(57)【要約】 【課題】  有用な抗アレルギー作用を有し、かつ副作用がなく長期間に渡り服用できる抗アレルギー剤および食品を提供することである。さらに抗アレルギー剤の製造方法を提供するものである。【解決手段】  本発明の抗アレルギー剤および食品はネオヘスペリジン、ナリンギン、ネオヘスペリジンおよびナリンギンを有効成分とするものである。また本発明の抗アレルギー剤および食品はネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実を有効成分として含有するものである。ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含む柑橘類果実を６０％以上のエタノール水溶液でネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを抽出して優れた抗アレルギー作用を有する抗アレルギー剤を製造する方法である。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ネオヘスペリジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
ナリンギンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項３】
ネオヘスペリジンおよびナリンギンを有効成分として含むことを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項４】
ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１つに記載の抗アレルギー剤を含むことを特徴とする食品。
【請求項６】
ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含有する柑橘類果実をエタノール水溶液で抽出する工程を含むことを特徴とする抗アレルギー剤の製造方法。
【請求項７】
前記エタノール水溶液中のエタノールの濃度が６０％以上であることを特徴とする請求項６記載の抗アレルギー剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗アレルギー作用を介して種々のアレルギー疾患を改善、治療するネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含有する柑橘類果実を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、抗アレルギー剤および抗炎症剤としては、グルココルチコイド型の副腎皮質ホルモン剤や、インドメタシンなどの非ステロイド性抗炎症剤などが用いられている。しかしながら、ステロイドホルモン剤は抗アレルギー作用および抗炎症作用を有するものの副作用が強いという問題があり、また、インドメタシンなどは抗炎症作用のみを有するため抗アレルギー剤としては有用でなかった。
【０００３】
また、薬物の投与で一時的に症状が抑制されることがあっても、効果および副作用の面で、充分とはいえない実状にある。かかる現状において、各種アレルギー疾患の中でも、特に気管支ぜん息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎などに対して強い抗アレルギー効果を有し、しかも長時間の投与に耐え得る安全性の高い治療薬であって、かつ経口投与可能な新しい治療薬の開発が望まれている。
【０００４】
一方、ミカン科植物のＣｉｔｒｕｓ属植物やＦｏｒｔｕｎｅｌｌａ属植物の果実は柑橘類果実と総称され、世界的に食用とされているものが数多くある。また、柑橘類果実は古来、薬用に供されるものも多く、『第十四改正日本薬局方』には陳皮［ミカン科
（Rutaceae）のウンシュウミカン（Citrus unshiu）あるいはCitrus reticulataの成熟した果皮］、枳実・枳殻［ミカン科（Rutaceae）のダイダイCitrus aurantium var．
daidai、Citrus aurantium又はナツミカンCitrus natsudaidaiの未熟果をそのまま或いはそれを半分に横切したもの］、橙皮［ミカン科（Rutaceae）のCitrus aurantium又はダイダイCitrus aurantium var． daidaiの成熟した果皮］が収載されている。
【０００５】
これら柑橘系生薬はいずれも特有の芳香と苦味を有し、中国では、陳皮および橙皮は芳香性苦味健胃薬として用いられ、枳実は堅く充実したうっ滞、うっ血による腫脹の改善を目的とした漢方方剤に配合される。
【０００６】
柑橘系生薬には、精油成分としてリモネン（limonene）、フラボノイド配糖体としてヘスペリジン（hesperidin）、ネオヘスペリジン（neohesperidin）、ナリンギン（
naringin）、アルカロイドとしてシネフリン（synephrine）などが含まれている。
【０００７】
ミカン類生薬（陳皮、橘皮、枳実、橙皮）には、消化器系に対する作用や抗アレルギー作用などが証明されている。抗アレルギー作用に関しては、陳皮水製エキスの経口投与によってラット受身皮膚アナフィラキシー反応は抑制される。典型的な従来の技術は、特許文献１に記載されている。特許文献１には、ウンシュウミカン果実についてマスト細胞からのｃｏｍｐｏｕｎｄ  ４８／８０によるヒスタミン遊離抑制作用を指標に、抗アレルギー作用を検討され、成熟したものよりも未成熟なものにより強い作用があることが記載されている。また、ヘスペリジンが主要成分と考えられている。たとえば、特許文献２参照。また、フラボノイド成分のノビレチン、タンゲリチン、３−メトキシノビレチンにもラット腹腔マスト細胞からのヒスタミン遊離抑制作用が認められている。また、枳実、枳殻の水エキスや５０％エタノールエキスにはラット受身皮膚アナフィラキシー反応やマウス塩化ピクリル誘発接触性皮膚炎を抑制する作用が報告されている。
【０００８】
【特許文献１】特開昭６３−１７０３２３
【特許文献２】特開平４−２９５４２８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
特許文献１記載の技術は、有効成分として柑橘類の未成熟な果実の水溶性エキスを含有してなる抗アレルギー剤を提供するものである。特許文献２記載の技術はヘスペリジンを有効成分としてなる抗アレルギー剤を提供するものである。しかし、ヘスペリジンは極めて水に難溶性故、柑橘類の未成熟な果実を水で抽出した抗アレルギー剤に抗アレルギー効果は期待できない。
【００１０】
柑橘類の未成熟な果実から抽出されるエキスにおいて抗アレルギー作用をもたらす成分としてヘスペリジンが知られていた。しかし、柑橘類果実に含まれるネオヘスペリジンおよびナリンギンについて抗アレルギー作用が存在することは知られていない。
【００１１】
本発明の目的は、長時間の投与に耐え得る安全性の高い治療薬若しくは食品であって抗アレルギー効果に優れ、気管支ぜん息、アレルギー性鼻炎、花粉症、アトピー性皮膚炎などを予防・改善することができる抗アレルギー剤若しくは食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
かかる事情により、本発明者らは鋭意研究を行った結果、ネオヘスペリジンおよびナリンギン、並びにネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含有する柑橘類果実がジニトロフルオロベンゼン誘発３相性皮膚反応試験において極めて強い抗アレルギー作用を示すことを見出し、本発明を完成した。
【００１３】
ネオヘスペリジン(neohesperidin)、ナリンギン（naringin）は下記の化学構造式で示される化合物である。
【００１４】
【化１】
2005170804.tif 000002
【００１５】
ここで、Ｇｌｃはグルコースを示し、Ｒｈａはラムノースを示す。
すなわち、本発明は、ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤である。
【００１６】
本発明のネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実とは、ミカン科Ｃｉｔｒｕｓ属植物を基原とする柑橘類果実を意味するものである。
【００１７】
本発明のネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含む柑橘類果実のエキスは、一般の抽出方法によって得られる。すなわち、果実を細切後、水あるいは任意の濃度で調製したエタノールで抽出、ろ過後、そのろ液から抽出溶媒を留去後、抽出エキスを得る。また、果実の乾燥粉末は、一般の乾燥方法によって得られる。すなわち、果実をそのままあるいは細切後、日陰あるいは陽干し、あるいは乾燥機を用いて乾燥し、粉末としたものである。生果実を絞った果汁、生果実をペースト状にしたもの、などその剤型は問われない。
【００１８】
このようにして、得られるエキスあるいは粉末などは、そのままあるいは必要に応じて他の公知の添加剤、たとえば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤などを混合して常法により、顆粒剤、散剤、カプセル剤、錠剤、ドライシロップ剤、液剤などの経口剤とすることができる。
【００１９】
また、本発明の食品は、ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含む柑橘類果実からの抽出物もしくはネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含む柑橘類果実の乾燥粉末またはネオヘスペリジンもしくはナリンギン、またはネオヘスペリジンおよびナリンギンを含有するものである。具体的には、これらを含有するマーマレード、ジャム、アイスクリーム、飴、チューイングガム、牛乳、ヨーグルト、乳清飲料、乳酸菌飲料、ジュース、飲料、プディング、水羊羹などとすることができる。本発明の食品には、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ビタミンＣ、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などの通常食品原料として使用されるものを適宜配合することにより製造することができる。
【００２０】
本発明の抗アレルギー剤の有効成分であるネオヘスペリジンあるいはナリンギンは１日０．００１ｇ〜２０ｇ用いる。１日０．１ｇ〜２０ｇ用いる。特に１日０．５ｇから５ｇ用いることが好ましい。ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含有する柑橘類果実エキスあるいは粉末は、１日０．１ｇ〜２０ｇ用いる。特に１日０．５ｇから１０ｇ用いることが好ましい。
【００２１】
本発明は、ネオヘスペリジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤である。
【００２２】
本発明に従えば、ネオヘスペリジンは、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制する。したがって、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支喘息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００２３】
また本発明は、ナリンギンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤である。
本発明に従えば、ナリンギンは、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制する。したがって、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支喘息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００２４】
また本発明は、ネオヘスペリジンおよびナリンギンを有効成分として含むことを特徴とする抗アレルギー剤である。
【００２５】
本発明に従えば、ネオヘスペリジンおよびナリンギンは、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制する。したがって、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支喘息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００２６】
また本発明は、ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤である。
【００２７】
本発明に従えば、ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実を有効成分として含有するので抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制する。したがって、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支喘息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００２８】
また本発明は、前述の抗アレルギー剤を含むことを特徴とする食品である。
本発明に従えば、抗アレルギー作用のあるネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つ、もしくはネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実を有効成分として含有する抗アレルギー剤が食品に含まれることによって抗アレルギー剤の摂取を容易にすることができる。
【００２９】
また本発明は、ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを含有する柑橘類果実をエタノール水溶液で抽出する工程を含むことを特徴とする抗アレルギー剤の製造方法である。
【００３０】
本発明に従えば、水に比較してネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つが多量に含まれているエキスを抽出することができる。
【００３１】
本発明は、前記エタノール水溶液中のエタノールの濃度が６０％以上であることを特徴とする。
【００３２】
本発明に従えば、エタノール濃度が６０％以上であると抽出されるエキス中に急激にネオヘスペリジンおよびナリンギンの含有量が増加する。したがって、多量のネオヘスペリジンおよびナリンギンが含まれているエキスを抽出することができる。
【発明の効果】
【００３３】
本発明によれば、本発明の抗アレルギー剤の有効成分であるネオヘスペリジンは、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制するので、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支ぜん息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００３４】
本発明によれば、本発明の抗アレルギー剤の有効成分であるナリンギンは、抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制するので、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支ぜん息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００３５】
本発明によれば、ネオヘスペリジンおよびナリンギンを含むので抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制するので、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支ぜん息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００３６】
本発明によれば、ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つを組成とする柑橘類果実を有効成分として含有するので抗アレルギー作用を有し、３相性皮膚反応試験に惹起されるアレルギー性の炎症像を抑制するので、アトピー性皮膚炎、花粉症、気管支ぜん息などのアレルギー性疾患の改善、治療に有効である。
【００３７】
本発明によれば、抗アレルギー剤を食品に含むことによって摂取を容易にすることができる。
【００３８】
本発明によれば、ネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つが多量に含まれている抗アレルギー作用を有するエキスを抽出することができる。またエタノールは、長年の使用により安全性が確認されている。
【００３９】
本発明によれば、６０％以上のエタノール水溶液で柑橘類果実を抽出することによりネオヘスペリジンおよびナリンギンのうち少なくとも１つをさらに多量に含有するエキスを抽出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４１】
試験例１
［ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）誘発３相性皮膚反応に及ぼすネオヘスペリジン、ナリンギンおよびダイダイ果実の影響］
被検体の調製；２００３年、８月１日、和歌山県有田郡金屋町で栽培されているダイダイ果実を採取、細切後乾燥した。乾燥後、さらに粉砕し、１０倍量の５０％エタノールで２時間、２回、約８５℃で抽出した。抽出後、ろ紙ろ過し、ろ液を減圧下に濃縮し、凍結乾燥を施して得たダイダイ果実エキス（収率；４１．０％）を被検体に供した。ネオヘスペリジンおよびナリンギンは市販品（ＳＩＧＭＡ社製）を被検体に供した。
【００４２】
（試験方法）
１）ジニトロフェニル化卵白アルブミン（ＤＮＰ−ＯＶＡ）の調製
卵白アルブミン（ovalbumin、type  Ｖ）およびＫ２ＣＯ３を各２ｇずつ１００ｍｌの水に溶解し、この溶液に２ｇのジニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム塩（
dinitrobenzenesulfonic acid sodium salt）を加え、遮光下で３７℃にて、２４時間スターラーで攪拌し、得られた反応液を水で２日間透析後、その内液を凍結乾燥し、調製した。
【００４３】
２）ＤＮＦＢ誘発３相性皮膚反応試験
ＩＣＲ系雌性マウスにゲル状の水酸化アルミニウム（aluminumhydroxide gel）１ｍｇとＤＮＰ−ＯＶＡ  １０μｇを含む生理食塩液０．２ｍＬを腹腔内投与し、能動的に感作する。その１週間後、０．１％  ＤＮＦＢエタノール溶液を両耳の表裏に１０μｌずつ塗布し、誘発２４時間後に充分に腫脹しているマウス（浮腫率１０％以上）を選別する。その後、選別したマウスに再度感作し、１週間後に反応を惹起する。耳介の厚さは反応惹起前および惹起後１、２４時間および８日後にdial thickness gaugeを用いて測定し、耳介浮腫率として算定する。反応を惹起した時点から１時間後の耳介浮腫率をＩＰＲ（
Immediate Phase Response）浮腫率、２４時間後の耳介浮腫率をＬＰＲ(Late Phase 
Response)浮腫率、８日後の耳介浮腫率をｖＬＰＲ(very Late Phase Response)浮腫率とする。なお、被検体は反応惹起１時間前および惹起２日後から８日後まで連日経口投与する。被検体および陽性対照薬は、０．２％カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ・Ｎａ）溶液に溶解あるいは懸濁し、ネオヘスペリジン、ナリンギンあるいはダイダイ果実エキスは水に懸濁し、マウス体重１０ｇあたり０．２ｍＬの用量で経口投与した。結果を表１および２に示す。
【００４４】
抑制率は、次式により求めた。
抑制率（％）＝（検体無添加である対照の浮腫率−被検体の浮腫率）
／（検体無添加である対照の浮腫率）×１００
表１は、３相性皮膚反応に及ぼすダイダイ果実エキスの影響を示す。
【００４５】
【表１】
2005170804.tif 000003
【００４６】
表２は、３相性皮膚反応に及ぼすネオヘスペリジン及びナリンギンの影響を示す。
【００４７】
【表２】
2005170804.tif 000004
【００４８】
マウスに３相性皮膚反応を惹起させたところ、ＩＰＲにおいては１９．７±１．３％、ＬＰＲにおいては１８．１±１．２％、ｖＬＰＲにおいては１９．７±０．９％の耳浮腫が観察された。ダイダイ果実エキスは２００ｍｇ／ｋｇ用量の経口投与で、いずれの耳浮腫も有意に抑制した。
【００４９】
ナリンギンは２０ｍｇ／ｋｇの用量で、ＩＰＲおよびｖＬＰＲの耳浮腫を有意に抑制し、投与量を１００ｍｇ／ｋｇまで増加すると、ＩＰＲ、ＬＰＲ、ｖＬＰＲに惹起される耳浮腫を有意に抑制した。
【００５０】
ネオヘスペリジンは２０あるいは１００ｍｇ／ｋｇの用量で、ｖＬＰＲに惹起される耳浮腫を有意に抑制した。
【００５１】
試験例２  
［ダイダイ果実中のネオヘスペリジンあるいはナリンギンの含量］
（１）ネオヘスペリジン、ナリンギンの検量線の作成
ネオヘスペリジンあるいはナリンギンの標準品（EXTRASYNTHESE社製）をメタノールにて５００μｇ／ｍＬに調製後、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、２５．０、５０．０、１００．０、２５０．０、５００．０μｇ／ｍＬに調製後、ウルトラフリーMC（０．２２μｍ）（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ社製）を用いてろ過したものを検量線作成用の溶液とする。これについて、下記の条件により、高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）分析を行い、得られた標準品のピーク面積から各成分の検量線を作成する。
【００５２】
（２）ＨＰＬＣの分析条件および装置
装置  バイナリポンプ：Ｇ１３１２Ａ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
脱気装置：Ｇ１３７９Ａ  ＤＥＤＡＳＳＥＲ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
検出器：ＵＶ−Ｖｉｓ検出器Ｇ１３１４Ａ  ＶＷＤ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム恒温槽：Ｇ１３１６Ａ  ＣＯＬＣＯＭ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
オートサンプラ：Ｇ１３１３Ａ  ＡＬＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム  ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８（２５０×４．６ｍｍ  ｉ．ｄ．）（ＹＭＣ社製）
ガードカラム  Ｃ−ＫＧＣ−３２４ＡＳＣ−３（ＹＭＣ社製）
移動相  アセトニトリル（acetonitrile）／１０ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４（20：80（ｖ／ｖ））
流速  １．０ｍＬ／ｍｉｎ
温度  ３７℃
検出波長  ２８０ｎｍ
注入量  １０μＬ
データ処理ソフト  Ｘｃａｌｉｂｕｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ社製）
【００５３】
（３）ダイダイ果実中のネオヘスペリジン、ナリンギンの定量
２００３年、８月５日、和歌山県有田郡金屋町で栽培されているダイダイ果実を採取、細切後乾燥した。乾燥後、さらに粉砕したもの５００ｍｇに１００ｍＬメタノールを加え、３０分間、３回還流下抽出した（約８０℃の水浴下）。抽出液をろ紙ろ過後、ろ液をエバポレーターで濃縮し、メタノールで一定量にメスアップした後、ウルトラフリーＭＣ（０．２２μｍ）（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ）を用いてろ過した後、ＨＰＬＣ分析を行った。これについて、（１）で求めた検量線から果実中の各成分の含量を算出した。
【００５４】
ダイダイ果実の乾燥粉末をメタノールで抽出し、ネオヘスペリジンおよびナリンギンの含量を測定した結果、それぞれ１６．９、９．４％であった。
【００５５】
試験例３
［ダイダイ果実エキスおよび乾燥果実中のネオヘスペリジンおよびナリンギン含量の測定］
１．被検エキスの調製
ダイダイ抽出エキスの作成：実験材料には和歌山県産のダイダイ（産地；和歌山県有田郡金屋町歓喜寺地区、平成１５年８月に採取したもの）を研究室にてスライス後自然乾燥した物を用いた。
【００５６】
検体１：この実験材料を粉砕後、１０倍量の水で２時間、２回熱時（約１００℃）還流抽出した。抽出液をガーゼろ過後、エバポレーターでエタノールを留去した後、凍結乾燥し、得られたエキスを被検エキスとした。（収率；４０．０％）
【００５７】
検体２：検体１の水を２０％エタノールで熱時（約８５℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３７．１％）。
【００５８】
検体３：検体１の水を４０％エタノールで熱時（約８５℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３８．３％）。
【００５９】
検体４：検体１の水を６０％エタノールで熱時（約８０℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３７．１％）。
【００６０】
検体５：検体１の水をエタノールで熱時（約８０℃）抽出した以外は同様にして得られたエキス（収率；３５．９％）。
【００６１】
２．被検エキス中のナリンギン、ネオヘスペリジン量の測定
１）１．で調製した被検エキス中のネオヘスペリジンおよびナリンギン量を測定した。すなわち、被検エキス２００〜５００ｍｇを１００ｍｌメタノールで３０分、３回還流下抽出した（水浴８０℃）。抽出液を濾紙濾過後、濾液をエバポレーターで濃縮し、メタノールで２０ｍｌにメスアップした後、ウルトラフリーＭＣ（０．２２μｍ）
（MILLIPORE）を用いて濾過した後、ＨＰＬＣ分析を行った。
【００６２】
２）検量線の作成：ネオヘスペリジンの標準品（EXTRASYNTHESE製）（Lot.03052706）およびナリンギンの標準品（EXTRASYNTHESE製）（Lot.03020407）をメタノールにて５００μｇ／ｍｌに調製後、１０、２５、５０、７５、１００、２５０、５００μｇ／ｍｌに調製後、ウルトラフリーＭＣ（０．２２μｍ）（MILLIPORE）を用いて濾過したものを検量線作成用の溶液とした。これについて、下記の条件により、ＨＰＬＣ分析を行い、得られたピーク面積から検量線を作成した。
【００６３】
―ＨＰＬＣ分析条件―
装置  バイナリポンプ゜：Ｇ１３１２Ａ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
脱気装置：Ｇ１３７９Ａ  ＤＥＤＡＳＳＥＲ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
検出器：ＵＶ−Ｖｉｓ検出器Ｇ１３１４Ａ  ＶＷＤ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム恒温槽：Ｇ１３１６Ａ  ＣＯＬＣＯＭ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
オートサンプラ：Ｇ１３１３Ａ  ＡＬＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ社製）
カラム  ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８（150×4.6ｍｍ  ｉ．ｄ．）（Lot.041593842(w)）（ＹＭＣ製）
ガードカラム  Ｃ−ＫＧＣ−３２４ＡＳＣ−３（ＹＭＣ社製）
移動相  アセトニトリル（acetonitrile）/１０ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４（20：80（ｖ／ｖ））
流速  ０．５ｍＬ／ｍｉｎ
温度  ３７℃
検出波長  ２８０ｎｍ
注入量  １０μＬ
データ処理ソフト  Ｘｃａｌｉｂｕｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ社製）
ネオヘスペリジンの保持時間（R.T.）  ２８ｍｉｎ
ナリンギンの保持時間（R.T.）  ２０ｍｉｎ
表３は、ダイダイ果実からのエキス収率とネオヘスペリジン含量を示す。
【００６４】
【表３】
2005170804.tif 000005
【００６５】
ダイダイ果実を水で抽出したエキス（検体１）１ｇ中には９．２ｍｇのネオヘスペリジンが含まれ、エキス中の含量から求められる乾燥果実１ｇ中のネオヘスペリジン含量（％）は０．３７％である。抽出溶媒を水からエタノールに変えると、エタノール濃度が増加するにつれて抽出されてくるネオヘスペリジン含量は増加する。エタノール濃度が４０％の場合と比較するとエタノール濃度が６０％の場合にはネオヘスペリジン含量が約２．６倍と増加している。エタノール濃度を６０％以上とすることによってネオヘスペリジンが多量に含まれている抗アレルギー剤を製造することができる。本発明において、エタノール濃度が６０パーセント以上のエタノール水溶液とは、エタノール濃度が１００％である場合も含むものとする。エタノールは水に比べて高価なことからエタノール濃度を６０％近傍（５０％以上７０％以下）にして抽出することにより抗アレルギー作用が高く、かつ、安価な抗アレルギー剤を製造することができる。
表４は、ダイダイ果実からのエキス収率とナリンギン含量を示す。
【００６６】
【表４】
2005170804.tif 000006
【００６７】
ダイダイ果実を水で抽出したエキス（検体１）１ｇ中には１６．７ｍｇのナリンギンが含まれ、エキス中の含量から求められる乾燥果実１ｇ中のナリンギン含量（％）は０．６７％である。抽出溶媒を水からエタノールに変えると、エタノール濃度が増加するにつれて抽出されてくるナリンギン含量は増加する。エタノール濃度が４０％の場合と比較するとエタノール濃度６０％の場合にはナリンギン含量が約２．７倍と増加している。エタノール濃度を６０％以上とすることによってナリンギンが多量に含まれている抗アレルギー剤を製造することができる。エタノールは水に比べて高価なことからエタノール濃度を６０％近傍（５０％以上７０％以下）にして抽出することにより抗アレルギー作用が高く、かつ、安価な抗アレルギー剤を製造することができる。