(57)【要約】      （修正有）【課題】無血清培地等の特殊な条件においても著しく優れた細胞接着性を発現し得る細胞接着性ポリペプチドを提供する。【解決手段】Ser Gln配列を含んでなる細胞接着性最小アミノ酸配列（Ａ）と、補助アミノ酸配列（Ｂ）とからなることを特徴とする細胞接着性ポリペプチドを用いる。（Ａ）をポリペプチドの１分子中に３〜５０個有することが好ましい。（Ｂ）をポリペプチドの１分子中に２〜５１個有することが好ましい。（Ａ）と（Ｂ）とが交互に化学結合してなる構造からなることが好ましい。（Ａ）が、Ser Gln配列、Ser Gln Gly配列及び特定のアミノ酸配列からなる群より選ばれる１種であることが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ser Gln配列を含んでなる細胞接着性最小アミノ酸配列（Ａ）と、
補助アミノ酸配列（Ｂ）とからなることを特徴とする細胞接着性ポリペプチド。
【請求項２】
細胞接着性最小アミノ酸配列（Ａ）をポリペプチドの１分子中に３〜５０個有してなる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
補助アミノ酸配列（Ｂ）をポリペプチドの１分子中に２〜５１個有してなる請求項１又は２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
細胞接着性最小アミノ酸配列（Ａ）と補助アミノ酸配列（Ｂ）とが交互に化学結合してなる構造からなる請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５】
最小アミノ酸配列（Ａ）が、Ser Gln配列、Ser Gln Gly配列、Ser Gln Gly Ala配列（１）、Ser Gln Gly Ala Gly配列（２）、Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（３）、Gly Ser Gln配列、Gly Ser Gln Gly配列（４）、Gly Ser Gln Gly Ala配列（５）、Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（６）、Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（７）、Leu Gly Ser Gln 配列（８）、Leu Gly Ser Gln Gly配列（９）、Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１０）、Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１１）、Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１２）、Gly Leu Gly Ser Gln 配列（１３）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１４）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１５）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１６）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１７）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（１８）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１９）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２０）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２１）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２２）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（２３）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（２４）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２５）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２６）及びTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２７）からなる群より選ばれる１種である請求項１〜４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチド及び基材（Ｃ）からなる細胞接着性ポリペプチド含有基材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞接着性ポリペプチドに関する。さらに詳しくは、細胞接着性を向上させる細胞接着性ポリペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞接着性最小アミノ酸配列として、Arg Gly Asp配列、Leu Asp Val配列、Arg Glu Asp Val配列（２８）、Tyr Ile Gly Ser Arg配列（２９）、Pro Asp Ser Gly Arg配列（３０）、Arg Tyr Val Val Leu Pro Arg配列（３１）、Leu Gly Thr Ile Pro Gly配列（３２）、Arg Asn Ile Ala Glu Ile Ile Lys Asp Ile配列（３３）、Ile Lys Val Ala Val配列（３４）、Leu Arg Glu配列及びAsp Gly Glu Ala 配列（３５）等が知られている（非特許文献１）。また、細胞接着性ポリペプチドとして、細胞接着性最小アミノ酸配列のArg Gly Asp配列と補助アミノ酸配列の（Gly Ala）10配列（３６）とからなるもの等が知られている（非特許文献２）。
【非特許文献１】大阪府立母子医療センター雑誌、第８巻 第１号、５８〜６６頁、１９９２年
【非特許文献２】接着、第４７巻 第８号、１６〜２３頁、２００３年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
従来の細胞接着性ポリペプチドは、無血清培地等の特殊な条件下において細胞培養する場合、細胞接着性が不十分な場合がある。本発明の目的は、無血清培地等の特殊な条件においても、著しく優れた細胞接着性を発現し得る細胞接着性ポリペプチドを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、鋭意研究を重ねてきた結果、特定のポリペプチドを使用することにより上記目的を達成することを見いだし本発明に到達した。
すなわち、本発明の細胞接着性ポリペプチドの特徴は、Ser Gln配列を含んでなる細胞接着性最小アミノ酸配列（Ａ）と、補助アミノ酸配列（Ｂ）とからなる点を要旨とする。
【発明の効果】
【０００５】
本発明の細胞接着性ポリペプチドは、細胞接着性が極めて高く、従来は接着が困難であった細胞（ＮＨＤＦ細胞等）でも基材等に効率良く接着させることができる。また、無血清培地等の特殊な条件においても、細胞接着性が極めて高い。また、熱安定性に著しく優れており、オートクレーブ等の簡便かつ安全性の高い殺菌ができる。よって、本発明の細胞接着性ポリペプチドは、牛海綿状脳症（ＢＳＥ）の危険性やウイルス感染などの観点から無血清培地を使用せざるを得ない様な細胞培養のみならず、細胞接着性が関係する研究開発、有用物質生産及び治療等に広く好ましく用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
「細胞接着性」とは、特定の最小アミノ酸配列が細胞のインテグリンレセプターに認識され細胞が基材に接着しやすくなる性質を意味する（大阪府立母子医療センター雑誌、第８巻 第１号、５８〜６６頁、１９９２年）。
【０００７】
細胞接着性最小アミノ酸配列（Ａ）は、Ser Gln配列を含んでなればよいが、他のアミノ酸を含んでもよい。また、最小アミノ酸配列（Ａ）にはSer Gln配列を２個以上含んでいてもよく、Ser Gln配列の含有個数は、１〜２０が好ましく、さらに好ましくは１〜１０、特に好ましくは１〜５である。
他のアミノ酸としては、必須アミノ酸等が含まれ、グリシン（Gly）、アラニン（Ala）、セリン（Ser）、トレオニン（Thr）、バリン（Val）、ロイシン（Leu）、イソロイシン（Ile）、システイン（Cys）、メチオニン（Met）、フェニルアラニン（Phe）、チロシン（Tyr）、プロリン（Pro）、トリプトファン（Trp）、アスパラギン（Asn）、グルタミン（Gln）、アスパラギン酸（Asp）、グルタミン酸（Glu）、アルギニン（Arg）、リジン（Lys）及びヒスチジン（His）等が挙げられる。
これらのうち、ポリペプチドの細胞接着性の観点等から、Tyr、Gly、Leu、Ser、Gln、Ala及びArgが好ましく、さらに好ましくはGly、Leu、Ser、Gln及びAlaである。
【０００８】
最小アミノ酸配列（Ａ）を構成するアミノ酸の数は、ポリペプチドの細胞接着性の観点等から、２〜４０個が好ましく、さらに好ましくは２〜２０個、特に好ましくは２〜１１個である。なお、この数には、Ser Gln配列のアミノ酸２個分が含まれている。
【０００９】
最小アミノ酸配列（Ａ）としては、ポリペプチドの細胞接着性の観点等から、Ser Gln配列、Ser Gln Gly配列、Ser Gln Gly Ala配列（１）、Ser Gln Gly Ala Gly配列（２）、Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（３）、Gly Ser Gln配列、Gly Ser Gln Gly配列（４）、Gly Ser Gln Gly Ala配列（５）、Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（６）、Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（７）、Leu Gly Ser Gln 配列（８）、Leu Gly Ser Gln Gly配列（９）、Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１０）、Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１１）、Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１２）、Gly Leu Gly Ser Gln 配列（１３）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１４）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１５）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１６）、Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１７）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（１８）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１９）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２０）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２１）、Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２２）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（２３）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（２４）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２５）、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２６）及びTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２７）等が好ましく挙げられる。
これらのうち、配列番号８、９又は２７で表されるアミノ酸配列がさらに好ましい。
【００１０】
ポリペプチドは、最小アミノ酸配列（Ａ）を１分子中に少なくとも１個有すればよいが、ポリペプチドの細胞接着性の観点等から、３〜５０個の最小アミノ酸配列（Ａ）を有することが好ましく、さらに好ましくは４〜３５個、特に好ましくは５〜２０個の最小アミノ酸配列（Ａ）を有することである。なお、ポリペプチドには２種以上の最小アミノ酸配列（Ａ）を含んでもよく、最小アミノ酸配列（Ａ）の含有種類は、１〜２０種が好ましく、さらに好ましくは１〜１０、特に好ましくは１〜５である。
【００１１】
補助アミノ酸配列（Ｂ）は、最小アミノ酸配列（Ａ）以外のアミノ酸配列が使用でき、ポリペプチドの耐熱性の観点等から、Gly 及び／又はAlaを有する配列が好ましく用いられる。
補助アミノ酸配列（Ｂ）としては、（Gly Ala）a 配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Tyr）c配列、（Gly Ala Gly Val Gly Tyr）ｄ配列、（Gly Ala Gly Tyr Gly Val）e配列、｛Asp Gly Gly (Ala)f Gly Gly Ala｝g配列、（Gly Val Pro Gly Val）h配列、（Gly）i配列、（Ala）j配列、（Gly Gly Ala）k配列、（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列、（Gly Pro Pro）ｎ配列、（Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly）ｏ配列、（Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln）ｐ配列及び／又は（Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro）ｑ配列を有する配列等が挙げられる。
なお、aは５〜１００の整数、b、ｃ、ｄ及びｅは２〜３３の整数、fは１〜１９４の整数、ｇは｛１｝〜｛２００／（６＋ｆ）｝の小数点以下を切り捨てした整数、hは２〜４０の整数、i及びjは１０〜２００の整数、kは３〜６６の整数、ｍは２〜４０の整数、ｎは３〜６６の整数、ｏは１〜２２の整数、ｐ及びｑは１〜１３の整数である。
これらのうち、（Gly Ala）a配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Tyr）c配列、（Gly Ala Gly Val Gly Tyr）d配列、（Gly Ala Gly Tyr Gly Val）e、｛Asp Gly Gly (Ala)f Gly Gly Ala｝g配列、（Gly Val Pro Gly Val）h配列、（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列及び／又は（Gly Pro Pro）ｎ配列を有するものが好ましく、さらに好ましくは（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列、（Gly Val Pro Gly Val）h配列、（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列及び／又は（Gly Pro Pro）ｎ配列を有するもの、特に好ましくは（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列を有するものである。
【００１２】
補助アミノ酸配列（Ｂ）を構成するアミノ酸の数は、３〜１０００個が好ましく、さらに好ましくは５〜５００個、特に好ましくは１０〜２００個、最も好ましくは１５〜１００個である。
【００１３】
好ましく用いられる補助アミノ酸配列（Ｂ）としては、以下の配列番号で表されるアミノ酸配列等が含まれる。
（Gly Ala）a配列を有するものとしては、配列番号（３７）〜（３９）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列を有するものとしては、配列番号（４０）〜（４２）、（８２）、（８４）及び（８８）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Ala Gly Tyr）c配列を有するものとしては、配列番号（４３）〜（４５）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Val Gly Tyr）d配列を有するものとしては、配列番号（４６）〜（４８）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Tyr Gly Val）e配列を有するものとしては、配列番号（４９）〜（５１）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
｛Asp Gly Gly (Ala)f Gly Gly Ala｝g配列を有するものとしては、配列番号（５２）〜（５４）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Val Pro Gly Val）h配列を有するものとしては、配列番号（５５）〜（５７）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly）i配列を有するものとしては、配列番号（５８）〜（６０）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Ala）j配列を有するものとしては、配列番号（６１）〜（６３）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Gly Ala）k配列を有するものとしては、配列番号（６４）〜（６６）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列を有するものとしては、配列番号（６７）〜（６９）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Pro Pro）ｎ配列を有するものとしては、配列番号（７０）〜（７２）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly）ｏ配列を有するものとしては、配列番号（７３）〜（７５）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln）ｐ配列を有するものとしては、配列番号（７６）〜（７８）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro）ｑ配列を有するものとしては、配列番号（７９）〜（８１）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列及び（Gly Val Pro Gly Val）h配列を有するものとしては、配列番号（８３）及び（８６）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
これらのうち、ポリペプチドの細胞接着性や耐熱性の観点等から、配列番号（５３）又は（８２）〜（８４）で表されるアミノ酸配列がさらに好ましい。
【００１４】
なお、ここで例示した補助アミノ酸配列（Ｙ）には、さらに他のアミノ酸｛グリシン（Gly）、アラニン（Ala）、セリン（Ser）、トレオニン（Thr）、バリン（Val）、ロイシン（Leu）、イソロイシン（Ile）、システイン（Cys）、メチオニン（Met）、フェニルアラニン（Phe）、チロシン（Tyr）、プロリン（Pro）、トリプトファン（Trp）、アスパラギン（Asn）、グルタミン（Gln）、アスパラギン酸（Asp）、グルタミン酸（Glu）、アルギニン（Arg）、リジン（Lys）及び／又はヒスチジン（His）等｝を含んでいてもよい。
【００１５】
補助アミノ酸配列（Ｂ）は、グリシン（Gly）及び／又はアラニン（Ala）を含むことが好ましい。グリシン（Gly）及びアラニン（Ala）を含む場合、これらの合計含有割合（％）は、補助アミノ酸配列（Ｂ）の全アミノ酸個数に基づいて、１０〜１００が好ましく、さらに好ましくは２０〜９５、特に好ましくは３０〜９０、最も好ましくは４０〜８５である。すなわち、（Gly）及び（Ala）の合計含有割合（％）の下限は、（Ｂ）の全アミノ酸個数に基づいて、１０が好ましく、さらに好ましくは２０、特に好ましくは３０、最も好ましくは４０であり、また同様に上限は１００が好ましく、さらに好ましくは９５、特に好ましくは９０、最も好ましくは８５である。この範囲であると、ポリペプチドの耐熱性がさらに良好となる。
グリシン（Gly）及びアラニン（Ala）の両方を含む場合、これらの含有個数割合（Gly／Ala）は、０．０３〜４０が好ましく、さらに好ましくは０．０８〜１３、特に好ましくは０．２〜５である。すなわち、この場合、グリシン（Gly）及びアラニン（Ala）の含有個数割合（Gly／Ala）の下限は、０．０３が好ましく、さらに好ましくは０．０８、特に好ましくは０．２であり、また同様に上限は４０が好ましく、さらに好ましくは１３、特に好ましくは５である。この範囲であると、ポリペプチドの耐熱性がさらに良好となる。
【００１６】
ポリペプチドは、細胞接着性の観点等から、好ましくは２〜５１個、さらに好ましくは３〜３５個、特に好ましくは４〜２０個の補助アミノ酸配列（Ｂ）を有する。また、ポリペプチドは、２種以上の補助アミノ酸配列（Ｂ）を含んでもよく、補助アミノ酸配列（Ｂ）の含有種類は、１〜２０種が好ましく、さらに好ましくは１〜１０、特に好ましくは１〜５である。
【００１７】
ポリペプチドは、分岐鎖を含んでいてもよく、一部が架橋されていてもよく、環状構造を含んでいてもよい。しかし、ポリペプチドは、架橋されていないことが好ましく、さらに好ましくは架橋されていない直鎖構造、特に好ましくは環状構造を持たず架橋されていない直鎖構造である。なお、直鎖構造には、β構造（直鎖状ペプチドが折れ曲がってこの部分同士が平行に並び、その間に水素結合が作られる二次構造）も含まれる。
【００１８】
ポリペプチドは、細胞接着性び耐熱性の観点等から、最小アミノ酸配列（Ａ）と補助アミノ酸配列（Ｂ）とが交互に化学結合してなる構造であることが好ましい。この場合、最小アミノ酸配列（Ａ）と補助アミノ酸配列（Ｂ）との繰り返し単位（Ａ−Ｂ）の数（個）は、ポリペプチドの細胞接着性の観点等から、２〜５０個が好ましく、さらに好ましくは２〜４０個、特に好ましくは３〜３０個、最も好ましくは４〜２０個である。
【００１９】
ポリペプチドの重量平均分子量（Ｍｗ）は、１，０００〜１，０００，０００が好ましく、さらに好ましくは２，０００〜７００，０００、特に好ましくは３，０００〜４００，０００、最も好ましくは４，０００〜２００，０００である。すなわち、ポリペプチドの（Ｍｗ）の下限は、１，０００が好ましく、さらに好ましくは２，０００、特に好ましくは３，０００、最も好ましくは４，０００であり、また同様に上限は１，０００，０００が好ましく、さらに好ましくは７００，０００、特に好ましくは４００，０００、最も好ましくは２００，０００である。
なお、本発明において、重量平均分子量（Ｍｗ）は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法により、測定サンプル｛ポリペプチド等｝を分離し、泳動距離を標準物質と比較する方法によって求められる（以下、同じ）。
【００２０】
本発明の細胞接着性ポリペプチドとしては、以下のポリペプチド｛三洋化成工業（株）製｝等が含まれる。
（１）最小アミノ酸配列（Ａ）としてLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）を含むもの：
（Ａ１）の１０個と（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）3配列（８２）（Ｂ１）の１０個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約４万のポリペプチド（Ｐ１）；（Ａ１）の４個と（Ｂ１）の４個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約２万のポリペプチド（Ｐ２）；（Ａ１）の１０個と（Gly Val Pro Gly Val）2Gly Gly （Gly Ala Gly Ala Gly Ser）3配列（８３）（Ｂ２）の１０個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約５万のポリペプチド（Ｐ３）；（Ａ１）の４個と（Ｂ２）の４個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約３万のポリペプチド（Ｐ４）；（Ａ１）の１０個とAsp Gly Gly (Ala)12 Gly Gly Ala配列（５３）（Ｂ３）の１０個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約４万のポリペプチド（Ｐ５）；（Ａ１）の４個と（Ｂ３）の４個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約２万のポリペプチド（Ｐ６）；（Ａ１）の１０個とAla Ser（Ala Gly Ser Gly Ala Gly）3 Ala Ser配列（８４）（Ｂ４）の９個とを有しこれらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約５万のポリペプチド（Ｐ７）；（Ａ１）の４個と（Ｂ４）の３個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約３万のポリペプチド（Ｐ８）等。
【００２１】
（２）最小アミノ酸配列（Ａ）としてTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２７）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２７）（Ａ２）に変更したポリペプチド（Ｐ９〜Ｐ１６）等。
【００２２】
（３）最小アミノ酸配列（Ａ）としてSer Gln配列を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をSer Gln配列（Ａ３）に変更したポリペプチド（Ｐ１７〜Ｐ２４）等。
【００２３】
（４）最小アミノ酸配列（Ａ）としてSer Gln Gly配列を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をSer Gln Gly配列（Ａ４）に変更したポリペプチド（Ｐ２５〜Ｐ３２）等。
【００２４】
（５）最小アミノ酸配列（Ａ）としてSer Gln Gly Ala配列（１）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をSer Gln Gly Ala配列（１）（Ａ５）に変更したポリペプチド（Ｐ３３〜Ｐ４０）等。
【００２５】
（６）最小アミノ酸配列（Ａ）としてSer Gln Gly Ala Gly配列（２）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をSer Gln Gly Ala Gly配列（２）（Ａ６）に変更したポリペプチド（Ｐ４１〜Ｐ４８）等。
【００２６】
（７）最小アミノ酸配列（Ａ）としてSer Gln Gly Ala Gly Arg配列（３）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をSer Gln Gly Ala Gly Arg配列（３）（Ａ７）に変更したポリペプチド（Ｐ４９〜Ｐ５６）等。
【００２７】
（８）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Ser Gln配列を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Ser Gln配列（Ａ８）に変更したポリペプチド（Ｐ５７〜Ｐ６４）等。
【００２８】
（９）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Ser Gln Gly配列（４）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Ser Gln Gly配列（４）（Ａ９）に変更したポリペプチド（Ｐ６５〜Ｐ７２）等。
【００２９】
（１０）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Ser Gln Gly Ala配列（５）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Ser Gln Gly Ala配列（５）（Ａ１０）に変更したポリペプチド（Ｐ７３〜Ｐ８０）等。
【００３０】
（１１）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Ser Gln Gly Ala Gly配列（６）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Ser Gln Gly Ala Gly配列（６）（Ａ１１）に変更したポリペプチド（Ｐ８１〜Ｐ８８）等。
【００３１】
（１２）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（７）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（７）（Ａ１２）に変更したポリペプチド（Ｐ８９〜Ｐ９６）等。
【００３２】
（１３）最小アミノ酸配列（Ａ）としてLeu Gly Ser Gln Gly配列（９）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をLeu Gly Ser Gln Gly配列（９）（Ａ１３）に変更したポリペプチド（Ｐ９７〜Ｐ１０４）等。
【００３３】
（１４）最小アミノ酸配列（Ａ）としてLeu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１０）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をLeu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１０）（Ａ１４）に変更したポリペプチド（Ｐ１０５〜Ｐ１１２）等。
【００３４】
（１５）最小アミノ酸配列（Ａ）としてLeu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１１）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をLeu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１１）（Ａ１５）に変更したポリペプチド（Ｐ１１３〜Ｐ１２０）等。
【００３５】
（１６）最小アミノ酸配列（Ａ）としてLeu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１２）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をLeu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１２）（Ａ１６）に変更したポリペプチド（Ｐ１２１〜Ｐ１２８）等。
【００３６】
（１７）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Leu Gly Ser Gln 配列（１３）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Leu Gly Ser Gln 配列（１３）（Ａ１７）に変更したポリペプチド（Ｐ１２９〜Ｐ１３６）等。
【００３７】
（１８）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１４）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１４）（Ａ１８）に変更したポリペプチド（Ｐ１３７〜Ｐ１４４）等。
【００３８】
（１９）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１５）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（１５）（Ａ１９）に変更したポリペプチド（Ｐ１４５〜Ｐ１５２）等。
【００３９】
（２０）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１６）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（１６）（Ａ２０）に変更したポリペプチド（Ｐ１５３〜Ｐ１６０）等。
【００４０】
（２１）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１７）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（１７）（Ａ２１）に変更したポリペプチド（Ｐ１６１〜Ｐ１６８）等。
【００４１】
（２２）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（１８）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（１８）（Ａ２２）に変更したポリペプチド（Ｐ１６９〜Ｐ１７６）等。
【００４２】
（２３）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１９）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（１９）（Ａ２３）に変更したポリペプチド（Ｐ１７７〜Ｐ１８４）等。
【００４３】
（２４）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２０）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２０）（Ａ２４）に変更したポリペプチド（Ｐ１８５〜Ｐ１９２）等。
【００４４】
（２５）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２１）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２１）（Ａ２５）に変更したポリペプチド（Ｐ１９３〜Ｐ２００）等。
【００４５】
（２６）最小アミノ酸配列（Ａ）としてGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２２）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をGly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２２）（Ａ２６）に変更したポリペプチド（Ｐ２０１〜Ｐ２０８）等。
【００４６】
（２７）最小アミノ酸配列（Ａ）としてTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（２３）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln 配列（２３）（Ａ２７）に変更したポリペプチド（Ｐ２０９〜Ｐ２１６）等。
【００４７】
（２８）最小アミノ酸配列（Ａ）としてTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（２４）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly配列（２４）（Ａ２８）に変更したポリペプチド（Ｐ２１７〜Ｐ２２４）等。
【００４８】
（２９）最小アミノ酸配列（Ａ）としてTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２５）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala配列（２５）（Ａ２９）に変更したポリペプチド（Ｐ２２５〜Ｐ２３２）等。
【００４９】
（３０）最小アミノ酸配列（Ａ）としてTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２６）を含むもの：
ポリペプチド（Ｐ１〜Ｐ８）のLeu Gly Ser Gln配列（８）（Ａ１）をTyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly配列（２６）（Ａ３０）に変更したポリペプチド（Ｐ２３３〜Ｐ２４０）等。
【００５０】
ポリペプチドは、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）又は遺伝子組み換え法等の人工的な方法によって容易に製造できる。有機合成法に関しては、生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）又は続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報（ＵＳＰ５５１４５８１に対応する）に記載されている方法等が適用できる。ポリペプチドを安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
【００５１】
本発明の細胞接着性ポリペプチドは、基材と共に、細胞接着性ポリペプチド含有基材を構成できる。すなわち、細胞接着性ポリペプチド含有基材は、本発明の細胞接着性ポリペプチド及び基材（Ｃ）からなる。
基材（Ｃ）の材質としては、細胞や生体に悪影響を及ぼさないものであれば制限がなく、創傷等への適用時に、体液等に分散、溶解又は吸収され易い材料｛以下、易生分解性材料（Ｃ１）｝、及び創傷等への適用時に、体液等に分散、溶解又は吸収され難い材料｛以下、難生分解性材料（Ｃ２）｝のいずれもが使用できる。また基材（Ｃ）は、易生分解性材料（Ｃ１）及び難生分解性材料（Ｃ２）を組み合わせてもよい。
【００５２】
易生分解性材料（Ｃ１）としては、天然高分子（Ｃ１Ａ）、合成高分子（Ｃ１Ｂ）及び無機物（Ｃ１Ｃ）等が使用できる。
天然高分子（Ｃ１Ａ）としては、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、エラスチン、キチン、キトサン、フィブリン、アルギン酸、デンプン、デキストラン、アルブミン、ポリヒドロキシ酪酸、ペクチン、ペクチン酸、ガラクタン、プルラン、アガロース、セルロース、グルテン及びフィブロイン等が挙げられる。
合成高分子（Ｃ１Ｂ）としては、乳酸、ロイシン、グリコール酸、ε−カプロラクトン、ジオキサノン、リンゴ酸、ラクチド及びグリコリドからなる群より選ばれた単量体を必須単量体としてなる（共）重合体（ポリグリコール酸）、並びにポリペプチドを含まない合成ポリペプチド等が挙げられる。
無機物（Ｃ１Ｃ）としては、炭酸カルシウム｛軽質炭酸カルシウム及び重質炭酸カルシウム等｝及びリン酸カルシウム｛ヒドロキシアパタイト、トリカルシウムフォスフェート及びこれらと他のリン酸カルシウム（モノカルシウムハイドロジェンフォスフェート等）との混合物等｝等が含まれる。
これらのうち、天然高分子（Ｃ１Ａ）及び合成高分子（Ｃ１Ｂ）が好ましく、さらに好ましくは天然高分子（Ｃ１Ａ）、特に好ましくはコラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、キチン、キトサン、フィブリン、アルギン酸、デンプン、デキストラン、アガロース、セルロース及びフィブロインである。
【００５３】
難生分解性材料（Ｃ２）としては、天然高分子（Ｃ２Ａ）、合成高分子（Ｃ２Ｂ）及び無機物（Ｃ２Ｃ）等が使用できる。
天然高分子（Ｃ２Ａ）としては、天然繊維（綿、毛、麻及び絹等）等が挙げられる。
合成高分子（Ｃ２Ｂ）としては、ポリオレフィン（ポリエチレン、ポリプロピレン及びこれらの変性物等）、オレフィン共重合体｛エチレン−ビニルアセテート共重合体、エチレン−エチル（メタ）アクリレート共重合体、エチレン−メチル（メタ）アクリレート共重合体及びエチレン−（メタ）アクリル酸共重合体等｝、ポリウレタン、ポリエステル、ポリアクリル酸、ポリアミド（ナイロン）、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリスチレン、フッ素樹脂、シリコーン樹脂、セルロース、ビスコースレイヨン、キュプラレーヨン、ポリアセテート、ポリアクリルニトリル、ビニロン及びビニリデン等が用いられる。
無機物（Ｃ２Ｃ）としては、金属（金、銀、プラチナ、チタン及びニッケル等）及びセラミックス（アルミナ、ジルコニア及び窒化アルミニウム等）等が用いられる。
これらのうち、合成高分子（Ｃ２Ｂ）と無機物（Ｃ２Ｃ）が好ましく、さらに好ましくは合成高分子（Ｃ２Ｂ）、特に好ましくは、ポリオレフィン、ポリウレタン、ポリエステル、ポリアクリル酸、ポリアミド（ナイロン）、ポリスチレン及びシリコーン樹脂である。
【００５４】
基材（Ｂ）の形状としては、細胞が接着可能な形状であれば特に制限がなく、一般に用いられるものが使用でき、プレート、シャーレ、Ｔ−フラスコ、ローラーボトル、マイクロキャリアビーズ及びホローファイバー、シート（フィルム、フォーム（スポンジ）及び布等）及びゲル等のいずれでもよい。
【００５５】
ポリペプチドと基材（Ｃ）とは、化学結合（イオン結合、水素結合及び／又は共有結合等）及び／又は物理吸着（ファンデルワールス力による吸着）によって結合される。
ポリペプチドと基材（Ｃ）とが強固に結合される点で、化学結合が好ましく、さらに好ましくは共有結合である。
【００５６】
ポリペプチドと基材（Ｃ）とを共有結合させる方法としては、（１）ポリペプチドのうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するもの｛アルギニン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、システイン、リシン、セリン、グリシン、オルニチン、ヒスチジン、３−アミノプロピオン酸、８−アミノオクタン酸及び／又は２０−アミノエイコサン酸等を構成単位として含むポリペプチド｝と、基材（Ｃ）のうちカルボキシル基を有するもの｛ポリグリコール酸、最小アミノ酸配列（Ａ）を含まない合成ポリペプチド、ポリエチレン又はポリプロピレンの変性物、エチレン−（メタ）アクリル酸共重合体、ポリアクリル酸、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、エラスチン、フィブリン、アルギン酸、アルブミン、ペクチン、ペクチン酸、グルテン及び／又はフィブロイン等からなる基材｝とを反応させる方法；（２）ポリペプチドのうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものと、基材（Ｃ）のうちヒドロキシル基を有するもの｛ポリグリコール酸、エチレン−ビニルアセテート共重合体、ポリウレタン、ポリエステル、セルロース、ビスコースレイヨン、キュプラーレーヨン、ポリアセテート、ポリアクリロニトリル、ビニロン、ビニリデン、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、エラスチン、キチン、キトサン、フィブリン、アルギン酸、デンプン、デキストラン、アルブミン、ポリヒドロキシ酪酸、ペクチン、ペクチン酸、ガラクタン、プルラン、アガロース、グルテン及び／又はフィブロイン等からなる基材｝とを反応させる方法；（３）ポリペプチドのうちヒドロキシル基を有するもの｛アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、チロシン、チロニン及び／又はヒドロキシプリン等を構成単位として含むポリペプチド｝と、基材（Ｃ）のうちカルボキシル基を有するものとを反応させる方法等が挙げられる。
【００５７】
これらの反応は公知の方法（「ペプチド合成の基礎と実験、平成９年１０月５日、丸善株式会社発行」に記載の方法等）で行うことができる。具体的には、以下の（１）〜（３）の通りである。
（１）ポリペプチドのうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものと基材（Ｃ）のうちカルボキシル基を有するものとを反応させる場合、（Ｃ）のカルボキシル基を予めカルボジイミド化合物と反応させ、アシルイソ尿素｛Ｒ’−Ｎ＝Ｃ（ＯＣＯＲ）−ＮＨ−Ｒ’（−ＯＣＯＲが（Ｃ）に由来する部分）｝を得た後、ポリペプチドのうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものをこのアシルイソ尿素に加えることによって、（Ｃ）とポリペプチドとをアミド結合できる。
カルボジイミド化合物としては、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩等が挙げられる。
【００５８】
（２）ポリペプチドのうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものと基材（Ｃ）のうちヒドロキシル基を有するものとを反応させる場合、（Ｃ）のヒドロキシル基を予めカルボニルジイミダゾール化合物と反応させ、イミダゾール誘導体｛Ｒ−Ｉｍ、Ｉｍはイミダゾリン環、Ｒが（Ｃ）に由来｝を得た後、ポリペプチドのうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものをこのイミダゾール誘導体に加えることによって、（Ｃ）とポリペプチドとをＮ−Ｃ結合できる。
カルボニルジイミダゾール化合物としては、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール等が挙げられる。
【００５９】
（３）ポリペプチドのうちヒドロキシル基を有するものと基材（Ｃ）のうちカルボキシル基を有するものとを反応させる場合、（Ｃ）のカルボキシル基を予めカルボジイミド化合物と反応させ、アシルイソ尿素を得た後、ポリペプチドのうちヒドロキシル基を有するものをこのアシルイソ尿素に加えることによって、（Ｃ）とポリペプチドとをエステル結合できる。
【００６０】
ポリペプチドを基材（Ｃ）に、物理吸着、イオン結合及び／又は水素結合させる方法としては、溶媒等にポリペプチドと（Ｃ）とを投入し、混合して作製する方法等が挙げられる。溶媒としては特に制限はないが、無機塩、有機酸塩、酸及び／又は塩基を０．００１〜５０重量％（好ましくは０．０１〜１０重量％）含有する水溶液等が使用できる。
【００６１】
無機塩としては、ハロゲン化金属塩、硫酸金属塩、リン酸金属塩、硝酸金属塩、炭酸金属塩及び過ハロゲン酸金属（例えば、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カルシウム、硝酸鉄、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素カリウム、硫酸銅、硫酸鉄、塩化リチウム、臭化ナトリウム、臭化リチウム、過塩素酸ナトリウム及び過塩素酸リチウム）等が含まれる。
有機酸塩としては、蟻酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、酢酸リチウム及び酒石酸ナトリウム等が挙げられる。
【００６２】
酸としては、無機酸及び炭素数１〜６の有機酸（例えば、塩酸、燐酸、酢酸、蟻酸、フェノール及び硫酸）等が含まれる。
塩基としては、無機塩基及び炭素数２〜６の有機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア及びトリエチルアミン）等が含まれる。
水としては、蒸留水、イオン交換水、水道水及びイオン交換蒸留水等が挙げられる。
これらの溶媒の中で、無機塩、酸及び／又は塩基を含有する水溶液、並びに水が好ましく、さらに好ましくは無機塩、酸及び／又は塩基を含有する水溶液である。
【００６３】
細胞接着性ポリペプチド含有基材中のポリペプチドの含有量は、細胞接着性の観点等から、基材の単位表面積あたり、０．１ｎｇ／ｃｍ2〜１００ｍｇ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは１ｎｇ／ｃｍ2〜１０ｍｇ／ｃｍ2、特に好ましくは１０ｎｇ／ｃｍ2〜１ｍｇ／ｃｍ2、最も好ましくは１００ｎｇ／ｃｍ2〜１００μｇ／ｃｍ2である。
なお、本発明において、単位表面積は、基材の表面のうち、細胞が接着し得る表面の表面積を意味する。なお、細胞が入り込まないような微小な凹凸（例えば、１μｍ以下）は平坦な表面として取扱うが、単位表面積を高める目的でリブ（畝）等が設けてある場合、このリブの表面積は単位表面積に含まれる。
単位表面積あたりのポリペプチドの含有量の測定方法は特に限定されないが、例えば、免疫学的測定法が利用できる。本発明において、単位面積あたりのポリペプチドの含有量は、基材の表面の一部（例えば、１ｃｍ×１ｃｍの正方形状）を切り取りとった試験片と、ポリペプチドと結合する抗体に酵素を標識したものとを反応させ、反応した酵素標識抗体の酵素量を測定することにより得られる。
酵素標識抗体は通常、酵素と特異抗体とを化学結合させたもの（公知の方法で化学結合できる）である。酵素（ペルオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びグルコース−６−リン酸脱水素酵素等）と特異抗体とをグルタルアルデヒド法、過ヨウ素酸法、マレイミド法又はピリジルジスルフィド法等によって化学結合させる方法等（超高感度酵素免疫測定法、石川榮治著、株式会社学会出版センター、１９９３年；エンザイムイムノアッセイ、石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年；及び酵素抗体法、渡辺慶一ら編、学際企画株式会社、１９９２年）が適用できる。
また、特異抗体はポリペプチドに特異的に結合する抗体｛公知の方法；ポリクローナル抗体作製法及びモノクローナル抗体作製法（エンザイムイムノアッセイ、石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年；及び酵素抗体法、渡辺慶一ら編、学際企画株式会社、１９９２年）等が適用できる｝である。尚、特異抗体の交差反応性抗原に対する親和定数は小さいほど好ましい。例えば、特異抗体のポリペプチドへの親和定数を１とした場合、交差反応性抗原に対する親和定数は、１以下が好ましく、さらに好ましくは０．１以下、特に好ましくは０．０１以下である。この親和定数はエンザイムイムノアッセイ（石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年）に記載の方法で得ることが出来る。
【００６４】
本発明の細胞接着性ポリペプチド含有基材は、必要に応じて滅菌処理を施してもよい。
滅菌方法としては、特に限定されないが、放射線滅菌、エチレンオキサイドガス滅菌、プラズマ滅菌、γ線滅菌、アルコール滅菌、オートクレーブ滅菌及び乾熱滅菌等が挙げられる。
【実施例】
【００６５】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
＜実施例１＞
特表平３−５０２９３５号公報中の実施例に記載の方法に準じて、Tyr Gly Gly Leu Gly Ser Gln Gly Ala Gly Arg配列（２７）の１０個とAla Ser（Ala Gly Ser Gly Ala Gly）3 Ala Ser配列（８４）の９個とを有しこれらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約５万の配列番号（８５）で表されるポリペプチドを遺伝子組み換え大腸菌により製造した。さらに、このポリペプチドをオートクレーブ滅菌（１２０℃、２０分）することにより、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）を得た。
【００６６】
＜実施例２＞
実施例１で得た細胞接着ポリペプチド（Ｐ１５）１ｍｇを４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液１ｍＬに溶解し、さらに、９９．５重量％塩化ナトリウムを０．８５重量％含有する０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２、ＰＢＳ）で２０倍希釈して、Ｐ１５溶液Ａ（Ｐ１５の濃度：５０μｇ／ｍＬ）を作製した。このＰ１５溶液Ａを９６穴のポリスチレンプレート（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）に５０μＬ／穴で投入し、２７±３℃で２時間放置した。アスピレーターを用いて溶液を除去した後、生理食塩水１００μＬ／穴で２回洗浄しさらに脱イオン水１００μＬ／穴で洗浄して、細胞接着性ポリペプチド含有基材（ＰＣ１５Ａ）を作製した（Ｐ１５付着量：約１μｇ／ｃｍ2）。
【００６７】
＜実施例３＞
実施例１で得た細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）１ｍｇを蟻酸１ｍＬに溶解し、さらに蟻酸で１０倍希釈して、Ｐ１５溶液Ｂ（Ｐ１５の濃度：１００μｇ／ｍＬ）を作製した。このＰ１５溶液Ｂを９６穴のポリスチレンプレート（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）に１６μＬ／穴で投入し、２７±３℃で１２時間放置し、蟻酸が完全に乾いた後、２時間の減圧（１０ｍｍＨｇ）乾燥を行った。乾燥後、生理食塩水１００μＬ／穴で２回洗浄しさらに脱イオン水１００μＬ／穴で洗浄して、細胞接着性ポリペプチド含有基材（ＰＣ１５Ｂ）を作製した（Ｐ１５付着量：約５μｇ／ｃｍ2）。
【００６８】
＜比較例１＞
特表平３−５０２９３５号公報中の実施例に記載の方法に準じて、Arg Gly Asp配列の８個とSer Pro Ala （Gly Val Pro Gly Val）2 Gly Gly （Gly Ala Gly Ala Gly Ser）3Ala Ser Thr Gly 配列（８６）の７個とを有しこれらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約３万の配列番号（８７）で表されるポリペプチドを遺伝子組み換え大腸菌により製造した。さらに、このポリペプチドをオートクレーブ滅菌（１２０℃、２０分）することにより、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１７）を得た。
【００６９】
＜比較例２＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）の代わりに、比較例１で得た細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１７）を使用した以外は、実施例２と同様にして、細胞接着性ポリペプチド含有基材（ＰＣ１７Ａ）を作製した（Ｐ１７付着量：約１μｇ／ｃｍ2）。
【００７０】
＜比較例３＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）の代わりに、比較例１で得た細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１７）を使用する以外は、実施例３と同様にして、細胞接着性ポリペプチド含有基材（ＰＣ１７Ｂ）を作製した（Ｐ１７付着量：約５μｇ／ｃｍ2）。
【００７１】
＜比較例４＞
特表平３−５０２９３５号公報中の実施例に記載の方法に準じて、Arg Gly Asp配列の１３個とSer Pro Ala Ser Ala Ala Gly Tyr （Gly Ala Gly Ala Gly Ser）9 Gly Ala Ala Val Thr Gly 配列（８８）の１２個とを有しこれらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｗ約１１万の配列番号（８９）で表されるポリペプチドを遺伝子組み換え大腸菌により製造した。さらに、このポリペプチドをオートクレーブ滅菌（１２０℃、２０分）することにより、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１８）を得た。
【００７２】
＜比較例５＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）の代わりに、比較例４で得た細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１８）を使用する以外は、実施例２と同様にして、細胞接着性ポリペプチド含有基材（ＰＣ１８Ａ）を作製した（Ｐ１８付着量：約１μｇ／ｃｍ2）。
【００７３】
＜比較例６＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）の代わりに、比較例４で得た細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１８）を使用する以外は、実施例３と同様にして、細胞接着性ポリペプチド含有基材（ＰＣ１８Ｂ）を作製した（Ｐ１８付着量：約５μｇ／ｃｍ2）。
【００７４】
＜比較例７＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）を使用しない以外は、実施例２と同様にして、基材（ＨＡ）を作製した。
【００７５】
＜比較例８＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ１５）を使用しない以外は、実施例３と同様にして、基材（ＨＢ）を作製した。
【００７６】
＜評価：ＮＨＤＦ細胞（正常ヒト皮膚線維芽細胞）の細胞接着活性＞
（１）ＰＢＳに牛血清アルブミンを０．２重量％含有する水溶液を評価基材に５０μＬ／穴で投入し、２７±３℃で２時間放置した。アスピレーターを用いて溶液を除去した後、生理食塩水１００μＬ／穴で２回洗浄しさらに脱イオン水１００μＬ／穴で洗浄した。次に、ＤＭＥＭ（ICN Biomedicals社製）を１００μＬ／穴で添加し、３７℃インキュベーター内に１時間保存した。１時間後、ＮＨＤＦ細胞を１万ｃｅｌｌｓ／穴で添加し、３７℃、ＣＯ2濃度５容量％のインキュベーター中にて１時間放置して培養した。
【００７７】
（２）培養終了後、アスピレーターを用いて培地を除去し、塩化ナトリウムを０．８５重量％含有するイオン交換水（以下、生理食塩水）を細胞に直接当たらないように注意しながら１００μＬ／穴で添加し、アスピレーターを用いて生理食塩水を除去した。次にＰＢＳを５０μＬ／穴で添加し、さらにテトラカラーワン（生化学工業株式会社）を１０μＬ／穴で添加して、３７℃、ＣＯ2濃度５容量％のインキュベーター中に４時間放置した。
【００７８】
（３）放置後、ホルマザン生成量を、４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度でプレートリーダー（コロナ電気株式会社製ＭＴＰ−３２）を用いて測定し、この値を細胞接着活性とした。
細胞接着活性は、当該吸光度の高さに比例し、値が大きい程細胞接着性に優れていることを意味する。これらの結果を表１に示す（これらの結果は各々８穴分の平均データである。）。なお、テトラカラーワンのテトラゾリウム塩が細胞内ミトコンドリアのデヒドロゲナーゼにより還元されて、ホルマザンを生成することにより発色する。
【００７９】
【表１】
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【００８０】
表１の結果から、本発明の細胞接着性ポリペプチドは、比較例の細胞接着性ポリペプチドや細胞接着性ポリペプチドを使用しない場合に比べて、細胞接着性が極めて高いことが判る。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明の細胞接着性ポリペプチドは、細胞接着性が極めて高いため、従来は接着が困難であった細胞（ＮＨＤＦ細胞等）を基材上に効率良く接着させることができる。また、オートクレーブ等に対する熱安定性が極めて高いため、簡便かつ安全性の高い殺菌ができる。したがって、本発明の細胞接着性ポリペプチド及び細胞接着性ポリペプチド含有基材は、細胞が関係する、研究開発、有用物質生産及び治療等に極めて有用である。
研究開発用としては、動物実験（毒性試験、刺激性試験及び代謝機能試験等）の代替、遺伝子導入、目的物質（細胞、生理活性物質、遺伝子、有害化学物質及び薬効成分等）のスクリーニング及び細胞の精製や機能解析等に利用できる。
有用物質生産用としては、サイトカイン、血栓溶解剤、血液凝固因子製剤、ワクチン、ホルモン、抗生物質、抗体及び増殖因子等の生産に利用できる。
治療用としては、皮膚、頭蓋骨、筋肉、皮膚組織、骨、軟骨、血管、神経、腱、靭帯、毛胞組織、粘膜組織、歯周組織、象牙質、骨髄、網膜、漿膜、胃腸管及び脂肪等の組織、並びに肺、肝、膵及び腎等の臓器の治療に利用できる。
【配列表】
2005263631000001.app