(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（II）
【化１】
0005123172.tif 000009
（式中、Ｇｌｃはグルコシル基を示す）
で表されるエラグ酸配糖体またはその塩を有効成分とする脱顆粒阻害剤。
【請求項２】
抗炎症剤である請求項１記載の脱顆粒阻害剤。
【請求項３】
抗アレルギー剤である請求項１記載の脱顆粒阻害剤。
【請求項４】
経口投与剤である請求項１ないし３の何れかの項記載の脱顆粒阻害剤。
【請求項５】
下記式（II）
【化２】
0005123172.tif 000010
（式中、Ｇｌｃはグルコシル基を示す）
で表されるエラグ酸配糖体またはその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脱顆粒阻害剤に関し、更に詳細には、特定のエラグ酸誘導体またはその塩を有効成分とする脱顆粒阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、多くの炎症やアレルギー疾患に対して、これを抑制するためにステロイド系および非ステロイド系の医薬が広く使用されている。しかし、ステロイド系の薬剤は、ホルモン作用などの副作用が出るという問題があり、また非ステロイド系の薬剤は、胃腸障害などの消化管障害が臨床上問題となることがあった。【０００３】
特に、花粉症など一定期間継続するアレルギー性疾患に対する医薬は、長期にわたって投与することが多いため、より安全性の高い医薬が求められており、これに対応した天然物由来の薬剤の提供が求められていた。【０００４】
ところで、炎症や、アレルギー性疾患は、脱顆粒がその原因の一つとされているが、この脱顆粒阻害作用を有する天然物由来の成分としては、ザクロ果皮に含まれるエラグ酸の二量体が知られており、このものが抗炎症、鎮痛および解熱剤として有効であることが報告されている（特許文献１）。また。バラ科植物から得られるＧＯＤタイプのエラジタンニンが抗アレルギー剤、脱顆粒阻害剤として有効であることも報告されている（特許文献２）。【０００５】
この他に、抗炎症作用を有する天然物由来の成分としては、ヤマモモ（Myrica rubra）の樹皮抽出物等、様々な植物から得られた抽出物が炎症と関連のあるヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性を示すことについて開示されている（非特許文献１）。【０００６】
しかしながら、これらの従来報告されているエラグ酸誘導体やエラジタンニンは、その作用が弱いなど、十分に実用性があるものとは言い難く、現在でも天然物の有する抗炎症作用についての研究が継続して行われており、更に優れた天然物由来の脱顆粒阻害作用を示す物質の探索が求められている。【０００７】
【特許文献１】特開平５−３１０７４５号
【特許文献２】特開平９−１２４４９８号
【非特許文献１】Matsuda H, Morikawa T, TaoJ, Ueda K, Yoshikawa M.                      Chem  Pharm  Bull(Tokyo).,50(2):208-215, 2002
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明は、ステロイド系ないし非ステロイド系脱顆粒阻害剤のような、ホルモン作用などの副作用や、消化管障害などがなく、しかもこれら脱顆粒阻害剤より優れた脱顆粒阻害作用等を有する化合物を自然界から見つけ出し、これを利用した医薬を提供することを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、前記課題を達成するため、天然物から優れた脱顆粒阻害作用等を発現する化合物を鋭意検索していたところ、ヤブツバキの葉の抽出物中に、強力な脱顆粒阻害作用を有する物質が存在することを知った。そして更にその物質を分離、精製すべく研究を行った結果、この物質は特定のエラグ酸誘導体であることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１０】
すなわち本発明は、次の式（Ｉ）
【化３】
0005123172.tif 000002
（式中、Ｒ１は水酸基またはメトキシ基を、Ｒ２はメトキシ基を示すか、Ｒ１とＲ２が一緒になってメチレンジオキシ基を示し、Ｒ３は水酸基またはメトキシ基を、Ｒ４はグルコシルオキシ基または水酸基を示す）
で表されるエラグ酸誘導体またはその塩を有効成分とする脱顆粒阻害剤である。【００１１】
また本発明は、次の式（II）
【化４】
0005123172.tif 000003
（式中、Ｇｌｃはグルコシル基を示す）
で表されるエラグ酸配糖体またはその塩である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の式（Ｉ）のエラグ酸誘導体は、現在広く用いられているフマル酸ケトチフェンと比較し、これより優れた脱顆粒阻害作用を有するものである。特に、新規化合物である式（II）で表される化合物は、フマル酸ケトチフェンに比べ格段に優れた脱顆粒阻害作用を有するものである。【００１３】
したがって、式（Ｉ）を有効成分とする脱顆粒阻害剤、特に式（II）の化合物を有効成分とする脱顆粒阻害剤は、種々の炎症やアレルギー疾患、例えば、インフルエンザまたは他のウイルス感染に関連する痛み、発熱、炎症等の症状、細菌感染による咽頭炎、咽頭の痛み、気管支炎、扁桃腺、歯周炎、歯槽骨炎、歯痛、歯肉炎、痛風、関節炎、腎炎、肝炎、月経困難症、頭痛、潰瘍性大腸炎、捻挫および挫傷、筋肉痛、神経痛、滑膜炎、やけど、花粉症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎並びに外科的・歯科的治療後の炎症等を治療、予防するために利用できるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の脱顆粒阻害剤の有効成分の一つである、式（II）で表されるエラグ酸誘導体は、例えば、ヤブツバキ抽出物中に含まれるものである。【００１５】
このヤブツバキ抽出物は、ヤブツバキの葉を常法に従って適当な溶媒で抽出することにより得ることができる。原料であるヤブツバキ（Camellia japonica  L.）は、ツバキ科の双子葉植物であり、ヤマツバキとも呼ばれる野生種である。ツバキの園芸品種の大部分はヤブツバキから分化したもので、変種を含み、種間雑種が多様に作出されている。このヤブツバキの葉は、特にその産地や葉の採取時期が限定されるものではない。また、未乾燥葉を用いてもよいが、通常、乾燥した葉が使用され、この葉は、粉末ないしは細断された後に抽出操作に供されることが好ましい。なお、上記エラグ酸誘導体（II）は、ヤブツバキのみならず、ツバキ、カンツバキ等の葉にも含まれているので、これを得るために、上記ヤブツバキ抽出物に代えてツバキまたはヤブツバキの抽出物を利用することも可能である。これら抽出物を得るためのツバキや、カンツバキの葉の産地、採取時期等も、特に制約されるものではない。【００１６】
ヤブツバキ抽出物を得るために使用する溶媒としては、水、親水性溶媒またはこれらの混液が好ましい。このうち、水としては、ｐＨ８から１２程度のアルカリ性の水を用いることが好ましい。また、親水性溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノールなどのアルコール類；セロソルブ類；アセトンなどのケトン類；ジオキサン、テトラヒドロフランなどのエーテル類；ピリジン、モルホリン、アセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの含有窒素溶媒などが挙げられる。これらの抽出溶媒は、単独又は二種類以上の混合溶媒あるいは水との混合溶媒として使用してもよい。【００１７】
親水性溶媒を水との混合溶媒として使用する際の、それらの割合は、例えば、水／溶媒＝９５／５〜５／９５（容量比；以後の溶媒混合比はすべて容量比を用いる）の範囲から適当に選択することができる。【００１８】
上記した抽出溶媒のうち、特に好ましいものとしては、熱水や、メタノール、エタノールなどの低級アルコール類と水との混合溶媒が挙げられ、更に、低級アルコールを水との容量比で３０／７０ないし７０／３０で含有する低級アルコール−水混液が好ましい。【００１９】
上記した溶媒を使用する抽出は、適当な温度、例えば、１０℃〜溶媒の還流温度で実施することができ、好ましくは１５〜８０℃程度で行うこともできる。また、室温で冷浸抽出しても良い。また、抽出時間は、抽出温度によっても相違するが、５分間ないし２４時間程度、好ましくは、３０分間ないし１時間程度である。【００２０】
本発明化合物（Ｉ）のうち配糖体である化合物は、前記のように抽出された抽出液を公知の分離、精製手段により分離、精製することにより得ることができる。【００２１】
具体的な分離、精製手段の例としては、溶媒分配法と、吸着剤カラムクロマトグラム法、中圧カラムクロマトグラム法、高速液体クロマトグラム法等を組み合わせた方法が挙げられる。【００２２】
このうち、溶媒分配法は、得られた抽出物に疎水性溶媒を加え、十分に撹拌すれば良く、これに用いられる疎水性溶媒としては、水と分液可能な種々の溶媒、例えば、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ヘキサノール、オクタノール、２−エチルヘキサノール、シクロヘキサノールなどのアルコール類；ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、トリクロロエチレンなどのハロゲン化炭化水素；エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ブチルエーテル、などのエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル類などが挙げられる。これらの疎水性溶媒は、単独で又は、二種以上の混合溶媒として使用でき、これらの疎水溶媒の中では、ｎ−ブタノールなどが繁用される。【００２３】
また、吸着剤カラムクロマトグラム法は、得られた抽出物あるいはその精製物をダイヤイオン（Diaion）ＨＰ−２０、ＨＰ−２１、セパビーズＳＰ−８２５、ＳＰ−８５０、ＳＰ−２０７（何れも三菱化学製）、セファデックス（Sephadex）ＬＨ２０（Amersham  Biosciences）、アンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ（ローム・アンド・ハース社製）、トヨパール（Toyopearl）ＨＷ４０Ｆ(東ソー製)等の吸着剤カラムあるいは分子篩カラムに通し、１種以上の適当な溶出液で分離すれば良く、より活性の高い画分として精製抽出物を得ることができる。【００２４】
上記の吸着カラムクロマトグラフィーにおいて、有利に用いることのできる溶媒としては、例えば、水や、メタノール、エタノール等の親水性溶媒あるいはこれらの混合溶媒を使用することができる。この工程では、２つ以上の吸着カラムクロマトグラフィーを組み合わせてもよい。【００２５】
更に、中圧カラムクロマトグラフ法としては、ＯＤＳ Ｗａｋｏｇｅｌ等のカラムを担体とし、上記同様、 水、アルコールまたはこれらの混液を溶出液とする方法が採用できる。更にまた、高速液体クロマトグラフィーも、コスモシル（Cosmosil）５Ｃ１８−ＡＲ（ナカライテスク）、デベロシル（Develosil、野村化学）、ＹＭＣ−ｇｅｌ（ワイエムシィ）、カプセルパック（資生堂）、ＴＳＫ−ＧＥＬ（東ソー）等の逆相系カラムを用い、移動相としてアセトニトリル／メタノール／水混液−酢酸アンモニウム溶液や、アセトニトリル／メタノール／水混液−酢酸溶液を使用する方法により実施できる。【００２６】
また、本発明化合物（Ｉ）のうち、配糖体でない化合物（アグリコン）は、配糖体である化合物（Ｉ）にβ−グルコシダーゼ等を作用させることにより容易に製造することができる。【００２７】
以上のようにして得られる本発明化合物（Ｉ）は、いずれも市販されているフマル酸ケトチフェンと比べ、優れた脱顆粒阻害作用を有するものであり、特に、新規化合物である式（II）の化合物は、格段に優れた脱顆粒阻害活性を有する。【００２８】
したがって、本発明化合物（Ｉ）は、これを公知の医薬担体と組み合わせることにより、例えば、抗炎症剤、抗アレルギー剤等の脱顆粒阻害剤とすることができる。【００２９】
この脱顆粒阻害剤は、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤等や、液剤、シロップ剤等の経口剤や、注射剤、点滴用剤、吸入剤、エアゾール剤、外用剤、貼付剤等の非経口剤とすることができる。【００３０】
上記の各製剤の製造において使用しうる医薬担体の例としては、デンプン、乳糖、ショ糖、マンニトール、コーンスターチ、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ケイ酸糖の賦形剤、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルエーテル、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストリン、ペクチン等結合剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール等の滑沢剤、崩壊剤、崩壊助剤、安定剤の公知の固形剤用担体や、水、エチルアルコール、エチレングリコール、グリセリン等の液剤成分、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等の界面活性剤、ブドウ糖、アミノ酸等の呈味成分、溶解補助剤、着色料、保存料等の液剤用担体を挙げることができる。また、吸入剤、エアゾール剤、外用剤、貼付剤については、これらの剤型に応じた公知の担体を使用することができる。【００３１】
本発明の脱顆粒阻害剤に配合される化合物（Ｉ）の量は、その種類や用途、症状等によっても相違するが、大人一人当たり一日量として、０.０１μｇないし１０ｍｇ程度とすることが好ましく、０.１μｇないし１ｍｇ程度とすることが特に好ましい。【００３２】
更に、本発明の化合物（Ｉ）は、他の食品素材と組み合わせ、健康食品あるいは一般の飲食品に添加する食品添加用剤とすることもできる。
【実施例】
【００３３】
以下に、実施例および実験例を挙げ、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例等に何ら制約されるものではない。【００３４】
実  施  例  １
ヤブツバキ抽出物からエラグ酸誘導体の調製
ヤブツバキ（沖縄産）の葉２ｋｇを６０℃で２〜３時間乾燥し、ミキサーで約３〜６ｍｍ幅程度に粉砕した。このヤブツバキの葉の粉砕物約１ｋｇにその約１０重量倍の水／メタノール（３／７）混液１０Ｌを加え、ホモジナイザーで２分間粉砕および撹拌抽出を行った。抽出液を３０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心し、得られた上清部分を採取した。残部に、５重量倍、３重量倍の水／メタノール（３／７）を順次加え、同様の操作を２回繰り返した。得られた上清を合わせ、ろ紙でろ過した後、減圧濃縮し、約６Ｌのろ液を得た。【００３５】
この減圧濃縮した液２Ｌに、酢酸エチル１Lを加え、室温で振盪分配し、同様の操作を２回繰り返した。すべてのろ液を分配後、得られた水層および酢酸エチル層は、それぞれ減圧濃縮した。水層については、更に減圧濃縮し、約５.６Lのろ液を得た。【００３６】
得られたろ液（水層）は、ＨＰ２０（ダイヤイオン、約１Ｌ）を担体とする樹脂吸着カラム（φ９０ｍｍｘ１７０ｍｍ）に吸着させ、水／メタノール（８／２；容量比、以下同じ）３Ｌ、水／メタノール（５／５）３Ｌおよびメタノール３Ｌにて順次溶出し、各画分をそれぞれ減圧乾固した。【００３７】
メタノールにより溶出された画分（メタノール画分）から固形物１４ｇを得、このうち１ｇを１５ｍｌの水に溶かし、中圧カラムクロマトグラフィー（ＯＤＳ  Ｗａｋｏｇｅｌ  Ｃ１８、２０ｍｍｘ３２０ｍｍ）に付し、水／メタノール（８／２）６００ｍｌ、水／メタノール（６／４）６００ｍｌ、水／メタノール（４／６）６００ｍｌおよびメタノール６００ｍｌにて順次溶出した（流速１２ｍｌ／ｍｉｎ）。【００３８】
このようにして得られた水／メタノール（６／４）画分を、高速液体クロマトグラフィー（カラム：コスモシル５Ｃ１８−ＡＲ：直径１０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）を用い、移動相としてアセトニトリル／メタノール／水（１／３／６）―２０ｍＭ酢酸アンモニウムを用いて溶出し（流速２.５ｍｌ／ｍｉｎ）、ＵＶ３６５ｎｍ、２８０ｎｍで検出して、画分１、２および３を得た。このうち、画分３から３,３',４ートリ−Ｏ−メチルエラグ酸（3,3',4-tri-O-methylellagicacid；化合物（Ｃ））を４ｍｇ得た。また、画分２を上記の条件でさらに分画した後、アセトニトリル／メタノール／水（１／３／６）―０.１％酢酸を移動相として精製し、新規化合物である、３,４−ジオキソロエラグ酸  ４'−グルコシド（3,4-dioxoloellagicacid  4'-glucoside；化合物（Ａ））を０.２ｍｇ得た。画分１をアセトニトリル／メタノール／水（１／３／６）―０.１％酢酸を移動相として精製し、３−Ｏ−メチルエラグ酸  ４'−グルコシド（3-O-methylellagicacid  4'-glucoside；化合物（Ｂ））を０.４ｍｇ得た。さらに、上記操作を繰り返すことにより、化合物（Ａ）、化合物（Ｂ）を約２ｍｇ得た。以上の工程をまとめて図１に示す。【００３９】
化合物（Ａ）の構造式及び理化学的性質：
【化５】
0005123172.tif 000004
【００４０】
（１）      物質の色：  薄黄
（２）      分子量：  ４７６
（３）      分子式：  Ｃ２１Ｈ１６Ｏ１３
（４）      質量分析：  ＨＲＭＳ  （ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ｎｅｇａｔｉｖｅ）
ｆｏｕｎｄ,  ｍ／ｚ  ４７５．０５１７  [Ｍ−Ｈ]−
Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２１Ｈ１５Ｏ１３  ４７５．０５０７
（５）旋光度 ：[α]Ｄ２４  −９２°  (ｃ  ０．０５,  Ｈ２Ｏ)
（６）１Ｈ−ＮＭＲ  （重水中で測定、６００ＭＨｚ）
δｐｐｍ:
７．０６（１Ｈ，ｓ）、６．７３（１Ｈ，ｓ）、５．９９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
１３Ｈｚ）、４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．９０（１Ｈ，ｂｒｄ，
Ｊ＝１２Ｈｚ）、３．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２，５  Ｈｚ）、３．６２−
３．５２（３Ｈ，ｍ）、３．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ）
（７）１３Ｃ−ＮＭＲ  （重水中で測定、１５０ＭＨｚ）
δｐｐｍ:
１６１．５、１６０．６、１５３．１、１５１．０、１５０．９、
１３８．９、１３７．３、１３１．０、１１５．９、１１４．３、
１１２．６、１１１．５、１０５．７、１０４．６、１０２．３、
９８．８、７７．０、７６．３、７３．９、７０．５、６１．６【００４１】
化合物（Ｂ）の構造式及び理化学的性質：
【化６】
0005123172.tif 000005
【００４２】
（１）物質の色：  薄黄
（２）分子量：  ４７８
（３）分子式：  Ｃ２１Ｈ１８Ｏ１３
（４）質量分析：ＥＩＭＳ  ｎｅｇａｔｉｖｅ
ｆｏｕｎｄ,  ｍ／ｚ ４７７[Ｍ−Ｈ]−
（５）１Ｈ−ＮＭＲ  （重水中で測定、６００ＭＨｚ）
δｐｐｍ：
７．１１（１Ｈ，ｓ）、６．８９（１Ｈ，ｓ）、４．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７Ｈｚ）、３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３，２Ｈｚ）３．８７（３Ｈ、ｓ）、
３．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３、５Ｈｚ）、３．６２−３．５５（３Ｈ，
ｍ）、３．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ）
（６）１３Ｃ−ＮＭＲ  （重水中で測定、１５０ＭＨｚ）
δｐｐｍ:
１６５．２、１６４．９、１５７．６、１５３．８、１４９．３
１４３．１、１４２．９、１４０．３、１１８．３、１１５．８、
１１５．１、１１４．６、１１４．５、１０４．９、１００．８
７９．８、７９．０、７６．７、７３．３、６４．９、６４．４【００４３】
化合物（Ｃ）の構造式及び理化学的性質：
【化７】
0005123172.tif 000006
【００４４】
（１）物質の色：  薄黄
（２）分子量：  ３４４
（３）分子式：  Ｃ１７Ｈ１２Ｏ８
（４）質量分析：ＥＩＭＳ  ｎｅｇａｔｉｖｅ
ｆｏｕｎｄ,  ｍ／ｚ ３４３[Ｍ−Ｈ]−
(５）１Ｈ−ＮＭＲ  （ジメチルスルホキシド中で測定、６００ＭＨｚ）
δｐｐｍ：
８．２３（１Ｈ，ｓ）、７．６７（１Ｈ，ｓ）、４．１２（３Ｈ，ｓ）、
４．０５（３Ｈ，ｓ）、４．０２（３Ｈ，ｓ）
(６）１３Ｃ−ＮＭＲ（ジメチルスルホキシド中で測定、１５０ＭＨｚ）
δｐｐｍ:
１５８．５、１５８．３、１５４．４、１４７．６、１４３．３、
１４１．４、１４０．９、１４０．９、１１７．６、１１４．１、
１１２．９、１１２．８、１１１．５、１０７．５、６１．５、
６１．３、５６．７【００４５】
実  施  例  ２
エラグ酸誘導体からのアグリコンの調製：
まず、３００μｇの化合物（Ａ）に５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６.０）を１ｍｌ加えた。一方、β―グルコシダーゼ（オリエンタル酵母社製）にリン酸緩衝液を加え、１ｍｇ／ｍｌに調整した。化合物（Ａ）の溶液とβ−グルコシダーゼの溶液を２００μｌずつ混合し、３７℃で１時間インキュベートした。反応後、１３，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心した。上清をフィルターろ過し（ワットマン製、ＰＶＤＦ、孔径０.４５μｍ）、ＬＣ／ＭＳで反応の状況を確認したところ、生成物は化合物（Ａ）のアグリコンであり、下式（Ｄ）に示す化合物、３,４−ジオキソロエラグ酸（3,4-dioxoloellagicacid）であった。【００４６】
【化８】
0005123172.tif 000007
【００４７】
実  施  例  ３
脱顆粒阻害活性の測定
脱顆粒阻害活性の測定は、非特許文献１および非特許文献２(Kataoka  M.,  Takagaki  Y.,  Shoyakugaku  Zasshi.,  46(1),  25-29,  1992）を参考に、ヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性試験を行った。まず、ラット好塩基性白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製後、９６穴プレートに播腫し、抗ＤＮＰ−ＢＳＡマウスＩｇＥ抗体を最終濃度０．２９μｇ／ｍｌになるように添加し、５％ＣＯ２、３７℃インキュベーター内で一晩培養し、細胞を感作した。その後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｍｉｘｔｕｒｅ（１１６．９ｍＭ  ＮａＣｌ、５．４ｍＭ  ＫＣｌ、０．８ｍＭ  ＭｇＳＯ４、２．０ｍＭ  ＣａＣｌ２、５．６ｍＭ  Ｇｌｕｃｏｓｅ、０．１％牛血清アルブミン、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）を１３０μｌ添加した。【００４８】
ついで、本発明で得た化合物（Ａ）および（Ｃ）を最初に２５％エタノールに溶解し、（Ａ）については、１％エタノールで最終濃度を１μｇ／ｍｌから５ｎｇ／ｍｌの７段階の濃度となるように、（Ｃ）については、１％エタノールで最終濃度を１０μｇ／ｍｌから５０ｎｇ／ｍｌの７段階の濃度となるように調製した。化合物（Ｂ）については、最初に水に溶解し、１％エタノールで最終濃度を５０μｇ／ｍｌから５０ｎｇ／ｍｌの７段階になるよう調製した。化合物（Ｄ）は、これを４％エタノール−２０ｍＭリン酸バッファーで最終濃度２.６μｇ／ｍｌから１６５ｎｇ／ｍｌの４段階の濃度となるように調製した。（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）の各濃度のサンプルを１０μｌ添加し、５％ＣＯ２、３７℃インキュベーターで１０分間静置した。次に抗原ＤＮＰ−ＢＳＡ（２μｇ／ｍｌ）を１０μｌ添加し、１時間インキュベーターで静置し脱顆粒を惹起させ、遠心分離し上清を回収した。上清４５μｌに５ｍＭヘキソサミニダーゼ基質溶液（p-nitrophenyl-β-D-glucosaminide）１５μｌを添加し、３７℃で３時間反応させ、反応停止液１８０μｌ（０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＣＯ３、ｐＨ１０．０）を加えた。反応終了後、４１５ｎｍの吸光度を測定し、下式からヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性を算出した。化合物（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）についての結果を表１に示す。なお、陽性コントロール（フマル酸ケトチフェン２００μＭ）および陰性コントロールを被験物質の最終溶媒濃度に合わせて設けた。【００４９】
ヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性（％）＝[１−（Ｓ−Ｂ／Ｃ−ｂ）]×１００
Ｓ  ：  被験物質の細胞添加時の吸光度
Ｂ  ：  細胞非存在下の被験物質添加時の吸光度
Ｃ  ：  陰性コントロールの吸光度
ｂ  ：  細胞非存在下の吸光度【００５０】
【表１】
0005123172.tif 000008
【００５１】
表１に記載のとおり、化合物（Ａ)のヘキソサミニダーゼ遊離阻害活性（ＩＣ５０値）は６.６３ｎｇ／ｍｌ、化合物（Ｂ）のＩＣ５０値は、１４.８３μｇ／ｍｌ、化合物（Ｃ)のＩＣ５０値は４.４７μｇ／ｍｌであった。また、化合物（Ｄ）のＩＣ５０値は１.０７μｇ／ｍｌであった。【００５２】
この結果から、陽性コントロールのフマル酸ケトチフェンのＩＣ５０値に比べ、化合物（Ａ)は１万倍以上と非常に高い活性であり、化合物（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）の何れも高い活性を示した。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
一般に炎症や、その原因となるアレルギー反応には、アナフィラキシー（Ｉ型）、細胞障害型（II型）、アルザス型（III型）及び細胞介在型（遅延型）（IV型）の４つの型があるが、最近特に問題になっている花粉症はＩ型アレルギー（即時型アレルギー）に分類される。また、アトピー性皮膚炎もＩ型アレルギー反応が主体と言われているが、さらに最近では、IV型アレルギー反応の関与もあることが判明してきている。【００５４】
このＩ型（即時型）アレルギーの反応機序としては、Ｂ細胞により産生されたＩｇＥが肥満細胞−好塩基球の細胞膜状に存在する高親和性ＩｇＥ受容体に結合し、更に外来からの抗原が細胞膜上のＩｇＥに架橋することでヒスタミンやロイコトリエン等のメディエーターが放出されアレルギーの症状に至るというものである。また、ヘキソサミニダーゼは顆粒物質としてヒスタミンに付随して放出されるため、ヒスタミン遊離の指標になる。したがって、Ｉ型アレルギー反応を防ぐためには、上記経路の何れかを切断すれば良いことになる。【００５５】
ところで、本発明の化合物（Ｉ）は、上記実施例で示したように、優れた脱顆粒阻害活性を有するものであるから、炎症に起因する疾患の治療、予防にきわめて有効なものである。【００５６】
したがって、上記化合物（Ｉ）を有効成分とする脱顆粒阻害剤は、ヒト及び動物用医薬品として、あるいは、健康食品を始めとする各種飲食品に添加して使用することができるものである。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】本発明化合物を得る工程を示した図面。
【図１】
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