(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
金属イオンに結合することが可能である化合物であって、次式（ＩＩ）
【化２】
0005186075.tif 000055
（式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり
【化３】
0005186075.tif 000056
（式中、Ａは、ＣＨ２又はＯである）；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜６の数であるように選択される）
で表される化合物。
【請求項２】
金属イオンに結合することが可能である化合物であって、次式（ＩＩＩ）
【化４】
0005186075.tif 000057
（式中、
Ｒは、１〜８の炭素原子を有する低級アルキル基であり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が次式に基づく複素環の環であり；
【化５】
0005186075.tif 000058
（式中、Ａは、ＣＨ２又はＯである）；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜６の数であるように選択される）
で表される化合物。
【請求項３】
金属イオンに結合することが可能である化合物であって、次式（ＩＶ）
【化６】
0005186075.tif 000059
［式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり
【化７】
0005186075.tif 000060
（式中、Ａは、ＣＨ２又はＯである）；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜６の数であるように選択される］
で表される化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物及び金属イオンを含む中性又は陽イオン性の放射性標識錯体。
【請求項５】
金属イオンが、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムから成る群から選択される請求項４に記載の中性又は陽イオン性の放射性標識錯体。
【請求項６】
金属イオンが、テクネチウム−９９ｍ又はレニウムの同位元素である請求項４又は５に記載の中性又は陽イオン性の放射性標識錯体。
【請求項７】
錯体が次式
【化９】
0005186075.tif 000061
［式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり
【化１０】
0005186075.tif 000062
（式中、Ａは、ＣＨ２又はＯである）；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜６の数であるように選択される］
で表されるテクネチウム錯体である請求項４〜６のいずれかに記載の放射性標識錯体。
【請求項８】
錯体が次式（ＶＩＩＩ）
【化１１】
0005186075.tif 000063
［式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり
【化１２】
0005186075.tif 000064
（式中、Ａは、ＣＨ２又はＯである）；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜６の数であるように選択される］
で表されるレニウム錯体である請求項４〜６のいずれかに記載の放射性標識錯体。
【請求項９】
金属イオン及び請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を含む放射性標識錯体を提供する工程：
該放射性標識された金属錯体に腫瘍を接触させる工程；及び
腫瘍を画像化するＸ線写真の画像を作製する工程：
を含む、少なくとも１種の腫瘍を生体内（ヒトを除く）又は生体外で画像化する方法。
【請求項１０】
腫瘍が、新生物、癌腫、又は黒色腫である請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
金属イオンが、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムから成る群から選択される請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
金属イオンが、テクネチウム−９９ｍ又はレニウムの同位元素である請求項９〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
放射性標識錯体が、請求項４〜８のいずれかに記載の放射性標識錯体である請求項９〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
金属イオン及び請求項１〜３のいずれかに記載の化合物を含む放射性標識錯体を含有してなる腫瘍を生体内又は生体外で画像化するための作用剤。
【請求項１５】
腫瘍を生体内又は生体外で画像化するための作用剤が、放射性金属診断剤である請求項１４に記載の作用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、腫瘍を画像化するための小型分子の放射性金属診断剤及び腫瘍を治療するための放射性治療剤に関する。さらに具体的には、本発明は、悪性黒色腫及び遠隔転移を画像化するための小型分子テクネチウム−９９ｍ診断剤及びそれを治療するためのレニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）治療用錯体に関するものであり、９９ｍＴｃ−錯体及び相当するレニウム錯体は、窒素原子を介してキレート配位子に結合する二置換アミノ基を有し、その際、特に該アミノ基は、下級アルキル基で置換される。
【０００２】
（発明の背景）
皮膚癌の増加は大きな関心事である。皮膚悪性腫瘍で起きる死亡のほとんどすべては悪性黒色腫によるものである。この疾患の有意に高い死亡率は、メラノーマ細胞の高い増殖率及び転移の早期発生が原因である。治療の選択は、黒色腫及び関連する転移の時宜を得た検出に依存する。１８Ｆを放射性標識したグルコース類縁体である２−「１８Ｆ］フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（１８Ｆ−ＦＤＧ）を用いた陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）は黒色腫の画像化に上手く用いられているが、黒色腫と親和性を持つ９９ｍＴｃ−標識した単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）用医薬は、同じ目的に対して費用効率の良い、さらに広く利用可能な代替品を提供する可能性がある。
【０００３】
放射性標識したモノクローナル抗体による黒色腫を画像化するこれまでの試みはほとんど成功していない。それに続く、メラニン形成サイクルにおける偽前駆体としての放射性ヨード化アミノ酸及び核酸を含むさらに単純な放射性標識した分子の使用は、腫瘍の不十分な局在化、及び従って腫瘍対非腫瘍の低い比を示すか、又は乏しい薬物動態を持つかのいずれかであった。９９ｍＴｃ標識したα−メラノトロピンペプチドによって最近さらに有望な結果が得られた。このような放射性抱合体を用いた腫瘍の取り込み試験及び生体分布試験が好ましい結果を生じたということは、標識ペプチドが生体内の黒色腫のシンチグラフィに有用であるかも知れないことを示している。９９ｍＴｃ−錯体１〜４は０．４％〜１．５％の黒色腫の低い取り込みを有する（％ＩＤ／ｇ、注射後１時間）（Auzeloux, P., J. Med> Chem., 43:190-199, 2000）。それにもかかわらず、黒色腫に対する親和性を持つ非ペプチドで、免疫原性のない小型分子の探索は続いている。
９９ｍＴｃ−錯体１〜４及びメラノーマ細胞によるその取り込み
【０００４】
【化３０】
0005186075.tif 000002
【０００５】
この点について、１２３Ｉ−標識したＮ−（２−ジエチルアミノエチル）−４−ヨードベンズアミド（［１２３Ｉ］ＢＺＡ）及びＮ−（２−ジエチルアミノエチル）−３−ヨード−４−メトキシベンズアミド（［１２３Ｉ］ＩＭＢＡ）によって黒色腫の取り込みが得られた。Ｂ１６メラノーマ細胞を皮下に移植したＣ５７Ｂｌ６マウスを用いた生体内試験は、腫瘍のｇ当り５％〜９％の注射用量の範囲の取り込み値を示した。それに続くヒトでの臨床試験もまた適当な黒色腫による取り込み及び良好なシンチグラフィ画像を示した。最近の報告は、取り込みは飽和可能ではなく、おそらくメラノソームの中でのメラニン形成に関係していることを示唆している。かかる放射性ヨード化ベンズアミド類は悪性黒色腫の診断のためのフェーズＩＩ臨床試験に入っているが、日常的な臨床での使用は、ヨード１２３にまつわる欠点、すなわち、生体内での脱ヨード化、日常的な利便性の欠如及び高いコストによって阻まれる可能性がある。
【０００６】
臨床核医学で最も広く用いられている同位元素である、テクネチウム−９９ｍは、核医学の画像化に理想的な特徴（ｔ１／２＝６．０２ｈ、１４０ｋｅＶの単一エネルギーのγ放射）を持ち、要求に応じて９９Ｍｏ−９９ｍＴｃジェネレータシステムから利用可能である。黒色腫に高い親和性を持つテクネチウム−９９ｍを標識した小型の錯体が望まれている。９９ｍＴｃ標識したα−メラノトロピンペプチドを除いて、文献で公開されているすべての四座９９ｍＴｃ−錯体は１つの形態であれ、別のものであれすべて、錯体の全体としての構造の中に芳香環と共にベンズアミドを用いることを基にしている。従って、黒色腫の画像化のための新規で有用な９９ｍＴｃ標識した診断剤は依然嘱望されている。
【０００７】
（発明の要約）
本発明は、放射性金属中心を含む、放射性標識した新しい診断剤及び治療剤を提供する。好ましい放射性金属には、９９ｍ−テクネチウム及び１又はそれより多くのレニウム放射性同位元素が挙げられる。好ましい作用剤は、新生物、癌腫、及び黒色腫のような腫瘍を生体内及び生体外で画像化するのに有用である。特に好ましい作用剤は、黒色腫を生体内及び生体外で画像化するのに有用である。本発明の好ましい作用剤は、第３級アミンのファルマコフォアに結合したオキソテクネチウムのコア（Ｔｃ＝Ｏ）又はオキソレニウムのコア（Ｒｅ＝Ｏ）を含む。
【０００８】
従って、本発明の化合物は、以下の構造を含む：
Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２
式中、Ｙはテクネチウムに結合することが可能であるキレート配位子であり、Ｘは１〜約８の原子を有する主鎖を含有する連結基であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基であり、同一であることも異なることもでき、又置換されることもでき、その際、組み合わせたＮＲ１Ｒ２は、酸素原子、イオウ原子又は窒素原子のような追加のヘテロ原子（Ｒ１とＲ２の組み合わせから）を包含することができる３〜８員環を形成する。さらに好ましくは、組み合わせたＮＲ１Ｒ２は１又は２のヘテロ原子を持つ５、６、又は７員環を形成する。
【０００９】
金属イオンを結合することが可能である、本発明の好ましい化合物には、式Ｉに基づいた化合物が挙げられる：
【００１０】
【化３１】
0005186075.tif 000003
【００１１】
式中、ＲＡは独立して、各ＲＡの存在にて、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、及びＸＮＲ１Ｒ２からなる群から選択され；
【００１２】
ＲＢは、各ＲＢの存在にて、水素であり；又は組み合せた−（ＣＲＡＲＢ）−は、ゼロ又は１つのＣ＝Ｏ基が存在するように−Ｃ＝Ｏ−であり；
【００１３】
ＲＣは独立して、各ＲＣの存在にて、水素、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基又はアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基又はアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、及びＸＮＲ１Ｒ２からなる群から選択され；
【００１４】
Ｘは、１〜約８の原子を有する主鎖を含む連結基であり、主鎖は任意で、主鎖におけるエステル結合、アミド結合、アミン結合、エーテル結合又はチオエーテル結合を包含することができ、連結基の主鎖に不可欠の芳香族基を包含せず；そして
【００１５】
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され、又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は３〜約８環原子又は１又は２のヘテロ環原子を有する複素環化合物の環であり；
ｎは、２又は３のいずれかであり、各ｎの存在にて独立して選択され；並びに式ＩにおけるＲＡ又はＲＣの位置の少なくとも１つはＸＮＲ１Ｒ２であるように選択され、その際、金属イオンへの化合物の結合の結果生じる放射性標識錯体は、中性又は陽イオン性である。
【００１６】
好ましい連結基、Ｘは、例えば−（ＣＨ２）ｎ−のような主鎖における１〜約８の原子を有する低級アルキル基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における１〜８の原子を有するアミン基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ− のような主鎖における１〜８の原子を有するエーテル基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における１〜８の原子を有するエステル基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における１〜８の原子を有するチオエーテル基、及び例えば−（ＣＨ２）ｎＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−ような主鎖における５〜８の原子を有するアミド基であり、その際、ｎ及びｍは、負ではない整数であり、ｎ＋ｍの合計は通常、約１〜約８である。特に好ましい連結基、Ｘは主鎖において約２から約５の間の原子を有する。
【００１７】
本発明の好ましい連結基、Ｘは、主鎖に不可欠な部分としての芳香族基を含有しない主鎖を有する。連結基、Ｘは、任意で、ペンダント芳香族基を含む主鎖に結合する１又はそれより多くの置換基を有する。好ましい置換基には、１〜約６の炭素原子及び０〜約３のＮ、Ｏ、又はＳ原子を有するアルキル基、ヒドロキシル基、アミノ基、カルボキシル基、１〜約６の炭素原子を有するアルコキシ基、１〜約６の炭素原子を有するアミノアルキル基、各アルキル基が１〜約６の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキル基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを含むハロゲン原子、０、１、２、又は３のＮ、Ｏ又はＳを包含してもよい約５〜約１８の環原子を有する芳香族基が挙げられる。
【００１８】
次いで、本発明の化合物は当該技術で周知の方法を用いて、放射性金属イオンにより錯体化され、放射性標識した錯体を提供する。本発明の典型的な放射性標識錯体は陽イオン系又は中性である。好ましい放射性金属イオンには、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムから成る群から選択される金属イオンを含む、α、β又はγ放射線を放射する同位元素の金属イオンが挙げられる。本発明の特に好ましい放射性標識錯体は、テクネチウム又はレニウムの金属イオンを含む。
【００１９】
本発明はまた、金属イオン及び以下の構造：
Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２
（式中、
Ｙは、金属イオンに結合することが可能であるキレート配位子であり；
Ｘは、１〜約８の原子を有する主鎖を含む連結基であり、主鎖は任意で主鎖の中にエステル結合、アミド結合、アミン結合、エーテル結合、又はチオエーテル結合を包含することができ、連結基の主鎖に不可欠である芳香族基を包含せず；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され、又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が、３〜約８の環原子又は１又は２のヘテロ環原子を有する複素環の環である）の化合物を含む放射性標識錯体を提供する工程；
該放射性標識錯体に腫瘍を接触させる工程；及び
腫瘍を画像化するＸ線写真の画像を作製する工程を含む、少なくとも１種の腫瘍を生体内又は生体外で画像化する方法も提供する。
【００２０】
好ましい実施態様では、放射性標識した錯体を哺乳類に注射して新生物、癌腫又は黒色腫のような少なくとも１種の腫瘍の画像を得る。好ましい放射性標識錯体は腫瘍の中に蓄積する。放射性シンチレーションカメラのような従来の技法によって画像を得る。
【００２１】
（定義）
Ｔｒ及びＴｒｔは、トリチル基、例えば、トリフェニルメチル基を言う。
ＤＴＧは、ジトリルグアニジンを言う。
ＡＡＤＴは、アミノ−アミド−ジチオレート配位子を言い、好ましいＡＡＤＴ配位子はＮ−［２−（２−メルカプト−エチルアミノ）−エチルアミノ］−エタンチオール構造を有する。
ＤＡＤＴは、ジアミノ−ジチオレート配位子を言い、好ましいＤＡＤＴ配位子は、２−［２−（２−メルカプト−エチルアミノ）−エチルアミノ］−エタンチオール構造を有する。
【００２２】
（発明の詳細な説明及びその好ましい実施態様）
本発明は、放射性金属中心を含む、放射性標識した新しい診断剤及び治療剤を提供する。好ましい放射性金属には９９ｍ−テクネチウム及び１又はそれより多いレニウム放射性同位元素が挙げられる。好ましい作用剤は、新生物、癌腫及び黒色腫のような腫瘍を生体内及び生体外で画像化するのに有用である。特に好ましい作用剤は、黒色腫を生体内及び生体外で画像化するのに有用である。本発明の好ましい作用剤は通常、第３級アミンのファルマコフォアに結合する少なくとも１種の配位子基Ｙによってキレートされたオキソテクネチウムのコア（Ｔｃ＝Ｏ）又はオキソレニウムのコア（Ｒｅ＝Ｏ）を含む。本発明の好ましい放射性標識した金属錯体は、中性又は陽イオン性の金属錯体、例えば金属イオンを含み、ひとまとめにした配位子の内部配位圏は中性又は陽イオン性である。好ましくは、放射性標識した錯体の電荷は全体として中性又は陽イオン性である。
【００２３】
従って、本発明の化合物は以下の構造を含み：
Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２
式中、Ｙはテクネチウムに結合可能なキレート配位子であり、Ｘは、１〜約８の原子を有する主鎖を含有する連結基であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して低級アルキル基から選択され、低級アルキル基はそれぞれ１〜約４の炭素原子を有し、同一であることも異なっていることもでき、置換されることもでき、その際、組み合わせられたＮＲ１Ｒ２は、３〜８員環の環であり、それは追加のヘテロ原子を包含することができる。好ましい複素環の環は、５、６又は７の環原子を有し、１又は２のヘテロ原子を含む。特に好ましい複素環化合物の環は、モルフォリノ、ピペリジニル、ピペリジニル及びチオモルフォリノである。
【００２４】
本発明の放射性標識錯体は、異性体という点では純粋であることができ、又は、光学異性体、ジアステレオマー、錯化異性体、回転異性体、幾何異性体、互変異性体及び類似異性体から選択される２以上の混合物を含む異性体の混合物を含むことができる。例えば、金属配位子基の相対的な配向及びＲＡ又はＲＣ又はＸＮＲ１Ｒ２のような金属キレート基、Ｙにおける置換の結果生じる異性体錯体は、通常、シン／アンチ異性体又は言い換えれば、シス／トランス異性体と言い、シン異性体は、オキソ配位子及び一般に同一方向に配向する配位子置換基を有し、アンチ異性体は、オキソ配位子及び一般に反対方向に配向する配位子置換基を有する。
【００２５】
本発明の放射線標識錯体で使用するのに好ましい金属イオンは、１又はそれより多くの離散形態の放射線を放射することが可能な起源である。好ましい放射線放射には、アルファ、ベータ及びガンマ放射線放射が挙げられる。通常のＸ線写真技術で検出するのに十分なエネルギーを持つアルファ、ベータ及びガンマ放射線を放射する、又は放射線療法の適用に十分なアルファ、ベータ及びガンマエネルギーを有する金属イオンがさらに好ましい。特に好ましい金属イオンには、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムから選択される金属の１又はそれより多くの同位元素が挙げられる。テクネチウム−９９ｍ及びレニウム放射性同位元素は本発明で使用するための見本となる金属イオンである。本発明の放射線標識錯体で使用するのに好適な金属イオンには、金属原子に配位する付加配位子を挙げてもよい。好ましい配位子には、オキソ基、ニトリド基、フルオリド基、クロリド基、ブロミド基、イオジド基、カルボニル基、イソニトリル基、ニトリル基、ニトロシル基、１〜約６の炭素原子を有するアルコキシド基、１〜約１２の炭素原子を有するアミン基、水、２〜約８の炭素原子を有するエーテル基、チオフェンを含む２〜約８の炭素原子を有するチオエーテル基、１〜約２０の炭素原子を有するホスフィン類及びホスフェート類並びにその他のテクネチウム及びレニウムの化合物に一般的な配位子が挙げられる。特に好ましいテクネチウム及びレニウムの金属イオンはさらにオキソ配位子、例えば、Ｔｃ＝Ｏ又はＲｅ＝Ｏを含む。
【００２６】
さらに、本発明の好ましい錯体はキレート配位子部分、Ｙを有し、その際、キレート配位子は複数の供与原子を介して金属イオンに結合することができる。供与原子はそれぞれ、通常、Ｃ、Ｎ、Ｓ又はＰであるが、その他の供与原子も特定の適用には許容可能である。好ましい供与原子は、Ｎ及びＳである。２つの化合物が金属に結合してキレート配位子−金属錯体を形成するように、複数の供与原子は単一の化合物に存在することができるし、又は２以上の化合物に存在することができる。特定の実施態様では、１つの化合物が３種の供与原子を含み、１又はそれより多くの追加の化合物がそれぞれ独立して単一の供与原子を含む。もう１つの方法としては、同一であることもでき、異なっていることもでき、独立して２以上の供与原子を含むことができる２つの化合物が金属中心に結合してビス配位子金属錯体を形成することができる。
【００２７】
特に好ましい化合物及び放射性標識した金属錯体は、四座配位子システムを含み、その際、四座配位子は４つの供与原子を包含する単一の化合物に含有される。追加的な好ましい化合物及び放射性標識した金属錯体では、四座キレート配位子は、”３＋１”配位子システムであり、その際、四座キレート配位子部分、Ｙの３つの供与原子は、１つの化合物に含有され、第４の供与原子はもう１つの化合物に存在する。
【００２８】
好ましい連結基、Ｘは、例えば−（ＣＨ２）ｎ−のような主鎖における１〜約８の原子を有する低級アルキル基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における３〜８の原子を有するアミン基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における３〜８の原子を有するエーテル基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における４〜８の原子を有するエステル基、例えば−（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における３〜８の原子を有するチオエーテル基、及び例えば−（ＣＨ２）ｎＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−のような主鎖における４〜８の原子を有するアミド基であり、その際、ｎ及びｍは、負ではない整数であり、ｎ＋ｍの合計は通常、約２〜約８である。特に好ましい連結基、Ｘは主鎖において約２から約５の間の原子を有する。
【００２９】
本発明の好ましい連結基、Ｘは、主鎖の不可欠な部分としての芳香族基を含有しない主鎖を有する。連結基Ｘは、任意で、ペンダント芳香族基を含む主鎖に結合する１又はそれより多くの置換基を有する。好ましい置換基には、１〜約６の炭素原子及び０〜約３のＮ、Ｏ、又はＳ原子を有するアルキル基、ヒドロキシル基、アミノ基、カルボキシル基、１〜約６の炭素原子を有するアルコキシ基、１〜約６の炭素原子を有するアミノアルキル基、各アルキル基が１〜約６の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキル基、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを含むハロゲン原子、０、１、２、又は３のＮ、Ｏ又はＳ環原子を包含してもよい約５〜約１８の環原子を有する芳香族基が挙げられる。
【００３０】
好ましいＮＲ１Ｒ２には、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して、約１〜約６の炭素原子を有するアルキル基から選択される基が挙げられる。Ｒ１及びＲ２がエチル、ｎ−プロピル及びｎ−ブチルのような約２〜約４の炭素原子を有するアルキル基である基がさらに好ましい。もう１つの方法としては、好ましい化合物には、ＮＲ１Ｒ２が組み合わせられて複素環化合物の環を形成する化合物が挙げられる。好ましくは複素環の環は３から約８の間の環原子を有し、環は任意で０、１、又は２の追加的なＮ、Ｏ又はＳ原子を含有することができる。さらに好ましいのは、５、６及び７員環の複素環化合物の環である。見本となる複素環の環には、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル、Ｎ−モルフォリニル及びＮ−チオモルフォリニルが挙げられる。
【００３１】
本発明の配位子、Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２の好ましいＸ−ＮＲ１Ｒ２の例には以下が挙げられる。
【００３２】
【化３２】
0005186075.tif 000004
【００３３】
本発明の放射性標識錯体は、金属中心が金属イオンを言い、配位子の内部圏が直接金属イオンに結合される、中性又は陽イオン性の金属中心を包含する。本発明の好ましい放射性標識錯体は、中性又は陽イオン性である金属中心を含有する。さらに、金属イオン及びその中に取り込まれる式Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２の化合物を含む放射性標識した錯体は全体として中性又は陽イオン性である。
【００３４】
本発明は、金属イオンを結合することが可能であり、化合物が式Ｉのである化合物を提供する：
【００３５】
【化３３】
0005186075.tif 000005
【００３６】
式中、ＲＡは独立して、各ＲＡの存在にて、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、及びＸＮＲ１Ｒ２からなる群から選択され；
【００３７】
ＲＢは、各ＲＢの存在にて、水素であり；又は組み合せた−（ＣＲＡＲＢ）−は、ゼロ又は１つのＣ＝Ｏ基が存在するようにＣ＝Ｏであり；
【００３８】
ＲＣは独立して、各ＲＣの存在にて、水素、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基又はアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基又はアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、及びＸＮＲ１Ｒ２からなる群から選択され；
【００３９】
Ｘは、１〜約８の炭素原子を有する主鎖を含む連結基であり、主鎖は任意で、主鎖におけるエステル結合、アミド結合、アミン結合、エーテル結合又はチオエーテル結合が包含することができ、連結基の主鎖に不可欠の芳香族基を包含せず；そして
【００４０】
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され、又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は３〜約８環原子又は１又は２のヘテロ環原子を有する複素環の環であり；
【００４１】
ｎは、２又は３のいずれかであり、各ｎの存在にて独立して選択され；並びに式ＩにおけるＲＡ又はＲＣの存在の少なくとも１つはＸＮＲ１Ｒ２であるように選択され、その際、金属イオンへの化合物の結合の結果生じる放射性標識錯体は、中性又は陽イオン性である。
【００４２】
式Ｉの好ましい化合物は、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムから成る群から選択される金属イオンを結合することが可能である。特に好ましい化合物は、テクネチウム−９９ｍ又はレニウム同位元素を結合することが可能である。
【００４３】
式Ｉの追加的に好ましい化合物は、組み合わせて炭素環又は複素環の環を形成するＮＲ１Ｒ２を有し、その際、該環は、３〜約７の環原子を有する。好ましい複素環の環は、少なくとも１つの窒素原子、酸素原子又はイオウ原子を有する。複素環の環の見本となる例には、Ｎ−モルフォリノ、Ｎ−ピペリジニル、Ｎ−ピペラジニル又はチオモルフォリノが挙げられる。
【００４４】
式Ｉのさらに好ましい化合物は、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−、又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であるＸを有し；ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される化合物である。
【００４５】
その他の好ましい式Ｉの化合物は、
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が次式に基づく複素環の環を形成する；
【００４６】
【化３４】
0005186075.tif 000006
【００４７】
（式中、
Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択される）化合物である。
【００４８】
式Ｉの追加の有用な化合物には式ＩＩに基づいた化合物が挙げられる。
【００４９】
【化３５】
0005186075.tif 000007
【００５０】
式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり
【００５１】
【化３６】
0005186075.tif 000008
【００５２】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【００５３】
式Ｉの追加の有用な化合物には式ＩＩＩに基づいた化合物が挙げられる。
【００５４】
【化３７】
0005186075.tif 000009
【００５５】
式中、
Ｒは、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル基、２〜約８の炭素原子を有するアルコキシアルキル基、又は６〜約２の炭素原子を有するアラルキル基であり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が次式に基づく複素環の環であり
【００５６】
【化３８】
0005186075.tif 000010
【００５７】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【００５８】
式Ｉの追加の有用な化合物には、式ＩＶに基づいた化合物が挙げられる。
【００５９】
【化３９】
0005186075.tif 000011
【００６０】
式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり
【００６１】
【化４０】
0005186075.tif 000012
【００６２】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【００６３】
もう１つの実施態様では、本発明は放射性標識した錯体を提供し、その際、金属錯体は、中性又は陽イオン性であり、式Ｉ及び金属イオンに基づいた化合物を包含する。追加の好ましい放射性標識した錯体は、金属イオン及び式ＩＩ、ＩＩＩ，ＩＶのいずれかの化合物を含む。本発明の放射性標識した錯体で使用するのに好ましい金属イオンは、１又はそれより多くの離散型放射線を放射することが可能な起源である。好ましい放射線放射には、アルファ、ベータ及びガンマの放射線放射が挙げられる。通常のＸ線写真技術で検出するのに十分なエネルギーを持つアルファ、ベータ及びガンマ放射線を放射する、又は放射線療法の適用に十分なアルファ、ベータ及びガンマエネルギーを有する金属イオンがさらに好ましい。特に好ましい金属イオンには、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムから選択される金属の１又はそれより多くの同位元素が挙げられる。テクネチウム−９９ｍ及びレニウム放射性同位元素は本発明で使用するための見本となる金属イオンである。
【００６４】
本発明の特定の実施態様では、金属イオンにその他の配位子も存在してもよい。好ましい配位子には、オキソ基、ニトリド基、フルオリド基、クロリド基、ブロミド基、イオジド基、カルボニル基、イソニトリル基、ニトリル基、ニトロシル基、１〜約６の炭素原子を有するアルコキシド基、１〜約１２の炭素原子を有するアミン基、水、２〜約８の炭素原子を有するエーテル基、チオフェンを含む２〜約８の炭素原子ならびに１、２又は３の窒素原子を有するチオエーテル基、１〜約２０の炭素原子を有するホスフィン類並びにその他のテクネチウム及びレニウムの化合物に一般的な配位子が挙げられる。特に好ましいテクネチウム及びレニウムの金属イオンはさらにオキソ配位子、例えば、Ｔｃ＝Ｏ又はＲｅ＝Ｏを含む。
【００６５】
本発明の特に好ましい放射性標識された錯体には、式Ｖ、ＶＩ又はＶＩＩに基づく錯体が挙げられる：
【００６６】
【化４１】
0005186075.tif 000013
【００６７】
【化４２】
0005186075.tif 000014
【００６８】
【化４３】
0005186075.tif 000015
【００６９】
式中、式Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩに存在する変数は以下のように定義される：
Ｍは、テクネチウム又はレニウムの少なくとも１つの同位元素であり；
Ｒは、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル基、２〜約８の炭素原子を有するアルコキシアルキル基、又は６〜約２の炭素原子を有するアラルキル基であり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が次式に基づく複素環の環であり
【００７０】
【化４４】
0005186075.tif 000016
【００７１】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【００７２】
本発明はまた、少なくとも１種の腫瘍を生体内又は生体外で画像化する方法も提供する。該方法は：
金属イオン及び以下の構造の化合物を含む放射性標識錯体を提供する工程：
Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２
（式中、
Ｙは、金属イオンに結合することが可能であるキレート配位子であり；
Ｘは、１〜約８の原子を有する主鎖を含む連結基であり、主鎖は任意で主鎖の中にエステル結合、アミド結合、アミン結合、エーテル結合、又はチオエーテル結合を包含することができ、連結基の主鎖に不可欠である芳香族基を包含せず；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され、又は
−ＮＲ１Ｒ２は一緒になって、３〜約８の環原子又は１又は２のヘテロ環原子を有する複素環の環である）；
該放射性標識錯体に腫瘍を接触させる工程；及び
腫瘍を画像化するＸ線写真の画像を作製する工程を含む。
【００７３】
腫瘍を画像化する方法で使用するのに好ましい金属イオンには、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムの放射性同位元素が挙げられる。特に好ましい金属イオンにはテクネチウム−９９ｍ及び１又はそれより多くのレニウム同位元素が挙げられる。
【００７４】
本発明の特定の実施態様では、金属イオンにその他の配位子も存在してもよい。好ましい配位子には、オキソ基、ニトリド基、フルオリド基、クロリド基、ブロミド基、イオジド基、カルボニル基、イソニトリル基、ニトリル基、ニトロシル基、１〜約６の炭素原子を有するアルコキシド基、１〜約１２の炭素原子を有するアミン基、水、２〜約８の炭素原子を有するエーテル基、チオフェンを含む２〜約８の炭素原子ならびに１、２又は３の窒素原子を有するチオエーテル基、１〜約２０の炭素原子を有するホスフィン類並びにその他のテクネチウム及びレニウムの化合物に一般的な配位子が挙げられる。特に好ましいテクネチウム及びレニウムの金属イオンはさらにオキソ配位子、例えば、Ｔｃ＝Ｏ又はＲｅ＝Ｏを含む。
【００７５】
本発明の方法によって画像化するのに好適な腫瘍には、新生物、癌腫及びその他の癌性腫瘍が挙げられる。画像化するのに好ましい腫瘍には、乳腺、前立腺、肺、膵臓、肝臓、結腸の新生物、リンパ腫、神経膠腫、及びその他の新生物が挙げられる。画像化するのに特に好ましい腫瘍には、悪性黒色腫、転移性黒色腫及び原発黒色腫腫瘍の部位から離れている黒色腫腫瘍のような黒色腫が挙げられる。いかなる組織においても、生体内又は生体外にて腫瘍、特に新生物及び黒色腫腫瘍を画像化することができる。好ましくは、画像化される腫瘍は哺乳類の組織におけるものであり、さらに好ましくは腫瘍はヒトの組織におけるものである。好ましい組織及び臓器には、皮膚、心臓、脳、肺、脾臓、結腸、肝臓、腎臓、筋肉及びその他の内蔵が挙げられる。
【００７６】
本発明の好ましい方法では、放射性標識した錯体は次式の化合物を含み：
Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２
式中、Ｙはテクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムから成る群から選択される金属イオンに結合することが可能なキレート配位子である。特に好ましい化合物にはテクネチウム−９９ｍ及び／又は１つ以上のレニウムの同位元素に結合可能な四座キレート配位子であるＹを有する。
【００７７】
特に好ましい配位子には、アミド−アミノ−ジチオレート基又はジアミノ−ジチオレート基であるＹが挙げられ、その際、テクネチウムを結合することが可能な窒素原子及びイオウ原子はエチレン基又はプロピレン基によって連結され、エチレンリンカー基又はプロピレンリンカー基の各炭素は、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、オキソ及び式Ｉで定義される−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択される１又はそれより多くの置換基により置換される。
【００７８】
追加的に好ましい方法には、ＮＲ１Ｒ２基が組み合わせられて次式に基づいた複素環の環となっている化合物の使用が挙げられる：
【００７９】
【化４５】
0005186075.tif 000017
【００８０】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択される。
【００８１】
特に好ましい方法は、金属イオン及び式Ｉに基づいた化合物を含む錯体を包含する：
【００８２】
【化４６】
0005186075.tif 000018
【００８３】
式中、
ＲＡ及びＲＢは独立して、配位子におけるそれぞれＲＡ及びＲＢの存在にて、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；又は
組み合わせた−（ＣＲＡＲＢ）は−Ｃ＝Ｏ−であり；
ＲＣは独立して、それぞれＲＣの存在にて、水素、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、１〜約８の原子を有する主鎖を含む連結基であり、主鎖は任意で主鎖の中にエステル結合、アミド結合、アミン結合、エーテル結合、又はチオエーテル結合を包含し、連結基の主鎖に不可欠である芳香族基を包含せず；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され、又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が、３〜約８の環原子又は１又は２のヘテロ環原子を有する複素環の環であり；
ｎは、２又は３であり、独立してｎの存在にて選択され；式ＩにおけるＲＡ又はＲＣの存在の少なくとも１つは、ＸＮＲ１Ｒ２であるように選択され、その際、金属イオンへの化合物の結合の結果生じる放射性標識された錯体は、中性又は陽イオン性である。
【００８４】
本発明の腫瘍を画像化する方法において使用するのに好ましい式Ｉのさらにその他の化合物は、Ｘに−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−を有する化合物であり；
ｍ及びｐはそれぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され、ｑはそれぞれｑの存在にて１〜約６であるように選択される。
【００８５】
本発明の腫瘍を画像化する方法において使用するのに好ましい式Ｉのその他の化合物は：
Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせられた−ＮＲ１Ｒ２が次式に基づいた複素環の環であり；
【００８６】
【化４７】
0005186075.tif 000019
【００８７】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択される化合物である。
【００８８】
本発明のもう１つの好ましい方法には、金属イオン及び式ＩＩの化合物を含む放射性標識された錯体が挙げられる：
【００８９】
【化４８】
0005186075.tif 000020
【００９０】
式中：
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づいた複素環の環であり；
【００９１】
【化４９】
0005186075.tif 000021
【００９２】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【００９３】
本発明のもう１つの好ましい方法には、金属イオン及び式ＩＩＩの化合物を含む放射性標識された錯体が挙げられる：
【００９４】
【化５０】
0005186075.tif 000022
【００９５】
式中：
Ｒは、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル基、２〜約８の炭素原子を有するアルコキシアルキル基、又は６〜約２の炭素原子を有するアラルキル基であり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり：
【００９６】
【化５１】
0005186075.tif 000023
【００９７】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【００９８】
本発明のもう１つの好ましい方法には、金属イオン及び式ＩＶの化合物を含む放射性標識された錯体が挙げられる：
【００９９】
【化５２】
0005186075.tif 000024
【０１００】
式中：
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり：
【０１０１】
【化５３】
0005186075.tif 000025
【０１０２】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【０１０３】
腫瘍を画像化するための特に好ましい方法において、見本となる放射性標識された錯体の例には、式Ｖ、ＶＩ又はＶＩＩに基づいたテクネチウム錯体及びレニウム錯体が挙げられる：
【０１０４】
【化５４】
0005186075.tif 000026
【０１０５】
【化５５】
0005186075.tif 000027
【０１０６】
【化５６】
0005186075.tif 000028
【０１０７】
式中、式Ｖ、ＶＩ及びＶＩＩの変数は以下のように定義される：
Ｍは、少なくとも１種のテクネチウム又はレニウムの同位元素であり；
Ｒは、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル基、２〜約８の炭素原子を有するアルコキシアルキル基、又は６〜約２の炭素原子を有するアラルキル基であり；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２は次式に基づく複素環の環であり：
【０１０８】
【化５７】
0005186075.tif 000029
【０１０９】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【０１１０】
本発明はまた、金属イオン及び以下の構造：
Ｙ−Ｘ−ＮＲ１Ｒ２
の化合物を含む細胞傷害性金属錯体と癌を接触させる工程を含む癌を治療する方法も包含する：
（式中、
Ｙは、金属イオンに結合することが可能であるキレート配位子であり；
Ｘは、１〜約８の原子を有する主鎖を含む連結基であり、主鎖は任意で主鎖の中にエステル結合、アミド結合、アミン結合、エーテル結合、又はチオエーテル結合を包含し、連結基の主鎖に不可欠である芳香族基を包含せず；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され、又は
−ＮＲ１Ｒ２は一緒になって、３〜約８の環原子又は１又は２のヘテロ環原子を有する複素環の環である）。
【０１１１】
好ましい治療方法は、放射性同位元素である放射性金属イオンを有する。好ましい放射性金属錯体は、アルファ、ベータ又はガンマの放射線を放射する。特に好ましい金属錯体には、テクネチウム、レニウム、イットリウム、銅、ガリウム、インジウム、ビスマス、白金及びロジウムが挙げられる。
【０１１２】
本発明の好ましい治療方法は、金属イオンを結合することが可能である四座キレート配位子を含む、式Ｉの化合物を含む放射性標識した治療剤を有する：
【０１１３】
【化５８】
0005186075.tif 000030
【０１１４】
式中、
ＲＡ及びＲＢは独立して、配位子のそれぞれＲＡ及びＲＢの存在にて、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；又は
組み合わせられた−（ＣＲＡＲＢ）は−Ｃ＝Ｏ−であり；
ＲＣは独立して、それぞれＲＣの存在にて、水素、１〜約８の炭素原子を有する低級アルキル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択され；
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が次式に基づく複素環の環であり：
【０１１５】
【化５９】
0005186075.tif 000031
【０１１６】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
ｎは、２又は３のいずれかであり、それぞれｎの存在にて独立して選択される。
【０１１７】
本発明の治療方法に用いるのに好ましい放射性標識錯体には、式ＶＩＩＩの錯体が挙げられる：
【０１１８】
【化６０】
0005186075.tif 000032
【０１１９】
式中、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基から選択され；又は
組み合わせた−ＮＲ１Ｒ２が次式に基づく複素環の環であり：
【０１２０】
【化６１】
0005186075.tif 000033
【０１２１】
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＲＤ、Ｏ又はＳであり；
ＲＤは、水素、１〜約４の炭素原子を有する低級アルキル基、７〜約１８の炭素原子を有するアラルキル基、６〜約１８の炭素原子を有するアリール基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルエステル基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールエステル基、約２〜約８の炭素原子を有するアルキルアミド基、約７〜約１８の炭素原子を有するアリールアミド基、各アルキル基が１〜約４の炭素原子を有するジ（アルキル）アミノアルキル基、−ＸＮＲ１Ｒ２から成る群から選択され；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｑ−、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）ｐ−又は−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−であり；
ｍ及びｐは、それぞれｍ及びｐの存在にて１〜約３であるように独立して選択され；並びに
ｑは、独立してｑの存在にて１〜約６の数であるように選択される。
【０１２２】
本発明の好ましい放射性標識錯体の例には、実施例１〜１２で調製される化合物Ａ〜Ｄ及びＨ〜Ｍのテクネチウム−９９ｍ及びレニウムの錯体が挙げられる。錯体Ｒｅ（化合物Ａ）の定常状態の構造を図１及び実施例２４に示す。各錯体の単一の鏡像異性体を以下に示すが、本発明における錯体及び化合物のあらゆる可能な立体異性体、ジアステレオマー、存在異性体、幾何異性体、配位異性体、互変異性体及びその他のあらゆる異性体型を熟考し、本発明の範囲内に包含する。
【０１２３】
【化６２】
0005186075.tif 000034
【０１２４】
【化６３】
0005186075.tif 000035
【０１２５】
【化６４】
0005186075.tif 000036
【０１２６】
【化６５】
0005186075.tif 000037
【０１２７】
【化６６】
0005186075.tif 000038
【０１２８】
【化６７】
0005186075.tif 000039
【０１２９】
【化６８】
0005186075.tif 000040
【０１３０】
【化６９】
0005186075.tif 000041
【０１３１】
（実施例）
一般的な実験の詳細：
市販品（アルドリッチケミカルズ、ギブコライフテクノロジーズ）から入手した化合物及び試薬はすべて分析用のグレードであるから、さらに精製することなく用いた。９９ｍＴＣ−ペルテクネテートは製造元（デュポン）を介して入手した。元素分析は、元素分析機、ＬＥＣＯ−ＣＨＮＳ−９３２で行った。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、バリアン（Varian）ＸＬ５００ＭＨｚ装置で得た。Ｘ線結晶解析は、ＭｏＫα放射線源を用い、ＣＣＤ検出器を備えたシーメンズ（Siemens）プラットホームゴニオメータで行った。ＳＨＥＬＸＴＬバージョン５．０を用いた直接法によって構造を解いた。ＦＴ−ＩＲスペクトルは、ＡＴＲ付きブルッカーベクター（Bruker Vector）２２ＦＴＩＲ装置で記録した。質量スペクトルは、マイクロマスＬＣＺ電気スプレーＬＣ−ＭＳ装置で記録した。ＨＰＬＣ精製は、キャンベラ電圧増幅器によって動力供給を受けている遮蔽光電子増倍管の中に取り付けられ、計数率計に接続され、γ線検出器に直列接続された９９６ＵＶ−ＶＩＳダイオードアレイ検出器を装備したウォーターズミレニウムクロマトグラフィシステムで行った。錯体の精製についてはすべて、１．０ｍＬ／分の流速にて１５：８５／Ａ：Ｂ〜９０：１０／Ａ：Ｂの線形勾配を用いて、メタノール（溶媒Ａ）及び０．００５Ｍリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４（シグマ）（溶媒Ｂ）でＣ１８ガードを装備した逆相Ｃ８カラムを溶出した。
【０１３２】
化学反応
前記の通り複数工程の反応によってＡＡＤＴキレート化合物を合成した。置換基としてのＣ２連結したジアルキルアミノ基（化合物Ａ及びＢ）を含有するキレート誘導体は、Ｎ−（２−ジアルキルアミノ）エチルクロリド（アルキル＝Ｅｔ、Ｂｕ）を用いたＡＡＤＴキレート化合物におけるアミン窒素のＮ−アルキル化によって合成したが、Ｃ３連結ジアルキルアミノ置換基（化合物Ｃ及びＤ）は、Ｎ−（３−クロロプロピル）−ＡＡＤＴ誘導体を用いた市販のジアルキルアミン（アルキル＝Ｅｔ、Ｂｕ）のアルキル化によってキレート化合物に組み入れた（模式図１）
【０１３３】
本発明に基づいた好ましい化合物の調製のための一般反応の模式図を模式図１に示す。以前記載されたように（「化学及び核医学におけるテクネチウム及びレニウム  ５」（Nicolini M, Bandoli G, Mazzi U,編、Padova Servizi Grafici Editoriali、１９９９年）の２５３〜２５７ページのMahmood A, Kuchma, MH, Goldstone J, Freiberg E, Davison A, Jones AG, 著の「官能化された四座キレート化合物及びそのテクネチウムとレニウムの錯体：合成分光分析及び構造的特性分析」及び「核医学におけるテクネチウム及びレニウム  ４」（Nicolini M, Bandoli G, Mazzi U,編、Verona: Cortina International、１９９５年）の２１１〜２１５ページのMahmood A, Wolff JA, Davison AG, 著の「アミンアミドジチオール配位子のテクネチウム及びレニウム錯体：配位子の合成及び金属錯体」、それらを参考として本明細書に組み入れる）、四座キレート化合物（ＡＡＤＴ）は１−クロロ−３ブロモプロパンによりアルキル化されてＮ−３−クロロプロピル置換ＡＡＤＴを形成する。次いで、３−クロロ−プロピル置換ＡＡＤＴキレート化合物はジアルキルアミンと反応して最終的なジアルキル置換でプロピル連結した四座キレート化合物を形成する。
【０１３４】
【化７０】
0005186075.tif 000042
【０１３５】
予め還元した９９ｍＴＣ−グルコヘプトネート前駆体からのテクネチウム−９９ｍの金属交換反応によってテクネチウム−９９ｍで標識した錯体（実施例１４）を合成した（模式図２）。７０℃にて反応混合物を加熱して、ＡＡＤＴ配位子を持つペンダント第３級アミンと９９ｍＴｃ（Ｖ）−グルコヘプトネート前駆体の配位子交換により３０分以内にほぼ定量的な収量にて、錯体Ｔｃ−（錯体Ａ〜Ｄ及びＨ〜Ｍ）を得た。９９ｍＴｃ−錯体の典型的な質量によって物理的な特性分析が省かれるが、テクネチウムとレニウムの双方は、構造的に同一のＡＡＤＴ錯体を形成するので、相似の非放射性レニウム錯体を合成し、ＨＰＬＣの比較のために代用物として用いた。同一のＨＰＬＣ保持時間によって画策したテクネチウム−９９ｍ種の存在が確証された。
【０１３６】
【化７１】
0005186075.tif 000043
【０１３７】
９９ｍＴｃ−錯体と同様の方法を用いて、グルコヘプトネートナトリウムの存在下、塩化スズによるペルレネート（ＶＩＩ）の還元によってモノ−オキソレニウム（Ｖ）錯体（実施例１６〜２４）を得、キレート配位子を脱保護し；反応混合物を７５℃で１時間加熱することにより茶紫色の固形物のレニウム錯体を得た。このような錯体は、９５０〜９６０ｃｍ−１の領域にて明瞭なυＲｅ＝０の赤外線振動を示し、それはモノ−オキソレニウム錯体に典型的であった。キレートの際、キレート化合物上のＮ−置換基は、非対称性のＭ＝Ｏコアに関してシン又はアンチの構造を取り入れてもよい。Ｍ＝Ｏコアの脱遮蔽性で異方性の環境及び非対称性オキソ金属コアにシン構造のＮ−置換基の接近によって、Ｍ＝Ｏコアに対してシンのプロトン共鳴の低磁場へのシフトを生じ、従って、ＮＭＲを介してシンとアンチのジアステレオマーの識別ができる（Lever S.Z., Baidoo K.E., Mahmood A, 「テクネチウムのＮ−アルキル化ジアミンジチオール（ＤＡＤＴ）錯体におけるシン／アンチ異性化現象の構造的証拠」、Inorg. Chem. Acta., 176:183-184, 1990; Francesconi LC, Graczyk G, Wehrli S, Shaikh SN, McClinton D, Liu S, Zubieta J, Kung HF, 「ペンダントフェニルピペリジン基を含有する中性のＭＶＯ（Ｍ＝Ｔｃ、Ｒｅ）アミン−チオール錯体の合成及び特性分析」、Inorg. Chem., 32:3114-3124, 1993; O'Neil JP, Wilson SR, Katzenellenbogen JA, 「テクネチウム（Ｖ）及びレニウム（Ｖ）のモノアミン−モノアミドビス（チオール）オキソ錯体の調製及び特性分析」、Inorg. Chem., 33:319-323, 1994; 並びにPelecanou M, Chryssou K, Stassinopoulou CI, 「アミンチオールを持つＴｃＯ（Ｖ）及びＲｅＯ（Ｖ）のＮＭＲ化学シフト及び配位子移動度の傾向」、J. Inorg. Biochem., 79:347-351, 2000)。例えば、Ｒｅ−化合物Ａの錯体の１Ｈ  ＮＭＲにおいて、Ｎ−置換基（Ｃ７）のメチレンのプロトンが
４．５５及び４．０６ｐｐｍの低磁場にて２つの別々の多重項（二重項の二重項）として出現するということは、Ｎ−置換基のシン構造を示している。この共鳴パターンはまた、合成した錯体すべてに認められた。シン構造のさらなる裏付けは、Ｒｅ−化合物Ａの結晶構造の測定によって得られる。予想通り、構造は歪んだ四角のピラミッド型を表し、アミン−アミド−ジチオール供与体セットは底面を形成し、オキソ基は四角いピラミッドの頂点を形成していた（図１）。レニウム原子はＡＡＤＴ底面のやや上方にある。Ｃ２アルキル鎖によって接続されるペンダント第３級アミン基は、Ｍ＝Ｏコアに対してシンに配向して見い出された。選択した結合の長さ及び角度を表１に列記する。キレート化合物の置換アミンにおける立体発生性中心の存在のために幾何的なシン異性体のみが形成されたが、このような錯体は２つの画像の鏡像異性体の対として存在する。物理化学的パラメータ（下記参照）のほとんどは個々の鏡像異性体については有意に異なることはないと予想されるので、それらをさらに分離することなく、そのものとして用いた。
【０１３８】
レニウム錯体の物理化学的パラメータ、すなわち、親油性  ｌｏｇＰ、ｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）及びｐＫａ（表２）は、ＨＰＬＣ法を用いて決定した（Braumann T, Grimme LH,「液体−液体分配及び逆相高速液体クロマトグラフィによるピリダジノン除草剤の疎水性パラメータの測定」、J. Chromatogr., 206:7-15, 1981; Stylli C, Theobald AE, 「混合溶媒における放射性医薬のイオン化定数のＨＰＬＣによる測定」、Appl. Radiat. Isot., 38:701-708, 1987; Joannsen B, Scheunemann M, Spies H, Brust P, Wober J, Syhre R, Pietzsch HJ, 「５−ＨＴ２Ａセロトニン受容体結合のためのテクネチウム（Ｖ）及びレニウム（Ｖ）錯体：構造−親和性の考察」、Nucl. Med. Biol., 23:429-438, 1996; 並びにJohannsen B, Berger R, Brust P, Pietzsch HJ, Scheunemann M, Seifert S, Spies H, Syhre R, 「脳における取り込みを改善するための受容体結合性のテクネチウム−９９ｍ錯体の構造的改変」、J. Nucl. Med., 24:316-319, 1997)。予想通り、１．６のｌｏｇＰを有するジエチルアミン含有錯体Ｒｅ−化合物Ａ（Ｃ２連結）に比べて、Ｒｅ−化合物Ｂ（Ｃ２連結）におけるジブチルアミン基は３．３という高いｌｏｇＰを示している。Ｒｅ−化合物Ｂにおけるジブチル基はＲｅ−化合物Ａに比べて通常、さらに塩基性のアミン部分となるが、双方の錯体は、ｐＫａ＝７．７を有する。ｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）は、ｌｏｇＰとｐＫａの複合的尺度なので、Ｒｅ−化合物ＢのｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）（１．９）も、Ｒｅ−化合物Ａのそれ（１．１）よりも高い。似たようなｌｏｇＰの差異は、Ｃ３連結の錯体Ｒｅ−化合物ＣとＲｅ−化合物Ｄにも認められた。しかしながら、Ｒｅ−化合物Ａ及びＲｅ−化合物Ｂとは異なって、ジブチルアミン錯体Ｒｅ−化合物Ｄは、ジエチルアミン錯体Ｒｅ−化合物Ｃの９．２に比べてやや高い９．５のｐＫａを生じる。Ｃ３連結の錯体Ｒｅ−化合物Ｃ及びＲｅ−化合物ＤのｌｏｇＰは
、Ｃ２連結の類似のＲｅ−化合物Ａ及びＲｅ−化合物Ｂよりもそれぞれやや低い。錯体は、ｐＨ７．４においてプロトン化形態で存在するので、Ｒｅ−化合物Ｃ及びＲｅ−化合物Ｄに対する＞９のｐＫａ値と共に生じる−０．５（Ｒｅ−化合物Ｃ）及び０．７（Ｒｅ−化合物Ｄ）の低いｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）値は意外ではない。
【０１３９】
【化７２】
0005186075.tif 000044
【０１４０】
式ＩＩＩ及びＩＶに基づいた化合物は、模式図３に概略されるように合成する。トリチル保護されたシステインエチルエステル、及び「核医学におけるテクネチウム及びレニウム４」（Nicolini M, Bandoli G, Mazzi U編、Verona Cortina International）（１９９５年）の２１１〜２１５ページのＭａｈｍｏｏｄ  Ａ，Ｗｏｌｆｆ  ＪＡ，Ｄａｖｉｓｏｎ  Ａ，Ｊｏｎｅｓ  ＡＧ著の「アミンアミドジチオール配位子のテクネチウム及びレニウム錯体：配位子の合成及び金属錯体」及びそこで引用される参考文献に記載されるような元来のＡＡＤＴ配位子を合成するのに用いられたものに類似する方法を用いて合成する。文献はすべて参考として本明細書に組み入れられる。２−クロロエチル−ジエチルアミンのようなハロ置換の第３級アミンでＡＡＤＴのエチルエステル誘導体をアルキル化し、実施例に記載されるようにＫ２ＣＯ３とＫＩの存在下アセトニトリル中で２４〜３６時間、反応物質を還流する。
【０１４１】
還元条件に対して安定である４−メトキシベンジル基を含むが、これに限定されない好適なチオール保護基によって式ＩＩに基づいた化合物を先ず保護し、次いで過剰の還元剤（通常、ＢＨ３のようなボラン類、ＬｉＡｌＨ４のような水素化アルミニウムなど）の存在下、チオール保護された化合物をＴＨＦ中で還流することにより前記化合物を還元することによってその他の誘導体を合成した。実施例１１及び１２を参照のこと。このような誘導体を２−ブロモエチルアセテートによりさらにアルキル化し、式Ｉの追加の化合物を得ることができる。
【０１４２】
あるいは、２−クロロ−エチル−ジエチルアミン又は２−クロロエチルジブチルアミンのようなハロ置換第３級アミンによる非置換型ＡＡＤＴキレート化合物のアルキル化という合成ルートもある。アルキル化の双方の手順には、実施例に記載されるようにＫ２ＣＯ３とＫＩの存在下、アセトニトリル中で２４〜３６時間、反応物質を還流することが関与する。
【０１４３】
模式図４に説明されているように、以前我々が合成した（「化学及び核医学におけるテクネチウム及びレニウム  ５」（Nicolini M, Bandoli G, Mazzi U,編、Padova Servizi Grafici Editoriali、１９９９年）の７１〜７６ページのMahmood A, Kuchma, MH, Goldstone J, Morse C, Davison A, Jones AG, 著の「固相合成のための四座キレート化合物：溶液及び固相における評価。テクネチウム−９９ｍ錯体の特性分析」）ＡＡＤＴキレート化合物のペンタクロロフェニル活性型エステルを用いてアミノ連結ジアルキル置換の配位子を合成した。第３級アミン塩基の存在下、活性型エステルの撹拌している溶液にＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミンを添加すると、２時間以内にほぼ定量的な収量にて生成物の形成を生じる。
【０１４４】
【化７３】
0005186075.tif 000045
【０１４５】
実施例１
Ｎ−［（２−ジエチルアミノエチル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（トリフェニル−メチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエタン」−チオール、［ＡＡＤＴ−（Ｔｒｔ）２−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２］（化合物Ａ）
Ｎ−（２−ジエチルアミノ）エチルクロリド（６８．８ｍｇ、０．４ミリモル）、ＡＡＤＴ−（Ｔｒｔ）２（２５２ｍｇ、０．４ミリモル）、ＫＩ（１９９．２ｍｇ、１．２ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（２７６．４ｍｇ、２ミリモル）を５０ｍＬのＣＨ３ＣＮに加え、アルゴン雰囲気下で２４時間還流する。室温に冷却した後、無機塩をろ過し、ろ液を乾燥するまで蒸発させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２に再溶解し、塩基性（ｐＨ１１）水溶液で抽出した。ＣＨ２Ｃｌ２部分ができるだけ少なくなるまで蒸発させ、以下の溶出順：１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２、２００ｍＬの１％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２及び２００ｍＬの２％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２ＴＬＣ（ＳｉＯ２）：７％ＮＨ３／ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ中の５％ＮＨ４ＯＨ）／９３％ＣＨ２Ｃｌ２にてシリカゲルカラムでクロマト分画した。生成物は黄色っぽい粘性の油状物（収率、４２％）として得られた。
１H NMR (CDC1３)δ7.946 (t, 1H, NH), 7.4357−7.208 (m, 30H, Ar), 3.116−3.077 (q, 2H, CH２), 2.94 (s, 2H,CH２CO), 2.52−2.45 (m, 10H, Alkyl) 2.403 (t, 2H, CH２), 2.295 (t, 2H, CH２), 0.977 (t,6H, CH３); Mass Spec (MW = 777.4) observed 778 (M+H)＋Anal(C５０H５５N３OS２)・l/2H２0 calcd (found): C, 76.29 (76.10); H, 7.17 (7.04); N, 5.33(5.34).
【０１４６】
実施例２
Ｎ−［（２−ジブチルアミノエチル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエチレンチオール［ＡＡＤＴ−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２］（化合物Ｂ）
この化合物は、Ｎ−（２−ジエチルアミノ）エチルクロリドに対して、Ｎ−（２−ジブチルアミノ）エチルクロリド（０．４０１ミリモル）が置き換えられたことを除いて、実施例１と同様の手順で調製された。７％メタノールＮＨ３（ＭｅＯＨ中で５％ＮＨ４ＯＨ）９３％ＣＨ２Ｃｌ２で展開されたシリカゲルＴＬＣプレートにて精製を行った。生成物は黄色っぽい粘性の油状物（収率、３８％）として得られた。
１H NMR (CDC1３)δ7.829−7.745 (s, 1H, NH), 7.440−7.350 (m, 12H, Ar), 7.295−7.242 (m, 12H, Ar), 7.230−7.100 (m, 6H, Ar), 3.090−3.035 (q, 2H, −CH２), 2.929 (s, 2H, −CH２CO), 2.540−2.300 (m, 12H, −CH２−), 2.297−2.265 (m, 2H, −CH２−), 1.360 (brs, 4H, −CH２−), 1.285−1.220 (m, 4H,−CH２−), 0.894 (t, 6H,−CH３); Mass Spec (MW ＝ 833.2)observed 834 (M+H)＋. Anal(C５４H６３N３OS２)calcd (found): C, 77.75 (77.03); H, 7.61 (7.62); N, 5.04 (5.03).
【０１４７】
実施例３
Ｎ−［（３−ジエチルアミノプロピル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエタンチオール、［ＡＡＤＴ−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２］（化合物Ｃ）
「化学及び核医学におけるテクネチウム、レニウム及びその他の金属  ５」（Nicolini M, Mazzi U,編、Padova Servizi Grafici Editoriali、１９９９年）の２５３〜２５７ページのＭａｈｍｏｏｄ  Ａ，Ｋｕｃｈｍａ  ＭＨ．，Ｆｒｅｉｂｅｒｇ  Ｅ，Ｇｏｌｄｓｔｏｎｅ  Ｊ，Ｄａｖｉｓｏｎ  Ａ，Ｊｏｎｅｓ  ＡＧ著の「官能化された四座キレート化合物及びそのテクネチウム−９９とレニウムの錯体：合成、分光分析及び構造的特性分析」で記載される方法に基づいて調製されるＡＡＤＴ−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃｌ、化合物Ｅ（３１０ｍｇ、０．４ミリモル）、ジエチルアミン（５９．９ｍｇ、０．４ミリモル）、ＫＩ（３４０．１ｍｇ、２．１ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（１４１．７ｍｇ、１．０ミリモル）を５０ｍＬのＣＨ３ＣＮに加え、溶液を２４時間還流した。３％メタノールＮＨ３（ＭｅＯＨ中の５％ＮＨ４Ｃｌ）９７％ＣＨ２Ｃｌ２を用いたシリカゲルのクロマトグラフィによって生成物を精製し、黄色っぽい油状物（収率、７２％）を得た。
１H NMR (CDC1３)δ7.535−7.500 (m, 1H, -NH),7.465−7.380 (m, 12H, Ar), 7.330−7.250 (m, 12H, Ar), 7.250−7.190 (m, 6H, Ar), 3.100−3.020 (q, 2H, −CH２−), 2.896 (s, 1H,−CH２CO), 2.600−2.520 (m, 4H,−CH２−),2.500−2.400 (m, 6H, −CH２−), 2.410−2.340 (m, 2H, −CH２−), 2.325−2.226 (m, 2H, −CH２−), 1.620−1.540 (m, 2H, −CH２−), 1.025 (t, 6H, −CH３); Mass Spec (MW = 791.4) observed 792 (M+H)＋. Anal (C５１H５７N３OS２)・1/2H２O calcd (found): C, 76.5 (76.65);H, 7.3 (7.24); N, 5.24 (5.30).
【０１４８】
実施例４
Ｎ−［（３−ジブチルアミノプロピル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエタンチオール、［ＡＡＤＴ−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２］（化合物Ｄ）
ジブチルアミン（１４９．９ｍｇ、１．２ミリモル）、ＡＡＤＴ−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃｌ（５８４ｍｇ、０．８ミリモル）、ＫＩ（６６４ｍｇ、４ミリモル）及びＫ２ＣＯ３（５５２．８ｍｇ、４．０ミリモル）をアルゴンを飽和した５０ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解し、２４時間還流した。４％のＣＨ３ＯＨ／９６％のＣＨ２Ｃｌ２、続いて１０％ＣＨ３ＯＨ／９０％ＣＨ２Ｃｌ２を溶出液として用い、シリカゲルクロマトグラフィによって、黄色っぽい油状物として生成物を精製した（収率、７８％）。
１H NMR (CDC1３)δ7.460−7.440 (m, 1H,−NH), 7.410−7.360 (m, 12H, Ar), 7.300−7.180 (m, 18H, Ar), 3.040−3.010 (q,2H, −CH２), 2.893 (s, 2H, −CH２−), 2.650−2.295 (m, 13H, −CH２−), 1.900−1.380 (m, 7H, −CH２−), 1.330−.1.250 (m, 4H, −CH２−), 0.914 (t, 6H, −CH３); Mass Spec (MW = 847.5) observed 848 (M+H)＋. Anal (C５５H６５N３OS２)・1/2H２O calcd (found): C, 77.06 (77.08); H, 7.75 (7.81); N, 4.90 (5.11).
【０１４９】
実施例５
Ｎ−（３−クロロプロピル）−Ｎ−［２−（２−（（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエタンチオール、（化合物Ｅ）
この化合物は、「化学及び核医学におけるテクネチウム及びレニウム  ５」（Nicolini M, Bandoli G, Mazzi U,編、Padova、イタリア、１９９８年）の２５３〜２５７ページのＭａｈｍｏｏｄ  Ａ，Ｋｕｃｈｍａ  Ｍ，Ｆｒｅｉｂｅｒｇ  Ｅ，Ｇｏｌｄｓｔｏｎｅ  Ｊ，Ｄａｖｉｓｏｎ  Ａ，Ｊｏｎｅｓ  ＡＧ著の「官能化された四座キレート化合物及びそのテクネチウム−９９とレニウムの錯体：合成、分光分析及び構造的特性分析」で記載されているように合成した。
【０１５０】
実施例６
Ｎ−（２−ペンタクロロフェニル  アセテート）−Ｎ−［２−（２−（（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエタンチオール、（化合物Ｆ）
この化合物は、「化学及び核医学におけるテクネチウム及びレニウム  ５」（Nicolini M, Bandoli G, Mazzi U,編、SG Editoriali, Padova、イタリア、１９９９年）の７１〜７６ページのＭａｈｍｏｏｄ  Ａ，Ｋｕｃｈｍａ  Ｍ，Ｇｏｌｄｓｔｏｎｅ  Ｊ，Ｍｏｒｓｅ  Ｃ，Ｄａｖｉｓｏｎ  Ａ，Ｊｏｎｅｓ  ＡＧ著の「固相合成のための四座キレート化合物：溶液及び固相における評価。テクネチウム−９９錯体の特性分析」に記載されているように合成した。
【０１５１】
実施例７
２−［［（２−ジエチルアミノ−エチルカルバモイル）−メチル］−（２−トリチルスルファニル−エチル）−アミノ］−Ｎ−（２−トリチルスルファニル−エチル）−アセトアミド、（化合物Ｈ）
１１８．２ｍｇ（０．１２０ミリモル）の活性化エステル基を持つＡＡＤＴ配位子（化合物Ｆ、実施例６）、１４．６ｍｇ（０．１２０ミリモル）のＮ，Ｎ−ジエチルエチレンジアミン、及び１５．５ｍｇ（０．１２０ミリモル）のエチル−イソプロピルアミンを８ｍｌのジクロロメタンに溶解し、室温にて１時間撹拌した。
【０１５２】
揮発性物質を減圧下で取り除き、ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（９９：１）を用いたＴＬＣプレート（シリカゲル）にて粗生成物を精製し、やや黄色っぽい沈殿物を得た。収率：９４％。
１H NMR (CDC1３, ppm): 7.45−7.38(m,12H,Ar), 7.32−7.18(m,18H,Ar), 7.07(m,2H,NH), 3.272(q,2H,), 3.439(q,2H,), 2.964(s, 2H), 2.957(s, 2H), 2.58−2.45(m,8H), 2.425(m,2H), 2.317(m,2H), 0.961(t,6H). Mass Spec (ES＋  ):Mol. Wt. for C５２H５８N４O２S２: 834.4, Found 835.5(M+H)＋.
【０１５３】
実施例８
Ｎ−［（２−ジエチルアミノエチル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−２−アミノ−３−（トリフェニルメチル）チオ−プロピオン酸エチルエステル、［エチルエステル−ＡＡＤＴ−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｎ（Ｃ４Ｈ９）２］（化合物Ｉ）
ＡＡＤＴキレート配位子が模式図３に概略された合成方法によって調製されることを除いて、この化合物は、実施例１と同様の手順で調製した。
１H NMR (CDC1３, ppm): 7.881(m,1H,NH), 7.5−7.32(m,12H,Ar), 7.32−7.12(m,18H,Ar), 4.33(q,1H,), 4.09(q, 2H), 2.965(d,2H), 2.599(d,2H), 2.56−2.4(m,9H), 2.33(m,3H), 1.2(t,3H) 0.96(t,6H). Mass Spec (ES＋  ):Mol. Wt. for C５３H５９N３O３S２: 849.4 Found:850.4(M+H)＋.
【０１５４】
実施例９
Ｎ−［（２−ピペリジニルエチル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエタンチオール、［ＡＡＤＴ−Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ピペリジニル］（化合物Ｊ）
１H NMR (CDC1３, ppm): 7.81(m,1H,NH), 7.48−7.34(m,12H,Ar), 7.32−7.18(m,18H,Ar), 3.06(q,2H,), 2.89(s, 2H), 2.52−2.36(m,7H), 2.34−2.18(m,7H), 1.6−1.3(m,6H). Mass Spec (ES＋  ):Mol. Wt. for C５１H５５N３OS２: 789.38, Found:790.3(M+H)＋.
【０１５５】
実施例１０
Ｎ−［（２−モルフォリニルプロピル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（トリフェニルメチル）チオ）エチル）アミノ）アセチル］−Ｓ−（トリフェニルメチル）−２−アミノエタンチオール、［ＡＡＤＴ（Ｔｒｔ）２−（ＣＨ２）３−モルフォリン］（化合物Ｋ）
この化合物は、模式図１に概略された手順によって調製され、その際、１−ブロモ−３−クロロ−プロパンによってＡＡＤＴ配位子をアルキル化し、次いで実施例３及び４に類似する方法においてモルフォリンでアミン化する。
１H NMR (CDC1３, ppm): 7.46(1H,NH), 7.44−7.34(m,12H Ar), 7.3−7.18(m,18H,Ar), 3.63(m,4H), 3.022(q,2H), 2.85(s,2H), 2.2.5−2.18(m,14H), 1.519(m,2H). Mass Spec(ES＋): Mol. , Wt. for C５１H５５N３O２S２: 805.37, Found: 806.7(M+H)＋.
【０１５６】
実施例１１
Ｎ−［（２−モルフォリニルプロピル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（４−メトキシベンジル）チオ）エチル）アミノ）エチル］−Ｓ−（４−メトキシベンジル）−２−アミノエタンチオール、［ＤＡＤＴ（４−ＭｅＯＢｚｌ）２−（ＣＨ２）３−モルフォリン］（化合物Ｌ）
アミノ−アミド−ジチオールをジアミノ−ジチオールキレート化合物に変換するジアミノ−ジチオキレート化合物の合成（模式図３、すなわち、還元工程）は、「化学及び核医学におけるテクネチウム及びレニウム  ５」（Nicolini M, Bandoli G, Mazzi U,編、Servizi Grafici Editoriali, Padova、イタリア、１９９９年）の３９３〜３９９ページのＭａｈｍｏｏｄ  Ａ，Ｋｒｏｎａｕｇｅ  ＪＦ，Ｂｒａｂａｒｉｃｓ  Ｅ，Ｍａｄｒａｓ  ＢＫ，Ｆｒｅｉｂｅｒｇ  Ｅ，Ｌｉ  Ｊ，Ｄａｖｉｓｏｎ  Ａ，Ｊｏｎｅｓ  ＡＧ著の「ＷＡＹ１００６３５  ５ＨＴ１ａ受容体結合錯体のテクネチウム（Ｖ）及びレニウム（ｖ）類縁体」に記載されている。
トリチル保護基が４−メトキシベンジル保護基で置き換えられているＡＡＤＴ（ＭｅＯＢｚｌ）２−（ＣＨ２）３−モルフォリン、化合物Ｋ（０．６９５ｇｍ、１．２３ミリモル）をアルゴン雰囲気下２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。この溶液に５０ｍＬの１ＭのＢＨ３／ＴＨＦ溶液を加え、アルゴンのもとで混合物を３６時間還流した。次いで、気体の発生が止まるまでメタノール：ＨＣｌ（濃）の５０：５０溶液をゆっくり加えることにより溶液の反応を止めた。次いで、溶液を３０分間５０℃にて加熱し、室温に冷却して１ＭのＮａＯＨで中和した。次いで、回転エバポレータにて有機物を蒸発させ、残っている水性混合物を塩化メチレンで抽出した（５０ｍＬで３回）。塩化メチレン抽出物を濃縮して淡黄色の油状物を得た。６％のメタノールＮＨ３（メタノール中１ＭのＮＨ３）／９４％ＣＨ２Ｃｌ２で溶出してシリカゲルクロマト分画により生成物を精製し、淡黄色の油状物を得た（収率、３４．８％）。
１H NMR (CDC1３, ppm): 7.2 (d, 4H, Ar), 6.82 (d, 4H, Ar), 3.76 (s, 6H, OＣＨ３), 3.72−3.55 (m, 8H), 3.2−2.7 (m, 4H), 2.7−2.2 (m, 16H), 1.6 (m, 2H). Mass Spec (ES＋): Mol. Wt. for C２９H４５N３O３S２: 547.29, Found: 548.1 (M+H)＋.
【０１５７】
実施例１２
Ｎ−［（２−ジエチルアミノエチル）−Ｎ−（２−（２−（Ｓ−（４−メトキシベンジル）チオ）エチル）アミノ）エチル］−Ｓ−（４−メトキシベンジル）−２−アミノエタンチオール、［ＤＡＤＴ（４−ＭｅＯＢｚｌ）２−（ＣＨ２）２−ＮＥｔ２］（化合物Ｍ）
トリチル保護基が４−メトキシベンジル保護基で置き換えられたＡＡＤＴ（ＭｅＯＢｚｌ）２−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｅｔ）２、化合物Ａ（０．８１０ｇｍ、１．５１ミリモル）をアルゴン雰囲気下、２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。この溶液に７０ｍＬの１ＭのＢＨ３−ＣＳ２／ＴＨＦ溶液を加え、アルゴンのもと、混合物を３６時間還流した。次いで、気体の発生が止まるまでメタノール：ＨＣｌ（濃）の５０：５０溶液をゆっくり加えることにより溶液の反応を止めた。次いで、溶液を３０分間６５℃にて加熱し、室温に冷却して１ＭのＮａＯＨで中和した。次いで、回転エバポレータにて有機物を蒸発させ、残っている水性混合物を塩化メチレンで抽出した（５０ｍＬで３回）。塩化メチレン抽出物を濃縮して淡黄色の油状物を得た。７％のメタノールＮＨ３（メタノール中１ＭのＮＨ３）／９３％ＣＨ２Ｃｌ２で溶出してシリカゲルクロマト分画により生成物を精製し、淡黄色の油状物を得た（収率、５７．３％）。
１H NMR (CDC1３, ppm): 7.25 (d, 4H, Ar), 6.85 (d, 4H, Ar), 3.808 (s, 6H,OCH３), 3.69 (m, 4H), 3.2−2.4 (m, 20H), 1.026 (t, 6H). Mass Spec (ES＋): Mol. Wt. for C２８H４５N３O２S２: 519.3, Found: 520.2 (M+H)＋.
【０１５８】
実施例１３
トリチル保護されたチオール基の脱保護に関する一般的手順
６．０ｍｇのビストリチル保護ＡＡＤＴ配位子を３ｍｌのトリフルオロ酢酸に溶解し、室温にて５分間撹拌した。黄色っぽい反応混合物が無色になるまで水素化トリエチルシリルを１〜２滴加えた。
溶媒を完全に蒸発させ、残留物を一晩真空下に置いた。
［９９ｍＴｃ］及びレニウムを標識した錯体の合成は、模式図２に概略する。
【０１５９】
実施例１４
テクネチウム−９９ｍの標識
反応を６０〜７５℃にて４５分間加熱することによって、必要とされる活性の９９ｍＴｃ−グルコヘプトネートで交換標識された、０．５ｍｌのリン酸緩衝液（０．００５Ｍ、ｐＨ＝７．５）に溶解した１．０ｍｇのチオール脱保護配位子（化合物Ａ〜Ｄ、Ｆ又はＨ〜Ｍ）を用いてテクネチウム−９９ｍの標識を行った。テクネチウム−９９ｍ標識された錯体のＨＰＬＣによる評価は、８０〜９５％の放射性化合物の収率を示した。
特性分析したレニウム錯体と類似するテクネチウム−９９ｍ錯体の同時注入は、相当するＵＶ活性のレニウム錯体を伴った放射性種の共溶出を示した。
【０１６０】
実施例１５
レニウム錯体化に関する一般的手順
０．２５ｍｌのアニソールと１０ｍｌのトリフルオロ酢酸にビストリチル保護した配位子（化合物Ａ〜Ｄ又はＨ〜Ｋ）（１００ｍｇ、０．１ミリモル）を溶解した。得られた黄色の溶液を５分間撹拌し、次いで無色になるまで水素化トリエチルシリルを滴下した。溶液を蒸発させ、残った残留物が完全に乾燥するまで真空に置いた。メトキシベンジル保護したチオール基の脱保護について公知のＨｇ（ＯＡｃ）２Ｈ２Ｓ常法を用いて化合物Ｌ及び化合物Ｍを脱保護した。予めアルゴンで飽和した水中にて５ｍｌの２０％ＭｅＯＨに脱保護した化合物を再溶解した。この溶液にＮａＲｅＯ４（３０ｍｇ、０．１ミリモル）とＮａ−グルコヘプトネート（５５ｍｇ、０．２２ミリモル）の水溶液、撹拌しながら固形のＳｎＣｌ２（２１ｍｇ、０．１１ミリモル）を加えた。溶液は、茶紫色に変わり始めた。反応混合物のｐＨを７に調整し、反応を７５℃で１時間加熱した。次いで、溶液を室温に冷却し、ｐＨを８に調整し、その後ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。ＣＨ２Ｃｌ２抽出物を濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２中４％のＭｅＯＨで溶出してシリカゲルでクロマト分画し、淡紫色の固形物として所望の生成物を得た。
【０１６１】
実施例１６
［ＲｅＯＡＡＤＴ］−Ｃ２−ＮＥｔ２（Ｒｅ−化合物Ａ）  収率：７４．４％
１H NMR (CDC1３)δ 4.943 (d, 1H,−CH２CO), 4.554 (dd, 1H, −CH２), 4.248 (d, 1H,−CH２CO), 4.065 (dd,1H, −CH２), 3.993 (m, 1H,−CH２), 3.639 (m, 1H, −CH２), 3.532 (dd, 1H, −CH２), 3.419 (ddd, 1H,−CH２), 3.212 (ddd, IH, −CH２), 3.160 (ddd, 1H,−CH２), 2.868 (dd, 2H, −CH２),2.795 (m, 1H,−CH２), 2.570 (m, 4H,−CH２), 1.579 (ddd, 1H,−CH２), 1.060 (t, 6H,−CH３); IR υＲｅ＝０= 952 cm−１; Mass Spec (MW = 493.1) observed 494 (M+H)＋. Anal(C１２H２４N３O２ReS２)calcd (found)C, 29.3 (29.5); H, 4.9 (5.1); N, 8.5 (8.4); S, 13.0(12.6).
【０１６２】
実施例１７
［ＲｅＯＡＡＤＴ］−Ｃ２−ＮＢｕ２（Ｒｅ−化合物Ｂ）  収率：１５％
１H NMR (CDC1３):δ 4.963 (d, 1H,−CH２CO), 4.582 (dd, 1H,−CH２), 4.209 (d, 1H,−CH２CO), 4.089 (dd,1H,−CH２), 3.975 (m, 1H,−CH２), 3.646 (m, 1H,−CH２), 3.492 (d, 1H, −CH２), 3.426 (m, 1H, −CH２), 3.264 (m, 1H,−CH２), 3.180 (m, 1H, −CH２), 2.899 (m, 2H, −CH２), 2.805(m, 1H, −CH２), 2.464 (m, 4H, −CH２), 1.606 (m, 1H, −CH２), 1.450 (m, 4H, −CH２), 1.336 (m, 4H, −CH２), 0.943 (t, 6H, −CH３); IRυＲｅ＝０= 958 cm−１; Mass Spec (MW =549.1)observed 550 (M+H)＋. Anal (C１６H３２N３O２ReS２)calcd (found) C, 35.0 (34.9);H, 5.9 (5.7); N, 7.7 (7.7); S, 11.6 (11.9).
【０１６３】
実施例１８
［ＲｅＯＡＡＤＴ］−Ｃ３−ＮＥｔ２（Ｒｅ−化合物Ｃ）  収率：７０．４％
１H NMR (CDC1３)δ 4.694 (d, 1H, −CH２CO), 4.567 (dd, 1H, −CH２), 4.113 (d, 1H, −CH２CO), 4.081 (dd, 1H,−CH２), 4.000 (ddd, 1H, −CH２), 3.610 (ddd, 1H, −CH２), 3.399 (ddd, 1H, −CH２), 3.239 (m, 2H,−CH２), 3.184 (4d, 1H, −CH２), 2.866 (dd, 1H,−CH２), 2.555 (m, 4H, −CH２), 2.496 (m, 2H, −CH２), 1.921 (m, 2H, −CH２), 1.614 (ddd, 1H, −CH２), 1.030 (t, 6H, −CH３); IRυＲｅ＝０= 955 cm−１; Mass Spec (MW = 507.1) observed 508 (M+H)＋. Anal (C１３H２６N３O２ReS２)calcd(found)C,30.8(30.7);H,5.2(5.0);N,8.3(8.6);S, 12.6 (12.3).
【０１６４】
実施例１９
［ＲｅＯＡＡＤＴ］−Ｃ３−ＮＢｕ２（Ｒｅ−化合物Ｄ）  収率：１２．４％
１H NMR (CDC1３)δ 4.698(d,1H,−CH２CO), 4.564(dd,1H,−CH２), 4.122(d,1H,−CH２CO), 4.071(dd,1H,−CH２), 3.985(ddd,1H,−CH２), 3.624(ddd,1H,−CH２), 3.351(ddd,1H,−CH２), 3.268(m,2H,−CH２), 3.202(4d,1H,−CH２), 2.875(dd,1H,−CH２), 2.525(m,4H,−CH２), 2.512(m,2H,−CH２),1.974(m,2H,−CH２), 1.645(ddd,1H,−CH２),1.389(m,4H,−CH２), 0.94(t,6H,−CH３); IRυＲｅ＝０= 564 cm−１; Mass Spec(MW=563.2) observed 564(M+H)＋. Anal (C１７H３４N３O２ReS２)calcd(found)C, 36.2(36.3); H,6.1(6.2); N,7.5(7.8);S,11.4(11.5).
【０１６５】
実施例２０
［ＲｅＯ（エチルエステル−ＡＡＤＴ）］Ｃ２−Ｎ（Ｅｔ）２（Ｒｅ−化合物Ｉ）
【０１６６】
【化７４】
0005186075.tif 000046
シンＲｅ−化合物Ｉ：
【０１６７】
１H NMR (CDC1３, ppm): 5.35(d,1H), 4.904(d,1H), 4.43(d,1H), 4.39(d,1H), 4.15−4.8 (m,3H), 3.65 (m,1H), 3.59−3.4(m,3H),2.84(m,3H),2.59(q,4H)1.87(ddd,1H),1.21(t,3H),1.08(t,6H)Mass Spec (ES＋): Mol. Wt. for C１５H２８N３O４ReS２: 565.1, Found: 566.00(M+H)＋.
【０１６８】
【化７５】
0005186075.tif 000047
アンチＲｅ−化合物Ｉ：
【０１６９】
１H NMR (CDC1３, ppm):5.1(d,IH),4.4−4.18(m,4H),3.975(d,1H),3.7−3.74(m,2H),3.65−3.2(m,3H), 3.15−2.85(m,3H),2.8−2.45(m,4H),1.785(ddd,1H),1.3(t,3H), 1.103 (t, 6H). Mass Spec (ES＋): Mol. Wt. for C１５H２８N３O４ReS２: 565.1, Found : 566.0 (M+H)＋
【０１７０】
実施例２１
［ＲｅＯＡＡＤＴ］−（ＣＨ２）２−ピペリジン（Ｒｅ−化合物Ｊ）
１H NMR (CDC1３, ppm): 4.88 (d, 1H), 4.567 (m, 1H), 4.28 (d, 1H), 4.073 (m, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 3.56−3.28 (m, 2H), 3.28−3.06 (m, 2H), 2.864 (ddd, 1H), 2.712 (m, 2H), 2.467 (m, 4H).1.7−1.4 (m, 7H). Mass Spec (ES＋): Mol. Wt. for C１３H２４N３O２ReS２: 505.09, Found: 506.0 (M+H)＋.
【０１７１】
実施例２２
［ＲｅＯＡＡＤＴ］−（ＣＨ２）３−モルフォリン（Ｒｅ−化合物Ｋ）
１H NMR (CDC1３, ppm): 4.657 (d, 1H), 4.546 (m, 1H), 4.08 (d, 1H), 4.047 (m, 1H), 4.04−3.88 (m, 1H), 3.76−3.66 (m, 4H), 3.62 (m, 1H), 3.375 (ddd, 1H), 3.3− 3.04 (m,3H), 2.856 (ddd, 1H), 2.52−2.34 (m, 6H), 2.06−1.86 (m, 2H), 1.622 (ddd, 1H).
Mass Spec (ES＋): Mol. Wt. for C１３H２４N３O３ReS２: 521.08, Found: 522.4 (M+H)＋.
【０１７２】
実施例２３
［ＲｅＯＤＡＤＴ］−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｅｔ）２（Ｒｅ−化合物Ｍ）
１H NMR (CDC1３, ppm): 4.3−4.08 (m, 3H), 3.97 (ddd, 1H), 3.7−3.68 (m, 2H), 3.512(ddd, 1H), 3.399 (ddd, 1H), 3.336 (m, 1H), 3.3−3.16 (m, 2H), 3.125−2.9 (m, 3H), 2.826 (dd, lH), 2.8−2.7 (m, 4H), 1.82 (ddd, 1H), 1.156 (t, 6H). Mass Spec (ES＋): Mol.Wt. for C１２H２６N３OReS２: 479.11, Found: 480.3 (M+H)＋.
【０１７３】
実施例２４
Ｒｅ−化合物ＡのＸ線構造決定。Ｘ線結晶解析によって決定された固体状態の構造を図１に示す。式、Ｃ１２Ｈ２４Ｎ３Ｏ２ＲｅＳ２；式量、４９３．１；単位気泡寸法、ａ＝６．８９２９（８）Å；ｂ＝９．８９２６（１２）Å；ｃ＝１２．２５６６（１４）Å；α＝９３．０７４（２）°；β＝９３．７７０（２）°；γ＝１０３．７０６（２）°；密度２．０２５ｍｇ／ｍ３（計算値）；空間群、Ｐ；波長、０．７１０７３Å；反射、３２４６（集めて）、２２６５（別個に）；吸収補正、ψ−スキャンからの半実証；精製；Ｆ２における完全行列の最小２乗法；最終Ｒ指数［Ｉ＞２σ（Ｉ）］、ＲＩ＝０．０５５０、ｗＲ２＝０．１３６１。
【０１７４】
【表１】
0005186075.tif 000048
【０１７５】
実施例２５
生体外腫瘍取り込み試験：  Ｂ１６／Ｆ０マウスメラノーマ細胞における腫瘍細胞の取り込み試験は、３７℃及び４℃にて錯体Ｔｃ−（化合物Ａ〜Ｄ及びＨ〜Ｍ）によって行った。さらに、錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）の腫瘍細胞による取り込みは、もう１つの迅速に分割するＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞株で調べた。
化合物はすべて、３７℃におけるインキュベートの１０分以内に迅速な細胞取り込みを示した（図２〜８）。Ｃ２連結の錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）は、４３％の最大取り込みを有するが、親油性のやや低いＣ３類縁体Ｔｃ−（化合物Ｃ）はさらに高い細胞取り込み６２％を有する。さらに高い親油性を持つジブチル相同体であるＣ３連結の錯体Ｔｃ−（化合物Ｄ）は、最も高いメラノーマ細胞の取り込み、６８％を示すが、相当するＣ２錯体Ｔｃ（化合物Ｂ）類縁体は、試験全体で最も低かった（１２％）。
受動的な拡散から能動的な取り込み成分を区別するために、測定は４℃でも行った。インキュベート温度の３７℃から４℃への低下によって、錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）、錯体Ｔｃ−（化合物Ｃ）及び錯体Ｔｃ−（化合物Ｄ）の取り込みの低下を生じ（図２〜８）、最も親油性の高い錯体Ｔｃ−（化合物Ｄ）が最も少ない差異を示し（２３％低下）、最も親油性の低い錯体Ｔｃ−（化合物Ｃ）が最も大きな差異（７７％低下）を示した。４℃における取り込みの低下が細胞死によるのではなく、代謝の低下によるものであることを確認するために、腫瘍細胞を３７℃にて６０分間、次いで４℃にてインキュベートした；これによって腫瘍細胞による錯体の取り込みは３７℃で観察されたレベルに回復した（表２）。このような所見は、メラノーマ細胞においてこのような化合物の有意な能動的蓄積過程が生じていることを示している。親油性（ｌｏｇＰ及びｌｏｇＤ（ｐＨ７．４））又はこのような錯体の腫瘍細胞による取り込みとの相関を推論するのを困難にしているのは、おそらく３７℃の取り込み過程におけるこの能動的成分の存在である。
【０１７６】
表２．  本発明の錯体及び放射性標識ヨードベンズアミドの腫瘍細胞への取り込み
【０１７７】
【化７６】
0005186075.tif 000049
【０１７８】
【表２】
0005186075.tif 000050
【０１７９】
錯体Ｔｃ−（化合物Ｂ）の生体外の取り込みは、未だ理解されていない理由で予想外に低い。しかしながら、錯体Ｔｃ−（化合物Ｂ）は、４種の錯体の中で最も高いｌｏｇＰ（３．３）を示し、またｐＫａは７．７であり、そのｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）１．９で示されるようにｐＨ７．４にて親油性が極めて高く、それがこの異常な挙動の原因となっている可能性がある。もう１つの分割の速い腫瘍細胞株ＭＣＦ−７における錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）の腫瘍細胞による取り込みはＢ１６／Ｆ０細胞株の４３％に比べて、３７℃にてたった６％の最大取り込みを示すにすぎない（図５）。さらに、錯体Ｔｃ−（化合物Ｃ）は、Ｂ１６メラノーマ細胞株で見られた６２％の最大取り込みに比べて、ＭＣＦ−７細胞株では３７℃にて１７％の最大取り込みを示している（図１３）。
【０１８０】
放射性ヨウ化されたベンズアミドは、種々の腫瘍で発現されているσ受容体に高い親和性を持つことが報告されているので（John, CS, Bowen WD, Saga T, Kinuya S, Vilner BJ, Baumgold J, Paik CH, Reba RC, Neumann RD, Varma VM, McAfee JG, 悪性黒色腫の造影剤：ヨード−１２５（２−ピペリジニルアミノエチル）−４−ヨードベンズアミドの合成、特性分析、生体外の結合及び生体分布、J. Nucl. Med., 34:2169-2175, 1993; John CS, Baumgold J, Vilner BJ, McAfee JG, Bowen WD, シグマ受容体造影剤としての［１２５Ｉ］Ｎ−２−ピペリジニルアミノエチル）−４−ヨードベンズアミド及び関連する類縁体；ヒト悪性黒色腫及びラットＣ６神経膠腫に対する高親和性の結合、J. Labelled Cmpd. Radiopharm., 35:242-244, 1994; Vilner BJ, John CS, Bowen WD, シグマ１及びシグマ２受容体は、多種多様なヒト及びげっ歯類の腫瘍細胞株に発現されている、Cancer Res., 55:408-413, 1995;及びJohn CS, Vilner BJ, Gulden ME, Efange SMN, Langason RB, Moody TW, Bowen WD, ４−［１２５Ｉ］−Ｎ−（Ｎ−ベンジルピペリジン−４−イル）−４−ヨードベンズアミドの合成及び医薬的特性分析：乳癌の画像化の可能性のための高親和性σ受容体リガンド、Cancer Res., 55:3022-3027, 1995)、高親和性のσリガンドとして知られる１，３−ジ−ｏ−トリルグアニジン（ＤＴＧ）の存在下でも腫瘍細胞の取り込み試験を行った。９９ｍＴｃ錯体の取り込み試験の３０分前での腫瘍細胞とＤＴＧ（９０μＭ）との予備インキュベートによって、３７℃にて錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）（２９％未満）、Ｔｃ（化合物Ｃ）（３３％未満）及びＴｃ（化合物Ｄ）（３２％未満）の腫瘍細胞による低い取り込みが得られた（図４）。Ｔｃ−（化合物Ｃ）と阻害剤としてのＤＴＧを用いた３７℃での無処置のＢ１６／Ｆ０細胞で行った追加的な用量依存実験は、錯体の取り込みにおけるＤＴＧの濃度依存性の減少を示している（図３）。錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）、Ｔｃ−（化合物Ｃ）及びＴｃ−（化合物Ｄ）は、それぞれ２１μＭ、４９μＭ及び５２μＭのＤＴＧにて５０％の最大阻害を示す。
【０１８１】
実施例２６
受容体結合試験：  このような９９ｍＴｃ−錯体のメラノーマ細胞による取り込みにおけるσ受容体結合の関与を理解するために、我々はさらに確立されたσ受容体アッセイにおいてこのような錯体の親和性を調べた。構造的に類似した非放射性レニウム錯体Ｒｅ−（化合物Ａ）、Ｒｅ−（化合物Ｃ）及びＲｅ−（化合物Ｄ）を９９ｍＴｃ−錯体に対する代用として用いて、競合的結合アッセイを行い、モルモットの脳細胞膜（σ１受容体）及びラットの肝細胞膜（σ２受容体）への結合を測定し、σ受容体の亜型選択性について評価する一方で、［３Ｈ］−（＋）ペンタゾシン（σ１）及び［３Ｈ］ＤＴＧ／デキストラロルファン（σ２）を高親和性の放射性リガンドとして用いた（Bowen WD, de Costa BR, Hellewell SB, Walker JM, Rice K, ［３Ｈ］−（＋）ペンタゾシン：シグマ−１受容体に対する強力で選択性の高いベンゾモルファンをもとにしたプローブ、Mol. Neuropharmacol., 3:117-126,1993; 及びHellewell SB, Bruce A, Feinstein G, Orringer J. Williams W, Bowen WD, ラットの肝臓及び腎臓は高密度のσ１及びσ２受容体を含有する：リガンド結合及び光親和性標識による特性分析、Eur. J. pharmacol. - Mol. pharmacol. Sect., 268:9-18,1994)。放射性リガンドに対する見かけのＫｄはそれぞれ６．４４±０．５３ｎＭ（σ１）及び２３．７±２．０ｎＭ（σ２）である。４種のＲｅ−錯体、Ｒｅ−（化合物Ａ〜Ｄ）はすべてσ１受容体に対してμＭの親和性を示すにすぎない（表３）。一般に、そのＫｉ（σ１）値は、７．０〜２６．１μＭの範囲である。しかしながら、ヨードベンズアミドと異なって（Eisenhut M, Hull WE, Mohammed A, Mier W, Lay D, Just W, Gorgas K, Lehmann WD, Haberkon U, 高いメラノーマへの取り込みを伴う放射性ヨード化Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−ベンズアミド誘導体：構造−親和性の関係、代謝的運命、及び細胞内局在、J. med. Chem., 43:3913-3922, 2000; 及びJohn CS, Bowen WD, Saga T, Kinuya S, Vilder BJ, Baumgold J, Paik CH, Reba RC, Neumann RD, Varma VM, McAfee JG,  悪性黒色腫の造影剤：ヨード−１２５（２−ピペリジニルアミノエチル）−４−ヨードベンズアミドの合成、特性分析、生体外の結合及び生体分布、J. Nucl. Med., 34:2169-2175,1993）、４種の錯体はすべて、σ１受容体に比べてσ２受容体に対してやや高い親和性を有している（表３）。σ２受容体に対するＫｉ値は０．１８〜２．３μＭの範囲であり、Ｒｅ−（化合物Ｃ）は、σ２受容体亜型に対して１００倍を超える高い親和性を示している。
【０１８２】
表３．オキソレニウム（Ｖ）ＡＡＤＴ錯体に関するｐＫａ、親油性、逆相ＨＰＬＣ保持時間並びにσ−１及びσ−２受容体への親和性
【０１８３】
【化７７】
0005186075.tif 000051
【０１８４】
【表３】
0005186075.tif 000052
【０１８５】
【表４】
0005186075.tif 000053
【０１８６】
【表５】
0005186075.tif 000054
【０１８７】
Ｒｅ錯体、Ｒｅ−（化合物Ａ）の明らかに低いσ受容体への親和性、σ２受容体の発現が知られているＭＣＦ−７細胞における低い腫瘍細胞への取り込み（John CS, Bowen WD, Saga T, Kinuya S, Vilner BJ, Baumgold J, Paik CH, Reba RC, Neumann RD, Varma VM, McAfee JG, 悪性黒色腫の造影剤：ヨード−１２５（２−ピペリジニルアミノエチル）−４−ヨードベンズアミドの合成、特性分析、生体外の結合及び生体分布、J. Nucl. Med., 34:2169-2, 1993;Vilner BJ, John CS, Bowen WD, シグマ１及びシグマ２受容体は、多種多様なヒト及びげっ歯類の腫瘍細胞株に発現されている、Cancer Res., 55:408-413, 1995 ）、及び無処置のＢ１６メラノーマ細胞における微量濃度の９９ｍＴｃ−錯体の取り込みを阻害するのに必要とされるＤＴＧの高いマイクロモル濃度は、蓄積過程からσ受容体を除外することはできないが、無処置のＢ１６細胞での取り込みアッセイで認められた阻害効果は、ＤＴＧにより誘導されるＢ１６メラノーマ細胞の成長及び増殖に対する副次的な効果による可能性があること（Vilner BJ, De Costa BR, Bowen WD, シグマリガンドの細胞傷害性効果：細胞の形態及び生存性におけるシグマ受容体が介在する変化、J. Neurisci., 15:117-134, 1995;及びBrent PJ, Pang GT, σ結合部位のリガンドは、培養中の乳癌、結腸癌細胞株及びメラノーマ細胞の細胞増殖を阻害する、Eur. J. Pharmacol., 278:151-160, 1995)、及び放射性ヨウ化されたベンズアミドで最近示されているように、メラニンの産生及びその含量のようなその他の要因が、黒色腫におけるこのような錯体の蓄積にさらに重要な役割を担っている可能性があることをを示唆するものと思われる。
【０１８８】
実施例２７
生体内の腫瘍による取り込み：  ９９ｍＴｃ−錯体の腫瘍による取り込みを検討するために、明瞭なＢ１６黒色腫を持つＣ５７Ｂｌ６マウスにおいて投与後１時間と６時間のＴｃ−（化合物Ａ〜Ｄ及びＪ〜Ｋ）の生体内の生体分布実験を行った。選択した臓器についての黒色腫／非腫瘍（Ｍ／ＮＴ）の比を含む生体分布のデータをグラム当りの投与した用量の比率（％ＩＤ／ｇ）として表４及び表５に要約する。
錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）は、投与後１時間で、７．６％ＩＤ／ｇ及びメラノーマ／血液（Ｍ／Ｂ）（７．６）、メラノーマ／脾臓（Ｍ／Ｓ）（４．２）及びメラノーマ／肺（Ｍ／Ｌ）（５．４）の高い比という試験全体で、最も高い腫瘍の取り込みを示している。投与後６時間（３．５％ＩＤ／ｇ）では腫瘍における％ＩＤ／ｇは低下しているが、Ｍ／ＮＴ比は、腫瘍に比べてこのような組織での錯体のクリアランスが速いために、血液（１０．８）、脾臓（１０．１）及び肺（７．３）では増加している。比較すると、さらに親油性の高い（ｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）＝１．９）類縁体である、錯体Ｔｃ−（化合物Ｂ）は、投与後１時間では、３．０％ＩＤ／ｇというさらに低いメラノーマの取り込みを得ている。全体的に腫瘍の取り込みは、Ｔｃ−（化合物Ａ）よりも有意に低いが、１時間後の時点では、Ｍ／ＮＴ比は同等である（２．１という低いＭ／Ｌ値を除く）。投与後６時間では、Ｍ／ＮＴ比は上昇するが、錯体Ｔｃ−（化合物Ｂ）の低い腫瘍含量は（１．１％ＩＤ／ｇ）、生体内の画像化には不適当である可能性がある。
錯体Ｔｃ−（化合物Ｃ）は投与後１時間で、３．７％ＩＤ／ｇのメラノーマの取り込みを示し、Ｍ／ＮＴ比は錯体Ｔｃ−（化合物Ａ）及びＴｃ−（化合物Ｂ）（Ｍ／Ｌを除く）とほぼ同一である。しかしながら、腫瘍組織におけるさらに長い保持及び非腫瘍組織からのさらに速いクリアランスによってＴｃ−（化合物Ｃ）では６時間の時点でＭ／ＮＴ比で有意な上昇を生じており、Ｍ／Ｂ、Ｍ／Ｓ及びＭ／Ｌの比はそれぞれ１９、１９及び１２．７である。錯体Ｔｃ−（化合物Ｄ）のメラノーマによる取り込み（投与後１時間、１．３％ＩＤ／ｇ）及びＭ／ＮＴ比は試験の中では最低であり、生体内の診断目的では理想から程遠い可能性がある。
ｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）＝１である錯体は、９９ｍＴｃ錯体Ｔｃ−（化合物Ａ〜Ｄ）のさらに高いメラノーマによる取り込みに有利に働くように思われる。しかしながら、Ｔｃ−（化合物Ａ）のようなさらに厳密な四座９９ｍＴｃ−ＡＡＤＴは、ｐＫａ＝７．７を持ち、生体内でさらに高いメラノーマによる取り込みを示す。
【０１８９】
実施例２８
親油性及びｐＫａ値の決定：  以前記載されたＨＰＬＣ法を用いて錯体すべての親油性及びｐＫａ値を測定した（Stylli C, Theobald AE, 混合溶媒における放射性医薬のイオン化定数のＨＰＬＣによる測定、Appl. Radiat. Isot., 38:701-708, 1987; Johannsen B, Scheunemann M, Spies H, Brust P, Wober J, Syhre R, Pietzsch HJ, 「５−ＨＴ２Ａセロトニン受容体結合のためのテクネチウム（Ｖ）及びレニウム（Ｖ）錯体：構造−親和性の考察」、Nucl. Med. Biol., 23:429-438, 1996; 並びにJohannsen B, Berger R, Brust P, Pietzsch HJ, Scheunemann M, Seifert S, Spies H, Syhre R, 「脳における取り込みを改善するための受容体結合性のテクネチウム−９９ｍ錯体の構造的改変」、Eur. J. Nucl. Med., 24:316-319, 1997)。逆相ＰＲＰ−１カラム（２５０ｘ４．１ｍｍ、１０μｍ；ハミルトン）を用い、室温にて流速１．５ｍＬ／分で定組成条件で作動するパーキンエルマーＨＰＬＣシステム１０２０によってｌｏｇＰ、ｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）、及びｐＫａの値を測定した。移動相は、３から１１の間で所望のｐＨに調整した水性緩衝液を伴ったアセトニトリル：リン酸緩衝液（０．０１Ｍ）、３：１（ｖ／ｖ）であった。各測定について利用率（κ'）を測定し（Braumann T, Grimme LH, 「液体−液体分配及び逆相高速液体クロマトグラフィによるピリダジノン除草剤の疎水性パラメータの測定」、J. Chromatogr., 206:7-15, 1981；El Tayer N, van der Waterbeemd H, Testa B, 逆相高速液体クロマトグラフィによるプロトン化塩基性化合物の親油性の測定ＩＩ、逆相高速液体クロマトグラフィにより測定される親油性指数の決定方法、J. Chromatogr., 320:305-312, 1985; 及びMinick DJ, Frenz JH, Patrick MA, Brent DAA, 逆相高速液体クロマトグラフィにより疎水性定数を決定するための総合的方法、J. Med. Chem., 31:1923-1933, 1988)、標準アミンを用いてパラメータａ及びｂが予め決定されている方程式ｌｏｇＤ＝ａｌｏｇκ'＋ｂから任意のｐＨ（Ｄ又はｌｏｇＤ）における分配係数を算出した。Ｓ字のＤＨＰＬＣ／ｐＨの特徴からの屈折の適合点によってｐＫＨＰＬＣを計算することができる（Stylli C, Theobald AE, 混合溶媒における放射性医薬のイオン化定数のＨＰＬＣによる測定、Appl. Radiat. Isot., 38:701-708, 1987）。標準アミン化合物を用いて得られた予め決定した補正因子で補正した後、ｐＫＨＰＬＣの値から水性イオン化定数ｐＫａを計算した。中性錯体のｌｏｇＰ値は、アルカリ範囲におけるＳ字ｌｏｇＤ／ｐＨ曲線のそれぞれの上限から計算した。
【０１９０】
実施例２９
生体外の細胞試験：  マウスのＢ１６／Ｆ０メラノーマ細胞及びヒトのＭＣＦ−７乳癌細胞は、バージニア州マナッサスのアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手し、４５００ｍｇ／ＬのＤ−グルコース、Ｌ−グルタミン、及び塩酸ピリドキシン、１１０ｍｇ／Ｌのピルビン酸ナトリウム、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０．２％のゲンタマイシン及び０．５％のペニシリン／ストレプトマイシン溶液を含有する１４ｍＬのダルベッコ改変イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ、メリーランド州、ゲーサーズバーグ、ギブコ、ライフテクノロジーズ）中でＴ−１７５フラスコにて増殖させた。１ｍＬのトリプシン−ＥＤＴＡ溶液（０．２５％のトリプシン、１ｍＭのＥＤＴＡｘ４Ｎａ）（ギブコ）によるトリプシン処理によって細胞はすべて培養フラスコから回収した。１２ｍＬのダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ギブコ）、ｐＨ７．２（Ｃａ２＋及びＭｇ２＋を含まず；ｇ／Ｌ  ＫＣｌ、０．２０；ＫＨ２ＰＯ４、０．２０；ＮａＣｌ，８．００；Ｎａ２ＨＰ、Ｏ４１．１５）で洗浄した後、細胞を数え、８ｍＬのＳ−ＭＥＭ（ギブコ）（Ｃａ２＋を含まず、Ｍｇ２＋含量を減らした）に再浮遊し、使用まで４℃に保管した。
生体外の腫瘍細胞の蓄積試験については、ポリプロピレン製の試験管中の５ｘ１０６個の細胞を１〜２μＣｉ（５μＬ）の９９ｍＴｃ−錯体、Ｔｃ−（化合物Ａ〜Ｄ）と共に総容量３５０μＬのＳ−ＭＥＭにて間欠的に撹拌しながら、３７℃又は４℃でインキュベートした。適当な時間間隔で試験管をボルテックスし、８μＬの試料を４００μＬのエッペンドルフ微量遠心管中にて３５０μＬの冷却ＦＢＳに重層した。１５，０００ｒｐｍにて２分間遠心した後、ドライアイス−アセトン槽で試験管を凍結した。凍結したまま、細胞塊を含有する微量遠心管の底の先端を切断し、カウント用チューブに入れた。上清を伴った遠心管の残りの部分は別のカウント用チューブに入れた。放射活性について両方の分画をγ−カウンタ（ワラック（Wallac）１４８０ウイザード３”ＴＭ）にて計測した。細胞塊中の上清の量は、別々の実験で＜１％であると測定された。９９ｍＴｃ−錯体の細胞による取り込みの比率は：
【０１９１】
％取り込み＝［ｃｐｍ（細胞塊）」／「ｃｐｍ（細胞塊）＋ｃｐｍ（上清）］ｘ１００  のように算出した。
【０１９２】
９９ｍＴｃ−錯体を添加する３０分前に細胞浮遊液に種々の濃度の阻害剤を加えることによって、このような錯体の細胞による取り込みに対する阻害剤、ＤＴＧの効果を検討した。０．３８ｍＬのＰＢＳと０．１２ｍＬの塩酸（０．１Ｎ）にＤＴＧ（３．０ｍｇ、１２．５マイクロモル）を溶解し、透明な溶液が得られるまで混合物を超音波処理し、続いて０．５０ｍＬのＦＢＳを加えてｐＨ７．４の中性溶液を生じることによって新鮮なＤＴＧストック溶液を作製した。適当な量のＳ−ＭＥＭによってストック溶液を希釈し、３５０μＬの細胞浮遊液の総容量にてＤＴＧの最終濃度が、０．０２μＭから１２０μＭの間になるように、５μＬから２５μＬの間の等量を細胞浮遊液に加えた。
【０１９３】
実施例３０
σ１−受容体結合アッセイ：  モルモットの脳細胞膜及び高親和性σ１リガンド、［３Ｈ］−（＋）−ペンタゾシンを用いた競合アッセイにて、錯体、Ｒｅ−（化合物Ａ）、Ｒｅ−（化合物Ｃ）、及びＲｅ−（化合物Ｄ）の生体外におけるσ１結合親和性を測定した。以前記載したように、モルモットの脳（小脳を差し引く）から細胞膜を調製した。総容量０．２５ｍＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（５０ｍＭ）（ｐＨ８）中にて、１０−１０Ｍ〜１０−３Ｍの範囲での１５種の濃度の非放射性レニウム錯体とタンパク質試料（０．１５ｍｇの膜タンパク質）を５ｎＭの［３Ｈ］−（＋）−ペンタゾシンと共にインキュベートした。インキュベートは２５℃にて１２０分間行った。アッセイはすべて氷冷した５ｍＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（１０ｍＭ）（ｐＨ８．０）で希釈することにより反応を止め、溶液をグラスファイバーのフィルタ（２５℃にて３０分間、０．５％のポリエチレンイミンに事前に浸したワットマンＧＦ／Ｂ）でろ過した。次いで、氷冷した５ｍＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（１０ｍＭ）（ｐＨ８．０）でフィルタを２回洗浄し、ヒオニック・フロー（Hionic-Fluor）カクテル（オランダ、グルニンゲン、パッカード）にてカウントした。シグマプロットソフトウエア（シグマプロット４．０：イリノイ州、シカゴのＳＰＳＳ社）を用いて相当するＩＣ５０値を決定し、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆの方程式（Cheng Y, Prusoff WH, 阻害定数（ＫＩ）と酵素反応において５０パーセントの阻害（Ｉ５０）を生じる阻害剤の濃度の関係、Biochem. Pharmacol., 22:3099-3108, 1973）を用いて見かけのＫｉ値を算出するのに用いた。
【０１９４】
実施例３１
σ２受容体結合アッセイ：  以前記載されたように（Hellewell SB, Bruce A, Feunstein G, Orringer J, Williams W, Bowen WD, ラットの肝臓及び腎臓は高密度のσ１及びσ２受容体を含有する：リガンド結合及び光親和性標識による特性分析、Eur. J. Pharmacol-Mol. Pharmacol. Sect., 268:9-18, 1994）オスのスプラーグドーリーラットの肝臓からラット肝細胞膜を調製した。記載されているようにσ１受容体を覆い隠すための１μＭのデキストラロルファンの存在下、放射性リガンドとして［３Ｈ］ＤＴＧを用いてσ２受容体を標識した。０．２５ｍＬにてのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（５０ｍＭ）（ｐＨ８）中で２５℃にて１２０分間、１０−１０Ｍ〜１０−３Ｍの範囲での１５種の濃度の非放射性レニウム錯体とタンパク質試料（０．１５ｍｇの膜タンパク質）と共に競合アッセイを行った。そのほかの操作及びデータ解析はすべてσ１受容体アッセイについて上述したように行った。
【０１９５】
実施例３２
動物試験：動物実験はすべて「実験動物取り扱い基準」（ＮＩＨ発行＃８５−２３、１９８５年改訂）に準拠して行った。生体分布試験及び腫瘍による取り込み測定は、後肢にＢ１６／Ｆ０マウス黒色腫を持つＣ５７Ｂｌ６マウス（１５〜２０ｇ）で行った。例えば、Brandau W, Niehoff T, Pulawski P, Jonas M, Dutschka K, Sciuk J, Coenen HH, Schober O, メラニン性黒色腫の検出のためのトレーサとしてのヨウ素−１２３−ヨードベンズアミドの構造分布関係、J. Nucl. Med., 37:1865-1871, 1996; Mohammed A, Nicholl C, Titsch U, Eisenhut M, 放射性ヨウ素化されたＮ−（アルキルアミノアルキル）−置換４−メトキシ−、４−ヒドロキシ、及び４−アミノベンザミド類：黒色腫の造影剤の改善のための生物学的研究、Nucl. Med. Biol., 24:373-380, 1997; Titsch U, Mohammed A, Wagner S, Oberdorfer F, Eisenhut M, ９９ｍＴｃ−錯体化に好適なＮ−（２−ジエチルアミノエチル）ベンズアミドの合成、J. Labelled Compd. Radiopharm., 40:416-418, 1997; Dittmann H, Coenen HH, Zoler F, Dutchka K, Brandau W, Streffer C., アミノアルキル−ヨードベンズアミド誘導体（ＡＢＡ）を画像化する黒色腫の細胞性の取り込みに関する生体外研究、Nucl. Med. Biol., 26:51-56, 1999; 及びMichelot J, Moreau MFC, Veyre AJ, Bonafous JF, Bacin FJ, Madelmont JC, Bussiere F, Souteyrand PA, Mauclaire LP, Chossat FM, Papon JM, Labarre PG, Kauffmann Ph, Plagne RJ, ヨウ素−１２３−Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル  ４−ヨードベンズアミド）による悪性黒色腫のフェーズＩＩシンチグラフィ臨床試験と転移、J. Nucl. Med., 34:1260-1266, 1993に記載され、参考として本明細書に組み入れられる試験を参照のこと。ＡＴＣＣから入手した腫瘍細胞（Ｂ１６／Ｆ０）をＰＢＳにて洗浄し、０．５ｘ１０６個の細胞（０．１ｍＬ）を接種することにより左後部脇腹の皮下に移植した。１０〜１４日後、動物は、直径３〜５ｍｍの明瞭な腫瘍結節を発達させた。２５〜３０μＣｉ（０．０５〜０．１ｍＬ）の９９ｍ−Ｔｃ標識した錯体、Ｔｃ−（化合物Ａ〜Ｄ、Ｈ、Ｊ、Ｋ又はＭ）の尾静脈注射によって生体分布試験を行った。尾静脈投与後、指定した時間に動物を計量し、屠殺した。臓器及び腫瘍を回収し、適当なときに、拭き取って乾燥し、重量測定し、注射用量のテクネチウム−９９ｍ標準と共にγ−カウンタでカウントした。結果は％ＩＤ／組織のｇとして表す（表４及び５）。
【０１９６】
芳香環を、例えばオキソ金属−ＤＡＤＴ部分又はオキソ金属−ＡＡＤＴ部分のようなオキソ金属−四座配位子で置き換えることによって、ＩＭＢＡのような悪性黒色腫を標的とするジアルキルアミノエチルベンズアミドのファルマコフォアの中に放射性金属を一体化させることは、生体内で十分な黒色腫への蓄積を示す金属錯体をもたらす。前述のオキソ金属「３＋１」錯体と同様に、このようなオキソテクネチウム（Ｖ）−ＡＡＤＴ錯体及びオキソレニウム（Ｖ）−錯体もまたペンダント第３級アミンを含有しており、ｌｏｇＤ（ｐＨ７．４）〜１（錯体Ｔｃ−化合物Ａ）を持つものは、生体内で黒色腫への相対的に高い蓄積を示す。錯体すべてに対するσ受容体の親和性は、低い〜中程度であるが、生体外の細胞による取り込み測定は、Ｂ１６メラノーマ細胞における能動的な取り込み成分を示している。このようなテクネチウム錯体によって示された生体内での相対的に高い黒色腫による取り込みは、黒色腫／非腫瘍の高い比と合わせて、黒色腫を標的とするテクネチウムに基づいた小型分子のプローブが設計される可能性があり、黒色腫及びその転移の早期検出及び診断に有用となる可能性があることを暗示している。
本発明を詳細に記載してきたが、当業者が、本発明の範囲内で修正及び改良していただければ幸いである。例えば、窒素原子の代わりにキレート配位子の炭素原子にファルマコア基を結合してもよい。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明のレニウム錯体（Ｒｅ−化合物Ａ）の固体構造の説明である。
【図２】  異なった温度でのメラノーマ細胞における本発明の化合物Ａ〜Ｄの９９ｍＴｃ標識した錯体の生体外取り込みを説明するグラフである。
【図３】  様々なＤＴＧ濃度でのメラノーマ細胞における本発明の化合物Ｃの９９ｍＴｃ標識した錯体の最大取り込みを説明するグラフである。
【図４】  異なった温度でのメラノーマ細胞における本発明の９９ｍＴｃ標識した錯体の生体外取り込みを説明するグラフである。
【図５】  異なった温度でのＢ１６メラノーマ細胞及びＭＣＦ７乳癌細胞における本発明の９９ｍＴｃ−化合物Ａ錯体の生体外取り込みを説明するグラフである。
【図６】  異なった温度でのメラノーマ細胞における本発明の９９ｍＴｃ−化合物Ｂ錯体の生体外取り込みを説明するグラフである。
【図７】  異なった温度でのメラノーマ細胞における本発明の９９ｍＴｃ−化合物Ｃ錯体の生体外取り込みを説明するグラフである。
【図８】  異なった温度でのメラノーマ細胞における本発明の９９ｍＴｃ−化合物Ｄ錯体の生体外取り込みを説明するグラフである。
【図９】  Ｃ５７Ｂｌ６マウスの腫瘍モデルにおける本発明の９９ｍＴｃ標識した錯体の生体内取り込みを説明するグラフである。
【図１０】  異なった温度でのメラノーマ細胞におけるＴｃ−化合物Ｈの生体外取り込みを説明するグラフである。
【図１１】  異なった温度でのメラノーマ細胞における本発明の環状アミン部分を有する９９ｍＴｃ標識した錯体の生体外取り込みを説明するグラフである。
【図１２】  異なった温度でのメラノーマ細胞におけるＴｃ−化合物Ｍの生体外取り込みを説明するグラフである。
【図１３】  異なった温度での乳癌細胞におけるＴｃ−化合物Ｃの生体外取り込みを説明するグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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