(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水分総質量に対し寒天を１．０乃至１．３質量％、ジェランガムを０．１乃至０．１５質量％含有することを、特徴とする油性試料の微生物検査用培地。
【請求項２】
カチオンを含有することを、特徴とする請求項１記載の油性試料の微生物検査用培地。
【請求項３】
水分総質量に対し１価のカチオンを０．１乃至１質量％または２価のカチオンを０．００２乃至０．０２質量％含有することを、特徴とする請求項１または２記載の油性試料の微生物検査用培地。
【請求項４】
水分総質量に対し塩化ナトリウムを０．１乃至１質量％含有することを、特徴とする請求項１，２または３記載の油性試料の微生物検査用培地。
【請求項５】
ｐＨ調整剤を含有することを、特徴とする請求項１乃至４のいずれか１項記載の油性試料の微生物検査用培地。
【請求項６】
前記油性試料は、油分が２５％以下であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか１項記載の油性試料の微生物検査用培地。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか１項記載の油性試料の微生物検査用培地を容器に収容し、表面を内部より乾燥させたことを、特徴とする油性試料の微生物検査器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、油性試料の微生物検査用培地および微生物検査器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、微生物検査用の培地として、寒天培地が一般的に使用されている。また、寒天培地よりも多量の試料を塗抹可能なものとして、各成分を所定量より多い溶解水に溶解して固化し、その固化した培地を乾燥して溶解水の量を所定量の７０乃至２００％に調整し、製造された固体培地がある（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
【特許文献１】特開２００１−２１８５７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、一般的な寒天培地や特許文献１記載の固体培地は、５〜１０℃程度の低温で保管しなければならないため、生産現場では大型保冷庫を使用し、流通過程では保冷輸送する必要があり、保冷処置の費用が嵩むという課題があった。また、水分量が多く、油性試料との親和性が悪いという課題もあった。長期間培養する場合、乾燥が進み、菌の培養ができなくなるという課題もあった。ｐＨが５．０以下になると軟化するため、それよりも低いｐＨでの培養が困難であるという課題もあった。
【０００５】
本発明は、このような課題に着目してなされたもので、親油性で保水性が高く、常温での保管・流通が可能で、長期間の培養および低ｐＨでの培養が可能な油性試料の微生物検査用培地および微生物検査器具を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明に係る油性試料の微生物検査用培地は、水分総質量に対し寒天を１．０乃至１．３質量％、ジェランガムを０．１乃至０．１５質量％含有することを、特徴とする。なお、ジェランガムは、水溶性の天然高分子多糖類であり、増粘安定剤として各種食品に利用されている。なお、ここで、各質量％は、乾燥質量％である。
【０００７】
本発明に係る微生物検査用培地は、寒天とジェランガムとを含有しているため、寒天のみを含有した寒天培地に比べて、保水性が高く、常温での保管・流通が可能である。また、寒天培地より多量の試料を短時間に吸収することができ、検出精度を高めることができる。寒天培地に比べて表面の弾力性が高いため、画線時や塗抹時に傷つきにくい。ジェランガムは親油性であるため、水性試料だけでなく、低濃度の油成分を含む試料も吸収することができる。ｐＨが５．０以下でも軟化しないため、低ｐＨでの培養が可能である。
【０００８】
本発明に係る微生物検査用培地は、保水性が高いため、例えば１週間以上におよぶ長期間の培養でも、乾燥せずに培養が可能である。また、５５℃程度の高温の培養でも、数日間は乾燥せずに培養が可能である。このように、高い保水性により、培養時に乾燥しにくく、硬さも維持されるため、寒天培地に比べて培養する菌に対する影響を小さくすることができる。
【０００９】
本発明に係る微生物検査用培地は、寒天とジェランガムとを乾燥状態で含有していても、水分を含んだゲル状態で含有していてもよい。また、本発明に係る微生物検査用培地は、一般の培地で使用される、酵母エキス、デンプン、ブドウ糖などの栄養分や、塩化ナトリウムなどの塩を含んでいることが好ましい。酸性培地の場合には、硫酸などの酸でｐＨを調整することが好ましい。
本発明に係る微生物検査用培地は、水分総質量に対し寒天を１．０乃至１．３質量％、ジェランガムを０．１乃至０．１５質量％含有しているため、特に、培地として適度な硬さに形成され、試料の吸収性が高い。
【００１０】
本発明に係る微生物検査用培地は、カチオンを含有することが好ましい。この場合、カチオンにより、ジェランガムをゲル化させることができる。また、カチオンの価数や量により、ゲルの状態を調整することができる。カチオンの含有量は、適度な硬さのゲル化のため、水分総質量に対し１価のカチオンで０．１乃至１質量％、２価のカチオンで０．００２乃至０．０２質量％であることが好ましい。カチオンは、塩として培地の水分に含有されることが好ましい。塩が塩化ナトリウムの場合、水分総質量に対し０．１質量％乃至１質量％、特に、０．１質量％含有されることが好ましい。この場合、培地として特に適度な硬さに形成される。
【００１１】
本発明に係る微生物検査用培地は、ｐＨ調整剤を含有することが好ましい。この場合、培地のｐＨを調整することができる。本発明に係る微生物検査用培地で、前記ｐＨ調整剤は、例えば、硫酸または水酸化ナトリウムから成る。硫酸から成る場合、ｐＨ４．０などの低ｐＨに調整することができる。水酸化ナトリウムから成る場合、高ｐＨに調整することができる。
本発明に係る微生物検査器具は、前述のいずれかの微生物検査用培地を容器に収容し、表面を内部より乾燥させたことを、特徴とする。容器は、シャーレが好ましい。表面を内部より乾燥させることにより、液状試料の吸収量を高めることができる。
本発明に係る微生物検査用培地および微生物検査器具は、油性試料の微生物検査用培地として優れた効果を発揮する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、親油性で保水性が高く、常温での保管・流通が可能で、長期間の培養および低ｐＨでの培養が可能な油性試料の微生物検査用培地およびその微生物検査用培地を用いた微生物検査器具を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
本発明の実施の形態の油性試料の微生物検査用培地は、水分と寒天とジェランガムと酵母エキスとデンプンとブドウ糖と塩化ナトリウムと硫酸とを含有している。なお、硫酸は、酸性培地を作成する場合に使用する。
【００１４】
寒天は、水分総質量に対し乾燥質量で０．５乃至１．５質量％の割合で含有されている。なお、寒天は、水分総質量に対し１．０質量％以上で固化し、１．５質量％以上になると硬くなりすぎる傾向を示す。
ジェランガムは、水分総質量に対し乾燥質量で０．０５乃至０．２質量％の割合で含有されている。ジェランガムには、市販製品（例えば、商品名「ゲルライト（ＧＥＬＲＩＴＥ；登録商標）」（発売元；三栄源エフ・エフ・アイ株式会社）や、商品名「ケルコゲル（登録商標）」（発売元；三晶株式会社）など）を使用することができる。なお、ジェランガムは、水分総質量に対し０．０５質量％以上で固化するが、０．５質量％以上の寒天と混合されなければ、塗抹に必要な硬さにならない。また、ジェランガムは、水分総質量に対し０．２質量％以上含むと、水分の吸収性が極度に低下する。
【００１５】
塩化ナトリウムは、水分総質量に対し０．１質量％の割合で含有されている。塩化ナトリウムは、水分中で１価のカチオンを生じる。
硫酸は、ｐＨ調整剤として含有されている。なお、硫酸は、耐熱性好酸性菌（ＴＡＢ）の検査用培地などで、一般的に使用される。
微生物検査用培地は、硫酸により、ｐＨが３．８になるよう調整される。
微生物検査器具は、容器、例えば、直径９０ミリ、厚さ１５ミリのシャーレに微生物検査用培地１０乃至３０ミリリットルを収容して成る。収容された微生物検査用培地は、表面を内部より乾燥させてある。
【００１６】
次に、作用について説明する。
微生物検査用培地は、寒天とジェランガムとを含有しているため、寒天のみを含有した寒天培地に比べて、保水性が高く、常温での保管・流通が可能である。これにより、長期保存したとき、培地から離水して水蒸気になり上皿に水滴が結露する現象を緩和することができる。
【００１７】
また、寒天培地より多量の試料を短時間に吸収することができ、検出精度を高めることができる。例えば、寒天培地では、添加可能な試料の量が０．１ミリリットルであるのに対し、微生物検査用培地では、製造時に表面を２ミリリットルの水分量だけ乾燥させることにより、１ミリリットルの試料を添加・吸収することができる。また、このときの吸収時間が１０〜１５分であり、寒天培地の約半分の時間で吸収することができる。
【００１８】
ジェランガムは親油性であるため、微生物検査用培地は、水性試料だけでなく、低濃度の油成分を含む試料も吸収することができる。このため、寒天培地では、油性試料を添加したとき培養中に油が遊離して浮き出してくる現象が発生していたが、微生物検査用培地では、このような油が遊離する現象を防ぐことができる。また、実質的に水に不溶の成分を含有する試料にも親和性があり、吸収可能である。
【００１９】
微生物検査用培地は、保水性が高いため、例えば１週間以上におよぶ長期間の培養でも、乾燥せずに培養が可能である。また、５５℃程度の高温の培養でも、数日間は乾燥せずに培養が可能である。このように、高い保水性により、培養時に乾燥しにくく、硬さも維持されるため、寒天培地に比べて、培養する菌に対する影響を小さくすることができる。
【００２０】
微生物検査用培地は、塩化ナトリウムが生じる１価のカチオンにより、ジェランガムをゲル化させて、培地として適度な硬さに形成されている。寒天培地に比べて表面の弾力性が高いため、画線時や塗抹時に傷つきにくい。ｐＨが４．０でも軟化しないため、培養が可能である。
本発明の実施の形態の微生物検査用培地および微生物検査器具は、油性試料の微生物検査用培地として優れた効果を発揮する。
【実施例】
【００２１】
[実施例1]
微生物検査用寒天培地を用いた微生物検査器具を以下の方法で作製して水分の吸収状況を観察した。
[ジェランガム添加寒天培地]
１０００ミリリットルの水に粉末寒天を１２．０ｇ、乾燥ジェランガムを１．２ｇ、酵母エキスを２．５g、ポリペプトンを５．０g、およびブドウ糖を１．０g加えて混合し、１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌器にて滅菌した。その後、６０℃まで冷却してｐHが７．０±０．１の微生物検査用標準寒天培地を作製した。直径９０ミリ、厚さ１５ミリのシャーレに、この標準寒天培地を２０ミリリットル注ぎ、２５℃まで冷やして固めた。この培地をエアーフィルター付き乾燥機にて、計量しながら２g軽くなるまで乾燥させた。
このようにして作製された寒天培地を使用した場合、希釈液１ミリリットルの吸収時間は、２０分前後であった。
【００２２】
[実施例２]
アリシクロバシルス検査用寒天培地を用いた微生物検査器具を以下の方法で作製した。
[ジェランガム添加寒天培地]
１０００ミリリットルの水に粉末寒天を１２．０ｇ、乾燥ジェランガムを１．２ｇ、酵母エキスを２．０ｇ、可溶性デンプンを２・０g、およびブドウ糖を１．０g加えて混合し、１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌器にて滅菌した。その後６０℃まで冷却し、これに１０％硫酸溶液を１．０5ミリリットル添加してｐHが３．７±０．２のアリシクロバシルス検査用寒天培地を作製した。直径９０ミリ、厚さ１５ミリのシャーレに、この寒天培地２０ミリリットルを注ぎ、２５℃に冷やして固めた。この培地をエアーフィルター付き乾燥機にて、計量しながら２g軽くなるまで乾燥させた。
このようにして作製された寒天培地に、アリシクロバシルスを添加した試料１ミリリットルを塗抹して実験を実施した。
【００２３】
[ジェランガム無添加寒天培地]
比較のため、ジェランガム無配合の培地も作製した。１０００ミリリットルの水に粉末寒天を１２．０ｇ、酵母エキスを２．０ｇ、可溶性デンプンを２・０g、およびブドウ糖を１．０g加えて混合し、１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌器にて滅菌した。その後、６０℃まで冷却し、これに１０％硫酸溶液を１．０5ミリリットル添加してｐHが３．７±０．２のアリシクロバシルス検査用寒天培地を作製した。直径９０ミリ、厚さ１５ミリのシャーレに、この寒天培地２０ミリリットルを注ぎ、２５℃に冷やして固めた。この培地をエアーフィルター付き乾燥機にて、計量しながら２g軽くなるまで乾燥させた。
【００２４】
[比較試験]
このようにして作製された寒天培地に試料１ミリリットルを塗抹した。試料には、耐熱性好酸性菌のアリシクロバシルス  アシドテレストリス（以下、「アリシクロバシルス」）102濃度の検体希釈液を使用した。
ジェランガム添加寒天培地および無添加寒天培地の両方を培養器に入れ、50℃で６日間培養を行った。
その結果、ジェランガム添加培地と無添加培地のどちらも培養前の寒天の厚みは５ミリであったものが３日目には添加培地は３ミリ、無添加培地は２ミリになった。また、ジェランガム無添加培地はシャーレと培地の間に亀裂がはいりだし、寒天から水分が放出されシャーレの蓋が水滴でいっぱいになった。
６日後には、ジェランガム添加培地は厚さが１ミリになり、寒天の厚みはなくなったものの６日目の時点においても表面がほとんど乾燥せず、アリシクロバシルスの培養も可能であった。ジェランガム無添加寒天培地は厚さが０．５ミリとなり、培地の深部まで乾燥していて、アリシクロバシルスの培養は困難な状態であった。
【００２５】
[実施例３]
微生物検査用寒天培地を用いた微生物検査器具を以下の方法で作製した。
[ジェランガム添加寒天培地]
１０００ミリリットルの水に粉末寒天１２．０ｇ、乾燥ジェランガム１．２ｇ、およびSCDLPブイヨン培地を３５．０ｇ加えて混合し、１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌器にて滅菌した。その後、６０℃まで冷却してｐHが７．２±０．１の微生物検査用SCDLP培地を作製した。９０ミリ、厚さ１５ミリのシャーレに、この寒天培地２０ミリリットルを注ぎ、２５℃に冷やして固めた。この培地をエアーフィルター付き乾燥機にて、計量しながら２g軽くなるまで乾燥させた。
【００２６】
[ジェランガム無添加寒天培地]
比較のため、ジェランガム無添加の寒天培地も作製した。１０００ミリリットルの水に粉末寒天を１２．０ｇとSCDLPブイヨン培地を３５．０ｇ加えて混合し、１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌器にて滅菌した。６０℃まで冷却してｐHが７．２±０．１の微生物検査用SCDLP培地を作製した。直径９０ミリ、厚さ１５ミリのシャーレに、この寒天培地２０ミリリットルを注ぎ、２５℃に冷やして固めた。この培地をエアーフィルター付き乾燥機にて、計量しながら２g軽くなるまで乾燥させた。
【００２７】
[比較試験]
SCDLPブイヨンにサラダ油をそれぞれ１％から３０％加えたものを用意して油性試料とした。油性試料は、１、５、１０、１５、２０、２５、３０％の７パターン用意した。これらの油性試料を、準備したジェランガム添加培地と無添加培地の両方にそれぞれ１ミリリットルずつ塗抹した。
試料の吸収時間は、15分前後であった。ジェランガム無添加の培地は、油性試料の油分が１５％以上の試料では、水分のみが培地に染込み、油分が表面に残りその油分が寒天培地になじまず、油分の流動が見られ培養が困難であった。ジェランガム添加の寒天培地は、油性試料が寒天表面になじみやすく、無添加培地に比べて油分も小さく分散され油分の流動は確認されなかった。また、ジェランガム添加培地は、無添加培地より表面の油分層も薄いことが確認された。しかしながら、油性分が３０％になると、ジェランガム添加培地においても、寒天表面の油分の流動が多少見られ始めた。ジェランガム添加寒天培地は、２5％以下の油分であれば培養に使用できる。
【００２８】
[実施例４]
微生物検査器具を以下の方法で作製した。
２０℃の水１０００ミリリットルに乾燥寒天１２．０ｇと乾燥ジェランガム１．２ｇと酵母エキス２．０ｇとデンプン２．０ｇとブドウ糖１．０ｇと塩化ナトリウム１．０ｇを加えて混合、１２１℃で１５分間、高圧蒸気滅菌した。６０℃まで冷却後、１Ｎ硫酸０．１ミリリットルを添加し、ｐＨ３．８の微生物検査用培地を作製した。その微生物検査用培地２０ミリリットルを直径９０ミリ、厚さ１５ミリのシャーレに注ぎ、２５℃に冷やして固めた。固まった後、計量しながら２ｇ軽くなるまで、エアーフィルター付乾燥機にて培地表面を乾燥させた。こうして、微生物検査器具を作製した。
作製した微生物検査器具の培地の上に、耐熱性好酸性菌であるアリシクロバチルス属菌を含む試料１ミリリットルを塗沫した。試料の吸収時間は、１０分であった。
作製した微生物検査器具を培養器に入れ、５５℃で１週間培養を行った。その結果、１週間後でも、培地の表面が乾燥せず、耐熱性好酸性菌を培養可能であった。
【００２９】
実施例４の微生物検査器具の培地の上に油性試料１ミリリットルを塗沫し、吸収させた。油性試料は、アリシクロバシルス102濃度の検体希釈液１０ミリリットルにオリーブオイル１滴を滴下して準備した。試料の吸収時間は、１０分であった。その微生物検査器具を培養器に入れ、５５℃で１週間培養を行った。その結果、１週間後でも、培地の表面が乾燥せず、耐熱性好酸性菌を培養可能であった。また、培養中に油が遊離して浮き出してくることはなかった。