(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0005182747.tif 000023
〔式中、Ａはトリフルオロメチル基又はトリフルオロメトキシ基であり；ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり；Ｙは窒素原子又は炭素原子であり；Ｒ１及びＲ２のそれぞれは水素原子又はアルキル基であり；ｍは０又は１であり；ｎは０〜６の整数であり；ｐは０〜５の整数である。但しＹが窒素原子のときｐは０〜４である。〕で表されるアミノスチレン誘導体又はその塩。
【請求項２】
ｐが１〜５の整数である、請求項１に記載のアミノスチレン誘導体又はその塩。
【請求項３】
式（Ｉ）：
【化２】
0005182747.tif 000024
〔式中、Ａはトリフルオロメチル基又はトリフルオロメトキシ基であり；ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり；Ｙは窒素原子又は炭素原子であり；Ｒ１及びＲ２のそれぞれは水素原子又はアルキル基であり；ｍは０又は１であり；ｎは０〜６の整数であり；ｐは０〜５の整数である。但しＹが窒素原子のときｐは０〜４である。〕で表されるアミノスチレン誘導体又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬。
【請求項４】
ｐが１〜５の整数である、請求項３に記載の画像診断薬。
【請求項５】
アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患がアルツハイマー病である請求項３に記載の画像診断薬。
【請求項６】
画像診断がＭＲＩである請求項３、４又は５記載の画像診断薬。
【請求項７】
式（Ｉ）：
【化３】
0005182747.tif 000025
〔式中、Ａはトリフルオロメチル基又はトリフルオロメトキシ基であり；ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり；Ｙは窒素原子又は炭素原子であり；Ｒ１及びＲ２のそれぞれは水素原子又はアルキル基であり；ｍは０又は１であり；ｎは０〜６の整数であり；ｐは０〜５の整数である。但しＹが窒素原子のときｐは０〜４である。〕で表されるアミノスチレン誘導体又はその塩を有効成分とする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬、特に、アルツハイマー病の診断に有用な新規アミノスチレン誘導体又はその塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、初老期から老年期に起こる進行性の痴呆を特徴とする疾患であり、現在、国内の患者数は１００万人以上と言われている。今後人口の高齢化に伴いその数は確実に増加すると予想される。【０００３】
アルツハイマー病の臨床症状は、記憶障害、高次脳機能障害（失語、失行、失認、構成失行）等である。その症状は他の痴呆疾患でも共通して見られることが多く、臨床症状だけでアルツハイマー病と確定診断することは極めて困難である。【０００４】
一方、アルツハイマー病の特徴的な病理組織所見としては、老人斑と神経原線維変化がある。前者の主構成成分はβシート構造をとったアミロイドβ蛋白であり、後者のそれは過剰リン酸化されたタウ蛋白である。アルツハイマー病においては臨床症状が発症するかなり前から、脳内ではアミロイドβ蛋白の蓄積等の上記病理的組織変化が始まっていることが知られている。したがって、脳内のアミロイドβ蛋白をマーカーとして検出することが、アミロイドが蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の早期診断方法の１つとなる。このような観点から、近年、脳内アミロイドβ蛋白に選択的に結合するポジトロン断層撮影法（PET）やシングルフォトン断層撮影法（SPECT）用の放射性造影剤の研究が進められている。アミロイドに親和性の高い古典的な化合物としては、アルツハイマー病の病理的確定診断に使用されているコンゴーレッド、チオフラビンSおよびチオフラビンTがある。その多くは、血液―脳関門を通過しがたく静脈内投与しても殆ど脳内へは移行しない。そこで、血液―脳関門の透過性を考慮した造影剤の研究が進められ、ISB、PIB、BF-168（特許文献１）等の造影剤が開発されており、そのいくつかは臨床試験で良好な成績が得られている。しかし、それらは、11C、13N、15O、18F等の放射性核種を用いるため放射線障害による副作用が懸念されるとともに、近くにサイクロトロン施設を併設する必要があり、放射性核種を用いない診断方法が望まれている。【０００５】
放射性核種を用いない診断方法の一つとして核磁気共鳴イメージング法（MRI）がある。近年、１９Ｆ−ＭＲＩを用いて老人斑の画像化に成功したとの報告（特許文献２、非特許文献１）がなされ、ＭＲＩ診断への期待が高まっている。しかしながら、ＭＲＩはＰＥＴ等に比べ検出感度が低いことが知られており、安全なアルツハイマー病の診断法確立に向け、高感度のＭＲＩ造影剤の開発が切望されている。
【特許文献１】ＷＯ２００３/１０６４３９
【特許文献２】ＷＯ２００５/０４２４６１
【非特許文献１】M.Higuchi et al.,Nature Neuroscience 8(4),527(2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、アミロイドβ蛋白に対する高い結合特異性と高い血液−脳関門透過性を兼ね備えた物質を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、一定の化学構造の化合物がアミロイドβ蛋白に対する非常に高い結合特異性、ならびに血液−脳関門透過性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。【０００８】
すなわち、本発明は、式（Ｉ）：【０００９】
【化１】
0005182747.tif 000002
【００１０】
〔式中、Ａはトリフルオロメチル基又はトリフルオロメトキシ基であり；ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり；Ｙは窒素原子又は炭素原子であり；Ｒ１及びＲ２のそれぞれは水素原子又はアルキル基であり；ｍは０又は１であり；ｎは０〜６の整数であり；ｐは０〜５の整数である。但しＹが窒素原子のときｐは０〜４である。〕で表されるアミノスチレン誘導体又はその塩に関する。【００１１】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬に関する。【００１２】
さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑の染色薬に関する。【００１３】
Ｒ１又はＲ２のアルキル基としては、直鎖又は分枝状のＣ1-6アルキルであればよく、その具体例としてはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチルなどが挙げられ、直鎖又は分枝状のＣ1-3アルキル基が好ましい。Ｒ１とＲ２の一方又は両方がアルキル基であるのが好ましい。【００１４】
ｍは０又は１であり、好ましくは１である。【００１５】
ｎは０〜６の整数であり、好ましくは１〜６の整数である。【００１６】
ｐは０〜５の整数であり、好ましくは１〜５の整数である。画像診断薬の場合、ｐは１〜３の整数であるのが好ましく、染色薬の場合は０〜３の整数であるのが好ましい。【００１７】
ＸはＯ、Ｓ又はＮＨであり、Ｏが好ましい。【００１８】
式（Ｉ）の化合物の塩としては、医薬上許容される塩であればよく、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸塩；酒石酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、グリコール酸塩、琥珀酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩などの有機酸塩などが挙げられる。また、これらの塩の中で結晶水を持つものもある。
【発明の効果】
【００１９】
本発明化合物は、アミロイドβ蛋白に対する高い親和性と高い血液―脳関門透過性を有し、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬の有効成分、例えばＭＲＩ造影剤の有効成分として有用である。また、脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬の有効成分、例えば該蛋白の蛍光染色剤として有用である。従って、本発明化合物を用いれば、アルツハイマー病のようなアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の早期診断が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
式（Ｉ）の化合物又はその塩は、下記製法〔１〕から〔５〕のいずれかに記載の方法により製造することができる。
製法〔１〕
式（Ｉ）において、ｍが０、ｎが０である化合物は、式（II）の化合物と、式（III）の化合物とを反応させることにより製造する。【００２１】
【化２】
0005182747.tif 000003
【００２２】
〔式中、Ａ、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２及びｐは前述の定義通りであり、Halはハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）である〕
製法〔１〕において、反応を効率的に行うためには、塩基の存在下で反応を行うのが望ましい。具体的に使用される塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕−７−ウンデセン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンなどの有機塩基；リチウム、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属の水酸化物；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属の炭酸塩；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属の炭酸水素塩；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどのアルカリ金属の水素化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert−ブトキシドなどの金属アルコキシドなどを挙げることができる。塩基の使用量は、特に限定されないが、１当量から過剰量である。製法〔１〕の反応は、一般に０〜１５０℃、望ましくは０〜１００℃の反応温度で行われる。反応時間は、一般に０．５〜２４時間である。製法〔１〕において、式（II）の化合物１モルに対して式(III)の化合物は、０．８〜１０当量、望ましくは１〜２当量の割合で使用することができる。【００２３】
製法〔１〕の反応は、適当な溶媒の存在下で行うことができる。具体的に使用される溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
製法〔２〕
前記式（Ｉ）において、ｍが１、ｎが０〜６である化合物は、式（IV）の化合物と、式（Ｖ）の化合物とを反応させることにより製造する。【００２４】
【化３】
0005182747.tif 000004
【００２５】
〔式中、Ａ、Ｘ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２及びｐは前述の定義通りであり、Tsはトシル基である〕
製法〔２〕において、反応を効率的に行うためには、塩基の存在下で反応を行うのが望ましい。具体的に使用される塩基としては、トリエチルアミン、ピリジン、Ｎ−メチルモルホリン、１，８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕−７−ウンデセン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンなどの有機塩基；リチウム、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ金属の水酸化物；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムなどのアルカリ金属の炭酸塩；炭酸水素リチウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属の炭酸水素塩；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウムなどのアルカリ金属の水素化物；ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム tert−ブトキシドなどの金属アルコキシドなどを挙げることができる。製法〔２〕の反応は、一般に−７０〜１５０℃、望ましくは−１０〜１００℃の反応温度で行われる。反応時間は、一般に０．１〜１５０時間である。製法〔２〕において、式（IV）の化合物１モルに対して式（V）の化合物は、１〜１０当量、望ましくは１〜５当量の割合で使用することができる。【００２６】
製法〔２〕の反応は、適当な溶媒の存在下で行うことができる。具体的に使用される溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
製法〔３〕
前記式（Ｉ）において、ｍが０、ｎが1〜６である化合物は、式（IV-a）の化合物と、式（ＶI）の化合物を使用して、製法〔２〕と同様の方法で製造することができる。【００２７】
【化４】
0005182747.tif 000005
【００２８】
〔式中、Ａ、X、Ｙ、Ｒ1、Ｒ2及びｐは前述の定義通りであり、Tsはトシル基を示し、MはNa、Li又はKを示す。〕
前記式(IV）の化合物は、公知の類似化合物の製造方法又はそれらに準じた方法によって製造でき、例えば下記製法〔Ａ〕に記載の方法により製造することができる。すなわち、式（II）の化合物と、式（VII）の化合物とをトリフェニルホスフィン並びにアゾジカルボン酸ジイソプロピルの存在下で反応させることにより製造できる。なお、式(VII)で表される化合物は、公知の方法｛Organic Letters,4(14),2329-2332 (2002)など｝で製造することができる。
製法〔Ａ〕【００２９】
【化５】
0005182747.tif 000006
【００３０】
〔式中、Ｘ、Ｒ１及びＲ２は前述の定義通りであり、Tsはトシル基である〕
製法〔Ａ〕の反応は、適当な溶媒の存在下で行うことができる。具体的に使用される溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。製法〔Ａ〕の反応は、一般に−７０〜１５０℃、望ましくは−１０〜１００℃の反応温度で行われる。反応時間は、一般に０．１〜４８時間である。製法〔Ａ〕において、式（II）の化合物１モルに対して式（VII）の化合物は、１〜１０当量、望ましくは１〜５当量の割合で使用することができる。【００３１】
前記式（II）の化合物は、公知の類似化合物の製造方法又はそれらに準じた方法によって製造でき、例えば下記製法〔Ｂ〕に記載の方法により製造することができる。すなわち、式（VIII）の化合物を酸で脱保護することにより製造できる。
製法〔Ｂ〕【００３２】
【化６】
0005182747.tif 000007
【００３３】
〔式中、Ｘ、Ｒ１及びＲ２は前述の定義通りである〕
製法〔Ｂ〕の反応は、適当な溶媒の存在下で行うことができる。具体的に使用される溶媒としては、水；メタノール、エタノールなどのアルコール類；テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
前記式（VIII）の化合物は、公知の類似化合物の製造方法又はそれらに準じた方法によって製造でき、例えば下記製法〔Ｃ〕に記載の方法により製造することができる。すなわち、式（IX）の化合物と、式（X）の化合物とを反応することにより製造できる。なお、式（IX）の化合物は、公知の方法で製造できる。
製法〔Ｃ〕【００３４】
【化７】
0005182747.tif 000008
【００３５】
〔式中、Ｘ、Ｒ１及びＲ２は前述の定義通りである〕
製法〔Ｃ〕において、反応を効率的に行うためには、アルカリ金属の水酸化物、アルカリ金属アルコラート、金属フッ化物、テトラアルキルアンモニウムフッ化物または金属水素化物の存在下で反応を行うのが望ましい。具体的に使用される化合物としては、水酸化ナトリウム、ナトリウムエトキシド、ナトリウムメトキシド、カリウム tert−ブトキシド、フッ化カリウム、フッ化セシウム、フッ化テトラエチルアンモニウム、フッ化テトラｎ−ブチルアンモニウム、水素化ナトリウムなどを挙げることができる。製法〔Ｃ〕の反応は、一般に−７０〜１５０℃、望ましくは−１０〜１００℃の反応温度で行われる。反応時間は、一般に０．１〜４８時間である。製法〔Ｃ〕において、前記式（IX）の化合物１モルに対して式（X）の化合物は、０．８〜２当量、望ましくは１〜１．５当量の割合で使用することができる。【００３６】
製法〔Ｃ〕の反応は、適当な溶媒の存在下で行うことができる。具体的に使用される溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素類；ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテル、リグロイン、石油ベンジンなどの脂肪族炭化水素類；ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類；スルホランなどのスルホン類；ヘキサメチルホスホルアミドなどのリン酸アミド類；クロロホルム、ジクロロメタン、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。
製法〔４〕
前記式（Ｉ）において、ｍが１、ｎが０〜６であり、XがＯ又はＳである化合物は、式（XI）の化合物を酸で脱保護することにより製造できる。【００３７】
【化８】
0005182747.tif 000009
【００３８】
〔式中、Ａ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、ｎ及びｐは前述の定義通りであり、ｍは１であり、Ｘ１はＳ又はＯであり、Bocはtert−ブトキシカルボニル基を示し、Ｒ１a、Ｒ２aはそれぞれ独立にアルキル基又はBocである〕
製法〔４〕の反応は、酸及び適当な溶媒の存在下で行うことができる。酸としては、塩酸、硫酸、トリフルオロ酢酸等が挙げられる。具体的に使用される溶媒としては、水；メタノール、エタノールなどのアルコール類；テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。製法〔４〕の反応は、一般に０〜５０℃、望ましくは１０〜３０℃の反応温度で行われる。反応時間は、一般に０．５〜５時間である。【００３９】
前記式(XI）の化合物は、前述の製法〔Ｃ〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XII）の化合物と、式（X-a）の化合物とを反応することにより製造できる。なお、式（X-a）の化合物は、公知の方法で製造できる。【００４０】
【化９】
0005182747.tif 000010
【００４１】
〔式中、Ａ、Ｒ１a、Ｒ２a、Ｘ１、Ｙ、ｎ、ｐ及びBocは前述の定義通りであり、ｍは１である〕
前記式（XII）の化合物は、公知の類似化合物の製造方法又はそれらに準じた方法によって製造でき、例えば下記製法〔Ｅ〕に記載の方法により製造することができる。すなわち、式（XIII）の化合物とジ-tert-ブチルジカルボナートとを反応することにより製造できる。
製法〔Ｅ〕【００４２】
【化１０】
0005182747.tif 000011
【００４３】
〔式中、Ａ、Ｘ１、Ｙ、ｎ、ｐ及びBocは前述の定義通りであり、ｍは１である〕
製法〔Ｅ〕の反応は、適当な溶媒の存在下で行うことができる。具体的に使用される溶媒としては、水；メタノール、エタノールなどのアルコール類；テトラヒドロフランなどのエーテル類；アセトニトリル、プロピオニトリルなどのニトリル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドなどの酸アミド類；ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類及びこれらの混合溶媒を挙げることができる。【００４４】
製法〔Ｅ〕の反応において、反応を効率的に行うために、必要に応じて塩基の存在下で反応を行うことができる。塩基としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのような金属水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのような炭酸塩；トリエチルアミン、ピリジンなどの有機塩基などを挙げることができる。
製法〔Ｅ〕の反応は、一般に２０〜１００℃の反応温度で行われる。反応時間は、一般に１〜２４時間である。【００４５】
前記式（ＸIII）の化合物は、前述の製法〔２〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XIV）の化合物と、式（Ｖ）の化合物とを反応することにより製造できる。【００４６】
【化１１】
0005182747.tif 000012
【００４７】
〔式中、Ａ、Ｘ１、Ｙ、ｎ、ｐ及びTsは前述の定義通りであり、ｍは１である〕
前記式(XIV）の化合物は、前述の製法〔Ａ〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XV）の化合物と、式（VII）の化合物とを反応することにより製造できる。なお、式（XV）の化合物は、公知の方法で製造できる。【００４８】
【化１２】
0005182747.tif 000013
【００４９】
〔式中、Ｘ１、n、Tsは前述の定義通りである〕
製法〔５〕
前記式（Ｉ）において、ｍが１、ｎが1〜６であり、ＸがＮＨである化合物は、式（XVI）の化合物を酸で脱保護することにより製造できる。【００５０】
【化１３】
0005182747.tif 000014
【００５１】
〔式中、Ａ、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１a、Ｒ２a、ｎ、ｐ及びBocは前述の定義通りであり、ｍは１である〕
製法〔５〕の反応は、前述の製法〔４〕に記載の方法に準じて製造することができる。【００５２】
前記式(XVI）の化合物は、前述の製法〔Ｃ〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XVII）の化合物と、式（X-a）の化合物とを反応することにより製造できる。なお、式（X-a）の化合物は、公知の方法で製造できる。【００５３】
【化１４】
0005182747.tif 000015
【００５４】
〔式中、Ａ、Ｙ、Ｒ１a、Ｒ２a、ｎ、ｐ及びBocは前述の定義通りであり、ｍは１である〕
前記式（XVII）の化合物は、前述の製法〔Ｅ〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XVIII）の化合物とジ-tert-ブチルジカルボナートとを反応することにより製造できる。【００５５】
【化１５】
0005182747.tif 000016
【００５６】
〔式中、Ａ、Ｙ、ｎ、ｐ及びBocは前述の定義通りであり、ｍは１である〕
前記式（XVIII）の化合物は、前述の製法〔２〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XIX）の化合物と、式（Ｖ）の化合物とを反応することにより製造できる。【００５７】
【化１６】
0005182747.tif 000017
【００５８】
〔式中、Ａ、Ｙ、ｎ、ｐ、Tsは前述の定義通りであり、ｍは１である〕
前記式（XIX）の化合物は、前述の製法〔Ｅ〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XX）の化合物とジ-tert-ブチルジカルボナートと反応することにより製造できる。【００５９】
【化１７】
0005182747.tif 000018
【００６０】
〔式中、n、Ts及びＢocは前述の定義通りである〕
前記式(XX）の化合物は、公知の類似化合物の製造方法又はそれらに準じた方法によって製造でき、例えば下記製法〔Ｆ〕に記載の方法により製造することができる。すなわち、式（XXI）の化合物と酢酸を反応することにより製造できる。製法〔Ｆ〕の反応は、一般に５０〜１２０℃の反応温度で行われる。反応時間は、一般に１〜２０時間である。
製法〔Ｆ〕【００６１】
【化１８】
0005182747.tif 000019
【００６２】
〔式中、ｎ、Ts及びBocは前述の定義通りである〕
前記式(XXI）の化合物は、前述の製法〔Ａ〕に記載の方法に準じて製造することができる。すなわち、式（XXII）の化合物と、式（VII）の化合物とを反応することにより製造できる。なお、式（XXII）の化合物は、公知の方法で製造できる。すなわち、３，４−ジアミノフェノールとジ-tert-ブチルジカルボナートとを反応することにより製造できる。【００６３】
【化１９】
0005182747.tif 000020
【００６４】
〔式中、n、Ts及びＢocは前述の定義通りである〕
上記した製法〔１〕〜〔５〕及びそれに付随した方法で得られる前記式（Ｉ）の化合物は、公知の手段、例えば、濃縮、減圧濃縮、蒸留、分留、転溶、溶媒抽出、結晶化、再結晶、クロマトグラフィーなどにより単離、精製することができる。【００６５】
前記式（Ｉ）の化合物がフリー体で得られる場合、通常の方法で塩を形成させることができる。【００６６】
式（Ｉ）の化合物のいくつかの例を第１表に示す。【００６７】
【表１】
0005182747.tif 000021
【００６８】
【表２】
0005182747.tif 000022
【００６９】
式（Ｉ）の化合物又はその塩は、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬として使用することができる。また、式（Ｉ）の化合物又はその塩は、脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬として使用することができる。【００７０】
本発明の望ましい実施形態は、次のものである。
（１）式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断薬。
（２）アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患がアルツハイマー病である（１）に記載の画像診断薬。
（３）脳内アミロイドのＭＲＩ造影剤である（１）又は（２）に記載の画像診断薬。
（４）式（Ｉ）の化合物又はその塩を有効成分とする脳をはじめとする組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑染色薬。
（５）アミロイドβ蛋白の蛍光染色薬である（４）に記載の染色薬。
（６）（１）に記載の画像診断薬を用いる、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患の診断方法。
（７）（４）に記載の染色薬を用いて組織中のアミロイドβ蛋白又は老人斑を染色する方法。【００７１】
式（Ｉ）の化合物の多くは疎水性の化合物であり、水に対する溶解度は低い。生体に投与する化合物としては水溶解度が高いことが望ましく、式（Ｉ）の化合物の内、ｍ＝１、ｎが１以上及び/又は塩を持つ化合物がより望ましく、化合物（３）又は（４）がさらに望ましい。【００７２】
式（Ｉ）の化合物又はその塩を画像診断薬として使用する場合、本化合物により脳内の老人斑を特異的に検出することができる。特に、本化合物の内、ｐが１以上の化合物は、トリフルオロメチル基又はトリフルオロメトキシ基を有するため、19Ｆ―ＭＲＩを用いて非侵襲的にアミロイドβ蛋白を検出することができる。19Ｆ―ＭＲＩにおける検出感度は、フッ素原子の数に依存しており、置換基（Ａ）ｐの数は、多いほうが望ましい。【００７３】
式（Ｉ）の化合物又はその塩を画像診断薬として使用する場合、その投与は、局所的であってもよく、全身的であってもよい。投与方法には特に制限はなく、経口的又は非経口的に投与される。非経口的投与経路としては、皮下、腹腔内、静脈、動脈又は脊髄液への注射又は点滴等が挙げられる。【００７４】
式（Ｉ）の化合物又はその塩を含む画像診断薬は、ヒトへの投与に適した医薬上許容される形態であって、生理学的に許容し得る添加剤を含む。かかる組成物は、適宜、医薬として許容し得る希釈剤、緩衝剤、可溶化剤（例えば、シクロデキストリン、プルロニック、ポリエチレングリコール、Ｔｗｅｅｎ、クレモフォール又はリン脂質のような界面活性剤）、無痛化剤等を添加してもよく、更に必要に応じて、医薬として許容し得る溶剤、安定化剤又は酸化防止剤（例えばアスコルビン酸等）のような成分を含んでもよい。本発明化合物の投与量は、用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度により適宜選択される。【００７５】
アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患としては、アルツハイマー病の他、ダウン症候群が挙げられ、蛋白のβシート構造が病因又は病因の一部となる疾患しては、アルツハイマー病、ダウン症候群の他、前頭側頭型痴呆症、ピック病、進行核上性麻痺（PSP)、プリオン病等が挙げられる。
【実施例】
【００７６】
次に本発明に係わる合成例及び試験例を記載するが、本発明はこれらに限定されるわけではない。【００７７】
〔合成例１〕２−(４’−ジメチルアミノスチリル)−６−[４’−(トリフルオロメチルオキシ)ベンジルオキシ]ベンゾオキサゾール（化合物（１））の合成【００７８】
(1) ６−ヒドロキシ−２−メチルベンゾオキサゾール２．９８ｇ（0.02mol）をDMF１５ｍLに溶かし、氷浴中、カリウムtert−ブトキシド ２．６９ｇ(0.024mol)を撹拌しながら少量ずつ加えた。つぎに、クロロメチルメチルエーテル２．０９ｇ(0.026mol)のDMF５ｍL溶液を10℃以下でゆっくり滴下し、滴下終了後、氷冷下で10分間撹拌し、さらに室温で15分間撹拌した。再び氷冷し、反応液がアルカリ性になるまで固体の炭酸水素ナトリウムを加えた後、水を加えてジクロロメタンで抽出した。抽出液を水洗した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、６−メトキシメトキシ−２−メチルベンゾオキサゾール  ３．６４ｇ（収率９４％）を無色油状物として得た。1HNMR (CDCl3) δ2.58 (s, 3H), δ3.48 (s, 3H), δ5.17 (s, 2H), δ6.9〜7.5 (arom.H, 3H).【００７９】
(2) 前記工程(1)で得られた６−メトキシメトキシ−２−メチルベンゾオキサゾール１９３ｍｇ（1.0mmol)と４−ジメチルアミノベンズアルデヒド１５０ｍｇ（1.0mmol)の混合物をDMF１ｍLに溶かし、次に、カリウムtert−ブトキシド１１２ｍｇ（1.0mmol)を加えて、室温で５時間撹拌した。反応終了後、水６ｍLを加えて室温で撹拌した。析出した結晶を濾別して、２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−メトキシメトキシベンゾオキサゾール２７０ｍｇ（収率８３％）を黄色結晶として得た。  mp.108〜109℃. 1HNMR (CDCl3) δ3.03 (s, 6H), δ3.52 (s, 3H), δ5.22 (s, 2H), δ6.81 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.65 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.9〜7.6 (arom. H, 7H).【００８０】
(3) 前記工程(2)と同様の方法で得られた２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−メトキシメトキシベンゾオキサゾール１２．５ｇ(0.039mol)をエタノール１４５ｍLに溶かし、１．０M―HCｌ ４ｍLを加えて、２時間沸騰させた。冷却後、析出した結晶を濾別し、２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾオキサゾール９．９３ｇ（収率９２％）を黄色結晶として得た。  mp.>220℃. 1HNMR (d6DMSO) δ2.97 (s, 6H), δ6.91 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.55 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.7〜7.6 (arom.H, 7H).【００８１】
(4) 前記工程(3)で得られた２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾオキサゾール１．４０ｇ（5.0mmol)をDMF２０ｍLに溶解し、カリウムtert−ブトキシド０．８４ｇ（7.5mmol)を加えた後、４−（トリフルオロメトキシ）ベンジルブロミド２．５５ｇ（10.0mmol)のDMF溶液３ｍLを室温でゆっくり滴下した。反応液を室温で３時間撹拌し、析出した黄色結晶を濾別後、十分に水洗して目的物の２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[４’−（トリフルオロメトキシ）ベンジルオキシ]ベンゾオキサゾール（化合物（１））１．１７ｇ（収率５２％）を黄色結晶として得た。mp.187〜188(dec), 1HNMR (CDCl3) δ3.01 (s, 6H), δ5.09 (s, 2H), δ6.78 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.62 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.6〜7.6 (arom.H, 11H). 19FNMR (d6DMSO) δ-58.00 (s)【００８２】
〔合成例２〕２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ベンジルアミノエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（２））の合成【００８３】
(1) 前記合成例１の(3)で得られた２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾオキサゾール０．５６ｇ(2.0mmol)、トリフェニルホスフィン１．１６ｇ（4.4mmol)及び２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエタノール１．１５ｇ（4.4mmol）をDMF１５ｍLに溶解し、氷冷下、撹拌しながらアゾジカルボン酸ジイソプロピル０．９０ｍLを滴下した。滴下終了後、反応液を室温で４時間撹拌し、反応液をジエチルエーテル３００ｍｌで希釈し、水洗後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ついで飽和食塩水で洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、抽出液を約20mlまで濃縮した。析出した結晶を濾別して２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾール０．７２ｇ（収率６９％）を黄色結晶として得た。125〜127℃(dec). 1HNMR (CDCl3) δ2.40 (s, 3H), δ3.04 (s, 6H), δ3.78 (m, 2H), δ3.82 (m, 2H), δ4.10 (m, 2H), δ4.21 (m, 2H), δ6.81 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.64 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.9〜7.8 (arom.H, 11H).【００８４】
(2) 前記工程(1)で得られた２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾール３６５ｍｇ（0.70mmol）とベンジルアミン３００ｍｇ（2.8mmol）をDMF３．５ｍLに溶解した後、炭酸カリウム４８０ｍｇ（3.5mmol）を加え、室温で６５時間攪拌した。反応終了後、ジエチルエーテル５０ｍLを加えて、不溶物を濾過して除き、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、次に水で充分洗い、更に飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル）により精製して、２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ベンジルアミノエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾールを得た。得られた精製物をジエチルエーテルに溶かし、1M-HCl/EtOHを加えた後、エタノールより再結晶し、目的物の２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ベンジルアミノエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾール・塩酸塩(化合物（２）)１８６ｍｇ（収率：５４％）を得た。 mp.180〜182℃(dec). 1HNMR (D2O) δ3.04 (s, 6H), δ3.14 (m, 2H), δ3.69 (m, 4H), δ3.99 (m, 2H), δ4.04 (s, 2H), δ6.62 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.36 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.5〜7.5 (arom.H, 12H).【００８５】
〔合成例３〕２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（３））の合成
前記合成例２の(1)と同様の方法で得られた２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾール１．０４ｇ(2.0mmol)と３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミン１．５３ｇ（8.0mmol)をDMF １０ｍｌに溶解した後、炭酸カリウム１．３８ｇ(10.0mmol)を加え、室温で92時間撹拌した。反応終了後、ジエチルエーテル１００ｍLを加えて、不溶物を濾過して除き、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、次に水で十分に洗い、さらに飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル）により精製して、２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾールを得た。得られた精製物をジエチルエーテルに溶かし、1M-HCl/EtOHを加えた後、エタノールより再結晶し、目的物の２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（３））７６４ｍｇ（収率６６％）を黄色結晶として得た。 mp.204〜207℃(dec). 1HNMR (d6DMSO) δ3.02 (s, 6H), δ3.16 (m, 2H), δ3.85 (m, 4H), δ4.25 (m, 2H), δ4.27 (s, 2H), δ6.96 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.59 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.7〜7.7 (arom.H, 11H).  19FNMR (d6DMSO) δ-57.84 (s)【００８６】
〔合成例４〕２-（４’-ジメチルアミノスチリル）−６−[２―（３’,５’―ビス（トリフルオロメチル））ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（４））の合成
３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミンに代えて３，５−（ジトリフルオロメチル）ベンジルアミンを使用する以外は合成例３と同様にして、標記化合物(４)を得た。【００８７】
mp. 182-4℃(decomp.)、1HNMR (d6DMSO) δ3.05 (s, 6H), δ3.22 (m, 2H), δ3.85-3.93 (4H), δ4.26 (m, 2H), δ4.44 (m, 2H), δ6.98 (dd, J=2,4Hz, 8.6Hz, 1H), δ6.98 (d, J=8.9Hz, 2H), δ7.03 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.35 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.58 (d, J=8.6Hz, 1H), δ7.63 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.68 (d, J=8.9Hz, 2H), δ8.20 (s, 1H), δ8.38 (s, 2H)【００８８】
〔合成例５〕２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（3’，５’―ビス（トリフルオロメチル））ベンジルアミノエトキシエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（５））の合成
３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミンに代えて３，５−（ジトリフルオロメチル）ベンジルアミンを使用し、２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾールに代えて２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾールを使用する以外は合成例３と同様にして、標記化合物(５)を得た。【００８９】
mp.162-4℃(decomp.)、1HNMR (d6DMSO) δ3.05 (s, 6H), δ3.17 (m, 2H), δ3.6-3.75 (4H), δ3.75-3.85 (4H), δ4.18 (m, 2H), δ4.42 (m, 2H), δ6.92 (dd, J=2.4Hz, 8.6Hz, 1H), δ7.04 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.29 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.64 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.9-7.1 (2H), δ7.5-7.75 (3H), δ8.17 (s, 1H), δ8.37 (s, 2H)【００９０】
〔合成例６〕２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（６））の合成
２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾールに代えて２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾールを使用する以外は合成例３と同様にして、標記化合物(６)を得た。【００９１】
mp.127-129℃ (decomp.)、1HNMR (d6DMSO) δ2.97 (s, 6H), δ3.07 (m, 2H), δ3.62 (m, 4H), δ3.75 (m, 4H), δ4.14 (m, 2H), δ4.21 (s, 2H), δ6.91 (d, J=16.4Hz, 1H), δ7.54 (d, J=16.4Hz, 1H), δ6.7〜7.6 (arom.H, 11H)【００９２】
〔合成例７〕２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメチル）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（７））の合成
３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミンに代えて３−（トリフルオロメチル）ベンジルアミンを使用する以外は合成例３と同様にして、標記化合物(７)を得た。【００９３】
mp.200-201℃ (decomp.)、1HNMR (d6DMSO) δ3.02 (s, 6H), δ3.18 (m, 2H), δ3.88 (m, 4H), δ4.26 (m, 2H), δ4.33 (m, 2H), δ6.78 (d, J=8.6Hz, 2H), 6.96 (d, J=16.2Hz, 1H), δ6.98 (dd, J=2.4Hz, 8.6Hz, 1H), δ7.35 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.58 (d, J=8.6Hz, 2H), δ7.62 (d, J=16.2Hz, 1H), δ7.63 (d, J=8.6Hz, 1H), δ7.69 (br.t, J=7.6Hz, 1H), δ7.81 (br.d, J=7.6Hz, 1H),  δ7.92 (br.d, J=7.6Hz, 1H), δ8.02 (br.s, 1H)【００９４】
〔合成例８〕２−（４’−ジエチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩の合成（化合物（８））の合成
２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾールに代えて２−（４’−ジエチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾールを使用する以外は合成例３と同様にして、標記化合物(８)を得た。【００９５】
油状物質、 1HNMR (CD3OD) δ1.17 (t, J=7.2Hz, 6H), δ3.33 (s, 2H), δ3.69 (m, 4H), δ3.89 (m, 2H), δ3.95 (m, 2H),δ4.28 (m, 2H), δ4.31 (s, 2H), δ7.80 (d, J=16.8Hz, 1H), δ7.0〜7.9 (m, 12H).【００９６】
〔合成例９〕２−（４’-ジメチルアミノスチリル）−６−[２−[（５’−トリフルオロメチル）ピリジン−２’−イル]メチルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール・塩酸塩（化合物（９））の合成
３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミンに代えて２−（アミノメチル）−５−（トリフルオロメチル）ピリジンを使用する以外は合成例３と同様にして、標記化合物(９)を得た。【００９７】
mp.172-174℃(decomp.)、1HNMR (d6DMSO) δ2.98 (s, 6H), δ3.26 (m, 2H), δ3.84 (m, 4H), δ4.20(m, 2H), δ4.48 (s, 2H), δ6.73 (d, J=9.2Hz, 2H), δ6.91 (d, J=16.0Hz, 1H), 6.93 (m, 1H), 7.30 (d, J=2.4Hz, 1H), δ7.56 (d, J=16.0Hz, 1H), δ7.51〜7.62 (m, 3H), δ7.76 (d, J=8.0Hz, 1H), δ8.30 (dd, J=2.0Hz, 8.0Hz, 1H), δ9.00 (br.s, 1H).【００９８】
〔合成例１０〕２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾチアゾール (化合物（１０）)の合成【００９９】
(1) ２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−ヒドロキシベンゾチアゾール１０５ｍｇ(0.355mmol)、トリフェニルホスフィン２０５ｍｇ（0.782mmol)及び２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエタノール２０３ｍｇ（0.781mmol）をDMF３ｍLに溶解し、氷冷下、撹拌しながら１．９Mアゾジカルボン酸ジイソプロピル／トルエン溶液０．４３ｍL(0.817mmol)を滴下した。滴下終了後、反応液を室温で４時間撹拌し、反応液をジエチルエーテル１００ｍLで希釈し、水洗後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ついで飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、抽出液を５〜１０mLまで濃縮した。析出した結晶を濾別して２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾチアゾール  ８２ｍｇ（収率４４．５％）を黄色結晶として得た。1HNMR (CDCl3) δ2.40 (s, 3H), δ3.03 (s, 6H), δ3.79 (t, J=4.8Hz, 2H), δ3.83 (t, J=4.8Hz 2H), δ4.11 (t, J=4.8Hz 2H), δ4.21 (t, J=4.8Hz 2H), δ7.17 (d, J=16.4Hz, 1H), δ7.36 (d, J=16.0Hz, 1H), δ6.7〜7.8 (arom.H, 11H).【０１００】
(2) 前記(1)で得られた２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾチアゾール８２ｍｇ（0.152mmol）とｍ−トリフルオロエトキシベンジルアミン１１７ｍｇ（0.612mmol）をDMF３ｍLに溶解した後、炭酸カリウム１０５ｍｇ（0.760mmol）を加え、室温で１４４時間攪拌した。反応終了後、ジエチルエーテル１５ｍLを加えて、水洗後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ついで飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル:n-ヘキサン＝１：１，酢酸エチル）により精製して、油状の２−（４’−ジメチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾチアゾール (HT-204)１６ｍｇ（収率１９％）を得た。 1HNMR (CDCl3) δ2.83 (m, 2H), δ3.02 (d, 6H), δ3.69 (m, 2H), δ3.85 (m, 4H), δ4.16 (m, 2H), δ7.16 (d, J=16.0Hz, 1H), δ7.35 (d, J=16.4Hz, 1H), δ6.6〜7.9 (arom.H, 12H).【０１０１】
〔合成例１１〕２−（４’−メチルアミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾールの合成（化合物（１１））の合成【０１０２】
(1) DMF３ｍL中に６−ヒドロキシ−２−メチルベンゾオキサゾール ３００ｍｇ（2mmol）、トリフェニルホスフィン１１６０ｍｇ(4.4mmol)、２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエタノール１１５２ｍｇ（4.4mmmol）を順次加え、氷浴中攪拌しながら１．９Mアゾジカルボン酸ジイソプロピル／トルエン溶液２．３２ｍL(4.4mmol)を滴下した。室温で１６時間３０分攪拌しエーテルを投入後、水洗、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗い、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：３）にて精製して油状の２−メチル−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾール６３０ｍｇ（収率８０％）を得た。1HNMR (CDCl3) δ2.41 (s, 3H), δ2.60 (s, 3H), δ3.80 (m, 4H), δ4.08 (m, 2H), δ4.21 (m, 2H), δ6.8〜7.8 (arom.H, 7H).【０１０３】
(2) 前記(1)で得られた２−メチル−６−（２−ｐ−トルエンスルフォニルオキシエトキシエトキシ）ベンゾオキサゾール６３０ｍｇ(1.6mmol)と３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアミン６１５ｍｇ（3.2mmol)をDMF ５ｍｌに溶解した後、炭酸カリウム５５６ｍｇ(4.0mmol)を加え、室温で１１４時間撹拌した。反応終了後、ジエチルエーテルを加えて、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル）により精製して、油状の２−メチル−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール４００ｍｇ（収率６０％）を得た。1HNMR (CDCl3) δ2.59(s, 3H), δ2.84 (m, 2H), δ3.70 (m, 2H), δ3.85 (m, 4H), δ4.15 (m, 2H), δ6.8〜7.5 (arom.H, 7H). 【０１０４】
(3) 前記(2)で得られた２−メチル−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール４００ｍｇ(0.98mmol)をTHF５mＬに溶解した後、ジ-tert-ブチルジカルボナート３１９ｍｇ(1.46mmol)を溶解したTHF１mＬ溶液を滴下し、室温で３０分間攪拌した。水投入後、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。溶媒を留去後、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、油状の２−メチル−６−｛２−［Ｎ-tert-ブトキシカルボニル（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ］エトキシエトキシ｝ベンゾオキサゾール３９０ｍｇ（収率７８％）を得た。【０１０５】
1HNMR (CDCl3) δ1.45 (m, 9H), δ3.43 (m, 2H), δ3.66 (m, 2H), δ3.78 (m, 2H), δ4.10 (m, 2H), δ4.53 (m, 2H), δ6.8〜7.5 (arom.H, 7H). 【０１０６】
(4) 前記(3)で得られた２−メチル−６−｛２−［Ｎ-tert-ブトキシカルボニル（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ］エトキシエトキシ｝ベンゾオキサゾール１５０ｍｇ（0.29mmol）およびＮ−tert-ブトキシカルボニル−4−メチルアミノベンズアルデヒド６９ｍｇ(0.29mmol)をＤＭＦ２mＬに溶解した後、tert-ブトキシカリウム３３ｍｇ(0.29mmol)を添加して室温で１２５分間攪拌した。水投入後、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を留去後、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、２−メチル−６−｛２−［Ｎ-tert-ブトキシカルボニル（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ］エトキシエトキシ｝ベンゾオキサゾールと２−メチル−６−｛２−［Ｎ-tert-ブトキシカルボニル（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ］エトキシエトキシ｝ベンゾオキサゾールの油状混合物１５０ｍｇを得た。混合物１５０ｍｇとＮ−tert-ブトキシカルボニル−４−メチルアミノベンズアルデヒド３５ｍｇ(0.15mmol)をＤＭＦ１．５mＬに溶解した後、tert-ブトキシカリウム１７ｍｇ(0.15mmol)を添加して室温で５６０分攪拌した。その間反応促進の為に3回tert-ブトキシカリウム１７ｍｇを追加した。水投入後、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を留去後、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製し、油状の２−（４’−［Ｎ−tert−ブトキシカルボニル］メチルアミノスチリル）−６−｛２−［Ｎ-tert-ブトキシカルボニル（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ］エトキシエトキシ｝ベンゾオキサゾール１４０ｍｇ（cis-trans混合物）を得た（収率６５％）。1HNMR (CDCl3) δ1.44 (ｍ, 18H), δ3.30 (m, 3H), δ3.49 (m, 2H), δ3.66 (m, 2H), δ3.79 (m, 2H), δ4.11 (m, 2H), δ4.52 (m, 2H), 6.4〜7.8 (m, 13H).【０１０７】
(5) 前記(4)で得られた２−（４’−［Ｎ−tert−ブトキシカルボニル］メチルアミノスチリル）−６−｛２−［Ｎ-tert-ブトキシカルボニル（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ］エトキシエトキシ｝ベンゾオキサゾール14mg（cis-trans混合物 ２:３）にトリフルオロ酢酸０．５ｍＬ添加して室温で３０分攪拌した。溶媒留去後、１Ｎ−ＮａＯＨと酢酸エチルを混入して抽出。有機層を水および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒留去後、油状の２−（４’−メチルアミノスチリル）−６−｛２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノ］エトキシエトキシ｝ベンゾオキサゾール１０ｍｇ（cis-trans混合物  ２:３）を得た（収率９９％）。1HNMR (CD3OD) δ2.85 (m, 2H) , δ2.89 (s, 3H), δ3.71 (m, 2H), δ3.81 (m, 4H) , δ4.14 (br.s, 1H), δ4.17 (m, 2H),δ6.3〜7.8 (m, 13H).【０１０８】
〔合成例１２〕２−（４’−アミノスチリル）−６−[２−（３’−トリフルオロメトキシ）ベンジルアミノエトキシエトキシ]ベンゾオキサゾール（化合物（１２））の合成
前記合成例１１（４）において、Ｎ−tert-ブトキシカルボニル−4−メチルアミノベンズアルデヒドに代えてＮ−tert-ブトキシカルボニルアミノベンズアルデヒドを使用し、得られた生成物を同(５)で使用した以外は前記合成例１１と同様の方法で目的物を油状物として得た。1HNMR (CD3OD) δ2.86 (m, 2H) , δ3.71 (m, 2H), δ3.83 (m, 4H) , δ3.90 (br.s, 2H),δ4.16 (ｍ, 2H), δ6.2〜7.8 (m, 13H).【０１０９】
〔試験例１〕
化合物（１）の１mg/mlのDMSO溶液並びに化合物（２）及び（３）の１０mg/mlのDMSO溶液を調製した後、各々１００μl及び１０μlを量りとり、０．３％-Triton X100含有１００mM-ホスフェートバッファー（pH７．４）（以下PBS-T）を加えて１０ｍlとした（薬液濃度：１０μg/ｍl）。
この溶液にアルツハイマー症例のヒト脳組織固定標本（２０μm厚）を遮光下、室温で浸漬した。１時間後、検体を取り出し、PBS-Tで５分間３回洗浄した後、マウス抗ヒトアミロイドβモノクローナル抗体（6E10,Signet社）と４℃で一晩反応させた。更に、本検体をPBS-Tで１０分間３回洗浄した後、Alexa６４７抗マウスIgG抗体（MolecularProbes社）と室温下４時間反応した。本検体をPBS-Tで１０分間３回洗浄した後、更に蒸留水で洗浄後グリセロール封入を行なったものを検体とし倒立型蛍光顕微鏡（IX70、オリンパス）にてアミロイドβ蛋白への化合物の結合能を観察した。尚、化合物像はＤＡＰＩフィルターで、アミロイドβ蛋白像はＣｙ５フィルターで測定した。又、陰性対照試験として0.1%−DMSO含有PBS-T溶液を用いて同染色処理をおこなった。
図１にアルツハーマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片における本発明化合物（１）、（２）及び（３）の蛍光染色像と抗アミロイドβ抗体による老人斑の染色像を示す。Ａは化合物１、Ｂは化合物２、Ｃは化合物３、Ｄは陰性対象で染色した場合を示し、左列は化合物（ＤＡＰＩ）の染色像、右列はアミロイドβ抗体の染色像を示す。本発明化合物（１）、（２）及び（３）は老人斑を形成するアミロイドβ蛋白質と親和性を有し、同一位置に染色を認めた。尚、陰性対照Ｄでは老人斑特異的な蛍光染色像は認められなかった。
尚、化合物（４）〜（１３）も同様にアミロイドβ蛋白質と高い親和性を示す。【０１１０】
〔試験例２〕
化合物（３）２ｍｇをクレモフォールEL ３００μlに溶解後、生理食塩水７００μlを加えて化合物（３）の投与溶液（２ｍｇ/ｍl）を調製した。
本投与液５００μlをアミロイド前駆体蛋白トランスジェニックマウス（Tg2576。Science,274,99 (1996) 記載の方法に従い作製）にペントバルビタールナトリウム麻酔をかけ、インフュージョンポンプを用いて尾静脈より約２時間かけて投与した。
投与終了後に麻酔下、マウス頭部をＭＲＩ装置を用いて約４時間測定した。１９Ｆ−ＭＲＩの脳画像はChemical Shift imaging法（ＣＳＩ法）によって得た。尚、使用したＭＲＩ装置は、７Ｔ Unity Inova MR Scanner （Varian製）である。
得られたＭＲＩの脳画像を図２に示す。図中、Ａは１Ｈ−ＭＲＩ、Ｃは19Ｆ−ＭＲＩ、ＢはＡとＣのマージ像を示す。19Ｆ−ＭＲ画像において老人斑と推定される斑点が検出された。【０１１１】
〔試験例３〕
上記試験例２で実施した１９Ｆ−ＭＲＩスキャンしたマウス脳を採取し、４％−ホルマリン溶液で２日間固定した後、１５％−ショ糖溶液に移してクリヨプロテクションし、クリヨスタットで厚さ２０μｍの切片を作成した。次に、本切片をマウス抗ヒトアミロイドβモノクローナル抗体（6E10,Signet社）と４℃で一晩反応させた。更に、本検体をPBS-Tで１０分間３回洗浄した後、Alexa６４７抗マウスIgG抗体（MolecularProbes社）と室温下４時間反応した。本検体をPBS-Tで１０分間３回洗浄した後、更に蒸留水で洗浄後グリセロール封入を行なったものを検体とし、倒立型蛍光顕微鏡にて老人斑への化合物の結合能を観察した。尚、化合物像はＤＡＰＩフィルターで、アミロイドβ蛋白像はＣｙ５フィルターで測定した。又、正常マウスに対しても同様の処理を実施した。【０１１２】
得られたマウス脳切片の染色像を図３に示す。図中、左列はアミロイド前駆体蛋白トランスジェニックマウス像、右列は正常マウス像であり、Ａは明視野像、Ｂは化合物（３）の蛍光染色像、Ｃはβアミロイド抗体染色像を示す。Ｃで認められる老人斑を形成するアミロイドβの斑点とＢで認められる化合物（３）の蛍光染色像が一致し、本発明化合物の血液−脳関門透過性とインビボでの老人斑への充分な結合が確認された。
【産業上の利用可能性】
【０１１３】
本発明の化合物は、アミロイドβ蛋白に対する親和性が高く、且つ血液−脳関門透過性が高いためアミロイドの蛍光染色剤として老人斑及びアミロイド関連疾患の病理組織検査薬として有用である。さらに、本発明の化合物の内、フッ素を含む化合物は、アミロイドβ蛋白に特異性を有するＭＲＩ造影剤として機能するため、医療機関に広く普及しているＭＲＩ装置を用いてアルツハイマー病をはじめとするアミロイド蓄積性疾患の生前非侵襲的診断に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
【図１】アルツハイマー病患者の死後脳側頭葉皮質切片の染色像。
【図２】化合物（３）をアミロイド前駆体蛋白トランスジェニックマウスに投与した場合のインビボ１Ｈ−ＭＲＩ及び１９Ｆ−ＭＲＩ脳画像。
【図３】化合物（３）をアミロイド前駆体蛋白トランスジェニックマウス及び正常マウスに投与した場合のマウス脳切片の染色像。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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