(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ココナツケーキ、コプラミール又はパーム核ミールに、含有するマンナン重量あたり１０重量％以上のβ−１，４−マンノビオースが生成するようにマンナン分解酵素を作用させて得られる、β−１，４−マンノビオース含有組成物の水溶性成分を有効成分とする肥満細胞脱顆粒抑制効果を有する、抗アレルギー剤。
【請求項２】
ココナツケーキ、コプラミール又はパーム核ミールに、含有するマンナン重量あたり１０重量％以上のβ−１，４−マンノビオースが生成するようにマンナン分解酵素を作用させて得られるβ−１，４−マンノビオース含有組成物を乾燥させ、エタノールを加えて抽出した残渣成分に水を加えて抽出される成分を有効成分とする肥満細胞脱顆粒抑制効果を有する、請求項１に記載の抗アレルギー剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の属する技術分野】
【０００１】
本発明は、β−１，４−マンノビオースを主成分とすることを特徴として、肥満細胞脱顆粒抑制効果を有して、アレルギーの発症に重要な物質であるヒスタミン放出抑制効果をもつ、抗アレルギー組成物であり、またはそれらを含む飲食物または飼料に関するものである。
【従来の発明】
【０００２】
最近はアレルギー疾患の増加傾向にあり、その原因は、スギ花粉の増大、住環境によるアレルゲンの増加、欧米型の食事による食生活の変化、大気汚染等々いろいろ考えられているが原因ははっきりしていない。またアレルギー症としては、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息などが主たる増加疾病である。
【０００３】
アレルギーは、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞の活性化のバランスがＴｈ２に傾くことで起こるといわれている。Ｔｈ１細胞は、細胞性免疫といわれるものをつかさどっており、Ｔ細胞の増殖、分化やマクロファージ活性化を行っており、Ｔｈ2細胞は、液性免疫といわれており、Ｂ細胞の増殖、分化をつかさどっている。このＢ細胞は、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）といわれるものを産出している。このバランスがＴｈ２に傾きすぎると、過剰なＩｇＥが産出されてしまい、肥満細胞上の受容体と結合し、カルシウムバランスが崩れて、肥満細胞内の浸透圧がさがり、肥満細胞内部へ水が移動していき、最後には破裂（脱顆粒）してしまう。この肥満細胞の中には、ヒスタミン、セロトニン、ロイコトリエンなどの物質が入っており、肥満細胞の脱顆粒とともに、放出され、ヒスタミンの場合は生体内のＨ１受容体と結合し、鼻水、発赤・かゆみ・浮腫(ふしゆ)・痛み・気管支収縮といったいわゆるアレルギー症状を起こす。ＩｇＥは本来、寄生虫などに対して抗原抗体反応を示すもので、食品中のアレルゲンや花粉などにより分泌されてはいけないものである。たとえば食品中のアレルゲンが体内に侵入してくると腸管内では経口免疫寛容により、体内の免疫システムは本来無視しなければならない。しかしながら、免疫システムがＴｈ２側に傾きが崩れてしまっていると、この経口免疫寛容が作動しなくなり、やみくもにＩｇＥを産出してしまい、アレルギー症状になるのである。したがって、アレルギーの防御策としては、Ｔｈ１とＴｈ２の免疫システムのバランス改善というのが大きな課題となるが、食生活の改善という日常の注意事項とは別に、より能動的に改善する場合、以下のような考え方ができる。１）インフルエンザ、ツベルクリン反応のような強制的に、細菌を体内に導入しＴｈ１の細胞性免疫のみ活性化する方法２）ＩｇＡを産生促進させ、抗原を体内にいれない３）肥満細胞内の化学物質がＨ１受容体と結合しないようにする４）肥満細胞に直接働きかけて脱顆粒化を抑制する。
【０００４】
１）の方法については、あまり安全ということができず、体への負担も大きい。今後の医学の発展に負うところが大きい。２）のＩｇＡ産生促進は、特開２００５−７５７４０号公報にキノコの抽出物がＩｇＡを産生促進することなどが開示されている。３）のＨ１受容体に結合しないようにするのは、市販のアレルギー薬や風邪薬としてすでに大量に市場にでている。最後に４）の肥満細胞に直接働きかけて脱顆粒化を抑制する工夫であるが、この研究は最近始まったばかりである。例えば  J Pharmacol sci 98,90-93(2005)にはプロスタグランジンがＩｇＥが肥満細胞へ働きかけるのを阻止することにより脱顆粒化を抑制し、ヒスタミンの放出を抑制する効果があることが開示されている。またBiol.Pharm.Bull 28(8)1438-1443(2005)にはクルクミン化合物が肥満細胞におけるカルシウム伝達になんらかの影響及ぼして、脱顆粒化することを防止する機能があることを開示している。しかしながらこれは、高度な化合物であり、入手するには経済的な問題も考えられる。以上の現状から、本発明は、安全で、経済性に優れたもので、体に負担をかけないような天然に存在する成分で、肥満細胞に直接働きかけて脱顆粒を抑制するものがないかを検討し、その結果として得られたものである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明が解決しようとする課題は、安全性に優れ、肥満細胞に直接働きかけて脱顆粒を防止し、ヒスタミン放出抑制を行うことができる抗アレルギー組成物又は剤およびそれらを含む飲食物、飼料を提供することにある。【０００６】
本発明者らは、このような課題を解決するために鋭意検討の結果、コプラミール、パーム核ミールを原料として、マンナン分解酵素を作用させ、加水分解し、エタノールを用いて侠雑物を除去し、水溶性成分を得て、１０重量％以上のβ−１，４−マンノビオースを主成分とするものが、肥満細胞に直接働きかけて、ヒスタミン放出抑制作用があることを見出し、本発明に至った。【０００７】
すなわち、本発明はコプラミール、パーム核ミールにマンナン分解酵素を作用させ、エタノールで侠雑を物除去した水溶性成分中、分解前のマンナンに対して少なくとも１０重量％以上のβ−１，４−マンノビオースを主成分とすることを特徴とする肥満細胞の脱顆粒を抑制する効果のある抗アレルギー組成物であって、それらを含有する飲食物及び飼料を要旨とするものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、β−１，４−マンノビオースは、Ｄマンノース２分子がβ−１，４−グリコシド結合してなるものである。本発明において、β−１，４−マンノビオースは、例えば、マンノースから合成する方法や、β−１，４−マンナン（以下、単にマンナンともいう）を分解する方法により得ることができる。【０００９】
β−１，４−マンナンを分解する方法は、原料の資源性及び反応効率の点でより好ましく、より簡便にβ−１，４−マンノビオースを得ることができる。この方法では、例えば、マンナンを豊富に含有するココナツケーキ、パーム核ミール、コプラミール、グアーガム、ローカストビーンガムなどのマンナン含有天然物又はこれら天然物から抽出したマンナンに、マンナン分解酵素を作用させて、β−１，４−マンノビオースを得ることができる。【００１０】
ココナツケーキは、ココヤシ果実中の胚乳を潰してスラリー状にしたものを固液分解して得られる固形物をいい、食用としてされるものである。コプラミールは、一般に、ココヤシ果肉内の核肉を天日乾燥もしくは熱風乾燥で乾燥させたコプラからヤシ油を抽出した際の残渣をいうが、本発明においては、天日若しくは熱風乾燥工程を経ずに抽出した搾油残渣をも含む。なお、ヤシ油の抽出方法は、溶剤、エクストルーダーもしくはこれらを併用したものを用いて抽出したもの等、特に限定されない。また、パーム核ミールは、アブラヤシの種子であるパーム核からパーム核油を抽出した残渣であり、これも、溶剤抽出、エクストルーダー抽出もしくはこれらの併用等によって抽出できるが特に限定されるものではない。これらのうち、ココナツケーキは、食用として用いられることから、後述するマンノビオースの抽出、精製を省略してコストを抑えられることができる点で、より好ましく用いられる。【００１１】
本発明においてマンナンの分解は、酵素による加水分解でなくてはならない。加水分解の方法の代表例としては、酸分解などがあるが、これらの方法による加水分解では、得られる組成物の酸変性等が起こりやすく、期待される効果が得られにくい。使用される酵素としては、マンナンを分解し、β−１，４−マンノビオースを分解前のマンナンに対して少なくとも１０重量％を産出するものであれば特に限定されるものではなく、マンナナーゼ、マンノシダーゼなどのヘミセルラーゼが挙げられ、例えば市販の製剤、菌体培養した培養液もしくは菌体から分離してきたものを使用することが可能である。市販の製剤としては、例えばヘミセルラーゼＧＭ「アマノ」（天野製薬株式会社製）、スミチームＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製）、セルロシンＧＭ５（阪急バイオインダストリー株式会社）等を好ましく使用できる。また、これらのほか、キシラナーゼ、セルラーゼとして市販されているものであっても、当該加水分解活性を有するものも使用でき、例えば、セルラーゼＹ-ＮＣ（ヤクルト薬品工業株式会社製）を使用できる。特に、マンノシダーゼ（exo型）活性が低く、マンナナーゼ（endo型）活性が高いヘミセルラーゼＧＭ「アマノ」（天野製薬株式会社製）、スミチームＡＣＨ（新日本化学工業株式会社製）が、マンノースの生成を抑え、多量にマンノビオースを生成させることができる点で好ましい。【００１２】
さらに、本発明で用いられる酵素は、水に溶解又は分散させた酵素液として、マンナン含有天然物又はこれから抽出したマンナンに作用させる。そして、マンナン含有天然物を用いる場合において効率的な反応を行うためには、マンナン含有天然物、マンナン分解酵素及び水からなる反応系における水分の調整が重要である。水分調整のための水の添加量としては、マンナン１００重量部に対して、５０〜１００００重量部であることが好ましく、５０〜１５００重量部であることがより好ましい。水の添加量をこのような範囲とすることにより、十分な水分の存在下で、マンナン類の繊維質を十分に膨潤させ、酵素液を接触しやすくすることができる。しかしながら、必要以上の水分量は、酵素濃度を希釈する結果、却って反応効率を低下させるばかりでなく、乾燥させる場合には、乾燥工程における乾燥コストの上昇を招く。したがって、以上を考慮すれば、マンナン類１００重量部に対して、好ましくは５０〜５００重量部の水を添加するのが適当である。【００１３】
また、酵素量、反応時間としては、生成するマンノビオースが分解前のマンナンに対し、少なくとも１０重量％、好ましくは、加水分解により生成するマンノビオースが分解前のマンナンに対し１０〜８０重量％程度となるものであれば特に限定されず、かかる条件下では湿潤な酵素処理物を得ることができる。しかし、マンナナーゼ（endo型）活性が高い酵素は、通常、マンノシダーゼ（exo型）活性をも有していることから、酵素反応の時間が長すぎると、マンノビオースが分解されてマンノース量が増加してしまうため、反応時間は必要以上に長い時間としないことが好ましい。これら酵素反応条件は、マンノビオースの生成量ができるだけ多くなるように適宜設定される。この場合、β−１，４−マンノビオースがマンノースより多く含まれるよう設定するのが好ましく、例えば、β−１，４−マンノビオースに対するマンノースの割合が、６０重量％以下であるのがより好ましく、２０重量％以下であるのが特に好ましい。【００１４】
以上のようにして、例えば、原料としてパームカーネルミール（マンナン含有量は、およそ３６％）を用いて３〜３６時間反応させた場合、マンノビオース量は、使用する酵素の種類や量、時間にもよるが、原料１００重量部に対して、６〜１７重量部程度まで生成させることができる。【００１５】
得られた分解物は、好ましくは乾燥されるが、そのままの水溶液組成物であってもかまわない。乾燥方法は、特に限定されず、凍結乾燥や、デキストリンなどの賦形剤を加えての、スプレードライ、流動層乾燥等があげられる。また、必要に応じ、得られた酵素分解物から、侠雑物を除去するために、エタノールが利用される。他に侠雑物を除去する可能性のある溶剤としては、メタノール、イソプロパノール、ヘキサンなどが考えられるが、安全なものという観点からエタノールが好ましい。エタノールで侠雑物を除去した後は、水抽出を行ってもよい。その場合、主成分として考えられるβ−１，４−マンノビオースが水溶性であることから、濃縮操作を行っても良い。得られた水溶性成分の乾燥方法は特に限定されない。特に乾燥せずに、そのままの水溶液組成物を用いてもかまわない。乾燥方法としては、凍結乾燥や、デキストリンなどの賦形剤を加えての、スプレードライ、流動層乾燥等があげられる。【００１６】
β−１，４−マンノビオースの含量は、加水分解前のマンナン重量に対して１０重量％以上となるように加水分解したものが好ましい。この含量が１０未満であるとき期待されるような肥満細胞の脱顆粒抑制効果は見られない。本発明に見られる肥満細胞の脱顆粒抑制効果が、このβ−１，４−マンノビオースのみによって起こるかどうかは定かではないが、少なくとも主要成分として働いていることが予想される。しかしながら、より期待する肥満細胞の脱顆粒抑制効果を得ようとするとマンナン含有組成物としてココナツケーキ、コプラミール及びパーム核ミールに限定されることから、これらの原料中に存在する微量な成分とβ−１，４−マンノビオースの相乗作用によって特異な効果を示していると考えられる。したがって、β−１，４−マンノビオースの存在量は１００％でも本発明の効果は得られると考えられるが、β−１，４−マンノビオースを高純度に取り出すには経済的にも負担がかかり、なおかつ推測される微量成分との相乗効果も期待できないことから、β−１，４−マンノビオースの含量は１０重量％以上、９０重量％未満が好ましく、１５重量%以上、４０重量%未満より好ましい。【００１７】
本発明の肥満細胞の脱顆粒抑制効果をもつ抗アレルギー組成物は、公地の方法により適宜製剤化して腸管免疫賦活剤の形態で用いられてもよく、これらは、そのまま単体で食することや、パン類、菓子類さらにはビタミン剤やその他健康食品といわれるものに添加して飲食物として摂取食することができ、特に制限されることはない。また同様に水産及び陸上動物用飼料に添加して飼料としても使用することができる。
【実施例】
【００１８】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。なお、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
＜試料の調整＞
0.25重量部のヘミセルラーゼ（ヘミセルラーゼＧＭ「アマノ」（天野製薬株式会社製））を水に溶かした酵素液１５０重量部を３０％のマンナンを含むコプラミール、コプラミールA（乾燥工程を経ずに搾油した残渣の乾燥物）もしくはパーム核ミール、もしくはココナツケーキ１００重量部と混合し、60℃１２時間後、水分含量を１０％未満になるまで流動層乾燥を行い乾燥粉末を得た。【００１９】
この乾燥物１００重量部に対して２倍量のエタノールを加えて、攪拌後ろ過を行い、この操作を３回繰り返したのちに、残存エタノールを除去して得られたもの１００重量部に対して、５００重量部の60℃の温水を加えて、攪拌後ろ過を行い得られたろ液を凍結乾燥して本発明の抗アレルギー組成物を得た。その糖組成は以下のようであった。【００２０】
【表１】
0005169827.tif 000002
【００２１】
次に実施例１及び２にかかる肥満細胞脱顆粒抑制効果を確認するために以下の実験を行った。
ラットの肥満細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）の懸濁液（２×１０５cell/ml）を４００μｌ入れたマイクロプレート上に０．０５％ＢＳＡ含有タイロード液４００μｌ添加し、50μｇ/ｍｌの濃度の実施例１及び２水溶液を50μｌ添加し、37℃で1時間二酸化炭素培養を行った。【００２２】
その後、カルシウム輸送抗生物質である１μｇ/ｍｌのＡ２３１８７を50μｌ添加し5分後に反応を停止させて、遠心分離により上清を採取しヒスタミンの濃度を測定した。ヒスタミンの濃度測定は、ヒスタミン  ＥＩＡキット（Labor Diagnostika Nord GmbH & Co.KG）を用いて行った。
実施例における肥満細胞の脱顆粒抑制におけるヒスタミン放出抑制効果を表２に示す。【００２３】
【表２】
0005169827.tif 000003
【００２４】
以上の結果からも分かるように、本発明品は、肥満細胞に働きかけて、有意にヒスタミンの放出抑制をしていることが認められ、抗アレルギー組成物として機能を発揮することが分かる。
【産業上の利用可能性】
【００２５】
本発明によれば、β−１，４−マンノビオースを含む植物性マンナン分解物を主成分とすることを特徴として、腸管免疫に関して重要な抗体であるIgA産生量を上昇させることができる腸管免疫賦活作用を有し、病原性細菌、ウイルスによる疾病防止機能をもつ組成物、またはそれらを含む飲食物または飼料に利用可能である。