(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量の１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、及び
治療的有効量の１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、並びに
医薬的に許容される担体
を含む、医薬組成物であって、
１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン及び１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンは、１：２０〜１：２の重量比である、上記医薬組成物。
【請求項２】
１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン及び１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンは、１：５〜１：７の重量比である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
経口投与、静脈内投与または直腸内投与に適した、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の医薬組成物であって、該組成物は溶液、懸濁液、乳化液、シロップ、カプセル、錠剤及び坐剤からなる群より選択される形態である、上記医薬組成物。
【請求項５】
１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン及び１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの総量は、３５ｍｇ〜２５００ｍｇである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン及び１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの総量は、７０ｍｇ〜５６０ｍｇである、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
哺乳動物における中枢神経系障害の処置のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記中枢神経系障害はてんかん、偏頭痛、双極性障害および疼痛から選択される、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記中枢神経系障害はてんかんである、請求項７記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明はバルプロ酸（ｖａｌｐｒｏｉｃ  ａｃｉｄ）のリン脂質誘導体である化合物、上記化合物からなる組成物、ならびにてんかん、偏頭痛、双極性障害および疼痛の処置のためのその使用に関する。
【０００２】
（背景技術）
てんかんは脳の電気活性の発作性、一過性の障害を特徴とする神経学的疾患である。てんかん性けいれんには、脳内の特定の部位に限定される部分発作および局所運動発作または脳全体を通じて異常な活性を生じる全般性けいれんがある。てんかん発作時における脳機能の障害は、たとえば記憶喪失、幻覚、既知記憶等のような精神的病的もしくは知覚的発作として、たとえば筋肉の不随意的収縮もしくは全身けいれんのような異常運動現象、または意識喪失として表現される。極端な場合、てんかんは致命的なことがあるてんかん重積持続状態に進展できる（ＤｅＬｏｒｅｎｚｏら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．１２：３１６−３２５，１９９５）。
【０００３】
バルプロ酸（ＶＰＡ）およびそのナトリウム塩（バルプロ酸ナトリウム，ＮａＶＰＡ）は最も頻繁に処方される抗てんかん薬の一つである。これらの薬物はまた双極性障害の処置および偏頭痛の予防にも有効である。
【０００４】
バルプロ酸の臨床的有用性は十分に確立されているが、この化合物には大きな欠点がある。ＶＰＡによる処置は有害な副作用たとえば胃腸刺激、骨髄抑制（とくに再生不良性貧血および血小板減少症として発現）、および肝機能不全を伴う。ＶＰＡはまた催奇形作用をもつことが報告され、ＶＰＡで処置された患者は、悪心、嘔吐、めまい感、錯乱または鎮静を経験することがある。
【０００５】
バルプロ酸の他の欠点はその薬物の迅速なクリアランスによるその短い半減期である。その結果として、ＶＰＡの血漿レベルは慢性処置時には動揺し、持続放出型の製剤でも１日に数回投与されなければならない。加えて、液体であるバルプロ酸は経口投与用剤形としての使用には望ましくない。他方、バルプロ酸ナトリウムは固体であるが、吸湿性が強く安定性に乏しい。
【０００６】
ＶＰＡ−誘発副作用およびこの薬物の不利な生理学的および薬物動態学的性質を克服するために、これまで多くの努力が払われてきた。採用された大部分のアプローチはＶＰＡ分子の修飾が包含される。修飾された一部の薬物は有害な副作用を欠いたが、しかしながら多くの場合、それらは治療効果を失い、また効力が著しく低下した。
【０００７】
Ｍｅｒｇｅｎら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３：８１５−８１６，１９９１）は、バルプロ酸の１，３−ジパルミトイルグリセロール、１，２−ジパルミトイルグリセロールまたは１，３−ジアミノパルミトイル−プロパン−２−オールとの接合体を記載している。Ｍｅｒｇｅｎらの報告によれば、最後の化合物のみが抗てんかん活性を有することが見出され、一方、ジグリセライドとのＶＰＡの接合体はいずれも不活性であった。
【０００８】
Ｈａｄａｄら（Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ＆  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  １４：５１−５９，１９９３）は１，４−ブタンジオールジバルプロエート、グリセロールトリバルプロエートおよびバルプロミドの抗けいれん活性をバルプロ酸と比較して検討した。彼らの研究では、試験されたモデルシステムの一つにおいて、１，４−ブタンジオールジバルプロエートのみがＶＰＡよりも良好な保護係数値を示した。
【０００９】
米国特許４，６５４，３７０（Ｍａｒｒｉｏｔｔ  ＆  Ｐａｒｉｓ）には、バルプロ酸１もしくは２モルでエステル化されたグリセライドが開示されている。これらの化合物は、バルプロ酸単独と同じ有用な治療効果を有し、胃の刺激を起こさないことが見出されている。
【００１０】
米国特許４，９８８，７３１および５，２１２，３２６（いずれもＭｅａｄｅ）には、バルプロ酸ナトリウムとバルプロ酸の１：１のモル比を有するオリゴマーが開示されている。これらはバルプロ酸またはバルプロ酸ナトリウムの場合と類似の生理学的性質を有するが、優れた安定性を示す。
【００１１】
米国特許４，５５８，０７０（Ｂａｕｅｒ  ＆  Ｓｈａｄａ）にはバルプロ酸とカリウム、セシウムまたはルビジウムの間の安定な複合体が開示されている。これらは４モルのバルプロ酸と１モルのアルカリ金属イオンを混合することによって形成される。バルプロ酸のアルカリ金属塩は改良された安定性を有すると報告されている。
【００１２】
この分野における引き続いての努力にもかかわらず、改良された薬物動態学的性質および全体的に優れた治療係数を示す抗−てんかん医療の提供は依然として不適当で、満足されない要求がある。
【００１３】
（発明の要旨）
本発明は、活性成分として、バルプロ酸またはリン脂質残基に共有結合によって結合したその医薬的に許容される誘導体からなる化合物を含有する医薬組成物を提供する。本発明の好ましい実施態様においては、リン脂質残基は、プラズマローゲン、ホスファチジン酸およびホスホグリセライドから選択される。さらに好ましい化合物には、上記リン脂質残基がリゾホスファチジル−エタノールアミン、Ｎ−モノ−（Ｃ1-4）−アルキル，Ｎ，Ｎ−ジ−（Ｃ1-4）−アルキルおよびそれらのアミンの四級誘導体がある。
【００１４】
本発明による最も好ましい実施態様は、バルプロ酸がリン脂質残基のｓｎ−２位置においてエステルとして共有結合したバルプロ酸のリン脂質誘導体（以下、ＤＰ−ＶＰＡという）からなる組成物である。
【００１５】
現時点で最も好ましいＤＰ−ＶＰＡ化合物は１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１−ヘキサデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリンとも呼ばれる。以下Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡと呼ぶことにする）および１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１−オクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリンとも呼ばれる。以下Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡと呼ぶことにする）である。
【００１６】
本発明の好ましい実施態様によれば、医薬組成物はＤＰ−ＶＰＡ化合物の混合物、さらに好ましくはＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの混合物（以下、Ｃ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡという）からなる。
【００１７】
好ましい一実施態様においては、Ｃ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ混合物中におけるＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの比は約１：２０〜約１：２重量比である。最も好ましい混合物においては、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの比は約１：５〜約１：７ｗ／ｗ（１５±５％  Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ：８５±５％  Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ（ｗ／ｗ）に相当）である。
【００１８】
本発明の化合物および組成物は中枢神経系の障害たとえばそれらに限定されるものではないが、てんかん、偏頭痛、慢性疼痛および双極性障害の処置に有用である。
【００１９】
したがって、本発明のさらに他の実施態様によれば、対象における中枢神経系障害を処置する方法において、それを必要とする患者に、本発明の化合物または医薬組成物の治療有効量を投与する工程からなる方法を提供する。
【００２０】
本発明の更なる目的は本発明の詳細な説明および特定の実施例についての以下の開示をさらに参照すれば、本技術分野の熟練者には自明の通りである。
【００２１】
図面の簡単な説明
図１はＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ組成物の典型的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。この場合、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ対Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの重量比は約１５％：８５％である。
図２Ａ−Ｂはヒト対象に０．６２５ｇのＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ（Ｃ16／Ｃ18比＝１３％：８７％  ｗ／ｗ）を１回経口投与した場合の様々な時点で測定した、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ（２Ａ）およびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ（２Ｂ）の血漿濃度を示す。
【００２２】
発明の詳細な説明
本発明は、バルプロ酸のリン脂質誘導体、これらの化合物およびそれらの混合物からなる医薬組成物、ならびに神経学的障害の処置におけるそれらの使用に関する。
【００２３】
ＤＰ−ＶＰＡ分子は米国特許出願０８／４７９，９５９および国際特許公開ＷＯ９４／２２４８３に開示されている。この開示は引用により本明細書に導入される。
【００２４】
上述の出願には、「ＴＶＡ  １６」と呼ばれるバルプロ酸と１−ヘキサデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリンとの１：１のエステルがとくに開示されている。ＴＶＡ  １６は有意な抗けいれん活性を有し、バルプロ酸ナトリウムよりも強力であることが示されていた。本出願においては、バルプロ酸と１−ヘキサデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリンの１：１エステル、もしくはその化学名、１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを以下Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡと呼ぶこととする。
【００２５】
本出願に開示された他の実施態様は、バルプロ酸と１−オクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリンの１：１エステル、もしくはその化学名、１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンである。この分子は以下Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡと呼ぶことにする。
【００２６】
本発明のＤＰ−ＶＰＡ化合物にはバルプロ酸またはその医薬的に許容される誘導体と任意のリン脂質、好ましくはホスホグリセライドとの接合体が包含される。適当なリン脂質には、それらに限定されるものではないが、プラズマローゲン、ホスファチジン酸およびそのホスホ−エステル誘導体が包含される。本発明の好ましいリン脂質残基にはリゾホスファチジル−エタノールアミン、Ｎ−モノ−（Ｃ1-4）−アルキル，Ｎ，Ｎ−ジ−（Ｃ1-4）−アルキルおよびそれらのアミンの四級誘導体が包含される。本発明の化合物における現時点で最も好ましいリン脂質はホスファチジルコリンである。
【００２７】
グリセロ−リン脂質の位置ｓｎ−１における脂肪酸残基の選択は、本発明の好ましい化合物との関係でとくに以下に考察する。しかしながら、ＶＰＡまたはその医薬的に許容される誘導体はリン脂質残基に位置ｓｎ−１，ｓｎ−２において共有結合し、またリン脂質の頭部の基に位置ｓｎ−３で連結する。したがって、ＶＰＡまたはその誘導体は、以下のスキーム１に示すようにそれぞれのホスホリパーゼ、ＰＬＡ1，ＰＬＡ2，ＰＬＣおよびＰＬＤによって切断されて放出される。
0005140224.tif 000002
【００２８】
本発明の好ましい実施態様においては、ＶＰＡまたはその医薬的に許容される誘導体は、位置ｓｎ−２におけるエステル結合を介してリン脂質に連結しているので、ホスホリパーゼＡ2によってＶＰＡの放出が可能である。とくに好ましい実施態様においては、ＶＰＡはホスファチジルコリンのｓｎ−２位置にエステル結合により共有結合で連結している。
【００２９】
本明細書で用いられる「ＶＰＡの医薬的に許容される誘導体」の語は類似の治療活性を有するバルプロ酸の医薬的に許容される同族体を意味する。これには飽和または１または２個以上の二重結合および／または三重結合を有する不飽和炭素鎖とのＶＰＡの誘導体が包含される。この分子の炭素原子上には医薬的に許容される置換基を含有することが可能であり、たとえばハロゲン原子または１〜５個の炭素原子からなる低級アルキル基が包含される。ＶＰＡのアミドおよびその上述のような同族体も本発明の範囲内に包含される。さらにまた、不斉のキラル中心を有する化合物については、本発明の化合物には光学的に活性な異性体、ラセミ体または好ましくはそれらの混合物が包含される。
【００３０】
本発明の範囲にはまた、ＤＰ−ＶＰＡ化合物の医薬的に許容される塩も包含されることを理解すべきである。「医薬的に許容される塩」の語は本発明の化合物の非毒性塩を意味し、それらに限定されるものではないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムまたはアミン由来の塩が包含される。
【００３１】
Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ16−ＤＰ−ＶＰＡは類似の効力を有する強力な抗けいれん剤であるが、これらの２種の化合物は予期に反して、それらの薬物動態学的プロフィルにおいて相異することが見出された。１回経口投与後Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ化合物はＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの半減期に比較して血漿中で有意に長い半減期を示す。しかしながら、Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの血漿濃度はＣ16−ＤＰ−ＶＰＡ分子のピークレベルに比べて遅い時点でピ−クレベルに達することが見出された。
【００３２】
Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡとＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの混合物（以下、Ｃ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡと呼ぶ）は、今回、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡまたはＣ18−ＤＰ−ＶＰＡいずれかの単独と比較して高い神経保護値および長い治療効果を発現するという利点を提供することが最初に開示される。
【００３３】
本発明による好ましい組成物はＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ混合物におけるＣ16−ＤＰ−ＶＰＡとＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの比は約１：２０〜約１：２（重量比）である。最も好ましい混合物のＣ16−ＤＰ−ＶＰＡとＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの比は約１５±５％：８５±５％（ｗ／ｗ）である。
【００３４】
単一の機構または理論に限定することを望むものではないが、リン脂質の位置ｓｎ−１においてエステル化するアルキル残基の長さがＤＰ−ＶＰＡ分子の親油性、すなわち細胞膜を横切るその移動を決定することが示唆される。
【００３５】
この場合もまた単一の機構または理論に限定することを望むものではないが、位置ｓｎ−１における脂肪酸残基がリン脂質に対する基質としてＤＰ−ＶＰＡの接合体の性質を決定し、したがって、バルプロ酸の調節された放出にたとえば疾患部位におけるホスホリパーゼＡ2（ＰＬＡ2）の活性の上昇により影響する可能性もある。ホスホリパーゼＡ2はホスホグリセライド分子中のｓｎ−２エステル結合を加水分解するエステラーゼのファミリーである。てんかんのような障害ではＰＬＡ2の活性化がてんかんのけいれんと一致することが示されている（Ｆｌｙｎｎ  ＆  Ｗｅｃｋｅｒ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．４８：１１７８−８４，１９８７；Ｂｅｚａｎら，Ａｄｖ．Ｎｅｕｒｏｌ．４４：８７９−９０２，１９８６）。
【００３６】
また、ホスホリパーゼＡ2の活性の上昇は双極性障害、および炎症過程に伴うある種の疼痛および偏頭痛に関連する（Ｈｏｒｒｏｂｉｎ  ＆  Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｌｅｕｋｏｔ  Ｅｓｓｅｎｔ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ  ６０：１４１−１６７，１９９９）。
【００３７】
本発明による化合物は本来、疎水性であるので、生物学的膜および障壁を透過することが可能であり、細胞または臓器、たとえばそれらの効果が要求される脳への薬物の輸送が促進される。
【００３８】
冒された標的部位におけるバルプロ酸残基の調節された放出は、薬物の効力を上昇させ、副作用および毒性の可能性は低下させることが期待されるので薬物の治療係数をさらに改善するものとみなされる。バルプロ酸は、リン脂質の位置ｓｎ−２におけるホスホリパーゼＡ2または他のリパーゼもしくはエステラーゼによるＤＰ−ＶＰＡ化合物の切断によって放出される可能性がある。しかしながら活性薬物は、化学基（単数または複数）がその構造から除去されまたはその構造に付加し、一方、その細胞内輸送アジュバントから放出されまたは生理学的なリン脂質の代謝の結果として元の母体化合物、ＶＰＡとは異なる可能性も除外することはできない。
【００３９】
本発明の接合体、すなわちバルプロ酸またはリン脂質残基に共有結合により連結したその医薬的に許容される誘導体が、それ自体活性である可能性に注目することは重要である。また、脂質−薬物接合体の共有結合が、ある環境下に切断され医薬的に活性な薬物を放出するのかもしれない。後者の場合、本発明の化合物は治療薬物がその輸送アジュバントから放出されるという意味でプロドラッグとみなすことができる。
【００４０】
正確な作用機構とは関係なく、本発明の化合物が改善された治療プロフィルを有し、ＶＰＡに比べて２つの態様：（ｉ）効力の上昇および（ｉｉ）副作用の低下の点でより有効であることは明瞭である。
【００４１】
ＤＰ−ＶＰＡ化合物は、ＶＰＡの現在用いられている用量に比べてはるかに低いモル当量で有効なことが見出された。治療用量の低下は、一方では毒性学的な危険および随伴する副作用を低下させ、また他の薬物との望ましくない相互作用の危険を低下させる。さらにＤＰ−ＶＰＡ分子では、ＶＰＡに比べて薬物動態学的性質（たとえば血清および脳組織における半減期の実質的な増大）が有意な改善を示すことが見出された。したがって、ＤＰ−ＶＰＡ分子は優れた抗てんかん薬のクラスである。
【００４２】
さらにまた、本発明による好ましい医薬組成物、すなわちＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの両者の混合物からなる組成物は天然のソースから便利に調製することができる。
【００４３】
天然のソースから比較的簡単な操作で誘導することができる出発原料から得られるＤＰ−ＶＰＡ分子をもつことはきわめて有利である。容易に入手可能なこのような出発原料は卵または大豆レシチンから得られるリゾ−レシチンである。非動物のソースである大豆はヒトに用いられる医薬の製造には好ましい出発原料である。大豆由来の典型的な水素化プレパレーションには、約８〜１８％（重量）の１−パルミトイル−リゾレシチンおよび約８０〜９０％（重量）の１−ステアロイル−リゾレシチンを含有する。
【００４４】
純粋はＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ分子は化学的に新たに合成することができる。別法として、純粋なＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物は天然のソースから得られる出発原料を用いて製造することができる。すなわち、Ｃ16−リゾレシチンおよびＣ18−リゾレシチンをたとえば卵または大豆から単離精製し、ついでＶＰＡによりアシル化する（半天然合成）。
【００４５】
Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡは、とくに本発明の好ましい範囲内の比率での混合物として使用した場合、有意に改善された治療性を発現することが示されている。有利な性質は実質的に上昇した血清中ＤＰ−ＶＰＡの半減期および薬物の高い効力によって例示された。改善された血清中保持時間は、治療血中レベルの周辺で変動が低下した定常状態の薬物レベルの達成が促進され、１日１ないし２回に薬物の投与頻度を低下することができる。
【００４６】
本発明の組成物は、経口的に、非経口的に（たとえば、静脈内点滴または腹腔内、皮下もしくは筋肉内注射）、局所的に（たとえば、経鼻的適用または吸入による）または経直腸的に投与することができる。現時点でより好ましい投与経路は経口投与である。
【００４７】
本発明の化合物の投与に適当な製剤には、それらに限定されるものではないが、別個にまたは混合物としての使用にかかわらず、粉末、顆粒、乳化液、懸濁液、または水もしくは非水メジウム中溶液、錠剤、カプセル、シロップまたは溶液の剤形が包含される。
【００４８】
経口投与のためには、１日あたり約０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日あたり約１〜８ｍｇ／ｋｇ体重のＤＰ−ＶＰＡ量が有用である。用量は症状の重症度およびＤＰ−ＶＰＡ薬物に対する対象の応答性に依存することになる。内科医または本技術分野における通常の技術を有する他の担当者は至適投与量および剤形、ならびに投与基準および投与方法を容易に決定することができる。
【００４９】
（実施例）
次に本発明を以下の非限定的実施例により例示する。
実施例１：ＤＰ−ＶＰＡの合成
ＤＰ−ＶＰＡの合成は２段階工程である。第一の段階は、無水酢酸溶液中ピリジンの触媒下にバルプロ酸を加熱することにより、無水バルプロ酸を得ることを目的とする。ＤＰ−ＶＰＡはバルプロ酸とリゾ−レシチンの相互作用によって調製される。この反応は無水バルプロ酸の溶液中、４−ジメチルアミノピリジンの触媒により９０〜１００℃で実施した。
【００５０】
得られた生成物の抽出および精製は４段階で実施される。精製の第一段階は、アセトン中未反応無水バルプロ酸、バルプロ酸および触媒（４−アミノピリジン）の抽出によって行われる。得られた粗製生成物は第二段階で溶液から沈殿させ、分離する。得られた固体生成物を第三段階で残りの化合物から洗浄する。最後に生成物を、数回アセトン／エタノール溶液から再結晶し、残った溶媒を真空下に除去する。生成物の収率は約８０％である。
0005140224.tif 000003
【００５１】
１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ）および１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ）化合物はそれぞれリゾ−ステアリック−およびリゾ−パルミチック−ホスファチジルコリンを用いて製造された。
【００５２】
リゾ−ステアリック−およびリゾ−パルミチック−ホスファチジルコリンは天然のソース（たとえば、卵または大豆）から本技術分野で周知の手段および操作を用いて精製された（Ｆ．Ｇｕｎｓｔｏｎｅ，Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ｌｉｐｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｐ．８７−９９，１９９９，Ａｓｐｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．）。
【００５３】
別法として、これらの出発原料は本技術分野で周知の化学的合成によっても得ることができる。
【００５４】
実施例２：Ｃ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ
Ｃ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの混合物は実施例１にＤＰ−ＶＰＡの製造について記載したのと同じ操作によって製造した。混合組成物の場合には、無水バルプロ酸と、大豆から得られ、水素化によって飽和させたリゾ−レシチン（Ｓ  ＶＰＣ−３  ｆｒｏｍ  Ｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ，Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を相互作用させた点が相異した。
【００５５】
実施例３：ＤＰ−ＶＰＡ化合物の解析
実施例２に上述したようにして合成したＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ混合物を、特性の解析および構造の証明のために分析アッセイに付した。１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ）および１−ステアロイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ）を１３％：８７％（重量比）で含有する生成物の解析結果を以下に示す。
【００５６】
マススペクトロスコピー
ＥＳＩ（＋）で測定したプロトン化ＤＰ−ＶＰＡ分子のマスはＣ16−ＤＰ−ＶＰＡについては６２２．４〜６２２．８，Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡについては６５０．４〜６５０．８である。これは計算した分子量の値によく一致する。
【００５７】
元素分析
計算値はＭ．Ｈ２Ｏ：Ｃ  ６０．９３％，Ｈ  １０．２５％，Ｎ  ２．１１％，Ｐ  ４．６６％（Ｍは１−パルミトイル−２−バルプロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンの含量による補正値である）、平均分析値は、Ｃ  ６０．７２％，Ｈ  １０．５８％，Ｎ  ２．０９％，Ｐ  ４．５６％であった。これらの値は計算値とよく一致した。
【００５８】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析
ＴＬＣはアルミニウムシート上シリカゲル６０Ｆ254を用い、クロロホルム：メタノール：水（６５：３５：５ｖ／ｖ）で流した。検出のためのスプレー試薬には４−メトキシベンズアルデヒド（５ｍＬ）、硫酸９５〜９８％（５ｍＬ）、エタノール（１００ｍＬ）および氷酢酸（１ｍＬ）を使用する。シートをこの試薬でスプレーし、ついで熱空気により１２０〜１５０℃に加熱した。ＴＬＣ分析の結果は、Ｒf０．５８〜０．６０に１個のスポットを示す。
【００５９】
分析ＮＭＲデータ
プロトン、炭素−１３およびリン−３１について典型的なＮＭＲデータを以下に示す。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3），δ（ｐｐｍ）：０．８４−０．９０（ｍ，９Ｈ），１．２４−１．２７（ｂｒｏａｄ  ｓ）＋１．３１−１．４１（ｍ）（いずれも３４Ｈ），１．５０−１．５９（ｍ，４Ｈ），２．２１−２．２８（ｔ，２Ｈ），２．２９−２．３７（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｓ，９Ｈ），３．７７−３．７８（ｂｒｏａｄ  ｓ，２Ｈ），３．８８−３．９６（ｍ，２Ｈ），４．０６−４．１４（ｍ，１Ｈ），４．３０（ｂｒｏａｄ  ｓ，２Ｈ），４．４０−４．４６（ｄ，１Ｈ），５．１８（ｍ，１Ｈ）．
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3），δ（ｐｐｍ）：８．６２（ＣＨ3），２２．６５（ＣＨ3），６２．９９［（ＣＨ3）3Ｎ］，２９．１７，３０．９３，３３．１５，３９．９２，４３．０７，５３．８６，６７．９７，７１．８９，７４．９９，７８．９１（ＣＨ2およびＣＨ），１８２．２１（ＣＯ），１８４．４３（ＣＯ）．
31Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3），δ（ｐｐｍ）：−０．２９（それぞれＤ2Ｏ中Ｈ3ＰＯ4）．
【００６０】
ＨＰＬＣ分析
ＤＰ−ＶＰＡは以下の条件を用いてＨＰＬＣにより分析する：
装置：積分装置を装着させた液体ククロマトグラフ
カラム：Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ  Ｃ１８，５μ，４．６×２５０ｍｍ
移動相：メタノール−アセトニトリル−水（８５：１５：５ｖ／ｖ）
流速：１．０ｍＬ／分
検出：ＵＶ  ＠  ２２０ｎｍ
注入容量：２０μＬ
典型的な保持時間は以下の表に示す。
0005140224.tif 000004
上述のように分析したＣ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ１５％：８５％（重量）比混合物の典型的なＨＰＬＣクロマトグラムは図１に示す。
【００６１】
実施例４：ヒトの毒性試験および安全性試験
フェーズＩ安全性および催奇形性臨床試験はＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ混合物（Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ，比１５％：８５％ｗ／ｗ）の５％  Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ  Ｆ−１２７＋０．５％Ｔｗｅｅｎ−８０溶液を用いて経口投与経路で実施した。
【００６２】
この試験のデザインは二重盲検プラセボ無作為試験とした。１回投与した部分と７日連続して反復投与した部分に分割した。用量は各部分で前回の用量に十分耐えられたならば７日間隔で増量した。
【００６３】
ＤＰ−ＶＰＡ  ０．３１２５ｇから５ｇまでの段階用量を第一部分における試験での１回用量として投与し、第二部分の試験における反復用量としては３つの用量（０．３１２５ｇ，０．６２５ｇおよび１．２５ｇ）を投与した。総計５６例の対象がこの試験に組み入れられ、第一部分には２９例、第二部分には２７例が割り付けられた。
【００６４】
第一の部分では、悪心が最も一般的に記録された有害作用であり、その発現は最高の用量群（ＤＰ−ＶＰＡ  ５ｇ）で最も高かった。二番目に高い用量群では、６例中２例が悪心および嘔吐を報告した。頭痛、下痢、腹部痛およびめまい感も記録されたが、研究者らの意見ではそれらは多分試験薬物に関係するものではなかった。臨床試験の結果に関しては、生命徴候とＥＣＧパラメーターに一定の傾向はみられず、すべての結果は全患者について許容されるパラメーターの範囲内であった。
【００６５】
第二の部分では、悪性作用はより少なく、わずかに３例（胃の灼熱痛および腹部痛）が投与後まもなく認められたことから、多分薬物に関係するものと考えられた。悪心の発症はなく、嘔吐の１病相が投与後２４時間以上で起こったが、試験薬物には関係ないと判断された。生命徴候、ＥＣＧ、臨床試験、尿分析および身体検査からみて、耐容性はきわめて良好であった。
【００６６】
結論：この試験の１回投与および反復投与いずれの部分においても、臨床的および生物学的耐容性はＤＰ−ＶＰＡ２．５ｇの用量まできわめて良好であることが分かった。ＤＰ−ＶＰＡの毒性学的プロフィルは、母体薬物ＶＰＡの場合に比較して有意に改善された。
【００６７】
実施例５：ヒトにおける薬物動態学的試験
Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物の薬物動態学的性質を評価するために、これらの化合物の血漿レベルをヒト対象においてモニターした。
【００６８】
健康な男性ボランティア、１８〜４０歳（試験した各用量につき７例の個体）にＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの混合物０．３１２５ｇ，０．６２５ｇまたは１．２５ｇをＣ16／Ｃ18−＝１３％：８７％の比（ｗ／ｗ）で投与した。血液サンプル各１０ｍＬを薬物の投与後指示した時間に各個体から採取した。サンプルは収集後直ちに４℃、１１００ｇで遠心分離した。Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの血漿レベルはＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を用いて測定した。Ｃ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ  ０．６２５ｇの１回経口投与後２４時間モニターしたＣ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの血漿濃度プロフィルをそれぞれ図２Ａおよび２Ｂに示す。
【００６９】
ヒト試験の結果から明らかなように、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物は異なる薬物動態プロフィルを示した。血漿中のＣ16−ＤＰ−ＶＰＡ濃度のピークは、薬物投与６時間後に到達したのに対し、Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡのピークは、２時間遅れて投与８時間後に到達した。
【００７０】
Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物について末端血漿半減期（ｔ1/2）をそれらの血漿濃度時間プロフィルから計算した。２種の化合物について計算された1/2値は有意に異なっていた。Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡについての1/2は１４．０±０．６時間であったのに対し、Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物では８．３±１．３時間であった。
【００７１】
全体のＤＰ−ＶＰＡについて測定したｔ1/2は１０．６±１．２時間であり、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ両者の薬物動態学的プロフィルを合したものであった、
【００７２】
０．６２５ｇのＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡを１回経口投与したのちの様々な時点において、収集したサンプル中で測定したＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡの血漿濃度（μｇ／ｍＬ）を表１にまとめる。
0005140224.tif 000005
【００７３】
表１の結果から明らかなように、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの観察された比は６．７の期待された比（Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ：Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ比８７％：１３％（重量比））とは異なっていた。
【００７４】
驚くべきことに、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ化合物の血漿中における表示は投与した混合物中のその比率より高いことが見出された。
この現象はさらに短い時点で、すなわちＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ投与６時間後以前にはより顕著であった。
【００７５】
Ｃ18／Ｃ16の最高の比は、すなわち３．１（この値は期待される値の６．７よりまだ低い）にはＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ投与後８時間に到達した。この時点でＣ18−ＤＰ−ＶＰＡレベルは血漿中のそれらのピーク濃度に達する。
【００７６】
これらの観察はＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物が異なる薬物動態学的プロフィルを有することを示している。
【００７７】
実施例６：Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ，Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ混合物の抗けいれん作用（効力試験）
Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ，Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡならびにＣ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ両者の混合物の抗てんかん（けいれん）作用をマウスで評価した。化合物の保護作用をペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）による化学的発作（けいれん）誘発後の様々な時点で比較した。
【００７８】
マウスにおけるペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ）誘発けいれんモデルは、てんかんの確立された動物モデルシステムである。対照動物へのＰＴＺの皮下注射は、以下の順序の現象を生じる。すなわち、１〜２分以内の間代性単収縮、ついでそれぞれ約５〜１０秒間持続する間代性および間代性強直性けいれんであり、３０分まで時間とともにけいれんの重症度は増大する。第二のけいれんは通常６〜１０分後に、それに続くけいれんがあれば６分毎に認められる。
【００７９】
ＣＤ−１マウス（２５〜３０ｇ）に、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡもしくはＣ18−ＤＰ−ＶＰＡまたはそれらの混合物のいずれかを皮下（ｓ．ｃ．）注射によって前処置した。使用した量はＶＰＡ  ４０ｍｇに相当した。指示した１，２または４時間後に、けいれん用量のペンチレンテトラゾール（８５〜１００ｍｇ）をマウスの皮下に注射した。動物はＰＴＺ投与後１時間、少なくとも５秒間持続する間代性けいれんの病相の発現についてモニターした。保護効果は第二のけいれんを経験しなかった動物数を試験動物数で除して計算した。
【００８０】
表２Ａ〜Ｄには上述のＰＴＺ−誘発けいれん試験の結果を示す。試験した組成物は次の通りであった。
表Ａ−Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ  １００％
表Ｂ−Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ  比５０／５０（重量比）
表Ｃ−Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ  比１０／９０（重量比）
表Ｄ−Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ  １００％
ｎ＝けいれんを経験した動物数
Ｎ＝アッセイにおける動物総数
0005140224.tif 000006
【００８１】
表２から明らかなように、Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物は第二のけいれんの防止により有効であり、１００％Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡにより得られた最大保護５０％に比べ８６％の保護を示した。
【００８２】
Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ混合物は中間の挙動を示し、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの１０／９０における作用（表Ｃ）は純粋なＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物で得られた作用に類似していた。しかしながら、保護は１００％Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡによるよりも１０／９０混合物により１時間でさらに明らかであった。
【００８３】
また、２種のＤＰ−ＶＰＡ化合物による保護作用の異なる動態に注目することが重要である。Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡのピーク活性はＰＴＺの投与４時間後に得られたが、一方純粋なＣ16−ＤＰ−ＶＰＡでは既に１時間以内にその最大治療効果に達した。
【００８４】
結論：Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡおよびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡは抗けいれん剤として類似の効力（すなわち類似のＥＤ50値）を有するが、それらの治療的プロフィルは相異する。Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ化合物はＰＴＺの皮下投与によるけいれんの誘発後最初の１時間では、けいれんの防止作用は強い。Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物は他方もっと遅い時間に、すなわちＰＴＺの注射４時間後に最大抗けいれん活性を示す（表Ａ参照。表Ｄと比較）。
【００８５】
試験したＣ16−ＤＰ−ＶＰＡ／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの混合物、とくに比１０／９０のＣ16／Ｃ18混合物は１００％Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ化合物と類似の方法で行動し、すなわち高い最大けいれん保護をさらに長時間にわたって示す。
【００８６】
実施例７：ＤＰ−ＶＰＡの投与に適当な製剤
本発明のＤＰ−ＶＰＡ化合物および組成物は対象に、本技術分野で周知の多くの方法によって投与することができる。たとえば、投与は経口的に、非経口的に（たとえば静脈内点滴または腹腔内、皮下もしくは筋肉内注射）、局所的に（たとえば経鼻適用または吸入による）または経直腸的に行われる。
【００８７】
局所投与用の製剤には、それらに限定されるものではないが、滴剤、液体、スプレー、散剤、坐剤、クリーム、ゲルおよび軟膏が包含される。慣用の医薬用担体、水、粉末または油基剤、増粘剤等が必要または所望に応じて使用される。
【００８８】
非経口投与のための製剤には、それらに限定されるものではないが、さらに緩衝剤、希釈剤および他の適当な添加物を含有してもよい滅菌水溶液が包含される。
【００８９】
経口投与用の組成物は、散剤もしくは顆粒、水性もしくは非水性メジウム中の懸濁液もしくは溶液、錠剤、カプセル、シロップもしくは溶液の剤形として製剤化される。製剤は活性成分の改良された制御放出が可能なように設計することができる。カプセルおよび錠剤は胃腸管の異なる部分への部位特異的な送達を与えるようにコーティングしてもよい。増粘剤、希釈剤、賦香剤、分散補助剤、乳化剤または結合剤の添加が望ましい。
【００９０】
製剤に添加できる適当な医薬用担体には、それらに限定されるものではないが、リン脂質、トリグリセライド、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ポロキサマー、サーファクタントおよびコサーファクタントが包含される。
【００９１】
用量は症状の重症度およびＤＰ−ＶＰＡ薬物に対する対象の応答性に依存する。本技術分野の通常の熟練者は、至適な投与量および剤形、ならびに投与基準および投与手段を容易に決定することができる。
【００９２】
以上、本発明を詳細に説明してきたが、本技術分野の熟練者には多くの変化および修飾が可能なことは自明である。したがって、本発明はとくに詳細に記載した実施態様によって限定されるものではなく、前述の特許請求の範囲を参照すれば、本発明の範囲、精神および概念は容易に理解できるものと確信する。
【図面の簡単な説明】
【図１】  Ｃ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ組成物の典型的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。この場合、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ対Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡの重量比は約１５％：８５％である。
【図２】  ヒト対象に０．６２５ｇのＣ16／Ｃ18−ＤＰ−ＶＰＡ（Ｃ16／Ｃ18比＝１３％：８７％  ｗ／ｗ）を１回経口投与し、様々な時点で測定した、Ｃ16−ＤＰ−ＶＰＡ（図２Ａ）およびＣ18−ＤＰ−ＶＰＡ（図２Ｂ）の血漿濃度を示す。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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