(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する、甲状腺癌、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤であって、
前記ＲＥＴキナーゼ阻害物質が、
（ａ）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である；または
（ｂ）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドのメタンスルホン酸塩である、
治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＲＥＴキナーゼ活性を阻害する物質（以下、「ＲＥＴキナーゼ阻害物質」と称する場合がある）を含有する多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ，ｔｙｐｅ  ＩＩＡ）、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ，ｔｙｐｅ  ＩＩＢ）、家族性甲状腺髄様癌（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、甲状腺乳頭癌（ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、散発性甲状腺髄様癌（ｓｐｏｒａｄｉｃ  ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ヒルシュスプルング病（Ｈｉｒｓｃｈｓｐｒｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、褐色細胞腫（Ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ）、副甲状腺過形成症（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）および消化管の粘膜神経腫（ｍｕｃｏｓａｌ  ｎｅｕｒｏｍａｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｒａｃｔ）からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤、治療方法、前記治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質に関するものである。
また、本発明は、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する甲状腺癌（ｔｈｙｒｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）に対する治療剤、治療方法、前記治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質に関するものである。
さらに、本発明は、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与することを特徴とする疾患の治療方法、前記医薬組成物の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記医薬組成物のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質に関するものである。
また、本発明は、ＲＥＴキナーゼ阻害剤に関するものである。
さらに、本発明は、細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標として、患者に対するＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果を予測する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＲＥＴは、レセプターチロシンキナーゼの一つであり、細胞増殖や分化のシグナルを伝達する細胞表面分子である。
ＲＥＴの変異は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、散発性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、ヒルシュスプルング病などの疾患に関連することが知られている（１、２）。そして、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、前記疾患に対する有用な治療剤となりうることが示唆されている（１、２）。
多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型の患者の９３％から９８％において、ＲＥＴのコドン６０９，６１１，６１８，６２０，６３４の５つのシステイン残基のうちの一つの変異が認められる。そして、ＲＥＴのコドン６３４の変異が、最も多く認められる（３、４）。
一方、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型の患者の９５％において、ＲＥＴのコドンＭ９１８Ｔの変異（コドン９１８のメチオニンからチロシンへの変異）が認められる（４）。
また、家族性甲状腺髄様癌の多くの患者において、ＲＥＴのコドン６０９，６１１，６１８，６２０，６３４，７６８，７９０，７９１，８０４，８９１のうちの一つの変異が認められる（４）。
これらの点変異は、いずれもリガンド非依存的なＲＥＴの恒常的活性化を引き起こすことが知られている（３、４）。
ここで、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型は、甲状腺髄様癌、褐色細胞腫および副甲状腺過形成症が特徴の症候群である。一方、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型は、甲状腺髄様癌、褐色細胞腫、消化管の粘膜神経腫の症状を伴う症候群である。また、家族性甲状腺髄様癌は、甲状腺髄様癌を主な症状とする症候群である（５）。
また、散発性甲状腺髄様癌の患者の約４０％において、ＲＥＴの体細胞の点変異が認められ、これらの変異のほとんどは、コドン９１８において認められる（６）。
さらに、甲状腺乳頭癌において、染色体逆位（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｉｎｖｅｒｓｉｏｎｓ）または染色体転座（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）により、ＲＥＴ遺伝子と他の遺伝子との融合遺伝子、すなわち、ＲＥＴ遺伝子の再構築（ｒｅａｒｒｅｎｇｅｍｅｎｔ）が認められる。そして、ＲＥＴ遺伝子の再構築により生成された融合タンパク質は、リガンド非依存的なダイマリゼーションとＲＥＴの恒常的活性化を引き起こすことが知られている（７）。
ヒルシュスプルング病（Ｈｉｒｓｃｈｓｐｒｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）は、大腸神経叢の異常に起因する新生児の腸管拡張と頑固な便秘を特徴とする疾患である。ヒルシュスプルング病の原因の一つは、ＲＥＴの変異が原因であることが知られている（８）。
ＲＥＴの変異は、ＮＩＨ３Ｔ３細胞において足場非依存性増殖および造腫瘍性を引き起こしたことが報告されている（２）。
また、ＲＥＴキナーゼ阻害物質であるＺＤ６４７４は、変異型ＲＥＴにより形質転換させたＮＩＨ３Ｔ３細胞における足場非依存性増殖を抑制し、ヌードマウスへの当該細胞の注入後の腫瘍の形成を阻害したことが報告されている（２）。
さらに、ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）皮下移植モデルにおいて、ＲＥＴキナーゼ阻害物質であるＢＡＹ  ４３−９００６は、腫瘍を縮小させたことが報告されている（９）。
このように、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、変異型ＲＥＴを発現している細胞に対して細胞増殖抑制を引き起こし、前記細胞を含む腫瘍に対して抗腫瘍効果を示すことが示唆されている。また、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、ＲＥＴの変異を原因とする疾患に対して有効であると考えられる。
すなわち、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫ならびに甲状腺癌に有効であると考えられる。
ここで、血管新生阻害物質として、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよびその類似化合物が知られている（１０−１２）。しかしながら、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよびその類似化合物がＲＥＴキナーゼ阻害活性を有することについては一切報告されていない。
参考文献
（１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９，５５９０−５５９７，２０００．
（２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１５，７２８４−７２９０，２００２．
（３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６６，１１７７−１１８０，２００６．
（４）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８８，５４３８−５４４３，２００３．
（５）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８９，４１４２−４１４５，２００４．
（６）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８９，５８２３−５８２７，２００４．
（７）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４５，５４４８−５４５１，２００４．
（８）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，１０２，８９４９−８９５４，２００５．
（９）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，９８，３２６−３３４，２００６．
（１０）国際公開第０２／３２８７２号パンフレット
（１１）国際公開第２００４／０８０４６２号パンフレット
（１２）国際公開第２００５／０６３７１３号パンフレット
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その解決しようとする課題は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患ならびに甲状腺癌に対する治療剤および治療方法を提供すること、ならびに、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して、より有効に効果を発揮する医薬組成物および治療方法を提供することにある。さらに、本発明の解決しようとする別の課題は、ＲＥＴキナーゼ阻害剤を提供することにある。また、本発明の解決しようとする別の課題は、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよびその類似化合物の効果を予測する方法を提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドがＲＥＴキナーゼ阻害活性を有することを見出した。そして、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよびその類似化合物は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患ならびに甲状腺癌に対して、より有効に効果を発揮することを見出した。また、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよびその類似化合物は、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して、より有効に効果を発揮することを見出した。さらに、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドおよびその類似化合物の効果は、細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標とすることにより予測することができることを見出した。
すなわち本発明は、以下に関する。
（１）ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤。
（２）ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する甲状腺癌に対する治療剤。
（３）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物。
（４）ＲＥＴキナーゼ阻害物質を患者に有効量投与することを特徴とする、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の治療方法。
（５）ＲＥＴキナーゼ阻害物質を患者に有効量投与することを特徴とする甲状腺癌の治療方法。
（６）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対してＲＥＴキナーゼ阻害物質を有効量投与することを特徴とする、疾患の治療方法。
（７）多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用。
（８）甲状腺癌に対する治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用。
（９）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用。
（１０）多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質。
（１１）甲状腺癌に対する治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質。
（１２）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質。
（１３）細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標として、患者がＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性であるか否かを予測する方法。
（１４）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する細胞の感受性を分析する方法。
（１５）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性を示す細胞を選択する方法。
（１６）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性を示す患者を選択する方法。
（１７）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することにより、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する感受性を分析し、得られる結果により患者を分類する方法。
（１８）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定し、得られる測定結果から、変異型ＲＥＴを発現している細胞を有する患者を選択することを含む、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の投与対象となる患者を選択する方法。
（１９）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、患者に対するＲＥＴキナーゼ阻害物質の治療効果を予測する方法。
（２０）患者のＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する感受性の程度を予測するために、当該患者由来の細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定する方法。
前記ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、
一般式（Ｉ）
0005190361.tif 000002
［式（Ｉ）中、Ｒ１は、式−Ｖ１−Ｖ２−Ｖ３（式中、Ｖ１は、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基を意味する；Ｖ２は、単結合、酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、スルフィニル基、スルホニル基、式−ＣＯＮＲ６−で表される基、式−ＳＯ２ＮＲ６−で表される基、式−ＮＲ６ＳＯ２−で表される基、式−ＮＲ６ＣＯ−で表される基または式−ＮＲ６−で表される基を意味する（式中、Ｒ６は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する。）；Ｖ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ２は、シアノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、カルボキシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；Ｖａ１２は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｙ１は、式
0005190361.tif 000003
（式中、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルチオ基、ホルミル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶｄ１Ｖｄ２（式中、Ｖｄ１およびＶｄ２は、それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｗ１およびＷ２は、それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する；
Ｒ５は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。］で表される化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を挙げることができる。
また、前記ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミド、Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−（５−メチル−３−イソキサゾリル）ウレア
および
４−［（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イル）オキシ］−６−メトキシ−７−［３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ］キナゾリン
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を挙げることができる。
また、本発明は、以下に関する。
（２１）前記の一般式（Ｉ）で示される化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有するＲＥＴキナーゼ阻害剤。
（２２）５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド  （２−ジエチルアミノエチル）アミド、
Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−（５−メチル−３−イソキサゾリル）ウレア
および
４−［（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イル）オキシ］−６−メトキシ−７−［３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ］キナゾリン
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有するＲＥＴキナーゼ阻害剤。
また、本発明は、好ましくは以下に関する。
（２３）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有する多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤。
（２４）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有する甲状腺癌に対する治療剤。
（２５）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有する医薬組成物。
（２６）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を患者に有効量投与することを特徴とする、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の治療方法。
（２７）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を患者に有効量投与することを特徴とする甲状腺癌の治療方法。
（２８）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を有効量投与することを特徴とする、疾患の治療方法。
（２９）多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤の製造のための４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の使用。
（３０）甲状腺癌に対する治療剤の製造のための４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の使用。
（３１）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物の製造のための４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の使用。
（３２）多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤のための４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（３３）甲状腺癌に対する治療剤のための４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（３４）変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物のための４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（３５）細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標として、患者が４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドもしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物に対して高感受性であるか否かを予測する方法。
（３６）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物に対する細胞の感受性を分析する方法。
（３７）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物に対して高感受性を示す細胞を選択する方法。
（３８）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物に対して高感受性を示す患者を選択する方法。
（３９）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することにより、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物に対する感受性を分析し、得られる結果により患者を分類する方法。
（４０）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定し、得られる測定結果から、変異型ＲＥＴを発現している細胞を有する患者を選択することを含む、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の投与対象となる患者を選択する方法。
（４１）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定することを含む、患者に対する４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の治療効果を予測する方法。
（４２）患者の４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物に対する感受性の程度を予測するために、当該患者由来の細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定する方法。
（４３）４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有するＲＥＴキナーゼ阻害剤。
本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤、治療方法、前記治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質が提供される。
また、本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する甲状腺癌に対する治療剤、治療方法、前記治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質が提供される。
さらに、本発明により、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与することを特徴とする疾患の治療方法、前記医薬組成物の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記医薬組成物のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質が提供される。
また、本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害剤が提供される。
さらに、本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果を予測する方法が提供される。
より詳細には、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果は、細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標とすることにより予測することが可能となった。
本発明に係る方法により、患者に化合物を投与することなく、効果を予測することが可能となるため、当該化合物による効果をより期待できる患者を選択することができ、患者のＱＯＬに貢献することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）培養下におけるＲＥＴキナーゼおよびＥｒｋ１／２の活性化（リン酸化を指標）に対する４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの効果を示したものである。なお、一番左のレーンは、被検物質を加えずにＲＥＴキナーゼおよびＥｒｋ１／２の活性化（リン酸化を指標）を測定したものである。
図２は、ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）皮下移植モデルにおける４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの抗腫瘍効果を示したものである。
図３は、ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）皮下移植モデルにおける腫瘍組織内のＲＥＴキナーゼに対する４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの効果を示したものである。（Ａ）は、被検物質の各投与量（１０，３０または１００ｍｇ／ｋｇ）での経口投与２時間後のＲＥＴのリン酸化に対する効果、（Ｂ）は、被検物質の１００ｍｇ／ｋｇ投与後の２、８、１２または２４時間後のＲＥＴのリン酸化に対する効果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
以下に本発明の実施の形態について説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
なお、本明細書において引用した文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、本願優先権主張の基礎となる米国仮出願６０／７４７，５７０号の開示内容を包含する。
１．本発明の治療剤、医薬組成物、治療方法
（１）ＲＥＴ
本発明において、ＲＥＴとは、ｒｅｔ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅによりコードされるタンパク質であり、例えば、配列番号：２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０２０９７５）で表されるアミノ酸配列または配列番号：４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０２０６３０）で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを挙げることができる。配列番号：２で表されるアミノ酸配列は１１１４ａａの長さを有し、配列番号：４で表されるアミノ酸配列は１０７２ａａの長さを有する配列である。
また、ｒｅｔ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅは、例えば、配列番号：１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０２０９７５）で表される塩基配列のうち、１８１〜３５２２番の塩基配列からなるポリヌクレオチド、または配列番号：３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０２０６３０）で表される塩基配列のうち、１８１〜３３９６番の塩基配列からなるポリヌクレオチドなどを挙げることができる。
本発明において、これらのＲＥＴを、「野生型のＲＥＴ」と称する場合もある。
（２）変異型ＲＥＴ
本発明において、変異型ＲＥＴは、野生型のＲＥＴのアミノ酸配列、例えば、配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、一もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加され、またはそれらの組み合わせにより変異されたアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ＲＥＴキナーゼ活性を有するポリペプチドを挙げることができる。また、変異型ＲＥＴは、好ましくは、野生型のＲＥＴのアミノ酸配列、例えば、配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、一個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ＲＥＴキナーゼ活性を有するポリペプチドを挙げることができる。
ここで、「ＲＥＴキナーゼ活性」は、ＲＥＴが自己または他のタンパク質のチロシン残基をリン酸化する活性を意味する。
変異型ＲＥＴは、例えば、下記（ｉ）〜（ｘｉｘ）で表される配列を含むポリペプチドを挙げることができる。
（ｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、３２１番目のグリシンが他のアミノ酸、好ましくはアルギニンに置換されたアミノ酸配列（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，２８，９０５−９０９，２００５．）、
（ｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、５３３番目のグリシンが他のアミノ酸、好ましくはシステインに置換されたアミノ酸配列（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８８，５４３８−５４４３，２００３．）、
（ｉｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６０９番目のシステインが他のアミノ酸、好ましくはセリンに置換されたアミノ酸配列（Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，６３，６７６−６８２，２００５．）、
（ｉｖ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６１１番目のシステインが他のアミノ酸、好ましくはセリン、チロシンまたはフェニルアラニンに置換されたアミノ酸配列（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１１，３６４−３６８，２００３．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８６，１１０４−１１０９，２００１．）、
（ｖ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６１８番目のシステインが他のアミノ酸、好ましくはアルギニン、セリン、グリシンまたはフェニルアラニンに置換されたアミノ酸配列（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１６８，１２６２−１２７５，２００６．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８６，１１０４−１１０９，２００１．）、
（ｖｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６２０番目のシステインが他のアミノ酸、好ましくはアルギニンまたはセリンに置換されたアミノ酸配列（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１６８，１２６２−１２７５，２００６．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８６，１１０４−１１０９，２００１．）、
（ｖｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６３０番目のシステインが他のアミノ酸、好ましくはアルギニンまたはチロシンに置換されたアミノ酸配列（Ｔｈｙｒｏｉｄ，１５，６６８−６７１，２００５．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２５５，５８７−５９０，１９９９．）、
（ｖｉｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６３１番目のアスパラギン酸が他のアミノ酸、好ましくはチロシン、グリシン、アスパラギンまたはアラニンに置換されたアミノ酸配列（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２５５，５８７−５９０，１９９９．）、
（ｉｘ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６３４番目のシステインが他のアミノ酸、好ましくはアルギニン、グリシン、チロシン、フェニルアラニン、セリンまたはトリプトファンに置換されたアミノ酸配列（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２５５，５８７−５９０，１９９９．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８６，１１０４−１１０９，２００１．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０７，１０２２−１０２８，１９９５．）、
（ｘ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、６９１番目のグリシンが他のアミノ酸、好ましくはセリンに置換されたアミノ酸配列（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６６，１１７７−１１８０，２００６．）、
（ｘｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、７６８番目のグルタミン酸が他のアミノ酸、好ましくはアスパラギン酸に置換されたアミノ酸配列（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５０，５２２−５２９，２００４．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８６，１１０４−１１０９，２００１．）、
（ｘｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、７９０番目のロイシンが他のアミノ酸、好ましくはフェニルアラニンに置換されたアミノ酸配列（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８３，７７０−７７４，１９９８．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８６，１１０４−１１０９，２００１．）、
（ｘｉｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、７９１番目のチロシンが他のアミノ酸、好ましくはフェニルアラニンに置換されたアミノ酸配列（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８３，７７０−７７４，１９９８．）、
（ｘｉｖ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、８０４番目のバリンが他のアミノ酸、好ましくはメチオニンに置換されたアミノ酸配列（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８６，１１０４−１１０９，２００１．）、
（ｘｖ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、８０６番目のチロシンが他のアミノ酸、好ましくはシステインに置換されたアミノ酸配列（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９０，１−５，１９９９．）、
（ｘｖｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、８４４番目のアルギニンが他のアミノ酸、好ましくはロイシンに置換されたアミノ酸配列（Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１０８，１２８−１３２，２０００．）、
（ｘｖｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、８８３番目のアラニンが他のアミノ酸、好ましくはフェニルアラニンまたはチロシンに置換されたアミノ酸配列（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４２，５７３−５７５，２０００．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８９，５８２３−５８２７，２００４．）、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、８９１番目のセリンが他のアミノ酸、好ましくはアラニンに置換されたアミノ酸配列（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８９，４１４２−４１４５，２００４．）、
（ｘｉｘ）配列番号：２または４で表されるアミノ酸配列のうち、９１８番目のメチオニンが他のアミノ酸、好ましくはスレオニンに置換されたアミノ酸配列（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，８，４５７−４６３，２００２．）。
また、変異型ＲＥＴは、配列番号：２または４に記載されたアミノ酸配列において、上記の（ｉ）〜（ｘｉｘ）に示す置換を少なくとも一つ含むもの、すなわち、コドン３２１、５３３、６０９、６１１、６１８、６２０、６３０、６３１、６３４、６９１、７６８、７９０、７９１、８０４、８０６、８４４、８８３、８９１および９１８のアミノ酸からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸が他のアミノ酸に置換された変異部位を含むものを挙げることができる。例えば、配列番号：２で表されるアミノ酸配列のうち、８０４番目のバリンが他のアミノ酸に置換された変異部位、および８０６番目のチロシンが他のアミノ酸に置換された変異部位を含有するアミノ酸配列を含むポリペプチドは、変異型ＲＥＴに含まれる。ここで、変異型ＲＥＴに含まれる、上記の（ｉ）〜（ｘｉｘ）に示す置換の個数および組み合わせは、特に限定されるものではない。
本発明において、変異型ＲＥＴは、好ましくは上記の（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）、（ｉｘ）、（ｘｉ）、（ｘｉｉ）、（ｘｉｉｉ）、（ｘｉｖ）、（ｘｖｉｉｉ）または（ｘｉｘ）で表される配列を含むポリペプチドであり、より好ましくは（ｉｘ）または（ｘｉｘ）で表される配列を含むポリペプチドである。
なお、本明細書中、アミノ酸のアルファベット表記は通常の３文字または１文字で表すことがある。また、数字の前に表示したアルファベットは、置換前のアミノ酸の１文字表記を示し、数字の後に表示したアルファベットは、置換後のアミノ酸の１文字表記を示し、数字はアミノ酸配列における当該アミノ酸の存在位置を示すことがある。例えば、上記の（ｘｉｘ）に示すように、９１８番目のメチオニンがスレオニンに置換された場合は「Ｍ９１８Ｔ」と表示することがある。
また、コドンに続く数字は、アミノ酸配列におけるアミノ酸の存在位置を示すことがある。例えば、「コドン９１８のアミノ酸」は、アミノ酸配列において９１８番目のアミノ酸を意味する。
また、本発明において、変異型ＲＥＴは、野生型のＲＥＴをコードする遺伝子（以下、「ＲＥＴ遺伝子」と称する場合がある）が他の遺伝子と再構築された遺伝子によってコードされるポリペプチドであって、ＲＥＴキナーゼ活性を有するポリペプチドを挙げることができる。また、本発明において、変異型ＲＥＴは、例えば、配列番号：１または３に記載された塩基配列からなるポリヌクレオチドのうち、一部のポリヌクレオチドが他の遺伝子と再構築されたポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドであって、ＲＥＴキナーゼ活性を有するポリペプチドを挙げることができる。さらに、本発明において、変異型ＲＥＴは、例えば、配列番号：１の１８１〜３５２２番の塩基配列からなるポリヌクレオチド、または配列番号：３の１８１〜３３９６番の塩基配列からなるポリヌクレオチドが他の遺伝子と再構築されたポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドであって、ＲＥＴキナーゼ活性を有するポリペプチドを挙げることができる。
ここで、「遺伝子の再構築」とは、遺伝子間で組み換えが起こり、その結果、新しい遺伝子ができることをいう。
変異型ＲＥＴは、例えば、下記（ｉ）〜（ｘｉ）のポリペプチドを挙げることができる。下記の（ｉ）〜（ｘｉ）のポリペプチドにおける遺伝子の再構築の態様は、括弧内に示した各文献に記載されている。
（ｉ）ＲＥＴ遺伝子がＨ４（ＣＣＤＣ６、ｃｏｉｌｅｄ−ｃｏｉｌ  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ６またはＤ１０Ｓ１７０ともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００５４３６）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ１」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，４１，８１６−８２１，２００５．、Ｃｅｌｌ，６０，５５７−５６３，１９９０．）、
（ｉｉ）ＲＥＴ遺伝子がＲＩα（ＰＲＫＡＲ１Ａ、ｃＡＭＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ａｌｐｈａともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿２１２４７１）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ２」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４７，７４１−７４５，２００２．）、
（ｉｉｉ）ＲＥＴ遺伝子がＥＬＥ１（ＮＣＯＡ４、ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ４またはＲＦＧともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００５４３７）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ３」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，４１，８１６−８２１，２００５．）、
（ｉｖ）ＲＥＴ遺伝子がＥＬＥ１（ＮＣＯＡ４、ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ４またはＲＦＧともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００５４３７）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ４」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１３，１０９３−１０９７，１９９６．）、
（ｖ）ＲＥＴ遺伝子がＲＦＧ５（ＧＯＬＧＡ５、ｇｏｌｇｉｎ−８４ともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００５１１３）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ５」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５８，１９８−２０３，１９９８．）、
（ｖｉ）ＲＥＴ遺伝子がｈＴＩＦ（ＴＲＩＭ２４、ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｍｏｔｉｆ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ２４またはＰＴＣ６ともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００３８５２）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ６」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１８，４３８８−４３９３，１９９９．）、
（ｖｉｉ）ＲＥＴ遺伝子がＲＦＧ７（ＴＲＩＭ３３、ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｍｏｔｉｆ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ３３、ＰＴＣ７ともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿０３３０２０）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ７」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，２７８６−２７８９，２０００．）、
（ｖｉｉｉ）ＲＥＴ遺伝子がｋｉｎｅｃｔｉｎ（ＫＴＮ１、ｋｉｎｅｃｔｉｎ  １ともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿１８２９２６）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＴＣ８」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，７０２８−７０３２，２０００．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，２７８６−２７８９，２０００．）、
（ｉｘ）ＲＥＴ遺伝子がＥＬＫＳ（ＲＡＢ６ＩＰ２またはＲＡＢ６  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２ともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿１７８０３７）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＥＬＫＳ」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｇｅｎｅｓ  Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２５，９７−１０３，１９９９．）、
（ｘ）ＲＥＴ遺伝子がＰＣＭ−１（ＰＣＭ１またはｐｅｒｉｃｅｎｔｒｉｏｌａｒ  ｍａｔｅｒｉａｌ  １ともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００６１９７）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＥＴ／ＰＣＭ−１」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９，４２３６−４２４２，２０００．）。
（ｘｉ）ＲＥＴ遺伝子がＲＦＰ（ｒｅｔ  ｆｉｎｇｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎともいう。ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００６５１０）の遺伝子と再構築された遺伝子（「ＲＦＰ−ＲＥＴ」ともいう。）によってコードされるポリペプチド（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４５，５４４８−５４５１，２００４．）。
ＲＥＴの変異の有無は、ＲＥＴの遺伝子配列またはＲＥＴ遺伝子の転写産物であるｍＲＮＡの配列を解析することにより調べることができる。配列の解析方法は、例えば、ジデオキシヌクレオチドチェーンターミネーション法（Ｓａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７４：５４６３）などを挙げることができる。適当なＤＮＡシークエンサーを利用して配列を解析することも可能である。
また、ＲＥＴの変異の有無は、例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ノーザンブロット解析、ＤＮＡマイクロアレイ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＳＳＣＰ−ＰＣＲ（Ｓｉｎｇｌｅ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ−ＰＣＲ）などの方法により解析することもできる。これらの方法は、常法に従い行うことができる（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，８，４５７−４６３，２００２．）。
さらに、ＲＥＴの変異の有無は、例えば、免疫化学的方法（例えば、免疫組織化学的方法、免疫沈降法、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡなど）により解析することもできる。これらの方法は、常法に従い行うことができる。
変異型ＲＥＴの有無をＰＣＲで解析するために、プライマーの配列は、常法に従い設計することができる。プライマーの配列は、例えば、Ｐｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて設計することができる。
また、変異型ＲＥＴの有無をＰＣＲで解析するために、例えば、表１に記載のプライマーを用いることができる。例えば、ＲＥＴ／ＰＴＣ１を解析するためには、配列番号：５および６に記載の配列からなるポリヌクレオチドをプライマーとすることができる。
【表１】
0005190361.tif 000004
表１は、解析対象となる変異型ＲＥＴに対するプライマーの一例を示したものである。
以下に、配列番号：５〜２０に記載の塩基配列を示す。
配列番号：５  ＡＴＴ  ＧＴＣ  ＡＴＣ  ＴＣＧ  ＣＣＧ  ＴＴＣ
配列番号：６  ＴＧＣ  ＴＴＣ  ＡＧＧ  ＡＣＧ  ＴＴＧ  ＡＡＣ
配列番号：７  ＴＡＴ  ＣＧＣ  ＡＧＧ  ＡＧＡ  ＧＡＣ  ＴＧＴ  ＧＡＴ
配列番号：８  ＴＧＧ  ＡＧＡ  ＡＧＡ  ＧＡＧ  ＧＣＴ  ＧＴＡ  ＴＣ
配列番号：９  ＣＧＴ  ＴＧＣ  ＣＴＴ  ＧＡＣ  ＴＴＴ  ＴＣ
配列番号：１０  ＴＧＣ  ＣＣＣ  ＴＴＣ  ＡＧＴ  ＧＴＴ  ＣＣＴ  ＡＣＴ
配列番号：１１  ＣＴＴ  ＧＡＴ  ＡＡＣ  ＡＣＴ  ＧＧＣ  ＡＧＧ  ＴＴ
配列番号：１２  ＧＡＧ  ＧＣＧ  ＴＴＣ  ＴＣＴ  ＴＴＣ  ＡＧＣ  ＡＴ
配列番号：１３  ＴＧＧ  ＡＡＧ  ＡＡＣ  ＴＴＣ  ＧＧＣ  ＡＴＧ  ＡＧ
配列番号：１４  ＧＡＡ  ＴＴＣ  ＡＣＡ  ＧＣＣ  ＡＣＣ  ＡＡＧ  ＴＧ
配列番号：１５  ＣＴＡ  ＣＴＴ  ＡＧＣ  ＴＴＴ  ＣＣＡ  ＡＧＴ  ＧＧ
配列番号：１６  ＧＧＧ  ＡＣＡ  ＧＡＣ  ＡＣＣ  ＴＴＴ  ＧＧＡ  ＡＡＴ  Ａ
配列番号：１７  ＧＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＣＴＴＧＡＣＴＧ
配列番号：１８  ＣＴＴＴＣＡＧＣＡＴＣＴＴＣＡＣＧＧ
配列番号：１９  ＡＧＴＧＡＡＧＴＴＴＣＴＡＣＣＡＴＣＣ
配列番号：２０  ＧＧＣＧＴＴＣＴＣＴＴＴＣＡＧＣＡＴＣＴ
（３）変異型ＲＥＴを発現している細胞
本発明において、変異型ＲＥＴを発現している細胞は、好ましくは多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫の細胞である。また、本発明において、変異型ＲＥＴを発現している細胞は、好ましくは甲状腺癌の細胞である。
（４）本発明のＲＥＴキナーゼ阻害物質
本明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意味する。
「ハロゲン原子」の好適な例としては、フッ素原子、塩素原子をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数が１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を意味し、具体例としては、メチル基、エチル基、１−プロピル基（ｎ−プロピル基）、２−プロピル基（ｉ−プロピル基）、２−メチル−１−プロピル基（ｉ−ブチル基）、２−メチル−２−プロピル基（ｔ−ブチル基）、１−ブチル基（ｎ−ブチル基）、２−ブチル基（ｓ−ブチル基）、１−ペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−１−ブチル基、２−メチル−２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−ヘキシル基、２−ヘキシル基、３−ヘキシル基、２−メチル−１−ペンチル基、３−メチル−１−ペンチル基、４−メチル−１−ペンチル基、２−メチル−２−ペンチル基、３−メチル−２−ペンチル基、４−メチル−２−ペンチル基、２−メチル−３−ペンチル基、３−メチル−３−ペンチル基、２，３−ジメチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−１−ブチル基、２，２−ジメチル−１−ブチル基、２−エチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−２−ブチル基、２，３−ジメチル−２−ブチル基などがあげられる。
「Ｃ１−６アルキル基」の好適な例としては、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、２−メチル−１−プロピル基、２−メチル−２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルキレン基」とは、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、具体例としては、メチレン基、１，２−エチレン基、１，１−エチレン基、１，３−プロピレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−６アルケニル基」とは、二重結合を１個有する、炭素数が２〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基を意味し、具体例としては、エテニル基（ビニル基）、１−プロペニル基、２−プロペニル基（アリル基）、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−６アルキニル基」とは、三重結合を１個有する、炭素数が２〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキニル基を意味し、具体例としては、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、１−ブチニル基、２−ブチニル基、３−ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数が３〜８個の単環または二環の飽和脂肪族炭化水素基を意味し、具体例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、ビシクロ［２．１．０］ペンチル基、ビシクロ［３．１．０］ヘキシル基、ビシクロ［２．１．１］ヘキシル基、ビシクロ［４．１．０］ヘプチル基、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル基（ノルボルニル基）、ビシクロ［３．３．０］オクチル基、ビシクロ［３．２．１］オクチル基、ビシクロ［２．２．２］オクチル基などがあげられる。
「Ｃ３−８シクロアルキル基」の好適な例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ６−１０アリール基」とは、炭素数が６〜１０個の芳香族性の炭化水素環式基を意味し、具体例としては、フェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、インデニル基、アズレニル基などがあげられる。
「Ｃ６−１０アリール基」の好適な例としては、フェニル基をあげることができる。
本明細書において、「ヘテロ原子」とは、窒素原子、酸素原子または硫黄原子を意味する。
本明細書において、「５〜１０員ヘテロアリール基」とは、環を構成する原子の数が５〜１０個であり、環を構成する原子中に１〜５個のヘテロ原子を含有する芳香族性の環式基を意味し、具体例としては、フリル基、チエニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、フラザニル基、チアジアゾリル基、オキサジアゾリル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、トリアジニル基、プリニル基、プテリジニル基、キノリル基、イソキノリル基、ナフチリジニル基、キノキサリニル基、シンノリニル基、キナゾリニル基、フタラジニル基、イミダゾピリジル基、イミダゾチアゾリル基、イミダゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンズイミダゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、インダゾリル基、ピロロピリジル基、チエノピリジル基、フロピリジル基、ベンゾチアジアゾリル基、ベンゾオキサジアゾリル基、ピリドピリミジニル基、ベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、チエノフリル基などがあげられる。
「５〜１０員ヘテロアリール基」の好適な例としては、フリル基、チエニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基をあげることができる。
本明細書において、「３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基」とは、
（ａ）環を構成する原子の数が３〜１０個であり、
（ｂ）環を構成する原子中に１〜２個のヘテロ原子を含有し、
（ｃ）環中に二重結合を１〜２個含んでいてもよく、
（ｄ）環中にカルボニル基、スルフィニル基またはスルホニル基を１〜３個含んでいてもよい、
（ｅ）単環式または二環式である非芳香族性の環式基を意味し、環を構成する原子中に窒素原子を含有する場合、窒素原子から結合手が出ていてもよい。
具体例としては、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、アゾカニル基、ピペラジニル基、ジアゼパニル基、ジアゾカニル基、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプチル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、１，１−ジオキソチオモルホリニル基、オキシラニル基、オキセタニル基、テトラヒドロフリル基、ジオキソラニル基、テトラヒドロピラニル基、ジオキサニル基、テトラヒドロチエニル基、テトラヒドロチオピラニル基、オキサゾリジニル基、チアゾリジニル基などがあげられる。
「３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基」の好適な例としては、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、ピペラジニル基、ジアゼパニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、１，１−ジオキソチオモルホリニル基、テトラヒドロフリル基、テトラヒドロピラニル基をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」の末端に酸素原子が結合した基であることを意味し、具体例としては、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基（ｎ−プロポキシ基）、２−プロポキシ基（ｉ−プロポキシ基）、２−メチル−１−プロポキシ基（ｉ−ブトキシ基）、２−メチル−２−プロポキシ基（ｔ−ブトキシ基）、１−ブトキシ基（ｎ−ブトキシ基）、２−ブトキシ基（ｓ−ブトキシ基）、１−ペンチルオキシ基、２−ペンチルオキシ基、３−ペンチルオキシ基、２−メチル−１−ブトキシ基、３−メチル−１−ブトキシ基、２−メチル−２−ブトキシ基、３−メチル−２−ブトキシ基、２，２−ジメチル−１−プロポキシ基、１−ヘキシルオキシ基、２−ヘキシルオキシ基、３−ヘキシルオキシ基、２−メチル−１−ペンチルオキシ基、３−メチル−１−ペンチルオキシ基、４−メチル−１−ペンチルオキシ基、２−メチル−２−ペンチルオキシ基、３−メチル−２−ペンチルオキシ基、４−メチル−２−ペンチルオキシ基、２−メチル−３−ペンチルオキシ基、３−メチル−３−ペンチルオキシ基、２，３−ジメチル−１−ブトキシ基、３，３−ジメチル−１−ブトキシ基、２，２−ジメチル−１−ブトキシ基、２−エチル−１−ブトキシ基、３，３−ジメチル−２−ブトキシ基、２，３−ジメチル−２−ブトキシ基などがあげられる。
「Ｃ１−６アルコキシ基」の好適な例としては、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基、２−プロポキシ基、２−メチル−１−プロポキシ基、２−メチル−２−プロポキシ基、１−ブトキシ基、２−ブトキシ基をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルキルチオ基」とは、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」の末端に硫黄原子が結合した基であることを意味し、具体例としては、メチルチオ基、エチルチオ基、１−プロピルチオ基（ｎ−プロピルチオ基）、２−プロピルチオ基（ｉ−プロピルチオ基）、２−メチル−１−プロピルチオ基（ｉ−ブチルチオ基）、２−メチル−２−プロピルチオ基（ｔ−ブチルチオ基）、１−ブチルチオ基（ｎ−ブチルチオ基）、２−ブチルチオ基（ｓ−ブチルチオ基）、１−ペンチルチオ基、２−ペンチルチオ基、３−ペンチルチオ基、２−メチル−１−ブチルチオ基、３−メチル−１−ブチルチオ基、２−メチル−２−ブチルチオ基、３−メチル−２−ブチルチオ基、２，２−ジメチル−１−プロピルチオ基、１−ヘキシルチオ基、２−ヘキシルチオ基、３−ヘキシルチオ基、２−メチル−１−ペンチルチオ基、３−メチル−１−ペンチルチオ基、４−メチル−１−ペンチルチオ基、２−メチル−２−ペンチルチオ基、３−メチル−２−ペンチルチオ基、４−メチル−２−ペンチルチオ基、２−メチル−３−ペンチルチオ基、３−メチル−３−ペンチルチオ基、２，３−ジメチル−１−ブチルチオ基、３，３−ジメチル−１−ブチルチオ基、２，２−ジメチル−１−ブチルチオ基、２−エチル−１−ブチルチオ基、３，３−ジメチル−２−ブチルチオ基、２，３−ジメチル−２−ブチルチオ基などがあげられる。
「Ｃ１−６アルキルチオ基」の好適な例としては、メチルチオ基、エチルチオ基、１−プロピルチオ基（ｎ−プロピルチオ基）、２−プロピルチオ基（ｉ−プロピルチオ基）、２−メチル−１−プロピルチオ基（ｉ−ブチルチオ基）、２−メチル−２−プロピルチオ基（ｔ−ブチルチオ基）、１−ブチルチオ基（ｎ−ブチルチオ基）、２−ブチルチオ基（ｓ−ブチルチオ基）をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ３−８シクロアルコキシ基」とは、上記定義「Ｃ３−８シクロアルキル基」の末端に酸素原子が結合した基であることを意味し、具体例としては、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロヘプチルオキシ基、シクロオクチルオキシ基、ビシクロ［２．１．０］ペンチルオキシ基、ビシクロ［３．１．０］ヘキシルオキシ基、ビシクロ［２．１．１］ヘキシルオキシ基、ビシクロ［４．１．０］ヘプチルオキシ基、ビシクロ［２．２．１］ヘプチルオキシ基（ノルボルニルオキシ基）、ビシクロ［３．３．０］オクチルオキシ基、ビシクロ［３．２．１］オクチルオキシ基、ビシクロ［２．２．２］オクチルオキシ基などがあげられる。
「Ｃ３−８シクロアルコキシ基」の好適な例としては、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基をあげることができる。
本明細書において、「モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基」とは、アミノ基中の１個の水素原子を、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」で置換した基を意味し、具体例としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、１−プロピルアミノ基（ｎ−プロピルアミノ基）、２−プロピルアミノ基（ｉ−プロピルアミノ基）、２−メチル−１−プロピルアミノ基（ｉ−ブチルアミノ基）、２−メチル−２−プロピルアミノ基（ｔ−ブチルアミノ基）、１−ブチルアミノ基（ｎ−ブチルアミノ基）、２−ブチルアミノ基（ｓ−ブチルアミノ基）、１−ペンチルアミノ基、２−ペンチルアミノ基、３−ペンチルアミノ基、２−メチル−１−ブチルアミノ基、３−メチル−１−ブチルアミノ基、２−メチル−２−ブチルアミノ基、３−メチル−２−ブチルアミノ基、２，２−ジメチル−１−プロピルアミノ基、１−ヘキシルアミノ基、２−ヘキシルアミノ基、３−ヘキシルアミノ基、２−メチル−１−ペンチルアミノ基、３−メチル−１−ペンチルアミノ基、４−メチル−１−ペンチルアミノ基、２−メチル−２−ペンチルアミノ基、３−メチル−２−ペンチルアミノ基、４−メチル−２−ペンチルアミノ基、２−メチル−３−ペンチルアミノ基、３−メチル−３−ペンチルアミノ基、２，３−ジメチル−１−ブチルアミノ基、３，３−ジメチル−１−ブチルアミノ基、２，２−ジメチル−１−ブチルアミノ基、２−エチル−１−ブチルアミノ基、３，３−ジメチル−２−ブチルアミノ基、２，３−ジメチル−２−ブチルアミノ基などがあげられる。
本明細書において、「ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基」とは、アミノ基中の２個の水素原子を、それぞれ同一のまたは異なる、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」で置換した基を意味し、具体例としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−プロピルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｉ−プロピルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｉ−ブチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｓ−ブチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｔ−ブチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｎ−プロピル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｉ−プロピル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｉ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｓ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−７アシル基」とは、上記定義の「Ｃ１−６アルキル基」が結合したカルボニル基であることを意味し、具体例としては、例えば、アセチル基、プロピオニル基、イソプロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−７アルコキシカルボニル基」とは、上記定義の「Ｃ１−６アルコキシ基」が結合したカルボニル基であることを意味し、具体例としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、１−プロピルオキシカルボニル基、２−プロピルオキシカルボニル基、２−メチル−２−プロポキシカルボニル基などがあげられる。
本明細書において、「置換基を有していてもよい」とは、「置換可能な部位に、任意に組み合わせて１または複数個の置換基を有してもよい」ことを意味し、置換基の具体例としては、例えば、ハロゲン原子、水酸基、チオール基、ニトロ基、シアノ基、ホルミル基、カルボキシル基、アミノ基、シリル基、メタンスルホニル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員ヘテロアリール基、３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ２−７アシル基またはＣ２−７アルコキシカルボニル基などをあげることができる。ただし、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員ヘテロアリール基、３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ２−７アシル基およびＣ２−７アルコキシカルボニル基はそれぞれ独立して下記置換基群からなる群から選ばれる１〜３個の基を有していてもよい。
＜置換基群＞
ハロゲン原子、水酸基、チオール基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員ヘテロアリール基、３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、Ｃ１−６アルコキシ基およびＣ１−６アルキルチオ基。
本発明において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、例えば、
一般式（Ｉ）
0005190361.tif 000005
で表される化合物を挙げることができる。
（ｉ）Ｒ１
Ｒ１は、式−Ｖ１−Ｖ２−Ｖ３（式中、Ｖ１は、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基を意味する；Ｖ２は、単結合、酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、スルフィニル基、スルホニル基、式−ＣＯＮＲ６−で表される基、式−ＳＯ２ＮＲ６−で表される基、式−ＮＲ６ＳＯ２−で表される基、式−ＮＲ６ＣＯ−で表される基または式−ＮＲ６−で表される基を意味する（式中、Ｒ６は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する。）；Ｖ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。）で表される基を意味する。
Ｒ１の好適な例としては、Ｃ１−６アルキル基があげられる。ただし、この場合、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基、アミノ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基およびジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基から選ばれる置換基を有していてもよい。
Ｒ１のより好適な例としては、メチル基または式
0005190361.tif 000006
（式中、Ｒａ３はメチル基を意味する；Ｒａ１は水素原子または水酸基を意味する；Ｒａ２は、メトキシ基、エトキシ基、１−ピロリジニル基、１−ピペリジニル基、４−モルホリニル基、ジメチルアミノ基またはジエチルアミノ基を意味する。）のいずれかで表される基があげられる。
Ｒ１のさらに好適な例としては、メチル基または２−メトキシエチル基があげられる。
（ｉｉ）Ｒ２
Ｒ２は、シアノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、カルボキシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；Ｖａ１２は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する。
Ｒ２の好適な例としては、シアノ基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１およびＶａ１２は、前記定義と同じ意味である。）で表される基があげられる。
Ｒ２のより好適な例としては、シアノ基または式−ＣＯＮＨＶａ１６（式中、Ｖａ１６は、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基またはＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。ただし、Ｖａ１６は、ハロゲン原子、シアノ基、水酸基およびＣ１−６アルコキシ基から選ばれる置換基を有していてもよい。）で表される基があげられる。
Ｒ２のさらに好適な例としては、式−ＣＯＮＨＶａ１７（式中、Ｖａ１７は、水素原子、Ｃ１−６アルキル基またはＣ１−６アルコキシ基を意味する。）で表される基があげられる。
Ｒ２のもっとも好適な例としては、式−ＣＯＮＨＶａ１８（式中、Ｖａ１８は、水素原子、メチル基またはメトキシ基を意味する。）で表される基があげられる。
（ｉｉｉ）Ｙ１
Ｙ１は、式
0005190361.tif 000007
（式中、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルチオ基、ホルミル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶｄ１Ｖｄ２（式中、Ｖｄ１およびＶｄ２は、それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｗ１およびＷ２は、それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。）で表される基を意味する。
Ｙ１の好適な例としては、式
0005190361.tif 000008
（式中、Ｒ７１は、水素原子またはハロゲン原子を意味する。）で表される基があげられる。
（ｉｖ）Ｒ３およびＲ４
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する。
Ｒ３およびＲ４の好適な例としては、水素原子があげられる。
（ｖ）Ｒ５
Ｒ５は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。
Ｒ５の好適な例としては、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基があげられる。
Ｒ５のより好適な例としては、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基またはＣ６−１０アリール基（ただし、Ｒ５は、ハロゲン原子およびメタンスルホニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい）があげられる。
Ｒ５のさらに好適な例としては、メチル基、エチル基またはシクロプロピル基があげられる。
また、一般式（Ｉ）で表される化合物の好適な例としては、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（２−メトキシエトキシ）−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
Ｎ−（２−クロロ−４−（（６−シアノ−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−シクロプロピルウレア、
Ｎ−（４−（（６−シアノ−７−（（（２Ｒ）−３−（ジエチルアミノ）−２−ヒドロキシプロピル）オキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
Ｎ−（４−（（６−シアノ−７−（（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロピル）オキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−シクロプロピル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−メトキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−フルオロエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−エチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）オキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（メチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−エトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（４−（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ−（２−フルオロ−４−（（６−カルバモイル−７−メトキシ−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−シクロプロピルウレア、
Ｎ６−（２−ヒドロキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（１−プロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（ｃｉｓ−２−フルオロ−シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−（４−モルホリノ）エトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（２−フルオロエチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（（２Ｒ）テトラヒドロ−２−フラニルメチル）−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−３−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−３−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（２−メトキシエトキシ）−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ′−シクロプロピルウレア、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（３−（４−モルホリノ）プロポキシ）−４−キノリル）オキシフェニル）−Ｎ′−（３−（メチルスルホニル）フェニル）ウレア、
４−（４−（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（（２−フルオロエチルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−エトキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（４−（３−エチルウレイド）−３−フルオロ−フェノキシ）−７−メトキシキノリン−６−カルボキシリック  アシッド  （２−シアノエチル）アミドおよび
Ｎ−（４−（６−（２−シアノエチル）カルバモイル−７−メトキシ−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ’−シクロプロピルウレア
を挙げることができる。
さらに、一般式（Ｉ）で表される化合物のより好適な例としては、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（メチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
および
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドを挙げることができる。
また、一般式（Ｉ）で表される化合物のさらに好適な例としては、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（式（ＩＩ）参照）を挙げることができる。
ＲＥＴキナーゼ阻害物質の最も好適な例としては、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドのメタンスルホン酸塩を挙げることができる。
0005190361.tif 000009
一般式（Ｉ）で表される化合物は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第０２／３２８７２号パンフレット（ＷＯ０２／３２８７２）および国際公開第２００５／０６３７１３号パンフレット（ＷＯ２００５／０６３７１３）に記載された方法によって製造することができる。
また、本発明において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、例えば、
５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド  （２−ジエチルアミノエチル）アミド（以下、「ＳＵ１１２４８」ともいう。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９，３２７−３３７，２００３、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４６：１１１６−９，２００３．、ＷＯ０１／０６０８１４）（式（ＩＩＩ）参照）、
0005190361.tif 000010
Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−（５−メチル−３−イソキサゾリル）ウレア（以下、「ＫＲＮ９５１」ともいう。ＷＯ０２／０８８１１０）（式（ＩＶ）参照）、
0005190361.tif 000011
４−［（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イル）オキシ］−６−メトキシ−７−［３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ］キナゾリン（以下、「ＡＺＤ２１７１」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．６５：４３８９−４００，２００５、ＷＯ００／４７２１２）（式（Ｖ）参照）、
0005190361.tif 000012
などを挙げることができる。
ＳＵ１１２４８、ＫＲＮ９５１およびＡＺＤ２１７１は、公知の方法で製造することができ、例えば、それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。
本発明において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、酸または塩基と薬理学的に許容される塩を形成する場合もある。本発明における上記ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、これらの薬理学的に許容される塩をも包含する。酸との塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩およびギ酸、酢酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸塩などを挙げることができる。また、塩基との塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、アルギニン、リジンなどの有機塩基塩、アンモニウム塩などを挙げることができる。
また、本発明において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、これら化合物の溶媒和物および光学異性体が存在する場合には、それらの溶媒和物および光学異性体が含まれる。溶媒和物は、例えば、水和物、非水和物などを挙げることができ、好ましくは水和物を挙げることができる。溶媒は、例えば、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール）、ジメチルホルムアミドなどを挙げることができる。
さらに、本発明において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、結晶でも無結晶でもよく、また、結晶多形が存在する場合には、それらのいずれかの結晶形の単一物であっても混合物であってもよい。
また、本発明において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、生体内で酸化、還元、加水分解、抱合などの代謝を受けるＲＥＴキナーゼ阻害物質をも包含する。また、本発明において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、生体内で酸化、還元、加水分解などの代謝を受けてＲＥＴキナーゼ阻害物質を生成する化合物をも包含する。
なお、本発明のＲＥＴキナーゼ阻害物質は、ＲＥＴキナーゼ活性を阻害する活性（「ＲＥＴキナーゼ阻害活性」とも称する場合がある）を有するものである。本発明のＲＥＴキナーゼ阻害物質は、ＲＥＴの有するキナーゼ活性を阻害する作用を有すればよく、その阻害の程度には限定されない。ＲＥＴキナーゼ阻害物質の有するＲＥＴキナーゼ阻害活性の測定方法は、例えば、Ｃｅｌｌ  ｆｒｅｅキナーゼアッセイ、ウエスタンブロット、細胞増殖アッセイ、生存アッセイなどがあげられる。細胞増殖アッセイは、例えば、トリチウムチミジン取り込み法、ＭＴＴ法、ＸＴＴ法（ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ−８（同仁化学株式会社））、アラマーブルー法、ニュートラルレッド法、ＢｒｄＵ法、Ｋｉ６７染色法、ＰＣＮＡ染色法などがあげられる。生存アッセイは、例えば、ＴＵＮＮＥＬ染色法、Ｃａｓｐａｓｅ−３切断検出法、ＰＡＲＰ切断検出法などがあげられる。これらの方法は、常法に従い行うことができる（Ｂｌｏｏｄ．２００５，１０５，２９４１−２９４８．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．２００５，４，７８７−７９８．）。
以下、ＲＥＴキナーゼ阻害活性の測定方法の一例について記載する。
ＲＥＴキナーゼ阻害活性は、Ｃｅｌｌ  ｆｒｅｅキナーゼアッセイによって測定することができる。
ＲＥＴは、常法に従い遺伝子工学的手法により作製することができる。例えば、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍの方法により、昆虫細胞（Ｓｐｏｎｄｏｐｔｅａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ  ９（Ｓｆ９））にヒトリコンビナントＧＳＴ融合タンパク質、ヒトリコンビナントヒスチジンタグ融合タンパク質などとして発現させることができる。また、発現させたリコンビナントタンパク質は、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＧＳＨ−ａｇａｒｏｓｅ（シグマ社製）またはＮｉ−ＮＴＨ−ａｇａｒｏｓｅ（キアゲン社製）など）により精製することができる。タンパク質の純度および同定は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、銀染色およびＲＥＴに対する特異的抗体を用いたウエスタンブロットにより確認することができる。
Ｃｅｌｌ  ｆｒｅｅキナーゼアッセイは、以下の通りに行うことができる。
まず、プレート（例えば、９６ウエル、３８４ウエルなど）の各ウエルに、標準反応液２０μｌ、ＡＴＰ溶液５μｌ、被検物質５μｌ、ＲＥＴリコンビナントタンパク質５０ｎｇを含む溶液１０μｌおよびビオチン化修飾Ｐｏｌｙ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１１２５ｎｇを含む溶液１０μｌの混合溶液を順次加えることができる。
このキナーゼ反応液５０μｌには、６０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ（ｐＨ７．５）、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３μＭ  Ｎａ−ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、１．２ｍＭ  ＤＴＴ、５０μｇ／ｍｌ  ＰＥＧ２００００、１μＭ  ＡＴＰなどを含ませることができる。このとき、ＡＴＰは、［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰ、［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰなどの放射性同位体で標識したＡＴＰを用いることができる。
反応液を、所定の時間インキュベーションした後、２％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４溶液５０μｌを添加することにより反応を停止させることができる。
各ウエルは、適宜洗浄操作を行うことができる。
ＡＴＰの取り込み量を測定することによりＲＥＴキナーゼ阻害活性を評価することができる。上記の放射性同位体標識ＡＴＰを用いた場合は、ＡＴＰの取り込み量は、プレート上に捕捉された放射活性をシンチレーションカウンターで測定することで評価することができる。
上記の方法により、化合物のＲＥＴキナーゼ阻害活性を評価することができる。
（５）治療剤、医薬組成物、治療方法
本発明の治療剤は、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有するものであり、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤である。また、本発明の治療剤は、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有するものであり、甲状腺癌に対する治療剤である。本発明の治療剤は、好ましくは変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む疾患に対して使用される。
本発明の治療剤は、上記疾患の治療の必要のある生体、すなわち、哺乳動物（例、ヒト、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して、投与することができる。
また、本発明の医薬組成物は、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物である。
本発明の医薬組成物は、変異型ＲＥＴを発現していることを特徴とする疾患に対する治療剤として使用することができる。変異型ＲＥＴを発現していることを特徴とする疾患としては、例えば、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症、消化管の粘膜神経腫などを挙げることができる。
本発明の医薬組成物は、生体、すなわち、哺乳動物（例、ヒト、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して、投与することができる。本発明において、当該生体は、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体である。
本発明において、治療剤には、予後改善剤および再発予防剤なども含まれる。癌または腫瘍の治療剤の場合は、治療剤には、抗腫瘍剤および癌転移抑制剤なども含まれる。
治療の効果は、レントゲン写真、ＣＴ等の所見や生検の病理組織診断により、または疾患マーカーの値により確認することができる。
本発明の治療剤または医薬組成物を使用する場合、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与時期、投与間隔、医薬製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類等によって異なり、特に限定されないが、通常成人（体重６０Ｋｇ）１日あたり０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．５〜１００ｍｇ、さらに好ましくは１〜３０ｍｇであり、これを通常１日１〜３回に分けて投与することができる。
本発明のＲＥＴキナーゼ阻害物質を有効成分として含む治療剤または医薬組成物は、そのまま用いることもできるが、通常、適当な添加剤を混和し製剤化したものを使用することもできる。
上記添加剤としては、一般に医薬に使用される、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤、吸収促進剤等を挙げることができ、所望により、これらを適宜組み合わせて使用することもできる。以下に上記添加剤の例を挙げる。
賦形剤：乳糖、白糖、ブドウ糖、コーンスターチ、マンニトール、ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム
結合剤：例えばポリビニルアルコール、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、マクロゴール
滑沢剤：ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、タルク、ポリエチレングリコール、コロイドシリカ
崩壊剤：結晶セルロース、寒天、ゼラチン、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム
着色剤：三二酸化鉄、黄色三二酸化鉄、カルミン、カラメル、β−カロチン、酸化チタン、タルク、リン酸リボフラビンナトリウム、黄色アルミニウムレーキ等、医薬品に添加することが許可されているもの
矯味矯臭剤：ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末
乳化剤または界面活性剤：ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、モノステアリン酸グリセリン、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル
溶解補助剤：ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、安息香酸ベンジル、エタノール、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド
懸濁化剤：前記界面活性剤のほか、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子
等張化剤：ブドウ糖、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール
緩衝剤：リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液
防腐剤：メチルパラベン、プロピルパラベン、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸
抗酸化剤：硫酸塩、アスコルビン酸、α−トコフェロール
安定化剤：一般に医薬に使用されるもの
吸収促進剤：一般に医薬に使用されるもの
また、必要に応じて、ビタミン類、アミノ酸等の成分を配合してもよい。
また、上記製剤としては、錠剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤等の経口剤；坐剤、軟膏剤、眼軟膏剤、テープ剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤、ローション剤等の外用剤または注射剤を挙げることができる。
上記経口剤は、上記添加剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。なお、必要に応じてこれらの表面をコーティングしてもよい。
上記外用剤は、上記添加剤のうち、特に賦形剤、結合剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤または吸収促進剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。
上記注射剤は、上記添加剤のうち、特に乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤または吸収促進剤を適宜組み合わせて製剤化することができる。注射剤は、点滴、筋注、皮下注、皮内注、静注などの方法で使用することができる。
本発明は、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を患者に有効量投与することを特徴とする、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療方法を含むものである。また、本発明は、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を患者に有効量投与することを特徴とする甲状腺癌に対する治療方法を含むものである。
さらに、本発明は、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対してＲＥＴキナーゼ阻害物質を有効量投与することを特徴とする疾患の治療方法をも含むものである。本発明において、上記疾患は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患であることが好ましい。
本発明の治療方法において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の投与経路および投与方法は特に限定されないが、上記本発明の治療剤または医薬組成物の記載を参照することができる。
本発明は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用を含むものである。また、本発明は、甲状腺癌に対する治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用を含むものである。
さらに、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用をも含むものである。本発明の使用において、上記医薬組成物は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤として有用である。
本発明は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質を含むものである。また、本発明は、甲状腺癌に対する治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質を含むものである。
さらに、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質をも含むものである。本発明において、上記医薬組成物は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤として有用である。
また、本発明により、一般式（Ｉ）で示される化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有するＲＥＴキナーゼ阻害剤が提供される。
一般式（Ｉ）で示される化合物は、上記のとおりであるが、好ましくは４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドである。
さらに、本発明により、５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド  （２−ジエチルアミノエチル）アミド（ＳＵ１１２４８）、Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−（５−メチル−３−イソキサゾリル）ウレア（ＫＲＮ９５１）
および
４−［（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イル）オキシ］−６−メトキシ−７−［３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ］キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物を含有するＲＥＴキナーゼ阻害剤が提供される。
本発明のＲＥＴキナーゼ阻害剤の有するＲＥＴキナーゼ阻害活性は、前述のように測定することができる。
本発明のＲＥＴキナーゼ阻害剤は、化合物をそのまま用いることもできるし、前記の適当な添加剤を混和し、製剤化したものを使用することもできる。
本発明ＲＥＴキナーゼ阻害剤の用法、用量は、上記の治療剤または医薬組成物の記載を参照することができる。
また、本発明には、ＲＥＴキナーゼ阻害剤の製造のための一般式（Ｉ）で示される化合物、ＳＵ１１２４８、ＫＲＮ９５１およびＡＺＤ２１７１からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物の使用も含まれる。
さらに、本発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物、ＳＵ１１２４８、ＫＲＮ９５１およびＡＺＤ２１７１からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物による、ＲＥＴキナーゼの阻害方法も含まれる。本発明の方法において、当該化合物等の用法、用量は特に限定されないが、上記の治療剤または医薬組成物の記載を参照することができる。
２．感受性を予測する方法
本発明は、細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標として、患者が本発明のＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性であるか否かを予測する方法を提供する。ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して感受性の高い患者は、当該物質による治療効果をより期待できる患者である。
本発明の方法において、患者は、好ましくは多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患の患者である。
（１）細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定する工程
本工程において、細胞は、患者より取り出された細胞が好ましい。そして、細胞は、例えば、患者より外科的処置（例えば、バイオプシーなど）にて摘出することにより得ることができる。また、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫などの遺伝的な変異に起因する疾患では、細胞は、血液細胞を使用することが好ましい。
ＲＥＴの変異の有無は、前述の方法により測定することができる。
（２）患者がＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性であるか否かを予測する工程
本工程では、好ましくは（１）で測定した細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標として、患者がＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性であるか否かを予測することができる。すなわち、測定した細胞において、変異型ＲＥＴを発現している場合には、患者がＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性であると判断することができる。
本発明の別の態様として、（１）の測定結果を指標に用いて、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する細胞の感受性を分析する方法をあげることができる。すなわち、（１）の測定結果から、細胞が変異型ＲＥＴを発現しているときは、当該細胞は、変異型ＲＥＴを発現していない細胞に比べてＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する高い感受性を示すと判断することができる。
また、本発明の別の態様として、（１）の測定結果を指標に用いて、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性を示す細胞または患者を選択する方法をあげることができる。すなわち、（１）の測定結果から、細胞が変異型ＲＥＴを発現しているときは、当該細胞または当該細胞を有する患者はＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する高感受性を示すと判断できる。したがって、このような細胞または患者を、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する高感受性を示す細胞または患者として選択することができる。
また、本発明の別の態様として、（１）の測定結果を指標に用いて、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する感受性を分析し、分析結果によって患者を分類する方法をあげることができる。すなわち、本発明の方法において、（１）の測定結果から、上記のようにＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する感受性を分析し、この分析結果に基づいて、所定の細胞を含む患者を分類することができる。例えば、患者を、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含むグループと、発現していない細胞を含むグループとに分類することができる。あるいは、患者を、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性を示すグループと、それ以外のグループとに分類することができる。
また、本発明の別の態様として、（１）の測定結果から、変異型ＲＥＴを発現している細胞を有する患者を選択することを含む、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の投与対象となる患者を選択する方法をあげることができる。変異型ＲＥＴを発現している細胞を有する患者は、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の投与対象となる。
また、本発明の別の態様として、（１）の測定結果から、患者に対するＲＥＴキナーゼ阻害物質の治療効果を予測する方法をあげることができる。本発明の方法において、（１）の測定の結果、細胞が、変異型ＲＥＴを発現しているときは、ＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高い感受性を示すと判断できるため、当該細胞または当該細胞を有する患者における当該物質の治療効果は高いと予測することができる。
また、本発明には、患者のＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する感受性の程度を予測するために、当該患者由来の細胞中のＲＥＴの変異の有無を測定する方法が含まれる。当該測定方法は、上記（１）に示すとおりである。
ＲＥＴの変異の有無を測定することにより、患者のＲＥＴキナーゼ阻害物質に対する感受性の程度を予測することが可能となる。
本工程において、ＲＥＴキナーゼ阻害物質は、前述のとおりであるが、好ましくは４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である。
本発明に係る方法は、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を患者に投与する前に、当該患者におけるＲＥＴキナーゼ阻害物質の有効性の程度を予測するのに用いることができる。そして、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の有する効果をより期待できる患者を選択して、疾患の治療を行うことができる。したがって、本発明は、臨床上非常に有用である。
本発明は、本発明の方法に用いるための、ＲＥＴの変異の有無を測定するための検査用キットを提供する。本発明の検査用キットは、測定において使用される上記試薬を含むものである。本発明の検査用キットにより、患者がＲＥＴキナーゼ阻害物質に対して高感受性であるか否かを予測することができる。
また、本発明は、上記予測のための当該検査用キットの使用も含む。
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
【実施例１】
【０００６】
ＲＥＴキナーゼ阻害物質のＲＥＴキナーゼ阻害活性の測定
被検物質のＲＥＴキナーゼ阻害活性は、ＰｒｏＱｉｎａｓｅ社（Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，ドイツ、ＧｍｂＨ）への委託試験として実施された。ＲＥＴキナーゼ阻害活性は、具体的には、下記のように測定した。
１．ＲＥＴの発現および精製
ＲＥＴは、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍの方法により、昆虫細胞（Ｓｐｏｎｄｏｐｔｅａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ  ９（Ｓｆ９））にヒトリコンビナントＧＳＴ融合タンパク質として発現させた（以下、「ＲＥＴリコンビナントタンパク質」と称する場合がある）。発現させたＲＥＴリコンビナントタンパク質は、ＧＳＨ−ａｇａｒｏｓｅ（シグマ社製）またはＮｉ−ＮＴＨ−ａｇａｒｏｓｅ（キアゲン社製）を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。タンパク質の純度および同定は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ銀染色ならびにＲＥＴに対する特異的抗体を用いたウエスタンブロット法により確認した。
２．ＲＥＴキナーゼ活性に対する阻害活性の測定
まず、ストレプトアビジンコートされた９６ウェルＦｌａｓｈＰｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／ＮＥＭ社製）の各ウェルに、標準反応液２０μＬ、ＡＴＰ溶液（Ｈ２Ｏで希釈）５μＬ、被検物質５μＬ（１０％ジメチルスルホキシド水溶液）、及びＲＥＴリコンビナントタンパク質５０ｎｇを含む溶液１０μＬとビオチン化修飾Ｐｏｌｙ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１１２５ｎｇを含む溶液１０μＬの混合溶液を順次加えた。このキナーゼ反応液５０μＬには、６０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ（ｐＨ７．５）、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３μＭ  Ｎａ−ｏｒｔｈｏｖａｎａｄａｔｅ、１．２ｍＭ  ＤＴＴ、５０μｇ／ｍｌ  ＰＥＧ２００００、１μＭ［γ−３３Ｐ］−ＡＴＰが含まれていた。
被検物質には、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（メタンスルホン酸塩）、６−［２−（メチルカルバモイル）フェニルスルファニル］−３−Ｅ−［２−（ピリジン−２−イル）エテニル］インダゾール（以下、「ＡＧ０１３７３６」と称する場合がある）、ＳＵ１１２４８、ＫＲＮ９５１またはＡＺＤ２１７１を用いた。
なお、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドは、国際公開第０２／３２８７２号パンフレット（ＷＯ０２／３２８７２）および国際公開第２００５／０６３７１３号パンフレット（ＷＯ２００５／０６３７１３）の記載に基づいて製造した。
また、ＡＧ０１３７３６は、国際公開第０１／００２３６９号パンフレット（ＷＯ０１／００２３６９）の記載に基づいて製造した。さらに、ＳＵ１１２４８は、国際公開第０１／０６０８１４号パンフレット（ＷＯ０１／０６０８１４）の記載に基づいて製造した。また、ＫＲＮ９５１は、国際公開第０２／０８８１１０号パンフレット（ＷＯ０２／０８８１１０）の記載に基づいて製造した。ＡＺＤ２１７１は、国際公開第００／４７２１２号パンフレット（ＷＯ００／４７２１２）の記載に基づいて製造した。
次に、反応液を、３０℃で８０分間インキュベーションした後、２％（ｖ／ｖ）Ｈ３ＰＯ４溶液５０μｌを添加することにより反応を停止させた。
９６ウエルプレートの各ウエルを、０．９％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌ溶液２００μｌにより２回洗浄および吸引を行った。
３３Ｐｉの取り込み量は、プレート上に捕捉された放射活性をｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ，Ｗａｌｌａｃ製）により測定することで評価した。
操作は、ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ／Ｓａｇｉａｎ  ｒｏｂｏｔｉｃ  ｓｙｓｔｅｍにより行った。
ＲＥＴキナーゼ活性を５０％阻害するのに必要な被検物質の濃度（ＩＣ５０）は、各濃度（１０μＭから０．０００３μＭまで１０ポイント）における３３Ｐ比放射活性を用いて、Ｐｒｉｓｍ  ３．０３（Ｗｉｎｄｏｗｓ，Ｇｒａｐｈｐａｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を用いて算出した。
その際、ＲＥＴリコンビナントタンパク質を含まず基質Ｐｏｌｙ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１のみを入れた場合の値を０％値とし、被検物質を入れないでＲＥＴリコンビナントタンパク質と基質Ｐｏｌｙ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１を入れた場合の値を１００％値とした。
各濃度の被検物質存在下におけるキナーゼ活性は、それぞれの放射活性の値から０％値を差し引いた値が、１００％値から０％値を引いた値に対して何パーセントに相当するかを算出し、この比率（％）によりＲＥＴキナーゼ活性を５０％阻害するのに必要な被検物質の濃度（ＩＣ５０）を算出した。
その結果、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドは、ＲＥＴキナーゼ阻害活性を有すること（ＩＣ５０＝３５ｎＭ）が明らかとなった。また、ＳＵ１１２４８、ＫＲＮ９５１、ＡＺＤ２１７１は、ＲＥＴキナーゼ阻害活性を有すること（それぞれＩＣ５０＝６４，９２，７５ｎＭ）が明らかになった。ＡＧ０１３７３６は、ＩＣ５０＝５６００ｎＭであった。さらに、各被検物質のＲＥＴキナーゼ阻害活性には、程度の差があることが明らかになった。
【実施例２】
【０００７】
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）におけるリガンド非依存性ＲＥＴリン酸化に対するＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果
１．細胞抽出液の調製
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ、ＡＴＣＣより購入）を、１５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地（Ｓｉｇｍａ社より購入）に懸濁した。なお、ＴＴは、野生型ＲＥＴのアミノ酸配列において、コドン６３４のシステインがトリプトファンに変異したＲＥＴを発現している細胞である（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２０７，１０２２−１０２８，１９９５．）。その細胞懸濁液（４×１０５個／ｍＬ）２ｍＬ／ｗｅｌｌを細胞培養用６ウェルプレート（ＦＡＬＣＯＮ社より購入）に加え、５％ＣＯ２インキュベーター中（３７℃）で一晩培養した。培養後、各ウェルから上清を取り除き、１．８ｍＬの１５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地を加えた。そこに、ジメチルスルホキシドに溶解させた被検物質４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（メタンスルホン酸塩）（１５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で希釈）を０．２ｍＬ加えて、５％ＣＯ２インキュベーター中（３７℃）で１時間培養した。各ウェルから上清を取り除き、各ウェルをＰＢＳ４００μＬで洗浄し、そこへ可溶化緩衝液（５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４），１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１０％（ｖ／ｖ）グリセロール、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００，１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０），１００ｍＭ  ＮａＦ，１ｍＭ  ＰＭＳＦ，１０μｇ／ｍＬ  Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，５０μｇ／ｍＬ  Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，１μｇ／ｍＬ  Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ  Ａ，１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４）を１００μＬ加えた。この溶液を含む細胞をスクレイパーで回収し、４℃、１５分、１５，０００ｒｐｍにて処理し、上清にＳＤＳ  ｂｕｆｆｅｒを加えた後に９４℃、５分処理を行なうことで、タンパク質を可溶化させ、それを細胞抽出液として２０μｇ／１０μＬに調製した。
２．電気泳動およびウェスタンブロッティング
前記細胞抽出液２０μｇ／１０μＬを４−２０％  ｇｒａｄｉｅｎｔ  ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｇｅｌ（第一化学薬品株式会社より購入）で電気泳動を行なった。泳動後、常法に従い、ＰＶＤＦ膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ  ｂｉｏｔｅｃｈ社より購入）にトランスファーした。そして、トランスファーしたメンブレンについて、一次抗体として抗ＲＥＴ抗体（ａｎｔｉ−ＲＥＴ，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社より購入）、抗リン酸化ＲＥＴ抗体（ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ  ＲＥＴ（Ｔｙｒ９０５），Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社より購入）、抗Ｅｒｋ１／２抗体（ａｎｔｉ−Ｅｒｋ１／２，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社より購入）または抗リン酸化Ｅｒｋ１／２抗体（ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｅｒｋ１／２，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社より購入）を、二次抗体としてｈｏｒｓｅ  ｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ，ＨＲＰ−ｌｉｎｋｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社より購入））を用いてイムノブロットを行なった。メンブレンを洗浄後、Ｓｕｐｅｒ  Ｓｉｇｎａｌ（ＰＩＥＲＣＥ社より購入）で発色させた。
被検物質を添加していない細胞抽出液を加えたウェルの吸光度を１００％のＲＥＴ自己リン酸化活性として、各レーンのＲＥＴ自己リン酸化活性（％）を求めた。被検物質の濃度を数段階に変えて、それぞれの場合におけるＲＥＴ自己リン酸化活性（％）を求め、被検物質のＲＥＴ自己リン酸化活性を５０％阻害するのに必要な被検物質の濃度（ＩＣ５０）を算出した。
その結果、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドは、濃度依存的にＲＥＴのリン酸化を阻害した（ＩＣ５０＝２７ｎＭ）（図１）。また、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドは、ＲＥＴの下流分子の一つであり細胞増殖シグナルに関連するＥｒｋ１／２のリン酸化に対してもＲＥＴキナーゼと同等の濃度で阻害することが明らかとなった（図１）。
【実施例３】
【０００８】
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）の細胞増殖に対するＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ、ＡＴＣＣより購入）を、１５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地（Ｓｉｇｍａ社より購入）に懸濁した。その細胞懸濁液（３×１０４個／ｍＬ）０．１ｍＬ／ｗｅｌｌを細胞培養用９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ社より購入）に加え、５％ＣＯ２インキュベーター中（３７℃）で一晩培養した。培養後、各ウェルに１５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で希釈した被検物質４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（メタンスルホン酸塩）０．１ｍＬを加えて、更に５％ＣＯ２インキュベーター中（３７℃）で１０日間培養した。培養後、各ウェルにＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−１（ＤＯＪＩＮＤＯ社より購入）を１０μＬ加え、５％ＣＯ２インキュベーター中（３７℃）で発色後、測定波長を４１５ｎｍ、対照波長を６６０ｎｍとして、各ウェルの吸光度をプレートリーダーＭＴＰ−５００（コロナ電気社製）を用いて測定した。被検物質を加えていないウェルの吸光度に対する被検物質を加えた各ウェルの吸光度の比率（％）を求め、この比率から細胞増殖を５０％阻害するのに必要な被検物質の濃度（ＩＣ５０）を算出した。
その結果、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドは、ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）の増殖に対してＩＣ５０＝７８ｎＭの阻害活性を有することが明らかとなった。
【実施例４】
【０００９】
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）皮下移植モデルにおけるＲＥＴキナーゼ阻害物質の抗腫瘍効果
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ、ＡＴＣＣより購入）を３７℃下、５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１５％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルレントとなるまで培養し、常法に従いトリプシン−ＥＤＴＡにより、細胞を回収した。細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製した。そして、得られた細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス（チャールズリバー社より購入）体側皮下に移植した。
移植後、腫瘍体積が約１００−２００ｍｍ３になった時点から、被検物質４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（メタンスルホン酸塩）を１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回、４週間のスケジュールで経口投与した。腫瘍長径および短径をデジマチックキャリパ（Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ）で測定し、以下の式で腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ＴＶ）＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
その結果、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドは、ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）皮下移植モデルにおいて、用量依存的に抗腫瘍効果を有することが明らかとなった（図２）。
【実施例５】
【００１０】
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）皮下移植モデルにおけるＲＥＴのリン酸化に対するＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果
ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ、ＡＴＣＣより購入）を３７℃下、５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１５％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルレントとなるまで培養し、常法に従いトリプシン−ＥＤＴＡにより、細胞を回収した。細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製した。そして、得られた細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス（チャールズリバー社より購入）体側皮下に移植した。
移植後、腫瘍体積が約１００−２００ｍｍ３になった時点において、被検物質４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（メタンスルホン酸塩）１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを経口投与した。投与後、２、８、１２または２４時間で腫瘍を摘出し、摘出した腫瘍へ可溶化緩衝液（５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４），１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１０％（ｖ／ｖ）グリセロール、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００，１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０），１００ｍＭ  ＮａＦ，１ｍＭ  ＰＭＳＦ，１０μｇ／ｍＬ  Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，５０μｇ／ｍＬ  Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，１μｇ／ｍＬ  Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ  Ａ，１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４）、２５ｍＭ  β−ｇｌｙｃｅｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ  ＩＩ（ＳＩＧＭＡ））を加えてホモジナイズした。４℃、１５分、１５，０００ｒｐｍにて処理し、上清にＳＤＳ  ｂｕｆｆｅｒを加えた後に９４℃、５分処理を行なうことで、タンパク質を可溶化させ、それを細胞抽出液として２０μｇ／１０μＬに調製した。実施例２と同様の方法により、前記細胞抽出液で電気泳動およびイムノブロットを行った。
その結果、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドは、ヒト甲状腺髄様癌細胞株（ＴＴ）皮下移植モデルにおいて、抗腫瘍効果の認められた投与量でＲＥＴの自己リン酸化の阻害活性を有することが明らかとなった（図３）。
これらの結果から、本発明のＲＥＴキナーゼ阻害物質は、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して、より有効な効果を期待できることが示された。そして、本発明のＲＥＴキナーゼ阻害物質は、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患ならびに甲状腺癌に対する治療剤として有用であることが示された。
［参考例］
ＲＥＴキナーゼ阻害物質の一つである４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの製剤の製造法を以下に参考例として記載する。
（医薬組成物の製造）
（１）１ｍｇ錠
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド  メタンスルホン酸塩の結晶（Ｃ）（以下、「結晶（Ｃ）」と称する場合がある。なお、結晶（Ｃ）は、ＷＯ２００５／０６３７１３の実施例７に記載の方法に従って製造したものである。）２４ｇと無水軽質ケイ酸（ゲル化防止剤、商品名ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）２００、日本アエロジル株式会社）１９２ｇを２０Ｌスーパーミキサーで混合後、さらにＤ−マンニトール（賦形剤、東和化成工業株式会社）１２３６ｇ、結晶セルロース（賦形剤、商品名アビセルＰＨ１０１、旭化成工業株式会社）７２０ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース（結合剤、商品名ＨＰＣ−Ｌ、日本曹達株式会社）７２ｇを加えて混合した。その後、無水エタノールを適量添加し結晶（Ｃ）を含有する造粒物を得た。この造粒物を棚式乾燥機（６０℃）で乾燥後、パワーミルを用いて整粒し、顆粒を得た。この顆粒とともに、クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤、商品名Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ、ＦＭＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）１２０ｇ、フマル酸ステアリルナトリウム（滑沢剤、ＪＲＳ  Ｐｈａｒｍａ  ＬＰ）３６ｇを２０Ｌタンブラーミキサーに入れて混合後、打錠機で製錠し、１錠あたり総質量１００ｍｇの錠剤を得た。さらに錠剤コーティング機で、コーティング液として１０％オパドライイエロー（ＯＰＡＤＲＹ  ０３Ｆ４２０６９  ＹＥＬＬＯＷ、日本カラコン株式会社）水溶液を用いて、錠剤にコーティングし、１錠あたり総質量１０５ｍｇのコーティング錠を得た。
（２）１０ｍｇ錠
結晶（Ｃ）６０ｇと無水軽質ケイ酸（ゲル化防止剤、商品名ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）２００、日本アエロジル株式会社）１９２ｇを２０Ｌスーパーミキサーで混合後、さらにＤ−マンニトール（賦形剤、東和化成工業株式会社）１２００ｇ、結晶セルロース（賦形剤、商品名アビセルＰＨ１０１、旭化成工業株式会社）７２０ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース（結合剤、商品名ＨＰＣ−Ｌ、日本曹達株式会社）７２ｇを加えて混合した。その後、無水エタノールを適量添加し結晶（Ｃ）を含有する造粒物を得た。この造粒物を棚式乾燥機（６０℃）で乾燥後、パワーミルを用いて整粒し、顆粒を得た。この顆粒とともに、クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤、商品名Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ、ＦＭＣＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）１２０ｇ、フマル酸ステアリルナトリウム（滑沢剤、ＪＲＳ  Ｐｈａｒｍａ  ＬＰ）３６ｇを２０Ｌタンブラーミキサーに入れて混合後、打錠機で製錠し、１錠あたり総質量４００ｍｇの錠剤を得た。さらに錠剤コーティング機で、コーティング液として１０％オパドライイエロー（ＯＰＡＤＲＹ  ０３Ｆ４２０６９  ＹＥＬＬＯＷ、日本カラコン株式会社）水溶液を用いて、錠剤にコーティングし、１錠あたり総質量４１１ｍｇのコーティング錠を得た。
（３）１００ｍｇ錠
結晶（Ｃ）３１．４ｇと無水軽質ケイ酸（ゲル化防止剤、商品名ＡＥＲＯＳＩＬ（登録商標）２００、日本アエロジル株式会社）４ｇを１Ｌスーパーミキサーで混合後、さらに、無水リン酸水素カルシウム（賦形剤、協和化学工業株式会社）４０．１ｇ、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（結合剤、商品名Ｌ−ＨＰＣ（ＬＨ−２１）、信越化学工業株式会社）１０ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース（結合剤、商品名ＨＰＣ−Ｌ、日本曹達株式会社）３ｇを加えて混合した。その後、無水エタノールを適量添加し結晶（Ｃ）を含有する造粒物を得た。この造粒物を棚式乾燥機（６０℃）で乾燥後、パワーミルを用いて整粒し、顆粒を得た。この顆粒とともに、クロスカルメロースナトリウム（崩壊剤、商品名Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ、ＦＭＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）１０ｇ、フマル酸ステアリルナトリウム（滑沢剤、ＪＲＳ  Ｐｈａｒｍａ  ＬＰ）１．５ｇを混合後、打錠機で製錠し、１錠あたり総質量４００ｍｇの錠剤を得た。
【産業上の利用可能性】
【００１１】
本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＡ型、多発性内分泌腫瘍症ＩＩＢ型、家族性甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、散発性甲状腺髄様癌、ヒルシュスプルング病、褐色細胞腫、副甲状腺過形成症および消化管の粘膜神経腫からなる群から選択される少なくとも一つの疾患に対する治療剤、治療方法、前記治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質が提供される。
また、本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する甲状腺癌に対する治療剤、治療方法、前記治療剤の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記治療剤のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質が提供される。
さらに、本発明により、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与するための、ＲＥＴキナーゼ阻害物質を含有する医薬組成物、変異型ＲＥＴを発現している細胞を含む生体に対して投与することを特徴とする疾患の治療方法、前記医薬組成物の製造のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質の使用および前記医薬組成物のためのＲＥＴキナーゼ阻害物質が提供される。
また、本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害剤が提供される。
さらに、本発明により、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果を予測する方法が提供される。
より詳細には、ＲＥＴキナーゼ阻害物質の効果は、細胞中のＲＥＴの変異の有無を指標とすることにより予測することが可能となった。
本発明に係る方法により、患者に化合物を投与することなく、効果を予測することが可能となるため、当該化合物による効果をより期待できる患者を選択することができ、患者のＱＯＬに貢献することが可能となった。
【配列表フリーテキスト】
【００１２】
配列番号：５〜２０    プライマー
［配列表］
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【図２】
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【図１】
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【図３】
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