(57)【要約】【課題】  強力な抗酸化活性を有し、飲食品、医薬品等の分野において有用な抗酸化剤を提供する。【解決手段】  ルトナリンを有効成分として含有する。【選択図面】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルトナリンを有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はルトナリンを含有する抗酸化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明者らは、先に、麦類植物の緑葉、殊に大麦の若い緑葉中にα−トコフェロールを凌ぐ強い酸化防止活性を有する物質が含まれていることをつきとめ、その物質を抽出精製し、それが２″−０−グルコシルイソビテキシンであることを明らかにした（特許文献１）。
【特許文献１】特開平５−６５４８０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者は、麦類植物の緑葉中に含まれる抗酸化活性物質についてさらに研究をすすめた結果、麦類植物の緑葉中には、２″−０−グルコシルイソビテキシンが含まれる抽出画分とは別の画分にも強力な抗酸化活性を示す画分が存在することを発見し、その画分から抗酸化活性を示す本体を分離し同定を行なった結果、それがルトナリンであることが判明した。
【０００４】
このルトナリンは、上記２″−０−グルコシルイソビテキシンよりもはるかに強力な抗酸化活性を有しており、飲食品、医薬品等をはじめとする各種の製品の抗酸化剤として有用であることが見い出された。
【０００５】
そこで、本発明は、強力な抗酸化活性を有し、飲食品、医薬品等の分野において有用な抗酸化剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の抗酸化剤は、ルトナリンを有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の抗酸化剤は、タルク、亜鉛華、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、二酸化チタン、カオリン、リン酸カルシウム等の医薬、塗料、化粧品、発泡剤等の原料に混合しまたは噴霧乾燥、真空乾燥等により粉末として配合することにより、新規な工業製品の製造が可能となり、しかも製品の品質にも変化を起こさせない等の利点を有する。さらに、水溶性で、更にアルコール可溶性を有する本発明の抗酸化剤は、無機および有機組成物の安定化にも役立ち、優れた新規製品、例えば、ポリマー製造用酸化防止剤；エマルジョン塗料；香粧料；紙製品；食品；医薬品；医療用材料等の製造を可能にするものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、麦類植物の緑葉からのルトナリンの抽出法及びルトナリンの抗酸化剤としての用途についてさらに詳細に説明する。
【０００９】
ルトナリンの抽出原料として使用される麦類植物としては、大麦、小麦、裸麦、エン麦、ハト麦、トウモロコキシ、キビ、イタリアンダイグラスなどが挙げられるが、中でも、大麦及び裸麦が好適であり、殊に大麦が最適である。
【００１０】
本発明では、これら麦類植物の中でも成熟期前に収穫した若い植物の新鮮な茎及び／又は葉の部分（本明細書ではこれらを総称して「緑葉」という）が特に適している。
【００１１】
麦類植物の緑葉はまず、ミキサー、ジューサー、等の機械的破砕手段によって搾汁し、必要に応じて、篩別、濾過等の手段によって粗固形分を除去することにより搾汁液（以下、これを「青汁」という）を調製する。
【００１２】
次いで、この青汁をそのまま、或いはそれを凍結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥することにより得られる青汁粉末を充分量の水（好ましくは熱水）又はｎ−ヘキサンで抽出処理する。この抽出処理は通常室温で行なうことができ、場合によっては２回又はそれ以上繰り返し行なってもよく、それによって、水可溶性成分又はｎ−ヘキサンに実質的に不溶性の成分を分離回収する。回収された抽出成分はこの段階で前記と同様にして乾燥し固形化することができる。
【００１３】
かくして得られるｎ−ヘキサン不溶性成分を次いで含水率が０〜８０％、好ましくは１０〜７０％、さらに好ましくは１５〜５０％の含水エタノール、例えば含水率２０％の含水エタノールで抽出処理を行ない、該含水エタノールに可溶性の成分を分離回収する。なお、本明細書において含水率の％はｖ／ｖ％である。この含水エタノールによる抽出処理は、前記の如くして調製される青汁もしくはそれから水不溶性成分を完全に除去した緑葉の水溶性成分又はそれらを凍結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥して得られる粉末に対して直接行なうこともできる。
【００１４】
このようにして回収された含水エタノール可溶性成分は、そのままで或いは濃縮又は溶媒を留去することができる。
【００１５】
以上の如くして得られる水可溶性成分及び含水エタノール可溶性成分は、次いで、多孔性樹脂吸着剤で処理する。この吸着処理に使用しうる多孔性樹脂吸着剤としては、多孔性で大きな吸着表面積を有する非イオン性（好ましくは疎水性）の樹脂、例えば、スチレン−ジビニルベンゼン重合体、フェノール−ホルムアルデヒド樹脂、アクリル系樹脂をベースとするものが挙げられ、具体的には例えば、アンバーライトＸＡＤ−１、アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８、アンバーライトＸＡＤ−１１、アンバーライトＸＡＤ−１２（以上、ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨＰ−１０、ダイヤイオンＨＰ−２０、ダイヤイオンＨＰ−３０、ダイヤイオンＨＰ−４０、ダイヤイオンＨＰ−５０（以上、三菱化学（株）製）、イマクティＳｙｎ−４２、イマクティＳｙｎ−４４、イマクティＳｙｎ−４６（以上、Imacti社製）等を挙げることができる。
【００１６】
吸着処理された多孔性樹脂吸着剤は、含水率が６５〜７５％、好ましくは７０％の含水エタノールで溶離処理を行なうことによって、ルトナリンを含有する該含水エタノールに可溶性の成分を回収することができる。この含水メタノール可溶性成分はそのまま又は濃縮後、或いは凍結乾燥、噴霧乾燥等の乾燥手段で乾燥した後に本発明の抗酸化剤としては使用することができる。
【００１７】
上記の如くして得られる含水メタノール可溶性成分は、必要に応じて、濃縮し、濃縮液を冷却下に静置することにより、ルトナリンを結晶として回収することができる。回収された結晶は、必要に応じてさらに、例えば含水率が２０〜９０％、好ましくは３０〜８０％の含水メタノールを用いて再結晶精製することができる。このようにして単離されるルトナリンは下記式（Ｉ）
【００１８】
【化１】
2005281702.tif 000002
【００１９】
で示される微黄色の結晶である。
【００２０】
このようにして麦類植物の緑葉から抽出されるルトナリンは、後記実施例から明らかなように強力な酸化防止活性を有しており、例えば、食品、医薬品等の分野における酸化防止剤として有用である。
【００２１】
上記の如くして調製されるルトナリンは、原料の緑葉中に通常含まれる各種金属元素や食品の変性を促進する物質等が除去されており、抗酸化剤として、抗酸化性が要求される食品、医薬品等の分野における各種の無機又は有機（組成）物に有利に配合することができる。特に、本発明の抗酸化剤は、配合した組成物の水溶性、透明性に実質的に悪影響を与えることがなく、また、水性の組成物にあっては、濾過滅菌が可能である。その際、ルトナリンは、必要により、シクロデキストリン、クラウンエーテル等による包接を行なった後、果糖、ブドウ糖、デキストリン、デンプン等の糖類；アミノ酸類；クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸等の有機酸；各種ビタミン類；着色料、香料、各種増粘剤等と混合することができる。
【００２２】
次に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
【実施例】
【００２３】
実施例１
成熟期前の大麦の青汁の凍結乾燥粉末２０ｇにｎ−ヘキサン５００ｍｌを加え常温で約５分間よく撹拌した後、不溶成分を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）により分離し、さらに分離した不溶成分にｎ−ヘキサン５００ｍｌを加え、同様の操作を繰り返しｎ−ヘキサン不溶成分を得た。
【００２４】
この不溶成分に、含水率２０％の含水エタノール５００ｍｌを加え常温で約５分間よく撹拌した後、不溶分を濾別する。濾別した不溶分を再度含水率２０％の含水エタノール５００ｍｌで同様に処理し、得られる濾液を合わせて、減圧下に溶媒を留去する。これによって含水エタノール抽出物１３. ０ｇを得た。
【００２５】
この含水エタノール抽出物をアンバーライトＸＡＤ−２カラムに吸着させた後、含水率が７０％の含水メタノールで溶離処理し、溶出液を得た。この溶出液を減圧下に濃縮し、この濃縮液を１週間冷蔵庫に入れて保存した。析出した結晶を遠心分離し、さらにメタノールを用いて再結晶し、１７ｍｇの微黄色の結晶を得た。この結晶の構造決定を質量分析及びＮＭＲにより行った。
【００２６】
質量分析はＦＡＢ−ＭＳ：ＪＭＳ−ＳＸ１０２Ａ型質量分析装置（日本電子（株）製）を用いて、本物質を negative ＦＡＢ（Fast Atom Bombertment ）−ＭＳにて測定したところ、図１に示すように、ｍ／ｚ＝６０９に［Ｍ- Ｈ] - のピークが観測され、分子量は６１０であることが明らかになった。また、同時にｍ／ｚ＝４４７に相当するピークやｍ／ｚ２８５に［Ｍ- Ｈ- hexose- hexose] - に相当するピークが観測されることから、本物質は、他の測定結果を考慮するとき、ルトナリンにヘキソースが２モル結合した構造であると推定される。
【００２７】
上記結晶の紫外線吸収スペクトルをＨ2 Ｏ及びメタノール中で測定したところ、それぞれ図２及び図３に示すようになりフラボノイドグルコシドの吸収を示した。
【００２８】
上記結晶の赤外線吸収スペクトルを、ＪＡＳＣＯＦＴ／ＩＲ−７０００Ｓを用いＫＢｒ法により測定した結果を図４に示す。３４２２ｃｍ-1にＯＨ基の存在を示している。
【００２９】
上記結晶の1 Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）をＪＥＯＬｄ−５００型核磁気共鳴スペクトル吸収測定装置（日本電子（株）製）により溶媒としてＤＭＳＯを用いて測定し、図５に示す結果を得た。
【００３０】
さらに、上記結晶の13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）を、ＪＥＯＬＧＸ−４００型核磁気共鳴スペクトル吸収測定装置（日本電子（株）製）により溶媒としてＤＭＳＯを用いて測定し、図６に示す結果を得た。
【００３１】
以上の分析結晶を総合すると、上記の微黄色の結晶は、前記式（Ｉ）に示す構造をもつルトナリンであると同定される。
【００３２】
実施例２
成熟期前の裸麦の青汁の噴霧乾燥物５００ｇを水３ｌで熱水抽出を行ない、得られる水抽出液をアンバーライトＸＡＤ−２カラムクロマトグラフィー（１ｌ容）に通した後、含水率が７０％の含水メタノールで溶離処理を行ない、得られた含水メタノール分画を減圧留去し、この濃縮液を約１週間、冷蔵庫保存し、析出した結晶を遠心分離し、結晶を得た。さらに、この結晶をメタノールを用いて再結晶した。得られた結晶について実施例１におけると同様にしてアンバーライトＸＡＤ−２カラムクロマトグラフィーを行い、７０％含水メタノールによる溶出液を得た。この溶出液を減圧濃縮後、メタノールを用いて再結晶する。
【００３３】
得られた結晶はメタノールで洗浄後デシケーター（シリカゲル）で２４時間以上減圧乾燥させ、２４０ｍｇの黄色結晶を得た。この結晶について実施例１と同様の分析を行ない、ルトナリンと同定した。
【００３４】
実施例３
ｐＨ７．４の０. ０５ＭＫＨ2 ＰＯ4 −Ｎａ2 ＨＰＯ4 緩衝液（Ａ）、７８０μＭＮＡＤＨの緩衝液（Ａ）溶液及び１００μＭニトロブル−テトラゾリウム（ＮＢＴ）の緩衝液（Ａ）溶液の６：１：１の混合溶液を、１. ５ｍｌ容プラスティックディスポセルに０. ８ｍｌ注加した。この系に７５０μＭのルトナリンまたはコーヒー酸水溶液を加え、撹拌後、１００μＭフェナジンメトサルフェート（ＰＭＳ）水溶液０. １ｍｌ注加し、分光光度計ＨＩＴＡＣＨＩＵ−３０００にセットして経時的に５６０ｎｍの吸光度を測定した。この結果を、ルトナリン及びコーヒー酸は７５μＭの濃度においてそれぞれ４８. ９％及び２５. ７％の阻害率で、ＮＡＤＨとＮＢＴによるスーパーオキサイドアニオンの生成を抑制した。
【００３５】
実施例４
１．１×１０-4Ｍ１, １−ジフェニル−２−ピクリル−ヒドラジル（ＤＰＰＨ）のエタノール溶液を１. ５ｍｌ容プラスティックディスポセルに１. ３５ｍｌづつ分注し、各セルに各濃度のルトナリンまたはルチンを注加し、ルトナリン又はルチンによるＤＰＰＨラジカルの非ラジカル体への変換をＤＰＰＨの５１７ｎｍの吸光度の減少量で測定した。この結果、ルトナリンのＥＣ50は１. ２×１０-4Ｍであり、ルチンのＥＣ50は１. ５×１０-4Ｍであった。
【００３６】
実施例５
リノール酸エチルエステル１０μｌ、０. ２％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の０. ０５Ｍトリス−ＨＣｌ緩衝液５ｍｌ、２０ｍＭＦｅＣｌ2 水溶液５０μｌ及び１０ｍＭＨ2 Ｏ2 水溶液５０μｌの混合溶液に、２８. ３ｍＭのルトナリンまたはコーヒー酸水溶液１００μｌ、そしてコントロールとしてＤＭＳＯ１００μｌを添加し、３７℃で１６時間反応後、反応溶液２００μｌに、４％ＢＨＴ溶液５０μｌ、８％ＳＤＳ溶液２００μｌ、チオバルビツール酸試薬（ＴＢＡ試薬：ＴＢＡ０. ６７ｇ／Ｈ2 Ｏ１００ｍｌ）及び１００ｍＭ、ｐＨ３. ５酢酸緩衝液１. ５ｍｌの混合溶液３. ２５ｍｌを加え、沸騰浴中で２０分間加熱し、冷却後、ｎ−ブタノール：メタノール＝９：１を５ｍｌ添加して混合し、２０００ｒｐｍで１０分間遠心し、その上層の５３２ｎｍの吸光度を測定した。その結果、リノール酸エチルエステルの酸化によるマロンアルデヒドの生成の抑制率が、ルトナリンは２７％であり、そしてコーヒー酸は１５％であった。
【００３７】
実施例６
ビタミンＢ2 の２００μＭ溶液をＴｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝液（ｐＨ７）を用いて調製し、この溶液２. ０ｍｌと各種の抗酸化剤の２００μＭ溶液２. ０ｍｌの混合溶液を石英セルに注加し、これに光安定性試験装置ライトトロンＬＴ−１２０（ナガノ科学機械製作所）を用いて紫外線強度３００μＷ／ｃｍ2 、２０℃の条件下で紫外線を照射し、経時的にサンプリングし、Ｓｈｉｍｐａｃ−ＣＬＣ−ＯＤＳ（Ｍ）（５μｍ、４. ６ｍｍ×１５０ｍｍ）カラムを装備した島津高速液体クロマトグラフＴＬＣ−６Ａにより、移動相：１０ｍＭＮａＨ2 ＰＯ4 （ｐＨ５. ５）／メタノール＝６５／３５、流速：０. ５ｍｌ／分、カラム温度：４０℃で展開し、蛍光（Ｅｘ４４５ｎｍ、Ｅｍ５３０ｎｍ）でビタミンＢ2 の濃度を測定した。この測定値より前記混合溶液中のビタミンＢ2 の半減期を計算した。この結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
2005281702.tif 000003
【００３９】
実施例７
ビタミンＫ1 ４５. １ｍｇをエタノールに溶解し、正確に５０ｍｌに調節した。この溶液５ｍｌを分取し、ＳＤＳ０. ２５ｇを添加して溶解し、トリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７）で５０ｍｌに調節した。この溶液に対して実施例６と同様にして紫外線照射を行い、ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ５μｍ（４. ６×１５０ｍｍ）カラムを装備した島津高速液体クロマトグラフＬＣ−６Ａにより、移動相：メタノール／酢酸＝９９／１、流速：１. ０ｍｌ／分、３０℃で展開し、２７０ｎｍの吸光度を島津マルチパーパス目記分光光度計ＭＰＳ−２００により測定してビタミンＫ2 の濃度を測定した。この測定値より半減期を計算した。その結果を表２に示す。
【００４０】
【表２】
2005281702.tif 000004
【００４１】
実施例８
実施例７と同様にして、β−カロチンのＵＶ照射に対するルトナリンおよびコーヒー酸の保護作用を測定したところ、半減期はコントロール２８３分、ルトナリン５００分、コーヒー酸３７４分であった。
【００４２】
実施例９
ｐＨ７のＩＭＫＭ2 ＰＯ4 −Ｎａ2 ＨＰＯ4 溶液０. １５ｍｌ、６μＭＬ−アスコルビン酸水溶液０. ５ｍｌ及び２００μＭ抗酸化剤水溶液１. ５ｍｌの混合溶液を試験管に分注し、２７℃で５分間放置後、６μＭＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ水溶液０. ５ｍｌを注加し、経時的に２８５ｎｍの吸光度を測定してＬ−アスコルビン酸の濃度を求め、半減期を計算した。その結果を表３に示す。
【００４３】
【表３】
2005281702.tif 000005
【００４４】
実施例１０
実施例９と同様にして反応系を構成し、さらに酸化剤として７５ｍＭＨ2 Ｏ2 水溶液０. ５ｍｌを注加し、経時的に２８５ｎｍの吸光度を測定してＬ−アスコルビン酸の濃度を求め、半減期を計算した。その結果を表４に示す。
【００４５】
【表４】
2005281702.tif 000006
【００４６】
実施例１１
実施例９と同様にして反応系を構成し、さらに酸化剤として１５μＭＦｅＣｌ2 水溶液０. ２ｍｌ及び７５ｍＭＨ2 Ｏ2 水溶液０. ２ｍｌを注加し、経時的に２８５ｎｍの吸光度を測定してＬ−アスコルビン酸の濃度を求め、半減期を計算した。その結果を表５に示す。
【００４７】
【表５】
2005281702.tif 000007
【００４８】
実施例１２
実施例２で得られたルトナリン５ｇ及びタルク４００ｇを水２ｌに添加して懸濁液を調製し、吸気温度１８０℃、排気温度１２０℃において噴霧乾燥を行い、３８２ｇの粉体原料を製造した。
【００４９】
実施例１３
実施例２で得られた裸麦若葉の青汁粉末の熱水抽出物の含水エタノール（含水率２０％）抽出物５ｇ及びテキストリン４００ｇを水１ｌに添加した溶液を調製し、吸気温度１９０℃、排気温度１２０℃において噴霧乾燥を行ない、３５０ｇの粉体原料を得た。
【００５０】
実施例１４
リンテックス−Ｐ（三楽株式会社製サイクロデキストリン）１００ｇに水３００ｍｌに加えて混和してスラリーを形成させ、これに実施例２で得られた裸麦の青汁粉末の熱水抽出物の含水エタノール（含水率２０％）抽出物１０ｇを加えて常温で９０分間撹拌後、濃度を３０％とし、吸気温度１７０℃、排気温度１１０℃において噴霧乾燥を行い、１０５ｇのサイクロデキストリンによる包接物を製造した。
【００５１】
実施例１５
実施例２で得られたルトナリン２ｇ及びデキストリン４００ｇを水２ｌに添加した溶液を調製し、吸気温度１９０℃、排気温度１２０℃において噴霧乾燥し、３７０ｇの粉体原料を得た。
【００５２】
実施例１６
リンテックス−Ｐ（三楽株式会社製サイクロデキストリン）１００ｇを水３００ｍｌに加えて混和してスラリーを形成させ、これに実施例１と同様の方法により製造したルトナリン１ｇを加えて常温で９０分間撹拌後、濃度を３０％とし、吸気温度１７０℃、排気温度１１０℃において噴霧乾燥を行い、９５ｇのルトナリンのサイクロデキストリンによる包接化合物を製造した。
【００５３】
実施例１７
実施例２で得られたルトナリン１ｇをカオリン２００ｇに混和して３０％懸濁液を調製し、吸気温度１７０℃、排気温度１１０℃において噴霧乾燥して１８７ｇの粉体原料を製造した。
【００５４】
実施例１８
ケイ酸ナトリウムの４％溶液１００ｍｌを脱塩した後、１％水酸化カリウムでｐＨ９に調節し、その１５ｍｌを９５℃で１５分間加熱した。一方、実施例１と同様の方法により製造したルトナリン２ｇを残りのケイ酸ナトリウム溶液８５ｍｌに添加し、その溶液を前記の加熱溶液に逐次添加し、９０℃で８時間濃縮を行い、ルトナリンを含有する球状シリカを製造した。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】図１は実施例１で得られたルトナリンのＦＡＢ−ＭＳ法による測定チヤートである。
【図２】図２はルトナリンのＨ2 Ｏ系における紫外線吸収スペクトルである。
【図３】図３はルトナリンのＭｅＯＨ系における紫外線吸収スペクトルである。
【図４】図４はルトナリンの赤外線吸収スペクトルである。
【図５】図５はルトナリンの1 Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図６】図６はルトナリンの13Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１】
2005281702.tif 000008
【図２】
2005281702.tif 000009
【図３】
2005281702.tif 000010
【図４】
2005281702.tif 000011
【図５】
2005281702.tif 000012
【図６】
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