(57)【要約】【課題】主に、液体培地を培養用バッグに充填する際の作業の煩雑さを低減すると共に、液体培地を培養用バッグに充填する際に培養液が外気に晒されることを無くし、さらには、培養液が流れる流路自体も外気に晒されることを無くし、培養液が細菌等に汚染される危険性を低減した、細胞の増殖性の良い培地バッグ付き培養バッグを提供することにある。【解決手段】無菌培地が充填された酸素不透過性の袋状容器からなる第１の容器２と、滅菌された酸素透過性の袋状容器からなる第２の容器３と、無菌培地を第１の容器２から第２の容器３に、培地を外気に晒すことなく移し替え可能な、滅菌された連結具３とを備え、培養液を培養用バッグに充填するために必要な部品または道具を無菌状態で一括して提供し、無菌培地を第１の容器２から第２の容器３に培地を外気に晒すことなく連結具３で移し替え可能に構成する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
無菌培地が充填された酸素不透過性の袋状容器からなる第１の容器と、滅菌された酸素透過性の袋状容器からなる第２の容器と、前記無菌培地を第１の容器から第２の容器に、前記無菌培地を外気に晒すことなく移し替え可能な、滅菌された連通具とからなることを特徴とする培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項２】
前記連通具の流路を封止および開封自在の封止具を備えることを特徴とする請求項１に記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項３】
前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具の何れもが無菌的に外包装材に包装されていることを特徴とする請求項１または２に記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項４】
前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具が一つの外包装材に包装されていることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項５】
前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具が、無菌的に連通可能に連結されていることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項６】
前記第１の容器のポートまたは前記連通具の流路の一部に、破壊することにより前記第１の容器の流路と前記連通具の流路とを連通可能にする隔離手段が設けられていることを特徴とする請求項５に記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項７】
前記隔離手段が、前記第１の容器のポートまたは前記連通具の流路に設けられた膜であって、これを破壊する手段が、流路内において膜側に突刺部を向けて配置された管状体であることを特徴とする請求項６に記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項８】
前記隔離手段が、前記第１の容器のポートまたは前記連通具の流路に設けられた形成物であって、当該形成物が管状部と蓋部とそれらを液密に繋ぐ容易に破断可能な薄肉部を有することを特徴とする請求項６に記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項９】
前記第１の容器が長方形または疑似長方形の袋状容器であって、４角の内の少なくとも１カ所に内容物を排出するためのポートを有し、その対角線上の角近傍に懸垂口を有することを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項１０】
前記第１の容器の容器壁を形成するフィルムが、少なくとも、酸素不透過性の層とシーラント層を有する多層フィルムであって、酸素透過性が５ｃｃ／（ｍ２・２４ｈｒ・ａｔm）以下であることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項１１】
前記多層フィルムが共押出しフィルムであって、酸素不透過性の層の主成分がエチレンビニルアルコールであることを特徴とする請求項１０に記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項１２】
前記第１の容器に充填された培地が無菌充填されたものであることを特徴とする請求項１０または１１のいずれかに記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項１３】
前記多層フィルムがドライラミネートフィルムであって、酸素不透過性の層の主成分が、酸化珪素または酸化アルミであることを特徴とする請求項１０に記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項１４】
前記第１の容器に充填された培地が、前記第１の容器と共に高圧蒸気滅菌されたものであることを特徴とする請求項１０〜１３のいずれかに記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【請求項１５】
前記第２の容器の容器壁を形成するフィルムがオレフィン系の樹脂からなり、酸素透過性が２０００ｃｃ／（ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ）以上であることを特徴とする請求項１〜１４のいずれかに記載の培地バッグ付き培養バッグ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、培地付き培養バッグに関し、詳しくは、生体の外で細胞を培養するための培地が充填された培地バッグと培養用の培養バッグからなる培地バッグ付き培養バッグに関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、細胞を生体の外で培養するために培養用バッグが用いられる。その際に、液体培地を培養用バッグに充填し、培養されるべき細胞をこのバッグに添加する方法が採られている。これらの作業は、無菌的に行われなければならないが、作業に必要な部品または道具を、無菌の作業環境下にそれぞれ別々に無菌的に導入しなければならないので、煩雑で、無菌であるべき作業環境を細菌により汚染する危険がある。さらに、液体培地を培養用バッグに充填するときには、培地を、無菌環境下とはいえ、細菌が若干でも存在する可能性のある外気に晒すことになり、培養液が細菌に汚染されてしまう危険がある。
【０００３】
これを改善するべく、予め培地を充填した培養用バッグを無菌的に外包装したものが提案されている。（特許文献１）
【０００４】
その提案によれば、培養用バッグに予め培地が充填されているので、培養バッグへの培地の充填作業がなくなる。さらに、培養用バッグが無菌的に外包装されているので、培養されるべき細胞をこのバッグに添加する作業の無菌化が容易になり、培養作業の煩雑さが改善される。
【０００５】
ところが、培養用バッグは高い酸素透過性が要求されるので、これを維持するために、通常、柔軟性の高い素材を用い、しかも、容器壁の肉厚を薄くしなければならない。さらに、培地内への酸素透過性を維持するために、容器寸法に比べて少ない量の培地を充填することになるので、予め培地が充填された培養用バッグは、著しく柔軟で、不安定で取り扱いにくいものになり、培地充填後のクリーンベンチ内で取り扱い、特に、その外包装材内への挿入、また、培養されるべき細胞をこのバッグに添加するときの取り扱い、特に外包装材からの取り出しが困難で煩雑なものになるという欠点がある。
【０００６】
また、培地は一般に酸化劣化し易いのに、容器寸法に比べて少量の培地しか充填されない前記提案では、培地の量に比べて外包装材の面積も大きくなり、それに比例して酸素透過性も大きくなるので、より性能の高い酸素不透過性の材料、すなわち、高価な材料を選定しなければ、保管時に培地が酸化劣化しやすいという欠点がある。さらに、容器寸法に比べて少量の培地しか充填されない前記提案では、コンパクトな包装、梱包が困難であるという欠点もある。
【０００７】
通常、細胞の密度が適度に高い方が増殖し易いと言われているが、予め全ての培地が充填された前記提案では、細胞の増殖に合わせて培地を徐々に供給する事ができないので、最適な培養条件が得られないという欠点もある。さらに、培養中は、全ての培地が、酸素透過性の高い培養バッグの中で高濃度の酸素に、しかも、培地の劣化を促進する高い温度条件下で晒されるので、培養中の培地の劣化を抑えることが全くできないという欠点がある。
【０００８】
【特許文献１】特許第２８５４３９４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明が解決しようとする課題は、液体培地を培養用バッグに充填する際の作業の煩雑さを低減すると共に、液体培地を培養用バッグに充填する際に培養液が外気に晒されることを無くして、さらには、培養液が流れる流路自体も外気に晒されることを無くして、培養液が細菌等に汚染される危険性を低減した、細胞の増殖性の良い培地バッグ付き培養バッグを提供することにある。
【００１０】
ここでいう液体培地とは、連通部を介して第１の容器から第２の容器へ移し替え可能な流動性を有する培地をいう。
【００１１】
また、保管時の培地の酸化劣化を安価な包装形態で進みにくくしたり、比較的高い温度、例えば、培養温度での長期保存においても酸化劣化が進行しにくい培地バッグ付き培養バッグを提供することにある。
【００１２】
さらに、細胞の増殖の程度に合わせて培地を容易に、無菌的に、且つ、繰り返し供給することが可能で、培養中であっても、供給待ちの培地が酸化劣化しない培地バッグ付き培養バッグを提供することにある。
【００１３】
それに加えて、コンパクトな外包装、梱包が容易で、外包装材からの出し入れが容易で、取り扱い易い培地バッグ付き培養バッグを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の培地バッグ付き培養バッグは、無菌培地が充填された酸素不透過性の袋状容器からなる第１の容器と、滅菌された酸素透過性の袋状容器からなる第２の容器と、前記無菌培地を第１の容器から第２の容器に、培地を外気に晒すことなく移し替え可能な、滅菌された連結具とからなることを特徴とする。
【００１５】
本発明の培地バッグ付き培養バッグは、液体培地を培養用バッグに充填するために必要な部品または道具を、すなわち、第１の容器と第２の容器と連結具を無菌状態で一括して提供することにより、例えば、一つの外包装材にまとめて包装して提供することにより、作業が煩雑になることを防止するものであり、さらに、無菌培地を第１の容器から第２の容器に培地を外気に晒すことなく移し替え可能な連結具で第１の容器と第２の容器を連通することによって、培地が外気中に含まれる細菌等に汚染される危険性を低減する。
【００１６】
また、培地が充填された容器を容易に潰れやすい袋状の容器にすることによって、培地を移し替える際に、すなわち、容器から培地を排出する際に、容器内を空気で置換する必要がないので、置換する空気による培地の細菌汚染等を心配する必要がない。
【００１７】
さらに、培養する容器を容易に潰れやすい袋状の容器にすることによって、培地を移し替える際に、すなわち、容器に培地を充填する際に、容器内の空気を排出する必要がないので、空気抜きのベントを設ける必要がなく、ベントからの細菌汚染を心配する必要がない。
【００１８】
なお、ここで、培地を外気に晒すことなく移し替え可能な連結具とは、管状体、例えば、柔軟性のあるチューブの一端に、第１の容器と連結可能なまたは連通した入出口を有し、連結具の前記一端と連通した別の一端に第２の容器と連通可能なまたは連通した入出口を有するもので、それぞれの入出口の形態は、培地バッグ付き培養バッグの違いにより異なり、予め、第１の容器または第２の容器のポートと接合した形態のもの、または、第１の容器または第２の容器のポートの一部を穿刺可能で、且つ、第１の容器または第２の容器と連通可能な管状体、例えば、輸液セットの瓶針の形態のもの等がある。なお、何れの場合も第１の容器と第２の容器は、連結具と連結または連通するためのポートを有する。
【００１９】
ここで言う「連通」とは、流路を有する２つ以上の形成物を繋ぐ時に、流路と流路の繋がりを生じることを意味し、ここで言う「連結」とは、２つ以上の形成物を繋ぐ時に、流路と流路の繋がりを生じるか生じないかに拘わらず、接続して離れない状態を意味する。
なお、ここで言う「流路」には、液体または気体が貯留する容器内も含まれる。「管状体」とは、内部に連続した中空の流路が形成された形成物または形成物を組み合わせた構造物を意味する。
【００２０】
前記柔軟性のあるチューブの材質としては、軟質塩化ビニル樹脂、ポリブタジエン樹脂、エチレン−酢酸ビニル共重合体、塩素化ポリエチレン樹脂、ポリウレタン系熱可塑性エラストマー、ポリエステル系熱可塑性エラストマー、スチレン系エラストマー、例えば、ＳＢＳ、ＳＩＳ、ＳＥＢＳ、ＳＥＰＳ等が挙げられる。
【００２１】
請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の構成に加え、連通具の流路を封止及び開封自在の封止具を備えることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグによれば、第１の容器から第２の容器に必要量の培地を移し替えた後に、封止具で連通具の流路を閉じて第２の容器内で細胞を培養し、細胞が目的の濃度まで増殖後、再度、第１の容器から第２の容器に必要量の培地を追加供給して培養することが容易に、無菌的に、且つ、繰り返し可能で、しかも、追加供給する培地は、新鮮な培地、すなわち、酸化劣化していない培地とすることができる。
【００２２】
ここで、「封止」及び「開封自在」とは、必要に応じて連通具の流路を閉じて培地の移動を止めることができ、封止後は、必要に応じて封止操作を解除して流路を開き培地の移動を再開できることをいう。
【００２３】
請求項３に記載の発明は、請求項１または２に記載の構成に加え、前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具の何れもが無菌的に外包装材に包装されていることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具の何れもが、外側も無菌状態にあるので、無菌環境下に、改めて煩雑な殺菌処理等を行わなくても、無菌環境を汚染することなしに持ち込むことが容易にできる。例えば、培養されるべき細胞をこのバッグに添加する操作が無菌操作を必要とする場合などでも、そのまま無菌環境下に持ち込むことができる。
【００２４】
請求項４に記載の発明は、請求項１〜３のいずれかに記載の構成に加え、前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具が一つの外包装材に包装されていることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具を一つの外包装材に包装することにより、一括して提供し易くし、さらに、無菌的に一つの外包装材に包装することにより、無菌環境下への無菌的な持ち込み性を向上して、無菌環境の細菌等による汚染を防止し、ひいては、培地が細菌等に汚染される危険性を低減する。
【００２５】
請求項５に記載の発明は、請求項１〜４のいずれかに記載の構成に加え、前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具が、無菌的に連通可能に連結されていることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、前記第１の容器と前記第２の容器と前記連通具が、無菌的に連通可能に連結されて提供されるので、前記連通具を前記第１の容器と前記第２の容器に繋ぐ手間が必要なく、繋ぎ間違いも生じない。さらに、培地が移動する流路も全く外気に晒されることがないので、無菌的な移し替えを確実に行うことができる。
【００２６】
請求項６に記載の発明は、請求項５に記載の構成に加え、前記第１の容器のポートまたは前記連通具の流路の一部に、破壊することにより前記第１の容器の流路と前記連通具の流路とを連通可能にする隔離手段が設けられていることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、使用前には、隔離手段により、第１の容器の培地が第２の容器に移行しない状態を維持することができ、使用時には、この隔離手段を破壊して、隔離手段前後の流路を連通させることにより、第１の容器の培地を第２の容器に移し替えることができる。
【００２７】
請求項７に記載の発明は、請求項６に記載の構成に加え、前記隔離手段が、前記第１の容器のポートまたは前記連通具の流路に設けられた隔膜であって、これを破壊する手段が、流路内において隔膜側に突刺部を向けて配置された管状体であることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、穿刺部を有する管状体で隔膜を刺通することによって、容易に管状体の内径に流路を形成することができる。
【００２８】
請求項８に記載の発明は、請求項６に記載の構成に加え、隔離手段７が、前記第１の容器２のポートまたは前記連通具４の流路に設けられた形成物であって、当該形成物が管状部と蓋部とそれらを液密に繋ぐ容易に破断可能な薄肉部を有することを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、当該形成物を薄肉部で折り曲げて破壊し、管状部と蓋部を切り離すことによって、流路を形成しようとするものである。
【００２９】
なお、蓋部は、管状部と反対側に棒状に伸びた部分を有する方が折り曲げ易く、また、当該形成物を連通具の流路に設けるような場合には、蓋部を培養用バッグ側に向けて配置することによって、切り離された蓋部による流路の閉塞を防止することができる。
【００３０】
請求項９に記載の発明は、請求項１〜８のいずれに記載の構成に加え、前記第１の容器が長方形または疑似長方形の袋状容器であって、４角の内少なくとも１カ所に内容物を排出するためのポートを有し、その対角線上の角近傍に懸垂口を有することを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、長方形の袋状容器の対角線上でそれぞれの角に内容物を排出するためのポートと懸垂口を有するので、懸垂口でバッグを吊すと、真下にポートがくるので安定して排出し易く、また、ポートの両サイドが立ち上がっているので残液も少ない。ここで「疑似長方形」とは、例えば、長方形の角の一部または全部が円弧置き換えられる等、長方形の性質は有するものの、正規の長方形から変形したものを言う。
【００３１】
請求項１０に記載の発明は、請求項１〜９のいずれに記載の構成に加え、前記第１の容器の容器壁を形成するフィルムが、少なくとも、酸素不透過性の層とシーラント層を有する多層フィルムであって、酸素透過性が５ｃｃ／（ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ）以下であることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、酸素不透過性の層とシーラント層を有する多層フィルムにより形成されているので、容易に熱シールによる製袋が可能で、培養液の酸化劣化を抑えることができる。
【００３２】
請求項１１に記載の発明は、請求項１０に記載の構成に加え、前記多層フィルムが共押出しフィルムであって、酸素不透過性の層の主成分がエチレンビニルアルコールであることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、第１の容器の容器壁を形成するフィルムに、酸素不透過性の層の主成分がエチレンビニルアルコールの共押出しフィルムを採用することにより、安価で、培地に細胞の増殖を阻害する因子の溶出が少ない第１の容器を作製することができる。
【００３３】
請求項１２に記載の発明は、請求項１０または１１に記載の構成に加え、第１の容器に充填された培地が無菌充填されたものであることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、前記第１の容器を放射線滅菌後、無菌的に培地を充填することにより、安価で、培地に容器壁からの溶出による細胞の増殖を阻害する因子の混入の少ない培地が充填された第１の容器が得られる。
【００３４】
請求項１３に記載の発明は、請求項１０に記載の構成に加え、前記多層フィルムがドライラミネートフィルムであって、酸素不透過性の層の主成分が、酸化珪素または酸化アルミであることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、酸化珪素または酸化アルミが蒸着されたフィルムをシーラントフィルムとドライラミネートすることによって、高圧蒸気滅菌可能で、酸素バリア性が極めて高く、比較的高い温度での長期保存においても酸化劣化が進行しにくい第１の容器を得ることができる。
【００３５】
請求項１４に記載の発明は、請求項１０〜１３のいずれかに記載の構成に加え、第１の容器に充填された培地が、第１の容器と共に高圧蒸気滅菌されたものであることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、培地が充填された第１の容器ごと高圧蒸気滅菌することにより、無菌でない環境下で充填された培地でも、簡単にまた確実に滅菌することができる。
【００３６】
請求項１５に記載の発明は、請求項１〜１４のいずれかに記載の構成に加え、第２の容器の容器壁を形成するフィルムがオレフィン系の樹脂またはジエン系のエラストマーからなり、酸素透過性が２０００ｃｃ／（ｍ２・２４ｈｒ・ａｔｍ）以上であることを特徴とする。本発明の培地バッグ付き培養バッグは、第２の容器の容器壁を形成するフィルムがオレフィン系の樹脂またはジエン系のエラストマーからなる酸素透過性の良いフィルムを使用することにより、細胞の増殖性の良い培養用バッグを得ることができる。
【００３７】
ここで、酸素透過性の良いオレフィン系のフィルムとしては、低密度ポリエチレン樹脂、直鎖状低密度ポリエチレン樹脂、エチレン酢酸ビニル共重合体、メチルペンテン樹脂等が、またはジエン系のエラストマーとしては、ポリブタジエン樹脂、スチレン−ブタジエン−スチレンブロック共重合体、スチレン−イソプレン−スチレンブロック共重合体、スチレン−エチレン・ブチレン−スチレンブロック共重合体、スチレン−エチレン・プロピレン−スチレンブロック共重合体等が挙げられる。
【発明の効果】
【００３８】
以上のとおり本発明によれば、液体培地を培養用バッグに充填する際の作業の煩雑さを低減すると共に、液体培地を培養用バッグに充填する際に培養液が外気に晒されることを無くして、さらには、培養液が流れる流路自体も外気に晒されることを無くして、培養液が細菌等に汚染される危険性を低減した、細胞の増殖性の良い培地バッグ付き培養バッグを提供することができる。
【００３９】
また、保管時の培地の酸化劣化を安価な包装形態で進みにくくしたり、比較的高い温度、例えば、培養温度での長期保存においても酸化劣化が進行しにくい培地バッグ付き培養バッグを提供することができる。
【００４０】
また、細胞の増殖の程度に合わせて培地を容易に、無菌的に、且つ、繰り返し供給することが可能で、培養中であっても、供給待ちの培地が酸化劣化しない培地バッグ付き培養バッグを提供することができる。
【００４１】
さらには、コンパクトな包装、梱包が容易で、外包装材からの出し入れが容易で、取り扱い易い培地バッグ付き培養バッグを提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４２】
本発明の実施の形態を実施例１〜３に基づき、図面を参照しながら説明する。
【実施例１】
【００４３】
図１に示す如く、本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１は、無菌培地６が充填された酸素不透過性の第１の容器（培地バッグ）２と、滅菌された酸素透過性の第２の容器（培養バッグ）３と、前記無菌培地を第１の容器２から第２の容器３に、培地を外気に晒すことなく移し替えることを可能にする、滅菌された連通具４からなる培地バッグ付き培養バッグである。
【００４４】
第１の容器２と第２の容器３は、それぞれ第１の容器２のポート２１と第２の容器３のポート３１において、柔軟性を有するチューブからなる連通具４により、予め連通可能に連結されているが、使用前に、第１の容器２内の無菌培地６が連通具４の流路または第２の容器３内に流入することがないように、第１の容器２のポート２１に設けられた隔離手段７により、第１の容器２内と連通具４の流路が隔離されている。また、連通具４の途中には、連通具４の流路をいつでも封止及び開封が可能な封止具５が備えられている。
【００４５】
第１の容器２のポート２１は、第１の容器２の４角の内の１カ所に設けられ、その対角線上の角近傍に懸垂口９が設けられている。第１の容器２は培地充填後高圧蒸気滅菌され、その他の容器または部品は電子線滅菌される。そして、これらの一連の容器及び部品、すなわち、第１の容器２、第２の容器３、連通具４、封止具５は、無菌的に１つの外包装材に包装されて提供される。
【００４６】
ここで、第１の容器２の容器壁に使用されるフィルムは、シリカ蒸着された１２ミクロンのポリエステルフィルムと７０ミクロンのポリエチレンフィルムをドライラミネートしたものであり、差圧０．１Ｍｐａ下における１平方メートル、２４時間当たりの酸素透過量は１ｃｃ以下である。第２の容器３の容器壁に使用されるフィルムは、密度が１立方センチメートルあたり０．９２グラムで厚さが１００ミクロンのフィルムであり、差圧０．１Ｍｐａ下における１平方メートル、２４時間当たりの酸素透過性は約２３００ｃｃである。
【００４７】
次に、本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１の使用方法について説明すると、外包装材に一括して包装された本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１は、外包装材の外側表面をアルコールで殺菌後、外包装材を一部開封して、無菌室へ通じるパスボックス内に仮置きされ、次いで、無菌室側からの操作により、パスボックス内から無菌的に、例えば、外包装材の外側の面に触れないようにして外包装材から取り出され、無菌室に搬入され、さらには、無菌室内のクリーンブース内に搬入される。
【００４８】
無菌室内のクリーンブース内に搬入された本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１は、図１に示す如く、第１の容器２は、ハンガー８に懸垂口９で吊り下げられ、第２の容器３はクリーンブース内の床面またはクリーンブース内に設けられたテーブル上に水平に置かれる。
【００４９】
次に、隔離手段７を破壊して、第１の容器２内と連通具４の流路とを連通して第１の容器２内の無菌培地６を第２の容器３内に移し替え、連通具４をシールして密封してから第２の容器３から第１の容器２を切り離して取り除く。
【００５０】
次に、第２の容器３の細胞導入チューブ１０から第２の容器３内に細胞浮遊液を導入し、細胞導入チューブ１０をシールして密封した後に、クリーンブースから出して恒温槽内に第１の容器２を静置し、細胞培養を行う。
【００５１】
なお、上記のように、第１の容器２内の無菌培地６の全てを第２の容器３内に一度に移し替えてから培養しても良いが、細胞数が少なくて適正な細胞密度が得られないような場合には、培地を必要量だけ移し替えた後に、封止具５よって連通具４の流路を封止して培地の供給を一時的に中断して、細胞を導入し、一旦培養した後に封止具５を開封して、培地を追加供給し、さらに培養を続けることもできる。
【００５２】
ここでは、第１の容器２に充填された培地を、単に無菌培地としているが、必ずしも、培地内に細胞等が存在しないことを意味するものではなく、培養を妨げる雑菌等が存在しないことを意味するもので、管理された細胞等は存在しても構わない。ここでいう、「細胞等」とは、増殖性のタンパク質、ウイルス、リケッチア、細菌、真菌、植物性または動物性の細胞類を言う。
【００５３】
細胞には、多くの機能を保持した正常細胞、不死化し株細胞があり、これらの細胞は、別に、培養形態により、浮遊系細胞、接着系細胞に分類される。
培養する細胞としては、上記の何れの細胞でも良く、例えば、浮遊系の正常細胞であるリンパ球や血液幹細胞等、浮遊系の株化細胞であるハイブリドーマやＫ５６２細胞等、接着系の正常細胞である角化細胞やＥＳ細胞等、接着系の株化細胞であるＨｅＬａ細胞やＣＨＯ細胞等が挙げられる。
【００５４】
尚、ここでいう細胞には、各種生物、例えば、ヒト、イヌ、ラット、マウス、トリ、ブタ、ウシ、昆虫等の細胞、または、これらが集合して形成した組織、器官、更には、微生物、ウイルス等が含まれる。
【００５５】
ここで、隔離手段７には、図４に示す如く、管状体７１と蓋体７２とそれらを液密に繋ぐ容易に破断可能な薄肉部７３からなる形成物を、薄肉部７３で折り曲げて破壊し、管状体７１と蓋体７２を切り離すことによって、流路を形成するものである。蓋体７２は、管状体７１と反対側に棒状部７４を有する方が曲げやすい。
【００５６】
なお、隔離手段７は、必ずしも、上記の形態でなくても、使用前は、第１の容器の培地が第２の容器に移行することがなく、使用時に隔離手段前後の流路を連通させることができるものであればよい。例えば、図５に示すが如く、流路７５に設けられた隔膜７６と、流路７５内において隔膜７６側に突刺部７７を向けて配置された管状体７８からなり、使用時に流路の外からの操作によって、穿刺部７７を有する管状体７８を移動させて隔膜７６を刺通することによって、流路を形成するようなものであってもよい。
【実施例２】
【００５７】
図２に示す如く、本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１は、無菌培地が充填された酸素不透過性の第１の容器２と、滅菌された酸素透過性の第２の容器３と、前記無菌培地を第１の容器２から第２の容器３に、培地を外気に晒すことなく移し替えることを可能にする、滅菌された連通具４からなる培地バッグ付き培養バッグである。
【００５８】
第２の容器３は、第２の容器３のポート３１において、予め柔軟性を有するチューブからなる連通具４と連通可能に連結され、連通具４は、第２の容器３のポート３１の反対側に、連結針１１を具備している。また、第１の容器２は、第１の容器２のポート２１に、連通針１１により刺通可能で、連結針１１と連通可能なアダプター２２を具備している。また、連通具４の途中には、実施例１と同様に封止具５が備えられている。
【００５９】
第１の容器２には、実施例１と同様にポート２１と懸垂口９が設けられている。また、第１の容器２は、電子線滅菌後、無菌的に培地が充填され、その他の容器または部品は電子線滅菌される。そして、これらの一連の容器及び部品は、すなわち、第１の容器２、第２の容器３、連通具４、封止具５は、無菌的に１つの外包装材に包装されて提供される。なお、連結針１１は、使用しないときは、針先が連結針キャップ１２により保護されている。
【００６０】
ここで、第１の容器２の容器壁に使用されるフィルムは、ナイロンとエチレンビニルアルコールと７０ミクロンのポリエチレンフィルムを共押し足成形にて成形したものであり、差圧０．１Ｍｐａ下における１平方メートル、２４時間当たりの酸素透過性は３ｃｃである。第２の容器３の容器壁に使用されるフィルムは、密度が１立方センチメートルあたり０．９１８グラムで厚さが１００ミクロンのフィルムであり、差圧１Ｍｐａ下における１平方メートル、２４時間当たりの酸素透過性は約３０００ｃｃである。
【００６１】
次に、本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１の使用方法について説明すると、外包装材に一括して包装された本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１は、実施例１と同様の方法で、無菌室内のクリーンブース内に搬入され、予め、連通具４の流路を封止具５で封止してから、連結針１１を第１の容器２のアダプター２２に刺通、嵌合する。
【００６２】
次に、実施例１と同様にクリーンブース内に設置され、封止具５を開封して、第１の容器２と第２の容器３とを連通して、第１の容器２の無菌培地６を第２の容器３に移し替え、連通具４をシールして密封してから第２の容器３から第１の容器２を切り離して除去する。以降は、実施例１と同様である。
【００６３】
ここで、連結針１１は、図６に示す如く、管状体４０の一端が封止され、隔膜を刺通するための尖った先端に形成された突刺部４１と、管状体の突刺部４１の近傍側面に形成され、管状体の内側と連通する開口部４２と、柔軟性を有するチューブと接続するための接合部４３と、突刺部４１と接合部４３の中間、接合部よりの位置に設けられたフランジ４４からなり、後述するアダプター２２の隔膜を容易に刺通可能で、刺通後は、連通路を形成すると共に、容易にはアダプター２２と外れない嵌合強度を有するものである。
【００６４】
ここで、アダプター２２は、図７に示す如く、中間に隔壁２６を有する管状体２５と蓋体２７とそれらを密液に繋ぐ容易に破断可能な薄肉部２８からなる形成物であって、蓋体２７に設けられた蓋体つまみ２９を管状体２５と反対側に引っ張ることにより、薄肉部２８を破壊して蓋体２７を取り除き、さらに、連結針１１により隔膜２６を刺通することによって、第一の容器２と連通具４との流路を確保するものである。
【実施例３】
【００６５】
図３に示す如く、本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１は、無菌培地が充填された酸素不透過性の第１の容器２と、滅菌された酸素透過性の第２の容器３と、前記無菌培地を第１の容器２から第２の容器３に、培地を外気に晒すことなく移し替えることを可能にする、滅菌された連通具４からなる培地バッグ付き培養バッグである。連通具４は、柔軟性を有するチューブからなり、そのチューブの両端にはそれぞれ連結針１１を具備しており、連通具４の途中には、実施例１と同様に封止具５が備えられている。
【００６６】
第１の容器２は、実施例２と同一の形態であり、第２の容器３のポート３１には、第１の容器２のポート２１に設けられたアダプター２２と同じ形成物であるアダプター３２が設けられている。また、第１の容器２、第２の容器３、連通具４、封止具５は、無菌的に１つの外包装材に包装されて提供される。第２の容器３の容器壁に使用されるフィルムは、実施例１と同様のフィルムが使用される。
【００６７】
次に、本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１の使用方法について説明すると、本実施例の培地バッグ付き培養バッグ１は、実施例１と同様の方法で、無菌室内のクリーンブース内に搬入され、予め、連通具４の流路を封止具５で封止してから、連結針１１を第１の容器２のアダプター２２及び第２の容器３のアダプター３２に刺通、嵌合する。以降は、実施例２と同様に細胞培養を行う。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】本発明に係る培地バッグ付き培養バッグ１の一例を示す斜視図である。
【図２】本発明に係る培地バッグ付き培養バッグ１の別の一例を示す斜視図である。
【図３】本発明に係る培地バッグ付き培養バッグ１の別の一例を示す斜視図である。
【図４】本発明に使用される隔離手段の一例を示す部分断面図である。
【図５】本発明に使用される隔離手段の別の一例を示す部分断面図である。
【図６】本発明に使用される連結針の一例を示す部分断面図である。
【図７】本発明に使用されるアダプターの一例を示す部分断面図である。
【符号の説明】
【００６９】
１      培地バッグ付き培養バッグ
２      第１の容器
３      第２の容器
４      連通具
５      封止具
６      無菌培地
７      隔離手段
８      ハンガー
９      懸垂口
１０    細胞導入チューブ
１１    連結針
１２    連結針キャップ
２１    ポート
２２    アダプター
２５    管状体
２６    隔膜
２７    蓋体
２８    薄肉部
２９    蓋体つまみ
３１    ポート
３２    アダプター
４０    管状体
４１    突刺部
４２    開口部
４３    チューブ接合部
４４    フランジ
７１    管状体
７２    蓋体
７３    薄肉部
７４    棒状部
７５    中空体の流路
７６    隔膜
７７    突刺部
７８    管状体
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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