(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
内皮剥離(de-endothelialization)による血管損傷に続く新脈管内膜増殖および肥厚の処置用医薬の製造のための、４０−Ｏ−(２−ヒドロキシ)エチル−ラパマイシンの使用。
【請求項２】
内皮剥離による血管損傷に続く再狭窄および／または血管閉塞の予防もしくは処置用医薬の製造のための、４０−Ｏ−(２−ヒドロキシ)エチル−ラパマイシンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規使用、特に、遊離または製薬学的に許容される塩または錯体形のラパマイシンの誘導体を含む化合物群の新規使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
適当なラパマイシンの誘導体は、例えば
【化１】
0005124431.tif 000002
〔式中、
Ｘは(Ｈ,Ｈ)またはＯ；
Ｙは(Ｈ,ＯＨ)またはＯ；
Ｒ１およびＲ２は、独立してＨ、アルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシカルボニルアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリル、ジオキソラニルアリル、ジアルキル−ジオキソラニルアルキル、ジ(アルコキシカルボニル)−トリアゾリル−アルキルおよびヒドロキシ−アルコキシ−アルキル；ここで、“alk-”または“アルキル”は分枝鎖または直鎖Ｃ１−６アルキル；“アリール”はフェニルまたはトリル；およびアシルはカルボン酸由来の残基；そして
Ｒ４はメチルまたは
Ｒ４とＲ１が共にＣ２−６アルキルを形成する；
但し、Ｒ１およびＲ２は両方ともＨではない；そしてヒドロキシアルコキシアルキルはヒドロキシアルコキシメチル以外である〕
の式Ｉの化合物を含む。
【０００３】
このような化合物はＷＯ９４／０９０１０に記載され、特に、本化合物に関するその内容を、引用して本明細書に包含させる。
【０００４】
Ｒ１またはＲ２として存在し得るアシルは、好ましくはＲaＣＯ−(式中、ＲaはＣ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６シクロアルキル、アリール、アリールＣ１−６アルキル(ここで、アリールは上記で定義の通り)またはヘテロアリール、例えば、Ｎ、ＳまたはＯをヘテロ原子として、および所望により１個または２個のＮを更なるヘテロ原子として含む５または６員へテロ環由来の残基)である。適当なヘテロアリールは、例えば、ピリジル、モルホリノ、ピペラジニルおよびイミダゾリルを含む。
【０００５】
このような化合物の例は、
１．４０−Ｏ−ベンジル−ラパマイシン
２．４０−Ｏ−(４'−ヒドロキシメチル)ベンジル−ラパマイシン
３．４０−Ｏ−[４'−(１,２−ジヒドロキシエチル)]ベンジル−ラパマイシン
４．４０−Ｏ−アリル−ラパマイシン
５．４０−Ｏ−[３'−(２,２−ジメチル−１,３−ジオキソラン−４(Ｓ)−イル)−プロプ−２'−エン−１'−イル]−ラパマイシン
６．(２'Ｅ,４'Ｓ)−４０−Ｏ−(４',５'−ジヒドロキシペント−２'−エン−１'−イル)−ラパマイシン
７．４０−Ｏ−(２−ヒドロキシ)エトキシカルボニルメチル−ラパマイシン
８．４０−Ｏ−(２−ヒドロキシ)エチル−ラパマイシン
９．４０−Ｏ−(３−ヒドロキシ)プロピル−ラパマイシン
１０．４０−Ｏ−(６−ヒドロキシ)ヘキシル−ラパマイシン
１１．４０−Ｏ−[２−(２−ヒドロキシ)エトキシ]エチル−ラパマイシン
１２．４０−Ｏ−[(３Ｓ)−２,２−ジメチルジオキソラン−３−イル]メチル−ラパマイシン
１３．４０−Ｏ−[(２Ｓ)−２,３−ジヒドロキシプロプ−１−イル]−ラパマイシン
１４．４０−Ｏ−(２−アセトキシ)エチル−ラパマイシン
１５．４０−Ｏ−(２−ニコチノイルオキシ)エチル−ラパマイシン
１６．４０−Ｏ−[２−(Ｎ−モルホリノ)アセトキシ]エチル−ラパマイシン
１７．４０−Ｏ−(２−Ｎ−イミダゾリルアセトキシ)エチル−ラパマイシン
１８．４０−Ｏ−[２−(Ｎ−メチル−Ｎ'−ピペラジニル)アセトキシ]エチル−ラパマイシン
１９．３９−Ｏ−デスメチル−３９,４０−Ｏ,Ｏ−エチレン−ラパマイシン
２０．(２６Ｒ)−２６−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシ)エチル−ラパマイシン
２１．２８−Ｏ−メチル−ラパマイシン
２２．４０−Ｏ−(２−アミノエチル)−ラパマイシン
２３．４０−Ｏ−(２−アセトアミドエチル)−ラパマイシン
２４．４０−Ｏ−(２−ニコチンアミドエチル)−ラパマイシン
２５．４０−Ｏ−(２−(Ｎ−メチル−イミダゾ−２'−イルカルボキシアミド)エチル)−ラパマイシン
２６．４０−Ｏ−(２−エトキシカルボニルアミノエチル)−ラパマイシン
２７．４０−Ｏ−(２−トリルスルホンアミドエチル)−ラパマイシン
２８．４０−Ｏ−[２−(４',５'−ジカルボエトキシ−１',２',３'−トリアゾル−１'−イル)−エチル]−ラパマイシン
好ましい化合物は、例えば４０−Ｏ−(２−ヒドロキシ)エチル−ラパマイシン(以後、化合物Ａと称する)である。
【０００６】
式Ｉの化合物は、例えば、マクロフィリン−１２(ＦＫ−５０６結合タンパク質またはＦＫＢＰ−１２としても既知)に結合し、例えばＷＯ９４／０９０１０に記載のような、観察される活性に基いて、例えば、免疫抑制剤として、例えば、急性同種移植片拒絶反応の処置に有用であることが見出された。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
肝臓、腎臓、肺および心臓の臓器移植は、末期臓器疾患の処置として現在通常行われている。移植可能な同種移植片のヒトドナーの現在の不足のため、移植における異種移植片(種間での移植)を使用する可能性に注意が向けられている。ヒトにおける異種移植片の移植成功に対する一つの主要な障害は、免疫である。
【０００８】
同種および異種移植における更なる障害は慢性拒絶であり、従って、臓器移植は不可逆性臓器疾患の臨床的に有効な解決とはまだなっていない。
【０００９】
進行性および不可逆性移植機能不全として明白な慢性拒絶は、ある場合、手術後１年以後の臓器移植片損失の第１の理由である。慢性拒絶の臨床的問題は、移植片生存期間から明らかである；約半分の腎臓同種移植片が手術後５年以内に失われ、同様の値が心臓同種移植片でも見られる。
【００１０】
慢性拒絶は移植片に向かう免疫反応だけでなく、移植臓器の血管壁の損傷への反応(“損傷応答”反応)も役割を担う複合過程により特徴付けられる。最悪の予後である様々な慢性反応は、動脈硬化様変性(移植片血管疾患、移植片脈管疾病、移植片動脈硬化症、移植片冠動脈疾病などとも呼ばれる)である。この血管損傷は、恐らくとりわけ内皮細胞により合成される成長因子の影響下の、平滑筋細胞の移動および増殖により特徴付けられる。これは脈管内膜増殖および肥厚、平滑筋細胞過形成修復、および徐々に管腔閉塞(血管リモデリング)を導く。とりわけ宿主抗体または抗原−抗体複合体により誘発される反復性内皮損傷を介してまた進行すると考えられ、また高血圧、高脂血症、高コレステロール血症のようないわゆる非免疫学的因子もまた役割を担う。
【００１１】
慢性拒絶は、既知の有効な処置または予防法がないため、変化させ難いおよびコントロールできないように思われる。従って、慢性移植血管疾病の予防、コントロールまたは回復させる有効な処置の必要性が続いている。
【００１２】
例えば、血管形成術(angioplasty)のような血管手術により誘発された脈管内膜平滑筋細胞の増殖および移動の結果としての再狭窄または血管閉塞の予防または処置の必要性もまた続いている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明に従って、驚くべきことに、式Ｉの化合物が血管リモデリングのような血管疾病を抑制することが判明し、特に移植臓器の慢性拒絶の発現を予防し、またはそれを制御するが示された。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の特別の発見に従って：
１．治療的有効量の式Ｉの化合物を患者に投与することを含む、処置を必要とする患者の新脈管内膜増殖および肥厚を予防または処置する方法が提供される。
【００１５】
更に特異的なまたは別の態様のシリーズにおいて、本発明はまた：
２.１.レシピエントに治療的有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を含む、臓器または組織レシピエントの慢性拒絶の発現を予防しまたはそれを抑制する方法。
２.２.レシピエントに治療的有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を含む、臓器または組織移植片レシピエントの移植片血管疾患、例えば、移植片血管疾病、動脈硬化またはアテローム性動脈硬化の発現を予防しまたはそれを制御する方法。
を提供する。
【００１６】
慢性拒絶の発現は、上記のように、移植片に対する免疫反応および移植臓器または組織における血管壁の反応に由来する状態を意味する。式Ｉの化合物は、慢性拒絶発現の低減または慢性拒絶に由来する状態の改善に有用である。
【００１７】
臓器または組織移植は同じまたは異なる種のドナーからレシピエントに対して行い得る。とりわけ、このような臓器または組織移植は、例として、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺、小腸および膵臓またはこれらの組み合わせである。
【００１８】
更にまたは別の態様において、本発明は：
３．患者に治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、処置を必要とする患者の血管障害、例えば、血管形成術に続く脈管内膜平滑筋細胞増殖および移動、例えば再狭窄および／または血管閉塞を予防または処置する方法。
を提供する。
【００１９】
更なるまたは別の態様において、本発明は：
４．レシピエントに治療的有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む、臓器または組織異種移植片移植のレシピエントの急性または慢性拒絶を予防するまたはそれを制御する方法。
を提供する。
【００２０】
異種臓器または組織移植片は、例えば、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、肺、小腸、膵臓(完全または一部、例えばランゲルハンス島)、皮膚および骨髄異種移植片を含む。
【００２１】
上記の別の態様として、本発明はまた：
５．上記１から４で定義の方法に使用するための式Ｉの化合物；または
６．上記１から４で定義の方法に使用するための医薬組成物の製造における式Ｉの化合物の使用；または
７．製薬学的に許容される希釈剤または担体と共に、式Ｉの化合物を含む、上記１から４で定義の方法に使用するための医薬組成物。
も提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
上記で特記した疾病および状態の処置における式Ｉの化合物の有効性は、例えば、以下に記載の動物試験により証明し得る。
【実施例】
【００２３】
Ａ．慢性同種移植片拒絶
雄ＤＡ(ＲＴ１ａ)ラットの腎臓を雄Ｌewis(ＲＴ１ｌ)レシピエントに同所移植する。全２４匹の動物を移植する。全動物を、移植の日に開始して１４日間シクロスポリンＡ、経口７.５mg／kg／日で処置し、急性細胞性拒絶を予防する。反対側の腎臓摘出は行わない。６匹の動物から成る各実験群を、異なる量の式Ｉの化合物またはプラセボで処置する。
【００２４】
移植後５３−６４日に開始して、レシピエント動物を経口で更に６９−７２日式Ｉの化合物で処置するか、プラセボを投与する。移植後１４日目に動物は、腎臓の環流測定(移植片および自分の反対側の腎臓の比較のために)を伴う磁気共鳴影像法(ＭＲＩ)による移植片の評価に付される。これを移植後５３−６４日および実験の最後に繰り返す。次いで、動物を剖見する。ＭＲＩスコア、移植腎臓の相対的環流速度および細胞性拒絶および血管変化の腎臓同種移植片の組織学的スコアのような拒絶パラメーターを測定し、統計学的に分析する。このラット腎臓同種移植片モデルでの０.５から２.５mg／kgでの式Ｉの化合物、例えば、化合物Ａの投与は、上記拒絶パラメーターのすべての減少をもたらす。このアッセイにおいて、２.５mg／kg／日の化合物Ａで処置した動物が、プラセボ群の動物と比較して、有意に低い拒絶のＭＲＩスコア、細胞性拒絶および血管変化の組織学的スコアならびにＭＲＩで測定した環流速度の有意に低い低減を示す。
【００２５】
Ｂ．大動脈移植
このラットの大動脈移植モデルにおいて、移植片に対する同種性の反応は移植片を破壊しないが、臨床移植における慢性移植と類似の病理学的変化を起こす。これらは単核細胞(リンパ球、マクロファージ、ある血漿細胞)の外膜への浸出および脈管内膜の肥厚を含む。
【００２６】
約１cmの長さの腎動脈の分枝部と腸間膜尾部動脈起部の間のドナー動脈を雄ＤＡ(ＲＴ１ａ)ラットから取出し、雄Ｌewis(ＲＴ１ｌ)ラットに同所移植する。移植後、毎週体重を記録する。剖見において、移植片の前部および後部に隣接するレシピエントの動脈の一部と共に移植片を切除する。これをエクスビボで２％パラホルムアルデヒドおよび２.５％グルタールアルデヒド含有リン酸緩衝食塩水で約２分環流し、次いで、２４時間、同溶液中の浸入固定により固定し、その後４％緩衝ホルマリンに固定する。移植片の一片を、両方の横断面および長手部分が移植片動脈およびレシピエント自体の動脈からなるようにパラフィンに埋め込む。
【００２７】
４μm厚さの切片をヘマトキシリン−エオシン、エラスティカ−フォン−ギエソンおよび過ヨウ素酸シッフで染色する。慣用の光学顕微鏡の他に、映像を共焦点レーザー走査顕微鏡で記録する。各切片で４つの領域を走査し、各領域で脈管内膜および脈管内膜＋中膜の厚さを５つの位置で測定する。
【００２８】
剖見において、秤量および組織学を胸腺、脾臓、肝臓、腎臓、精巣および精嚢で行う。
【００２９】
最初の実験は、各４匹の動物を含む４群で行う。一つの群において、同系移植(ＬewisからＬewis)を行い、動物はプラセボマイクロエマルジョンを投与される；他の群は同種移植を含み、動物はプラセボマイクロエマルジョンまたはマイクロエマルジョンの式Ｉの化合物を経口で２.５mg／kg／日で投与される。実験を移植７週間後に止める。
【００３０】
第２の実験はそれぞれ４匹の動物からなる４群を含む。すべての例で、同種移植を行い、動物はプラセボマイクロエマルジョンまたはマイクロエマルジョンの式Ｉの化合物を０.６３、１.２５、２.５または５.０mg／kg／日で投与される。実験を移植後１１週間後に止める。
【００３１】
両方の実験において、式Ｉの化合物、特に化合物Ａは移植片浸潤および新規脈管内膜形成を有意に抑制する。
【００３２】
Ｃ．血管形成術
血管形成術の実験をバルーンカテーテル傷害のモデルで行う：バルーンカテーテル法を０日に、本質的にPowell et al. (1989)に記載のように行う。イソフルオラン麻酔下に、フォガルティ２Ｆカテーテルを外部頸動脈を介して左総頚動脈に挿入し、膨らませる(膨張 ≒ １０μｌ  Ｈ２Ｏ)。膨らませたバルーンを総頚動脈の長さに沿って３回引き、残りの２回は穏やかにねじりながら行い、均質な内皮剥離(de-endothelialization)を行う。次いで、カテーテルを除き、出血を防止するための外部頚動脈の周りの結紮部位および動物を回復させる。
【００３３】
１２匹RoRoラット(４００ｇ、約２４週齢)の２群を研究に使用する：一つはコントロール群および一つの群は式Ｉの化合物を投与される。ラットは全ての取扱い、実験操作および分析中完全にランダマイズする。
【００３４】
試験すべき化合物をp.o.(胃管法)で、バルーン損傷の３日前(日−３)から実験の最後、バルーン障害１４日目(日＋１４)まで投与する。ラットを個々のケージに入れ、餌および水を自由に摂取させる。
【００３５】
ラットを次いでイソフルオランで麻酔し、環流カテーテルを左心室を通して挿入し、大動脈弧に固定し、吸入カニューレを右心室に挿入する。動物を１５０mmHgの環流圧で、最初に１分、０.１Ｍリン酸緩衝緩衝液(ＰＢＳ、ｐ７.４)および次いでリン酸緩衝液(ｐＨ７.４)中の２.５％グルタールアルデヒドで環流する。環流圧は、外側頚動脈にトランスデューサーに結合したカニューレを挿入することにより、予備実験で測定して、カニューレの先端で１５０mmHg(頚動脈で≒ １００mmHg)である。頚動脈を次いで摘出し、周りの組織から離し、７％サッカロース含有０.１Ｍカコジレート緩衝液(ｐＨ７.４)に浸し、一晩４℃でインキュベートする。翌日、頚動脈を０.１Ｍカコジレート中の０.０５％ＫＭｎＯ４に浸し、１時間中で室温で振る。次いで、組織を、７５％で２回１０分、８５％で２回１０分、９５％で３回１０分および１００％エタノールで３回１０分からなる段階的エタノールシリーズで脱水する。脱水頚動脈を次いでTechnovit 7100に、製品説明書に従って包埋する。酸素がブロックの適節な硬化を阻害することが判明したため、包埋した媒体をアルゴン下、一晩乾燥機中で重合化させる。
【００３６】
１−２μmの厚さの切片を各頚動脈の中心部分から、回転ミクロトーム上の硬金属ナイフで切断し、２分、ギムザ染色で染色する。各頚動脈の約５つの切片をこのように調製し、媒体、新脈管内膜および管腔を形態学的に画像分析システム(MCID, Tronto, Canada)を用いて評価する。
【００３７】
このアッセイにおいて、式Ｉの化合物は、経口で一日量０.５から２.５mg／kg投与した場合、筋内膜増殖を阻害する。内膜肥厚は化合物Ａを投与された動物の血管で、コントロール動物と比較して有意に少なく、例えば、０.５mg／kgで、新脈管内膜形成を５０％統計的に阻害し、２.５mg／kgで７５％の有意な阻害をもたらす。
【００３８】
Ｄ．インビボ心臓異種移植(ハムスターからラット)
ハムスターからラット異種移植組み合わせは、いわゆる困難な調和の組み合わせである。ラットは、天然抗ハムスター抗体を、通常調和した組み合わせで見られるような即座の超急性拒絶を産生するほど十分な量で有しない：しかしながら、補体と組み合わさった非処理レシピエントでの拒絶が抗体により３−４日以内に起こる。これは血管の組織学的破壊、赤血球の滲出および管外遊出、更に多形核顆粒球の流入により可視化される；ここではしばしば出血および血栓の兆項が見られる。抗体合成の有効な阻害または補体の不活性化によりこの拒絶に一旦打ち勝ったら、細胞性拒絶が次ぎに発現し得る。これは、リンパ球、リンパ芽球、およびマクロファージを含む単核球細胞流入および筋実質組織の破壊により組織学的に可視化される。細胞性拒絶の阻害には、同種移植片のそれよりもより強い免疫抑制を必要とする。先天性(congenitially)無胸腺(rnu/rnu)ラットは補体(胸腺依存性)細胞性免疫システムを欠き、一般に同種移植片を拒絶できない。このような動物はハムスター異種移植片を正常胸腺ラットと同じ形式で拒絶し、(少なくとも一部の)抗ハムスター抗体のラット内の合成が、胸腺非依存的Ｂ細胞応答に続いて起こることを示す。このようなレシピエントはハムスター異種移植片が胸腺非依存的抗体介在拒絶により拒絶されることを評価するのに有用である。
【００３９】
シランハムスターの心臓を雄ルイス(ＲＴ１')ラットの腹部に、ドナーとレシピエントの大動脈吻合およびドナーの右肺動脈をレシピエントの腹側大静脈に吻合して、異所移植する。移植片を腹部の触診により毎日追跡する。拒絶は、心拍の停止の場合に確定される。動物を毎日計量する。本シリーズの実験では、終点を２８日に設定する。動物を剖見し、移植片とは別に、胸腺、脾臓、肝臓、精嚢および精巣を秤量し組織学的に評価する。血液を採り、細胞融解性抗ハムスター赤血球抗体および溶血性補体活性を測定するための血清を得る。
【００４０】
このアッセイにおいて、式Ｉの化合物、例えば、化合物Ａは無胸腺および正常胸腺レシピエントの両方で移植片生存を延長できると結論付けできる。
【００４１】
本発明の方法を実施するために必要な毎日の投与量は、例えば、用いる式Ｉの化合物、宿主、投与方法および処置する状態の重症度に依存して変化する。好ましい一日量は、一回投与でも、分割投与でも、約０.２５から２５mgである。患者への適当な一日量は、例えば、０.２から２５mg p.o.、好ましくは５から２５の範囲である。式Ｉの化合物は慣用の経路、特に経腸、例えば経口で、例えば錠剤、カプセル、飲用溶液、経鼻、肺(吸入により)の形で、または非経腸で、例えば、注射可能溶液または懸濁液の形で投与し得る。経口投与のための適当な単位用量製剤は、約０.０５から１２.５mg、通常１から１０mg活性成分、例えば化合物Ａを、１個またはそれ以上の製薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む。
【００４２】
前記で特記のように慢性拒絶または異種移植片拒絶を予防または処置するために使用する場合、式Ｉの化合物は唯一の活性成分として、または免疫調節レジメの他の医薬と共に投与し得る。例えば、式Ｉの化合物は、シクロスポリンまたはアスコマイシン、もしくはそれらの免疫抑制性アナログ、例えばシクロスポリンＡ、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキサート；ブレクイナール；レフルノミド；ミゾリビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制性モノクローナル抗体、例えばリンパ球レセプター、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４５またはＣＤ５８への抗体またはそれらのリガンド；または他の免疫調節性化合物、例えばCTLA4Igと組み合わせて使用し得る。
【００４３】
上記に特記のように、例えば、慢性拒絶または異種移植片拒絶の予防または処置のために式Ｉの化合物を他の免疫抑制性／免液調節性療法と組み合わせて投与する場合、共投与免疫抑制性または免疫調節性化合物の用量はもちろん用いる共医薬のタイプ、例えば、ステロイドかシクロスポリンか、用いる特異的医薬、処置する状態などに依存して変化する。前記に従って、本発明は更に別の態様において：
８．例えば、同時にまたは連続して、治療的有効量の式Ｉの化合物および第２の医薬物質(ここで、第２の医薬物質は、上記で示したように免疫抑制性または免疫調節性医薬である)を共投与することを含む、前記で定義の方法。
【００４４】
製剤例：カプセル
【表１】
0005124431.tif 000003
式Ｉの化合物は本発明に従った使用に必要な投与量で非常に耐容性である。例えば、化合物Ａの４週間実験でのＮＴＥＬはラットで０.５mg／kg／日およびサルで１.５mg／kg／日である。