(57)【要約】【課題】膜によるウイルス除去法により完全にウイルスフリーにすることは困難で、常に、ウイルスに汚染される危険性をはらんでいる。一方、薬害エイズに代表されるウイルス汚染事故が実際に発生した事から、近年は医薬品や血液製剤に対して徹底したウイルスフリー化が要求されると伴に、従来にも増してウイルスフリー化に対して簡便なプロセスが望まれている。【解決手段】多孔性粒子の外表面にウイルスを吸着しないリガンドを固定化し、内表面に目的物質を吸着するリガンドを固定化したことを特徴とする、多孔性二重構造充填剤。【選択図】    選択図なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
多孔性粒子の外表面にウイルスを吸着しないリガンドを固定化し、内表面に目的物質を吸着するリガンドを固定化したことを特徴とする、多孔性二重構造充填剤。
【請求項２】
多孔性粒子の細孔が、細孔内に実質的にウイルスが進入できず、かつ、目的物質は進入することができる程度の平均細孔径を有することを特徴とする、請求項１に記載の多孔性二重構造充填剤。
【請求項３】
外表面に固定化するリガンドが多価アルコールであることを特徴とする、請求項１乃至２に記載の多孔性二重構造充填剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、感染性ウイルス粒子による汚染の恐れのある蛋白から多孔性粒子等を使用して感染性ウイルスを除去する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
バイオ医薬品や血液製剤等に使用される蛋白等は、ヒト血液あるいは動物組織由来か組換え動物細胞の培養工程から得られる。その為、該医薬品や製剤がエイズウイルス、各種肝炎ウイルスなど人体に悪影響を与えるウイルスに汚染されている可能性は否定できない。従って、これら蛋白を使用した薬剤の製造には、ウイルスを充分に不活化及び／又は除去する工程を組みこむことは必須である。医薬品や製剤に夾雑する危惧のあるウイルスとしては、例えば、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、ピコナウイルス等が例示できる。
【０００３】
これらのウイルスを不活化する方法としては、例えば、採取目的となる蛋白などを糖等の安定剤で安定化させた後、高いアルカリｐＨでウイルスを不活化させる方法を提案している（例えば、特許文献1参照）。この方法は、確かに、ウイルスの不活化には効果があるが、目的物の保護、脱離、精製とかなり多くの工程を踏まないと高純度の目的物が得られないとの問題点を抱えている。又、目的物が、アルカリ薬品で変成される危険をはらんでいる。また脂質エンベロープウイルスの不活化法として、不活化するのに充分な量の溶媒および洗剤を組み合わせて用いることを提案している（例えば、特許文献２参照）。エンベロープを持つウイルスの不活化には、現在、一般的に用いられている方法で効果はあるが、やはり不活化したウイルスの除去、溶媒や洗剤の除去と数多くの工程を必要としているとの問題点を持っている。その他、カオトロピック試薬による長時間処理でウイルスを不活化する方法を提案している（例えば、特許文献３参照）。更に明細書中にはウイルス除去の確実性を増す為、界面活性剤を用いて処理することを提案しているが、やはり、工程増や薬品の徹底した除去など複雑な問題を抱えている。
【０００４】
一方、ウイルスの除去方法に関しては、例えば、除去対象のウイルスをリガンドと結合させて、ウイルスのサイズを大きくした後、限外濾過により蛋白質溶液から分離する方法を提案している（例えば、特許文献４参照）。この方法も効果はあるが、添加したリガンドの除去や見掛け上ウイルスが大きくなったとは言え、濾過に多大の時間を要するなど目的蛋白の歩留りなどの問題点を抱えている。又、現在一般的に行われている加熱によるウイルスの不活化では目的物が変成する恐れがある為、それに変わる方法として、多段フィルターを用いる方法を提案している（例えば、特許文献５参照）。この方法も効果はあるが、目的物の歩留りの問題やウイルスが漏れ出る危険性をはらんでいる。
【０００５】
またウイルス含有の恐れのある目的物含有水溶液に電極を挿入して、電圧をかけることで、ウイルスを変成させたり、電極に吸着させたりして除去する方法を提案しているが、本法は、かなり厳しい条件設定を行わないと、水溶液中の有用成分の変成をも引き起こす危険性をはらんでいる（例えば、特許文献６参照）。又、ｐＨ５〜７のウイルスを含む水溶液を、除去対象ウイルスの平均直径より大きな細孔径を有し、かつ、正の電荷を持ったデプスフィルターを通過させて、ウイルスを捕捉する方法を提案している（例えば、特許文献７参照）。該方法も、確実にウイルスを除去するとの観点からは課題があった。又、アフェレシス治療用吸着剤に関する提案ではあるが、Ｃ型肝炎ウイルスに高い吸着能を示す化合物（例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、リウマチ因子など）を多孔性基材に固定化した吸着剤の提案を行っている（例えば、特許文献８参照）。この方法は、特定のウイルスの除去を目的としている為、他のウイルスに対しては吸着能が無いか極端に低下する。
【０００６】
以上述べてきたように、ウイルスを不活化しても、しなくても、目的物を医薬品や血液製剤として使用する場合は、目的物とウイルスの分離は必須であり、提案の大半は濾過に頼る方法が主体となっている。ところが、濾過法は、目的物の歩留りや濾過時間、工程増による固定費の負担など種々の問題を抱えており、簡便、かつ、安価な方法で目的物を採取できる方法が望まれていた。
【０００７】
【特許文献１】特開平０９−１８７２７３号公報
【０００８】
【特許文献２】特開２００２−０３４５５６号公報
【特許文献３】特開平０７−１８７９３５号公報
【特許文献４】特開平０８−２４２８４９号公報
【特許文献５】特開平１０−３３７４４５号公報
【特許文献６】特開平０５−１６９０６４号公報
【特許文献７】特開平１０−０２８５８１号公報
【特許文献８】特開平１０−３２３３８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
加熱によるウイルスの不活化は目的物を変成させる恐れがあるので、それに変わる方法として、ウイルスの大きさと目的蛋白の大きさとの違いを利用した濾過による分離が一般的である。それは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ１型，２型）は８０〜１００ｎｍ、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は４０〜６０ｎｍ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は４０〜４５ｎｍ程度の大きさであるのに対して、薬用に使用されるＩｇＧ抗体で９ｎｍ、アルブミン蛋白で６ｎｍの大きさである。よって、理論上は適度の細孔径を有した多孔質膜を用いればウイルスを除去出来ることになる。しかし、現実には、膜によるウイルス除去法は完全にウイルスフリーにすることは困難で、常に、ウイルスに汚染される危険性をはらんでいる。一方、薬害エイズに代表されるウイルス汚染事故が実際に発生した事から、近年は医薬品や血液製剤に対して徹底したウイルスフリー化が要求されると共に、従来にも増してウイルスフリー化に対して簡便なプロセスが望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従来の技術はウイルスを分離するのに多孔質膜を使用している。膜による分離は確かに効果はあるが、常にウイルスの漏洩の危険をはらんでいる。本発明者らは、膜分離に変わる新しい方法について検討した結果、ウイルスの大きさと目的物質の大きさに差がある事と、ウイルスを吸着するのではなく、逆に目的物を吸着する方法を採用すればウイルスの漏れに対する懸念が解消されることに着目した。つまり、目的物質は細孔内に進入できるが、ウイルスは進入し難い細孔径を有する多孔性粒子を用い、細孔内に目的物質を吸着させる方法によりウイルスの除去を試みた。その結果、ウイルスが減少する事は確認できたが、期待した効果をあげる事が出来なかった。
【００１１】
色々原因を調べた結果、脂質エンベロープを有するウイルスが粒子の表面にイオン的或いは疎水的に吸着されていることをつきとめた。そこで、ウイルスを吸着しない条件を調べた結果、粒子の外表面を親水化し、内表面は目的物を吸着するリガンドを固定化した二重構造充填剤を用いるとウイルスは充填剤に吸着されず系外に流去し、目的物質は粒子の内表面に吸着され、その後、目的物質を流去させる条件で系外に取り出せば、ウイルスフリーの目的物が簡便に得られる事を見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
すなわち本発明は、多孔性粒子の外表面にウイルスを吸着しないリガンドを固定化し、内表面に目的物質を吸着するリガンドを固定化したことを特徴とする、多孔性二重構造充填剤である。以下、本発明について詳細に説明する。
【００１３】
以下に使用する用語の定義を記す。本発明で粒子或いは基材とは、例えば、懸濁重合等により生成した粒子を意味する。この粒子の外表面にウイルスを吸着しないリガンドを固定化した物を二重構造基材とし、その後、粒子の内表面に目的物を吸着するリガンドを固定化した物を二重構造充填剤とする。ただし、ウイルスを吸着しないリガンドを固定化した二重構造基材が次の反応を伴うことなく、そのまま使用される場合は、二重構造基材がそのまま二重構造充填剤となる。なお、本発明において粒子の外表面とはいわゆる粒子表面を示し、一方、粒子の内表面とは細孔の内部表面を示すものである。
【００１４】
本発明に用いられる多孔性粒子を構成する素材は、特に限定されるものではなく、その外表面は、ウイルスを吸着しないリガンドを有するものであり、例えばウイルスがイオン的或いは疎水的に吸着されるのを妨げることができるリガンドである。そして内表面は目的物質を吸着するリガンドが固定化されているものであり、これらによって充分目的を達することが出来る。
【００１５】
該粒子を構成する素材としては、まず第一は、粒子の内外表面にリガンドを固定化する為に、粒子化後必要に応じてリガンドを固定化するための反応の基点を設けることができるものであることが好ましい。例えば、ビニル化合物としてＮ−ビニルアルキルアミド、アルキルビニルエーテル（ここで、用いられるアルキル基としては、炭素数１から２０で、直鎖状でも分岐していても良い、また、環状脂肪族や芳香族化合物や不飽和２重結合基を含有していても良く、更に、アルキル基がＯＨ基、アミノ基、Ｃｌ，Ｂｒ、Ｉ、Ｆなどのハロゲン基等を含有していても良い）、芳香族系では、スチレン、αメチルスチレン、アルキルスチレン、アルキノスチレン、ビニルナフタレン、アルキル−ビニルナフタレン、アルキノ−ビニルナフタレン、ビニルアントラセン、アルキル−ビニルアントラセン、アルキノ−ビニルアントラセン、ビニルフェナンスレン、アルキル−ビニルフェナンスレン、又はアルキノ−ビニルフェナンスレン等が挙げられる。ここで用いられるアルキル基は炭素数１から２０で、直鎖状でも分岐していてもよく、また、環状脂肪族及び／又は不飽和２重結合基を含有していても良く、更に、ＯＨ基を含有していても良い。
【００１６】
第二は、リガンド固定化の為の反応点を新たに設ける必要の無い材料を用いる例である。（メタ）アクリル系では、グリシジル（メタ）アクリレート、アミノアルキル（メタ）アクリレート、アミノアルキル（メタ）アクリルアミド（ここで用いられるアルキル鎖長は炭素数１から２０の直鎖状及び／又は分岐状でもよく、該アルキル基中に飽和環状化合物及び／又は不飽和環状化合物及び／又は飽和複素環化合物及び／又は不飽和複素環化合物を含んでいてもよい）、芳香族系では、ハロアルキルスチレン、ハロアルキルビニルナフタレン、ハロアルキルビニルアントラセン、ハロアルキルビニルフェナンスレン、スチリル−ｐ−グリシジルエーテル、ビニルベンジルグリシジルエーテル、アリール化合物ではアリールグリシジルエーテル等が挙げられる。
【００１７】
ここで、用いられるアルキル基としては、炭素数１から１０で、直鎖状でも分岐していても良い、また、環状脂肪族や芳香族化合物や不飽和２重結合基を含有していても良く、更に、アルキル基がＯＨ基、アミノ基、などを含有していても良い。又、ここで用いられるハロゲン基として、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ等が挙げられ、該ハロゲン基は１級、２級、３級の何れの炭素に結合していても良い。ビニル系として、ビニルフォルムアミド、ビニルアセトアミド、塩化ビニル、酢酸ビニル、炭酸ビニレン等が挙げられる。又必要があれば、該アミド系ビニルモノマーを重合後、加水分解して、アミノ基に変換しても良い。酢酸ビニルの場合も重合後、加水分解してＯＨ基に変換しても良い。
【００１８】
該発明の粒子は架橋されていることが必須であるが、架橋方法としては、多官能モノマーを併用して、粒子化時に同時に架橋する方法でも、粒子化後、反応を利用して、架橋を行う方法の何れを用いても差し支えない。安価に製法するとの観点からは粒子化と同時に架橋されていることが望ましい。
【００１９】
ここで用いらる多官能モノマーとして、例えば、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨで表されるポリエチレングリコール類（ここで、繰り返しユニット数はあまり大きすぎる粒子が柔らかくなるので、ｎは１〜３０の範囲が良い、より好ましくは１〜２０の範囲、更に好ましくは１〜５の範囲が良い。）、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ）ａ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｂＨで表させる化合物（ここで、ａとｂの比率は、特に限定はしない。ａ及びｂの範囲はそれぞれ独立に０〜２０の範囲がよく、より好ましくは０〜１０の範囲、更に好ましくは０〜５の範囲である。ただし、ｂは１以上の整数）等からなる化合物のＯＨ基が（メタ）アクリル化合物とエステル結合した化合物が挙げられる。
【００２０】
上記以外の多官能モノマーとして、ＨＯ−ＣｎＨ２ｎ−ＯＨで表される化合物（ここで、ｎは３から１０の範囲、アルキレン基は直鎖状でも分岐していても良い）のＯＨ基と（メタ）アクリル化合物とのエステル結合した化合物等が挙げられる。その他の多官能性モノマーとして、ＨＲＮ−ＣｎＨ２ｎ−ＮＲＨで示される化合物（ここで、ｎは１から１１の範囲内、アルキレン基は直鎖状でも、分岐状でも良い。また、Ｒは水素基及び又は炭素数１から１０の範囲からなる直鎖状及び又は分岐状アルキル基を示す。）と（メタ）アクリル化合物とのアミド結合した化合物等を挙げることが出来る。
【００２１】
更に、その他の多官能性モノマーとして、多価アルコール類、例えば、グリセリン、ペンタエリスリトール、トリメチロールエタン、トリメチロールプロパン、ソルビトール等と（メタ）アクリル化合物とのエステル結合からなる化合物等、トリアリールイソシアヌレート化合物、ジビニルベンゼン、ジビニルナフタレン、ジビニルアントラセン等の化合物等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２２】
上記の単官能モノマー及び／又は多官能モノマーを用いて、粒子化する時に使用する溶媒について述べる。この時の溶媒は使用モノマーを溶解する能力を有していれば特に限定されないが、生成粒子は吸着剤として使用するので、粒子の表面積を大きくする目的で、一般に適度の細孔を持たせる。この時の細孔径や空孔率を決めるのに、該溶媒が用いられる。例えば、レトロウイルス（例えば、ＨＩＶなど）のような非常に大きなウイルスの除去を目的とする場合は、平均細孔径は比較的大きくても差し支えない。又、ＨＢＶのようなウイルスの場合は比較的小さい細孔径を有した充填剤が要求される。
【００２３】
細孔径は、用いる溶媒の生成粒子に対する親和力によって影響を受ける。大きい細孔径を有した粒子を作る場合、比較的親和力の小さい溶媒を用いる。逆に、細孔径の小さな粒子を作る場合は、親和力の大きな溶媒を用いると良い。また、空孔率は用いた単官能及び多官能モノマー量と溶媒の比率で調節することが出来る。空孔率を大きくする場合は、溶媒の比率を多くすれば良いが、あまり大きすぎると充填剤が壊れやすくなるので、空孔率（粒子の体積中に占める空間の割合）としては、最大８０％、より好ましくは、７５％以下が良い。逆に空孔率を下げすぎると目的物質の吸着量の低下を招くので、空孔率としては、４０％以上より好ましくは５０％が良い。
【００２４】
本発明に用いられる多孔性粒子の平均細孔径は、除去したいウイルスの大きさによって、異なるので、目的に応じて適宜決めればよい。ただ、ＨＩＶウイルスが平均９０ｎｍ、ＨＢＶで平均４３ｎｍであるのに対して、吸着目的物質として、例えば、ＩｇＧで９ｎｍ、アルブミンで６ｎｍである。多孔性粒子の平均細孔径は８０ｎｍ以下、より好ましくは５０ｎｍ以下が良い。
【００２５】
次に、粒子製造の代表例として、一般的な多孔性粒子製造法である懸濁法について以下に示す。まず、攪拌機付きの容器に水を所定量注入し、必要があれば界面活性剤や塩類を添加しても良い。この水溶液を所定の温度に昇温する。その後、別の容器に単官能モノマー、多官能モノマー、重合開始剤及び溶媒をそれぞれ精秤する。この溶液を水溶液中に攪拌しながら注入、引き続き、重合を遂行させて、多孔性粒子を製造する。生成多孔性粒子の粒径は攪拌機の回転数、攪拌羽根の形状、反応容器の形状などの影響を受けるので、用いる装置毎に、攪拌羽根の形状や回転数を調節する必要がある。該多孔性粒子はウイルス除去用充填剤に使用されるので、粒径が小さいと培養液を通液したときの圧力損失が大きくなり、使用し難い。また、逆に粒径が大きすぎると目的物質の吸着効率が低下するので、好ましくない。好ましい粒径範囲として、５０μｍ以上５００μｍ以下、より、好ましくは１００μｍから３００μｍの範囲の粒子が好適に使用される。
【００２６】
このようにして製造した多孔性粒子を用いて、本発明の反応の基点を設ける方法について記す。重合時に用いられた溶媒が次の反応に不適な場合を想定して記す。粒子化直後の粒子から溶媒を除去する。その方法は真空蒸発法でも、別の溶媒（例えば、反応溶媒等）で洗浄・置換する方法でも良い。特に、この方法に限定されるものではない。この時用いる反応溶媒としては該多孔性粒子を膨潤させる働きがあり、かつ反応時に溶媒が劣化や目的の反応以外の反応を引き起こすものでなければ得に限定は無い。例えば、エチレンジクロライド、プロピレンジクロライド、メチレンクロライド、四塩化炭素、トリクロルエタン、トリクロルエチレン等が挙げられる。
【００２７】
膨潤した粒子を含んだ溶媒にハロメチル化反応を行う場合は、ハロメチル化剤を添加し、その後、フリーデルクラフト触媒、例えば、塩化アルミ、塩化亜鉛、塩化チタン、塩化錫などから選ばれたルイス酸型触媒を滴下して、室温或いは加温して反応を行わせることで、反応の基点となるハロメチル基を芳香環に導入することが出来る。ハロメチル化以外の反応として、上述のハロメチル化剤の替わりにハロアルキルカルボニルハロイド化合物を用いて、同様の溶媒及び触媒で、フリーデルクラフト反応を行い、反応の基点となるハロアルキルカルボニル基を芳香環に導入することが出来る。ここで用いられるハロゲン基はＣｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆの何れのハロゲン基でもよい。又、ここで用いられるアルキル基は炭素数１から２０で、直鎖状でも分岐していても良い、また、環状脂肪族や芳香族化合物や不飽和２重結合基を含有していても良く、更に、アルキル基がＯＨ基を含有していても良い。更に、Ｃｌ，Ｂｒ、Ｉ、Ｆなどのハロゲン基等を含有していても良い。
【００２８】
このようにして、反応の基点を設けた多孔性粒子或いは既に反応の基点を有している多孔性粒子を用いて、該粒子の外表面にウイルスを吸着しないリガンドを固定化する二重構造基材の製造法について、リガンドとして多価アルコールの場合を例に説明する。懸濁重合により生成した該多孔性粒子は有機化合物から構成されており、かつ、比較的疎水性を示す。その為、有機溶媒を主成分とする溶媒に対して該多孔性粒子は膨潤し、水を主成分とする溶媒に対して収縮する。この性質を利用して、外表面部だけにウイルスを吸着しないリガンドを固定化することができる。
【００２９】
以下に具体的方法を例示するが、製造法はこれらに限定されるわけではない。まず、第一の方法は、外表面に固定化するリガンドを溶解しない溶媒を該多孔性粒子の内部に含浸させた後、固定化したいリガンドを良溶媒に溶解或いは固定化するリガンドを溶媒兼反応試薬として、更に、必要に応じて触媒も添加する。その後、加熱する必要があれば加熱して多孔性粒子の外表面だけにリガンドを固定化する方法である。
【００３０】
第二の方法は、該多孔性粒子が水を主成分とする溶媒中で、収縮する性質を利用する方法である。まず、該粒子が有機溶媒を含有しているなら、（真空）蒸発で溶媒を留去させる。もし含有溶媒が水不溶性なら水溶性有機溶媒で該多孔性粒子を洗浄（粒子内部を置換するとの意味）し、その後、水を主成分とする溶媒で該粒子を洗浄する。もし、含有溶媒が水溶性なら、直接、水を主成分とする溶媒で該粒子を洗浄する。上記の何れかの方法で、該多孔性粒子の内部に有機溶媒が存在しない状態、所謂、粒子が収縮した状態にする。その後、水を主成分とする溶媒中に固定化したいウイルスを吸着するリガンドを溶解し、その後、該収縮粒子を投入し、必要に応じて、触媒を添加する。引き続いて、加熱する必要があれば加熱して多孔性粒子の外表面だけにリガンドを固定化する方法である。本法において、外表面部に固定化するリガンドの固定化率（基材中の全反応点に対する実反応量の比率）は反応温度、反応時間、投入薬剤量により、適宜調節される。
【００３１】
第三の方法は、多孔性粒子の平均細孔径より大きな固体触媒とリガンドと多孔性粒子を添加して、反応を行なう方法である。ここで用いる外表面に固定化するウイルスを吸着しないリガンドとしては、エチレングリコール類、例えば、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＨで表されるポリエチレングリコール類（ここで、繰り返しユニット数はあまり大きすぎると目的物質が粒子内の細孔部に進入し難くなるのでｎは３〜５００の範囲が良い、より好ましくは３〜２００の範囲、さらに好ましくは３〜１００の範囲が良い）、ＨＯ（ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ）ａ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｂＨで表させる化合物（ここで、ａとｂの比率は、化合物が水溶性である限り、特に限定はしない。ａ及びｂの範囲はそれぞれ独立に、０〜５００の範囲が良い、より好ましくは０〜２００の範囲、更に好ましくは０〜１００の範囲が良い。ただし、ｂは１以上の整数）等が挙げられる。
【００３２】
上記以外の２価のアルコールとして、ＨＯ−（ＣｎＨ２ｎ−Ｏ）ｍＨで表される化合物（ここで、ｎは３以上６の範囲、アルキル基は直鎖状でも分岐していても良い。ｍは１〜６の範囲内の整数、ＯＨ基は１級でも２級でも３級でも良い。）、３価のアルコールとして、例えば、グリセリン、トリメチロールエタン、トリメチロールプロパン等が挙げられる。４価のアルコールとして、例えば、ペンタエリスリトール、ジトリメチロールエタン、ジトリメチロールプロパン、エリスリトール、スレイトール等、５価のアルコールとして、例えば、リビトール、アラビニトール、キシリトール等、６価のアルコールとして、例えば、アリトール、ダルシトール、グルシトール、ソルビトール、マンニトール、アルトリトール、イジトール等、その他に、単糖類や二糖類等、更に、二糖類含有アルコール、例えば、マルチトール、ラクチトール等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３３】
ここで用いられるリガンドを溶解する溶媒としては、水、アセトン、ジオキサン、ＴＨＦ等の溶媒或いは混合溶媒が例示される。又、必要に応じて用いる触媒の種類及び量は、固定化条件によって異なるので、一概に決めることは出来ない。一般的に使用される固定化用触媒は例えば、ＬｉＯＨ、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、４級アンモニウム化合物等のアルカリ化合物が挙げられる。ただし、触媒はこれらに限定されるものではない。第三の方法において、用いられる固体触媒の大きさは多孔性粒子の平均細孔径により適宜選択すれば良いが、粒径が大きくなると触媒能が低下するので好ましくない。一般的には粒径として、０．１μｍ〜１０μｍ程度、より好ましくは０．４μｍ〜５μｍ程度が最も好ましい。
【００３４】
以上の各工程により、外表面にウイルスを吸着しないリガンドが固定化された二重構造基材を製造することが出来る。
【００３５】
次に、上記の二重構造基材の内表面に目的物質を吸着するリガンドを固定化する方法について説明する。二重構造基材の内表面に固定化するリガンドは、吸着しようとする物質の種類によって適宜選択される。その固定化は定法に従って固定化すれば良い。例えば、ＩｇＧのようなヒト化抗体（蛋白の一種）を吸着しようとする場合は、アフィニティー性を示すプロテインＡ或いはカチオン交換能を有するリガンドを固定化すればよい。又、血漿アルブミン等を吸着しようとする場合は、アニオン交換能を有するリガンドを固定化すれば良い。固定化法の一例として、まず、二重構造基材を膨潤させる有機溶媒又は有機溶媒と水の混合物中に、該基材と狙いとするリガンドを投入し、必要なら触媒を添加して、そのまま反応を進行させるか、加温して反応を進行させるかすると良い。
【００３６】
該二重構造充填剤を用いて、ウイルスフリーの蛋白等を得る方法は、従来から行われている定法がそのまま適用出来る。
【発明の効果】
【００３７】
以上説明したように、本願発明によって、外表面にはウイルスを吸着しないリガンドが固定化され、内表面には目的物を吸着するリガンドが固定化された吸着剤を簡便な方法で作ることが出来る。又、該吸着剤は、現在一般に行われている充填剤を用いた蛋白の精製法がそのまま適用できる為、新たな設備投資が不要、かつ、簡便にウイルスの除去ができるので、バイオ医薬品や血液製剤の製造等に好適である。
【実施例】
【００３８】
以下実施例により本願発明を更に詳細に説明するが、本願発明はこれらに限定されるものではない。
【００３９】
製造例１
（１）Ｏ相の調製：
スチレンを１６．９ｇｒ、高純度のジビニルベンゼン５．１ｇｒ、開始剤であるベンジルパーオキサイド（以下ＢＰＯ）１．０５ｇｒをトルエン１２．７ｇｒとイソアミルアルコール１７．０ｇｒの混合溶媒に添加して、良く攪拌した。
【００４０】
（２）Ｗ相の調製：
鹸化度８８％、重合度約２０００のポリビニルアルコール４ｇｒとＮａ２ＳＯ４  ２．４ｇｒを２１０ｇｒの水に溶解した溶液を７０℃に加温した。
【００４１】
（３）懸濁重合：
Ｗ相を攪拌しつつ、Ｏ相を短時間に投入後、７０℃の温度を保ちつつ約１０時間重合を行った。
【００４２】
（４）多孔性粒子の洗浄：
生成粒子を予め濾紙を引いたヌッチェ上に移し、Ｗ相を濾別した。その後、粒子容量の１０倍のジオキサンで良く洗浄を行った。
【００４３】
（５）クロルメチル化反応：
上述の乾燥させた多孔性粒子９０ｇｒに二塩化エタン３５０ｇｒとクロロメチルメチルエーテル２４０ｇｒを添加して、粒子を良く膨潤させた。引き続いて、無水塩化アルミ１３３ｇｒを約２時間かけて、反応液の温度が３０℃を超えないように注意しながら滴下した。その後、１時間反応を進行させ、４０℃に反応液を昇温して、更に７時間反応を行わせた。
【００４４】
（６）多孔性粒子の洗浄：
クロルメチル化粒子を予め濾紙を引いたヌッチェ上に移し、溶媒及び反応試薬を濾別した。その後、粒子容量の１０倍のジオキサンで良く洗浄を行った。引き続き、分級操作を行い、１００μｍから３００μｍの粒径範囲の多孔性粒子を得た。その後、水で良く洗浄を行い、ジオキサンを洗い出し、多孔性粒子とした。
【００４５】
（７）クロルメチル化率：
良く乾燥させた多孔性粒子を用いて、元素分析からクロルの含有率を測定し、クロルメチル化反応は全て、スチレン上の芳香環に対して行われたと仮定して、導入率を計算すると、８４．１％であった。
【００４６】
（８）平均細孔径：
良く乾燥させた多孔性粒子を用いて、水銀ポロシメーターで細孔径を測定した。その結果、累積細孔容積が５０％の点を平均細孔径とした。その時の値は４５ｎｍであった。
【００４７】
（９）粒子の外表面にウイルスを吸着しないリガンドの固定化：
良く乾燥させた多孔性粒子３０．０ｇｒ、純水１３８．０ｇｒ及びポリエチレングリコール１０００（和光純薬（株）、分子量約１０００）４２．０ｇｒを攪拌羽根付５００ｍｌセパラブルフラスコに計り取り、内温が８０℃になるように攪拌しながら加熱した。約１時間後、内温が８０℃に保持されているのを確認して４８％ＮａＯＨ水溶液を１４．３ｇｒ添加して８０℃で１５時間攪拌した。１５時間後、加熱攪拌を止めてゲルをグラスフィルター上に移し、ろ液のｐＨが中性になるまで６０℃の純水で繰り返し洗浄した。引き続いて、グラスフィルター上でジオキサンを用いて３回洗浄した。その後、ケット式水分計で１２０℃、１５ｍｉｎ．加熱してジオキサンの含液率を求めると６２．１％であった。この多孔性吸着剤の残存Ｃｌ量を元素分析法で測定し、元のＣｌ量との差を元のＣｌ量で除した値を固定化率とした。固定化率は６．９％であった。
【００４８】
（１０）二重構造基材の内表面へのリガンドの固定化：
引き続き、トリメチルアミンによるアミノ化反応を実施した。まず、ジオキサン含有二重構造基材５４．２ｇｒと３０％トリメチルアミン水溶液７０ｇｒを攪拌羽根付３００ｍｌオートクレーブに計り取り、室温で３０分間攪拌した後、８０℃に昇温して７時間処理した。その後、５０℃の温水で充分該吸着剤を洗浄した。このようにして得られた、吸着剤をＮａＯＨ水溶液と接触させて、ＯＨ型に変換後、０．５ＮのＨＣｌで滴定して、イオン交換容量を求めると、０．４５ｍｅｑ／ｍｌ−ｇｅｌであった。
【００４９】
製造例２
（１）Ｏ相の調製：
ビニルベンジルグリシジルエーテルを１４．９ｇｒ、高純度のジビニルベンゼン５．３ｇｒ、開始剤であるアゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）０．３５ｇｒをオクタン１３ｍｌと４−メチル−２−ペンタノール１７ｍｌの混合溶媒に添加して、良く攪拌した。
【００５０】
（２）Ｗ相の調製：
鹸化度８８％、重合度約２０００のポリビニルアルコール４ｇｒとＮａ２ＳＯ４  ３ｇｒを２００ｇｒの水に溶解した溶液を７０℃に加温した。
【００５１】
（３）懸濁重合：
Ｗ相を攪拌しつつ、Ｏ相を短時間に投入後、７０℃の温度を保ちつつ約１０時間重合を行った。
【００５２】
（４）多孔性粒子の洗浄：
生成粒子を予め濾紙を引いたヌッチェ上に移し、Ｗ相を濾別した。その後、粒子容量の１０倍のジオキサンで良く洗浄を行った。引き続き、分級操作を行い、１００μｍから３００μｍの粒径範囲の多孔性粒子を得た。
【００５３】
（５）多孔性粒子中のエポキシ量の測定法：
ジオキサン含有率７０．５％の多孔性粒子約２ｇｒを容量２００ｍｌの共栓付三角フラスコに投入した後、秤量した。次に正確に２５ｍｌの約０．２Ｍ−塩酸／ジオキサン溶液を加え、攪拌子を入れて室温で３時間穏やかに攪拌した。次いで、５０ｍｌのエチルアルコールと１ｍｌのフェーノルフタレイン溶液を加え、０．１Ｍ−ＮａＯＨ溶液で残存塩酸量を滴定により求めた。同時に約０．２Ｍ−塩酸／ジオキサン溶液中の塩酸濃度を０．１Ｍ−ＮａＯＨで求めた。また、約２ｇｒのジオキサン含有ゲルを容量２００ｍｌの共栓付三角フラスコに投入、秤量し、７５ｍｌのエチルアルコールを加え、室温で約３０分間攪拌し、フェノールフタレイン溶液を指示薬として０．１Ｍ−ＮａＯＨ溶液で滴定して、測定ゲル中の酸価を求めた。残存塩酸量、酸価及びゲルの含液率からエポキシ量を求めた。該多孔性粒子のエポキシ量は乾燥ゲル１ｇ当り５．３３ｍｍｏｌであった。
【００５４】
（６）排除限界分子量及び空孔率の測定：
ＴＨＦ含有多孔性粒子のゲルスラリー液を用いて内径２２ｍｍ、長さ１５０ｍｍのガラス製カラムに最密充填になるように充填した。次に、東ソー製ＲＩ−８０００検出器を装備した東ソー製ＨＬＣ−８０３Ｄに該カラムを装着した。引き続き、標準ポリスチレンを用い、２ｍｌ／ｍｉｎ．の流速で種々の分子量の標準物質を注入し、その溶出容量から排除限界分子量を求めた。また、分子量１０００万の標準ポリスチとフタル酸ジシクロヘキシルの溶出容量及びカラム容積から空孔率を求めた。該粒子の排除限界分子量は、３０万、空孔率は６０％であった。
【００５５】
（７）平均細孔径：
良く乾燥させた多孔性粒子を用いて、製造例１と同様の装置を用い測定すると、平均細孔径は４９ｎｍであった。
【００５６】
（８）粒子の外表面にウイルスを吸着しないリガンドの固定化：
上述のジオキサン含有率６２．１％の多孔性粒子９２．３ｇｒ、純水７２．６ｇｒ及びソルビトール３７．８ｇｒを攪拌羽根付５００ｍｌセパラブルフラスコに計り取り、内温が７０℃になるように攪拌しながら加熱した。約１時間後、内温が７０℃に保持されているのを確認して４８％ＮａＯＨ水溶液を１４．３ｇｒ添加して７０℃で１５時間攪拌した。１５時間後、加熱攪拌を止めてゲルをグラスフィルター上に移し、ろ液のｐＨが中性になるまで６０℃の純水で繰り返し洗浄した。引き続いて、グラスフィルター上でジオキサンを用いて３回洗浄した。その後、ケット式水分計で上述と同一の条件でジオキサンの含液率を求めると７３．１％であった。この多孔性吸着剤の残存エポキシ量を上記の測定法で測定した結果、乾燥ゲル１ｇｒ当り４．８２ｍｍｏｌで、固定化率は９．６％であった。
【００５７】
（９）二重構造基材の内表面のアミノ化：
引き続き、トリメチルアミンによるアミノ化反応を実施した。まず、ジオキサン含有二重構造基材５９．５ｇｒと純水１５５．８ｇｒを攪拌羽根付５００ｍｌセパラブルフラスコに計り取り、室温で３０分間攪拌した。次にトリメチルアミンの塩酸塩１１．１ｇｒを添加し、３０分間攪拌した。次いで水酸化ナトリウム４．５ｇｒを添加し、引き続き３０分間攪拌した。３０分後に内温が４０℃になるように加熱して、４０℃になって２時間攪拌した。２時間後、加熱を停止し、内温を３０℃以下にするために冷却を行った。内温が２５℃以下になった時点で６Ｎ−塩酸水溶液１９．０ｇｒを内温が３０℃以上にならないように添加した。塩酸滴下後の内温は２７．４℃、ｐＨは８．３であった。攪拌を止めてゲルをグラスフィルター上に移し、６０℃の純水６００ｍｌで４回洗浄した。このようにして得られた吸着剤をＮａＯＨ水溶液と接触させてＯＨ型に変換後、０．５ＮのＨＣｌで滴定してイオン交換容量を求めると、０．４３ｍｅｑ／ｍｌ−ｇｅｌであった。
【００５８】
製造例３
（１）Ｏ相の調製：
ビニルベンジルグリシジルエーテルを１７．０ｇｒ、高純度のジビニルベンゼン３．９ｇｒ、開始剤であるベンジルパーオキサイド（ＢＰＯ）０．８ｇｒをオクタン１８．０ｍｌと４−メチル−２−ペンタノール１２ｍｌの混合溶媒に添加して、良く攪拌した。
【００５９】
（２）Ｗ相の調製：
鹸化度８８％、重合度約２０００のポリビニルアルコール４ｇｒとＮａ２ＳＯ４  ３ｇｒを２００ｇｒの水に溶解した溶液を７０℃に加温した。
【００６０】
（３）懸濁重合：
Ｗ相を攪拌しつつ、Ｏ相を短時間に投入後、７０℃の温度を保ちつつ約１０時間重合を行った。
【００６１】
（４）多孔性粒子の洗浄：
生成粒子を予め濾紙を引いたヌッチェ上に移し、Ｗ相を濾別した。その後、粒子容量の１０倍のジオキサンで良く洗浄を行った。引き続き、分級操作を行い、１００μｍから３００μｍの粒径範囲の多孔性粒子を得た。
【００６２】
（５）多孔性粒子のエポキシ量
製造例２と同様の方法で求めると、エポキシ量は乾燥ゲル１ｇｒ当り５．５１ｍｍｏｌであった。
【００６３】
（６）平均細孔径
製造例１と同様の装置で測定すると、２７ｎｍであった。
【００６４】
（７）ウイルスを吸着しないリガンドの粒子外表面への固定化：
よく乾燥させた多孔性粒子３０ｇｒを２００ｇｒのキシレン液中に浸漬し、４５℃に加温しながら２４時間放置した。キシレンの含浸率は５６．９％であった。ガラスフィルターでキシレン溶液を濾別した膨潤粒子と水１０９．８ｇｒとポリエチレングリコール６００  ３７．８ｇｒをセパラブルフラスコに計り取り、攪拌機で混合しながら７０℃に加温した。内温が７０℃になったら、４８％ＮａＯＨ水溶液１４．３ｇｒを添加して、１５時間反応を行った。その後、グラスフィルターに移し、温水でよく洗浄し、引き続き、ジオキサンで洗浄して、膨潤させた溶媒を除去した。その後、ケット式水分計で１２０℃、１５ｍｉｎ．加熱して、ジオキサンの含液率を求めると５７．１％であった。該二重構造基材の残存エポキシ量を製造例２の測定法で求め、固定化率を計算すると、４．９％であった。
【００６５】
（８）二重構造基材の内表面のアミノ化：
引き続き、トリメチルアミンによるアミノ化反応を実施した。まず、上述のジオキサン含有二重構造基材３７．３ｇｒと純水９７．７ｇｒを攪拌羽根付５００ｍｌセパラブルフラスコに計り取り、室温で３０分間攪拌した。次にトリメチルアミンの塩酸塩１１．１ｇｒを添加し、３０分間攪拌した。次いで水酸化ナトリウム４．５ｇｒを添加し、引き続き３０分間攪拌した。３０分後に内温が４０℃になるように加熱して、４０℃になって２時間攪拌した。２時間後、加熱を停止し、内温を３０℃以下にするために冷却を行った。内温が２５℃以下になった時点で６Ｎ−塩酸水溶液１９．０ｇｒを内温が３０℃以上にならないように添加した。塩酸滴下後の内温は２７．４℃、ｐＨは８．３であった。攪拌を止めてゲルをグラスフィルター上に移し、６０℃の純水６００ｍｌで４回洗浄した。このようにして得られた、吸着剤をＮａＯＨ水溶液と接触させて、ＯＨ型に変換後、０．５ＮのＨＣｌで滴定して、イオン交換容量を求めると、０．５４ｍｅｑ／ｍｌ−ｇｅｌであった。
【００６６】
製造例４
（１）Ｏ相の調製：
グリシジルメタクリレートを６４．２ｇｒ、エチレングリコールジメタクリレート１３．０ｇｒ、開始剤であるＡＩＢＮ１．３５ｇｒを溶媒である酢酸エチル１２８ｇｒと酢酸ｎ−ブチル４３ｇｒの混合溶媒に添加して、良く攪拌した。
【００６７】
（２）Ｗ相の調製：
鹸化度８８％、重合度約２０００のポリビニルアルコール１５．２ｇｒとＮａ２ＳＯ４  ５．４ｇｒを３００ｇｒの水に溶解した溶液を６０℃に加温した。
懸濁重合：Ｗ相を攪拌しつつ、Ｏ相を短時間で投入後、６０℃の温度を保ちつつ約１５時間重合を行った。
【００６８】
（３）多孔性粒子の洗浄：
生成粒子を予め濾紙を引いたヌッチェ上に移し、Ｗ相を濾別した。その後、粒子容量の１０倍のジオキサンで良く洗浄を行った。引き続き、分級操作を行い、１００μｍから３００μｍの粒径範囲の多孔性粒子を得た。
【００６９】
（４）含液率及び含水率の測定：
該粒子のジオキサンの含液率を求めるため、ケット式水分計で１２０℃、１５分間加熱して粒子の重量減より求めた。その結果、含液率は７０．２％であった。その後、水で良く洗浄を行い、ジオキサンを洗い出し、水含有多孔性粒子を得た。該粒子の含水率をケット式水分計で１２０℃、１５分間加熱して粒子の重量減より求めた。その結果、含水率は６０．９％であった。
【００７０】
（５）多孔性粒子のエポキシ量の測定：
製造例２と同様の方法で、エポキシ量を求めた結果、該多孔性粒子のエポキシ量は乾燥ゲル１ｇ当り５．２１ｍｍｏｌであった。
【００７１】
（６）排除限界分子量及び空孔率の測定：
水含有多孔性粒子のゲルスラリー水溶液を用いて内径２２ｍｍ、長さ１５０ｍｍのガラス製カラムに最密充填になるように充填した。次に、東ソー製ＲＩ−８０００検出器を装備した東ソー製ＨＬＣ−８０３Ｄに該カラムを装着した。引き続き、標準物質に分子量４０００万のデキストラン及びプルランを用い、２ｍｌ／ｍｉｎ．の流速で種々の分子量の標準物質を注入し、その溶出容量から排除限界分子量を求めた。また、デキストランとエチレングリコールの溶出容量及びカラム容積から空孔率を求めた。該粒子の排除限界分子量は３１万、空孔率は６０％であった。
【００７２】
（７）平均細孔径
製造例１と同様の方法で測定すると、３７ｎｍであった。
【００７３】
（８）ウイルスを吸着しないリガンドの粒子外表面への固定化：
上述の含水率６０．９％の多孔性粒子７６．７ｇｒ、純水９５．５ｇｒ及びジエチレングリコール３７．８ｇｒを攪拌羽根付５００ｍｌセパラブルフラスコに計り取り、内温が７０℃になるように攪拌しながら加熱した。約１時間後、内温が７０℃に保持されているのを確認して４８％ＮａＯＨ水溶液を１４．３ｇｒ添加して７０℃で１５時間攪拌した。１５時間後、加熱攪拌を止めてゲルをグラスフィルター上に移し、ろ液のｐＨが中性になるまで６０℃の純水で繰り返し洗浄した。引き続いて、グラスフィルター上でジオキサンを用いて３回洗浄した。その後、ケット式水分計で上述と同一の条件でジオキサンの含液率を求めると７３．１％であった。該二重構造基材の残存エポキシ量を上記の測定法で測定した結果、乾燥ゲル１ｇｒ当り４．９６ｍｍｏｌで、部分親水化率は６．９％であった。
【００７４】
（９）細孔内表面のアミノ化：
引き続き、トリメチルアミンによるアミノ化反応を実施した。まず、ジオキサン含有二重構造基材５９．５ｇｒと純水１５５．８ｇｒを攪拌羽根付５００ｍｌセパラブルフラスコに計り取り、室温で３０分間攪拌した。次にトリメチルアミンの塩酸塩１１．１ｇｒを添加し、３０分間攪拌した。次いで水酸化ナトリウム４．５ｇｒを添加し、引き続き３０分間攪拌した。３０分後に内温が４０℃になるように加熱して、４０℃になって２時間攪拌した。２時間後、加熱を停止し、内温を３０℃以下にするために冷却を行った。内温が２５℃以下になった時点で６Ｎ−塩酸水溶液１９．０ｇｒを内温が３０℃以上にならないように添加した。塩酸滴下後の内温は２７．４℃、ｐＨは８．３であった。攪拌を止めてゲルをグラスフィルター上に移し、６０℃の純水６００ｍｌで４回洗浄した。このようにして得られた、吸着剤をＮａＯＨ水溶液と接触させて、ＯＨ型に変換後、０．５ＮのＨＣｌで滴定して、イオン交換容量を求めると、０．３７ｍｅｑ／ｍｌ−ｇｅｌであった。
【００７５】
製造例５
製造例４の多孔性粒子を用いて、以下の反応を行なった。
【００７６】
（１）ウイルスを吸着しないリガンドの粒子外表面への固定化：
ジエチレングリコールの替わりにグリセリンを用い、純水８０．０ｇｒとジオキサン１５．５ｇｒの混合溶媒、反応時間を２２時間に変えた以外は、製造例４（８）と全く同様の条件で反応を実施した。その後、純水、引き続きジオキサンで基材を良く洗浄した。二重構造基材のジオキサンの含液率は７０．１％、リガンドの固定化率は、１１．９％であった。
【００７７】
（２）細孔内表面のアミノ化：
上記のジオキサン含有二重構造基材を６２．０ｇｒに替えた以外は、製造例４（９）と全く同様の条件で反応を行なった。イオン交換量は０．３５ｍｅｑ／ｍｌ−ｇｅｌであった。
【００７８】
製造例６
（１）ウイルスを吸着しないリガンドの粒子外表面への固定化：
製造例４の（４）で得られた含水率６０．９％の多孔性基材５１．２ｇｒとジエチレングリコール２９．５ｇｒを純水２６０ｇｒ中に投入し、良く攪拌した。その後、７０℃に昇温した。そして、ＩＲＡ４００（オルガノ（株）製、陰イオン交換樹脂）を磨り潰し、デカンテーションで１μｍの中心粒径を有するＯＨ型陰イオン交換樹脂を作成し、触媒として０．８５ｇｒ投入した。７０℃で２５時間反応を行った。得られた基材を純水、引き続きジオキサンで良く洗浄した。生成二重構造基材のジオキサンの含液率は６８．４％、リガンドの固定化率は４．１％であった。
【００７９】
（２）二重構造基材の内表面のアミノ化：
上記のジオキサン含有二重構造基材を４９．０ｇｒに替えた以外は、製造例４（９）と全く同様の条件で反応を行なった。イオン交換量は０．３９ｍｅｑ／ｍｌ−ｇｅｌであった。
【００８０】
製造例７
（１）Ｏ相の調製：
ビニルベンジルグリシジルエーテルを１７．０ｇｒ、高純度のジビニルベンゼン３．９ｇｒ、開始剤であるベンジルパーオキサイド（ＢＰＯ）０．８ｇｒをオクタン１８．０ｍｌと４−メチル−２−ペンタノール１２ｍｌの混合溶媒に添加して、良く攪拌した。
【００８１】
（２）Ｗ相の調製：
鹸化度８８％、重合度約２０００のポリビニルアルコール４ｇｒとＮａ２ＳＯ４  ３ｇｒを２００ｇｒの水に溶解した溶液を７０℃に加温した。
【００８２】
（３）懸濁重合：
Ｗ相を攪拌しつつ、Ｏ相を短時間に投入後、７０℃の温度を保ちつつ約１０時間重合を行った。
【００８３】
（４）多孔性粒子の洗浄：
生成粒子を予め濾紙を引いたヌッチェ上に移し、Ｗ相を濾別した。その後、粒子容量の１０倍のジオキサンで良く洗浄を行った。引き続き、分級操作を行い、１００μｍから３００μｍの粒径範囲の多孔性粒子を得た。
【００８４】
（５）多孔性粒子のエポキシ量
製造例２と同様の方法で求めると、エポキシ量は乾燥ゲル１ｇｒ当り５．５０ｍｍｏｌであった。
【００８５】
（６）平均細孔径
製造例１と同様の装置で測定すると、２７ｎｍであった。
【００８６】
実施例１
製造例１の二重構造充填剤を７．５ｍｍＩ．Ｄ．×７．５ｃｍカラムに充填した。カラムを２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）で平衡化した。ＨＢＶ粒子は文献（Ｊ．  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ、８５２、２５−３０）に記載の方法で作製した。ヒト血清アルブミンを２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）で１０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。このアルブミン溶液１０部に、ＨＢＶ粒子溶液１部を加えサンプル溶液とした。上記カラムに１分間１ｍｌの流速でサンプル溶液１ｍｌを注入した。サンプル注入から１０分間、カラムからの溶出液を分取し、溶出液１とした。１０分後に２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌに１．０ＭのＮａＣｌを含む緩衝液（ｐＨ８．０）に切り替え、１０〜２０分間の溶出液も同様に分取し、溶出液２とした。ウイルスの検出は市販のＨＢＶ表面抗原測定ＥＬＩＳＡキットにて測定した。溶出液１にはウイルスが検出されたが、ヒト血清アルブミンは検出されなかった。溶出液２中にはウイルスは検出されなかったが、替わりに、ヒト血清アルブミンが検出された。ヒト血清アルブミンの回収率を計算すると、９７％であった。
【００８７】
実施例２〜６
製造例２〜６の二重構造充填剤を用いて、実施例１と同様条件で、同様の操作を行った。結果を表１，２に示す。
【００８８】
【表１】
2005120044.tif 000002
【００８９】
【表２】
2005120044.tif 000003
比較例１
製造例７の充填剤を用いて、実施例１の要領に従って、テストを実施した。その結果を表２に示す。
【００９０】
比較例２
Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  ＳｕｐｅｒＱ−６５０ＥＣ（東ソー製、全面アミノ化充填剤、イオン交換容量は０．３０ｍｅｑ／ｍｌ）を用いて、実施例１の方法に従ってテストを実施した。その結果を表２に示す。