(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
千里香の抽出物を含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項２】
毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の育毛剤。
【請求項３】
千里香の抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤。
【請求項４】
サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する請求項３に記載の抗肥満剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、千里香の抽出物を含有する抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、並びにこれらを含有する化粧料及び美容用飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしている。
しかし、前記活性酸素の過剰な生成は生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。しかし、スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の一つであると考えられている。
これらの中でも、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため、スーパーオキサイドが生成し易い器官であるから、スーパーオキサイド濃度の上昇により、例えば、コラーゲン等の生体組織を分解、変性、又は架橋したり、また油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成して、皮膚のしわを形成したり、皮膚の弾力性低下等の老化、炎症、肌の色素沈着を引き起こすという問題がある（非特許文献１参照）。
そこで、活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、過酸化水素消去物質等を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物（特許文献１参照）、ベンケイソウ科リュウキュウベンケイ属植物の抽出物（特許文献２参照）、タマコチョウの抽出物（特許文献３参照）、スイオウの抽出物（特許文献４参照）、などに有効性が確認されている。
【０００３】
グルタチオンは、グルタミン酸、システイン、グリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンの役割としてはラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、各種酵素のＳＨ供与体であり、抗酸化成分としても知られており、その作用発現はシステイン残基に由来すると考えられている。皮膚中のグルタチオン量については、加齢により低下することが報告されており、このことが皮膚における酸化防御能を低下させ、細胞内のＤＮＡ、タンパク質等の構成成分にダメージを与える一因になると考えられている。そこで、皮膚においてグルタチオンの産生を促進することは、加齢により衰える酸化ストレスの防御を高め、かつ紫外線による酸化ストレスに対する傷害を抑制することにつながり、皮膚の老化の予防、治療、あるいはシミなどの色素沈着に対する改善が期待できる。このような考えに基づき、グルタチオン産生促進作用を有するものとして、例えばビルベリー抽出物及びウォルナット抽出物（特許文献５参照）、クチナシ属植物の抽出物（特許文献６参照）、などが知られている。
【０００４】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては、皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの産生量が減少すると共に架橋による弾力低下を起こす。その結果、皮膚は保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始めるため、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
このように皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン等の真皮マトリックス成分の減少乃至変性が関与している。
【０００５】
近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群の分解及び再構築がある。
前記ＭＭＰｓはその一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群(ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−１３)、（２）ゼラチナーゼ群(ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９)、（３）ストロメライシン群(ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−１０)、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６、及びＭＭＰ−１７）、（５）その他（ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１１、及びＭＭＰ−１２）の５つのグループに分類されている（特許文献７参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ−１（マトリックスメタロプロテアーゼ−１）及びＭＭＰ−１４（マトリックスメタロプロテアーゼ−１４）は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因の一つであると考えられている。
【０００６】
また、加齢に伴う皮膚老化の一因として、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することがある。エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっており、その分泌不足は種々の内科的疾患を招く他、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等の好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。
したがってコラゲナーゼ活性の阻害、皮膚線維芽細胞の増殖の促進、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害、あるいは加齢によるエストロゲン分泌減退を補うことにより、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を予防乃至治療できると考えられる。
【０００７】
また、炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因及び発症機構は多種多様である。その原因としてヒアルロニダーゼ活性阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離（ヒスタミン遊離）抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、主にマクロファージから産生される腫瘍壊死因子（以下、「ＴＮＦ−α」と称することもある）によるものが知られている。
体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中では紫外線、酵素等によって分解され、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、ヒアルロン酸は細胞間組織として存在し、血管透過性とも関与している。更に、ヒアルロニダーゼは肥満細胞中にあって活性化により、肥満細胞からの脱顆粒に関与していると考えられている。したがってヒアルロン酸の加水分解酵素であるヒアルロニダーゼの活性を阻害することにより、ヒアルロン酸の安定化をはかり、肥満細胞からの種々のケミカルメディエーターの放出を防止し、保湿の強化又は抗炎症が期待できる。
このようなヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、オスベッキア属植物の抽出物（特許文献８参照）、藤茶抽出物（特許文献９参照）、ローズマリー、タイム抽出物及びメリッサ抽出物（特許文献１０参照）などが報告されている。
【０００８】
前記ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離したヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このようなヒスタミン遊離抑制剤としては、例えばトラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジンなどが用いられてきた。しかし、これらの物質はいずれも副作用があり、安全性の点で問題がある。
【０００９】
前記一酸化窒素（ＮＯ）は、大気汚染、酸性雨等の要因となる窒素酸化物である。また、近年、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管内皮由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）、神経伝達物質、生体防御における微生物、腫瘍細胞の障害因子等、生体内で多彩な機能を示す生理活性物質であることが報告されている。生理活性物質としては、マクロファージから産生される一酸化窒素が細菌及びウイルスの感染を防御することが知られている。しかし、前記マクロファージから産生される一酸化窒素が大量に生合成されると、生体にとって無毒ではなく、自己組織の破壊を引き起こし、炎症の悪化、リューマチ、糖尿病等の病態の原因となることがある。また、大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こすこともある。
したがって炎症性疾患において、一酸化窒素（ＮＯ）の過剰な産生を抑制することが重要となる。このような一酸化窒素の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、ローズマリー抽出液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ抽出液（特許文献１１参照）、唐独活、タラ根皮、和続断、車前子、遠子、茜草根、半枝連、槐花、花椒（非特許文献２参照）、などが報告されている。
【００１０】
前記ＴＮＦ−αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ−αは炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。そのような炎症としては、例えば、関節リューマチ、変形性関節症などの慢性炎症性疾患が代表的である。したがって、病的な炎症においてはＴＮＦ−αの過剰な産生を抑制することが重要となる。このようなＴＮＦ−α産生抑制剤としては、例えば、シソ抽出液（非特許文献３参照）、ヒガンバナ科アルカロイドのリコリン及びリコリシジノール（非特許文献４参照）、などが挙げられる。
【００１１】
また、血小板凝集は、アラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ２の活性化を招き、それによりロイコトリエンＢ及びプロスタグランジンＥ２等が放出されて起炎物質となる。このため、血小板の凝集を阻害乃至抑制する物質によりアレルギー疾患性疾患、炎症性疾患を予防乃至治療する試みがなされている。このような血小板凝集抑制作用を有する生薬の抽出物としては、例えば、カナリウム属に属する植物の抽出物（特許文献１２参照）、コウサンフウ抽出物（特許文献１３参照）、藤茶抽出物（特許文献１４参照）、などが報告されている。
【００１２】
毛髪の成長は、成長期、退行期、休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期へかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖乃至分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞へ働きかけてその増殖を促す等の、毛髪への分化に重要な役割を担っている（非特許文献５参照）。
このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖乃至分化及び毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、例えば、毛乳頭細胞に対象物質を接触させて、その細胞の増殖活性の有無、あるいは強弱を特定することで、その対象物質の育毛効果を検定する方法が提案されている（特許文献１５参照）。また、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬としては、例えばハトムギ抽出物、ワイルドタイム抽出物、スギナ抽出物、ショウブ抽出物、ローズマリー抽出物、ウコン抽出物、シラカバ抽出物、コウチャ抽出物などが提案されている（特許文献１６参照）。
【００１３】
また、男性ホルモンの１種であるテストステロンは、還元酵素であるテストステロン−５α−リダクターゼにより還元されて、ジヒドロテストステロンとなる。生成されたジヒドロテストステロンが頭皮に蓄積すると、毛根を萎縮させて、脱毛を誘発する原因となることが知られている。したがってジヒドロテストステロンの生成を抑制乃至阻害することによって、脱毛を予防及び治療できると考えられている。
そこで、テストステロン−５αリダクターゼ阻害作用を有する生薬の抽出物としては、例えば、ウルシ科Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属植物の抽出物（特許文献１７参照）、マジトの抽出物及びカチュアの抽出物（特許文献１８参照）、五斂子の抽出物（特許文献１９参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓、及び穿心蓮から選択されるいずれかの抽出物（特許文献２０参照）、などが提案されている。
【００１４】
また、肥満の防止には、脂肪の代謝促進に関与しているサイクリックＡＭＰを分解する酵素であるサイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑制することが有効であると考えられる。実際、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼの作用を抑えると、細胞内サイクリックＡＭＰの濃度が上昇して脂質代謝が活発になり、肥満が解消されることが知られている。
そこで、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害作用を有する物質を天然物から抽出することが試みられており、例えば、藤茶抽出物（特許文献９参照）、カエデ属植物の抽出物（特許文献２１参照）、などが報告されている。
【００１５】
これまでの美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、最近、紫外線ＵＶＢ照射後に表皮ケラチノサイトからの産生が上昇し、色素細胞（メラノサイト）を活性化するサイトカインとしてα−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、一酸化窒素（ＮＯ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）等が報告されており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニン産生を抑制して美白効果を導く物質の開発が盛んに行われるようになってきている。このようなエンドセリン−１（ＥＴ−１）の色素細胞（メラノサイト）への作用を阻害する生薬の抽出物として、例えばカミツレ抽出物及びアルテア抽出物が報告されている（非特許文献６参照）。
【００１６】
しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【００１７】
【特許文献１】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献２】特開２００５−２９４８３号公報
【特許文献３】特開２００６−３２１７３０号公報
【特許文献４】特開２００７−８９０２号公報
【特許文献５】特開２００６−２４１０６２号公報
【特許文献６】特開２００６−３４７９３４号公報
【特許文献７】特開２０００−３４４６７２号公報
【特許文献８】特開２００３−５５２４２号公報
【特許文献９】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献１０】特開平８−３３３２６７号公報
【特許文献１１】特開２００２−８７９７５号公報
【特許文献１２】特開２００２−５３４７８号公報
【特許文献１３】特開２００２−５３４７７号公報
【特許文献１４】特開２００１−９７８７３号公報
【特許文献１５】特開平１０−２２９９７８号公報
【特許文献１６】特開２００６−２１９４０７号公報
【特許文献１７】特開２００３−５５１６２号公報
【特許文献１８】特開２００２−２４１２９７号公報
【特許文献１９】特開２００２−２４１２９６号公報
【特許文献２０】特開２００２−８７９７６号公報
【特許文献２１】特開２００３−１１３０６８号公報
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」臨時増刊Ｎｏ．１４、ｐ１５６  １９９５年
【非特許文献２】「和漢医薬学雑誌」，Ｖｏｌ．１５，ｐ．３０２−３０３，１９９８年発行
【非特許文献３】「炎症」１９９３年，Ｖｏｌ.１３，Ｎｏ．４，ｐ.３３７〜３４０
【非特許文献４】「薬学雑誌」２００１年，Ｖｏｌ.１２１，Ｎｏ．２，p.１６７〜１７１
【非特許文献５】「Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ．５６−６１
【非特許文献６】「フレグランスジャーナル」，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．９，ｐ６５〜７１，２０００年発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第１に、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗酸化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第３に、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗炎症剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第４に、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系育毛剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第５に、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗肥満剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第６に、優れた美白作用を有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第７に、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した化粧料、及び美容用飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
前記課題を解決するため、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、化粧料及び美容用飲食物に広く使用可能な抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤について本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、千里香の抽出物が、（１）優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有し、抗酸化剤として有用であること、（２）優れたエラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有し、抗老化剤として有用であること、（３）優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有し、抗炎症剤として有用であること、（４）優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有し、育毛剤として有用であること、（５）優れたサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有し、抗肥満剤として有用であること、（６）優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有し、美白剤として有用であることを、それぞれ知見した。
なお、前記抗酸化剤におけるグルタチオン産生促進作用は、加齢により衰える酸化ストレスの防御を高め、かつ紫外線による酸化ストレスに対する傷害を抑制することにつながり、皮膚の老化の予防、治療、あるいはシミなどの色素沈着に対する改善が期待できるので、抗老化剤及び美白剤としても有用である。
【００２０】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  千里香の抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞  スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞  千里香の抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞  エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞  千里香の抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜６＞  ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜５＞に記載の抗炎症剤である。
＜７＞  千里香の抽出物を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜８＞  毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有する前記＜７＞に記載の育毛剤である。
＜９＞  千里香の抽出物を含有することを特徴とする抗肥満剤である。
＜１０＞  サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有する前記＜９＞に記載の抗肥満剤である。
＜１１＞  千里香の抽出物を含有することを特徴とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤である。
＜１２＞  前記＜１＞から＜１１＞のいずれかに記載の千里香の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする化粧料である。
＜１３＞  前記＜１＞から＜１１＞のいずれかに記載の千里香の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美容用飲食品である。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の抗酸化剤によると、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを通じて、生体内の酸化防止、皮膚の老化を防止乃至改善することができる。
本発明の抗老化剤によると、優れたエラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワ及び皮膚の弾力低下の防止乃至改善することができる。
本発明の抗炎症剤によると、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを通じて、炎症性疾患を防止乃至改善することができる。
本発明の育毛剤は、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを通じて、男性型脱毛症等の予防乃至治療に極めて有用である。
本発明の抗肥満剤は、優れたサイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を通じて、肥満を予防乃至防止することができる。
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、美白効果を奏することができる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、天然系抽出物であり安全性に優れ、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさないので化粧料に配合したり、美容用飲食品に添加して用いるのに好適なものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
（抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤）
本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、千里香の抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００２３】
前記抗酸化剤は、抗酸化作用として、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗老化剤は、抗老化作用として、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗炎症剤は、抗炎症作用として、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかを有している。
前記育毛剤は、育毛作用として、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗肥満剤は、抗肥満作用として、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有している。
前記エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有している。
前記千里香の抽出物における抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有する物質の詳細については不明であるが、該千里香の抽出物がこれらの優れた作用を有し、抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤として有用であることは現在までのところ全く知られておらず、これらのことは、本発明者らの鋭意研究による新知見である。
【００２４】
前記千里香（センリコウ）は、モクレン科の植物であり、学名はＭｉｃｈｅｌｉａ ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．であり、ウンナンオガタマノキ、山辛夷（サンシンイ）、羊皮袋（ヨウヒタイ）、皮袋香（ヒタイコウ）とも呼ばれる、常緑の低木であって、葉は卵形から卵状楕円形、先端が尖っている。花は葉腋に単生し、芳香がある。
前記千里香は、中国の雲南省に分布しており、この地域から容易に入手可能である。
前記千里香には、例えば消炎、清熱等の効能があり、咽喉炎、鼻炎、眼疾患の治療に用いられている。
【００２５】
前記千里香の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。なお、前記千里香の抽出物には、千里香の抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２６】
前記千里香の抽出原料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、千里香の葉部、花（蕾）部、枝部、種子、樹皮（これらを地上部という）、根部などを用いることができる。これらの中でも、花部等の地上部が特に好ましい。
【００２７】
前記抽出原料である千里香は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記千里香は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。なお、脱脂等の前処理を行うことにより、千里香の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２８】
前記抽出に用いる溶媒としては、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒を室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２９】
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部添加することが好ましい。
【００３０】
本発明において、抽出原料である千里香から、抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有する物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
【００３１】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としての千里香の花部を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤として用いることができる。
【００３２】
得られる千里香の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３３】
なお、得られる千里香の抽出液は、そのままでも抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、前記千里香の抽出物は、特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料及び美容用飲食品に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製としては、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００３４】
以上のようにして得られる千里香の抽出物は、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、エストロゲン様作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、血小板凝集抑制作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲンレセプター拮抗作用、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有しており、これらの作用に基づいて、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤として使用することができる。
【００３５】
本発明の抗酸化剤における抗酸化作用は、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、及びグルタチオン産生促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗老化剤における抗老化作用は、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、及びエストロゲン様作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗炎症剤における抗炎症作用は、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、及び血小板凝集抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の育毛剤における育毛作用は、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲンレセプター拮抗作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される。
本発明の抗肥満剤における抗肥満作用は、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用に基づいて発揮される。
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用に基づいて発揮される。
本発明の千里香の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有すると共に、皮膚及び頭皮に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、特に、以下に説明する本発明の化粧料に配合するのに好適である。
また、本発明の千里香の抽出物は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有すると共に、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、特に、以下に説明する本発明の美容用飲食品に配合するのに好適である。
【００３６】
（化粧料）
本発明の化粧料は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
【００３７】
ここで、前記化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス、などが挙げられる。
【００３８】
本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、又は前記エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の前記化粧料全体における配合量は、化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記千里香の抽出物に換算して０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜１質量％がより好ましい。
【００３９】
前記化粧料は、更に必要に応じて本発明の目的及び作用効果を損なわない範囲で、化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、本発明の抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかの妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。これらの成分は、前記千里香の抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた作用効果をもたらすことがある。
【００４０】
本発明の化粧料は、皮膚及び頭皮に使用した場合に高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、グルタチオン産生促進作用、エラスターゼ活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用、皮膚線維芽細胞増殖促進作用、エストロゲン様作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用、ＴＮＦ−α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、血小板凝集抑制作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲンレセプター拮抗作用、サイクリックＡＭＰ−ホスホジエステラーゼ活性阻害作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを効果的に発揮して、生体内の酸化防止、育毛、老化防止、炎症性疾患の予防乃至治療に有用である。
【００４１】
（美容用飲食品）
本発明の美容用飲食品は、本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、及び前記エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
【００４２】
本発明の前記美容用飲食物は、千里香の抽出物を、その活性を妨げないように任意の飲食物に配合したものであってもよいし、千里香の抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。
【００４３】
前記美容用飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００４４】
前記その他の成分としては、前記美容用飲食品を製造するに当たって通常用いられる補助的原料又は添加物、などが挙げられる。
前記原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、などが挙げられる。
【００４５】
前記美容用飲食品における本発明の前記抗酸化剤、前記抗老化剤、前記抗炎症剤、前記育毛剤、前記抗肥満剤、又は前記エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の添加量は、対象となる美容用飲食品の種類に応じて異なり一概には規定することができないが、美容用飲食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、各種対象美容用飲食品に対し、０．００１質量％〜５０質量％が好ましく、０．０１質量％〜２０質量％がより好ましい。また、顆粒、錠剤又はカプセル形態の美容用飲食品の場合には、０．０１質量％〜１００質量％が好ましく、５質量％〜１００質量％がより好ましい。
【００４６】
本発明の美容用飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分である千里香の抽出物の働きによって、抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを極めて効果的に発揮させることができる。
【００４７】
なお、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、化粧料、及び美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００４９】
（製造例１）
−千里香の水抽出物の製造−
抽出原料として千里香の花部の粉砕物１００ｇを、水１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００５０】
（製造例２）
−千里香の５０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料として千里香の花部の粉砕物１００ｇを、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００５１】
（製造例３）
−千里香のエタノール抽出物の製造−
抽出原料として千里香の花部の粉砕物１００ｇを、エタノール１０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。得られたろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して、抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００５２】
【表１】
0005162174.tif 000002
【００５３】
（参考例１）
−スーパーオキサイド消去試験（ＮＢＴ法）−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ、１．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液、０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）各０．１ｍＬと、０．０５ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬを試験管にとり、これに各試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いで、キサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、酵素溶液を添加せず、更に試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
測定した各吸光度より、下記数式１によりスーパーオキサイド消去率を求めた。
＜数式１＞
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
ただし、前記数式１中、Ａは試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度、Ｂは試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度、Ｃは試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度、Ｄは試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度をそれぞれ表す。
【００５４】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表２に示す。
【００５５】
【表２】
0005162174.tif 000003
表２の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、高いスーパーオキサイド消去作用を有することが確認できた。
【００５６】
（参考例２）
−ＤＰＰＨに対するラジカル消去試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により非常に安定なラジカルである１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ  ｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した後、波長５２０ｎｍの吸光を測定した。
コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えたのち直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。
そして、測定した各吸光度より、下記数式２によりラジカル消去率（％）を算出した。
＜数式２＞
ラジカル消去率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式２中、Ａはコントロールの吸光度、Ｂは試料溶液を添加した場合の吸光度、Ｃはブランクの吸光度をそれぞれ表す。
【００５７】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ラジカル消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表３に示す。
【００５８】
【表３】
0005162174.tif 000004
表３の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、高いＤＰＰＨに対するラジカル消去作用を有することが確認できた。
【００５９】
（参考例３）
−グルタチオン産生促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりグルタチオン産生促進作用を試験した。
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、４８穴プレートに１穴当たり２００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養後、１％ＦＢＳ含有Ｄ−ＭＥＭで溶解した試料溶液を各穴に２００μＬ添加し、２４時間培養した。培養終了後、各穴から培地を抜き、４００μＬのＰＢＳ（−）にて洗浄後、１５０μＬのＭ−ＰＥＲ（ＰＩＥＲＣＥ社）を用いて細胞を溶解した。このうちの１００μＬを用いて総グルタチオンの定量を行った。
具体的には、９６穴プレートに溶解した細胞抽出液１００μＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液５０μＬ、２ｍｍｏｌ／ＬのＮＡＤＰＨを２５μＬ、及びグルタチオンレダクターゼ２５μＬ（終濃度１７．５ｕｎｉｔ／ｍＬ）を加え、３７℃で１０分間加温した後、１０ｍｍｏｌ／Ｌの５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）  ２５μＬを加え、５分間後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度を測定しΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線に基づき算出した。得られた値は総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記数式３に従いグルタチオン産生促進率を算出した。試料濃度２００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、及び１２．５μｇ／ｍＬでのグルタチオン産生促進率を表４に示す。
＜数式３＞
グルタチオン産生促進率（％）＝（Ｂ／Ａ）×１００
ただし、前記数式３中、Ａは試料溶液を添加しない細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）を表す。Ｂは試料溶液を添加した細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量を表す。
【００６０】
【表４】
0005162174.tif 000005
表４の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物がグルタチオン産生促進作用を有することが確認された。また、グルタチオン産生促進作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できる。
【００６１】
（参考例４）
−一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験方法により一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を試験した。
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。培養終了後、培地を抜き、終濃度２質量％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭで溶解した試料溶液を各穴に１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％のＦＢＳ含有フェノールレッド不含ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、４８時間培養した。ＮＯ産生量は亜硝酸イオン（ＮＯ２−）量を指標に測定した。培養終了後、各穴の培養液に、同量のグリス試薬（１質量％のスルファニルアミド、０．１質量％のＮ−１−ｎａｐｈｔｈｙｌ  ｅｔｈｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ  ｄｉｈｙｄｒｏｃｈｌｐｒｉｄｅ  ｉｎ  ５質量％のリン酸溶液）を添加し、１０分間室温にて反応した。反応後、波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールの一酸化窒素（ＮＯ）産生量を基にして、下記数式４からＮＯ産生抑制率を算出した。
【００６２】
＜数式４＞
ＮＯ産生抑制率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
ただし、前記数式４中、Ａは試料添加、ＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料添加、ＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＣはコントロールのＬＰＳ刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、ＤはコントロールのＬＰＳ無刺激時の波長５４０ｎｍにおける吸光度、をそれぞれ表す。
【００６３】
次に、製造例１〜３の各抽出物溶液の濃度を段階的に減少させて上記ＮＯ産生抑制率を測定し、ＮＯ産生抑制率が５０％になる濃度ＩＣ５０を内挿法により求めた（このＩＣ５０値が小さいほどＮＯ産生抑制作用が強い）。結果を表５に示す。
【００６４】
【表５】
0005162174.tif 000006
表５の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、高い一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制作用を有することが認められた。
【００６５】
（参考例５）
−ＴＮＦ−α産生抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりＴＮＦ−α産生抑制作用を試験した。
まず、マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞、大日本製薬株式会社製）を、１０質量％の牛胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコＭＥＭ（日水製薬株式会社製）培地にて前培養後、セルスクレーパーより細胞を集め、１穴当たり１×１０５／ｃｅｌｌｓ／１００μＬの密度で９６穴マイクロプレートに細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４時間前培養した。
次に、９６穴マイクロプレート中の培地を捨て、予め２質量％のＤＭＳＯを含む培養液で溶解した各試料溶液を１００μＬ添加した後、リポポリサッカライド（ＬＰＳ、終濃度１μｇ／ｍＬ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１、Ｂ４、ＤＩＦＣＯ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を１００μＬ添加し、細胞を刺激した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間の培養により産生したＴＮＦ−αの産生量を、下記サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
次に、一次抗体であるラット抗マウスＴＮＦ−αモノクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．製）を５０ｍｍｏｌ／Ｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）で２．５μｇ／ｍＬとなるように溶解した。その溶液１００μＬを９６穴マイクロプレートに加え、一夜、４℃でコーティングした。次いで、洗浄液（０．０５質量％のＴｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液）で各穴を洗浄後、１質量％の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝液でブロッキングを行った。
次に、洗浄液によって各穴を洗浄後、試験培地で培養上清を希釈し、その１００μＬを各穴に加え、３７℃で１２０分間インキュベートした。各穴を洗浄した後、二次抗体として、０．３質量％のＢＳＡを含むリン酸緩衝液に２．５μｇ／ｍＬの濃度で溶解させたウサギ抗マウスＴＮＦ−αポリクローナル抗体（Ｅｎｄｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．製）１００μＬを加え、３７℃で６０分間インキュベートしてから洗浄した。
【００６６】
次いで、５００倍に希釈したアルカリフォスファターゼ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ＣＨＥＭＩＣＯＮ  Ｉｎｃ．製）を１００μＬ加え、３７℃で６０分間インキュベートした。各ウェルを洗浄した後、発色用緩衝液（２０ｍｍｏｌ／Ｌの硫酸マグネシウム含有トリス塩酸緩衝液、ｐＨ８．０）１００ｍＬにｐ−ニトロフェニルリン酸５０ｍｇを溶解してなる基質溶液１５０μＬをウェルに添加し、３７℃で２０分間〜３０分間酵素反応を行って発色させ、４０５ｎｍの吸光度を測定し、リコビナントマウスＴＮＦ−α（Ｅｎｄｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．製）標準液より作成した標準曲線から、培養上清中のＴＮＦ−α量（ｐｇ／ｍＬ）を求めた。
そして、各試料溶液のＴＮＦ−α産生抑制率は、以下の数式５に基づいて算出した。
＜数式５＞
ＴＮＦ−α産生抑制率（％）＝{（Ｂ−Ａ）／Ｂ}×１００
ただし、前記数式５中、Ａは試料溶液添加時のＴＮＦ−α量、Ｂは試料溶液無添加時のＴＮＦ−α量を表す。
【００６７】
次に、試料濃度を段階的に減少させて上記ＴＮＦ−α産生抑制率の測定を行い、ＴＮＦ−α産生を５０％抑制する試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表６に示す。
【００６８】
【表６】
0005162174.tif 000007
表６の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物がＴＮＦ−α産生抑制作用を有することが確認できた。また、ＴＮＦ−α産生抑制作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できる
【００６９】
（参考例６）
−ヒアルロニダーゼ活性阻害試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりヒアルロニダーゼ活性阻害作用について試験した。
まず、各抽出物を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）０．２ｍＬにヒアルロニダーゼ溶液〔Ｔｙｐｅ  ＩＶ−Ｓ（ｆｒｏｍ  ｂｏｖｉｎｅ  ｔｅｓｔｉｓ；ＳＩＧＭＡ  ４００  ＮＦ  ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）〕０．１ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応した。更に、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃にて２０分間反応した。これに０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウム溶液（ｆｒｏｍ  ｒｏｂｓｔｅｒ  ｃｏｍｂ）０．５ｍＬを加え、３７℃にて４０分間反応した。その後、０．４ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム０．２ｍＬを加え、反応を止めて冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬６ｍＬを加え、３７℃にて２０分間反応した。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、これらの結果から、下記数式６によりヒアルロニダーゼ活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのヒアルロニダーゼ活性阻害率を表７に示す。
＜数式６＞
ヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）＝
［１−（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）］×１００
ただし、前記数式６中、Ｓｔは、試料溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｓｂは、試料溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃｔは、コントロール溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃｂは、コントロール溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００７０】
【表７】
0005162174.tif 000008
表７の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
【００７１】
（参考例７）
−ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物について、下記の試験方法によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。なお、細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に培地で希釈し、ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＥ（ＳＩＧＭＡ社製）が終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるよう添加した後、９６穴プレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、Ｓｉｒａｇａｎｉａｎ緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した試料溶液１０μＬを加え、３７℃にて１０分静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ（ＬＳＬ  ｃｏ．，Ｌｔｄ製）溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６穴プレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。各穴の細胞上清１０μＬ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ＮＡＧ（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌ  β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄｅ、ＳＩＧＭＡ社製）溶液１０μＬを、新たな９６穴プレートに添加し、３７℃、１時間反応させた。反応終了後、各穴に０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３を２５０μＬ加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬ、及び０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３を２５０μＬ混合液の波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。そして、下記数式７からヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を表８に示す。
＜数式７＞
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式７中、Ａは、試料溶液無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、ｐ−ＮＡＧ無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００７２】
【表８】
0005162174.tif 000009
表８の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、ヘキソサミニダーゼ遊離（ヒスタミン遊離）抑制作用を有することが確認できた。
【００７３】
（参考例８）
−血小板凝集抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により血小板凝集抑制作用を試験した。
まず、ヘパリンナトリウム注射液（日本薬局方）を１／１０量加えて採血したウサギの血液を遠心分離（１８０×ｇ、１０分、室温）して、血小板浮遊液（Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｒｉｃｈ  Ｐｌａｓｍａ；Ｐ．Ｒ．Ｐ．）を得た。
次に、血小板浮遊液（Ｐ．Ｒ．Ｐ．）２２３μＬに２００ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム溶液１μＬを加え、３７℃で１分間反応した。これに試料溶液１μＬを加え、更に２分間反応し、撹拌子を入れて１分間撹拌した後、コラーゲン溶液を２５μＬ添加して、３７℃で１０分間の血小板凝集率を測定した。別に、コントロールとして試料溶液の代わりに試料溶液の溶媒を添加した以外は、上記と同様に操作して血小板凝集率を測定した。
そして、これらの測定結果から、下記数式８により血小板凝集抑制率（％）を求めた。試料濃度４００μｇ／ｍＬでの血小板凝集抑制率（％）を表９に示す。
＜数式８＞
血小板凝集抑制率（％）＝〔（Ａ−Ｂ）／Ａ〕×１００
ただし、前記数式８中、Ａは、コントロールの血小板凝集率、Ｂは、試料溶液添加時の血小板凝集率を表す。
【００７４】
【表９】
0005162174.tif 000010
表９の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、血小板凝集抑制作用を有することが確認できた。
【００７５】
（参考例９）
−エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ；ＮＨＥＫ）を、８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２）において、３７℃、５％ＣＯ２下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
次に、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ社製）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加え、ＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後、ＥｐｉＬｉｆｅ−ＫＧ２で必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（Ｗａｋｏ社製；Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にてｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ  ＲＮＡを調製した。
このｔｏｔａｌ  ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１（ＥＴ−１）、及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置（Ｓｍａｒｔ  Ｃｙｃｌｅｒ（Ｒ）、Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、Ｔａｋａｒａ  ＳＹＢＲ  ＥｘＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ）によるリアルタイム  ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
ＥＴ−１の発現量は、「紫外線未照射、試料溶液無添加」、「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、更に「紫外線未照射、試料溶液無添加」の補正値を１００とした時の「紫外線照射、試料溶液無添加」、及び「紫外線照射、試料溶液添加」の補正値を算出した。
そして、得られた結果から、下記数式９によりＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を算出した。試料濃度１０μｇ／ｍＬでのＥＴ−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率を表１０に示す。
＜数式９＞
エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）
＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
ただし、前記数式９中、Ａは紫外線未照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｂは紫外線照射、試料溶液無添加時の補正値、Ｃは紫外線照射、試料溶液添加時の補正値をそれぞれ表す。
【００７６】
【表１０】
0005162174.tif 000011
表１０の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、エンドセリン−１（ＥＴ−１）ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが確認できた。
【００７７】
（参考例１０）
−エラスターゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりエラスターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、９６穴マイクロプレートにて、０．２ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ８．０）で調製した各試料溶液５０μＬ、及び２０μｇ／ｍＬのエラスターゼ・タイプＩＩＩ溶液５０μＬを混合した。その後、上記緩衝液にて調製した０．４５１４ｍｇ／ｍＬのＮ−ＳＵＣＣＩＮＹＬ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ＡＬＡ−ｐ−ＮＩＴＲＯＡＮＩＬＩＤＥを１００μＬ添加して、２５℃にて１５分間反応させた。反応終了後、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、これらの結果から、下記数式１０によりエラスターゼ活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのエラスターゼ活性阻害率を表１１に示す。
【００７８】
＜数式１０＞
エラスターゼ活性阻害率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式１０中、Ａは、試料溶液無添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、試料溶液添加、酵素添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、試料溶液添加、酵素無添加での波長４１５ｎｍにおける吸光度を表す。
【００７９】
【表１１】
0005162174.tif 000012
表１１の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、エラスターゼ活性阻害作用を有することが確認できた。
【００８０】
（参考例１１）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）活性阻害作用を試験した。この試験方法は、Ｗｕｎｓｃｈ  ａｎｄ  Ｈｅｉｄｒｉｃｈ法を一部改変したものである。
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／ｍＬの塩化カルシウム含有０．１ｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１）に溶解した各試料溶液５０μＬ、ＭＭＰ−１溶液５０μＬ、及びＰｚ−ｐｅｐｔｉｄｅ溶液４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸溶液１ｍＬを加え反応を停止した。その後、酢酸エチル５ｍＬを加え、激しく振とうした。これを遠心分離（１６００×ｇ、１０分）し、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。
なお、ＭＭＰ−１としては、ＣＯＬＬＡＧＥＮＡＳＥ  Ｔｙｐｅ  ＩＶ  ｆｒｏｍ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（シグマ社製）を使用した。
Ｐｚ−ｐｅｐｔｉｄｅとしては、Ｐｚ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＨ（ＢＡＣＨＥＭ  Ｆｅｎｉｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ  ＡＧ社製）を使用した。
そして、得られた結果から、下記数式１１によりＭＭＰ−１活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのＭＭＰ−１活性阻害率を表１２に示す。
＜数式１１＞
ＭＭＰ−１活性阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
ただし、前記数式１１中、Ａは試料溶液無添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｂは試料溶液無添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｃは試料溶液添加、酵素添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度、Ｄは試料溶液添加、酵素無添加での波長３２０ｎｍにおける吸光度を表す。
【００８１】
【表１２】
0005162174.tif 000013
表１２の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、ＭＭＰ−１活性阻害作用を有することが確認できた。
【００８２】
（参考例１２）
−マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、マトリックスメタロプロテアーゼ−１４（ＭＭＰ−１４）活性阻害作用を試験した。
９６穴マイクロプレートにて、５０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＣａＣｌ２、０．０５質量％のＢｒｉｊ−３５、１ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＮＢ〔５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｏｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ〕緩衝液（ｐＨ７．５）で調製したＭＭＰ−１４溶液２０μＬ、及び５０ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／ＬのＣａＣｌ２、０．０５質量％のＢｒｉｊ−３５、１ｍｍｏｌ／ＬのＤＴＮＢ〔５，５’−ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２−ｎｉｔｏｒｏ−ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ〕緩衝液で調製した各試料溶液２０μＬを混合した。３７℃にて４５分間反応させた後、１０μＬの基質溶液を添加し、反応を開始した。基質分解産物のメルカプト基と緩衝液中のＤＴＮＢとの反応生成物である２−ｎｉｔｏｒｏ−５−ｔｈｉｏｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄの量を波長４１２ｎｍで３０分間の吸光度を測定し、１分間当たりの生成量に基づいて３０分間の傾斜度の値を求めた。同様の方法で空試験を行い補正した。
ＭＭＰ−１４としては、Ｅｎｚｙｍｅ（Ｈｕｍａｎ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）  Ｆｒｏｍ：Ｅ．ｃｏｌｉ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＭＭＰ−１４  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｄｏｍａｉｎ（Ｂｉｏｍｏｌ社製）を用いた。
基質としては、ｔｈｉｏｐｅｐｔｉｄｅ（Ａｃ−ＰＬＧ−［２−ｍｅｒｃａｐｔｏ−４−ｍｅｔｈｙｌ−ｐｅｎｔａｎｏｙｌ］−ＬＧ−ＯＣ２Ｈ５）（Ｂｉｏｍｏｌ社製）を用いた。
そして、得られた結果から、下記数式１２により、ＭＭＰ−１４活性阻害率を算出した。試料濃度４００μｇ／ｍＬでのＭＭＰ−１４活性阻害率を表１３に示す。
＜数式１２＞
ＭＭＰ−１４活性阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
ただし、前記数式１２中、Ａは試料溶液無添加時の３０分間における傾斜度の値、Ｂは試料溶液添加時の３０分間における傾斜度の値を表す。
【００８３】
【表１３】
0005162174.tif 000014
表１３の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、ＭＭＰ−１４活性阻害作用を有することが確認できた。
【００８４】
（参考例１３）
−エストロゲン様作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりエストロゲン様作用を試験した。
ヒト乳癌由来細胞（ＭＣＦ−７）を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）、１質量％のＮＥＡＡ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を活性炭処理した１０％のＦＢＳ、１質量％のＮＥＡＡ、及び１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するフェノールレッド不含ＭＥＭ（Ｔ−ＭＥＭ）を用いて３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、４８穴マイクロプレートに１穴あたり４５０μＬずつ播種し、細胞を定着させるため培養した。６時間後（０日目）にＴ−ＭＥＭで終濃度の１０倍に調製した各試料溶液を各穴に５０μＬずつ添加し、培養を続けた。３日目に培地を抜き、Ｔ−ＭＥＭで終濃度に調製した試料溶液を各穴に５００μＬ添加し、更に培養を続けた。
エストロゲン様作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、１質量％のＮＥＡＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌのピルビン酸ナトリウムを含有するＭＥＭに終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に２００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。ポジティブコントロールとして、１０−９ｍｏｌ／Ｌのエストラジオールを使用した。
そして、得られた測定結果から、エストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）率を下記数式１３から算出した。試料濃度５０μｇ／ｍＬでのエストロゲン様作用率（％）を表１４に示す。
【００８５】
＜数式１３＞
エストロゲン様作用率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式１３において、Ａは、試料溶液添加の場合の吸光度を表す。Ｂは、試料溶液無添加の場合の吸光度を表す。
【００８６】
【表１４】
0005162174.tif 000015
表１４の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、エストロゲン様作用を有することが確認できた。
【００８７】
（参考例１４）
−皮膚線維芽細胞増殖促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により皮膚線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）含有α−ＭＥＭを用いて培養後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を５％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭで７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈後、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
培養終了後、５％のＦＢＳ含有α−ＭＥＭに溶解した試料溶液（濃度：４００μｇ／ｍＬ）を各穴に１００μＬ添加し、３日間培養した。
次いで、皮膚線維芽細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。具体的には、各穴から１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴ〔３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ〕を各穴に２０μＬずつ添加した。４．５時間培養後に、１０質量％のＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌ塩酸溶液を各穴に１００μＬ添加し、一晩培養後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。
そして、得られた測定結果から、下記数式１４により試料濃度２００μｇ／ｍＬの皮膚線維芽細胞増殖促進率を算出した。結果を表１５に示す。
＜数式１４＞
皮膚線維芽細胞増殖促進率（％）＝（Ｓｔ−Ｓｂ）／（Ｃｔ−Ｃｂ）×１００
ただし、前記数式１４中、Ｓｔは試料溶液を添加した細胞での吸光度、Ｓｂは試料溶液を添加した空試験の吸光度、Ｃｔは試料溶液を添加しない細胞での吸光度、Ｃｂは試料溶液を添加しない空試験の吸光度、をそれぞれ表す。
【００８８】
【表１５】
0005162174.tif 000016
表１５の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、皮膚線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認できた。
【００８９】
（実施例１５）
−毛乳頭細胞増殖促進作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法により毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＣＡ６０２０５）を、毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞は１０％ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ）含有ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｍｅｄｉｕｍ）を用いて１．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、コラーゲンコートした９６穴プレートに１穴当り２００μＬ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、無血清ＤＭＥＭに溶解した試料溶液を各穴に２００μＬ添加し、更に４日間培養した。
毛乳頭細胞増殖作用はＭＴＴアッセイを用いて測定した。具体的には、培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ（（３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  Ｂｒｏｍｉｄｅ、同仁化学研究所製）を各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。そして、下記数式１５に従い毛乳頭細胞増殖促進率を算出した。試料濃度２５μｇ／ｍＬ、６．２５μｇ／ｍＬ、及び１．５６μｇ／ｍＬでの毛乳頭細胞増殖促進率を表１６に示す。
＜数式１５＞
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式１５中、Ａは試料溶液を添加した時の吸光度を表す。Ｂは試料溶液を添加しない時の吸光度を表す。
【００９０】
【表１６】
0005162174.tif 000017
表１６の結果から製造例１〜３の千里香の抽出物が毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが確認できた。また、毛乳頭細胞増殖促進作用の程度は、千里香の抽出物の濃度によって調節できることが分かった。
【００９１】
（実施例１６）
−テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、秤量蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬのテストステロン２０μＬ、及び１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨ含有５ｍｍｏｌ／ｍＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬを混合した。これに、各試料溶液８０μＬ、及びラット肝ホモジネート（Ｓ−９）７５μＬを加え、再び混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止した。これを遠心分離（１６００×ｇ、１０分間）し、塩化メチレン層を下記の条件でガスクロマトグラフィー分析した。また、同様の方法で空試験を行った。
【００９２】
−ガスクロマトグラフィー分析−
予め、３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンの標準品の塩化メチレン溶液を同様にガスクロマトグラフィー分析し、これら３つの化合物の精秤量とピーク面積よりピーク面積あたりの化合物量を算出しておき、ラット肝ホモジネート（Ｓ−９）による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンのピーク面積あたりの濃度をそれぞれ求めた（下記数式１６参照）。その後、下記数式１７に従って、各試料溶液の変換率を求めた。得られた変換率に基づいて、下記数式１８からテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率を求めた。試料濃度３０００μｇ／ｍＬの時の結果を表１７に示す。
【００９３】
＜数式１６＞
濃度（％）＝（試料溶液のピーク面積×標準品濃度）／標準品のピーク面積
【００９４】
＜数式１７＞
変換率（％）＝（Ａ＋Ｂ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）
ただし、前記数式１７中、Ａは、３α−アンドロスタンジオールの濃度を表す。Ｂは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度を表す。Ｃは、テストステロンの濃度を表す。
【００９５】
＜数式１８＞
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００
ただし、前記数式１８中、Ｄは、空試験での変換率を表す。Ｅは、試料溶液添加での変換率を表す。
【００９６】
〔ガスクロマトグラフィーの条件〕
・使用機器：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＧＣ−７Ａ（株式会社島津製作所製）
・カラム：ＤＢ−１７０１（直径０．５３ｍｍ×３０ｍ、膜厚：１．０μｍ）
・カラム温度／注入温度：２４０℃／３００℃
・検出器：ＦＩＤ
・キャリアガス：窒素ガス
【００９７】
【表１７】
0005162174.tif 000018
表１７の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を有することが分かった。
【００９８】
（実施例１７）
−アンドロゲンレセプター拮抗作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、下記の試験法によりアンドロゲンレセプター拮抗作用を試験した。
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌、ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２％の活性炭処理牛胎児血清（ＦＢＳ）、及び１０−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロン含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ（ＭＥＭ／２）で希釈し、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０−９ｍｏｌ／Ｌのジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を含む０．５質量％のＢＳＡ含有Ｈａｍ  Ｆ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した試料溶液を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭ／２に溶解したＭＴＴを各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
そして、これらの結果から、下記数式１９により、アンドロゲンレセプター拮抗率を算出した。試料濃度５０μｇ／ｍＬでのアンドロゲンレセプター拮抗率（％）を表１８に示す。
＜数式１９＞
アンドロゲンレセプター拮抗率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式１９中、Ａは、ＤＨＴ添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｂは、ＤＨＴ無添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｃは、ＤＨＴ添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。Ｄは、ＤＨＴ無添加、試料溶液添加での５７０ｎｍ〜６５０ｎｍにおける吸光度を表す。
【００９９】
【表１８】
0005162174.tif 000019
表１８の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、高いアンドロゲンレセプター拮抗作用を有することが確認できた。また、アンドロゲンレセプター拮抗作用の程度は、千里香の抽出物の濃度によって調節できることが確認できた。
【０１００】
（実施例１８）
−サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用試験−
製造例１〜３の各抽出物を試料として用い、以下のようにして、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を試験した。
まず、５ｍｍｏl／Ｌの塩化マグネシウム含有５０ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）０．２ｍＬに、２．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液０．１ｍＬ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのホスホジエステラーゼ溶液０．１ｍＬ、各試料溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で５分間予備反応した。これに０．５ｍｇ／ｍＬのｃＡＭＰ溶液０．０５ｍＬを加え、３７℃で６０分間反応した。３分間沸騰水浴上で煮沸することにより反応を停止した。これを遠心分離（２２６０×ｇ、１０分間、４℃）し、上清を試料反応液として、下記の条件でＨＰＬＣ分析した。また同様の方法で空試験を行い補正した。
〔ＨＰＬＣ条件〕
・カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ  Ｃ１８−ＯＤＳ  ５μｍ
・移動相：１ｍｍｏｌ／ＬのＴＢＡＰ  ｉｎ  ２５ｍｍｏｌ／ＬのＫＨ２ＰＯ４：ＣＨ３ＣＮ＝９０：１０
・流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
・検出：ＵＶ、２６０ｎｍ
【０１０１】
次に、サイクリックＡＭＰ標準品のピーク面積（Ａ）とサイクリックＡＭＰ標準品とホスホジエステラーゼ反応した上清のピーク面積（Ｂ１）とサイクリックＡＭＰ標準品と被験試料とホスホジエステラーゼ反応した上清のピーク面積（Ｂ２）を下記数式２０に基ついて標準品の分解率（Ｃ）と被験試料の分解率（Ｄ）を求めた。
＜数式２０＞
分解率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００
ただし、前記数式２０中のＢは、Ｂ１又はＢ２のいずれかを表す。
【０１０２】
その後、前記数式２０から求めた分解率に従い、ホスホジエステラーゼ活性阻害率を下記数式２１に基づいて算出した。
＜数式２１＞
ホスホジエステラーゼ活性阻害率（％）＝（Ｃ−Ｄ）／Ｃ×１００
【０１０３】
次に、試料溶液の試料濃度を段階的に減少させて上記サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害率の測定を行い、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性を５０％阻害する試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表１９に示す。
【０１０４】
【表１９】
0005162174.tif 000020
表１９の結果から、製造例１〜３の千里香の抽出物が、サイクリックＡＭＰホスホジエステラーゼ活性阻害作用を有することが確認された。
【０１０５】
（配合実施例１）
−乳液−
下記組成から乳液を常法により製造した。
・製造例１の千里香の水抽出物・・・０．１０ｇ
・ホホバオイル・・・４．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．５０ｇ
・オリーブオイル・・・２．００ｇ
・スクワラン・・・２．００ｇ
・セタノール・・・２．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・黄杞エキス・・・０．１０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１０ｇ
・イチョウ葉エキス・・・０．１０ｇ
・コンキオリン・・・０．１０ｇ
・オウバクエキス・・・０．１０ｇ
・カツミレエキス・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計１００．００ｇ）
【０１０６】
（配合実施例２）
−化粧水−
下記組成から化粧水を常法により製造した。
・製造例２の千里香の５０質量％エタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・グリセリン・・・３．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・２．００ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．１５ｇ
・クエン酸・・・０．１０ｇ
・クエン酸ソーダ・・・０．１０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１０ｇ
・海藻エキス・・・０．１０ｇ
・クジンエキス・・・０．１０ｇ
・キシロビオースミクスチャー・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１０７】
（配合実施例３）
−クリーム−
下記組成からクリームを常法により製造した。
・製造例３の千里香のエタノール抽出物・・・０．１０ｇ
・スクワラン・・・１０．００ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．００ｇ
・流動パラフィン・・・５．００ｇ
・サラシミツロウ・・・４．００ｇ
・セタノール・・・３．００ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．００ｇ
・ラノリン・・・２．００ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）・・・１．５０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５０ｇ
・ステアリン酸・・・１．００ｇ
・酵母抽出液・・・０．１０ｇ
・シソ抽出液・・・０．１０ｇ
・シナノキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ジユ抽出液・・・０．１０ｇ
・香料・・・０．１０ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１０８】
（配合実施例４）
−パック−
下記組成からパックを常法により製造した。
・製造例１の千里香の水抽出物・・・０．２０ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５．００ｇ
・エタノール・・・１０．００ｇ
・プロピレングリコール・・・７．００ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．００ｇ
・セージ抽出液・・・０．１０ｇ
・トウキ抽出液・・・０．１０ｇ
・ニンジン抽出液・・・０．１０ｇ
・パラオキシ安息香酸エチル・・・０．０５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（合計：１００．００ｇ）
【０１０９】
（配合実施例５）
−ヘアトニック−
下記組成の育毛作用を有するヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・製造例２の千里香の５０質量％エタノール抽出物・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
【０１１０】
（配合実施例６）
−シャンプー−
下記組成の育毛作用を有するシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・製造例１の千里香の水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
【０１１１】
（配合実施例７）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例１の千里香の水抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
【０１１２】
（配合実施例８）
−リンス−
下記組成の育毛作用を有するリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・製造例３の千里香のエタノール抽出物・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）
【０１１３】
（配合実施例９）
−錠剤状栄養補助食品−
下記の混合物を打錠して、錠剤状栄養補助食品を製造した。
・製造例１の千里香の水抽出物・・・３０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【０１１４】
（配合実施例１０）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例２の千里香の５０質量％エタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【０１１５】
（配合実施例１１）
−顆粒状栄養補助食品−
下記の混合物を顆粒状に形成して、栄養補助食品を製造した。
・製造例３の千里香のエタノール抽出物・・・２０ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【０１１６】
本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の少なくともいずれかを配合した化粧料は、優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有し、生体内の酸化防止、育毛、皮膚のシワや皮膚の弾力低下の防止及び改善、肌荒れの予防、肌荒れの防止に有効であり、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどに幅広く用いられる。
また、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、抗肥満剤、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の少なくともいずれかを添加した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、抗肥満作用、及びエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用の少なくともいずれかを有し、安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品などに幅広く用いられる。