(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式の化合物：
【化１】
0005191079.tif 000042
ここで、
Ｒ１は、式−Ｓ−Ｒ１’の基であり、ここで、Ｒ１’は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基である；
Ｒ３は、スルファメート基であって、ここで、該スルファメート基が、式（Ｒ４）（Ｒ５）Ｎ−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−を有し、ここで、Ｒ４およびＲ５が独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリールから選択されるか、または、一緒になってアルキレンを表し、ここで、該アルキル、該シクロアルキルもしくは該アルケニルは、必要に応じて１個またはそれ以上のヘテロ原子もしくは基を含む、
化合物。
【請求項２】
Ｒ１’が、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１’が、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４およびＲ５の各々がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
次式：
【化５】
0005191079.tif 000043
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
次式：
【化６】
0005191079.tif 000044
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
薬剤において使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物を含有する組成物。
【請求項９】
薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと混合した、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項１０】
癌の処置の際に使用する医薬の製造における、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
癌を処置するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物を含有する組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、化合物に関する。
【０００２】
特に、本発明は、化合物およびその化合物を含有する製薬組成物に関する。本発明はまた、この化合物または組成物を治療用途で使用することに関する。
【０００３】
（発明の背景）
エストロゲンは内分泌依存性組織（例えば、胸部または子宮内膜）での腫瘍の成長を促進する際に関与している主要な有糸分裂促進因子であるということを、根拠が示唆している。血漿エストロゲン濃度は、乳癌がある女性と乳癌がない女性とで類似しているものの、乳房腫瘍エストロンおよびエストラジオールのレベルは、正常な乳房組織または血液中よりも著しく高い。エストロゲンのインサイチュでの合成は、腫瘍内の高いレベルのエストロゲンに大きく寄与していると考えられており、従って、エストロゲン生合成のインヒビター（特に、特異的インヒビター）は、内分泌依存性腫瘍の治療に対して、潜在的に重要となる。
【０００４】
過去２０年間にわたって、アンドロゲン前駆体であるアンドロステンジオンをエストロンに転化するアロマターゼ経路のインヒビターを開発することに、相当な関心が集まっている。しかしながら、現在、エストロンスルファターゼ（Ｅ１−ＳＴＳ）経路（すなわち、エストロンサルフェートのエストロン（Ｅ１ＳからＥ１）への加水分解）は、このアロマターゼ経路とは対照的に、乳房腫瘍での主要なエストロゲン源であるという証拠がある。この理論は、乳癌をアロマターゼインヒビター（例えば、アミノグルテチミドおよび４−ヒドロキシアンドロステンジオン）で治療した閉経後の女性での血漿エストロゲン濃度の緩やかな減少により、また、これらのアロマターゼインヒビター治療を受けた患者での血漿Ｅ１Ｓ濃度が比較的高いままであるという事実により、支持されている。非共役エストロゲンの半減期（２０分間）と比較した血液中のＥ１Ｓの長い半減期（１０〜１２時間）、ならびに肝臓、および正常な乳房組織および悪性の乳房組織における高いレベルのステロイドスルファターゼ活性もまた、この理論を支持している。
【０００５】
ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７は、エストロン依存性の腫瘍（特に、乳癌）の治療で使用する新規なステロイドスルファターゼインヒビターおよびそれらを含有する製薬組成物を教示している。これらのステロイドスルファターゼインヒビターは、スルファミン酸エステル（例えば、エストロン−３−スルファミン酸Ｎ，Ｎ−ジメチル、および好ましくは、エストロン−３−スルファメート；これは、別に、「ＥＭＡＴＥ」として知られている）である。ＥＭＡＴＥは、以下の構造を有する：
【０００６】
【化７】
0005191079.tif 000002
ＥＭＡＴＥは、０．１ｍＭで無傷ＭＣＦ−７細胞においてＥ１−ＳＴＳ活性を９９％より高く阻害するので、強力なＥ１−ＳＴＳインヒビターであることが知られている。ＥＭＡＴＥはまた、時間および濃度に依存した様式で、Ｅ１−ＳＴＳ酵素を阻害し、このことは、それが活性部位指向失活剤として作用することを意味している。ＥＭＡＴＥは、最初は、Ｅ１−ＳＴＳを阻害するために設計されたものの、これらはまた、デヒドロエピアンドロステロンスルファターゼ（ＤＨＡ−ＳＴＳ）（これは、エストロゲン性ステロイドアンドロステンジオールの生合成を制御する際に中心的な役割を果たすと考えられている酵素である）も阻害する。また、現在では、アンドロステンジオールが、乳房腫瘍の成長の促進剤として、さらに重要であり得ることを示唆する証拠がある。ＥＭＡＴＥはまた、経口投与または皮下投与のいずれかで投与したときに生じるラット肝臓のＥ１−ＳＴＳ活性（９９％）およびＤＨＡ−ＳＴＳ活性（９９％）の殆ど完全な阻害として、インビボで活性である。さらに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて、記憶増強効果を有することが示された。マウスでの研究により、ＤＨＡ−ＳＴＳ活性と免疫応答の一部の制御との間の関係が示唆された。これはまた、ヒトでも起こり得ると考えられている。ＥＭＡＴＥでのスルファメート部分の架橋Ｏ原子は、阻害活性に重要である。それゆえ、エストロン−３−Ｎ−スルファメートおよびエストロン−３−Ｓ−スルファメートのように、この３−Ｏ原子が、他のヘテロ原子で置換されるとき、これらの類似物は、弱い時間非依存性失活剤である。
【０００７】
Ｅ１−ＳＴＳの阻害に最適な効力は、ＥＭＡＴＥで達成され得るものの、スルファターゼ阻害中にてエストロンが放出され得る可能性があり、また、ＥＭＡＴＥおよびそのエストラジオールコンジナーがエストロゲン活性を有し得る可能性がある。
【０００８】
Ａｈｍｅｄら（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １９９９年１月２７日；２５４（３）：８１１−５）は、ＳＴＳのステロイド性インヒビターおよび非ステロイド性インヒビターの構造−活性関係研究について報告している。
【０００９】
本発明は、Ｅ１−ＳＴＳの阻害だけでなく他の治療用途に適当な新規化合物を提供しようと試みる。
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、ある種の化合物が、有効なステロイドスルファターゼインヒビターとして、および／または細胞周期に影響を与えることができる試薬として、および／またはアポトーシスに影響を与えることができる試薬として使用できるという驚くべき発見に基づいている。
【００１１】
１局面では、本発明は、ある種のヒドロカルビルスルファニル化合物が、有効なステロイドスルファターゼインヒビターとして、および／または細胞周期のモジュレーターとして、および／またはアポトーシスのモジュレーターとして使用できるという驚くべき発見に基づいている。
【００１２】
「ヒドロカルビルスルファニル」との用語は、少なくとも１個のヒドロカルビル基（本明細書中で定義した）およびイオウを含有する基を意味する。そのイオウ基は、必要に応じて、酸化され得る。
【００１３】
これらのヒドロカルビルスルファニル化合物は、少なくとも１個のヒドロカルビルスルファニル基（これは、環系化合物の置換基である）を含有する。これらの環系化合物は、少なくとも１個の環成分を含有する。その環成分は、その環内に、少なくとも４個の原子を含有する。典型的には、これらの４個の原子は、炭素原子である。それゆえ、典型的には、その環成分は、ヒドロカルビル基である。この環系化合物はまた、その環系上のさらに別の置換基として、１個またはそれ以上のスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基を含有する。このスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基の少なくとも１個は、この環成分上の置換基である。好ましい局面では、このヒドロカルビルスルファニル基は、少なくとも１個のスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基を有する原子に隣接した原子上の置換基である。
【００１４】
本発明の化合物は、他の置換基を含有し得る。これらの他の置換基は、例えば、本発明の化合物の活性をさらに高め得、および／または（エキソビボおよび／またはインビボでの）安定性を高め得る。
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明の１局面によれば、式Ｉの化合物が提供される：
【００１６】
【化８】
0005191079.tif 000003
ここで、Ｘは、環内に少なくとも４個の原子を有する環である；Ｋは、ヒドロカルビル基である；Ｒ１は、式−Ｌ１−Ｓ−Ｒ１’の任意の基であり、ここで、Ｌ１は、任意のリンカー基であり、そしてＲ１’は、ヒドロカルビル基である；Ｒ２は、式−Ｌ２−Ｓ−Ｒ２’の任意の基であり、ここで、Ｌ２は、任意のリンカー基であり、そしてＲ２’は、ヒドロカルビル基である；Ｒ３は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種である；ここで、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１個は、存在している；ここで、該化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、ならびに／あるいは細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞成長のモジュレーターとして作用できる。
【００１７】
本発明の１局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）式Ｉの１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを調節できるかどうかを決定する工程；ならびに（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを調節できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【００１８】
本発明の１局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）式Ｉを有する１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性を阻害できるかどうかを決定する工程；ならびに（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを阻害できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【００１９】
本発明の方法のいずれか１方法では、１個またはそれ以上の追加工程が存在し得る。例えば、前記方法はまた、（例えば、化学技術および／または酵素技術により）同定した候補化合物を変性する工程および変性した化合物をＳＴＳ阻害効果について試験する任意の追加工程（これは、その効果が大きいか異なるかを調べるためにあり得る）を包含し得る。さらに別の例として、該方法はまた、（例えば、結晶学的技術を使用することにより）同定した候補化合物の構造を決定する工程、次いで、例えば、そのＳＴＳ阻害作用をさらに高めるために、コンピューターモデル化研究を実行する工程を包含し得る。それゆえ、本発明はまた、該同定した候補化合物についてのデータセット（例えば、結晶座標）を有するコンピューターを包含する。本発明はまた、その分析（例えば、タンパク質結合研究）のためにコンピュータースクリーン上に提示されているときの同定した候補化合物を包含する。
【００２０】
本発明の１局面によれば、本発明の方法により同定された化合物が提供される。
【００２１】
本発明の１局面によれば、薬剤で使用する本発明の化合物が提供される。
【００２２】
本発明の１局面によれば、必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと混合した本発明の化合物を含有する製薬組成物が提供される。
【００２３】
本発明の１局面によれば、ＳＴＳおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞成長に関連した状態または疾患を治療する際に使用する医薬品の製造における本発明の化合物の使用が提供される。
【００２４】
本発明の１局面によれば、有害なＳＴＳレベルおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞成長に関連した状態または疾患を治療する際に使用する医薬品の製造における本発明の化合物の使用が提供される。
【００２５】
本発明はまた、本発明の新規化合物（例えば、本明細書中で提示したもの）、ならびにそれらを製造する方法（例えば、本明細書中で提示した方法）およびこれらの方法で使用する新規中間体（例えば、本明細書中で提示したもの）を包含する。
【００２６】
参照し易くするために、本発明のこれらの局面およびさらに別の局面は、現在、適当な節の表題で、論述する。しかしながら、各節での教示は、必ずしも、各特定の節には限定されない。
【００２７】
（好ましい局面）
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＩである：
【００２８】
【化９】
0005191079.tif 000004
ここで、Ｘ、Ｋ、Ｒ１、Ｌ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｌ２、Ｒ２’およびＲ３の各々は、前述の意味を有する。
【００２９】
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＩＩである：
【００３０】
【化１０】
0005191079.tif 000005
ここで、Ｘ、Ｋ、Ｒ１、Ｌ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｌ２、Ｒ２’およびＲ３の各々は、前述の意味を有する。
【００３１】
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＶである：
【００３２】
【化１１】
0005191079.tif 000006
ここで、Ｘ、Ｋ、Ｒ１、Ｌ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｌ２、Ｒ２’およびＲ３は、前述の意味を有する。
【００３３】
好ましくは、Ｘは、Ｋと結合して、ステロイド構造を模倣する。
【００３４】
好ましくは、Ｋは、環状基である。
【００３５】
好ましくは、Ｘは、６員環である。
【００３６】
好ましくは、Ｘ環は、その環内に６個の炭素原子を有する。
【００３７】
好ましくは、Ｋ基およびＸ環は、ステロイド環構造またはその置換誘導体である。
【００３８】
好ましくは、Ｒ３基は、Ｘ環の３位置にある。
【００３９】
好ましくは、Ｒ３は、スルファメート基である。
【００４０】
好ましくは、Ｒ１は、Ｘ環の２位置にある。
【００４１】
好ましくは、Ｒ２は、Ｘ環の４位置にある。
【００４２】
好ましくは、Ｒ１’および／またはＲ２’は、アルキル基である。
【００４３】
好ましくは、Ｒ１’および／またはＲ２’は、Ｃ１〜１０アルキル基、好ましくは、Ｃ１〜６アルキル基、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基から選択される。
【００４４】
好ましくは、Ｒ１’および／またはＲ２’は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ３である。
【００４５】
好ましくは、Ｋ基およびＸ環は、一緒になって、全ての置換基を含めて、最大で約５０個の炭素原子、さらに普通には、約３０〜４０個以下の炭素原子を含有する。
【００４６】
本発明のある化合物には、Ｘがステロイド環であるのが非常に好ましい；ここで、少なくとも、ＸのＤ環は、置換されている。
【００４７】
本発明のある化合物には、Ｘがステロイド環であるのが非常に好ましい；ここで、少なくとも、ＸのＤ環の１７位置は、置換されている。
【００４８】
本発明のある化合物には、Ｘがステロイド環であるのが非常に好ましい；ここで、少なくとも、ＸのＤ環の１７位置は、ヒドロカルビル基（好ましくは、アリール基）で置換されている。
【００４９】
本発明のある化合物には、Ｘがステロイド環であるのが非常に好ましい；ここで、少なくとも、ＸのＡ環は、アルコキシ基で置換されている。
【００５０】
本発明のある化合物には、Ｘがステロイド環であるのが非常に好ましい；ここで、少なくとも、ＸのＡ環の２位置は、アルコキシ基で置換されている。
【００５１】
好ましくは、前記アルコキシ基は、メトキシである。
【００５２】
本発明のある化合物には、Ｘがステロイド環であるのが非常に好ましい；ここで、少なくとも、ＸのＡ環は、ヒドロカルビル基で置換されている。
【００５３】
本発明のある化合物には、Ｘがステロイド環であるのが非常に好ましい；ここで、少なくとも、ＸのＡ環の２位置は、アルキル基で置換されている。
【００５４】
好ましくは、前記アルキル基は、エチルである。
【００５５】
本発明のある化合物には、該化合物は、少なくとも２個またはそれ以上のスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基を含有するのが非常に好ましい。
【００５６】
本発明のある化合物には、該化合物は、少なくとも２個のスルファメート基を含有するのが非常に好ましい。
【００５７】
本発明のある化合物には、該化合物は、少なくとも２個のスルファメート基を含有するのが非常に好ましく、ここで、該スルファメート基は、同じ環上にはない。
【００５８】
本発明のある化合物には、Ｘは、ステロイド環であるのが非常に好ましく、ここで、ＸのＡ環は、少なくとも１個のスルファメート基を含有し、ここで、ＸのＤ環は、少なくとも１個のスルファメート基を含有する。
【００５９】
ある用途には、好ましくは、前記化合物は、エストロゲン効果が全くないか、最小限のエストロゲン効果しか有しない。
【００６０】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、エストロゲン効果を有する。
【００６１】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、可逆作用を有する。
【００６２】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、非可逆作用を有する。
【００６３】
１実施形態では、本発明の化合物は、乳癌の治療に有用である。
【００６４】
本発明はまた、本発明の化合物を調製するのに有用な新規中間体を包含する。例えば、本発明は、該化合物用の新規アルコール前駆体を包含する。別の例として、本発明は、該化合物用のビス保護前駆体を包含する。該前駆体の各々の例は、本明細書中で提示する。本発明はまた、本発明の化合物を合成するために該前駆体の各々または両方を含む方法を包含する。
【００６５】
２種の好ましい化合物には、以下の化合物がある：
【００６６】
【化１２】
0005191079.tif 000007
（利点）
本発明の１つの重要な利点は、本発明のスルファメート化合物がＳＴＳインヒビターとして作用できることにある。
【００６７】
本発明の化合物の他の利点は、それらがインビボで効能があり得ることにある。
【００６８】
本発明の化合物の一部は、非エストロゲン性化合物であり得る。ここで、「非エストロゲン性」との用語は、エストロゲン活性を全く示さないか、実質的に全く示さないことを意味する。
【００６９】
他の利点は、これらの化合物の一部がホルモン活性を示すか誘発する化合物に代謝でき得ないことにある。
【００７０】
本発明の化合物の一部はまた、経口活性であり得る点で、有利である。
【００７１】
本発明の化合物の一部は、特に、医薬品を最初から投与する必要があり得るとき、癌（例えば、乳癌）の治療だけでなく（またはその代わりに）、非悪性状態（例えば、自己免疫疾患）の防止にも有用であり得る。
【００７２】
それゆえ、本発明の化合物の一部はまた、内分泌依存性癌の治療（例えば、自己免疫疾患の治療）以外の治療用途を有すると考えられている。
【００７３】
本発明の化合物はまた、アポトーシスの誘発剤としても有用であり得る。
【００７４】
本発明の化合物はまた、細胞成長インヒビターとしても有用であり得る。
【００７５】
（ステロイドスルファターゼ）
ステロイドスルファターゼは、時には、数種のスルファターゼステロイド（例えば、エストロンサルフェート、デヒドロエピアンドロステロンサルフェートおよびコレステロールサルフェート）を短時間で加水分解するためのステリルスルファターゼまたは「ＳＴＳ」と呼ばれる。ＳＴＳは、酵素番号ＥＣ  ３．１．６．２を割り当てられている。
【００７６】
ＳＴＳは、クローン化され発現される。例えば、Ｓｔｅｉｎら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１３８６５〜１３８７２（１９８９））およびＹｅｎら（Ｃｅｌｌ  ４９：４４３〜４５４（１９８７））を参照せよ。
【００７７】
ＳＴＳは、多数の疾患状態に関係している酵素である。
【００７８】
例として、研究者は、ＳＴＳが全く欠乏すると魚鱗癬が起こることを発見した。一部の研究者によれば、ＳＴＳの欠乏は、日本で、かなり蔓延している。同じ研究者（Ｓａｋｕｒａら、Ｊ  Ｉｎｈｅｒｉｔ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓ  １９９７年１１月；２０（６）：８０７−１０）はまた、アレルギー性疾患（例えば、気管支喘息、アレルギー性鼻炎またはアトピー性皮膚炎）がステロイドスルファターゼの欠乏に関連し得ることを報告している。
【００７９】
ＳＴＳ活性が全く欠けていることにより起こる疾患状態に加えて、高いレベルのＳＴＳ活性もまた、疾患状態を誘発し得る。例として、上で述べたように、乳癌の成長および転移におけるＳＴＳの役割を支持する強力な証拠がある。
【００８０】
ＳＴＳはまた、他の疾患状態にも関係している。例として、Ｌｅ  Ｒｏｙら（Ｂｅｈａｖ  Ｇｅｎｅｔ  １９９９年３月；２９（２）：１３１−６）は、ステロイドスルファターゼ濃度とマウスでの攻撃挙動の開始との間で遺伝的な相関があり得ると決定した。著者は、ステロイドのスルファターゼ付加が複雑なネットワーク（突然変異誘発による攻撃性に関係していることが分かった遺伝子を含めて）の原動力であり得ると結論づけている。
【００８１】
（ＳＴＳ阻害）
ＳＴＳ活性に関連した一部の疾患状態は、非活性スルファターゼエストロンが活性非硫酸化エストロンに変換することによると考えられている。ＳＴＳ活性に関連した疾患状態では、ＳＴＳ活性を阻害することが望まれている。
【００８２】
ここで、「阻害」との用語は、ＳＴＳの有害な作用を少なくするか、および／またはなくすか、および／または遮蔽するか、および／または防止することを含む。
【００８３】
（ＳＴＳインヒビター）
本発明によれば、本発明の化合物は、ＳＴＳインヒビターとして作用できる。
【００８４】
ここで、本発明の化合物に関して本明細書中で使用する「インヒビター」との用語は、ＳＴＳ活性を阻害できる（例えば、ＳＴＳの有害な作用を少なくできるか、および／またはなくすことができるか、および／または遮蔽できるか、および／または防止できる）化合物を意味する。このＳＴＳインヒビターは、アンタゴニストとして作用し得る。
【００８５】
化合物がエストロンサルフェート活性を阻害する性能は、無傷ＭＣＦ−７乳癌細胞または胎盤ミクロソームのいずれかを使用して、評価できる。それに加えて、動物モデルが使用され得る。適当なＡｓｓａｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓに関する詳細は、以下の節で提示される。ＳＴＳ活性（それゆえ、ＳＴＳ阻害）を測定するために、他のアッセイが使用できることに注目すべきである。例えば、ＷＯ−Ａ−９９／５０４５３の教示が参照され得る。
【００８６】
好ましくは、いくつかの用途について、この化合物は、そのスルファメート基がスルフェート基で置換されてサルフェート誘導体を形成する場合、このスルフェート誘導体は、ステロイドスルファターゼ（ＥＣ  ３．１．６．２）活性を有する酵素により加水分解可能である（すなわち、ステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２を３７℃でｐＨ７．４でインキュベートしたとき）という特徴により、さらに特徴付けられる。
【００８７】
好ましい１実施形態では、この化合物のスルファメート基がスルフェート基で置換されてサルフェート化合物を形成する場合、そのスルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＥＣ  ３．１．６．２）活性を有する酵素により加水分解可能であり、ステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２を３７℃でｐＨ７．４でインキュベートした場合、２００ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、１５０ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、１００ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、７５ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、５０ｍｍｏｌａｒ未満のＫｍ値を生じる。
【００８８】
好ましい実施形態では、本発明の化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素により、加水分解可能ではない。
【００８９】
いくつかの用途について、好ましくは、本発明の化合物は、望ましい標的（例えば、ＳＴＳ）に対する少なくとも約１００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約１５０倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約２００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約２５０倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約３００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約３５０倍の選択性を有する。
【００９０】
本発明の化合物は、それがＳＴＳ活性を阻害する能力に加えてまたはその代わりに、他の有益な特性を有し得ることに注目すべきである。
【００９１】
（Ｒ１基およびＲ２基）
上述のように、Ｒ１は、式−Ｌ１−Ｓ−Ｒ１’の任意の基であり、そしてＲ２は、式−Ｌ２−Ｓ−Ｒ２’の任意の基である。Ｌ１は、任意のリンカー基である。Ｒ１’は、ヒドロカルビル基である。Ｌ２は、任意のリンカー基である。Ｒ２’は、ヒドロカルビル基である。
【００９２】
独立して、リンカー基Ｌ１およびＬ２のいずれかは、存在し得るかまたは存在し得ない。存在している場合、Ｌ１またはＬ２は、ヒドロカルビル基であり得る。
【００９３】
好ましくは、Ｌ１またはＬ２は、独立して、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル、Ｃ１〜Ｃ５ヒドロカルビルまたはＣ１〜Ｃ３ヒドロカルビルから選択される。
【００９４】
好ましくは、Ｌ１またはＬ２は、独立して、炭化水素基、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ１０炭化水素、Ｃ１〜Ｃ５炭化水素またはＣ１〜Ｃ３炭化水素から選択される。
【００９５】
好ましくは、Ｌ１またはＬ２は、独立して、アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルキルから選択される。
【００９６】
Ｌ１およびＬ２のヒドロカルビル／炭化水素／アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得、そして／または飽和または不飽和であり得る。
【００９７】
１局面では、Ｌ１および／またはＬ２は、末端イオウ部分を含有し得る。この局面では、Ｌ１および／またはＬ２は、スルフィド結合によって、それぞれ、Ｒ１またはＲ２の残部に連結される。Ｒ１またはＲ２は、全体として、ジスルフィド結合を含有する。
【００９８】
間違いを避けるために、Ｓは、イオウを表わす。
【００９９】
Ｒ１’またはＲ２’は、それぞれ独立して、ヒドロカルビル基である。
【０１００】
好ましくは、Ｒ１’およびＲ２’は、独立して、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル、Ｃ１〜Ｃ５ヒドロカルビルまたはＣ１〜Ｃ３ヒドロカルビルから選択される。
【０１０１】
好ましくは、Ｒ１’およびＲ２’は、独立して、炭化水素基、Ｃ１〜Ｃ１０炭化水素、Ｃ１〜Ｃ５炭化水素またはＣ１〜Ｃ３炭化水素から選択される。
【０１０２】
好ましくは、Ｒ１’およびＲ２’は、独立して、アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルキルから選択される。
【０１０３】
Ｒ１’およびＲ２’のヒドロカルビル／炭化水素／アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得、そして／または飽和または不飽和であり得る。
【０１０４】
非常に好ましい局面では、Ｒ１’およびＲ２’は、独立して、メチル（−ＣＨ３）およびエチル（−ＣＨ２ＣＨ３）から選択される。
【０１０５】
（Ｋ基）
Ｋ基は、環状構造である必要はない。このことに関して、Ｋ基は、直鎖構造であり得、これは、インビボの場合、環状構造に適合する能力を有し得る。
【０１０６】
好ましい局面では、Ｋ基は、環状基Ｋを形成するように、環状である。
【０１０７】
環状基Ｋは、必ずしも、環Ｘと縮合する必要はない。このことに関して、それらは、ヒドロカルビル基であり得る適切なスペーサ基により、分離され得る。
【０１０８】
好ましい局面では、環状基Ｋは、環Ｘに縮合される。
【０１０９】
Ｋ基は、多環式基であり得、これは、縮合多環である必要はない。
【０１１０】
それゆえ、好ましい局面では、Ｋ基およびＸ環は、多環式化合物を構成する。本明細書中の「多環式」との用語は、縮合環構造および非縮合環構造（それらの組合せを含めて）を含む。
【０１１１】
環状基ＫおよびＸの少なくとも１個は、複素環式基（複素環）または非複素環式基であり得る。
【０１１２】
環状基ＫおよびＸの少なくとも１個は、飽和環構造または不飽和環構造（例えば、アリール基）であり得る。
【０１１３】
好ましくは、これらの環状基の少なくとも１個は、アリール環である。
【０１１４】
この環状基が多環式である場合、その化合物の環成分の一部または全部は、一緒に縮合され得るか、または１個またはそれ以上の適切なスペーサ基を介して連結され得る。
【０１１５】
この多環式化合物は、多数の縮合環を含有し得る。この局面では、これらの縮合環は、異なるサイズの環（例えば、３個の６員環（６，６，６）、１個の６員環、１個の７員環および１個の６員環（６，７，６）、１個の６員環および２個の８員環（６，８，８）など）の組合せを含有し得る。
【０１１６】
１局面では、本発明は、その多環式化合物が（６，６，７）環以外のものである化合物に関する。さらなる局面では、本発明は、その多環式化合物が７員以外ものを有する環だけを含む化合物に関する。
【０１１７】
好ましくは、この多環式化合物は、全ての置換基を含めて、約５０個以下の炭素原子、より通常は、約３０〜４０個以下の炭素原子を含有する。
【０１１８】
この多環式化合物は、少なくとも２個の環成分、または少なくとも３個の環成分、または少なくとも４個の環成分を含有し得る。
【０１１９】
好ましくは、この多環式化合物は、４個の環成分を含有する。
【０１２０】
好ましい多環式化合物は、ステロイド環成分またはそのバイオアイソスター（ｂｉｏ−ｉｓｏｓｔｅｒｅｓ）を有する。
【０１２１】
（ヒドロカルビル）
本明細書中で使用する「ヒドロカルビル基」との用語は、少なくともＣおよびＨを含有する基を意味し、必要に応じて、１個またはそれ以上の他の適切な置換基を含有し得る。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。この置換基が環状基である可能性に加えて、置換基を組み合わせて環状基が形成され得る。このヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有する場合、これらの炭素は、必ずしも、互いに連結される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、連結され得る。それゆえ、このヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、イオウ、窒素および酸素が挙げられる。ヒドロカルビル基の非限定的な例には、アシル基がある。
【０１２２】
典型的なヒドロカルビル基は、炭化水素基である。ここで、「炭化水素」との用語は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基（これらの基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはアリール基のいずれか１個を意味する。炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換された基を含む。この炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造である場合、その置換は、炭化水素骨格上または分枝上のいずれかであり得る；あるいは、これらの置換は、この炭化水素骨格上および分枝上であり得る。
【０１２３】
（スルファメート基）
１実施形態では、環Ｘは、置換基として、スルファメート基を有する。本明細書中で使用する「スルファメート」との用語は、スルファミン酸のエステル、またはスルファミン酸のＮ−置換誘導体のエステル、またはそれらの塩を含む。
【０１２４】
Ｒ３がスルファメート基である場合、本発明の化合物は、スルファメート化合物と呼ばれる。
【０１２５】
典型的には、このスルファメート基は、次式を有する：
（Ｒ４）（Ｒ５）Ｎ−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール、またはそれらの組合せから選択されるか、または一緒になって、アルキレンを表わし、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１２６】
本発明のＮ−置換化合物は、置換された場合、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれが含有する。Ｒ４および／またはＲ５がアルキルである場合、好ましい値は、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）から選択される値である。Ｒ４およびＲ５は、共にメチルであり得る。Ｒ４および／またはＲ５がアリールである場合、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ４およびＲ５がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ４およびＲ５は、一緒になる場合、典型的には、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を表わし、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で中断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１２７】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、当該化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、このスルファメート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または結合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、１個より多いスルファメート基が存在し得る。例として、２個のスルファメート基（すなわち、ビス−スルファメート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）のスルファメート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１３０】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個は、Ｈである。
【０１３１】
さらに好ましいいくつかの実施形態では、Ｒ４およびＲ５の各々は、Ｈである。
【０１３２】
（ホスホネート基）
Ｒ３が、ホスホネート基である場合、本発明の化合物は、ホスホネート化合物と呼ばれる。
【０１３３】
典型的には、このホスホネート基は、次式を有する：
（Ｒ６）−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルまたはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１３４】
本発明のＮ−置換化合物は、置換された場合、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれが含有する。Ｒ６がアルキルである場合、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ６は、メチルであり得る。Ｒ６がアリールである場合、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ６がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ６は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で中断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１３５】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、このホスホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または結合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、１個より多いホスホネート基が存在し得る。例として、２個のホスホネート基（すなわち、ビス−ホスホネート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）のホスホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１３８】
（チオホスホネート基）
Ｒ３が、チオホスホネート基である場合、本発明の化合物は、チオホスホネート化合物と呼ばれる。
【０１３９】
典型的には、このチオホスホネート基は、次式を有する：
（Ｒ７）−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルもしくはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含有する。
【０１４０】
本発明のＮ−置換化合物は、置換したとき、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ７がアルキルであるとき、Ｒ７は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ７は、メチルであり得る。Ｒ７がアリールであるとき、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ７がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ７は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子またはヘテロ基で遮断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１４１】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１４２】
ある実施形態では、このチオホスホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または会合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１４３】
ある実施形態では、１個より多いチオホスホネート基が存在し得る。例として、２個のチオホスホネート基（すなわち、ビス−チオホスホネート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）チオホスホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１４４】
（スルホネート基）
Ｒ３が、スルホネート基である場合、本発明の化合物は、スルホネート化合物と呼ばれる。
【０１４５】
典型的には、このスルホネート基は、次式を有する：
（Ｒ８）−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルもしくはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子またはヘテロ基を含有する。
【０１４６】
本発明のＮ−置換化合物は、置換したとき、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ８がアルキルであるとき、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ８は、メチルであり得る。Ｒ８がアリールであるとき、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ８がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ８は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子またはヘテロ基で遮断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１４７】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１４８】
ある実施形態では、このスルホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または会合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１４９】
ある実施形態では、１個より多いスルホネート基が存在し得る。例として、２個のスルホネート基（すなわち、ビス−スルホネート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）スルホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１５０】
（スルホネート／ホスホネート／チオホスホネート／スルファメートの組合せ）
本発明のある化合物に対して、本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの１種が存在し得；そして本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの他種が存在し得る。例として、本発明の化合物は、１個のスルファメート基および１個のホスホネート基を含有し得る。
【０１５１】
本発明のこれらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、好ましくは、この基の他方は、このステロイド核の１７位置に位置している。
【０１５２】
（模倣）
１局面では、ＸおよびＫは、模倣ステロイド環構造であり得る。
【０１５３】
本明細書中で使用する「模倣」との用語は、類似または異なる構造を有するが類似の機能効果を有することを意味する。言い換えれば、Ｋ基および環Ｘは、一緒になって、ステロイドの環のバイオアイソスターまたはその活性部分であり得る。
【０１５４】
好ましい局面では、Ｋ基および環Ｘは、一緒になって、エストロンの環のバイオアイソスターまたはその活性部分であり得る。
【０１５５】
（ステロイド環構造）
好ましい１局面では、ＸまたはＫは、ステロイド環構造、すなわち、シクロペンタノフェナントレン骨格またはそのアイソスターを構成する。
【０１５６】
当該技術分野で周知であるように、古典的なステロイド環構造は、以下の一般式を有する：
【０１５７】
【化１３】
0005191079.tif 000008
上式では、それらの環は、通常の様式で標識されている。
【０１５８】
バイオアイソスターの例には、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が複素環である場合、および／または環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が置換されている場合、および／または環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が変性されている場合である；しかし、ここで、このバイオアイソスターは、スルファメート基なしでも、ステロイド特性を有する。
【０１５９】
このことに関して、好ましい多環式構造の構造は、以下として提示できる：
【０１６０】
【化１４】
0005191079.tif 000009
ここで、各環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’は、別個に、複素環または非複素環を表わすが、これらの環は、別個に、置換または非置換で飽和または不飽和であり得る。
【０１６１】
例として、環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’のいずれか１個またはそれ以上は、別個に、適切な基（例えば、アルキル基、アリール基、水酸基、ハロ基、ヒドロカルビル基、オキシヒドロカルビル基など）で置換され得る。
【０１６２】
Ｄ’の例には、少なくとも１個の置換基を有する５員または６員の非複素環がある。
【０１６３】
好ましい１実施形態では、環Ｄ’は、エチニル基で置換される。
【０１６４】
環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’のいずれか１個が複素環である場合、好ましくは、その複素環は、Ｃ原子と少なくとも１個のＮ原子および／または少なくとも１個のＯ原子との組合せを含有する。他の複素環原子は、その環内に存在し得る。
【０１６５】
本発明の化合物の適切な好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’の例には、デヒドロエピアンドロステロンおよびエストロゲン（エストロンを含めて）の環Ａ〜Ｄが挙げられる。
【０１６６】
本発明の化合物の好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’には、以下の環Ａ〜Ｄが挙げられる：
エストロンおよび置換エストロン、すなわち：
エストロン
２−ＯＨ−エストロン
４−ＯＨ−エストロン
６α−ＯＨ−エストロン
７α−ＯＨ−エストロン
１６α−ＯＨ−エストロン
１６β−ＯＨ−エストロン
２−ＭｅＯ−エストロン
１７−デオキシエストロン。
【０１６７】
エストラジオールおよび置換エストラジオール、すなわち：
４−ＯＨ−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
４−ＯＨ−１７α−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１７α−エストラジオール
１７β−エストラジオール
１７α−エチニル−１７β−エストラジオール
１７β−エチニル−１７α−エストラジオール
１７−デオキシエストラジオール。
【０１６８】
エストリオールおよび置換エストリオール、すなわち：
エストリオール
４−ＯＨ−エストリオール
６α−ＯＨ−エストリオール
７α−ＯＨ−エストリオール
１７−デオキシエストリオール。
【０１６９】
デヒドロエピアンドロステロンおよび置換デヒドロエピアンドロステロン、すなわち：
デヒドロエピアンドロステロン
６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
７α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６β−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
アンドロステンジオール。
【０１７０】
大まかに言えば、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、種々の非妨害置換基を含有し得る。特に、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、１個またはそれ以上のヒドロキシ、アルキル（特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、第二級ブチル、第三級ブチル、ｎ−ペンチルおよび他のペンチル異性体、ならびにｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体）、アルコキシ（特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、アルキニル（例えば、エチニル）またはハロゲン（例えば、フルオロ置換基）を含有し得る。
【０１７１】
（非ステロイド構造）
代替実施形態では、本発明の化合物は、ステロイド核を含有またはベースにし得ない。このことに関して、この多環式化合物は、非ステロイド環系（例えば、ジエチルスチルボエストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｏｅｓｔｒｏｌ）、スチルボエストロール（ｓｔｉｌｂｏｅｓｔｒｏｌ）、クマリン、フラボノイド、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）および他の環系）を含有またはベースにし得る。本発明の組成物中でまたは本発明の組成物として使用する他の適切な非ステロイド化合物は、ＵＳ−Ａ−５５６７８３１で見られ得る。
【０１７２】
（他の置換基）
本発明の化合物は、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３以外の置換基を有し得る。例として、これらの他の置換基は、以下の１種またはそれ以上であり得る：１個またはそれ以上のスルファメート基、１個またはそれ以上のホスホネート基、１個またはそれ以上のチオホスホネート基、１個またはそれ以上のスルホネート基、１個またはそれ以上のスルホンアミド基、１個またはそれ以上のハロ基、１個またはそれ以上のＯ基、１個またはそれ以上の水酸基、１個またはそれ以上のアミノ基、１個またはそれ以上のイオウ含有基、１個またはそれ以上のヒドロカルビル基（例えば、オキシヒドロカルビル基）。
【０１７３】
（オキシヒドロカルビル）
本明細書中で使用する「オキシヒドロカルビル」基との用語は、少なくとも、Ｃ、ＨおよびＯを含有する基を意味し、必要に応じて、１個またはそれ以上の他の適切な置換基を含有し得る。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。これらの置換基が環状基である可能性に加えて、置換基の組合せは、環状基を形成し得る。このオキシヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有する場合、これらの炭素は、必ずしも、互いに結合される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、結合され得る。それゆえ、このオキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、これには、例えば、イオウおよび窒素が挙げられる。
【０１７４】
本発明の１実施形態では、このオキシヒドロカルビル基は、オキシ炭化水素基である。
【０１７５】
ここで、「オキシ炭化水素」との用語は、アルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基（これらの基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはオキシアリール基のいずれか１種を意味する。オキシ炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換されたこれらの基が挙げられる。このオキシ炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造である場合、この置換基は、その炭化水素骨格上または分枝上のいずれかにあり得るか；あるいは、これらの置換基は、この炭化水素骨格上および分枝上であり得る。
【０１７６】
典型的には、このオキシヒドロカルビル基は、式Ｃ１〜６Ｏ（例えば、Ｃ１〜３Ｏ）である。
【０１７７】
（癌細胞を使用してＳＴＳ活性を決定するアッセイ（プロトコル１））
（ＭＣＦ−７細胞でのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
インビトロで、インタクトなＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を使用して、ステロイドスルファターゼ活性を測定する。このホルモン依存性細胞株は、ヒト乳癌細胞の成長の制御を研究するのに、広く使用されている。それは、著しいステロイドスルファターゼ活性を有し（Ｍａｃｌｎｄｏｅら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２３，１２８１〜１２８７（１９８８）；Ｐｕｒｏｈｉｔ  ＆  Ｒｅｅｄ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５０，９０１〜９０５（１９９２））、米国において、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から、また、英国において、例えば、Ｔｈｅ  Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｕｎｄから入手できる。
【０１７８】
細胞を、Ｍｉｎｉｍａｌ  Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）（これは、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、非必須アミノ酸および０．０７５％重炭酸ナトリウムを含有する）で維持する。３０回まで複製して、２５ｃｍ２組織培養フラスコに、上記培地を使用して、約１×１０５個の細胞／フラスコで播種する。細胞は、８０％のコンフルーエンシーまで増殖し、その培地を、３日ごとに交換する。
【０１７９】
３連の２５ｃｍ２組織培養フラスコ中のＭＣＦ−７細胞のインタクトな単層を、Ｅａｒｌｅ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＥＢＳＳ；ＩＣＮ  Ｆｌｏｗ，Ｈｉｇｈ  Ｗｙｃｏｍｂｅ，Ｕ．Ｋ．）で洗浄し、そして３７℃で、３〜４時間にわたって、無血清ＭＥＭ（２．５ｍｌ）中にて、エストロン−３−スルファメート（１１種の濃度；０；１ｆＭ；０．０１ｐＭ；０．１ｐＭ；１ｐＭ；０．０１ｎＭ；０．１ｎＭ；１ｎＭ；０．０１ｍＭ；０．１ｍＭ；１ｍＭ）と共に、５ｐｍｏｌ（７×１０５ｄｐｍ）の［６，７−３Ｈ］エストロン−３−サルフェート（比放射能６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）と共にインキュベートする。インキュベーション後、各フラスコを冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（比放射能９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．））にピペットで採取する。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−サルフェートが除去されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を除去し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により、決定する。エストロン−３−サルフェート加水分解物の質量は、得られた３Ｈカウント（これは、使用した培地および有機相の容量、ならびに添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の比放射能から計算した。実験の各バッチは、スルファターゼ陽性ヒト胎盤（正コントロール）および細胞なしフラスコ（この基質の見かけ非酵素加水分解を評価するために）から調製したミクロソームのインキュベーションを含む。１フラスコあたりの細胞核の数は、その細胞単層をＺａｐｏｎｉｎで処理した後、Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｕｎｔｅｒを使用して決定する。Ｔｒｙｐａｎ  Ｂｌｕｅ除去術を使って、各バッチあたり１個のフラスコを使用して、細胞膜の状態および生存度を評価する（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｈ．Ｊ．（１９７３）  Ｉｎ：Ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，［編者：Ｋｒｕｓｅ，Ｄ．Ｆ．＆  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｋ．］；４０６〜４０８ページ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。
【０１８０】
ステロイドスルファターゼ活性の結果は、このインキュベーション期間（２０時間）中に形成された全生成物（エストロン＋エストラジオール）の平均値±１標準偏差として表わされ、これは、１０６個の細胞について、エストロン−３−スルファメートを含有しないインキュベーションに対する低下割合（阻害）として、統計的に有意性を示す値について、計算される。スチューデントのｔ−検定を使用して、結果の統計的な有意性を試験した。
【０１８１】
（胎盤ミクロソームを使用してＳＴＳ活性を決定するアッセイ（プロトコル２））
（胎盤ミクロソームでのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
正常期の妊娠から得たスルファターゼ陽性ヒト胎盤をハサミで十分に細かく刻み、そして冷リン酸緩衝液（ｐＨ  ７．４、５０ｍＭ）で１回洗浄し、次いで、冷リン酸緩衝液（５ｍｌ／組織１ｇ）に再懸濁した。Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーを使って、氷中での２分間の冷却期間で切り離した３回の１０秒間バースト（ｂｕｒｓｔｓ）を使用して、均質化を達成する。２０００ｇで３０分間遠心分離（４℃）することにより、核および細胞の細片を除去し、その上清の一部（２ｍｌ）を２０℃で保存する。これらの上清のタンパク質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，７２，２４８〜２５４（１９７６））の方法により、決定する。
【０１８２】
１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度、２０ｍＭ［６，７−３Ｈ］エストロン−３−サルフェートの基質濃度（比放射能６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）および３７℃で２０分間のインキュベーション時間を使用して、インキュベーション（１ｍｌ）を実行する。必要なら、以下の８種の化合物濃度を使用する；０（すなわち、コントロール）；０．０５ｍＭ；０．１ｍＭ；０．２ｍＭ；０．４ｍＭ；０．６ｍＭ；０．８ｍＭ；１．０ｍＭ。インキュベーション後、各試料を冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（比放射能９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．））にピペットで採取する。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−サルフェートが除去されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を除去し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により決定する。エストロン−３−サルフェート加水分解物の質量は、得られた３Ｈカウント（これは、使用した培地および有機相の容量、ならびに添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の比放射能から計算する。
【０１８３】
（ＳＴＳ活性を決定する動物アッセイモデル（プロトコル３））
（インビボでのエストロンスルファターゼ活性の阻害）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除したラット）を使用して研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の成長を刺激する。
【０１８４】
この化合物（５日間にわたって、０．１ｍｇ／ｋｇ／日）を、ビヒクル（プロピレングリコール）だけを与えた他の群の動物と共に、経口投与する。この研究の終了時点で、肝臓組織の試料を得、以前に記述されているように（ＰＣＴ／ＧＢ９５／０２６３８を参照）、この基質として３Ｈエストロンサルフェートを使用して、エストロンスルファターゼ活性をアッセイした。
【０１８５】
（エストロゲン活性を決定する動物アッセイモデル（プロトコル４））
（インビボエストロゲン性の欠如）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除したラット）を使用して研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の成長を刺激する。
【０１８６】
この化合物（５日間にわたって、０．１ｍｇ／ｋｇ／日）を、ビヒクル（プロピレングリコール）だけを与えた他の群の動物と共に、経口投与した。この研究の終了時点で、子宮を得、秤量して、その結果を、子宮重量／全体重×１００として表した。
【０１８７】
子宮の成長に対して著しい効果がない化合物は、エストロゲン性ではない。
【０１８８】
（ＳＴＳ活性を決定する生物工学アッセイ（プロトコル５））
化合物がエストロゲンスルファターゼ活性を阻害する能力もまた、例えば、高処理能力スクリーンにおいて、ＳＴＳをコード化するアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、または活性フラグメント、それらの誘導体、相同体または改変体を使用して、評価できる。
【０１８９】
適切な標的（例えば、アミノ酸配列および／またはヌクレオチド配列）のいずれか１個またはそれ以上は、種々の薬物スクリーニング技術のいずれかにおいて、ＳＴＳを調節することができる薬剤を同定するのに使用され得る。このような試験で使用される標的は、溶液中で遊離され得るか、固体支持体に固着され得るか、細胞表面に凭れ（ｂｏｒｎｅ）得るか、または細胞内に位置し得る。標的活性の消滅または標的と試験する薬剤との間で結合する複合体の形成が、測定され得る。
【０１９０】
本発明のアッセイは、スクリーンであり得、それにより、多数の薬剤が試験される。１局面では、本発明のアッセイ方法は、高処理能力スクリーンである。
【０１９１】
薬物スクリーニング技術は、１９８４年９月１３日に公開されたＧｅｙｓｅｎの欧州特許出願第８４／０３５６４号で記述された方法に基づき得る。要約すると、多数の異なる小ペプチド試験化合物を、固体基質（例えば、プラスチックピンまたはある種の他の表面）上で合成する。これらのペプチド試験化合物を、適切な標的またはそのフラグメントと反応させて、洗浄する。結合した要素を、次いで、例えば、当該技術分野で周知の適切に改造した方法により、検出する。精製した標的はまた、薬物スクリーニング技術で使用するプレート上に、直接被覆できる。あるいは、このペプチドを捕捉して固体支持体上で固定化するために、非中和抗体が使用できる。
【０１９２】
本発明はまた、競合薬物スクリーニングアッセイの使用も考慮しており、このアッセイでは、標的を結合できる中和抗体は、標的を結合する試験化合物と特異的に競合する。
【０１９３】
別のスクリーニング技術は、これらの基質に対する適切な結合親和性を有する薬剤の高処理能力スクリーニング（ＨＴＳ）を提供し、ＷＯ８４／０３５６４で詳細に記述された方法に基づいている。
【０１９４】
本発明のアッセイ方法は、試験化合物の小規模スクリーニングおよび大規模スクリーニングの両方、ならびに定量アッセイで適切であると予想される。
【０１９５】
好ましい１局面では、本発明は、ＳＴＳを選択的に調節する薬剤を同定する方法に関し、これらの化合物は、式（１ａ）を有する。
【０１９６】
（レポーター）
本発明のアッセイ方法（およびスクリーン）では、広範囲のレポーターが使用され得、好ましいレポーターは、（例えば、分光法により）便利に検出可能な信号を提供する。例として、レポーター遺伝子は、光吸収特性を変える反応を触媒する酵素をコード化し得る。
【０１９７】
他のプロトコルには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が挙げられる。２個の非妨害エピトープと反応性のモノクローナル抗体を利用する２部位モノクローナルベース免疫測定さえ、使用され得る。これらのアッセイおよび他のアッセイは、特に、Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒら（１９９０，Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ  Ｐａｕｌ  ＭＮ）およびＭａｄｄｏｘ  ＤＥら（１９８３，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １５  ８：  １２１  １）で記述される。
【０１９８】
レポーター分子の例には、β−ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、（−グルクロニダーゼ、エキソ−グルカナーゼおよびグルコアミラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、放射標識または蛍光タグ標識ヌクレオチドは、初期の転写物に取り込むことができ、これは、次いで、オリゴヌクレオチドプローブに結合したとき、同定される。
【０１９９】
さらに別の例として、多数の企業（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ），Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）およびＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ））は、アッセイ手順用の市販のキットおよびプロトコルを供給している。適切なレポーター分子または標識には、それらの放射性核種、酵素、蛍光試薬、化学発光試薬または色素生産試薬、ならびに基質、補助因子、インヒビター、磁性粒子などが挙げられる。このような標識を教示している特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９およびＵＳ−Ａ−４３６６２４１が挙げられる。
【０２００】
（宿主細胞）
本発明に関連した「宿主細胞」との用語は、本発明の薬剤用の標的を含有できる任意の細胞を含む。
【０２０１】
それゆえ、本発明のさらに他の実施形態は、本発明の標的であるかまたは本発明の標的を発現するポリヌクレオチドを用いて形質転換またはトランスフェクトされる宿主細胞を提供する。好ましくは、該ポリヌクレオチドは、この標的であるかまたはこの標的を発現するポリヌクレオチドの複製および発現のためのベクター中に保有される。これらの細胞は、該ベクターと適合するように選択され、例えば、原核生物（例えば、細菌）細胞、真菌細胞、酵母菌細胞または植物細胞であり得る。
【０２０２】
グラム陰性菌Ｅ．ｃｏｌｉは、異種遺伝子発現のための宿主として、広く使用されている。しかしながら、その細胞の内部には、大量の異種タンパク質が蓄積する傾向にある。時には、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞内タンパク質のバルクから所望のタンパク質を引き続いて精製することが困難であり得る。
【０２０３】
Ｅ．ｃｏｌｉとは対照的に、バシラス属に由来の細菌は、それらが培地にタンパク質を分泌する能力があるために、異種宿主として非常に適切である。宿主として適切な他の細菌には、ストレプトマイセス属およびシュードモナス属に由来のものがある。
【０２０４】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの性質、および／または発現したタンパク質のさらなるプロセシングに対する好適性に依存して、真核生物宿主（例えば、酵母または他の真菌）が好まれ得る。一般に、酵母細胞は、操作の容易さから、真菌細胞よりも好ましい。しかしながら、ある種のタンパク質は、酵母細胞からの分泌が少ないか、いくつかの場合には、適切にプロセシングされない（例えば、酵母における過剰グリコシル化（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ））かいずれかである。これらの場合には、異なる真菌宿主生物を選択すべきである。
【０２０５】
本発明の範囲内で適切な発現宿主の例には、真菌（例えば、アスペルギルス属）（例えば、ＥＰ−Ａ−０１８４４３８およびＥＰ−Ａ０２８４６０３に記載されたもの）およびトリコデルマ属；バシラス属のような細菌（例えば、ＥＰ−Ａ−０１３４０４８およびＥＰ−Ａ−０２５３４５５で記述されたもの）、ストレプトマイセス属およびシュードモナス属；および酵母（例えば、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属（例えば、ＥＰ−Ａ−００９６４３０およびＥＰ−Ａ−０３０１６７０で記述されたもの））およびサッカロミセス属がある。例として、典型的な発現宿主は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ｔｕｂｉｇｅｎｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｖｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから選択され得る。
【０２０６】
適切な宿主細胞（例えば、酵母、真菌および植物宿主細胞）の使用は、本発明の組換え発現産物に最適な生物学的活性を与えるのに必要であり得る翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、トランケーション、ラピデーション、およびチロシン、セリンまたはスレオニンリン酸化）を提供し得る。
【０２０７】
（生物）
「生物」との用語は、本発明に関連して、本発明による標的および／またはそれから得た産物を含み得る任意の生物を含む。生物の例には、真菌、酵母または植物が挙げられ得る。
【０２０８】
「トランスジェニック生物」との用語は、本発明に関連して、本発明による標的および／または得られた産物を含有する任意の生物を含む。
【０２０９】
（宿主細胞／宿主生物の形質転換）
先に示したように、宿主生物は、原核生物または真核生物であり得る。適切な原核宿主の例には、Ｅ．ｃｏｌｉおよび枯草菌が挙げられる。原核宿主の形質転換に関する教示は、当該技術分野でよく引証されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版、１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０２１０】
原核宿主を使用する場合、そのヌクレオチド配列は、形質転換前に、例えば、イントロンの除去により、適切に修飾される必要があり得る。
【０２１１】
他の実施形態では、このトランスジェニック生物は、酵母であり得る。このことに関して、酵母はまた、異種遺伝子発現用のビヒクルとして、広く使用されている。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、歴史上、長く産業的に使用されている（異種遺伝子発現のための使用を含む）。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子の発現は、Ｇｏｏｄｅｙら（１９８７，Ｙｅａｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄ  Ｒ  Ｂｅｒｒｙら著、４０１〜４２９頁、ＡｌｌｅｎおよびＵｎｗｉｎ，Ｌｏｎｄｏｎ）およびＫｉｎｇら（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ，Ｅ  Ｆ  ＷａｌｔｏｎおよびＧ  Ｔ  Ｙａｒｒｏｎｔｏｎ著、１０７〜１３３頁、Ｂｌａｃｋｉｅ，Ｇｌａｓｇｏｗ）により概説されている。
【０２１２】
いくつかの理由で、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、異種遺伝子発現に適している。第一に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、ヒトに病原性でなく、特定の内毒素を産生できない。第二に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、種々の目的のために何世紀にもわたり商業的に開発され、その後、安全に使用されている長い歴史がある。これにより、公に広く受け入れられている。第三に、その生物に向けられた広範な商業的使用および研究の結果、その遺伝子および病原性についてだけでなく、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの大規模な発酵特性についての豊富な知識が獲得されている。
【０２１３】
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子発現および遺伝子産物の分泌の原理は、Ｅ  Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ  Ｅ  Ｋｅｎｎｙ（１９９３，「Ｙｅａｓｔ  ａｓ  ａ  ｖｅｈｉｃｌｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅｓ」、Ｙｅａｓｔｓ，第５巻、Ａｎｔｈｏｎｙ  Ｈ  ＲｏｓｅおよびＪ  Ｓｔｕａｒｔ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ著、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ．）により概説されている。
【０２１４】
種々のタイプの酵母ベクターが入手可能であり、これには、組込み型（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）ベクター（これは、それらの維持のために、宿主ゲノムとの組換えを必要とする）および自己複製プラスミドベクターが挙げられる。
【０２１５】
トランスジェニックＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓを調製するために、酵母での発現用に設計された構築物にヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構築物が調製される。異種発現に使用されるいくつかのタイプの構築物が開発されている。これらの構築物は、このヌクレオチド配列と融合された、酵母において活性なプロモーターを含有し、通常、酵母起源のプロモーター（例えば、ＧＡＬ１プロモーター）が使用される。通常、酵母起源のシグナル配列（例えば、ＳＵＣ２シグナルペプチドをコードする配列）が使用される。酵母で活性なターミネーターは、この発現系を終了する。
【０２１６】
酵母の形質転換のために、いくつかの形質転換プロトコルが開発されている。例えば、本発明によるトランスジェニックＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓは、Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＡ  ７５，１９２９）；Ｂｅｇｇｓ，Ｊ  Ｄ（１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，２７５，１０４）；およびＩｔｏ，Ｈら（１９８３，Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  １５３，１６３〜１６８）の教示に従い、調製できる。
【０２１７】
形質転換した酵母細胞は、種々の選択マーカーを使用して選択される。形質転換に使用されるマーカーには、多数の栄養要求マーカー（例えば、ＬＥＵ２、ＨＩＳ４およびＴＲＰ１）および優性抗生物質耐性マーカー（例えば、アミノグリコシド抗生物質マーカー（例えば、Ｇ４１８））がある。
【０２１８】
別の宿主生物は、植物である。遺伝的に改変された植物の構築における基本原理は、挿入した遺伝物質を安定に維持するために、その植物ゲノムに遺伝情報を挿入することにある。この遺伝情報を挿入するいくつかの技術が存在しており、その２つの主要な原理は、遺伝情報の直接的な導入およびベクター系を使用することによる遺伝情報の導入がある。一般的な技術の概説は、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ（Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ［１９９１］４２：２０５〜２２５）およびＣｈｒｉｓｔｏｕ（Ａｇｒｏ−Ｆｏｏｄ−Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｈｉ−Ｔｅｃｈ  Ｍａｒｃｈ／Ａｐｒｉｌ  １９９４  １７〜２７）による文献で見られ得る。植物形質転換に関するさらに詳しい教示は、ＥＰ−Ａ−０４４９３７５で見られ得る。
【０２１９】
したがって、本発明はまた、標的であるか標的を発現するヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法を提供する。このヌクレオチド配列で形質転換される宿主細胞は、そのコードするタンパク質の発現に適切な条件下にて、培養され得る。組換え細胞により産生されるタンパク質は、その細胞の表面で提示され得る。もし望ましいなら、当業者が理解しているように、コード配列を含有する発現ベクターは、特定の原核生物または真核生物の細胞膜を通って、これらのコード配列の分泌を指向するシグナル配列を用いて設計できる。他の組換え構築物は、このコード配列を、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列に連結し得る（Ｋｒｏｌｌ  ＤＪら（１９９３）  ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２：４４１〜５３）。
【０２２０】
（改変体／ホモログ／誘導体）
本明細書中で言及した特定のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列に加えて、本発明はまた、それらの改変体、ホモログおよび誘導体の使用を包含する。ここで、「相同性」との用語は、「同一性」と同等とみなすことができる。
【０２２１】
本発明の文脈では、相同配列は、少なくとも７５％、８５％または９０％同一、好ましくは、少なくとも９５％または９８％同一であり得るアミノ酸配列を含むと見なされる。相同性はまた、類似性（すなわち、類似した化学的特性／機能を有するアミノ酸残基）としてみなされ得るが、本発明の文脈では、配列同一性の形で相同性を表現することが好ましい。
【０２２２】
相同性の比較は、目視により実施され得るが、より通常は、容易に入手できる配列比較プログラムの補助により実施され得る。これらの市販のコンピュータープログラムは、２個以上の配列間の相同性％を計算できる。
【０２２３】
相同性％は、連続配列にわたって計算され得る。すなわち、１つの配列は、他の配列と整列され、１つの配列中の各アミノ酸は、１個の残基ごとに、他の配列中の対応しているアミノ酸と直接比較される。これは、「アンギャップド（ｕｎｇａｐｐｅｄ）」アラインメントと呼ばれている。典型的には、このようなアンギャップドアラインメントは、比較的短い数の残基にわたってのみ、実行される。
【０２２４】
これは、非常に簡単で一貫した方法ではあるものの、例えば、他の点では同一の対の配列において、１個の挿入または欠失が次のアミノ酸残基をアラインメントから外し、従って、全体的なアラインメントを実行する場合に、相同性％の大きな減少を生じる可能性があることを考慮していない。結果的に、殆どのアラインメント比較方法は、全体的な相同性スコアにペナルティーを過度に科することなく、挿入および欠失の可能性を考慮する、最適なアラインメントを生じるように設計されている。これは、局所相同性を最大にするように、その配列アラインメントに「ギャップ」を挿入することにより、達成される。
【０２２５】
しかしながら、これらのさらに複雑な方法は、その整列において起こる各ギャップに対して、「ギャップペナルティー」を割り当て、その結果、同数の同一アミノ酸に対して、できるだけ少数のギャップを有する配列アラインメント（これは、２個の比較した配列間での高い関連性を反映している）は、多くのギャップを有するものよりも高いスコアを達成する。典型的には、「Ａｆｆｉｎｅギャップコスト」が使用され、これは、ギャップの存在に対して、比較的高いコストを課し、また、ギャップにおける引き続く残基の各々に対して、より小さいペナルティーを課する。これは、最も一般的に使用されるギャプスコアリングシステムである。高いギャップペナルティーは、もちろん、より少ないギャップを有する最適化されたアラインメントを生じる。殆どの整列プログラムによれば、これらのギャップペナルティーを修飾できる。しかしながら、配列を比較するためにこのようなソフトウェアを使用する場合、そのデフォルト値を使用するのが好ましい。例えば、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（以下を参照）を使用するとき、アミノ酸配列に対するデフォルトギャップペナルティーは、１ギャップに対して−１２であり、また、各伸長部に対して、−４である。
【０２２６】
従って、最大相同性％の計算には、第一に、ギャップペナルティーを考慮して、最適なアラインメントを生じる必要がある。このようなアラインメントを実行するのに適切なコンピュータープログラムは、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｕ．Ｓ．Ａ．；Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２：３８７）である。配列比較が実行できる他のソフトウェアの例には、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（上記）、１８章を参照）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０３〜４１０を参照）および比較ツールのＧＥＮＥＷＯＲＫＳスートが挙げられるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴおよびＦＡＳＴＡの両方は、オフラインおよびオンライン検索に利用できる（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（上記）、７−５８〜７−６０ページを参照）。しかしながら、このＧＣＧ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用するのが好ましい。
【０２２７】
さらに有用な参考文献には、ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９年５月１５日；１７４（２）：２４７−５０で見出される参考文献である（およびＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９年８月１日；１７７（１）：１８７−８において公開された正誤表）。
【０２２８】
最終相同性％は、同一性の形で測定できるものの、そのアラインメントプロセス自体は、典型的には、全か無かの対比較には基づいていない。その代わりに、目盛りを付けた類似性スコアマトリックスが一般に使用され、これは、化学的類似性または進化距離に基づいて、各々の対の比較にスコアを割り当てる。通例使用されるこのようなマトリックスの例には、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスがあり、これは、プログラムのＢＬＡＳＴスートに対するデフォルトマトリックスである。ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは、一般に、一般デフォルト値またはカスタムシンボル比較表（もし、提供されたなら）のいずれかを使用する（さらなる詳細は、ユーザーマニュアルを参照）。ＧＣＧパッケージについては、一般デフォルト値を使用するのが好ましく、または他のソフトウェアの場合、このデフォルトマトリックス（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２）を使用するのが好ましい。
【０２２９】
一旦、このソフトウェアが最適な整列を生じると、相同性％、好ましくは、配列同一性％を計算することが可能となる。このソフトウェアは、典型的には、この配列比較の一部としてこれを行い、数値結果を作成する。
【０２３０】
これらの配列はまた、サイレント変化を生じる、アミノ酸残基の欠失、挿入または置換を有し得、機能的に等価な物質を生じる。意図的なアミノ酸の置換は、この物質の二次的な結合活性が保持されている限り、それらの残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の性質の類似性に基づいて行われ得る。例えば、負に荷電したアミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる；正に荷電したアミノ酸としては、リシンおよびアルギニンが挙げられる；そして類似の親水性値を有する非荷電極性ヘッド基を備えたアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが挙げられる。
【０２３１】
保存的な置換は、例えば、以下の表に従って、行われ得る。第二列の同じ枠、好ましくは、第三列の同じ行にあるアミノ酸は、互いに代用され得る。
【０２３２】
【表１】
0005191079.tif 000010
（発現ベクター）
標的として使用されるか標的を発現するヌクレオチド配列は、組換え複製可能ベクターに組み込まれ得る。このベクターは、適合性宿主細胞において、および／または適合性宿主細胞から、ヌクレオチド配列を複製および発現するのに使用され得る。発現は、制御配列（これは、プロモーター／エンハンサーおよび他の発現調節シグナルを含む）を使用して、制御され得る。原核生物プロモーター、および真核生物細胞内で機能的なプロモーターが使用され得る。組織特異的プロモーターまたは刺激特異的プロモーターが使用され得る。キメラプロモーターもまた使用され得、これは、上記２種以上の異なるプロモーターに由来の配列エレメントを含む。
【０２３３】
このヌクレオチド配列の発現によって宿主組換え細胞により産生されるタンパク質は、使用する配列および／またはベクターに依存して、分泌され得るか、または細胞内に含まれ得る。このコード配列は、特定の原核生物または真核生物の細胞膜を通って物質コード配列の分泌を指向するシグナル配列を使って、設計され得る。
【０２３４】
（融合タンパク質）
標的アミノ酸配列は、例えば、抽出および精製を助けるために、融合タンパク質として産生され得る。融合タンパク質パートナーの例には、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６ｘＨｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合および／または転写性活性化ドメイン）およびβ−ガラクトシダーゼが挙げられる。融合タンパク質配列の除去を可能にするために、その融合タンパク質パートナーと目的のタンパク質配列との間に、タンパク質分解開裂部位を含ませることもまた、好都合であり得る。好ましくは、この融合タンパク質は、標的の活性を妨害しない。
【０２３５】
この融合タンパク質は、抗原、または本発明の物質に融合した抗原または抗原性決定基を含有し得る。この実施形態では、この融合タンパク質は、天然には存在しない融合タンパク質であり得、これは、その免疫系の全般性の刺激を与えるという意味でアジュバントとして作用し得る物質を含有する。この抗原または抗原性決定基は、この物質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに結合され得る。
【０２３６】
本発明の別の実施形態では、このアミノ酸配列は、融合タンパク質をコード化する異種配列に連結され得る。例えば、この物質の活性に影響を与えることができる試薬のペプチドライブラリをスクリーニングするために、異種エピトープ（これは、市販の抗体により認識される）を発現するキメラ物質をコードすることが有用であり得る。
【０２３７】
（治療）
本発明の化合物は、治療剤として（すなわち、治療用途で）使用され得る。
【０２３８】
「治療」との用語は、治癒効果、軽減効果および予防効果を含む。
【０２３９】
この治療は、ヒトまたは動物（好ましくは、雌性動物）に行われ得る。
【０２４０】
（薬学的組成物）
１局面では、本発明は、薬学的組成物を提供し、これは、本発明の化合物および必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（それらの組合せを含めて）を含有する。
【０２４１】
この薬学的組成物は、医学および獣医学においてヒトまたは動物に使用され得、典型的には、薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤のいずれか１種またはそれ以上を含有し得る。治療用途に受容可能なキャリアまたは希釈剤は、製薬分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ著  １９８５）で記述されている。薬学的キャリア、賦形剤または希釈剤は、意図される投与経路および標準的な薬学的な実行に関連して、選択できる。これらの薬学的組成物は、このキャリア、賦形剤または希釈剤として、またはそれに加えて、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁剤、塗装剤、可溶化剤を含有し得る。
【０２４２】
この薬学的組成物には、防腐剤、安定剤、染料およびさらに香料が提供され得る。防腐剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。酸化防止剤および懸濁剤もまた、使用され得る。
【０２４３】
異なる送達システムに依存して、異なる組成物／処方要件が存在し得る。例として、本発明の薬学的組成物は、ミニポンプを使用して、または粘膜経路により（例えば、鼻スプレーまたはエアロゾル（吸入液または経口摂取液用）として）、または非経口的（ここで、この組成物は、例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路による送達のための注射可能形態により、処方される）に処方され得る。あるいは、この処方物は、両方の経路により送達されるように、設計され得る。
【０２４４】
この薬剤は、胃腸粘膜を通って粘膜送達される場合、胃腸管を通過中に安定なままであるべきである；例えば、それは、タンパク質分解に抵抗性であり、酸性ｐＨで安定であり、そして胆汁の洗浄効果に抵抗性であるべきである。
【０２４５】
適切な場合、これらの薬学的組成物は、吸入により、坐剤またはペッサリーの形態で、ローション、溶液、クリーム、軟膏または散剤の形態で局所的に、皮膚パッチを使用することにより、賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）を含有する錠剤の形態で、またはカプセルまたは卵剤（ｏｖｕｌｅｓ）をいずれか単独でまたは賦形剤と混合して、またはエリキシル剤、溶液または懸濁液（これは、香料または着色剤を含有する）の形態で投与できるか、またはそれらは、例えば、静脈内、筋肉内または皮下で、非経口的に注射できる。非経口投与には、これらの組成物は、無菌水溶液の形態で最もよく使用され得、これは、他の物質（例えば、その溶液を血液と等張性にするのに十分な塩または単糖類）を含有し得る。舌下投与には、これらの組成物は、錠剤または薬用ドロップ（これは、従来の様式で処方できる）の形態で投与され得る。
【０２４６】
（組合せ医薬）
本発明の化合物は、１種またはそれ以上の活性剤（例えば、１種またはそれ以上の他の薬学的に活性な薬剤）と併用され得る。
【０２４７】
例として、本発明の化合物は、他のＳＴＳインヒビターおよび／または他のインヒビター（例えば、アロマターゼインヒビター（例えば、４−ヒドロキシアンドロステンジオン（４−ＯＨＡ））および／またはステロイド（例えば、天然に存在するステルニューロステロイドデヒドロエピアンドロステロンスルフェート（ＤＨＥＡＳ））およびプレグネノロンスルフェート（ＰＳ）および／または他の構造上類似した有機化合物）と併用され得る。他のＳＴＳインヒビターの例は、上記参考文献で見出され得る。例として、本発明で使用されるＳＴＳインヒビターには、ＥＭＡＴＥ、およびその２−エチルおよび２−メトキシ１７−デオキシ化合物（これらは本明細書中で示される化合物５と類似している）のいずれかまたは両方が挙げられる。
【０２４８】
それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、生物学的応答調整物質と併用され得る。
【０２４９】
生物学的応答調整物質（「ＢＲＭ」）との用語は、サイトカイン、免疫調節剤、成長因子、造血制御因子、コロニー刺激因子、走化因子、溶血因子および血栓溶解因子、細胞表面レセプタ、リガンド、白血球接着分子、モノクローナル抗体、予防および治療ワクチン、ホルモン、細胞外マトリックス成分、フィブロネクチンなどが挙げられる。ある用途には、好ましくは、この生物学的応答調節剤は、サイトカインである。サイトカインの例には、以下が挙げられる：インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１９；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、例えば、ＴＮＦ−α；インターフェロンα、βおよびγ；ＴＧＦ−β。ある用途には、好ましくは、このサイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。ある用途には、このＴＮＦは、任意の型のＴＮＦ（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β（それらの誘導体または混合物を含めて））であり得る。さらに好ましくは、このサイトカインは、ＴＮＦ−αである。ＴＮＦに関する教示は、当該技術分野（例えば、ＷＯ−Ａ−９８／０８８７０およびＷＯ−Ａ−９８／１３３４８）で見出され得る。
【０２５０】
（投与）
典型的には、医師は、個々の被験体に最も適切な実際の投薬量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重および応答と共に変わる。以下の投薬量は、平均的な場合の例である。もちろん、それより高いまたは低い範囲が有益な場合が個々に存在し得る。
【０２５１】
本発明の組成物は、直接的な注射により、投与され得る。この組成物は、非経口投与、粘膜投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮下投与、眼内投与または経皮投与用に処方され得る。その薬剤は、要求に応じて、０．０１〜３０ｍｇ／体重１ｋｇ、例えば、０．１〜１０ｍｇ／体重ｋｇ、さらに好ましくは、０．１〜１ｍｇ／体重１ｋｇの用量で、投与され得る。
【０２５２】
さらなる例として、本発明の薬剤は、１日１〜４回、好ましくは、１日１回または２回のレジメンに従って、投与され得る。任意の特定の患者に対する特定の用量レベルおよび投薬頻度は、変わり得、種々の要因に依存しており、これには、使用する特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用期間、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食生活、投与様式および投与時間、排泄の速度、薬剤組合せ、特定の疾患の重症度および治療を受ける宿主が挙げられる。
【０２５３】
上で示した典型的な送達様式は別として、「投与する」との用語はまた、脂質媒介トランスフェクション、リポソーム、イムノリポソーム、リポフェクチン、カチオン性表面両親媒性物質（ＣＦＡｓ）およびそれらの組合せのような技術による送達を含む。このような送達機構の経路には、粘膜経路、鼻内経路、経口経路、非経口経路、胃腸経路、局所経路または舌下経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５４】
「投与する」との用語には、粘膜経路による（例えば、鼻スプレーまたはエアロゾル（吸入液または経口摂取液用）としての）；非経口的経路（ここで、送達は、注射可能形態（例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路）による）による送達が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５５】
それゆえ、医薬の投与について、本発明のＳＴＳインヒビターは、任意の適切な様式（これは、通常の製薬処方技術および薬学的キャリア、アジュバント、賦形剤、希釈剤などを使用する）で、通常、非経口投与用に処方できる。大体の有効投薬割合は、当該化合物の個々の活性に依存して、平均体重（７０ｋｇ）の患者に対して、１〜１０００ｍｇ／日、例えば、１０〜９００ｍｇ／日、さらに、１００〜８００ｍｇ／日の範囲であり得る。好ましいさらに活性が高い化合物にさらに通例の投薬速度は、２００〜８００ｍｇ／日、さらに好ましくは、２００〜５００ｍｇ／日、最も好ましくは、２００〜２５０ｍｇ／日の範囲である。それらは、単一用量レジメン、分割用量レジメンおよび／または複数用量レジメン（これは、数日にわたって持続する）で投与され得る。経口投与には、それらは、錠剤、カプセル、溶液または懸濁液（これは、単位用量あたり、１００〜５００ｍｇの化合物を含有する）で処方され得る。あるいは、好ましくは、これらの化合物は、適切な非経口投与可能な非経口投与用にキャリアで処方され、これは、２００〜８００ｍｇ、好ましくは、２００〜５００ｍｇ、さらに好ましくは、２００〜２５０ｍｇの範囲の単位毎日投薬速度を提供する。このような有効毎日用量は、しかしながら、その活性成分の固有の活性および患者の体重に依存して変わり、このような変動は、医師の技術および判断の範囲内である。
【０２５６】
（細胞周期）
本発明の化合物は、細胞周期障害の治療方法で、有用であり得る。
【０２５７】
「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、３版、Ｌｏｄｉｓｈら、１７７〜１８１ページで述べられているように、異なる真核生物細胞は、極めて異なる速度で成長し分裂できる。例えば、酵母菌細胞は、１２０分ごとに分裂でき、ウニや昆虫の真核生物細胞にある受精卵の第一分裂は、１個の大きな既存細胞が細分されるので、１５３０分間しかかからない。しかしながら、最もよく成長する植物および動物の細胞は、数が２倍になるのに１０〜２０時間かかり、一部のものは、ずっと遅い速度で２つに分裂する。成体中の多くの細胞（例えば、神経細胞および横紋筋細胞）は、全く分裂しない；創傷の治癒を助ける線維芽細胞のような他のものは、要求に応じて成長するが、そうでなければ、静止している。
【０２５８】
さらに、分裂する各真核生物細胞は、２個の娘細胞に同じ遺伝物質を供与する準備ができていなければならない。真核生物でのＤＮＡ合成は、この細胞分裂周期の初めから終わりまで起こるのではなく、細胞分裂前、その一部に制限される。
【０２５９】
真核生物ＤＮＡ合成と細胞分裂との間の関係は、成長および分裂が全て可能であった哺乳動物細胞の培養物中で、十分に分析された。細菌とは対照的に、真核生物細胞は、ＤＮＡ合成におけるその時間の一部だけを費やすことが分かり、それは、細胞分裂の何時間も前に完了する（有糸分裂）。それゆえ、ＤＮＡ合成後および細胞分裂前に、時間のギャップが生じる；他のギャップは、分裂後およびＤＮＡ合成の次の過程で起こることが分かった。この分析により、真核生物細胞周期は、Ｍ（有糸分裂）期、Ｇ１期（第一ギャップ）、Ｓ（ＤＮＡ合成）期、Ｇ２期（第二ギャップ）からなり、そしてＭに戻る。有糸分裂間（Ｇ１、ＳおよびＧ２）の局面は、総称して、間期として知られている。
【０２６０】
組織内での多くの非分裂細胞（例えば、全ての静止線維芽細胞）は、有糸分裂後およびＤＮＡ合成の直前に、この周期を一時停止する；このような「休止」細胞は、その細胞周期から出ていったと言われ、Ｇｏ状態にあると言われている。
【０２６１】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用することにより、その細胞周期の３つの間期段階のうちの１つにある細胞を同定してそれらの相対的なＤＮＡ含量を測定することが可能である；Ｇ１（ＤＮＡ合成前）にある細胞は、規定量ｘのＤＮＡを有する；Ｓ（ＤＮＡ複製）中にて、それは、ｘと２ｘとの間にある；Ｇ２（またはＭ）の場合、それは、２ｘのＤＮＡを有する。
【０２６２】
動物細胞における有糸分裂および細胞質分裂の段階は、以下のとおりである：
（ａ）間期。間期のＧ２段階は、有糸分裂の開始のすぐ前に先行する。染色体ＤＮＡは、このＳ局面中に、複製され、そしてタンパク質に結合されるが、染色体は、別の構造としてはまだ見えない。その核小体は、唯一の核の下部構造であり、これは、光学顕微鏡下にて、見える。ＤＮＡ複製前の２倍体細胞では、各型の２個の形態染色体が存在しており、その細胞は、２ｎと言われている。Ｇ２では、ＤＮＡ複製後、この細胞は、４ｎである。４部の各染色体ＤＮＡが存在している。その姉妹染色体は、互いからまだ分離されていないので、姉妹染色分体と呼ばれている。
【０２６３】
（ｂ）初期の分裂前期。中心小体は、各々、新たに形成された娘中心小体を備えているが、その細胞の反対側の分裂極に向かって移動し始める；これらの染色体は、長い糸と見ることができる。その核膜は、小胞に解離し始める。
【０２６４】
（ｃ）中期および後期の分裂前期。染色体の凝縮が完結する；各々の可視染色体構造は、それらのセントロメアで一緒に保持された２個の染色分体から構成される。各染色分体は、２個の新たに複製された娘ＤＮＡ分子のうちの１個を含有する。その微小管紡錘体は、それらの中心小体にすぐ隣接した領域から広がり始め、これらは、それらの分裂極に近づいて移動する。一部の紡錘体繊維は、分裂極から分裂極に及ぶ；殆どは、染色分体に進み、動原体で付着する。
【０２６５】
（ｄ）分裂中期。これらの染色体は、その細胞の赤道に向かって移動し、その場所で、それらは、その赤道面で整列される。その姉妹染色分体は、まだ分かれていない。
【０２６６】
（ｅ）分裂後期。２個の姉妹染色分体は、別個の染色体に分かれる。各々は、紡錘体繊維で１極に連結された動原体を含有し、それは、この極に移動する。それゆえ、各染色体の１コピーは、各娘細胞に供与される。同時に、この細胞は、極−極紡錘体に関して、伸長する。その開裂溝が形成し始めるにつれて、細胞質分裂が始まる。
【０２６７】
（ｆ）分裂終期。その娘核の周りで、新たな膜が形成される；これらの染色体は、解かれ、区別しにくくなり、その核小体が再度見えるようになり、その核膜は、各娘核の周りで、形成される。細胞質分裂がほぼ完結し、この紡錘体は、それらの微小管および他の繊維が解重合するにつれて、見えなくなる。有糸分裂全体にわたって、各極にある「娘」中心小体は、普通の長さになるまで、成長する。分裂終期では、最初の中心小体の各々の複製が完結し、新たな娘中心小体は、次の間期の間に、発生する。
【０２６８】
（ｇ）間期。細胞質分裂が完結すると、この細胞は、その細胞周期のＧ１局面に入り、再度、その周期を進む。
【０２６９】
細胞周期が非常に重要な細胞プロセスであることが認識されている。正常な細胞周期から逸脱すると、多くの医学的な障害が生じ得る。細胞周期が高まったり、および／またはその制限がなくなると、癌が起こり得る。細胞周期が低下すると、変性疾患が起こり得る。本発明の化合物を使用すると、このような障害や疾患を治療する手段が得られ得る。
【０２７０】
それゆえ、本発明の化合物は、細胞周期障害（例えば、癌（ホルモン依存性癌およびホルモン非依存性癌を含めて））の治療で使用するのに適当であり得る。
【０２７１】
それに加えて、本発明の化合物は、乳癌、卵巣癌、子宮体癌、肉腫、黒色腫、前立腺癌、膵臓癌などのような癌、および他の固形腫瘍を治療するのに適当であり得る。
【０２７２】
ある用途には、細胞周期は、阻止および／または防止および／または制止され、好ましくは、ここで、細胞周期は、防止および／または制止される。１局面では、細胞周期は、Ｇ２／Ｍ段階で、阻止および／または防止および／または制止され得る。１局面では、細胞周期は、非可逆的に防止および／または阻止および／または制止され得、好ましくは、ここで、細胞周期は、非可逆的に防止および／または制止される。
【０２７３】
「非可逆的に防止および／または阻止および／または制止される」との用語は、本発明の化合物を適用した後、その化合物を除去しても、この化合物の効果、すなわち、細胞周期の防止および／または阻止および／または制止が依然として観察できることを意味する。さらに詳しく言えば、「非可逆的に防止および／または阻止および／または制止される」との用語は、本明細書中で提示した細胞周期アッセイプロトコルに従ってアッセイしたとき、対象化合物で処理した細胞は、プロトコルＩの段階２の後、対照細胞よりも成長が少ないことを意味する。このプロトコルの詳細は、以下で提示する。
【０２７４】
それゆえ、本発明は、以下を引き起こす化合物を提供する：細胞周期を防止および／または阻止および／または制止することにより、インビトロで、エストロゲンレセプター陽性（ＥＲ＋）およびＥＲ陰性（ＥＲ−）乳癌細胞の成長の阻止；および／または無傷動物（すなわち、卵巣切除していない動物）において、ニトロソメチル尿素（ＮＭＵ）で誘発した乳房腫瘍の退行、および／または癌細胞での細胞周期を防止および／または阻止および／または制止する；および／または細胞周期を防止および／または阻止および／または制止することにより、インビボで作用する、および／または細胞周期アゴニストとして作用する。
【０２７５】
（細胞周期アッセイ）
（プロトコル６）
手順
段階１
マルチウェル培養皿に、１０５個の細胞／ウェルの密度で、ＭＣＦ−７乳癌細胞を播種する。細胞は、以下のように処理したときに約３０％が集密するまで、付着させ成長させた：
対照−未処理
対象化合物（ＣＯＩ）２０μＭ
細胞は、このＣＯＩを含有する成長培地において、６日間成長させ、培地／ＣＯＩを３日ごとに変える。この期間の終了時点で、コールター細胞カウンタを使用して、細胞数を数えた。
【０２７６】
段階２
ＣＯＩで６日間細胞を処理した後、細胞を、１０４個の細胞／ウェルの密度で、再播種する。それ以上の処理は、追加しない。細胞を、成長培地の存在下にて、さらに６日間成長させる。この期間の終了時点で、細胞数を再度数える。
【０２７７】
（癌）
上で述べたように、本発明の化合物は、細胞周期障害の治療で有用であり得る。特定の細胞周期障害には、癌がある。
【０２７８】
癌は、依然として、ほとんどの西洋諸国において、主な死亡原因である。今までに開発された癌の治療法には、ホルモンの作用または合成を阻止してホルモン依存性腫瘍の成長を阻止することが挙げられていた。しかしながら、現在では、ホルモン非依存性の腫瘍を治療するために、さらに積極的な化学療法が使用されている。
【０２７９】
それゆえ、化学療法に付随した副作用の一部または全部をなくしたホルモン依存性および／またはホルモン非依存性腫瘍の抗癌治療用の医薬品が開発されると、大きな治療上の進歩になる。
【０２８０】
エストロゲンが、それらの合成後、多数のヒドロキシル化反応および共役反応を受けることは、知られている。最近まで、このような反応は、最終的にエストロゲンを水溶性にして体内からの排出を高める代謝過程の一部であると考えられていた。現在では、一部のヒドロキシ代謝物（例えば、２−ヒドロキシおよび１６−α−ヒドロキシ）および共役物（例えば、エストロンサルフェート、Ｅ１Ｓ）は、体内でエストロゲンが有する錯体作用の一部を決定する際に重要であることが明らかである。
【０２８１】
研究者は、乳癌のリスクを変える条件に関連した２−および１６−ヒドロキシル化エストロゲンの形成を研究した。現在、１６−α−ヒドロキシル化が乳癌のリストを高め得るのに対して、２−ヒドロキシラーゼ活性を高める因子が、癌のリスクを低くすることに関連しているという証拠がある。エストロゲン代謝物の生物学的な役割の点で、２−メトキシエストラジオールが抗有糸分裂特性を備えた内生代謝物である一連の証拠により、さらに興味が刺激されている。２−ＭｅＯＥ２は、カテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼ（これは、体内全体にわたって広く分布している酵素である）により、２−ヒドロキシエストラジオール（２−ＯＨＥ２）から形成される。
【０２８２】
研究者は、インビボで、２−ＭｅＯＥ２が、Ｍｅｔｈ  Ａ肉腫、Ｂ１６黒色腫またはＭＤＡ−ＭＢ−４３５エストロゲンレセプター陰性（ＥＲ−）乳癌細胞の皮下注射から生じる腫瘍の成長を阻止することを明らかにした。それはまた、内皮細胞の増殖および移動、およびインビトロ血管形成を阻止する。２−ＭｅＯＥ２がインビボでの腫瘍の成長を阻止する性能は、腫瘍細胞の増殖を直接阻止するよりもむしろ、腫瘍誘発血管形成を阻止する性能が原因であり得ることが示唆された。
【０２８３】
２−ＭｅＯＥ２がその強力な抗分裂促進効果および抗血管形成効果に加える機構は、依然として、解明中である。それは、高濃度では、微小管重合を阻止し、チューブリンに結合するコルヒチンの弱いインヒビターとして作用するという証拠がある。しかしながら、最近では、有糸分裂を阻止する濃度で、細胞内のチューブリンフィラメントは、解重合されず、タキソール処理後に見られるものと同じ形態を有することが分かった。従って、乳癌および卵巣癌の治療に使用される薬剤である２−ＭｅＯＥ２は、タキソールのように、微小管の動態を安定化することにより作用する可能性がある。
【０２８４】
癌のための新たな治療法として２−ＭｅＯＥ２を確認したことは、重要な進歩ではあるものの、経口投与エストロゲンの生体利用能は、乏しい。さらに、それらは、最初に肝臓を通っている間に、広範囲にわたる代謝を受け得る。乳癌治療用のステロイドスルファターゼインヒビターを開発するための研究プログラムの一部として、エストロン−３−Ｏ−スルファメート（ＥＭＡＴＥ）は、強力な活性部位指向インヒビターとして同定された。予想外なことに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて、エストラジオールよりも１００倍も高い経口ウテロトロピック（ｕｔｅｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）活性を備えた強力なエストロゲン特性を有することが判明した。その高いエストロゲン性は、それが赤血球（ｒｂｃｓ）（これは、それが肝臓を通る間に不活性化することから保護し、また、長期間にわたる遅延放出用のレザバとして作用する）に吸収されることから生じると考えられている。多数のＡリング変性類似物が合成され、試験されているが、これらには、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートが挙げられる。この化合物は、ステロイドスルファターゼインヒビターととして、ＥＭＡＴＥと等しい効力を有するものの、エストロゲン性が欠けていた。
【０２８５】
本発明者は、本発明の化合物が癌（特に、乳癌）を治療する手段を提供すると考えている。
【０２８６】
それに加えてまたはその代わりに、本発明の化合物は、白血病を含めた癌および固形腫瘍（例えば、乳房腫瘍、子宮内膜腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍および膵臓腫瘍）の成長を阻止する際に有用であり得る。
【０２８７】
（エストロゲンに関係した治療）
本発明者は、本発明の化合物の一部は、体内（特に、女性の体内）のエストロゲンレベルを制御する際に有用であり得ると考えている。それゆえ、これらの化合物の一部は、受精能を制御する手段（例えば、経口避妊錠剤、丸薬、溶液または薬用ドロップ）を提供するものとして、有用であり得る。あるいは、この化合物は、移植片またはパッチの形状にできる。
【０２８８】
それゆえ、本発明の化合物は、エストロゲンに関連したホルモン疾患を治療する際に有用であり得る。
【０２８９】
それに加えてまたはその代わりに、本発明の化合物は、エストロゲンに関連した疾患以外のホルモン疾患を治療する際に有用であり得る。それゆえ、本発明の化合物はまた、ホルモン活性に影響を与えるることができ得、また、免疫応答に影響を与えることができ得る。
【０２９０】
（神経変性疾患）
本発明者は、本発明の化合物の一部が神経変性疾患および類似の疾患の治療で有用であり得ると考えている。
【０２９１】
例として、ＳＴＳインヒビターは、記憶喪失、頭部外傷、アルツハイマー病、癲癇性痴呆、初老期痴呆、外傷後痴呆、老人性痴呆、血管性痴呆および卒中後痴呆のような病気に罹っている患者、または記憶向上を求めている個人の記憶機能を高めるのに有用であると考えられている。
【０２９２】
（ＴＨ１）
本発明者は、本発明の化合物の一部がＴＨ１に関連して有用であり得ると考えている。
【０２９３】
例として、マクロファージまたは他の抗原提示細胞内にＳＴＳインヒビターが存在していると、感作Ｔ細胞がＴＨ１（高ＩＬ−２、ＩＦＮγ低ＩＬ−４）応答を組み込む性能を低くし得ると考えられている。従って、他のステロイド（例えば、グルココルチコイド）の正常な制御影響力が優勢となる。
【０２９４】
（炎症性疾患）
本発明者は、本発明の化合物の一部が炎症性疾患（例えば、以下のいずれか１種またはそれ以上に関連した疾患）を治療する際に有用であり得ると考えている：自己免疫（例えば、関節リウマチ、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、甲状腺炎、血管炎、潰瘍性大腸炎およびクローン病）、皮膚疾患（例えば、乾癬および接触性皮膚炎）；移植片対宿主病；湿疹；喘息および移植後の臓器拒絶。
【０２９５】
例として、ＳＴＳインヒビターは、ＤＨＥＡまたは関連したステロイドの免疫応答および／または炎症応答に対する通常の生理学的効果を防止し得ると考えられている。
【０２９６】
本発明の化合物は、内生グルココルチコイド様効果を現す医薬品の製造で有用であり得る。
【０２９７】
（他の治療法）
本発明の化合物／組成物が他の重要な医学的関連性を有し得ることまた、理解できるはずである。
【０２９８】
例えば、本発明の化合物または組成物は、すなわち、ＷＯ−Ａ−９９／５２８９０で列挙された疾患の治療で有用であり得る。
【０２９９】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５で列挙された疾患の治療で有用であり得る。言及し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：癌、炎症疾患または炎症性疾患、皮膚障害、発熱、心血管効果、出血、凝血および急性期応答、悪液質、拒食症、急性伝染病、ＨＩＶ感染、ショック状態、移植片対宿主反応、自己免疫疾患、再灌流傷害、髄膜炎、偏頭痛およびアスピリン依存性抗血栓；腫瘍の成長、侵入および展開、血管形成、転移、悪性、腹水および悪性胸水；脳虚血、虚血性心臓病、骨関節炎、関節リウマチ、骨粗鬆症、喘息、多発性硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、卒中、血管炎、クローン病および潰瘍性大腸炎；歯周病、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性胃潰瘍、表皮水疱症；角膜潰瘍、網膜症および手術による創傷の治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、過敏症；再狭窄、鬱血性心不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化症またはエンド硬化症（ｅｎｄｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）。
【０３００】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０７８５９で列挙された疾患の治療で有用であり得る。言及し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：サイトカインおよび細胞増殖／分化活性；免疫抑制または免疫刺激活性（例えば、免疫不全症（ヒト免疫不全ウイルスへの感染を含めて）の治療；リンパ球成長の調節；癌および多くの自己免疫疾患の治療、および移植拒絶の防止または腫瘍免疫の誘発）；造血の調節（例えば、骨髄疾患またはリンパ球疾患の治療）のため）；骨、軟骨、腱、靱帯および神経組織の成長の促進（例えば、創傷の治癒、火傷、潰瘍および歯周病および神経変性を治療するため）；卵胞刺激ホルモンの阻害または活性化（受精能の調節）；走化性／化学動態ホルモン（例えば、特定の細胞型を傷害部位または感染部位に移動するため）；出血活性および血栓活性（例えば、血友病および卒中の治療のため）；抗炎症活性（例えば、敗血症性ショックまたはクローン病を治療するため）；抗菌剤として；例えば、代謝または挙動の調節剤；鎮痛剤として；特定の欠乏症を治療する；例えば、ヒトおよび動物の薬剤における乾癬の治療。
【０３０１】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０９９８５で列挙された障害の治療において有用であり得る。言及し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：マクロファージ阻害および／またはＴ細胞阻害活性、それゆえ、抗炎症活性；抗免疫活性、すなわち、細胞および／または体液免疫応答（炎症と関連していない応答を含めて）に対する阻害効果；マクロファージおよびＴ細胞が細胞外マトリックス成分およびフィブロネクチンに付着する性能、ならびにＴ細胞でのアップギュレートファス（ｆａｓ）レセプター発現を阻止する；不要な免疫反応および炎症を阻止することであって、これには、関節炎（関節リウマチを含めて）、過敏症に関連した炎症、アレルギー反応、喘息、全身性エリテマトーデス、膠原病および他の自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症に関連した炎症、動脈硬化症、アテローム硬化型心臓病、再灌流傷害、心不全、心筋梗塞、血管炎症障害、呼吸窮迫症候群または他の心肺疾患、消化性潰瘍に関連した炎症、潰瘍性大腸炎および胃腸管の他の疾患、肝臓線維症、肝硬変または他の肝臓病、甲状腺炎または他の腺疾患、糸球体腎炎または他の腎臓病および泌尿器病、耳炎または他の耳鼻咽喉病、皮膚炎または他の皮膚病、歯周病または他の歯の病気、精巣炎または副睾丸精巣炎、不妊症、睾丸外傷または他の免疫関連精巣病、胎盤不全、胎盤機能不全症、習慣性流産、子癇、子癇前症および他の免疫関連および／または炎症関連婦人病、後部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎、視神経炎、眼内炎症（例えば、網膜炎または類嚢胞黄斑浮腫）、交感性眼炎、強膜炎、網膜色素変性症、変性フォンダス（ｆｏｎｄｕｓ）疾患の免疫成分および炎症成分、眼球外傷の炎症成分、感染により引き起こされる眼球炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血性視神経障害、過剰傷瘢痕（例えば、緑内障濾過手術に続くもの）、眼球移植物に対する免疫および／または炎症反応および他の免疫および炎症関連眼病、自己免疫疾患または状態または他の障害に関連した炎症であって、この障害の場合、中枢神経系（ＣＮＳ）または任意の他の臓器の両方において、免疫および／または炎症抑制が有益である；パーキンソン病、パーキンソン病の治療の合併症および／または副作用、ＡＩＤＳ関連痴呆に複合したＨＩＶ関連脳症、デビック病、シデナム舞踏病、アルツハイマー病および他の変性疾患、ＣＮＳの状態または障害、卒中の炎症成分、小児麻痺後症候群、精神障害の免疫および炎症成分、脊髄炎、脳炎、亜急性硬化性汎脳炎、脳脊髄炎、急性神経障害、亜急性神経障害、慢性神経障害、ギラン・バレー症候群、シデナム舞踏症、重症筋無力症、偽脳腫瘍、ダウン症候群、ハンチントン舞踏症、筋萎縮性側索硬化症、ＣＮＳ圧縮またはＣＮＳ外傷またはＣＮＳの感染の炎症成分、筋萎縮および筋ジストロフィーの炎症成分、ならびに中枢および末梢神経系の免疫および炎症関連疾患、状態または障害、外傷後炎症、敗血症性ショック、感染症、手術の炎症性合併症または副作用、骨髄移植または他の移植の合併症および／または副作用、遺伝子治療の炎症および／または免疫合併症および副作用（例えば、ウイルスキャリアでの感染が原因のもの）、またはＡＩＤＳに関連した炎症、ホルモンおよび／または細胞免疫応答を抑制または阻害する、単球または白血球の量を少なくすることにより単球または白血球増殖疾患（例えば、白血病）を治療または改善する、天然または人工の細胞、組織および臓器（例えば、角膜、骨髄、臓器、水晶体、ペースメーカー、天然または人工の皮膚組織）の移植の場合での移植片拒絶の防止および／または治療。
【０３０２】
（化合物の調製）
本発明の化合物は、適当なアルコールと適当な塩化物とを反応させることにより、調製され得る。例として、本発明のスルファメート化合物は、適当なアルコールと、式Ｒ４Ｒ５ＮＳＯ２Ｃｌの適当な塩化スルファモイルとを反応させることにより、調製され得る。
【０３０３】
この反応を実行する典型的な条件は、以下のとおりである。
【０３０４】
塩化ナトリウムおよび塩化スルファモイルを、０℃で、このアルコールの無水ジメチルホルムアミド攪拌溶液に添加する。引き続いて、この反応物を室温まで暖め、それから、さらに２４時間にわたって、攪拌を継続する。その反応混合物を重炭酸ナトリウムの冷飽和溶液に注ぎ、得られた水相をジクロロメタンで抽出する。合わせた有機抽出物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥する。濾過に続いて真空中で溶媒蒸発し、トルエンと共に蒸発させると、粗残留物が得られ、これを、フラッシュクロマトグラフィーでさらに精製する。
【０３０５】
好ましくは、このアルコールは、適当なら、この塩化スルファモイルとの反応前に、誘導体化される。必要な場合、このアルコール中の官能基は、公知様式で保護され得、その保護基は、その反応の最後に除去される。
【０３０６】
好ましくは、このスルファメート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９〜２０６８）の教示に従って調製される。
【０３０７】
このホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示を適当に組み合わせることにより、調製され得る。
【０３０８】
このスルホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示を適当に適応させることにより、調製され得る。
【０３０９】
このチオホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９１／００２７０の教示を適当に適応させることにより、調製され得る。
【０３１０】
好ましい調製はまた、以下の本文で提示される。
【０３１１】
（要約）
要約すると、本発明は、ステロイドスルファターゼインヒビターおよび／またはアポトーシス調節剤および／または細胞周期調節剤および／または細胞成長調節剤として使用する新規化合物、ならびにそれらを含有する薬学的組成物を提供する。
【０３１２】
（実施例）
ここで、本発明を、添付の図面を参照して、例としてのみ、さらに詳細に説明する。
【０３１３】
図１は、要約図式である。
【０３１４】
ここで、本発明を、例としてのみ、説明する。しかしながら、これらの実施例はまた、本発明の好ましい化合物、ならびにそれを製造するための好ましい経路およびそれを調製する際に有用な中間体を提示することが理解されるべきである。
【０３１５】
（実施例１  −  ２−メチルスルファニル−１，３，５［１０］−エストラトリエン−３−オール（７）の合成）
（１７，１７−エチレンジオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン−３−オール）
【０３１６】
【化１５】
0005191079.tif 000011
エストロン（１２．５ｇ、４６．２ｍｍｏｌ）、トルエン（１５０ｍｌ）、エチレングリコール（１４ｍｌ）およびトシル酸（１２０ｍｇ）の懸濁液を、ディーン−スターク条件下にて、１４時間還流した。得られた淡桃色の透明溶液を、飽和重炭酸ナトリウム溶液（１５０ｍｌ）に注ぎ、そして酢酸エチル（２５０ｍｌ）で希釈した。洗浄した有機層を分離し、その水性残留物を、酢酸エチルのさらなるアリコート（１００ｍｌ）で抽出し、合わせた有機物を水（１５０ｍｌ）およびブライン（１５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させて、オフホワイトの結晶性固形物（融点１８３〜１８４℃）として、粗ジオキソロン（１５ｇ、１０３％）を得、これを、さらに精製することなく使用した（ＮＭＲにより、９５％より高い純度が示された）。
【０３１７】
（１７，１７−エチレンジオキシ−３−Ｏ−メトキシメチレン−１，３，５［１０］−エストラトリエン）
【０３１８】
【化１６】
0005191079.tif 000012
保護エストロン（１８．２ｇ、５８ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）の０℃溶液に、水素化ナトリウム（１．９１ｇ、４７．７ｍｍｏｌ、１．５当量）を一部ずつ添加し、Ｈ２の発生がなくなった後、メチルクロロメチルエーテル（８．８１ｍｌ、２当量）を滴下し、その攪拌溶液を、一晩かけて、室温にした。次いで、この溶液をアンモニア溶液（１００ｍｌ、２Ｍ）に注いで、全ての残留ハロエーテル汚染物質を破壊した。酢酸エチル（５００ｍｌ）を添加し、その水層を除去し、次いで、その有機層を、ブライン（５×２００ｍｌ）を一部ずつ滴下して洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた。得られた淡黄色オイルをカラムクロマトグラフィー（４：１のヘキサン：酢酸エチル、直径１０ｃｍのカラム、ベッド深さ２０ｃｍ）により精製して、無色オイル（１８．１１ｇ、８８％）として、その生成物を得、これを固化して、白色結晶固形物（融点６２〜６３℃）が得られた。混合カラム画分を再精製することにより、さらなる別の生成物１．６ｇを得た。
【０３１９】
【化１７】
0005191079.tif 000013
（２−メチルスルファニル−３−Ｏ−メトキシメチレン−１７，１７−エチレンジオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン）
【０３２０】
【化１８】
0005191079.tif 000014
保護エストラン（２０ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４００ｍｌ）攪拌溶液を、ドライアイス／アセトン浴中にて、−７８℃まで冷却した後、１．５時間にわたって、ｓｅｃ−ブチルリチウム（１２９ｍｌ、１６７ｍｍｏｌ、シクロヘキサン中の１．３Ｍ溶液）を滴下して処理した。そのアニオンを、さらに４時間にわたって、この温度で維持した後、次いで、５分間にわたって、ジメチルジスルフィド（２０ｍｌ、２２３ｍｍｏｌ）でクエンチし、次いで、さらに２時間にわたって、室温に温めた。この段階で、飽和塩化アンモニウム溶液（２５ｍｌ）を添加し、クエンチした溶液をジエチルエーテル（２５０ｍｌ）で希釈し、その有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３×１５０ｍｌ）、水（１５０ｍｌ）、最後に、ブライン（１５０ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させて、非常に淡黄色のオイルを得た。シリカゲル上にて、ヘキサン／酢酸エチル混合物（１００：０〜８５：１５）の勾配を付けた溶出により精製すると、無色透明オイルとして、所望のスルフィド（１４．６ｇ、３６ｍｍｏｌ、６５％）の純粋な画分が得られ、その混合物から、クロマトグラフィーにより、このスルフィドのさらなるバッチ（５．９ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を回収して、２０．５ｇの全体収量（９１％）を得た。
【０３２１】
（２−メチルスルファニル−１，３，５［１０］−エストラトリエン−３−オール（６））
【０３２２】
【化１９】
0005191079.tif 000015
塩化アセチル（６．１ｍｌ）を氷冷メタノール（１５．６ｍｌ）に注意深く添加することにより、含メタノールＨＣｌの４Ｍ溶液を調製し、５分間攪拌した後、この溶液を、保護したエストロンＸ（１．５ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）に注いだ。超音波処理を適用して、この保護エストロンの溶解を速めると、５分後、この反応混合物にピンク色が現れ、さらに１０分後、酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、次いで、この反応混合物を中和するのに十分な炭酸水素ナトリウムを添加した。次いで、その有機層を、水（２×５０ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させた。シリカゲル上にて、ヘキサン／酢酸エチル混合物（１００：０〜８０：２０）の勾配を付けた溶出により精製すると、白色結晶固形物（融点１５３−５℃）が得られ、これは、以下を示した：
【０３２３】
【化２０】
0005191079.tif 000016
（２−メチルスルファニル−３−Ｏ−スルファモイル−１，３，５［１０］−エストラトリエン（７））
【０３２４】
【化２１】
0005191079.tif 000017
２−メチルスルファニルエストロン（４００ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）攪拌溶液を、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（７７６ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ）で処理した。さらに５分後、塩化スルファモイル（５．４ｍｌ、３．７８ｍｍｏｌ、トルエン中で０．７Ｍ）を滴下し、得られた黄色溶液を、１６時間攪拌した。次いで、この反応混合物を水（２５ｍｌ）に注ぎ、その有機層を分離し、そして中性になるまで水で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させて、オイルを得た。カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸エチル９：１）により、白色結晶固形物（融点１８４−５℃）として、所望のスルファメートが得られ、これは、以下を示した：
【０３２５】
【化２２】
0005191079.tif 000018
（実施例２  −  ２−エチルスルファニル−３−Ｏ−スルファモイル−１，３，５［１０］−エストラトリエン（９）の合成）
（２−エチルスルファニル−３−Ｏ−メトキシメチレン−１７，１７−エチレンジオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン）
【０３２６】
【化２３】
0005191079.tif 000019
保護エストロン（５ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍｌ）攪拌溶液を、ドライアイス／アセトン浴中にて、−７８℃まで冷却した後、０．５時間にわたって、ｓｅｃ−ブチルリチウム（３２．２ｍｌ、４１．８ｍｍｏｌ、シクロヘキサン中の１．３Ｍ溶液）を滴下して処理した。そのアニオンを、さらに４時間にわたって、この温度で維持した後、次いで、５分間にわたって、ジエチルジスルフィド（９．１ｍｌ、７０ｍｍｏｌ）でクエンチし、次いで、さらに２時間にわたって、室温に温めた。この段階で、飽和塩化アンモニウム溶液（１０ｍｌ）を添加し、クエンチした溶液をジエチルエーテル（１００ｍｌ）で希釈し、その有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３×５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、最後に、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させて、非常に淡黄色のオイルを得た。シリカゲル上にて、ヘキサン／酢酸エチル混合物（１００：０〜８５：１５）の勾配を付けた溶出により精製すると、無色透明オイルとして、所望のスルフィド（５．３ｇ、１２．６ｍｍｏｌ、９７％）の純粋な画分が得られ、これは、以下を示した：
【０３２７】
【化２４】
0005191079.tif 000020
（２−エチルスルファニル−１，３，５［１０］−エストラトリエン−３−オール（８））
【０３２８】
【化２５】
0005191079.tif 000021
塩化アセチル（６．１ｍｌ）を氷冷メタノール（１５．６ｍｌ）に注意深く添加することにより、含メタノールＨＣｌの４Ｍ溶液を調製し、５分間攪拌した後、この溶液を、保護したエストロンＸ（１．８ｇ、４．３ｍｍｏｌ）に注いだ。超音波処理を適用して、この保護エストロンの溶解を速めると、５分後、この反応混合物にピンク色が現れ、さらに１０分後、酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、次いで、この反応混合物を中和するのに十分な炭酸水素ナトリウムを添加した。次いで、その有機層を、水（２×５０ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させた。結晶化（エタノール）により精製すると、黄色結晶固形物（融点１３９〜１４１℃）が得られ、これは、以下を示した：
【０３２９】
【化２６】
0005191079.tif 000022
（２−エチルスルファニル−３−Ｏ−スルファモイル−１，３，５［１０］−エストラトリエン（９））
【０３３０】
【化２７】
0005191079.tif 000023
２−エチルスルファニルエストロン（３００ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）攪拌溶液を、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（６１５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）で処理した。さらに５分後、塩化スルファモイル（４．２８ｍｌ、３ｍｍｏｌ、トルエン中で０．７Ｍ）を滴下し、得られた黄色溶液を、１６時間攪拌した。次いで、この反応混合物を水（２５ｍｌ）に注ぎ、その有機層を分離し、そして中性になるまで水で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させて、オイルを得た。カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸エチル９：１）により、白色結晶固形物（融点１７９〜１８１℃）として、所望のスルファメートが得られ、これは、以下を示した：
【０３３１】
【化２８】
0005191079.tif 000024
（実施例３  −  ２−メチルスルファニル−３−Ｏ−スルファモイル−１７−デオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン（５）の合成）
（３−Ｏ−メトキシメチレン−１７−デオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン）
【０３３２】
【化２９】
0005191079.tif 000025
１７−デオキシエストロン（３．１２ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）０℃攪拌溶液を、少しずつ、水素化ナトリウム（７３１ｍｇ、１８．３ｍｍｏｌ）で処理した。０．５時間攪拌した後、メチルクロロメチルエーテル（０．９３ｍｌ、２５ｍｍｏｌ）を添加し、その反応混合物を、一晩攪拌したまました。２Ｍアンモニア水（１０ｍｌ）を添加して、過剰の塩素化出発物質を破壊し、さらに１０分後、酢酸エチル（２００ｍｌ）およびブライン（５０ｍｌ）を添加した。その有機層を分離し、そしてブライン（５０ｍｌアリコート）で５回洗浄し、乾燥し、蒸発させ、そしてシリカゲル（溶離液として９：１のヘキサン：酢酸エチル）のカラムに入れて、無色透明オイルとして、所望の保護１７−デオキシエストロンを得、これは以下を示した。
【０３３３】
【化３０】
0005191079.tif 000026
（２−メチルスルファニル−３−Ｏ−メトキシメチレン−１７−デオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン）
【０３３４】
【化３１】
0005191079.tif 000027
保護エストロン（２．７８ｇ、９．３５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍｌ）攪拌溶液を、ドライアイス／アセトン浴中にて、−７８℃まで冷却した後、０．５時間にわたって、ｓｅｃ−ブチルリチウム（２８ｍｌ、２１．５ｍｍｏｌ、シクロヘキサン中の１．３Ｍ溶液）を滴下して処理した。そのアニオンを、１時間にわたって、この温度で維持し、次いで、５分間にわたって、ジメチルジスルフィド（４．２ｍｌ、４７ｍｍｏｌ）でクエンチし、次いで、さらに２時間にわたって、室温に温めた。この段階で、飽和塩化アンモニウム溶液（１０ｍｌ）を添加し、クエンチした溶液をジエチルエーテル（１００ｍｌ）で希釈し、その有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３×５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、最後に、ブライン（５０ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させて、分光学的に純粋な黄色オイルとして、所望の生成物を得、これは、以下を示した：
【０３３５】
【化３２】
0005191079.tif 000028
（２−メチルスルファニル−１７−デオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン−３−オール（４））
【０３３６】
【化３３】
0005191079.tif 000029
塩化アセチル（６．１ｍｌ）を氷冷メタノール（１５．６ｍｌ）に注意深く添加することにより、含メタノールＨＣｌの４Ｍ溶液を調製し、５分間攪拌した後、この溶液を、保護したエストロンＸ（１．８ｇ、５．２ｍｍｏｌ）に注いだ。超音波処理を適用して、この保護エストロンの溶解を速めると、５分後、この反応混合物にピンク色が現れ、さらに１０分後、酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、次いで、この反応混合物を中和するのに十分な炭酸水素ナトリウムを添加した。次いで、その有機層を、水（２×５０ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄した後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（８：１のヘキサン：酢酸エチル）により精製すると、無色透明オイルが得られ、これは、以下を示した：
【０３３７】
【化３４】
0005191079.tif 000030
（２−メチルスルファニル−３−Ｏ−スルファモイル−１７−デオキシ−１，３，５［１０］−エストラトリエン（５））
【０３３８】
【化３５】
0005191079.tif 000031
２−メチルスルファニルエストロン（５２０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍｌ）攪拌溶液を、室温で、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（８８３ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）で処理した。さらに５分後、塩化スルファモイル（６．１５ｍｌ、４．３ｍｍｏｌ、トルエン中で０．７Ｍ）を滴下し、得られた黄色溶液を、１６時間攪拌した。次いで、この反応混合物を水（２５ｍｌ）に注ぎ、その有機層を分離し、そして中性になるまで水で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させて、オイルを得た。カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸エチル９：１）により、白色発泡体（４７０ｍｇ、７２％）として、所望のスルファメートが得られ、これをエタノール／ヘキサンから結晶化して、白色結晶固形物（融点１１９〜１２０℃）を得、これは、以下を示した：
【０３３９】
【化３６】
0005191079.tif 000032
（実施例４  −  さらに別の合成実施例）
１７−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−１３−メチル−２−メチルスルファニル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールＡ
【０３４０】
【化３７】
0005191079.tif 000033
室温で、０．５時間にわたって、４−（ｔ−ブチル）ベンジルブロマイド（３．６７ｍｌ、エーテル２０ｍｌ中で２０ｍｍｏｌ）の含エーテル溶液をマグネシウムターニング（１．４８ｇ、６１ｍｍｏｌ）に滴下することにより、４−（ｔ−ブチル）ベンジルマグネシウムブロマイドの溶液を調製した。得られた混合物をさらに２時間攪拌した後、得られたグリニヤール試薬溶液１０ｍｌを添加を、２−メチルスルファニルエストロン（３１６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）室温攪拌溶液に添加した。一晩攪拌した後、その反応を飽和塩化アンモニウム溶液（１０ｍｌ）でクエンチし、酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出し、その有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして蒸発させた。生成物および出発物質のクロマトグラフィー分離を促進するために、その粗生成物をメタノール（３０ｍｌ）に溶解し、そしてホウ水素化ナトリウム（７５ｍｇ、２ｍｍｏｌ）で処理した。標準的なワークアップの後、この生成物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル勾配溶出）により精製して、白色固形物として、所望の生成物である１７−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−１３−メチル−２−メチルスルファニル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールを得、これは、以下を示した：
【０３４１】
【化３８】
0005191079.tif 000034
（スルファミン酸１７−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−２−メチルスルファニル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルエステルＢ）
【０３４２】
【化３９】
0005191079.tif 000035
先に調製したエストラジオール（１３０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解し、そしてジ−ｔ−ブチルメチルピリジン（１７２ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、塩化スルファモイル（０．７Ｍトルエン溶液１．２７ｍｌ、０．８９ｍｍｏｌ）で処理した。標準的なワークアップ後、カラムクロマトグラフィーにより、白色粉末（融点１３５℃）として、所望生成物（４２ｍｇ）を得、これは、以下を示した：
【０３４３】
【化４０】
0005191079.tif 000036
（１７−ベンジル−１３−メチル−２−メチルスルファニル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールＣ）
【０３４４】
【化４１】
0005191079.tif 000037
化合物Ａの合成と同じ様式で、２−メチルスルファニルエストロン（３１６ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をベンジルマグネシウムクロライド（ＴＨＦ中の２モル溶液５ｍｌ）と反応させて、白色粉末（２００ｍｇ）として、所望のエストラジオールを得、これは、以下を示した：
【０３４５】
【化４２】
0005191079.tif 000038
（スルファミン酸１７−ベンジル−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−２−メチルスルファニル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イルエステル）
【０３４６】
【化４３】
0005191079.tif 000039
化合物Ｂの合成と同じ様式で、エストラジオールＣ（１４２ｍｇ、０．３４８ｍｍｏｌ）をＤＢＭＰ（２１４ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）および塩化スルファモイル（０．７Ｍトルエン溶液１．５９ｍｌ、１．１１ｍｍｏｌ）と反応させて、白色粉末（１７８〜１８０℃）として、スルファメートＤ（４０ｍｇ）を得た。
【０３４７】
（実施例４−生物学的データ）
以下の表で識別した多数の化合物を合成した。
【０３４８】
【表２】
0005191079.tif 000040
これらの化合物により得られたＳＴＳ阻害を、プロトコル２の胎盤ミクロソームアッセイおびプレートアッセイに従って決定した。
【０３４９】
【表３】
0005191079.tif 000041
（実施例５−細胞周期およびアポトーシス分析）
ＭＣＦ７、ＣＡＬ５１、ＣＡＭＡ１およびＺＲ−７５−１乳癌誘導細胞株をＡＴＣＣ（ＭＣＦ７、ＣＡＭＡ１およびＺＲ−７５−１）またはＤｕｔｒｉｌｌａｕｘ研究所（ＣＡＬ５１）（２２）から得、そしてダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）（これは、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清および抗体で補足した）内で維持した。
【０３５０】
（２０）で記述したように、それぞれ、ヨウ化プロピジウム染色細胞およびＴｄＴ媒介ｄＵＴＰ−ニック末端標識化（ＴＵＮＥＬ）のフローサイトメトリ分析により、ＤＮＡ含量を決定した。この細胞周期のＧ２／Ｍ段階での細胞の割合は、２Ｎ〜４Ｎ  ＤＮＡ含量を備えた細胞の割合として計算した。＜Ｇ１  ＤＮＡ含量を備えた細胞の割合は、全細胞の百分率として計算した。
【０３５１】
有糸分裂における細胞の割合を決定するために、トリプシン処理により、薬剤で処理した細胞を収集し、サイトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎｓ）を調製した。細胞を、５分間にわたって、氷冷メタノールで固定し、空気乾燥し、そしてヨウ化プロピジウム（ＰＩ）（１０％（ｖ／ｖ）新生児ウシ血清および０．０５％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中、０．１ｍｇ／ｍｌ）を使用して、ＤＮＡを染色した。細胞を、ＬＳＭ５１０共焦点システムを備えたＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ  １００Ｍ顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ，Ｊｅｎａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、共焦点顕微鏡検査により、分析した。
【０３５２】
本発明者は、本発明の化合物の阻害効果に対する乳癌細胞株の特異な感度（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）があるかどうかを検査した。本発明の化合物は、このような効果を有することを示した。特に、化合物７は、細胞が丸くなってプレート／フラスコから引き離されるように誘導し、このことは、これらの細胞が、微小管崩壊、有糸分裂／細胞周期の制止およびアポトーシスを受けていることを意味していた。
【０３５３】
上記明細書で言及した全ての文献および特許および特許出願の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０３５４】
本発明の種々の改良および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明らかとなる。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して記述されているものの、請求された発明がこのような特定の実施形態には過度に限定されないことが理解できるはずである。実際、本発明を実施するために記載された様式の種々の改良は、化学、生物学または関連した分野の当業者に明らかであるが、上記特許請求の範囲の範囲内であると解釈される。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、要約図式である。
【図１】
0005191079.tif 000045