(57)【要約】【課題】優れたコラーゲンの産生増強作用を発揮して肌質を改善する、皮膚改善組成物を提供すること。【解決手段】プロアントシアニジンと、コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸とを含有する皮膚改善組成物を提供すること。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロアントシアニジンと、コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸とを含有する、皮膚改善組成物。
【請求項２】
さらに、アスコルビン酸またはその誘導体を含有する、請求項１に記載の皮膚改善組成物。
【請求項３】
前記プロアントシアニジンが、松樹皮由来である、請求項１または２に記載の皮膚改善組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚改善組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
コラーゲンは皮膚あるいは血管の主成分であり、ヒトの体内の２５〜３０％を占める弾力性のある繊維状のタンパク質である。コラーゲンの産生が正常であれば、張りがあり、かつ滑らかな肌を保つことができる。さらに血管においては、弾力のある血管が形成され、動脈硬化などが起こりにくい。
【０００３】
しかしながら、コラーゲンの産生能力（合成能力）は、老化、偏食による栄養摂取の偏りなどによって低下し、このコラーゲン産生量の減少が、皮膚のシワやたるみを引き起こす。
【０００４】
このような背景の下、コラーゲンの産生増強作用を有する食品および化粧品が提案され、肌質を改善する試みがなされている（例えば、特許文献１〜５）。しかし、現代人は、栄養バランスの偏った食事を摂取していることが多いため、これらの食品および化粧品を経口投与または経皮投与（塗布）により摂取しても、その効果は十分ではない。
【０００５】
【特許文献１】
特表昭６０−５００９５５号公報
【特許文献２】
特開平７−２６９９号公報
【特許文献３】
特開平７−２８５８４６号公報
【特許文献４】
特開平１１−３１５００７号公報
【特許文献５】
特開２０００−１９１４９８号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、優れた肌質改善効果を有する皮膚改善組成物を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、肌の状態の改善、特に肌のコラーゲン量を改善する組成物について、鋭意検討を行った結果、驚くべきことに、松樹皮抽出物と、コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸との組み合わせが、経口投与および経皮投与のいずれにおいても、優れたコラーゲンの産生増強作用を発揮し、その結果、肌質を改善することを見出して本発明を完成するに至った。
【０００８】
本発明の皮膚改善組成物は、プロアントシアニジンと、コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸とを含有する。
【０００９】
好ましい実施態様においては、さらに、アスコルビン酸またはその誘導体を含有する。
【００１０】
好ましい実施態様においては、上記プロアントシアニジンは、松樹皮由来である。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の皮膚改善組成物について説明する。なお、以下に説明する構成は、本発明を限定するものでなく、本発明の趣旨の範囲内で種々改変することができる。
【００１２】
本発明の皮膚改善組成物は、プロアントシアニジン（以下、Ａ成分という場合がある）と、コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸（以下、アミノ酸成分、Ｂ成分などという場合がある）とを含有し、好ましくは、さらにアスコルビン酸またはその誘導体（以下、Ｃ成分という場合がある）を含有し得る。この皮膚改善組成物は、必要に応じて、その他の成分を含有し得る。以下、各成分について説明する。
【００１３】
（１）プロアントシアニジン（Ａ成分）
本明細書において、プロアントシアニジンとは、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体からなる化合物群をいう。
【００１４】
このプロアントシアニジンとしては、重合度の低い縮重合体、特に重合度が２〜４の縮重合体（２〜４量体）が好ましく用いられる。この重合度が２〜４の縮重合体を、本明細書ではオリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ：以下、ＯＰＣという）という。プロアントシアニジンは、ポリフェノール類の一種で、植物が作り出す強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮もしくは種の部分に集中的に含まれている。プロアントシアニジン、特にＯＰＣは、具体的には、松、樫、山桃などの植物の樹皮；ブドウ、ブルーベリー、イチゴ、アボガド、ニセアカシア、コケモモの果実もしくは種子；大麦；小麦；大豆；黒大豆；カカオ；小豆；トチの実の殻；ピーナッツの薄皮；イチョウ葉などに含まれている。また、西アフリカのコーラナッツ、ペルーのラタニアの根、日本の緑茶にも、ＯＰＣが含まれることが知られている。ＯＰＣは、ヒトの体内では、生成することのできない物質である。
【００１５】
特に、ＯＰＣ含有量が高いプロアントシアニジンまたはＯＰＣ含有量が高いプロアントシアニジンを含む抽出物を用いると、重合度の高いプロアントシアニジン（ＯＰＣ含有量が少ないもの）を用いた場合と対比して、優れた抗酸化作用のみならず、高い抗ストレス効果が得られる。ストレスが溜まると、肌荒れなどが生じることが知られており、ストレスを抑制することは、肌荒れなどの防止に有益である。ＯＰＣは、直接的な肌質改善効果のみならず、このように間接的な肌質改善効果にも寄与し得る。
【００１６】
本発明の皮膚改善組成物に用いられるプロアントシアニジンとしては、上記の樹皮、果実もしくは種子の粉砕物、またはこれらの抽出物のような食品原料を使用することができる。特に、松樹皮由来の抽出物を用いることが好ましい。上記プロアントシアニジンを含む植物のうち、松樹皮がＯＰＣを豊富に含むため、プロアントシアニジンの原料として好ましく用いられる。
【００１７】
以下、ＯＰＣを豊富に含む松樹皮を原料植物として用いた例に挙げて、プロアントシアニジンを主成分とする抽出物の調製方法を説明する。
【００１８】
松樹皮抽出物としては、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）、カラマツ、クロマツ、アカマツ、ヒメコマツ、ゴヨウマツ、チョウセンマツ、ハイマツ、リュウキュウマツ、ウツクシマツ、ダイオウマツ、シロマツ、カナダのケベック地方のアネダなどのマツ目に属する植物の樹皮の抽出物が好ましく用いられる。中でも、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）の樹皮抽出物が好ましい。
【００１９】
フランス海岸松は、南仏の大西洋沿岸の一部に生育している海洋性松をいう。このフランス海岸松の樹皮は、プロアントシアニジン（ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）、有機酸、ならびにその他の生理活性成分などを含有し、その主要成分であるフラボノイド類のプロアントシアニジンに、活性酸素を除去する強い抗酸化作用があることが知られている。
【００２０】
松樹皮抽出物は、上記の松樹皮を水または有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には、温水または熱水を用いることが好ましい。これらの水には、抽出効率を向上させる点から、塩化ナトリウムなどの塩を添加することが好ましい。抽出に用いる有機溶媒としては、食品あるいは薬剤の製造に許容される有機溶媒が用いられ、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、メチルエチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、および１，１，１，２−テトラフルオロエタンが挙げられる。これらの水および有機溶媒は単独で用いてもよいし、組合わせて用いてもよい。特に、熱水、含水エタノール、および含水プロピレングリコールが好ましく用いられる。
【００２１】
松樹皮からプロアントシアニジンを抽出する方法は、特に限定されないが、例えば、加温抽出法、超臨界流体抽出法などが用いられる。
【００２２】
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、二酸化炭素が好ましく用いられる。
【００２３】
超臨界流体抽出法は、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程と、目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程とを行う。分離工程では、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤・吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００２４】
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエン、その他の脂肪族低級アルコール類、脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、またはケトン類を２〜２０Ｗ／Ｖ％程度添加し、得られた抽出流体で超臨界流体抽出を行うことによって、ＯＰＣ、カテキン類（後述）などの目的とする抽出物の抽出溶媒に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、効率的に松樹皮抽出物を得る方法である。
【００２５】
超臨界流体抽出法は、比較的低い温度で操作できるため、高温で変質・分解する物質にも適用できるという利点；抽出流体が残留しないという利点；および溶媒の循環利用が可能であり、脱溶媒工程などが省略でき、工程がシンプルになるという利点がある。
【００２６】
また、松樹皮からの抽出は、上記の方法以外に、液体二酸化炭素回分法、液体二酸化炭素還流法、超臨界二酸化炭素還流法などにより行ってもよい。
【００２７】
松樹皮からの抽出は、複数の抽出方法を組み合わせてもよい。複数の抽出方法を組み合わせることにより、種々の組成の松樹皮抽出物を得ることが可能となる。
【００２８】
上記抽出により得られた松樹皮抽出物は、プロアントシアニジン含有量を増加させる目的で精製してもよい。精製には、通常、酢酸エチルなどの溶媒が用いられるが、安全性などの面から、さらに、外用剤としての皮膚化粧品および医薬部外品への応用を容易にするため、溶媒を使用しない方法、例えば、限外濾過、あるいはダイヤイオンＨＰ−２０、セファデックス−ＬＨ２０、キチンなどの吸着性担体を用いたカラム法またはバッチ法により精製することが好ましい。
【００２９】
本発明において、プロアントシアニジンを主成分として含む松樹皮抽出物は、具体的には、以下のような方法によりに調製されるが、これは例示であり、この方法に限定されない。
【００３０】
フランス海岸松の樹皮１ｋｇを、塩化ナトリウムの飽和溶液３Ｌに入れ、１００℃にて３０分間抽出し、抽出液を得る（抽出工程）。その後、抽出液を濾過し、得られる不溶物を塩化ナトリウムの飽和溶液５００ｍｌで洗浄し、洗浄液を得る（洗浄工程）。この抽出液と洗浄液とを合わせて、松樹皮の粗抽出液を得る。
【００３１】
次いで、この粗抽出液に酢酸エチル２５０ｍｌを添加して分液し、酢酸エチル層を回収する工程を５回行う。回収した酢酸エチル溶液を合わせて、無水硫酸ナトリウム２００ｇに直接添加して脱水する。その後、この酢酸エチル溶液を濾過し、濾液を元の５分の１量になるまで減圧濃縮する。濃縮された酢酸エチル溶液を２Ｌのクロロホルムに注ぎ、攪拌して得られる沈殿物を濾過により回収する。その後、この沈殿物を酢酸エチル１００ｍｌに溶解した後、再度１Ｌのクロロホルムに添加して沈殿させる操作を２回繰り返す洗浄工程を行う。この方法により、例えば、ＯＰＣを２０重量％以上含み、かつカテキン類を５重量％以上含有する、約５ｇの松樹皮抽出物が得られる。
【００３２】
上記松樹皮のような原料植物に由来する抽出物は、４０重量％以上のプロアントシアニジンを含有することが好ましい。さらに、この原料植物由来の抽出物中にＯＰＣを２０重量％以上含有することが好ましく、３０重量％以上含有することがより好ましい。このようにプロアントシアニジンを高い割合で含有する原料として、上述のように松樹皮抽出物が好ましく用いられる。
【００３３】
上記松樹皮抽出物などの植物抽出物には、さらにプロアントシアニジン、特にＯＰＣとともにカテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類が含まれることが好ましい。カテキン類とは、ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称である。カテキン類としては、（＋）−カテキン（狭義のカテキンといわれる）、（−）−エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、アフゼレキンなどが知られている。上記松樹皮のような原料植物由来の抽出物からは、上記の（＋）−カテキンの他、ガロカテキン、アフゼレキン、（＋）−カテキンの３−ガロイル誘導体、およびガロカテキンの３−ガロイル誘導体が単離されている。カテキン類は、単独では水溶性が乏しく、その生理活性が低いが、ＯＰＣの存在下で水溶性が増すと同時に、活性化する性質があり、ＯＰＣとともに摂取することで効果的に作用する。
【００３４】
カテキン類は、上記原料植物抽出物中に、５重量％以上含有されていることが好ましい。より好ましくは、該抽出物中にＯＰＣが２０重量％以上、そしてカテキン類が５重量％以上含有される。例えば、抽出物のカテキン類含量が５重量％未満の場合、カテキン類を添加し、最終的な含量が５重量％以上となるように調整してもよい。ＯＰＣを２０重量％以上含有し、かつカテキン類を５重量％以上含有する松樹皮抽出物を用いることが最も好ましい。
【００３５】
本発明の皮膚改善組成物中に含まれるプロアントシアニジンの含有量は特に限定されない。プロアントシアニジンの一日の摂取量が好ましくは５ｍｇ〜１０００ｍｇ、より好ましくは１０ｍｇ〜５００ｍｇとなるように皮膚改善組成物中に含有されることが好ましい。皮膚改善組成物を外用剤として用いる場合は、局所的な投与となるため、皮膚改善組成物中にプロアントシアニジンを好ましくは０．０００１〜１０重量％、より好ましくは０．００１〜５重量％含有することが好ましい。０．０００５重量％未満であると、肌質改善作用が十分に発揮されず、１０重量％を超えると製剤化が困難な場合がある。
【００３６】
本発明に用いられるプロアントシアニジン、特にＯＰＣは、コラーゲン産生増強効果を有するため、肌質を改善することができる。特に、プロアントシアニジンとして、松樹皮由来の抽出物を用いることが、他の植物抽出物に比べて高いコラーゲン増強作用を有する点で好ましい。
【００３７】
（２）コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸（Ｂ成分）
本発明の皮膚改善組成物に含有されるコラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸は、コラーゲンの構成成分となる重要なアミノ酸であり、好ましくは、プロリン、グリシン、アルギニン、およびアラニンからなる群より選択される少なくとも１種のアミノ酸である。上記アミノ酸は、プロアントシアニジンと相俟って、優れた肌質改善効果を発揮する。これらのアミノ酸は、例えば、コラーゲンの構成成分として該コラーゲン中にプロリンが平均１２％、グリシンが平均２１％、アラニンが平均８．１％、およびアルギニンが平均６．９％の割合で含有されている。これらは、通常、生体内で合成されるが、通常の食事から十分な量を摂取しにくいアミノ酸である。したがって、老化により代謝が低下すると、これに伴い生体内でのこれらのアミノ酸合成能力も低下するため、肌質を改善するためには、特に積極的に摂取する必要がある。なお、上記アミノ酸は、コラーゲンに比べて、経皮投与および経口投与のいずれにおいても吸収効率がよいため、コラーゲン自体を投与する場合に比べて、効果的に吸収され、体内で容易にコラーゲンに変換される。したがって、上記アミノ酸は、コラーゲンに比べて、プロアントシアニジンと組み合わせる場合にも、より高い肌質改善効果が得られ得る。
【００３８】
プロリンは、肌を構成するコラーゲンがへリックス構造をとるために必須なアミノ酸であるため、皮膚改善には特に重要である。すなわち、コラーゲンは、３本のポリペプチド鎖がへリックス構造をとって形成されるが、これは繊維芽細胞がコラーゲンペプチドを合成するに際し、コラーゲン中のプロリンがビタミンＣを補酵素として還元され、ハイドロキシプロリンとなり、該ハイドロキシプロリンの水酸基により３本のポリペプチド鎖が水素結合を形成して、ヘリックスが形成されるためである。
【００３９】
上記アミノ酸は、本発明の皮膚改善組成物中に一日の摂取量が５０ｍｇ〜２０ｇ、好ましくは１００ｍｇ〜１０ｇとなるように含有されることが好ましい。皮膚改善組成物を外用剤とする場合は、局所的に投与できるようアミノ酸の量を適宜調整すればよく、好ましくは、皮膚改善組成物中に０．００１〜５重量％、より好ましくは０．００５〜３重量％の割合で含有される。
【００４０】
（３）アスコルビン酸およびそれらの誘導体（Ｃ成分）
アスコルビン酸（ビタミンＣ）およびその誘導体は、コラーゲン合成に重要である。本発明の組成物中にアスコルビン酸およびその誘導体を含有することによって、コラーゲン産生増強効果をより高めることができる。この効果は、本発明の組成物を経口投与する場合に特に効果的である。経皮投与する場合は、アスコルビン酸の経皮吸収を容易にするために、パルミチン酸アスコルビルなどの親油性が高められたアスコルビン酸を用いることが好ましい。さらに、経皮投与の場合は、皮膚中のコラーゲンの酸化を防止し、合成を促進するという観点からも、該組成物中に含有され得る。アスコルビン酸およびその誘導体は、皮膚改善組成物中に好ましくは０．０００１〜３０重量％、より好ましくは０．００１重量％〜１０重量％含有し得る。
【００４１】
（４）その他の成分
本発明の皮膚改善組成物は、上記の成分以外に、用途に応じて、種々の成分を含有し得る。例えば、通常の食品や医薬品として添加し得る成分（抗酸化剤、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、滑沢剤、湿潤剤、懸濁剤、着色料、香料、栄養成分、食品添加物など）；および化粧品、医薬品等の皮膚外用剤として通常用いられる成分（美白剤、保湿剤、抗酸化剤、油性成分、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、各種皮膚栄養剤など）が挙げられる。
【００４２】
上記成分のうち、抗酸化剤は、酸化による肌荒れ、老化を防止する目的で含有され得る。このような抗酸化剤としては、ＳＯＤ、マンニトール、カロテノイド類（例えば、アスタキサンチン）、ハイドロキノン、ユビキノン、ビルビリン、コレステロール、トリプトファン、ヒスチジン、ビタミンＰ様物資（ルチン、ケルセチン、ヘスペリジンなど）、没食子酸、ビタミンＢ類、ビタミンＤまたはその誘導体、ビタミンＥ、グルタチオン、ＢＴＨ、ＢＨＡ、植物抽出物（例えば、オウゴンおよびローズマリー）などが挙げられる。このような抗酸化剤は、皮膚改善組成物中に好ましくは０．０００１重量％〜４０重量％の割合で含有され得る。皮膚改善組成物を食品、医薬品などとして摂取する場合は、好ましくは０．００１重量％〜２０重量％、より好ましくは０．０１重量％〜１０重量％の割合で含有され得、化粧品、医薬品などとして外用する場合は、好ましくは０．０００１重量％〜４０重量％、より好ましくは０．００１〜２０重量％の割合で含有され得る。
【００４３】
栄養成分としては、例えば、ローヤルゼリー、ビタミン、プロテイン、カルシウム含有材料（卵殻カルシウムなど）、レシチン、クロレラ末、アシタバ末、およびモロヘイヤ末が挙げられる。食品添加物としては、ステビア末、抹茶パウダー、レモンパウダー、はちみつ、還元麦芽糖、乳糖、糖液、調味料などが挙げられる。
【００４４】
（５）皮膚改善組成物
本発明の皮膚改善組成物は、プロアントシアニジンと、コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸とを含有し、その割合は任意である。好ましくは、プロアントシアニジン１００重量部に対して、上記アミノ酸を好ましくは、５０〜５０００重量部、より好ましくは、１００〜５０００重量部の割合で含有し得る。
【００４５】
本発明の皮膚改善組成物は、上記の必須成分以外に、さらにアスコルビン酸またはその誘導体およびその他の成分を含有し得る。この皮膚改善組成物は、肌質改善効果を得ること目的として、例えば、食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして、各種の形態に調製することができる。
【００４６】
上述の用途のうち、本発明の皮膚改善組成物を食品、医薬品、医薬部外品などとして経口摂取する場合、その形態に特に制限はない。例えば、ハードカプセル、ソフトカプセルなどのカプセル剤、錠剤、丸剤、粉末（散剤）、顆粒、ティーバッグ、飴状の粘稠な液体、液体などの当業者が食品に通常用いる形態で利用される。これらは、形状または好みに応じて、そのまま摂取してもよく、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて飲んでもよく、成分を浸出させたものを摂取してもよい。
【００４７】
本発明の皮膚改善組成物を医薬部外品、化粧品などとして皮膚に塗布する場合にも、これらの形態に特に制限はなく、軟膏剤、クリーム剤、乳液、ローション、パック、湿布剤、浴用剤などの従来皮膚外用剤に用いられる形態であればいずれでもよい。また、マウスウォッシュ、歯磨き粉、目薬などの口腔内あるいは目などの粘膜に適用するために適した形態であってもよく、これらは同様の作用によって、粘膜の強化及び保護作用を得ることができる。
【００４８】
本発明の皮膚改善組成物は、プロアントシアニジンおよびコラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸を含有し、該組成物でなる食品、医薬品などを摂取することあるいは化粧品などを皮膚に塗布することによって、コラーゲン量を増加させ、優れた肌質改善効果を発揮する。そして、この効果は、コラーゲン産生能力が低下している状態においても得られる。このように、本発明の組成物は、肌のハリ・ツヤの改善およびシワの防止に優れた食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして利用され得る。さらに、本発明の組成物は、プロアントシアニジン、特にＯＰＣが優れた抗ストレス効果を有するため、間接的にも肌質改善効果（美容効果）を有する皮膚外用剤または健康食品として有用である。
【００４９】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明がこの実施例により制限されるものではない。
【００５０】
（製造例：プロアントシアニジンの調製）
松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱した。次いで、直ちに濾過して濾液を得た。濾過後の残渣を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮粗抽出液を得た。
【００５１】
この粗抽出液を２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムを１００％飽和濃度となるまで添加してよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過して濾液を得た。１Ｌの上記濾液を以下に示す工程によりさらに精製した。まず、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに上記濾液を通液し、さらに１Ｌの精製水で洗浄した。次いで、カラムから１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒で溶出し、２００ｍＬの精製松樹皮抽出物を得た。得られた精製松樹皮抽出物を凍結乾燥して粉末化した。本操作を繰り返して、９Ｌの松樹皮の熱水抽出液から精製松樹皮抽出物の乾燥粉末７．２１ｇを得た。この精製松樹皮抽出物の乾燥粉末は、プロアントシアニジンを４０重量％（ＯＰＣとして２０重量％）含有していた。
【００５２】
（参考例：プロアントシアニジンの肌質改善効果の確認）
プロアントシアニジンの基本的な肌質改善効果を確認するために、予め皮膚のコラーゲン量を減少させた試験モルモットにプロアントシアニジンを経皮投与（塗布）あるいは経口投与（経口摂取）し、投与後に皮膚を構成するコラーゲンに特異的に存在するハイドロキシプロリン（Ｈｙｐ量）を測定した。
【００５３】
１．試験モルモットの調製
平均体重２７９ｇの雄性モルモット（日本エスエルシー（株））３０匹に基本飼料（ＣＧ−７：日本クレア（株）、ビタミンＣ含有量０．１７重量％）を一週間与えて馴化させた。このモルモットを総無作為化法により一群５匹ずつ割り振った。６群のモルモット（ａ〜ｆ群）のうち、１群のモルモット（ｆ群）は、その後も基本飼料を摂取させ、対照群とした。５群のモルモット（ａ〜ｅ群）に低ビタミンＣ飼料（ＣＧ−７：日本クレア（株）、ビタミンＣ含有量０．０１重量％）を２週間自由摂取させ、低ビタミンＣ状態にすることによって、皮膚のコラーゲン量（Ｈｙｐ量）を減少させた。これらを試験モルモットとした。
【００５４】
２．経皮投与による肌質改善効果の確認
上記の５群の試験モルモットのうち、３群の試験モルモット（ａ〜ｃ群）を用いた。まず、３群のモルモットの経皮投与する部位の毛をバリカンを用いて除去した。上記製造例で得られた松樹皮抽出物の乾燥粉末を０．３重量％含有する水溶液を、１群のモルモット（ａ群）の毛を除去した部位に５００μＬ／５００ｃｍ２の割合で塗布し、その後、冷風で乾燥させた。この塗布および乾燥の操作を一日一回の頻度で２週間行った。塗布期間中、モルモットには、低ビタミンＣ飼料を自由摂取させた。
【００５５】
塗布期間終了後、皮膚のＨｙｐ量を以下のようにして測定した。モルモットから皮膚を摘出し、６０℃にて一晩乾燥した。この乾燥物を粉砕し、粉砕物５０ｍｇを５ｍＬの塩酸（６Ｍ）に添加し、ヒーティングブロックを用いて１１０℃に保持し、２４時間加水分解した。この加水分解物中のＨｙｐ量をクロラミンＴ法により測定した。結果を表１に示す。なお、Ｈｙｐ量が多いほど、皮膚のコラーゲン量が多く、皮膚が改善されていることを示す。
【００５６】
残りの２群の毛を除去した試験モルモット（ｂ群およびｃ群）には、プロアントシアニジンを３８重量％含有するブドウ種子抽出物（キッコーマン株式会社）を０．３重量％含有する水溶液および精製水をそれぞれ塗布し、上記と同様にして、皮膚のＨｙｐ量を測定した。結果を表１に示す。
【００５７】
３．経口投与による肌質改善効果の確認
残りの２群の試験モルモット（ｄ群およびｅ群）のうち、１群の試験モルモット（ｄ群）に、上記製造例で得られた松樹皮抽出物の乾燥粉末を０．３重量％含有する低ビタミンＣ飼料を２週間自由摂取させた。摂取期間終了後、上記と同様にＨｙｐ量を測定した。残りの１群の試験モルモット（ｅ群）には、プロアントシアニジンを３８重量％含有するブドウ種子抽出物（キッコーマン株式会社）を０．３重量％含有する低ビタミンＣ飼料を上記と同様に摂取させ、Ｈｙｐ量を測定した。これらの結果を表１に示す。
【００５８】
【表１】
2005029486.tif 000002
【００５９】
表１の結果から、松樹皮抽出物およびブドウ種子抽出物を塗布あるいは経口摂取した群（プロアントシアニジン投与群）は、精製水のみ塗布した群（プロアントシアニジン非投与群）に比べて、Ｈｙｐ量が増加し、さらに健常体（対照）とほぼ同等のＨｙｐ量まで回復していることから、皮膚改善効果を有することが分かる。特に、松樹皮抽出物は、他の植物抽出物に比べて優れた皮膚改善効果を有することが分かる。
【００６０】
（実施例１：飼料１の調製）
上記製造例で得られた松樹皮抽出物の乾燥粉末（Ａ成分）およびプロリン（Ｂ成分）を低ビタミンＣ飼料に表２に記載の割合で混合して飼料１を製造した。
【００６１】
（実施例２〜４：飼料２〜４の調製）
プロリン（Ｂ成分）の代わりに、他のＢ成分として、アラニン、グリシン、およびアルギニンをそれぞれ用いたこと以外は、実施例１と同様にして、表２に記載の割合で混合して、各々飼料２〜４を製造した。
【００６２】
（実施例５：飼料５の調製）
実施例１の組成に、さらにＣ成分としてアスコルビン酸を表２に記載の割合で混合したこと以外は、実施例１と同様にして、飼料５を製造した。
【００６３】
（比較例１および２：飼料６および７の調製）
表２に記載の成分を混合して飼料をそれぞれ製造し、これらを飼料６および７とした。
【００６４】
（実施例６：皮膚改善組成物の経口投与による検討）
平均体重が２６７ｇの雄性モルモット（日本エスエルシー（株））３５匹に基本飼料を一週間与えて馴化させた。このモルモットを総無作為化法により一群５匹ずつ割り振った。各群すべてのモルモットを上記参考例と同様にして、低ビタミンＣ飼料を２週間自由摂取させ、試験モルモットとした。松樹皮抽出物の乾燥粉末を０．３重量％含有する低ビタミンＣ飼料の代わりに、上記飼料１〜７を用いたこと以外は、参考例の「経口投与による肌質改善効果の確認」と同様にして、Ｈｙｐ量を測定し、皮膚改善効果を評価した。結果を表２に示す。
【００６５】
【表２】
2005029486.tif 000003
【００６６】
表２の結果より、実施例のプロアントシアニジン（Ａ成分）およびアミノ酸（Ｂ成分）を含有する飼料１〜５（実施例１〜５）を摂取した群は、比較例のＡ成分およびＢ成分のいずれか一方を含有する飼料６および７（比較例１および２）に比べて、Ｈｙｐ量が増加していた。このことは、Ａ成分およびＢ成分を含有する飼料を摂取することによって、肌質が改善され、優れた皮膚改善効果が得られることを示す。特に、実施例５のＡ成分およびＢ成分に加えて、アスコルビン酸（Ｃ成分）を含有する飼料５を摂取した群は、Ｈｙｐ量がさらに増加した。
【００６７】
（実施例７〜１１）
表３に記載の成分を表３に記載の割合で基剤（エタノール５重量％およびグリセリン３重量％を含有する水溶液）に溶解させ、試料液１〜５をそれぞれ調製した。
【００６８】
（比較例３および４）
表３に記載の成分を表３に記載の割合で基剤（エタノール５重量％およびグリセリン３重量％を含有する水溶液）に溶解させ、試料液６および７をそれぞれ調製した。
【００６９】
（実施例１２：皮膚改善組成物の経皮投与による検討）
平均体重が２７２ｇの雄性モルモット（日本エスエルシー（株））３５匹に基本飼料を一週間与えて馴化させた。このモルモットを総無作為化法により一群５匹ずつ７群にわけた。各群すべてのモルモットを上記参考例と同様にして、低ビタミンＣ飼料を２週間自由摂取させ、皮膚のコラーゲン量を減少させた試験モルモットとした。松樹皮抽出物の乾燥粉末を０．３重量％含有する水溶液の代わりに、上記試料液１〜７を用いたこと以外は、参考例の「経皮投与による肌質改善効果の確認」と同様に操作し、Ｈｙｐ量を測定し、皮膚改善効果を評価した。結果を表３に示す。
【００７０】
【表３】
2005029486.tif 000004
【００７１】
表３の結果より、実施例のプロアントシアニジン（Ａ成分）およびアミノ酸（Ｂ成分）を含有する試料液１〜５（実施例７〜１１）を塗布した群は、比較例のＡ成分およびＢ成分のいずれか一方を含有する試料液６および７（比較例３および４）を塗布した群に比べて、Ｈｙｐ量が増加していた。このことは、Ａ成分およびＢ成分を含有する試料液を塗布することによって、肌質が改善され、優れた皮膚改善効果が得られることを示す。特に、実施例１１のＡ成分およびＢ成分に加えて、アスコルビン酸（Ｃ成分）を含有する試料液５を塗布した群は、Ｈｙｐ量がさらに増加した。
【００７２】
（実施例１３：錠剤１の製造）
製造例で得られた松樹皮抽出物の乾燥粉末（Ａ成分）、プロリン、アラニン、グリシン、アルギニン（以上、Ｂ成分）、アルコルビン酸（Ｃ成分）、および賦形剤（結晶セルロース、ショ糖エステル、還元麦芽糖、二酸化ケイ素、および卵殻カルシウムを重量比で１：０．３：０．１：０．２：４の割合で混合した混合物）を表４に記載の割合にて混合して錠剤（１錠当たり、約２００ｍｇ）を製造し、これを錠剤１とした。
【００７３】
（比較例５：錠剤２の製造）
松樹皮抽出物の乾燥粉末を用いなかったこと以外は、実施例１３と同様にして、表４に記載の割合にて混合して錠剤（１錠当たり、約２００ｍｇ）を製造し、これを錠剤２とした。
【００７４】
（実施例１４：化粧水１の製造）
製造例で得られた松樹皮抽出物の乾燥粉末（Ａ成分）、プロリン、アラニン、グリシン、アルギニン（以上、Ｂ成分）、およびアルコルビン酸（Ｃ成分）を表４に記載の割合にて基剤（グリセリン３重量％、プロピレングリコール２重量％、およびエタノール５重量％含有する水溶液）に溶解させ、化粧水１を製造した。
【００７５】
（比較例６：化粧水２の製造）
松樹皮抽出物の乾燥粉末を用いなかったこと以外は、実施例１４と同様にして、表４に記載の割合にて基剤に溶解させ、化粧水２を製造した。
【００７６】
（実施例１５：皮膚改善組成物のヒトによる評価）
３０〜４５歳の女性（被験者）２０名を４群に分けた。１群の被験者に実施例１３の錠剤１を１日あたり１８錠の割合で１ヶ月間摂取させた。他の１群の被験者には比較例５の錠剤２を上記と同様の条件で摂取させた。摂取期間終了後、各群の被験者に対して、摂取前に比べて、肌の状態に関する表５に記載の項目をアンケート調査し、皮膚改善効果を評価した。アンケート調査は、「はい」または「いいえ」で自己評価してもらい、「はい」と答えた人数を集計した。結果を表５に示す。
【００７７】
残りの２群の被験者のうち、１群の被験者において、実施例１４の化粧水１を被験者の顔に１日に３回の頻度で１ヶ月間塗布してもらった。なお、１回あたりの塗布量の制限は設定しなかった。別の１群の被験者には、比較例６の化粧水２を上記と同様の条件で塗布してもらった。塗布期間期間終了後、各群の被験者に対して、上記と同様に表５に記載の項目をアンケート調査し、皮膚改善効果を評価した。結果を表５に示す。
【００７８】
【表４】
2005029486.tif 000005
【００７９】
【表５】
2005029486.tif 000006
【００８０】
表５の結果から、実施例１３の錠剤１を摂取した群は、比較例５の錠剤２を摂取した群に比べて優れた皮膚改善効果を有することがわかる。実施例１４の化粧水１を塗布した群は、比較例６の化粧水２を塗布した群に比べて優れた皮膚改善効果を有することがわかる。以上のことから、本発明の皮膚改善組成物は、経口投与および経皮投与のいずれにおいても優れた皮膚改善効果が得られることが分かる。
【００８１】
（実施例１６）
製造例で得られた松樹皮抽出物の乾燥粉末および以下の各成分を混合して飲料を調製した：
＜飲料の配合成分＞                                配合重量（１Ｌあたり）
果糖ブドウ糖液糖                                  １０ｇ
レモン果汁                                        １０ｇ
クエン酸                                            ２ｇ
Ｌ−アスコルビン酸                                  ２ｇ
松樹皮抽出物                                      ７０ｍｇ
香料                                            １５０ｍｇ
グリシン                                        １００ｍｇ
プロリン                                        １００ｍｇ
アラニン                                          ８０ｍｇ
アルギニン                                        ４０ｍｇ
純水                                              残量
【００８２】
（実施例１７）
製造例で得られた松樹皮抽出物の乾燥粉末および以下の各成分を均一に攪拌混合して、ゲル状物を得、これをポリエステルフィルム（５０μｍ厚）上にゲル厚１ｍｍとなるように製膜した後、ポリエステル不織布（伸度５０％）に貼り合わせて、５０℃で２４時間加温し、シート状含水パック剤を得た。本パックは、局所的に多量のプロアントシアニジンおよびアミノ酸を経皮投与できるため、その効果が極めて高いことが期待できる：
＜パックの配合成分＞                                （単位は重量％）
松樹皮抽出物                                        ０．０１
ポリアクリル酸（重量平均分子量：５００万）          ６．０
プロリン                                            ０．２
アラニン                                            ０．１
グリシン                                            ０．２
アルギニン                                          ０．１
パルミチン酸アスコルビル                            ０．０１
グリセリン                                        ２０．０
エタノール                                          ０．５
パラオキシ安息香酸エステル                          ０．１
香料（ミント）                                      ０．１
乾燥水酸化アルミニウムゲル                          ０．３５
水                                                  残量
【００８３】
【発明の効果】
以上のように、プロアントシアニジンと、コラーゲン産生促進効果を有するアミノ酸とを含有する皮膚改善組成物を摂取することあるいは塗布することにより、優れた皮膚改善効果が得られる。本発明の皮膚改善組成物は、食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などに効果的に利用され得る。