(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
0005299926.tif 000023
［式中、
Ｙ１は、炭素数１〜８の２価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なり、水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３アルキル基であり；
Ｒ３は下記式（ａ）：
【化２】
0005299926.tif 000024
又は下記式（ｂ）：
【化３】
0005299926.tif 000025
（式中、
Ｒ４は水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ５は水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ６は置換又は非置換のＣ１−１０炭化水素基であり；
Ｒ７は水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−６炭化水素基であり；
Ｙ２は−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−である）
である］
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する抗菌剤。
【請求項２】
Ｙ１が、炭素数１〜８の２価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基であり；
Ｒ１及びＲ２が、同一又は異なり、水素原子又はメチル基であり；
Ｒ４が水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ５が水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ６が置換又は非置換のＣ１−１０炭化水素基であり；
Ｒ７が水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−６炭化水素基であり；
Ｙ２が−ＣＨ２−、−ＮＨ−又は−Ｏ−である、
請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
Ｙ１が、炭素数４〜７の２価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基であり；
Ｒ１及びＲ２が水素原子であり；
Ｒ４が水素原子又はメチル基であり；
Ｒ５が水素原子又はメチル基であり；
Ｒ６が−ＣＨ＝ＣＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８は置換又は非置換のＣ１−３炭化水素基であり、Ｒ９は置換又は非置換のＣ３−５炭化水素基である）であり；
Ｒ７が水素原子又はメチル基であり；
Ｙ２が−ＣＨ２−又は−ＮＨ−である、
請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項４】
下記式（ＩＩ）：
【化４】
0005299926.tif 000026
で示される化合物又はその塩。
【請求項５】
下記式（ＩＩＩ）：
【化５】
0005299926.tif 000027
（式中、ｎは４又は７である）
で示される化合物又はその塩。
【請求項６】
請求項４もしくは５に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ミキソピロニン誘導体及びその用途、特に抗菌剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ミキソピロニン（下記式参照）は、Myxococcus fulvus Mxf50 から単離されたポリケチド由来の細菌性代謝産物であり、細菌ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲＮＡＰ）を選択的に阻害することによって、グラム陽性菌及びグラム陰性菌に対して抗菌作用を示す（非特許文献１〜３）。
【０００３】
【化１】
0005299926.tif 000002
【０００４】
ミキソピロニンは、原核生物のＲＮＡＰには作用するが真核生物のＲＮＡＰには作用しないという選択性を有する。また、リファンピシン耐性 Staphylococcus aureus への作用が確認されていることに加え、ＲＮＡＰにおける作用部位がリファンピシンとは異なる蝶番部位であることが同定されているため、リファンピシン耐性Mycobacterium tuberculosis をはじめ、幅広い耐性菌への適応が期待されている（非特許文献４、５）。よって、昨今急速に増えている薬剤耐性菌感染症や結核等の新興・再興感染症に対する方策の一つとして、その薬理作用の活用が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Hofle, G. et al., Liebigs Ann. Chem.（1983）1656-1667
【非特許文献２】Hofle, G. et al., Liebigs Ann. Chem.（1984）1088-1093
【非特許文献３】Hofle, G. et al., The Journal of Antibiotics（1983）36, 1651-1658
【非特許文献４】Panek, S. J. et al., The Journal of Organic Chemistry（1998）63, 2401-2406
【非特許文献５】Ebright, H. R. et al., Cell（2008）135, 295-307
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、ミキソピロニンは高脂溶性であるため溶解性が低く、細胞移行性にも際限を有することから、ミキソピロニンを用いた創薬研究は滞っていた。そこで、本発明では、溶解性及び細胞移行性を改善し、広域抗菌スペクトルを示すミキソピロニン誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、極性基であることに加え高細胞移行性を有する抗菌性化合物ホロチンを用いて、ミキソピロニン類とのハイブリッド型分子として設計することで、有効な抗菌活性を発揮し得る化合物を見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、以下の発明を包含する。
［１］下記式（Ｉ）：
【化２】
0005299926.tif 000003
［式中、
Ｙ１は、炭素数１〜８の２価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基であり；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なり、水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３アルキル基であり；
Ｒ３は下記式（ａ）：
【化３】
0005299926.tif 000004
又は下記式（ｂ）：
【化４】
0005299926.tif 000005
（式中、
Ｒ４は水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ５は水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ６は置換又は非置換のＣ１−１０炭化水素基であり；
Ｒ７は水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−６炭化水素基であり；
Ｙ２は−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−である）
である］
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する抗菌剤。
【０００９】
［２］Ｙ１が、炭素数１〜８の２価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基であり；
Ｒ１及びＲ２が、同一又は異なり、水素原子又はメチル基であり；
Ｒ４が水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ５が水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３炭化水素基であり；
Ｒ６が置換又は非置換のＣ１−１０炭化水素基であり；
Ｒ７が水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−６炭化水素基であり；
Ｙ２が−ＣＨ２−、−ＮＨ−又は−Ｏ−である、
［１］に記載の抗菌剤。
【００１０】
［３］Ｙ１が、炭素数４〜７の２価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基であり；
Ｒ１及びＲ２が水素原子であり；
Ｒ４が水素原子又はメチル基であり；
Ｒ５が水素原子又はメチル基であり；
Ｒ６が−ＣＨ＝ＣＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８は置換又は非置換のＣ１−３炭化水素基であり、Ｒ９は置換又は非置換のＣ３−５炭化水素基である）であり；
Ｒ７が水素原子又はメチル基であり；
Ｙ２が−ＣＨ２−又は−ＮＨ−である、
［１］に記載の抗菌剤。
【００１１】
［４］下記式（ＩＩ）：
【化５】
0005299926.tif 000006
で示される化合物又はその塩。
【００１２】
［５］下記式（ＩＩＩ）：
【化６】
0005299926.tif 000007
（式中、ｎは４又は７である）
で示される化合物又はその塩。
【００１３】
［６］［４］もしくは［５］に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬組成物。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、グラム陽性菌及びグラム陰性菌等の生育を阻害することができるミキソピロニン誘導体及びそれを用いた抗菌剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、ペーパーディスク法による抗菌活性試験の結果を示す。図中、ＲＦＰはリファンピシンを表す。また、阻止円のうち、ペーパーディスクの直径である８ｍｍを越える部分を黒色で表した。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、「Ｃ１−３炭化水素基」とは、例えば炭素数１〜３の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基を意味する（本明細書において、それぞれＣ１−３アルキル基、Ｃ２−３アルケニル基、Ｃ２−３アルキニル基と称す）。「Ｃ１−３アルキル基」としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基が挙げられる。「Ｃ２−３アルケニル基」としては、例えばビニル基、１−プロペニル基、アリル基が挙げられる。「Ｃ２−３アルキニル基」としては、例えばエチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル（プロパルギル）基が挙げられる。
【００１７】
本発明において、「Ｃ１−６炭化水素基」とは、例えば炭素数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基を意味する（本明細書において、それぞれＣ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基と称す）。「Ｃ１−６アルキル基」としては、上記Ｃ１−３アルキル基において例示した基の他に、例えばブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられる。「Ｃ２−６アルケニル基」としては、上記Ｃ２−３アルケニル基において例示した基の他に、１−ブテニル基、２−ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基が挙げられる。「Ｃ２−６アルキニル基」としては、上記Ｃ２−３アルキニル基において例示した基の他に、例えば３−ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基が挙げられる。
【００１８】
本発明において、「Ｃ１−１０炭化水素基」とは、例えば炭素数１〜１０の直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基を意味する（本明細書において、それぞれＣ１−１０アルキル基、Ｃ２−１０アルケニル基、Ｃ２−１０アルキニル基と称す）。「Ｃ１−１０アルキル基」としては、上記Ｃ１−６アルキル基において例示した基の他に、例えば１−エチル−ｎ−プロピル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、２−エチル−１，１−ジメチル−ｎ−ブチル基、１，２，３−トリメチル−ｎ−ブチル基、１，５−ジメチル−ｎ−ヘプタン−３−イル基が挙げられる。「Ｃ２−１０アルケニル基」としては、上記Ｃ２−６アルケニル基において例示した基の他に、例えば１−ヘプテニル基、１−オクテニル基、１−ノネニル基が挙げられる。「Ｃ２−１０アルキニル基」としては、上記Ｃ２−３アルキニル基において例示した基の他に、例えば１−ヘプチニル基、４−エチルヘプタン−５−イニル基が挙げられる。
【００１９】
本発明において、「ＣＸ−Ｙ炭化水素基」とは、上記の通り、炭素数Ｘ〜Ｙの直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基を意味する。従って、例えば、本明細書中の「Ｃ３−５炭化水素基」は、上記で示したプロピル基、１−プロペニル基、２−プロピニル基等に限定することなく、その範囲の炭素数を有するアルキル基等を含む。
【００２０】
本発明において、「２価の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基」とは、例えばアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基が挙げられる。「アルキレン基」とは、特に断りがない限り、炭素原子及び水素原子からなる２価の直鎖状又は分岐鎖状の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、プロピレン基、テトラメチレン基、エチルエチレン基が挙げられる。「アルケニレン基」は、特に断りがない限り、炭素原子及び水素原子からなり、少なくとも１個の二重結合を有し、かつ２価の直鎖状又は分岐鎖状の不飽和炭化水素基を意味する。アルケニレン基は、非対称性の炭素により生じるシス又はトランス（（Ｅ）又は（Ｚ））異性体の基を含む。アルケニレン基の例としては、エテニレン基、１−プロペニレン基、２−プロペニレン基、２−ブテニレン基が挙げられる。「アルキニレン基」は、特に断りがない限り、炭素原子及び水素原子からなり、少なくとも１個の三重結合を有し、かつ２価の直鎖状又は分岐鎖状の不飽和炭化水素基を意味する。アルキニレン基の例としては、エチニレン基、１−プロピニレン基、２−プロピニレン基が挙げられる。
【００２１】
本明細書におけるアルキル基、アルケニル基、アルキニル基等は、特に断りがない限り、芳香族基、アシル基、水酸基、カルボキシル基、アミノ基（−ＮＨ２）、ニトロ基、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基（例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基）等から選択される１以上の置換基で置換されていてもよい。
【００２２】
芳香族基としては、例えばフェニル基、トリル基、ナフチル基等の芳香族炭化水素基；フリル基、チエニル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、キノリル基、イソキノリル基等の芳香族複素環基が挙げられる。
【００２３】
アシル基としては、例えばホルミル基、アセチル基、プロピオニル基（プロパノイル基）、ブチリル基（ブタノイル基）、バレリル基（ペンタノイル基）、ヘキサノイル基等のＣ１−６脂肪族アシル基；ベンゾイル基、トルオイル基等の芳香族アシル基（アロイル基）が挙げられる。
【００２４】
ハロゲン原子としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
【００２５】
前記式（Ｉ）で示される化合物の薬学的に許容される塩としては、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、ピロ硫酸、メタリン酸等の無機酸、又はクエン酸、安息香酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、スルホン酸（例えば、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸）等の有機酸との塩が挙げられる。また、フェノール性水酸基又はカルボキシル基を有する場合には、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩として用いることもできる。
【００２６】
本発明の式（Ｉ）で示される化合物において、Ｙ１の直鎖状又は分岐鎖状の炭化水素基は、炭素数が１〜８であり、好ましくは４〜７である。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５は、同一又は異なり、水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−３アルキル基であり、好ましくは水素原子又はメチル基である。Ｒ６は置換又は非置換のＣ１−１０炭化水素基であり、好ましくは−ＣＨ＝ＣＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８は置換又は非置換のＣ１−３炭化水素基であり、Ｒ９は置換又は非置換のＣ３−５炭化水素基である）であり、特に好ましくは、Ｒ８はメチル基であり、Ｒ９はブチル基である。また、Ｒ７は水素原子又は置換もしくは非置換のＣ１−６炭化水素基であり、好ましくは水素原子又はメチル基である。Ｙ２は−ＣＨ２−、−ＮＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−であり、好ましくは−ＣＨ２−又は−ＮＨ−である。
【００２７】
【化７】
0005299926.tif 000008
【００２８】
前記式（Ｉ）で示される化合物のうち、Ｒ１、Ｒ２及びＲ５が水素原子であり、Ｙ１が−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−である化合物は、上記のスキーム１に従い得ることができる（Ｒ６は前記と同義である）。既存の合成方法（Panek, S. J. et al., The Journal of Organic Chemistry（1998）63, 2401-2406）に従いピロン体１を合成後、ピロン体１をピリドン体２へと変換する（Xiang, X. A. et al, Heterocycles（2006）68, 1099-1103）。続いて、アルドール縮合により左側鎖を導入して得られたカルボン酸３をクルチウス転位に付し、別途合成したホロチン塩酸塩４とともに縮合させることで、アミド体５を合成する。
【００２９】
【化８】
0005299926.tif 000009
【００３０】
前記式（Ｉ）で示される化合物のうち、Ｒ１及びＲ２が水素原子であり、Ｙ２が−ＮＨ−である化合物は、上記のスキーム２に従い得ることができる（Ｙ１及びＲ７は前記と同義である）。市販の４−ヒドロキシ−６−メチル−２Ｈ−ピラン−２−オン（７）を出発原料として、カルボン酸６とＤＩＣ、ＤＭＡＰを用いて縮合後、加熱還流を行うことで、転位体８を得る。続いて、エステル部位を塩基性条件下において加水分解してカルボン酸９へと変換後、オキサリルクロライドにより酸塩化物へと導き、ホロチン塩酸塩４と縮合することでハイブリッド体１０を合成する。
【００３１】
【化９】
0005299926.tif 000010
【００３２】
前記式（Ｉ）で示される化合物のうち、Ｒ１及びＲ２が水素原子であり、Ｙ１がメチレン基であり、Ｙ２が−ＮＨ−である化合物は、上記のスキーム３に従い得ることができる（Ｒ７は前記と同義である）。市販の４−ヒドロキシ−６−メチル−２Ｈ−ピラン−２−オン（７）を出発原料として、トリエチルアミン存在下、イソシアネートとともにキシレン溶媒中にて加熱還流することで、アミド体を得る。次に、エステル部位を、水酸化バリウムを用いて加水分解することにより、カルボン酸１１へ変換する。最後に、オキサリルクロライドにより酸塩化物へと導いた後、ホロチン塩酸塩４と縮合することでハイブリッド体１２を合成する。
【００３３】
前記のようにして得られる生成物を精製するには、通常用いられる手法、例えばシリカゲル等を担体として用いたカラムクロマトグラフィーやプレパラティブ薄層クロマトグラフィー、メタノール、エタノール、クロロホルム、ジメチルスルホキシド、水等を用いた再結晶法によればよい。カラムクロマトグラフィーの溶出溶媒及びプレパラティブ薄層クロマトグラフィーの展開溶媒としては、メタノール、エタノール、クロロホルム、アセトン、ヘキサン、ジクロロメタン、酢酸エチル、及びこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００３４】
本発明では、感染性疾患、特に、動物において例えばブドウ球菌、枯草菌、レンサ球菌及び結核菌等のグラム陽性菌及びその耐性菌、大腸菌、肺炎桿菌、赤痢菌、変形菌、セラチア及びエンテロバクター等のグラム陰性菌及びその耐性菌、バクテロイデスフ、ラジリス等の嫌気性菌を包含する広範囲な病原菌によって引き起こされる疾患を処置するための方法が提供される。本発明の化合物は、特にMicrococcus luteus によって引き起こされる感染を処置するのに有用である。また、この化合物は、Staphylococcus aureus、Enterococcus faecalisを含む、腸球菌による感染を処置するのに有用である。このような疾患の例には、重篤なブドウ球菌性の感染、例えば、ブドウ球菌中毒性表皮壊死症及びブドウ球菌性肺炎が挙げられる。
【００３５】
前記式（Ｉ）で示される化合物はそのまま、あるいは慣用の製剤担体と共に動物及びヒトに投与することができる。投与形態としては、特に限定がなく、必要に応じ適宜選択して使用され、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、徐放性製剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エリキシル剤等の経口剤、注射剤、坐剤、塗布剤、貼付剤等の非経口剤が挙げられる。
【００３６】
経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従って製造される。
【００３７】
この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。
【００３８】
結合剤としては、例えばデンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴールが挙げられる。
【００３９】
崩壊剤としては、例えばデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。
【００４０】
界面活性剤としては、例えばラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０が挙げられる。
【００４１】
滑沢剤としては、例えばタルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコールが挙げられる。
【００４２】
流動性促進剤としては、例えば軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウムが挙げられる。
【００４３】
注射剤は常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、オリブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を用いることができる。更に必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、注射剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥技術により水分を除去し、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。更に、必要に応じて適宜、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加えてもよい。
【００４４】
その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏等の塗布剤、貼付剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、常法に従って製造される。
【００４５】
本発明の製剤は、剤形、投与経路等により異なるが、例えば１日１〜数回から１〜数回／週〜月の投与が可能である。
【００４６】
経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人でミキソピロニン誘導体（Ｉ）の重量として１〜２００ｍｇを、１日数回に分けての服用が適当である。
【００４７】
非経口剤として所期の効果を発揮するためには、患者の年令、体重、疾患の程度により異なるが、通常成人でミキソピロニン誘導体（Ｉ）の重量として１日１〜５０ｍｇの静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当である。
【００４８】
以下、実施例をあげて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００４９】
［実施例１］
（Ｅ）−６−（３−（（２Ｅ，４Ｅ）−２，５−ジメチルノナ−２，４−ジエノイル）−４−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−６−イル）−Ｎ−（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）ヘプト−２−エナミド（１）の合成  
【化１０】
0005299926.tif 000011
【００５０】
前記スキーム１に従い、アルゴン雰囲気下、（２Ｅ）−６−（５−（（２Ｅ，４Ｅ）−２，５−ジメチルノナ−２，４−ジエノイル）−４−ヒドロキシ−６−オキソ−６Ｈ−ピラン−２−イル）−ヘプト−２−エノイルクロライドの無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、ホロチン塩酸塩の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）と無水トルエン溶液（１ｍＬ）を加えた。続いて、トリエチルアミン（５０ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を注意深く加え、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を除去し、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルム）で精製し、黄色油状物１（２．２ｍｇ、１２％）を得た。
HRMS (ESI）m/z calcd for C28H32N2O6S2[M+H]+ 557.1780, found 557.1727。
【００５１】
［実施例２］
６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソ−Ｎ−（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）ヘキサナミド（２）の合成  
【化１１】
0005299926.tif 000012
【００５２】
〈実施例２．１〉
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロンからメチル６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサノエートの合成
前記スキーム２に従い、アルゴン雰囲気下、４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン（２００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（５ｍＬ）に、アジピン酸モノメチル（２５３ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３８．８ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（０．２４ｍＬ、１．５９ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した後、さらに６時間加熱還流した。反応溶液を除去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、橙色結晶６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサノエート（２７０ｍｇ、６４％）を得た。
mp 65.3-65.8 ℃
IR (neat) cm-1: 2956, 1746, 1725, 1644, 1550, 1252, 1163, 987
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.89 (1H, s), 3.61 (3H, s), 3.03 (2H, t, J = 6.6 Hz), 2.31 (2H, t, J = 6.8 Hz), 2.20 (3H, s), 1.66-1.64 (4H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207.10, 181.09, 173.74, 168.92, 160.85, 101.39, 99.38, 51.41, 41.10, 33.73, 24.32, 23.17, 20.57
HRMS (ESI) m/z calcd for C13H17O6 [M+H]+ 269.1025, found 269.1012。
【００５３】
〈実施例２．２〉
６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサノエートから６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサン酸の合成
アルゴン雰囲気下、６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサノエート（２６８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４ｍＬ）に、１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（１ｍＬ）を加え、室温で２０時間撹拌した。反応溶液に、１．０Ｍ塩酸を加え酸性とした後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）した後、溶媒除去して黄色結晶６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサン酸（１９７ｍｇ、７８％）を得た。
mp 121.6-122.3 ℃
IR (neat) cm-1: 2940, 1716, 1692, 1644, 1614, 1567, 1451, 1413, 1240
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.93 (1H, s), 3.11 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.41 (2H, t, J = 6.5 Hz), 2.26 (3H, s), 1.72 (4H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207. 50, 181.53, 179.52, 169.31, 161.38, 101.85, 99.84, 41.53, 34.08, 24.47, 23.53, 21.00
HRMS (ESI) m/z calcd for C12H14O6Na [M+Na]+ 277.0688, found 277.0679。
【００５４】
〈実施例２．３〉
６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサン酸から化合物２の合成
アルゴン雰囲気下、６−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−６−オキソヘキサン酸（５０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、オキサリルクロリド（５０ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応溶媒を除去した後、得られた粗生成物である酸クロライドは精製することなく、すぐさま次の反応に用いた。続いて酸クロライドの無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、ホロチン塩酸塩の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）と無水トルエン溶液（１ｍＬ）を加えた。続いて、トリエチルアミン（８４ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）を注意深く加え、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を除去し、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）で精製し、黄色油状物２（３９ｍｇ、４８％）を得た。
IR (neat) cm-1: 3393, 2921, 2850, 1715, 1644, 1557, 1455, 1246
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.58 (1H, s), 9.79 (1H, s), 7.05 (1H, s), 6.27 (1H, s), 2.96-3.01 (2H, m), 2.38 (1H, t, J = 6.4 Hz), 2.26 (3H, s), 1.58 (2H, br s), 1.21 (2H, br s)
13C NMR (100 MHz, DMSO-d6): δ 207.27, 180.91, 174.75, 172.10, 170.43, 168.40, 160.78, 134.17, 115.82, 111.01, 101.51, 99.60, 41.09, 34.95, 24.99, 23.37, 20.54
HRMS (ESI) m/z calcd for C17H16N2O6NaS2[M+Na]+ 431.0347, found 431.0330。
【００５５】
［実施例３］
８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソ−Ｎ−（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）オクタナミド（３）の合成  
【化１２】
0005299926.tif 000013
【００５６】
〈実施例３．１〉
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロンからメチル８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタノエートの合成
前記スキーム２に従い、アルゴン雰囲気下、４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン（２００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（５ｍＬ）に、スベリン酸モノメチル（２９９ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３８．８ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（０．２４ｍＬ、１．５９ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で３時間撹拌した後、さらに６時間加熱還流した。反応溶液を除去後、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、黄色結晶メチル８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタノエート（４３８ｍｇ、９３％）を得た。 
mp 111.9-112.4 ℃
IR (neat) cm-1: 2939, 1738, 1718, 1649, 1550, 1454, 1345, 1239, 1163, 995
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.93 (1H, s), 3.66 (3H, s), 3.06 (2H, t, J = 7.4 Hz), 2.31 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.26 (3H, s), 1.60-1.69 (4H, m), 1.34-1.41 (4H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207.83, 181.30, 174.23, 168.86, 161.00, 101.57, 99.51, 51.46, 41.53, 34.03, 28.93, 28.82, 24.78, 23.75, 20.67 
HRMS (ESI) m/z calcd for C15H20O6Na [M+Na]+ 319.1158, found 319.1141。
【００５７】
〈実施例３．２〉
メチル８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタノエートから８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタン酸の合成
アルゴン雰囲気下、メチル８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタノエート（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４ｍＬ）に１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（１ｍＬ）を加え、室温で２０時間撹拌した。反応溶液に１．０Ｍ塩酸を加え酸性とした後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）した後、溶媒除去して黄色結晶８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタン酸（５４ｍｇ、５８％）を得た。
mp 99.1-101.1 ℃
IR (neat) cm-1: 2938, 1713, 1664, 1555, 1461, 1245, 994
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.95 (1H, s), 3.08 (2H, t, J = 3.7 Hz), 2.37 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.29 (3H, s), 1.63-1.72 (4H, m), 1.37-1.47 (4H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207.88, 181.36, 179.63, 168.94, 161.12, 101.63, 99.59, 41.59, 33.99, 28.86, 28.71, 24.57, 23.79, 20.73
HRMS (ESI) m/z calcd for C14H19O6 [M+H]+ 283.1182, found 283.1186。
【００５８】
〈実施例３．３〉
８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタン酸から化合物３の合成
アルゴン雰囲気下、８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタン酸（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、オキサリルクロリド（４５ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応溶媒を除去した後、得られた酸クロライドは、精製することなくすぐさま次の反応に用いた。続いて、酸クロライドの無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、ホロチン塩酸塩の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）と無水トルエン溶液（１ｍＬ）を加えた。続いて、トリエチルアミン（７６ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を注意深く加え、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を除去した後、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）で精製し、黄色油状物３（４５．５ｍｇ、５８％）を得た。
IR (neat) cm-1: 3248, 2933, 2857, 1715, 1643, 1609, 1557, 1456, 1241, 996
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.71 (1H, br s), 8.24 (1H, br s), 6.90 (1H, s), 5.94 (1H, s), 3.04-3.09 (2H, m), 2.34-2.41 (2H, m), 2.27 (3H, s), 1.67 (4H, m), 1.41 (4H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207.79, 181.28, 178.22, 172.11, 168.87, 161.07, 136.32, 133.35, 114.55, 113.24, 101.57, 99.51, 41.52, 35.04, 28.87, 28.81, 24.93, 23.71, 20.66
HRMS (ESI) m/z calcd for C19H20N2O6NaS2 [M+Na]+ 459.0660, found 459.0641。
【００５９】
［実施例４］
９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソ−Ｎ−（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）ノナナミド（４）の合成  
【化１３】
0005299926.tif 000014
【００６０】
〈実施例４．１〉
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロンからメチル９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナノエートの合成
前記スキーム２に従い、アルゴン雰囲気下、４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン（２００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（５ｍＬ）に、アゼライン酸モノメチル（３１８ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３８．８ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（０．２４ｍＬ、１．５９ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で３時間撹拌した後、さらに６時間加熱還流した。反応溶液を除去し、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、黄色結晶メチル９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナノエート（３４５ｍｇ、７０％）を得た。
mp 120.2-120.9 ℃
IR (neat) cm-1: 2939, 1717, 1692, 1644, 1614, 1567, 1239
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.94 (1H, s), 3.67 (3H, s), 3.07 (2H, t, J = 7.4 Hz), 2.31 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.28 (3H, s), 1.59-1.69 (4H, m), 1.33-1.43 (6H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207.94, 181.30, 174.29, 168.84, 161.00, 101.56, 99.52, 51.46, 41.59, 34.09, 29.05, 29.02, 28.98, 24.90, 23.89, 20.94
HRMS (ESI) m/z calcd for C16H22O6 [M+H]+ 311.1495, found 311.1498。
【００６１】
〈実施例４．２〉
メチル９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナノエートから９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナン酸の合成
アルゴン雰囲気下、メチル９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナノエート（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４ｍＬ）に、１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（１ｍＬ）を加え、室温で２０時間撹拌した。反応溶液に、１．０Ｍ塩酸を加え酸性とした後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）した後、溶媒除去して黄色結晶９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナン酸（８４ｍｇ、８８％）を得た。
mp 101.6-102.5 ℃
IR (neat) cm-1: 2942, 1717, 1645, 1607, 1557, 1459, 1427, 1241, 995
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.96 (1H, s), 3.09 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.37 (2H, t, J = 7.5 Hz), 2.30 (3H, s), 1.64-1.69 (4H, m), 1.38 (4H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207.94, 181.31, 179.54, 168.84, 161.04, 101.57, 99.52, 41.58, 33.96, 29.03, 28.99, 28.29, 24.63, 23.88, 20.67 
HRMS (ESI) m/z calcd for C16H20O6Na [M+Na]+ 319.1158, found 319.1146。
【００６２】
〈実施例４．３〉
９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナン酸から化合物４の合成
アルゴン雰囲気下、９−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−９−オキソノナン酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、オキサリルクロリド（４３ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応溶媒を除去した後、得られた酸クロライドは精製することなくすぐさま次の反応に用いた。続いて、酸クロライドの無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、別途合成したホロチン塩酸塩の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）と無水トルエン溶液（１ｍＬ）を加えた。続いて、トリエチルアミン（７１ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を注意深く加え、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を除去し、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）で精製し、黄色油状物４（３９．８ｍｇ、５２％）を得た。
IR (neat) cm-1: 3248, 2927, 2852, 1716, 1644, 1601, 1556, 1455, 1288, 1245, 996
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.70 (1H, br s), 7.66 (1H, br s), 6.79 (1H, s), 5.93 (1H, s), 3.07 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.36 (2H, t, J = 7.4 Hz), 2.27 (3H, s), 1.64-1.67 (5H, m), 1.37 (5H, m)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 207.92, 181.30, 171.74, 168.83, 168.71, 161.04, 135.86, 133.17, 114.57, 111.74, 101.58, 99.52, 41.56, 36.37, 29.70, 29.01, 28.96, 25.32, 23.87, 20.67 
HRMS (ESI) m/z calcd for C20H22N2O6NaS2[M+Na]+ 473.0817, found 473.0819。
【００６３】
［実施例５］
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−Ｎ−（２−オキソ−２−（（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）アミノ）エチル）−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド（５）の合成  
【００６４】
【化１４】
0005299926.tif 000015
【００６５】
〈実施例５．１〉
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロンからエチル２−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）アセテートの合成
前記スキーム３に従い、アルゴン雰囲気下、４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン（３００ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）のキシレン溶液（１５ｍＬ）に、イソシアナート酢酸エチル（０．３０ｍＬ、２．８５ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．３３ｍＬ、２．３８ｍｍｏｌ）を加え、４時間、加熱還流した。反応溶媒を除去した後、茶褐色固体エチル２−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）アセテート（５４０ｍｇ、８９％）を得た。このものは精製することなく次の反応に用いた。続いて、アルゴン雰囲気下、エチル２−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）アセテート（１５０ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）に水（１２ｍＬ）と水酸化バリウム（２０１ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を加え、７３℃で２時間撹拌した。反応溶液に塩酸を注意深く加え、クロロホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）後、溶媒除去して橙色不定形物２−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）酢酸（８３ｍｇ、６３％）を得た。
IR (neat) cm-1: 3297, 2981, 2932, 2638, 1740, 1704, 1633, 1566, 1454, 1396, 1370, 1297, 1252, 1158, 1037, 994
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.36 (1H, t, J = 5.2 Hz), 6.44 (1H, s), 4.18 (2H, d, J = 5.6 Hz), 2.40 (3H, s)
13C NMR (100 MHz, DMSO-d6): δ 179.07, 170.38, 169.92, 167.48, 162.53, 101.82, 90.17, 41.07, 19.92
HRMS (ESI) m/z calcd for C9H10NO6 [M+H]+ 228.0508, found 228.0529。
【００６６】
〈実施例５．２〉
２−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）酢酸から化合物５の合成
アルゴン雰囲気下、２−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）酢酸（５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、オキサリルクロリド（５５ｍＬ、０．６６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応溶媒を除去した後、得られた酸クロライドは精製することなくすぐさま次の反応に用いた。続いて酸クロライドの無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、ホロチン塩酸塩の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）と無水トルエン溶液（１ｍＬ）を加えた。続いて、トリエチルアミン（９３ｍＬ、０．６６ｍｍｏｌ）を注意深く加え、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を除去し、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルム）で精製し、褐色油状物５（３１．８ｍｇ、３８％）を得た。
IR (neat) cm-1: 3318, 2920, 2849, 1698, 1640, 1510, 1247, 1224, 1175, 1156
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ11.57 (1H, s), 10.74 (1H, s), 10.18 (1H, s), 7.09 (1H, s), 6.30 (1H, s), 3.16 (2H, s), 2.26 (3H, s)。
【００６７】
［実施例６］
（Ｅ）−６−（４−ヒドロキシ−２−オキソ−３−プロピオニル−２Ｈ−ピラン−６−イル）−Ｎ−（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）ヘプト−２−エナミド（６）の合成    
【化１５】
0005299926.tif 000016
【００６８】
〈実施例６．１〉
３−（１−プロピオニル）−４−ヒドロキシ−６−（５−（メトキシカルボニル）−１−メチル−４−ペンテニル）−２−ピロンから（２Ｅ）−６−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−５−プロピオニル−６Ｈ−ピラン−２−イル）ヘプト−２−エノン酸の合成
アルゴン雰囲気下、３−（１−プロピオニル）−４−ヒドロキシ−６−（５−（メトキシカルボニル）−１−メチル−４−ペンテニル）−２−ピロン（５６．８ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）に、１．０Ｍ水酸化リチウム水溶液（３ｍＬ）、ＴＨＦ／水（４：１、３ｍＬ）を加え、室温で２０時間撹拌した。反応溶液に、５％塩酸を加え酸性とし、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）した後、溶媒除去して黄色油状物（２Ｅ）−６−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−５−プロピオニル−６Ｈ−ピラン−２−イル）ヘプト−２−エノン酸（５２．９ｍｇ、１００％）を得た。このものは精製することなく、次の反応に用いた。
IR (neat) cm-1: 2923, 1728, 1636, 1560, 1448, 1378, 1233
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ6.97-7.04 (1H, m), 5.93 (1H, s), 5.83 (1H, d, J = 15.6 Hz), 3.10 (2H, q, J = 7.2 Hz), 2.57-2.26 (1H, m), 2.25 (2H, q, J = 6.9 Hz), 1.67-1.94 (2H, m), 1.26 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.15 (3H, t, J = 7.2 Hz)
13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ208.38, 180.99, 174.76, 171.19, 160.98, 150.10, 121.60, 100.21, 99.80, 38.42, 35.35, 32.12, 29.71, 17.83, 7.75
HRMS (ESI) m/z calcd for C15H19O6 [M+H]+ 295.1182, found 295.1183。
【００６９】
〈実施例６．２〉
（２Ｅ）−６−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−５−プロピオニル−６Ｈ−ピラン−２−イル）ヘプト−２−エノン酸から化合物６の合成
アルゴン雰囲気下、（２Ｅ）−６−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−５−プロピオニル−６Ｈ−ピラン−２−イル）ヘプト−２−エノン酸（５２．９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、オキサリルクロリド（４５ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応溶媒を除去した後、得られた酸クロライドは精製することなく次の反応に用いた。続いて、酸クロライドの無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、ホロチン塩酸塩の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）と無水トルエン溶液（１ｍＬ）を加えた。続いて、トリエチルアミン（７５ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を注意深く加え、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を除去し、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルム）で精製し、褐色油状物６（３２．６ｍｇ、４０％）を得た。
IR (neat) cm-1: 3236, 3018, 2918, 2849, 1720, 1635, 1558, 1446, 1290, 1215
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.71 (1H, br s), 9.91 (1H, br s), 7.07 (1H, s), 6.71 (1H, dt, J = 15, 6.6), 6.32 (1H, d, J = 15), 6.20, (1H, s), 2.95 (2H, m), 2.66 (1H, m), 2.19-2.13 (2H, m), 1.79-1.55 (2H, m), 1.17 (3H, d, J = 6.6), 1.00 (3H, t, J = 7.4)
HRMS (ESI) m/z calcd for C20H21N2O6S2[M+H]+ 449.0841, found 449.0866。 
【００７０】
［実施例７］
（Ｅ）−Ｎ−（２，２−ジオキシド−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）−６−（４−ヒドロキシ−２−オキソ−３−プロピオニル−２Ｈ−ピラン−６−イル）ヘプト−２−エナミド（７）の合成  
【化１６】
0005299926.tif 000017
【００７１】
化合物６（１５ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）のアセトン／水（１：１）（１ｍＬ）溶液に、氷冷撹拌下においてＯｘｏｎｅ（登録商標）（４７ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加え２０分間撹拌後、室温に昇温してさらに６０分間撹拌した。続いて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１ｍＬ）を添加し３０分間撹拌後、反応溶液に水を加え、酢酸エチルを用いて抽出を行い、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒除去後、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルム）で精製し、黄色油状物７（２．６ｍｇ、１６％）を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.5 (1H, br s), 9.9 (1H, br s), 7.2 (1H, s), 6.8 (1H, m), 6.5 (1H, d, J = 16), 6.3 (1H, s), 2.8 (2H, m), 2.6 (2H, m), 2.2 (2H, t, J = 7.3), 1.7-1.4 (2H, m), 1.1 (3H, m), 0.96 (3H, m)。
【００７２】
［実施例８］
Ｎ−（２，２−ジオキシド−５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）−８−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−イル）−８−オキソオクタナミド（８）の合成    
【化１７】
0005299926.tif 000018
【００７３】
化合物３（２０ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）のアセトン／水（１：１）（４ｍＬ）溶液に、氷冷撹拌下においてＯｘｏｎｅ（登録商標）（７０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加え２０分間撹拌後、室温に昇温しさらに６０分間撹拌した。続いて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１ｍＬ）を添加し３０分間撹拌後、反応溶液に水を加え、酢酸エチルを用いて抽出を行い、得られた有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒除去後、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）で精製し、黄色油状物８（８．６ｍｇ、４０％）を得た。
IR (neat) cm-1: 2918, 2849, 1725, 1682, 1661, 1644, 1607, 1547, 1450, 1283, 1219, 1029, 993
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.48 (1H, br s), 10.52 (1H, br s), 7.25 (1H, s), 6.28 (1H, s), 2.98 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.45 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.27 (3H, s), 1.48-1.61 (4H, m), 1.26-1.36 (4H, m)
13C NMR (100 MHz, DMSO-d6): δ 207.22, 180.91, 175.00, 174.03, 166.16, 160.93, 143.79, 123.79, 115.62, 109.87, 101.73, 99.64, 41.40, 35.13, 29.46, 28.69, 24.92, 23.74, 20.52
HRMS (ESI) m/z calcd for C19H20N2O8NaS2 [M+Na]+ 491.0559, found 491.0548。
【００７４】
［実施例９］
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−Ｎ−（３−（（５−オキソ−４，５−ジヒドロ−［１，２］ジチオロ［４，３−ｂ］ピロール−６−イル）カルバモイル）フェニル）−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド（９）の合成      
【化１８】
0005299926.tif 000019
【００７５】
〈実施例９．１〉
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロンからメチル３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）ベンゾエートの合成
アルゴン雰囲気下、４−ヒドロキシ−６−メチル−２−ピロン（１００ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）のキシレン溶液（５ｍＬ）に、イソシアン酸３−カルボメトキシフェニル（１５３．９ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．１１ｍＬ、０．７９ｍｍｏｌ）を加え、４時間加熱還流した。反応溶媒を除去した後、橙色結晶メチル３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）ベンゾエート（１６２ｍｇ、６８％）を得た。このものは精製することなく次の反応に用いた。
【００７６】
〈実施例９．２〉
メチル３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）ベンゾエートから３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）安息香酸の合成
アルゴン雰囲気下、メチル３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）ベンゾエート（２００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の水（１３．２ｍＬ）とメタノール（９ｍＬ）溶液に、水酸化バリウム（２２６ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を加え、７３℃で２時間撹拌した。反応溶液に塩酸を注意深く加え、クロロホルムで抽出後、有機層を飽和食塩水で洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒除去を行うことにより、淡褐色結晶３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）安息香酸（１５３ｍｇ、８０％）を得た。
mp 278.6-282.1 ℃
IR (neat) cm-1: 2955, 2923, 2850, 1698, 1557, 1445, 1409, 1259, 1219, 1124, 1078, 1025
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 15.81 (1H, br s), 13.07 (1H, br s), 11.01 (1H, s), 8.24 (1H, s), 7.73-7.76 (2H, m), 7.50 (1H, t, J = 7.8 Hz), 6.40 (1H, s), 2.30 (3H, s)
13C NMR (100 MHz, DMSO-d6): δ 179.16, 168.59, 168.14, 167.33, 163.61, 137.12, 132.16, 129.92, 126.33, 125.68, 122.09, 102.44, 91.61, 20.30
HRMS (ESI) m/z calcd for C14H12NO6 [M+H]+ 290.0665, found 290.0658。
【００７７】
〈実施例９．３〉
３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）安息香酸から化合物９の合成
アルゴン雰囲気下、３−（４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキサミド）安息香酸（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、オキサリルクロリド（４３ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応溶媒を除去した後、精製することなくすぐさま次の反応に用いた。続いて、酸クロライドの無水トルエン溶液（２ｍＬ）に、ホロチン塩酸塩の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）と無水トルエン溶液（１ｍＬ）を加えた。続いて、トリエチルアミン（７２ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を注意深く加え、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を除去し、得られた残留物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（１０％メタノール／クロロホルム）で精製し、褐色油状物９（４１．４ｍｇ、５５％）を得た。
IR (neat) cm-1: 2920, 2850, 1723, 1692, 1678, 1642, 1592, 1550, 1444, 1280
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ10.75 (1H, s), 10.08 (1H, s), 8.11 (1H, s), 7.85 (1H, d, J = 6.9 Hz), 7.71 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.44 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.11 (1H, s), 6.93 (1H, s), 2.24 (3H, s)
HRMS (ESI) m/z calcd for C19H13N3O6S2[M+H]+ 444.0324, found 444.0361。
【００７８】
［実施例１０］抗菌活性評価（ペーパーディスク試験）
枯草菌（B.subtillis ATCC6633）懸濁液（１０９ｃｆｕ／ｍＬ）を２０μＬずつ内径９０ｍｍの滅菌シャーレに播いた。続いて、高圧蒸気滅菌したニュートリエント寒天培地を１０ｍＬずつシャーレに入れ、菌と十分に混合させた後、１時間静置して固化させた。８ｍｍペーパーディスク（Advantec社）に、以下の表１に示した試験化合物を溶解させたメタノール溶液（１ｍｇ／ｍｌ）３０μＬを浸した。続いて、上記の作製した固化培地上にペーパーディスクを置き、温度３７℃、相対湿度９５％以上で一晩培養した。菌の発生を目視で観察し、形成した阻止円（直径ｍｍ）を計測した。なお、リファンピシン（ＲＦＰ）を正対照とし、化合物を含まないメタノール溶液のみのものを負対照とした。
【００７９】
【表１】
0005299926.tif 000020
0005299926.tif 000021
【００８０】
表１及び図１より、化合物１〜５では、有意な阻止円が形成され、抗菌活性を示すことがわかった。一方、化合物６〜１５では、有意な阻止円は形成されず、ペーパーディスク直径（８ｍｍ）のままであったことから、十分な抗菌活性を示さないことがわかった。ホロチン部とピロン部とのハイブリッド型である化合物１〜５と、α-ピロン含有カルボン酸を有する化合物１０〜１３及び化合物１４〜１５とを比較することにより、ホロチン部やピロン部単独の化合物ではなく、ハイブリッド型の化合物であることが活性発現に大きく影響を与えることも示唆された。特に、式（Ｉ）中の置換基Ｒ６の構造が活性発現に重要であるといえる。また、置換基Ｒ7 については、ミキソピロニンＣ７位側鎖構造と大きく異なる置換基でも活性を示すことが明らかとなった。
【００８１】
［実施例１１］化合物４及び５の抗菌活性評価（最小阻止濃度測定試験）
菌株は、グラム陽性球菌のStaphylococcus aureus ATCC29213株、Enterococcus faecalis ATCC29212株、及びKocuria rizophila（Micrococcus luteus）ATCC9341株、グラム陽性桿菌のBacillus subtilis ATCC6633株、グラム陰性桿菌のEscherichia coli ATCC25922株、Pseudomonas aeruginosa ATCC27853株、及びSerratia marcescens ATCC13880株、並びに真菌としてCandida albicans ATCC10231株を使用した。薬剤感受性は、Clinical and Laboratory Standards Institute（CLSI, M7-A8）に記載の微量液体希釈法により測定した。試験菌液の調製は、Muller-Hinton寒天培地（Oxoid）で３５℃、２４時間培養したコロニーをMuller-Hinton液体培地（MHB, Oxoid）にMcFarland standard（bioMerieux）０．５と同程度（１．５×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）になるように懸濁した。この菌懸濁液をＭＨＢで１０倍希釈し、９６ウェルマイクロプレート（Stem）に１００ｍｌずつ分注した。薬剤は、各濃度が１２８ｍｇ／ｍｌ〜０．１２５ｍｇ／ｍｌとなるようにＭＨＢに溶解し、９６ウェルマイクロプレートに１００ｍｌずつ分注した。ＭＩＣ２０００イノキュレーター（Dynatech）を用いて、菌液プレートを薬剤プレートに約１ｍｌ（１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）接種した。接種後、３５℃、２４及び４８時間培養し、ILLUMINATED VIEWER MIC-2000（Dynatech）を用いて菌の生育の有無を判定した。菌の発育を阻止した薬剤の最小濃度をその菌株に対する最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）とした。
【００８２】
【表２】
0005299926.tif 000022
【００８３】
表２より、Micrococcus luteus及びBacillus subtilisでは、ミキソピロニンの文献値（Hofle, G. et al., The Journal of Antibiotics（1983）36, 1651-1658）との比較においてＭＩＣ値が小さく、非常に高い活性値が得られた。また化合物４は、グラム陽性菌に対する選択的阻害活性を示す一方で、ピロン環Ｃ３位にアミド部位を導入した化合物５は、グラム陽性・陰性菌、真菌のいずれにおいても活性を示した。さらに、ミキソピロニンでは、連鎖球菌であるEnterococciには細胞移行性の低さから高い活性値を示さないと報告されているが（Haebich, D. et al., Angewandte Chemie International Edition（2009）48, 3397-3400）、本発明のハイブリッド型化合物では中程度の活性値を示した。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明は抗菌剤等の医薬の分野で利用される。
【図１】
0005299926.tif 000028