(57)【要約】【課題】  生体組織や細胞の接着抑制効果、血小板の粘着・活性化の抑制および補体系の活性化抑制の各効果を有し、かつ、安全性の高い医療および医薬用途を目標にした生体適合性共重合体を提供する。【解決手段】  該共重合体が下記一般式（１）で表される側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体であって、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）換算重量平均分子量が５００〜５００，０００であることを特徴とするエチレンオキサイド共重合体。【化１】2005281665.tif 000027（式中、ｘ、ｙはそれぞれ１以上の整数を示し、ｙ／（ｘ＋ｙ）＝０．００１〜０．５００の範囲である。Ｒは水素または炭素数１〜１２からなる化合物残基である。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体であって、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）換算重量平均分子量が５００〜５００，０００であることを特徴とするエチレンオキサイド共重合体。
【化１】
2005281665.tif 000026
（式中、ｘ、ｙはそれぞれ１以上の整数を示し、ｙ／（ｘ＋ｙ）＝０．００１〜０．５００の範囲である。Ｒは水素または炭素数１〜１２からなる化合物残基である。）
【請求項２】
該共重合体のＰＥＧ換算重量平均分子量／ＰＥＧ換算数平均分子量（Ｍｗ／Ｍｎ）が１．２〜２．２であることを特徴とする請求項１に記載のエチレンオキサイド共重合体。
【請求項３】
該共重合体が下記に示されるモノマー（Ａ）及び（Ｂ）から製造されることを特徴とする請求項１又は２に記載のエチレンオキサイド共重合体。
（Ａ）エチレンオキサイド
（Ｂ）エポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物
【請求項４】
該（Ｂ）のエポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物が、グリシジルメチルエーテル、エチルグリシジルエーテル、グリシジル−ｎ−プロピルエーテル、グリシジルイソプロピルエーテル、ｎ−ブチルグリシジルエーテル、ｓｅｃ−ブチルグリシジルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルグリシジルエーテル、２−エチルへキシルグリシジルエーテル、２−メチルオクチルグリシジルエーテル、アリルグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテル、グリセロールトリグリシジルエーテル、アセチルグリシドール、ベンジルグリシジルエーテル、グリシジルフェニルエーテル、グリシジルトリメチルシリルエーテル、グリシジルテトラヒドロピラニルエーテル、（１−エトキシ）エチルグリシジルエーテルから選ばれた少なくとも１種であることを特徴とする請求項３に記載のエチレンオキサイド共重合体。
【請求項５】
請求項１に記載の一般式（１）のＲが水素である請求項１又は２に記載のエチレンオキサイド共重合体が、架橋剤により架橋されていることを特徴とする架橋エチレンオキサイド共重合体。
【請求項６】
架橋剤がエポキシ基を有する化合物であって、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエチレングリコールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテルおよびグリセオールトリグリシジルエーテルから選ばれた少なくとも１種の化合物であることを特徴とする請求項５に記載の架橋エチレンオキサイド共重合体。
【請求項７】
架橋剤が、請求項５に記載の共重合体の重量に対して５〜３００重量％用いられていることを特徴とする請求項５又は６に記載の架橋エチレンオキサイド共重合体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体の生体組織または体液と接触する部分への使用。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体のポリペプチドまたは蛋白と接触する部分への使用。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体からなる、医療用具、生体由来蛋白あるいはポリペプチド精製に用いられる樹脂材料への添加剤。
【請求項１１】
樹脂材料が、ポリエステル、ポリアミド、ポリイミド、ポリオレフィンおよびポリスルフォンから選ばれた少なくとも１種以上からなる樹脂材料であることを特徴とする請求項１０に記載の添加剤。
【請求項１２】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体からなる、医療用具、生体由来蛋白あるいはポリペプチド精製器材の被覆剤。
【請求項１３】
医療用具および器材が、ポリエステル、ポリアミド、ポリイミド、ポリオレフィンおよびポリスルフォンから選ばれた少なくとも１種以上からなることを特徴とする請求項１２に記載の被覆剤。
【請求項１４】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる生体組織の癒着防止用フィルム。
【請求項１５】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる創傷被覆材。
【請求項１６】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる化粧料。
【請求項１７】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる繊維処理剤。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなるコンタクトレンズ用保存液。
【請求項１９】
請求項１〜７のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる血液処理材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体液、生体組織と接触する部分、およびポリペプチド及び蛋白と接触する部分に用いることができ、また医療用具に用い得るエチレンオキサイド共重合体に関する。
詳しくは、生体組織の接着および癒着抑制効果、蛋白接着抑制効果、細胞接着抑制効果、血小板の粘着おび活性化の抑制効果、補体系の活性化の抑制効果、生体組織に担して保湿効果を有し、かつ、生体に対する安全性の高いエチレンオキサイド共重合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、各種の高分子材料を利用した医療・医用材料の検討が進められており、人工腎臓用膜、血漿分離用膜、ウイルス除去膜、人工肺用膜、人工血管、癒着防止膜、創傷被覆材、人工皮膚等への利用が期待されている。これらの分野においては、生体にとって異物である合成材料は、生体組織や体液と接触させて使用される。したがって、これらの医療および医用材料は、生体組織や体液と相互作用・干渉作用を起こさないという意味での体液適合性および生体組織適合性を有することが要求される。
医療および医用材料に要求される、体液適合性および生体組織適合性は、その目的および使用法によって異なる。例えば血液と接する材料として使用する場合には、血漿蛋白の接着抑制、細胞接着抑制、血液凝固系の抑制、血小板の粘着・活性化の抑制および補体系の活性化の抑制という特性が求められている。この目的に対して、血液適合性が改善された種々のアクリレート系生体適合性材料が報告されてきた（例えば、非特許文献１および非特許文献２）。
医療および医用材料には、その目的および使用法に応じた体液適合性および生体組織適合性が要求されるが、更に、それらの医療および医用材料を構成する材料自体の高い安全性が望まれている。これは、医療および医用材料は、長期間の使用中にその一部が基材からはがれる等により体液中に放出されることが予想され、たとえ組織適合性または血液適合性に優れる材料であっても、臓器等に蓄積した際に障害を引き起こすことが懸念されるためである。
【０００３】
一方、側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体の用途として、共重合体の親水性および膨潤性を背景とする潤滑性を利用した医療器具が開示されている（例えば、特許文献１）。この特許文献ではアルキレンオキサイド共重合体の用途として表皮との接触における潤滑性を利用した医療器具およびカテーテル・生体移植物等が、シェービング用具（Ｓｈａｖｉｎｇ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）などと並列で例示されているものの、実施例においては、上記共重合体を合成して潤滑性の評価をしているのみであり、本発明における生体組織適合性または体液適合性に関する挟持も示唆もない。
更に、アルキルグリシジルエーテル類の重合による体液適合性および生体適合性を有する共重合体に関しては（例えば、特許文献２）に開示されているが、共重合体に関する記載はあるものの、共重合の組成比に関しての記載は無い。
体液または生体組織と接する部分に使用する医療および医用材料においては、組織接着および組織癒着の抑制、血漿蛋白の接着抑制、細胞接着抑制、血液凝固系の抑制、血小板の粘着・活性化の抑制および補体系の活性化の抑制に加えて、構成材料自体の高い安全性が望まれている。
【０００４】
【特許文献１】国際公開第02/22739号パンフレット
【特許文献２】国際公開第2004/04794号パンフレット
【非特許文献１】M. Tanaka, T . Motomura , M . Kawada , T . Anzai , Y . Kasori, T. Shiroya, K. Shimura, M.Onishi, A. Mochizuki , Blood compatible aspects of poly(2-methoxyethylacrylate)(PMEA) relationship between protein adsorption and platelet adhesion on PMEA surface, Biomaterials, 21, 1471-1481 (2000)
【非特許文献２】K. Ishikawa, T. Ueda, and N. Nakabayashi, Preparation of Phospholipid and Their Properties as Polymer Hydrogel Membaranes, Polymer Journal, 22, 355-360 (1990)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、生体組織や細胞の接着抑制効果、血小板の粘着・活性化の抑制および補体系の活性化抑制の各効果を有し、かつ、安全性の高い医療および医薬用途を目的とした生体適合性を有する共重合体を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下のとおりである。
（１）下記一般式（１）で表される側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体であって、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）換算重量平均分子量が５００〜５００，０００であることを特徴とするエチレンオキサイド共重合体。
【化１】
2005281665.tif 000002
（式中、ｘ、ｙはそれぞれ１以上の整数を示し、ｙ／（ｘ＋ｙ）＝０．００１〜０．５００の範囲である。Ｒは水素または炭素数１〜１２からなる化合物残基である。）
（２）該共重合体のＰＥＧ換算重量平均分子量／ＰＥＧ換算数平均分子量（Ｍｗ／Ｍｎ）が１．２〜２．２であることを特徴とする上記（１）に記載のエチレンオキサイド共重合体。
【０００７】
（３）該共重合体が下記に示されるモノマー（Ａ）及び（Ｂ）から製造されることを特徴とする上記（１）又は（２）に記載のエチレンオキサイド共重合体。    （Ａ）エチレンオキサイド
（Ｂ）エポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物
（４）該（Ｂ）のエポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物が、グリシジルメチルエーテル、エチルグリシジルエーテル、グリシジル−ｎ−プロピルエーテル、グリシジルイソプロピルエーテル、ｎ−ブチルグリシジルエーテル、ｓｅｃ−ブチルグリシジルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルグリシジルエーテル、２−エチルへキシルグリシジルエーテル、２−メチルオクチルグリシジルエーテル、アリルグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテル、グリセロールトリグリシジルエーテル、アセチルグリシドール、ベンジルグリシジルエーテル、グリシジルフェニルエーテル、グリシジルトリメチルシリルエーテル、グリシジルテトラヒドロピラニルエーテル、（１−エトキシ）エチルグリシジルエーテルから選ばれた少なくとも１種であることを特徴とする上記（３）に記載のエチレンオキサイド共重合体。
【０００８】
（５）上記（１）に記載の一般式（１）のＲが水素である上記（１）又は（２）に記載のエチレンオキサイド共重合体が、架橋剤により架橋されていることを特徴とする架橋エチレンオキサイド共重合体。
（６）架橋剤がエポキシ基を有する化合物であって、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエチレングリコールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテルおよびグリセオールトリグリシジルエーテルから選ばれた少なくとも１種の化合物であることを特徴とする上記（５）に記載の架橋エチレンオキサイド共重合体。
（７）架橋剤が、上記（５）に記載の共重合体の重量に対して５〜３００重量％用いられていることを特徴とする上記（５）又は（６）に記載の架橋エチレンオキサイド共重合体。
（８）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体の生体組織または体液と接触する部分への使用。
（９）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体のポリペプチドまたは蛋白と接触する部分への使用。
【０００９】
（１０）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体からなる、医療用具、生体由来蛋白あるいはポリペプチド精製に用いられる樹脂材料への添加剤。
（１１）樹脂材料が、ポリエステル、ポリアミド、ポリイミド、ポリオレフィンおよびポリスルフォンから選ばれた少なくとも１種以上からなる樹脂材料であることを特徴とする上記（１０）に記載の添加剤。
（１２）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体からなる、医療用具、生体由来蛋白あるいはポリペプチド精製器材の被覆剤。
（１３）医療用具および器材が、ポリエステル、ポリアミド、ポリイミド、ポリオレフィンおよびポリスルフォンから選ばれた少なくとも１種以上からなることを特徴とする上記（１２）に記載の被覆剤。
【００１０】
（１４）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる生体組織の癒着防止用フィルム。
（１５）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる創傷被覆材。
（１６）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる化粧料。
（１７）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる繊維処理剤。
（１８）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなるコンタクトレンズ用保存液。
（１９）上記（１）〜（７）のいずれかに記載のエチレンオキサイド共重合体又は架橋エチレンオキサイド共重合体を含有してなる血液処理材。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のエチレンオキサイド共重合体（以下、単に「共重合体」という）は、体液、生体組織、ポリペプチド、蛋白と相互作用や干渉作用を抑制するという特徴を有し、生体組織の接着および癒着抑制効果、血漿蛋白接着抑制効果、細胞接着抑制効果、血小板の粘着おび活性化の抑制効果、補体系活性化の抑制効果、ポリペプチド接着抑制効果、蛋白接着抑制効果を有する。更に本発明の共重合体は、ポリペプチドおよび蛋白の分離、精製等を目的とした器材を構成する基材に混和或いは該器材に対し被覆することで、目的とするポリペプチドおよび蛋白の回収率が向上し、該器材の目的とする効果持続性、効果持続性が達成される。特に、本発明の共重合体は、仮に長期間の使用中に、その一部が基材や器材からはがれる等により体液中に放出されることがあっても、生体との相互作用が極めて少なく臓器等に蓄積することが少ないために、臓器障害や細胞毒性を引き起こす可能性が低減される。
本発明の共重合体は、例えば、医療用途として、人工腎臓用膜、血漿分離膜、人工肺用膜、人工血管、癒着防止膜、創傷被覆材、人工皮膚、ウイルス除去膜、白血球除去膜等の生体材料、医療用材料や医療用具の構成成分または被覆材として使用することができる。更にフィルムの形態として床ずれ、火傷、潰瘍、外傷による創傷を被覆するため、あるいは、真皮、皮下組織、筋肉、筋、関節、骨に及ぶ組織破壊による創傷を被覆するために使用できる。更に親水性付与効果および蛋白吸着抑制効果を活用しコンタクトレンズ用溶液としても使用できる。また本発明のエチレンオキサイド共重合体の親水性付与、保湿性付与効果を活用し化粧用あるいは繊維処理用としても使用できる。
【００１２】
本発明の共重合体は、例えば、ヒト、ほ乳類、は虫類、微生物、昆虫などを含  む生物由来ポリペプチドおよび蛋白の分離、精製、濃縮、濾過、脱塩濃縮用途等に使用することができる。あるいは該ポリペプチドあるいは蛋白よりなる医薬品、医薬品原体、医薬品原料の分離、精製、濃縮、濾過、脱塩用途等に使用することができる。また本発明の共重合体は、これらの用途を達成するための器材を構成する基材に対する添加材または、器材に対する被覆材として使用することができる。
更に本発明の共重合体はその保湿作用および蛋白吸着抑制作用などの生体非認識作用を活用し、化粧料、例えば毛髪の帯電を抑制する目的での毛髪料化粧料として、また刺激性物質の付着した繊維素材を低刺激化することの出来る繊維用刺激抑制剤として、さらにはコンタクトレンズ用の保存洗浄液などに使用することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明で述べる体液としては、血液、涙液、リンパ液、脊髄液、関節液等が挙げられる。生体組織としては、表皮を除く臓器および組織を言い、肝臓、膵臓、腎臓、脾臓等の内臓組織、上皮組織、結合組織、血球・骨髄組織、筋肉、骨、軟骨、血管、目、脂肪組織、消化管・消化管粘膜、神経組織等が挙げられる。本発明のエチレンオキサイド共重合体は、このような体液または生体組織と接触する部分に用いられる。
本発明の共重合体は、単体で医療用具の構成材料に用いられる。その他に、医療用具に用いられる樹脂材料の添加剤および医療用具の体液または生体組織と接触する部分の被覆剤として用いられる。
本発明において、医療用具とは、人もしくは動物の、疾病の診断、治療若しくは予防に使用されること、または人若しくは動物の、身体の構造若しくは機能に影響を及ぼすことが目的とされている器具機械である。医療用具の例として、人工腎臓装置、透析機、人工心肺装置、人工肺、血液浄化器、血液浄化用装置、補助循環装置、腹膜灌流用機器、腹水ろ過濃縮部、自家輸血システム、コンタクトレンズ、整形用品例えば創傷被覆材、吸収性局所止血材、救急絆創膏等が挙げられる。
【００１４】
本発明は、下記に示される側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体（１）であることを特徴とする。
【化２】
2005281665.tif 000003
ここで式中、ｘ、ｙはそれぞれ１以上の整数を示し、ｙ／（ｘ＋ｙ）は０．００１〜０．５００の範囲であり、好ましくは０．０２５〜０．５００の範囲である。また、Ｒは水素または炭素数１〜１２からなる化合物残基であれば如何なる基でもよく、同一の共重合体内でＲは同一であっても異なっていてもよい。
また、本発明のエチレンオキサイド共重合体は、下記に示されるモノマー（Ａ）と（Ｂ）を出発原料とすることが好ましい。
（Ａ）エチレンオキサイド
（Ｂ）エポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物
【００１５】
本発明のエチレンオキサイド共重合体は、その出発原料の組合せから、（イ）１種のモノマー（Ａ）と１種のモノマー（Ｂ）からなる共重合体、（ロ）１種のモノマー（Ａ）と２種以上のモノマー（Ｂ）からなる共重合体とすることが可能であり、さらに、（ハ）１種のモノマー（Ａ）と１種のモノマー（Ｂ）と更に他のモノマーからなる共重合体、（ニ）１種のモノマー（Ａ）と２種以上のモノマー（Ｂ）と更に他のモノマーからなる共重合体であってもかまわない。また、（ホ）本発明の共重合体と、他の重合体との混合物であってもかまわない。
本発明の共重合体に関し、共重合についてはランダムあるいはブロックの両者があり得るが、生体内に存在した場合における安全性の点から考慮して、本発明の共重合体としてはランダム共重合体が好ましい。
【００１６】
（イ）および（ロ）の場合、モノマー（Ａ）の割合は、モル比で好ましくは１０〜９９％であり、（Ｂ）エポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物の割合は、総モル比で１〜９０％であり、好ましくは１〜５０％であるが、更に好ましくは２．５〜５０％である。（イ）の場合においては（Ｂ）／（（Ａ）＋（Ｂ））は、０．００１〜０．５であり、好ましくは０．０２５〜０．５である。例えば、モノマー（Ａ）を親水性部として活用し、モノマー（Ｂ）を疎水性部として活用する場合、生成する共重合体における親水−疎水バランスの関係から、モノマー（Ｂ）の使用量を適宜選択することにより、目的とする親水−疎水バランスを有する本発明の共重合体を製造することができる。
（ハ）および（ニ）の場合、共重合体中に存在する他のモノマーのモル分率は好ましくは９０％以下である。他のモノマーとしては、オキセタンもしくはその誘導体、トリオキサンもしくはその誘導体、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）もしくはその誘導体、アクリル酸エステル、メタクリル酸エステル、ビニルエーテルまたは重合あるいは側鎖での反応開始点として、例えば、アリル基等のオレフィン類の官能基を有する例えばアリルメタクリレートの様な化合物等が挙げられる。
（ホ）の場合、他の重合体の含有率は好ましくは９０質量％以下である。他の重合体としては、ポリエステル、ポリアミド、ポリイミド、ポリオレフィン、ポリエーテルスルフォン、ポリスルフォン等が挙げられる。
【００１７】
本発明の共重合体の構成成分である、側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体のポリエチレングリコール換算重量平均分子量（以下、「ＰＥＧ換算重量平均分子量」と略記する）は５００〜５００，０００であり、好ましくは５００〜１５０，０００である。ＰＥＧ換算重量平均分子量が５００未満になると重合体が水に溶けやすくなり、５００，０００を越えると重合体は水に対し溶けにくくなる。基材と併用する場合、基材に対する溶解性または被覆率を考慮すると、ＰＥＧ換算重量平均分子量は５００〜１５０，０００が好ましく、５００〜１００，０００がより好ましい。本発明の共重合体は単独で用いることができ、添加あるいは被覆といった形で基材と併用することもできる。基材に対する溶解性および本発明の共重合体が基材から溶出した場合の安全性を考慮すると、ＰＥＧ換算重量平均分子量は好ましくは５００〜１００，０００であり、さらに５００〜６５，０００がより好ましい。
【００１８】
これは本発明の共重合体における「生体適合性」とも関連し、安全性の高い共重合体を提供するための背景技術となっている。すなわち本発明の共重合体における生体適合性とは、「共重合体それ自身が生体との相互作用・干渉作用が極めて少なく、さらに腎臓から速やかに排泄される分子量に設定していることにより臓器等に蓄積することが少なくしかも安全性が高い」ことを意味している。安全性の観点から見れば、仮に体液中に本発明の共重合体が放出された場合、生体中の血漿アルブミンの分子量（約６７，０００）よりも低い分子量であれば、体外への排泄が迅速に進行するためである。特に腎排泄については、血漿アルブミンの分子量よりも低い分子量であれば体外への排泄が迅速に進行することから、共重合体の分子量としては好ましくは５００〜１００，０００であり、特に５００〜６５，０００が好ましい。
【００１９】
ここでＰＥＧ換算重量平均分子量とは、標準単分散ポリエチレングリコールサンプルの検量線を用いてＧＰＣ（ゲルパーミエーションクロマトグラフィー）により分子量分布の測定を実施し、その際、ＰＥＧを標準試料（商品名：ＴＳＫｓｔａｎｄａｒｄ  ＰＯＬＹ（ＥＴＨＹＬＥＮＥ  ＯＸＩＤＥ）、ＴＯＳＯＨ（株）製）とし、その重量平均分子量に換算して得られた分子量をいう。ＰＥＧは水性溶媒および有機溶媒にも可溶なため、親水性重合体および疎水性重合体の分子量測定の際に分子量標準物質として用いる。ＰＥＧ換算重量平均分子量の測定法は後で詳細に述べる。
本発明の共重合体における、ポリエチレングリコール換算重量平均分子量／ポリエチレングリコール換算数平均分子量（Ｍｗ／Ｍｎ）で表示される分子量分布は１．２〜２．５であることが好ましく、品質確保のためには１．２〜２．２であることがより好ましく、１．２〜２．０であることがさらに好ましく、最も好ましくは１．０〜１．８である。分子量分布が２．５を越える場合は、低分子量から高分子量まで、広い範囲の種々の分子量を有する高分子体の集合となり、本発明の共重合体の生体適合性に関する性能を均一に発揮することが困難となる場合がある。一方、この分子量分布が１．０以下となるポリエーテル製造は工業的製法では困難である。
【００２０】
本発明の共重合体は、ポリエチレングリコールやポリエチレンオキサイドとの明確な構造的相違がある。即ち本発明の共重合体は、ポリマーの両末端以外にも主鎖に置換基がランダムに導入されているという特徴を有するため、構造および物理化学的性質がポリエチレングリコールやポリエチレンオキサイドとは全く異なる。本発明の共重合体が特にランダム共重合であることは、界面活性剤としての作用が弱いことの原因となっている。
本発明の共重合体の構成成分である、側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体を製造するためのモノマー原料（（Ｂ）エポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物）の例としては、アルキルグリシジルエーテル等の脂肪族炭化水素グリシジルエーテル、アリールグリシジルエーテル等の芳香族炭化水素グリシジルエーテルが挙げられる。グリシジルエーテルの例として、グリシジルメチルエーテル、エチルグリシジルエーテル、グリシジル−ｎ−プロピルエーテル、グリシジルイソプロピルエーテル、ｎ−ブチルグリシジルエーテル、ｓｅｃ−ブチルグリシジルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルグリシジルエーテル、２−エチルへキシルグリシジルエーテル、２−メチルオクチルグリシジルエーテル、アリルグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテル、グリセロールトリグリシジルエーテル、アセチルグリシドール、グリシジルメタクリレート、ベンジルグリシジルエーテルおよびグリシジルフェニルエーテル等を挙げることができる。
【００２１】
本発明の共重合体は、ポリエチレングリコールに比べて、水に対する溶解性が制御され、脂溶性が向上している。その結果、体液または生体組織と接触する部分に用いる、医療または医用材料としての樹脂基材に添加した場合には、基材との混和が速やかに進行する。医療用具として用いた場合に、剥離や溶出が抑えられる。
本発明の共重合体に含まれる、酸あるいは塩基で処理することによって側鎖にヒドロカルビル基を導入することが可能な側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体は、高い反応性を有する一級水酸基の存在により、容易に架橋することができきる。更に生体適合性を有し、しかも高い透明性，吸水性および保湿性能を有するゲルフィルムを容易に調製できる。
【００２２】
本発明の共重合体は、従来の材料であるアクリレートやメタクリレート系ポリマーに比べ生体に対する影響が少ないため、細胞毒性も低減される。例えば、ポリアルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、血小板の粘着・活性化の抑制および補体系の活性化抑制の効果を奏し、血液適合性に優れていることが知られているが、肝臓、脾臓等の臓器に蓄積した際に、臓器障害を引き起こす場合がある。更にポリアルコキシアルキル（メタ）アクリレートは、従来、血小板の粘着・活性化の抑制および補体系の活性化抑制の各効果のみが重視され、基材からはがれる等により、体液中に放出され、肝臓、脾臓等の臓器に蓄積した際に臓器障害を引き起こす点は、十分に考慮されてこなかった。しかし、生体に対する安全性を考慮した場合、このような臓器障害等を引き起こす原因となる化合物の使用は適切ではない。
一方、本発明の共重合体の類似物としてのポリエチレングリコールは、既に、「PEG-INTRON」（登録商標）(Schering Corporation, Kenilworth, NJ, USA) で知られるように、医薬医療用途として実績のある化合物である。本発明の共重合体は，蛋白・細胞吸着抑制、血小板の粘着・活性化の抑制および生物学的安全性の効果が最大限に発揮できるように、分子量、側鎖官能基種類および側鎖官能基導入量を、その使用目的に応じて最適化することが可能である。
【００２３】
ポリエチレンオキサイド系化合物の架橋生成物としては、ポリマー電解質として、特にポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）系ポリマーとリチウム塩の複合体を、リチウム二次電池に応用することが試みられていた。そのため、下記、非特許文献３に記載されているように、アリル基を導入したポリエチレンオキシド系ポリマーを用いたラジカル反応での架橋について報告されている。放射線によるポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）の架橋については、下記、非特許文献４にＰＥＯ単独およびＰＥＯ−ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）の系が報告されている。また、これらＰＥＯ系ポリマーを構成するためのモノマーであるグリシジルエーテル類については下記、非特許文献５に記載されており、更にモノマー類およびエチレンオキサイドとの重合生成物においては特許文献３に記載されている。
［非特許文献３］：玉井聡行、松川公洋、井上弘、飯村卓哉、西岡昇、科学と工業、７４（９）、４５９−４６１（２０００）
［非特許文献４］：F. Yosii, Y. Zhanshan, K. Isobe, K. Shinozaki, K. Makuuchi, Radiation Physics and Chemistry, 55, 133-138 (1999) 
［非特許文献５］：H. Koinuma, S. Inoue, T. Tsuruta, Makromoleculare Chemie, 136, 65-71 (1970)
［特許文献３］：特公昭６１−０３７６１１号公報
本発明における架橋方法は、後で述べるように、ＰＥＯ誘導体の酸あるいは塩基処理により側鎖に生成する反応性の高い一級水酸基を化学的に架橋するものである。さらにエポキシ基を有する架橋剤を用いることにより、架橋後に新規に水酸基が生成し、架橋剤による脂溶性の増大が抑制され、架橋後も優れた体液および生体組織適合性が維持される点が従来技術とは異なる。
【００２４】
次に、本発明の共重合体の製造方法について説明する。
本発明の共重合体の組成についてはその組成比が効果発現には特に重要であり、モノマーとして反応に用いるエチレンオキサイド（Ａ）および少なくとも１以上のエポキシ基を有する炭素数４〜１５の化合物（Ｂ）を所望の割合で混合し、必要に応じて溶媒を添加した後、重合反応を行う。
ここに、重合溶媒を用いる場合、重合溶媒としては、トルエン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、２−メトキシエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル等を用いることができる。そして、重合反応は０〜８０℃の反応温度、１〜４０時間の反応時間、窒素やヘリウム、アルゴン等の反応雰囲気下で、大気圧〜１０気圧までの反応圧力で製造することができる。本発明の共重合体の製造では重合時に、アルキルアルミ等のルイス酸あるいはカリウムアルコキサイド等の強塩基等の重合開始剤を用いても良く、用いる場合には使用モノマーの総モル数に対し０．００１〜２モル％程度添加すれば良い。
【００２５】
本発明に用い得る重合開始剤を具体的に示すと、例えばルイス酸としては、三フッ化ホウ素エーテル錯体、トリアルキルアルミニウム、トリエチルアルミニウム、トリフェニルアルミニウムやトリブチルアルミニウムなどを挙げることができ、その他、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化セシウムやナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ナトリムプロポキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムプロポキシド、カリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−２−メチル−２−ブトシキド等などの重合開始剤を単独あるいは混合して使用することができる。本発明の共重合体は反応触媒としてトリアルキルアルミニウムまたはカリウムアルコキシド等を用い、また必要に応じて両者を同時に用いることにより達成することが出来る。
【００２６】
エチレンオキサイドと共にアルキルグリシジルエーテルをモノマー原料として用いて重合体を製造した場合、用いるエチレンオキサイドとアルキルグリシジルエーテルの種類、重合開始剤の種類、反応条件の選択等によっては、目的とするエチレンオキサイド誘導体だけでなく、微量の３−ヒドロキシオキセタン誘導体が生じることがあると報告されている（例えば、下記、非特許文献５及び６参照）。このような場合、微量の３−ヒドロキシオキセタン誘導体が混合物になることも否定できないが、本発明の効果はエチレンオキサイド誘導体により達成され、微量の混在により本発明の効果には影響しない。
［非特許文献６］：E. J. Vandenberg, J. Polym. Sci., Polym. Chem. Ed., 23, 915-949 (1985)
［非特許文献６］：E. J. Vandenberg, J. C. Mullis, R. S. Juvet, Jr., T. Miller and R. A. Nieman, J. Polym. Sci., Part A, 27, 3113-3149 (1989)
【００２７】
本発明の共重合体は、原料として用いるエチレンオキサイド（Ａ）と組み合わせるエポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物（Ｂ）を適宜選択することにより、生成物における親水性および疎水性の制御が可能である。共重合体の組成比に関して、特に本発明における共重合体においては、（ｙ）／（（ｘ）＋（ｙ））は、０．００１〜０．５００であり、好ましくは０．０２５〜０．５００である。更に、本発明の共重合体は、原料として用いるエチレンオキサイドと組み合わせるエポキシ基を有する炭素数４〜１５からなる化合物を適宜選択することにより、生成物における親水性および疎水性の制御が可能である。特に本発明における共重合体においては、（Ｂ）／（（Ａ）＋（Ｂ））は、０．００１〜０．５であり、好ましくは０．０２５〜０．５である。その結果、体液または生体組織と接触する部分に用いる医療用具の疎水性表面に混和あるいは被覆する場合には、アルキルグリシジルエーテル等の脂肪族炭化水素グリシジルエーテル、アリールグリシジルエーテル等の芳香族炭化水素グリシジルエーテル等の疎水基部分としてプロピル、アリル、ブチル、へキシルまたはフェニル、ベンジル基のような脂溶性の高い基を導入すると、医療用具に用いられる樹脂に添加する場合の混和性が向上する。そのため、医療用具の体液または生体組織と接触する部分に被覆した場合には、被覆後の剥離をより抑制することができる。
【００２８】
例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）膜表面との親和性を高めることを目的として、本発明の共重合体に脂溶性基を導入することを試みた結果、グリシジルエーテルとして、グリシジルプロピルエーテル、ブチルグリシジルエーテル、グリシジルフェニルエーテルまたはベンジルグリシジルエーテルを用いることにより、ＰＥＴ表面からの剥離を１２時間以上抑制することができた。従って被覆材料として、剥離抑制を目的にグリシジルエーテルを選択する場合には、グリシジルエーテルの疎水基部分としてプロピル基、アリル基、ブチル基、フェニル基またはベンジル基等の疎水性基が優れる。これらの疎水性置換基を導入することによって、置換ポリエチレンオキサイド誘導体に関して、実施例に示したように被覆に用いた場合、蛋白や細胞吸着抑制、血小板の粘着や活性化の抑制の各効果に特に優れた性能が発現される。更にポリペプチドや蛋白の分離精製、細胞分離用途、細胞回収用途に使用した場合には、目的とするポリペプチド、蛋白、細胞の分離性能向上および回収率向上が期待されるだけでなく処理時間短縮も期待される。
【００２９】
本発明の共重合体において、モノマー（Ａ）がエチレンオキサイドであり、モノマー（Ｂ）がｎ−ブチルグリシジルエーテルである場合、エチレンオキサイドの割合が大きくなるにつれ化合物の親水性が向上し、水に溶けやすくなる傾向がある。逆に、ｎ−ブチルグリシジルエーテルの割合が大きくなるにつれて、化合物の疎水性が向上し、水に溶けにくくなる傾向がある。エチレンオキサイドに比べてｎ−ブチルグリシジルエーテルの割合が極端に高い場合、例えば、ｎ−ブチルグリシジルエーテルが９５％以上の場合、重合生成物の脂溶性が向上し、医療用具の体液または生体組織と接触する部分への被覆、あるいは基材への混和が容易となり、例えば被覆率は向上するものの、器材に対する吸着蛋白量が増加する現象、血小板等の吸着増加現象等が見られる。同様にｎ−ブチルグリシジルエーテルに比べてエチレンオキサイドの割合が極端に高い場合、例えば、エチレンオキサイドが９５％以上の場合、重合生成物が水溶性となって、器材への被覆が容易で無くなり、剥離し易くなるものの、ポリペプチド、蛋白、細胞や血小板等の吸着抑制が顕著に見られる。
【００３０】
以上のように、蛋白・細胞吸着抑制、血小板の粘着・活性化の抑制の各効果を十分に発揮するためには、本発明の共重合体を構成する親水性基（例えばエチレンオキサイド）および疎水性基（例えば、ｎ−ブチルグリシジルエーテル）のバランスが重要である。
本発明の共重合体を被覆材料として用いる場合に、基材への被覆のために最適な疎水性基をモノマー（Ｂ）として、必要な量だけ導入することが可能である。基材や器材の性質に適した疎水性基をモノマー（Ｂ）として導入することにより、混和あるいは被覆後、目的とするポリペプチド、蛋白、細胞吸着抑制、血小板の粘着や活性化の抑制の各効果、さらにポリペプチド、蛋白分離、除去、回収率向上、細胞分離・除去・回収率向上、血小板回収率向上を十分に発揮することが可能である。先にも述べたが、特に本発明における共重合体においては、（Ｂ）／（（Ａ）＋（Ｂ））は、０．００１〜０．５であり、好ましくは０．０２５〜０．５である。同様に（ｙ）／（（ｘ）＋（ｙ））は、０．００１〜０．５００であり、好ましくは０．０２５〜０．５００である。
【００３１】
本発明の共重合体は主鎖および側鎖、例えばヒドロカルビル基の効果によって、ポリペプチド、蛋白、細胞吸着抑制、血小板の粘着や活性化の抑制、さらにポリペプチド、蛋白分離、除去、回収率向上、細胞分離、除去、回収率向上、血小板回収率向上の各効果を発揮し、モノマー（Ｂ）により側鎖に導入された疎水性基によって脂溶性が向上し、本発明の共重合体以外の基材に対する本発明の共重合体の混和あるいは器材に対する被覆は容易となる。
本発明の共重合体の構成成分である側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体は、架橋構造を有していてもよい。例えば、酸あるいは塩基処理操作により側鎖にヒドロカルビル基が導入された共重合体は、エポキシ化合物系架橋剤等により架橋することが可能である。酸あるいは塩基処理操作により、側鎖にヒドロカルビル基が導入される共重合体としては、ｔ−ブチルグリシジルエーテル、グリシジルトリメチルシリルエーテル、グリシジルテトラヒドロピラニルエーテル、アセチルグリシドール、グリシジルメタクリレートおよび（１−エトキシ）エチルグリシジルエーテルから選ばれた少なくとも１種と、エチレンオキサイドとからなる共重合体が好ましい。
【００３２】
（１）側鎖にヒドロカルビル基を有する共重合体を架橋する場合
例えば、モノマー（Ｂ）がｔ−ブチルグリシジルエーテルの場合、モノマー（Ａ）との反応により得られた共重合体を塩化水素−ジオキサン溶液、塩酸水溶液、イオン交換樹脂等の脱保護反応に通常使用される手法により処理することにより、ｔ−ブチル基を除去することができる。その結果、側鎖に一級水酸基であるヒドロキシメチル基の導入された共重合体が得られる。共重合体は、種々の反応条件下において下記に示す架橋剤により架橋することができ、その結果、例えば、親水性または疎水性のゲルを得ることができる。モノマー（Ｂ）がグリシジルトリメチルシリルエーテル、グリシジルテトラヒドロピラニルエーテル、または（１−エトキシ）エチルグリシジルエーテルの場合には、上記と同様に塩化水素−ジオキサン溶液、塩酸水溶液、イオン交換樹脂等による酸処理により保護基を除去することができ、同様に側鎖に一級水酸基の導入された共重合体が得られる。これらの共重合体も下記に示す架橋剤により架橋することができる。
【００３３】
例えば、モノマー（Ｂ）がアセチルグリシドールなどのカルボン酸グリシジルエステル類やグリシジルメタクリレートなどのアクリル酸やメタクリル酸グリシジルエステル類の場合、モノマー（Ａ）との反応により得られた共重合体を水酸化ナトリウム溶液、水酸化カリウム溶液等の塩基性溶液により処理することにより、アセチル基を除去することができる。その結果、側鎖に一級水酸基であるヒドロキシメチル基の導入された共重合体が得られる。これらの共重合体も下記に示す架橋剤により架橋することができる。
架橋剤としては、１分子内に複数個のエポキシ基を有するグリシジルエーテル、例えばエチレングリコールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテル、グリセオールトリグリシジルエーテル等、１分子内に２個以上のカルボキシル基を有するコハク酸、リンゴ酸、クエン酸、アジピン酸等の多価カルボン酸、エピクロルヒドリン、エピブロモヒドリン、チタン、アルミ、シリカ等の金属化合物等が挙げられる。
【００３４】
架橋剤として好ましいグリシジルエーテルは、１分子内に２個あるいは３個のエポキシ基を有するジグリシジルエーテルである。ジグリシジルエーテルの例としては、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエチレングリコールジグリシジルエーテル、プロピレングリコールジグリシジルエーテル、ブタンジオールジグリシジルエーテル、１，６−ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、炭素数８〜２０からなるジグリシジルエーテル等が挙げられる。またグリセオールトリグリシジルエーテル等も挙げられる。
これらの中でも、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ジエチレングリコールジグリシジルエーテルおよびブタンジオールジグリシジルエーテル等のジグリシジルエーテル類が、架橋反応の反応収率および架橋生成物の親水・疎水性バランス等の効果の点で、より好ましい。すなわち、エポキシ基を有する架橋剤を用いることにより、架橋後に新規に水酸基が生成する。そのため、架橋剤による脂溶性の増大が抑制され、架橋後も優れた体液および生体組織適合性が維持される。
【００３５】
架橋反応において、製造時における側鎖に一級水酸基であるヒドロキシメチル基の導入された共重合体の濃度、架橋剤量、溶媒の種類、酸や塩基などの架橋触媒、反応温度等の反応条件により架橋度（架橋割合）を制御することが可能であり、架橋度の制御により生成物の疎水性の制御もまた可能である。
架橋反応に用いる架橋剤の量に応じて架橋度が変化し、生成物の疎水性も変化し、架橋剤の量には最適値が存在する。その結果、難水溶性のゲルまでもが生成可能である。更に架橋生成物はフィルムあるいはシート状に加工成形が可能である。例えば塩基を架橋触媒として用いる場合には水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化セシウム、炭酸カリウムやナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ナトリムプロポキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムプロポキシド、カリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−２−メチル−２−ブトシキド等を挙げることが出来る。
【００３６】
架橋剤の量は、側鎖を有するエチレンオキサイド共重合体、ここでは側鎖に一級水酸基であるヒドロキシメチル基の導入された共重合体に対して５〜３００重量％の範囲であるが、５〜１５０重量％の範囲が好ましく、５〜１００重量％がより好ましい。この範囲であれば、目的とする体液適合性、生体組織適合性、生体組織接着抑制、ポリペプチド、蛋白、細胞吸着抑制、血小板の粘着や活性化の抑制の各効果に、特に優れた性能が発現される。更に生体組織の癒着防止に使用するフィルム、床ずれ、火傷、潰瘍、外傷による創傷を被覆するために使用するフィルム、真皮、皮下組織、筋肉、筋、関節、骨に及ぶ組織破壊による創傷を被覆するために使用するフィルム等においても優れた性能を発揮することが出来る。
【００３７】
（２）共重合しながら架橋する場合
架橋生成物を得る他の方法としては、本発明の生体中の体液および組織適合性樹脂において、例えば、モノマー（Ａ）がエチレンオキサイドであり、モノマー（Ｂ）がエチレングリコールルジグリシジルエーテルあるいはブタンジオールジグリシジルエーテルである場合、耐圧反応容器を用い、トルエン、ヘキサン、２−メトキシエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル等の反応溶媒中または無溶媒で、例えば、公知（例えば、非特許文献３及び４）のトリブチルアルミニウム等のルイス酸等の重合開始剤またはカリウム第３級ブチルアルコール等の強塩基等の重合開始剤存在下、氷冷、室温下、または必要に応じて加熱下にて、常圧または加圧下で開環重合させることにより共重合体（架橋生成物）が得られる。
【００３８】
共重合しながら架橋する場合、架橋割合は、用いる架橋剤量が多いほど架橋度が高くなり、生成する化合物の疎水性も高まり、難水溶性のゲル化化合物までもが生成可能である。架橋剤の量としては、置換ポリエチレンオキサイドからなる重合体に対して０．１〜１００重量％の範囲が好ましく、０．１〜５０重量％がより好ましい。生成物が難水溶性の場合、生成物を加熱融解しフィルムに成形することが可能であり、このフィルムも目的とする体液適合性、生体組織適合性、生体組織接着抑制、ポリペプチド、蛋白、細胞吸着抑制、血小板の粘着や活性化の抑制の各効果に、特に優れた性能が発現される。更に生体組織の癒着防止に使用するフィルム、床ずれ、火傷、潰瘍、外傷による創傷を被覆するために使用するフィルム、真皮、皮下組織、筋肉、筋、関節、骨に及ぶ組織破壊による創傷を被覆するために使用するフィルム等においても優れた性能を発揮することが出来る。本発明の共重合体は、単体で医療用具に用いられる。あるいは医療用具に用いられる樹脂材料の添加剤および医療用具の体液または生体組織と接触する部分に用いられる被覆剤として用いられる。
以上、本発明の共重合体について説明した。
【００３９】
本発明の共重合体は基材に混和或いは被覆することで生体適合性材料としての効果を奏するが、特に混和した場合において耐久性に優れる。
次に本発明の共重合体を混和する基材、被覆する器材について説明する。
本発明に用いることができる基材としては、例えば、ポリエステル、ポリアミド、ポリイミド、ポリオレフィン、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチレン、ハロゲン化ポリオレフィン、ポリカーボネート、ポリビニリデンフルオライド等であり、またそれらを含む基材を挙げることができる。そして、基材に混和、器材に被覆した場合の材料中の本発明共重合体含有率は好ましくは９０質量％以下である。
例えば、本発明の共重合体を、１）混和させる場合：本発明の共重合体を、ポリペプチドおよび蛋白と接触する部分に用いる基材に対して、０．００１〜９０質量％の範囲、好ましくは０．００１〜５０質量％の範囲、より好ましくは０．００１〜２０質量％の範囲、さらに好ましくは０．００１〜１０質量％の範囲で添加する。このようにして得られる本発明共重合体含有基材および樹脂は、例えば、シート、フィルム、中空糸を含む糸、編織物、不織布、その他三次元成形体等に成形される。
【００４０】
また、本発明の共重合体を、２）被覆剤として用いる場合：体液、生体組織、ポリペプチドおよび蛋白と接触する部分に用いる器材に被覆して用いられる。本発明の組成物に用いる本発明の共重合体以外の樹脂、および上記成形体に用いる本発明の共重合体以外の樹脂器材に対して、０．０００１〜３０質量％の範囲、好ましくは０．０００１〜２０質量％の範囲、より好ましくは０．０００１〜１０質量％の範囲、さらに好ましくは０．０００１〜５質量％の範囲で被覆する。  本発明の共重合体は基材に対して混和し器材として成形することで、あるいは器材に対して被覆することで体液、生体組織、ポリペプチドおよび蛋白と接触する部分に保持させることが可能である。該共重合体を保持させた結果としてポリペプチド、蛋白、細胞吸着抑制、血小板の粘着や活性化の抑制、さらにポリペプチド、蛋白分離、除去、回収率向上、細胞分離、除去、回収率向上、血小板回収率向上の各効果が発揮される。
【００４１】
特に体液、生体組織、ポリペプチドおよび蛋白と接触する部分に用いる器材に被覆・保持させる方法としての被覆法については、本発明の共重合体の希釈溶液を用いて、浸漬法、スプレー法、フローコーター法等の公知の方法により基材に溶液を被覆し、乾燥することにより行われる。被覆した際の被膜の膜厚は限定されないが、好ましくは１ｍｍ以下である。溶媒の例としては、水、エタノール、アセトン、イソプロパノール、ＴＨＦ等の有機溶媒およびそれらの含水溶媒等が挙げられる。
尚、本発明の共重合体を器材に対する被覆材料として用いる場合、体液、生体組織、ポリペプチドおよび蛋白と接触する部分に用いる器材は、樹脂以外にも、ステンレス鋼、チタン、チタン合金等の金属材料、ヒドロキシアパタイト、グラファイト、窒化チタン等のセラミック等であってもよい。
本発明の共重合体は基材に対して混和し成形すること、あるいは器材に対して被覆するだけでなく、フィルム、中空糸を含む糸、不織布、ゲル、三次元構造体等に成形することができる。
【００４２】
本発明の共重合体は、体液、生体組織、ポリペプチドおよび蛋白との界面において安定に存在することができ、重合体が体液、生体組織、ポリペプチドおよび蛋白を含む溶液等の中に溶出することが極めて少ない。本発明の共重合体は、生体内に投与した場合には、生体組織による認識を受けにくく、臓器による取り込み量が減少し、その結果臓器に対する毒性発現が減少するという利点がある。また架橋生成物も同様に、生体内から徐々に排泄され、安全性が高いという特徴を有する。
本発明の共重合体によって、体液、生体組織、ポリペプチドおよび蛋白の分離・除去・回収率向上、細胞分離・除去・回収率向上の各効果および効果の持続性を発揮し、更に側鎖に導入された疎水性基によって脂溶性が向上し、本発明の共重合体以外の基材に対する本共重合体の混和あるいは器材に対する被覆が容易となりしかもその効果が持続する。
【００４３】
本発明の共重合体を含有してなる化粧料は化粧水、乳液、クリーム、口紅、ファンデーション、ヘアクリーム等に用いることが出来、これらの化粧料および毛髪用化粧料は本発明の共重合体を配合することで定法に従って製造できる。本発明の化粧用組成物および毛髪用化粧料組成物には共重合体に加えて、本発明の効果を損ねない範囲で通常化粧品に使用される各種成分等を目的に応じて配合することが出来る。例えば各種界面活性剤、保湿剤、色素、顔料、酸化防止剤、防腐剤、紫外線吸収剤、香料等を配合することが出来る。本発明の化粧料組成物および毛髪用化粧料組成物はともに本発明の共重合体を含むため、乾燥時等における肌荒れ、つや不足等の皮膚を改善し、十分な帯電防止作用がえられることで毛髪の帯電防止とともに毛髪表面のつやを抑制あるいは改善することが出来る。
本発明の共重合体を含有してなる繊維刺激抑制組成物は繊維表面に対し被覆することで、繊維製品において問題となる皮膚刺激を減少させると同時に繊維の防汚性を高めることが出来る。本発明の繊維刺激抑制剤および繊維用刺激抑制組成物により低刺激の繊維を得るためには、繊維用刺激抑制剤組成物の原液またはその希釈液に繊維を浸漬し軽く絞るあるいは遠心脱水、脱溶剤を行いその後室温乾燥で風乾あるいは乾燥機での乾燥による。また繊維用刺激抑制組成物をアルコール類もしくは含水アルコール類等で希釈し、得られた液を繊維に噴霧させ乾燥することで達成されるが、それら方法は繊維の種類や目的に応じて使い分けることが可能である。
【００４４】
対象とする繊維を構成する素材としては通常用いられる素材であればよく木綿、麻、絹、毛、アクリル繊維、レーヨン、ナイロン、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリアミドおよびこれらの混紡品からなる織物、編み物、不織布とうが挙げられるが、この中でも綿、ポリエステル、ポリエステル−綿混紡、ナイロン、毛の繊維に対して本発明の刺激抑制効果が高い。更にはティッシュペーパー、トイレットペーパーなどのセルロース線から構成される紙類も含まれ、糸状、ひも状、縄状でもよいまたそれらが布状に構成されていても良い。
本発明の共重合体を含有してなるコンタクトレンズ用材は蛋白、脂質などの付着、沈着を抑制することでレンズに付着する汚れを抑制すると同時にレンズ表面に親水性の付与と装用感の向上させることが出来きる。本発明の共重合体を含有してなるコンタクトレンズ用材組成物は本発明の共重合体以外に必要に応じて無機固体粒子、保湿成分、界面活性剤、蛋白分解酵素、あるいは殺菌剤などをその成分として含有することが出来る。さらに本発明の共重合体はコンタクトレンズに対して形状変化を起こさせることが無い。
【００４５】
本発明におけるＰＥＧ換算重量平均分子量測定の手法であるゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）の条件は、以下のとおりである。
カラム：G4000PWXL（東ソー（株）製）、G5000PWXL（東ソー（株）製）        移動相：20％アセトニトリルin50mM塩化リチウム
流速：0.8ml/min
カラム温度：４０℃
ポンプ：L-6200（（株）日立製作所製）
検出器：L-3300（RI：示差屈折計、（株）日立製作所製）
L-4200（UV-VIS：紫外可視吸光計、（株）日立製作所製）
分子量を算出するための検量線は、スタンダードポリエチレンオキサイド（TOSOH製、重量平均分子量が2.40x104, 5.00x104, 1.07x105, 1.40x105, 2.5x105, 5.4x105の６種類）を用いて作成する。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
［製造例１］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１４．２ｍｌ、エチレンオキサイド４１．３ｍｌ、トリイソブチルアルミニウム１モル（Ｍ）濃度ヘキサン溶液４．６ｍｌ、およびカリウム２−メチル−２−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液０．５ｍｌと、溶媒としてヘキサン１５０ｍｌを加え、２５℃で２４時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（１）３９ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は４１，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を標準とする重水素化メタノール（ＣＤ3ＯＤ）溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．３９およびδ１．５４にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４０〜３．９０に、主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基の導入率は、モル比で４．５％であった。
【００４７】
［製造例２］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１４．２ｍｌ、エチレンオキサイド４１．３ｍｌ、トリイソブチルアルミニウム１Ｍヘキサン溶液４．５ｍｌおよびカリウムｔ−ブトキシド１ＭＴＨＦ溶液０．５ｍｌ溶媒としてヘキサン２００ｍｌを加え、２５℃で２０時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（２）４６ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は６７，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、ＴＭＳを標準とするＣＤ3ＯＤ溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．３９およびδ１．５４にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．３９〜３．９０に、主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基の導入率は、モル比で２．８％であった。
【００４８】
以下、種々の割合でｎ−ブチルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体３、４）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖ｎ−ブチル基導入率を求めた。その結果を表１に示す。
【表１】
2005281665.tif 000004
【００４９】
［製造例３］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１４．２ｍｌ、エチレンオキサイド４１．３ｍｌおよびトリイソブチルアルミニウム１Ｍヘキサン溶液５．０ｍｌと、溶媒としてヘキサン５００ｍｌを加え、２５℃で２０時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（５）４１ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は３４，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、ＴＭＳを標準とするＣＤ3ＯＤ溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．４０およびδ１．５５にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４４〜３．８９に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基の導入率はモル比で６．３％であった。
【００５０】
以下、種々の割合でｎ−ブチルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体６、７）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖ｎ−ブチル基導入率を求めた。その結果を表２に示す。
【表２】
2005281665.tif 000005
【００５１】
［製造例４］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１５ｍｌ、エチレンオキサイド９０ｍｌおよびカリウムｔ−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液０．７ｍｌと、溶媒としてジエチレングリコールジエチルエーテル２００ｍｌを加え、８０℃で２４時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（８）５０．３ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は４７，０００であった。   1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、ＴＭＳを標準とするＣＤ3ＯＤ溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．４０およびδ１．５５にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４０〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基の導入率はモル比で５．７％であった。
【００５２】
以下、種々の割合でｎ−ブチルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体９、１０）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖ｎ−ブチル基導入率を求めた。その結果を表３に示す。
【表３】
2005281665.tif 000006
【００５３】
［製造例５］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にグリシジルフェニルエーテル１５ｍｌ、エチレンオキサイド９０ｍｌおよびカリウムｔ−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液０．７ｍｌと、溶媒としてエチレングリコールジメチルエーテル２００ｍｌを加え、９０℃で２４時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（１１）８６．２ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は１２０，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、ＴＭＳを標準とするＣＤ３ＯＤ溶媒中での測定により、δ６．７８〜６．９６およびδ７．１２〜７．２９にフェニル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４０〜４．１５に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるフェニル基の導入率はモル比で６．４％であった。
【００５４】
以下、種々の割合でグリシジルフェニルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体１２、１３）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖フェニル基導入率を求めた。その結果を表４に示す。
【表４】
2005281665.tif 000007
【００５５】
［製造例６］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１１．４ｍｌ、グリシジルメチルエーテル１．８ｍｌ、エチレンオキサイド４１．３ｍｌ、トリイソブチルアルミニウム１モル（Ｍ）濃度ヘキサン溶液４．６ｍｌ、およびカリウム２−メチル−２−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液０．５ｍｌと、溶媒としてヘキサン１５０ｍｌを加え、２５℃で２０時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（１４）３１ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は３３，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を標準とする重水素化メタノール（ＣＤ3ＯＤ）溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．３９およびδ１．５４にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測され、さらにδ３．３０にメトキシ基に由来するピークが見られ、さらにδ３．４０〜３．９０に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基、メトキシ基の導入率はそれぞれモル比で３．３％および０．８％であった。
【００５６】
［製造例７］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１４．２ｍｌ(100mmol)、エチレンオキサイド４１．３ｍｌ(826mmol)、トリイソブチルアルミニウムの１．０モル濃度ヘキサン溶液、４．５ｍｌ（4.5mmol）、およびカリウムｔ−ブトキシド５６ｍｇ (0.5mmol) と、溶媒としてヘキサン５００ｍｌを加え、２５℃で２０時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（１５）３６ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は６７，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール（ＣＤ3ＯＤ）溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．３９およびδ１．５４にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．３９〜３．９０に、主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基の導入率は、モル比で２．８４％であった。
【００５７】
以下、種々の割合でｎ−ブチルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体１６、１７）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖n-ブチル基導入率を求めた。その結果を表５に示す。
【表５】
2005281665.tif 000008
【００５８】
［製造例８］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１４．２ｍｌ(100mmol)、エチレンオキサイド４１．３ｍｌ(826mmol)およびトリイソブチルアルミニウムの１．０モル濃度ヘキサン溶液５．０ｍｌ（5.0mmol）と、溶媒としてヘキサン５００ｍｌを加え、２５℃で２０時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（１８）３１ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は３４，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール（ＣＤ3ＯＤ）溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．４０およびδ１．５５にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４４〜３．８９に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基の導入率はモル比で６．２９％であった。
【００５９】
以下、種々の割合でｎ−ブチルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体１９、２０）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖ｎ−ブチル基導入率を求めた。その結果を表６に示す。
【表６】
2005281665.tif 000009
【００６０】
［製造例９］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｎ−ブチルグリシジルエーテル１５ｍｌ (106mmol)、エチレンオキサイド９０ｍｌ (1802mmol)およびカリウムｔ−ブトキシド７６ｍｇ(0.68mmol)と、溶媒としてジエチレングリコールジエチルエーテル２００ｍｌを加え、８０℃で２４時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（２１）５０．３ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は４７，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール（ＣＤ3ＯＤ）溶媒中での測定により、δ０．９４、δ１．４０およびδ１．５５にｎ−ブチル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４０〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｎ−ブチル基の導入率はモル比で５．７０％であった。
【００６１】
以下、種々の割合でｎ−ブチルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体２２、２３）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖ｎ−ブチル基導入率を求めた。その結果を表７に示す。
【表７】
2005281665.tif 000010
【００６２】
［製造例１０］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にグリシジルフェニルエーテル１５ｍｌ(111mmol)、エチレンオキサイド９０ｍｌ(1802mmol)およびカリウムｔ−ブトキシド７８ｍｇ (0.70mmol)と、溶媒としてエチレングリコールジメチルエーテル２００ｍｌを加え、９０℃で２４時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（２４）５５．９ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は１４０，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール（ＣＤ3ＯＤ）溶媒中での測定により、δ６．７８〜６．９６およびδ７．１２〜７．２９にフェニル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４０〜４．１５に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるフェニル基の導入率はモル比で６．４４％であった。
【００６３】
以下、種々の割合でグリシジルフェニルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体２５、２６）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖フェニル基導入率を求めた。その結果を表８に示す。
【表８】
2005281665.tif 000011
【００６４】
［製造例１１］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、エチレングリコールジグリシジルエーテル１０ｍｌ (64mmol)、エチレンオキサイド９０ｍｌ(1820mmol)およびカリウムｔ−ブトキシド７６ｍｇ(0.68mmol)と、溶媒としてエチレングリコールジメチルエーテル４００ｍｌを加え、４０℃で２４時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（２７）２５．５ｇを白色固体として得た。
以下、種々の割合でエチレングリコールジグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体２８、２９）。その結果を表９に示す。
【表９】
2005281665.tif 000012
【００６５】
［製造例１２］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、アリルグリシジルエーテル５０ｍｌ(42mmol)、エチレンオキサイド２１．１ｍｌ (424mmol)、トリイソブチルアルミニウムの１．０モル濃度ヘキサン溶液４．５ｍｌ（4.5mmol）、およびカリウムｔ−ブトキシド５６ｍｇ(0.5mmol)と、溶媒としてヘキサン２５０ｍｌを加え、２５℃で２０時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体（３０）１３．７ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は４５，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール（ＣＤ3ＯＤ）溶媒中での測定により、δ３．９５、δ５．１０〜５．３０および、δ５．８０〜５．９０にアリル基に由来する多重線ピークが観測された。さらにδ３．４０〜４．１５に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるアリル基の導入率はモル比で４．５２％であった。
【００６６】
以下、種々の割合でアリルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドを用い、本実施例と同様の方法により目的共重合体を得た（共重合体３１、３２）。 1Ｈ−ＮＭＲ分析により側鎖アリル基導入率を求めた。その結果を表１０に示す。
【表１０】
2005281665.tif 000013
【００６７】
［製造例１３］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器に、ｔ−ブチルグリシジルエーテル２５ｍｌ(176mmol)、エチレンオキサイド１５２ｍｌ (3043mmol)およびカリウムｔ−ブトキシド１０７ｍｇ (0.95mmol)と、溶媒としてエチレングリコールジメチルエーテル200mlを加え、８０℃で２５時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去して目的とする共重合体９４．０ｇを白色固体として得た。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は８１，０００であった。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）溶媒中での測定により、δ１．１１にｔ−ブチル基に由来する単線ピークが観測された。さらにδ３．４０〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率はモル比で５．１０％であった。
氷冷下、上記共重合体２０．８４ｇに、４Ｎ−塩化水素の１，４−ジオキサン溶液２００ｍｌを加えて室温下で３０時間反応させた。反応終了後、反応溶媒を減圧下留去し、スペクトラポア（株）製透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ２（商標）、分子量分画１２，０００−１４，０００）を用い、精製水を外液とした２日間の透析を行った。次いで、ミリポア（株）社製メンブランフィルター（ＤＵＲＡＰＯＲＥ（商標）、０．２２μｍ）を用いたろ過、および凍結乾燥の工程を経て、白色非晶質の目的共重合体（３３）１４．６１ｇを得た。
【００６８】
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化ＤＭＳＯ溶媒中での測定により、δ１．１１に存在したｔ−ブチル基に由来する単線ピークが消失し、ｔ−ブチル基が除去されたことが確認された。得られた共重合体の分子量分布をＧＰＣにより測定した結果は７１，０００であった。
次に、共重合体（３３）２００ｍｇに対し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１．０ｍｌを加えた後、エチレングリコールジグリシジルエーテル０．１５ｍｌを加えて攪拌した。その後、反応液の一部を取り、ビニールテープで間隔を調整した２枚の硝子板の間に反応液を挟み、３７℃で１５時間静置した。残りの液は、室温下で１５時間攪拌した。反応液は架橋が進行しゲルが生成した。
２枚の硝子板の間で静置した反応液はシート状のゲルとなった。調製したゲルをシャーレに入れ、１Ｎ塩酸水溶液で中和した後、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で振とうした。このゲルシートの厚みは約０．５ｍｍ（３４）および約１．０ｍｍ（３５）であり、その後の評価に供した。
【００６９】
［製造例１４］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にｔ−ブチルグリシジルエーテル３３ｍｌ、エチレンオキサイド８５ｍｌ、カリウムｔ−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン溶液１ｍｌおよびトリイソブチルアルミニウム１Ｍヘキサン溶液１０ｍｌ、および溶媒としてヘキサン３００ｍｌを加え、２５℃で２４時間反応を行った。反応終了後、反応生成物を回収し、減圧下で溶媒を除去することによって目的とする共重合体（３６）６２ｇを白色固体として得た。
得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は５３，０００であった。ＧＰＣの結果を図１に示す。更に 1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２０にｔ−ブチル基に由来する単線ピークが観測され、さらにδ３．４０〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率は、モル比で３．９％（ｙ＝０．０３９）であった。
【００７０】
室温下、上記共重合体２０ｇに、４Ｎ−塩化水素１，４−ジオキサン溶液２００ｍｌを加えて室温下で２４時間反応させた。反応終了後、反応溶媒を減圧下留去し、米国スペクトラポア社製透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ２、分子量分画１２，０００−１４，０００）を用い、精製水を外液とした２日間の透析を行いった。次いで、ミリポア社製メンブランフィルター（ＤＵＲＡＰＯＲＥ、０．２２μｍ）を用いたろ過、次いで、凍結乾燥の工程を経て、白色非晶質の目的とする共重合体（３７）１６．６ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２０に存在したｔ−ブチル基に由来する単線ピークが消失し、ｔ−ブチル基が除去されたことが確認された。得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は６１，０００であり、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．５４であった。ＧＰＣの結果を図２に示す。
共重合体（３７）は、水、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、トルエン、テトラヒドロフラン、酢酸エチルおよびエタノールに対しては１００ｍｇ／ｍｌ以上の溶解性を示した。ヘキサンに対しては溶解しなかった。
【００７１】
［製造例１５］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にｔ−ブチルグリシジルエーテル４２ｍｌ、エチレンオキサイド８５ｍｌ、カリウム２−メチル−２−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン溶液１．１ｍｌおよびトリイソブチルアルミニウム１Ｍヘキサン溶液１１．１ｍｌ、および溶媒としてヘキサン３００ｍｌを加え、２５℃で２４時間反応を行った。反応終了後、反応生成物を回収し、減圧下溶媒を除去することにより、目的とする共重合体（３８）５５ｇを白色固体として得た。
得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は４０，０００であった。ＧＰＣの結果を図３に示す。更に 1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２２にｔ−ブチル基に由来する単線ピークが観測され、さらにδ３．４２〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率は、モル比で５．７％（ｙ＝０．０５７）であった。
【００７２】
室温下、上記共重合体２０．８ｇに、４Ｎ−塩化水素１，４−ジオキサン溶液２００ｍｌを加えて室温下で２４時間反応させた。反応終了後、反応溶媒を減圧下留去し、米国スペクトラポア社製透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ２、分子量分画１２，０００−１４，０００）を用い精製水を外液とした２日間の透析を行い、次いで、ミリポア社製メンブランフィルター（ＤＵＲＡＰＯＲＥ, ０．２２μｍ）を用いたろ過、次いで、凍結乾燥の工程を経て、白色非晶質の目的とする共重合体（３９）１５．１ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２２に存在したｔ−ブチル基に由来する単線ピークが消失し、ｔ−ブチル基が除去されたことが確認された。得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は４４，０００であり、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．７０であった。ＧＰＣの結果を図４に示す。
【００７３】
［製造例１６］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にｔ−ブチルグリシジルエーテル３０ｍｌ、エチレンオキサイド８６ｍｌ、カリウムｔ−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン溶液２ｍｌおよびトリイソブチルアルミニウム１Ｍヘキサン溶液１８ｍｌ、および溶媒としてヘキサン３００ｍｌを加え、２５℃で２４時間反応を行った。反応終了後、反応生成物を回収し、減圧下溶媒を除去することにより目的とする共重合体６１ｇを白色固体として得た。
得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は２８，０００であった。更に 1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２０にｔ−ブチル基に由来する単線ピークが観測され、さらにδ３．４０〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。更に、 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率はモル比で５．２％（ｙ＝０．０５２）であった。
【００７４】
室温下、上記共重合体２０ｇに、５Ｎ塩酸溶液２００ｍｌを加えて室温下で１０時間反応させた。反応終了後、反応溶媒を減圧下留去し、米国スペクトラポア社製透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ２、分子量分画１２，０００−１４，０００）を用い精製水を外液とした２日間の透析を行い、次いで、ミリポア社製メンブランフィルター（ＤＵＲＡＰＯＲＥ、０．２２μｍ）を用いたろ過、次いで凍結乾燥の工程を経て、白色非晶質の目的共重合体１５．８ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２０に存在したｔ−ブチル基に由来する単線ピークが消失し、ｔ−ブチル基が除去されたことが確認された。得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は２７，０００であり、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．７９であった。
【００７５】
［製造例１７］
重合原料であるｔ−ブチルグリシジルエーテルとエチレンオキサイドの使用量を変える以外は製造例１６と同様の反応条件下で、ランダム共重合を実施し、反応生成物を得た（４０、４１、４２）。これらの収量およびＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果および 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率を表１１に示す。
更に、製造例１６と同様の反応条件下それぞれの共重合体におけるｔ−ブチル基を脱保護し、ｔ−ブチル基除去の結果を製造例１６と同様に 1Ｈ−ＮＭＲ分析により確認した。脱保護により得られたポリエーテル誘導体（４３、４４、４５）のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果、およびＭｗ／Ｍｎを求めた結果を表１１に示す。
以上の結果から、ｔ−ブチルグリシジルエーテルの割合がモル比で１．８４％、２．２８％および３．８１％導入された共重合体が得られた。
【００７６】
【表１１】
2005281665.tif 000014
【００７７】
［製造例１８］
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にｔ−ブチルグリシジルエーテル１５ｍｌ、エチレンオキサイド９１ｍｌ、およびカリウムｔ−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン溶液０．６ｍｌ、および溶媒としてエチレングリコールジメチルエーテル２００ｍｌを加え、８０℃で１９時間反応を行った。反応終了後、溶媒を除去することにより、目的とする共重合体５６ｇを白色固体として得た。
得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は５４，０００であった。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化ジメチルスルホキシド溶媒中での測定により、δ１．１１にｔ−ブチル基に由来する単線ピークが観測され、さらにδ３．４０〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率はモル比で５．６％（ｙ＝０．０５６）であった。
【００７８】
氷冷下、上記共重合体２０．３５ｇに、４Ｎ−塩化水素の１，４−ジオキサン溶液２００ｍｌを加えて室温下で３０時間反応させた。反応終了後、反応溶媒を減圧下留去し、米国スペクトラポア社製透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ２、分子量分画１２，０００−１４，０００）を用い精製水を外液とした２日間の透析を行った。次いで、ミリポア社製メンブランフィルター（ＤＵＲＡＰＯＲＥ、０．２２μｍ）を用いたろ過、次いで、凍結乾燥の工程を経て、白色非晶質の目的共重合体１５．７ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化ＤＭＳＯ溶媒中での測定により、δ１．１１に存在したｔ−ブチル基に由来する単線ピークが消失し、ｔ−ブチル基が除去されたことが確認された。得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は５８，０００であり、Ｍｗ／Ｍｎ=１．５４であった。
【００７９】
［製造例１９］
共重合体（３７）のポリエーテル２００ｍｇに対し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１ｍｌを加え溶解した後、エチレングリコールジグリシジルエーテル０．１５ｍｌを加え攪拌した。その後、反応液の一部を取り、ビニールテープで間隔を調整した２枚の硝子板の間に反応液を挟み５０℃で１５時間静置した。残りの液は室温下で１５時間攪拌した、反応液は架橋が進行しゲルが生成した。２枚の硝子板の間で静置した反応液はシート状のゲルとなった。調製したゲルはシャーレに入れ１Ｎ塩酸１ｍｌを加え中和した後、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で振とうした。このゲルシート（４６）の厚みは約０．２ｍｍであった。
【００８０】
［製造例２０］
製造例１９と同様に架橋反応を行った。製造例１７で調製したポリエーテル化合物（４３）、（４４）および（４５）に存在する各水酸基のモル数に対し、等モル量の水酸化ナトリウムおよび４倍モル量のエチレングリコールジグリシジルエーテルを添加して架橋生成物を製造し、その物性を評価した。混合した架橋反応液の一部を取り、ビニールテープで間隔を調整した２枚の硝子板の間に反応液を挟み５０℃で１５時間静置した。
その結果、共重合体化合物（４５）についてのみ、２枚の硝子板の間で静置した反応液はシート状のゲルとなった。調製したゲルをシャーレに入れ、１Ｎ塩酸を加え中和した後、生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）で振とうした。このゲルシートの厚みは約０．２ｍｍであった。共重合体（４５）と異なり、共重合体（４３）および（４４）については、同一反応条件下で粘調性液体のままであり、ゲル化せず、シート状に加工することもできなかった。その結果を表１２に示す。  以上の結果より明らかなように、ｔ−ブチル基導入率が１．８４％および２．２８％の共重合体は、本条件下ではゲル化することができず、ｔ−ブチル基導入率が３．８１％の共重合体のみがゲルを生成した。
【００８１】
【表１２】
2005281665.tif 000015
【００８２】
〔実施例１〕
ポリスルホン１ｇをＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ：1-Methyl-2-pyrrolidinone）３ｍｌに溶解し、ついで製造例１で調製された本発明のポリエーテル（１）１００ｍｇを加え混合溶解し、粘性透明液体を得た。この液体を両端に０．１ｍｍのスペーサーをはさんだガラス板を使い、厚みを均一にしたシート状に延伸し、その直後に水槽に入れることで白色のポリスルホン−共重合体混合膜（ａ）を調製した。
以下、種々の割合でポリスルホンと本発明のポリエーテルを用い、本実施例と同様の方法によりポリスルホン−ポリエーテル混合膜を調製（膜ｂ〜膜ｆ）した。その結果を表１３に示す。表１３の結果より明らかなように、ポリスルホンと本発明のポリエーテルはＮＭＰ溶媒下ではいずれも容易に混合溶解し、溶解後は透明粘性液体として得られた。更にこの粘性液体は製膜することが可能であった。
次に比較対照として、ポリスルホン１ｇをＮＭＰ３ｍｌに溶解し調製した液体から、上記と同様の手法によりポリスルホン膜を調製した。
更に、これらの膜を精製水による４時間煮沸洗浄を３回繰り返しすることでＮＭＰを除去し被検試料を調製した。次にこれらの膜を直径約１５ｍｍの円形に打ち抜き、血漿蛋白質の吸着評価用試料を調製した。
【００８３】
【表１３】
2005281665.tif 000016
【００８４】
〔実施例２〕
ポリエーテルスルホン１ｇをＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ：1-Methyl-2-pyrrolidinone）３ｍｌに溶解し、ついで製造例１で調製された本発明のポリエーテル（１）１００ｍｇを加え混合溶解し、粘性透明液体を得た。この液体を両端に０．１ｍｍのスペーサーをはさんだガラス板を使い、厚みを均一にしたシート状に延伸し、その直後に水槽に入れることで白色のポリエーテルスルホン−ポリエーテル混合膜（ｇ）を調製した。
以下、種々の割合でポリエーテルスルホンと本発明のポリエーテルを用い、本実施例と同様の方法によりポリエーテルスルホン−ポリエーテル混合膜を調製（膜ｈ〜膜ｌ）した。その結果を表１４に示す。表１４より明らかなように、ポリエーテルスルホンと本発明のポリエーテルはＮＭＰ溶媒下ではいずれも容易に混合溶解され、溶解後は透明粘性液体として得られた。更にこの粘性液体は製膜することが可能であった。
次に比較対照として、ポリエーテルスルホン１ｇをＮＭＰ３ｍｌに溶解し調製した液体から、上記と同様の手法によりポリエーテルスルホン膜を調製した。
更に、これらの膜を精製水による４時間煮沸洗浄を３回繰り返しすることでＮＭＰを除去し被検試料を調製した。次にこれらの膜を直径約１５ｍｍの円形に打ち抜き、血漿蛋白質の吸着評価用試料を調製した。
【００８５】
【表１４】
2005281665.tif 000017
【００８６】
〔実施例３〕
ヒト細胞付着評価：細胞接着阻害効果および細胞毒性を調べるための実験
上記製造例中の共重合体（１）（２）及び（１１）を、それぞれ７０％エタノール水溶液に５、２．５、１、０．５、０．１および０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した。この溶液を細胞培養用９６穴プレートに各０．２ｍｌ／ｗｅｌｌ添加し、４℃で一晩静置した。対照ｗｅｌｌには７０％エタノール水溶液を添加した。その後、サンプル液を吸引除去し、プレートを乾燥することにより、上記共重合体を被覆したプレートを調製した。同一の共重合体を被覆したプレートを２枚調製した。この２枚のプレートについて、以下の方法にて細胞付着評価を行った。
ＨＥＬヒト肺細胞溶液（３ｘ１０５cells/ml）を上記被検サンプル液が被覆された９６穴プレートに各０．１ｍｌ／ｗｅｌｌ加え、２時間培養した。培養終了後、プレートに付着した生細胞数を、CellTiter96AQueousAssayシステム（プロメガ（株）社（Madison, WI, USA）製)により評価した。更に上記共重合体（１）（２）および（１１）の細胞毒性を評価するためにもう１枚のプレートを用いて、付着した細胞に加えて付着せず浮遊した細胞についても、すなわち各ウエルに添加した全細胞を同一条件下でCellTiter96AQueousAssayシステムにより評価した。
評価結果を図５に示す。製造例１の共重合体（１）、製造例２の共重合体（２）、および製造例５の共重合体（１１）をそれぞれ被覆した９６穴プレートには、図５に示されるように、対照被覆（ポリマー未被覆）ｗｅｌｌに対する細胞接着量を１００％としたときに、いずれの化合物においても被覆量に対応したＨＥＬヒト肺細胞の接着抑制傾向が見られた（図中：□、△、および○で表示）。
さらに製造例１の共重合体（１）、製造例２の共重合体（２）、および製造例５の共重合体（１１）をそれぞれ被覆した９６穴プレートにおいて、図５に示されるように、いずれの共重合体についても対照被覆（ポリマー未被覆）に対して生細胞数は７０％以上であり、被覆量に関わらず細胞毒性を示さなかった（図中：■、▲、および●で表示）。
【００８７】
〔実施例４〕
血漿蛋白質の吸着評価（１）
上記製造例中の共重合体（１）（２）及び（１１）を、それぞれ、７０％エタノール水溶液に１０、１、０．１、０．０１、０．００１および０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した。コーニング（株）社(Corning, NY, USA)製のCoaster ９６穴ＥＩＡプレート（商品番号３５９０）に上記試料を０．２ｍｌ／ｗｅｌｌの割合で添加し、４℃で一晩静置することにより被覆した。同様に、対照ｗｅｌｌには７０％エタノール水溶液を添加した。その後、サンプル液を吸引除去し、プレートを乾燥することにより、上記化合物を被覆したプレートを調製した。このプレートについて、以下の方法にて血漿蛋白吸着評価を行った。
カペル（株）社製、精製ヒト免疫グロブリンＧ(Purified Human IgG; ICN/Cappel, USA)の５マイクログラム／ｍｌ溶液を、上記EIAプレートに０．１ｍｌ／ｗｅｌｌの割合で添加し、ｗｅｌｌ表面を３７℃で２時間接触させた。その後、ｗｅｌｌ表面に吸着したヒト免疫グロブリンＧ量を、カペル（株）社製、西洋わさび過酸化酵素標識ヤギ抗ヒト免疫グロブリンＧ（Horseradish peroxidase (HRP)-conjugated goat IgG fraction to human IgG (wholemolecule; ICN/Cappel, USA)）を用いる酵素免疫定量法（ELISA; Enzyme-linked Immunosorbant Assay）により評価した。
評価結果を図６に示す。同一プレートに既知濃度の免疫グロブリン標準品を添加し、測定することにより、検量線を作製した。この検量線をもとにプレート上の免疫グロブリンＧ吸着量を定量した。
製造例１の共重合体（１）、製造例２の共重合体（２）、および製造例５の共重合体（１１）をそれぞれ被覆した９６穴プレートには、図６に示されるように、未被覆ｗｅｌｌに対する免疫グロブリンＧ吸着量は、ほぼ５マイクログラム／ｍｌであり、更に被検試料については被覆量に応じたヒト免疫グロブリンＧ吸着抑制傾向が見られた。
【００８８】
〔実施例５〕
血漿蛋白質の吸着評価（２）
上記実施例１中の混合膜（ａ）（ｂ）および比較対照用ポリスルフォン膜を用い、２４穴プレートにシリコンリングにより固定し、以下の方法にて血漿蛋白吸着評価を行った。
カペル社製の精製ヒトアルブミン (Purified Human Albumin; ICN/Cappel, USA)の２マイクログラム／ｍｌ溶液を、２４穴プレートに０．８ｍｌ／ｗｅｌｌの割合で添加し、well表面を37℃で２時間接触させた。その後、well表面に吸着したヒトアルブミン量をカペル社製の西洋わさび過酸化酵素標識ヤギ抗ヒトアルブミン（Horseradish peroxidase (HRP)-conjugated goat IgG fraction to human Albumin (ICN/Cappel, USA) ）を用いる酵素免疫定量法（ELISA; Enzyme-linked Immunosorbant Assay）により評価した。
評価結果を表１５に示す。比較対照用ポリスルフォン膜に既知濃度のヒトアルブミン標準品を添加し、測定することにより、検量線を作製した。この検量線をもとに混合膜（ａ）および（ｂ）上のヒトアルブミン吸着量を定量した。表１５においては、比較対照用ポリスルフォン膜に対するヒトアルブミン吸着量を１００％とした場合の混合膜（ａ）および（ｂ）上のヒトアルブミン吸着量を％で示した。
結果、表１５より実施例１の膜（ａ）および膜（ｂ）はいずれも、強いヒトアルブミン吸着抑制傾向が見られた。
【００８９】
【表１５】
2005281665.tif 000018
【００９０】
〔実施例６〕
血漿蛋白質の吸着評価（３）
上記実施例２中の混合膜（ｇ）（ｈ）および比較対照用ポリエーテルスルフォン膜を用い、２４穴プレートにシリコンリングにより固定し、実施例５と同様の方法にて血漿蛋白（ヒトアルブミン）吸着評価を行った。
評価結果を表１６に示す。比較対照用ポリエーテルスルフォン膜に既知濃度のヒトアルブミン標準品を添加し、測定することにより、検量線を作製した。この検量線をもとに混合膜（ｇ）および（ｈ）上のヒトアルブミン吸着量を定量した。表１６においては、比較対照用ポリエーテルスルフォン膜に対するヒトアルブミン吸着量を１００％とした場合の混合膜（ｇ）および（ｈ）上のヒトアルブミン吸着量を％で示した。
結果、表１６より実施例２の膜（ｇ）および膜（ｈ）はいずれも、強いヒトアルブミン吸着抑制傾向が見られた。
【００９１】
【表１６】
2005281665.tif 000019
【００９２】
〔実施例７〕
毒性評価
マウス静脈内投与による毒性を調べるための実験：
上記製造例中の共重合体（１）及び（１４）を、生理食塩水を投与溶媒として、更に生理食塩水を比較対照として、投与量５００ｍｇ／ｋｇ、および投与容量２５ｍｌ／ｋｇの条件でBALB/c雌性マウス（各群ｎ＝３、日本エスエルシー（株）から購入）の尾静脈に単回投与試験を行った。体重減少を指標として評価を実施した。実験開始日におけるマウスの体重を１００％とした場合の体重変化を評価し、１０％の体重減少が起きた場合に毒性有りと判断した。
評価結果を図７に示す。生理食塩水にて溶解した共重合体（１）及び（１４）および比較対照の生理食塩水を、静脈内単回投与した。投与後の体重減少は見られず、更に１０％以上の体重減少は見られなかった。更に同一測定日において生理食塩水投与群との有意差が見られず、いずれの投与群も毒性無しと判断された。
【００９３】
〔実施例８〕
ヒト血小板付着評価：血小板接着阻害効果を調べるための実験
上記実施例中の共重合体（１５）（１８）（２１）及び（２４）を、それぞれ７０％エタノール水溶液に１０mg/mlの濃度で溶解した。この溶液を用い、浸漬法によりポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（厚さ６０μｍ）を、上記ポリエーテル誘導体により被覆したサンプルについて、以下の方法にて血小板接着評価を行った。
クエン酸ナトリウムで抗凝固した新鮮ヒト血漿を遠心分離して（１０００ｒｐｍ、１０分）ヒト新鮮血小板血漿（Ｉ）を調製し、さらに遠心分離して（２５００ｒｐｍ、１０分）ヒト新鮮血小板血漿（ＩＩ）を調製した。
これら両血小板血漿（Ｉ）および（ＩＩ）を混合して血小板濃度３００ｘ１０5cells/mlのヒト新鮮多血小板血漿を調製し、以下の実験に供した。
ＰＥＴフィルムを２４穴細胞培養用プレートに入れ、上記ヒト新鮮多血小板血漿にサンプル表面を３７℃で１時間接触させた。その後、フィルム表面を生理食塩水で洗浄し、グルタルアルデヒドでPETフィルム上の細胞を固定した後、走査型電子顕微鏡(SEM)で直接観した。
観察された走査型電子顕微鏡を図８、図９、図１０および図１１に示す。これらの図から明らかなように、比較対照の未被覆ＰＥＴフィルム（図１２）には血小板接着が見られるが、製造例７の共重合体（１５）（図８）、製造例８の共重合体（１８）（図９）、製造例９の共重合体（２１）（図１０）、および製造例１０の共重合体（２４）（図１１）を被覆したＰＥＴフィルムには、血小板接着が見られなかった。
【００９４】
〔実施例９〕
ヒト細胞付着評価：細胞接着阻害効果および細胞毒性を調べるための実験
上記実施例中の共重合体（１５）（１８）（２１）及び（２４）を、それぞれ７０％エタノール水溶液に５、２．５、１、０．５、０．１および０mg/mlの濃度で溶解した。この溶液を細胞培養用９６穴プレートに各０．２ml/well 添加し、４℃で一晩静置した。対照wellには７０％エタノール水溶液を添加した。その後、サンプル液を吸引除去し、プレートを乾燥することにより、上記共重合体を被覆したプレートを調製した。同一の共重合体を被覆したプレートを２枚調製した。
この２枚のプレートについて、以下の方法にて細胞付着評価を行った。
HELヒト肺細胞溶液（３×１０5 cells/ml）を上記被検サンプル液が被覆された９６穴プレートに各0.1ml/well加え、２時間培養した。培養終了後、プレートに付着した生細胞数を、CellTiter96AQueousAssayシステム（プロメガ（株）社（Madison, WI, USA）製）により評価した。更に上記共重合体（１５）（１８）（２１）および（２４）の細胞毒性を評価するためにもう１枚のプレートを用いて、付着した細胞に加えて付着せず浮遊した細胞についても、すなわち、各ウエルに添加した全細胞を同一条件下でCellTiter96AQueousAssayシステムにより評価した。
評価結果を図１３に示す。製造例７の共重合体（１５）、製造例８の共重合体（１８）、製造例９の共重合体（２１）、および製造例１０の共重合体（２４）をそれぞれ被覆した９６穴プレートには、図６に示されるように、対照被覆（ポリマー未被覆）wellに対する細胞接着量を100%としたときに、いずれの共重合体においても被覆量に対応したHELヒト肺細胞の接着抑制傾向が見られた（図中：●で表示）。
さらに製造例７の共重合体（１５）、製造例８の共重合体（１８）、製造例９の共重合体（２１）、および製造例１０の共重合体（２４）をそれぞれ被覆した９６穴プレートにおいて、図１３に示されるように、いずれの化合物についても対照被覆（ポリマー未被覆）にたいして生細胞数は７０％以上であり、被覆量に関わらず細胞毒性を示さなかった（図中：□で表示）。
【００９５】
〔実施例１０〕
血漿蛋白質の吸着評価（１）
上記実施例中の共重合体（１５）（１８）（２１）及び（２４）を、それぞれ、７０％エタノール水溶液に１０、１、０．１、０．０１、０．００１および０mg/mlの濃度で溶解した。コーニング（株）社(Corning, NY, USA)製のCoaster ９６穴EIAプレート（商品番号３５９０）に上記試料を0.2ml/wellの割合で添加し、４℃で一晩静置することにより被覆した。同様に、対照wellには７０％エタノール水溶液を添加した。その後、サンプル液を吸引除去し、プレートを乾燥することにより、上記共重合体を被覆したプレートを調製した。このプレートについて、以下の方法にて血漿蛋白吸着評価を行った。
カペル（株）社製、精製ヒト免疫グロブリンG(Purified Human IgG;ICN/Cappel, USA)の５マイクログラム/ml溶液を、上記EIAプレートに0.1ml/wellの割合で添加し、well表面を３７℃で２時間接触させた。その後、well表面に吸着したヒト免疫グロブリンG量を、カペル（株）社製、西洋わさび過酸化酵素標識ヤギ抗ヒト免疫グロブリンG （Horseradish peroxidase (HRP)-conjugated goat IgG fraction to human IgG (wholemolecule; ICN/Cappel, USA)）を用いる酵素免疫定量法（ELISA; Enzyme-linked Immunosorbant Assay）により評価した。
評価結果を図１４に示す。同一プレートに既知濃度の免疫グロブリン標準品を添加し、測定することにより、検量線を作製した。この検量線をもとにプレート上の免疫グロブリンＧ吸着量を定量した。
製造例７の共重合体（１５）、製造例８の共重合体（１８）、製造例９の共重合体（２１）、および製造例１０の共重合体（２４）をそれぞれ被覆した９６穴プレートには、図１４に示されるように、未被覆wellに対する免疫グロブリンＧ吸着量は、ほぼ５マイクログラム/mlであり、更に被検試料については被覆量に応じたヒト免疫グロブリンＧ吸着抑制傾向が見られた。
【００９６】
〔実施例１１〕
血漿蛋白質の吸着評価（２）
上記実施例中の共重合体（１５）（１８）（２１）及び（２４）を用い、実施例１０に記載の方法と同一の方法で、上記化合物を被覆したプレートを調製した。このプレートについて、以下の方法にて血漿蛋白吸着評価を行った。
バイオジェネシス（株）社製のヒトフィブリノーゲン (Human fibrinogen; Biogenesis, Kingston, NH, USA)の５マイクログラム/ml溶液を上記９６穴EIAプレートに0.1ml/wellの割合で添加し、well表面を37℃で２時間接触させた。その後、well表面に吸着したヒトフィブリノーゲン量をEYラボラトリーズ（株）社製の西洋わさび過酸化酵素標識抗ヒトフィブリノーゲン（Horseradish peroxidase (HRP)-conjugated to human fibrinogen; EYlaboratories, Inc, SanMateo, CA, USA））を用いるELISAにより評価した。
評価結果を図１５に示す。同一プレートに既知濃度のヒトフィブリノーゲン標準品を添加し測定することにより、検量線を作製した。この検量線をもとにプレート上のフィブリノーゲン吸着量を定量した。
製造例７の共重合体（１５）、製造例８の共重合体（１８）、製造例９の共重合体（２１）、および製造例１０の共重合体（２４）をそれぞれ被覆した９６穴プレートには、図１５に示されるように、対照被覆（ポリマー未被覆）wellに対するフィブリノーゲン吸着量はほぼ５マイクログラム/mlであり、被検試料については被覆量に応じたヒトフィブリノーゲン吸着抑制傾向が見られた。
【００９７】
〔実施例１２〕
毒性評価
マウス静脈内投与による毒性を調べるための実験：
共重合体（１５）及び（３３）を、生理食塩水を投与溶媒として、更に生理食塩水を比較対照として、投与量１g/kg、および投与容量２５ml/kgの条件でBALB/c雌性マウス（各群ｎ＝３、日本エスエルシー（株）から購入）の尾静脈に、実験開始日から２日目、９日目、１６日目の３回にわたり、週に１回の間歇投与試験を行った。
体重減少を指標として評価を実施した。実験開始日におけるマウスの体重を100％とした場合の体重変化を評価し、１０％の体重減少が起きた場合に毒性有りと判断した。
評価結果を図１６に示す。生理食塩水にて溶解した共重合体（１５），（３３）および比較対照の生理食塩水を、週に１回、計３回に渡り静脈内間歇投与した。投与後は多少の体重減少が見られたが、１０％以上の体重減少は見られず、しかも体重は数日で回復し、更に生理食塩水投与群および正常マウスと同程度まで回復し、いずれの投与群も毒性無しと判断された。
【００９８】
〔実施例１３〕
３群の雌性ラット（Crj-CD(SD)、日本チャールズリバー（株）より購入、７週齢, 各群ｎ＝７）に対し、ペントバルビタール麻酔後、腹部正中線に沿って切開し盲腸を取りだしガーゼにより盲腸の漿膜を擦過し、およそその１／２を剥離した。漿膜を剥離した部分に製造例１３で調製された４×４ｃｍのシート状ゲル共重合体（３４）をあて、盲腸を戻して縫合を行った。また、シート状ゲルを処置せず、そのまま盲腸を戻したものを比較対照とした。
術後５日目に剖検し、癒着形成の有無を判定した。癒着形成は、繊維状のもので厚みがあり、ピンセットで引いても容易に引き剥がされない程度の強い癒着を生じた場合を癒着と判定した。その結果を表１７に示す。
表１７より、本評価において本発明の共重合体（３４）により処置することにより比較対照群に比べ癒着生成の割合が減少した。
【００９９】
【表１７】
2005281665.tif 000020
【０１００】
〔実施例１４〕
３群の雌性ラット（Crj-CD(SD)、日本チャールズリバー（株）より購入、７週齢, 各群ｎ＝５）に対し、背部の毛を剃りペントバルビタール麻酔後、背部皮膚部分を一辺２ｃｍの矩形に切開してはく離し、完全皮膚欠損創を作製した。創部分に対し、製造例１３で調製された２×２ｃｍのシート状ゲル（共重合体３４）で被覆後、医療用不織布ガーゼを適用した処置群と、医療用不織布ガーゼのみを適用した比較対照群を設定した。
処置群および比較対照群の創部分の上皮３辺を縫合して固定した。治療効果は創部面積の経時的変化を測定することで評価した。すなわち、創部面積比（％）＝｛（観察日の創面の長径×短径）／（初期創面の長径×短径）｝×１００により評価した。その結果を表１８に示す。
表１８より、本評価において本発明の共重合体（３４）により処置することにより比較対照群に比べ創傷治癒効果を増強することが分かった。
【０１０１】
【表１８】
2005281665.tif 000021
【０１０２】
〔実施例１５〕
雌性ラット（Ｃｒｊ−ＣＤ（ＳＤ）ＩＧＳを日本チャールズリバー（株）より購入、７週齢, ３匹）に対し、ペントバルビタール麻酔後、腹部正中線に沿って切開し製造例１９で調製された４×４ｃｍのゲルシート（４６）を各ラットに１枚づつ埋植し、縫合を行った。
術後５日目に剖検し、ゲルシートによる癒着形成の有無、ゲルシートへの蛋白吸着を判定した。癒着形成は、繊維状のもので厚みがあり、ピンセットで引いても容易に引き剥がされない程度の強い癒着を生じた場合を癒着と判定した。術後５日目において３匹ともゲルシートに対する癒着形成は見られず、ゲルシートはいずれも透明のまま維持されていた。
【０１０３】
〔実施例１６〕
毒性評価
製造例１４の共重合体（３７）に関し、生理食塩水を投与溶媒として、更に生理食塩水を比較対照として、共重合体（３７）投与量１０００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇについて、投与液量２５ml/kgの条件で６週齢BALB/c雌性マウス（各群ｎ＝５、日本エスエルシー（株）から購入）の尾静脈より実験開始日から０日目、３日目、６日目の３回にわたり間歇投与を行った。
体重減少を指標として評価を実施した。実験開始日におけるマウスの体重を100％とした場合の体重変化を評価し、10％の体重減少が起きた場合に毒性有りと判断した。
評価結果を図１７に示す。生理食塩水にて溶解した共重合体（３７）の各濃度投与群および比較対照の生理食塩水を２５ml/kgの投与液量で、３日に１回、計３回に渡り静脈内間歇投与した。投与後の１０％以上の体重減少は見られず、体重に関し、いずれの投与群においても同一日測定日における優位差は見られず、毒性無し、と判断された。図中の各ポイントは平均体重±標準偏差（ＳＤ）を示す。図中の上向き矢印は投与日であることを示す。
【０１０４】
〔実施例１７〕
サンプルとして製造例１で得られた本発明の共重合体（１）を精製水に溶かし、１重量％水溶液を得た。得られた水溶液を試験液として皮膚の実用テストを実施した。日頃静電気による不快を感じる邦人女性２０人（年齢２２〜４０歳）を無作為に各１０人に分け、Ａ群には製造例１の溶液を、またＢ群には比較例の溶液をそれぞれ１ヶ月使用してもらい、１ヶ月後の皮膚による帯電防止効果と使用中の感触について群間比較を行った。その結果を表１９に示す。
［比較例］試験液として市販のモノアルキル４級アンモニウム塩１０ｇを精製水に溶解して１重量％水溶液を得た。
表１９の結果より、製造例１で得られた本発明の化合物（１）は、比較例に比べて感触的に優れ、かつ帯電防止に基づく美肌効果に優れることがわかる。
【０１０５】
【表１９】
2005281665.tif 000022
【０１０６】
〔実施例１８〕
サンプルとして製造例２で得られた本発明の共重合体（２）および（４）を精製水に溶かし、各共重合体濃度の水溶液を得た。これに綿１００％からなる布を浸漬し軽く絞った後、風乾し、試験布を作成した。試験布は直径６ｍｍの円形に打ち抜き試験に供した。
アレルゲン物質として診断用アレルゲンスクラッチエキス「スギ花粉」の原液を精製水−グリセリン混合液（１／１）で１０倍希釈し、試験布（直径６ｍｍ）に１０μｌずつ滴下しアレルゲン物質付着試験布を作成した。
スギ花粉に対しアレルギーのある被験者５名の前腕部皮膚面に対し、上記試験布を軽く押し付け貼布した。貼布２０分後に試験布を取り除き、その２０分後に皮膚反応を目視により観察した。皮膚反応は下記の表２０のアレルギー判定基準に従い判定した。アレルゲン物質付着試験布のアレルギー反応性はアレルギー反応指数（各試験の点数総和の平均値に１００を掛けた数値）で評価した。その結果を表２１に示す。
以上の結果から、本発明の繊維用刺激抑制剤は、その組成物が実験的アレルゲン刺激を低減することから繊維用刺激抑制組成物であることが分かった。また被覆による効果が見られることから繊維に限らず被覆器材に対しての刺激抑制効果が期待された。
【０１０７】
【表２０】
2005281665.tif 000023
【０１０８】
【表２１】
2005281665.tif 000024
【０１０９】
〔実施例１９〕
サンプルとして製造例７で得られた本発明の共重合体（１７）および製造例８で得られた本発明の共重合体（２０）を用いた。コントロールとしてプルロニック界面活性剤を用いた。試験用コンタクトレンズは市販のハードコンタクトレンズ表面を洗浄することで輸送用の保存洗浄液を除去しその後使用した。
【０１１０】
［タンパク質洗浄力試験］
アルブミン、γ−グロブリン、リゾチームによりＦＤＡ人工涙液処方に基づきタンパク質汚れ液を調製した。タンパク質汚れ液５ｍＬ中にコンタクトレンズを７０℃下、３時間浸漬することによりタンパク質付着コンタクトレンズを作製した。このレンズを各コンタクトレンズ用溶液５ｍＬ中に室温下、４時間浸漬した。その後、生理食塩水５００ｍＬ中でコンタクトレンズを３回リンスし、１％ＳＤＳ−炭酸ナトリウム水溶液中にレンズを浸漬し、３７℃終夜で涙液タンパク質を抽出した。
抽出液のタンパク質濃度をＭｉｃｒｏ  ＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ製）を用いて測定することによりレンズに付着したタンパク質量を求めた。得られた結果より、各試験液のタンパク質に対する洗浄率（％）を次式により評価した。
タンパク質汚れに対する洗浄率（％）＝｛１−（試験液浸漬前タンパク質量−試験液浸漬後タンパク質量）／試験液浸漬前タンパク質量｝×１００
表２２に示す各成分を各配合割合にて精製水に溶解し、コンタクトレンズ用溶液を調製した。得られたコンタクトレンズ用溶液を用いてコンタクトレンズに付着したタンパク質汚れに対する洗浄力試験を前記試験法にて行った。その結果を表２２に併せて示す。
以上の結果から、共重合体（１７）および（２０）は対照に比べ、レンズに付着したタンパク質に対する洗浄力が高いことが分かる。
【０１１１】
【表２２】
2005281665.tif 000025
【産業上の利用可能性】
【０１１２】
本発明は、生体組織や細胞の接着抑制効果、血小板の粘着・活性化の抑制およ  び補体系の活性化抑制の各効果を有し、かつ、安全性の高い医療および医薬用途を目的とした生体適合性を有する共重合体を提供することを課題とする。本発明の材料は医療用材料の分野で好適に利用できる。本発明は、ポリペプチドおよび蛋白の分離、精製、濃縮、濾過、脱塩に際し、ポリペプチドおよび蛋白の回収率向上および耐久性を奏し、しかも低毒性であることを特徴とする、ポリペプチドおよび蛋白と接触させて用いる共重合体の提供を可能にする。
【図面の簡単な説明】
【０１１３】
【図１】製造例１４の共重合体（３６）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図２】製造例１４の共重合体（３７）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図３】製造例１５の共重合体（３８）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図４】製造例１５の共重合体（３９）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図５】実施例３のＨＥＬヒト細胞接着評価のグラフ。
【図６】実施例４のヒト免疫グロブリン吸着評価のグラフ。
【図７】実施例７の本発明の共重合体（１）および（１４）における毒性評価のグラフ。
【図８】実施例８の共重合体（１５）を被覆したＰＥＴフィルムのＳＥＭ写真。
【図９】実施例８の共重合体（１８）を被覆したＰＥＴフィルムのＳＥＭ写真。
【図１０】実施例８の共重合体（２１）を被覆したＰＥＴフィルムのＳＥＭ写真。
【図１１】実施例８の共重合体（２４）を被覆したＰＥＴフィルムのＳＥＭ写真。
【図１２】実施例８の未被覆ＰＥＴフィルムのＳＥＭ写真。
【図１３】実施例９のＨＥＬヒト細胞接着評価のグラフ。
【図１４】実施例１０のヒト免疫グロブリン吸着評価のグラフ。
【図１５】実施例１１のヒトフィブリノーゲン吸着評価のグラフ。
【図１６】実施例１２における毒性評価のグラフ。
【図１７】実施例１６における毒性評価のグラフ。
【図１】
2005281665.tif 000028
【図２】
2005281665.tif 000029
【図３】
2005281665.tif 000030
【図４】
2005281665.tif 000031
【図５】
2005281665.tif 000032
【図６】
2005281665.tif 000033
【図７】
2005281665.tif 000034
【図８】
2005281665.tif 000035
【図９】
2005281665.tif 000036
【図１０】
2005281665.tif 000037
【図１１】
2005281665.tif 000038
【図１２】
2005281665.tif 000039
【図１３】
2005281665.tif 000040
【図１４】
2005281665.tif 000041
【図１５】
2005281665.tif 000042
【図１６】
2005281665.tif 000043
【図１７】
2005281665.tif 000044