(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経変性および／または臨床的痴呆として発症する疾患状態を伴うタウタンパク質凝集を阻害するための、化合物を含む治療組成物であって、化合物が下記式（Ｉ）：
【化１】
0005147157.tif 000021
（式中、
Ｊ１およびＪ２は、ともに＝Ｏであり；βおよびδで表される共有結合は、単結合であり、γで表される共有結合は、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂがともに存在しないで二重結合であるか：
【化２】
0005147157.tif 000022
または：
Ｊ１およびＪ２は、ともに＝Ｏであり；βおよびδで表される共有結合は、単結合であり、γで表される共有結合は、単結合であるか：
【化３】
0005147157.tif 000023
または：
Ｊ１は、−ＯＲ７であり、Ｊ２は、−ＯＲ８であり；βおよびδで表される共有結合は、二重結合であり、γで表される共有結合は、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂがともに存在しないで単結合であり：
【化４】
0005147157.tif 000024
ここで、Ｒ１Ａが、独立して、−Ｍｅ、−ＯＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であり、化合物が式（ＩＩ）で示される化合物である場合、Ｒ１Ａは−ＯＭｅ、−ＣＯＯＨ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＣＯＯＭｅ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、または−ＳＯ３Ｍｅであり；
存在する場合には、Ｒ１Ｂが、−Ｈ、−Ｍｅ、−ＯＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２であり；
存在する場合には、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂが、それぞれ独立して、−Ｈ、−Ｍｅ、−ＯＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２；ここで、化合物が、式ＩＩＩの化合物である場合、Ｒ２Ａ及びＲ２Ｂは、ともにＨであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれが、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅまたは−ＯＣ（＝Ｏ）Ｅｔであり；
Ｒ７およびＲ８のそれぞれが、独立して、−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｍｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｅｔ、―ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅ、または−ＳＯ３Ｅｔであり；そして、
Ｍは、−ＳＯ３−基上の電荷を相殺する電荷または累積電荷の１個または複数のカチオンを意味する）
で示される化合物、並びに薬学的に許容され得るその塩および溶媒和物から選択される、治療組成物。
【請求項２】
Ｊ１およびＪ２がともに＝Ｏであり、βおよびδで表される共有結合が単結合であり、γで表される共有結合が、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂがともに存在しないで二重結合である、請求項１記載の治療組成物。
【化５】
0005147157.tif 000025
【請求項３】
Ｊ１およびＪ２がともに＝Ｏであり、βおよびδで表される共有結合が単結合であり、γで表される共有結合が、単結合である、請求項１記載の治療組成物。
【化６】
0005147157.tif 000026
【請求項４】
Ｊ１が、−ＯＲ７であり、Ｊ２が−ＯＲ８であり；βおよびδで表される共有結合が、二重結合であり、γで表される共有結合が、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂがともに存在しないで単結合である、請求項１記載の治療組成物。
【化７】
0005147157.tif 000027
【請求項５】
Ｒ７およびＲ８のそれぞれが、独立して、−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｍｅ、―ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、または−ＳＯ３Ｍｅである、請求項４記載の治療組成物。
【請求項６】
Ｒ７およびＲ８のそれぞれが、−Ｈである、請求項５記載の治療組成物。
【請求項７】
Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂがともに−Ｈである、請求項３記載の治療組成物。
【化８】
0005147157.tif 000028
【請求項８】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれが、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅ、−ＯＭｅ、または、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅである、請求項１〜７のいずれか１項記載の治療組成物。
【請求項９】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれが、独立して、−Ｈまたは−ＯＨである、請求項８記載の治療組成物。
【請求項１０】
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれが、−Ｈである、請求項９記載の治療組成物。
【請求項１１】
Ｒ３が、−Ｈである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の治療組成物。
【請求項１２】
Ｒ３が、−ＯＨである、請求項１〜１０のいずれか一項記載の治療組成物。
【請求項１３】
Ｒ１Ａが、−ＳＯ３Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり、Ｒ２Ａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれが、−Ｈである、請求項２記載の治療組成物。
【請求項１４】
Ｒ１Ａが、−ＯＭｅであり、Ｒ２Ａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれが、−Ｈである、請求項２記載の治療組成物。
【請求項１５】
Ｒ１Ａが、−ＣＯＯＨであり、Ｒ２Ａ、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれが−Ｈであり、Ｒ７およびＲ８が−Ｈである、請求項１記載の治療組成物。
【請求項１６】
Ｍが、存在する場合には、Ｎａ＋またはＫ＋である、請求項１〜１５のいずれか一項記載の治療組成物。
【請求項１７】
化合物が以下の化合物、並びに薬学的に許容され得るその塩および溶媒和物から選択される、請求項１記載の治療組成物：
【化１１】
0005147157.tif 000029
0005147157.tif 000030
【請求項１８】
疾患が、家族性多発性システムタウオパシー、皮質−基質変性、家族性ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインケル病、運動ニューロン疾患、レーヴィ体疾患、ピック病、進行性核上麻痺およびアルツハイマー病からなる群より選択される、請求項１〜１７のいずれか一項記載の治療組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、アルツハイマー病（ＡＤ）などの神経変性を伴うタンパク質の凝集、およびそのような凝集を調節し得る化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＡＤなどの痴呆状態は、しばしば、罹患患者の脳におけるβ−アミロイドプラークおよび神経原線維のもつれ（ＮＦＴ）などのタンパク性構造物の細胞内および／または細胞外沈着の進行性蓄積を特徴とする。これらの病変の出現は、病理的神経原線維変性および脳萎縮、ならびに認知障害とおおむね相関する（Mukaetova-Ladinska, E. B. et al. (2000) Am. J. Pathol. Vol. 157, No. 2, 623-636）。
【０００３】
ＡＤにおいて、神経炎プラークおよびＮＦＴの両方が、対螺旋フィラメント（ＰＨＦ）を包含し、その主要な構成要素は、微小管結合タンパク質であるタウである（Wischik et al. (1988a) PNAS USA 85,4506-4510）。プラークは、アミロイド前駆体タンパク質の異常プロセシングに由来する細胞外β−アミロイド原線維をも含む（ＡＰＰ； Kang et al. (1978) Nature 325, 733）。Wischikらの記載（"Neurobiology of Alzheimer's Disease", 2nd Edition (2000) Eds. Dawbarn, D. and Allen, S. J. , The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers, Oxford）では、神経変性性痴呆の病院におけるタウタンパク質の推定的役割を詳細に検討している。中前頭葉皮質におけるタウの正常形態の喪失、病理的ＰＨＦの蓄積およびシナプス喪失は、随伴する認知障害に相関する。さらに、シナプス喪失および錐体細胞喪失は、ともにタウ反応性の神経原病変の形態測定に相関し、分子レベルで、アルツハイマー病における可溶性形態から重合形態（即ちＰＨＦ）までのタウタンパク質プールのほとんどすべての再分布と平行する。
【０００４】
タウは、選択的スプライシングを受けたイソ型で存在し、その型は、微小管結合ドメインに相当する反復配列を３または４コピー含有する（Goedert, M. , et al. (1989) EMBO J. 8, 393-399; Goedert, M. , et al. (1989) Neuron 3, 519-526）。ＰＨＦ中のタウは、タンパク質分解的にプロセシングされて、コアドメインになり（Wischik, C. M., et al. (1988b) PNAS. USA 85,4884-4888 ; Wischik et al. (1988a) 前出); Novak, M., et al. (1993) EMBO J. 12, 365-370）、これは、反復ドメインの相シフトしたものからなる。そして、３つの反復のみが、安定なタウ−タウ相互作用に関与する（Jakes, R., et al. (1991) EMBO J. 10, 2725-2729）。一度形成されると、ＰＨＦ様タウ凝集物は、更なる捕獲の種として作用し、完全長タウタンパク質のタンパク質分解的プロセシングのための鋳型を提供する（Wischik et al. 1996 Proc Natl Acad Sci USA 93, 11213-11218）。
【０００５】
ＰＨＦに取り込まれたタウの反復ドメイン中に観察される相シフトは、反復ドメインが、フィラメントに取り込まれる間に誘導性のコンホーメーション変化を経ることを示唆する。ADの発症の間、このコンホーメーション変化が、傷害を受けたまたは突然変異した膜タンパク質などの、病理学的基質へのタウの結合により開始され得ることが予想される（Wischik, C. M., et al. (1997) in "Microtubule-associated proteins: modifications in disease", eds. Avila, J., Brandt, R. and Kosik, K. S. (Harwood Academic Publishers, Amsterdam) pp. 185-241を参照）。
【０００６】
形成および蓄積の過程では、まず、ＰＨＦが、おそらくＰＨＦの集合の前および集合過程において切断された初期タウオリゴマーから、細胞質内でフィラメントとして集合する（Mena, R., et al. (1995) Acta Neuropathol. 89, 50-56 ; Mena, R., et al. (1996) Acta Neuropathol. 91, 633-641）。その後、従来の細胞内ＮＦＴを形成し続ける。この状態では、ＰＨＦは、切断されたタウのコアと、完全長タウを含有するファジーな外殻からなる（Wischik C. M., et al. (2000) 前出）。集合プロセスは、対数的であり、正常な機能的タウの細胞内プールを消費しながら、新しいタウ合成を誘導して不足を補う（Lai, R. Y. K., et al., (1995), Neurobiology of Ageing, Vol. 16, No. 3, 433-445）。最終的に、ニューロンの機能的障害が進行して細胞死にまで至り、細胞外ＮＦＴを残す。細胞死は、細胞外ＮＦＴの数に強く相関する(Wischik et al. 2000, 前出)。もつれが細胞外空間に出されるので、ニューロンのファジーな外殻が漸進的に喪失するとともにＮ末端タウの対応する免疫反応性が喪失するが、ＰＨＦコアを伴うタウ免疫反応性は保持される（Bondareff, W. etal., (1994) J. Neuropath. Exper. Neurol., Vol. 53, No. 2, 158-164）。
【０００７】
明らかに、タウなどの疾患関連タンパク質の凝集を調節し得る化合物の同定は、非常に興味深い。
【０００８】
ＷＯ９６／３０７６６（Ｆ  Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）は、タウ−タウ会合の阻害のためのアッセイ、そのアッセイを用いて同定された特定の阻害剤を開示する。その中の図２３および２４は、その阻害特性に従って特定の化合物を順位付けしている。ビタミンＫ（＝Ｋ２）は、０．６７４の値を有し、メナジオン（ビタミンＫ３としても知られる）は、１．０４２の値を有すると記載されている。順位付けにおいて、値１は、化合物の非存在下で観察される結合に同等な結合を表す。
【０００９】
無論、ビタミンＫは、それ自体、治療薬として周知である。ビタミンＫの短い総説が、"Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics", 9th edition, pp 1582-1585, 1998に掲載されている。さらに包括的な総説がWilliam Friedrich "Vitamins", pp 285-338, 1988 ; Thorp et al (1995), Drugs 49, 376-387; Vermeer and Schurgers (2000), Blood Stasis and Thrombosis, 14, 339-353に掲載されている。ビタミンＫの還元型は、酵素であるγ−グルタミルカルボキシラーゼのコファクターとして作用する。この酵素は、ビタミンＫ依存性凝固因子（第ＩＩ、ＶＩＩ、ＩＸ、Ｘ因子、ならびに抗凝固タンパク質である、プロテインＣおよびプロテインＳ）上のγ−カルボキシグルタメートへのグルタミン酸残基の転移に関与する。タンパク質を含有する他のγ−カルボキシグルタミン酸（いわゆるＧｌａ−タンパク質）は、血漿（プロテインＺ）、骨（オステオカルシン）、腎、肺および精巣の組織に見出されている。非血液学的Ｇｌａ−タンパク質の機能は、Vermeer and Schurgers (2000, 前出）に大要が述べられている。しかし、これらのタンパク質は、脳内には見出されていない（Vermeer (1990), Biochem J, 266, 625-636）。
【００１０】
ビタミンＫ類似体の従来からの治療的使用には、成人および新生児における低プロトロンビン血症、脂溶性物質の不適切な吸収、および嚢胞性線維症、スプルー、クローン病および全腸炎などの腸吸収不良症候群が含まれる。
【００１１】
上記の治療的使用に加え、ビタミンＫ３は、広い範囲のげっ歯類およびヒトの腫瘍細胞系に対して、in vitroにおいて抗腫瘍活性を有することでも知られている（Hu et al., 1996）。この活性のメカニズムは不明である。ビタミンＫ３が、いくつかのセカンドメッセンジャーキナーゼカスケードに対して複雑な作用を有することが示されており（Markovits et al. , 1998; Wu and Sun 1999）、ビタミンＫ３が、ペプチド配列（Ｉ／Ｖ）ＨＣＸＸＸＸＸＲ（Ｓ／Ｔ）Ｇを含むキナーゼ／ホスファターゼと共有結合を形成し、Ｃｄｃ２５ホスファターゼを阻害することにより細胞周期停止および細胞死を誘導することが、具体的に提唱されている。しかし、タウの反復ドメイン中には、共通配列［ＨＣＸＸＸＸＸＲ（Ｓ／Ｔ）Ｇ］は見出されていない。
【００１２】
１件の研究（Nakajima et al., 1993）において、ビタミンＫ誘導体の培養ＣＮＳニューロンに対する作用を検討したところ、ビタミンＫ１およびＫ２が、１０ｎＭ〜１μＭの範囲で顕著な生存促進作用を有することが見出された。対照的に、ビタミンＫ３（メナジオン）は、この生存促進活性のわずか１０％たらずを有するのみであり、しかも１μＭにおいてのみ見られた。この作用のメカニズムが何であれ、エポキシドレダクターゼのステップに干渉するクマリン抗凝固剤が、生存促進アッセイに何ら作用を有しなかったことから、ビタミンＫサイクルに依存するものではなかった。培養ヒト神経芽腫細胞を使用して、Ko et al. (1997）は、メナジオンが高用量（２００μＭ）でタウタンパク質の脱リン酸化、および広い範囲のタンパク質の酸化の両方を起こすことを示した。興味深いことに、Wischik et al. (2000）で詳細に検討された理由から、タウタンパク質脱リン酸化は、タウタンパク質の凝集を促進すると予測されるかもしれない。
【００１３】
さらに最近、Ko et al. (2000）は、高用量メナジオンで誘導された酸化的ストレスに対するニューロン細胞の感受化におけるα−シヌクレインの病原的突然変異の役割を検討している。本明細書では、著者らは、酸化的ストレスを生ずる化合物によって誘導されるチオール枯渇が、遺伝性パーキンソン病における突然変異体α−シヌクレインの毒性に関与する一般的メカニズムであることを論じ、治療への理に叶った取組みが、メナジオンなどの物質により生じた酸化剤損傷に対向することに基づくことを暗示している。
【００１４】
しかし、ＷＯ９６／３０７６６（Ｆ  Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）に記載された単独のデータ以外には、神経変性疾患を伴うタンパク質凝集の阻害におけるナフトキノン型化合物の役割を示し、最適化するために、研究は行われていない。
【００１５】
発明の開示
本発明者は、神経変性疾患を伴うタンパク質の凝集を阻害するために使用することができるナフトキノン型化合物の構造を研究してきた。新規なアッセイ技術を使用して、ＷＯ９６／３０７６６に記載のデータとは対照的に、メナジオンおよび関連化合物が、高度に効果的な阻害剤であり得ることを示している。ビタミンＫ由来化合物などのナフトキノン型化合物についての詳細な構造−機能の特性を、タンパク質（例えばタウタンパク質）凝集阻害剤としてのその使用面において決定した。当業者が理解するであろうように、本開示に鑑みれば、これらの結果は、特に、こうしたタンパク質凝集を伴う疾患（ＡＤなど）の処置におけるこうした化合物の有用性を示す。
【００１６】
より具体的には、本発明者は、下記構造式中の「３」位の基、一般には置換基Ｒ２Ａが、存在しないか、または伸長した基（例えば、ビタミンＫ２またはＫ３における）よりむしろ、比較的短い（例えば、メナジオンにおけるように）ことが効能において有利であり得ることを決定してきた。これは、ＷＯ９６／３０７６６に鑑みて予測されないことであるばかりでなく、以前の、より一般的なこれらの化合物の構造−機能関係に鑑みても予測されないことである。例えば、Isler and Wiss (1959), Vitamins and Hormones, 17, 53-90, at page 77, the"biological activity"of Vitamin Kl and K2において、ビタミンＫ１およびＫ２ならびにそれらの類似体の「生物学的活性」が、「３」位の側鎖が短くなるにつれ低下することを示す。
【００１７】
本発明の化合物
本発明の態様は、３’位に、比較的短い基を有するか、または基を有しないビタミンＫ型化合物（以下に、より詳細に定義）の、タンパク質凝集の神経変性疾患との関連における使用に基づくものである。
【００１８】
上記の通り、「ビタミンＫ］として知られる一クラスの化合物は、それらの天然の形態において、血液凝固に要するいくつかの因子の正常な生合成に必須な食物成分に対応する。この活性は、ビタミンＫ１（葉野菜に多い形態である、フィトナジオン即ち２−メチル−３−フィチル−１，４−ナフトキノン）およびビタミンＫ２（メナキノン）と呼ばれる、少なくとも２種の明らかに異なる天然の物質が担っている。後者は、フィトナジオンのフィチル側鎖が、２〜１３プレニル単位からなる側鎖に置き換えられており、それに従って番号付けされている、一連の化合物（メナキノン）を示す。腸内細菌および肝は、合成脂溶性類似体であるメナジオンからメナキノン（大部分はメナキノン−４）を合成することができる。メナジオンには、２つの一般的な水溶性誘導体、メナジオールリン酸ナトリウムおよびメナジオン硫酸水素ナトリウムがあり、これらは投与後メナジオンに変換される。メナジオンに関連する他の化合物、特にラパコール（２−ヒドロキシ−３−（３−メチル−２−ブテニル）−１，４−ナフトキノン）に関連する化合物は、抗腫瘍活性について研究されている。３位における側鎖についての構造変異体を、Rao (1974)が概説している。ラパコールに関するいくつかの典型的な毒性学的データおよび臨床データは、Seiber et al. (1976）およびMorrison et al. (1970）により記載されている。
【００１９】
本発明は、具体的には下記式：
【００２０】
【化８】
0005147157.tif 000002
【００２１】
（式中、
Ｊ１およびＪ２は、ともに＝Ｏであり；即ち、αおよびεで表される共有結合は、二重結合であり；βおよびδは、単結合であり、
γで示される共有結合は、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂがともに存在しないで二重結合であるか；または、
γで示される共有結合は、単結合である）
で示される化合物に関する。
【００２２】
別の実施態様においては、Ｊ１は、−ＯＲ７であり、Ｊ２は、―ＯＲ８であり；即ち、αおよびεで表される共有結合は、単結合であり；βおよびδは、二重結合であり、γで示される共有結合は、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂがともに存在しないで二重結合である。
【００２３】
本明細書に記載の化合物の酸化型および還元型はともに、本発明に使用することができる。
【００２４】
したがって、具体的実施態様においては、本発明の化合物は下記式を有する。
【００２５】
【化９】
0005147157.tif 000003
【００２６】
一つの実施態様において、本発明の化合物は、下記式を有する。
【００２７】
【化１０】
0005147157.tif 000004
【００２８】
一つの実施態様において、本発明の化合物は、下記式を有する。
【００２９】
【化１１】
0005147157.tif 000005
【００３０】
様々な、好ましく、具体的な実施態様を、ビタミンＫ１およびＫ２とともに図２に示し、本発明の部分を形成しない特定の他の不活性な化合物を、比較のために含めた。
【００３１】
存在する場合のＲ２ＡおよびＲ２Ｂ
本発明の化合物は、Ｒ２Ａが、比較的短い基（例えば、Ｋ１およびＫ２をＤＨ１０およびＫ３と比較）である化合物である。
【００３２】
したがって、Ｒ２Ａは、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル（例えば、非置換Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７ヒドロキシアルキル、Ｃ１−７アミノアルキル、Ｃ１−７カルボキシアルキルなどの置換Ｃ１−７アルキルなど）、−ＯＨ、Ｃ１−７アルコキシ、アシルオキシ、−ＣＯＯＨ、エステル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、スルホネート、Ｃ１−７アルキルスルホネート、または１〜１５個の炭素原子、好ましくは１〜１２個、より好ましくは１〜１０個、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル基で、飽和または部分的に不飽和であってもよい「短鎖アルキル基」から独立に選択してもよい。
【００３３】
本明細書で使用する「Ｃ１−７ハロアルキル基」は、少なくとも１個の水素原子（例えば、１、２、３個）がハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で置き換えられているＣ１−７アルキル基に関する。２個以上の水素原子がハロゲン原子と置き換えられている場合には、ハロゲン原子は、独立に、同一であっても異なっていてもよい。各水素原子が、ハロゲン原子と置き換えられていてもよく、その場合には、その基を、便宜的にＣ１−７ペルハロアルキル基と呼称しても良い。Ｃ１−７ハロアルキル基の例として、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２ＣＨＦ２、および−ＣＨ２ＣＦ３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
本明細書で使用する「Ｃ１−７ヒドロキシアルキル基」は、少なくとも１個の水素原子が、ヒドロキシ基で置き換えられているＣ１−７アルキル基に関する。Ｃ１−７ヒドロキシアルキル基の例として、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、および−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３５】
本明細書で使用する「Ｃ１−７アミノアルキル基」は、少なくとも１個の水素原子が、アミノ基で置き換えられているＣ１−７アルキル基に関する。Ｃ１−７アミノアルキル基の例として、−ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、および−ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ３）２が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３６】
本明細書で使用する「Ｃ１−７カルボキシアルキル基」は、少なくとも１個の水素原子が、カルボキシ基で置き換えられている。Ｃ１−７アルキル基に関する。Ｃ１−７カルボキシアルキル基の例として、−ＣＨ２ＣＯＯＨおよび−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
一つの実施態様において、短鎖アルキル基は、下記式：
【００３８】
【化１２】
0005147157.tif 000006
【００３９】
（ここで、ｎは０、１または２である）
の一つである。
【００４０】
Ｒ２Ｂは、存在する場合には、Ｒ２Ａと同じ群から選択され、Ｒ２Ａと同一であっても異なっていてもよい。しかし、好ましい化合物は、Ｒ２Ｂが存在しない化合物である。
【００４１】
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂのそれぞれは、独立して、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル（例えば、非置換Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７ヒドロキシアルキル、Ｃ１−７アミノアルキル、Ｃ１−７カルボキシアルキルなどの置換Ｃ１−７アルキルなど）、−ＯＨ、Ｃ１−７アルコキシ、アシルオキシ、−ＣＯＯＨ、エステル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、スルホネート、Ｃ１−７アルキルスルホネート、または短鎖アルキル基である。
【００４２】
Ｍは、−ＳＯ３−基上の電荷を相殺するための、電荷または累積電荷の１個のカチオンまたは複数のカチオンを意味する。一つの実施態様においては、Ｍは、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋またはＣｓ＋、より好ましくはＮａ＋またはＫ＋などのアルカリイオンを意味する。
【００４３】
好ましい化合物は、Ｒ１Ｂが不存在である化合物であるが、不存在ではない化合物（例えばＤＨ３）も活性を示す。
【００４４】
好ましい化合物は、Ｒ１Ａが、メチルなどのアルキルである化合物である（例えば、ＤＨ２およびＤＨ１４、さらにＤＨ１、ＤＨ７およびＤＨ１５を比較）。しかし、メチルに代わる、サルフェート基などの他の小さな基が好ましいこともある（Ｋ３およびＤＨ８を比較）。好ましくは、Ｒ１Ａ基は、電子供与基である。
【００４５】
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ
一つの実施態様においては、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂのそれぞれは、独立して、−Ｈ；−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＢｕ、−ｓＢｕ、−ｉＢｕ、−ｔＢｕ；−ＯＨ；−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−Ｏ（ｎＰｒ）、−Ｏ（ｉＰｒ）、−Ｏ（ｎＢｕ）、−Ｏ（ｓＢｕ）、−Ｏ（ｉＢｕ）、−Ｏ（ｔＢｕ）；−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｅｔ、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｎＰｒ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｉＰｒ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｎＢｕ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｓＢｕ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｉＢｕ）または−Ｏ（Ｃ＝Ｏ）（ｔＢｕ）；−Ｃ（＝Ｏ）ＯＭｅ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＥｔ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ｎＰｒ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ｉＰｒ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ｎＢｕ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ｓＢｕ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ｉＢｕ）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ｔＢｕ）；−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅ、−ＳＯ３Ｅｔ、−ＳＯ３（ｎＰｒ）、−ＳＯ３（ｉＰｒ）、−ＳＯ３（ｎＢｕ）、−ＳＯ３（ｓＢｕ）、−ＳＯ３（ｉＢｕ）、−ＳＯ３（ｔＢｕ）である。
【００４６】
一つの実施態様においては、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂのそれぞれは、独立して、−Ｈ；−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｅｔ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＭｅ、−ＣＯＯＥｔ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅ、−ＳＯ３Ｅｔ、または−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２である。
【００４７】
一つの実施態様においては、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂのそれぞれは、独立して、−Ｈ；−Ｍｅ、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＭｅ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２である。
【００４８】
一つの実施態様において、Ｒ１Ａは、−Ｍｅであり、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂは不存在である：
【００４９】
【化１３】
0005147157.tif 000007
【００５０】
一つの実施態様において、Ｒ１ＡおよびＲ１Ｂは、ともに−Ｈであり、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂは、上記定義の通りである：
【００５１】
【化１４】
0005147157.tif 000008
【００５２】
一つの実施態様において、Ｒ２ＡおよびＲ２Ｂは、ともに−Ｈであり、Ｒ１ＡおよびＲ１Ｂは、上記定義の通りである：
【００５３】
【化１５】
0005147157.tif 000009
【００５４】
一つの実施態様において、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂは、ともに−Ｈであり、Ｒ１ＢおよびＲ２Ｂは、上記定義の通りである：
【００５５】
【化１６】
0005147157.tif 000010
【００５６】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−７アルキル（例えば、非置換Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７ヒドロキシアルキル、Ｃ１−７アミノアルキル、Ｃ１−７カルボキシアルキルなどの置換Ｃ１−７アルキルなどを含む）、Ｃ１−７アルコキシまたはアシルオキシである。
【００５７】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の有無は、活性に大きく影響しないようである（例えば、Ｋ３とＤＨ２を比較）。
【００５８】
一つの実施態様において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、独立して、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルコキシまたはＣ１−７アルキルアシルオキシである。
【００５９】
一つの実施態様において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、独立して、−Ｈ；−ＯＨ；−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＢｕ、−ｓＢｕ、−ｉＢｕ、−ｔＢｕ；−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−Ｏ（ｎＰｒ）、−Ｏ（ｉＰｒ）、−Ｏ（ｎＢｕ）、−Ｏ（ｓＢｕ）、−Ｏ（ｉＢｕ）、−Ｏ（ｔＢｕ）；−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｅｔ、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｎＰｒ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｉＰｒ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｎＢｕ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｓＢｕ）、−ＯＣ（＝Ｏ）（ｉＢｕ）または−ＯＣ（＝Ｏ）（ｔＢｕ）である。
【００６０】
一つの実施態様において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、独立して、−Ｈ；−ＯＨ；−Ｍｅ、−Ｅｔ；−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅまたは−ＯＣ（＝Ｏ）Ｅｔである。
【００６１】
一つの実施態様において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、独立して、−Ｈ；−ＯＨ；−Ｍｅ；−ＯＭｅ；または、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｍｅである。
【００６２】
一つの実施態様において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、独立して、−Ｈまたは−ＯＨである。
【００６３】
一つの実施態様において、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、−Ｈであり、Ｒ３は、上記定義の通りである：
【００６４】
【化１７】
0005147157.tif 000011
【００６５】
一つの実施態様において、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、−Ｈであり、Ｒ３は、−Ｈである：
【００６６】
【化１８】
0005147157.tif 000012
【００６７】
一つの実施態様において、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のそれぞれは、−Ｈであり、Ｒ３は、−ＯＨである：
【００６８】
【化１９】
0005147157.tif 000013
【００６９】
Ｊ１およびＪ２
実施例に示したように、Ｊ１およびＪ２がともに＝Ｏである化合物、またはＪ１およびＪ２がそれぞれ−ＯＲ７および−ＯＲ８である化合物は、両方とも、高い活性を有し得る（例えば、Ｋ３とＤＨ９、そしてＤＨも比較）。
【００７０】
したがって、上記式ＩＶについては、Ｒ７およびＲ８のそれぞれは、独立して、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル（例えば、非置換Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７ハロアルキル、Ｃ１−７ヒドロキシアルキル、Ｃ１−７アミノアルキル、Ｃ１−７カルボキシアルキルなどの置換Ｃ１−７アルキルなどを含む）、アシル（例えば、アセチルなどのＣ１−７アルキルアシルを含む）、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍまたはスルホネートである。
【００７１】
本明細書で使用する「アシル」は、基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒに関し、ここでＲは、例えば、Ｃ１−７アルキル基（Ｃ１−７アルキルアシルまたはＣ１−７アルカノイルとも呼ばれる）、Ｃ３−２０ヘテロシクリル基（Ｃ３−２０ヘテロシクリルアシルとも呼ばれる）、またはＣ５−２０アリール基（Ｃ５−２０アリールアシルとも呼ばれる）などのアシル置換基、好ましくはＣ１−７アルキル基である。アシル基の例として、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３（アセチル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３（プロピオニル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）３（ｔ−ブチリル）および−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ（ベンゾイル、フェノン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
一つの実施態様において、Ｒ７とＲ８は同一である。
一つの実施態様において、Ｒ７とＲ８は異なっている。
【００７３】
一つの実施態様において、Ｒ７およびＲ８のそれぞれは、独立して、−Ｈ、Ｃ１−７アルキル、Ｃ１−７アルキルアシル、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３ＭまたはＣ１−７アルキルスルホネートである。
【００７４】
一つの実施態様において、Ｒ７およびＲ８のそれぞれは、独立して、−Ｈ；−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＢｕ、−ｓＢｕ、−ｉＢｕ、−ｔＢｕ；−Ｃ（＝Ｏ）Ｍｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｅｔ、−Ｃ（＝Ｏ）（ｎＰｒ）、−Ｃ（＝Ｏ）（ｉＰｒ）、−Ｃ（＝Ｏ）（ｎＢｕ）、−Ｃ（＝Ｏ）（ｓＢｕ）、−Ｃ（＝Ｏ）（ｉＢｕ）、−Ｃ（＝Ｏ）（ｔＢｕ）；−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅ、−ＳＯ３Ｅｔ、−ＳＯ３（ｎＰｒ）、−ＳＯ３（ｎＢｕ）、−ＳＯ３（ｓＢｕ）、−ＳＯ３（ｉＢｕ）、または−ＳＯ３（ｔＢｕ）である。
【００７５】
一つの実施態様において、Ｒ７およびＲ８のそれぞれは、独立して、−Ｈ；−Ｍｅ、−Ｅｔ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｍｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｅｔ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ３Ｍｅ、または−ＳＯ３Ｅｔである。
【００７６】
一つの実施態様において、Ｒ７およびＲ８のそれぞれは、独立して、−Ｈ；−Ｍｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｍｅ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、または−ＳＯ３Ｍｅである。
【００７７】
一つの実施態様において、Ｒ７およびＲ８のそれぞれは、−Ｈである：
【００７８】
【化２０】
0005147157.tif 000014
【００７９】
本発明の好ましい化合物は、本明細書記載のアッセイ、具体的には以下に記載する「細胞系アッセイＩ」において高い活性を示す。好ましい化合物は、１０未満、より好ましくは５未満のＢ５０を有する。同様に、低い毒性を有し、４を超える、より好ましくは１０を超えるＲｘｉｎｄｘを有する。
【００８０】
以下に用いるように、文脈が別途必要としない限り、「ビタミンＫ化合物」は、メナジオン、メナジオールおよびそれらのジエステルなどのこれらの化合物のすべて、および本明細書に記載された式によるこれらのあらゆる類似体（以上は単なる例示）を包含することを意図する。
【００８１】
本発明の使用
一態様において、疾患状態を伴う、タンパク質の凝集を阻害するためのビタミンＫ化合物の使用が開示されている。
【００８２】
一般に、本発明を適用し得るタンパク質凝集は、誘導されたコンホーメーションの重合化相互作用、即ち、タンパク質、またはそのフラグメントのコンホーメーション変化が、自己伝播的様式で、更なる（前駆体）タンパク質分子の鋳型性の結合および凝集を引き起こす相互作用から生じるタンパク質凝集である。一旦、核形成が始まると、更なるタンパク質分子の、誘導されたコンホーメーション重合化を含む凝集カスケードが順々に起こり、凝集物中に、更なるタンパク質分解に実質的に抵抗性の毒性生成物フラグメントを形成することになる。そのように形成されたタンパク質凝集物は、神経変性、臨床的痴呆およびその他の病理症状として発現される疾患状態の近因であると考えられている。
【００８３】
タウタンパク質との関連における使用
本発明の好ましい実施態様は、タウタンパク質の凝集の阻害に基づく。本明細書で使用する「タウタンパク質」は、タウタンパク質ファミリーのあらゆるタンパク質に広く言及する。タウタンパク質の特徴は、重合と脱重合の繰り返し周期の間に微小管と一緒に精製される、多数のタンパク質ファミリー中の一員であることであり（Shelanski et al. (1973) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 70., 765-768）、微小管結合タンパク質（ＭＡＰ）として知られている。タウファミリーの構成員は、特徴的なＮ末端セグメント、Ｎ末端セグメントに挿入されている約５０アミノ酸の配列（脳内で発生的に制御されている）、３１〜３２アミノ酸の３または４回の直列反復からなる特徴的な直列反復領域、およびＣ末端テールを有するという特性を共有する。
【００８４】
ＭＡＰ２は、細胞体樹状突起コンパートメント中の優勢な微小管結合タンパク質である（Matus, A., in "Microtubules" [Hyams and Lloyd, eds.] pp 155-166, John Wiley and Sons, NY）。ＭＡＰ２のイソ型は、直列反復領域におけるタウタンパク質とほぼ同一であるが、Ｎ末端ドメインの配列および長さの両方については実質的に異なる（Kindler and Garner (1994) Mol. Brain Res. 26,218-224）。それにもかかわらず、直列反復配列における凝集は、タウの反復ドメインに選択的ではない。したがって、タウタンパク質またはタウ−タウ凝集に関する本明細書の考察は、タウ−ＭＡＰ２凝集、ＭＡＰ２−ＭＡＰ２凝集などとも関係するとして捉えるべきであることが理解されるであろう。
【００８５】
他のタンパク質
図４は、種々の他の疾患に関連する凝集するタンパク質を列挙した表であり、その阻害は、本発明の一部を形成する。それぞれの場合において、それらのタンパク質の凝集開始および／または突然変異が、役割を果たし得る疾患をも列挙する。
【００８６】
表から明らかに見て取れるように、病理学的タンパク質凝集を特徴とする疾患の例として、運動ニューロン疾患およびレーヴィ体疾患が挙げられる。さらに、ピック（Pick）病および進行性核上麻痺（ＰＳＰ）などの神経原線維障害の病因は、それぞれ歯状回（dentate gyrus）および新皮質の星状錐体細胞（stellate pyramidal cells）中の、異常な、切断されたタウ凝集物の蓄積と相関するようである（Wischik et al. 2000, 前出）。本発明を適用し得る他の「タウオパシー」として、家族性多発性システムタウオパシー（Familial Multiple System Tauopathy）、皮質−基質変性、および家族性ゲルストマン‐シュトロイスラー−シャインケル病が挙げられる。
【００８７】
したがって、タウタンパク質またはタウ様タンパク質（例えばＭＡＰ２）について本発明の実施態様が記載されている上記考察に鑑みて、その記載は、上記の他のタンパク質（例えば、β−アミロイド、シヌクレイン、プリオンなど）、または凝集の伝播に必須のドメインのコンホーメーション変化により類似の病理学的凝集を開始もしくは受け得る他のタンパク質、またはそのように形成された凝集物にタンパク質分解に対する安定性を付与する他のタンパク質に等しく適用するものとして捉えるべきであることが理解されるであろう（article by Wischik et al. (in "Neurobiology of Alzheimer's Disease", 2nd Edition (2000) Eds. Dawbarn, D. and Allen, S. J., The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers, Oxford）。このようなタンパク質はすべて、本明細書において「凝集疾患タンパク質」と言及する。こうした疾患を、本明細書において「タンパク質凝集の疾患」と言及する。
【００８８】
同様に、本明細書において「タウ−タウ凝集」などと言及する場合には、β−アミロイド凝集、プリオン凝集およびシヌクレイン凝集などの、この点において類似の特性を有する、他のタンパク質の他の凝集に適用可能であるとも考えられる。「タウのタンパク質分解性の分解」なども同様である。
【００８９】
他の使用および方法
上記の通り、一つの態様において、タンパク質の凝集を阻害するためのビタミンＫ化合物の使用が開示されており、その凝集は、上記の疾患状態と関連するものである。
【００９０】
更なる実施態様は、上記のタンパク質凝集の疾患の治療または予防の方法であり、その方法は、上記疾患状態を伴うタンパク質の凝集を阻害するために、被検対象にビタミンＫ化合物、またはそれを含む治療組成物を投与することを含む。
【００９１】
更なる実施態様において、上記のタンパク質凝集の疾患の治療または予防の方法における使用のためのビタミンＫ化合物またはそれを含む治療組成物が開示されており、その方法は、上記疾患状態を伴うタンパク質の凝集を阻害するような、被検対象にビタミンＫ化合物、またはそれを含む治療組成物を投与することを含む。
【００９２】
更なる実施態様において、上記のタンパク質凝集の疾患の治療または予防の方法における使用のためのビタミンＫ化合物またはそれを含む治療組成物が開示されており、その方法は、上記疾患状態を伴うタンパク質の凝集を阻害するような、被検対象に医薬を投与することを含む。
【００９３】
一つの実施態様において、上記の疾患状態を伴う、哺乳類の脳内におけるタンパク質の凝集を制御する方法であって、その処置が、その治療を要する上記哺乳類に、上記凝集の阻害剤の予防的または治療的な有効量を投与するステップを含み、阻害剤がビタミンＫ化合物である方法を開示している。
【００９４】
本発明の別の実施態様において、哺乳類の脳内のタンパク質凝集（例えば、ＰＨＦの形態、場合によりＮＦＴ）の生成を阻害する方法であって、処置が上記の通りである方法を提供する。
【００９５】
ビタミンＫ化合物は、治療すべき状態または疾患により、単独でまたは他の処置と併用で、同時にまたは逐次的に投与してもよい。具体的には、ビタミンＫ化合物を関係のあるタンパク質凝集反応に対する他の阻害剤と使用または処方することが望ましいかもしれない。例えば、タウの場合には、これは、その内容が参考として本明細書に取り込まれている、ＷＯ９６／３０７６６または以前に出願された未公開の出願であるＧＢ０１０１０４９．５に記載されたような化合物であってもよい。
【００９６】
本発明を組合わせ得る、例えばＡＤを処置するための他の治療剤として、ドネペジル、ムスカリン受容体アゴニスト、およびβ―アミロイドの阻害剤などのコリンエステラーゼ阻害剤が挙げられる。
【００９７】
本発明の更なる態様は、ビタミンＫ化合物および１つの更なる化合物を含む治療併用組成物を提供する。
【００９８】
治療の投与量
本明細書に記載する化合物、組成物または医薬の投与は、好ましくは、「予防的有効量」または「治療的有効量」（場合によるが、予防は治療と考えてもよい）においてであり、これは、個々に利益を示すのに十分である。投与される実際の量、および投与の速度および時間経過は、処置される疾患の性質および重症度に依存する。
【００９９】
例えば、投与量の決定などの処置の処方は、一般開業医または他の医師の責任の範囲内にあり、典型的には、処置されるべき障害、個々の患者の状態、送達部位、投与方法および開業医に公知の他の因子を考慮する。
【０１００】
典型的には哺乳類はヒトであるが、動物における使用（例えば、試験目的または獣医治療目的）も本発明に包含されている。
【０１０１】
ビタミンＫの１日の推奨許容量は、約１０〜２０μg／日（乳児）；１５〜６０μg／日（１１歳以下の小児および少年）および５０〜１４０μg／日（１１歳を超える小児および成人）（米国でのＲＤＡ、１９８０）の間で変化する。他の報告では、０．０１〜０．０３mg/kg体重を推奨している（Friedrich, 1988, 前出、 discussion pages 319-320を参照）。本発明に使用されているもののようなビタミンＫ型化合物は、７０kgの成人に対して、約１０mg／日以上の量で投与してもよい（英国医師会および英国薬剤師会により発表されている英国国民医薬品集のデータによる）。
【０１０２】
治療薬の処方および投与
上記に示した式の化合物またはその薬学的に許容し得る塩などの適切な化合物を、更に毒性を試験した後に、本発明のこの態様の組成物に配合してもよい。
【０１０３】
上記成分に加え、組成物は、薬学的に許容し得る賦形剤、保存剤、可溶化剤、増粘性物質、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、着香剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、または被覆剤を含んでもよい。このような物質は、非毒性であるべきであり、活性成分の有効性を妨害すべきではない。担体または他の物質の正確な特徴は、投与経路に依存し得る。技術およびプロトコルの例は、"Remington's Pharmaceutical Sciences", 16th edition, Osol, A. (ed. ), 1980に見ることができる。メナジオン（ビタミンＫ３）の安定性に影響する化合物は、Daabis & Khawas (1969 Pharmazie 24,750) およびFattah and Daabis (1977 Pharmazie 32 H. 4, 232）で考察されている。
【０１０４】
組成物が医薬組成物に処方されている場合は、その投与は、粉剤、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬および軟ゼラチンカプセル、溶液、エマルジョンまたは懸濁剤の形態の経口的、経鼻的（例えば、鼻腔スプレー剤の形態で）などにより経口的に、または直腸的に（例えば、座剤の形態で）行うことができる。しかし、投与は、筋肉内、静脈内、皮膚、皮下または腹腔内投与により、非経口的にも行うことができる（例えば、注射用溶液の形態で）。
【０１０５】
したがって、例えば、医薬組成物が錠剤の形態である場合には、それはゼラチンまたは佐剤などの固体担体を含んでもよい。錠剤、コーティング錠、糖衣錠ならびに硬および軟ゼラチンカプセルの製造では、活性化合物およびそれらの薬学的に許容し得る酸付加塩を、薬学的に不活性な無機または有機賦形剤とともに加工することができる。乳糖、トウモロコシ、デンプンまたはそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩などを、例えば、錠剤、糖衣錠ならびに硬ゼラチンカプセルのために、そのような賦形剤として使用することができる。軟ゼラチンカプセルに適した賦形剤は、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固体および液体ポリオールなどである。組成物が、液体医薬処方物の形態である場合は、一般に、水、石油系、動物または植物油、鉱物油または合成油などの液体担体を含む。生理食塩液、デキストロース、または他の糖溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールを含んでもよい。溶液およびシロップの製造に適した他の賦形剤は、例えば、水、ポリオール、ショ糖、転化糖、ブドウ糖、トリハロースなどである。注射用溶液に適する賦形剤は、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油などである。静脈内、皮膚または皮下注射、または脳への内カテーテル注入のためには、活性成分は、発熱物質を含まず、適したｐH、等張性および安定性を有する非経口的に許容し得る水溶液の形態とされる。当業者は、例えば、注射用塩化ナトリウム、注射用リンゲル、注射用乳糖リンゲルなどの等張のビヒクルを用いて適切な溶液を調製することができるであろう。保存剤、安定化剤、緩衝剤および／または他の添加剤を、必要に応じて含んでもよい。
【０１０６】
ビタミンＫ１およびビタミンＫ３の経口および非経口製剤は、市販されている（本明細書に開示された使用のためではないが）。
【０１０７】
本明細書において行ったあらゆる相互参照の開示が、当業者が本開示を補うのに必要であり得る限りにおいて、本明細書中に具体的に取り込まれている。
【０１０８】
本発明を、以下の非限定的な図および実施例を参照しながら、ここでさらに記載する。本発明の他の実施態様は、これらに照らして当業者に思い浮かぶであろう。
【０１０９】
図
図１は、ビタミンＫ２存在下でのin vitroタウ−チュブリン結合を示す。
【０１１０】
図２ａは、ビタミンＫ１〜Ｋ３および２，３−ジメチル−１，４−ナフトキノン（ＤＨ１０と示す）の構造を示す。
【０１１１】
図２ｂは、２種の５−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン誘導体（ＤＨ１４およびＤＨ２と示す）を示す。比較のために、更なる化合物（ＤＨ１６と示す）を含む。
【０１１２】
図２ｃは、３種の化合物（ＤＨ１５、ＤＨ７およびＤＨ１と示される）において２’位にヒドロキシが存在することの効果を示す。
【０１１３】
図２ｄは、２’位にスルフェート基および亜硫酸水素基が存在することの効果を示す（ＤＨ８，ＤＨ３と示される化合物）。さらに、本発明のアルコキシ誘導体（ＤＨ１７）、および比較のために含まれる更なる化合物（ＤＨ１９と示し、ハロゲン化物を含む）を示す。
【０１１４】
図２ｅは、２種の１，４−ナフトキノール（ＤＨ４、ＤＨ５と示される化合物）を評価したことを示す。
【０１１５】
図２ｆは、アセテートおよびサルフェート置換の効果を示す（ＤＨ９、ＤＨ１１、ＤＨ１３と示される化合物）。
【０１１６】
図２ｇは、アルコキシおよびメチル置換の効果を示し（ＤＨ１８と示される化合物）、および比較のために含まれる更なる化合物（ＤＨ２０と示され、ハロゲン化物を含む）を示す。
【０１１７】
図３ａおよび３ｂは、細胞系アッセイＩＩを使用するタウ−タウ凝集阻害を示す。
【０１１８】
図４は、本発明において使用し得る、種々の他の疾患関連凝集タンパク質を列挙した表を示す。
【０１１９】
図５は、２つの切断された単位の結合が測定されているＷＯ９６／３０７６６のin vitro凝集アッセイの模式的表示を示す。Ａｌａ−３９０（「ａ」）で終了する種をまずＥＬＩＳＡプレートにコーティングする（炭酸ナトリウム緩衝液中：５０mM、ｐH９．６）。次に、Ｇｌｕ−３９１（「ｅ」）で終了する第二の切断されたタウ種を、種々の緩衝液条件でインキュベートする。種「ｅ」のみが、ｍＡｂ４２３により認識され、したがって、ｍＡｂ４２３免疫反応性は、第二のインキュベーション中に結合されるタウのみを測定する。
【０１２０】
図６ａは、細胞系アッセイＩ（「Ｔ４０／１２ｋＤ」）の基礎となるプロセスの模式的表示を示す。この図は、完全長タウの誘発が、どのようにしてその１２ｋＤフラグメントへの変換を導くことができるかを示す。ただし、細胞中に多少の１２ｋＤタウが予め存在する。図６ｂ〜ｅは、ＤＨ１５（陰性結果）、ビタミンＫ３、ＤＨ９およびＤＨ１７を使用したアッセイから得られた例示結果である。
【０１２１】
図７は、細胞系アッセイＩＩ（「ＳＳＫ４０／２５ｋＤ’」）の模式的表示を示す。
【０１２２】
実施例
方法
in vitroアッセイ
これは、ＷＯ９６／３０７６６に詳細に記載されている。簡単に述べると、固相基体に吸着させてある、コア反復ドメインに相当するタウのフラグメントは、可溶性完全長タウを捕獲し、高親和性をもってタウに結合することができる。この会合が、凝集したタウ分子のタンパク質分解による切断に対する安定性を付与する。そのプロセスは、自己伝播性であり、試作の医薬作用物質により選択的に遮断することができる（Wischik, C. M., et al. (1996), 前出）。
【０１２３】
アッセイを、模式的に図５に示す。
【０１２４】
細胞系アッセイＩ（「Ｔ４０／１２ｋＤ」）
本質的には、線維芽細胞（３Ｔ６）は、誘導可能なプロモーターの制御下で完全長タウ（「Ｔ４０」）を、および低い構成的レベルのＰＨＦ−コアタウフラグメント（１２ｋＤフラグメント）を発現する。Ｔ４０発現が誘導されたときは、Ｎ末端が〜αα２９５でありＣ末端が〜αα３９０で、細胞内で凝集依存性の切断を経て、それにより、より高いレベルの１２ｋＤのＰＨＦ−コアドメインフラグメントを生成する。１２ｋＤフラグメントの生成は、タウ凝集阻害剤によって用量依存的にブロックされ得る。実際、細胞内におけるタンパク質分解による１２ｋＤフラグメント生成に対する化合物の阻害活性の定量は、in vitroでのタウ−タウ結合の阻害を説明する、同じパラメータに関しては、完全に説明することができる。即ち、細胞内におけるタンパク質分解による１２ｋＤフラグメント生成の程度は、反復ドメインを介するタウ−タウ結合の程度によって、完全に決定される。細胞内における関連プロテアーゼの利用性は、限定的ではない。
【０１２５】
図６ａにそのプロセスを模式的に示し、図６ｂ〜６ｄに実施例の結果を示す。このプロセスは、以前出願された、未公開の出願ＧＢ０１０１０４９．５により詳細に記載されている。
【０１２６】
細胞系アッセイＩで使用されるパラメータ
１２ｋＤバンドの生成について観察された細胞データを、in vitroでのタウ−タウ結合の阻害を記述する標準的関数に近似的（即ち、測定値対予測値相関係数＞０．９）にあてはめることができる。このあてはめを成し得るために、２つの仮定を立てる必要があり、これらは、他の細胞に基づくin vitro研究からの結果と一致している：
１）タウの細胞内濃度は、約５００ｎＭである；
２）タウ−タウ結合親和性は２２ｎＭである。
【０１２７】
これらの仮定を立てると、下記関数：
活性＝［タウ］（［タウ］＋Ｋｄ＊（１＋［阻害剤］／ＫＩ））
を、標準的な数学的方法により解いて、見かけのＫＩ値を導き出すことができる。タウ−タウ結合のKd値が２２nMであることが知られている、タウ濃度５００nMでin vitroでのタウ−タウ結合について観察される値と比較したところ、細胞内でタンパク質分解に対して安定なＰＨＦのコアタウ単位を生成する唯一の決定因子は、単にタウ−タウ結合の程度であることが確認された。
【０１２８】
本明細書に例示された化合物について、更なるパラメータＢ５０が確立されている。Ｂ５０値は、細胞アッセイにおいて使用される試験化合物の確定した濃度であり、その濃度では完全長タウからの１２ｋＤバンドの相対的生成は、その化合物の非存在下で観察されるものの５０％にまで低下した。これは、in vivoにおいて対応する活性を達成するのに要する組織濃度の示唆を与える。一般に、見かけのＫＩ値とＢ５０との間には、おおよその直線的関係があり、この関係をＫＩ値を導き出すのに使用することができる：
Ｂ５０（μM）＝０．０２１７  ×  ＫＩ（nM）
【０１２９】
細胞系アッセイＩＩ（「ｓｓＫ４０／２５ｋＤ」）
プロセスは、以前に出願された未公開の出願ＧＢ０１００１１９．７により詳細に記載されている。そこに示されているように、膜を標的とするタウ（ｓｓタウ１９０〜４４１、「ｓｓＫ４０」）の構成的発現が、２つの特異的切断生成物を生成する。すなわち、フラグメントがＣ末端で〜３９０残基で切断されている、少量の３０ｋＤ種（「Ｋ３０」）およびＮ末端で〜２９５残基で切断されている主要な２５ｋＤ種（「Ｋ２５」）である。これらの切断部位は、ＰＨＦコアドメインの既知の境界に相当し、細胞内でのこれらの生成は、反復ドメインのアンチパラレルな相シフト配置を介するＰＨＦ様タウの凝集に依存することを示す。
【０１３０】
これを模式的に図７に示す。完全長タウ（Ｔ４０）の発現が、膜を標的とするｓｓＫ４０フラグメントを構成的に発現する細胞中で誘導性プロモーターの制御下で活性化される場合には、Ｔ４０は、タンパク質分解によるプロセシングを受け、Ｋ４０フラグメント（〜αα１８５でのＮ末端切断）、Ｋ３０フラグメント（〜αα３９０でのＣ末端切断）およびＫ２５フラグメント（〜αα２９５でのＮ末端切断）を与える。
【０１３１】
実施例１−in vitroタウ−タウおよびタウ−チュブリン結合
ビタミンＫ２が、in vitroにおいてタウ−タウ結合アッセイにおいて何らかの活性を有することが見出された。１００μM未満の値では、in vitroでの見かけのＫＩ値は、９４２nMであった。しかし、ビタミンＫ２は、５００μM（すなわち、アッセイ条件におけるタウについては、２５００：１モル比）以下の濃度では、in vitroでのタウ−チュブリン結合を阻害しない。図１を参照のこと。
【０１３２】
更なるデータ（示さず）は、ＤＨ３(図２ｄ）が、５０μM（タウ濃度１００nm）以上の濃度で阻害を起こすことを示した。しかし、メナジオン（図２ａ）は、おそらくその溶解性低下のために、in vitroアッセイにおいて活性を示さなかった。
【０１３３】
これに基づいて、種々の溶解性の化合物とより容易に用いることができる細胞系アッセイを使用して、更なる構造活性特性評価を行った。
【０１３４】
実施例２  細胞系アッセイＩを使用するタウ−タウ阻害
図２ａは、ビタミンＫ１〜Ｋ３、およびＫ３（２−メチル−１，４−ナフトキノン（メナジオール））に密接に関連する２，３−ジメチル−１，４−ナフトキノン（ＤＨ１０と示される）の構造を示す。
【０１３５】
Ｔ４０／１２ｋＤ細胞アッセイを使用する細胞データから算出された見かけのＫＩおよびＢ５０について、対応する値を列挙し、上記のようにタウ−タウ結合の阻害の程度を決定した。
【０１３６】
細胞における阻害活性と構造を比較することにより、３’位の側鎖を長くすることが、活性の低下に関連することが明らかである。
【０１３７】
図２ｂは、２種の５−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン誘導体を示す。ＤＨ１４とＤＨ２の比較は、３’位のメチル基が、活性の増大には好ましいこと、および５’位のヒドロキシ基が不利にはならないことを示唆する。ＤＨ２は、細胞ＬＤ５０値２．１μMであり、試験された全化合物のうち最も毒性が高かったことが証明された。ＤＨ１６化合物は、活性を示さなかった。
【０１３８】
図２ｃは、３つの化合物における２’位のヒドロキシの存在の効果を示す。ＤＨ１５およびＤＨ１７から見て取れるように、２’位のヒドロキシは、活性には不利なようである。しかし、３−フェニル誘導体（ＤＨ１）には、弱い活性を観察することができる。
【０１３９】
図２ｄは、２’位のサルフェート基の存在の効果を示す。見てとれるように、サルフェート基を、活性を実質的に失うことなく、この位置に置くことができる。しかし、亜硫酸水素（動物用栄養剤として広く使用されているＫ３の一形態）は、活性を低下させた。メトキシ誘導体（ＤＨ１７）は、図２ａにおいてビタミンＫ３との比較から予測されるように、良好な活性を示した。ＤＨ１９と示された化合物は、凝集の阻害剤としてまったく活性を示さず、実際、凝集促進剤であり得るようである（結果を示さず）。これは、ＤＨ１９のエノール化特性を有する化合物が望ましくない可能性を示唆する。
【０１４０】
図２ｅは、２種の１，４−ナフトキノールを試験して得られた結果を示す。ジカルボニトリルは、完全に不活性であったが、ナフトエ酸型は、予備実験において活性を有した。ナフトエ酸は、一般に野菜に存在し、葉野菜および細菌において、より高級なナフトキノンの合成のための天然の前駆体である。
【０１４１】
図２ｆは、１位および４位のアセテートおよびサルフェート置換の効果を示す。このシリーズから見て取れるように、２−メチルジアセテート（ＤＨ９）は、高度に活性であるが、対応するナフトキノンと同様に、２，３−ジメチルジアセテート（ＤＨ１１）の活性は低下していた。２−メチルジサルフェートは、活性においては、中間である。
【０１４２】
図２ｇは、図２ａ中のＤＨ１０に関連する化合物を示すが、メチル基が、メトキシに置き換えられている（ＤＨ１８）。さらに、これも活性を有した（ＤＨ１７およびＫ３を参照）。ＤＨ２０と示される化合物は、凝集の阻害剤としてまったく活性を示さず、実際、凝集促進剤であり得るようである（結果を示さず）。
【０１４３】
実施例３  細胞系アッセイＩＩを使用するタウ−タウ阻害
細胞系アッセイＩを使用して得られた結果を確認するために、更なる実験を、細胞系アッセイＩＩで実施した。
【０１４４】
図３ａおよび３ｂは、タンパク質分解によるプロセシングを、１〜２μMの濃度のビタミンＫ３（メナジオン）を用いてこの系で遮断し得ることを示す。図３ａは、Ｔ４０→Ｋ２５の変換は、Ｋ３なしで見られるものの約４分の１にまで低下し、図３ｂは、Ｋ４０→Ｋ２５の変換が、Ｋ３なしで見られるものの約２分の１にまで低下していることを示す。このことから、Ｔ４０→Ｋ４０の変換も、Ｋ３なしで見られるものの約２分の１まで低下することが推測される。
【０１４５】
実施例４  細胞系アッセイＩを使用する毒性
上記化合物の毒性を、活性評価に使用されたＴ４０／１２ｋＤ細胞アッセイにおいて評価した。乳酸デヒドロゲナーゼアッセイキットＴＯＸ−７（Sigma Biosciences）を使用して製造元の指示書に従って化合物に２４時間曝露した後、残った細胞を融解した後、細胞数によって毒性を測定した。または、Promega UK（CytoTox 96）からのキットを、やはり製造元の指示書に従って使用した。
【０１４６】
この解析から、２つの重要な結論が得られる：
１．アッセイにおいて、タウ−タウ凝集の阻害剤としての化合物の活性と毒性との間には相関性は見られない。
【０１４７】
２．これまでに試験された化合物を考慮すると、いくつかのものは、約１２０nMという近似したＫＩ値を有し、これはＢ５０細胞活性レベル２．６μMに相当する。しかし、それらは、ＬＤ５０値により表されるように、相対的毒性が異なる。臨床使用のためのこの群の好ましい化合物は、最も高いＬＤ５０値を有するものであり得る。細胞アッセイにおいて化合物のそれぞれについて、以下のように治療係数（ＲｘＩｎｄｘ）が算出されている。
ＲｘＩｎｄｘ  ＝  ＬＤ５０／Ｂ５０
【０１４８】
ある種の上記化合物を、順に並べることができる。
【０１４９】
【表１】
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【０１５０】
【表２】
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【図面の簡単な説明】
【０１５１】
【図１】ビタミンＫ２存在下でのin vitroタウ−チュブリン結合を示す。
【図２ａ】ビタミンＫ１〜Ｋ３および２，３−ジメチル−１，４−ナフトキノン（ＤＨ１０と示される）の構造を示す。
【図２ｂ】２種の５−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン誘導体（ＤＨ１４およびＤＨ２と示す）を示す。
【図２ｃ】３種の化合物（ＤＨ１５、ＤＨ７およびＤＨ１と示される）において２’位にヒドロキシが存在することの効果を示す。
【図２ｄ】２’位にサルフェート基およびビスルファイト基が存在することの効果を示す（ＤＨ８、ＤＨ３と示される化合物）。
【図２ｅ】２種の１，４−ナフトキノール（ＤＨ４、ＤＨ５と示される）を評価したことを示す。
【図２ｆ】アセテートおよびサルフェート置換の効果を示す（ＤＨ９、ＤＨ１１、ＤＨ１３と示される化合物）。
【図２ｇ】アルコキシおよびメチル置換の効果を示す（ＤＨ１８と示される化合物）。
【図３ａ】細胞系アッセイＩＩを使用するタウ−タウ凝集阻害を示す。
【図３ｂ】細胞系アッセイＩＩを使用するタウ−タウ凝集阻害を示す。
【図４】本発明において使用し得る、種々の他の疾患関連凝集タンパク質を列挙した表を示す。
【図５】２つの切断された単位が測定されるＷＯ９６／３０７６６のin vitro凝集アッセイの模式的表示を示す。
【図６ａ】細胞系アッセイＩ（「Ｔ４０／１２ｋＤ」）の基礎となるプロセスの模式的表示を示す。
【図６ｂ】ＤＨ１５の影響を示す。
【図６ｃ】ビタミンＫ３の影響を示す。
【図６ｄ】ＤＨ９の影響を示す。
【図６ｅ】ＤＨ１７の影響を示す。
【図７ａ】細胞系アッセイＩＩ（「ＳＳＫ４０／２５ｋＤ」）の模式的表示を示す。
【図７ｂ】細胞系アッセイＩＩ（「ＳＳＫ４０／２５ｋＤ’」）の模式的表示を示す。
【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図２ｅ】
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【図２ｆ】
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【図２ｇ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６ａ】
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【図６ｂ】
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【図６ｃ】
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【図６ｄ】
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【図６ｅ】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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