(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニル−プロピオン酸  ４α−アセトキシ−２α−ベンゾイルオキシ−５β，２０−エポキシ−１β−ヒドロキシ−７β，１０β−ジメトキシ−９−オキソ−１１−タキセン−１３α−イル又はその製薬学的に許容され得る塩もしくは溶媒和物を有効成分として含有することを特徴とする、静脈内、腹腔内、筋肉内もしくは皮下投与により投与される、脳における異常細胞増殖を処置するための薬剤。
【請求項２】
異常細胞増殖が脳のガンである請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
少なくとも他の治療的処置と同時に使用される請求項２に記載の薬剤。
【請求項４】
他の治療的処置が抗悪性腫瘍薬、モノクローナル抗体、免疫療法、放射線療法又は生体応答調節物質を含んでなる請求項３に記載の薬剤。
【請求項５】
応答調節物質がリンホカイン及びサイトカインを含んでなる請求項４に記載の薬剤。
【請求項６】
応答調節物質がインターロイキン、α、βもしくはδインターフェロン及びＴＮＦを含んでなる請求項５に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】  本発明はタキソイド誘導体の新規な使用に関する。それはさらに正確には、一般式（Ｉ）：
【０００２】
【化３】
0005354762.tif 000002
【０００３】［式中：
Ｚは水素原子又は一般式：
【０００４】
【化４】
0005354762.tif 000003
【０００５】の基を示し、
ここで：
Ｒ1は、
場合によりハロゲン原子及び１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基、１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシ基もしくはトリフルオロメチル基から選ばれる１つもしくはそれより多い同一もしくは異なる原子もしくは基で置換されていることができるベンゾイル基、
テノイルもしくはフロイル基、又は
基Ｒ2−Ｏ−ＣＯ−
を示し、ここでＲ2は：
−１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基、
−２〜８個の炭素原子を含有するアルケニル基、
−３〜８個の炭素原子を含有するアルキニル基、
−３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキル基、
−４〜６個の炭素原子を含有するシクロアルケニル基、又は
−７〜１０個の炭素原子を含有するビシクロアルキル基
これらの基は場合によりハロゲン原子及びヒドロキシル基、１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシ基、各アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するジアルキルアミノ基、ピペリジノもしくはモルホリノ基、１−ピペラジニル基（場合により４位において１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基もしくはアルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するフェニルアルキル基で置換されていることができる）、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキル基、４〜６個の炭素原子を含有するシクロアルケニル基、フェニル基（場合によりハロゲン原子及び１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基もしくは１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシ基から選ばれる１つもしくはそれより多い原子もしくは基で置換されていることができる）、シアノもしくはカルボキシル基又はアルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシカルボニル基から選ばれる１つもしくはそれより多い置換基で置換されていることができる、
−場合によりハロゲン原子及び１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基又は１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシ基から選ばれる１つもしくはそれより多い原子もしくは基で置換されていることができるフェニル又はα−もしくはβ−ナフチル基、あるいは
−好ましくはフリル及びチエニル基から選ばれる５−員芳香族複素環式基、
−あるいは４〜６個の炭素原子を含有し、場合により１〜４個の炭素原子を含有する１つもしくはそれより多いアルキル基で置換されていることができる飽和複素環式基
を示し、
Ｒ3は、
１〜８個の炭素原子を含有する非分枝鎖状もしくは分枝鎖状アルキル基、
２〜８個の炭素原子を含有する非分枝鎖状もしくは分枝鎖状アルケニル基、
２〜８個の炭素原子を含有する非分枝鎖状もしくは分枝鎖状アルキニル基、
３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキル基、
場合によりハロゲン原子及びアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アリールオキシ、アリールチオ、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、メルカプト、ホルミル、アシル、アシルアミノ、アロイルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、シアノ、ニトロ及びトリフルオロメチル基から選ばれる１つもしくはそれより多い原子もしくは基で置換されていることができるフェニル又はα−もしくはβ−ナフチル基、
あるいは窒素、酸素及び硫黄原子から選ばれる１つもしくはそれより多い同一もしくは異なる複素原子を含有し、場合によりハロゲン原子及びアルキル、アリール、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アシル、アリールカルボニル、シアノ、カルボキシル、カルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル又はアルコキシカルボニル基から選ばれる１つもしくはそれより多い同一もしくは異なる置換基で置換されていることができる５−員芳香族複素環
を示し、
ただし、フェニル、α−もしくはβ−ナフチル及び芳香族複素環式基の置換基において、アルキル基及び他の基のアルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルケニル及びアルキニル基は２〜８個の炭素原子を含有し、アリール基はフェニル又はα−もしくはβ−ナフチル基であり、
Ｒ4は、
非分枝鎖もしくは分枝鎖中に１〜６個の炭素原子を含有するアルコキシ基、
非分枝鎖もしくは分枝鎖中に３〜６個の炭素原子を含有するアルケニルオキシ基、
非分枝鎖もしくは分枝鎖中に３〜６個の炭素原子を含有するアルキニルオキシ基、
３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルオキシ基、又は
４〜６個の炭素原子を含有するシクロアルケニルオキシ基
を示し、
これらの基は場合により１つもしくはそれより多いハロゲン原子で、又は１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシ基、１〜４個の炭素原子を含有するアルキルチオ基又はカルボキシル基、アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するアルキルオキシカルボニル基、シアノもしくはカルバモイル基又は各アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するか、又はそれが結合している窒素原子と一緒になって場合により酸素、硫黄もしくは窒素原子から選ばれる第２の複素原子を含有することができ、場合により１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基もしくはフェニル基もしくはアルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するフェニルアルキル基で置換されていることができる飽和５−もしくは６−員複素環式基を形成するＮ−アルキルカルバモイル又はＮ，Ｎ−ジアルキルカルバモイル基で置換されていることができ、
Ｒ5は、
非分枝鎖もしくは分枝鎖中に１〜６個の炭素原子を含有するアルコキシ基、  ３〜６個の炭素原子を含有するアルケニルオキシ基、
３〜６個の炭素原子を含有するアルキニルオキシ基、
３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキルオキシ基、又は
３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルケニルオキシ基
を示し、
これらの基は場合により１つもしくはそれより多いハロゲン原子で、又は１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシ基、２〜４個の炭素原子を含有するアルキルチオ基又はカルボキシル基、アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するアルキルオキシカルボニル基、シアノもしくはカルバモイル基又は各アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するか、又はそれが結合している窒素原子と一緒になって場合により酸素、硫黄もしくは窒素原子から選ばれる第２の複素原子を含有することができ、場合により１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基もしくはフェニル基もしくはアルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するフェニルアルキル基で置換されていることができる飽和５−もしくは６−員複素環式基を形成するＮ−アルキルカルバモイル又はＮ，Ｎ−ジアルキルカルバモイル基で置換されていることができる］
の化合物又は製薬学的に許容され得るそれらの塩もしくは溶媒和物を投与することにより、ヒトを含む哺乳類の脳における異常細胞増殖を処置するための方法に関する。
【０００６】  好ましくは、Ｒ3により示され得るアリール基は、場合によりハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）及びアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アリールオキシ、アリールチオ、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、メルカプト、ホルミル、アシル、アシルアミノ、アロイルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、カルバモイル、ジアルキルカルバモイル、シアノ、ニトロ及びトリフルオロメチル基から選ばれる１つもしくはそれより多くの原子もしくは基で置換されていることができるフェニル又はα−もしくはβ−ナフチル基であり、ただし、アルキル基及び他の基のアルキル部分は１〜４個の炭素原子を含有し、アルケニル及びアルキニル基は２〜８個の炭素原子を含有し、アリール基はフェニル又はα−もしくはβ−ナフチル基である。
【０００７】  好ましくは、Ｒ3により示され得る複素環式基は、窒素、酸素及び硫黄原子から選ばれる１つもしくはそれより多い同一もしくは異なる原子を含有し、場合によりハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）及び１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基、６〜１０個の炭素原子を含有するアリール基、１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシ基、６〜１０個の炭素原子を含有するアリールオキシ基、アミノ基、１〜４個の炭素原子を含有するアルキルアミノ基、各アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するジアルキルアミノ基、アシル部分が１〜４個の炭素原子を含有するアシルアミノ基、１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシカルボニルアミノ基、１〜４個の炭素原子を含有するアシル基、アリール部分が６〜１０個の炭素原子を含有するアリールカルボニル基、シアノ、カルボキシルもしくはカルバモイル基、アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するアルキルカルバモイル基、各アルキル部分が１〜４個の炭素原子を含有するジアルキルカルバモイル基又はアルコキシ部分が１〜４個の炭素原子を含有するアルコキシカルボニル基から選ばれる１つもしくはそれより多い同一もしくは異なる置換基で置換されていることができる５−員芳香族複素環式基である。
【０００８】  好ましくは、基Ｒ4及びＲ5は同一もしくは異なることができ、場合によりメトキシ、エトキシ、エチルチオ、カルボキシル、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、シアノ、カルバモイル、Ｎ−メチルカルバモイル、Ｎ−エチルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイル、Ｎ−ピロリジノカルボニル又はＮ−ピペリジノカルボニル基で置換されていることができる１〜６個の炭素原子を含有する非分枝鎖状もしくは分枝鎖状アルコキシ基を示す。
【０００９】  さらに特定的には、本発明は、Ｚが水素原子又は一般式（ＩＩ）の基を示し、ここでＲ1はベンゾイル基又は基Ｒ2−Ｏ−ＣＯ−を示し、ここでＲ2はｔｅｒｔ−ブチル基を示し、Ｒ3は１〜６個の炭素原子を含有するアルキル基、２〜６個の炭素原子を含有するアルケニル基、３〜６個の炭素原子を含有するシクロアルキル基、場合によりハロゲン原子（フッ素、塩素）及びアルキル（メチル）、アルコキシ（メトキシ）、ジアルキルアミノ（ジメチルアミノ）、アシルアミノ（アセチルアミノ）、アルコキシカルボニルアミノ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）又はトリフルオロメチル基から選ばれる１つもしくはそれより多い同一もしくは異なる原子もしくは基で置換されていることができるフェニル基、あるいは２−もしくは３−フリル、２−もしくは３−チエニル又は２−、４−もしくは５−チアゾリル基を示し、Ｒ4及びＲ5が同一もしくは異なることができ、それぞれ１〜６個の炭素原子を含有する非分枝鎖状もしくは分枝鎖状アルコキシ基を示す一般式（Ｉ）の生成物に関する。
【００１０】  さらにもっと特定的には、本発明は、Ｚが水素原子又は一般式（ＩＩ）の基を示し、ここでＲ1はベンゾイル基又は基Ｒ2−Ｏ−ＣＯ−を示し、ここでＲ2はｔｅｒｔ−ブチル基を示し、Ｒ3はイソブチル、イソブテニル、ブテニル、シクロヘキシル、フェニル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル又は５−チアゾリル基を示し、Ｒ4及びＲ5が同一もしくは異なることができ、それぞれメトキシ、エトキシ又はプロポキシ基を示す一般式（Ｉ）の生成物に関する。
【００１１】  さらに特別に興味深いのは、Ｒ3がフェニル基を示し、Ｒ1がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を示し、Ｒ4及びＲ5が同一もしくは異なることができ、メトキシ、エトキシ又はプロポキシ基を示す一般式（Ｉ）の生成物である。
【００１２】  さらにもっと興味深く、本発明は式（Ｉａ）
【００１３】
【化５】
0005354762.tif 000004
【００１４】の（２Ｒ，３Ｓ）−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−ヒドロキシ−３−フェニル−プロピオン酸  ４α−アセトキシ−２α−ベンゾイルオキシ−５β，２０−エポキシ−１β−ヒドロキシ−７β，１０β−ジメトキシ−９−オキソ−１１−タキセン−１３α−イルに関する。
【００１５】  特許ＷＯ  ９６／３０３５５から、２つの方法によって本発明に従う誘導体を製造することは既知である。第１の多段階法に従えば、式：
【００１６】
【化６】
0005354762.tif 000005
【００１７】の１０−デアセチルパッカチンＩＩＩを用いて出発し、それを７及び１３位において例えばシリルジエーテルの形態で選択的に保護し、続いて一般式：
Ｒ−Ｘ                  （ＩＶ）
［式中、Ｒは上記で定義した基を示し、Ｘは反応性エステル残基、例えば硫酸もしくはスルホン酸エステル残基又はハロゲン原子を示す］
の生成物を作用させ、１０位に単位−ＯＲならびに７及び１３位にシリル基を有する生成物を得る。次にシリル保護基を水素原子で置き換え、１０位にまだ基−ＯＲならびに７及び１３位にＯＨ基を有する化合物を得る。後者の誘導体を式ＩＶの誘導体との反応により７位において選択的にエーテル化し、Ｚが水素に等しい式（Ｉ）の誘導体を得る。
【００１８】  最後の段階は、それ自体既知の方法に従って、Ｚが水素を示す式（Ｉａ）の誘導体を、例えば特許ＥＰ  ６１７，０１８に記載されている方法に従って、β−ラクタムの存在下で、あるいは例えば上記の特許ＷＯ  ９６／３０３５５に記載されている通りにオキサゾリジンの存在下で、１３位においてエステル化することにある。７及び１０位における保護基の脱保護の後、Ｚが水素以外であり、Ｒが水素を示す式（Ｉａ）のエステルがかくして得られる。次の段階は、式（Ｖ）              Ｒ−ＳＯ−Ｒ                  （Ｖ）
［式中、Ｒは上記と同じ意味を有する］
のスルホキシド及び無水酢酸からその場で生成する試薬の作用により（Ｐｕｍｍｅｒｅｒ−型反応）、７及び１０位を同時に反応させて７及び１０位におけるアルキルチオアルキルオキシ−型中間体を生成させることにある。
【００１９】  所望の式（Ｉａ）の化合物を得ることを可能にする最後の段階は、上記で得られる中間化合物につき、活性化ラネイニッケルの作用により行われる。
【００２０】  一般に、一般式（Ｖ）のスルホキシド、好ましくはジメチルスルホキシドと無水酢酸からその場で生成する試薬の作用は、酢酸又は酢酸誘導体、例えばハロ酢酸の存在下に、０〜５０℃の温度で行われる。
【００２１】  一般に、脂肪族アルコールもしくはエーテルの存在下における活性化ラネイニッケルの作用は、−１０〜６０℃の温度で行われる。
【００２２】  ＦＲ  ９７−１４４４２出願に、さらに別の方法が記載されている。この発明は、式（ＶＩ）
【００２３】
【化７】
0005354762.tif 000006
【００２４】［式中、Ａは水素又は下記の式（ＩＩａ）：
【００２５】
【化８】
0005354762.tif 000007
【００２６】の側鎖を示し、
ここでＧはヒドロキシル官能基のための保護基を示し、Ｒ1及びＲ3は式（ＩＩ）の場合と同じ意味を有するか、
あるいは式（Ｉｄ）：
【００２７】
【化９】
0005354762.tif 000008
【００２８】のオキサゾリジン単位を示し、
ここでＲ1及びＲ3は式（ＩＩ）の場合と同じ意味を有し、Ｒa及びＲbは同一もしくは異なることができ、水素又はアルキル、アリール、ハロ、アルコキシ、アリールアルキル、アルコキシアリール、ハロアルキル、ハロアリールを示し、置換基は場合により４−〜７−員環を形成することができる］
の１０−デアセチルバッカチン又は１３位においてエステル化されたそれらの誘導体の７及び１０位における２つのヒドロキシル官能基を１段階で、直接、選択的に、且つ同時にアルキル化することを可能にする。
【００２９】  出発材料として１０−デアセチルバッカチン、すなわち式（ＩＩＩ）の生成物を用いるのが好ましく、それによりプロセスに関して評価できる節約が可能となり、さらに古い方法において必要な中間の保護及び脱保護の段階を避ける。
【００３０】  式（ＩＩａ）のヒドロキシル官能基を保護するための基Ｇの中で、一般に、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ及びＭａｃＯｍｉｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７５，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓのような本に記載されており、分子の残りの部分をほとんど又は全く分解させない条件下で脱保護されるすべての保護基、例えば：
・エーテル類、そして好ましくはメトキシメチルエーテル、１−エトキシエチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、ｐ−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、場合によりメトキシ、クロロ、ニトロのような１つもしくはそれより多い基で置換されていることができるベンジルエーテル、１−メチル−１−メトキシエチルエーテル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル及びシリルエーテル、例えばトリアルキルシリルエーテルのようなエーテル類、
・炭酸トリクロロエチルのような炭酸エステル
を選ぶのが好ましい。
【００３１】  さらに特定的には、一般式（ＩＩｂ）の基Ｒa及びＲbは特許ＷＯ  ９４／０７８７８に記載されているものから選ばれ、もっと特別に好ましい誘導体はＲaが水素であり、Ｒbがｐ−メトキシフェニル基である誘導体である。
【００３２】  アルキル化剤は：
・ハロゲン化アルキルそして好ましくはヨウ化アルキル（ＲＩ）
・硫酸アルキル、例えば硫酸メチル
・オキソニウム類、例えばトリアルキルオキソニウム硼酸塩、特にトリメチルオキソニウムテトラフルオロボレート（Ｍｅ3ＯＢＦ4）
から選ばれる。
【００３３】  ヨウ化メチルが好適に用いられる。
【００３４】  アルキル化剤はアニオン化剤、例えば１種もしくはそれより多い強塩基の存在下に、無水媒体中で用いられる。
【００３５】  無水媒体中で用いられ得る塩基の中で：
・アルカリ金属水素化物、例えば水素化ナトリウムもしくはカリウム
・アルカリ金属アルコキシド、例えばカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド
・酸化銀Ａｇ2Ｏ
・１，８−ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン
・一−もしくは二金属性塩基混合物、例えば、Ｐ．Ｃａｕｂｅｒｅ  Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９３，９３，２３１７−２３３４又はＭ．Ｓｃｈｌｏｓｓｅｒ  Ｍｏｄ．Ｓｙｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９９２），６，２２７−２７１のような刊行物に記載されているものを挙げることができ；特にアルキルリチウム／アルカリ金属ｔ−ブトキシド又はアルカリ金属アミド／アルカリ金属ｔ−ブトキシドの組合わせが好ましい。２つの塩基の１つを「その場で」生成させることができる。
【００３６】  アルキル化剤とアニオン化剤のすべての可能な組合わせの中で、水素化カリウムの存在下でヨウ化メチルを用いるのが好ましい。
【００３７】  反応は好ましくは反応条件下で不活性な有機媒体中で行われる。溶媒の中で：・エーテル類、例えばテトラヒドロフラン又はジメトキシエタン
・酸化銀が用いられる場合、極性非プロトン性溶媒、例えばジメチルホルムアミド又は芳香族溶媒、例えばトルエン
・１，８−ビス（ジメチルアミノ）ナフタレンが用いられる場合、アルキルエステル類、例えば酢酸エチル
を用いるのが好ましい。
【００３８】  本発明のより良い実施のために、２より大きい、そして好ましくは２〜２０のアニオン化剤と基質の間のモル比を用いるのが好ましい。
【００３９】  ２より大きい、そして好ましくは２〜４０のアルキル化剤と基質の間のモル比を用いるのも好ましい。
【００４０】  −３０℃〜８０℃の反応温度を用いるのが好ましい。
【００４１】  反応時間は、有利には、選ばれる試薬に依存して数時間〜４８時間の範囲である。
【００４２】  アルキル化段階が１０−デアセチルバッカチンについて行われる場合、アルキル化段階の後、プロセスは次いで既知の方法で、例えば、上記の特許ＥＰ  ６１７，０１８又はＷＯ  ９６／３０３５５に記載されている方法に従うエステル化段階に進む。
【００４３】  かくして、第１の３−段階法に従うと、手順は最初に強塩基の存在下でアルキル化剤を用いる１０−デアセチルバッカチンのジアルキル化で始まり、第２段階で、７及び１０位においてジエーテル化された１０−デアセチルバッカチンを適切に保護されたβ−ラクタムと１３位において、１３位におけるアルコキシドの生成を確実にする第３級アミン類及び金属塩基から選ばれる活性化剤の存在下に、カップリングさせる。次いで無機もしくは有機酸の作用により側鎖の脱保護が行われる。
【００４４】  かくして、第２の３−段階法に従うと、手順は最初に強塩基の存在下でアルキル化剤を用いる１０−デアセチルバッカチンのジアルキル化で始まり、第２段階で、７及び１０位においてジエーテル化された１０−デアセチルバッカチンを１３位においてオキサゾリジンと、ジイミド類のようなカップリング剤の存在下に、ジアルキルアミノピリジンのような活性化剤の存在下でカップリングさせる。無機もしくは有機酸の作用によりオキサゾリジンの開環を行う。
【００４５】  第３の方法に従うと、手順は７及び１０位において適切に保護されたバッカチンを１３位において、上記の２つの方法で記載したようなカップリング剤及び／又は活性化剤の存在下でβ−ラクタム又はオキサゾリジンを用いてエステル化することで始まる。７及び１０位における脱保護の後、強塩基の存在下においてアルキル化剤により７及び１０位におけるジエーテル化を行う。次いで無機もしくは有機酸の作用により側鎖の脱保護を行う。
【００４６】  一般式（Ｉ）の生成物は顕著な生物学的性質を有する。
【００４７】  試験管内で、ブタ脳から抽出されるチューブリンにつき、Ｍ．Ｌ．Ｓｈｅｌａｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７０，７６５−７６８（１９７３）の方法により生物学的活性の測定が行われる。微小管からチューブリンへの解重合の研究はＧ．Ｃｈａｕｖｉｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃ．Ｒ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，２９３，ｓｅｒｉｅ  ＩＩ，５０１−５０３（１９８１）の方法に従って行われる。
【００４８】  生体内で、一般式（Ｉ）の生成物は、他の液状（ｌｉｑｕｉｄ）もしくは充実性腫瘍への場合と同様に、Ｂ１６黒色腫を移植されたマウスにおいて、腹腔内で１〜５０ｍｇ／ｋｇの投薬量において活性であることがわかった。
【００４９】  該化合物は、抗腫瘍性、さらに特定的にはＴａｘｏｌR及びＴａｘｏｔｅｒｅRに耐性である腫瘍に対する活性を有する。そのような腫瘍には例えばｍｄｒ  １遺伝子（多剤耐性遺伝子）の発現が高められている脳腫瘍が含まれる。多剤耐性は、異なる構造及び作用機構を有する種々の化合物に対する腫瘍による耐性に関する普通の用語である。タキソイド類は、ｍｄｒ  １を発現するドキソルビシン（ＤＯＸ）耐性に関して選択されたＰ３８８ネズミ白血病細胞系であるＰ３８８／ＤＯＸのような実験的腫瘍により高度に認識されることが一般的に既知である。本発明に従う化合物はＰ３８８／ＤＯＸによる認識が比較的低い。さらに特定的には、該化合物はｍｄｒ  １による認識がＴａｘｏｔｅｒｅRより低い。
【００５０】  式（Ｉ）の化合物は主に脳における異常細胞増殖の処置のための薬剤の製造に用いられる。
【００５１】  該化合物及び主にＲ4及びＲ5がそれぞれメトキシである式（Ｉ）の化合物は、血液脳関門を横切る性質を有する。それは、ＴａｘｏｌR又はＴａｘｏｔｅｒｅRのような他の既知のタキソイド類と比較して、脳のガンの処置のために活性である。
【００５２】  式（Ｉ）の生成物を少なくとも他の治療的処置と同時に用いることができる。それは抗悪性腫瘍薬、モノクローナル抗体、免疫療法、放射線療法又は生体応答調節物質を含む他の治療的処置と一緒により好適に用いられる。生体応答調節物質の中で、リンホカイン及びサイトカイン、インターロイキン、α、βもしくはδインターフェロン及びＴＮＦが好適に用いられる。
【００５３】  式（Ｉ）の生成物は好ましくは静脈内、腹腔内、筋肉内又は皮下投与のような非経口的投与により投与される。
【００５４】 実施例１
１．緒言
式（Ｉａ）の生成物は、前臨床モデル（ｐｒｅ−ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｏｄｅｌ）における有力な抗ガン剤である。
【００５５】  ここに報告するのは、マウスにおける１回の静脈内ボーラスの薬物動態学的研究から得られる分析結果である。
【００５６】  雌のＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスの群に、１２０ｍｇ．ｍ-2に相当する４０ｍｇ．ｋｇ-1の投薬量レベルでボーラスとして静脈内経路により生成物を与える。投薬から最高で７２時間後の間隔で犠牲にされた、投薬されたすべての動物から血液及び脳の試料を得た。脳及び対応する血漿の試料をＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイにより生成物Ｉａの含有量に関して検定した。
２．方法
処合（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）：５％のＰｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０、５％のエタノール及び９０％のグルコース５％水溶液を含有する２．２５ｍｇ．ｍｌ-1溶液。
【００５７】  それぞれ約２０ｇの体重の５６匹の雌のＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスに、配合された生成物ＩＩを静脈内ボーラスにより尾の静脈を介して、０．４ｍｌの注入容量でそれぞれ投与し、４０ｍｇ．ｋｇ-1の合計投薬量を与えた。
【００５８】 血液及び組織の試料採取
試料採取：ＣＯ2犠牲（ＣＯ2  ｓａｃｒｉｆｉｃｅ）の後、心臓穿刺により血液、ならびに解剖により肝臓及び脳。
試料採取時間（Ｓａｍｐｌｅ  Ｔｉｍｅｓ）：投薬後２、５、１５、３０、４５分、１、２、４、６、８、１４、２４、４８及び７２時間において。
【００５９】  全血をヘパリン添加管（ｈｅｐａｒｉｎｉｓｅｄ  ｔｕｂｅｓ）中に集め、遠心により対応する血漿試料を得、直後に−２０℃で凍結した。組織をブロッティングし、秤量し、直後に−２０℃で凍結した。すべての試料は分析のために急速凍結された（ｄｉｓｐａｔｃｈｅｄ  ｆｒｏｚｅｎ）。受け取ったら、分析の間中、試料を約−１８℃で凍結保存した。
【００６０】 脳及び血漿試料のＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
検出：ターボ−イオンスプレーモード（ｔｕｒｂｏ−ｉｏｎｓｐｒａｙ  ｍｏｄｅ）におけるＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ  ＩＩＩ  ｐｌｕｓ）
以下のＭＳ条件を適用した：
補助ガス流          ６Ｌ．分-1
ネブライザーガス流  ０．６Ｌ．分-1
ターボ温度          ４５０℃
ＣＧＴ              ３００
カーテンガス流      ０．６Ｌ．分-1
走査時間            １走査／秒
溶離物スプリット比  １：１０
カラム：７５ｘ４．６ｍｍ  Ｓｕｐｅｌｃｏｓｉｌ  ＡＢＺ  ｐｌｕｓ（３μｍ）
移動相：アセトニトリル／メタノール／酢酸アンモニウム（１０ｍＭ）；４０／２５／３５  ｖ／ｖ／ｖ。
流量：１ｍｌ．分-1。
温度：周囲温度。
抽出：血漿：試料（５０μｌ）に１００μｌのアセトニトリルを添加。渦動、遠心、上澄み液を除去、１００μｌの移動相を添加及び１５０μｌを注入。
【００６１】      脳：均質化された試料（脳と水との１：１  ｗ／ｗ  ホモジネートの１００ｍｇ）に１００μｌのアセトニトリルを添加及び渦動。１ｍｌのジエチルエーテルを添加、渦動、遠心、有機層を除去そしてＮ2下において乾燥。２００μｌの移動相中において再構築そして１５０μｌを注入。
キャリブレーション標準：血漿：５、１０、２０、５０、１００、２００、３００、４００及び５００ｎｇ．ｍｌ-1（生成物Ｉａ）の濃度における９種。エタノール中の生成物の適したアリコート（濃度＝０．１、１又は１０μｇ．ｍｌ-1）を０．５ｍｌのマウス血漿のアリコートに加えることにより調製。薬剤添加に続いてそれぞれの試料を渦動させた；次いでアッセイのために５０μｌのアリコートを取り出した。
【００６２】                      脳：均質化されたマウス脳（脳と水  １：１  ｗ／ｗ）中の１０、２０、３０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００、２５００及び５０００ｎｇ．ｇ-1の濃度における１１種。エタノール中の生成物の適したアリコート（濃度＝１、１０又は１００μｇ．ｍｌ-1）を０．５、１、３又は４ｇの均質化されたマウス脳に加えることにより調製。薬剤の添加に続いてそれぞれの試料を渦動させ、次いで１００ｍｇのアリコートをアッセイのために取り出した。
保持時間：薬剤；生成物Ｉａ：〜２．３分。
抽出効率：血漿：２００ｎｇ．ｍｌ-1において約５８％。
【００６３】          脳：５００ｎｇ．ｇ-1において約４１％及び１０００ｎｇ．ｇ-1において３９％。
３．結果
３．１  血漿レベル（ｐｌａｓｍａ  ｌｅｖｅｌｓ）
以下の表はマウスに４０ｍｇ．ｋｇ-1の用量レベル（ｄｏｓｅ  ｌｅｖｅｌ）で生成物Ｉｃを静脈内投与した後に観察される生成物Ｉａの血漿レベルを含む。
【００６４】
【表１】
0005354762.tif 000009
【００６５】  ３．２  脳レベル（ｂｒａｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ）
以下の表はマウスに４０ｍｇ．ｋｇ-1の用量レベルで生成物Ｉａを静脈内投与した後に観察される生成物Ｉａの全脳レベルを含む。
【００６６】
【表２】
0005354762.tif 000010
【００６７】  ３．３  薬物動態学的パラメーター
以下の表は、４０ｍｇ．ｋｇ-1においてマウスに静脈内投与した後に誘導される、平均血漿及び脳レベルデータを用いて算出される生成物Ｉｃに関する予備的薬物動態学的パラメーターを含む。
【００６８】
【表３】
0005354762.tif 000011
【００６９】  ＳＩＰＨＡＲパッケージの一部としての相互作用的線状最小二乗アルゴリズム（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ  ｌｉｎｅａｒ  ｌｅａｓｔ−ｓｑｕａｒｅ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）を用い、プロフィール（ｐｒｏｆｉｌｅｓ）に複指数方程式（ｂｉｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ  ｅｑｕａｔｉｏｎ）をフィッティングした。台形法則（ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ  ｒｕｌｅ）により、０の時点から、血漿の場合には検出限界+（４ｎｇ．ｍｌ-1）又は定量限界＃（２０ｎｇ．ｍｌ-1）に等しいか又はそれより大きい最後の値の時点まで、ならびに脳の場合には投薬から７２時間後まで、ＡＵＣを算出し、次いで無限に外挿した。
手がかり（ｋｅｙ）：
ＡＵＣ0-∞：ｔ＝０（輸液の開始）から無限までの血漿もしくは脳濃度対時間曲線の下の面積。
初期Ｔ1/2：初期（分布（ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ））半減期。
末期Ｔ1/2：末期（除去（ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ））半減期（末期における試料採取頻度及びアッセイ感度に依存する単なる概算値とみなされねばならない）。
ＣｌT：合計血漿クリアランス。
Ｖｄｓｓ：定常状態における分布の容量。
ｎ．ａ．：適用不可能。
４．結論
・生成物Ｉｃのレベルは４０ｍｇ．ｋｇ-1の静脈内投薬の後、予測される通りに高かったが、２分におけるピーク（４６．９μｇ．ｍｌ-1の平均）から４時間以内に１μｇ．ｍｌ-1未満に急速に下降した（≦０．７時間の初期半減期）。しかしながらレベルは投薬から１４時間後まで厳密な定量の限界（２０ｎｇ．ｍｌ-1）より上で、そして最高で投薬後２４時間、一貫して検出限界（４ｎｇ．ｍｌ-1）より上で持続した。
・６．２時間の末期半減期は検出可能な血漿レベル（≧４ｎｇ．ｍｌ-1）から算出された。しかしながら末期半減期はこの場合、アッセイ感度に非常に依存性であり、代わりに薬物動態学的パラメーターの算出に厳密な定量の限界（２０ｎｇ．ｍｌ-1）より上のレベルを用いると、末期半減期は２．０時間に低下することに注意しなければならない。
【００７０】  平均合計血漿クリアランスは１．３  ｌ．時-1．ｋｇ-1であると決定され、それは平均肝臓血漿流の有意な割合に相当する（約５．２  ｌ．時-1．ｋｇ-1の平均肝臓血流に基づいて）。
・この種では静脈内投与後、生成物Ｉｃが血液脳関門を容易に貫通すると思われる。最初の試料採取時間に高いレベルが検出され（２分において７．９μｇ．ｇ-1）、その組織内への急速な吸収を示している。９．１μｇ．ｇ-1のピークレベルは１４時間において観察されたが、最後の試料採取時間まで高い濃度が持続した（７２時間において５．３μｇ．ｇ-1）。生成物が３１．４時間の半減期で脳からゆっくりクリアランスされることは驚くべきことではない。ＡＵＣ0-∞値に基づくと（７８８時．μｇ．ｇ-1対３０時．μｇ．ｍｌ-1）、脳における生成物Ｉａのレベルは血漿におけるレベルの約２０倍であった。
【００７１】 実施例２
ＮＣｒ−ｎｕマウスにおける、頭蓋内移植されたヒト膠芽細胞腫Ｕ２５１及びＳＦ−２９５に対する抗腫瘍活性に関する生成物（ＩＡ）の評価。
【００７２】  生成物（Ｉａ）を用いる処置に対するＵ２５１及びＳＦ−２９５膠芽細胞腫の応答を評価するために４つの研究を開始した。２つの研究では、マウス当たりに１０6個の細胞の容量で頭蓋内移植された細胞からＵ２５１及びＳＦ−２９５膠芽細胞腫を開始させた。頭蓋内移植されたＵ２５１膠芽細胞腫細胞の処置スケジュールは移植後４日に開始し、静脈内に、３回の処置の間６日目毎に１日１回であった（ｑ６ｄ  ｘ  ３）。頭蓋内移植されたＳＦ−２９５膠芽細胞腫細胞の処置スケジュールは移植後２日に開始し、静脈内に、３回の処置の間４日目毎に１日１回であった（ｑ４ｄ  ｘ  ３）。頭蓋内移植された研究の場合、化合物を動物の寿命を延ばすそれらの能力に基づいて評価した。これらの腫瘍モデルの両方の場合に用いた正の標準はニトロソウレアであった。
【００７３】  この実験の目的は、ヒト膠芽細胞腫モデルに対する抗腫瘍効果に関して生成物（Ｉａ）を評価することであった。
【００７４】  これらの実験では、生体内有効性研究のための一般的ＤＣＴＤ、ＮＣＩ法及び手順を特殊な用途のために修正した（Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｏｄｅｌｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｉｏｎ  Ｎｏ．８４−２６３５，１９８４）。これらの研究は認可された施設で行われた（ＡＡＡＬＡＣ  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｎｏ．０００６４３，ＡＡＬＡＳ  Ｍｅｍｂｅｒｓｈｉｐ  Ｎｏ．８４０７２３００１，ＵＳＤＡ  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｎｏ．６４−Ｒ−００１，ＯＰＰＲ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＡＷＡ，Ａｓｓｕｒａｎｃｅ  Ｎｏ．Ａ３０４６−０１）。これらの施設はＩＳＯ  ９００１保証されている（ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ）。監視委員会はＳｏｕｔｈｅｒｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅであり；用いた案はＩＡＣＵＣ  Ｎｏ．９６−８−５０であった。
希釈：
生成物（Ｉａ）は５％のエタノール、５％のｔｗｅｅｎ  ８０、９０％のＤ５Ｗ中で調製された。
【００７５】  ニトロソウレアは２％のエタノール、９８％の生理食塩水中で調製された。
投薬調剤：すべての投薬溶液はＳｏｕｔｈｅｒｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅで調製された。
化合物投与：
生成物（Ｉａ）は合計体重平均に基づいてマウス当たりに０．４ｍｌで投与された。
【００７６】  ニトロソウレアは体重の１０ｇ当たりに０．１ｍｌ投与された。
化合物の安定性：
生成物（Ｉａ）は氷上に保持され、調製から２０分以内に投与された。
【００７７】  ニトロソウレアは氷上に保持され、調製から４５分以内に投与された。
保存条件：すべての化合物は冷蔵されたデシケーター中に保存された。
取り扱いの予備注意：化合物はＳａｆｅｔｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより必要とされる手順に従って取り扱われた。すべての技術者は化合物の投与の間、完全にガウンを着てグローブをはめ、フェースマスク及び安全メガネを用いた。
【００７８】  死にかけているように見える頭蓋内移植された動物は人道的目的のために安楽死させた。有効性研究はこの基本的研究のカテゴリー内に含まれるので、実験の終了は最適であると決定される結果に基づいた。
種：６〜８週令の無胸腺ＮＣｒ−ｎｕ雌マウスを頭蓋内移植されるＵ２５１試験に用いた。６〜８週令の無胸腺ＮＣｒ−ｎｕ雄マウスを頭蓋内移植されるＳＦ−２９５試験に用いた。
正当化：開発されている化合物に関する標的組織であったヒト腫瘍異種移植片の増殖には免疫不全マウスが必要である。
供給源：頭蓋内移植されるＳＦ−２９５試験のためにＦＣＲＤＣ（Ａｎｉｍａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ａｒｅａ），Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ；頭蓋内移植されるＵ２５１試験のためにＴａｃｏｎｉｃ  Ａｎｉｍａｌ  Ｆａｒｍｓ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＮＹ。
数及び性別：頭蓋内移植されるＳＦ−２９５試験においては合計で１６０匹の雄を用いた；頭蓋内移植されるＵ２５１試験においては合計で１５４匹の雌を用いた。
体重及び年令：各試験が開始される時点に平均体重を測定した。Ｕ２５１膠芽細胞腫を頭蓋内に移植されるマウスの平均体重は２１〜２２ｇであった。ＳＦ−２９５膠芽細胞腫を頭蓋内に移植されるマウスの平均体重は２４〜２６ｇであった。
動物の同定：標準的耳マーク（ｅａｒ  ｍａｒｋｓ）。
検疫（ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ）：すべての動物を、試験に供する前に７日間の観察期間のために拘留した（ｈｅｌｄ）。
収容（ｈｏｕｓｉｎｇ）及び衛生管理（ｓａｎｉｔａｔｉｏｎ）：フィルターをかぶせた隔離ケージ（ｉｓｏｌａｔｏｒ  ｃａｇｅｓ）内に、ケージ当たり５匹で動物を収容した。ケージ及び寝床を週に２回交換した。
食物及び水：任意にＴｅｋｌａｄ  Ｓｔｅｒｌｉｚａｂｌｅ  ８６５６  Ｍｏｕｓｅ  Ｄｉｅｔ（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ）を与えた。濾過された水道水を任意に与えた。
環境条件：ＩＡＣＵＣ委員会により認可されたＳＲＩ標準操作手順に従って保持した。
【００７９】  この研究には２つの実験が含まれた（ＲＰ−３６及びＲＰ−３８）。
【００８０】  前記の通り、この実験は無胸腺ＭＣｒ−ｎｕマウスにおける頭蓋内Ｕ２５１及びＳＦ−２９５膠芽細胞腫に対する生成物（Ｉａ）の活性を評価するために設計された。生成物（Ｉａ）に関する投薬量は投薬当たりに３０、２０及び１３．４ｍｇ／ｋｇであった。２つの頭蓋内に移植される実験のために、媒体のｍｌ当たり３．３３ｘ１０7個の細胞の濃度で細胞を調製し、マウス当たり０．０３ｍｌの容量で注入した。２５ゲージ、３／８インチのステンレススチール針を用い、大脳中、中線の右に細胞を注入した。Ｕ２５１実験（ＲＰ−３６）のためには培養された細胞を用いた。処置スケジュールは、ｑ６ｄ  ｘ  ３、静脈内、移植後４日に開始、であった。ＳＦ−２９５実験（ＲＰ−３８）のためには充実性腫瘍から作られる腫瘍ブライを用いた。処置スケジュールは、ｑ４ｄ  ｘ  ３、静脈内、移植後２日に開始、であった。ＣＮＳ腫瘍に対するニトロソウレアの既知の活性の理由で、各実験において比較目的のためにニトロソウレアを与えた。投薬量は投薬当たりに２７、１８及び１２ｍｇ／ｋｇであり、処置スケジュールは各実験において生成物（Ｉａ）に関する処置スケジュールと同じであった。
【００８１】  第１の実験（ＲＰ−３６）で、各化合物は頭蓋内に移植されるＵ２５１膠芽細胞腫の処置において有効であった。生成物（Ｉａ）を用いる処置は、投薬当たり３０、２０（ＭＴＤ）及び１３．４ｍｇ／ｋｇの投薬量群に関し、それぞれ１０匹中５匹、１０匹中４匹及び１０匹中３匹の１２２−日生存個体ならびに１７６％、２０２％及び１４４％のＩＬＳという結果を与えた。ニトロソウレアを用いる処置はそれぞれ投薬当たり１８及び１２ｍｇ／ｋｇの投薬量群において２０５％及び５１％のＩＬＳという結果を与えた。投薬量当たり２７（ＭＴＤ）及び１８ｍｇ／ｋｇの投薬量群において１０匹中１０匹及び１０匹中７匹の１２２−日生存個体があった。
【００８２】  第２の実験（ＲＰ−３８）で、各化合物は頭蓋内に移植されるＳＦ−２９５膠芽細胞腫の処置において有効であった。投薬当たり３０、２０及び１３．４（ＭＴＤ）ｍｇ／ｋｇにおいて生成物（Ｉａ）を用いる処置はそれぞれ−９％、９４％及び８１％のＩＬＳという結果を与えた。処置期間を通してのそれぞれ７ｇ及び６ｇの平均体重損失により証明される通り、投薬当たり３０及び２０ｍｇ／ｋｇの投薬量レベルにおいていくらかの毒性があった。投薬当たり１３．４ｍｇ／ｋｇの投薬量群において、１０匹の動物から１匹の６８−日生存個体があった。処置期間を通しての７ｇの平均体重損失により証明される通り、ニトロソウレアは投薬当たり２７ｍｇ／ｋｇの最高投薬量レベルにおいて毒性であった。投薬当たり２７、１８及び１２ｍｇ／ｋｇの投薬量においてニトロソウレアを用いる処置はそれぞれ５０％、１３１％及び１０６％のＩＬＳという結果を与えた。投薬当たり２７（ＭＴＤ）ｍｇ／ｋｇの投薬量レベルにおいて１０匹の動物から２匹の６８−日生存個体があり、投薬当たり１８ｍｇ／ｋｇの投薬量レベルにおいて１０匹の動物から１匹の６８−日生存個体があった。
【００８３】  要するに、頭蓋内に移植されたＵ２５１及びＳＦ−２９５膠芽細胞腫の両方に対して生成物（Ｉａ）を調べた。この化合物はこれらの２つの腫瘍系に対し、両移植部位において非常に活性であった。
【００８４】
【表４】
0005354762.tif 000012
【００８５】
【表５】
0005354762.tif 000013