(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルセロバクター  ヒスチジノロボランス  Ｍ−１（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０９０８）を有効成分とする植物生長促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は植物生長促進剤に関し、特に野菜、穀物類等広範囲の植物の生長を促進し、収量向上、開花促進等の効果を有する植物生長促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
植物の生長を促進させ、必要な野菜、穀物等の収量を向上させることは、食料増産の点から、光合成を向上させることにより地球温暖化の原因となるＣＯ2を減少させる点からも極めて重要であり、従来多くの手段が開発されてきた。このうち、植物ホルモンは植物の器官の一部に作用するものがほとんどであり、植物全体に作用し収量を増大させるものではなかった。また、遺伝子操作による植物の生長促進も研究されているが、その安全性については確立されていない。
【０００３】
かかる観点から、自然界に存在する物質等の中から植物生長促進作用を有するものを見出すのが望ましく、本発明者は、シュードモナス  アルギナリスに属する微生物が優れた植物生長促進作用を有することを見出し、特許出願した（特許文献１）。
【特許文献１】特開２０００−１９１４２１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしシュードモナス属に属する微生物は植物の病原となることもあることから、より安全性の高い植物生長促進剤が望まれていた。
従って、本発明は、安全性が高く、かつ優れた植物生長促進作用を有する天然物由来の植物生長促進剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
そこで、本発明者は、植物を栽培しつつその土壌中の成分、微生物を長期にわたり探索してきたところ、落花生の栽培土壌から分離したアルセロバクター  ヒスチジノロボランスに属する微生物が、優れた植物生長促進作用を有し、かつ安全性も高いものであることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、アルセロバクター  ヒスチジノロボランス（Arthrobactor histidinolovorans）又はその変異体に属する微生物を有効成分とする植物生長促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の植物生長促進剤を用いれば、植物全体の生長が促進され、野菜、穀物等の収量増大を図ることができる。また、安全性も高い。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の植物生長促進剤の有効成分であるアルセロバクター  ヒスチジノロボランス又はその変異体は、例えば落花生栽培中の根留中から分離することができる。
【０００９】
また、アルセロバクター  ヒスチジノロボランス又はその変異体は、通常の栄養培地で増殖させることができるが、例えば通常の有機物や塩類を含む栄養培地で前培養後、さらに例えば糖蜜のような栄養分を用いて１００倍に稀釈した水溶液を培地として本培養すれば、１０6〜１０7／mL程度の菌体数を得ることができるので、この培養液を滅菌して植物生長促進剤として用いることができる。
【００１０】
本発明で用いるアルセロバクター  ヒスチジノロボランス又はその変異体の例としては、次のＭ−１株が挙げられる。当該Ｍ−１株は、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列から同定した結果、アルセロバクター  ヒスチジノロボランス（Arthrobactor histidinolovorans）と同定された。そこで、このＭ−１株をＦＥＲＭ  Ｐ−２０９０８として、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託した。また、ここで変異体としては突然変異体が挙げられる。
【００１１】
本発明のＭ−１株の培養は、上記と同様に有機物や簡単な液体肥料を培地として行えばよい。
【００１２】
本発明で用いるアルセロバクター  ヒスチジノロボランス又はその変異体は上記の方法で得られた培養物をそのまま用いてもよく、また常法により精製して用いてもよい。
【００１３】
本発明の植物生長促進剤は、アルセロバクター  ヒスチジノロボランス又はその変異体のみでも十分効果を奏するものであるが、これ以外に、他の植物生長調節剤；糖類；窒素、リン酸及びカリウムを含む無機塩；尿素、アミノ酸、ビタミン、その他のミネラル等を配合することができる。また他の農薬、肥料等を本発明の効果を損なわない限り混合して用いてもよい。
【００１４】
本発明の植物生長促進剤の剤型としては、液剤の他、粉末、粒剤等が挙げられ、これらは常法に従って製造することができる。
【００１５】
本発明植物生長促進剤を植物に適用するには、次の方法が例示される。
（a）土壌に灌注する方法
１０4〜１０8／mLの菌体数の液を６０℃、２４時間滅菌して用いる。灌注の時期は、植物によって適宜決定すればよいが、本葉が３〜６cm位の長さになる時期（播種後１２〜１６日）が好ましい。例えば、葉菜類等においては、２０℃±５℃の成育通温時期に、１５cmのポットに土量７００〜８００ｇとし、１ポットに５００〜１０００倍液を５０mL注入すればよい。
（b）葉面散布法
（a）の液を用いて本葉２〜３cmの長さになる時期（播種後７〜１０日）に１回、５０〜１０００倍液を５０mL位散布する。
【００１６】
作物により異なるが、上記（a)、(b)いずれの方法でも、１回の処理でよい。生育促進効果は、１０〜１４日後位から著しく改善され、特に中後期の生育が著しい。そして採取時には、本発明品を用いない対照と比べて１．５〜２．５倍の増収となる。
【００１７】
一般的にそれぞれの作物の生育適温での処理濃度は、５００〜１０００倍であり、生育適温外の高温では濃度を低くする（１０００倍又は２０００倍以下）が好ましい。イネ、ムギなどの単子葉植物では濃度を低くする（１０００〜３０００倍）が好ましい。
ただし、処理期間が長すぎたり、菌体濃度が高すぎると生育が抑制されることがあるので、処理期間はそれぞれの作物についてテストして決定することが望ましい。
【００１８】
本発明の植物生長促進剤の適用対象となる植物としては、例えば小松菜、ホウレンソウ、大型山東菜、野沢菜、広島菜、ハクサイ、ダイコン、キャベツ、カブ、カボチャ、ピーマン、トマト等の野菜類；イネ、大麦、小麦、ヒエ、トウモロコシ、アワ等の穀物類；コスモス、トレニア、キク、ガーベラ、パンジー、ラン、シャクヤク、チューリップ等の花卉類；アズキ、インゲン、大豆、落花生、ソラマメ、エンドウ等の豆類；コウライシバ、ベントグラス、ノシバ等の芝類；ネギ類；アルファルファ、クローバー、レンゲ等の牧草類等が挙げられる。
【００１９】
これらのうち、花卉類に対しては、開花促進効果をも得ることができる。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、これらに限定されるものではない。
【００２１】
実施例１
落花生を栽培していたところ、その中に突然変異体と思われる非常に生育のよい個体を見つけた。その個体の、根粒を採取し洗浄後中の菌をＴＳＢを培地として培養し多くのコロニーを得た。そこでこのコロニーをもとに１０分画にそれぞれ分け小松菜をもとにしてバイオアッセイを行った。
くり返し行うことにより特に生育を促進する分画を得た。さらにこれをいくつかに細分しバイオアッセイを行った結果、生育促進とする菌体Ｍ−１を得た。
【００２２】
得られた菌体（Ｍ−１）から次の方法でＤＮＡを抽出し、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列より同定した。
（１）ＤＮＡの抽出
ＤＮＡの抽出はSepa Gene Kit（三光純薬（株））を用いアルカリ−ＳＤＳ法により行った。
（２）ｒＲＮＡ遺伝子の増幅
細菌は１６ＳｒＲＮＡに特異的なユニバーサルプライマー２種を用いて約１．５kbpの遺伝子の増幅を行った。
（３）塩基配列の解析と同定
得られた増幅産物を精製した後、ＤＮＡシーケンサー（Applied Biosystems 3100 DNA Sequencer）を用いて塩基配列解析を実施した。また得られた塩基配列についてGenebankのデータベースからオンライン検索を行った。
【００２３】
その結果、Ｍ−１株は、アルセロバクター  ヒスチジノロボランスの１６ＳｒＲＮＡと１００％一致し、アルセロバクター  ヒスチジノロボランスに属する株と同定された。
【００２４】
実施例２
（１）処理濃度
培養液（ＴＳＢトリプトソーイブイヨン）に２５℃３日間培養し、Ｍ−１株の菌体数４．６×１０8／mL位になった後８０℃、１時間滅菌した。この液の５００〜１０００倍液を用いる。
【００２５】
（２）土壌
(a)市販の培養土、又は(b)黒土、赤玉土（小粒）を等量混合させ、ＩＢ４８普通化成（８：８：８）を、土７００ｇに対して１ｇ混合したものを用いる。
【００２６】
（３）処理方法及び時期
１５cmポリビニールポット（気温１５〜２０℃）に上記土を入れ、３０ヶ作り対照１５体、処理１５体とする。そろった種子を１０ヶ体播種生育途中で３ヶ体残し同じ生育の個体とする。本葉が２〜３cmになったところで処理を行う。対照はＰＳＢ液のみで処理する。
【００２７】
（４）供試作物
小松菜、ホウレンソウ。
５００倍液処理は１回のみとし、灌液で５０mLずつ灌注処理後２０〜３０日後生体重を測定した。生長に差異が生ずるのは１０〜１４日位の中〜後期にかけてであった。
その結果、小松菜は、対照に比べて平均１．４３倍になった。ホウレンソウは対照に比べて平均１．９８倍になった。なお、高温時は７００〜１０００倍の希薄液で処理した。
【００２８】
実施例３  小松菜
（畑を用いた実施例）
耕作地２ｍ2を用い、１ｍ2当たり苦土石灰１００ｇ完熟堆肥２kg、有機配合肥６０ｇを施し、よく混合した（追肥はしない）。低温時・高温時共にマルチを用いトンネル法とし、低温時はビニールでおおい、高温時にはべたがけ栽培用不織布又は寒冷紗（光線透過率９０％、日光を充分に入れ、上から散水も可で高温時にも防虫剤を用いない）でおおった。発芽後６〜１０日後本葉２〜３cmを基準に１穴２本とし、それに５００〜１０００倍の液を５０mLずつ注入する。低温時２５日後高温時には２０日後に採取し生体重を測定した。その結果、低温では対照に比べて１．５倍、高温時は対照に比べて２．０倍位の差を生じた。
【００２９】
ホウレンソウ（品種パルク）についてもほぼ同じ方法で行った。酸性を嫌うので１ｍ2当り苦土石灰１５０ｇ、完熟堆肥２kg、有機配合肥料１２０ｇ、追肥なし。その結果、対照に比べて２倍位生長していた。