(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アジュバントを伴わないコポリマー１を含む、全身性の神経保護を付与しそれによって緑内障患者に治療的免疫を付与するための点眼ワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は免疫学の分野にあり、そして活性薬剤としてランダムコポリマー、特に、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、又はコポリマー１関連ポリペプチドを含む点眼薬剤、及び、特に損傷、疾患、障害、又は状態の後の中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系（ＰＮＳ）における免疫保護のため、或いはグルタミン酸毒性からＣＮＳ及びＰＮＳの細胞を保護するための哺乳動物の治療的免疫の方法に関する。
【０００２】
略号：ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン；ＣＦＡ：完全フロイントアジュバント；ＣＮＳ：中枢神経系；Ｃｏｐ１：コポリマー１、酢酸グラチラマー；ＦＣＳ：胎仔ウシ血清；ＩＦＡ：不完全フロイントアジュバント；ＩＯＰ：眼圧；ＭＢＰ：ミエリン塩基性タンパク質；ＮＳ：神経系；ＰＢＳ：リン酸緩衝化生理食塩水；ＰＮＳ：末梢神経系；ＲＧＣ：網膜神経節細胞。
【背景技術】
【０００３】
神経系は中枢神経系及び末梢神経系を含む。末梢神経系（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ）（ＣＮＳ）は脳及び脊髄から構成され；末梢神経系は（ＰＮＳ）は他のすべての神経要素、すなわち、脳及び脊髄以外の神経及び神経節からなる。
【０００４】
神経系に対する損傷は、穿通性外傷若しくは鈍的外傷などの外傷的損傷、又はアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症、糖尿病性神経障害、緑内障、老人性痴呆症、若しくは虚血を含むがこれらに限定されない疾患、障害、若しくは状態を生じ得る。
【０００５】
神経変性障害は、一般的に、ＣＮＳにおけるニューロンの欠損の進行と関連する。第１の危険因子によって引き起こされるニューロンの欠損の後、さらなる（第２の）ニューロンの欠損が、自己の化合物、例えば、グルタミン酸、一酸化炭素、又は反応性酸素種によって媒介され、これらの化合物は、これらの生理学的濃度を超えている。これらの化合物は、種々の型の神経学的障害及び急性ＣＮＳ損傷に関係している。神経変性疾患に共通の破壊的成分がまた、例えば多発性硬化症などの自己免疫疾患において同定されてきたこと；この疾患においては、ＣＮＳにおけるミエリン損傷が引き続くニューロン欠損に付随することに注目することは興味深い。
【０００６】
緑内障は、高齢者集団において高い発生率（約１％）である、ゆっくりと進行する視神経障害である。最近まで、これは高い眼圧（ＩＯＰ）と関連するので、それゆえに、疾患の進行を抗高血圧薬によって遅らせることに試みが集中されてきた。何年もかかって、緑内障が疾患の１ファミリーであって、及びすべてが圧力と関係しているのではないことが明らかになってきた。さらに、この疾患が圧力と関連する場合でさえ、後者は正常値及び正常値より下にまで低下し得、かつ変性が継続し得ることが明白となった。臨床医の間で継続している議論は、正常なＩＯＰ値にもかかわらず、緑内障患者における継続性の変性は、圧力以外のさらなる危険因子の存在の反映であるか、又は残りのニューロン及び線維の脆弱性の増加、及びそれゆえに正常値より下にＩＯＰを減少させる必要性の反映であるかを問題としてきた。
【０００７】
本発明者らは、緑内障における進行性の失明の根底にあるメカニズムが、神経系に対する任意の急性の損傷又はＣＮＳの任意の神経変性疾患において起こるものと類似していることを１９９６年に示唆した（Ｓｃｈｗａｒｔｚら、１９９６）。この提案に従って、第１の危険因子（例えば、圧力）に加えて、第１の事象を見逃した神経に影響を与える変性の進行中のプロセスが存在する（Ｓｃｈｗａｒｔｚら、１９９６；Ｓｃｈｗａｒｔｚ及びＹｏｌｅｓ、２０００ａ及び２０００ｂ）。このプロセスは、第１の事象の結果として表れた化合物によって、又は第１の危険因子の結果としての損失によって媒介され、これらのすべてが初期の侵襲に隣接するニューロンに敵対的な環境を作り出す。
【０００８】
本発明者らはさらに最近、機械的な（軸索切断）又は生化学的な（グルタミン酸、酸化的ストレス）損傷によって引き起こされた神経変性条件下で、免疫系が決定的な役割を果たすことを観察した。このようにして、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／６００２１に記載されるように、神経系（ＮＳ）の抗原を認識する活性化されたＴ細胞が神経再生を促進するか、又は神経保護を付与することが見出された。より詳細には、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）に反応性であるＴ細胞が、部分的に破砕された視神経（Ｍｏａｌｅｍら、１９９９）及び脊髄損傷（Ｈａｕｂｅｎら、２０００）のラットモデルにおいて、神経保護的であることが示された。最近まで、免疫系は、神経系修復に関与することから免疫細胞を除外すると考えられてきた。ＮＳ特異的活性化Ｔ細胞が、神経再生を促進し、又はＣＮＳ若しくはＰＮＳの損傷若しくは疾患によって引き起こされる損傷に続き得る二次的な変性から神経系組織を保護するために使用され得ることを発見することはまったく驚きであった。
【０００９】
本発明者らによって、ＣＮＳにおけるストレス条件が、そのストレスに対応する適応性の免疫応答を抑制すること、及びこの応答が遺伝子によって制御されていることがさらに観察された。したがって、視神経の破砕的損傷又は毒性投薬量のグルタミン酸の硝子体内注入後の成体マウス又はラットにおける網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の生存率は、感受性の系統においてよりも、ＣＮＳ自己免疫疾患に対して抵抗性である系統において２倍まで高いことが示された。この違いは、抵抗性の系統においてＣＮＳ損傷後に自発的に進化したが、感受性系統では進化しなかった、有益な自己免疫Ｔ細胞応答に起因し得ることが見出された。したがって、自己に対して指向されるＴ細胞応答が惹起される場合に、それが十分に調節されるならば、このような損傷の結果としてのニューロンの生存率はより高い。換言すれば、保護的自己免疫応答が、損傷の結果から動物を保護するためにストレス条件に対抗して惹起されることが実証された。このような応答を調節するための能力が損なわれた動物において、又は成熟Ｔ細胞を欠く動物（出生時に胸腺摘出を受けた結果として）において、ストレス条件に対処する能力が減少することがさらに観察された。結果として、これらの動物におけるＣＮＳ損傷後のニューロンの生存率は、保護的自己免疫Ｔ細胞応答媒介応答を備えるための有効なメカニズムが与えられている動物よりも有意に低い（Ｋｉｐｎｉｓら、２００１）。
【００１０】
本発明者らの研究室におけるより最近の研究は、自己免疫神経保護が、ＣＮＳ損傷が起こるときに呼び覚まされる身体の生理学的防御メカニズムであることを示した（Ｋｉｐｎｉｓら、２００１；Ｙｏｌｅｓら、２００１）。本発明者らは、増加したＩＯＰに対する抵抗性が系統間で異なること（Ｂａｋａｌａｓｈら、２００２）、及びこの違いが、有益な結果を伴う、自己免疫応答を抑制する能力に関連付けられていることを実証した。本発明者らはさらに、成熟Ｔ細胞の非存在下において（新生児胸腺摘出を通して）、ＩＯＰの上昇に対する相対的な抵抗性がその有益な形質を喪失し、そして逆に、抵抗性系統からの脾細胞がＭＨＣが適合した感受性系統に受動的に移動される場合、神経保護効果が再開されることを示した（Ｂａｋａｌａｓｈら、２００２）。本発明者らのグループによって、Ｔ細胞を用いる受動性ワクチン接種もまた、急性損傷（例えば、部分的な視神経粉砕又は脊髄挫傷）において有効であることがさらに示された（Ｋｉｐｎｉｓら、２００１；Ｍｏａｌｅｍら、１９９９）。
【００１１】
損傷状態からニューロンを保護する手段としてこのような抗自己応答を追加免疫するための試みは、ワクチン接種抗原が病変の部位に存在する化合物から誘導されるはずであることを明らかにした。したがって、眼において最も豊富なペプチドである光受容体間結合タンパク質（ＩＲＢＰ）（Ｂａｋａｌａｓｈら、２００２；Ｍｉｚｒａｈｉら、２００２）に由来する自己抗原の使用は、感受性系統と抵抗性系統の両方においてＲＧＣ保護を生じた。対照的に、視神経に付随するミエリン中に存在する化合物に由来するペプチドの使用は、ＩＯＰ上昇損傷を患う網膜神経節細胞に対しては利点をもたらさなかった。
【００１２】
自己免疫疾患を誘発するリスクを伴うことなく免疫系に追加免疫する、緑内障のためのワクチン接種を設計することを試みて、本発明者らはコポリマー１に焦点を当てることを選択し、そしてこれが、アジュバントとともに与えられた場合に緑内障のために神経保護的であることを示した（Ｂａｋａｌａｓｈら、２００２；Ｓｃｈｏｒｉら、２００１；Ｓｃｈｗａｒｔｚ及びＫｉｐｎｉｓ、２００２；ＷＯ０１／５２８７８；ＷＯ０１／９３８９３）。コポリマー１（Ｃｏｐ−１）は、広範な種々の自己反応性Ｔ細胞と免疫学的に交差反応する。したがって、その活性は、変化されたペプチドリガンド、変化し、かつ結果として病原性を喪失した自己ペプチドの活性を連想させる（ＷＯ０２／０５５０１０；Ｋｉｐｎｉｓ及びＳｃｈｗａｒｔｚ、２００２）。
【００１３】
コポリマー１（Ｃｏｐ１又は酢酸グラチラマーとも呼ばれる）は、それぞれ、０．１４１、０．３３８、０．４２７、及び０．０９５の平均分子画分を有する４アミノ酸：Ｌ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ｌｙｓ、Ｌ−Ａｌａ、及びＬ−Ｔｙｒから構成され、かつ４，７００から１１，０００の平均分子量を有する非病原性合成ランダムコポリマーである。酢酸グラチラマーの商標名、ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標）（Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．、Ｐｅｔａｃｈ  Ｔｉｋｖａ、Ｉｓｒａｅｌの商標）は、多発性硬化症の治療のために現在多くの国々において認可されている薬物である。これは、耐容性が十分に良好であり、有害な反応はほんのわずかである。摂取又は吸入によるＣｏｐ１を用いる治療は、米国特許第６，２１４，７９１号に開示されているが、Ｃｏｐ１の多発性硬化症患者への唯一の投与経路は、毎日の皮下注射による。
【００１４】
最近、動物モデルにおいて、Ｃｏｐ１がいくつかのさらなる障害のために有益な効果を提供することが見出された。したがって、Ｃｏｐ１は骨髄移植の場合における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）において（Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、１９９６；米国特許第５，８５８，９６４号）、並びに固形臓器移植の場合における移植拒絶において（Ａｈａｒｏｎｉら、２００１）現れる免疫拒絶を抑制する。自己免疫疾患を治療するためのＣｏｐ１及びＣｏｐ１関連コポリマー及びペプチドは、ＷＯ００／０５２５０に開示されている。
【００１５】
本出願人らのＷＯ０１／５２８７８及びＷＯ０１／９３８９３は、Ｃｏｐ１、Ｃｏｐ１関連ペプチド及びポリペプチド、並びにそれで活性化されたＴ細胞が、ＣＮＳ細胞をグルタミン酸毒性から保護し、そしてＣＮＳ及びＰＮＳにおいて神経変性を予防若しくは阻害するか、又は神経再生を促進することを開示する。ＷＯ０１／９３８２８は、Ｃｏｐ１がＣＮＳ障害の治療のために使用され得ることを開示する。これらの刊行物のいずれもが、Ｃｏｐ１を含む点眼剤の投与による免疫化を開示していない。
【００１６】
生ウイルス又は感染性因子からの免疫原性タンパク質をコードする組換えＤＮＡを含む点眼剤としての投与のための家禽ワクチンは、鳥類動物におけるウイルス疾患の予防のために記載されている（Ｍｕｋｉｂｉ−Ｍｕｋａら、１９８４；Ｓｈａｒｍａ、１９９９；Ｒｕｓｓｅｌｌ及びＭａｃｋｉｅ、２００１）。
【００１７】
このセクション又は本願の任意の他の部分におけるいかなる参考文献の引用又は照合も、このような参考文献が本発明に対する先行技術として利用可能であることを認めるものとして解釈されるべきではない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
ここで、本発明に従って、コポリマー１が、点眼ワクチンとして投与された場合に、急性又は慢性の眼圧（ＩＯＰ）上昇によって誘導される死に対して、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の保護によって例示されるように、ＣＮＳ又はＰＮＳにおける神経保護のために必要とされる全身性Ｔ細胞依存性免疫応答を誘発することが見出された。
【００１９】
したがって、１つの態様において、本発明は、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンに関する。
【００２０】
別の態様において、本発明は、点眼ワクチンの製造のための、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤の使用に関する。
【００２１】
本発明の点眼ワクチンは、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系（ＰＮＳ）における損傷、疾患、障害、又は状態によって引き起こされる神経変性を治療するため、ＣＮＳにおいて一次損傷に続き得る二次神経変性を予防又は阻害するため、損傷、疾患、障害、又は状態の後でＣＮＳ又はＰＮＳにおいて神経再生を促進するため、或いはグルタミン酸毒性からＣＮＳ及びＰＮＳの細胞を保護するための神経保護のための、哺乳動物（特にヒト）の治療的免疫のために特に有用である。
【００２２】
さらなる態様において、本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系（ＰＮＳ）における損傷、疾患、障害、又は状態によって引き起こされる神経変性を治療するため、ＣＮＳにおいて一次損傷に続き得る二次神経変性を予防又は阻害するため、損傷、疾患、障害、又は状態の後でＣＮＳ又はＰＮＳにおいて神経再生を促進するため、或いはグルタミン酸毒性からＣＮＳ及びＰＮＳの細胞を保護するための治療的免疫の方法を提供し、前記方法は、必要のある個体を、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンで、個体における前記損傷、疾患、障害、又は状態によって引き起こされる前記神経変性を治療、予防、又は阻害するために有効な量で免疫する工程を包含する。
【００２３】
本発明の点眼ワクチンにおいて、活性薬剤は、いかなるアジュバントも伴わずに、例えば、生理食塩水又はリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で投与され得、又はこれは、サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、又はＩＦＮ−γ）などのような可溶性アジュバントとともに投与され得る。
【００２４】
最も好ましい実施形態において、本発明の点眼ワクチンの活性薬剤はコポリマー１である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
本明細書中で使用される場合、用語「コポリマー１」、「Ｃｏｐ１」、「Ｃｏｐ−１」、又は「酢酸グラチラマー」は各々交換可能に使用される。
【００２６】
本発明の目的のために、「Ｃｏｐ１又はＣｏｐ１関連ペプチド、又はＣｏｐ１関連ポリペプチド」は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）と機能的に相互作用し、かつ抗原提示においてＭＨＣクラスＩＩ上のＭＢＰと競合することができるランダムコポリマーを含む任意のペプチド又はポリペプチドを含むことが意図される。
【００２７】
本発明の点眼ワクチン中の活性薬剤としての使用のためのコポリマーは、適切な量の正に荷電したアミノ酸（例えばリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）など）を含み、負に荷電したアミノ酸（例えばグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ））（好ましくはより少ない量で）と組み合わせ、選択的に、賦形剤として役立つ非荷電中性アミノ酸（例えばアラニン（Ａ）又はグリシン（Ｇ））と組み合わせ、及び場合によっては、コポリマーに免疫原性特性を付与するように適合されたアミノ酸（例えばチロシン（Ｙ）又はトリプトファン（Ｗ）のような芳香族性アミノ酸）と組み合わせたランダムコポリマーであり得る。
【００２８】
本発明における使用のためのコポリマーは、Ｌ型アミノ酸又はＤ型アミノ酸、又はそれらの組み合わせから構成され得る。当業者によって公知であるように、Ｌ−アミノ酸は大部分の天然タンパク質に存在する。しかし、Ｄ−アミノ酸は市販されており、本発明において使用されるコポリマーを作製するために使用されるいくつか又はすべてのアミノ酸の代わりに置換され得る。本発明は、Ｄアミノ酸とＬアミノ酸の両方を含むコポリマー、並びにＬアミノ酸又はＤアミノ酸のいずれかから本質的になるコポリマーの使用を意図する。
【００２９】
１つの実施形態において、本発明における使用のための活性薬剤は、少なくとも１つのランダムな３アミノ酸又は４アミノ酸のコポリマーを含み、このコポリマーは以下の４つの群：（ａ）リジン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ）；（ｂ）グルタミン酸（Ｅ）及びアスパラギン酸（Ｄ）；（ｃ）アラニン（Ａ）及びグリシン（Ｇ）；並びに（ｄ）チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）の各々から選択される１つのアミノ酸を含む。
【００３０】
１つの好ましい実施形態において、本発明のコポリマーは、正味の全体の正電荷のアミノ酸チロシン、グルタミン酸、アラニン、及びリジンの組み合わせ（本明細書中ではポリＹＥＡＫと呼ぶ）を含み、最も好ましくは、本発明のコポリマーは、以下のモル比のアミノ酸のコポリマー１である：約０．１４グルタミン酸、約０．４３アラニン、約０．１０チロシン、及び約０．３４リジン。これは、約１５から約１００まで、好ましくは約４０から約８０までのアミノ酸長のポリペプチドである低分子量又は高分子量のコポリマーであり得る。このコポリマーは、約２，０００から４０，０００Ｄａ、好ましくは約２，０００から１３，０００Ｄａ、より好ましくは約４，７００から約１３，０００Ｄａ、最も好ましくは約５，０００から９，０００Ｄａ、及び最も好ましくは約６，０００から８，０００Ｄａの平均分子量を有する。この好ましいコポリマー、Ｃｏｐ１は、最も好ましくは、一般名が酢酸グラチラマーで知られるその酢酸塩の形態である。好ましい分子量範囲及びＣｏｐ１の好ましい型を製造するためのプロセスは米国特許第５，８００，８０８号に記載され、その全体の内容は、あたかも本明細書中に全体が開示されるかのように、その全体が参照により本明細書に援用される。
【００３１】
これは例示のみの手段で与えられること、及び活性薬剤が構成成分及び構成成分の相対的な比率の両方に関して変化され得、したがって、Ｃｏｐ１とは異なるポリＹＥＡＫコポリマーを得ることは明白である。
【００３２】
別の実施形態において、本発明の点眼ワクチンの活性薬剤は、群（ａ）から（ｄ）の各々異なる１つからの、４つの異なるアミノ酸を含むランダムコポリマーであるがＣｏｐ１以外の、Ｃｏｐ１−関連ポリペプチドである。コポリマー１によって示される活性は、以下の置換の１つ又はそれ以上がコポリマーのアミノ酸組成においてなされる場合に残存することが予測される：グルタミン酸（Ｅ）の代わりにアスパラギン酸（Ｄ）、アラニン（Ａ）の代わりにグリシン（Ｇ）、リジン（Ｋ）の代わりにアルギニン（Ｒ）、及びチロシン（Ｙ）の代わりにトリプトファン（Ｗ）。
【００３３】
したがって、別の実施形態において、本発明のＣｏｐ１−関連ポリペプチドは、ＷＯ００／０５２５０（その全体の内容は、あたかも本明細書中に全体が開示されるかのように、本明細書中に参照により本明細書に援用される）に開示されるコポリマーのいずれか、並びに、他のコポリマー、例えば、多発性硬化症の治療のための候補としてＦｒｉｄｋｉｓ−Ｈａｒｅｌｉら（２００２）によって記載されるランダム４アミノ酸コポリマー、すなわち、アミノ酸フェニルアラニン、グルタミン酸、アラニン、及びリジンを含むか（ポリＦＥＡＫ）、又はチロシン、フェニルアラニン、アラニン、及びリジンを含む（ポリＹＦＡＫ）コポリマー（１４マー、３５マー、及び５０マー）、並びにＣｏｐ１に類似の汎用的な抗原と見なされ得る、発見されるべき任意の他の類似のコポリマーを含み得る。
【００３４】
別の実施形態において、本発明のＣｏｐ１関連ポリペプチドは群（ａ）から（ｄ）の３つの群の各々異なる１つからの、異なる３つのアミノ酸の組み合わせを含むコポリマーである。これらのコポリマーは本明細書中でターポリマーといわれる。より好ましい実施形態において、ターポリマーのアミノ酸のモル画分は、ほぼコポリマー１のために好ましいものである。
【００３５】
１つの実施形態において、本発明における使用のためのターポリマーは、チロシン（Ｙ）、アラニン（Ａ）、及びリジン（Ｋ）を含み、本明細書中以下でポリＹＡＫと呼ばれる。これらのターポリマー中のアミノ酸の平均モル画分は変化し得る。例えば、チロシンは約０．００５から０．２５０のモル画分で存在し得；アラニンは約０．３から０．６のモル画分で存在し得；そしてリジンは約０．１から０．５のモル画分で存在し得るが、好ましくは、チロシン、アラニン、及びリジンのモル比は、約０．１０対約０．５４対約０．３５である。ポリＹＡＫの平均分子量は約２，０００から４０，０００Ｄａ、好ましくは約３，０００から３５，０００Ｄａ、より好ましくは約５，０００から２５，０００Ｄａである。リジン（Ｋ）の代わりにアルギニン（Ｒ）、アラニン（Ａ）の代わりにグリシン（Ｇ）、及び／又はチロシン（Ｙ）の代わりにトリプトファン（Ｗ）に置換することが可能である。
【００３６】
別の実施形態において、本発明における使用のためのターポリマーは、チロシン（Ｙ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びリジン（Ｋ）を含み、本明細書中以下でポリＹＥＫと呼ばれる。これらのターポリマー中のアミノ酸の平均モル画分は変化し得る：グルタミン酸は約０．００５から０．３００のモル画分で存在し得、チロシンは約０．００５から０．２５０のモル画分で存在し得、そしてリジンは約０．３から０．７のモル画分で存在し得るが、好ましくは、グルタミン酸、チロシン、及びリジンのモル比は、約０．２６対約０．１６対約０．５８である。ポリＹＥＫの平均分子量は約２，０００から４０，０００Ｄａ、好ましくは約３，０００から３５，０００Ｄａ、より好ましくは約５，０００から２５，０００Ｄａである。リジン（Ｋ）の代わりにアルギニン（Ｒ）、グルタミン酸（Ｅ）の代わりにアスパラギン酸（Ｄ）、及び／又はチロシン（Ｙ）の代わりにトリプトファン（Ｗ）に置換することが可能である。
【００３７】
さらなる実施形態において、本発明における使用のためのターポリマーは、リジン（Ｋ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアラニン（Ａ）を含み、本明細書中以下でポリＫＥＡと呼ばれる。これらのポリペプチド中のアミノ酸の平均モル画分もまた変化し得る。例えば、グルタミン酸は約０．００５から０．３００のモル画分で存在し得、アラニンは約０．００５から０．６００のモル画分で存在し得、そしてリジンは約０．２から０．７のモル画分で存在し得るが、好ましくは、グルタミン酸、アラニン、及びリジンのモル比は、約０．１５対約０．４８対約０．３６である。ＹＥＫの平均分子量は約２，０００から４０，０００Ｄａ、好ましくは約３，０００から３５，０００Ｄａ、より好ましくは約５，０００から２５，０００Ｄａである。リジン（Ｋ）の代わりにアルギニン（Ｒ）、グルタミン酸（Ｅ）の代わりにアスパラギン酸（Ｄ）、及び／又はアラニン（Ａ）の代わりにグリシン（Ｇ）に置換することが可能である。
【００３８】
さらに別の実施形態において、本発明における使用のためのターポリマーは、チロシン（Ｙ）、グルタミン酸（Ｅ）、及びアラニン（Ａ）を含み、本明細書中以下でポリＹＥＡと呼ばれる。これらのポリペプチド中のアミノ酸の平均モル画分は変化し得る。例えば、チロシンは約０．００５から０．２５０のモル画分で存在し得、グルタミン酸は約０．００５から０．３００のモル画分で存在し得、そしてアラニンは約０．００５から０．８００のモル画分で存在し得るが、好ましくは、グルタミン酸、アラニン、及びチロシンのモル比は、約０．２１対約０．６５対約０．１４である。ポリＹＥＡの平均分子量は約２，０００から４０，０００Ｄａ、好ましくは約３，０００から３５，０００Ｄａ、及びより好ましくは約５，０００から２５，０００Ｄａである。チロシン（Ｙ）の代わりにトリプトファン（Ｗ）、グルタミン酸（Ｅ）の代わりにアスパラギン酸（Ｄ）、及び／又はアラニン（Ａ）の代わりにグリシン（Ｇ）に置換することが可能である。
【００３９】
ターポリマーは、例えば、上記に言及した公開特許ＷＯ０１／５２８７８及びＷＯ０１／９３８９３において記載されるような、当業者に利用可能な任意の手順によって作製され得る。
【００４０】
ＭＳ結合したＨＬＡ−ＤＲ分子に対するＣｏｐ１の結合モチーフが知られているので、固定された配列のポリペプチドが容易に調製され得、そしてＦｒｉｄｋｉｓ−Ｈａｒｅｌｉら（１９９９）において記載されるようなＨＬＡ−ＤＲ分子のペプチド結合溝への結合について試験され得る。このようなペプチドの例はＷＯ００５２４９（その全体の内容は、あたかも本明細書中に全体が開示されるかのように、参照により本明細書に援用される）に開示されているものである。前記出願において具体的に開示されている３２のペプチドが、本明細書中以下の表１において再現されている（配列番号：１から３２まで）。これらは、４種のアミノ酸アラニン、グルタミン酸、リジン、及びチロシンを含むか（ペプチド２、３、５から３２）、又は３種のアミノ酸アラニン、リジン、及びチロシンのみ（ペプチド１、４）を含む１５マーペプチドである。このようなペプチド及び他の類似のペプチドは、Ｃｏｐ１と類似の活性を有することが予測され、そして本発明のＣｏｐ１関連ペプチド又はＣｏｐ１関連ポリペプチドの定義に含まれる。
【００４１】
【表１】
0005291878.tif 000002
【００４２】
本発明は、１つの態様において、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む、点眼ワクチンに関する。
【００４３】
別の態様において、本発明は、点眼ワクチンの製造のための、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤の使用に関する。
【００４４】
１つの実施形態において、本発明の点眼ワクチンは、任意の適切なキャリア（例えば、生理食塩水又はＰＢＳ）中に溶解された活性薬剤を含み、いかなるアジュバントも伴わない。
【００４５】
別の実施形態において、本発明の点眼ワクチンは、適切な可溶性アジュバント（例えば、例示されるような可溶性サイトカイン、サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、又はＩＦＮ−γであるがこれらに限定されない）とともに活性薬剤を含む。
【００４６】
本発明はさらに、必要のある個体を、前記個体に神経保護を与えるために有効な量で、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンを用いて免疫する工程を包含する、神経保護のための治療的免疫の方法に関する。
【００４７】
１つの実施形態において、本発明は、必要のある個体を、ＣＮＳ又はＰＮＳにおける損傷によって引き起こされる神経変性を治療するための治療的免疫の方法を提供し、この方法は、前記個体における損傷によって引き起こされる神経変性を治療するのに有効な量で、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンを用いて免疫する工程を包含する。
【００４８】
別の実施形態において、本発明は、ＣＮＳにおいて一次損傷に続き得る二次神経変性を予防又は阻害するための治療的免疫の方法を提供し、この方法は、必要のある個体を、前記個体のＣＮＳにおける一次損傷に続き得る神経変性を予防又は阻害するために有効な量で、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンを用いて免疫する工程を包含する。
【００４９】
さらなる実施形態において、本発明は、損傷の後でＣＮＳ又はＰＮＳにおいて神経再生を促進するための治療的免疫の方法を提供し、この方法は、必要のある個体を、損傷後の前記個体のＣＮＳ又はＰＮＳにおける神経再生を促進するために有効な量で、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンを用いて免疫する工程を包含する。
【００５０】
ＣＮＳ又はＰＮＳにおける任意の損傷（例えば、脊髄損傷、鈍的外傷、穿通性外傷、脳の直撃若しくは対側衝撃、出血性脳卒中、及び虚血性脳卒中であるがこれらに限定されない）が本発明に従って治療され得る。
【００５１】
なお別の実施形態において、本発明は、ＣＮＳ又はＰＮＳにおいて疾患、障害、又は状態によって引き起こされる神経変性を治療するための治療的免疫の方法に関し、この方法は、必要のある個体を、前記個体のＣＮＳ又はＰＮＳにおける疾患、障害、又は状態によって引き起こされた神経変性を治療するために有効な量で、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンを用いて免疫する工程を包含する。
【００５２】
なおさらなる実施形態において、本発明は、疾患、障害、又は状態の後でＣＮＳ又はＰＮＳにおいて神経再生を促進するための治療的免疫の方法に関し、この方法は、必要のある個体を、前記個体におけるＣＮＳ又はＰＮＳの疾患、障害、又は状態の後で必要とされるＣＮＳ又はＰＮＳにおける神経再生を促進するために有効な量で、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンを用いて免疫する工程を包含する。
【００５３】
なおさらなる実施形態において、本発明は、グルタミン酸毒性からＣＮＳ及びＰＮＳの細胞を保護するための治療的免疫の方法に関し、この方法は、必要のある個体を、前記個体におけるＣＮＳ又はＰＮＳの細胞をグルタミン酸毒性から保護するために有効な量で、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、及びコポリマー１関連ポリペプチドからなる群より選択される活性薬剤を含む点眼ワクチンを用いて免疫する工程を包含する。
【００５４】
本発明に従って治療され得る疾患、障害、及び状態の間には以下のものがあるがこれらに限定されない：アルツハイマー病を含む老人性痴呆症、パーキンソン病を含むパーキンソン症候群、顔面神経麻痺（ベル麻痺）、ハンティングトン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症を含む運動ニューロン疾患、クロイツフェルト−ヤーコブ病を含むプリオン病、アルパーズ病、バッテン病、コケーン症候群、レヴィー小体病、てんかん重積持続状態、手根管症候群、椎間板ヘルニア、ビタミンＢ欠乏などのビタミン欠乏、てんかん、記憶喪失、不安、痛覚過敏、精神病、発作、酸化的ストレス、アヘン耐性及びアヘン依存性、多発性硬化症（ＭＳ）などの自己免疫疾患、又はアミロイド多発性神経障害などの疾患に関連する末梢性神経障害、糖尿病性神経障害、尿毒症性神経障害、ポルフィリン症性多発性神経障害、低血糖症、シェーグレン−ラルソン症候群、急性感覚性神経障害、慢性運動失調性神経障害、胆汁性肝硬変、原発性アミロイドーシス、閉塞性肺疾患、先端巨大症、吸収不良症候群、真性赤血球増加症、ＩｇＡガンマパシー及びＩｇＧガンマパシー、ニトロフラントイン、メトロニダゾール、イソニアジドなどの種々の薬物及びアルコール又は有機リン酸などの毒素の合併症、シャルコー−マリー−ツース病、毛細血管拡張性運動失調、フリートライヒ運動失調、副腎脊髄神経障害、巨大軸索神経障害、レフサム病、ファブリー病、リポタンパク質症、非動脈炎性眼神経障害、年齢関連黄斑変性、網膜変性などの網膜障害、又は緑内障などの異常上昇した眼圧と関連する疾患。
【００５５】
発明の背景のセクションにおいて言及したように、本発明者らは、１９９６年に、おそらく緑内障において、神経系に対する任意の損傷又はＣＮＳの任意の神経変性疾患におけるのと同様に、第１の事象（例えば、圧力上昇）を見逃した神経に影響を与える変性の進行中のプロセスが存在することを示唆した（Ｓｃｈｗａｒｔｚら、１９９６）。このプロセスは、第１の事象の結果として表れた化合物によって、又は第１の危険因子の結果としての損失によって媒介され、これらのすべてが初期の侵襲に隣接するニューロンに敵対的な環境を作り出す（Ｓｃｈｗａｒｔｚら、１９９６；Ｓｃｈｗａｒｔｚ及びＹｏｌｅｓ、２０００ａ及び２０００ｂ）。このようなプロセスが緑内障において起こり得るという認識によって、所定の時間施術すると変性の進行を停止し得る治療の探索は助長された。
【００５６】
確かに、１９９６年以来、これらのメディエーターをブロック、回避、若しくは除去する方法を見出すため、又はすでに変性したニューロンによって作られる敵対的環境に対して残りのニューロンをより耐容性にする方法を見出すために、毒性のメディエーターを同定する試みが世界的規模でなされている。
【００５７】
本発明者らのグループは、約４年前に、損傷した視神経又は損傷した網膜が全身性の免疫系にストレスシグナルを送達し、そしてストレスの部位に存在する豊富な抗原に対して指向されるＴ細胞応答の誘発を導くことによってその補助を補充することを見出した。免疫応答の特異性は傷害の部位にＴ細胞を運ぶための方法である。一旦活性化すると、このようなＴ細胞は、局所的に、小神経膠細胞、星状細胞、及びおそらくニューロンにさえ影響を与えるサイトカイン及び神経栄養因子の供給源として働く。本発明者らの研究の過程で、本発明者らは、このような免疫応答が、追加免疫される必要のある、外傷におけるような、傷害状態及び疾患状態に対処するために身体を補助する必要が基本的にあることに気付いた（Ｍｏａｌｅｍら、１９９９；Ｓｃｈｏｒｉら、２００１及び２００２；Ｋｉｐｎｉｓら、２０００）。
【００５８】
本発明者らは、その敵対的な環境から損傷した神経を保護するために必要とされるＴ細胞依存性免疫応答を首尾よく追加免疫するいくつかの方法を見出した。リスクのない保護は、広いスペクトルの自己抗原と、低いアフィニティーで交差反応する化合物の使用によって見出された。このような化合物の１つはコポリマー１すなわち酢酸グラチラマーである。この化合物は、多発性硬化症の患者のために認可された薬物であり、したがって、自己免疫疾患を引き起こすリスクを有しないという大きな利点を有する（Ｓｃｈｏｒｉら、２００１及び２００２；Ｋｉｐｎｉｓら、２０００）。
【００５９】
本発明者らの以前の特許出願ＷＯ０１／５２８７８及びＷＯ０１／９３８９３において記載されたように、アジュバント中で乳化されたコポリマー１は、ＩＯＰ上昇の慢性モデルにおいてＩＯＰ上昇に対してＲＧＣについて保護的であることが見出された。本発明で、本発明者らは、Ｃｏｐ−１が十分に強力であり、したがって、ＩＯＰの急性モデルと慢性モデルの両方においてＩＯＰの結果に対して有効に保護し得る強烈な免疫応答を誘発し得ることを議論する。興味深いことに、Ｃｏｐ−１は、慢性ＭＳ病のために使用されるレジメン（すなわち、毎日の反復注射）において投与される場合に、単回注射の利点を相殺し、自己免疫疾患及び神経変性疾患についての要件が異なっているとの主張を立証する（Ｓｃｈｗａｒｔｚ及びＫｉｐｎｉｓ、２００２；Ｋｉｐｎｉｓ及びＳｃｈｗａｒｔｚ、２００２）。前者は抑制を必要とするが、後者は免疫活性化を必要とし、両者は一方が免疫調節のアプローチを取る場合に合致し得る。
【００６０】
本願の実験において明らかとなった別の特徴は、慢性高ＩＯＰに付随するＲＧＣ損失の場合において、介入が疾患の進行を停止する際の任意の時点で有効であることである。ＩＯＰの慢性モデルにおいて、相互作用が０日目よりも７日目でより有効であったという事実は、ＩＯＰの上昇が高すぎて死がはるかにより早く起こる急性モデルにおけるのとは異なり、ＲＧＣの損失が圧力の上昇後すぐには開始されないことを示唆する。
【００６１】
Ｃｏｐ−１を用いるワクチン接種による保護は、薬物Ｃｏｐ−１それ自体によっては媒介されないが、それが誘発する免疫応答によって媒介されることが、Ｔ細胞枯渇動物において効果が観察されない場合に明らかになった。このことは、身体からのそのクリアランスが早く、薬物を保持する必要が存在する薬理学的化合物にはよくあるような、免疫保護のために薬物の毎日の投与の必要性がなぜ存在しないかを説明する。しかし、化合物の投与は、進行している変性からの保護のために必要とされるＴ細胞の最適レベルを保持するために定期的に必要とされる。
【００６２】
Ｃｏｐ−１が緑内障において保護的である方法は、Ｔ細胞応答を誘発することを通してである。誘発されたＴ細胞は眼に向かい、ここでこのＴ細胞は眼に存在するのと同じ自己抗原を提示し得る小神経膠細胞と接触し、このＴ細胞はその小神経膠細胞と相互作用し得る。活性化されたＴ細胞は、保護のために必要とされるサイトカイン及び神経栄養性因子の供給源である。本発明者らのインビトロ研究は、活性化されたＴ細胞が、ストレスに対処し得る小神経膠細胞中の遺伝子のクラスター、及びまた、それらの緩衝性活性と関連する遺伝子をアップレギュレートし得ることを示唆した。
【００６３】
他の研究は、眼における毒性化合物を中和し得る化合物が、緑内障のための治療として潜在的に開発され得ることを明らかにした。このような化合物の中には、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ＮＯシンテターゼインヒビターがある。緑内障は任意の他の神経変性疾患と同様に単一の化合物の疾患ではないので、全体的な保護を得るためにはいくつかの薬剤を組み合わせなくてはならないことが示唆される。本発明に従うワクチン接種の利点は、それが身体自体のストレスを除去する方法を刺激すること、及びそれが、部位特異的であるが損傷特異的でない免疫細胞の活性を誘発し、したがって、広範な脅威から保護し得るという事実にある。
【００６４】
本発明に従って、Ｃｏｐ１点眼剤を用いる単回治療が、急性又は慢性の緑内障ラットモデルにおけるＩＯＰ誘導性ＲＧＣ損失に対してＲＧＣを保護する際の有効な治療として見出された。動物に注射された場合にＣｏｐ１の神経保護効果を示す本発明者らによる以前の刊行物を考慮すると、Ｃｏｐ１が点眼剤として投与された場合に全身的に神経保護を付与することを発見することは非常に驚きであった。
【００６５】
本発明の１つの好ましい実施形態において、コポリマー１、コポリマー１関連ペプチド、又はコポリマー１関連ポリペプチドを含む点眼ワクチンは、緑内障を治療するため、すなわち、緑内障、視神経の神経変性疾患の進行を阻止するために使用される。上記に言及したように、眼圧（ＩＯＰ）の上昇は、しばしば慢性又は急性の緑内障と関連する。しかし、非常に頻繁に、圧力の減少は疾患の進行を停止するために不十分である。自己破壊の要素は、疾患進行と関連することが見出されている。ここで本発明者らは、点眼剤中に（又は比較のために、皮下的に）与えられるＣｏｐ１を用いる単回ワクチン接種が、ＩＯＰ誘導性損失からＲＧＣをレスキューするために十分であることを示す。さらに、本発明者らは、疾患の慢性モデルにおいて、遅延処理（７日）がＩＯＰの慢性モデルにおいてすぐの治療と同程度に有効であることを見出した。点眼剤を用いて又は全身的にのいずれかでの治療が、直接的には有効ではないが免疫媒介性であることの証拠が提供される。Ｔ細胞枯渇した動物において効果は達成されないが、しかし、点眼効果は、眼において眼圧が上昇した側に対して対側性に与えられた場合に達成される。免疫化の結果及び経路は、臨床的な発生のために直接的に実施され得る。
【００６６】
本発明に従って、本発明の活性薬剤としての使用のための好ましいコポリマーはＣｏｐ１であり、最も好ましくは一般名酢酸グラチラマーの下で知られるその酢酸塩の形態である。投与されるＣｏｐ１の投薬量は、患者の年齢及び疾患の段階に従って医師によって決定され、これは０．１ｍｇから１，０００ｍｇの範囲、好ましくは１０ｍｇから８０ｍｇの範囲、より好ましくは２０から６０ｍｇの範囲から選択され得るが、任意の他の適切な投薬量が本発明によって含まれる。
【００６７】
多発性硬化症の患者のために、投与は、１回又は複数回の投与で毎日行われ得、好ましくは、合計０．１ｍｇから１，０００ｍｇで１回から３回の毎日の用量、好ましくは１０ｍｇから８０ｍｇの範囲内、より好ましくは２０ｍｇから６０ｍｇであり、又は隔日で投与されるが、任意の他の適切な投薬量が、患者の状態に従って本発明によって想定される。多発性硬化症以外の患者のために、Ｃｏｐ１の投薬量は、定期的な頻度で上記に示されたように、例えば、少なくとも１週間に１回、又は少なくとも１カ月に１回まで、又は２カ月若しくは３カ月毎に少なくとも１回まで、又はより少ない頻度であるが、しかし免疫化の間の任意の他の適切な間隔が、患者の状態に従って本発明によって想定される。
【００６８】
以下の実施例は、本発明の特定の特徴を例証するが、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００６９】
（実施例）
材料及び方法
（ｉ）動物。純系成体雄性Ｌｅｗｉｓラット及びＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（ＳＰＤ）ラット（８週齢；平均体重３００ｇ）はＡｎｉｍａｌ  Ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒ  ａｔ  Ｔｈｅ  Ｗｅｉｚｍａｎｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｒｅｈｏｖｏｔ、Ｉｓｒａｅｌ）によって供給された。ラットを光及び温度制御室で維持し、各実験前に齢及び体重について一致させた。すべての動物を、ＩＡＣＵＣ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって作成された規則に従って取り扱った。
【００７０】
（ｉｉ）慢性的な高い眼圧（ＩＯＰ）の誘導。水分の流出の閉塞はＩＯＰの増大を引き起こし、これは、ＲＧＣの死を生じる（Ｂａｋａｌａｓｈら、２００２；Ｓｃｈｏｒｉら、２００１；Ｊｉａら、２０００ａ：Ｌｅｖｋｏｖｉｔｃｈ−Ｖｅｒｂｉｎら、２００２）。ＩＯＰの増加は以下のようにしてラットの右眼において達成した。ラットを、塩酸ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）及び塩酸キシラジン（０．５ｍｇ／ｋｇ）の筋肉内注射によって深く麻酔した。青−緑アルゴンレーザー放射を放出するスリットランプ（Ｈａａｇ−Ｓｔｒｅｉｔ、Ｋｏｅｎｉｚ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して、麻酔したラットの右眼を、４つの強膜上静脈のうちの３つに対して方向付けられた８０から１２０の適用で、及び縁叢（ｌｉｍｂａｌ  ｐｌｅｘｕｓ）の２７０°に向かって処理した。レーザービームを１Ｗの出力で０．２秒適用し、強膜上静脈に１００μｍ、及び縁叢に５０μｍのスポットサイズを作った。１週間後の２回目のレーザーセッションにおいて、すべての適用においてスポットサイズが１００μｍであったこと以外は同じパラメーターを使用した。放射は４つすべての強膜上静脈に対して、縁叢の３６０°に方向付けられた（Ｓｃｈｏｒｉら、２００１）。
【００７１】
（ｉｉｉ）急性の高い眼圧の誘導。ＩＯＰの増加を、深く麻酔した（塩酸ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）及び塩酸キシラジン（０．５ｍｇ／ｋｇ）、筋肉内注射）ラットの右眼において、ポリエチレンチューブに接続された３０ゲージ針を挿入すること及び１バッグの生理食塩水（０．９％）注入によって達成した。注入バッグをラットの頭部の１メートル上に配置し、閉ループ循環を作製した。高いＩＯＰを、針が眼から取り除かれかつ穴がそれ自体でシールされた正確に１時間後に誘導した。
【００７２】
（ｉｖ）眼圧の測定。大部分の麻酔剤はＩＯＰの減少を引き起こし（Ｊｉａら、２０００ｂ）、したがって信頼性のある測定を妨げる。ラットが平穏状態にあった間に正確な圧力測定を得るために、本発明者らは、１０ｍｇ／ｍＬアセプロマジン（ＩＯＰを減少させない鎮静剤）を腹腔内で（ｉ．ｐ．）ラットに注射し、５分後に角膜へのＬｏｃａｌｉｎの適用後、眼圧計（Ｔｏｎｏ−Ｐｅｎ  ＸＬ；Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓ、Ｅｌｌｉｃｏｔｔ  Ｃｉｔｙ、ＭＤ、ＵＳＡ）を用いて両方の眼における圧力を測定した。Ｔｏｎｏ−Ｐｅｎによって測定されたＩＯＰに対する麻酔剤の報告された効果のため（Ｊｉａら、２０００ｂ）、圧力は常にアセプロマジンの注射後同時に測定され、そして各眼から取られた１０回の測定の平均が記録された。測定は、すべて日の同じ時間に、異なる機会に対して（３週間、２日毎）なされた。治療されていない対側性眼はコントロールとして役立った。
【００７３】
（ｖ）ＩＯＰの増加によって引き起こされる網膜損傷の解剖学的評価。親水性神経トレーサー色素デキストランテトラメチルローダミン（ローダミンデキストラン；（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ、ＵＳＡ））を、視神経の眼窩内部分に直接的に適用した。高いＩＯＰで生存し、かつ生きている細胞体を有し機能的であるままである軸索のみが色素を取り込み得、標識されたＲＧＣを実証する。ラットを２４時間後に屠殺し、それらの網膜を切除し、全体をマウントし、そして４％パラホルムアルデヒド中で保存した。ＲＧＣを、蛍光顕微鏡（Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中で８００倍の強度下で計数した。各網膜から４つの視野を計数し、すべてが同じ直径（０．０７６ｍｍ２）を有し、視神経円板から同じ距離であった（Ｋｉｐｎｉｓら、２００１；Ｙｏｌｅｓら、２００１）。処理されていないラットからの眼をコントロールとして使用した。ＲＧＣは、網膜の同一性に対してブラインドであった観察者によって計数された。
【００７４】
（ｖｉ）Ｃｏｐ１及びアジュバントを用いる活性免疫化。ＩＯＰのレーザー誘導増加又は急性ＩＯＰ上昇のいずれかを有するラットを、２．５ｍｇ／ｍｌのＣＦＡ中で乳化した、総量１００μｌのＣｏｐ１（１００μｇ）（Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．、Ｐｅｔａｃｈ  Ｔｉｋｖａ、Ｉｓｒａｅｌ）で免疫した（Ｋｉｐｎｉｓら、２０００）。各動物を、尾の根元で皮下的にワクチン接種した。
【００７５】
（ｖｉｉ）アジュバントを用いない、Ｃｏｐ１を用いる活性免疫化。ＰＢＳ中のＣｏｐ−１を、一次損傷後、異なる濃度及び異なる時点で皮下的に与えた。Ｃｏｐ−１の局所的投与を、２０ｍｇ／ｍｌの濃度でＰＢＳ中に物質を浸漬する後で行った。各滴は５０μｌであったので、本発明者らは、５分毎に１滴、２５分間中に計５滴を投与した。
【実施例１】
【００７６】
Ｃｏｐ−１ワクチン接種はビヒクルなしで与えたときにＩＯＰ誘導性の死からＲＧＣを保護する
以前の研究は、アジュバント中で乳化されたＣｏｐ１がＩＯＰ誘導性のＲＧＣの死に対して保護することを示した。ここで、本発明者らは、その効果が慢性モデルにおいて長期的に持続するか否かを試験した。
【００７７】
動物を、ＩＯＰの片眼性上昇に供し、レーザー治療の日に免疫した（ＩＯＰ上昇を誘導するために）。ラットを、最初のレーザー照射の日にＩＯＰの慢性的上昇に供した。動物を４つの群に分けた：２つの群はＣＦＡ中で乳化したＣｏｐ−１を受容し、そして２つの群はＣＦＡ中のＰＢＳを受容した。１つの群のＣｏｐ−１処理動物から、３週間後に網膜を切除し、そして第２の群はＣｏｐ−１を、２、６、及び９週間後に受容した。この群から、最初のレーザー照射の１２週間後に網膜を切除した。２つのＰＢＳ−ＣＦＡ処理群のうち、１つは最初のレーザー照射の３週間後のＲＧＣ生存について分析し、そして１つはレーザーの２、６、及び９週間後にＰＢＳ−ＣＦＡのさらなる注射を受容し、かつ最初のレーザーの１２週間後に網膜を切除した。結果を図１に示す。３週間後及び１２週間後の生存しているＲＧＣの数の評価は、ＩＯＰ上昇の開始の１２週間後でさえ、コントロールとＣｏｐ−１免疫ラットとＰＢＳ免疫ラットとの間の有意な違いを明らかにした。Ｃｏｐ−１の有益な効果（ＲＧＣ死の％として表現される）は、３週間目（１２．６±５対４５．７±８、ｎ＝７）及び１２週間目（３３．７±１．４対５７．２±６．３、それぞれｎ＝５及び４）で見られた。このように、最初のレーザー照射の１２週間後、３週間目と比較してさらなるＲＧＣの損失が存在した（３週間目の４５．７％から１２週間目までに５７．２０％まで）。それにもかかわらず、ワクチン接種は、最初のレーザーの１２週間後に損失を３３．７％まで減少させた。ある程度の損失は不可避であったが、ある程度の損失は、ＩＯＰが最初に上昇した後１２週間までの長さでさえ保護を受けたようである。
【実施例２】
【００７８】
アジュバントを伴わないＣｏｐ−１免疫化
Ｃｏｐ−１は複数のエピトープを有する高分子量化合物であるので、本発明者らは、それがアジュバントを伴わない場合でさえ免疫原性であり得る可能性を考慮した。
【００７９】
第１の実験において、ラットをＩＯＰ上昇に供し、そしてレーザー治療の最初の日に、種々の投薬量（１００μｇ、２５０μｇ、５００μｇ、及び１０００μｇ）で、アジュバントを含まない異なる投薬量のＣｏｐ−１の皮下注射を受容させた；コントロール動物はＰＢＳを受容した。結果は図２Ａに示され、これは、ラットに皮下注射された５００μｇのＣｏｐ−１を用いて達成され得る最適な効果を示す；より高い投薬量又はより低い投薬量は効果が少なかった。５００μｇで治療された群は、１００μｇで治療した群における４４±６％のＲＧＣ死、及び２５０μｇで治療した群における５０．５±８％のＲＧＣ死と比較して、最大の効果：２６．６±１０％のＲＧＣ死を示した。すべての群において、４から６匹の動物を含めた。
【００８０】
別の実験において、本発明者らはまた、タイミング及び頻度を試験し、ＩＯＰ上昇後７日目での注射が、０日目よりもより効果的であったのに対して、１週間又は毎日のいずれかの間隔での反復注射はより効果が小さいことを見出した。ラットをＩＯＰに供し、そして最初のレーザーの直後（０）、又は１週間後（７）、又は０日目と７日目の両方（０、７）、又は０日目から開始して７日間の連続して毎日（０−７）のいずれかで、アジュバントを含まない５００μｇのＣｏｐ−１を受容させた。コントロール群はＰＢＳを受容した。網膜は３週間後に切除した。結果を図２Ｂに示し、これは、ＲＧＣ死の％が７日目の単回注射を受容した群において最も低く、７日間毎日注射を受容した群において最も高かったことを示す（１９．１±４．７対４１．４±６、ｐ＜０．０１）。
【００８１】
アジュバントを含まないＣｏｐ−１の効果をまた、ＩＯＰが最初に上昇した６週間後に試験した。２回の注射−１回は０日目及び２回目は３週間後−は、３週間後の単回注射よりも効果的であることが見出された。このことは、ワクチン接種が死の動態学と同調するはずであり、これはより効果が低いことを示唆する。ＩＯＰが最初に上昇する３週間後よりも初期に死は開始するので、最初の注射が、ＩＯＰが最初に上昇する３週間後に与えられる場合にはより効果が低い。
【実施例３】
【００８２】
Ｃｏｐ−１効果はＴ細胞依存性である
Ｃｏｐ−１の効果が確かに免疫媒介性であり、かつ局所的薬物として作用しないことを確認するために、本発明者らは、ＩＯＰが上昇した、Ｔ細胞枯渇している動物にＣｏｐ−１を投与した。
【００８３】
第１の実験において、正常成体ラット及びＴ細胞枯渇している成体ラット（出生時に胸腺摘出を受けた結果として）を、ＩＯＰ上昇に供した。ＩＯＰ上昇の直後に、動物は、Ｃｏｐ−１、単回注射、又はＰＢＳ、又は毎日のブリモニジンを受容した。３週間後、網膜を切除し、ＲＧＣを計数した。ＩＯＰ上昇後、胸腺摘出していない動物において、胸腺摘出した動物におけるよりも、より少ないパーセンテージのＲＧＣが死滅した（３４±３対５０．２±３、ｐ＜０．００１、それぞれｎ＝６及び５）。図３Ａ及び３Ｂに示されるように、α２−アドレナリンレセプターアゴニスト緑内障薬物ブリモニジンで処理した、胸腺摘出した動物において、ＲＧＣの損失は、非処理の胸腺摘出ラット又はＣｏｐ−１処理した胸腺摘出ラットにおけるよりも低かった［３８．７±（ｎ＝６）対５５±５．２（ｎ＝５）；ｐ＝０．００１］。上昇したＩＯＰを有する胸腺摘出していない動物におけるブリモニジン及びＣｏｐ−１の効果は、図３Ｂに示される。胸腺摘出していない動物のＣｏｐ−１での処理は、ブリモニジンよりも効果的であった（２３．５±５．７対３４．５±３．５１、ｐ＜０．０５）。コントロール未処理群における死の％は４７．９±７．５であった。２つの処理の間に相乗作用は明白ではなかった。
【００８４】
したがって、予測されるように、Ｔ細胞枯渇動物における損失は正常動物におけるよりも高かった（５０％対３０％）。第２に、Ｃｏｐ−１はＴ細胞枯渇動物におけるＩＯＰ−誘導性ＲＧＣを減少しなかった（５５％対５０％）。対照的に、ポジティブコントロールとして使用したα２−アドレナリンレセプターアゴニストは、胸腺摘出した動物においてさえＲＧＣ損失から保護した（図３Ａ）。本発明者らはまた、正常動物においてＩＯＰ−誘導性死からＲＧＣを保護する際にα２−アドレナリンレセプターアゴニストブリモニジンとＣｏｐ−１との間の相乗作用が存在するか否かを試験した。図３Ｂは、同時に与えられた場合に、ＲＧＣ保護の程度に関する限り、２つの化合物の間に相加効果又は相乗効果が存在しないことを示す。したがって、これらの結果は、Ｃｏｐ−１が強力な免疫原であり、かつＩＯＰが上昇する７日後の単回注射後にＩＯＰ誘導性死からＲＧＣを保護し得ることを示す。
【実施例４】
【００８５】
Ｃｏｐ−１点眼剤は慢性ＩＯＰのモデルにおいてＲＧＣを保護する
Ｃｏｐ−１治療はＴ細胞媒介され、本発明者らはアジュバントを伴わない単回注射が保護を示すために十分であることを上記で示したので、ここで本発明者らは、アジュバントを伴わない点眼剤としてＣｏｐ−１を使用する可能性を探索した。点眼剤の約１０％が血液中に入っていくと仮定して、本発明者らは、５ｍｇのＣｏｐ−１（皮下的に与えられた場合に活性であることが見出されている最適量５００μｇの１０倍）に等価な点眼剤を適用した。Ｃｏｐ−１点眼剤を、慢性モデルにおいてＩＯＰ上昇の直後（図４Ａ）又は７日後（図４Ｂ）のいずれかに与えた。点眼剤を用いるＣｏｐ−１保護は、皮下的に与えた場合に、同様に効果的であった。これは、圧力上昇の３週間後に評価した（ｐ＜１０−５；１０３  ＲＧＣ対１５０  ＲＧＣ）。
【実施例５】
【００８６】
Ｃｏｐ−１点眼剤は急性ＩＯＰのモデルにおいてＩＯＰ誘導性死からＲＧＣを保護する
慢性ＩＯＰの結果は、緑内障の急性モデルにおいてＣｏｐ−１がＲＧＣのＩＯＰ誘導性損失から保護し得るか否かを試験するよう本発明者らを促した。
【００８７】
本発明者らは、ＩＯＰの一過性上昇（４０ｍｍ／Ｈｇについて１時間）の十分に較正されたモデルを以前に確立した。これは２週間後にＲＧＣの約５０％の損失を生じた。このＩＯＰ上昇の急性モデルにおいて、アジュバントを伴わないＣｏｐ−１の適用は、２週間後に２０％のみの損失を生じた。
【００８８】
５４．７５±１１ｍｍＨｇの平均ＩＯＰを有するＬｅｗｉｓラットにおける急性ＩＯＰ上昇モデルを使用して、本発明者らは、皮下的に（図５Ａ）又は局所的に（点眼剤；図５Ｂ）、Ｃｏｐ−１又はビヒクル（ＰＢＳ）のいずれかを用いてワクチン接種した。ＩＯＰの上昇の１時間後すぐに、２５分間の過程の間にわたって総計５ｍｇのＣｏｐ−１を各動物に与えた。ＩＯＰ上昇の２週間後の平均細胞死の比率は、コントロール群において５８．５８％±７．４２（ｎ＝４）及びＣｏｐ−１ワクチン接種群において３１．１２±３．２２（ｎ＝４）ｐ＜０．００１であった。
【００８９】
２つの投与の経路は、ＩＯＰが惹起された２週間後に評価された場合に、ＲＧＣを保護する際に同様に有効であると思われた。点眼剤が免疫化の経路を提供し、局所的薬物適用の手段ではないことを証明するために、本発明者らは、１つの眼において圧力を上昇させ、対側側の眼に点眼剤中のＣｏｐ−１を適用した。同側性に与えられた場合と同じ効果が得られた。
【００９０】
引用文献
Ａｈａｒｏｎｉ  Ｒ．、Ｔｅｉｔｅｌｂａｕｍ  Ｄ．、Ａｒｍｏｎ  Ｒ．、Ｓｅｌａ  Ｍ．。コポリマー１は移植拒絶の徴候を阻害する（Ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  １  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｒａｆｔ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ）。Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ２７、５９８（２００１）
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Ｆｒｉｄｋｉｓ−Ｈａｒｅｌｉ  Ｍ、Ｓａｎｔａｍｂｒｏｇｉｏ  Ｌ．、Ｓｔｅｒｎ  ＪＮ、Ｆｕｇｇｅｒ  Ｌ、Ｂｒｏｓｎａｎ  Ｃ、Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ  ＪＬ。自己抗原特異的Ｔ細胞応答を阻害しかつ実験的自己免疫脳脊髄炎を抑制する、新規な合成アミノ酸コポリマー（Ｎｏｖｅｌ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）。Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １０９（１２）：１６３５−１６４３（２００２）
Ｈａｕｂｅｎ，Ｅ．、Ｎｅｖｏ，Ｕ．、Ｙｏｌｅｓ，Ｅ．、Ｍｏａｌｅｍ，Ｇ．、Ａｇｒａｍｏｖ，Ｅ．、Ｍｏｒ，Ｆ．、Ａｋｓｅｌｒｏｄ，Ｓ．、Ｎｅｅｍａｎ，Ｍ．、Ｃｏｈｅｎ，Ｉ．Ｒ．、及びＳｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．。脊髄損傷のための潜在的神経保護治療としての自己免疫Ｔ細胞（Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎｊｕｒｙ）。Ｌａｎｃｅｔ  ３５５：２８６−２８７（２０００）
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Ｋｉｐｎｉｓ，Ｊ．及びＳｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．。自己免疫疾患の治療剤及びＣＮＳ損傷後の保護的自己免疫のためのワクチンとしての酢酸グラチラマー（Ｃｏｐ−１）の２重作用（Ｄｕａｌ  Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ  Ａｃｅｔａｔｅ（Ｃｏｐ−１）ａｓ  ａ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ａ  Ｖａｃｃｉｎｅ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｆｔｅｒ  ＣＮＳ  Ｉｎｊｕｒｙ）。Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８、３１９−３２３（２００２）
Ｋｉｐｎｉｓ，Ｊ、Ｙｏｌｅｓ  Ｅ、Ｐｏｒａｔ  Ｚ、Ｃｏｈｅｎ  Ａ、Ｍｏｒ  Ｆ、Ｓｅｌａ  Ｍ、Ｃｏｈｅｎ  ＩＲ、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  Ｍ．。コポリマー１に対するＴ細胞免疫は損傷した視神経に神経保護を付与する：視神経障害のための治療の可能性（Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  １  ｃｏｎｆｅｒｓ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｄａｍａｇｅｄ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ：ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ）。Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７、７４４６−７４５１、（２００１）
Ｋｉｐｎｉｓ，Ｊ、Ｙｏｌｅｓ  Ｅ、Ｓｃｈｏｒｉ  Ｈ、Ｈａｕｂｅｎ  Ｅ、Ｓｈａｋｅｄ  Ｉ、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  Ｍ．。ＣＮＳ損傷後のニューロン生存は遺伝子にコードされた自己免疫応答によって決定される（Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｆｔｅｒ  ＣＮＳ  ｉｎｓｕｌｔ  ｉｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｂｙ  ａ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）。Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１、４５６４−４５７１、（２００１）
Ｌｅｖｋｏｖｉｔｃｈ−Ｖｅｒｂｉｎ  Ｈ、Ｑｕｉｇｌｅｙ  ＨＡ、Ｍａｒｔｉｎ  ＫＲ、Ｖａｌｅｎｔａ  Ｄ、Ｂａｕｍｒｉｎｄ  ＬＡ、Ｐｅａｓｅ  ＭＥ。ラットにおける緑内障のモデルとしての小柱網への縁を横切ったレーザー光凝固（Ｔｒａｎｓｌｉｍｂａｌ  ｌａｓｅｒ  ｐｈｏｔｏｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ  ｍｅｓｈｗｏｒｋ  ａｓ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｉｎ  ｒａｔｓ）。Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４３、４０２−４１０、（２００２）
Ｍｉｚｒａｈｉ，Ｔ．、Ｈａｕｂｅｎ，Ｅ．及びＳｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．。組織特異的自己病原体は保護的自己抗原である：ブドウ膜炎の場合（Ｔｈｅ  ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｅｌｆ−ｐａｔｈｏｇｅｎ  ｉｓ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｓｅｌｆ−ａｎｔｉｇｅｎ：Ｔｈｅ  ｃａｓｅ  ｏｆ  ｕｖｅｉｔｉｓ）。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９、５９７１−５９７７（２００２）
Ｍｏａｌｅｍ，Ｇ．、Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ−Ａｍｉｔ  Ｒ、Ｙｏｌｅｓ  Ｅ、Ｍｏｒ  Ｆ、Ｃｏｈｅｎ  ＩＲ、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  Ｍ。自己免疫Ｔ細胞は中枢神経系軸索切断後の二次的変性からニューロンを保護する（Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｘｏｔｏｍｙ）。Ｎａｔ．Ｍｅｄ．５、４９−５５（１９９９）
Ｍｕｋｉｂｉ−Ｍｕｋａ  Ｇ、Ｊｏｎｅｓ  ＲＣ、Ｋｉｂｅｎｇｅ  ＦＳ。異なる経路を通してレオウイルスを摂取したニワトリの血清学的応答及びウイルスの脱落（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ｖｉｒｕｓ  ｓｈｅｄｄｉｎｇ  ｏｆ  ｃｈｉｃｋｅｎｓ  ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒｅｏｖｉｒｕｓ  ｖｉａ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｒｏｕｔｅｓ）。Ｒｅｓ  Ｖｅｔ  Ｓｃｉ  ３７（２）：２２７−９（１９８４）
Ｒｕｓｓｅｌｌ  ＰＨ、Ｍａｃｋｉｅ  Ａ。点眼ＤＮＡはニワトリの涙液及び胆液中でＩｇＡを誘導し得る（Ｅｙｅ−ｄｒｏｐ  ＤＮＡ  ｃａｎ  ｉｎｄｕｃｅ  ＩｇＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｅａｒｓ  ａｎｄ  ｂｉｌｅ  ｏｆ  ｃｈｉｃｋｅｎｓ）。Ｖｅｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  ８０（３−４）：３２７−３２（２００１）
Ｓｃｈｌｅｇｅｌ  ＰＧ、Ａｈａｒｏｎｉ  Ｒら。クラスＩＩ  ＭＨＣ分子に不規則に結合する合成ランダムコポリマーは主要又は主要でない組織適合抗原に対するＴ細胞増殖性応答をインビトロで阻害し、かつインビボにおけるマウス移植片対宿主病を予防する能力を付与する（Ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｒａｎｄｏｍ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ＭＨＣ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍａｊｏｒ  ａｎｄ  ｍｉｎｏｒ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｃｏｎｆｅｒｓ  ｔｈｅ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｔｏ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｍｕｒｉｎｅ  ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ）。Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３、５０６１（１９９６）
Ｓｃｈｏｒｉ，Ｈ．、Ｊ．Ｋｉｐｎｉｓ、Ｅ．Ｙｏｌｅｓ、Ｅ．ＷｏｌｄｅＭｕｓｓｉｅ、Ｇ．Ｒｕｉｚ、Ｌ．Ａ．Ｗｈｅｅｌｅｒ、及びＭ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ。グルタミン酸細胞毒性及び高眼圧症からの死に対する網膜神経節細胞の保護のためのワクチン接種：緑内障についての関連（Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｇａｎｇｌｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｄｅａｔｈ  ｆｒｏｍ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｇｌａｕｃｏｍａ）。Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８、３３９８−３４０３．（２００１）
Ｓｃｈｏｒｉ，Ｈ．、Ｌａｎｔｎｅｒ，Ｆ．、Ｓｈａｃｈａｒ，Ｉ．及びＳｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．。重篤な免疫欠損はグルタミン感受性マウス及びグルタミン抵抗性マウスにおいてニューロン生存に対して反対の効果を有する：Ｂ細胞の副作用（Ｓｅｖｅｒｅ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｈａｓ  ｏｐｐｏｓｉｔｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ−ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ  ａｎｄ  −ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｍｉｃｅ：Ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ）。Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９、２８６１−２８６５（２００２）
Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．、Ｂｅｌｋｉｎ，Ｍ．、Ｙｏｌｅｓ，Ｅ．及びＳｏｌｏｍｏｎ，Ａ．。緑内障性神経障害のための潜在的治療様式：神経保護及び神経再生（Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｍｏｄａｌｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｇｌａｕｃｏｍａｔｏｕｓ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）。Ｊ．Ｇｌａｕｃｏｍａ  ５、４２７−４３２（１９９６）
Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．及びＫｉｐｎｉｓ，Ｊ．。保護的自己免疫を維持することの失敗の副産物としての多発性硬化症：パラダイムシフト（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ａｓ  ａ  ｂｙ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆａｉｌｕｒｅ  ｔｏ  ｓｕｓｔａｉｎ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ：Ａ  ｐａｒａｄｉｇｍ  ｓｈｉｆｔ）。Ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔ  ８、４０５−４１３（２００２）
Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．及びＹｏｌｅｓ，Ｅ．。神経保護：緑内障のための新たな治療様式？（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ：ａ  ｎｅｗ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｍｏｄａｌｉｔｙ  ｆｏｒ  ｇｌａｕｃｏｍａ？）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１、１０７−１１１（２０００ａ）。
Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｍ．及びＹｏｌｅｓ，Ｅ．。損傷した視神経における自己破壊的プロセス及び自己保護プロセス：緑内障についての関連（Ｓｅｌｆ−ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｓｅｌｆ−ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄａｍａｇｅｄ  ｏｐｔｉｃ  ｎｅｒｖｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｇｌａｕｃｏｍａ）。Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．４１、３４９−３５１（２０００ｂ）
Ｓｈａｒｍａ  ＪＭ．。家禽のワクチン及び免疫についての序論（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｐｏｕｌｔｒｙ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ）。Ａｄｖ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．４１、４８１−９４（１９９９）
Ｙｏｌｅｓ  Ｅ、Ｈａｕｂｅｎ  Ｅ、Ｐａｌｇｉ  Ｏ、Ａｇｒａｎｏｖ  Ｅ、Ｇｏｔｈｉｌｆ  Ａ、Ｃｏｈｅｎ  Ａ、Ｋｕｃｈｒｏｏ  Ｖ、Ｃｏｈｅｎ  ＩＲ、Ｗｅｉｎｅｒ  Ｈ、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  Ｍ。保護的自己免疫はＣＮＳ外傷に対する生理学的応答である（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｉｓ  ａ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＣＮＳ  ｔｒａｕｍａ）。Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１、３７４０−３７４８（２００１）
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】コポリマー１（Ｃｏｐ−１）が、慢性モデルにおいてＩＯＰ−誘導性の死からＲＧＣを保護する際に持続性効果を有することを示す図である。
【図２Ａ】アジュバントを伴わない５００μｇ  Ｃｏｐ−１を用いる（２Ａ）、最初のレーザー治療の７日後（２Ｂ）の免疫化が、慢性モデルにおいてＩＯＰ−誘導性のＲＧＣ死からＲＧＣを保護することを示す図である。
【図２Ｂ】アジュバントを伴わない５００μｇ  Ｃｏｐ−１を用いる（２Ａ）、最初のレーザー治療の７日後（２Ｂ）の免疫化が、慢性モデルにおいてＩＯＰ−誘導性のＲＧＣ死からＲＧＣを保護することを示す図である。
【図３Ａ】Ｃｏｐ−１の効果がＴ細胞依存性であることを示す図である。胸腺摘出していない動物におけるＣｏｐ−１を用いる上昇したＩＯＰの治療は、胸腺摘出した動物において（３Ａ）より有効であったこと、及び緑内障薬物ブリモニジン（３Ｂ）よりも有効であった。
【図３Ｂ】Ｃｏｐ−１の効果がＴ細胞依存性であることを示す図である。胸腺摘出していない動物におけるＣｏｐ−１を用いる上昇したＩＯＰの治療は、胸腺摘出した動物において（３Ａ）より有効であったこと、及び緑内障薬物ブリモニジン（３Ｂ）よりも有効であった。
【図４Ａ】点眼薬において適用されるＣｏｐ−１が慢性モデルにおいてＩＯＰ−誘導性のＲＧＣ死から保護することを示す図である。各々５分間隔で与えられる５滴の１ｍｇ  Ｃｏｐ−１が、ＩＯＰ上昇の慢性モデルにおいて、ＩＯＰ上昇の直後（４Ａ）又は７日後（４Ｂ）に適用された。網膜は３週間後に切除された。
【図４Ｂ】点眼薬において適用されるＣｏｐ−１が慢性モデルにおいてＩＯＰ−誘導性のＲＧＣ死から保護することを示す図である。各々５分間隔で与えられる５滴の１ｍｇ  Ｃｏｐ−１が、ＩＯＰ上昇の慢性モデルにおいて、ＩＯＰ上昇の直後（４Ａ）又は７日後（４Ｂ）に適用された。網膜は３週間後に切除された。
【図５Ａ】Ｃｏｐ−１が皮下的に（５Ａ）又は点眼剤として（５Ｂ）投与された場合に、急性一過性ＩＯＰ上昇に対してＲＧＣを保護することを示す図である。
【図５Ｂ】Ｃｏｐ−１が皮下的に（５Ａ）又は点眼剤として（５Ｂ）投与された場合に、急性一過性ＩＯＰ上昇に対してＲＧＣを保護することを示す図である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【配列表】
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