(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルスのキャプシドタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種であるウイルスタンパク質と、
被封入物質である金属および金属化合物の少なくとも一方を含む微粒子であって、表面荷電として正または負の電荷を有する微粒子と、
を含有し、前記キャプシドタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種の集合体への自己集合組織化の過程で前記微粒子を前記集合体の内部に取り込ませることにより形成されてなる、実質的に均一サイズであるウイルス粒子様構造体。
【請求項２】
前記金属および金属化合物の少なくとも一方が、鉄、酸化鉄またはフェライトである、請求項１に記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項３】
前記ウイルスタンパク質が、正二十面体の構造を呈するウイルスに由来するタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種である、請求項１または２に記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項４】
前記キャプシドタンパク質およびその変異体または改変体が、ＶＰ１キャプシドタンパク質、ＶＰ２キャプシドタンパク質およびそれらの変異体または改変体からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項１〜３のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項５】
前記ウイルスタンパク質がパポーバウイルス属由来のものである、請求項１〜４のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項６】
前記ウイルスタンパク質が、ＳＶ４０ウイルス、ＪＣＶウイルスおよびＢＫＶウイルスからなる群から選ばれるウイルス由来である、請求項５に記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項７】
前記ウイルスタンパク質の変異体または改変体が、ウイルスタンパク質を構成するアミノ酸において、１個以上のアミノ酸が欠失、１個以上のアミノ酸が付加または他のアミノ酸により置換されたアミノ酸配列からなるタンパク質である、請求項１〜６のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項８】
前記ウイルスタンパク質の変異体または改変体が、遺伝子組換え技術、突然変異誘発法または化学修飾法により作製された変異体もしくは改変体である、請求項１〜７のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項９】
前記ウイルスタンパク質と前記微粒子との自己集合および組織化を促進する粒子形成促進因子がさらに含まれる、請求項１〜８のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項１０】
前記粒子形成促進因子が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または生体高分子、人工高分子、化合物単量体、もしくはこれらで表面をコーティングしたフェライト粒子である、請求項９に記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項１１】
さらに生理活性物質を含有する、請求項１〜１０のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体を含有し、画像化剤、腫瘍に対する診断剤または治療剤である、製剤。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体を含有し、画像化剤として超音波画像診断装置、核磁気共鳴画像化診断装置またはＸ線画像診断装置のための造影剤である、製剤。
【請求項１４】
前記製剤が癌の温熱療法用の製剤である、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれかに記載のウイルス粒子様構造体を含有し、前記ウイルス粒子様構造体に含まれる微粒子を細胞導入するための組成物。
【請求項１６】
ウイルスのキャプシドタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種であるウイルスタンパク質と、
被封入物質である金属および金属化合物の少なくとも１種を含む微粒子であって、表面荷電として正または負の電荷を有する微粒子とを、
１００ｍＭ〜５００ｍＭの一価陽イオンおよび２μＭ〜５０ｍＭの二価陽イオンの存在下で、ｐＨ５〜ｐＨ１０で、１５〜３０℃にてインキュベートすることにより、前記キャプシドタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種の集合体への自己集合組織化の過程で前記微粒子を前記集合体の内部に取り込ませることを特徴とする、ウイルス粒子様構造体の製造方法。
【請求項１７】
前記一価陽イオンがナトリウムイオンである、請求項１６に記載の製造方法。
【請求項１８】
前記二価陽イオンがカルシウムイオンである、請求項１６または１７に記載の製造方法。
【請求項１９】
前記一価陽イオンの濃度が１００〜５００ｍＭであり、前記二価陽イオンの濃度が１〜５ｍＭである、請求項１６〜１８のいずれかに記載の製造方法。
【請求項２０】
ウイルスのキャプシドタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種であるウイルスタンパク質３６０重量部と、表面荷電として正または負の電荷を有し、金属および金属化合物の少なくとも１種を含む微粒子０．０１〜１００重量部と、を混合する工程（Ｉ）と、
前記工程（Ｉ）で得られた混合物を一価の金属塩および二価の金属塩を含む水溶液に対して透析することにより、前記キャプシドタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種の集合体への自己集合組織化の過程で前記微粒子を前記集合体の内部に取り込ませる工程（ＩＩ）と、
を含むウイルス粒子様構造体の製造方法。
【請求項２１】
金属もしくは金属化合物を含む前記微粒子が表面荷電として負の電荷を有し、前記微粒子の前記ウイルスタンパク質に対する重量比が０．２以上である、請求項２０に記載の製造方法。
【請求項２２】
前記一価の金属塩がナトリウム塩であり、前記二価の金属塩がカルシウム塩である、請求項２０または２１に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス粒子様構造体およびそれを含有する製剤に関する。そのウイルス粒子様構造体は、ウイルスタンパク質の自己集合過程で、金属もしくは金属化合物を含有する微粒子も含めて組織化され、形成された構造体である。
【背景技術】
【０００２】
金属化合物からなる粒子は、製剤として医療分野でも広く一般に用いられている。その中で、生体の画像診断の一手法である磁気共鳴画像（ＭＲＩ）は、正常組織と病態組織との磁気共鳴緩和時間の違いを計測することで癌などの診断ができることから、Ｘ線被爆のない診断法として広く利用されている。この中で緩和時間の違いをより顕著にするために、例えば米国特許第４，８２７，９４５号（特表平０１−５００１９６号）または国際公開第９４／０３５０１号パンフレットなどに記載されている酸化鉄粒子からなる造影剤が臨床現場で用いられ、これらの造影剤は、酸化鉄粒子を高分子多糖などで分散することで製剤化されている。【０００３】
また、癌組織は、正常組織に比べて、熱による損傷を受け易いという生物学的な特性を利用して、臨床現場では腫瘍部分を局所的に加温する癌の温熱治療が行なわれている。この手法は生体組織を誘電加温により加熱する方法で、副作用の少ない非侵襲治療法として注目されているが、誘電加温で生体組織全体を加温するために、正常組織へのダメージを惹き起こさない温度コントロールが必要となる。このことから例えば欧州特許出願公開第０４４４１９４号（特開平２−１７４７２０号）または特開平３−１２８３３１号などに記載されているように、酸化鉄等の強磁性微粒子を生体内へ導入し、交流磁場中で、この強磁性微粒子のヒステリシス損による発熱を利用して、腫瘍部分を局所的に加温する方法、あるいは国際公開第０１／０５８４５８号パンフレット（特表２００３−５２２１４９号）に記載されているように、光熱変換可能な誘電性または半導性であるコアおよび導電性であるシェルを有する粒子を生体内へ導入し、光熱変換可能な光を照射することにより細胞または組織で局所的高熱を誘発させる方法などが提案されている。【０００４】
さらに近年、細胞移植や細胞治療の検討が再生医療分野で盛んに行なわれており、これらの移植や治療効果を早期に確認するために、細胞移植や細胞治療の細胞の動態追跡が重要となっている。このような生体内に移植された細胞を非侵襲的にモニターする有効な方法として、磁気共鳴画像法などが提案されている。このようなものとしては、例えば国際公開第０５／００９４７８号パンフレット（特開２００５−９５１５３号）に記載されているような、磁気粒子で標識された不活性化したウイルスのエンベロープを用いる手法などが提案されている。一方、非侵襲生体組織計測では、生体組織に対してある程度透過性を有する近赤外光を用いた光診断法も注目され、検討がなされている。一般に光は生体組織で散乱あるいは吸収されることから減衰率が高く、その欠点を補うために光造影剤のような薬剤を併用することが検討されている。このようなものとしては、例えば国際公開第０１／０５８４５８号パンフレット（特表２００３−５２２１４９号）に記載されているように、希土類発光体をドープしたシリカを用いる手法が提案されている。【０００５】
上で例示した磁気共鳴画像法の造影剤、温熱治療法に用いられる治療剤、細胞の動態追跡に用いられる標識剤、あるいは光による非侵襲計測に用いられる光造影剤などの医療分野で用いられる金属化合物からなる粒子は、それぞれの臨床用途に合わせて、生体親和性、組織親和性、または細胞親和性のある物質で表面改質したり、あるいは組織特異的吸着物質や細胞特異的吸着物質などで表面を修飾することにより目的とする機能を向上させることが検討されている。
【発明の開示】
【０００６】
しかしながら、現時点では臨床適用を考えた場合、充分な機能が付与されているとは言えない現状である。
【０００７】
生理活性物質を内包するウイルス粒子様構造体はこれまで種々検討されているが、構造体の作製時に生理活性物質自体が失活したり、作製時の溶媒に難溶であるという問題があった。これに対して金属もしくは金属化合物という非生理的な物質を封入した製剤については、有効な利用法も含め、ドラッグデザイン、製造方法についての研究は、必ずしも充分進んでいるとは言えない。
【０００８】
上記の状況に鑑みて本発明者らは、金属または金属化合物からなる粒子を医療適用に好適な形態の構造体として提供することが臨床への実用化に最も近いアプローチとして開発研究を進めた。生体親和性のある物質、特定物質に吸着・結合し得る特異的な物質、標識またはレポーターとして機能し得る物質などを用いる表面改質の多様な可能性を与えるタンパク質を利用すること、自己組織化の機能を本来的に有するウイルスタンパク質が本目的に有用であると確信して本発明を完成するに至った。
【０００９】
したがって、本発明は、ウイルス粒子様構造体およびその製造方法と応用を提供することを目的とする。
【００１０】
本発明のウイルス粒子様構造体は、ウイルスタンパク質と、被封入物質である金属および金属化合物の少なくとも一方（以下、金属／金属化合物と称することもある）を含む微粒子と、を含有し、実質的に均一サイズであるウイルス粒子様構造体である。すなわち、本発明は、画像診断や組織再生または温熱治療などで有効な金属または金属化合物をウイルス粒子様構造体に取り込ませることにより、細胞レベルの診断、治療に対して有望な、金属または金属化合物を内包するウイルス粒子様構造体を提供し、またその構造体の最適な形成方法を提供する。
【００１１】
本発明によれば、ウイルスタンパク質と、被封入物質として金属または金属化合物などを含むウイルス粒子様構造体とすることで、ばらつきや副作用の少ない細胞診断や治療に対して有効な製剤としての可能性を秘めているだけではなく、この構造体の安定な形成方法により均一なサイズのウイルス粒子様構造体の提供が可能である。
【００１２】
本発明のウイルス粒子様構造体は、ゲスト分子として金属／金属化合物を含むナノ粒子を封入し、実質的に均一サイズの粒子であるため、ゲスト分子のナノ粒子特性が充分に発揮させることができる。
【００１３】
また、本発明のウイルス粒子様構造体は、ゲスト分子の金属または金属化合物の種類を目的に応じて適宜変えることにより、極めて様々な方面の用途に用いることができる多用途対応タイプの構造体である。
【００１４】
本発明に用いられるウイルスタンパク質は、ゲスト分子の担体としてのみならず、細胞指向性があり、修飾を施すことにより、様々に多機能化し、または特性を所望する形に変更することができる。
【００１５】
自己集合および組織化能を有するウイルスタンパク質を利用するために、本発明のウイルス粒子様構造体は、所定の条件下で、構成成分を混合してから簡単な操作で調製することができる。
【００１６】
本発明のさらに他の目的、特徴および特質は、以後の説明および添付図面を参酌することによって、明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、フェライトの存在下および非存在下でのＳＶ４０ウイルスのキャプシドタンパク質ＶＰ１（五量体；ｐｅｎｔａｍｅｒ）のインビトロ再構成を示す透過型電子顕微鏡写真である。
【００１８】
上段：ＶＰ１五量体のみで再構成を行うと、ｐＨ５では、チューブ状構造物、ｐＨ７または９では、不完全な構造物が形成された。【００１９】
下段：フェライト（ｆｅｒｒｉｔｅ）存在下でＶＰ１五量体の再構成を行うと、ｐＨ５，７および９いずれにおいても、直径２５〜３０ｎｍの小型粒子の形成が確認できた。
【図２】図２Ａは、中空ウイルス粒子様構造体に対する、抗ＶＰ１抗体を用いたウエスタンブロッティングの結果を示す図である。また、図２Ｂ上は、実施例５のウイルス粒子様構造体に対する、抗ＶＰ１抗体を用いたウエスタンブロッティングの結果を示す図であり、図２Ｂ下は、実施例５のウイルス粒子様構造体中のＦｅ２＋の存在量を示す図である。さらに、図２Ｃは、実施例８のコントロール中のＦｅ２＋の存在量を示す図である。
【図３】図３は、実施例５のウイルス粒子様構造体のモリブデン染色による電子顕微鏡観察写真である（左；中空ウイルス粒子様構造体、右；本願発明のウイルス粒子様構造体）。
【図４】図４Ａは、実施例１０のウイルス粒子様構造体の透過型電子顕微鏡写真である。図４Ｂは、実施例１０のウイルス粒子様構造体に対する、抗ＶＰ１抗体を用いたウエスタンブロッティングの結果を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、本発明の実施の形態を詳細に説明する。【００２１】
・ウイルス粒子様構造体
本発明の構造体は、ウイルスタンパク質と、被封入物質である金属／金属化合物を含む微粒子とを含有した、実質的に均一サイズのウイルス粒子様構造体であることを特徴としている。【００２２】
本明細書でいう「ウイルス粒子様構造体」とは、ウイルス粒子に類似する構造を持つ、複数の構造要素から構成される構造体をいう。ウイルス粒子またはウイルス粒子に近似する構造のために、単に「ウイルス様粒子」ということもある。【００２３】
「ウイルス粒子」とは、ヴィリオン（ｖｉｒｉｏｎ）ともいい、形態的にウイルスとしての条件を満たしている粒子構造であり、その大きさは２０〜３００ｎｍである。ヴィリオンには、エンベロープなる膜を持つものもあるが、本発明のウイルス粒子様構造体は、典型的にはエンベロープを有しない構造を対象とし、ウイルスタンパク質と、被封入物質である金属／金属化合物を含む微粒子とを含有している。なお本明細書でいう「内包」、「封入」とは、ウイルスタンパク質集合体が形成する閉鎖空間の内部にあるもののみならず、ウイルスタンパク質と結合（または吸着、捕捉などの態様でもよい）し、ウイルスタンパク質集合体内か、または粒子表面近くにあるものも含まれる。【００２４】
上記ウイルス粒子様構造体は、さらに必要であれば粒子形成促成因子または所望する場合には生理活性物質を含有してもよい。そうした生理活性物質は、ウイルスタンパク質に結合されるか、ウイルスタンパク質の集合体内に封入される薬剤（例えば抗癌剤、抗生物質、生理活性ペプチドなどの低分子化合物、ポリペプチド、タンパク質、多糖類などの高分子物質）または遺伝子治療用の核酸などである。「粒子形成促成因子」については後記する。【００２５】
・本発明の構造体
本発明のウイルス粒子様構造体は、ウイルスが本来的に有する粒子形成能、すなわち、ウイルスタンパク質が発揮する自己集合組織化の特性を利用している。ウイルスタンパク質は核酸から分離され、各構成員としてバラバラの状態に分散されていても、インビトロで、可逆的に元のウイルス超分子構造に類似した、空の（核酸は含まない）シェル構造へ再構成され得る。そうしたウイルスタンパク質の集合過程で、金属／金属化合物を含む微粒子をその集合体内に取り込ませて形成された構造体が、本発明のウイルス粒子様構造体である。金属／金属化合物を含む微粒子は、好ましくは金属／金属化合物の集合体である微粒子であり、また好ましくは、そのサイズがナノメーター・オーダーの微粒子が多数、ウイルスタンパク質集合体内部に取り込まれている。【００２６】
本発明のウイルス粒子様構造体は、ウイルスタンパク質による自己集合能と自己組織化に基づいて形成される構造であることから、その構造の均一性が確保される。すなわち本発明の構造体は、その大きさ、サイズ分布および形状において均質である。構造体の大きさも実質的に均一なサイズであると考えてもよい。「実質的に均一」とは、構造体のサイズ分布が狭い範囲内に収まっていることを意味する。したがって本構造体の平均粒子径に対して、粒子径の変動係数が１０％未満、好ましくは８％未満、特に好ましくは２〜５％であることが好ましい。かような範囲であれば単分散の系として分布していることを意味する。人工的に合成される粒子系の粒径分布と比較すると、際立って均一な系といえる。「変動係数（ＣＶ）」とは、１００×（粒子径標準偏差／平均粒子径）（％）で表される係数である。これはその数値が小さいほど単分散の粒子集団であることを示す指標である。平均粒子径、変動係数などの粒子径分布は、ＴＥＭ（透過型電子顕微鏡）観察による方法に基づいた。形状も元のウイルス粒子の形状と同一か、類似する形状であり、球形か、球形に近い。本ウイルス粒子様構造体のサイズは、エンベロープを持たない構造であるために、好ましくは２０〜１５０ｎｍ、より好ましくは２０〜１００ｎｍ、さらに好ましくは３０〜５０ｎｍの範囲にあり、ナノ粒子の担体として好適である。【００２７】
金属などの超微細粒子のうち、電子の波長（１０ｎｍ程度）より小さい粒子径を有するナノサイズの粒子は、量子サイズ効果として、電子の運動に対するサイズ有限性の影響が大きくなってくるためにバルク体とは異なる特異な物性を示すことが知られている。このようなナノレベルの金属の特性を活かすための好適な担体として、本発明のウイルス粒子様構造体は特別の意義を有する。金属／金属化合物を担体であるウイルスタンパク質構造内に安定的に取り込むために、好ましくは金属／金属化合物を含む粒子の表面に官能基を導入し、該粒子の官能基とタンパク質との相互作用を生じさせる。【００２８】
・金属および金属化合物
本発明のウイルス粒子様構造体に含める金属または金属化合物は特に制限されない。【００２９】
画像診断や組織再生または温熱治療などに対して有効な金属または金属化合物であれば特に限定はされない。ウイルス粒子様構造体に被封入物質として封入させることから、これらの金属または金属化合物単独で、またはこれらの金属または金属化合物を主成分とする組成物としてウイルス粒子様構造体に封入させる場合は、金属または金属化合物は粒子状のものが好ましい。【００３０】
このような金属または金属化合物としては鉄、マンガン、コバルト、ニッケル、銅、亜鉛、マグネシウム、カドミウム、モリブデン、バリウム、チタン、シリコン、ガドリニウム、金、白金、バナジウム、セレン、アルミニウム、スズなどの金属またはそれらの複合体、前記の一種または二種以上の金属の酸化物、窒化物、炭化物またはそれらの複合体、さらには、前記金属のイオンと錯形成可能な有機配位子とのキレート錯体などが挙げられる。なお、これらの金属または金属化合物は本発明の用途に応じて生体や組織、細胞にとって悪影響のないものが望ましい。【００３１】
前述の中で、特に超音波画像診断装置や核磁気共鳴画像化診断装置での画像化剤、診断剤、あるいは交番磁場治療装置を利用した温熱治療剤として用いる場合には、磁性金属粒子または磁性金属化合物粒子を用いるのが好ましい。このような粒子状の被封入物質としては、鉄、酸化鉄、フェライトを主成分とすることがより好ましい。【００３２】
このような鉄、酸化鉄、フェライトを主成分とする粒子は、常磁性体、強常磁性体、強磁性体などの磁性体（以下、これらを総称して単に「磁性体」ともいう。）が好ましく、より好ましくは、常磁性体および強常磁性体であり、特に残留磁化がないかまたは少ない点で、強常磁性体を用いることが好ましい。【００３３】
かかる磁性体の具体例としては、四三酸化鉄（Ｆｅ３Ｏ４）、γ−重三二酸化鉄（γ−Ｆｅ２Ｏ３）などの酸化鉄、各種フェライト粒子、鉄、マンガン、コバルト、クロムなどの金属、コバルト、ニッケル、マンガンなどの各種合金を挙げることができ、フェライト粒子は、ＭＩＩＯ・Ｆｅ２Ｏ３（ＭＩＩ＝Ｍｎ，Ｆｅ，Ｃｏ，Ｎｉ，Ｃｕ，Ｚｎ，Ｍｇ，Ｃｄ）型の２価金属塩などである。【００３４】
本発明に用いられる磁性粒子は、磁鉄鉱、Ｆｅ２Ｏ３、Ｆｅ３Ｏ４、混合フェライト、有機強磁性材料を包含する他の鉄含有化合物などいずれも使用することできるが、最大の磁力を示すＦｅ３Ｏ４であるフェライト（Ｆｅ３Ｏ４とδ−Ｆｅ２Ｏ３の固溶体）は磁気応答性が良好であり、特に好ましい。磁気特性が良好なフェライトのナノレベルサイズの微粒子は、特開２００２−１２８５２３号公報に開示されているように、４〜２５℃、中性ｐＨ付近の温和な条件下の制御沈殿法によって合成できる。フェライトをコアとする磁性粒子には、さらにＺｎ、Ｃｏ、Ｎｉなどの各種金属元素を含有させて磁気特性を制御することができる。【００３５】
さらに、光による画像化や診断に用いられる画像化剤や診断剤としては、各種のプローブ、発光体として働き得る金属／金属化合物を含む微粒子を本発明では好適に用いることができる。このような金属としては、モリブデン、銅、バリウム、亜鉛、チタン、ガドリウム、金、白金、カドミウム、シリコン、バナジウム、セレン、テルル、アルミニウム、スズなどが挙げられる。【００３６】
これらの金属／金属化合物を含む微粒子の中で量子ドットと称されるものは、励起波長に対して発光波長がずれていること、蛍光寿命が長いこと、さらには粒子径により波長制御が可能なことから用途に応じて好適に用いることができる。このような量子ドットは、周期表の第ＩＩ〜ＶＩ族、第ＩＩＩ〜Ｖ族および第ＩＶ族の元素からなる量子サイズ粒子として調製され、具体的な組成としては、ＣｄＳ、ＣｄＳｅ、ＣｄＴｅ、ＺｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、ＭｇＴｅ、ＧａＡｓ、ＧａＰ、ＧａＳｂ、ＧａＮ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、ＨｇＴｅ、ＩｎＡｓ、ＩｎＰ、ＩｎＳｂ、ＩｎＮ、ＡｌＡｓ、ＡｌＰ、ＡｌＳｂ、ＡｌＳ、ＰｂＳ、ＰｂＳｅ、Ｇｅ、Ｓｉ、それらの合金、または３元および４元混合物等のそれらの混合物などが挙げられる。さらに必要であれば、前述の組成の粒子をコアとし、その表面にＺｎＯ、ＺｎＳ、ＺｎＳｅ、ＺｎＴｅ、ＣｄＯ、ＣｄＳ、ＣｄＳｅ、ＣｄＴｅ、ＭｇＳ、ＭｇＳｅ、ＧａＡｓ、ＧａＮ、ＧａＰ、ＧａＡｓ、ＧａＳｂ、ＨｇＯ、ＨｇＳ、ＨｇＳｅ、ＨｇＴｅ、ＩｎＡｓ、ＩｎＮ、ＩｎＰ、ＩｎＳｂ、ＡｌＡｓ、ＡｌＮ、ＡｌＰ、ＡｌＳｂ、それらの合金、またはそれらの混合物からなる組成のシェルで被覆してもよい。このようなコア／シェル構造にする場合は、シェルのバンドギャップエネルギーはコアのものより大きいことが好ましい。【００３７】
また、赤外線蛍光体として知られる、放射性希土類（ランタニド）イオン性種もナノサイズ粒子にすることで利用することが可能であり（ＷＯ  ０１／０５８４５８）、このような希土類としてはネオジウム、エルビウム、プラセオジウムなどが挙げられる。【００３８】
さらに、金属または金属化合物として、生理的に受け入れられる有機酸または無機酸の酸付加塩も適宜選択して用いることができ、このような塩としては、例えば酢酸塩、臭化物、塩化物、クエン酸塩、マレイン酸塩、メシラート塩、硝酸塩、リン酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、ステアリン酸塩、トシラート塩、カルシウム塩、メグルミン塩、カリウム塩およびナトリウム塩が挙げられる。【００３９】
または金属または金属化合物として、キレート化剤と結合した錯塩などが挙げられる。このような錯塩としては、金属原子および配位子となる化合物（以下、「配位子成分」という。）、または配位子が配位された金属錯体である。【００４０】
ここで、金属塩としては、塩化鉄、臭化鉄、ヨウ化鉄などの鉄化合物；塩化コバルト、臭化コバルト、ヨウ化コバルトなどのコバルト化合物；塩化ニッケル、臭化ニッケル、ヨウ化ニッケル、ニッケルアセチルアセトナートなどのニッケル化合物；塩化パラジウム、臭化パラジウム、ヨウ化パラジウムなどのパラジウム化合物；などが挙げられる。また配位子成分は、典型的には架橋鎖として活性アミノ基を有する鎖式または環式のポリアミノポリカルボン酸が好適である。さらにトリフェニルホスフィン、２，２’−ビピリジン、１，５−シクロオクタジエン、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパンなども挙げられる。上記配位子成分である化合物は、１種単独で、または２種以上を併用することができる。【００４１】
・微粒子
本発明のウイルスタンパク質の自己組織化により形成される構造体に、「ゲスト分子」として封入される金属または金属化合物は、微粒子の形態でウイルスタンパク質と混合されて、タンパク質構造体に取り込まれる。微粒子の形態、サイズ、構成物質は特に限定されないが、ナノメーター・オーダーの微粒子が多数、ウイルスタンパク質の集合体内部に取り込まれることが好ましい。そうした微粒子のサイズは、限定されないが、平均粒子径は通常、０．５〜１００ｎｍであることが好ましく、さらに好ましくは１．０〜５０ｎｍ、より好ましくは１．５〜３０ｎｍの範囲である。【００４２】
上記微粒子は、金属および/または金属化合物からなる粒子であってもよい。例えば鉄貯蔵タンパク質であるフェリチンに見られるように、タンパク質のシェルによる拘束的環境によって金属粒子の結晶核形成および凝集が促されることもある。【００４３】
あるいは、上記微粒子は、金属および/または金属化合物とともにこれらを結合するバインダー機能を有する化合物を含めた複合微粒子であってもよい。そうしたバインダー化合物として、水不溶性の有機ポリマーが望ましい。このような有機ポリマーを得るための単量体として、例えば芳香族ビニル化合物、α，β−不飽和カルボン酸エステル類、α，β−不飽和カルボン酸アミド類、α，β−不飽和ニトリル化合物、ハロゲン化ビニル化合物、共役ジエン化合物、低級脂肪酸ビニルエステルなどを用いることができる。【００４４】
被封入物質である金属または金属化合物を含む微粒子の表面は、表面荷電として正または負の電荷を有することが望ましい。負の表面電荷を微粒子表面が有することで、被封入物質の金属／金属化合物の相互作用が生じて、内包の増大と安定化が図られる。そうした表面電荷は、またウイルスタンパク質のアミノ酸残基の側鎖と相互作用をして封入される微粒子の構造体内での固定安定化にも寄与する。【００４５】
負の電荷はカルボキシル基、リン酸基、スルホン酸基を微粒子の表面に出るようにすればよい。例えば、金属／金属化合物を含む微粒子をカルボン酸／カルボン酸塩でコーティングするなどの方法がある。負の電荷を導入するための好適な酸としては、例えば乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、ジメルカプトコハク酸、マレイン酸、フマル酸およびアスコルビン酸が挙げられる。また正の電荷は、アミノ基、グアニジル基などが挙げられる。【００４６】
上記粒子本体の表面に荷電を有する官能基を露出させるためには、有機ポリマーに、荷電を有する基を導入すればよい。【００４７】
金属／金属化合物のバインダー機能のために、有機ポリマーに表面処理することも望ましい。表面処理官能基としては、アミノ基、カルボキシル基、チオール基、アルデヒド基、カルボジイミド基などの一般の表面処理基が使用可能であるがこれらに限定されるものではない。【００４８】
金属／金属化合物は、同種の金属もしくは金属化合物であってもよく、異なる種類の金属もしくは金属化合物の組み合わせまたは混合であってもよい。【００４９】
金属／金属化合物を含有する微粒子の別の好ましい態様として、コア／シェル構造を有するナノ粒子も例示される。このような構造の微粒子において、粒子コア部とは異なる材料で被覆し、コアとなる粒子のサイズや形状を変化させることなく機能化でき、あるいはコアとシェルのいずれのバルク材料とも異なる特性の発現が期待できる。例えば発光性ナノ粒子の表面が露出していると、ナノ粒子表面に存在する多数の欠陥が発光キラーとなってしまい、発光効率が低下してしまう。そこでナノ粒子の発光波長に相当するバンドギャップよりも大きいバンドギャップを持つシェル材料で被覆してコア／シェル構造にする。【００５０】
コアが非導電性、例えば誘電物質または半導体物質で形成され、シェル層が導電性である金属または金属様物質から構成されるナノ粒子が例示される（ＷＯ  ０１／０５８４５８）。そうした物質の性質は粒子の特性に影響する。一例としてネオジミウム、エルビウム、プラセオジミウムなどの希土類発光体をドープしたシリカコアを、シリカナノ粒子として利用する態様を示すことができる。誘電物質にはシリコンジオキサイド、チタニウムジオキサイド、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリスチレン、金スルフィド、およびデンドリマーのごときマクロ分子などがある。半導体物質の例としては、ＣｄＳｅ、ＣｄＳおよびＧａＡｓなどがある。【００５１】
ウイルスタンパク質１００重量部に対して、微粒子が０．００２〜５０重量部含まれることが好ましく、０．００２５〜５０重量部含まれることがより好ましく、０．１〜５０重量部含まれることがさらに好ましく、４〜３０重量部含まれることが最も好ましい。また、微粒子の大きさおよび密度により、範囲は変動しうるが、一般的に、ウイルスタンパク質１μｇに対して、微粒子が、３×１０８〜４×１０１１粒子含まれることが好ましく、３×１０１０〜４×１０１１粒子含まれることがより好ましい。【００５２】
・ウイルスタンパク質
種類
本発明の構造体は、ウイルス粒子の持つ構造の均一性、ウイルスタンパク質の自己集合能と自己組織化の能力を活かし、タンパク質集合超分子内の空洞（いわば「ｃａｇｅ」構造）に取り込んだ金属／金属化合物の機能をナノレベルで発揮させる新しいナノ構造の構築体である。【００５３】
ウイルスタンパク質には各種のタンパク質が存在するが、本発明の構造体には特に制限されることなく用いられる。好ましくはタンパク質外殻であるキャプシドである。キャプシドはキャプソメアという単位粒子から構成され、このキャプソメアタンパク質は、単一または複数のタンパク質が存在することが知られている。本発明には、いずれのキャプシドのタンパク質であってもよい。なかでもＶＰ１またはＶＰ２のキャプシドタンパク質が好ましい。【００５４】
他に、使用されるウイルスタンパク質として、ウイルス核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）と結合したタンパク質、このタンパク質・核酸複合体を包むようにしているタンパク質、上記キャプシドの裏打ちをするタンパク質などもある。さらにエンベロープを有するウイルスでは、そのエンベロープを構成する脂質膜に結合するか、一緒に膜を構成しているエンベロープタンパク質のいずれも、本発明構造体のウイルスタンパク質として用いることができる。また粒子形成能が保持され、発揮される限り、異種のウイルスに由来する複数のタンパク質、または同一ウイルスの異なる種類のウイルスタンパク質を適宜に組み合わせて用いてもよい。具体的には２種のキャプシドタンパク質、例えばＶＰ１とＶＰ２とを一緒に使用してもよい。【００５５】
・ウイルス
ウイルスタンパク質を供給するウイルスの種類には特に限定されず、各種のウイルスからの様々なタンパク質が本発明の構造体に用いることができる。本発明を適用できるウイルスとして、具体的にはＳＶ４０ウイルス、ＪＣＶウイルス、ＢＫＶウイルスなどのパポーバウイルス属のウイルス；ヘパドナウイルス（Ｂ型肝炎ウイルスなど）、アデノウイルス、フラビウイルス（日本脳炎ウイルスなど）、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス、水痘−帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス、ＥＢウイルスなど）、ポックスウイルス、パルボウイルス（アデノ関連ウイルスなど）、オルソミクソウイルス（インフルエンザウイルスなど）、ラブドウイルス（狂犬病ウイルスなど）、レトロウイルス（後天性免疫不全症候群ウイルスなど）、Ｃ型肝炎ウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、バクテリオファージ、インフルエンザウイルス、センダイウイルス、ワクシニアウイルスまたはバキュロウイルスなどのウイルスを挙げることができる。なかでも正二十面体の構造を呈するウイルスが好ましい。【００５６】
ウイルスにより、宿主（本発明構造体の投与を受けるヒト被検者も含まれる）の細胞に対する親和性、吸着の特異性が異なるために、必要とする構造体の指向特性を考慮してウイルスの種類を選択してそのタンパク質を利用することが望ましい。これにより、特異的なターゲティング性能を付与することができる。【００５７】
ウイルスタンパク質を生体に適用される製剤に使用される場合に、直ちに問題となるのは、その安全性である。ウイルス自身が病原性を有していたり、その構造タンパク質が細胞障害性を持っていたり、抗原性を示すものもある。この観点から、パポーバウイルス属のウイルス、特にＳＶ４０ウイルス、ＪＣＶウイルス、ＢＫＶウイルスからのウイルスタンパク質が好ましいと言える。これらのウイルスは、宿主に感染してもほとんどこれに起因する病理的兆候が認められず、ヒトには無害であるか、極めて病原性が低いと考えられている。霊長類に感染するパポーバウイルス、中でヒトへの高い安全性および高い構造安定性を有するＳＶ４０ウイルスでは、ヒトに投与しても抗原性が認められない利点がある。他方、ＪＣＶウイルスは、脳部位で感染するウイルスであるため、そのタンパク質も血液-脳関門を通過できる特性があるが、抗原性を有する。本発明の構造体においては、ウイルスタンパク質としてパポーバウイルス属由来のものが特に好ましい。【００５８】
・ウイルスタンパク質の変異体または改変体
ウイルスタンパク質は、天然のウイルスから得られる、ネイティブなタンパク質を精製して用いてもよいが、必要な修飾を施したウイルスタンパク質の変異体または改変体も好ましく利用することができる。あるいはネイティブなウイルスタンパク質とその変異体または改変体とをともに使用してもよい。このような変異体または改変体を用いる理由として、ウイルス粒子様構造体の抗原性を軽減するか、あるいは免疫監視機構からから認識されにくくなる（いわゆる「ステルス化」された状態である）効果が期待できる。またはターゲティング機能を付与する観点から、特定の臓器、組織、細胞への親和性を増強する必要性も生じる。あるいは構造体のより安定性を高める必要性もある。さらにはタンパク質表面に様々な機能を付加し得る部分を形成する要求に応じる必要性がある。このように様々な観点からの要求に対しても、タンパク質分子の適切な修飾により応じることが可能である。【００５９】
ウイルスタンパク質の親水的傾向を増強することにより血中安定性を増して、長時間にわたり血液中の濃度を維持できる。また血中滞留性を向上させるために、タンパク質表面にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリアルキレンオキシド鎖を導入して親水性を増すことが可能である。そのオキシエチレン単位の長さと導入する割合を適宜変えることにより、その機能を調節することができる。ＰＥＧとして、オキシエチレン単位が１０〜３５００のポリエチレングリコールが好適である。【００６０】
ウイルスタンパク質の表面に導入されたポリエチレングリコール、ポリアルキレンオキシド鎖の先端に、さらに機能性官能基として、「機能性物質」を付してもよい。先端に「機能性物質」を結合しているポリアルキレンオキシド鎖が固定化された構造体は、ポリアルキレンオキシド鎖導入の効果に加えて、ポリアルキレンオキシド鎖に邪魔されることなく「機能性物質」の機能、例えば「認識素子」として特定臓器指向性、特定の組織指向性などの作用が充分に発揮される。【００６１】
ウイルス粒子様の表面、実際にはウイルスタンパク質の表面を、「機能性物質」として薬剤分子、レポーター標識（例として、発色物質、酵素または放射性標識）または親和性リガンド（例えば抗体または抗体フラグメント、特異的な結合をするパートナー片割れ（具体的にはビオチンまたはストレプトアビジン）、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチドまたはオリゴ糖）を、粒子を構成するウイルスタンパク質にカップリングさせることにより機能化させてもよい。直接的なカップリングは、タンパク質の官能基、例えばアミノ基、オキシカルボニルイミダゾール基、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド基といった反応性に富む官能基によって結合される。【００６２】
親和性リガンドには、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント、核酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、オリゴペプチド、多糖糖、糖類、ペプチドをコードする核酸分子、レクチン、細胞接着因子、抗原、薬剤および他のリガンドなどが挙げられる。【００６３】
・変異体または改変体の作製
上記のようにウイルスタンパク質は、ネイティブのウイルスタンパク質と機能的に等価である変異体もしくは改変体であってもよい。すなわち粒子形成能を保持し、しかもネイティブのウイルスタンパク質の有する標的の組織性または細胞指向性を改変した変異体もしくは改変体であってもよい。この場合の変異体または改変体は、突然変異誘発法、化学修飾法または遺伝子組換え技術により得られる。ウイルスタンパク質の変異体もしくは改変体とは、ウイルスタンパク質を構成するアミノ酸配列において、１個以上、好ましくは１個もしくは数個、より好ましくは１〜２４個、さらに好ましくは１〜１５個のアミノ酸残基が欠失、付加または他のアミノ酸残基により置換されたアミノ酸配列からなるタンパク質である。また、かような変異体もしくは改変体は、粒子形成能を有するものである。【００６４】
ここで「欠失」とは、ネイティブタンパク質のポリペプチド鎖から、1個以上のアミノ酸残基が喪失されていることをいう。逆に「付加」とは、ポリペプチド鎖に1個以上のアミノ酸を挿入することであり、1箇所にペプチドの形態で入れてもよい。また「置換」とは特定部位のアミノ酸残基を他の種類のアミノ酸に置き換えることを言う。【００６５】
「機能的に等価」なる用語は、アミノ酸配列において１個または複数個のアミノ酸の欠失、置換、付加および／または挿入により修飾されたアミノ酸配列であるか、あるいは、アミノ酸配列において、例えばリン酸化もしくは脱リン酸化、グルコシル化もしくは脱グルコシル化などにより化学的にアミノ酸残基の側鎖が修飾された配列であるが、それにも拘わらず天然ウイルスタンパク質と実質的に同等の作用あるいは活性が維持されていることに対応している。このような機能的に等価な変異体は、天然の生物学的突然変異として発生することがあるが、特定部位の突然変異誘発、不特定部位の突然変異誘発の方法により作製してもよい。さらに改変体は、化学修飾法、酵素的開裂および／または連結反応などの公知技術を用いて製造することができる。発現制御配列を作動的に結合させた適切な核酸分子を宿主細胞で発現させるか、またはそのような組換えＤＮＡ分子を含む組換えＤＮＡクローニングベクターを発現させる組換え手段により、あるいは化学的または生化学的な合成（細胞外）により調製することもできる。【００６６】
ウイルスタンパク質の突然変異体あるいはネイティブタンパク質を人工的に一部もしくは全部合成されたもの、または生物起源のタンパク質を改変して得られた改変体は、上記のようにそのウイルス起源のタンパク質にない機能を有するか、あるいは不適切な性質、例えば抗原性が改善されたものであってもよい。【００６７】
ウイルスタンパク質の変異体または改変体は、粒子形成能を喪失している場合、あるいは抗原性が強化される場合もある。このような変異体または改変体は本発明の構造体に利用することができない。したがって、ウイルスタンパク質の変異体または改変体には、事前にこのような不利な性質を示さないかをチェックする必要性はついて回る。【００６８】
ウイルスタンパク質、ウイルスタンパク質の変異体または改変体は、ＳＶ４０ウイルス、ＪＣＶウイルスまたはＢＫＶウイルスなどのＶＰキャプシドタンパク質およびその変異体または改変体の少なくとも１種であることが望ましい。ウイルスタンパク質の中でもこれらのキャプシドタンパク質は、アミノ酸配列が既知であり、容易に入手でき、また精製ができるためである。【００６９】
本発明者らの研究により、ＳＶ４０のＶＰ１キャプシドタンパク質、ＪＣＶキャプシドタンパク質、ＢＫＶキャプシドタンパク質の場合、粒子形成能および細胞接着性を保持し得る外来ペプチド挿入可能部位が存在していることが見出された。さらに挿入した外来ペプチド鎖の種類によっては、細胞指向性を変更することも確認された。これらの知見から、ウイルスタンパク質は、選択的かつ特異的にその担体機能を変化させる可変性を備えていることがわかる。【００７０】
・粒子形成促進因子
本発明のウイルス粒子様構造体には、ウイルスタンパク質と前記微粒子との自己集合と自己組織化を促進する粒子形成促進因子がさらに含まれてもよい。このような粒子形成促進因子の存在下で、ウイルスタンパク質と金属（化合物）含有粒子とを混合した場合でも、ウイルスタンパク質が備えている自己集合的組織化の発揮が促進され、効率よく構造要素が会合して組織化が進み、その結果としてほぼ同一サイズの構造体が形成される。【００７１】
粒子形成促進因子として、ウイルス粒子のキャプシドタンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは生体高分子、人工高分子、化合物単量体、もしくはこれらで表面をコーティングしたフェライト粒子などが挙げられる。生体高分子としては、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質などが挙げられる。また、人工高分子としては、ポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ−Ｌ−リジン、ポリ−Ｌ−アスパラギン酸、ポリ−Ｌ−アルギニンなどが挙げられる。化合物単量体としては、クエン酸、ジメルカプトコハク酸などが挙げられる。ウイルスのキャプシドタンパク質では、粒子形成促進活性を有する領域は、アミノ末端の領域であることが知られている。例えばＳＶ４０ウイルスのキャプシドタンパク質ＶＰ２では、少なくとも１〜２７２位のアミノ酸配列を有するポリペプチドが粒子形成促進因子として機能を発揮できる。キャプシドタンパク質のＶＰ１は、ペンタマーを形成するが、粒子形成因子の存在下でその構造が変化して互いに会合し、正２０面体の構造体を形成する。生体高分子等でコーティングされているフェライト粒子の場合、表面が電荷（例えばカルボキシル基）を有することが好ましい。【００７２】
製造方法
上記のウイルス粒子様構造体は、以下のようにして作製することができる。【００７３】
本発明のウイルス粒子様構造体の形成方法は、ウイルスタンパク質および／またはその変異体もしくは改変体と、被封入物質である金属および金属化合物の少なくとも一方を含む微粒子とを、１００ｍＭ〜５００ｍＭの一価陽イオンおよび２μＭ〜５０ｍＭの二価陽イオンの存在下で、ｐＨ５〜ｐＨ１０で、１５〜３０℃にてインキュベートすることを特徴としている。【００７４】
具体的には既存のタンパク質精製技術を利用して精製したウイルスタンパク質に、被封入物質である金属もしくは金属化合物を含有する微粒子とを充分に撹拌しながら混合する工程（Ｉ）と、工程（Ｉ）で得られた混合物を１００ｍＭ〜５００ｍＭの一価陽イオンおよび２μＭ〜５０ｍＭの二価陽イオンの存在下で、ｐＨ５〜ｐＨ１０で、１５〜３０℃にてインキュベートする工程（ＩＩ）とを含む。【００７５】
工程（Ｉ）の後、工程（ＩＩ）の前に、塩（例えばＮａＣｌ、ＣａＣｌ２など）、キレート化剤（例えばＥＤＴＡ、ＥＧＴＡなど）、さらに必要であれば還元剤（例えば、ＤＴＴ）などを含む緩衝液を加えて、次いでこの混合溶液を４℃で所定の時間、インキュベートしてもよい。工程（ＩＩ）の好ましい一実施形態を挙げると、溶液を１５〜２０時間、好ましくは１６時間、１５〜３０℃でｐＨ５，７またはｐＨ９の１００ｍＭ〜５００ｍＭの一価陽イオンおよび２μＭ〜５０ｍＭの二価陽イオンを含む溶液で透析をする。【００７６】
前記一価陽イオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオン、アンモニウムイオンなどが挙げられ、好ましくはナトリウムイオンである。また、二価陽イオンとしては、マグネシウムイオン、カルシウムイオンなどが挙げられ、好ましくはカルシウムイオンである。さらに前記一価陽イオンの濃度が１００〜５００ｍＭであることが望ましく、１００〜２００ｍＭであることがより望ましく、１４０〜１６０ｍＭであることがさらに望ましく、１５０ｍＭであることが最も望ましい。また前記二価陽イオンの濃度が１〜５ｍＭであることが望ましく、２ｍＭであることがより望ましい。【００７７】
表面荷電として正または負の電荷を有し、金属／金属化合物を含む微粒子と、ウイルスタンパク質および／またはその変異体もしくは改変体とを含有するウイルス粒子様構造体の製造において、ウイルスタンパク質と、当該ウイルスタンパク質３６０重量部に対して、金属／金属化合物を含む微粒子０．０１〜１００重量部とを混合し、一価の金属塩および二価の金属塩を含む水溶液に対して透析することにより調製されることを特徴とする製造方法も本発明の方法である。【００７８】
該製造方法において、金属／金属化合物を含み、負の電荷を有する微粒子の前記ウイルスタンパク質に対する重量比が０．２以上であることが好ましく、０．２〜３であることがより好ましく、０．２〜０．２７であることがさらに好ましい。【００７９】
さらに該製造方法において、前記一価の金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩などが挙げられ、ナトリウム塩であることが望ましく、また前記二価の金属塩としては、マグネシウム塩、カルシウム塩などが挙げられ、カルシウム塩であることが望ましい。【００８０】
金属／金属化合物を含む微粒子は、すでに報告されている技術を適用して製造することができる。凝集性の金属、金属イオンもしくは金属化合物のクラスタをナノ粒子として形成する。あるいはバインダーに沈着させるか、リンカー分子を介して連結させる。溶液金属の還元によるか、コロイドベースの沈着プロセスによるものである。【００８１】
金属／金属化合物を、金属を含有しない、例えば有機物等で被覆してもよいし、逆に非金属化合物からなる粒子を金属もしくは金属化合物で被覆してもよい。さらに、例えばＡｕ２Ｓ粒子上にＡｕの還元（硫化ナトリウムによるクロロ金酸の還元）により金で被覆したＡｕ２Ｓコアを有する粒子のような、金属もしく金属化合物のみからなるコア／シェル構造の粒子にすることもできる。別の方法として、金属もしくは金属化合物をモノマーと混ぜて重合させ、ポリマー中に分散させてもよい。【００８２】
利用の態様
本発明のウイルス粒子様構造体が、生体内に導入されると、そのウイルスタンパク質集合体に封入された金属／金属化合物は、予定された機能を発揮する。磁性金属であれば、ヒステリシス損による熱を発散させ、磁気共鳴の場合にはその信号を、発光体であれば、光を発して、これに付随して生体内の情報も提供される。発熱の場合には治療に、信号に付加される生体情報は診断に利用できる。したがって、上記ウイルス様構造体を含有する製剤は、そうした目的を達成するためのものであり、本発明に含まれる。【００８３】
・画像化剤
具体的には前記の製剤が、画像化剤、腫瘍に対する診断剤または治療剤である。さらに具体的には前記製剤が、画像化剤として超音波画像診断装置、核磁気共鳴画像化診断装置またはＸ線画像診断装置のための造影剤であることが望ましい。【００８４】
磁気共鳴造影剤に用いられる常磁性金属化合物の金属原子として、各種の常磁性金属を用いることができる。本発明のウイルス粒子様構造体に封入して好適に磁気共鳴造影剤として用いられる磁性体粒子は、特に鉄、酸化鉄、フェライトを主成分とするものである。磁鉄鉱、Ｆｅ２Ｏ３、Ｆｅ３Ｏ４、混合フェライト、有機強磁性材料を包含する他の鉄含有化合物などいずれも使用することできるが、最大の磁力を示すＦｅ３Ｏ４であるフェライト（Ｆｅ３Ｏ４とδ−Ｆｅ２Ｏ３の固溶体）は磁気応答性が良好であり、特に好ましい。【００８５】
磁気共鳴造影剤に用いられる常磁性金属化合物の金属原子として、上記の鉄以外にも原子番号５７〜７０のランタノイド系元素、特にガドリニウム（Ｇｄ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、イッテルビウム（Ｙｂ）、プラセオジム（Ｐｒ）、ネオジム（Ｎｄ）、サマリウム（Ｓｍ）、テルビウム（Ｔｂ）、ホルミウム（Ｈｏ）、エルビウム（Ｅｒ）、クロム（Ｃｒ）、マンガン（Ｍｎ）、コバルト（Ｃｏ）、ニッケル（Ｎｉ）、銅（Ｃｕ）の遷移金属種などが挙げられる。【００８６】
上記遷移金属を用いる場合、二価または三価のイオンとキレート化化合物とを反応させて形成された錯体をウイルスタンパク質集合体の中に内包させる態様であってもよい。その理由はタンパク質が分解を受けたりして常磁性金属イオンが構造体の外に出ても、錯体の形態であればその毒性が軽減されるからである。例えば遊離のガドリニウムは組織に沈着し肝臓・骨髄などに強い毒性を示すが、キレート化により腎臓から速やかに排泄される。このようにキレート化化合物は、重金属である常磁性金属の毒性を低下させるとともに、その投与を補助する機能、生体内での移行、排泄、常磁性金属のプロトンとの作用などにおいても有用性を発揮する。【００８７】
キレート化化合物として、常磁性金属原子と錯体を形成でき、かつ本発明のウイルス粒子様構造体と適度の親和性を有するものであれば特に限定されない。具体的には架橋鎖として活性アミノ基を有する鎖式または環式のポリアミノポリカルボン酸であって、金属イオンを捕捉して錯体を形成する能力を有する二官能性構造をもったものが好ましい。例えば、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタ酢酸）の誘導体およびその塩が考えられる。具体的にはモノアルキルアミドＤＴＰＡ、ジアルキルアミドＤＴＰＡ、モノアリールアミドＤＴＰＡ、ジアリールアミドＤＴＰＡ、モノアルキルエステルＤＴＰＡ、ジアルキルエステルＤＴＰＡ、モノアリールエステルＤＴＰＡ、ジアリールエステルＤＴＰＡ、アルキル化ＤＴＰＡなどが例示される。これらの化合物のうち、アルキルとして炭素数１２０のアルキル基、アリールとしてフェニル、ナフチルが例示される。アリールは、アルキル、ハロゲン原子などで置換されていてもよい。【００８８】
キレート化化合物のほかの例として、ＴＴＨＡ（トリエチレンテトラアミンヘキサ酢酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸）、ＥＨＰＧ（Ｎ，Ｎ−エチレンビス［２−（２−ヒドロキシフェニル）グリシン］）、Ｃｙｃｌａｍ（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン）、ＮＴＡ、ＨＥＤＴＡ、ＢＯＰＴＡ、ＮＯＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＨＰＤＯ３Ａ、ＥＯＢ−ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＨＡＭ、ＤＰＤＰ、ポルフィリンおよびその誘導体などが挙げられる（なおＥＯＢは、エトキシベンジルを意味する。）。【００８９】
上記常磁性金属原子イオンとキレート化剤とを常法によりキレート結合させる。その結果、生成した常磁性金属またはその化合物の誘導体の例として、次の化合物が例示される：Ｇｄ−ＤＴＰＡ，Ｇｄ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡ，Ｙｂ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡ，Ｄｙ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡ，Ｍｎ−ＤＴＰＡ，Ｇｄ−ＢＯＰＴＡ，Ｇｄ−ＤＯＴＡ，Ｇｄ−ＨＰＤＯ３Ａ。ガドブトロール（ｇａｄｏｂｕｔｒｏｌ）のような金属含有大環に基づく化合物も適している。【００９０】
・治療剤
癌の温熱療法は、レーザー治療法、光線力学療法などともに非侵襲的な癌治療法の範疇に属する。このように、癌の温熱療法は、独特の特性、優れた側面を有する治療法であるが、必ずしも癌の治療現場では積極的に採用されて来なかった。温熱療法は単独で用いるのではなく、むしろ放射線や抗癌剤の効果を強めることを目的に、放射線や抗癌剤と併用されているのが現状である。その理由としていくつか挙げられるが、必ずしもその治療効果が他の治療法を凌ぐほどの成果を上げることができないために、従来法にとって代わるほどの理由はなかったと言っても差し支えない。このため、癌の温熱療法に使用される部材、薬剤、装置に依然として改良の余地があると考えられる。【００９１】
今のところ、この治療法の対象となるのは、通常の治療法では治すことが難しい局所進行癌や再発癌である。温熱療法には全身を加温する方法（全身温熱療法）と、癌やその近傍を温める方法（局所温熱療法）がある。一般には局所温熱療法が主に行われる方法であり、マイクロ波、電磁波（交番磁場）、超音波を用いた装置で局所を加温する。身体の外から加温する方式が最も多く行われるが、その他に食道、直腸、子宮、胆管といった管腔内に器具を入れて加温する方法、癌組織の中に数本の電極針を刺し入れて加温する方法なども試みられている。癌に対する効果は４１℃以上で得られるが、４２．５℃以上で特に強くなることが知られている。身体の表面に近い癌は目的の温度まで比較的容易に温めることができるが、身体の奥深いところにある癌は脂肪、空気、骨が邪魔をして十分に温めることが難しい場合が多く、温熱療法の効果が不十分になることが多い。そこでウイルス粒子様構造体に磁性粒子を封入させた本発明製剤を体内に導入して、温熱療法の発熱素子として使用すれば、身体奥の癌組織、散在する癌細胞、微小な初期癌の細胞について効果的な治療が可能となる。【００９２】
本発明の製剤をこのような温熱治療剤として用いる場合は、例えば被検者の静脈内に、フェライトのような磁性を発現しうる金属または金属化合物からなる磁性粒子（本発明の磁性粒子含有製剤である）を投与し、この投与が開始されてから１分以上４８時間以内、好ましくは３０分以上３６時間以内に、その被検者の癌細胞のある部位に対して、後述するエネルギー照射を行うことにより、磁性粒子に近接する腫瘍組織の温度を上昇させ、正常細胞にほとんど影響を与えることなく、治療を行なうことができる。一方、被検者の腫瘍組織の近傍に、直接に磁性粒子含有製剤を注入してもよく、注入が開始されてから０．５分以上３６時間以内、好ましくは１０分以上２４時間以内に、被験者の癌細胞のある部位に対して、後述するエネルギー照射を行うことにより、封入磁性粒子に近接する腫瘍組織の温度を上昇させることができる。【００９３】
エネルギー照射としては、好ましくは交番磁場照射または超音波照射が挙げられ、交番磁場照射は、周波数２５〜５００ｋＨｚで行うことが好ましい。【００９４】
・細胞導入用組成物
さらに上記のウイルス粒子様構造体を含有し、前記の金属／金属化合物を含む微粒子を細胞内に導入するための組成物もまた本発明に含まれる。【００９５】
標的細胞の膜内に、目的とする金属／金属化合物またはこれを含む粒子を導入する場合、導入する金属などをウイルス粒子様構造体に封入した形態によれば、容易かつ効率的に移入することができる。本発明の組成物は、そうしたウイルス粒子様構造体を含有し、さらに必要な添加物質を含んでなる。添加物質として、上記構造体の安定化物質、塩類、キレート化剤、融合促進剤としてのポリエチレングリコール、リゾレシチン、グリセロールオレイン酸エステルなどが挙げられる。トランスフェクションのための適切な技術はよく知られており、これには、エレクトロポーレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ウイルス・トランスフェクションおよびプロトプラスト融合などが挙げられる。【００９６】
ウイルス粒子内に担持されて細胞内に導入・移送される金属／金属化合物分子は、上記のように粒子形態にされ、ウイルスタンパク質が形成する粒子様構造体内に取り込まれる。例えばウイルスの外被（ｃｏａｔ）またはキャプシドのタンパク質構造体の内部に取り込まれる。一般的に遺伝子治療または他のインビボ応用に用いられる場合、安全上の理由から、ウイルスは通常、不能化される。その結果、それらのウイルスは宿主細胞に感染できるが、新しいヴィリオンを複製、組み立てることはできない。また新しい細胞に感染し、つまり複製を無能（ｉｎｃｏｍｐｅｔｅｎｔ）とすることはできない。遺伝子治療に使用されているアデノウイルスもまた、本発明の使用に好ましいウイルスの系である。上記のウイルス粒子様構造体も不能化されていることに変わりはない。【００９７】
［実施例］
以下に示す実施例は、本発明の範囲内の好適な態様にすぎない。また、実施例中で用い
る装置名及び、使用材料の濃度、使用量、処理時間、処理温度等の数値的条件、処理方法
等はこの発明の範囲内の好適例にすぎない。【００９８】
（実施例１）
フェライト粒子の合成
一般的な共沈法により合成を行なった。具体的には、０．１Ｍ  ＦｅＣｌ２水溶液８．３ｍＬと０．１Ｍ  ＦｅＣｌ３水溶液１６．７ｍＬを混合した水溶液２５ｍＬを２００ｍＭ  ＮａＯＨ水溶液５０ｍＬ中に添加し、１時間室温で攪拌することでフェライト粒子（Ｆｅ３Ｏ４およびγ−Ｆｅ２Ｏ３の固溶体）を調製した。【００９９】
ここで調製されたフェライト粒子は、透過型電子顕微鏡による観察から平均粒子径８ｎｍであることが確認された。【０１００】
（実施例２）
クエン酸固定化フェライト粒子の合成
実施例１によって調製されたフェライト粒子１８０ｍｇに対して、１００ｍＭクエン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ７．０）を５０ｍＬ添加し、超音波処理を施しながらフェライト粒子表面へクエン酸分子の固定化を行なった。得られたクエン酸固定化フェライト粒子は透析処理により超純水中へ分散した状態にした。その後、分散液中に含まれる凝集物を取り除くために遠心処理を行い、その上清をクエン酸固定化フェライト粒子として回収した。得られたクエン酸固定化フェライト粒子は動的光散乱法により水溶液中において平均粒子径１２ｎｍ程度で分散していることが確認された。【０１０１】
（実施例３）
ジメルカプトコハク酸固定化フェライト粒子の合成
実施例１によって調製されたフェライト粒子１８０ｍｇに対して、１００ｍＭジメルカプトコハク酸ナトリウム水溶液（ｐＨ７．０）を５０ｍＬ添加し、超音波処理を施しながらフェライト粒子表面へジメルカプトコハク酸分子の固定化を行なった。得られたジメルカプトコハク酸固定化フェライト粒子は透析処理により超純水中へ分散した状態にした。その後、分散液中に含まれる凝集物を取り除くため遠心処理を行い、その上清をジメルカプトコハク酸固定化フェライト粒子として回収した。得られたジメルカプトコハク酸固定化フェライト粒子は、動的光散乱法により水溶液中において平均粒子径１２ｎｍ程度で分散していることが確認された。【０１０２】
（実施例４）
フェライト含有ウイルス様粒子の再構成
精製したＳＶ４０のＶＰ１五量体タンパク質、１０μｇに実施例２のクエン酸固定化フェライト粒子、３．６×１０１２粒子(４８００ｎｇ)を混合した。この混合液を２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．９）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、５ｍＭ  ＤＴＴ溶液で総体積を１００μＬに定容した。この混合溶液を１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび２ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む溶液をｐＨ５（ＨＣｌ［ｐＨ５．０］）、ｐＨ７（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ７．０］）およびｐＨ９（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ９．０］）に調整した各溶液に１６時間、室温（２２℃）で前記混合物を透析することにより溶媒を置換した。【０１０３】
この溶液を回収して、透過型電子顕微鏡を用いて、置換した溶媒中のＶＰ１五量体の集合化様式を観察した。フェライト粒子の添加により、１２個のＶＰ１五量体タンパク質の集合体である、Ｔ＝１ウイルス粒子様の構造体の形成が確認された。【０１０４】
このようなフェライト含有ウイルス様粒子の再構成実験から、ナノ磁性フェライト粒子をウイルス様粒子の内部へ包含させることができることが示された。【０１０５】
（実施例５）
フェライト量を変えた場合のウイルス粒子様構造体の形成効率
精製したＳＶ４０のＶＰ１五量体タンパク質、１０μｇに実施例２のクエン酸固定化フェライト粒子、０．３×１０１０粒子(４８ｎｇ)、３．６×１０１１粒子(４８０ｎｇ)、１．１×１０１２粒子(１５００ｎｇ)および３．６×１０１２粒子(４８００ｎｇ)それぞれを混合した。この混合液を２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  （ｐＨ７．９）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、５ｍＭ  ＤＴＴ溶液で総体積を１００μＬに定容した。この混合溶液を１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む溶液をｐＨ５（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ５．０］）、ｐＨ７（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ７．０］）およびｐＨ９（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ９．０］）に調整した各溶液に１６時間、室温（２２℃）で透析をすることにより、置換した。【０１０６】
この溶液を回収して、透過型電子顕微鏡を用いて、置換した溶媒中のＶＰ１五量体の集合化様式を観察した。通常、ＶＰ１タンパク質のみで透析した場合には、チューブ状の構造物が形成された。この条件でフェライト粒子の添加量に依存して、１２個のＶＰ１五量体タンパク質の集合体である、Ｔ＝１ウイルス粒子様の構造体の形成が確認された。【０１０７】
図１に示すように、フェライト粒子の添加により、１２個のＶＰ１五量体タンパク質の集合体である、Ｔ＝１ウイルス粒子様の構造体の形成が確認された。なお、図１に示したものは、フェライト粒子を３．６×１０１２粒子(４８００ｎｇ)添加したものである。【０１０８】
（実施例６）
画像化剤
ラット副腎褐色細胞腫由来の細胞株ＰＣ−１２は定法に従って培養し、培地２ｍＬ当たり２×１０５細胞を直径３５ｍｍプレート（６−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）に播種し、一晩培養した後、上述の実施例５で作製したフェライト粒子３．６×１０１２粒子(４８００ｎｇ)を包含するウイルス粒子様構造体の懸濁液３５μＬを、ＰＣ−１２細胞（２ｍＬ  ｃｕｌｔｕｒｅ）に添加し、同プレートを３５℃、１，６００×ｇ、１０分間遠心した。遠心後、培地交換し、プレートを３７℃、５％  ＣＯ２下、２０時間インキュベートし、ＰＣ−１２内にフェライト粒子を包含するウイルス粒子様構造体を導入した。なお、ネガティブコントロールとして、フェライト粒子を包含しないウイルス粒子様構造体を用いて前述と同様の方法で作製した。【０１０９】
次に、上述のウイルス粒子様構造体を導入したＰＣ−１２細胞とフェライト粒子を包含しないウイルス粒子様構造体をそれぞれトリプシン処理によりプレートから剥がし、培地０．２ｍＬに懸濁させ（約１×１０６細胞／ｍＬ）、これをＮＭＲ試料管に細胞懸濁液０．２ｍＬを採取し、磁気共鳴計測（２テスラ動物実験用ＣＳＩ：ブルーカー、カールスルエー、ドイツ）を行った。撮像方法にはスピン・エコー法を用い、関心領域（ＦＯＶ）３５ｍｍ×３５ｍｍ、スライス厚４ｍｍ、マトリックス２５６×１２８に設定して、Ｔ１−強調画像とＴ２−強調画像を観察した。Ｔ１−強調画像の撮像条件は、繰り返し時間（ＴＲ）５００ｍｓ、エコー時間（ＴＥ）１８ｍｓ、フリップ角９０°、２回スキャンで、約２分の計測時間を要した。また、Ｔ２−強調画像の撮像条件は、繰り返し時間２０００ｍｓ、エコー時間８０〜１２０ｍｓ、フリップ角９０°、４回スキャンで、約１７分の計測時間を要した。それぞれの元データにはゼロ・フィルを加えて画像化し、最終的にマトリックス２５６×２５６の画像データを得た。その結果、フェライト粒子を包含しないウイルス粒子様構造体を導入したＰＣ−１２細胞懸濁液のＴ２−強調画像の信号強度を１００とした際、フェライト粒子を包含するウイルス粒子様構造体を導入したＰＣ−１２細胞懸濁液のＴ２−強調画像の信号強度が４０であった。【０１１０】
上記のことから本発明のフェライト粒子を包含するウイルス粒子様構造体は、生体に対する画像化剤や診断剤として有効に機能することが期待される。【０１１１】
（実施例７）
温熱治療剤
ラット副腎褐色細胞腫由来の細胞株ＰＣ−１２は定法に従って培養し、培地２ｍＬ当たり２×１０５細胞を直径３５ｍｍプレート（６−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ）に播種し、一晩培養した後、上述の実施例５で作製したフェライト粒子３．６×１０１２粒子(４８００ｎｇ)を包含するウイルス粒子様構造体の懸濁液３５μＬを、ＰＣ−１２細胞（２ｍＬ  ｃｕｌｔｕｒｅ）に添加し、同プレートを３５℃、１，６００×ｇ、１０分間遠心した。遠心後、培地交換し、プレートを３７℃、５％  ＣＯ２下、２０時間インキュベートし、ＰＣ−１２内にフェライト粒子を包含するウイルス粒子様構造体を導入した。なお、ネガティブコントロールとして、フェライト粒子を包含しないウイルス粒子様構造体を用いて前述と同様の方法で作製した。【０１１２】
次に、上述のウイルス粒子様構造体を導入したＰＣ−１２細胞とフェライト粒子を包含しないウイルス粒子様構造体のプレートを用いて、プレート内のＰＣ−１２細胞の温度計測を行なうため、光ファイバ温度計を配置し、共振周波数３００ＫＨｚ、磁界を発生させるためのコイルの直径２００ｍｍ、磁場強度６ｍＴ、電流２２５Ａ、出力３ＫＷ、アプリケーターからの距離２０ｍｍ、の条件で２分間交番磁場照射したところ、ウイルス粒子様構造体を導入したＰＣ−１２細胞のプレートの方が約６℃温度が高くなった。【０１１３】
上記のことから、本発明のフェライト粒子を包含するウイルス粒子様構造体は、生体に対する温熱治療剤として有効に機能することが期待される。【０１１４】
（実施例８）ショ糖密度勾配遠心によるフェライト含有ウイルス様粒子の解析
２０％（ｗ／ｖ）から４０％（ｗ／ｖ）ショ糖（２０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．９））の密度勾配溶液６００μｌ中に、上述の実施例５で作製したフェライト粒子３．６×１０１２粒子(４８００ｎｇ)を包含するウイルス様粒子溶液２０μｌを添加し、５０，０００ｒｐｍで１時間遠心した。遠心後、上から５５μｌずつ吸い取ることにより１２分画した。【０１１５】
このうち７μｌを使って、抗ＶＰ１抗体を用いたウエスタンブロットを行いＶＰ１の存在する画分を調べた。コントロールとして、中空のウイルス様粒子溶液も同様の実験を行った。【０１１６】
中空のＴ＝１ウイルス様粒子は３−４画分、大型のウイルス様粒子は７−９画分に検出された（図２−Ａ）のに対して、フェライト含有のＴ＝１ウイルス様粒子は７−９画分に検出された（図２−Ｂ上）。【０１１７】
また、残り４８μｌを使って、６Ｍ  ＨＣｌ  ５０μｌ，９０８ｍＭアスコルビン酸  １００μｌ添加後１０分間静置し、次に１．０４ｍＭ  ５−Ｂｒ−ＰＳＡＡ  １５０μｌ、３．６６Ｍ酢酸ナトリウム１５０μｌ添加後２０分間静置して、５５８ｎｍの吸光度測定によってフェライト由来のＦｅ２＋の存在する画分を調べた。コントロールとして、フェライト溶液も同様の実験を行った。【０１１８】
フェライトそのものは１２画分に検出された（図２−Ｃ下）のに対して、フェライト含有ウイルス様粒子は７−９画分に検出された（図２−Ｂ）。【０１１９】
上記のことから、フェライト含有ウイルス様粒子は中空のウイルス様粒子より密度が高くなり、かつフェライトが吸着していることがわかる。【０１２０】
（実施例９）モリブデン酸アンモニウム染色によるフェライト含有ウイルス様粒子の電子顕微鏡観察
上述の実施例５で作製したフェライト粒子３．６×１０１２粒子(４８００ｎｇ)を包含するウイルス様粒子溶液をモリブデン酸アンモニウムで染色後、透過型電子顕微鏡観察を用いて観察した。コントロールとして、中空のウイルス様粒子にフェライトを加えた状態の溶液も同様の実験を行った。【０１２１】
すべてのフェライト含有ウイルス様粒子の中心にフェライトが観察できた（図３左）のに対して、コントロールではウイルス様粒子の周囲にフェライトが付着している状態は観察できたが中心にフェライトは観察できなかった（図３右）。【０１２２】
上記のことから、フェライト含有ウイルス様粒子はすべてフェライトを内包していることがわかる。【０１２３】
（実施例１０）フェライト表面の被覆物質によるＶＰ１五量体タンパク質の集合化様式の影響
精製したＳＶ４０  ＶＰ１五量体タンパク質、１０μｇに実施例３のジメルカプトコハク酸固定化フェライト、３．６×１０１２粒子（１４１００ｎｇ）を混合し、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．９），１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，５ｍＭ  ＥＧＴＡ，５ｍＭ  ＤＴＴ溶液で総体積を１００μｌに定容した。この混合溶液を１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，２ｍＭ  ＣａＣｌ２，ｐＨ７の溶液に１６時間、室温で透析をする事で溶媒を置換した。【０１２４】
この溶液を回収し、透過型電子顕微鏡を用いて、置換した溶媒中のＶＰ１五量体の集合化様式を観察した。ジメルカプトコハク酸固定化フェライトの添加によって、１２個のＶＰ１五量体タンパク質の集合体であるＴ＝１ウイルス様粒子の形成が確認された。（図４−Ａ）また、ショ糖密度勾配遠心による解析では、クエン酸固定化フェライトの場合と同程度の形成効率であった（図４−Ｂ）。【０１２５】
上記のことから、フェライト含有ウイルス様粒子の形成は、表面が負に帯電しているフェライトの粒子数に依存していることがわかる。【０１２６】
さらに、本出願は、２００６年４月３日に出願された日本特許出願番号２００６−１０２３５１号に基づいており、その開示内容は、参照され、全体として、組み入れられている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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