(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、天然型インターフェロンα、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、ＰＥＧ化天然型インターフェロンα、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ、又はＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂとを有効成分として組み合わせたことを特徴とする、Ｃ型肝炎ウイルスによって引き起こされるウイルス性疾患の予防又は治療剤。
【請求項２】
前記ウイルス性疾患が、Ｃ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌である、請求項１に記載の予防又は治療剤。
【請求項３】
２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、天然型インターフェロンα、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、ＰＥＧ化天然型インターフェロンα、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ、又はＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂの、Ｃ型肝炎ウイルスによって引き起こされるウイルス性疾患の予防又は治療剤を製造するための使用。
【請求項４】
前記ウイルス性疾患が、Ｃ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌である、請求項３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、インターフェロンとを組み合わせたことを特徴とする、ウイルス性疾患の予防又は治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
国内のＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の持続感染者は約１５０万〜２００万人と推計され、その多くは、慢性肝炎の症状を呈していると推定されている（非特許文献１参照）。Ｂ型肝炎の場合、慢性肝炎を経由しないで肝癌へ進行する例も多く見られる。一方、ＨＣＶ感染者の８０〜９０％は肝組織所見からみれば慢性肝疾患であり、感染者の５０〜６０％は慢性肝炎から肝硬変・肝細胞癌へと進展する可能性がある（非特許文献２参照）。ＨＣＶ感染症は、世界的にも重要な医療上の問題となっている。【０００３】
インターフェロン（ＩＦＮ）は、ウイルス複製及び細胞増殖を阻害して免疫応答を調節する、高度に相同な種特異的タンパク質のファミリーであり、４つのクラスのインターフェロンがヒトに存在していることが知られている（非特許文献３）。
このインターフェロンの抗ウイルス作用に着目し、インターフェロンは様々なウイルス性疾患に応用されている。特に、プラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つウイルスの一種であるＨＣＶの感染により引き起こされるＣ型慢性肝炎ではＨＣＶの除去を目的として、治療に広く用いられている。しかしながら、ＩＦＮの治療効果を左右する因子で、我が国におけるＣ型慢性肝炎患者の７割以上を占めるといわれる遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）１ｂ、あるいは、高ウイルス量（１Ｍｅｑ以上）の患者では、ＩＦＮの治療効果は低いことが知られている（非特許文献４、５参照）。また副作用として発熱、脱力及び精神症状の異常などが高頻度に認められている。【０００４】
遺伝子型１ｂで且つ高ウイルス量の患者の既存の治療法として、ＩＦＮとリバビリンとの併用療法、ペグインターフェロンα−２ａ（ＰＥＧ−ＩＦＮα−２ａ）、ペグインターフェロンα−２ｂ（ＰＥＧ−ＩＦＮα−２ｂ）とリバビリンとの併用療法が知られている。これらの治療効果（完治率）は、まだ満足できるものではない。現在最も治療効果が高いＰＥＧ−ＩＦＮとリバビリンとの併用療法でも、その効果は５０％程度である。また、副作用としてＩＦＮ単独療法に比し、ＩＦＮとリバビリンとの併用療法では、ヘモグロビン減少、赤血球減少、白血球減少等が高頻度に認められている。ＰＥＧ−ＩＦＮα−２ａでは、インフルエンザ様症状はＩＦＮより低いものの、皮膚症状とリンパ球減少、血小板減少、赤血球減少がより多く認められている。ＰＥＧ−ＩＦＮα−２ｂとリバビリンとの併用療法では、投与部位障害が多く発生し、血球系有害事象の検査値の回復に若干遅れが認められ、さらに高齢者で、高度の検査値異常や減量を要する頻度が高くなる傾向が認められている。従って、ＩＦＮ治療によって充分な効果が得られなかった症例や遺伝子型１ｂ又は高ウイルス量でＩＦＮ投与により有効性が期待できない症例、あるいは、高齢者や既に肝硬変へ進展している症例などに有効な治療方法の開発が期待されている。【０００５】
一方、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールは、下記の構造を示す化合物であり、肝細胞障害抑制効果を有することが知られている（特許文献１、２参照）。【０００６】
【化１】
0005114401.tif 000002
【０００７】
また、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールは、抗ＨＣＶ活性を有することが報告されており（非特許文献６参照）、ウイルス性肝疾患治療剤としての開発が期待されている。しかし、他の薬剤との併用効果についてはこれまで研究されていなかった。【０００８】
【特許文献１】国際公開第９７／０３０８８号パンフレット
【特許文献２】特許第３２７９５７４号明細書
【非特許文献１】日本肝臓学会編，「慢性肝炎の治療ガイド」，（株）文光堂，２００６年，ｐ．２１
【非特許文献２】飯野四郎，「Ｃ型肝炎治療ガイドライン」，日本臨牀，２００４，第６２巻，増刊号７，ｐ．３４２−３４６
【非特許文献３】「アニュアル・レビュー・オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），（米国），１９８７年，第５６巻，ｐ．７２７−７７７
【非特許文献４】飯野四郎，「明らかになったインターフェロンの効果と限界」，内科，１９９９年，第８４巻，第２号，ｐ．２８５−２９１
【非特許文献５】「ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）」，（英国），１９９８年，第３５２巻，第９１３８号，ｐ．１４２６−１４３２
【非特許文献６】「ヘパトロジー（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ）」，（米国），２００５年，第４２巻，ｐ．２４８Ａ
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者は、前記のような課題を解決するため、ウイルス性疾患、特にはプラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つウイルスによる感染症の予防又は治療に有効な薬剤について鋭意研究した結果、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、インターフェロンとを組み合わせて併用投与することにより、ＨＣＶ増殖抑制効果が増強し、上記ウイルス性疾患の予防又は治療のための優れた治療剤となり得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
すなわち、本発明は、
［１］２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとインターフェロンとを有効成分として組み合わせたことを特徴とする、ウイルス性疾患の予防又は治療剤、
［２］前記ウイルス性疾患が、ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患である、［１］に記載の予防又は治療剤、
［３］前記ＲＮＡウイルスが、プラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つウイルスである、［２］に記載の予防又は治療剤、
［４］前記ＲＮＡウイルスがＣ型肝炎ウイルスである、［３］に記載の予防又は治療剤、［５］前記ウイルス性疾患が、Ｃ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌である、［１］に記載の予防又は治療剤、
［６］２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとインターフェロンとを、ウイルス性疾患の予防又は治療が必要な対象に、有効量で投与することを含む、ウイルス性疾患を予防又は治療する方法、
［７］前記ウイルス性疾患が、ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患である、［６］に記載の予防又は治療方法、
［８］前記ＲＮＡウイルスが、プラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つウイルスである、［７］に記載の予防又は治療方法、
［９］前記ＲＮＡウイルスがＣ型肝炎ウイルスである、［８］に記載の予防又は治療方法、
［１０］前記ウイルス性疾患が、Ｃ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌である、［６］に記載の予防又は治療方法、
［１１］２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとインターフェロンの、ウイルス性疾患の予防又は治療剤を製造するための使用、
［１２］前記ウイルス性疾患が、ＲＮＡウイルスによって引き起こされる疾患である、［１１］に記載の使用、
［１３］前記ＲＮＡウイルスが、プラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つウイルスである、［１２］に記載の使用、
［１４］前記ＲＮＡウイルスがＣ型肝炎ウイルスである、［１３］に記載の使用、
［１５］前記ウイルス性疾患が、Ｃ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌である、［１１］に記載の使用
に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の予防又は治療剤は、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、インターフェロンとを組み合わせて併用投与することにより、ウイルス性疾患、好ましくはＲＮＡウイルスによって引き起こされるウイルス性疾患、より好ましくはプラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つウイルスによって引き起こされるウイルス性疾患、特に好ましくはＣ型肝炎ウイルスにより発症するＣ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌に対して高い予防又は治療効果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオール単独添加、ＩＦＮ単独添加、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとＩＦＮとの併用添加した、Ａｄ−Ｔ７ｐｏｌ感染１日後のＨＣＶ増殖抑制効果を示すグラフである。
【図２】２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオール単独添加、ＩＦＮ単独添加、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとＩＦＮとの併用添加した、Ａｄ−Ｔ７ｐｏｌ感染２日後のＨＣＶ増殖抑制効果を示すグラフである。
【図３】２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオール単独添加、ＩＦＮ単独添加、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとＩＦＮとの併用添加した、Ａｄ−Ｔ７ｐｏｌ感染３日後のＨＣＶ増殖抑制効果を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本明細書において「ウイルス性疾患」とは、ウイルスによって引き起こされる疾患を意味し、前記ウイルスには、ＤＮＡウイルスとＲＮＡウイルスとの両方が含まれる。ＤＮＡウイルスとしては、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、パルボウイルスを挙げることができる。ＲＮＡウイルスとしては、例えば、レオウイルス、トガウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、オルトミクソウイルス、ブンヤウイルス、アレナウイルス、レトロウイルス、ピコナウイルス、カリシウイルスを挙げることができる。【００１４】
本発明の予防又は治療剤において、前記ウイルスとしては、ＲＮＡウイルスが好ましく、プラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つＲＮＡウイルスがより好ましく、Ｃ型肝炎ウイルスが特に好ましい。プラス鎖のＲＮＡを遺伝情報に持つＲＮＡウイルスとしては、例えば、ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルス、エンテロウイルス、ライノウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、風疹ウイルス、東部馬脳炎ウイルス、西部馬脳炎ウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス、コロナウイルス、西ナイルウイルス、水胞性口内炎ウイルスを挙げることができる。【００１５】
プラス鎖のＲＮＡを遺伝情報に持つＲＮＡウイルスは共通の方法により増殖する。すなわち、ウイルスが細胞に感染後、細胞内にウイルスＲＮＡが侵入する。侵入したウイルスＲＮＡから、直接、ウイルスタンパク質が翻訳され、ウイルスＲＮＡが複製するために必要なＲＮＡ依存的ＲＮＡポリメラーゼなどのタンパク質が作られる。これらの発現タンパク質により、侵入したＲＮＡを鋳型として、ウイルスＲＮＡが複製される。複製されたウイルスＲＮＡは、自ら作ったタンパク質に取り込まれ、ウイルスとなって細胞外に放出される（以上、特開２００５−３５９１３号公報参照）。【００１６】
一方、インターフェロンの抗ウイルス作用機序について、例えば、特開２００５−３５９１３号公報には、以下の機構が提案されている。すなわち、インターフェロンが細胞表面上の受容体に結合した後、細胞内に抗ウイルス作用を示すタンパク質が誘導される。例えば、インターフェロンにより誘導された２’−５’アデニル酸合成酵素により、オリゴ２’−５’アデニル酸が作られる。これが、ＲＮＡ依存的ＲＮＡアーゼを活性化し、活性化したＲＮＡ依存的ＲＮＡアーゼによりウイルスＲＮＡが分解され、その結果、インターフェロンが抗ウイルス作用を示すと考えられている。以上の作用機序から、プラス鎖のＲＮＡを遺伝情報に持つＲＮＡウイルスに対して、本発明の予防又は治療剤は充分に効果を示すと考えられる。【００１７】
前記ウイルス性疾患の内、肝炎ウイルス［例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）］によって引き起こされる疾患としては、例えば、急性又は慢性ウイルス性肝炎（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎）の肝障害等を挙げることができ、好ましくはＣ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌である。Ｂ型肝炎とは、ＨＢＶ感染により発症した肝炎をいい、Ｃ型肝炎とは、ＨＣＶ感染により発症した肝炎をいう。慢性肝炎とは、６ヶ月以上肝臓に炎症が持続あるいは持続していると思われる病態をいう。肝障害とは、肝臓の炎症性疾患を意味し、症状の進行によっては脂肪肝、肝硬変、肝細胞癌をも含む概念として用いることとする。【００１８】
本発明の予防又は治療剤の有効成分として用いることのできる２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールは公知化合物であり、例えば、ＷＯ９７／０３０８８号公報の実施例２２（化合物２７）に記載の方法により得ることができる。【００１９】
２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールは、通常、例えば、カプセル剤、マイクロカプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、粉末等、慣用の医薬製剤の形で経口投与することができる。また、静注、筋注等の注射剤等、慣用の医薬製剤の形で非経口（例えば、静注、筋注、皮下投与、腹腔内投与、直腸投与、経皮投与）投与することもできる。各種製剤は、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤などを用いて常法により製造することができる。使用可能な無毒性の上記添加剤としては、例えば、乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップ、ワセリン、グレセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。【００２０】
本発明の予防又は治療剤における２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールの剤形、投与方法、投与量、投与期間等は、例えば、患者の体重、年齢、症状の程度等によって適宜設定することができる。また、インターフェロンとの併用により抗ウイルス作用が増強する範囲内であれば特に制限はない。例えば、１日１〜１０００ｍｇを１回あるいは複数回に分けて、経口又は非経口投与される。好ましくは１日２５〜８００ｍｇを２回に分けて経口又は非経口投与する。【００２１】
本発明の予防又は治療剤の有効成分として用いるインターフェロン（ＩＦＮ）は、特に限定されない。例えば、市販又は臨床開発中の任意のＩＦＮとしては、天然型ＩＦＮα（スミフェロン：大日本住友製薬社製）、ＩＦＮα−２ａ、ＩＦＮα−２ｂ（イントロンＡ：シェリング・プラウ社製）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）化天然型ＩＦＮα、ＰＥＧ化ＩＦＮα−２ａ（ペガシス：中外製薬社製）、ＰＥＧ化ＩＦＮα−２ｂ（ＰＥＧ−イントロンＡ）、天然型ＩＦＮβ（ＩＦＮβモチダ：持田製薬社製、フェロン：東レ社製）、ＰＥＧ化天然型ＩＦＮβ、天然型ＩＦＮγ、コンセンサスＩＦＮ（アドバフェロン：アステラス製薬社製）、若しくはＰＥＧ化コンセンサスＩＦＮ、又はこれらの組み合わせ等が挙げられる。【００２２】
本発明の予防又は治療剤におけるＩＦＮの投与量、投与期間、投与スケジュール、投与経路等は、上記ウイルス性疾患の予防又は治療に有効であれば、特に制限はない。例えばＣ型肝炎おいては、通常、１日１０万〜１０００万国際単位を１日１回あるいは複数回に分けて、２週〜４８週、連日又は週３回程度の間歇投与により、皮下、筋肉内あるいは静脈内に投与されるが、ウイルスの型やウイルス量、患者の体重、年齢等によって適宜変更することができる。好ましくは、１日６００〜１０００万単位を、２週〜８週連日投与後、２２週〜４６週間歇投与するが、投与するＩＦＮの種類や剤形によって適宜変更することができる。【００２３】
更に、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、インターフェロンとの組み合わせ比率（使用比率あるいは配合比率）は、上記ウイルス性疾患の予防又は治療に有効であれば、特に制限はない。例えば、Ｃ型肝炎においては、通常、１日１ｍｇ：１０万国際単位〜１０００ｍｇ：１０００万国際単位の範囲内から適宜決められるが、１日２５ｍｇ：１００万国際単位〜８００ｍｇ：１０００万国際単位の範囲が好ましい。本発明の予防又は治療剤は、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、インターフェロンとを併用投与するものであるが、「併用」とは、それぞれの単独製剤の形態で同時に又は時間差をおいて投与すること等を包含し、各成分の投与回数は同じであっても、異なっていてもよい。
２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとインターフェロン各々の適切な投与量や投与間隔を設定するにあたっては、制御された臨床試験により決定され得る。【００２４】
本発明の予防又は治療剤は、上記した２種の有効成分を１つの組成物中に含む１剤系の薬剤であってもよいし、２種の有効成分を別々の組成物中に含む２剤系の薬剤であってもよい。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。【００２６】
《実施例１：２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとインターフェロンとの併用によるＨＣＶ増殖抑制効果の確認》
本実施例では、非特許文献６に記載の全ゲノムＨＣＶ複製モデル（full-genome
HCV replication model）を用いて、本発明の予防又は治療剤の評価を実施した。【００２７】
すなわち、感染性を有し、インターフェロン治療に難治性を示す遺伝子型１ａのＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）Ｈ７７株［GenBank AF011751；Yanagi, M., Purcell, R.H., Emerson, S.U., Bukh, J.
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16), 8738-8743(1997)］の全長クローンから作成されたｃＤＮＡの５’側にＴ７プロモーターを、３’側にデルタ肝炎ウイルスのリボザイム遺伝子を持つプラスミド（ｐＴ７−ｆｌＨＣＶ−Ｒｚ）を作成した。このプラスミドｐＴ７−ｆｌＨＣＶ−Ｒｚを、６ウェルプレートに播種したＨｅｐＧ２細胞（資源番号：JCRB1054）にトランスフェクション（３μｇ／ウェル）し、その２４時間後に、Ｔ７ポリメラーゼを発現する組換えアデノウイルス（Ａｄ−Ｔ７ｐｏｌ）を感染（１０プラーク形成単位／細胞）させることにより、ＨＣＶ遺伝子を宿主細胞に発現させた。この複製モデルでは、その結果、ＨＣＶ遺伝子（プラス鎖）と全く相同なＲＮＡが細胞に作成される。このＨＣＶプラス鎖は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ作用を持つＮＳ５Ｂタンパク質を発現し、その結果、ＨＣＶマイナス鎖が発現し、ＨＣＶの細胞内増殖が観察される。【００２８】
Ａｄ−Ｔ７ｐｏｌ感染３時間後に、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオール及び／又はＩＦＮ−α２ｂ（イントロンＡ：シェリング・プラウ社製）を各々単独あるいは併用添加し、ＨＣＶ増殖抑制効果を検討した。２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールは最終濃度０．１μｍｏｌ／Ｌ、ＩＦＮ−α２ｂは最終濃度１００ＩＵ／ｍＬとなるように培養液（２ｍＬ）に添加した。培養液交換（交換後の培養液にも、前記濃度の各評価用化合物を添加）はＡｄ−Ｔ７ｐｏｌ感染１日後に実施した。なお、コントロールの培養液には、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールの溶解に用いたジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のみを最終濃度０．１％となるように添加した。なお、本試験は細胞毒性のない濃度範囲で実施された。【００２９】
Ａｄ−Ｔ７ｐｏｌ感染１、２、３日後に、それぞれ、細胞を回収し、ＲＮＡを抽出した。ＨＣＶ  ＲＮＡの発現はｒＴｔｈ  ＤＮＡポリメラーゼを用いて、宿主細胞側のハウスキーピング遺伝子であるグリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡはＭｕＬＶ逆転写酵素を用いて逆転写反応を行った後、リアルタイムＰＣＲ（Light Cycler：Roche Diagnostics社製）で定量した。なお、リアルタイムＰＣＲ用のプライマーとして、ＨＣＶ  ＲＮＡについては、
センスプライマー：
5'-GCA GAA AGC GTC TAG CCA TGG CGT-3'（配列番号１：5'UTRの68-91nt）
アンチセンスプライマー：
5'-CTC GCA AGC ACC CTA TCA GGC AGT-3'（配列番号２：5'UTRの311-288nt）
を使用し、ＧＡＰＤＨについては、市販キット（Human GAPDH primer
set：Search LC社）を使用した。【００３０】
結果を図１〜図３に示す。図１〜図３において、レーン１はコントロールの結果であり、レーン２は、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオール単独添加（０．１μｍｏｌ／Ｌ）の結果であり、レーン３は、ＩＦＮ単独添加（１００ＩＵ／ｍＬ）の結果であり、レーン４は、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとＩＦＮとの併用添加の結果である。
この結果、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールとＩＦＮとを併用添加した場合、ＨＣＶ増殖抑制効果は各々の単独添加に比較して有意に相乗的な増強が確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明によれば、２２β−メトキシオレアン−１２−エン−３β，２４（４β）−ジオールと、インターフェロンとを組み合わせたことを特徴とする、ウイルス性疾患の予防又は治療剤、好ましくは、プラス鎖ＲＮＡを遺伝情報に持つウイルスによる感染症、特にＣ型肝炎ウイルスにより発症するＣ型肝炎、又はＣ型肝炎に起因する肝硬変若しくは肝癌に有効な薬剤を提供することができる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変形や改良は本発明の範囲に含まれる。
【図１】
0005114401.tif 000003
【図２】
0005114401.tif 000004
【図３】
0005114401.tif 000005
【配列表】
0005114401000001.app