(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（２）で示されることを特徴とする、修飾された生体関連物質の中間体。
【化１】
0005273589.tif 000066
（式中、Ｒはメチル基またはエチル基であり、OＡ1、OＡ2は炭素数２〜４のオキシアルキレン基であり、Ｒ、OＡ2は一分子中で互いに同一または異なっており、ｎおよびｍは前記オキシアルキレン基の平均付加モル数であり、ｎは０〜１０００を示し、ｍは１０〜１０００を示し、Ｘは、群（Ｉ）または群（ＩＩ）より選択される基である）
【化２】
0005273589.tif 000067
（群（Ｉ）、群（ＩＩ）中、Zはアルキレン基単独、もしくはエーテル結合、エステル結合、ウレタン結合、アミド結合、カーボネート結合または２級アミノ基を含むアルキレン基を示す。Yは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基を示す。）
【請求項２】
前記式（２）において、Ｚが下記式（Ｚ１）、（Ｚ２）、（Ｚ３）、（Ｚ４）、（Ｚ５）または（Ｚ６）で表されることを特徴とする、請求項１記載の中間体。
【化３】
0005273589.tif 000068
（式中、ｓは１〜６の整数である）  
【請求項３】
式（２）において、Ｒがメチル基であり、OＡ1、OＡ2がオキシエチレン基であり、ｎが０〜５０であり、ｍが２０〜８００である、請求項１または２記載の中間体。
【請求項４】
式（２）においてｎが０である、請求項１〜３のいずれか一つの請求項に記載の中間体。
【請求項５】
式（２）においてｎが１〜５０である、請求項１〜３のいずれか一つの請求項に記載の中間体。
【請求項６】
分子中に少なくとも１個の下記式（１）で表されるポリアルキレングリコールオキシ基を結合してなる、修飾された生体関連物質を製造する方法であって、
生体関連物質に対して、請求項１〜５のいずれか一つの請求項に記載の中間体を結合する工程を有することを特徴とする、修飾された生体関連物質の製造方法。
【化４】
0005273589.tif 000069
（式中、Ｒはメチル基またはエチル基であり、OＡ1、OＡ2は炭素数２〜４のオキシアルキレン基であり、Ｒ、OＡ2は一分子中で互いに同一または異なっており、ｎおよびｍは前記オキシアルキレン基の平均付加モル数であり、ｎは０〜１０００を示し、ｍは１０〜１０００を示す。）
【請求項７】
分子中に少なくとも１個の下記式（１）で表されるポリアルキレングリコールオキシ基を結合してなる、修飾された生体関連物質であって、請求項１〜５のいずれか一つの請求項に記載の中間体と、修飾前の生体関連物質との反応物であることを特徴とする、修飾された生体関連物質。
【化５】
0005273589.tif 000070
（式中、Ｒはメチル基またはエチル基であり、OＡ1、OＡ2は炭素数２〜４のオキシアルキレン基であり、Ｒ、OＡ2は一分子中で互いに同一または異なっており、ｎおよびｍは前記オキシアルキレン基の平均付加モル数であり、ｎは０〜１０００を示し、ｍは１０〜１０００を示す。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリアルキレングリコール誘導体との結合によって修飾された生体関連物質、その製造方法、および中間体である反応性ポリアルキレングリコール誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生理活性を有するタンパク質、ポリペプチド、合成化合物、及び天然資源より抽出された化合物等が数多く発見されており、それらの医薬品への応用が盛んに研究されている。しかし、これらの生理活性物質は、生体内に投与された際の血中半減期が短く、十分な薬理効果を得ることは難しい。これは、通常生体内へ投与された生理活性物質が、腎臓における糸球体濾過や、肝臓や脾臓などにおけるマクロファージの取り込みにより、生体内から消失するためである。このため、これらの生理活性物質をリポソームやポリマーミセル中へ封入したり、両親媒性高分子であるポリエチレングリコールを化学修飾させて分子量を増大させることで、生体内挙動を改善する試みがなされている。ポリエチレングリコールは、その立体反発効果のために他の生体成分との相互作用が低く、結果、ポリエチレングリコールで修飾したタンパク質や酵素等のポリペプチドは、生体内へ投与された場合、腎臓における糸球体濾過や免疫反応等の生体反応を回避させる効果があり、非修飾のものより長い血中半減期を達成する。また、毒性や抗原性も低下し、更には、疎水性の高い難水溶性の化合物の溶解性を高める効果もある。
【０００３】
従来、生理活性物質をポリエチレングリコール修飾する場合、特に低分子薬剤やペプチドを修飾する場合、ポリエチレングリコール修飾に用いることができる反応性官能基が少ないという問題点があった。更には、十分なポリエチレングリコール修飾の効果を得るために、数多くのポリエチレングリコール分子で修飾した場合、ペプチドや薬剤の活性点を封鎖してしまい、それ自身が持つ機能、薬効を十分に発現できなくなったり、十分な水への溶解性が得られなくなるという問題点があった。
このような問題点を解決するために、分岐型のポリエチレングリコール誘導体を用い、ポリエチレングリコールの修飾数を減らし、この問題点を解決しようとする試みがなされている。特許文献１には、ポリエチレングリコール化L−アスパラギナーゼが提案されている。しかしながら、反応性ポリエチレングリコール誘導体の原料である塩化シアヌルには３つの反応性部位があり、ここに２本のポリエチレングリコール鎖を選択的に導入することは困難であり、純度の高いポリエチレングリコール化L−アスパラギナーゼを合成するのは困難である。
【特許文献１】特公昭６１−４２５５８号公報
【０００４】
また、特許文献２には、ポリエチレングリコール化インターフェロンαが提案されている。しかしながら、この物質はインターフェロンαとポリエチレングリコールオキシ基との結合部位も含めて、ウレタン結合やアミド結合が３個存在する。これらの結合は保存中、あるいはアルカリ性条件下での反応中に加水分解を受けやすく、結果、分岐型ポリエチレングリコール部分が一本鎖に分解してしまうという問題点があった。これは、中間原料のポリエチレングリコール誘導体が、２本のモノメトキシポリエチレングリコールとリジンのα位およびε位のアミノ基とウレタン結合にて結合させた後、リジンのカルボキシル残基をコハク酸イミドエステルへ変換させる方法で製造されるためである。また、このポリエチレングリコール化インターフェロンαを製造するためには、２本のモノメトキシポリエチレングリコール末端水酸基の活性化、リジンとの結合、リジンのカルボキシル残基の活性化、インターフェロンαとの結合等、多段階の工程数を経るため、不純物も多くなるという問題点もある。
【特許文献２】特開平１０−６７８００号公報
【０００５】
そのため、安定性の高い結合で形成された生体関連物質、その製造方法、及び、簡便かつ高純度に製造でき、より安定性が高い、分岐型の反応性ポリアルキレングリコール誘導体が望まれていた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の第１の目的は、安定な結合によって形成され、一本鎖に分解しにくい、分岐型ポリアルキレングリコールオキシ基を有する生体関連物質とその製造方法を提供することである。
【０００７】
本発明の第２の目的は、グリセリン骨格の１位の１級炭素に生体関連物質と結合可能な反応性基を、２位と３位にポリアルキレングリコール鎖を有し、生体関連物質との結合部位を除くすべての結合を安定性の高いエーテル結合で形成させるポリアルキレングリコール誘導体を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、新規な分岐型ポリアルキレングリコールオキシ基を有する生体関連物質、その製造方法、及びその中間体となるポリアルキレングリコール誘導体を見いだし、本発明を完成した。
【０００９】
即ち、本発明は、分子中に少なくとも１個の下記式（１）で表されるポリアルキレングリコールオキシ基を結合してなる、修飾された生体関連物質に係るものである。
【化６】
0005273589.tif 000002
（式中、Ｒはメチル基またはエチル基であり、OＡ1、OＡ2は炭素数２〜４のオキシアルキレン基であり、Ｒ、OＡ2は一分子中で互いに同一または異なっており、ｎおよびｍはオキシアルキレン基の平均付加モル数であり、ｎは０〜１０００を示し、ｍは１０〜１０００を示す。）
【００１０】
また、本発明は、前記修飾された生体関連物質に対する中間体であり、下記式（２）で示されることを特徴とする中間体に係るものである。
【化７】
0005273589.tif 000003
（式中、Ｒ、OＡ1、OＡ2、ｎ、ｍは上記と同じであり、Xは、生体関連物質と化学反応可能な官能基を示す）
【００１１】
また、本発明は、分子中に少なくとも１個の式（１）で表されるポリアルキレングリコールオキシ基を結合してなる、修飾された生体関連物質を製造する方法であって、生体関連物質に対して前記中間体を結合する工程を有することを特徴とする。
また、本発明は式（２）の化合物の原料となる、式（ｐ）の化合物、並びにその製造方法に係るものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の修飾された生体関連物質は、安定な結合によって形成され、一本鎖に分解しにくい。また、グリセリン骨格の１位の１級炭素に生体関連物質と結合可能な反応性基を、２位と３位にポリアルキレングリコール鎖を有し、生体関連物質との結合部位を除くすべての結合を安定性の高いエーテル結合で形成させるポリアルキレングリコール誘導体を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の修飾された生体関連物質は、少なくとも１個の前記式（１）で表されるポリアルキレングリコールオキシ基に対して、生体関連物質を結合させたものである。
式（１）のポリアルキレングリコールオキシ基におけるＲは、メチル基、エチル基であり、更に好ましくはメチル基である。
OＡ1、OＡ2は、炭素数２〜４のオキシアルキレン基を示す。具体的には、オキシエチレン基、オキシプロピレン基、オキシトリメチレン基、オキシ−１−エチルエチレン基、オキシ−１、２−ジメチルエチレン基、オキシテトラメチレン基などが挙げられる。オキシアルキレン基は同一であっても異なっていてもよく、またはランダム状に付加していてもブロック状に付加していてもよい。一般に、アルキレン基の炭素数の少ない方がより親水性が高く、好ましくはオキシエチレン基、オキシプロピレン基であり、より好ましくはオキシエチレン基である。ｍおよびｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数である。ｍは１０〜１０００であり、好ましくはｍは２０〜８００であり、更に好ましくは５０〜８００であり、最も好ましくは１００〜８００である。ｎは０〜１０００であり、好ましくは０〜５００であり、更に好ましくは０〜２００であり、最も好ましくは０〜５０である。好適な実施形態においてはｎが０である。他の好適な実施形態においてはｎが１〜５０である。後者の場合には、ｎが１〜３であることが特に好ましい。
生体関連物質へのポリアルキレングリコールオキシ基の修飾数は特に限定されないが、１〜１００箇所が好ましく、更に好ましくは１〜２０箇所である。
【００１４】
本発明で言う「生体関連物質」とは、生体に関連する物質を意味する。生体に関連する物質とは、以下を含むものである。
（１）
リン脂質、糖脂質、糖タンパク等の動物細胞構成材料
動物細胞構成材料とは、細胞膜等を構成する成分であり、特にその種類を限定されるものではないが、例えばリン脂質、糖脂質、糖タンパク質等が挙げられる。より具体的なリン脂質としては、例えばファスファチジジン酸、フォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノールアミン、カルジオリピン、フォスファチジルセリン、フォスファチジルイノシトールが挙げられる。また、これらのリゾ体も含まれる。これらリン脂質は卵黄あるいは大豆等の天然物由来のものでも良いし、合成物でも良い。脂肪酸組成としては、特に限定されるものではないが、好ましくは炭素数１２〜２２の脂肪酸が挙げられる。これらの脂肪酸は飽和脂肪酸でも良いし、不飽和結合を含んだものでも良い。より具体的な糖脂質としては、例えばセラミド、セレブロシド、スフィンゴシン、ガングリオシド、グリセロ糖脂質等が挙げられる。また、脂肪酸、モノグリセライド、ジグリセライド、コレステロール、胆汁酸もこれに含まれる。
【００１５】
（２）
血液、リンパ液、骨髄液等の体液構成物質
体液構成物質とは、細胞内外に存在する液体成分であり、特にその種類を限定されるものではないが、血液、リンパ液、骨髄液が挙げられる。これら体液のより具体的な構成成分としては、例えばヘモグロビン、アルブミン、血液凝固因子等が挙げられる。
【００１６】
（３）ビタミン、神経伝達物質、タンパク質、ポリペプチド、薬剤等の生理活性物質
生理活性物質とは、体の働きを調節する成分であり、特にその種類を限定されるものではないが、ビタミン、神経伝達物質、タンパク質、ポリペプチド、薬剤が挙げられる。
より具体的なビタミンとしては、例えばビタミンA、ビタミンB、ビタミンC、ビタミンD、ビタミンE、ビタミンK等が挙げられる。
より具体的な神経伝達物質としては、例えばアドレナリン、ノルアドレナリン、ドーパミン、アセチルコリン、GABA、グルタミン酸、アスパラギン酸等が挙げられる。
より具体的なタンパク質、ポリペプチドとしては、例えば以下に挙げられるものがある。脳下垂体ホルモン、甲状腺ホルモン、男性ホルモン、女性ホルモン、副腎皮質ホルモン等のホルモン。ヘモグロビン、血液因子等の血清タンパク質。IgG、IgE、IgM、IgA、IgD等の免疫グロブリン。インターロイキン（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１およびＩＬ１２サブタイプ）、インターフェロン（―α、−β、−γ）、顆粒球コロニー刺激因子（αおよびβ型）、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子、血小板由来増殖因子、ホスホリパーゼ活性化タンパク質、インシュリン、グルカゴン、レクチン、リシン、腫瘍壊死因子、上皮細胞増殖因子、トランスフォーミング増殖因子（―α、−β）、繊維芽細胞増殖因子、肝細胞増殖因子、血管内皮増殖因子、神経成長因子、骨増殖因子、インスリン様増殖因子、ヘパリン結合増殖因子、腫瘍増殖因子、グリア細胞株由来神経栄養因子、マクロファージ分化因子、分化誘導因子、白血病阻害因子、アンフィレグリン、ソマトメジン、エリスロポエチン、ヘモポエチン、トロンボポエチン、カルシトニン等のサイトカインおよびそのフラグメント。タンパク質分解酵素、オキシドリダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、リガーゼ、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドトキシナーゼ、カタラーゼ、キモトリプシン、リパーゼ、ウリカーゼ、エラスターゼ、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、アデノシンジホスファターゼ、チロシナーゼ、ビリルビンオキシターゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコダーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、グルコウロニダーゼ等の酵素。モノクロナール及びポリクロナール抗体およびそれらのフラグメント。ポリーL−リジン、ポリーD−リジン等のポリアミノ酸。Ｂ型肝炎ワクチン、マラリアワクチン、メラノーマワクチン、ＨＩＶ−１ワクチン等のワクチンおよび抗原。また、糖タンパクも含まれる。また、これらの生理活性物質と同様の生理活性を有する類似構造物質もこれに含まれる。
また、これらのタンパク質、ポリペプチドは、それらの天然源または遺伝子工学的処理を受けた細胞から単離されるか、あるいは種々の合成法を経て作り出されたものでも良い。
【００１７】
薬剤としては、特に限定されるものではないが、より好ましくは抗癌剤と抗真菌剤が挙げられる。
より具体的な抗癌剤としては、特に限定されるものではないが、例えばパクリタキセル、アドリアマイシン、ドキソルビシン、シスプラチン、ダウノマイシン、マイトマイシン、ビンクリスチン、エピルビシン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、アクラシノマイシン、イダマイシン、ブレオマイシン、ピラルビシン、ペプロマイシン、パンコマイシン、カンプトテシン等が挙げられる。
具体的な抗真菌剤としては、特に限定されるものではないが、例えばアムホテリシンB、ナイスタチン、フルシトシン、ミコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾールおよびペプチド性抗真菌剤が挙げられる。
また、これら生理活性物質には、例えば抗酸化作用、PAF阻害作用、抗炎症作用、抗菌作用等を有する、フラボノイド、テルペノイド、カルテノイド、サポニン、ステロイド、キノン、アントラキノン、キサントン、クマリン、アルカロイド、ポルフィリン、ポリフェノール等も含まれる。
【００１８】
本発明の生体関連物質の中間体は、下記式（２）で示される。
【化８】
0005273589.tif 000004
【００１９】
式中、Ｘは、群（Ｉ）、群（ＩＩ）で示される基である。
【化９】
0005273589.tif 000005
【化１０】
0005273589.tif 000006
【００２０】
生体関連物質のアミノ基と反応させる場合は、(a)、(b)、(d)、(f)、(h)、(i)、(k)で示される基が好ましく、生体関連物質のメルカプト基と反応させる場合は、(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(h)、(i),(k)で示される基が好ましく、生体関連物質の不飽和結合と反応させる場合は、(c)で示される基が好ましく、生体関連物質のカルボキシル基と反応させる場合は（ｃ）、(g)、(j)で示される基が好ましい。
【００２１】
群（Ｉ）、群（ＩＩ）におけるＺは、ポリアルキレングリコールオキシ基と反応性官能基との間のリンカーであり、共有結合であれば特に制限は無いが、好ましくはアルキレン基、及びエステル結合、ウレタン結合、アミド結合、エーテル結合、カーボネート結合、２級アミノ基を含んだアルキレン基等が挙げられる。アルキレン基として好ましいものは、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、イソプロピレン基、テトラメチレン基、ブチレン基、イソブチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基等が挙げられ、更に好ましくは下記(z1)のような構造が挙げられる。エステル結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記(z2)のような構造が挙げられる。アミド結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記(z3)のような構造が挙げられる。エーテル結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記(Z4)のような構造が挙げられる。ウレタン結合を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記(z5)のような構造が挙げられる。２級アミノ基を含んだアルキレン基として更に好ましいものは、下記(z6)のような構造が挙げられる。各式において、ｓは１〜６の整数であるが、好ましくはｓは１〜３の整数であり、更に好ましくは２〜３の整数である。
【００２２】
【化１１】
0005273589.tif 000007
Yは炭素数１〜１０のフッ素原子を含んでも良い炭化水素基であり、具体的にはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、第三ブチル基、ヘキシル基、ノニル基、ビニル基、フェニル基、ベンジル基、４−メチルフェニル基、トリフルオロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、４−（トリフルオロメトキシ）フェニル基等が挙げられるが、好ましくはメチル基、ビニル基、４−メチルフェニル基、２，２，２−トリフルオロエチル基の場合である。
式（２）で表される化合物において、Ｒ、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ、ｎ、ｍは前述と同じである。
群（ＩＩ）におけるZ、Ｒ、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ、ｎ、ｍも前述と同じである。
【００２３】
以下、前記した生体関連物質の残基Ｔと、この残基Ｔと化学結合を生成するポリアルキレングリコールオキシ基側の官能基Ｘとの関係を、表１、表２に示す。また、生体関連物質とＸとの反応によって生成する、ポリアルキレングリコールオキシ基と生体関連物質との化学結合の種類も表１、表２に示す。
【００２４】
【表１】
0005273589.tif 000008
【００２５】
【表２】
0005273589.tif 000009
【００２６】
表から明らかなように、本発明の修飾された生体関連物質においては、ポリアルキレングリコールオキシ基と生体関連物質とは、例えばアミド結合、二級アミノ基、ウレタン結合、チオエステル結合、スルフィド結合、ジスルフィド結合，チオカーボネート結合によって結合されている。
【００２７】
本発明の修飾された生体関連物質は、以下のようにして製造することができる。
（生体関連物質のアミノ基と本発明の中間体を反応させる場合）
生体関連物質のアミノ基を用いて修飾する場合、本発明の中間体(a), (b), (d), (f), (h),
(i)、(k) を用いる。更に好ましくは、(a), (b), (d),
(f)を用いる。反応の際には、生体関連物質に対し、本発明の中間体(a), (b), (d), (f), (h), (i)、(k)を等モル以上の使用割合にて反応させればよい。反応溶媒としては、反応に関与しない溶媒であれば特に限定されないが、タンパク質、ポリペプチドを反応させる場合は、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、トリス酸緩衝液、酢酸緩衝液、炭酸緩衝液などの緩衝液が好ましい溶媒として挙げられる。更には、タンパク質、ポリペプチドの活性を失うことなく、反応に関与しないアセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等の有機溶媒を添加しても良い。抗癌剤、抗真菌剤、リン脂質を反応させる場合は、前述の緩衝液のほかにもトルエン、ベンゼン、キシレン、アセトニトリル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルーメチルエーテル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、水、メタノール、エタノール、ｎ-プロパノール、２-プロパノール、ｎ−ブタノール等が好ましい溶媒として挙げられる。また、溶媒を用いなくとも良い。本発明の中間体と生体関連物質を反応溶媒に加える順番はどちらが先でも良い。反応温度は、生体関連物質の活性が失われない温度であれば特に限定されないが、タンパク質、ポリペプチドを反応させる場合は、好ましくは０〜４０℃であり、抗癌剤、抗真菌剤、リン脂質を反応させる場合は、好ましくは−２０〜１５０℃である。反応時間は０．５〜７２時間が好ましく、更に好ましくは、１〜２４時間である。反応に際しては、Ｎ，Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）等の縮合剤を用いても良い。この反応を行うことで、生体関連物質と本発明の中間体との間に共有結合が形成されるが、(a)、(k)を用いた場合はアミド結合、(b)を用いた場合は２級アミノ基、(d)、(h)、(i)を用いた場合はウレタン結合、(f)を用いた場合はシッフ塩基形成される。シッフ塩基が形成される場合は、これをシアノ水素化ホウ酸ナトリウム等の還元剤を用いて還元処理を行い、２級アミノ基を形成させても良い。反応後は、透析、塩析、限外ろ過、イオン交換クロマトグラフィー、電気泳動、抽出、再結晶、吸着処理、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、超臨界抽出等の精製手段にて精製してもよい。
【００２８】
（生体関連物質のメルカプト基と本発明の中間体を反応させる場合）
生体関連物質のメルカプト基を用いて修飾する場合、本発明の中間体(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(h)、(i)、(k)を用いるが、より好ましくは、(e)を用いる。反応溶媒、反応条件等は、アミノ基を用いる場合と同じである。反応に際しては、ヨウ素やＡＩＢＮの様なラジカル発生剤を用いてもよい。この反応を行うことで、生体関連物質と本発明の中間体との間に共有結合が形成されるが、(a)、（k）を用いる場合はチオエステル結合が、(d)、(h)、(i)を用いた場合はチオカーボネート結合が、(ｃ)を用いた場合はジスルフィド結合が、(b)、(e)、(f)を用いた場合はスルフィド結合が形成される。
【００２９】
（生体関連物質の不飽和結合と本発明の中間体を反応させる場合）
生体関連物質の不飽和結合を用いて修飾する場合、本発明の中間体(ｃ)を用いる。反応溶媒、反応条件等は、アミノ基を用いる場合と同じである。反応に際しては、ヨウ素やＡＩＢＮの様なラジカル発生剤を用いてもよい。この反応を行うことで、生体関連物質と本発明の中間体との間にスルフィド結合が形成される。
【００３０】
（生体関連物質のカルボキシル基と本発明の中間体を反応させる場合）
生体関連物質のカルボキシル基を用いて修飾する場合、本発明の中間体(c)、(g)、(j)を用いる。反応溶媒、反応条件等は、アミノ基を用いる場合と同じである。反応に際しては、適宜ＤＣＣ、ＥＤＣ等の縮合剤を用いても良い。この反応を行うことで、生体関連物質と本発明の中間体との間に共有結合が形成されるが、（ｃ）を用いる場合はチオエステル結合が、(g)、（ｊ）を用いる場合はアミド結合が形成される。
また、生体関連物質にアミノ基、メルカプト基、不飽和結合、カルボキシル基が無い場合も、適宜生体関連物質に反応性基を導入し、本発明の中間体を用いて修飾させることができる。
【００３１】
（中間体の製造）
本発明の中間体は、例えば次のようにして製造することができる。２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールの１級水酸基残基へ、アルキレンオキシドを０〜１０００モル重合させ、末端水酸基をベンジル基やt-Bu基で保護した後、酸性条件にて環状アセタール構造を脱保護し、新たに生成した２個の水酸基へアルキレンオキシドを１０〜１０００モル重合させ、末端をアルキルエーテル化する。次いで、ベンジル基やt-Bu基等の保護基を脱保護し、下記一般式（ｐ）の化合物を得ることができる。ｎが０の場合は、２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールの１級水酸基残基をベンジル基やt-Bu基で保護した後、酸性条件にて環状アセタール構造を脱保護し、新たに生成した２個の水酸基へアルキレンオキシドを１０〜１０００モル重合させ、末端をアルキルエーテル化する。次いで、ベンジル基やt-Bu基等の保護基を脱保護し、下記一般式（ｐ）の化合物を得ることができる。
【化１２】
0005273589.tif 000010
【００３２】
また、化合物（ｐ）は次のような方法でも製造することができる。２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールの１級水酸基をベンジル基やt-Bu基で保護した後、酸性条件にて環状アセタール構造を脱保護し、新たに生成した２個の水酸基へアルキレンオキシドを１０〜１０００モル重合させ、末端をアルキルエーテル化し、次いで、ベンジル基やt-Bu基等の保護基を脱保護し、ｎ＝０の化合物（ｐ）を得る。新たに生成した水酸基へアルキレンオキシドを０〜１０００モル重合させても得ることができる。
ｎが１〜３の場合は、２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールと２−ベンジルオキシエタノール（ｎ＝１）やジエチレングリコールベンジルエーテル（ｎ＝２）、トリエチレングリコールベンジルエーテル（ｎ＝３）をカップリングした後、酸性条件にて環状アセタール構造を脱保護し、新たに生成した２個の水酸基へアルキレンオキシドを１０〜１０００モル重合させ、末端をアルキルエーテル化する。次いで、ベンジル基やt-Bu基等の保護基を脱保護し、一般式（ｐ）の化合物を得ることができる。
【００３３】
この様に、アルキレンオキシド付加重合反応を用いることで、高収率で、かつカラム精製することなく、工業的に適した方法で、高純度の分岐型ポリアルキレングリコール誘導体を製造することができる。
【００３４】
このようにして得られた化合物（ｐ）の水酸基を用いて、群（Ｉ）、群（II）に示した各種反応性基へ変性させることで本発明の中間体を製造することができる。更には、生成した反応性基を用いて、各種生体関連物質を反応、修飾させ、本発明の修飾された生体関連物質を製造することができる。
また、群（Ｉ）、群（ＩＩ）の各官能基を有する中間体は、生体関連物質と反応させることができるが、場合によってはこれらの中間体を更に他の化合物と反応させて他の中間体を製造し、この他の中間体を生体関連物質と反応させることができる。例えば、群（ＩＩ）に属する（ｇ）（ｊ）（ｋ）の官能基を有する中間体を原料とし、群（Ｉ）の（ａ）（ｅ）（ｆ）の中間体を合成することができる。
【００３５】
２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールの１級水酸基残基へのアルキレンオキシド付加重合は次のような方法で製造することができる。トルエンもしくは無溶媒中、金属ナトリウムや金属カリウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム−ｔ−ブトキシド等のアルカリ条件下、オキシアルキレンを付加重合させて得ることができる。ｎ＝１〜３の場合はこのアルキレンオキシド付加重合工程は行わなくて良い。続くベンジルエーテル化は、次のような方法で製造することができる。
１）非プロトン性溶媒もしくは無溶媒中、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ触媒存在下、ベンジルクロリドまたはベンジルブロマイドと、２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールまたはそのアルキレンオキシド付加物を反応させて得ることができる。
２）非プロトン性溶媒もしくは無溶媒中、２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノール及びまたはそのアルキレンオキシド付加物の水酸基を金属ナトリウム、金属カリウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、カリウム−ｔ−ブトキシド等を用いてアルコラート化させ、塩基性条件下、ベンジルクロリドまたはベンジルブロマイドと反応させて得ることができる。
３）非プロトン性溶媒もしくは無溶媒中、２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノール及びまたはそのアルキレンオキシド付加物の水酸基をメタンスルホン酸クロリドやｐ−トルエンスルホン酸クロリド、２，２，２−トリフルオロエタンスルホン酸クロリド等で活性化させ、ベンジルアルコールのアルコラートと反応させて得ることができる。
４）非プロトン性溶媒もしくは無溶媒中、２−ベンジルオキシエタノール（ｎ＝１）やジエチレングリコールベンジルエーテル（ｎ＝２）、トリエチレングリコールベンジルエーテル（ｎ＝３）の水酸基をメタンスルホン酸クロリドやｐ−トルエンスルホン酸クロリド、２，２，２−トリフルオロエタンスルホン酸クロリド等で活性化させ、２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノールのアルコラートと反応させて得ることができる。
ベンジルエーテル化に続く環状アセタール構造の脱保護は、酢酸、リン酸、硫酸、塩酸等の酸にてｐH１〜４に調整した水溶液中で反応させ、式（９）の化合物を製造することができる。
【００３６】
環状アセタール構造の脱保護により新たに生成した2個の水酸基を有する下記式（９）のアルキレンオキシド付加重合は、特に制限されないが、以下の工程（Ｃ１）、工程（Ｃ２）を経ることで製造することができる。
【化１３】
0005273589.tif 000011
工程（Ｃ１）：式（９）の化合物をアルコラート化する方法としては、触媒として金属ナトリウム又は金属カリウムを用い、好適には金属ナトリウムを用い、触媒量を５〜５０モル％、１０〜５０℃で溶解させる
工程（Ｃ２）：５０〜１３０℃の反応温度でアルキレンオキシド付加重合する。
工程（Ｃ１）における触媒量については、５モル％未満だとアルキレンオキシドの重合反応速度が遅くなり、熱履歴が増して末端ビニルエーテル体等の不純物が生じるため、５モル％以上とすることが高品質の高分子量体を製造する上で有利である。触媒が５０モル％を超えると、アルコラート化反応の際に反応液の粘性が高まり、あるいは固化してしまい、攪拌効率が低下し、アルコラート化が促進されない傾向がある。また固化した場合はハンドリングがしにくくなる傾向があり、吸湿の原因となる。アルコラート化物が吸湿してしまうと、水分由来のポリアルキレングリコール体が生成し、医薬品用途としては望ましくない不純物として混入してしまう。
【００３７】
溶解時の温度が５０℃より高いと、分解反応がおき、ベンジルアルコールやグリセリンが生成する。ベンジルアルコールが生成した場合、目的物と同様にアルキレンオキシドとの付加重合が起き、目的物の０.５倍の分子量を有する低分子量不純物が生成する。ベンジルアルコール由来の低分子量不純物が生成した場合は、目的物と同様に次工程の水酸基のアルキルエーテル化工程、脱保護工程を経て官能基導入されるので、生体関連物質と反応可能な低分子量不純物となる。このような不純物は生体関連物質と反応し、製剤の物性を変化させる可能性がある。また、グリセリンが生成した場合も同様に、アルキレンオキシドとの付加重合が起き、目的物の１.５倍の分子量を有する高分子量不純物が生成する。この高分子量不純物は、ベンジル基がなく、末端水酸基がアルキルエーテル化されるのみであるため、官能基を有することはないが、このような不純物を含んだまま薬剤等との結合を行うと、得られる薬剤は不均一なものとなり、品質にバラツキが生ずる傾向がある。また高純度品が求められる医薬品用途には望ましくない。
１０℃より低い温度で溶解する場合、触媒量が５０モル％より多い場合と同様、アルコラート化反応の際に反応液の粘性が高まり、あるいは固化してしまい、ハンドリングしにくくなる傾向があり、また吸湿の原因となる。
【００３８】
反応溶媒については、トルエン、ベンゼン、キシレン、アセトニトリル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等の非プロトン性溶媒であれば特に制限はないが、トルエンあるいは無溶媒が好ましい。反応時間については、１〜２４時間が好ましい。１時間より短いと触媒が完全に溶解しない恐れがある。２４時間より長いと、前述の分解反応が起きる恐れがある。
工程（Ｃ２）における反応温度については、５０℃より低いと、重合反応の速度が遅く、熱履歴が増すことで、式（５）の化合物の品質が低下する傾向がある。また、１３０℃より高いと、重合中に末端のビニルエーテル化等の副反応が起き、目的物の品質が低下する傾向がある。重合中、分子量が大きくなるにつれ、反応液の粘度が上がるため、適宜非プロトン性溶剤、好適にはトルエンを加えても良い。
【００３９】
アルコラート化の工程における、もう一つの製造方法としては、下記工程（Ｃ３）が挙げられる。
工程（Ｃ３）：触媒としてナトリウムメトキシド、カリウム−ｔ−ブトキシド又はカリウムメトキシドを、更に好適にはナトリウムメトキシドを５〜５０モル％の量添加し、６０〜８０℃で反応させる。このとき、より交換反応がおきやすいように、減圧操作を行っても良い。
触媒量については前述の通りの理由で５〜５０モル％の量が好ましい。反応温度については、６０℃より低いと、交換反応の反応率が低下し、メタノール等のアルコールが残存し、アルキレンオキシドの付加重合を経て、目的物の０.５倍の分子量を有する不純物が生成する。８０℃より高いと分解反応が起きる。このアルコラート化反応は温度を上げる必要があり、分解反応がおきやすいため、反応時間は１〜３時間とするのが望ましい。１時間より短いとアルコラート化反応率が低くなる恐れがある。また３時間より長いと、分解反応が起きる恐れがある。反応溶媒においては、非プロトン性溶媒であれば特に制限はないが、好ましくはトルエン、あるいは無溶媒である。
【００４０】
続く末端のアルキルエーテル化は、下記に（１）、（２）いずれでもよい。
（１）ポリアルキレングリコール鎖末端をアルコラート化させ、ハロゲン化アルキルと反応させる方法
（２）ポリアルキレングリコール鎖末端水酸基をメタンスルホン酸クロリドやｐ−トルエンスルホン酸クロリド、２，２，２−トリフルオロエタンスルホン酸クロリド等で活性化させ、アルキルアルコールのアルコラートと反応させる方法
【００４１】
好適には（２）の方法であり、以下に、より詳細に説明する。
（２）の製造方法は下記工程（Ｂ１）、工程（Ｂ２）、工程（Ｂ３）よりなる。
工程（Ｂ１）：式（５）で示される化合物に対し、脱ハロゲン剤、式（６）で示される化合物を加え、２０〜６０℃において反応させ、式（７）の化合物を得る工程。このとき、各々の仕込みモル比は下記関係を満足する。
Ｖｃ≧３Ｖａ
Ｖｂ＞Ｖｃ
Va：式（５）で示される化合物のモル数
Vb：脱ハロゲン剤のモル数
Vc：式（６）で示される化合物のモル数
より好ましくは、
２０Ｖａ≧Ｖｃ≧３Ｖａ
４Ｖｃ＞Ｖｂ＞Ｖｃ
なる関係を満足する場合である。
ここでＶｃ＜３Ｖａであると、反応率が低くなりオキシアルキレン鎖末端に水酸基が残存してしまう。残存水酸基は後工程で官能基導入され、目的物と同分子量の多官能性不純物となる。このような多官能不純物が存在すると、生体関連物質との結合の際に架橋剤として働き、修飾された生体関連物質の純度が低下する傾向がある。またＶｂ≦Ｖｃとなると、反応の進行に伴って副生する酸を効率よくトラップできないために反応率が低くなり、オキシアルキレン鎖末端に水酸基が残存してしまう。また、Ｖｃ＞２０Ｖａ、Ｖｂ≧４Ｖｃである場合は、過剰量分が後工程へ混入し、副反応の原因となりうる。
【００４２】
【化１４】
0005273589.tif 000012
【化１５】
0005273589.tif 000013
【化１６】
0005273589.tif 000014
【００４３】
使用する脱ハロゲン剤としては、トリエチルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン等の有機塩基、もしくは炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カリウム等の無機塩基が挙げられるが、好ましい脱塩酸剤はトリエチルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン等の有機塩基である。
また、使用する式（６）の化合物においては、ＷがＣｌ、Ｂｒが好ましく、又Ｒ１はメチル基、フェニル基、ｐ-メチルフェニル基の場合が好ましいが、更に好適にはＷがＣｌでＲ１がメチル基であるメタンスルホニルクロリドが最も好ましい。
このときに使用する溶剤としては、非プロトン性溶剤であれば特に制限されないが、好ましくはトルエン、ベンゼン、キシレン、アセトニトリル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等が挙げられ、更に好ましくは、反応系中水分を共沸脱水除去できるトルエンである。反応時の使用溶剤量については、式（５）の化合物に対して０．５倍重量から１０倍重量が好ましい。式（５）の分子量が大きい場合は反応液の粘度が高くなり、反応率が低下するために溶剤で希釈したほうが好ましい。
反応温度については、特に制限されないが、副反応を抑制するためには６０℃以下が好ましく、また反応液の粘度上昇を抑制する意味で２０℃以上が好ましい。反応時間については１〜２４時間が好ましい。１時間より短いと、反応率が低い恐れがある。２４時間より長いと、副反応が起こる恐れがある。
【００４４】
反応に際しては、反応前に共沸脱水等の原料脱水操作を行っても良い。また、２，６−Di−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌ−ｐ−ｃｒｅｓｏｌ等の酸化防止剤を加えても良い。また、反応が進行し、式（７）の化合物が生成するのに伴い、塩が生成するが、反応終了後にそのまま次の工程に進んでも良いし、ろ過にて塩を除いても良いし、ろ過後に抽出、再結晶、吸着処理、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、超臨界抽出等の精製手段にて式（７）の化合物を精製してもよい。
【００４５】
工程（Ｂ２）：式（７）の化合物に、式（８）で示される化合物を加え、２０〜８０℃において反応させて式（４）の化合物を得る工程。このとき、各々の仕込みモル比は下記関係を満足する。
Ｖｄ＞Ｖｃ
Vd：式（８）で示される化合物のモル数
より好ましくは、
１０Ｖｃ＞Ｖｄ＞Ｖｃ
なる関係を満足する場合である。
【化１７】
0005273589.tif 000015
式（８）において、Ｒは前述の通りであり、Ｍはナトリウムまたはカリウムであり、好適にはナトリウムである。
ここで、Ｖｄ≦Ｖｃであると、アルキルエーテル化反応十分に進行せず、オキシアルキレン鎖末端にメシレート基のような反応性基が残存することになる。オキシアルキレン鎖末端に反応性基が残存した場合、前述同様、多官能化合物となり、生体関連物質との結合時に重大な副反応を引き起こす。また、Ｖｄ≧１０Ｖｃであった場合、過剰のアルコラートが後工程に混入し、副反応等を引き起こす原因となりうる。
この反応で使用する溶剤としては、前述の非プロトン性溶剤であれば特に制限されないが、好ましくはトルエンである。反応時の使用溶剤量については式（７）の化合物に対して０．５倍から１０倍量が好ましい。式（７）の分子量が大きい場合は反応液の粘度が高くなるために溶剤で希釈したほうが好ましい。
反応温度については、特に制限されないが、副反応の抑制するためには８０℃以下が好ましく、また反応液の粘性上昇を抑制する意味で２０℃以上が好ましい。反応時間については１〜２４時間が好ましい。１時間より短いと反応率が低い恐れがある。２４時間より長いと、副反応が起こる恐れがある。反応に際しては、反応前に共沸脱水等の原料脱水操作を行っても良い。
【００４６】
工程（Ｂ３）：反応液をろ過、又は反応液を１０重量％以上の濃度の無機塩水溶液で水洗する工程。
ここで、無機塩については、特に種類は制限されないが、好適には食塩である。濃度については、１０重量％より少ないと、目的物が水層へ移行し、著しく歩留まりを落とす。この水洗操作は複数回繰り返しても良い。この工程（Ｂ３）は、過剰に添加した原料や副生した塩等除去するためであり、この工程を省略すると、次に工程（Ｂ１）〜工程（Ｂ３）を再度行う場合は、副反応の原因となる恐れがある。次工程として脱ベンジル工程を行う場合は、これらの不純物が触媒毒となり、反応率に影響を及ぼす恐れがある。
また、オキシアルキレン鎖末端のアルキルエーテル化率を高めるため、工程（Ｂ１）〜工程（Ｂ３）を再度繰り返して行うことが好ましい。オキシアルキレン鎖末端のアルキルエーテル化率が低いと、前述のように多官能の不純物が生成する恐れがある。
このようにして得られた式（４）の化合物は、抽出、再結晶、吸着処理、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、超臨界抽出等の精製手段にて精製してもよい。
【００４７】
【化１８】
0005273589.tif 000016
続く脱ベンジル化による化合物（ｐ）の製造は、特に制限されないが、水素化還元触媒、水素供与体を用い、次の工程（Ａ）の水添反応にて製造することができる。
【００４８】
工程（Ａ）：
式（４）の化合物を、反応系中の水分量を１％以下の条件で水素化還元反応させる工程。反応系中の水分量が１％より多いと、ポリオキシアルキレン鎖の分解反応がおきる。分解生成したポリアルキレングリコールは水酸基を有するため、次工程にて官能基化され、反応性の低分子量不純物となる。このような反応性低分子量不純物は、前述のように生体関連物質と反応し、製剤の物性を変化させる傾向がある。
水素化還元触媒としては、パラジウムが好ましい。担体については特に制限されないが、好ましくはアルミナ、カーボンであり、更に好適にはカーボンである。パラジウム量としては、式（４）の化合物に対して１〜２０重量％が好ましい。１重量％より少ないと、脱保護反応率が低くなり、次工程での官能基化率が低くなる恐れがある。また、２０重量％より多いと、ポリアルキレングリコール鎖の分解反応が起き、前述の反応性低分子量体が副生する恐れがある。反応溶媒については、反応系中水分量が１％より少なくなれば特に制限されないが、好ましくはメタノール、エタノール、２−プロパノール等が挙げられ、更に好ましくはメタノールである。水素供与体については、特に制限されないが、水素ガス、シクロヘキセン、２−プロパノール等が挙げられる。反応温度については、４０℃以下が好ましく、４０℃より高いとポリアルキレングリコール鎖の分解反応が起こり、反応性低分子量体が生成する恐れがある。反応時間については、特に制限はなく、触媒量が多いと短時間で反応が終了し、触媒量が少ないと長時間要するが、１〜５時間が好ましい。１時間より短いと反応率が低い恐れがある。５時間より長いと、ポリアルキレングリコール鎖の分解反応が起こる恐れがある。
【００４９】
得られた式（ｐ）の化合物は、抽出、再結晶、吸着処理、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、超臨界抽出等の精製手段にて精製してもよい。
このようにして得られた化合物は、下記式（ｐ）で表わされ、実質的に２級水酸基を含まない、ポリアルキレングリコール誘導体である。
【化１９】
0005273589.tif 000017
（式中、Ｒはメチル基またはエチル基であり、OＡ1、OＡ2は炭素数２〜４のオキシアルキレン基であり、Ｒ、OＡ2は一分子中で互いに同一または異なっており、ｎおよびｍは前記オキシアルキレン基の平均付加モル数であり、ｎは０〜１０００を示し、ｍは１０〜１０００を示す。）
【００５０】
式（ｐ）の化合物は、実質的に２級水酸基を含まないので、次の官能基導入反応の反応率が高く、高純度のポリアルキレングリコール誘導体を得ることができる。２級水酸基がある場合、官能基導入の反応率が低く、修飾された生体関連物質の中間体純度が低くなり、薬剤等に不純物が混入し、問題となる可能性がある。
【００５１】
本発明の式（ｐ）の化合物は、式（ｐ）のポリアルキレングリコール誘導体のゲル浸透クロマトグラフィーより得られる、ピーク頂点に相当する分子量をMpとし、２位と３位のポリオキシアルキレン鎖末端において、アルキル基Ｒに含まれる残存水酸基の割合をＨｒｄとしたとき、
Ｈｒｄ／Mp×１００００００≦３
なる関係を満足する。より好ましくは、
Ｈｒｄ÷Mp×１００００００≦２
なる関係を満足する。
Mpは、ゲル浸透クロマトグラフィーに使用した展開溶媒などに起因するピークや、使用したカラムや装置に起因するベースラインの揺らぎによる擬似ピークを除いたピークの内、屈折率最大点の重量平均分子量を示す。本発明において、ゲル浸透クロマトグラフィーは、ＧＰＣシステムとしてはＳＨＯＤＥＸ
ＧＰＣ ＳＹＳＴＥＭ−１１を用い、下記条件にて測定を行った。
展開溶媒：テトラヒドロフラン
流速：１ml／min カラム：SHODEX
KF-801,
KF-803, KF-804 (I.D. 8mm X 30cm) カラム温度：４０℃ 検出器：RI X 8
サンプル量：1mg／g, 100ul
【００５２】
アルキル基Ｒに含まれる残存水酸基の割合Ｈｒｄは、脱保護する前の前駆体である式（４）の化合物をメシル化して測定する。以下にＲがメチル基の場合を例示する。
式（４）の化合物Ｖｅグラムに５Ｖｅグラムのトルエンを加え、常圧にて還流脱水を行う。４０℃に冷却後、式（４）の化合物１モルに対し、トリエチルアミン２０モルを加え、よく攪拌後、メタンスルホニルクロリド６モルを添加する。このとき、トルエン希釈、あるいは無希釈で滴下して添加するのが望ましい。そのまま４０℃で反応を３時間行い、ろ過にてメタンスルホン酸のトリエチルアミン塩を除き、ろ液に１０Ｖｅ〜２０Ｖｅグラムの酢酸エチルを加え、室温まで冷却後、ヘキサンを結晶が析出するまで徐々に加える。得られた結晶を濾取し、結晶に再度１０Ｖｅ〜２０Ｖｅグラムの酢酸エチルを加え、加温溶解し、室温まで冷却後、ヘキサンを結晶が析出するまで徐々に加える。結晶を濾取、乾燥し、得られた乾燥物２０ｍｇを重クロロホルムに溶解し、１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを測定する。ＴＭＳ基準ピークを０ｐｐｍとしたとき、３．３８ｐｐｍに検出されるオキシアルキレン鎖末端のメチル基ピーク積分値Ｍｍｅと、３．０８ｐｐｍに検出されるオキシアルキレン鎖末端に残存した水酸基がメシル化された際のメシル基ピークの積分値Ｍｍｓとしたとき、Ｈｒｄは以下の関係で示される。
Ｈｒｄ＝Ｍｍｓ／（Ｍｍｓ＋Ｍｍｅ）
Ｒがメチル基以外の基である場合は、適宜アルキル基の検出されるピーク位置を同定し、プロトン数を加味し、同様の式から求めることができる。
このようにして求めたＨｒｄが、
Ｈｒｄ／Mp×１００００００＞３
であった場合、２位と３位のポリオキシアルキレン鎖末端に水酸基が残存する不純物が多量に混入していることを意味する。このような不純物があった場合、後工程でポリオキシアルキレン鎖末端の水酸基も官能基導入され、多官能の不純物が生成することとなる。このような不純物は前述のように生体関連物質との結合の際、架橋剤として作用し、副反応を引き起こす恐れがある。
【００５３】
本発明の式（ｐ）の化合物は、ゲル浸透クロマトグラフィー測定を行った際、溶出開始点から溶出終了点までの全ピークにおける多分散度Mw/Mnが、
Mw/Mn≦１．０７
なる関係を満足する。より好ましくは、
Mw/Mn≦１．０５
を満足する場合である。
Mw/Mn＞１．０７である場合、前述の高分子量不純物や低分子量不純物が多いことを意味し、生体関連物質と結合させる際、副反応物が多くなり、純度不十分となる恐れがある。また、純度不十分となった場合、医薬品として副作用を引き起こす恐れがある。
【００５４】
本発明の式（ｐ）の化合物は、メタンスルホニルクロリドを反応させてメシル化物を得、重メタノール溶液で１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを得た際、３．１３ｐｐｍ付近に検出されるｎ＝０の場合のグリセロール骨格に直接結合した１位の水酸基から誘導されたメシル基由来のメチル基積分値Ｍ１と、３．１２付近ｐｐｍに検出されるポリアルキレングリコール鎖の水酸基から誘導されたメシル基由来のメチル基積分値Ｍ２が、
Ｍ２／（Ｍ１＋Ｍ２）×１００≦１０
なる関係を満足する。より好ましくは
Ｍ２／（Ｍ１＋Ｍ２）×１００≦８
なる関係を満足する。
【００５５】
以下にＭ１、Ｍ２の算出方法を例示する。
式（ｐ）の化合物Ｖｆグラムに４Ｖｆグラムのトルエンを加え、常圧にて還流脱水を行う。４０℃に冷却後、式（ｐ）の化合物１モルに対し、トリエチルアミン２０モルを加え、よく攪拌後、メタンスルホニルクロリド６モルを添加する。このとき、トルエン希釈、あるいは無希釈で滴下して添加するのが望ましい。そのまま４０℃で反応を３時間行い、ろ過にてメタンスルホン酸のトリエチルアミン塩を除き、ろ液に１０Ｖｆ〜２０Ｖｆグラムの酢酸エチルを加え、室温まで冷却後、ヘキサンを結晶が析出するまで徐々に加える。得られた結晶を濾取し、結晶に再度１０Ｖｆ〜２０Ｖｆグラムの酢酸エチルを加え、加温溶解し、室温まで冷却後、ヘキサンを結晶が析出するまで徐々に加える。結晶を濾取、乾燥し、得られた乾燥物２０ｍｇを重メタノールに溶解し、１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを測定する。ＴＭＳ基準ピークを０ｐｐｍとし、３．１３ｐｐｍに検出されるｎ＝０の場合のグリセロール骨格に直接結合した１位の水酸基から誘導されたメシル基由来のメチル基積分値Ｍ１とする。また、３．１２ｐｐｍに検出されるオキシアルキレン鎖末端、または分解生成したポリアルキレングリコールから誘導されたメシル基由来のメチル基積分値をＭ２として求めることができる。
このようにして求めたＭ１，Ｍ２から誘導される
Ｍ２／（Ｍ１＋Ｍ２）×１００＞１０の場合、下記に示す不純物が多量に混入するため、修飾された生体関連物質の純度が低下する傾向がある。
（Ａ）：式（９）の化合物のアルコラート化の際、分解反応が起き、生成したベンジルアルコールにアルキレンオキシドが付加重合し、後工程でベンジル基が脱保護されて生成する、化合物（ｐ）の０．５倍分子量の水酸基を有する不純物
（Ｂ）：（５）の化合物のアルキルエーテル化の際に生成する、２位、あるいは３位に水酸基が残存した化合物（ｐ）と同分子量の不純物
（Ｃ）：（４）の化合物の脱ベンジル化の際、ポリオキシアルキレン鎖が分解して生成する低分子量の水酸基を有する不純物
等の不純物に由来する、ポリオキシアルキレン鎖末端に水酸基を有する不純物の量が多いことを意味する。
【００５６】
本発明の脱ベンジル反応は、他の誘導体に広く適用できるものである。
より具体的には、下記工程（AA）を有することを特徴とする、式（１１）のポリエチレングリコール誘導体の製造方法である。
工程（ＡＡ）：式（１０）で示される化合物を、反応系中の水分量を１％以下の条件で水素化還元反応させる工程
【化２０】
0005273589.tif 000018
【化２１】
0005273589.tif 000019
【００５７】
（式中、Gは２〜４個の水酸基を有する化合物の残基であり、Ｒ２は炭素数１〜４の炭化水素基である。ｍ１、ｍ２、ｍ３はオキシエチレン基の平均付加モル数であり、下記関係を満たす。
０≦ｍ１≦１０００、
０≦ｍ２≦１０００、 ０≦ｍ３≦１０００、
１０≦ｍ１＋ｍ２＋ｍ３≦１０００
X1はアミノ基、カルボキシル基、あるいはそれらの保護基である。ｇ１、ｇ２、ｇ３は各々整数を表わし、下記関係式を満たす。
１≦ｇ１≦３、
０≦ｇ２、 ０≦ｇ３、
２≦ｇ１＋ｇ２＋ｇ３≦４ ）
【００５８】
Ｇにおける、より具体的な２〜４個の水酸基を有する化合物残基としては、エチレングリコール、グリセリン、ペンタエリスリトール、ジグリセリン等が挙げられ、より好ましくはエチレングリコール、グリセリンの場合である。
より具体的なＲ２としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、等が挙げられるが、好ましくはメチル基の場合である。
ｍ１、ｍ２、ｍ３については、
０≦ｍ１≦１０００、
０≦ｍ２≦１０００、 ０≦ｍ３≦１０００、
１０≦ｍ１＋ｍ２＋ｍ３≦１０００であれば特に制限されないが、より好ましくは、２０≦ｍ１＋ｍ２＋ｍ３≦１０００の場合であり、更に好ましくは、４０≦ｍ１＋ｍ２＋ｍ３≦１０００、の場合であり、最も好ましくは１００≦ｍ１＋ｍ２＋ｍ３≦１０００
の場合である。
具体的なＸ１としては、アミノ基、Ｂｏｃアミノ基、Ｆｍｏｃアミノ基、カルボキシル基等が挙げられ、より好ましくはＢｏｃアミノ基である。Ｂｏｃはｔ−ブトキシカルボニル基を示し、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基を示す。
【００５９】
反応系中の水分、触媒量、反応時間、溶媒等は前述の工程（Ａ）の通りである。水素化還元反応は、水素化還元触媒を用いて行うことができる。水素化還元触媒としてはパラジウムが好ましい。
【００６０】
本発明のアルキルエーテル化反応は、他の誘導体に広く適用できるものである。
より具体的には、下記に示す工程（ＢＢ１）〜工程（ＢＢ３）を行う式（１６）で示されるポリエチレングリコール誘導体の製造方法である。
工程（ＢB１）：式（１２）で示される化合物に対し、脱ハロゲン剤、式（１４）で示される化合物を加え、２０〜６０℃で反応させ、式（１３）の化合物を得る工程。このとき、各々の仕込みモル比は下記関係を満足する。
Ｖｊ≧１．５×Ｖｈ×ｇ５
Ｖｉ＞Ｖｊ
Vｈ：式（１２）で示される化合物のモル数
Vｉ：脱ハロゲン剤のモル数
Vｊ：式（１４）で示される化合物のモル数
工程（ＢＢ２）：式（１３）の化合物に、式（１５）で示される化合物を加え、２０〜８０℃において反応させて式（１６）の化合物を得る工程。このとき、各々の仕込みモル比は下記関係を満足する。
Ｖｋ＞Ｖｊ
Vｋ：式（１５）で示される化合物のモル数
【化２２】
0005273589.tif 000020
（式中、G、ｍ１、ｍ２、ｍ３、X1は上記に同じである。ｇ４、ｇ５、ｇ６は各々整数を表わし、下記関係式を満たす。
０≦ｇ４、
１≦ｇ５≦３、 ０≦ｇ６、
２≦ｇ４＋ｇ５＋ｇ６≦４）
【化２３】
0005273589.tif 000021
【化２４】
0005273589.tif 000022
（式中、G、ｍ１、ｍ２、ｍ３、X1は上記に同じである。ＷはＣｌ，Ｂｒ、Ｉから選択されるハロゲン原子である。Ｒ３は炭素数１〜１０の炭化水素基である。）
【化２５】
0005273589.tif 000023
（式中、Ｒ2は上記に同じである。Ｍはカリウムまたはナトリウムである。）
【化２６】
0005273589.tif 000024
（Ｇ，Ｒ２、ｍ１、ｍ２、ｍ３、Ｘ１については、上記に同じである。）
工程（ＢＢ３）：反応液をろ過、又は反応液を１０重量％以上の濃度の無機塩水溶液で水洗する工程。
【００６１】
式（１４）の化合物においては、ＷがＣｌ、Ｂｒが好ましく、又Ｒ３はメチル基、フェニル基、ｐ-メチルフェニル基の場合が好ましいが、更に好適にはＷがＣｌでＲ３がメチル基であるメタンスルホニルクロリドが最も好ましい。
無機塩については、特に種類は制限されないが、好適には食塩である。
また、前述の理由で、オキシエチレン鎖末端のアルキルエーテル化率を高めるため、工程（ＢＢ１）〜工程（ＢＢ３）を再度繰り返して行うことが好ましい。
反応系中の水分、触媒量、反応時間、溶媒等は、前述の工程（Ｂ１）〜（Ｂ３）の通りである。
【００６２】
化合物（ｐ）の反応経路を下記に示す。
【化２７】
0005273589.tif 000025
【００６３】
【化２８】
0005273589.tif 000026
【００６４】
続いて、脱ベンジル化反応により生成した化合物(p)の水酸基への反応性基の導入について説明する。
（(b)、(d)、(h)、(i) の製造方法）
化合物（ｐ）とトルエン、ベンゼン、キシレン、アセトニトリル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルーメチルエーテル、テトラヒドロフラン、クロロホルム、塩化メチレン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中、トリエチルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン等の有機塩基、もしくは炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カリウム等の無機塩基と下記一般式(b1)、(d1)、(h1)、（i1）で示される化合物のいずれかと反応させることで、それぞれ(b)、(d)、(h)、(i)を導入することができる。また、上記有機塩基、無機塩基は用いなくとも良い。有機塩基、無機塩基の使用割合は、特に制限はないが、化合物(p)に対して等モル以上が好ましい。また、有機塩基を溶媒として用いてもよい。(b1)、(d1)におけるWはCl、Br、Iより選択されるハロゲン原子であり、好ましくはClである。一般式(b1)、(d1)、(h1)、（i1）で示される化合物の使用割合は、特に制限はないが、化合物(p)に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルの範囲で反応させるのが好ましい。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。生成した化合物は、抽出、再結晶、吸着処理、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、超臨界抽出等の精製手段にて精製してもよい。
【００６５】
【化２９】
0005273589.tif 000027
（WはCl、Br、Iより選択されるハロゲン原子）
【００６６】
（(a)、(k)の製造方法）
化合物(p)を無水コハク酸や無水グルタル酸等のジカルボン酸無水物と反応させてカルボキシル体(k)を得た後、ＤＣＣ、ＥＤＣ等の縮合剤存在下、N-ヒドロキシコハク酸イミドと縮合反応させることで、(a)のコハク酸イミド体を得ることができる。化合物(p)とジカルボン酸無水物との反応は、上述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中で行う。ジカルボン酸無水物の使用割合は、特に制限はないが、化合物(p)に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。反応にはトリエチルアミン、ピリジン、ジメチルアミノピリジン等の有機塩基や炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化カリウム等の無機塩基を触媒として用いてもよい。触媒の使用割合は０．１〜５０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．５〜２０重量％である。このようにして生成したカルボキシル体(k)は、前述の精製手段にて精製してもよいし、そのまま次の縮合反応に用いても良い。
【００６７】
続く縮合反応も同様に上記非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中で行う。縮合剤としては、特に制限は無いが、好ましくはＤＣＣである。ＤＣＣの使用割合は化合物(p)に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。N-ヒドロキシコハク酸イミドの使用割合は化合物(p)に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
【００６８】
（(ｇ)、（ｊ）の製造方法）
化合物(p)を水、アセトニトリル等の溶媒中、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の無機塩基を触媒とし、アクリロニトリル等を付加させてニトリル体を得たあと、オートクレーブ中でニッケルやパラジウム触媒下でニトリル基の水添反応を行うことで(g)のアミン体を得ることができる。ニトリル体を得る際の無機塩基の使用割合は、特に制限はないが、化合物(p)に対して０．０１〜５０重量％が好ましい。アクリロニトリル等の使用割合は、特に制限はないが、化合物(p)の重量に対して０．５〜５倍重量が好ましく、更に好ましくは１〜４倍重量の範囲で反応させるのが、より好ましい。また、アクリロニトリルを溶媒として用いても良い。反応温度としては、−５０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、−２０〜６０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。続くニトリル体の水添反応における反応溶媒は、反応に関与しない溶媒であれば特に制限は無いが、好ましくはトルエンである。ニッケル、もしくはパラジウム触媒の使用割合は、特に制限は無いが、ニトリル体に対して０．０５〜３０重量％であり、好ましくは０．５〜２０重量％である。反応温度は２０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、５０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。水素圧は２〜１０ＭＰａが好ましく、更に好ましくは３〜８ＭＰａである。また、２量化を防ぐために反応系中にアンモニアを加えてもよい。アンモニアを加える場合のアンモニア圧は特に制限はないが、０．１〜１０ＭＰａであり、更に好ましくは０．３〜２ＭＰａである。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
【００６９】
上記アミン体(g)、（ｊ）は、(b)をアンモニア水と反応させることでも得ることができる。反応は、アンモニア水中で行い、アンモニアの濃度は特に制限は無いが、好ましくは１０％〜４０％の範囲である。アンモニア水の使用割合は、（ｂ）の重量に対して１〜３００倍であるのが好ましい。反応温度としては、０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜７２時間が好ましく、更に好ましくは１〜３６時間である。
また、アミン体(g)、（ｊ）は、オートクレーブ中、（ｂ）をアンモニアと反応させても得ることができる。反応溶剤については、特に制限はないが、好ましくはメタノール、エタノールが挙げられる。アンモニア量は（ｂ）に対して１０〜３００重量％が好ましく、更に好ましくは２０〜２００重量％である。反応温度としては、５０〜２００℃が好ましく、８０〜１５０℃が更に好ましい。反応時間については、１０分〜２４時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。
生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
【００７０】
（(ｅ)の製造方法）
更に、得られた(g)のアミンを、前述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中、無水マレイン酸と反応させてマレアミド体を得たあと、無水酢酸及び酢酸ナトリウムを触媒として、閉環反応させることで(e)のマレイミド体を得ることができる。マレアミド化反応における無水マレイン酸の使用割合は、特に制限はないが、化合物(p)に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１２０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成したマレアミド体は、前述の精製手段にて精製してもよいし、そのまま次の閉環反応に用いても良い。
【００７１】
続く閉環反応における反応溶媒は特に限定されないが、非プロトン性溶媒または無水酢酸が好ましい。酢酸ナトリウムの使用割合は、特に制限はないが、マレアミド体に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５０モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
【００７２】
上記マレイミド体は、下記一般式(e1)と、上述の(g)、(j)のアミンを反応させることでも得ることができる。反応は、前述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中で行い、化合物(e1)を(g)、(j)のアミンに対して等モル以上加えて反応させる。(e1)の使用割合は(g)、（ｊ）の等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜５モルである。反応温度としては、０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１２時間である。反応時は遮光してもよい。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
【００７３】
【化３０】
0005273589.tif 000028
（Qは炭素数１〜７の炭化水素基を示す。）
【００７４】
（(ｆ)の製造方法）
化合物(b)を(f1)のアセタール化合物と反応させてアセタール体を得た後、酸性条件にて加水分解を行うことで、アルデヒド体(f)を得ることができる。化合物(b)の製造は上述の通りである。アセタール化反応は前述の非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中、(b)と等モル以上、好ましくは等モル〜５０モルの(f1)を反応させることで得ることができる。(f1)は相当するアルコールから、金属ナトリウム、金属カリウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム、ナトリウムメトキシド、カリウム−ｔ−ブトキシド等を用いて調製することができる。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。
(f2)を用いる場合は、化合物(p)の水酸基を上述の方法でアルコラートとした後、前述の非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中、(f2)を等モル以上、好ましくは等モル〜１００モルの割合で反応を行うことでアセタール体を得ることができる。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、特に好ましくは３０分〜２４時間である。
(f3)を用いる場合は、(a), (b), (d), (h)、(i)もしくは(k) と(f3)を反応させることでアセタール体を得ることができる。(a),
(b), (d), (h)、(i)もしくは(k)の製造については前述の通りである。(f3)との反応では、溶媒は特に制限されないが、好ましくは前述の非プロトン性溶媒中で行う。(a), (b), (d), (h)、(i)もしくは(k)に対する(f3)の仕込み割合は、等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モル〜１０モルである。反応温度としては、−３０〜２００℃が好ましく、更に好ましくは、０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。(k)を用いる場合は、適宜ＤＣＣ、ＥＤＣ等の縮合剤を用いても良い。いずれのアセタール化反応も遮光して行っても良い。このようにして得られたアセタール体は前述の精製手段にて精製してもよいし、精製を行わずにそのまま次のアルデヒド化反応に用いても良い。
アルデヒド化は、アセタール体を０．１〜５０％の水溶液とし、酢酸、リン酸、硫酸、塩酸等の酸にてｐH１〜４に調整した水溶液中で加水分解させ、製造することができる。反応温度としては、−２０〜１００℃が好ましく、更に好ましくは、０〜８０℃である。反応時間は１０分〜２４時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜１０時間である。反応は遮光して行っても良い。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
【００７５】
【化３１】
0005273589.tif 000029
（式中、Ｒ1、Ｒ2は炭素数１〜３の炭化水素基であり、それぞれ同一であっても、異なっていても良い。また相互に環を形成していても良い。Ｍはナトリウムもしくはカリウムであり、WはCl、Br、Iより選択されるハロゲン原子であり、ｔは１〜５の整数である。）
【００７６】
（(ｃ)の製造方法）
（ｃ）のメルカプト体は、化合物（b）とチオウレア等のチア化剤と反応させることで得ることができる。化合物(b)の製造は前述の通りである。チア化反応は水、アルコール、アセトニトリル等の溶媒中もしくは無溶媒中で行う。チオウレアの使用割合は、化合物(b)に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モルから５０モルの範囲である。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜１５０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。反応後、生成したチアゾリウム塩をアルカリ加水分解し、メルカプト体を得ることができる。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
また、上記メルカプト体は、化合物（b）を下記化合物(c1)と反応させ、1級アミンにて分解させることでも得ることができる。(b)と(c1)との反応は、前述の非プロトン性溶媒中、もしくは無溶媒中で行う。(c1)の使用割合は、化合物(p)に対して等モル以上が好ましく、更に好ましくは等モルから５０モルの範囲である。反応温度としては、０〜３００℃が好ましく、更に好ましくは、２０〜８０℃である。反応時間は１０分〜４８時間が好ましく、更に好ましくは３０分〜２４時間である。続く１級アミンによるアルカリ分解は、前述の非プロトン性溶媒、もしくは無溶媒中で行う。用いる１級アミンとしては特に制限は無いが、好ましくはアンモニア、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、ブチルアミン、ペンチルアミン、ヘキシルアミン、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン、プロパノールアミン、ブタノールアミン等が挙げられる。当然、これらの1級アミンを溶媒として用いても良い。生成した化合物は前述の精製手段にて精製してもよい。
【００７７】
【化３２】
0005273589.tif 000030
【００７８】
本発明によれば、分岐型のポリアルキレングリコールオキシ基によって修飾された生体関連物質を得ることができる。この生体関連物質は、ポリアルキレングリコールオキシ基とのリンカー部分を除き、すべてエーテル結合で形成されるため、1本鎖に分解することなく、高い安定性が期待される。このため、分岐型のポリアルキレングリコールを、生体関連物質に修飾することで、生体内挙動が改善された生体関連物質を提供することができる。本発明の生体関連物質の中間体は、グリセリン骨格の１位の１級炭素に生体関連物質と結合可能な反応性基を有し、２位と３位にポリアルキレングリコール鎖を有する新規化合物である。
【実施例】
【００７９】
以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明する。なお、例中の化合物の分析、同定には1Ｈ-ＮＭＲおよびＧＰＣを用いた。
＜1Ｈ-ＮＭＲの分析方法＞1Ｈ-ＮＭＲ分析では、日本電子データム（株）製JNM-ECP400を用いた。ＮＭＲ測定値における積分値は理論値である。
（ＧＰＣの分析方法）
： ＧＰＣ分析では、ＧＰＣシステムとしてはSHODEX GPC SYSTEM-11を用い、下記条件にて測定を行った。
展開溶媒：テトラヒドロフラン
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ カラム：SHODEX KF-801, KF-803, KF-804 (I.D. 8mm X
30cm) カラム温度：４０℃ 検出器：RI X 8 サンプル量：1mg/g,
100ul
GPC測定値には、高分子量不純物と低分子量不純物を、溶出曲線の変曲点からベースラインに対して垂直に切って除いたメインピークでの解析値、及び溶出開始点から溶出終了点までのピーク全体での解析値を併記した。
Ｍｎは数平均分子量、Ｍｗは重量平均分子量、Ｍｐはピークトップ分子量を表す。
水分量の測定は、カールフィッシャー水分計（メトローム・シバタ製「７Ｓ８／３−２０型）を用い、カールフィッシャー試薬は、「ハイドラメール・コンポジット２」（シグマアルドリッチ製）を用いた。
【００８０】
（実施例１）
化合物（ｐ）の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１００００の場合）
(実施例１−１)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機を付した１０００ｍｌ丸底フラスコへ２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノール１３２．２ｇ(1.0mol)、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液２３１．４ｇ(1.2mol)、トルエン５００ｍｌを加え、窒素を吹き込みながらトルエンを1時間減圧還流させ、メタノールを留去した。この溶液を８０℃保ちながら、ベンジルクロリド１２６．６ｇ(1.0mol)を滴下漏斗を用いて、２時間かけて滴下させ、更に２時間反応させた。反応液を脱溶媒、蒸留精製(b.p. 93-95℃/266
Ｐａ)し、４−（ベンジルオキシメチル）―２，２−ジメチルー１，３−ジオキソランを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 1.36,
1.42 (3H, 3H,
s, C(CH3)2 )
3.45-3.57(2H,
m, CH2O-C(CH3)2 3.73-3.76(1H, m, CHO-C(CH3)2
4.03-4.07,
4.28-4.32(2H, m, CH2O-CH2Ph) 4.57(2H,
q, -CH2Ph) 
7.15-7.40(5H,
m, -CH2Ph) （Ｐｈはフェニル基を示す）
(実施例１−２)
１Lビーカーに、１−１で精製した４−（ベンジルオキシメチル）―２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン２２２ｇ(1.0mol)、エタノール２５０ｍｌ、蒸留水４００ｍｌを計りとり、リン酸でｐHを２に調整した。窒素を吹き込みながら、溶液を７０℃に加温し、１.５時間反応後、水酸化ナトリウムでｐHを７．０に調整し、吸着剤「キョーワード１０００」（協和化学工業株式会社製）にて塩を吸着処理し、脱溶剤を行い、３−ベンジルオキシー１，２−プロパンジオールを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.50-3.71(4H,
m, CH2OH
, CH2O-CH2Ph)
3.86-3.91(1H,
m, CHOH) 
4.54(2H, m, -CH2Ph)
7.27-7.38(5H, m,
-CH2Ph)
(実施例１−３)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機を付した３００ｍｌ丸底フラスコへ３−ベンジルオキシー１，２−プロパンジオール２７．３ｇ(0.15mol)、脱水トルエン１２７ｇ、金属ナトリウム０．９ｇ(39mmol：26mol%)を加え、窒素を吹き込みながら金属ナトリウムが溶解するまで室温で攪拌した。この溶液を５Lオートクレーブへ仕込み、系内を窒素置換後、１００℃に昇温し、１００〜１５０℃、１ＭＰａ以下の圧力でエチレンオキシド１４７３ｇ(33.5mol)を加えた後、更に１時間反応を続けた。減圧にて未反応のエチレンオキシドガスを除去後、６０℃に冷却して８５％リン酸水溶液にてｐHを７．５に調整し、下記化合物(p1)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.40-3.80(901H,
m, -CH2O
(CH2CH2O)mH, CHO(CH2CH2O)mH，CH2O
CH2Ph),
4.54(2H, s, -CH2Ph)
7.27-7.38(5H, m,
-CH2Ph)
ＧＰＣ分析；
〈メインピーク〉 数平均分子量(Mn)：9978 重量平均分子量(Mw)：10171 多分散度(Mw/Mn)：1.019 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１００４４
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：9865 重量平均分子量(Mw)：10114 
多分散度(Mw/Mn)：1.025 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１００４４
【００８１】
【化３３】
0005273589.tif 000031
【００８２】
(実施例１−４)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した５００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p1)を１００ｇ(10mmol)、トルエン３２０ｇを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン１０．１２ｇ(100mmol)、メタンスルホン酸クロリド６．８７ｇ(60mmol)を加え、４０℃にて６時間反応させた。反応液をろ過後、ろ液を温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した５００ｍｌ丸底フラスコへ移し、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液１９．３ｇ(100mmol)を加え、７０℃で６時間反応させた。続いて反応液へ吸着剤「キョーワード７００」（協和化学工業株式会社製）を２７ｇ加え、更に７０℃で１時間攪拌し、過剰のナトリウムメトキシドを吸着処理させた。反応液をろ過後、濾液を１Lビーカーへ仕込み、酢酸エチル３００ｇ、ヘキサン３５０ｇを加えて晶析を行った。析出した結晶を１Lビーカーへ濾取し、酢酸エチル４００ｇを加えて４０℃にて加温溶解後、ヘキサン３００ｇを加えて再度晶析を行い、析出した結晶を濾取、乾燥し、下記化合物(p2)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(901H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
，CH2O
CH2Ph
4.54(2H, s, -CH2Ph)
7.27-7.38(5H, m,
-CH2Ph)
ＧＰＣ分析；
〈メインピーク〉 数平均分子量(Mn)：10320 重量平均分子量(Mw)：10551 多分散度(Mw/Mn)：1.022 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10390
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：10128 重量平均分子量(Mw)： 10452
多分散度(Mw/Mn)：1.032 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10390
【００８３】
【化３４】
0005273589.tif 000032
【００８４】
(実施例１−５)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した５００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p２)を１５ｇ、５％パラジウムカーボン(５０％含水品)１５ｇを仕込み、窒素置換後、メタノール３００ｍｌ、シクロヘキセン１５０ｍｌを加えて昇温し、５２〜５５℃で緩やかに還流させ、５時間反応させた。反応液を室温まで冷却後、パラジウムカーボンを濾別し、濾液を濃縮した。濃縮液に酢酸エチル５０ｍｌ、ヘキサン５０ｍｌを加えて晶析させた。得られた結晶を濾取、乾燥し、下記化合物(p3)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(901H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
，CH2OH)
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：10069 重量平均分子量(Mw)：10227 多分散度(Mw/Mn)：1.016 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10351
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：9860 重量平均分子量(Mw)：10294 
多分散度(Mw/Mn)：1.044 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10351
【００８５】
【化３５】
0005273589.tif 000033
【００８６】
（実施例２）
メシレート体(群Ｉ（ｂ）、Y=CH3)の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１００００の場合）
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p3)を２０ｇ(2mmol)、トルエン７５ｇを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン１．０１２ｇ(10mmol)、メタンスルホン酸クロリド０．６８７ｇ(6mmol)を加え、４０℃にて６時間、更に５０℃で１時間反応させた。反応液をろ過後、ろ液をへ吸着剤「キョーワード１０００」（協和化学工業株式会社製）を１．０ｇ加え、更に６０℃で１時間攪拌し、副生成物のメタンスルホン酸のトリエチルアミン塩を吸着処理させた。反応液をろ過後、濾液を５００ｍｌビーカーへ仕込み、酢酸エチル１００ｍｌ、ヘキサン１５０ｍｌを加えて晶析を行った。析出した結晶を３００ｍｌビーカーへ濾取し、酢酸エチル１００ｍｌを加えて４０℃にて加温溶解後、ヘキサン１００ｍｌを加えて再度晶析を行い析出した結晶を濾取、乾燥し、下記メシレート体（p4）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.08(3H,
s, -SO3CH3)
3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80(899H,
m, -CH2O
(CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
4.27-4.44(2H,
m, -CH2O SO3CH3 )
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：10054 重量平均分子量(Mw)：10214 多分散度(Mw/Mn)：1.016 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10442
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：9778 重量平均分子量(Mw)：10252 
多分散度(Mw/Mn)：1.049 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10442
【００８７】
【化３６】
0005273589.tif 000034
【００８８】
（実施例３）
アミノ体(群II（ｊ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１００００の場合）
温度計、攪拌機、及び冷却管を付した１００ｍｌ丸底フラスコへ上記メシレート体(p4)を１ｇ(0.1mmol)、２８％アンモニア水５０ｍｌを仕込み、５０℃で３６時間攪拌した。液温を６５℃に上げ、２時間窒素を吹き込みながら、アンモニアを除去した。室温へ冷却後、食塩１０ｇを加え、クロロホルム１０ｍｌにて抽出を３回行った。得られたクロロホルム層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、クロロホルムを留去した。得られた濃縮液にヘキサンを１００ｍｌ加えて再沈殿を行い、析出した結晶を濾取、乾燥し、下記アミノ体（p5）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（D2O , 内部標準H2O=4.7ppm） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
2.93-3.11(2H,
m, -CH2NH2
)
3.40-3.80(899H, m, -CH2O (CH2CH2O)mCH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
) 
【００８９】
【化３７】
0005273589.tif 000035
【００９０】
（実施例４）
アルデヒド体(群I（ｆ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１００００の場合
(実施例４−１)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ上記メシレート体(p4)を１０ｇ(1mmol)、トルエン４０ｍｌを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去し、室温へ冷却した。一方、温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した１００ｍｌ丸底フラスコへ、３，３−ジエトキシー１−プロパノール１４．８ｇ(0.1mol)、トルエン４０ｍｌを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。室温へ冷却後、金属ナトリウム０．３６ｇ(15.6mmol)を加え、室温で溶解するまで2時間攪拌した。
金属ナトリウムの溶解を確認後、反応液を上記脱水を行った化合物(p4)の入った丸底フラスコへ投入し、１１０℃で１２時間反応させた。反応液を４０℃まで冷却後、イオン交換水０．３６ｇ(20mmol)を加えて３０分攪拌後、２０％食塩水５０ｍｌを加え、８５％リン酸を用いて水層のｐHを７．０に調整した。上層のトルエン層をとった後、水槽をクロロホルムにて２回抽出し、トルエン層とクロロホルム層をあわせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後、トルエンとクロロホルムを留去し、濃縮を行った。濃縮液に酢酸エチル５０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン５０ｍｌを加えて結晶を析出させた。得られた結晶を濾取し、酢酸エチル５０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン５０ｍｌを加えて再度結晶を析出させた。この再沈殿操作を３回繰り返したあと、得られた結晶を濾取、乾燥し、下記アセタール体(p６)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)：1.20(6H, ｔ, -CH2CH2CH（OCH2CH3）2) 1.88-1.92(2H, m, - CH2CH2CH（OCH2CH3）2 ) 3.38(6H, s, -CH3) 
3.40-3.80(907H,
m, -CH2O (CH2CH2O)mCH3
，CHO(CH2CH2O)mCH3，-CH2-O-CH2CH2CH（OCH2CH3）2 ) 
4.64(1H, ｔ, -CH2CH2CH（OCH2CH3）2 )
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：9898 重量平均分子量(Mw)：10076 多分散度(Mw/Mn)：1.018 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10215
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：9297 重量平均分子量(Mw)：9932 
多分散度(Mw/Mn)：1.068 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：10215
【００９１】
【化３８】
0005273589.tif 000036
【００９２】
(実施例４−２)
得られたアセタール体(p6)の４ｇを２００ｍｌビーカーへはかりとり、イオン交換水８０ｇを加えて結晶を溶解後、８５％リン酸を用いてｐHを１．５へ調整し、室温で２時間攪拌した。その後、食塩１６ｇを加えて溶解させ、３０％水酸化ナトリウム水溶液にてｐHを７．０へ調整し、クロロホルム抽出を行った。得れたクロロホルム層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後、クロロホルムを留去し、濃縮を行った。濃縮液にトルエン３０ｍｌ、酢酸エチル３０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン６０ｍｌを加えて結晶を析出させ、濾取した。得られた結晶を２００ｍｌビーカーへ計りとり、トルエン３０ｍｌ、酢酸エチル３０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン６０ｍｌを加えて結晶を再度析出させ、濾取し、乾燥し、下記アルデヒド体（ｐ7）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 2.65(2H,
m, CH2COH)
3.38(6H, s, -CH3) 
3.40-3.80(903H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m,
CHO(CH2CH2O)m，CH2OCH2CH2COH
9.78(1H, m, CH2COH)
【００９３】
【化３９】
0005273589.tif 000037
【００９４】
（実施例５）
１００ｍMリン酸２水素ナトリウム溶液５０ｍｌ中へ、シアノトリヒドロほう酸ナトリウム６３ｍｇ（２０ｍM）を加えて溶解させた。この溶液１ｍｌへOVA（ALBUMIN, CHIKEN EGG 分子量約４万）５．０ｍｇ(0.1μmol)、アルデヒド体(p7)１００ｍｇを加え、室温で１２時間攪拌した。反応液をイオン交換水にて５倍希釈し、この希釈液２０μｌとトリスＳＤＳサンプル処理液２０μｌを混合後、沸騰水浴中で２分３０秒加温した。この処理液をドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミドゲル電気泳動（４−２０％）分析した。染色はＣＢＢ染色で行った。結果を図１に示す。（A）はOVA＋アルデヒド体、（B）はOVAのみ、（C）はマーカー（Bio-rad Broad range
SDS-PAGE standards）であり、上から分子量 201000, 130000, 94000, 48600, 36400, 29800, 20600, 6600 のバンドを示す。
これらの結果、（Ａ）において、原料ＯＶＡのバンドは残存せず、ＯＶＡ１分子あたり１〜１５個所の化合物(p6)の修飾を受けた場合に相当する分子量のバンドが観察された。
【００９５】
（実施例６）
本発明の化合物の安定性を評価するため、以下のモデル化合物を合成し、安定性の比較を行った。
(実施例６−１) シアノトリヒドロほう酸ナトリウム６３ｍｇ（２０ｍM）をメタノール５０ｍｌへ溶解させた。この溶液２ｍｌ中へ、アルデヒド体(p7)０．５ｇ、ｎ−ブチルアミン５０μｌを加えて室温で１８時間攪拌した。メタノールを留去、濃縮を行った後、濃縮液にクロロホルム２０ｍｌ、２０％食塩水２０ｍｌを加えて抽出を行い、この抽出操作を３回繰り返した。得られたクロロホルム層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後、濃縮した。濃縮液に酢酸エチル２０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン３０ｍｌを加えて結晶を析出させ、濾取した。得られた結晶を１００ｍｌビーカーへとり、酢酸エチル２０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン２０ｍｌを加えて結晶を再度析出させ、濾取、乾燥し、下記化合物（ｐ８）を得た。
【００９６】
【化４０】
0005273589.tif 000038
【００９７】
（実施例６−2) 安定性評価(加速劣化試験)
合成した上記化合物（ｐ８）１２ｍｇを計りとり、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐH＝８．８）１ｍｌを加えて、７５℃水浴中にて１２時間攪拌した。開始前と攪拌終了後、GPC測定を行った。結果を図２、３に示す。図２は化合物（ｐ８）の開始前サンプルのGPCチャート、図３は（ｐ８）の加温後サンプルのGPCチャートである。
【００９８】
(比較例１)
Shearwater
Polymers, Inc. より購入した分子量約１０７００の下記化合物(p9)を１０７ｍｇ計りとり、ｎ−ブチルアミン１０μｌとクロロホルム１ｍｌを加えて室温で１８時間攪拌した。クロロホルムを留去、濃縮し、濃縮液に酢酸エチル２０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン３０ｍｌを加えて結晶を析出させ、濾取した。得られた結晶を１００ｍｌビーカーへとり、酢酸エチル２０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン２０ｍｌを加えて結晶を再度析出させ、濾取、乾燥し、下記化合物(p10)を得た。
【００９９】
【化４１】
0005273589.tif 000039
【０１００】
合成した上記化合物（ｐ１０）を用い、実施例６−２と同じ操作を行い、GPC測定を行った。結果を図４、５に示す。図４は化合物（ｐ１０）の開始前サンプルのGPCチャート、図５は（ｐ１０）の加温後サンプルのGPCチャートである。
図２、３の結果から、本発明の化合物は加水分解は起きず、高い安定性を示すことが示された。一方、図４、５の結果から、比較例の（ｐ１０）では１／２分子量体が約２５％生成しており、ウレタン結合が分解し、分岐型ポリエチレングリコールが一本鎖に分解していることが示された。
【０１０１】
（実施例７）
化合物（ｐ）の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１９０００の場合）
(実施例７−１)
実施例１−３と同じ操作にて、エチレンオキシド２８５０ｇ(64.8mol)を仕込み、下記化合物(p11)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.40-3.80(1733H,
m, -CH2O
(CH2CH2O)mH, CHO(CH2CH2O)mH，CH2OCH2 Ph) 4.54(2H, ｓ,
-CH2Ph)
7.27-7.38(5H,
m, -CH2Ph) 
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：18521 重量平均分子量(Mw)：18758
多分散度(Mw/Mn)：1.013 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：19108
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：18403 重量平均分子量(Mw)：18913
多分散度(Mw/Mn)：1.028 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：19108
【０１０２】
【化４２】
0005273589.tif 000040
【０１０３】
(実施例７−２)
実施例１−４と同じ操作にて、(p11)を１００ｇ(5mmol)、トルエン３２０ｇ、トリエチルアミン５．０６ｇ(50mmol)、メタンスルホン酸クロリド３．４４ｇ(30mmol)、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液９．６５ｇ(50mmol)を用いて、下記化合物(p12)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(1733H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
，CH2OCH2Ph)
4.54(2H, s, -CH2Ph)
7.27-7.38(5H, m,
-CH2Ph)
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：18365 重量平均分子量(Mw)：18602 多分散度(Mw/Mn)：1.013 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：18992
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：18290 重量平均分子量(Mw)：18861 
多分散度(Mw/Mn)：1.031 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：18992
【０１０４】
【化４３】
0005273589.tif 000041
【０１０５】
(実施例７−３)
実施例１−５と同じ操作にて、下記化合物(p13)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(1733H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
，CH2OH)
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：18395 重量平均分子量(Mw)：18632 多分散度(Mw/Mn)：1.013 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：18989
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：18146 重量平均分子量(Mw)：18750
多分散度(Mw/Mn)：1.033 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：18989
【０１０６】
【化４４】
0005273589.tif 000042
【０１０７】
（実施例８）
カルボキシル体(群II(k)
)、及びコハク酸イミドエステル体(群Ｉ（a）
)の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１９０００の場合
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p13)を２０ｇ(1.0mmol)、酢酸ナトリウム５０ｍｇ、トルエン１００ｍｌを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。反応液へ無水グルタル酸１３７ｍｇ(1.2mmol)を加え、１０５℃で１２時間反応させた。反応終了後、反応液を４０℃に冷却し、N-ヒドロキシコハク酸イミド１５０ｍｇ(1.3mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド２８９ｍｇ(1.4mmol)を加え、そのまま６時間反応させた。反応液をろ過して析出したウレアを除去し、ろ液へ酢酸エチル５０ｍｌを加えた後、ヘキサン１５０ｍｌを加えて結晶を析出させた。析出した結晶をろ取し、結晶を酢酸エチル１００ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン１００ｍｌを加えて再度結晶化させた。析出した結晶をろ取、乾燥し、下記コハク酸イミドエステル体(p14)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 2.07(2H,
m, -OCOCH2CH2CH2COON-)
2.50(2H, t, -OCOCH2CH2CH2COON-)
2.72(2H, t, -OCOCH2CH2CH2COON-)
2.84(4H, s,
succinimide) 3.38(6H, s, -CH3) 3.40-3.80(1731H,
m, -CH2O
(CH2CH2O)m
CH3, CHO(CH2CH2O)mCH3
) 
4.10-4.30(2H,
m, -CH2OCOCH2CH2CH2COON-)
【０１０８】
【化４５】
0005273589.tif 000043
【０１０９】
（実施例９）
ｐ−ニトロフェニルカーボネート体(群Ｉ（ｄ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１９０００の場合
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p13)を２０ｇ(1.0mmol)、トルエン１００ｍｌを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。反応液を８０℃に降温し、トリエチルアミン、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメートを加え、８０℃で５時間反応させた。反応終了後、反応液をろ過し、ろ液へ酢酸エチル１００ｍｌを加えた後、ヘキサン２００ｍｌを加えて結晶を析出させた。析出した結晶をろ取し、結晶を酢酸エチル１００ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン１００ｍｌを加えて再度結晶化させた。この晶析操作を合計５回繰り返した。ろ取した結晶を乾燥し、下記ｐ−ニトロフェニルカーボネート体(p15)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(1731H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
) 
4.30-4.50(2H,
m, -CH2OCOOPhNO2) 7.39(2H, d, -Ph
NO2)
8.28 (2H, d, -Ph
NO2) 
【０１１０】
【化４６】
0005273589.tif 000044
【０１１１】
（実施例１０）
化合物（ｐ）の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝約15、分子量約１９５００の場合）
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した５００ｍｌ丸底フラスコへ実施例７−３で得られた化合物(p13)を６７ｇ(3.5mmol)、トルエン４００ｍｌを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。反応液を４０℃に降温し、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液０．４１ｇ(2.1mmol)を加え、７０℃に昇温し、窒素バブリングを行いながらトルエンーメタノール混合液約２００ｍｌを留去した。この溶液を５Lオートクレーブへ仕込み、系内を窒素置換後、１００℃に昇温し、１００〜１５０℃、１ＭＰａ以下の圧力でエチレンオキシド９．２ｇ(0.2mol)を加えた後、更に３時間反応を続けた。減圧にて未反応のエチレンオキシドガス、及びトルエンを除去後、６０℃に冷却して８５％リン酸水溶液にてｐHを７．５に調整し、下記化合物(p16)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(1853H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
-CH2O
(CH2CH2O)nH)
ＧＰＣ分析； (メインピーク) 数平均分子量(Mn)：19153 重量平均分子量(Mw)：19462 
多分散度(Mw/Mn)：1.016 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９６１２
（ピーク全体）
数平均分子量(Mn)：１８４７３ 重量平均分子量(Mw)：１９０８７
多分散度(Mw/Mn)：１．０３３ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９６１２
【０１１２】
【化４７】
0005273589.tif 000045
【０１１３】
（実施例１１）
メシレート体(群Ｉ（ｂ）、Y=CH3)の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝約１５、分子量約１９５００の場合）
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p16)を１０ｇ(0.5mmol)、トルエン７５ｇを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン０．２５３ｇ(2.5mmol)、メタンスルホン酸クロリド０．１７２ｇ(1.5mmol)を加え、４０℃にて６時間、更に５０℃で１時間反応させた。反応液をろ過後、ろ液へ吸着剤「キョーワード１０００」を０．５ｇ加え、６０℃で１時間攪拌し、副生成物のメタンスルホン酸のトリエチルアミン塩を吸着処理させた。反応液をろ過後、濾液を３００ｍｌビーカーへ仕込み、酢酸エチル５０ｍｌ、ヘキサン７０ｍｌを加えて晶析を行った。析出した結晶を３００ｍｌビーカーへ濾取し、酢酸エチル５０ｍｌを加えて４０℃にて加温溶解後、ヘキサン５０ｍｌを加えて再度晶析を行い、析出した結晶を濾取、乾燥し、下記メシレート体（p17）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.08(3H,
s, -SO3CH3)
3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80(1851H, m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
-CH2O
(CH2CH2O)nSOOCH3)
4.37-4.39(2H, m, -CH2O(CH2CH2O)n-1CH2CH2O
SOOCH3)
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：19253 重量平均分子量(Mw)：19601 
多分散度(Mw/Mn)：1.018 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９７７０
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：18400 重量平均分子量(Mw)：19140
多分散度(Mw/Mn)：1.040 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９７７０
【０１１４】
【化４８】
0005273589.tif 000046
【０１１５】
（実施例１２）
アルデヒド体(群Ｉ（ｆ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝約１５、分子量約１９５００の場合
(実施例１２−１)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ上記メシレート体(p17)を１０ｇ(0.5mmol)、トルエン４０ｍｌを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去し、室温へ冷却した。一方、温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した１００ｍｌ丸底フラスコへ、３，３−ジエトキシー１−プロパノール７．４ｇ(50mmol)、トルエン４０ｍｌを仕込み、加熱還流させ、水分を共沸除去した。室温へ冷却後、金属ナトリウム０．１７ｇ(7.4mmol)を加え、室温で溶解するまで2時間攪拌した。金属ナトリウムの溶解を確認後、反応液を上記脱水を行った化合物(p17)の入った丸底フラスコへ投入し、７０℃で４時間反応させた。反応液を４０℃まで冷却後、イオン交換水０．１８ｇ(10mmol)を加えて３０分攪拌後、２０％食塩水３０ｍｌを加え、８５％リン酸を用いて水層のｐHを７．０に調整した。上層のトルエン層をとった後、水槽をクロロホルムにて２回抽出し、トルエン層とクロロホルム層をあわせて硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後、トルエンとクロロホルムを留去し、濃縮を行った。濃縮液に酢酸エチル５０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン５０ｍｌを加えて結晶を析出させた。得られた結晶を濾取し、酢酸エチル５０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン５０ｍｌを加えて再度結晶を析出させた。この再沈殿操作を３回繰り返したあと、得られた結晶を濾取、乾燥し、下記アセタール体(p１８)を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)：1.20(6H,
ｔ, -CH2CH2CH（OCH2CH3）2) 
1.88-1.92(2H,
m, - CH2CH2CH（OCH2CH3）2 ) 3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80(1857H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
-CH2O
(CH2CH2O)nCH2CH2CH（OCH2CH3）2 ) 4.64(1H, ｔ, -CH2CH2CH（OCH2CH3）2 )
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：19318 重量平均分子量(Mw)：19699 多分散度(Mw/Mn)：1.020 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９７７０
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：18302 重量平均分子量(Mw)：19168
多分散度(Mw/Mn)：1.047 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９７７０
【０１１６】
【化４９】
0005273589.tif 000047
【０１１７】
(実施例１２−２)
得られたアセタール体(p18)の２ｇを１００ｍｌビーカーへはかりとり、イオン交換水４０ｇを加えて結晶を溶解後、８５％リン酸を用いてｐHを１．５へ調整し、室温で２時間攪拌した。その後、食塩８ｇを加えて溶解させ、３０％水酸化ナトリウム水溶液にてｐHを７．０へ調整し、クロロホルム抽出を３回行った。得られたクロロホルム層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後、クロロホルムを留去し、濃縮を行った。濃縮液にトルエン３０ｍｌ、酢酸エチル３０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン６０ｍｌを加えて結晶を析出させ、濾取した。得られた結晶を２００ｍｌビーカーへ計りとり、トルエン３０ｍｌ、酢酸エチル３０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン６０ｍｌを加えて結晶を再度析出させ、濾取、乾燥し、下記アルデヒド体（ｐ１９）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 2.66-2.69(2H,
m, CH2COH)
3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80(1855H, m, -CH2O
(CH2CH2O)m
CH3
, CHO(CH2CH2O)mCH3
-CH2O
(CH2CH2O)nCH2CH2COH)
9.79(1H, t,
-CH2CH2COH ) 
【０１１８】
【化５０】
0005273589.tif 000048
【０１１９】
（実施例１３）
メシレート体(群Ｉ（ｂ）、Y=CH3)の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１９０００の場合）
化合物（ｐ１３）を原料とし、実施例２と同様の方法にて、下記メシレート体（ｐ２０）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.08(3H,
s, -SO3CH3)
3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80(1731H, m, -CH2O
(CH2CH2O)m
CH3, CHO(CH2CH2O)mCH3
) 4.27-4.44(2H,
m, -CH2O
SO3CH3
) 
ＧＰＣ分析； (メインピーク) 
数平均分子量(Mn)：18435 重量平均分子量(Mw)：18682 多分散度(Mw/Mn)：1.013 ピークトップ分子量(Mp)：１８７４０
(ピーク全体) 数平均分子量(Mn)：18081 重量平均分子量(Mw)：18721 多分散度(Mw/Mn)：1.035 ピークトップ分子量(Mp)：１８７４０
【０１２０】
【化５１】
0005273589.tif 000049
【０１２１】
（実施例１４）
アミノ体(群II（ｊ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１９０００の場合）
化合物（ｐ２０）を原料とし、実施例３と同様の方法にて下記アミノ体（ｐ２１）を合成した。
1Ｈ−ＮＭＲ（D2O , 内部標準H2O=4.7ppm） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
2.93-3.11(2H,
m, -CH2NH2 ) 3.40-3.80(1731H, m, -CH2O
(CH2CH2O)mCH3, CHO(CH2CH2O)mCH3
) 
【０１２２】
【化５２】
0005273589.tif 000050
【０１２３】
（実施例１５）
マレイミド体(群I（ｅ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約１９０００の場合
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した１００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p２１)を７．５ｇ(0.35mmol)、酢酸エチル３５ｍｌ、トリエチルアミン７３μｌを仕込み、４５℃にて加温溶解させた。この溶液へN-Succinimidyl
3-maleimidopropionate０．１４ｇ(0.525mmol)を加え、４５℃で４時間反応させた。反応終了後、吸着剤「キョーワード７００」を０．５ｇ、「キョーワード１０００」０．５ｇを加え、４５℃で更に１時間攪拌した。反応液をろ過し、濾液にヘキサン５０ｍｌを加えて結晶を析出させ、濾取した。得られた結晶を２００ｍｌビーカーへ計りとり、酢酸エチル５０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサン５０ｍｌを加えて結晶を再度析出させ、濾取、乾燥し、下記マレイミド体（ｐ２２）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 2.51(2H,
t, NHCOCH2CH2)
3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80(1735H, m, -CH2O
(CH2CH2O)m
CH3, 
CHO(CH2CH2O)mCH3 CH2NHCOCH2CH2)
6.69(2H,
s, CH=CH )
6.86(1H, t, CH2NHCOCH2CH2)
ＧＰＣ分析；〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：18425 重量平均分子量(Mw)：18672 多分散度(Mw/Mn)：1.013 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１８７４２
（ピーク全体）
数平均分子量(Mn)：17924 重量平均分子量(Mw)：19086
多分散度(Mw/Mn)：1.065 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１８７４２
【０１２４】
【化５３】
0005273589.tif 000051
【０１２５】
(実施例１６) 化合物（ｐ）の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約２００００、約45000の合成）
(実施例１６−１)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機を付した１０００ｍｌ丸底フラスコへ２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン−４−メタノール１３２．２ｇ(1.0mol)、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液を２０２．５ｇ(1.05mol)、トルエン５００ｍｌを加え、窒素を吹き込みながらトルエンを1時間減圧還流させ、メタノールを留去した。この溶液を８０℃保ちながら、ベンジルクロリド１２６．６ｇ(1.0mol)を滴下漏斗を用いて、２時間かけて滴下させ、更に２時間反応させた。反応後、温度を60℃とし、キョーワード６００を１０ｇを加えて1時間攪拌した。反応液をろ過後、脱溶媒、蒸留精製(b.p.
93-95℃/266
Ｐａ)し、４−（ベンジルオキシメチル）―２，２−ジメチルー１，３−ジオキソランを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 1.36,
1.42 (3H, 3H,
s, C(CH3)2 )
3.45-3.57(2H,
m, CH2O-C(CH3)2 3.73-3.76(1H, m, CHO-C(CH3)2
4.03-4.07,
4.28-4.32(2H, m, CH2O-CH2Ph) 4.57(2H,
q, -CH2Ph) 
7.15-7.40(5H,
m, -CH2Ph) （Ｐｈはフェニル基を示す）
(実施例１６−２)
４−（ベンジルオキシメチル）―２，２−ジメチルー１，３−ジオキソラン２２２ｇ(1.0mol)、蒸留水４００ｇを加えて、リン酸でｐHを２に調整し、窒素を吹き込みながら、溶液を７０℃に加温し、２時間反応後、水酸化ナトリウムでｐHを７．０に調整した。クロロホルム１Lを仕込んで抽出後、クロロホルム層を硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮を行った後、濃縮液をろ過して塩を取り除き、３−ベンジルオキシー１，２−プロパンジオールを得た。このＮＭＲデータは実施例1−2と同じである。
(実施例１６−３)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、減圧ラインを付した３００ｍｌ丸底フラスコへ３−ベンジルオキシー１，２−プロパンジオール２７．３ｇ(0.15mol)、脱水トルエン２００ｇ、金属ナトリウム０．７７ｇ(33.4mmol：22.3mol%)を加え、窒素を吹き込みながら温度を35℃まで上げ、金属ナトリウムを溶解した。この溶液を事前に十分乾燥した５Lオートクレーブへ仕込み、系内を窒素置換後、１００℃に昇温し、１００〜１５０℃、１ＭＰａ以下の圧力でエチレンオキシド３０９０ｇを圧入した後、更に１．５時間反応を続けた。減圧にて未反応のエチレンオキシドガス、トルエンを留去後、70℃に冷却し、釜内から２.0ｋｇを抜き取り、抜いた反応液を８５％リン酸水溶液にてｐHを７．５に調整し、下記化合物（ｐ２３）を得た。
【０１２６】
【化５４】
0005273589.tif 000052
【０１２７】
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.40-3.80(1773H, m, -CH2O
(CH2CH2O)mH, CHO(CH2CH2O)mH,
CH2OCH2Ph 4.54(2H, s, -CH2Ph) 7.27-7.38(5H,
m,
-CH2Ph)
ＧＰＣ分析；
〈メインピーク〉 数平均分子量(Mn)：１８９２０ 重量平均分子量(Mw)：１９１５４ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１２ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９６３９
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：１８７７７ 重量平均分子量(Mw)：１９０８６ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１７ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９６３９
【０１２８】
(実施例１６−４)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２Ｌ丸底フラスコへ上記化合物(p２３)を２００ｇ(10mmol)、トルエン１０００ｇを仕込み、加熱還流させ、トルエン２００ｇと水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン１０．１２ｇ(100mmol)を加えて40℃に加温、メタンスルホニルクロリド６．８７ｇ(60mmol)を滴下し、４０℃にて３時間反応させた。反応終了後、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液１９．２８ｇ(100mmol)を反応液に加え、４０℃で３時間反応させた。反応液を４０℃に保ちながら減圧し、メタノール／トルエン混合液を約２００ｇ留去した後、ろ過にて塩を除去した。ろ液をにトルエン５００ｇを加え、温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２L丸底フラスコへ移し、加熱還流させ、トルエン２００ｇと水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン１０．１２ｇ(100mmol)を加えて40℃に加温、メタンスルホニルクロリド８．８９ｇ(60mmol)を再度滴下し、４０℃にて３時間反応させた。反応終了後、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液１９．２８ｇ(100mmol)を反応液に加え、４０℃で３時間反応させた。反応液を４０℃に保ちながら減圧し、メタノール／トルエン混合液を約２００ｇ留去した後、ろ過にて塩を除去した。ろ液を５０℃に加温し、２５％食塩水を２００ｇ加え、攪拌後、静置分層し、下層の水層を除去した。この水洗操作は２回繰り返した。上層のトルエン層を硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、ろ液に酢酸エチル１L加え、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。結晶をろ取、乾燥し、下記化合物（ｐ２４）を得た。
【０１２９】
【化５５】
0005273589.tif 000053
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(1773H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
, CH2OCH2Ph
4.54(2H, s, -CH2Ph)
7.27-7.38(5H, m,
-CH2Ph)
ＧＰＣ分析；
〈メインピーク〉 数平均分子量(Mn)：１９０７０ 重量平均分子量(Mw)：１９３０６ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１２ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９７８６
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：１８９１１ 重量平均分子量(Mw)：１９２５６ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１８ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９７８６
【０１３０】
(実施例１６−５) 
加圧ろ過器に５％パラジウムカーボン（５０％含水品、エヌ・イー・エムキャット社製）１２０ｇを仕込み、窒素置換しながら脱水メタノール５００ｍｌで４回溶剤置換を行い、パラジウムカーボンの脱水を行った。温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した２L丸底フラスコへ上記化合物(p２４)を１００ｇと溶剤置換を行ったパラジウムカーボン全量を仕込み、窒素置換後、脱水メタノール１２００ｍｌ、シクロヘキセン５００ｍｌを加えて３０℃まで昇温し、そのまま３．５時間反応させた。反応液をろ過し、ろ液の水分量をカールフィッシャー水分計にて測定したところ、１２５９ｐｐｍであった。ろ液を濃縮し、酢酸エチル１Lを加え、結晶が析出するまでヘキサンを加えた。得られた結晶を濾取、乾燥し、下記化合物(p２５)を得た。
【０１３１】
【化５６】
0005273589.tif 000054
【０１３２】
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H,
s, -CH3)
3.40-3.80(1773H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
，CH2OH
ＧＰＣ分析；
〈メインピーク〉 数平均分子量(Mn)：１８９７１ 重量平均分子量(Mw)：１９２０４ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１２ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９６８７
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：１８８１１ 重量平均分子量(Mw)：１９１５８ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１８ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：１９６８７
【０１３３】
(実施例１６−６)
実施例１６−３にて、釜内に残存した反応液約１ｋｇに脱水トルエン2.0ｋｇを加えた。釜温95℃、微減圧にて１．０ｋｇのトルエンを留去した後、釜内を窒素置換し、１２０℃に昇温し、１００〜１５０℃、１ＭＰａ以下の圧力でエチレンオキシド１２６０ｇを圧入し、更に４時間反応を続けた。反応終了後、70℃に冷却し、８５％リン酸水溶液にてｐHを７．５に調整し、下記化合物（ｐ２６）を得た。
【０１３４】
【化５７】
0005273589.tif 000055
【０１３５】
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.40-3.80(4045H,
m, -CH2O
(CH2CH2O)mH, CHO(CH2CH2O)mH
，CH2OCH2Ph） 4.54(2H, s, -CH2Ph)
7.27-7.38(5H,
m, -CH2Ph) 
ＧＰＣ分析；
〈メインピーク〉 数平均分子量(Mn)：４１８３０ 重量平均分子量(Mw)：４２６２１ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１９ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：４４５９４
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：４０５４８ 重量平均分子量(Mw)：４２０５９ 多分散度(Mw/Mn)：１．０３７ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：４４５９４
【０１３６】
(実施例１６−７)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２Ｌ丸底フラスコへ式（ｐ２６）の化合物２７０ｇ(6mmol)、トルエン１０００ｇを仕込み、加熱還流させ、トルエン２００ｇと水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン６．６５ｇ(65.7mmol)を加えて40℃に加温、メタンスルホニルクロリド４．５１ｇ(39.4mmol)を滴下し、４０℃にて３時間反応させた。反応終了後、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液２５．３ｇ(131.4mmol)を反応液に加え、４０℃で３時間反応させた。反応液を４０℃に保ちながら減圧し、メタノール／トルエン混合液を約２００ｇ留去した後、ろ過にて塩を除去した。ろ液にトルエン５００ｇを加え、温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２L丸底フラスコへ移し、加熱還流させ、トルエン２００ｇと水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン６．６５ｇ(65.7mmol)を加えて40℃に加温、メタンスルホニルクロリド４．５１ｇ(39.4mmol)を再度滴下し、４０℃にて３時間反応させた。反応終了後、ナトリウムメトキシド２８％メタノール溶液２５．３ｇ(131.4mmol)を反応液に加え、４０℃で３時間反応させた。反応液を４０℃に保ちながら減圧し、メタノール／トルエン混合液を約２００ｇ留去した後、ろ過にて塩を除去した。ろ液を５０℃に加温し、２５％食塩水を２００ｇ加え、攪拌後、静置分層し、下層の水層を除去した。この水洗操作は２回繰り返した。上層のトルエン層を硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、ろ液に酢酸エチル１L加え、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。結晶をろ取、乾燥し、下記化合物（ｐ２７）を得た。
【０１３７】
【化５８】
0005273589.tif 000056
【０１３８】
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80
(4045H, m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
，CH2OCH2Ph）
4.54(2H, s, -CH2Ph)
7.27-7.38(5H, m,
-CH2Ph)
〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)： 42206 重量平均分子量(Mw)：43056
多分散度(Mw/Mn)： 1.020 ピークトップ分子量（Ｍｐ）： 45057
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)： 40990 重量平均分子量(Mw)：42519
多分散度(Mw/Mn)： 1.037 ピークトップ分子量（Ｍｐ）： 45057
【０１３９】
(実施例１６−８) 
加圧ろ過器に５％パラジウムカーボン（５０％含水品、エヌ・イー・エムキャット社製）２００ｇを仕込み、窒素置換しながら脱水メタノール５００ｍｌで４回溶剤置換を行い、パラジウムカーボンの脱水を行った。温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した２L丸底フラスコへ上記化合物(p２７)１００ｇと溶剤置換を行ったパラジウムカーボン全量を仕込み、窒素置換後、脱水メタノール１２００ｍｌ、シクロヘキセン５００ｍｌを加えて３０℃まで昇温し、そのまま３．５時間反応させた。反応液をろ過し、ろ液の水分量をカールフィッシャー水分計にて測定したところ、２２１５ｐｐｍであった。ろ液を濃縮し、酢酸エチル１Lを加え、結晶が析出するまでヘキサンを加えた。得られた結晶を濾取、乾燥し、下記化合物(p２８)を得た。
【０１４０】
【化５９】
0005273589.tif 000057
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80
(4045H, m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3，CH2OH）
〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：42121 重量平均分子量(Mw)：42946
多分散度(Mw/Mn)：1.020 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：45057
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：41021 重量平均分子量(Mw)：42450
多分散度(Mw/Mn)：1.035 ピークトップ分子量（Ｍｐ）：45057
【０１４１】
(実施例１７) アミノ体(群II（ｇ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約４５０００の場合）
(実施例１７−１)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した５００ｍｌ丸底フラスコへ上記化合物(p２８)を７０ｇとイオン交換水７０ｇを加え、40℃に加温して溶解した。溶解後、10℃以下に冷却し、５０％水酸化カリウム水溶液４．３８ｇを加えた。続いて５〜10℃を保ちながらアクリロニトリル２１０ｇを2時間かけて滴下した。滴下終了後、更に2時間反応させ、８．５％リン酸水溶液２６．２５ｇを滴下し、中和した。反応液にイオン交換水１４０ｇを加えて分液漏斗に移し変え、酢酸エチルを２１０ｍｌ加えて攪拌後、静置し、上層の酢酸エチル層を廃棄した。この酢酸エチル抽出は、6回繰り返した。抽出終了後、水層に食塩６５ｇを加えて溶解し、クロロホルム２８０ｍｌを用いて抽出した。得られたクロロホルム層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過後、濃縮した。濃縮液に酢酸エチル７００ｍｌを加えて溶解し、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。結晶をろ取し、再度酢酸エチル７００ｍｌに加温溶解し、室温に冷却後、結晶が析出するまでヘキサンを加えた。結晶をろ取、乾燥し、下記ニトリル体（ｐ２９）を得た。
【０１４２】
【化６０】
0005273589.tif 000058
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 2.59-2.66(2H、ｍ、−CH2CH2CN)
3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80 (4047H, m, -CH2O
(CH2CH2O)m
CH3, CHO(CH2CH2O)mCH3,
CH2OCH2CH2CN
(メインピーク) 数平均分子量(Mn)： ４１８４９
重量平均分子量(Mw)：４２６６６ 多分散度(Mw/Mn)：１．０２０ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：４４５９４
(ピーク全体) 数平均分子量(Mn)： ４０２７１
重量平均分子量(Mw)：４１９８０ 多分散度(Mw/Mn)：１．０４２ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：４４５９４
【０１４３】
(実施例１７−２)
１Lオートクレーブに式（ｐ２９）のニトリル体５０ｇ、トルエン５００ｇ、ニッケル（エヌ・イー・エムキャット社製５１３６ｐ）４．５ｇを加え、60℃まで昇温した。アンモニアで内圧０．７ＭＰａになるまで加圧し、その後、水素を内圧４。５ＭＰａとなるまで加圧し、１３０℃で３時間反応させた。反応後、反応液を７０℃に冷却し、アンモニア臭が消えるまで窒素パージを繰り返した。反応液を全量抜き取り、ろ過し、ろ液を室温まで冷却後、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。結晶をろ取、乾燥し、下記アミン体（ｐ３０）を得た。
【０１４４】
【化６１】
0005273589.tif 000059
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 1.82-1.90(2H、ｍ、−CH2CH2CH2NH2)
2.90-2.97(2H、ｍ、−CH2CH2CH2NH2)
3.38(6H, s, -CH3) 
3.40-3.80
(4047H, m, -CH2O (CH2CH2O)mCH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3，, CH2OCH2CH2CH2NH2
【０１４５】
(実施例１８)
マレイミド体(群Ｉ（ｅ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約４５０００の場合）
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した３００ｍｌ丸底フラスコへ式（ｐ３０）の化合物４５ｇ(1mmol)、アセトニトリル４２ｍｌ、トルエン８４ｍｌを加え、４０℃にて加温溶解した。室温へ冷却後、遮光下、N-メチルモルホリン０．５１ｇ(5mmol)、N-Succinimidyl 3-maleimidopropionate３９９ｍｇ(1.5mmol)を加えて3.5時間反応させた。反応液をろ過後、酢酸エチル８４０ｍｌを加え、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。結晶をろ取し、アセトニトリル４２ｍｌ、酢酸エチル８４０ｍｌを加えて加温溶解後、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。結晶をろ取、乾燥し、下記（ｐ３１）の化合物を得た。
【０１４６】
【化６２】
0005273589.tif 000060
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 1.70-1.78(2H、ｍ、−CH2CH2CH2N)
2.45-2.53(2H、ｍ、−NHCOCH2CH2N)
3.38(6H, s, -CH3) 
3.40-3.80
(4051H, m, -CH2O(CH2CH2O)mCH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3, CH2OCH2CH2CH2NHCOCH2CH2)
6.44（1H、m, NHCO） 6.71(2H, s, -CH=CH-
〈メインピーク〉
数平均分子量(Mn)：４１９１８ 重量平均分子量(Mw)：４２７０９ 多分散度(Mw/Mn)：１．０１９ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：４４５９４
〈ピーク全体〉
数平均分子量(Mn)：４０２３１ 重量平均分子量(Mw)：４２６０２ 多分散度(Mw/Mn)：１．０５９ ピークトップ分子量（Ｍｐ）：４４５９４
【０１４７】
(実施例１９)
コハク酸イミド体(群Ｉ（ａ） )の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約２００００の場合）
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ式（ｐ２５）の化合物１０ｇ(0.5mmol)、酢酸ナトリウム０．１ｇ、トルエン１００ｍｌを加えて還流脱水した。この反応液に無水グルタル酸２８５ｍｇ(2.5mmol)を加え、110℃で１２時間反応させた。反応液を冷却後、N-ヒドロキシコハク酸イミド５１８ｍｇ(4.5mmol)、DCC９３４ｍｇ(4.55mmol)を加えて40℃で２時間反応させた。反応液をろ過後、ろ液に結晶が析出するまでヘキサンを加えた。結晶をろ取し、酢酸エチル１００ｍｌ、アセトニトリル１０ｍｌに再度溶解し、溶解液に結晶が析出するまでヘキサンを加えた。結晶をろ取、乾燥し、下記コハク酸イミド体（ｐ３２）を得た。
【０１４８】
【化６３】
0005273589.tif 000061
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)： 2.07(2H,
m, -OCOCH2CH2CH2COON-)
2.50(2H, t,
-OCOCH2CH2CH2COON-) 2.72(2H,
t, -OCOCH2CH2CH2COON-) 
2.84(4H, s,
succinimide) 3.38(6H, s, -CH3) 
3.40-3.80(1771H,
m, -CH2O (CH2CH2O)m
CH3,
CHO(CH2CH2O)mCH3
) 
4.10-4.30(2H,
m, -CH2OCOCH2CH2CH2COON-)
【０１４９】
(実施例２０)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機を付した３００ｍｌ丸底フラスコへ３−ベンジルオキシー１，２−プロパンジオール２７．３ｇ(0.15mol)、脱水トルエン１３５ｇ、金属ナトリウム０．９ｇ(39mmol：26mol%)を加え、窒素を吹き込みながら８０℃で金属ナトリウムが溶解するまで攪拌した。溶解後、更に８0℃で２時間攪拌し続けた。
この反応液を事前に十分乾燥した５Lオートクレーブへ仕込み、実施例１６−３、実施例１６−６、実施例１６−７、実施例１６−８と同じ操作を行い、（ｐ２８）と同じ構造の化合物（ｐ３３）を得た。
【０１５０】
(実施例２１)
実施例１−３の３−ベンジルオキシー１，２−プロパンジオールのナトリウム化溶液、実施例１６−３のナトリウム化溶液、実施例２０のオートクレーブへ仕込む前のナトリウム化溶液を採取し、下記条件にて誘導体化、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）測定を行った。結果を表３に示す。
サンプル０．２ｇを計りとり、ピリジン１．０ｍｌを加えて溶解後、ヘキサメチルジシラザン０．８ｍｌを加えた。この溶液にクロロトリメチルシラン０．４ｍｌを加えて３０分攪拌した。反応液をシリンジフィルター（ＰＴＦＥ，０．４５μｍ）でろ過し、下記条件にてＧＣ測定を行った。
ＧＣシステム：ＨＰ６８９０
カラム：ＨＰ−５（０．２５μｍＸ３０ｍ） 検出器：ＦＩＤ
注入口温度：３２０℃ 注入：スプリットレス 注入量：０．２μｌ キャリアーガス：ヘリウム
流速：２３ｃｍ／ｓｅｃ 
カラム温度：８０℃（０ｍｉｎ）→１５℃／ｍｉｎ→３２０℃（２４ｍｉｎ）
検出器温度：３２０℃
【０１５１】
【表３】
0005273589.tif 000062
【０１５２】
表３の結果、反応性の低分子量不純物の原因となるベンジルアルコール、及び非反応性の高分子量不純物の原因となるグリセリンは、実施例１−３、１６−３のようなナトリウム化条件で生成しにくいことが判明した。
【０１５３】
（実施例２２）
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ、実施例１−４で得られた化合物（ｐ２）１０ｇ(1mmol)、トルエン５０ｇを仕込み、加熱還流させて水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン２．０２ｇ(20mmol)を加えて40℃に加温、メタンスルホニルクロリド０．６８７ｇ(6mmol)を滴下し、４０℃にて３時間反応させた。反応終了後、塩酸塩をろ過にて除き、ろ液に酢酸エチル１００ｍｌを加え、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。得られた結晶をろ取し、酢酸エチル２００ｍｌに加温溶解し、室温へ冷却後、結晶が析出するまでヘキサンを加えた。結晶をろ取し、乾燥した。得られた結晶２０ｍｇを採取し、重クロロホルムに溶解し、１H核磁気共鳴測定を行い（積算１２８回）、スペクトルを得た。このとき、Mme＝６、Mms＝０．０７３であった。
【０１５４】
(実施例２３)
実施例７−２で得られた化合物（ｐ１２）を１０ｇ(0.5mmol)、トリエチルアミン１．０１ｇ(10mmol)、メタンスルホニルクロリド０．３４４ｇ(3mmol)を用い、実施例２２と同じ操作を行った。核磁気共鳴測定(積算２５６回)を行い、スペクトルを得た。このとき、Mme＝６、Mms＝０．１０２であった。
【０１５５】
(実施例２４)
実施例１６−４において、アルキルエーテル化が2回終了した化合物（ｐ２４）１０ｇ(0.5mmol) 、トリエチルアミン１．０１ｇ(10mmol)、メタンスルホニルクロリド０．３４４ｇ(3mmol)を用い、実施例２２と同じ操作を行った。核磁気共鳴測定(積算２５６回)を行い、スペクトルを得た。このとき、Mme＝６、Mms＝０．０１９であった。
【０１５６】
(実施例２５)
実施例１６−７において、アルキルエーテル化が２回終了した化合物（ｐ２７）１１．３ｇ(0.25mmol)について、トリエチルアミン０．５０６ｇ(5mmol)、メタンスルホニルクロリド０．１７２ｇ(1.5mmol)を用い、実施例２２と同じ操作を行った。核磁気共鳴測定(積算２５６回)を行い、スペクトルを得た。このとき、Mme＝６、Mms＝０．０２６であった。
【０１５７】
(実施例２６)
実施例２２〜実施例２５で得られたMme、Mms、及びピークトップ分子量（Mp）を用い、Hrd、及びHrd／Mp×１００００００を算出した。ピークトップ分子量は、各々、（ｐ３）（ｐ１３）（ｐ２５）（ｐ２８）のデータを用いた。結果を表４に示す。この結果、本発明の式（ｐ）の化合物のアルキルエーテル化率は高く、アルキルエーテル化反応を繰り返したものについては、更に反応率が高く、水酸基の残存が少ないことが示された。
【０１５８】
【表４】
0005273589.tif 000063
【０１５９】
(実施例２７)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Dean-stark管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ、実施例１−５で得られた化合物（ｐ３）１０ｇ(1mmol)、トルエン５０ｇを仕込み、加熱還流させて水分を共沸除去した。室温へ冷却後、トリエチルアミン２．０２ｇ(20mmol)を加えて40℃に加温、メタンスルホニルクロリド０．６８７ｇ(6mmol)を滴下し、４０℃にて３時間反応させた。反応終了後、塩酸塩をろ過にて除き、ろ液に酢酸エチル１００ｍｌを加え、ヘキサンを結晶が析出するまで加えた。得られた結晶をろ取し、酢酸エチル２００ｍｌに加温溶解し、室温へ冷却後、結晶が析出するまでヘキサンを加えた。結晶をろ取し、乾燥した。得られた結晶２０ｍｇを採取し、重メタノールに溶解し、１H核磁気共鳴測定を行い（積算１２８回）、スペクトルを得た。このとき、３．１３２ｐｐｍに検出されたＭ１を３としたとき、３．１１７ｐｐｍに検出されたＭ２は０．２９５であった。
【０１６０】
(実施例２８)
実施例１６−５で得られた化合物（ｐ２５）を１０ｇ(0.5mmol)、トリエチルアミン１．０１ｇ(10mmol)、メタンスルホニルクロリド０．３４４ｇ(3mmol)を用い、実施例２７と同じ操作を行った。核磁気共鳴測定(積算２５６回)を行い、スペクトルを得た。このとき、Ｍ１＝３、Ｍ２＝０．０９１であった。
【０１６１】
(実施例２９)
実施例１６−８で得られた化合物（ｐ２８）を１１．３ｇ(0.25mmol) 、トリエチルアミン０．５１ｇ(5mmol)、メタンスルホニルクロリド０．１７２ｇ(1.5mmol)を用い、実施例２７と同じ操作を行った。核磁気共鳴測定(積算２５６回)を行い、スペクトルを得た。このとき、Ｍ１＝３、Ｍ２＝０．１１２であった。
【０１６２】
(実施例３０)
実施例２０で得られた化合物（ｐ３３）１１．３ｇ(0.25mmol) 、トリエチルアミン０．５１ｇ(5mmol)、メタンスルホニルクロリド０．１７２ｇ(1.5mmol)を用い、実施例２７と同じ操作を行った。核磁気共鳴測定(積算２５６回)を行い、スペクトルを得た。このとき、Ｍ１＝３、Ｍ２＝０．２１２であった。
【０１６３】
(実施例３１)
実施例２７〜実施例３０で得られたＭ１，Ｍ２より、Ｍ２／（Ｍ１＋Ｍ２）×１００を算出した。結果を表５に示す。この結果、本発明の化合物は高い純度を有することが示された。また、実施例２９と３０の結果から、式（９）の化合物をアルコラート化する際、温度を下げてから行う方が、更に高純度となることが判明した。
【０１６４】
【表５】
0005273589.tif 000064
【０１６５】
(実施例３２)
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、及び冷却管を付した２L丸底フラスコへ(p２７)の化合物１００ｇと５％パラジウムカーボン（５０％含水品、エヌ・イー・エムキャット社製）２００ｇを含水品のまま仕込み、実施例１６−８と同じ操作にて脱ベンジル反応を行い、（ｐ２８）と同じ構造の化合物（ｐ３４）を得た。この際、反応系中の水分量をカールフィッシャー水分計にて測定したところ、４．１７％であった。
得られた化合物（ｐ３４）１１．３ｇ(0.25mmol)、トリエチルアミン０．５１ｇ(5mmol)、メタンスルホニルクロリド０．１７２ｇ(1.5mmol)を用い、実施例２７と同じ操作を行った。核磁気共鳴測定(積算２５６回)を行い、スペクトルを得た。このとき、Ｍ１＝３、Ｍ２＝０．１６２であった。
表５に示すように、実施例２９と実施例３２の結果から、反応系中の水分量を１％以下としたほうが、より高純度の式（ｐ）の化合物を得ることができることが判明した。
【０１６６】
（実施例３３）
（ペプチドの修飾）
Humanin(Met-Ala-Pro-Arg-Gly-Phe-Ser-Cys-Leu-Leu-Leu-Leu-Thr-Ser-Glu-Ile-Asp-Leu-Pro-Val-Lys-Arg-Arg-Ala)（分子量2687.2）のペプチドを１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ＝６．４）にて０．５μＭに調整した。この溶液２００μｌ中に式（ｐ３１）の化合物４ｍｇを加え、室温にて4時間反応させた。反応液２００μｌを、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ（アマシャム社製） カラムにチャージし、２０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ＝８．２）で平衡化した。平衡化後、バッファーに１Ｎとなる様ＮａＣｌを加えた溶液をカラムに通し、ＵＶにて溶出液をモニターしながら、（ｐ３１）により修飾されたペプチドの分画を得た。この分画２０μｌとトリスＳＤＳサンプル処理液２０μｌを混合後、沸騰水浴中で２分３０秒加温し、この溶液２０μｌを、ドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミドゲル電気泳動（４−２０％）分析した。染色はＣＢＢ染色で行った。結果を図６に示す。
この結果、ペプチドのメルカプト基（システイン）と（ｐ３１）のマレイミドが反応し、修飾されていることが示された。
【０１６７】
（実施例３４）
コハク酸イミド体(群Ｉ（ａ）)の合成（Ｒ＝メチル基、Ａ1Ｏ、Ａ2Ｏ＝オキシエチレン基、ｎ＝０、分子量約４５０００の場合）
温度計、窒素吹き込み管、攪拌機、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ管、及び冷却管を付した２００ｍｌ丸底フラスコへ式（ｐ２８）の化合物１１．３ｇ(0.25mmol)、酢酸ナトリウム０．１ｇ、トルエン１００ｍｌを加えて還流脱水した。この反応液に無水グルタル酸２８５ｍｇ(2.5mmol)を加え、110℃で１２時間反応させた。反応液を冷却後、N-ヒドロキシコハク酸イミド５１８ｍｇ(4.5mmol)、DCC９３４ｍｇ(4.55mmol)を加えて40℃で２時間反応させた。反応液をろ過後、ろ液に結晶が析出するまでヘキサンを加えた。結晶をろ取し、酢酸エチル２００ｍｌ、アセトニトリル２０ｍｌに再度溶解し、溶解液に結晶が析出するまでヘキサンを加えた。結晶をろ取、乾燥し、下記コハク酸イミド体（ｐ３５）を得た。
【化６４】
0005273589.tif 000065
1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3 , 内部標準TMS） δ(ppm)：2.07( 2H, m, -OCOCH2CH2CH2COON-)
2.50( 2H, t, -OCOCH2CH2CH2COON-) 2.72(2H,
t, -OCOCH2CH2CH2COON-) 2.84(4H,
s, succinimide) 
3.38(6H, s, -CH3)
3.40-3.80(4043H, m, -CH2O
(CH2CH2O)m
CH3, CHO(CH2CH2O)mCH3
) 
4.10-4.30(2H,
m, -CH2OCOCH2CH2CH2COON-)
【０１６８】
(実施例３５) インシュリンの修飾
実施例１９で得られた（ｐ３２）のコハク酸イミド体と、実施例３４で得られた（ｐ３５）のコハク酸イミド体を用い、インシュリン（ＳＥＲＯＬＯＧＩＣＡＬＳ
ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮＰＮ製、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｈｕｍａｎ Ｉｎｓｕｌｉｎ、Mw５８００）の修飾を行った。
０．１Ｎ炭酸ナトリウムバッファー（ｐＨ＝９．０）を用い、インシュリンの１０ｍｇ／ｍｌバッファー溶液を調製した。この溶液１００μｌ中に式（ｐ３２）の化合物６．８ｍｇを加え、４℃で２０時間反応させた。反応液全量を、Q−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ（アマシャム社製） カラムにチャージし、２０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ＝８．２）で平衡化した。平衡化後、バッファーに１Ｎとなる様ＮａＣｌを加えた溶液をカラムに通し、ＵＶにて溶出液をモニターしながら、（ｐ３２）により修飾されたインシュリンの分画を得た。この分画２０μｌとトリスＳＤＳサンプル処理液２０μｌを混合後、沸騰水浴中で２分３０秒加温し、この溶液２０μｌを、ドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミドゲル電気泳動（４−２０％）分析した。染色はＣＢＢ染色で行った。
同様に（ｐ３５）においても、インシュリンの１０ｍｇ／ｍｌバッファー溶液１００μｌ中に式（ｐ３５）の化合物１３．６ｍｇを加え、同様の処理を行った。
結果を図７に示す。この結果、インシュリンが式（ｐ３２）、（ｐ３５）に修飾されていることが示された。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】ＯＶＡと、修飾されたＯＶＡのポリアクリルアミドゲル電気泳動法による実験結果を示す。
【図２】化合物ｐ−８の加速劣化試験前のＧＰＣ測定の結果を示すチャートである。
【図３】化合物ｐ−８の加速劣化試験後のＧＰＣ測定の結果を示すチャートである。
【図４】化合物ｐ−１０の加速劣化試験前のＧＰＣ測定の結果を示すチャートである。
【図５】化合物ｐ−１０の加速劣化試験後のＧＰＣ測定の結果を示すチャートである。
【図６】Humaninを化合物（ｐ３１）で修飾した化合物の電気泳動結果である。
【図７】インシュリンを化合物（ｐ３２）、化合物（ｐ３５）で修飾した化合物の電気泳動結果である。
【図１】
0005273589.tif 000071
【図２】
0005273589.tif 000072
【図３】
0005273589.tif 000073
【図４】
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【図５】
0005273589.tif 000075
【図６】
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【図７】
0005273589.tif 000077