(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を有効成分として含有することを特徴とする抗皮膚炎症剤。
【請求項２】
前記化合物が、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用及び／又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することを特徴とする請求項１に記載の抗皮膚炎症剤。
【請求項３】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。
【請求項４】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を有効成分として含有することを特徴とするチロシナーゼ活性阻害剤。
【請求項５】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を有効成分として含有することを特徴とする抗皮膚老化剤。
【請求項６】
前記化合物が、線維芽細胞増殖促進作用及び／又は表皮角化細胞増殖促進作用を有することを特徴とする請求項５に記載の抗皮膚老化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤、抗老化剤及び皮膚化粧料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程により生じるものであり、スーパーオキサイド（すなわち酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン：・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）及び一重項酸素等がある。生体内において、酸素を基に最初に生成されるラジカルは、スーパーオキサイドであり、ヒドロキシラジカル等の他のラジカルはスーパーオキサイドを経て生成される。スーパーオキサイドは、細胞中で産生されるスーパーオキシドジスムターゼ（以下「ＳＯＤ」という。）の作用により過酸化水素に変換される。
【０００３】
ＳＯＤ量は老化と共に減少し、ＳＯＤ量の減少によってスーパーオキサイドの細胞内濃度が高くなる。また、活性酸素の無毒化酵素であるカタラーゼ等の活性も低下し、スーパーオキサイドが生体に対して障害をもたらすようになる。例えば、関節リュウマチやベーチェット病などの組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩こり、冷え性、肌のしみ・シワ等の障害をもたらすようになる。このような障害を予防又は治療するＳＯＤ様作用剤として、ムラサキ科チシャノキ属植物抽出物（特許文献１参照）等が知られている。
【０００４】
炎症性の疾患、例えば接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因としてヒアルロニダーゼ、ヒスタミン、ヘキソサミニダーゼ等によるものが知られている。
【０００５】
生体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中で紫外線や酵素等によって分解され、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、ヒアルロン酸は細胞間組織中に存在し、血管透過性とも関与している。さらに、肥満細胞中に存在し、活性化されたヒアルロニダーゼは、肥満細胞からの脱顆粒に関与しているといわれている。したがって、ヒアルロン酸の加水分解酵素であるヒアルロニダーゼの活性を阻害することにより、ヒアルロン酸の安定化を図り、肥満細胞からの種々のケミカルメディエーターの放出を防ぐことができるとともに、保湿の強化、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚疾患等、様々な炎症性疾患の予防、治療又は改善に効果があるものと考えられる。
【０００６】
このような考えに基づき、ヒアルロニダーゼ阻害作用を有するものとしては、例えば、オスベッキア属に属する植物の抽出物（特許文献２参照）、藤茶抽出物（特許文献３参照）、ローズマリー、タイム及びメリッサ抽出物（特許文献４参照）等が知られている。
【０００７】
また、ヒスタミンは、マストセル内に存在し、脱顆粒反応により放出されたものが起炎物質として作用する。細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼの遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。したがって、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制でき、これにより接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚疾患等、様々な炎症性疾患等の予防、治療又は改善に効果があるものと考えられる。
【０００８】
このような考えに基づき、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するものとしては、例えば、紅雪茶抽出物（特許文献５参照）等が知られている。
【０００９】
皮膚においてメラニンは、紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般にメラニンは、色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、ついで５，６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成されるものとされている。したがって、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）、シミ、ソバカス等を予防、治療又は改善するためには、メラニンの産生に関与するチロシナーゼの活性を阻害することが考えられる。
【００１０】
従来、皮膚色素沈着症、シミ、ソバカス等の予防、治療又は改善には、ハイドロキノン等の化学合成品を有効成分とする美白剤を外用する処置が行われてきた。しかしながら、ハイドロキノン等の化学合成品は、皮膚刺激、アレルギー等の副作用のおそれがある。そこで、安全性の高い天然原料を有効成分とする美白剤の開発が望まれており、チロシナーゼ阻害作用を有するものとしては、例えば、藤茶抽出物（特許文献６参照）、ヤナギタデ抽出物（特許文献７参照）等が知られている。
【００１１】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞、及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、コラーゲン等の皮膚組織の相互作用により皮膚に水分が保持されるとともに、皮膚の柔軟性、弾力性等が確保され、皮膚は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【００１２】
ところが、紫外線、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると線維芽細胞の増殖が遅くなり皮膚の保湿機能や弾力性が低下する。そして、皮膚は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。そのため、線維芽細胞の増殖を促進することにより皮膚の老化を予防又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、線維芽細胞増殖促進作用を有するものとしては、例えば、クスノハガシワ抽出物（特許文献８参照）等が知られている。
【特許文献１】特開２００２−３６３０８７号公報
【特許文献２】特開２００３−５５２４２号公報
【特許文献３】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献４】特開平８−３３３２６７号公報
【特許文献５】特開２００３−２１２７８９号公報
【特許文献６】特開２００２−３７０９６２号公報
【特許文献７】特開２００４−８３４８８号公報
【特許文献８】特開２００３−１４６８３７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は第一に、ＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用及びラジカル消去作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有する物質を見出し、それを有効成分とする抗酸化剤を提供することを目的とする。
【００１４】
本発明は第二に、ヒアルロニダーゼ阻害作用及び／又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有する物質を見出し、それを有効成分とする抗炎症剤を提供することを目的とする。
【００１５】
本発明は第三に、チロシナーゼ阻害作用を有する物質を見出し、それを有効成分とする美白剤又はチロシナーゼ阻害剤を提供することを目的とする。
【００１６】
本発明は第四に、線維芽細胞増殖促進作用及び／又は表皮角化細胞増殖促進作用を有する物質を見出し、それを有効成分とする抗老化剤を提供することを目的とする。
【００１７】
本発明は第五に、ＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、チロシナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖促進作用及び表皮角化細胞増殖促進作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有するものを見出し、それを配合した皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
上記課題を解決するため、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤及び抗老化剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を有効成分として含有することを特徴とし、また、本発明の皮膚化粧料は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を配合したことを特徴とする。
【００１９】
本発明の抗酸化剤においては、上記化合物がＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用及びラジカル消去作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましく、本発明の抗炎症剤においては、上記化合物が、ヒアルロニダーゼ阻害作用及び／又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが好ましく、本発明の抗老化剤においては、上記化合物が、線維芽細胞増殖促進作用及び／又は表皮角化細胞増殖促進作用を有することが好ましい。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を有効成分として含有する抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤、抗老化剤又は皮膚化粧料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明について説明する。
〔抗酸化剤，抗炎症剤，美白剤，チロシナーゼ阻害剤，抗老化剤〕
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤又は抗老化剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）を有効成分として含有する。
【００２２】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、次式で表される化学構造を有するフラボノイド誘導体の一種である。
【００２３】
【化１】
0005224648.tif 000002
【００２４】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する植物抽出物から単離・精製することにより製造することもできるし、合成により製造することもできる。合成により製造する場合、公知の方法により合成することができる。
【００２５】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する植物としては、例えば、テンニンカ（学名：Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) Hassk.）等が挙げられる。
【００２６】
テンニンカ（Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) Hassk.）は、東南アジアの熱帯から亜熱帯域等の地域に分布しているフトモモ科に属する常緑低木であり、日本では沖縄等に自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。テンニンカの果実は、生食される他、ジュースやジャムの原料にも使用されている。また中国では桃金娘と呼ばれ、果実は民間的に妊婦の貧血、止血剤として、また、葉や根も民間的に頭痛、腹痛等の治療等に使用されている。
【００２７】
抽出原料として使用し得るテンニンカの構成部位としては、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部、根部若しくは果実部、又はこれらの部位の混合物である。
【００２８】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する植物抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２９】
抽出溶媒としては、極性溶媒を用いるのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００３０】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３１】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００３２】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１０〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００３３】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００３４】
以上のようにして得られた抽出液、当該抽出液の濃縮物又は当該抽出液の乾燥物からピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを単離・精製する方法は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。例えば、植物抽出物を、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、水、アルコール、アセトンの順で溶出させ、アルコールで溶出される画分として得ることができる。カラムクロマトグラフィーにて溶出液として用いられるアルコールは、特に限定されるものではなく、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール又はそれらの水溶液等が挙げられる。さらに、カラムクロマトグラフィーにより得られた画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液−液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。
【００３５】
以上のようにして得られるピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、ＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、チロシナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖促進作用又は表皮角化細胞増殖促進作用を有しているため、それらの作用を利用して抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤、抗老化剤の有効成分として使用することができる。なお、抽出処理により得られた植物抽出物はピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有しており、そのまま抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤又は抗老化剤の有効成分として使用し得るが、精製してピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドの純度を高めたものを使用することが好ましい。ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドの純度を高めたものを有効成分として使用することによって、より一層使用効果に優れた抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤又は抗老化剤を得ることができる。ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する植物抽出物には、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００３６】
ここで、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する抗酸化作用は、例えば、ＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用及びラジカル消去作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する抗酸化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるものではない。なお、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、ＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用及びラジカル消去作用を有するため、それらの作用を利用して、ＳＯＤ様作用剤、過酸化水素消去剤又はラジカル消去剤の有効成分として利用することができる。
【００３７】
また、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する抗炎症作用は、例えば、ヒアルロニダーゼ阻害作用及び／又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用に基づいて発揮される。ただし、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。なお、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、ヒアルロニダーゼ阻害作用及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するため、それらの作用を利用して、ヒアルロニダーゼ阻害剤又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤の有効成分として利用することができる。
【００３８】
また、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する美白作用は、例えば、チロシナーゼ阻害作用に基づいて発揮される。ただし、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する美白作用は、上記作用に基づいて発揮される美白作用に限定されるものではない。
【００３９】
さらに、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する抗老化作用は、例えば、線維芽細胞増殖促進作用及び／又は表皮角化細胞増殖促進作用に基づいて発揮される。ただし、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。なお、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、線維芽細胞増殖促進作用及び表皮角化細胞増殖促進作用を有するため、それらの作用を利用して、線維芽細胞増殖促進剤又は表皮角化細胞増殖促進剤の有効成分として利用することができる。
【００４０】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤又は抗老化剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドのみからなるものであってもよいし、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを製剤化したものであってもよい。
【００４１】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、他の組成物（例えば、後述する皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００４２】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤又は抗老化剤は、必要に応じて、抗酸化作用、ＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、抗炎症作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、美白作用、チロシナーゼ阻害作用、抗老化作用、線維芽細胞増殖促進作用又は表皮角化細胞増殖促進作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として用いることができる。
【００４３】
本発明の抗酸化剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有するＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用及びラジカル消去作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を通じて、関節リュウマチやベーチェット病などの組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、糖尿病、動脈硬化、肩こり、冷え性、肌のしみ・シワ等の活性酸素が関与する各種障害を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗酸化剤は、これらの用途以外にもＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用及びラジカル消去作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４４】
本発明の抗炎症剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有するヒアルロニダーゼ阻害作用及び／又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を通じて、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡等の各種炎症性疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗炎症剤は、これらの用途以外にもヒアルロニダーゼ阻害作用及び／又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４５】
本発明の美白剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有するチロシナーゼ阻害作用を通じて、皮膚色素沈着症、シミ、ソバカス等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の美白剤は、これらの用途以外にもチロシナーゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４６】
本発明のチロシナーゼ阻害剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有するチロシナーゼ阻害作用を通じて、皮膚色素沈着症、シミ、ソバカス等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のチロシナーゼ阻害剤は、これらの用途以外にもチロシナーゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４７】
本発明の抗老化剤は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有する線維芽細胞増殖促進作用及び／又は表皮角化細胞増殖促進作用を通じて、皮膚のシワ形成、弾力性低下等の老化現象を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗老化剤は、これらの用途以外にも線維芽細胞増殖促進作用及び／又は表皮角化細胞増殖促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４８】
〔皮膚化粧料〕
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドは、ＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、チロシナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖促進作用又は表皮角化細胞増殖促進作用を有しており、皮膚に適用した場合の使用感と安全性とに優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。この場合、皮膚化粧料には、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを配合してもよいし、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドから製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤又は抗老化剤を配合してもよい。ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド、上記抗酸化剤、上記抗炎症剤、上記美白剤、上記チロシナーゼ阻害剤又は上記抗老化剤を皮膚化粧料に配合することによって、皮膚化粧料にＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、チロシナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖促進作用又は表皮角化細胞増殖促進作用を付与することができる。
【００４９】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを配合し得る皮膚化粧料の種類は、特に限定されるものではなく、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、ファンデーション、リップクリーム、口紅、入浴剤等が挙げられる。
【００５０】
ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドを皮膚化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。
【００５１】
本発明の皮膚化粧料は、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドが有するＳＯＤ様作用、過酸化水素消去作用、ラジカル消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、チロシナーゼ阻害作用、線維芽細胞増殖促進作用又は表皮角化細胞増殖促進作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された上記成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。
【００５２】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、チロシナーゼ阻害剤、抗老化剤又は皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００５３】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００５４】
〔製造例１〕ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドの製造
粉砕したテンニンカの果実部の乾燥物１００ｇに８０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比＝１：４）１０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出液を減圧下に濃縮し、乾燥してテンニンカ果実部抽出物６．６ｇを得た。
【００５５】
得られたテンニンカ果実部抽出物を多孔性吸着樹脂（製品名：ダイヤイオンＨＰ−２０，三菱化学社製）に付し、水３０００ｍＬ、メタノール１０００ｍＬ、アセトン１０００ｍＬの順で溶出させた。得られたメタノール溶出部（固形分：２．６ｇ）を、シリカゲルカラム（富士シリシア社製，移動相；クロロホルム：メタノール：水＝１０：５：１(質量比)）を用いて分画し、画分１（固形分：３６０ｍｇ）、画分２（固形分：３９０ｍｇ）、画分３（固形分：１１０ｍｇ）、画分４（固形分：３２０ｍｇ）、画分５を得た。得られた画分４をＯＤＳカラム（移動相：３０質量％メタノール）に付し、さらにリサイクルＨＰＬＣ（製品名：ＬＣ−９０８型リサイクル分取ＨＰＬＣ，日本分析工業社製，移動相：メタノール）に付して分離・精製し、精製物４２ｍｇを得た（試料１）。この精製物を１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲにより分析した結果を以下に示す。
【００５６】
＜１Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属水素）＞
7.03(1H,d,J=8.5Hz,5'-H)，6.92(1H,d,J=1.5Hz,2'-H)，6.81(1H,d,J=16.4Hz,β-H)，6.80(1H,dd-like,6'-H)，6.72(2H,d,J=2.2Hz,2,6-H)，6.08(1H,br s,4-H)，4.68(1H,d,J=7.3Hz,1''-H) 
【００５７】
＜１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）＞
159.6(3,5-C)，149.2(3'-C)，146.7(4'-C)，140.8(1-C)，134.5(1'-C)，129.0(β-C)，128.6(α-C)，119.1(6'-C)，118.5(5'-C)，114.8(2'-C)，105.9(2,6-C)，104.1(1''-C)，103.3(4-C)，78.2(3''-C)，77.5(5''-C)，74.8(2''-C)，71.2(4''-C)，62.4(6''-C)
【００５８】
以上の結果から、得られた精製物がピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドであることが確認された。
【００５９】
〔試験例１〕ＳＯＤ様作用試験
製造例１により得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにしてＳＯＤ様作用を試験した。
【００６０】
試験管に０．０５ｍｏｌ／Ｌの炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬ、３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン０．１ｍＬ、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ０．１ｍＬ、５０μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン０．１ｍＬ、及び０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム０．１ｍＬを加え、これに試料溶液を０．１ｍＬ添加し、２５℃で１０分間放置した。
【００６１】
その後、キサンチンオキシダーゼ溶液０．１ｍＬを加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間反応させた。そして、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法にて空試験を行った。得られた結果から、下記式に基づいてスーパーオキサイド消去率（％）を算出した。
【００６２】
スーパーオキサイド消去率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「試料溶液の波長５６０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｓｂは「試料溶液ブランクの波長５６０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｔは「コントロール溶液の波長５６０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｂは「コントロール溶液ブランクの波長５６０ｎｍにおける吸光度」を表す。
【００６３】
試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）のＩＣ５０は、８１．７μｇ／ｍＬであった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れたＳＯＤ様作用を有することが確認された。
【００６４】
〔試験例２〕過酸化水素消去作用試験
製造例１により得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにして過酸化水素消去作用を試験した。
【００６５】
１．５ｍｍｏｌ／Ｌの過酸化水素溶液１０μＬに試料溶液１０μＬを加え、３７℃で２０分間反応させた後、発色溶液（１００μｍｏｌ／ＬのＤＡ−６４，０．５％トライトンＸ−１００を含有する０．１ｍｏｌ／ＬのＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）１００ｍＬに１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペルオキシダーゼ１ｍＬを添加）２．９８ｍＬを添加し、３７℃で５分間反応させた。反応終了後、波長７２７ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法で空試験を行った。得られた結果から、下記式に基づいて過酸化水素消去率（％）を算出した。
【００６６】
過酸化水素消去率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「試料溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｓｂは「試料溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｔは「コントロール溶液の波長７２７ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｂは「コントロール溶液ブランクの波長７２７ｎｍにおける吸光度」を表す。
【００６７】
試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、過酸化水素の消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）のＩＣ５０は、６３．９μｇ／ｍＬであった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れた過酸化水素消去作用を有することが確認された。
【００６８】
〔試験例３〕ラジカル消去作用試験
製造例１により得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにしてラジカル消去作用を試験した。
【００６９】
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨ（diphenyl-p-picrylhydrazyl）エタノール溶液３ｍＬに試料溶液３ｍＬを加えて密栓し、振り混ぜた後に３０分間放置した。放置後、波長５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式に基づいてＤＰＰＨに対するラジカル消去率（％）を算出した。
【００７０】
ＤＰＰＨ消去率(％)＝{Ｃ−(Ｓｔ−Ｓｂ)}／Ｃ×１００
式中、Ｓｔは「試料溶液の波長５２０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｓｂは「試料溶液ブランクの波長５２０ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃは「コントロール溶液の波長５２０ｎｍにおける吸光度」を表す。
【００７１】
試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、ラジカルの消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）のＩＣ５０は、１５９．７μｇ／ｍＬであった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れたラジカル消去作用を有することが確認された。
【００７２】
〔試験例４〕ヒアルロニダーゼ阻害作用試験
製造例１により得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにしてヒアルロニダーゼ阻害作用を試験した。
【００７３】
０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）に試料１を溶解させた試料溶液（試料濃度：４００μｇ／ｍＬ）０．２ｍＬとヒアルロニダーゼ溶液（Type IV-S(from bovine testis)，SIGMA社製，４００ユニット／ｍＬ）０．１ｍＬとを混合し、３７℃で２０分間反応させた。さらに、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させ、酵素を活性化させた。その後、０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸カリウム溶液（from rooster comb）０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間反応させ、０．４ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム溶液０．２ｍＬを加えるとともに氷冷し反応を停止させた。
【００７４】
各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、沸騰湯浴中で３分間加熱した後、１０分間氷冷した。次いで、ｐ−ＤＡＢＡ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎの塩酸１２．５ｍＬと酢酸８７．５ｍＬの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６ｍＬを加え、３７℃で２０分間反応させた。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式に基づいてヒアルロニダーゼ阻害率（％）を算出した。
【００７５】
ヒアルロニダーゼ阻害率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「試料溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｓｂは「試料溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｔは「コントロール溶液の波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｂは「コントロール溶液ブランクの波長５８５ｎｍにおける吸光度」を表す。
【００７６】
上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）のヒアルロニダーゼ阻害率は、３４．２％であった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を有することが確認された。
【００７７】
〔試験例５〕ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験
製造例１で得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにしてヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
【００７８】
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）を１５％ＦＢＳ含有Ｓ−ＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように希釈し、DNP-specific IgEの終濃度が０．５μｇ／ｍＬとなるようにDNP-specific IgEを添加した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、シラガニアン緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。
【００７９】
次に、シラガニアン緩衝液３０μＬ及び同緩衝液に溶解した試料溶液（試料終濃度：４００μｇ／ｍＬ）１０μＬを加え、３７℃で１０分間静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのＤＮＰ−ＢＳＡ溶液１０μＬを加え、３７℃で１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することによりヘキソサミニダーゼの遊離を停止させた。各ウェルの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニド（ｐ−ＮＡＧ）溶液１０μＬを、新たな９６ウェルプレートに添加し、３７℃で１時間反応させた。反応終了後、各ウェルに０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様にして試料を添加せずにシラガニアン緩衝液１０μＬを添加したウェルの細胞上清１０μＬと０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３２５０μＬとの混合液の吸光度を測定した。また、同様にして試料を添加しｐ−ＮＡＧを添加せずに吸光度を測定した。得られた結果から、下記式に基づいてヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を算出した。
【００８０】
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率(％)＝{１−(Ｂ−Ｃ)／Ａ}×１００
式中、Ａは「試料無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｂは「試料添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・ｐ−ＮＡＧ無添加時の波長４１５ｎｍにおける吸光度」を表す。
【００８１】
上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）のヘキソサミニダーゼ遊離抑制率は、１７．８％であった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが確認された。
【００８２】
〔試験例６〕チロシナーゼ阻害作用試験
製造例１で得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにしてチロシナーゼ阻害作用を試験した。
【００８３】
４８ウェルプレートに、Mcllvaine緩衝液（ｐＨ６．８）０．２ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬのチロシン溶液０．０６ｍＬ及び試料の２５％ＤＭＳＯ溶液０．１８ｍＬを添加し、３７℃で１０分間静置した。これに、２５００ユニット／ｍＬのチロシナーゼ溶液０．０２ｍＬを加え、引き続き３７℃で１５分間反応させた。反応終了後、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記式に基づいてチロシナーゼ阻害率（％）を算出した。
【００８４】
チロシナーゼ阻害率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「試料溶液の波長４７５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｓｂは「試料溶液ブランクの波長４７５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｔは「コントロール溶液の波長４７５ｎｍにおける吸光度」を表し、Ｃｂは「コントロール溶液ブランクの波長４７５ｎｍにおける吸光度」を表す。
【００８５】
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、チロシナーゼの活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０（ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）のＩＣ５０は、１１４．４μｇ／ｍＬであった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れたチロシナーゼ阻害作用を有することが確認された。
【００８６】
〔試験例７〕線維芽細胞増殖促進作用試験
製造例１で得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにして線維芽細胞増殖促進作用を試験した。
【００８７】
ヒト正常皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を７．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、５％ＦＢＳ含有α−ＭＥＭで溶解した試料溶液（試料濃度：４００μｇ／ｍＬ）を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３日間培養した。線維芽細胞増殖作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、各ウェルから１００μＬずつ培地を抜き、終濃度５ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ウェルに２０μＬずつ添加した。４．５時間培養した後に、１０％ＳＤＳを溶解した０．０１ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液を各ウェルに１００μＬずつ添加し、一晩培養した後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。また、同様の方法で空試験を行い補正した。得られた結果から、下記の式により、線維芽細胞増殖促進率（％）を算出した。
【００８８】
線維芽細胞増殖促進率(％)＝(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)×１００
式中、Ｓｔは「試料を添加した細胞での吸光度」を表し、Ｓｂは「試料を添加した空試験の吸光度」を表し、Ｃｔは「試料を添加しない細胞での吸光度」を表し、Ｃｂは「試料を添加しない空試験の吸光度」を表す。
【００８９】
上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）の線維芽細胞増殖促進率は、１１５．２±１．３％であった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れた線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【００９０】
〔試験例７〕表皮角化細胞増殖促進作用試験
製造例１で得られたピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）について、以下のようにして表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
【００９１】
正常ヒト新生児包表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）を用いて培養した後、トリプシン処理にて細胞を回収した。回収した細胞を１．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度にＥｐｉｌｉｆｅ−ＫＧ２にて希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。精製終了後、試料１をEpiLife-KG2に溶解した試料溶液（試料濃度：１２．５μｇ／ｍＬ）を各ウェルに１００μＬ添加し、３日間培養した。
【００９２】
表皮角化細胞増殖作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（−）に溶解したＭＴＴを各ウェル１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。得られた結果から、下記式に基づいて表皮角化細胞増殖促進率（％）を算出した。
【００９３】
表皮角化細胞増殖促進率(％)＝Ｓｔ／Ｃｔ×１００
式中、Ｓｔは「試料を添加した細胞での吸光度」を表し、Ｃｔは「試料を添加しない細胞での吸光度」を表す。
【００９４】
上記試験の結果、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）の表皮角化細胞増殖促進率は、１１２．７±３．８％であった。このことから、ピセアタンノール４’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（piceatannol 4'-O-β-D-glucopyranoside）は、優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【００９５】
〔配合例１〕
以下の組成の乳液を常法により製造した。
ピセアタンノール４’−Ｏ−Ｄ−グルコピラノシド（製造例１）  ０．０１ｇ
ホホバオイル                                                ４．０ｇ
プラセンタエキス                                            ０．１ｇ
オリーブオイル                                              ２．０ｇ
スクワラン                                                  ２．０ｇ
セタノール                                                  ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリン                                  ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.）                  ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.）            ２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール                                  ３．０ｇ
ヒノキチオール                                              ０．１５ｇ
香料                                                        ０．０５ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００９６】
〔配合例２〕
以下の組成のクリームを常法により製造した。
ピセアタンノール４’−Ｏ−Ｄ−グルコピラノシド（製造例１）  ０．１ｇ
流動パラフィン                                              ５．０ｇ
サラシミチロウ                                              ４．０ｇ
セタノール                                                  ３．０ｇ
スクワラン                                                １０．０ｇ
ラノリン                                                    ２．０ｇ
ステアリン酸                                                １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.）            １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリン                                  ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール                                  ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                    １．５ｇ
香料                                                        ０．１ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００９７】
〔配合例３〕
以下の組成の化粧水を常法により製造した。
ピセアタンノール４’−Ｏ−Ｄ−グルコピラノシド（製造例１）  ０．１ｇ
グリセリン                                                  ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール                                  ３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O.）            ２．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１５ｇ
クエン酸                                                    ０．１ｇ
クエン酸ソーダ                                              ０．１ｇ
油溶性甘草エキス                                            ０．１ｇ
海藻エキス                                                  ０．１ｇ
クジンエキス                                                ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー                                  ０．０５ｇ
香料                                                        ０．０５ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【００９８】
本発明の抗酸化剤は、活性酸素が関与する各種障害の予防、治療又は改善に、本発明の抗炎症剤は、各種炎症性疾患の予防、治療又は改善に、本発明の美白剤又はチロシナーゼ阻害剤は、皮膚色素沈着症、シミ等の予防、治療又は改善に、本発明の抗老化剤は、皮膚の老化の予防、治療又は改善に大きく貢献できる。