(57)【要約】【課題】酵母抽出成分によるチロシナーゼ活性抑制その他のメラニン生成抑制作用があり、しかも活性酸素消去や細胞賦活性も有する総合的に優れた皮膚美白効果を有する化粧料とすることである。【解決手段】シゾサッカロミセス  ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）などのシゾサッカロミセス属酵母の水性溶媒抽出物を有効成分として０．０５〜１０重量％含有する化粧料とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母の水性溶媒抽出物を有効成分として含有する化粧料。
【請求項２】
シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母が、シゾサッカロミセス  ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）である請求項１に記載の化粧料。
【請求項３】
有効成分としての含有量が、０．０５〜１０重量％である請求項１または２に記載の化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、化粧料に関し、詳しくは皮膚細胞賦活作用や美白作用のある酵母成分を含有する化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
一般に、日焼け後やニキビ後に起こる色素沈着、更年期の女性に頻発する肝斑、老化とともに現れる老人性色素斑等の症状は、黒褐色の色素であるメラニンの生成により生じるものと考えられている。
【０００３】
メラニンは、皮膚が紫外線などの外的刺激を受けると皮膚のメラニン細胞中に存在するチロシナーゼが活性化し、アミノ酸の一種であるチロシンが酸化されて生成する。このことからメラニン生成に関与するチロシナーゼの活性を抑制することにより、肌を白くする美白効果が期待され、チロシナーゼ活性抑制成分を化粧料に配合したものがある。
【０００４】
しかしながら、化粧料にチロシナーゼ活性抑制成分を配合したものであってもＢ１６メラノーマ培養細胞におけるメラニン生成抑制効果が充分でなかったり、実際に皮膚につけても沈着した色素の淡色化の効果が充分でない化粧料が多い。
【０００５】
このように化粧料に美白効果を確実に発揮させるためには、上述のチロシナーゼ活性抑制効果やメラニン生成抑制効果のみでは不充分であって、さらに活性酸素を消去して色素沈着を抑制する作用や、表皮細胞の賦活によるメラニン排泄の促進作用などを発揮させる必要がある。
【０００６】
酵母を配合した従来の化粧料としては、サッカロマイセス属酵母培養液から得られた発酵液を有効成分として配合した美白効果のある化粧料が知られている（特許文献１参照）。
【０００７】
また皮膚表層内部で表皮細胞自身のセラミド合成を活性化させ、皮膚バリア機能を改善するセラミド合成促進剤が知られ（特許文献２参照）、ラズベリーケトン  Ｄ  グルコシド（β体）などの配糖体とイーストエキスまたはそれを含む菌培養物を配合した美白化粧料も知られている（特許文献３参照）。
【０００８】
【特許文献１】
特開平７−１０７３４号公報
【特許文献２】
特開平８−２１７６５８号公報
【特許文献３】
特開２０００−１０９４０８号公報
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
上記した従来の美白化粧料は、イーストエキス（酵母抽出物）を単独で配合するか、またはイーストエキスと共に配糖体を配合しているが、前述のチロシナーゼ活性阻害作用やメラニン生成抑制作用の他、より総合的な作用による美白効果を確実に得るためには改良の余地がある。
【００１０】
そこで、この発明の課題は、上記した従来技術の問題点を解決し、酵母抽出成分によるチロシナーゼ活性抑制その他のメラニン生成抑制作用があり、しかも活性酸素消去や細胞賦活性も有する総合的に優れた皮膚美白効果を有する化粧料とすることである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本願の発明者らは、分裂により増殖する酵母を遺伝学的に解析した知見から、それらが出芽酵母に比べてヒトの細胞により近い増殖形態をとる分裂細胞であり、従来の酵母エキスにはない高い有効性を持つ成分が含まれる可能性が高いものと判断し、分裂酵母であるシゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属に属する酵母の細胞抽出液や胞子抽出液の皮膚に対する効果を他の酵母と比較して実際に調べたところ、この属に属するものだけが上述に示す諸効果を併せもつことを見出すことにより、この発明を完成させたものである。
【００１２】
すなわち、前記の課題を解決するために、この発明においては、シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母の水性溶媒抽出物を有効成分として含有する化粧料としたのである。
【００１３】
後述する試験結果からも明らかなように、シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母の水性溶媒抽出物には、繊維芽細胞の分裂を促進することで常に新しい細胞を生み出すという細胞賦活作用があると共に、メラニン生成抑制作用があり、これらが相乗的に作用する結果、優れた皮膚美白効果を有する化粧料となる。
【００１４】
このように優れた作用を確実に奏する化粧料とするためには、シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母として、シゾサッカロミセス  ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）を採用した化粧料であることが好ましい。
【００１５】
また、化粧料中の水性溶媒抽出物のより好ましい有効成分としての含有量は、０．０５〜１０重量％である。
【００１６】
【発明の実施の形態】
この発明で用いる酵母は、子嚢菌類に属する単細胞真核微生物で、動物細胞のように均等に二分裂するシゾサッカロミセス属に属する酵母（以下、分裂酵母と称する。）であり、代表的なものとして、シゾサッカロミセス  ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）が挙げられる。因みにシゾは分裂を意味する。
【００１７】
シゾサッカロミセス  ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）は古くから食品分野においては利用され、１８９０年代に東アフリカのミレットビール（スワヒリ語でポンベ）から単離されてからは広く知られるようになり、分裂酵母は、グレープジュース、パームワイン、サトウキビ、シロップ、パン、ビール醸造などに広く利用されていて、市販品を容易に入手でき、公的に安全性も確認されているものである。
【００１８】
分裂酵母は栄養源の豊富な時は体細胞分裂過程により増殖し、栄養源飢餓と性フェロモンの存在下では接合した後に胞子形成する有性生殖を行う。
【００１９】
このような分裂酵母を培養する際に用いられる培地は、通常使用される酵母用培地でよいが、酵母の細胞または胞子をそれぞれ得る場合には、合成培地が望ましく、また胞子形成培地は窒素源を加えないものを用いる。培養条件、例えば温度や時間などについては、一般に行われている酵母培養の条件を適用できる。
【００２０】
分裂酵母の細胞および胞子の具体的な抽出方法は、以下の通りである。
すなわち、培養後の菌体を回収し、精製水等を用いて充分に洗浄した後、培養液の１／１０量の精製水で懸濁する。そして、細胞壁分解酵素を２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で加え、３７℃で４日間反応させる。なお、培養時間（日数）については、例えば、培地の温度等を指標にして定常期となるまでを目安とすればよい。
【００２１】
次いで酵素を失活させ、遠心分離などの操作を行った後に濾過する（酵母の自己消化を利用する場合は、洗浄後の湿菌体に対して１０〜１００倍量の精製水を加え、３５〜４５℃で、２４〜７２時間程度をかけて自己消化させた後、凍結乾燥または減圧濃縮する。）。これに水、エタノール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどの水性溶媒の単独溶媒もしくはそれらの混合溶媒を湿菌体に対して１０〜１００倍量添加し、遠心分離などの操作を行った後に濾過する。
【００２２】
酵素分解法を利用する場合は、洗浄後の湿菌体に対して１０〜１００倍量の精製水を加え、プロテアーゼを酵母菌体１ｋｇに対して２０〜５０万ユニット程度を添加し、酵素活性温度で一昼夜反応させる。
【００２３】
次いで酵素を失活させた後、水性溶媒を適量加えるか、または加えないで、遠心分離などの分離操作を行ってから濾過する。酸分解法を利用する場合は、洗浄後の湿菌体に対して１０倍量の１〜５％塩酸を加え、４０〜６０℃にて３〜８時間、時々撹拌しながら加水分解する。その後、アルカリを用いて中和した後、同様に処理する。尚、中和後に透析処理などにより脱塩してもよい。
【００２４】
この発明による分裂酵母抽出エキスの有効成分としての配合量は、化粧料の処方中に０．０５〜１０重量％（望ましくは２〜５重量％）配合することによってこの発明の所期した効果、すなわち、皮膚美白効果、活性酸素消去効果、細胞賦活効果が充分に奏されるようになる。
【００２５】
また、この発明における分裂酵母の水性溶媒抽出物は、化粧品や浴用剤で常用される基剤、薬剤などと共に処方し、任意の形態の化粧品を製造することができる。
【００２６】
例えば、分裂酵母の水性溶媒抽出物に配合することが適当な油分としては、動植物油、鉱物油が代表例であり、その他にエステル油、ワックス油、高級アルコール、脂肪酸類、シリコン油、リン脂質などの油または油脂が挙げられる。
【００２７】
また、界面活性剤としては、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤などが挙げられる。またｐ−アミノ安息香酸、アントラニル誘導体、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、シコニン、ビタミンＢ６誘導体などの紫外線吸収剤、アスコルビン酸およびその塩、ステアリン酸エステル、トコフェロール及びそのエステル誘導体、ノルジヒドログアセレテン酸、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、パラヒドロキシアニソール、没食子酸プロピルなどの抗酸化剤、ヒドロキシエチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、アラビアガム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタクリレート、ポリアクリル酸塩、カルボキシビニルポリマー、カラギナン、ペクチン、アルギン酸およびその塩、カゼイン、ゼラチンなどの増粘剤、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ヒアルロン酸およびその塩、ポリエチレングリコール、コンドロイチン硫酸およびその塩、水溶性キチンあるいはキトサン誘導体、乳酸ナトリウムなどの保湿剤、低級アルコール、多価アルコール、水溶性高分子、ｐＨ調製剤、キレート剤、防腐剤、防バイ剤、香料、着色料、清涼剤、安定化剤、動・植物を起源とした抽出物、動・植物性タンパク質およびその分解物、動・植物を起源とした抽出物、動・植物性多糖類およびその分解物、動・植物を起源とした抽出物、動・植物性糖タンパク質およびその分解物、血流促進剤、消炎・抗炎症剤、細胞賦活剤、ビタミン類、アミノ酸及びその塩、核質溶解剤、収斂剤、創傷治癒剤、増泡剤、消臭・脱臭剤などを必要に応じて併用し、前述のような各種化粧品とすることができる。
【００２８】
この発明の化粧料は、化粧品、医薬部外品として色素沈着の予防および改善、また皮膚の細胞賦活を目的として適用されるものであり、その形態としては、例えばクリーム、軟膏、乳液、美容液、化粧水、パック、浴用剤、メークアップ化粧料等が挙げられ、その剤型は特に限定されないものである。
【００２９】
【実施例および比較例】
（分裂酵母の培養例１）
下記組成の培地１、２をそれぞれ調製し、培地１に分裂酵母を１白金耳添加し、３０℃で３日間培養した。この培養液を遠心分離して菌体を回収し、これを同量の培地２に全量懸濁し、５日間培養した。この培養液を遠心分離して菌体を回収し、精製水で充分洗浄した。
【００３０】
＜培地１＞  グルコース                            ３０ｇ
酵母エキス                              ５ｇ
【００３１】
＜培地２＞  グルコース                  １０ｇ
リン酸２水素カリウム          ０．２５ｇ
硫酸マグネシウム              ０．５ｇ
塩化カルシウム                ０．１ｇ
ホウ酸                        ０．５ｍｇ
硫酸銅                      ４０μｇ
ヨウ化カリウム                ０．１ｍｇ
塩化鉄                        ０．２ｍｇ
硫酸マンガン                  ０．４ｍｇ
モリブデン酸                  ０．１６ｍｇ
硫酸亜鉛                      ０．４ｍｇ
ビオチン                      １μｇ
パントテン酸カルシウム        １ｍｇ
ニコチン酸                  １０ｍｇ
イノシトール                １０ｍｇ
【００３２】
（分裂酵母の培養例２）
前記同じ培地１を調製し、これに分裂酵母（１白金耳）を添加し、３０℃で１０日間培養した。この培養液を遠心分離して菌体を回収し、精製水で充分洗浄した。
【００３３】
（分裂酵母エキスの抽出例１）
前記培養例１で得られた分裂酵母（０．１〜１．０ｋｇ）を、培養の１／１０量の蒸留水で懸濁した。この懸濁液に２．５ｍｇ／ｍｌの濃度となるよう酵素（ＬＹＳＩＮＧ  ＥＮＺＹＭＥＳ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ６９Ｈ１５５７，  ＳＩＧＭＡ社製）を添加し３０℃で４日間酵素処理を行った。酵素処理の後に、この懸濁液を超音波処理し、全量を１００ｍｌとした。この液を９０℃で１時間加熱処理を行い酵素を失活させ、濾過助剤、ろ紙、メンブランフィルターを用いて濾過した。
【００３４】
（分裂酵母エキスの抽出例２）
培養例２の方法で得られた分裂酵母（０．１〜１．０ｋｇ）を、培養の１／１０量の蒸留水で懸濁した。この懸濁液に２．５ｍｇ／ｍｌの濃度となるよう酵素（ＬＹＳＩＮＧ  ＥＮＺＹＭＥＳ，  Ｌｏｔ  Ｎｏ．  ６９Ｈ１５５７，  ＳＩＧＭＡ社製）を添加し３０℃で４日間酵素処理を行った。酵素処理の後、この懸濁液を超音波処理し、全量を１００ｍｌとした。この液を９０℃で１時間加熱処理を行い酵素を失活させた後、遠心分離して沈殿を除き、さらに濾過助剤、ろ紙、メンブランフィルターを用いて濾過した。
【００３５】
〔比較抽出例１、２〕（出芽酵母エキス）
出芽酵母であるサッカロミセス  セルベシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を抽出原料に用いた市販の甲社製の酵母エキスを比較抽出例１とし、乙社製の酵母エキスを比較抽出例２とした。
【００３６】
＜メラニン合成抑制作用の比較試験＞
前記抽出例１または抽出例２の分裂酵母抽出エキスおよび市販の出芽酵母抽出エキス比較抽出例１、２を試料として、メラノーマ細胞のメラニン合成抑制作用の比較試験を行なった。
【００３７】
試験方法としては、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞を１０％  ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地中で３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養したものを使用した。詳細には、１Ｔ：×５個のＢ１６メラノーマ細胞を、６０ｍｍプラスティックシャーレに植え込み、２４時間前培養した。その後、新鮮な培地に交換し、試験試料をそれぞれ２％になるよう培地中に添加した。試料添加後３日後、細胞をトリプシン処理によって回収し、１Ｎ  ＮａＯＨ、１０％  ＤＭＳＯ溶液で加熱溶解して、４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、無処理の細胞のメラニン合成率を１００％として試料添加時のメラニン合成率を算出した。メラニン合成阻害率は、無処理のメラニン合成率（１００％）から試料添加時のメラニン合成率を差し引いたものとした。この結果をメラニン生成阻害率（％）として表１に示した。
【００３８】
【表１】
2005001995.tif 000002
【００３９】
表１の結果からも明らかなように、抽出例１または抽出例２で得られた分裂酵母抽出エキスにはメラニン生成抑制作用が認められ、シミ、ソバカス等の防止効果が期待でき、その効果は、市販の出芽酵母抽出エキスである比較抽出例１、２に比べて高いことを確認した。
【００４０】
＜細胞賦活作用（細胞増殖）の比較試験＞
前記の抽出例１または抽出例２の分裂酵母抽出エキスおよび市販の出芽酵母抽出エキス比較抽出例１、２を試料として、細胞賦活作用（細胞増殖）の比較試験を行なった。
【００４１】
賦活作用を調べる対象の細胞は、正常ヒト皮膚線維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢを５％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地中で培養したものを使用した。なおこの培養は、全て３７℃、５％ＣＯ２の条件下で行なった。詳細に説明すると、まず、０．５×１０４個の正常ヒト線維芽細胞を５％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を用いて９６穴マイクロプレートに播種し、２４時間培養した。この培養液を試験試料を加えた０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地に交換し、９日間培養した。培養液を５０μｇ／ｍｌのＮＲ（ニュートラルレッド）を含む０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地に交換して２時間培養し、この培養液を捨てた後１％ＣａＣｌ２、１％ホルマリン水溶液でプレートを一度洗浄した。ここに１％酢酸、５０％エタノール水溶液を添加して、細胞の取り込んだＮＲを抽出し、この５７０ｎｍにおける吸収波長をマイクロプレートリーダーで測定し、この結果を表２に示した。
【００４２】
【表２】
2005001995.tif 000003
【００４３】
表２の結果からも明らかなように、分裂酵母抽出エキスには、細胞増殖を促進する作用、すなわち細胞賦活作用が認められ、これにより皮膚の角化細胞、線維芽細胞の増殖を促し、皮膚の状態を改善する効果が期待できる。また、比較抽出例１、２の出芽酵母エキスに比べ、その効果が高いことが確認された。
【００４４】
＜化粧水の製造と官能評価＞
表３に示す配合割合で、分裂酵母抽出エキス（抽出例１）を配合した実施例１の化粧水、比較例１、２として、比較抽出例１、２を配合した化粧水をそれぞれ製造した。なお、比較例３は、酵母抽出エキスを非含有のブランク品であり、各実施例および比較例には適量の防腐剤およびｐＨ調整剤を配合した。
これらをパネラー（成人男女各１０人）の皮膚（顔面部）に毎日朝晩２回、２ヶ月間使用させ、２ヶ月後に官能結果を調査した。調査項目は表４に示した５項目とし、それぞれ５段階で評価し、その平均値を表３中に示した。
【００４５】
【表３】
2005001995.tif 000004
【００４６】
【表４】
2005001995.tif 000005
【００４７】
＜化粧水を塗布した皮膚の美白作用確認試験＞
表３に示した組成の実施例１の分裂酵母抽出エキス、比較例１、２、３を使用した化粧水を用いて、美白効果試験（皮膚メラニン量測定試験）を行なった。すなわち、パネラー（成人男女各１０人）の皮膚（顔面部）に毎日朝晩２回、３ヶ月間塗布し、ＣＫ社製の美白効果試験機（ＭＥＸＡＭＥＴＥＲ  ＭＸ１８）によりメラニン量を測定し、その結果を図１に示した。
【００４８】
図１の結果からも明らかなように、実施例１の分裂酵母から得られた抽出物を配合した化粧水は、７０日目を過ぎてから３ヶ月目にかけて、明かに従来品より優れたメラニン量の減少効果を示した。
【００４９】
＜化粧水を塗布した皮膚の角質水分量の変化＞
表３に示した組成の実施例１の分裂酵母抽出エキス、比較例１、２、３を使用した化粧水を塗布した皮膚の角質水分量の経時変化（塗布後５４０分まで）をＣＫ社製の水分量測定試験機（ＳＫＩＣＯＳ３０１）により測定し、その結果を図２に示した。
【００５０】
図２の結果からも明らかなように、実施例１の分裂酵母から得られた抽出物を配合した化粧水は、塗布後１２０分経過後から明かに従来品より優れた角質水分保持量を示した。
【００５１】
【発明の効果】
この発明の分裂酵母エキスを用いた化粧料は、以上説明したように、シゾサッカロミセス属酵母の水性溶媒抽出物を有効成分として含有する化粧料としたので、優れたメラニン生成抑制作用、すなわち美白作用を有し、また顕著な細胞賦活作用を奏する。このような効果は、従来の出芽酵母やその抽出物を含有する化粧料の効果に比べて有利なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】化粧水を塗布した皮膚メラニン量の経時変化を示す図表
【図２】化粧水を塗布した皮膚の角質水分量の経時変化を示す図表
【図１】
2005001995.tif 000006
【図２】
2005001995.tif 000007