(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＧＭ−０８０（受託番号ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）であるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を有効成分として含有する医薬用のリン酸化ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ；ｐ−ＪＮＫ）、Ｂｃｌ−２関連死プロモーター（Ｂｃｌ−２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ；Ｂａｄ）及びＢｃｌ−２関連Ｘタンパク（Ｂｃｌ−２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｂａｘ）よりなる群から選ばれる１種または２種以上の遺伝子発現抑制剤。
【請求項２】
前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、生又は不活化されるものである請求項１に記載の遺伝子発現抑制剤。
【請求項３】
前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、その他の混合菌株を更に含むものである請求項１または２に記載の遺伝子発現抑制剤。
【請求項４】
前記その他の混合菌株は、アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）、発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルスブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、サーモフィルス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルスパラカゼイサブスピーシーズパラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ.ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ）及び前記の任意の組み合わせからなる群より選ばれたものである請求項３に記載の遺伝子発現抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロバイオティクス菌株の用途に関し、特に、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療におけるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ又はｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ）は、一般的に人体内における、腸内健康に有益な生菌を指し、外部から補充され、体に有益になる可能性がある微生物をも指しており、例えば、乳酸菌（ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ  ｂａｃｔｅｒｉａ；ＬＡＢ）と一部の酵母菌が挙げられる。その内、乳酸菌が乳糖又はその他の糖類を乳酸に転換する微生物の総称である。乳酸菌はグラム陽性菌に属し、常に食品工業における発酵に用いられる。
【０００３】
近年の研究において、乳酸菌は、アレルギーに関する疾病及び胃腸病、例えば炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ；ＩＢＤ）等を改善できることが証明されている。一般的に、乳酸菌は、乳酸桿菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、リューコノストック属（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）及びレンサ球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）等を主として、またアエロコッカス属（Ａｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、カルノバクテリウム属（Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、腸内球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、オエノコッカス属（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、スポロラクトバチルス属（Ｓｐｏｒｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、テトラジェノコッカス属（Ｔｅｔｒａｇｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、バゴコッカス属（Ｖａｇｏｃｏｃｃｕｓ）及びウィッセラ属（Ｗｅｉｓｓｅｌｌａ）等を有し、その内、大部分の乳酸菌が乳酸桿菌属に属する。前記菌属は乳酸桿菌目（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｌｅｓ）に属し、その内、一部の菌種がプロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）とされている。現在、プロバイオティクスの乳酸桿菌属及びビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）に対し、深く研究されている。
【０００４】
近年、感染病学に関する研究において、更に乳酸菌が免疫反応を刺激することができ、無害のアレルゲン（ｉｎｎｏｃｅｎｔ  ａｌｌｅｒｇｅｎｓ）に対しての免疫寛容（ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）を発達させることが示されている（Ｐｅｎｄｅｒｓ,  Ｊ.,  Ｓｔｏｂｂｅｒｉｎｇｈ,  Ｅ.Ｅ.,  ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｒａｎｄｔ,  Ｐ.Ａ.,  Ｔｈｉｊｓ,  Ｃ.    Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｔｏｐｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ.    Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６２（１１）,  １２２３−１２３６.（２００７）を参照）。
【０００５】
その他の研究において、乳酸菌が人間や家畜の抗生剤による下痢（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｉａｒｒｈｅａ）と旅行者下痢（ｔｒａｖｅｌｌｅｒｓ'  ｄｉａｒｒｈｅａ）、小児下痢（ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｄｉａｒｒｈｅａ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ｉｒｒｉｔａｂｌｅ  ｂｏｗｅｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）  （以上はＦｕｒｒｉｅ,  Ｅ.    Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ａｌｌｅｒｇｙ.    Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ６４（４）,  ４６５−４６９,  ２００５;  Ｇｏｏｓｓｅｎｓ,  Ｄ.,  Ｊｏｎｋｅｒｓ,  Ｄ.,  Ｓｔｏｂｂｅｒｉｎｇｈ,  Ｅ.,  ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｇａａｒｄ,  Ａ.,  Ｒｕｓｓｅｌ,  Ｍ.,  Ｓｔｏｃｋｂｒｕｇｇｅｒ,  Ｒ.    Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｉｎ  ｇａｓｔｒｏｅｎｔｒｏｌｏｇｙ:  ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ.    Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２３９  （Ｓｕｐｐｌ.）,  １５−２３,  ２００３;  Ｋａｌｌｉｏｍａｋｉ,  Ｍ.,  Ｓａｌｍｉｎｅｎ,  Ｓ.,  Ｐｏｕｓｓａ,  Ｔ.,  ＡｒＶｉｌｏｍｍｉ,  Ｈ.,  Ｉｓｏｌａｕｒｉ,  Ｅ.    Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｔｏｐｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ:  ４−ｙｅａｒ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ  ｏｆ  ａ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ.    Ｌａｎｃｅｔ  ３６１,  １８６９−１８７１,  ２００３;  Ｐｆｒｕｅｎｄｅｒ,  Ｈ.,  Ａｍｉｄｊｏｊｏ,  Ｍ.,  Ｈａｎｇ,  Ｆ.,  Ｗｅｕｓｔｅｒ−Ｂｏｔz,  Ｄ.    Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ３,５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ.    Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６７,  ６１９−６２２,  ２００５;  Ｓｈａｎａｈａｎ,  Ｆ.    Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｂｏｗｅｌ  ｄｉｓｅａｓｅ:  ｉｓ  ｔｈｅｒｅ  ａ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｒａｔｉｏｎａｌｅ？    Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ６（２）,  １０７−１１５,  ２０００を参照）、アトピー性疾患（ａｔｏｐｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）  （以上はＰｅｎｄｅｒｓ,  Ｊ.,  Ｓｔｏｂｂｅｒｉｎｇｈ,  Ｅ.Ｅ.,  ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｒａｎｄｔ,  Ｐ.Ａ.,  Ｔｈｉｊｓ,  Ｃ.    Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｔｏｐｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ.    Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６２（１１）,  １２２３−１２３６,  ２００７;  Ｌｅｅ,  Ｊ.,  Ｓｅｔｏ,  Ｄ.,  Ｂｉｅｌｏｒｙ,  Ｌ.    Ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｏｆ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ａｔｏｐｉｃ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ.    Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２３（１）,  ２６６−２６���,  ２００９.を参照）等を有効に改善できることも示されている。
【０００６】
乳酸菌による心血管疾患を治療する関連研究は、すでに５０年を超え行われている。従来の研究において、乳酸菌が血圧と高コレステロール血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ）を有効に低減できることが示されている（以上はＰｆｒｕｅｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ.,  ２００５;  Ｌｙｅ,  Ｈ.Ｓ.,  Ｋｕａｎ,  Ｃ.Ｙ.,  Ｅｗｅ,  Ｊ.Ａ.,  Ｆｕｎｇ,  Ｗ.Ｙ.,  Ｌｉｏｎｇ,  Ｍ.Ｔ.    Ｔｈｅ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ｂｙ  ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ:  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ,  ｄｉａｂｅｔｅｓ,  ｒｅｎｉｎ,  ａｎｄ  ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ.    Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １０,  ３７５５−３７７５,  ２００９を参照）。
【０００７】
しかし、前記研究において、プロバイオティクス菌株がアレルギーによる心臓炎症と心臓細胞アポトーシスに応用できるかどうかについて殆ど検討されておらず、プロバイオティクス菌株が関与する制御機構も示されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記事情に鑑みて、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療におけるプロバイオティクス菌株の新用途を提供し、プロバイオティクス菌株をその他に応用するよう開発する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで、本発明の一態様において、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を含み、その含有量が心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを有効に治療できる心臓炎症と細胞アポトーシスの治療用の組成物が提供される。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の他の一態様においては、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の用途が提供され、このプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、単独又はその他の混合菌株と併用してもよく、リン酸化ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ；ｐ−ＪＮＫ）、Ｂｃｌ−２関連死プロモーター（Ｂｃｌ−２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ；Ｂａｄ）及びＢｃｌ−２関連Ｘタンパク（Ｂｃｌ−２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｂａｘ）の発現を特異的に抑制することによって、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを有効に治療する。
【００１１】
本発明の前記態様によれば、心臓炎症と細胞アポトーシスの治療に用いられる組成物が提供される。一実施例において、この組成物は、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を含み、このプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、例えばラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）  ＧＭ−０８０（中国典型培養物保蔵センターに寄託されており、受託番号はＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）であってもよい。
【００１２】
本発明の一実施例によれば、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０が生又は不活化である。
【００１３】
本発明の一実施例によれば、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、ｐ−ＪＮＫ、Ｂａｄ及びＢａｘの発現を特異的に抑制することに用いられる。
【００１４】
本発明の一実施例によれば、前記組成物は、医薬組成物、補助飲食品、食品又はその組成分である。
【００１５】
本発明の他の一態様によれば、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の用途が示され、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、ｐ−ＪＮＫ、Ｂａｄ及びＢａｘの発現を特異的に抑制することができる。
【００１６】
本発明の一実施例によれば、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、その他の混合菌株を更に含んでもよい。
【００１７】
本発明の、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療におけるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を応用する場合、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を用いて、ｐ−ＪＮＫ、Ｂａｄ及びＢａｘの発現を特異的に抑制することによって、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを有効に治療し、これによりプロバイオティクス菌株をその他に応用するよう開発する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
下記の図面の簡単な説明は、本発明の前記またはその他の目的、特徴、利点及び実施例をより分かりやすくするためのものである。
【００１９】
【図１】本発明の一実施例によるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０が心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療における情報伝達経路の模式図である。
【図２】本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図である。
【図３】α−チューブリンの発現量によって標準化された図２のｐ−ＪＮＫ発現量を示す棒グラフである。
【図４】α−チューブリンの発現量によって標準化された図２のＪＮＫ  １／２発現量を示す棒グラフである。
【図５】本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図である。
【図６】α−チューブリンの発現量によって標準化された図５のｐ−ＮＦκＢ発現量を示す棒グラフである。
【図７】α−チューブリンの発現量によって標準化された図５のｐ−ＩκＢ発現量を示す棒グラフである。
【図８】本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図である。
【図９】α−チューブリンの発現量によって標準化された図８のＢａｄ発現量を示す棒グラフである。
【図１０】α−チューブリンの発現量によって標準化された図８のＢａｘ発現量を示す棒グラフである。
【図１１】本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図である。
【図１２】α−チューブリンの発現量によって標準化された図１１の細胞質のシトクロムＣ発現量を示す棒グラフである。
【図１３】α−チューブリンの発現量によって標準化された図１１の活性化状態のカスパーゼ３発現量を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
前述によれば、本発明は、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療におけるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の用途を提供し、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を用いて組成物を製造し、且つこのプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の含有量が心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを有効に治療することができる。
【００２１】
ここで、本発明の「プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０」とは、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）ＧＭ−０８０であり、この菌株ＧＭ−０８０は、すでに２００４年２月１９日に中国典型培養物保蔵センター（Ｃｈｉｎａ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；ＣＣＴＣＣ；中国湖北省武漢市武昌珞珈山）（受託番号（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ）はＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）に寄託されている。前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、従来の方法、又は中国特許公開番号第ＣＮ  １６９６２８１Ａ号に開示されている分離及び培養方法によって得られるので、ここで詳しく述べない。簡単に言えば、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、ＭＲＳブロス培地（ｂｒｏｔｈ  ｍｅｄｉｕｍ；ＤＩＦＣＯ（商標）０８８１、最終ｐＨは６.５±０.２）を用い、３７℃の温度で、嫌気又は好気で培養される。他の一例において、前記ＭＲＳブロス培地を用いる菌液を寒天培地に画線接種することができる（ｓｔｒｅａｋ  ｐｌａｔｉｎｇ）。
【００２２】
一実施例において、生体内の（ｉｎ  ｖｉｖｏ）動物免疫実験によって、本発明のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、確かにｐ−ＪＮＫ、Ｂａｄ及びＢａｘの遺伝子発現を特異的に抑制し、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを治療することができると証明されている。心臓炎症と心臓細胞アポトーシスは、心筋炎（ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ）及び心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ）を引き起こす可能性があり、例えば、アレルギー性心筋炎（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ）、リウマチ性心疾患（心臓弁膜症ともいう）、肥大型心筋症（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ  ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、拡張型心筋症（ｄｉｌａｔｅｄ  ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、拘束型心筋症（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｖｅ  ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）等が挙げられる。さらに、このプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の含有量は、例えばアレルギー反応によって誘発される心筋炎症と心筋細胞アポトーシスを有効に治療することができる量である。ここで特に説明すべきことは、本発明の「動物免疫実験」とは、「アレルゲン感作動物」を用いることによって、即ち、例えばオボアルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ；ＯＶＡ）のようなアレルゲンにより、実験動物のアレルギー反応を人為的に誘発することであり、これによって、心筋炎症と心筋細胞アポトーシスに対するプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の効果を評価する。
【００２３】
図１は、本発明の一実施例によるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０が心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療における情報伝達経路の模式図である。一実施例において、図１の右側の情報伝達経路（ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙ）１０３に示すように、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０  １０１は、リン酸化ｃ−ＪｕｎＮ末端キナーゼ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ；ｐ−ＪＮＫ）を特異的に抑制することによって、下流のｐ−ＮＦκＢ及びＴＮＦ−αの発現を抑制し、これにより例えばアレルギー反応によって誘発される心筋炎症（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）等の心臓炎症（ｃａｒｄｉａｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）を緩和する。
【００２４】
他の一実施例において、図１の左側の情報伝達経路１０５に示すように、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、Ｂａｄ及びＢａｘの発現を特異的に抑制することによって、Ｂｃｌ−２関連死プロモーター（Ｂｃｌ−２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ；Ｂａｄ）とＢｃｌ−２関連Ｘタンパク（Ｂｃｌ−２−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｂａｘ）が糸粒体１１１の表面に堆積することを有効に防止でき、これにより下流のシトクロムＣ（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｃ）とカスパーゼ３（ｃａｓｐａｓｅ  ３）の発現を抑制し、これによって、心臓細胞内の糸粒体１１１に制御される細胞アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；プログラム細胞死ともいう；ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ）、例えばアレルギー反応によって誘発される心筋細胞アポトーシス（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）を抑制する。
【００２５】
さらに一つの実施例において、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は更にその他の混合菌株を選択的に含んで、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療用の組成物を製造することに用いることもできる。一例において、前記その他の混合菌株は、アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）、発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルスブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、サーモフィルス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルスパラカゼイサブスピーシーズパラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ.  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ）又は前記の任意の組み合わせを含むが、これらに限られない。
【００２６】
ここで補充するのは、一実施例において、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０（例えばラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０；受託番号はＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）は、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療用の組成物を製造することに用いられる場合、生（ｌｉｖｅ）又は不活化（ｉｎａｃｔｉｖｅ）であってもよい。一例において、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、医薬組成物、補助飲食品、食品又はその組成分であってもよい。他の一例において、前記プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０が凍結乾燥の形にしてもよく、また、このプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０がその他の成分を更に含んでもよく、例えばブドウ糖、マルトデキストリン（ｍａｌｔｏｄｅｘｔｒｉｎ）、乳児用調製粉乳、フラクトオリゴ糖（ｆｒｕｃｔｏ−ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ）、ステアリン酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｓｔｅａｒａｔｅ）、ヨーグルト香料（ｙｏｇｕｒｔ  ｓｐｉｃｅｓ）、その他の分離しにくい成分、又は前記の任意の組み合わせを更に含んでもよい。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例を用いて本発明の応用を説明するが、それは本発明を限定するものではなく、当業者であれば、本発明の精神と範囲から逸脱しない限り、種々の変更及び修飾することができる。
【００２８】
実  施  例  １
動物評価モードの形成：
１.プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の調製
この実施例では、ラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（受託番号はＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）を用いて動物免疫実験を行い、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを治療するプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の効果を評価した。ラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）の菌量は、１ｇあたり約１×１０６〜約１×１０１１コロニー形成単位（ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ；ＣＦＵ）（ＣＦＵ／ｇ）であってもよい。このラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）は、凍結乾燥の形にしてもよく、また、その他の成分を含んでもよく、例えばブドウ糖、マルトデキストリン、乳児用調製粉乳、フラクトオリゴ糖、ステアリン酸マグネシウム、ヨーグルト香料、その他の分離しにくい成分、又は前記の任意の組み合わせを含んでもよい。
【００２９】
この実施例では、その他の混合菌株を選んでラクトバチルス・パラカゼイと併用してもよく、前記その他の混合菌株は、アシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）、発酵乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルスブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、サーモフィルス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトバチルスパラカゼイサブスピーシーズパラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ.  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ）又は前記の任意の組み合わせを含むが、これらに限られない。前記混合菌株を含む製品の市販品を用いて行ってもよい。
【００３０】
一例において、前記その他の混合菌株は、第１の混合菌株を含んでもよく、第１の混合菌株は、例えばアシドフィルス菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ビフィオバクテリアム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）、発酵乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、サーモフィルス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・クレモリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｅｍｏｒｉｓ）又は前記の任意の組み合わせを含むが、これらに限られない。第１の混合菌株の菌量が１×１０７ＣＦＵ／ｇより多い又は同じであってもよい。
【００３１】
他の一例において、前記その他の混合菌株は、第２の混合菌株を含んでよく、第２の混合菌株は、例えば前記第１の混合菌株に加えて、ラクトバチルスパラカゼイサブスピーシーズパラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ.  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ  ＧＧ）又は前記の任意の組み合わせを更に含んでもよいが、これらに限られない。第２の混合菌株の菌量が１×１０７ＣＦＵ／ｇより多いか又は同じであってもよい。
【００３２】
２.アレルゲン感作動物実験モデルの作製
この実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウス（台湾台北楽斯科生物科技股有限公司）でアレルゲン感作動物実験モデルを作製した。まず、実験マウスを３群の実験群（アレルギー実験群）及び２群の対照群（健康対照群、アレルギー対照群）に分けた。各群はそれぞれ５週齢の雄のマウス７匹（健康対照群）又は８匹（アレルギー対照群、アレルギー実験群）であった。健康対照群とアレルギー対照群のマウスには、口胃挿管（ｏｒｏｇａｓｔｒｉｃ  ｉｎｔｕｂａｔｉｏｎ）の方式を用いて、毎日一回に蒸留水０.２ｍＬを投与した。各アレルギー実験群のマウスには、異なるプロバイオティクス菌株（それぞれ第１の混合菌株、第２の混合菌株、ラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２））を毎日一回に経口投与し、各匹にそれぞれ約１×１０６〜１×１０１１ＣＦＵ／ｇを与えた。アレルギー対照群とアレルギー実験群のマウスには、第０日と第１４日に、それぞれ腹腔内に２マイクログラム（μｇ）と６マイクログラム（μｇ）のオボアルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ；ＯＶＡ）と完全フロイントアジュバント（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ'ｓ  ａｄｊｕｖａｎｔ；ＣＦＡ）を注射し、マウスのアレルギー反応を誘発した。すべてのマウスに対して、２８日の処理した後、秤量し、屠殺してから、心臓を取り出して蒸留水で洗浄し、左右心房と左右心室に分けて再び秤量した。
【００３３】
マウスの飼育温度は２５±１℃、相対湿度は６５±５％であり、１２時間毎の明暗サイクルに維持し、標準実験室レベルの飼料（ＭＦ−１８；オリエンタル酵母工業株式会社、Ｏｒｉｅｎｔａｌ  Ｙｅａｓｔ  Ｃｏ.  Ｌｔｄ、日本）で飼育し、飼育期間中に飼料及び水を自由摂取させた。マウスの飼育条件は、全てが台湾の国家衛生研究院より公表されている実験動物管理ガイドにより行った。
【００３４】
３.心臓組織の抽出
前記マウスの左心室を溶解バッファー（ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ）に入れ、組織１００ｍｇ／溶解バッファー１ｍＬの割合で、左心室組織を約１分間均質化（ｈｏｍｏｇｅｎｉzｅ）して、心筋細胞（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｔｙｅｓ）内のタンパク質をさらに溶出した。前記溶解バッファーは、２０ｍＭのトリスヒドロキシメチルアミノメタン（ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ；Ｔｒｉｓ）溶液、２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ；ＥＤＴＡ）、５０ｍＭの２−メルカプトエタノール（２−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）、１０％のグリセリン、プロテアーゼ阻害剤（ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；Ｒｏｃｈｅ）、およびホスファターゼ阻害剤カクテル（ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ；ｓｉｇｍａ）を含み、ｐＨが７.４である。その後、得られたホモジネート（ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ）を氷上に約１０分間置き、約１２０００×ｇの遠心力で４０分間遠心し、合計二回遠心した。そして、上澄みを回収して−８０℃で保存し、その後、評価を行った。
【００３５】
実  施  例  ２
プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の心臓炎症治療効果の評価：
この実施例において、電気泳動分析とウェスタンブロッティング分析（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ  ａｓｓａｙ）によって、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを治療する効果を評価した。以下それぞれ記述する。
【００３６】
前記のように得られたホモジネートを、１０％のドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ｓｏｄｉｕｍ  ｄｏｄｅｃｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ−ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ  ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）に付し、８５Ｖ、３.５時間で行った。その後、１９２ｍＭのグリシン（ｇｌｙｃｉｎｅ）と２０％（ｖ／ｖ）のメタノールを含む２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ溶液（ｐＨ８.３）で１５分間平衡化した。前記ＳＤＳ−ＰＡＧＥの調製及び関連設備は、当業者が既に熟知しているので、ここで詳しく述べない。
【００３７】
前記ＳＤＳ−ＰＡＧＥの電気泳動ゲルは、ウェスタンブロッティング分析（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ  ａｓｓａｙ）を続けて行ってもよい。この実施例において、ウェスタンブロッティングキットによって、（例えばＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｕｎｉｔ）、８５Ｖ、２.５時間で、前記電気泳動ゲルのタンパク質を転写膜に転写し、転写膜が例えばポリフッ化ビニリデン膜（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ  ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ、ＰＶＤＦ  ｍｅｍｂｒａｎｅ；孔径０.４５ｍ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ,  Ｂｅｄｆｏｒｄ,  ＭＡ,  Ｕ.Ｓ.Ａ.）であってもよい。その後、５％の脱脂粉乳をＴＢＳ緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｂａｓｅ、ＮａＣｌ、Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ  ７.４）に溶解してブロッキング溶液とし、室温で約１時間後、一次抗体（ｆｉｒｓｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）（抗体結合溶液で５００倍に希釈した。抗体結合溶液の組成は後述する）を入れて、４℃で一晩反応した。そして、ＴＢＳ緩衝液で三回洗浄し、毎回１０分間であった。続いて、ＴＢＳ緩衝液により５００倍に希釈した二次抗体（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を入れて、３７℃、１時間で反応してから、ＴＢＳ緩衝液で三回に洗浄した。洗浄は、毎回が１０分間であった。その後、例えば増強化学発光（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍｉＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ；ＥＣＬ）ウェスタンブロッティングルミノール試薬（Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔｔｉｎｇ  ｌｕｍｉｎｏｌ  ｒｅａｇｅｎｔ；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕz  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,  ＣＡ）などの冷光呈色剤を入れて、冷光蛍光分析器システム（例えばＦｕｊｉｆｉｌｍ  ＬＡＳ−３０００  ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ,  Ｔｏｋｙｏ,  Ｊａｐａｎ）によって結果を分析した。
【００３８】
前記一次抗体は、例えば腫瘍壊死因子−α（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−α；ＴＮＦ−α；Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,  Ｂｅｖｅｒｌｙ,  ＭＡ,  ＵＳＡ）、Ｔｏｌｌ様受容体４（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４；ＴＬＲ４）、ｐ−ＪＮＫ、ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ１／２（ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ；ＪＮＫ  １／２）、リン酸化核因子−κＢ  （ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−κＢ；ｐ−ＮＦκＢ）、リン酸化ＮＦ−κＢ抑制因子（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ−ＩκＢ；ｐ−ＩκＢ）、ｐ−ｐ３８、Ｂａｄ、Ｂａｘ、シトクロムＣ、カスパーゼ３及びα−チューブリン（α−ｔｕｂｕｌｉｎ）に対するモノクロナール抗体（上記製品がＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ,  ＣＡ,  ＵＳＡより）であってもよい。前記二次抗体は、例えばワサビペルオキシダーゼを結合したヤギ抗マウスＩｇＧ（ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ−ＨＲＰ）、ワサビペルオキシダーゼを結合したヤギ抗ウサギＩｇＧ（ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ−ＨＲＰ）、又はワサビペルオキシダーゼを結合したロバ抗ヤギＩｇＧ（ｄｏｎｋｅｙ  ａｎｔｉ−ｇｏａｔ  ＩｇＧ−ＨＲＰ）（上記製品がＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ,  ＣＡ,  ＵＳＡより）であってもよい。
【００３９】
前記抗体結合溶液は、例えば１００ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ溶液（ｐＨ７.５）、０.９％（ｖ／ｖ）のＮａＣｌ及び０.１％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ−２０を含んでもよい。
【００４０】
１．プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０がアレルゲン感作マウス心臓ｐ−ＪＮＫ及び
ＪＮＫ  １／２発現量に対する影響の評価：
図２は、本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図であり、レーン１−２が健康対照群を表し、レーン３−４がアレルギー対照群を表し、レーン５−６がアレルギー実験群（混合菌株Ａ、即ち第１の混合菌株）を表し、レーン７−８がアレルギー実験群（混合菌株Ｂ、即ち第２の混合菌株）を表し、レーン９−１０がアレルギー実験群（ラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２））を表す。図２は、アレルゲン感作マウス心臓組織内の、ＴＬＲ４（約８９ｋＤａ）、ｐ−ＪＮＫ（約５４ｋＤａと４６ｋＤａ）及びＪＮＫ  １／２（約５４ｋＤａと４６ｋＤａ）の発現を分析するものである。α−チューブリン（約５７ｋＤａ）は、内部標準（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｃｏｎｔｒｏｌ）とすることにより、前記タンパクの発現量を標準化する。
【００４１】
図３は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図２のｐ−ＪＮＫ発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたｐ−ＪＮＫ発現量の相対発現量（即ち、ｐ−ＪＮＫ／α−チューブリンの相対発現量）を示し、また、健康対照群のｐ−ＪＮＫ／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００４２】
図４は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図２のＪＮＫ  １／２発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたｐ−ＪＮＫ発現量の相対発現量（即ち、ＪＮＫ  １／２／α−チューブリンの相対発現量）を示し、また、健康対照群のＪＮＫ  １／２／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００４３】
図２〜図４の結果から、健康対照群（図２のレーン１−２）に比べて、マウスがアレルゲン感作された後、アレルギー対照群（図２のレーン３−４）のマウス心臓組織のｐ−ＪＮＫ及びＪＮＫ  １／２の発現量が著しく増加したことが分かった。そして、アレルギー対照群（図２のレーン３−４）に比べて、アレルギー実験群のマウスの心臓組織におけるｐ−ＪＮＫ及びＪＮＫ  １／２の発現量（図２のレーン９−１０）が、アレルギー実験群（混合菌株Ａと混合菌株Ｂ、図２のレーン５−８）とアレルギー対照群（図２のレーン３−４）より著しく低く、図３〜図４に示すように、実施例１のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を経口摂取することにより確かにｐ−ＪＮＫ及びＪＮＫ  １／２の発現量を特異的に抑制できる。
【００４４】
２．プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０がアレルゲン感作マウス心臓ｐ−ＮＦκＢ及び
ｐ−ＩκＢ発現量に対する影響の評価：
図５は、本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図であり、レーン１−２が健康対照群を表し、レーン３−４がアレルギー対照群を表し、レーン５−６がアレルギー実験群（混合菌株Ａ、即ち第１の混合菌株）を表し、レーン７−８がアレルギー実験群（混合菌株Ｂ、即ち第１の混合菌株）を表し、レーン９−１０がアレルギー実験群（ラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２））を表す。図５は、アレルゲン感作のマウス心臓組織内の、ｐ−ＮＦκＢ（約６５ｋＤａ）及びｐ−ＩκＢ（約４０ｋＤａ）の発現を分析するものであり、α−チューブリンは、前記タンパクの発現量を標準化することに用いられる。
【００４５】
図６は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図５のｐ−ＮＦκＢ発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたｐ−ＮＦκＢ発現量の相対発現量（即ち、ｐ−ＮＦκＢ／α−チューブリンの相対発現量）を示し、また、健康対照群のｐ−ＮＦκＢ／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００４６】
図７は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図５のｐ−ＩκＢ発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたｐ−ＩκＢ発現量の相対発現量（即ち、ｐ−ＩκＢ／α−チューブリンの相対発現量）を示し、また、健康対照群のｐ−ＩκＢ／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００４７】
図５〜図７の結果により、健康対照群（図５のレーン１−２）に比べて、マウスがアレルゲン感作された後、アレルギー対照群（図５のレーン３−４）のマウス心臓組織のｐ−ＮＦκＢ及びｐ−ＩκＢの発現量が多少増加したことが分かった。そして、アレルギー対照群（図５のレーン３−４）に比べて、アレルギー実験群のマウスの心臓組織におけるｐ−ＮＦκＢの発現量（図５のレーン９−１０）が、アレルギー対照群（図５のレーン３−４）より著しく低く、さらに、アレルギー実験群のマウスの心臓組織におけるｐ−ＩκＢの発現量（図５のレーン９−１０）が、アレルギー実験群（混合菌株Ａと混合菌株Ｂ、図５のレーン５−８）とアレルギー対照群（図５のレーン３−４）より著しく低く、図５〜図７に示すように、実施例１のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を経口摂取することにより確かにｐ−ＮＦκＢ及びｐ−ＩκＢの発現量を特異的に抑制できる。
【００４８】
３．プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０がアレルゲン感作マウス心臓Ｂａｄ及びＢａｘ
発現量に対する影響の評価：
図８は、本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図であり、レーン１−２が健康対照群を表し、レーン３−４がアレルギー対照群を表し、レーン５−６がアレルギー実験群（混合菌株Ａ、即ち第１の混合菌株）を表し、レーン７−８がアレルギー実験群（混合菌株Ｂ、即ち第１の混合菌株）を表し、レーン９−１０がアレルギー実験群（ラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２））を表す。図８は、アレルゲン感作のマウス心臓組織内の、Ｂａｄ（約２５ｋＤａ）及びＢａｘ（約２３ｋＤａ）の発現を分析するものであり、α−チューブリンは、前記タンパクの発現量を標準化することに用いられる。
【００４９】
図９は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図８のＢａｄ発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたＢａｄ発現量の相対発現量（即ちＢａｄ／α−チューブリンの相対発現量）を示し、また、健康対照群のＢａｄ／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００５０】
図１０は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図８のＢａｘ発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたＢａｘ発現量の相対発現量（即ちＢａｘ／α−チューブリンの相対発現量）を示し、また、健康対照群のＢａｘ／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００５１】
図８〜図１０の結果により、健康対照群（図８のレーン１−２）に比べて、マウスがアレルゲン感作された後、アレルギー対照群（図８のレーン３−４）のマウス心臓組織のＢａｄ及びＢａｘの発現量が著しく増加したことが分かった。そして、アレルギー対照群（図８のレーン３−４）に比べて、アレルギー実験群のマウスの心臓組織におけるＢａｄ及びＢａｘの発現量（図８のレーン９−１０）が、アレルギー実験群（混合菌株Ａと混合菌株Ｂ、図８のレーン５−８）とアレルギー対照群（図８のレーン３−４）より著しく低く、図８〜図１０に示すように、実施例１のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を経口摂取することにより確かにＢａｄ及びＢａｘの発現量を特異的に抑制できる。
【００５２】
４．プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０がアレルゲン感作マウス心臓のシトクロムＣ及
びカスパーゼ３発現量に対する影響の評価：
図１１は、本発明の一実施例によるマウス心臓組織のウェスタンブロッティング解析図であり、レーン１−２が健康対照群を表し、レーン３−４がアレルギー対照群を表し、レーン５−６がアレルギー実験群（混合菌株Ａ、即ち第１の混合菌株）を表し、レーン７−８がアレルギー実験群（混合菌株Ｂ、即ち第２の混合菌株）を表し、レーン９−１０がアレルギー実験群（ラクトバチルス・パラカゼイＧＭ−０８０（ＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２））を表す。図１１は、アレルゲン感作したマウスの心臓組織内の、細胞質のシトクロムＣ（約１１ｋＤａ）及び活性化状態のカスパーゼ３（約１７ｋＤａ）の発現を分析するものであり、α−チューブリンは、前記タンパクの発現量を標準化することに用いられる。
【００５３】
図１２は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図１１の細胞質のシトクロムＣ発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたシトクロムＣ発現量の相対発現量（即ち、シトクロムＣ／α−チューブリンの相対発現量）を示す。なお、健康対照群のシトクロムＣ／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００５４】
図１３は、α−チューブリンの発現量によって標準化された図１１の活性化状態のカスパーゼ３発現量を示す棒グラフであり、縦軸はα−チューブリンの発現量によって標準化されたカスパーゼ３発現量の相対発現量（即ち、活性化状態のカスパーゼ３／α−チューブリンの相対発現量）を示す。なお、健康対照群の活性化状態のカスパーゼ３／α−チューブリンの相対発現量を１.０とする。
【００５５】
図１１〜図１３の結果により、健康対照群（図１１のレーン１−２）に比べて、マウスがアレルゲン感作された後、アレルギー対照群（図１１のレーン３−４）のマウス心臓組織におけるシトクロムＣ及びカスパーゼ３の発現量が多少増加したことが分かった。そして、アレルギー対照群（図１１のレーン３−４）に比べて、アレルギー実験群のマウスの心臓組織におけるシトクロムＣ及びカスパーゼ３の発現量（図１１のレーン９−１０）が、アレルギー実験群（混合菌株Ａと混合菌株Ｂ、図１１のレーン５−８）とアレルギー対照群（図１１のレーン３−４）より著しく低く、図１２〜図１３に示すように、実施例１のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を経口摂取することにより確かに細胞質のシトクロムＣ及び活性化状態のカスパーゼ３の発現量を特異的に抑制できる。
【００５６】
上記によって、本発明のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０（ラクトバチルス・クレモリスＧＭ−０８０）（受託番号はＣＣＴＣＣ  Ｍ  ２０４０１２）はアレルギーで起こる心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療に応用できることが証明されており、また、本発明は、乳酸菌が関与する制御機構、即ち、ｐ−ＪＮＫ、Ｂａｄ及びＢａｘの発現を特異的に抑制することによって、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを有効に治療できる制御機構を提供し、これによりプロバイオティクス菌株をその他に応用するよう開発できる。ここで補充するのは、本発明は、特定の菌株、特定の分析方式、特定の動物モデル、特定の反応条件、特定の免疫方法、特定の材料又は特定の設備等を例として、本発明の、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療におけるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の用途を説明するが、当業者が理解するように、本発明はこれらに限られなく、本発明の精神及び範囲から逸脱しない限り、本発明のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０がその他のプロバイオティクス菌株、その他の分析方式、その他の動物モデル、その他の反応条件、その他の免疫方法、その他の同等レベルの材料又はその他の設備等によって行ってもよい。また、本発明のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を、例えば医薬組成物、補助飲食品、食品又はその組成分などの、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを治療する組成物の製造に用いる場合、プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は、生又は不活化であってもよく、また、凍結乾燥の形であってもよい。なお、本発明のプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０は更にその他の成分を含んでもよく、例えばブドウ糖、マルトデキストリン、乳児用調製粉乳、フラクトオリゴ糖、ステアリン酸マグネシウム、ヨーグルト香料、その他の分離しにくい成分、又は前記の任意の組み合わせを更に含んでもよい。
【００５７】
本発明の前記実施例から分かるように、本発明の、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスの治療におけるプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０の用途は、その利点がプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０を用いて、ｐ−ＪＮＫ、Ｂａｄ及びＢａｘの発現を特異的に抑制することによって、心臓炎症と心臓細胞アポトーシスを有効に治療することであり、これによりプロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０をその他に応用するよう開発できる。
【００５８】
本発明を複数の実施例によって以上のように開示したが、これは本発明を限定するものではなく、当業者であれば、本発明の精神及び範囲から逸脱しない限り、各種の変更及び修飾することができる。本発明は、特許請求の範囲の記載によって限定される。
【符号の説明】
【００５９】
１０１  プロバイオティクス菌株ＧＭ−０８０
１１１  糸粒体
１０３／１０５  情報伝達路
【図１】
0005324557.tif 000002
【図３】
0005324557.tif 000003
【図４】
0005324557.tif 000004
【図６】
0005324557.tif 000005
【図７】
0005324557.tif 000006
【図９】
0005324557.tif 000007
【図１０】
0005324557.tif 000008
【図１２】
0005324557.tif 000009
【図１３】
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【図２】
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【図５】
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【図８】
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【図１１】
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