(57)【要約】【課題】  高い抗酸化作用を発揮する抗酸化剤、高い抗菌作用を発揮する抗菌剤、高い抗腫瘍作用を発揮する抗腫瘍剤、及び健康増進効果又は保存性の向上を図るのが容易な飲食品を提供する。【解決手段】  抗酸化剤は、下記化１に示されるニムフェオール−Ｂ、化２に示されるニムフェオール−Ａ、及び化３に示されるニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を有効成分として含有するものである。抗菌剤及び抗腫瘍剤も同様に、前記フラバノン化合物を有効成分として含有するものである。飲食品は、前記フラバノン化合物、抗酸化剤又は抗菌剤を含有するものである。    【化１】2005029778.tif 000011    【化２】2005029778.tif 000012    【化３】2005029778.tif 000013【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する抗酸化剤。
【請求項２】
ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する抗菌剤。
【請求項３】
ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する抗腫瘍剤。
【請求項４】
ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、ニムフェオール（nymphaeol）−Ａ、Ｂ及びＣから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する抗酸化剤、抗菌剤、抗腫瘍剤及び飲食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来より、これらのフラバノン化合物は非特許文献１〜３に開示されている。即ち、ニムフェオール−Ａはハスノハギリやミゾホオズキ属から単離され、ニムフェオール−Ｂはハスノハギリから単離され、ニムフェオール−Ｃはハスノハギリやマハングから単離されていることが知られている。
【非特許文献１】K.Yakushijin, K.Shibayama, H.Murata and H.Furukawa、ハスノハギリ由来の新規プレニルフラバノン類（New prenylflavanones from Hernandia nymphaefolia(presl) Kubitzki）、Heterocycles, 14, 397-402, 1980.
【非特許文献２】W.R.Phillips, N.J.Baj, A.A.L.Gunatilaka and D.G.I.Kingston、ミゾホオズキ属由来のＣ−ゲラニル化合物（C-Geranyl compounds from Mimulus clevelandii）、 J.Nat.Prod.,59, 495-497, 1996.
【非特許文献３】M.H.Tseng, C.H.Chou, Y.M.Chen and Y.H.Kuo、マハング落葉由来のアレロパシー作用を有するプレニルフラバノン類（Allelopathic prenylflavanones from the fallen leaves of Macaranga tanarius）、J.Nat.Prod., 64, 827-828, 2001.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ところが、前記各非特許文献では、各フラバノン化合物が有する生理活性についてはほとんど解明されていない。
この発明は、本発明者らの鋭意研究の結果、これらフラバノン化合物が発揮する有用な生理活性を見出したことによりなされたものである。その目的とするところは、高い抗酸化作用を発揮する抗酸化剤、高い抗菌作用を発揮する抗菌剤、及び高い抗腫瘍作用を発揮する抗腫瘍剤を提供することにある。その他の目的とするところは、健康増進効果又は保存性の向上を図るのが容易な飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明の抗酸化剤は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有するものである。請求項２に記載の発明の抗菌剤は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有するものである。請求項３に記載の発明の抗腫瘍剤は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有するものである。請求項４に記載の発明の飲食品は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有するものである。
【発明の効果】
【０００５】
この発明によれば、次のような効果を奏する。
請求項１に記載の発明の抗酸化剤によれば、高い抗酸化作用を発揮することができる。請求項２に記載の発明の抗菌剤によれば、高い抗菌作用を発揮することができる。請求項３に記載の発明の抗腫瘍剤によれば、高い抗腫瘍作用を発揮することができる。請求項４に記載の発明の飲食品によれば、健康増進効果又は保存性の向上を図るのが容易となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、この発明を具体化した実施形態を詳細に説明する。
実施形態の第１のフラバノン化合物は、下記化１に示される構造を有するニムフェオール−Ｂ（nymphaeol-B；5,7,3',4'-tetrahydroxy-2'-C-geranylflavanone）である。
【０００７】
【化１】
2005029778.tif 000002
この第１のフラバノン化合物は、分子式Ｃ25Ｈ28Ｏ6、分子量４２４、融点（ＭＰ）８０〜８３℃である（図１参照）。このフラバノン化合物は、本発明者らによって沖縄産プロポリスから単離された天然物由来の有機化合物であり、エリオディクティオール（Eriodictyol）と類似した構造的特徴を有しているが、２’位にＣ−ゲラニル基を備えていることからエリオディクティオールよりも親油性（膜透過性）が高い。
【０００８】
実施形態の第２のフラバノン化合物は、下記化２に示される構造を有するニムフェオール−Ａ（nymphaeol-A；5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-C-geranylflavanone）である。
【０００９】
【化２】
2005029778.tif 000003
この第２のフラバノン化合物は、分子式Ｃ25Ｈ28Ｏ6、分子量４２４、融点（ＭＰ）１７２〜１７５℃である（図３参照）。このフラバノン化合物は、本発明者らによって沖縄産プロポリスから単離された天然物由来の有機化合物であり、エリオディクティオールと類似した構造的特徴を有しているが、６位にＣ−ゲラニル基を備えていることからエリオディクティオールよりも親油性（膜透過性）が高い。
【００１０】
実施形態の第３のフラバノン化合物は、下記化３に示される構造を有するニムフェオール−Ｃ（nymphaeol-C；5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-(3''',3'''-dimetylallyl)-2'-C-geranylflavanone）である。
【００１１】
【化３】
2005029778.tif 000004
この第３のフラバノン化合物は、分子式Ｃ30Ｈ36Ｏ6、分子量４９２である（図５参照）。このフラバノン化合物は、本発明者らによって沖縄産プロポリスから単離された天然物由来の有機化合物であり、エリオディクティオールと類似した構造的特徴を有しているが、６位に3''',3'''-ジメチルアリル基を備えるとともに２’位にＣ−ゲラニル基を備えている。このため、このフラバノン化合物は、エリオディクティオール、上記第１及び第２のフラバノン化合物よりも親油性（膜透過性）が高い。
【００１２】
第１から第３のフラバノン化合物はいずれも、エリオディクティオールやα−トコフェロール（α-Tocopherol）と同程度の高い抗酸化作用を有している。また、これら第１から第３のフラバノン化合物はいずれも、乳癌細胞等の癌細胞の増殖を抑制する抗腫瘍作用を有している。前記抗腫瘍作用については、第２及び第３のフラバノン化合物が高く、両化合物と比べると若干低いものの第１のフラバノン化合物にも抗腫瘍作用がある。さらに、これら第１から第３のフラバノン化合物はいずれも、生理的な細胞死（アポトーシス；apoptosis）等により、癌化しつつある異常細胞や細胞寿命を迎えつつある老化細胞等の不要細胞を除去する作用を有している。また、第１のフラバノン化合物は、黄色ブドウ球菌等のグラム陽性菌、バチルス属菌等の芽胞菌に対する抗菌作用を有している。第２及び第３のフラバノン化合物は、大腸菌等のグラム陰性菌、上記グラム陽性菌及び芽胞菌に対する抗菌作用を有している。
【００１３】
実施形態の抗酸化剤は、上記第１から第３のフラバノン化合物から選ばれる少なくとも１種を有効成分（抗酸化素材）として含有するものである。この抗酸化剤は、油脂の酸化劣化、香料の劣化、色素の分解、色素の退色等の様々な製品の劣化（主に酸化劣化）を効果的に抑えるための劣化防止剤として飲食品中に添加して利用され得る。また、この抗酸化剤は、健康食品等の飲食品中に含有させて利用することにより、経口摂取した生体内で活性酸素を消去して、肝機能の増強作用、アセトアルデヒドの毒性の軽減、低密度コレステロール（ＬＤＬ）の抗酸化作用、乳癌細胞の増殖抑制作用、免疫機能改善等の健康増進効果を発揮する。また、この抗酸化剤は、化粧品又は医薬部外品中に含有させて利用することも可能であり、皮膚や口腔等の美白効果や老化の防止等に役立つ。
【００１４】
実施形態の抗菌剤は、上記第１から第３のフラバノン化合物から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有するものである。この抗菌剤は、主として飲食品中に添加して利用され、該飲食品の腐敗を防止する。また、この抗菌剤は、医薬品中に含有させて利用してもよく、或いは感染症治療薬や抗菌性化学療法薬等の医薬品として利用してもよい。また、この抗菌剤は、化粧品又は医薬部外品中に添加して利用することも可能であり、皮膚、口腔、腋下等を清潔に保つのに役立つ。この抗菌剤は、前記有効成分が飲食品、医薬品、化粧品又は医薬部外品中に、好ましくは１０ｐｐｍ以上の濃度、より好ましくは１５ｐｐｍ以上、さらに好ましくは３０〜１００００ｐｐｍの濃度、特に好ましくは５０〜１０００ｐｐｍの濃度で含有されるように添加される。前記有効成分の濃度が５０ｐｐｍ未満の場合には十分な抗菌作用が発揮されず、逆に１００００ｐｐｍを越える場合には不経済である。
【００１５】
実施形態の抗腫瘍剤は、上記第１から第３のフラバノン化合物から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有するものであり、主に医薬品として利用される。この抗腫瘍剤は、前記有効成分が癌細胞に対して、好ましくは０．１μＭ〜１００ｍＭ、より好ましくは１０〜１０００μＭの濃度で晒されるように投与される。前記有効成分の濃度が０．１μＭ未満の場合には治療効果が少なく、逆に１００ｍＭを越える場合には不経済である。また、この抗腫瘍剤の投与量としては、成人１日当たり好ましくは前記有効成分を０．５〜１０ｇ、より好ましくは２〜５ｇ投与するように構成される。この有効成分の１日当たりの投与量が０．５ｇ未満の場合には抗腫瘍作用を十分に発揮させることができず、逆に１０ｇを越える場合には不経済である。また、小人の場合は、前記成人の場合の半量が目安となる。
【００１６】
一方、前記有効成分を飲食品（健康食品）、化粧品又は医薬部外品中に含有させた場合には、癌化しつつある異常細胞等の不要細胞の生理的な除去を促進させて、癌予防効果を発揮する製品として利用することもできる。このとき、前記製品中における有効成分の濃度は、好ましくは前記医薬品の場合の１〜５０％、より好ましくは１０〜３０％程度が目安となる。
【００１７】
実施形態の飲食品は、上記第１から第３のフラバノン化合物から選ばれる少なくとも１種を含有するものであり、上記抗酸化剤又は抗菌剤を含有するものであってもよい。この飲食品は、上記フラバノン化合物が有する抗酸化作用を十分に引き出すことにより、生体内で活性酸素を消去して様々な健康増進効果を発揮する健康食品として利用することができる。また、上記フラバノン化合物が有する劣化防止作用を十分に引き出すことにより、飲食品の劣化を防止して保存性を高め、長期間に渡って安定した品質を保持させることが可能となる。或いは、上記フラバノン化合物が有する抗菌作用を十分に引き出すことにより、飲食品の腐敗を防止して保存性を高め、長期間に渡って安定した品質を保持させることが可能となる。同様に、上記フラバノン化合物が有する抗腫瘍作用を十分に引き出すことにより、癌化しつつある異常細胞や細胞寿命を迎えつつある老化細胞等の不要細胞の生理的な除去を促進させて、高い健康増進効果を発揮する健康食品として利用することもできる。
【００１８】
この飲食品において、上記フラバノン化合物の１日当たりの摂取量は、成人１日当たり好ましくは０．０５〜１０ｇ、より好ましくは０．２〜５ｇであるとよい。この有効成分の１日当たりの摂取量が０．０５ｇ未満の場合には前記有効成分による抗酸化作用を効果的に発揮させることができないおそれがあり、逆に１０ｇを越える場合には不経済である。
【００１９】
上記実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
・  実施形態の第１から第３のフラバノン化合物はいずれも、抗酸化作用、抗腫瘍作用及び抗菌作用を有していることから、飲食品や医薬品を始めとする様々な種類の用途に利用することができる。特に、各フラバノン化合物は、単一の化合物でありながら複数種類の多面的な作用を同時に発揮することができることから、プロポリスに代表されるような多機能健康食品素材としての利用が可能である点は注目に値する。また、これら各フラバノン化合物は、エリオディクティオールと同様な用途に利用できる他、エリオディクティオールよりも親油性が高いことを利用した様々な用途に利用することができる。さらに、これら各フラバノン化合物は、健康食品素材として利用されているプロポリス中に含有されているものであることから、経口摂取や経皮投与における問題もない。
【００２０】
・  実施形態の抗酸化剤は、高い抗酸化作用を有するフラバノン化合物を有効成分として含有していることから、飲食品、化粧品又は医薬部外品の劣化を防止して保存性を高めたり、経口摂取又は経皮投与することにより健康増進効果や老化防止効果を発揮することができる。実施形態の抗菌剤は、高い抗菌作用を有するフラバノン化合物を有効成分として含有していることから、飲食品、化粧品又は医薬部外品の腐敗を防止して保存性を高めたり、化粧品又は医薬部外品として経皮投与することにより高い衛生効果や消臭効果を発揮したり、医薬品としての利用も可能である。実施形態の抗腫瘍剤は、高い抗腫瘍作用を有するフラバノン化合物を有効成分として含有していることから、癌に対する高い治療効果を発揮することができるうえ予防効果も期待され得る。
【００２１】
・  実施形態の飲食品（飲料品又は食品）は、抗酸化作用、抗腫瘍作用、抗菌作用等を有するフラバノン化合物を含有していることから、飲食品自体の劣化防止や腐敗防止、健康増進効果や老化防止効果、新陳代謝増進効果や癌予防効果等の多面的で有用な効果を同時に発揮させることができる。また、この飲食品は、フラバノン化合物の含有量を低く設定することにより、劣化防止効果又は腐敗防止効果を利用して保存性のみを高めることも容易である。
【実施例】
【００２２】
以下、前記実施形態を具体化した実施例及び比較例について説明する。
＜化合物の単離＞
沖縄産プロポリス原体５０ｇにエタノール５００ｍｌを加え、数分間超音波処理を行い一晩室温で撹拌した後、ろ過を行なって残留物を取り除くことにより、抽出操作を行なった。得られた抽出液を減圧濃縮することによりエタノール抽出物３９．７３ｇを得た。次に、前記エタノール抽出物を以下の条件のカラムクロマトグラフィーにて（１）〜（11）の１１の画分に分画した。
【００２３】
カラム管：  ガラスカラム  ５．０×４５ｃｍ
充填剤  ：  シリカゲル    約５９０ｃｍ3
溶出溶媒：  （１）  ヘキサン：酢酸エチル＝90：10（ 350ml）
（２）  ヘキサン：酢酸エチル＝80：20（ 220ml）
（３）  ヘキサン：酢酸エチル＝70：30（ 250ml）
（４）  ヘキサン：酢酸エチル＝60：40（1000ml）
（５）  ヘキサン：酢酸エチル＝50：50（ 200ml）
（６）  ヘキサン：酢酸エチル＝40：60（ 100ml）
（７）  ヘキサン：酢酸エチル＝30：70（ 100ml）
（８）  ヘキサン：酢酸エチル＝20：80（ 100ml）
（９）  ヘキサン：酢酸エチル＝10：90（ 100ml）
（10）  酢酸エチル（200ml）
（11）  メタノール（700ml）
次に、各画分を下記ＨＰＬＣ条件１で分析したところ、（４）の画分に４つの主要成分が含まれていることが確認された。
【００２４】
ＨＰＬＣ条件１
カラム  ：  YMC-Pack R&D ODS (4.6×250mm)
溶媒    ：  Ａ：水（２％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（２％酢酸）
溶出条件：  0-60min（グラジエント溶出 ； A:B＝80:20 → A:B＝20:80）
流速    ：  １ml/min
検出    ：  ＵＶ２８０ｎｍ
次に、画分（４）を用いて下記ＨＰＬＣ条件２にて分取・精製を行なうことにより、化合物１（収量６１．１ｍｇ）、化合物２（収量６５．７ｍｇ）及び化合物３（収量９９．８ｍｇ）を単離した。さらに、画分（４）を用いて下記ＨＰＬＣ条件３にて分取・精製を行なうことにより、化合物４（収量２０．０ｍｇ）を単離した。
【００２５】
ＨＰＬＣ条件２
カラム：  YMC-Pack R&D ODS (20×250mm)
溶媒  ：  水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝40：60
流速  ：  ９ml/min
検出  ：  ＵＶ２８０ｎｍ
ＨＰＬＣ条件３
カラム：  YMC-Pack R&D ODS (20×250mm)
溶媒  ：  水（0.1%TFA）：アセトニトリル（0.1％TFA）＝20：80
流速  ：  ９ml/min
検出  ：  ＵＶ２８０ｎｍ
＜各化合物の同定＞
上記化合物１，３，４のそれぞれについて、1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＭＳ、ＩＲ、ＵＶスペクトル等を測定することにより構造解析を行なった。詳細を以下に記載する。なお、化合物２についても同様に構造解析を行なったところ、5,7,3',4'-tetrahydroxy-5'-C-geranylflavanoneであることが判明した。
【００２６】
（化合物１：Compound 1）
物理化学的特性を図１に示した。ＥＳＩ−ＭＳによる測定から分子量は４２４と確認され、ＩＲスペクトルから３４２０ｃｍ-1に水酸基、１６８０ｃｍ-1にカルボニル基の存在が示唆された。またＵＶスペクトルにおいて、フラバノンあるいはフラバノールに特徴的なスペクトルを示したので、フラバノン骨格を有すると推定された。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの積分値から２８個のプロトンが確認され、13Ｃ−ＮＭＲスペクトルでは２５本のシグナルが観測された。ＤＥＰＴスペクトルより３個のメチル、４個のメチレン、７個のメチン、１１個の４級炭素が確認され、これらの情報から分子式をＣ25Ｈ28Ｏ6と推定した。これらに加えＨＳＱＣスペクトル、1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣスペクトル、ＣＤスペクトル等のＮＭＲデータを図２にまとめた。以上の結果から本化合物は上記化１に示した構造を有しており、nymphaeol-B(5,7,3',4'-tetrahydroxy-2'-C-geranylflavanone)であると同定した。本化合物はハスノハギリからの単離は既に報告されているが、プロポリスから単離されたのは本研究が初めてである。
【００２７】
（化合物３：Compound 3）
物理化学的特性を図３に示した。ＥＳＩ−ＭＳによる測定から分子量は４２４と確認され、ＩＲスペクトルから３３８０ｃｍ-1に水酸基、１６８０ｃｍ-1にカルボニル基の存在が示唆された。またＵＶスペクトルにおいて、フラバノンあるいはフラバノールに特徴的なスペクトルを示したので、フラバノン骨格を有すると推定された。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの積分値から２８個のプロトンが確認され、13Ｃ−ＮＭＲスペクトルでは２５本のシグナルが観測された。ＤＥＰＴスペクトルより３個のメチル、４個のメチレン、７個のメチン、１１個の４級炭素が確認され、これらの情報から分子式をＣ25Ｈ28Ｏ6と推定した。これらに加えＨＳＱＣスペクトル、1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣスペクトル、ＣＤスペクトル等のＮＭＲデータを図４にまとめた。以上の結果から本化合物は上記化２に示した構造を有しており、nymphaeol-A(5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-C-geranylflavanone)であると同定した。本化合物はハスノハギリおよびミゾホオズキ属からの単離は既に報告されているが、プロポリスから単離されたのは本研究が初めてである。
【００２８】
（化合物４：Compound 4）
物理化学的特性を図５に示した。ＦＡＢ−ＭＳによる測定から分子量は４９２と確認され、ＩＲスペクトルから３４００ｃｍ-1に水酸基、１６４０ｃｍ-1にカルボニル基の存在が示唆された。またＵＶスペクトルにおいて、フラバノンあるいはフラバノールに特徴的なスペクトルを示したので、フラバノン骨格を有すると推定された。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの積分値から３６個のプロトンが確認され、13Ｃ−ＮＭＲスペクトルでは３０個のカーボンの存在が推定された。ＤＥＰＴスペクトルより５個のメチル、５個のメチレン、７個のメチレン、１３個の４級炭素が確認され、これらの情報から分子式をＣ30Ｈ36Ｏ6と推定した。これらに加えＨＳＱＣスペクトル、1Ｈ−1Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣスペクトル、ＣＤスペクトル等のＮＭＲデータを図６にまとめた。以上の結果から本化合物は上記化３に示した構造を有しており、nymphaeol-C(5,7,3',4'-tetrahydroxy-6-(3''',3'''-dimetylallyl)-2'-C-geranylflavanone)であると同定した。本化合物はハスノハギリおよびマハング（Macaranga tanarius）からの単離は既に報告されているが、プロポリスから単離されたのは本研究が初めてである。
【００２９】
＜プロポリス中の含有量の測定＞
上記化合物１〜４が沖縄産プロポリス中にどれだけ含まれているかを下記ＨＰＬＣ条件４にて分析し含有量を求めた。その結果、沖縄産プロポリス原体１００ｇ中に化合物１は１２．７ｇ、化合物２は１０．５ｇ、化合物３は１３．５ｇ、化合物４は９．１ｇ含有されていることが確認された。
【００３０】
ＨＰＬＣ条件４
カラム  ：  YMC-Pack R&D ODS (4.6×250mm)
溶媒    ：  Ａ：水（0.1%TFA）、Ｂ：アセトニトリル（0.1%TFA）
溶出条件：  0-50min（グラジエント溶出 ； A:B＝65:35 → A:B＝0:100）
流速    ：  １ml/min
検出    ：  ＵＶ２８０ｎｍ
＜ＤＰＰＨラジカル捕捉活性試験＞
ＤＰＰＨ（α,α-diphenyl-β-picrylhydradil）は５１７ｎｍに極大吸収を持つ紫色の安定ラジカルであり、水素を得ることにより無色のヒドラジンになる。この呈色反応を利用して以下の方法にてラジカル捕捉活性を測定した。即ち、試料としての上記化合物１，３又は４をエタノールに溶解することにより濃度２５μＭの試料溶液を３ｍｌ調製した。続いて、各試料溶液に０．５ｍＭのＤＰＰＨ溶液（溶媒はエタノール）を０．７５ｍｌ加えて攪拌し、暗所にて１時間反応させた後に５１７ｎｍにおける吸光度を測定した。一方、比較対照としては、前記化合物の代わりの試料としてＢＨＴ（butylated hydroxytoluene）、α−トコフェロール又はエリオディクティオールを用い同様に試験を実施した。また、前記試料を加えていないものをコントロールとして用い、同様に試験を実施した。ラジカル捕捉活性（％）は下記数１にて算出した。結果を下記表１に示す（全ての試験は３回行い、その平均値及び標準偏差を示した）。
【００３１】
【数１】
2005029778.tif 000005
【００３２】
【表１】
2005029778.tif 000006
表１より、これら３種類の化合物全てが比較対照としてのＢＨＴを上回っており、さらにα−トコフェロールとほぼ同程度の高いラジカル捕捉活性を示すことが明らかとなった。中でも化合物３は最も高い活性を示し、その活性はエリオディクティオールとほぼ同等であった。化合物１，３，４は既知物質であるが、これらの化合物のラジカル捕捉活性に関する検討は従来なされておらず、本研究において、これら３種の天然由来化合物は非常に高いラジカル捕捉活性を有していることが初めて確認された。
【００３３】
＜β−カロテン退色試験＞
この方法は、リノール酸の自動酸化に伴って生じるリノール酸過酸化物が、β−カロテンの二重結合と反応することにより、β−カロテンの色が消失する現象を利用したものであり、以下の方法にて抗酸化活性を測定した。即ち、まず、２００ｍｇ／ｍｌのTween４０クロロホルム溶液２ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌのリノール酸クロロホルム溶液０．４ｍｌ、及び０．１ｍｇ／ｍｌのβ−カロテンクロロホルム溶液３ｍｌを混合した後、窒素ガスを用いて溶媒を除去した。続いて、蒸留水１００ｍｌを加え十分に攪拌することによりエマルジョンを得た。このエマルジョン３ｍｌにエタノールを加え溶質を溶媒中に完全に溶解させた後、１．２ｍＭの各試料溶液５０μｌを混合することにより反応液を調製し、該反応液を６０℃で６０分間インキュベートした。インキュベート前の反応液（０分の試料反応液）と、インキュベート後の反応液（６０分の試料反応液）とについて４７０ｎｍの吸光度を測定した。
【００３４】
なお、前記試料溶液は、試料としての上記化合物１，３又は４をエタノールに溶解することにより濃度１．２ｍＭとなるように調製したものである。また、前記反応液中の試料濃度は２０μＭになるように調製した。一方、比較対照としては、前記化合物の代わりの試料としてＢＨＴ、α−トコフェロール又はエリオディクティオールを用いた反応液を調製し同様に試験を実施した。また、前記試料を加えていないコントロール反応液を調製し同様に試験を実施した。抗酸化活性（％）は下記数２により求めた。結果を上記表１に示す（全ての試験は３回行い、その平均値及び標準偏差を示した）。
【００３５】
【数２】
2005029778.tif 000007
但し、上記コントロールの退色速度は、（０分のコントロール反応液の吸光度／６０分のコントロール反応液の吸光度）／６０の値の自然対数で表され、上記試料の退色速度は、（０分の試料反応液の吸光度／６０分の試料反応液の吸光度）／６０の値の自然対数で表される。その結果、表１より、化合物３は若干活性が弱いものの、３種類の化合物とも高い抗酸化活性を示し、それらの活性はＢＨＴ、α−トコフェロール及びエリオディクティオールとほぼ同等であったことが確認された。化合物１，３及び４は既知物質であったが、これらの化合物の抗酸化活性に関する検討は従来なされておらず、本研究において、これら３種類の天然由来化合物は非常に高い抗酸化活性を有していることが初めて確認された。
【００３６】
＜乳癌細胞増殖抑制試験＞
乳癌細胞（MCF-7）を培養する際に細胞増殖促進作用のあるエストラジオール（17β-Estradiol）を添加することにより、短期間で簡易的に乳癌細胞の増殖を進めることができる。これを利用し上記各化合物が乳癌細胞に及ぼす増殖抑制効果を以下の方法にて測定した。即ち、まず、試料としての上記化合物１，３又は４をジメチルスルフォキシドに希釈し試料溶液を作製した。次に、９６ウェルプレートの各ウェルに２×１０3個の乳癌細胞（MCF-7）を播種し、４時間後にエストラジオール及び試料溶液を添加した。エストラジオールは終濃度で０．１ｎＭ、試料溶液は終濃度で０．２μＭ、２μＭ又は２０μＭになるようそれぞれ添加した区分を設けた。所定の培養期間経過した後（3、5days）に培地を交換し、酵素溶液（Cell counting Kit-8：Wako）を培地の１０％量ずつ加えた後、３７℃のインキュベーターにて２時間加温し、分光光度計で波長４５０ｎｍ（参照波長630nm）の吸光度を測定し、各区分における生細胞数を定量した。
【００３７】
なお、前記培養期間５日の区分は、培養３日目に培地を交換した後、エストラジオール及び試料を添加して５日目まで培養を継続させた。また、０日目の区分は、細胞を播種して４時間後に酵素溶液を添加し、上記方法に従って加温後、吸光度を測定した。比較対照としては、前記化合物の代わりの試料としてエリオディクティオールを用い同様に試験を実施した。また、エストラジオール及び試料を加えていないものをコントロール１として用い、試料を加えていないものをコントロール２として用いて、同様に試験を実施した。一方、前記生細胞数の定量は、コントロール１の０日目の吸光度を１としたときの相対細胞数で表し、各区分とも８ウェルずつ試験を実施し測定値の平均及び標準偏差の平均値をデータとした。結果を表２に示す。
【００３８】
【表２】
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表２より、化合物１，３，４とも、効果に若干の強弱はあるものの乳癌細胞の増殖を抑制し、さらには濃度依存的に乳癌細胞の増殖抑制効果が強まる傾向が認められた。特に化合物３，４を２０μＭ添加した区分では、コントロール１よりも強い乳癌細胞増殖抑制効果（乳癌細胞に対する細胞毒性）が認められた。化合物１，３及び４は既知物質であったが、これらの化合物の癌細胞増殖抑制作用に関する検討は従来なされておらず、本研究において、これら３種の天然由来化合物は非常に高い抗腫瘍活性を有していることが初めて確認された。
【００３９】
＜エタノール抽出物に関する抗菌活性試験＞
抗菌活性を評価するため、グラム陰性菌の指標菌として E.coli (IFO3366)、グラム陽性菌の指標菌として Staphylococcus aureus (IFO15035)、熱殺菌等の工程にも耐性を有する芽胞菌の指標菌として Bacillus cereus (IFO15305T)、及び缶詰における変敗の原因となる菌類の指標菌として変敗缶詰から分離した Bacillus coagulans を用い、上記化合物の抗菌活性を評価した。即ち、まず、上記＜化合物の単離＞におけるエタノール抽出物を７０％エタノールに溶解させた後、該抽出物濃度が０ｐｐｍ、１２．５ｐｐｍ、２５ｐｐｍ、５０ｐｐｍ、１００ｐｐｍ又は１５０ｐｐｍになるように調製した標準寒天培地を作製した。続いて、これらの標準寒天培地をオートクレーブ殺菌することにより評価培地を作製し、これらの評価培地に上記各菌を接種してその生育を確認した。その結果、上記全ての指標菌に対し、エタノール抽出物の濃度に依存して抗菌効果が高められていることが確認された。さらに、エタノール抽出物濃度が３０ｐｐｍ以上、好ましくは５０ｐｐｍ以上で上記全ての指標菌が検出されなくなったことが確認された。なお、前記７０％エタノールによる上記各指標菌への影響はほとんど見られなかった。
【００４０】
＜化合物１，３及び４に関する抗菌活性試験＞
抗菌活性を評価するため、グラム陰性菌の指標菌として上記 E.coli 及び Salmonella enteritidis (S.en；NBRC3313)、グラム陽性菌の指標菌として上記 Staphylococcus aureus (Sta.)及び上記芽胞菌の指標菌として上記 Bacillus cereus (B.ce)を用い、化合物１，３及び４の抗菌活性を評価した。即ち、試料としての化合物１，３又は４を７０％エタノールに溶解させた後、該試料濃度が０ｐｐｍ、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、１５ｐｐｍ、２０ｐｐｍ又は５０ｐｐｍになるように調製した標準寒天培地を作製した以外は、上記＜エタノール抽出物に関する抗菌活性試験＞と同様にして上記各菌を評価培地に接種した。次いで、各菌を培養した後、１シャーレ当たりの菌数（ＣＦＵ／シャーレ）を測定した。化合物１に関する結果を表３に示し、化合物３及び４に関する結果を表４に示す。
【００４１】
【表３】
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【００４２】
【表４】
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表３より、化合物１は、上記グラム陽性菌及び芽胞菌に対し、濃度に依存して抗菌効果が高められる傾向が認められた。また、化合物１は、上記 E.coli 及び S.en に対し上記全ての濃度において抗菌効果がなかった。表３より、抗菌剤が化合物１（第１のフラバノン化合物）を有効成分として含有するときには、該抗菌剤は有効成分が上記飲食品等中に好ましくは１０ｐｐｍ以上の濃度、より好ましくは１５ｐｐｍ以上の濃度で含有されるように添加される。
【００４３】
一方、表４より、化合物３及び４は上記全ての指標菌に対して抗菌活性を有しており、特に上記 E.coli、 Sta. 及び B.ce に対し高い抗菌活性を有していることが認められた。表４より、抗菌剤が化合物３（第２のフラバノン化合物）を有効成分として含有するときには、該抗菌剤は有効成分が上記飲食品等中に好ましくは１０ｐｐｍ以上の濃度、より好ましくは１５ｐｐｍ以上の濃度で含有されるように添加される。また、抗菌剤が化合物４（第３のフラバノン化合物）を有効成分として含有するときには、該抗菌剤は有効成分が上記飲食品等中に好ましくは１０ｐｐｍ以上の濃度、より好ましくは５０ｐｐｍ以上の濃度で含有されるように添加される。なお、前記７０％エタノールによる上記各指標菌への影響はほとんど見られなかった。
【００４４】
さらに、前記実施形態より把握できる技術的思想について以下に記載する。
・  ３０ｐｐｍ以上のフラバノン化合物を含有することを特徴とする請求項４に記載の飲食品。３０〜１００００ｐｐｍのフラバノン化合物を含有することを特徴とする請求項４に記載の飲食品。このように構成した場合、飲食品の保存性を容易に高めることができる。
【００４５】
・  ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する化粧品。このように構成した場合、美白効果、スキンケア効果又は保存性の向上を図るのが容易となる。ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する医薬部外品。このように構成した場合、衛生効果、消臭効果又は保存性の向上を図るのが容易となる。ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも１種のフラバノン化合物を含有する医薬品。このように構成した場合、抗腫瘍効果や抗菌効果等の有用な薬効を容易に発揮させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】実施例の化合物１の物理化学的特性をまとめた。
【図２】実施例の化合物１のＮＭＲデータを示す。
【図３】実施例の化合物３の物理化学的特性をまとめた。
【図４】実施例の化合物３のＮＭＲデータを示す。
【図５】実施例の化合物４の物理化学的特性をまとめた。
【図６】実施例の化合物４のＮＭＲデータを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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