(57)【要約】【課題】  新規なヒト膜タンパク質の提供。【解決手段】  ヒト由来の完全長ｃＤＮＡライブラリーから新規な膜タンパク質をコードするｃＤＮＡを単離し、そのアミノ酸配列を明らかにした。本発明の膜タンパク質及び該膜タンパク質をコードする核酸は該膜タンパク質の機能解析において有用な情報を与え、該膜タンパク質の関与する疾患の診断、治療及び医薬品の開発等に有効である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする膜タンパク質。
【請求項２】
請求項１記載の膜タンパク質の部分ペプチド。
【請求項３】
請求項１記載の膜タンパク質をコードする塩基配列を有するポリヌクレオチドおよびその一部を含有してなるポリヌクレオチド。
【請求項４】
配列番号：２で表される塩基配列を有する請求項３記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
請求項３記載のポリヌクレオチドとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項３記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列およびその一部を含有してなるポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項３〜６のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター。
【請求項８】
請求項７記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体。
【請求項９】
請求項８記載の形質転換体を培養し、請求項１記載の膜タンパク質を生成せしめることを特徴とする請求項１記載の膜タンパク質の製造方法。
【請求項１０】
請求項１記載の膜タンパク質もしくは請求項２記載の部分ペプチドに対する抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト由来の新規膜タンパク質およびそれをコードするＤＮＡに関する。
【背景技術】
【０００２】
膜タンパク質は、生体膜を構成しているタンパク質の総称であり、受容体（レセプター）、輸送体（トランスポーター）など、生体反応に重要な機能を担っているものが多い。たとえば、ホルモン、神経伝達物質、成長因子などの生理活性物質は、細胞膜に存在する特異的な膜タンパク質である受容体を通じて、細胞やその細胞が構成する組織の機能を調節している。なかでも、Ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質（ＧＰＣＲ）と総称される一群のレセプター蛋白質は、７個の膜貫通領域を有する共通した構造をもっており、共役しているｇｕａｎｉｎｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎの活性化を通じて細胞内のエフェクター分子にシグナルを伝達することができる。このように、レセプター蛋白質は、ホルモン、神経伝達物質あるいは生理活性物質等といった細胞外の情報を細胞内へと伝達し、その細胞や組織の機能を制御・調節するといった生理的に非常に重要な役割を担っている。一方、輸送体は、生体膜にあって、各種イオンあるいは糖やアミノ酸などの有機物質などを選択的に透過させる機能を持つ膜タンパク質であり、細胞の恒常性維持等に非常に重要な働きをしている。
【非特許文献１】生化学辞典  第３版  ｐ６８８，ｐ１３５０−１３５１，ｐ１４４０
【０００３】
このように膜タンパク質は、細胞内と細胞外とでシグナルあるいは物質を仲介することにより、細胞や組織の機能を維持・調整するという、生体にとって非常に重要な機能を有している。このようなことから、膜タンパク質、なかでも受容体は、医薬品の標的分子として、その構造及び機能が、現在盛んに研究されている。
【０００４】
しかしながら、生体内には未知の生理活性物質も多く、それらの情報あるいは物質を仲介する膜タンパク質に関しても、未だ未知な部分が多い。それらの生理活性物質と、その特異的膜タンパク質との関係を明らかにすることは、それらの機能と密接に関連した医薬品の開発において重要な手がかりとなり得る。また、膜タンパク質の機能を明らかにし、医薬品に繋げるためには、生体内で発現している膜タンパク質の遺伝子を取得し、それらを適当な発現系で発現させることが必須である。近年、これらの遺伝子を解析する手段として、ｃＤＮＡの配列をランダムに解析する研究が活発に行なわれており、このようにして得られたｃＤＮＡの断片配列がＥｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｔａｇ（ＥＳＴ）としてデータベースに登録され、公開されている。しかし、多くのＥＳＴは、発現しているｍＲＮＡのごく一部の配列情報のみであり、その全体像及び機能を推定することは非常に困難である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上述したように、膜タンパク質は、医薬品の標的分子として、その構造及び機能が現在盛んに研究されている。特に膜タンパク質のなかでもレセプタータンパク質については、本来の生理活性物質（リガンド）の結合を阻害する物質（アンタゴニスト）や、結合して生理活性物質と同様なシグナル伝達を引き起こす物質（アゴニスト）が、医薬品の開発に直結するため特に重点的に研究が行われている。しかし、膜タンパク質はその全てが見出されているわけではなく、新たな膜タンパク質の探索および機能解明が切望されている。膜タンパク質を新規に見出し、その遺伝子をクローニングすることは、その膜タンパク質の機能不全に関連する疾患の診断を可能にするのみでなく、その膜タンパク質を発現・製造することが可能となることから、その特異的リガンドや、アゴニスト、アンタゴニストのスクリーニングが可能となる。本発明は、そのような有用な新規膜タンパク質を提供するものである。即ち、本発明は、新規膜タンパク質もしくはその部分ペプチド、該膜タンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチド、該ポリヌクレオチドを含有する組換えベクター、該組換えベクターを保持する形質転換体、該膜タンパク質の製造法、該膜タンパク質もしくはその部分ペプチドに対する抗体などを提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、ヒトの完全長ｃＤＮＡライブラリーより、完全長の新規な膜タンパク質をコードするｃＤＮＡを単離し、その全塩基配列を解析することに成功した。そして、その塩基配列をアミノ酸配列に翻訳し、ｃＤＮＡにコードされる蛋白質が複数の膜貫通領域を持つ膜タンパク質であることを確認した。本発明者らは、これらの知見に基づいて、さらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は以下のような構成からなる。
項１．
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有することを特徴とする膜タンパク質。
項２．
項１記載の膜タンパク質の部分ペプチド。
項３．
項１記載の膜タンパク質をコードする塩基配列を有するポリヌクレオチドおよびその一部を含有してなるポリヌクレオチド。
項４．
配列番号：２で表される塩基配列を有する項３記載のポリヌクレオチド。
項５．
項３記載のポリヌクレオチドとハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチド。
項６．
項３記載のポリヌクレオチドと相補的な塩基配列およびその一部を含有してなるポリヌクレオチド。
項７．
項３〜６のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する組換えベクター。
項８．
項７記載の組換えベクターで形質転換させた形質転換体。
項９．
項８記載の形質転換体を培養し、項１記載の膜タンパク質を生成せしめることを特徴とする項１記載の膜タンパク質の製造方法。
項１０．
項１記載の膜タンパク質もしくは項２記載の部分ペプチドに対する抗体。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の新規膜タンパク質もしくはその部分ペプチド、およびそれらをコードするポリヌクレオチドは、該膜タンパク質の製造、該膜タンパク質に対する抗体の作製、該膜タンパク質の特異的リガンドや、アゴニスト、アンタゴニストのスクリーニング、該膜タンパク質の機能解析に利用可能なプローブ、ＰＣＲプライマー、あるいはｓｉＲＮＡの作成、該膜タンパク質の機能不全に起因する疾患の遺伝子診断に利用可能なプローブ、ＰＣＲプライマーなどに用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の膜タンパク質は、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列（図１および図２中のアミノ酸配列）と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する膜タンパク質である。本発明の膜タンパク質は、ヒトであれば、あらゆる組織由来のものあってもよく、また、培養細胞由来のものでもよい。さらには合成タンパク質であってもよい。
【００１０】
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。本発明の配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質としては、例えば、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。実質的に同質の活性としては、例えば、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用などの活性が性質的に同質であることを示す。
【００１１】
また、本発明の膜タンパク質としては、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列を含有する蛋白質なども含まれる。
【００１２】
本発明の膜タンパク質の部分ペプチドとしては、前記した本発明の膜タンパク質の部分ペプチドであれば何れのものであってもよい。部分ペプチドのアミノ酸の数は、前記した本発明の膜タンパク質の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個以上、より好ましくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが好ましい。実質的に同一のアミノ酸配列とは、これらアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列を示す。
【００１３】
また、本発明の部分ペプチドは、上記アミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数個（１〜５個））のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは数個、さらに好ましくは１〜５個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよい。
【００１４】
本発明の膜タンパク質は、前述したヒトや哺乳動物の細胞または組織から自体公知の膜タンパク質の精製方法によって製造することもできるし、後述する本発明の膜タンパク質をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養することによっても製造することができる。また、本明細書の実施例２で示すように無細胞タンパク質合成系やこれに準じるた方法にて製造することもできる。
【００１５】
本発明の膜タンパク質をコードするポリヌクレオチドとしては、前述した本発明の膜タンパク質をコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよく、ＤＮＡ、ＲＮＡ、一本鎖あるいは二本鎖であってもよい。また二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖であっても、アンチセンス鎖であってもよい。本発明の膜タンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて、該膜タンパク質のｍＲＮＡを定量することができる。また、ｓｉＲＮＡの作成をしてＲＮＡｉの現象を利用して本発明の膜タンパク質の機能を解析することができる。具体的には、本発明の膜タンパク質をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：２で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の膜タンパク質と実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有する膜タンパク質をコードするＤＮＡであれば何れのものでもよい。該ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１５〜４０ｍＭ、好ましくは約２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは６０〜６５℃の条件で実施することを示す。
【００１６】
本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。具体的には、本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、（１）配列番号：２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡ、または（２）配列番号：２で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の膜タンパク質ペプチドと実質的に同質の活性（例、リガンド結合活性、シグナル情報伝達作用など）を有する膜タンパク質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤＮＡなどが用いられる。配列番号：２で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：２で表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００１７】
本発明の膜タンパク質またはその部分ペプチドを完全にコードするＤＮＡのクローニングの手段としては、本発明の膜タンパク質の部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、または適当なベクターに組み込んだゲノミックＤＮＡライブラリーあるいはｃＤＮＡライブラリーを、本発明の膜タンパク質の一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡにてスクリーニングすることによって選別することができる。
【００１８】
本発明で用いる組換えベクターとしては、宿主細胞を形質転換し得るものであればよく、宿主細胞に応じて大腸菌用のプラスミド、枯草菌用のプラスミド、酵母用のプラスミド、レトロウイルス，ワクシニアウイルス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスベクターなどが用いられる。これらには、その宿主細胞にてタンパク質を適切に発現させ得るプロモーターを有しているものが好ましい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ−ＴＫプロモーターなどが挙げられる。また、宿主細胞としては、組換えベクターにて外来性遺伝子を発現できる物であればよく、一般的には、大腸菌、枯草菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが用いられる。
【００１９】
宿主細胞に組換えベクターを移入する方法としては、一般的に常用されている方法を用いればよく、例えば、大腸菌の場合は塩化カルシウム法やエレクトロポレーション法、枯草菌の場合はコンピテントセル法やエレクトロポレーション法、酵母の場合は塩化リチウム法やエレクトロポレーション法が利用できる。昆虫細胞の形質転換は、例えば、バイオテクノロジー（ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ），６，  ４７−５５（１９８８））などに記載の方法に従って行なうことができる。また、動物細胞の形質転換は、エレクトロポレーション等の物理的方法、あるいは、リポソーム法やリン酸カルシウム法等の化学的方法、あるいはレトロウイルス等のウイルスベクターを用いて行なうことができる。このようにして、膜タンパク質をコードするＤＮＡを保持する発現ベクターで形質転換された形質転換体が得られる。
【００２０】
形質転換体である宿主細胞の培養形態は、宿主の栄養生理学的性質を考慮して培養条件を選択すればよく、通常多くの場合は液体培養で行うが、工業的には通気攪拌培養を行うのが有利である。宿主細胞が大腸菌、枯草菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。また、酵母、ビタミン類、生長促進因子などを添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
【００２１】
上記培養物から本発明の膜タンパク質を分離精製するには、通常の一般的な精製により行なうことができる。すなわち、培養後、公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により膜タンパク質の粗抽出液を調製する。緩衝液中には、尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変性剤や、トリトンＸ−１００ＴＭなどの界面活性剤が含まれていてもよい。また、培養液中に膜タンパク質が分泌される場合には、培養終了後の菌体あるいは細胞を分離した培養上清を用いることもできる。このようにして得られた抽出液、あるいは培養上清中に含まれる膜タンパク質の精製は、通常の分離・精製法を適切に組み合わせて行なうことができる。これらの分離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度の差を利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的新和性を利用する方法、逆相クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法などが用いられる。
【００２２】
本発明の膜タンパク質もしくはその部分ペプチドに対する抗体は、本発明の膜タンパク質もしくはその部分ペプチドを認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよい。本発明の膜タンパク質もしくはその部分ペプチドに対する抗体は、本発明の膜タンパク質等を抗原として用い、自体公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造することができる。
【００２３】
本明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を示す。
〔配列番号：１〕本発明のヒト新規膜タンパク質ＴＨ０４１Ｂ０９のアミノ酸配列を示す。
〔配列番号：２〕配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有する本発明のヒト新規膜タンパク質ＴＨ０４１Ｂ０９をコードするｃＤＮＡの塩基配列を示す。
【実施例】
【００２４】
以下に実施例を示して、本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法は、特に記載しない限りモレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ）２ｎｄ（Ｊ．  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔａｌ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂ．  Ｐｒｅｓｓ，  １９８９）に記載されている方法に従った。
【００２５】
実施例１  ヒト新規膜タンパク質ＴＨ０４１Ｂ０９をコードするｃＤＮＡのクローニングと塩基配列の決定
ヒト脳組織由来トータルＲＮＡからオリゴキャッピング法（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ  ２００  １４９−１５６）を用いて完全長のｃＤＮＡを選別し、これをプラスミドベクターｐＭＥ１８ＳＦＬ３に挿入して完全長濃縮ｃＤＮＡライブラリーを作製した。これを用いて大腸菌ＤＨ５αを形質転換し、アンピシリンを含むＬＢ寒天培地上にコロニーを形成させた。形成されたコロニーから約１００００個の大腸菌形質転換体を選抜し、個々にＬＢ液体培地に植菌した。培養後、各大腸菌形質転換体からＭａｇＥｘｔｒａｃｔｏｒ−Ｐｌａｓｍｉｄ−及び自動核酸抽出装置ＭＦＸ９６００（東洋紡績製）を用いてプラスミドを抽出し、抽出したプラスミドを用いて各ｃＤＮＡの５‘端の塩基配列を解析した。塩基配列の解析は、ＢｉｇＤｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｒ  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｋｉｔ  Ｖ３．０（アプライドバイオシステムズ社）を用いてキット添付のプロトコールに従い実施し、オートシーケンサーＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ３７００（アプライドバイオシステムズ社）により行った。次に、解析した５’ワンパス配列をＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）の核酸配列データベースｎｒに投入しＢＬＡＳＴ解析を実施し、既知の遺伝子と相同性がない、すなわち新規なｃＤＮＡ配列を持つクローンを選抜した。次にこれらのｃＤＮＡの全塩基配列をプライマーウォーキング法にて決定し、決定した塩基配列をアミノ酸に翻訳してｃＤＮＡがコードするアミノ酸配列を決定した。このアミノ酸配列を、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のペプチド配列データベースｎｒに対してＢＬＡＳＴ解析を行い、既知のタンパク質と相同性がないクローンを選抜した。次に、それらのクローンのアミノ酸配列の疎水性プロットを作成し、膜貫通領域の有無を調べた。その結果、膜貫通領域を複数有する新規膜タンパク質を見出し、そのアミノ酸配列（配列番号：１）からなる新規膜タンパク質をＴＨ０４１Ｂ０９と命名した。また、該新規膜タンパク質をコードするｃＤＮＡを含むプラスミドをｐＭＥ／ＴＨ０４１Ｂ０９と命名した。
【００２６】
実施例２  ヒト新規膜タンパク質ＴＨ０４１Ｂ０９の調製
本発明のヒトの新規膜タンパク質ＴＨ０４１Ｂ０９をコードするｃＤＮＡ（配列番号：２）を無細胞タンパク合成系用の発現プラスミドｐＥＵ３−ＮＩＩ（東洋紡績・インヴィトロテック製）にサブクローニングし、プラスミドｐＥＵ／ＴＨ０４１Ｂ０９を得た。これを鋳型にＴ７  ＲＮＡポリメラーゼを用いて試験管内転写（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）を行い、本膜タンパク質をコードするｍＲＮＡを合成した。次に、合成されたｍＲＮＡを無細胞タンパク合成システムＰＲＯＴＥＩＯＳ  ＴＭ（東洋紡績・インヴィトロテック製）に供し、キット添付のプロトコールに従ってタンパク合成を行った。合成されたタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにて解析した結果、本膜タンパク質の分子量に相当する位置にバンドとして確認することができた。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明の新規膜タンパク質もしくはその部分ペプチド、およびそれらをコードするポリヌクレオチドは、該膜タンパク質の製造、該膜タンパク質に対する抗体の作製、該膜タンパク質の特異的リガンドや、アゴニスト、アンタゴニストのスクリーニング、該膜タンパク質の機能解析に利用可能なプローブ、ＰＣＲプライマー、あるいはｓｉＲＮＡの作成、該膜タンパク質の機能不全に起因する疾患の遺伝子診断に利用可能なプローブ、ＰＣＲプライマーに用いることができ、産業界に寄与するところが大である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明のヒト新規膜タンパク質ＴＨ０４１Ｂ０９のアミノ酸配列の疎水性プロット図を示す。
【図１】
2005137228.tif 000002
【配列表】
2005137228000001.app