(57)【要約】【課題】      安価で品質安定性に優れ、動物細胞増殖促進能を有する油脂組成物及びこの油脂組成物を含有する動物細胞培養用培地を提供すること。【解決手段】  トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド及び遊離脂肪酸を含む油脂組成物であって、γ−リノレン酸及びγ−リノレン酸グリセリドから選ばれる一種以上を含有する動物細胞増殖促進剤油脂組成物、及びこの油脂組成物を含有する動物細胞培養用培地である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド及び遊離脂肪酸を含む油脂組成物であって、γ−リノレン酸及びγ−リノレン酸グリセリドから選ばれる一種以上を含有する動物細胞増殖促進剤油脂組成物。
【請求項２】
前記トリグリセリド、ジグリセリド及びモノグリセリドの含有割合が、グリセリド全量に対してそれぞれ１０〜７９質量％、２０〜７０質量％及び１〜７０質量％である請求項１に記載の動物細胞増殖促進剤油脂組成物。
【請求項３】
前記トリグリセリド、ジグリセリド及びモノグリセリドの含有割合が、グリセリド全量に対してそれぞれ１０〜７０質量％、２５〜６０質量％及び３〜６５質量％である請求項２に記載の動物細胞増殖促進剤油脂組成物。
【請求項４】
γ−リノレン酸の含有割合が、前記グリセリドを構成する脂肪酸と遊離脂肪酸の合計量に対して５質量％以上である請求項１〜３のいずれかに記載の動物細胞増殖促進剤油脂組成物。
【請求項５】
微生物体内油脂又は微生物分泌油脂の、加水分解処理又はエステル交換処理により得られるものである請求項１〜４のいずれかに記載の動物細胞増殖促進剤油脂組成物。
【請求項６】
前記微生物が、モルティエレラ（Mortierella)属菌である請求項５に記載の動物細胞増殖促進剤油脂組成物。
【請求項７】
前記微生物が、ムコール（Mucor)属菌である請求項５に記載の動物細胞増殖促進剤油脂組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の動物細胞増殖促進剤油脂組成物を含有する動物細胞培養用培地。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物細胞増殖促進能を有するγ−リノレン酸（以下、ＧＬＡと略記することがある。）やγ−リノレン酸グリセリドを含む動物細胞増殖促進剤油脂組成物、及びこの油脂組成物からなる動物細胞培養用培地に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、分子生物学の発展と相まって、動物細胞培養の必要性が著しい増加を示している。動物細胞の培養技術は、例えば、細胞融合、モノクローナル抗体の製造、ワクチンの製造等に広く使用され、研究のみでなく、疾病治療薬製造の先端技術として、社会的にも強くその発展が要請されている生物技術である。
動物細胞は、単にアミノ酸、糖分、塩類等の栄養分を含むだけの培地中では増殖せず、動物細胞を増殖させるためには、単なる栄養分以外の細胞増殖剤の存在が必要である。
従来、このような細胞増殖剤として、牛胎児血清等の各種血清が使用されている。しかし、血清中には複数の細胞増殖因子が存在し、しかも現状ではその因子の多くが未知成分であるため、その因子の含有量を測定することもできない。このため、前記血清を使用した動物細胞用培地は、培地毎に細胞増殖活性がばらつくという問題がある。また、血清の細胞増殖因子の活性は、採取する動物個体差によっても変動するため、血清の品質が一定しないという問題もある。
一方、前記血清以外にも、種々の動物細胞促進剤が開発されている。例えば、５−アミノレブリン酸（例えば、特許文献１参照）、リゾープス属菌生産物質（ＲＵ物質）（例えば、特許文献２参照）、５−ヒドロキシ−２，７−ジメトキシ−６−メチル−１，４−ナフトキノン（例えば、特許文献３参照）、オタネニンジンエキス（例えば、特許文献４参照）、フィトグリコーゲン（線維芽細胞用）（例えば、特許文献５参照）、糖（単糖、二糖）と脂肪酸の糖エステル（例えば、特許文献６参照）などの動物細胞促進剤が開発されている。しかしながら、これらの動物細胞促進剤は、生産が困難、生産コストが高い、品質が安定しない等の問題があり、安価で品質安定性に優れた動物細胞増殖促進剤の開発が望まれている。
【０００３】
【特許文献１】特開平５−４９４７２号公報
【特許文献２】特開平５−９７６８５号公報
【特許文献３】特開平５−１３７５６９号公報
【特許文献４】特開平６−２３９７５９号公報
【特許文献５】特開平１１−２５５６５７号公報
【特許文献６】特開２００３−５２３６６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、前記事情に鑑みなされたもので、安価で品質安定性に優れ、動物細胞増殖促進能を有する油脂組成物及びこの油脂組成物を含有する動物細胞培養用培地を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、動物細胞増殖促進能を有する特定の物質を含有する油脂組成物により、上記目的が達成されることを見出した。本発明はかかる知見に基づいて完成したものである。
すなわち、本発明は、トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド及び遊離脂肪酸を含む油脂組成物であって、γ−リノレン酸及びγ−リノレン酸グリセリドから選ばれる一種以上を含有する動物細胞増殖促進剤油脂組成物を提供するものである。
また、本発明は、この動物細胞増殖促進剤油脂組成物を含有する動物細胞培養用培地を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、安価で品質安定性に優れた動物細胞増殖促進剤油脂組成物、及びこの動物細胞増殖促進剤油脂組成物を含有する動物細胞培養用培地を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の動物細胞増殖促進剤油脂組成物（以下、単に「油脂組成物」と略記することがある。）の成分であるトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドを構成する脂肪酸に制限はなく、例えば炭素数２〜２４の飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸が挙げられる。好ましい脂肪酸としては、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、ペンタデセン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグレノリン酸、セロチン酸、オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、オクタデカテトラエン酸、エイコセン酸、エイコサジエン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコセン酸、ドコサジエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。
グリセリドとしては特に制限はなく、化学合成品でも植物、動物由来のものでも、微生物由来のものでも用いることができるが、入手が容易である点から、植物又は微生物由来のものが好ましい。
本発明の油脂組成物中に含まれるトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドの含有割合は、動物細胞増殖効果にばらつきが生じるのを防ぐ点から、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜７９質量％、２０〜７０質量％、１〜７０質量％が好ましい。トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドの含有割合は、より好ましくは、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜７０質量％、２５〜６０質量％、３〜６５質量％である。最も好ましくは、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜６５質量％、３０〜６０質量％、５〜６０質量％である。
このような組成のグリセリドは公知の方法で製造することができる。例えば、トリグリセリド型油脂を化学触媒又は酵素触媒を用いて、ジグリセリド、モノグリセリドに誘導する方法（例えば、特開２０００−２３６８８８、特開２０００−３３３６８８号公報参照）により製造することができる。
【０００８】
本発明の油脂組成物の有効成分であるＧＬＡは遊離脂肪酸としてのみならず、エステルとして存在してもよい。「ＧＬＡ含有量」とは、本発明の油脂組成物中のＧＬＡ誘導体を全て遊離のＧＬＡとし、グリセリドを加水分解して得られる遊離脂肪酸と、油脂組成物に存在している遊離脂肪酸の合計から算出する。例えば、ＧＬＡがエステルとして存在する場合には、このエステルを加水分解して得られる遊離のＧＬＡ量を測定すればよい。
ＧＬＡの含有量は、増殖促進の対象となる動物細胞の種類に応じて適宜調整すればよい。一般的には、動物細胞種の相違による動物細胞増殖効果のばらつきを防ぐ点から、グリセリドを構成する脂肪酸と遊離脂肪酸の合計量に対し、５質量％以上が好ましい。より好ましくは１０質量％以上、さらに好ましくは２０質量％以上である。ＧＬＡの含有量には特に上限はないが、９８質量％を超えて含有しても、動物細胞増殖効果がより向上するものでもなく、経済的な観点から９８質量％以下が好ましい。
ＧＬＡは化学的に合成して得ることもでき、ボラージ、月見草、ユキノシタ等の植物種子やスピルリナ（Spirulina)属等の藻類、カニンガメラ（Cunninghamella）属、モルティエレラ（Mortierella)属、ムコール（Mucor)属等の微生物から得ることもできる。得られたＧＬＡが誘導体である場合には、そのまま用いてもよく、加水分解処理やエステル交換処理を行ってもよい。
【０００９】
本発明の油脂組成物は、グリセリドとＧＬＡ油脂とを前記所定の割合で、公知の混合方法で混合することにより製造することができる。また、本発明の油脂組成物は、ＧＬＡを含有する微生物から、ＧＬＡを含有する微生物体内油脂又は微生物分泌油脂を抽出し、このＧＬＡ含有油脂を、加水分解処理又はエステル交換処理することにより得ることができる。
このＧＬＡ含有油脂は、ＧＬＡ含有油脂生産能を有する微生物を常法により培養することによって得ることができる。ＧＬＡ含有油脂生産能を有する微生物としては、前述したように、糸状菌や酵母、藻類など種々のものが挙げられる。例えば、γ−リノレン酸含有油脂生産能を有する微生物としては、特開昭６０−１６８３９１号公報等に記載されているモルティエレラ（Mortierella)属に属する微生物、特開昭６３−２８３５８９号公報等に記載されているムコール（Mucor)属に属する微生物、特開昭６３−１３３９９４号公報等に記載されているリゾプス（Rhizopus）属に属する微生物などが挙げられる。
より具体的には、モルティエレラ（Mortierella)属に属する微生物として、例えばモルティエレラ・イサベリナ（Mortierella isabellina）ＩＦＯ７８２４やモルティエレラ・ラマニアナ・アングリスポラ（Mortierella ramaniana var.angrispora）ＩＦＯ８１８７などが挙げられる。また、ムコール（Mucor)属に属する微生物としては、例えばムコール・シルシネロイデス（Mucor circinelloides）ＨＵＴ１１２１（ＦＥＲＭ  Ｐ−９３５９）やムコール・ジャバニクス（Mucor javanicus)ＨＵＴ１１６２（ＦＥＲＭ  Ｐ−９３６０）などが挙げられる。
【００１０】
前記微生物を培養するための培地は、前記微生物が良く生育して目的とする脂質を生産し得るものであればよく、炭素源、窒素源、無機塩類及び必要により微生物の生育に好適なアミノ酸等の成分を含むものが用いられる。炭素源としては、グルコース、デンプン、廃糖蜜等の糖類や有機酸や酢酸ナトリウムなどが使用でき、特にグルコース等の糖類が好適である。また、窒素源としては、アンモニウム塩、酵母エキス、コーンスティープリカー、ペプトンなどが挙げられる。無機塩類としては、マグネシウム塩、カルシウム塩、リン酸塩、鉄塩、銅塩などが挙げられる。
培養にあたり、炭素源や窒素源あるいはリン酸塩を、培地に最初から全量を加えた場合、微生物の生育に悪影響を及ぼすことがあるので、培養開始以降の適当な時期に一部追加することにより、γ−リノレン酸の生産性を向上させることができ、好ましい。
その他の培養条件、例えば温度、培養時間は、培地組成や目的とするγ−リノレン酸の含有率や脂質の生産性を考えて好ましい条件を設定すればよい。温度は通常２０〜３５℃程度、好ましくは２５〜３０℃、ｐＨは通常３〜７程度、好ましくは３．５〜６．５にて、通常７２〜２４０時間程度、好ましくは９６〜１６８時間行えばよい。
【００１１】
ＧＬＡを含有する脂質は、通常、微生物菌体中に蓄積されるので、常法により培養液を固液分離し、ＧＬＡを含有する脂質を含む菌体を得る。ＧＬＡの用途によってはこの菌体をそのまま用いることもできるが、さらに油脂を抽出し精製するためには、Ｂｌｉｇｈ＆Ｄｙｅｒ法、Ｆｏｌｉｃｈ法や特開昭５７−１４４９８６号公報などに記載の方法で菌体破砕、溶剤抽出を行い、目的とするＧＬＡ含有油脂を得ることができる。
以上のようにして得られたＧＬＡ含有油脂を、公知の方法により加水分解処理又はエステル交換処理することにより、本発明の油脂組成物を得ることができる。このような方法で本発明の油脂組成物を得る場合、油脂組成物におけるＧＬＡの含有割合は、油脂組成物の一部を採り、メチルエステル化の後、ガスクロマトグラフィーにより決定される（特開昭５７−１４４９８６号公報参照）。
【００１２】
本発明の油脂組成物には、本発明の効果を阻害しないものであれば、他の成分を含有させてもよい。他の成分としては、例えば、ＧＬＡ以外の前述した脂肪酸などが挙げられる。グリセリドやＧＬＡとして、植物由来、微生物由来のものを用いる場合には、植物由来、微生物由来の他の成分を含有させてもよい。
本発明の油脂組成物は、表皮角化細胞、皮膚線維芽細胞、メラノサイト、小腸上皮細胞、ヒト子宮頸部癌細胞（Hela）、肺線維芽細胞などの接着依存性細胞、リンパ球細胞、骨髄腫細胞、白血病細胞、及びある細胞と他の細胞との細胞融合によって得られたハイブリドーマ等の動物細胞の培養に用いることによって、培養時間の短縮と細胞量の増収を図ることができる。
したがって、本発明の油脂組成物は、動物細胞の増殖を要する用途であれば限定なく使用することができる。例えば、動物細胞増殖培地用添加剤、人口皮膚剤（細胞増殖用添加剤）、医薬品、食品、化粧品成分などを挙げることができる。以下、これらのの用途について説明する。
【００１３】
本発明の油脂組成物を動物細胞培養用培地に添加することにより、効率的に動物細胞を増殖させることができる。適用できる動物細胞培養用培地は、増殖させる動物細胞に適したものであれば特に限定されず、市販の基本培地であっても、また、これらを適宜改変したものであってもよい。具体的な基本培地の例として、ＭＥＭ（Minimun Essential Medium）培地、イスコフ培地、ＲＰＭ１１６４０培地、Ham's Ｆ−１２培地、ダルベッコ変法イーグル培地、ダルベッコ改変ＭＥＭ培地、１０％ＦＢＳ加イスコフ改変ダルベッコ培地が挙げられ、好ましくはダルベッコ変法イーグル培地である。これらの培地は単独で使用しても二種以上を組み合わせて使用してもよい。本発明の油脂組成物の培地への添加量は、対象動物細胞種により適宜調整すればよい。一般的に、培養液中の濃度が０．００１〜１００ｍｇ／ミリリットル程度、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ミリリットル、さらに好ましくは０．０１〜１ｍｇ／ミリリットルとなるように、本発明の油脂組成物を添加する。
【００１４】
本発明の油脂組成物を培地に加える際には、溶液として加えることが好ましい。この溶液の調製に使用する溶媒は、本発明の油脂組成物を溶解し、かつ培養液と相溶性であることが好ましい。このような溶媒としては、例えば、メタノール、ジメチルスルホキシド、アセトンなどが挙げられ、好ましくはアセトンである。これらの溶媒は単独で使用しても二種以上を組み合わせて使用してもよい。また、添加した溶媒による動物細胞への影響を抑える点から、溶媒は、培地全量に対して２質量％以下となるように使用するのが好ましい。
本発明の油脂組成物を人口皮膚生産用培地に添加したり、培養された人口皮膚に塗布又は噴射することにより、人口皮膚の早期形成や人口皮膚の増加を促すことができる。塗布又は噴射に際しては、本発明の油脂組成物を適当な溶媒に溶解させた溶液又は分散させた分散液を、塗布又は噴射してもよい。溶媒としては前記と同様のものを用いることができる。人口皮膚生産用培地の場合、溶媒は、前記と同様に培地全量に対して２質量％以下となるように使用するのが好ましい。また、前記溶液又は分散液の場合、溶媒は、培養された人口皮膚に悪影響を与えない範囲で塗布又は噴霧することができる。
本発明の油脂組成物を、医薬品、食品、化粧品の成分として用いた場合、動物細胞増殖促進による各種効果が期待できる。本発明の油脂組成物を医薬品などに混合するには、公知の方法を用いることができる。
【実施例】
【００１５】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
下記実施例及び比較例で用いた原料油脂及び油脂組成物の脂肪酸組成は、特開昭５７−１４４８９６号公報に記載されている方法によりメチルエステル化し、ガスクロマトグラフィーにより測定した。また、実施例及び比較例の油脂組成物の構成グリセリド組成は、イアトロスキャン法（Ｊ．Ｊｐｎ．Ｏｉｌ  Ｃｈｅｍ．ｓｏｃ．，Ｖｏｌ３５，Ｎｏ．８，６２５−６３１（１９８６））に基づき、薄層クロマトグラフ（ＴＬＣ）と水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）を組み合わせたＩａｔｒｏｓｃａｎ  ＴＨ−１０型（ヤトロン社製）により求めた。すなわち、試料溶液１マイクロリットルをシリカゲル薄層棒（クロマロッド  Ｓ−１１１、ヤトロン社製）の片側に滴下した後、溶媒展開を行い、溶媒展開後、シリカゲル薄層棒を前記分析機ＴＨ−１０型に取り付け、下記条件で分析した。
【００１６】
試料溶液濃度：２０ｍｇ／ミリリットルアセトン
ＴＬＣ展開溶媒及び展開条件
展開溶媒：ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸＝７０／３０／１（容量比）
展開距離：１０．０ｃｍ
イアトロスキャン分析条件
水素流量    ：１６０ミリリットル／ｍｉｎ
空気流量    ：２．０ミリリットル／ｍｉｎ
スキャン速度：３０ｓｅｃ／ＳＣＡＮ
検出器      ：水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）
【００１７】
実施例１（油脂組成物の製造）
表１に示す脂肪酸組成を有するＧＬＡ含有油脂（出光興産（株）製、商品名：グラノイルＨＧＣ、ＧＬＡ：２５．９質量％）１００ｇ及び蒸留水１００ｇを含む反応系に、Rhizopus niveus 産生リパーゼ（天野エンザイム（株）製、ニューラーゼＦ３Ｇ、３０，０００Ｕ／ｇ）を２０，０００ユニット加え、攪拌しながら３０℃で４８時間反応させた。
【００１８】
【表１】
2005198648.tif 000002
【００１９】
得られた分解反応物に１０質量％水酸化ナトリウム水溶液を添加して分解反応物のｐＨを８〜９に調整した後、ジエチルエーテル２００ミリリットルを用いて分解反応物中の油分を抽出し、水洗し、脱水後エーテルを除去して油分（油脂組成物）５６．４ｇを得た。
この油脂組成物の一部を用いて前記方法により構成グリセリド組成分析を行い、また、油脂組成物の一部をメチルエステル化した後、ガスクロマトグラフィーで脂肪酸組成を分析した。その結果を表３に示す。なお、表３において、例えばＣ１６：０は、炭素数１６で、二重結合を有しない脂肪酸を意味し、Ｃ１８：３は、炭素数１８で、二重結合を３個有する脂肪酸を意味する。
【００２０】
実施例２（油脂組成物の製造）
実施例１で用いたものと同じＧＬＡ含有油脂１００ｇに、水３ｇ、グリセリン３０ｇ及びAlcaligenes sp. 産生リパーゼ（名糖産業（株）製、リパーゼＰＬ、９０，０００Ｕ／ｇ）を３００，０００ユニット加え、攪拌しながら３０℃で７２時間反応させた。
得られた分解反応物に１０質量％水酸化ナトリウム水溶液を添加して分解反応物のｐＨを８〜９に調整した後、ジエチルエーテル２００ミリリットルを用いて分解反応物中の油分を抽出し、水洗し、脱水後エーテルを除去して油分（油脂組成物）８７．９ｇを得た。
この油脂組成物の一部を用いて前記方法により構成グリセリド組成分析を行い、また、油脂組成物の一部をメチルエステル化した後、ガスクロマトグラフィーで脂肪酸組成を分析した。その結果を表３に示す。
【００２１】
実施例３（油脂組成物の製造）
実施例１において、ＧＬＡ含有油脂として、表２に示す脂肪酸組成を有するＧＬＡ含有油脂（出光興産（株）製、商品名：グラノイルＣＳ、ＧＬＡ：７．９質量％）を用いた以外は、実施例１と同様の酵素処理及び抽出により油脂組成物を得た。
【００２２】
【表２】
2005198648.tif 000003
【００２３】
得られた油脂組成物の分析結果を表３に示す。
比較例１（油脂組成物の製造）
実施例１において、ＧＬＡ含有油脂を用いる代わりに、ＧＬＡ酸を含まないサフラワー油（ＳＩＧＭＡ社製）を用いた以外は、実施例１と同様の処理を行い、油脂組成物を得た。得られた油脂組成物の分析結果を表３に示す。
【００２４】
【表３】
2005198648.tif 000004
【００２５】
実施例４（細胞増殖試験）
実施例１〜３及び比較例１で得られた油脂組成物の、正常ヒト表皮角化細胞に対する増殖促進効果を評価した。
正常ヒト表皮角化細胞（三光純薬（株）製、Ｃｒｙｏ  ＮＨＥＫ−Ｎｅｏ：新生児由来）を、ブレットキットＫＭＧ基礎培地（三光純薬（株）製）５００ミリリットルに付属の牛脳下垂体抽出液２ミリリットル、上皮成長因子（ｈＥＧＦ）０．５ミリリットル及びインシュリン０．５ミリリットル添加した試験培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ2存在下で４〜７日間培養し、７０〜９０％のサブコンフルエントになったものを増殖試験に用いた。
増殖試験は、９６ウエルマイクロプレートを用い、細胞密度３．５×１０3ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌで、正常ヒト表皮角化細胞（三光純薬（株）製、Ｃｒｙｏ  ＮＨＥＫ−Ｎｅｏ：新生児由来）を播種し、ブレットキットＫＭＧ基礎培地（三光純薬（株）製）５００ミリリットルに付属の牛脳下垂体抽出液２ミリリットル、上皮成長因子（ｈＥＧＦ）０．０２５ミリリットル及びインシュリン０．５ミリリットル添加した試験培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ2存在下で６日間培養し、細胞数を測定することにより行った。
細胞数はＰｒｅｍｉｘ  ＷＳＴ−１  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（宝酒造（株）製）を用い、４５０ｎｍでの吸収をウエルリーダー（生化学工業（株）製、ＳＫ６０１型）で測定した。また、本発明の油脂組成物を含まない試験培地のみでの細胞数を基準（１００％）とし、油脂組成物を添加した場合の増殖率（％）を算出した。結果を表４に示す。
【００２６】
【表４】
2005198648.tif 000005
【００２７】
実施例５（細胞増殖及び抗体生産向上試験）
実施例１〜３及び比較例１で得られた油脂組成物のＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵細胞を由来とする培養細胞）に対する細胞増殖促進効果について評価した。増殖試験には、ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ II培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）１００ミリリットルを用いて、ＣＨＯ細胞（ＡＴＣＣ保存株：ＣＲＬ−１１３９７株）を、３７℃、５％ＣＯ2存在下で７日間静置培養したものを用いた。
増殖試験は以下のようにして行った。すなわち、ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ II培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）に実施例１〜３及び比較例１で得られた油脂組成物各々を０．１ｍｇ／ミリリットルの濃度で添加した試験培地１０ミリリットルに、ＣＨＯ細胞（ＡＴＣＣ保存株：ＣＲＬ−１１３９７株）１×１０5ｃｅｌｌを懸濁させ、インテグラセルライン（ＩＮＴＥＧＲＡ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ社製、ＣＬ−３５０）中の培養細胞スペースに添加した。また、基礎培地として、本発明の油脂組成物を添加しないＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ II培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）２００ミリリットルを、培養細胞スペースに添加した。
培地とＣＨＯ細胞を添加した上記インテグラセルラインを３７℃、５％ＣＯ2存在下で７日間静置培養した後、培養細胞スペースから細胞懸濁液１０ミリリットルを回収した。この細胞懸濁液を遠心分離し（２００Ｇ、５分間）、細胞を新しい試験培地（ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ II培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）に実施例１〜３及び比較例１で得られた油脂組成物各々を０．１ｍｇ／ミリリットルの濃度で添加した培地）に懸濁させ、これを培養細胞スペースに戻した。その後、再び３７℃、５％ＣＯ2存在下で７日間静置培養を継続した。
合計１４日間培養を行った後、細胞懸濁液全量を回収した。この細胞懸濁液中の細胞数を血球計算盤を用いて測定した後、培養上清み中のｌｇＧ抗体産生量を検疫蛍光法（ＥＬＩＳＡ法）により測定した。また、上記油脂組成物含まない基礎培地（ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ II培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製））のみで同様の試験を行った際の細胞数及びｌｇＧ抗体産生量を基準（１００％）とし、油脂組成物を添加した場合の増殖率（％）及びｌｇＧ抗体産生向上率（％）を算出した。結果を表５に示す。
【００２８】
【表５】
2005198648.tif 000006
【産業上の利用可能性】
【００２９】
本発明の動物細胞増殖促進剤油脂組成物を動物細胞の増殖促進に利用することにより、動物細胞の生産性向上、あるいは細胞の産生する有用性生理活性物質の生産性向上を図ることができる。