(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式(１)：
【化１】
0005236593.tif 000010
[式中、Ｍeはメチルである]
で示される化合物を有効成分として０．０１〜１０重量％含有する脂肪分解促進のための内用剤。
【請求項２】
以下の式(１)：
【化２】
0005236593.tif 000011
[式中、Ｍeはメチルである]
で示される化合物を有効成分として０．０１〜１０重量％含有する脂肪分解促進のための外用剤。
【請求項３】
ヒトに使用するジェル状クリーム剤である、請求項２の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安全性の高い下記の式(１)で示される化合物を有効成分として含有する脂肪分解促進剤に関する。本発明の脂肪分解促進剤は、優れた抗肥満効果を有している。
【背景技術】
【０００２】
日本人の食事は、近年著しく欧米化し、高カロリー化が進んでいる。特に脂質の過剰摂取が、現代の文明病とも言われる肥満を引き起こしている。また、肥満は、高脂血症、動脈硬化、糖尿病等、種々の疾病と密接に関連しているため、社会問題の一つとなっている。さらに、近年の日本人の美意識に痩せたいという願望が極めて強くなってきている。
【０００３】
しかし今日に至るまで、抗肥満用に市販されている皮膚化粧料のなかで極めて有効と認められたものはない。一方、文献には、例えば、エピネフリン、テオフィリンなどのアドレナリン作動性β−刺激薬を使用する例(特許文献１)が記載されているが、これらは安全性に問題がある。
【０００４】
また、肥満の治療法には、一般に食事療法、運動療法および薬物療法がある。このうち、通常は食事療法と運動療法を組み合わせて肥満の治療を行う。しかし、これらの療法は、効果が現れるまでに長時間を要する。従って、強固な意志を必要とするが、多忙な現代においては実行が極めて困難である。一方、薬物療法では、マジンドールやフェンフルラミンなどの食欲抑制剤が開発されているが、口渇や抑鬱などの副作用があることが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第４５２５３５９号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、脂肪細胞中の脂肪の分解を促進することにより抗肥満効果を発揮する、安全性の高い脂肪分解促進剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために、種々の天然物および化合物についてスクリーニングを行った。このスクリーニングは、ラット副睾丸脂肪組織からコラゲナーゼを用いて得た遊離脂肪細胞中の脂肪の分解効果を指標にして行った。その結果、下記の式(１)で示される化合物が目的の効果を有することを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、以下の式(１)：
【化１】
0005236593.tif 000002
[式中、Ｍeはメチルである]
で示される化合物を有効成分として含有する脂肪分解促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
化合物(１)は優れた脂肪分解活性を示し、化合物(１)を配合した脂肪分解促進剤は優れた抗肥満効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下において本発明を詳しく説明する。
本発明において用いる化合物(１)は既知物質であり、マウス白血病細胞(Ｍ１細胞)およびヒト白血病細胞(ＨＬ-６０細胞)に対して分化誘導作用を有することが知られている[Chem. Pharm. Bull. 41(4), 714-719, 1993]。しかし、この化合物に脂肪分解促進効果があることはこれまで知られていなかった。この化合物(１)は化学合成によって製造することも可能であるが、通常は化合物(１)を含む植物から単離することによって得られる。
【００１１】
化合物(１)を、ミカン科植物であるウンシュウミカン(Citrus unshiu)、ダイダイ(Citrus aurantium)、あるいはタチバナ(Citrus tachibana)からの抽出によって得るのが好都合である。
【００１２】
化合物(１)を植物からの抽出によって調製する場合、使用する植物部位としては、葉、茎、樹皮、花、果実、果皮などが挙げられるが、特に果皮が好ましい。植物を採取後そのまま用いてもよいし、乾燥処理したものを用いてもよい。
【００１３】
抽出に用いる溶媒としては、水、または低級アルコール(メチルアルコール、エチルアルコールまたはブタノールなど)、アセトンもしくは酢酸エチルなどの有機溶媒の１種または２種以上を適宜混合して使用することができる。好ましい抽出溶媒は、水または低級アルコールの単独、または水と低級アルコールの混合液である。
【００１４】
抽出は通常の方法で行ってよい。抽出温度は、通常は０〜１２０℃、好ましくは４０〜１２０℃の範囲である。抽出時間は、抽出温度によって変化するが、通常、室温付近で抽出する場合は１〜１０日間であり、４０℃以上で抽出する場合は０.５〜１２０時間である。
【００１５】
このようにして得た植物抽出物から、シリカカラムクロマトグラフィーあるいは分取ＨＰＬＣなどの方法によって、化合物(１)を分離および精製することができる。このように分離および精製した化合物(１)を、本発明の脂肪分解促進剤の有効成分として用いることができる。
【００１６】
本発明の脂肪分解促進剤は、内用または外用のいずれの形態に調製することもできる。
外用の形態としては、ジェル状クリーム、洗顔クリーム、乳液、パックなどが挙げられ、その形態に応じて有効成分以外の他の成分を選択する。
内用の形態としては、顆粒、錠菓、ゼリー、飴、飲料などが挙げられ、その形態に応じて有効成分以外の他の成分を選択する。
【００１７】
本発明の脂肪分解促進剤中の化合物(１)の配合割合は、脂肪分解促進剤の形態によって異なるが、通常は脂肪分解促進剤全量に対して０.０００１〜９９重量％、好ましくは０.００１〜５０重量％、より好ましくは０.００１〜２０重量％、さらに好ましくは０.０１〜１０重量％の範囲である。
【００１８】
本発明の脂肪分解促進剤は、活性成分である化合物(１)の他に、種々の脂肪分解促進剤の形態に応じてそれらを調製する際に一般的に使用される各種成分を含有する。
外用に調製する際に使用される他の成分は、例えば、油分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐剤、香料、着色料、薬剤などである。本発明の外用脂肪分解促進剤は、１またはそれ以上のこれら成分を含むことができる。
また、内用に調製する際に使用される他の成分は、この分野で普通に使用される原料であってよく、これら原料の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、リンゴファイバー、大豆ファイバー、肉エキス、黒酢エキス、ゼラチン、コーンスターチ、蜂蜜、動植物油脂、多糖類などが挙げられる。本発明の内用脂肪分解促進剤は、１またはそれ以上のこれら原料を含むことができる。
【００１９】
本発明の内用脂肪分解促進剤は、上記の原料に加えて、１またはそれ以上の潤沢剤、乳化剤、懸濁化剤、酸化防止剤、防腐剤、甘味剤および香味剤などの成分をさらに含むことができる。また、他の有効成分(水溶性ビタミン類および油溶性ビタミン類などを含む)をさらに含んでいてもよい。
当業者は、化合物(１)の脂肪分解促進効果を妨げることのない適切な成分を容易に選択することができる。
【００２０】
本発明の脂肪分解促進剤は、その形態に応じて当該分野で周知の方法によって製造してよい。
また、本発明の脂肪分解促進剤は、その形態に応じて適宜に適用することができる。
【実施例】
【００２１】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００２２】
実施例１：化合物(１)の調製
トウヒ(高砂薬業より購入)１ｋｇに５０％(v/v)エタノール３Ｌを加え、４０℃で２日間抽出した。混合物を濾過し、濾液２.１Ｌを得た。この濾液を６０℃以下で減圧濃縮し、得られた濃縮液を酢酸エチル／蒸留水で分液した。酢酸エチル層を集め、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。次いで、酢酸エチル層を６０℃以下で減圧濃縮し、オイル状物質を得た。
このオイル状物質をシリカカラムクロマトグラフィー[溶出溶媒；酢酸エチル：ｎ-ヘキサン＝１：１(750ml)→２：１(1050ml)→５：１(780ml)]にて粗精製して、化合物(１)を含む分画を得た。化合物(１)は、主に酢酸エチル：ｎ-ヘキサン＝２：１で溶出する分画に含まれ、化合物(１)を含む分画を薄層クロマトグラフィー(展開溶媒：酢酸エチル)によって確認した。
次いで、化合物(１)を含む分画を一緒にし、さらにシリカカラムクロマトグラフィー(溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝５０：１)にかけて精製し、化合物(１)１４２ｍｇを得た。
【００２３】
化合物(１)のプロトン核磁気共鳴スペクトルの測定結果は次の通りであった。
1Ｈ-ＮＭＲ(CDCl3, 500MHz) δ(ppm)：3.77(s,3H)、3.83(s,3H)、3.84(s,3H)、3.87(s,3H)、3.96(s,3H)、4.01(s,3H)、6.85(s,1H)、7.15(d,J=8.6Hz,1H)、7.53(d,J=2.1Hz,1H)、7.64(dd,J=2.1, 8.6Hz,1H)。
この結果は、文献[Chem.Pharm.Bull., 35(7), 3025-3028, 1987]記載の化合物(１)のデータと良く一致した。
また、化合物(１)の純度を、以下の条件下で高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)によって分析したところ、その化学純度は９９.２％であった。
ＨＰＬＣ分析条件：
カラム：μBONDASPHERE C18、3.9×150mm(ウォーターズ社製)
流動層：アセトニトリル(２％酢酸水溶液中)１５〜６０％、３０分
流速：１.０ｍＬ／分
カラム温度：４０℃
検出：ＵＶ ２８０ｎｍ
保持時間：２９.０５分
【００２４】
実施例２：ラット副睾丸脂肪細胞に対する脂肪分解活性の測定
脂肪細胞中の脂肪が分解されると、グリセロールと遊離脂肪酸が放出されることがわかっている。培地中に放出された遊離脂肪酸を定量することによって脂肪分解活性を測定した。遊離脂肪酸の定量は酵素法で行った。
ロッドベル[Rodbell, M,J.Biol.Chem., 239, 375 (1964)]の方法により、ウィスター系８週令の雄性ラット４匹の副睾丸脂肪組織から、コラゲナーゼ溶液を用いて遊離脂肪細胞を調製した。実施例１で調製した化合物(１)の濃度が１０μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬとなるように調製した牛血清アルブミンを含むクレブス・リンガー(Krebs Ringer)重炭酸塩緩衝液中で、上記の脂肪細胞を３７℃にて９０分間インキュベートし、遊離した脂肪酸を市販のキット(和光純薬、ＮＥＦＡ Ｃ−テストワコー)により測定した。また、化合物(１)を添加しないものを対照とし、脂肪分解活性を比較した。これらの結果を表１に示す。
【表１】
0005236593.tif 000003
表１から明らかなように、化合物(１)の濃度が１０μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬの場合、対照(無添加)に比べて脂肪細胞からの遊離脂肪酸量が、それぞれ１１０.６５％および２１９.９１％増加した。
【００２５】
実施例３：ラット皮下脂肪細胞に対する脂肪分解活性の測定
ウィスター系８週令の雄性ラット５匹の腹部皮膚組織を、皮下脂肪組織と共に直径３ｃｍ大で剥離し、直径１.８ｃｍのフランツ型拡散セルにセットした。
実施例１で調製した化合物(１)と白色ワセリンを１.０：９９.０および２.０：９８.０の重量比で混合し、この混合物(０.２ｇ)を上記のラット皮膚表面に均一に塗布し、下部セルにはクレブス・リンガー重炭酸塩緩衝液を満たした。
３７℃にて５時間放置した後、下部セル内の緩衝液中に遊離したグリセロールをＦ-キット グリセロール(ベーリンガー・マンハイム社製)により測定した。対照には１００％ワセリンを用いた。得られた結果を以下の表２に示す。結果は、対照に対する％±ＳＤ％(ｎ＝４)で表示した。
【表２】
0005236593.tif 000004
表２の結果から、化合物(１)は皮膚を通して皮下脂肪細胞に作用し、脂肪細胞からのグリセロールの遊離を促進することが明らかとなった。即ち、化合物(１)は脂肪分解促進活性を有することが明らかとなった。
【００２６】
実施例４：ジェル状クリーム
実施例１で得た化合物(１)を有効成分として下記のジェル状クリームの処方(全１００重量％)に用いる。
【表３】
0005236593.tif 000005
全成分を室温にて撹拌および混合して均一な溶液とし、ｐＨ６.５に調整してジェル状クリームを得た。
【００２７】
比較例１：従来のジェル状クリーム
実施例４において、化合物(１)の代わりに精製水を用いたものを従来のジェル状クリームとした。
【００２８】
実施例５：乳液
実施例１で得た化合物(１)を有効成分として下記の乳液の処方(全１００重量％)に用いる。
【表４】
0005236593.tif 000006
成分Ａを加熱溶解し、８０℃に保持する。別に８０℃で加熱溶解した成分Ｂを成分Ａに加え、充分混合する。撹拌しながら冷却を行い、５０℃にて成分Ｃを加え、乳液を得た。
【００２９】
実施例６：錠剤
以下の成分を用いて錠剤を調製した。
【表５】
0005236593.tif 000007
【００３０】
実施例７
実施例４のジェル状クリームおよび比較例１のジェル状クリームを用いて、２０歳から５０歳の女性３０人を対象に４ヶ月間の使用試験(外部塗布、１日１回入浴後)を行った。使用後、ヒップおよびウエストまわりを測定し、試験開始前と比較した。これらの結果を以下の表６および表７に示す。
【表６】
0005236593.tif 000008
【表７】
0005236593.tif 000009
これらの表から明らかなように、化合物(１)を含有するジェル状クリームは優れた抗肥満効果を示した。