(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ラディックスサルビアミルトリザエとパナックスノトギンセンとを別々に熱水還流処理と濾過処理とで別々に抽出するステップと、
ｂ）濾液を別々に濃縮するステップと、
ｃ）樹脂カラムを使用して濃縮液を別々に濃縮精製し、ラディックスサルビアミルトリザエとパナックスノトギンセンの精製水溶性抽出液を別々に入手するステップと、
ｄ）ステップ（ｃ）から得られた精製水溶性抽出液を適量のボルネオールと共に混合するステップと、
を含むダンシェンピル（ＤＳＰ）を製造する方法。
【請求項２】
（１）パナックスノトギンセンの水溶性成分を次のように抽出するステップと：
（ａ）薬草を５倍から７倍の水で薄める；
（ｂ）空気圧０．０４から０．０６ＭＰａで２時間、タンク内で沸騰させてパナックスノトギンセンの水溶性成分を抽出する；
（ｃ）同一条件で１．５時間、工程（ｂ）の抽出を反復する；
（ｄ）抽出液を１００−メッシュネットで濾過する；
（ｅ）微小孔質吸着樹脂を使用してエタノールで溶出することで濾液を精製する；
（ｆ）密度が１．３３ｇ／ｃｍ３から１．３５ｇ／ｃｍ３となるまで、空気流入を０．０４から０．０６ＭＰａとし、真空状態を−０．０７６から−０．０８８ＭＰａとした減圧条件下で溶出抽出液を濃縮する、
（２）ラディックスサルビアミルトリザエの水溶性成分を次のように抽出するステップと、：
（ａ）薬草を５倍から７倍の水で薄める；
（ｂ）空気圧０．０４から０．０６ＭＰａで２時間、タンク内で沸騰させてラディックスサルビアミルトリザエの水溶性成分を抽出する；
（ｃ）同一条件で１．５時間、工程（ｂ）の抽出を反復する；
（ｄ）抽出液を１００−メッシュネットで濾過する；
（ｅ）１Ｋｇの当初薬草が１リットルとなるまで、真空状態を−０．０７６から−０．０８８ＭＰａとした減圧条件下で濾液を濃縮する；
（ｆ）エタノールで濃縮液を沈殿させる；
（ｇ）１００−メッシュネットでエタノール沈殿溶液を濾過する；
（ｈ）空気圧０．０４から０．０６ＭＰａとし、真空状態を−０．０７６から−０．０８８ＭＰａとした減圧条件下で濾液を濃縮する；
（ｉ）エタノールでポリアミドクロマトグラフィ溶出することで濃縮液を精製する；
（ｊ）密度が１．３３ｇ／ｃｍ３から１．３５ｇ／ｃｍ３になるように精製抽出液を濃縮する、
（３）錠剤を次のように製造するステップと：
（ａ）パナックスノトギンセンの抽出液、ラディックスサルビアミルトリザエの抽出液、合成ボルネオール及びポリエチレングリコール６０００を４．０：２０．６：１．９：７９．５の割合で混合する；
（ｂ）混合物を溶解させる；
（ｃ）次の仕様の滴下機械を用いて溶解混合物を錠剤とする：
ドロップポット温度：８９から９３℃
冷却剤：８℃未満の流動パラフィン
ドロップヘッド内径：１．８ｍｍ
ドロップヘッド外径：２．４ｍｍ
ドロップヘッドと冷却剤表面との距離：１５ｃｍ
（ｄ）８００から１１００ｒｐｍで１５分間錠剤を遠心分離処理してオイルを取り除く、を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本願を通じて、様々な刊行物が参照されており、こうした刊行物の引用はすべて、本明細書の終わり、特許請求の範囲の前にある参考文献一覧において確認することができる。こうした刊行物の開示内容は、本明細書に記載され且つ請求される本発明の日付の時点で当業者に公知の最新技術を十分に説明するために、参照により本願に含めるものとする。
【０００２】
慢性安定狭心症は、一過性の心筋虚血によるものである。単独使用又は互いに組み合わせて使用される、アスピリン、硝酸塩、ベータアドレナリン受容体遮断薬、及びカルシウムチャネル遮断薬は、狭心症に関して一般に使用される薬物である。
【０００３】
アスピリンは、抗血栓剤として、慢性安定狭心症の対症療法となる。
【０００４】
硝酸塩は、アンギナ性の症状の発現を治療するのに使用され、予測可能な症状を有する患者の予防においても効果を発揮できる。すべての硝酸塩について、特定の敏感な個人では、不快な頭痛のために使用が控えられる場合がある。
【０００５】
ベータアドレナリン受容体遮断薬は、狭心症治療の基礎とされているが、閉塞性気道疾患及び重度の心室機能障害を有する患者では明確に禁忌であり、糖尿病患者、及び末梢血管疾患、除脈、又は心臓ブロックを有する患者では相対的に禁忌である。
【０００６】
カルシウム拮抗薬は、狭心症において確実に有効であり、冠状動脈及び抹消循環における平滑筋の弛緩により効果を達成し、心筋の供給を増加させ、心筋の働きを低減する。
【０００７】
狭心症の複合薬による治療には進歩が見られ、大部分の患者は、硝酸塩とベータアドレナリン受容体遮断薬又はカルシウム拮抗薬とにより治療を開始するが、非常に有効で、長期間に渡って摂取可能で、非常に毒性の低い慢性安定狭心症の薬物に対する必要性が存在している。
【０００８】
上で述べた薬物に関連する問題点を考慮して、慢性安定狭心症の標準的な治療の代替として、薬草治療を応用するために注目すべき努力が成されてきた。中国伝統医学（ＴＣＭ）は、この点に関して大きく貢献している。
【０００９】
米国特許第５２８８４８５号及び第５４３３９５７号では、狭心症等の血液循環の障害によって生じる疾患を治療又は予防するｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｅｒｅｃｔｕｍ  ｔｈｕｎｂからの抽出物について触れている。
【００１０】
米国特許第５７７６４６３号では、狭心症を含む循環系心疾患に関連するストレスを予防及び治療する、ルリヂサの花弁又はルリヂサ花弁の抽出物を含む経口製薬組成物について触れている。
【００１１】
ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ  ｅｒｅｃｔｕｍ  ｔｈｕｎｂ及びルリヂサ花弁に加え、他の多くの薬草も、狭心症の治療に使用されている。こうした植物の一つは、Ｖａｌｅｒｉａｎａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  ｌａｔｉｆｏｌｉａである。ヤンＧＹら（１９９４）は、８２人の狭心症患者をＶａｌｅｒｉａｎａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  ｌａｔｉｆｏｌｉａにより治療したと報告しており、そのうち５０人の病状では、治療前にＳＴ−Ｔの虚血性変化がＥＣＧに現れていた。単純狭心症（検出可能な虚血の所見がないもの）に関する全体の実効率は、８７．８０％であり、虚血の所見がある狭心症では、８８．００％だった。加えて、Ｖａｌｅｒｉａｎａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  ｌａｔｉｆｏｌｉａが血漿脂質を低下させることも発見された。肝臓、腎臓、造血組織に対する毒性は見られなかった（１）。
【００１２】
ウーＹ（１９９０）は、狭心症を有する２６７人の患者において、Ｘｉｎｔｏｎｇｋａｎｇカプセルにより治療した患者の９３．３％に効果があったと報告している。
【００１３】
Ｓｈｅｎｓｈａｏ  ｔｏｎｇｇｕａｎ  ｐｉａｎと呼ばれる別の薬草製剤も、狭心症の治療に使用されている。１９９０年、フーＪＸらは、Ｓｈｅｎｓｈａｏ  ｔｏｎｇｇｕａｎ  ｐｉａｎが薬用人参及びＲａｄｉｘ  Ｐａｅｏｎｉａｅ  Ａｌｂａその他の茎及び葉からのサポニンにより主に構成されていると報告した。狭心症治療における全体の実効率は、９４．７１％であり、ＥＣＧの改善率は、６３．３８％だった。加えて、研究室での調査により、Ｓｈｅｎｓｈａｏ  ｔｏｎｇｇｕａｎ  ｐｉａｎが、左心室での拍出を促進し、血液の粘性を低減し、血液の血小板の凝血を抑制することも明らかとなった。急性及び慢性の毒性試験では、Ｓｈｅｎｓｈａｏ  ｔｏｎｇｇｕａｎ  ｐｉａｎに毒性又は副作用がないことが分かっている。
【００１４】
Ｋｕｏ−ｇｕａｎ顆粒は、狭心症のための別の薬草製剤である。リーＹら（１９９０）は、狭心症を伴う冠状動脈性心疾患を有する３１人の患者における原子吸光分析法及びＤＴＮＢ着色により、１ヶ月のＫｕｏ−ｇｕａｎ顆粒の摂取の前後で、血漿亜鉛、銅、及び赤血球のグルタチオンペルオキシダーゼの変化が測定されたと報告した。この結果では、治療前（Ｐ＜０．０１）には、正常な対照群に比べ、患者の血漿亜鉛及び赤血球のグルタチオンペルオキシダーゼは低く、銅は高くなっており、治療後（Ｐ＜０．０１）には、血漿亜鉛及び赤血球のグルタチオンペルオキシダーゼが増加し、銅が減少している。これは、狭心症を伴う冠状動脈性心疾患に対するＫｕｏ−ｇｕａｎ顆粒の治療的メカニズムが、体内の微量元素の障害を調整することに関連する可能性を示している。
【００１５】
Ｔｒｉｂｕｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓのサポニンは、狭心症を治療するもう一つの薬草組成である。
【００１６】
Ｆｕｆａｎｇ  Ｄａｎｓｈｅｎ  Ｐｉａｎは、Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットの民間処方であり、これは冠状動脈虚血による慢性安定虚血症の治療を示しており、１９７７年版以降、中国薬局方に記載されており、数十年に渡って臨床使用されている。
【００１７】
Ｆｕｆａｎｇ  Ｄａｎｓｈｅｎ  Ｐｉａｎは、植物からの多数の有効抽出物を含有する、これにはダンシェン（Ｄａｎｓｈｅｎ）（Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅ）、及びサンチ（Ｓａｎｃｈｉ）（Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ）が含まれる。これら両方の植物が、最初に記録されたのは、２００年に完成したＳｈｅｎ  Ｎｏｎｇ  Ｂｅｎ  Ｃａｏ  Ｊｉｎｇ（Ｓｈｅｎ−ｎｏｎｇの薬草薬局方）である。Ｆｕｆａｎｇ  Ｄａｎｓｈｅｎ  Ｐｉａｎは、更に、天然ボルネオール（Ｂｉｎｇｐｉａｎ）の異形である合成ボルネオールを含む。天然ボルネオールが、最初に記録されたのは、６５９年頃に編纂された、Ｔａｎｇ  Ｂｅｎ  Ｃａｏ（唐王朝の薬草薬局方）である。
【００１８】
リー・チェンズーら（１９７９）は、（Ａｃｔａ  Ａｃａｄ  Ｍｅｄ  Ｐｒｉｍ  Ｓｈａｎｇｈａｉ）において、Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの血栓阻害効果の実験的研究について報告している。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ血栓症、血小板及び凝固、フィブリン溶解に対する効果を、ウサギで観察している。Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの注射後、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ血栓症の阻害において、三つのリンクが重要な役割を果たすことが発見され、これは（１）血小板機能の阻害と、（２）凝固機能の阻害と、（３）フィブリン溶解の促進だった。このうち、最初に二つのメカニズムは、より強く機能する。この結果は、血栓性疾患、特に動脈血栓性疾患の治療におけるものと一致している。
【００１９】
チャンＷＴら（１９８２）は、（Ａｃｔａ  Ａｃａｄ  Ｍｅｄ  Ｐｒｉｍ  Ｓｈａｎｇｈａｉ）において、イヌの虚血心筋及び分離されたブタの冠状動脈における「ダンシェンス（Ｄａｎｓｈｅｎｓｕ）」及びｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの他の二つの水溶性構成要素の効果について報告している。新しい三種類の水溶性構成要素、つまり、Ｓａｌｖｉａ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ  Ｂｕｎｇｅから分離されたダンシェンス（ＤＳ−１８２、Ｄ（＋）−３，４−ジヒドロキシフェニル乳酸）、プロトカテク酸アルデヒド（ＰＣＡＤ）、及び、不純ジテルペン酸（ＤＳ−１８７）を、ジピリダモールのものと比較している。結果では、（１）マウスにおいて、ＤＳ−１８２は、低酸素症に対する大きな保護を提供したが、ＰＣＡＤは効果が無く、（２）ＤＳ−１８２は、ピッイトリンが誘発する心電計での虚血性のＳＴ−Ｔの上昇を無効にできるが、心拍数の低下に対する効果は有していない。ＤＳ−１８７、ＰＣＡＤ、及びジピリダモールは、不完全な保護のみを示し、（３）左冠状動脈の下行枝の結紮により準備した急性梗塞のイヌのモデルにおいて、ＤＳ−１８２の静脈注射により達成された利点は、左心室機能、左心室ピーク収縮期血圧（ＬＶＰＳＰ）、及び左心室終点拡張期血圧（ＬＶＥＤＰ）に関して、ＤＳ−１８７及びＰＣＡＤより優れていることが証明された。ＰＣＡＤは、逆に、ＬＶＰＳＰ及びＬＶＥＤＰにおける悪影響を発生させる。静脈から投与したジピリダモールは、ＬＶＥＤＰを変化させないが、ＬＶＰＳＰを大幅に抑制し、顕著な低血圧効果を伴う。サルビア及びジピリダモールのこうした構成要素は、すべて、最終的な心筋の梗塞のサイズ（Ｎ−ＢＴ評価）を低減しており、ＤＳ−１８２が最も効果的で、ジピリダモール及びＤＳ−１８７が次に続き、ＰＣＡＤが最低であり、（４）分離し潅流されたブタの冠状動脈標本において、ＤＳ−１８２は、冠状血管の抵抗を大幅に減少させ、一方、ＤＳ−１８７、ＰＣＡＤ、或いは、サルビアの別の構成要素であるナトリウムタンシノンＩＩ−Ａスルホン酸塩（ＤＳ−２０１）は、これを増加させた。分離された冠状動脈標本に対するモルヒネ及びプロプラノロールの収縮作用は、ＤＳ−１８２の事前投与により中和された。こうしたすべての事柄は、虚血性心疾患の治療において、ダンシェンスがＳａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの主要な有効成分である可能性があり、プロプラノロール又はモルヒネとの併用が有益であることを示していた。
【００２０】
リー・チェンズーら（１９８３）は、（Ｃｈｉｎ  Ｊ  Ｉｎｔｅｇｒ  Ｍｅｄ）において、Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの抗凝集効果について報告している。ダンシェンスは、Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅから抽出される水溶性モノマである。市販される注入薬Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの主要な成分でもある。本研究では、ダンシェンスが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの血栓と、血小板の凝集（ＡＤＰにより誘発）と、内部及び外部の凝集体系とを抑制し、血小板の数を減少させ、フィブリン又はフィブリノゲンの分解を促進することが証明された。こうした効果は、ウサギへの２０ｍｇ／ｋｇの単一の注射から３０分後にピークに達し、一時間継続し、徐々に回復した。注射から４．５時間には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの血栓症試験を除き、すべてが正常に戻った。
【００２１】
チェン・チャンホワ（１９８７）は、Ａｃｔａ  Ａｃａｄ  Ｍｅｄ  Ｐｒｉｍ  Ｓｈａｎｇｈａｉにおいて、実験的な微小循環障害及び血漿乳酸濃度に対する「ダンシェンス」の効果について報告している。天然ダンシェンスは、Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅ（ＲＳＭ）から抽出された水溶性のモノマである。ウサギの微小循環障害は、高分子量のデキストランの静脈注射により誘発された。天然ダンシェンス（４乃至６ｍｇ／ｋｇ投与）は、眼球結膜の毛細血管の数を顕著に増加させ、ウサギの血漿乳酸の濃度を減少させた。腸間膜微小循環障害は、マウスでの局所的なノルアドレナリン（４ｇ）点滴により生成した。天然ダンシェンスは、動脈を拡張し、血流の速度を加速し、これにより、微小循環血液の停止を排除した。我々の実験において、合成ダンシェンスの効果が、付随して観察された。この結果において、微小循環障害の軽減において、天然及び合成ダンシェンスには大きな違いが見られなかった。
【００２２】
スン・シーミンら（１９９１）は、ダンシェン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）の抽出物の新しい薬理作用を報告している。この文書では、細胞培養の研究により、Ｄ（＋）−（３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸のナトリウム塩を含むダンシェン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）の抽出物が、細胞内のコレステロールの生合成及び抗リポタンパク質酸化を減少させる新しい薬理作用を有することが発見されたと報告している。対照との比較では、電気泳動速度が顕著に低下し、ＭＤＡ含有量及び細胞毒性が明らかに減少した。こうした結果は、Ｄ（＋）−（３，４−ジヒドロキシフェニル）乳酸の塩が、アテローム性動脈硬化の予防及び治療に有効である可能性を示している。
【００２３】
チェン・ルオシュワンら（１９９２）は、（Ｃｈｉｎ  Ｊ  Ｉｎｔｅｇｒ  Ｍｅｄ）において、マウスの冠状動脈結紮により誘発した心筋虚血に対するＲａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの予防効果について報告している。冠状動脈結紮によるマウスの急性心筋虚血に関する明らかな予防効果は、Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの水抽出物（５ｇ生薬／ｋｇ）の腹膜内投与後に得られた。処置グループでは、対照と比較して、心筋虚血によるＥＣＧでのＳ−Ｔ部の上昇は遙かに低く、左心室での虚血サイズは小さく、生存率は高かった。
【００２４】
ウー・ヤオチョンら（１９９５）は、（Ａｃｔａ  Ｎａｎｊｉｎｇ  Ｕｎｉｖ  Ｔｒａｄ  Ｃｈｉｎ  Ｍａｔｅｒ  Ｍｅｄ）において、鬱血を除去することで血液の循環を促進することにおけるＲａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの効果について報告している。Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの薬理学的研究は、一般的である。しかしながら、血小板により生成されるＰＧＩ２、ＥＴ、及びＴＸＡ２を評価することによるＲａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの流動学的研究は、数少ない。ウサギにおける血栓症と、ＰＴ、ＫＰＴＴ、ＦＧ、ＥＳＲ、及びＨＣＴの変化と、血小板凝集とに対するＲａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの影響は、本研究において評価されている。結論としては、Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅは、ＴＸＡ２の合成を低下させ、血小板凝集及び血栓症の増加による影響を減少させる。
【００２５】
シー・リンら（１９９０）は、（Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍｃｏｌ  Ｓｉｎ）において、頸動脈のＰＧＩ2の増加及び血小板のＴＸＡ２の減少におけるＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇのトータルサポニンの効果について報告している。Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇのトータルサポニン（ＰＮＳ）は、８週間に渡ってウサギに一日１００ｍｇ／ｋｇを経口投与した。大動脈アテローム斑形成は、対照群と比較して抑制された。ラジオイムノアッセイを使用して、頸動脈におけるプロスタサイクリン及びラットの血小板におけるトロンボキサンＡ２の含有量に対するＰＮＳの影響が調査された。一日２５、５０、１００ｍｇ／ｋｇのＰＮＳの経口投与により、対照群と比較して、頸動脈のプロスタサイクリンは増加し、血小板のトロンボキサンＡ２は減少した。こうした結果は、ＰＮＳの抗アテローム硬化作用がプロスタサイクリンとトロンボキサンＡ２との間の不均衡の修正の結果である可能性を示した。
【００２６】
リー・シンら（１９９０）は、（Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍｃｏｌ  Ｓｉｎ）において、ラットにおける虚血及び再潅流によって誘発された実験的な心筋傷害に関するＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇサポニンの保護効果について報告している。心臓虚血及び再潅流によって誘発された心筋傷害に対する、Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇのトータルサポニン（ＰＮＳ）と、ＰＮＳからの精製ジンセノイドＲb1及びＲg1との効果は、ｉｎ  ｓｉｔｕ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏでのラットの心臓を使用して研究された。ペントバルビタール麻酔を施したラットにおいて、ＰＮＳ前処置（１００及び２００ｍｇ／ｋｇ）により、対照と比較して、左下行冠状動脈結紮（４０分）及び再潅流（１２０分）後の心筋梗塞のサイズは、大きく減少した。ＰＮＳ１２．５及び２５ｍｇ／Ｌ、Ｒb1１０ｍｇ、及びＲg1１０ｍｇ／Ｌでは、大域的な虚血（４０分）及び再潅流（１２０分）を行った潅流分離ラット心臓における対照と比較して、心臓でのＣＰＫの放出が大幅に低下し、心筋でのＣａ＋＋の蓄積が減少し、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の生産が減少し、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性の減少が予防された。この結果により、ＰＮＳ、Ｒb1、及びＲg1が心臓虚血を予防し、この作用が脂質過酸化反応の抑制に関連することが明らかとなった。
【００２７】
ファン・コンら（１９９１）は、（Ｃｈｉｎ  Ｂｕｌｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ）において、意識のあるウサギにおける心筋虚血及び再潅流傷害に対するＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇサポニンの効果について報告している。意識のあるウサギにおける心筋虚血及び再潅流傷害に対するＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇサポニン（ＰＮＧＳ）の効果は、心電図（ＥＣＧ）、クレアチンホスキナーゼ（ＣＰＫ）及び乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤ）の活性、及び虚血面積のサイズにおける変化の観察により研究された。ＰＮＧＳの５０ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇ投与により、心筋虚血面積のサイズは大幅に減少した。こうした結果は、ＰＮＧＳが心筋虚血及び再潅流傷害に対する予防効果を有することを示した。
【００２８】
モー・チーシャンら（１９８７）は、（Ｐｒｏｐｒｉｅｔ  Ｔｒａｄ  Ｃｈｉｎ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ）において、3Ｈ−ボルネオールの動態について報告している。ボルネオールの芳香族性の復活を誘導するメカニズムを強調するために、静脈注射及び経口投与により、3Ｈ−ボルネオールの動態を導いた。結果として、3Ｈ−ボルネオールの単一の静脈注射後の半減時間が２．８分であることが明らかになった。これは、投与後、この薬物が関連する器官及び組織へ急速に分配され、迅速な効果を発生させることを示している。ｉｎ  ｖｉｖｏの分配は、心臓、肺、肝臓、腎臓、及び脳といった、血流が豊富な器官及び組織に集中した。これは、特定の理論に基づく臨床応用を提供している。この薬物の経口投与後の半減時間は５．３時間であるため、これは、経口ボルネオールが蓄積にはつながらず、生物活性が低いことを示している。薬物投与量及び投与形態との関係を検討するために、更なる研究を行うべきである。
【００２９】
チェン・ティーフェンら（１９９９）は、（Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｉｎ）において、合成ボルネオールによるテトラメチルピラジンの吸収の強化について報告している。Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、ボルネオール５ｍｇ／ｋｇを事前に与えた状態又は与えない状態で、リン酸テトラメチルピラジン（ＴＭＰ）５ｍｇ／ｋｇを胃内投与した。血漿ＴＭＰ濃度をＧＣ法により分析し、このデータをＮＯＮＬＩＮプログラムにより処理した。Ｃｍａｘは、それぞれ、９３１及び５６２ｎｇ／ｍｌ（ｐ＜０．０１）であり、ＡＵＣは、それぞれ、６８８４９及び３７１７４（ｐ＜０．０５）だった。これは、ボルネオールがＴＭＰの吸収を高め、排出を高めないことを示している。
【００３０】
シュー・ウェイら（１９９５）は、（Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｃｈｉｎ  Ｍｅｄ  Ｃｌｉｎ）において、ラット及びマウスの脳におけるスルファジアジンナトリウム及びエバンスブルーの分布に対するメンソール及びボルネオールの効果について報告している。メンソール（１．５ｇ／ｋｇ）及びボルネオール（１．５ｇ／ｋｇ）は、ラットにおいて、スルファジアジンナトリウムの分布の半減時間ｔ1/2を引き延ばした。経口投与した上の投与量のメンソール及びボルネオールも、ラットの脳におけるスルファジアジンナトリウムの濃度を増加させた。メントール（三日間に渡り０．５ｋｇを胃内投与）及びボルネオール（三日間に渡り０．５ｋｇを胃内投与）は、マウスの脳におけるエバンスブルーの濃度を高めたが、濃度の値は虚血性再潅流傷害を有するマウスのものよりも大幅に低かった。この結果は、メントール及びボルネオールが、脳血液障壁に損傷を与えずに、脳血液障壁における移動を強化できることを示している。
【００３１】
米国において、冠状動脈のアテローム硬化性心疾患は、最も一般的な心血管障害及び死亡の原因である。
【００３２】
アテローム性動脈硬化は、大動脈及び中動脈の壁の内層のコレステロール、脂質、及び細胞組織片の黄色がかったプラークにより特徴付けられる動脈障害である。この状態は、脂肪の線条として始まり、繊維状のプラーク又はアテローム病変が徐々に形成される。血管壁は、厚くなり、繊維形成され、石灰化する。動脈の内腔は狭くなる。
【００３３】
多くのアテロームプラークは、安定状態を維持するか、或いは、徐々に進行する。他のものは断裂し、出血、血小板活性化、及びこれによる血管内血栓症を発生させる。冠状動脈血栓症は、部分的又は完全な血管の閉塞を引き起こし、血流を弱くし、これにより、不安定狭心症又は心筋梗塞の原因となる。若しくは、断裂したプラークは、再び固定される可能性があり、これは更に深刻な狭窄となる場合が多い。
【００３４】
運動及び精神的ストレスは、心筋の酸素必要量を増加させる。正常な生理的条件下において、増加した心筋酸素必要量は、細動脈が拡張し、血流を増やすことで充足される。アテローム性動脈硬化が存在する場合、細動脈は、基本的な必要量を満たすために、最大限に拡張する可能性がある。こうした拡張した細動脈は、増加した心筋酸素必要量を満たせない恐れがある。酸素必要量が酸素供給量を上回ると、心筋の虚血が発生する。若しくは、いくつかの血管の閉塞が、血流を制限し、これにより、心筋虚血を引き起こす可能性がある。一過性の心筋虚血の臨床的な発現は、狭心症であり、これは発作性の胸の痛みで、腕部、特に左腕に痛みが広がることが多く、窒息及び差し迫った死の感覚が伴う場合と伴わない場合とがある。
【００３５】
狭心症は、安定及び不安定の二種類に区分される。安定狭心症は、殆どの場合、心筋酸素必要量の増加によって発生する。そのため、安定狭心症は、運動、精神的ストレス、その他といった、心筋が必要とする酸素を増加させる刺激により、予測可能な頻度及び期間で発作が起こる。対照的に、不安定狭心症の発作は、刺激なしで発生し、通常は、心筋への酸素供給量の減少によって起きる。プラークの断裂、血小板の栓塞、及び冠状動脈血栓症は、心筋への酸素供給量を減少させる。
【００３６】
狭心症は、様々な薬物、外科的処置、冠状動脈バイパス移植、バルーン血管形成、ステント留置、その他により治療される。安定狭心症の治療は、主に、心筋酸素必要量を最小化すること、及び予防的な処置である。急性の狭心症症候群の治療は、主に、血小板活性化を抑制すること及び血栓溶解である。
【００３７】
慢性安定狭心症の現在の治療剤は、ニトログリセリン、その他の硝酸塩、カルシウムチャネル遮断薬、及びベータアドレナリン受容体遮断薬である。こうした薬物は、単独で、或いは他の薬物と組み合わせて投与され、狭心症を治療するのではなく、緩和又は予防する。
【００３８】
狭心症の発作が発生した時には、症状を緩和するために、ニトログリセリンを舌下投与する。ニトログリセリンは、運動及びストレスによって発生する狭心症の発作を予防する目的でも利用される。硝酸塩は、狭心症の発作を予防するために利用される。ニトログリセリン及び硝酸塩は、血管平滑筋を弛緩させ、心筋の活動を低下させ、これにより、心筋酸素必要量を減少させることで、その効果を媒介する。副作用には、拍動頭痛、目眩、脱力感、起立性低血圧、頻脈、その他がある。
【００３９】
プロプラノロール等のベータアドレナリン受容体遮断薬は、活動及びストレスの最中に、心筋が必要とする酸素量を減らすことで、狭心症を予防するために利用される。主な禁忌は、気管支痙攣疾患、除脈性不整脈、及び明白な心不全である。喘息その他の形態の気道閉塞を有する個人において、ベータ遮断薬は、その状態を悪化させる可能性がある。
【００４０】
カルシウム拮抗薬は、心筋の酸素必要量を減少させることで狭心症を予防するために利用される。心筋は、正常な機能に関して、カルシウムの流入に依存する。カルシウムの流入を抑制することにより、カルシウム拮抗薬は、血管の平滑筋を弛緩させ、心筋の活動を減少させ、心筋の酸素必要量を減らし、これにより、狭心症を予防することができる。カルシウム拮抗薬は、副作用を有する。軽度の副作用には、顔面紅潮、浮腫、目眩、吐き気、その他がある。心筋へのカルシウム流入の過度の抑制は、心停止、除脈、房室ブロック、鬱血性心不全、その他の重度の副作用を引き起こす恐れがある。カルシウム拮抗薬の副作用は、ベータアドレナリン性薬物との組み合わせにより増大する場合が多い。
【００４１】
中国では、Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ及びＲａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅは、心血管疾患の治療のために、西暦２００年から使用されてきた（Ｓｈｅｎ−ｎｏｎｇの薬草薬局方）。Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、狭心症の治療に使用されてきた。Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅは、血行の促進、及び鬱血の分散のために使用されてきた。多数の臨床前及び臨床研究において、Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ及びＲａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの有効性及び安全性が実証されている。
【００４２】
伝統漢方薬は、煎出を必要とするいくつかの薬草の混合物である。冠状動脈心疾患を治療する、形態を修正した漢方薬が、Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットである。Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットは、大きく滑らかな丸剤であり、直径１ｃｍほどの大きさであることが多い。Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットは、Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの抽出物、Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの粉末、及び合成ボルネオールから作られ、１９７７年から中国薬局方に記載されており、数十年に渡って心血管疾患の治療に使用されている。
【００４３】
開示するダンシェン（Ｄａｎ  Ｓｈｅｎ）ピル（ＤＳＰ）又は強心性ピルと呼ばれるものは、冠状動脈心疾患のための新世代の漢方薬である。漢方薬は、様々な薬草で構成されており、薬草のタイプ及び薬草の割合は処方に応じて変化する。品質を管理するために、ＤＳＰは、標準化された製法により製造される。ＤＳＰの治療成分は、１０乃至３０％、場合によっては約２０％のＲａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの水溶性抽出物と、Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの水溶性抽出物（２乃至６％）と、ボルネオール（１乃至３％）とである。更に、狭心症を迅速に緩和するために、ＤＳＰは、舌下投与時に即座に溶解可能で、心筋へ迅速に伝達され、これにより狭心症を素早く緩和することが可能な小型のピルとして製造される。
【００４４】
ＤＳＰは、臨床前及び臨床研究において、無毒性であり、冠状動脈虚血によって発生する心血管疾患の予防及び治療に効果的であることが証明されている。更に、冠状動脈疾患の治療に関する、Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットよりも優れたＤＳＰの有効性は、臨床前及び臨床研究において実証されている。
【００４５】
ＤＳＰは、１９９８年から中国薬局方の補足版に記載され、中国厚生省に承認されており、１９９３年から中国で薬品として販売され、５００万人を上回る人々に使用されている。
【発明の開示】
【００４６】
開示するダンシェンピル（ＤＳＰ）は、冠状動脈心疾患を治療する新世代の漢方薬であり、標準化された製法で製造される。ＤＳＰは、標準化された量のＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの抽出物、Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅの抽出物、及びボルネオールを含む。
【００４７】
Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、狭心症を緩和及び予防する目的で含有される。Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅは、血小板活性化を抑制し、冠状動脈血栓症を予防し、これにより血行を促進するために含有される。ボルネオールは、治療成分を心筋へ効果的に伝達するために含有される。
【００４８】
ＤＳＰは、小型のピルとして製造され、約２５ｇで、舌下投与時に即座に溶解可能であり、これにより、治療的効果を素早く媒介する。狭心症を緩和及び予防するＤＳＰの有効性は、臨床前及び臨床研究において証明されている。
【００４９】
本発明では、ＤＳＰその他の小型ピルを製造することが可能な滴下機械について開示する。
【００５０】
本発明では、薄層クロマトグラフィ、高性能液体クロマトグラフィ、その他の分析的手法を応用して、薬剤の治療成分を識別及び計量することで、薬剤の品質を管理する方法について開示する。
発明の詳細な説明
本発明では、以下を含むダンシェンピル（ＤＳＰ）薬剤の組成を開示する。
（ａ）Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅの［水溶性］抽出物、Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの［水溶性］抽出物、及び［合成］ボルネオール。
（ｂ）Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅ、Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、ボルネオール、及び担体。
（ｃ）Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅ、Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ、ボルネオール、及び薬剤担体。
【００５１】
上の薬剤の実施形態において、Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅ及びＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、西暦２００年から冠状動脈心疾患の治療に中国において使用されていたものと同様に利用される。Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、狭心症に治療に使用されており、Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅは、血行の促進に使用されている。ボルネオールは、治療成分のターゲット器官への迅速な伝達を促進するために利用される。天然ボルネオールは、西暦６００年から中国で使用されている。ボルネオールは殆ど絶滅しているため、ＤＳＰは、合成ボルネオールを含む。
【００５２】
本発明は、以下のようなＤＳＰの使用法を提供する。
（ａ）冠状動脈心疾患の治療。
（ｂ）他の薬物と併せた冠状動脈心疾患の治療。
（ｃ）冠状動脈心疾患の一次予防。
（ｄ）他の薬物と併せた冠状動脈心疾患の一次予防。
（ｅ）冠状動脈心疾患の二次予防。
（ｆ）他の薬物と併せた冠状動脈心疾患の二次予防。
（ｇ）狭心症患者による硝酸塩の摂取の低減。
（ｈ）血清コレステロールレベルの低減。
【００５３】
ＤＳＰの実施形態において、適応症は、冠状動脈のアテローム硬化性疾患であり、その一部には、狭心症を緩和すること、活動及びストレスによって発生する狭心症を予防すること、及び血小板の凝集を抑制して血行を促進し、これにより冠状動脈血栓の形成を予防することが含まれる。ＤＳＰは、狭心症を緩和及び予防するために頻繁に使用されるニトログリセリンの摂取量を減らすために利用することができる。ＤＳＰは、血漿のコレステロールレベルを減らし、これにより新しいアテローム病変の形成を予防するために利用することもできる。アテローム性動脈硬化は、血管壁に堆積するコレステロールの線条によって始まる場合が多い。
【００５４】
本発明は、以下のステップを含む分析的手法を使用して治療成分を分析及び識別し、薬剤の治療成分の組成及び濃度を標準化することで、薬剤の品質を管理する方法を開示する
（ａ）分析手法を使用して薬剤を細分すること。
（ｂ）関連する精製物質の分析プロフィールを基準として比較することで、薬剤に含まれる治療物質を識別及び計量すること。
【００５５】
上の発明の実施形態において、分析的手法の例は、薄層クロマトグラフィ、高性能液体クロマトグラフィ、及びその他である。治療成分の精製基準は、薬剤中の主要な識別済み有効成分である。例えば、ＤＳＰの有効成分の精製基準には、その一部として、サポニン、ダンシェンス等のフェノール酸、ボルネオール、その他がある。ＤＳＰの有効成分は、高性能液体クロマトグラフィの保持時間等のＤＳＰ分留物の位置、或いは薄層クロマトグラフィにおけるＤＳＰ分留物の位置及び色を精製基準の特徴と比較することで識別される。ＤＳＰの有効成分は、ＤＳＰの有効分留物のサイズを、既知の量の基準と比較することで計量される。例えば、ＤＳＰに含まれるサポニンの量は、既知の量の精製サポニンの標準曲線と比較することで決定される。
【００５６】
別の実施形態において、ＤＳＰは、５乃至４０％のＲａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅの水溶性フェノール酸と、１乃至１０％のＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの水溶性サポニンと、１乃至５％のボルネオールとを含む。
【００５７】
別の実施形態において、ＤＳＰは、１０乃至３０％のＲａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅの水溶性フェノール酸と、２乃至６％のＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの水溶性サポニンと、１乃至３％のボルネオールとを含む。
【００５８】
本発明は、容易に溶解可能で、器官へ容易に伝達される小型の薬剤を製造する滴下機械を開示し、これは以下の部分を含む。
（ａ）温度が［６０乃至１００℃］、［更に好ましくは８９乃至９３℃］である［滴下ポット］［複数の滴下ポット］。
（ｂ）温度が８℃未満である流動パラフィン冷却溶液。
（ｃ）内径１．８ｍｍ及び外径２．３５ｍｍである滴下ヘッド。
（ｄ）冷却溶液の表面から約［１５ｃｍ］の距離にある［滴下ヘッド］。
【００５９】
上の機械の使用法の実施形態では、投与時に即座に溶解可能な小型のピルが製造される。
【００６０】
別の実施形態において、小型のピルのサイズは以下の通りである。
（ａ）直径０．３３乃至０．３４ｃｍ。
（ｂ）重さ２１．２５乃至２８．７５ｍｇ。
（ｃ）密度１．１３乃至１．４０ｍｇ／ｍｍ3。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６１】
実験の詳細
ダンシェンピル（ＤＳＰ）の製造
ＤＳＰは、約２５ｍｇの小型のピルで、その治療成分にはＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの水溶性抽出物と、Ｓａｌｖｉａｅの水溶性抽出物と、合成ボルネオールとが含まれる。
【００６２】
ＤＳＰの製造において、Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ及びＳａｌｖｉａｅは、循環システム内の熱水により別個に抽出し、濾過する。濾過物は、減圧条件下で凝縮させ、濾過及び沈殿させる。この濃縮物を、樹脂カラムを使用して純化し、減圧条件下で濃縮する。このようにして得られた純化水溶性抽出物は、合成ボルネオール及び薬剤担体と混合した。この混合物を、特別な滴下機械を使用して小型のピルにする。ＤＳＰの品質は、主要な治療成分であるサポニン、ダンシェンス等のフェノール酸、及びボルネオールの量及び割合を標準化することで管理される。ＤＳＰの治療成分を識別及び計量するために、薄層クロマトグラフィ、高性能液体クロマトグラフィ、フィンガープリント、及びその他の分析的手法が使用される。
【００６３】
ＤＳＰの製造
１．Ｐａｎａｘ Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの水溶性成分の抽出。
（ａ）５乃至７倍の水による薬草の稀釈。
（ｂ）０．０４乃至０．０６ＭＰａの気圧で、二時間に渡りタンク内で煮沸することによるＰａｎａｘＮｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの水溶性成分の抽出。
（ｃ）同じ条件下で、１．５時間に渡り抽出を反復する。
（ｄ）１００メッシュのネットによる抽出物の濾過。
（ｅ）エタノールによる溶出を行うマクロ細孔吸収樹脂を使用した濾過物の純化。
（ｆ）０．０４乃至０．０６ＭＰａでの空気流入及び−０．０７６乃至−０．０８８ＭＰａの真空状態を伴う減圧条件下において、密度１．３３ｇ／ｃｍ３乃至１．３５ｇ／ｃｍ３まで溶出抽出物を濃縮する。
【００６４】
２．Ｒａｄｉｘ ＳａｌｖｉａｅＭｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅの水溶性成分の抽出。
（ａ）５乃至７倍の水による薬草の稀釈。
（ｂ）０．０４乃至０．０６ＭＰａの気圧で、二時間に渡りタンク内で煮沸することによるＲａｄｉｘＳａｌｖｉａｅ Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅの水溶性成分の抽出。
（ｃ）同じ条件下で、１．５時間に渡り抽出を反復する。
（ｄ）１００メッシュのネットによる抽出物の濾過。
（ｅ）−０．０７６乃至−０．０８８ＭＰａの真空状態を伴う減圧条件下において、当初１ｋｇの薬草が１リットルになるまで濾過物を濃縮する。
（ｆ）エタノールによる濃縮物の沈殿。
（ｇ）１００メッシュのネットによるエタノール沈殿溶液の濾過。
（ｈ）０．０４乃至０．０６ＭＰａの流入空気圧及び−０．０７６乃至−０．０８８ＭＰａの真空状態を伴う減圧条件下における濾過物を濃縮する。
（ｉ）エタノールによる溶出を行うポリアミドクロマトグラフィにより濃縮物を純化する。
（ｊ）密度１．３３ｇ／ｃｍ３乃至１．３５ｇ／ｃｍ３まで純化抽出物を濃縮する。
【００６５】
３．ＤＳＰの製造
（ａ）Ｐａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの抽出物、Ｒａｄｉｘ  Ｓａｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｏｒｒｈｉｚａｅの抽出物、合成ボルネオール、及びポリエチレングリコール６０００を４．０：２０．６：１．９：７９．５の比率で混合する。
（ｂ）混合物を溶解する。
（ｃ）以下の特徴を有する滴下機械を使用して、溶解混合物からＤＳＰを製造する。滴下ポットの温度は常に８９乃至９３℃で、冷却溶液は温度８℃未満の流動パラフィンで、滴下ヘッドの内径は１．８ｍｍで、滴下ヘッドの外径は２．４ｍｍで、滴下ヘッドと冷却溶液の表面との間の距離は１５ｃｍである。
（ｄ）油を除去するために、１５分間に渡り、８００乃至１１００ｒｐｍでピルを遠心分離する。
【００６６】
ＤＳＰの品質管理
ＤＳＰは、識別された治療成分であるプロトカテク酸アルデヒド、サポニン、及びその他の様々な成分を含む。こうした化合物の薬草中の含有量は、薬草のロットによって異なる。ＤＳＰの治療成分の含有量を標準化し、これによりＤＳＰの品質を管理するために、薬剤中の治療剤を識別及び計量する方法が開発された。こうした手順の例は、以下を含む。
（ａ）ＤＳＰ３０個を３ｍｌのメタノールで溶解し、１０分間、超音波処理する。
（ｂ）５分間の遠心分離。
（ｃ）薄層クロマトグラフィ、高性能液体クロマトグラフィ、その他を用いた標準的な分析的手法を使用して上澄みを細分化する。
（ｄ）位置、サイズ、色に関して、ＤＳＰ分留物を関連する精製基準と比較することで、ナトリウムダンシェンス、プロトカテク酸アルデヒド、サポニン、その他のＤＳＰの治療成分を識別する。
（ｅ）ＤＳＰ分留物の位置、サイズ、及び色を、関連する精製基準の位置、サイズ、及び色と比較することで、ＤＳＰ中の治療成分を識別及び計量する。
（ｆ）フィンガープリントにおけるピークの相対保持時間及び相対面積を基準フィンガープリントにおける相対保持時間及び相対面積と比較することで、ＤＳＰ中の治療成分を識別する。
【００６７】
ＤＳＰのＴＬＣ識別
薄層クロマトグラフィにより、慢性安定狭心症を治療可能な薬草調合物のナトリウムダンシェンス及びプロトカテク酸アルデヒドを識別する方法は、以下のステップを含む。
【００６８】
ａ）以下のステップを含むアッセイを準備すること。
ｉ．前記調合物３０ペレットを、３ｍｌのメタノールに加え、１０分間の超音波処理により溶解し、溶液を形成すること。
ｉｉ．この溶液を、５分間、遠心分離し、上澄みを収集すること。
ｉｉｉ．この溶液１０μｌを、０．５％ＣＭＣ−Ｎａを含むシリコンＧゲルプレート上に接触させること。
ｉｖ．比率１０：４：１．６のクロロホルム、アセトン、及びメタン酸で構成される展開溶液によりプレートを展開すること。
ｖ．プレートを乾燥させ、アンモニアにより燻蒸消毒し、このプレートを、１５分間、保管すること。
ｖｉ．紫外線光の下でプレートをチェックし、前記調合物を表すスポットが、基準の対応位置に存在し、同じ色を示すかを調べること。
【００６９】
ｂ）ナトリウムダンシェンス及びプロトカテク酸アルデヒドを基準として使用すること。
【００７０】
薄層クロマトグラフィにより、慢性安定狭心症を治療可能な薬草調合物のジペノサイドを識別する方法は、以下のステップを含む。
【００７１】
ａ）以下のステップを含むアッセイを準備すること。
ｉ．前記調合物３０ペレットを、５ｍｌのアンモニア溶媒に加え、超音波処理により溶解し、溶液を形成すること。
ｉｉ．前記溶液をマクロ細孔吸収樹脂カラムに、０．５／分の速度で導入すること。
ｉｉｉ．２０ｍｌの蒸留水でマクロ細孔吸収樹脂カラムを洗浄後、マクロ細孔吸収樹脂カラムを２ｍｌのメタノール溶液により溶出すること。
ｉｖ．溶出物を収集すること。
ｖ．前記溶出物１０μｌを、０．５％ＣＭＣ−Ｎａを含むシリコンＧゲルプレート上に接触させること。
ｖｉ．比率６：３：１．６のクロロホルム、アセトン、及び水の溶液を１０℃で２時間経過した後の下層清澄液である展開溶液１０ｍｌによりプレートを展開すること。
ｖ．プレートを乾燥させ、１０％硫酸エタノールをスプレした後、このプレートを、１０５℃で数分間に渡って焼くこと。
ｖｉ．紫外線光の下でプレートをチェックし、前記調合物を表すスポットが、基準の対応位置に存在し、同じ色を示すかを調べること。
【００７２】
ｂ）トータルジペノシド、サポニンＲ１、ジンセノサイドＲｇ１を基準として使用すること。
【００７３】
強心性ピルのフィンガープリント
１．フィンガープリントの作成
（１）クロマトグラフィシステム及びシステムの適合性
アルキルシラン連結シリコ−１８を固定相として使用し、Ａ及びＢの混合物を移動相として使用した。Ａは、メタノールであり、Ｂは、水、「Ｎ，Ｎ−ジメチル−ホルムアミド」、及び氷酢酸（１００：４５：４）の混合物である。Ａの濃度は、勾配溶出の時間が０乃至２５分経過する時、５％乃至３０％で変化する。検出波長は、２８１ｎｍに設定した。理論上のカラムのプレート数は、ダンシェンスのピークにより計算する時、２０００以上とするべきである。
【００７４】
（２）装置及び試薬
クロマトグラフ：ＨＰ１１００液体クロマトグラフ
検出器：ＨＰ  ＶＷＤスタイル紫外線検出器
カラム：Ａｌｌｔｅｃｈ社、５ｕ、２５０×４．６ｍｍ、ＯＤＳカラム
プレカラム：Ａｌｌｔｅｃｈ社、Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ18  ５ｕプレカラム
カラムの温度：３０℃
【００７５】
（３）対照試料の作成
サルビア酸Ｂ、ダンシェンス、及びプロトカテク酸アルデヒドを、それぞれメタノールに溶解し、１ｍｌにそれぞれが５０μｇ、４０μｇ、及び１０μｇ含まれる三種類の対照溶液を生成した。
【００７６】
（４）テスト試料の作成
強心性ピル十錠を２５ｍｌメスフラスコに入れ、２０ｍｌのメタノールを加え、２０分間、超音波処理し、冷却させ、この溶液をメタノールによりスケールラインまで稀釈し、遠心分離して、上澄みをテスト溶液として取り出す。
【００７７】
（５）手順
各対照溶液及びテスト溶液をそれぞれ正確に１０μｌずつカラムに注入し、クロマトグラフチャートを記録し、含有量を計算する。
【００７８】
２．強心性ピルの様々なバッチのフィンガープリント
強心性ピルの２０種類のバッチを、上で説明した方法によりテストし、その統計データを表１、表２、及び表３として示す。これらのデータから、強心性ピルが独自の特定のフィンガープリントを有し、このフィンガープリントが八カ所の共通するピークを含んでおり、つまり、これらのピークがＤＳＰの各バッチに同時に存在していることが明らかとなった。プロトカテク酸アルデヒドのピークを基準のピークとし、その相対保持時間を１とすると、八カ所のピークの相対保持時間の平均値は、０．６７２、１．０００、１．４１７、１．５１２、２．０１６、２．２３５、２．４０７、２．７５７となった。八カ所のピークの相対保持時間及び相対面積の値は、非常に安定しており、八カ所の共通するピークにおいて、ピーク番号１はダンシェンス、ピーク番号２はプロトカテク酸アルデヒド、ピーク番号７はサルビア酸Ｂとなり、相対面積の値の比率は、それぞれ、０．４７６乃至０．５５８：１：０．３９１乃至０．６４１となった。
【００７９】
強心性ピルの三種類のバッチのフィンガープリントは、更に、図１乃至図３として提示されている。
【００８０】
【表１】
0005121038.tif 000002
【００８１】
【表２】
0005121038.tif 000003
【００８２】
【表３】
0005121038.tif 000004
【００８３】
ＤＳＰ中のダンシェンスの定量分析
クロマトグラフィ及びシステム適応条件、装置、及び試薬
１．フィンガープリントの作成
（１）クロマトグラム及びシステム調整のパラメータ
アルキルシラン連結シリコ−１８を充填剤として使用し、水−アセトニトリル−氷酢酸（８７：１２：１）を移動相として使用した。検出波は、２８１ｎｍに設定した。理論上のプレート数は、ダンシェンスのピークにより計算する時、２５００以上とし、分離の度合いは要件を満たすべきである。
【００８４】
（２）装置及び試薬
クロマトグラフ：ＨＰ１１００液体クロマトグラフ
検出器：ＨＰ  ＶＷＤスタイル紫外線検出器
カラム：Ａｌｌｔｅｃｈ社、５ｕ、２５０×４．６ｍｍ、ＯＤＳカラム
プレカラム：Ａｌｌｔｅｃｈ社、Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５ｕプレカラム
カラムの温度：３０℃
アセトニトリル：クロマトグラフ的に純粋、Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｓｉｙｏｕ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ＆  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．
氷酢酸：クロマトグラフ的に純粋、Ｔｉａｎｊｉｎ  Ｔｉａｎｈｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ
【００８５】
（３）対照試料の作成
２５．０ｍｇのサルビア酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｖｉａｎｉｃ  ａｃｉｄ）及び５．０ｍｇのプロトカテク酸アルデヒドを対照試料として使用する。両試料の重量を正確に測定し、５０ｍｌメスフラスコに入れる。これを溶解するために移動相を追加し、この溶液をフラスコのスケールラインまで稀釈し、完全に振り混ぜ、原液として保管する。少量のパラアミノ安息香酸の重量を正確に測定し、移動相により溶解し０．２ｍｇ／ｍｌの溶液とし、内部基準原液とする。適切な量のサルビア酸ナトリウムＡ、プロトカテク酸アルデヒド、及び内部基準溶液を、ピペットにより、体積を正確に読みとれる状態で取り、移動相により稀釈し、５０μｇのサルビア酸ナトリウムＡと、１０μｇのプロトカテク酸アルデヒドと、８０μｇのパラアミノ安息香酸とを含む溶液を作成する。作成した溶液は、対照溶液とした。
【００８６】
（４）テスト試料の作成
強心性ピル十錠と内部基準原液とを取り出し、２５ｍｌメスフラスコに入れ、移動相により溶解し、この溶液をスケールラインまで稀釈する。
【００８７】
対照溶液及びテスト試料溶液を、それぞれ１０ｍｌ取り出し、注入を行い、クロマトグラフチャートを記録する。
【００８８】
対照溶液の作成：２５．０ｍｇのナトリウムタンシノール（ｓｏｄｉｕｍ  ｔａｎｓｈｉｎｏｌ）を取り出し、正確に重量を測定し、メスフラスコに入れる。移動相を加え、溶解し、スケールまで稀釈する。この溶液を振り混ぜ、対照原液として保存する。パラアミノ安息香酸の重量を正確に測定し、移動相により稀釈し０．２ｍｇ／ｍｌの溶液にする。この溶液を内部基準原液として保管する。適切な量の対照原液及び内部基準原液を取り出し、１ミリリットル当たり５０μｇのナトリウムタンシノール及び８０μｇのパラアミノ安息香酸を含む対照溶液を作成する。
【００８９】
テスト溶液の作成：本物品十錠及び１ｍｌの内部原液を取り出す。これらを２５ｍｌメスフラスコに入れ、スケールまで溶解し、テスト溶液を作成する。
【００９０】
１０ｌの対照溶液及び１０ｌのテスト溶液をそれぞれ取り出し、フィンガープリントを記録し、結果を計算する。
【００９１】
ＤＳＰを含むこの薬草調合物は、１錠当たり０．１４乃至０．１８ｍｇのダンシェンスを含むべきである。
【００９２】
ＤＳＰ中のジンセノサイドＲｇ１及びサンチノサイド（Ｓａｎｃｈｉｎｏｓｉｄｅ）Ｒ１の定量分析
（１）クロマトグラフィシステム及びシステムの適合性
アルキルシラン連結シリコ−１８を固定相として使用し、水とアセトニトリルとの混合物を移動相として使用した。アセトニトリルの濃度は、０乃至１５分において２５％で、１５分より後では３５％である。ネブライザのガス流量は、毎分２．５リットルで、ドリフト管の温度は、９３．８℃に設定した。理論上のプレート数は、ジンセノサイドＲｇ１のピークにより計算する時、５０００以上となった。
【００９３】
（２）装置及び試薬
クロマトグラフ：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００液体クロマトグラフ
検出器：Ａｌｌｔｅｃｈ  ＥＬＳＤ２０００検出器（蒸発光散乱検出器）
カラム：Ａｌｌｔｅｃｈ社、５ｕ、２５０×４．６ｍｍ、ＯＤＳ−Ｃ18カラム
プレカラム：Ａｌｌｔｅｃｈ社、Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ18  ５ｕプレカラム
カラムの温度：３０℃
【００９４】
（３）対照試料の作成
ジンセノサイドＲｇ１及びサンチノサイドＲ１を、それぞれメタノールで溶解し、１ｍｌに対して、それぞれ０．９８ｍｇ及び０．２５ｍｇが含まれる二種類の対照溶液を作成した。
【００９５】
（４）テスト試料の作成
強心性ピル５０錠を５ｍｌメスフラスコに入れ、４％アンモニアをスケールラインまで加え、２０分間の超音波処理を施し、この溶液を準備済みのＣ18カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社のＳＴＲＡＴＡ  Ｃ１８−Ｅカラム、５００ｍｇ及び３ｃｃチューブ）に加え、１０ｍｌの水を溶出し、この溶出物を廃棄し、その後、２ｍｌのメタノールを溶出し、この溶出物をメスフラスコに収集し、メタノールによりスケールラインまで稀釈し、この溶液をテスト試料とする。
【００９６】
（５）手順
対照溶液及びテスト溶液をそれぞれ１０μｌずつ正確にカラムに注入し、クロマトグラフチャートを記録し、含有量を計算する。
【００９７】
（６）結果
２０バッチの強心性ピル試料を、上で説明した方法によりテストし、その統計データを表４として示す。上記の表から導くと、ＤＳＰを含むこの薬草調合物は、０．４０１％乃至０．７１２％、平均０．５５０％のサンチノサイドＲ１と、２．０６９％乃至４．０４４％、平均２．８４７％のジンセノサイドＲｇ１とを含む。
【表４】
0005121038.tif 000005
【００９８】
このように製造されたＤＳＰの特徴は次の通りである。
（ａ）ＤＳＰは、ｂ−３，４−ジヒドロキシフェニル乳酸と、ナトリウムダンシェンスと、サポニンと、ボルネオールとを含む。
（ｂ）バクテリアに関して陰性：１，０００未満のバクテリアを含む。
（ｃ）菌類に関して陰性：１００未満の菌類を含む。
（ｄ）重金属に関して陰性：含有流は、中国政府が定めた安全な量よりも少ない
（ｅ）ＤＳＰの保管寿命は、室温において四年間である。
【００９９】
ＤＳＰの臨床研究
狭心症は、狭心症の病歴、血清の脂質レベル、心電図記録（ＥＣＧ）、運動中のＥＣＧ、虚血のシンチオグラフィック（ｓｃｉｎｔｉｏｇｒａｐｈｉｃ）評価、冠状動脈の血管造影、その他によって評価される。こうしたエンドポイントを使用した治療の有効性の評価において、ＤＳＰは、狭心症の治療に有効であることが証明されている。
【０１００】
ＤＳＰは、狭心症に有効である
冠状動脈心疾患を有する１５７人の患者を、１０ＤＳＰの一日三回の経口投与により四週間処置した。狭心症の頻度、強度、及び持続時間と、胸部の圧迫感と、動悸とについて評価したところ、９５．３％の患者で、これらの症状が消失又は軽減した。
【０１０１】
ＤＳＰは、狭心症の緩和において、Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットより有効である
Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットは、狭心症の治療のために中国で現在使用されている別の漢方薬である。ＤＳＰ及びＤａｎ  Ｓｈｅｎタブレットの有効性を比較した。冠状動脈心疾患の患者を二つのグループにランダムに区分した。１０７人の患者をＤＳＰにより処置し、５０人の患者をＤａｎ  Ｓｈｅｎタブレットにより処置した。狭心症発作の頻度、及び硝酸塩の消費量を比較したところ、ＤＳＰは、狭心症の治療に関して、Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットよりも効果的だった。下の表５を参照。
表５．ＤＳＰとＤａｎ  Ｓｈｅｎタブレットとの比較
┌──────────────┬───────────────────┐
│                            │            患者数                    │
│                            ├───────┬───────────┤
│                            │  合計        │反応があった患者      │
├──────────────┼───────┼───────────┤
│ＤＳＰ                      │１０７        │１０２（９５．３％）  │
├──────────────┼───────┼───────────┤
│Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレット  │５０          │３８（７６％）        │
└──────────────┴───────┴───────────┘
【０１０２】
ＤＳＰがＤａｎ  Ｓｈｅｎタブレットよりも効果的であることを証明した後、ＤＳＰの有効性を、慢性安定狭心症の治療のために米国で現在使用されている様々な薬物と比較した。
【０１０３】
ＤＳＰとニトログリセリンとの比較
ニトログリセリンは、狭心症を軽減するために頻繁に使用される。ＤＳＰ及びニトログリセリンが狭心症を軽減する有効性を比較した。狭心症発生時に、ＤＳＰ又はニトログリセリンにより患者を処置し、狭心症が緩和されるまでに要した時間を比較した。ＤＳＰ及びニトログリセリンの両方について、狭心症は、すべての患者で１５分以内に緩和される。ＤＳＰの有効性は、ニトログリセリンよりも僅かに低かった、下の表６を参照。
表６．ＤＳＰとニトログリセリンとの比較
┌─────────┬─────────────────────────┐
│                  │           反応があった患者数                     │
│                  ├───────┬────────┬────────┤
│                  │１乃至５分以  │６乃至１０分以  │１１乃至１５分  │
│                  │内            │内              │以内            │
├─────────┼───────┼────────┼────────┤
│ＤＳＰ            │１１          │１４            │５              │
├─────────┼───────┼────────┼────────┤
│ニトログリセリン  │１７          │１２            │１              │
└─────────┴───────┴────────┴────────┘
合計：１グループ当たり３０人の患者
ＤＳＰは心拍数を変化させない。
【０１０４】
ＤＳＰが狭心症を効果的に緩和することは、データにより実証されている。ＤＳＰが心拍数を増やすことで狭心症を軽減しているかどうかについて、調査を行った。ＤＳＰ処置後の心拍数は、処置前の心拍数と同等であり、これは、ＤＳＰが心拍数に影響を与えることなく狭心症を軽減することを示している（表７）。
表７．ＤＳＰは心拍数に影響しない
┌──────────┬───────────────────────┐
│                    │                心拍数                        │
│                    ├───────────┬───────────┤
│                    │      処置前          │      処置後          │
├──────────┼───────────┼───────────┤
│ＤＳＰ              │８４．３±２３．１    │８２．８±２２．８    │
└──────────┴───────────┴───────────┘
【０１０５】
ＤＳＰの有効性の硝酸塩イソソルビドジニトレートとの比較
ＤＳＰがニトログリセリンと同様の有効性で狭心症を緩和することを証明した後、ＤＳＰが狭心症を予防できるかについて調査した。ＤＳＰの有効性を硝酸塩イソソルビドジニトレートと比較した。イソソルビドジニトレートは、長時間効果のある硝酸塩で、米国において慢性安定狭心症を予防するのに頻繁に使用されている。患者は、一日三回、一回当たり十錠のＤＳＰの経口投与、又は一日三回、一回当たり１０ｍｇのイソソルビドジニトレートの経口投与により処置した。心臓機能及び心電図を調査した。
【０１０６】
心臓機能
心臓機能に対するＤＳＰ及び硝酸塩の有効性は、一拍動当たりの心拍出量（ＣＯ）、一分間の拍出量（ＳＶ）、拍出血液の割合（ＥＦ）、及び左心室短軸短縮率の割合（ＦＳ）を測定することで評価した。ＤＳＰは、硝酸塩よりも効果的に心臓機能を改善した。下の表８を参照。
表８．ＤＳＰ及び硝酸塩が心臓機能に与える効果
┌──────┬─────────────┬──────────────┐
│            │ＤＳＰ                    │イソソルビドジニトレート    │
│            ├──────┬──────┼──────┬───────┤
│            │前          │後          │前          │後            │
├──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤
│ＳＶ        │７５．３８  │８３．４５  │７４．９６  │７９．４７    │
│            │±８．３２  │±９．１１  │±８．４４  │±８．７２    │
├──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤
│ＣＯ        │５．６１±  │６．９４    │６．５４    │６．１２      │
│            │１．３４    │±１．３６  │±１．３６  │±１．４１    │
├──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤
│ＥＦ        │０．５７    │０．７９    │０．５９    │０．７０      │
│            │±０．０２  │±０．０２  │±０．０３  │±０．０３    │
├──────┼──────┼──────┼──────┼───────┤
│ＦＳ        │１７．１４  │１６．６９  │１７．３２  │１８．４６    │
│            │±３．４    │±３．６    │±３．１    │±４．２      │
└──────┴──────┴──────┴──────┴───────┘
前：処置前
後：処置後
【０１０７】
ＤＳＰはＥＣＧを改善する
ＳＴ−Ｔセグメントにおける変化の頻度を記録することで、ＳＴ−Ｔ有効率を評価した。ＤＳＰ及びイソソルビドジニトレートは、両方とも、ＳＴ−Ｔにおける変化の頻度を大幅に減少させた。しかしながら、ＤＳＰは、より効果的だった。下の表９を参照。
表９．ＥＣＧに対するＤＳＰ及び硝酸塩の効果の比較
┌──────────────┬────────────────────┐
│                            │        ＳＴ−Ｔ変化の頻度              │
│                            ├──────────┬─────────┤
│                            │処置前              │処置後            │
├──────────────┼──────────┼─────────┤
│ＤＳＰ                      │１３１              │３５              │
├──────────────┼──────────┼─────────┤
│イソソルビドジニトレート    │１２９              │４２              │
└──────────────┴──────────┴─────────┘
【０１０８】
鬱血の低減におけるＤＳＰ及びアスピリンの比較
アテローム病変における出血は、血小板の活性化、冠状動脈血栓症、及び鬱血を誘発し、血行障害を発生させる。したがって、血流を高めるために、狭心症患者には血小板活性化阻害剤であるアスピリンの長期投与が推奨される。ＤＳＰ及びアスピリンが血流を高める有効性は、［Ｈｂ、Ｌｂ、Ｐ、及び気流量］を評価することで比較した。ＤＳＰは、アスピリンと同様の有効性で血流を高めた。下の表１０を参照。
表１０．ＤＳＰ及びアスピリンは血流を高める
┌──────┬─────────────┬─────────────┐
│            │         ＤＳＰ           │       アスピリン         │
│            ├──────┬──────┼──────┬──────┤
│            │前          │後          │前          │後          │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│Ｈｂ        │６．２３    │４．３５    │６．１２    │４．２８    │
│            │±１．６７  │±１．０２  │±１．５６  │±１．０７  │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│Ｌｂ        │１０．９２  │８．３０    │１０．３８  │８．２１    │
│            │±２．２１  │±１．１４  │±１．９６  │±０．３    │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│Ｐ          │１．９５    │１．７７    │１．８９    │１．６７    │
│            │±０．０８  │±０．０８  │±０．１２  │±０．７    │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│気流量      │１．７９    │１．３９    │１．８２    │１．４０    │
│            │±０．１３  │±０．１１  │±０．１７  │±０．１０  │
└──────┴──────┴──────┴──────┴──────┘
患者合計数：ＤＳＰ２５人及びアスピリン２８人
【０１０９】
ＤＳＰは血小板活性化を阻害することで鬱血を低減する
トロンボキサンＢ２は、血小板を活性化する。活性化した血小板は、鬱血を発生させるβ血小板ミクログロブリンを含め、様々な物質を放出し、これにより血流を低下させる。ＤＳＰが血小板の活性化を阻害する有効性を調査した。ＤＳＰは、トロンボキサンＢ２の濃度を低下させ、血小板の凝集を効果的に阻害する。血小板の活性化を阻害できないことが知られていることから対照として使用したイソソルビドジニトレートは、トロンボキサンＢ２を低下させず、血小板の活性化を阻害しなかった。下の表１１を参照。
表１１．ＤＳＰは血小板の活性化を阻害する
┌────────────┬──────────┬──────────┐
│                        │処置前              │処置後              │
├────┬───────┼──────────┼──────────┤
│βＰＭ  │ＤＳＰ        │６２．４４          │４６．６５          │
│        │              │±１４．３７        │±１２．２５        │
│        ├───────┼──────────┼──────────┤
│        │硝酸塩        │５９．８９          │５４．３６          │
│        │              │±１５．４２        │±１３．１８        │
├────┼───────┼──────────┼──────────┤
│Ｔｘβ２│ＤＳＰ        │１３１２±５３５    │７３８±３８４      │
│        ├───────┼──────────┼──────────┤
│        │硝酸塩        │１３１５±５０７    │１２１８±４４５    │
└────┴───────┴──────────┴──────────┘
【０１１０】
ＤＳＰは血漿コレステロールレベルを低下させる
増加した血漿コレステロールは、アテローム性動脈硬化の発生に関係するとされている。新しいアテローム病変の形成を予防するために、食生活の修正又は薬物による血漿コレステロールの低減が推奨されている。ＤＳＰが血漿コレステロールを減少させるかについて調査した。ＤＳＰは、コレステロールレベルを０．３ｍｍｏｌ／Ｌ低下させており、これはＰ値０．０５において統計的に有意である。下の表１２を参照。
表１２．ＤＳＰは血漿コレステロールを減少させる
┌──────────┬───────────────────────┐
│                    │血漿コレステロール（ｍｍｏｌ／Ｌ）            │
│                    ├───────────┬───────────┤
│                    │処置前                │処置後                │
├──────────┼───────────┼───────────┤
│ＤＳＰ              │５．１５±０．１６    │４．８４±０．２      │
└──────────┴───────────┴───────────┘
患者数：８０
【０１１１】
冠状動脈心疾患の患者の血清における強心性ピルのＬＰＯ及びＳＯＤに対する効果
方法：処置グループでは、１９７９年に修正された中国冠状動脈心疾患診断基準（China Reference Diagnosis Standards for Coronary Heart Disease）による２４人の患者に対して、強心性ピル十錠／回を一日三回投与した。標準グループでは、健康な２０人に対して、薬物療法を全く行わない。
【０１１２】
結果：冠状動脈心疾患の患者のＬＰＯレベルは、健康な人に比べ明らかに高く、ＳＯＤの含有量は、明らかに低い（ｐ＜０．０１）。患者を強心性ピルにより処置した後、ＬＰＯは、明確に減少し（ｐ＜０．０１）、ＳＯＤは、明確に増加した（ｐ＜０．０１）。下の表１３を参照。
表１３．標準グループ及び処置グループにおけるＳＯＤ及びＬＰＯの含有量
の比較（ｘ±ｓ）
┌──────┬────┬───────────┬──────────┐
│グループ    │患者    │ＳＯＤ（ｎｇ／ｍｌ）  │ＬＰＯ（ｎｍｏｌ／  │
│            │        │                      │ｍｌ）              │
├──────┼────┼───────────┼──────────┤
│標準グルー  │２０    │３４８±１０６        │４．６４±１．５２  │
│プ          │        │                      │                    │
├──────┼────┼───┬───────┼──────────┤
│処置グルー  │２４    │処置前│２６７±７６* │７．１６±１．４８* │
│            │        ├───┼───────┼──────────┤
│プ          │        │処置後│３０９±８７  │４．６８±１．７２  │
│            │        │      │＃            │＃＃                │
└──────┴────┴───┴───────┴──────────┘
注：標準グループとの比較では、*ｐ＜０．０５。処置前のグループとの比較では、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１。
【０１１３】
結論：冠状動脈心疾患の患者における心筋の慢性虚血、及び組織酸素欠乏症は、ＳＯＤ、特に細胞のＳＯＤの活性低下と、酸素遊離基の増加とにつながり、これはＬＰＯの上昇と、ＳＯＤの更なる消費とを発生させる。強心性ピルによって患者を治療した後、ＬＰＯのレベルは、明確に減少し、ＳＯＤの含有量は、明らかに増加する。これは、強心性ピルが酸素遊離基を除去する強い作用を有することを証明しており、これも冠状動脈心疾患を治療するメカニズムの一つである。
【０１１４】
肺性心疾患の治療におけるＬＰＯ及び抗酸化酵素の活性に対する強心性ピルの効果
方法：被験者：４８人の肺性心疾患患者を、ランダムに三グループに分割する。標準グループでは、１６人の患者を、抗炎症治療、抗喘息、酸素吸入、その他といった複合治療によって処置する。強心性ピルグループでは、１４人の患者を、強心性ピル十錠／回、三回／日で投与により処置する。Ｇａｎｔａｎｇｚｈｉグループでは、１８人の患者を、５％グルコース注射液２５０ｍｌに溶解したＧａｎｔａｎｇｚｈｉ２００ｍｇを、一回／日、１０日／期間で点滴することにより処置した。
【０１１５】
結果：強心性ピルによる治療後、ＧＳＨ−Ｐｘの値は上昇し、ＬＰＯの値は低下するため、ＧＳＨ−Ｐｘ／ＬＰＯが上昇する。標準治療グループとの比較では、大きな違いが存在する。下の表１４を参照。
【表１４】
0005121038.tif 000006
注：治療前と治療後との比較では、#ｐ＞０．０５、##ｐ＜０．０５、*＞０．０５、**ｐ＜０．０５。
【０１１６】
結論：強心性ピルは、抗酸化の機能を有し、脂質過酸化反応を軽減し、人体の抗酸化能力を高めることができる。
【０１１７】
強心性ピルによる本態性高血圧の治療
方法：（１）患者の選択：I期又はII期の本態性高血圧症だが、二次性高血圧症、或いは心臓、肝臓、及び腎臓の機能不全症を伴わない患者を選択する。
【０１１８】
（２）投与：患者に西洋医薬及び伝統漢方薬（血圧降下剤を除く）の摂取を二週間停止させ、その後、三週目に、血圧及び流動学的指数を測定し、臨床発現を記録する。二重盲検法を利用する。強心性ピルグループでは、被験者は、強心性ピル十錠／回を、三回／日で摂取する。合成ダンシェンタブレットグループでは、被験者は、ダンシェンタブレット五錠／回を、三回／日で摂取する。対照グループの被験者は、プラシーボを摂取し、処置期間は六週間とする。
【０１１９】
結果：（１）全血の粘性に対する効果。処置後、強心性ピルグループ及び合成ダンシェンタブレットグループにおける患者の全血の粘性は、著しく低下したが、強心性ピルグループにおける全血の粘性は、あらゆる剪断速度で、合成ダンシェンタブレットグループのものよりも急激に低下している。表１５を参照。
【表１５】
0005121038.tif 000007
注：処置前の同じグループとの比較では、*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。治療後の強心性ピルグループとの比較では、#ｐ＜０．０５、##ｐ＜０．０１。治療後の対照グループとの比較では、&ｐ＜０．０５、&&ｐ＜０．０１。
【０１２０】
（２）赤血球の変形及び凝集に対する効果。治療後、強心性ピルグループにおける赤血球の変形は、治療前のものよりも著しく大きくなり、凝集の面積及び指数は、治療前のものよりも明らかに小さくなる。合成ダンシェンタブレットグループとの比較では、強心性ピルグループは、遙かに素早く下落している（ｐ＜０．０１）。表１６を参照。
【表１６】
0005121038.tif 000008
注：処置前の同じグループとの比較では、*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。処置後の強心性ピルとの比較では、#ｐ＜０．０５、##ｐ＜０．０１。処置後の対照グループとの比較では、&ｐ＜０．０５、&&ｐ＜０．０１。
【０１２１】
（３）血圧に対する効果。処置後、患者の収縮期圧及び拡張期圧は、強心性ピルグループ及び合成ダンシェンタブレットグループの両方において、著しく低下し（ｐ＜０．０１）、二グループ間に目立った違いは存在しない。表１７を参照。
表１７．血圧に対する強心性ピルの効果（ｍｍＥｇ、ｘ±ｓ）
┌────────────┬───────────┬─────────┐
│グループ                │収縮期圧              │拡張期圧          │
├───────┬────┼───────────┼─────────┤
│強心性グループ│処置前  │１５５．００±８．０  │９０．７０±７．  │
│（被験者数３０）        │８                    │９３              │
│              ├────┼───────────┼─────────┤
│              │処置後  │１４９．２０±８．８  │８６．５９±８．  │
│              │        │９**&&                │３０**&&          │
├───────┼────┼───────────┼─────────┤
│合成ダンシェン│処置前  │１５２．９３±９．５  │９２．５９±８．  │
│タブレットグル│        │９                    │３０              │
│              ├────┼───────────┼─────────┤
│ープ（被験者数│処置後  │１４６．０２±１０．  │８８．５５±７．  │
│３０）        │        │２０**&&              │２２**&&          │
├───────┼────┼───────────┼─────────┤
│対照グループ  │処置前  │１５４．０６±７．０  │９０．９０±９．  │
│（被験者数１５）        │５                    │１０              │
│              ├────┼───────────┼─────────┤
│              │処置後  │１５２．０８±９．２  │９１．１０±８．  │
│              │        │５                    │７０              │
└───────┴────┴───────────┴─────────┘
注：処置前の同じグループとの比較において、**ｐ＜０．０１。処置後の対照グループとの比較において、&&ｐ＜０．０１。
【０１２２】
（４）高血圧の症状に対する効果。強心性ピルグループ及び合成ダンシェンタブレットグループの両方の患者では、頭痛、目眩、四肢の痺れに関して大幅に改善されるが（ｐ＜０．０１）、不眠は改善されない。表１８を参照。
表１８．高血圧の臨床症状に対する強心性ピルの効果（効果）
┌───────────┬─────┬────┬─────┬──────┐
│グループ              │頭痛      │目眩    │四肢の痺  │不眠        │
│                      │          │        │れ        │            │
│                      ├──┬──┼─┬──┼──┬──┼──┬───┤
│                      │あり│なし│あ│なし│あり│なし│あり│なし  │
│                      │    │    │り│    │    │    │    │      │
├───────┬───┼──┼──┼─┼──┼──┼──┼──┼───┤
│強心性グルー  │処置前│２０│１０│１│１４│１２│１８│８  │２２  │
│プ（被験者数  │      │    │    │６│    │    │    │    │      │
│              ├───┼──┼──┼─┼──┼──┼──┼──┼───┤
│３０）        │処置後│７  │２３│２│２８│３  │２７│４  │２６  │
│              │      │    │*   │  │*   │    │*   │   │       │
├───────┼───┼──┼──┼─┼──┼──┼──┼──┼───┤
│合成ダンシェ  │処置前│２２│８  │１│１３│１０│２０│６  │２４  │
│ンタブレット  │      │    │    │７│    │    │    │    │      │
│              ├───┼──┼──┼─┼──┼──┼──┼──┼───┤
│グループ（被  │処置後│１５│１５│８│２２│３  │２７│６  │２４  │
│験者数３０）  │      │    │*   │  │*   │    │*   │    │８    │
├───────┼───┼──┼──┼─┼──┼──┼──┼──┼───┤
│対照グループ  │処置前│８  │７  │６│９  │４  │１１│４  │１１  │
│              ├───┼──┼──┼─┼──┼──┼──┼──┼───┤
│（被験者数１  │処置後│７  │８  │５│１０│３  │１２│２  │１３  │
│５）          │      │    │    │  │    │    │    │    │      │
└───────┴───┴──┴──┴─┴──┴──┴──┴──┴───┘
注：処置前の同じグループとの比較では、*ｐ＜０．０１
【０１２３】
結論：本態性高血圧患者の赤血球の流動特性は、明らかに異常である。赤血球の変形は明らかに低下し、凝集は明確に上昇する。この実験は、強心性ピルが全血の粘性と赤血球の凝集面積の指数とを著しく減少させ、赤血球変形能を大きく上昇させる機能を有することを示している。強心性ピルは、更に、血圧を低下させ、患者の臨床発現を改善することができる。そのため、強心性ピルには、本態性高血圧及び心臓−脳症候群の発生を予防又は先送りする大きな利点がある。
【０１２４】
毒性
ＤＳＰは、安全で無毒性である。中国では、５００万人を超える患者が、重度の副作用を起こすことなく、ＤＳＰにより治療されている。軽度の副作用である頭痛又は目眩は、少ない割合の患者において報告されている。
【０１２５】
臨床研究の概要
ＤＳＰは、冠状動脈心疾患を治療する新世代の漢方薬である。臨床研究では、ＤＳＰが、心臓機能を改善し、心筋虚血を低減し、血小板活性化を阻害し、これにより鬱血を低減し、血漿コレステロールを減少させることで、狭心症を緩和及び予防することが実証されている。ＤＳＰの治療有効性は、他の形態の漢方Ｄａｎ  Ｓｈｅｎタブレットよりも優れている。ＤＳＰは、米国で使用される薬物と同様の有効性を有する。ＤＳＰは、ニトログリセリンと同様の有効性で狭心症を緩和し、長時間効果のある硝酸塩イソソルビドジニトレートと同様の有効性で狭心症を予防し、アスピリンと同様の有効性で血小板の凝集を阻害する。ＤＳＰは、無毒性であり、５００万人を超える人々が治療されており、殆どのケースで目立った副作用はない。
【０１２６】
臨床前研究
臨床前研究では、ＤＳＰが狭心症を予防及び緩和するメカニズムが明らかになる。
【０１２７】
ＤＳＰは血流を増加させることで狭心症を緩和する
約２６０ｇのＷｉｓｔａｒラットを、ウレタンにより麻酔し、開胸し、心臓を摘出し、３７℃でランゲンドルフ法にて潅流した。冠状動脈潅流圧は、常に６５ｃｍ  Ｈ2Ｏに定めた。
【０１２８】
心拍数を安定させた後、大動脈カニューレの側枝を通じて、ＤＳＰ又はダンシェンタブレットをそれぞれの時期に適用した。その後、冠状動脈流量及び心拍数を測定した。ＤＳＰは、広い範囲の投与量で冠状動脈流量を増加させた。一方、ダンシェンタブレットは、狭い範囲の投与量で冠状動脈流量を増加させた。下の表１９を参照。
表１９．ＤＳＰは冠状動脈の流量を増加させる
┌────────────────┬─────────────────┐
│                                │冠状動脈流量                      │
├───────┬────────┼────────┬────────┤
│              │投与量（ｍｇ／  │処置前          │処置後          │
│              │ｌ）            │                │                │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│              │なし            │７．０±１．１  │７．１±０．９  │
│              │                │                │７              │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│ＤＳＰ        │５．８          │７．２±１．１  │７．０±１．４  │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │２９０          │６．７±１．６  │８．７±１．４  │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │５８０          │６．７±１．５  │９．３±２．９  │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│ＤＳタブレット│５．８          │６．７±１．４  │７．１±１．５  │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │２９０          │７．３±１．７  │９．１±２．１  │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │５８０          │６．８±１．４  │７．１±１．５  │
└───────┴────────┴────────┴────────┘
【０１２９】
心拍数に対するＤＳＰ及びダンシェンタブレットの効果を調査した。ＤＳＰ及びダンシェンタブレットは、どちらも心拍数を変化させない。表２０を参照。
表２０．ＤＳＰは心拍数を増加させない
┌────────────────┬─────────────────┐
│                                │心拍数                            │
├───────┬────────┼────────┬────────┤
│              │投与量（ｍｇ／  │処置前          │処置後          │
│              │ｌ）            │                │                │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│              │なし            │１９４±１７    │１９３±１２    │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│ＤＳＰ        │５．８          │１８０±１１    │１８９±９      │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │２９０          │１８８±７      │１８４±８      │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │５８０          │１７３±１３    │１６７±１３    │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│ＤＳタブレット│５．８          │１８０±１１    │１８９±９      │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │２９０          │１８９±１６    │１８３±１４    │
│              ├────────┼────────┼────────┤
│              │５８０          │１８６±２３    │１７１±８      │
└───────┴────────┴────────┴────────┘
【０１３０】
ＤＳＰは、血管平滑筋を弛緩させ、血管を拡張することで、冠状動脈流量を増加させる
ウサギの動脈片のカリウム誘発血管収縮に対するＤＳＰの効果を調査した。ＤＳＰは、平滑筋を弛緩させ、血管を大幅に拡張する。同様の効果は、ブタの冠状大動脈リングを使用した実験でも観察された。
【０１３１】
ＤＳＰは血小板凝集を阻害する
血小板凝集に対するＤＳＰの効果を調査した。ウサギの血小板を、ＤＳＰにより処置し、凝集を調査した。ＤＳＰは、血小板の凝集を大幅に阻害した。下の表２１を参照。
表２１．ＤＳＰは血小板凝集を阻害する
┌────────┬──────┬─────────┬────────┐
│ＤＳＰ（ｍｇ／  │動物の数    │凝集率（％）      │阻害（％）      │
│ｍｌ）          │            │                  │                │
├────────┼──────┼─────────┼────────┤
│０              │６          │６．７±４．４    │０              │
├────────┼──────┼─────────┼────────┤
│１．８          │６          │４２．７±２．５  │８．３±４．５  │
├────────┼──────┼─────────┼────────┤
│３．５          │６          │３３．４±３．４  │２３．６±６．  │
│                │            │                  │７*             │
├────────┼──────┼─────────┼────────┤
│７              │６          │２５．３±２．１  │３７．６±５．  │
│                │            │                  │９*             │
├────────┼──────┼─────────┼────────┤
│１４            │６          │１５．８±３．０  │６９．０±６．  │
│                │            │                  │９*             │
└────────┴──────┴─────────┴────────┘
【０１３２】
表２２は、本発明の薬草調合物（８４００ｍｇ／ｋｇ）による処置後の様々な時期におけるマウスの小核の割合を示している。
表２２．
┌───────┬────────┬─────┬───────────┐
│時間（時）    │多染性ＲＢＣ    │小核細胞  │小核の割合（％）（ｘ  │
│              │                │          │±ＳＤ）              │
├───────┼────────┼─────┼───────────┤
│１２          │６，０００      │９        │１．５±０．８        │
├───────┼────────┼─────┼───────────┤
│２４          │６，０００      │１１      │１．８±０．７        │
├───────┼────────┼─────┼───────────┤
│３６          │６，０００      │１１      │１．８±１．２        │
├───────┼────────┼─────┼───────────┤
│４８          │６，０００      │１１      │１．８±１．５        │
├───────┼────────┼─────┼───────────┤
│７２          │６，０００      │１３      │２．２±０．７        │
├───────┼────────┼─────┼───────────┤
│溶媒２４      │６，０００      │９        │１．５±１．４        │
└───────┴────────┴─────┴───────────┘
【０１３３】
表２３は、ＤＳＰ及びＣＰの投与から２４時間後のマウスにおける小核の割合を示している。
表２３．
┌──────────┬─────┬─────┬───────────┐
│投与量（ｍｇ／ｋｇ）│多染性ＲＢ│小核細胞  │小核の割合（％）（ｘ  │
│                    │Ｃ        │          │±ＳＤ）              │
├──────────┼─────┼─────┼───────────┤
│８，４００          │６，０００│１２      │２．０±０．６        │
├──────────┼─────┼─────┼───────────┤
│８４０              │６，０００│９        │１．５±１．０        │
├──────────┼─────┼─────┼───────────┤
│８４                │６，０００│１１      │１．８±１．０        │
├──────────┼─────┼─────┼───────────┤
│溶媒                │６，０００│９        │１．５±１．４        │
├──────────┼─────┼─────┼───────────┤
│ＣＰ（８０ｍｇ／ｋ  │６，０００│１３８    │２３．０±４．０*     │
│ｇ）                │          │          │                      │
└──────────┴─────┴─────┴───────────┘
*溶媒との比較、ｐ＜０．０１。
【０１３４】
表２４は、テストした薬物の段階的な効果の評価基準を示している。
表２４．
┌──────┬──────┬──────┬──────┬──────┐
│パラメータ、│非常に高い  │高い効果    │効果あり    │効果なし    │
│効果        │効果        │            │            │            │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│ＲＢＣ凝集  │なし        │僅か        │顕著        │重度        │
│の状態      │            │            │            │            │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│発現時間    │９０未満    │９０乃至１８│１８０乃至  │３００超    │
│            │            │０          │３００      │            │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│マイクロ血  │正常な状態  │正常な状態に│改善        │悪化        │
│流の状態    │より良好    │回復        │            │            │
├──────┼──────┼──────┼──────┼──────┤
│持続時間    │１５未満    │１５乃至１０│１０乃至５  │５未満      │
│（分）      │            │            │            │            │
└──────┴──────┴──────┴──────┴──────┘
【０１３５】
ＤＳＰは微小循環を改善する
チャイニーズハムスタにおける微小循環に対するＤＳＰの効果を調査した。ＤＳＰは、すべての被験動物で、口腔内投与から１１１分以内に、微小循環を２３分間改善した。下の表２５を参照。
表２５．ＤＳＰは微小循環を改善する
┌───────┬────────┬────────┬────────┐
│              │発現時間（分）  │持続時間（分）  │実効率（％）    │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│ＤＳＰ        │１１１          │２３            │１００          │
└───────┴────────┴────────┴────────┘
【０１３６】
表２６は、ラットにおいてピッイトリンにより誘発された心筋に対するＤＳＰの予防効果を示している（第二期）。
表２６．（ｎ＝８）
┌────┬───┬────┬────────────────────┐
│グルー  │投与量│投薬前  │投薬後                                  │
│        │      │        ├───────┬────────────┤
│プ      │      │        │ピッイトリン  │ピッイトリン後（４０    │
│        │      │        │前            │秒乃至１５分）、異常な  │
│        │      │        │              │ＥＣＧを伴ったラット    │
│        │      │        │              │の数                    │
├────┼───┼────┼───────┼────────────┤
│対照    │      │正常    │正常          │７                      │
├────┼───┼────┼───────┼────────────┤
│ＤＳＰ  │０．４│正常    │正常          │３*                     │
│        ├───┼────┼───────┼────────────┤
│        │０．８│正常    │正常          │１**                    │
│        ├───┼────┼───────┼────────────┤
│        │１．２│正常    │正常          │１**                    │
├────┼───┼────┼───────┼────────────┤
│ＤＳＴ  │０．４│正常    │正常          │４                      │
│        ├───┼────┼───────┼────────────┤
│        │０．８│正常    │正常          │１**                    │
└────┴───┴────┴───────┴────────────┘
対照との比較。*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．０１。
【０１３７】
表２７は、ラットにおいてピッイトリンにより誘発された心筋虚血に対するＤＳＰの阻害効果を示している。
表２７．
┌──────────┬───────────┬───────────┐
│グループ            │投与量（ｇ／ｋｇ）    │阻害（％）            │
├──────────┼───────────┼───────────┤
│ＤＳＰ              │０．４                │７１．４*             │
│                    ├───────────┼───────────┤
│                    │０．８                │８５．７*             │
│                    ├───────────┼───────────┤
│                    │１．２                │７１．４*             │
├──────────┼───────────┼───────────┤
│ＤＳＴ              │０．４                │４２．８*             │
│                    ├───────────┼───────────┤
│                    │０．８                │８５．７*             │
└──────────┴───────────┴───────────┘
対照との比較。*ｐ＜０．０５。
【０１３８】
表２８は、ラットにおいてピッイトリンにより誘発された心筋虚血に対するＤＳＰの予防効果を示している（第一期）。
表２８．（ｎ＝８）
┌──┬────┬──────────────────────────┐
│グル│投与量  │第一期のＥＣＧ−（ｌｅａｄ  ＩＩ）のＴ−ＳＴに      │
│ープ│（ｇ／  │おける変化                                          │
│    │        ├─────┬────────────────────┤
│    │ｋｇ）  │投薬前    │投薬後                                  │
│    │        │          ├────┬───────────────┤
│    │        │          │ピッイ  │ピッイトリン後（０乃至４０    │
│    │        │          │トリン  │秒）、異常なＥＣＧを伴ったラ  │
│    │        │          │前      │ットの数                      │
│    │        │          │        ├─────┬────┬────┤
│    │        │          │        │Ｔ上昇    │Ｔ逆転  │合計    │
├──┼────┼─────┼────┼─────┼────┼────┤
│対照│−      │正常      │正常    │４        │３      │７      │
├──┼────┼─────┼────┼─────┼────┼────┤
│ＤＳ│０．４  │正常      │正常    │３        │０      │３*     │
│    ├────┼─────┼────┼─────┼────┼────┤
│Ｐ  │０．８  │正常      │正常    │１        │１      │２*     │
│    ├────┼─────┼────┼─────┼────┼────┤
│    │１．２  │正常      │正常    │２        │１      │３*     │
├──┼────┼─────┼────┼─────┼────┼────┤
│ＤＳ│０．４  │正常      │正常    │３        │２      │５      │
│    ├────┼─────┼────┼─────┼────┼────┤
│Ｔ  │０．８  │正常      │正常    │１        │１      │２*     │
└──┴────┴─────┴────┴─────┴────┴────┘
対照との比較。*ｐ＜０．０５。
【０１３９】
酸素遊離基に対する強心性ピルの除去作用
酸素遊離基に対する強心性ピルの除去作用の研究は、電子常磁性共鳴（ＥＲＰ）及びスピントラッピングを使用することで、キサンタン−キサンタン酸化酵素系及びＨ2Ｏ2−Ｆｅ2+系をそれぞれ使用して生成したスーパーオキシドアニオン及びヒドロキシラジカルにより実施する。
【０１４０】
方法：（１）ヒドロキシラジカルの生成。フェントンの原理によるテストモデルを設定する。Ｈ2Ｏ2、硫酸鉄、及びＤＭＰＯ（５，５−ジメチル−ピロリン−ｌ−オキシド）を混合し、その後、ＥＰＲテストを実施する。結果として生じた信号は、対照の役割を果たす。処置グループに強心性ピルを追加する。
【０１４１】
（２）スーパーオキシドアニオンの生成。キサンタン−キサンタン酸化酵素反応に基づいたテストモデルを設定する。キサンタン、ジエチレントリアミン五酢酸、ＤＭＰＯ、及びキサンタン酸化酵素を混合した後、ＥＰＲテストを実施する。結果として生じた信号は、対照の役割を果たす。処置グループに強心性ピルを追加する。
【０１４２】
四グループそれぞれの十試料をテストし、結果を平均に関して表現する。統計的分析において、Ｔテストを応用する。
【０１４３】
結果：（１）Ｈ2０2−Ｆｅ2+系により生成されたヒドロキシラジカルに対する強心性ピルの除去効果。アダクトＤＭＰＯ−ＯＨは、ヒドロキシラジカルがＤＭＰＯに取り込まれた時に生成される。対照グループにおけるアダクトのピーク値は、１１．８±０．６相対単位であり、一方、強心性ピルグループでは、４．１±０．５相対単位である。これらの間には有意の差（ｐ＜０．０１）があり、強心性ピルの除去率は、６５％を超えている。
【０１４４】
（２）キサンタン−キサンタン酸化酵素系により生成されたスーパーオキシドアニオンに対する狭心症ピルの除去作用。アダクトＤＭＰＯ−ＯＯＨは、スーパーオキシドアニオンがＤＭＰＯに取り込まれた時に生成される。対照グループにおけるアダクトのピーク値は、１０．６±０．６７相対単位であり、一方、強心性ピルのスペクトル信号は、完全に消失する。対照グループとの比較では、有意の差（ｐ＜０．０１）が存在し、強心性ピルの除去率は、１００％である。
【０１４５】
上の実験は、強心性ピルがキサンタン−キサンタン酸化酵素システムによって生成されたスーパーオキシドアニオンと、Ｈ2０2−Ｆｅ2+系により生成されたヒドロキシラジカルとに対する有効な除去効果を有することを示している。
【０１４６】
ラットの脳虚血再灌流傷害組織の遊離基に対する強心性ピルの効果
方法：３０匹のＳＤラットを準備し、偽手術グループ（手術を実行するが、血管及び神経を結紮しない）と、脳虚血再灌流モデルグループと、強心性ピルグループ（４ｇ／ｋｇ）との三グループにランダムに区分する。三日間の連続腹腔内（ＩＰ）投与し、三日目の投与の二時間後に、マウスを２０％エチルウレタンにより麻酔し、首の両側の伝導動脈と迷走神経とを分離及び結紮する。３０分間の再灌流後、頭部を切断し、脳を取り出す。約５００ｍｇの左脳の皮質組織及び両側の海馬組織を取り出し、液体窒素に入れ、均一化する。これを冷凍生理食塩水によりホモジェネートにした後、このホモジェネートを遠心分離する。上澄みを取り出し、ＣＡＴ及びＳＯＤの活性及びＭＡＤ及びＧＳＨの含有量を判定する。
【０１４７】
結果：表２９を参照。（１）脳組織のＣＡＴの活性及び含有ＧＳＨに対する強心性ピルの効果。脳虚血再灌流モデルグループにおける大脳皮質及び海馬組織のＣＡＴの活性と大脳皮質のＧＳＨの含有量とは、偽手術グループのものよりも遙かに低い。強心性ピルグループにおける海馬組織のＣＡＴの活性及び大脳皮質のＧＳＨの含有量は、両方とも、このモデルグループのものよりも大幅に大きい。
【表２９】
0005121038.tif 000009
注：偽手術グループとの比較において、*ｐ＜０．０５。モデルグループとの比較において、#ｐ＜０．０５。
【０１４８】
（２）脳組織のＳＯＤの活性及び含有ＭＤＡに対する強心性ピルの効果。モデルグループにおける脳組織のＳＯＤの活性は、偽手術グループのものよりも大幅に低く、一方、ＭＤＡの含有量は、大幅に高い。強心性ピルグループにおける大脳皮質及び海馬組織のＳＯＤの活性は、大幅に増加しており、一方、ＭＤＡの含有量は、大幅に減少している。
【０１４９】
結論：脳虚血再灌流後、脳組織のＭＤＡの含有量は増加し、一方、ＧＳＨの含有量は減少する。組織の酸素遊離基を除去する二つの重要な酵素であるＣＡＴ及びＳＯＤの活性は、大幅に減少し、これは、脳虚血再灌流の過程で、遊離基除去系の機能の障害により、大量の酸素遊離基が発生することを示す。これは、脂質過酸化反応につながり、その後、脳の損傷につながる。強心性ピルは、再灌流したラットの大脳皮質及び海馬組織のＭＤＡの含有量を減少させ、ＧＳＨの含有量とＣＡＴ及びＳＯＤの活性とを増加させ、これは、強心性ピルが酸素遊離基の反応を著しく抑制し、脂質過酸化反応を制御し、虚血再灌流によって損傷を受けた脳細胞を保護する機能を有することを示している。
【０１５０】
慢性肝臓損傷における強心性ピルの抗酸化
方法：Ｗｉｓｔｅｒラットにおいて、ＣＣＬ４、高脂肪、高タンパク質により誘発された軽度の肝臓損傷モデルを利用する。強心性ピルグループでは、ラットの胃に強心性ピルを投与量４ｇ／ｋｇで灌流させ、正常グループ及びモデルグループでは、同量の生理食塩水を灌流させる。ＳＯＤの活性は、キサンタン酸化酵素法を使用して判定し、ＭＤＡの含有量は、改良したチオバルビツール酸法により判定する。
【０１５１】
結果：表３０を参照。モデルグループを正常グループと比較すると、ＳＯＤの活性は低下しており、一方、ＭＤＡの活性は増加している。しかしながら、強心性ピルグループでは、ＳＯＤの活性が増加し、一方、ＭＤＡの活性が低下しており、これにより強心性ピルグループは正常に戻っている。
表３０．慢性肝臓損傷におけるＳＯＤの活性及びＭＤＡの含有量
┌───────┬────────┬────────┬────────┐
│グループ      │ラット          │ＳＯＤ（ＮＵ／  │ＭＤＡ（ｎＭ／  │
│              │                │ｍｇ．ｐｒ）    │ｍｇ．ｐｒ）    │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│正常グループ  │１２            │１．７１７±０．│１５．２１±４．│
│              │                │５２１          │３５            │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│モデルグループ│１２            │１．３２６±０．│１９．３９±４．│
│              │                │３２１８        │６２*           │
├───────┼────────┼────────┼────────┤
│強心性ピルグル│１１            │１．７１０±０．│１５．１６±４．│
│ープ          │                │４１５＃        │２９＃          │
└───────┴────────┴────────┴────────┘
注：正常グループとの比較において、*ｐ＜０．０５。モデルグループとの比較において、＃ｐ＜０．０５。
【０１５２】
結論：ＭＤＡは、脂質過酸化反応の主要な分解産物である。ＭＤＡは、細胞膜の構造、更に肝臓の細胞に、深刻な損傷を与える可能性がある。ＳＯＤは、スーパーオキシドアニオン遊離基のスカベンジャであり、遊離基によって発生する脂質過酸化反応を抑制することができる。強心性ピルは、ＳＯＤの活性を大幅に増加させ、ＭＤＡの含有量を減少させることが可能であり、これは、脂質過酸化反応のレベルを低下させ、肝臓損傷を軽減する。
【０１５３】
ＤＳＰは変異原性がない
エイムス検定において、ＤＳＰに変異原性があるかについて調査した、ＤＳＰには、変異原性がなかった。下の表３１を参照。
【表３１】
0005121038.tif 000010
【０１５４】
生薬の生成
１．Ｄａｎ  Ｓｈｅｎ
（１）品質管理
生薬のＤａｎ  Ｓｈｅｎは、中国全土の生産地域からサンプリングした。こうした様々なベースからの試料を、その主成分に関して化学分析した。その結果、シャンルオという名称の地域からのＤａｎ  Ｓｈｅｎの品質が最も優れていることが分かり、シャンルオの気候がＤａｎ  Ｓｈｅｎの生育に最適であることが証明された。タンシノン及びサルビア酸ＡといったＤａｎ  Ｓｈｅｎの有効成分は、最適な量であることが認められた。
【０１５５】
（２）地勢
シャンルオは、地理的には、東経１０８°３４’２０’’、北緯３３°２’２０’’乃至３４°２４’４０’’、平均海抜９００メートルに位置している。この地域は、低い山及び中程度の山を伴うエリアで、汚染されていない。汚染のない清潔な空気の状況により、薬草の生育に理想的な場所となっている。
【０１５６】
（３）気候
温暖でやや多湿であり、亜熱帯から温帯へ推移する山岳地帯に代表的な気候である。東南の季節風に影響を受け、四季が明確で、雨が大量に降る。この地域の年間降雨量は、推定７３３．９乃至８９９ｍｍである。日照時間は、年間１８７４．１乃至２１８５時間で、年間の日光照射量は、１１９．５７乃至１２４．３６キロカロリ／ｃｍ2である。気温は、１８℃乃至４０．８℃の範囲で変化する。霜の降りない期間は、年間１９８乃至２１８日間継続する。
【０１５７】
（４）土壌
シャンルオの土壌の８０％は砂質で、耕作地の大半は、ｐＨ値６．５乃至８の中性乃至弱アルカリ性の土壌を含む。０乃至２０ｃｍの耕作層において、土壌栄養素は、以下のように構成される：有機物１．３６％、窒素０．０８５％、即効性リン１８ｐｐｍ、即効性カリウム１３６ｐｐｍ、及びアルカリ性の加水分解性窒素６０ｐｐｍ。土壌に含まれる重金属その他の有毒物質は、国が定めた農業基準を超えていない。この地域は、植物及び動物が豊かである。現地の農家では、有機肥料を使用している。
【０１５８】
（５）重金属
鉛、カドミウム、水銀、ヒ素、その他を含む八種類の金属、残留農薬、空気、及び水は、すべて国の環境基準を満たしている。
【０１５９】
（６）標準化
Ｄａｎ  Ｓｈｅｎの植え付け及び耕作は、優良農法規定（ＧＡＰ）に従っている。Ｄａｎ  Ｓｈｅｎの栽培に関連する技術的ノウハウは、ブックレットに編集され、ベース内のＤａｎ  Ｓｈｅｎ栽培者に配布されている。植え付け時期には、専門家が、現地に派遣され、大規模なプランテーションのような規模でＤａｎ  Ｓｈｅｎの植え付けを標準化するために、現場での栽培者の研修を行い、技術的な支援を提供している。
【０１６０】
（７）シャンルオ生産ベースでは、２０種類のＤａｎ  Ｓｈｅｎ品種を交配及び栽培してきた。様々なＤａｎ  Ｓｈｅｎを、生育状況、収量、外観、及び化学成分について三年間に渡って観察及び比較した。最高品質の品種を、大規模プランテーションのために選択している。
【０１６１】
（８）Ｄａｎ  Ｓｈｅｎの栽培では、組織培養及びクローン技術を利用し、手順の速度を上げ、成長のサイクルを短くしている。
【０１６２】
（９）３０日間の試験管での植え付け期間後、拡大繁殖手順が実行される。これは、定着期間までの４０日間に渡り継続する。定着期間には、更に１０日間を要し、これは植物が根の発生及び拡充をおこなう期間である。定着率は、通常、９０％以上に達する。その後、この植物を苗床へ移すことが可能となり、ここでは、新型のスプレ灌漑デバイス及び条件がコンピュータ技術によって制御される。苗床での一ヶ月の栽培後、この植物を屋外の畑地へと移植することが可能となる。
【０１６３】
（１０）専門家によれば、我々の生産ベースで栽培されたＤａｎ  Ｓｈｅｎは、品質が高いだけでなく、有用な根の生産性が高く（他のエリアのものに比べ根の重量が５０％多い）、高い化学組成を有する（他の場所からの試料に比べ有効な薬効成分が７０％高い）。
【０１６４】
２．天然ボルネオール
（１）生育条件
天然ボルネオールの生育エリアは、中国湖南省新晃県で、海抜３００乃至６００ｍの中程度の高さの丘を伴う地域である。このエリアの６０％は、霜に覆われる。土地は、ｐＨ５乃至６の黄砂及び赤砂土壌で構成される。空気汚染又は水質汚染は、この地域では確認されない。
【０１６５】
（２）樹木の生物学的特徴
極めて強い成長能力を有し、藪地においてｍｕ（６６６．７ｍ2と同等）当たり３００乃至４００本の木が成長し、枝の葉より上の部分が採集され、純収穫量はｍｕ当たり１０００ｋｇとなる。
【０１６６】
（３）繁殖及び移植
繁殖には接ぎ木及び挿し木技術を使用する。この植物は、一年目は種苗園で成長させ、二年目の春に畑地に移植する。畑地は、定期的に肥料を与え、土かきを行う必要がある。
【０１６７】
（４）この植物は、高さ３０ｃｍ、最大直径８０乃至１００ｃｍまでに成長する場合がある。この植物の様々な部分、つまり葉、枝、幹、及び根には、天然のカンファが含まれる。特に、葉は、カンファ含有量の大部分が含まれている。
【０１６８】
（５）新晃のボルネオール型カンファは、Ｃｉｒｎａｍｏｎｉｕｍ  ｇｌａｎｄｕｌｌｆｅｒｍ（ｗａｌｌ）  Ｎｏｅｓの天然変種の一つである。クスノキは、カンファ及びボルネオールの含有量に幅があり、ボルネオールが少なく、カンファが多いもの、及びボルネオールが多く、カンファが少ないものがある。大量の試料の検定及び多くのＨＰＬＣ分析を通じて、最終的には、８０％超のボルネオールを含有し、不純物が少ないクスノキの一種を選択した。
【０１６９】
３．Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ
ａ．植物の種子
（１）Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの判定
分子量のマーキングのためのＰＣＲ反応により、Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、着色し観察可能であり、Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、特徴的なＤＮＡフィンガープリントを有する。
（２）形状及び特性
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの種子は、丸みのある円形の本体を有する。成長期の異なる種子として、Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、二年又は三年種子を有する。二年種子は、直径０．４５乃至０．５５ｃｍで、乾燥種子の重量は９５乃至１０３グラムである。三年種子は、直径０．５４乃至０．６５ｃｍで、乾燥種子の重量は９８乃至１０９グラムである。
（３）種子の発芽に適した温度
種子の発芽に適した温度は、１０乃至３０℃であり、理想的な温度は１５℃乃至２０℃である。
（４）含水量
含まれる水の量は６０乃至７０％にするべきであり、含水量が長期に渡って２０％を下回ると、その種子は活性を失う。
（５）休眠状態
種子は、採集後４５乃至６０日間は休眠状態となる傾向を有する。
（６）寿命
種子は、自然状態において、採集後１５日間の寿命を有する。
（７）種子の保管に関する要件
保管する種子は、二年より長く成長した植物から採集し、採集する樹木は、地面より上の部分が順調に生育し、害虫が存在しない状態にするべきである。樹齢三年の植物から種子を採集することを推奨する。
（８）種子保留領域の管理
種子保留領域では、通常の生産領域よりも優れた管理を行い、汚染された植物は常に処分し、いかなる状況においても、害虫が芽と接触しないようにするべきである。芽及び葉の発生期には、３０００ｐｐｍのＹｕｎｄａ−１２０及びＹａｎｇ  Ｋａｎｇ生物肥料の４００倍溶液を二度スプレするべきである。更に、開花結実期には、Ｐｈｙｔｏｋｉｎｉｎをスプレする。
（９）種子の収穫期
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの種子の収穫期は、十月終わり乃至十二月初めである。
（１０）種子の採集方法
種子の採集は、種子の成熟レベルに応じて判定する。強く成長した樹木からの種子は、別個に採集及び保管する。ベースでは、未成熟な種子の採集を厳しく禁止している。
（１１）加工
植物は、採集後すぐに洗浄し、同時に果肉及び枯れた種子を選別する。洗浄後、植物を日光で乾燥させる。
（１２）保管
５８％メタラキシルマンガン亜鉛溶解液の３００倍水溶液を使用してＲａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの種子を３０分間処理する。種子の表面を乾燥させ、２０％の水を含む砂により種子を保管する。これは、このプロセスにとって非常に重要なステップである。
（１３）パッケージング
最終的な製品は、汚染のない容器にパッケージする。採集日、処理日、及び製品バッチ番号を示す表示を付けるべきである。
（１４）輸送
製品が有毒物質により汚染されるのを防止するために、輸送には、清潔で、水を通さない、通気式の輸送車両用器具を使用する。輸送に八時間より長くかかる場合は、製品の種子は、濡れた砂と一緒にするべきである。
（１５）種子の活力のテスト
ＴＴＣ法を使用する：テトラゾリウム粉末を正確に１ｇ計量し、１０００ｍｌの蒸留水に溶解し、０．１％ＴＴＣ溶液を作成する。この溶液に試料を浸し、この状態を２４時間維持した後、取り出して、半分に切り、その半分を培養ディスクに置く。調合済みの０．１％ＴＴＣを使用して、試料を３０分間着色する。種子の活力は、種子の色によって判定できる。
（１６）害虫の検査
ｉ．５００乃至１０００の試料ペレットを白いシート又は紙或いはガラス上に置き、人間の目で種子を観察する。試料表面に異常な点又は害虫が存在する場合、汚染があると判断できる。汚染されている試料は、詳しく調べ、汚染のレベルを特定するべきである。
ｉｉ．切断及び調査：外科用メスを使用して、それぞれ１００個の種子を含む二つの試料セットを切断し開く。汚染された種子の数を計算し、汚染のレベルを判断する。
ｉｉｉ．臭いによる試料の調査：試料を手に置き、かびの臭いを鼻で感知する。或いは、温水（６０乃至７０℃）の入ったカップに試料を入れ、２乃至３分間、蓋をした後、温水を注ぎ出し、種子の臭いをかぐ。この種子は、ほのかな香りを発するべきであり、そうでない場合は、おそらく汚染されている。
（１７）色の検査
汚染のない種子は、淡黄色及び白色である。
（１８）顕微鏡検査
五つの試料セットをランダムに選び出し（各試料は５０個より多くの種子を含む）、この試料を２４時間に渡って培養ディスクに置く。これらを顕微鏡により観察し、病原菌の存在を調べ、存在する場合は、汚染のレベルを計算する。
【０１７０】
ｂ．植物の苗木
（１）発芽の温度
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの発芽温度は、１乃至２０℃で、理想的な温度は、１５℃である。
（２）含水量
苗木に使用される土壌の含水量は、２０乃至２５％である。
（３）保管
休眠芽から発芽までのＲａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの成長には、９０日間の休眠期間を要する。１００ｐｐｍのジベレリンにより、Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの休眠期間の短縮を助けることができる。
（４）純化
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの純化時期は、十二月初め乃至一月終わりである。純化を行う際、根の取り扱いには注意するべきである。純化後は、迅速に植える。
（５）輸送
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、長距離の輸送は不可能であり、これを行うと損傷を与えることになる。避けられない場合は、Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇを、通気式の容器に土と共に入れ、直射日光に当てないようにするべきである。
（６）品質検査
ｉ．各単位の重量に関しては、３００乃至５００本の苗木を試料として選択し、それぞれ１００本の苗木をグループとし、秤で重さを量り、単位重量を計算する。
ｉｉ．害虫検査：それぞれ１００本の苗木を含む四つの試料グループを設定する。試料をガラスディスク上に置き、人間の目又は五乃至十倍の拡大鏡により試料を観察し、農薬に関してチェックする。
ｉｉｉ．それぞれ１００本の植物を含む四つの試料グループを設定し、試料をスライスし、顕微鏡で観察する。
【０１７１】
ｃ．苗木の栽培
（１）畑地の条件
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの苗木は、最適な条件のエリアで栽培する。ベースでは、集中栽培及び大規模栽培法を使用している。
（２）環境
栽培エリアには、汚染が全く存在しない。空気品質は、ＧＢ３０５９−９６規格のレベル２を上回る。
（３）水資源
水資源は、雨水と、自然の流水とによって構成される。このエリアの水質は、ＧＢ５０８４−９２規格によりモニタされる。
（４）土壌
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、泥を含む土壌に植えることは不可能であり、Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇのために選択した土壌中の重金属の量は、関連する国の基準以内である必要がある。
（５）理想的な土壌
予測される良好な結果を得るために、傾斜１５°以下の酸性土壌（ｐＨ５．５乃至７．０）を選択する。海抜１６００ｍ以下の高さでは、８乃至１２％の日光が伴うべきであり、海抜１６００ｍを超える高さでは、１０乃至２０％の日光が伴うべきである。
（６）温度
発芽期には、気温が２０乃至２５℃となり、地温が１０乃至１５℃となるべきである。結実期には、最適な気温が２０乃至２５℃、最適な地温が１５℃乃至２０℃となる。
（７）含水量
土壌の含水量は、２５乃至３０％とするべきである。
（８）土壌の準備
土壌のプロッティングは、植樹前に三回繰り返し、土壌を日光に晒すべきであり、これは、土壌中のバクテリア物質を根絶するのを助ける。
（９）  土壌の取り扱い
根の損傷を防ぐため、移植前に、各平方メートルに７５乃至１００ｇの石灰を使用する。
（１０）シェードの構造及び管理
シェードは、地面からの高さが１．８ｍで、地中に深さ２ｍのトレンチを有する。通過する日光は、海抜１６００ｍ以下のエリアの場合、８乃至１０％が最適であり、或いは、海抜１６００ｍを超える場合、１０乃至１５％が最適である。地面は平坦で、土地の深い層は緩く、一方、土地表面レベルは堅くなっているべきである。植え付けシーズンは、十二月終わり乃至一月終わりが最適である。植え付け前には、種子を５８％メタラキシル亜鉛（５００乃至８００倍）又は１．５％アンチマイシン（２００ｐｍ）に３０乃至５０分間に渡って浸し、すくい出して乾燥させる。これは、植物を病気から守るためである（コーティングされた種子には、上の手順を施す必要はない）。植え付けの密度は、４×５ｃｍ又は５×５ｃｍとなり、ｍｕ当たり１０万乃至２０万個の種子となる。特殊な道具を使用して、浅い溝を作成し、機械又は手を使って、種まき及び植え付けを行う。種子は、細かい土により完全に覆い隠す。
【０１７２】
すべてが完了後、肥料追加、水まき、除草作業を実行する。雑草は、常に除去するべきである。シェードが破損した場合には、即座に修理し、正確な日光通過量を確保する。天然肥料には、鶏糞、ストーブの灰、及び骨粉が含まれる（人糞は利用するべきではない）。
【０１７３】
ｄ．Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの栽培
（１）トポロジ
地面は、１５°未満のなだらかな傾斜があり、日当たりの良い場所が最適である。
（２）土壌の構成
緩い砂土が深くまで存在する地面が最適である。
（３）土壌のｐＨは、５．５乃至７にするべきである。
（４）事前に植え付ける作物
新しい畑地では、土壌の破壊を避けるために、トウモロコシ、小麦、及び豆を事前に植え付ける。
（５）海抜
高度２３．５°近くの海抜１４００乃至１８００ｍの場所が、Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇの栽培エリアとして最適である。
（６）日光
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇは、８乃至２０％の日光のみを必要とする種類の植物である。日光の量は、成長の様々な時期に合わせて増加量を変化させるべきである。しかしながら、日光への露出が多すぎると、活力のない植物が生じる。
（７）含水量
土壌の含水量は、２５乃至３０％にするべきである。
（８）肥料
有機肥料を、化成肥料、微量栄養素肥料、又は微量元素肥料と合わせて使用する。
（９）温度
Ｒａｄｉｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇのエリアにおいて、年間の平均気温は、１５乃至１８°になると推定される。発芽期の気温は２０乃至２５°、地温は１５°が最も相応しい。栄養生育及び開花期の温度は、２５°に維持するのが良い。温度が１５°を下回る場合は、開花に影響が出る。
（１０）畑地の区分
栽培前には、畑地の構造が粉末状になるように、畑地を三回起こして、緩めるべきである。
（１１）土壌の管理
播種及び移植の前に、殺菌の目的で、７５乃至１００ｇの生石灰を土壌に加える。
（１２）苗床の基準
平坦な地面の苗床は高さ２０乃至２５ｃｍとし、傾斜エリアでは１５乃至２０ｃｍとする。苗床の幅は、１２０乃至１４０ｃｍのタイル形状とする。浸透性を高めるために、ベースの底部の土壌は緩くし、最上部は堅くするべきである。
（１３）種子の浸漬
移植中には、種子を５８％メタラキシル（５００乃至８００倍）に３０乃至５０分間に渡って浸し、その後、乾燥させ、これにより植物を病気から保護し、害虫を駆除する。
（１４）植え付けの密度
植え付け密度においては、１０×１２．５ｃｍ乃至１０×１５ｃｍの距離を維持する。これにより、ｍｕ当たり２万６０００乃至３万２０００本の植物となる。
（１５）移植の方法
苗は、管理の目的から、同じ方向を向くように植え付ける。傾斜地面の場合、苗は、下端から高地に向かって植え付ける。苗の第一の列が上を向き、第二の列が下を向くようにする。芽も上を向くようにし、底部は内側を向くようにする。
（１６）覆土
粉末状で緩く水分を含んだ土壌を使用して、苗を完全に多い、根又は芽が露出しないようにする。
（１７）肥料の追加
鶏糞、ストーブの灰、骨灰、リン酸カルシウムマグネシウム、その他を特別な肥料として使用する。
【０１７４】
【特許文献１】米国特許第５２８８４８５号「血管拡張剤」
【特許文献２】米国特許第５４３３９５７号「血管拡張剤」
【特許文献３】米国特許第５７７６４６３号「フリーズドライしたルリヂサ花弁抽出物によりストレス及び循環系心疾患を低減する方法」
【非特許文献１】ヤンＧＹら，「Ｖａｌｅｒｉａｎａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ  ｖａｒｌａｔｉｆｏｌｉａによる冠状動脈心疾患の治療に関する臨床研究」Chung Kuo Chun Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(9):540-2,1994.
【非特許文献２】ウーＹ，「冠状動脈心疾患の狭心症の治療におけるＸｉｎｔｏｎｇｋａｎｇカプセルに関する臨床研究」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin,10(7):395-8, 1990.
【非特許文献３】リューＫＹら，「タポニンによる冠状動脈心疾患の狭心症患者４５人の治療に関する臨床観察」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin,15(11):649-51, 1995.
【非特許文献４】フーＪＸら，「冠状動脈心疾患の狭心症の治療におけるＳｈｅｎｓｈａｏ  ｔｏｎｇｇｕａｎ  ｐｉａｎの臨床及び実験的研究」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 10(10):596-9, 1990.
【非特許文献５】リーＹら，「狭心症を有する患者における血漿亜鉛、銅、及び赤血球のＧＳＨ−Ｐｘ（グルタチオンペルオキシダーゼ）に対するＫｕｏ−ｇｕａｎ顆粒の効果」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 10(6):348-50, 1990.
【非特許文献６】ワンＢら，「Ｔｒｉｂｕｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓのサポニンにより治療した冠状動脈心疾患における狭心症の４０６症例」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 10(2):85-7, 1990.
【非特許文献８】チンＣら，「冠状動脈心疾患における赤血球ナトリウム含有量及びナトリウム輸送に対するＡｓｔｒａｇａｌｕｓ  ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓの効果」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 11(11):651-3, 1991.
【非特許文献９】チアンＨＷら，「ｑｉ  ｘｕｅ顆粒による狭心症のｑｉの欠陥及び鬱血症候群の治療における臨床研究」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 12(11):663-5, 1992.
【非特許文献１０】ワンＸＦら，「安静時狭心症患者８２人の治療におけるｗｅｎｘｉｎ煎出物の臨床観察」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 16(4):201-3, 1996.
【非特許文献１１】レイＺｙら，「狭心症の左心室機能に対するＡｓｔｒａｇａｌｕｓ  ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓの作用」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 14(4):199-202, 1994.
【非特許文献１２】ホーＷら，「虚血心疾患におけるｂｅｎ−ｘｕ  ｂｉａｏ−ｓｈｉ症候群を有する患者の免疫機能に対するＫｕｏ  ｇｕａｎ粉末の効果」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 9(4):213-5, 1999.
【非特許文献１３】チェンＫら，「冠状動脈心疾患の治療におけるｓｈｕｘｕｅｎｉｎｇタブレットの効果に関する臨床研究」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 16(1):24-6, 1996.
【非特許文献１４】チャンＨら，「冠状動脈心疾患に対するｂｕｙａｎｇ  ｈｕａｎｗｕ煎出物の効果に関する臨床研究」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 15(4):213-5,1995.
【非特許文献１５】チャンＨら，「冠状動脈心疾患の狭心症の治療におけるバラｓｈｕ−ｘｉｎ経口液の予備研究」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 12(7):414-6, 1992.
【非特許文献１６】フーＪＸら，「冠状動脈心疾患の狭心症の治療におけるｓｈｅｎｓｈａｏ  ｔｏｎｇｇｕａｎ  ｐｉｎの臨床及び実験的研究」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin
【非特許文献１７】チューＷら，「心筋虚血及び再灌流中のダンシェンの予防効果：分離ラット心臓の研究」American Journal of Clinical Medicine, 18(1-2):19-24, 1990.
【非特許文献１８】リーＹＹ，「冠状動脈心疾患に対するｘｕｅ  ｍａｉ  ｔｏｎｇの効果に関する臨床及び実験的研究」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 9(2):79-81, 1989.
【非特許文献１９】カイＰＹら，「冠状動脈心疾患の治療におけるｈｅｈｕａｎｔａｎｇの臨床研究」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 16(4):204-6, 1996.
【非特許文献２０】リンＱＣ，「冠状動脈心疾患の治療におけるｇｕａｎ  ｍａｉ  ｌｅの臨床研究」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 9(5):280-2, 1989.
【非特許文献２１】リーＳＱら，「Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ  ｍｅｎｂｒａｎａｃｅｕｓによる虚血心疾患の治療に関する臨床観察」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 15(2):77-80, 1995.
【非特許文献２２】ルーＢＪら，「急性心筋梗塞患者における脂質過酸化反応に対するＳｈｅｎｇ  ｍａｉ  ｓａｎの効果」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 14(12):712-4, 1994.
【非特許文献２３】ワンＳら，「トロンボキサンＡ２及びプロスタサイクリンの合成に対するＣｏｎｄｏｎｏｐｓｉｓ  ｐｉｌｏｓｕｌａｅの効果」Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 10(7):391-4, 1990.
【非特許文献２４】コワンＭら，「ｋｕｏ  ｇｕａｎ  ｑｕ  ｙｕ  ｌｉｎｇによる冠状動脈心疾患の治療に関する観察」Journal of Traditional Chinese Medicine 10(1):49-53, 1990.
【非特許文献２５】「Ｆｕｆａｎｇ  Ｄａｎｓｈｅｎ  Ｐｉａｎ」中華人民共和国薬局方、英語版１９９７年、第一巻、２８０．
【非特許文献２６】チューＨＧ，「冠状動脈心疾患の無症候性心筋虚血の治療におけるｘｉｎｋｅｎｉｎｇに関する臨床研究」Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chin, 14(4):213-5, 1994.
【非特許文献２７】チャンＷＴら，「イヌの虚血心筋及び分離されたブタの冠状動脈におけるＳａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａの「ダンシェンス」その他二種類の水溶性成分の効果」Acta Acad Med Prim Shanghai 1982; 9:13-19.
【非特許文献２８】スン・シーミンら，「ダンシェン（Ｓａｌｖｉａ  ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ）の抽出物の新しい薬理作用に関する研究」Chin Med Herb 1991; 22:20-23.
【非特許文献２９】チェンＺＨら，「実験的な微小循環障害及び血漿乳酸濃度に対する「ダンシェンス」の効果に関する研究」Acta Acad Med Prim Shanghai 1987; 14:25-29.
【非特許文献３０】ファンＣら，「意識のあるウサギにおける心筋虚血及び再潅流傷害に対するＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇサポニンの効果」Chin Bull Pharmacol 1991; 7:190-3.
【非特許文献３１】シーＬら，「頸動脈のＰＧＩ2の増加及び血小板のＴＸＡ２の減少におけるＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇのトータルサポニンの効果」Acta Pharmcol Sin 1990; 11:29-32.
【非特許文献３２】シューＷら，「ラット及びマウスの脳におけるスルファジアジンナトリウム及びエバンスブルーの分布に対するメンソール及びボルネオールの効果」Pharmacol Chin Med Clin 1995; (6):31-33.
【非特許文献３３】チェンＴＦら，「合成ボルネオールによるテトラメチルピラジンの吸収の強化」Acta Pharmacol Sin 1990; 11:42-44.
【非特許文献３４】リーＸら，「ラットにおける虚血及び再潅流によって誘発された実験的な心筋傷害に関するＰａｎａｘ  Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇサポニンの保護効果」Acta Pharmacol Sin 1990; 11:26-29.
【非特許文献３５】パンＪＧら，「６種類のＡｒｔｅｍｉｓｉａ種からのエッセンシャルオイルに関する化学的研究」Chin J Chin Mater Med 1992; 17: 741-6.
【非特許文献３６】ウーＹＺら，「鬱血を除去することで血液の循環を促進することにおけるＲａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの効果」Acta Nanjing Univ Trad Chin Mater Med 1995;11:35-6.
【非特許文献３７】ワンＮＳら，「支援又は指針としてのボルネオールの利点の実験的研究」J Trad Chin Med 1994; 35:46-7.
【非特許文献３８】リーＣＺら．「Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの抗凝集効果」Chin J Integr Med 1983; 3: 297-9.
【非特許文献３９】リーＣＺら，「Ｒａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅのトロンボキサン阻害効果に対する実験的研究」Med Prim Shanghai 1979; 6:145-9.
【非特許文献４０】モーＱＸら，「３Ｈ−ボルネオールの動態」Propriet Trad Chin Med Res 1982; 8:5-7.
【非特許文献４１】チェンＲＸら，「マウスの冠状動脈結紮により誘発した心筋虚血に対するＲａｄｉｘ  Ｓｉｌｖｉａｅ  Ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｅの予防効果」Chin J Integr Med 1992; 12:424-6.
【図面の簡単な説明】
【０１７５】
【図１】バッチ番号１９９９０８０６の図である。
【図２】バッチ番号１９９９０８１５の図である。
【図３】バッチ番号１９９９０８２３の図である。
【０１７６】
フィンガープリントのピークの位置：グループＩは、ピーク１及び２で構成され（保持時間７乃至１５分）、グループＩＩは、ピーク３及び４で構成され（保持時間１５乃至２０分）、グループＩＩＩはピーク５、６、７、及び８で構成される（保持時間２０乃至４０分）。全体として見ると、グループＩのピークの発生量は、最大であり、ピーク１の高さはピーク２に近い。グループＩＩのピークは、並んで存在しており、ほぼ同じ高さを有し、発生量は非常に小さい。グループＩＩＩは、四つのピークを含み、その高さは段階的に増加している。こうした三つのグループは、複合ダンシェン滴下ピルの代表的なフィンガープリントを構成する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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