(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オルニプラビンを有効成分として含む肝機能改善剤。
【請求項２】
肝機能改善剤の製造のためのオルニプラビンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オルニプラビンを有効成分として含む肝機能改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
真菌スタキボトリス・ミクロスポラ（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ  ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）に由来するトリプレニルフェノール化合物であるオルニプラビンは、プラスミノーゲン活性化促進作用を有することが知られている（特開２００４−２２４７３７）。より具体的には、オルニプラビンは、線溶因子であるプラスミノーゲンに結合し、そのコンホメーションを変化させ、プラスミノーゲンアクチベーターによるプラスミノーゲンのプラスミンへの変換を促進する。また、オルニプラビンは、プラスミノーゲンのフィブリンへの結合を促進する。オルニプラビンは、インビボで肺塞栓モデルラットの肺塞栓血栓の溶解を促進する。【０００３】
しかし、オルニプラビンのプラスミノーゲン活性化作用以外の作用は知られていなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、新規肝機能改善剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意努力した結果、オルニプラビンが肝機能障害を改善することができることを見出し、本発明を完成させた。【０００６】
したがって、本発明は、
オルニプラビンを有効成分として含む肝機能改善剤、
肝機能改善剤の製造のためのオルニプラビンの使用、及び
オルニプラビンを投与することを含む、肝機能改善方法
に関する。【０００７】
オルニプラビンは、下記の構造式：
0005135523.tif 000002
を有する。【０００８】
上記の化合物は、塩にすることができるが、そのような塩としては、好適には、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩又はカルシウム塩のようなアルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩；トリエチルアミン塩、トリメチルアミン塩のような有機塩基の塩を挙げることができ、そのような塩も本発明に包含される。また、水和物や溶媒和物のような塩も本発明に包含される。さらに、本発明の化合物は、エステルの形態でも用いることができる。たとえば、炭素数１〜１０個のアルコール又はカルボン酸など、好ましくは、メチルアルコール、エチルアルコール、酢酸又はプロピオン酸などが、本発明の化合物の薬学的に許容され得るエステルの形成に好適である。【０００９】
オルニプラビンは、スタキボトリス属等の糸状菌の代謝産物であり、当該菌株を培養することによって調製することができる。【００１０】
より具体的には、詳細には、生産菌としては、スタキボトリス属などの糸状菌が選択され、好ましくはスタキボトリス属の糸状菌が選択される。特に好ましい生産菌は、スタキボトリス・ミクロスポラ（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓ ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）などであり、より好ましくはスタキボトリス・ミクロスポラ（Ｓ． ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）ＩＦＯ３００１８株であるが、本発明は、この菌に限定されるものではない。【００１１】
培地は、生産菌の増殖に適したものであれば任意の培地を用いることができるが、好ましくは、Ａ培地である。Ａ培地は、グルコース２０ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス３ｇ、リン酸二カリウム３ｇ、硫酸マグネシウム７水和物１ｇを１リットルの精製水に溶解し、塩酸あるいは水酸化ナトリウムでｐＨを５．５に調整して調製することができる。【００１２】
培地組成で最も重要な点は、オルニチンを培地に添加することである。オルニチンの添加濃度は、０．５から２ｍｇ／ｍｌが望ましいが、この濃度に限定されるものではない。オルニチンの添加時期は、培養直後から培養３日目までが望ましい。培養温度は２５℃が最適であるが、この温度に限定されるものではない。培養時間は、オルニチン添加後１から６日で充分な生産量が得られる。通気攪拌条件は、５００ｍｌ容の三角フラスコに１００ｍｌのＡ培地を入れ、適当な通気栓をした場合、１８０ｒｐｍの旋回培養で得られる条件が適当である。ジャーファーメンターを用いる場合、これに相当する条件が望ましい。【００１３】
得られた化合物は、必要ならば、常法、例えば、カラムクロマトグラフィー、シリカゲルクロマトグラフィー等により、精製することもできる。【００１４】
本発明の化合物の投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等による経口投与又は注射剤、たとえば静脈投与、皮下投与、腹腔内投与用の注射剤若しくは坐剤等による非経口投与を挙げることができる。これらの製剤は、賦型剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤等の添加剤を用いて、周知の方法で製造される。【００１５】
その使用量は、症状、年齢等により異なるが、１日０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を、通常成人に対して、１日１回又は数回に分けて投与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】血漿ＡＳＴの測定結果である。各群間の有意差検定はチューキーの多重比較検定により行い、コントロール群に対して有意水準０．０１で有意差が認められた場合は＊＊で示した。またノーマル群に対して有意水準０．０５として有意差が認められた場合は＃、０．０１で有意差が認められた場合は＃＃で示した。エラーバーは標準誤差を示す。
【図２】血漿ＡＬＴの測定結果である。図中の符号は、図１と同義である。
【図３】血漿ＣｈＥの測定結果である。図中の符号は、図１と同義である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
慢性肝炎モデルマウスにおける肝機能改善効果
（１）慢性肝炎モデルマウスの作製
慢性肝炎マウスの作製はVogtenらの方法（J. Mathys Vogten et al, Int J Colorectal Dis (2004) 19:387-394）を改良した方法により行った。
約３０ｇのＩＣＲマウス（６週齢、雄、三協ラボサービス）を固形飼料（ラボＭＲストック）および蒸留水を自由に摂取させて５日間予備飼育を行った後に実験に供した。動物の飼育は２２℃±２℃、湿度６０±５％、光周期１２時間サイクルの条件の動物飼育室で行った。【００１８】
予備飼育の後、四塩化炭素（１０％コーンオイル溶液（vol/vol））を週３回、腹腔内に投与した。投与量は、初回は３３０μｌ／ｋｇ、二回目は４００μｇ／ｋｇ、それ以降は５００μｌ／ｋｇであった。この投与を６週間にわたり行うことでマウス慢性肝障害モデルを作製した。【００１９】
（２）オルニプラビン調製
グルコース２０ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス３ｇ、リン酸二カリウム３ｇ、硫酸マグネシウム７水和物１ｇを１リットルの精製水に溶解し、塩酸あるいは水酸化ナトリウムでｐＨを５．５に調整して調製したＡ培地を、５００ｍｌ容三角フラスコに入れ、１２１℃、１５分間オートクレーブ滅菌した。これにスタキボトリス・ミクロスポラＩＦＯ３００１８株を接種して、２５℃で４日間ロータリーシェーカーで１８０ｒｐｍにて培養した。この培養液を種培養液として、同様に調製した１００ｍｌのＡ培地を含む５００ｍｌ容三角フラスコに１ｍｌ接種した。この接種の際に、L−オルニチンを１ｍｇ／ｍｌとなるように添加した。これを２５℃で４日間ロータリーシェーカーで１８０ｒｐｍにて培養した。この培養濾液中には、オルニプラビン（ＳＭＴＰ−７）が３０５μｇ／ｍｌ蓄積した。培養濾液３リットルのｐＨを３に塩酸で調整後、メチルエチルケトン２．７リットルを加えオルニプラビンを抽出した。この溶媒抽出液を濃縮乾固して１．９ｇの乾固物を得た。乾固物をメタノールに溶解し、LiChrolut  RP-18固相抽出カラムに通した後に、逆相ＨＰＬＣカラムを用いたクロマトグラフィーに供した。５０ｍＭ酢酸アンモニウムを含む８０％水性メタノールを用いて４０℃で２５ｍｌ／分の流速でカラムを展開し、保持時間３４〜３９分に溶出された画分から、４３１ｍｇのオルニプラビンを得た。【００２０】
（３）オルニプラビン投与
６週間の四塩化炭素投与の後、統計的に同質となるようにオルニプラビン投与群および対照群の２群に分けた（オルニプラビン投与群：７匹、対照群：６匹）。オルニプラビン１０ｍｇ／ｋｇを腹腔内に連日投与した。対照群については生理食塩水２ｍｌ／ｋｇを腹腔内に連日投与した。この操作を１４日間行った。【００２１】
投与終了後、抗凝固剤として３．８％クエン酸ナトリウム溶液（採血量の１／１０量）を含む注射筒に大静脈から採血を行い、得られた血液はただちに３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離してその上清を集め、血漿サンプルとした。【００２２】
（３）血漿パラメーターの測定
得られた血漿サンプルについて、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ＧＯＴ）、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＧＰＴ）及びＣｈＥ（コリンエステラーゼ）量を測定した（ＨＩＴＡＣＨＩ自動分析装置７１８０）。【００２３】
ＡＳＴについては、オルニプラビン投与群で、コントロール群に対する有意な（Ｐ＜０．０１）減少が認められた（図１）。ＣｈＥについては、オルニプラビン投与群で、コントロール群に対する有意な（Ｐ＜０．０１）増加が認められ、コントロール群で、ノーマル群に対する有意な（Ｐ＜０．０１）減少が認められた（図３）。【００２４】
ＡＬＴについては、オルニプラビン群とコントロール群間に有意差は認められなかったが、オルニプラビンの投与による値の減少が認められた。またコントロール群で、ノーマル群に対する有意な（Ｐ＜０．０１）上昇が認められたが、オルニプラビン群ではその上昇が認められなかった（図２）。【００２５】
ＡＳＴやＡＬＴといった肝細胞障害をあらわす重要なパラメーターでオルニプラビン投与により肝細胞障害の程度がノーマルレベル近くまで回復しているということが示されており、その他には肝臓のタンパク合成能を示すコリンエステラーゼの値もノーマルと同じ水準まで回復していることから肝機能が回復傾向にあるといえる。
【図１】
0005135523.tif 000003
【図２】
0005135523.tif 000004
【図３】
0005135523.tif 000005