(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸に光反応性基と薬剤とがスペーサーを介して共有結合にて結合しており、光反応性基がケイ皮酸であり、薬剤が非ステロイド性抗炎症剤又は抗リウマチ剤であり、スペーサーがアミノアルコールであり、「光反応性基」および「薬剤」を合わせた導入率が、ヒアルロン酸の繰り返し二糖単位モル数に対して１０〜５０モル％であり、注入具より押し出し可能な性状である、薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項２】
２０〜２５ゲージの注射針により、０．５〜５ｋｇ／ｃｍ２の圧力で押し出し可能である請求項１に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項３】
「薬剤」が、アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤、プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤又はアクタリットである請求項１又は２に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項４】
「薬剤」が、ナプロキセン、イブプロフェン、フルルビプロフェン、フェルビナク、ジクロフェナク、エトドラク又はアクタリットである請求項１〜３の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項５】
「光反応性基」がエステル結合にて「スペーサー」と結合し、当該光反応性基結合スペーサーがアミド結合にてヒアルロン酸のカルボキシル基に結合されていることを特徴とする請求項１〜４の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項６】
「薬剤」がエステル結合にて「スペーサー」と結合し、当該薬剤結合スペーサーがアミド結合にてヒアルロン酸のカルボキシル基に結合されていることを特徴とする請求項１〜５の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項７】
「光反応性基」がシクロブタン環を形成した架橋構造を有している請求項１〜６の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項８】
「光反応性基」の導入率が、ヒアルロン酸の繰り返し二糖単位モル数に対して５〜３０モル％である請求項１〜６の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項９】
製造工程において、光架橋の前にアルカリ処理することにより得られうる請求項１〜８の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項１０】
「ヒアルロン酸」に「光反応性基」と「薬剤」とがスペーサーを介して共有結合にて結合しており、光反応性基がケイ皮酸であり、薬剤が非ステロイド性抗炎症剤又は抗リウマチ剤であり、スペーサーがアミノアルコールであり、「光反応性基」および「薬剤」を合わせた導入率が、ヒアルロン酸の繰り返し二糖単位モル数に対して１０〜５０モル％であり、水性媒体に対し可溶性であることを特徴とする薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
【請求項１１】
「薬剤」が、アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤、プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤又はアクタリットである請求項１０に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
【請求項１２】
「薬剤」が、ナプロキセン、イブプロフェン、フルルビプロフェン、フェルビナク、ジクロフェナク、エトドラク又はアクタリットである請求項１０または１１に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
【請求項１３】
「光反応性基」がエステル結合にて「スペーサー」と結合し、当該光反応性基結合スペーサーがアミド結合にてヒアルロン酸のカルボキシル基に結合されていることを特徴とする請求項１０〜１２の何れか一項に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
【請求項１４】
「薬剤」がエステル結合にて「スペーサー」と結合し、当該薬剤結合スペーサーがアミド結合にてヒアルロン酸のカルボキシル基に結合されていることを特徴とする請求項１０〜１３の何れか一項に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
【請求項１５】
「光反応性基」の導入率が、ヒアルロン酸の繰り返し二糖単位モル数に対して５〜３０モル％である請求項１０〜１４の何れか一項に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
【請求項１６】
製造工程において、ヒアルロン酸への光反応性基及び／又は薬剤の導入後のいずれかの段階でアルカリ処理することにより得られうる請求項１０〜１５の何れか一項に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
【請求項１７】
請求項１０〜１６の何れか一項に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体の水性溶液に、紫外線を照射させて得られうる薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項１８】
紫外線を照射後、滅菌することにより得られうる請求項１７記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
【請求項１９】
請求項１〜９、請求項１７および１８の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルが注入具に充填され、ガスケットで密封された薬剤封入注入具。
【請求項２０】
滅菌に供された請求項１９記載の薬剤封入注入具。
【請求項２１】
請求項１〜９、請求項１７および１８の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む医薬。
【請求項２２】
請求項１〜９、請求項１７および１８の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む局所投与用製剤。
【請求項２３】
請求項１〜９、請求項１７および１８の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む関節症治療剤。
【請求項２４】
請求項１〜９、請求項１７および１８の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む、ヒアルロン酸に導入した薬剤を徐放する性質を有することを特徴とする薬剤徐放用製剤。
【請求項２５】
請求項１０〜１６の何れか一項に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を水性媒体に溶解させて溶液を調製し、当該溶液に紫外線を照射する工程を含むことを特徴とする注入可能な薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルの製造方法。
【請求項２６】
請求項１〜９、請求項１７および１８の何れか一項に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルが、該ゲルを押し出すことが可能な注入具に充填されたヒアルロン酸誘導体注入用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光架橋ヒアルロン酸に薬剤が共有結合により導入された薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルに関する。また本発明は、薬剤と光反応性基が導入された薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
疾患部位に注射器などの注入用具で直接投与することが可能で、十分な量の薬剤を保持することができ、また疾患部位に滞留して薬剤を長期間にわたって放出することができる徐放性を有し、かつ生体に対して安全なドラッグデリバリーシステム（以下、ＤＤＳとも言う）が利用可能であれば、変形性関節症、慢性関節リウマチなどの整形外科的疾患、腫瘍などの治療に極めて有用である。【０００３】
ヒアルロン酸（以下、ＨＡとも言う）やグリコサミノグリカン（以下、ＧＡＧとも言う）などの生体由来の多糖類は生体適合性が高く、これまでこれらの多糖類を利用したＤＤＳが種々提案されてきた。【０００４】
例えば、架橋したヒアルロン酸に薬剤を混合したり、水和させたりすることにより、架橋体中に薬剤を包括させた物質を、ＤＤＳの基材や徐放用製剤として用いる試みがなされ、報告されている（特許文献１など）。これらにおいては、架橋したＨＡあるいは架橋したＧＡＧと薬剤とがイオン的な作用により複合体を形成しており、薬剤を保持する力は弱く、生体内に投与すると薬剤が短時間で放出されてしまう欠点があり、薬剤を徐放する用途や薬剤を目的患部まで輸送させるためのＤＤＳ用途に関し、十分な効果が得られなかった。【０００５】
これに対し、上記のような多糖類に共有結合により薬剤を結合した材料も提案されており、ＨＡのカルボキシ基にエステル結合により薬剤を結合したＨＡ誘導体（特許文献２）、架橋したアルギン酸ゲルなどにスペーサーとペプチド分解性基を介して薬剤を共有結合により結合した高分子ゲル（特許文献３）、ＨＡあるいは架橋ＨＡなどのＨＡ誘導体にスペーサーを介し共有結合で薬剤を結合したＨＡ誘導体（特許文献４）などがこれまで提案されている。【０００６】
しかしながら、通常、高分子の多糖やＨＡに薬剤などの疎水性の高い物質を共有結合により導入すると、生成物の溶解性は大幅に低下し、不溶化あるいは半不溶化することが常識であり、薬剤を多く導入するほど、生成物の不溶化傾向は高まり、注射器などから注入できる性状のものを得ることは不可能になる。上記特許文献２では、薬剤を導入したＨＡ誘導体については薬剤の導入、内部エステル化に使用されるＨＡのカルボキシ基の量からみて親水性の保持を前提としていない。特許文献３の高分子ゲルは水性液体により膨潤するものであって、注射器などにより注入できるものではなく、薬剤を導入した生成物はシート、フィルムなどの形態とされるものである。特許文献４には薬剤を導入した生成物の性状についての記載はないが、実施例においては溶解性に関与するカルボキシル基への結合による導入率が低く設定されている。【０００７】
上記のように、関節、臓器などの疾患部位に注射器などの注入用具で直接局所に投与することが可能で、十分な量の薬剤を保持することができ、疾患部位に滞留して薬剤を長期間にわたって放出することができる徐放性を有するという条件のいずれをも満たす、ＨＡをベースとするＤＤＳは知られていなかった。
一方、本発明者らはこれまでに親水性の高いヒアルロン酸ゲルとして、光架橋基を利用した光架橋ヒアルロン酸を提案している（特許文献５）。
【特許文献１】特許第３１０７４８８号公報
【特許文献２】ＷＯ８９／１０９４１公報
【特許文献３】米国特許第５，７７０，２２９号明細書
【特許文献４】ＷＯ９９／５９６０３公報
【特許文献５】米国特許第６，６０２，８５９号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、疾患部位に注射器などの注入用具で直接投与することが可能であり、そのようにして直接投与することにより投与又は疾患部位において十分な量の薬剤を保持することができ、投与又は疾患部位に滞留することにより薬剤を長期間にわたって放出することができる薬剤徐放性を有し、かつ生体に対して安全なドラッグデリバリーシステムを提供することを目的とする。また本発明は、上記のようなドラッグデリバリーシステムの製造に有用な中間体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、光架橋基を利用した光架橋ヒアルロン酸に薬剤を導入することにより上記条件を満たすＤＤＳとしての薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを提供できることを見出し、さらに薬剤導入のための諸条件を検討し、本発明を完成させるに到った。
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（３１）に関する。【００１０】
（１）  薬剤を共有結合により導入した光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルであって、注入具より押し出し可能な性状である薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（２）  「ヒアルロン酸」に「光反応性基」と「薬剤」とがスペーサーを介して共有結合によりそれぞれ結合している（１）に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（３）  ２０〜２５ゲージの注射針により、０．５〜５ｋｇ／ｃｍ２の圧力で押し出し可能である（１）または（２）に記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（４）  「光反応性基」が、ケイ皮酸誘導体またはアミノケイ皮酸誘導体からなることを特徴とする（１）〜（３）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（５）  「薬剤」が、カルボキシル基あるいは水酸基と結合できる官能基を有する物質であることを特徴とする（１）〜（４）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。【００１１】
（６）  「スペーサー」が、カルボン酸、水酸基およびアミノ基から選択される官能基を２個以上有する化合物の残基であることを特徴とする（５）記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（７）  「薬剤」が、非ステロイド性抗炎症剤、抗リウマチ剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、ステロイド剤および抗癌剤から選択される（１）〜（６）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（８）  「薬剤」が、非ステロイド性抗炎症剤または抗リウマチ剤であることを特徴とする（７）記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（９）  「光反応性基」および「薬剤」が、ヒアルロン酸のカルボキシル基にそれぞれ結合されていることを特徴とする（１）〜（８）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（１０）「光反応性基」又は「光反応性基を結合しているスペーサー」がアミド結合にてヒアルロン酸のカルボキシル基に結合されていることを特徴とする上記（１）〜（９）のいずれか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。【００１２】
（１１）「薬剤」がエステル結合又はアミド結合にて直接ヒアルロン酸のカルボキシル基に結合されていることを特徴とする上記（１）〜（１０）の何れか一つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（１２）「薬剤」がエステル結合にて「スペーサー」と結合し、当該薬剤結合スペーサーがアミド結合にてヒアルロン酸のカルボキシル基に結合されていることを特徴とする上記（１）〜（１０）の何れか一つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（１３）「光反応性基」および「薬剤」を合わせた導入率が、ヒアルロン酸の繰り返し二糖単位モル数に対して１０〜４５モル％である（１）〜（１２）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（１４）製造工程において、光架橋の前にアルカリ処理することにより得られうる（１）〜（１３）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（１５）「ヒアルロン酸」に「光反応性基」と「薬剤」とがそれぞれ共有結合にて結合しており、水性媒体に対し可溶性であることを特徴とする薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。【００１３】
（１６）「ヒアルロン酸」に「光反応性基」と「薬剤」とがスペーサーを介して共有結合によりそれぞれ結合している（１５）に記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
（１７）  製造工程において、ヒアルロン酸への光反応性基及び／又は薬剤の導入後のいずれかの段階でアルカリ処理することにより得られうる（１５）または（１６）記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体。
（１８）  （１５）〜（１７）の何れか１つに記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体の水性溶液に、紫外線を照射させて得られうる薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（１９）  紫外線を照射後、滅菌することにより得られうる（１８）記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル。
（２０）（１）〜（１１）、（１８）および（１９）の何れか一つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルが注入具に充填され、ガスケットで密封された薬剤封入注入具。【００１４】
（２１）  滅菌に供された（２０）記載の薬剤封入注入具。
（２２）  （１）〜（１１）、（１８）および（１９）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む医薬。
（２３）  （１）〜（１１）、（１８）および（１９）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む局所投与用製剤。
（２４）  （１）〜（１１）、（１８）および（１９）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む関節症治療剤。
（２５）  （１）〜（１１）、（１８）および（１９）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを含む、ヒアルロン酸に導入した薬剤を徐放する性質を有することを特徴とする薬剤徐放用製剤。【００１５】
（２６）  カルボン酸、水酸基およびアミノ基から選択される反応性基を２個以上有するスペーサーと薬剤が共有結合により結合している薬剤誘導体。
（２７）  薬剤が、非ステロイド性抗炎症剤、抗リウマチ剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、ステロイド剤および抗癌剤から選択される（２６）記載の薬剤誘導体。
（２８）  「ヒアルロン酸」に「光反応性基」と「薬剤」とを、スペーサーを介し、あるいは介さずにそれぞれ共有結合により結合させて薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を得た後、該誘導体の水性溶液に紫外線を照射することを特徴とする注入可能な薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルの製造方法。
（２９）  （１５）〜（１７）の何れか１つに記載の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を水性媒体に溶解させて溶液を調製し、当該溶液に紫外線を照射する工程を含むことを特徴とする注入可能な薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルの製造方法。
（３０）  （１）〜（１１）、（１８）および（１９）の何れか１つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルを直接患部に投与することを特徴とする薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルの薬剤徐放性剤としての使用。
（３１）（１）〜（１１）、（１８）および（１９）の何れか一つに記載の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルが、該ゲルを押し出すことが可能な注入具に充填されたヒアルロン酸誘導体注入用キット
【発明の効果】
【００１６】
本発明により、関節、臓器などの疾患部位に注射器などの注入用具で直接局所に投与することが可能で、そのようにして直接投与することにより投与又は疾患部位において十分な量の薬剤を保持することができ、投与または疾患部位に滞留することにより薬剤を長期間にわたって放出することができる薬剤徐放性を有し、かつ生体に対して安全なドラッグデリバリーシステムとしての薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲルが提供される。本発明の薬剤導入光架橋ヒアルロン酸誘導体ゲル（以下、「薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ」ともいう）は、注射器などの注入用具で患部に直接投与することが可能であり、投与部位での薬剤の放出がコントロールされ、薬剤の徐放が可能となる。また、本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは、その具体的な構成要素の選択次第で、湿熱滅菌などの常法による滅菌が可能であるため、医薬用途に非常に有用である。【００１７】
注入具により押し出し可能な本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを用いることにより、薬剤を局所投与用製剤として患部に直接投与することができるのみならず、薬剤を選択することより様々な適用に応用できる。例えば、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）や抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）を薬剤として用いた薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを、変形性膝関節症や慢性リウマチのような慢性関節炎患者の膝関節腔内に直接投与すれば、長期に渡り薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌが膝関節腔内あるいは滑膜組織内に留まることにより薬剤が患部に徐々に放出されるため、慢性的な膝関節症の患者の痛みを長期に渡り軽減することができる。また、例えば制癌剤、抗癌剤等を導入薬剤として使用した場合、癌組織に対し直接制癌剤導入光架橋ヒアルロン酸ゲルを投与することにより、他の正常な臓器に悪影響を及ぼすことなく必要箇所のみに制癌剤を徐放させることができ、また長期に渡る副作用を伴う制癌剤の服用という苦痛から患者を解放することもできる。【００１８】
ＤＤＳの基本概念として薬剤を基材に包括させ、必要なところまで運び（デリバリー）、必要箇所（患部）で放出するという機能を有するということがあるが、生体内には様々な防御作用や障害があり、実際このような概念のＤＤＳ剤を投与しても目的患部に達する前に消失したり、失活したり、さらには目的患部に辿り着いても薬剤が放出されなかったりするものがほとんどである。これに対し、本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは注入具により押し出し可能であるため、関節等への局所投与が可能であり、しかも基材の光架橋ヒアルロン酸ゲル自体の安全性が高いため、生体内に長く留まっていても悪影響を及ぼさないという性質を有する。この様な性質を利用し、薬剤を迂遠な経路によりデリバリーさせることなく目的患部に直接投与（インジェクト）し、目的患部で該ゲルを滞留させ、そして徐々に薬剤を放出させるという有効な方法による治療を可能とする。【００１９】
上記の方法によれば、生体内の機能を使って薬剤をデリバリーさせるのではなく直接患部に薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを投与するため、確実に患部に薬剤を到達させることができ、しかも患部に対し基材をアンカーとして留まることができるため、その場から確実に薬剤を長期に渡り徐放することができることという利点が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは、ヒアルロン酸鎖間又はヒアルロン酸分子内に光架橋基を介して共有結合で結合して形成された架橋構造を有する架橋ヒアルロン酸であって、さらに薬剤あるいはその誘導体を直接あるいはスペーサーを介してヒアルロン酸の官能基との共有結合により保持しているものである。本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは、ヒアルロン酸に光架橋基、および薬剤もしくはその誘導体を同時にあるいは逐次導入して薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を形成し、該薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を光架橋することにより製造される。【００２１】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌに使用されるヒアルロン酸は、グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとからなる二糖単位の重合体であるが、本発明におけるヒアルロン酸は、本発明の効果を阻害しない範囲において、その誘導体も含み、そのような誘導体の例としては、例えば、還元末端を有しているヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸中の水酸基が部分的にアセチル化されているアセチル化ヒアルロン酸などが挙げられる。【００２２】
ヒアルロン酸の由来は特に限定されず、鶏冠、臍帯などの動物由来のヒアルロン酸、ヒアルロン酸を産生する微生物を用いたり、遺伝子工学的に製造されたヒアルロン酸、及び、化学合成的に製造されたヒアルロン酸等をいずれも使用することができる。特に、高純度に精製され、医薬として混入が許されない物質を実質的に含まないものが好ましい。
ヒアルロン酸の分子量は特に限定されないが、重量平均分子量として、例えば10,000〜5,000,000であり、好ましくは100,000〜3,000,000であり、特に好ましくは600,000〜1,500,000である。【００２３】
ちなみに、本発明の効果は、ＧＡＧの中でも、高分子であるヒアルロン酸については、より有利に発揮される。すなわち、上述の様に、多糖が高分子物質であるほど、疎水性の高い物質が導入された多糖誘導体の溶解性はより大きく低下し、不溶化することが常識であり、また高分子であるヒアルロン酸の方が光架橋反応によりゲル化しやすい。よって、本発明を適用することにより得られる、薬剤などの疎水性の高い物質の導入による不溶化を軽減し、注射器などから注入できる性状を維持し得るという効果は、高分子であるヒアルロン酸についてより意義の高いものとなる。【００２４】
本発明に使用するヒアルロン酸は、塩を形成していない遊離状態のものでもよく、また薬学的に許容され得る塩の形態のものでもよい。ヒアルロン酸の薬学的に許容され得る塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属イオン塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属イオン塩、アンモニウム塩等の無機塩基との塩、ジエタノールアミン塩、シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基が挙げられる。生体への親和性が特に高いことから、ヒアルロン酸塩はアルカリ金属イオンとの塩が好ましく、ナトリウムイオンとの塩が特に好ましい。【００２５】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの基材となる光架橋ヒアルロン酸の架橋基としては光反応性架橋基（光反応性基）を使用する。【００２６】
光反応性基は、光（紫外線）照射によって光二量化反応または光重合反応を生じる化合物の残基であって、ヒアルロン酸上で光反応性基として光照射によってヒアルロン酸分子間や分子内にて架橋する化合物の残基であれば特に限定されないが、そのような化合物としては共役二重結合を有するオレフィン系化合物が好ましい。具体例としては、ケイ皮酸、置換ケイ皮酸、アクリル酸、マレイン酸、フマル酸、ソルビン酸、クマリン、チミンなどが挙げられる。これらの中では、光によりシクロブタン環を形成可能なビニレン基を有するものが好ましく、光反応性および安全性の面からケイ皮酸および置換ケイ皮酸が好ましい。置換ケイ皮酸の例としては、ケイ皮酸のベンゼン環上の任意の１または２個の水素が低級アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、t-ブチルなど）、低級アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシなど）、アミノ基、水酸基などで置換された置換ケイ皮酸が挙げられる。置換ケイ皮酸としては、アミノケイ皮酸が好ましく、p-アミノケイ皮酸が特に好ましい。【００２７】
光反応性基は、ヒアルロン酸のカルボキシル基または水酸基と共有結合により結合される。結合様式は本発明の目的が達成される限り特に限定されないが、エステル結合またはアミド結合が好ましく、アミド結合が最も好ましい。光反応性基は、ヒアルロン酸に直接結合されてもよいが、光反応性を向上し、光架橋反応を容易にしたり、多糖に光反応性基を導入する反応を容易にする等の面から、スペーサーを介してヒアルロン酸に結合されることが好ましい。従って、ケイ皮酸または置換ケイ皮酸にスペーサーが結合した誘導体（スペーサー誘導体）の残基が光反応性基として最も好ましい。【００２８】
上記のようなスペーサーとなる化合物は、光反応性基及びヒアルロン酸と結合できる様な官能基を二つ以上有する化合物であれば特に限定されないが、好ましくはカルボン酸、水酸基およびアミノ基から選択される官能基を２個以上有する化合物であり、好ましい例としては、例えば、アミノアルコール（Ｈ2Ｎ−（ＣＨ2）n−ＯＨ（ｎ=１〜１８）、Ｈ2Ｎ−（ＣＨ2−Ｏ）m−Ｈ（ｍ＝２〜９）など）、ジアミン（Ｈ2Ｎ−（ＣＨ2）l−ＮＨ2（ｌ＝２〜１０）など）、ジオール（ＨＯ−（ＣＨ2）k−ＯＨ（ｋ＝２〜１０）など）、アミノ酸（Ｈ２Ｎ−ＣＨＲ−ＣＯＯＨ（Ｒ:アミノ酸側鎖）、Ｈ２Ｎ-（ＣＨ２）ｊ−ＣＯＯＨ（ｊ＝２〜１８））およびペプチドなどが挙げられる。【００２９】
上記のようなスペーサーを構成する化合物をヒアルロン酸に結合し、その後光反応性基を構成する化合物を結合してもよいが、スペーサーを構成する化合物と光反応性基を構成する化合物とを先に結合し、得られた化合物をヒアルロン酸に結合することが、製造の容易さから好ましい。上記のようなスペーサーを構成する化合物と光反応性基を構成する化合物を結合して得られる化合物の好ましい例としては、例えば、ケイ皮酸のカルボキシル基にアミノアルコールがエステル結合したケイ皮酸アミノアルキル誘導体（Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ2）n−ＮＨ2、Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−（ＯＣＨ2）m−ＮＨ2（ｎ、ｍは上記と同じ、Ｐｈはフェニル基を表す）など）、ケイ皮酸のカルボキシル基にアミノアルコールがアミド結合したケイ皮酸アミド誘導体（Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ2）n−ＯＨ、Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ2Ｏ）m−ＯＨ（ｎ、ｍは上記と同じ、Ｐｈはフェニル基を表す）など）、ケイ皮酸のカルボキシル基にジアミンがアミド結合により結合されたケイ皮酸アミド誘導体（Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ2）l−ＮＨ2（ｌ、Ｐｈは上記と同じ）など）、ケイ皮酸のカルボキシル基にジオールがエステル結合により結合されたケイ皮酸エステル誘導体（Ｐｈ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ2）k−ＯＨ（ｋ、Ｐｈは上記と同じ）など）、アミノ酸あるいはペプチドを置換ケイ皮酸（アミノケイ皮酸）にアミド結合により結合した誘導体（ＨＯＯＣ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｐｈ−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨＲ−ＮＨ２（Ｒ、Ｐｈは上記と同じ）など）などが挙げられ、ケイ皮酸のカルボキシル基にアミノアルコールがエステル結合により結合された誘導体（ケイ皮酸アミノアルキル）、ケイ皮酸のカルボキシル基にアミノアルコールがアミド結合したケイ皮酸アミド誘導体が好ましい。アミノアルコールは上記一般式Ｈ2Ｎ−（ＣＨ2）n−ＯＨで表されるものが好ましく、ｎは２〜１８であり、好ましくは２〜６であり、より好ましくは２〜４である。スペーサーを構成する化合物の好ましい例としては、アミノエタノール、アミノプロパノール及びアミノブタノール等が挙げられる。【００３０】
ヒアルロン酸における、光反応性基又は光反応性基が結合したスペーサー誘導体との結合部位（ヒアルロン酸の官能基）は、水酸基又はカルボキシル基が挙げられるが、光反応性基又はスペーサー誘導体の導入反応の容易性からカルボキシル基の方が好ましい。【００３１】
また、スペーサーを構成する化合物と光反応性基を構成する化合物との結合様式、およびスペーサーを構成する化合物とヒアルロン酸との結合様式の組み合わせは特に限定されず、任意の組み合わせの結合を採用することができる。例えば、光反応性基としてケイ皮酸を、スペーサーとしてアミノアルコールを用いた場合には、ケイ皮酸のカルボキシル基とアミノアルコールとがエステル結合し、アミノアルコールのアミノ基とヒアルロン酸のカルボキシル基がアミド結合することによって、スペーサーを介し光反応性基がヒアルロン酸に結合してもよく、あるいは、ケイ皮酸のカルボキシル基にアミノアルコールがアミド結合し、アミノアルコールの水酸基とヒアルロン酸のカルボキシル基とがエステル結合することによって、スペーサーを介し光反応性基がヒアルロン酸に結合されてもよい。【００３２】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌに導入される薬剤は、ヒアルロン酸のカルボキシル基あるいは水酸基に結合するための官能基を有し、ヒアルロン酸に共有結合により直接導入できる薬剤、あるいは、ヒアルロン酸のカルボキシル基あるいは水酸基に結合できる官能基を有するスペーサーを介して結合することができる薬剤であれば特に限定されない。カルボキシル基あるいは水酸基と結合できる官能基を有する物質であることが好ましい。【００３３】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌに導入される薬剤の例としては、サリチル酸系非ステロイド性抗炎症剤（サリチル酸、サザピリン、アスピリン、ジフルニサル、サリチルアミドなど）、フェナム酸系非ステロイド性抗炎症剤（フルフェナム酸、フルフェナム酸アルミニウム、メフェナム酸、フロクタフェニン、トルフェナム酸など）、アリール酢酸系非ステロイド性抗炎症剤（フェルビナク、ジクロフェナク、トルメチンナトリウム、スリンダク、フェンブフェン、インドメタシン、インドメタシンファルネシル、アセメタシン、マレイン酸プログルメタシン、アンフェナクナトリウム、ナブメトン、モフェゾラク、エトドラク、アルクロフェナクなど）、プロピオン酸系非ステロイド性抗炎症剤（イブプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセン、プラノプロフェン、フェノプロフェン、チアプロフェン酸、オキサプロジン、ロキソプロフェンナトリウム、アルミノプロフェン、ザルトプロフェン、チアプロフェン酸など）、ピラゾロン系非ステロイド性抗炎症剤（ケトフェニルブタゾンなど）、オキシカム系非ステロイド性抗炎症剤（ピロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカムなど）、その他の非ステロイド性抗炎症剤（塩酸チアラミド、塩酸チノリジン、塩酸ベンジダミン、エピリゾール、エモルファゾン、トルメチン、ジフルニサル、アセトアミノフェン、フロクタフェニン、チノリジンなど）などの非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）；シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬；ペニシラミン、ロベンザリット二ナトリウム、オーラノフィン、ブシラミン、アクタリット、サラゾスルファピリジン、金チオリンゴ酸ナトリウム、クロロキン、ＴＮＦα受容体製剤、ミゾリビン、シクロスポリン、メトトレキセート、レフルノミド、アザチオプリン、抗ＴＮＦα抗体、抗ＩＬ−６受容体抗体、抗ＣＤ４抗体、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＣＤ５２抗体、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害薬、ＩＣＥ阻害薬、ＴＡＣＥ阻害薬などの抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）；酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、トリアムシフロン、トリアムシフロンアセトニド、デキサメタゾン、パルミチン酸デキサメタゾン、ベタメタゾン、酢酸パラメタゾン、酢酸ハロプレドン、ファルネシル酸プレドニゾロン、酢酸テトラコサクチドなどのステロイド剤；塩酸プロカイン、塩酸テトラカイン、塩酸リドカインなどの局所麻酔薬；ヒドロキサム酸などのマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤；キサンチン類縁薬（テオフィリンなど）、抗アレルギー薬（フェキソキナジン、エピナスタチン、セチリジン、ケトチフェン、クロモグリク酸ナトリウム、ペミロラストなど）、抗ヒスタミン薬（フェキソキナジン、セチリジンなど）などのアレルギー性疾患治療薬；イリノテカン、５−フルオロウラシルなどの抗癌剤などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましい薬剤としては、非ステロイド性抗炎症剤、抗リウマチ剤、ＭＭＰ阻害剤、ステロイド剤、抗癌剤が挙げられ、中でも非ステロイド性抗炎症剤、抗リウマチ剤、抗癌剤が好ましく挙げられる。【００３４】
ヒアルロン酸にスペーサーを介して薬剤を導入する場合は、該スペーサーを構成する化合物は、ヒアルロン酸と結合する官能基および薬剤と結合する官能基をそれぞれ有するものであり、これら官能基を複数有していてもよい。該スペーサーの官能基は、ヒアルロン酸および薬剤との結合様式により種々選択できるが、該スペーサーとヒアルロン酸および薬剤との結合様式は好ましくはエステル結合またはアミド結合である。またスペーサーを構成する化合物と薬剤との結合様式、およびスペーサーを構成する化合物とヒアルロン酸との結合様式の組み合わせは特に限定されず、任意の組み合わせの結合を採用することができる。【００３５】
例えば、ヒアルロン酸のカルボキシル基とアミド結合でスペーサーを導入する場合、アミノ基を有しているスペーサーを選択し、ヒアルロン酸のカルボキル基あるいは水酸基とエステル結合でスペーサーを導入する場合には、水酸基あるいはカルボキシル基を有しているスペーサーを選択することができる。薬剤とスペーサーとの結合についても同様であり、例えば、水酸基やカルボキシル基を有している薬剤の場合、カルボキシル基や水酸基を有するスペーサーを選択すればエステル結合により、アミノ基を有するスペーサーを選択すればアミド結合により薬剤を導入できる。【００３６】
また、生体内に薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを注入する場合、より好ましくは、生体内で薬剤がヒアルロン酸鎖より徐々に遊離し放出されることが求められる。光架橋ヒアルロン酸誘導体の分解に合わせて徐々に薬剤が放出されることが考えられるが、特に、薬剤とスペーサーとの結合部分が生分解されることが望ましい。薬剤とスペーサーとの間の結合様式を変えることにより、生分解への耐性を変えることができ、それにより徐放速度をコントロールすることも可能となる。例えば生体内で起こる加水分解を考えた場合、エステル結合はアミド結合に較べ分解を受けやすい。このためヒアルロン酸とアミド結合し、薬剤とエステル結合するスペーサーを選択する場合、生体内に注入した薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは、加水分解により、ヒアルロン酸鎖より薬剤を遊離しやすくなる。同様に、ヒアルロン酸に直接薬剤を導入する場合には、エステル結合にてヒアルロン酸に薬剤を導入する方が、生体内での加水分解を考慮すると好ましい。【００３７】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌにおいて薬剤とヒアルロン酸との結合に使用されるスペーサーは上記のような点を考慮して選択することができ、薬剤とヒアルロン酸とを結合でき、本発明の目的を達成し得る限り特に限定されない。スペーサーを構成する化合物の好ましい例などについては上述の光反応性基の導入について記載したものが同様に挙げられ、アミノアルコールがより好ましく、例えば、アミノエタノール、アミノプロパノール及びアミノブタノール等が挙げられる。【００３８】
上記のようなスペーサーを構成する化合物は、光反応性基の導入と同様に、先にヒアルロン酸にスペーサーを結合し、その後、スペーサーを結合したヒアルロン酸に薬剤を結合してもよいが、スペーサーを構成する化合物と薬剤との結合物を先に合成し、得られた化合物をヒアルロン酸に結合することが、製造の容易さから好ましい。【００３９】
また、ヒアルロン酸における、薬剤又はスペーサーとの結合部位（ヒアルロン酸の官能基）についても、光反応性基の導入と同様に、水酸基であってもよいが、薬剤又はスペーサーの導入反応の容易性からカルボキシル基の方が好ましい。
なお、以下の記載において、ヒアルロン酸への光反応性基および薬剤の導入について、直接であるか、あるいはスペーサーを介するか明記してない場合には、基本的に何れでも構わないものとする。つまり、光反応性基および薬剤は、各々スペーサー部分を有する光反応性基誘導体およびスペーサー部分を有する薬剤誘導体も包含する。【００４０】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの製造においては、まず中間生成物として光反応性基および薬剤がヒアルロン酸に導入された、水性媒体に可溶な薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を調製し、次いで、該薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体水溶液に光照射し、架橋させることにより製造することができる。中間生成物である水溶性の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体は、ヒアルロン酸に光反応性基および／又は薬剤を導入した後、アルカリ処理することにより製造することができる。【００４１】
ヒアルロン酸に薬剤および光反応性基を導入するにあたっては、ヒアルロン酸に光反応性基を導入した後に薬剤を導入する方法、薬剤を導入した後に光反応性基を導入する方法、あるいは薬剤および光反応性基を同時に導入する方法の何れも使用することができる。薬剤あるいは光反応性基何れか一方を先に導入する場合、薬剤あるいは光反応性基を導入した後、後処理して単離し、改めて他方を導入する方法、あるいは、１ポットの反応でどちらか一方から順次導入する方法の何れも使用することができる。前者の方法の場合、工程上での手間や時間を要するものの薬剤および光反応性基の導入率を精度よくコントロールできるメリットがあり、後者の方法の場合、反応上の手間や時間を要せず効率的に目的物を得ることができるというメリットがある。【００４２】
上記の通り、光反応性基あるいは薬剤は、ヒアルロン酸のカルボキル基あるいは水酸基のいずれにも結合できるが、官能基の持つ反応性からカルボキシル基に結合する方が容易であり好ましい。このような結合を達成する方法としては、例えば、水溶性カルボジイミド（例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ・ＨＣｌ）、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド−メト−ｐ−トルエンスルホネート、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド塩酸塩など）等の水溶性の縮合剤を使用する方法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＨＯＳｕ）やＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）等の縮合補助剤と上記の縮合剤とを使用する方法、活性エステル法、酸無水物法などが挙げられる。これらの中では、水性媒体の存在下の反応として、水溶性の縮合剤を使用する方法または反応補助剤と水溶性の縮合剤とを使用する方法が好ましい。特に副反応の抑制という観点から反応補助剤と水溶性の縮合剤とを使用する方法がより好ましい。水性媒体としては、水の単独溶媒の他、水と水可溶性有機溶媒、例えば、ジオキサン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトン、アルコール（メタノール、エタノール等）等との混合溶媒が挙げられる。上記の通り、ヒアルロン酸のカルボキシル基と光反応性基または薬剤とは、エステル結合またはアミド結合で結合されることが好ましい。【００４３】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌにおいては、ヒアルロン酸への光反応性基および薬剤の導入率は、薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体の水性媒体への可溶性が保持され、さらにそれを光架橋して得られる薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌが注入具により押し出し可能な性状を保持する限り特に制限されない。言い換えればそれらの条件が満たされるように導入率を選択する必要がある。【００４４】
本明細書において導入率とは、ヒアルロン酸二糖単位あたりに対する薬剤または光反応性基の導入割合（百分率）を示す。例えば、ヒアルロン酸のカルボキシル基に薬剤を導入する場合において、薬剤の導入率１０％とは、当該ヒアルロン酸鎖の二糖単位１００個に１０個の割合で薬剤が導入されていることを示す。勿論、隣り合う二糖単位各々のカルボキシル基にそれぞれ薬剤が置換されていても構わない。【００４５】
光反応性基および薬剤の導入率は、縮合剤、縮合補助剤、光反応性基および薬剤の投入量、反応溶媒、反応温度等の反応条件を変えることにより調整することができ、その後の架橋反応での光反応性基の必要量、あるいは生体に投与するときの薬剤の患部における必要量あるいは徐放効率などを考慮して光反応性基および薬剤の適当な導入率を決定する。【００４６】
ヒアルロン酸の繰り返し二糖単位モル数に対して、薬剤の導入率は、通常１〜６０モル％であり、好ましくは５〜３０モル％であり、より好ましくは５〜２５モル％であり、特に好ましくは７〜２０モル％である。光反応性基の導入率は、通常５〜５０モル％であり、好ましくは５〜３０モル％であり、より好ましくは５〜２０モル％であり、特に好ましくは８〜２０モル％である。さらに、光反応性基と薬剤を合わせた総導入率は、通常６〜６０モル％であり、好ましくは１０〜５０モル％であり、より好ましくは１０〜４５モル％であり、特に好ましくは１５〜４０モル％である。これらの範囲において光反応性基と薬剤がそれぞれ適性な比率で導入されることがより望ましい。光反応性基および薬剤の導入量は、例えば吸光度の測定やＨＰＬＣ、ＮＭＲ等の方法で測定することができる。【００４７】
上記のようにして製造された薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体をさらにアルカリにより処理することが好ましい。導入反応後の反応溶液をアルカリ性とするアルカリ処理は、該溶液がアルカリ性となる処理である限り特に限定されない。
具体的には有機塩基又は無機塩基の何れかを該溶液に添加する方法がアルカリ処理として例示されるが、その後の処理等を考慮すると無機塩基の方が好ましい。更には、無機塩基の中にあっても水酸化ナトリウムのような強塩基より、炭酸水素ナトリウムや炭酸ナトリウムのような弱塩基の方が、ヒアルロン酸や薬剤に影響を及ぼすおそれが低いことから望ましい。ここでのアルカリ処理のpH条件は7.2〜11、好ましくは7.5〜10が例示される。【００４８】
アルカリ処理の処理時間は、ヒアルロン酸の低分子化に影響を及ぼさなければ特に限定されないが、2〜12時間、好ましくは２〜６時間が挙げられ、当該時間処理すればヒアルロン酸に影響を与えず可溶性の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を得ることができる。【００４９】
つまり一例としては、薬剤および光反応性基をヒアルロン酸に導入した後の反応液に炭酸水素ナトリウム等の弱アルカリを加え、数時間攪拌処理した後、エタノール沈殿、乾燥等の後処理をすることにより可溶性の薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を得ることができる。【００５０】
通常、ヒアルロン酸のカルボキシル基に上記のような光反応性基および薬剤が導入されると、該カルボキシル基はアミド結合あるいはエステル結合への置換反応によりその親水性が低下することになるが、上記アルカリ処理を行うことにより、光反応性基および薬剤の導入量、特に薬剤の導入量を従来の技術では見られなかった大きな量としても、薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体は水性媒体への可溶性を維持する（原料ヒアルロン酸と同等の可溶性を保持する）ことが可能となる。【００５１】
上記のようにして製造された薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体に光を照射し、架橋させることにより本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを製造することができる。つまり、上記のようにして製造された薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を単離して水性媒体に溶解して水溶液とした後、当該水溶液を光照射に供して架橋させる。溶液に用いる水性媒体は、生体に対し影響を及ぼさず、さらに後工程の光架橋反応に影響を及ぼさないものであれば特に制限はないが、生理食塩水やリン酸緩衝生理食塩水が望ましい。上記水溶液における薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体の濃度は、注入具で押し出し可能な性状の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを得るためには重量％で通常0.1％〜１０％であり、0.5％〜３％がより好ましく、0.5％〜1.5％がさらに好ましい。【００５２】
上記のように薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を中間生成物として単離することのメリットの一つとして、薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を緩衝液等の水系溶媒に溶解することにより一旦均一な水溶液の状態を形成し、この状態で光照射、架橋することにより、含水状態、すなわち多くの水分子がヒアルロン酸鎖に水和した状態で架橋することが可能であり、これにより最終的に注入具で押し出し可能な性状のゲルが形成される。また、製造上のメリットとして、該中間生成物で一旦精製、単離するため、未反応物や縮合剤等の不純物の除去が可能であること、さらに該薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体が水性媒体に可溶であるため、水溶液とした後、該水溶液を濾過することにより滅菌、除菌あるいは異物の除去が可能となることがある。【００５３】
薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体水溶液への光照射は、どのような形態で行ってもよいが、ガラスシリンジに薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体水性溶液を充填した後、光照射するのが望ましい。例えば、光反応性基としてケイ皮酸誘導体を用いた場合、光照射後、ケイ皮酸同士が二量体を形成することによりヒアルロン酸鎖同士が架橋構造を取ることになる。光源として高圧水銀ランプ、メタルハライドランプ等の紫外線ランプを用いた場合、ガラスシリンジを用いるとガラス自体がヒアルロン酸に対し悪影響を及ぼす波長をカットし、光反応に必要な波長を透過させるカットフィルターの働きをする。【００５４】
上記薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体水溶液に光照射して架橋した薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは、水分子を含有、包括したまま架橋するため、ゲル状の構造を取ることとなり、これらは注射針などから押し出し可能な性質を有する。【００５５】
本発明において「注入具より押し出し可能な」性状とは、本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを充填した通常使用される医療用の注射器に装着された注射針などから、機械による加圧ではなく、ヒト（一般成人）の通常の手操作により得られる程度の加圧によっても、本発明の薬剤導入ＨＡ−ｇｅｌを押し出すことができ、生体などの対象物に注入可能である性質をいう。より具体的には、例えば、２５℃付近の室温において、２０（外径0.90mm、内径0.66mm）〜２７（外径0.40mm、内径0.22mm）ゲージ、好ましくは２０〜２５（外径0.50mm、内径0.32mm）ゲージ、更に好ましくは２３（外径0.65mm、内径0.40mm）〜２５ゲージの注射針を装着した注射器から、０．５〜５ｋｇ／ｃｍ２、好ましくは０．５〜２ｋｇ／ｃｍ２程度の圧力により押し出し可能な性質をいう。勿論、上記定義における圧力を得るための加圧は、機械による加圧でも、ヒトによる手操作による加圧でも構わない。また、通常使用される医療用の注射器としては、医療や生物実験等で用いられている注射器が挙げられるが、例えば、直径14mm、シリンジ長さ58mmで、５ｍｌ容量（例えば、テルモ社製5Mlシリンジ）の注射器が挙げられる。例えば、この注射器に上記注射針（例えば、２０〜２５ゲージ）を装着し、充填されている本発明の薬剤導入ＨＡ−ｇｅｌを5ml分押出するには、上記圧力（例えば０．５〜５ｋｇ／ｃｍ２）によると、１秒〜５分かかる。薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの「注入具より押し出し可能な」性状は、必ずしも薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの粘度と厳密に対応するものではない。しかし、薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの粘度を本発明における「注入具より押し出し可能な」性状のひとつの目安として考えると、当該性状は、回転粘度計により、標準コーン（１°３４’、１ｒｐｍ）を使用して、２０℃で測定した粘度として、好ましくは１〜５０Ｐａ・ｓ、より好ましくは３〜４０Ｐａ・ｓ、さらに好ましくは３〜３５Ｐａ・ｓ程度に対応する。
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは、上記特性により、注入や注射により薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを対象物（生体等）に投与する局所投与用製剤や非経口投与用製剤とすることができる。
更に、本発明は、薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌが注入具内に充填され、ガスケットで密封された注入具や、当該注入具と薬剤押出用プランジャー等を具備したキット等の提供も可能である。
例えば、ＮＳＡＩＤｓ導入ＨＡ-ｇｅｌを局所投与用製剤として用いた場合、消化器系による代謝や消化器管への副作用を回避することができ、より効率良い、かつ安全性の高い治療効果が期待できる。【００５６】
このような架橋されている薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの生体内での残留性は、架橋することにより薬剤を導入したヒアルロン酸よりさらに長くなり、また架橋の程度（架橋率）を変えることによりその残留性をコントロールできる。【００５７】
薬剤は光架橋ヒアルロン酸に共有結合で導入されているため、投与直後に薬剤が急激に放出されることはなく、基材となる光架橋ヒアルロン酸の分解あるいは、光架橋ヒアルロン酸と薬剤との結合の解離に伴い徐放される。そのため、残留性の高いつまり架橋率の高い薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを調製することにより徐放期間を延長できる。【００５８】
本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌは、投与部位に滞留して薬剤を長期にわたり放出する薬剤徐放性を有する担体としての作用を示すだけでなく、例えば、関節疾患における部位に投与した場合には、ヒアルロン酸が本質的に有する潤滑作用も同時に期待することができる。【００５９】
上記の通り、本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌを製造するための中間生成物である薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体が水溶性となり、また薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌが注入具から押し出し可能な性状とするためには、薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体をアルカリ処理して得る他に、主としてヒアルロン酸の分子量、光反応性基および薬剤の種類、導入率、薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体を架橋する際の水溶液におけるその濃度などを適切に選択することも必要であり、望む性状を有するものを製造することができる。従って、本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの具体的な構成を決定するにあたっては、必要とされる薬剤に対し、これらの要素を適当に選択すればよい。このような観点から、本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌの具体的な態様として以下のようなもの（（１）〜（１４））挙げられる。ただし本発明はこれらに限定されるものではない。【００６０】
（１）ヒアルロン酸の分子量が10,000〜5,000,000であり、光反応性基の導入率がヒアルロン酸二糖単位に対して（以下も同じ）５〜５０モル％であり、薬剤の導入率が１〜６０モル％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が６〜６０モル％である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（２）ヒアルロン酸の分子量が10,000〜3,000,000であり、光反応性基の導入率が５〜３０モル％であり、薬剤の導入率が５〜３０モル％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１０〜５０モル％である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（３）ヒアルロン酸の分子量が600,000〜1,500,000であり、光反応性基の導入率が５〜２０％であり、薬剤の導入率が５〜２５％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１０〜４５％である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。【００６１】
（４）ヒアルロン酸の分子量が600,000〜1,500,000であり、光反応性基の導入率が５〜２０モル％であり、薬剤の導入率が５〜２５モル％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１０〜４５モル％であり、薬剤の分子量が100〜500である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（５）ヒアルロン酸の分子量が800,000〜1,200,000であり、光反応性基の導入率が５〜２０％であり、薬剤の導入率が５〜２５％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１０〜４５％である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（６）薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体の溶液の濃度を０．５〜３重量％として光架橋して得られうる上記（３）〜（５）の本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。【００６２】
（７）ヒアルロン酸の分子量が800,000〜1,200,000であり、光反応性基の導入率が8〜20モル％であり、薬剤の導入率が7〜20モル％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１５〜４０モル％であり、薬剤がＮＳＡＩＤｓ、ＤＭＡＲＤから選択される薬剤である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（８）ヒアルロン酸の分子量が800,000〜1,200,000であり、光反応性基の導入率が8〜20モル％であり、薬剤の導入率が7〜20モル％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１５〜４０モル％であり、薬剤が抗癌剤である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（９）ヒアルロン酸の分子量が800,000〜1,200,000であり、光反応性基の導入率が8〜20モル％あり、薬剤の導入率が7〜20モル％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１５〜４０モル％であり、薬剤がナプロキセン、イブプロフェン、フルルビプロフェン、フェルビナク、ジクロフェナク、エトドラクおよびアクタリットから選択される薬剤である本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。【００６３】
（１０）薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体の溶液の濃度を０．５〜１．５重量％として光架橋して得られうる上記（７）〜（９）の本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（１１）スペーサーに光反応性基（光架橋基）がエステル結合により結合し、当該光反応性基（光架橋基）結合スペーサーがヒアルロン酸のカルボキシル基にアミド結合にて結合しており、スペーサーに薬剤がエステル結合により結合し、当該薬剤結合スペーサーがヒアルロン酸のカルボキシル基にアミド結合にて結合している本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（１２）スペーサーがアミノアルコールであり、光反応性基がケイ皮酸または置換ケイ皮酸である上記（１１）の本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。【００６４】
（１３）スペーサーがアミノエタノール、アミノプロパノール及びアミノブタノールから選択されるアミノアルコールであり、光反応性基がケイ皮酸またはアミノケイ皮酸であり、ヒアルロン酸の分子量が800,000〜1,200,000であり、光反応性基の導入率が５〜２０％であり、薬剤の導入率が５〜２５％であり、光反応性基および薬剤の導入率の合計が１０〜４５％である上記（１１）の本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
（１４）薬剤導入光反応性ヒアルロン酸誘導体の溶液濃度を０．５〜１．５重量％として光架橋して得られうる上記（１３）の本発明の薬剤導入ＨＡ-ｇｅｌ。
【実施例】
【００６５】
以下、実施例によりさらに本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００６６】
（調製例１）ｔ−ブトキシカルボニル−アミノプロパノール（Boc-アミノプロパノール）の合成
アミノプロパノール１．５４２ｇ（２０．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍＬに溶解し、氷冷下で、ジ-t-ブチルジカルボネート（Boc2O）４．４８４ｇ（２０．５ｍｍｏｌ）／ジクロロメタン溶液１０ｍＬをゆっくり滴下した。その後、反応液を室温に戻し、２時間４０分攪拌し、原料の消失を薄層クロマトグラフィー（以下、ＴＬＣとも言う）で確認した後、ジクロロメタンを減圧留去した。反応は定量的に進行し、収量３．９２ｇのオイル状のBoc-アミノプロパノールを得た。構造は1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００６７】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 1.46 (9H, s, Boc), 1.66 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 3.27 (3H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 3.66 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 4.91 (1H, br, CH2OH)【００６８】
（調製例２）ケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩の合成
ｔ−ブトキシカルボニル-アミノプロパノール1.21g（6.9mmol）にクロロホルム６mLを加え、氷冷下、トリエチルアミン956μL（6.9mmol）、ケイ皮酸クロリド1.15g（6.9mmol）、４−ジメチルアミノピリジン253mg（2.1mmol）を順次加えた。室温で２０分間攪拌した後、この反応液に酢酸エチルを加え、５％クエン酸水溶液で２回、水、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で２回、水、飽和食塩水で分液洗浄した後、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。該硫酸ナトリウムを濾取し、濾液を減圧濃縮した後、析出した白色固体をヘキサンで洗浄、減圧乾燥し、化合物（１−１）を1.38g（収率６５％）得た。次いで、化合物（１−１）860mg（2.8mmol）に４Ｍ塩化水素／ジオキサン溶液６Mlを氷冷下加え３５分室温で攪拌した。減圧乾燥し、白色結晶としてケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩を得た。収率７６％。【００６９】
（実施例１）ケイ皮酸アミノプロピル導入ヒアルロン酸ナトリウム（以下、光反応性ＨＡとも言う）の合成
重量平均分子量９０万のヒアルロン酸ナトリウム１．０ｇ（２．５ｍｍｏｌ／二糖単位（二糖単位としてのモル数（以下同様）。以下、このヒアルロン酸ナトリウムをＨＡとも言う。）を水１１５ｍＬ／ジオキサン１４４ｍＬに溶解させた後、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（以下、ＨＯＳｕとも言う。）１７２ｍｇ／水５ｍＬ、水溶性カルボジイミド塩酸塩（以下、ＷＳＣＩ・ＨＣｌとも言う。）１４３ｍｇ／水５ｍＬ、ケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩１８１ｍｇ／水５ｍＬを順次加え、３時間３０分攪拌し反応させた。続いて、反応液に７．５％炭酸水素ナトリウム水溶液１０ｍＬを加え、２時間５０分攪拌した後、酢酸２１４ｍｇ／水２ｍＬを加え中和し、次いで、塩化ナトリウム１ｇを加え攪拌した。エタノール５００ｍＬを加え沈殿させ、得られた沈殿物にエタノール１５０ｍＬを加え２回デカンテーションした後、９５％エタノールで２回洗浄し、４０℃で一晩減圧乾燥し、白色個体の１．０ｇのケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ（光反応性ＨＡ）を得た。ケイ皮酸の導入率は１６．２％であった。【００７０】
（実施例２）ナプロキセン導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルの合成
（１）アミノプロピル−ナプロキセン（エステル）塩酸塩の合成
調製例１で得られたBoc−アミノプロパノール３５０ｍｇ（２ｍｍｏｌ）とナプロキセン４６２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２ｍＬに溶解し、氷冷下でＮ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン（以下、ＤＭＡＰとも言う）４８ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ４２２ｍｇ（２．２ｍｍｏｌ）／ジクロロメタン２ｍＬを順次添加した。反応液を室温に戻し、４時間５０分攪拌した後、ジクロロメタンを減圧留去し、さらに酢酸エチルを加え、５％クエン酸で２回、水と５％炭酸水素ナトリウムで２回、さらに水と飽和食塩水で順次分液洗浄した。硫酸ナトリウムで脱水乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去し、白色結晶のＢｏｃ−アミノプロピル−ナプロキセン７２０ｍｇ（収率９３％）を得た。構造は、1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００７１】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 1.42 (9H, s, Boc), 1.58 (3H, d,-OCOCH(CH3)-), 1.75 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 3.07 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 3.85 (1H, q, -OCOCH(CH3)-), 3.91 (3H, s, -OCH3), 4.13 (2H,m,-NHCH2CH2CH2O-), 4.63 (1H, br, -NHCH2-), 7.09-7.75 (6H, m, Aromatic H)【００７２】
得られたＢｏｃ−アミノプロピル−ナプロキセン６８４ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍＬに溶解し、氷冷下で４Ｎ塩酸／酢酸エチル２ｍＬ（渡辺化学工業（株）製）を加えて、氷冷下で２０分間攪拌し、その後、室温で１時間攪拌した。Ｂｏｃ−アミノプロピル−ナプロキセンの消失をＴＬＣにより確認した後、反応液にジエチルエーテルを加え３回デカンテーションした。次いで、減圧乾燥し、アミノプロピル−ナプロキセン（エステル）塩酸塩を得た（収量５６４ｍｇ）。構造は１Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００７３】
1H-NMR (500MHz, CDCl3+CD3OD) δ (ppm): 1.57 (3H, d, -OCOCH(CH3)-), 2.02 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 2.88 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 3.87 (1H, q, -OCOCH(CH3)-), 3.90 (3H, s, -OCH3), 4.17 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 7.08-7.73 (6H, m, Aromatic H), 8.10 (br, H3N+CH2-)【００７４】
（２）ナプロキセン導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲル（ナプロキセン導入光架橋ＨＡゲル）の合成
実施例１で得られたケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ（光反応性ＨＡ）１００ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ／二糖単位）を、水１１．５ｍＬ／ジオキサン１１．５ｍＬの溶液に溶解させた後、１ｍｏｌ／ＬのＨＯＳｕ０．１ｍＬ、０．５ｍｏｌ／ＬのＷＳＣＩ・ＨＣｌ０．１ｍＬ、および、上記（１）で得られた０．５ｍｏｌ／Ｌのアミノプロピル−ナプロキセン（エステル）塩酸塩０．１ｍＬを順次加え、一昼夜攪拌し反応させた。反応液に５％炭酸水素ナトリウム水溶液１．５ｍＬを加え、４時間攪拌した。次いで、５０％酢酸４３μＬを加え中和し、その後、塩化ナトリウム６２０ｍｇを加え攪拌した。エタノール５０ｍＬを加え沈殿させ、８０％エタノールで２回、エタノールで２回、ジエチルエーテルで１回洗浄し、一晩減圧乾燥し、８３ｍｇのナプロキセン導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。ナプロキセンの導入率は９．３％であった。【００７５】
得られたナプロキセン導入光反応性ＨＡ（光反応性基：ケイ皮酸）の１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、５ｍＬガラスシリンジに充填した。充填されたシリンジに、３ｋｗメタルハライドランプにより光照射し、ナプロキセン導入光架橋ＨＡゲルを得た。さらに、ナプロキセン導入光架橋ＨＡゲルが充填されたシリンジについて１２１℃、２０分間の熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（１°３４’、１ｒｐｍ）で３４．７Ｐａ・ｓであった。【００７６】
（実施例３）イブプロフェン導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルの合成
（１）アミノプロピル−イブプロフェン（エステル）塩酸塩の合成
調製例１で得られたBoc−アミノプロパノール３５２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）とイブプロフェン４１２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２ｍＬに溶解し、氷冷下でＤＭＡＰ４８ｍｇ（０．４ｍｍｏｌ）、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ４２３ｍｇ（２．２ｍｍｏｌ）／ジクロロメタン２ｍＬを順次添加した。反応液を室温に戻し、一昼夜攪拌した。さらに、酢酸エチルを加え、実施例２（１）と同様の方法で分液洗浄および脱水乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去し、Ｂｏｃ−アミノプロピル−イブプロフェン６６５ｍｇ（収率９１％）を得た。構造は、1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００７７】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 0.88 (6H, d, -CH(CH3)2), 1.44 (9H, s, Boc), 1.49 (3H, d, -OCOCH(CH3)-), 1.75 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 1.85 (1H, m, -CH2CH(CH3)2), 2.45 (2H, d, -CH2CH(CH3)2), 3.05 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 3.69 (1H, q, -OCOCH(CH3)-), 4.13 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 4.63 (1H, br, -NHCH2-), 7.07-7.21 (4H, m, Aromatic H)【００７８】
得られたＢｏｃ−アミノプロピル−イブプロフェン６３６ｍｇ（１．７５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍＬに溶解し、氷冷下で４Ｎ塩酸／酢酸エチル４ｍＬを加えて、氷冷下で１０分間攪拌し、その後、室温で３時間攪拌した。Ｂｏｃ−アミノプロピル−イブプロフェンの消失をＴＬＣにより確認した後、反応液にジエチルエーテルを加え３回デカンテーションした。次いで、減圧乾燥し、アミノプロピル−イブプロフェン（エステル）塩酸塩を得た（収量４０６ｍｇ、収率７７％）。構造は１Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００７９】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 0.89 (6H, d, -CH(CH3)2), 1.47 (3H, d, -OCOCH(CH3)-), 1.83 (1H, m, -CH2CH(CH3)2), 2.08 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 2.44 (2H, d, -CH2CH(CH3)2), 3.01 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 3.71 (1H, q, -OCOCH(CH3)-), 4.11-4.27 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 7.06-7.20 (4H, m, Aromatic H), 8.25 (br, H3N+CH2-)【００８０】
（２）イブプロフェン導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲル（イブプロフェン導入光架橋ＨＡゲル）の合成  
実施例１で得られたケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ（光反応性ＨＡ）１００ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ／二糖単位）と上記（１）で得られた０．５ｍｏｌ／Ｌのアミノプロピル−イブプロフェン（エステル）塩酸塩０．１ｍＬを用い、実施例２（２）と同様の手順により８５ｍｇのイブプロフェン導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。イブプロフェンの導入率は９．１％であった。【００８１】
得られたイブプロフェン導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法により光照射を行い、イブプロフェン導入光架橋ＨＡゲルを得、さらに、１２１℃、２０分の熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃で粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で１３．１Ｐａ・ｓであった。【００８２】
（実施例４）フルルビプロフェン導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルの合成
（１）アミノプロピル−フルルビプロフェン（エステル）塩酸塩の合成  
調製例１で得られたBoc−アミノプロパノール３５２ｍｇ（２ｍｍｏｌ）とフルルビプロフェン４８９ｇ（２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２ｍＬに溶解し、実施例３（１）と同様の手順により、Ｂｏｃ−アミノプロピル−フルルビプロフェン７５３ｍｇ（収率９４％）を得た。構造は、1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００８３】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 1.26 (9H, s, Boc), 1.54 (3H, d, -OCOCH(CH3)-), 1.80 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 3.13 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 3.76 (1H, q, -OCOCH(CH3)-), 4.15 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 4.66 (1H, br, -NHCH2-), 7.10-7.55 (9H, m, Aromatic H)【００８４】
上記で得られたＢｏｃ−アミノプロピル−フルルビプロフェン７２０ｍｇ（１．７９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍＬに溶解し、氷冷下で４Ｎ塩酸／酢酸エチル４ｍＬを加えて、氷冷下で３分間攪拌し、その後、室温で３時間１０分攪拌した。Ｂｏｃ−アミノプロピル−フルルビプロフェンの消失をＴＬＣにより確認した後、反応液にジエチルエーテルを加え２回デカンテーションした。次いで、減圧乾燥し、アミノプロピル−フルルビプロフェン（エステル）塩酸塩を得た（収量３５２ｍｇ、収率９４％）。構造は１Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００８５】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 1.51 (3H, d, -OCOCH(CH3)-), 2.10 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 3.05 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 3.76 (1H, q, -OCOCH(CH3)-), 4.13-4.29 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 7.07-7.53 (9H, m, Aromatic H), 8.27 (br, H3N+CH2-)【００８６】
（２）フルルビプロフェン導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲル（フルルビプロフェン導入光架橋ＨＡゲル）の合成  
実施例１で得られたケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ（光反応性ＨＡ）２００ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ／二糖単位）を水２３ｍＬ／ジオキサン２３ｍＬに溶解させた後、１ｍｏｌ／ＬのＨＯＳｕ０．２ｍＬ、０．５ｍｏｌ／ＬのＷＳＣＩ・ＨＣｌ０．２ｍＬ、および、上記（１）で得られた０．５ｍｏｌ／Ｌのアミノプロピル−フルルビプロフェン（エステル）塩酸塩０．２ｍＬを順次加え、一昼夜攪拌し反応させた。反応液に５％炭酸水素ナトリウム水溶液１．５ｍＬを加え、４時間攪拌した。次いで、５０％酢酸４３μＬを加え中和し、その後、塩化ナトリウム１．２ｇを加え攪拌した。エタノール１００ｍＬを加え沈殿させ、８０％エタノールで２回、エタノールで２回、ジエチルエーテルで１回洗浄し、一晩減圧乾燥し、２０４ｍｇのフルルビプロフェン導入光反応性ＨＡを得た。フルルビプロフェンの導入率は９．３％であった。【００８７】
得られたフルルビプロフェン導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法により光照射を行い、フルルビプロフェン導入光架橋ＨＡゲルを得、さらに、１２１℃、２０分の熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃で粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で２１．２Ｐａ・ｓであった。【００８８】
（実施例５）フェルビナク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルの合成
（１）アミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩の合成
調製例１で得られたBoc−アミノプロパノール２．０４ｍｍｏｌ、フェルビナク２．０４ｍｍｏｌおよびＤＭＡＰ０．４１ｍｍｏｌをジオキサン７ｍｌに溶解させた後、氷冷下で、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ２．３５ｍｍｏｌ／ジオキサン：ジクロロメタン（３：４）溶液７ｍＬを加えた。さらに、ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦとも言う）３ｍｌを添加し、反応液を澄明とした後、室温に戻し、一昼夜攪拌した。酢酸エチルを加え、５％クエン酸水溶液、５％炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水により順次分液洗浄を行った。硫酸ナトリウムで脱水乾燥した後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１の０．５％トリメチルアミン溶液））により精製し、Ｂｏｃ−アミノプロピル−フェルビナク６２３ｍｇ（収率８３％）を得た。構造は、1Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００８９】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 1.44 (9H, s, Boc), 1.80-1.85 (2H, m, BocHNCH2CH2CH2O-), 3.15-3.19 (2H, m, BocHNCH2CH2CH2O-), 3.67 (2H, s, PhCH2-), 4.18 (2H, t, BocHNCH2CH2CH2O-), 4.67 (1H, s, NH), 7.34-7.59 (9H, m, Aromatic)【００９０】
得られたＢｏｃ−アミノプロピル−フェルビナク１．６９ｍｍｏｌをジクロロメタン１ｍＬに溶解し、氷冷下で４Ｎ塩酸／酢酸エチル３ｍＬを加えた後、室温で２時間攪拌した。Ｂｏｃ−アミノプロピル−フェルビナクの消失をＴＬＣにより確認した後、反応液にジエチルエーテルを加え、生じた沈殿を遠心分離した。得られた沈殿をジエチルエーテルにより３回デカンテーションした後、減圧乾燥し、アミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩を得た（収量５１１．７ｍｇ、収率９９％）。構造は１Ｈ−ＮＭＲ（CDCl3）により同定した。【００９１】
1H-NMR (500MHz, CDCl3:CD3OD=1:1) δ (ppm): 1.98-2.04 (2H, m, H2NCH2CH2CH2O-), 2.95 (2H, t, H2NCH2CH2CH2O-), 3.73 (2H, s, -PhCH2-), 4.23 (2H, t, H2NCH2CH2CH2O-), 7.33-7.59 (9H, m, Aromatic)【００９２】
（２）フェルビナク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲル（フェルビナク導入光架橋ＨＡゲル）の合成
実施例１で得られたケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ（光反応性ＨＡ）１００ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ／二糖単位）を、水１１．５ｍＬ／ジオキサン１１．５ｍＬに溶解させた後、ＨＯＳｕ(０．１ｍｍｏl)／水０．１ｍＬ、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ(０．０５ｍｍｏｌ)／水０．１ｍＬ、および、上記（１）で得られたアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩（０．０５ｍｍｏｌ）／水：ジオキサン（１：１）溶液２ｍＬを順次加え、一昼夜攪拌し反応させた。反応液に５％炭酸水素ナトリウム水溶液１．５ｍＬを加え、４時間攪拌した。次いで、５０％酢酸４３μＬを加え中和し、その後、塩化ナトリウム６００ｍｇを加え攪拌した。エタノール９０ｍＬを加え沈殿させ、８０％エタノールで２回、エタノールで２回、ジエチルエーテルで１回洗浄し、室温で一晩減圧乾燥し、９４ｍｇのフェルビナク導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。フェルビナクの導入率は１０．８％であった。【００９３】
得られたフェルビナク導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法で光照射し、フェルビナク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルを得、さらに、１２１℃、２０分の熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で７．３２Ｐａ・ｓであった。【００９４】
（実施例６）ジクロフェナク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルの合成
（１）アミノプロピル−ジクロフェナク（エステル）塩酸塩の合成
調製例１で得られたBoc-アミノプロパノール135.8mg(0.775mmol)をジクロロメタン1mLに溶解し、予めH-フォームとしたジクロフェナク229.6mg(0.775mmol)／ジクロロメタン溶液4mL、DMAP 18.9mg(0.155mmol)／ジクロロメタン溶液1mL、DMF 0.5mLを順次加え、氷冷下でWSCI・HCl 191.4mg(0.998mmol)／ジクロロメタン溶液2mLを加えて徐々に室温としながら７時間撹拌した。さらに反応液を氷冷し、予めH-フォームとしたジクロフェナク91.9mg(0.310mmol)／ジクロロメタン溶液1mL、DMAP 7.5mg(0.061mmol)、WSCI・HCl 70.9mg(0.370mmol)／ジクロロメタン溶液1mLを順次加えて徐々に室温としながら１１時間撹拌した。さらに反応液を氷冷し、予めH-フォームとしたジクロフェナク91.8mg(0.310mmol)／ジクロロメタン溶液1mL、WSCI・HCl 70.4mg(0.367mmol)／ジクロロメタン溶液1mLを順次加えて徐々に室温としながら５時間撹拌した。さらに反応液を氷冷し、予めH-フォームとしたジクロフェナク91.9mg(0.310mmol)／ジクロロメタン溶液1mL、WSCI・HCl 70.7mg(0.369mmol)／ジクロロメタン溶液1mLを順次加えて徐々に室温としながら５時間撹拌した。さらに反応液を氷冷し、予めH-フォームとしたジクロフェナク91.7mg(0.310mmol)／ジクロロメタン溶液1mL、WSCI・HCl 71.6mg(0.374mmol)／ジクロロメタン溶液1mLを順次加えて徐々に室温としながら１４時間撹拌した。【００９５】
さらに反応液を氷冷し、予めH-フォームとしたジクロフェナク92.0mg(0.311mmol)／ジクロロメタン溶液1mL、WSCI・HCl 72.0mg(0.376mmol)／ジクロロメタン溶液1mLを順次加えて徐々に室温としながら６時間撹拌した。。酢酸エチルを加え、５％クエン酸水溶液で２回、５％重曹水で２回、飽和食塩水で順次分液洗浄した。硫酸ナトリウムで脱水後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン：酢酸エチル（７：１）の0.5% トリエチルアミン溶液）で精製し、標記化合物を280.2mg(80%)得た。構造は1H-NMRにより同定した。【００９６】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 1.44 (9H, s, Boc), 1.85 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 3.16 (2H, q, -NHCH2CH2CH2O-), 3.82 (2H, s, Ph-CH2-CO), 4.22 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 4.68 (1H, s, NH), 6.54-7.35 (8H, m, Aromatic H, NH)【００９７】
得られたBoc-アミノプロピル−ジクロフェナク1019mgをジクロロメタン2mLに溶解し、氷冷下で４Ｎ塩酸/酢酸エチル8mLを加えて３時間撹拌した。ジエチルエーテル150mLを加えて沈殿させ、沈殿を減圧乾燥し、アミノプロピル−ジクロフェナク（エステル）塩酸塩を791mg(90%)得た。構造は1H-NMRにより同定した。
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 2.13 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 3.08 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 3.84 (2H, s, Ph-CH2-CO), 4.25 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 6.52-7.33 (8H, m, Aromatic H, NH)【００９８】
（２）ジクロフェナク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲル（ジクロフェナク導入光架橋ＨＡゲル）の合成
実施例１で得られたケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ（光反応性ＨＡ） 110mg (0.28mmol/二糖単位)を水12.7mL/ジオキサン12.7mLに溶解させた後、HOSu(0.11mmol)/水0.11mL、WSCI・HCl(0.055mmol)/水0.11mL、実施例６（１）で得られたアミノプロピル−ジクロフェナク（エステル）塩酸塩(0.055mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを順次加え、一昼夜撹拌し反応させた。反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液1.65mLを加え、４時間撹拌した。反応液に50%酢酸47μLを加え中和後、塩化ナトリウム660mgを加えて撹拌した。エタノール90mlを加えて沈殿させ、沈殿物を80%エタノールで２回、エタノールで２回、ジエチルエーテルで洗浄し、室温により一晩減圧乾燥した。111mgのジクロフェナク導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。1H-NMRによるジクロフェナクの導入率は13.6%だった。【００９９】
上記で得られたジクロフェナク導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様な方法で光照射し、ジクロフェナク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルを得た。【０１００】
（実施例７）エトドラク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルの合成
（１）アミノプロピル−エトドラク（エステル）塩酸塩の合成
調製例１で得られたBoc-アミノプロパノール178.8mg(1.02mmol)、エトドラク293.8mg(1.02mmol)およびDMAP 23.8mg(0.20mmol)をジクロロメタン4mLに溶解し、氷冷下でWSCI・HCl 233.8mg(1.22mmol)／ジクロロメタン溶液2mLを加えて徐々に室温としながら一昼夜撹拌した。さらに氷冷下でWSCI・HCl 68.8mg(0.36mmol)／ジクロロメタン溶液2mLを加えて徐々に室温としながら８０分間撹拌した。酢酸エチルを加え、５％クエン酸水溶液で２回、５％重曹水で２回、飽和食塩水で順次分液洗浄した。硫酸ナトリウムで脱水後、酢酸エチルを減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン：酢酸エチル（３：１）の0.5% トリエチルアミン溶液）で精製し、Boc-アミノプロピル−エトドラク436.3mg(収率96%)を得た。構造は1H-NMRにより同定した。【０１０１】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 0.83 (3H, t, -CH2CH3), 1.37 (3H, t, -CH2CH3), 1.43 (9H, s, Boc), 1.79 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 3.14 (2H, q, -NHCH2CH2CH2O-), 4.10-4.22 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 4.63 (1H, s, NH), 7.00-7.37 (3H, m, Aromatic H), 8.97 (1H, s, NH)【０１０２】
上記で得られたBoc-アミノプロピル−エトドラク421.5mg(0.948mmol)をジクロロメタン1mLに溶解し、氷冷下で４Ｎ塩酸/酢酸エチル3mLを加えて３時間撹拌した。ジエチルエーテル、ヘキサンを加えて沈殿させ、沈殿を減圧乾燥した。沈殿をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム：メタノール（３：１）の0.5% トリエチルアミン溶液）で精製し、アミノプロピル−エトドラク（エステル）塩酸塩を197.6mg(55%)得た。構造は1H-NMRにより同定した。【０１０３】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 0.81 (3H, t, -CH2CH3), 1.35 (3H, t, -CH2CH3), 1.92-2.17 (4H, m, -CH2CH3, -NHCH2CH2CH2O-), 4.12 (1H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 4.20 (1H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 6.99-7.35 (3H, m, Aromatic H), 8.99 (1H, s, NH)【０１０４】
（２）エトドラク導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲル（エトドラク導入光架橋ＨＡゲル）の合成
実施例１で得られたケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ89.2mg (0.223mmol/二糖単位)を水10.3mL/ジオキサン10.3mLに溶解させた後、HOSu(0.0892mmol)/水0.1mL、WSCI・HCl(0.0446mmol)/水0.1mL、実施例７（１）で得られたアミノプロピル−エトドラク（エステル）塩酸塩(0.0446mmol)/水：ジオキサン（１：１）溶液2mLを順次加え、一昼夜撹拌し反応させた。反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液1.34mLを加え、４時間撹拌した。反応液に50%酢酸38μLを加え中和後、塩化ナトリウム540mgを加えて撹拌した。エタノール90mlを加えて沈殿させ、沈殿物を80%エタノールで２回、エタノールで２回、ジエチルエーテルで洗浄し、室温で一晩減圧乾燥した。80mgのエトドラク導入光反応性ＨＡ（白色固体）を得た。HPLCにより測定したエトドラクの導入率は7.7%であった。【０１０５】
上記で得られたエトドラク導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法で光照射し、エトドラク導入光架橋ＨＡゲルを得、さらに１２１℃、２０分の熱処理を実施した。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で１２．７Ｐａ・ｓであった。【０１０６】
（実施例８）アクタリット導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲルの合成
（１）アミノプロピル−アクタリット（エステル）塩酸塩（抗リウマチ薬）の合成
調製例１で得られたBoc-アミノプロパノール123.1mg(0.703mmol)、をジクロロメタン2mLに溶解し、アクタリット136.0mg(0.704mmol)／DMF溶液1mLを加え、氷冷下でDMAP 17.1mg(0.140mmol)、WSCI・HCl 175.4mg(0.915mmol)を順次加えて徐々に室温としながら一昼夜撹拌し反応させた。反応液に酢酸エチルを加え、実施例５（１）と同様の方法で分液洗浄、脱水乾燥した後、溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。シリカゲルクロマトグラフィーの展開溶媒には、ヘキサン：酢酸エチル（１：２）の0.5% トリエチルアミン溶液を用いた。アミノプロピル−アクタリット（エステル）塩酸塩を203.1mg(83%)得た。構造は1H-NMRにより同定した。【０１０７】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm): 1.44 (9H, s, Boc), 1.80 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-), 2.18 (3H, s, NAc), 3.14 (2H, q, -NHCH2CH2CH2O-), 3.59 (2H, s, Ph-CH2-CO), 4.15 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 4.66 (1H, s, NH), 7.13 (1H, s, NH), 7.23 (2H, d, Aromatic H), 7.46 (2H, d, Aromatic H)【０１０８】
得られたBoc-アミノプロピル−アクタリット201.3mg(0.574mmol)をジクロロメタン2mLに溶解し、氷冷下で４Ｎ塩酸／酢酸エチル3mLを加えて３時間撹拌した。ジエチルエーテルを加えて沈殿させ、沈殿をジエチルエーテルで２回洗浄後、減圧乾燥し、アミノプロピル−アクタリット（エステル）塩酸塩161.3mg(98%)得た。構造は1H-NMRにより同定した。【０１０９】
1H-NMR (500MHz, CD3OD) δ (ppm): 1.94-1.99 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 2.11 (3H, s, NAc), 2.94 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 3.63 (2H, s, Ph-CH2-CO), 4.19 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-), 7.22-7.51 (4H, m, Aromatic H)【０１１０】
（２）アクタリット導入光架橋ヒアルロン酸ナトリウムゲル（アクタリット導入光架橋ＨＡゲル）の合成【０１１１】
実施例１で得られたケイ皮酸アミノプロピル導入ＨＡ（光反応性ＨＡ）100mg (0.25mmol/二糖単位)を水11.5mL/ジオキサン11.5mLに溶解させた後、HOSu(0.2mmol)/水0.1mL、WSCI・HCl(0.1mmol)/水0.1mL、上記（１）で得られたアミノプロピル−アクタリット（エステル）塩酸塩(0.1mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを順次加え、一昼夜撹拌し反応させた。反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液1.5mLを加え、５時間１０分撹拌した。実施例５（２）と同様の方法で、反応液を中和後、エタノールで沈殿させ、沈殿物を洗浄、減圧乾燥し、100mgのアクタリット導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。HPLCにより測定したアクタリットの導入率は15.6%だった。【０１１２】
得られたアクタリット導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法で光照射し、アクタリット導入光架橋ＨＡゲルを得、さらに１２１℃、２０分の熱処理を実施した。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で１０．８Ｐａ・ｓであった。【０１１３】
（実施例９）ケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩およびアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩を同時添加するフェルビナク導入光架橋ＨＡゲルの合成
重量平均分子量８０万のヒアルロン酸100mg (0.25mmol/二糖単位)を水11.25mL/ジオキサン11.25mLに溶解させた後、HOSu(0.275mmol)/水0.1mL、WSCI・HCl(0.1375mmol)/水0.1ｍＬを加え、さらに、実施例５（１）で得られたアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩(0.05mmol)と調製例２で得られたケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩(0.0875mmol)／水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを同時に添加し一昼夜撹拌し反応させた。実施例５（２）と同様の手順により、反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液1.5mLを加え４時間撹拌し、次いで、反応液を中和させた後、エタノールにより沈殿させ、沈殿物を洗浄、減圧乾燥して、92mgのフェルビナク導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。HPLCにより測定したフェルビナクの導入率は8.7%、trans-ケイ皮酸の導入率は13.3%だった。【０１１４】
得られたフェルビナク導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法で光照射し、フェルビナク導入光架橋ＨＡゲルを得、次いで、熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で１２．１Ｐａ・ｓであった。【０１１５】
上記結果より、ケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩およびアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩を同時に導入して製造した薬剤導入光反応性ヒアルロン酸もゲル化できることが明らかになった。【０１１６】
（実施例１０）アミノプロピル−フェルビナク導入ヒアルロン酸ナトリウムへのケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩添加によるフェルビナク導入光架橋ＨＡゲルの合成
（１）フェルビナク導入ヒアルロン酸ナトリウム（フェルビナク導入ＨＡ）
重量平均分子量８０万のヒアルロン酸500mg (1.25mmol/二糖単位)を水56.3mL/ジオキサン56.3mLに溶解させた後、HOSu(0.5mmol)/水0.5mL、WSCI・HCl(0.25mmol)/水0.5mL、実施例５（１）で得られたアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩(0.25mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液5mLを順次加え、一昼夜撹拌し反応させた。反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液7.5mLを加え、４時間撹拌した。反応液に50%酢酸215μLを加え中和後、塩化ナトリウム3gを加えて撹拌した。エタノール500mlを加えて沈殿させ、沈殿物を80%エタノールで２回、エタノールで２回、ジエチルエーテルで順次洗浄し、室温で一晩減圧乾燥した。489mgのフェルビナク導入ＨＡの白色固体を得た。HPLCにより測定したフェルビナクの導入率は7.6%だった。【０１１７】
（２）フェルビナク導入光架橋ＨＡゲル
実施例１０（１）で得られたフェルビナク導入ＨＡ100mg (0.25mmol/二糖単位)を水11.25mL/ジオキサン11.25mLに溶解させた後、HOSu(0.2mmol)/水0.2mL、WSCI・HCl(0.1mmol)/水0.2mL、実施例２で製造したケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩(0.1mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを順次加え、一昼夜撹拌し反応させた。反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液1.5mLを加え、４時間撹拌した。次いで、実施例５（２）と同様の手順により、反応液を中和後エタノールにより沈殿させ、沈殿物を洗浄、減圧乾燥して、85mgのフェルビナク導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。HPLCにより測定したtrans-ケイ皮酸の導入率は14.8%だった。【０１１８】
得られたフェルビナク導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法で光照射し、フェルビナク導入光架橋ＨＡゲルを得、その後、１２１℃、２０分の熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で２７．０８Ｐａ・ｓであった。【０１１９】
（実施例１１）アミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩およびケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩の逐次添加によるフェルビナク導入光架橋ＨＡゲルの合成
重量平均分子量８０万のヒアルロン酸100mg (0.25mmol/二糖単位)を水11.25mL/ジオキサン11.25mLに溶解させた後、HOSu(0.1mmol)/水0.1mL、WSCI・HCl(0.05mmol)/水0.1mL、実施例５（１）で得られたアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩(0.05mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを順次加え、６時間撹拌した。さらに、HOSu(0.2mmol)/水0.2mL、WSCI・HCl(0.1mmol)/水0.2mL、ケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩(0.1mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを順次加え、一昼夜撹拌し反応させた。反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液1.5mLを加え、５時間３０分撹拌した。反応液に50%酢酸43μLを加え中和後、塩化ナトリウム0.6gを加えて撹拌した。エタノール100mlを加えて沈殿させ、沈殿物を80%エタノールで２回、エタノールで２回、ジエチルエーテルで順次洗浄し、室温で一晩減圧乾燥した。90mgのフェルビナク導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。HPLCにより測定したフェルビナクおよびtrans-ケイ皮酸の導入率は11.4および13.9%だった。【０１２０】
得られたフェルビナク導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法で光照射し、フェルビナク導入光架橋ＨＡゲルを得、その後、１２１℃、２０分の熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で１２．９５Ｐａ・ｓであった。【０１２１】
（実施例１２）ケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩およびアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩の逐次添加によるフェルビナク導入光架橋ＨＡゲルの合成
重量平均分子量８０万のヒアルロン酸100mg (0.25mmol/二糖単位)を水11.25mL/ジオキサン11.25mLに溶解させた後、HOSu(0.2mmol)/水0.2mL、WSCI・HCl(0.1mmol)/水0.2mL、ケイ皮酸アミノプロピル塩酸塩(0.1mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを順次加え、６時間撹拌した。さらに、HOSu(0.1mmol)/水0.1mL、WSCI・HCl(0.05mmol)/水0.1mL、実施例５（１）で得られたアミノプロピル−フェルビナク（エステル）塩酸塩(0.05mmol)/水：ジオキサン(１：１)溶液2mLを順次加え、一昼夜撹拌し反応させた。実施例１１と同様の手順により、反応液に5%炭酸水素ナトリウム水溶液1.5mLを加え５時間３０分撹拌した後、反応液を中和し、エタノールで沈殿させ、沈殿物を洗浄、減圧乾燥した。89mgのフェルビナク導入光反応性ＨＡの白色固体を得た。HPLCにより測定したtrans-ケイ皮酸およびフェルビナクの導入率は18.2および5.7%だった。【０１２２】
得られたフェルビナク導入光反応性ＨＡの１％リン酸緩衝生理的食塩水溶液を調製し、実施例２（２）と同様の方法で光照射しフェルビナク導入光架橋ＨＡゲルを得、その後、１２１℃、２０分の熱処理を行った。回転粘度計を用いて、２０℃にて粘度を測定したところ、標準コーン（1°34’、１ｒｐｍ）で２２．５８Ｐａ・ｓであった。【０１２３】
（実施例１３）
上記実施例２〜５、実施例７〜９の計７種類の薬剤導入架橋ＨＡゲルの粘度、性状および２３Ｇの注射針からの押出具合を調べた。評価は、以下の基準に従い実施した。【０１２４】
［性状］
注射針先からの押出状態：下記「押出具合」の試験において押し出し可能な被検物質について、下方約４５度に傾けた２３Ｇの注射針からゆっくりと押し出した時に針先に保形性を有する固まりができるものを（○）、できないものを（×）とした。
［押出具合］
○：押出易
×：押出難【０１２５】
尚、押出具合の基準としては、制限圧力（0.5〜5kg/cm2）範囲内で、５ｍｌ容量のシリンジ内に充填したゲル（２ml〜５ml）が、２３ゲージの注射針を通って全て押出される場合を、押出易（○）とした。また、同様の操作により、例えば不溶物による詰まり等によりにシリンジ内に充填したゲルが全て押出されない場合を、押出難（×）とした。
結果を下記表に示す。【０１２６】
【表１】
0005147396.tif 000002