(57)【要約】【目的】マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とするエストロゲンレセプター傷害抑制剤を提供する。【構成】本発明はマンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とするエストロゲンレセプター傷害抑制剤である。マンネンタケ属に属するキノコの抽出物は優れたエストロゲンレセプター傷害抑制効果を示した。マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とするエストロゲンレセプター傷害抑制剤は安全で優れた老化防止効果を示した。マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とする化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品も安全で優れた老化防止効果を示した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とするエストロゲンレセプター傷害抑制剤。
【請求項２】
マンネンタケ属に属するキノコがマゴジャクシであるエストロゲンレセプター傷害抑制剤。
【請求項３】
マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有し、エストロゲンレセプターの傷害を抑制することを特徴とするシワ予防改善剤。
【請求項４】
マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有し、エストロゲンレセプターの傷害を抑制することを特徴とする更年期障害予防改善剤。
【請求項５】
請求項１あるいは２のエストロゲンレセプター傷害抑制剤を含有することを特徴とする化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、エストロゲンレセプター傷害抑制剤に関し、特に皮膚老徴のひとつであるくすみやシワの形成防止にその有効性を発揮するエストロゲンレセプター傷害抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
エストロゲンとは、いわゆる女性ホルモンのひとつであり、女性の健康維持に大切な働きを持っている。皮膚においてもエストロゲンは、ケラチノサイトの増殖促進及び線維芽細胞におけるコラーゲンやプロテオグリカンの生成促進作用を有し、表皮の新陳代謝や真皮の弾力性維持に重要な役割を果たしている（非特許文献１〜３参照）。これらエストロゲンの皮膚細胞に及ぼす作用は皮膚細胞に存在するエストロゲンレセプターに結合して発揮されることから、エストロゲンレセプターが傷害を受けるとエストロゲンが存在してもその作用は現れなくなる。
更年期障害とは、不定愁訴とよばれる他人には分からない不快感をともなうもので、女性にとってそれらの症状に対する悩みは深刻である。更年期障害のいくつかの症状はエストロゲンの低下が原因といわれているが、エストロゲンレセプターが傷害を受けることも更年期障害のいくつかの症状の原因になりうる。
マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とする化粧料としては、特許文献１が知られているが、この抽出物にエストロゲンレセプター傷害に対する抑制作用があることは知られていなかった。
【０００３】
【非特許文献１】
Ｕｚａｋａ，Ｍ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１９８１，６７３，３８７−３９３
【非特許文献２】
Ｖａｒｉｌａ，Ｅ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎａｅｃｏｌ．，１９９５，１０２，９８５−９８９
【非特許文献３】
Ｕｒａｎｏ，Ｒ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．，１９９５，９，１７６−１８４
【特許文献１】
特願２００１−２４２００２号
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
皮膚に対するエストロゲンの作用低下は、表皮の新陳代謝低下や真皮の弾力性低下を引き起こし、くすみ、シワ等、皮膚の老化につながると考えられる。また、全身的には更年期障害の症状につながる。エストロゲンの減少による作用低下に対しては、エストロゲンの投与やその分泌を促進することが有効であるが、エストロゲンレセプターの傷害による作用低下についてはその傷害を抑制することが重要であり、それが皮膚老化あるいは更年期障害の症状の予防、改善策のひとつになると考えられる。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
この様な事情により、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、マンネンタケ属に属するキノコの抽出物が、紫外線照射による皮膚細胞のエストロゲンレセプター傷害に対して、優れた抑制効果を持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とするエストロゲンレセプター傷害抑制剤である。
【０００７】
マンネンタケ属は、担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）、ヒダナシタケ目（Ａｐｈｙｌｌｏｐｈｏｒａｌｅｓ）、サルノコシカケ科（Ｐｏｌｙｐｏｒａｃｅａｅ）、マンネンタケ族（Ｇａｎｏｄｅｒｍｅａｅ）に属し、マンネンタケ、マゴジャクシ、シママンネンタケ、ツノマンネンタケ、オオマンネンタケ、コウモリマンネンタケ、ツガノマンネンタケなどが含まれる。また、マンネンタケとしては、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫芝、青芝、黄芝、白芝などが神農本草経に記載されている。これらの学名は、非特許文献４によると、霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｌｕｃｉｄｕｍ）、黒霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｕｍ）、紫芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｓｉｎｅｎｓｅ）に分類されているが、それに限定されるものでない。
【０００８】
【非特許文献４】
Ａｃｔａ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ，１９７９，１９，２６５−２７９
【０００９】
本発明で用いられる黒霊芝（黒芝）は、主に南中国（上海以南）において、カエデ科の樹木に生育する。効能について、神農本草経によれば、黒霊芝は、尿閉や排尿困難で、下腹部が脹満する症状の治療をし、排尿を促し、腎臓の機能を高めると記載されている。
【００１０】
本発明で用いられる霊芝（赤芝）は、広葉樹に広く生育する。効能について、神農本草経によれば、霊芝は主に結胸（心下痛があり、しこりのある病症）を治療し、心臓の機能を強め、活力を補い、思考力を増強して物忘れを防ぐと記載されている。
【００１１】
本発明で用いられるマゴジャクシ（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ  ｎｅｏｊａｐｏｎｉｃｕｍ）は、霊芝とは分類上、区別されている。
【００１２】
以上マンネンタケ属に属するキノコのなかでも、マンネンタケやマゴジャクシが好ましい。
【００１３】
本発明で使用するマンネンタケ属に属するキノコの抽出物は、マンネンタケ属に属するキノコの子実体から抽出して得られるものである。その調製方法は特に限定されず、例えば加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。また、上記抽出物の中には市販されているものもあり、これらを用いることができる。
【００１４】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）、炭化水素（ベンゼン、ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）、アセトニトリル等があげられる。好ましくは、水、低級１価アルコール及び液状多価アルコールが良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。
【００１５】
また、マンネンタケ属に属するキノコの抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過等の処理及び活性炭等による脱色、脱臭処理をしても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１６】
本発明のエストロゲンレセプター傷害抑制剤には、上記マンネンタケ属に属するキノコの抽出物をそのまま使用しても良く、効果を損なわない範囲内で、通常の食品、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤等の成分を配合することもできる。
【００１７】
本発明に用いるエストロゲンレセプター傷害抑制剤は、食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、錠菓、飲料、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤などを含む）等が挙げられる。
【００１８】
本発明に用いるマンネンタケ属に属するキノコの抽出物の配合量は特に限定されないが、本発明のエストロゲンレセプター傷害抑制剤全量に対し、乾燥物に換算して０．０００１〜７５重量％の範囲が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜３０重量％である。０．０００１重量％以下ではエストロゲンレセプター傷害抑制効果が低く、また７５重量％を超えても効果に大きな増強はみられにくく、効率的でない。また、添加の方法については、予め加えておいても製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００１９】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量は重量％を示す。
【００２０】
製造例１  マゴジャクシの熱水抽出物
マゴジャクシの乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してマゴジャクシの熱水抽出物２．０ｇを得た。
【００２１】
製造例２  黒霊芝の熱水抽出物
黒霊芝の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝の熱水抽出物１．３ｇを得た。
【００２２】
製造例３  霊芝の熱水抽出物
霊芝の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝の熱水抽出物１．４ｇを得た。
【００２３】
製造例４  マゴジャクシのエタノール抽出物
マゴジャクシの乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮乾固してマゴジャクシのエタノール抽出物１．５ｇを得た。
【００２４】
製造例５  黒霊芝のエタノール抽出物
黒例芝の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮乾固して黒霊芝のエタノール抽出物１．５ｇを得た。
【００２５】
製造例６  霊芝のエタノール抽出物
霊芝の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮乾固して霊芝のエタノール抽出物１．６ｇを得た。
【００２６】
製造例７  マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
マゴジャクシの乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、不溶物を濾過し、マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物１．９ｋｇを得た。
【００２７】
製造例８  黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、不溶物を濾過し、黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物１．９ｋｇを得た。
【００２８】
製造例９  霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
霊芝の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、不溶物を濾過し、霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物１．９ｋｇを得た。
【００２９】
実施例１  クリーム
処方                                                配合量（重量％）
１．マゴジャクシの熱水抽出物（製造例１）              ０．０５
２．スクワラン                                        ５．５
３．オリーブ油                                        ３．０
４．ステアリン酸                                      ２．０
５．ミツロウ                                          ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                      ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  ３．０
８．ベヘニルアルコール                                １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                        ２．５
１０．香料                                              ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール                        ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル                          ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１４．精製水                                          ６８．１
［製造方法］成分２〜９を加熱して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３０】
比較例１  従来のクリーム
実施例１において、マゴジャクシの熱水抽出物を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００３１】
実施例２  化粧水
処方                                                配合量（重量％）
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例２）                    ０．０１
２．１，３−ブチレングリコール                        ８．０
３．グリセリン                                        ２．０
４．キサンタンガム                                    ０．０２
５．クエン酸                                          ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                                ０．１
７．エタノール                                        ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）    ０．１
１０．香料                                              ０．１
１１．精製水                                          ８４．５６
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００３２】
実施例３  乳液
処方                                                配合量（重量％）
１．霊芝の熱水抽出物（製造例３）                      ０．０５
２．スクワラン                                        ５．０
３．オリーブ油                                        ５．０
４．ホホバ油                                          ５．０
５．セタノール                                        １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                        ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）  ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート        ２．０
９．香料                                              ０．１
１０．プロピレングリコール                              １．０
１１．グリセリン                                        ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１３．精製水                                          ７３．１５
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３３】
実施例４  軟膏
処方                                                配合量（重量％）
１．マゴジャクシのエタノール抽出物（製造例４）        １．０
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）  ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                      １０．０
４．流動パラフィン                                    ５．０
５．セタノール                                        ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
７．プロピレングリコール                            １０．０
８．精製水                                          ６５．９
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３４】
実施例５  ファンデーション
処方                                                配合量（重量％）
１．黒霊芝のエタノール抽出物（製造例５）              １．０
２．ステアリン酸                                      ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート      １．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
５．セタノール                                        １．０
６．液状ラノリン                                      ２．０
７．流動パラフィン                                    ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                          ６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル                          ０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム              ０．１
１１．ベントナイト                                      ０．５
１２．プロピレングリコール                              ４．０
１３．トリエタノールアミン                              １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１５．二酸化チタン                                      ８．０
１６．タルク                                            ４．０
１７．ベンガラ                                          １．０
１８．黄酸化鉄                                          ２．０
１９．香料                                              ０．１
２０．精製水                                          ６０．０
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３５】
実施例６  浴用剤
処方                                                配合量（重量％）
１．マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール          ５．０
水溶液抽出物（製造例７）
２．炭酸水素ナトリウム                              ５０．０
３．黄色２０２号（１）                                ０．０５
４．香料                                              ０．２５
５．無水硫酸ナトリウム                              ４４．７
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３６】
実施例７  錠菓
処方                                                配合量（重量％）
１．マゴジャクシの熱水抽出物（製造例１）              ２．０
２．乾燥コーンスターチ                              ５０．０
３．エリスリトール                                  ３８．０
４．クエン酸                                          ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                              ３．０
６．香料                                              ０．２５
７．水                                                １．７５
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。
【００３７】
実施例８  飲料
処方                                                配合量（重量％）
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例２）                    １．０
２．ステビア                                          ０．０５
３．リンゴ酸                                          ５．０
４．香料                                              ０．１
５．水                                              ９３．８５
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１及び４、５を加えて混合する。
【００３８】
実施例９  錠剤
処方                                                配合量（重量％）
１．霊芝の熱水抽出物（製造例３）                    １０．０
２．トウモロコシデンプン                            １０．０
３．精製白糖                                        ２０．０
４．カルボキシメチルセルロース                      １０．０
５．微結晶セルロース                                ３５．０
６．ポリビニルピロリドン                              ５．０
７．タルク                                          １０．０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤として成分７を加えて配合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠した。
【００３９】
実施例１０  散剤
処方                                                配合量（重量％）
１．マゴジャクシの熱水抽出物（製造例１）            １０．０
２．トウモロコシデンプン                            ４０．０
３．微結晶セルロース                                ５０．０
［製造方法］上記成分を混合し、常法により散剤とした。
【００４０】
実施例１１  注射剤
処方                                                配合量（重量％）
１．マゴジャクシの熱水抽出物（製造例１）                １．０
２．ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油              ３．７
３．ゴマ油                                              ０．２
４．塩化ナトリウム                                      ０．９
５．プロピレングリコール                                ４．０
６．リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．０）              １０．０
７．蒸留水                                            ８０．２
［製造方法］成分１、２、３及び成分５の半量を混合して約８０℃で加温溶解し、これに成分４、６と成分５の半量を予め溶解した成分７を約８０℃に加温して加え全量を１０００ｍＬの水溶液とした。この水溶液を１ｍＬのアンプルに分注して熔閉した後、加熱滅菌した。
【００４１】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００４２】
実験例１  エストロゲンレセプターの減少抑制試験
エストロゲンレセプターの減少抑制効果を下記の条件にて測定した。
【００４３】
コンフルエントな状態の正常ヒト皮膚線維芽細胞に３０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢを照射した。次に１０μｇ／ｍｌの試料を添加したＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭ培地にてさらに２４時間培養した後、総タンパクの抽出を行った。このタンパク１０μｇをＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動に供した後、トランスファーメンブレン（ミリポア）にブロッティングした。ブロッティング終了後、１次抗体としてＥｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｂ−１１抗体（ＮｅｏＭａｒｋｅｒｓ）、２次抗体としてＡｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧ  ＨＲＰ−Ｌｉｎｋｅｄａｎｔｉｂｏｄｙ（アマシャムファルマシア）、検出試薬としてＥＣＬウエスタンブロッティング検出試薬（アマシャム）を用いてエストロゲンレセプタータンパクをバンドとして検出した。これらのバンドをデンシトメーターにて定量化した。ＵＶＢ未照射の細胞に対し、ＵＶＢを照射された細胞ではエストロゲンレセプタータンパクの減少がみられる。このコントロールのエストロゲンレセプタータンパク量に対する試料添加時のエストロゲンレセプタータンパク量値からエストロゲンレセプターの減少抑制率を求めた。
【００４４】
これらの試験結果を表１に示した。その結果、マンネンタケ属に属するキノコの抽出物には優れたエストロゲンレセプターの減少抑制効果が認められた。
【００４５】
【表１】
2005029493.tif 000002
【００４６】
実験例２  エストロゲンレセプターの機能低下抑制試験
エストロゲンレセプターの機能低下抑制効果を下記の条件にて測定した。
【００４７】
コンフルエントな状態の正常ヒト皮膚線維芽細胞に３０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢを照射した。次に１０μｇ／ｍｌの試料及び１０ｎＭの１７ベータ−エストラジオールを添加したＥａｇｌｅ’ｓ  ＭＥＭ培地にてさらに２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞から抽出した総ＲＮＡを基にＲＴ−ＰＣＲ法によりコラーゲンｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法にはＴａＫａＲａ  ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ  （ＡＭＶ）  Ｖｅｒ．２．１を用いた。また、内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ＰＣＲ反応液をアガロースゲル電気泳動に供し、コラーゲン及びＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現をバンドとして確認した。これらのバンドをポラロイドカメラにて撮影してデンシトメーターを用いて定量化し、コラーゲンｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ発現量に対する割合として求めた。ＵＶＢ未照射で１７ベータ−エストラジオールを添加した細胞ではコラーゲンｍＲＮＡ発現量の増加がみられるが、ＵＶＢを照射した細胞ではエストロゲンレセプターの機能が低下し、１７ベータ−エストラジオールを添加してもコラーゲンｍＲＮＡ発現量の増加がみられなくなる。このコントロールのコラーゲンｍＲＮＡ発現量に対する試料添加時のコラーゲンｍＲＮＡ発現量値からエストロゲンレセプターの機能低下抑制率を求めた。なお、今回の実験で１７ベータ−エストラジオール添加によるコラーゲンｍＲＮＡ発現量の増加がエストロゲンレセプターを介したものであることをエストロゲンのアンタゴニストを用いて確認している。
【００４８】
これらの試験結果を表２に示した。その結果、マンネンタケ属に属するキノコの抽出物には優れたエストロゲンレセプターの機能低下抑制効果が認められた。
【００４９】
【表２】
2005029493.tif 000003
【００５０】
実験例３  使用試験
マゴジャクシ熱水抽出物（製造例１）の１％水溶液を用いて、各々女性３０人（３０〜４５才）を対象に２ヶ月間の外用による使用試験を行った。対照として精製水を用いた。使用後、しわ、たるみ、くすみについてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００５１】
これらの結果を表３に示した。マゴジャクシ熱水抽出物は優れた老化防止効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００５２】
【表３】
2005029493.tif 000004
【００５３】
黒霊芝熱水抽出物（製造例２）、霊芝熱水抽出物（製造例３）、マゴジャクシエタノール抽出物（製造例４）、黒霊芝エタノール抽出物（製造例５）、霊芝エタノール抽出物（製造例６）、マゴジャクシ１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物（製造例７）、黒霊芝１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物（製造例８）及び霊芝１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物（製造例９）についても使用試験を行ったところ、安全で優れた老化防止効果を示した。
【００５４】
実験例４  使用試験
実施例１のクリーム及び比較例１の従来のクリームを用いて、各々女性３０人（３０〜４５才）を対象に２ヶ月間の使用試験を行った。使用後、しわ、たるみ、くすみについてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００５５】
これらの結果を表４に示した。実施例１のマゴジャクシの熱水抽出物を含有することを特徴とする皮膚外用剤は優れた老化防止効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００５６】
【表４】
2005029493.tif 000005
【００５７】
実施例２の化粧水、実施例３の乳液、実施例４の軟膏、実施例５のファンデーション、実施例６の浴用剤について同様に使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れた老化防止効果を示した。また、実施例７の錠菓、実施例８の飲料、実施例９の錠剤及び実施例１０の散剤については経口摂取、実施例１１の注射剤については皮下投与による使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れた老化防止効果を示した。
【００５８】
【発明の効果】
以上のことから、本発明のマンネンタケ属に属するキノコの抽出物は優れたエストロゲンレセプター傷害抑制効果を示した。マンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とする化粧品、医薬部外品、医薬品又は食品も安全で優れた老化防止効果を示した。
また、本発明のマンネンタケ属に属するキノコの抽出物を含有することを特徴とするエストロゲンレセプター傷害抑制剤には皮膚の老化及び更年期障害の症状を予防、改善する効果が期待できる。