(57)【要約】【課題】  簡易な構成によって、塵埃等による汚染を低減できるとともに効率的に多血小板血漿を製造する。【解決手段】  内部を滅菌処理された第１の容器に血液を収容するステップＳ１と、この血液を収容した第１の容器に遠心力を作用させて血液から血球を分離するステップＳ２と、第１の容器に無菌的に接続された第２の容器に、血球を分離した残りの液体を移動させるステップＳ３と、第１の容器と第２の容器との間を密閉するステップＳ４と、この液体を収容した第２の容器に遠心力を作用させて液体から血漿を分離するステップＳ５と、第２の容器に無菌的に接続された第３の容器に、血漿を分離した残りの多血小板血漿を移動させるステップＳ６とを備える多血小板血漿の製造方法を提供する。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
内部を滅菌処理された第１の容器に血液を収容するステップと、
この血液を収容した第１の容器に遠心力を作用させて血液から血球を分離するステップと、
前記第１の容器に無菌的に接続された第２の容器に、血球を分離した残りの液体を移動させるステップと、
第１の容器と第２の容器との間を密閉するステップと、
この液体を収容した第２の容器に遠心力を作用させて液体から血漿を分離するステップと、
前記第２の容器に無菌的に接続された第３の容器に、分離した血漿を移動させ多血小板血漿を精製させるステップとを備える多血小板血漿の製造方法。
【請求項２】
血球を分離するステップが、１０００ｒｐｍ以上２５００ｒｐｍ以下の回転で１５ｍｉｎ以上２５ｍｉｎ以下の時間にわたり遠心力を作用させる請求項１に記載の多血小板血漿の製造方法。
【請求項３】
多血小板血漿を分離するステップが、１５００ｒｐｍ以上３５００ｒｐｍ以下の回転で１０ｍｉｎ以上２０ｍｉｎ以下の時間にわたり遠心力を作用させる請求項１または請求項２に記載の多血小板血漿の製造方法。
【請求項４】
内部を滅菌処理された３つの容器と、これら容器を無菌的に接続する熱溶着可能な材質からなる少なくとも２本のチューブとを備える多血小板血漿の抽出容器。
【請求項５】
前記容器が、外力によって内容積可変の材質からなる請求項４に記載の多血小板血漿の抽出容器。
【請求項６】
前記チューブの途中位置に該チューブを密閉、開通可能なバルブが設けられている請求項４または請求項５に記載の多血小板血漿の抽出容器。
【請求項７】
前記第１の容器に採血用の針が無菌的に接続されている請求項４から請求項６のいずれか１項に記載の多血小板血漿の抽出容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多血小板血漿（ＰＲＰ：Platelet Rich Plasma）の製造方法および抽出容器に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、多血小板血漿（以下、ＰＲＰという。）が、ＴＧＦ−β１、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ−１のような種々の自家成長因子を含んでいることが知られてきており、これを用いた骨、軟部組織移植の際の創傷治癒を促進することが報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。また、最近では、再生医療や組織工学の発達、臨床応用により、ＰＲＰの重要性は増してきている。
【非特許文献１】多血小板血漿（ＰＲＰ）［平成１５年５月９日検索］、インターネット＜URL:http://home.att.ne.jp/iota/dental/newpage29.htm＞
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、ＰＲＰの採取は、血液からの分離作業を行うために、採血用のシリンジによる患者からの採血、採血された血液のシリンジから遠心分離容器への移し替え、遠心分離容器において分離された血球や血漿からの抽出のように複数回にわたる容器の入れ替えが必要である。その結果、最終的にＰＲＰが採取されるまでに、血液は種々の容器やシリンジに接触することになり、各種容器の滅菌を十分に行っておかなければ、ＰＲＰに異物や塵埃が混入する可能性がある。
また、多数の容器やシリンジへの入れ替え作業により、採取された血液内のＰＲＰが、入れ替えの都度にこれらの容器やシリンジの内壁に付着して残ることになり、ＰＲＰの効率的な抽出が困難であるという不都合もある。
【０００４】
本発明は、上述した事情に鑑みてなされたものであって、簡易な構成によって、塵埃等による汚染を低減できるとともに効率的に多血小板血漿を製造するための製造方法および抽出容器を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
請求項１に係る発明は、内部を滅菌処理された第１の容器に血液を収容するステップと、この血液を収容した第１の容器に遠心力を作用させて血液から血球を分離するステップと、前記第１の容器に無菌的に接続された第２の容器に、血球を分離した残りの液体を移動させるステップと、第１の容器と第２の容器との間を密閉するステップと、この液体を収容した第２の容器に遠心力を作用させて液体から血漿を分離するステップと、前記第２の容器に無菌的に接続された第３の容器に、分離した血漿を移動させ多血小板血漿を精製させるステップとを備える多血小板血漿の製造方法を提供する。
【０００６】
この発明によれば、第１の容器内に血液を収容した状態で、第１の容器に遠心力を作用させることにより、内部の血液が血球と残りの液体とに分離される。多血小板血漿ＰＲＰは血球を除いた残りの液体内に含有されているので、この残りの液体を第２の容器に移動させることにより、血液中から血球が除去される。この場合に、第１の容器と第２の容器とは無菌的に接続されているので、移動に際して塵埃等の混入のおそれがない。次いで、この液体を収容した第２の容器に遠心力を作用させることにより、液体が、血漿と多血小板血漿とに分離される。そして、分離された多血小板血漿を第３の容器に移動させることにより、多血小板血漿のみを簡易に抽出することができる。この場合においても、第２の容器と第３の容器とは無菌的に接続されているので、塵埃等が混入していない多血小板血漿が得られることになる。さらに、第１の容器内に残った血球、第２の容器内に残った血漿にも塵埃が混入していないので、患者の体内に戻すことができる。
【０００７】
請求項２に係る発明は、請求項１に記載の多血小板血漿の製造方法血球を分離するステップが、１０００ｒｐｍ以上２５００ｒｐｍ以下の回転で１５ｍｉｎ以上２５ｍｉｎ以下の時間にわたり遠心力を作用させる製造方法を提供する。
請求項３に係る発明は、請求項１または請求項２に記載の多血小板血漿の製造方法において、多血小板血漿を分離するステップが、１５００ｒｐｍ以上３５００ｒｐｍ以下の回転で１０ｍｉｎ以上２０ｍｉｎ以下の時間にわたり遠心力を作用させる製造方法を提供する。
これらの発明によれば、多血小板血漿を効率的に抽出することが可能となる。
【０００８】
請求項４に係る発明は、内部を滅菌処理された３つの容器と、これら容器を無菌的に接続する熱溶着可能な材質からなる少なくとも２本のチューブとを備える多血小板血漿の抽出容器を提供する。
この発明によれば、簡易な構成で、塵埃等の混入のない多血小板血漿を抽出することが可能となる。
【０００９】
請求項５に係る発明は、請求項４に記載の多血小板血漿の抽出容器において、前記容器が、外力によって内容積可変の材質からなる多血小板血漿の抽出容器を提供する。
この発明によれば、各容器を外力によって変形させるだけで、容器の内部に分離された血球や多血小板血漿を他の容器に無菌的に移し替えることができる。
【００１０】
請求項６に係る発明は、請求項４または請求項５に記載の多血小板血漿の抽出容器において、前記チューブの途中位置に該チューブを密閉、開通可能なバルブが設けられている多血小板血漿の抽出容器を提供する。
この発明によれば、バルブの操作によってチューブを開閉して血球や多血小板血漿の移し替えを簡易にコントロールすることが可能となる。
【００１１】
請求項７に係る発明は、請求項４から請求項６のいずれか１項に記載の多血小板血漿の抽出容器において、前記第１の容器に採血用の針が無菌的に接続されている多血小板血漿の抽出容器を提供する。
この発明によれば、採血用の針を患者に刺すだけで、血液を第１の容器内に吸引することが可能となり、シリンジを介した移し替えの手間と塵埃の混入の可能性を低減することが可能となる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、外部から密閉された状態で多血小板血漿を抽出することができるので、外部からの塵埃や異物の混入のない多血小板血漿を簡易に得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
この発明の一実施形態に係る多血小板血漿の製造方法および抽出容器について、図１から図  を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る抽出容器１は、図１に示されるように、３つの容器２，３，４と、これらの容器２，３，４を接続する２本のチューブ５，６と、一の容器２に接続された採血用のチューブ７とを備えている。
【００１４】
各容器２，３，４およびチューブ５，６，７は、例えば、塩化ビニルにより一体的に形成されている。容器２，３，４は、比較的薄い柔軟なシートにより構成され、周囲を熱溶着により密封されている。これにより、容器２，３，４は、外部からの圧力により容易に変形することができるようになっている。
【００１５】
各チューブ５，６は、両端を容器２，３，４内部に開口するように容器２，３または容器３，４にそれぞれ接続されている。また、各チューブ５，６の途中位置にはこれらのチューブ５，６を閉鎖あるいは開放するバルブ８，９がそれぞれ設けられている。
また、前記採血用のチューブ７は、一端を容器２内部に開口するように容器２に接続されているとともに、他端に注射針１０、途中位置にバルブ１１を備えている。
容器２，３，４およびチューブ５，６，７の内部および注射針１０には滅菌処理が施されている。
【００１６】
このように構成された本実施形態に係る抽出容器１を用いてＰＲＰを製造する製造方法について以下に説明する。
本実施形態に係るＰＲＰの製造方法は、図２および図３に示されるように、患者に注射針１０を刺して容器２内に血液Ａ１を収容する第１ステップＳ１と、この血液Ａ１を収容した容器２に遠心力を作用させて血液Ａ１から血球Ａ２を分離する第２ステップＳ２と、血球Ａ２を分離した残りの液体Ａ３を容器３へ移動させる第３ステップＳ３と、容器２，３間のバルブ８を閉じる第４ステップＳ４と、容器３に遠心力を作用させて残りの液体Ａ３から血漿Ａ５を分離する第５ステップＳ５と、血漿Ａ５を分離した残りの多血小板血漿Ａ６を容器４へ移動させる第６ステップＳ６とを備えている。
【００１７】
第１のステップＳ１においては、バルブ１１を開いて容器２内を負圧にし、血液Ａ１が容器２内に流入するようにする。負圧にする方法は、例えば、内容積を広げるように、外部から容器２の外面を吸引することにすればよい。この際に、採血した血液Ａ１が凝固しないように、凝固防止用のクエン酸等を所定量、容器２内に注入しておけばよい。吸引終了後はバルブ１１を閉じる。
【００１８】
第２のステップＳ２は、血液Ａ１を収容した容器２ごと遠心分離機（図示略）にかけることにより行われる。遠心分離機においては、例えば、１２００ｒｐｍの回転数で、２０ｍｉｎの間、容器２を回転させる。これにより、血液Ａ１中の比較的重い血球Ａ２が遠心方向外方に分離される。したがって、容器２のチューブ５が接続されている側を遠心方向内方に配置しておくことにより、血液Ａ１から血球Ａ２を分離した残りの液体Ａ３（血漿＋多血小板血漿）をチューブ５側に配置することが可能となる。
【００１９】
第３のステップＳ３は、バルブ８を開いて容器２の外部から容器２を押圧することにより行われる。すなわち、容器２は、柔軟なシート状の材料により、外部からの圧力により容易に変形することができるようになっているので、外部から容器２を押圧すると容易に変形し、内部の収容物を押し出すことができる。容器２内においては、第２のステップＳ２において遠心されることにより、血球Ａ２が明確な分離面Ｐ１によって残りの液体Ａ３から分離されているので、容器２を押圧することで、血球Ａ２以外の残りの液体Ａ３を容器２内からチューブ５を介して容器３へ移動させることができる。
第４のステップＳ４は、チューブ５をバルブ８によって閉鎖する。これにより、容器３に移動した液体Ａ３が容器２に逆戻りすることを防止できる。
【００２０】
第５のステップＳ５は、前記液体Ａ３を収容した容器３ごと遠心分離機にかけることにより行われる。遠心分離機においては、例えば、３０００ｒｐｍの回転数で、１５ｍｉｎの間、容器３を回転させる。これにより、液体Ａ３中の比較的重い多血小板血漿Ａ４が遠心方向外方に分離される。
【００２１】
第６のステップＳ６は、バルブ９を開いて容器３の外部から容器３を押圧することにより行われる。したがって、第３のステップＳ３と同様に、容器３内から血漿Ａ５がチューブ５を介して容易に容器４内へ移動させられることになる。
【００２２】
このように、本実施形態に係る多血小板血漿Ａ４の製造方法によれば、無菌的に接続された３個の容器２，３，４およびチューブ５，６によって囲まれた閉空間から外部に取り出すことなく、血液Ａ１から多血小板血漿Ａ４を抽出することができる。したがって、抽出された多血小板血漿Ａ４に外部からの塵埃等の異物が混入することを防止することができる。また、多血小板血漿Ａ４を抽出した残りの血球Ａ２および血漿Ａ５も、それらの内部に異物を混入させることなくそれぞれ分離されているので、有効利用することができる。
【００２３】
特に、シリンジ等によって容器を移し替えることなく多血小板血漿Ａ４が抽出されるので、採血された血液Ａ１は全て容器２，３，４およびチューブ５，６，７内に配されている。したがって、血球Ａ２や血漿Ａ５等の他の体液についても無駄なく返血することができる。
【００２４】
なお、本実施形態に係る多血小板血漿Ａ４の製造方法および抽出容器１においては、容器２にチューブ７を介して注射針１０を取り付け、容器２を外部から吸引して採血を行うことにしたが、これに代えて、図４に示されるように、チューブ７の途中にシリンジ１２と、凝固防止剤（例えば、クエン酸）を封入した収容部１３とを取り付け、シリンジ１２の操作によって、採血、凝固防止剤の混入および容器２への血液Ａ１の投入を行うことにしてもよい。図中符号１４，１５はバルブである。
【００２５】
この場合に、バルブ１５を閉じ、バルブ１４を開いてシリンジ１２を作動させることにより、収容部１３から所定量の凝固防止剤をシリンジ１２内に吸引する。次いで、バルブ１４を閉じて、注射針１０を患者に刺し、バルブ１１を開いてシリンジ１２を作動させる。これにより、所定量の血液をシリンジ１２内に吸引し、シリンジ１２内において血液と凝固防止剤とを混合する。この後に、バルブ１１を閉じてバルブ１５を開き、シリンジ１２を作動させることにより、シリンジ１２内の血液と凝固防止剤との混合液を容器２内に収容することができる。
【００２６】
また、容器２，３，４やチューブ５，６，７の材質は任意であり、その形状および寸法も任意に設定してよい。また、チューブ５，６の途中位置にバルブ８，９を設けて、閉鎖および解放を選択することとしたが、これに代えて、チューブ５，６を解放状態とし、閉鎖したいときにはピンチバルブ（図示略）等によって外部からチューブ５，６を押し潰して閉鎖することにしてもよい。
また、容器２における注射針１０を備えたチューブ７をなくし、これに代えて、患者から採血したシリンジの注射針を抜き差し可能な注入口（図示略）を設けてもよい。
【００２７】
また、遠心分離の条件を２０００ｒｐｍ、２０分間および３０００ｒｐｍ１５ｍｉｎ間としたが、これに限定されるものではなく、血球を分離するステップＳ２では、１０００ｒｐｍ以上２５００ｒｐｍ以下の回転で１５ｍｉｎ以上２５ｍｉｎ以下の時間にわたり、多血小板血漿を分離するステップでは、１５００ｒｐｍ以上３５００ｒｐｍ以下の回転で１０ｍｉｎ以上２０ｍｉｎ以下の時間にわたり行うことにしてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】本発明の一実施形態に係る抽出容器を示す正面図である。
【図２】図１の抽出容器を用いてＰＲＰを製造する製造方法を示すフローチャートである。
【図３】図２のフローチャートに従う各作業工程を示す概略図である。
【図４】図１の抽出容器の変形例を示す正面図である。
【符号の説明】
【００２９】
１  抽出容器
２，３，４  容器
５，６  チューブ
７，８  バルブ
１０  注射針（針）
Ａ１  血液
Ａ２  血球
Ａ３  残りの液体
Ａ４  多血小板血漿
Ａ５  血漿
Ｓ１  収容するステップ
Ｓ２  分離するステップ
Ｓ３  移動させるステップ
Ｓ４  密閉するステップ
Ｓ５  分離するステップ
Ｓ６  移動させるステップ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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