(57)【要約】  【課題】  本発明の課題は、遷移金属を目的とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積させる材料の提供であり、またこれを利用した造影剤及び効率性や選択性の高い発熱方法およびリポソームの破壊方法を提供することである。  【解決手段】（１）リポソームが０価遷移金属微粒子を含有すること、（２）リポソームが親水性配位子と０価遷移金属微粒子を含有すること、（３）０価遷移金属微粒子が金であること、を各々特徴とするリポソーム複合体である。【選択図】      なし  【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソームが０価遷移金属微粒子を含有することを特徴とするリポソーム複合体。
【請求項２】
リポソームが親水性配位子と０価遷移金属微粒子を含有することを特徴とするリポソーム複合体。
【請求項３】
０価遷移金属微粒子が金であることを特徴とする請求項１又は２に記載のリポソーム複合体。
【請求項４】
親水性配位子が分子内に１つのメルカプト基又はニトリル基を有することを特徴とする請求項２又は３に記載のリポソーム複合体。
【請求項５】
親水性配位子が非イオン性配位子であることを特徴とする請求項２〜４のいずれかに記載のリポソーム複合体。
【請求項６】
親水性配位子が水酸基又はポリアルキレンオキシド基を有することを特徴とする請求項２〜４のいずれかに記載ののリポソーム複合体。
【請求項７】
平均粒径が７０ｎｍから２００ｎｍであることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載のリポソーム複合体。
【請求項８】
超臨界二酸化炭素法で製造されていることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載のリポソーム複合体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載のリポソーム複合体を必須成分とする造影剤。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載のリポソーム複合体において、リポソームを含む部分に赤外線を照射し該リポソームを含む部分を発熱させることを特徴とする発熱方法。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれかに記載のリポソーム複合体において、リポソームを含む部分に赤外線を照射し該リポソームを含む部分を破壊させることを特徴とする破壊方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、金属微粒子を含むリポソーム複合体及びこれを利用した造影剤並びにこれを利用した発熱方法及び破壊方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｘ線単純撮影やＣＴ撮影は今日の画像診断の中核をなしている。骨や歯などのいわゆる硬組織はＸ線を良く吸収するため容易に高コントラスト像を得ることができるが、軟組織間ではＸ線吸収の差が小さいため高いコントラストが得られない。このような場合にコントラストの高い画像を得るために造影剤を利用することが一般に行われている。
【０００３】
現在実用化されているＸ線造影剤の大部分は、トリヨードフェニル基を水溶性化した化合物である。これらは、血管、尿管、輸卵管等の管腔部位に投与され、管腔の形状、狭窄等の診断に使用されている。しかしながら、これらの化合物は組織や疾患部位と相互作用することなく管腔部位から速やかに排出されるため、組織や疾患部位をより詳細に診断する目的には不充分である。このため目的とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積し、その他の部位と明瞭なコントラストで区別できる画像を提供するＸ線造影剤が望まれている。
【０００４】
特許文献１には、トリヨードフェニル基を水溶性化した化合物以外の物質として金コロイドとポリエチレングリコール及びトロンビンの混合物を血管塞栓剤として血管内に導入して使用する技術が開示されている。この技術では金コロイドが造影剤として機能しＸ線でモニターしながら患部付近にカテーテルを挿入でき動脈瘤や動脈奇形などの血管障害の治療に用いようというものである。金コロイドの分散安定化にポリエチレングリコールを使用しているが安定性は低く、患部付近への血管内導入であって血管塞栓を目的に使用するのあれば問題ないが、これ以外の目的に対しては分散安定性が不十分である。
【０００５】
特許文献２には、遷移金属特に、平均粒径２．５ｎｍの金コロイドと３−メルカプトプロピオン酸の複合体が生理食塩水濃度で安定に分散し、Ｘ線造影効果があることが開示されている。しかしながら、この金コロイド造影剤は、従来のヨード系造影剤と同様に組織や疾患部位と相互作用することなく管腔部位から速やかに排出されるため、大量の投与が必要で、ヨード系造影剤と比べ経済性が著しく劣るばかりか、目的とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積し、その他の部位と明瞭なコントラストで区別できる画像を提供することはできない。
【０００６】
一方、腫瘍部組織は正常組織と比べ温熱に高感受性があることから、腫瘍患部を温熱処理する治療方法が知られ、腫瘍部分を選択的効率的に熱処理する方法の開発が望まれている。
【０００７】
また、リポソームは選択的に腫瘍組織に集積することが知られており、抗ガン剤等の薬剤の腫瘍組織への運搬に用いることが検討されている。リポソームを用いて造影剤を特定部位に運搬させることも考えられ、特許文献３及び４では、リポソーム中外に造影化合物であるヨード化合物を存在させリポソームの安定性を向上させる技術が開示されている。しかしながら、抗ガン剤と異なり、造影化合物は撮影終了後、速やかに体外に排出されることが望まれているのに、開示内容のリポソームは不必要に長く腫瘍部分に滞留する。このため、適当な刺激で任意にリポソームを破壊する手段の開発が望まれる。
【特許文献１】特開平５−１７３６９
【特許文献２】特開平１０−３３０２８８
【特許文献３】特開平７−３１６０７９
【特許文献４】特表平９−５０５８２１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、遷移金属を目的とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積させる材料の提供であり、またこれを利用した造影剤及び効率性や選択性の高い発熱方法およびリポソームの破壊方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の上記課題は、下記構成によって達成される。
１．リポソームが０価遷移金属微粒子を含有することを特徴とするリポソーム複合体。
【００１０】
２．リポソームが親水性配位子と０価遷移金属微粒子を含有することを特徴とするリポソーム複合体。
【００１１】
３．０価遷移金属微粒子が金であることを特徴とする前記１又は２に記載のリポソーム複合体。
【００１２】
４．親水性配位子が分子内に１つのメルカプト基又はニトリル基を有することを特徴とする前記２又は３に記載のリポソーム複合体。
【００１３】
５．親水性配位子が非イオン性配位子であることを特徴とする前記２〜４のいずれかに記載のリポソーム複合体。
【００１４】
６．親水性配位子が水酸基又はポリアルキレンオキシド基を有することを特徴とする前記２〜４のいずれかに記載ののリポソーム複合体。
【００１５】
７．平均粒径が７０ｎｍから２００ｎｍであることを特徴とする前記１〜６のいずれかに記載のリポソーム複合体。
【００１６】
８．超臨界二酸化炭素法で製造されていることを特徴とする前記１〜７のいずれかに記載のリポソーム複合体。
【００１７】
９．前記１〜８のいずれかに記載のリポソーム複合体を必須成分とする造影剤。
【００１８】
１０．前記１〜８のいずれかに記載のリポソーム複合体において、リポソームを含む部分に赤外線を照射し該リポソームを含む部分を発熱させることを特徴とする発熱方法。
【００１９】
１１．前記１〜８のいずれかに記載のリポソーム複合体において、リポソームを含む部分に赤外線を照射し該リポソームを含む部分を破壊させることを特徴とする破壊方法。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、遷移金属を目的とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積させる金属微粒子を含むリポソーム複合体及びこれを利用した造影剤並びにこれを利用した発熱方法及び破壊方法を提供でき、特に腫瘍部分では造影レベルが持続し、単一膜のリポソームを提供できる。そして、本発明は、リポソームが目的とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積する点に着目し、造影効果ばかりでなくその他の機能も持たせることを意図としたものであり、効率的で選択的な発熱方法及びリポソームの破壊方法を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明を更に詳しく説明する。
本発明におけるリポソームとは脂質膜から形成されているが、脂質膜の成分としては、リン脂質または糖脂質が好ましく使用される。また、これらは単一でも併用しても良い。
【００２２】
リン脂質としては、大豆、卵黄等から得られるレシチン、リゾレシチン及びまたはこれらの水素添加物、水酸化物の誘導体を挙げることができる。さらには、ホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、スフィンゴミエリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルセリン（ＤＳＰＳ）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（ＤＰＰＩ）ジステアロイルホスファチジルイノシトール（ＤＳＰＩ）、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）、ジステアロイルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）等を挙げることができる。
これらのリン脂質は通常単独で使用されるが、２種以上併用しても良い。
【００２３】
糖脂質としては、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジジグリセリド硫酸エステル等のグリセロ脂質、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エステル、ラクトシルセラミド、ガングリオシドＧ７、ガングリオシドＧ６、ガングリオシドＧ４等のスフィンゴ糖脂質等を挙げることができる。
【００２４】
リポソームの製造方法は、バンガム法等公知の任意の方法で作製することができるが、特にクロル溶剤を使用しない方法、特に、脂質を超臨界状態（亜臨界状態を含む）の二酸化炭素に溶解、分散、あるいは混合させてリポソームを生成させる超臨界二酸化炭素法が好ましい。その際に低級アルコール、グリコール、グリコールエーテル等のアルコール類を１種または２種以上併用すると、脂質成分の溶解性が向上し好ましい。好ましい溶解助剤としては安全性の観点からエタノールが挙げられる。
【００２５】
超臨界状態（含む亜臨界状態）の二酸化炭素の好適な圧力は、５０〜５００ｋｇ／ｃｍ２  好ましくは１００〜４００ｋｇ／ｃｍ２  である。また好適な臨界状態の炭酸ガスの温度としては２５〜２００℃、好ましくは３１〜１００℃、さらに好ましくは、３５〜８０℃である。
【００２６】
本発明に用いるリポゾームの好適な調整方法は以下のとおりである。すなわち上記の好適な圧力及び温度の超臨界状態あるいは亜臨界状態の二酸化炭素に脂質成分さらに必要に応じてポリエチレングリコールを加えて撹拌溶解させる。また必要に応じて先述した脂質の溶解助剤を併用することができる。続いて０価遷移金属微粒子と親水性配位子の混合水溶液を連続的に添加し、水相／二酸化炭素エマルジョンを形成する。  しばらく撹拌を続けてエマルジョンが安定化した後、さらに、二酸化炭素相と水相分離するまで水を連続的に添加する。リポソームは水相に転相しているので、二酸化炭素を排出すると、金属微粒子と親水性配位子を内包するリポソームが分散する水系分散液ができる。この場合、リポソームの中以外に水相に０価遷移金属微粒子と親水性配位子が含まれていても良い。
【００２７】
本発明のリポゾームの中心粒径は使用目的によって任意に設定することができるが、５０〜２５０ｎｍ程度であればよく、例えば腫瘍部分の撮影目的の場合は８０〜１５０ｎｍが好ましい。粒径は大塚電子ＥＬＳ８００等で測定することができ、中心粒径とは重量換算の粒子径分布で最も出現頻度の高い粒径を指している。粒径の調整は、処方やプロセス条件でこなうことができ、例えば、超臨界の圧力を大きくすると小粒径化ができる。
【００２８】
本発明において遷移金属とは、周期律表において３Ａ、４Ａ、５Ａ、６Ａ、７Ａ、８、１Ｂ、及び２Ｂの各族に属する元素である。具体的には、スカンジウム（Ｓｃ）、イットリウム（Ｙ）等のスカンジウム族元素、チタン（Ｔｉ）、ジルコニウム（Ｚｒ）、ハフニウム（Ｈｆ）等のチタン族元素、バナジウム（Ｖ）、ニオブ（Ｎｂ）、タンタル（Ｔａ）等のバナジウム族陽元素、クロム（Ｃｒ）、モリブデン（Ｍｏ）、タングステン（Ｗ）等のクロム族元素、マンガン（Ｍｎ）、テクネチウム（Ｔｃ）、レニウム（Ｒｅ）等のマンガン族元素、鉄（Ｆｅ）、ルテニウム（Ｒｕ）、オスミウム（Ｏｓ）等の鉄族元素、コバルト（Ｃｏ）、ロジウム（Ｒｈ）、イリジウム（Ｉｒ）等のコバルト族元素、ニッケル（Ｎｉ）、パラジウム（Ｐｄ）、白金（Ｐｔ）等のニッケル族元素、銅（Ｃｕ）、銀（Ａｇ）、金（Ａｕ）等の銅族元素、亜鉛（Ｚｎ）、カドミウム（Ｃｄ）、水銀（Ｈｇ）等の亜鉛族元素、ランタン（Ｌａ）、セリウム（Ｃｅ）、プラセオジム（Ｐｒ）、ネオジム（Ｎｄ）、プロメチウム（Ｐｍ）、サマリウム（Ｓｍ）、ユウロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、テルビウム（Ｔｂ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、ホルミウム（Ｈｏ）、エルビウム（Ｅｒ）、ツリウム（Ｔｍ）、イッテルビウム（Ｙｂ）、ルテチウム（Ｌｕ）等のランタノイド元素、アクチニウム（Ａｃ）、トリウム（Ｔｈ）、プロトアクチニウム（Ｐａ）、ウラン（Ｕ）、ネプツニウム（Ｎｐ）、プルトニウム（Ｐｕ）、アメリシウム（Ａｍ）、キュリウム（Ｃｍ）、バークリウム（Ｂｋ）、カリホルニウム（Ｃｆ）、アインスタイニウム（Ｅｓ）、フェルミウム（Ｆｍ）、メンデレビウム（Ｍｄ）、ノーベリウム（Ｎｏ）等のアクチノイド元素である。
【００２９】
Ｘ線造影剤としては、上記の元素のうち原子番号が高いものほど効果的である。具体的には、周期律表の第４、第５、第６及び第７周期に属する元素が挙げられる。但し、その効果と経済性の観点から第６周期に属する元素が好ましく、中でもランタン、セリウム、プラセオジム、ネオジム、プロメチウム、サマリウム、ユーロピウム、ガドリニウム、テルビウム、ジスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、イッテルビウム、ルテチウム等のランタノイド元素、あるいは金、白金等の貴金属元素が好ましく、最も好ましくは金である。
【００３０】
金属微粒子は、平均粒径が０．３ｎｍ〜１０００ｎｍ、好ましくは０．５ｎｍ〜５００ｎｍ、更に好ましくは０．５〜１００ｎｍが好ましい。特に好ましくは、粒径５〜５０ｎｍの金コロイドである。
【００３１】
本明細書において平均粒径とは、電子顕微鏡観察で無作為に選んだ約２０個の粒子の最大径を単純平均したものである。
【００３２】
本発明に用いる親水性配位子は、上記で述べた０価遷移金属微粒子と相互作用し金属微粒子を水系媒体中で分散安定化させる。このような非イオン性水性配位子は、分子内にイオン結合性構造、例えばカルボン酸塩、スルホン酸塩、燐酸塩、アンモニウム塩、ホスホニウム塩等の構造を有さず、しかも親水性基を有し、同時に０価の遷移金属に対する親和性（あるいは配位能）を有する官能基を有する化合物である。
【００３３】
親和性を有する官能基は、特定の０価の遷移金属との結合あるいは相互作用を血流中で安定に生じせしめる限りにおいて特に制限はないが、例えば、メルカプト基（チオール基）、セレノール基、ジスルフィド基、スルフィド基、ジセレニド基、セレニド基、ニトリル基（シアノ基）、イソニトリル基、ニトロ基、３価リン原子、イソチオシアネート基、キサンテート基、チオカルバメート基、チオ酸基（−ＣＯＳＨ）、ジチオ酸基（−ＣＳＳＨ）等を例示できる。このうち、安全性と遷移金属への親和性の点で好適なのは、メルカプト基、ジスルフィド基、スルフィド基、ニトリル基、イソニトリル基、ニトロ基、キサンテート基、チオカルバメート基、チオ酸基、ジチオ酸基等であり、中でもメルカプト基、ジスルフィド基、スルフィド基、ニトリル基、イソニトリル基、チオカルバメート基等はより好適であり、最も好適なのはメルカプト基とニトリル基である。なお、かかる０価の遷移金属に対する親和性を有する官能基は、該配位子分子中に１つだけ存在するのが望ましい。これは、かかる官能基が該配位子分子中に２つ以上存在すると、該配位子が複数の金属微粒子複合体を架橋するため凝集構造を生じ、造影効率の低下、ひいては沈殿性の凝集構造を生じる場合があるためと推測される。
【００３４】
親水性配位子の親水性基とは、本発明の金属微粒子複合体を造影剤として血流中に注入した場合の溶解性、あるいは血流中で沈殿性の凝集構造を生じせしめない性質を賦与する構造である。具体的には、水酸基、アミノ基、ヒドラジド基、カルボキシル基、スルホン酸基、アミド基、カーバメート基、尿素基等の活性水素原子を有する官能基、あるいはカルボニル基、エステル基、ニトリル基、ニトロ基、アルデヒド基、ポリアルキレンオキシド基等の活性水素原子を有さない官能基等が例示される。
【００３５】
ここで言うポリアルキレンオキシド基の好適な例としては、ポリエチレンオキシド基、ポリプロピレンオキシド基、ポリブチレンオキシド基、ポリペンチレンオキシド基、ポリヘキシレンオキシド基、ポリイソプロピレンオキシド基、ポリイソブチレンオキシド基、ポリシクロペンチレンオキシド基、ポリシクロヘキシレンオキシド基等の炭素数６以下のアルキレン基を有するモノマー単位構造が挙げられ、これらのモノマー単位構造は２種以上が共重合されていても構わない。
【００３６】
これらのうち好ましいのは、水酸基、アミノ基、尿素基、及びポリエチレンオキシド基等のポリアルキレンオキシド基であり、最も好ましいのは水酸基、及びポリエチレンオキシド基等のポリアルキレンオキシド基である。また、本発明の金属微粒子複合体の親水性を損なわない限りにおいて、その構成成分として、上記の親水性基２種以上を１分子内に有する非イオン性親水性配位子を用いても良く、また異なる種類の非イオン性親水性配位子を混合して用いても良い。
【００３７】
上記の諸条件を備えた親水性配位子でメルカプト基を分子内に１つ有する化合物の具体例としては、２−メルカプトエタノール、３−メルカプト−ｎ−プロパノール、４−メルカプト−ｎ−ブタノール、５−メルカプト−ｎ−ペンタノール、６−メルカプト−ｎ−ヘキサノール等の炭素数６以下のω−メルカプトアルコール類、２−ヒドロキシメチル−３−メルカプト−ｎ−プロパノール、ビス（２−ヒドロキシメチル）−３−メルカプト−ｎ−プロパノール、１−メルカプト−１−デオキシグルコース、１−メルカプト−１−デオキシガラクトース、１−メルカプト−１−デオキシマンノース、１−メルカプト−１−デオキシフコース、１−メルカプト−１−デオキシキシロース、１−メルカプト−１−デオキシリボース、１−メルカプト−１−デオキシアラビノース、２−メルカプト−２−デオキシグルコース、３−メルカプト−３−デオキシグルコース、４−メルカプト−４−デオキシグルコース、６−メルカプト−６−デオキシグルコース、６−メルカプト−６−デオキシガラクトース、６−メルカプト−６−デオキシマンノース、４−Ｏ−（６−メルカプト−６−デオキシグルコシル）グルコース等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類、２−メルカプトエチルアミン、３−メルカプト−ｎ−プロピルアミン、４−メルカプト−ｎ−ブチルアミン、５−メルカプト−ｎ−ペンチルアミン、６−メルカプト−ｎ−ヘキシルアミン等のω−メルカプトアルキルアミン類、Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）アミン、Ｎ，Ｎ−ビス（２−アミノエチル）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）アミン、Ｎ−｛２−（Ｎ’−２’−アミノエチル）アミノエチル｝−Ｎ−（２−メルカプトエチル）アミン、Ｎ，Ｎ−ビス｛２−（Ｎ’−２’−アミノエチル）アミノエチル｝−Ｎ−（２−メルカプトエチル）アミン等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアミン類、メルカプト酢酸、３−メルカプトプロピオン酸、４−メルカプトブタン酸、５−メルカプトペンタン酸、６−メルカプトヘキサン酸等のω−メルカプト脂肪酸類、チオリンゴ酸、チオクエン酸等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリカルボン酸類、２−メルカプトエタンスルホン酸、３−メルカプトプロパンスルホン酸、４−メルカプトブタンスルホン酸、５−メルカプトペンタンスルホン酸、６−メルカプトヘキサンスルホン酸等のω−メルカプト脂肪族スルホン酸類、上記したω−メルカプト脂肪酸類、メルカプト基を分子内に１つ有するポリカルボン酸類、及びω−メルカプト脂肪族スルホン酸類をアンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン等の低級アミン類と反応させて得られるメルカプト基を分子内に１つ有する酸アミド類、上記したω−メルカプトアルコール類、及びメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類の水酸基をカーバメート化して得られるメルカプト基を分子内に１つ有するカーバメート類、上記したω−メルカプトアルキルアミン類、及びメルカプト基を分子内に１つ有するポリアミン類を尿素化して得られるメルカプト基を分子内に１つ有する尿素類、上記したω−メルカプトアルコール類、及びメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類の水酸基をチオカーバメート化して得られるメルカプト基を分子内に１つ有するチオカーバメート類、上記したω−メルカプトアルキルアミン類、及びメルカプト基を分子内に１つ有するポリアミン類をチオ尿素化して得られるメルカプト基を分子内に１つ有するチオ尿素類、片末端にメルカプト基を有するポリエチレンオキシド、片末端にメルカプト基を有するポリプロピレンオキシド等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルキレンオキシド類、あるいは、１−メルカプト−１−デオキシグルクロン酸、２−メルカプト−２−デオキシグルクロン酸、３−メルカプト−３−デオキシグルクロン酸、４−メルカプト−４−デオキシグルクロン酸等のメルカプト基を分子内に１つ有する糖カルボン酸類、１−メルカプト−１−デオキシグルコサミン、１−メルカプト−１−デオキシガラクトサミン、１−メルカプト−１−デオキシマンノサミン、１−メルカプト−１−デオキシフコサミン、１−メルカプト−１−デオキシキシロサミン、１−メルカプト−１−デオキシリボサミン、１−メルカプト−１−デオキシアラビノサミン、３−メルカプト−３−デオキシグルコサミン、４−メルカプト−４−デオキシグルコサミン、６−メルカプト−６−デオキシグルコサミン、４−Ｏ−（６−メルカプト−６−デオキシグルコシル）グルコサミン等のメルカプト基を分子内に１つ有するアミノデオキシ糖類、上記したω−メルカプトアルコール類、メルカプト基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類、ω−メルカプトアルキルアミン類、及びメルカプト基を分子内に１つ有するポリアミン類等の水酸基あるいはアミノ基の一部あるいは全部をアセチル基等でエステル化したもの、システイン、エチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）やジエチレントリアミン５酢酸（ＤＴＰＡ）あるいは１，４，７，１０−トリ（アセティックアシッド）テトラアザシクロドデカン（ＤＯＴＡ）等のポリアミノカルボン酸の１つのカルボキシル基がメルカプト基に変換されたもの等の１つのメルカプト基を有するアミノカルボン酸類等、複数の親水性基を有する化合物等が挙げられる。
【００３８】
親水性配位子でニトリル基を分子内に１つ有する化合物の具体例としては、２−シアノエタノール、３−シアノ−ｎ−プロパノール、４−シアノ−ｎ−ブタノール、５−シアノ−ｎ−ペンタノール、６−シアノ−ｎ−ヘキサノール等の炭素数６以下のω−シアノアルコール類、２−ヒドロキシメチル−３−シアノ−ｎ−プロパノール、ビス（２−ヒドロキシメチル）−３−シアノ−ｎ−プロパノール、１−シアノ−１−デオキシグルコース、１−シアノ−１−デオキシガラクトース、１−シアノ−１−デオキシマンノース、１−シアノ−１−デオキシフコース、１−シアノ−１−デオキシキシロース、１−シアノ−１−デオキシリボース、１−シアノ−１−デオキシアラビノース、２−シアノ−２−デオキシグルコース、３−シアノ−３−デオキシグルコース、４−シアノ−４−デオキシグルコース、６−シアノ−６−デオキシグルコース、６−シアノ−６−デオキシガラクトース、６−シアノ−６−デオキシマンノース、４−Ｏ−（６−シアノ−６−デオキシグルコシル）グルコース等のシアノ基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類、２−シアノエチルアミン、３−シアノ−ｎ−プロピルアミン、４−シアノ−ｎ−ブチルアミン、５−シアノ−ｎ−ペンチルアミン、６−シアノ−ｎ−ヘキシルアミン等のω−シアノアルキルアミン類、Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−（２−シアノエチル）アミン、Ｎ，Ｎ−ビス（２−アミノエチル）−Ｎ−（２−シアノエチル）アミン、Ｎ−｛２−（Ｎ’−２’−アミノエチル）アミノエチル｝−Ｎ−（２−シアノエチル）アミン、Ｎ，Ｎ−ビス｛２−（Ｎ’−２’−アミノエチル）アミノエチル｝−Ｎ−（２−シアノエチル）アミン等のシアノ基を分子内に１つ有するポリアミン類、シアノ酢酸、３−シアノプロピオン酸、４−シアノブタン酸、５−シアノペンタン酸、６−シアノヘキサン酸等のω−シアノ脂肪酸類、２−シアノエタンスルホン酸、３−シアノプロパンスルホン酸、４−シアノブタンスルホン酸、５−シアノペンタンスルホン酸、６−シアノヘキサンスルホン酸等のω−シアノ脂肪族スルホン酸類、上記したω−シアノ脂肪酸類、及びω−シアノ脂肪族スルホン酸類をアンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン等の低級アミン類と反応させて得られるシアノ基を分子内に１つ有する酸アミド類、上記したω−シアノアルコール類、及びシアノ基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類の水酸基をカーバメート化して得られるシアノ基を分子内に１つ有するカーバメート類、上記したω−シアノアルキルアミン類、及びシアノ基を分子内に１つ有するポリアミン類を尿素化して得られるシアノ基を分子内に１つ有する尿素類、上記したω−シアノアルコール類、及びシアノ基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類の水酸基をチオカーバメート化して得られるシアノ基を分子内に１つ有するチオカーバメート類、上記したω−シアノアルキルアミン類、及びシアノ基を分子内に１つ有するポリアミン類をチオ尿素化して得られるシアノ基を分子内に１つ有するチオ尿素類、片末端にシアノ基を有するポリエチレンオキシド、片末端にシアノ基を有するポリプロピレンオキシド等のシアノ基を分子内に１つ有するポリアルキレンオキシド類、あるいは、１−シア���−１−デオキシグルクロン酸、２−シアノ−２−デオキシグルクロン酸、３−シアノ−３−デオキシグルクロン酸、４−シアノ−４−デオキシグルクロン酸等のシアノ基を分子内に１つ有する糖カルボン酸類、１−シアノ−１−デオキシグルコサミン、１−シアノ−１−デオキシガラクトサミン、１−シアノ−１−デオキシマンノサミン、１−シアノ−１−デオキシフコサミン、１−シアノ−１−デオキシキシロサミン、１−シアノ−１−デオキシリボサミン、１−シアノ−１−デオキシアラビノサミン、３−シアノ−３−デオキシグルコサミン、４−シアノ−４−デオキシグルコサミン、６−シアノ−６−デオキシグルコサミン、４−Ｏ−（６−シアノ−６−デオキシグルコシル）グルコサミン等のシアノ基を分子内に１つ有するアミノデオキシ糖類、上記したω−シアノアルコール類、シアノ基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類、ω−シアノアルキルアミン類、及びシアノ基を分子内に１つ有するポリアミン類等の水酸基あるいはアミノ基の一部あるいは全部をアセチル基等でエステル化したもの、エチレンジアミン４酢酸やジエチレントリアミン５酢酸等のポリアミノカルボン酸の１つのカルボキシル基がシアノ基に変換されたもの等の１つのシアノ基を有するアミノカルボン酸類等、複数の親水性基を有する化合物等が挙げられる。
【００３９】
上記したその他の０価の遷移金属に対する親和性を有する官能基についても、ここに例示した非イオン性親水性配位子の構造例に準じて好ましい具体的な例、例えばシスチンのようなジスルフィド基を有するアミノ酸を容易に想定できるのは言うまでもない。
【００４０】
上記の例示された親水性配位子の具体例のうち、造影剤用途に適したものとしては、２−メルカプトエタノール、３−メルカプト−ｎ−プロパノール、４−メルカプト−ｎ−ブタノール等の炭素数４以下のω−メルカプトアルコール類、ビス（２−ヒドロキシメチル）−３−メルカプト−ｎ−プロパノール、１−メルカプト−１−デオキシグルコース、１−メルカプト−１−デオキシガラクトース、１−メルカプト−１−デオキシマンノース、１−メルカプト−１−デオキシフコース、１−メルカプト−１−デオキシキシロース、１−メルカプト−１−デオキシリボース、１−メルカプト−１−デオキシアラビノース、６−メルカプト−６−デオキシグルコース、６−メルカプト−６−デオキシガラクトース、６−メルカプト−６−デオキシマンノース等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類、メルカプト酢酸、３−メルカプトプロピオン酸、４−メルカプトブタン酸等のω−メルカプト脂肪酸類、チオリンゴ酸、チオクエン酸等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリカルボン酸類、片末端にメルカプト基を有するポリエチレンオキシド等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルキレンオキシド類、あるいは、１−メルカプト−１−デオキシグルクロン酸、４−メルカプト−４−デオキシグルクロン酸等のメルカプト基を分子内に１つ有する糖カルボン酸類等が挙げられ、中でも２−メルカプトエタノール、３−メルカプト−ｎ−プロパノール等のω−メルカプトアルコール類、ビス（２−ヒドロキシメチル）−３−メルカプト−ｎ−プロパノール、１−メルカプト−１−デオキシグルコース、１−メルカプト−１−デオキシガラクトース、６−メルカプト−６−デオキシグルコース、６−メルカプト−６−デオキシガラクトース等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類、片末端にメルカプト基を有するポリエチレンオキシド等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルキレンオキシド類等が更に好ましい。
【００４１】
造影剤用途に好ましい遷移金属と非イオン性親水性配位子の組み合わせの例としては、鉄、コバルト、ニッケル、銅、銀、ガドリニウム、白金、及び金からなる群から任意に選ばれる遷移金属と、２−メルカプトエタノール、３−メルカプト−ｎ−プロパノール等のω−メルカプトアルコール類、ビス（２−ヒドロキシメチル）−３−メルカプト−ｎ−プロパノール、１−メルカプト−１−デオキシグルコース、１−メルカプト−１−デオキシガラクトース、６−メルカプト−６−デオキシグルコース、６−メルカプト−６−デオキシガラクトース等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルコール類や糖類、片末端にメルカプト基を有するポリエチレンオキシド等のメルカプト基を分子内に１つ有するポリアルキレンオキシド類からなる群から任意に選ばれる非イオン性親水性配位子との組み合わせが挙げられ、中でも、金の使用が安全性と造影効果の点で最適である。
【００４２】
本発明の金属微粒子と親水性配位子の混合物の製造方法は特に制限がないが、以下のような複合体として作製すたものが好ましい。相当する金属陽イオンの塩と配位子とを同時に溶解し、該陽イオンを０価の金属に変換するために適当な還元剤を作用させて製造する。かかる金属陽イオンの対陰イオンは、上記の還元剤の作用で生成するプロトンとともに酸を形成した場合にこれが揮発性あるいは分解性となるものが特に好適である。これは、蒸留等により該対陰イオンを容易に除去できるからである。かかる対陰イオンとしては塩化物イオン、臭化物イオン、沃化物イオン等のハロゲン化物イオン、蟻酸イオン、酢酸イオン、蓚酸イオン等の脂肪酸イオン、炭酸イオン、炭酸水素イオン等が挙げられる。
【００４３】
また、上記の還元剤としては、水溶性かつ人体に対する毒性の低いものであるのが望ましい。これは、かかる還元剤は目的とする金属微粒子錯体からの除去が困難な場合があるためである。即ち、該錯体とともに人体に対して使用しても差し支えないことが望ましい。かかる条件を満たす好適な還元剤としては、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール類、クエン酸、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、ビタミンＥ等の酸化され易い有機酸類、システイン等の酸化され易いアミノ酸、ヒドロキノン、トコールやトコフェロール類（あるいはビタミンＥ）等の酸化されてキノン構造となり易いフェノール類等が例示できる。このうち特に好ましいのはエタノール、クエン酸、アスコルビン酸、ビタミンＥ、システインである。
【００４４】
上記の還元剤を使用する製造方法の反応溶媒としては、水、あるいはメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール類等の水溶性溶媒、あるいはこれらを含む混合溶媒が好適である。かかる溶媒系には、必要に応じて適当な添加剤、例えば界面活性剤、酸化防止剤、塩類等を共存させても構わない。
【００４５】
本発明のリポソーム複合体を造影剤として用いるには、静脈内投与などの非経口投与の方法が用いられる。
【００４６】
造影剤中のリポソームの濃度は、リポソーム中の金属微粒子量、該造影剤の性質、意図する最終生成物の投与経路及び臨床上の指標といった因子により、任意に設定することができる。典型的な金属微粒子量の含有量は５〜９０ｗｔ％、好ましくは２０〜７０ｗｔ％である。
【００４７】
本発明の造影剤は、投与後にリポソームが体内に安定に維持されるように、好ましくは体内の浸透圧に対して等張の溶液または懸濁液の形でリポソーム中に封入される。媒質として、水、緩衝液、例えばＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液等を使用することができる。  室温での好ましいｐＨ範囲は６．５〜８．５、さらに好ましくは６．８〜７．８である。多ヒドロキシル基を有する水溶性非イオン性ヨウド化合物である場合、緩衝液は好ましくは、米国特許第４２７８６５４号に記載されているような負の温度係数を有するものである。アミン緩衝液は要求される性質を持ち好ましくはＴＲＩＳである。このタイプの緩衝液はオートクレープ温度において低いｐＨを有し、このことがオートクレープ中のＸ線造影剤の安定性を増し、他方室温においては生理的に許容されるｐＨに戻る。
【００４８】
等張の溶液または懸濁液を得るためには、等張液を提供する濃度で造影剤を媒質中に溶解または懸濁させる。例えば造影剤の溶解性が低いために造影剤が単独では等張液を提供できない場合、等張溶液が形成されるように他の非毒性水溶性物質、例えば塩化ナトリウムの如き塩類、マンニトール、グルコース、ショ糖、ソルビトール等の糖類を媒質に添加することができる。
【００４９】
本発明の造影剤において、ポリエチレングリコールを必要に応じて含有させることができる。脂質成分は肝臓に貯まり易いので肝臓の造影を目的とする場合は、ポリエチレングリコールを使用しなくて良いが、他の臓器の造影の場合は、ポリエチレングリコールの使用により肝臓に集まり難くなるためポリエチレングリコールの使用が好ましい。ポリエチレングリコールはオキシエチレン単位が１０〜３５００のポリエチレングリコールであれば良い。また、使用する場合の使用量はリポソームを構成する脂質に対し、０．１〜３０質量％含めば良く、好ましくは１〜１５質量％程度含めば良い。
【００５０】
本発明の金属微粒子を含むリポソーム複合体に赤外光を照射し、リポソームを含む部分を発熱させることができる。赤外光としては、近赤外、遠赤外のどちらも任意で使用できるが、好ましくは近赤外光で、さらに好ましくは６００〜９００ｎｍである。光源は特に限定されないが、６００〜９００ｎｍの近赤外領域の高出力光源が安価に得られる半導体レーザー例えば、シャープ製ＬＴ０２４ＭＤ（７８０ｎｍ、２０ｍＷ）、ＬＴ０１５ＭＦＯ（８３２ｎｍ、３０ｍＷ）、浜松ホトニクス社製Ｌ２３７６（９０４ｎｍ、１０Ｗ）、ＮＥＣ社製ＮＤＬ３２００（６７０ｎｍ、３ｍＷ）等を使用することができる。
【００５１】
本発明の金属微粒子を含むリポソーム複合体に赤外光を照射し、リポソームを含む部分を加熱することによって、リポソーム部分を破壊することができる、加熱技術としては、上記発熱方法に記載の技術を採用できる。
【００５２】
本発明のリポソームを造影剤として用いる場合は、一般に所望の造影効果が副作用を伴うことなく得られる投与量で投与され、造影目的に応じて任意の量を用いることができる。一般にはおおよそ一回の診断につき、体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは１ｍｇ〜０．４ｇである。
【実施例】
【００５３】
以下、実施例を挙げて本発明を例証する。
比較例１
超純水で調整した１％塩化金酸（ＨＡｕＣｌ４・４Ｈ２Ｏ）及びクエン酸ナトリムを１００ｍｌの沸騰水にそれぞれ１ｍｌ、１．５ｍｌ加え、５分間加熱後２００ｍＭ炭酸カリウムでｐＨ７．０に調整し、金コロイド液を得た。得られた金コロイド液１０ｍｌに特開平７−４８４４９号の実施例３の方法により合成したＨＳ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｈ（ｎ＝５７）を１．２５ｇ添加し撹拌しながら６０℃まで一旦昇温しその後放冷しながら約２時間撹拌を続けた。その後、遠心分離を行い、上積み液を取り除き、等張グルコース液を加えて０．５ｍｇ金／ｍｌの濃度とし超音波をかけて分散し、末端にメルカプト基を有するポリエチレンと金コロイドとの超微粒子複合体を含む造影剤を作成した。
【００５４】
この液を転移性腫瘍を持つマウスに静脈内注射し、Ｘ線画像で観察した。腫瘍部分以外の造影レベルは時間と共に減少する速度と、腫瘍部分の減少速度で、多少差があり腫瘍部分の方が早く造影レベルが落ちた。
【００５５】
比較例２
超純水で調整した塩化金酸（ＨＡｕＣｌ４・４Ｈ２Ｏ）水溶液（濃度５．６ｍＭ）２０ｍｌを窒素雰囲気下、撹拌しながら加熱還流させ、ここに３−メルカプトプロピオン酸水溶液（濃度１６．８ｍＭ）２０ｍｌに２重量％のクエン酸を溶かしたものを加えた。その後、加熱還流を３時間継続した。得られた均一溶液は炭酸カリウム溶液でｐＨ７．０に調整し、さらに等張グルコース液を加えて０．３ｍｇ金／ｍｌの濃度とし超音波をかけて分散し、メルカプトプロピオン酸と金コロイドとの超微粒子複合体を含む造影剤を作成した。
【００５６】
この液を転移性腫瘍を持つマウスに静脈内注射し、Ｘ線画像で観察した。腫瘍部分以外の造影レベルは時間と共に減少する速度と、腫瘍部分の減少速度で、多少差があり腫瘍部分の方が早く造影レベルが落ちた。
【００５７】
実施例１
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）１重量部と二酸化炭素４００重量部をステンレス製オートクレーブにエタノール７０重量部と共に仕込み、オートクレーブ内を６０℃３００ｋｇ／ｃｍ２にして撹拌し、超臨界二酸化炭素中にＤＰＰＣを溶解させた。超臨界二酸化炭素溶液を撹拌しながら、比較例１で作成した造影剤液１００重量部を定量ポンプで連続的に注入した。その後、系内を減圧し二酸化炭素を排出し、金コロイドを含有するリポゾームの分散液を得た。
【００５８】
得られた造影剤中のリポゾームの粒径は大塚電子ＥＬＳ８００等で測定し、重量換算の粒子径分布で最も出現頻度の高い粒径を中心粒径とした。造影剤中のリポソームの中心粒径は、１３０ｎｍであった。
【００５９】
また、得られた造影剤を凍結後破砕し破砕面をカーボンで蒸着し得られたカーボン膜を透過型電子顕微鏡で観察した。できあがったリポソームは単一膜のリポソームであった。
【００６０】
この液を転移性腫瘍を持つマウスに静脈内注射し、Ｘ線画像で観察した。腫瘍部分以外では時間と共に造影レベルは減少したが、腫瘍部分では造影レベルが持続した。
【００６１】
実施例２
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）１重量部と二酸化炭素４００重量部をステンレス製オートクレーブにエタノール７０重量部と共に仕込み、オートクレーブ内を６０℃３００ｋｇ／ｃｍ２にして撹拌し、超臨界二酸化炭素中にＤＰＰＣを溶解させた。超臨界二酸化炭素溶液を撹拌しながら、比較例２で作成した造影剤液を定量ポンプで連続的に注入した。その後、系内を減圧し二酸化炭素を排出し、金コロイドを含有するリポゾームの分散液を得た。
【００６２】
得られた造影剤中のリポゾームの粒径は大塚電子ＥＬＳ８００等で測定し、重量換算の粒子径分布で最も出現頻度の高い粒径を中心粒径とした。造影剤中のリポソームの中心粒径は、１３０ｎｍであった。
【００６３】
また、得られた造影剤を凍結乾燥し透過型電子顕微鏡で観察した。できあがったリポソームは単一膜のリポソームであった。
【００６４】
この液を転移性腫瘍を持つマウスに静脈内注射し、Ｘ線画像で観察した。腫瘍部分以外では時間と共に造影レベルは減少したが、腫瘍部分では造影レベルが持続した。
【００６５】
実施例３
超純水で調整した１％塩化金酸（ＨＡｕＣｌ４・４Ｈ２Ｏ）及びクエン酸ナトリムを１００ｍｌの沸騰水にそれぞれ１ｍｌ、１．５ｍｌ加え、５分間加熱後２００ｍＭ炭酸カリウムでｐＨ７．０に調整し、金コロイド液を得た。得られた液は炭酸カリウム溶液でｐＨ７。０に調整し、さらに等張グルコース液を加えて０．３ｍｇ金／ｍｌの濃度とし超音波をかけて分散し、メルカプトプロピオン酸と金コロイドとの超微粒子複合体を含む造影剤を作成した。
【００６６】
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）１重量部と二酸化炭素４００重量部をステンレス製オートクレーブにエタノール７０重量部と共に仕込み、オートクレーブ内を６０℃３００ｋｇ／ｃｍ２にして撹拌し、超臨界二酸化炭素中にＤＰＰＣを溶解させた。超臨界二酸化炭素溶液を撹拌しながら、作成した造影剤液を定量ポンプで連続的に注入した。その後、系内を減圧し二酸化炭素を排出し、金コロイドを含有するリポゾームの分散液を得た。
【００６７】
得られた造影剤中のリポゾームの粒径は大塚電子ＥＬＳ８００等で測定し、重量換算の粒子径分布で最も出現頻度の高い粒径を中心粒径とした。造影剤中のリポソームの中心粒径は、１３０ｎｍであった。
【００６８】
また、得られた造影剤を凍結乾燥し透過型電子顕微鏡で観察した。できあがったリポソームは単一膜のリポソームであった。
【００６９】
この液を転移性腫瘍を持つマウスに静脈内注射し、Ｘ線画像で観察した。腫瘍部分以外では時間と共に造影レベルは減少したが、腫瘍部分では造影レベルが持続した。
【００７０】
実施例４
ハロゲン化銀写真感光材料のハレーション防止に用いるイエローフィルター層に用いる特開平５−２２４２記載のコロイド銀を希釈し、金属銀含有量１％の銀コロイド液を調整した。
得られた液は炭酸カリウム溶液でｐＨ７．０に調整し、さらに等張グルコース液を加えて１ｍｇ銀／ｍｌの濃度とし超音波をかけて分散し、特開平７−４８４４９号の実施例３の方法により合成したＨＳ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｈ（ｎ＝５７）を１ｍｌあたり２ｍｇ添加し撹拌しながら６０℃まで一旦昇温しその後放冷しながら約２時間撹拌を続けた。ポリエチレンオキシド基を有する化合物と銀コロイドとの超微粒子複合体を含む造影剤を作成した。
【００７１】
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）１重量部と二酸化炭素４００重量部をステンレス製オートクレーブにエタノール７０重量部と共に仕込み、オートクレーブ内を６０℃３００ｋｇ／ｃｍ２にして撹拌し、超臨界二酸化炭素中にＤＰＰＣを溶解させた。超臨界二酸化炭素溶液を撹拌しながら、作成した造影剤液を定量ポンプで連続的に注入した。その後、系内を減圧し二酸化炭素を排出し、金コロイドを含有するリポゾームの分散液を得た。
【００７２】
得られた造影剤中のリポゾームの粒径は大塚電子ＥＬＳ８００等で測定し、重量換算の粒子径分布で最も出現頻度の高い粒径を中心粒径とした。造影剤中のリポソームの中心粒径は、１３０ｎｍであった。
【００７３】
また、得られた造影剤を凍結乾燥し透過型電子顕微鏡で観察した。できあがったリポソームは単一膜のリポソームであった。
【００７４】
この液を転移性腫瘍を持つマウスに静脈内注射し、Ｘ線画像で観察した。腫瘍部分以外では時間と共に造影レベルは減少したが、腫瘍部分では造影レベルが持続した。
【００７５】
実施例５
比較例２の３−メルカプトプロピオン酸水溶液（濃度１６．８ｍＭ）の替わりに、２−シアノエタノールを用いた以外は同様にして金コロイド溶液を作成した。ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）１重量部と二酸化炭素４００重量部をステンレス製オートクレーブにエタノール７０重量部と共に仕込み、オートクレーブ内を６０℃３００ｋｇ／ｃｍ２にして撹拌し、超臨界二酸化炭素中にＤＰＰＣを溶解させた。超臨界二酸化炭素溶液を撹拌しながら、作製した造影剤液を定量ポンプで連続的に注入した。その後、系内を減圧し二酸化炭素を排出し、金コロイドを含有するリポゾームの分散液を得た。
【００７６】
得られた造影剤中のリポゾームの粒径は大塚電子ＥＬＳ８００等で測定し、重量換算の粒子径分布で最も出現頻度の高い粒径を中心粒径とした。造影剤中のリポソームの中心粒径は、１１０ｎｍであった。また、得られた造影剤を凍結乾燥し透過型電子顕微鏡で観察した。できあがったリポソームは単一膜のリポソームであった。
【００７７】
実施例６
比較例１のポリオキシエチレン化合物の替わりに、３−メルカプト−ｎ−プロパノールを用いた以外は同様にして金コロイドを含む造影剤を作製した。ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）１重量部と二酸化炭素４００重量部をステンレス製オートクレーブにエタノール７０重量部と共に仕込み、オートクレーブ内を６０℃３００ｋｇ／ｃｍ２にして撹拌し、超臨界二酸化炭素中にＤＰＰＣを溶解させた。超臨界二酸化炭素溶液を撹拌しながら、作製した造影剤液を定量ポンプで連続的に注入した。その後、系内を減圧し二酸化炭素を排出し、金コロイドを含有するリポゾームの分散液を得た。
【００７８】
得られた造影剤中のリポゾームの粒径は大塚電子ＥＬＳ８００等で測定し、重量換算の粒子径分布で最も出現頻度の高い粒径を中心粒径とした。造影剤中のリポソームの中心粒径は、１５０ｎｍであった。また、得られた造影剤を凍結乾燥し透過型電子顕微鏡で観察した。できあがったリポソームは単一膜のリポソームであった。
【００７９】
実施例７
実施例１について、オートクレーブ内の温度および圧力及び減圧速度を変えリポソームの中心粒径を６０ｎｍ、９０ｎｍ、１７０ｎｍ、２５０ｎｍと変えた以外は同様にして造影剤を作製した。  この液を転移性腫瘍を持つマウスに静脈内注射し、Ｘ線画像で観察した。２５０ｎｍのもの以外は、腫瘍部分以外では時間と共に造影レベルは減少したが、腫瘍部分では造影レベルが持続し６０ｎｍでは持続時間が短かった。また、２５０ｎｍのものは、腫瘍部分以外の造影レベルは時間と共に減少する速度と、腫瘍部分の減少速度で、明らかな差があり腫瘍部分の方が早く造影レベルが落ちた。
【００８０】
実施例８
比較例１及び実施例１〜４においてＸ線造影直後に、チタンサファイアレーザーを用い、マウスにレーザー光を均一に照射した。照射出力はマウスの皮膚表面付近で５０μＷ／ｃｍ２になるよう調整し、照射時間は腫瘍部分の温度上昇を確認できる時間とした。実施例１〜４に使用したマウスの場合、腫瘍部分の方が他の部分に比較し温度が高いの対し、比較例１に使用したマウスでは温度差が無かった。
【００８１】
実施例９
実施例１で得られたリポソームを含有する造影剤液を赤外線ヒーターで、一旦４５℃まで加熱し、その後室温で放冷した。
得られた液（造影剤）を凍結後破砕し破砕面をカーボンで蒸着し得られたカーボン膜を透過型電子顕微鏡で観察したが、リポソームは観察できなかった。