(57)【要約】【課題】長期にわたり安定したＭＣＰ−１機能阻害剤の徐放性と体内での安定性をもつステントを提供することができる遺伝子・薬剤放出型ステントを提供すること。【解決手段】ステント基材（１１）表面を、単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を含有する高分子材料からなる薬剤保持層（Ｍ）で被覆した遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。前記ＭＣＰ−１機能阻害剤が、抗ＭＣＰ−１抗体、ＭＣＰ−１アンタゴニスト、ＭＣＰ−１ドミナントネガティブ及びそれらをコードする遺伝子から選ばれる１種又は２種以上のものである。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステント基材（１１）表面を、単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を含有する高分子材料からなる薬剤保持層（Ｍ）で被覆したことを特徴とする遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項２】
ＭＣＰ−１機能阻害剤が、抗ＭＣＰ−１抗体、ＭＣＰ−１アンタゴニスト、ＭＣＰ−１ドミナントネガティブ及びそれらをコードする遺伝子から選ばれる１種又は２種以上のものである請求項１記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項３】
ＭＣＰ−１ドミナントネガティブをコードする遺伝子が、配列番号１で表わされるものである請求項１ないし請求項２に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項４】
ステント基材（１１）表面をプライマー処理した後、当該プライマー層（Ｐ）を、前記薬剤保持層（Ｍ）で被覆したことを特徴とする請求項１ないし請求項３に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項５】
前記薬剤保持層（Ｍ）を、単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を含有しない高分子材料からなる被覆層（１２）で被覆したことを特徴とする請求項１ないし請求項４に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項６】
前記薬剤保持層（Ｍ）は、前記単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を生体内で徐放し、吸水性高分子材料からなる請求項１ないし請求項５に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項７】
前記プライマー層（Ｐ）はステント基材（１１）と薬剤保持層（Ｍ）を構成する吸水性高分子材料の両方に対して親和性の高い材料からなり、  前記被覆層（１２）は前記薬剤保持層（Ｍ）を被覆可能な高分子材料からなることを特徴とする請求項１ないし請求項６に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項８】
前記薬剤保持層（Ｍ）を構成する高分子材料が、ポリエーテル系ポリウレタン、生体吸収性高分子、架橋ポリビニルアルコールから選ばれるいずれかであることを特徴とする請求項１ないし請求項７に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【請求項９】
前記被覆層（１２）を構成する高分子材料が、ポリカーボネート系ポリウレタンであることを特徴とする請求項１ないし請求項８に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管、体腔内に埋没可能で狭窄部の治療に使用されるステントの改良に関し、特に生物学的活性物質を含んだ高分子材料で被覆されて、抗血栓性や血管内膜増殖抑制等の表面を提供し、再狭窄を予防するステントに関する。
【背景技術】
【０００２】
ステントとは、血管や他の生体内の管腔が狭窄や閉塞した場合、当該狭窄部等を拡張し必要な管腔領域を確保するため、当該部位に留置する管状の医療用具である。ステントは、直径が小さいまま体内に挿入し、狭窄部等で拡張させて直径を大きくし当該管腔を拡張・保持するのに使用される。
【０００３】
例えば、近年、狭窄した血管の再建を目的として、経皮的冠状動脈血管形成術（以下ＰＴＣＡ：Percutaneous Transluminal Coronary Angioplastyと称する。）により、ＰＴＣＡバルーンカテーテルによる拡張、及びステントの留置による治療が行われている。当該ステントは、カテーテルに装着したバルーンに空気を送って膨張・拡張して形成された血管内に留置することにより、その再狭窄を防止・抑制させることを企図しているものである。
このように、ステントの留置は、バルーン拡張のみによる血管形成に対し、再狭窄を抑制させる期待のもとに行われているものであったが、実際には、初期の予想ほど再狭窄率の低下を得られていないのが現状である。
【０００４】
これは、バルーンカテーテルやステントによる血管拡張は、血管外径の持続的収縮反応を引き起こし、また局所的な動脈ダメージにより、血管内皮細胞障害、炎症に伴う血液中炎症細胞の浸潤、血管平滑筋細胞の内膜下への遊走と増殖を引き起こす。これが血管の病的リモデリングであり、病理的には血管内腔の再狭窄を生じる。ステントの拡張、留置時に、当該ステント自身が引き起こす血管障害のため、再狭窄の発生率はＰＴＣＡで約３０〜４０％の患者に起こることが知られており、ＰＴＣＡの最大の問題点とされている。
そのため、従来から、抗がん剤、抗生物質等の薬剤をステントにコーティングし、局所的にこれら薬剤を徐放させる試みが行われてきた。
【０００５】
生理的活性因子であるケモカインは、白血球やリンパ球に対して、遊走活性を有する一群の蛋白質である。ケモカインは、その構造から大きく４種類に分けられ、１番目と２番目のシステインが連続して配置されているものは、ＣＣケモカインと称されている。
ＣＣケモカインのひとつである単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１：Monocyte Chemoattractant Protein-1）は、それ自身が蛋白として報告され、またほぼ同時期にｃＤＮＡ配列も明らかになった（J.
Exp. Med. 169, 1449-1459, 1989；J. Exp. Med. 169, 1485-1490, 1989；FEBS lett,
244, 487-493, 1989）。ＭＣＰ−１を認識する受容体はすでに同定され、またｃＤＮＡもクローニングされている（Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 91, 2752-2756, 1994；Biochem. Biophys. Res. Commun. 202, 1156-1162,
1994）。現在、ＣＣケモカイン受容体として１１種類の受容体が知られており、ＭＣＰ−１受容体はＣＣＲ２と呼ばれている。
【０００６】
ロリンズらは、ＭＣＰ−１蛋白のアミノ酸変異体を各種作成し、そのうちいくつかは細胞遊走活性が消失することを報告した（J. Bio. Chem. 269, 15918-15924, 1994）。これらの変異体のうち、Ｎ末端から数えて２から８番目のアミノ酸を欠失させた変異体７ＮＤ−ＭＣＰ−１は、ＣＣＲ２に対する結合能はあるが、細胞遊走を惹起しない、又はドミナントネガティブ（dominant  negative）として野生型ＭＣＰ−１とダイマーを形成し、ＭＣＰ−１の機能を阻害した。また、ケモカインのＮ末端欠失が、ケモカインの対応する内在性単量体とのヘテロ２量体を形成することによるケモカイン受容体の相互作用の有力なドミナントネガティブ阻害剤になり得、このものが関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、肺繊維症などの慢性肺炎等の炎症、自己免疫疾患等の治療に有効であることが知られている（特表平１１−５０６００５号公報）。
【０００７】
本発明者らは、７ＮＤ−ＭＣＰ−１遺伝子を含む発現ベクター（ｐｃＤＮＡ３）をモデル動物（ラット）の大腿部に筋肉注射し、ベクタープラスミドが導入された筋肉細胞で産生される７ＮＤ−ＭＣＰ−１が血行再建術を施こした血管の再狭窄を抑制することを確認し、ＭＣＰ−１機能阻害剤が血管再狭窄の予防及び／又は治療剤として有用であることを見出した。（特許文献１、特開２００２−２８４６９号公報）
すなわち、本発明はＰＴＣＡ後の血管再狭窄の予防及び／又は治療剤となりうるＭＣＰ−１機能阻害剤を有効成分とし、留置したステントより当該ＭＣＰ−１機能阻害剤を徐々に放出することにより、ステント留置後の再狭窄予防に非常に有効であることを見いだした。
【０００８】
また特許文献１には生理活性薬剤としてのＭＣＰ−１について、さらに特許文献２、３には薬剤を含有するコーティングステントが開示されている。特許文献１にはステントへの応用は開示されておらず、特許文献２、３には生理活性薬剤としてＭＣＰ−１機能阻害剤を用いた記載は無く、当該発明は、薬剤保持層のステントからの剥がれ及び長期にわたる薬剤の徐放が困難である事が指摘され、これらの具体的解決法についての開示がなされていない。
【特許文献１】特開２００２−２８４６９８号公報（特許請求の範囲）
【特許文献２】特開平２００１−２９３０９４号公報（特許請求の範囲１〜３項）
【特許文献３】WO  02/13883  A2号公報（特許請求の範囲１〜7項、１０〜３４項）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明が解決しようとする問題点は、経皮的冠動脈形成術又は末梢血管動脈硬化等に対する経皮的インターベンション等によって生じる治療部の再狭窄、及び薬剤コーティングステントにおける薬剤保持層の剥がれ及び長期にわたる薬剤の徐放が困難である点である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の目的は、ＭＣＰ−１受容体と特異的に拮抗し機能を阻害する化合物（ＭＣＰ−１機能阻害剤、例えば７ＮＤ−ＭＣＰ−１）を、留置したステントより徐々に放出することによりＭＣＰ−１により活性化される遺伝子の発現を抑制することで、経皮的インターベンション後の再狭窄の予防し、また高分子被覆層（薬剤保持層）を改良することにより、水溶性薬剤の高分子材料中への保持量と徐放性を向上させ、剥離等を伴うことなく、より長期間当該ステントを体内で安定的に使用しうるようにする技術を提供することである。
【００１１】
本発明に従えば、以下の発明が提供される。
［１］本発明は、ステント基材（１１）表面を、単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を含有する高分子材料からなる薬剤保持層（Ｍ）で被覆した遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する
［２］本発明は、ＭＣＰ−１機能阻害剤が、抗ＭＣＰ−１抗体、ＭＣＰ−１アンタゴニスト、ＭＣＰ−１ドミナントネガティブ及びそれらをコードする遺伝子から選ばれる１種又は２種以上のものである［１］に記載の薬剤放出ステント（１）を提供する。
［３］本発明は、ＭＣＰ−１ドミナントネガティブをコードする遺伝子が、配列番号１で表わされた［１］ないし［２］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
［４］本発明は、ステント基材（１１）表面をプライマー処理した後、当該プライマー層（Ｐ）を、前記薬剤保持層（Ｍ）で被覆した［１］ないし［３］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
［５］本発明は、前記薬剤保持層（Ｍ）を、単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を含有しない高分子材料からなる被覆層（１２）で被覆した［１］ないし［４］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
［６］本発明は、前記薬剤保持層（Ｍ）は、前記単球遊走因子−１（ＭＣＰ−１）機能阻害剤を生体内で徐放し、吸水性高分子材料からなる［１］ないし［５］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
［７］本発明は、前記プライマー層（Ｐ）はステント基材（１１）と薬剤保持層（Ｍ）を構成する吸水性高分子材料の両方に対して親和性の高い材料からなり、
前記被覆層（１２）は前記薬剤保持層（Ｍ）を被覆可能な高分子材料からなる［１］ないし［６］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
［８］本発明は、前記薬剤保持層（Ｍ）を構成する高分子材料が、ポリエーテル系ポリウレタンである［１］ないし［７］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
［９］本発明は、前記被覆層（１２）を構成する高分子材料が、ポリカーボネート系ポリウレタンである［１］ないし［７］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
[１０]本発明は、前記薬剤保持層（Ｍ）を構成する高分子材料が、生体吸収性高分子である［１］ないし［９］に記載の遺伝子・薬剤放出型ステント（１）を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、高分子材料からなる薬剤保持層Ｍを形成し、これにＭＣＰ−１機能阻害剤を含有、保持させ、最表面を生体内で安定性の高い高分子材料で被覆層１２を形成することにより、長期にわたり安定したＭＣＰ−１機能阻害剤の徐放性と体内での安定性をもつステントを提供することができる。
また本発明のステントによれば、ＭＣＰ−１機能阻害剤の徐放量および速度は、薬剤の含有量、薬剤保持層Ｍ及び被覆層１２の厚さを適宜変更することでコントロールすることが可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の薬剤放出ステント１は、ステント基材１１の表面に、生理活性薬剤であるＭＣＰ−１機能阻害剤を含有する高分子材料からなる薬剤保持層Ｍで被覆している。
さらにステント基材１１表面をプライマー処理した後、当該プライマー層Ｐを、前記薬剤保持層Ｍで被覆している。
さらに前記薬剤保持層Ｍを、ＭＣＰ−１機能阻害剤を含有しない高分子材料からなる被覆層１２で被覆している。
以上のように、本発明の薬剤放出ステント１（以下、ステント１）は、ステント基材１１の表面にプライマー層Ｐ／薬剤保持層Ｍ／被覆層１２の順に被覆している。ステント基材１１の「表面」とは、図２に例示するようにステント基材１１の「外面」及び「内面」の双方を含む意味である。
前記薬剤保持層Ｍは、ＭＣＰ−１機能阻害剤（例えば７ＮＤ−ＭＣＰ−１）を含み当該ＭＣＰ−１機能阻害剤を生体内で徐放することができる。
前記プライマー層Ｐはステント基材１１と薬剤保持層Ｍを構成する高分子材料の両方に対して親和性の高い材料からなる。
前記被覆層１２は前記薬剤保持層Ｍを被覆可能な高分子材料からなる。
本発明は、ステント基材１１上に薬剤保持層Ｍを形成するにあたり、まずステント基材１１及び薬剤保持層Ｍを形成する前記高分子材料の両方に対して親和性の高いプライマーにより、前記ステント基材１１表面を処理してプライマー層Ｐを形成する。
次に高分子材料と薬剤を溶解した溶液を調整し、これを前記プライマー層Ｐを形成したステント基材表面１１に塗布または浸漬して溶媒を揮発させることにより、薬剤保持層Ｍを形成することができる。
また当該薬剤保持層Ｍ中に、水溶性の薬剤を導入する別の方法として、所望のＭＣＰ−１機能阻害剤の水溶液中に前記薬剤保持層Ｍを形成したステント基材１１を任意の時間浸漬後、乾燥することにより導入することができる。この場合においては、薬剤保持層Ｍを形成する高分子材料は、少なくとも自重の１００％以上の水を吸収する吸水性高分子材料であることが好ましい。
さらに当該薬剤保持層Ｍを、高分子材料からなる被覆層１２で被覆する。このようにしてステント基材１１の表面（内面及び／又は外面）には三層の被覆層（プライマー層Ｐ／薬剤保持層Ｍ／被覆層１２）が形成される。ステント１自体は、ステント基材１１も含めて四層及び／又は七層構造となる。
なお、被覆層１２については、導入する薬剤の種類や放出する期間の設定によって、内面及び／又は外面に形成しないこともあり、この場合ステント自体は、ステント基材１１も含めて三層及び／又は六層構造となる。
【００１４】
図１は、本発明のステント１の一例を示す概略図、図２は図１の一部拡大断面図で、ステント基材１１の表面（内面及び外面）に、それぞれ三層の被覆層（プライマー層Ｐ／薬剤保持層Ｍ／被覆層１２）が形成され、ステント１自体は、ステント基材１１も含めて七層構造より形成されている例である。
ステントの基材１１を構成する材質は、それ自身公知のものでよく、特に限定するものではないが、例えばＳＵＳ３１６Ｌ等のステンレス鋼、Ｔｉ−Ｎｉ合金等の形状記憶合金、チタン、チタン合金、タンタル、タンタル合金、プラチナ、プラチナ合金、タングステン、タングステン合金等からなる金属パイプや平板をレーザー加工することにより表面に所定のパターンを形成した略管状体、又はこれら金属のワイヤーにより形成した編目状の略管状体等が使用される。なお、略管状体の形状については、目的の物性が得られるものであれば、特に限定されるものではない。
【００１５】
また本発明で使用される薬剤保持層Ｍは、少なくともＭＣＰ−１機能阻害剤を含み、当該ＭＣＰ−１機能阻害剤を生体内で徐放しうるものであれば種々の高分子材料を用いることが可能であるが、本発明においては少なくとも自重の１００％以上の水を吸収する吸水性高分子材料又は生体吸収性材料より形成される事が好ましい。
前記吸水性高分子材料として、例えば公知のデンプン・ポリアクリロニトリル加水分解物、ポリアクリクアミド及びその誘導体、酢酸ビニル・アクリル酸メチル共重合体ケン化物系の材料や、デンプン・ポリアクリル酸塩架橋物、架橋カルボキシメチルセルロース、ポリアクリル酸ナトリウム架橋物、架橋ポリビニルアルコールなどの水溶性高分子を架橋し水に不溶化（または難溶化）した高分子が好ましい。これらの架橋においては、種々の公知の架橋剤を用いることができ、また架橋化時にポリエチレングリコール等の他の高分子とブレンドしてもよい。
更に有機溶媒に可溶でステントに被覆できること、少なくともステントの拡張に応じて剥離等することなく、追従できるコンプライアンスのある吸水性高分子材料である、ポリプロピレンオキシド鎖、ポリテトラメチレンオキシド鎖等のポリエーテル鎖を構造中に有するポリウレタン系エラストマー及びこれらを基にしたゲルないしゲル状の吸水性高分子材料が好ましい。
生体吸収性高分子としては、ポリ乳酸、ポリ乳酸系共重合体、ポリグリコール酸、ポリグリコール酸系共重合体等の高分子が挙げられる。
【００１６】
なお本発明で使用可能な吸水性高分子材料は、前記に列挙したものに限定されるものではなく、有効量のＭＣＰ−１機能阻害剤を、生体内において前記被覆層１２を通して表面より徐々に溶出（徐放）することが可能であり、前記特性を有するものであれば何でも使用することができる。
生体吸収性高分子についても同様で前記に列挙したものに限定されるものではない。
【００１７】
また前記被覆層１２の材料として、ステントとして薬剤保持層ＭからのＭＣＰ−１機能阻害剤の放出を妨げず、被覆層１２の種類（材料）及び厚み等を制御することで一定期間以上の徐放性を維持しやすいという理由で、ポリエーテル系、ポリカーボネート系のポリウレタン、ポリエステル及びポリエーテルポリアミド、ポリブチルメタアクリレート等が好ましい。より具体的には、血管内に留置される血管内ステントは、カテーテルなどの一時的な処置または留置を行う医療用具とは異なり、半永久的に体内に留置（インプラント）するものであるため、耐加水分解性が高いポリカーボネート系のポリウレタンが、本発明の血管内ステントの被覆層１２の材料として最も好ましい。
【００１８】
後述するように、薬剤保持層Ｍを構成する高分子材料をステントの基材１１に塗布（ディップ、スプレーコート等）して乾燥するが、本発明では、前記ステント基材１１と、当該ステント基材１１に被覆される高分子材料の両方に対して親和性の高いプライマーで、あらかじめ前処理してステント基材１１にプライマー層Ｐを形成しておくことが重要である。
すなわち、ステント基材１１の構成材料（金属）と高分子材料との両方に対して親和性を有するプライマーにより、まず当該ステント基材１１の表面を処理してプライマー層Ｐを形成し、その後に薬剤保持層Ｍを形成した後、さらに高分子材料よりなる被覆層１２を形成するものである。
【００１９】
本発明ではかかるプライマーとして、種々のものが使用可能である。好ましくは、加水分解性基と有機官能基を有するシランカップリング剤である。
シランカップリング剤の、当該加水分解基（例えばアルコキシ基）はシラノール基を生成して金属性のステント基材と共有結合等により結合され、一方当該有機官能基（例えエポキシ基、アミノ基、メルカプト基、ビニル基、メタクリロキシ等）は、ＭＣＰ−１機能阻害剤を含む吸水性高分子材料と化学結合により結合することにより、当該吸水性高分子材料とステント基材１１は、シランカップリング剤を介して、これを使用しない場合に比較して、ずっと密接に固着されるのである。ここで特に好ましくは、有機官能基としてエポキシ基を有するエポキシ系のシランカップリング剤であるが、これと同様の性能を有するアミノ系、メルカプト系のシランカップリング剤も好適に使用することができる。
その他、シアノアクリレート系接着剤、ポリウレタン系のペーストレジン適宜使用できる。
【００２０】
当該シランカップリング剤は、使用する吸水性高分子材料の樹脂の種類により、これに対応する有機官能基を有する適当なものを選択すればよく、例えば以下のものが好適に使用可能である。すなわち、３−グリシドキシプロピルトリメトキシシラン、３−グリシドキシプロピルジメトキシシラン、２−（３，４−エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシラン、ビニルトリエトキシシラン、３−メタクリロキシプロピルトリメトキシシラン、Ｎ−２（アミノエチル）３−アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ−２（アミノエチル）３−アミノプロピルトリメトキシシラン、３−アミノプロピルトリエトキシシラン、３−メルカプトプロピルトリメトキシシラン、Ｎ−フェニル−３−アミノプロピルトリメトキシシラン３−クロロプロピルトリメトキシシラン等が好適に使用される。
【００２１】
また、プライマーとしては、上記シランカップリング剤の他に、これと同様な機能を有する、テトラブトキシチタネート、テトラステアリルチタネート、テトライソプロポキシチタネート、イソプロポキシチタニウムステアレート、チタニウムラクテートのごとき有機チタン系カップリング剤；アセトアルコキシアルミニウムジイソプロピレートのごときアルミニウム系カップリング剤：クロム系カップリング剤；有機リン酸系カップリング剤も適宜使用可能である。
【００２２】
前記ステント基材１１の構成材料（金属）と高分子材料との両方に対して親和性を有するシランカップリング剤等のプライマーは、通常、水、適当な有機溶媒、又は水と有機溶媒との混合溶媒に溶解し、これを処理溶液として、基材表面に塗布・乾燥することにより、前処理が行われる。有機溶媒としては、特に限定するものではないが、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール又は当該アルコールと水との混合溶媒や、ベンゼン、トルエン、キシレン等が好ましく用いられる。当該処理溶液中のプライマー濃度としては、比較的希薄溶液が用いられ、０．０５〜２質量％、好ましくは０．１〜１．０質量％である。
更には、プライマー層として、パリレン（ポリパラキシリレン、ポリクロロパラキシリレン）を用いることができる。パリレンは真空化学蒸着法（ＣＶＤ）によりステント上に薄膜を形成しプライマー層とすることができる。
【００２３】
本発明においては、ステント基材１１に対し、高分子材料の被覆前に、このようなプライマー処理を実施（プライマー層Ｐの形成）することにより、高分子材料の被覆の安定性が飛躍的に高められ、得られたステントは、これを体内に留置し、例えば血管内に埋殖した際に、内膜が形成されるに充分な期間、例えば少なくとも１ヶ月間程度体内に留置した場合においても、水（生理食塩液、リン酸緩衝液）環境下では、剥がれなど全く伴うことなく安定的に被覆層（薬剤保持層Ｍ、被覆層１２）を維持することができるという顕著な作用効果を奏することができる。この点、ステント基材を構成する金属に、直接的に高分子材料を塗布した場合には、条件によっては、水環境下において数日〜数週間で被覆層（薬剤保持層Ｍ）の剥がれが発生することがありうるため、上記ごとき長期間は、ステントを体内に留置することは到底困難であることと著しい対照をなしているといえる。
【００２４】
本発明においては、以上のようにステント基材１１にプライマー層Ｐを形成し、当該ステント基材１１にＭＣＰ−１機能阻害剤を含んだ薬剤保持層Ｍを形成する。当該薬剤保持層Ｍの形成方法としては、ＭＣＰ−１機能阻害剤を含んだ基材となる高分子材料を直接被覆する方法もあるが、薬剤保持層Ｍの基材として少なくとも自重の１００％以上の水を吸収する吸水性高分子材料を被覆して、当該ステント基材１１に薬剤保持層Ｍを形成した後、当該ステント基材１１をＭＣＰ−１機能阻害剤の水溶液中に所定の時間浸漬後、乾燥することによりＭＣＰ−１機能阻害剤を薬剤保持層Ｍ中に導入する方法が好ましい。
さらに当該ステント基材１１の薬剤保持層Ｍを高分子材料により被覆して被覆層１２を形成することにより、ステント基材１１の表面（内面及び／又は外面）には三層の被覆層（プライマー層Ｐ／薬剤保持層Ｍ／被覆層１２）が形成され、ステント基材１１も含めて四層及び／又は七層構造のステント１とすることができる。
従って、当該薬剤保持層ＭにＭＣＰ−１機能阻害剤を、当該高分子材料に結合していない、すなわち物理的に混合・分散されている状態でＭＣＰ−１機能阻害剤を含むようなステント１とすることができる。このように、ステント基材１１に形成される薬剤保持層Ｍ及び被覆層１２の厚さは、含有させるべきＭＣＰ−１の濃度、所望の溶出量や溶出量の経時変化等に応じて任意に採用できるものであるが、通常、０．１〜２００μｍ、好ましくは０．１〜５０μｍである。
【００２５】
ここで本発明において定義されるＭＣＰ−１機能阻害剤は、生体におけるＭＣＰ−１の機能を阻害できるものであれば特に限定されるものではない。具体的には、抗ＭＣＰ−１抗体（ポリクローナル及びモノクローナルを含む）、ＭＣＰ−１アンタゴニスト（蛋白及び非蛋白低分子化合物を含む）、ＭＣＰ−１ドミナントネガティブ（蛋白及び非蛋白低分子化合物を含む）及び、ＭＣＰ−１機能を阻害するものが蛋白の場合は、それらをコードする遺伝子をも挙げることができる。これらの抗体、アンタゴニスト、ドミナントネガティブ及びこれらをコードする遺伝子はすでに種々のものが知られており、また公知の手法により得ることが可能なものを本発明に用いることができる。
【００２６】
本発明においては、蛋白としてのＭＣＰ−１機能阻害剤を生体へ投与するよりも、蛋白としてのＭＣＰ−１機能阻害剤をコードする遺伝子を導入する方が、遺伝子導入後の蛋白発現をより持続的にすることができるため好ましい。
本発明においては、ＭＣＰ−１アンタゴニスト又はＭＣＰ−１ドミナントネガティブが好ましく、中でも７ＮＤ−ＭＣＰ−１が好ましい。更には、ＭＣＰ−１アンタゴニスト又はＭＣＰ−１ドミナントネガティブをコードする遺伝子が好ましく、中でも７ＮＤ−ＭＣＰ−１をコードする遺伝子が好ましい。７ＮＤ−ＭＣＰ−１をコードする遺伝子としては、配列表の配列番号１に示される塩基配列を有するＤＮＡが用いられる。このＤＮＡは、それ自体公知の遺伝子工学的手法によって作成することができる。
【００２７】
以下、図面を参照しながら本発明のステントの実施の形態を説明する。
図１は、すでに説明したように、本発明のステントの一例を示す概略図であるが、ステント１は、例えば図２の断面図に示すようにステンレス鋼製のステント基材１１から構成され、その外周面にはプライマー層Ｐ、薬剤保持層Ｍ、被覆層１２が順次被覆されている。このステント１の場合、ステント基材１１を構成する金属と薬剤保持層Ｍを構成する吸水性高分子材料との両方に対して親和性を有するプライマーにより、まず当該ステント基材１１の表面を処理しプライマー層Ｐを形成後、その後に吸水性高分子材料で塗布して薬剤保持層Ｍを形成して、ＭＣＰ−１を当該薬剤保持層４に導入後、当該薬剤保持層４を高分子材料で被覆することにより被覆層１２を形成し、ステント基材１１の表面（内面及び外面）に三層の被覆層（プライマー層Ｐ／薬剤保持層Ｍ／被覆層１２）が形成され、ステント基材１１も含めて七層構造にしたステント１の一例である。
【００２８】
かかる被覆層１２、薬剤保持層Ｍの形成方法は、すでに述べたとおり、被覆用溶液をスプレーによる塗布やディッピング等の既知の方法による塗布により被覆層（被覆層１２、薬剤保持層Ｍ）の形成が可能である。ここで、スプレーやディッピングの回数は一回でも良いが、被覆層１２、薬剤保持層Ｍを形成する高分子材料の濃度等によって被覆層（被覆層１２、薬剤保持層Ｍ）の厚さを調整するためは、複数回に分けて塗布する方法が通常用いられる。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明がこれらの実施例により限定的に解釈されるものではない。
【００３０】
〔実施例１〕コーティングステントの作製方法
（１）エポキシ系シランカップリング剤（ＫＢＭ４０３（３−グリシドキシプロピルトリメトキシシラン）：信越化学工業社製）１．０ｇをＭｅＯＨ／水（５０／５０）１００ｍｌに溶解し、１質量％溶液を調整した。
（２）吸水性高分子であるTecophilic HP-93A-100（ポリエーテルタイプ熱可塑性ポリウレタン，溶液Ａとする）及びCarbothane
PC-3585A（ポリカーボーネートタイプ熱可塑性ポリウレタン，溶液Ｂとする）２．０ｇを、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１００ｍｌに溶解し、その２質量％溶液（溶液Ａ、Ｂ）を調整した。
（３）まず（１）の溶液を、図１に示すパターンを形成した管状のステント１（ステント基材１１）に塗布し、メタノール／水を揮発させシランカップリング剤による前処理を行い、プライマー層Ｐを形成した。次に溶液Ａを塗布乾燥して、薬剤保持層Ｍを被覆した後、当該ステント１を７ＮＤ−ＭＣＰ−１遺伝子プラスミド水溶液に１時間浸漬した後、真空乾燥を行い７ＮＤ−ＭＣＰ−１を導入した。その後、溶液Ｂを塗布し被覆層１２を形成し遺伝子・薬剤放出型ステントを得た。
【００３１】
〔実施例２〕コーティングステントの作製方法
（１）エポキシ系シランカップリング剤（ＫＢＭ４０３（３−グリシドキシプロピルトリメトキシシラン）：信越化学工業社製）１．０ｇをＭｅＯＨ／水（５０／５０）１００ｍｌに溶解し、１質量％溶液を調整した。
（２）ポリビニルアルコール（ゴーセノールEG-05：日本合成化学社製）を５ｇ秤量し、９５gの蒸留水に入れ撹拌しながら８０℃まで加熱する。完全に溶解したことを確認した後室温まで冷却し溶液Ｃとする。
（３）まず（１）の溶液を、図１に示すパターンを形成した管状のステント１（ステント基材１１）に塗布し、メタノール／水を揮発させシランカップリング剤による前処理を行い、プライマー層Ｐを形成した。次に溶液Ｃ1００部対し、架橋剤（オルガチックスTC-310：松本製薬工業社製）を１．５部、７ＮＤ−ＭＣＰ−１遺伝子プラスミドを５部加え溶液Ｄとする。
この溶液Ｄにて所定のコーティング量になるよう塗布後、約６０℃で５時間加熱乾燥しPVAを架橋させて薬剤保持層Ｍを形成し、遺伝子・薬剤放出型ステントを得た。
【００３２】
〔実施例３〕プラスミド溶出の確認試験
（１）実施例２に得られた遺伝子・薬剤放出型ステントを生理食塩水内に浸し、溶出した遺伝子プラスミドの電気泳動を行った（図３）。その結果、ステントより放出された遺伝子プラスミド及びその制限酵素（HindIII）消化物の移動度（図３中の１、２）は、オリジナルプラスミド及びその制限酵素（HindIII）消化物の移動度（図３中の３，４）と同等であり、変性していないことを確認した。
（２）実施例２に得られた遺伝子・薬剤放出型ステントのサンプルを拡張後、リン酸緩衝液が入った試験管に入れ、３７℃にて６０回／分の速度にて振盪させながら経時的にサンプリングし、７ＮＤ−ＭＣＰ−１の放出を測定した。測定結果を図４に示す。
この結果、実施例２に得られた遺伝子・薬剤放出型ステントより、リン酸緩衝液環境下で７ＮＤ−ＭＣＰ−１の徐放を確認できた。
【００３３】
〔実施例４〕コレステロール負荷ウサギ・モデルにおける遺伝子発現と炎症像の検討
１％コレステロールを４週間負荷した高脂血症家兎の腸骨動脈に、マーカー遺伝子であるLacZをコードした遺伝子をコートしたステントを留置し３日後に遺伝子発現を検討した。遺伝子発現陽性細胞は、内膜細胞で６０〜７０％、中膜−外膜細胞で５０％に認められた（図５参照）。遺伝子をコートしていないステントでは陽性細胞は認めなかった。したがって、特に以前の遺伝子プラスミド溶出型ステントの文献（Nat
Biotechnol. 2000 Nov;18(11):1181-4）の結果と比較して本発明では１０倍以上の導入効率が得られた。
さらに、金属ステント(n=5)、及び実施例２の方法により作製した7NDをコードした遺伝子からなるプラスミド(plasmid)を含む遺伝子・薬剤放出型ステント(n=5)を留置し、１０日後に動脈組織のマクロファージ浸潤および単球遊走因子MCP-1の血中濃度測定を行った。組織化学的検討では、ウサギ・マクロファージを特異的に認識する抗体を用い、動脈へのマクロファージ浸潤を検索したところ、金属ステント群に比べ、遺伝子・薬剤放出型ステント群において、有意（p  0.01未満）に浸潤程度が抑制された。
【００３４】
〔実施例５〕コレステロール負荷サル・モデルにおける内膜肥厚の検討
また、１％コレステロールを１２週間負荷したカニクイザルの腸骨動脈に、金属ステント(n=5)、及び実施例１の方法により作製した7NDコードした遺伝子からなるプラスミド(plasmid)を含む遺伝子・薬剤放出型ステント(n=5)を留置し、28日後に動脈内膜肥厚(内膜占有面積)の測定を行った。組織学的検討では、金属ステント群に比べ、遺伝子・薬剤放出型ステント群において、有意(p  0.01未満)に内膜肥厚が抑制された。またステント置換10日後の炎症性変化を表現する血中単球遊走因子MCP-1濃度は、金属ステントに比べ、遺伝子・薬剤放出型ステント群において、有意（p  0.05未満）に抑制された。
【００３５】
以上、実施例の結果から、本発明のステントにおいては、塗布膜（薬剤保持層Ｍ、被覆層１２）は、７ＮＤ−ＭＣＰ−１を含有せしめた高分子材料を被覆したステント１からの７ＮＤ−ＭＣＰ−１のリリース挙動については、約４週間にわたっても、当該薬剤保持層Ｍ及び被覆層１２は、ステント基材１１から剥がれることがなく、当該生理活性薬剤の放出が可能であることが確認された。
【００３６】
実施例において提示した、プライマー剤、薬剤保持層及び被覆層並びにステント１に用いた特定の材料及びステントのデサイン等は、一例として提示したものであり、特にこれに限定されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】本発明のステントの概略図
【図２】図１のステントの一部拡大断面図
【図３】実施例３の電気泳動写真（遺伝子プラスミドが変性していないことを確認）
【図４】実施例３の７ＮＤ−ＭＣＰ−１遺伝子プラスミド溶出量測定結果
【図５】実施例４コレステロール負荷ウサギ・モデルにおける遺伝子発現を確認した写真
【符号の説明】
【００３８】
１  ステント
１１  基材（ステント基材）
１２  被覆層
Ｍ  薬剤保持層
Ｐ  プライマー層
【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図３】
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【図５】
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【配列表】
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