(57)【要約】    【解決手段】本発明のヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤は、ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物を有効成分として含有することを特徴としている。    【効果】本発明のヒスタミン遊離抑制剤は、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体が肥満細胞の受容体に結合した際に分泌されるヒスタミンの遊離を有意に抑制することができ、アトピー性皮膚炎などのアレルギー性皮膚疾患の症状を抑制し、治療に好適に用いることができる他、アレルギー性鼻炎、気管支喘息などの皮膚疾患以外のI型アレルギー性疾患への治療効果も期待できる。  また、本発明の皮膚疾患治療剤は、アトピー性皮膚炎や過敏肌などの皮膚の炎症を好適に抑制することができ、かつ、副作用が少なく安全性にも優れる。    【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物を有効成分として含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。
【請求項２】
ミルラ樹脂由来の成分の濃度が1．０×１０-6〜1．０×１０-4重量％であることを特徴とする請求項１に記載のヒスタミン遊離抑制剤。
【請求項３】
ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする皮膚疾患治療剤。
【請求項４】
エタノールが、純エタノールまたはエタノール濃度７０％以上のエタノール水であることを特徴とする請求項３に記載の皮膚疾患治療剤。
【請求項５】
ミルラ抽出物が、１０〜５０℃において、エタノールまたはエタノール濃度８０重量％以上のエタノール水溶液に、ミルラ樹脂の少なくとも一部を溶解して得た液状成分であることを特徴とする請求項３または４に記載の皮膚疾患治療剤。
【請求項６】
ミルラ抽出物が、エタノールまたはエタノール濃度８０重量％以上のエタノール水溶液に、ミルラ樹脂の少なくとも一部を溶解して得た液状成分を、減圧濃縮して得た成分であることを特徴とする請求項３〜５のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
【請求項７】
ミルラ樹脂由来の成分の濃度が１．０×１０-7〜１．０×１０-1重量％であることを特徴とする請求項３〜６のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
【請求項８】
ミルラ樹脂由来の成分の濃度が1．０×１０-6〜1．０×１０-2重量％であることを特徴とする請求項３〜７のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
【請求項９】
皮膚疾患が、アトピー性皮膚炎であることを特徴とする請求項３〜８のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
【請求項１０】
液剤、クリーム剤、乳液剤、軟膏剤および湿布剤のいずれかであることを特徴とする請求項３〜９のいずれかに記載の皮膚疾患治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤に関する。詳しくは、本発明は、ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物を有効成分として含有し、アレルギー性疾患の治療などに有効なヒスタミン遊離抑制剤、および、アトピー性皮膚炎などの皮膚疾患の治療に有効な皮膚疾患治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、建材などによる住環境、衣料品の繊維素材、食品あるいは食品添加物、空気の乾燥や汚れ、使用する道具や化粧品などの生活環境や、精神的ストレスなどにより、アレルギー性疾患に罹患する人が増加している。中でも、アトピー性皮膚炎や過敏肌になどの皮膚疾患に悩む患者は近年急増している。
【０００３】
アトピー性皮膚炎などのアレルギー性皮膚疾患の治療には、ステロイド系の薬剤が主に使用されているが、このような皮膚疾患は長期にわたって罹患するケースが多く、治療も長期にわたる場合が多い。このため、長期間の使用でも副作用が少ない生薬を用いており、しかも充分な治療効果の得られる治療剤の出現が強く求められている。
【０００４】
特許文献１には、カンラン科モツヤクジュを含む多数の漢方生薬の起源植物を、ストレスの悪影響からの回復促進剤あるいは皮膚外用剤として用いることが提案されている。そして、実施例においては、マメ科コンメイケットウおよびショウガ科ショウガのメタノール抽出物を含む化粧水によるアトピー性皮膚炎の改善作用、および、オミナエシ科カンショウコウおよびマメ科クズのメタノール抽出物を含むクリームにより敏感肌の改善作用が示されている。
【０００５】
また、特許文献２には、和漢薬、ハーブを、痒み防止皮膚外用剤の成分として用いることが提案されており、和漢薬として没薬が挙げられている。そして、和漢薬あるいはハーブを、グリチルリチン酸と併用することで、より痒み防止効果が向上することが記載されている。
【０００６】
しかしながら、これらの特許文献を参照しても、効果が漢方生薬、和漢薬、ハーブ等による作用であるのか、基材成分の作用であるのかが不明であり、多数の漢方生薬、和漢薬、ハーブのうち、何をどの程度用いた場合に好ましい治療効果が得られるのも不明であった。また、痒み防止などの効果がどのような作用により得られるのかについても不明であり、清涼感などによる一時的な作用であるのか、持続した作用を示すのかについても検証されておらず、実際に使用可能な治療剤は特定されていなかった。
【０００７】
ところで、ミルラ（没薬）はカンラン科の植物であり、その樹脂は香料として用いられる他、防腐剤としての効果を有することが従来より知られている。また、ミルラの樹脂は、水、アルコール、エーテルに一部可溶であることが知られている。
【０００８】
このようなミルラは、強壮薬あるいは歯磨きなどの成分として利用されており、また、ミルラの樹脂から水蒸気蒸留法により抽出した精油を、傷や炎症の治療やアロマテラピーに使用できることが知られている。
【０００９】
本発明者は、このような状況に鑑みて鋭意研究したところ、ミルラのエタノール抽出成分が、Ｉ型アレルギー反応による痒みや炎症の直接の原因物質となるヒスタミンの遊離を、有意に抑制し得ることを見出して、本発明を完成させるに至った。
【特許文献１】特開２００１−１９２３３８号公報
【特許文献２】特開２００３−５５２４１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ヒスタミン遊離抑制剤、および、皮膚疾患治療剤を提供することを課題とする。詳しくは、本発明は、生薬として知られるミルラの抽出物を有効成分として含有し、副作用が少なく、ヒスタミン遊離を抑制してアレルギー症状を軽減し得るヒスタミン遊離抑制剤、および、アトピー性皮膚炎など炎症を軽減し得る皮膚疾患治療剤を提供することを課題としている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤は、ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物を有効成分として含有することを特徴としている。
【００１２】
このような本発明のヒスタミン遊離抑制剤では、ミルラ樹脂由来の成分の濃度が1．０
×１０-6〜1．０×１０-4重量％であることが好ましい。
【００１３】
また、本発明の皮膚疾患治療剤は、ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物を有効成分として含有することを特徴としている。
【００１４】
このような本発明の皮膚疾患治療剤では、エタノールが、純エタノールまたはエタノール濃度７０％以上のエタノール水であることが好ましい。
【００１５】
また、本発明の皮膚疾患治療剤では、ミルラ抽出物が、１０〜５０℃において、エタノールまたはエタノール濃度８０重量％以上のエタノール水溶液に、ミルラ樹脂の少なくとも一部を溶解して得た液状成分であることが好ましく、ミルラ抽出物が、エタノールまたはエタノール濃度８０重量％以上のエタノール水溶液に、ミルラ樹脂の少なくとも一部を溶解して得た液状成分を、減圧濃縮して得た成分であることも好ましい。
【００１６】
本発明の皮膚疾患治療剤においては、ミルラ樹脂由来の成分の濃度が１．０×１０-7〜1．０×１０-1重量％であることが好ましく、1．０×１０-6〜1．０×１０-2重量％であ
ることがより好ましい。
【００１７】
本発明の皮膚疾患治療剤では、皮膚疾患が、アトピー性皮膚炎であることが好ましい。
【００１８】
本発明の皮膚疾患治療剤は、液剤、クリーム剤、乳液剤、軟膏剤および湿布剤のいずれかであることが好ましい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤は、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体が肥満細胞の受容体に結合した際に分泌されるヒスタミンの遊離を有意に抑制することができ、アトピー性皮膚炎などのアレルギー性皮膚疾患の症状を抑制し、治療に好適に用いることができる他、アレルギー性鼻炎、気管支喘息などの皮膚疾患以外のI型アレルギー性疾患への治療効
果も期待できる。
【００２０】
また、本発明の皮膚疾患治療剤は、アトピー性皮膚炎や過敏肌などの皮膚の炎症を好適に抑制することができ、かつ、副作用が少なく安全性にも優れる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明について具体的に説明する。
【００２２】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤は、ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物を含有する。
【００２３】
ミルラ樹脂は、ミルラの幹からとれる油性でゴム質の樹脂であり、市販のものを用いることができ、乾燥物を好ましく用いることができる。
【００２４】
ミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出物としては、具体的には、ミルラ樹脂の少なくとも一部が溶解した液状性分、これを濃縮あるいは希釈した液体成分、またはこれらから常法により得られる固体成分が挙げられる。ここで、エタノールとしては、純エタノールまたは濃度７０％以上のエタノール水溶液、好ましくは、純エタノールまたはエタノール濃度８０％以上のエタノール水溶液が好適に用いられる。
【００２５】
ミルラ樹脂の溶解は、例えば、粉砕したミルラ樹脂を、エタノールまたはエタノール水溶液中に、通常０．１〜６０重量％、好ましくは０．５〜３０重量％程度の量で導入し、必要に応じて攪拌することにより行うことができる。このようなミルラ樹脂の溶解は、通常５〜７５℃、好ましくは１０〜５０℃のエタノール温度条件で行うのが好ましい。溶解の温度条件が５℃未満である場合には、ミルラ樹脂由来の成分の溶解度が低く抽出が不十分なことがあり、７５℃を超える場合には、ミルラ樹脂由来の成分のうち、揮発性の高い成分が揮発してしまい、皮膚疾患治療剤では有効成分を充分に活用できない場合がある。
【００２６】
抽出は、エタノールまたはエタノール水溶液中に、ミルラ樹脂由来の成分の少なくとも一部が溶解する条件で行えばよく、特に限定されるものではないが、エタノールまたはエタノール水溶液中に、導入したミルラ樹脂の１０重量％以上、好ましくは２０重量％以上、より好ましくは２０〜６０重量％程度が溶解する条件で行うのが望ましい。
【００２７】
エタノールまたはエタノール水溶液に溶解したミルラ樹脂の量は、導入したミルラ樹脂と不溶分として除去したミルラ樹脂との重量の差により求めることができる。不溶分の除去は、デカンテーション、ろ過、遠心分離などの公知の方法により適宜行うことができ、ミルラ樹脂が溶解したミルラ樹脂抽出液を有効に活用する意味でろ過により行うのが好ましい。ミルラ樹脂がエタノールまたはエタノール水溶液中に完全に溶解した場合には、不溶分の除去は行わなくともよい。このようにして得られたミルラ抽出液中には、ミルラ樹脂に含まれるヒスタミン遊離抑制作用を有する成分が含有されている。
【００２８】
このようにしてミルラ樹脂からエタノールで抽出して得たミルラ抽出液は、そのまま本発明のヒスタミン遊離抑制剤あるいは皮膚疾患治療剤の有効成分として、ヒスタミン遊離抑制剤あるいは皮膚疾患治療剤の調製に用いることができるが、溶媒であるエタノールあるいはエタノール水の少なくとも一部を除去して、濃縮して用いてもよい。濃縮は、どのような方法で行ってもよいが、減圧濃縮または加熱還流により容易に行うことができ、好ましくは減圧濃縮により行うことができる。減圧濃縮では、ミルラ樹脂抽出液を長時間高度に加熱する必要がないため、有効成分の分解による効果の低下や、分解物による副作用を防止することができる。
【００２９】
エタノール溶液またはエタノール水溶液として抽出されたミルラ抽出液を、減圧濃縮などにより濃縮した場合には、溶媒であるエタノールおよび水が除去されるとともに、ミルラ由来の揮発成分の一部も除去されるが、濃縮された抽出物がヒスタミン遊離抑制の効果を示すため、濃縮物を、本発明のヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤の有効成分として好適に用いることができる。また、本発明の皮膚疾患治療剤では、ミルラ由来の揮発成分による芳香ならびに清涼感が、好適に作用するため、エタノール溶液またはエタノ
ール水溶液として抽出されたミルラ抽出液を、濃縮せずにそのまま有効成分として含有することも好ましい。
【００３０】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤は、剤形や症状、使用部位などにもより特に限定されるものではないが、ミルラ樹脂由来の成分を１．０×１０-7〜１．０×１０-1重量％、好ましくは１．０×１０-6〜1．０×１０-2重量％、より好ましくは１
．０×１０-6〜5．０×１０-3重量％の濃度で含有するのが望ましい。このような濃度で
ミルラ樹脂由来の成分を含有する場合には、ヒスタミンの遊離を有意に抑制することができ、Ｉ型アレルギー反応を防止あるいは軽減する効果が期待できる。特に、本発明のヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤が、ミルラ樹脂由来の成分を、1．０×１０-6〜1．０×１０-4重量％の量で含有する場合には、ヒスタミンの遊離を顕著に抑制することができ、優れた薬効を示す。皮膚疾患治療剤中において、ミルラ樹脂由来の成分量が１重量％以上の場合など、ミルラ樹脂由来の成分を過度に高濃度に含有すると、皮膚炎の増悪などの副作用を誘引する場合もあるため好ましくない。
【００３１】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、気管支喘息などのＩ型アレルギー疾患の治療に有効である。また、本発明の皮膚疾患治療剤は、アトピー性皮膚炎、過敏肌などの皮膚疾患の治療に有効であり、特にアトピー性皮膚炎の治療剤として好ましく用いることができる。
【００３２】
アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、アレルギー性気管支炎のようなＩ型アレルギーでは、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体がアレルギー症状の発症に関与している。このようなアレルギー症状の発症は、通常、ＩｇＥ抗体が肥満細胞の受容体に結合し、ヒスタミンなどの生理活性物質が分泌されることに起因するため、肥満細胞からのヒスタミンの遊離が抑制できれば、アレルギー症状の発祥も抑制することができる。本発明のヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤は、ＩｇＥ受容機能とヒスタミン遊離機能を有する細胞からのヒスタミン遊離を有意に抑制することができる。このため本発明のヒスタミン遊離抑制剤および皮膚疾患治療剤は、Ｉ型アレルギー症状の発現を抑制し、アトピー性皮膚炎や過敏肌などの皮膚疾患を改善することができる。
【００３３】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤は、その剤形を特に限定するものではなく、たとえば、錠剤、タブレット、シロップ、粉末剤などの経口投与剤、液剤、クリーム剤、乳液剤、軟膏状、湿布剤などの外用剤などのいずれであってもよく、適用する疾患、投与する患者の症状等に応じて適宜選択することができる。また、本発明の皮膚疾患治療剤は、アトピー性皮膚炎などの皮膚疾患の患部に適用できる剤形であれば、その剤形を特に限定するものではないが、たとえば、液剤、クリーム剤、乳液剤、軟膏状、湿布剤などであるのが好ましい。
【００３４】
本発明のヒスタミン遊離抑制剤あるいは皮膚疾患治療剤は、ミルラ抽出物を有効成分として単独で含有していてもよく、その他の薬剤成分とともに含有していてもよい。
【００３５】
実施例
以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
調製例１（ミルラ樹脂抽出液Ａの調製）
ミルラ樹脂（生活の木社製）の乾燥物を乳鉢で粉砕し、粉状ミルラ樹脂を得た。得られた粉状ミルラ樹脂１０ｇを、２０℃の純エタノール１０００ｍｌ中に入れ、室温にて攪拌してろ過し、ろ液をミルラ樹脂抽出液Ａとして得た。ろ別された固形分量は8．6ｇであった。
調製例２（ミルラ樹脂濃縮液Ｂの調製）
調製例１で得たミルラ樹脂抽出液Ａ１００ｍｌを、減圧濃縮して、容量２．５ｍｌのミルラ樹脂濃縮液Ｂを得た。
【実施例１】
【００３６】
（ヒスタミン遊離抑制作用の検証）
液体培地に懸濁したＲＢＬ−２Ｈ３細胞を２４穴プレートに分注し、2,4-dinitrophenyl（ＤＮＰ）特異的ＩｇＥ抗体で感作させ、一晩培養した。ここで、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞
は、Wistar系ラットにβ−chlorethylamineを投与することにより、白血病化させて得ら
れた好塩基球のうち、ＩｇＥ−receptorとヒスタミン遊離機能を持った細胞であり、肥満細胞のモデルとして用いられる細胞である。
【００３７】
翌日、培地をSiraganian Buffer（１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、０．４ｍＭ ＭｇＣｌ2、５．６ｍＭ グルコース、１ｍＭ ＣａＣｌ2、０．１％ bovine serum albumin（ＢＳＡ）および２５ｍＭ ＰＩＰＥＳを含む。ｐＨ７．２）に置き換え、感作ＲＢＬ−２Ｈ３細胞がSiraganian Bufferに懸濁した懸濁液を得た。
【００３８】
得られた懸濁液中に、懸濁液中におけるミルラ濃縮液Ｂの希釈倍率が、１０2倍、１０3倍、１０4倍、１０5倍、１０6倍、１０7倍、１０8倍となるように、調製例２で得たミル
ラ濃縮液Ｂをそれぞれ添加した。次いでこれらの各サンプルと、ミルラ濃縮液Ｂを添加しないサンプル（コントロール）とのそれぞれに、ＤＮＰ−ＢＳＡを添加して、ＲＢＬ−２Ｈ３細胞からヒスタミンが遊離される抗原抗体反応を誘導した。
【００３９】
一定時間経過後、遠心分離により各サンプルから細胞を除去した上清に、p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosamnidase（p-NAD）を添加し、遊離ヒスタミン量を示す吸光度（O.D. ５０４ｎｍ）を測定した。
【００４０】
ミルラ濃縮液を添加せずに抗原抗体反応を行ったコントロールの遊離ヒスタミン量を１００％とした時の、ヒスタミン遊離率を図１のグラフに示す。図１のグラフより、ミルラ濃縮液Ｂの希釈倍率が１０6倍のサンプルでは、特にヒスタミン遊離率が低く、ヒスタミ
ン遊離を顕著に抑制していることがわかった。なお、ミルラ濃縮液Ｂの希釈倍率が１０2
倍の場合には、吸光度が高く、見かけ上高いヒスタミン遊離率を示したが、これは、高濃度のミルラ濃縮液Ｂに起因する吸光か、またはＲＢＬ−２Ｈ３細胞膜の破壊による蛋白遊離に起因する吸光を示すものと考えられる。
【実施例２】
【００４１】
白色ワセリンに、調製例１で得たミルラ樹脂抽出液Ａを、５％（ｖ／ｗ）、２．５％（ｖ／ｗ）、および、１．２５％（ｖ／ｗ）の量でそれぞれ混合し、５％ミルラ軟膏、２．５％ミルラ軟膏および１．２５％ミルラ軟膏をそれぞれ調製した。
（皮膚炎の症状改善効果の検証）
８時から２０時までを明期とする１２時間明暗サイクルで、市販の固形食を自由摂食させて飼育した、６週齢のＳＤ系雄ラットを、Ａ〜Ｆ群について各３匹被験動物とした。飼育条件は、治験開始後も同様とした。
【００４２】
１日目夕方、各被験動物の左右の耳介表裏に、表１に示す軟膏をそれぞれ塗布した（誘発前軟膏塗布）。ただし対照実験となるＡ群の被験動物については塗布を行わなかった。なお、Ｂ群の塗布軟膏として用いたポジコンは、アトピー性皮膚炎などの治療薬として用いられる市販薬であり、副腎皮質ホルモンである吉草酸ベタメゾンを含有する。また、Ｃ群の塗布軟膏として用いた白色ワセリンは、ミルラ軟膏の基材として用いたものと同一である。
【００４３】
【表１】
2005170829.tif 000002
【００４４】
２日目（上記各軟膏を塗布した翌日）、皮膚炎を誘発する抗原であるピクリルクロライドを２０％含有するアセトン溶液を、各被験動物の左右の耳介表裏に塗布し、皮膚炎の誘発を行った。各被験動物には、皮膚炎誘発を行った当日の夕方に、表１に示す軟膏を１日目と同様に再度塗布した（誘発後軟膏塗布）。
【００４５】
各被験動物の左右の耳介厚を、炎症が最大となる誘発６時間後に測定した。
【００４６】
３日目夕方、１日目と同様にして各被験動物の左右の耳介表裏に、表１に示す軟膏をそれぞれ塗布した（誘発前軟膏塗布）。そして４日目には、２日目と同様にして、皮膚炎の誘発および誘発後軟膏塗布を行い、誘発から６時間後に左右の耳介厚を測定した。
【００４７】
以上の実験で、各群３匹の被験動物について、左右、各２回の測定結果を得た。これらを平均して各群の平均耳介厚を求めた。結果を図２のグラフに示す。
【００４８】
この結果より、軟膏を用いない皮膚炎のＡ群、市販軟膏であるポジコンを用いたＢ群、および、基材である白色ワセリンのみを用いたＣ群よりも、ミルラを含有する軟膏を塗布したＤ、Ｅ、Ｆ群では耳介厚が小さく、皮膚炎症が抑制されていることがわかる。また、ミルラを含有する軟膏を塗布したＤ、Ｅ、Ｆ群のうちでは、ミルラ抽出液濃度の低い１．２５％ミルラ軟膏を用いたＦ群で、もっとも耳介厚が小さく、皮膚炎症が抑制されたことがわかり、実施例２で用いたミルラ軟膏のうちでは、１．２５％ミルラ軟膏がより好ましい有効成分濃度を有していることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】図１は、実施例１において測定した、ミルラ濃度によるヒスタミン遊離率の変化を示すグラフである。
【図２】図２は、実施例２における皮膚炎症抑制効果を示すグラフである。
【図１】
2005170829.tif 000003
【図２】
2005170829.tif 000004