(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）ハンダマ生葉を乾燥し、
（２）前記工程で得られた乾燥物をそのまま又は粉砕し、５０〜８０％エタノール水溶液を供し、クロロフィルを含有する抽出残渣と、ＧＡＢＡとアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液とに分別し、
（３）前記工程で得られたＧＡＢＡとアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液に対してエタノールを回収除去することによりクロロフィルを沈殿させて除去し、ＧＡＢＡとアントシアニン系色素が濃縮された濃縮液を取得し、
（４）前記工程で得られた濃縮液を、疎水成分の吸着機能を持つ吸着材カラムに供することによりアントシアニン系色素を吸着させ、素通りするＧＡＢＡ含有水溶液を除去し、  （５）次いで、前記吸着カラムに吸着されたアントシアニン系色素をエタノール水溶液で溶出することによりアントシアニン系色素を含有する吸着画分を取得することを特徴とするアントシアニン系色素抽出物の製造方法。
【請求項２】
前記工程（１）で用いるハンダマ生葉の乾燥物は、ハンダマ生葉を凍結乾燥法、減圧温風乾燥法、或いは熱風乾燥法により乾燥して得たものである請求項１に記載のアントシアニン系色素抽出物の製造方法。
【請求項３】
前記工程（２）で用いるエタノール水溶液はｐＨが酸性側に調整されたものである請求項１に記載のアントシアニン系色素抽出物の製造方法。
【請求項４】
前記工程（２）で得られた抽出残渣に対しエタノール水溶液を再度供して、該抽出残渣中に未だ残存しているＧＡＢＡとアントシアニン系色素をエタノール水溶液に移行させ、夾雑物であるクロロフィルを抽出残渣として分別し、
該工程で得られたエタノール水溶液と前記工程（２）で得られたエタノール水溶液を混合し、次いで、前記工程（３）、（４）及び（５）を行う請求項１に記載のアントシアニン系色素抽出物の製造方法。
【請求項５】
前記工程（５）におけるアントシアニンを溶出・回収するためのエタノール水溶液は５０〜８０％のエタノール水溶液である請求項１に記載のアントシアニン系色素抽出物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハンダマ葉からアントシアニン系色素抽出物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ハンダマは、別名、金時草、或いはスイゼンジナとも呼ばれており、奄美大島では長寿食として多く食べられている。ハンダマは、高血圧抑制、抗酸化能、抗ガン能など健康維持機能を持つことが知られている。またハンダマには、アントシアニン系色素、クロロフィル、ＧＡＢＡ、粘性多糖類が含まれていることが知られている〔特開２００６−１１７５８４号公報（特許文献１）、特開２００７−２８９０５７号公報（特許文献２）、特許第４１１３９１８号公報（特許文献３）〕。
【０００３】
ハンダマは夏場において生じるアントシアニン系色素含量が著しく低下し、また寒さにも弱いため冬場は枯れて収穫できない。そこでハンダマ原料からアントシアニン系色素を効率的に抽出して、年間を通じてハンダマのアントシアニン系色素抽出物を製造する方法が望まれている。
【０００４】
従来、ハンダマ葉を熱水で加熱してアントシアニン系色素を熱水抽出する方法、あるいは加熱処理して凍結乾燥で保存後に熱水抽出する方法が知られているが、ハンダマ葉を熱水抽出するとハンダマ葉中の粘性多糖類が共に溶けだし、アントシアニン系色素の分別時の障害となっていた。
【０００５】
特許第４１１３９１８号公報（特許文献３）には、ハンダマの葉を蒸気加熱温度が８５〜１１０℃、蒸気加熱時間が３〜８分の条件で蒸気加熱した後、熱風乾燥して得た乾燥ハンダマを熱水で抽出し、或いはその抽出液を粉末化して、アントシアニン系色素を含有する色素抽出液又は粉末を製造する方法が示されている。
【０００６】
特開２００８−１７４４５９号公報（特許文献４）には、ハンダマを乾燥後、水及び親水性有機溶媒で抽出して得られた抽出液をそのまま、或いは濃縮して濃縮液又は乾燥物を得、或いは、抽出液から抽出溶媒を留去して乾燥して乾燥物を得ることが示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−１１７５８４号公報
【特許文献２】特開２００７−２８９０５７号公報
【特許文献３】特許第４１１３９１８号公報
【特許文献４】特開２００８−１７４４５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
前記特許文献３のアントシアニン系色素を含有する色素抽出液は、蒸気加熱した後、熱風乾燥して得た乾燥ハンダマを熱水で抽出してアントシアニン系色素を抽出しているが、該方法では乾燥ハンダマを熱水で抽出しているため水溶性粘性多糖類も同時に抽出されてしまい、抽出液と固形分を分別するのにろ過或いは遠心分離が極めて困難になるという問題がある。
【０００９】
前記特許文献３によれば、ハンダマをそのまま凍結乾燥により粉末化すると、得られる粉末は緑色を呈しており、目的とするアントシアニン系色素の赤紫色粉末は得られないとしている（特許文献３の段落〔０００９〕）。
【００１０】
前記特許文献４の抽出物は、アントシアニン系色素とＧＡＢＡを分別していない。
【００１１】
そこで本願発明は、アントシアニン系色素抽出物を製造するのに、クロロフィルを除去することができ、且つ、水溶性粘性多糖類を抽出せずにアントシアニン系色素抽出物を効率良く取得でき、アントシアニン系色素とＧＡＢＡを分別してアントシアニン系色素抽出物を得る製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記課題を解決するための本発明のアントシアニン系色素抽出物の製造方法は、（１）ハンダマ生葉を乾燥し、（２）前記工程で得られた乾燥物をそのまま又は粉砕し、５０〜８０％エタノール水溶液を供し、クロロフィルを含有する抽出残渣と、ＧＡＢＡとアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液とに分別し、（３）前記工程で得られたＧＡＢＡとアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液に対してエタノールを回収除去することによりクロロフィルを沈殿させて除去し、ＧＡＢＡとアントシアニン系色素が濃縮された濃縮液を取得し、（４）前記工程で得られた濃縮液を、疎水成分の吸着機能を持つ吸着材カラムに供することによりアントシアニン系色素を吸着させ、素通りするＧＡＢＡ含有水溶液を除去し、（５）次いで、前記吸着カラムに吸着されたアントシアニン系色素をエタノール水溶液で溶出することによりアントシアニン系色素を含有する吸着画分を取得することを特徴とする。
【００１３】
前記工程（１）で用いるハンダマ生葉の乾燥物は、ハンダマ生葉を凍結乾燥法、減圧温風乾燥法、或いは熱風乾燥法により乾燥して得ることができる。ハンダマ生葉を乾燥物とすることにより生葉に多量に含まれる水分が存在しないので、抽出に用いるエタノール水溶液のエタノール濃度が低下しない。そのためハンダマ葉に含まれる水溶性の粘性多糖類が抽出されず安定して抽出できる。
【００１４】
前記工程（２）で用いるエタノール水溶液はｐＨが酸性側に調整されたものであることが望ましい。酸性側ではアントシアニン系色素を安定に抽出するために望ましく、また、酸性下ではアントシアニンの呈色がきれいに観察できる。
【００１５】
前記工程（２）で得られたＧＡＢＡとアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液に対して、前記工程（３）によりエタノールを回収除去することにより、クロロフィルを沈殿させることができるので、クロロフィルを除去したＧＡＢＡとアントシアニン系色素が濃縮された濃縮液を取得することができる。
【００１６】
前記工程（４）において、前記工程（３）で得られた濃縮液を、疎水成分の吸着機能を持つ吸着材カラムに供することによりアントシアニン系色素を該吸着材カラムに吸着させ、ＧＡＢＡを素通りする水溶液として除去することができる。
【００１７】
前記工程（５）において、吸着カラムに吸着されたアントシアニン系色素をエタノール水溶液で溶出することによりアントシアニン系色素を含有する吸着画分を取得することができる。
【００１８】
さらにアントシアニン系色素の抽出率を上げるには、前記工程（２）で得られた抽出残渣に対しエタノール水溶液を再度供して、該抽出残渣中に未だ残存しているＧＡＢＡとアントシアニン系色素をエタノール水溶液に移行させ、夾雑物であるクロロフィルを抽出残渣として分別し、該工程で得られたエタノール水溶液と前記工程（２）で得られたエタノール水溶液を混合し、次いで、前記工程（３）、４及び（５）を行うことが好ましい。該クロロフィルを抽出残差として分別することにより、得られたアントシアニン系色素は、クロロフィル由来の黒緑色乃至緑色成分が排除される。
【００１９】
前記工程（５）におけるアントシアニン系色素を溶出・回収するためのエタノール水溶液は５０〜８０％のエタノール水溶液を用いることが望ましい。該アントシアニン系色素を５０〜８０％のエタノール水溶液で溶出・回収することにより、ハンダマ葉に含まれる粘性多糖類も抽出されない。
【発明の効果】
【００２０】
本発明のアントシアニン系色素抽出物の製造方法により得られたアントシアニン系色素抽出物は、粘性多糖類、クロロフィル、ＧＡＢＡの分離除去処理がなされているため、アントシアニン系色素抽出物は色調が安定であり、飲料の色付、酒の色付、ケーキ・パンの色付、米炊飯時の着色などあらゆる食品の加熱操作のあるなしにかかわらずに着色に利用でき、また、医薬品、化粧料の着色に利用できる。
【００２１】
本発明のアントシアニン系色素抽出物の製造方法によれば、ハンダマ生葉を乾燥して得た乾燥物に５０〜８０％のエタノールによりアントシアニン系色素を抽出しているので、アントシアニン系色素抽出操作時に、エタノール濃度を下げる原因となる葉の水分も影響せず、且つ、ハンダマ葉に含まれる粘性多糖類も抽出されず、アントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液は粘度の低いサラサラの状態となる。従って、アントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液は、固形分と分別が容易に行える。例えば、ロ紙を用いてブフナーロートなどで簡便に吸引ろ過、或いは遠心分離して固形分を分別してアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液を得ることができる。
【００２２】
ハンダマ生葉を乾燥して得た乾燥物に５０〜８０％のエタノール水溶液によりアントシアニン系色素を抽出しており、アントシアニン系色素抽出操作時に生じる抽出残差に大部分のクロロフィルが移行するのでクロロフィルを除去できる。さらに、アントシアニン系色素抽出操作時に得られるアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液に対してエタノールを回収除去する時にエタノール水溶液に一部溶解していたクロロフィルが沈殿するので、該クロロフィルを含有する沈殿物を除去することができる。したがって、本発明のアントシアニン系色素抽出物はクロロフィルの分離除去処理がなされている。
【００２３】
また、ハンダマ生葉を乾燥して得た乾燥物に５０〜８０％のエタノール水溶液によりアントシアニン系色素を抽出しているので、該抽出時にハンダマ葉から水分が移行することなくエタノール水溶液の濃度が低下しないので、蒸留等によるエタノールの回収を簡便に行うことができる。
【００２４】
本発明のアントシアニン系色素抽出物は、前記アントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液を、疎水成分の吸着機能を持つ吸着材カラムに供することによりアントシアニン系色素を吸着させ、ＧＡＢＡを素通りさせて除去し、該吸着カラムにエタノール水溶液を供してアントシアニン系色素を溶出しているので、得られたアントシアニン系色素を含有する抽出液にはＧＡＢＡの分離除去処理がなされている。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ハンダマ粗抽出物とＨＰ吸着区分のそれぞれのサンプルの溶出パターンを示す図である。
【図２】図１のピーク部分を拡大して示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
ハンダマ生葉を凍結乾燥法、減圧温風乾燥法、或いは熱風乾燥法により乾燥する。乾燥物は砕いて室温で保存できる。粉砕した乾燥ハンダマ葉に室温で５０〜８０％エタノール水溶液、好ましくは５５〜７５％エタノール水溶液、さらに好ましくは６０〜７０％エタノール水溶液を加えて攪拌し、ＧＡＢＡとアントシアニン系色素を抽出する。エタノール水溶液の濃度が５０％未満ではハンダマ葉に含まれる粘性多糖類が抽出されてきて、ろ過あるは遠心分離が困難となり抽出液を得るのに不都合があるので、５０％以上とすることが必要である。アルコール濃度が８０％を超える場合には費用が増すので経済的観点から好ましくない。
【００２７】
抽出に用いるエタノール水溶液は、酸で酸性側に調整しておくことが望ましい。酸性側ではアントシアニン系色素を安定に抽出するために望ましく、酸性下ではアントシアニンの呈色がきれいに観察できる。
【００２８】
エタノール水溶液で抽出する抽出液と固形分はろ過あるいは遠心分離法で分離され、固形分を分離除去し、抽出液を集める。この時、凍結乾燥ハンダマ葉を原料とすることから、生葉に多量に含まれる水分が存在しないので、エタノール水溶液のエタノール濃度が低下しない。そのためハンダマ葉に含まれる水溶性の粘性多糖類が抽出されず安定して抽出できる利点がある。また、粘性多糖類が抽出されないため抽出液の粘度が上昇しないのでろ過あるいは遠心分離法で極めて簡便に抽出液を得ることができる。
【００２９】
抽出残渣に再度、５０〜８０％エタノール水溶液、好ましくは５５〜７５％エタノール水溶液、さらに好ましくは６０〜７０％エタノール水溶液を加えて攪拌し、乾燥葉のアントシアニンン系色素及びＧＡＢＡを抽出・回収することにより回収率を高めることができる。従って、多量の凍結乾燥葉を用いて少ない溶媒量でアントシアニン系色素及びＧＡＢＡの効率的な抽出が可能となる。
【００３０】
次に、減圧下（例えば、ロータリーエバポレーターを使用して）でエタノールを回収除去する。このエタノール除去時にエタノール濃度の減少と共に共雑物であるクロロフィルが沈澱するため、これを分離除去する。次に、少量の水を加えて更に減圧濃縮を繰り返しエタノールを回収除去、例えば、留去すると同時に、共雑するクロロフィルを再度分離除去する。残った水溶液は、微酸性の赤色透明で、きれいなアントシアニン系色素及びＧＡＢＡを含有する水溶液が得られる。
【００３１】
前記特許文献３のハンダマ色素の抽出法では、凍結乾燥法ではうまくアントシアニン系色素を抽出することが不可と報告している。この原因はアントシアニン系色素がクロロフィルと共に抽出され、黒い溶液となることを指している。本発明では５０〜８０％エタノール水溶液でのアントシアニン系色素抽出操作時に生じる抽出残差に大部分のクロロフィルが移行するのでクロロフィルを除去でき、且つ、エタノールを回収除去することで、エタノール水溶液中に一部溶解していた共雑物であるクロロフィルを沈殿として除くことにより、前記特許文献３の問題点をクリアーしている。
【００３２】
次に、前記工程で得られたアントシアニン系色素及びＧＡＢＡを含有する水溶液を疎水成分の吸着機能を持つ吸着材を充填したカラムに供し、疎水成分であるアントシアニン系色素を吸着させ、素通り画分にはＧＡＢＡが溶出するので除去する。ついで、該カラムを充分量の水で洗浄することにより、さらにＧＡＢＡを溶出させて除去する。
【００３３】
次に、吸着しているアントシアニンを４０％〜８０％エタノール水溶液、さらに好ましくは４５％〜７０％のエタノール水溶液で溶離・回収し、この画分を再度減圧化でエタノールを除去・回収し、濃縮されたアントシアニン水溶液を得る。得られた濃縮アントシアニン溶液を凍結乾燥し、乾燥品を得る。前記疎水成分の吸着機能を持つ吸着材には、例えば、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着材が挙げられ、例えば、三菱化学株式会社製のＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ２０（商品名）を用いることができる。
【００３４】
水洗後、吸着しているアントシアニン系色素をエタノール水溶液、好ましくは４０％〜８０％のエタノール水溶液、さらに好ましくは４５％〜７０％のエタノール水溶液で溶出・回収し、再度減圧下でエタノールを回収・除去し、アントシアン系色素含有水溶液を得る。これを凍結乾燥法で乾燥粉末化してアントシアニン系色素粉末を得る。
【実施例】
【００３５】
［実施例１］
アントシアニンの抽出
ハンダマ生草を水洗後、凍結乾燥させたものをミルにて粉砕させ、ハンダマ粉末とした。得られたハンダマ粉末２．５ｇを５％酢酸を含有する７０％エタノール水溶液に加え、よく攪拌後、４，５００ｒｐｍ、２０分間遠心分離することにより固形分を分離除去し、得られた溶液をハンダマ粗抽出物とした。
【００３６】
得られたハンダマ粗抽出物をエバポレーターにて減圧濃縮することにより酢酸およびエタノールを除去して５倍濃縮抽出物を得た。これを三菱化学株式会社製のＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ２０（商品名、スチレン−ジビニルベンゼン系クロマト分離材）を充填したカラム（直径４０ｍｍ、長さ３００ｍｍ）にアプライし、蒸留水にて溶出して素通り画分を得た。さらに５０％エタノール水溶液に溶媒を切り替え、カラムに吸着していた成分を溶出してＨＰ吸着画分を得た。
【００３７】
前記工程で得られたハンダマ粗抽出物およびＨＰ吸着区分をそれぞれ凍結乾燥した。各々の凍結乾燥品をアセトニトリルにてそれぞれ１ｍｇ／ｍｌに溶解させた。それぞれのアセトニトリル溶解液についてＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を用いて分析を行った。測定条件はインタクト社製Ｃａｄｅｎｚａ  ＣＤ−Ｃ１８（商品名、２５０×４．６ｍｍ）カラムを用い、流速１ｍ／ｍｉｎ、検出波長２６０ｎｍとし、移動層（Ａ）水／ＴＦＡ＝１００：０．１、（Ｂ）アセトニトリル／ＴＦＡ＝１００：０．１を０〜１２分までは（Ａ）：（Ｂ）＝９０：１０で、１２〜２０分までは（Ａ）：（Ｂ）＝６０：４０のリニアグラジエントで溶出を行った。
【００３８】
ハンダマ粗抽出物とＨＰ吸着区分のそれぞれのサンプルの溶出パターンを図１、図２の矢印Ａ、矢印Ｂにて示す。図２は図１の種々の個別のアントシアニンのピーク部分を拡大して示したものである。図１及び図２によれば、ハンダマ粗抽出物ではそれぞれのアントシアニンのピークは非常に小さいものであった。これに対してＨＰ吸着区分の分析パターンでは各ピークが明瞭に出現することがわかった。
【００３９】
図１及び図２のアントシアニンのピーク中のＮｏ．１およびＮｏ．２のアントシアニンを代表的に着目した。表１に、ピークＮｏ．１、ピークＮｏ．２について、ｔＲ（リテンションタイム：クロマトでサンプルを注入した後に、その画分がカラムから溶出するまでに要する時間）、ハンダマ粗抽出物５μｇの場合のピークの面積、ハンダマＨＰ２０吸着部５μｇの場合のピーク面積、並びに、相対面積比（吸着部／粗抽出部）を示す。
【００４０】
【表１】
0005137220.tif 000002
【００４１】
図１及び図２のピークパターン中のＮｏ．１およびＮｏ．２の画分についてＨＰ吸着区分／ハンダマ粗抽出部の面積比でみてみるとＮｏ．１のピークで３９．３倍、Ｎｏ．２のピークで１５．５倍に濃縮されていた。また、ＨＰ吸着区分について塩酸−メタノール法にてアントシアニンの定量を行ったところ、デルフィニジン相当量として１４．８％相当量であることがわかった。
【００４２】
これは、三菱化学株式会社製のＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ２０（商品名、スチレン−ジビニルベンゼン系クロマト分離材）を充填したカラムにより、アントシアニンが高濃度に濃縮されたことを示す。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
本発明のアントシアニン系色素抽出物の製造方法により得られたアントシアニン系色素抽出物は、粘性多糖類、クロロフィル、ＧＡＢＡの分離除去処理がなされているため、アントシアニン系色素抽出物は色調が安定であり、飲料の色付、酒の色付、ケーキ・パンの色付、米炊飯時の着色などあらゆる食品の加熱操作のあるなしにかかわらずに着色に利用でき、また、医薬品、化粧料の着色に利用できる。
【要約】
【課題】  アントシアニン系色素抽出物を製造するのに、クロロフィルを除去でき、且つ、水溶性粘性多糖類を抽出せずにアントシアニン系色素抽出物を効率良く取得でき、アントシアニン系色素とＧＡＢＡを分別してアントシアニン系色素抽出物を得る製造方法を提供する。
【解決手段】  ハンダマ生葉を乾燥し、乾燥物をそのまま又は粉砕し、５０〜８０％エタノール水溶液を供し、クロロフィルを含有する抽出残渣と、ＧＡＢＡとアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液とに分別し、得られたＧＡＢＡとアントシアニン系色素を含有するエタノール水溶液に対してエタノールを回収除去することによりクロロフィルを沈殿させて除去し、ＧＡＢＡとアントシアニン系色素が濃縮された濃縮液を取得し、濃縮液を、疎水成分の吸着機能を持つ吸着材カラムに供することによりアントシアニン系色素を吸着させ、素通りするＧＡＢＡ含有水溶液を除去し、次いで、前記吸着カラムに吸着されたアントシアニン系色素をエタノール水溶液で溶出することによりアントシアニン系色素を含有する吸着画分を取得する。
【選択図】なし【図１】
0005137220.tif 000003
【図２】
0005137220.tif 000004