(57)【要約】【目的】土壌に生息する微生物の活性を維持しながら、低コストで油汚染土壌を継続的に浄化する方法を提供する。【解決手段】  油汚染土壌に、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を植栽する、好ましくは植物を植栽する油汚染土壌にラムノリピッドを添加する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
油汚染土壌に、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を植栽することからなる、油汚染土壌の浄化方法。
【請求項２】
植物を植栽する油汚染土壌に、ラムノリピッドを添加することを特徴とする請求項１に記載する油汚染土壌の浄化方法。
【請求項３】
油汚染土壌に、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を植栽することからなる、土壌中におけるデヒドロゲナーゼの活性低下抑制方法。
【請求項４】
植物を植栽する油汚染土壌に、ラムノリピッドを添加することを特徴とする請求項３に記載する土壌中におけるデヒドロゲナーゼの活性低下抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、油汚染土壌を、植物を利用して効率的に浄化する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、油で汚染された土壌を浄化するために、幾つもの方法が提案されている。例えば、油汚染土壌を燃焼して土壌中の油を浄化する熱処理方式（例えば、特許文献１等参照）、油汚染土壌を水洗することにより土壌表面に付着した油を物理的に除去する分級洗浄方式（例えば、特許文献２等参照）、並びに油汚染土壌から揮発性ガスを吸引して油成分を除去する土壌ガス吸引方式（例えば、特許文献３等参照）等を挙げることができる。しかし、上記熱処理方式では、高価な熱処理装置が必要で、しかも処理に多大な燃焼エネルギーを要するため多大なコストがかかるという問題に加えて、大気汚染など環境への影響が甚大であるという問題がある。また、上記分級洗浄方式では、シルト分・粘土質などの微細な土壌粒子に付着した油は除去できないため、結局廃棄しなければならないという問題がある。さらに、上記土壌ガス吸引方式は、揮発性油は除去されるが、土壌に付着した油や高沸点化合物は浄化できないという問題点がある。
【０００３】
一方、最近では、細菌やカビなどの微生物の分解能力を利用して環境中の汚染物質を分解無害化するバイオレメディエーション技術（例えば、特許文献４等参照）を、油汚染土壌の浄化処理に応用する研究も進められている。かかるバイオレメディエーション技術では、土壌に生息する微生物を活性化するか、若しくは処理に有用な微生物を処理対象の土壌に添加することにより、汚染物質を良好に分解させることが可能であるが、微生物の活性（汚染物質分解能力）を維持することが容易でないこと、また汚染の度合いに関わらず所定のランニングコストが必要で経済的でないという問題がある。
【特許文献１】特開２００１−２５７５７号公報
【特許文献２】特開２００２−２５４０６３号公報
【特許文献３】特開平８−３２３３３９号公報
【特許文献４】特開２００３−１１６５２６号公報
【特許文献５】特開２００２−１７２３８０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、油汚染土壌の浄化に関する従来の事情を考慮し、土壌に生息する微生物の活性を維持しながら、低コストで油汚染土壌を継続的に浄化する方法を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記目的を達成すべく、日夜鋭意研究を重ねていたところ、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムといったいずれもイネ科に属する特定の植物が、油汚染土壌において悪影響を著しく受けることなく生育し、しかもかかる植物の生育と共に、土壌に含まれる油が継続的に分解浄化されることを見いだした。
【０００６】
植物による油汚染土壌の浄化方法としては、アカザ科ハマアカザ科に属する植物を利用した方法が知られているが（例えば、特許文献５等参照のこと）、イネ科に属する植物、特に上記特定のイタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムを植栽することによって、優れた油分解浄化効果が得られることは知られておらず、本発明者らによって初めて見いだされ、開発されたものである。
【０００７】
すなわち、本発明は下記の実施態様を包含するものである。
項１．  油汚染土壌に、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を植栽することからなる、油汚染土壌の浄化方法。
項２．  植物を植栽する油汚染土壌に、ラムノリピッドを添加することを特徴とする項１に記載する油汚染土壌の浄化方法。
項３．  油汚染土壌に、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を植栽することからなる、土壌中におけるデヒドロゲナーゼの活性低下抑制方法。
項４．  植物を植栽する油汚染土壌に、ラムノリピッドを添加することを特徴とする項３に記載する土壌中におけるデヒドロゲナーゼの活性低下抑制方法。
【０００８】
以下に、本発明を詳細に説明する。
（１）油汚染土壌の浄化方法
本発明の油汚染土壌の浄化方法は、当該油汚染土壌にイタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を植栽することによって実施することができる。
【０００９】
これらの植物は、多種存在する植物の中でも、土壌の油汚染によっても生育が損なわれず、しかも油浄化効果並びにその持続性に優れた、イネ科（学名：Gramineae）に属する植物（草本）である。
【００１０】
ここでイタリアンライグラス（学名：Lolium multiflorum L.）は、一年生のイネ科牧草であり、初期成長が早く、水田の裏作としても使用される植物である。エンバク（学名：Avena sativa）は、一年生のイネ科飼育作物であり、寒冷地では春まき栽培、暖地では秋まき栽培で利用される植物である。ペレニアルライグラス（学名：Lolium perenne）は、多年生のイネ科牧草で冷涼穏和な気候と肥沃な土壌を好み、主に草地の放牧や土壌保全に広く利用されている。また、ソルガム（学名：Sorghum vulgare）は、一年生のイネ科飼育作物で、草丈は品種によっては３ｍ以上にもなり、また干ばつ及びアルカリ性土壌に強い植物である。
【００１１】
なお、本発明の効果を有する限りにおいて、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラスまたはソルガムの近縁種も用いることができる。近縁種とは分類学的、遺伝的に近縁なもので、交配により属間雑種ができる種も近縁種に含まれる。
【００１２】
これらイタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムは、１種単独で播種・植栽してもよいし、また２種以上を任意に組み合わせて播種・植栽することもできる。中でも、イタリアンライグラスとエンバク、特にエンバクは、比較的高濃度の油に対して生育耐性を示し、良好な油浄化作用を示す点から、好適な植物である。ゆえに、上記植物のうち２種以上を任意に組み合わせて播種・植栽する場合には、イタリアンライグラスまたはエンバクのいずれか一方を植物種の１つとして含むことが好ましい。
【００１３】
本発明が浄化の対象とする油汚染土壌は、制限されないが、重油や軽油などの燃料油、潤滑油や防錆油などの機械油、ごま油や菜種油などの植物性又は豚油脂などの動物性の食用油などによって汚染された土壌である。浄化対象とする土壌の油汚染濃度としては、特に制限されないが、好適な目安として、重油の場合は１重量％程度、軽油の場合は２重量％程度、及び機械油の場合は３重量％程度を、上限濃度として例示することができる。
【００１４】
本発明の油汚染土壌の浄化方法は、まず浄化の対象となる油汚染土壌に、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物の種子を播種することによって実施することができる。なお、播種する種子として、予め催芽処理もしくは芽出し処理を施したものを使用することもできる。なお、催芽とは種子を水に浸けるなどしてわずかに発芽させた状態のものであり、また芽出しとはある程度生育させて苗の状態にしたものを指す。
【００１５】
ここで浄化の対象となる油汚染土壌は、そのままでもよいが、必要に応じて土壌改良材または肥料の一方または両方を加え、植栽する植物の生育に適した環境に調整することも可能である。土壌改良材としては、例えば腐葉土、コンポスト、パーライト、及び珪藻土を焼結させた多孔性物質など、土壌の通水性及び通気性といった植物に対する土壌環境（生育環境）を改善するものが挙げられる。また肥料も、液体肥料や固形肥料の別を問わず、植栽する植物種に応じて、通常使用される肥料を使用することができる。なお、植栽（生育）の過程で、不足する肥料成分について適宜液体肥料等で追肥することも可能である。なお、液肥の添加成分としては、窒素（アンモニア性窒素、硝酸性窒素等を含む）、水溶性燐酸、水溶性カリ、水溶性苦土、水溶性マンガン、及び水溶性ホウ素などを挙げることができる。こうした土壌改良材や肥料の油汚染土壌への添加配合は、植栽する植物の生育を促進したり、また植栽する植物根圏に生育する微生物の油分解活性を向上させることができるため、本発明の目的に適った好適な方法の１つである。
【００１６】
なお、本発明は、上記のように調整した油汚染土壌に覆土することを制限するものではない。覆土に使用する土壌としては、油を含まない土壌（非汚染土壌）を好適に挙げることができ、また珪藻土を焼結させた多孔性物質などの土壌改良材を含む土壌や人工土壌等も使用することができる。また覆土する手段は特に制限されず現場の地形や油汚染土壌の性状により適当に決めることができる。覆土の厚さは植物種などの条件により変化させる必要があるが、５〜１５ｃｍ程度、好ましくは１０ｃｍ程度を好適に例示することができる。
【００１７】
このように調整した油汚染土壌に上記植物を播種後、所定期間放置し植物を発芽させ、その後、生育を維持させる。ここで上記植物の生育維持には、必要に応じて撒水や栄養塩の添加などを行えばよいが、自然環境が生育環境に適しているのであれば、特段、人工的に制御する必要はない。
【００１８】
なお、灌水（給水）を人為的に行う場合は、バイオサーファクタントを添加した液を用いて行うことが好ましい。また、灌水液にはバイオサーファクタントに加えて、必要に応じて液体肥料などを組み合わせて添加することもできる。
【００１９】
バイオサーファクタントとは微生物や植物などの生物が生産する界面活性剤（生物系界面活性剤）であり、生分解性が高く、生物への毒性が小さいという特徴を持つ。バイオサーファクタントとして、例えばラムノリピッド（Rhamnolipid）、マンノシル・エリスリトール・リピッド(MEL:Mannosyl Erythritol Lipid)、サポニン、及びエスシンなどの糖脂質系バイオサーファクタント；スピクリスポール酸、アガリチン酸、及びコリノミコール酸など脂肪酸系バイオサーファクタント；サーファクチンなど環状ペプチド系バイオサーファクタント；レシチンなどリン脂質系バイオサーファクタントなどが挙げられる。このうち糖脂質系のバイオサーファクタントが望ましく、特にラムノリピッドが好ましい。ここでバイオサーファクタントの使用濃度（灌水液中の濃度）としては、特に制限されないが、０.０１〜０.１重量％が望ましい。好ましくは０.０２〜０.０８重量％、より好ましくは０.０５％前後である。
【００２０】
斯くして油汚染土壌に、イタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を播種し、生育させることにより、緑化を図りながら、汚染土壌内の油を継続的に分解除去することができる。なお、これらの植物は、その生育が終了した後は、目的や植物種に応じて、刈り取ったり鋤き込んだりされてもよく、またその刈り取り又は鋤き込み土壌に、再び上記の植物のいずれかを（先に植栽した植物と同種植物であっても、また異種植物であってもよい）、播種し生育させることもできる。なお、上記植物のうち、ペレニアルライグラスは多年草であるため、植栽の維持が可能であり、これにより、土壌の油分解（浄化）並びに緑化を継続的に実施することができる。
【００２１】
（２）土壌中におけるデヒドロゲナーゼの活性低下抑制方法
本発明はまた、油汚染土壌のデヒドロゲナーゼ活性の低下を抑制する方法を提供するものである。当該方法は、油汚染土壌にイタリアンライグラス、エンバク、ペレニアルライグラス及びソルガムより選択される少なくとも１種の植物を植栽することによって実施することができる。
【００２２】
後述する試験例１に示すように、油で汚染された土壌中のデヒドロゲナーゼ活性（ＤＨ活性）は、最初は増加するものの、その後、低下する。この傾向を、上記植物（イタリアンライグラス）を植栽した土壌（植栽土壌）と植栽しない土壌（非植栽土壌）とで対比すると、植栽土壌は、３ヶ月以降に徐々にＤＨ活性が低下するものの、２ヶ月以降にＤＨ活性が急激に低下する非植栽土壌に比べると、ＤＨ活性が有意に維持されていた（ＤＨ活性の低下が有意に抑制）（図２参照）。そして、これに対応して、非植栽土壌の油含有量は３ヶ月以降は殆ど減少せず、油浄化が行われなかったのに対し、植栽土壌の油含有量は３ヶ月以降も減少傾向にあり、油浄化作用が維持されていた。このことから、土壌中のデヒドロゲナーゼ活性を維持すること（デヒドロゲナーゼ活性の低下を抑制すること）が、油汚染土壌中の油の浄化及び浄化機能維持に有効であると思われる。
【００２３】
なお、土壌のデヒドロゲナーゼ活性は、公知の方法に基づいて測定し評価することができる（例えば、「土壌微生物実験法」新編第２版、p.366-367、土壌微生物研究会編、養賢堂）。具体的には、下記の方法を挙げることができる。
【００２４】
＜土壌のデヒドロゲナーゼ活性の測定方法＞
(1)  土壌試料１ｇを試験管に秤取し、これに0.25M Tris緩衝液(pH7.6)１mlを加える。さらに１％グルコースまたは１％酵母エキス50μlを加え、最後に0.2mlの0.4％TTC（トリフェニルテトラゾリウムクロライド）溶液またはINT〔2-(p-ヨードフェニル)-3-(p-ニトロフェニル)-5-フェニルテトラゾリウムクロライド〕溶液を添加して30℃で６時間暗所に保つ。
(2)  ６時間後、これにメタノール10mlを添加してミキサーで１分間攪拌後濾過する。
(3)  濾液の吸光度（Ａ485nm）を分光分析計により測定する。併せて、トリフェニルフォルマザン及びヨードニトロフェニルフォルマザンの標準溶液の吸光度（Ａ485nm）も測定して標準曲線を作成する。
(4)  オートクレーブ殺菌土壌について同様の操作をしたものをコントロールとして、コントロールを差し引いた吸光度（Ａ485nm）を検量線に挿入して、フォルマザンを定量する。(5)  活性を、生成したフォルマザンnmol/時/g乾土、nmol/分/g乾土、またはpmol/秒/g乾土で表示する。
【００２５】
なお、酵素単位１kat（１秒間に1molの基質変化を触媒する酵素活性：1U=1/60μkat）はmol/秒であるから、最後に力価表示「pkat/g乾土」として示すことが好ましい。
【００２６】
本発明の方法において、植栽に使用される植物の種類、その播種及び植栽の方法、植物生育環境の調整（灌水、土壌改良材や肥料など）、汚染土壌の油の種類や油濃度、などは、全て（１）において前述するものを同様に用いることができる。
【発明の効果】
【００２７】
本発明の方法によれば、油汚染土壌を、緑化を図りながら、低コストで持続的に浄化することが可能となる。また土壌の性状を変化させないで油を浄化処理できるため、処理後の土壌の再利用も容易である。また本発明の方法は、従来の熱処理方式に比べて環境負荷が小さく、他の工法に比べても植物を使用して浄化を行うという点で住民の理解が得られ易く、受け入れられ易いという利点がある。さらに本発明の方法は、従来の方法に比べ施工コストやランニングコストを抑えることができ、非常に経済的な方法である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
以下、試験例及び実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例等に限定されるものではない。
試験例１
イネ科に属するイタリアンライグラスを用いて、油汚染土壌における生育状況、油汚染土壌中に生息する微生物数及び酵素活性、並びに油汚染土壌の浄化状況を調べた。  
（１）試験方法
[1] 試験土壌の調整
試験土壌には、真砂土に軽油を添加して作成した模擬汚染土壌を使用した。なお、模擬汚染土壌は、最終的な鉱物油含有量が1.5重量％（鉱物油含有量初期値：14,000mg/kg）及び0.75重量％（鉱物油含有量初期値：8,100mg/kg）の２種類を作成した。
【００２９】
具体的には、まず、油の吸着を円滑にするために、真砂土を１週間程度天日干しして土壌に含まれる水分を取り除いた。この土壌を５０Ｌ容量のモルタルミキサーで攪拌しながら、軽油を噴霧して全体に均一になるように添加した。得られた油添加土壌は、揮発性成分を除去するために、ビニルハウス内でブルーシート上に拡げ、適宜切り返しを行いながら放置し、経時的に油含有量をモニタリングした。揮発性成分がなくなり、油含有量の低下が落ち着いたことを確認した後、土壌改良材を添加して、これを試験土壌とした。なお、土壌改良材の添加比率は、油添加土壌：腐葉土：パーライト＝３：１：１（容積比）とした。
【００３０】
[2] 試験系列
試験系列を表１に示すように設定した。系列内データのばらつきをなくすため、ｎ＝５で試験を行い、得られたデータは最大値と最小値を除き、平均値をとった。データは月に一回採取し、５ヶ月間試験を実施した。
【００３１】
【表１】
2005169285.tif 000002
[3] 植物播種
容量約400mLの４号鉢（直径約10cm）を使用し、当該鉢に試験土壌を300mLずつ充填し、適宜圧密した後に、播種を行った。播種は、１鉢（直径約10cm）に均一になるように８カ所（１箇所２種子ずつ）に行った（合計１６種子／鉢 播種）。
【００３２】
[4] 生育管理
グロースチャンバーにより、植物の生育環境を下記に示す条件に制御した。チャンバー内は外部の影響を受けることなく安定した環境を提供することができる。
【００３３】
気温：２５℃  一定
湿度：７０％  一定
照明：ビオルックス（NEC社製）使用
明条件：１０時間（照度約3,500lx、実測値）
暗条件：１４時間。
【００３４】
灌水は、水に液体肥料（ハイポネックス1:10:1：ハイポネックスジャパン社製）を250倍希釈した水溶液を用いて行った。灌水は、播種後、２週間程度生育させた後に開始し、おおむね土壌の含水率が１０％以下となった時点で上記水溶液を５０mLずつ灌水することにより実施した。その結果、灌水の頻度は約１〜２回／週であった。
【００３５】
[5] モニタリング
経時的に各植物及び土壌を採取して、表２に記載する分析・測定方法に従って、各植物の草丈、根長、土壌中の微生物数、土壌の酵素活性、及び土壌の鉱物含油量をモニタリングした。サンプリング回数は、初期値を含めて計４回とした。
【００３６】
【表２】
2005169285.tif 000003
（２）結果
[1]  草丈、根長
結果を図１に示す。この結果からわかるように、鉱物油を1.5重量％（鉱物油含有量初期値：14,000mg/kg）または0.75重量％（鉱物油含有量初期値：8,100mg/kg）の割合で含む土壌中のいずれでもイタリアンライグラスは順調に生育した。根の生育は、油含有量1.5重量％の土壌系列よりも油含有量0.75重量％の土壌系列のほうがよかったが、草丈は、油含有量1.5重量％及び0.75重量％の系列土壌間で、有意差は認められなかった。
【００３７】
[2]  微生物数、酵素活性
系列１と３（鉱物油含有量1.5％）の結果を図２のＡに、系列２と４（鉱物油含有量0.75％）の結果を図２のＢに示す。
【００３８】
この結果からわかるように、土壌中の微生物数は、全生育日数を通じてイタリアンライグラスを植栽しない土壌よりも植栽した土壌の方が多く、このことから、イタリアンライグラスの植栽によって微生物数の増加が生じていることが確認された。
【００３９】
土壌のデヒドロゲナーゼ活性については、試験開始当初はイタリアンライグラスを植栽しない土壌の方が植栽した土壌のよりも高いかまたは同等であったが、生育２ヶ月以降急激に低下し、５ヶ月目には殆ど活性が消失した。一方、イタリアンライグラスを植栽した土壌のデヒドロゲナーゼ活性は、生育３ヶ月以降やや低下が認められるが、植栽しない土壌に比して有意に活性が維持されていた。
【００４０】
[3]  鉱物油含有量
系列１と３（鉱物油含有量1.5％）の結果を図３のＡに、系列２と４（鉱物油含有量0.75％）の結果を図３のＢに示す。
【００４１】
イタリアンライグラスを植栽しない土壌に関して、上記[2]で示すように生育３ヶ月以降、デヒドロゲナーゼ活性の急激な低下が認められたが、それと相関するように、３ヶ月目からは殆ど鉱物油含有量の減少が認められなかった。それに対し、イタリアンライグラスを植栽した土壌に関しては、生育３ヶ月以降もデヒドロゲナーゼ活性が維持されていたことに基づいて、持続的に鉱物油含有量が減少していた。このことから、イタリアンライグラスを植栽することにより、土壌中の酵素活性を維持して油分解浄化を継続的に促進することができることがわかる。
【００４２】
試験例２
試験例１と同様にして、赤玉土にＡ重油を添加し、攪拌混合して模擬油汚染土壌を調製した。調製した油汚染土壌は、揮発成分を除去するためビニルハウス内でブルーシート上に拡げ、適宜切り返しを行いながら放置し、経時的に油含有量をモニタリングした。なお、土壌中の油含有量は、土壌から四塩化炭素で油分を抽出し、FT-IRにより測定することによって算出した。揮発性成分がなくなり、油含有濃度が一定に安定した土壌を下記の試験に使用した。試験開始時の土壌の油含有濃度は16,000mg/kgであった。
【００４３】
上記で調製した油汚染土壌（油含有濃度：16,000mg/kg）300mLを、容量約400mLの４号鉢（直径約10cm）に充填し、適宜圧密した後に、イタリアンライグラスを播種した。播種は、１鉢（直径約10cm）に均一になるように８カ所（１箇所２種子ずつ）に行った（合計１６種子／鉢播種）。
【００４４】
これを、土壌渇水時に、一方には水を、他方には0.05重量％濃度に調整したバイオサーファクタント（ラムノリピッド；Jeneil社製(米国)）含有水溶液を与えながら、３９日間にわたり育てた。播種から３９日目に、各鉢植えについて、生長したイタリアンライグラスの草丈を測定するとともに、各鉢植えの土壌について、その油含有量を四塩化炭素抽出-FT-IR法に従って測定した。
【００４５】
結果を表３に示す。
【００４６】
【表３】
2005169285.tif 000004
このように、試験例１で得られた結果と同様に、油汚染土壌にイタリアングラスを播種し植栽することによって、土壌中の油が有意に減少することが示された。さらに、この試験結果から、土壌中の油含有量の低減効果は、植栽土壌にバイオサーファクタントの一種であるラムノリピッドを与えることによってより一層向上することが示された。
【００４７】
試験例３
イネ科に属するエンバク、ソルガム及びペレニアルライグラスを用いて、油汚染土壌における生育状況、並びに油汚染土壌の浄化状況を調べた。
【００４８】
（１）試験方法
[1] 試験土壌の調整
試験土壌には、真砂土に軽油を添加して、試験例１（１）と同様にして作成した模擬汚染土壌を使用した（土壌改良材として腐葉土とパーライトを各々20v/v%ずつ配合）。なお、模擬汚染土壌は、最終的な軽油含有量が1.5重量％（軽油含有量初期値：14,000mg/kg）、2.5重量％（軽油含有量初期値：25,000mg/kg）及び3.5重量％（軽油含有量初期値：30,800mg/kg）の、３種類を作成した。また、対照のため軽油を添加しない有機質土壌を調整した（真砂土に土壌改良材として腐葉土とパーライトを各々20v/v%ずつ配合）。
【００４９】
[2] 試験系列
試験系列を表４に示すように設定した。系列内データのばらつきをなくすため、ｎ＝５で試験を行い、得られたデータは最大値と最小値を除き、平均値をとった。データは月に一回採取し、５ヶ月間試験を実施した。
【００５０】
【表４】
2005169285.tif 000005
[3] 植物播種
容量約400mLの４号鉢（直径約10cm）を使用し、当該鉢に試験土壌を300mLずつ充填し、適宜圧密した後に、播種を行った。播種は、１鉢（直径約10cm）に均一になるように８箇所（１箇所２種子ずつ）に行った（合計１６種子／鉢播種）。なお、４種混合系（系列10〜12）については、１種の植物種子を２箇所（１箇所２種子、合計４種子）ずつ播種した。
【００５１】
[4] 生育管理
試験例１と同様に、グロースチャンバーにより一定の生育条件に制御した。灌水も、試験例１と同様に水に液体肥料（ハイポネックス1:10:1：ハイポネックスジャパン社製）を250倍希釈した水溶液を用い、平均５日に１回の頻度で行った。
【００５２】
[5] モニタリング
播種後、４５日間生育させた後に、各植物の生育状況（植物体の乾燥重量、根長）、及び土壌中の鉱物含油量を測定した。
【００５３】
（２）結果
[1]  植物体の乾燥重量及び根長
生育試験終了時の植物生育状況を、植物体の乾燥重量と根長から評価した。各植物体の乾燥重量を比較した結果を図４に示す。
【００５４】
いずれも植物も、土壌中の油含有量が多くなるにつれて若干の生育阻害を受けるものの、油含有量2.5％までは生育可能であった。４種混合系列でも、各植物が生育阻害を示すいわゆるアレロパシーは見られず、各植物ともに同程度生育することが確認された。中でもエンバクは、有機質土壌（対照土壌）では他の植物に比して生育状況は劣っていたが、油含有量が2.5％以上の土壌で他の植物が生育阻害をみせる中、油含有量3.0％の土壌でも十分に生育を維持していた。このことから、エンバク、ソルガム及びペレニアルライグラスのうち、エンバクが最も油耐性のある植物と位置づけられる。また、油含有量1.5％までは、植物の中でソルガムが最も良好な生育を示した。このことから、ソルガムは低濃度の油含有土壌での生育に適している（耐性）と考えられる。
【００５５】
各植物体の根長を比較した結果を図５に、また根径別に根の長さを比較した結果を図６に示す。
【００５６】
図５の結果からわかるように、上記生育状況から最も油への耐性が認められたエンバクは、有機質土壌（対照土壌）では他の植物に比べて根長は短いものの、他の植物では根の伸長がみられなくなった油含有量が3.0％の土壌でも、有意に根の伸長が認められた。また、図６に示すように、根径別に根の長さを比較すると、ソルガムやペレニアルライグラスの根径ピークが約0.15mmであるのに対し、エンバクの根径ピークは約0.3mmであり、他の植物に比して一回り根径が大きいことがわかり、これが油耐性を示す要因のひとつと考えられた。
【００５７】
[2]  鉱物油含有量
生育試験終了時の土壌中の鉱物油含有量を対比した結果を図７に示す。
【００５８】
灌水なしの系列と初期値に、殆ど差がないことから、生育試験期間中に油成分の揮発は殆ど生じておらず、植栽系列における土壌油含有量の減少に、揮発による影響は殆どないと判断された。
【００５９】
図７に示すように、いずれの植物も良好な生育を示した油含有量1.5％の土壌では、ほぼ同レベルまで油含有量が低下していた。一方、多くの植物で生育阻害が認められ、且つエンバク以外の植物について著しい根の伸長抑制が認められた油含有量2.5％の土壌では、若干ではあるものの他の植物の植栽土壌に比してエンバクの植栽土壌の方が油含有量の低下率が高く、油含有量3.0％の土壌になるとその傾向がより明白になった。
【００６０】
このことから、エンバク、ソルガム及びペレニアルライグラスはいずれも油汚染土壌の浄化に有効な植物であるが、特にエンバクにその効果が高いことが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明の方法によれば、油汚染土壌にイタリアンライグラス、エンバク、ソルガム及びペレニアルライグラスより選択される少なくとも１種、好ましくはイタリアンライグラス及びエンバクより選択される少なくとも１種を播種し生育させることにより、緑化を図りながら、継続的に当該土壌の油を分解浄化することができる。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】油含有量1.5重量％及び0.75重量％の土壌で、それぞれイタリアンライグラスを植栽した場合における、各生育日数（１，２，３，４及び５ヶ月）における草丈及び根長を、植物を植栽しない土壌と比較した図である。図中、棒グラフは、各生育日数において、左から油含有量1.5重量％の土壌での草丈（cm）、及び0.75重量％の土壌での草丈（cm）を示す。
【図２】油含有量1.5重量％及び0.75重量％の土壌で、それぞれイタリアンライグラスを植栽した場合における、各生育日数（１，２，３及び５ヶ月）における土壌中の微生物数（cfu/g乾土）及びデヒドロゲナーゼ活性（pkat/g乾土）を、植物を植栽しない土壌と比較した図である。図Ａは油含有量1.5重量％の土壌の結果を、図Ｂは油含有量0.75重量％の土壌の結果を、それぞれ示す。
【図３】油含有量1.5重量％及び0.75重量％の土壌で、それぞれイタリアンライグラスを植栽した場合における、各生育日数（１，２，３，４及び５ヶ月）における土壌の油含有量（mg/g乾土）を、植物を植栽しない土壌と比較した図である。図Ａは油含有量1.5重量％の土壌の結果を、図Ｂは油含有量0.75重量％の土壌の結果を、それぞれ示す。
【図４】油含有量0重量％、1.5重量％、2.5重量％及び3.0重量％の土壌で、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス、及び４種混合（イタリアンライグラス、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス）を播種し一定期間育成した後の、各植物体の乾燥重量（g）を比較した結果を示す。
【図５】油含有量0重量％、1.5重量％、2.5重量％及び3.0重量％の土壌で、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス、及び４種混合（イタリアンライグラス、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス）を播種し一定期間育成した後の、各植物体の根長（cm）を比較した結果を示す。
【図６】油含有量0重量％、1.5重量％、2.5重量％及び3.0重量％の土壌で、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス、及び４種混合（イタリアンライグラス、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス）を播種し一定期間育成した後の各植物体について、根径別に根の長さ（cm）を比較した結果を示す。図中、各根径(mm)毎に示す棒グラフは、左からエンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス、及び４種混合の根長（cm）を示す。
【図７】油含有量0重量％、1.5重量％、2.5重量％及び3.0重量％の土壌で、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス、及び４種混合（イタリアンライグラス、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス）を播種し一定期間（45日間）育成した後の、各土壌中の油含有量mg/g乾土を比較した結果を示す。図中、各土壌の鉱物油含有量を示す棒グラフは、左から初期値、灌水なし、植物なし、エンバク、ソルガム、ペレニアルライグラス、及び４種混合の結果を示すものである。
【図１】
2005169285.tif 000006
【図２】
2005169285.tif 000007
【図３】
2005169285.tif 000008
【図４】
2005169285.tif 000009
【図５】
2005169285.tif 000010
【図６】
2005169285.tif 000011
【図７】
2005169285.tif 000012