(57)【要約】【課題】皮膚のメラノサイト増殖抑制剤、並びに、日焼け防止剤、美白剤または日焼け防止用化粧料、美白用化粧料を提供すること。【解決手段】本発明は、皮膚表皮細胞からの情報伝達作用機序を利用した、シャクヤク及び／又はタイソウの抽出物を含有するメラノサイト増殖抑制剤、並びに、このメラノサイト増殖抑制剤としてシャクヤク及び／又はタイソウの抽出物を含有する日焼け防止用または美白用化粧料である。【選択図】        図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シャクヤク及び／又はタイソウ抽出物を含有することを特徴とするメラノサイト増殖抑制剤。
【請求項２】
請求項１に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む皮膚外用剤。
【請求項３】
請求項１に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む化粧料。
【請求項４】
請求項１に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む日焼け予防用化粧料。
【請求項５】
請求項１に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む美白用化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、紫外線照射による著しい皮膚メラノサイトの増殖を抑制し、日焼けやシミ、そばかすを未然に防ぐことができるメラノサイト増殖抑制剤、並びにこのメラノサイト増殖抑制剤を含む美白用化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
紫外線による皮膚のシミ、黒ずみや色素沈着などを改善するために、従来から美白剤或いは美白化粧料が広く検討され、提案されている。肌色の決定要因の中で最も大きいものはメラニン色素であり、皮膚のメラノサイト（色素細胞）内でのこのメラニンの生成抑制、既成メラニンの還元、メラニンの排出促進などの作用機序を考慮して、種々の薬剤を配合した美白化粧料が提案されており、例えばアルブチン、コウジ酸、ビタミンＣおよびその誘導体などが有効成分として広く配合されている（例えば、非特許文献１参照）。あるいは、過酸化水素、アスコルビン酸、グルタチオン、コロイド硫黄等も有効成分として知られ、各々美白効果を目的とした美白化粧料あるいは皮膚外用剤として利用されている。
【０００３】
メラニン生成を著しく抑制し、安全で美白効果が高い美白用化粧料組成物として、ガイヨウなどの特定の生薬成分の抽出物が、強いメラニン生成抑制効果があり、細胞毒性が極めて弱く、化粧料の美白成分として有効であることも提案されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００４】
また、上述のように紫外線が照射された後皮膚のメラニンが増加するが、これとともに皮膚のメラノサイトそのものも増加することが知られている。従って、このような色素細胞であるメラノサイトの増殖を抑制することも美白剤或いは美白化粧料としての効果を発揮するために検討されており、例えば、ビタミンＣあるいはその誘導体を配合しメラノサイトの増殖を抑制する方法（例えば、特許文献２参照）、コウジ酸を配合する方法（例えば、特許文献３参照）、ビタミンＤを配合する方法（例えば、特許文献４参照）などが提案されている。
【０００５】
【特許文献１】
特開平７−１２６１４９号公報
【特許文献２】
特開２００２−２７５０３０号公報
【特許文献３】
特許第２９７７８６５号公報
【特許文献４】
再公表特許Ｗ０１／２８５６５号公報
【非特許文献１】
「化粧品の有用性−評価技術の進歩と将来展望−」日本化粧品技術者会編集、１４４−１５０頁、２００１年３月３１日、（株）薬事日報社発行
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、これらの従来の美白剤あるいは美白化粧料には、まだその効果が十分でなかったり、安全性の問題があったり、その他種々の問題点が残されており、実用性という面でさらに改良すべき問題があった。
従って、本発明は、上記のような従来の美白剤または美白用化粧料の問題点を改良するための、皮膚のメラノサイト増殖抑制剤を提供するものであり、更には、このメラノサイト増殖抑制剤を利用した美白剤または日焼け予防用化粧料あるいは美白用化粧料を提供することを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題につき鋭意検討した結果、紫外線（ＵＶ−Ｂ）に曝された場合にケラチノサイト（皮膚表皮細胞）により誘引されるメラノサイトの増殖が、特定の植物の抽出物によって抑制されることを見出し、本発明を完成した。
即ち、ヒトの皮膚のメラノサイトは通常、皮膚表皮層の基底部分に分布しており、常に細胞数が一定に保たれるように、その細胞増殖が調節されている。しかし、日焼け時の肌の黒化や炎症などによる色素沈着などに見られるように、紫外線や炎症により産生されるサイトカインによってメラノサイトの細胞増殖が亢進する。近年の研究により、メラノサイトの増殖がケラチノサイトによる情報伝達機構によって制御されており、ｂＦＧＦ、α−ＭＳＨ、ＥＴ−１、ＧＭ−ＣＦＳ、アラキドン酸代謝物，ＡＤＦなどがメラノサイト刺激因子としてメラノサイトの増殖作用を示すことが明らかになってきた。従って、本発明者らは、かかる皮膚表皮細胞からメラノサイトへの情報伝達作用機序に着目し、本発明を完成したものである。
【０００８】
即ち、本発明は以下の内容をその要旨とするものである。
（１）本発明は、シャクヤク及び／又はタイソウ抽出物を含有することを特徴とするメラノサイト増殖抑制剤である。
（２）また、本発明は、前記（１）に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む皮膚外用剤である。
（３）更に、本発明は、前記（１）に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む化粧料である。
（４）また、本発明は、前記（１）に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む日焼け予防用化粧料である。
（５）また、本発明は、前記（１）に記載のメラノサイト増殖抑制剤を含む美白用化粧料である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下において、本発明を更に詳しく説明する。
本発明は、シャクヤク及び／又はタイソウの抽出物を含むことを特徴とするメラノサイト増殖抑制剤、及びこの剤を含む皮膚外用剤、日焼予防あるいは美白用化粧料である。
【００１０】
本発明に使用するシャクヤク抽出物（Ｐｏｅｎｙ  Ｒｏｏｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ）は、シャクヤク（Ｐａｅｏｎｉａ  Ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ  Ｐａｌｌａｓ）またはその近縁植物（Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ、ボタン科）の根から溶媒を用いて抽出して得られる植物エキスである。抽出に用いる溶媒は、エタノール、１，３−ブチレングリコール、精製水、またはこれらの混合溶媒が特に好ましい。
タイソウは、ナツメ（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ  ｊｕｊｕｂａ  Ｍｉｌｌｅｒ  ｖａｒ．ｉｎｅｒｍｉｓ  Ｒｅｈｄｅｒ）またはその近縁植物の果実であり、ナツメは南欧が原産の落葉喬木である。タイソウ抽出物は、このナツメまたはその近縁植物の果実から、溶媒を用いて抽出して得られる植物エキスである。抽出に用いる溶媒は、エタノール、１，３−ブチレングリコール、精製水、またはこれらの混合溶媒が特に好ましい。
【００１１】
シャクヤク又はタイソウの抽出と精製は、通常一般に行なわれる抽出方法や精製方法に準拠して行なうことができる。
抽出に使用する溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、アセトン、キシレン、トルエン、ベンゼン、クロロホルム、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどが挙げられる。抽出温度、抽出溶媒の量は特に限定はされないが、通常、抽出温度は５〜９０℃、好ましくは１０〜５０℃、抽出溶媒の量は被抽出物の２〜２０質量倍の量を使用する。
抽出する際にタンパク分解酵素を加えて加水分解を行なってもよい。
【００１２】
抽出物の精製は、濾過、遠心分離、デカンテーションなどにより不溶物を除去した後、必要に応じて脱色、脱臭の目的で活性炭、活性白土、シリカゲル、活性アルミナ、合成樹脂系の吸着剤などを用いて処理したり、溶剤分画、逆浸透膜、イオン交換体等によって分画、精製、或いは濃縮することができる。得られた抽出物はそのまま液状の状態で、或いは減圧濃縮、スプレードライ、凍結乾燥などの方法で粉末化して使用することもできる。
【００１３】
本発明においては、ヒトの皮膚に、シャクヤクもしくはタイソウの抽出物またはこれらを含む組成物を直接塗付することにより、皮膚のケラチノサイトからの情報伝達により、メラノサイトの細胞増殖を抑制することができ、メラノサイトの細胞増殖が抑制される結果、皮膚の日焼け予防あるいは美白作用が得られるという著しく特異な効果を有する。
このことは、普通に使用される皮膚化粧料の組成物にシャクヤクまたはタイソウの抽出物を加えたものをヒトの皮膚に塗布して使用すれば、これが皮膚のケラチノサイト細胞に作用し、ここでケラチノサイト由来メラノサイト増殖抑制因子が生成し、その結果メラノサイトの細胞増殖が有意に抑制されることとなり、その結果優れた皮膚の日焼け予防あるいは美白作用を示すことができる。従って、本発明はまた、かかるヒトケラチノサイト細胞の作用を利用する、シャクヤク抽出物及び／又はタイソウ抽出物を含有する日焼け予防用あるいは美白用化粧料である。
【００１４】
本発明の皮膚外用剤または皮膚化粧料へのシャクヤク抽出物またはタイソウ抽出物の配合量としては、それぞれ０．００１〜１０質量％、好ましくは０．０１〜２質量％が好ましいが、用いる剤型、使用対象等の様々の条件に応じて、その配合量を適宜設定できる。
【００１５】
本発明のシャクヤク抽出物またはタイソウ抽出物を含有する日焼け予防用あるいは美白用化粧料は、シミ、ソバカス等の予防又は治療に有効な、皮膚の美白作用を有する皮膚用化粧料組成物、医薬部外品、医薬であり、例えば、水溶液、油剤、乳液、懸濁液等の液剤、ゲル、クリーム等の半固形剤、粉末、顆粒、カプセル、マイクロカプセル、固形等の固形剤の形態で適用可能である。従来から公知の方法でこれらの形態に調製し、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏、硬膏、ハップ剤、エアゾル剤等の種々の剤型とすることができる。これらを身体に塗布、貼付、噴霧等により適用することができる。化粧料としては、化粧水、乳液、クリーム、パック等の顔用化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料等とすることができる。
【００１６】
本発明の皮膚外用剤または皮膚化粧料の組成物には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子物質、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。
【００１７】
添加成分として使用する、油脂類としては、例えば、オリーブ油、ツバキ油、月見草油、マカデミアナッツ油、ナタネ油、トウモロコシ油、ゴマ油、ホホバ油、胚芽油、小麦胚芽油、トリオクタン酸グリセリン、等の液体油脂、カカオ脂、ヤシ油、硬化ヤシ油、パーム油、パーム核油、モクロウ、モクロウ核油、硬化油、硬化ヒマシ油等の固体油脂、ミツロウ、キャンデリラロウ、綿ロウ、ヌカロウ、ラノリン、酢酸ラノリン、液状ラノリン、サトウキビロウ等のロウ類が挙げられる。
【００１８】
炭化水素類としては、例えば、流動パラフィン、スクワレン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス等が挙げられる。
高級脂肪酸として、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）等が挙げられる。
【００１９】
高級アルコールとしては、例えば、ベヘニルアルコール、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、セチルアルコール、セトステアリルアルコール等の直鎖アルコール、モノステアリルグリセリンエーテル、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、オクチルドデカノール等の分枝鎖アルコール等が挙げられる。
【００２０】
シリコーンとしては、例えば、鎖状ポリシロキサンのジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等、環状ポリシロキサンのデカメチルシクロペンタシロキサン等が挙げられる。
【００２１】
アニオン界面活性剤としては、例えば、ラウリン酸ナトリウム等の脂肪酸塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の高級アルキル硫酸エステル塩、ＰＯＥラウリル硫酸トリエタノールアミン等のアルキルエーテル硫酸エステル塩、Ｎ−アシルサルコシン酸、スルホコハク酸塩、Ｎ−アシルアミノ酸塩等が挙げられる。
【００２２】
カチオン界面活性剤としては、例えば、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等が挙げられる。
【００２３】
両性界面活性剤としては、例えば、アルキルベタイン、アミドベタイン等のベタイン系界面活性剤等が挙げられる。
【００２４】
非イオン界面活性剤としては、例えば、ソルビタンモノオレエート等のソルビタン脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体等が挙げられる。
防腐剤としては、例えば、メチルパラベン、エチルパラベン等を挙げることができる。
【００２５】
金属イオン封鎖剤としては、例えば、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、エデト酸、エデト酸ナトリウム塩等のエデト酸塩を挙げることができる。
【００２６】
高分子物質としては、例えば、アラビアゴム、トラガカントガム、ガラクタン、グアーガム、カラギーナン、ペクチン、寒天、クインスシード、デキストラン、プルラン、カルボキシメチルデンプン、カゼイン、ゼラチン、メチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）、アルギン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー（ＣＡＲＢＯＰＯＬ等）等のビニル系高分子、等を挙げることができる。
【００２７】
増粘剤としては、例えば、カラギーナン、トラガカントガム、クインスシード、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ＣＭＣ、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、グアーガム、キサンタンガム、ベントナイト等を挙げることができる。
【００２８】
粉末成分としては、例えば、タルク、カオリン、雲母、シリカ、ゼオライト、ポリエチレン粉末、ポリスチレン粉末、セルロース粉末、無機白色顔料、無機赤色系顔料、酸化チタンコーテッドマイカ、酸化チタンコーテッドタルク、着色酸化チタンコーテッドマイカ等のパール顔料、赤色２０１号、赤色２０２号等の有機顔料を挙げることができる。
【００２９】
紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸、サリチル酸フェニル、パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン等を挙げることができる。
【００３０】
紫外線遮断剤としては、例えば、酸化チタン、タルク、カルミン、ベントナイト、カオリン、酸化亜鉛等を挙げることができる。
【００３１】
保湿剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、キシリトール、マルチトール、マルトース、ソルビトール、ブドウ糖、果糖、コンドロイチン硫酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸、シクロデキストリン等が挙げられる。
【００３２】
薬効成分としては、例えば、ビタミンＡ油、レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン等のビタミンＢ２類、ピリドキシン塩酸塩等のＢ６類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム等のパントテン酸類、ビタミンＤ２、コレカルシフェロール等のビタミンＤ類；α−トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ−α−トコフェロール等のビタミンＥ類等のビタミン類を挙げることができる。
【００３３】
プラセンタエキス、グルタチオン等の美白剤、ローヤルゼリー、ぶなの木エキス、海洋深層水等の皮膚賦活剤、カプサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモール、カフェイン、タンニン酸、γ−オリザノール等の血行促進剤、グリチルリチン酸誘導体、アズレン等の消炎剤、アルギニン、ロイシン、トリプトファン等のアミノ酸類、常在菌コントロール剤のマルトースショ糖縮合物、塩化リゾチーム等を挙げることができる
【００３４】
さらに、植物抽出物として、カミツレエキス、ユキノシタエキス、パセリエキス、バナバエキス、グレープフルーツエキス、スイカズラエキス、コメエキス、ブドウエキス、ホップエキス、ビワエキス、オウバクエキス、ヨクイニンエキス、センブリエキス、メリロートエキス、バーチエキス、カンゾウエキス、サボンソウエキス、ヘチマエキス、トウガラシエキス、レモンエキス、ゲンチアナエキス、シソエキス、アロエ（アロエベラ）エキス、ローズマリーエキス、セージエキス、タイムエキス、茶エキス、海藻エキス、キューカンバーエキス、チョウジエキス、ニンジンエキス、マロニエエキス、ハマメリスエキス、キウイエキス、センテラアジアチカエキス、リンゴエキス等の各種抽出物を挙げることができる。
【００３５】
上記植物の抽出物は市販のものを使用できるが、それぞれの植物を水又はエタノール、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、プロピレングリコール等のような有機溶媒を用いて抽出することにより製造することができる。抽出にあたって、原料である植物に応じてその果実、種子、葉、茎、根等をそのまま、または細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後、抽出を行う方が効率的である。抽出は抽出溶媒に浸漬して行え、攪拌することや、抽出溶媒中でホモジナイズ又は加圧することもできる。抽出温度は、５〜１００℃程度が適切であり、抽出時間は、５分〜１０日間程度の間で、適宜設定することができる。
【００３６】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。なお、実施例中の「％」、「部」および「比率」は特に注記しない限り質量基準である。
【００３７】
実施例１：
（ｉ）植物エキスの抽出
以下の方法によって植物の抽出エキスを調製した。なお、比較対照例として、類似の生薬成分であるエチナシ抽出物を使用した場合についても同様の評価を行なった。
・シャクヤク抽出物：
日本薬局方シャクヤクを乾燥し、細切した後、これにエタノールと水の５０／５０の混合液を加えて２４時間浸漬し、その後圧搾分離して抽出液を得た。この分離した抽出残分に更に、エチレングリコールと水の６０／４０の混合液を加えて２４時間浸漬し、その後濾過して、両方で得られた抽出液を濃縮、減圧乾燥し、シャクヤク抽出物を得た。
・タイソウ抽出物：
ナツメの果実であるタイソウを細切した後、これに１，３−ブチレングリコールと水の３０／７０の混合液を加えて２４時間浸漬し、その後濾過して、得られた抽出液を濃縮、減圧乾燥し、タイソウ抽出物を得た。
・エチナシ抽出物：
ホソババレンギク（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ  ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ  Ｄｉｏｃｌｅｕｓ  Ｃａｒｙｓｔｉｕｓ（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ））の葉をエタノールと水の２０／８０の混合液に浸漬し、濾過した液にエタノールを加えて、エタノール濃度が３０％になるように調整し、エチナシ抽出物を得た。
【００３８】
（ｉｉ）被検試料の調製
エタノールと水の５０／５０の混合液にて、上記（ｉ）で得たそれぞれの植物抽出物の１０ｍｇ／ｍＬの溶液を調製し、これを下記の細胞培養に用いる培地に添加した。この際、培地中のエタノール濃度が１％以下となるようにした。
【００３９】
（ｉｉｉ）メラノサイト増殖抑制の評価
ヒトケラチノサイト（ＫＣ）を培養する培地に、上記の（ｉｉ）で調製した種々の植物エキスを含む被検試料を添加し、ＵＶＢ照射された場合のヒトメラノサイト（ＭＣ）の増殖抑制の効果を評価した。
即ち、まず、ＫＣを３．０×１０５ｃｅｌｌの細胞密度で３５ｍｍのデイッシュに播種した。これを、翌日上記の（ｉｉ）で調製した各被検試料を添加した培地（Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２）に交換して培養を開始した。２４時間の間培養を継続した後、培地をＨａｎｋｓ（−）に置き換え、これに紫外線（ＵＶＢ）を５ｍｊ／ｃｍ２照射した。ＵＶＢ照射後、再び各被検試料の添加培地（Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２）に交換し、２４時間の間培養を継続した。２４時間経過後各被検試料で培養した培養液を回収し、これを培養上清（Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＭ）とした。紫外線照射後のＫＣのＵＶＢによる細胞障害を確認するために、ニュートラルレッド法によってこれらのサンプルを評価し、細胞生存率を求めた。
次に、ＭＣを３．０×１０４ｃｅｌｌの細胞密度で９６穴マイクロプレートに播種した。これを、翌日上記で得たＣＭ（Ｈｕｍｅｄｉａ−ＫＧ２）に交換して培養を開始した。培養４８時間後、ＭＴＴアッセイによって細胞増殖率を評価した。なお、ＭＴＴアッセイによれば、ＭＴＴ（３−（４，５−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）が細胞内のミトコンドリアの脱水素酵素の基質となり、生存能の高い細胞ほど多くのＭＴＴを還元し、その結果生じるホルマザンの量が生存する細胞数とよく対応することから、生存した細胞数が評価できる。即ち、４８時間培養後の培養液を０．４ｍＬのＭＴＴを含有する培地と交換し、２時間培養した。培地を除去した後、２−プロパノールを添加して、細胞内に生成したホルマザンを溶解抽出し、このホルマザン量を評価するためにマイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。
【００４０】
なお、ここで使用したＫＣ、ＭＣおよびＨａｎｋｓ（−）は以下のものを用いた。
・正常ヒトケラチノサイト（ＫＣ）：
正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清培地、クラボウ（株）製。
・正常ヒトメラノサイト（ＭＣ）：
正常ヒト表皮メラニン細胞増殖用低血清培地、クラボウ（株）製。
・Ｈａｎｋｓ（−）：
ハンクス緩衝塩類溶液（Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋非含有）
【００４１】
（ｉｖ）評価結果
紫外線照射後のＫＣのＵＶＢによる細胞障害を確認するために、ニュートラルレッド法によってこれらのサンプルを評価し、細胞生存率を求めた。その結果を図１〜３に示す。
これらの図において、横軸は添加した植物エキスの濃度（ｇ／ｍＬ）、縦軸はニュートラルレッド法による細胞生存率を、ＵＶＢ未照射で植物エキスを無添加のものの生存率を１００％とした場合の、各植物エキスを種々の濃度とした被検試料で培養した細胞の相対的生存率で表した棒グラフである。そして、白色の棒がＵＶＢを照射しない場合の細胞生存率（ケラチノサイトにおける相対的な細胞生存率）であり、黒色の棒がＵＶＢを照射した場合の細胞生存率（ケラチノサイトにおける相対的な細胞生存率）を表している。
その結果、いずれの被験試料についても細胞生存率はほぼ１００％であり、ケラチノサイトを増殖させていないことが分かる。
【００４２】
次に、ＭＴＴアッセイによるメラノサイト増殖抑制の評価結果を図４〜図６に示す。
ＵＶ照射を行なわず、かつ被検試料の植物エキスを含まないで培養したＭＣの細胞（コントロール）の吸光度を１００として、各植物エキスを種々の濃度で培地に添加し、培養した細胞の相対的吸光度をＩｎｄｅｘ（％）で表した。
これらの図において、横軸は添加した植物エキスの濃度（ｇ／ｍＬ）、縦軸はＭＴＴアッセイによる吸光度を、ＵＶＢ未照射で植物エキス無添加のものの吸光度を１００％とした場合のＩｎｄｅｘ（％）で表した棒グラフである。そして、白色の棒がＵＶＢを照射しない場合のＭＴＴ  Ｉｎｄｅｘ（メラノサイトにおける相対的な細胞増殖量を表す指標）であり、黒色の棒がＵＶＢを照射した場合のＭＴＴ  Ｉｎｄｅｘ（メラノサイトにおける相対的な細胞増殖量を表す指標）を表している。
まず、図４のシャクヤク抽出物の場合では、ＭＴＴ  Ｉｎｄｅｘが１２５％まで増加したものが、シャクヤク抽出物の添加濃度を増加させるに従ってこの値が大きく減少し、無添加の場合の増加抑制に比べて有意にメラノサイトにおける細胞の増殖が抑制されたことが分かる。
次に、図５のタイソウ抽出物の場合にも、ＭＴＴ  Ｉｎｄｅｘが１２５％まで増加したものが、タイソウ抽出物の添加濃度を増加させるに従ってこの値が大きく減少し、無添加の場合の増加抑制に比べて有意にメラノサイトにおける細胞の増殖が抑制されたことが分かる。
次に、図６のエチナシ抽出物の場合では、ＵＶＢ照射した場合に、無添加でＭＴＴ  Ｉｎｄｅｘが１１３％まで増加したものが、エチナシ抽出物の添加濃度を増加させてもＭＴＴ  Ｉｎｄｅｘの値に減少傾向が見られず、逆にＵＶＢ未照射の場合のＭＴＴ  Ｉｎｄｅｘの値に増加傾向が見られ、類似した植物エキスであってもエチナシの場合にはメラノサイトにおける細胞の増殖の抑制効果が見られないことが分かる。
【００４３】
実施例２：
実施例１で得たシャクヤク抽出物およびタイソウ抽出物用いて、下記の表１に示す配合組成の美白用クリームを調製した。同時に、比較品として植物エキスを含まない美白用クリームも同様にして調製した。これらの美白用クリームを用いて、以下に記載する二つの色素沈着改善効果の評価によって、使用した美白用クリームの効果を調べた。
（ｉ）  色素沈着改善効果  その１
２０〜４０代の女性２０名に、表１に示す美白用クリームを１日に１回０．５ｇの量で、シミの目立つ部位に２ケ月連続して使用し、使用開始前と２ケ月経過後のそれぞれの女性の、美白用クリームを適用した部位の皮膚の明度およびシミの面積を求めた。皮膚の明度は分光測色計（ＣＭ−８００ｄ、ミノルタ（株）製）を用いてＬ＊値を計測し、２０名の使用前と使用後の明度の変化量の平均値を求めた。シミの面積は、デジタルカメラ（Ｄ−１００，ニコン（株）製）でシミの部位を撮影し、グレー画像化したシミの部分の面積を画像解析ソフト（Ｗｉｎ  Ｒｏｏｆ、三谷商事）を用いて算出し、２０名の使用前と使用後の明度の変化量の平均値を求めた。
【００４４】
（ｉｉ）色素沈着改善効果  その２
２０〜４０代の男性２０名に対して、最小紅斑紫外線量（ＭＥＤ）の紫外線を背中に照射し、１週間後の皮膚の明度とメラニン量を計測した後、表１の美白用クリーム０．５ｇを紫外線を照射していない部位に２ケ月期間連続して塗付し、再び同じＭＥＤの紫外線を背中に照射し、１週間後の皮膚の明度とメラニン量を計測した。皮膚の明度は分光測色計（ＣＭ−８００ｄ、ミノルタ（株）製）を用いてＬ＊値を計測し、２０名の美白クリームの塗付前と塗付後の明度の変化量の平均値を求めた。メラニン量は、メグザメーター（Ｍｅｘａ  Ｍｅｔｅｒ、Ｃ＋Ｋ社製）を用いてＭ値を計測し、２０名の美白クリームの塗付前と塗付後のＭ値の差の平均値を求めた。Ｍ値はメラニンの量を表す数値であり、この値が大きいほどメラニンの量が多い。表１の数値がマイナスとなるのはメラニンの量が減少したことを表す。
これらの色素沈着改善効果の評価結果を表１に示す。
【００４５】
【表１】
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【００４６】
シャクヤク抽出物（本発明品１）又はタイソウ抽出物（本発明品２）を用いた本発明の美白用クリームの場合には、すでにできてしまったシミについても、強制的に紫外線に暴露した場合でも、この美白用クリームを２ケ月程度連続して皮膚に塗布することにより、シャクヤク抽出物又はタイソウ抽出物が皮膚のケラチノサイトに作用することにより、皮膚の明度が向上し、またシミの面積やメラニンの量も減少させることができた。これに対して、シャクヤク抽出物又はタイソウ抽出物を含まないクリーム（比較品１）の場合には、使用前後で皮膚の明度の変化はほとんどなく、またシミの面積やメラニンの量もほとんど減少しなかった。
【００４７】
【発明の効果】
本発明の方法によれば、紫外線による皮膚のシミ、そばかす、黒ずみや色素沈着などを改善するために、従来の方法のように、例えば、過酸化水素やアスコルビン酸等のように皮膚の色素を直接漂白したり、アルブチン、コウジ酸あるいはビタミンＣなどのように皮膚のメラニンの生成の抑制を図るものではなく、皮膚に塗付することによって皮膚のケラチノサイトに作用し、さらにその生成物質が皮膚のメラノサイトに作用して、その増殖を抑制することができ、結果として皮膚のシミやそばかす、黒ずみ、色素沈着を予防、改善できるという効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】シャクヤク抽出物を用いた場合のケラチノサイトの細胞生存率を示すグラフである。
【図２】タイソウ抽出物を用いた場合のケラチノサイトの細胞生存率を示すグラフである。
【図３】エチナシ抽出物を用いた場合のケラチノサイトの細胞生存率を示すグラフである。
【図４】シャクヤク抽出物を用いた場合のメラノサイト細胞増殖抑制効果を示すグラフである。
【図５】タイソウ抽出物を用いた場合のメラノサイト細胞増殖抑制効果を示すグラフである。
【図６】エチナシ抽出物を用いた場合のメラノサイト細胞増殖抑制効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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