(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）アルコールの３０〜６０％水溶液、水、酸含有水溶液、酵素含有水溶液、又は酸及び３０〜６０％のアルコールを含有する水溶液である第１の溶剤を用い、コケモモの果実に対して抽出を行って第１の抽出液を得る工程と、
（ｂ）イオン交換樹脂、吸着樹脂、又は限外ろ過膜で前記第１の抽出液を処理する工程と、
（ｃ）処理後の前記第１の抽出液を濃縮し、乾燥して第１の抽出物を得る工程と、
（ｄ）前記第１の溶剤で抽出を行ったコケモモの果実に対して、エチルアセテート、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、ヘキサン、アセトン、メタノール、エタノール、及びその混合物からなる群から選択され、或いはメタノール又はエタノールの７０〜９５％水溶液である第２の溶剤で再抽出を行うことで、第２の抽出液を得る工程と、
（ｅ）ヘキサン、エチルアセテート、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、及びその混合溶剤からなる群から選択される溶離液を用い、カラムクロマトグラフィによって前記第２の抽出液を処理し、レスベラトロールを主成分とするコケモモの第３の抽出液を得る工程と、
（ｆ）前記第３の抽出液を濃縮、乾燥して第２の抽出物を得る工程と、を有するコケモモ抽出物の製造方法。
【請求項２】
前記第１の溶剤は、酸を１〜５質量％の量で含有する、酸含有水溶液又は酸及びアルコールを含有する水溶液であり、
前記抽出を２０〜５０℃で行う請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記酸は、塩酸、硫酸、酢酸、又はクエン酸からなる群より選択される請求項２記載の製造方法。
【請求項４】
前記第１の溶剤は、セルラーゼ及び／又はペクターゼの含有量が０．０５〜０．２質量％である酵素含有水溶液であり、酵素の分解を３０〜６０℃で行う請求項１記載の製造方法。
【請求項５】
前記第１の溶剤は、アルコールの含有量が３０〜９０質量％であるアルコール水溶液であり、
前記抽出を２０〜７０℃で行う請求項１記載の製造方法。
【請求項６】
工程（ａ）後に、前記第１の抽出液の濃度を高める濃縮工程（ｘ）を更に有する請求項５記載の製造方法。
【請求項７】
工程（ｂ）において、前記第１の抽出液に吸着樹脂カラム又はイオン交換樹脂カラムを通過させ、３０〜９５％のメタノール又はエタノールで溶離する請求項１記載の製造方法。
【請求項８】
前記吸着樹脂は、ＨＰ−２０、ＡＤＳ−Ｆ８、ＨＰＤ−５００、ＹＷＤ−０６、ＳＰ８５０、ＨＰ−３０、Ｓ−８６１、Ｄ−１０１、ＤＡ−２０１、ＧＤＸ−１０５、ＭＤ０５２７１、ＣＡＤ−４０、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−６から選択され、前記イオン交換樹脂は、ＣＨＰＡ−２０、ＷＫ１、ＣＫ０８Ｓ、ＳＰ−５５０Ｃ、ＤＥＡＥ−６５０Ｓ、ＳＰ−５ＰＷから選択される請求項７記載の製造方法。
【請求項９】
工程（ｂ）において、分画分子量が２０００の限外ろ過膜でろ過を行い、分画された溶液を回収して次の工程を行う請求項１記載の製造方法。
【請求項１０】
前記第２の溶剤は、エチルアセテート、ヘキサン、メタノール、エタノール、及びその混合物からなる群から選択される請求項１記載の製造方法。
【請求項１１】
工程（ｄ）及び（ｅ）の間に、前記第２の抽出液の濃度を高める工程（ｙ）を更に有する請求項１記載の製造方法。
【請求項１２】
工程（ｅ）において、前記カラムクロマトグラフィはシリカゲルカラムクロマトグラフィであり、ヘキサン及びエチルアセテートが混合された溶離剤を用いて勾配溶離を行う請求項１記載の製造方法。
【請求項１３】
請求項１から１２いずれか記載の第１抽出物及び第２抽出物を、任意の割合で混合するコケモモ抽出物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コケモモ抽出物並びにその製造方法及び使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
コケモモ［（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｖｉｔｉｓ−ｉｄａｅａ  Ｌ）、別名：唐アズキ、小リンゴ、歯くれ、熊果葉等］は、ツツジ（Ｅｒｉｃａｃｅａｅ）科のコケモモ属（シャシャンボ属）に属し、落葉又は常緑の潅木、又は小潅木の種類である。当初、中国の東北、前ソ連、北朝鮮、アメリカ、北ヨーロッパの高山帯にて生育し、クロマメノキ（ｂｏｇ  ｂｉｌｂｅｒｒｙ）と一緒に生育する常緑の小潅木である。高さは１５〜３０ｃｍであり、葉が常緑の草本であり、耐寒性が強く、耐乾性に優れる。コケモモの果実は、明るい赤色を有し、渋くて酸っぱい味を呈するが、栄養に富んでいるため、高い利用価値を秘めている。
【０００３】
特許文献１には、コケモモの葉及び果実の抽出物、他の補助材料により美容混合物を製造する方法が開示されている。この文献では、アルコール水溶液を用いてコケモモの葉及び果実に抽出を行い、得られた抽出液を濃縮し、樹脂処理を経てコケモモ抽出物を得る。
【特許文献１】特許第３８２６６９８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、この文献に開示されている方法で得られる抽出物には、（ｉ）コケモモの葉及び果実の併用原料を用いるため、得られる製品中の成分が複雑で、応用範囲が限られること、（ｉｉ）製品が外用剤としてのみ使用されること、（ｉｉｉ）コケモモの有効成分を充分に抽出できず資源を浪費すること、といった問題がある。
【０００５】
そこで、本発明は、安全で直接食用可能なコケモモ抽出物を得るために、コケモモの果実単独の原料を用いて人の健康に有益である有用成分を抽出できる方法を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明は、コケモモの果実から有用成分をより充分に抽出できる方法を提供することを別の目的とする。
【０００７】
これにより、本発明は、コケモモの果実から得られる食用可能な混合物を提供することを更に別の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、コケモモに対する研究を経て、コケモモの果実に、アントシアニン、プロアントシアニン、及びレスベラトロールが豊富に含まれていることを発見した。アントシアニンは、アントシアンとも称され、フラボン類の化合物に属する。毛細血管の柔軟性を向上し、血管の拡張及び伸縮性を促進するとともに、血管の破裂を防止できる。また、血管を硬化するフリーラジカルを除去して動脈硬化を予防することもできる。目及び体の他の組織内の毛細血管を増強して、各臓器の血管病変を予防できる。現在、既に食品及び薬品に用いられており、食品に応用された例としては、ペラルゴニジン、シアニジン、デルフィニジン、ペオニジン、ペチュニジン、マルビジン、又はこれらのアントシアニジンとグルコース、ガラクトース、アラビノースの各々と結合して形成されたアントシアニンが挙げられる。アントシアニンは、モノグリコシド及びジグリコシドである場合が多い。
【０００９】
プロアントシアニンは、植物の縮合タンニンであり、酸性媒体中で加熱するとアントシアニンが得られるため、プロアントシアニンという名前が付けられた。プロアントシアニンは、コレステロール及び低密度リポタンパク質のレベルを有効に降下させ、血栓の形成や心脳血管病の発生を予防できる。また、フリーラジカルの酸化傷害を受けないよう細胞ＤＮＡを保護することで、癌を誘発する遺伝子変異を予防できる。
【００１０】
レスベラトロール及びレスベラトロールグリコシドは、活性ポリフェノール物質であり、漢方薬である虎杖（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ  ｃｕｓｐｉｄａｔｕｍ、イタドリ）に豊富に含有される。高い抗酸化機能を有するとともに、レスベラトロール及びレスベラトロールグリコシドは、癌への変化過程において細胞及び組織が変異する三つの主要段階（誘導、開始、発展）のいずれに対しても抑制作用を有するので、組織の癌化及び腫瘍の発生を抑制し治療する物質として、最も可能性が高い物質である。最近の研究によると、レスベラトロールは、化学的な損傷を受けないように、細胞のミトコンドリアＤＮＡ（デオキシリボ核酸）を保護することで老衰防止の役割を果たしていることが発表されている。その他、単純生命体の寿命に関する試験において、レスベラトロールと、カロリー摂取を制限することとの両方が寿命を延長する共同メカニズムが研究され、レスベラトロールは、Ｓｉｒ２酵素を活性化することで酵母の寿命を約７０％延長することが分かった。よって、レスベラトロールは、Ｓｉｒ２酵素に対する活性化作用を介して、多段階及び多様な方法で生命体の健康に影響を与える。
【００１１】
本発明の第１の態様で提供されるコケモモ抽出物の製造方法は、以下の工程を含む。
（ａ）アルコール、アルコール水溶液、水、酸含有水溶液、酵素含有水溶液、又は酸及びアルコールを含有する水溶液である第１の溶剤を用い、コケモモの果実に対して抽出を行って第１の抽出液を得る。
（ｂ）イオン交換樹脂カラム、吸着樹脂カラム、又は限外ろ過膜で第１の抽出液を処理する。
（ｃ）処理後の第１の抽出液を濃縮、乾燥を経て、第１の抽出物を得る。
（ｄ）第１の溶剤で抽出を行ったコケモモの果実に対して、エチルアセテート、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、ヘキサン、アセトン、メタノール、エタノール、及びその混合物からなる群から選択され、或いはメタノール又はエタノールの７０〜９５％水溶液である第２の溶剤で再抽出を行うことで、第２の抽出液を得る。
（ｅ）ヘキサン、エチルアセテート、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、及びその混合溶剤からなる群から選択される溶離液を用い、カラムクロマトグラフィによって前記第２の抽出液を処理し、レスベラトロールを主成分とするコケモモの第３の抽出液を得る。
（ｆ）第３の抽出液を濃縮、乾燥して第２の抽出物を得る。
【００１２】
本発明の具体的な実施形態において、第１の溶剤は、酸の含有量が１〜５質量％である酸含有水溶液又は酸及びアルコールを含有する水溶液で、その抽出は２０〜５０℃で行う。この酸は、塩酸、硫酸、酢酸、及びクエン酸から選択できる。
【００１３】
他の形態として、第１の溶剤は、セルラーゼ又はペクターゼを０．０５〜０．２質量％含有する酵素含有水溶液であり、酵素の分解は３０〜６０℃で行う。
【００１４】
他の形態として、第１の溶剤は、アルコールの含有量が３０〜９０質量％のアルコール水溶液で、抽出は２０〜７０℃で行う。
【００１５】
本発明において、使用可能な吸着樹脂は、ＨＰ−２０、ＡＤＳ−Ｆ８、ＨＰＤ−５００、ＹＷＤ−０６、ＳＰ８５０、ＨＰ−３０、Ｓ−８６１、Ｄ−１０１、ＤＡ−２０１、ＧＤＸ−１０５、ＭＤ０５２７１、ＣＡＤ−４０、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−６から選択できる。また、使用可能なイオン交換樹脂は、ＣＨＰＡ−２０、ＷＫ１、ＣＫ０８Ｓ、ＳＰ−５５０Ｃ、ＤＥＡＥ−６５０Ｓ、ＳＰ−５ＰＷから選択できる。
【００１６】
本発明では、第１の抽出物と第２の抽出物を任意の割合で混合して、第３の抽出物を得る工程を含む。
【００１７】
本発明の第２の態様において、上記の方法で得られる、アントシアニンと、プロアントシアニンと、レスベラトロールとを含有するコケモモ抽出物が提供される。
【００１８】
本発明の第３の態様において、５〜３５質量％のアントシアニンと、２０〜９５質量％のプロアントシアニンと、５質量％未満のレスベラトロールとを含み、好ましくは、５〜２０質量％のアントシアニンと、５０〜９５質量％のプロアントシアニンと、２質量％未満のレスベラトロールとを含むコケモモの果実の抽出物が提供される。
【００１９】
本発明の第４の態様において、６０〜９８質量％のレスベラトロールを含むコケモモの果実の抽出物が提供される。
【００２０】
本発明は、フケ防止、ダイエット、酸素フリーラジカルの除去、心脳血管病気の予防、血栓形成の抑制及び顔面の美容に用いられる、上記のいずれの抽出物を含有する経口用組成物に関する。
【００２１】
本発明は、上記のいずれかの抽出物を含有する経口用組成物の、フケ防止、ダイエット、酸素フリーラジカルの除去、心脳血管病気の予防、血栓形成の抑制及び顔面の美容等における使用にも関する。
【００２２】
本発明は、コケモモの果実のみを原料としたので、得られる抽出物を直接内服でき、抽出物の生物学的利用能を向上できる。また、限外ろ過膜等のろ過を行ったので、製品に高含有量のアントシアニンとプロアントシアニンを含ませることができ、薬用効果を向上できる。更に本発明は、レスベラトロールの含有量が高いコケモモ抽出物及びその製造方法を提供し、レスベラトロールの新しい提供ルートを開発した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
専門用語「アントシアニン」は配糖体で、植物の花、果実、葉、茎等を、青色、紫、赤等の顕著な色に呈させるクロメン誘導体を指し、そのアグリコンはアントシアニジンと呼ばれる。一般的なアントシアニジンとしては、ペラルゴニジン（ｐｅｌａｒｇｏｎｉｄｉｎ）、シアニジン（ｃｙａｎｉｄｉｎ）、デルフィニジン（ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ）、ペオニジン（ｐｅｏｎｉｄｉｎ）、ペチュニジン（ｐｅｔｕｎｎｉｄｉｎ）、マルビジン  （ｍａｌｖｉｄｉｎ）、ヒレアティン（ｈｉｒｅａｔｉｎ）、ジェスネリン（ｇｅｓｎｅｒｉｎ）が挙げられる。
【００２４】
専門用語「プロアントシアニン」は、植物に存在し、酸性媒体中で加熱されると、アントシアニンを生成するポリフェノール化合物を指す。
【００２５】
本発明において、異なる抽出溶剤を用い、複数の段階に分けてコケモモの果実から有益の成分を抽出する。具体的には、まず、第１の溶剤を用いてコケモモの果実からアントシアニン及びプロアントシアニンを豊富に含有する第１の抽出物を得た後、第１の溶剤での抽出後の果実から第２の溶剤を用いてレスベラトロールを豊富に含有する第２の抽出物を得る。その後、第１の抽出物及び第２の抽出物を任意の割合で混合し、第３の抽出物を得る。
【００２６】
更に具体的には、本発明の第１の発明に係る方法は、以下の工程を含む。
（ａ）アルコール、アルコール水溶液、水、酸含有水溶液、酵素含有水溶液、又は酸及びアルコールを含有する水溶液である第１の溶剤を用い、コケモモの果実に対して抽出を行って第１の抽出液を得る。
（ｂ）イオン交換樹脂、吸着樹脂、又は限外ろ過膜で第１の抽出液を処理する。
（ｃ）処理後の前記第１の抽出液を濃縮し、乾燥して第１の抽出物を得る。
（ｄ）第１の溶剤で抽出を行ったコケモモの果実に対して、エチルアセテート、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、ヘキサン、アセトン、メタノール、エタノール、及びその混合物からなる群から選択され、或いはメタノール又はエタノールの７０〜９５％水溶液、或いはセルラーゼ又はペクターゼを０．０１〜０．３％含有する酵素含有水溶液である第２の溶剤で再抽出を行うことで、第２の抽出液を得る。
（ｅ）ヘキサン、エチルアセテート、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、及びその混合溶剤からなる群から選択される溶離液を用い、カラムクロマトグラフィによって前記第２の抽出液を処理し、レスベラトロールを主成分とするコケモモの第３の抽出液を得る。
（ｆ）第３の抽出液を濃縮し、乾燥して第２の抽出物を得る。
【００２７】
本発明の具体的な実施形態において、第１の溶剤はアルコール水溶液である。好ましくは、メタノール又はエタノールの水溶液である。抽出は、２０〜７０℃で行う。抽出を行う時間は、温度に応じて適宜設定でき、高温では短く、低温では長くする。しかし、生産効率を考慮して、抽出時間は、１６時間以内、好ましくは１０時間以内、更に好ましくは６時間以内、例えば１又は２時間に設定する。また、例えば、２〜４回繰り返す等、上記の抽出操作を複数回繰り返すことができる。通常、抽出操作において、例えば、高温及び長い抽出時間である場合、繰返し回数を減らし又は一回のみ抽出する等、抽出時間、温度、抽出回数を包括的に考慮すべきである。通常、アルコールの含有量が３０〜７０質量％のアルコール水溶液が適切である。本発明の具体的な実施形態では、３〜５倍量の６０％エタノール水溶液にて、５０〜６０℃で９０分の抽出を２回行う。
【００２８】
本発明の他の実施形態において、第１の溶剤は水である。この場合、１〜５倍量の水を使用して、３０〜８０℃まで、好ましくは３０〜６０℃まで、更に好ましくは４０〜５０℃まで加熱する。抽出時間は、温度に応じて適宜設定でき、高温では短くする必要がある。しかし、アントシアニン及びプロアントシアニンは、熱水中での安定性が悪いので、抽出を行う温度が高すぎるのは好ましくない。その他、上記の操作を複数回繰り返すことができる。本発明の具体的な実施形態では、抽出は、３〜５倍量の水を用い、６０〜８０℃で１６時間を２回行った。
【００２９】
本発明の好ましい実施形態において、第１の溶剤は酸を少量含有する水溶液である。この場合、抽出は常温（２０〜３０℃）で行い、又は、例えば３０〜８０℃、好ましくは３０〜６０℃まで加熱したうえで行うこともできる。更に好ましくは、常温で行う。本発明において使用される酸は、無機酸又は有機酸であってよく、ここでの「少量」とは、酸の含有量が１０質量％、好ましくは５質量％、更に好ましくは３ｖ％以下であることを指す。ここで使用する酸としては、特に限定されないが、好ましくは安価である塩酸及び硫酸を使用する。他の好ましい酸としては、酢酸、シュウ酸、マロン酸、ブタン二酸、クエン酸が挙げられる。本発明の具体的な実施形態では、３〜５倍量の水、ｐＨ１〜２、４０〜５０℃、６０〜９０分の抽出を１〜２回繰り返す。本発明者らは、アルコール水溶液及び湯に比べ、第１の溶液として酸含有水溶液を用いることが好ましく、第１の抽出物の収率も前者より高いことを発見した。
【００３０】
本発明の好ましい実施形態において、酵素法によってアントシアニン及びプロアントシアニン成分を抽出し、酵素分解条件は０．０５〜０．２質量％のセルラーゼ又はペクトース酵素を含有する水溶剤で、酵素分解温度は３０〜６０℃である。本発明者らは、アルコール水溶液及び湯に比べ、かかる第１の溶液を用いる場合の第１の抽出物の収率が高いことを発見した。
【００３１】
本発明において、アルコール水溶液を抽出剤とした場合、抽出工程によって得た溶液の濃度を高めて、一部の溶剤を除去する。酸の水溶液又は酵素の水溶液を抽出剤とした場合、濃縮せず、抽出溶液を吸着樹脂カラム又はイオン交換樹脂カラムに直接通し、３０〜９５％エタノールで溶離する。本発明において、使用可能な吸着樹脂の種類としては、ＨＰ−２０、ＡＤＳ−Ｆ８、ＨＰＤ−５００、ＹＷＤ−０６、ＳＰ８５０、ＨＰ−３０、Ｓ−８６１、Ｄ−１０１、ＤＡ−２０１、ＧＤＸ−１０５、ＭＤ０５２７１、ＣＡＤ−４０、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−６等が挙げられるが、これらに限定されない。使用可能なイオン交換樹脂の種類としては、ＣＨＰＡ−２０、ＷＫ１、ＣＫ０８Ｓ、ＳＰ−５５０Ｃ、ＤＥＡＥ−６５０Ｓ、ＳＰ−５ＰＷが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
本発明では、膜ろ過法でアントシアニン及びプロアントシアニンを抽出できる。その方法は、コケモモ果実の抽出液に粗ろ過又はセラミック膜のろ過を行うことで透明の溶液を得て、得られた溶液を分画分子量が２０００の限外ろ過膜にろ過する。本発明者らは、この方法を試す際、ろ液からアントシアニンと一部のプロアントシアニンが得られると考えたが、意外にもろ液からはこれらの成分を検知できなかった。分析によると、それらは限外ろ過膜により全て分画され、従来技術とは全く異なっていた。このような発見は本発明の実施について極めて有利である。限外ろ過法によって抽出したアントシアニン及びプロアントシアニンをすべて回収でき、収率を更に向上できるからである。また、上記の樹脂浄化方法に比べ、この浄化方法は、限外ろ過に分画される液体濃度がかなり高いので、大規模な濃縮を行う必要なく、直ちに乾燥操作を行うことができる点で好ましい。
【００３３】
また、第１の粗抽出物に限外ろ過膜の処理を行った後、樹脂カラムを用いて精製を行い、乾燥することでコケモモの第１の抽出物を得る、又は第１の粗抽出物に樹脂カラムを用いて精製を行った後、限外ろ過膜の処理を経て乾燥することでコケモモの第１の抽出物を得る等、吸着樹脂方法又はイオン交換樹脂方法を組み合せて精製を行ってもよい。
【００３４】
第１の溶剤により抽出された原料に、第１の溶剤より極性が小さい第２の溶剤を用いて二回目の抽出を行うことによって、コケモモの第２の抽出物を得る。適切な第２の溶剤は、エチルアセテート、フェン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、ヘキサン、アセトン、メタノール、エタノール、又はその混合物から選択され、或いは、メタノール又はエタノールの７０〜９５％水溶液であり、適切な抽出温度は６０〜１００℃、好ましくは沸騰温度である。
【００３５】
具体的実施形態では、エチルアセテートを使用し、他の具体的実施形態では、エタノールの７０〜９５％水溶液を使用し、更に他の具体的実施形態では、ヘキサンを使用する。エタノールの７０〜９５％水溶液を用いて抽出する場合に比べ、ヘキサンを用いて抽出する場合には、収率がある程度低下するが、抽出物におけるレスベラトロールの含有量は上昇する。
【００３６】
本発明において、カラムクロマトグラフィ法によってコケモモの第２の抽出物を分離する。カラムクロマトグラフィ材料としては、吸着樹脂又はイオン交換樹脂及びシリカを用いることができるが、シリカが好ましい。用いられる溶液は、ヘキサン、エチルアセテート、アセトン、クロロホルム、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、又はその混合溶剤であってよく、好ましくは、ヘキサン、エチルアセテート、メタノール、エタノール、又はその混合溶剤を採用する。ヘキサン、エチルアセテート、メタノール、及びエタノールからなる群より選ばれる２種以上の溶剤を、適宜の割合で混合した混合溶剤を用いて勾配溶離を行うことが好ましい。例えば、ヘキサン：メタノールの割合が１：０、１：０．３、１：０．５、１：０．８である混合溶剤を用いて溶離を行うことができる。第２の溶剤を少なくとも一部除去できるように、上記のカラムクロマトグラフィ法の前に、第２の抽出液を濃縮することが好ましい。
【００３７】
通常、精製工程後に乾燥工程が必要になり、例えば真空乾燥方法を行う。
【００３８】
第１の抽出物及び第２の抽出物を任意の割合で混合し、コケモモの第３の抽出物を得る。製品の用途に応じて第１及び第２の抽出物の割合を決定する。例えば、抗酸化作用を目的とする製品の場合、第１の抽出物を多量に含み又は第２の抽出物を含まず、フケ防止を目的とする製品の場合、第１の抽出物を主成分とし、第２の抽出物の割合を適当に高めればよい。例えば、第１の抽出物：第２の抽出物は、１０：１であってよい。ダイエットを目的とする製品の場合、組成物に第１の抽出物及び第２の抽出物を略等質量ずつ含ませればよい。
【００３９】
本発明に係る方法によって得られる第１の抽出物は、５〜３５質量％のアントシアニンと、２０〜９５質量％のプロアントシアニンと、５質量％未満のレスベラトロールとを含有する。
【００４０】
本発明の好ましい方法によって得られる第１の抽出物は、５〜２０質量％のアントシアニンと、５０〜９５質量％のプロアントシアニンと、２質量％未満のレスベラトロールとを含有する。本発明に係る方法によって得られる第１の抽出物において、アントシアニンは、シアニジン−３−ガラクトース、シアニジン−３−グルコースとシアニジン−３−アラビノースである。プロシアニンは、主に、プロシアニンＢ１、プロシアニンＢ２、及びプロシアニンＣ１を含む。
【００４１】
本発明に係る方法によって得られる第２の抽出物は、６０〜９８質量％のレスベラトロールを含有する。
【００４２】
本発明では、コケモモの果実における異なる目標成分に対して、異なる溶剤を用いて複数段階に分けて抽出を行っているので、製品の収率を向上できるとともに、製品における有効成分を更に明確化できる。また、当該方法によって得られる製品は直接内服できるとともに、いかなる毒・副作用も有しない。しかも、本発明では、酸含有水溶液及び酵素含有水溶液を用いて抽出を行うので、抽出操作が更に容易で、コストを更に低下し、収率を更に向上できる。また、樹脂精製法及び限外ろ過膜精製法を用いているので、有効成分の回収を更に明確化できる。
【００４３】
＜分析＞
本発明において、コケモモの第１及び第２の抽出物、並びにその組成物の定性分析は、ＨＰＬＣで行う。
【００４４】
第１の抽出物に対して採用するＨＰＬＣの条件は、
条件１
クロマトカラム            ＯＤＳ−Ｃ１８
移動相                    Ａ相、水：ギ酸＝９０：１０
Ｂ相、水：アセトニトリル：メタノール＝
４５：２２．５：２２．５
測定波長                  ５４０ｎｍ
又は条件２
クロマトカラム            ＯＤＳ−Ｃ１８
移動相                    Ａ相、アセトニトリル
Ｂ相、リン酸：水＝６７：３１
測定波長                  ２８０ｎｍ
を採用する。
第２の抽出物に対して採用するＨＰＬＣの条件は、
条件３
クロマトカラム              ＯＤＳ−Ｃ１８
移動相                    Ａ相、アセトニトリル
Ｂ層、水：ギ酸＝２７０：１
測定波長                  ３０３ｎｍ
である。
【００４５】
その他、本発明において、ＨＰＬＣ法によってアントシアニン及びレスベラトロールの定量分析を行い、プロアントシアニンの定量分析は、葡萄種子のプロアントシアニンの測定方法である酒石酸ナトリウムカリウム法によって行う。即ち、ポリフェノール及び酒石酸鉄をｐＨ＝７．５のリン酸塩緩衝液の中で特性反応させて、最大吸収波長５４０ｎｍで反応物を定量してポリフェノールの総量を得て、この総量からアントシアニンの含有量を除きプロアントシアニンの量を得る。
【００４６】
＜使用＞
本発明において得られるコケモモ抽出物は、主にアントシアニン及びプロアントシアニンからなり、アントシアニンは主にシアニジン−３−ガラクトシドである。アントシアニンは酸化を防止する作用を持つ。プロアントシアニンは、酸性の水溶液に加熱処理すると、アントシアニンに分解されるとともに、コレステロール及び低密度リポタンパク質のレベルを有効に降下させ、血栓が形成されて心脳血管の病気が発生することを予防できる。また、フリーラジカルの酸化損害を受けないよう細胞ＤＮＡを保護することで、癌を誘発する遺伝子変異を予防できる。
【００４７】
コケモモ抽出物は、レスベラトロール及びレスベラトロールグリコシドも含有するところ、レスベラトロール及びレスベラトロールグリコシドは、活性なポリフェノール物質であり、高い抗酸化機能を有する他、癌に変化する過程における細胞及び組織の変異の三つの主要段階（誘導、開始、発展）のいずれに対しても抑制作用を持つので、組織の癌化及び腫瘍の発生を抑制・治療する物質として、最も高い可能性を持つ。最近の研究によると、レスベラトロールは、細胞のミトコンドリアＤＮＡ（デオキシリボ核酸）を化学的な損傷を受けないよう保護するで、老衰防止機能を果たすことが発表されている。その他、近日、単純生命体の寿命に関する試験において、レスベラトロール及び摂取カロリーを制限することの両方の寿命延長の共同メカニズムが研究され、レスベラトロールが、Ｓｉｒ２酵素を活性化することで酵母の寿命を約７０％延長することが分かった。このように、レスベラトロールは、Ｓｉｒ２酵素に対する活性化作用を介して、多段階、多様な方法で生命体の健康に影響を与える。
【００４８】
本発明の範囲は、コケモモ抽出物の抗酸化活性及び老衰防止、ダイエット、美容、心脳血管病気等の治療における使用も包含する。
【００４９】
ｏ‐フェナントロリンＦｅ２＋酸化法によって、ヒドロキシフリーラジカル及びコケモモ抽出物のヒドロキシに対する消去作用を測定した結果、コケモモ抽出物はヒドロキシフリーラジカルに対する消去作用を持ち、この消去能力は薬物濃度及び顕著な量効関係を持ち、消去率は濃度に明らかに正に相関し、ＩＣ５０は同等な実験条件でのアスコルビン酸（Ｖｃ）のＩＣ５０よりはるかに小さいことが発見された。これにより、コケモモ抽出物のヒドロキシフリーラジカルに対する消去能力はアスコルビン酸より強く、コケモモ抽出物は明らかな体外抗酸化作用を有することが分かった。
【００５０】
フリーラジカルは、人間の老衰及び多種の病気の発生及び発展において非常に重要な作用を果たす。コケモモ抽出物は良好な抗酸化作用を有するので、本発明に係る方法によって得られるコケモモ抽出物が老衰防止、ダイエット、美白、しわ防止と心脳血管病気の治療において有効であることは予見できる。
【００５１】
生物体の細胞代謝過程では、次々とフリーラジカルが生成され、例えば、紫外線、化学物質等の外部環境の各種の刺激要因も生命体におけるフリーラジカルの生成を促進する。これらのフリーラジカルが過剰に蓄積されると、例えばＤＮＡ、タンパク質等の生物高分子物質を損傷して、生物生命体の老衰を招く。コケモモ抽出物には、アントシアニン、プロアントシアニン及びレスベラトロール等の抗酸化物質が豊富に含まれており、フリーラジカルを有効に消去できるので、人間の老衰防止の作用を果たす。実験によると、コケモモ抽出物で飼育した老年マウスの血液における過酸化脂質分解産物であるＭＤＡの含有量は明らかに低下すると同時に、血清中のグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＳＨ−Ｐｘ）の活性が明らかに向上する。これにより、コケモモ抽出物は、抗酸化作用を介して老衰防止の作用を果たすことができることが分かる。
【００５２】
高脂肪飼料による栄養性肥満のネズミモデルにコケモモ抽出物を摂食させた実験によると、肥満なネズミの体重の増加は鈍化したが、動物の食物の摂取量は殆ど変化していなかった。また、睾丸及び腎臓周囲の脂肪量は明らかに減少した。これにより、コケモモ抽出物は、摂取量の明らかな抑制作用は有しないが、体内脂肪の蓄積を抑制できるので、健康的ダイエット食品として利用できることが分かる。
【００５３】
台湾学者（国植等、国外医薬・植物薬分冊、１９９６、１１（５）：１９６〜２０４）は、研究を経て、プロアントシアニンは、血栓素ＴＸＡ２を抑制することで血小板の凝集を抑制できることを発見した。由倍安等、中国心脳血管雑誌、２００３、８（６）：３８３〜３８５、実験によれば、葡萄種子のプロアントシアニンは、実験性の高血脂病のイエウサギの血脂レベルを明らかに変化することはできないが、抗酸化作用によって血漿の低密度リポタンパク質の酸化を抑制できるので、動脈の粥状硬化の予防及び治療に重要な役割を果たす。研究によると、葡萄種子におけるプロアントシアニンは、イエウサギの離体の大動脈を弛緩する役割を有し、分析によると、このような作用は、内皮細胞のＮＯ釈放を促進することと関連する（張団笑等、中草薬、２００６、３７（１）：８７〜８９）。コケモモ抽出物には、豊富なアントシアニンとプロアントシアニン、及び少量のレスベラトロールが含まれるので、良好な血栓形成の抑制、血脂の降下と血管の弛緩作用を有し、高血圧、動脈の粥状硬化、血栓性病気等を予防・治療する保健品と機能性食品に用いられる。
【００５４】
その他、コケモモの抗酸化活性を、美容系製品の開発に用いることができる。皮膚は、結合組織に属し、その中に含まれるコラーゲンと弾性タンパク質は、皮膚の全般構造に重要な役割を果たす。コラーゲンの適当な架橋は皮膚の完全性を維持できるが、体内のフリーラジカルの酸化は過度の架橋を招き、皮膚においてシワや嚢胞等を生じる。アントシアニン、プロアントシアニンは、コラーゲンを適度に架橋させ、フリーラジカルを有効に消去することで、柔軟で滑らかな皮膚を維持できる。また、弾性タンパク質は皮膚に弾性を保たせるので、弾性タンパク質が乏しい皮膚は、弛んで、老けたように見える。弾性タンパク質は、フリーラジカル又は弾性タンパク質酵素により分解される。アントシアニン、プロアントシアニンはフリーラジカルを消去し、弾性タンパク質酵素の生成を防止するとともに、その活性を抑制することで、皮膚の健康状況を改善する。紫外線照射により皮膚が光老化したモデルマウスの皮膚中のヒドロキシプロリンの含有量及びＳＯＤ活性の測定から分かるように、コケモモ抽出物を摂食させたマウスの皮膚中のヒドロキシプロリンの含有量及びＳＯＤ活性は、いずれもモデル動物より高い。これにより、コケモモ抽出物は良好な抗酸化作用を介して皮膚のコラーゲンを保持することで、シワ防止及び美容の役割を果たすことが分かる。
【実施例１】
【００５５】
コケモモの第１の抽出物の製造
１０００ｇのコケモモを原料とし、ｐＨ値が１である塩酸水溶液を溶剤として２０〜４０℃で抽出し、抽出液を樹脂カラムに通した。樹脂としてはＨＰ２０型樹脂を使用し、９５％のエタノールで製品を溶離した。アルコールにより溶離された液を収集し、５０℃で真空濃縮した後、噴霧乾燥して、約８ｇのコケモモ抽出物を得た。得られたコケモモ抽出物は、３６．８％のアントシアニンと、５２．７％のプロアントシアニンと、３．２％のレスベラトロールとを含んでいた。
【実施例２】
【００５６】
コケモモの第１の抽出物の製造
１０００ｇのコケモモを原料とし、５倍量の水を溶剤として、６０〜８０℃で１６時間、２回抽出した。抽出液を樹脂カラムに通した。樹脂としてはＣＨＰＡ２０イオン交換樹脂を使用した。６０％のエタノールで製品を溶離した。アルコールにより溶離された液を収集し、濃縮した後、噴霧乾燥して、約６．５ｇのコケモモ抽出物を得た。得られたコケモモ抽出物は、１９．６％のアントシアニンと、７２．０％のプロアントシアニンと、１．４％のレスベラトロールとを含んでいた。
【実施例３】
【００５７】
コケモモの第１の抽出物の製造
１０００ｇのコケモモを原料とし、６０％のエタノール水溶液を溶剤として、５０〜６０℃で９０分抽出し、２回抽出した。抽出液を濃縮してエタノールを除去し、水を加えて希釈した後、樹脂カラムに通した。樹脂としてはＨＰ２０マクロポーラス型樹脂を使用した。９５％のエタノールで製品を溶離した。アルコールにより溶離された液を収集し、真空濃縮した後、噴霧乾燥して、約７．０ｇのコケモモ抽出物を得た。得られたコケモモ抽出物は、１４．５％のアントシアニンと、６７．７％のプロアントシアニンと、１．５％のレスベラトロールとを含んでいた。
【実施例４】
【００５８】
コケモモの第１の抽出物の製造
１０００ｇのコケモモを原料とし、ｐＨ３である３０％のエタノール水溶液を溶剤として抽出し、抽出液を樹脂カラムに通した。樹脂としてはＨＰ２０型樹脂を使用し、９５％のエタノールで製品を溶離した。アルコールにより溶離された液を収集し、濃縮した後、噴霧乾燥して、約７．２ｇのコケモモ抽出物を得た。得られたコケモモ抽出物は、２６．８％のアントシアニンと、６８．９％のプロアントシアニンと、０．７％のレスベラトロールと、を含んでいた。
【実施例５】
【００５９】
コケモモの第１の抽出物の製造
１０００ｇのコケモモを３倍量の水中に浸し、０．０８％のペクトース酵素の水溶液を加え、４０℃の恒温ウォーターバスに置いて２時間保温し、ろ過して抽出液を得た。抽出液に吸着樹脂の処理を行って、７．６グラムのコケモモ抽出物を得た。得られたコケモモ抽出物は、３４．８％のアントシアニンと、５３．９％のプロアントシアニンと、１．２％のレスベラトロールとを含んでいた。
【実施例６】
【００６０】
コケモモの第１の抽出物の製造
１０００ｇのコケモモを３倍量の水中に浸し、０．１％のセルラーゼを加えて混合し、４０℃の恒温水浴中に置いて２時間保温し、ろ過して抽出液を得た。抽出液に限外ろ過膜のろ過（分子量２０００）を行った。膜ろ過後の濃縮液にＣＨＰＡ２０イオン交換樹脂を介して精製処理を行い、３０％のエタノールで製品を溶離し、濃縮した後、噴霧乾燥して、７．４ｇのコケモモ抽出物を得た。得られたコケモモ抽出物は、２５．２％のアントシアニンと、６８．２％のプロアントシアニンと、０．５％のレスベラトロールとを含んでいた。
【実施例７】
【００６１】
コケモモの第１の抽出物の製造
１０００ｇのコケモモを純水の中に浸漬して抽出し、抽出液にセラミック膜のろ過（分子量１５万）を行った。膜ろ過後の透析液に再び限外ろ過膜のろ過（分子量２０００）を行った。濃縮液を噴霧乾燥して、１５．９ｇのコケモモ抽出物を得た。得られたコケモモ抽出物は、５．２％のアントシアニンと、２２．３％のプロアントシアニンと、０．５％のレスベラトロールとを含んでいた。図１に、当該実施例の製品を例に、上記条件１のクロマト条件での第１の抽出物の液相クロマトグラムを示す。
【実施例８】
【００６２】
コケモモの第２の抽出物の製造
実施例１にて抽出された果実原料（２００ｇ）を原料とし、光を避けた窒素雰囲気において、エチルアセテートで抽出して、９．８ｇの淡黄色のペーストを得る。このペーストにシリカゲルカラムクロマトグラフィを行って、ヘキサンで不純物を溶離した後、ヘキサンとエチルアセテートの混合溶剤で勾配溶離を行って、ＴＬＣ分析方法でモニターする。レスベラトロールを濃集した成分を収集し、レスベラトロールの含有量が８０％であるレスベラトロールの粗品を得る。エタノールで当該粗品を再結晶して、１．８ｇのレスベラトロール結晶を得る。得られたコケモモの第２の抽出物におけるレスベラトロールの含有量は９８％である。
【実施例９】
【００６３】
コケモモの第２の抽出物の製造
実施例１にて抽出された果実原料（２００ｇ）を原料とし、遮光した窒素雰囲気において、８００ｍＬのエタノール７０〜９５％水溶液で抽出して、淡黄色のペーストを得た。このペーストにシリカゲルカラムクロマトグラフィを行い、ヘキサンで不純物を溶離した後、ヘキサン及びエチルアセテートの混合溶剤で勾配溶離を行って、ＴＬＣ分析法でモニターした。レスベラトロールを濃集した成分を収集し、レスベラトロールの含有量が５０％であるレスベラトロールの粗品を得た。エタノールで当該粗品を再結晶して３．１ｇのレスベラトロールの結晶を得た。得られたコケモモの第２の抽出物におけるレスベラトロールの含有量は６５％であった。図２に、実施例の製品を例として第２の抽出物の液相クロマトグラムを示す。
【実施例１０】
【００６４】
コケモモの第２の抽出物の製造
実施例１にて抽出された果実原料（２００ｇ）を原料とし、遮光した窒素雰囲気において、ヘキサンで抽出し、この抽出物に直接にシリカゲルカラムクロマトグラフィを行い、ヘキサンで不純物を溶離した後、ヘキサン及びエチルアセテートの混合溶剤で勾配溶離を行って、ＴＬＣ分析方法でモニターした。レスベラトロールを濃集した成分を収集し、レスベラトロールの含有量が７０％であるレスベラトロールの粗品を得た。エタノールで当該粗品を再結晶して、２．０ｇのレスベラトロールの結晶を得た。得られたコケモモの第２の抽出物におけるレスベラトロールの含有量は８０％であった。
【実施例１１】
【００６５】
コケモモの第２の抽出物の製造
実施例１にて抽出された果実原料（２００ｇ）を原料とし、遮光した窒素雰囲気において、エチルアセテートで抽出し、直接にシリカゲルカラムクロマトグラフィを行い、ヘキサンで不純物を溶離した後、ヘキサン及びメタノールの混合溶剤で勾配溶離を行って（勾配割合が順次１：０、１：０．３、１：０．５、１：０．８である混合溶剤）、ＴＬＣ分析方法でモニターした。レスベラトロールを濃集した成分を収集し、レスベラトロールの含有量が６５％であるレスベラトロールの粗品を得た。エタノールで当該粗品を再結晶して、１．８ｇのレスベラトロールの結晶を得た。得られたコケモモの第２の抽出物におけるレスベラトロールの含有量は７５％であった。
【実施例１２】
【００６６】
コケモモの第３の抽出物の製造
０．８９ｇの第１の抽出物（実施例３）（１４．５％のアントシアニン、６７．７％のプロアントシアニン、１．５％のレスベラトロールを含む）と、０．１１ｇの第２の抽出物（実施例１０）（８０％のレスベラトロールを含む）とを混合し、エタノールで溶解した後、真空濃縮して噴霧乾燥して、１．００ｇの第３の抽出物を得た（１２．９％のアントシアニンと、６０．３％のプロアントシアニンと、１０．１％のレスベラトロールとを含む）。
【００６７】
図３に当該実施例の製品を例として、条件２のクロマト条件での第３の抽出物の液相クロマトグラムを示す。
【実施例１３】
【００６８】
コケモモの第１抽出物の体外酸化防止作用
コケモモの第１の抽出物（実施例７の方法で製造、５．２％のアントシアニン、２２．３％のプロアントシアニン、０．５％のレスベラトロールを含む）を再蒸留水で溶解して、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２５、０．０３１２５、０．０１５６２５、０．００７８１２５ｍｇ／ｍｌ濃度に希釈する。アスコルビン酸を再蒸留水で２、１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２５ｍｇ／ｍｌ濃度に調製する。
【００６９】
ｏ‐フェナントロリンＦｅ２＋酸化法で、ヒドロキシフリーラジカルと、被験薬物がヒドロキシフリーラジカルに対する消去作用とを測定して、コケモモの抗酸化性能を実証した。
【００７０】
総反応体積は４．７ｍｌであった。従って、アスコルビン酸の最終濃度は、０．８５１、０．４２６、０．２１３、０．１０６ｍｇ／ｍｌであり、コケモモ抽出物の最終濃度は、０．１０６、０．０５３、０．０２７、０．０１３ｍｇ／ｍｌである。各群に五つのサンプルを測定し、それぞれについて・ＯＨの消去率を計算し、平均値を算出した。
【００７１】
２  結果、
【表１】
0005324084.tif 000002
【００７２】
本実験において、コケモモ抽出物がヒドロキシフリーラジカルに対する消去作用を測定するとともに、既知の・ＯＨ消去剤であるアスコルビン酸を陽性対照として、当該方法の信頼性を検証した。ＩＣ５０は、０．３０７８ｍｇ／ｍｌである。
【００７３】
【表２】
0005324084.tif 000003
【００７４】
コケモモ抽出物がヒドロキシフリーラジカルを消去するＩＣ５０は、０．１１８１ｍｇ／ｍｌである。
【００７５】
３．結論
本実験の反応体系において、コケモモ抽出物の水溶液は、Ｆｅｎｔｏｎ反応で生成されるヒドロキシフリーラジカルと結合して、ヒドロキシフリーラジカルによるＦｅ２＋の酸化を阻害し、反応体系の吸光度値を測定することによって、ヒドロキシフリーラジカルに対する消去作用を検測する。
【００７６】
コケモモ抽出物は、ヒドロキシフリーラジカルと結合して、Ｆｅ２＋に対するヒドロキシフリーラジカルの酸化を阻害し、反応体系におけるｏ‐フェナントロリン−Ｆｅ２＋結合物の濃度を向上することで、ヒドロキシフリーラジカルを消去する作用を表す。その消去能力と薬物の濃度とは明らかな量効関係を持ち、消去率はその濃度と明らかな正の相関を表す。ＩＣ５０は、０．１１８１ｍｇ／ｍｌである。しかし、同じ実験条件で、アスコルビン酸（Ｖｃ）のＩＣ５０は、０．３０７８ｍｇ／ｍｌである。これにより、ヒドロキシフリーラジカルに対する消去能力はアスコルビン酸より強く、顕著な体外抗酸化作用を持つことが分かった。
【実施例１４】
【００７７】
コケモモ抽出物がマウスの血液中のＭＤＡ含有量とＧＳＨ−Ｐｘ活性に対する影響の評価
６０匹の１０月齢の老年マウス（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＫＭ）を適切に飼育して一週間後、老年対照群と、コケモモの高、中、低剤量群との４群に任意に分ける。高、中、低の投薬群にそれぞれ１６０、８０、４０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗのコケモモの第３の抽出物（実施例１２の方法で製造し、１２．９％のアントシアニン、６０．３％のプロアントシアニン、１０．１％のレスベラトロールを含む）を投薬し、対照群には同じ体積の蒸留水を供与した。８週間後、マウスを採取し、血清中の過酸化脂質の分解産物であるＭＤＡとグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＳＨ−Ｐｘ）とを測定した。この結果、コケモモ抽出物は、老年マウスのＭＤＡの含有量を明らかに降下させ、老年マウスの血清中のＧＳＨ−Ｐｘ活性を明らかに上昇した（表３参照）。
【００７８】
【表３】
0005324084.tif 000004
【実施例１５】
【００７９】
コケモモ抽出物が栄養性肥満ネズミモデルに対する影響の評価
体重が１５０〜２００ｇのＳＤオスネズミ５０匹を基礎飼料で適切に１週間飼育した後、体重によって任意に５つの群、つまり、基礎飼料の対照群、高脂肪飼料の対照群、コケモモ抽出物の高、中、低の３剤量群に分けた。基礎飼料対照群は普通のネズミ飼料で飼育し、他の各群は高脂肪飼料で飼育する。高脂肪飼料の組成は、５５％の普通飼料、１２％の豚脂、５％の蔗糖、８％のミルクパウダー、５％の落花生、１０％の卵、３％ゴマ油、２％の食塩であった。高、中、低の各投薬群にはそれぞれ、１１０、５５、２８ｍｇ／ｋｇ  ｂｗのコケモモ抽出物（実施例１２の方法で製造し、１２．９％のアントシアニンと、６０．３％のプロアントシアニンと、１０．１％のレスベラトロールとを含む）を投薬し、対照群には同じ体積の蒸留水を供与した。毎日、実験動物の体重、食量を測定した。８週間後、動物を殺して、腎臓及び睾丸の周囲の脂肪組織を採取してその質量を測った。
【００８０】
実験過程において、各群のネズミは良好に成長し、死亡した動物は無く、異常の表現も無かった。食量も正常で、明確な異常が無かった。実験前後の各群のネズミの体重及び体内における脂肪の含有量、体脂比（腎臓及び睾丸の周囲の脂肪質量／体重×１００）の変化は、表４の通りである。
【００８１】
【表４】
0005324084.tif 000005
【００８２】
これにより、コケモモ抽出物は、実験動物の飲食を影響しない一方、栄養の過剰による重量超過を明らかに抑制し、組織周囲の脂肪含有量及び体脂比を低下する。これにより、ダイエット機能を備える保健食品に使用できることが分かった。
【実施例１６】
【００８３】
コケモモ抽出物が光老化モデルマウスの皮膚におけるＳＯＤ活性とＨＹＰ（ヒドロキシプロリン）の含有量に対する影響
体重が１５〜２０ｇであるマウス（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ＫＭ）５０匹を、以下の５群：正常対照群、モデル対照群、コケモモ高、中、低の３つの剤量群に分けた。正常対照群以外の各群は、いずれも背部の毛を剃って、毎日ＵＶＡランプで照射し、光老化モデルを作った。高、中、低の各投薬群に、それぞれ１６０、８０、４０ｍｇ／ｋｇ  ｂｗのコケモモの第１の抽出物（実施例１２の方法で製造し、１２．９％のアントシアニンと、６０．３％のプロアントシアニンと、１０．１％のレスベラトロールとを含む）を投与し、対照群には同じ体積の蒸留水を供与した。８週間後、動物を殺して直ちに背部における脱毛箇所の全皮膚層を採取し、生化学的方法で局部のＳＯＤ活性及びＨＹＰの含有量を測定した。この結果は表５の通りである。
【００８４】
【表５】
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【００８５】
これにより、コケモモ抽出物は、光の照射による皮膚の老化過程を抑制し、皮膚におけるＳＯＤの活性及びＨＹＰの含有量を上昇して、皮膚の活力及び弾性を回復でき、美容効果を備える保健品及び化粧品に使用できることが分かった。
【００８６】
本発明は、コケモモの果実のみを原料とするので、得られる抽出物を直接内服でき、抽出物の生物学的利用能を向上でき、限外ろ過膜のろ過法を用いるので、製品にアントシアニン及びプロアントシアニンを多量に含有させて、薬用効果を向上できることを特徴とする。また、本発明は、レスベラトロールの含有量が高いコケモモ抽出物及びその製造方法を提供し、レスベラトロールの新しい提供経路を開発した。
【００８７】
上記の例は、本発明の好ましい実施例にすぎず、本発明を限定するものではない。本発明において、種々の変更及び変形が可能であることは、当業者にとって明らかである。本発明の技術的思想及び技術的範囲内で行う変更、均等物の代替、改善等は、すべて本発明で保護される。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】本発明の一実施例で得られた第１の抽出物のＨＰＬＣチャートである。
【図２】本発明の一実施例で得られた第２の抽出物のＨＰＬＣチャートである。
【図３】本発明の一実施例で得られた第３の抽出物のＨＰＬＣチャートである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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