(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）インスリン、パラチロイドホルモンのＮ末端フラグメント（アミノ酸１−３４）、及びエリトロポエチンから選択される、少なくとも一の生物学的に活性なペプチド；及び
（Ｂ）下式：
【化１】
0005144861.tif 000011
を有する化合物またはその塩を含む担体；
を含む組成物。
【請求項２】
前記生物学的に活性なペプチドが、インスリンを含み、前記インスリンがブタインスリンまたはヒトインスリンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記生物学的に活性なペプチドが、パラチロイドホルモンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記生物学的に活性なペプチドが、エリトロポエチンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
（I）請求項１に記載の組成物；及び
（II）（ａ）賦形剤、
（ｂ）希釈剤、
（ｃ）錠剤分解物質、
（ｄ）潤滑剤、
（ｅ）可塑剤、
（ｆ）着色剤、
（ｇ）投薬媒体、または
（ｈ）これらのあらゆる組み合わせ；
を含み、前記活性剤が、生物学的に活性なペプチドである、投薬製剤。
【請求項６】
前記生物学的に活性なペプチドが、インスリンを含み、前記インスリンがブタインスリンまたはヒトインスリンである、請求項５に記載の投薬製剤。
【請求項７】
前記生物学的に活性なペプチドが、パラチロイドホルモンを含む、請求項５に記載の投薬製剤。
【請求項８】
前記生物学的に活性なペプチドが、エリトロポエチンを含む、請求項５に記載の投薬製剤。
【請求項９】
錠剤、粉末、カプセル、または液体を含む、請求項５に記載の投薬製剤。
【請求項１０】
請求項１に記載の組成物を含む、経口投与剤。
【請求項１１】
（Ａ）インスリン、パラチロイドホルモンのＮ末端フラグメント（アミノ酸１−３４）、及びエリトロポエチンから選択される、少なくとも一の生物学的に活性なペプチド；
（Ｂ）下式：
【化２】
0005144861.tif 000012
を有する化合物；及び
（Ｃ）任意の投与媒体；
を混合することを含む、組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、活性剤、特に生物学的または化学的活性剤のデリバリーのための化合物に関する。これらの化合物は、活性剤のデリバリーを促進するための担体として使用される。該担体化合物は、動物への、肺、口、皮下、鼻内、舌下、頬、眼、結腸内、十二指腸内、直腸、腟、粘膜、経皮、真皮内、非経口、静脈内、及び筋内からの投与、並びに血液脳関門の通過のための、生物学的活性剤との非共有結合混合物の生成に非常に好適である。こうした組成物の投与及び調製の方法もまた開示する。
【０００２】
【従来の技術】
活性剤のデリバリーのための従来の方法は、生物学的、化学的、及び物理的バリアによってしばしば厳しく制限される。典型的には、これらのバリアは、デリバリーが起きる環境、デリバリーのターゲットの環境、またはターゲット自身によって負わされる。生物学的または化学的活性剤は、特にこうしたバリアに対して脆弱である。
【０００３】
例えば、生物学的に活性または化学的に活性な薬理及び治療剤の動物へのデリバリーにおいては、バリアは身体によって負わされる。物理的バリアの例は、ターゲットに到達する前に越えねばならない、皮膚及び様々な器管の膜である。化学的バリアには、これらに制限されるものではないが、ｐＨ変化、脂質二重層、及び分解酵素が含まれる。
【０００４】
これらのバリアは、薬剤デリバリーシステムの設計において、特に顕著である。例えば、胃腸管膜内においてｐＨが変化すること等の生物学的、化学的、及び物理的バリアがないとすれば、多くの生物学的または化学的活性剤の経口デリバリーは、動物への投与のために選択しうる、代替的経路となるであろう。典型的には経口投与になじみにくい多数の剤の中には、生物学的または化学的に活性なペプチド、例えばカルシトニン及びインスリン；多糖類、特に限定するものではないがヘパリンを含むムコ多糖類；ヘパリノイド；抗生物質；及び他の有機物質がある。これらの剤は、胃腸管内で、酸加水分解、酵素などによって、迅速に不活性化または破壊される。さらに、巨大分子薬剤のサイズ及び構造は、吸収を妨げうる。
【０００５】
血液脳関門の通過、並びに経口、皮下、鼻内、舌下、頬、眼、結腸内、十二指腸内、粘膜、経皮または肺からの循環器系へのデリバリーは、ある種の生物学的活性剤に対して比較的不透過性であり、これらの経路を経てデリバリーされた剤が、該循環器系に到達する前にその一以上を越えねばならない皮膚、脂質二重層、及び多様な器官膜などの物理的バリアがないとすれば、多くの生物学的活性剤にとって、動物への投与のために選択しうる経路となりうる。さらに、例えば舌下からのデリバリーなどのデリバリーは、胃腸（ＧＩ）管内におけるｐＨの変化及び強力な消化酵素の存在などの化学的バリアによって妨げられうる。
【０００６】
脆弱な薬理剤の経口投与のための初期の方法は、腸壁の透過性を人工的に増大させるための助剤（例えば、レゾルシノール及び非イオン性界面活性剤、例えばポリオキシエチレンオレイルエーテル及びｎ-ヘキサデシルポリエチレンエーテル）の共投与、並びに酵素による分解を抑制するための酵素阻害剤（例えば、膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスファート（ＤＦＦ）及びトラシロール（trasylol））の共投与に依存してきた。
【０００７】
リポソームがまた、インスリン及びヘパリンのための薬剤デリバリーシステムとして開示されている。例えば、米国特許公報代４，２３９，７５４合；Patel et al. (1976), FEBS Letters, Vol. 62, pg. 60;及びHashimoto et al. (1979), Endocrinology Japan, Vol. 26, pg. 337.を参照のこと。
【０００８】
しかしながら、こうした薬剤デリバリーシステムの多種多様な使用は、不可能である。なぜなら、（１）該システムが、助剤または阻害剤の毒性量を要する；（２）好適な低分子量の貨物、すなわち活性剤が入手できない；（３）該システムが、安定性に乏しく、不適当な貯蔵寿命を呈する；（４）該システムが、製造困難である；（５）該システムが、活性剤（貨物）を保護できない；（６）該システムが、活性剤を不利に変質させる；または（７）該システムが、活性剤を吸収させるまたは活性剤の吸収を促進することができない；ためである。
【０００９】
近年、混合アミノ酸の人口ポリマー（プロテイノイド）のミクロスフィアが、薬理剤のデリバリーに使用されている。例えば、米国特許公報第４，９２５，６７３号には、プロテノイドミクロスフィア担体を含む薬剤並びにその調製法及び使用が開示されている。これらのプロテノイドミクロスフィアは、多数の活性剤のデリバリーに有用である。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、容易に調製され、様々な経路から広範な活性剤をデリバリー可能な、単純で、安価なデリバリーシステムが、依然として求められている。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下式：
【化３】
0005144861.tif 000002
を有する化合物及びその塩を提供する。これらの化合物は、活性剤のデリバリーに有用である。
【００１２】
本発明の別の実施態様は、
（Ａ）少なくとも一の活性剤；及び
（Ｂ）下式：
【化４】
0005144861.tif 000003
を有する化合物またはその塩；
を含む組成物である。
【００１３】
上記の組成物及び、付形剤、希釈剤、錠剤分解物質、潤滑剤、可塑剤、着色剤、投薬媒体、またはこれらのあらゆる組み合わせを含む投薬ユニット形態もまた提供される。
【００１４】
生物学的活性剤を、前記剤を必要とする動物に、肺、口、皮下、鼻内、舌下、頬、眼、結腸内、十二指腸内、直腸、腟、粘膜、経皮、真皮内、非経口、静脈内、及び筋内からの経路、または血液脳幹門の通過によって、本発明の組成物を用いて投与する方法もまた提供される。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明の組成物の一群には、活性剤及び、化合物２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸またはその塩、例えばそのナトリウム塩（２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸ナトリウム）を含む担体が含まれる。これらの組成物は、多様な活性剤を、様々な生物学的、化学的、及び物理的バリアを経てデリバリーするために使用可能であり、特に環境により分解しがちな活性剤のデリバリーに好適である。本発明の組成物は、生物学的または化学的な活性剤の、あらゆる動物、例えば、これに制限するものではないが鶏を含む鳥；ほ乳類、例えば霊長類、特に人間；及び昆虫へのデリバリーまたは投与に、特に有用である。
【００１６】
本発明の別の利点には、調製が容易で、安価な原料の使用が含まれる。本発明の組成物及び製剤方法は、コスト的に有効であり、簡便に実行でき、商業ベースの製造のための工業スケールアップになじみやすいものである。
【００１７】
活性剤、例えば、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）；サケカルシトニン；インスリン；これらに制限するものではないが、低分子量ヘパリン及び極低分子量ヘパリンを含むヘパリン；パラチロイドホルモン（ＰＴＨ）；と、ここに記載した組成物中の化合物との、肺、口、皮下、鼻内、舌下、頬、眼、結腸内、十二指腸内、直腸、腟、粘膜、経皮、真皮内、非経口、静脈内、及び筋内からの共投与によれば、活性剤単独の投与に比べて、活性剤の生物学的利用能が増大する。
【００１８】
（活性剤）
本発明における使用に好適な活性剤には、これらに制限されるものではないが、化粧品、殺虫剤、薬理剤及び治療剤を含む、生理学的及び化学的な活性剤が含まれる。例えば、本発明における使用に好適な生理学的または化学的な活性剤には、これらに制限されるものではないが、タンパク質；ポリペプチド；ペプチド、特にスモールペプチド；ホルモン、特に単独では胃腸粘膜を通過しない、または投与量のフラクションのみが通過する、及び／または胃腸管内で酸及び酵素により化学開裂しがちであるホルモン；多糖類、特にムコ多糖類の混合物；炭化水素：脂質；他の有機化合物；またはこれらのあらゆる組み合わせが含まれる。さらなる例には、これらに制限されるものではないが、合成、天然または組換え由来のものを含む以下のもの：ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、ウシ成長ホルモン、及びブタ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出ホルモン；α、β及びγを含むインターフェロン；インターロイキン-I；インターロイキン-II；インスリン；ＩＧＦ-Iを含むインスリン様増殖因子；未分画ヘパリン、ヘパリノイド、デルマタン、コンドロイチン、低分子量ヘパリン、極低分子量ヘパリン、超低分子量ヘパリンを含むヘパリン；サケ、ウナギ及びヒトのカルシトニン；エリトロポエチン（ＥＰＯ）；心房性ナトリウム利尿因子；抗原；モノクローナル抗体；ソマトスタチン；プロテアーゼインヒビター；アドレノコルチコトロピン；ゴナドトロピン放出ホルモン；オキシトシン；黄体形成ホルモン放出ホルモン；小胞刺激ホルモン；グルコセレブロシダーゼ；トロンボポエチン；フィルグラスチム；プロスタグランジン；シクロスポリン；バソプレシン；クロモリンナトリウム（ナトリウムまたは二ナトリウムのクロモグリケート）；バンコマイシン；デフェロキサミン（ＤＦＯ）；そのフラグメントを含むパラチロイドホルモン（ＰＴＨ）；抗真菌剤を含む抗菌剤；これらの化合物の類似物、フラグメント、擬剤及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）変性誘導体；及びこれらのあらゆる組み合わせが含まれる。
【００１９】
（担体）
本発明の担体化合物は、
【化５】
0005144861.tif 000004
２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸
及びその塩を含む。該化合物の塩には、これらに制限されるものではないが、有機または無機の塩、例えばナトリウム塩が含まれる。
【化６】
0005144861.tif 000005
２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸ナトリウム
【００２０】
さらに、本発明の担体には、本発明の担体化合物を一以上含む、ポリアミノ酸及びペプチドが含まれる。
【００２１】
これらの担体化合物、ポリアミノ酸、及びペプチドは、これらに制限するものではないが、生物学的または化学的活性剤、例えば薬理剤及び治療剤を含む活性剤のデリバリーに使用することができる。
【００２２】
アミノ酸とは、少なくとも一の遊離のアミン基を有するあらゆるカルボン酸であり、天然産及び合成のアミノ酸を含む。
ポリアミノ酸は、ペプチドであるか、あるいは結合可能な他の基によって形成される結合、例えばエステル、酸無水物、または酸無水物結合によって結合してなる二以上のアミノ酸である。
【００２３】
ペプチドは、ペプチド結合によって結合してなる二以上のアミノ酸である。ペプチドはアミノ酸が二つのジペプチドから、アミノ酸が数百のポリペプチドまで、長さが様々である。Chambers Biological Dictionary, editor Peter M.B. Waker, Cambridge, England: Chambers Cambridge, 1989, page 215.を参照のこと。特に、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドを挙げることができる。
【００２４】
ここに記載した担体は、アミノ酸から誘導可能であり、本開示に基づいて当業者の技量の範囲内の方法及びＷＯ９６／３００３６、ＷＯ９７／３６４８０、ＵＳ５，６４３，９５７及びＵＳ５，６５０，３８６に記載の方法によって、アミノ酸から容易に調製可能である。例えば、該化合物は、単一のアミノ酸、二以上のアミノ酸の混合物、またはアミノ酸エステルを、アミノ酸中に存在する遊離のアミノ部分と反応する適当なアシル化剤またはアミン変性剤と反応させてアミドを生成させることによって調製可能である。当業者には周知の通り、望ましからぬ副反応を回避するために、保護基が使用可能である。保護基に関しては、T.W. Greene, Protecting Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York (1981).が参照され、その開示をここに参照のために取り込むこととする。
【００２５】
好適には、これらに制限するものではないが、アシル化アミノ酸の調製に有用なアシル化剤の例には、下式：
【化７】
0005144861.tif 000006
[式中、Ｒ1は変性アミノ酸の調製に好適な基、例えば、これらに制限するものではないが、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、または芳香族、特にメチル、エチル、シクロヘキシル、シクロフェニル、フェニル、またはベンジルであり、さらにＸは脱離基である]
の酸塩化物アシル化剤が含まれる。典型的な脱離基には、これらに制限するものではないが、ハロゲン、例えば塩素、臭素及びヨウ素が含まれる。
【００２６】
アシル化剤の例には、これらに制限するものではないが、塩化アセチル、塩化プロピル、塩化シクロへキサノイル、塩化シクロペンタノイル、及び塩化シクロヘプタノイル、塩化ベンゾイル、塩化ヒッパリル等を含むハロゲン化アシル；酸無水物、馬尿酸無水物等が含まれる。好ましいアシル化剤には、塩化ベンゾイル、塩化ヒッパリル、塩化アセチル、塩化シクロへキサノイル、塩化シクロペンタノイル、及び塩化シクロヘプタノイルが含まれる。
【００２７】
アミン基はまた、アミノ酸、特にフェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシン等の親水性アミノ酸のカルボジイミド誘導体等のカプリング剤との、カルボン酸の反応によってもまた変性される。さらなる例には、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどが含まれる。
【００２８】
アミノ酸が、多官能性である、即ち、一以上の-ＯＨ、-ＮＨ、または-ＳＨ基を有するならば、これは、一以上の官能基において任意にアシル化可能であり、例えばエステル、アミドまたはチオエステル結合を形成する。
【００２９】
例えば、多くのアシル化アミノ酸の調製において、アミノ酸は、例えば水酸化ナトリウムまたはカリウムなどの金属水酸化物の水性アルカリ溶液中に溶解させ、アシル化剤を添加する。反応時間は、約１時間から約４時間まで、好ましくは約２から約２．５時間までの範囲をとりうる。該混合物の温度は、一般的に約５℃から約７０℃まで、好ましくは約１０℃から約５０℃の範囲の温度に維持する。アミノ酸中のＮＨ2基の等量毎に使用されるアルカリの量は、一般的に、ＮＨ2基の等量あたり約１．２５モルから約３モルまで、好ましくは約１．５モルから約２．２５モルまでの範囲である。反応溶液のｐＨは、一般的に、ｐＨ約８からｐＨ約１３までであり、好ましくはｐＨ約１０からｐＨ約１２までである。アミノ酸の量に対して、使用するアミノ変性剤の量は、アミノ酸中で完全に遊離のＮＨのモル数に基づく。一般的に、アミノ変性剤は、アミノ酸中の全ＮＨ基のモル等量毎に、約０．５と約２．５モル等量、好ましくは約０．７５と約１．２５等量の範囲の量で使用される。
【００３０】
変性アミノ酸生成反応は、典型的には、適当な酸、例えば濃塩酸を用いて、該混合物のｐＨを、ｐＨが約２から約３までの範囲に達するまで調整することによってクエンチされる。該混合物を、室温に静置すると分離し、透明な上層と白色またはオフホワイトの沈殿とを生成する。上層を捨て、濾過または傾瀉によって変性アミノ酸を回収する。粗製の変性アミノ酸を、水と混合する。不溶物質を濾過によって除去し、濾液を真空乾燥させる。変性アミノ酸の収率は、一般的に、約３０から約６０％までの範囲であり、通常は約４５％である。本発明はまた、多重アシル化、例えばジアシル化、トリアシル化等によって変性されてなる、アミノ酸を企図する。
【００３１】
アミノ酸エステルまたはアミドが、出発物質である場合、これらをジメチルホルムアミドまたはピリジンなどの好適な有機溶媒中に溶解させ、約５℃から約７０℃までの範囲、好ましくは約２５０℃の温度にて、約７から約２４時間、アミノ変性剤と反応させる。アミノ酸エステルに対して使用されるアミノ変性剤の量は、アミノ酸について上記したものと同様である。
【００３２】
その後、反応溶媒を陰圧下で除去し、任意に、該変性アミノ酸エステルを、好適なアルカリ溶液、例えば１Ｎ水酸化ナトリウムを用い、約５０℃から約８０℃までの範囲、好ましくは約７０℃の温度にて十分な時間加水分解して、エステル基を加水分解によっておとし、遊離のカルボキシル基を有する変性アミノ酸を生成させる。加水分解混合物を、その後室温に冷却し、例えば２５％塩酸水溶液を用いて、約２から約２．５までのｐＨに酸性化する。変性アミノ酸が溶液から析出し、例えば濾過または傾瀉等の従来法によって回収される。
【００３３】
変性アミノ酸は、酸析出、再結晶、または単独もしくはタンデムに接合した一以上の固体クロマトグラフィー支持体上での分別によって精製可能である。好適な再結晶溶媒システムには、これらに制限されるものではないが、アセトニトリル、メタノール、及びテトラヒドロフランが含まれる。分別は、メタノール／ｎ-プロパノール混合物または酢酸／ブタノール／水混合物などの溶媒混合物を溶離液として使用してシリカゲルまたはアルミナなどの適当なクロマトグラフィー支持体にて、トリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物を溶離液として使用して逆相カラム支持体にて、さらに水を溶離液として使用してイオン交換クロマトグラフィーにて、実行可能である。アニオン交換クロマトグラフィーを行う場合、好ましくは０−５００mMの塩化ナトリウム勾配を採用する。変性アミノ酸はまた、メタノール、ブタノール、またはイソプロパノールなどの低級アルコールを用いる抽出によって、無機塩などの不純物を除去して精製することができる。
【００３４】
変性アミノ酸は、一般的にはアルカリ水溶液（ｐＨ≧９．０）、特にエタノール、ｎ-ブタノール及び１：１（v/v）トルエン／エタノール溶液中に可溶性であり；中性の水には不溶である。変性アミノ酸のアルカリ金属塩、例えばナトリウム塩は、一般的に、ｐＨ約６−８の水に可溶性である。
【００３５】
ポリアミノ酸またはペプチド中で、一以上のアミノ酸が変性、アシル化、及び／またはスルホン化されていても良い。ポリアミノ酸及びペプチドは、一以上のアシル化アミノ酸を含有可能である。直鎖状の変性ポリアミノ酸及びペプチドは、一般的に唯一のアシル化アミノ酸を含むが、他のポリアミノ酸及びペプチド構造は、一以上のアシル化アミノ酸を含有可能である。ポリアミノ酸及びペプチドは、アシル化アミノ酸を用いて重合化可能、または重合化の後にアシル化可能である。
【００３６】
（デリバリーシステム）
本発明の組成物は、一以上の活性剤を含有可能である。
一の実施態様において、上記化合物もしくはこれらの化合物の塩、またはこれらの化合物の少なくとも一を含むポリアミノ酸またはペプチドは、一以上の化合物または塩、ポリアミノ酸またはペプチドを、投与前に活性剤と単純に混合することによって、デリバリー担体として直接使用可能である。
【００３７】
投与混合物は、担体の水溶液を活性成分の水溶液と、投与の直前に混合することによって調製される。あるいはまた、担体と生物学的または化学的活性成分とを、製造工程中に混合することも可能である。該溶液は、リン酸緩衝液塩、クエン酸、酢酸、ゼラチン及びアカシアゴムなどの添加剤を任意に含有可能である。
【００３８】
安定化添加剤は、担体溶液に導入可能である。幾つかの薬剤については、こうした添加剤の存在により、溶液中の該剤の安定性及び分酸性が向上する。安定化添加剤は、約０．１から５％（w/v）まで、好ましくは約０．５％（w/v）の濃度で使用可能である。安定化添加剤の好適ではあるが非限定適な例には、アカシアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、カルボン酸及びその塩、及びポリリジンが含まれる。好ましい安定化添加剤は、アカシアゴム、ゼラチン、及びメチルセルロールである。
【００３９】
活性剤の量は、ターゲット表示のための特定の活性剤の目的達成に有効な量である。組成物中の活性剤の量は、典型的には、薬理学的、生物学的、治療上、または化学的に有効な量である。しかしながら、該組成物が、投薬ユニット形態、例えばカプセル、錠剤、粉末、または液体で使用される場合には、前記量は、薬理学的、生物学的、治療上、または化学的に有効な量よりも少なくとも良く、なぜなら、投薬ユニット形態は、担体／生物学的または化学的活性剤成分を複数含み、薬理学的、生物学的、治療上、または化学的に有効な量の分割量を含んでいてもよいためである。その場合、生物学的または薬理学的活性剤の薬理学的、生物学的、治療上、または化学的に有効な量を総計として含有する、累積ユニットとして、有効量全量を投与可能である。
【００４０】
使用する活性剤、特に生物学的または化学的活性剤の全量は、当業者によって決定可能である。しかしながら、驚くべきことに、生物学的または化学的活性剤の中には、ここに開示した担体の使用によってこの上なく効率の良いデリバリー、特に口、鼻内、舌下、十二指腸内、皮下、頬、結腸内、直腸、腟、粘膜、肺、経皮、真皮内、非経口、静脈内、筋内及び視覚系におけるデリバリー、並びに血液脳関門の通過を供するものがあることが判明した。従って、従来の投薬ユニット形態またはデリバリーシステムに使用されたよりも低量の生物学的または化学的活性剤を被験者に投与し、依然同様の血中濃度及び治療効果を達成することが可能である。
【００４１】
本発明の組成物中の担体の量は、デリバリーに有効な量であり、いかなる特定の担体または生物学的または化学的活性剤についても、当業者には周知の方法によって決定可能である。組成物中の活性剤及び担体の有効量は、かなりの範囲に渡って変化し得るものであり、個体の年齢、体重、性別、感受性、治療歴等に依存する。明らかに、これら全てが治療用としての有効投与量の決定に寄与する、活性剤および担体の性質、前記剤（生物活性／質量の単位）の特定の活性、及び胃腸管内におけるその吸収速度を考慮に入れる必要がある。
【００４２】
投与後、該組成物または投薬ユニット形態中に存在する活性剤は、迅速に循環系に取り込まれる。摂取された剤の生物活性は、血中での既知の薬理活性、例えばヘパリンによって引き起こされる血液凝固時間の増大、またはカルシトニンによって引き起こされる循環カルシウム濃度の低下を測定することによって容易に検定される。
【００４３】
投薬ユニット形態はまた、付形剤、希釈剤、錠剤分解物質、潤滑剤、可塑剤、着色剤、風味剤、味覚マスキング剤、砂糖、甘味料、塩、及び、これらに限定されるものではないが、水、１，２-プロパンジオール、エタノール、オリーブオイル、またはこれらのあらゆる組み合わせを含む投与媒体のいずれをも含有可能である。
【００４４】
本発明のデリバリー組成物はまた、一以上の酵素阻害剤を含有可能である。こうした酵素阻害剤には、これらに限定されるものではないが、アクチノニンまたはエピアクチノニン及びこれらの誘導体が含まれる。これらの化合物の誘導体は、米国特許公報５，２０６，３８４号に開示されており、その内容をここに参照のために取り込むこととする。他の酵素阻害剤には、これらに制限されるものではないが、アプロチニン（Trasylol）及びBowman-Birk阻害剤が含まれる。
【００４５】
前記システムは、これによらなければ、ターゲット領域（すなわち、デリバリー組成物の活性剤が放出される領域）に達する前及び投与された動物の身体内で遭遇する条件によって破壊されるか、または効力が低下する、化学的または生物学的な活性剤のデリバリーに特に有利である。特に、本発明は、活性剤、特に肺からの経路によっては通常デリバリー不可能であるものまたはより優れたデリバリーが所望されるものの、吸入器等による肺からの投与において有用である。より優れたデリバリーとは、より迅速なデリバリーまたは与えられた時間内におけるより大量のデリバリーである。
【００４６】
以下の実施例は、本発明を限定なしに詳説する。全ての部は、特記のない限り重量部として表した。
【００４７】
【実施例】
（実施例１：２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸の調製）
２-（４-アミノフェニル）プロピオン酸５８．６g（０．３５５mol）及び塩化メチレン５００mlのスラリーを、塩化トリメチルシリル９０．１１ml（７７．１３g.０−７１０mol）で処理し、１２０分間加熱還流させた。反応混合物を０℃に冷却し、トリエチルアミン１８４．４４ml（１０７．７７g、１０６５mol）で処理した。５分間攪拌した後、この混合物を、Ｏ-アセチルサリチロイルクロライド７０．４５g（０．３５５mol）及び塩化メチレン１５０mlの溶液で処理した。反応混合物を２５℃に加温し、６４時間攪拌した。揮発物を真空中で除去した。残渣を２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液中で１時間攪拌し、２Ｍの希硫酸で酸性化した。固体をエタノール／水から再結晶させ、黄褐色の固体を得た。濾過により単離し、２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸５３．０５g（収率５２％）が得られた。
特性：溶解度２００mg/ml：２００mg＋３５０μl ２Ｎ ＮａＯＨ＋６５０μｌＨ２Ｏ-ｐＨ-７．６７．元素分析理論値-Ｃ：６７．３６，Ｈ：５．３，Ｎ：４．９１．実測値-Ｃ：６７．０５，Ｈ：５．２５，Ｎ：４．７２．
【００４８】
（実施例２：２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸ナトリウムの調製）
２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸５３．０５g（０．１８６mol）及びエタノール３００mlの溶液を、水２２ml中に溶解させたＮａＯＨ７．５９g（０．１９０mol）で処理した。反応混合物を２５℃にて３０分間、０℃にて３０分間攪拌した。生じた暗黄色固体を濾過によって単離し、２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸ナトリウム５２．６１gを得た。
特性：溶解度２００mg/ml透明溶液、ｐＨ＝６．８５．元素分析理論値-Ｃ：６０．４５，Ｈ：５．４５，Ｎ：３．９２，Ｎａ：６．４３．実測値-Ｃ：６０．８４，Ｈ：５．８７，Ｎ：３．８５，Ｎａ：６．４３．融点２３６−２３８℃．
【００４９】
（実施例３）
ブタインスリン０．１mg/kgと実施例２の化合物７．５mg/kgを水中とした、肺からのデリバリー投薬混合物を調製した。ｐＨ７．３−７．６である肺投薬混合物０．３ml/kg投薬量を、５匹の正常な、断食させていないラットに、以下の操作によって投与した。１・１／２のPopper and Sons栄養針を、前記動物ののどに約数センチメートル挿入した。必要な秘訣として、針が穴の中に降りるように前記動物の背方向へ操作し、さらに気管内へ操作した。針が気管内に入ったところで、投薬溶液を針からデリバリーした。
尾の動脈から、周期的に血液サンプルを採り、血中グルコース濃度を、Ektachem DT slides(Johnson & Johnson Clinical Diagonostics, Inc., Rochester N. Y.)を用いて測定した。
結果を図１に示した。
【００５０】
（比較例３Ａ）
前記投薬混合物を、ブタインスリン０．１mg/kg及び水の投薬混合物に代えて、実施例３の操作に従った。
結果を図１に示した。
【００５１】
（比較例３Ｂ）
前記投薬混合物を、実施例１において調製した化合物を水中に７．５mg/kg含む投薬溶液に代えて、実施例３の操作に従った。
結果を図１に示した。
【００５２】
（実施例４）
ｐＨ６．６−６．９の前記投薬混合物を、水中にブタインスリン０．５mg/kg及び実施例２において調製した化合物７．５mg/kg含む投薬混合物に代えて、実施例３の操作に従った。
結果を図２に示した。
【００５３】
（比較例４Ａ）
前記投薬混合物を、ブタインスリン０．５mg/kg及び水の投薬混合物に代えて、実施例４の操作に従った。
結果を図２に示した。
【００５４】
（比較例４Ｂ）
前記投薬混合物を、実施例２において調製した化合物を水中に７．５mg/kg含む投薬混合物に代えて、実施例４の操作に従った。
結果を図２に示した。
【００５５】
（実施例５）
水中に、実施例２において調製した化合物３００mg/kg及びヒトインスリン３mg/kgを含み、ｐＨ７．０２である投薬混合物を調製した。湾曲したカテーテルを挿入された（Strept catherized）ラットに、該投薬混合物１ml/kgを経口栄養により投与した。血中グルコース濃度（mg/dL）を測定した。
結果を下記の表１に示す。
【００５６】
【表１】
0005144861.tif 000007
【００５７】
（実施例６）
水中に、実施例１において調製した化合物３００mg/kg及びパラチロイドホルモンのＮ末端フラグメント（アミノ酸１−３４）１００Mg/kgを含み、ｐＨ８．１３である投薬混合物を調製した。正常なラットに、該投薬混合物１ml/kgを経口栄養により投与した。パラチロイドホルモンの血清中濃度（pg/mL）を測定した。
結果を下記の表２に示す。
【００５８】
【表２】
0005144861.tif 000008
【００５９】
（実施例７）
水中に、実施例１において調製した化合物１００mg/kg及びパラチロイドホルモンのＮ末端フラグメント（アミノ酸１−３４）２００ug/kgを含み、ｐＨ７．６５である投薬混合物を調製した。正常なラットに、該投薬混合物１ml/kgを経口栄養により投与した。パラチロイドホルモンの血清中濃度（pg/mL）を測定した。
結果を下記の表３に示す。
【００６０】
【表３】
0005144861.tif 000009
【００６１】
実施例７の方法を、投薬混合物のｐＨを７．５５として行った。結果を下記の表４に示す。
【００６２】
【表４】
0005144861.tif 000010
【００６３】
（実施例９：肺からのインスリンデリバリー）
担体化合物２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸を、下記の通り試験した。各ラットの体重を計り、消えないマーカーを用いて識別し、トラジン（thorazine）（３mg/kg）及びケタミン（４４mg/kg）の筋内注射によって麻酔をかけた。
シリンジ（Hamiltonシリンジ）を接合してなる気管内チューブ（スプレー点滴注射器、Penn Century of Philadelphia, PA製）を、光ファイバー喉頭鏡を用いて挿入した。点滴注射器の前記シリンジ（Hamiltonシリンジ）を利用して、インスリン（０．０３mg/kg）及び担体化合物（１６mg/kg）を、気道の下方部に滴下した。投与に次いで、気管内チューブを取り外し、これ以降の研究の間、呼吸速度をモニターした。
血液サンプルを、０、５、１５、３０、６０、及び１２０分の時点で、尾の動脈から採り、DSL Inslin Kit #10-1600を用い、該キットに表示された操作に従って検定した。担体を用いたＣmax値は、４４．６±１０．０であった。担体なしのＣmax値は、１９．４±４．３であった。
【００６４】
（実施例１０：組換えヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）の経口デリバリー）
リン酸緩衝液１００％中に、担体化合物２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸２００mg/kg及びｒＨＧＨ３mg/kgを含有する経口栄養（ＰＯ）投与溶液を、混合によって調製した。該溶液のｐＨは、約７．６７から約８．０９までの範囲であった。
体重２００−２５０gのオスのSpague-Dawleyラットを、２４時間断食させ、投薬の１５分前に、ケタミン（４４mg/kg）及びクロルプロマジン（１．５mg/kg）を投与した。該ラットに、投薬溶液１ml/kgを、ＰＯにより投与した。血液サンプルを、尾の動脈から非経口採取し、血清中ｒＨＧＨ濃度の測定に用いた。血清中ｒＨＧＨ濃度を、ｒＨＧＨ免疫アッセイテストキット（Genzyme Corporation Inc., Cambridge, MA製、Kit#K1F4015）によって計量した。ｒｈＧＨの平均最高血清中濃度は、９３±７４ng/mlであった。
【００６５】
（実施例１１：エリトロポエチン（ＥＰＯ）の経口デリバリー）
水１００％中に、担体化合物２-（４-（Ｎ-サリチロイル）アミノフェニル）プロピオン酸２００mg/kg及びヒトエリトロポエチンクアンチキン（quantikine）ＩＵＤ１mg/kgを含有する経口栄養（ＰＯ）投与溶液を、混合によって調製した。該溶液のｐＨは、約６．９から約７．９までの範囲であった。
体重２００−２５０gのオスのSpague-Dawleyラットを、２４時間断食させ、投薬の１５分前に、ケタミン（４４mg/kg）及びクロルプロマジン（１．５mg/kg）を投与した。該ラットに、投薬溶液１ml/kgを、ＰＯにより投与した。血液サンプルを、尾の動脈から非経口採取し、血清中ＥＰＯ濃度の測定に用いた。血清中ＥＰＯ濃度を、Elisaアッセイテストキット（R&D Systems, Minneapolis, MN製、Kit#DEPOO）によって計量した。ＥＰＯの平均最高血清中濃度は、１６３±１３６ng/mlであった。
この操作を、担体化合物を使用せずに繰り返した。平均最高血清中濃度は、０ng/mlであった。
【００６６】
上記の特許、出願、試験方法、及び文献は、参照のため、ここにその全体を取り込むこととする。
当業者には、上記の詳細な説明に鑑みて、本発明の多くの変形が連想されるであろう。こうした全ての明らかな変形は、添付の請求の範囲に意図する範囲に、完全に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、インスリンの肺からのデリバリー後の血中グルコース濃度の図示である。
【図２】  図２は、インスリンの肺からのデリバリー後の血中グルコース濃度の図示である。
【図１】
0005144861.tif 000013
【図２】
0005144861.tif 000014