(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
共役リノール酸のトリグリセリドの粉末を含む組成物であって、該粉末は、重量／重量ベースで２０％を超え、該組成物がＨＩ−ＣＡＰ１００およびＨＩ−ＣＡＰ２００から選択される賦形剤をさらに含む、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記粉末が、重量／重量ベースで２５％を超える、組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物であって、前記粉末が、重量／重量ベースで４０％を超える、組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、前記粉末が、重量／重量ベースで５０％を超える、組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物であって、前記粉末が、自由に流動する、組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物であって、前記粉末が無臭である、組成物。
【請求項７】
食糧および共役リノール酸のトリグリセリドの粉末を含む組成物であって、該粉末が、重量／重量ベースで２０％を超え、該組成物がＨＩ−ＣＡＰ１００およびＨＩ−ＣＡＰ２００から選択される賦形剤をさらに含む、組成物。
【請求項８】
請求項７に記載の組成物であって、前記粉末が、重量／重量ベースで２５％を超える、組成物。
【請求項９】
請求項７に記載の組成物であって、前記粉末が、重量／重量ベースで４０％を超える、組成物。
【請求項１０】
請求項７に記載の組成物であって、前記粉末が、重量／重量ベースで５０％を超える、組成物。
【請求項１１】
請求項７に記載の組成物であって、前記粉末が、自由に流動する、組成物。
【請求項１２】
請求項７に記載の組成物であって、前記粉末が無臭である、組成物。
【請求項１３】
共役リノール酸のトリグリセリドの粉末を含む組成物であって、該粉末は、重量／重量ベースで２０％〜６５％であり、該組成物がＨＩ−ＣＡＰ１００およびＨＩ−ＣＡＰ２００から選択される賦形剤をさらに含む、組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の組成物であって、前記粉末が、自由に流動する、組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の組成物であって、前記粉末が無臭である、組成物。
【請求項１６】
食糧および共役リノール酸のトリグリセリドの粉末を含む組成物であって、該粉末は、重量／重量ベースで２０％〜６５％であり、該組成物がＨＩ−ＣＡＰ１００およびＨＩ−ＣＡＰ２００から選択される賦形剤をさらに含む、組成物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の組成物であって、前記粉末が、自由に流動する、組成物。
【請求項１８】
請求項１６に記載の組成物であって、前記粉末が無臭である、組成物。
【請求項１９】
油および賦形剤を含む組成物であって、該組成物が、重量／重量ベースで少なくとも４０％の油を含む、自由に流動する粉末であり、該賦形剤がＨＩ−ＣＡＰ１００またはＨＩ−ＣＡＰ２００であり、該油が共役リノール酸のトリグリセリドを含む、組成物。
【請求項２０】
請求項１９に記載の組成物であって、前記自由に流動する粉末が、重量／重量ベースで少なくとも５０％の油を含む、組成物。
【請求項２１】
以下の工程：
ａ）油および賦形剤を提供する工程；
ｂ）該油および該賦形剤から水中油型エマルジョンを形成する工程；ならびに
ｃ）自由に流動する粉末が形成される条件下で、該エマルジョンを噴霧乾燥させる工程、
を包含し、該賦形剤がＨＩ−ＣＡＰ１００またはＨＩ−ＣＡＰ２００であり、該油が共役リノール酸のトリグリセリドを含む、方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、前記自由に流動する粉末が、重量／重量ベースで少なくとも４０％の油を含むような濃度として、前記油および前記賦形剤が提供される、方法。
【請求項２３】
請求項２１に記載の方法であって、前記自由に流動する粉末が、重量／重量ベースで少なくとも５０％の油を含むような濃度として、前記油および前記賦形剤が提供される、方法。
【請求項２４】
請求項２１に記載の方法であって、前記自由に流動する粉末が、重量／重量ベースで少なくとも６０％の油を含むような濃度として、前記油および前記賦形剤が提供される、方法。
【請求項２５】
請求項２１に記載の方法により生成される、自由に流動する粉末。
【発明の詳細な説明】
【０００１】  （発明の分野）
本発明は、ヒトおよび動物の栄養の分野に関し、そして特に共役リノール酸（ＣＬＡ）粉末の新規組成物に関する。
【０００２】  （発明の背景）
１９７８年に、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎの研究者らは、調理された牛肉中に含まれる、突然変異誘発を阻害するようである物質の同定を得た。この物質は、共役した二重結合を有するリノール酸（Ｃ１８：２）の位置異性体の混合物であることが見出された。ｃ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｃ１２異性体は、非常に多量存在するが、どの異性体が観察された生物学的活性の原因であるかは不確定である。９，１１異性体が動物組織のリン脂質画分にいくらか優先的に取り込まれかつ組み込まれ、そして１０，１２異性体はその程度が低いようであることが、標識された取り込み研究より記述されてきた（Ｈａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：１０９７（１９９０））。
【０００３】  共役リノール酸（ＣＬＡと称する）に関する生物学的活性は、多様でありかつ複雑である。現在、作用の機構についてほとんど知られていないが、進行中のいくつかの前臨床研究および臨床研究は、作用の生理学的様式および生化学的様式に新たな光を与えるようである。ＣＬＡの抗発癌性特性は、十分実証されてきた。ＣＬＡの投与は、Ｂｉｒｔら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５２：２０３５ｓ（１９９２）によって実証されるようにラット乳腺腫瘍形成を阻害する。Ｈａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：１０９７（１９９０）は、マウス噴門洞新生物形成様式において同様の結果を報告した。ＣＬＡはまた、インビトロで標的ヒト黒色腫、結腸直腸癌細胞および乳癌細胞に対する強力な細胞傷害性剤として同定された。最近の主要な総説論文は、個々の研究より得られる結論を確認する（Ｉｐ，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，６６（６補遺）：１５２３ｓ（１９９７））。
【０００４】  ＣＬＡ作用の機構は未だ不明であるが、免疫系のいくつかの成分が、少なくともインビボで関与し得るという証拠が存在する。米国特許第５，５８５，４００号（Ｃｏｏｋら、本明細書中に参照として援用される）は、ＣＬＡを含有する食餌を投与することによって、Ｉ型またはＴｇＥ過敏性によって媒介される、動物でのアレルギー性反応を減弱するための方法を開示する。約０．１〜１．０％の濃度でのＣＬＡはまた、白血球を保存するに効果的なアジュバントであることが示された。本明細書中に参照として援用される米国特許第５，６７４，９０１号（Ｃｏｏｋら）は、遊離酸または遊離塩のいずれかの形態でのＣＬＡの経口または非経口の投与が、細胞性免疫に関与するＣＤ−４およびＣＤ−８のリンパ球亜集団における上昇をもたらしたことを開示した。外因性腫瘍壊死因子での前処置により生じる不利な効果は、ＣＬＡが投与された動物中のＣＤ−４細胞およびＣＤ−８細胞のレベルの上昇または維持により間接的に緩和され得る。最後には、米国特許第５，４３０，０６６号（参考として本明細書中に援用される）は、免疫刺激による体重減少および食欲不振を予防する際のＣＬＡの効果を記載する。
【０００５】  上記のＣＬＡの有力な治療的適用および薬理的適用とは別に、栄養補助食品として栄養的なＣＬＡの使用に関して、非常に興奮させられている。ＣＬＡは、身体構成に対して非常に一般化された効果を発揮することが見出されている。特に、脂肪組織塊と脂肪のない組織塊との区画を再指向する。参考として本明細書中に援用される、米国特許第５，５５４，６４６号（Ｃｏｏｋら）は、栄養補助食品としてＣＬＡを利用する方法を開示し、ここで、ブタ、マウスおよびヒトは、０．５％  ＣＬＡを含有する食品を給餌された。各種において、脂肪含量における顕著な減少が、タンパク質質量において付随する増加とともに観察された。これらの動物において、ＣＬＡの添加による食餌の脂肪酸含量の増加は、体重の増加をもたらさないが、身体内の脂肪および無脂肪（ｌｅａｎ）の再分布に関連したことは興味深い。目的の別の食餌現象は、食餌転換に対するＣＬＡ補填の効果である。米国特許第５，４２８，０７２号（Ｃｏｏｋら、本明細書中に参考として援用される）は、動物食餌（トリおよび哺乳動物）へのＣＬＡの組み込みがＣＬＡ補填動物におけるより大きな体重増加を導く食餌変換の効果を増加することを示すデータを提供した。食品動物飼育者にとってのＣＬＡ補填の潜在的な有利な効果は、明白である。
【０００６】  ＣＬＡの目的の別の重要な供給源、およびその初期の商業的潜在性を強調するものは、それがヒトおよび動物などによって消費される食品および食餌の中に天然に存在することである。特に、ＣＬＡは、反芻動物からの産物中に豊富である。例えば、ＣＬＡが種々の乳製品において調査された、いくつかの研究が実施されてきた。Ａｎｅｊａら、Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．，４３：２３１（１９９０）は、牛乳からヨーグルトへの加工がＣＬＡの濃縮を生じることを観察した。（Ｓｈａｎｔａら、Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，４７：２５７（１９９３））は、処理する温度および乳清の添加における組合わせた増加がプロセスチーズの調製の間ＣＬＡ濃度を増加したことを示した。別の研究において、Ｓｈａｎｔａら、Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．６０：６９５（１９９５）は、処理および貯蔵の条件は明らかにはＣＬＡ濃度を減少しないがいずれの増加も観察されなかったことを報告した。実際、いくつかの研究は、季節的変動および動物間の変動は牛乳のＣＬＡ含量における３倍もの差異の原因であり得ることを示した。（例えば、Ｐａｒｏｄｉら、Ｊ  Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉ．，６０：１５５０（１９９７）を参照のこと。）また、Ｃｈｉｎら、Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｃａｍｐ．Ａｎａｌ．，５：１８５（１９９２）に記されるように、食物因子は、ＣＬＡ含量のこの変動に関係している。天然の供給源におけるＣＬＡ含量の変動のために、規定された量の種々の食品の摂取は、ヒト（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）または動物が最適用量を受けて所望の栄養効果を達成することを確保することを保障しない。
【０００７】  リノール酸は、重要な生物脂質の成分であり、顕著な割合のトリグリセリドおよびリン脂質を含む。リノール酸は、「必須」脂肪酸として公知であり、自己合成され得ないので、動物は、外因性食餌供給源からそれを得なければならないことを意味する。リノール酸のＣＬＡ型の組み込みは、非共役リノール酸が移動するであろう脂質の位置へのＣＬＡの直接置換を生じ得る。しかし、このことは証明されておらず、そしてかなり有利だが説明できない観察された効果のいくつかが、非共役リノール酸がさもなければ移動しない部位での脂質構造内のＣＬＡの再位置付けから生じ得る。現在、動物ＣＬＡのある供給源（特に、乳製品において）がネイティブなリノール酸への特定のルーメン細菌の生化学的作用から生じ、まず、リノール酸をＣＬＡに異性化し、次いで、ルーメンキャビティー内にそれを分泌することが、明白である。Ｋｅｐｌｅｒら、Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，５６：１１９１（１９６６）は、ルーメン細菌であるＢｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ  ｆｉｂｒｉｓｏｌｖｅｎｓを単離した。この細菌は、リノール酸の生物水素化における中間体として９，１１−ＣＬＡの形成を触媒する。Ｃｈｉｎら、Ｊ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１２４：６９４（１９９４）はさらに、対応する無菌ラットがＣＬＡを産生しないので、げっ歯類の組織中に見出されたＣＬＡは細菌と関連することを見出した。
【０００８】  治療的適用および栄養的適用の両方のための、ＣＬＡの規定された商業的供給源の開発において、口に合う、食品の成分として組みこまれ得るＣＬＡを生成するためのプロセスが必要である。遊離脂肪酸油として提供されるＣＬＡは、しばしば不快な味を有し、その摂取は、一部の個体において、所望されない嘔吐を引き起こし得る。さらに、遊離脂肪酸油は、食物内、特に乾燥食品に取りこむことが困難であり得る。従って、感覚器に対する良好な反応および良好な処方特性を有するＣＬＡ組成物は、当該分野で所望される。
【０００９】  （発明の要旨）
本発明は、ヒトおよび動物の栄養分野に関し、特に共役リノール酸（ＣＬＡ）粉末の新規の組成物に関する。
【００１０】  いくつかの実施形態において、本発明は、共役リノール酸成分および賦形剤を含む組成物を提供する。本発明は、いかなる特定の共役リノール酸成分にも限定されない。実際に、種々の共役リノール酸成分が考えられ、トリグリセリド、遊離脂肪酸、およびアルキルエステルを含むが、これらに限定されない。
【００１１】  本発明は、いかなる特定の賦形剤にも限定されない。実際に、ＨＩ−ＣＡＰ  １００およびＨＩ−ＣＡＰ  ２００を含む種々の賦形剤が考えられるが、これらに限定されない。
【００１２】  本発明は、賦形剤と比べ、いかなる特定の割合の共役リノール酸成分にも限定されない。いくつかの実施形態において、粉末は、重量／重量基準において、２０％を越える共役リノール酸成分である。他の実施形態において、粉末は、重量／重量基準において、３５％を越える共役リノール酸成分である。さらなる実施形態において、粉末は、重量／重量基準において、５０％を越える共役リノール酸成分である。さらなる実施形態において、粉末は、重量／重量基準において、６５％を越える共役リノール酸成分である。なおさらなる実施形態において、粉末は、重量／重量基準において、２０％と６５％との間の共役リノール酸成分である。いくつかの実施形態において、粉末は、自由流動（ｆｌｏｗｉｎｇ）する。他の実施形態において、粉末は、無臭である。
【００１３】  なおさらなる実施形態において、本発明は、上記のような食材および粉末を含む組成物を提供する。本発明は、いかなる特定の食材にも限定されない。実際に、野菜、肉、果物、乳製品、パン、および粉末、加工食品（例えば、栄養棒（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ｂａｒ）、シェイクなど）、ならびにこれらの組み合せを含む種々の食材が考えられるが、これらに限定されない。
【００１４】  いくつかの実施形態において、本発明は、賦形剤および油を含む組成物を提供する。好ましい実施形態において、組成物は、重量／重量基準において、５０％を越える油である。他の実施形態において、組成物は、重量／重量基準において、６０％を越える油である。なおさらなる好ましい実施形態において、賦形剤は、ＨＩ−ＣＡＰ  １００およびＨＩ−ＣＡＰ  ２００から選択される。特に好ましい実施形態において、組成物は、自由流動する粉末である。他の好ましい実施形態において、油は、遊離脂肪酸、トリグリセリド、およびアルキルエステル、ならびにこれらの組み合せを含む群から選択されるＣＬＡ成分を含む。
【００１５】  本発明はまた、自由流動粉末を作る方法を提供し、この方法は、賦形剤およびに油を提供する工程、油／水エマルジョンを賦形剤および油で形成する工程、ならびに自由流動粉末が形成されるような条件下でエマルジョンを噴霧乾燥する工程を含む。本発明の方法は、いずれの特定の油を含む粉末にも限定されない。実際に、種々の油の使用が考えられ、共役リノール酸トリグリセリド、ルリヂサ油、月見草油、フロー（ｆｌａｗ）油、および遊離脂肪酸油（例えば、共役リノール酸の遊離脂助酸）を含むが、これらに限定されない。本発明は、いかなる特定の賦形剤にも限定されない。実際に、ＨＩ−ＣＡＰ  １００およびＨＩ−ＣＡＰ  ２００を含む種々の賦形剤の使用が考えられるが、これらに限定されない。いくつかの好ましい実施形態において、油および賦形剤は、得られる粉末が重量／重量基準において、賦形剤と比べて、約４０％を越える油であるような濃度で提供される。なおさらなる実施形態において、油および賦形剤は、得られる粉末が重量／重量基準において、賦形剤と比べて、約５０％を越える油であるような濃度で提供される。なお他の実施形態において、油および賦形剤は、得られる粉末が重量／重量基準において、賦形剤と比べて、約６０％を越える油であるような濃度で提供される。他の好ましい実施形態において、油は、以下を含む群から選択されるＣＬＡ成分を含む：遊離脂肪酸、トリグリセリド、およびアルキルエステル、ならびにこれらの組み合せ。なおさらなる実施形態において、本発明は、以前に記載された方法によって生成される組成物を提供する。
【００１６】  （定義）
本明細書において用いる場合、「共役リノール酸」または「ＣＬＡ」とは、任意の、共役リノール酸、またはオクタデカジエン遊離脂肪酸をいう。この用語は、リノール酸の分子の任意の位置で２つの共役炭素間二重結合を有する、リノール酸の全ての位置的および幾何的な異性体（アイソマー）を包含し、そして示すことが意図される。ＣＬＡは、普通のリノール酸は、炭素原子９および１２で二重結合を有するという点で、普通のリノール酸とは異なる。ＣＬＡの例としては、以下：２，４−オクタデカジエン酸、４，６−オクタデカジエン酸、６，８−オクタデカジエン酸、７，９−オクタデカジエン酸、８，１０−オクタデカジエン酸、９，１１−オクタデカジエン酸、および１０，１２−オクタデカジエン酸、１１，１３−オクタデカジエン酸、の位置異性体のシス異性体およびトランス異性体（「Ｅ／Ｚ異性体」）が挙げられる。本明細書において用いる場合、「ＣＬＡ」は、単一の異性体、２つ以上の異性体の選択された混合物、および天然の供給源から得られた異性体の非選択的混合物、ならびに合成ＣＬＡおよび半合成ＣＬＡを包含する。
【００１７】  本明細書において用いる場合、用語「異性体化された共役リノール酸」は、化学的方法（例えば、水性アルカリ異性体化、非水性アルカリ異性体化、またはアルカリアルコレート異性体化）によって合成されたＣＬＡをいう。
【００１８】  本明細書において用いる場合、用語「共役リノール酸部分」とは、共役リノール酸または誘導体を含む任意の化合物または複数の化合物をいう。例としては、脂肪酸、アルキルエステル、および共役リノール酸のトリグリセリドが挙げられるがこれらに限定されない。
【００１９】  本明細書において用いる場合、ＣＬＡの「トリグリセリド」は、トリグリセリド骨格の上の３つの位置の任意または３つ全ての位置（例えば、ＳＮ−１、ＳＮ−２、またはＳＮ−３の位置）においてＣＬＡを含むことが意図される。従って、ＣＬＡを含有するトリグリセリドは、ＣＬＡの位置異性体および幾何異性体のうちいずれかを含み得る。
【００２０】  本明細書において用いる場合、ＣＬＡの「エステル」は、アルコールまたは任意の他の化学基（生理学的に受容可能な、天然に存在するアルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール）が挙げられるがこれらに限定されない）に対してエステル結合を通じて結合したＣＬＡの位置異性体および幾何異性体のいずれかおよび全てを含むことが意図される。従って、ＣＬＡのエステルまたはエステル化されたＣＬＡは、ＣＬＡの位置異性体および幾何異性体のいずれかを含み得る。
【００２１】  ＣＬＡの「天然に存在しない異性体」としては、ｃ１１，ｔ１３；ｔ１１，ｃ１３；ｔ１１，ｔ１３；ｃ１１，ｃ１３；ｃ８，ｔ１０；ｔ８，ｃ１０；ｔ８，ｔ１０；ｃ８，ｃ１０；ならびにオクタデカジエン酸のトランス−トランス異性体が挙げられるがこれらに限定されない。そしてオクタデカジエン酸のｔ１０、ｃ１２、およびｃ９，ｔ１１の異性体を含まない。「天然に存在しない異性体」はまた、ＣＬＡがアルカリ異性体化によって合成されるとき、これらの異性体が一般に低量で生成されるので、ＣＬＡの「マイナー異性体」とも呼ばれ得る。
【００２２】  本明細書において用いる場合、「低不純物」ＣＬＡとは、遊離脂肪酸、アルキルエステル、およびトリグリセリドを含み、１％未満の８，１０−オクタデカジエン酸、１１，１３−オクタデカジエン酸、およびトランス−トランスオクタデカジエン酸の総量を含む、ＣＬＡ組成物をいう。
【００２３】  本明細書において用いる場合、「ｃ」は、シス配向における化学結合を包含し、そして「ｔ」は、トランス配向における化学結合をいう。ＣＬＡの位置異性体が「ｃ」も「ｔ」もなしに命名されるならば、その命名は、４つ全ての可能性のある異性体を含む。例えば、１０，１２−オクタデカジエン酸は，ｃ１０，ｔ１２；ｔ１０，ｃ１２；ｔ１０，ｔ１２；およびｃ１０，ｃ１２オクタデカジエン酸を包含するが、ｔ１０，ｃ１２−オクタデカジエン酸またはＣＬＡは、単一の異性体のみをいう。
【００２４】  本明細書において用いる場合、用語「オイル（油）」とは、長鎖脂肪酸（例えば，ＣＬＡ）、トリグリセリド、または他の長鎖炭化水素基を含む、自由流動性の液体をいう。長鎖脂肪酸としては、ＣＬＡの種々の異性体が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２５】  本明細書において用いる場合、用語「生理学的に受容可能なキャリア」とは、油状の医薬品とともに通常用いられる任意のキャリアまたは賦形剤をいう。このようなキャリアまたは賦形剤としては、オイル、デンプン、スクロースおよびラクトースが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２６】  本明細書において用いる場合、用語「経口送達ビヒクル」とは、医薬品を経口的に送達する任意の手段をいい、カプセル、丸剤、錠剤、およびシロップが挙げられるがこれらに限定されない。
【００２７】  本明細書において用いる場合、用語「食品（ｆｏｏｄ  ｐｒｏｄｕｃｔ）」とは、ヒト、非反芻動物、または反芻動物による消費に適切な任意の食物または飼料をいう。「食品」とは、調製され包装された食物（例えば、マヨネーズ、サラダドレッシング、パン、またはチーズ食品）、または動物用飼料（例えば、押し出されたおよびペレット化された動物用飼料または粗混合飼料）であり得る。「調製された食品」とは、ヒトの消費について承認された任意の予め包装された任意の食物を意味する。
【００２８】  本明細書において用いる場合、用語「フードスタッフ」とは、ヒトまたは動物の消費に適した任意の物質をいう。
【００２９】  本明細書において用いる場合、用語「揮発性有機化合物」とは、所定の温度で部分的に、または完全にガス状態で存在する、任意の炭素含有化合物をいう。揮発性有機化合物は、有機化合物（例えば、ＣＬＡ）の酸化から形成され得る。揮発性有機化合物の例としては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、２−ブテナール、エタノール、３−メチルブタナール、４−メチルペンタノン、ヘキサナール、ヘプタナール、２−ペンチルフラン、オクタナールが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３０】  本明細書において用いる場合、用語「金属酸化剤キレート剤」とは、金属をキレート化する任意の抗酸化剤をいう。例としては、レシチンおよびクエン酸エステルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３１】  本明細書において用いる場合、用語「アルコレート触媒」とは、カリウムメチレートおよびカリウムエチレートが挙げられるがこれらに限定されない、任意の一価アルコールのアルカリ金属化合物をいう。
【００３２】  本明細書において用いる場合、用語「自由流動」とは、互いにまたは他の物質に対する粒子の凝集なしに、粒状物質が流動する能力をいう。
【００３３】  本明細書において用いる場合、ＣＬＡの粉末を参照して使用されるような、用語「無臭」とは、粉末を形成するために使用される賦形剤と同じ臭いを有する（またはそれを欠く）粉末をいう。
【００３４】  本明細書において用いる場合、用語「粉末剤」はとは、油または他の液体の粉末を形成するために使用される化合物（例えば、デンプンベースの化合物）をいう。
【００３５】  （発明の詳細な説明）
本発明は、ヒトおよび動物の栄養の分野に関し、詳細には、共役リノール酸（ＣＬＡ）粉末の新規組成物に関する。ＣＬＡ粉末は、多数の用途を見出す。詳細には、ＣＬＡ粉末は、ＣＬＡの遊離脂肪酸またはトリグリセリドが通常使用される、任意の用途において使用され得る。ＣＬＡ粉末はまた、遊離脂肪酸のみからなる組成物よりも酸化に対して安定である。さらに、ＣＬＡ粉末は、良好な感覚受容性特性を有する。この粉末は、本質的に味がなく、かつこの粉末の摂取は、ＣＬＡの遊離脂肪酸油がいくつか個体において引き起こす望ましくないおくび（ｂｅｌｃｈｉｎｇ）を生じない。
【００３６】  本発明のＣＬＡ粉末は、食品および動物飼料における使用に特に適している。この適用の目的のために、ＣＬＡを含む食品は、ＣＬＡが添加された、任意の天然の食品、加工食品、ダイエット食品または非ダイエット食品を意味する。ＣＬＡ粉末は、種々の食品（ダイエット飲料、ダイエットバー、補助食品、加工凍結食、キャンディー、スナック製品（例えば、チップス）、加工肉製品、牛乳、チーズ、ヨーグルトおよび任意の他の脂肪または油含有食品が挙げられるが、これらに限定されない）に直接含まれ得る。いくつかの好ましい実施形態において、ＣＬＡ粉末は、非常に低カロリーダイエットのために処方される製品において提供される。本発明のＣＬＡ粉末がＣＬＡの遊離脂肪酸を含む食品よりも、味および匂いにおいてより優れることが考慮される。従って、本発明のいくつかの実施形態は、ＣＬＡ粉末を含む食品を提供し、ここで、この食品の味および匂いは、影響を受けない。
【００３７】  本発明のＣＬＡ粉末は、種々の形態で提供され得る。いくつかの実施形態において、投与は経口である。ＣＬＡ粉末はさらに、適切なキャリア（例えば、デンプン、スクロースまたはラクトース）と共に、錠剤、丸剤、糖衣剤およびカプセル剤に処方され得る。好ましくは、ＣＬＡ粉末処方物は、抗酸化剤（Ｃｏｎｔｒｏｘ（Ｇｒｕｎａｕ（Ｈｅｎｋｅｌ），Ｉｌｌｅｒｔｉｓｓｅｎ，ＤＥ）、Ｈｅｒｂａｌｏｘ（ローズ・マリーの抽出物；Ｋａｌｓｅｃ，Ｋａｌａｍａｚｏｏ，ＭＩ）、Ｃｏｖｉ−ＯＸ（Ｇｒｕｎａｕ（Ｈｅｎｋｅｌ），Ｉｌｌｅｒｔｉｓｓｅｎ，ＤＥ）、およびビタミンＣの油溶性形態が挙げられるが、これらに限定されない）を含む。ＣＬＡは、水溶液、油性溶液、または上記の他の形態のいずれかで提供され得る。本発明の錠剤またはカプセル剤は、腸溶性コーティングでコートされ得、このコーティングは、約６．０〜７．０のｐＨで溶解する。小腸で溶解するが胃で溶解しない適切な腸溶性コーティングは、酢酸フタル酸セルロースである。
【００３８】  本発明のＣＬＡ粉末は、ＣＬＡ部分（例えば、ＣＬＡの遊離脂肪酸、ＣＬＡアルキルエステルまたはＣＬＡを含むトリグリセリド）を賦形剤または粉末剤と組み合わせることによって形成される。次いで、この混合物は、噴霧乾燥のような方法によって粉末中に形成される（例えば、本明細書中で参考として援用される、米国特許第４，２３２，０５２号を参照のこと）。一般に、噴霧乾燥は、物質を液化する工程および乳化する工程、次いでそれを微粒化する工程を包含し、その結果、少ないが全ての割合の水が除去され、自由流動粉末を生じる。適切な噴霧乾燥ユニットとしては、高圧ノズル噴霧乾燥器および回転ディスクまたは遠心噴霧乾燥器の両方が挙げられる。本発明により、高い付加（例えば、４０％〜６５％）の共役リノール酸および／または他の油（例えば、オオマツヨイグサ油、ルリヂサ油、亜麻油、ＣＬＡ油）を含む粉末が、油、賦形剤および水のエマルジョンの単純な噴霧乾燥によって形成され得ることが発見された。流動床中に噴霧する工程または逆流様式において噴霧する工程を包含するより複雑な方法を組み入れる必要はない。
【００３９】  本発明は、任意の特定の賦形剤に限定されない。実際には、種々の賦形剤が考慮され、これらの賦形剤としては、ＨＩ−ＣＡＰ  １００（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｒｃｈ，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）およびＨＩ−ＣＡＰ  ２００（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｒｃｈ，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の粉末は、賦形剤と比較して、高いパーセンテージの油を含む。いくつかの実施形態において、この油は、重量／重量に基づいて粉末の２０％である（すなわち、この粉末は、粉末１００グラム毎に、２０グラムの油を含む）。他の実施形態において、この油は、重量／重量に基づいて３５％の粉末である。なお他の実施形態において、この油は、重量／重量に基づいて少なくとも５０％の粉末である。さらなる実施形態において、この油は、重量／重量に基づいて少なくとも６０％〜６５％の粉末である。各場合において、油粉末は、自由流動であり、かつ無臭である。好ましい実施形態において、この油は、ＣＬＡ部分を含む。特定の好ましい実施形態において、この油は、ＣＬＡ脂肪酸、ＣＬＡトリグリセリドおよび／またはＣＬＡアルキルエステルを含む。
【００４０】  いくつかの好ましい実施形態において、ＣＬＡ部分は、実施例５、６および１２に記載されるような、ＣＬＡを含むトリグリセリドである。これらの実施形態において、トリグリセリドは、部分的にまたは全体的に、グリセロール骨格に結合されたＣＬＡから構成され得る。好ましくは、トリアシルグリセロールの合成において使用されるＣＬＡは、異性化ＣＬＡが１％未満の８，１０−オクタデカジエン酸、１１，１３−オクタデカジエン酸、およびトランス−トランスオクタデカジエン酸を含むような条件下で、アルカリアルコレート触媒を用いて作製され得る。トリアシルグリセロールを作製するために使用されるＣＬＡは、１００ｐｐｍ以下、好ましくは１０ｐｐｍ以下のレベルまで揮発性有機化合物を除去するために（例えば、分子蒸留および吸着によって）、好ましくは、処理される。ＣＬＡ（９０〜９６％）について高度に濃縮された純粋なトリアシルグリセロールは、Ｈ  ＮＭＲによって確認され得る。エステル化は、固定されたＣａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼを用いて進行させる。好ましくは、ＣＬＡは、少なくとも４０％、および４５〜４８％以上のｃ９，ｔ１１−オクタデカジエン酸およびｔ１０，ｃ１２−オクタデカジエン酸、ならびにこれらの混合物を含む。
【００４１】  固定されたＣａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼは、ｎ−３型の多価不飽和脂肪酸について記載されたものと類似の様式で使用される。エステル化反応は、５０°〜７５℃、好ましくは６５℃で、形成の際に同時生成される水またはアルコールを（エステルから）除去するために使用されるいかなる溶媒も減圧も存在させずに、実行される。これは、トリアシルグリセロール生成を完了にシフトさせ、そして本質的に定量的な収率での、いかなるモノアシルグリセロールおよびジアシルグリセロールも実質的に含まない高度に純粋な生成物を確実にする。化学量論量の遊離脂肪酸（すなわち、グリセロールに基づく場合、３モル当量、またはグルセロール部分に存在するヒドロキシル基のモル当量の数に基づく場合、１モル当量）が使用され得る。基質の総重量に基づく場合、１０％投与量のリパーゼのみが、必要であり、これは多数回使用され得る。これは、生産性の観点から非常に重要である。これらの全ては、溶媒が必要とされないという事実とともに、このプロセスを、スケールアップおよび工業化の観点から非常に実現可能性のあるものにする。なぜなら、容積およびかさ高さの削減が、莫大であるからである。また、わずかに過剰な遊離脂肪酸は、終了へと反応を加速するため、および反応の完結を確実にするために、使用され得る。
【００４２】  反応の開始において、１−モノ−アシルグリセリドまたは３−モノ−アシルグリセリドが最初に形成され、続いて１，３ジアシルグリセリドが形成され、そして最終的に、より長い反応時間においてトリグリセリドが形成される。モノアシルグリセリドおよびジアシルグリセリドは、これらが生物学的活性を表すが、水性細胞環境においてより大きな可溶性を有し、かつ代替的な分子合成経路（例えば、リン脂質または他の機能的脂質の合成）に関与し得るという点で、有用な中間体である。対照的に、トリグリセリドは、しばしば細胞膜または貯蔵小胞中にインタクトで沈積される。従って、遊離脂肪酸またはエステルよりもモノグリセロール、ジグリセロールまたはトリグリセロール形態のＣＬＡの投与は、ＣＬＡ成分の取り込みの様式および分布、代謝速度ならびに構造的役割または生理学的役割に影響を与え得る。
【００４３】  （実験）
以下の実施例は、本発明の特定の好ましい実施形態および局面を実証およびさらに例示するために提供され、そして本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００４４】  以下の実験の開示において、以下の略語を適用する：Ｍ（モル濃度）；ｍＭ（ミリモル濃度）；μＭ（マイクロモル濃度）；ｋｇ（キログラム）；ｇ（グラム）；ｍｇ（ミリグラム）；μｇ（マイクログラム）；ｎｇ（ナノグラム）；Ｌまたはｌ（リットル）；ｍｌ（ミリリットル）μｌ（マイクロリットル）；ｃｍ（センチメートル）；ｍｍ（ミリメートル）；ｎｍ（ナノメートル）；℃（摂氏度）；ＫＯＨ（水酸化カリウム）；ＨＣＬ（塩酸）；Ｈｇ（水銀）。
【００４５】  （実施例１）
（低温でプロピレングリコールを使用するサフラワー油の異性化）
サフラワー油を、触媒としてＫＯＨを使用して、低温にてプロピレングリコール中で異性化した。この異性化装置は、温度計を備えた２首フラスコからなり、温度計は、一方の首に配置され、過剰の圧力を放出するために小さい開口を残す。窒素供給源を、このフラスコのもう一方の首に取り付けた。フラスコに添加した溶液を、磁気棒および磁気スターラーの使用によって攪拌した。フラスコの温度を、磁気スターラー上に配置したサーモスタット制御油浴中にフラスコを配置することによって制御した。
【００４６】  フラスコを、６０．２７ｇのプロピレングリコールおよび２８．２０ｇのＫＯＨで満たし、そして油浴中に漬けた。温度を１３０℃に上昇させ、ＫＯＨを溶解させた。ＫＯＨが溶解した後、６０．０９ｇのサフラワー油をフラスコに導入した。多量の窒素を、２首フラスコを通して５分間循環させ、次いで、より少量に減少させた。この混合物を１５０℃に加熱した（約４０分を要した）。次いで、この混合物を、３．５時間１５０℃で反応させた。間隔を開けながら、３ｍｌのサンプルを分析用に採取した。
【００４７】  これらのサンプルを、６ｍｌの熱水中に直接配置し、そしてクエン酸を、遊離脂肪酸が上層として分離されるまで過剰に添加した。加熱は、クエン酸を添加する間の凝固を防止するために必要であった。ガスクロマトグラフィーによる分析のために遊離脂肪酸をメチルエステルに変換するために、０．０２５ｇの遊離脂肪酸、５ｍｌの４％  ＨＣｌ溶液およびエタノールを試験管に添加した。窒素を試験管に添加し、次いで、試験管を密閉し、そして２０分間６０℃の水浴中に置いた。次いで、試験管を冷却し、１ｍｌの精製水および５ｍｌのイソオクタンを添加した。窒素を試験管に添加し、そして試験管を３０秒間振盪した。得られた上層を、新しい試験管中の１μｌの精製水に添加し、そして再度窒素下で振盪した。次いで、得られた上層をイソオクタンで洗浄し、第３の試験管にデカントした。少量の硫酸ナトリウムを、水分吸収のために添加した。次いで、１μｌのサンプルを、ガスクロマトグラフに直接注入した。
【００４８】  ガスクロマトグラフィー条件は、以下のとおりである：
システム：Ｐｅｒｋｉｎｓ−Ｅｌｍｅｒ自動システム
注入器：２４０℃でのスプリットなし（Ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ）
検出器：２８０℃での水素炎イオン化検出器
キャリア：ヘリウム
カラム：ＷＣＯＴ融合シリカ０．２５ｍｍ×１００Ｍ、ＣＰ−ＳＬ  ８８  ＦＡＭＥ用、ＤＦ０．２
オーブンプログラム：８０℃（０分）から、１０℃／分で２２０℃まで上昇し、２２０℃で１０分間維持。
【００４９】  全ての結果を、相対的なピーク面積％として表す。標準は一般的に利用可能でなく、そのため、溶出したピークを他のシステムで確かめた。ＧＣ−ＭＳは、シス結合およびトランス結合の数を決定するが、これらの位置を決定しない。従って、ＮＭＲ分析を使用して、結合の位置を確認した。大きいピークは、ｃ９，ｔ１１およびｔ１０，ｃ１２であった。ＣＬＡ異性体のＮＭＲ分析については、Ｍａｒｃｅｌ  Ｓ．Ｆ．Ｌｉｅ  Ｋｅｎ  ＪｉｅおよびＪ．Ｍｕｓｔａｆａ，Ｌｉｐｉｄｓ，３２（１０）１０１９−３４（１９９７）（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。
【００５０】  このデータ（表１に示されそして表５に要約される）は、ポリプロピレングリコール（溶媒として）、ＫＯＨ（触媒として）および低い温度を使用するサフラワー油の異性化が、８，１０異性体および１１，１３異性体を欠く共役リノール酸の生成を生じることを実証する。この実験において使用した高度に極性のカラムは、ｃ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｃ１２異性体から８，１０異性体および１１，１３異性体を分離するために首尾よく使用され得る。８，１０異性体は、ｃ９，ｔ１１異性体と同時に溶出されるかまたはｃ９，ｔ１１異性体の直後に溶出される傾向がある。１１，１３異性体は、カラム条件に依存して、ｔ１０，ｃ１１異性体の前に溶出するか、またはｔ１０，ｃ１２異性体と共に溶出する。
【００５１】  この方法に従って生成された共役リノール酸を、生成される種々の異性体を比較することによって特徴付けた。第１に、この異性化反応は、実質的に完了するまで進行させた。この反応の完全性は、リノール酸異性体−残留するｃ９，ｔ１２リノール酸についての総ピーク面積を、総ピーク面積によって除算することによって得られる。この値は、０．９９４である。第２に、総ピーク面積に対するｃ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｃ１２異性体の比が決定され得る。この値は、０．９５３である。第３に、ｃ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｃ１２異性体に対するｔ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｔ１２異性体の比が決定され得る。この値は、０．０１０である。第４に、総ピーク面積に対するｔ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｔ１２異性体の比が決定され得る。この値は、０．００９である。第５に、ｃ９，ｔ１１異性体に対するｔ１０，ｃ１２異性体の比が決定され得る。この値は、１．０１８である。これらの比を、表１１に要約する。
【００５２】  （実施例２）
（高温および高圧での水性異性化）
５０ｇの水および２５．３２ｇのＮａＯＨを、高圧リアクタ（Ｐａｒｒ  Ｍｏｄｅｌ  ４５０  ＭＬ  Ｂｅｎｃｈｔｏｐ  Ａｌｌｏｙ  ４００（圧力ゲージおよびスターラーを備える））に添加した。ＮａＯＨを溶解させ、そして９４．０ｇのサフラワー油をリアクタに添加した。リアクタを閉じ、そして２分間窒素をフラッシュし、次いで、全ての弁を閉じた。リアクタを電気ガスケット中で２１０℃に加熱し、この温度で６時間維持した。次いで、温度を６０℃に低下させ、その後圧力を放出し、そしてリアクタを開けた。２ｇの生じた凝固セッケンをリアクタから採取し、そして約４０℃の水に溶解した。次いで、クエン酸を添加して溶液中のｐＨを６未満に低下させた。サンプルを、脂肪酸の上層から採取し、そして実施例１のようにガスクロマトグラフィー用に調製した。
【００５３】  ガスクロマトグラフィーの結果を表２に表し、そして表５に要約する。これらのデータは、この異性化方法が、比較的多い量の８，１０異性体および１１，１３異性体の形成を生じることを示す。比を表６に示す。
【００５４】  （実施例３）
（高温および高圧でのサフラワー油の非水性アルカリ異性化）
１００．４８ｇのプロピレングリコールおよび４６．７５ｇのＫＯＨを、実施例２に記載されるような高圧リアクタに添加した。次いで、このリアクタを、ＫＯＨを溶解するために１３０℃まで加熱した。次いで、１００．１２ｇのサフラワー油を、ＫＯＨ−プロピレングリコール混合物に添加した。このリアクタを閉じ、窒素で１分間フラッシュし、そして全てのバルブを閉じた。次いで、このリアクタを２１０℃まで加熱し、そしてこの温度で１時間維持した。このリアクタを冷却し、そして内容物を１２０ｇの熱水にデカントした。攪拌しながら、３５．３ｇの３７％ＨＣｌおよび２７．５９ｇのクエン酸を、この脂肪酸に連続して添加した。最上層からサンプルを採取し、そして減圧フラスコ中６０℃で乾燥させた。得られた脂肪酸のサンプルを、実施例１に記載のようにガスクロマトグラフィーによって分析した。
【００５５】  この結果を表３に表し、そして表５に要約する。この実験は、高温でＫＯＨおよび非水性溶媒を用いるサフラワー油の異性化が、有意な量の８，１０異性体および１１，１３異性体、ならびにｔ９，ｔ１１異性体およびｔ１０，ｔ１２異性体の形成を生じることを実証する。比を表６に示す。
【００５６】  （実施例４）
（低温での水性アルカリ反応）
４９．９４ｇの水および３９．９６ｇのＮａＯＨを、実施例３に記載される高圧リアクタに添加した。この混合物を、ＮａＯＨが溶解するまで加熱した。次に、１００．５４ｇのサフラワー油をこの高圧リアクタに添加し、このリアクタを窒素でフラッシュし、そして全てのバルブを閉じた。この高圧リアクタを、１７９℃まで２２．５時間加熱した。実施例３のように、ガスクロマトグラフィーのためのサンプルを調製した。このデータを表４に示し、そして表５に要約する。この実験は、水性アルカリ異性化について低温が用いられる場合、共役反応は完了しないことを実証する。さらに、有意な量の８，１０異性体および１１，１３異性体が生成される。比を表６に示す。
【００５７】
【表１】
0005258134.tif 000002
【００５８】
【表２】
0005258134.tif 000003
0005258134.tif 000004
【００５９】
【表３】
0005258134.tif 000005
0005258134.tif 000006
【００６０】
【表４】
0005258134.tif 000007
0005258134.tif 000008
【００６１】
【表５】
0005258134.tif 000009
【００６２】
【表６】
0005258134.tif 000010
（実施例５）
（直接エステル化によるＣＬＡのトリアシルグリセロールの調製）
概要。溶媒としての重水素化クロロホルム中で、Ｈ核磁気共鳴スペクトルをＢｒｕｋｅｒ  ＡＣ  ２５０  ＮＭＲ分光器で記録した。石油エーテル中の１０％ジエチルエーテルで溶出する、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製のＰｒｅｐＰａｋ（登録商標）５００／Ｓｉｌｉｃａ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅカラムを使用し、Ｗａｔｅｒｓ製のＰｒｅｐＬＣＴＭ  Ｓｙｓｔｅｍ  ５００Ａ機器によってＨＰＣＬ分離を行った。分析用ＧＬＣを、Ｈａｒａｌｄｓｓｏｎら，Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ  Ｓｃａｎｎｅｄ  ４５：７２３（１９９１）に記載されるような、以前に記載された手順に従って、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ８１４０  Ｇａｓ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈで行った。
【００６３】  固定したＣａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼを、ＤｅｎｍａｒｋのＮｏｖｏ ＮｏｒｄｉｓｋからＮｏｖｏｚｙｍｅＴＭとして得た。これを、エステル化実験において提供する場合、直接使用した。Ｍｅｒｃｋから購入した分析等級のジエチルエーテルは、いずれの精製もなく使用したが、Ｍｅｒｃｋからの合成等級のｎ−ヘキサンは、抽出およびＨＰＬＣクロマトグラフィーにおいて使用する前に、新たに蒸留した。グリセロール（９９％）を、Ｓｉｇｍａ  ａｎｄ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから購入し、そしてさらなる精製なしで使用した。ＣＬＡ濃縮物を、ＮｏｒｗａｙのＮａｔｕｒａｌ  Ｌｉｐｉｄｓから、遊離脂肪酸としてＴｏｎａｌｉｎＴＭとして得た。この純度を、分析用ＧＬＣおよび高磁場ＮＭＲ分光法によって確認し、これによってある程度のグリセリド不純物が明らかになった。Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅでのＧＬＣによって、ＣＬＡ濃縮物は、４３．３％の９−ｃｉｓ，１１−ｔｒａｎｓ−リノール酸、４４．５％の１０−ｔｒａｎｓ，ｌ２−ｃｉｓ−リノール酸、５．４％の他のＣＬＡ異性体、５．６％のオレイン酸、および各々０．６％のパルミチン酸およびステアリン酸を含むことがわかった。
【００６４】  （実施例６）
（直接エステル化によるＣＬＡのトリアシルグリセロールの調製）
固定したＣａｎｄｉｄａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼ（１．２５ｇ）を、グリセロール（１．２２ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）および遊離脂肪酸としてのＣＬＡ（Ｍ．ｗｔ．２８０．３ｇ／ｍｏｌ；１１．６ｇ，４１．５ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。この混合物をマグネチックスターラーホットプレート上、６５℃、０．０１〜０．５Ｔｏｒｒの持続減圧下で、緩やかに攪拌した。この反応の進行の間に精製した揮発性の水を、液体窒素冷却トラップ中に持続的に凝縮した。４８時間後、この反応を中断し、ｎ−ヘキサンを添加し、そして酵素を濾過によって濾別した。この有機相を、炭酸ナトリウムのアルカリ性水溶液で処理して、過剰の遊離脂肪酸を除去した（必要な場合）。この有機溶媒（適切な場合、無水硫酸マグネシウムで乾燥後）を、ロータリーエバポレーターで減圧下で除去し、続いて、高減圧処理によって実質的に純粋な生成物を、わずかに黄色がかった油状物として得た（１０．９ｇ；平均Ｍ．ｗｔ．８７８，６ｇ／ｍｏｌ；収率９３％）。化学量論量の遊離脂肪酸が使用される場合、標準化水酸化ナトリウムによる滴定を適用して、粗反応生成物の遊離脂肪酸含有量を決定した（エステル基のモル数に基づく場合の１％未満の遊離脂肪酸含有量は、少なくとも９９％の取り込みに対応し、これは、最低９７％のトリグリセリド含有量と等価である）。この粗生成物を、ＨＰＬＣに直接導入し、ｎ−ヘキサン中の１０％ジエチルエーテルで溶出して、１００％純度のトリグリセリドを無色の油状物として得た。２５０ＭＨｚ  １Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）８（ｐｐｍ）６．３５−６．２３（３Ｈ，ｄｄｔ，Ｊｔｒａｎｓ＝１５．０Ｈｚ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，Ｊアリル＝１．３，＝ＣＨＣＨ＝ＣＨ），５．９８−５．９０（３Ｈ，ｄｄ，Ｉｃｉｓ＝１０．９，Ｊ＝１０．９，−ＣＨ＝ＣＨＣＨ＝），５．７１−５．５９（３Ｈ，ｄｔｄ，Ｊｔｒａｎｓ＝１５．０Ｈｚ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，＝ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−），５．３５−５．２６（４Ｈ，ｍ，＝ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−および−ＣＨ２Ｃ−ＩＣＨ２−），４．３３−４．２６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊｇｅｍ＝１１．９Ｈｚ，Ｊ＝４．３，−ＣＨ２ＣＨＣＨ２−），４．１８−４．１０（２Ｈ，ｄｄ，Ｊｇｅｍ＝１．８Ｈｚ，Ｊ＝６．０，−ＣＨ２ＣＨＣＨ２−），２．３７−２．３１（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４  Ｈ２，−ＣＨ２ＣＯＯＲ），２．１９−２．０５（１２Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−），１．６６−１．６０（６Ｈ，ｑｕ．，Ｊ＝Ｈｚ，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＲ），１．４３−１．３０  １８Ｈ，ｍ，−ＣＨ２−），０．９１−０．８６（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，−ＣＨ３）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８（ｐｐｍ）１７３．２，１７２．８，１３４．６，１３０．０，１２８．６，１２５．５，６８．８，６２．０，３４．０，３２．９，３１．６，２９．６−２８．９（６Ｃ），２７．６，２４．８，２２．５，１４．１。
【００６５】  この反応の進行をモニターするため、およびこの反応の間の個々のグリセリドの組成についてのより詳細を提供するために、サンプルを、この反応の進行に伴なって規則正しく収集した。これらをＨＮＭＲ分光法によって分析し、そしてこの反応の進行の間のモノ−、ジ−およびトリアシルグリセロールの組成における良好な洞察を提供した。この結果を、以下の表７に示す。この表から認識され得るように、１，３−ジアシルグリセロールは、この反応の最初の２時間の間、この反応混合物の優位を占める。４時間後、トリアシルグリセロールが優勢になり、そして２２時間後に９８％の組成に達し、そして４８時間後に１００％に達した。予想され得るように、１，２−ジアシルグリセロールは、１，３−ジアシルグリセロールよりも相当低いレベルに達した。１−モノアシルグリセロールは、この反応の最初の時間の間に最大に達したが、２−モノアシルグリセロールは、この反応を通して検出されなかった。
【００６６】
【表７】
0005258134.tif 000011
（実施例７）
（ＣＬＡの収率および組成に対する、種々の温度および反応持続時間の影響）
サフラワー油の結合に対する温度および反応持続時間の影響を決定した。水およびＮａＯＨを、表１の欄１および２に示されるように、高圧反応器（圧力ゲージおよびスターラーを備えたＰａｒｒ  Ｍｏｄｅｌ  ４５０  ＭＬ  Ｂｅｎｃｈｔｏｐ  Ａｌｌｏｙ  ４００）に添加した。ＮａＯＨを溶解し、そしてサフラワー油（欄３）をこの反応器に添加した。この反応器を閉じ、そして２分間窒素でフラッシュし、次いで全てのバルブを閉じた。この反応器を、電気的ガスケットで所望の温度まで加熱し（欄４）、そして所望の時間（欄５）この温度を維持した。次いで、圧力を開放する前に、この温度を６０℃まで低下し、そして反応器を開けた。各反応について、反応器から、得られた２グラムの凝固した石鹸を取り出し、そして約４０℃の水に溶解した。次いで、クエン酸を添加して、この溶液のｐＨを６未満まで下げた。サンプルを、この脂肪酸最上層から取り出し、そしてガスクロマトグラフィーのために調製した。
【００６７】  このガスクロマトグラフィーの結果を、欄６（９，１１異性体および１０，１２異性体の全パーセンテージ）、欄７（１１，１３異性体の全割合）、ならびに欄８（全てのＣＬＡ異性体の全割合または収率）に示す。これらのデータは、反応の持続時間および温度が増加するにつれて、共役体の総量および１１，１３異性体の割合が増加することを示す。１１，１３異性体の形成が少ない条件下では、共役体の総量もまた少ない。
【００６８】
【表８】
0005258134.tif 000012
（実施例８）
（サフラワー脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）の結合）
この反応を、閉鎖容器中で行った。以下の成分を一緒に混合した：１００ｇのサフラワーＦＡＭＥ、ならびに約２．８ｇのＫＯＣＨ３および２．８ｇのメタノールの混合物。２種の成分の混合の間のメタノールの蒸発に起因して、メタノールより多くのＫＯＭｅがおそらく存在する。この混合物を、この閉鎖反応容器中、窒素雰囲気下で、１１１〜１１５℃で５時間攪拌した。異性体の分布を、ガスクロマトグラフィーによって分析した。この結果を、表２に要約する。未処理のＧＣデータを、表９に示す。これらのデータは、結合サフラワーＦＡＭＥが、穏やかな条件下で達成され得、かなりの量の所望でない８，１０異性体および１１，１３異性体を含まない生成物を生じることを示す。
【００６９】              表９：異性体の分布
パルミチン酸                ６．６％
ステアリン酸                ２．７％
オレイン酸                  １２．９％
リノール酸                  ５．７％（未結合）
ＣＬＡ  ｃ９，ｔ１１        ３４．１％
ＣＬＡ  ｔ１０，ｃ１２      ３３．３％
ＣＬＡ  ｃ，ｃ              １．８％
ＣＬＡ  ｔ，ｔ              １．０％
ＣＬＡ  合計                ７０．２％。
【００７０】  （実施例９）
（結合サフラワーＦＡＭＥの大規模バッチ生成）
サフラワー結合ＦＡＭＥの生成を、２つの段階に分け得る：メタノール分解および結合。メタノール分解のために、６，０００ｋｇのサフラワー油を、閉鎖反応器に入れた。この反応器を、大気圧の窒素でパージし、そして１１５０リットルのメタノールおよび１６０ｋｇのＮａＯＣＨ３（３０％溶液）を添加した。この混合物を、攪拌しながら６５℃まで加熱し、そして６５℃で２時間反応させた。得られた底部層を、反応器を窒素ガスでパージしながらデカントした。次いで、１０００リットルの水（４０〜５０℃、これに５０ｋｇのクエン酸一水和物が溶解される）を、攪拌しながら添加した。この層を分離させ（約６０分）、そして底部層を、この反応器を窒素ガスでパージしながらデカントした。得られたサフラワーＦＡＭＥ生成物を、８０℃、減圧下で１時間乾燥させた。
【００７１】  サフラワーＦＡＭＥを結合するために、メタノールに溶解してペーストを形成した２５０ｋｇのＫＯＣＨ３を、この反応器に添加した。次いで、この混合物を攪拌しながら１２０℃まで加熱し、そして反応を３時間続けた。この混合物を１００℃まで冷却し、そして１０００リットルの水（４０〜５０℃、これに５０ｋｇのクエン酸一水和物が溶解される）を、攪拌しながら添加した。この混合物を１５分間攪拌し、次いでこの層を２０分かけて分離した。底部層をデカントし、そして生成物を８０℃で１時間乾燥させ、次いで窒素下で保存した。
【００７２】  得られたＣＬＡを、以下の条件下で、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ａｕｔｏｓｙｓｔｅｍ  ＸＬ  ＧＣを用いて分析した：
カラム：    ＷＣＯＴ融合シリカ  １００ｍ×０．２５ｍｍ，Ｃｏａｔｉｎｇ  ＣＰ  ＳＩＬ  ８８
キャリア：  Ｈｅガス，３０．０ＰＳＩ
温度：      ２２０℃
作動時間：  ３５〜９０分
注入：      Ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ，２４０℃
検出：      ＦＩＤ，２８０℃。
【００７３】  このＧＣの結果を、表１０に要約する。
【００７４】
【表９】
0005258134.tif 000013
（実施例１０）
以下は、本発明のＣＬＡ遊離脂肪酸、トリグリセリド、およびエステルを含む代表的な動物の食料の例である。
【００７５】  Ａ．ブタの開始期食料
【００７６】
【表１０】
0005258134.tif 000014
Ｂ．ブタのための飼育期−仕上げ期食料（４０−２４０ＬＢＳ［１８−１０９ＫＧＳ］）
【００７７】
【表１１】
0005258134.tif 000015
Ｃ．ブタの飼育期−仕上げ期食料（ブタ１２１−２４０ＬＢＳ［５５−１０９ＫＧＳ］）
【００７８】
【表１２】
0005258134.tif 000016
ブタの微量鉱物再混合物の組成および分析
【００７９】
【表１３】
0005258134.tif 000017
（ブタビタミンプレミックスの組成）
【００８０】
【表１４】
0005258134.tif 000018
（Ｄ．雌鶏についての１８％タンパク質層食料）
【００８１】
【表１５】
0005258134.tif 000019
（Ｅ．ブロイラーについての開始期食料および仕上げ期食料）
【００８２】
【表１６】
0005258134.tif 000020
（Ｆ．飼育期／仕上げ期シチメンチョウ食料）
【００８３】
【表１７】
0005258134.tif 000021
（Ｇ．乾燥ドッグフード処方）
【００８４】
【表１８】
0005258134.tif 000022
（Ｈ．やや湿気のあるドッグフードの処方）
【００８５】
【表１９】
0005258134.tif 000023
（実施例１１）
（ＣＬＡの大規模な調製）
本実施例は、サフラワー油の異性化による試験的規模でのＣＬＡの遊離脂肪酸の調製方法を示す。１０００ｋｇのＫＯＨを、２０７０Ｌのプロピレングリコールに溶解した。その後、この混合物を、攪拌しながら１００℃まで加熱した。ついで、２３４０Ｌのサフラワー油を添加し、そしてその温度を、１５０℃まで３時間上昇させた。その後、この混合物を、冷却し、そして１０００Ｌの水および１３５０ＬのＨＣＬを添加した。この時点で、その溶液が、遊離脂肪酸を上層として、二層に分離した。これらの層を分離し、そして下の水層を廃棄した。上層を、５０ｋｇのクエン酸を含む１０００Ｌの水を用いて洗浄した。この水層を廃棄し、そして油（ＣＬＡ）含有層を、減圧下で乾燥した。
【００８６】  （実施例１２）
（トリアシルグリセリドの生成）
ＣＬＡを、実施例１１の方法に従って調製した。その後、この製品を、１５０℃および圧力１０−２ｍｂａｒで分子蒸留プラントにて蒸留した。次いで、１０００ｋｇのこの蒸留生成物を、９７ｋｇの純粋なグリセロールおよび８０ｋｇリパーゼと混合した。この反応を、減圧下で攪拌しながら、５５℃で１２時間進行させた。そのトリアシルグリセリド生成物を、分子蒸留装置にて蒸留して、未反応脂肪酸を除去した。
【００８７】  （実施例１３）
（吸収剤での処理）
ＣＬＡのトリグリセリドを、実施例１４に記載されるように調製した。このサンプルを、１５０℃および１ｍｍＨｇで３時間脱臭した。次いで、このサンプル５００ｍｌを、粉末シリカで処理した。シリカを２％まで添加し、減圧下で３０分間、９０〜１００℃まで加熱した。次いで、このサンプルを冷却し、そして濾過した。
【００８８】  （実施例１４）
（アルコラート触媒を用いたＣＬＡの生成）
本実施例は、カリウムメチレートを触媒として使用して、サフラワー油からＣＬＡを生成することを記載する。サフラワー油の蒸留メチルエステル（４１．５ｇ）を、０．２０７ｇメタノールおよび０．６２ｇカリウムメチレートを含むリアクター中に配置し、そしてそのリアクターを、閉める前に窒素でパージした。このリアクターの内容物を、攪拌しながら１２０℃にした。その後、その反応を、１２０℃で４時間進行させた。その後、そのリアクターを８０℃まで冷却し、そしてその内容物を、分液漏斗に移し、そして熱蒸留水で洗浄し、その後、クエン酸を含む熱湯で洗浄した。その後、メチルエステルを、穏やかに加熱しながら、減圧下で乾燥させた。その乾燥メチルエステルを、イソオクタン中で溶解し、そしてＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒオートサンプラーを用いてＧＬＣにより分析した。そのカラムは、高極性の溶融シリカ型であった。以下のプログラムを使用した：
注入：２５０℃のスプリットレス（Ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ）
検出：２８０℃で水素炎イオン化検出器
キャリア：ｐｓｉｇでヘリウム
オーブンプログラム：８０℃〜１３０℃（４５℃／分）、その後１℃／分で２２０℃まで、そして２２０℃で１０分間
カラム：ＷＣＯＴ  ＦＵＳＥＤ  ＳＩＬＩＣＡ  ０．２５ｍｍ  １００ｍ、ＣＰ−ＳＩＬ  ８８  ｆｏｒ  ＦＡＭＥ、ｄｆ＋０．２。
【００８９】  得られたＣＬＡは、ほぼ、表２１に示されるようなＣＬＡのｃ９、ｔ１１異性体およびｔ１０，ｃ１２異性体のみからなった。
【００９０】
【表２０】
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（実施例１５）
（ＣＬＡ粉末の生成）
この実施例は、ＣＬＡトリグリセリドを含む粉末の生成を記載する。このＣＬＡトリグリセリドを、上記のように調製し得る。温水（１００〜１２０°Ｆで５３８．２ｍｌ）およびＨＩ−ＣＡＰ  １００（約２３０．９ｇ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｒｃｈ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ）を合わせ、そして、この分散の塊のいずれもがなくなるまで攪拌した。次いで、ＣＬＡトリグリセリド（２３０．９ｇ）を添加し、そして混合物を、設定３０のＡｒｄｅ  Ｂｅｒｉｎｃｏ  ｌａｂホモジェナイザー中で、２分間にわたってホモジェナイズした。次いで、前乳濁液を２〜５分間、最高速度でホモジェナイズする（全圧３５００ｐｓｉで１パス）。粒子サイズをチェックし、そしてこれは約０．８〜１．０ミクロンであるはずである。次いで、この乳濁液を、以下の設定の７脚コニカルドライヤー（ｓｅｖｅｎ  ｆｏｏｔ  ｃｏｎｉｃａｌ  ｄｒｙｅｒ）で噴霧乾燥する：入口温度（１９０〜２１５℃）；出口温度（９５〜１００℃）。出口温度は乳濁液供給速度を調整することによって維持される。このプロセスは、約５０％ＣＬＡトルグリセリドを含む自由に流れる粉末を生成する。
【００９１】  （実施例１６）
（他の油を含む粉末の生成）
ＴＯＮＡＬＩＮ  遊離脂肪酸  ＣＬＡ、フラックスオイル（ｆｌａｘ  ｏｉｌ）、サクラソウ油、およびルリヂサ油をＣＬＡトリグリセリドの代りに使うことを除いて、実施例１５に記載の方法を繰り返した。それぞれの脂肪酸またはオイルが約５０％である自由の流れる粉末を得た。
【００９２】  （実施例１７）
（他のカプセル化剤を用いた粉末の生成）
ＭＩＲＡ−ＣＡＰ（Ａ．Ｅ．Ｓｔａｎｌｅｙ）およびマルトデキストリンをＨＩ−ＣＡＰ１００の代りに使用することを除いて、実施例１５に記載の方法を繰り返した。５０％の油のロードで試験した場合、これらの薬剤は乳濁液を生成することができず、そして従って噴霧乾燥し得ない。
【００９３】  （実施例１８）
（より高度なオイルのロードを伴った粉末の生成）
油の濃度を、それぞれ６０％または６５％に、増大することを除いて、実施例１５に記載の方法を繰り返した。このＨＩ−ＣＡＰ  １００は乳濁液の形成を支援し、そして噴霧乾燥した場合、自由に流れる粉末を生成した。しかし、この乳濁液は、１０ミクロンまでのビーズレット（ｂｅａｄｌｅｔ）を含む。
【００９４】  上記から明確であるべきことは、本発明は、多い量のＣＬＡトリグリセリドまた他の油を含んでいる自由に流れる粉末を提供することである。この粉末を、動物飼料の処方物として、およびヒトの消費に適切な食品において使用し得る。
【００９５】  上の明細書で言及した、全ての刊行物および特許は、本明細書中で参考として援用される。本発明の記載された方法およびシステムの様々な改変および変化は、本発明の範囲および精神から逸脱することなしに、当業者に明らかである。本発明は、具体的な好ましい実施形態に関連づけて記載したが、特許請求される本発明は、このような具体的な実施形態にまで、過度に限定すべきではないことが理解される。実際、医学、生化学、または関連する分野の当業者にとって明らかな、本発明を実施するために記載された様式の種々の改変は、上記の特許請求の範囲内にあることが意図される。