(57)【要約】    【課  題】  従来知られているものに比べて、より活性の強い天然物由来のリパーゼ阻害剤を提供すること。    【解決手段】  褐藻類の一種であるアスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）の抽出物を有効成分とすることを特徴とするリパーゼ阻害剤。上記リパーゼ阻害剤は、肥満また高脂血症の治療・予防を目的とする有用な健康食品あるいは特定保健用食品として提供できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤。
【請求項２】
請求項１記載の抽出物の精製物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤。
【請求項３】
飲食品である請求項１または２記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項４】
肥満の治療・予防を目的とする健康食品または特定保健用食品である、請求項３記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項５】
高脂血症の治療・予防を目的とする健康食品または特定保健用食品である、請求項３記載のリパーゼ阻害剤。
【請求項６】
アスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血漿トリグリセライド低下活性剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は海藻抽出物、詳しくは褐藻類の一種であるアスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）の抽出物を有効成分として含有するリパーゼ阻害剤、および肥満および高脂血症の治療・予防用飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の欧米化に伴って、栄養過多等の原因により、肥満が増加している。肥満は動脈硬化症の危険因子の一つであり、また、糖尿病や高血圧等とも関連があることから、深刻な社会問題となっている。肥満は身体に脂肪が過剰に蓄積した状態であり、その原因の一つに脂肪の過剰摂取がある。
一般に、カロリーの過剰摂取は貯蔵カロリーを増やすように働き、その結果貯蔵カロリーが体内で増加する。すなわち、食品成分のうち、最もカロリーの高い脂肪の過剰摂取により肥満に至る。そこで、脂肪摂取から肥満に至る経路を阻害することにより、肥満を予防し、あるいは改善することができると考えられる。
食品中の脂肪はそのままの形では腸管から吸収されない。すなわち、脂肪（トリグリセライド）は膵リパーゼにより分解されて脂肪酸と２−モノグリセライドまたはグリセロールとなり、小腸より吸収される。小腸内で、これらは再合成され、血液中に運ばれる。従って、膵リパーゼの活性を阻害することにより脂肪の分解が抑制され、腸管からの脂肪の吸収もまた抑制される。
このようなリパーゼ阻害剤として、海外ではオルリスタット（商品名：ゼニカル；ロシュ社）が実際に医薬品として臨床に用いられている（例えば、非特許文献１参照）。
しかし、このものは日本での使用が現在承認されておらず、医薬品のみならず食品としても用いることはできないのが現状である。
【０００３】
リパーゼ阻害物質およびそれを添加した食品は、前記疾患の病状を改善することから関連する代謝異常の患者に有用であり、更に日常の食生活に取り入れることにより肥満や高脂血症の予防にも適している。そのため、安全性が高く摂食可能な天然物として、海藻類（例えば、特許文献１、２、３参照）、ピーマン、かぼちゃ、しめじ、まいたけ、ひじき、他（例えば、特許文献４参照）、シソ科植物（例えば、特許文献５参照）、ホップ（例えば、特許文献６参照）、脱脂米糠（例えば、特許文献７参照）、タマリンド種皮（例えば、特許文献８参照）等由来のリパーゼ阻害物質が、これまでに提案されている。
【０００４】
一方、アスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）は、褐藻類ヒバマタ目、ヒバマタ科に属する海藻であり、主にノルウェーのリアス式海岸の岩礁地帯に生育している。アスコフィラム  ノドサムはアルギン酸を高濃度で含有しているためアルギン酸製造用原料として利用される外、ミネラル、ビタミン類を豊富に含んでいるため、原藻を乾燥し粉末に加工された製品が飼料あるいは肥料・土壌改良剤として広く用いられている。
【特許文献１】特開平５−２８４９３７号公報
【特許文献２】特開平１０−２０３９７４号公報
【特許文献３】特開２０００−２３６８４６号公報
【特許文献４】特開平３−２１９８７２号公報
【特許文献５】特開平１０−２６２６０６号公報
【特許文献６】特開２００１−３２１１６６号公報
【特許文献７】特開平２００１−９７８８０号公報
【特許文献８】特開平９−２９１０３９号公報
【非特許文献１】池田義雄、「海外におけるオルリスタット最近の使用状況」、肥満研究、日本肥満学会、平成１３年、第７巻、第３号、ｐ．３１６−３１８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、生体内での脂質の消化吸収に関与する酵素である膵リパーゼを阻害し、体内脂肪の蓄積を抑えるより活性の強い天然物由来のリパーゼ阻害物質、およびそれを含むリパーゼ阻害剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、褐藻類の一種であるアスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）の抽出物が強力な膵リパーゼ阻害作用を有することを見出し、さらにこの抽出物は血漿中トリグリセライドの低下活性作用、すなわち、血漿中のトリグリセライドの量を減少させる作用も併せ持つことを見出した。本発明者らはこれらの知見に基づいてさらに研究をすすめ、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、
（１）  アスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤、
（２）  上記（１）記載の抽出物の精製物を有効成分として含有することを特徴とするリパーゼ阻害剤、
（３）  飲食品である上記（１）または（２）記載のリパーゼ阻害剤、
（４）  肥満の治療・予防を目的とする健康食品または特定保健用食品である、上記（３）記載のリパーゼ阻害剤、
（５）  高脂血症の治療・予防を目的とする健康食品または特定保健用食品である、上記（３）記載のリパーゼ阻害剤、および
（６）  アスコフィラム  ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｎｏｄｓｕｍ）の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血漿トリグリセライド低下活性剤、
に関する。
また本発明は、アスコフィラム  ノドサムの抽出物を摂取することによる肥満または高脂血症の治療・予防方法に関する。さらに本発明は、肥満または高脂血症の治療・予防のための飲食品を製造するためのアスコフィラム  ノドサムの抽出物の使用に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明で得られるアスコフィラム  ノドサムからの抽出物は、強いリパーゼ阻害作用および血漿トリグリセライド低下活性作用を有するので、前記抽出物を含有するリパーゼ阻害剤およびトリグリセライド低下活性剤は、従来知られている海藻由来のリパーゼ阻害物質に比べても、より効果的に肥満および高脂血症を治療・予防できる。
本発明のリパーゼ阻害剤は、肥満および高脂血症を治療・予防できることから関連する代謝異常の患者に有用であり、飲食品、特に健康食品または特定保健用食品として日常の食生活に取り入れることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明において、アスコフィラム  ノドサム（以下アスコフィラムと略す。）は、そのいずれの組織、部位も用いることができるが、好ましくは葉茎部である。アスコフィラムからの抽出に際し、海から収穫された全藻または葉茎部をそのまま、あるいはそれらを裁断、細断または磨細したもの、またそれらを乾燥したもの、さらに全藻または葉茎部を乾燥後に裁断、細断または粉砕したものを用いることができ、好ましくは生のものを乾燥し、粉砕されたものである。乾燥は、自体公知の方法、例えば風乾、天日乾燥、凍結乾燥等いずれの方法であってもよい。
【０００９】
抽出溶剤としては、水または有機溶剤、またはそれらの混合液が用いられる。有機溶剤としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコール、ジメチルケトン、メチルエチルケトン、アセトンおよびメチルイソブチルケトン等のケトン類等の極性有機溶剤、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、あるいはジエチルエーテル等の非極性有機溶剤が挙げられ、さらにこれら極性有機溶剤と非極性有機溶剤を適宜組み合わせることもできる。
これらの抽出溶剤の内、好ましくは極性有機溶剤および極性有機溶剤と水の混合液、より好ましくはメタノール、エタノールまたはアセトン、またはそれらと水の混合液であり、特に好ましくは、メタノール、エタノールまたはアセトンとの水の混合液である。極性有機溶剤と水の混合液の混合割合は、極性有機溶剤により異なるが、通常極性有機溶剤／水が５／９５〜１００／０（ｖ／ｖ）の範囲内である。例えば、抽出溶剤としてメタノール−水混合液またはエタノール−水混合液を用いる場合、その割合としては５／９５〜１００／０（ｖ／ｖ）が挙げられ、好ましくは３０／７０〜７０／３０（ｖ／ｖ）である。またアセトン−水混合液を用いる場合、その割合としては５／９５〜１００／０（ｖ／ｖ）が挙げられ、好ましくは３０／７０〜８０／２０（ｖ／ｖ）である。これらの割合は、抽出効率、抽出物量および抽出物の酵素阻害活性等を考慮して決められるのが好ましい。
【００１０】
本発明において、抽出物を得るための抽出方法に制限はなく、浸漬による抽出、加熱抽出、連続抽出あるいは超臨界抽出等、自体公知の方法を用いることができる。アスコフィラムと抽出溶剤との比率は、特に制限されないが、アスコフィラム乾燥物／溶剤比が１／１００〜１／２（ｗ／ｖ）が好ましい範囲であり、１／１０〜１／５（ｗ／ｖ）がより好ましい範囲である。具体的には、抽出は、例えばアスコフィラムを乾燥し、粉砕した抽出原料１００ｇに対して抽出溶剤約２００ｍＬ〜１０Ｌ、好ましくは５００ｍＬ〜１Ｌを用い、静置または緩やかに撹拌しながら行われる。抽出温度は室温から常圧下での溶剤の沸点以下の範囲とするのが作業上便利であり、また抽出時間は抽出温度等によって異なるが、数分から７日間の範囲であり、約３０分〜２４時間とするのが好ましい。
【００１１】
抽出操作終了後、ろ過あるいは遠心分離等自体公知の方法で固形物（抽残）が除かれ、抽出液が得られる。抽出液は自体公知の方法で濃縮され、黒〜褐色油状またはペースト状に濃縮された抽出物が得られる。また、抽出液または濃縮された抽出物は、例えば温熱乾燥、凍結乾燥等自体公知の方法で乾燥することにより、固形の抽出物とすることもできる。
抽出液、濃縮物、または濃縮物を水および／または有機溶剤に溶解した溶液は、例えば限外ろ過、吸着樹脂処理、分子クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィーあるいは液−液抽出等の方法により精製されてもよい。精製された抽出物は、精製物として本発明に用いることができる。
本発明に係る抽出物は強いリパーゼ阻害作用をすることからリパーゼ阻害剤として有用である。
【００１２】
本発明のリパーゼ阻害剤は、上記抽出物または精製物をそのまま、あるいは抽出物または精製物に製薬学的に許容される添加物、あるいは食品素材、食品原料、さらに必要に応じて食品添加物等を適宜混合し、自体公知の方法で液剤、散剤、顆粒剤、錠剤、マイクロカプセル、ソフトカプセルあるいはハードカプセル等の製剤として製造されることができる。また、飲食品として、固形食品、クリーム状またはジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料等あらゆる食品形態にすることが可能である。このような飲食品としては、例えば、清涼飲料、コーヒー、紅茶、乳飲料、乳酸菌飲料、ドロップ、キャンディー、チューインガム、チョコレート、グミ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、水羊羹、ゼリー菓子、クッキー等が挙げられる。これら各種製剤および飲食品は、糖尿病の治療・予防を目的とする健康食品または特定保健用食品として有用である。
【００１３】
上記製剤および飲食品の製造に用いられる添加物、食品素材、食品原料あるいは食品添加物としては、例えば賦形剤（乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、デンプン、結晶セルロース等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、蔗糖脂肪酸エステル等）、崩壊剤（デンプン、カルメロースナトリウム、炭酸カルシウム等）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、アラビアゴム液等）、乳化剤・溶解補助剤（アラビアゴム、ポリソルベート８０、ポピドン等）、甘味料（白糖、果糖、単シロップ、ハチミツ等）、着色料（食用タール色素、酸化鉄等）、保存料（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、ソルビン酸等）、増粘剤（ヒドロキシエチルセルロース、ポリエチレングリコール、アルギン酸ナトリウム等）、酸化防止剤（亜硫酸水素ナトリウム、エデト酸ナトリウム、アスコルビン酸等）、安定化剤（チオ硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム等）、酸味料（レモン果汁等）、調味料（グルタミン酸ナトリウム等）、香料（ハッカ、ストロベリー香料等）等を使用することができる。
【００１４】
上記各種製剤および飲食品に対する該リパーゼ阻害剤の添加量としては、抽出物に含まれる活性成分の含有量により異なり一様ではないが、抽出物（固形分換算）として、例えば約０．０００１〜５０質量％、好ましくは約０．００１〜２０質量％、より好ましくは約０．０１〜１０質量％である。
【００１５】
これら各種製剤および飲食品を経口的に摂取する場合、本発明抽出物の一日あたりの用量は、固形物に換算して、体重１ｋｇに対して、約０．０１〜１０００ｍｇ、好ましくは約０．１〜５００ｍｇ、さらに好ましくは約１〜３００ｍｇの範囲である。この用量を、１回または数回に分けて摂取すると良い。但し、実際の用量は、目的や摂取者の状況（性別、年齢、体重、ＢＭＩ等）を考慮して決められるべきである。
【００１６】
以下に本発明において好ましい実施例について述べるが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００１７】
アスコフィラム乾燥粉末約５０．０ｇを精密に量り、表１の割合のエタノール−水混合液５００ｍＬを加え、緩やかに撹拌しながら室温で１時間抽出した。抽出液を遠心管に移し、遠心分離により上澄み液と沈殿に分け、沈殿には上記と同じエタノール−水混合液５００ｍＬを加え、１回目と同様にして１時間抽出した。抽出液を１回目と同様にして上澄み液と沈殿に分け、１回目と２回目の上澄み液を合わせて吸引ろ過し、ろ液として計約１Ｌの抽出液を得た。この抽出液を、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下、約６０℃で濃縮し、次に濃縮物を凍結乾燥して黒褐色粉末状の抽出物１〜６を得た。収量を表１に示す。
【表１】
2005170836.tif 000002
【実施例２】
【００１８】
アスコフィラム乾燥粉末約８００ｇに、エタノール−水〔５０：５０（ｖ／ｖ）〕混合液８Ｌを加え、緩やかに撹拌しながら室温で１時間抽出した。抽出液を遠心管に移し、遠心分離により上澄み液と沈殿に分け、沈殿にはエタノール−水混合液８Ｌを加え、１回目と同様にして１時間抽出した。抽出液を１回目と同様にして上澄み液と沈殿に分け、１回目と２回目の上澄み液を合わせて吸引ろ過し、ろ液として計約１６Ｌの抽出液を得た。この抽出液を、分画分子量１万の限外ろ過膜（製品名：ＦＢ０２−ＶＣ−ＦＵＳＯ１８１；ダイセンメンブレンシステムズ社）を用いて限外ろ過し、濃縮液量が５Ｌになった時点で水５Ｌを加えてろ過を続け、濃縮液量が再び５Ｌになった時点で限外ろ過を終了した。濃縮液はロータリーエバポレーターを用いて減圧下、約６０℃で濃縮し、次に濃縮物を凍結乾燥して黒褐色粉末状の抽出物（抽出物７）約７３ｇを得た。
【実施例３】
【００１９】
トリオレインを基質として、実施例２で得た抽出物７のリパーゼ阻害活性を測定した。
１）リパーゼ阻害活性の測定
抽出物７をそれぞれ５、１０、５０、１００、５００μｇ／ｍＬ含む試料溶液１ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬのリパーゼ（ＴｙｐｅII；シグマ社）溶液（ｐＨ７．４）１ｍＬ、マッキルベイン緩衝液（ｐＨ７．４）７ｍＬ、アラビアガム１００ｍｇ、トリオレイン（和光純薬工業製）１．０ｍｇを混和し、約３７℃で１時間振とう後、エタノール２０ｍＬを加えて反応を停止し、反応液を得た。対照区１は、リパーゼ溶液の代わりにマッキルベイン緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬを加え、対照区２は、試料溶液の代わりにマッキルベイン緩衝液（ｐＨ７．４）１ｍＬを加えた。反応液にフェノールフタレイン溶液を数滴加え、０．０５Ｎ  ＮａＯＨで滴定し、次式によりリパーゼ阻害率を算出した。
リパーゼ阻害率（％）＝  （Ｃ−Ｓ）／（Ｃ−Ｂ）×１００
Ｓ：被験試料区の滴定量（ｍＬ）
Ｂ：対照区１の滴定量（ｍＬ）
Ｃ：対照区２の滴定量（ｍＬ）
【００２０】
抽出物のリパーゼ阻害率を測定した結果を表２に示す。
【表２】
2005170836.tif 000003
この結果から求めた実施例２の抽出物７のリパーゼ活性を５０％阻害するときの濃度（ＩＣ５０）は、約２９μｇ／ｍＬであった。
【実施例４】
【００２１】
各種海藻の乾燥粉末約５０．０ｇを精密に量り、エタノール−水〔３０：７０（ｖ／ｖ）〕混合液５００ｍＬを加え、緩やかに撹拌しながら室温で１時間抽出した。抽出液を遠心管に移し、遠心分離により上澄み液と沈殿に分け、沈殿はエタノール−水〔３０：７０（ｖ／ｖ）〕混合液５００ｍＬを加え、１回目と同様にして１時間抽出した。抽出液を１回目と同様にして上澄み液と沈殿に分け、１回目と２回目の上澄み液を合わせて吸引ろ過し、ろ液として計約１Ｌの抽出液を得た。この抽出液を、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下、約６０℃で濃縮し、次に濃縮物を凍結乾燥して粉末状の抽出物（抽出物８、比較例１〜８）を得た。
【００２２】
これら抽出物のリパーゼ阻害活性を、前記実施例３に準じて測定した。試料溶液の濃度は１００μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬの２点とした。結果は表３に阻害率（％）で示す。
【表３】
2005170836.tif 000004
表３から、アスコフィラムの抽出物は他の海藻類に比べて強いリパーゼ阻害活性を有し、しかも低濃度でもその活性が発現することが分かった。
【実施例５】
【００２３】
前記実施例２で得た抽出物７を試料として、マウスへの油の単回投与試験を行った。
１）血中トリグリセライド低下活性の測定
一晩絶食した７週齢のｄｄＹマウスを対照群、試料投与群それぞれ８匹ずつ用いた。マウスの尾静脈からヘパリン入り採血管に約５０μＬ採血した。採血後、対照群にはオリーブ油と生理食塩水のエマルジョンを、オリーブ油５ｇ／体重ｋｇ／６ｍＬになるように調製したものを、胃ゾンデを用いて経口投与した。試料投与群にはオリーブ油と生理食塩水に溶解した試料溶液とのエマルジョンを、オリーブ油として５ｇ／体重ｋｇ／６ｍＬ、試料として抽出物７を１００ｍｇ／体重ｋｇ／６ｍＬおよび５００ｍｇ／体重ｋｇ／６ｍＬになるように混合・調製したものを、それぞれ胃ゾンデを用いて経口投与した。投与後、１、２、３、４および５時間後に約５０μＬ採血した。採血した血は遠心分離で血漿画分を分画して、分析に供するまで−４０℃で保存した。
【００２４】
血漿トリグリセライド量は、ＧＰＯ・ＤＡＳＯ法による測定キット（トリグリセライドＥ−テストワコー；和光純薬工業製）を用いて測定した。血漿トリグリセライド量の経時変化を表４に示す。
【表４】
2005170836.tif 000005
アスコフィラムの抽出物は、対照群と比較して、投与１〜５時間後の血漿トリグリセライド量の上昇を有意に抑制することが分かる。
【実施例６】
【００２５】
乳糖５０質量部、コーンスターチ３８質量部、ストロベリー香料１質量部及び庶糖脂肪酸エステル１質量部に、実施例２の抽出物７を１０質量部加えて混合後、打錠機を用いて打錠し、サプリメントを作製した。
【実施例７】
【００２６】
表５に示す配合の飲料溶液を約６５℃で１０分間加熱処理し、室温まで冷却した後滅菌容器に無菌的に充填し、ハチミツレモン飲料を作製した。
【表５】
2005170836.tif 000006
【実施例８】
【００２７】
以下の手順でオレンジゼリーを作製した。
（１）粉ゼラチン１５ｇを約４５ｍＬの水に入れ、ふやかしておく。
（２）鍋にオレンジジュース（果汁１００％）７５０ｍＬ、グラニュー糖９０ｇを入れ煮立たせる。グラニュー糖が溶けたら火を止め、実施例２の抽出物７約７ｇと（１）を加えてよく溶かす。
（３）鍋底を氷水に当て、混ぜながらトロミが付くまで冷まし、内側を湿らせたゼリー型に流し込み、冷やして固める。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明で得られるアスコフィラム  ノドサムからの抽出物は、強いリパーゼ阻害作用および血漿トリグリセライド低下活性作用を有するので、アスコフィラム  ノドサムからの抽出物を含有するリパーゼ阻害剤は、従来知られている海藻由来のリパーゼ阻害物質に比べても、より効果的な肥満および高脂血症の治療・予防に利用できる。また上記抽出物を含有する飲食品は肥満および高脂血症の治療・予防用の健康食品または特定保健用食品として有用である。