(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
受託番号：NITE BP-412によって独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託された紅麹菌株。
【請求項２】
請求項１に記載の紅麹菌株を用いて得られる紅麹。
【請求項３】
モナスカス・ピローサス(Monascus pilosus) NBRC4520に、生存率約0.5%の割合となる紫外線照射を行い、スクリーニング法により、請求項１に記載の紅麹菌株を取得する方法。
【請求項４】
請求項１に記載の紅麹菌株を用いて、米を製造原料とする紅麹の製造方法。
【請求項５】
請求項１に記載の紅麹菌株を用いて、モナコリンKを生産する方法。
【請求項６】
請求項２に記載の紅麹を用いて、モナコリンKを生産する方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、モナコリンＫの生産能力に優れた紅麹菌株及び紅麹に関する。
【背景技術】
【０００２】
紅麹は穀類にモナスカス属の菌株を繁殖させた麹で、中国、台湾などでは紅酒、老酒、紅乳腐などの醸造原料として利用されており、また古来より生薬として「消食活血」「健脾燥胃」などの効果が知られている。（李時珍「本草綱目」（１５９０年））。また、血圧降下作用、コレステロール改善作用等、様々な機能を有することが知られ、味噌、醤油、食酢等の醸造食品をはじめ、パン、麺類等、色々な食品に使われている。
【０００３】
紅麹のコレステロール改善作用については、モナスカス属の菌株によって生産されるモナコリンＫ（ロバスタチンとも呼ばれる）が、体内のコレステロール合成の律速酵素であるHMG-CoAレダクターゼを阻害することにより血中コレステロールを低下させることが明らかにされている（非特許文献１、２、特許文献１〜３）。それに伴い、紅麹はコレステロール調節用のサプリメント素材としての利用も増加している。
【０００４】
紅麹菌が生産するモナコリンKの量は製麹条件により調節することが可能で、原料に米胚芽を添加し、水分率および培養温度を一定条件に調節することにより、モナコリンK含量が多い紅麹を生産できることが明らかにされている（特許文献４）。さらに紅麹からモナコリンＫを抽出し、高濃度のモナコリンＫを含むエキスが得られることが報告されている（特許文献５）。
【０００５】
ところが現在使用している菌株では、最適製麹条件下でもサプリメント用原料として必要なモナコリンＫ含量（２％）を得ることはできず、サプリメント用の原料としては紅麹ではなくエキス加工した製品が用いられている。しかしエキスは、紅麹に本来含まれているアミノ酸、ミネラルなどの栄養成分の一部が消失しており、直接サプリメント用原料として利用できるモナコリンＫ含量が確保された紅麹が望まれていた。
【非特許文献１】発酵工学  第６４巻  第６号  1986年発行
【非特許文献２】日本臨床栄養学会誌  第２２巻  第３号  2000年発行
【特許文献１】特開昭５８−４３７８３号公報
【特許文献２】特公昭６０−４４９１４号
【特許文献３】特公昭５９−２５５９９号
【特許文献４】特開２０００−１０６８３５号公報
【特許文献５】特開２００２−２７９９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、モナコリンKの生産性が高い紅麹菌株、及び当該菌株によって得られる紅麹を提供することを主な目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、紅麹菌株モナスカス・ピローサス(Monascus pilosus) NBRC4520に変異処理を行って、モナコリンKの生産性が高い菌株のスクリーニングを試み、該紅麹菌株の取得に至った。
【０００８】
本発明は、以下の紅麹菌株及び紅麹を提供する。
項１．モナスカス・ピローサス（Monascus pilosus）に属するモナコリンK高産生性紅麹菌株。
項２．受託番号：NITE BP-412によって独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受託された項１に記載の紅麹菌株。
項３．項１又は２に記載の紅麹菌株を用いて得られる紅麹。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により取得した紅麹菌株を利用すれば、従来菌株では製造できなかった高濃度のモナコリンKを含有する、例えば、紅麹重量に対し２％程度の濃度で含まれる紅麹の製造ができる。また、例えば、モナコリンＫ含量が０．２重量％程度の従来紅麹を生産する場合も、従来菌株を使った場合に比べ、約１週間程度培養期間を短縮することが可能になる。
【００１０】
従来は、モナコリンＫを含む紅麹をサプリメント等に調製する場合、通常１０倍程度に濃縮（エキス化）する必要があり、濃縮工程は必須であった。しかしながら、本発明によれば、モナコリンＫ含量が高い紅麹の生産が可能になることから、エキスに代わるサプリメント用原料としての提供が可能になり、従来よりも少量の紅麹で必要量のモナコリンＫを摂取することができ（モナコリンＫの１日摂取推奨量は約2mgとされている）、サプリメントとして調製されやすいことから、より簡便にモナコリンＫによる効果（血中コレステロール値の低下等）が得られる。また、濃縮工程を省略できることから、紅麹に本来含まれているアミノ酸、ミネラルなどの栄養成分の消失を回避できるのみならず、生産コストの低減も可能である。
【００１１】
さらに、本発明の紅麹菌株は、目的とする量のモナコリンＫを含量する紅麹を作るのに要する製麹日数が、従来の紅麹菌株に比べて少なくて済み、生産性に優れたものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のモナコリンＫ高生産性紅麹菌株は、従来紅麹菌株であるモナスカス属に属する菌(Monasucus. pilosus)を親菌株として、これに対して変異処理を行い、目的菌株をスクリーニングすることにより取得することができる。
【００１３】
モナコリンＫは紅麹菌の培養物から発見されたコレステロール合成阻害剤で、下記式(1)で示される構造をもつ物質であり、肝臓での生合成を抑制することによって、血中のコレステロールを減少させる働きがある。
【００１４】
【化１】
0005283363.tif 000002
【００１５】
変異処理を行うモナスカス属菌種としては、モナスカス・プルプレウス（Monascus purpureus）、モナスカス・アンカ（Monascus anka）、モナスカス・ピローサス（Monascus pilosus）等が挙げられ、好ましくはモナスカス・ピローサスである。
【００１６】
変異処理法は紫外線(UV)照射、X線照射、γ線照射などの物理的方法、NTG（N-メチル-Ｎ’-ニトロ-N-ニトロソグアニジン）、EMS（エチルメタンスルホネート）などの突然変異誘起処理による化学的方法のいずれでもよい。
【００１７】
高モナコリンＫ生産菌株のスクリーニング方法としては、例えば以下のような方法が挙げられる。
変異処理の終了した紅麹菌胞子を基本平板培地上に塗抹し、出現してきたコロニーをランダムに分離する。次に分離した菌株を約５日間、斜面培地で培養し増殖させた後、フラスコスケールの紅麹製麹を無菌的に行う。製麹条件としては、原料の精白米に3〜10％量の米胚芽を添加し、水分率を３５〜５０％に維持、培養温度は２０〜３５℃、ただし製麹後期3日以上の期間は２７℃以下として製麹日数１４〜１７日で行えばよい（特許文献２）。こうして得られた紅麹を１１０℃、２０分間の熱処理により菌および酵素を失活させた後、通風乾燥機で水分率が１０％以下になるまで乾燥し、粉砕機にて粉末化、調製した後、以下の方法でモナコリンＫの生産性を評価する。
【００１８】
モナコリンＫ含量は、調製した紅麹粉末に２０〜１００倍量の６０％エタノールを加え、攪拌しながら３０分間抽出し、その抽出液を高速液体クロマトグラフィーにかけて定量し、紫外線処理前の菌株の１．５倍以上、好ましくは２倍以上、より好ましくは２．５倍以上となる菌株をモナコリンＫ高生産性菌の候補株として選抜する。上述の製麹方法であれば、通常、紫外線処理前の菌株のモナコリンＫ生産量（紅麹100g中のモナコリンK含有量）は、50〜300mg/100gである。
【００１９】
以上のようにして得られる具体的な菌株としては、例えば独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター(NMPD)に、平成19年9月4日に受託番号：NITE BP-412として寄託されている紅麹菌株が上げられる。NITE BP-412は、モナスカス・ピローサス(Monascus pilosus) NBRC4520に生存率約０．５％の割合となる紫外線照射を行い、上記のスクリーニング法で取得したものである。
【００２０】
本発明のNITE BP-412菌株と親菌株であるNBRC4520菌株の培養的性質を下記表１に示す。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
NITE BP-412菌株の形態的性質を表２に示す。
【００２３】
【表２】
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【００２４】
NITE BP-412菌株の生理的性質を表３に示す。
【００２５】
【表３】
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【００２６】
上記表１〜３に示されるように、NITE BP-412菌株とNBRC4520菌株では、モナコリンＫ産生能以外の培養的性質、形態的性質及び生理的性質は同等であることが確認された。
【００２７】
さらに、28S rDNAD1/D2およびITS-5.8S rDNA塩基配列の解析結果からも、NITE BP-412菌株はモナスカス属の１種と推定され、親菌株であるM. pilosusの塩基配列と98.7〜100％の高い相同率を示した。
【００２８】
本発明のモナスカス属菌株を用いて紅麹を製造し、食品素材等に用いることができる。製麹方法としては、従来公知の方法を採用すればよく、例えば特許第2591635号（米を製造原料とする紅麹の製造法）に記載される方法に従って紅麹を製造することができる。製麹は所望量のモナコリンＫを含有する紅麹が得られるまで行えばよく、製麹期間は適宜設定され得るが、本発明の紅麹菌株はモナコリンＫ高生産性であることから従来の紅麹菌株を用いる場合よりも製麹期間が短縮される。
【００２９】
本発明の紅麹菌株を用いて得られる紅麹には、血中コレステロール値の低減作用に有効とされるモナコリンＫが通常（紫外線処理前）の紅麹菌株に比べて好ましくは約２倍以上も含有されており、血中コレステロール値改善のための健康食品素材、特にサプリメント用途として有用である。
【実施例】
【００３０】
本発明の菌株を用いて得られた紅麹について、モナコリンＫの生産性を分析した試験例を挙げて説明するが、これに限定されるものではない。
【００３１】
試験例１
精白米を一晩水に浸漬し約1時間水切りした後、オートクレーブで125℃、20分間蒸気滅菌し蒸米を得た。これをフラスコ当たり３０ｇ入れた培地に本発明菌株(Monascus pilosus NITE BP-412)、または親菌株(Monascus pilosus NBRC4520)を植菌し、最初の４日間は30〜35℃、４日目以後は２３〜２５℃で、計１７日間培養し、培養途上７、１０、１４日目にサンプリングを行った。なお、培養期間中の水分率は４０〜５０％に調整した。こうして得た培養物および培養終了後の紅麹を１１０℃、２０分間の熱処理により紅麹菌と酵素を失活させた後、通風60℃で水分率を約10％まで乾燥し、さらに粉砕して紅麹粉末とし、モナコリンＫ含量を定量した。その結果を表４に示す。
【００３２】
【表４】
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【００３３】
これによると、本発明菌株を用いることにより、培養１７日間でモナコリンＫ含量を212mg/100gから634mg/100gへと約３倍に高めることができた。またモナコリンＫ含量が0．2％の紅麹を製造するのに、親菌株を用いた場合は１７日間を要するのに対し、本発明菌株を用いれば１０日間で達成することができ、培養期間を約1週間短縮できることがわかった。
【００３４】
試験例２
精白米を一晩水に浸漬し約1時間水切りした後、オートクレーブで125℃、20分間蒸気滅菌し蒸米を得た。これをフラスコ当たり３０ｇ入れた培地に本発明菌株(Monascus pilosus NITE BP-412)、または親菌株(Monascus pilosus NBRC4520)を植菌し、最初の４日間は30〜35℃、４日目以後は２３〜２５℃で、計８週間培養し、培養途上１週間目毎にサンプリングを行った。なお、培養期間中の水分率は４０〜６８％に調整した。こうして得た培養物および培養終了後の紅麹を１１０℃、２０分間の熱処理により紅麹菌と酵素を失活させた後、通風60℃で水分率を約10％まで乾燥し、さらに粉砕して紅麹粉末とし、モナコリンＫ含量を定量した。その結果を図１に示す。
【００３５】
これによると、本発明菌株を用いることにより、８週間の培養でモナコリンＫ含量はほぼ2.5％に達するのに対し、親菌株では0．9％程度までしか達しなかった。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】NITE BP-412菌株と親菌株（NBRC4520）を８週間製麹した結果を示すグラフである。
【図１】
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