(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩よりなる育毛剤。
【請求項２】
イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩を含有することを特徴とする育毛用組成物。
【請求項３】
イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩、および下記アミノ酸第一群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上を含有することを特徴とする育毛用組成物アミノ酸第一群：グルタミン、ロイシン
【請求項４】
イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩、下記アミノ酸第一群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上、および下記アミノ酸第二群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上を含有することを特徴とする育毛用組成物
アミノ酸第一群：グルタミン、ロイシン
アミノ酸第二群：リジン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、グルタミン酸
【請求項５】
イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩（Ａ成分）の質量に対するアミノ酸第一群（Ｂ成分）の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１５〜７００である、請求項３または４に記載の育毛用組成物。
【請求項６】
イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩（Ａ成分）の質量に対するアミノ酸第二群（Ｃ成分）の質量比（Ｃ／Ａ）が０．０００５〜２００である、請求項４または５に記載の育毛用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩よりなる育毛剤、およびイプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩を含有する育毛用組成物。更に、特定のアミノ酸を含有する育毛用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脱毛症は、遺伝的な要因、男性ホルモンの影響、毛包の血流低下や老化などの身体的要因に加え、ストレスの増加やライフスタイルの変化などが複雑に絡みあって発生する。
従来の育毛剤、例えばペンタデカン酸グリセリド、アデノシンやミノキシジル等を主成分とする育毛剤は、主として栄養補給、血行促進、頭皮改善、細胞賦活化効果等を狙ったものである。
ペンタデカン酸グリセリドは、エネルギー代謝レベルの低下した毛包に対し効率的なエネルギー供給物質として働き、毛の成長を促進することが知られていた（ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ、Ｎｏ．８０、１９８６、ｐ．１０９−１１４）。しかし必ずしも満足できる育毛効果を有しているとは言えなかった。
アデノシンあるいはミノキシジルは毛乳頭細胞に作用して細胞成長因子の産生を促し、毛包細胞を活発化させる効果があることが知られていた（Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１１７、２００１、ｐ．１５９４−１６００；ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ、Ｎｏ．６、２００５、ｐ．１３−１８；およびＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ、Ｎｏ．３、２００１、ｐ．３９−４６を参照せよ）。しかしこれらもまた必ずしも満足できる育毛効果を有しているとは言えなかった。
一方、イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩を含有する化粧料が公知であった（特開平５−３０１８１４号公報）。しかしその目的とするところはいわゆる“美肌効果”であった。
従来の育毛剤やそれに含まれる有効成分は、十分に満足できる育毛効果を有しておらず、新規な作用機序を有する、新規育毛用組成物が切に望まれていた。
【発明の開示】
【０００３】
発明の詳細な説明
発明が解決しようとする課題
本発明の課題は、新規な作用機序を有する、新規育毛用組成物を提供することである。
本発明者らは鋭意検討の結果、イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩が毛乳頭細胞およびヒト表皮角化細胞を増殖させることにより、育毛効果を有することを見出し本発明を完成させた。また、本発明の育毛剤を特定のアミノ酸と併用することにより、ヒト表皮角化細胞を増殖させ、これによりさらによい育毛効果があることを見出した。
すなわち、本発明は以下の態様を含む。
〔１〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩よりなる育毛剤。
〔２〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩を含有することを特徴とする育毛用組成物。
〔３〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩、および
下記アミノ酸第一群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上
を含有することを特徴とする育毛用組成物
アミノ酸第一群：グルタミン、ロイシン
〔４〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩、
下記アミノ酸第一群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上、および
下記アミノ酸第二群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上を含有することを特徴とする育毛用組成物
アミノ酸第一群：グルタミン、ロイシン
アミノ酸第二群：リジン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、グルタミン酸
〔５〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩（Ａ成分）の質量に対するアミノ酸第一群（Ｂ成分）の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１５〜７００である、上記〔３〕または〔４〕に記載の育毛用組成物。
〔６〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩（Ａ成分）の質量に対するアミノ酸第二群（Ｃ成分）の質量比（Ｃ／Ａ）が０．０００５〜２００である、上記〔４〕または〔５〕に記載の育毛用組成物。
〔７〕  育毛のための、イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩の使用。
〔８〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩を含有する組成物を皮膚に塗布することを特徴とする育毛方法。
〔９〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩、および
下記アミノ酸第一群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上
を含有することを特徴とする組成物を皮膚に塗布することを特徴とする育毛方法
アミノ酸第一群：グルタミン、ロイシン
〔１０〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩、
下記アミノ酸第一群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上、および
下記アミノ酸第二群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種又は２種以上
を含有することを特徴とする組成物を皮膚に塗布することを特徴とする育毛方法
アミノ酸第一群：グルタミン、ロイシン
アミノ酸第二群：リジン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、グルタミン酸
〔１１〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩（Ａ成分）の質量に対するアミノ酸第一群（Ｂ成分）の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１５〜７００である、上記〔９〕または〔１０〕に記載の育毛方法。
〔１２〕  イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩（Ａ成分）の質量に対するアミノ酸第二群（Ｃ成分）の質量比（Ｃ／Ａ）が０．０００５〜２００である、上記〔１０〕または〔１１〕に記載の育毛方法。
本明細書において、「Ａ成分の質量」とはグルタミルリジンとしての質量を意味し、Ａ成分としてグルタミルリジン塩を使用する場合には、適宜換算して使用することができる。
同様に、本明細書において、「Ｂ成分の質量」および「Ｃ成分の質量」とはＢ成分およびＣ成分として含まれるアミノ酸のフリー体としての質量を意味し、塩を使用する場合には、適宜換算して使用することができる。
発明の効果
本発明により、毛母細胞や毛乳頭細胞といった毛包細胞の増殖を促す育毛用組成物を提供することができる。
詳細な説明
本発明の育毛用組成物について、以下順次説明する。
本発明の使用されるイプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン（以下、グルタミルリジンと略記）は、下記構造式（１）の構造を有するジペプチド（イソペプチド）である。
0005315992.tif 000002
かかるグルタミルリジンを得る方法としては、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２巻７４０−７４５頁（１９６３）あるいは特開昭５１−１０５０１４号公報に記載されている方法などを用いることができる。
以上のようにして得られるグルタミルリジンは、無臭の白色粉末であり、メタノール、エタノール、アセトンなどの各種有機溶剤には難溶、もしくは不溶であるが、アルカリ性水又は酸性水などに溶解しうる。
上記グルタミルリジンは塩の形で用いることができる。グルタミルリジンを塩の形で用いることにより、前記アルカリ性水又は酸性水ばかりでなく、中性水にも溶解することが可能となる。
かかる塩の形態としては、カリウム、ナトリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム、トリエタノールアミン等の有機アミン塩、リジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸塩、さらには塩酸、硫酸等の鉱酸塩、酢酸、クエン酸等の有機酸塩、などを挙げることができるが、溶解性、安全性等を考慮した場合に、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、塩基性アミノ酸塩が好ましく、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩がより好ましく、アルカリ金属塩が特に好ましい。
以下、イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩をＡ成分と記載する。
イプシロン−Ｎ−（ガンマ−グルタミル）リジン又はその塩と、アミノ酸第一群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種または２種以上を併用すると、細胞の正常な増殖を阻害せずにグルタミルリジン単独の細胞増殖効果を増強させることができる。
以下アミノ酸第一群をＢ成分と記載する。アミノ酸第一群は、グルタミンまたはロイシンである。これらのアミノ酸はフリー体でも塩の状態でもよい。Ｌ体やＤ体といったいずれの光学異性体も使用することができ、ラセミ体（ＤＬ体）を使用することもできる。これらは１種のみを使用してもよいし、２種以上を混合して使用することもできる。
組成物として使用する場合、本発明のＢ成分の配合量は制限されるものではないが、Ａ成分の質量に対するＢ成分の質量（Ｂ／Ａ）は０．０１５〜７００であることが好ましい。０．０１５よりも小さいと、細胞増殖率を期待するほど上げられない場合があり、７００よりも大きいと、細胞増殖率を返って阻害してしまう場合がある。細胞増殖率を効率的に増強できるという観点で、下限値は０．１がより好ましく、０．２が更に好ましく、２が更に一層好ましく、４が殊更好ましく、４．８が特に好ましい。一方、細胞増殖率の阻害要因にならないという観点で、上限値は、３００がより好ましく、２５０が更に好ましく、１２５が更に一層好ましく、６０が殊更好ましく、３５が特に好ましい。
特に細胞の正常な増殖を阻害せずにグルタミルリジン単独の効果を増強させられるという観点では、グルタミン又はその塩と、ロイシン又はその塩とを併用して使用することが好ましい。その場合のグルタミン又はその塩と、ロイシン又はその塩との配合割合は、質量比で１：２〜２５０：１であることが好ましく、３：１〜６０：１であることがより好ましく、５：１〜２５：１であることが更に好ましい。
更に、アミノ酸第二群から選ばれるアミノ酸又はその塩の１種または２種以上を併用すると、細胞増殖効果を更に増強させることができる。以下アミノ酸第二群をＣ成分と記載する。アミノ酸第二群は、リジン、イソロイシン、アスパラギン、アルギニン、グルタミン酸である。これらのアミノ酸はフリー体でも塩の状態でもよい。Ｌ体やＤ体といったいずれの光学異性体も使用することができ、ラセミ体（ＤＬ体）を使用することもできる。これらは１種のみを使用してもよいし、２種以上を混合して使用することもできる。特に細胞増殖率が顕著であるという観点では、リジン、イソロイシンが好ましく、リジンが特に好ましい。
本発明のＣ成分の配合量は制限されるものではないが、Ａ成分の質量に対するＣ成分の質量（Ｃ／Ａ）は０．０００５〜２００であることが好ましい。０．０００５よりも小さいと、細胞増殖効果の増強に殆ど影響を与えない場合があり、２００よりも大きいと、細胞増殖率を阻害する場合がある。細胞を賦活化させられるという観点で、下限値は０．００１がより好ましく、０．０１が更に好ましく、０．０１５が更に一層好ましく、０．０３が殊更好ましく０．０７が特に好ましい。一方、細胞増殖率を阻害しないという観点で、上限値は、１６０がより好ましく、１２０が更に好ましく、６０が更に一層好ましく、３０が殊更好ましく、１５が特に好ましい。
本発明の育毛剤は、溶媒に溶解させることにより育毛用組成物として使用することができる。使用される溶媒としては、具体的には、エタノール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール；水等を使用することができる。使用する溶媒量は育毛用組成物の組成に応じて適宜選択することができる。
育毛用組成物中のＡ成分の含有量は、０．０００１〜１０質量％の範囲が好ましい。０．０００１質量％未満では育毛効果が乏しい場合があり、１０質量％を越えると効果の増加は実質上望めないのに加え、Ａ成分の析出により毛穴が塞がれてしまう場合がある。育毛効果が有効に発揮されるという観点で、下限値は０．０００５質量％がより好ましく、０．０００７質量％が更に好ましく、０．００１質量％が特に好ましい。毛穴詰まりなく効果を発揮できるという観点で、上限値は５質量％がより好ましく、２質量％が更に好ましく、０．１質量％が特に好ましい。
また、本発明の育毛用組成物には、医薬品、化粧品等に一般に用いられる各種成分を本発明の効果を阻害しない程度に適宜配合することができる。具体的には、水性成分、油性成分、粉末成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、色剤、香料、抗酸化剤、ＰＨ調整剤、キレート剤、防腐剤、あるいは紫外線防御剤、抗炎症剤、美白剤、抗老化剤、血流促進剤、白髪防止剤等を配合することができる。
尚、本発明の育毛用組成物の形態は、特に制限は無いが、具体例としては、液状、ペースト状、ジェル状、フォーム状、クリーム状、固形状等が挙げられるが、育毛効果を効率よく発揮できる観点から、液状、ジェル状が好ましい。
本発明の育毛効果の試験方法は、「ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ臨時増刊、Ｎｏ．１３、１９９４、ｐ．１０５〜１０６」にも記載されているような、毛乳頭細胞や毛母細胞の細胞増殖率を測定する試験方法を採用している。特に本発明の試験方法は、毛乳頭細胞およびヒト表皮角化細胞（毛母細胞の代替品）を利用して、簡便かつ迅速に育毛効果を試験できるという観点で極めて有用な試験方法である。特にヒト表皮角化細胞増殖試験（アミノ酸ゼロ培地）という試験方法は、栄養源としてのアミノ酸を全く存在させない培地であり、退行期の頭皮における細胞増殖を見ることができる簡便な方法として極めて有用な試験方法である。
【実施例】
【０００４】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明は下記の実施例により限定されるものではない。
試験方法を説明する。
＜毛乳頭細胞増殖試験＞
（１）増殖用培地ＰＣＧＭ：Ｐａｐｉｌｌａ  Ｃｅｌｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｍｅｄｉｕｍ（東洋紡より購入、ＴＰＧＭ−２５０）を用い、９６ウェルプレートにおいて、細胞播種密度が１．０ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように毛乳頭細胞を播種した。
（２）３７℃、５％炭酸ガス（ＣＯ２）雰囲気下、１日間培養後、培地を取り除き、細胞増殖試験に用いる評価用培地、すなわちＦＣＳ（ウシ胎児血清）を１％含有するＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）培地で洗浄を行った。その後、各種試験成分を同様の評価用培地に溶解し、各種濃度（μｍｏｌ／ｌ）となるように添加した。
（３）引き続き、３７℃、５％炭酸ガス（ＣＯ２）雰囲気下、更に２日間培養し、毛乳頭細胞の増殖率をＭＴＴ法により測定した。
（４）各種育毛成分を入れない培地のみのものを１００として、相対評価値を計算し、増殖率とした。
＜ヒト表皮角化細胞増殖試験＞
（１）増殖添加剤ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ（クラボウより購入、ＫＫ−６１５０）を加えた増殖用無血清培地ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２（クラボウより購入、ＫＫ−２３５０Ｓ）を用い、９６ウェルプレートにおいて、細胞播種密度が２．０ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるようにヒト表皮角化細胞を播種した。
（２）３７℃、５％炭酸ガス（ＣＯ２）雰囲気下、１日間培養後、培地を取り除き、細胞増殖試験に用いる評価用培地、すなわちＭＣＤＢ１５３培地で洗浄を行った。その後、各種試験成分を同様の評価用培地に溶解し、各種濃度（μｍｏｌ／ｌ）となるように添加した。
（３）引き続き、３７℃、５％炭酸ガス（ＣＯ２）雰囲気下、更に２日間培養し、ヒト表皮角化細胞の増殖率をＭＴＴ法により測定した。
（４）各種育毛成分を入れない培地のみのものを１００として、相対評価値を計算し、増殖率とした。
＜ヒト表皮角化細胞増殖試験（アミノ酸ゼロ培地）＞
（１）増殖添加剤ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ（クラボウより購入、ＫＫ−６１５０）を加えた増殖用無血清培地ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２（クラボウより購入、ＫＫ−２３５０Ｓ）を用い、９６ウェルプレートにおいて、細胞播種密度が２．０ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるようにヒト表皮角化細胞を播種した。
（２）３７℃、５％炭酸ガス（ＣＯ２）雰囲気下、１日間培養後、培地を取り除き、細胞増殖試験に用いる評価用培地、すなわち全てのアミノ酸を除いたＭＣＤＢ１５３培地（アミノ酸ゼロ培地）で洗浄を行った。その後、同様の評価用培地に溶解した表２に示すような各種育毛用組成物を添加した。
（３）引き続き、３７℃、５％炭酸ガス（ＣＯ２）雰囲気下、更に２日間培養し、ヒト表皮角化細胞の増殖率をＭＴＴ法により測定した。
（４）各種アミノ酸、および各種育毛成分を入れない培地のみのものを１００として、相対評価値を計算し、増殖率とした。
〔実施例１、比較例１−２〕
表１に示す化合物について各種濃度における、ヒト表皮角化細胞増殖試験と毛乳頭細胞増殖試験を行った。
【表１】
0005315992.tif 000003
毛乳頭細胞およびヒト表皮角化細胞の増殖という観点で、グルタミルリジンは公知の育毛成分であるアデノシンやミノキシジルよりも同等あるいはそれ以上の増殖効果を有することが明らかとなった。
〔実施例２−１４〕
実施例２−１４の組成物を調製し、ヒト表皮角化細胞増殖試験（アミノ酸ゼロ培地）を行った。
【表２】
0005315992.tif 000004
本発明の育毛剤であるグルタミルリジンは、アミノ酸第一群を添加することにより、更にヒト表皮角化細胞の増殖効果が大きくなる。加えて、アミノ酸第二群を添加することにより、更にヒト表皮角化細胞の増殖効果が大きくなることが明らかである。
〔処方例１〕
下表３に示す組成で、育毛ローションを作成した。
【表３】
0005315992.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【０００５】
新規作用機序の育毛剤および育毛用組成物を提供できるようになった。