(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（１）に示されることを特徴とする有機化合物。
【化１】
0005221155.tif 000025
【請求項２】
請求項１に記載の有機化合物を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
【請求項３】
請求項１に記載の有機化合物を有効成分として含有する抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１に記載の有機化合物を有効成分として含有する抗菌剤。
【請求項５】
下記化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗腫瘍剤。
【化２】
0005221155.tif 000026
【請求項６】
下記化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。
【化３】
0005221155.tif 000027
【請求項７】
下記化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤。
【化４】
0005221155.tif 000028
【請求項８】
下記化学式（３）に示されることを特徴とする有機化合物。
【化５】
0005221155.tif 000029
【請求項９】
請求項８に記載の有機化合物を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
【請求項１０】
請求項８に記載の有機化合物を有効成分として含有する抗酸化剤。
【請求項１１】
下記化学式（４）に示されることを特徴とする有機化合物。
【化６】
0005221155.tif 000030
但し、化学式（４）に示されるＭｅはメチル基を示す。
【請求項１２】
請求項１１に記載の有機化合物を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
【請求項１３】
請求項１１に記載の有機化合物を有効成分として含有する抗酸化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フラバノン類、メガスティグマン配糖体及びリグナン配糖体に属する有機化合物、並びにその用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
フラバノン類（２，３−ジヒドロフラボン類）としては、例えばニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ、ニムフェオール−Ｃ、イソニムフェオール−Ｂ等のニムフェオールが知られている（特許文献１〜３参照）。ニムフェオールは、トウダイグサ科オオバギ属に属するオオバギ（大葉木）の抽出物に含まれることが知られている（特許文献４参照）。本発明者らは、オオバギ抽出物に含まれる新規なフラバノン類について報告している（非特許文献１参照）。加えて、メガスティグマン配糖体について報告している（非特許文献２参照）。更に、リグナン配糖体としてピノレジノール配糖体は、ゴマの抽出物から得られることが報告されている（特許文献５参照）。
【特許文献１】特開２００５−２９５６０号公報
【特許文献２】特開２００５−２９７７８号公報
【特許文献３】特開２００５−２７２３７４号公報
【特許文献４】特開２００７−４５７５４号公報
【特許文献５】特開平６−１１６２８２号公報
【非特許文献１】川上紫織、Liva Harinantenaina、松浪勝義、大塚英昭他、オオバギ（Macaranga tanarius）の成分研究（２）、日本生薬学会第５４回年会講演要旨集、ｐ．２０９、２００７年発行
【非特許文献２】Radical-scavenging activities of new megastigmane glucosides from Macaranga tanarius (L.) Mull.-Arg.,Katsuyoshi Matsunami,Ichiko Takamori,Hideaki Otsuka,Takakazu Shinzato,Mitsunori Aramoto,Kazunari Kondo and YoshioTakeda,Chemical & Pharmaceutical Bulletin,54(10),1403-1407,(2006)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
この発明は、本発明者らの鋭意研究の結果、有機化合物を単離し、かつ有用な生理活性を見出したことによりなされたものである。本発明の目的は、有用な生理活性を発揮する有機化合物及びその用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明の有機化合物は、下記化学式（１）に示されることを特徴とする。
【０００５】
【化１】
0005221155.tif 000002
請求項２に記載の発明の抗腫瘍剤は、請求項１に記載の有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００６】
請求項３に記載の発明の抗酸化剤は、請求項１に記載の有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
請求項４に記載の発明の抗菌剤は、請求項１に記載の有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００７】
請求項５に記載の発明の抗腫瘍剤は、下記化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００８】
【化２】
0005221155.tif 000003
請求項６に記載の発明の抗酸化剤は、下記化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００９】
【化３】
0005221155.tif 000004
請求項７に記載の発明の抗菌剤は、下記化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１０】
【化４】
0005221155.tif 000005
請求項８に記載の発明の有機化合物は、下記化学式（３）に示されることを特徴とする。
【００１１】
【化５】
0005221155.tif 000006
請求項９に記載の発明の抗腫瘍剤は、請求項８に記載の有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
請求項１０に記載の発明の抗酸化剤は、請求項８に記載の有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
請求項１１に記載の発明の有機化合物は、下記化学式（４）に示されることを特徴とする。
【００１３】
【化６】
0005221155.tif 000007
但し、化学式（４）に示されるＭｅはメチル基を示す。
【００１４】
請求項１２に記載の発明の抗腫瘍剤は、請求項１１に記載の有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
請求項１３に記載の発明の抗酸化剤は、請求項１１に記載の有機化合物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、有用な生理活性を発揮する有機化合物及びその用途が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（第１の実施形態）
本発明を具体化した第１の実施形態を詳細に説明する。
第１の実施形態の有機化合物は、下記化学式（１）に示される。同有機化合物は、フラバノン骨格を有する新規なフラバノン化合物である。
【００１７】
【化７】
0005221155.tif 000008
この有機化合物は、上記化学式に“＊”で示されるように３´´の炭素は不斉炭素であり、その３´´位について互いにエピマーの関係にある３´´Ｒと３´´Ｓとが存在する。すなわち、上記有機化合物は、下記化学式（１Ａ）に示される有機化合物と下記化学式（１Ｂ）に示される有機化合物とを示している。
【００１８】
【化８】
0005221155.tif 000009
上記有機化合物は、トウダイグサ科オオバギ属に属するオオバギ（大葉木）の抽出物から単離される。オオバギは、マカランガ・タナリウス（Ｍａｃａｒａｎｇａ  ｔａｎａｒｉｕｓ）とも呼ばれる植物であって、常緑広葉樹（雌雄異株）である。オオバギは、沖縄、台湾、中国南部、マレー半島、フィリピン、マレーシア、インドネシア、タイなどの東南アジア、オーストラリア北部などに生育している。また、オオバギは、樹木の中でも成長が極めて早く、荒廃地における成長も可能である。
【００１９】
オオバギ抽出物の原料としては、オオバギの各器官やそれらの構成成分を用いることができる。原料としては、単独の器官又は構成成分を用いてもよいし、二種以上の器官や構成成分を混合して用いてもよい。オオバギ抽出物の抗腫瘍及び抗酸化作用が高まるという観点から、原料には果実、種子、花、根、幹、茎の先端部、葉身、及び分泌物（ワックス等）を含むことが好ましい。茎の先端部は、茎の成長点及び葉芽を含んでおり、葉身に比べて柔軟であるため、抽出操作を効率的に行うことが容易である。また、オオバギの全体に対して各器官が占める割合を比較すると、幹、根、及び葉の占める割合は高い。このため、扱いやすいオオバギの葉身をオオバギ抽出物の原料として用いることは、原料確保が容易であるという観点から、工業的に好適である。こうした原料は、採取したままの状態、採取後に粉砕、破砕若しくはすり潰した状態、採取・乾燥後に粉砕、破砕若しくはすり潰した状態、又は、採取後に破砕、粉砕若しくはすり潰した後に乾燥させた状態として、抽出操作を行うことができる。こうした破砕には、例えばカッター、裁断機、クラッシャー等を用いることができる。また、粉砕した原料を調製する際には、例えばミル、クラッシャー、グラインダー等を用いることができる。すり潰した原料を調製する際には、ニーダー、乳鉢等を用いることができる。
【００２０】
上述した原料からオオバギ抽出物を抽出するための抽出溶媒としては、水と有機溶媒との混合溶媒、低級アルコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、グリセリン、プロピレングリコール等の有機溶媒が挙げられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等が挙げられる。有機溶媒としては、単独種を用いてもよいし、複数種を混合した混合溶媒を用いてもよい。
【００２１】
抽出溶媒として水と有機溶媒の混合溶媒を用いる場合、混合溶媒中における有機溶媒の含有量は、好ましくは５０体積％以上、より好ましくは８０体積％以上である。混合溶媒中における有機溶媒の含有量が５０体積％未満の場合、オオバギに含まれる有効成分を効率的に抽出できないおそれがある。なお、有機溶媒としては低級アルコールが好ましい。
【００２２】
抽出操作としては、抽出溶媒中に上記原料を所定時間浸漬させる。こうした抽出操作においては、抽出効率を高めるべく、必要に応じて攪拌操作、加温等を行ってもよい。また、原料から抽出される夾雑物を削減すべく、抽出操作に先だって、別途水抽出操作又は熱水抽出操作を行ってもよい。
【００２３】
抽出操作の後には固液分離操作が行われることで、オオバギ抽出液と原料の残渣とを分離する。こうした固液分離操作の分離法としては、例えばろ過、遠心分離等の公知の分離法を利用することができる。得られたオオバギ抽出液は、必要に応じて濃縮してもよい。
【００２４】
また、オオバギ抽出液に含まれる抽出溶媒を必要に応じて除去することにより、固体状のオオバギ抽出物を得ることができる。こうした溶媒の除去は、例えば減圧下で加熱することにより行ってもよいし、凍結乾燥により行ってもよい。
【００２５】
なお、オオバギ抽出物には、上記有機化合物以外にニムフェオール類等が含有されている。ニムフェオール類としては、例えばニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃ等が挙げられる。
【００２６】
第１の実施形態の有機化合物は、オオバギ抽出物をクロマトグラフィーで精製することにより単離される。クロマトグラフィーとしては、分配クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、分子排斥クロマトグラフィー等が挙げられる。ここで、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいて、例えばヘキサンと酢酸エチルの混合溶媒、又はトルエンとアセトンの混合溶媒を展開溶媒として用いた場合、上記化学式（１）に示される有機化合物は、ニムフェオール−Ｃを含む粗精製物として得られる。このため、そうした粗精製物からニムフェオールＣを精製する過程において、第１の実施形態の有機化合物も得ることができる。
【００２７】
第１の実施形態の抗腫瘍剤は、上記化学式（１）に示される有機化合物を有効成分として含有する。すなわち、抗腫瘍剤は、上記化学式（１Ａ）に示される有機化合物、及び、上記化学式（１Ｂ）に示される有機化合物の少なくとも一方を有効成分として含有する。抗腫瘍剤は、癌細胞の増殖を抑制する抗腫瘍作用を発揮する。その癌細胞としては、例えば肺癌細胞、鼻咽喉癌細胞、白血病細胞、乳癌細胞等が挙げられる。こうした抗腫瘍剤は、主に医薬品として有用である。
【００２８】
第１の実施形態の抗酸化剤は、上記化学式（１）に示される有機化合物を有効成分として含有する。すなわち、抗酸化剤は、上記化学式（１Ａ）に示される有機化合物、及び、上記化学式（１Ｂ）に示される有機化合物の少なくとも一方を有効成分として含有する。この抗酸化剤は、例えば油脂、香料、色素等の化学物質の酸化を抑制する。また、抗酸化剤は、経口摂取した生体内において活性酸素を消去することにより、肝機能の増強作用、アセトアルデヒドの毒性の軽減、低密度コレステロール（ＬＤＬ）の抗酸化作用、免疫機能改善等の健康増進効果を発揮する。また、抗酸化剤は皮膚、口腔等について、美白、老化防止等の効果を発揮する。こうした抗酸化剤は、例えば健康食品、食品等の飲食品、化粧品、医薬部外品等の添加剤として有用である。
【００２９】
第１の実施形態の抗菌剤は、上記化学式（１）に示される有機化合物を有効成分として含有する。すなわち、抗菌剤は、上記化学式（１Ａ）に示される有機化合物、及び、上記化学式（１Ｂ）に示される有機化合物の少なくとも一方を有効成分として含有する。この抗菌剤は、カビ、グラム陰性菌、及びグラム陽性菌に対する抗菌性を有している。こうした抗菌剤は、例えば健康食品、食品等の飲食品、化粧品、医薬品、医薬部外品、洗浄剤等の添加剤として有用である。
【００３０】
上記抗腫瘍剤、抗酸化剤及び抗菌剤には、例えば賦形剤、基剤、乳化剤、安定剤、溶剤、香料、甘味料等を含有させてもよい。抗腫瘍剤、抗酸化剤及び抗菌剤は、液状であってもよいし、固体状であってもよい。それらの剤形としては、特に限定されないが、例えば散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、液剤、注射剤等が挙げられる。
【００３１】
（第２の実施形態）
本発明を具体化した第２の実施形態について上記第１の実施形態と異なる点を中心に説明する。第２の実施形態は、有機化合物の５´´位において二重結合を有する点で、第１の実施形態と異なっている。
【００３２】
第２の実施形態の抗腫瘍剤は、下記化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有する。同有機化合物は、フラバノン骨格を有するフラバノン化合物である。
【００３３】
【化９】
0005221155.tif 000010
この有機化合物は、上記化学式に“＊”で示されるように３´´の炭素は不斉炭素であり、その３´´位について互いにエピマーの関係にある３´´Ｒと３´´Ｓとが存在する。すなわち、上記有機化合物は、下記化学式（２Ａ）に示される有機化合物と下記化学式（２Ｂ）に示される有機化合物とを示している。
【００３４】
【化１０】
0005221155.tif 000011
すなわち、抗腫瘍剤は、化学式（２Ａ）に示される有機化合物、及び、化学式（２Ｂ）に示される有機化合物の少なくとも一方を有効成分として含有する。
【００３５】
第２の実施形態の有機化合物は、上記第１の実施形態と同様にオオバギの抽出物から単離される。ここで、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいて、例えばヘキサンと酢酸エチルの混合溶媒、又はトルエンとアセトンの混合溶媒を展開溶媒として用いた場合、化学式（２）に示される有機化合物は、ニムフェオール−Ｃを含む粗精製物として得られる。このため、そうした粗精製物からニムフェオールＣを精製する過程において、第２の実施形態の有機化合物も得ることが可能である。
【００３６】
第２の実施形態の抗酸化剤は、化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有する。すなわち、抗酸化剤は、化学式（２Ａ）に示される有機化合物、及び、化学式（２Ｂ）に示される有機化合物の少なくとも一方を有効成分として含有する。
【００３７】
第２の実施形態の抗菌剤は、化学式（２）に示される有機化合物を有効成分として含有する。すなわち、抗菌剤は、化学式（２Ａ）に示される有機化合物、及び、化学式（２Ｂ）に示される有機化合物の少なくとも一方を有効成分として含有する。
【００３８】
（第３の実施形態）
本発明を具体化した第３の実施形態について上記第１の実施形態と異なる点を中心に説明する。第３の実施形態は、有機化合物の構造について第１の実施形態と異なっている。
【００３９】
第３の実施形態の有機化合物は、下記化学式（３）に示される有機化合物である。同有機化合物は、新規なメガスティグマン配糖体である。
【００４０】
【化１１】
0005221155.tif 000012
第３の実施形態の有機化合物は、上記第１の実施形態と同様にオオバギの抽出物から単離される。抽出操作においては、抽出効率を高めるという観点から、水と有機溶媒の混合溶媒を用いて抽出するのが好ましい。その混合溶媒中における水の比率は、好ましくは１０容量％以上、より好ましくは５０容量％以上である。また、抽出温度を高めることで、抽出効率を高めることが容易である。
【００４１】
第３の実施形態の抗腫瘍剤は、化学式（３）に示される有機化合物を有効成分として含有する。第３の実施形態の抗酸化剤は、化学式（３）に示される有機化合物を有効成分として含有する。この抗腫瘍剤と抗酸化剤は上記第1の実施形態と同様に使用することができ、剤形も特に限定されない。
【００４２】
（第４の実施形態）
本発明を具体化した第４の実施形態について上記第１の実施形態と異なる点を中心に説明する。第４の実施形態は、有機化合物の構造について第１の実施形態と異なっている。
【００４３】
第４の実施形態の有機化合物は、下記化学式（４）に示される有機化合物である。同有機化合物は、新規なリグナン配糖体である。
【００４４】
【化１２】
0005221155.tif 000013
但し、化学式（４）に示されるＭｅはメチル基を示す。
【００４５】
第４の実施形態の有機化合物は、上記第１の実施形態と同様にオオバギの抽出物から単離される。抽出操作においては、抽出効率を高めるという観点から、水と有機溶媒の混合溶媒を用いて抽出するのが好ましい。その混合溶媒中における水の比率は、好ましくは１０容量％以上、より好ましくは５０容量％以上である。また、抽出温度を高めることで、抽出効率を高めることが容易である。
【００４６】
第４の実施形態の抗腫瘍剤は、化学式（４）に示される有機化合物を有効成分として含有する。第４の実施形態の抗酸化剤は、化学式（４）に示される有機化合物を有効成分として含有する。この抗腫瘍剤と抗酸化剤は上記第1の実施形態と同様に使用することができ、剤形も特に限定されない。
【００４７】
（実施形態の効果）
上記第１から第４の実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
（１）第１から第４の実施形態に係る有機化合物は、抗腫瘍作用、抗酸化作用又は抗菌作用を発揮することから、抗腫瘍剤、抗酸化剤及び抗菌剤が提供される。
【００４８】
（２）第１及び第２の実施形態に係る有機化合物の中でも、化学式（１Ａ）に示される有機化合物を有効成分として含有する抗腫瘍剤は、優れた抗腫瘍活性を有する。
（３）第１から第４の実施形態に係る有機化合物は、いずれもオオバギ抽出物から得られる。オオバギは、樹木の中でも成長が極めて早く、荒廃地における成長も可能である。このようにオオバギは、その栽培管理に手間がかからない。また、オオバギ抽出物は、植物由来の原料であるため、安全性が高い。従って、抗腫瘍剤、抗酸化剤及び抗菌剤は、原料の供給、生産性、安全性等について優れている。
【００４９】
（４）第１及び第２の実施形態に係る有機化合物は、オオバギ抽出物を原料として、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより粗精製することができる。そのシリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいて、例えばヘキサンと酢酸エチルの混合溶媒、又はトルエンとアセトンの混合溶媒を展開溶媒として用いた場合、第１及び第２の実施形態に係る有機化合物は、ニムフェオール−Ｃを含む粗精製物として得られる。このため、そうした粗精製物からニムフェオールＣを精製する過程において、第１及び第２の実施形態の有機化合物も得ることが可能である。
【実施例】
【００５０】
次に、実施例を挙げて前記実施形態をさらに具体的に説明する。
＜抽出物の粗精製＞
オオバギの乾燥葉１２．１ｋｇを原料として、メタノールを用いて３回（メタノールの合計量７５Ｌ）抽出することにより、メタノール抽出液を得た。そのメタノール抽出液を３Ｌのヘキサンを用いて分配した後、メタノール層を減圧濃縮した。その残渣を水に懸濁させた後に、酢酸エチルで抽出することで、８０２ｇの酢酸エチル層を得た。こうして得られた酢酸エチル層について、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径１０ｃｍ×高さ５０ｃｍ）により精製した。この精製においては、以下に示される展開溶媒を用いて１画分１Ｌの条件で画分を得た。
【００５１】
画分（１−１）：  ヘキサン：酢酸エチル＝２０容量部：１容量部，６Ｌ
画分（１−２）：  ヘキサン：酢酸エチル＝５容量部：１容量部，６Ｌ
画分（１−３）：  ヘキサン：酢酸エチル＝４容量部：１容量部，６Ｌ
上記画分（１−３）の１４５ｇについて、更にシリカゲルカラムクロマトグラフィー（内径１０ｃｍ×高さ５０ｃｍ）により精製した。この精製においては、以下に示される展開溶媒を用いて１画分１Ｌの条件で画分を得た。
【００５２】
画分（２−１）：  トルエン
画分（２−２）：  トルエン：アセトン＝１００容量部：１容量部，６Ｌ
画分（２−３）：  トルエン：アセトン＝７０容量部：１容量部，３Ｌ
画分（２−４）：  トルエン：アセトン＝５０容量部：１容量部，３Ｌ
画分（２−５）：  トルエン：アセトン＝４０容量部：１容量部，３Ｌ
画分（２−６）：  トルエン：アセトン＝３０容量部：１容量部，３Ｌ
画分（２−７）：  トルエン：アセトン＝１０容量部：１容量部，３Ｌ
画分（２−８）：  トルエン：アセトン＝５容量部：１容量部，３Ｌ
上記画分（２−５）から画分（２−８）を合わせた１０２ｇを粗精製物とした。
【００５３】
＜化学式（１）に示される有機化合物の単離＞
上記粗精製物１０２ｇについて、逆相系多孔質樹脂（三菱化学社製、商品名：ダイヤイオンＨＰ−２０）を充填剤として用いたカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径１１ｃｍ×高さ５０ｃｍ）により精製した。同精製においては、以下に示される展開溶媒を用いて１画分１Ｌの条件で画分を得た。
【００５４】
画分（１）：  水：メタノール＝１容量部：３容量部，９Ｌ
画分（２）：  メタノール，９Ｌ
画分（３）：  メタノール：クロロホルム＝１容量部：１容量部，９Ｌ
画分（４）：  クロロホルム，９Ｌ
上記画分（３）と（４）を合わせた２１．８ｇについて、更に逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径５ｃｍ×高さ２０ｃｍ）を用いて精製した。この精製においては、以下に示される溶媒のリニアグラジエント（linear gradient）溶媒を展開溶媒として用いて１画分１３ｇの条件で画分（１）〜画分（１２０）を得た。
【００５５】
水：メタノール＝５０容量部：５０容量部（１Ｌ）→メタノール（１Ｌ）
メタノール（１Ｌ）→メタノール：クロロホルム＝１容量部：１容量部（１Ｌ）
メタノール：クロロホルム＝１容量部：１容量部（１Ｌ）→クロロホルム（１Ｌ）
次いで、得られた画分１．２９ｇを２回に分けて、充填剤として多孔質ゲル（ＧＥヘルスケア  バイオサイエンス社製、商品名：Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０）を用いたサイズ排除カラムクロマトグラフィーにより精製した。同精製においては、移動層としてクロロホルムとメタノールの混合溶媒（クロロホルム：メタノール＝１容量部：１容量部）を用いて、１画分２ｇの条件で画分（４２）〜画分（５５）を得た。
【００５６】
続いて、得られた画分３９０ｍｇについて、高速液体クロマトグラフィーにより精製した。この精製においては、保持時間５２分に現れる比屈折率（ＲＩ）のピークにて確認される画分より、化学式（１Ａ）に示される有機化合物２１．０ｍｇを得た。
【００５７】
なお、上記高速液体クロマトグラフィーの詳細は、以下のとおりである。
分取用カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ（商品名、６．０×２５０ｍｍ、ガスクロ工業社製）、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ（商品名、２０×２５０ｍｍ、ＮａｃａｌａｉＴｅｓｑｕｅ社製）
検出器：ＵＶ８０００（東ソー社製）、ＲＩ８０００（東ソー社製）
流速：１．６ｍｌ／ｍｉｎ又は５．０ｍｌ／ｍｉｎ
移動層：メタノールと水の混合溶媒（メタノール：水＝８５容量部：１５容量部）
紫外部吸収の検出波長：２５４ｎｍ
一方、上記高速液体クロマトグラフィーにおいて、保持時間４４〜４７分の非屈折率（ＲＩ）のピークから得られる画分について、更に高速液体カラムクロマトグラフィーにより精製した。なお、この精製においては、移動層として、メタノール、２−プロパノール及び水の混合溶媒（メタノール：２−プロパノール：水＝３容量部：３容量部：４容量部）を用いている。この精製においては、保持時間１９９分に現れる比屈折率（ＲＩ）のピークにて確認される画分より、化学式（１Ｂ）に示される有機化合物１８．７ｍｇを得た。
【００５８】
＜化学式（２）に示される有機化合物の単離＞
化学式（２）に示される有機化合物は、上記粗精製物１０２ｇについて、上記＜化学式（１）に示される有機化合物の単離＞により得られる画分より単離することができる。すなわち、粗精製物１０２ｇについて、上記逆相系多孔質樹脂を充填剤として用いたカラムクロマトグラフィーにより精製した際に、メタノールを展開溶媒として得られる画分（２）より単離することができる。この画分（２）の６８．７ｇを更に逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径５ｃｍ×高さ２０ｃｍ）により精製した。この精製においては、以下に示される溶媒のリニアグラジエント（linear gradient）溶媒を展開溶媒として用いて１画分１０ｇの条件で画分（２４７）〜画分（２７６）を得た。
【００５９】
メタノール：水＝５０容量部：５０容量部（２Ｌ）
→メタノール（２Ｌ）
次いで、得られた画分２．４５ｇについて、高速液体クロマトグラフィーにより精製した。同精製においては、保持時間３１〜３７分に現れる比屈折率（ＲＩ）のピークにて確認される画分の３６６ｍｇを得た。なお、この精製においては、移動層として、メタノールとジクロロメタンと水との混合溶媒（メタノール：ジクロロメタン：水＝９０容量部：０．２容量部：９．８容量部）を用いている。続いて、得られた画分３６６ｍｇについて、更に高速液体クロマトグラフィーにより精製した。同精製においては、保持時間４８分に現れる比屈折率（ＲＩ）のピークにて確認される画分より、化学式（２Ａ）に示される有機化合物を得た。また、保持時間５５分に現れる比屈折率（ＲＩ）のピークにて確認される画分より、化学式（２Ｂ）に示される有機化合物を得た。
【００６０】
＜化学式（３）及び化学式（４）に示される有機化合物の単離＞
オオバギの乾燥葉１２．１ｋｇをメタノールで３回（合計４５Ｌ）抽出し、約３Ｌまで濃縮した後、ヘキサン３Ｌで抽出した。残ったメタノール層をさらに濃縮してメタノールを留去した後、水３Ｌに懸濁させ、酢酸エチル及び１−ブタノールのそれぞれ３Ｌで連続的に抽出、濃縮し、ヘキサン層７０．０ｇ、酢酸エチル層８０１ｇ、１−ブタノール層３７４ｇ、水層４９９ｇを得た。
【００６１】
このうち１−ブタノール可溶画分１８１ｇを２０容量％メタノール２Ｌに懸濁したものについて、逆相系多孔質樹脂（三菱化学社製、商品名：ダイヤイオンＨＰ−２０）を充填剤として用いたカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径８ｃｍ×高さ４０ｃｍ）により精製した。同精製においては、以下に示される展開溶媒を用いて１画分１Ｌの条件で画分を得た。
【００６２】
水：メタノール＝４容量部：１容量部，６Ｌ
水：メタノール＝２容量部：３容量部，６Ｌ
水：メタノール＝３容量部：２容量部，６Ｌ
水：メタノール＝１容量部：４容量部，６Ｌ
メタノール，６Ｌ
このうちメタノール：水＝２：３→３：２溶出画分のフラクションＭＴＢ−４（２３．１ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径５ｃｍ×長さ５０ｃｍ）により、ＭＴＢ−４−１からＭＴＢ−４−６を得た。同精製においては、以下に示される展開溶媒を用いて１画分０．５Ｌの条件で画分を得た。
【００６３】
クロロホルム：メタノール＝１００容量部：１容量部，６Ｌ
クロロホルム：メタノール＝２５容量部：１容量部，３Ｌ
クロロホルム：メタノール＝１０容量部：１容量部，３Ｌ
クロロホルム：メタノール＝２容量部：１容量部，３Ｌ
クロロホルム：メタノール＝１容量部：１容量部，３Ｌ
シリカゲルカラムクロマトグラフィーから得られたクロロホルム：メタノール＝２：１溶出画分ＭＴＢ−４−５の７．６６ｇを、４回に分けて、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径５ｃｍ×長さ２０ｃｍ）により精製した。同精製においては、以下に示される溶媒のリニアグラジエント（linear gradient）溶媒を展開溶媒として用いて１画分１０ｇの条件で画分（１２６）〜画分（１４４）であるＭＴＢ４−５−３の２．４７ｇを得た。
【００６４】
水：メタノール＝９０容量部：１０容量部（１Ｌ）
→水：メタノール＝５０容量部：５０容量部（１Ｌ）
→水：メタノール＝５０容量部：５０容量部（０．６Ｌ）
→水：メタノール＝２０容量部：８０容量部（０．６Ｌ）
次に、ＭＴＢ４−５−３の２．４７ｇを液滴向流分配クロマトグラフィー（商品名：ＥＹＥＬＡ  ＤＣＣ−３０００、東京理化器械）により精製した。同精製においては、溶媒は固定相にクロロホルム：メタノール：水：１−プロパノール＝９：１２：８：２の下層を、移動相にその上層を用いて液滴上昇法にて溶出した。溶出液は５ｇを１フラクションとして画分（８６）〜画分（１５）であるＭＴＢ４−５−３−５の１５４ｇを得た。続いて、ＭＴＢ４−５−３−５の１５４ｇを高速液体カラムクロマトグラフィーにより精製した。同精製においては、移動層としてアセトニトリルと水との混合溶媒（アセトニトリル：水＝２０容量部：８０容量部）を用いて、保持時間１７分に現れる比屈折率（ＲＩ）のピークにて確認される画分より、化学式（３）に示される有機化合物２．９ｍｇを得た。
【００６５】
一方、シリカゲルカラムクロマトグラフィーから得られたクロロホルム：メタノール＝１：１溶出画分ＭＴＢ−４−６の３．５４ｇを、２回に分け、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（カラム寸法：内径５ｃｍ×長さ２０ｃｍ）により精製した。同精製においては、以下に示される溶媒のリニアグラジエント（linear gradient）溶媒を展開溶媒として用いて１画分１０ｇの条件で画分（５１）〜画分（１０５）であるＭＴＢ４−６−２の３０６ｍｇを得た。
【００６６】
水：メタノール＝９０容量部：１０容量部（１Ｌ）
→水：メタノール＝５０容量部：５０容量部（１Ｌ）
→水：メタノール＝５０容量部：５０容量部（１Ｌ）
→水：メタノール＝３０容量部：７０容量部（１Ｌ）
次に、ＭＴＢ４−６−２の３０６ｍｇを液滴向流分配クロマトグラフィーにより精製した。同精製においては、溶媒は固定相にクロロホルム：メタノール：水：１−プロパノール＝９：１２：８：２の下層を、移動相にその上層を用いて液滴上昇法にて溶出した。溶出液は５ｇを１フラクションとして画分（４３）〜画分（６０）であるＭＴＢ４−６−２−２の９７．６ｍｇを得た。続いて、ＭＴＢ４−６−２−２の９７．６ｍｇを高速液体カラムクロマトグラフィーにより精製した。同精製においては、移動層としてアセトニトリルと水との混合溶媒（アセトニトリル：水＝２０容量部：８０容量部）を用いて、保持時間２４分に現れる比屈折率（ＲＩ）のピークにて確認される画分より、化学式（４）に示される有機化合物６．６ｍｇを得た。
【００６７】
＜化学式（１Ａ）に示される有機化合物の同定＞
化学式（１Ａ）に示される有機化合物については、高分解能エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ）の結果より、分子式Ｃ３０Ｈ３６Ｏ６と決定した。
【００６８】
表１に示される１ＨＮＭＲスペクトルのデータにおいて、δ１．３４，１．６０，１．６９，１．７５，１．８１にそれぞれ３Ｈ分のメチル水素のシグナルが５個、δ６．８２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）にオルトカップリングした芳香環上の水素のシグナルが２個、δ１２．４に分子内水素結合により大きく低磁場にシフトした水酸基の水素のシグナルが１個観測された。
【００６９】
表１に示される１３ＣＮＭＲスペクトルのデータにおいては、炭素総数３０個のうち、δ７５．９，７６．９に酸素原子が結合すると推測されるｓｐ３炭素のシグナルが２個、δ１９６．６にカルボニル炭素のシグナルが１個観測されたことにより、この有機化合物はフラバノン骨格を有し、１個のプレニル基と１個のゲラニル基を有することが推測された。
【００７０】
【表１】
0005221155.tif 000014
更に、ＨＭＢＣスペクトルにより、５位の水酸基（δ１２．４（ｓ））と６位の炭素（δ１０７．０）とに相関が見られ、１´´´位の水素（δ３．３５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ））は、５位の炭素（δ１６１．３）及び７位の炭素（δ１６３．７）に相関が見られたことから、フラバノン骨格のＡ環の６位にプレニル基が結合していることが明らかとなった。また、１´´位の水素（δ２．８０（ｍ），δ２．７０（ｍ））は、１´位の炭素（δ１２７．２）及び３´位の炭素（δ１４１．０）に相関が見られた。このことから、Ｂ環の２´位にゲラニル基が結合しており、分子式から得られた不飽和度を換算してその３´´´位の炭素と７位の炭素がエーテル結合により閉環していることが明らかとなった。
【００７１】
以上により、上記有機化合物の平面構造について同定した。
立体化学の決定法は、例えば文献：Cichewicz, R. H., Kenyon, V. A. and Whitman, S., J. Am. Chem. Soc., 126, 14910-14920, (2004)、文献：Kikuchi, T., Mori, Y., Yokoi, T., Nakazawa, S., Kuroda, H., Masada, Y., Kitamura, K. and Kuriyama, K., Chem. Pharm. Bull., 31, 106-113, (1983)等を参考にした。これにより、３´´位の絶対立体配置については、３´´Ｒと決定された。
【００７２】
次に、化学式（１Ａ）に示される有機化合物の物理的性質について以下に示す。
性状：黄色非晶質粉末
旋光度：［α］Ｄ３０＋７５．９°（ｃ＝１．４０，ＣＨＣｌ３）
赤外吸収スペクトル：νｍａｘ（ｆｉｌｍ）ｃｍ−１：３３６７，１６３４，１６０１，１４４９，１１５２
円二色性スペクトル：Δε（ｎｍ）：＋２５．２（２１８），−２．３（２９３），＋２．０（３３０）
（ｃ＝２．１３×１０−５Ｍ，ＭｅＯＨ）
紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：２２０（４．１１），２３４（４．１５），２８９（４．１１），３３５ｓｈ（３．６３）
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｍ／ｚ：５１５．２４１６［Ｍ＋Ｎａ］＋
（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ３４Ｏ６Ｎａ：５１５．２４２４）
＜化学式（１Ｂ）に示される有機化合物の同定＞
化学式（１Ｂ）に示される有機化合物の同定においては、上記＜化学式（１Ａ）に示される有機化合物の同定＞欄に記載の方法と同様に行った。
【００７３】
化学式（１Ｂ）に示される有機化合物について、１ＨＮＭＲスペクトル及び１３ＣＮＭＲスペクトルのデータを表２に示す。
【００７４】
【表２】
0005221155.tif 000015
３´´位の絶対立体配置については、上述した文献を参考にして、３´´Ｓと決定された。
【００７５】
次に化学式（１Ｂ）に示される有機化合物の物理的性質について以下に示す。
性状：黄色非晶質粉末
旋光度：［α］Ｄ２５＋２５．０°（ｃ＝１．２５，ＣＨＣｌ３）
赤外吸収スペクトル：νｍａｘ（ｆｉｌｍ）ｃｍ−１：３３６７，１６３７，１６０３，１４５１，１１５５
円二色性スペクトル：Δε（ｎｍ）：＋９．２（２２６），−３．１（２９２），＋１．３（３３５）
（ｃ＝３．７４×１０−５Ｍ，ＭｅＯＨ）
紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：２１２（４．４６），２３０ｓｈ（４．３２），２９０（４．１８），３３５ｓｈ（３．５４）
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｍ／ｚ：５１５．２４２４［Ｍ＋Ｎａ］＋
（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ３４Ｏ６Ｎａ：５１５．２４０４）
＜化学式（２Ａ）に示される有機化合物の同定＞
化学式（２Ａ）に示される有機化合物については、ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳの結果より、分子式Ｃ３０Ｈ３４Ｏ６と決定した。
【００７６】
表３に示される１ＨＮＭＲスペクトルのデータにおいて、δ１．７５に６Ｈ分のメチル水素のシグナルが１個、δ１．４８，１．６９，１．８１にそれぞれ３Ｈ分のメチル水素のシグナルが３個、δ６．８４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）にオルトカップリングした芳香環上の水素のシグナルが２個、δ５．５９（ｄ，Ｊ＝１５Ｈｚ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝１５，１１Ｈｚ）にｔｒａｎｓ二重結合のシグナルが、δ５．７８（ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ），６．３４（ｄｄ，Ｊ＝１５，１１Ｈｚ）にＣ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｃの水素のシグナルが、またδ１２．４に分子内水素結合により大きく低磁場にシフトした水酸基の水素のシグナルが１個みられた。
【００７７】
表３に示される１３ＣＮＭＲスペクトルのデータにおいては、炭素総数３０個のうちδ７６．１，７７．２に酸素原子が結合すると推測されるｓｐ３炭素のシグナルが２個、δ１９６．５にカルボニル炭素のシグナルが１個観測されたことにより、この有機化合物はフラバノン骨格を有し、１個のプレニル基と１個のゲラニル基を有することが推測された。
【００７８】
【表３】
0005221155.tif 000016
更に、ＨＭＢＣスペクトルにより、５位の水酸基（δ１２．４（ｓ））と６位の炭素（δ１０７．０）に相関が見られ、１´´´位の水素［δ３．３５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ））と５位の炭素（δ１６１．３）及び７位の炭素（δ１６３．７）に相関が見られた。このことから、フラバノン骨格のＡ環の６位にプレニル基が結合していることが明らかとなり、また１´´位の水素（δ２．７７（ｍ），δ２．７３（ｍ））と１´位の炭素（δ１２７．３）及び３´位の炭素（δ１４１．１）に相関が見られた。このことから、Ｂ環の２´位にゲラニル基が結合しており、分子式から得られた不飽和度を勘案してその３´´´位の炭素と７位の炭素がエーテル結合により閉環していることが明らかとなった。
【００７９】
上記有機化合物において２位の絶対立体配置については、ＣＤスペクトルを測定し、上記＜化学式（１Ａ）に示される有機化合物＞欄に記載の方法と同様にして２Ｓと決定した。
【００８０】
上記有機化合物において３´´位の絶対立体配置については、上述した文献を参考にして、３´´Ｒと決定された。
次に化学式（２Ａ）に示される有機化合物の物理的性質について以下に示す。
【００８１】
性状：黄色非晶質粉末
旋光度：［α］Ｄ３０−９．５３°（ｃ＝０．４８５，ＣＨＣｌ３）
赤外吸収スペクトル：νｍａｘ（ｆｉｌｍ）ｃｍ−１：３４３４，１６３４，１４５１，１１５３
円二色性スペクトル：Δε（ｎｍ）：−６．８（２３９），＋０．３９（２６２），−５．４（２９３），＋０．８６（３２３）
（ｃ＝２．８６×１０−５Ｍ，ＭｅＯＨ）
紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：２３７（４．３８），２７５ｓｈ（４．０２），２８９（４．１６），３３４ｓｈ（３．５４）
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｍ／ｚ：４９１．２４２４［Ｍ＋Ｈ］＋
（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ３５Ｏ６：４９１．２４２８）、５１３．２２３５［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ３４Ｏ６Ｎａ：５１３．２２４７）
＜化学式（２Ｂ）に示される有機化合物の同定＞
化学式（２Ｂ）に示される有機化合物の同定においては、上記＜化学式（２Ａ）に示される有機化合物の同定＞欄に記載の方法と同様に行った。
【００８２】
化学式（２Ｂ）に示される有機化合物について、１ＨＮＭＲスペクトル及び１３ＣＮＭＲスペクトルのデータを表４に示す。
【００８３】
【表４】
0005221155.tif 000017
３´´位の絶対立体配置については、上述した文献を参考にして、３´´Ｓと決定された。
【００８４】
次に化学式（２Ｂ）に示される有機化合物の物理的性質について以下に示す。
性状：黄色非晶質粉末
旋光度：［α］Ｄ３０＋７５．６°（ｃ＝０．４１８，ＣＨＣｌ３）
赤外吸収スペクトル：νｍａｘ（ｆｉｌｍ）ｃｍ−１：３３９６，１６３２，１６０２，１４５２，１１５３
円二色性スペクトル：Δε（ｎｍ）：＋１９．１（２３２），＋１．５（２６８），−２．３（２９５），＋１．３（３３１）
（ｃ＝２．４７×１０−５Ｍ，ＭｅＯＨ）
紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：２３７（４．３８），２７５ｓｈ（４．０１），２９２（４．１５），３３８ｓｈ（３．５１）
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）ｍ／ｚ：４９１．２４２３［Ｍ＋Ｈ］＋
（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ３５Ｏ６：４９１．２４２８）、５１３．２２４１［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ３４Ｏ６Ｎａ：５１３．２２４７）
＜化学式（３）に示される有機化合物の同定＞
化学式（３）に示される有機化合物については、ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳの結果より、分子式Ｃ２６Ｈ３４Ｏ１１と決定した。
【００８５】
表５に示される１ＨＮＭＲ及び１３ＣＮＭＲスペクトルのデータにおいて、δＨ７．１０（２Ｈ，ｓ）の芳香環水素、δＣ１６８．３のエステルカルボニル炭素、δＣ１１０．４（ｄ）に２個分のｓｐ２炭素が観測されたことからガロイル基が存在することが示唆された。また、δＨ４．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）のアノマー水素およびδＣ１０３．３（ｄ）のアノマー炭素のほか、δＣ７５．３（ｄ），δＣ７８．１（ｄ），δＣ７２．１（ｄ），δＣ７５．６（ｄ），δＣ６５．２（ｔ）のシグナルから６位がエステル化されたグルコースの存在が示唆された。残りの炭素１３個分のシグナルについては、δＣ２０２．２（ｓ）はケトン基の存在を示唆し、４つのｓｐ２炭素（δＣ１６６．０（ｓ），δＣ１３８．０（ｄ），δＣ１２９．５（ｄ），δＣ１２６．１（ｄ））から二重結合が２個存在することが示唆された。また、２個の二重結合は、１ＨＮＭＲにおいてδＨ５．６９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５，７，１Ｈｚ）とδＨ５．５３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５，９，１Ｈｚ）から２置換のトランス二重結合、及び、δＨ５．７９（１Ｈ，ｂｒｓ）から３置換の二重結合であることが推定された。また、メチル炭素が４個（δＣ２７．９（ｑ），δＣ２７．４（ｑ），δＣ２３．７（ｑ），δＣ２１．６（ｑ））存在し、遠隔スピン結合していると考えられるδＨ１．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ）、ｄｏｕｂｌｅｔメチルδＨ１．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）、及び、ｓｉｎｇｌｅｔメチルが２個（δＨ０．８７（３Ｈ，ｓ）、δＨ０．８６（３Ｈ，ｓ））観測された。残りの炭素は、４級炭素が１個（δＣ３７．０（ｓ）、メチン炭素が２個（δＣ５６．３（ｄ），δＣ７８．６（ｄ））、メチレン炭素が１個（δＣ４９．１（ｔ））でδＣ７８．６（ｄ）のシグナルは酸素が結合したものと考えられた。以上のＮＭＲデータおよび分子式から導き出される不足水素指数（不飽和度）を勘案することにより、アグリコン部分はメガスティグマン骨格を有していると推測した。
【００８６】
【表５】
0005221155.tif 000018
更に、ＨＭＱＣ、及びＨＭＢＣスペクトルを測定したところ、グルコースの６位の水素（δＨ４．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，２Ｈｚ），δＨ４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，７Ｈｚ））とガロイル基のカルボニル炭素（δＣ１６８．３（ｓ））との間に相関ピークが観測されたことからガロイル基がグルコースの６位にエステル結合していることが明らかになった。またグルコースの１位の水素（δＨ４．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ））とアグリコン部の９位の炭素δＣ７８．６（ｄ）に相関が見られたことから、グルコースの結合位置を９位と決定した。
【００８７】
ＤＱＦ−ＣＯＳＹスペクトルを測定したところ、３´と４´位の相関は対角ピークにより不明瞭であったものの、グルコースの１´位から３´位および４´位から６´位、また、アグリコン部の６から１０位までのスピン結合が観測された。また、ＨＭＢＣの観測により、ガロイル基を除いた部分の平面構造は３−ｏｘｏ−α−ｉｏｎｏｌｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓであることが明らかになった。９位の立体構造については、δＣ７８．６により９Ｒであると決定した。また６位の立体構造についてはＣＤスペクトルを測定したところ、＋３２．３（２４５）の値を示したことから６Ｒであることが明らかになった。
【００８８】
以上の結果、この有機化合物は（６Ｒ，９Ｒ）−３−ｏｘｏ−α−ｉｏｎｏｌ  ９−Ｏ−（６−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ）−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅであると決定した。
【００８９】
次に化学式（３）に示される有機化合物の物理的性質について以下に示す。
性状：非晶質粉末
旋光度：［α］Ｄ２５＋７８．４°（ｃ＝０．１９３,ＣＨ３ＯＨ）
赤外吸収スペクトル：νｍａｘ（ｆｉｌｍ）ｃｍ−１：３３０３，１７０６，１６４８，１４４９，１２５９,１０３１
紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：２１９（４．８），２７５（４．４）
円二色性スペクトル：Δε（ｎｍ）：＋３２．３（２４５），−１．５６（３１７）
（ｃ＝１．０６×１０−５Ｍ，ＭｅＯＨ）
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ：５４５．１９９０［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２６Ｈ３４Ｏ１１Ｎａ：５４５．１９９３）
＜化学式（４）に示される有機化合物の同定＞
化学式（４）に示される有機化合物については、ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳの結果より、分子式Ｃ３３Ｈ３６Ｏ１５と決定した。
【００９０】
表６に示される１ＨＮＭＲ及び１３ＣＮＭＲスペクトルのデータにおいて、δＨ７．１０（２Ｈ，ｓ）の芳香環水素、δＣ１６８．２のエステルカルボニル炭素、δＣ１１０．５（ｄ）に２個分のｓｐ２炭素が観測されたことから、ガロイル基が存在することが示唆された。また、δＨ４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）のアノマー水素およびδＣ１０２．７（ｄ）のアノマー炭素のほか、δＣ７５．０（ｄ），δＣ７８．０（ｄ），δＣ７２．２（ｄ），δＣ７５．８（ｄ），δＣ６５．０（ｔ）のシグナルから６位がエステル化されたグルコースの存在が示唆された。
【００９１】
残りの炭素１８個分のシグナルについては、ｓｐ２炭素（δＣ１５０．７（ｓ），δＣ１４９．２（ｓ），δＣ１４７．５（ｓ），δＣ１４７．３（ｓ），δＣ１３７．６（ｓ），δＣ１３３．９（ｓ），δＣ１２０．３（ｄ），δＣ１１９．８（ｄ），δＣ１１８．１（ｄ），δＣ１１６．２（ｄ），δＣ１１１．９（ｄ），δＣ１１１．３（ｄ））が１２個観測されたことから芳香環が２個存在し、そのうち４個の炭素（δＣ１５０．７（ｓ），δＣ１４９．２（ｓ），δＣ１４７．５（ｓ），δＣ１４７．３（ｓ））には酸素が結合していると考えられた。また、芳香環領域の１ＨＮＭＲのカップリングパターン（δＨ６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ），δＨ７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），δＨ６．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，２Ｈｚ））、及び（δＨ６．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ），δＨ６．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），δＨ６．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８，２Ｈｚ））から１，３，４−置換ベンゼンが２個存在することが示唆された。また、δＣ８７．７（ｄ），δＣ８７．１（ｄ），δＣ７３．０（ｔ），δＣ７２．６（ｔ）のシグナルからこれらの炭素には酸素が結合しており、分子式から導き出される不足水素指数（不飽和度）および残りのδＣ５５．５（ｄ），δＣ５５．４（ｄ）の比較的低磁場にシフトしたメチン炭素の存在を勘案することにより、アグリコン部分はセサミン型リグナン骨格を有していると推測した。
【００９２】
【表６】
0005221155.tif 000019
更に、ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣスペクトルを測定したところ、グルコースの６位の水素（δＨ４．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，２Ｈｚ），δＨ４．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，８Ｈｚ））とガロイル基のカルボニル炭素（δＣ１６８．２（ｓ））との間に相関ピークが観測されたことからガロイル基がグルコースの６位にエステル結合していることが明らかになった。またグルコースの１位の水素（δＨ４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ））とアグリコン部の４位の炭素（δＣ１４７．５（ｓ）］に相関が見られたこと、及びＰＮＯＥＳＹスペクトルでグルコースの１位の水素（δＨ４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ））とアグリコン部の５位水素（δＨ７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ））との間にＮＯＥ相関が観測されたことから、グルコースの結合位置を４位と決定した。更に、ＯＭｅの結合位置については、δＨ３．８４（３Ｈ，ｓ）とδＣ１５０．７（ｓ）に相関が見られるとともに、δＨ３．８７（３Ｈ，ｓ）とδＣ１４９．２（ｓ）に相関が見られたことから、それぞれアグリコン部の３位、３´位に結合していることが明らかになった。その他の部分についてもＨＭＢＣ相関の観測により、この有機化合物の平面構造を決定した。この有機化合物のアグリコン部はｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌである。
【００９３】
絶対配置を決定するためにＣＤスペクトルを測定したところ、−０．２３（２３５），＋１．７（２８０）の値が観測されたことにより、（＋）−ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌをアグリコンとすることが明らかになった。以上の結果、この有機化合物は（＋）−ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ  ４−Ｏ−（６−Ｏ−ｇａｌｌｏｙｌ）−β−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅであると決定した。
【００９４】
次に化学式（４）に示される有機化合物の物理的性質について以下に示す。
性状：非晶質粉末
旋光度：［α］Ｄ２５＋１８．１°（ｃ＝０．４４０，ＣＨ３ＯＨ）
赤外吸収スペクトル：νｍａｘ（ｆｉｌｍ）ｃｍ−１：３３６７，１７０２，１６０６，１５１４，１２６６，１２２６
紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（ｌｏｇε）：２７６（４．１），２１８（４．４），２０７（４．６）
円二色性スペクトル：Δε（ｎｍ）：＋１．７（２８０），＋１．８（２５６），−０．２３（２３５），＋１．２８（２２３）
（ｃ＝１．１８×１０−５Ｍ，ＭｅＯＨ）
ＨＲ−ＥＳＩ−ＭＳ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ  ｍｏｄｅ）ｍ／ｚ：６９５．１９４９［Ｍ＋Ｎａ］＋（ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３３Ｈ３６Ｏ１５Ｎａ：６９５．１９４６）
＜化学式（１）及び（２）に示される有機化合物の活性試験＞
（ｉ）抗腫瘍活性
ＫＢ細胞（ヒト鼻咽喉癌細胞）及びＡ５４９細胞（ヒト肺癌細胞）を用いてＭＴＴ分析法を行ない、癌細胞に対する増殖抑制活性を調べた。培養、及び測定には９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅを使用し、ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅで行なった。
【００９５】
培地は牛胎児血清を含むＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）１０％ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｃａｌｆ  Ｓｅｒｕｍ）５００ｍｌに、抗生物質としてｋａｎａｍｙｃｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ、ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ  Ｂ（ｓｉｇｍａ  Ａ９５２８）２０００倍濃度溶液を２５０μｌ加えたものを使用した。抗生物質はγ線照射済みのａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ  Ｂ  １００ｍｇを無菌的に２０ｍｌの滅菌ミリＱ水で溶解し、１ｍｌずつ滅菌１．５ｍｌチューブに分注して−２０℃で凍結保存した。注射用アンプル入りｋａｎａｍｙｃｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  １ｇ（力価）／４ｍｌと上記のａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ  Ｂ  ｓｏｌｎ  １ｍｌを無菌的に混和することで抗生物質の２０００倍溶液とした。ＦＣＳは５６℃、３０分処理することで非働化し、５０ｍｌチューブに分注して−２０℃で凍結保存した。細胞の培養は３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターを用いて培養した。
【００９６】
ＭＴＴ試薬は、ＰＢＳに溶解し、５ｍｇ／ｍｌになるように調製した。使用時には培地で１０倍希釈（０．５ｍｇ／ｍｌ）したものを用いた。
上記有機化合物を乾燥させた後、１．５ｍｌチューブに量り取りＤＭＳＯに溶解させて５ｍＭに調製したもの及びさらに段階希釈したものをサンプルとして用意した。
【００９７】
ＭＴＴ分析はｔｒｉｐｌｉｃａｔｅで行なった。ＫＢ細胞を３×１０３ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌ（９０μｌ  ｍｅｄｉｕｍ）で９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに播き、３７℃で２４時間培養した。培養後、サンプル及びコントロールをそれぞれ培地で１０倍希釈したものを１０μｌずつ各ｗｅｌｌに加え、３７℃で７２時間培養した。その後、培地をアスピレーターで吸い出し、培地で１０倍希釈したＭＴＴ溶液１００μｌを各ｗｅｌｌに加え、３７℃で１．５時間培養した。Ｐｌａｔｅを逆さにして培地を捨て、１００μｌのＤＭＳＯを加えて細胞を溶解させた後、分光マイクロプレートリーダー（λ１＝５４０ｎｍ，λ２＝６２０ｎｍ，λ１−λ２）で比色定量した。
【００９８】
抗腫瘍活性試験の結果を表７に示す。
なお、表７には、コントロールを１００％とし、生存率（％）を引いた値を示している。生存率（％）は、コントロールに対する各サンプルの百分率である。
【００９９】
【表７】
0005221155.tif 000020
表７に示される結果から明らかなように、ＫＢ細胞及びＡ５４９細胞のいずれについても、化学式（１Ａ）に示される有機化合物が最も強い活性を有することがわかった。
【０１００】
（ｉｉ）抗酸化活性
ＤＰＰＨ（α,α-diphenyl-β-picrylhydradil）は５１７ｎｍに極大吸収を持つ紫色の安定ラジカルであり、水素を得ることにより無色のヒドラジンになる。この呈色反応を利用してラジカル捕捉活性を測定した。まず、上記有機化合物をエタノールに溶解して試料溶液を０．５ｍｌ調製した。続いて、各試料溶液に０．１５ｍＭのＤＰＰＨ溶液（溶媒はエタノール）を０．５ｍｌ加えて攪拌し、暗所にて１時間反応させた後に５１７ｎｍにおける吸光度を測定した。一方、α−トコフェロールを比較対照として評価した。表８には、活性がほとんど確認されなかった場合は“±”で示し、活性が確認されたが弱い場合は“＋”で示し、活性が十分に確認された場合は“＋＋”で示し、強い活性が確認された場合は“＋＋＋”で示している。
【０１０１】
【表８】
0005221155.tif 000021
（ｉｉｉ）抗菌活性
グラム陰性菌の指標菌として下記表９に示される菌株について抗菌活性を評価した。上記有機化合物を７０％エタノールに溶解させた後、該試料濃度が０ｐｐｍ、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、１５ｐｐｍ、２０ｐｐｍ又は５０ｐｐｍになるように調製した標準寒天培地を作製した。続いて、これらの標準寒天培地をオートクレーブ殺菌することにより評価培地を作製し、これらの評価培地に上記各菌を接種してその生育を確認した。表９には、活性がほとんど確認されなかった場合は“±”で示し、活性が確認されたが弱い場合は“＋”で示し、活性が十分に確認された場合は“＋＋”で示し、強い活性が確認された場合は“＋＋＋”で示している。
【０１０２】
【表９】
0005221155.tif 000022
＜化学式（３）及び（４）に示される有機化合物の活性試験＞
（ｉｖ）抗腫瘍活性
上記（ｉ）抗腫瘍活性に示される方法と同様にして抗腫瘍活性を評価した場合において、得られる結果を推定した。表１０には、活性がほとんど確認されない場合は“±”で示し、活性が確認されるが弱い場合は“＋”で示し、活性が十分に確認される場合は“＋＋”で示し、強い活性が確認される場合は“＋＋＋”で示している。
【０１０３】
【表１０】
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（ｖ）抗酸化活性
上記（ｉｉ）抗酸化活性に示される方法と同様にして抗酸化活性を評価した場合において、得られる結果を推定した。表１１には、活性がほとんど確認されない場合は“±”で示し、活性が確認されるが弱い場合は“＋”で示し、活性が十分に確認される場合は“＋＋”で示し、強い活性が確認される場合は“＋＋＋”で示している。
【０１０４】
【表１１】
0005221155.tif 000024