(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、
２つのゲル枠と、該ゲル枠間に配置したスペーサーとを備え、前記ゲル枠間のスペーサー幅にゲルが配置され、
当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材が前記ゲルの一方又は双方の面に配置され、当該メッシュ様部材と前記ゲルとが一体的に構成されてなることを特徴とするスラブ型電気泳動用ゲル。
【請求項２】
ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化することにより、スラブ型ゲルの一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着されていることを特徴とする請求項１記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
【請求項３】
上記ゲルの幅が１〜１０ｍｍであることを特徴とする、請求項１記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
【請求項４】
上記メッシュ様部材の目開きが０．２μｍ〜４，０００μｍであることを特徴とする、請求項１記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
【請求項５】
上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、請求項１記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
【請求項６】
上記ゲルがランニングゲルである請求項１〜請求項５のいずれか一項記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
【請求項７】
上記ランニングゲルの上部に、スタッキングゲルをさらに含むことを特徴とする、請求項６記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば電気泳動後、ゲルの支持体、および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、分子生物学分野では、タンパク質や核酸を移動度の違いによって分離する電気泳動が行われている。当該電気泳動では、分子篩としてゲルが用いられている。
電気泳動に使用するゲルとして、ポリアクリルアミドゲルをプラスチックフィルムを支持体として固着させ、取り扱い易くしたものが既に市販されている。しかしながら、当該製品は、取り扱い易いものの、水平平板型電気泳動用であり、また使用する泳動装置も大型のものであるので、通常頻繁に使用されているスラブ型電気泳動用ゲルと比較して、汎用性に欠ける。また、電気泳動後、メンブレンに転写するには特殊な器具でゲルをフィルムから剥離させなければならず、その剥離した薄ゲルは極めて扱いにくい。
また、スラブ型電気泳動用ゲルとして市販されているプレキャストゲルパッケージは、品質が一定で、保存性も良い。しかしながら、当該ゲルはガラス板に挟んだ状態で供給されるので、コストがかかる。特許文献１には、プレキャスト型の電気泳動用ゲル構造体が開示されている。
一方、特許文献２には、電気泳動用ゲルフィルムに対する接着が改善された電気泳動用支持体が開示されている。また、特許文献３には、電気泳動法によるＤＮＡ塩基配列の測定に用いる電気泳動分析用ゲル・カセットが開示されている。
さらに、特許文献４には、電気泳動（特に、２次元電気泳動）に使用する選択的に透過性な多孔性ポリマーから形成されたゲル支持体チューブが開示されている。
アガロースゲルは核酸の電気泳動に多用され、低濃度のポリアクリルアミドゲルは大分子量のタンパク質の分離に有用だが、共にゲル強度が低く、通常のスラブ型電気泳動の実施は困難である。
従来、電気泳動後、ゲルの支持体、および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルは知られていなかった。
【特許文献１】特開２００４−１３２９０７号公報
【特許文献２】米国特許第４，４１５，４２８号明細書
【特許文献３】特開平１０−２３９２７７号公報
【特許文献４】米国特許第６，８３３，０６０号明細書
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、上述した実情に鑑み、例えば電気泳動後、ゲルの支持体、および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルを提供することを目的とする。
上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、まず、メッシュ様部材により片面又は両面を支持されたゲルが柔軟性と強度に富むことを見いだした。さらにそれを基に、２つのゲル枠と該２つのゲル枠の一方又は双方の面に配置したメッシュ様部材とゲル枠間に配置したスペーサーとゲル枠間のスペーサー幅に配置したランニングゲルとを含み、該ランニングゲルがゲル枠及びメッシュ様部材により支持されたスラブ型電気泳動用ゲルを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は以下を包含する。
（１）ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材と当該ゲルとが一体的に構成されてなることを特徴とするスラブ型電気泳動用ゲル。
（２）ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルの一方又は双方の面に、当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材が配置されてなることを特徴とする（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（３）ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化することにより、スラブ型ゲルの一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着されていることを特徴とする、（２）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（４）上記ゲルの幅が１〜１０ｍｍであることを特徴とする、（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（５）上記メッシュ様部材の目開きが０．２μｍ〜４，０００μｍであることを特徴とする、（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（６）上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、（１）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（７）２つのゲル枠と、
前記２つのゲル枠の一方又は双方の面に配置したメッシュ様部材と、
前記ゲル枠間に配置したスペーサーと、
前記ゲル枠間のスペーサー幅に配置したランニングゲルと、
を含み、前記ランニングゲルが前記ゲル枠及びメッシュ様部材により支持されていることを特徴とする、スラブ型電気泳動用ゲル。
（８）上記ランニングゲルの上部に、スタッキングゲルをさらに含むことを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（９）上記メッシュ様部材の目開きが０．２μｍ〜４，０００μｍであることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１０）上記メッシュ様部材の材質がポリマーであることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１１）上記ポリマーがポリエステル、ナイロン、ポリプロピレン、テフロン及びポリエチレンから成る群から選択されるポリマーであることを特徴とする、（１０）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１２）上記ゲルの幅が１〜１０ｍｍであることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲル。
（１３）２つのゲル枠の一方又は双方の面にメッシュ様部材を配置する工程と、
前記ゲル枠間にスペーサーを配置し、前記２つのゲル枠を合わせる工程と、
前記ゲル枠間のスペーサー幅にランニングゲルを作製する工程と、
を含み、前記ランニングゲルが前記ゲル枠及びメッシュ様部材により支持されていることを特徴とする、（７）記載のスラブ型電気泳動用ゲルの製造方法。
（１４）上記ランニングゲルの上部に、スタッキングゲルを作製する工程をさらに含むことを特徴とする、（１３）記載の製造方法。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２００６−１６８５２号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの作製を示す。（１ａ、１ｂ：ゲル枠；２：メッシュ；３ａ、３ｂ：スペーサー；４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄ：両面テープ）
図２は、型枠付メッシュの作製を示す。（５：切込プレート；６：平プレート；７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄ：両面テープ；８：メッシュクロス；９ａ、９ｂ：スペーサー用ＰＥＴプレート；）
図３は、ＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティングの結果を示す。（（ａ）：対照ゲルのブロッティング、（ｂ）：型枠付メッシュゲルのブロッティング）
図４は、ＣＢＢ染色の結果を示す。（（ａ）：対照ゲルのＣＢＢ染色結果、（ｂ）：型枠付メッシュゲルのＣＢＢ染色結果）
図５は、銀染色の結果を示す。（（ａ）：対照ゲルの銀染色結果、（ｂ）：型枠付メッシュゲルの銀染色結果）
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のスラブ型電気泳動用ゲルは、ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲル面にメッシュ様部材を配置し、それらにより、ゲルが支持されていることを特徴とする。
すなわち、本発明は、ゲル電気泳動用に供するスラブ型ゲルであって、当該ゲルを支持するためのメッシュ様部材と当該ゲルとが一体的に構成されてなることを特徴とするスラブ型電気泳動用ゲルを特徴とする。
本発明において、メッシュ様部材は、ゲルの一方又は双方の面に配置される。
本発明のゲルを、図面を参照しながら、さらに具体的に説明する。
本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、図１に示すように、２つのゲル枠１ａ、１ｂと、ゲル枠１ａ、１ｂの一方又は双方の面に配置したメッシュ２と、ゲル枠１ａとゲル枠１ｂとの間に配置したスペーサー３ａ、３ｂと、ゲル枠１ａとゲル枠１ｂとの間のスペーサー幅に配置したランニングゲルとを含む。
なお、以下の説明ではゲル枠を設けたもののみを詳述するが、ゲル枠及びスペーサーを持たずメッシュ様部材のみを有するゲルとすることもでき、その製法は本法に準じる。また、以下の説明ではメッシュ様部材のうちメッシュを用いる場合を詳述するが、それ以外の素材を利用する場合も本法に準じる。
ゲル枠の縦方向及び横方向のサイズは、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートの対応するサイズと同等であることが好ましい。ゲル枠の材質としては、特に限定されないが、ガラス、ポリマー（例えば、ポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）及びその他のポリエステル、テフロン、ナイロン、ポリプロピレン並びにポリエチレン）等が挙げられる。一方のゲル枠は、泳動面に合わせて、具体的にはスタッキングゲルのウェルの数に準じた幅とサンプルの泳動距離とに合わせて切り抜いた窓を有する。また、他方のゲル枠は、上記と同様の切り抜き窓の他に、コームの大きさに合わせた切込を有する（図１のゲル枠１ｂ）。
本発明において「メッシュ様部材」とは、１）ゲルを物理的に支持するとともに、２）電気泳動に供されたサンプルがブロッティング等の作業の際に面方向に選択的に通過可能な微細な隙間を有する面状の部材であれば特に限定されるものではない。さらに、電気泳動等の際に印加される電流を実質的に通すことのない材料から構成されるものが、サンプルの泳動を阻害する虞がなくより好ましい。より好ましいメッシュ様部材の一例としては、電気泳動等の際に印加される電流を実質的に通すことのない材料から構成されるメッシュ、多孔質、不織布が挙げられる。いずれのメッシュ様部材を選択するかについてはゲル電気泳動の目的、方法などにより適宜選択されるが、面方向のブロッティングの効率の観点ではメッシュが最も好ましく、ゲルの形状の維持の観点では発泡性プラスチック等の材料からなる多孔質メンブレンが最も好ましい。
本発明の好ましい形態として、メッシュ様部材はゲルと一体的に構成される。ここで「メッシュ様部材とゲルとが一体的に構成される」とは、メッシュ様部材が有する微細な隙間にゲルが咬み込むことで両者が一体不可分な状態となっている構成をさす。両者が一体的に構成されている限りにおいては、メッシュ様部材がゲルの中心部に配されていてもよく、ゲルの少なくとも一方の面に配されていてもよい。作製の容易さや使い勝手の点では、メッシュ様部材がゲルの少なくとも一方の面に配されていることが一般的により好ましい。なお、「メッシュ様部材がゲルの面に配されている」とは、メッシュ様部材がゲルの面近傍に配されている状態（つまり、メッシュ様部材が実質的にゲルの面に配されているとみなせる状態）も含む。
なお、メッシュ様部材とゲルとを一体的に構成する方法は特に限定されるものではないが、例えば、ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化する（固める）ことにより容易に作製可能である。
また、メッシュ様部材がゲル枠との組み合わせで用いられる場合には、当該メッシュ様部材はゲル枠の内側面又は外側面、好ましくはランニングゲルが作製される内側面にゲルと隣接して配置される。また、メッシュ様部材は、２つのゲル枠の一方又は双方に配置することができる。メッシュ様部材の数は、１又は複数であり、電気泳動やブロッティングに悪影響を及ぼさない限り、複数のメッシュ様部材を重ねてもよい。本発明において、メッシュ様部材は、ゲル枠とともにゲルを支持するために有効であり、且つブロッティングのためにメンブレンへのタンパク質やペプチドの移動も可能にする。従って、メッシュ様部材は、電気泳動に供するサンプル中のタンパク質やペプチドが透過でき、且つ作製されるゲルが透過しないような目開きを有する。目開きとは、大きなサイズの孔から微細なサイズの孔を意味し、多孔質であれば通常、ポアサイズによって定義することができる。そのサイズは、特に限定はされないが、例えば、０．２μｍ〜４，０００μｍ、好ましくは５．０μｍ〜４，０００μｍ、特に好ましくは１００μｍ〜２００μｍとし、メッシュ様部材が多孔質であれば、その平均ポアサイズを、０．２２μｍ〜０．４５μｍ以上とすることができる。また、メッシュ様部材の厚さは、例えば、５０μｍ〜２，５００μｍ、好ましくは６０μｍ〜２００μｍとする。さらに、メッシュ様部材の材質としては、上記特性を付与するいずれの材質でもよく、例えば、布、ポリマー（例えば、ポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）及びその他のポリエステル、ナイロン、ポリプロピレン、テフロン並びにポリエチレン）等が挙げられるが、特にＰＥＴが好ましい。なお、本発明で使用するメッシュ様部材として、例えばＰＥＴ１０５（材質：ＰＥＴ、目開き：１０５μｍ、メッシュ１４５／ｉｎｃｈ、株式会社セミテック（大阪、日本）製）のような市販のメッシュクロスを使用することができる。
なお、メッシュ様部材がゲル枠との組み合わせで用いられる場合にも上述の通り、メッシュ様部材とゲルとが一体的に構成されていることが好ましい。
スペーサーは、ゲル枠間に配置することで、ランニングゲルが形成される空間を用意することができる。一般に、スペーサーの厚さ（スペーサー幅）が、そのままランニングゲルの厚さとなる。スペーサーの材質は、ゲル枠と同じであってもよいし、異なってもよく、例えば、ガラス、ポリマーなどである。
本発明において、ランニングゲル又はスタッキングゲルは、例えば、アクリルアミドとＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドとから作製されるポリアクリルアミドゲルである。ランニングゲルのアクリルアミド濃度は、電気泳動に供するサンプル中のペプチドやタンパク質の分子量に応じて適宜選択することができる。また、ランニングゲルは、アクリルアミド濃度が均一なゲルだけでなく、アクリルアミド濃度に勾配をつけたグラジエントゲルであってもよい。
本発明のゲルのサイズ及び厚さは、特に制限はなく、使用目的に応じて任意のサイズ及び厚さとしうる。また、ゲルの形状は、通常、四角形（例えば、長方形および正方形）であり、細長いストリップ形状（例えば、幅１〜１０ｍｍ）の形状も含む。
本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの製造方法（以下、単に「本発明に係る製造方法」という）では、まず２つのゲル枠の一方又は双方の面にメッシュ様部材を配置する。メッシュ様部材は、例えば、図１に示す両面テープ４ａ、４ｂ、４ｃ、４ｄを用いてゲル枠に固定させることができる。
次いで、本発明に係る製造方法では、メッシュ様部材を配置したゲル枠間にスペーサーを配置し、２つのゲル枠を合わせることで、ランニングゲル（及び必要に応じてスタッキングゲル）のための型枠を作製する。スペーサーは、例えば両面テープなどでゲル枠及びメッシュ様部材に固定することができる。
さらに、ゲル枠とメッシュ様部材とスペーサーとを含む型枠（以下、単に「型枠」又は「型枠付メッシュ」という）作製後、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートで型枠を挟み、型枠のスペーサー幅にランニングゲル溶液を注ぎ入れる。その際、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートは、側片と底辺とを防水テープで十分に密閉し、さらに両側をダブルクリップ等で押さえておく。ランニングゲル溶液は、直接又は例えばパスツールピペットを使用して型枠のスペーサー幅に注ぎ入れることができる。このようにして、型枠中にランニングゲルを固めることで、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルを作製することができる。
さらに、必要に応じて、ランニングゲル上部にスタッキングゲル溶液を注ぎ入れ、その際に適当なコーム（くし）を差し込み、スタッキングゲルを作製することができる。スタッキングゲル溶液は、上述したランニングゲル溶液と同様に注ぎ入れることができる。固化後、コームはゲルから引き抜いてもよいし、そのまま保持されてもよい。このとき形成されるウエルは泳動サンプルウエルとして使用される。
このようにして作製された本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートから外して、例えばサランラップに包み使用時まで冷蔵保存することができる。使用時には、適当な容器に水を張り、水中で迅速に再度、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルをスラブ型電気泳動装置用ガラスプレートに挟み込み、スラブ型電気泳動に供することができる。
以上のようにして作製した本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、ランニングゲル（及び必要に応じてスタッキングゲル）の一方又は双方の面がメッシュ様部材によって支持されている。さらに、必要に応じてゲル枠によってその支持は強化されている。このように、メッシュ様部材及び／又はゲル枠によりゲルが支持されていることにより、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、通常使用されるスラブ型ゲルよりも物理的強度が高く、また取り扱いが容易である。
また、上述のように、本発明では例えば、ゲル溶液とメッシュ様部材とを接触させた状態で当該ゲル溶液をゲル化する（固める）ことにより、スラブ型ゲルの一方又は双方の面にメッシュ様部材が固着された（一体化された）構成をとることが出来る。この構成によれば、メッシュ様部材が有する微細な隙間にゲルが侵入し、ゲルとメッシュ様部材とがより強固に固着されるので、メッシュ様部材がゲル面から剥離する虞もないという効果も奏する。
また、電気泳動後、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルは、従来のようにスラブ型電気泳動装置用ガラスプレートからゲルを剥離することなく、スラブ型電気泳動装置用ガラスプレートから外して、そのまま染色（例えば、クーマシーブリリアントブルー（ｃｏｏｍａｓｉｅ  ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｂｌｕｅ；ＣＢＢ）染色や銀染色）又はブロッティングに供することができる。染色やブロッティングでは、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルの支持体（すなわち、メッシュ様部材）、および場合により型枠、は保持される。
さらに、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルをプレキャストゲルとして供給する場合、従来市販されているプレキャストゲルと異なり、ガラス板に挟んだ状態ではなく、ゲル枠に囲まれた裸のゲルパッケージとして供給でき、コストを低く抑えることができる。あるいは、本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲルを、ブロッティング用のメンブレン（例えば、ＰＶＤＦ膜）とゲル枠を介して密着させて供給することも可能であり、電気泳動からブロッティングまでの操作がより簡便に行うことができる。
なお、言うまでもないが本発明におけるスラブ型ゲル（スラブ型電気泳動用ゲル）は平板状のゲルを指し、電気泳動時にはゲルの面を任意の方向（一般的には、水平方向又は垂直方向）に固定して使用することが出来る。
本発明のゲルを保存するときには、例えば、ポリマー製フィルムで包装するか、あるいはポリマー製バッグに入れて密封し、乾燥しない程度の十分な湿度下で冷暗所に保存する。
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
〔実験方法〕
（１）型枠付メッシュの作製
型枠付メッシュの作製を図２に基づいて説明する。
１０ｃｍ（幅（Ｗ））ｘ１０ｃｍ（高さ（Ｈ））正方形のポリエチレンテレフタラート（ＰＥＴ）プレート（０．５ｍｍ厚）を２枚用意した。これら２枚のプレートについて、三辺より１ｃｍ、残りの一辺より２ｃｍの位置に８ｃｍ（Ｗ）ｘ７ｃｍ（Ｈ）の長方形を切り抜いた。一方のプレートはさらに、２ｃｍ幅の余白面を上にして立てたとき、両端から各１ｃｍの位置に、上端から１ｃｍの垂直幅で８ｃｍ（Ｗ）ｘ１ｃｍ（Ｈ）の長方形を切り抜いた。このプレートを切込プレート５と呼ぶ。また、他方のプレートを平プレート６と呼ぶことにする。
平プレート６の長方形切り抜き窓の四縁に１ｃｍ幅の両面テープ７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄを施した。次いで、１０ｃｍ（Ｗ）ｘ９ｃｍ（Ｈ）のメッシュクロス８（材質：ＰＥＴ、目開き１０５μｍ、メッシュ１４５／ｉｎｃｈ、製品名ＰＥＴ１０５、（株）セミテック、大阪）を、平プレート６の両側辺と底辺に合わせて長方形窓をふさぐように両面テープ７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄに貼り付けた。さらに、１ｃｍ（Ｗ）ｘ１０ｃｍ（Ｈ）ｘ０．１ｃｍ（奥行（Ｄ））のスペーサー用ＰＥＴプレート９ａ、９ｂの２枚の縁をそれぞれ切込プレート５の両端に上下を合わせて両面テープで貼り付け、切込が上方になるようにして平プレート６上のメッシュクロス８に重ねることで、型枠付メッシュを完成させた。
（２）ゲルの作製
上記（１）で得られた型枠付メッシュと同型同大のミニスラブ型電気泳動装置用ガラスプレート（１ｍｍ又は２ｍｍ厚）でこの型枠付メッシュを挟み、側辺と底辺を防水テープで十分に密閉し、両側をダブルクリップで押さえ、全体を安定して垂直に立たせ、以下の表１に示す組成から成るランニングゲル溶液を流し込んだ。
【表１】
0005252686.tif 000002
ランニングゲル溶液の注入後、水又はブタノールを重層して静置し、ゲル化させた（約１５分）。
次に、ランニングゲルの上部に、以下の表２に示す組成から成るスタッキングゲル溶液を流し込んだ。
【表２】
0005252686.tif 000003
スタッキングゲル溶液の注入後、厚さ０．７５ｍｍのコームをさしてゲル化させた（約１０分）。このようにして、型枠付メッシュに支持されたゲル（以下、「型枠付メッシュゲル」という：本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲル）を作製した。
ゲル化後、ガラスプレートを外して、型枠付メッシュゲルを取り出し、サランラップに包み使用時まで冷蔵保存が可能であった。使用時は、適当な容器に水を張り、水中で素早く型枠付メッシュゲルをスラブ型電気泳動装置用ガラスプレートで挟んで密着させた。
（３）型枠付きメッシュゲルを用いた電気泳動
ミニスラブ型電気泳動装置（ＳＥ−８０１０、（株）ＳＩＣマリソル、東京）に型枠付メッシュゲルを備えたゲルプレート又は型枠付メッシュなしの通常のゲル（以下、「対照ゲル」という）を備えたゲルプレートをセットした。
一方、タンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）（５μｇ）５μｌ又は分子量マーカー（プレシジョンｐｌｕｓスタンダード、（株）日本バイオラッドラボラトリーズ、東京）５μｌに、５×サンプルバッファー（組成：０．２５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、１０％ＳＤＳ、βメルカプトエタノール３／１０容、５０％グリセロール、１％ＢＰＢ数滴）２μｌ及び蒸留水３μｌを加え、９５℃で３分間煮沸した。得られたサンプルを、上述のゲルプレートの各ウェルに添加した。
次いで、これらゲルプレートを用いて、以下の表３に示す組成から成る泳動バッファー中にて４０ｍＡで６０分間電気泳動した。
【表３】
0005252686.tif 000004
（４）ＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティング
８ｃｍ（Ｗ）×７ｃｍ（Ｈ）に切った濾紙６枚とＰＶＤＦ膜を用意した。以下の表４に示す組成から成るブロッティングバッファーに十分浸した濾紙３枚を重ねてセミドライブロッタ（ＡＥ６６７７、（株）アトー、東京）の陰極プレート上に置き、上記（３）で電気泳動した型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを、枠内に濾紙がちょうどはまるように重ねた。
次いで、アルコール浸潤後、ブロッティングバッファーに十分浸しておいたＰＶＤＦ膜を空気が入らないようにゲルに密着させて重ねた。さらに、残りの濾紙３枚を重ねた。ガラスピペットの腹などを利用して、濾紙の上を軽くしごき、濾紙／ゲル／膜の間の空気を追い出した。
最後に、陽極プレートをかぶせ、１５０ｍＡにて１時間通電させた。
【表４】
0005252686.tif 000005
（５）クーマシーブリリアントブルー（ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｂｌｕｅ；ＣＢＢ）染色及び銀染色
上記（３）で電気泳動した型枠付メッシュゲル又は対照ゲルの両端をメタルフリークリップ（プラスチック製）で押さえた。染色、脱色中のゲルの伸縮変形に伴うゆがみを低減させるために、ここで使用する通常のバッファー全てに０．３７５Ｍ  Ｔｒｉｓ塩または０．３７５Ｍ  ＮａＣｌおよび１０％グリセロールを含ませて使用した。
（５−１）ＣＢＢ染色
ＣＢＢ染色は、まず型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを以下の表５に示す組成から成るＣＢＢ染色液に浸して、室温で３０分間振盪した。
【表５】
0005252686.tif 000006
次いで、以下の表６に示す組成から成るＣＢＢ脱色液に型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを浸し、キムワイプを添えて室温で１５分間振盪後、新しい脱色液に交換し、以後３０分間振盪するごとに液交換するという操作を数回繰り返した。
【表６】
0005252686.tif 000007
十分脱色されてバンドが明瞭になるまで振盪、液交換を繰り返した後、型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを水で軽くリンスしてから、４０％メタノール／１０％酢酸／０．３７５Ｍ  ＮａＣｌ／１０％グリセロール液中に保存した。
（５−２）銀染色
銀染色は、まず型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを５０％メタノール／０．３７５Ｍ  ＮａＣｌ／１０％グリセロールに浸し、室温で１時間振盪した。次いで、以下の表７に示す組成から成る銀染色液の溶液Ｃに型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを１５分間浸した。
【表７】
0005252686.tif 000008
水で５分間洗浄した後、次いで表８に示す組成から成る現像液の溶液Ｄに型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを浸し、像が現れるまで（約１５分間）振盪した。像が現れた後、型枠付メッシュゲル又は対照ゲルを水で軽くリンスした後、１０％ＥＤＴＡ／４０％メタノール／１０％酢酸／０．３７５Ｍ  ＮａＣｌ／１０％グリセロールに浸して保存した。
【表８】
0005252686.tif 000009
（６）メッシュゲルの物理的強度
上記（２）で作製した型枠付メッシュゲルのメッシュゲル部分又は対照ゲルの上端と下端とを合わせるように軽く折り曲げ、屈曲部分を少しずつ押していき、どのくらい強く押すとゲルが割れて壊れるか否かを観察した。
〔実験結果〕
上述のように行ったＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティング、ＣＢＢ染色及び銀染色の結果について、型枠付メッシュゲルの場合と対照ゲルの場合とを比較した写真を図３〜５に示す。
図３は、ＰＶＤＦ膜へのセミドライブロッティングの結果を示す。（ａ）の写真は、対照ゲルのブロッティングを示す。（ｂ）の写真は、型枠付メッシュゲルのブロッティングを示す。泳動像はいずれも分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）である。
図４は、ＣＢＢ染色の結果を示す。（ａ）の写真は、対照ゲルのＣＢＢ染色結果を示す。（ｂ）の写真は、型枠付メッシュゲルのＣＢＢ染色結果を示す。（ａ）において、左側より１、２、８、９、１０レーンの各泳動像が、分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）であり、一方、左側より３、４、５、６、７レーンの泳動像が各種濃度のタンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）である。また、（ｂ）において、左側より１、２、７、８、９レーンの各泳動像が、分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）であり、一方、左側より３、４、５、６レーンの泳動像が各種濃度のタンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）である。
図５は、銀染色の結果を示す。（ａ）の写真は、対照ゲルの銀染色結果を示す。（ｂ）の写真は、型枠付メッシュゲルの銀染色結果を示す。（ａ）及び（ｂ）において、左側より１、５、６レーンの泳動像が、分子量マーカー（プレシジョンプレステインドマーカー）であり、一方、左側より２、３、４レーンの泳動像がタンパク質試料（マウス脳由来の１００，０００ｘｇ遠心分離上清）である。
図３〜５に示すように、型枠付メッシュゲル（本発明に係るスラブ型電気泳動用ゲル）を用いた泳動後の染色像及びブロッティング結果は、対照ゲル（通常のゲル）を用いた場合と比較して、全く同様の感度と分解能を示しており、型枠付メッシュゲルを従来のゲルと全く同じ目的で用いることができることが判った。
さらに、ゲルの物理的強度比較では、対照ゲルは折りたたんだ後、ごくわずかな圧力ですぐに割れてしまったが、一方、メッシュゲルはほぼ完全に折りたたんでも、壊れずに元に戻すことができた。
【産業上の利用可能性】
【０００６】
本発明によれば、電気泳動後、支持体および場合により型枠、を保持したまま、容易に染色又はブロッティングに供することができるスラブ型電気泳動用ゲルが提供される。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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