(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリカフェオイルアルダル酸からなる、α−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項２】
請求項１記載のα−グルコシダーゼ阻害剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸は、トリカフェオイルアルトラル酸である、α−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項３】
請求項１記載のα−グルコシダーゼ阻害剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸がヤーコン由来である、α−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項４】
請求項３記載のα−グルコシダーゼ阻害剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸がヤーコンの地上部由来である、α−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項５】
請求項３記載のα−グルコシダーゼ阻害剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸が、ヤーコンから水または親水性有機溶媒を含む溶媒を用いて抽出されてなる抽出エキス由来である、α−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項６】
請求項１記載のα−グルコシダーゼ阻害剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸は、トリカフェオイルアルダル酸ナトリウム塩として含まれている、α−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項７】
トリカフェオイルアルダル酸と、ジカフェオイルキナ酸類とからなる、α−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項８】
トリカフェオイルアルダル酸からなる、血糖値上昇抑制剤。
【請求項９】
請求項８記載の血糖値上昇抑制剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸は、トリカフェオイルアルトラル酸である、血糖値上昇抑制剤。
【請求項１０】
請求項８記載の血糖値上昇抑制剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸がヤーコン由来である、血糖値上昇抑制剤。
【請求項１１】
請求項１０記載の血糖値上昇抑制剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸がヤーコンの地上部由来である、血糖値上昇抑制剤。
【請求項１２】
請求項１０記載の血糖値上昇抑制剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸がヤーコンの水または親水性有機溶媒を含む溶媒を用いて抽出されてなる抽出エキス由来である、血糖値上昇抑制剤。
【請求項１３】
請求項８記載の血糖値上昇抑制剤において、
前記トリカフェオイルアルダル酸は、トリカフェオイルアルダル酸ナトリウム塩として含まれている、血糖値上昇抑制剤。
【請求項１４】
トリカフェオイルアルダル酸と、ジカフェオイルキナ酸類とからなる、血糖値上昇抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリカフェオイルアルダル酸を含むα−グルコシダーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、機能性食品、およびトリカフェオイルアルダル酸の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、生活習慣病の中でも食生活と関連が深いとされ、特に全糖尿病者の９割以上を占める軽症２型糖尿病は、国内においても肉食中心の食生活化が進むにつれて増加の一途を辿っている。また、糖尿病の合併症として、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害など重篤な多臓器・器官の障害が知られており、また動脈硬化や心筋梗塞など循環器障害のリスクファクターとしても生命予後に大きく影響する。日頃の血糖値を如何にコントロールできるかが生命予後や将来のＱＯＬを決定する大きなカギとなる。【０００３】
日常の食生活の中では、血糖値の上昇を抑える作用のある食品として、難消化性デキストリン、小麦アルブミン、グァバ茶ポリフェノール、豆乳エキス、Ｌ−アラビノースなどがあり、それらを含有した食品が既に特定保健用食品として表示認可されている。これらの機能性食品は、医薬品で見られるような副作用などもなく、安全性の高さからも注目されている。これらとは別の機能性素材としてヤーコンがある。【０００４】
ヤーコン（Ｓｍａｌｌａｎｔｈｕｓ  ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉａ）はアンデス山地原産のキク科植物である。本発明者らは、ヤーコン地上部熱水エキスに血糖上昇抑制活性を見出し、作用発現にα−グルコシダーゼ阻害活性が関与していること、またエキス中の３、４−ジカフェオイルキナ酸などのジカフェオイルキナ酸（ＤＣＱＡ）類が強力かつ選択的なα−グルコシダーゼ阻害活性を有することを報告している（非特許文献１参照）。さらには、ヤーコンに含まれるトリカフェオイルアルダル酸が、抗酸化剤としての活性を有することが報告されている（特許文献１参照）。【０００５】
最近、活性酸素が膵臓ランゲルハンス氏島に作用して糖尿病発症を促進し、これが抗酸化物質投与により抑制されることが報告（非特許文献２、３参照）されている。また、抗酸化活性を有するポリフェノールによりＳＴＺ誘発糖尿病マウスの血糖値が低下することも報告されている（非特許文献４参照）。Ｃａｆｆｅｉｃ  ａｃｉｄやＤＣＱＡ類には抗酸化活性のあることが知られている（非特許文献５、６参照）。【０００６】
【特許文献１】特許第３０３９８６４号明細書
【非特許文献１】Terada S., Ito K., Taka M., Ogose N., Noguchi N., Koide Y., Natural Medicines, 57, 89-94 (2003)
【非特許文献２】Tanaka Y., Gleason C. E., Tran P. O. T, Harmon J. S., Robertson R. P., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 96, 10857-10862 (1999)
【非特許文献３】Katoh M., Sakurai K., Fujimoto Y., YAKUGAKU ZASSHI, 122, 831-839 (2002)
【非特許文献４】Moharram F. A., Marzouk M. S., EI-Toumy S. A., Ahmed A. A., Aboutabl E. A., Phytother. Res., 17, 767-773 (2003)
【非特許文献５】Chuda Y., Ono H., Ohnishi-Kameyama M., Nagata T., Tsushida T., J. Agric. Food Chem., 44, 2037-2039 (1996)
【非特許文献６】Ohnishi M., Morishita H., Toda S., Yase Y., Kido R., Phytochemistry, 47, 1215-1218 (1998)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、上記文献記載の従来技術は、ヤーコンに含まれる成分のうち、α−グルコシダーゼ阻害作用および血糖値上昇抑制作用をもたらす成分について、完全に明らかにしていたわけではなかった。また、ヤーコンからα−グルコシダーゼ阻害作用および血糖値上昇抑制作用をもたらす成分を収率よく精製するための方法も確立されていなかった。【０００８】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、ヤーコンに含まれる成分のうち、α−グルコシダーゼ阻害作用および血糖値上昇抑制作用をもたらす成分を明らかにして提供することを目的とする。また、ヤーコンからα−グルコシダーゼ阻害作用および血糖値上昇抑制作用をもたらす成分を収率よく精製するための方法を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記目的を解決するために、鋭意研究に励み、ヤーコンに含まれる成分のうちトリカフェオイルアルダル酸が、優れたα−グルコシダーゼ阻害作用および血糖値上昇抑制作用をもたらすことを見出し、本発明を完成した。【００１０】
すなわち、本発明によれば、トリカフェオイルアルダル酸を含む、α−グルコシダーゼ阻害剤が提供される。このα−グルコシダーゼ阻害剤は、優れたα−グルコシダーゼ阻害作用を有するトリカフェオイルアルダル酸を含むため、α−グルコシダーゼの活性を好適に阻害することができる。【００１１】
また、本発明によれば、上記のα−グルコシダーゼ阻害剤を含有する、機能性食品が提供される。この機能性食品は、優れたα−グルコシダーゼ阻害活性を有するトリカフェオイルアルダル酸を含むため、α−グルコシダーゼの活性を好適に阻害することができる。【００１２】
また、本発明によれば、トリカフェオイルアルダル酸を含む、血糖値上昇抑制剤が提供される。この血糖値上昇抑制剤は、優れた血糖値上昇抑制作用を有するトリカフェオイルアルダル酸を含むため、血糖値の上昇を好適に抑制することができる。【００１３】
また、本発明によれば、上記の血糖値上昇抑制剤を含有する、機能性食品が提供される。この機能性食品は、優れた血糖値上昇抑制作用を有するトリカフェオイルアルダル酸を含むため、血糖値の上昇を好適に抑制することができる。【００１４】
また、本発明によれば、トリカフェオイルアルダル酸の製造方法であって、ヤーコン地上部から、水または親水性有機溶媒を含む溶媒を用いてトリカフェオイルアルダル酸含有エキスを抽出する工程と、トリカフェオイルアルダル酸含有エキスから、芳香族系吸着剤を用いて第一のトリカフェオイルアルダル酸含有画分を固相抽出する工程と、トリカフェオイルアルダル酸含有画分のｐＨを６以上１０以下の範囲内に調整した条件下で、ゲル濾過剤を用いて第二のトリカフェオイルアルダル酸含有画分を固相抽出する工程と、を含む、トリカフェオイルアルダル酸の製造方法が提供される。【００１５】
この方法によれば、トリカフェオイルアルダル酸の含有率が高いヤーコン地上部を用いて、芳香族系吸着剤およびゲル濾過剤を組み合わせて固相抽出を行い、さらに、ゲル濾過の際にトリカフェオイルアルダル酸を安定化させるために、本来ｐＨ４．５から５位の弱酸性を示すエキスに重曹、炭酸ソーダ、苛性ソーダなどを加えてｐＨを６以上１０以下の範囲内に調整するため、トリカフェオイルアルダル酸のナトリウム塩を大量に収率よく精製することができる。【００１６】
また、本発明によれば、トリカフェオイルアルダル酸含有エキスの製造方法であって、ヤーコン地上部から、エタノール濃度が０％以上７０％以下（ｖ／ｖ）であるエタノールおよび水の混液を用いて、２５℃（室温）以上１００℃以下の温度でトリカフェオイルアルダル酸を含有するエキスを抽出する工程を含む、トリカフェオイルアルダル酸含有エキスの製造方法が提供される。この方法によれば、トリカフェオイルアルダル酸の含有率が高いヤーコン地上部から、水とアルコールとの混液を用いることにより、トリカフェオイルアルダル酸含有量の多いトリカフェオイルアルダル酸含有エキスを大量に精製することができる。【００１７】
また、本発明によれば、トリカフェオイルアルダル酸含有エキスの製造方法であって、ヤーコン地上部から、塩基性溶媒を用いてトリカフェオイルアルダル酸を含有するｐＨ８以上１０以下の塩基性エキスを抽出する工程と、前記塩基性エキスを、ｐＨ２以上６以下に調整してトリカフェオイルアルダル酸を含有する酸性エキスを生成する工程と、を含む、トリカフェオイルアルダル酸含有エキスの製造方法が提供される。この方法によれば、トリカフェオイルアルダル酸の含有率が高いヤーコン地上部から、塩基性溶媒を用いて、トリカフェオイルアルダル酸を安定化した状態で抽出することにより、トリカフェオイルアルダル酸含有量の多いトリカフェオイルアルダル酸含有エキスを大量に収率よく精製することができる。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤またはそれを含む機能性食品によれば、トリカフェオイルアルダル酸を含むため、α−グルコシダーゼの活性を好適に阻害することができる。【００１９】
また、本発明の血糖値上昇抑制剤またはそれを含む機能性食品によれば、トリカフェオイルアルダル酸を含むため、血糖値の上昇を好適に抑制することができる。【００２０】
また、本発明のトリカフェオイルアルダル酸の製造方法によれば、特定の固相抽出の組み合わせを用いて、特定の条件下で抽出を行うため、トリカフェオイルアルダル酸を大量に収率よく精製することができる。【００２１】
さらに、本発明のトリカフェオイルアルダル酸含有エキスの製造方法によれば、トリカフェオイルアルダル酸の含有率が高いヤーコン地上部から、特定の溶媒で抽出を行うため、トリカフェオイルアルダル酸含有量の多いトリカフェオイルアルダル酸含有エキスを大量に収率よく精製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ヤーコン抽出エキスから得られたＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０  ５０％メタノール溶出画分のＨＰＬＣクロマトグラフを示した図である。
【図２】トリカフェオイルアルダル酸の一種であるトリカフェオイルアルトラル酸（ＴＣＡＡ）の構造式について説明するための図である。
【図３】ラットにおけるマルトース負荷ＴＣＡＡの血糖値上昇抑制作用を調べるための試験スケジュールを示した概念図である。
【図４】ラットにおけるマルトース負荷後の血糖値の推移を示すグラフである。
【図５】水−エタノール混合比とＴＣＡＡ抽出効率を示すグラフである。
【図６】抽出温度とＴＣＡＡ抽出効率を示すグラフである。
【図７】抽出液のpHとＴＣＡＡ抽出効率を示すグラフである。
【発明の実施の形態】
【００２３】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
【００２４】
本発明者らは、上記目的を解決するために、ヤーコン地上部エキスについて検討したところ、α−ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌや（±）−ｃａｔｅｃｈｉｎに匹敵する強力な抗酸化活性を見出した。そして、本発明者らは、その活性成分の探索の結果、抗酸化活性は上記のα−グルコシダーゼ阻害活性と同様に、熱水エキスのＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーの  ５０％メタノール溶出画分に収斂することを見出した。さらに、本発明者らは、ＨＰＬＣ分析により本画分はｃａｆｆｅｏｙｌ基を有するポリフェノール成分の混合物であることを見出し、ＤＣＱＡなどのα−グルコシダーゼ阻害活性成分を検出した。そして、本発明者らは、同時に、これまで未検出で含量の高い成分が認められたことから精製を行い、既知物質２、３、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄまたは、２、４、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄ（ＴＣＡＡ：トリカフェオイルアルトラル酸）を分離した。
【００２５】
なお、２、３、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄと２、４、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄは区別が困難であることから、以後これらを含めてＴＣＡＡ：トリカフェオイルアルトラル酸と定義する。従って、文章中における「ＴＣＡＡ」との記載には、２、３、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄ、または２、４、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄが含まれるものとする。
【００２６】
本発明者らは、ＴＣＡＡを他の天然物由来の抗酸化活性成分とともに評価し、α−グルコシダーゼ阻害活性ならびに血糖値上昇抑制作用について検討したところ、トリカフェオイルアルダル酸の一種であるＴＣＡＡが優れたα−グルコシダーゼ阻害作用および血糖値上昇抑制作用を有することを見出した。
【００２７】
すなわち、本実施形態によれば、トリカフェオイルアルダル酸を含む、α−グルコシダーゼ阻害剤および機能性食品が提供される。このα−グルコシダーゼ阻害剤および機能性食品は、優れたα−グルコシダーゼ阻害作用を有するトリカフェオイルアルダル酸を含むため、α−グルコシダーゼの活性を好適に阻害することができる。なお、この機能性食品には、消費者の便宜および消費意欲喚起のためにα−グルコシダーゼ阻害のために用いられる旨の表示が付されていてもよい。
【００２８】
また、本実施形態によれば、トリカフェオイルアルダル酸を含む、血糖値上昇抑制剤および機能性食品が提供される。この血糖値上昇抑制剤は、優れた血糖値上昇抑制作用を有するトリカフェオイルアルダル酸を含むため、血糖値の上昇を好適に抑制することができる。なお、この機能性食品には、消費者の便宜および消費意欲喚起のために血糖値上昇抑制のために用いられる旨の表示が付されていてもよい。
【００２９】
ここで、アルダル酸（Aldaric acids）とは、アルドースの両末端の炭素をカルボン酸にまで形式的に酸化して得られる酸を意味する。なお、アルダル酸は、異性体として、アラル酸、アルトラル酸、グルカル酸、マンナル酸、グルロン酸、イダル酸、ガラクタル酸、タルロン酸を含み、いずれも自然界ではＤ−体である。
【００３０】
そして、トリカフェオイルアルダル酸とは、アルダル酸とカフェ酸とがエステル結合した化合物であり、ＴＣＡＡ、トリカフェオイルアラル酸、トリカフェオイルグルカル酸、トリカフェオイルマンナル酸、トリカフェオイルグルロン酸、トリカフェオイルイダル酸、トリカフェオイルガラクタル酸、トリカフェオイルタルロン酸を含む総称である。すなわち、トリカフェオイルアルダル酸とは、ＴＣＡＡをはじめとする複数種類の異性体を含む総称である。
【００３１】
これらの中でも、トリカフェオイルアルダル酸として、特に好ましいのは、後述するように、アルダル酸の異性体の一つであるアルトラル酸とカフェ酸とがエステル結合したＴＣＡＡである。そして、ＴＣＡＡとは、２、３、５−トリカフェオイルアルトラル酸だけでなく、２、４、５−トリカフェオイルアルトラル酸も含むものとする。
【００３２】
ＴＣＡＡについては、後述するように、ヤーコン地上部から精製されたトリカフェオイルアルダル酸中に含まれていることを、精密質量分析により決定した分子式、核磁気共鳴スペクトルにより確認している。なお、ＴＣＡＡの構造式を、以下に示す。
【００３３】
【化１】
0005159622.tif 000002
【００３４】
繰り返しになるが、上記のトリカフェオイルアルダル酸の異性体には、上記のＴＣＡＡの他に、トリカフェオイルアラル酸、トリカフェオイルグルカル酸、トリカフェオイルマンナル酸、トリカフェオイルグルロン酸、トリカフェオイルイダル酸、トリカフェオイルガラクタル酸、トリカフェオイルタルロン酸などの異性体も含まれるものとする。したがって、ＴＣＡＡ以外のトリカフェオイルアルダル酸の異性体も、本実施形態におけるα−グルコシダーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、それらを含む機能性食品などに好適に用いることができる。
【００３５】
また、上記のトリカフェオイルアルダル酸はヤーコン由来であることが好ましい。ヤーコンには、トリカフェオイルアルダル酸が高含有率で含まれているからである。さらに、上記のトリカフェオイルアルダル酸はヤーコンの地上部由来であることが好ましい。ヤーコンの中でも、葉や茎などの地上部には、トリカフェオイルアルダル酸が特に高含有率で含まれているからである。
【００３６】
ここで、ヤーコン（Ｓｍａｌｌａｎｔｈｕｓ  ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉａ）とは、アンデス山地原産のキク科植物の一種である。ヤーコンは、地中に塊根と塊茎の二種類の栄養器官を作り、一般的に塊根は食用に、塊茎は繁殖用（苗）に利用される。芋（塊根）の部分は水分が多く、シャキッとした食感とほんのりとした甘みを持ち、古代インカ時代より食用として用いられている。一方で、ヤーコンの葉や茎などの地上部は、スープやサラダに利用されている。
【００３７】
なお、上記のα−グルコシダーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、それらを含む機能性食品には、トリカフェオイルアルダル酸だけでなく、さらに、ジカフェオイルキナ酸（ＤＣＱＡ）類を含んでもよい。ジカフェオイルキナ酸（ＤＣＱＡ）類もトリカフェオイルアルダル酸と同様に、ヤーコン地上部熱水エキスに含まれており、強力かつ選択的なα−グルコシダーゼ阻害活性を有するためである。
【００３８】
また、上記のα−グルコシダーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、それらを含む機能性食品には、それ以外にも、他の生理活性物質、食品原料、食品添加物などを適宜必要に応じて含有してもよい。ここで、食品添加物とは、食品の製造の過程において又は食品の加工若しくは保存の目的で、食品に添加、混和、浸潤その他の方法によって使用する物をいい、保存料、甘味料、着色料等を含むものとする。
【００３９】
また、上記の機能性食品には、厚生労働省の定める保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）が含まれるものとする。もっとも、厚生労働省の定める保健機能食品でなくても、通常の食品に比べて優れた何らかの生理活性を有する食品であれば、機能性食品に含まれるものとする。さらに、上記の機能性食品に付する表示には、厚生労働省の定める保健機能食品に対して認められた表示が含まれ、例えば機能性食品の包装容器に付される表示が含まれるものとする。
【００４０】
上記のトリカフェオイルアルダル酸は、ヤーコンから水または親水性有機溶媒を含む溶媒を用いて抽出されてなる抽出エキス由来であることが好ましい。特に、熱水抽出または水およびエタノール混合溶媒により抽出されることが好ましい。このように、ヤーコンから水または親水性有機溶媒を含む溶媒を用いて抽出することにより、トリカフェオイルアルダル酸を含むエキスを得ることができるからである。
【００４１】
また、上記のトリカフェオイルアルダル酸は、トリカフェオイルアルダル酸ナトリウム塩として含まれていてもよい。トリカフェオイルアルダル酸ナトリウム塩として抽出する方が、トリカフェオイルアルダル酸が安定化するためである。このとき、ｐＨを６以上１０以下の範囲内に調整した条件下でナトリウム塩として抽出すれば、さらにトリカフェオイルアルダル酸が安定化するため好ましい。
【００４２】
例えば、トリカフェオイルアルダル酸の製造方法としては、ヤーコン地上部から、水または親水性有機溶媒を含む溶媒を用いてトリカフェオイルアルダル酸含有エキスを抽出する工程と、トリカフェオイルアルダル酸含有エキスから、芳香族系吸着剤を用いて第一のトリカフェオイルアルダル酸含有画分を固相抽出する工程と、トリカフェオイルアルダル酸含有画分のｐＨを６以上１０以下の範囲内に調整した条件下で、ゲル濾過剤を用いて第二のトリカフェオイルアルダル酸含有画分を固相抽出する工程と、を含むトリカフェオイルアルダル酸の製造方法が挙げられる。 
【００４３】
この方法によれば、トリカフェオイルアルダル酸の含有率が高いヤーコン地上部を用いて、芳香族系吸着剤およびゲル濾過剤を組み合わせて固相抽出を行い、さらに、ゲル濾過の際にトリカフェオイルアルダル酸を安定化させるためにｐＨを６以上１０以下の範囲内に調整するため、トリカフェオイルアルダル酸をナトリウム塩として大量に収率よく精製することができる。このとき、トリカフェオイルアルダル酸ナトリウムをさらに安定化するためには、第二のトリカフェオイルアルダル酸含有画分は、トリカフェオイルアルダル酸ナトリウムを含有する画分として溶出されることが好ましい。
【００４４】
一方、従来公知の特許文献１に記載のＨＰＬＣを用いる方法では、大量のトリカフェオイルアルダル酸を精製することは困難であり、特にグラム単位以上のトリカフェオイルアルダル酸を得るには現実的な方法ではない。これに対して、本実施形態の方法によれば、トリカフェオイルアルダル酸の含有率が高いヤーコン地上部を用い、さらにＨＰＬＣを用いることがないため、トリカフェオイルアルダル酸を大量に精製することができる。また、本実施形態の方法によれば、芳香族系吸着剤およびゲル濾過剤を組み合わせて固相抽出を行うために、得られるトリカフェオイルアルダル酸の純度を向上することができ、さらにゲル濾過の際にｐＨを６以上１０以下の範囲内に調整するため、トリカフェオイルアルダル酸を安定化させることができ、従来は困難であった優れた収率を実現することができる。
【００４５】
なお、本実施形態の方法においても、ヤーコンは、抽出効率を高めるために、細かく粉砕しておき、これを熱水抽出するか、水およびエタノールの混合溶媒により抽出してエキスを製造することが望ましい。ヤーコンは、トリカフェオイルアルダル酸の含有率が高い茎や葉などの地上部を用いることが望ましいが、塊根や塊茎を用いてもよい。
【００４６】
抽出条件としては特に制限はないが、通常、ヤーコン葉・茎１ｋｇあたり、５Ｌ以上５０Ｌ以下の範囲内の熱水や、５Ｌ以上５０Ｌ以下の範囲内の水およびエタノールの混合溶媒を用いることが好ましい。また、熱水を用いる場合には、抽出効率を高めるため、熱水の温度を４０℃以上１００℃（沸騰温度）以下の範囲内に調整し、０．１時間以上２４時間以下の範囲内で抽出することが好ましい。もっとも、熱水を用いずに、単なる常温の水で抽出することもできる。好ましくは６０℃以上８０℃以下の温度範囲、５分以上４０分以下抽出する。
【００４７】
一方、水およびエタノールの混合溶媒を用いる場合には、抽出効率を高めるため、水およびエタノールの混合溶媒の組成をエタノール濃度０％以上９０％以下（ｖ／ｖ）の範囲内とし、温度２５℃（室温）以上１００℃（沸騰温度）以下、０．１時間以上２４時間以下の範囲内で抽出することが好ましい。エタノール濃度は、更に、１０％以上でもよく、また、７０％以下でもよい。ここで、エタノールの代わりに、他の親水性有機溶媒として、例えば、メタノール、２−プロパノール、１−プロパノール、アセトン、ジオキサンなどを用いることができる。好ましくはエタノール濃度３０％以上７０％以下（ｖ／ｖ）の範囲で、温度４０℃以上９０℃以下で０．１時間以上１時間以下抽出する。あるいは、エタノール濃度２０％以上５０％以下（ｖ／ｖ）の範囲で、温度６０℃以上８０℃以下で抽出することが好ましい。最も好ましくは、エタノール濃度３０％（ｖ／ｖ）で、温度８０℃で３０分間抽出する。
【００４８】
さらに、より抽出効率を高めるために種々のpHについて検討した結果、塩基性条件下で抽出を行えば、より効率よくトリカフェオイルアルダル酸が抽出されることが明らかとなった。すなわち、溶媒中に塩基を添加し、抽出液のpHを８以上１０以下にした後、酸を加えることにより溶液を酸性とし、溶媒を濃縮し凍結乾燥することによりトリカフェオイルアルダル酸の含量が高いエキスを得ることが出来る。用いる塩基は炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニアなどを用いることが出来るが、抽出液のpHを８以上１０以下になるようにアンモニアを添加することが好ましい。抽出する温度と時間はトリカフェオイルアルダル酸の分解を抑えるために室温にて短時間、好ましくは１５分間で抽出する。酸性に戻す際に使用する酸は、塩酸、硫酸、硝酸、などを用いることが出来、特に限定されないが、塩酸が好ましい。酸性は、pH２以上６以下になるように酸を添加すればよく、好ましくはpH３以上４以下に調整する。
【００４９】
以上、本発明の実施形態について述べたが、これらは本発明の例示であり、上記以外の様々な構成を採用することもできる。
【００５０】
例えば、上記実施の形態では芳香族系吸着剤およびゲル濾過剤を組み合わせて固相抽出を行う製造方法としたが、特に限定されず、さらに他のカラムクロマトグラフィーを行ってトリカフェオイルアルダル酸を精製してもよい。また、これらの固相抽出は、カラム法に限定されず、バッチ法、膜法などのいずれの形態で行ってもよい。例えば、カラム法を例にとって説明すると、固相を充填したカラムに試料を通過させ、目的成分を捕集した後、適当な洗浄液を通して洗浄し、次いでアルコールなどからなる溶離液を通して捕集した目的成分を溶出することができる。なお、固相抽出するにあたっては、あらかじめエタノールなどの親水性の溶媒をカラムに通すコンディショニングを行い、固相表面を濡らしておくとよい。
【実施例】
【００５１】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００５２】
＜実施例１：ＴＣＡＡの抗酸化活性およびα−グルコシダーゼ阻害活性＞
１．実験方法
１）ヤーコンの栽培
ヤーコンは２００２年東京都練馬区大泉町２丁目の全薬工業（株）中央研究所圃場にて、茨城大学農学部月橋輝男教授より恵与頂いたペルーＡ系ヤーコンの種芋を用いて栽培した。【００５３】
２）カラムの種類
カラムクロマトグラフィー用の担体は、ＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０（三菱化学）、ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ−１８（メルク）、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ  ＨＷ−４０Ｆ（東ソー）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（アマシャム）を用いた。【００５４】
３）ＴＣＡＡの分離
ヤーコン地上部１００ｇを１Ｌの７０℃熱水で１５分間攪拌抽出し、熱時綿栓濾過した。濾液を濃縮・凍結乾燥し暗褐色粉末１７．３ｇを得た。この全量をＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィー（３０ｍｍφ×２００ｍｍ）に付し、水、５０％メタノール／水、メタノール各１Ｌで順次溶出後、濃縮して凍結乾燥し水溶出部１３．９ｇ、５０％メタノール／水溶出部２．２１ｇ、メタノール溶出部０．４８ｇを各々得た。それぞれにつきＨＰＬＣでＴＣＡＡの検出を行った。図１にヤーコン抽出エキスから得られたＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０  ５０％メタノール画分のＨＰＬＣクロマトグラフを示す。【００５５】
次いで、５０％メタノール／水溶出部２．１９ｇを２回に分けてＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ−１８カラムクロマトグラフィー（３５ｍｍφ×３７０ｍｍ）に付し、メタノール−５％酢酸（３：７）、次いでメタノール−５％酢酸（４：６）で溶出した。このメタノール−５％酢酸（４：６）溶出部をまとめＴＯＹＯＰＥＡＲＬ  ＨＷ−４０Ｆカラムクロマトグラフィー（メタノール−水＝３：７→９：１）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（メタノール−水＝８：２）にて分離し、淡黄色粉末としてＴＣＡＡを１１．６ｍｇを得た。【００５６】
４）ＴＣＡＡの同定方法
ＮＭＲはＪＮＭ−ＥＸ４００（日本電子）にて測定し、内部標準はＴＭＳを用いた。なお、ｄｏｕｂｌｅｔはｄ、ｄｏｕｂｌｅ  ｄｏｕｂｌｅｔはｄｄと各々略した。高分解能ＦＡＢ−ＭＳはＪＭＳ−ＳＸ１０２Ａ（日本電子）にて測定した。ＵＶスペクトルはＵＶ−２５５０（島津製作所）、比旋光度はＳＥＰＡ−３００（堀場製作所）により各々測定した。ＨＰＬＣはポンプＬＣ−１０Ａｔｖｐ、ＵＶ／フォトダイオードアレー検出器ＳＰＤ−Ｍ１０Ａｖｐ、カラムオーブンＣＴＯ−１０Ａｓｖｐ、システムコントローラーＳＣＬ−１０Ａｖｐ（何れも島津製作所）を用いて行った。【００５７】
５）ヤーコン地上部エキス中のＴＣＡＡの定量
カラム：ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  １２０−Ｓ５（４．６ｍｍφ×１５０ｍｍ）、移動相：テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）−０．１％リン酸混液（７：３）、カラム温度：４０℃、流量：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出波長：３３２ｎｍの条件で定量を行った。【００５８】
具体的には、エキス約０．１ｇを精密に量り、移動相に溶解し正確に５０ｍｌとし試料溶液とした。別途、上記方法で分離・精製したＴＣＡＡ標準品約０．０１ｇを精密に量り、ＴＨＦに溶解し正確に５０ｍｌとした。この液２ｍｌに０．１％リン酸１５ｍｌを加え混和した後、移動相を加えて正確に５０ｍｌとし標準溶液とした。試料溶液及び標準溶液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過し２０μｌずつをＨＰＬＣに注入し、各液のＴＣＡＡのピーク面積ＡＴ及びＡＳを測定し、以下の式によりエキス１ｇ中のＴＣＡＡ量を算出した。【００５９】
エキス１ｇ中のＴＣＡＡ量（ｍｇ）
＝標準品採取量（ｍｇ）×ｆ×（１／２５）×（ＡＴ／ＡＳ）
×（１ｇ／エキス採取量ｇ）
なお、ｆ：標準品純度（％）／１００【００６０】
６）脳ホモジネート自動酸化試験
Ｏｈｋａｗａらの方法（参照文献２）に準じてチオバルビツール酸法により測定した。【００６１】
７）１，１−Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）ラジカル捕捉試験
Ｂｌｏｉｓらの方法（参照文献３）に準じて測定した。【００６２】
８）糖水解酵素阻害活性試験
α−アミラーゼ、マルターゼ、及びスクラーゼ阻害活性は何れも前報（非特許文献１）に記載の方法により測定した。【００６３】
２．実験結果
ヤーコン地上部エキスをＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに付して得られた水、５０％メタノール／水、メタノール各溶出画分の抗酸化活性を調べたところ、表１に示すように５０％メタノール溶出部に活性は収斂した。【００６４】
【表１】
0005159622.tif 000003
【００６５】
この画分をＵＶ／フォトダイオードアレー検出器を接続したＨＰＬＣで多波長分析したところ２９０ｎｍ及び３３０ｎｍ付近に極大吸収を有する成分が多数存在し、５０％メタノール溶出部はｃａｆｆｅｏｙｌ基を有する成分から成ると推定された。この画分には、３、４−ＤＣＱＡ、３、５−ＤＣＱＡ、４、５−ＤＣＱＡ、ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｒｉｎなど前報（非特許文献１）で報告したα−グルコシダーゼ阻害活性成分が確認された他、図１に示すように、これまで未確認の高含量成分が検出されたことから、カラムクロマトグラフィーにて分離・精製し、１Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲデータを取得した。【００６６】
ＴＣＡＡの同定方法によって得られた結果を以下に示す。これらのデータと文献値（参照文献７）との比較から、ヤーコン塊根部から抗酸化活性物質としての分離の報告（参照文献８）があるＴＣＡＡ（図２）と同定した。すなわち、上記の未確認の高含量成分が、２、３、５−トリカフェオイルアルトラル酸（２、３、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄ）または２、４、５−トリカフェオイルアルトラル酸（２、４、５−ｔｒｉｃａｆｆｅｏｙｌａｌｔｒａｒｉｃ  ａｃｉｄ）であることが確認された。【００６７】
淡黄色粉末
［α］Ｄ＋３１°（ｃ＝０．２、メタノール）
High Resolution FAB-MS(negative)m/z: 695.1200(M+-H) for C33H28O17
UVλmax(EtOH)nm(logε): 244(4.28),328(4.50)【００６８】
1H-NMR(CD3OD)δ: 4.84 (1H, dd, J=9.0, 2.0Hz), 5.28(1H, d, J=2.0Hz), 5.65(1H, dd, J=9.0, 2.0Hz), 5.66(1H, d, J=2.0Hz), 6.22(1H, d, J=15.9Hz), 6.366(1H, d, J=15.9Hz), 6.371(1H, d, J=15.9Hz), 6.74(1H, d, J=8.3Hz), 6.77(1H, d, J=8.0Hz), 6.78(1H, d, J=8.3Hz), 6.91(1H, dd, J=8.3, 1.9Hz), 6.970(1H, dd, J=8.3, 1.8Hz), 6.974(1H, dd, J=8.3, 1.8Hz), 7.02(1H, d, J=1.9Hz), 7.08(1H, d, J=1.9Hz), 7.09(1H, d, J=1.9Hz), 7.53(1H, d, J=15.9Hz), 7.64(1H, d, J=15.8Hz), 7.66(1H, d, J=16.1Hz) 【００６９】
13C-NMR(CD3OD)δ: 69.9,72.7(2C), 73.1, 113.9, 114.1, 114.2, 115.3(3C), 116.5(3C), 123.4(2C), 123.5, 127.6, 127.7, 127.8, 146.8(2C), 146.9, 148.2, 148.40, 148.43, 149.8, 149.9(2C), 167.4, 168.1, 168.4, 170.4, 171.6【００７０】
単離したＴＣＡＡとＤＣＱＡ類の抗酸化活性を天然物由来の抗酸化活性成分とともに過酸化脂質生成抑制及びＤＰＰＨラジカル捕捉試験により評価した。その結果、過酸化脂質生成抑制作用はＴＣＡＡが最も強くモル濃度比較で（±）−ｃａｔｅｃｈｉｎの６８倍、ｅｌｌａｇｉｃ  ａｃｉｄの２．５倍の活性を示した。また、ＴＣＡＡ、ＤＣＱＡ類のＤＰＰＨラジカル捕捉作用はｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃ  ａｃｉｄ（参照文献４）、ｅｌｌａｇｉｃ  ａｃｉｄ（参照文献５）、ｅｎｚｏｇｅｎｏｌ（参照文献６）と同等で、α−ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌよりは強いものであった（表１）。【００７１】
一方、α−グルコシダーゼ阻害活性では、スクラーゼ及びアミラーゼに対する阻害活性は弱かったが（それぞれＩＣ５０＞１０００μｇ／ｍｌ、ＩＣ５０＝４２０μｇ／ｍｌ）、マルターゼに対しては強い阻害活性を示し（ＩＣ５０＝４９μｇ／ｍｌ）、対照としたａｃａｒｂｏｓｅに比べ１９分の１の活性であった。【００７２】
ヤーコン地上部エキス中のＴＣＡＡを定量した結果、含量は０．２５％であり、ヤーコン地上部エキスのα−グルコシダーゼ阻害活性（ＩＣ５０＝５．８ｍｇ／ｍｌ）に対する寄与率は３０％と算出された。【００７３】
３．考察
今回ヤーコン地上部より分離した強力な抗酸化活性とα−グルコシダーゼ阻害活性を有するＴＣＡＡは、同じヤーコンの塊根部より既に単離・報告（参照文献７）されているものであるが、α−グルコシダーゼ阻害活性が認められたのは今回が最初である。【００７４】
なお、ＤＣＱＡ類は春菊（非特許文献４）、ヨモギ（参照文献９）など多くのキク科植物やコーヒー豆（参照文献１０）に含まれていることが知られており、ヤーコン特有のα−グルコシダーゼ阻害活性成分とは言えないが、ＴＣＡＡはこれまでにヤーコン以外の植物より分離された報告はなく、エキス中に占める含量も高いことからヤーコンエキスのα−グルコシダーゼ阻害活性に関与する主成分と考えられる。【００７５】
また、ＴＣＡＡは（±）−ｃａｔｅｃｈｉｎよりも強い過酸化脂質生成抑制効果を示し、α−ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌと同等のラジカル捕捉効果を示した。【００７６】
従来から、食後高血糖状態の繰り返しは膵β細胞を傷害し、膵β細胞容積の低下を伴うインスリン分泌の障害を導き、II型糖尿病の耐糖能をさらに悪化させ、空腹時高血糖を示すような糖尿病へと移行すると言われている（非特許文献２）。また、膵臓β細胞の疲弊を抗酸化物質が抑制することは多くの報告（参照文献１１）があり、ＴＣＡＡにも同様の効果が期待される。【００７７】
以上のように、ヤーコン地上部は抗酸化活性とマルターゼ選択的なα−グルコシダーゼ阻害活性を併せ持つ成分を多量に含んでおり、糖尿病発症予防に有用な素材と考えられる。【００７８】
＜実施例２：ヤーコン地上部からの抽出エキスの製造方法＞
１） 水−エタノールによる抽出例：
８０℃に加熱した水−エタノール（７：３）混液４Ｌに、ヤーコン地上部（１００g）を加え、その温度で１５分間攪拌した後吸引濾過した。濾液を減圧濃縮し、濃縮液を凍結乾燥することにより、エキス29.51ｇを得た。そのエキス１ｇ中のTCAA量は２．８ｍｇであったことから、ヤーコン地上部１００ｇから抽出される総TCAA量は８２．６４ｍｇであった。【００７９】
２） 塩基性溶媒による抽出例：
０．２８％アンモニア水２Ｌに、ヤーコン地上部（１００ｇ）を加え、室温にて１５分間攪拌した後吸引濾過した。濾液を２Ｎ塩酸にてｐＨ３．０とした後減圧濃縮し、濃縮液を凍結乾燥することによりエキス４０．３５ｇを得た。そのエキス１ｇ中のTCAA量は３．７９ｍｇであったことから、ヤーコン地上部１００ｇから抽出される総TCAA量は１５２．９３ｍｇであった。【００８０】
＜実施例３：ＴＣＡＡの製造方法＞
ヤーコン葉・茎１５０ｋｇに対し、メタノール−水（１：１）混液１５００Ｌを加え、室温で一夜放置したのち濾過した。濾液を減圧濃縮し、流エキス３５Ｌを得た。流エキス５ＬをＤＩＡＩＯＮ  ＨＰ−２０（三菱化学）カラム（１７φ×４０ｃｍ）に供し、水３０Ｌ溶出後、メタノール−水（１：１）混液２５Ｌで溶出した。メタノール−水（１：１）溶出部を集め、減圧濃縮して５０％メタノール溶出部３Ｌを得た。一部を凍結乾燥して乾燥重量を求めた結果、５０％メタノール溶出部は２１１ｇであった。【００８１】
５０％メタノール溶出部３ＬをポリアミドＣ−２００（和光純薬工業）カラム（１７φ×３５ｃｍ）に供し、水２５Ｌ溶出、メタノール２５Ｌ溶出後、０．１％アンモニア水を含むメタノール１０Ｌで溶出、さらに０．５％アンモニア水を含むメタノール２５Ｌで溶出した。溶出液を５Ｌずつ分取し、ＨＰＬＣ（Ａ法）でＴＣＡＡの検出を行った。ＴＣＡＡを含む画分を集め、減圧濃縮後、凍結乾燥してＴＣＡＡ含有画分２８．４ｇを得た。【００８２】
ＴＣＡＡ含有画分２８．４ｇを水１５０ｍｌに溶解し、ｐＨメーターで測定しながら１ｍｏｌ／Ｌ  Ｎａ２ＣＯ３を加えｐＨを８．５に調整したのち、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（アマシャムバイオサイエンス）カラム（５．０φ×７０ｃｍ）に供し、メタノール−水（３：７）混液で溶出した。５００ｍｌ溶出後、１５ｍｌずつ分取し、ＨＰＬＣ（Ａ法）でＴＣＡＡの検出を行った。ＴＣＡＡを含む画分を集め、減圧濃縮後、凍結乾燥してＴＣＡＡ−ナトリウム含有画分５．７１ｇを得た。ＨＰＬＣ（Ｂ法）による純度は、９２％であった。【００８３】
このＴＣＡＡ−ナトリウム含有画分５．７１ｇをメタノール−水（３：７）混液約３０ｍｌに溶解し、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ  ＨＷ−４０（東ソー）カラム（５．０φ×３４ｃｍ）に供し、メタノール−水（３：７）混液で溶出した。２００ｍｌ溶出後、１５ｍｌずつ分取し、ＨＰＬＣ（Ｂ法）でＴＣＡＡの検出を行った。純度９４％以上のＴＣＡＡを含む画分を集め、減圧濃縮後、凍結乾燥してＴＣＡＡ−ナトリウム画分４．１４ｇを得た。ＨＰＬＣ（Ｂ法）による純度は、９５％であった。【００８４】
ＴＣＡＡ−ナトリウム画分４．１４ｇをメタノール−水（３：７）混液約２０ｍｌに溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラム（５．０φ×７０ｃｍ）に供し、メタノール−水（３：７）混液で溶出した。５００ｍｌ溶出後、１２ｍｌずつ分取し、ＨＰＬＣ（Ｂ法）でＴＣＡＡの検出を行った。純度９７％以上のＴＣＡＡを含む画分を集め、減圧濃縮後、凍結乾燥してＴＣＡＡ−ナトリウム  ２．４８ｇを得た。ＨＰＬＣ（Ｂ法）による純度は、９７％であった。【００８５】
このＴＣＡＡ−ナトリウムのうち３００ｍｇを水１５ｍｌに溶解し、濾紙濾過後、濾液に０．１ｍｏｌ／ｌ塩酸１０．５ｍｌを滴下し、１時間室温放置した。析出した結晶をろ取し、水２０ｍｌで洗浄したのち褐色ビンに移し、−４０℃で減圧乾燥してＴＣＡＡ  １７７ｍｇを得た。ＨＰＬＣ（Ｂ法）による純度は９８．８％であった。【００８６】
ＨＰＬＣ（Ａ法）
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｒ−ＯＤＳ−５−Ａ（４．６φ×２５０ｍｍ）
移動相：アセトニトリル−５％酢酸（２：８）→（３：７）リニアグラジエント２０ｍｉｎ
流  速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検  出：紫外吸光光度計（測定波長３３２ｎｍ）【００８７】
ＨＰＬＣ（Ｂ法）
カラム：ＴＳＫ−ｇｅｌ  ＯＤＳ−８０ＴＭ（４．６φ×１５０ｍｍ）
移動相：ＴＨＦ−０．１％リン酸（３：７）
カラム温度：４０℃
流  速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検  出：紫外吸光光度計（測定波長３３２ｎｍ）【００８８】
＜実施例４：ラットにおけるマルトース負荷ＴＣＡＡの血糖上昇抑制作用＞
本発明者らは、前報（非特許文献１）に示したように、このヤーコンの葉・茎エキスが血糖上昇抑制作用を持つことを確認しており、さらに、実施例１および実施例２に示すように、ヤーコン葉・茎エキスから単離・精製されたＴＣＡＡがα−グルコシダーゼ阻害活性作用を有することも明らかにした。実施例４では、ＴＣＡＡの血糖に対する作用を確認するために、健常ラットを用いたマルトース負荷血糖上昇抑制作用を調べた。【００８９】
１．材料
１）被験物質：ＴＣＡＡは、ヤーコン熱水エキスをＨＰ−２０カラムクロマトグラフに付し、水溶出に次いで５０％メタノールにて溶出させポリフェノール画分を得た。この画分をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフに付し４０％メタノール／水にて分離し、ＨＰＬＣにてＴＣＡＡを確認しながらＴＣＡＡを含むところを全て集めた。ついで粗のＴＣＡＡ画分をＨＷ−４０カラムクロマトグラフに付し、同様にＨＰＬＣにて確認しながら４０％メタノール／水にて分離しＴＣＡＡ以外の成分を除去した。これを更にＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ−１８カラムクロマトグラフに付し５％酢酸：メタノール（３：７）で精製しＴＣＡＡを得た（純度９１％、マルターゼ阻害活性ＩＣ５０＝６１μｇ／ｍＬ）。また、マルトースは和光純薬より購入して用いた。【００９０】
２）動物：ＳＤ（ＩＧＳ）雄ラット７週齢を１群５匹で用いた。【００９１】
２．試験方法
１）投与群の構成
（１）対照群（マルトース単独）
（２）マルトース＋ＴＣＡＡ（６００ｍｇ／ｋｇ×２）
（３）マルトース＋ＴＣＡＡ（３００ｍｇ／ｋｇ×２）
（４）マルトース＋ＴＣＡＡ（１５０ｍｇ／ｋｇ×２）【００９２】
２）被験物質の調製
マルトースは１．５ｇを秤量して１５ｍＬの蒸留水に溶解して１ｇ／１０ｍＬ／ｋｇの割合で強制経口投与した。ＴＣＡＡは２回投与としたため、初回投与物質についてはマルトース溶液、２回投与物質については蒸留水にそれぞれ１５０、３００、６００ｍｇ／１０ｍＬの割合で溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの割合で強制経口投与した。【００９３】
３）試験系（図３）
１７時間絶食したラットに、被験物質投与前の採血（０ｔｉｍｅ）を行ったのち、初回投与した。１５分後に２回目の投与を実施し、投与後すぐに採血（すなわち１５分）、３０分、４５分、６０分、９０分および１２０分にそれぞれ採血して、グルコカード（アベンティス・ファーマ）を用いて血糖値を測定した。【００９４】
３．測定項目
各採血時間における血糖値の測定と、被験物質投与後の血糖値から投与前（０分時）の血糖値を差し引いた変化量（△）を算出して、血糖曲線下面積（△ＡＵＣ）および最高血中濃度（△Ｃｍａｘ）を求めた。【００９５】
４．統計解析
本試験で得られた測定値は平均および標準誤差の算出ならびに対照群との２群間比較を行った。検定方法はＢａｒｔｌｅｔｔ法により、測定値の分散を９５％信頼限界で検定し、等分散の場合のみＳｔｕｄｅｎｔ'ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行って、ｐ＜０．０５を統計学的に有意差ありと判断した。【００９６】
５．血糖値の推移
血糖値の推移を図４に示した。対照群ではマルトース負荷による血糖値の急激な増加が１５分にみられ、ＴＣＡＡの各用量群ではその増加を有意（ｐ＜０．０１）に抑制した。一方、ＴＣＡＡ  ６００ｍｇ／ｋｇ群の９０分値において、対照群と比較して明らかな増加がみられた。【００９７】
６．ＡＵＣおよびＣｍａｘ
△ＡＵＣおよび△Ｃｍａｘを表２に示した。ＴＣＡＡ各用量群の△ＡＵＣは対照群と比較して変化は認められなかった。ＴＣＡＡ  ６００ｍｇ／ｋｇ群の△Ｃｍａｘは対照群と比較して、有意な（ｐ＜０．０５）抑制が認められた。表２に、マルトース負荷後の血糖値から求めた△ＡＵＣおよび△Ｃｍａｘを示す。【００９８】
【表２】
0005159622.tif 000004
【００９９】
７．考察
本試験に用いたマルトースは経口摂取された後、上部消化管において小腸刷子縁膜に存在するα−グルコシダーゼの働きによって単糖（ブドウ糖）に分解され、血糖値を上昇させる。そこで今回、ＴＣＡＡの健常ラットにおけるマルトース負荷に対する血糖値への影響を調べたところ、ＴＣＡＡの各用量群では対照群でみられた１５分後の急激な血糖値の増加を有意に抑制することが明らかとなった。またＴＣＡＡはＡＵＣには変化を与えずにＣｍａｘを抑制したことから、糖の吸収を緩やかにすることにより、食後の急激な血糖値の上昇を抑制することのできる成分であることが示された。【０１００】
＜実施例５：水−エタノール混合比とＴＣＡＡ抽出効率の検討＞
ヤーコン葉・茎１０ｇを各比の水−エタノール混液２００ｍｌ中に入れ、１５分間攪拌したのちガーゼろ過し、ろ液を濃縮、凍結乾燥してエキスを調製し、ＴＣＡＡを定量した。図５に、水−エタノール混合比とＴＣＡＡ抽出効率のグラフを示す。本試験では、室温又は８０℃の何れにおいても、エタノール濃度が０％以上７０％以下（ｖ／ｖ）のエタノールおよび水の混液を用いて抽出した際に、高いＴＣＡＡ抽出効率が得られた。また、エタノール濃度が２０％以上７０％以下ではより高いＴＣＡＡ抽出効率が得られた。また、更にエタノール濃度が３０％以上及び／又は５０％以下では、更に高いＴＣＡＡ抽出効率が得られた。また、エタノール濃度が３０％では最も高いＴＣＡＡ抽出効率が得られた。【０１０１】
＜実施例６：抽出温度とＴＣＡＡ抽出効率の検討＞
ヤーコン葉・茎１０ｇを各温度の水２００ｍｌ中に入れ、１５分間撹拌したのちガーゼろ過し、ろ液を濃縮、凍結乾燥してエキスを調製し、ＴＣＡＡを定量した。図６に、抽出温度とＴＣＡＡ抽出効率のグラフを示す。本試験では、室温（２５℃）以上沸騰温度（１００℃）以下の温度範囲において、一定の抽出効率が得られた。取り扱いの容易さから、沸騰しない温度（９０℃以下）を用いることも好ましい。また、温度４０度以上では、より好ましいＴＣＡＡ抽出効率が得られ、温度６０℃以上８０℃以下では、更に高いＴＣＡＡ抽出効率が得られた。また、８０℃では最も高い抽出効率が得られた。【０１０２】
＜実施例７：抽出液のpHとＴＣＡＡ抽出効率の検討＞
ヤーコン葉・茎１０ｇに対し、２００ｍｌの溶媒を加え、室温１５分間撹拌抽出し、ガーゼろ過後、ろ液を濃縮、凍結乾燥してエキスを調整しＴＣＡＡを定量した。ＴＣＡＡ収量は、エキス中のＴＣＡＡ濃度に収量を乗じて、総ＴＣＡＡ量として算出した。図７に、抽出液のpHとＴＣＡＡ抽出効率のグラフを示す。本試験では、抽出液のpHが８以上１１以下の際に、高い抽出効率が得られた。また、pH８以上１０以下では、更に高いＴＣＡＡ抽出効率が得られた。尚、本実施例においては、溶媒としては、アンモニア水（濃度０．０２８％から０．２８％）、又は水酸化ナトリウム水溶液（濃度０．０１Ｎから０．１Ｎ）、又は炭酸ナトリウム水溶液（濃度０．０１Ｍから０．１Ｍ）を用いた。【０１０３】
以上、本発明を実施例に基づいて説明した。この実施例はあくまで例示であり、種々の変形例が可能なこと、またそうした変形例も本発明の範囲にあることは当業者に理解されるところである。【０１０４】
＜参照文献＞
参照文献１）  Ohnishi M., Morishita H., Toda S., Yase Y., Kido R., Phytochemistry, 47, 1215-1218 (1998)
参照文献２）  Ohkawa H., Ohnishi N., Yagi K., Anal. Biochem., 95, 351-358 (1979)
参照文献３）  Blois M. S., Nature, 181, 1199-1200 (1958)
参照文献４）  Kweon M.H., Hwang H. J., Sung H.C., J. Agric. Food Chem., 49, 4646-4655 (2001)
参照文献５）  Solon S., Lopes L., Teixera deSousa P. Jr., Schmeda-Hirschmann G., J. Ethnopharmacol.,72, 173-178 (2000)
参照文献６）  Kahkonen M. P., Hopia A. I., Vuorela H. J., Rauha J. P., Pihlaja K., Kujala T. S., Heinonen M., J. Agric. Food Chem., 47, 3954-3962 (1999)
参照文献７）  Takenaka M., Yan X., Ono H., Yoshida M., Nagata T., Nakanishi T., J. Agric. Food Chem., 51, 793-796 (2003)
参照文献８）  Takenaka M., Ono H., Nagata T., Kameyama M., Yan X., Kokai Tokkyo Koho., JP 2001-19664(2001)
参照文献９）  Okuda T., Hatano T., Agata I., Nishibe S., Kimura K., YAKUGAKU ZASSHI, 106, 894-899 (1986).
参照文献１０）  Clifford M. N. and Kellard B., Food Chemistry, 34, 81-88 (1989)
参照文献１１）  Adeghate E., and Parvez S. H., Toxicicology, 153, 143-156 (2000);Uchiyama K., Naito Y., Hasegawa G., Nakamura N., Takahashi J., Yoshikawa T., Redox Rep., 7, 290-293 (2002);Lapidot T., Walker M. D., Kanner J., J. Agric. Food Chem., 50, 7220-7225 (2002)
【図１】
0005159622.tif 000005
【図２】
0005159622.tif 000006
【図３】
0005159622.tif 000007
【図４】
0005159622.tif 000008
【図５】
0005159622.tif 000009
【図６】
0005159622.tif 000010
【図７】
0005159622.tif 000011