(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
充填剤を保持したカラムと、
上記カラムに供給するための溶離液を保持した１または複数の溶離液保持部と、
を備えた液体クロマトグラフィ装置であって、
上記カラムに供給される溶離液中の溶存酸素濃度を、一定に維持するための溶存酸素濃度調整手段をさらに備え、
上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するまでの間に上記溶離液を脱気するためのものであり、かつガス透過膜および減圧空間を有する脱気装置をさらに備えており、
上記溶存酸素濃度調整手段は、上記カラムに供給される上記溶離液の温度を直接的または間接的に測定するための温度測定手段を有しており、かつ、上記温度測定手段での測定結果に基づいて、上記減圧空間の減圧度を調整して上記溶離液中の溶存酸素濃度を調整するように構成されている、液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２】
上記溶離液保持部と上記脱気装置との間を接続する第１配管と、
上記脱気装置と上記カラムとの間を接続する第２配管と、
をさらに備えており、
上記温度測定手段は、上記第１配管内、上記第２配管内、または上記脱気装置内に存在する上記溶離液の温度、もしくは上記減圧空間内の温度を測定するように構成されている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項３】
上記温度測定手段は、当該液体クロマトグラフィ装置の周りの環境温度、または当該クロマトグラフの装置内部の温度を測定するように構成されている、請求項１または請求項２に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項４】
上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するための配管と、
上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するまでの間に上記溶離液を脱気するためのものであり、かつ上記配管の途中に設けられたガス透過膜および減圧空間を有する脱気装置と、をさらに備えており、
上記溶存酸素濃度調整手段は、上記配管内の存在する上記溶離液中の溶存酸素濃度を測定するための溶存酸素濃度測定手段を有しており、かつ、上記溶存酸素濃度測定手段での測定結果に基づいて、上記減圧空間の減圧度を調整して上記溶離液中の溶存酸素濃度を調整するように構成されている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項５】
上記配管は、上記溶離液保持部と上記脱気装置との間を接続する第１配管と、上記脱気装置と上記カラムとの間を接続する第２配管と、を含んでおり、
上記溶存酸素濃度測定手段は、上記第１配管内、上記第２配管内または上記脱気装置内の溶離液の酸素濃度を測定するための酸素センサを含んでいる、請求項４に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項６】
上記溶存酸素濃度調整手段は、上記溶離液を加熱または冷却するための温調機構を有し
ている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項７】
上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するまでの間に上記溶離液を脱気するための脱気装置と、
上記溶離液保持部と上記脱気装置との間を接続する第１配管と、
上記脱気装置と上記カラムとの間を接続する第２配管と、をさらに備えており、
上記温調機構は、上記溶離液が上記第１配管、第２配管または上記脱気装置を通過する際に、上記溶離液の温度を調整するように構成されている、請求項６に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項８】
上記カラムに供給される上記溶離液の温度を直接的または間接的に測定するための温度測定手段をさらに備えており、
上記温調機構は、上記温度測定手段での測定結果に基づいて、溶離液の温度を調整するように構成されている、請求項７に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項９】
上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するまでの間に上記溶離液を脱気するためのものであり、かつガス透過膜および減圧空間を有する脱気装置をさらに備えており、
上記減圧空間における酸素分圧の変動を抑制するための酸素分圧変動抑制手段をさらに備えている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１０】
上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するための配管をさらに備えており、
上記配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有している、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１１】
上記溶離液保持部から上記カラムに上記溶離液を供給するまでの間に上記溶離液を脱気するための脱気装置をさらに備えており、かつ、
上記配管は、上記溶離液保持部と上記脱気装置との間を接続する第１配管と、上記脱気装置と上記カラムとの間を接続する第２配管と、を含んでおり、
上記酸素難透過部は、上記第２配管の全部または一部に設けられている、請求項１０に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１２】
上記カラムからの脱離液に基づいて、試料中の特定成分を検出するための検出機構と、上記カラムと上記検出機構との間を接続する配管と、をさらに備えており、
上記配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有している、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１３】
上記カラムに導入する試料を調製するための試料調製手段をさらに備えており、
上記試料調製手段は、試料中の酸素飽和度を８５％以上とするように構成されている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１４】
上記試料調製手段は、赤血球を含む検体を、赤血球を溶血させた後に希釈液を用いて希釈し、かつ、希釈後の試料を一定時間放置して酸素飽和度を８５％以上とするように構成されている、請求項１３に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１５】
上記試料調製手段は、希釈後の試料を一定時間大気開放させることにより、上記試料中の酸素飽和度を８５％以上とするように構成されている、請求項１４に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１６】
上記試料調製手段は、１分間以上大気開放させることにより、上記試料中の酸素飽和度を８５％以上とするように構成されている、請求項１５に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１７】
上記試料調製手段は、上記希釈液として酸素飽和度の高いものを用いるとともに、希釈後において一定時間放置するように構成されている、請求項１４に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１８】
希釈後における放置時間は、１分以上である、請求項１７に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項１９】
上記希釈液として、酸素飽和度が８５％以上のものを用いる、請求項１７に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２０】
上記試料調製手段は、空気または酸素リッチなガスを用いて上記試料をバブリングするためのバブリング機構を有している、請求項１３に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２１】
上記カラムに導入する試料を調製するための試料調製手段をさらに備えており、
上記試料調製手段は、血球を含む試料における血球を多く含む層の上層部から上記調製用試料を採取するように構成されている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２２】
上記試料調製手段は、赤血球を含む血液試料を、赤血球がリッチな血球層と赤血球がプアーな血漿層とに分離させたときの上記血球層の上層部から調製用試料を採取し、かつ上記調製用試料を用いて上記カラムに導入する導入用試料を調製するように構成されている、請求項２１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２３】
上記試料調製手段は、上記血球層と上記血漿層との界面を検出するための検出手段と、
上記血球層の上層部から上記調製用試料を採取するためのサンプリングノズルと、を備えており、
上記サンプリングノズルは、上記検出手段による検出結果に基づいて、上記血球層の上層部から上記調製用試料を採取するように動作させられる、請求項２２に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２４】
上記サンプリングノズルは、上記血球層における上記界面からの距離が、上記血球層の厚みに対して５〜３０％の範囲にある領域から上記調製用試料を採取するように動作させられる、請求項２３に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２５】
上記サンプリングノズルは、上記血球層における上記界面からの距離が０．５〜５．０ｍｍの範囲にある領域から上記調製用試料を採取するように動作させられる、請求項２３に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【請求項２６】
試料中のグリコヘモグロビンを測定するように構成されている、請求項１に記載の液体
クロマトグラフィ装置。
【請求項２７】
充填剤を保持したカラムに対して、試料および溶離液を供給して試料中のグリコヘモグロビンを測定するように構成された液体クロマトグラフィ装置であって、
上記カラムにおけるオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンの比率を、各回の測定毎に、一定にするための手段を備えている、請求項１に記載の液体クロマトグラフィ装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、カラムに導入される溶離液中の溶存酸素の影響を低減することができる液体クロマトグラフィ装置に関する。
【背景技術】
【０００２】  血液などの生体試料を用いて生体成分を分離分析する場合には、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を利用した高速液体クロマトグラフィ装置（ＨＰＬＣ装置）が広く用いられている（たとえば特許文献１参照）。一般的なＨＰＬＣ装置は、図１２に示したように、試料調製ユニット９０において生体成分を含んだ試料を調製した後にその試料を分析カラム９１に導入させ、生体成分を分析カラム９１の充填剤に吸着させるように構成されている。その一方で、充填剤に吸着させた生体成分は、送液ポンプ９２によって溶離液ボトル９３から分析カラム９１に溶離液を供給することによって脱離させられる。分析カラム９１からの脱離液は、測光機構９４に導入され、この測光機構９４において脱着液の吸光度を連続的に測定することにより、生体成分の分析が行なわれる。【０００３】  一方、のＨＰＬＣ装置９では、分離分析を安定して行なうため、送液ポンプ９１の上流に脱気装置９３を設置している（たとえば特許文献２参照）。脱気装置９３は、溶離液中に存在する酸素等の気体を除去するためのものである。この脱気装置９３を設けることにより、溶離液に溶存する気体が気泡となることが抑制され、送液ポンプ９１の流量が不安定になるのを防止することができるため、ＨＰＬＣ装置９において分離分析を安定して行なうことができるようになる。【０００４】  図１３に示したように、脱気装置９５としては、減圧空間９６に配置したガス透過性チューブ９７に溶離液を流通させるとともに、ポンプ９８によって減圧空間９６を減圧することで、溶離液中の溶存気体を吸引除去するように構成されたものがある（たとえば特許文献３参照）。すなわち、溶離液中の溶存気体は、ガス透過性チューブ９７の内部を溶離液が流通する際にガス透過性チューブ９７の外部（減圧空間９６）へ移動させられることにより除去される。【０００５】
【特許文献１】特開平７−１２０４４７号公報
【特許文献２】特開２００１−１３３４４５号公報
【特許文献３】特開２０００−２７５２２９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】  しかしながら、溶離液への気体の溶解量は、溶離液の温度によって異なるため、装置外部の温度（環境温度）が変動した場合、あるいは環境温度が異なる状態で生体成分の分析を行なった場合には、溶離液中の溶存気体の状態（溶解量）が異なったものとなる。その一方で、脱気装置９３においては、溶離液中の溶存気体の状態に関係なく、減圧空間９４の減圧度が固定されており、また減圧空間９４における溶離液の滞留時間（流量）も固定されている。そのため、脱気装置９３においては、溶離液中の溶存気体の状態に関係なく、一定量の気体しか除去することができないため、環境温度の変動などによって溶離液の溶存気体量が変動した場合には、分析カラム９０に供給される溶離液中の溶存気体量が変動することとなる。その結果、環境温度が大きく変動する環境下で分析を行なった場合には分析結果が安定しなくなり、また、環境温度が異なる環境下で分析を行なった場合にはそれぞれの環境下での分析結果が異なったものとなる。【０００７】  また、血液試料中のグリコヘモグロビン濃度を測定する場合には、グリコヘモグロビンは、ヘモグロビン総量におけるグリコヘモグロビンの割合として把握される。しかしながら、溶離液中の溶存酸素が環境温度の変動などに伴って変動した場合には、ヘモグロビン中のオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が変動する。その一方で、測光機構９２においては、血液試料を希釈して酸素が比較的多い状態で分析カラム９０に導入することから、オキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍを測定波長として使用している。そのため、環境温度の変化が大きな環境下では、オキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が変動することとなるため、オキシヘモグロビンの最大吸収波長によってグリコヘモグロビンの濃度を正確に測定するのが困難となる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】  本発明は、溶離液中の溶存酸素が分析結果に与える影響を適切に抑制することを課題としている。【０００９】  本発明の第１の側面においては、充填剤を保持したカラムと、上記カラムに供給するための溶離液を保持した１または複数の溶離液保持部と、を備えた液体クロマトグラフィ装置であって、上記カラムに供給される溶離液中の溶存酸素濃度を、一定に維持するための溶存酸素濃度調整手段をさらに備えている、液体クロマトグラフィ装置が提供される。【００１０】
本発明の液体クロマトグラフィ装置は、溶離液保持部からカラムに溶離液を供給するまでの間に溶離液を脱気するためのものであり、かつガス透過膜および減圧空間を有する脱気装置をさらに備えている。この場合、溶存酸素濃度調整手段は、カラムに供給される溶離液の温度を直接的または間接的に測定するための温度測定手段を有し、かつ温度測定手段での測定結果に基づいて、減圧空間の減圧度を調整して溶離液中の溶存酸素濃度を調整するように構成されている。
【００１１】  本発明の液体クロマトグラフィ装置は、溶離液保持部と脱気装置との間を接続する第１配管と、脱気装置と上記カラムとの間を接続する第２配管と、をさらに備えたものとされる。この場合、温度測定手段は、たとえば第１配管内、第２配管内、または脱気装置内に存在する溶離液の温度、もしくは減圧空間内の温度を測定するように構成される。この場合の温度測定手段は、たとえば第１配管、第２配管あるいは脱気装置の内部に設けられたサーミスタを有するものとされる。【００１２】  温度測定手段はまた、液体クロマトグラフィ装置の周りの環境温度、または液体クロマトグラフィ装置の内部の温度を測定するように構成されたものであってもよい。ここで、環境温度とは、装置の周辺の温度、装置外壁の温度、もしくは溶離液保持部の温度のうちのいずれかのことである。【００１３】  本発明の液体クロマトグラフィ装置は、温度測定手段に代えて、配管内の存在する溶離液中の溶存酸素濃度を測定するための溶存酸素濃度測定手段を備えたものとして構成することもできる。この場合、溶存酸素濃度調整手段は、溶存酸素濃度測定手段での測定結果に基づいて、減圧空間の減圧度を調整して溶離液中の溶存酸素濃度を調整するように構成するのが好ましい。溶存酸素濃度測定手段は、たとえば第１配管内、第２配管内または脱気装置内の溶離液の酸素濃度を測定するための酸素センサを含むものとされる。【００１４】  脱気装置は、たとえば減圧空間を減圧するためのポンプをさらに備えたものとされる。この場合、溶存酸素濃度調整手段は、ポンプの駆動（たとえば駆動電圧あるいは弁の開放状態）を制御することにより吸引力を制御し、減圧空間の減圧度を調整するように構成するのが好ましい。【００１５】  溶存酸素濃度調整手段は、溶離液を加熱または冷却するための温調機構を有するものとして構成することもできる。この場合、温調機構は、たとえば溶離液が第１配管、第２配管または脱気装置を通過する際に、溶離液の温度を調整するように構成される。また、温調機構は、カラムに供給される溶離液の温度を直接的または間接的に測定するための温度測定手段での測定結果に基づいて、溶離液の温度を調整するように構成してもよい。【００１６】  本発明の液体クロマトグラフィ装置は、脱気装置の減圧空間における酸素分圧の変動を抑制するための酸素分圧変動抑制手段をさらに備えた構成であってもよい。【００１７】  溶離液保持部からカラムに溶離液を供給するための配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有するものとして構成するのが好ましい。この場合の酸素難透過部は、たとえば脱気装置とカラムとの間を接続する第２配管の全部または一部に設けられる。【００１８】  本発明の液体クロマトグラフィ装置は、たとえばカラムを含み、かつ一定温度に温調された分析ユニットをさらに備えたものとされる。この場合の酸素難透過部は、少なくとも第２配管における分析ユニットから延出する部分に設けるのが好ましい。【００１９】  分析ユニットは、第２配管の途中に設けられたマニホールドをさらに備えたものとされ、この場合には、酸素難透過部は、第２配管における脱気装置とマニホールドとの間に設けるのが好ましい。【００２０】  本発明の液体クロマトグラフィ装置は、カラムからの脱離液に基づいて、試料中の特定成分を検出するための検出機構と、カラムと検出機構との間を接続する追加の配管と、をさらに備えたものとされる。この場合、追加の配管は、酸素透過性の低い材料により形成された酸素難透過部を有するものとするのが好ましい。【００２１】  酸素難透過部は、たとえばナイロン、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリエチレン、またはステンレス（ＳＵＳ）により形成される。【００２２】  本発明の液体クロマトグラフィ装置は、カラムに導入する試料を調製するための試料調製手段をさらに備えたものとすることもできる。試料調製手段は、たとえば赤血球を含む検体を、赤血球を溶血させた後に希釈液を用いて希釈し、かつ、希釈後の試料を一定時間放置して酸素飽和度を８５％以上とするように構成するのが好ましい。【００２３】  試料調製手段は、たとえば希釈液として酸素飽和度の高いものを用いるとともに、希釈後において一定時間放置するように構成される。希釈後における放置時間は、１分以上であるのが好ましい。希釈液として、酸素飽和度が８５％以上のものを用いるのが好ましい。【００２４】  試料調製手段はまた、希釈後の試料を一定時間大気開放させることにより、試料中の酸素飽和度を８５％以上とするように構成してもよい。この場合の大気開放時間は、たとえば１分間以上とされ、好ましくは１〜２分間とされる。【００２５】  試料調製手段は、空気または酸素リッチなガスを用いて試料をバブリングすることにより、試料中の酸素飽和度を８５％以上とする構成であってもよい。【００２６】  試料調製手段は、たとえば血球を含む試料における血球を多く含む層の上層部から上記調製用試料を採取するように構成される。試料調製手段はまた、赤血球を含む血液試料を、赤血球がリッチな血球層と赤血球がプアーな血漿層とに分離させたときの血球層の上層部から調製用試料を採取し、かつ調製用試料を用いてカラムに導入する導入用試料を調製するように構成される。この場合の試料調製手段は、たとえば血球層と血漿層との界面を検出するための検出手段と、血球層の上層部から調製用試料を採取するためのサンプリングノズルと、を備えたものとされる。【００２７】
サンプリングノズルは、検出手段による検出結果に基づいて、血球層の上層部から調製用試料を採取するように、たとえば血球層における上部界面からの距離が、血球層の厚みに対して５〜３０％の範囲にある領域、あるいは血球層における上部界面からの距離が０.５〜５．０ｍｍの範囲にある領域から調製用試料を採取するように動作させられる。
【００２８】  本発明の液体クロマトグラフィ装置は、たとえば試料中のグルコヘモグロビンを測定するように構成される。【００２９】  本発明の第２の側面においては、充填剤を保持したカラムに対して、試料および溶離液を供給して試料中のグリコヘモグロビンを測定するように構成された液体クロマトグラフィ装置であって、上記カラムにおけるオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンの比率を、各回の測定毎に、一定にするための手段を備えている、液体クロマトグラフィ装置が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明に係るＨＰＬＣ装置の一例を示す全体斜視図である。
【図２】図１に示したＨＰＬＣ装置の概略構成図である。
【図３】図１に示したＨＰＬＣ装置における脱気ユニットを説明するための一部を断面で示した配管図である。
【図４】図１に示したＨＰＬＣ装置の界面検出機構を説明するための斜視図である。
【図５】図４のＶ−Ｖ線に沿う断面図である。
【図６】試料採取方法を説明するための断面図および要部拡大図である。
【図７】図１に示したＨＰＬＣ装置における測光ユニットを説明するための断面図である。
【図８】本発明に係るＨＰＬＣ装置の他の例を説明するための図２に相当する概略構成図である。
【図９】本発明に係るＨＰＬＣ装置における脱気ユニット他の例を説明するための図３に相当する一部を断面で示した配管図である。
【図１０】本発明に係るＨＰＬＣ装置における酸素飽和手段の他の例を示す模式図である。
【図１１】実施例および比較例での溶存酸素濃度の測定結果を示すグラフである。
【図１２】従来のＨＰＬＣ装置（高速液体クロマトグラフィ装置）の一例を示す概略構成図である。
【図１３】図１２に示したＨＰＬＣ装置における脱気装置を説明するための一部を断面で示した配管図である。
【符号の説明】
【００３１】  Ｘ  ＨＰＬＣ装置  １２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃ  溶離液ボトル  １３  血液試料  １３Ａ  血漿層  １３Ｂ  血球層  １３Ｃ  界面  ４  脱気ユニット（脱気装置）  ４０，４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃ  温度測定部  ４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ  減圧空間  ４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ  スパイラル管  ４３  ポンプ  ５  試料調製ユニット  ５０  界面検出機構  ５１  ノズル  ５４  バブリング機構  ６  分析ユニット  ６０  分析カラム  ６１  マニホールド  ７  測光ユニット（検出機構）  ８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃ  配管  ８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃ  配管  ８４  配管  ８６  配管
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】  以下、本発明の具体的な例について、図１ないし図７を参照して説明する。【００３３】  図１および図２に示したＨＰＬＣ装置Ｘは、ラック１０に保持させた採血管１１をテーブル２０にセットして、全血中のグリコヘモグロビン濃度を自動で測定するように構成されたものである。このＨＰＬＣ装置Ｘは、複数の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃ（図面上は３つ）、および装置本体２を備えている。【００３４】  各溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃは、後述する分析カラム６０に供給すべき溶離液を保持したものであり、装置本体２におけるホルダ部２１に配置されている。溶離液としては、たとえばｐＨや塩濃度の異なるバッファが使用される。【００３５】  装置本体２は、上述のテーブル２０およびホルダ部２１の他に、筐体３の内部に収容された、脱気ユニット４、試料調製ユニット５、分析ユニット６、および測光ユニット７を有している。【００３６】  テーブル２０は、所定部位にセットされたラック１０を移動させることにより、ラック１０に保持させた採血管１１を、後述する試料調製ユニット５におけるノズル５１により採取可能な位置に移動させるように構成されている。【００３７】  筐体３には、操作パネル３０および表示パネル３１が設けられている。操作パネル３０は、複数の操作ボタン３２が設けられたものであり、操作ボタン３２を操作することにより、各種の動作（分析動作や印字動作など）を行わせるための信号を生成させ、あるいは各種の設定（分析条件の設定や被験者のＩＤ入力など）を行うことができる。表示パネル３１は、分析結果やエラーである旨を表示するとともに、設定時における操作手順や操作状況などを表示するためのものである。【００３８】  図２に示したように、脱気ユニット４は、分析ユニット６（分析カラム６０）に溶離液を供給する前に、溶離液から溶存気体を除去するためのものであり、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃを介して溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃに、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを介して分析ユニット６のマニホールド６１に連結されている。図３に示したように、脱気ユニット４は、温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃ、チャンバ４１、複数のスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ（図面上は３つ）、ポンプ４３、演算部４４および制御部４５を有している。【００３９】  温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃは、チャンバ４１に導入させる溶離液の温度を測定するためのものであり、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃにおけるチャンバ４１の近傍に設けられている。この温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃは、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃの内部に配置されたサーミスタ（図示略）を備えており、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃに存在する溶離液の温度を直接測定できるように構成されている。この温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃにおける測定結果は、演算部４４に出力される。【００４０】  チャンバ４１は、複数の減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ（図面上は３つ）を規定するとともに、スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃを収容するためのものである。【００４１】  スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃは、内部において溶離液を流通させるものであるとともに、溶離液中の溶存気体を透過させるもの���あり、シリコンなどの公知のガス透過膜により中空に形成されている。このスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃは、スパイラル状とされることにより、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ内での流路長が大きく確保されており、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃにおける気体との接触面積を大きく確保しつつ、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃにおける溶離液の滞留時間を大きく確保できるように構成されている。【００４２】  ポンプ４３は、配管８２を介して減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの気体を排出し、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃを減圧するためのものである。このポンプ４３は、制御部４５によって、その動作が制御されている。【００４３】  演算部４４は、温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃから送信されてくる溶離液の温度データに基づいて、ポンプ４３に対する制御量を演算するためのものである。この演算部４４は、たとえば予め定めておいた溶離液の温度とポンプ４３の吸引圧力との関係式にしたがって、ポンプ４３に対する制御量を演算するように構成される。吸引圧力は、たとえばポンプ４３における弁（図示略）の開放状態あるいはポンプ４３の駆動電力（駆動電圧）により調整される。【００４４】  制御部４５は、演算部４４において演算された制御量にしたがってポンプ４３の動作を制御するためのものである。【００４５】  演算部４４および制御部４５は、たとえばＣＰＵ、ＲＯＭおよびＲＡＭにより構成される。【００４６】  図２に示したように、試料調製ユニット５は、採血管１１から採取した血球成分から、分析カラム６０に導入する試料を調製するためのものである。この試料調製ユニット５は、界面検出機構５０、ノズル５１、調製液タンク５２および希釈槽５３を有している。【００４７】  図４ないし図６に示したように、界面検出機構５０は、採血管１１の血液試料１３における血漿層１３Ａと血球層１３Ｂとの界面１３Ｃを光学的手法により検出するためのものであり、透過型のフォトセンサとして構成されている。この界面検出機構５０は、Ｕ字ホルダ５４に対して、互いに対面した状態で光照射部５５および受光部５６を配置したものである。採血管１１は、テーブル２０において、ラック１０に保持された状態で光照射部５５と受光部５６との間の空間を横切るように移動させられる。【００４８】  光照射部５５は、採血管１１における上下方向の一定範囲に光を照射可能なものであり、たとえば赤血球での光吸収の大きな波長範囲（５００〜５７０ｎｍ）にピーク波長を有する光を照射可能な線状光源が用いられている。光照射部５５としては、たとえば点状光源を上下方向に走査可能に構成したものを採用することもできる。一方、受光部５６は、採血管１１を透過した光を受光するためのものであり、採血管１１における上下方向の一定範囲において受光可能とされている。このような受光部５６としては、たとえばラインセンサあるいはエリアセンサを使用することができる。【００４９】  もちろん、界面検出機構５０としては、たとえば採血管１１の表面において反射した光を検出する反射型のフォトセンサを有するものであってもよく、また光学的手法に限らず、たとえばノズル５１を採血管１１に挿入したときの挿入抵抗の変化により、あるいは電気抵抗の変化により血漿層１３Ａと血球層１３Ｂとの界面１３Ｃを検出するように構成してもよい。【００５０】  図２および図６に示したように、ノズル５１は、採血管１１の血液試料１３をはじめとする各種の液体を採取するためのものであり、液体の吸引・吐出が可能であるとともに、上下方向および水平方向に移動可能とされている。このノズル５１の動作は、図外の制御手段によって制御されており、採血管１１から血液試料１３を採取する場合には、界面検出機構５０において検出された界面１３Ｃを基準として、その界面１３Ｃよりも若干下方において、血球層１３Ｂから血球成分を採取するように動作させられる。【００５１】  図２に示した調製液タンク５２は、血液試料１３をもとに、分析カラム６０に導入する導入用試料を調製するための調製液を保持したものである。この調製液タンク５２には、調製液として、赤血球の溶血させるための溶血液、溶血液を希釈するための希釈液などが保持されている。希釈液としては、酸素飽和度の高いもの、たとえば酸素飽和度が８５％以上のものを使用するのが好ましい。調製液タンク５２からの調製液の採取には、ノズル５１が使用される。【００５２】  希釈槽５３は、血液試料１３中の赤血球を溶血させ、かつ溶血液を希釈して導入用試料を調製する場を提供するとともに、導入用試料を大気に接触させて導入用試料における酸素飽和度（溶存酸素濃度）を高めるためのものである。この希釈槽５３は、後述する分析ユニット６におけるインジェクションバルブ６３に配管８３を介して接続されており、希釈槽５３において調製された導入用試料がインジェクションバルブ６３を介して分析カラム６０に導入できるように構成されている。希釈槽５３はまた、導入用試料を大気に接触させるために上部が開放されている。【００５３】  図２に示したように、分析ユニット６は、分析カラム６０の充填剤に対する生体成分の吸着・脱着をコントロールし、各種の生体成分を測光ユニット７に供するためのものであり、図外の温調機構により温度コントロールされている。分析ユニット６における設定温度は、たとえば４０℃程度とされる。分析カラム６０は、試料中のヘモグロビンを選択的に吸着させるための充填剤を保持させたものである。充填剤としては、たとえばメタクリル酸エステル共重合体が使用される。【００５４】  分析ユニット６は、分析カラム６０の他に、マニホールド６１、送液ポンプ６２、およびインジェクションバルブ６３を有している。【００５５】  マニホールド６１は、複数の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃのうちの特定の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃから、インジェクションバルブ６３に選択的に溶離液を供給させるためのものである。このマニホールド６１は、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを介して脱気ユニット４の減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ（スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ）に接続され、配管８４を介してインジェクションバルブ６３に接続されている。【００５６】  ここで、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃとしては、全体が酸素透過性の低い材料、たとえばナイロン、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリエチレンまたはステンレス（ＳＵＳ）により形成されたものが使用���れる。【００５７】  送液ポンプ６２は、溶離液をインジェクションバルブ６３に移動させる動力を付与するためのものであり、配管８４の途中に設けられている。送液ポンプ６２は、たとえば溶離液の流量が１．０〜２．０ｍｌ／ｍｉｎとなるように動作させられる。【００５８】  インジェクションバルブ６３は、一定量の導入用試料を採取するとともに、その導入用試料を分析カラム６０に導入可能とするものであり、複数の導入ポートおよび排出ポート（図示略）を備えている。このインジェクションバルブ６３には、インジェクションループ６４が接続されている。このインジェクションループ６４は、一定量（たとえば数μＬ）の液体を保持可能なものであり、インジェクションバルブ６３を適宜切り替えることにより、インジェクションループ６４が希釈槽５３と連通して希釈槽５３からインジェクションループ６４に導入用試料が供給される状態、インジェクションループ６４が配管８５を介して分析カラム６０と連通してインジェクションループ６４から導入用試料が分析カラム６０に導入される状態、あるいはインジェクションループ６４に図外の洗浄槽から洗浄液が供給される状態を選択することができる。このようなインジェクションバルブ６３としては、たとえば六方バルブを使用することができる。【００５９】  図７に示したように、測光ユニット７は、分析カラム６０からの脱着液に含まれるヘモグロビンを光学的に検出するためのものであり、測光セル７０、光源７１、ビームスプリッタ７２、測定用受光系７３および参照用受光系７４を有している。【００６０】  測光セル７０は、測光エリアを規定するためのものである。この測光セル７０は、導入流路７０Ａ、測光流路７０Ｂおよび排出流路７０Ｃを有しており、これらの流路７０Ａ，７０Ｂ，７０Ｃが一連に連通している。導入流路７０Ａは、分析カラム６０（図２参照）からの脱離液を測光流路７０Ｂに導入するためのものであり、分析カラム６０に配管８６を介して接続されている。配管８６としては、  先に説明した配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃと同様に、全体が酸素透過性の低い材料、たとえばナイロン、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリエチレンまたはステンレス（ＳＵＳ）により形成されたものが使用される。測光流路７０Ｂは、測光対象となる脱離液を流通させ、かつ脱離液を測光するための場を提供するものであり、直線状に形成されている。この測光流路７０Ｂは、両端が開放しているとともに、両端部が透明カバー７５により塞がれている。排出流路７０Ｃは、測光流路７０Ｂの脱離液を排出するためのものであり、配管８７を介して廃液槽８８に接続されている（図２参照）。【００６１】  光源７１は、測光流路７０Ｂを流通する脱離液に光を照射するためのものである。この光源７１は、光軸Ｌが測光流路７０Ｂの中心を通過するように、測光流路７０Ｂの端面７０Ｂａ（透明カバー７５）に対面した状態で配置されている。光源７１としては、オキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍおよび参照波長である５００ｎｍの光を含んだ波長範囲の光を出射可能なもの、たとえばハロゲンランプが使用されている。もちろん、光源７１としては、ハロゲンランプ以外のもの、たとえば１��たは複数のＬＥＤ素子を備えたものを使用することもできる。【００６２】  ビームスプリッタ７２は、光源７１から出射された光のうち、測光流路７０Ｂを透過した光を分割して測定用受光系７３および参照用受光系７４に入射させるためのものであり、光軸Ｌ上において、４５度傾斜した状態で配置されている。ビームスプリッタ７２としては、ハーフミラーなどの公知の種々のものを使用することができる。【００６３】  測定用受光系７３は、ビームスプリッタ７２を透過した光のうち、オキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍの光を選択的に受光するものであり、光軸Ｌ上に配置されている。この測定用受光系７３は、４１５ｎｍの光を選択的に透過させる干渉フィルタ７３Ａと、干渉フィルタ７３Ａを透過した光を受光するための受光素子７３Ｂと、を備えている。受光素子７３Ｂとしては、フォトダイオードを使用することができる。【００６４】  参照用受光系７４は、ビームスプリッタ７２において反射して光路が変えられた光のうち、参照波長である５００ｎｍの光を選択的に受光するものである。この測定用受光系７４は、５００ｎｍの光を選択的に透過させる干渉フィルタ７４Ａと、干渉フィルタ７４Ａを透過した光を受光するための受光素子７４Ｂと、を備えている。受光素子７４Ｂとしては、フォトダイオードを使用することができる。【００６５】  次に、ＨＰＬＣ装置Ｘの動作について説明する。【００６６】  ＨＰＬＣ装置Ｘを用いてグリコヘモグロビンを測定する場合には、まず血液試料１３が入った採血管１１をラック１０に保持させた状態で、ラック１０をテーブル２０の所定の部位にセットする。採血管１１の血液試料１３は、予め血漿層１３Ａと血球層１３Ｂに分離されている。このような分離は、遠心分離機を用いて、あるいは血球成分を自然沈降させることにより行なうことができる。【００６７】  血漿層１３Ａと血球層１３Ｂとの分離は、ＨＰＬＣ装置Ｘに遠心分離機を組み込んでＨＰＬＣ装置Ｘにおいて行なうようにしてもよく、また、テーブル２０に採血管１１をセットした状態で一定時間静置することにより行ってもよい。【００６８】  ＨＰＬＣ装置Ｘにおいては、測定開始の指示が確認された場合、テーブル２０においてラック１０を移動させ、目的とする採血管１１から血液試料１３を採取する。測定開始の指示は、使用者がＨＰＬＣ装置Ｘの所定の操作ボタン３２を操作することにより行なわれる。【００６９】  採血管１１からの血液試料１３の採取は、界面検出機構５０において血漿層１３Ａと血球層１３Ｂとの界面１３Ｃを検出した後、その界面１３Ｃから一定距離Ｄだけ下方に離れた領域において行なわれる。より具体的には、界面検出機構５０では、光照射部５５から採血管１１に対して光を照射するとともに、採血管１１を透過した光が受光部５６において受光される。ここで、光照射部５５として赤血球での光吸収の大きな波長範囲にピーク波長を有する光を照射した場合には、血漿層１３Ａに比べて、血球層１３Ｂでの光吸収がより大きくなる。そのため、界面検出機構５０においては、光吸収が著しく変化する部分を受光部５６での受光量に基づいて検出することにより、血漿層１３Ａと血球層１３Ｂとの間の界面１３Ｃを検出する���とができる。【００７０】  界面検出機構５０において界面１３Ｃの検出が終了した場合には、界面検出機構５０での検出結果に基づいてノズル５１を動作させることにより、血球層１３Ｂの上層部から血液試料１３が採取される。この場合、ノズル５１は、血漿層１３Ａと血球層１３Ｂとの間の界面１３Ｃから距離Ｄが、たとえば血球層１３Ｂの厚みに対して５〜３０％の範囲にある領域、あるいは距離Ｄが０．５〜５．０ｍｍの範囲にある領域に先端が位置させられ、この状態において吸引動作を行なうことにより採血管１１から血液試料１３を採取するように動作させられる。【００７１】  ここで、遠心分離などにより血球成分を採血管１１の底部に分離した場合には、血球層１３Ｂの上層部は、下層部に比べて酸素飽和度（溶存酸素濃度）が高くなり、また血液試料１３を静置しておいた場合にも、気相からの距離が小さい血球層１３Ｂの上層部は、下層部に比べて酸素飽和度（溶存酸素濃度）が高くなる。そのため、界面検出機構５０における界面１３Ｃの検出結果に基づいてノズル５１の動作を制御し、血球層１３Ｂにおける上層部から血液試料１３を採取するようにすれば、酸素飽和度（溶存酸素濃度）の高い血液試料１３を採取することができる。また、界面１３Ｃからの距離Ｄが先の領域にある部分から血液試料１３を採取する場合には、血球層１３Ｂの上層部から血液試料１３を確実に採取することができる。【００７２】  ノズル５１によって採取された血液試料１３は、ノズル５１を動作させることによって希釈槽５３に供給される。希釈槽５３にはさらに、調製液タンク５２から溶血剤および希釈液が順次供給され、ノズル５１を利用したピペッティング操作によって希釈槽５３内の液体を混合することによって導入用試料が調製される。【００７３】  希釈槽５３において調製された導入用試料は、希釈槽５３において大気と一定時間接触させた後にインジェクションループ６４に供給され、インジェクションループ６４において保持される。【００７４】  導入用試料を一定時間大気と接触させた場合には、導入用試料の溶存酸素濃度が増加させられる。このようにして導入用試料の酸素飽和度を増加させた場合には、インジェクションループ６４ひいては分析カラム６０に対して溶存酸素濃度の高い導入用試料を供給することができる。すなわち、導入用試料に含まれるヘモグロビンにおいて、オキシヘモグロビンの割合を大きなものとすることができる。【００７５】  ここで、導入用試料と大気との接触時間（大気開放時間）は、たとえば１〜２分とされる。これは、大気開放時間が短すぎる場合には導入用試料に対して十分な量の酸素を溶存させることができない一方で、大気開放時間が長すぎる場合には導入用試料調製後からインジェクションループ６４へ導入用試料を導入するまでの時間が大きくなって測定時間が長くなってしまうからである。【００７６】  また、希釈液として酸素飽和度の高いもの、たとえば酸素飽和度が８５％以上のものを使用する場合には、必ずしも希釈後の導入用試料を大気開放する必要はない。すなわち、酸素飽和度の高い希釈液を用いる場合には、希釈槽５３として閉鎖されたものを用いる場合であっても一定時間（たとえば１分以上）放置することによ��、希釈後の導入用試料の酸素飽和度を高めることができ、オキシヘモグロビンの割合を大きなものとすることができる。【００７７】  ＨＰＬＣ装置Ｘにおいてはさらに、測定開始の指示が確認された場合には、インジェクションバルブ６３に対して溶離液が供給される。溶離液は、送液ポンプ６２の動力により、溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃから脱気ユニット４、マニホールド６１を介してインジェクションバルブ６３に供給され、また複数の溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃのうちのいずれの溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃの溶離液を供給するかは、マニホールド６１を制御することによって選択される。【００７８】  脱気ユニット４では、溶離液が配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃを流通する間に温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃにおいて溶離液の温度が測定される。この温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃにおける測定結果は演算部４４に出力され、演算部４４において、温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃから送信されてくる溶離液の温度データに基づいて、ポンプ４３の制御量が演算される。この演算部４４は、たとえば予め定めておいた溶離液の温度とポンプ４３の吸引力（たとえばポンプ４３における弁（図示略）の開放状態あるいはポンプ４３の駆動電力（駆動電圧）との関係式にしたがって、ポンプ４３に対する制御量の演算を行なう。演算部４４においてポンプ４３の制御量が演算された場合には、制御部４５は、演算部４４において演算された制御量にしたがってポンプ４３の動作を制御する。これにより、配管８２を介して減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃから排気される気体の量が、溶離液の温度（溶存酸素濃度）に応じて調整される、その結果、脱気ユニット４では、溶離液の温度（溶存酸素濃度）に応じて、ポンプ４３によって減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの減圧度が調整される。【００７９】  一方、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃを流通する溶離液は、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの内部においてスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃを流通した後に、スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃから排出される。このとき、スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃがガス透過性の高い材質により形成されているとともに、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃがポンプ４３によって減圧されているため、溶離液がスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃを流通する間に、溶離液からは溶存酸素を含めた溶存ガスが除去される。そして、脱気ユニット４では、溶離液の温度に応じて減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの減圧度が調整されるため、溶離液が減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃから排出される際には、溶離液の温度に関係なく、溶離液の溶存酸素濃度が一定とされる。ここで、溶離液の温度は、ＨＰＬＣ装置Ｘの外部の温度（環境温度）の影響を受けるが、脱気ユニット４においては、環境温度に関係なく溶存酸素濃度が一定の溶離液を排出することが可能となる。これにより、環境温度の変動が生じた場合、あるいは異なる環境温度下で測定が行なわれる場合であっても、脱気ユニット４から排出される溶離液の溶存酸素濃度を略一定なものとすることができる。【００８０】  減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ（スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ）から排出された溶離液は、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを介してマニホールド６１に供給された後、配管８４を介してインジェクションバルブ６３に導入される。【００８１】  ここで、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃとしては、酸素透過率の低い材料により形成されたものが使用されている。そのため、マニホールド６１に供給される溶離液が配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを流通する間においては、溶離液に酸素などのガスが再吸収されることが抑制される。その結果、脱気ユニット４において溶存酸素濃度が一定なものとされた溶離液は、その状態を適切に維持したままマニホールド６１に供給されることとなる。【００８２】  インジェクションバルブ６３に供給された溶離液は、配管８５を介して分析カラム６０に供給される。その一方で、インジェクションバルブ６３の切替操作を行うことにより、インジェクションループ６４の導入用試料が溶離液とともに分析カラム６０に導入される。導入用試料の導入開始から一定時間経過した場合には、インジェクションバルブ６３の切替操作を行うことにより、分析カラム６０に対して引き続き溶離液を供給するとともに、インジェクションループ６４の洗浄を行なう。一方、インジェクションループ６４の洗浄と同時的に、先に説明したのと同様にして、先とは異なる採血管１１の血液試料１３から導入用試料を調製し、インジェクションループ６４の洗浄後においては、再び導入用試料をインジェクションループ６４に導入する。このような導入用試料の調製、導入、洗浄は、インジェクションバルブ６３を適宜切り替えつつ、測定対象となる採血管１１（血液試料１３）の数に応じて繰り返し行なわれる。【００８３】  一方、分析カラム６０においては、導入用試料が導入されることにより、充填剤にグリコヘモグロビンが吸着する。充填剤にグリコヘモグロビンを吸着させた後においては、マニホールド６１によって、分析カラム６０に供給する溶離液の種類を適宜切り替え、充填剤に吸着したグリコヘモグロビンを脱着させる。【００８４】  このとき、複数の溶離液相互で流量を異ならせて分析カラム６０に供給し、複数種類の溶離液ごとに配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃを通過する時間（滞留時間）が異なったものとなったとしても、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃにおける酸素の再吸収が適切に抑制される。そのため、分析カラム６０では、１つの血液試料１３の測定において、溶離液の種類（流量）を変えたとしても、分析カラム６０を移動する溶離液における溶存酸素の量が変化することが適切に抑制される。その結果、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃでの酸素の再吸収に起因して、測定結果が真値からズレてしまうことを抑制し、正確な測定を行なうことが可能となる。【００８５】  また、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互では配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの酸素透過性について製造間差が生じることも想定され、その場合には、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互での配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃでの再吸収量が異なったものとなるため、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互での測定精度に差が生じてしまうことが懸念されるが、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃとして酸素透過性の低いものを使用することにより、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの製造間差の影響を極力抑制することが可能となる。【００８��】  分析カラム６０から排出されるグリコヘモグロビンを含む脱着液は、配管８６を介して測光ユニット７の測光セル７０に供給される。測光セル７０に対しては、配管８６および導入流路７０Ａを介して脱着液が導入され、この脱着液は測光流路７０Ｂおよび排出流路７０Ｃを通過した後に、配管８７を介して廃液槽８８に導かれる。【００８７】  ここで、配管８６としては、酸素透過率の低い材料により形成されたものが使用されている。そのため、配管８６を介して分析カラム６０から測光ユニット７（測光セル７０）に脱離液が供給される間において、脱離液に酸素などのガスが再吸収されることが抑制される。その結果、測光ニット７に対しては、溶存酸素濃度が一定に維持されたままに分析カラム６０から脱離液が供給されることとなる。また、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの場合と同様に、複数のＨＰＬＣ装置Ｘ相互での配管８６の酸素透過性について製造間差に起因する測定精度の低下を抑制することが可能となる。【００８８】  測光ユニット７においては、脱離液が測光流路７０Ｂを通過する際に、光源７１によって脱離液に対して連続的に光が照射される。その一方で、測光流路７０Ｂを透過した光は、ビームスプリッタ７２において分割された後、測定用受光系７３および参照用受光系７４において受光される。測定用受光系７３では、干渉フィルタ７３Ａを透過したオキシヘモグロビンの最大吸収波長である４１５ｎｍの光が受光素子７３Ｂにおいて選択的に受光される。一方、参照用受光系７４では、干渉フィルタ７４Ａを透過した参照波長である５００ｎｍの光が受光素子７４Ｂにおいて選択的に受光される。【００８９】  受光素子７３Ａ，７４Ａでの受光結果は、図外の演算回路に出力され、この演算回路においてヘモグロビンのクロマトグラム、グリコヘモグロビンの濃度（ヘモグロビン総量におけるグリコヘモグロビンの割合）が演算される。演算回路での演算結果は、表示パネル３１に表示され、また自動的あるいは使用者のボタン操作によってプリントアウトされる。【００９０】  このようなＨＰＬＣ装置Ｘでは、溶離液の溶存酸素濃度は、脱気ユニット４において一定化されるとともに、酸素透過性の低い配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃにより脱気ユニット４からの溶離液を、溶存酸素濃度を略一定に維持したままマニホールド６１に供給するようにしている。その一方で、マニホールド６１は、インジェクションバルブ６３や分析カラム６０とともに分析ユニット６を構成するものであるとともに、分析ユニット６が一定温度に温調されている。そのため、マニホールド６１から分析カラム６０に供給される溶離液は、温度変化に起因する溶存酸素濃度の変化が生じにくくなっている。その結果、分析カラム６０に対しては、環境温度に関係なく、溶存酸素濃度が一定化された溶離液を供給することが可能となる。したがって、ＨＰＬＣ装置Ｘでは、溶離液の溶存酸素濃度の変動など起因する測定結果の不安定性を抑制することが可能となる。【００９１】  一方、分析カラム６０に導入するための導入用試料における溶存酸素濃度は、血球層１３Ｂの上部から採取した血液試料１３に基づいて調製されるとともに、調製後においては、分析カラム６０に導入する前に、希釈槽５３に��いて導入用試料を実質的に飽和させられている。そのため、分析カラム６０に導入される導入用試料は、溶存酸素濃度が画一化されるため、導入用試料におけるオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンの比率を、一定化して分析カラム６０に供給することが可能となる。しかも、分析カラム６０から測光ユニット７に脱離液が供給されるまでの間において、配管８６での酸素の再吸収が抑制されている。その結果、測光ユニット７に対しては、導入用試料ごとのオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率のバラツキが抑制され、このバラツキに起因する測定結果のバラツキを抑制することが可能となる。【００９２】  本発明は、上述した実施の形態には限定されず、種々に変更可である。たとえば、脱気ユニット４の減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの減圧度を調整するに当たっては、必ずしも配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃに温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃを設けて溶離液の温度を直接測定する必要はなく、たとえば図８Ａに示したように温度測定部４０を装置内部に設けて装置内部の温度を測定するようにし、図８Ｂに示したように温度測定部４０を装置外部に設けて装置外部の環境温度（たとえば装置Ｘの周辺温度、装置Ｘの筐体３の外壁の温度、あるいは溶離液ボトル１２Ａ，１２Ｂ，１２Ｃの温度）を測定するように構成してもよい。また、温度測定部は、脱気ユニット４におけるマニホールド６１と接続された配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃ、スパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃ、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃ（図３参照）に設けてもよい。さらに、図２および図３に示した温度測定部４０Ａ，４０Ｂ，４０Ｃに代えて、配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃ、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃ、あるいはスパイラル管４２Ａ，４２Ｂ，４２Ｃに溶存酸素測定センサ（酸素サンサ）を設けてもよい。【００９３】  また、脱気ユニットとしては、減圧空間にスパイラル管を収容させた構成に限らず、フィルム状のガス透過膜によって、溶離液流通空間と減圧空間とを区画した構成であってもよい。さらに、脱気ユニット４は、必ずしも減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの減圧度を調整することにより、溶離液の溶存酸素濃度を一定化する必要はなく、図９に示したように、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃの温度を温調機構４６Ａ，４６Ｂ，４６Ｃによって溶離液の溶存酸素濃度を一定化するように構成してもよく、また、溶離液が配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃ、あるいは配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃ，８４，８５を流通する際に溶離液の温度を調整するようにしてもよい。さらに、溶離液や環境温度に応じて溶離液の流量を調整して、減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃにおける滞留時間により溶存酸素濃度を一定化するようにしてもよく、また減圧空間４１Ａ，４１Ｂ，４１Ｃにおける酸素分圧の変動を抑制するための酸素分圧変動抑制手段を備えた構成であってもよい。【００９４】  本発明ではさらに、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの全体が酸素ガスの透過率の低い材料により形成されていたが、配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃの一部を酸素ガスの透過率の低い材料により形成してもよく、また配管８１Ａ，８１Ｂ，８１Ｃ以外の配管８０Ａ，８０Ｂ，８０Ｃ，８４，８５についても酸素ガスの透過率の低��材料により形成してもよい。【００９５】  また、希釈槽５３において調製された導入用試料の酸素飽和度（溶存酸素濃度）を高めるための手段としては、たとえば図１０に示したように希釈槽５３の導入用試料を、酸素リッチなガス、あるいは空気によりバブリングするバブリング機構５４を採用することもできる。【００９６】  本発明はさらに、血液中のグリコヘモグロビン濃度を測定するためのＨＰＬＣ装置に限らず、血液以外の検体を用いる場合、グリコヘモグロビン濃度以外の成分を測定する場合、あるいはＨＰＬＣ装置以外の液体クロマトグラフィ装置についても適用することができる。
【実施例】
【００９７】（参考例）  本参考例においては、環境温度と溶存酸素濃度との関係について検討した。【００９８】  溶存酸素濃度の測定は、グリコヘモグロビン測定装置（「ＡＤＡＭＳ  Ａ１ｃ  ＨＡ−８１６０」；アークレイ株式会社製）におけるマニホールドの入口に溶存酸素濃度測定装置を接続した状態とし、通常の分析と同様にして溶離液を供給することにより、分析カラムに導入される溶離液中の溶存酸素濃度を測定した。【００９９】  溶離液としては、商品名「６１Ａ」、「６１Ｂ」および「６１Ｃ」（アークレイ株式会社製）を用い、溶離液は、流量が１．７ｍｌ／ｍｉｎとなるようにして供給した。環境温度（装置外部の温度）は、１０℃および３０℃に設定した。溶存酸素濃度の測定結果については、下記表１に示した。【０１００】
【表１】
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【０１０１】  表１から分かるように、グリコヘモグロビン測定装置を使用する場合の一般的な環境温度範囲である１０℃と３０℃においては、溶離液中の溶存酸素濃度が大きく異なっている。すなわち、環境温度によって溶離液中の溶存酸素濃度が変動することで、分析カラムから溶離されるグリコヘモグロビンにおけるオキシヘモグロビンとデオキシヘモグロビンとの比率が変動することが伺える。そのため、オキシヘモグロビンの最大吸収波長においてグリコヘモグロビンを測定する場合には、環境温度が変動することにより、同一濃度の検体を用いる場合であっても、実測値が変動することが伺える。【０１０２】（比較例）  本比較例では、環境温度がグリコヘモグロビンの測定値に与える影響について検討した。【０１０３】  グリコヘモグロビンの濃度は、環境温度を１０℃および３０℃とした場合について、グリコヘモグロビン測定装置（「ＡＤＡＭＳ  Ａ１ｃ  ＨＡ−８１６０」；アークレイ株式会社製）を用いて測定した。検体としては、健常人から採取した血液（健常人検体）および糖尿病患者から採取した血液（糖尿患者血液）を用いた。グリコヘモグロビンの測定結果については下記表２に示すとともに、健常人検体については図１１Ａに、糖尿病患者検体については図１１Ｂにそれぞれ示した。【０１０４】
【表２】
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【０１０５】  表２、図１１Ａおよび図１１Ｂから分かるように、環境温度が異なる場合には、健常人検体および糖尿病患者検体ともに、測定値が異なったものとなった。【０１０６】（実施例）  本実施例では、溶離液の温度に基づいて脱気装置における減圧度を調整した場合について、環境温度がグリコヘモグロビン濃度の測定結果に与える影響について検討した。【０１０７】  グリコヘモグロビンの測定値は、グリコヘモグロビン測定装置（「ＡＤＡＭＳ  Ａ１ｃ  ＨＡ−８１６０」；アークレイ株式会社製）を、図１ないし図７を参照して先に説明したＨＰＬＣ装置と同様に、脱気ユニットを図３に示した構成とするとともに、脱気装置とマニホールドとの間を繋ぐ配管を、テフロン（登録商標）製のものからナイロン製（商品名「Ｎ２‐１−１／８（乳白色）」；ニッタ・ムアー株式会社製）に変更したものを用いて行なった。【０１０８】  脱気ユニットは、温度測定部としてサーミスタ（商品名「ＰＢ３−４３−Ｓ２」；株式会社芝浦電子製）を用い、溶離液の温度に応じて、ポンプの圧力を下記数式１にしたがって調整するように構成した。【０１０９】
【数１】
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【０１１０】  検体としては、比較例と同様に、健常人から採取した血液（健常人検体）および糖尿病患者から採取した血液（糖尿患者血液）を用いた。グリコヘモグロビンの測定結果については下記表３に示すとともに、健常人検体については図１１Ａに、糖尿病患者検体については図１１Ｂにそれぞれ示した。【０１１１】
【表３】
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【０１１２】  表３、図１１Ａおよび図１１Ｂから分かるように、溶離液の温度に応じて減圧空間の減圧度（ポンプの圧力）を調整して溶離液中の溶存酸素濃度を一定となるように試みた場合には、環境温度が異なっていても、健常人検体および糖尿病患者検体ともに、測定値が略同一なものとなった。すなわち、溶離液の温度、あるいは溶離液の温度に影響を与える環境温度に応じて、溶離液中の溶存酸素濃度を一定化した場合には、環境温度などの影響を受けることなく、測定値を安定化させることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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