(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ペプチド及びムコ多糖から選択される少なくとも１つの生物学的活性剤；及び、
（Ｂ）下記の化合物：
【化１】
0005215977.tif 000055
及びそれらの塩からなる群から選択される少なくとも１つのキャリアを含んでなる組成物。
【請求項２】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、成長ホルモン−放出ホルモン、インターフェロン、インターロイキン−ＩＩ、インシュリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、エリスロポエチン、心房性ナトリウム利尿因子、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、アデノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、バソプレシン、クロモリンナトリウム、バンコマイシン、上皮小体ホルモン、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記生物学的活性剤が、インターフェロン、インターロイキン−ＩＩ、インシュリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、オキシトシン、バソプレシン、バンコマイシン、ＤＦＯ、上皮小体ホルモン、及びこれらの組み合わせを含む請求項２記載の組成物。
【請求項４】
（Ａ）請求項１記載の組成物；及び、
（Ｂ）（ａ）賦形剤、
（ｂ）希釈剤、
（ｃ）崩壊剤、
（ｄ）潤滑剤、
（ｅ）可塑剤、
（ｆ）着色剤、
（ｇ）投与賦形剤、または、
（ｈ）これらの任意の組み合わせ、
を含有する単位投与形態にある製剤。
【請求項５】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、成長ホルモン−放出ホルモン、インターフェロン、インターロイキン−ＩＩ、インシュリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、エリスロポエチン、心房性ナトリウム利尿因子、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、アデノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、バソプレシン、クロモリンナトリウム、バンコマイシン、上皮小体ホルモン、デフェロキサミン（ＤＦＯ）、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される請求項４記載の単位投与形態にある製剤。
【請求項６】
前記生物学的活性剤が、インターフェロン、インターロイキン−ＩＩ、インシュリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、オキシトシン、バソプレシン、バンコマイシン、ＤＦＯ、上皮小体ホルモン、及びこれらの組み合わせを含む請求項５記載の単位投与形態にある製剤。
【請求項７】
錠剤、カプセル、または液状である請求項４記載の単位投与形態にある製剤。
【請求項８】
前記投与賦形剤が、水、１，２-プロパンジオール、エタノール、またはこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される請求項４記載の単位投与形態にある製剤。
【請求項９】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を経口投与することを含んでなる方法。
【請求項１０】
下記式：
【化２】
0005215977.tif 000056
及びそれらの塩からなる群から選択される化合物。
【請求項１１】
（Ａ）ペプチド及びムコ多糖から選択される少なくとも１つの生物学的活性剤；
（Ｂ）請求項１０記載の化合物の少なくとも１つ；及び、
（Ｃ）任意に、投与賦形剤を混合することを含んでなる組成物の調製方法。
【請求項１２】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を鼻内投与することを含んでなる方法。
【請求項１３】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を舌下投与することを含んでなる方法。
【請求項１４】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を十二指腸内投与することを含んでなる方法。
【請求項１５】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を皮下投与することを含んでなる方法。
【請求項１６】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を直腸内投与することを含んでなる方法。
【請求項１７】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を腟投与することを含んでなる方法。
【請求項１８】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を頬投与することを含んでなる方法。
【請求項１９】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物に投与する方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を眼投与することを含んでなる方法。
【請求項２０】
生物学的活性剤を当該薬剤を必要とするヒトを除く動物の血液／脳障壁を介して通過にさせる方法において、前記動物に、請求項１記載の組成物を投与することを含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性剤、特に生物学的または化学的活性剤を送達(deriver)するための組成物に関する。これらの化合物は、積荷の標的への送達を促進するキャリアとして用いられる。このキャリア化合物は、動物への経口投与のために、生物学的活性剤と非共有結合混合物を好ましく形成する。このような組成物の調製及び投与の方法も開示される。
【背景技術】
【０００２】
活性剤の送達のための従来の方法は、生物学的、化学的、及び物理的障害によって制限されていることが多い。典型的には、これらの障害は、そこを通して送達が行われる環境、送達のための標的の環境、または標的そのものである。生物学的または化学的活性剤は、特にそのような障害を受けやすい。例えば、生物学的又は化学的活性製薬及び治療薬の動物への送達において、障害は身体によって与えられる。物理的障害の例は、皮膚及び標的に到達する前に通過しなければならない種々の器官膜である。化学的障害は、ｐＨ変化、二層脂質、及び分解酵素を含むがこれらに限定されない。
【０００３】
これらの障害は、経口送達系の設計において特に重要である。多くの生物学的又は化学的活性剤の経口送達は、胃腸（ＧＩ）管におけるｐＨ変化、強力な分解酵素、及び活性剤不透過性胃腸膜といった生物学的、化学的、及び物理的障害について以外には、動物への投与のための優れた経路である。多くの薬剤の中で典型的には経口投与になじまないのは、カルシトニン及びインシュリン等の生物学的または化学的活性ペプチド；多糖類、特にヘパリンに限られないムコ多糖；ヘパリノイド；抗生物質；及び他の有機物質である。これらの薬剤は、胃腸管において、加水分解、酵素などによって即座に不活性化または破壊される。従攻撃を受けやすい製薬剤を経口投与する従来の方法は、補助薬（例えば、レゾルシノール、及び、ポリオキシエチレンオレイルエーテル及びn-ヘキサデシルポリエチレンエーテル等の非イオン性界面活性剤）を共投与して腸壁の透過性を人工的に増大させる、並びに、酵素阻害剤（例えば、膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）及びトラシロール(trasylol)）を共投与して酵素的分解を阻止することに依存していた。
【０００４】
また、リポソームも、インシュリン及びヘパリンのための薬物送達系として記載されている。例えば、米国特許第4,239,754号明細書；Patel等, (1976), FEBS Letters, Vol. 62, pg.60；及びHashimoto 等, (1979), Endocrinology Japan, Vol.26, pg.337参照。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第4,239,754号明細書
【特許文献２】米国特許第4,925,673号明細書
【特許文献３】米国特許出願第60/017,902号明細書
【特許文献４】米国特許出願第08/414,654号明細書
【特許文献５】米国特許出願第08/335,148号明細書
【特許文献６】米国特許出願第60/003,111号明細書
【特許文献７】米国特許第5,206,384号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Patel等, (1976), FEBS Letters, Vol. 62, pg.60
【非特許文献２】Hashimoto 等, (1979), Endocrinology Japan, Vol.26, pg.337
【非特許文献３】Chambers Biological Dictionary, editor Peter M.B. Walker, Cambridge, Englamd: Chambers Cambridge, 1989, page 215
【非特許文献４】Henry, J.B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods; Philadelphia, PA; W.B. Saunders (1979)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、これらの薬物送達系の広範な使用は、（１）系が毒性量の補助薬または阻害剤を必要とすること；（２）好ましい低分子量の積荷、即ち活性剤が入手できないこと；（３）系が低い安定性及び不十分な保存性を示すこと；（４）系の製造が困難なこと；（６）系が活性剤を逆に変化させること；あるいは（７）系が活性剤の吸収を許容または促進しないことにより、予め除外されていた。
【０００８】
さらに最近は、混合アミノ酸（タンパク質）の人工ポリマーの微小球(microsphere)が、薬品の送達に用いられた。例えば、米国特許第4,925,673号明細書は、薬物含有プロテイノイド微小球キャリア、並びにそれらの製造及び使用を記載している。プロテイノイド微小球は、多くの活性剤の送達に有用である。
この分野において、調製が容易で広範な活性剤の送達が可能な、簡単かつ安価な送達系への要求がいまだに存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
活性剤の送達に有用な化合物及び組成物が提供される。これらの組成物は、少なくとも１つの活性剤、好ましくは生物学的または化学的活性剤、及び少なくとも１つの以下の化合物１−１９３、またはそれらの塩を含有する。
【化１−１】
0005215977.tif 000002
【化１−２】
0005215977.tif 000003
【化１−３】
0005215977.tif 000004
【化１−４】
0005215977.tif 000005
【化１−５】
0005215977.tif 000006
【化１−６】
0005215977.tif 000007
【化１−７】
0005215977.tif 000008
【化１−８】
0005215977.tif 000009
【化１−９】
0005215977.tif 000010
【化１−１０】
0005215977.tif 000011
【化１−１１】
0005215977.tif 000012
【化１−１２】
0005215977.tif 000013
【化１−１３】
0005215977.tif 000014
【化１−１４】
0005215977.tif 000015
【化１−１５】
0005215977.tif 000016
【化１−１６】
0005215977.tif 000017
【化１−１７】
0005215977.tif 000018
【化１−１８】
0005215977.tif 000019
【化１−１９】
0005215977.tif 000020
【化１−２０】
0005215977.tif 000021
【化１−２１】
0005215977.tif 000022
【化１−２２】
0005215977.tif 000023
【化１−２３】
0005215977.tif 000024
【化１−２４】
0005215977.tif 000025
【化１−２５】
0005215977.tif 000026
【化１−２６】
0005215977.tif 000027
【化１−２７】
0005215977.tif 000028
【化１−２８】
0005215977.tif 000029
【化１−２９】
0005215977.tif 000030
【化１−３０】
0005215977.tif 000031
【化１−３１】
0005215977.tif 000032
【化１−３２】
0005215977.tif 000033
【化１−３３】
0005215977.tif 000034
【化１−３４】
0005215977.tif 000035
【００１０】
上記のキャリア化合物、及び活性剤を含む組成物は、選択された生物学的系への活性剤の送達において有用である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の特別な組成物は、活性剤及びキャリアを含む。これらの組成物は、種々の活性剤を、種々の生物学的、化学的、及び物理的障害を通して送達するのに使用でき、特に、環境による分解を受ける活性剤の送達に適している。本発明の組成物は、ニワトリを含むがそれに限定されない鳥類、霊長類、特にヒト等の哺乳類、及び昆虫類といった任意の動物に、生物学的または化学的活性剤を送達するのに特に有用である。
【００１２】
本発明の他の利点は、調製の容易さ、安価な原材料の使用を含む。本発明の組成物及び製剤方法は、コスト効率が良く、実施が簡単であり、そして商業生産への工業的規模拡大に適している。
【００１３】
活性剤、例えば、組み換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）；サーモンカルシトニン；低分子量ヘパリンを含むがそれに限定されないヘパリン；上皮小体ホルモン；及び上記の組成物中の化合物を、皮下、舌下、及び鼻内共投与することは、活性剤の単独投与に比較して、活性剤の生体利用性(bioavailability)の増大をもたらす。
【００１４】
活性剤
本発明で用いるのに適した活性剤は、生物学的または化学的活性剤、香料を含むがそれらに限定されない化学的活性剤、並びに、例えば化粧品等の他の活性剤を含む。
【００１５】
生物学的または化学的活性剤は、農薬、薬理剤、及び治療薬を含むが、これらに限定されない。例えば、本発明で用いるのに適した生物学的または化学的活性剤は、これらに限定されないが、ペプチド、特に小ペプチド；ホルモン、特に、それ自身では、または投与量の一部しか胃腸膜を通過しない及び／または胃腸管における酸及び酵素で化学的開裂を受けやすいホルモン；多糖類、特にムコ多糖の混合物；炭化化物；脂質；またはこれらの任意の混合物である。さらなる例は、これらに限られないが、ヒト成長ホルモン；ウシ成長ホルモン；成長放出ホルモン；インターフェロン；インターロイキン−１；インターロイキン−ＩＩ；インシュリン；ヘパリン、特に低分子量ヘパリン；カルシトニン；エリスロポエチン；心房性ナトリウム利尿因子；抗原；モノクローナル抗体；ソマトスタチン；アドレノコルチコトロピン；ゴナドトロピン放出ホルモン；オキシトシン；バソプレシン；クロモリンナトリウム（ナトリウム又は二ナトリウムクロモグリケート）；バンコマイシン；デフェロキサミン（ＤＦＯ）；上皮小体ホルモン；抗−真菌薬を含むがそれに限定されない抗−微生物薬、及びこれらの任意の組み合わせを含む。
【００１６】
キャリア
上記の化合物１−１９３は、生物学的または化学的活性剤の経口送達のためのキャリアとして作用することが見出されたが、特に、上記の化合物９、３５、６４，６７、７９、１０２、１０９、１１１、１１７、１２２、１３６及び１４１を挙げることができる。
【００１７】
化合物１−１９３の特性を、以下の表１に掲げる。
【表１−１】
0005215977.tif 000036
【表１−２】
0005215977.tif 000037
【表１−３】
0005215977.tif 000038
【表１−４】
0005215977.tif 000039
【表１−５】
0005215977.tif 000040
【表１−６】
0005215977.tif 000041
【表１−７】
0005215977.tif 000042
【表１−８】
0005215977.tif 000043
【００１８】
これらのキャリア化合物、即ちポリアミノ酸及びペプチドは、アミノ酸を含み、例えば、薬理剤及び治療薬等の生物学的または化学的活性剤を含むがそれらに限定されない活性剤の送達に使用される。
【００１９】
アミノ酸は、少なくとも１つのフリーなアミン基を持つ任意のカルボン酸であり、天然及び合成のアミノ酸を含む。
【００２０】
ポリアミノ酸は、、ペプチド、あるいは、他の結合可能な奇によって形成される結合、例えば、エステル、無水、または無水結合によって結合した２又はそれ以上のアミノ酸である。
【００２１】
ペプチドは、ペプチド結合で結合した２又はそれ以上のアミノ酸である。ペプチドは、２つのアミノ酸を持つジペプチドから数百のアミノ酸を持つポリペプチドまで長さが変化しうる。Chambers Biological Dictionary, editor Peter M.B. Walker, Cambridge, Englamd: Chambers Cambridge, 1989, page 215 参照。特に、ジ−ペプチド、トリ−ペプチド、テトラ−ペプチド、及びペンタ−ペプチドを挙げることができる。
【００２２】
これらキャリア化合物の、例えばナトリウム塩等の塩も、良好に用いることができる。
【００２３】
ここに記載する多くの化合物は、アミノ酸から誘導される。
【００２４】
本発明の多くの化合物は、これらに限られないが、アミノカプリル酸、ブチリルヒドロキシアミノ酸(butyrylhydroxaminic acid)、アミノフェニル酪酸、アミノフェニルヘキサン酸、アミノフェニルプロピオン酸、アミノサリチル酸、アミノフェニルコハク酸、アミノノナン酸(aminononanic acid)、アミノニコチン酸、アミノバレン酸(amino valenic acid)、アミノフェニル酢酸、アミノカプロン酸、アミノウンデカン酸、アミノヘプタン酸、アミノヒドロキシ安息香酸、及びアミノデカン酸を含むアミノ酸から、この開示に基づく当業者の通常の技術の範囲内の方法、及び、1996年3月29日に出願された米国特許出願第60/017,902号明細書；1995年3月31日に出願された米国特許出願第08/414,654号明細書；1994年10月25日に出願された米国特許出願第08/335,148号明細書；及び1995年9月1日に出願された米国特許出願第60/003,111号明細書に記載された方法により容易に調製することができる。
【００２５】
例えば、これらの化合物は、単一の酸をアミノ酸に存在するフリーなアミノ部位と反応する適当な試薬と反応させ、アミドを形成することにより調製することができる。望まない副反応を避けるために、当業者に知られているような保護基を用いることもできる。
【００２６】
キャリア化合物は、再結晶または固体カラム支持体での分画により精製してもよい。好ましい再結晶溶媒系は、アセトニトリル、メタノール及びテトラヒドロフランを含む。分画は、アルミナ等の適当な固体カラム支持体上で、メタノール／n-プロパノール混合物を移動相として用いて；トリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物を移動相として用いた逆相カラム支持体；及び、水を移動相として用いるイオン交換クロマトグラフィで行われる。アニオン交換クロマトグラフィが行われるとき、好ましくは連続した０−５００mM塩化ナトリウム勾配が用いられる。
【００２７】
送達系
本発明の組成物は、１つ又はそれ以上の活性剤を含有する。
【００２８】
一実施態様では、化合物又は塩又は化合物１−１９３又はポリアミノ酸又はペプチドであって、これらの化合物又は塩を少なくとも１つ含むものは、１つ又はそれ以上の化合物又は塩、ポリアミノ酸又はペプチドを、投与前に活性剤と単に混合することにより、送達キャリアとして直接用いることができる。
【００２９】
投与混合物は、キャリアの水溶液を活性剤の水溶液と投与の直前に混合することにより調製される。あるいは、キャリア及び生物学的または化学的活性成分は、製造工程中に混合することもできる。この溶液は、リン酸緩衝塩、クエン酸、酢酸、ゼラチン、アラビアゴム等の添加剤を任意に含んでもよい。
【００３０】
安定化添加剤を、キャリア溶液に混合してもよい。幾つかの薬剤では、そのような添加剤の存在により、溶液中の薬剤の安定性及び分散性が向上する。
【００３１】
安定化添加剤は、約０．１から５％(W/V)の範囲、好ましくは約０．５％(W/V)の濃度で用いられる。好ましくは、それに限られないが、安定化添加剤の例は、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、プロピレングリコール、カルボン酸及びその塩、及びポリリシンを含む。好ましい安定化添加剤は、アラビアゴム、ゼラチン及びメチルセルロールである。
【００３２】
活性剤の量は、特に活性剤の目的を達成するのに有効な量である。組成物中の量は、典型的には、製薬的、生物学的、治療的、または化学的に有効な量である。しかし、その量は、組成物が、カプセル、錠剤又は液状の投与単位形で用いられる場合、投与単位形が複数のキャリア／生物学的又は化学的活性剤組成物を含んでもよく、あるいは分割された製薬的、生物学的、治療的、または化学的有効量を含んでもよいので、製薬的、生物学的、治療的、または化学的に有効な量より少なくてもよい。全体として製薬的、生物学的、治療的、または化学的有効量の生物学的又は化学的活性剤を含む複数の単位により合計として有効量が投与される。
【００３３】
用いるべき活性剤、特に生物学的または化学的活性剤の合計量は、当業者によって決定される。しかし、驚くべきことに、幾つかの生物学的または化学的活性剤では、ここで開示するキャリアが、特に経口、鼻内、舌下、十二指腸内、直腸内、腟、頬、眼、または皮下系、並びに、血液／脳障壁を介する系において極めて有効な送達をもたらすことが見出された。従って、従来の投与単位形又は送達系よりも少量の生物学的または化学的活性剤を患者の投与しても、同様の血液レベル及び治療効果を達成することができる。
【００３４】
本発明の組成物におけるキャリアの量は、送達有効量であり、任意の特定に生物学的または化学的活性剤について、当業者に周知の方法で決定することができる。
【００３５】
投与単位形(dosage unit form)も、任意の賦形剤(excipients)；希釈剤、崩壊剤(disintegrants)；潤滑剤；可塑剤；着色剤；及び、水、１，２−プロパンジオール、オリーブオイル、またはこれらの任意の組み合わせを含むがそれに限られない投与賦形剤(dosing vehicles)を含有できる。
【００３６】
これらの組成物又は投与単位形の投与は、好ましくは経口または十二指腸内注入による。
【００３７】
本発明の送達組成物は、１またはそれ以上の酵素阻害剤を含んでいてもよい。そのような酵素阻害剤は、これらに限られないが、アクチノニンまたはエピアクチノニン及びこれらの誘導体等の化合物を含む。これらの化合物は、以下の式で表される：
【化２】
0005215977.tif 000044
これらの化合物の誘導体は、米国特許第5,206,384号明細書に開示されている。
アクチノニン誘導体は、以下の式で表される：
【化３】
0005215977.tif 000045
ここで、Ｒ５は、スルホキシメチル又はカルボキシル、又は、カルボキシアミド、ヒドロキシアミノカルボニル及びアルコキシカルボニル基から選択される置換カルボキシ基であり；Ｒ６は、ヒドロキシル、アルコキシ、ヒドロキシアミノ又はスルホキシアミド基である。他の酵素阻害剤は、アプロチニン（トラシロール）及びボーマン‐バークインヒビターを含むが、これらに限られない。
【００３８】
本発明の化合物及び組成物は、鳥類等の任意の動物、霊長類特にヒト等の哺乳類；及び昆虫類に、生物学的または化学的活性剤を投与するのに有効である。この系は、活性剤がその標的部位（即ち、送達組成物中の活性剤が放出されるべき領域）に達する前に直面する、投与された動物体内の条件により、破壊または油構成の低下を受けやすい生物学的または化学的活性剤の送達に特に有利である。
【００３９】
以下の実施例は、何ら限定することなく本発明を例示する。全ての分量は、特に示さない限り重量で表す。
【実施例１】
【００４０】
実施例１−キャリアの調製
キャリアの一般的調製。ここに記載した化合物の調製に以下の方法を用いた。化合物の多くは、適当なアミノ酸と適当な酸塩化物との反応によって調製した。化合物７９の調製を、この方法による化合物調製の代表例として与える。
【００４１】
化合物７９の調製。方法Ａ。マグネチックスターラーを取り付けた1Lの丸底フラスコに、3-(4-アミノフェニル）プロピオン酸（46.3g、0.28モル、1.17当量）及び2M水酸化ナトリウム水溶液（300mL）を入れた。2,3-ジメトキシベンゾイルクロライド（48.0g、0.24モル、1.00当量）を分けて１時間かけて攪拌しながら添加した。添加後、反応物を２．５時間室温で攪拌し、10M水酸化ナトリウム水溶液を添加して溶液のｐＨを約１０に調節した。次いで、1M塩酸（3×100mL）、水（100mL）で溶液を酸性化し、空気乾燥させた。それを、煮沸アセトン（約500mL）中に再溶解し、活性炭(3g)で脱色して濾過した。水（1.5L）を炉化物に添加し、褐色オイルの形成を促した。褐色オイルを室温で１０分間攪拌して固化した。原料固体を濾過で回収し、70%メタノール-水(v/v)で再結晶させて目的化合物７９を黄褐色固体として得た(39.5）g、50%）。
【００４２】
化合物１、５、３０、３１、３３、３６、５３−６６、６８、６９、７１−７４、７８、８０−８８、９５、９７−９９、１０２、１０８−１１０、１１２−１１５、１１９、１２１−１２６、１３６、１３７、１３９、１４１、１４４、１４６、１４７、１５１、１５２、１５５−１５８、１６０、１６１、１６３、１６５、１６６、１７０、１７２−１７４、１７６、１７７、１８４−１８６、１８８、１８９、１９１及び１９２も、この方法によって調製した。
【００４３】
化合物７９の調製。方法Ｂ。2Lの三口丸底フラスコに、マグネチックスターラー及び２つの漏斗を窒素雰囲気下で取り付けた。酢酸エチル（700mL）中の3-(4-アミノフェニル）プロピオン酸（46.3g、0.28モル、1.17当量）をフラスコに添加した。酢酸エチル（250mL）中の2,3-ジメトキシベンゾイルクロライド（48.0g、0.24モル、1.00当量）を一方の漏斗に導入し、１時間かけて滴下した。次いで、トリエチルアミン（28.20g、0.28モル、1.00当量）を第２の漏斗に導入し、１５分間かけて滴下した。反応物を室温で３時間攪拌し、溶媒を真空留去して残った褐色オイルを得た。残ったものに水（600mL）、次いで水酸化ナトリウム（2M、500mL）を加え、混合物を室温で３時間攪拌した。得られた褐色溶液を2M塩酸（約1L）で酸性化した。混合物をアイスバスで１時間冷却させた後、黄色固体が形成され、濾過によって回収した。固体は水（3×1.5L）で洗浄し、50%エタノール−水から再結晶させて、化合物７９を黄褐色固体として得た（59.2g、68%）。
【００４４】
化合物１８、３２、３７、４１、１６８、１７５、及び１８３も、この方法で調製した。
【００４５】
化合物７９の調製。方法Ｃ。マグネチックスターラー及び環流冷却管を取り付けた2Lの丸底フラスコに、3-(4-アミノフェニル）プロピオン酸（46.3g、0.28モル、1.17当量）のジクロロメタン（560mL）中の懸濁液を入れた。クロロトリメチルシラン（62.36g、0.57モル、2.05当量）を一度に添加し、混合物をアルゴン下で１時間環流加熱した。反応物を室温まで冷却し、アイスバス（内部温度＜１０℃）に配置した。環流冷却管を、トリエチルアミン（42.50g、0.42モル、1.50当量）を入れた漏斗と交換した。トリエチルアミンを１５分間滴下し、添加中に黄色固体が形成された。漏斗を、ジクロロメタン（100mL）中の2,3-ジメトキシベンゾイルクロライド（48.0g、0.24モル、1.00当量）を入れた別の漏斗と交換した。溶液を３０分間滴下した。反応物をアイスバス中でさらに３０分間、室温で１時間攪拌した。ジクロロメタンを真空留去し、褐色オイルを得た。褐色オイルをアイスバスで冷却し、氷冷した2M水酸化ナトリウム溶液（700mL）を添加した。アイスバスを取り外し、反応物を２時間攪拌して透明な褐色溶液とした。溶液を2M塩酸（400mL）で酸性化し、５℃で１時間保存した。黄色固体が形成され、濾過で回収した。固体を見ず（3×100mL）で洗浄し、50%エタノール−水(v/v)から再結晶させて化合物７９を黄褐色ニードルとして得た（64.7g、82%）。
【００４６】
化合物２−４、６−１７、１９−２９、３４、３８−４０、４２−４８、５０−５２、６７、７０、７５−７７、８９−９４、１００、１０１、１０７、１１１、１１６−１１８、１２７−１３２、１３４、１３５、１９３、１４２、１４３、１４８、１４９、１５９、１６２、１６４、１６９、１７８−１８２、１８７、及び１９０も、この方法により調製した。
【００４７】
化合物３５の調製。Ｏ-アセチルサリチロイルクロライド（24.68g、124mmol、1当量）のテトラヒドロフラン（300mL）溶液をアイスバス中で冷却した。トリエチルアミン（25g、249mmol、2当量）を、漏斗を通して滴下した。メチル 9-アミノノナノエートヒドロクロライドをＤＭＦ（190mL、溶解のため僅かに加温）に溶解し、添加漏斗に導入して上記混合物に滴下した。反応物をアイスバス中で２０分間、室温で２時間攪拌した。減圧したでのTHFの留去により、ピンク色のDMF溶液を得た。ピンク色溶液をアイスバスで冷却し、2M水酸化ナトリウム水溶液（300mL）を添加した。室温で１２事件攪拌した後、混合物を2M塩酸（500mL）で酸性化した。溶液をアイスバスで冷却し、固体を形成させた。固体を濾過で回収し、50%エタノール／水から再結晶させて化合物３５をオフホワイト固体として得た（32g、87%）。
【００４８】
化合物４９の調製。1-(2-ヒドロキシフェニル)-3-(4-メチルベンゾエート)-1,3-プロパンジオン（3.00g、0.0101mil.）を、アルゴンパージ、マグネチック攪拌棒及び冷水冷却管を備えた100ml丸底フラスコに入れた。氷酢酸（20mls）及び濃硫酸（5mls）を添加し、反応混合物の加熱を開始した。反応混合物は環流温度で６時間加熱し、加熱を停止した。反応混合物を室温に戻し、次いで100mlsの氷／水に投入した。これを約１／２時間攪拌し、混合物を濾過し、褐色固体を単離した。褐色固体を、酢酸から２回再結晶させ、化合物４９を黄褐色固体として得た（1.44g、53.8%）。
【００４９】
化合物１６７の調製。マグネチック攪拌棒、アルゴンパージ及び冷水冷却管を備えた250ml丸底フラスコ中で、アセトニトリル（75mls）に2-クマラノン（4.21g、0.0314mol）を溶解して攪拌した。トリエチルアミン（3.18g、0.0314mol）及び8-アミノカプリル酸（5.00g、0.0314mol）を添加し、黄褐色スラリーを形成させた。加熱を開始し、反応混合物を終夜環流させた。終夜加熱した後、反応混合物の薄層クロマトグラフィ（50%酢酸エチル／50%ヘキサン）は、反応が完結したことを示した。加熱を中止し、反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮した。得られた残りのものを塩化メチレンに取り込み、１回100mlの1N塩酸溶液で２回洗浄した。塩化メチレン相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した。得られた黄褐色固体を真空下で終夜乾燥させ、化合物１６７を黄褐色固体として生成させた（8.35g、70.4%）。
【００５０】
化合物１７１の調製。マグネチック攪拌棒、アルゴンパージ及び冷水冷却管を備えた250ml丸底フラスコ中で、アセトニトリル（70mls）に1,4-ベンゾジオキサン-2-オン（3.93g、0.0262mol）を溶解させて攪拌した。トリエチルアミン（2.64g、0.0262mol）及び8-アミノカプリル酸（500g、0.0262mol）を添加し、黄褐色スラリーを形成させた。加熱を開始し、反応混合物を約３時間環流させた。この時点で、反応混合物の薄層クロマトグラフィ（50%酢酸エチル／50%ヘキサン）は、反応が完結したことを示した。加熱を中止し、反応混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮した。得られた残りのものを塩化メチレンに取り込み、１回100mlの1N塩酸溶液で洗浄した。この時点で、黄褐色固体の析出が見られ、それを濾過で単離した。この黄褐色固体を、１回100mlの1N塩酸溶液、次いで100mlの水でさらに洗浄した。得られた黄褐色固体を真空下で終夜乾燥させ、化合物１７１を黄褐色固体として生成させた（7.73g、95.6%）。
【００５１】
化合物１２０の調製。3.00g（18.3mmol）の2-ニトロフェニルイソシアネート及び5mLのテトラヒドロフランの溶液を、氷冷した2.08g（13.1mmol）の8-アミノカプリル酸、1.40mLの10N NaOH及び40mLの水の溶液に１０分間滴下した。反応混合物を更に３０分間攪拌し、２５℃に加温し、3%ＨＣｌ溶液でｐＨが５となるまで処理した。黄色析出物をｐ、2-プロパノール及び水で再結晶させ、3.7gの化合物１２０を黄色結晶として得た。
【００５２】
化合物１０４−１０６も、この方法で調製した・
【００５３】
化合物１３３の調製。20mLのプロピレングリコール中の2.40g（16.3mmol）及び2.82g（15.6mmol）の4-(4-アミノフェニル)酪酸懸濁液、2.40mL（1.74g、17.3mmol）のトリエチルアミン、及び10mg（0.08mmol）のジメチルアミノピリジンを１４０℃に加熱した。混合物は１４０℃で５分後に透明溶液となった。３３０分間攪拌した後、反応混合物を２５℃に冷却し、20mLの水で希釈した。形成された固体フタルイミドを濾別した。濾過物を3%ＨＣｌ溶液で酸性化した。得られた固体を濾別し、2-プロパノール及び水から再結晶させて、0.62gの化合物１３３を黄褐色固体として得た。
【００５４】
化合物１３８の調製。1.73g（12.9mmol）のフタル酸ジアルデヒド、2.04gの8-アミノカプリル酸及び20mLの酢酸を１０分間環流温度で加熱した。反応混合物を４０℃に冷却し、水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（2×20mL）で抽出した。有機相を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて留去した。残ったものをエーテルに溶解し、2NのＮａＯＨで抽出した。相を分離させた。水相を3%ＨＣｌで酸性化してＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて留去した。残った黄色物をアセトニトリル及び水から再結晶させ、1.25gの化合物１３８を黄色固体として得た。
【００５５】
化合物１４０の調製。1.40g（9.48mmol）の無水フタル酸及び1.51g（9.48mmol）の8-アミノカプリル酸を１５０℃で５分間加熱した。冷却すると、2.61gの固体化合物１４０が得られた。
【００５６】
化合物１５０も、この方法で調製した。
【００５７】
化合物１４５の調製。2.11g（10.1mmol）エチルカルバモイルアントラニル酸及び5mLのＣＨ２Ｃｌ２を、2.20mLの塩化オキサリルで処理した。１時間の攪拌の後、揮発物質を除去した。同時に、1.60g（10.1mmol）の8-アミノカプリル酸及び15mLのＣＨ２Ｃｌ２を2.60mL（2.23g、20.5mmol）のＴＭＳＣｌで処理した。この混合物を環流温度で９０分間加熱し、アイスバス中で冷却し、4.30mL（3.12g、30.9mmol）のトリエチルアミンで処理した。５分後、20mLのＣＨ２Ｃｌ２中での塩化オキサリルからの残りのスラリーを添加した。反応混合物を２５℃に加温し、終夜攪拌した。3%ＨＣｌの混合で酸性化して、白色固体を形成させた。固体を濾別し、EtOH及び水から再結晶させて、1.88gの化合物１４５を得た。
【００５８】
化合物１５３も、この方法で調製した。
【００５９】
化合物１５４の調製。4.02g（25.6mmol）のトランス-4-アミノメチルシクロヘキサン-カルボン酸、4.18g（25.6mmol）の無水イサトン酸(isatoic anhydride)、20mLのＣＨ２Ｃｌ２、20mlのジオキサン、及び4mLの水の懸濁液を環流温度で１２時間加熱した。溶液を２５℃に冷却し、エーテル（4×20mL）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて濃縮した。得られた固体をEtOH及び水から再結晶させ、4.95gの化合物１５４を得た。
【００６０】
化合物１０３は、Aldrich Chemical Company, Ic., Milwaukee, WIから入手した。
【実施例２】
【００６１】
実施例２−上皮小体ホルモン注入溶液
100mg/kgのキャリア、及び25μg/kgの上皮小体ホルモンの25%プロピレングリコール溶液を含む結腸内（”ＩＣ”）注入(dosing)組成物、または、400mg/kgのキャリア及び100μg/kgの水中の上皮小体ホルモンを含む経口栄養”ＰＯ”）注入溶液を、キャリア９、３３、３５、７７、７９、１０９、１１０、１２３、１３６、１４１、及び１６９で調製した。注入溶液は、Ｐ−キャリア番号−ＤＳで表される。
【００６２】
比較例２Ａ−上皮小体注入溶液
100mg/kgの下記式
【化４】
0005215977.tif 000046
のキャリア、及び25μg/kgの上皮小体ホルモンの25%プロピレングリコール溶液を含む結腸内注入組成物を調製した。注入溶液は、Ｐ−９Ａ−ＤＳで表される。
【実施例３】
【００６３】
実施例３−インビボ上皮小体ホルモン送達
体重200-250gの雄のSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、注入の１５分前に、ケタミン（44mg/kg）及びクロロプロマジン（1.5mg/kg）を投与した。ラットに、注入溶液Ｐ-９-ＤＳ、Ｐ-３３-ＤＳ、Ｐ-３５-ＤＳ、Ｐ-７７-ＤＳ、Ｐ-７９-ＤＳ、及びＰ-１４１-ＤＳの１つを経口栄養（”ＰＯ”）または結腸内点滴注入（”ＩＣ”）によって投与した。血清の上皮小体ホルモン濃度を測定するために、血液サンプルを尾の動脈から連続的に回収した。血清上皮小体ホルモン濃度は、免疫正確度試験ホスト(immunoaccuracy test host)によって定量化した。
【００６４】
結果を下記の表２に示す。
【００６５】
比較例３Ａ−インビボ上皮小体ホルモン送達
注入溶液Ｐ-９-ＤＳを注入溶液Ｐ-９Ａ-ＤＳに換えて、実施例３の方法に従った。結果を下記の表２に示す。
【００６６】
比較例３Ｂ−インビボ上皮小体ホルモン送達
キャリアを含まない注入溶液Ｐ-¢Ａ-ＤＳ（投与量25μg/kgの上皮小体ホルモン（結腸内）または100μg/kgの上皮小体ホルモン（経口））を用いて、実施例３の方法に従った。
【００６７】
結果を下記の表２に示す。
【表２】
0005215977.tif 000047
【実施例４】
【００６８】
実施例４−組み換え人成長ホルモン注入溶液
25mg/kgのキャリア及び1mg/kgのリン酸緩衝液中のｒＨＧＨを含む結腸注入組成物、または、600mg/kgのキャリア及び3mg/kgのリン酸緩衝液中のｒＨＧＨを含む経口栄養を、キャリア９、３５、３６、４７、６２、６４、６７、７７、７９、９０、９４、１０７、１０９、１３６、及び１４１で調製した。
【００６９】
注入溶液は、Ｒ−キャリア番号−ＤＳで表される。
【００７０】
比較例４Ａ−組み換えヒト成長ホルモン注入溶液
キャリアとして、下記の式
【化５】
0005215977.tif 000048
で表されるキャリアで置き換えて、実施例４の方法に従って結腸内注入溶液を調製した。注入溶液は、Ｒ−３５Ａ−ＤＳで表される。
【００７１】
比較例４Ｂ−組み換えヒト成長ホルモン注入溶液
キャリアとして、下記の式
【化６】
0005215977.tif 000049
で表されるキャリアで置き換えて、実施例４の方法に従って結腸内注入溶液を調製した。注入溶液は、Ｒ−３５Ｂ−ＤＳで表される。
【００７２】
比較例４Ｃ−組み換えヒト成長ホルモン注入溶液
キャリアとして、下記の式
【化７】
0005215977.tif 000050
で表されるキャリアで置き換えて、実施例４の方法に従って結腸内注入溶液を調製した。注入溶液は、Ｒ−９Ａ−ＤＳで表される。
【実施例５】
【００７３】
実施例５−インビボ組み換えヒト成長ホルモン送達
体重200-250gの雄のSprague-Dawleyラットを２４時間絶食させ、注入の１５分前に、ケタミン（44mg/kg）及びクロロプロマジン（1.5mg/kg）を投与した。ラットに、実施例３の注入溶液を、経口栄養または結腸内点滴注入によって投与した。血清のｒＨＧＨ濃度を測定するために、血液サンプルを尾の動脈から連続的に回収した。血清ｒＨＧＨ濃度は、ｒＨＧＨ免疫アッセイキットによって定量化した。
【００７４】
結果を下記の表３に示す。
【００７５】
比較例５Ａ−インビボ組み換えヒト成長ホルモン送達
注入溶液を比較例３Ａ−３Ｃの注入溶液に換えて、実施例５の方法に従った。結果を下記の表３に示す。
【００７６】
比較例５Ｂ−インビボ上皮小体ホルモン送達
キャリアを含まない活性剤の注入溶液（投与量1mgのｒＨＧＨ／kg（結腸内）または3mgのｒＨＧＨ／kg（経口））を用いて、実施例５の方法に従った。これらの注入溶液は、Ｒ-¢Ｄ-ＤＳ及びＲ-¢Ｅ-ＤＳで表される。結果を下記の表３に示す。
【表３】
0005215977.tif 000051
【実施例６】
【００７７】
実施例６−インビボのインターフェロン送達
50mg/kgのキャリア９及び250μg/kgの50%プロピレングリコール中のインターフェロンを含有する結腸内注入組成物を調製した。ラットに、注入組成物を結腸点滴注入によって投与した。送達は、Biosource, Inc.からのヒトインターフェロン用ELISAアッセイを用いて評価した。血清インターフェロンの平均ピーク濃度は、２６１１±６９５であった。
【００７８】
比較例６Ａ−インビボのインターフェロン送達
1mg/kgのインターフェロンを含みキャリアを含まない注入溶液を、ラットに経口及び結腸点滴注入によって投与した。送達は、実施例６の方法に従って評価した。血清インターフェロンの平均ピーク濃度は、１９５１±１８５７（ＰＯ）、及び７９±１００（ＩＣ）であった。
【実施例７】
【００７９】
実施例７−ヘパリン注入溶液
50mg/kgのキャリア、及び25mg/kgの25%水性プロピレングリコール中のヘパリンを含む結腸内注入組成物、または、300mg/kgのキャリア及び100mg/kgの25%水性プロピレングリコール中のヘパリンを含む経口栄養注入溶液を、キャリア９、３５、４７、５０、５８、６２、６４、６７、７６、９６、１０２、１０９、１１０、１１１、１１７、１２２、１２３、１３９、１４１、１４４、及び１６９で調製した。注入溶液は、Ｈ−キャリア番号−ＤＳで表される。
【００８０】
比較例７Ａ−ヘパリン注入溶液
キャリアを下記式
【化８】
0005215977.tif 000052
【化９】
0005215977.tif 000053
のキャリアに換えて、実施例７の方法に従って比較用の結腸内注入組成物を調製した。
【００８１】
これらの注入溶液は、各々、Ｈ−３５Ａ−ＤＳ、Ｈ−３５Ｂ−ＤＳ、及びＨ−１０９Ａ−ＤＳで表される。
【実施例８】
【００８２】
実施例８−ラットにおけるヘパリンのインビボ評価
実施例７の注入溶液を、絶食させたラットに、経口栄養または結腸点滴注入のいずれかによって投与した。
【００８３】
ケタミン（44mg/kg）の投与に続いて、静脈穿刺によって血液サンプルを回収した。ヘパリン活性は、Henry, J.B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods; Philadelphia, PA; W.B. Saunders (1979)の方法に従って、活性化された部分的トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を用いて測定した。
結果を下記の表４に示す。
【００８４】
比較例８Ａ−ラットにおけるヘパリンのインビボ評価
比較例７Ａの注入溶液を、絶食させたラットに結腸点滴注入によって投与した。実施例８の方法によって、血液サンプルを回収し、ヘパリン活性を測定した。
【００８５】
結果を下記の表４に示す。
【００８６】
比較例８Ｂ−ラットにおけるヘパリンのインビボ評価
25mg/kgのヘパリンを含む結腸内注入溶液、及び100mg/kgのヘパリンを含む経口栄養注入溶液を、絶食させたラットに投与した。これらの注入溶液は、各々、Ｈ-¢Ａ-ＤＳ及びＨ-¢Ｂ-ＤＳで表される。
【００８７】
実施例８の方法によって、血液サンプルを回収し、ヘパリン活性を測定した。
【００８８】
結果を下記の表４に示す。
【表４】
0005215977.tif 000054
【００８９】
上記の特許、特許出願、試験方法、及び刊行物は、それらの全体を、ここに参考として取り込まれる。
【００９０】
上記の詳細な説明から見て、当業者には、本発明の多くの変形例が示唆されるであろう。それらの自明な変形例は、添付する請求の範囲に全て含まれるものとする。