量は、比較例１のラットと比較して有意に低いものであった（表１及び図２を参照）。このことから実施例１のフタリド誘導体（内臓脂肪蓄積抑制剤）によれば、摂取開始後約２週間（短期間の摂取）で、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏することがわかった。
【００４０】
（ｂ）精巣周囲の白色脂肪組織量の重量割合（ＷＡＴｔ／ＢＷ）の測定結果
実施例１にかかるラットの精巣周囲の白色脂肪組織量は、比較例１のラットと比較して有意に低いものであった（表１及び図３を参照）。このことから実施例１のフタリド誘導体（内臓脂肪蓄積抑制剤）によれば、短期間の摂取で、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏することがわかった。
そして参考例１のラットには、精巣周囲の白色脂肪組織量の低下が見られなかったことから、この精巣周囲における白色脂肪の蓄積抑制作用が、実施例１のフタリド誘導体に特有の効果であることがわかった。
【００４１】
そして上記（ａ）及び（ｂ）の結果を総合すると、本実施例のフタリド誘導体によれば、短期間の摂取で、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏することがわかった。このため実施例１のフタリド誘導体を有効成分とする内臓脂肪蓄積抑制剤によれば、メタボリックシンドローム等の生活習慣病の発症を好適に抑制可能であることがわかった。
そして実施例１のフタリド誘導体（一般式中、Ｒ１及びＲ２が共にメトキシ基を有する化学式（２）のフタリド誘導体）が上記作用を奏することがわかった。このことから、一般式中、Ｒ１及びＲ２が、それぞれ独立に比較的低分子のアルコキシ基を備える一般式（１）のフタリド誘導体であれば同様の効果を奏することが容易に推測される。
【００４２】
（ｃ）褐色脂肪組織量の重量割合（ＢＡＴ／ＢＷ）の測定結果
実施例１のラットの褐色脂肪組織量は、比較例１のラットと比較して増加する傾向にあった（表１及び図４を参照）。このことから実施例１のフタリド誘導体が、褐色脂肪組織量の増加により消費エネルギー量を増大させる（基礎代謝率を向上させる）ことによっても、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏することが容易に推測される。
【００４３】
（ｄ）呼吸商（ＲＱ）の測定結果
実施例１のラットの呼吸商は、比較例１のラットと比較して増加する傾向にあった（表１及び図５を参照）。このことから実施例１のフタリド誘導体が、脂質代謝よりも優先的に糖代謝を高めることにより、体外へのエネルギー放散を効率的に促進することが示唆された。
【００４４】
（ｅ）機能性成分の効能メカニズムの解析結果
実施例１のフタリド誘導体により、白色脂肪組織において、コントロールに対して３倍以上の遺伝子発現が見られたのはインスリンシグナル関連遺伝子（ＩＲＳ１）であった。また実施例１のフタリド誘導体は、グルコーストランスポーター４（ＧＬＵＴ４）、ヘキソキナーゼ１及びヘキソキナーゼ３（Ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ１、Ｈｅｘｏｋｉｎａｓｅ３）、グルコキナーゼ（Ｇｌｕｃｏｋｉｎａｓｅ）の発現を誘導することがわかった。また実施例１のフタリド誘導体は、ＴＣＡサイクル（リンゴ酸デヒドロゲナーゼ）−電子伝達系（チトクロームｂ５及びチトクロームＣオキシダーゼ）の発現を誘導することがわかった。そして実施例１のフタリド誘導体により糖新生系が抑制された。
このことから実施例１のフタリド誘導体が、インスリンシグナル経路を活性化し、血液中のグルコースを組織内に取込み、解糖系を活性化させることにより白色脂肪組織内での糖利用を促進させることが示唆された。そしてこの示唆は、上記呼吸商（ＲＱ）の測定結果からも支持されるものであった（表１及び図５を参照）。
また実施例１のフタリド誘導体が、β酸化に関わるカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ２の発現を誘導したことから、脂肪酸分解を促進し、エネルギーとして利用していることが示唆された。
【００４５】
さらに実施例１のフタリド誘導体により、悪玉アデチィポサイトカインであるレジスチン（Ｒｅｓｉｓｔｉｎｌｉｋｅ ａｌｐｈａ （Ｒｅｔｎｌａ））の発現がコントロールよりも低下した。
ここで生体内における悪玉アデチィポサイトカインの増加は、糖尿病や動脈硬化を誘発する一因であることが知られている。従って本実施例のフタリド誘導体によれば、好適な内臓脂肪の蓄積抑制作用を奏するとともに、糖尿病や動脈硬化などの各種疾患に対しても好適な効果を奏することが示唆される。
【００４６】
本実施形態のフタリド誘導体又は内臓脂肪蓄積抑制剤は、上述した実施例に限定されるものではなく、その他各種の実施形態を取り得る。
（ａ）本実施例では、専ら化学式（２）で示されるフタリド誘導体の合成方法を例示したが、一般式（１）に含まれる各種の化合物も、その出発物質を適宜選択することで、化学式（２）で示されるフタリド誘導体と同様の経路により合成することができる。
（ｂ）また本実施例の内臓脂肪蓄積抑制剤には、ビタミン類、ミネラル類、ホルモン類、酸化防止剤、生理活性物質、甘み料、酸味料、香料、塩分又は糖類を、必要に応じて添加することができる。
（ｃ）また本実施形態のフタリド誘導体（内臓脂肪蓄積抑制剤）は、牛、豚及び鶏などの家畜の飼料に混合して使用することができる。
（ｄ）また本実施形態では、化学的に合成したフタリド誘導体を使用したが、定法に従い植物から単離したフタリド誘導体を使用してもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】フタリド誘導体の製造工程図である。
【図２】腎臓周囲の白色内臓脂肪量の測定結果を示す図である。
【図３】精巣周囲の白色内臓脂肪量の測定結果を示す図である。
【図４】褐色脂肪量の測定結果を示す図である。
【図５】呼吸商の測定結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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