(57)【要約】【課題】メタロチオネイン産生誘導金属錯体の外用塗布による経皮吸収性を高め、表皮下部でのメタロチオネイン産生を効率的に誘導する皮膚外用剤を提供すること。【解決手段】メタロチオネイン産生誘導金属錯体と界面活性剤を併用することにより、飛躍的に経皮吸収性及び細胞内取り込み効率が上昇することを見出し、このメタロチオネイン産生誘導金属錯体および界面活性剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤を開発することによって、上記課題が解決された。【選択図】「なし」【特許請求の範囲】
【請求項１】
メタロチオネイン産生誘導金属錯体と界面活性剤を含有する皮膚外用剤
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明に係るメタロチオネイン産生誘導金属錯体と界面活性剤を含有した皮膚外用剤は、メタロチオネイン産生誘導金属錯体の経皮吸収性を高め、外用塗布による表皮下部でのメタロチオネイン産生を効率的に誘導し、光老化の進行を抑制する皮膚外用剤を提供できる。
【背景技術】
【０００２】
皮膚への太陽紫外線（ＵＶ）の照射によって活性酸素が生じることはよく理解されている。活性酸素は皮膚に対してＤＮＡ損傷等の種々のダメージを加え、最終的に皮膚の光老化を亢進させる。そのため、活性酸素による刺激を軽減し光老化を防ぐ方法が望まれる。一般に、活性酸素による光老化の進行を防ぐにはラジカルスカベンジャーの使用（細胞外からの投与）が有効と思われるが、ラジカルスカベンジャーは不安定なものが多いため、大量の物質を継続的に投与する必要があり、有効な効果を得ることは難しい。
【０００３】
一方、複数の重金属によって産生が誘導されることが知られているメタロチオネインは、一般に、重金属の解毒作用を主に担うと考えられているが、さらに抗酸化活性を有すことが明らかとなり、炎症時に生じるフリーラジカルのスカベンジャーとして作用することが報告されている。（非特許文献１参照）
【０００４】
この点において、皮膚細胞のメタロチオネイン産生を誘導する物質を外的添加することによって、活性酸素による細胞ダメージが軽減されることが、培養細胞系において実証されている。（特許文献１参照）
【０００５】
メタロチオネイン産生誘導剤としては、亜鉛、カドミウム、銅、水銀、金、銀、ビスマス、等の金属が知られている。しかしながら、一般に、遊離金属イオンの状態では、その電荷のため、皮膚に対する浸透性及び細胞内への取り込みの効率が低く、外用塗布による表皮下部でのメタロチオネイン誘導は期待できない。
【特許文献１】特開２０００−８００２３号公報
【非特許文献１】Ｈａｎａｄａ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，  ｖｏｌ．１７９（ｓｕｐｐｌ．１），  ｐ．１４３，  １９８９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
解決しようとする問題点は、メタロチオネイン産生誘導金属錯体の外用塗布による経皮吸収性を高め、表皮下部でのメタロチオネイン産生を効率的に誘導し、光老化の進行を抑制する皮膚外用剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者はこの問題を解決すべく鋭意研究した結果、メタロチオネイン産生誘導金属錯体と界面活性剤を併用することにより、細胞内透過性を上昇させ、飛躍的に経皮吸収性が上昇し、上記課題が解決されることを見出した。
【発明の効果】
【０００８】
メタロチオネイン産生誘導金属錯体の経皮吸収性を高め、外用塗布による表皮下部でのメタロチオネイン産生を効率的に誘導し、光老化の進行を抑制する皮膚外用剤を提供することが可能になった。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明で用いるメタロチオネイン産生誘導金属錯体を構成する金属としては、亜鉛、カドミウム、銅、水銀、金、銀、ビスマス等の金属が挙げられる。好ましくは亜鉛である。
【００１０】
また本発明で用いる上記メタロチオネイン産生誘導金属錯体を構成するカウンターイオンとしては、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、グリシン、セリン、トレオニン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸、Ｎ−アセチルシステインなどのアミノ酸誘導体である。本発明における具体的なメタロチオネイン産生誘導金属錯体としては、グリシン亜鉛、バリン亜鉛、スレオニン亜鉛が好ましい。前記メタロチオネイン産生誘導金属錯体の配合量は，皮膚外用剤全量中０．００１〜１０重量％が好ましく，さらに好ましくは０．０１〜５重量％である。
【００１１】
本発明で用いる界面活性剤としては、皮膚外用剤に一般に配合されるものが用いられるが、非イオン界面活性剤が好ましい。好ましく用いられる非イオン界面活性剤としては、例えば大豆リン脂質、などのレシチン誘導体、アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体、などの高分子乳化剤、モノステアリン酸プロピレングリコール、などのプロピレングリコール脂肪酸エステル、モノウンデシレン酸グリセリル、ミリスチン酸グリセリル、モノステアリン酸グリセリル、モノイソステアリン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、モノオリーブ油脂肪酸グリセリル、グリセリン脂肪酸エステル、ジオレイン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、などのグリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸ジグリセリル、モノオレイン酸ジグリセリル、ジオレイン酸ジグリセリル、モノイソステアリン酸ジグリセリル、トリイソステアリン酸ジグリセリル、モノステアリン酸テトラグリセリル、モノオレイン酸テトラグリセリル、トリステアリン酸テトラグリセリル、ペンタステアリン酸テトラグリセリル、ペンタオレイン酸テトラグリセリル、モノラウリン酸ヘキサグリセリル、モノミリスチン酸ヘキサグリセリル、モノステアリン酸ヘキサグリセリル、モノオレイン酸ヘキサグリセリル、トリステアリン酸ヘキサグリセリル、テトラベヘン酸ヘキサグリセリル、ペンタステアリン酸ヘキサグリセリル、ペンタオレイン酸ヘキサグリセリル、ポリリシノレイン酸ヘキサグリセリル、モノラウリン酸デカグリセリル、モノミリスチン酸デカグリセリル、モノステアリン酸デカグリセリル、モノイソステアリン酸デカグリセリル、モノオレイン酸デカグリセリル、モノリノール酸デカグリセリル、ジステアリン酸デカグリセリル、ジイソステアリン酸デカグリセリル、トリステアリン酸デカグリセリル、トリオレイン酸デカグリセリル、ペンタステアリン酸デカグリセリル、ペンタヒドロキシステアリン酸デカグリセリル、ペンタイソステリアン酸デカグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、ペンタオレイン酸デカグリセリル、ヘプタステアリン酸デカグリセリル、ヘプタオレイン酸デカグリセリル、デカステアリン酸デカグリセリル、デカイソステアリン酸デカグリセリル、デカオレイン酸デカグリセリル、デカマカデミアナッツ油脂肪酸デカグリセリル、ポリリシノレイン酸デカグリセリル、などのポリグリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル、モノオレイン酸ポリオキシエチレングリセリル、などのポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステリアン酸ソルビタン、セスキステアリン酸ソルビタン、トリステアリン酸ソルビタン、モノイソステアリン酸ソルビタン、セスキイソステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、などのソルビタン脂肪酸エステル、モノヤシ油脂肪酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノイソステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、などのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビット、ヘキサステアリン酸ポリオキシエチレンソルビット、テトラステアリン酸ポリオキシエチレンソルビット、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット、などのポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンラノリン、ポリオキシエチレンラノリンアルコール、ポリオキシエチレンソルビットミツロウ、などのポリオキシエチレンラノリン・ラノリンアルコール・ミツロウ誘導体、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などのポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンフィトステロール、ポリオキシエチレンフィトスタノール、ポリオキシエチレンコレスタノール、などのポリオキシエチレンステロール・水素添加ステロール、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンベヘニルエーテル、ポリオキシエチレン（Ｃ１２−１５）アルキルエーテル、ポリオキシエチレン２級アルキルエーテル、ポリオキシエチレン（Ｃ２０−４０）アルキルエーテル、ポリオキシエチレン（Ｃ３０−５０）アルキルエーテル、などのポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル、などのポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ジポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸ナトリウム、ジポリオキシエチレンオレイルエーテルリン酸ナトリウム、ジポリオキシエチレン（Ｃ１２−１５）アルキルエーテルリン酸、トリポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸、トリポリオキシエチレンセチルエーテルリン酸、トリオレイルリン酸、トリポリオキシエチレン（Ｃ１２−１５）アルキルエーテルリン酸、などのポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸・リン酸塩、ポリオキシエチレンステアリルアミン、ポリオキシエチレンオレイルアミン、ポリオキシエチレンステアリン酸アミド、ポリオキシエチレンオレイン酸アミド、などのポリオキシエチレンアルキルアミン・脂肪酸アミド、モノラウリン酸ポリエチレングリコール、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸ポリエチレングリコール、モノオレイン酸ポリエチレングリコール、モノステアリン酸エチレングリコール、ジステアリン酸エチレングリコール、ステアリン酸ジエチレングリコール、ジステアリン酸ポリエチレングリコール、ジイソステアリン酸ポリエチレングリコール、などのポリエチレングリコール脂肪酸エステル、であるが、これらのみに限定されるものではない。
【００１２】
界面活性剤の配合量は，皮膚外用剤全量中０．０１〜２０重量％が好ましく，さらに好ましくは０．０５〜１０重量％である。
【００１３】
本発明のメタロチオネイン産生誘導金属錯体及び界面活性剤を配合した皮膚外用剤には、本発明の効果を損なわない範囲で化粧品、医薬部外品などの皮膚外用剤に配合される成分を配合することができる。
本発明においては、メタロチオネイン産生誘導金属錯体と共にビタミンＣ、あるいはビタミンＥなどのビタミン類及び／又はその誘導体、あるいはそれらの塩を併用することにより、相加的なメラニン抑制作用が認めらる。ビタミン類及び／又はその誘導体、あるいはその塩の配合量は，皮膚外用剤全量中０．００１〜５重量％が好ましく，さらに好ましくは０．０１〜２重量％である。
【００１４】
本発明においては、その他、動植物油由来の硬化油、天然由来のロウ、炭化水素系の油相成分、動植物由来の油相成分、シリコーン系の油相成分、高級アルコール、増粘剤、紫外線吸収剤、粉体、顔料、多価アルコール、糖、高分子化合物、生理活性成分、溶媒、酸化防止剤、香料、防腐剤等を配合することができる。
【００１５】
本発明に係るメタロチオネイン産生誘導金属錯体と界面活性剤を含有した皮膚外用剤は、細胞内取り込み効率に優れ、特に皮膚浸透性に優れ、表皮基底層に局在するメラノサイト及び周辺ケラチノサイト内で効果的なメタロチオネイン産生の誘導を促進する。
【００１６】
本発明の皮膚外用剤は、化粧料等に好適に応用する事ができる。皮膚外用剤の使用形態としては、例えば軟膏、クリーム、ローション、貼付剤等が挙げられる。外用剤の基剤としては、公知の外用基剤で良く、特に限定されない。
【実施例１】
【００１７】
本発明を詳細に説明するが、本発明の技術範囲が実施例に限定されるものではない。
（試験例）  メタロチオネイン産生量を指標とした細胞内取り込み効率効果
（１） 方法
【００１８】
ケラチノサイトをＭＣＤＢ１５３系培地にて２０×１０４  個／ｍｌに調製し、２４穴プレート（スミロン社製）に１ｍｌずつ播種し、９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で１日間静置培養した。
【００１９】
培養上清を吸引除去し、グリシン亜鉛錯体及び単純塩である塩化亜鉛（関東化学社製）を０、５０、１００、２００μＭ添加した培地を１ｍｌずつ各シャーレに加えた。このプレートを９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃で１日間静置培養した。尚、ケラチノサイトについても、ＭＣＤＢ１５３系培地にて２０×１０４  個／ｍｌに調製し、２４穴プレート（スミロン社製）に１ｍｌずつ播種して、その他は同様に行った。グリシン亜鉛錯体にレシチンを添加した培地も同様の方法で行った。
【００２０】
培養細胞からＲＮＡを抽出し、メタロチオネインｍＲＮＡ量についてＲＴ−ＰＣＲ解析を行なった。グリシン亜鉛は５０％エタノール水溶液で溶解させ、エタノールの最終濃度が１％以下となるように添加した。
（２） 結果
【００２１】
ＥＬＩＳＡ解析による単層培養系でのメタロチオネインタンパク質発現量変化の結果を図１に示す。
【００２２】
図１より明らかなように、比較として使用した塩化亜鉛を加えることによりケラチノサイトにおいてメタロチオネイン量の上昇傾向が認められてはいるものの非常に弱い。一方、グリシン亜鉛錯体を加えることにより、同濃度の塩化亜鉛と比較しても、有意に高いメタロチオネイン産生を誘導することが確認できた。グリシン亜鉛錯体にレシチンを添加した単層培養系でのメタロチオネインタンパク質発現量は、更に有意に高いメタロチオネイン産生を誘導することが確認できた。メラノサイトについても同様の結果である。
（３）  次にＲＴ−ＰＣＲによるメタロチオネインｍＲＮＡ発現誘導効果の結果を表１に示す。
【００２３】
グリシン亜鉛は５０％エタノール水溶液で溶解させ、エタノールの最終濃度が１％以下となるように添加した。
【００２４】
表１のようにケラチノサイト及びメラノサイトで、グリシン亜鉛を添加することで、メタロチオネインｍＲＮＡの誘導が認められた。これは、ともに比較として使用したグリシン亜鉛無添加、塩化亜鉛ではメタロチオネインｍＲＮＡの誘導が認められなかった。さらに、グリシン亜鉛と界面活性剤を併用した場合、強いシグナルが検出され、顕著なメタロチオネインｍＲＮＡの誘導が認められた。
【００２５】
【表１】
2005281160.tif 000002
（４）  次にメラニン産生抑制作用を評価した。  
【００２６】
グリシン亜鉛は５０％エタノール水溶液で溶解させ、エタノールの最終濃度が１％以下となるように添加した。
【００２７】
表２のようにグリシン亜鉛を添加することで、メラニン産生抑制効果が認められた。比較として使用したグリシン亜鉛無添加ではメラニン産生抑制効果が認められなかった。さらに、グリシン亜鉛と界面活性剤を併用した場合、中程度のシグナルが検出され、中程度の抑制作用が検出された。グリシン亜鉛と界面活性剤、ビタミンＣを併用した場合、強いシグナルが検出され、顕著なメラニン産生抑制効果が認められた。
【００２８】
【表２】
2005281160.tif 000003
【００２９】
表１より明らかなように、角層を有する皮膚モデルに対しては、活性剤を同時添加した場合、亜鉛グリシン単独と比較してメタロチオネイン発現量は顕著に増加した。
【００３０】
また、表２に示したとおり、メラニン産生抑制効果が既に知られているビタミンＣ、あるいはビタミンＥとの併用により、相加的なメラニン抑制作用が認められた。このことは、グリシン亜鉛の作用とビタミンの作用点が異なるためと考えられ、これらを併用することにより、より高い効果が期待される。
【００３１】
各項目のテスト結果より、本発明のメタロチオネイン産生を誘導する皮膚外用剤は、皮膚へのメタロチオネイン産生誘導剤の経皮吸収性を高め、外用塗布による表皮下部でのメタロチオネイン産生を効率的に誘導し、光老化の進行を抑制する効果があることが明らかである。
【００３２】
次に、本発明の皮膚外用剤の応用例を示す。尚、表３中の配合量は重量％である。
表３の処方で皮膚外用剤（美容液）を調製した。調製方法は、表３に示す成分を室温で撹拌混合し、皮膚外用剤（美容液）を調製した。
【００３３】
【表３】
2005281160.tif 000004
【００３４】
次に各試料について下記方法に従って肌荒れ改善効果テストを行った。
（１）肌荒れ改善効果テスト
【００３５】
試験対象者として１０名のパネラーの前腕部に１×１ｃｍの照射部位を資料の数だけ設定し（本使用テストの場合はブランク、グリシン亜鉛錯体、グリシン亜鉛錯体＋レシチンの計５箇所）、それぞれの箇所に各試料を０．０５ｍｌずつ均一に塗布した。その後、人工紫外光源として東芝ＵＶ−Ｂランプ（ＳＥ−３０Ｅ）を０．７ｍＷ／?強度になるようセットし、資料を塗布した各部位にそれぞれ３分間照射した。こうして紫外線を照射した２４時間後に、照射部位の炎症の程度を６０倍の接触型肌拡大ビデオで観察、評価した。その結果を表４に示す。
【００３６】
【表４】
2005281160.tif 000005
【００３７】
この結果から、実際にパネラーで使用テストした場合、ブランク、界面活性剤フリーのグリシン亜鉛錯体に比較して、グリシン亜鉛錯体＋レシチンを含む皮膚外用剤（美容液）は光老化の進行を抑制する顕著な肌荒れを改善する効果が認められた。
【００３８】
応用例皮膚外用剤は何れも皮膚へのメタロチオネイン産生誘導剤の経皮吸収性を高め、外用塗布による表皮下部でのメタロチオネイン産生を効率的に誘導し、光老化の進行を抑制する効果があることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
メタロチオネイン産生誘導金属錯体の経皮吸収性を高め、外用塗布による表皮下部でのメタロチオネイン産生を効率的に誘導し、光老化の進行を抑制する皮膚外用剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】細胞内メタロチオネイン定量結果（ＥＬＩＳＡ）
【図１】
2005281160.tif 000006