(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される構造を有するマンノシルエリスリトールリピッドを含むことを特徴とするベシクル。
【化１】
0005246613.tif 000007
（式（１）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよく炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２のいずれか一方がアセチル基であり、他方が水素である。また、置換基Ｒ３は水素又は炭素数２〜２４の脂肪族アシル基を表す。ただし、置換基Ｒ１がともに炭素数１２の脂肪族アシル基であって、置換基Ｒ２がともにアセチル基であって、置換基Ｒ３が水素であるものを除く。）
【請求項２】
上記一般式（１）中、置換基Ｒ３が炭素数２〜２４の脂肪族アシル基であることを特徴とする請求項１に記載のベシクル。
【請求項３】
下記一般式（１）で表される構造を有するマンノシルエリスリトールリピッドを含むことを特徴とする乳化組成物。
【化２】
0005246613.tif 000008
（式（１）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよく炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２のいずれか一方がアセチル基であり、他方が水素である。また、置換基Ｒ３は水素又は炭素数２〜２４の脂肪族アシル基を表す。ただし、置換基Ｒ１がともに炭素数１２の脂肪族アシル基であって、置換基Ｒ２がともにアセチル基であって、置換基Ｒ３が水素であるものを除く。）
【請求項４】
上記一般式（１）中、置換基Ｒ３が炭素数２〜２４の脂肪族アシル基であることを特徴とする請求項３に記載の乳化組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のベシクル又は乳化組成物を含むことを特徴とする化粧料。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のベシクル又は乳化組成物を含むことを特徴とする食品。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のベシクル又は乳化組成物を含むことを特徴とする医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マンノシルエリスリトールリピッド（以下、単にＭＥＬと称する場合もある）が形成するベシクル、乳化組成物及びその利用に関し、より詳細には微生物生産糖脂質の一種であるＭＥＬであって、分子構造中のマンノシルエリスリトール骨格が１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトールであるＭＥＬが形成するベシクル、乳化組成物及びその利用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
糖脂質は、糖の性質に由来する親水性と脂質の性質に由来する親油性の二つの性質を合わせ持つ両親媒性物質であり、このような性質を有する物質は界面活性物質と呼ばれている。石油化学工業が隆盛となるまでは、レシチン、サポニン等の生体成分由来の界面活性剤（バイオサーファクタント）が利用されてきたが、石油化学工業の発展により合成界面活性剤が開発され、界面活性剤の生産量は飛躍的に増加し、日常生活には無くてはならない物質となった。しかしながら、合成界面活性剤の使用量の拡大につれて環境汚染が広がってきた。そこで、安全性が高く、環境に対する負荷を低減するために、再度生分解性の高い界面活性物質であるバイオサーファクタントが見直されており、それに伴い様々な種類のバイオサーファクタントの開発が望まれている。
【０００３】
バイオサーファクタントとしては、微生物が生産する界面活性物質が代表的なものとして挙げられる。現在、上述した微生物が生産する界面活性物質としては、糖脂質系、アシルペプタイド系、リン脂質系、脂肪酸系及び高分子化合物系の５つに大別されている。これらのうち、リン脂質系バイオサーファクタントは、古くから乳化剤として用いられているばかりでなく、水に懸濁させると、このリン脂質が会合して二分子膜を形成し、水相を閉じこめたベシクルを形成することが知られている。このベシクルは、リポソームとも呼ばれ、生体膜のモデルや、化粧品や薬物の担体としても極めて利用価値が高い。しかしながら、リン脂質系以外のバイオサーファクタントにおいてベシクルを形成するものは、ほとんど知られていないのが現状である。
【０００４】
一方、糖脂質系の界面活性剤は、細菌及び酵母により生産された、多くの種類の物質が報告されている。糖脂質系のバイオサーファクタントは、生分解性が高く、低毒性で環境に優しいばかりでなく、優れた生理機能を有している。従って、その化合物自身に保湿効果等の生理機能があるばかりでなく、実用面においてもベシクルを形成可能であり、かつ乳化剤としても優れているような糖脂質系のバイオサーファクタントが熱望されている。
【０００５】
代表的な糖脂質系バイオサーファクタントの一つにマンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）がある。ＭＥＬは、Ustilago nuda（ウスチラゴ  ヌーダ）とShizonella melanogramma（シゾネラ  メラノグラマ）から発見された物質である（非特許文献１及び２参照）。その後、イタコン酸生産の変異株であるCandida属酵母（特許文献１及び非特許文献３参照）、Candida antarctica（キャンデダ  アンタークチカ）（現在はPseudozyma antarctica（シュードザイマ  アンタークチカ））（非特許文献４及び５参照）、Kurtzmanomyces（クルツマノマイセス）属（非特許文献６参照）等の酵母らによっても生産されることが報告されている。現在では、長時間の連続培養・生産を行うことで３００ｇ／Ｌ以上の生産が可能となっている。
【０００６】
上記ＭＥＬが有する糖骨格には複数の不斉炭素原子が存在し、その数をｎとすると２ｎ個の光学異性体が存在する。しかし、これまで報告されてきたＭＥＬは全て、その糖骨格が以下の式（２）に示されるような４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造であった。
【０００７】
【化１】
0005246613.tif 000002
【０００８】
この４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬについては、抗菌性、抗腫瘍性、糖タンパク結合能をはじめ、様々な生理活性を有することが報告されている（非特許文献７）。また、この従来のＭＥＬは極めて特異な自己集合特性を示し、分子構造の僅かな違いが自己集合体の形成に多大な影響を与えるばかりでなく、それを活用したベシクル形成について、希薄溶液（６．３×１０−２ ｗｔ％以下）においてのみ報告されている（非特許文献８）。さらに、従来のＭＥＬの両連続スポンジ構造を用いた液晶乳化技術（特許文献２）が報告されている。
【特許文献１】特公昭５７−１４５８９６号公報
【特許文献２】特開２００７−１８１７８９号公報
【非特許文献１】アール．エイチ．ハスキンス（R. H. Haskins），ジェイ．エー．トーン（J. A. Thorn），B. Boothroyd，「カナデアン ジャーナル オブ ケミストリー（Can. J. Microbiol.）」，１巻，ｐ７４９−７５６（１９５５）．
【非特許文献２】ジー．デム（G. Deml），ティ．アンケ（T. Anke），エフ．オーバーウインカー（F. Oberwinkler），ビー．エム．ジアネッティー（B. M. Giannetti），ダブリュ．ステグリッチ（W. Steglich），「フィトケミストリー（Phytochemistry）」，１９巻，ｐ８３−８７（１９８０）．
【非特許文献３】ティ．ナカハラ（T. Nakahara），エイチ．カワサキ（H. Kawasaki），ティ．スギサワ（T. Sugisawa），ワイ．タカモリ（Y. Takamori），ティ．タブチ（T. Tabuchi），「ジャーナル オブ ファーメンテーションテクノロジー（J. Ferment.Technol.）」，（日本），日本発酵工学会，６１巻，ｐ１９−２３（１９８３）．
【非特許文献４】ディ．キタモト（D. Kitamoto），エス．アキバ（S. Akiba），シー．ヒオキ（C. Hioki），ティ．タブチ（T. Tabuchi）「アグリカリチュラル アンド バイオロジカル ケミストリー（Agric. Biol. Chem.）」，（日本），日本農芸化学会，５４巻．ｐ３１−３６（１９９０）．
【非特許文献５】エイチ．エス．キム（H.-S. Kim），ビー．ディ．ユーン（B.-D. Yoon），ディ．エイチ．チョン（D.-H. Choung），エイチ．エム．オー（H.-M. Oh），ティ．カツラギ（T. Katsuragi），ワイ．タニ（Y. Tani）「アプライド マイクロバイオロジー アンド バイオテクノロジー（Appl. Microbiol. Biotechnol.）」，（ドイツ），スプリンガー−バーラグ（Springer-Verlag），５２巻，ｐ７１３−７２１（１９９９）．
【非特許文献６】角川（K. kakukawa），玉井（M. Tamai），今村（K. Imamura），宮本（K. Miyamoto），三好（S. Miyoshi），森永（Y. Morinaga），鈴木（O. Suzuki），宮川（T. Miyakawa）「バイオサイエンス，バイオテクノロジー アンド バイオケミストリー（Biosci. Biotechnol. Biochem.）」，（日本），日本農芸化学会，６６巻，ｐ１８８−１９１（２００２）．
【非特許文献７】北本  大「オレオサイエンス」，（日本），日本油化学会，３巻，ｐ６６３−６７２（２００３）．
【非特許文献８】ティ．イムラ（T. Imura），エヌ．オオタ（N. Ohta），ケー．イノウエ（K. Inoue），エヌ．ヤギ（N. Yagi），エイチ．ネギシ（H. Negishi），エイチ．ヤナギシタ（H. Yanagishita），ディ．キタモト（D. Kitamoto）「ケミストリー ア ヨーロピアン ジャーナル（Chem. Eur. J）」，（米国），ワイリー（Wiley），１２巻，ｐ２４３４−２４４０（２００６）．
【非特許文献９】ディ．クリッチ（D. Crich），エム．エー．モーラ（M. A. Mora），アール．クルツ（R. Cruz）「テトラヘドロン（Tetrahedron）」，（オランダ），エルゼビア（Elsevier），５８巻，ｐ３５−４４（２００２）．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
分解性が高く、低毒性で環境に優しい界面活性剤を広く、化粧品工業、食品工業、医薬品工業等に普及をはかるためには、新規な糖脂質等のバイオサーファクタントを開拓し、その機能・用途を拡充することは極めて重要な課題である。
【００１０】
特に、ＭＥＬは、生産性、界面物性に優れるだけでなく、特異な自己集合特性と生理活性を利用した種々の用途開発が行われている。しかしながら、これまで報告されている微生物由来のＭＥＬは、糖骨格が主に４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造であり、構造や機能のバラエティの拡充が強く求められていた。
【００１１】
さらに、化粧品工業分野では、要素技術の高度化に伴って、分子自身に保湿効果などの機能があるばかりではなくて、それ自身がベシクルの形成や各種乳化組成物の提供に寄与するような新素材の開発が熱望されている。
【００１２】
ところで、β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造には、もう一つ１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造（下記式（３））の異性体が想定される。
【００１３】
【化２】
0005246613.tif 000003
【００１４】
この１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬの１種を合成し、これとの比較によって従来のＭＥＬの糖骨格が上記式（２）の構造であることが証明されている（非特許文献９）。
【００１５】
また、従来の４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬに対して、その光学異性体である上記式（３）の１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬをシュードザイマ・ツクバエンシス（Pseudozyma tsukubaensis）又はシュードザイマ・クラッサ（Pseudozyma crassa）等の微生物を用いて生産することによって、量産できることが本願発明者らの研究グループにより確認されている（特願２００７−３０３１６４号公報及びT. Fukuoka，T. Morita，M. Konishi，T. Imura，D. Kitamoto、Carbohyd. Res.，Elsevier，in press．  いずれも本願出願時点において未公開）。
【００１６】
ここで、自己集合特性により機能を発現する界面活性剤にとって、その分子のキラリティーは極めて重要なポイントとなる。このため、従来知られていたＭＥＬの光学異性体である１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬは、従来のＭＥＬと異なるベシクル形成能や乳化能を示すことが考えられる。
【００１７】
しかし、上記未公開の特許文献（特願２００７−３０３１６４号公報）及び非特許文献（T. Fukuoka，T. Morita，M. Konishi，T. Imura，D. Kitamoto、Carbohyd. Res.，Elsevier，in press．）には、従来のＭＥＬの光学異性体である１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬの製造方法について記載されているだけであり、その詳細な機能解析は行われていない。
【００１８】
本発明は、上記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、従来の４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬに対して、その光学異性体である１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬの機能・用途を明らかにし、実用上重要である、この新規ＭＥＬが形成するベシクル、乳化組成物及びその利用を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明者らは上記目的を達成すべく鋭意努力した結果、従来の４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬ（以下、「従来型ＭＥＬ」又は「４−Ｏ−ＭＥＬ」と称する場合もある。）に対して、その光学異性体である１−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトール構造を有するＭＥＬ（以下、「本発明に係るＭＥＬ」又は「１−Ｏ−ＭＥＬ」と称する場合もある。）を活用することによって、化粧品素材等として実用上重要なベシクルや、乳化組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。
【００２０】
（１）下記一般式（１）で表される構造を有するマンノシルエリスリトールリピッドを含むベシクル。
【００２１】
【化３】
0005246613.tif 000004
【００２２】
（式（１）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよく炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよく水素又はアセチル基を表す。また、置換基Ｒ３は水素又は炭素数２〜２４の脂肪族アシル基を表す。ただし、置換基Ｒ１がともに炭素数１２の脂肪族アシル基であって、置換基Ｒ２がともにアセチル基であって、置換基Ｒ３が水素であるものを除くことが好ましい。）
（２）上記一般式（１）中、置換基Ｒ２のいずれか一方がアセチル基であり、他方が水素である（１）に記載のベシクル。
【００２３】
（３）上記一般式（１）中、置換基Ｒ３が炭素数２〜２４の脂肪族アシル基である（１）又は（２）に記載のベシクル。
【００２４】
（４）下記一般式（１）で表される構造を有するマンノシルエリスリトールリピッドを含む乳化組成物。
【００２５】
【化４】
0005246613.tif 000005
【００２６】
（式（１）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよく炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよく水素又はアセチル基を表す。また、置換基Ｒ３は水素又は炭素数２〜２４の脂肪族アシル基を表す。ただし、置換基Ｒ１がともに炭素数１２の脂肪族アシル基であって、置換基Ｒ２がともにアセチル基であって、置換基Ｒ３が水素であるものを除くことが好ましい。）
（５）上記一般式（１）中、置換基Ｒ２のいずれか一方がアセチル基であり、他方が水素である（４）に記載の乳化組成物。
【００２７】
（６）上記一般式（１）中、置換基Ｒ３が炭素数２〜２４の脂肪族アシル基である（４）又は（５）に記載の乳化組成物。
【００２８】
（７）上記（１）〜（６）のいずれかに記載のベシクル又は乳化組成物を含む化粧料。
【００２９】
（８）上記（１）〜（６）のいずれかに記載のベシクル又は乳化組成物を含む食品。
【００３０】
（９）上記（１）〜（６）のいずれかに記載のベシクル又は乳化組成物を含む医薬品。
【発明の効果】
【００３１】
本発明に係るベシクル又は乳化組成物は、従来型ＭＥＬと立体構造（キラリティー）が異なるＭＥＬを用いているため、従来型ＭＥＬを用いたものに比べて、より幅広い濃度・温度範囲において形成可能であるという効果を奏する。これらのベシクル又は乳化組成物は、化粧料、食品及び医薬品として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
本発明の一実施形態について説明すると以下の通りである。なお、本発明では、特願２００７−３０３１６４号公報に開示のＭＥＬを用いているため、必要に応じて適宜当該特願２００７−３０３１６４号公報の内容を援用することができる。
【００３３】
＜１．マンノシルエリスリトールリピッド（ＭＥＬ）＞
本発明に係るＭＥＬの理解の一助とすべく、まず従来型ＭＥＬについて概説する。
【００３４】
従来型ＭＥＬは、ＭＥＬ生産菌の培養によって得られ、その化学構造の代表例は以下の一般式（４）に示すように、４−Ｏ−β−Ｄ−マンノピラノシル−ｍｅｓｏ−エリスリトールをその基本構造とするものである。
【００３５】
【化５】
0005246613.tif 000006
【００３６】
上記一般式（４）中、置換基Ｒは炭化水素基（アルキル基又はアルケニル基）である。上記従来型ＭＥＬは、マンノースの４位及び６位のアセチル基の有無からＭＥＬ−Ａ、ＭＥＬ−Ｂ、ＭＥＬ−Ｃ及びＭＥＬ−Ｄの４種類が知られている。
【００３７】
まず、ＭＥＬ−Ａは、上記一般式（４）中、置換基Ｒ１及びＲ２がともにアセチル基である。ＭＥＬ−Ｂは、上記一般式（４）中、置換基Ｒ１がアセチル基で置換基Ｒ２は水素である。ＭＥＬ−Ｃは、上記一般式（４）中、置換基Ｒ１が水素で置換基Ｒ２はアセチル基である。ＭＥＬ−Ｄは、上記一般式（４）中、置換基Ｒ１及びＲ２がともに水素である。
【００３８】
上記ＭＥＬ−Ａ〜ＭＥＬ−Ｄにおける置換基Ｒの炭素数は、ＭＥＬ生産培地に含有させる油脂類中のトリグリセリドを構成する脂肪酸の炭素数及び使用するＭＥＬ生産菌の脂肪酸の資化の程度により変化する。また、上記トリグリセリドが不飽和脂肪酸残基を有する場合、ＭＥＬ生産菌が上記不飽和脂肪酸の二重結合部分まで資化しなければ、置換基Ｒとして不飽和脂肪酸残基を含ませることも可能である。以上の説明から明らかなように、得られる各ＭＥＬは、通常、置換基Ｒの脂肪酸残基部分が異なる化合物の混合物の形態である。
【００３９】
一方、本発明に係るＭＥＬは上記一般式（１）で表される構造を有し、ＭＥＬ中のエリスリトールが従来型ＭＥＬとは逆向きに導入された光学異性体であることが大きな特徴である。なお、上記一般式（１）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよく炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよく水素又はアセチル基を表す。また、置換基Ｒ３は水素又は炭素数２〜２４の脂肪族アシル基を表す。ただし、置換基Ｒ１がともに炭素数１２の脂肪族アシル基であって、置換基Ｒ２がともにアセチル基であって、置換基Ｒ３が水素であるものを除く。これは、上記非特許文献９に開示のＭＥＬを除く意図であり、それ以外の意図はなく、本発明の権利範囲を不当に制限する限定事項ではないことを念のため付言しておく。
【００４０】
また、上記一般式（１）中の置換基Ｒ１は、飽和脂肪族アシル基であっても不飽和脂肪族アシル基であってもよく、限定されるものではない。不飽和結合を有している場合、複数の二重結合を有していてもよい。炭素鎖は直鎖状であってもよく分岐鎖状であってもよい。また、酸素原子含有炭化水素基の場合、含まれる酸素原子の数及び位置は限定されない。
【００４１】
さらに、上記一般式（１）中、置換基Ｒ２のいずれか一方がアセチル基であり、他方が水素であることが好ましい。つまり、１−Ｏ−ＭＥＬであって、ＭＥＬ−Ｂ又はＭＥＬ−Ｃであることが好ましい。なかでも特に、４位が水素であって、６位がアセチル基である、すなわちＭＥＬ−Ｂであることがより好ましい。
【００４２】
例えば、ＭＥＬ−Ａ（アセチル基が２個）に比べて、ＭＥＬ−ＢまたはＭＥＬ−Ｃ（アセチル基が１個）は極性が高く、水中での自己組織化挙動が異なる。このため、形成される液晶の形態が異なり、ＭＥＬ−Ａでは幅広い濃度領域でスポンジ相（Ｌ３相）等を作るのに対して、ＭＥＬ−Ｂ又はＭＥＬ−Ｃではラメラ相（Ｌα）を作りやすい。ラメラ相は肌の角質層と非常に近い形態ですので、肌浸透性が良くなり、スキンケア素材として有用である。さらに、ＭＥＬ−Ｂは２分子膜がカプセル化したベシクル（リポソーム）を形成しやすく、カプセル内に薬剤を内包できることから、リポソーム化粧品、医薬品への応用が容易になると期待される（上記非特許文献７参照）。しかし、製造法や精製法の問題から、上記ＭＥＬ−Ｂ又はＭＥＬ−Ｃの物性については、これまで、６．３×１０−２ ｗｔ％以下の希薄溶液についてのみしか知られていない。
【００４３】
なお、上記非特許文献９において合成されたＭＥＬはＡタイプであり、かつ脂肪酸鎖が２本ともＣ１２のものである。これに対して、本発明に関わるものは、従来型ＭＥＬの光学異性体のＭＥＬ−Ｂであり、また脂肪酸鎖長も多様性を持たせることができる。その結果、これを活用することによって、幅広い濃度・温度範囲においてベシクルを形成可能であることや、各種エマルション・マイクロエマルションなどの乳化組成物を容易に得ることができる。
【００４４】
また、上記非特許文献９に記載の合成方法はあくまでＭＥＬ−Ａの合成方法のみに限定されており、ＭＥＬ−Ｂ，Ｃを合成するためには、異なる保護基の使用や異なるステップの反応を繰り返さなければならず、上記文献を参酌しても本発明に係るＭＥＬを合成することはできないことを念のため付言しておく。
【００４５】
また、上記一般式（１）中、置換基Ｒ３が炭素数２〜２４の脂肪族アシル基であることが好ましい。式（１）中、置換基Ｒ１及びＲ３がいずれも脂肪族アシル基であれば、トリアシルＭＥＬとなり、ジアシルＭＥＬとは異なった性質のＭＥＬを得ることができる。
【００４６】
具体的には、トリアシル体は従来のジアシル体と比べてＨＬＢ（親水−疎水バランス）が低く、より親油性の高い界面活性剤である。このため、応用用途が異なってくる。例えば、Ｗ／Ｏエマルジョンや分散剤等への利用が考えられる。また上述と同様、上記非特許文献９に記載の合成方法はあくまでジアシル体のＭＥＬ−Ａの合成方法のみに限定されており、トリアシル体の合成には根本的に異なる合成経路（異なる保護基や多段階反応）を経る必要がある。それゆえ、上記非特許文献９を参酌しても本発明に係るＭＥＬを合成することはできない。
【００４７】
本発明に係るＭＥＬの分子構造は、基本的には上記一般式（１）における置換基Ｒ１の脂肪族アシル基の炭素数あるいは二重結合の有無等において異なる各化合物の混合物の形態で得られるが、これらはさらに分取ＨＰＬＣ等により精製すれば、単一のＭＥＬ化合物とすることもできる。
【００４８】
本発明に係るＭＥＬは、従来型ＭＥＬと異なり、幅広い濃度・温度範囲においてベシクルを形成可能であることや、各種エマルション・マイクロエマルションなどの乳化組成物を容易に得ることができる。さらにＭＥＬは生分解性があり、高い安全性を有する点でも非常に意義ある物質である。つまり、生分解性が高く、低毒性で環境に優しいバイオサーファクタントである。
【００４９】
さらに、従来型ＭＥＬは様々な生理活性作用を有することが報告されている。例えば、ヒト急性前骨髄性白血病細胞性ＨＬ６０株にＭＥＬを作用させると、顆粒系を分化させる白血病細胞細胞分化誘導作用があること。またラット副腎髄質褐色細胞腫由来のＰＣ１２細胞にＭＥＬを作用させると神経突起の伸長が生ずる神経系細胞分化誘導作用等の生理活性作用を有すること、さらに微生物産生の糖脂質として初めて、メラノーマ細胞のアポトーシスを誘導することが可能となり（X. Zhao et. al., Cancer Research,59, 482-486 (1999)）、癌細胞増殖抑制作用があること、等が報告されている。これら従来型ＭＥＬの生理作用からみて、本発明に係るＭＥＬにも種々の生理活性を有することが期待でき、例えば抗ガン剤等の医薬としての用途や新規化粧品材料用途が考えられる。
【００５０】
＜２．ＭＥＬの製造方法＞
本発明に係るＭＥＬの製造は、特願２００７−３０３１６４号公報（本願出願時において未公開）に従って製造し、１−Ｏ−ＭＥＬの生産能を有する微生物を用いることが特徴である。具体的には、例えば、シュードザイマ（Pseudozyma）属に属し、かつマンノシルエリスリトールリピッドを生産する能力を有する微生物を培養し、上記一般式（１）で表される構造を有するマンノシルエリスリトールリピッドを製造するＭＥＬの製造方法である。なお、本ＭＥＬの製造方法を説明する記載においては、上記一般式（１）中、置換基Ｒ１は同一でも異なっていてもよく炭素数４〜２４の脂肪族アシル基であり、置換基Ｒ２は同一でも異なっていてもよく水素又はアセチル基を表す。また、置換基Ｒ３は水素又は炭素数２〜２４の脂肪族アシル基を表す。
【００５１】
＜２−１．使用微生物＞
本発明に係るＭＥＬの製造に使用可能な微生物としては、上記シュードザイマ属に属し、ＭＥＬを生産する能力を有するもののうち、上記式（１）で表されるＭＥＬ光学異性体を生産するものであれば特に限定されるものではない。
【００５２】
上記一般式（１）のＭＥＬを生産する微生物の例としては、例えばシュードザイマ・ツクバエンシス又はシュードザイマ・クラッサ等に属する微生物が挙げられ、このうち特に、シュードザイマ・ツクバエンシスに属する微生物が好ましい。シュードザイマ・ツクバエンシスに属する微生物は、例えば２５〜３５℃で培養した場合、ＭＥＬの生産性向上効果が高く、特にシュードザイマ・ツクバエンシスＪＣＭ  １０３２４株の場合、培養温度３０℃の場合に最も良好な生産性が得られる。
【００５３】
＜２−２．使用培地及び培養方法＞
培地は、例えば、一般的な微生物又は酵母に対して一般に用いられる培地を使用でき、特に限定されるものではなく、特に酵母に用いられる培地が好ましい。このような培地としては、例えば、ＹＰＤ培地（イーストイクストラクト１０ｇ、ポリペプトン２０ｇ、及びグルコース１００ｇ）を挙げることができる。特に、シュードザイマ・ツクバエンシスＪＣＭ  １０３２４株を用いる場合は、培養温度を２７℃〜３３℃に設定することが好ましいという知見を得ている。上述のとおり、ＭＥＬの生産性が著しく向上するためである。
【００５４】
さらに、本発明に係るＭＥＬ製造に利用可能な微生物、特に前記シュードザイマ・ツクバエンシスＪＣＭ  １０３２４株を用いてＭＥＬを生産する場合の好適な培地組成は、以下のとおりである。
・酵母エキス；０．１〜２ｇ／Ｌが好ましく、１ｇ／Ｌが特に好ましい。
・硝酸ナトリウム；０．１〜１ｇ／Ｌが好ましく、０．３ｇ／Ｌが特に好ましい。
・リン酸２水素カリウム；０．１〜１ｇ／Ｌが好ましく、０．３ｇ／Ｌが特に好ましい。
・硫酸マグネシウム；０．１〜１ｇ／Ｌが好ましく、０．３ｇ／Ｌが特に好ましい。
・油脂類；４０ｇ／Ｌ以上が好ましく、８０ｇ／Ｌが特に好ましい。
【００５５】
また、上記微生物の培養においては、培地に炭素源を添加することが好ましい。炭素源としては油脂類、脂肪酸、脂肪酸誘導体（脂肪酸トリグリセリド等の脂肪酸エステル類）、あるいは合成エステルを少なくとも１種、さらには複数種混合して含有させればよく、その他の諸条件については、特に制限はなく、本発明の利用当時の技術水準に基づいて適宜選定することができる。
【００５６】
「油脂類」としては、植物油、動物油、鉱物油及びその硬化油であればよい。具体的には、アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油（コーン油）、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、ピーナッツ油、ベニバナ油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油及びその硬化油、流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油、トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリンが挙げられる。好ましくはアボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、より好ましくはオリーブ油、大豆油である。
【００５７】
「脂肪酸」又は「脂肪酸誘導体」としては、高級脂肪酸由来が好ましく、例えばカプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。好ましくはラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ウンデシレン酸、より好ましくはオレイン酸、リノール酸、ウンデシレン酸である。
【００５８】
「合成エステル」としては、例えば、カプロン酸メチル、カプリル酸メチル、カプリン酸メチル、ラウリン酸メチル、ミリスチン酸メチル、パルミチン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、リノレン酸メチル、ステアリン酸メチル、ウンデシン酸メチル、カプロン酸エチル、カプリル酸エチル、カプリン酸エチル、ラウリン酸エチル、ミリスチン酸エチル、パルミチン酸エチル、オレイン酸エチル、リノール酸エチル、リノレン酸エチル、ステアリン酸エチル、ウンデシン酸エチル、カプロン酸ビニル、カプリル酸ビニル、カプリン酸ビニル、ラウリン酸ビニル、ミリスチン酸ビニル、パルミチン酸ビニル、オレイン酸ビニル、リノール酸ビニル、リノレン酸ビニル、ステアリン酸ビニル、ウンデシン酸ビニル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等が挙げられる。好ましくはラウリン酸メチル、ミリスチン酸メチル、パルミチン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、リノレン酸メチル、ステアリン酸メチル、ウンデシレン酸メチル、より好ましくはオレイン酸メチル、リノール酸メチル、ウンデシレン酸メチルである。
【００５９】
これらは、１種を単独で又は２種以上を適宜混合して用いてもよい。
【００６０】
本発明に係るＭＥＬの製造方法の具体的な工程については、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、種培養、本培養及びＭＥＬ生産培養の順にスケールアップしていくことが好ましい。これらの培養における、培地並びに培養条件を例示すると以下のとおりである。
ａ）種培養；グルコース４０ｇ／Ｌ、酵母エキス１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム０．３ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地５ｍＬが入った試験管に１白金耳接種し、３０℃で１日間振とう培養を行う。
ｂ）本培養；所定量の植物性油脂等の油脂類と、酵母エキス１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム０．３ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地１００ｍＬの入った坂口フラスコにａ）の培養液を接種して、３０℃で２日間培養を行う。
ｃ）マンノシルエリスリトールリピッド生産培養；所定量の植物性油脂等の油脂類と酵母エキス１ｇ／Ｌ、硝酸ナトリウム０．３ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム０．３ｇ／Ｌ、及び硫酸マグネシウム０．３ｇ／Ｌの組成の液体培地１．４Ｌが入ったジャーファメンターに接種して、３０℃で８００ｒｐｍの撹拌速度で培養を行う。この培養においては、培養途中から植物性油脂を培養容器中に流下させて、培地中の油脂類濃度を２０〜２００ｇ／Ｌに保持することが好ましい。
【００６１】
＜２−３．ＭＥＬの回収方法＞
ＭＥＬの回収についても従来公知の脂質の精製方法を用いることができ、特に限定されるものではない。例えば、培養終了後、当容積〜４容積倍の酢酸エチルで脂質成分を抽出し、酢酸エチルを、エバポレーターを用いて留去して脂質及び糖脂質成分を回収する工程を挙げることができる。その後、この脂質成分を等量のクロロホルムに溶解し、これをシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム、クロロホルム：アセトン（８０：２０）、同（７０：３０）、同（６０：４０）、同（５０：５０）、同（３０：７０）、アセトンの順で溶出させる。各溶液を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレートにチャージし、クロロホルム：メタノール：アンモニア水＝６５：１５：２（容積比）で展開する。展開終了後、アンスロン硫酸試薬で糖脂質の存在を確認する。糖脂質の含まれる溶出液を集め、溶媒を留去して糖脂質成分を得ることができる。
【００６２】
＜３．本発明に係るＭＥＬを用いたベシクル＞
次に、本発明におけるベシクルについて説明する。一般に、ベシクルとは、脂質や界面活性剤が二分子膜状に自己集合してカプセル構造を構築したものであり、親水部と疎水部のバランスがつりあう、主に疎水部に炭化水素鎖を二つ有するような二鎖型の界面活性剤によって形成される。本発明に係るＭＥＬは、上記一般式（１）において、Ｒ１とＲ３のうち、少なくとも２ヶ所にアシル基が結合しているため、効率的にベシクルを形成することができる。
【００６３】
また、炭化水素鎖が親水基と比較して小さすぎる場合は、通常のミセルが生成されることになる。また、炭化水素鎖が親水基と比較して大きすぎる場合も、ベシクルは生じない。本発明に係るＭＥＬでは、親水基がマンノシルエリスリトール（ＭＥ）であるため、上記一般式（１）のＲ１に炭素数４〜２４、より好ましくは炭素数８〜１４のアシル基を有し、Ｒ３に水素もしくは炭素数２〜２４、さらには水素もしくは炭素数６〜２０のアシル基を有することがより好ましい。本構成であれば、ベシクルを形成しやすいという利点がある。
【００６４】
また、ベシクルを調製する場合、本発明に係るＭＥＬを０．０００３〜２０ｗｔ％の範囲で用いることが好ましく、さらには０．０００３〜１０ｗｔ％の範囲がより好ましい。上記数値範囲内であれば、効率的にベシクルを調製することができる。
【００６５】
ベシクルは、カプセル構造を有しているため、有効成分の安定配合や皮膚への浸透性、滞留性の向上などの優れた効果があり、化粧品製剤としては極めて有効である。それゆえ、それ自身が保湿効果などの機能性を有する糖型バイオサーファクタント、特にＭＥＬにおいてベシクルを形成することは実用上も大きな利点である。
【００６６】
本発明に係るＭＥＬを用いることによって、ボルテックスミキサーで１０分程度撹拌することによって、５℃〜９５℃までの非常に幅広い温度領域や１０ｗｔ％以下までの濃度領域において、ベシクルを容易に形成させることができる。なお、ベシクルの形成は、分子集合体の内部の構造を観察することが可能な共焦点レーザー操作顕微鏡（ＣＬＳＭ）や光学的異方性を検討する偏光顕微鏡、又はベシクル内水相に保持させた水溶性物質の保持効率測定によって確認した。ベシクルの保持効率は、グルコース透析法により求め、保持効率とは、内水相に保持されたグルコースと系全体のグルコースとの比である。
【００６７】
＜４．本発明に係るＭＥＬを用いた乳化組成物＞
次に、本発明における乳化組成物について説明する。
【００６８】
水と油のように混じりあわない液体を、界面活性剤等を活用して、他方へ分散することを乳化という。このような乳化によって得られた乳化組成物は、エマルションもしくはマイクロエマルションと呼ばれる。通常のエマルションは、熱力学的に不安定であるため、やがて、水と油のように二相に分離してしまう。この問題を解決するため、様々な界面活性剤を用いた乳化法が開発されている。一方、マイクロエマルションは、熱力学的に安定であり、一般に液滴粒子径は１０ｎｍ〜１００ｎｍ程度であるため、通常のエマルションのように不安定化し難いことが特徴である。本発明に係る乳化組成物にはエマルション及びマイクロエマルションの双方が含まれる。
【００６９】
外力に依らず、長期にわたって分散安定なエマルションを調製する方法としてリオトロピック液晶を利用する方法が知られている。ここで、リオトロピック液晶とは、結晶のようにその分子配列を一定の規則性を保ちながら、液体のように流動性を兼ね備えた状態であり、このうち、界面活性剤等の濃度を変化させることによって、得られるものをリオトロピック液晶と呼ぶ。
【００７０】
この方法は、界面活性剤が形成するリオトロッピク液晶中に乳化粒子となる分散相を分散保持させることにより、エマルションの生成及び安定化を行うものである。しかしながら、工業レベルで使用させる合成界面活性剤は、分子構造が均一でないものが多く、分子の配向性が低いため、一般にリオトロピック液晶形成能が低い。
【００７１】
これに対して、本発明に係るＭＥＬは、水又は水性媒体と混合するでのみで極めて容易にリオトロピック液晶の一種であるラメラ液晶を極めて幅広い領域において形成することができる。このようにして形成されたラメラ液晶を活用することによって、水又は油をラメラ液晶中に分散した乳化組成物を得ることができる。
【００７２】
つまり、本発明に係るＭＥＬが形成するリオトロピック液晶に、油脂あるいは油性物質又は水を所定量添加して、混合乃至攪拌することによってもエマルションを得ることができる。この場合、リオトロピック液晶の粘度が高いため、室温付近の熱エネルギーのみでは、乳化組成物は得られにくいことから温度を７０℃付近まで上昇させることが望ましい。このように得られる乳化組成物は、リオトロピック液晶の粘度でエマルションの凝集、合一などが阻害されるため、安定である。
【００７３】
また、本発明に係るＭＥＬは、低濃度領域（具体的には０．０００３〜３５ｗｔ％）において、Ｗ／Ｏ型、両連続型、Ｏ／Ｗ型の各種マイクロエマルジョンを形成することができる。なお、これらのエマルションタイプは、例えば、ＭＥＬ／水系／油系の相平衡図を用いることにより、適宜調製することができる。
【００７４】
本発明に係るＭＥＬを乳化剤として用いる場合、上記一般式（１）のＲ１に炭素数４〜２４、より好ましくは炭素数８〜１４のアシル基を有し、Ｒ３に水素もしくは炭素数２〜２４、さらには水素もしくは炭素数４〜２０のアシル基を有することがより好ましい。本構成であれば、安定な乳化物を調製することができる。なお、乳化物を調製する場合のＭＥＬの濃度は、油脂の種類、量、エマルションタイプ等に応じて適宜設定でき、特に限定されるものではない。
【００７５】
このように本発明においては、本発明に係るＭＥＬを用いることによって、わずかな機械的外力で、複数の界面活性剤やコーサーファクタントを用いることなく、低コストで効率的に、Ｗ／Ｏ型、両連続型、Ｏ／Ｗ型の各種マイクロエマルジョンを提供することができる。
【００７６】
本明細書における「マイクロエマルジョン」とは、少なくとも油性成分、水性成分及び界面活性剤の三成分から成る、熱力学的に安定な等方性一液相を意味する。すなわち、熱力学的に不安定な通常のエマルジョン系において、液滴粒子径が小さいために透明あるいは半透明な外観を有するものとは本質的に異なっている。マイクロエマルジョンの性状は、透明、あるいは半透明の外観であり、また配合する全ての成分が均一に溶解している一相状態の溶液である。マイクロエマルジョンは、その製法にかかわらず、組成、温度が同一であれば同一の状態を得ることができる。このため、上記の三成分やその他の成分は、任意の順番で混合することができ、非常に弱い機械的外力で、同一状態のマイクロエマルジョンを得ることができる。このことは、製造のプロセスが煩雑とならないため、エマルジョンの製造上極めて有効である。
【００７７】
本発明では、各種マイクロエマルジョンについても、水、本発明に係るＭＥＬ及び油性成分、並びに必要に応じてその他の成分を、高速ミキサー等の強度の機械的外力を用いることなく任意の順番で混合ことにより作製することができる。
【００７８】
本発明の乳化組成物に配合する成分として、例えば、マカデミアナッツ油、アボガド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類、流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類、オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類、セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール等の高級アルコール等、イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン、アミノ変性ポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等の必須成分に分類されないカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリ��モノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等の多価アルコール類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類、グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸，ローカストビーンガム，サクシノグルカン，カロニン酸，キチン，キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等の増粘剤、（表面を処理されていても良い）マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、（表面を処理されていても良い）ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、（表面を処理されていても良い）雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、（レーキ化されていても良い）赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４’−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、ビタミンＡ又は��の誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩，ビタミンＢ６トリパルミテート，ビタミンＢ６ジオクタノエート，ビタミンＢ２又はその誘導体，ビタミンＢ１２，ビタミンＢ１５又はその誘導体等のビタミンＢ類、α−トコフェロール，β−トコフェロール，γ−トコフェロール，ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類などが好ましい。植物由来のタンパク質、例えば小麦タンパク質及び大豆タンパク質、大豆イソフラボン；動物由来のタンパク質、例えばケラチン、ケラチン加水分解物及びスルホン系のケラチン、ラクトフェリン、コラーゲン、エラスチン及びこれらの誘導体並びにその塩類等のタンパク質などを添加してもよい。ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、カルジオリピン、卵黄レシチン、水添卵黄レシチン、大豆レシチン、水添大豆レシチン等のグリセロリン脂質類、スフィンゴエミリン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロールから選ばれるスフィンゴリン脂質類、プラスマローゲン類、及び／又はこれらからなる群より選ばれる１種類、糖脂質が、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド硫酸エステル等のグリセロ脂質類、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エステル、ラクトシルセラミド、ガングリオシドＧ７、ガングリオシドＧ６、ガングリオシドＧ４等のスフィンゴ糖脂質類、及び／又はこれらの混合物、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、スフリンゴ脂質、テルペン、ステロイド、プロスタグランジン等の脂質などを用いることもできる。
【００７９】
以上のように、本発明に係るＭＥＬは、従来知られていたＭＥＬの光学異性体である。分子のキラリティーの違いは機能面において、自己集合体形成能等に大きな影響を及ぼすことから、従来型ＭＥＬとは、その他の諸性質において異なる挙動を示すようになる。それゆえ、本発明に係るＭＥＬを用いて物性・機能評価を行うことにより、ＭＥＬの用途開発に向けて大きく貢献できる。特に、本発明に係るＭＥＬは、従来型ＭＥＬと異なり、幅広い濃度・温度範囲においてベシクルを形成可能であることや、各種エマルション・マイクロエマルションなどの乳化組成物を容易に得ることができる。
【００８０】
上記発明を実施するための最良の形態の項においてなした具体的な実施態様及び以下の実施例は、あくまでも、本発明の技術内容を明らかにするものであって、そのような具体例にのみ限定して狭義に解釈されるべきものではなく、当業者は、本発明の精神及び添付の特許請求の範囲内で変更して実施することができる。
【実施例】
【００８１】
以下に実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【００８２】
〔実施例１：室温におけるＭＥＬ−Ｂ／水系の相挙動〕
まず、特願２００７−３０３１６４号公報の実施例２に従い、シュードザイマ・ツクバエンシスに属する微生物によって生産・精製された所定量のＭＥＬ−Ｂ（上記一般式（１）において、Ｒ１は炭素数８〜１４の脂肪族アシル基であり、Ｒ３は水素である。なお、油脂原としてオリーブ油を用いた。）０．０５ｇと水を、試験管に測りとり、２５℃〜７０℃の間でサンプルを昇降温させながら、ボルテックスミキサーで撹拌することによって、種々の濃度のＭＥＬ−Ｂ水溶液を得た。その目視観察結果を図１に示した。図１より、ＭＥＬ−Ｂ水溶液濃度が６０ｗｔ%以下の場合、二相領域であったが、それ以上の場合、一相領域となった。この二相領域の上相は水相である。
【００８３】
次に、各相の光学的異方性を偏光顕微鏡（ECLIPSE E600、ニコン社製）によって観察した。その結果を図２に示す。図２より明らかなように、いずれの濃度においても、ラメラ液晶相に特有のモザイクテクスチャーが観測された。このことから、上記ＭＥＬ−Ｂはいずれの濃度においても、良好なリオトロピック液晶形成能を示すことが判明した。
【００８４】
次いで、得られたリオトロピック液晶の詳細な構造を小角Ｘ線散乱（RU-200、リガク社製）測定によって検討した。なお、サンプルは、外径１．５ｍｍの石英セルに封入した。得られた結果を図３に示す。図３より、Ｘ線散乱ピークは、ｑ値が１：２の位置に得られたことから、このリオトロピック液晶がラメラ液晶であることが判明した。
【００８５】
従来型のＭＥＬ−Ｂは、ごく低濃度領域の６．３×１０−２ｗｔ％においてのみ、ラメラ液晶が形成することが報告されているが、本発明に係るＭＥＬ−Ｂに関して様々な濃度領域で同様の実験を行ったところ、ごく低濃度から１００ｗｔ％の極めて幅広い濃度領域においてラメラ液晶を形成することがわかった。
【００８６】
〔実施例２：ＭＥＬ−Ｂ／水系の温度依存性〕
次に、上記のラメラ液晶形成領域を、示差走査熱量計（セイコー社製、DSC6200）測定によって検討した結果を図４に示す。なお測定は、アルミニウムパンに２０ｍｇのサンプルを封入し、１℃／ｍｉｎの昇温速度にて行った。図４より、ＭＥＬ−Ｂ水溶液濃度が８０ｗｔ％までは、ラメラ液晶の融解に起因する吸熱ピークは観測されなかったものの、ＭＥＬ−Ｂ水溶液濃度が８０ｗｔ％以上では、ラメラ液晶の融解に起因する吸熱ピークが認められた。
【００８７】
これらの結果をもとに作成した、温度と濃度を変数としたＭＥＬ−Ｂ／水系の相平衡状態図を図５に示した。図５より明らかなように、ＭＥＬ−Ｂは極めて幅広い温度領域（５℃〜９５℃）および濃度領域（ごく低濃度から１００ｗｔ％）において、ラメラ液晶を形成可能であることがわかった。
【００８８】
〔実施例３：ＭＥＬ−Ｂによる水中でのベシクル形成〕
二分子膜構造を有するカプセルであるベシクルは、通常、ラメラ液晶と水相が共存する場合に、ラメラ液晶が水中に分散した際に生じる。従って、図５より、ラメラ液晶と水相が共存する領域において、ボルテックスミキサーで外力を付与することによって、ベシクルの調製を試みたところ、１０ｗｔ％以下の濃度において、ベシクルの形成が確認された。
【００８９】
図６には、ＭＥＬ−Ｂ水溶液濃度が１０ｗｔ％において、ナイルレッド（和光純薬社製）で染色したベシクルを共焦点レーザー操作顕微鏡（LSMS PASCAL、ツワイス社製）で観察した結果を示す。図６より、内部に中空構造を有する粒子径１０μmにも及ぶ大きなベシクルが形成することが明らかになった。また、得られたベシクル（１０ｗｔ％）の保持効率を、グルコース透析法で検討したところ、６．７％となり、ベシクルの内水相に水溶性物質を保持可能であることが確認された。
【００９０】
〔実施例４：ＭＥＬ−Ｂ／水／油系の相挙動〕
次に、デカン（和光純薬社製）を油相として、ＭＥＬ−Ｂ／水／デカン系の相状態についても検討した。なお、サンプルの調製については、実施例１と同様である。その結果を図７に示す。
【００９１】
図７より、まず、ＭＥＬ−Ｂ低濃度領域において、マイクロエマルションに特有の半透明の外観を有する相が観察された。これらの相は、それぞれ、相図中Ｉ、ＩＶの領域では、親水性と疎水性がつりあった両連続のマイクロエマルションであり、相図中ＩＩ、ＩＩＩの領域においては、それぞれ水中に油が分散したＯ／Ｗ型のマイクロエマルション（ＩＩの領域）及び油中に水が分散したＷ／Ｏ型のマイクロエマルション（ＩＩＩの領域）が形成しているものと考えられる。これらのマイクロエマルションは熱力学的に安定であるため、長時間経過しても相分離することがないばかりでなく、容易に形成させることができる。
【００９２】
〔実施例５：ＭＥＬ−Ｂを活用した液晶乳化〕
図７のＭＥＬ−Ｂ／水／デカン系の相平衡図より、ラメラ液晶と水又は油が共存する二相領域が得られている。このような領域においては、リオトロピック液晶中に水又は油を分散する液晶乳化を実施することが可能である。そこで、（１）ＭＥＬ−Ｂ／水／デカン＝４５／４５／１０及び（２）ＭＥＬ−Ｂ／水／デカン＝４５／１０／４５の組成を用いて、温度を７０℃に上昇させた後、ボルテックスミキサーで１０分間撹拌して、液晶乳化を試みた。その結果、図８に示すように、（１）、（２）のいずれの組成においてもエマルションを得ることができた。なお、このエマルションは少なくとも１ヶ月以上は安定であった。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明に係るＭＥＬは、従来型ＭＥＬに対してエリスリトールがマンノースに逆向きにエーテル結合したキラリティーの全く異なる構造をしており、このことにより、優れたベシクル形成能や産業上有用な乳化組成物を提供することができる。このような物性により、食品工業、化学工業、環境分野等への幅広い利用はもちろん、特に医薬、化粧品産業等でのバイオサーファクタントの用途拡大に多大に貢献できると考えられるものと期待される。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】実施例１において、本発明に係るＭＥＬ−Ｂが各濃度水溶液中で形成する相構造の目視観察結果を示す図である。
【図２】実施例１において、本発明に係るＭＥＬ−Ｂが各濃度水溶液中で形成するリオトロピック液晶の偏光顕微鏡観察結果を示す図である。
【図３】実施例１において、本発明に係るＭＥＬ−Ｂが各濃度水溶液中で形成するリオトロピック液晶の小角Ｘ線散乱測定の結果を示す図である。
【図４】実施例２における、本発明に係るＭＥＬ−Ｂの各濃度水溶液の示差走査熱量計測定の結果を示す図である。
【図５】実施例２における、本発明に係るＭＥＬ−Ｂ／水系の相平衡状態を示す図である。
【図６】実施例３において、本発明に係るＭＥＬ−Ｂが１０ｗｔ％水溶液中で形成するベシクルを共焦点レーザー操作顕微鏡で観察した結果を示す図である。
【図７】実施例４における、本発明に係るＭＥＬ−Ｂ／水／デカン系の相平衡状態を示す図である。
【図８】実施例５において、本発明に係るＭＥＬ−Ｂを用いて作製したエマルションの目視観察結果を示す図である。
【図４】
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【図５】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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