(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される化合物１、下記一般式（２）で表される化合物２及び下記一般式（３）で表される化合物３を有効成分として含有する神経細胞賦活用組成物であって、
化合物１と化合物２の割合（モル比）が化合物１：化合物２＝１：０．００１２〜１：０．０１０８であり、かつ
化合物１と化合物３の割合（モル比）が化合物１：化合物３＝１：０．０００００１７〜１：０．００９である
ことを特徴とする神経細胞賦活用組成物（ただし、化合物３と化合物１の割合（モル比）が化合物３：化合物１＝４.８：１０００〜２.４：１０００であり、かつ化合物３と化合物２の割合（モル比）が化合物３：化合物２＝２.４：２.４〜４.８：１０.８である神経細胞賦活用組成物を除く）。
【化１】
0005376786.tif 000018
【化２】
0005376786.tif 000019
［一般式（２）中、Ｒは−ＣＮを示す］
【化３】
0005376786.tif 000020
［一般式（３）中、２つの
【化４】
0005376786.tif 000021
は二重結合を示す］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（１）で表される化合物を含有する神経細胞賦活組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経は神経細胞から成り立ち、情報の統合のために体正中部集合して存在する中枢神経系と、中枢外に存在する個別に繊維として存在する末梢神経系に分けられる。存在場所による便宜的な区別であり、それらの機能構造に大きな差異はない。これらの組織に障害が生じると、情報伝達が障害されることによる種々の症状が生じる。例えば、痴呆、アルツハイマー病などの記憶障害にはじまり、顔面神経麻痺、胃無力症、インポテンツ、外眼筋麻痺、排尿困難、便通異常、手足のしびれ、痛み、立ちくらみ、潰瘍などを生じ、著しくＱＯＬを害し、重篤な症状である。神経は再生力が弱いため、当該症状に対し、移植などによる再生医療が主となっている。これに対し、昨今ではより簡便な内服製剤等の治療薬、予防薬が求められている。
【非特許文献１】日本臨床  Ｖｏｌ．６４，８，１５５３−１５５９（２００６．８．１）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、優れた神経細胞賦活作用を有する組成物を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、下記式（１）に示される化合物（以下化合物１と表記することがある）が神経細胞賦活作用を有することを見出した。化合物１は、強い細胞毒性を有していることが知られている。神経細胞が通常の細胞と同様の構成を有しているにもかかわらず、化合物１が特異的に神経細胞に対して細胞賦活作用を有していることは、本発明者等によって初めて見出されたものである。さらに、化合物１に下記式（２）で表される化合物（以下化合物２と表記することがある）及び下記式（３）で表される化合物（以下化合物３と表記することがある）からなる群より選択される少なくとも１種を配合することにより神経細胞賦活効果が高まることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいてさらに研究を重ねた結果完成されたものである。
【０００５】
すなわち、本発明は以下の神経細胞賦活組成物を提供するものである。
項１．下記式（１）で表される化合物を有効成分として含有することを特徴とする神経細胞賦活組成物。
【０００６】
【化１】
0005376786.tif 000002
【０００７】
項２．さらに、下記一般式（２）で表される化合物及び一般式（３）で表される化合物からなる群より選択される少なくとも１種を含有することを特徴とする、項１に記載の組成物；
【０００８】
【化２】
0005376786.tif 000003
【０００９】
［一般式（２）中、Ｒは−ＣＮ、−ＯＨ（Ｈ２Ｏ）、−ＣＨ3又は基：
【００１０】
【化３】
0005376786.tif 000004
【００１１】
を示す］
【００１２】
【化４】
0005376786.tif 000005
【００１３】
［一般式（３）中、２つの
【００１４】
【化５】
0005376786.tif 000006
【００１５】
は同一又は異なって単結合又は二重結合を示す］
項３．前記式（１）で表される化合物１重量部に対して前記式（２）で表される化合物の少なくとも１種を総量で０．０００００５〜１重量部含有する項２に記載の組成物。
項４．前記式（１）で表される化合物１重量部に対して前記一般式（３）で表される化合物の少なくとも１種を総量で０．０００００３４〜０．０９重量部含有する項２又は３のいずれかに記載の組成物。
項５．
下記式（１）で表される化合物を添加することを特徴とする神経細胞の賦活方法。
【００１６】
【化６】
0005376786.tif 000007
【発明の効果】
【００１７】
本発明の組成物によれば、化合物１による優れた神経細胞賦活作用が発揮され、神経細胞の機能、活性が高められる。さらに、化合物１と、化合物２及び化合物３からなる群より選択される少なくとも１種とを併用することによって、さらに顕著に神経細胞賦活作用が高められる。
【００１８】
このような本願発明の組成物は、特に、従来では再生医療に頼らざるを得なかった神経性の疾患の予防又は治療に有効であると考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
本発明の神経細胞賦活組成物は、有効成分として下記化合物１を含有する。本発明において神経細胞賦活作用とは、神経細胞の機能、活性を高めその生命力を増加させる作用を指す。以下、各成分について説明する。
【００２０】
(1)化合物１
化合物１は、解熱鎮痛剤としての作用が知られる下記式（１）で表される化合物であって、ダイト株式会社などから商業的に入手可能である。
【００２１】
【化７】
0005376786.tif 000008
【００２２】
本発明の組成物において化合物１は、成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量あたり通常５０〜２４００ｍｇ程度、好ましくは１００〜１６００ｍｇ程度、より好ましくは１５０〜８００ｍｇ程度の投与量となるように配合する。
【００２３】
上記化合物１に下記一般式（２）で表される化合物２及び下記一般式（３）で表される化合物３からなる群より選択される少なくとも１種を組み合わせて用いることにより、化合物１の神経賦活作用がさらに増強される。
【００２４】
(2)化合物２
化合物２は、下記一般式（２）で表される化合物であって、ＤＳＭ  ニュートリション  ジャパン株式会社などから商業的に入手可能である。
【００２５】
【化８】
0005376786.tif 000009
【００２６】
［一般式（２）中、Ｒは−ＣＮ、−ＯＨ（Ｈ２Ｏ）、−ＣＨ3又は基：
【００２７】
【化９】
0005376786.tif 000010
【００２８】
を示す］
本発明においては、上記化合物２のＲが−ＣＮであることが好ましい。
上記化合物２を１種を単独で用いることもできるが、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２９】
本発明の組成物における化合物２の配合量は、本発明の効果を奏するように化合物１の配合量に基づいて適宜設定することができる。化合物１の配合量を１重量部とした場合、化合物２の配合割合は、総量で通常０．０００００５〜１重量部程度、好ましくは０．００００２〜０．１６重量部程度、より好ましくは０．００００８〜０．０７５重量部程度である。この様な配合割合であれば、本発明の組成物の神経賦活作用が顕著に発揮される。特に化合物２の配合量は、前記配合割合の範囲内であって、成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）1日量として、０．０１２５〜２４００ｍｇ程度、好ましくは０．０２５〜１２００ｍｇ程度、より好ましくは０．０５〜６００ｍｇ程度の投与量となるように配合することが望ましい。
【００３０】
(3)化合物３
化合物３は、下記一般式（３）で表される化合物であって、ＤＳＭ  ニュートリション  ジャパン株式会社などから商業的に入手可能である。
【００３１】
【化１０】
0005376786.tif 000011
【００３２】
上記一般式（３）中、２つの
【００３３】
【化１１】
0005376786.tif 000012
【００３４】
は同一又は異なって単結合又は二重結合を示し、好ましくは二重結合である。上記化合物３を１種を単独で使用してもよいが、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００３５】
本発明の組成物における化合物３の配合量は、本発明の効果を奏するように化合物１の配合量に基づいて適宜設定することができ、化合物１の配合量を１重量部とした場合、総量で通常０．０００００３４〜０．０９重量部程度、好ましくは０．０００２４〜０．０１４重量部程度、より好ましくは０．０００９６〜０．００６２５重量部程度である。化合物１と化合物３がこの様な割合で含有されることにより、化合物１の神経細胞賦活作用が増強される。
【００３６】
特に化合物３の配合量として、当該配合割合の範囲内であって、配合量を成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量として、０．２５〜４０ｍｇ程度、好ましくは０．５〜２０ｍｇ程度、より好ましくは１〜１０ｍｇ程度であることが望ましい。
【００３７】
本発明の効果が顕著に奏される好ましい実施態様の１つとして、化合物１を成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）１日量として１５０〜８００ｍｇ程度含有し；化合物１重量部に対して、化合物２の少なくとも１種を０．００００８〜０．０７５重量部程度の範囲内であって０．０５〜６００ｍｇ程度含有し；化合物３の少なくとも１種を０．０００９６〜０．００６２５重量部程度の範囲内であって１〜１０ｍｇ程度含有する組成物が例示される。
【００３８】
(4)剤型
本発明の組成物は、従来公知の方法に従って、経口又は非経口の別を問わず各種の製剤剤型に調製することができ、例えば、液剤（シロップ等を含む）等の液状製剤（懸濁剤含む）や、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）等の固形製剤形態の経口製剤；液剤、点滴剤、注射剤、点眼剤等の液状製剤や、錠剤、丸剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）などの固形製剤形態の非経口製剤が挙げられる。本発明の組成物としては、フィルムコート錠、糖衣錠、甘味剤コート錠、カプセル剤、舌下錠、静脈用注射剤、可食フィルム等の形態が好ましい。
【００３９】
本発明の組成物が液状製剤である場合は、凍結保存することもでき、また凍結乾燥等により水分を除去して保存してもよい。凍結乾燥製剤やドライシロップ等は、使用時に注射用蒸留水、滅菌水等を加え、再度溶解して使用される。
【００４０】
例えば、本発明の組成物が注射剤、点滴等として調製される場合、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用することができる。なお、この場合、体液と等張な溶液を調整するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを本発明の組成物中に含有させてもよい。また、当分野において一般的に使用されている溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。
【００４１】
固形剤として本発明の組成物を調製する場合、例えば、錠剤の場合であれば、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用することができる。このような担体としては、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、アルギン酸ナトリウム等の結合剤；乾燥デンプン、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、クロスポビドン、ポビドン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、等の崩壊剤；ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン等保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。さらに錠剤は、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。また、前記有効成分を含有する組成物を、ゼラチン、プルラン、デンプン、アラビアガム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）等を原料とする従来公知のカプセルに充填して、カプセル剤とすることができる。
【００４２】
また、丸剤の形態に調製する場合は、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。その例としては、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【００４３】
上記以外に、添加剤として、例えば、界面活性剤、吸収促進剤、吸着剤、充填剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節する塩を、得られる製剤の投与単位形態に応じて適宜選択し使用することができる。
【００４４】
また、アミノ酸、ビタミン類、無機塩類等の他の活性成分を含有させても良い。他の活性成分としては、例えば、バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等のアミノ酸；ビタミンＡ１、ビタミンＡ２、カロチン、リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、アスコルビン酸、ニコチン酸アミド、ビオチン等のビタミン類；塩化ナトリウム、塩化カリウム等のアルカリ金属塩や、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩等の無機塩類が挙げられる。
【００４５】
本発明の組成物の投与量としては、本発明の効果が奏される限り特に限定されず、剤型、患者の年齢、性別、病状の程度等によって適宜設定され得るが、例えば、化合物１の投与量として成人（１５才以上、体重約６０ｋｇ）1日量あたり０．８３〜４０ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは１．６７〜２６．７７ｍｇ／ｋｇ程度、より好ましくは２．５〜１３．３３ｍｇ／ｋｇ程度である。
【００４６】
このようにして得られる本発明の組成物は、優れた神経細胞賦活作用を発揮し得ることから神経細胞の機能、活性を高めその生命力を増加させ、排尿困難、便通異常、手足のしびれ、痛み、立ちくらみ、潰瘍等の神経系の伝達経路に傷害を生じる疾患（または神経系伝達経路の障害によって引き起こされる疾患）の予防又は治療に有用である。
【００４７】
(5)神経細胞を賦活する方法
本発明は、上記化合物１を添加することを特徴とする神経細胞を賦活する方法をも提供するものである。また、上記化合物２及び化合物３からなる群より選択される少なくとも１種を組み合わせて添加することもできる。本発明の方法における化合物１、化合物２、化合物３の具体的種類や配合量等については、上記(1)〜(3)に記載される通りである。
【実施例】
【００４８】
以下に実施例、比較例及び処方例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
＜試験例＞
(1)凍結保存のP19 EC cells細胞（マウス胚性腫瘍由来細胞株  理化学研究所提供）を非働化牛胎児血清（以下、ＦＢＳと記載する）を１５％含有するＤＭＥＭ液体培地で培養した。
(2)1×105 cells/ml/wellで、レチノイン酸（１μM）を含むＤＭＥＭ液体培地（ＦＢＳなし）で37℃、ＣＯ２濃度５％で１日間培養した。
【００４９】
（６穴プレートを使用し、１wellに２mLで培養）
(3)上清を取り除き、下記表１〜３に示される濃度（液体培地中の濃度）の被験物質を含む液体培地で培養した。
(4)12時間後に浮遊細胞数（死んだ細胞）を測定し、下記式より神経細胞賦活率を算出した。本試験例において浮遊細胞は、十分な機能、活性を得られず死滅した神経細胞である。結果を表１〜３に示す。
【００５０】
神経細胞賦活率＝（Ａ／Ｂ）×100（％）
Ａ：各被験物質投与時：（初期細胞数−浮遊細胞数）／初期細胞数
Ｂ：被験物質非投与時（比較例１に相当）：（初期細胞数−浮遊細胞数）／初期細胞数
細胞分化は細胞の増殖から転じて成立する過程であり、細胞が器官、組織において固有の機能を果たすように構造が変化することである。細胞分化は通常の細胞周期から外れるため、十分な機能、活性を発揮するに至らなかった脆弱な細胞は死滅する。本試験系では、通常（化合物１〜３無添加）であれば死滅するであろう細胞（神経細胞）を生存に導いた活性・作用を、細胞の生存率で評価している。従って、当該生存率を測定してその率が高まったことは細胞を賦活し、生存するに足る活性を補ったことを示すと考え、この率を神経細胞賦活率と設定した。
【００５１】
【表１】
0005376786.tif 000013
【００５２】
【表２】
0005376786.tif 000014
【００５３】
【表３】
0005376786.tif 000015
【００５４】
実施例１に示されるように、化合物１が神経細胞賦活作用を有することが示された。比較例２に示されるように、同様に解熱鎮痛剤としての作用が知られるアセトアミノフェンを用いた場合には、約半数の細胞が浮遊細胞（死んだ細胞）となった。また、比較例３〜９から明らかなように、アセトアミノフェンと化合物２及び化合物３を配合した場合には、神経細胞賦活効果は示されなかった。
【００５５】
さらに、化合物１の神経細胞賦活作用は、化合物２及び化合物３を添加することによってさらに増強されることが示された（実施例２〜１４）。特に実施例２、３及び１０に示されるように、神経細胞賦活率がコントロール（比較例１）に比べて２０％以上増強されることが確認された。
【００５６】
以下に本発明の処方例を示す。
【００５７】
【表４】
0005376786.tif 000016
【００５８】
処方例１〜５を、手足のしびれを訴える患者に服用させる有効性試験を実施したところ、各処方例の有効性及び有用性が確認された。
【００５９】
【表５】
0005376786.tif 000017
処方例１８及び１９に使用された化合物２※２は、Ｒ＝−ＣＨ３の化合物である。