(57)【要約】【課題】  ベンズイミダゾール系薬剤の併用薬剤を提供する。【解決手段】  ベンズイミダゾール系薬剤と、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬およびインターフェロンからなる群から選ばれる1または2種以上の薬剤とを組み合わせてなる医薬組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベンズイミダゾール系薬剤と、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬およびインターフェロンからなる群から選ばれる1または2種以上の薬剤とを組み合わせてなる医薬組成物。
【請求項２】
ベンズイミダゾール系薬剤が、下記一般式(1)で表されるベンズイミダゾール化合物、その3H互変異性体、光学活性対掌体およびこれらの医薬的に許容される酸付加塩からなる群から選ばれる少なくとも1種である請求項1に記載の医薬組成物。
【化１】
2005281283.tif 000007
(式中、Rは炭素数1〜5のアルキル基、ヒドロキシフェニル基またはメトキシフェニル基を示す。)
【請求項３】
ベンズイミダゾール化合物が、一般式(1)中、Rがメチル基、2-ペンチル基、4-メトキシフェニル基または4-ヒドロキシフェニル基である請求項2に記載の医薬組成物。
【請求項４】
糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎、移植に伴う免疫拒絶の予防・治療に用いられる請求項1から請求項3のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
請求項1から請求項3のいずれかに記載の医薬組成物の、糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎、移植に伴う免疫拒絶の予防・治療への使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ベンズイミダゾール系薬剤の併用医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記一般式(1)で表わされる5-(5-メチル-3-オキソ-4,5-ジヒドロ-2H-6-ピリダジニル)-ベンズイミダゾールの2位置換体(ベンズイミダゾール化合物)、その3H-互変異性体、光学活性対掌体およびそれらの医薬的に許容される酸付加塩は、薬理学的に活性を有し、特に、2-(4-メトキシフェニル)-5-(5-メチル-3-オキソ-4,5-ジヒドロ-2H-6-ピリダジニル)-ベンズイミダゾール(以下、「ピモベンダン」と称する)は、日本において、慢性心不全または狭心症の治療薬として用いられている。また、該化合物は、慢性関節リウマチを始めとするサイトカイン関連の疾患の治療に用いる免疫調節用医薬組成物としても知られており、悪性関節リウマチ患者に対する経口投与で、CRP値(反応性蛋白値または炎症蛋白値)の低下と慢性関節リウマチの炎症症状の改善が観察されることが開示されている(特許文献1)。
【０００３】
【化１】
2005281283.tif 000002
【０００４】
(式中、Rは炭素数1〜5のアルキル基、ヒドロキシフェニル基またはメトキシフェニル基を示す。)
ピモベンダンの薬理学的作用については、核内転写因子であるNF-κBの阻害作用が報告されている(非特許文献1)。NF-κBは、免疫グロブリンκ鎖遺伝子のエンハンサーに結合して、遺伝子の転写を活性化するB細胞特異的核内因子として発見され、細胞の分化や増殖、サイトカインの産生などの生体反応に広く重要な役割を果たしている。NF-κBは、また炎症反応にも関与することから、その活性化を抑制すれば炎症を抑制できることも期待される(非特許文献2)。該NF-κBの機能を修飾する物質、例えばその活性化を抑制する作用を有する物質は、さらなる医薬への応用が期待されるが、現在、そのような具体的な物質および該物質の実用化については、未だ研究途上にある。
【０００５】
一方、腎疾患および肝疾患の治療のための医薬は多く開発されているものの、未だ十分に満足できる薬効を奏し得る安全な医薬の開発はなされておらず、かかる治療薬の開発が望まれている。
【特許文献１】欧州特許出願公開第1123703号明細書
【非特許文献１】Matsumori, A., et al., Life Science, 2000年,第67巻,pp.2513-2519
【非特許文献２】Ghosh, S. and Karin, M., Cell, 2002年,第109巻,Suppl:S81-96
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、新しい医薬、特に腎疾患および肝疾患に有効な医薬を提供することにある。より詳しくは、現在尚十分な薬物療法が確立されていない、例えば糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎、移植に伴う免疫拒絶等の予防および治療に有用な医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記目的を達成するために研究を行った結果、従来より炎症に関与するNFκ-Bの阻害作用を有することが知られているベンズイミダゾール系薬剤と、ある種の薬剤との組み合わせが、上記目的に合致する改善された薬理作用を奏する新しい医薬となるという事実を発見した。
【０００８】
本発明は、この知見を基礎として更に鋭意研究を重ねた結果完成されたものである。本発明の要旨は、下記項1〜5にある。
【０００９】
項1. ベンズイミダゾール系薬剤と、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬およびインターフェロンからなる群から選ばれる1または2種以上の薬剤とを組み合わせてなる医薬組成物。
【００１０】
項2. ベンズイミダゾール系薬剤が、下記一般式(1)で表されるベンズイミダゾール化合物、その3H互変異性体、光学活性対掌体およびこれらの医薬的に許容される酸付加塩からなる群から選ばれる少なくとも1種である項1に記載の医薬組成物。
【００１１】
【化２】
2005281283.tif 000003
【００１２】
(式中、Rは炭素数1〜5のアルキル基、ヒドロキシフェニル基またはメトキシフェニル基を示す。)
項3.  ベンズイミダゾール化合物が、一般式(1)中、Rがメチル基、2-ペンチル基、4-メトキシフェニル基または4-ヒドロキシフェニル基である項2に記載の医薬組成物。
【００１３】
項4.  糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎、移植に伴う免疫拒絶の予防・治療に用いられる項1から項3のいずれかに記載の医薬組成物。
【００１４】
項5.  項1から項3のいずれかに記載の医薬組成物の、糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎、移植に伴う免疫拒絶の予防・治療への使用。
【発明の効果】
【００１５】
本発明医薬組成物は、特に、従来、十分な治療が確立していなかった糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎、移植に伴う免疫拒絶等の予防および治療に有用である。本発明によれば、かかる各種疾患の予防および治療技術が確立される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明医薬組成物につき詳述する。本発明医薬組成物は、ベンズイミダゾール系薬剤と、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬およびインターフェロンからなる群から選ばれる1または2種以上の薬剤を組み合わせてなることを特徴としている。
【００１７】
(ベンズイミダゾール系薬剤)
本発明において、ベンズイミダゾール系薬剤としては、従来より炎症に関与するNFκ-Bの阻害作用を有することが知られている各種の化合物をいずれも利用することができる。代表的化合物としては、上記一般式(I)で表わされるベンズイミダゾール化合物、該化合物の3H互変異性体、光学活性対掌体およびそれらの医薬的に許容される酸付加塩を挙げることができる。
【００１８】
上記一般式(1)で表されるベンズイミダゾール化合物の内では、特にRが炭素数1〜5のアルキル基、ヒドロキシフェニル基またはメトキシフェニル基である化合物が好ましく、その内でも特にRがメチル基、2-ペンチル基、4-メトキシフェニル基または4-ヒドロキシフェニル基である化合物は好ましい。最も好ましい化合物は、Rが4-メトキシフェニル基である化合物、即ちピモベンダンを挙げることができる。
【００１９】
また、好ましいベンズイミダゾール系薬剤には、更に、上記化合物の3H互変異性体、光学活性対掌体および医薬的に許容される酸付加塩も含まれる。
【００２０】
即ち、上記化合物は、前記一般式(1)に示されるとおり、その3位カルボニル基のα位に水素をもつカルボニル化合物（ケト形）であるため、この水素が酸素上に移動した形のエノール形異性体との平衡状態にある。本発明はかかる互変異性体形態の化合物をもベンズイミダゾール系薬剤として利用することができる。また、該化合物は前記一般式(1)に示されるとおり不斉炭素原子を有しており、立体配置が互いに一対の対掌体の関係にある光学異性体の形態をも取り得る。本発明ベンズイミダゾール系薬剤は、かかる光学活性対掌体であってもよい。更に、上記化合物は、その有するアミノ基を利用して、酸付加塩の形態を取ることができる。本発明ベンズイミダゾール系薬剤は、医薬的に許容される酸付加塩であってもよい。該酸付加塩の代表例としては、例えば塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、グルタル酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、フタル酸塩などの有機カルボン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、カンファースルホン酸塩等の有機スルホン酸塩などを挙げることができる。これらの内では、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などが好ましい。これらの酸付加塩は常法に従って製造することができる。
【００２１】
(併用薬剤)
本発明において、上記ベンズイミダゾール系薬剤と併用される薬剤は、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬およびインターフェロンからなる群から選択される。
【００２２】
ここで、アンジオテンシン変換酵素阻害薬につき詳述すれば次の通りである。即ち、生体の血圧上昇機構の一つであるレニン-アンジオテンシン系では、アンジオテンシン変換酵素(以下、ACEと略す)が中心的な役割を果たしている。即ち、ACEは血圧の上昇に不活性なアンジオテンシンIを血管の筋肉を収縮させる作用のあるアンジオテンシンIIに変換する作用を奏する。該アンジオテンシンIは、10個のアミノ酸より成るペプチドで、肝臓で生成されるレニン基質に腎傍糸球体より分泌されるレニンが作用して生成される。これにACEが働くと、末端にあるヒスチジンとロイシンが外れて、アンジオテンシンIIに変換される。また、ACEは血管の筋肉を拡張させる作用があるブラジキニンを分解・不活性化する作用をも有している。ACEは、これらの作用により、血圧を上昇させる方向に誘導する。一方、ACEを阻害すれば、昇圧性ペプチドであるアンジオテンシンIIの生成が抑制され、降圧性ペプチドであるブラジキニンの分解も抑制されて、血圧は降下する方向に誘導される。
【００２３】
本発明において該ACE阻害薬としては、従来より、血圧の上昇(昇圧)を抑制する作用を奏する降圧薬として、また該昇圧を阻害する治療薬として知られている各種の薬剤をいずれも利用することかできる。その代表例としては、例えば、カプトリル、エラナプリル、イミダプリル、テモカプリル、ペリンドプリルエルブミン、リシノプリル、アラセプリル、シラザプリルなどが挙げられる。本発明では、これらのACE阻害薬は、その一種を単独で用いることもでき、また2種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００２４】
アンジオテンシンII受容体拮抗薬につき詳述すれば次の通りである。即ち、アンジオテンシンII受容体拮抗薬とは、アンジオテンシンIIの作用を、アンジオテンシンII受容体で拮抗して抑制する薬剤を言う。該アンジオテンシンII拮抗薬は、前記ACE阻害薬と同様にアンジオテンシンIIの作用を阻害することから、降圧薬として、高血圧症、心臓疾患(例えば、心不全、心筋梗塞など)、脳卒中、腎炎、動脈硬化などの循環器系疾患の予防・治療に利用されてきている。本発明では、公知のアンジオテンシンII受容体拮抗薬をいずれも利用することができる。その具体例としては、例えばカンデサルタン・シレキセチル、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンなどが挙げられる。これらは、その一種を単独で用いることもでき、また2種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００２５】
更に、インターフェロン(以下、「IFN」と略す)は、抗ウイルス性タンパク質であって、抗ウイルス作用のほか、細胞増殖作用やサイトカインの誘導・抑制作用等を有することが知られている。該IFNには、α型、β型、γ型、あるいはコンセンサス型、ハイブリット型の各種が知られている。本発明で用い得るIFNは、これらのいずれでもよい。またその由来も天然型、遺伝子組換え型、化学合成型の各種があり、本発明では、それらのいずれをも利用することができる。
【００２６】
（本発明医薬組成物）
本発明医薬組成物は、上記ベンズイミダゾール系薬剤と、ACE阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬およびIFNからなる群から選ばれる1または2種以上の薬剤を組み合わせることが重要である。その組み合わせは、特に限定されず、(1)ベンズイミダゾール系薬剤とACE阻害薬との組み合わせ、(2)ベンズイミダゾール系薬剤とアンジオテンシンII受容体拮抗薬との組み合わせ、(3)ベンズイミダゾール系薬剤とIFNとの組み合わせ、(4)ベンズイミダゾール系薬剤とACE阻害薬およびアンジオテンシンII受容体拮抗薬との組み合わせ、(5)ベンズイミダゾール系薬剤とACE阻害薬およびIFNとの組み合わせ、(6)ベンズイミダゾール系薬剤とアンジオテンシンII受容体拮抗薬およびIFNとの組み合わせ、並びに(7)ベンズイミダゾール系薬剤とACE阻害薬、アンジオテンシンII受容体拮抗薬およびIFNとの組み合わせが含まれる。
【００２７】
より詳しくは上記(1)の組み合わせには、ベンズイミダゾール系薬剤、特にピモベンダンと、カプトリル、エラナプリル、イミダプリル、テモカプリル、ペリンドプリルエルブミン、リシノプリル、アラセプリルおよびシラザプリルからなる群から選ばれる少なくとも1種のACE阻害薬との組み合わせが包含される。
【００２８】
上記(2)の組み合わせには、ベンズイミダゾール系薬剤、特にピモベンダンと、カンデサルタン・シレキセチル、ロサルタン、バルサルタンおよびテルミサルタンからなる群から選ばれる少なくとも1種の組み合わせが包含される。
【００２９】
また、上記(3)の組み合わせには、ベンズイミダゾール系薬剤、特にピモベンダンと、IFN-α、IFN-βおよびIFN-γからなる群から選ばれる少なくとも1種との組み合わせが包含される。
【００３０】
これらの組み合わせは、それぞれ、糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎、移植に伴う免疫拒絶の予防および治療に有用である。これらの内で、腎疾患、例えば糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎に対しては、前記(1)、(2)、(4)および(7)の組み合わせが有効である。肝疾患、例えばB型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎等に対しては、前記(3)、(5)、(6)および(7)の組み合わせが有効である。移植に伴う免疫拒絶の予防および治療の場合、腎移植の場合は、前記(1)、(2)、(4)および(7)の組み合わせが有効であり、肝移植の場合は、前記(3)、(5)、(6)および(7)の組み合わせが有効である。
【００３１】
本発明医薬組成物において、組み合わせ薬剤の併用量は、前記いずれの組み合わせの場合も、各組み合わせ薬剤のそれぞれの投与量が、以下のものとなるように決定することができる。即ち、ベンズイミダゾール系薬剤は、その有するNF-κB抑制作用に基づく抗炎症作用が奏される有効量とすることができる。より具体的には、該有効量は、成人1日当たりの投与量として約0.1〜5.0 mg、好ましくは1.0〜2.5mg程度とすることができる。これは1日1回投与に限らず、1日2回以上の分割投与によることもできる。特に、ベンズイミダゾール系薬剤は、1日約1.25mgずつを2回に分けて投与するのが望ましい。勿論、この投与量は、治療すべき患者の症状や体重、投与すべき化合物の種類および投与ルート等を含む状況を考慮して、適宜決定することができる。それ故、上述の投与範囲は単に目安であって投与量範囲を限定するものではない。尚、ベンズイミダゾール系薬剤、特にピモベンダンの急性毒性は、文献等から公知である。
【００３２】
ACE阻害薬およびアンジオテンシンII受容体拮抗薬は、それぞれの有するACE阻害作用およびアンジオテンシンII受容体拮抗作用が奏される有効量とすることができる。この有効量は、これら各薬剤の種類によって当然異なっているが、通常、いずれの薬剤の場合も、成人1日当たりの投与量が1μg〜100mgの範囲から適宜決定することができる。勿論、この投与量も上記ベンズイミダゾール系薬剤と同様に、治療すべき患者の症状や体重、薬剤の投与ルート等を含む状況を考慮して、適宜増減することができる。
【００３３】
また、IFNは、一般には、成人1日当たりの投与量が100万単位〜1000万単位の範囲から適宜決定することができる。勿論、この投与量も、治療すべき患者の症状や体重、薬剤の投与ルート等を含む状況を考慮して、適宜増減することができる。
【００３４】
本発明医薬組成物は、上記各薬剤の組み合わせて得られる医薬が、各薬剤を一剤に含む単一投与製剤形態に調製されてもよく、また各薬剤をそれぞれ別個に含む複数の投与製剤形態に調製されてもよい。本発明医薬の投与単位形態は、通常この種医薬製剤がとり得る各種の形態のいずれでもよい。該形態としては、具体的には、素錠剤、被覆錠剤等の錠剤形態、顆粒剤、カプセル剤、散剤、懸濁液、ドロップ剤、アンプル剤、シロップ剤、坐剤等の形態を挙げることができる。特に、ベンズイミダゾール系薬剤は、上記錠剤形態等の経口投与用固形剤形態に調製されるのが好ましく、ACE阻害薬およびアンジオテンシンII受容体拮抗薬もまた、同様に経口投与用固形剤形態に調製されるのが有利である。IFNは、一般には注射剤形態に調製される。
【００３５】
各形態への調製は、一般的によく知られている製剤学的に許容される担体(賦形剤乃至希釈剤)およびその他の各種添加剤(結合剤、充填剤、増量剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤など)を利用して、常法に従って実施することができる。
【００３６】
各形態の調製に利用される担体としては、代表的には、例えば、コーンスターチ、ラクトース、グルコース、微晶質セルロース、マグネシウムステアレート、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、水／エタノール、水／グリセロール、水／ソルビトール、水／ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、セチルステアリルアルコール、カルボキシメチルセルロース、硬化油等の脂肪物質を挙げることができる。
【００３７】
上記錠剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤、ドロップ剤、シロップ剤などは、経口投与され、座剤は直腸投与され、懸濁剤、アンプル剤などは、注射または吸入などの局所投与もしくは非経口投与される。
【００３８】
尚、複数の投与単位形態に調製された本発明医薬は、各形態を同時に投与するのが普通であるが、特に同時である必要はなく、各形態の薬剤の投与時間の間隔が約1〜3時間程度離れていてもかまわない。
【００３９】
（本発明医薬の使用および治療方法）
本発明は、前述した本発明医薬組成物と共に、該医薬組成物の、糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎および移植に伴う免疫拒絶の予防および治療剤としての使用を提供する。
【００４０】
また、本発明は、前述した本発明医薬組成物の有効量を、処置を要求される患者に投与することを特徴とする、糸球体腎炎、IgA腎症、ネフローゼ、糸球体硬化症、膜性腎症、糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病腎症、ウイルス関連腎炎、ANCA関連腎炎、B型ウイルス性肝炎、C型ウイルス性肝炎および移植に伴う免疫拒絶の予防および治療方法をも提供する。
【００４１】
以下、本発明を更に具体的に説明するために実施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００４２】
ピモベンダン1.25mg含有する錠剤の調製
活性物質としてのピモベンダン1.25mg、ラクトース66.75mgおよびコーンスターチ70.00mgを秤量、混合し、該混合物をポリビニルピロリドン8.00mgを含むエタノール溶液を用いて粒状に造粒し、乾燥後、篩分し、次いで得られた顆粒をエアロシル3.00mgおよびマグネシウムステアレート1.00mgと混合し、混合物を圧縮して錠剤化した(全量150.00mg)。
【実施例２】
【００４３】
腎障害に対するピモベンダンとACE阻害薬との併用
Wisterラット(6週齢、雄、平均190g)を、対照群(活性物質を含まない賦形剤を投与する群)と、活性物質としてのピモベンダンを投与する群(比較群)、およびピモベンダンの投与とマレイン酸エナラプリルの投与とを同時に行う群(本発明群)の3群に分けた(各群3匹)。
【００４４】
この試験において、ピモベンダンは、その10mg/kg/dayを、生理食塩水に懸濁させた液形態で、1日1回ゾンデを用いて胃内に直接投与し、マレイン酸エナラプリルは、その0.2mg/kg/dayを、生理食塩水に懸濁させた液形態で、1日1回同様にゾンテで胃内に直接投与した。
【００４５】
腎障害を誘発するために、Thy1.1抗体を0.72mL/headで各試験ラットに尾静脈から投与した。投与初日をday0とし、day0における上記抗体の静脈内投与3時間前より、投薬を開始し、day7まで投薬を継続した。
【００４６】
蛋白尿は、投薬前およびday7に測定した。また腎臓の組織像は、day7の投薬終了後に調べ、1切片について10個の腎糸球体でメサギウム細胞の増殖と細胞外マトリックス増加の程度(腎の線維化程度)を平均化して比較した。メサギウム細胞の増殖の判定と細胞外マトリックス増加の程度の判定は、いずれも4段階評価とした(+1：対照群に対し0-25％増加、+2：同25-50％増加、+3：同50-75％増加、+4：同75-100％増加)。測定結果はラット3匹の平均値で示した。
【００４７】
得られた結果を表1に示す。
【００４８】
【表１】
2005281283.tif 000004
【００４９】
表1に示される結果から明らかな通り、比較群(ピモベンダン単独投与群)で腎障害改善傾向が認められ、この腎障害改善効果は、本発明群(ピモベンダン投与とマレイン酸エナラプリル投与との併用群)では、より一層顕著となることが判った。
【実施例３】
【００５０】
腎障害に対するピモベンダンとアンジオテンシン受容体拮抗薬との併用
Wisterラット(6週齢、雄、平均190g)を、対照群(活性物質を含まない賦形剤を投与する群)と、活性物質としてのピモベンダンを投与する群(比較群)、およびピモベンダンの投与とカンデサルタン・シレキセチルの投与とを同時に行う群(本発明群)の3群に分けた(各群3匹)。
【００５１】
この試験において、ピモベンダンは、その10mg/kg/dayを、生理食塩水に懸濁させた液形態で、1日1回ゾンデを用いて胃内に直接投与し、カンデサルタン・シレキセチルは、その5.0mg/kg/dayを、生理食塩水に懸濁させた液形態で、1日1回同様にゾンデで胃内に直接投与した。
【００５２】
腎障害を誘発するために、Thy1.1抗体を0.72mL/headで各試験ラットに尾静脈から投与した。投与初日をday0とし、day0における上記抗体の静脈内投与3時間前より、投薬を開始し、day7まで投薬を継続した。
【００５３】
蛋白尿は、投薬前およびday7に測定した。また腎臓の組織像は、day7の投薬終了後に調べ、1切片について10個の腎糸球体でメサギウム細胞の増殖と細胞外マトリックス増加の程度(腎の線維化程度)を実施例2に記載の方法と同様にして評価した。
【００５４】
得られた結果を表2に示す。
【００５５】
【表２】
2005281283.tif 000005
【００５６】
表2に示される結果から明らかな通り、比較群で腎障害の改善傾向が認められ、この効果は本発明群においてより一層顕著となることが判った。
【実施例４】
【００５７】
肝障害に対するピモベンダンとIFN-βとの併用
DBA/2マウス(4週齢、雄、平均 20g)を対照群(溶媒としてのメチルセルロールを投与する群)、比較群1(活性物質としてのピモベンダンを投与する群)、比較群2(マウス・インターフェロンβを投与する群)および本発明群(ピモベンダンの投与とマウス・インターフェロンβの投与とを同時に行う群)の4群に分けた(各群5匹)。
【００５８】
この試験において、ピモベンダンは、その1mg/kg/dayを、生理食塩水に懸濁させた液形態で、1日1回ゾンデを用いて胃内に直接投与した。また、マウス・インターフェロンβは、その106U/kg/dayを、生理食塩水に溶解させた液形態で、1日1回腹腔内に注射投与した。
【００５９】
マウスは脳心筋炎ウイルス10pfuを腹腔内に接種し、その接種日をday0とし、day0における上記ウイルスの接種3時間前より、投薬を開始し、day7まで投薬を継続した。
【００６０】
ウイルス接種7日後の肝臓および心臓の病理組織学的検討を行った。即ち、各臓器の細胞壊死、細胞浸潤について、その頻度を+1〜+4に分類し(Iwasaki, A., et al., J. Am. Col.l Cardiol., 1999; 33: 1400-1407)、各群マウスの平均値を比較検討した。
【００６１】
結果を表3に示す。
【００６２】
【表３】
2005281283.tif 000006
【００６３】
表3に示される結果から明らかなとおり、ピモベンダン単独投与の比較群1およびインターフェロンβ単独投与の比較群2において、若干の肝障害と心筋障害の改善が認められるのと比較して、これらを組み合わせ投与した本発明群では、非常に顕著な肝障害と心筋障害の改善効果が発揮されることが判った。