(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液接触材料を改質する方法であって、
血液接触材料にデキストラン硫酸およびトリプトファンを固定化し、
前記デキストラン硫酸の固定化量を表面積１ｍ2当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下とし、
トリプトファンの固定化量とデキストラン硫酸固定化量とのモル比を５以上５０以下とし、
血液接触材料が有する補体活性化作用を抑制し、当該血液接触材料による血液の処理後における血漿中のＣ３ａ濃度を７２０ｎｇ／ｍＬ以下にすることを特徴とする血液接触材料の改質方法。
【請求項２】
血液接触材料がヒドロキシル基を有する高分子化合物よりなる請求項１に記載の血液接触材料の改質方法。
【請求項３】
血液接触材料が水不溶性多孔質担体である請求項１または２に記載の血液接触材料の改質方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療分野において血液と接触する部位に使用される材料について、その材料の有する補体活性化作用を抑制する表面改質方法及び補体活性化が抑制された血液接触材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
補体とは免疫反応を媒介する血中タンパク質の一群で、動物血液中に含まれる。抗体が体内に侵入してきた細菌などの微生物に結合すると、補体は抗体により活性化され、そして細菌の細胞膜を壊すなどして生体防御に働く。補体の成分はＣ１〜Ｃ９で表される。血液接触材料のような異物と接触した抗体により補体系は活性化され、Ｃ３ａ、Ｃ５ａ等が産出される。これらは強力な生物学的作用を有しており、体内に侵入した際に呼吸困難、悪心、腹痛、肺高血圧等のアナフィラキシー様反応が惹起される場合がある（非特許文献１）。また、前述のＣ３ａについては難治性の疾患である糖尿病性腎症の発症・悪化要因である可能性も指摘されいる（非特許文献２）。このような特徴から、血液浄化の分野における血液透析に代表される血液接触材料と血液の接触が生じる医療において、血液接触材料による補体活性化は治療の安全面および患者のＱＯＬの低下を防ぐ上で解決すべき大きな問題となっている。補体活性化が抑制された血液接触材料としては、例えば特許文献１に記載されているようなエチレンオキサイド共重合体等が知られているが、接触材料の基盤であるポリマーを限定してしまっており汎用性に欠ける。このような状況の中、汎用的かつ簡便な血液接触材料が有する補体活性化作用を抑制する血液接触材料の改質方法の開発が望まれていた。
【非特許文献１】日本アフェレシス学会編、アフェレシスマニュアル、１３５−１４２頁、１９９９年
【非特許文献２】内分泌・糖尿病科、２０巻、ｐ２５１−２６０、２００５年
【特許文献１】特開２００５-２８１６６５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、血液接触材料が有する補体活性化作用を低減しうる血液接触材料の改質方法、該方法により改質された血液接触材料、および該改質血液接触材料が使用された血液接触回路、体内留置器具、血液浄化装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題を解決するために血液接触材料が有する補体活性化作用を抑制しうる血液接触材料の改質方法につき鋭意検討した結果、驚くべきことに血液接触材料にポリアニオン性化合物を材料表面積１ｍ２当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下で、かつトリプトファン誘導体をポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が１以上７０以下で固定化することにより、血液を接触させたときの補体活性化作用が元の血液接触材料よりも大幅に抑制されることを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものであり、以下の発明を包含する。
[１]
血液接触材料にポリアニオン性化合物およびトリプトファン誘導体を固定化することにより、補体の活性化を抑制することを特徴とする血液接触材料の改質方法。
[２]
ポリアニオン性化合物の固定化量が表面積１ｍ２当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下で、かつトリプトファン誘導体の固定化量とポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が１以上７０以下である[１]記載の血液接触材料の改質方法。
[３]
ポリアニオン性化合物がデキストラン硫酸である[１]または[２]記載の血液接触材料の改質方法。
[４]
トリプトファン誘導体がトリプトファンである[１]から[３]のいずれかに記載の血液接触材料の改質方法。
[５]
血液接触材料がヒドロキシル基を有する高分子化合物よりなる[１]から[４]のいずれかに記載の血液接触材料の改質方法。
[６]
ポリアニオン性化合物の固定化量が表面積１ｍ２当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下、かつトリプトファン誘導体の固定化量とポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が１以上７０以下であり、補体の活性化を抑制することを特徴とする血液接触材料。
[７]
ポリアニオン性化合物がデキストラン硫酸である[６]記載の血液接触材料。
[８]
トリプトファン誘導体がトリプトファンである[６]または[７]記載の血液接触材料。
[９]
血液接触材料がヒドロキシル基を有する高分子化合物よりなる[６]から[８]のいずれかに記載の血液接触材料。
[１０]
[６]から[９]のいずれかに記載の血液接触材料を用いた血液接触回路。
[１１]
[６]から[９]のいずれかに記載の血液接触材料を用いた体内留置器具。
[１２]
[６]から[９]のいずれかに記載の血液接触材料を用いた血液浄化装置。
[１３]
血液接触材料が水不溶性多孔質担体である[１]から[９]記載の血液接触材料。
[１４]
水不溶性多孔質担体にポリアニオン性化合物を湿潤体積の吸着材１ｍｌ当たり０．１５μｍｏｌ以上１．５μｍｏｌ以下で固定し、かつトリプトファン誘導体をトリプトファン誘導体の固定化量とポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が１以上７０以下となるように固定化することによる、[１３]記載の血液接触材料。
[１５]
水不溶性多孔質担体の球状蛋白質の排除限界分子量が５×１０５以上１×１０８以下である[１４]に記載の吸着材。
[１６]
液の入口および出口を有し、かつ吸着材の容器外への流出防止手段を備えた容器内に、[１４]および[１５]のいずれかに記載の吸着材を充填してなることを特徴とする吸着器。
[１７]
吸着器の容積が１００ｍｌ以上４００ｍｌ以下である[１６]記載の吸着器。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の血液接触材料の改質方法により、血液接触材料が有する補体活性化作用を劇的に抑制することが可能であり、より安全性の高い医療器具の作製が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の血液接触材料の改質方法は、ポリアニオン性化合物を表面積１ｍ２当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下で、かつトリプトファン誘導体をポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が１以上７０以下で固定化してなる。
【０００８】
本発明におけるポリアニオン性化合物とは、分子内に複数のアニオン性官能基を有する化合物をいう。本発明におけるアニオン性官能基とは、カルボキシル基、スルホン酸基、硫酸エステル基、リン酸エステル基など、ｐＨが中性で負に帯電する官能基をいう。
【０００９】
このようなポリアニオン性化合物の代表例としては、ポリアクリル酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイン酸共重合体などの合成ポリアニオン性化合物、デキストラン硫酸、カルボキシメチルセルロースなどの合成酸性多糖類、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケタラン硫酸などの硫酸エステル基を有する生体由来の酸性ムコ多糖類、ヘパリン、ヘパラン硫酸などのＮ−スルホン酸基および硫酸エステル基を有する酸性ムコ多糖類、コンドロイチン、ホスホマンナンなどの生体由来のアニオン性官能基を有する多糖類、ならびにデオキシリボ核酸、リボ核酸などの生体由来の核酸などがあげられるが、これらの代表例に限定されるわけではない。
【００１０】
これらに代表される化合物のなかでも、安価に純度の高い物質が得られる、さらにはアニオン性官能基の導入量をコントロール出来る等の理由から、生体由来の化合物をそのまま用いるよりも、合成化合物を用いる方がより実用的である。これらの点より、ポリアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイン酸共重合体などの合成ポリアニオン性化合物や、デキストラン硫酸、カルボキシメチルセルロースなどの合成酸性多糖類が好ましく用いられる。中でも安価であるという点から、ポリアクリル酸、ポリスチレンスルホン酸、デキストラン硫酸が好ましく、安全性の点からデキストラン硫酸が特に好ましい。また、ポリアニオン性化合物の分子量の上限はとくに制限はないが、実用上の面から１００万以下が好ましい。
【００１１】
本発明において、血液接触材料にポリアニオン性化合物を固定化する方法は種々あり、いかなる方法でもよいが、代表的な方法としては、（１）ポリアニオン性化合物を、放射線や電子線を用いたグラフト法によって表面に共有結合する方法、（２）官能基を介して化学的方法によりポリアニオン性化合物を共有結合する方法などがある。なおこれらの固定化方法は材料の形状によらず、用いることが出来る。
【００１２】
このなかでも、本発明の血液接触材料がポリアニオン性化合物とトリプトファン誘導体とを固定化してなる材料であることを考慮し、官能基を介して化学的にポリアニオン性化合物を共有結合させる方法が、トリプトファン誘導体の固定化と同じ方法で行えるため、本発明においてはより簡便で好ましい方法といえる。
【００１３】
本発明におけるトリプトファン誘導体とは、トリプトファン、トリプトファンエチルエステル、トリプトファンメチルエステルなどのトリプトファンエステル類、トリプタミン、トリプトファノールなどのインドール環を有するトリプトファンと類似した構造を有する化合物をいう。またこれらのトリプトファン誘導体はＬ体、Ｄ体、ＤＬ体、またこれらの混合物のいずれであってもよい。さらに２種類以上のトリプトファン誘導体の混合物であってもよい。これらのトリプトファン誘導体のなかでも、トリプトファンが安全上好ましく、その中でもＬ−トリプトファンが天然型のアミノ酸であること、その安全性に関するデータが豊富であること、安価で入手しやすいことから、実用上好ましく用いられる。
【００１４】
本発明におけるトリプトファン誘導体の固定化方法としては、血液接触材料の官能基を介して化学的方法によりトリプトファン誘導体を共有結合する方法が好ましく用いられる。
【００１５】
本発明におけるポリアニオン性化合物の固定化量は表面積１ｍ２当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下であり、かつトリプトファン誘導体固定化量とポリアニオン性化合物固定化量とのモル比が１以上７０以下であることが必要である。
【００１６】
本発明におけるトリプトファン誘導体固定化量とポリアニオン性化合物固定化量モル比（ＴＲ／ＰＡ比）とは、下式により算出される値をいう。
【００１７】
ＴＲ／ＰＡ比＝材料表面積１ｍ２当たりのトリプトファン誘導体固定化モル数／材料表面積１ｍ２当たりのポリアニオン固定化モル数
本発明者らは、ポリアニオン性化合物の固定化量、並びにトリプトファン誘導体の固定化量と、血液接触時の補体活性化の程度につき鋭意検討した結果、驚くべきことに、ポリアニオン性化合物の固定化量を表面積１ｍ２当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下とし、かつＴＲ／ＰＡ比を１以上７０以下に制御することにより、血中の補体活性化の低減効果があることを見いだした。
【００１８】
本発明において、ポリアニオン性化合物の固定化量は、表面積１ｍ２当たり７．５ｎｍｏｌ以上９６．２ｎｍｏｌ以下である。この固定化量を７．５ｎｍｏｌより少なくした場合、血液接触材料による補体活性化が顕著となる。また、９６．２ｎｍｏｌ以下より多くすると、ポリアニオンの陰性荷電による血中物質の吸着が顕著になる。これらの２点から好ましくは１０．０ｎｍｏｌ以上６６．１ｎｍｏｌ以下であり、最も好ましくは１０．０ｎｍｏｌ以上３２．１ｎｍｏｌ以下である。
【００１９】
また、本発明において、トリプトファン誘導体固定化量とポリアニオン性化合物固定化量とのモル比（ＴＲ／ＰＡ比）は１以上７０以下であり、ＴＲ／ＰＡ比がこの範囲から逸脱すると、血小板の付着性が増加する。この点から好ましくは５以上６０以下であり、最も好ましくは１０以上５０以下である。
【００２０】
本発明における血液接触材料の表面積測定法としては、積分により数学的に算出する方法、ＢＥＴ法に代表される材料表面への気体吸着量測定を利用した方法などがあるが、多孔質の表面積を測定する際には後者の手法がより簡便である。気体吸着量測定を利用して表面積を測定する場合、サンプルに乾燥処理を施す必要があるが、この際、材料の構造を破壊しない凍結乾燥の様な処理方法をとることが望ましい。
【００２１】
本発明におけるポリアニオン性化合物の固定化量の測定方法としては、ポリアニオン性化合物に含まれる元素の血液接触材料中の含有量を定量する方法（例えばデキストラン硫酸の場合、血液接触材料の硫黄含有量を定量する）、ポリアニオン性化合物と結合する性質を有する色素溶液と血液接触材料を接触させ、溶液中の色素の減少量から測定する方法などがあるが、その中でも色素溶液を用いる方法は簡便でしかも正確にポリアニオン性化合物の固定化量を測定することができる。具体的には、ポリアニオン性化合物がデキストラン硫酸やポリアクリル酸などのばあいには、該化合物がトルイジンブルーと結合する性質を有していることを利用し、トルイジンブルー溶液と血液接触材料を接触させた時のトルイジンブルーの吸着量からその固定化量を非常に簡便に測定することができる。
【００２２】
本発明におけるトリプトファン誘導体の固定化量は、強酸性条件下でｐ−ジメチルベンズアルデヒドなどのアルデヒドをトリプトファン誘導体の分子内に存在するインドール環に縮合させるときに発色する性質を利用して定量することができる（山田浩一編、アミノ酸発酵（下）各論、４３〜４５頁、共立出版、１９７２年）。また、トリプトファン誘導体の分子内に存在するインドール環が２８０ｎｍ付近の光で励起させたときに３５０ｎｍ付近に極大を有する蛍光を発する性質を利用して定量する方法や、材料自身が窒素を含有しない化合物である場合は、実施例１において具体的方法を示す通り、血液接触材料中の窒素含有量の定量により測定することもできる。
【００２３】
本発明における血液接触材料の改質方法は、血液の接触する医療器具であれば、特に制限無く適用可能である。このような医療器具の例としては、血液接触回路、体内留置器具、血液保存容器、血管内治療器具、血液浄化装置等が挙げられる。
【００２４】
本発明の血液接触材料は、常温常圧で固体であり水不溶性である。血液接触材料の形状としては、板状、球状、粒状、平膜状、繊維状、中空糸状等いずれも有効に用いられ、特に制限はない。
【００２５】
本発明における血液接触材料は、その形状によらず、ポリアニオン性化合物、およびトリプトファン誘導体を固定化するために、結合に利用し得る官能基を有することが好ましい。このような官能基の代表例としては、アミノ基、アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシンイミド基、ヒドロキシル基、チオール基、アルデヒド基、ハロゲン基、エポキシ基、シラノール基、トレシル基などがあげられるが、これらに限定されるわけではない。また、これらの官能基は、たとえばハロゲン化シアン化法、エピクロロヒドリン法、ビスエポキシド法、ブロモアセチルブロミド法などの方法で活性化されていてもよく、このなかで実用上、安全上の観点から、エピクロロヒドリン法が特に好ましく用いられる。
【００２６】
本発明における血液接触材料の材質は特に限定されないが、セルロース、酢酸セルロース、デキストリン等の多糖類からなる有機材料、ポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリビニルアルコール等の合成高分子などが代表例として挙げられる。これらは、ヒドロキシエチルメタクリレート等のヒドロキシル基を有する高分子材料や、ポリエチレンオキサイド鎖を有する単量体と他の重合性単量体との共重合のようなグラフト共重合体等のコーティング層を有していてもよい。これらの中でセルロースや、ポリビニルアルコール等からなる合成高分子が、材料表面に活性基を導入しやすいため、実用上好ましく用いられる。
【００２７】
本発明における水不溶性多孔質担体の材質は特に限定されないが、セルロース、酢酸セルロース、デキストリン等の多糖類からなる有機材料、ポリスチレン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸エステル、ポリビニルアルコール等の合成高分子などが代表例として挙げられる。これらは、ヒドロキシエチルメタクリレート等のヒドロキシル基を有する高分子材料や、ポリエチレンオキサイド鎖を有する単量体と他の重合性単量体との共重合のようなグラフト共重合体等のコーティング層を有していてもよい。これらの中でセルロースや、ポリビニルアルコール等からなる合成高分子が、材料表面に活性基を導入しやすいため、実用上好ましく用いられる。
本発明における吸着材は、その形状によらず、ポリアニオン性化合物、およびトリプトファン誘導体を固定化するために、結合に利用し得る官能基を有することが好ましい。このような官能基の代表例としては、アミノ基、アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシンイミド基、ヒドロキシル基、チオール基、アルデヒド基、ハロゲン基、エポキシ基、シラノール基、トレシル基などがあげられるが、これらに限定されるわけではない。また、これらの官能基は、たとえばハロゲン化シアン化法、エピクロロヒドリン法、ビスエポキシド法、ブロモアセチルブロミド法などの方法で活性化されていてもよく、このなかで実用上、安全上の観点から、エピクロロヒドリン法が特に好ましく用いられる。
【実施例】
【００２８】
以下に実施例にもとづいて本発明の血液接触材料の改質方法をさらに詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００２９】
（実施例１）
平均粒径約４５０μｍの湿潤時の沈降体積１００ｍLのセルロースビーズに水３．８ｍｌ、４Ｎ  ＮａＯＨ水溶液３２ｍｌおよびエピクロロヒドリン２９ｍｌを加え、４０℃で２時間攪拌して反応させた。反応後ビーズを水で十分洗浄してエポキシ化セルロースビーズを得た。
【００３０】
デキストラン硫酸（硫黄含量約１８％、分子量約４０００）１．５ｇを１０ｍｌの水に溶解したデキストラン硫酸水溶液を調製し、水に湿潤した状態のエポキシ化セルロースビーズを表面積にして１５６ｍ２（沈降体積１０ｍｌ）加え、ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性とした後、４５℃で３時間反応させた。反応後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄した後、Ｌ−トリプトファン０．１６ｇを希ＮａＯＨ水５．３ｍｌに溶解させた液を加え、５０℃で８時間反応させた。その後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄して改質セルロースビーズを得た。
【００３１】
得られた改質セルロースビーズをポリプロピレンチューブに沈降体積として０．２ｍｌ計量し、生理食塩液で湿潤させた後、これに健常人血液２ｍｌを添加し、３７℃で１５分バッチ接触させた。改質セルロースビーズへの接触後の血漿中におけるＣ３ａおよびＣ５ａの濃度をＲＩＡにより測定したところそれぞれ６６０ｎｇ／ｍｌおよび≦１０ｎｇ／ｍｌであった（表１、図１）。
【００３２】
なお、改質セルロースビーズの表面積はＢＥＴ多点法により計測した。すなわち改質セルロースビーズをエタノールにより脱水し、ｔ−ブタノール中で凍結乾燥処理を施した後、単位重量あたりの面積（比表面積）をＡＳＡＰ−２４００（ＭＩＣＲＯＭＥＲＩＴＩＣＳ社製）により計測した。
【００３３】
また、デキストラン硫酸およびトリプトファンの固定化量はそれぞれ改質セルロースビーズの硫黄および窒素の含有量から求めた。すなわち１ｍｌの改質セルロースビーズを水で充分洗浄した後、６０℃で６時間以上減圧乾燥した後、元素分析により定量した。その結果、改質セルロースビーズのデキストラン硫酸固定化量は１２．３ｎｍｏｌ／ｍ２、トリプトファンの固定化量はそれぞれ５５５．０ｎｍｏｌ／ｍ２であり、ＴＲ／ＰＡ比は４５．０であった。
【００３４】
なお、ここでの湿潤状態のセルロースビーズの体積は以下のように求める。すなわち、セルロースビーズは水に浸漬したスラリーとしてメスシリンダーなどの計量容器に移しとり、計量容器内のスラリー状のセルロースビーズを自然に沈降させる。この後、計量容器が割れないようゴム製のマットなどを敷き、その上に計量容器を５〜１０ｃｍ程度の高さから鉛直方向に５回ないし１０回程度軽く（一度沈降したセルロースビーズが極度に舞い上がらない程度に）叩きつけることにより振動を加える。１５分以上静置した後、セルロースビーズの沈降体積を読みとる。この振動、静置の操作を繰り返し、セルロースビーズの沈降体積が変化しなくなった段階の湿潤状態のセルロースビーズの沈降体積とする。
【００３５】
（実施例２）
実施例１のセルロースビーズに水２２ｍｌ、４Ｎ  ＮａＯＨ水溶液３１ｍｌおよびエピクロロヒドリン３２ｍｌを加え、４０℃で２時間攪拌して反応させた。反応後ビーズを水で十分洗浄してエポキシ化セルロースビーズを得た。
【００３６】
実施例１のデキストラン硫酸４．０ｇを５ｍｌの水に溶解したデキストラン硫酸水溶液を調製し、水に湿潤した状態のエポキシ化セルロースビーズを表面積にして１５６ｍ２（沈降体積１０ｍｌ）加え、ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性とした後、４５℃で１．５時間反応させた。反応後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄した後、Ｌ−トリプトファン０．１６ｇを希ＮａＯＨ水８．５ｍｌに溶解させた液を加え、５０℃で８時間反応させた。その後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄して改質セルロースビーズを得た。
【００３７】
実施例１と同様の方法で実施例１と同一のヒト血漿とバッチ接触させたところ、改質セルロースビーズへの接触後の血漿中におけるＣ３ａおよびＣ５ａの濃度はそれぞれ７２０ｎｇ／ｍｌおよび≦１０ｎｇ／ｍｌであった（表１、図１）。
【００３８】
実施例１と同様の方法で求めたデキストラン硫酸およびトリプトファンの固定化量はそれぞれ１７．４ｎｍｏｌ／ｍ２および４９５．０ｎｍｏｌ／ｍ２であり、ＴＲ／ＰＡ比は２８．４であった。
（実施例３）
実施例１のセルロースビーズに水５５ｍｌ、４Ｎ  ＮａＯＨ水溶液１５ｍｌおよびエピクロロヒドリン１４ｍｌを加え、４０℃で２時間攪拌して反応させた。反応後ビーズを水で十分洗浄してエポキシ化セルロースビーズを得た。
【００３９】
実施例１のデキストラン硫酸４．０ｇを５ｍｌの水に溶解したデキストラン硫酸水溶液を調製し、水に湿潤した状態のエポキシ化セルロースビーズを表面積にして１５６ｍ２（沈降体積１０ｍｌ）加え、ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性とした後、４５℃で６時間反応させた。反応後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄した後、実施例２と同様の方法でＬ−トリプトファンを固定化し改質セルロースビーズを得た。
【００４０】
実施例１と同様の方法で実施例１と同一のヒト血漿とバッチ接触させたところ、改質セルロースビーズへの接触後の血漿中におけるＣ３ａおよびＣ５ａの濃度はそれぞれ４７７ｎｇ／ｍｌおよび≦１０ｎｇ／ｍｌであった（表１、図１）。
【００４１】
実施例１と同様の方法で求めたデキストラン硫酸およびトリプトファンの固定化量はそれぞれ２９．７ｎｍｏｌ／ｍ２および２８５．０ｎｍｏｌ／ｍ２であり、ＴＲ／ＰＡ比は９．６であった。
（実施例４）
実施例１のセルロースビーズに水４ｍｌ、４Ｎ  ＮａＯＨ水溶液３２ｍｌおよびエピクロロヒドリン２９ｍｌを加え、４０℃で２時間攪拌して反応させた。反応後ビーズを水で十分洗浄してエポキシ化セルロースビーズを得た。
【００４２】
実施例１のデキストラン硫酸４．０ｇを５ｍｌの水に溶解したデキストラン硫酸水溶液を調製し、水に湿潤した状態のエポキシ化セルロースビーズを表面積にして１５６ｍ２（沈降体積１０ｍｌ）加え、ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性とした後、４５℃で６時間反応させた。反応後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄した後、実施例２と同様の方法でＬ−トリプトファンを固定化し改質セルロースビーズを得た。
【００４３】
実施例１と同様の方法で実施例１と同一のヒト血漿とバッチ接触させたところ、改質セルロースビーズへの接触後の血漿中におけるＣ３ａおよびＣ５ａの濃度はそれぞれ５８０ｎｇ／ｍｌおよび≦１０ｎｇ／ｍｌであった（表１、図１）。
【００４４】
実施例１と同様の方法で求めたデキストラン硫酸およびトリプトファンの固定化量はそれぞれ４３．５ｎｍｏｌ／ｍ２および４６５．０ｎｍｏｌ／ｍ２であり、ＴＲ／ＰＡ比は１０．７であった。
【００４５】
（比較例１）
実施例１のセルロースビーズに水５５ｍｌ、４Ｎ  ＮａＯＨ水溶液１５ｍｌおよびエピクロロヒドリン１４ｍｌを加え、４０℃で２時間攪拌して反応させた。反応後ビーズを水で十分洗浄してエポキシ化セルロースビーズを得た。
【００４６】
実施例１のデキストラン硫酸１．５ｇを５ｍｌの水に溶解したデキストラン硫酸水溶液を調製し、水に湿潤した状態のエポキシ化セルロースビーズを表面積にして１５６ｍ２（沈降体積１０ｍｌ）加え、ＮａＯＨ水溶液でアルカリ性とした後、４５℃で０．５時間反応させた。反応後、ビーズを水および食塩水で十分洗浄した後、実施例２と同様の方法でＬ−トリプトファンを固定化し改質セルロースビーズを得た。
【００４７】
実施例１と同様の方法でヒト血漿とバッチ接触させたところ、改質セルロースビーズへの接触後の血漿中におけるＣ３ａおよびＣ５ａの濃度はそれぞれ３７２０ｎｇ／ｍｌおよび１７ｎｇ／ｍｌであった（表１、図１）。
【００４８】
実施例１と同様の方法で求めたデキストラン硫酸およびトリプトファンの固定化量はそれぞれ５．８ｎｍｏｌ／ｍ２および４０５．０ｎｍｏｌ／ｍ２であり、ＴＲ／ＰＡ比は６９．８であった。
【００４９】
（比較例２）
実施例１のセルロースビーズを、実施例１と同様の方法で実施例１と同一のヒト血漿とバッチ接触させたところ、改質セルロースビーズへの接触後の血漿中におけるＣ３ａおよびＣ５ａ濃度はそれぞれ１１７０ｎｇ／ｍｌおよび≦１０ｎｇ／ｍｌであった（表１）
【００５０】
【表１】
0005374064.tif 000002
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】各種濃度でデキストラン硫酸を固定化して得られた改質セルロースビーズへ血液を接触させた後の血漿中におけるＣ３ａ濃度
【図１】
0005374064.tif 000003