(57)【要約】【解決手段】▲１▼Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上であることを確認する工程及び▲２▼試験物質が、活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する工程、を含むことを特徴とする、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質のスクリーニング方法，及び該方法によって特定される物質を含有する心房細動抑制剤並びにＮａチャネル阻害剤。【効果】 心房細動抑制剤等に使用できる物質を容易に判別できる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程、
（１）Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上であることを確認する工程、及び
（２）試験物質が、活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する工程、
を含むことを特徴とする、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質のスクリーニング方法。
【請求項２】
活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有する心房細動抑制剤であって、
該物質が、
（１）心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上であり、及び
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とする、心房細動抑制剤。
【請求項３】
活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有するＮａチャネル阻害剤であって、
該物質が、
（１）心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上であり、及び
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とする、Ｎａチャネル阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、心筋のナトリウムチャネル（以下、Ｎａチャネルと略記する）に結合し、高頻度の拍動だけに阻害作用を有する物質、より詳細には、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質をスクリーニングする方法に関する。
また、該スクリーニング方法によって得られた物質を含有することを特徴とする心房細動抑制剤、またはＮａチャネル阻害剤に関する。
また、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質に関する。
【０００２】
【従来の技術】
心房細動は心房が４４０〜６５０／分の頻度で無秩序に興奮し、この無秩序な心房興奮の一部が房室結節を経由して心室に不規則に伝わるため、心室の興奮も不規則となる。心房細動は期外収縮を除けば最も遭遇することが多く、加齢とともに増加する不整脈である。健常人の０．２〜３．０％にみられ（Kannel WB; N Engl J Med, 306, 1018-1022；Laupacis A ; Antithrombic therapy inａtrial fibrillation, 102, 426-432, 1992）、６５歳以上では５．９％と報告されている（Feinberg WM; Analysis and implications. Arch Inter Med, 155, 469-474, 1995／福井ら；臨床検査、vol．４３、no.１２、１５２１−２４、１９９９年）。心房細動は、致死性不整脈ではないものの、動悸や息切れ、胸苦などの自覚症状が強くＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ）の低下が問題となり、放置すれば生命に危険性のある心室性不整脈への移行も有り得る。また、この不整脈は心房内鬱血により血液凝集塊が生成しやすく、脳梗塞の危険率を上昇させることが知られている。さらに、心房細動は、致死性不整脈ではないが、たとえ基礎心疾患に伴わない場合にも単独に予後に影響を与えることが、１９９８年のＦｒａｍｉｎｇｈａｍ研究（Benjamin E el.Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ, 98, 946-52, 1998）により、明らかな治療の重要性が再認識されてきている。従って、高齢人口の増加ともあいまって、その意義が改めて重要視されるようになってきている。
【０００３】
心房細動に対する薬物療法としては、通常、Ｖａｕｇａｈａｎ Ｗｉｌｌｉａｍｓの分類のＩａ、Iｃ群薬が主に使用され、肥大型心筋症に伴う心房細動には III群薬が使用されるている。しかしながら、これらの薬物には副作用があり、その使用には十分注意が必要である。例えば、Ｉａ群薬であるジソピラミドには、陰性変力作用があり、心不全や重症左室機能障害の患者への使用は慎重を要し、また、明らかなＱＲＳ及びＱＴの延長、催不整脈作用の出現などに対して注意深い観察が必要である。Ｉｃ群薬であるフレニカイニドやピルジカイニドなどは、循環系への副作用が多く、Ｐ−Ｑ間隔、ＱＲＳ間隔、ＱＴ間隔など正常な心電図への影響があり、十分な監視下で使用せざるを得ない。III群薬であるアミオダロンは肺、甲状腺、眼などの心臓外の副作用があり、十分な注意が必要である。従って、副作用の少ない、正常心電図に影響を与えず、心機能抑制作用や催不整脈作用のない優れた心房細動抑制薬が望まれている。
【０００４】
一方、Ｖａｕｇｈａｎ Ｗｉｌｌｉａｍｓによる薬物の作用としての「イオンチャネル」を抑制することが不整脈抑制に結びつくと考えた分類は、薬物の分類には使えても臨床有効性の機序の説明としては使えるとは言えなかった。しかし、その後の電位固定法などの進歩でナトリウムやカルシウムチャネルの電気生理学的な性質が直接的研究ができるようになり、チャネル抑制薬がチャネルと結合して通り道を塞ぎ（抑制）、離れることによりイオンを通すようになることを繰り返すという「ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ仮説」（ヒル（Ｈｉｌｌ．  Ｂ）ジャーナル・オブ・ジェネラル・フィジオロジー（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．），６９巻、４９７−５１５頁、１９７７年；ホンデンヘムら（Ｈｏｎｄｅｇｈｅｍ，Ｌ．Ｍ．）、バイオチミカ・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．），４７２巻、３７３−３９８頁、１９７７年）が発表され、Ｓｉｃｉｌｉａｎ  Ｇａｍｂｉｔの分類としてナトリウムチャネル抑制薬も再分類された。この分類では、ナトリウムチャネルへの結合の仕方とチャネルからの解離、すなわち、活性化または不活性化状態に結合するのか、及び結合・解離が速いか遅いかで分類している。
【０００５】
ナトリウムチャネルの活動状態は活動電位の各相に応じて、０相では活性化状態（開口状態）、１、２、３相では不活性化状態、４相では静止状態として存在するが、薬剤がどの状態のナトリウムチャネルへ親和性を有するかはその種類によって異なる。心房筋ではナトリウムチャネルが不活性化状態となる活動電位のプラトー相が短いため、心房不整脈に対する不活性化状態に結合する薬物の効果は一般に弱く、活性化状態に結合する薬物は、心房性、心室性いずれの不整脈にも効果を発揮することが知られている（三田村秀雄、メビオ、１７巻、１号、５２〜５８頁、２０００年）。活性化状態に結合する薬物として、プロカインアミド、キニジン、プロパフェノン、ジソピラミド、ピルメノール、シベンゾリン、フレカイニド、ピルジカイニド；不活性化状態に結合する薬物として、リドカイン、メキシレチン、アプリジン、ベプリジル、アミオダロン等が知られている。また、薬物がナトリウムチャネルに結合した後、解離する速度はさまざまであり、解離速度が速いと次の興奮への影響は少ないが、解離速度が遅いと次の興奮にも影響を残し、ナトリウムチャネルの遮断効果を増強する結果となる。
【０００６】
ナトリウムチャネルへの結合のチャンスは頻脈時に増えるが、それとともに薬物のナトリウムチャネルからの解離速度が遅いものほどチャネル遮断効果が強まり、伝導抑制作用もより顕著になる。この現象を頻度依存性ブロック（ｒａｔｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｌｏｃｋまたはｆｒｅｑｕｅｎｃｙ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｂｌｏｃｋ）とよび、興奮が繰り返されたときに、蓄積効果によりこの頻度依存性ブロックが徐々に増強する現象を使用依存性ブロック（ｕｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｂｌｏｃｋ）と呼ぶ。解離速度が遅い（例えば、発現速度＜０．１ＡＰ-1あるいは回復時定数＞２０ｓｅｃ）薬物は、正常洞調律時でも伝導抑制効果を示し、しばしＱＲＳ幅を増大させる。このような薬剤は運動時などの心拍数の増加したときに著明な伝導抑制をきたし、リエントリを助長し、催不整脈作用を呈することもある。また、解離速度が遅い薬剤は心収縮力を低下させるため（陰性変力作用）、心不全を悪化させることもある。反対に解離速度の速い（例えば、発現速度＞０．３ＡＰ-1あるいは回復時定数＜１ｓｅｃ）薬剤としては、リドカイン、メキシレチン、アミオダロン、ベプリジンなどがあり、その中間に位置する薬剤としてキニジン、プロカインアミド、プロパフェノン、アプリジンなどがある。
しかしながら、現在までに副作用がなく、心機能の異常がない人への長期投与、虚血例や心機能に異常がある人への投与において、使用可能で使いやすい心房細動治療薬は見出されていない。
【０００７】
国際公開ＷＯ００／６１５５７号公報には、抗不整脈作用を有する４−ヒドロキシピペリジン誘導体が記載されている。この化合物は、ベラトリンの単離心筋の拘縮抑制作用を有し、虚血−再灌流不整脈モデルにおいて経口で心室細動に有効であること、正常な心筋活動に影響を与えないことが開示されている。また、この作用は持続性ナトリウム電流阻害作用に基づくことが記載されている。しかしながら、これら化合物が結合する際のＮａチャネルの状態（活性化／不活性化）、結合・解離の速度などについては、まったく開示が無い。また、心房細動に対する抑制作用については、一切開示が無い。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、心筋のナトリウムチャネルに結合し、高頻度の拍動時だけ阻害作用を有する物質、とりわけ、正常な心筋活動に影響が無く催不整脈作用のない安全性に優れた心房細動治療に有用な物質を提供することである。
また、本発明の目的は、心筋のＮａチャネルに結合し、高頻度の拍動時だけに阻害作用を有する物質、より詳細には、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質をスクリーニングする方法を提供することである。また、該スクリーニング方法によって得られた物質を含有することを特徴とする心房細動抑制剤、またはＮａチャネル阻害剤を提供することである。
このような薬剤が提供できれば、副作用がなく、使いやすい画期的な心房細動治療薬となりうる。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を達成すべく、鋭意研究を行った結果、１）心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３以上ＡＰ-1である化合物中に、２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有する化合物があること、この特徴を有する化合物がイヌ迷走神経刺激心房細動モデルにおいて心房細動を抑制し、正常心電図に影響を与えない特徴を有することを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の第１の態様は、次の工程、
（１）Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上であることを確認する工程、及び
（２）試験物質が、活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する工程、
を含むことを特徴とする、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質のスクリーニング方法である。
本発明の第２の態様は、次の工程、
（１）心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上である物質を選択する工程、及び
（２）試験物質が、活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する工程、
を含むことを特徴とする、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質のスクリーニング方法である。
【００１１】
本発明の第１及び第２の態様において工程（１）の具体的な態様として、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験には以下のような方法がある。適当な標本を用い、標本ごとの刺激強度で、一定の刺激頻度、一定の刺激休止期の後、再度刺激して活動電位の測定を行い、活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax）から発現速度を求める方法。より詳細には、例えば、モルモットの心臓を摘出し、その心臓から右心室乳頭筋を標本として、標本ごとに設定する刺激強度（活動電位を誘導させる閾値電圧(徐々に刺激電圧を上げていき、初めて活動電位が誘導される電圧）の約１．２倍）のもと、試験物質の存在下、例えば、各刺激頻度（例：０．５、１、２、３．３Ｈｚ／刺激間隔で２０００、１０００、５００、３００ｍｓ）で刺激を行い、安定後１２０秒間の刺激休止期をはさみ、再度６０回刺激し活動電位の測定を行うプロトコールで、それぞれの活動電位を記録し、ｎ回目の刺激に対する活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax）をdV/dtmax（n）とし、計算式  dV/dtmax（n）/ dV/dtmax（1）で標準化し、物質によるdV/dtmax抑制の発現を指数関数にフィッティングし、発現速度（onset rate、 単位はAP-1）を求める方法（例えば、後述の実験例１に記載の方法）。その方法を用いて、試験物質の発現速度が０．３ＡＰ-1 以上であるか、未満であるかを判断できる。
ここで、使用依存性抑制における「発現速度」とは、電気刺激により発生する活動電位の最大立ち上がり速度（ｄＶ／ｄｔmax）やＮａ電流に対する化合物の抑制の発現を指数関数にフィッティングして求められ，単位はＡＰ-1である。この発現速度は、ＫｏｊｉｍａらやＴｏｙａｍａらの方法に準じて（Kojima M et al.: Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. 1989;339:441-447. Toyama J et al.: J. Cardiovasc. Pharmacol. 1987;9:165-172）、求めることができ、確認される。この「発現速度」は、０．３ＡＰ-1であることが好ましく、０．５ＡＰ-1であることがより好ましく、０．６ＡＰ-1以上であることが特に好ましい。発現速度は、「回復時定数」で置き換えることも可能である。文献（Kodama I et  al. Cardiovascular Drug Reviews 14, 135-147, 1996 ）では、発現速度０．３ＡＰ-1以下の物質はすべて、回復時定数が１０００ｍｓｅｃ以上であり，すなわち発現速度が０．３ＡＰ-1以上は、回復時定数が１０００ｍｓｅｃ以下に相当する。
また、使用依存性抑制における「回復時定数」とは、電気刺激後に種々の間隔の休止期をおいて刺激により活動電位またはＮａ電流を発生させると、休止期の延長とともに活動電位最大立ち上がり速度またはＮａ電流が回復する。この回復過程を指数関数で近似することで回復時定数は求めることができ、単位はｍｓｅｃ（またはｓｅｃ／秒押）である。
この工程（１）により、不活性化状態または静止状態Ｎａチャネルから速やかに解離する性質が示される。また，前記活動電位の記録において、２回目の刺激に対する活動電位立ち上がり速度が抑制を示すことによっても速やかな解離する性質が示される。
【００１２】
工程（２）の具体的な態様として、試験物質が活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認するには以下のような方法がある。例えば、ラットの心臓を摘出し、その心臓から心室筋細胞を単離し、全細胞膜電位固定法を用い、試験物質存在下、ベラトリジンで誘発されるＮａ電流に対する抑制効果を測定する方法（例えば、後述する実験例２に記載の方法）。その方法を用いて、各試験物質の濃度に対するＮａ電流の抑制率（％）、例えば、５０％抑制濃度（ＩＣ50値）を求めることで、活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性があると判断できる。例えば、後述実験例２の被験化合物のＮａ電流の抑制率（％）が、３０μｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０μｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましく、５μｍｏｌ／Ｌ以下であることが特に好ましい。
この工程（２）により、活性化状態のＮａチャネルに結合する性質が示される。
【００１３】
本発明の第３の態様は、第１または第２の態様に記載のスクリーニング方法によって得られた物質を含有することを特徴とする、心房細動抑制剤である。
本発明の第４の態様は、第１または第２の態様に記載のスクリーニング方法によって得られた物質を含有することを特徴とする、心房細動の予防及び／または治療剤である。
本発明の第５の態様は、第１または第２の態様に記載のスクリーニング方法によって得られた物質を含有することを特徴とする、Ｎａチャネル阻害剤である。
【００１４】
本発明の第６の態様は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有する心房細動抑制剤であって、該物質が、
（１）Ｎａチャネルに対する使用依存性抑制において、発現速度が０．３以上（ＡＰ-1）であり、且つ
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とする、心房細動抑制剤である。
本発明の第７の態様は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有する心房細動抑制剤であって、該物質が、
（１）心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３以上ＡＰ-1であり、且つ
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とする、心房細動抑制剤である。
【００１５】
本発明の第８の態様は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有する心房細動の予防及び／または治療剤であって、該物質が、
（１）Ｎａチャネルに対する使用依存性抑制において、発現速度が０．３以上（ＡＰ-1）であり、且つ
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とする心房細動の予防及び／または治療剤である。
本発明の第９の態様は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有する心房細動の予防及び／または治療剤であって、該物質が、
（１）心臓由来の標本を用いた、活動電位立ち上がり速度に対し試験化合物の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３以上（ＡＰ-1）であり、且つ
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とする、心房細動の予防及び／または治療剤である。
本発明の第１０の態様は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有するＮａチャネル阻害剤であって、該物質が、
（１）Ｎａチャネルに対する使用依存性抑制において、発現速度が０．３以上（ＡＰ-1）であり、且つ
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とするＮａチャネル阻害剤である。
本発明の第１１の態様は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有するＮａチャネル阻害剤であって、該物質が、
（１）心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３以上ＡＰ-1であり、
（２）活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有すること、
を特徴とする、Ｎａチャネル阻害剤である。
本発明の第１２の態様は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質である。
本発明の第１３の態様は，第１２の態様に記載の物質を含有することを特徴とする，心房細動抑制剤である。
本発明の第１４の態様は，第１２の態様に記載の物質を含有することを特徴とする，心房細動の予防及び／または治療剤である。
本発明の第１５の態様は，第１２の態様に記載の物質を含有することを特徴とする，Ｎａチャネル阻害剤である。
【００１６】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、「心臓由来の標本」とは、心室筋、心房筋、プルキンエ繊維、あるいは心臓から調整された細胞、Ｎａチャネル遺伝子を導入した細胞、Ｎａチャネル遺伝子を導入したアフリカツメガエルの卵母細胞などが挙げられる。また、これらの組織、細胞、Ｎａチャネル遺伝子の由来は、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、サル、フェレット、ヒトなど特に制限はない。
【００１７】
本発明において、「Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験」とは、当業者であれば種々の試験方法を行うことができるが、例えば、後述する実験例１に示すように、モルモットの乳頭筋を用いて活動電位最大立ち上がり速度を測定する試験が可能である。また、イヌのプルキンエ繊維を用いて活動電位最大立ち上がり速度を測定する試験、単離心筋を用いてＮａ電流を測定する試験、Ｎａチャネル遺伝子を導入した哺乳類由来の細胞（例えばＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＷ1102細胞など）を用いてＮａ電流を測定する試験、Ｎａチャネル遺伝子を導入したアフリカツメガエルの卵母細胞を用いてＮａ電流を測定する試験なども挙げられる。試験薬物の影響を確認することができる。
【００１８】
本発明において、使用依存性抑制における「発現速度」とは、電気刺激により発生する活動電位の最大立ち上がり速度（ｄＶ／ｄｔmax）やＮａ電流に対する化合物の抑制の発現を指数関数にカーブフィッティングして求められ，単位はＡＰ-1である。この発現速度は、ＫｏｊｉｍａらやＴｏｙａｍａらの方法に準じて（Kojima M et al.: Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol 1989;339:441-447. Toyama J et al.: J Cardiovasc Pharmacol 1987;9:165-172）、求めることができる。
【００１９】
本発明の使用依存性抑制おける「発現速度」は、０．３ＡＰ-1であることが好ましく、０．５ＡＰ-1であることがより好ましく、０．６ＡＰ-1以上であることが特に好ましい。この発現速度は、回復時定数に置き換えることも可能である。文献（Kodama I et  al. Cardiovascular Drug Reviews 14, 135-147, 1996 ）では、発現速度０．３ＡＰ-1以下の物質はすべて、回復時定数が１０００ｍｓｅｃ以上であり，すなわち発現速度が０．３ＡＰ-1以上は、回復時定数が１０００ｍｓｅｃ以下に相当する。
ここで、使用依存性抑制おける「回復時定数」とは、電気刺激後に種々の間隔の休止期をおいて刺激に活動電位またはＮａ電流を発生させると、休止期の延長とともに活動電位最大立ち上がり速度またはＮａ電流が回復する。この回復過程を指数関数でカーブフィッティングすることで回復時定数は求めることができ、単位はｍｓｅｃ（またはｓｅｃ／秒）である。
これら発現速度や回復時定数により、不活性化状態または静止状態Ｎａチャネルから速やかに解離する性質が示される。通常、Ｎａチャネルにおける使用依存性抑制の検討実験から求められる発現速度や回復時定数は、物質のＮａチャネルからの結合・解離の速さを示す指標となる。
【００２０】
本発明において、「活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する」には、例えば、▲１▼後述の実験例２に記載の方法で、ラットの単離心筋を用いた、全細胞膜電位固定法（パッチクランプ法）（ベーカーとボストック（Ｂａｋｅｒ  ａｎｄ  Ｂｏｓｔｏｃｋ）、ジャーナル・オブ・ニューロフィジオロジー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．）７７巻、１５０３頁、１９９７年、セガール（Ｓｅｇａｌ）とダグラス（Ｄｏｕｇｌａｓ）、ジャーナル・オブ・ニューロフィジオロジー（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．）７７巻、３０２１頁、１９９７年、タベルナ（Ｔａｖｅｒｎａ）ら、ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・エクスペリメンタル・セラピューティクス（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．）、２８８巻、９６０頁、１９９９年或いはヴェルドンク（Ｖｅｒｄｏｎｃｋ）ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．）、２０３巻、３７１頁、１９９１年）によるベラトリジン誘発ナトリウム電流に及ぼす影響を検討することで確認することができる。例えば、この検討における被験物質の抑制作用を確認すればよい。この抑制作用は、例えば、ＩＣ50値であらわすことができ、３０μｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０μｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましく、５μｍｏｌ／Ｌ以下であることが特に好ましい。
【００２１】
また、「活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する」には、▲２▼ベラトリジンによる単離心筋の拘縮抑制作用（ＩＣ50）を確認する方法、▲３▼不活性化が起こらないように遺伝子改変を行ったＮａチャネルにおける抑制作用を確認する方法（例えば、 Pugsley MK and Goldin AL, British Journal of Pharmacology, 127, 9-18, 1999）、▲４▼プロテアーゼ処理したＮａチャネルの抑制作用を確認する方法（例えば，Bezanilla F and Armstrong CM, Journal of General Physiology, 70, 549-566, 1977）の方法等が挙げられる。これらの方法は、単独で行っても適宜複数組み合わせて行ってもよい。上記▲２▼の工程である場合には、この抑制作用は、例えば、ＩＣ50値であらわすことができ、３０μｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０μｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましい。
このことにより、活性化状態のＮａチャネルに結合する性質が示される。通常のＮａチャネルは、脱分極により活性化された後、急速に不活性化され、観察されるＮａ電流は一過性である。ベラトリジンはＮａチャネルの不活性化を抑制するため、Ｎａチャネルは活性化状態にとどまり、持続的な電流が観察される。従って、ベラトリジンにより誘発される電流に対する抑制は、活性化状態のＮａチャネルに対する親和性を測るひとつの指標である。なお、▲１▼および▲２▼の工程で、Ｎａ電流を惹起したり、拘縮を誘発する毒素としては，ベラトリンやベラトリジン以外に、バトラコトキシンやアコニチンなども使用することが可能である。
【００２２】
本発明において、「心房細動抑制」なる語は、心房細動の停止、再発防止を含んでおり、例えば、発作性心房細動における発現（発作）頻度の減少、発現持続時間の短縮、細動の消失等の細動の抑止、または持続性心房細動における細動の停止または発現抑制（二度と起こらないようにする）等を包含する。「心房細動抑制剤」とは、当該抑制作用により心房細動の治療及び／または予防に用いられる薬剤（医薬組成物）または当該抑止作用を示す試薬等を意味する。
本発明において、「Ｎａチャネル阻害剤」とは、Ｎａチャネルを阻害する作用を有する物質を含有することを特徴とする薬剤（医薬組成物）、または試薬を意味する。本発明においては、Ｎａチャネル阻害剤の有効成分は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質であることが好ましい。
【００２３】
本発明によれば、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を効率的に見出すことができるが、以下にその一例を挙げる。
（１）心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上である物質を選択する工程は、
▲１▼モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（ｄＶ／ｄｔmax）に及ぼす試験物質の影響を、刺激回数、刺激頻度との関係で解析し、発現速度を求める（例えば、後述する実験例１）。
▲２▼その他、イヌのプルキンエ繊維を用いて活動電位最大立ち上がり速度を測定する試験、単離心筋を用いてＮａ電流を測定する試験、Ｎａチャネル遺伝子を導入した哺乳類由来の細胞（例えばＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＷ1102細胞など）を用いてＮａ電流を測定する試験、Ｎａチャネル遺伝子を導入したアフリカツメガエルの卵母細胞を用いてＮａ電流を測定する試験において、活動電位最大立ち上がり速度（ｄＶ／ｄｔmax）またはＮａ電流に及ぼす試験物質の影響を，刺激回数、刺激頻度との関係で解析し，発現速度を求める。
本発明の使用依存性抑制における「発現速度」は、０．３ＡＰ-1であることが好ましく、０．５ＡＰ-1であることがより好ましく、０．６ＡＰ-1以上であることが特に好ましい。この発現速度は、回復時定数に置き換えることも可能であり、例えば、０．３ＡＰ-1以上は、回復時定数の１０００ｍｓｅｃ以下に相当する。
【００２４】
（２）次に、例えば、（１）で選択される物質について、活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する。例えば、以下のような工程がある。
▲１▼ラットの単離心筋を用いた、全細胞膜電位固定法（パッチクランプ法）によるベラトリジン誘発ナトリウム電流に及ぼす影響を確認する工程（後述する実験例２）
▲２▼ベラトリンによる単離心筋の拘縮抑制作用（ＩＣ50）を確認する工程
▲３▼不活性化が起こらないように遺伝子改変を行ったＮａチャネルにおける抑制作用を確認する工程
▲４▼プロテアーゼ処理したＮａチャネルの抑制作用を確認する工程
【００２５】
例えば、（２）−▲１▼の工程では、被験物質の抑制作用を確認すればよい。この抑制作用は、例えば、ＩＣ50値であらわすことができ、３０μｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０μｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましく、５μｍｏｌ／Ｌ以下であることが特に好ましい。
また、（２）−▲２▼の工程である場合には、この抑制作用は、例えば、ＩＣ50値であらわすことができ、３０μｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０μｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましい。
【００２６】
本発明に用いられる、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質をスクリーニングするには、上記の（１）と（２）を適宜組み合わせて行うことができる。また、（２）の後に（１）を行っても良い。例えば、以下の例を参照して行われることが好ましい。
工程１：モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（ｄＶ／ｄｔmax）に及ぼす試験物質の影響を、刺激回数、刺激頻度との関係で解析し、発現速度を求める工程（例えば、後述する実験例１）。
工程２：ラットの単離心筋を用いた、全細胞膜電位固定法（パッチクランプ法）によるベラトリジン誘発ナトリウム電流に及ぼす影響を確認する工程（例えば、後述する実験例２）。
工程３：ベラトリンによる単離心筋の拘縮抑制作用（ＩＣ50）を確認する工程（例えば、ＷＯ００／６１５５７号公報に記載の実験例１の方法）。
工程１の後、工程２もしくは工程３を行う。または、工程２もしくは工程３の後、工程１を行っても良い。
【００２７】
これら工程のパラメーターを判断基準として物質を選定することにより、望ましいプロファイルを有する物質をスクリーニングできることは当業者に容易に理解される。本事例に準じて、上記スクリーニング方法については、適宜他のｉｎｖｉｔｒｏやｉｎ  ｖｉｖｏにおける評価系を、置換、付加することも当業者に理解される範囲である。例えば、上記（１）−▲１▼の発現速度の測定は、モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（ｄＶ／ｄｔmax）に及ぼす試験物質の影響を、刺激回数、刺激頻度との関係で解析して発現速度を求める方法だけでなく、当業に理解できる範囲で置換可能である。
【００２８】
以下に、本発明のスクリーニング方法で得られる「活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質」について説明する。
活性化状態のＮａチャネルとの結合は、前記した「活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性を有することを確認する」ことで確かめられる。▲１▼例えば、後述の実験例２に記載の方法で、ラットの単離心筋を用いた、全細胞膜電位固定法（パッチクランプ法）によるベラトリジン誘発ナトリウム電流に及ぼす影響を検討することで確認する方法では、被験物質の抑制作用は、ＩＣ50値が３０μｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０μｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましく、５μｍｏｌ／Ｌ以下であることが特に好ましい。また、▲２▼ベラトリンによる単離心筋の拘縮抑制作用（ＩＣ50）を確認する方法では、被験物質の抑制作用は、ＩＣ50値が３０μｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、１０μｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましい。
【００２９】
また、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離することは、前記した「Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験」で確かめられる。その試験で求められる「発現速度」は、０．３ＡＰ-1であることが好ましく、０．５ＡＰ-1であることがより好ましく、０．６ＡＰ-1以上であることが特に好ましい。この発現速度は、回復時定数に置き換えることも可能であり、例えば、０．３ＡＰ-1以上は、回復時定数の１０００ｍｓｅｃ以下に相当する。
【００３０】
活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質は、例えば、上記ＩＣ50値及び発現頻度もしくは回復時定数を有するものであれば、特に制限はなく、例えば、蛋白質であっても有機化合物であってもよい。有機化合物であれば、低分子化合物であることが好ましく、より好ましくは、分子量１０００以下である。
【００３１】
有機化合物の場合、単環式芳香環、縮合多環式炭化水素、単環式芳香族複素環もしくは縮合芳香族複素環等、またはそれらを置換基として有する化合物が挙げられる。単環式芳香環には、例えば、ベンゼン環などが挙げられる。縮合多環式炭化水素には、例えば、ナフタレン環、アンスラセン環等が挙げられる。単環式芳香族複素環には、例えば、ピロール環、フラン環、チオフェン環、イミダゾール環、オキサゾール環、チアゾール環、ピリジン環、ピリミジン環等が挙げられる。縮合芳香族複素環には、ベンゾフラン環、クロメン環、キサンテン環、インドリジン環、インドール環、インダゾール環、ベンゾイミダゾール環、プリン環、キナゾリン環、キノリン環、フタラジン環、キナゾリン環、シンノリン環、カルバゾール環、アクリジン環等が挙げられる。これらの芳香族環には、通常の置換基を有していても良い。
【００３２】
これらの有機化合物にはその置換基の種類等により、各種塩を形成する場合がある。かかる塩としては、具体的には、塩酸、臭化水素酸、よう化水素酸、硫酸、リン酸などの鉱酸；ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、エナント酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、乳酸、りんご酸、ソルビン酸、マンデル酸等の脂肪族モノカルボン酸、安息香酸、サリチル酸等の芳香族モノカルボン酸、しゅう酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸等の脂肪族ジカルボン酸、フタル酸等の芳香族ジカルボン酸、クエン酸等の脂肪族トリカルボン酸などの有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸等の脂肪族スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の芳香族スルホン酸などの有機スルホン酸；アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸等との酸付加塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等のアルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、ピリジン、リジン、アルギニン、オルニチン等の有機塩基との塩や、アンモニウム塩等が挙げられる。医薬として用いる場合には、製薬学的に許容しうる塩であることが好ましい。
【００３３】
これらの塩は常法，例えば、当量の本発明の活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する化合物と所望の酸あるいは塩基を含む溶液を混合し、所望の塩をろ取するか溶媒を留去して集めることにより得ることができる。また、本発明の活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する有機化合物またはその塩は、水、エタノール、グリセロールなどの溶媒と溶媒和物を形成しうる。
また本発明の活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する有機化合物の塩には、モノ塩およびジ塩等が含まれ、置換基によっては、酸付加塩と塩基との塩との両方を同時に形成しうる。
更に本発明の活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する有機化合物は、その化合物の水和物、製薬学的に許容可能な各種溶媒和物や結晶多形のもの等も含まれる。
【００３４】
活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質の一例として、ＷＯ００／６１５５７号公報に記載の抗不整脈作用を有する４−ヒドロキシピペリジン誘導体またはその塩、結晶等が挙げられる。より具体的な化合物の一例は、例えば、
１−ベンジル−４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１）；
１−ベンジル−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｎ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物２）；
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−（４−クロロフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物３）；
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−［４−（トリフルオロメチル）フェニルメチル］ピペリジン−４−オール（化合物４）；
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−（４−シアノフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物５）；
【００３５】
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−（４−メトキシカルボニルフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物６）；
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−（３−フルオロフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物７）；
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−（３，４−ジフルオロフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物８）；
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−（４−フルオロフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物９）；
４−［２−［Ｎ−（４−ｎ−ブトキシフェニル）−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−１−（２−フルオロフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物１０）；
【００３６】
１−（４−クロロフェニルメチル）−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１１）；
１−（４−ブロモフェニルメチル）−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１２）；
４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］−１−［４−（トリフルオロメチル）フェニルメチル］ピペリジン−４−オール（化合物１３）；
１−（４−フルオロフェニルメチル）−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１４）；
１−（４−シアノフェニルメチル）−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１５）；
【００３７】
４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］−１−（４−ニトロフェニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物１６）；
１−［４−（メトキシカルボニル）フェニルメチル］−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１７）；
１−［４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルメチル］−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１８）；
１−（４−ブロモ−２−フルオロフェニルメチル）−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物１９）；
４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］−１−（２−チエニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物２０）；
【００３８】
４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］−１−（３−チエニルメチル）ピペリジン−４−オール（化合物２１）；
１−［２−（メトキシカルボニル）フェニルメチル］−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物２２）；
１−［３−（メトキシカルボニル）フェニルメチル］−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物２３）；
４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］−１−［４−（ｉｓｏ−プロポキシカルボニル）フェニルメチル］ピペリジン−４−オール（化合物２４）；
１−［２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）フェニルメチル］−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物２５）；
【００３９】
４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−エトキシフェニル）アミノ］エチル］−１−［４−（トリフルオロメチル）フェニルメチル］ピペリジン−４−オール（化合物２６）；
１−ジフェニルメチル−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物２７）；
１−ビス（４−フルオロフェニル）メチル−４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物２８）；
１−ジフェニルメチル−４−［２−［ Ｎ−（４−エトキシフェニル）− Ｎ−メチルアミノ］エチル］ピペリジン−４−オール（化合物２９）
化合物２０の二塩酸塩（化合物３０）；
化合物２０の二臭化水素酸塩（化合物３１）
等が挙げられる。
この４−ヒドロキシピペリジン誘導体またはその薬学上許容される塩は、国際公開００／６１５５７号公報または特願２０００−３０８５３０に記載の方法、またはそれに準ずる方法を用いることにより、当業者であれば容易に得ることができ、本明細書は、これら公報を引用し本発明の内容とする。
【００４０】
＜製剤＞
本発明の活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質は、医薬組成物の形態で哺乳動物に投与される。
本発明における医薬組成物は、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質またはその薬学上許容される塩の少なくとも一つ以上を含んでいればよく、医薬上許容される添加剤と組み合わせてつくられる。より詳細には、賦形剤（例；乳糖、白糖、マンニット、結晶セルロース、ケイ酸、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン）、結合剤（例；セルロース類（ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ））、結晶セルロース、糖類（乳糖、マンニット、白糖、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール）、デンプン類（トウモロコシデンプン、バレイショデンプン）、α化デンプン、デキストリン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、マクロゴール、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ））、滑沢剤（例；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク）、崩壊剤（例；デンプン類（トウモロコシデンプン、バレイショデンプン）、カルボキシメチルスターチナトリウム、カルメロース、カルメロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン）、被膜剤（例；セルロース類（ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、アミノアルキルメタクリレートコポリマーＥ、メタクリル酸コポリマーＬＤ）、可塑剤（クエン酸トリエチル、マクロゴール）、隠蔽剤（酸化チタン）、着色剤、香味剤、防腐剤（塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸エステル）、等張化剤（例；グリセリン、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、マンニトール、ブドウ糖）、ｐＨ調節剤（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、塩酸、硫酸、リン酸緩衝液等の緩衝液）、安定化剤（例；糖、糖アルコール、キサンタンガム）、分散剤、酸化防止剤（例；アスコルビン酸、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、没食子酸プロピル、ｄｌ−−トコフェロール）、緩衝剤、保存剤（例；パラベン、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム）、芳香剤（例；バニリン、ｌ−メントール、ローズ油）、溶解補助剤（例；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ポリエチレングリコール、リン脂質コレステロール、トリエタノールアミン）、吸収促進剤（例；グリコール酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、アシルカルニチン類、リモネン）、ゲル化剤、懸濁化剤、または乳化剤、一般的に用いられる適当な添加剤または溶媒の類を、本発明の化合物と適宜組み合わせて種々の剤形とすることができる。
【００４１】
こうした剤形とは、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、座剤、膣座剤、舌下投与剤、バッカル剤、口腔内崩壊剤、咀嚼剤、トローチ、ゼリー状剤、ペースト剤、口腔粘膜パッチ剤、シロップ剤（経口用液剤、乳化剤）、吸入剤、注射剤、鼻腔投与剤（液剤、粉剤）、外用剤（軟膏剤、クリーム剤、ゼリー状剤、ゲル剤）貼付剤（テープ剤、パッチ剤、パップ剤等）、液剤、懸濁化剤、スプレー剤等の各種薬剤があげられ、経口または非経口（例えば、静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、直腸内投与、膣内投与、鼻腔内投与または口腔内粘膜、陰茎粘膜等の経粘膜吸収等）により患者に投与し得る。
【００４２】
本発明の活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから急速に解離する物質を薬剤としたときの該物質の投与量は、対象となる疾患を治療するのに十分な量とされるが、治療剤の剤形、投与方法、１日当たりの投与回数、症状の程度、体重、年齢等によって適宜増減する。
本発明の物質を薬剤としたときの該物質の投与量は、通常成人１日あたり０. １ｍｇ〜２. ５ｇ、好ましくは０．５ｍｇ〜１. ０ｇ、さらに好ましくは１ｍｇ〜５００ｍｇであるが、症状あるいは投与経路に応じて適宜増減できる。
全量を１回あるいは２〜６回に分割して経口または非経口投与することや、点滴静注等、連続投与することも可能である。
【００４３】
本発明の活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質を含有することを特徴とする医薬組成物または薬剤は、不整脈、例えば、心房性（上心室性）不整脈だけでなく、心室性不整脈にも用いることが可能である。より詳細には、これら不整脈には、上室期外収縮、心室期外収縮、上室頻拍、ＷＰＷ症候群、心房粗動・心房細動、心室頻拍、心室細動などが包含される。
心室性不整脈のうち、心室頻拍や心室細動は重篤な不整脈とされ、特に心筋梗塞患者や心不全患者などの虚血性心疾患の患者における突然死の原因となることが示唆されている。突然死のほとんどは、なんらかの心疾患のある者に起こるが、基礎に明らかな疾患はないが、過労により致死的不整脈が発生して突然死を起こす場合もある。重篤な不整脈である心室頻拍や心室細動の治療または予防、あるいは突然死の予防ににも有用である。
【００４４】
また、本発明の物質を含有することを特徴とする医薬組成物または薬剤は、心不全、狭心症、心筋梗塞、ＰＴＣＡ／ＰＴＣＲ／ＣＡＢＧ等による血行再建術に伴う心臓血管系障害、心筋虚血再灌流障害（重症不整脈を除く）、脳梗塞急性期、脳出血、一過性脳虚血、くも膜下出血、頭部外傷、脳手術後遺症、脳動脈硬化後遺症等の脳血管障害、更に臓器移植時の移植臓器障害、手術時の臓器の一時的血流遮断等に基づく症状、または痙攣、癲癇、痴呆（脳血管性，老人性）、神経痛、偏頭痛、ニューロパシー性疼痛、ジギタリス中毒、トリカブト中毒、ピレスロイド系殺虫剤中毒等の治療または症状の改善にも使用可能である。また、本発明化合物は、ナトリウムチャネル遺伝子異常のためチャネルの不活性化異常により生じる、すなわち持続性ナトリウム電流の発生によって引き起こされる先天性疾患であるｈｙｐｅｒｋａｌｅｍｉｃ  ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ｐａｒａｌｙｓｉｓ、先天性異常筋緊張症、ＱＴ延長症候群などにも使用可能である。
【００４５】
（実験例）
以下に、実験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【００４６】
実験例１：モルモット乳頭筋を用い、活動電位最大立ち上がり速度に及ぼす化合物の影響を、刺激回数、刺激頻度との関係で解析する工程
１）標本の摘出
Hartley系雄性モルモットをペントバルビタールナトリウム４０mg/kgの腹腔内投与により麻酔した後、頸静脈からヘパリン２００U/kg（ヘパリンモチダ、1000 U/mL、持田製薬）を投与した。数分後、頸部より脱血死させ、開胸して心臓を摘出した。９５％Ｏ2・５％ＣＯ2の混合ガスを通気し氷冷したTyrode液（以下、Tyrode液をベースとする溶液は、全て上記条件で通気したものを用いた）中で、摘出した心臓から右心室乳頭筋（長さ約２−３mm、直径約１mm）を切り出し、標本とした。溶媒を含むTyrode液をペリスタポンプ（SJ-1215、アトー）を用いて３mL/minの速度で灌流した組織チャンバー（BRAIN SLICE CHAMBER & BSC-ZT、HARVARD APPARATUS）内に標本を固定し、標本近部の測定（HL-301、安立計器）温度が３５℃前後になるように調節（TC-202、HARVARD APPARATUS）した。
【００４７】
２）標本の刺激
電気刺激装置（SEN-7103、日本光電）およびアイソレーター（SS-102J、日本光電）を用い、乳頭筋基部付近に接触させたステンレス製同芯円電極（UB-9007、ユニークメディカル）を介し、矩形波（１ms duration）による電気刺激を行った。刺激強度は標本ごとに設定し、活動電位を誘導させる閾値電圧（徐々に刺激電圧を上げていき、初めて活動電位が誘導される電圧）の約1.2倍とした。化合物３１と塩酸メキシレチンの影響を検討する場合の刺激頻度は、0.5、１、２、 3.3 Hz（刺激間隔で2000、 1000、 500、 300 ms）とし、塩酸ピルジカイニドと酢酸フレカイニドの影響を検討する場合の刺激頻度は、0.2、 0.5、 1、 2 Hz（刺激間隔で5000、 2000、 1000、 500 ms）とした。
【００４８】
３）活動電位の測定および記録
活動電位の測定は、中芯入りガラス管（外径 ２mm、サミットメディカル）から作製した微小電極（電極内電解質 ３mol/L KCl 先端抵抗 8-30 MΩ）を細胞内に刺入し、細胞内と組織チャンバー内灌流液の電位差を直流型前置増幅器（Duo773、WPI）を介して増幅することにより行った。増幅された電気信号を、心筋活動電位解析装置（WinCAPA Ver 1.1.4、フィジオテック）を用いてサンプリングレート 100 kHzで取り込み、磁気データとして記録した。心筋活動電位解析装置の機能を用いて、波形観察および活動電位各パラメーターの計測および記録を行い、テキストファイル型式のデータとして保存した。
【００４９】
４）スケジュール
実験は、１Hzの刺激頻度で標本の刺激を行い、活動電位各パラメーターの値が安定して計測できるようになってから行った。溶媒を含むTyrode液灌流下に（溶媒添加時）、上述の刺激頻度のうち最も低い頻度で刺激を行い、安定した後、１２０秒間の刺激休止期をはさみ、休止前と同じ頻度で再度６０回刺激し、活動電位を記録した。次に刺激頻度を上げて刺激を行い、安定した後、同様に１２０秒間の刺激休止期をはさみ、再度６０回刺激し、活動電位を記録した。このように刺激頻度を上昇させて、上述の刺激頻度すべてについて実験を行った。次に、灌流液を被験物質または対照物質の入ったTyrode液に変更し、２０分以上経過してから同様のプロトコールで各刺激頻度における活動電位を記録した。以上のプロトコールから、一標本につき、溶媒添加時のデータと物質添加時のデータが得られた。
【００５０】
５）解析方法
１２０秒間の休止期後、ｎ回目の刺激に対する活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax）をdV/dtmax（n）とし、計算式  dV/dtmax（n）/ dV/dtmax（1）で標準化した。物質添加時における標準化したdV/dtmax（60）と刺激頻度との関係を物質ごとに図式化した（頻度依存性、図１）。また、物質添加時における刺激回数と標準化したdV/dtmaxとの関係を、物質ごとに図式化した（使用依存性、図２）。KojimaらやToyamaらの方法に準じて(Kojima M et al.: Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol 1989;339:441-447. Toyama J et al.: J Cardiovasc Pharmacol 1987;9:165-172)、物質によるdV/dtmax抑制の発現を指数関数にフィッティングし、発現速度（onset rate、 単位はＡＰ-1）を求めた。
【００５１】
図１から明らかなように、化合物３１によるdV/dtmaxの明確な抑制は、Ｎａチャネルとの結合・解離が速い薬物として知られている塩酸メキシレチンと同様に、3.3ヘルツ（心拍数にすると毎分１９８回）の高い頻度においてのみ観察された。一方、結合・解離が遅い薬物の代表である塩酸ピルジカイニドと酢酸フレカイニドは比較的低い頻度である0.5ヘルツ（心拍数にすると毎分３０回）からdV/dtmaxを抑制した。塩酸ピルジカイニド、酢酸フレカイニドは、化合物３１、塩酸メキシレチンに比し，低い頻度から抑制を示した。
図４及び図５に示すように、結合・解離が遅い薬物の代表である塩酸ピルジカイニドや酢酸フレカイニドによるdV/dtmax抑制の発現過程は、緩やかであり、滑らかな曲線でフィッティング可能なものであった。
一方、化合物３１によるdV/dtmax抑制の発現過程は速やかで、dV/dtmaxは刺激２回目で急激に抑制された（図２）。この速い抑制作用の発現は、結合・解離が速い薬物として知られている塩酸メキシレチン（図３）と同様であった。
【００５２】
表１には、ほぼ同等の抑制が認められる刺激頻度（化合物３１および塩酸メキシレチンでは3.3ヘルツ、塩酸ピルジカイニドおよび酢酸フレカイニドでは１および２ヘルツ）で計算された発現速度を示した。この結果からも、化合物３１のＮａチャネルとの結合・解離は塩酸メキシレチンと同等以上に速いことが示された。
尚、酢酸フレカイニド、塩酸メキシレチンは、文献（キャンベルら、（CAMPBELL T. J, カージオバスキュラー・リサーチ（Cardiovascular Research）、１７巻、３４４−３５２頁、１９８３年）と同様に酢酸フレカイニドは抑制の発現が遅く、塩酸メキシレチンは速い結果となった。
また、化合物３０も化合物３１と同様の結果を示した。
【００５３】
【表１】
2005090957.tif 000002
【００５４】
実験例２：ラット単離心筋において、全細胞膜電位固定法による記録から化合物のベラトリジン誘発ナトリウム電流に及ぼす影響を検討する工程
１）ラット心室筋細胞単離
ラットをペントバルビタール 50 mg/kgの腹腔内投与により麻酔し、仰臥位に固定後、ヘパリン1000 U/kgを静脈内投与した。人工呼吸 (20 mL/100 g、 54 回/分) 下に第２、３肋骨間を開胸した。大動脈から、1 mmol/L CaCl2を含むKrebs-Ringer-HEPES 溶液(ＫＲＨ、 組成は後述)を満たしたポリエチレンチューブ(SP 95、 夏目製作所)を逆行性に挿入し、70 cm水柱圧で灌流すると同時に心臓を摘出した。心臓の自発収縮により残留血液を十分に洗い流した後、100 mmol/L EGTA を含むＫＲＨ(組成は後述)で10分間灌流し拍動を停止させた。上記灌流液はいずれも95% O2/5% CO2の混合ガスを通気し、37℃に保温し使用した。その後、0.13 mg/mL liberase blendzyme 4、0.125 mg/mL protease XIVを含むＫＲＨを心臓が柔らかくなるまでおよそ10分間灌流した。心室部を同酵素溶液中で細断後、95% O2/5% CO2で通気しながら酵素処理を続けた(37℃、およそ10 分)。ピペッティングにより細胞を分散させ、ステンレスメッシュ (NO.150、 TOKYO SCREEN)で濾過し、結合繊維などを除去した。濾液を２分間遠心 (300 回転/分、 室温、２分)し、上清液を廃棄した後、細胞を180 mmol/L CaCl2を含むＫＲＨ 40 mLに懸濁した。２分間遠心（上記条件）、上清液を廃棄した後、細胞を再度180 mmol/L CaCl2を含むKRH 40 mLに懸濁した。再度懸濁液を２分間遠心（上記条件）し、上清液を廃棄した後、細胞を180 mmol/L CaCl2を含むＫＲＨ 30 mLに懸濁した。懸濁液に100 mmol/L CaCl2水溶液96 mLを添加し、ピペッティングの後、静置した（懸濁液中Ca2+濃度  500 mmol/L）。5分後に同CaCl2溶液150 mL（懸濁液中Ca2+濃度  １mmol/L）、10分後に150 mLを添加（懸濁液中Ca2+濃度  1.5 mmol/L）し、それぞれピペッティングの後、静置した。15分後に懸濁液を２分間遠心（上記条件）し、細胞ペレットを得た。２mmol/L CaCl2を含むＫＲＨを満たしたカラム(高さ10 cm、直径15 mm)に細胞ペレットを重層し、２分間静置した。その後上清を静かに除去し、２mmol/L CaCl2を含むＫＲＨに懸濁し、Burker-Turk血球計算盤を用いてカウントした。
【００５５】
２）ラット心筋細胞膜電流測定
倒立顕微鏡のステージ上に固定したチャンバー（RC-25、 Warner Instrument；底面は顕微鏡用カバーグラス、 φ12 mm、 Fisher Scientific）に、生細胞数が１〜５×104 個/mLになるように調整した細胞懸濁液100 mLを入れ、10分間室温放置して細胞を底面に接着させた後、パッチ用低Na外液（組成は後述）を1.4 mL/分で灌流した（30-32 ℃）。灌流は重力により行い、排水はアスピレータによる吸引で行った。ガラスピペットは、ガラス管（外径 1.5 mm、 Clark Custom Patch Glass、 Warner Instrument）を二段引プラー（PP-83、 ナリシゲ）で引いた後、マイクロフォージ（MF-83、 ナリシゲ）で先端を熱研磨して作成した。電極内液（組成は後述）充填時のピペットの抵抗は1.0〜1.5 MWとなるようにした。パッチクランプアンプ（EPC-7、 List-electronic）を用いて全細胞膜電位固定法によりＮａ+電流を測定した。データの記録には市販のソフトウェア（pCLAMP7、 Axon Instruments）を使用した。細胞にピペットを接触させた際の刺激により細胞が拍動することを防ぐために、外液のGd3+により伸展刺激活性化チャネルを抑制した。内外液のCs+によりＫ+電流を抑制し、外液のCo2+、Gd3+によりCa2+電流を抑制した。持続性電流は数百pAと小さく、直列抵抗（series resistance、 Rs）による電圧降下は小さいので（数百mA）、Ｒｓ補償は行わなった。また、内外のＮａ+濃度差を無くすことにより、逆転電位確認のために必要な電位変化の大きさを小さくして、シールが壊れるのを防いだ。容量電流、リーク電流とも測定の妨げにはならないため、補正は行わなかった。
【００５６】
ギガシールを形成し、膜を破って全細胞記録の状態になってからもシール抵抗をモニタし続け、シール抵抗がギガΩを維持しているものを実験に使用した。次に保持電位-80 mVから正方向に10 mV間隔で20 mVまで持続時間10 msecの矩形波を与え、Ｎａ電流のI-V関係を確認した。この後、灌流液をパッチ用通常Ｎａ外液（組成は後述）に替えた。保持電位を-20 mVに固定し、50 mmol/L veratridineにより内向き電流を発生させた後、検体を累積的に投与し、その抑制効果を検討した。最後に灌流液から薬物を除去し、ベースラインの確認を行った。生データはコンピュータのハードディスク内に記録、保管した。
【００５７】
３）溶液組成（mmol/L）
ａ） Krebs-Ringer-HEPES (KRH)
125 NaCl、 2.6 KCl、 1.2 MgSO4、 1.2 KH2PO4、 10 glucose、 10 HEPES、
1 mmol/L NaOHでpH7.4に調整
ｂ）パッチ用通常Ｎａ外液
10 CsCl、 130 NaCl、 1.2 MgCl2、 2 CoCl2、 11 glucose、 20 HEPES、
2 CaCl2、1 mmol/L CsOHでpH7.3に調整
ｃ）パッチ用低Ｎａ外液
130 CsCl、 10 NaCl、 1.2 MgCl2、 2 CoCl2、 11 glucose、 20 HEPES、
2 CaCl2、 1 mmol/L CsOHでpH7.3に調整
ｄ）電極内液
130 CsCl、 10 NaCl、 0.4 MgCl2、 5 Mg-ATP、 5 glucose、 10 HEPES、
5 EGTA、 1 mmol/L CsOHでpH7.3に調整
【００５８】
４）数値処理方法
データの解析には市販のソフトウェア（clampfit6、 Axon Instruments；EXCEL 2000、 Microsoft；JMP、 SAS Institute）を使用した。ベラトリジン誘発性Ｎａ+電流に対する検体の抑制作用の濃度作用曲線は、clampfit６のトレース上にカーソルをあてて読み取られた数値を記録し、これをＪＭＰに入力して作成した。抑制率(Ｉ)は、以下の数式を用いて百分率で表した。
Ｉ＝｛１−(Ａ−Ｂ)／Ａ｝×１００
Ａ＝（ベラトリジンにより誘発された内向き電流の最大値）−（ベラトリジン投与前のベースラインの電流値）、Ｂ＝（被験薬物投与後の内向き電流値）−（ベラトリジン投与前のベースラインの電流値）。５０％抑制濃度（IC50値）および信頼区間はＪＭＰのカーブフィット機能を用いて求めた。
【００５９】
通常のＮａチャネルは脱分極により活性化された後、急速に不活性化され、観察されるＮａ電流は一過性である。ベラトリジンはＮａチャネルの不活性化を抑制するため、Ｎａチャネルは活性化状態にとどまり、持続的な電流が観察される。従って、ベラトリジンにより誘発される電流に対する抑制は、活性化状態のＮａチャネルに対する親和性を測るひとつの指標である。
上述の実験の結果、化合物３０はベラトリジン誘発Ｎａ電流を用量依存的に抑制し、そのIC50値は、1.4 μmol/L（９５％信頼区間、0.9-1.8 μmol/L）であった。このことから、化合物３０の活性化状態のＮａチャネルに対する高い親和性が示唆された。
【００６０】
実験例３：イヌ迷走神経刺激心房細動モデルにおいて、化合物の心房細動停止効果を確認する工程
１）手術
動物にチオペンタール・ナトリウム（３０  ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与して麻酔の導入を行い、その後直ちに気管内挿管して人工呼吸器により呼吸を保持した。手術中における麻酔の維持は、１％ ハロタンを含む混合笑気ガス（Ｎ2Ｏ：Ｏ2＝２：１）を吸入させて行った。また、手術中における水分補給のため、右前肢橈側皮静脈に穿刺した翼付き針（ニプロPSVセット）より乳酸リンゲル液を５ ｍL／ｋｇ／ｈｒの速度にて点滴した。
手術は、以下の手順で行った。初めに、左大腿動脈に血圧測定用カテーテルを、左大腿静脈に薬液投与用カテーテルを、右大腿静脈にプロプラノロール投与用カテーテルを、それぞれ挿入留置した。次に、頸部を正中切開して左右の迷走神経を剥離し、それぞれ上下2個所を結紮してから切断した。この両側の心臓側切断端近位部に迷走神経刺激用の双極型針電極をそれぞれ刺入留置した。この後、右側の第４あるいは第５肋間を切開して開胸を行い、右心耳に３対の電極を埋め込んだ電極板を縫い付けた。これらの電極対は、それぞれＢｕｒｓｔ刺激用、不応期測定時の刺激用、および心房電位測定用とした。また、右心房壁の適当な２ヵ所に２本の双極型針電極を刺入留置し、それぞれ心房電位記録用とした。さらに、心房に隣接する右心室壁には心室ペーシング用の双極型フック電極を刺入留置した。この他、実験中の胸腔内温度を測定するため、ＤＩＧＩＴＡＬ ＳＵＲＦＡＣＥ ＴＨＥＲＭＯＭＥＴＥＲ（ＨＬ−１００、安立計器）の温度センサーを胸腔内に留置した。なお、閉胸後には、胸腔内の空気を吸引排出して内部を軽度の陰圧とした。
【００６１】
２）実験手順とデータの測定方法
手術終了後は、乳酸リンゲル液の点滴を止めた。また、１％ ハロタンを止めて混合笑気ガス（Ｎ2Ｏ：Ｏ2＝２：１）だけの吸入とした。さらに、α−クロラロース（１００ ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与し、以後の主要な麻酔維持剤とした。この他、実験中には適宜動物を保温して胸腔内温度を３６〜３８℃に維持し、また、経時的に採血して血液のpHを測定した。手術終了後約１時間動物を回復させてから、プロプラノロールの静脈内投与を開始した。初めに０．５ｍｇ／ｋｇを単回にて、続いてインフージョンポンプ（ＳＴＣ−５２３、テルモ）により０．２５ｍｇ／ｋｇ／ｈｒの速度にて実験終了時まで持続して、それぞれ静脈内投与した。各パラメータの測定は、プロプラノロール投与後、血圧と心拍が安定した時点から開始した。心房細動の誘発は、両側の迷走神経刺激下（出力約６Ｖ、持続時間０．１あるいは０．２ms、頻度１０Ｈｚ ）、右心耳にＢｕｒｓｔ刺激（出力：閾値の２〜４倍の電圧、持続時間：２あるいは４ms、サイクルレングス：５０〜１００ms、回数：１０〜１００発）を与えて行った。なお、迷走神経刺激中は、右心室に刺入留置した双極型フック電極より刺激（出力：閾値の２倍の電圧、持続時間：２ms、サイクルレングス：６００ms ）を与えて心室を駆動した。右心房における有効不応期の測定は、右心耳電極から１２発のＳ１刺激（出力：閾値の２倍の電圧、持続時間：２ms、サイクルレングス：３００ms）を与えた後に任意の間隔にて１発のＳ２刺激を与えて求めた。有効不応期は、伝導性の心房電位を生じない最長のＳ１Ｓ２間隔とした。また、右心房における伝導速度は、心房電位を記録した３点の内適当な２点を選び、Ｓ１刺激時に観察されたそれら２点の心房電位のズレ（伝導時間）とその距離とから求めた。有効不応期に伝導速度を乗じて波長(wave length)を計算した。実験中の血圧、心電図（Lead II）ならびに3点における心房電位は、ＭＰ１００ＷＳ（フィジオテック）により経時的に記録した。
【００６２】
初めに、迷走神経非刺激下および刺激下に右心房の有効不応期を測定した。次に、心房細動を誘発させて４０分間持続することを確認した。確認ができたところで、迷走神経刺激を止めて心房細動を停止させ、再度、迷走神経非刺激下および刺激下に右心房有効不応期および伝導時間の測定を行った。この有効不応期の測定が終了したら、直ちに心房細動を再発させた。心房細動が３０分間持続したところで薬液の静脈内投与を開始した。薬液の持続静脈内投与開始１０分後にも、迷走神経非刺激下および刺激下の右心房不応期および伝導時間の測定を行った。
【００６３】
上記実験例３の結果を表２に示した。化合物３０ 2.5 mg/kgの静脈内投与により半数の動物で、5 mg/kg以上の投与により全例で心房細動の停止が観察された。また、化合物３０の投与によって用量依存的な有効不応期の延長および波長の増大が認められるとともに、化合物３０は、10 mg/kg投与によっても、心電図ＱＲＳ幅、QTｃ間隔に影響を及ぼさなかった。一方、塩酸ピルジカイニドでは、0.625 mg/kgの静脈内投与により半数の動物で、1.25 mg/kg以上の投与により全例で心房細動の停止が観察された。しかしながら、塩酸ピルジカイニドの投与によって用量依存的な有効不応期の延長および波長の増大が認められたものの、塩酸ピルジカイニドの投与により、臨床上においても報告されている明確なＱＲＳ幅の増大が認められた。
以上のことから、化合物３０は心電図に影響を与えない用量で心房細動を停止させ、さらに有効不応期の延長及び波長の増大が示された。これは、実験例１から推察されるように化合物３０のＮａチャネルに対する結合・解離が速いため、心房細動時のように速い頻度で興奮している心筋においては、結合しているＮａチャネル分画が蓄積的に増大するが、通常の心拍数程度の頻度ではほとんどのＮａチャネルは化合物と結合できないためと考えられた。
【００６４】
以上の結果より、４−［２−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−ｉｓｏ−プロポキシフェニル）アミノ］エチル］−１−（２−チエニルメチル）ピペリジン−４−オールまたはその塩は、発現速度が０．３（ＡＰ-1）以上且つ前記の実験例２に記載の方法でべラトリジン誘発ナトリウム電流抑制作用のＩＣ50値が３０μｍｏｌ／Ｌ以下であり、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離することを特徴を有していることが示された。さらに、この特徴を有する化合物が、イヌ迷走神経刺激心房細動モデルにおいて、用量依存的な心房細動抑制効果、及び有効不応期の延長および波長の増大効果を示し、且つ、心電図QRS幅、QTｃ間隔に影響を及ぼさないことが明らかとなった。
【００６５】
従って、心臓由来の標本を用いた、Ｎａチャネルに対する試験物質の使用依存性抑制を検討する試験において、発現速度が０．３ＡＰ-1以上である物質を選択し、且つ試験物質が、活性化状態のＮａチャネルに高い親和性を有することを確認することで、活性化状態のＮａチャネルに結合して、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質をスクリーニングすることが可能となった。
このように選定された物質は、正常心電図に影響を与えず、心機能抑制作用や催不整脈作用のない優れた心房細動抑制剤、あるいはＮａチャネル阻害剤として、例えば、心房細動の停止、再発防止に用いることができる。また、心機能に異常のない正常者における心室性期外収縮や心房細動の治療または再発防止を目的とした長期投与、あるいは虚血例や心機能低下例における不整脈（例えば、心室頻拍、心房細動）に対する治療に対して、既存薬のような副作用がなく、安全で使いやすい薬剤として用いることができる。
【００６６】
【表２】
2005090957.tif 000003
【００６７】
（製剤例）
次に、本発明の化合物を含有する製剤例を示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。
製剤例１  錠剤
化合物３１                        １００ｇ
乳糖                              １３７ｇ
結晶セルロース                      ３０ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース        １５ｇ
カルボキシメチルスターチナトリウム  １５ｇ
ステアリン酸マグネシウム              ３ｇ
上記成分を秤量した後，均一に混合する。この混合物を打錠して重量１５０mgの錠剤とする。
【００６８】
製剤例２  フィルムコーティング
ヒドロキシプロピルメチルセルロース    ９ｇ
マクロゴール６０００                  １ｇ
酸化チタン                            ２ｇ
上記成分を秤量した後，ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール６０００を水に溶解し、酸化チタンを分散させる。この液を、製剤例１の錠剤３００ｇにフィルムコーティングし、フィルムコート錠を得る。
【００６９】
製剤例３  カプセル剤
化合物３１                        ５０ｇ
乳糖                            ４３５ｇ
ステアリン酸マグネシウム          １５ｇ
上記成分を秤量した後、均一に混合する。混合物をカプセル封入器にて適当なハードカプセルに重量３００ｍｇづつ充填し、カプセル剤とする。
【００７０】
製剤例４  カプセル剤
化合物３１                  １００ｇ
乳糖                          ６３ｇ
トウモロコシデンプン          ２５ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース  １０ｇ
タルク                          ２ｇ
上記成分を秤量した後、化合物３１、乳糖、トウモロコシデンプンを均一に混合し、ヒドロキシプロピルセルロースの水溶液を加え、湿式造粒法により顆粒を製造する。この顆粒にタルクを均一に混合し，適当なハードカプセルに重量２００mgずつ充填し，カプセル剤とする。
【００７１】
製剤例５  散剤
化合物３１                      ２００ｇ
乳糖                            ７９０ｇ
ステアリン酸マグネシウム          １０ｇ
上記成分をそれぞれ秤量した後、均一に混合し、２０％散剤とする。
【００７２】
製剤例６  顆粒剤、細粒剤
化合物３１                      １００ｇ
乳糖                            ２００ｇ
結晶セルロース                  １００ｇ
部分α化デンプン                  ５０ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース      ５０ｇ
上記成分を秤量した後、化合物３１、乳糖、結晶セルロース，部分α化デンプンを加えて均一に混合し、ヒドロキシプロピルセルロース（HPC）の水溶液を加え、湿式造粒法により顆粒又は細粒を製造する。この顆粒又は細粒を乾燥し、顆粒剤又は細粒剤とする。
【００７３】
【発明の効果】
本発明を用いると、活性化状態のＮａチャネルに結合し、不活性化状態または静止状態のＮａチャネルから速やかに解離する物質をスクリーニングすることが可能である。
このように選定された物質は、正常心電図に影響を与えず、心機能抑制作用や催不整脈作用のない優れた心房細動抑制剤、あるいはＮａチャネル阻害剤として、例えば、心房細動の停止、再発防止に有用である。また、心機能に異常のない正常者における心室性期外収縮や心房細動の治療または再発防止を目的とした長期投与、あるいは虚血例や心機能低下例における不整脈（例えば、心室頻拍、心房細動）に対する治療に対して、既存薬のような副作用がなく、安全で使いやすい薬剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax)に対する各化合物の頻度依存性抑制を示すグラフである。
【図２】モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax)に対する化合物３１の使用依存性抑制を示すグラフである。
【図３】モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax)に対する塩酸メキシレチンの使用依存性抑制を示すグラフである。
【図４】モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax)に対する塩酸ピルジカイニドの使用依存性抑制を示すグラフである。
【図５】モルモット乳頭筋の活動電位最大立ち上がり速度（dV/dtmax)に対する酢酸フレカイニドの使用依存性抑制を示すグラフである。
【図１】
2005090957.tif 000004
【図２】
2005090957.tif 000005
【図３】
2005090957.tif 000006
【図４】
2005090957.tif 000007
【図５】
2005090957.tif 000008