(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数種の栄養補給成分と、インスリンの補充物質とを含有する、粉末状または液状の乳児用調製乳であって、前記インスリンが生物学的に活性であり、粉末１００ｇに対して約２５０００〜７５０００μＵまたは溶液１００ｍｌに対して３０００〜１００００μＵの濃度範囲である、乳児用調製乳。
【請求項２】
前記インスリンがヒトインスリンのアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の乳児用調製乳。
【請求項３】
前記インスリンが組換えインスリンである、請求項１に記載の乳児用調製乳。
【請求項４】
前記インスリンがヒトインスリンのアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の乳児用調製乳。
【請求項５】
前記インスリンが合成インスリンである、請求項１に記載の乳児用調製乳。
【請求項６】
前記インスリンがヒトインスリンのアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の乳児用調製乳。
【請求項７】
前記インスリンが天然インスリン精製物である、請求項１に記載の乳児用調製乳。
【請求項８】
前記複数種の栄養補給成分のうち少なくとも数種が乳由来である、請求項１に記載の乳児用調製乳。
【請求項９】
前記複数種の栄養補給成分のうち少なくとも数種が大豆由来である、請求項１に記載の乳児用調製乳。
【請求項１０】
複数種の栄養補給成分を含む溶液を得るために、複数種の栄養補給成分とインスリンの補充物質とを含有する乳児用調製乳粉末を水に溶解するステップを含む、乳児用調製乳を製造する方法であって、前記インスリンが生物学的に活性であり、粉末１００ｇに対して約２５０００〜７５０００μＵまたは溶液１００ｍｌに対して３０００〜１００００μＵの濃度範囲である、方法。
【請求項１１】
前記インスリンがヒトインスリンのアミノ酸配列からなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記インスリンが組換えインスリンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記インスリンがヒトインスリンのアミノ酸配列を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記インスリンが合成インスリンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記インスリンがヒトインスリンのアミノ酸配列を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記インスリンが天然インスリン精製物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記複数種の栄養補給成分のうち少なくとも数種が乳由来である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記複数種の栄養補給成分のうち少なくとも数種が大豆由来である、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳児用調製乳に関する。より詳細には、インスリンを補った乳児用調製乳に関する。
【背景技術】
【０００２】
自然の摂理に従った栄養補給方法である母乳育児は、乳児に様々な有益な効果をもたらす。第１に、母乳は、乳児が必要とする栄養素を含む最適な食餌であることが周知である。第２に、母乳は、感染に由来する多種多様な疾病から乳児を守るための免疫を授ける（非特許文献１）。第３に、母乳は活性インスリン分子を含有するため、１型糖尿病の発症から乳児を守る（非特許文献２、３）。第４に、乳が含有するインスリンは小腸の成長と発達を促す（非特許文献４）。
【０００３】
インスリン依存型糖尿病（ＩＤＤＭ）である１型糖尿病は、膵β細胞の自己免疫性破壊が初期の無症候期間中に進行した結果、発現するものであり、この無症候期間は何年間にも及ぶ場合がある（非特許文献５、６）。この病因は、β細胞の自己免疫性破壊を誘発する遺伝的素因と環境因子との複合的な作用にある。一卵性双生児に見られるＩＤＤＭの一致は３０〜５０％以下であるという事実（非特許文献７）と、最近になってＩＤＤＭであると診断された患者の９０％は、親兄弟にＩＤＤＭ発症者がいないという事実（非特許文献８）がある。これに加えて、過去１０年間におけるＩＤＤＭの発症率に急激な増加が見られる（非特許文献９）。これらの事実は、遺伝的にＩＤＤＭを発症しやすい人に対し自己免疫プロセスの発現を誘発する環境因子の重要性を示唆していると考えられている。
【０００４】
多くの研究結果から、１型糖尿病は、牛乳の消費と、新生児の食習慣とに関連があることが示されている（非特許文献２、１０）。症例対照法（Ｊｕｖｅｎｉｌｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｕｎｉｔ
ｏｆ ｔｈｅ  Ｒａｍｂａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈａｉｆａ，Ｉｓｒａｅｌにおける研究を含む）によると、１型糖尿病患者は、母乳を摂取した期間が３ヶ月間未満であり、かつ生後３ヶ月未満で牛乳蛋白に接触していた傾向がより高かった（非特許文献３）。さらに、抗体試験とリンパ球活性試験とによって、ＩＤＤＭ患者の免疫系が牛乳蛋白を認識することが実証された（非特許文献１１）。上記データは、食餌と、経口投与される蛋白質とが、自己免疫性糖尿病の発現に重要な関わりを持つことを強調するものである。
【０００５】
動物モデルにおいて、特定の抗原を経口摂取させることによって免疫系の抑制が可能になり、また、Ｔ細胞増殖、遅延型過敏症および抗体産生を含む多くのタイプの免疫応答を抗原特異的に低下させられることが示された（非特許文献１２〜１５）。インスリンの経口投与によって、自己免疫性糖尿病の発症を抑制する活性細胞機序が発現する（非特許文献１６）。これらの結果によって、「経口寛容アプローチ」への道が拓かれた。また、インスリンの経口投与治療に関し、ハイリスクグループにおける１型糖尿病予防に向けた人体への治験が既に実施されている（非特許文献１７）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Wold AE,Hanson LA. Defence factors in human milk. Curr OpinGastroenterol 10:652-8,1994.
【非特許文献２】Kostraba J. What can epidemiology tell us about the role of infantdiet in the etiology of IDDM?. Diabetes Care 17:87-91,1994
【非特許文献３】Verge C, Howard N, Irwig L, Simpson J, Mackerras D, Silink M.Environmental factors in childhood IDDM. Diabetes Care 17:1381-1338,1994.
【非特許文献４】Shulman RJ. Oral insulin increases small intestinal mass anddisaccharidase activity in the newborn miniature pig. pediatr Res28:171-5,1990.
【非特許文献５】Gorsuch AN, Spencer KN, Lister J, McNally JM, Bottazzo GF, CudworthAG: Evidence for a long prediabetic period in type1(insulin-dependent)Diabetes. Lancet ii:1363-1365,1981.
【非特許文献６】Eisenbarth G: Autoimmune beta cell insufficiency: Diabetes mellitustype 1. Triangle 23:111-124,1984.
【非特許文献７】Barnett AH, Eff C, Leslie RDG, Pyke DA. Diabetes in identical twins:a study of 200 pairs: Diabetologia 20:87-93,1983.
【非特許文献８】LaPorte RE, Cruickshanks KJ. Incidence and risk factors for insulindependent diabetes. In: National Diabetes Data Group. Diabetes in America:diabetes data compiled 1984. Bethesda, Md.:Department of health and humanservices, III-1-III-12. (NIH publication no.85-1468.),1985.
【非特許文献９】Laron Z, Shamis I, Gordon O, Albaz Y: Increased incidence ofchildhood IDDM (0-17yr) in Israel. J Ped Endocrinol Met 8:224, 1995.
【非特許文献１０】Fava D, Leslie D, Pozzilli P. Relationship between daily productconsumption and incidence of IDDM in childhood in Italy. Diabetes Care17:1488-1490,1994.
【非特許文献１１】Karjalainen J, Martin JM, Knip M, Ilonen J, Dosch H-M. A bovinealbumin peptide as a possible trigger of  insulin-dependent diabetesmellitus. N Engl J Med 327:302-307,1992.
【非特許文献１２】Weiner HL. Oral tolerance for the treatment of autoimmune diseases.Annu Rev Med 48:341-351,1997.
【非特許文献１３】Garside P, Mowat AM. Mechanisms of oral tolerance. Crit Rev Immunol17:119,1997.
【非特許文献１４】Ke Y, Kapp JA. Oral antigen inhibits priming of CD8+ CTL, CD4+ Tcells, and antibody responses while activating CD8+ suppressor T cells. JImmunol 156:916-21,1996.
【非特許文献１５】Bergerot I, Fabien N, Maguer V, Thivolet C. Oral administration ofhuman insulin to NOD mice generates CD4+ T cells that suppress adoptivetransfer of diabetes. J Autoimmun 7:65-71,1994.
【非特許文献１６】Zhang ZJ, Davidson L, Eisenbarth G, Weiner HL. Suppression ofdiabetes in nonobese diabetic mice by oral administration of porcine insulin.Proc Natl Acad Sci USA 80:10252-10256,1991.
【非特許文献１７】Schatz DA, Rogers DG, Brouhard BH. Prevention of insulin-dependentdiabetes mellitus: an overview of three trials. Cleve Clin J Med 63:270-4,1996.
【非特許文献１８】Vaarala O, Paronen J, Otonkoski T, Akerblom HK. Cow milk feedinginduces antibodies to insulin in children-A link between cow milk andInsulin-Dependent Diabetes Mellitus?. Scand J Immunol 47:131-135,1998.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
後述するように、従来技術において、乳児用調製乳を母乳に可能な限り近づけようという試みがなされているものの、免疫学的に認識可能なインスリンは人乳のそれに比べ非常に少ない。製造過程に伴う過酷な条件を鑑みれば、これらの調製乳における活性インスリンレベルは恐らくゼロであろう。
【０００８】
上述したように、インスリンが補われた乳児用調製乳の必要性は多方面で認識されており、インスリンが補われた乳児用調製乳が実現されれば非常に有益であろう。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の１つの態様によって、複数種の栄養補給成分と、インスリンサプリメントとを含有する、粉末状または液状の乳児用調製乳が得られる。
【００１０】
本発明の他の態様によって、複数種の栄養補給成分と、インスリンサプリメントとを含有する乳児用調製乳粉末を水に溶解させて前記複数種の栄養補給成分と前記インスリンサプリメントとを含有する溶液を得るステップと、前記溶液を乳児に摂取させるステップとを含む、前記乳児に食餌を摂取させる方法が得られる。
【００１１】
後述する本発明の好ましい実施態様によれば、前記インスリンが組換えインスリンであることをさらに特徴とする。
【００１２】
さらに説明する好ましい実施態様によれば、前記インスリンが合成インスリンであることをさらに特徴とする。
【００１３】
さらに説明する好ましい実施態様によれば、前記インスリンが天然インスリン精製物であることをさらに特徴とする。
【００１４】
さらに説明する好ましい実施態様によれば、前記インスリンが生物的に活性なものであることをさらに特徴とする。
【００１５】
さらに説明する好ましい実施態様によれば、前記インスリンの濃度範囲が、前記粉末１００ｇに対して約２５０００〜７５０００μＵまたは前記溶液１００ｍｌに対して３０００〜１００００μＵであることをさらに特徴とする。
【００１６】
さらに説明する好ましい実施態様によれば、前記インスリンは、ヒトインスリンのアミノ酸配列を有することをさらに特徴とする。
【００１７】
さらに説明する好ましい実施態様によれば、前記複数種の栄養補給成分のうち少なくとも数種は、乳由来または大豆由来であることをさらに特徴とする。
【発明の効果】
【００１８】
本発明は、人乳により類似し、１型糖尿病の発症を予防し、かつ乳児の腸の発達および成熟を促す乳児用調製乳を提供することによって、現状において周知の形態における課題を好首尾に解決するものである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、インスリン、好ましくはヒトインスリンを補った、乳児に摂取させることが可能な乳児用調製乳に関する。具体的には、本発明は、インスリンが欠乏した食餌を生後１年間に摂取したことに由来する症候群から乳児を守る目的で用いることができる。本発明によって、乳児用調製乳がより人乳に近いものとなる。
【００２０】
本発明の本質および本発明による乳児用調製乳の効果は、図面および以下の説明を検討することによって、より明瞭に理解されるであろう。
【００２１】
本発明の少なくとも１つの実施態様を詳細に説明するが、その前に、本発明の適用は、以下の説明に記載するか或いは図面に例示する構成の詳細および成分の処方に何ら限定されないことを理解されなければならない。本発明は、他の実施態様または様々な方法で実施若しくは実行することが可能である。また、本明細書において用いる表現および用語は説明を目的とするものであって、制約的なものであると認識されるべきでないことを理解されよう。
【００２２】
疫学および動物実験データにおいて、乳児の食餌におけるインスリン含有量が、自己免疫性糖尿病の予防および腸の発達の促進に重要な役割を果たす可能性が示されている。
【００２３】
実施例の項において後述するが、通常用いられる各種乳児用調製乳における免疫学的に認識されるインスリンレベルは極めて低い。そのレベルは人乳の少なくとも４分の１から１０分の１であるか、恐らくそれ以下である。検査を実施したわけではないが、製造過程に伴う過酷な条件を鑑みれば、この種の調製乳における活性インスリンレベルはゼロであると予想される。大豆ベースの乳児用調製乳は乳成分を含有しないため、免疫学的に認識可能なインスリンは一切含まれず、活性インスリンについては言うまでもない。
【００２４】
さらに、新鮮な牛乳に含まれるウシインスリンは、わずか３種のアミノ酸がヒトインスリンと異なるのみであるが、ウシインスリンと接触することでインスリンに対する寛容が破綻し、自己免疫性糖尿病が誘発される可能性が示されている（非特許文献１８）。
【００２５】
乳児用の食餌に関する上記２つの障害を克服するべく、乳児用調製乳にヒトインスリンを添加することを本明細書によって初めて提案する。上記２つの障害とは、乳児用調製乳におけるインスリン不足と、未加工の牛乳を使用することによってインスリンに対する免疫寛容が破綻するリスクである。
【００２６】
乳児用調製乳にインスリンを添加することは以下に示す有益な効果をもたらす。第１に、インスリン添加によって乳児用調製乳が人乳により近いものとなる。第２に、インスリン添加によって１型糖尿病の発症が予防される。第３に、インスリン添加によって乳児の腸の発達と成熟が促される。乳児用調製乳へのヒトインスリン添加は安全であり、それには少なくとも２点の根拠がある。第１の根拠は、人乳のインスリン濃度に近似するようなインスリン濃度が選択されている点である。第２の根拠は、数件の人間への治験において、インスリンの経口投与が既に実施されている点である（非特許文献１７）。
【００２７】
従って、本発明の１つの実施態様によって、複数種の栄養補給成分と、インスリンサプリメントとを含有する、粉末または液状の乳児用調製乳が得られる。
【００２８】
本発明の他の実施態様によって、乳児に食餌を摂取させる方法が得られる。前記方法は、以下のステップを実施することにより達成される。まず、複数種の栄養補給成分と、インスリンサプリメントとを含有する乳児用調製乳粉末を水に溶解させることによって前記複数種の栄養補給成分と前記インスリンサプリメントとを含有する溶液を得る。次いで、前記溶液を前記乳児に摂取させる。
【００２９】
以下の実施例の項で例示するが、前記複数種の栄養補給成分は、乳由来または大豆由来の複数種の栄養補給成分を含んでもよい。さらに１種以上含有してもよい成分として、ラクト−ス、野菜油、脱脂乳粉末、ホエー蛋白濃縮物、ナトリウム、カルシウム、リン、カリウム、塩化物、鉄、マグネシウム、タウリン、ビタミン類、ブドウ糖シロップ、大豆蛋白単離物、ショ糖、マルトオリゴ糖、メチオニン、タウリン、カルニチンおよび微量元素が挙げられる。
【００３０】
本発明の好ましい実施態様によれば、前記インスリンは、以下のインスリンタイプ：組換え型インスリン、合成インスリン、天然インスリン精製物、生物活性を有するインスリンおよびヒトインスリンアミノ酸配列を有するインスリン（例えばヒトインスリン）、から選択される。これらのタイプには重複しているものがあるため、前記インスリンは、上に列挙したインスリンタイプから１種以上のタイプが選択される、としてもよい。精製された形態の組換えヒトインスリンは、米国所在のＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ＆  Ｃｏより入手可能である。精製された形態の天然ヒトインスリンは、デンマーク所在のＮｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋより入手可能である。製造方法にもよるが、粗抽出物も有用な場合がある。合成インスリンは、従来技術において周知の、ＢｏｃおよびＦｍｏｃ化学ペプチド合成用の市販の組み立てユニットを用いて製造してもよい。
【００３１】
本発明の他の好ましい実施態様によれば、前記溶液に含まれる前記インスリンの濃度は人乳のインスリン濃度に近似している。従って、好ましい実施態様によれば、前記インスリン濃度は、前記粉末１００ｇに対して約２５０００〜７５０００μＵ（前記粉末を約７．５倍に希釈することによって前記溶液を形成する）または前記溶液１００ｍｌに対して３０００〜１００００μＵの範囲にあり、好ましくは前記溶液１００ｍｌに対して３０００〜６０００μＵの範囲にあり、最適には前記溶液１００ｍｌに対して約４２００μＵである。
【実施例】
【００３２】
以下の実施例をもってここに参考例を示す。以下の実施例と上記説明とをもって本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３３】
＜原料および方法＞
乳サンプルおよびインスリン測定：人間の母乳サンプルは、正常な妊娠期間を経て分娩した、分娩後２日目以上３０日目以内の母親から収集した。牛乳サンプルは、貯蔵されている未加工の市販の乳から採取した。牛乳調製乳は製造業者の指示に従って調製した。全サンプルをポリプロピレン管内で−２０℃に保管した。乳サンプルを、ＰＢＳ（ＫＨ２ＰＯ４  １０ｍＭ、ＮａＣｌ  ０．１５Ｍ、ｐＨ７．４）を用いて希釈することにより脂肪を含まない下清みを得、次いで１０００００ｇで６０分間遠心分離した。透明な下清みを吸引し、−２０℃で保管した。インスリン濃度は、ヒトインスリンを基準物質とし、市販のキット（Ｂｉｏ  Ｄａｔａ，Ｓｏｒｉｎ）を用いてラジオイムノアッセイにて決定した。
【００３４】
＜実験結果＞
表１に示すように、人乳のインスリン濃度（約４２μＵ／ｍｌ）は、市販の未加工牛乳（約１７μＵ／ｍｌ）や乳児用調製乳（約４〜１２μＵ／ｍｌ）に比し著しく高い。乳児用調製乳のインスリンレベルは非常に低く、このレベルはネガティブコントロール溶液（０．５％ウシ血清アルブミン溶液、約６μＵ／ｍｌ）で記録されたレベルに近い。
【００３５】
【表１】
0005188631.tif 000002
【００３６】
以下の表２と表３に、本発明による乾燥および溶液状態の、乳ベースおよび大豆ベースの、乳児用調製乳の組成例を示す。
【００３７】
乳児用調製乳Ｉ（乳ベース）
該調製乳は以下の成分を含有する：ラクト−ス、野菜油、脱脂乳粉末、ホエー蛋白濃縮物、ナトリウム、カルシウム、リン、カリウム、塩化物、鉄、マグネシウム、タウリン、ビタミン類およびインスリン。
【００３８】
【表２】
0005188631.tif 000003
0005188631.tif 000004
【００３９】
乳児用調製乳ＩＩ（大豆ベース）
該調製乳は以下の成分を含有する：ブドウ糖シロップ、野菜油、大豆蛋白単離物、ショ糖、マルトオリゴ糖、ナトリウム、カルシウム、リン、カリウム、塩化物、鉄、マグネシウム、ビタミン類、メチオニン、タウリン、カルニチン、微量元素およびインスリン。
【００４０】
【表３】
0005188631.tif 000005
0005188631.tif 000006
【００４１】
以上、具体的な実施態様と併せて本発明を説明してきたが、当業者にとって多くの代替物使用、修正および変更が容易であることは明らかである。従って、添付の請求の範囲に記載する趣旨および広い範囲内のあらゆる代替物使用、修正および変更を包含することを意図するものである。