(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式（１）で表されることを特徴とする化合物、その互変異性体、乃至それらの塩。
【化１】
0005283927.tif 000010
【請求項２】
請求項１に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法であって、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、請求項１に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有する微生物を培養し、得られた培養物から請求項１に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を採取することを特徴とする化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法。
【請求項３】
アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、請求項１に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有する微生物が、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１４６５のアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ  ｓｐ．）ＭＫ５７５−ｆＦ５株である請求項２に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法。
【請求項４】
アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、請求項１に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有し、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１４６５のアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ  ｓｐ．）ＭＫ５７５−ｆＦ５株であることを特徴とする微生物。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を有効成分として含むことを特徴とする抗菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌等の幅広い病原性細菌に対し、優れた抗菌活性を有する新規化合物、その製造方法及びその用途、並びに、前記新規化合物の生産菌である新規微生物に関する。
【背景技術】
【０００２】
病原性細菌に起因する感染症に対する治療には、通常、抗生物質等の薬剤の投与による化学療法が行われる。しかしながら、薬剤を汎用することにより、病原性細菌がこれらの薬剤を無毒化する能力を獲得してしまい、薬剤の効かない耐性菌が出現してくるという問題が従来から生じていた。実際に、医療現場を中心として、多くの薬剤耐性菌の存在が問題とされている。
例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）は、化膿性疾患、肺炎、食中毒等の起因菌として知られるが、抗生物質メチシリン等の多くの薬剤に対する耐性を獲得したメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）の出現が臨床上大きな問題となっている。現在、ＭＲＳＡに対する代表的な治療薬としては、バンコマイシン、テイコプラニン、アルベカシン、リネゾリドなどが使用されているが、完全にＭＲＳＡを排除することは一般に困難であるとされており、また、これらのうち、バンコマイシンについては、既にバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）の出現が報告されており、その使用には十分な注意が必要であるとされている（例えば、特許文献１参照）。
このような薬剤耐性菌の問題を克服するために、これらの従来の抗生物質とは異なる化学構造骨格を有し、かつ優れた抗菌活性を有する新たな化合物の開発が、望まれているのが現状である。
【０００３】
また、ヒトのみならず、ヒト以外の動物においても、病原性細菌に起因する感染症は大きな問題となり得、例えば、ウシやブタ等の家畜肺炎などは、畜産業上これを効果的に予防又は治療することが望まれる。そのため、このような家畜肺炎の起因菌に対して優れた抗菌活性を有する新たな化合物の開発も、望まれているのが現状である。
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｉｅｖｅｒｔ  ＤＭ，ｅｔ  ａｌ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｔｏ  Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ  −  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ，２００２．ＭＭＷＲ  Ｊｕｌｙ  ５，２００２；５１：５６５−５６７．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌等の幅広い病原性細菌に対し、優れた抗菌活性を有する新規化合物、その互変異性体、乃至それらの塩、及びそれらの製造方法、並びに、前記新規化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の生産菌である新規微生物、及び前記新規化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を利用した抗菌剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、新規な微生物として、アミコラトプシス属に属する菌株を分離することに成功し、この菌株が、新規な構造骨格を有する抗生物質を産生していることを見出した。本発明者らは、この抗生物質が薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌等の幅広い病原性細菌に対して優れた抗菌活性を有していることを見出し、更に、この抗生物質の化学構造を分析することで、これが新規化合物であることを確認し、本発明の完成に至った。なお、本発明者らは、この新規化合物を「アミコラマイシン（Ａｍｙｃｏｌａｍｉｃｉｎ）」と命名した。
【０００７】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  下記構造式（１）で表されることを特徴とする化合物、その互変異性体、乃至それらの塩である。
【化２】
0005283927.tif 000002
＜２＞  前記＜１＞に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法であって、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、前記＜１＞に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有する微生物を培養し、得られた培養物から前記＜１＞に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を採取することを特徴とする化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法である。
＜３＞  アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、前記＜１＞に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有する微生物が、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１４６５のアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ  ｓｐ．）ＭＫ５７５−ｆＦ５株である前記＜２＞に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法である。
＜４＞  アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、前記＜１＞に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有することを特徴とする微生物である。
＜５＞  受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２１４６５のアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ  ｓｐ．）ＭＫ５７５−ｆＦ５株である前記＜４＞に記載の微生物である。
＜６＞  前記＜１＞に記載の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を有効成分として含むことを特徴とする抗菌剤である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、前記従来における諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌等の幅広い病原性細菌に対し、優れた抗菌活性を有する新規化合物、その互変異性体、乃至それらの塩、及びそれらの製造方法、並びに、前記新規化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の生産菌である新規微生物、及び前記新規化合物、その互変異性体、乃至それらの塩を利用した抗菌剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
（化合物、その互変異性体、乃至それらの塩）
本発明の化合物は、下記構造式（１）で表されることを特徴とする。下記構造式（１）で表される化合物は、本発明者らが分離した新規化合物であり、以下、「アミコラマイシン（Ａｍｙｃｏｌａｍｉｃｉｎ）」と称することがある。
【化３】
0005283927.tif 000003
【００１０】
前記構造式（１）で表される化合物、即ち前記アミコラマイシンの物理化学的性状としては、次の通りである。即ち、
（１）  外観は、白色パウダー状である。
（２）  分子式は、Ｃ４４Ｈ６０Ｃｌ２Ｎ４Ｏ１４で表される。
（３）  高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：負イオンモード）による、実験値は、ｍ／ｚ  ９３７．３３８６（Ｍ−Ｈ）−であり、計算値は、ｍ／ｚ  ９３７．３４０５（Ｃ４４Ｈ５９Ｃｌ２Ｎ４Ｏ１４として）である。
（４）  比旋光度は、［α］Ｄ２３＝−２１．６°（ｃ０．５，メタノール）、である。
（５）  赤外線吸収スペクトルは、図１に示す通りである。
（６）  紫外線吸収スペクトルは、図２に示す通りである。
（７）  プロトン核磁気共鳴スペクトルとして、６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で３０℃にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは、図３に示す通りである。
（８）  炭素１３核磁気共鳴スペクトルとして、１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で３０℃にて測定した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、図４に示す通りである。
（９）  薄層クロマトグラフィーとして、シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製）の薄層クロマトグラフィーでは、展開溶媒としてクロロホルム：メタノール（９：１、容量比）を用いて展開したときのＲｆ値は、０．３１である。
【００１１】
化合物が、前記構造式（１）で表される構造を有するか否かは、適宜選択した各種の分析方法により確認することができ、例えば、前記プロトン核磁気共鳴スペクトル、前記炭素１３核磁気共鳴スペクトル、前記赤外部吸収スペクトル、前記マススペクトル等の分析を行うことにより、確認することができる。
【００１２】
なお、前記アミコラマイシンは互変異性を有しており、したがって、前記アミコラマイシンにはその互変異性体も含まれる。前記アミコラマイシンの互変異性体の構造式としては、例えば、下記に示す４種の構造式などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。前記アミコラマイシンは、このような数種類の構造パターンをとり得、ある一定の状態では固定されていない状態で存在しているものと考えられる。
【化４】
0005283927.tif 000004
【００１３】
そのため、前記アミコラマイシンは、例えば、前記プロトン核磁気共鳴スペクトル、前記炭素１３核磁気共鳴スペクトル等の分析を行った際に、図３、図４とは多少異なるチャートを示す場合がある。ただし、前記構造式（１）で表されるような構造を有する化合物が、実際には数種類の構造パターンをとり得、ある一定の状態で固定されていないことは、当業者であれば容易に把握ができる事項であり、そのため、例えば前記プロトン核磁気共鳴スペクトル、前記炭素１３核磁気共鳴スペクトル等におけるチャートが、多少異なる状態を示した場合であっても、当業者であれば前記アミコラマイシンを、容易に同定することが可能である。
【００１４】
また、前記アミコラマイシンは、塩の状態であってもよい。前記塩としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ナトリウム、カリウム等とのアルカリ金属塩；カルシウム、マグネシウム等とのアルカリ土類金属塩；メチルアミン、エチルアミン、ジエタノールアミン等との有機アミン塩；などが挙げられる。
【００１５】
前記アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩は、前記アミコラマイシンの生産菌から得られたものであってもよいし、化学合成により得られたものであってもよい。中でも、前記アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩は、後述する本発明の、化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法により、得られることが好ましい。
【００１６】
前記アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩は、後述する試験例１〜４に示されるように、薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌を含む幅広いグラム陽性細菌及び陰性細菌に対して優れた抗菌活性を有するものである。そのため、前記アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩は、例えば、後述する本発明の抗菌剤の有効成分として、好適に利用可能である。
【００１７】
（化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法）
本発明の化合物、即ちアミコラマイシン（Ａｍｙｃｏｌａｍｉｃｉｎ）、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法は、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有する微生物を培養し、得られた培養物からアミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩を採取することを特徴とする。なお、以下、微生物の培養により得られるアミコラマイシンを、「抗生物質アミコラマイシン」と称することがある。
【００１８】
即ち、抗生物質アミコラマイシンの製造は、抗生物質アミコラマイシンを生産する生産菌（以下、単に「アミコラマイシン生産菌」と称することがある）を栄養培地中に接種し、抗生物質アミコラマイシンの生産に良好な温度で培養することによって行われ、これにより抗生物質アミコラマイシンを含む培養物が得られる。
このような目的に用いる栄養培地としては、放線菌の培養に利用しうるものが使用される。栄養源としては、例えば、市販されている大豆粉、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、硫酸アンモニウム等の窒素源が使用できる。また、トマトペースト、グリセリン、でん粉、グルコース、ガラクトース、デキストリン等の炭水化物、或いは脂肪などの炭素源が使用できる。さらに食塩、炭酸カルシウム等の無機塩を培地に添加して使用することができる。その他、必要に応じて微量の金属塩を培地に添加して使用することができる。これらの材料は、抗生物質アミコラマイシンの生産菌が利用し、抗生物質アミコラマイシンの生産に役に立つものであればよく、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。
【００１９】
抗生物質アミコラマイシンの生産には、アミコラトプシス属に属し、抗生物質アミコラマイシンの生産能を有する微生物が使用される。具体的には、本発明者らの分離したアミコラトプシス・エスピーＭＫ５７５−ｆＦ５株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２１４６５、詳細は後述する本発明の微生物の項目に記す）が、抗生物質アミコラマイシンを生産できることが本発明者らによって明らかにされている。また、抗生物質アミコラマイシンを生産できるその他の菌株についても、抗生物質生産菌の単離の常法によって、自然界より分離することが可能である。また、前記アミコラトプシス・エスピーＭＫ５７５−ｆＦ５株を含め、抗生物質アミコラマイシンの生産菌を、放射線照射やその他の変異処理に供することにより、抗生物質アミコラマイシンの生産能を高めることも可能である。さらに、遺伝子工学的手法による抗生物質アミコラマイシンの生産も可能である。
【００２０】
抗生物質アミコラマイシン生産のための種母培地としては、例えば、寒天培地上、アミコラマイシン生産菌の斜面培養から得た生育物を使用することができる。抗生物質アミコラマイシンの製造に当たっては、アミコラマイシン生産菌を適当な培地で好気的に培養することが好ましく、その培養液から目的のものを採取するためには、常用の手段を用いることができる。培養温度としては、アミコラマイシン生産菌の発育が実質的に阻害されずに、抗生物質アミコラマイシンを生産しうる範囲であれば、特に制限はなく、使用する生産菌に応じて適宜選択することができるが、中でも、２５〜３５℃の範囲内の温度が好ましい。
【００２１】
例えば、前記アミコラトプシス・エスピーＭＫ５７５−ｆＦ５株による抗生物質アミコラマイシンの生産は、通常は３〜９日間で最高に達するが、一般に充分な抗菌活性が培地に付与されるまで続けることが好ましい。この培養液中の抗生物質アミコラマイシンの力価の経時変化は、例えば、ＨＰＬＣ法や、スタフィロコッカス・アウレウス等を被検菌とする円筒平板法等により測定することができる。
【００２２】
前記製造方法においては、得られた培養物から抗生物質アミコラマイシンを採取するが、採取法としては、微生物の生産する代謝物を採取するのに用いられる手段を適宜利用することができる。例えば、水と混ざらない溶媒による抽出の手段、各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する手段、ゲルろ過、向流分配を利用したクロマトグラフィー等を単独又は組み合わせて利用し、抗生物質アミコラマイシンを採取することができる。また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や菌体破砕による溶出法により、抗生物質アミコラマイシンを菌体から抽出し、上記と同様に単離精製して採取することができる。
以上のようにして前記製造方法を行うことができ、これにより、抗生物質アミコラマイシン（アミコラマイシン）、乃至その互変異性体を得ることができる。
また、前記アミコラマイシン、乃至その互変異性体は酸性物質であり、前記アミコラマイシン、乃至その互変異性体の塩は、例えば、製薬学的に許容できるアルカリ金属等の各種金属、若しくは第４級アンモニウム塩などの有機塩基と、通常公知の方法を用いて製造することができる。
【００２３】
（微生物）
本発明の微生物は、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属に属し、前記した本発明の化合物、即ちアミコラマイシン（Ａｍｙｃｏｌａｍｉｃｉｎ）、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有することを特徴とする。前記微生物は、アミコラトプシス属に属し、アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩を生産する能力を有し、そのために、前記した本発明の化合物、その互変異性体、乃至それらの塩の製造方法において、アミコラマイシン生産菌として使用され得る微生物であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００２４】
このような微生物の中でも、特に、平成８年５月、財団法人微生物化学研究会  微生物化学研究センターにおいて、宮城県仙台市の土壌より分離された放線菌で、ＭＫ５７５−ｆＦ５の菌株番号が付された微生物を使用することが好ましい。前記ＭＫ５７５−ｆＦ５株の菌学的性状は、以下の通りである。
【００２５】
ｌ．形態
基生菌糸はよく分技し、ジグザグ状を呈する。また分断が認められる。気菌糸は着生する場合としない場合がある。着生した場合、気菌糸は比較的長く、直状或いは不規則な曲状で、円筒形の胞子状に分断する。その表面は平滑で、大きさは約０．４〜０．６ｘ０．８〜２．２ミクロンである。又、気菌糸が絡まり合い球状を呈する場合がある。輪生技、菌束糸、胞子のう及び運動性胞子は認められない。
【００２６】
２．各種培地における生育状態
色の記載について［  ］内に示す標準は、コンティナー・コーポレーション・オプ・アメリカのカラー・ハーモニー・マニュアル（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  の  ｃｏｌｏｒ  ｈａｒｍｏｎｙ  ｍａｎｕａｌ）を用いた。
（１）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、２７℃培養）
発育はうす黄［２  ｇｃ，Ｂａｍｂｏｏ］を呈し、白の気菌糸をうっすら着生する場合と着生しない場合がある。溶解性色素は認められない。
（２）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、２７℃培養）
発育はうす黄［２  ｇｃ，Ｂａｍｂｏｏ］を呈し、白の気菌糸をうっすら着生する場合と着生しない場合がある。溶解性色素は認められない。
（３）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
発育はうす黄［２  ｅａ，Ｌｔ  Ｗｈｅａｔ］〜にぶ黄［３  ｎｃ，Ａｍｂｅｒ］を呈し、白の気菌糸をわずかに着生する場合がある。溶解性色素は認められない。
（４）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培地５、２７℃培養）
発育はにぶ黄だいだい［３  ｌｃ，Ａｍｂｅｒ］を呈し、うすだいだい［４  ｅａ，Ｌｉｇｈｔ  Ａｐｒｉｃｏｔ］の気菌糸を着生する場合と着生しない場合がある。溶解性色素は認められない。
（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７、２７℃培養）
発育はうす黄［３  ｃａ，Ｐｅａｒｌ  Ｐｉｎｋ］〜にぶ黄だいだい［３  ｌｃ，Ａｍｂｅｒ］を呈し、うすだいだい［４  ｃａ，Ｆｒｅｓｈ  Ｐｉｎｋ］の気菌糸を着生する場合と着生しない場合がある。溶解性色素は認められない。
（６）スクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）
無色〜うす黄だいだい［３  ｅａ，Ｌｔ  Ｍｅｌｏｎ  Ｙｅｌｌｏｗ］の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生する場合と着生しない場合がある。溶解性色素は認められない。
【００２７】
３．生理的性質
（１）生育温度範囲
グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース  １．０％、Ｌ−アスパラギン  ０．０５％、リン酸水素二カリウム  ０．０５％、ひも寒天  ３．０％、ｐＨ７．０）を用い、１０℃、２０℃、２４℃、２７℃、３０℃、３７℃、４５℃及び５０℃の各温度で試験した結果、１０℃、４５℃、５０℃での生育は認められず、２０℃〜３７℃の範囲で生育した。生育至適温度は３０℃付近である。
（２）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地、ＩＳＰ−培地４、２７℃培養）
２１日間の培養で、陰性である。
（３）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・プロス、ＩＳＰ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天培地、ＩＳＰ−培地６；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−培地７；いずれも２７℃培養）
いずれの培地においても陰性である。
（４）炭素源の利用性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培地、ＩＳＰ−培地９；２７℃培養）
Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース、スクロース、イノシトール、ラムノース、ラフィノース及びＤ−マンニトールを利用して発育する。
（５）硝酸塩の還元反応（０．１％  硝酸カリウム含有ペプトン水、ＩＳＰ−培地８、２７℃培養）
陽性である。
【００２８】
４．菌体成分
（１）細胞壁組成
メソ型の２，６−ジアミノピメリン酸を含有する。
（２）全菌体中の還元糖
アラビノース、ガラクトースを含み、Ａ型である。
（３）イソプレノイド・キノン
主要なメナキノンとしてＭＫ−９（Ｈ４）及び少量のＭＫ−１０（Ｈ４）を含有する。
（４）リン脂質
ＰＩＩ型（ホスファチジルエタノールアミンを含み、ホスファチジルコリン及び未知のグルコサミン含有リン脂質を含まない）。
（５）ミコール酸
含有しない。
【００２９】
５．１６ＳｒＲＮＡ遺伝子解析
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列（１４５５ｎｔ）を決定し、国際塩基配列データベース（ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ）による相同性検索を行った。その結果、ＭＫ５７５−ｆＦ５株の塩基配列は以下に示したとおり、アミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ）属放線菌の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子と高い相同性を示した。Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｋｅｎｔｕｃｋｙｅｎｓｉｓ（９９．１％）、Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｒｉｆａｍｙｃｉｎｉｃａ（９９．０３％）、Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ（９８．９％）、Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｂａｌｈｉｍｙｃｅｔｉｃａ（９８．８２％）等である。なお、カッコ内は塩基配列の相同値を表記した。
【００３０】
以上の性状を要約すると、ＭＫ５７５−ｆＦ５株の基生菌糸はジグザグ状を呈し、分断する。気菌糸は直状或いは不規則な曲状で、円筒形の胞子状に分断する。輪生技、菌束糸、胞子のう及び運動性胞子は認められない。種々の培地で、発育は無色〜黄だいだいを呈する。白〜うすだいだいの気菌糸を着生する場合と着生しない場合がある。溶解性色素は認められない。生育至適温度は、３０℃付近である。メラニン様色素の生成及びスターチの水解性は陰性、硝酸塩の還元反応は陽性である。
ＭＫ５７５−ｆＦ５株の菌体成分は、全菌体加水分解物中にメソ型の２，６−ジアミノピメリン酸、アラビノース、ガラクトースを含み、細胞壁タイプＩＶ型、全菌体の還元糖はＡ型を示した。また、ミコール酸は含有せず、リン脂質はＰＩＩ型（ホスファチジルエタノールアミンを含み、ホスファチジルコリン及び未知のグルコサミン含有リン脂質を含まない）、主要なメナキノンはＭＫ−９（Ｈ４）であった。
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列を公知菌株のデータと比較したところ、アミコラトプシス属放線菌の塩基配列と高い相同性を示した。
【００３１】
これらの性状により、前記ＭＫ５７５−ｆＦ５株はアミコラトプシス（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ，文献，Ｉｎｔｅｒｅｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，３６巻，２９−３７頁，１９８６年）属に属すると考えられた。そこで、前記ＭＫ５７５−ｆＦ５株をアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ  ｓｐ．）ＭＫ５７５−ｆＦ５株とした。なお、前記ＭＫ５７５−ｆＦ５株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託申請し、平成１９年１２月１２日、ＦＥＲＭ  Ｐ−２１４６５として受託された。
【００３２】
（抗菌剤）
本発明の抗菌剤は、前記した本発明の化合物、即ちアミコラマイシン（Ａｍｙｃｏｌａｍｉｃｉｎ）、その互変異性体、乃至それらの塩を有効成分として含み、必要に応じて適宜その他の成分を含む。
【００３３】
前記抗菌剤中の、アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記抗菌剤は、アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩そのものであってもよい。
【００３４】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、例えば、薬理学的に許容され得る担体の中から目的に応じて適宜選択することができ、具体例としては、エタノール、水、デンプンなどが挙げられる。前記抗菌剤中の、前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、アミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩の効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３５】
前記抗菌剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、粉末状、カプセル状、錠剤状、液状等の剤型とすることができる。これらの剤型の前記抗菌剤は、常法に従い製造することができる。
前記抗菌剤の個体への投与方法としては、特に制限はなく、例えば、前記抗菌剤の剤型などに応じて適宜選択することができ、経口又は非経口で投与することができる。
前記抗菌剤の投与量としては、特に制限はなく、投与対象個体の年齢、体重、体質、症状、他の成分を有効成分とする医薬の投与の有無など、様々な要因を考慮して適宜選択することができる。
前記抗菌剤の投与対象となる動物種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヒト、サル、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、トリなどが挙げられる。
【００３６】
前記抗菌剤は、有効成分としてアミコラマイシン、その互変異性体、乃至それらの塩を含むことから、後述する試験例１〜４に示されるように、薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌を含む幅広いグラム陽性細菌及び陰性細菌に対して優れた抗菌活性を有するものである。したがって、前記抗菌剤は、後述する試験例１〜４に示されるような薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌等の病原性細菌に起因する感染症の予防又は治療に、好適に利用可能である。なお、前記抗菌剤は、単独で使用されてもよいし、他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用されてもよい。また、前記抗菌剤は、他の成分を有効成分とする医薬中に、配合された状態で使用されてもよい。
【実施例】
【００３７】
以下に実施例及び試験例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例及び試験例に何ら限定されるものではない。また、以下の実施例及び試験例中、「％」は、特に明記のない限り「質量％」を表す。
【００３８】
（実施例１：アミコラマイシン（Ａｍｙｃｏｌａｍｉｃｉｎ）の製造）
寒天斜面培地に培養したアミコラトプシス・エスピー（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ  ｓｐ．）ＭＫ５７５−ｆＦ５株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２１４６５として寄託）を、ガラクトース  ２％、デキストリン  ２％、グリセリン  １％、バクトソイトン（ディフコ社製）  １％、コーン・スティープ・リカー  ０．５％、硫酸アンモニウム  ０．２％、炭酸カルシウム  ０．２％を含む液体培地（ｐＨ７．４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｌ容）に１１０ｍｌずつ分注して常法により１２０℃で２０分滅菌した培地に接種した。その後に３０℃で４日間回転振とう培養し、種母培養液を得た。
【００３９】
グリセリン  ０．５％、デキストリン  ０．５％、バクトソイトン（ディフコ社製）  ０．２５％、酵母エキス（日本製薬製）  ０．０７５％、硫酸アンモニウム  ０．０５％、炭酸カルシウム  ０．０５％（ｐＨ７．４に調整）の組成の培地１００リットルをタンク培養槽（２００リットル容）中に調製し、さらに滅菌し、生産培地とした。この生産培地に、上記の種母培養液の２体積％量を接種し、２７℃、通気量１００リットル、２００ｒｐｍの培養条件で４日間タンク培養した。
【００４０】
このようにして得られた培養液を遠心分離して、培養ろ液８０リットルと菌体２．５Ｋｇを分離した。つづいて、菌体に１２リットルのメタノールを加えてよく撹拌し、菌体からアミコラマイシンをメタノールで抽出した。これを減圧下でメタノールを除き、アミコラマイシンを含む菌体抽出液２リットルを得た。菌体抽出液２リットルに酢酸エチル６リットルを加え、十分撹拌し、アミコラマイシンを酢酸エチル抽出した。得られた酢酸エチル６リットルは、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮乾固して、アミコラマイシンを含む粗精製物１８ｇを得た。このアミコラマイシンを含む粗精製物の１８ｇに、ヘキサンを２００ミリリットル加え、ヘキサン可溶成分を除去し、アミコラマイシンを含むヘキサン不溶画分を３．３ｇ得た。このヘキサン不溶画分３．３ｇをメタノールで溶解して、セファデックスＬＨ−２０（内径２８ｍｍ×４５０ｍｍ、ファルマシア  バイオテク社製）カラムにのせ、クロマトグラフィーを行った。１フラクションを８ｇずつ分画すると、活性画分はフラクション１２から１５に溶出され、これを集めて減圧下で濃縮乾固し、１５８４ｍｇのアミコラマイシンを含む粗精製物を得た。この粗精製物１５８４ｍｇは、少量のメタノールに溶解し、その溶液にキーゼルグール（メルク社製）５０ｍｌを加え、溶媒を減圧下で濃縮乾固した。このキーゼルグールを、シリカゲルカラム（内径３２ｍｍ×長さ１７５ｍｍ、メルク社製）の上にのせ、クロマトグラフィーを行った。展開溶媒としてクロロホルム：メタノール：水＝１００：０：０（２００ミリリットル）、９５：５：０（４５０ミリリットル）、１：９５：５：０．２５（４５０ミリリットル）、１：９０：１０：０．５（４５０ミリリットル）で順次展開を行った。１フラクションを１８ｇずつ分画すると、アミコラマイシンはフラクション７６から１０３に溶出され、これを集めて減圧下で濃縮乾固し、８２７ｍｇの純粋なアミコラマイシンを得た。
【００４１】
得られたアミコラマイシンの物理化学的性状を測定したところ、以下の通りであり、これらのことから、アミコラマイシンが、下記構造式（１）で表される構造を有する新規化合物であることが確認された。また、このアミコラマイシンは互変異性を有していた。
（１）  外観は、白色パウダー状である。
（２）  分子式は、Ｃ４４Ｈ６０Ｃｌ２Ｎ４Ｏ１４で表される。
（３）  高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：負イオンモード）による、実験値は、ｍ／ｚ  ９３７．３３８６（Ｍ−Ｈ）−であり、計算値は、ｍ／ｚ  ９３７．３４０５（Ｃ４４Ｈ５９Ｃｌ２Ｎ４Ｏ１４として）である。
（４）  比旋光度は、［α］Ｄ２３＝−２１．６°（ｃ０．５，メタノール）、である。
（５）  赤外線吸収スペクトルは、図１に示す通りである。
（６）  紫外線吸収スペクトルは、図２に示す通りである。
（７）  プロトン核磁気共鳴スペクトルとして、６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で３０℃にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは、図３に示す通りである。
（８）  炭素１３核磁気共鳴スペクトルとして、１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で３０℃にて測定した炭素１３ＮＭＲスペクトルは、図４に示す通りである。
（９）  薄層クロマトグラフィーとして、シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク社製）の薄層クロマトグラフィーでは、展開溶媒としてクロロホルム：メタノール（９：１、容量比）を用いて展開したときのＲｆ値は、０．３１である。
【化５】
0005283927.tif 000005
【００４２】
また、得られたアミコラマイシンの抗菌活性を、以下の試験例１〜４で確認した。
【００４３】
（試験例１）
薬剤耐性菌（メチシリン耐性菌、バンコマイシン耐性菌等）を含む各種の微生物に対するアミコラマイシンの抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラ・ヒントン寒天培地上で倍数希釈法により測定した。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定結果を表１に示す。
【００４４】
（試験例２）
薬剤耐性菌（ペニシリン耐性肺炎球菌、マクロライド耐性肺炎球菌、ペニシリン耐性インフルエンザ菌等）を含む各種の微生物に対するアミコラマイシンの抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、５体積％緬羊血液添加ミュラ・ヒントン寒天培地上、５体積％ＣＯ２雰囲気下で倍数希釈法により測定した。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定結果を表２に示す。
【００４５】
（試験例３）
家畜肺炎起因菌に対するアミコラマイシンの抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、ブレイン・ハート・インヒュージョン寒天培地上で倍数希釈法により測定した。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定結果を表３に示す。
【００４６】
（試験例４）
表３に示されたもの以外の家畜肺炎起因菌に対するアミコラマイシンの抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、５体積％フィールズ・エンリッチメント添加ミュラ・ヒントン寒天培地上、５体積％ＣＯ２雰囲気下で倍数希釈法により測定した。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定結果を表４に示す。
【００４７】
【表１】
0005283927.tif 000006
【００４８】
【表２】
0005283927.tif 000007
【００４９】
【表３】
0005283927.tif 000008
【００５０】
【表４】
0005283927.tif 000009
【００５１】
表１〜４の結果から、アミコラマイシンは、薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌を含む幅広いグラム陽性細菌及び陰性細菌に対して優れた抗菌活性を有していることが示された。また、これらの中でも、ＭＲＳＡを含むＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ＶＲＥを含むＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ／ｆａｅｃｉｕｍ、マクロライド耐性菌及びペニシリン耐性菌を含むＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、ペニシリン耐性菌を含むＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｕｌｅｎｚａｅ、Ｍａｎｎｈｅｉｍｉａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、及び、Ｈｉｓｔｏｐｈｉｌｕｓ ｓｏｍｎｉに対して、特に優れた抗菌活性を有していることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明の新規化合物（アミコラマイシン）、その互変異性体、乃至それらの塩は、薬剤耐性菌、家畜肺炎起因菌等の幅広い病原性細菌に対して優れた抗菌活性を有することから、新たな抗菌剤として好適に利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、アミコラマイシンのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルのチャートである。縦軸：透過率（％）、横軸：波数（ｃｍ−１）。
【図２】図２は、アミコラマイシンのメタノール中での紫外線吸収スペクトルのチャートである。縦軸：吸光度（Ａｂｓ）、横軸：波長（ｎｍ）。
【図３】図３は、アミコラマイシンの重メタノール中で３０℃にて測定した６００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。
【図４】図４は、アミコラマイシンの重メタノール中で３０℃にて測定した１５０ＭＨｚにおける炭素１３ＮＭＲスペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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