(57)【要約】【課題】強力なＡＣＥ阻害作用を有する天然由来のペプチドを提供する。【解決手段】以下の(1)〜(2)のいずれかのアミノ酸配列を有するアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチド：(1) Tyr-Tyr-Ser-Pro；(2) Trp-Val-Leu【選択図】図１
2005281145.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の(1)〜(2)のいずれかのアミノ酸配列を有するアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチド：
(1) Tyr-Tyr-Ser-Pro；
(2) Trp-Val-Leu
【請求項２】
Tyr-Tyr-Ser-Pro及びTrp-Val-Leuからなる群から選ばれる少なくとも１種のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを含む食品。
【請求項３】
Tyr-Tyr-Ser-Pro及びTrp-Val-Leuからなる群から選ばれる少なくとも１種のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを含むアンジオテンシンＩ変換酵素阻害剤。
【請求項４】
ローヤルゼリー由来の蛋白質をAspergillus oryzae由来のプロテアーゼで加水分解することを特徴とする、以下の(1)〜(2)のいずれかのアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを含む、味のよい蛋白分解物の製造方法：
(1) Tyr-Tyr-Ser-Pro；
(2) Trp-Val-Leu
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンジオテンシンＩ変換酵素(Angiotensin I Converting Enzyme; 以下「ＡＣＥ」と略すことがある)阻害作用を有するペプチドに関し、詳しくはローヤルゼリーに含まれる蛋白質を加水分解して得られるＡＣＥ阻害ペプチドに関する。
【０００２】
さらに、本発明は、ローヤルゼリー由来の蛋白分解物及びその製造方法並びに、該蛋白分解物を含む食品、経口摂取用製剤に関する。本発明の蛋白分解物は、アンジオテンシンＩ変換酵素阻害作用、高血圧の予防ないし治療に有効である。
【背景技術】
【０００３】
高血圧症は、自覚症状が無く、放置すると心臓病、脳血管障害といった重大な疾患を二次的に引き起こす疾病であり、高血圧症の治療および予防が大きな課題となっている。高血圧症には昇圧系であるレニン−アンジオテンシン系を司るアンジオテンシンＩ変換酵素（Angiotensin I Converting Enzyme 、以下ＡＣＥという）が深く関与することが知られており、ＡＣＥを阻害することにより高血圧を予防ないし治療することが可能である。
【０００４】
一方、高血圧の予防ないし治療は長期間摂取することが必要となるため、副作用が極めて低いことも重要な要因となり、高血圧を予防する食品の開発が求められている。
【０００５】
ローヤルゼリーは、ミツバチが女王蜂を育てるために頭部の下咽頭腺と大あご腺から分泌した乳白色のゼリー状の物質で、生ローヤルゼリー中には蛋白質が約10%含まれる。この蛋白質は、アミノ酸バランスがよく、非常に良質な蛋白素材といえる。また、人の食品としての摂取暦は長く、滋養、強壮、体質改善等の広範な作用があるといわれている。その蛋白質の酵素分解物について研究され、ＡＣＥ阻害活性を有するローヤルゼリー由来のペプチドも知られている（特許文献１〜３、非特許文献１〜６）。
【０００６】
しかしながら、これらのペプチドはローヤルゼリー素材の加水分解により得られる量とＡＣＥ阻害活性の強さ、即効性、副作用、作用の持続時間、摂取する形状、保存安定性のバランスの観点から、工業化に向けて改善の余地があった。
【０００７】
さらに、ＡＣＥ阻害ペプチドは苦みを有し、食品としての応用に難点があった。
【特許文献１】特許第３０６８６５６号
【特許文献２】特開２００２−１４５８９９
【特許文献３】特開２００２−３３８５９４
【非特許文献１】Journal of Nutritional Biochemistry 13 (2002) pp.80-86
【非特許文献２】診断と新薬、第３９巻、第２号、２００２年、８５−９０頁
【非特許文献３】日本食品科学工学会誌、第５０巻、第１０号 457-462頁 (2003).
【非特許文献４】日本食品科学工学会誌、第５０巻、第６号 286-288頁 (2003).
【非特許文献５】日本食品科学工学会誌、第５０巻、第７号 310-315頁 (2003)
【非特許文献６】日本食品科学工学会誌、第５１巻、第１号 34-37頁 (2004).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、強力なＡＣＥ作用を有する天然由来の物質を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題に鑑み検討を重ねた結果、ローヤルゼリーをプロテアーゼ処理することにより、強力なＡＣＥ阻害作用を有するペプチドが得られることを見出した。
【００１０】
即ち、本発明は以下の発明に関する。
１．  以下の(1)〜(2)のいずれかのアミノ酸配列を有するアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチド：
(1) Tyr-Tyr-Ser-Pro；
(2) Trp-Val-Leu
２．  Tyr-Tyr-Ser-Pro及びTrp-Val-Leuからなる群から選ばれる少なくとも１種のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを含む食品。
３．  Tyr-Tyr-Ser-Pro及びTrp-Val-Leuからなる群から選ばれる少なくとも１種のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを含むアンジオテンシンＩ変換酵素阻害剤。
４．  ローヤルゼリー由来の蛋白質をAspergillus oryzae由来のプロテアーゼで加水分解することを特徴とする、以下の(1)〜(2)のいずれかのアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを含む、味のよい蛋白分解物の製造方法：
(1) Tyr-Tyr-Ser-Pro；
(2) Trp-Val-Leu
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００１１】
本発明のＡＣＥ阻害ペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する。
・Tyr-Tyr-Ser-Pro（以下、「ペプチド１」と略す）；
・Trp-Val-Leu（以下、「ペプチド２」と略す）
ペプチド１、ペプチド２は新規なペプチドであり、そのＡＣＥ阻害作用が本発明により初めて明らかにされた。
【００１２】
本発明のＡＣＥ阻害ペプチドは、遺伝子組換えや化学合成、発酵などにより得ることもでき、好ましくはローヤルゼリー自体（生ローヤルゼリー、乾燥ローヤルゼリーなど）またはローヤルゼリー由来の蛋白質画分をプロテアーゼ処理して得ることができる。プロテアーゼとしては、微生物、哺乳動物を含む動物、植物、酵母、真菌などの任意の生物由来のペプチド結合を加水分解し得る酵素が例示され、特にAspergillus oryzae, Aspergillus niger, Bacillus subtillis, Streptomyces griseus, Bacillus licheniformisなどが挙げられ、プロテアーゼの商品名としては、オリエンターゼ20A、オリエンターゼONS（以上、エイチビィアイ）；タシナーゼN-11-100（協和エンザイム）、プロテアーゼA（天野エンザイム）、ビオプラーゼSP-4、デナチームAP（以上、ナガセケムテックス）、アクチナーゼ（科研ファルマ）、アルカラーゼ（ノボザイムズ）が好ましく例示できる。
【００１３】
例えば、ローヤルゼリー由来の蛋白質を１５〜６５℃、望ましくは３５℃〜５５℃程度の温度下に各種生物由来のプロテアーゼとともに、１〜４８時間程度処理することにより、本発明のいずれかのＡＣＥ阻害ペプチドを得ることができる。
【００１４】
ペプチド１または２を得られる限りにおいて、ローヤルゼリー以外の蛋白質原料をプロテアーゼで加水分解したものを使用することもできる。
【００１５】
本発明のペプチドは、ローヤルゼリーに由来する蛋白質の酵素分解物から分離・精製して使用してもよく、本発明のＡＣＥ阻害ペプチドとともに多数の他のペプチドを含む蛋白分解物組成物（必要に応じて塩類、糖類あるいは高分子蛋白質などを除去処理したもの）をＡＣＥ阻害ペプチドとして食品用途に使用してもよい。
【００１６】
例えば、ローヤルゼリーを配合したドリンク剤は、ローヤルゼリーに５０〜１００％ｖ／ｖ程度のアルコール、好ましくはエタノールを添加して沈殿する蛋白質を除去して製造されているが、この含水アルコールに不溶性のローヤルゼリー由来の蛋白質を酵素処理の原料蛋白質として用いることができる。化学合成法としては、ペプチドシンセサイザーにより合成することもでき、固相合成または液相合成により段階的にアミノ酸をペプチド結合を介して伸長して製造することもできる。
【００１７】
本発明の蛋白分解物はそれ自体食品として利用することができ、或いは単独で、もしくは適当な無毒性の経口摂取用担体、希釈剤または賦形剤とともに、タブレット（素錠、糖衣錠、発泡錠、フィルムコート錠、チュアブル錠など）、カプセル、トローチ、粉末、細粒剤、顆粒剤、液剤、懸濁液、乳濁液、ペースト、クリーム、注射剤（アミノ酸輸液、電解質輸液等の輸液に配合する場合を含む）、或いは腸溶性の錠剤、カプセル剤、顆粒剤などの徐放性製剤などの食品用もしくは医薬用の製剤にすることが可能である。前記製剤中のペプチド１，ペプチド２，ペプチド１と２の混合物、或いはペプチド１と２を含むローヤルゼリー由来の蛋白分解物の含有量は適宜選択が可能であるが一般に、
１０-6〜１００重量％の範囲である。
【００１８】
また、本発明に係るローヤルゼリー酵素分解物を添加・配合して調製しうる食品の具体的形態としては、例えば、飲料類（清涼飲料（コーヒー、ココア、ジュース、ミネラル飲料、茶飲料、緑茶、紅茶、烏龍茶等）、乳飲料、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、炭酸飲料、酒類（日本酒、洋酒、果実酒、はちみつ酒等）等）、スプレッド（カスタードクリーム、バタークリーム、ピーナツクリーム、チョコレートクリーム、チーズクリーム等）、ペースト（フルーツペースト、野菜ペースト、ゴマペースト、海藻ペースト等）、洋菓子（チョコレート、ドーナツ、パイ、シュークリーム、エクレア、マフィン、ワッフル、ガム、グミ、ゼリー、キャンデー、クッキー、クラッカー、ビスケット、スナック菓子、ケーキ、プリン等）、和菓子（飴、煎餅、かりんとう、あられ、団子、おはぎ、大福、豆もち、餅、餡、饅頭、カステラ、あんみつ、羊かん等）、氷菓（アイスクリーム、アイスキャンディ、シャーベット、かき氷等）、レトルト食品（カレー、牛丼、中華丼、雑炊、おかゆ、味噌汁、スープ、ミートソース、デミグラスソース、ミートボール、ハンバーグ、おでん種、赤飯、焼き鳥、茶碗蒸し等）、即席食品（即席ラーメン、即席うどん、即席そば、即席焼きそば、即席スパゲティ、即席ワンタン麺、即席しるこ、味噌汁の素、粉末スープの素、粉末ジュースの素、ホットケーキミックス等）、瓶詰・缶詰、ゼリー状食品（ゼリー、寒天、テリーヌ、ゼリー状飲料等）、調味料（食塩、天然塩、醤油、みりん、酢、砂糖、蜂蜜、味噌、ドレッシング、旨味調味料、複合調味料、ソース、マヨネーズ、ケチャップ、ふりかけ、天つゆ、麺つゆ、だしの素、中華スープの素、中華の素（麻婆豆腐の素、チンジャオロースの素等）、ブイヨン、焼肉のたれ、冷しゃぶのたれ、カレールー、シチューのルー等）、養蜂産品（はちみつ、ローヤルゼリー、プロポリス、花粉荷（花粉だんご）、蜂の子等）、乳製品（牛乳、チーズ、ヨーグルト、生クリーム等）、加工果実（ジャム、マーマレード、シロップ漬、干し果実等）、加工野菜（野菜ジャム等）、穀類加工食品（麺、パスタ、パン、ビーフン等）、漬物（たくあん、奈良漬、キムチ漬、福神漬、らっきょう漬、白菜漬、からし漬、しば漬、浅漬け、ピクルス等）、漬物の素（即席漬けのもと、キムチ漬のもと等）、魚肉製品（かまぼこ、ちくわ、はんぺん等）、畜肉製品（ハム、ソーセージ、サラミ、ベーコン等）、珍味（さきするめ、さきタラ、ウニの塩辛、イカの塩辛、タコの塩辛、カワハギのみりんぼし、フグのみりんぼし、イカの薫製、コノワタの塩漬等）、乾物（味付け海苔等）、惣菜類（あえもの、揚げ物、炒め物、焼き物、煮物、酢の物等）、冷凍食品（エビフライ、コロッケ、春巻き、とんかつ、シューマイ、餃子、ハンバーグ、たこ焼き、今川焼き（回転焼き）、肉まん、あんまん等）、油脂食品（サラダオイル、マーガリン、バター）等を挙げることができる。本発明のローヤルゼリー蛋白分解物を添加・配合して調製しうる食品としては、いわゆる健康食品、機能性食品、栄養補助食品、サプリメント、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、特別用途食品（病者用食品、病者用単一食品、病者用組合せ食品、乳児用食品、妊産婦用食品、高齢者用食品）、明らか食品としてもよく、その場合であれば、素錠、フィルムコート錠、糖衣錠、顆粒、粉末、タブレット、カプセル（ハードカプセルとソフトカプセルとのいずれも含む。）、チュアブルタイプ、シロップタイプ、ドリンクタイプ等とすることもできる。本発明に係るローヤルゼリー酵素分解物を添加・配合した食品の調製は、それ自体公知の方法で行うことができる。
【００１９】
本発明のＡＣＥ阻害ペプチドは、ローヤルゼリー、プロポリス、蜂蜜、花粉、蜂の子、等、或いは、賦形剤（水、アルコール、ビタミン、ミネラル、でんぷん質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、脂肪酸、着香料、着色料、甘味料、調味料、香辛料、乳化剤、防腐剤、保存料、酸化防止剤など）と併用もしくは混合して使用することも可能である。
【００２０】
本発明の蛋白分解物を含む特定保健用食品等の食品は、血圧が正常高値（収縮期血圧が１３０−１３９ｍｍＨｇ、拡張期血圧が８５−８９ｍｍＨｇ）及び軽症高血圧（収縮期血圧１４０−１５９ｍｍＨｇないし拡張期血圧９０−９９ｍｍＨｇ）の両方のヒトに対して高血圧を予防する効果を有する。
【００２１】
本発明の蛋白分解物は、軽症高血圧及び正常高値の被験者には、特に有効に降圧作用を示すが、正常ないし低血圧の被験者の血圧に対してはほとんど影響しないか、マイルドな作用しか示さないという理想的な特性を有している。
【００２２】
本発明の蛋白分解物は、経口摂取により口腔粘膜或いは胃腸管から直接吸収されるか、胃腸管で加水分解を受けて吸収された後で強力で持続的なＡＣＥ阻害作用を示し、高血圧症の予防、高血圧傾向の緩和または血圧調節を目的として、継続的に摂取することが可能であり、高血圧予防のための機能性食品、特に特定保健用食品等として有用である。この目的に本発明の蛋白分解物ないし製剤を用いる場合、一般的に体重６０ｋｇの成人では、食品として摂取する場合には、１日に当該ペプチドとして１０μｇ〜１００ｍｇ程度、該ペプチドを含むローヤルゼリー等の蛋白分解物として０．１〜１００ｇ程度を経口摂取することにより、高血圧の予防ないし血圧低下作用を有し得る。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、天然物に由来する極めて安全性の高いＡＣＥ阻害ペプチドを得ることができ、特に食品として広く応用することができる。
【００２４】
本発明のＡＣＥ阻害ペプチドを長期間摂取することにより、血圧を緩やかに且つ持続的に低下させることができ、正常血圧の被験者が高血圧さらには、高血圧に起因する各種の疾患になるのを予防することができる。
【００２５】
本発明のＡＣＥ阻害ペプチドは、高血圧症の危険因子（遺伝的、環境的素因など）を有する正常高値または軽症高血圧の人ないし高血圧患者が摂取するのに適している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
以下、本発明を実施例を用いてより詳細に説明する
分析方法
本実施例において、以下の条件下にＧＰＣ分析，ＨＰＬＣ分析及びアミノ酸分析を行った。
（１）ＧＰＣ分析条件
システムコントローラー：島津製作所製SCL-6B
ポンプ：島津製作所製 LC-6A
カラム：アマシャム ファルマシア バイオテク社製Superdex Peptide HR10/30 (φ1cm×30cm)
検出器：島津製作所製 紫外可視検出器 SPD-6AV
記録計：島津製作所製 CHROMATOPAC C-R6A
流速：0.3ml/min
測定波長:220nm
カラム温度：３５℃
溶出：30%(v/v) CH3CN/0.1%(v/v)トリフルオロ酢酸(TFA)
（２）ODS-Phe HPLC条件
システムコントローラー：日立製SCL-6B
カラム：ナカライテスク社製COSMOSIL 5Ph Waters (ODS-Phe)(φ0.46cm×25cm)
検出器：島津製作所製 紫外可視検出器 SPD-10AV
記録計：島津製作所製 CHROMATOPAC C-R6A
流速：0.3ml/min
測定波長:220nm
カラム温度：室温
溶出：1-40%(v/v) CH3CN(60min)
（３）ODS HPLC条件
システムコントローラー：日本分光製インテリジェントHPLC ポンプ
カラム：ナカライテスク社製COSMOSIL 5C18-ARII(ODS)(φ0.46cm×25cm)
検出器：島津製作所製 紫外可視検出器 SPD-6A
記録計：島津製作所製 CHROMATOPAC C-R5A
流速：0.3ml/min
測定波長:220nm
カラム温度：３５℃
溶出：5-35%(v/v) CH3CN/0.1%(v/v)TFA (60 min)
（４）アミノ酸分析及びアミノ酸配列決定（シーケンス）
(i)塩酸加水分解(PICO・TAGワークステーションを使用)
ペプチド溶液を２０μｌ加え、小型試験管を反応バイアルに入れ、真空乾燥する。小型試験管に入らないように6M定沸点用塩酸をバイアル底部に入れ、減圧下でバイアルを密閉する。窒素ガスによるパージを行った後、１５０℃で１．５時間加水分解を行う。
(ii)AccQ・Flour誘導体化
加水分解後、小型試験管に超純水20μｌを添加し、真空乾燥させる。次に、20mM塩酸20μｌ、反応用緩衝液60μｌ及びAccQ・Flour溶液20μｌを順次添加し、１０秒間攪拌した後、１分間静置する。55℃で10分間誘導体化を行い、その後アミノ酸分析装置に供する（アミノ酸の種類と量比の決定を行う）
(iii)アミノ酸分析装置に供する
システム：Shimadzu SCL-10A
カラム：Waters製AccQ・Tag(3.9mm×150mm)
(iv)アミノ酸配列決定は、自動エドマン分解により、Shimadzu PPSQ-21 Protein Sequenc      erを用いて決定した。
実施例１：ＡＣＥ阻害ペプチドの調製
以下の(a)〜(h)の条件に従い、本発明のＡＣＥ阻害ペプチドを得た。
(a)アルコール変性ローヤルゼリー蛋白質の凍結乾燥物５ｇに水５０ｍｌを加え、ホモジ  ナイザー(Polytron)で２分間ホモジナイズする。
(b)得られた溶液を２０重量％水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ７．０に調整後、オ  リエンターゼONS（エイチビィアイ）を２０mg加え、５０℃で２時間インキュベートす  る。
(c)２時間後、９８℃で１５分間加熱して酵素を失活させ、濾過、１２０００ｒｐｍで１  ５分間遠心分離後、濾液を凍結乾燥する（濾液５ｍｌ当たり凍結乾燥後の重量４１０mg  ）。
(d)得られた凍結乾燥物10 mgに70％（v/v）エタノールを500μｌ添加後３分間攪拌し  、可溶性画分を濃縮した後、凍結乾燥する。得られた凍結乾燥物は、工程(c)で得られ  た凍結乾燥物10mgを抽出した場合、凍結乾燥物の重量として7.74mgが得られた。
(e)凍結乾燥物21.11mgを1 mlの30%(v/v)CH3CN/0.1%(v/v)TFAに溶解し、該溶液５００  μｌを上記(1)のＧＰＣ分析に供し、54〜57分の溶出画分を分画する。ＧＰＣ分析の結  果を図１に示す。
(f)上記(e)で得られた画分を遠心乾固し、1%(v/v)CH3CN 500μｌに溶解後上記(2)の  ODS-Phe HPLCに供し、31.7分（ピーク１）及び46.4分（ピーク２）溶出ピークを分取す  る。ODS-Phe HPLCの結果を図２に示す。
(g)工程(f)のピーク１画分を遠心乾固し、5%(v/v)CH3CN/0.1%(v/v)TFA 300μｌに溶  解後、上記(3)のODS HPLCに供し、51.0分溶出ピーク（＝ペプチド１, 乾燥重量4.15μ  ｇ）を分取する。ODS HPLCの結果を図３に示す。
(h)工程(f)のピーク２画分を遠心乾固し、5%(v/v)CH3CN/0.1%(v/v)TFA 300μｌに溶  解後、上記(3)のODS HPLCに供し、81.8分溶出ピーク（＝ペプチド２, 乾燥重量0.437  μｇ）を分取する。ODS HPLCの結果を図４に示す。
【００２７】
なお、工程(g)の51.0分溶出ピーク（ペプチド１）及び工程(h)の81.8分溶出ピーク(ペプチド２)の配列は、自動エドマン分解により、Shimadzu PPSQ-21 Protein Sequencerを用いて決定した。
実施例２：ACE阻害活性の測定
実施例１で得られたペプチド１とペプチド２のACE阻害活性をLiebermann変法(山本節子、戸井田一郎、岩井和郎：日胸疾会誌、１８、２９７−３０２（１９８０）)に従って測定した。
【００２８】
Liebermann変法を具体的には以下の方法に従い実施した。
(1) ペプチドを脱イオン水に溶解させて調製したペプチドサンプル25μｌ及びほう酸緩衝液(0.2Mほう酸、0.05M四ほう酸ナトリウム、pH8.3)に溶解した25mU/ml ACE(シグマ社製)５０μｌをおだやかに混合し、３７℃で５分間プレインキュベートした後、12.5mMの擬似基質hippuryl-L-histidyl-L-leucine（HHL，ペプチド研究所製）を５０μｌ添加することによって反応を開始した。
(2) ３７℃で１時間インキュベートした後、0.5M塩酸125μlの添加によって反応を停止した。
(3) 酢酸エチル750μｌを加えることによって生成した馬尿酸を抽出し、228nmでの吸光度を測定した。
(4) 阻害率IC(%)を以下の式〔１〕に従って算出した。
【００２９】
IC(%)＝〔｛(C−B)−(S−SB) ｝／(C−B) 〕×１００      〔式１〕
「C」はコントロールを表し、該コントロールはペプチドサンプルを脱イオン水に変える以外は、上記操作と同様にして調製した。
「B」はブランクを表し、該ブランクはペプチドサンプルを脱イオン水に変え、且つACEを加える前に反応停止液である0.5M塩酸を加えて反応させる以外は、上記操作と同様にして調製した。
「S」は、サンプルを表し、該サンプルは、上記(1)〜(3)に従い調製した。
「SB」はサンプルブランクを表し、該サンプルブランクはペプチドサンプルにACEを加える前に反応停止液である0.5M塩酸を加えて反応させる以外は、上記操作と同様にして調製した。
IC50値の計算方法
(イ) ACEの活性を50%阻害したとき（即ち、IC(%)＝50のとき）の反応液中でのペプチド濃度をIC50値として定義した。
(ロ) IC50値の具体的な求め方は、各ペプチドそれぞれについて、希釈によって濃度を変えた幾つかの濃度のペプチドサンプルで〔式１〕よりIC(%)を得て、ｙ軸に阻害率IC(%)をとり、x軸にサンプルの希釈率の対数をとり、検量線を作成する。
(ハ) その検量線から、50%活性が阻害された希釈率の対数値を読み取り、50%阻害時の希釈率を計算する。
(ニ) もとのサンプル濃度からその希釈率で割って、IC50値を計算する。
【００３０】
結果を以下の表に示す。
【００３１】
【表１】
2005281145.tif 000003
【００３２】
比較例１
オリエンターゼONSに代えてアルカラーゼを使用した以外は、実施例１と同様にして、アルカラーゼ蛋白分解物を得た。
実施例３；蛋白分解物70%エタノール可溶性画分のインビボ試験
（１）血圧測定
13週齢の雄性高血圧自然発症ラット（以下、SHRと略す）７匹を用いて単回経口投与試験を実施した。
【００３３】
まず、11週齢のSHR(SHR/NCrj、日本チャールズリバー)７匹を個別ケージにて２週間予備飼育を行った。このとき、飼料・脱イオン水共に自由摂取とし、室温は２２℃、明暗は8:00-20:00の１２時間周期とした。SHRを被験物質群と対照群に分け、投与12時間前より絶食を行い、被験物質群には実施例１の工程(d)で得られた本発明の蛋白分解物70%エタノール可溶性画分1g/kgを脱イオン水1mlに溶かした溶液をカテーテルを用いて単回経口投与した。対照群は脱イオン水を単回経口投与した。血圧測定は投与前、及び投与２，６時間後に39.5℃で10分間の予備保温を行った後、tail-cuff法(Softron BP-98A Softron社製)により非観血的に行った。
（２）統計処理
統計処理は、３回の連続した血圧測定により得られた収縮期血圧(SBP)の平均値±標準誤差を用いた。投与前及び対照群に対する各時間の血圧値の変化についてStudent's t検定により有意差検定（有意水準：危険率５％未満）を行った。
（３）結果
本発明の蛋白分解物70%エタノール可溶性画分投与群で、本画分投与前と比較して投与後２、６時間後に有意な血圧低下が認められた。さらに、対照群と比較しても有意な血圧低下が認められた。結果を表２に示す。
【００３４】
【表２】
2005281145.tif 000004
【００３５】
*投与前と比較して危険率5%未満で有意差あり
#対照群と比較して危険率5%未満で有意差あり
実施例４：官能試験
本発明のペプチド１、ペプチド２及びこれらペプチドを含む蛋白分解物（実施例１の工程(c)で得られたもの）、さらに比較例１で得られたアルカラーゼ蛋白分解物を５０ｍｇ／ｍｌの水に溶かし、１０人のパネラーに対し以下の基準で評価した。なお、この官能検査は単盲検で実施した。結果を表３に示す。
【００３６】
【表３】
2005281145.tif 000005
【００３７】
評価基準
「◎」：苦みを全く感じなかった；
「○」：苦みをほとんど感じなかった；
「△」：苦みを感じた；
「×」：強い苦みを感じた。
【００３８】
以下に、本発明の蛋白分解物を含む処方例を示す。
処方例１（粒）
下記の原料を常法により混合し、打錠機器で成型して、８ｍｍ径の素錠を製造した。この素錠を常法により食品用にフィルムコートして、粒状の健康食品を完成した。
（１粒当たりの組成）
【００３９】
【表４】
2005281145.tif 000006
【００４０】
処方例２（ドリンク）
下記の材料を水に十分攪拌後、全量を１００ｍｌとした。
（１本分の組成）
【００４１】
【表５】
2005281145.tif 000007
【００４２】
処方例３（カプセル剤）
下記の材料を均一に混合し、６０メッシュのふるいを通した後、この粉末全量を２号ゼラチンカプセルに充填した。
（１カプセル剤の組成）
【００４３】
【表６】
2005281145.tif 000008
【００４４】
処方例４（顆粒）
下記の材料を常法に従い顆粒状にし、スティック状のアルミ分包した。
（１本分の組成）
【００４５】
【表７】
2005281145.tif 000009
【００４６】
処方例５（ソース）
下記の材料を十分に混合し、使用時に十分攪拌してサラダやフライに用いた。
（１人分の組成）
【００４７】
【表８】
2005281145.tif 000010
【００４８】
処方例６（飴）
下記の材料を用いて常法に従い飴を作製した。
【００４９】
【表９】
2005281145.tif 000011
【００５０】
処方例７（ゼリー）
下記の材料を用いて常法に従いゼリーを作製した。
【００５１】
【表１０】
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【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】GPC分析の結果を示す。図１中、縦軸は黒いバー（■）で表される阻害率(Inhibitory ratio)（％）及び波長２２０ｎｍでの吸光度（Absorbance(220nm)）を示し、横軸は溶出時間（分）（Elution time (min)）を示す。
【図２】ODS-Phe HPLCの結果を示す。図２中、縦軸は波長２２０ｎｍでの吸光度（Absorbance(220nm)）を示し、横軸は溶出時間（分）（Elution time (min)）を示す。
【図３】ODS HPLCの結果を示す。図３中、縦軸は波長２２０ｎｍでの吸光度（Absorbance(220nm)）を示し、横軸は溶出時間（分）（Elution time (min)）を示す。
【図４】ODS HPLCの結果を示す。図４中、縦軸は波長２２０ｎｍでの吸光度（Absorbance(220nm)）を示し、横軸は溶出時間（分）（Elution time (min)）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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