(57)【要約】【課題】骨粗鬆症をはじめとする各種骨疾患の予防及び治療に有効であり、飲食品、医薬、又は飼料に広く用いる事ができ、日常的に継続して摂取可能であり、安全かつ安価な、骨強化組成物の提供。【解決手段】全卵又は卵黄から有機溶媒により脱脂後、得られた粉末を温水、又は０．５％塩化ナトリウム液で抽出する方法で得られ、骨芽細胞増殖促進活性、骨成長および骨強化作用を有する水溶性画分を含む骨強化組成物、及び該組成物を含有する飲食品、医薬または飼料。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨芽細胞増殖促進、骨成長及び骨強化作用を有する卵由来水溶性画分を有効成分として含有してなる骨強化組成物。
【請求項２】
前記の卵由来水溶性画分が、全卵または卵黄粉末をエタノール、イソプロパノール、又はヘキサン、その他食品加工に用いられる有機溶媒で脱脂処理を行った後、温水又は０．５％塩化ナトリウム水溶液で抽出されることを特徴とする請求項１記載の骨強化組成物。
【請求項３】
前記の卵由来水溶性画分が、全卵または卵黄液にカラギナン水溶液を加えることによって得られる抽出液であることを特徴とする請求項１記載の骨強化組成物。
【請求項４】
請求項１から４のいずれかに記載の骨強化組成物を配合した飲食品、医薬又は飼料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、骨成長及び骨強化作用を有する卵由来水溶性画分を含有する組成物に関する。また、本発明は、この卵由来水溶性組成物を配合した飲食品、医薬品、又は飼料に関する。本発明の卵由来水溶性画分は骨芽細胞を増殖させ、骨の成長端における軟骨細胞の増殖も促進させる作用を有するので、骨代謝のバランスが崩れて起こる骨疾患の予防や治療や、学童など若年層において成長期の骨強化に有用である。
【０００２】
【従来の技術】近年の骨粗鬆症の増加や若年層での骨折率の増加など各種骨疾患の増加が社会問題となっている。骨粗鬆症の患者は全国に約１０００万人いると推定されており、高齢化の進行により２０１０年には患者数が１６００万人に達するとの予測もある。骨粗鬆症は、主に閉経後の女性において、女性ホルモンの減少の影響から骨形成と骨破壊のバランスが崩れ起こる疾患として注目されているが、男性でも老齢化に伴い骨塩量の減少が見られ、現在でも５０歳以上で約２００万人の骨粗鬆症患者がいる。また、最近２０年で小中学生の骨折率は２倍以上に増加しており、骨粗鬆症を予防すると言う見地からも若年期にしっかりと骨塩量を高めて、より高い最大骨量を得ることは非常に重要である。このように、いまや骨の健康を保つことは性別や年齢の関係なく全社会的な関心事である。
【０００３】
従来より骨の疾患を予防あるいは治療する方法として、食餌療法によるカルシウム補給、軽い運動、日光浴、薬物治療等が行われている。食餌療法によるカルシウム補給には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム等のカルシウム塩や、牛骨粉、卵殻、魚骨粉等の天然カルシウム剤が使用されているが、溶解性や吸収性、呈味性の点で必ずしも経口摂取に適している素材であるとはいえない。適度な運動は、骨量を増やし、骨を強化するので、散歩やウオーキングは骨の健康によいとされるが、体が弱っている場合は軽い運動も厄介なものである、まして寝たきりの老人ではほとんど運動できない。日光浴は活性化ビタミンＤ３の補給と言う点ではよいとされているが、これだけでは不十分である。薬物投与には、ビスホスホネートやカルシトニン製剤等が使用されており、骨粗鬆症の治療には有効であると言うことが知られている。しかし、これらの物質は医薬そのものであり、その服用には特別な注意が必要で、耳鳴り、頭痛、食欲不振など副作用の危険性もあり、継続的な食品素材として使用可能なものではない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明では日常的に継続して摂取可能な骨強化剤として、骨強化作用を有し、安全、安価であり、飲食品に広く用いることが可能な食品素材を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
卵は、３７℃で３週間温められるとヒヨコに変わると言う現象が示すように、生体を形作るすべての材料を含み、次世代を生み出すバイオカプセルであり、まだ見出されていない生理活性も多いと考えられる。また、卵は古くからの食経験があり、そのものの栄養価も高く安全であって食品素材としての利用価値は非常に高い。
【０００６】
そこで、本発明者らは、卵の様々な画分について骨成長、骨強化を促進する成分の探索を行った結果、卵黄水溶性画分に骨芽細胞増殖及び石灰化促進活性があることを初めて見出し、また、この成分を経口摂取することによって骨成長を促進し、骨代謝を改善できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、請求項１記載の発明（以下、本発明１という）の骨強化組成物は、骨芽細胞増殖促進活性、骨成長および骨強化作用を有する卵由来の水溶性画分を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００８】
本発明２においては、前記卵黄水溶性画分がエタノール、イソプロパノール、ヘキサン、またはその他食品加工に用いられる有機溶媒のうちから選ばれた少なくともひとつの有機溶媒により脱脂された卵黄から抽出された水溶性画分であることが好ましい。
【０００９】
また、本発明３においては、前記卵黄水溶性画分が、全卵又は卵黄液にカラギナン液を加えることによって得られる抽出液であることが好ましい。
【００１０】
さらに、本発明４の飲食品、医薬または飼料は、本発明１から３で得られた卵黄水溶性組成物を配合して用いられることが好ましい。
【００１１】
本発明によれば、安全、安価で日常的に摂取可能な骨強化用素材及び飲食品、医薬、又は飼料を提供する事ができる。
【００１２】
【発明実施の形態】
本発明で用いられる卵は、鶏、アヒル、うずら等の卵があげられるが、生産性の点から、鶏卵が好ましく用いられる。
【００１３】
また、鶏卵を用いる場合には、全卵液、卵黄液、卵白液、全卵粉末、卵黄粉末、卵白粉末、脱脂全卵粉末、又は脱脂卵黄粉末を用いることができ、中でも脱脂全卵粉末、又は脱脂卵黄粉末が好ましく用いられる。
【００１４】
本発明の骨強化組成物は、全卵粉末から食品加工において用いられる有機溶媒を用いて脱脂して得られた粉末を、温水、又は０．５％塩化ナトリウムで抽出したときの上清として得ることができる。脱脂に用いる有機溶媒は、エタノール、イソプロパノール、ヘキサンと、ほかにも食品加工に用いられる有機溶媒であればいずれでも使用できるが、簡便性と安全性の点からエタノールが好ましく用いられる。
【００１５】
また、この骨強化組成物は、全卵液または卵黄液にアラビアガム、カラギナン、キサンタンガム等の天然ゴム質水溶液を加えることによって得られる抽出液として得ることができる。ここで用いる天然ガム質水溶液は、アラビアガム、カラギナン、キサンタンガム等のいずれでも使用できるが、抽出効率の点から、ラムダカラギナンが特に好ましく用いられる。
【００１６】
本発明の骨強化組成物は骨粗鬆症や各種骨疾患の予防または改善に適用され、その有効摂取量は、成人一日当たり卵黄水溶性画分粉末換算で１００ｍｇから６ｇである。また、本発明の骨強化組成物には、ラットによる急性毒性は認められなかった。
【００１７】
本発明の骨強化組成物は、必要に応じてタンパク質分解酵素により処理してもよい。上記タンパク質分解酵素としては、食品に用いることのできるタンパク質分解酵素であれば特に制限されず、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、アルカリプロテアーゼのいずれも用いることができる。本発明においては、中性プロテアーゼが好ましく用いられる。中世プロテアーゼとしては、オリエンターゼ（商品名、株式会社エイチビイアイ製）、フレーバーザイム（商品名、ノボノルディスク製）等が挙げられる。
【００１８】
このようにして回収された骨強化組成物は、通常粉末化して用いられる。粉末化は、凍結乾燥によって、あるいは噴霧乾燥によって行ってもよく、通常は飲食品として経口的に投与される。
【００１９】
本発明の骨強化組成物は、上述した成分のほかに、賦形剤、乳化剤、安定剤、甘味料、ｐＨ調整剤、増粘剤、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、多糖類、オリゴ糖等の通常食品に用いられる成分を含んでいてもよい。
【００２０】
本発明の骨強化組成物は、飲食品に加えるだけでなく投与形態に応じて種々の形に調製され、粉末（または顆粒）、ドリンク剤、錠剤、カプセル剤等として用いることもできる。卵は古くから食経験のある安全な素材であり、継続的に用いても副作用の問題のない素材として、医薬または飼料に用いることもできる。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
【００２２】
実施例１（有機溶媒による抽出）
卵黄粉末５００ｇにエタノール２．５ｌを加え、ブレンダーで３０分間攪拌したのち固形物を回収した。この操作を３回繰り返して卵黄から脱脂を行った。この結果、風乾したのちに２８４ｇの脱脂卵黄を得た。この脱脂卵黄粉末に３７℃の温水３ｌを加えて、温度を保ちながらスターラーでよく攪拌した後、８，０００ｒｐｍ、３０分間の遠心分離を行い、上清を得た。そして、凍結乾燥で粉末化して、１３．４ｇの卵黄水溶性組成物を得た。
【００２３】
実施例２（カラギナンによる抽出）
卵黄粉末５００ｇに１％ガンマカラギナン液を３Ｌ加え、軽く攪拌した後、３０分間静置すると凝集が見られる。この後、８，０００ｒｐｍ、３０分間の遠心分離を行い上清を得た。これを凍結乾燥で粉末化して、１４．８ｇの卵黄水溶性組成物を得た。
【００２４】
実施例１、２で得られた水溶性組成物は、以下の条件のゲル濾過クロマトグラフィーで分子量の分析を行った。
【００２５】
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ
Ｄｉｏｌ  ２００  （６．０＆Ｉｕｍｌ；３００  ｍｍ）  （商品名、ワイエムシイ社製）
溶出液：０．２Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．９）
流速：０．７ｍｌ／分
検出波長：２８０ｎｍ
【００２６】
その結果、実施例１、２の卵黄水溶性組成物はいずれも分子量１０，０００〜２００，０００に同様の主要なピークの分布がみられた。
【００２７】
試験例１（骨芽細胞増殖活性の測定）
実施例１で得られた卵黄水溶性組成物の骨芽細胞増殖活性を以下のようにして測定した。ヒト骨芽細胞のＩｎＭ１．２細胞を、１０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培養液で３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で培養し、コンフルエントになるまで培養した後、トリプシン処理により細胞を集め、上記培養液を用いて１×１０４個／ｍＬに調製した。この細胞調製液を２４ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに０．５ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で培養した。翌日、試料が１００、２５、１２．５  ｐｐｍとなるように細胞に添加し、また石灰化促進剤であるα−グリセロリン酸塩（２ｍｍｏｌ／Ｌ）を添加した。試料は５０％ＤＭＳＯに溶解して、溶剤が培養液の１％になるように加えた。培養液は１日おきに交換し、２０日後にＭＴＴを用いて骨芽細胞の数を測定した。骨芽細胞の増殖促進活性は、対照群の増殖数を１００としたときの相対値であらわした。この結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
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【００２９】
試験例２（骨成長促進活性）
実施例１で得られた卵黄水溶性組成物の骨成長促進活性を以下のようにして測定した。骨成長促進活性は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットを用いて評価した。試料を２０ｍｇ／ｍｌの濃度で精製水に溶かし、ラットに２０または１００ｍｇ／ｋｇ体重／１日摂取させた。試験期間中のラットの飲料水と飼料は自由摂取とし、基本飼料としてＭＦ（商品名、オリエンタル酵母社製）を用いた。試料摂取期間（１週間）中の３日目と５日目にそれぞれ蛍光物質としてテトラサイクリンを投与した。この試験例においてはテトラサイクリンがカルシウムをキレートし、骨に沈着される現象を利用して、骨に形成される蛍光ラインを観察することにより脛骨の卵タンパク質組成物による成長促進効果を測定した。脛骨を摘出し、テトラサイクリンを投与により脛骨成長板の下部、骨新生部に形成された各蛍光線間の長さ、すなわち成長した長さを測定した。卵黄由来水溶性組成物を与えた場合と基本試料（対照群）を与えた場合の骨の伸長を比較し促進効果を評価した。顕鏡観察の結果、卵黄由来水溶性組成物群でコントロール群に対して２本の染色バンドの間隔がコントロールと比較して３０％広く、骨伸長促進活性があると確認された。
【００３０】
試験例３（軟骨細胞増殖能を評価する動物試験）
実施例１、２で得られた卵黄水溶性組成物の生体における軟骨細胞増殖能を以下のようにして行った。軟骨細胞増殖能の評価は、細胞周期中のＤＮＡ合成能、細胞増殖能を表すブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を用いた取り込み実験により行った。実施例１、２で得られた卵黄水溶性組成物をＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに対し１００ｍｇ／ｋｇ体重／一日の割合で摂取させた。試験期間中のラットの飲料水と飼料は自由摂取とし、飼料としてＭＦ（商品名、オリエンタル酵母社製）を用いた。摂取期間（１週間）の後、ＢｒｄＵを腹腔内投与（ＢｒｄＵ  ５０ｍｇ／ｋｇ）し、投与２時間後に麻酔したラットから脛骨を摘出し成長板の軟骨細胞へのＢｒｄＵの取り込みを抗ＢｒｄＵ抗体を用いる免疫染色法により測定した。試料摂取群ではＢｒｄＵ取り込み活性がコントロールに比べて有意に高かった。このことは試料摂取により軟骨細胞の増殖活性が高くなることを示しており、骨の成長が促進されることが見出された。（図２）
【００３１】
実施例３（清涼飲料水）
実施例２で調製した卵黄水溶性組成物を含有する清涼飲料水を調製した。すなわち、組成が混合異性化糖１５．０％、果汁１０％、卵黄水溶性組成物２．０％、香料  ０．１％、カルシウム０．１％、水  ７２．８％である原料を混合し、プレート殺菌機を用いて９０℃、１５秒間殺菌し、骨強化作用を有する清涼飲料水を製造した。
【００３２】
実施例４（ヨーグルト）
実施例２で調整した卵黄水溶性組成物を含有するヨーグルトを調整した。すなわち、組成が卵黄水溶性組成物３．０％、蔗糖７％、香料０．１％、ヨーグルト８９．９％である原料を混合し容器に充填して、骨強化作用を有するヨーグルトを製造した。
【００３３】
実施例５（チーズ）
実施例２で調整した卵黄水溶性組成物を含有するプロセスチーズを調整した。すなわち、ゴーダチーズ３５％、チェダーチーズ３５％、パルメザンチーズ２０％、卵黄水溶性組成物２．０％、リン酸カルシウム１．０％、水７．０％を含むように各原料を混合後、乳化温度８５℃で乳化して、骨強化作用を有するプロセスチーズを製造した。
【００３４】
実施例６（カプセル剤）
実施例２で得られた卵黄水溶性組成物６０％、コーンスターチ３０％、乳糖１０％を含むように各原料を配合して、ゼラチンカプセルに充填（カプセル１個当たり２００ｍｇ）し、骨強化作用を有するカプセル剤を製造した。
【００３５】
実施例７（錠剤）
実施例２で得られた卵黄水溶性組成物６０％、還元麦芽糖１８％、結晶セルロース１８％、ショ糖エステル４％を含むように各原料を配合後打錠（１錠当たり３００ｍｇ）して、骨強化作用を有する錠剤を製造した。
【００３６】
【発明の効果】
以上のように、本発明の卵由来水溶性組成物は、骨芽細胞増殖促進、石灰化促進活性を有する。さらに、軟骨細胞の増殖を促進して骨の成長を促す活性を有している。また、本発明の骨強化剤は経口摂取が可能であり、チーズ、バター、発酵乳等の乳食品、飲料乳、ドリンクヨーグルト、コーヒー飲料、果汁等の飲料、ゼリー、プリン、クッキー、ビスケット、ウエハース等の菓子、冷凍食品等の各種の形態の飲食品に添加し、骨強化作用を有する飲食品とすることができる。また、カプセル、錠剤などの形態でサプリメントとして用いることもでき、骨粗鬆症の予防、症状改善を目的とした飲食品、医薬または飼料の素材として有用である。
【００３７】
【図面の簡単な説明】
【図１】通常飼料と卵黄水溶性画分を添加した飼料をラットに与えたときの、各飼料摂取群について頚骨端の伸長を比較したグラフである。
【図２】通常飼料、卵黄水溶性画分添加飼料の各飼育群においてラット頚骨成長板の軟骨細胞にＢｒｄＵが取り込まれる様子を表す図である。試料摂取群ではＢｒｄＵ取り込み活性がコントロールに比べて有意に高かった。図では通常飼料摂取群で３細胞の核が染色されているが、卵黄水溶性画分添加飼料摂取群では１１細胞で染色されている。
【図１】
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【図２】
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