(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
平均分子量２０００〜３０００ダルトンのカードランオリゴを有効成分として含有する樹状細胞活性化用組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物を用いて樹状細胞をin vitroで処理することを含む、樹状細胞を活性化させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、樹状細胞活性化用組成物、ならびに該組成物を用いて樹状細胞を活性化させる方法および活性化された樹状細胞に関する。
【背景技術】
【０００２】
樹状細胞（dendritic cell：ＤＣ）は免疫機能の要となる細胞であり、骨髄幹細胞に由来し、成熟すると免疫応答を誘導する強力な抗原提示細胞となる。樹状細胞は体内のいたるところに存在し、抗原をトラップし、免疫応答を起動ならびにコントロールする。樹状細胞等の抗原提示細胞は、外来異物を取り込んで細胞内でペプチド断片までに分解（抗原プロセシング）し、そのペプチド断片をＭＨＣ分子に結合し、これを細胞表面上に提示する。このように提示された複合物をヘルパーＴ細胞はＴ細胞受容体を介して認識し、ヘルパーＴ細胞は様々なサイトカインを産生する。サイトカインは、未熟なＢリンパ細胞や細胞傷害性Ｔリンパ細胞の前駆細胞等に作用し、分化成熟を促し、その結果抗原処理能を備えたエフェクター細胞が誘導される。
【０００３】
樹状細胞を活性化する物質については、幾つか報告されており、例えば特許文献１には、チョレイ、シュクシャ等の生薬を含有する未成熟樹状細胞活性化剤、特許文献２には、椎茸菌糸体抽出物を含む樹状細胞活性化剤、特許文献３には、メシマコブを含む樹状細胞活性化剤、特許文献４には、コルジセプス・シネンシスの抽出物を含む樹状細胞活性化剤が記載されている。
【０００４】
また、樹状細胞を活性化する物質として、β−グルカンが知られており、近年、その成熟化促進作用にはβ−グルカンレセプター、dectin-1が重要な役割を演じていることが報告されている（非特許文献１）。
【０００５】
β−グルカンに分類される多糖類であるカードランは、リンパ球活性化作用があることが明らかにされ、カードラン加水分解物を有効成分とする免疫賦活剤が特許文献５に記載されている。該文献には、抗原受容体を介する刺激等により活性化されたＴリンパ球およびＢリンパ球にカードラン加水分解物を作用させると、Ｔリンパ球およびＢリンパ球の活性が上昇するが、抗原受容体を介する刺激等を与えずにカードラン加水分解物を作用させると、ほとんど活性化しないことが記載されている。また、特許文献６には、加熱処理されたカードラン加水分解物を有効成分とする免疫抑制剤が記載されている。該文献には、脾臓細胞の培養系に加熱処理したカードラン加水分解物を添加すると、マイトジェン刺激を加えずに培養した場合はＴリンパ球およびＢリンパ球の細胞代謝活性等はそれほど損なわれなかったが、マイトジェン刺激下で培養した場合は細胞代謝活性等の上昇が強度に抑制されたことが記載されている。
【０００６】
【特許文献１】特開２００７−２３８５５９号公報
【特許文献２】特開２００６−１４１３４６号公報
【特許文献３】特開２００６−１２４３８３号公報
【特許文献４】特開２００６−１２４３８２号公報
【特許文献５】特開平１０−１９４９７７号公報
【特許文献６】特開平１０−１９４９７６号公報
【非特許文献１】Saijo S, Fujikado N, Furuta T, Chung SH, Kotaki H, Seki K, Sudo K, Akira S, Adachi Y, Ohno N, Kinjo T, Nakamura K, Kawakami K, Iwakura Y., “Dectin-1 is required for host defense against Pneumocystis carinii but not against Candida albicans”, Nat Immunol. 2007 Jan;8(1):39-46.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、樹状細胞を活性化する組成物、ならびに該組成物を用いて樹状細胞を活性化させる方法および活性化された樹状細胞を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、カードランオリゴを樹状細胞およびマウス脾臓細胞の培養系に適用してサイトカインの産生を調べることにより、カードランオリゴが樹状細胞の活性化作用を示すことを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
本発明の特徴は要約すると以下の通りである。
［１］カードランオリゴを有効成分として含有する樹状細胞活性化用組成物。
［２］樹状細胞の活性化によりサイトカインの産生が調節される、［１］に記載の組成物。
［３］［１］または［２］に記載の組成物を用いて樹状細胞をin vitroで処理することを含む、樹状細胞を活性化させる方法。
［４］［１］または［２］に記載の組成物を用いて樹状細胞をin vitroで処理することにより調製された活性化樹状細胞。
【００１０】
本明細書において「樹状細胞の活性化」とは、樹状細胞が成熟すること、または樹状細胞の機能が増強されることをいい、その機能は特に限定されない。樹状細胞の機能としては、例えば、抗原の取り込み、抗原プロセシング、抗原提示、細胞接着／共刺激分子の発現、サイトカインの産生、Ｔリンパ球などの他の細胞への刺激などが挙げられる。また、他の細胞への刺激によって、それらの細胞からサイトカイン産生の増強、オータコイド産生増強、抗体産生の増強、遅延型過敏症反応の増強、障害因子の産生増強、アポトーシス誘導促進など、様々な免疫機能が増強・強化・調節される。調節には、例えば、産生されるサイトカイン量の増加（増強）という調節だけでなく、減少（抑制）という調節も含まれる。
【発明の効果】
【００１１】
カードランオリゴを樹状細胞に適用することにより、樹状細胞を活性化させることができ、その結果サイトカインの産生を調節（増加または減少）することができる。カードランオリゴを含有する樹状細胞活性化用組成物は、医薬組成物、飲食品、培地等の形態をとることができる。特に医薬組成物、飲食品は、免疫が関連する難治性疾患の多くに新たな治療法、予防法を提供することができる。医薬組成物、飲食品を、ヒトを含む動物に投与したり、摂取させることにより、例えば腫瘍免疫や感染免疫において抗原プロセシングを効率よく進めることで特異的反応を強化したり、また自己免疫において自己ペプチドに対する誤った応答を制御することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の樹状細胞活性化用組成物は、カードランオリゴを有効成分として含有することを特徴とする。
【００１３】
カードラン（ＣＲＤ）は、多糖類であるβ−グルカンの１つであり、β型ブドウ糖がβ−（１，３）グルコシド結合で結合した構造を持つ。カードランオリゴはカードランを低分子化したもの（好ましくは平均分子量２０００〜３０００ダルトン）である。
【００１４】
カードランは、微生物、例えば、アルカリゲネス属またはアグロバクテリウム属の微生物によって生産される多糖類であり、加熱凝固性を有する。カードランとして、具体的には、アルカリゲネス・フェカリス・バール・ミクソゲネス菌株１０Ｃ３Ｋにより生産されるカードラン（アグリカルチュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Agricultural Biological Chemistry）Vol.30, p.196 (1966)）、アルカリゲネス・フェカリス・バール・ミクソゲネス菌株１０Ｃ３Ｋの変異株ＮＴＫ−u（ＩＦＯ１３１４０）により生産されるカードラン（特公昭４８−３２６７３号）、アグロバクテリウム・ラジオバクター（ＩＦＯ１３１２７）およびその変異株Ｕ−１９（ＩＦＯ１３１２６）により生産される多糖類（特公昭４８−３２６７４号）が挙げられる。また、カードランは和光純薬工業株式会社、キリンフードテック株式会社等から販売されている。
【００１５】
カードランオリゴ（低分子カードラン）は、例えば上記カードランをβ−１，３−グルカナーゼにより分解したり、ギ酸、酢酸等の有機酸や塩酸、硫酸等の無機酸で酸加水分解して調製できる。例えばカードランをアセトンに懸濁し、ＨＣｌで酸性とし、約５０℃で５〜６時間還流加熱することで調製できる。具体的には、図１−１および図１−２のスキームで調製することができる（図１−１の「＊」は、図１−２の「＊」に続くことを示す）。この方法よれば、平均分子量約２０００〜３０００ダルトンのカードランオリゴが得られる。図１−１および図１−２のスキームに従って調製された低分子カードランの分析結果を表１に示す。図１−１、図１−２および表１に示す(1)〜(4)の画分のカードランオリゴのいずれも本発明に用い得るが、図１−２および表１の(3)精製低分子ＣＲＤ−ＦＤ（低分子化処理後に凍結乾燥して得られたもの）、(4)精製低分子ＣＲＤ−ＳＤ（低分子処理後に噴霧乾燥して得られたもの）が好ましい。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
本発明の樹状細胞活性化用組成物は、例えばカードランオリゴそのもの、またはカードランオリゴを含む医薬組成物、飲食品、培地等の形態をとってもよい。
【００１８】
本発明の樹状細胞活性化用組成物が医薬組成物の場合、該医薬組成物は、例えば癌、悪性腫瘍、感染症、自己免疫疾患、アレルギー性疾患等の治療または予防等に用いることができる。適用可能な疾患として、具体的には、悪性リンパ腫、胃癌、大腸癌、食道癌、前立腺癌、頭頸部癌、口腔癌、肺癌、肝臓癌、膵臓癌、子宮癌、卵巣癌、乳癌、白血病、メラノーマ、骨髄腫、結核、インフルエンザ、マラリア、ウイルス性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、Ｅ型など）、風疹、ＭＲＳＡ、ＨＩＶ、細胞または臓器・組織移植に伴う移植片拒絶、移植片対宿主病、関節リウマチ、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、自己免疫性心筋炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性溶血性貧血、全身性強皮症、乾癬、クローン病、接触過敏症、アレルギー性鼻炎、食物アレルギー、喘息などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
医薬組成物は、経口、非経口で投与することができ、投与形態により、様々な剤形を採りうる。例えば経口投与の場合、液剤、エリキシル剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、散剤、錠剤、シロップ剤等にし、非経口の場合、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射等、あるいは貼付剤、坐剤等にすることができる。また、医薬組成物を徐放性、持続性製剤としてもよい。医薬組成物は、例えば公知の賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、甘味剤、懸濁化剤、乳化剤、分散剤、安定剤、コーティング剤、緩衝剤等の添加剤を含有させることができ、通常用いられる方法により製造することができる。
【００２０】
医薬組成物に含有されるカードランオリゴの量は、カードランオリゴとして１日あたり好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは１〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与されるように含まれていればよいが、疾患、投与対象（動物）、その体重、重篤度、年齢、性別、投与方法等により適宜調整することができる。また、予防剤として使用する場合は、治療薬として使用する場合と比べてより少量〜同量としてもよい。
【００２１】
本発明の樹状細胞活性化用組成物が飲食品の場合、当業者が利用可能である任意の適切な方法によって、カードランオリゴを飲食品に含有させることができる。そのような飲食品を、機能性飲料、機能性食品とすることもでき、該飲食品を摂取することにより、癌、悪性腫瘍などの予防・改善、免疫活性化、アレルギーの予防・改善等の効果が期待できる。カードランオリゴは、液状、固体若しくは顆粒状に加工してから飲食品に含有させてもよい。あるいは飲食品中に直接混合又は溶解してもよいし、食品に塗布、被覆、浸透、吹き付けまたは埋め込んでもよい。カードランオリゴは、飲食品中に均一に分布していてもよいし、不均一に分布していてもよい。あるいはまた、カードランオリゴ自体を、固形成形したり、カプセルや糖衣錠等の形状に製剤したものも、本発明の飲食品に包含される。具体的な飲食品としては、例えばジュース、茶等の飲料、クッキー、せんべい、アイスクリーム、ゼリー等の菓子、サプリメント等の栄養補助食品が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２２】
飲食品に含有されるカードランオリゴの量は、例えばヒトを対象とする場合、カードランオリゴの１日の摂取量として、好ましくは１０ｍｇ〜１ｇ、より好ましくは１００ｍｇ〜３００ｍｇの範囲で配合されるように含まれていればよく、特に限定されない。また、ネコ、イヌ等のペットや、ラット、マウス等の実験動物のための飲食品にもカードランオリゴを含めることができる。さらに、これらの飲食品には、発色剤、香料、甘味料、保存剤、乳化剤、酸化防止剤、化学調味料、増粘剤、膨張剤等の各種添加物をさらに含めてもよい。
【００２３】
本発明の樹状細胞活性化用組成物が培地の場合、該培地はヒト、ラット、マウス等の樹状細胞（その前駆細胞でもよい）を培養して樹状細胞を活性化することに用いることができる。培地へのカードランオリゴの添加量は、好ましくは１〜２００μｇ／ｍｌ、より好ましくは１０〜５０μｇ／ｍｌであるが、培養対象の樹状細胞、培養条件、培養サイズ、培養方法、用いる培地などにより適宜調節可能であり、特に限定されない。樹状細胞用培地は、例えばＲＰＭＩ １６４０培地（日本製薬株式会社、株式会社ニチレイ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、シグマアルドリッチジャパン株式会社）などの市販のものを用いることができる。
【００２４】
また、本発明の樹状細胞活性化用組成物を用いて、樹状細胞をin vitroで処理することにより活性化された樹状細胞を得ることができる。具体的には、カードランオリゴを含有する樹状細胞用培地で、樹状細胞（その前駆細胞でもよい）を培養すればよい。活性化樹状細胞は、例えば免疫の研究や、癌、悪性腫瘍、感染症、自己免疫疾患、アレルギー性疾患等の治療または予防に用い得る。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、これらの実施例は本発明を限定するものではない。
（１）カードランオリゴの調製
カードランはキリンフードテック株式会社から購入した。カードランオリゴは、図１−１および図１−２のスキームに従って調製し、本実施例には図１−２の(3)精製低分子ＣＲＤ−ＦＤおよび(4)精製低分子ＣＲＤ−ＳＤを用いた。該カードランオリゴを１ｍｇ／ｍｌで生理食塩水（大塚製薬株式会社）に溶解したものをオートクレーブ（１２１℃、２０分）処理した。サンプルは凍結させ、用事溶解させた。
【００２６】
（２）対照となる高分子β−グルカン（ＳＢＧ、standard beta-glucan）の調製
市販のマイタケ子実体を凍結乾燥し、乾燥粉末２０ｇを測りとった。これを蒸留水５００ｍＬに懸濁し、αアミラーゼ（和光純薬）１００ｍｇを添加し、３７℃で１２時間反応させ、αグルカンを除去した。残渣を十分に蒸留水で洗浄し、蒸留水５００ｍＬを加えて、高圧蒸気滅菌器にて２時間抽出操作した。抽出物を除去し、残渣に０．５Ｎ ＮａＯＨ ５００ｍLを加え、４℃で攪拌しながら一晩抽出した。遠心分離にて抽出物を集め、中和、透析後に遠心分離して不溶物を除去した。可溶部をさらに十分に透析し、８Ｍ尿素溶液となるように尿素の粉末を加え、DEAE-Sephadex A25カラムを通して、酸性多糖画分を吸着除去した。通過画分を透析し、尿素を除去し、凍結乾燥して精製β−グルカン画分（ＳＢＧ）を得た。ＳＢＧの収量は乾燥粉末あたり、約１００ｍｇであった。オートクレーブ（１２１℃、２０分）処理した後に凍結させ、用事溶解させた。
【００２７】
（３）動物
雄性ＤＢＡ／２マウスは日本ＳＬＣ株式会社より購入した。マウスはspecific pathogen free（ＳＰＦ）環境下で飼育された。
【００２８】
（４）培地
(a) Hank’s balanced salt solution（ＨＢＳＳ；株式会社ニッスイ）９．８ｇ／ｌを注射用水（光製薬株式会社）に溶解後、オートクレーブにて滅菌し、Gentamycin sulfate（５０μｇ／ｍｌ；和光純薬工業株式会社）、ヘパリン（５Ｕ／ｍｌ；和光純薬工業株式会社）及びＮａＨＣＯ３（０．３５ｇ／ｌ；和光純薬工業株式会社）を添加して使用した（以下、該培地をＨＢＳＳという）。
【００２９】
(b) ＲＰＭＩ１６４０ medium（シグマアルドリッチジャパン株式会社）にGentamycin sulfateを５０μｇ／ｍｌ添加し、後述の脾細胞の培養に使用した（以下、該培地をＲＰＭＩという）。
【００３０】
（５）サイトカインの測定（ＥＬＩＳＡ法）
Pharmingen社から抗体ならびに標準品を購入した。Pharmingen社の推奨する基本的なプロトコールに従い、以下のように実施した。
【００３１】
ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦの各サイトカインに対する一次抗体を１〜５μｇ／ｍＬ溶液とし、Nuncプレートに吸着させた。アルブミンにてブロッキング操作し、培養液を添加した。標準品も同様に添加した。十分に洗浄後、二次抗体を添加し、POX標識を指標にサイトカインの産生濃度を測定した。
【００３２】
〔実施例１〕ＤＢＡ／２マウスの骨髄由来樹状細胞におけるサイトカイン産生誘導
(a) 骨髄由来樹状細胞（bone marrow derived dendritic cell：ＢＭＤＣ）の培養
ＤＢＡ／２マウスをＣＯ２麻酔により屠殺し、大腿骨を摘出した。ＨＢＳＳを入れた１ｍｌのシリンジにて大腿骨をfrashした。得られた細胞懸濁液を１２００ｒｐｍ×５分で遠心分離して細胞を得た。得られた細胞をＲＰＭＩで２回洗浄した後、白血球数の計測により細胞濃度を１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製した。その後、樹状細胞の分化増殖を誘導するため、サイトカインのｒｍＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）、ｒｍＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）を含む５％ＦＣＳ／ＲＰＭＩに懸濁し、細胞培養用２４穴プレートに１ｍｌずつまき、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータにて２日間培養した。培養後、上清を静かに取り除き、新しいサイトカインと培地を再びプレートに添加した。さらに３日間培養したものをＢＭＤＣとして使用した。
【００３３】
(b) ＢＭＤＣにおけるサイトカイン産生誘導
上記(a)で調製したＤＢＡ／２マウス由来ＢＭＤＣ培養系にカードランオリゴ（０、１、１０、１００ｎｇ／ｍｌ）を添加し、３７℃で４８時間培養した。培養後、上清を回収し、上清中のＴＮＦ−α、ＩＬ−６産生をＥＬＩＳＡにて測定した。カードランオリゴの添加により、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６産生の誘導が観察された（図２）。従って、カードランオリゴは未成熟な樹状細胞に作用し、サイトカインの産生を誘導することが明らかとなった。
【００３４】
〔実施例２〕ＤＢＡ／２マウス由来脾細胞におけるサイトカイン産生誘導
(a) 脾細胞の培養
ＤＢＡ／２マウスをＣＯ２麻酔により屠殺し、脾臓を摘出した。ＲＰＭＩ中でmeshを用いてteaseした後、１２００ｒｐｍ×５分で遠心分離した。得られた細胞をACK-lysing buffer（８．２９ｇ／ｌ；ＮＫ４Ｃｌ、１ｇ／ｌ；ＫＨＣＯ３、３７．２ｍｇ／ｌ；ＥＤＴＡ・２Ｎａ）で処理し、ＲＰＭＩで２回洗浄した。その後、白血球数の計測により細胞濃度を５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製し、１０％の非働化ＦＣＳを含むＲＰＭＩ（１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ）に懸濁した。
【００３５】
(b) 脾細胞におけるサイトカイン産生誘導
(a)で調製した脾細胞を、細胞培養用２４穴プレートに１ｍｌずつまき、カードランオリゴ（０、１、１０、１００μｇ／ｍｌ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータにて４８時間培養した。また、positive controlとして上記（２）で調製した可溶性β−グルカンのＳＢＧを用い、カードランオリゴと同様にして培養した。上清を回収し、上清中のＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡで測定した。
【００３６】
ＳＢＧを添加したものは、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ産生の誘導が観察された。一方、カードランオリゴを添加したものは、ＳＢＧよりは弱いながらＧＭ−ＣＳＦおよびＩＦＮ−γ産生の誘導が観察された。しかしながら、ＴＮＦ−α産生の誘導は観察されなかった（図３、(a)の段）。
【００３７】
ＳＢＧによるサイトカイン産生には、ＧＭ−ＣＳＦが重要な役割を演じていることが報告されている（Harada T, Miura NN, Adachi Y, Nakajima M, Yadomae T, Ohno N., “Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) regulates cytokine induction by 1,3-beta-D-glucan SCG in DBA/2 mice in vitro”, J Interferon Cytokine Res. 2004 Aug;24(8):478-89）。そこで、ＤＢＡ／２マウス由来脾細胞培養系にｒｍＧＭ−ＣＳＦ（１ｎｇ／ｍｌ）を添加し、上記と同様にカードランオリゴまたはＳＢＧ（０、１、１０、１００μｇ／ｍｌ）で刺激したところ、カードランオリゴではＩＦＮ−γ産生の誘導は観察されたが、ＴＮＦ−α産生の誘導は観察されなかった（図３、(b)の段）。カードランもＳＢＧも可溶性β−グルカンであるが、β−グルカンの種類により誘導されるサイトカインの種類が上記のように異なっており、サイトカインの種類によりその誘導パターンが異なることが示唆される。
【００３８】
次に、ＳＢＧによるサイトカイン産生誘導に対してカードランオリゴが及ぼす影響を観察した。上記(a)で調製した脾細胞をｒｍＧＭ−ＣＳＦ（１ｎｇ／ｍｌ）共存下、３７℃で培養し、１時間後にカードランオリゴ（０、１、１０、１００μｇ／ｍｌ）を添加した。さらに１時間培養後、ＳＢＧ（１００μｇ／ｍｌ）で刺激し、４８時間３７℃で培養した。上清を回収し、上清中のＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡで測定した。また、ＳＢＧの代わりに生理食塩水を用い、上記と同様にして培養し、ＥＬＩＳＡ測定を行った。
【００３９】
ＳＢＧにより誘導されるＴＮＦ−αの産生は、カードランオリゴの添加により低下した（図４）。一方、ＳＢＧにより誘導されるＩＦＮ−γの産生には、著しい影響を及ぼさなかった。
【００４０】
以上、実施例１および２に示したように、骨髄樹状細胞ならびに脾臓細胞培養系を用いてカードランオリゴの活性を標準β−グルカン（ＳＢＧ）と比較したところ、下記の特徴があることが明らかとなった。
１．ＳＢＧならびにカードランオリゴは共に、骨髄樹状細胞からＴＮＦ−αならびにＩＬ−６産生を惹起した（ＳＢＧの結果は省略している）。
２．脾臓細胞培養系では、ＳＢＧはＧＭ−ＣＳＦ産生能を有し、ＩＦＮ−γならびにＴＮＦを産生した。一方で、カードランオリゴはＧＭ−ＣＳＦ産生能をほとんど示さなかった。
３．脾臓細胞培養系において、ＧＭ−ＣＳＦ共存下にカードランオリゴ刺激すると、ＩＦＮ−γ産生が上昇した。しかし、このような条件でもＴＮＦ−α産生は起きなかった。
【００４１】
これらのことから、標準β−グルカンとは樹状細胞活性化能において著しい差のあることがわかった。即ち、標準β−グルカンはＧＭ−ＣＳＦ産生能を有し、それに伴い、ＩＦＮ−γ産生能ならびにＴＮＦ産生能を示すが、カードランオリゴは、標準β−グルカンが示す活性の中で、骨髄樹状細胞からのサイトカイン産生ならびに脾臓でのＩＦＮ−γ産生を選択的に示した。
【００４２】
このように、β−グルカンがサイトカイン産生を選択的に制御できることは、本発明の樹状細胞活性化用組成物に含有されるカードランオリゴが初めてである。この活性は単に低分子化したことによって、十分な活性化に至らないという単純な発想ではなく、ＩＦＮ−γは産生できるが脾臓細胞からＴＮＦ−αは産生させないという選択的なものである。
【００４３】
この選択性は、β−グルカンを食品や医薬品に応用する上において重要な特徴となる。例えば、過剰なＴＮＦ産生は発熱を惹起し、敗血症などを誘導するが、カードランオリゴはそのような有害作用を示さない可能性がある。
【００４４】
以上、本発明の樹状細胞活性化用組成物は極めて特徴的な活性を示すので免疫調節作用を指向した食品、医薬品の原料として有用性が高い。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
特に医療分野における利用可能性が期待される。難治性の免疫疾患は多岐にわたり、治療法のめどの立たない疾患も多く、カードランオリゴはこれらの疾患の治療法の開発において有用なツールの一つとなるものと思われる。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１−１】低分子カードラン（カードランオリゴ）作製フローを示す。
【図１−２】低分子カードラン（カードランオリゴ）作製フローを示す。
【図２】ＤＢＡ／２マウス由来ＢＭＤＣにおけるカードランオリゴによるサイトカインの誘導を示す。パネルＡはＴＮＦ−αの誘導、パネルＢはＩＬ−６の誘導を示す。
【図３】ＤＢＡ／２マウス由来脾細胞におけるカードランオリゴによるサイトカインの誘導を示す。(a)の段のグラフは、培地にカードランオリゴまたはＳＢＧを添加した場合を示す。(b)の段のグラフは、ｒｍＧＭ−ＣＳＦを添加した培地に、カードランオリゴまたはＳＢＧを添加した場合を示す。
【図４】ＤＢＡ／２マウス由来の脾細胞におけるＳＢＧのサイトカイン誘導に対するカードランオリゴの影響を示す。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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