(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルキル化剤である癌化学療法剤と組み合わせたＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）およびチオ硫酸ナトリウム（ＳＴＳ）から選ばれるチオールをベースとする化学保護剤を含む、脳、頭または首に位置する腫瘍のための細胞毒性癌療法の副作用を治療または緩和するための医薬組成物であって、該チオールをベースとする化学保護剤は動脈内に投与され、チオールをベースとする化学保護剤の動脈内投与は、下行大動脈中または下行大動脈からさらに下流の位置で行われ、該アルキル化剤は大部分の投与量が腫瘍が位置する脳、頭または首の領域に向かうように投与される、医薬組成物。
【請求項２】
前記アルキル化剤が、チオールをベースとする化学保護剤の投与後８時間以内に投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記チオールをベースとする化学保護剤が、下行大動脈中に位置するチップを有するカテーテルを経由するカテーテル法手順により、発熱物質のない無菌の溶液で投与される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記チオールをベースとする化学保護剤の１手順当たりの投与量が２００ｍｇ／ｍ2〜２０ｇ／ｍ2である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ＮＡＣ薬剤の１回の処置当たりの投与量が４００ｍｇ／ｍ2〜１２００ｍｇ／ｍ2であって、ＳＴＳ薬剤の投与量が５ｇ／ｍ2〜４０ｇ／ｍ2である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
動脈のカテーテルを経由して投与するための脳、頭または首の腫瘍の治療用医薬組成物であって、頚動脈に投与される第１薬剤および下行大動脈またはそのさらに下流に投与される第２薬剤を含み、第１薬剤は全身に骨髄抑圧副作用を引き起こすアルキル化剤であり、第２薬剤がＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）およびチオ硫酸ナトリウム（ＳＴＳ）から選ばれるチオールをベースとする化学保護剤である、医薬組成物。
【請求項７】
前記第１薬剤が第２薬剤の８時間以内（投与前、投与中または投与後）に投与され、第２薬剤は発熱物質のない無菌の溶液で投与される、請求項６に記載の治療用医薬組成物。
【請求項８】
前記チオールをベースとする化学保護剤の１回の処置当たりの投与量が４００ｍｇ／ｍ2〜１２００ｍｇ／ｍ2である、請求項６に記載の治療用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】  関連する出願
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に基づき、２０００年４月２６日に出願されたアメリカ合衆国特許仮出願整理番号第６０／１９９，９３６号及び２０００年８月３０日に出願されたアメリカ合衆国特許仮出願整理番号第６０／２２９，８７０号の出願日の恩恵を主張するものであり、これら出願の内容がこの明細書に参考として組み込まれている。
【０００２】  連邦政府から資金提供を受けた研究または開発
本発明は、その一部に関し、ＮＩＨの助成金第ＮＳ３３６１８号と、退役軍人局の功績再検討助成金からの資金援助を受けた。アメリカ合衆国政府は、この発明に対して所定の権利を持つことができよう。
【０００３】  発明の背景
本発明の一部は、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）の投与方法がこの物質の効果的な体内分布に大きな影響を与えるという発見に基づいている。本発明により、頭または首に位置する腫瘍に対する細胞毒性癌療法の副作用（その中には、器官の損傷も含まれる）を治療または緩和する方法が提供される。さらに、ＮＡＣまたはそれ以外のチオールは、動脈内処置と同時、その処置の前、その処置の後のいずれかに投与することができ、器官の損傷を阻止または軽減する保護効果をもたらす。
【０００４】  Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）はシステインのアナローグである。ＮＡＣを哺乳類に投与すると、脱アシル化されてグルタチオンを産生するための細胞合成経路に入る。グルタチオンは、細胞毒性薬剤に対する腫瘍の抵抗性に影響を与える細胞経路に関係する。化学療法剤の細胞傷害特性は、ブチオニンスルホキシミン（ＢＳＯ）を用いてあらかじめ治療することによって向上させることができ、その結果として細胞内のグルタチオンが減少する。しかし細胞内のグルタチオンが減少すると、化学療法剤に付随する全身毒性が大きくなるであろう。したがって、この方法だと投与量に限度がある。その毒性から保護するため、ＢＳＯを用いて細胞毒性癌療法の細胞傷害特性を大きくする場合には、グルタチオンのレベルを「正常な」細胞におけるのと同じレベルまで回復させる必要がある（Ｋａｍｅｒ他、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、第４７巻、１５９３〜１５９７ページ、１９８７年；Ｏｚｏｌｓ他、「Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．」、第３６巻、１４７〜１５３ページ、１９８７年；ＭｃＬｅｌｌａｎ他、「Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」、第１７巻、２０９９〜２１０６ページ、１９９５年；Ｓｈａｔｔｕｃｋ他、「Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｅｎｔｅｒａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ」、第２４巻、２２８〜２３３ページ、１９９８年）。グルタチオンの１つまたは多くの作用（例えば共役、フリーラジカルの捕捉、多剤耐性関連タンパク質を通じた薬剤の流出）を真似るイオウ含有化学保護剤（チオ化合物、チオール化合物、チオエーテル化合物）を用いることにより、化学療法剤の骨髄毒性を減らすことができよう。ＮＡＣや、ＳＴＳを始めとする他のチオール剤には迅速な解毒作用があるが、グルタチオンのレベルが後で上昇することとは無関係である。こうした迅速な解毒効果が生まれるのは、チオールそのものがグルタチオンのいくつかの作用（例えばフリーラジカルの捕獲、抗酸化活性、化学的共役、流出ポンプの活性化）を真似るからである。
【０００５】  あらゆる化学保護剤は、化学療法または放射線療法の抗腫瘍効果を不活性化する可能性があるという潜在的な問題を抱えている。化学保護の目的は、治療効果に影響を与えることなく化学療法または放射線療法の望ましからぬ毒性を減らすことである。
【０００６】  脳腫瘍の化学療法では、脳腫瘍に対し、化学療法剤を多く供給すると同時に、化学保護剤の供給は阻止する必要がある。さらに、化学保護剤の標的を骨髄にして骨髄抑制が起こらないようにすると同時に、肝臓、腎臓、肺も標的にして器官毒性を阻止することを望むだろう。したがって、従来技術においては、化学保護剤の薬物動態と生体内分布を改善して、化学保護剤が組織特異的に供給されるときに効果がより大きくなるようにすることが求められている。好ましいのは、化学保護剤の供給が、骨髄と、胸部及び胴部の器官とに対して最大になり、脳に対しては最少になることである。
【０００７】  化合物を血液から脳に輸送する特異的な活性輸送系が１０種類以上知られている。他の方法だと、化学保護剤などの物質は、受動的拡散によってこの血液脳関門（ＢＢＢ）からわずかに侵入できるだけである。脳腫瘍は治療が特に難しい。というのも、血液脳関門が、血液中の成分が脳に入るのを制限する解剖学的構造体となっているからである。したがって、脳腫瘍は、化学療法剤にわずかしか反応しない。脳組織に対するさまざまな医薬化合物の生物学的利用能を脳において向上させようとする多くの試みがなされてきた。１つの方法は、内頚動脈を通じてマンニトールを投与することによりＢＢＢの浸透圧を変化させるというものである（Ｎｅｕｗｅｌｔ他、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」、第４５巻、２８２７〜２８３３ページ、１９８５年）。この方法は、化学療法剤であるメトトレキセートを、実験で作った脳腫瘍に投与するのに役立つ。（メトトレキセートはＢＢＢをほとんど通過しないため）他の方法では脳腫瘍にメトトレキセートを供給することができないからである。内頚動脈を通じてマンニトールを投与することにより浸透圧が小さくなると、一時的にＢＢＢが壊れ、腫瘍に到達するメトトレキセートが増加する。したがって、マンニトールなどの糖によりＢＢＢの関門機能を一時的に壊すことができ、他の方法ではＢＢＢを通過できなかったであろう医薬化合物の濃度を脳内で高くすることができる。ＢＢＢを開くこの方法は、他の化学療法剤でも研究されている（Ｎｅｕｗｅｌｔ他、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、第７９巻、４４２０〜４４２３ページ、１９８２年；Ｆｏｒｔｉｎ  Ｄ．、ＭｃＣｏｒｍｉｃｈ  Ｃｌ、Ｒｅｍｓｅｎ  ＬＧ、Ｎｉｘｏｎ  Ｒ、Ｎｅｕｗｅｌ  ＥＡ、『モデル・ラットを全身麻酔するためのプロポフォルを用いて血液脳関門を変化させた後にリン酸エトポシドを他の化学療法剤と組み合わせて投与した際にリン酸エトポシドが示す予想外の神経毒性』、「Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ」、第４７巻、１９９〜２０７ページ、２０００年）。
【０００８】  化学保護の一例は、アメリカ合衆国特許第５，１２４，１４６号に記載されている薬剤中和法である。この方法では、過剰な毒性薬剤化合物を、血液脳関門を通過できない結合剤または中和剤を用いて「一掃する」か、あるいは結合させる。この方法では、薬剤中和剤を投与するタイミングが正確でなくてはならない。
【０００９】  チオールをベースとする化学保護剤で、チオ部分、チオール部分、アミノチオール部分、チオエステル部分のいずれかを含むものがいくつか存在している。チオールをベースとするいくつかの化学保護剤は、アルキル化を行なう化学療法によって起こる全身毒性の少なくとも一部に対する保護効果を有することがわかっている。チオールをベースとする化学保護剤としては、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、チオ硫酸ナトリウム（ＳＴＳ）、ＧＨＳエチルエステル、Ｄ−メチオニン、チオールアミフォスチン（エチオールまたはＷＲ２７２１）などが挙げられる。ＮＡＣは、現在のところアメリカ合衆国では、アセトアミノフェンを過剰にするため、経口投与用または静脈内投与（ｉ．ｖ．）用としてだけ市販されている。ＮＡＣは、バナジン酸塩化合物と組み合わせて投与する場合に化学保護剤となることもわかっている（アメリカ合衆国特許第５，８４３，４８１号；Ｙａｒｂｏ（編）、「Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．」、第１０巻［補１］、５６〜６１ページ、１９８３年）。また、エチオールは、アメリカ合衆国ではアミフォスチンという一般名で市販されている。ＧＨＳエチルエステルは、臨床用としてはまだ市販されていない実験用チオールであるが、チオール類の中では直接グルタチオンに変換されるものの代表である。
【００１０】  さらに、ＮＡＣは、慢性気管支炎の治療に用いられる粘膜調節剤であることがわかっている（ＧｒａｓｓｉとＭｏｒａｎｄｉｎｉ、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．」、第９巻、３９３〜３９６ページ、１９７６年；マルチセンター研究グループ、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．」、第６１巻［補１］、９３〜１０８ページ、１９８０年；Ｂｏｒｍａｎ他、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ.」、第６４巻、４０５〜４１５ページ、１９８３年）。
【００１１】  血漿中では、ＮＡＣは、還元された完全な形態と、酸化されたさまざまな形態の両方の形態で存在している。ＮＡＣは、他の低分子量チオール（例えばシステインやグルタチオン）と反応させることにより酸化させてジスルフィドにすることができる。ＮＡＣは、血漿タンパク質のチオール基と反応させることにより酸化させることができる。ＮＡＣを静脈内投与した場合、脳におけるＮＡＣのレベルは５％未満である。しかし、ＮＡＣは、動脈内経路で投与した場合にはＢＢＢを確かに超える。ＮＡＣは、肝臓及び腎臓を通過することにより血漿から迅速に消失する。さらに、ＮＡＣは神経毒性を示さない。
【００１２】  血漿中のＮＡＣを測定する生物学的分析法が複数存在している。例えば、ＣｏｔｇｒｅａｖｅとＭｏｌｄｅｕｓ、「Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｐ．」、第８巻、３６５〜３７５ページ、１９８７年に記載の方法が挙げられる。ＪｏｈａｎｓｓｏｎとＷｅｓｔｅｒｌｕｎｄ、「Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．」、第３８５巻、３４３〜３５６ページ、１９８６年に記載の方法によっても、他の形態のＮＡＣを測定することができる。さらに、システインとシスチンは、ＮＡＣの主要な代謝物であることが明らかになっている。排泄される尿産物は、無機の硫酸塩のほか、タウリンと変化していないＮＡＣが少量である。アメリカン・リージェント・ラボラトリーズ社（シャーリー、ニューヨーク州）が製造しているＮＡＣのラベル表示によれば、瓶入りのＮＡＣが、経口投与用に水で希釈した無菌溶液として、すなわちソフト・ドリンクとして生産されている。
【００１３】  チオールを含む別の化学保護剤は、チオ硫酸ナトリウム（ＳＴＳ）である。その化学式はＮａ２Ｓ２Ｏ３であり、臨床において、シスプラチンによって起こるシアン化物毒性と腎毒性に対して用いられている。ＳＴＳは主として腎臓によって循環系から迅速に消失する。一回分の適用量を注射した後の血漿の半減期は約１７分である。ＳＴＳのモル数をプラチナに対して過剰にする（＞４０：１＝ＳＴＳ：プラチナ）と、ＳＴＳがプラチナ系薬剤と共有結合することによりプラチナ系薬剤が不活化される。ＳＴＳを静脈内投与した場合には、脳におけるＳＴＳのレベルは血液の５％未満であり、脳にほとんど局在していないことがわかる。神経毒性の副作用は、ＢＢＢが壊れてから３０分以内にＳＴＳを動脈内投与することによって脳におけるＳＴＳのレベルが増加したとき、発作の形で起こる可能性がある。
【００１４】  診断または治療において動脈内へのカテーテル挿入を含む処置を行なうことによって損傷が起こり、さまざまな器官毒性、併発症、副作用が生じる可能性がある。例えば、動脈カテーテルを置くと、血小板が動脈壁から剥がれて血管系のどこか別の場所にとどまり、虚血を引き起こす可能性がある。虚血になるとフリーラジカルが増加し、細胞死に至る。別の例は、レントゲン写真用造影剤の腎毒性により、たとえ毒性効果を減らす措置を取った場合でも、急性の腎不全が起こる可能性があるというものである。第３の例として、血管形成処置を行なっている最中に動脈内にカテーテルを置くことが挙げられる。この場合、バルーンカテーテルを動脈循環系の中に挿入し、（視覚化のためにレントゲン写真用造影剤を用いて）血管閉鎖部位に通す。閉鎖した動脈を拡張するにあたって、虚血組織の損傷など、組織がさまざまな形で損傷したり炎症反応（例えば再狭窄）を起こしたりする可能性がある。
【００１５】  具体的には、動脈内にカテーテルを置いたこととレントゲン写真用造影剤を注入したことによる毒性副作用のために入院期間が延び、医療費が増大するだけでなく、致命的なことになる可能性もある。レントゲン写真用造影剤により誘起される腎不全の発生は、現在のところ、糖尿病ですでに腎臓病も抱えている患者が造影剤を投与される場合には５０％にも上ると推定されているが、侵襲性の動脈内処置によって複雑な病気の診断や治療を行なうことが増え続けているため、この数値は今後も高いままであると思われる。
【００１６】  レントゲン写真用造影剤は、医療における画像化に用いられる。医療における画像化では、非外科的な方法を適用して体内の器官や組織の画像を得る。造影剤は、画質を高め、標的とする器官とその周囲にある組織のコントラストを増大させるのに用いる化学物質である。レントゲン写真用造影剤を投与した後に腎不全が起こるのを予防したり減らしたりすることは非常に難しい。カルシウム・チャネル・アンタゴニスト、アデノシン・アンタゴニスト、ドーパミンのいずれにしても、効果があるという説得力をもった証拠がないのに用いられてきた。
【００１７】  テペルらは、レントゲン写真用造影剤を投与する前日と当日に、何回かに分けてＮ−アセチルシステインを１日当たり１２００ｍｇ経口投与することを提案している（Ｔｅｐｅｌ他、「Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．」、２０００年７月２０日号）。中程度の腎不全であり、したがってハイリスクの患者にコンピュータ・トモグラフィを行なったところ、すべての患者において、経口投与により、予想される腎機能の低下が予防されたと報告されている。
【００１８】  ＮＡＣを用いることで、心臓、腎臓、肺、肝臓において実験または臨床で誘起されるさまざまな虚血−再灌流症候群の毒性効果をうまく改善することができている。これら症候群のそれぞれにおいて、ＮＡＣの活性は、フリーラジカル捕獲作用、または細胞の還元能力を増大させる反応性スルフヒドリル化合物としての作用と関係していると考えられている。ＮＡＣが造影剤の腎毒性効果を予防する特殊なメカニズムはわかっていない。
【００１９】  したがって、チオールをベースとする化学保護剤（例えば、ＮＡＣやＳＴＳ）を用いてその薬理動態特性の利点を生かすよりよい方法を見いだすことが、従来技術において要求されている。また、頭と首の腫瘍だけでなく脳腫瘍に対する細胞毒性療法として、より優れていて、投与量がより大きく、副作用のために投与量が制限されることのない方法を見いだすことも、従来技術において要求されている。
【００２０】  動脈内にカテーテルを配置する際に使用して器官毒性を減らすことのできる化合物が、従来技術において要求されている。腎機能が顕著に低下した糖尿病患者では、血管造影法によって腎機能に大きなリスクが生じるため冠状動脈造影法の実施がしばしば遅れることがあるが、そのような患者は、保護剤を標的に到達させることの利益を特に受けることになろう。さらに、汎用性があり、投与が容易で、副作用が限られている低コストの化合物が、当業界において要求されている。動脈内処置によって引き起こされる組織の損傷を減らす、あるいはなくすことのできる化合物とその化合物の投与法が、当業界において要求されている。
【００２１】  以上に加えて、チオールをベースとする放射線保護剤（例えばＮＡＣやＳＴＳ（チオ硫酸ナトリウム））を用いてその薬理動態特性の利点を生かすよりよい方法を見いだすことが、当業界において要求されている。また、動脈内にカテーテルを置いたことにより誘起される器官の機能低下が起こらないようにする薬剤を見出だすことも、当業界において要求されている。従来技術のこれらの問題ならびにその他の問題は、本発明の方法と医薬組成物によって解決される。
【００２２】  発明のまとめ
本発明は、頭または首に位置する腫瘍に対する細胞毒性癌療法の副作用を治療または緩和することを目的として、チオールをベースとする化学保護剤を局所的に投与するための方法と化合物を提供する。本発明はさらに、診断または治療のための動脈内処置による損傷から保護することを目的として、チオールをベースとする化学保護剤を器官または組織に局所的に投与するための方法と化合物も提供する。この方法は、細胞毒性薬剤の投与と同時、その投与前、その投与後のいずれかに、チオールをベースとする化学保護剤を動脈内に投与する操作を含んでいる。
【００２３】  一実施態様では、細胞毒性薬剤は、癌化学療法剤である。細胞毒性薬剤は、全身に骨髄抑制効果を及ぼすため、投与量が制限される。癌化学療法剤は、シスプラチナ化合物、タキサン（例えば、パクリタキセル）、ステロイド誘導体、抗代謝産物、ビンカアルカロイド、アドリアマイシン、ドキソルビシン及びエトポシド、砒素誘導体、挿入剤、アルキル化剤（例えば、メルラァラン）並びにそれらの組み合わせからなる群の中から選択する。細胞毒性薬剤は、チオールをベースとする化学保護剤の投与後８時間以内に（投与前に、投与中に、投与後に）投与する。さらに別の実施態様では、腫瘍が脳、頭、首のいずれかに位置するときには、細胞毒性薬剤は、投与量の大部分が頭または首の領域に向かうように投与する。
【００２４】  好ましくは、チオールをベースとする上記化学保護剤は、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、チオ硫酸ナトリウム（ＳＴＳ）、ＧＨＳエチルエステル、Ｄ―メチオニン、エチオール及びそれらの組み合わせからなる群の中から選択する。一実施態様では、チオールをベースとする上記化学保護剤は、一端が下向大動脈内に位置するように挿入したカテーテルを通じ、発熱物質を含まない無菌溶液として投与する。さらに別の実施態様では、チオールをベースとする上記化学保護剤を１回の処置で投与する量は、約２００ｍｇ／ｍ２〜約４０ｇ／ｍ２である。最も好ましいのは、１回の処置当たりのＮＡＣの投与量が約４００ｍｇ／ｍ２〜約１２００ｍｇ／ｍ２で、ＳＴＳの投与量が約５ｇ／ｍ２〜約４０ｇ／ｍ２となっていることである。
【００２５】  一実施態様では、動脈内カテーテルは、損傷している可能性のある部位または器官に血流を供給する動脈の中に位置させる。さらに別の実施態様では、動脈内投与は、下向大動脈内の部位において行なう。さらに別の実施態様では、損傷は、レントゲン写真用造影剤などの細胞毒性薬剤を動脈内カテーテルを用いて注入することによって起こる。
【００２６】  さらに別の実施態様では、チオールをベースとする上記化学保護剤は、還元剤と、ｐＨを生理的ｐＨまたはその近くに維持するための緩衝液と、チオールをベースとする化学保護剤を酸化するための触媒となりうる金属イオンと結合する金属キレート化剤とを含むが、発熱物質を含まず、酸化もされていない無菌溶液として投与する。上記還元剤は、ビタミンＥ、トコフェロール、ジチオトレイトール、メルカプトエタノール、グルタチオン及びそれらの組み合わせからなる群の中から選択することが好ましい。上記緩衝液は、比較的毒性がなく、ｐＨを６〜８に維持できるもの（例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液）が好ましい。チオールをベースとする上記化学保護剤は、不活性ガスを満たしたガラス瓶に入れて保管することが好ましい。最も好ましいのは、不活性ガスをアルゴン、ヘリウム、窒素及びそれらの組み合わせからなる群の中から選択することである。
【００２７】  本発明はさらに、診断または治療のために動脈内処置を行なうことによる損傷から保護するとともに、頭、首、脳の腫瘍を治療するための医薬組成物も提供する。この組成物は、動脈内に投与する第１の薬剤と、動脈内に投与する第２の薬剤を含んでいる。
【００２８】  第２の薬剤は、チオールをベースとする化学保護剤であることが好ましい。一実施態様では、第２の薬剤は、下行大動脈内またはそれよりも下流に投与する。
【００２９】  第１の薬剤は、頚動脈または脊椎動脈に投与する。第１の薬剤は、カテーテルの位置を決めるために動脈内に供給するレントゲン写真用造影剤である。一実施態様では、第１の薬剤は、第２の薬剤の投与後８時間以内に（投与前に、投与中に、投与後に）投与する。第２の薬剤は、動脈内にカテーテルを挿入した直後で、しかもレントゲン写真用造影剤の投与前から投与後８時間以内の時期に投与する。
【００３０】  一実施態様では、第２の薬剤は、発熱物質を含まない無菌溶液として投与する。さらに別の実施態様では、この溶液は酸化されておらず、還元剤と、ｐＨを生理的ｐＨまたはその近くに維持するための緩衝液と、チオールをベースとする化学保護剤を酸化するための触媒となりうる金属イオンと結合する金属キレート化剤とを含んでいる。上記還元剤は、ビタミンＥ、トコフェロール、ジチオトレイトール、メルカプトエタノール、グルタチオン及びそれらの組み合わせからなる群の中から選択することが好ましい。上記緩衝液は、比較的毒性がなく、ｐＨを６〜８に維持できるもの（例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液）が好ましい。
【００３１】  一実施態様では、チオールをベースとする上記化学保護剤は、不活性ガスを満たしたガラス瓶に入れて保管することが好ましい。最も好ましいのは、不活性ガスをアルゴン、ヘリウム、窒素及びそれらの組み合わせからなる群の中から選択することである。チオールをベースとする上記化学保護剤は、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、チオ硫酸ナトリウム（ＳＴＳ）、ＧＨＳエチルエステル、Ｄ−メチオニン、エチオール及びそれらの組み合わせからなる群の中から選択した化合物である。チオールをベースとする上記化学保護剤を１回の処置で投与する量は、２００ｍｇ／ｍ２〜２０００ｍｇ／ｍ２であることが好ましい。さらに好ましい実施態様では、１回の処置で投与するＮＡＣの量は、４００ｍｇ／ｍ２〜１２００ｍｇ／ｍ２である。
【００３２】  ＮＡＣのさらに別の利点は、動脈内処置を多数回行なうことによる毒性に対する保護機能を有することである。動脈内処置による毒性としては、例えばレントゲン写真用造影剤によるものが挙げられるが、それだけに限定されるわけではない。
【００３３】  本発明の方法と化合物は、好ましい実施態様に関する以下の詳細な説明を添付の図面と照らし合わせながら読むと、最もよく理解することができよう。以下の説明は、記述的、例示的、具体的であるが、添付の請求項に規定されている本発明の範囲がここに説明されていることだけに制限されると考えてはならない。
【００３４】  （発明の詳細な説明）
本発明の方法は、脳、頭、首いずれかの腫瘍を治療するために少なくとも２つの異なる薬剤を投与する操作を含んでいる。第１の薬剤は、細胞毒性薬剤である。一例を挙げると、細胞毒性薬剤は、放射線または化学療法剤である。放射線または化学療法剤は、一般に、骨髄抑制という全身性の副作用を有するため、投与量が限られる。骨髄抑制がひどくなりすぎると、生命が脅かされることになる。というのも、患者は、免疫防御機能を調節するさまざまな系列の白血球細胞を十分に産生することができず、病原体の攻撃から身体を護れなくなるからである。したがって、骨髄毒性または骨髄抑制を少なくする何らかの方法があれば、細胞毒性薬剤をより多く、しかもより効果的に投与することができよう。
【００３５】  骨髄に対する副作用を減らす現在の治療法としては、系列特異的な組み換え成長因子を用いる方法がある。このような成長因子としては、赤血球のためのＥＰＯ（エリスロポエチン）、感染と戦うさまざまな系列の白血球のためのＧ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子）またはＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）などが挙げられる。さらに、ＴＰＯ（トロンボポエチン）については、骨髄が抑制されている患者に血小板応答を増大させるための臨床試験が行なわれているところである。しかしこのような成長因子は、系列特異的な前駆体細胞を刺激し、系列特異的な経路へと分割、成熟させる働きがある。したがって、成長因子を使用すると骨髄毒性からより迅速に回復するが、一般に毒性の最低値が下がることはない。このような成長因子は、患者がより多くの種類の細胞毒性治療（細胞毒性治療では、骨髄抑制が制約となる毒性である）を受けられるようにすることがわかっているが、一般に、細胞毒性薬剤の投与量をより多くすることはできない。
【００３６】  本発明の方法により、従来よりも多い投与量の細胞毒性薬剤を頭と首の腫瘍に向けることができる。さらに詳細には、（細胞毒性薬剤が化合物または化合物の組み合わせであるならば）細胞毒性薬剤を動脈内に投与し、最初に頭と首に向かって循環するようにする。そのため、最大濃度の細胞毒性薬剤を、治療する腫瘍が存在している位置に向ける。これとは対照的に、静脈内投与を行なうと、全身投与量として同じ濃度の細胞毒性薬剤が骨髄に供給され、副作用が発生する。
【００３７】  チオールをベースとする化学保護剤は、非特異的な化学保護剤であって「正常な」組織または細胞に対する特異性はなく、正常な組織と腫瘍組織の両方を保護することができる。チオールをベースとする化学保護剤の化学保護特性を利用した以前の試みは失敗した。それは、経口投与または全身投与したために素早く代謝され、正常な組織と腫瘍組織の両方が保護されてしまったことが原因である。全身投与には、静脈内投与が含まれる。
【００３８】  本発明の方法には、空間的２区画薬理動態モデルを利用する操作が含まれる。このモデルでは、全身組織での初回通過効果により、チオールをベースとする化学保護剤のかなりの量、すなわち化学保護に必要な量が静脈循環系を通じて全身を循環することが妨げられる。この方法では、化学保護の効果を得るため、心臓よりも低い位置にある組織へと向かう１つの経路だけを利用する。したがって、投与した細胞毒性剤は、腫瘍が存在している脳または頭と首に局在するのに対し、投与した化学保護剤は、大部分の骨髄組織が位置する心臓よりも低い位置にある全身組織に局在することになるため、頭と首の腫瘍を治療することが可能になる。
【００３９】  チオールをベースとする化学保護剤が肝臓以外の組織で初回通過効果を示したのは驚きであった。チオールをベースとするどのような化学保護剤であれ、組織で吸収されずに静脈循環系に入ると、肝臓を初回に通過するときに消失するか、腎臓クリアランスを通じて素早く除去されることになる。ＮＡＣは、本発明の方法以外の方法で投与すると、ＢＢＢを通過して脳へと盛んに輸送される。空間的区画化の一例は、チオールをベースとする化学保護剤を下行大動脈またはそれよりも低い位置に投与して、チオールをベースとする化学保護剤の有意な量が、腫瘍組織が存在している脳または首の領域に決して到達しないようにするというものである。空間的区画化は、チオールをベースとする化学保護剤を組織が迅速に取り込むことで容易になる。空間的区画化は、チオールをベースとする化学保護剤を用いて何らかの意味ある治療効果を得るために必要である。空間的区画化を行なわないと、チオールをベースとする化学保護剤が腫瘍組織を保護するという望ましくないことが起こる。チオールをベースとする化学保護剤としてＮＡＣを用いる場合、ＮＡＣがＢＢＢを通過することによって脳腫瘍におけるグルタチオンのレベルが回復し、細胞毒性に対する腫瘍の抵抗力が増す。
【００４０】  ２区画薬理動態モデルを作りうることは、インビトロ・モデルとインビボ・モデルを用い、化学治療剤と、チオールをベースとする化学保護剤（ＮＡＣとＳＴＳ）の両方を投与するという一連の実験を行なうことによって発見された。しかし、放射線療法によっても化学療法剤を同様に局在させうること、あるいはより容易に局在させうることに注意する必要がある。組織培養に関する薬理学的研究として、ＮＡＣとＳＴＳを用いた治療を行なったところ、化学療法剤であるメルファラン、カルボプラチン、シスプラチンによる細胞死を減らせることが明らかになった。このインビボでの結果は、ＮＡＣまたはＳＴＳを局所的に投与すると骨髄抑制が少なくなり、化学療法からの回復が早まることを示している。さらに、チオールをベースとする化学保護剤であるＮＡＣとＳＴＳを組み合わせた場合に相乗的な結果が観察された。これは、チオールをベースとする化学保護剤を本発明に従って組み合わせて投与すると保護機能が向上することの証拠となっている。
【００４１】  図１に示したように、本発明の方法に関する別の実施態様では、チオールをベースとする化学保護剤を動脈内に投与し、全身に向かうようにする。こうすることによってチオールをベースとする化学保護剤が損傷した器官（例えば腎臓）の位置で最大濃度になり、腎臓機能の低下が回避される。これとは対照的に経口投与の場合には、全身に投与されることになって保護剤が体内の別の場所（主に肝臓）に行くため、投与量をより多くして腎臓（レントゲン写真用造影剤のために損傷することがしばしばある）の位置に十分な投与量が供給されるようにする必要がある。さらに、チオールをベースとする化学保護剤は、正常な組織または細胞に対する特異性はなぐ、正常な組織と腫瘍組織の両方を保護することができる。
【００４２】  本発明の方法は、空間的２区画薬理動態モデルを用いると、全身組織の初回通過効果により、チオールをベースとする放射線防護剤（その代表的なものがＮＡＣとＳＴＳ）の投与量のうちの有意な量すなわち放射線防護効果のある量が静脈循環系を通じて全身を循環することが阻止されるという結果が得られたことに基づいている。したがって、驚くべきことに、腎臓系の組織に向かう経路は１つしか必要とされなかった。その結果、投与されたレントゲン写真用造影剤が、レントゲン写真撮影を行なう領域に局在すると同時に、投与された保護剤が腎臓系に局在することになり、腎機能の低下が阻止された。
【００４３】  図１に示したように、カテーテルは一般に大腿動脈から循環系に挿入する。第１の実施態様では、カテーテルを体内に挿入し、１回分の投与量の造影剤を体内に投与する。動脈内にカテーテルを挿入した直後（カテーテルの挿入は造影剤を投与する前が好ましい）から造影剤を投与後約８時間以内の任意のときに、チオールをベースとする効果的な量の化学保護剤（ＮＡＣが好ましい）を投与する。放射線防護剤を供給するためのカテーテルは、動脈系において大動脈の下流位置に挿入し、腸間膜動脈系の中で向きを決めることが好ましい。チオールをベースとする化学保護剤は、レントゲン写真用造影剤を投与してから約５時間以内の任意のときに体内に導入し、腎臓造影剤の投与に付随した腎不全または腎機能の低下を軽減するかなくす。
【００４４】  さらに別の実施態様では、カテーテルを循環系（例えば大腿動脈）に挿入し、チオールをベースとする化学保護剤の有効量を体内に投与する。レントゲン写真用造影剤を同じカテーテルから投与し、その造影剤を用いて、そのカテーテルを治療または診断を行なうのに適切な位置に配置する。チオールをベースとする化学保護剤は、レントゲン写真用造影剤を投与する前後約５時間以内の任意のときに、一般に同じカテーテルを用いて体内に導入する。好ましくは、チオールをベースとする化学保護剤は、処置を行なっている間に１回で、または複数回にわたって、動脈カテーテルを通じて投与する。
【００４５】  医薬製剤
本出願の化合物の製造方法ならびに投与方法は、「レミントンの薬理科学」（マック出版社、イーストン、ペンシルバニア州、最新増補版）に見いだすことができる。適切な投与経路は、動脈内投与である。
【００４６】  本発明の組成物及び化合物は、公知の方法で製造することができる。例えば、混合、溶解、乳化、カプセル化、包括化、凍結乾燥といった従来法がある。したがって、本発明で使用する医薬組成物は、１つ以上の生理学的に受容可能な基剤を用いて従来法で製造することができる。なお基剤には、活性化合物を薬剤として使用できる調製物に加工するのを容易にする賦形剤、添加物が含まれている。適切な製剤に、どの投与経路を選択するかに応じて異なる。
【００４７】  注射用として、本発明の化合物を水溶液にすること、好ましくは、生理学的適合性のある緩衝液（例えば、ハンク液、リンゲル液、生理的食塩緩衝液）にすることができる。この化合物は、非経口投与である注射に適した形態（例えば、注射１回分の適用量または連続的輸液に適した形態）にすることができる。注射用製剤は、単位投与量の形態（例えば、アンプル、または多数回投与用の容器）にして、保存料を添加することができる。本発明の組成物は、懸濁液、溶液、油性または水性の賦形剤中の乳液といった形態にすることができ、懸濁剤、及び／または安定化剤、及び／または分散剤などの製剤用成分を含んでいてもよい。
【００４８】  非経口投与用の医薬製剤としては、活性化合物を水溶性の形態にした水溶液などが挙げられる。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な注射用油性懸濁液にすることもできる。適切な親油性の溶媒または賦形剤としては、不揮発性油（例えば、ゴマ油）、合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセライド）、リポソームなどが挙げられる。水性の注射用懸濁液は、その懸濁液の粘性を増大させる物質として、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、デキストランなどを含むことができる。所望により、懸濁液は、化合物の溶解性を大きくして調製物を非常に高濃度の溶液にすることができる適切な安定化剤または成分も含んでいてよい。
【００４９】  別の方法として、活性成分を粉末にして、使用前に適切な賦形剤（例えば、発熱物質を含まない無菌水）と合わせて使用する構成にすることができる。一実施態様では、チオールをベースとする化学保護剤からなる製剤に還元剤または抗酸化剤を添加して、チオールをベースとするこの化学保護剤が酸化するのを防止する。抗酸化剤としては、ビタミンＥ、トコフェロール、ジチオトレイトール、メルカプトエタノール、グルタチオンなどが挙げられるが、これだけに限定されるわけではない。一実施態様では、不活性ガスまたは非酸化性ガスを、動脈内投与用のガラス瓶の中に添加する。そのようなガスの具体例としては、窒素、アルゴン、ヘリウム、及びこれらの組み合わせ／混合物が挙げられる。
【００５０】  治療において効果的な投与量とは、骨髄抑制の進展が遅くなったり骨髄抑制の程度が軽くなったりする化合物の量を意味する。別の実施態様では、そのような化合物の毒性及び治療有効率は、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学、薬理学、毒物学の方法によって明らかにすることができる。そのためには、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％が死亡する投与量）とＥＤ５０（集団の５０％に治療効果がある投与量）を測定する。毒性効果が見られる投与量と治療効果が見られる投与量の比が治療指数であり、ＬＤ５０とＥＤ５０の比として表現することができる。治療指数が大きい化合物が好ましい。細胞培養物アッセイから得られたデータ、または動物の研、究から得られたデータを用い、ヒトに使用する投与量の範囲を決めることができる。そのような化合物の投与量は、毒性がほとんどないかまったくなく、循環濃度の範囲内にＥＤ５０が含まれるような量であることが好ましい。投与量は、投与形態と投与経路をどのようにするかに応じてこの範囲内で異なってくる可能性がある。正確な製剤形態、投与経路、投与量は、個々の医師が患者の状態を考慮して選択することができる。（例えば、「治療の薬理学的基礎」の中のフィングルらによる第１章、１９７５年を参照のこと）。
【００５１】  投与する組成物の量は、もちろん、治療している患者、その患者の体重、苦痛の程度、投与方法、処方する医師の判断に依存する。
【００５２】  本発明の方法によれば、チオールをベースとする化学保護剤を動脈内に投与することにより、全身の組織が、初期投与量のこの化学保護剤に十分に高濃度の状態で曝露されて化学保護効果がもたらされるようにするとともに、静脈循環系を迂回して、肝臓によってこの化学保護剤が除去されることのないようにする。ＮＡＣは、ＢＢＢを超えて盛んに輸送される。一実施態様では、ＮＡＣが脳に供給されるのを阻止するため、大腿貫通頚動脈／脊椎動脈カテーテルを配置して脳を灌流した後、そのカテーテルを引っ込めて下行大動脈の中に配置し、ＮＡＣを輸液する。したがって、１つのカテーテルを用いて外科的処置を１回だけ行なうことになる。このようにすると、動脈カテーテルを用いた処置しか行なわないためにリスクを最小にすることができ、しかも高濃度のＮＡＣを、末端の組織や器官には供給するが、脳と頭には供給しないようにすることができる。
【００５３】  合成
チオールをベースとするそれぞれの化学保護剤（例えばＮＡＣまたはＳＴＳ）は、従来法で合成することもできるし、無菌溶液として市販されているものを入手することもできる。
【００５４】  実施例１
この実施例は、ＮＡＣを投与するために下行大動脈の中にカテーテルを埋め込んだラットにおけるインビボの実験結果を示している。ラットに薬剤を投与するため、カテーテルを（大動脈の方向に向けて）押し込んで外頚動脈と内頚動脈の接合部よりも先に達するようにするとともに、よい測定ができるよう、一時的に内頚動脈を閉じて何も脳に行かないようにした（左頚動脈経由大動脈輸液法）。カテーテルを大腿動脈から入れ、大動脈を通じてまず最初に脳まで達するようにした患者では、カテーテルを大動脈まで引っ張って戻すだけでＮＡＣを輸液することができよう。
【００５５】  ラットは、カルボプラチン（２００ｍｇ／ｍ２）、メルファラン（１０ｍｇ／ｍ２）、リン酸エトポシド（１００ｍｇ／ｍ２）で治療した。ＮＡＣを投与するラットでは、化学療法剤を投与した直後に、ＮＡＣを４００〜１２００ｍｇ／ｍ２の濃度で左頚動脈経由大動脈輸液法により輸液した。白血球細胞（ｗｂｃ）と血小板（ｐｌｔ）について、実験を行なう前にカウントして基準値にするとともに、化学療法剤で治療した６日後と９〜１１日後にカウントした。ＮＡＣを投与しなかったラットは９〜１０日目にテストしたのに対し、ＮＡＣを投与したラットは１０〜１１日目にテストした。カウント数は、１μｌの血液について１０００秒間での値である。表１に示したこの最初の実験に関するデータは、白血球細胞の効果が見られない最初の結果を示している。白血球細胞の効果がないという結果は、以下に示すような有意な効果があったために再現されなかった。
【００５６】
【表１】
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【００５７】  表２のデータは、追加結果を示している。ＮＡＣを投与したラットでは、化学療法を行なう３０分前に、ＮＡＣを１２００ｍｇ／ｍ２の濃度で左頚動脈経由大動脈輸液法によって輸液した。白血球細胞（ｗｂｃ）と血小板（ｐｌｔ）について、実験を行なう前にカウントして基準値にするとともに、化学療法剤で治療した６日後と９日後にカウントした。表１のデータは、ＮＡＣを用いた治療により、白血球細胞と血小板の両方について血液カウント数の最低値が下がるが、血液カウント数がＡＣを用いない場合よりも早く化学療法から回復することを示している。
【００５８】
【表２】
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【００５９】  これらのデータは、ＮＡＣを用いると、血小板がＮＡＣを用いない場合よりも早く化学療法から回復したことを示している。
【００６０】  さらに、図２Ａに示したように、同じ化学療法剤を同じ投与量にしてＢＳＯ（ブチオニンスルホキシミン）を用いる場合と用いない場合について行なった実験から、化学保護剤（ＮＡＣ単独、またはＮＡＣ＋ＳＴＳを上記投与量にする）を用いると、白血球細胞の回復状態が改善されるとともに、最低値も大きくなることがわかる。血小板に関する同様のデータを図２Ｂに、顆粒球に関する同様のデータを図２Ｃに示してある。
【００６１】  実施例２
この実施例は、カテーテルを利用したさまざまな投与手段によってＮＡＣを供給した結果を示している。この実験では、放射性標識をしたＮＡＣを異なる３つの経路でラットに投与した。脳の同側半球と対側半球に加え、肝臓組織と腎臓組織の放射能を分析した。その結果は、組織１グラム当たりに注入した放射線量に対する割合の％表示という形で示してある。経路は、静脈内（ｉ．ｖ．）、右頚動脈内（ｉ．ａ．）、内動脈を閉鎖して左頚動脈から輸液（左頚動脈経由大動脈輸液法）のいずれかである。左頚動脈経由大動脈輸液法で動脈内に輸液する方法では、カテーテルの先端を下行大動脈の中に位置させてＮＡＣを投与する。
【００６２】
【表３】
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【００６３】  このデータは、ｉ．ａ．によりＮＡＣを注入された側の脳の半球にＮＡＣが多く到達したことを示している。ＮＡＣをｉ．ｖ．で投与した場合には、脳内に無視できるほどの量しか見いだせなかった（注入量の０．０３％、ｎ＝２）。放射性標識したＮＡＣをラットの右頚動脈に投与した場合には、高レベルの放射性標識が脳の右半球に見いだされた。到達量は注入量の０．４１％（ｎ＝３）であり、肝臓におけるレベル（注入量の０．５７％）または腎臓におけるレベル（注入量の０．７０％）と同程度であった。それに対して左頚動脈経由大動脈輸液法の場合には、脳への供給が阻止された。左頚動脈経由大動脈輸液法により、末端組織での体内分布も変化し、肝臓への供給が減少し、腎臓への供給が増加した。投与法の違いによって組織への供給が変化するのは、システインというアミノ酸と関係しているＮＡＣが、このアミノ酸の輸送体を通じて素早く組織に結合することに起因しているらしい。要するに、ＮＡＣの投与法が、ＮＡＣの体内分布に顕著な影響を与えている。
【００６４】  実施例３
この実施例では、動脈内に輸液する本発明の方法（左内部動脈を閉鎖した状態で左頚動脈に輸液）により、脳に供給されるＮＡＣを減らして全身に供給されるＮＡＣを増やすことができるかどうかを調べた。本発明の方法を用いたところ、脳への供給は注入量の０．０４％であった（ｎ＝２）。
【００６５】  このデータを他の薬理学的データ及び生理学的データと合わせて考えると、ＮＡＣを細胞毒性薬剤よりも前に（３０分前が好ましい）投与して、血清中のＮＡＣの濃度が０．５ｍＭ〜１５．０ｍＭ、好ましくは５ｍＭ〜１２．５ｍＭとなるようにすると、ＮＡＣが保護作用をすることがわかる。一般に、ＮＡＣの投与量を４０．０ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇにすると、ヒト及び他の哺乳類にとって適切な血清濃度になる。
【００６６】  実施例４
この実施例は、本発明の方法を用い、化学療法剤（単独または組み合わせ）の骨髄毒性を、ＮＡＣのみ（１０００〜１２００ｍｇ／ｍ２、単独または組み合わせ）を投与した場合及びＮＡＣ＋ＳＴＳを投与した場合と比較したものである。化学療法剤は、カルボプラチン（２００ｍｇ／ｍ２）、メルファラン（１０ｍｇ／ｍ２）、リン酸エトポシド（１００ｍｇ／ｍ２）であった。ラットでのＳＴＳの投与量は８ｇ／ｍ２にした。これは、ヒトで２０ｇ／ｍ２にしたことに相当する。投与法は、左頚動脈経由大動脈輸液法にした。データは、骨髄細胞の系列ごとに表３ａと表３ｂに示してある。
【００６７】
【表４】
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【００６８】
【表５】
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【００６９】  このデータは、チオールをベースとする化学保護剤であるＳＴＳとＮＡＣを組み合わせて本発明の方法に従って投与すると、相乗効果が現われることを示している。
【００７０】  実施例５
この実施例は、培養した腫瘍細胞に対してタキサン（パクリタキセル）にパクリタキセル細胞毒性増強剤（ＢＳＯ）とグルタチオン再生剤ＮＡＣを組み合わせて用いたインビトロでの実験結果を示している。パクリタキセルは、１〜１０μＭの濃度のときには培養細胞中で細胞分裂抑制性を示す。つまり、この濃度だと腫瘍細胞は成長も死滅もしない。パクリタキセルの濃度を２０μＭにすると細胞毒性が現われ始め、３０μＭでは培養した腫瘍細胞中で完全な毒性を有する。腫瘍細胞があらかじめＢＳＯで処理した細胞である場合には、パクリタキセルをわずか５μＭ添加しただけで、インビトロにおいて完全な細胞毒性を示す。
【００７１】  ＮＡＣは、単独のパクリタキセルに対しては、パクリタキセルの投与量に依存した応答変化を生じさせることはなかった。しかしＮＡＣは、ＢＳＯ処理による毒性増加を完全に打ち消し、効果があるパクリタキセルの濃度をＢＳＯ処理していないレベルに戻した。この実験は２回行なった。そのデータを表４に示す。
【００７２】
【表６】
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【００７３】  実施例６
細胞毒性に対する化学保護
４種類の低分子量イオウ含有化学保護剤について、化学療法の細胞毒性から保護するための投与量／応答を評価した。それぞれの化学療法剤は、ＢＳＯなしのときに死亡率が約９０％になる濃度で用いた（メルファラン２０μｇ／ｍｌ、カルボプラチン２００μｇ／ｍｌ、シスプラチン１５μｇ／ｍｌ）。結局、μｇ／ｍｌのレベルでテストしたチオール剤の中では、Ｎ−アセチルシステインが最も効果的であった。Ｎ−アセチルシステインを用いた場合の保護効果がどのような濃度依存性になるかを、Ｄ−メチオニンの場合と比較して図３Ａと図３Ｂに示す。表５は、それぞれの保護剤による保護効果に関するＥＣ５０を示している。図３Ａと表５からわかるように、各アルキル化剤の細胞毒性は、Ｎ−アセチルシステインを同時に投与すると７５〜９０％減少したが、Ｎ−アセチルシステインは、シスプラチン及びカルボプラチンに対してよりはメルファランに対してのほうが効果が大きかった（ＥＣ５０＝７４±１８μｇ／ｍｌ）。
【００７４】  それとは対照的に、図３Ｂと表５からわかるように、Ｄ−メチオニンは、テストした投与量（５０〜１０００μｇ／ｍｌ）ではメルファランの毒性に対する保護効果はなかったが、シスプラチンの毒性に対しては保護効果が非常に大きく、ＥＣ５０は１４０±４１μｇ／ｍｌであった。最大保護率は実験によって異なるが、約７０％〜１００％であった。保護率は、シスプラチンまたはメルファランに対してよりもカルボプラチンに対してのほうが一貫して低かった。テストしたすべての薬剤において、保護するための投与量は、シスプラチンまたはメルファランに対してよりもカルボプラチンに対してのほうが有意に大きかった。μｇ／ｍｌのレベルでは、グルタチオンエチルエステルが最も効果の少ない保護剤であった。
【００７５】  化学療法剤は、それぞれについて死亡率が９０％となる投与量に固定した。ＥＣ５０の測定値は、６通りの濃度（１つの濃度ごとに４つのウエルを用いた）での測定を含んでいる。各投与量に対する応答は、それぞれの保護剤について２回調べた。μｇ／ｍｌを単位として表わしたＥＣ５０の濃度は、２回の独立した実験での平均±プールされた標準偏差として示してある。Ｄ−メチオニンをメルファランと組み合わせた場合には、保護効果が検出できなかった。それぞれの化学保護剤につき、メルファラン対シスプラチン、シスプラチン対カルボプラチン、カルボプラチン対メルファランという形でｔ検定による比較を行なった。有意な差がある場合を記号で示してある（＊＊＝Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【００７６】
【表７】
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【００７７】  実施例７
組み合わせによる細胞エンハンスメントと化学保護
アルキル化化学療法剤の細胞毒性について、ＢＳＯ細胞エンハンスメントとチオールをベースとする化学保護剤が投与量／応答関係に及ぼす効果を、Ｂ．５  ＬＸ−１細胞において評価した。ＢＳＯ細胞エンハンスメントは、化学療法剤を添加する前に１００μＭのＢＳＯで約１８〜２４時間にわたってあらかじめインキュベートすることからなる。化学保護は、チオールをベースとする化学保護剤１０００〜２０００μｇ／ｍｌを、化学療法を行なった直後に添加することからなる。図４Ａと表６に示したように、ＢＳＯは、細胞毒性に関するＥＣ５０を一貫して低下させ、毒性を最大限に大きくする。カルボプラチン＋Ｎ−アセチルシステインという具体例が図４Ａに示してある。ＢＳＯによってグルタチオンが欠乏するとカルボプラチンの細胞毒性が大きくなり、ＥＣ５０が４８％低下する（Ｐ＜０．０１）。表６に詳しく示してあるように、同様のＢＳＯ細胞エンハンスメントがメルファランに対して見られた（ＥＣ５０が５３％低下、Ｐ＜０．０１）が、シスプラチンだとＥＣ５０は２９％低下しただけであった（Ｐ＜０．０５）。Ｎ−アセチルシステインを用いた化学保護により、カルボプラチンの毒性と、ＢＳＯにより上昇した細胞毒性が阻止された。同様の化学保護は、チオール剤、チオ硫酸ナトリウム、グルタチオンエチルエステルを添加した場合に見られたが、プラチナ系薬剤（カルボプラチン、シスプラチン）に対して効果があったのはＤ−メチオニンだけだった。
【００７８】  非アルキル化化学療法剤に対する細胞エンハンスメントと化学保護も評価した。図４Ｂに示したように、ＢＳＯによりグルタチオンが欠乏してもリン酸エトポシドの細胞毒性が大きくなることはなく、Ｎ−アセチルシステインがリン酸エトポシドの細胞毒性を少なくすることもなかった。同様に、Ｂ．５  ＬＸ−１細胞中ではメトトレキセートまたはドキソルビシンによるエンハンスメントも保護も見られなかったが、胃を発生源とする悪性腫瘍細胞は、ＢＳＯによりいくらかのエンハンスメントを示した（データは示さない）。興味深いことに、成長抑制に必要なタキソールの投与量（約１０ｎＭ）はＢＳＯによって変化しなかったが、グルタチオンの欠乏によってタキソールが細胞毒性を示す投与量が１５μＭから２μＭに変化した。細胞毒性のこの増加は、Ｎ−アセチルシステインによって完全に打ち消された（データは示さない）。
【００７９】  Ｂ．５  ＬＸ−１細胞で見られた細胞エンハンスメントと化学保護が一般的な現象であるかどうかを、ＧＭ２９４ヒト繊維芽細胞株において同様の実験条件で評価した。細胞を、Ｂ．５  ＬＸ−１細胞で見いだされたＥＣ５０とほぼ等しい投与量で化学療法を行なった場合と化学療法を行なわない場合、あらかじめＢＳＯで処理した場合としない場合に分類した。図３Ａと図３Ｂに示したように、メルファラン、シスプラチン、カルボプラチンのいずれも、腫瘍細胞よりも繊維芽細胞において細胞毒性が幾分か大きいが、ＢＳＯは、これら３つのアルキル化剤すべての毒性を増大させた。繊維芽細胞では、Ｎ−アセチルシステインは、ＢＳＯで処理したかどうかに関係なく、メルファラン、シスプラチン、カルボプラチンによって誘起された細胞毒性に対して部分的な化学保護あるいは完全な化学保護を実現した。図５に示したように、ＢＳＯによる細胞エンハンスメントも、Ｎ−アセチルシステインによる化学保護も、繊維芽細胞においてはリン酸エトポシドの細胞毒性に影響を与えなかった。
【００８０】  最大毒性の半分の毒性を示す濃度（ＥＣ５０）は、μｇ／ｍｌを単位として表示する。ＥＣ５０の測定値は、６通りの濃度（１つの濃度ごとに４つのウエルを用いた）での測定を含んでいる。各投与量に対する応答は、それぞれの化学保護剤について３回調べた。データは、３回の独立した実験での平均±プールされた標準偏差として示してある。ＢＳＯで処理することによるＥＣ５０の低下に関するＰ値を示してある（＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【００８１】
【表８】
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【００８２】  実施例８
化学療法剤の細胞毒性に対する化学保護の時間依存性
化学療法を行なってから化学保護剤を添加するまでの時間をどれだけ長くできるかと、化学保護剤がいつまで効果を持続するかを評価した。細胞は、化学療法により約９０％が死滅する投与量で処理した（メルファラン２０μｇ／ｍｌ、カルボプラチン２００μｇ／ｍｌ、シスプラチン１５μｇ／ｍｌ）。チオールをベースとする化学保護剤を、化学療法を行なうのと同時に、あるいは化学療法を行なってから８時間後までに添加した。図６に示したように、メルファランの場合には、ＳＴＳを２時間遅らせて投与した場合に化学保護が減少したが、チオ硫酸ナトリウムは、化学療法を行なった４時間後まで投与を遅らせてもプラチナ系化学療法剤に対する保護効果をまだ保持していた。同様に、Ｎ−アセチルシステインやグルタチオンエチルエステルを遅らせて投与すると、メルファランの細胞毒性に対する保護作用が低下したが、プラチナ系化学療法剤の細胞毒性に対してはどちらの薬剤でも保護作用が維持された。また、これら３つの化学保護剤は、図６に示したようにメルファランの投与から２時間後に投与するのではなく１時間後に投与した場合には、完全に保護作用を有していた。化学保護は、リン酸エトポシドの細胞毒性に対しては時間に関係なく効果がなかった。
【００８３】  シスプラチンの細胞毒性に対してＤ−メチオニンによる保護が可能な時間範囲も評価した。チオ硫酸塩、Ｎ−アセチルシステイン、グルタチオンエチルエステルを用いて化学保護を行なう場合とは異なり、Ｄ−メチオニンによる保護は、投与が遅れると顕著に少なくなる。シスプラチンを投与してから２時間後だと、Ｄ−メチオニンによる保護は、同時に投与した場合の最大保護状態と比較して４１．２±１０．２％減少した。Ｄ−メチオニンを４時間後に投与すると、保護は、同時投与の場合と比較して６６．１±４．５％減少した。シスプラチンを添加する前にＤ−メチオニンで３０分間にわたって前処理しても、同時投与の場合と比較して保護量は増加しなかった。
【００８４】  実施例９
細胞エンハンスメントと化学保護がアポトーシスに及ぼす効果
カスパーゼ−２という酵素の活性測定と、生体内でのＴＵＮＥＬ染色により、アポトーシスを評価した。図７Ａに示すように、Ｂ．５  ＬＸ−１細胞をメルファランで処理したところ、カスパーゼ−２の活性が増加した。この活性は、メルファランが低濃度の状態でＢＳＯによる前処理を行なうと、より一層大きくなった。カスパーゼ−２の活性が増加した程度は実験によって異なり、メルファランで処理してから７〜８時間後には５０〜１００％、２０〜２４時間後には２５０〜６００％であった。ＴＵＮＥＬ染色によっても、メルファランにより誘起されたアポトーシスが明らかになった。図７Ｂに示した実験では、メルファランによる処理後のＴＵＮＥＬ染色の結果は、細胞３６４３個のうちの２９個でポジティブであった。それに対してメルファランで処理していない対照では、細胞４３９５個のうちの７個がポジティブであった。また、メルファランの前にＢＳＯで処理すると、ポジティブな染色結果となる細胞が、１６９９個のうちの８００個に増加した。図７Ａに示したカスパーゼ−２アッセイと図７Ｂに示したＴＵＮＥＬ染色アッセイの両方において、メルファランがアポトーシスに及ぼす効果は、化学保護剤であるＮ−アセチルシステインによって減少した。両方のアッセイにおいて活性が最大になったのは、メルファランの投与量が少ない場合、または細胞毒性アッセイで用いた投与量で１時間パルス処理をした場合である。メルファランが細胞毒性を有する投与量で連続的処理を行なうと、カスパーゼ−２の活性とＴＵＮＥＬ染色は実際に減少した。
【００８５】  シスプラチンとカルボプラチンは、カスパーゼの活性を増大させるという点に関してはメルファランよりも効果が少なかった。それぞれのプラチナ系化学療法剤は、さまざまな投与量（カルボプラチンは１００、１５０、２００μｇ／ｍｌ、シスプラチンは５、１０、１５μｇ／ｍｌ）と時間（８、１２、１６、２０、２４時間）の範囲で、カスパーゼ−２の活性を５０〜１００％増大させた。ＢＳＯを用いて処理してもカスパーゼ−２の活性が有意に増加することはなかった。さらに、Ｎ−アセチルシステインを添加した後は、カスパーゼ−２の活性低下は検出できなかった。いくつかの実験では、Ｎ−アセチルシステインで処理することによって、シスプラチンまたはカルボプラチンにより誘起されるカスパーゼの活性が実際に増加した。カスパーゼ−２アッセイとＴＵＮＥＬ染色アッセイで用いた細胞のサンプルについて、トリパンブルー排除試験によって膜の浸透性も評価した。カスパーゼ−２アッセイまたはＴＵＮＥＬ染色アッセイでネガティブな結果が出た実験では、カルボプラチンまたはシスプラチンで処理した後に生きていなかった細胞の数が多いこと、しかもこの数はＢＳＯによる処理で増加することが、トリパンブルー排除試験によりわかった。
【００８６】  実施例１０
放射性標識したＮＡＣの体内分布
ＮＡＣの投与法とＮＡＣの体内分布の関係を調べた。一時的に左内頚動脈を閉鎖した状態だと動脈内に輸液したときに左外頚動脈から戻ることが、下行大動脈を通じて脳に限られた量しか灌流させないメカニズであることを確認した。ＮＡＣを静脈内に投与した場合には、脳内には無視できる量のＮＡＣしか見いだされなかった。そのことは、図８に示したように、組織１グラム当たりの１４Ｃ−ＮＡＣ投与量に対する脳内到達量の割合を％で表わした数値からわかる。放射性標識を右内頚動脈内に供給したところ、脳の右半球に高いレベルの放射性標識が存在したが、ＢＢＢＤ状態にしてもそのレベルは高くならなかった。しかし図８に示したように、大動脈に輸液した場合には、脳に供給されるＮＡＣが最少になった。ＮＡＣの投与量が少ないと（１４０ｍｇ／ｋｇ）、大動脈への輸液によって肝臓への供給が減り、腎臓への供給が増えた。逆にＮＡＣの投与量が多い（１２００ｍｇ／ｋｇ）場合には、肝臓と腎臓への供給に変化はなかった（データは示さない）。ＮＡＣを１２００ｍｇ／ｋｇの割合で投与してから１０分後の血清濃度は、２．４  ０．６ｍｇ／ｍｌ（ｎ＝６）であった。この値は、血液中に残っている放射性標識から決定した。
【００８７】  実施例１１
ＮＡＣの毒性
ラットでＮＡＣの投与量を増加させる実験を行なった。化学療法を行なった直後に最初はＮＡＣを１４０〜８００ｍｇ／ｋｇの割合で静脈内投与したときには（ｎ＝４）十分な耐性が見られたが、骨髄保護は検出されなかった。ＮＡＣの投与量が１２００ｍｇ／ｋｇを超えると（ｎ＝３）毒性が現われたが、１２００ｍｇ／ｋｇでは毒性がなかった。そこで、ＮＡＣを１２００ｍｇ／ｋｇにして骨髄保護の研究を行なった。ただしＳＴＳを組み合わせて投与する場合には、合計量を考慮してＮＡＣの投与量を１０００ｍｇ／ｋｇにした。
【００８８】  ＮＡＣの毒性を、骨髄を保護するために輸液するときに測定した。図９に示したように、ＮＡＣによる死亡率は、投与経路によって有意に異なる。静脈内投与する場合には、大動脈に輸液する場合よりも毒性が有意に大きい（Ｐ＝０．００１４）。あらかじめＢＳＯで治療しておくと、ＮＡＣの毒性が顕著に増大した。ＢＳＯで治療した後にＮＡＣを静脈内投与したグループは、死亡率が大きくなりすぎたために初期の段階で実験を中止した。ラットの数がｎ＝４以下の場合に死亡率７５％というのが、中止の規則である。すべてのグループから選択したラット（ｎ＝２１）について、血圧のモニター値から、死亡したほとんどのラットが持続性の急性高血圧になったことがわかった。これは、心臓毒性があったことを示唆している。しかし特に指摘しておくべきなのは、ＢＳＯで治療せず、化学療法の３０分前にＮＡＣを大動脈輸液により１２００ｍｇ／ｋｇ投与した１２匹のラットが死亡せず、毒性の証拠もまったく見られなかったことである。
【００８９】  実施例１２
化学療法により誘起される骨髄毒性に対してＮＡＣが及ぼす効果
化学療法により誘起される骨髄毒性に対する化学保護を、ＢＳＯで治療したラットとＢＳＯで治療していないラットにカルボプラチン、リン酸エトポシド、メルファランを動脈内投与して調べた。ＮＡＣ＋ＳＴＳまたはＮＡＣのみを、化学療法の約３０分前、または化学療法の直後に投与した。投与法は、静脈内投与または大動脈輸液である。ＮＡＣによる化学保護が見られた。それは、最低値における血液（白血球細胞、顆粒球、血小板）のカウント数が、化学保護剤なしの場合と比較して増加していることに示されている。その様子を表７と表８に示してある。図１０に示したように、化学保護は、ラットをあらかじめＢＳＯで治療したかどうかには関係なく効果的であり、化学療法により誘起される骨髄毒性のために血液カウント数は最低値になるが、血小板の正常なレベルへの回復は改善された。
【００９０】
【表９】
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【００９１】
【表１０】
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【００９２】  ＢＳＯで治療しなかったラットでは、ＮＡＣ（１２００ｍｇ／ｋｇ）を大動脈輸液することが最適の治療法であることが、図１０Ａと図１０Ｃからわかる。ＳＴＳを合わせて使用するかどうかには関係がない。図１０Ａには、化学療法により誘起される顆粒球数の減少が完全に止まることが示されている（ｐ＜０．０５）。また、化学療法の３０分前にＮＡＣを大動脈に輸液することによって血小板に対する毒性が低下することが、図１０Ｃに示されている。
【００９３】  あらかじめＢＳＯで治療したラットでは、化学療法の３０分前にＮＡＣを大動脈に輸液することによって顆粒球がよく保護されるが、最もよく保護されるのは、図１０Ｂと図１０Ｄからわかるように、化学療法の前にＮＡＣを大動脈に輸液し、化学療法の直後にＳＴＳを大動脈に輸液する場合である。化学保護剤を組み合わせる（ＮＡＣとＳＴＳ）と、化学保護をされていないラットと比較して、図１０Ｂからわかるように顆粒球に対する毒性が有意に阻止され（ｐ＜０．０１）、図１０Ｄからわかるように血小板に対する毒性が有意に阻止される（ｐ＜０．０１）。化学保護により、化学療法からの血小板の回復も顕著になった。ＳＴＳを単独で使用する場合には、常に骨髄保護がなされるとは限らない（データは示さない）。
【００９４】  すでに指摘したように、上記の説明は、記述的、例示的、具体的であるが、添付の請求項に規定した本発明の範囲がそれだけに制限されると考えてはならない。
【図面の簡単な説明】［図１］  主な動脈の解剖図と、チオールをベースとする化学保護剤を投与するためのカテーテルを配置する最も高い位置を示している。
［図２（Ａ〜Ｃ）］  図２（Ａ〜Ｃ）は化学療法剤と化学保護剤ＮＡＣを左頚動脈に注入する本発明の方法を利用した場合の骨髄回復効果と、それよりも低い最低値を示すグラフである。さらに詳細には、図２Ａは、白血球細胞に対する効果、図２Ｂは血小板に対する効果、図２Ｃは顆粒球に対する効果を示している。
［図３Ａ］  Ｎ−アセチルシステインを化学保護剤として用いた場合の投与量／応答を示すグラフである。
［図３Ｂ］
［外１］
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［図４Ａ、４Ｂ］
［外２］
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［図５］  繊維芽細胞における細胞エンハンスメントと化学保護を示すグラフである。細胞毒性は、９６ウエルのプレートで１つのウエル当たりの細胞数が１×１０４個となるようにした培養ＧＭ２９４ヒト繊維芽細胞において、ＷＳＴ比色アッセイにより評価した。細胞を１００μｌのＢＳＯで１８時間にわたってあらかじめ処理した後、あるいはＢＳＯで処理せずに、化学療法剤（メルファラン＝１０μｇ／ｍｌ、カルボプラチン＝１００μｇ／ｍｌ、シスプラチン＝７．５μｇ／ｍｌ、リン酸エトポシド＝１００μｇ／ｍｌ）のみ（白色）、化学保護剤Ｎ−アセチルシステイン（１０００μｇ／ｍｌのＮ−アセチルシステイン、斜線）、ＢＳＯ細胞エンハンスメント（黒色）、ＢＳＯ細胞エンハンスメント＋化学保護剤Ｎ−アセチルシステイン（縦横縞）のいずれかを添加した。データは、生きている細胞の数を処理しない対照サンプル（化学療法なし）と比較して％で表示した。それぞれの点は、４つのウエルの平均±標準偏差を表わしている。
［図６］  化学療法の細胞毒性に対する化学保護剤の時間依存性を示すグラフである。化学療法の細胞毒性は、培養したＬＸ−１  ＳＣＬＣ細胞（９６ウエルのプレート中で１×１０４細胞／ウエル）において、ＷＳＴ比色アッセイにより評価した。細胞は、メルファラン２０μｇ／ｍｌ、カルボプラチン２００μｇ／ｍｌ、シスプラチン１０μｇ／ｍｌ、リン酸エトポシド２００μｇ／ｍｌのいずれかで処理した。次に、細胞に保護剤を添加せず（白色）、細胞に対してチオ硫酸ナトリウム２０００μｇ／ｍｌを化学療法の直後に添加（斜線）、化学療法の２時間後に添加（黒色）、４時間後に添加（縦横縞）のいずれかの操作を行なった。データは、生きている細胞の数を処理しない対照サンプル（化学療法なし）と比較して％で表示した。それぞれの点は、４つのウエルの平均±標準偏差を表わしている。
［図７Ａ、図７Ｂ］  図７Ａ及び７Ｂは細胞エンハンスメントと化学保護がアポトーシスに及ぼす効果を示すグラフである。図７Ａは、カスパーゼ−２の酵素活性を示すグラフである。図７Ｂは、ＤＮＡの断片化を調べるためのＴＵＮＥＬ染色の結果を示すグラフである。アポトーシスは、１００μｌのＢＳＯで１８時間にわたってあらかじめ処理した後の、あるいはＢＳＯで処理していないＬＸ−１  ＳＣＬＣ培養細胞において評価した。実験は、何も添加せず（白色）、回収の２０時間前にメルファラン（１０μｇ／ｍｌ）を添加（斜線）、回収の２０時間前にメルファラン（１０μｇ／ｍｌ）＋Ｎ−アセチルシステイン（１０００μｇ／ｍｌ）を添加（縦横縞）という条件で行なった。カスパーゼ−２の活性は、処理しない対照サンプル（化学療法なし）と比較した活性の割合を％で表示した（平均±標準偏差、ｎ＝３）。ＴＵＮＥＬ染色は、ポジティブな染色結果であった細胞の割合を％で表示した。
［図８］  ラットの脳にＮＡＣを供給した結果を示すグラフである。放射性標識したＮＡＣを標識していない低投与量のＮＡＣ（１４０ｍｇ／ｋｇ）または高投与量のＮＡＣ（１２００ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせ、ラットに対して以下の注入経路で投与した。すなわち、静脈内へ（白色）、右頚動脈内へ（斜線）、左内動脈を閉鎖した状態で左頚動脈から動脈内へ（大動脈輸液）（黒色）、ＢＢＢＤの状態で動脈（右頚動脈）内へ（交差縞）という経路である。組織ホモジェネート中の放射性標識の量は、組織１グラム当たりの１４Ｃ−ＮＡＣ投与量に対する割合を％で表わした平均と標準偏差として表示してある（１グループにつきｎ＝３匹のラット）。静脈内への供給とは有意な差があることを、＊Ｐ＜０．０５と＊＊Ｐ＜０．００１で示してある。
［図９］  ＮＡＣの投与経路とＢＳＯによる治療の有無が死亡率に及ぼす効果を示すグラフである。ＮＡＣを用いた化学保護に起因する死亡率を評価するのにカプラン−マイアー産物限界分析を用いた。ラットをＢＳＯであらかじめ治療した（１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．ｂ．ｉ．ｄ．×３、黒い棒）後、あるいはＢＳＯで治療せずに、化学療法を行なった（カルボプラチン２００ｍｇ／ｍ２、リン酸エトポシド１００ｍｇ／ｍ２、メルファラン１０ｍｇ／ｍ２）。化学保護は、ＮＡＣ（１２００ｍｇ／ｍ２）、またはＮＡＣ（１０００ｍｇ／ｍ２）＋ＳＴＳ（８ｇ／ｍ２）を静脈内に投与すること（ｎ＝１７ＢＢＳＯ、ｎ＝８＋ＢＳＯ）、または大動脈に輸液すること（ｎ＝１９ＢＢＳＯ、ｎ＝２８＋ＢＳＯ）により実現した。ウィルコクスン分析によるとＰ＝０．００１４である。
［図１０Ａ〜図１０Ｄ］  図１０Ａ〜１０Ｄは化学療法によって誘起される骨髄抑制に対する化学保護のテスト結果を示すグラフである。ラットに対し、化学保護ありの場合（三角形、正方形）となしの場合（丸）について、３薬利用化学療法（カルボプラチン２００ｍｇ／ｍ２、リン酸エトポシド１００ｍｇ／ｍ２、メルファラン１０ｍｇ／ｍ２）を行なった。血液は、化学療法を行なう前、血液の最低値（治療６日後）、回復期（治療９日後）の３回にわたってカウントした。化学保護は、化学療法を行なう３０分前にＮＡＣ（１２００ｍｇ／ｋｇ）を大動脈に輸液することによって（三角形）、あるいは化学療法を行なう前にＮＡＣを、化学療法の直後にＳＴＳ（８ｇ／ｍ２）を投与することによって（正方形）実現した。図１０Ｂと図１０Ｄでは、ラットに対して化学療法を行なう前にＢＳＯ（１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内×３ｄ）を投与した。図１０Ａのグラフは、ＢＳＯなしの場合における顆粒球のカウント数を示している。図１０Ｂは、ＢＳＯありの場合における顆粒球のカウント数を示している（平均±標準偏差、１グループにつきｎ＝６）。図１０Ｃは、ＢＳＯなしの場合における血小板のカウント数を示している。図１０Ｄは、ＢＳＯありの血小板のカウント数を示している。ウィルコクスン／クルスカル−ウォリス順位和検定（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）により、保護剤なしのグループとは有意な差のあることが明らかになった。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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