(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６若しくはモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、光照射による、血管新生をほとんど又は全く伴わない皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤。
【請求項２】
前記有効成分がモノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６又はそのアルカリ金属塩である請求項１記載の薬剤。
【請求項３】
前記有効成分がモノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６の四ナトリウム塩である請求項２記載の薬剤。
【請求項４】
前記血管性病変が、単純性血管腫、いちご状血管腫、海綿状血管腫、毛細血管拡張症又は動静脈奇形である請求項１ないし３のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項５】
皮膚血管性病変治療用薬剤である請求項１ないし３のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項６】
前記皮膚血管性病変が、単純性血管腫、いちご状血管腫又は海綿状血管腫である請求項５記載の薬剤。
【請求項７】
前記光照射が、レーザー照射である請求項１ないし４のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項８】
前記光照射が、レーザー照射である請求項５又は６記載の薬剤。
【請求項９】
モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６若しくはモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、血管新生をほとんど又は全く伴わない皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変診断薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光照射による皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤及び診断薬に関する。より詳細には、本発明は、光照射により皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変を治療又は診断する際に患者に投与し、光により励起されて標的細胞を選択的に破壊する光感受性物質である光照射による皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤、及びこれらの血管性病変の二次元更には三次元的な広がりを診断することが可能な診断薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚血管性病変（単純性血管腫、いちご状血管腫、海綿状血管腫など）に対しての治療としては、現在色素レーザー治療が第１選択である。しかし、色素レーザー治療では、深部病変に対する治療効果の限界があり、また頻回に治療を行わなくてはならないために患者にとって時間的・精神的・経済的な負担が大きいなどの問題点がある。【０００３】
一方、光線力学的治療（Photodynamic Therapy：PDT）は、従来、癌の選択的治療として注目されてきた。腫瘍親和性、新生血管への集積性のある光感受性物質を投与した後、腫瘍組織にレーザーを照射することにより光化学反応を引き起こし、組織を変性壊死させるものである。治療効果は、レーザー光と光感受性物質との光化学反応によって産生される一重項酸素の酸化作用によると考えられている。【０００４】
PDTのための光感受性物質としては、ポルフィリン関連化合物であるポリファーマナトリウムが知られているが、治療後遮光時間が最低4週間必要といった問題点がある。すなわち、光感受性物質は光と反応して細胞を破壊するので、患者は最低４週間、体が光にさらされることを避けなければならない。さもなければ、皮膚が光線過敏症により炎症を起こす。このため、患者は最低４週間は薄暗い部屋で暮らさねばならず、正常な日常生活ができない。【０００５】
一方、ポルフィリン関連化合物であるモノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６若しくはモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６又はその薬理学的に許容される塩を光線力学的治療の光感受性物質として用いて肺癌治療（特許文献１）や眼底の新生血管の閉塞（特許文献２、特許文献３）に用いることが知られている（特許文献２と特許文献３のモノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６はエステル化の部位が異なる）。しかしながら、これらの光感受性物質を、レーザー照射による皮膚血管性病変治療のために用いることについては全く知られていない。【０００６】
一方、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の、皮膚表面から観察することができない血管性病変の二次元更には三次元的な広がりを診断する方法も知られていない。皮膚表面から観察することができない血管性病変の二次元更には三次元的な広がりを診断することができれば、いずれの治療方法を採用するにしても治療にとって有用である。【０００７】
【特許文献１】国際公開公報WO98/19677
【特許文献２】国際公開公報WO01/60360
【特許文献３】特開平９−７１５３１号公報
【特許文献４】特開平８−２４３１８１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、光照射による皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療において、深部の病変の治療に有効であり、それでいて皮膚表面の正常細胞を破壊することがなく、治療後の遮光時間も短い、新規な光照射による皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤を提供することである。また、本発明の目的は、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の、皮膚表面から観察することができない血管性病変の二次元更には三次元的な広がりを診断することができる、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の診断薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本願発明者は、鋭意研究の結果、クロリン系薬剤であるモノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６若しくはモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６又はその薬理学的に許容される塩を光線力学的治療の光感受性物質として用いて光照射により皮膚血管性病変を治療すると、真皮における血管内皮細胞が消失して光照射により皮膚血管性病変が治療されるにもかかわらず、表皮細胞は正常に維持されることを見出し、本発明を完成した。また、モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６若しくはモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６又はその薬理学的に許容される塩は、波長670nm付近にピークを持つ蛍光を発することが知られており、この蛍光性を利用して皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の、皮膚表面から観察することができない血管性病変の二次元更には三次元的な広がり（即ち蛍光を発する面積からは病変の広さ、蛍光の強さからはその深さ）を診断することが可能であることに想到し、本発明を完成した。【００１０】
すなわち、本発明は、モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６若しくはモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、血管新生をほとんど又は全く伴わない光照射による皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤を提供する。
【００１１】
また、本発明は、モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６若しくはモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、血管新生をほとんど又は全く伴わない皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変診断薬を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、光照射による皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療において、深部の病変の治療に有効であり、それでいて皮膚表面の正常細胞を破壊することがなく、治療後の遮光時間も短い、光照射による皮膚血管性病変治療用薬剤が初めて提供された。下記実施例において具体的に記載されるように、本発明の皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤を用いると、光照射部位では皮膚血管性病変の退色が顕著であり、血管内皮細胞の消失が認められ、それでいて、表皮角質層の連続性は保たれており、また表皮基底層も温存される。また、この薬剤の遮光時間は、２〜３日程度でよいため、患者の日常生活に対する制約が少ない。したがって、本発明の皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤は、単純性血管腫、いちご状血管腫、海綿状血管腫、毛細血管拡張症及び動静脈奇形に代表される皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の治療に極めて有効である。さらに、本発明により、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の、皮膚表面から観察することができない血管性病変の二次元更には三次元的な広がりを診断することができる、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の診断薬が初めて提供された。また本発明に関わる治療及び診断の機序は、増殖し続ける異常細胞或いはその周辺に薬剤が取り込まれるのを待って、この蓄積された当該薬剤をターゲットとして光照射するのではなく、血管自体が拡大しているために相対的に周辺より滞留血液量従って薬剤量が多い病変部に光を照射するものである。そのため患者の全身に薬剤が均一に分布しておればよく、ほぼ薬剤の投与直後に光照射が可能なため、医療側及び患者が待つための負担が少ない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６及びモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６ならびにその薬理学的に許容できる塩自体並びにそれらの製造方法は公知であり、特許文献１及び特許文献２に記載されている。その化学構造を下記式(A)に示す。【００１４】
【化１】
0005265186.tif 000002
【００１５】
式(A)において、ｎは１又は２の整数であり、ｎが１の場合がモノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６であり、ｎが２の場合が、モノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６である。４つのカルボキシル基の全部又は１部は、薬理学的に許容できる塩の形態にあってもよく、ナトリウム塩等のアルカリ金属塩が好ましい。特に、四ナトリウム塩が好ましい。モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６の四ナトリウム塩（タルポルフィンナトリウム）は、肺癌治療用に市販されており、その吸収極大波長である664.5nmの半導体レーザーを照射する装置も市販されている。【００１６】
本発明の薬剤の適用症は、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変であり、好ましい例として、単純性血管腫、いちご状血管腫、海綿状血管腫、毛細血管拡張症及び動静脈奇形を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。これらのうち、好ましい適用症は、皮膚血管性病変であり、特に好ましい例として、単純性血管腫、いちご状血管腫及び海綿状血管腫を挙げることができる。なお、これらの皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変は、良性血管種であり、血管新生をほとんど又は全く伴わない。【００１７】
本発明の薬剤の投与経路は、静脈注射、皮下注射、筋肉内注射等の非経口投与経路が好ましい。また、投与量は、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の程度等に応じて適宜選択されるが、後述するように、本発明者らは、１回の光治療において、体重1kg当たり、0.1mg〜1.0mg程度、好ましくは0.1〜0.5mg程度であることを見出した。また、製剤は、常法に従い、注射液等として製剤することが可能であり、例えば、生理緩衝液中に薬剤を例えば、5mg/mlないし50mg/ml程度の濃度に溶解した溶液であってよい。【００１８】
本発明の薬剤を投与後、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の部位に光を照射する。皮膚血管性病変の場合には、皮膚の表面から光を照射すればよい。皮下軟部組織の血管性病変の場合には、手術療法にて患部を露出した後に、術中に上記の薬剤投与を行った後、患部に光を照射する。光の照射は、上述した機序からして、薬剤投与直後から１時間の間に行なうことが好ましい。光の波長は、該薬剤の吸収極大がある、664.5nm, 609.5nm、507.3nm若しくは411.0nm又はこれらの近傍（±5nm)が好ましい。これらの波長のうち、より弱い出力で深部に到達できるものを採用すると、正常な皮膚表面への損傷を小さくできるので好ましい。すなわち、照射する光の波長は、波長の長い664.5nm又はその近傍（±5nm)が最も好ましい。光は、当該波長の光成分を含む光であればいずれのものでもよく、レーザーが好ましい。もっとも、LEDのような他の光源を用いてもよい。また、レーザーを用いる場合、そのパワー密度は、20mW/cm2〜200mW/cm2が好ましく、エネルギー密度は、25J/cm2〜100J/cm2が好ましい。レーザー等の光は、連続光であってもよいが、パルス光であってもよい。パルス光を利用することにより、正常な皮膚表面への損傷を小さくできるので好ましい。【００１９】
モノ−Ｌ−アスパルチル・クロリンｅ６及びモノ−Ｌ−グルタミル・クロリンｅ６ならびにその薬理学的に許容できる塩は、波長670nm付近にピークを持つ蛍光を発することが知られている（特許文献４）。この蛍光性を利用して、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の二次元更には三次元的な広がりを診断することができる。すなわち、血管性病変の皮膚内部の二次元更には三次元的な広がりは、皮膚表面からの肉眼観察では不明であるが、上記蛍光を測定することにより、これらを診断することができる。すなわち、励起光を照射すると、血管性病変から蛍光が発せられるので、この蛍光を測定することにより二次元更には三次元的な広がりを診断することができる。なお、励起光としては、治療の場合と同様、波長664.5nm又はこの近傍（±5nm)が好ましく、従って治療に用いるものと同じ光照射装置を利用できる。【００２０】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２１】
皮膚血管病変モデル動物（ニワトリ）を用いた実験
方法
使用動物  第22-24週令のニワトリ（体重2.5-3.5kg）
光感受性物質  タルポルフィンナトリウム  
使用レーザー    Panalas6405   半導体レーザー  波長664.5nm±2nm、 出力75-500mW【００２２】
皮膚血管病変（単純性血管腫）に対するPDTのモデルとして、ニワトリの鶏冠を利用した。なお、ニワトリの鶏冠は、皮膚血管病変（単純性血管腫）のモデルとしてこの分野において認められているものである。第22-24週令のニワトリ（体重2.5kg前後）の上膊静脈よりタルポルフィンナトリウム溶液（濃度：5mg/ml)を、タルポルフィンナトリウム量として、ニワトリの体重当り2.5mg/kg静注し、静注直後より鶏冠に対して半導体レーザー（波長664.5nm±2nm、照射パワー密度127mW/cm2、エネルギー密度25J/cm2、50J/cm2）にて照射を行った。実験群として、(i) PDT施療群、対照群として、(ii)タルポルフィンナトリウム静注のみ、(iii)レーザー照射のみの群を設定した。また、治療終了時の平均血漿中タルポルフィンナトリウム濃度を測定した。【００２３】
処置後7日間の形態的変化を肉眼的に検索し、また処置後7日後に剖検を行った。組織標本は常法に従い、ヘマトキシリンエオジン染色を行い、また必要に応じてPTAH染色（フィブリン染色）、AZAN染色（膠原線維染色）を追加した。【００２４】
結果
タルポルフィンナトリウム血漿濃度
治療終了時の平均血漿中タルポルフィンナトリウム濃度は、2.3μg/mLであった。【００２５】
肉眼的所見
PDT施療群において、照射部位に一致して褪色反応が見られた。レーザー照射のみ、薬物投与のみでは、褪色反応は認められなかった。【００２６】
組織学的所見
PDT施療群は、ヘマトキシリンエオジン染色において、照射部位に一致し真皮内の拡張した血管の消失を認めた。照射部位においては、表皮角質層の連続性は保たれており、また表皮基底層も温存されていた。真皮内の強拡大像においては、血管内皮細胞の消失が認められた。間質の膠原線維の増生などは見られなかった。レーザー照射のみ、また薬物投与のみでは、変化は全く認められなかった。【００２７】
考察
実験結果より、タルポルフィンナトリウムを用いたPDTにおいては、表皮成分の破壊を伴わず、選択的に血管内皮細胞の破壊を起こすことが出来ることが確認された。ヒトにおける血漿タルポルフィンナトリウム濃度の実測値（下記実施例２）から、上記血漿タルポルフィンナトリウム濃度を達成するための静注量は、0.2mg/kgであり、従って、今回投与したタルポルフィンナトリウムの静注量は、一般的に悪性腫瘍の治療で投与されている量1.0mg/kgの1/5であり、非常に少ない投与量にて、皮膚血管性病変の治療が可能であることが示唆された。よって、従来のPDTに認められた副作用である遮光時間の長さをより短かくすることが可能になると考えられる。また使用したレーザーの波長は、従来用いられている色素レーザー585nm、595nmの波長に比べ、664.5nmと長波長であり、到達深度の深いレーザーである。PDTを用いることによって、従来の治療によって治療し得なかった深部病変に関しても治療の可能性が開ける可能性があることが示唆された。また、血管径が太い場合にも適用可能であり、静脈瘤も併せて治療可能であると考えられる。【００２８】
従来の皮膚血管性病変に対しての治療の原理は、生体内の標的細胞に吸収波長のあった高いエネルギーを持ったレーザー光を照射することで、その伝導熱を利用し選択的に標的細胞を破壊するものであるが、PDTにおいては標的細胞に光感受性物質を作用させ、吸収波長の合致した低いエネルギーをもったレーザー光を照射し、選択的に標的細胞を破壊するものである。よって、弱い光エネルギーにて、生体内において最大効果を生み出すことが出来る点において非常に優れている。このように、皮膚血管性病変に、タルポルフィンナトリウムを用いたPDTを行うことは、従来の皮膚血管性病変の治療法の概念を覆すものである。
【実施例２】
【００２９】
ヒトに対する安全性試験
健常人２名（被検者Ａ：３３歳健常男性、被検者Ｂ：４２歳健常男性）に対し、タルポルフィンナトリウムを0.2 mg/kg静注投与し、投与後より上腕内側部皮膚に対して半導体レーザー照射（照射条件：エネルギー密度127mW/cm2にて照射エネルギー量25J/cm2及び50J/cm2、照射径ともに1cm)を行い、被検者Ａでは２週間、被検者Ｂでは２ヶ月の経過観察を行なった。【００３０】
PDT治療直後より、照射部位および周辺部において若干の浮腫を認め、術後２日間は、50J/cm2照射部位では照射部位に一致して軽度の紅斑を認めた。術後１週間では紅斑は消失し、両被検者ともに２週間では25J/cm2および50J/cm2ともに照射部位が判別できない程度にまで改善し、色素沈着、色素脱失などの副作用は認めなかった。また、被検者Ｂにおいて２ヶ月経過した時点において、照射部と健常部とが判別できなく、副作用は認めなかった。これより、ヒト健常部皮膚に対して、本発明の血管性病変治療用薬剤を用いたPDTを施しても皮膚障害が生じないことがわかった。【００３１】
また、PDT後に行なった血漿中薬剤濃度の推移から、静注後２４〜４８時間で光線過敏反応が消失する血漿濃度に達することが確認された。この時間は、薬物動態モデルにて推定した時間とほぼ一致し、前述した推定必要遮光時間の妥当性が確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明の皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤を用いると、光照射部位では皮膚血管性病変の退色が顕著であり、血管内皮細胞の消失が認められ、それでいて、表皮角質層の連続性は保たれており、また表皮基底層も温存される。また、この薬剤の遮光時間は、２〜３日でよい。したがって、本発明の皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変治療用薬剤は、単純性血管腫、いちご状血管腫、海綿状血管腫、毛細血管拡張症及び動静脈奇形に代表される皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の治療に極めて有効である。さらに、本発明の診断薬により、皮膚又は皮下軟部組織の血管性病変の、皮膚表面から観察することができない血管性病変の二次元更には三次元的な広がりを診断することができる。