(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分としてのヒドロキシプロリンまたはその塩と、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤から選ばれる１つ以上の添加剤とを含有し、剤形が錠剤、散剤または顆粒剤である、皮膚のしわまたはたるみの抑制または改善用経口剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒドロキシプロリンまたはその塩を有効成分として含有する、組織コラーゲン合成促進用経口剤、皮膚の創傷治癒促進用経口剤、および皮膚のしわまたはたるみの抑制または改善用経口剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
コラーゲンは、生体組織の細胞と細胞、あるいは細胞集団と細胞集団とのすきまを満たしている細胞外マトリックスの主要タンパク質成分であり、哺乳動物では体の総タンパク質の30％ 近くを占めることがあると言われている（非特許文献１参照）。【０００３】
コラーゲンは繊維状や膜状の構造体を形成し、第一義的な機能としては、組織の構造維持、支持、結合、補強などを担っており、皮膚、骨、腱、靱帯、角膜、血管などに多く存在する。これらの組織の老化に伴い引き起こされる、しわやたるみ、骨粗鬆症などは、組織コラーゲンの減少、変性などが大きな要因であると考えられている。実際、長期間の日光暴露により組織コラーゲンが著明に減少する（非特許文献２参照）、加齢に伴う生体成分の新陳代謝の低下は、コラーゲンの新陳代謝の低下が引き金となって進行する（非特許文献３参照）との報告もある。【０００４】
コラーゲンの合成を促進するものとしては、グロースファクターであるTGFβ-1（非特許文献４参照）、植物抽出物（特許文献１参照）、コラーゲン分解物（特許文献２〜５参照）あるいはアミノ酸組成物（特許文献６参照）などが知られている。より具体的には、経口摂取によりコラーゲン合成促進作用を有するコラーゲン分解物の特徴的な配列としてGly-Pro-Hyp のトリペプチドが知られている一方で、Gly、Pro、Hyp等のコラーゲン構成アミノ酸をコラーゲン中の構成比と等しくしたアミノ酸組成物はコラーゲン合成促進作用を示さないことが知られている（特許文献４参照）。【０００５】
一方、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体の経口摂取によるコラーゲン合成促進作用が知られており（非特許文献４）、ヒドロキシプロリンのＮ-アセチル誘導体を含む外用剤は、創傷の治療薬として欧州で用いられている。また、ヒドロキシプロリンおよびヒドロキシプロリンのＮ−アシル化誘導体の、培養ヒト繊維芽細胞に対するコラーゲン合成促進作用、外用によるしわ形成の抑制または改善作用が知られている（特許文献７）。しかしながら、ヒドロキシプロリンの経口摂取によるコラーゲン合成促進作用、皮膚の創傷治癒促進作用、皮膚のしわまたはたるみの抑制または改善作用は知られていない。
【特許文献１】特開２００４−３５５２７号公報
【特許文献２】特開平７−２７８０１２号公報
【特許文献３】特開２０００−２０１６４９号公報
【特許文献４】特開２００１−１３１０８４号公報
【特許文献５】特開２００３−１３７８０７号公報
【特許文献６】特開２００５−２８９９２８号公報
【特許文献７】国際公開第２０００／０５１５６１号パンフレット
【非特許文献１】「生化学辞典  第１版」、東京化学同人、１９８４年、ｐ．４８０
【非特許文献２】「加齢と皮膚」、清至書院、１９８６年、ｐ．３５
【非特許文献３】「老化のメカニズムと制御」、アイピーシー、１９９３年、ｐ．１５１
【非特許文献４】「エクスペリメンタル・アンド・モレキュラー・パソロジー（Experimental & Molecular Pathology）」、１９７８年、第２８巻第１号、ｐ．５８−６４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、安全で優れた効果を有する組織コラーゲン合成促進用経口剤、皮膚の創傷治癒促進用経口剤、または皮膚のしわもしくはたるみの抑制もしくは改善用経口剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、下記の（１）〜（１０）に関する。
（１）ヒドロキシプロリンまたはその塩を有効成分として含有する、組織コラーゲン合成促進用経口剤。
（２）組織が皮膚である上記（１）のコラーゲン合成促進用経口剤。
（３）ヒドロキシプロリンまたはその塩の有効量を、経口投与することを特徴とする、組織コラーゲン合成促進方法。
（４）組織コラーゲン合成促進用経口剤の製造のための、ヒドロキシプロリンまたはその塩の使用。
（５）ヒドロキシプロリンまたはその塩を有効成分として含有する、皮膚の創傷治癒促進用経口剤。
（６）ヒドロキシプロリンまたはその塩の有効量を、経口投与することを特徴とする、皮膚の創傷治癒促進方法。
（７）皮膚の創傷治癒促進用経口剤の製造のための、ヒドロキシプロリンまたはその塩の使用。
（８）ヒドロキシプロリンまたはその塩を有効成分として含有する、皮膚のしわまたはたるみの抑制または改善用経口剤。
（９）ヒドロキシプロリンまたはその塩の有効量を、経口投与することを特徴とする、皮膚のしわまたはたるみの抑制または改善方法。
（１０）皮膚のしわまたはたるみの抑制または改善用経口剤の製造のための、ヒドロキシプロリンまたはその塩の使用。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、ヒドロキシプロリンまたはその塩を有効成分として含有する、安全で優れた効果を有する組織コラーゲン合成促進用経口剤、皮膚の創傷治癒促進用経口剤、または皮膚のしわもしくはたるみの抑制もしくは改善用経口剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、ヒドロキシプロリンの経口摂取後における、血清中の遊離ヒドロキシプロリン濃度を示すグラフである。
【図２】図２は、ヒドロキシプロリンの経口摂取後における、皮膚中の遊離ヒドロキシプロリン濃度を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明で用いられるヒドロキシプロリンは、いずれのヒドロキシプロリンの立体異性体であってもよい。すなわち、ヒドロキシプロリンのプロリンがＤ体かＬ体か、また水酸基の位置が３位か４位か、およびその立体異性体がシスかトランスかによって８種類の立体異性体があるが、いずれの化合物も本発明に用いることができる。【００１１】
具体的なヒドロキシプロリンとしては、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンがあげられる。【００１２】
ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分として、また、エラスチンの構成アミノ酸として自然界に広く存在するアミノ酸の一種であり、例えばブタやウシ等の動物由来のコラーゲンを酸加水分解し、常法により精製することにより製造することができる。【００１３】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、アミコラトプシス（Amycolatopsis）属またはダクチロスポランジウム（Dactylosporangium）属より単離したプロリン４位水酸化酵素（特開平７−３１３１７９）を用いて製造することができる。また、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、ストレプトマイセス（Streptomyces）属より単離したプロリン３位水酸化酵素（特開平７−３２２８８５）を用いて製造することができる（バイオインダストリー, １４巻, ３１号, １９９７年）。【００１４】
上記の微生物由来の酵素を用いて製造されるヒドロキシプロリンは、品質が優れており、本発明で用いるヒドロキシプロリンとしてより好ましい。
ヒドロキシプロリンの塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等があげられる。
酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、α−ケトグルタル酸塩、グルコン酸塩、カプリル酸塩等の有機酸塩があげられる。【００１５】
金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられる。
アンモニウム塩としては、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩があげられる。
有機アミン付加塩としては、モルホリン、ピペリジン等の塩があげられる。【００１６】
アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸等の塩があげられる。【００１７】
本発明の組織コラーゲン合成促進用経口剤、皮膚の創傷治癒促進用経口剤、または皮膚のしわもしくはたるみの抑制もしくは改善用経口剤は、ヒドロキシプロリンまたはその塩を含有し、必要に応じて薬理学的に許容される一種または二種以上の担体、さらに必要に応じて他の治療のための有効成分を含有していてもよい。
本発明の組織コラーゲン合成促進用経口剤、皮膚の創傷治癒促進用経口剤、または皮膚のしわもしくはたるみの抑制もしくは改善用経口剤は、ヒドロキシプロリンまたはその塩を必要に応じ担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造することができる。【００１８】
本発明の組織コラーゲン合成促進用経口剤、皮膚の創傷治癒促進用経口剤、または皮膚のしわもしくはたるみの抑制もしくは改善用経口剤を製剤化する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることができる。
製剤の剤形としては、錠剤、散剤、顆粒剤、乳剤、シロップ剤、カプセル剤等があげられる。
製剤の剤形がシロップ剤等の液体調製物である場合は、水、蔗糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類などを添加して、製剤化することができる。【００１９】
また、経口投与に適当な、例えば錠剤、散剤、顆粒剤等の場合には、乳糖、白糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、カンゾウ末、ゲンチアナ末等の植物末等の賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコン油等の滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルメロース、ゼラチン、澱粉のり液等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤などを添加して、製剤化することができる。
また、経口投与に適当な製剤には、一般に飲食品に用いられる添加剤、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色剤、漂白剤、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等が添加されてもよい。
経口投与に適当な製剤は、そのまま、または例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態のものであってもよい。また、組織コラーゲン合成促進用、皮膚の創傷治癒促進用、または皮膚のしわもしくはたるみの抑制もしくは改善用の健康食品、機能性食品、栄養補助食品、特定保健用食品等の飲食品として用いてもよい。【００２０】
本発明の経口剤中のヒドロキシプロリンまたはその塩の濃度は、経口剤の種類、当該経口剤の投与により期待する効果等に応じて適宜選択されるが、ヒドロキシプロリンまたはその塩として、通常は０．１〜１００重量％、好ましくは０．５〜７０重量％、特に好ましくは１〜５０重量％である。
本発明の経口剤の投与量は、投与形態、投与される者の年齢、体重等に応じて異なるが、成人に対し一日あたりヒドロキシプロリンまたはその塩として、通常は５ｍｇ〜５０００ｍｇ、好ましくは５０ｍｇ〜５０００ｍｇ、より好ましくは５００ｍｇ〜５０００ｍｇであり、１日に１回または数回に分けて投与する。投与期間は、特に限定はないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ケ月間である。【００２１】
なお、本発明の経口剤は、ヒトだけでなく、ヒト以外の動物（以下、非ヒト動物と略す）に対しても使用することができる。
非ヒト動物としては、ほ乳類、鳥類、は虫類、両生類、魚類等、ヒト以外の動物をあげることができる。
非ヒト動物に投与する場合の投与量は、動物の年齢、種類等に応じて異なるが、体重１ｋｇ１日当たり、ヒドロキシプロリンまたはその塩として、通常は０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは１０ｍｇ〜１００ｍｇとなるように一日一回ないし数回投与する。【００２２】
投与期間は、特に限定されないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ヶ月間である。【００２３】
以下に、ヒドロキシプロリンの皮膚におけるコラーゲン合成促進効果、創傷治癒促進効果および皮膚のしわまたはたるみの改善効果を調べた試験例を示す。
試験例１
試験には、ＨＯＳ：ＨＲ−１マウス（メス、７週齢、日本エスエルシー社より購入）を用いた。【００２４】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（協和発酵工業社製、以下、ヒドロキシプロリンと略す）を精製水に５０ mg/mlとなるように溶解し、５００ mg/kgで経口投与した。０．５、１、２、４、６、２４時間後にジエチルエーテル吸入麻酔下で腹部大静脈から採血し血清を得た。また、頚椎脱臼後に背部皮膚を採取し、凍結粉砕後、水抽出による皮膚抽出物を得た。【００２５】
該血清および該皮膚抽出物中のヒドロキシプロリン量は、等量の２％(ｗ/ｖ)スルホサリチル酸で除タンパク処理後、NBD-Cl（4-Chloro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole、東京化成工業社製）で第２アミノ基を標識し、ODSカラム（4.6 cmφｘ15 cm、ジーエルサイエンス社製）用いた高速液体クロマトグラフィー法により分析した。
結果を図１および２に示す。経口摂取したヒドロキシプロリンは速やかに血中および皮膚中に移行することが明らかとなった。
試験例２
２９週齢のF344/DuCrlCrlj ラット（雄性、日本チャールスリバー株式会社より購入）１２匹を６匹ずつ２群に分けた。【００２６】
第１群のラットに実施例５記載の飼料を、第２群のラットに比較例１記載の対照飼料を７日間、それぞれ自由摂取させた。ペントバルビタール腹腔内投与麻酔下で腹部をバリカンで剃毛し、皮下２箇所に約１５０ mgにカットしたスポンジ（アイバロン社製、2 mm厚、約38 mmＸ12 mm）を挿入・縫合し、さらに７日間飼育の後にスポンジを摘出した。
スポンジ１枚につき６N塩酸２０ mlを用いて１１０℃、１８時間反応させることにより酸熱分解した。得られた酸熱分解物は1M ほう酸緩衝液（pH 10.6)で10倍希釈した後、試験例１と同様の方法でヒドロキシプロリン量を測定し、ラットのコラーゲン合成能および組織修復能の指標とした。【００２７】
値は平均値±標準偏差で表し、統計学的有意差検定はｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ検定により行った。【００２８】
【表１】
0005188388.tif 000002
【００２９】
結果を表１に示す。ヒドロキシプロリンを摂取した第１群のラットにおいて、熱分解されたコラーゲンに由来するヒドロキシプロリン量が有意に増加したことから、皮膚におけるコラーゲン合成が促進され、その結果、組織修復すなわち創傷治癒が促進されたことが明らかとなった。【００３０】
試験例３
慢性的に肌が乾燥し、肌荒れに悩んでいる４７歳から６５歳までの女性２１名を被験者として２群に分け、２週間の観察期間後、第１群の被験者（９名）には実施例６記載のハードカプセルを、第２群の被験者(１２名)には比較例２記載のハードカプセルをそれぞれ朝晩２カプセルずつ４週間摂取させた。試験は並行群間二重盲検試験で行った。ハードカプセルの摂取開始時および摂取終了時に、被験者に対して「１」の回答を1段階、「１０」の回答を１０段階とする以下の質問1〜３を行い、被験者の皮膚状態を１０段階法で評価した。【００３１】
質問１．あなたの顔のしわのレベルを評価しなさい。
１．全面にしわがある。１０．全くしわがない。
質問２．あなたの顔の皮膚の弾力性を評価しなさい。
１．弾力性がない。１０．極めて弾力性がある。
質問３．あなたの顔の皮膚に張りがあるか評価しなさい。
１．全く張りがない。１０．張りがある。【００３２】
上記評価において、段階が高いほど、質問１では被験者が皮膚のしわが改善したと感じていることを、質問２および３では皮膚のたるみと関連する弾力性および張りがそれぞれ高くなったと感じていることを示す。また、改善率（％）は式１に従って算出した。
【式１】
【００３３】
改善率（％）＝  摂取後の段階の平均値／摂取前の段階の平均値   ×１００                     
【００３４】
得られた結果を表２に示す。なお、表中の値は平均値を示す。
【表２】
0005188388.tif 000003
【００３５】
表２より、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンの摂取により、顔のしわおよびたるみが改善されることが明らかとなった。
以上の試験例から、経口摂取したヒドロキシプロリンは皮膚に移行してコラーゲン合成促進効果、創傷治癒効果および皮膚のしわまたはたるみの改善効果を有することが示された。
【００３６】
以下に、本発明の実施例を示す。
【実施例１】
【００３７】
ヒドロキシプロリンを含む錠剤の製造
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有する錠剤を、常法により製造する。すなわち、下記の各成分を均一に混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径５ｍｍ、重量１５ｍｇの組織コラーゲン合成促進用の錠剤を得る。
【表３】
0005188388.tif 000004
【実施例２】
【００３８】
ヒドロキシプロリンを含有する顆粒剤の製造
実施例１で得られる錠剤を粉砕、製粒し、篩別して２０−５０メッシュの皮膚の創傷治癒促進用の顆粒剤を得る。
【実施例３】
【００３９】
ヒドロキシプロリンを含有する飲料の製造
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有する組織コラーゲン合成促進用の飲料を、下記の各成分を均一に攪拌溶解し、精製水を加えて全量を１０００ｍｌとすることにより製造する。なお、下記成分中の適量とは、香料、色素に関しては、通常の飲料の製造に用いられる量であり、精製水に関しては、他の成分に加え、全量として１０００ｍｌにするために必要な量のことをいう。【００４０】
【表４】
0005188388.tif 000005
【実施例４】
【００４１】
ヒドロキシプロリンを含有する飴の製造
下記の各成分からなるトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有する皮膚の創傷治癒促進用の飴を、常法により製造する。
【表５】
0005188388.tif 000006
【実施例５】
【００４２】
ヒドロキシプロリンを含有する動物飼料の製造 
下記の各成分からなるトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有する動物飼料を、常法により製造した。
【表６】
0005188388.tif 000007
【実施例６】
【００４３】
ヒドロキシプロリンを含有するカプセルの製造
下記の各成分をそれぞれ秤量後、混合機に投入し、十分に混合して均一とした後、常法によりハードタイプのゼラチンカプセルに封入し、１カプセルが約５００mgのトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有するハードカプセルを製造した。
【表７】
0005188388.tif 000008
比較例１
実施例５のトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンをＬ−アスパラギン酸に置き換えた動物飼料を製造した。
比較例２
実施例６のトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンをコーンスターチに置換えたハードカプセルを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明により、ヒドロキシプロリンまたはその塩を有効成分として含有する、組織コラーゲン合成促進用経口剤、皮膚の創傷治癒促進用経口剤、または皮膚のしわもしくはたるみの抑制もしくは改善用経口剤を提供することができる。
【図１】
0005188388.tif 000009
【図２】
0005188388.tif 000010