(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物（１）：
【化１】
0005238493.tif 000016
を含有する組成物から、７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンを製造する方法であって、化合物（１）から化合物（２）：
【化２】
0005238493.tif 000017
を生成し、化合物（２）から、化合物（３）：
【化３】
0005238493.tif 000018
を生成し、化合物（３）から、化合物（４）：
【化４】
0005238493.tif 000019
を生成し、化合物（４）から、化合物（５）：
【化５】
0005238493.tif 000020
を生成する工程において、化合物（２）〜（５）より選ばれる少なくとも１つを触媒存在下で水素源として水素またはギ酸もしくはその塩を用いて接触還元することを特徴とする、前記７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法。
【請求項２】
化合物（５）を接触還元することを特徴とする、請求項１に記載の７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法。
【請求項３】
化合物（１）を含有する組成物が、化合物（６）：
【化６】
0005238493.tif 000021
との混合物である、請求項１または２に記載の７−エチル−１０−[４−(1−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法。
【請求項４】
化合物（１）を含有する組成物がクサミズキ抽出物である、請求項１〜３のいずれかに記載の７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンおよびその誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
カンプトテシン（以下、「ＣＰＴ」と記載する）は、中国原産の喜樹(Camptotheca acuminata, Nyssaceae)等の天然素材から単離される５環式アルカロイドであり、これを出発化合物として製造される抗腫瘍活性を有する種々の有用な半合成誘導体が、本発明者らによる探索研究によって提供されてきた。
カンプトテシンから誘導される７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシン（以下、「ＳＮ−３８Ｂ−１１」と記載する）の塩酸塩三水和物であるＣＴＰ−１１は、高い抗腫瘍活性を有し、かつ毒性の少ない化合物であって、現在、ＣＰＴ−１１は抗腫瘍剤（一般名；塩酸イリノテカン）として広く販売されている。【０００３】
ところが、原材料である喜樹等の天然素材から得られるＣＰＴの量は極めてわずかであるため、有用な誘導体であるＣＰＴ−１１の需要が高まるにつれて、植樹等の原材料調達手段を講じているにも拘わらず、ＣＰＴを充分量供給することが困難になるものと予想される。また、ＣＰＴ−１１は天然由来の抽出物より単離・精製後、製造されるものであるため、喜樹、クサミズキ（Nothapodytes foetida）等の原材料の相違から異なる不純物を含み得るものであり、クサミズキを原料とする場合、化合物（１）：
【化１】
0005238493.tif 000002
で表される１８，１９−デヒドロカンプトテシンを、カンプトテシンに対し数％含む抽出物として得られる（特許文献１、非特許文献１参照）。１８，１９−デヒドロカンプトテシン等のビニル基を有するビニル体は、その後のＣＰＴ−１１の製造工程においても下記のようにビニル基が残存し、いずれの工程においても、ビニル体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー等によって完全に除去することはできず、クサミズキを原料とする場合、純度の高いＣＰＴ−１１を得ることは困難であった。【０００４】
【化２】
0005238493.tif 000003
一方、全合成によれば不純物の問題は解消するが、全合成による製法は、設備、収率及びコスト等の面で問題が多く、実用化までは至っていないのが現状である。【０００５】
【特許文献１】特開昭６４−６１４８２号公報
【非特許文献１】R. Aiyama, et al, Phytochemistry, Vol. 27, No. 11,pp. 3663-3664, 1988
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明の課題は、１８，１９−デヒドロカンプトテシンを含むカンプトテシン組成物から、ビニル体を含まない７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンを製造する方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討を進める中で、カンプトテシンから７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンを製造する工程で得られる中間体のうち、いずれかの中間体を一定条件下で還元することにより、カンプトテシンや１８，１９−デヒドロカンプトテシン等の複素環内の二重結合やカルボニル基を還元せずに、ビニル基のみを還元し、最終的にビニル体を含まない７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンを製造し得ることを見いだし、発明を完成するに至った。【０００８】
すなわち、本発明は、化合物（１）：
【化３】
0005238493.tif 000004
を含有する組成物から、７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンを製造する方法であって、化合物（１）から化合物（２）：
【化４】
0005238493.tif 000005
を生成し、化合物（２）から、化合物（３）：
【化５】
0005238493.tif 000006
を生成し、化合物（３）から、化合物（４）：
【化６】
0005238493.tif 000007
を生成し、化合物（４）から、化合物（５）：
【化７】
0005238493.tif 000008
を生成する工程において、化合物（１）〜（５）より選ばれる少なくとも1つを接触還元することを特徴とする、前記７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法に関する。【０００９】
また本発明は、化合物（５）を接触還元することを特徴とする、前記７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法に関する。
さらに本発明は、化合物（１）を含有する組成物が、化合物（６）：
【化８】
0005238493.tif 000009
との混合物である、前記７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法に関する。
また本発明は、化合物（１）を含有する組成物がクサミズキ抽出物である、前記７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法に関する。
さらにまた、本発明は、触媒存在下で水素源として水素又はギ酸もしくはその塩を用いて接触還元する、前記７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の方法によれば、今までＣＰＴ−１１の原料として使用することが困難であったクサミズキ抽出物等の１８，１９−デヒドロカンプトテシンを含むカンプトテシン組成物を、７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造に使用することが可能となり、原材料調達や製品の純度向上の観点で極めて優れた効果を奏するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下に本発明による７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンの製造方法について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
１８，１９−デヒドロカンプトテシンを含むカンプトテシン組成物から、以下の工程により７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシンを製造する。
【化９】
0005238493.tif 000010
【００１２】
出発原料であるＣＰＴおよび各工程の反応条件等については、本明細書に組み込まれる特公昭６２−４２９１４号公報、特公昭６２−４７１９３号公報、特公平３−６８００７号公報およびＷＯ０１／０７０７４７号公報が参照される。
本発明の方法において、上記化合物（１）〜（５）のいずれかの化合物を接触還元することにより、最終的にビニル体を含まない７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−1−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシン、およびその塩酸塩三水和物であるＣＰＴ−１１を製造することができる。
化合物（５）は、化合物（１）〜（４）と比較すると反応溶媒への溶解性が高く、使用する反応溶媒の量が少なくてすむため、高濃度で接触還元反応を行うことができ、同量の触媒を用いた場合に反応効率が良く、より短時間で接触還元反応を終了することができるため、特に化合物（５）を還元させることが好ましい。【００１３】
接触還元は、触媒存在下、水素源として水素またはギ酸もしくはその塩を用いて行うことができる。用いられる触媒として、パラジウム、白金、ロジウム、ルテニウム等の白金族触媒、もしくはニッケル等のニッケル系触媒またはこれらの塩が挙げられ、好ましくはパラジウム、ロジウム、ルテニウム、ニッケルであり、特にパラジウムが好ましい。また、水素源として用いることができるギ酸塩は、ギ酸アンモニウム、ギ酸トリエチルアンモニウム等が挙げられ、好ましくはギ酸アンモニウムである。
ギ酸アンモニウムの使用が、安全性、取り扱い等の観点から最も好ましい。
本方法は、１８，１９−デヒドロカンプトテシンを含むカンプトテシン組成物であればいずれにも使用可能であるが、クサミズキから抽出された１８，１９−デヒドロカンプトテシン含有組成物に好適である。
［実施例］【００１４】
さらに本発明について、実施例により詳細に説明する。【００１５】
実施例１
７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシ−１８，１９−デヒドロカンプトテシン（１８，１９−デヒドロＳＮ−３８Ｂ−１１、化合物（５））を含む７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシン（ＳＮ−３８Ｂ−１１）の接触還元【００１６】
クサミズキ（Nothapodytes foetida）より単離精製した、約３％の１８，１９−デヒドロカンプトテシン（化合物（１））を含むカンプトテシンをＳＮ−３８Ｂ−１１の製造工程に沿って製造し、１８，１９−デヒドロＳＮ−３８Ｂ−１１（化合物（５））を含むＳＮ−３８Ｂ−１１を得る。
なお、単離精製により得られたＳＮ−３８Ｂ−１１中のビニル体（化合物（５））の含量は以下のとおりである。【００１７】
【表１】
0005238493.tif 000011
【００１８】
［試験方法］
単離精製により得たビニル体（化合物（５））含有ＳＮ−３８Ｂ−１１（１００ｍｇ）を水添用反応容器（１００ｍＬ）中で２０ｍＬのジオキサン−エタノール混液（１：１）に溶解し、これに約１０ｍｇの１０％Ｐｄ−Ｃを加える。混合物の約１．２ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、ろ液の１ｍＬを正確に量り、溶解液[MeOH-H2O-0.1N  HCl（５：４：１）]を加えて正確に１０ｍＬとし、開始時の試料溶液とする。反応容器を減圧下脱気し、水素雰囲気下振盪する。３０，６０，１２０及び２４０分後の試料の約１．２ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、ろ液の１ｍＬを正確に量り、溶解液を加えて正確に１０ｍＬとし、各経時の試料溶液とする。各試料溶液の２０μＬにつき下記のＨＰＬＣ操作条件で、反応混合物中のビニル体（化合物（５））の含量を測定する。【００１９】
［ＨＰＬＣ操作条件］
Column: Inertsil ODS2, 5μm, 4.6mm×25cm
Eluent: 20mM PBS(pH3.5)-MeOH-MeCN(3.5：1:1)
Detect: 254nm【００２０】
【表２】
0005238493.tif 000012
【００２１】
以上の反応により、いずれのサンプルについても２４０分後にはビニル体（化合物（５））は検出されなかった。【００２２】
実施例２
７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−1−ピペリジノ]カルボニルオキシ−１８，１９−デヒドロカンプトテシン（１８，１９−デヒドロＳＮ−３８Ｂ−１１、化合物（５））を含む７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシン（ＳＮ−３８Ｂ−１１）の接触還元【００２３】
水素ガスにかわり、ギ酸アンモニウムを水素源として接触還元を行った。
［試験方法］
粗ＳＮ−３８Ｂ−１１をメタノール（６０ｖ／ｗ）、ジオキサン（１５ｖ／ｗ）に加え溶解し、ろ過市水（約０．２ｗ／ｗ）で懸濁したＰｄ−Ｃ（１０％）（Ｄｒｙ換算０．０５、０．０５、０．１０ｗ／ｗ）を加えた後、ギ酸アンモニウム（０．５０、１．００、１．００ｗ／ｗ）を加え反応し、１，２，３及び４時間後の反応混合物中のビニル体（化合物（５））含量をＨＰＬＣ法により調べた。結果を表３に示す。【００２４】
［ＨＰＬＣ操作条件］
Column: Chemcosorb 5−ODS-H, 4.6mmID×150mm
Eluent: ０．１％(ｖ／ｖ)リン酸水溶液／ＣＨ３ＣＮ（４／１）
Detect: 254nm
温度： ４０℃
流量： １ｍＬ／ｍｉｎ【００２５】
【表３】
0005238493.tif 000013
【００２６】
Ｐｄ−Ｃ（１０％）０．１０ｗ／ｗ（粗ＳＮ−３８Ｂ−１１に対して）、ギ酸アンモニム１．００ｗ／ｗを用いることにより、反応は６０〜１８０分で完結した。【００２７】
実施例３
１８，１９−デヒドロカンプトテシン（１８，１９−デヒドロＣＰＴ、化合物（１））を含むカンプトテシン（ＣＰＴ）の接触還元
クサミズキより単離した、１８，１９−デヒドロカンプトテシン（化合物（１））を含むカンプトテシンからＳＮ−３８Ｂ−１１の製造工程に沿ってＳＮ−３８Ｂ−１１を製造し、中間体１８，１９−デヒドロＳＮ−２２（化合物（２））、１８，１９−デヒドロＳＮ−２２ａ（化合物（３））及び１８，１９−デヒドロＳＮ−３８（化合物（４））を含むＳＮ−２２、ＳＮ−２２ａ及びＳＮ−３８を得る。
なお、試験に用いたＣＰＴ、ＳＮ−２２、ＳＮ−２２ａ及びＳＮ−３８中のビニル体（化合物（１）、化合物（２）、化合物（３）及び化合物（４））の含量は表４のとおりである。【００２８】
［試験方法］
ビニル体（化合物（１））含有ＣＰＴ（１００ｍｇ）をナス型フラスコ中で２００ｍＬのジオキサン−メタノール混液（１：１）に溶解し、これに約２０ｍｇの１０％Ｐｄ−Ｃを加える。混合物の約１ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、開始時の試料溶液とする。反応容器を減圧下脱気し、水素雰囲気下室温で激しく攪拌する。１、３及び５時間後の試料の約１ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、各経時の試料溶液とする。各試料溶液の２０μＬにつき、下記のＨＰＬＣ操作条件で、反応混合物中のビニル体（化合物（１））の含量を測定する。
試験結果を表４に示す。５時間後には、ビニル体（化合物（１））は検出されなかった。【００２９】
［ＨＰＬＣ操作条件］
Column: Chemcosorb 5-ODS-H, 4.6mmID×150mm
温度: ４０℃
Eluent: メタノール／０．１％（ｖ／ｖ）リン酸水溶液（５３／４７）混液
Detect: 254nm
流量: ０．８ｍＬ／ｍｉｎ【００３０】
実施例４
７−エチル−１８，１９−デヒドロカンプトテシン（１８，１９−デヒドロＳＮ−２２、化合物（２））を含む７−エチルカンプトテシン（ＳＮ−２２）の接触還元
［試験方法］
ビニル体（化合物（２））含有ＳＮ−２２（１００ｍｇ）をナス型フラスコ中で１００ｍＬのジオキサン−エタノール混液（１：１）に溶解し、これに約１０ｍｇの１０％Ｐｄ−Ｃを加える。混合物の約１ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、開始時の試料溶液とする。反応容器を減圧下脱気し、水素雰囲気下室温で激しく攪拌する。１、３、５及び７時間後の試料の約１ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、各経時の試料溶液とする。各試料溶液の１０μＬにつき、実施例３のＨＰＬＣ操作条件で、反応混合物中のビニル体（化合物（２））の含量を測定する。
試験結果を表４に示す。７時間後には、ビニル体（化合物（２））は検出されなかった。【００３１】
実施例５
７−エチル−１８，１９−デヒドロカンプトテシン  Ｎ−オキシド（１８，１９−デヒドロＳＮ−２２ａ、化合物（３））を含む７−エチルカンプトテシン  Ｎ−オキシド（ＳＮ−２２ａ）の接触還元
［試験方法］
ビニル体（化合物（３））含有ＳＮ−２２ａ（１００ｍｇ）につき、実施４と同様に接触還元して試料溶液を採取し、下記のＨＰＬＣ操作条件で、反応混合物中のビニル体（化合物（３））の含量を測定する。
試験結果を表４に示す。７時間後には、ビニル体（化合物（３））は検出されなかった。【００３２】
［ＨＰＬＣ操作条件］
Column: Chemcosorb 5-ODS-H, 4.6 mmID×150mm
温度: ３５℃
Eluent: メタノール／０．１％（ｖ／ｖ）リン酸水溶液（５３／４７）混液
Detect: 254nm
流量: ０．８ｍＬ／ｍｉｎ【００３３】
実施例６
７−エチル−１０−ヒドロキシ−１８，１９−デヒドロカンプトテシン（１８，１９−デヒドロＳＮ−３８、化合物（４））を含む７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ−３８）の接触還元
［試験方法］
ビニル体（化合物（４））含有ＳＮ−３８（１００ｍｇ）をナス型フラスコ中で４０ｍＬのジオキサン−メタノール混液（１：１）に溶解し、これに約２０ｍｇの１０％Ｐｄ−Ｃ及び水０．１５ｍＬを加える。混合物の約０．５ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、開始時の試料溶液とする。この混合物にギ酸アンモニウム（１００ｍｇ）を加え、室温で激しく攪拌する。１及び３時間後の試料の約０．５ｍＬを量り、メンブランフィルター（０．４５μｍ）でろ過し、各経時の試料溶液とする。各試料溶液の４μＬにつき、実施例３のＨＰＬＣ操作条件で、反応混合物中のビニル体（化合物（４））の含量を測定する。
試験結果を表４に示す。３時間後には、ビニル体（化合物（４））は検出されなかった。【００３４】
【表４】
0005238493.tif 000014
【００３５】
参考試験
７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシ−１８，１９−デヒドロカンプトテシン（１８，１９−デヒドロＳＮ−３８Ｂ−１１、化合物（５））を含む７−エチル−１０−[４−(１−ピペリジノ)−１−ピペリジノ]カルボニルオキシカンプトテシン（ＳＮ−３８Ｂ−１１）のシリカゲルクロマトグラフ法による除去【００３６】
表１の試料１  ２００ｍｇに対し、シリカゲルを約１５０倍用いたカラムクロマトグラフ法による分画とそれらの分析結果を表５に示す。
［試験方法］
試料１をシリカゲルカラム（Merck Silica Gel 60, 230-400mesh ATMS, 2×10cm，約３０ｇ）にチャージし、CHCl3-MeOH（20:1）混液により流下（１０ｍＬ／分）する。流下液は、３０ｍＬずつ分画する。各画分を減圧下濃縮乾固し、残留物を１ｍｇ／ｍＬの濃度になるように溶解液に溶かし、試料溶液とする。試料溶液の１０μＬにつき以下のＨＰＬＣ条件下試験する。
溶解液：MeOH-H2O-0.１N HCl（5:4:1）【００３７】
［ＨＰＬＣ操作条件］
Column: Inertsil ODS2, 5μm, 4.6mm×25cm
Eluent: 20mM PBS(pH3.5)-MeOH-MeCN（3.5:1:1）
Detect: 254nm【００３８】
【表５】
0005238493.tif 000015
【００３９】
ビニル体はＳＮ−３８Ｂ−１１画分の後半でその含量が増加し、本操作条件ではビニル体の除去は困難であった。