(57)【要約】【課題】            優れた効果を有するチロシナーゼ活性抑制剤、並びにかかるチロシナーゼ活性抑制剤を美白有効成分として含有する皮膚外用剤、食品褐変防止有効成分として適用した食品を提供する。【解決手段】        ネロール，バニリン，ヒドロキシシトロネラール，ヘプチンカルボン酸メチル，ベンジルアルコール，メチルナフチルケトン，ローズフェノン，酢酸イソボルニルから選択される１種又は２種以上の成分を有効成分とする、チロシナーゼ活性抑制剤。またかかるチロシナーゼ活性抑制剤を、皮膚外用剤に美白有効成分として含有させる。さらに、かかるチロシナーゼ活性抑制剤を食品褐変防止有効成分として食品に適用する。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ネロール，バニリン，ヒドロキシシトロネラール，ヘプチンカルボン酸メチル，ベンジルアルコール，メチルナフチルケトン，ローズフェノン，酢酸イソボルニルから選択される１種又は２種以上の成分を有効成分とする、チロシナーゼ活性抑制剤。
【請求項２】
請求項１に記載のチロシナーゼ活性抑制剤を、美白有効成分として含有する皮膚外用剤。
【請求項３】
請求項１に記載のチロシナーゼ活性抑制剤を、食品褐変防止有効成分として適用した食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、優れた効果を有するチロシナーゼ活性抑制剤、並びにかかるチロシナーゼ活性抑制剤を美白有効成分として含有する皮膚外用剤、食品褐変防止有効成分として適用した食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
チロシナーゼは、種々のカテコール誘導体を基質とする酸化酵素である。そのほとんどがモノフェノールモノオキシゲナーゼ活性を有し、モノフェノールを基質として、オルト−ジフェノールを生じ、さらにオルト-キノン類に酸化する。この酸化酵素は広く自然界に分布し、キノコやジャガイモ、リンゴなどの植物、動物の色素細胞に存在する。動物中の酸化酵素は、特にチロシン、ドーパに対して高い活性を示し、メラニンの生合成に深く関与する。メラニンは、チロシンからＬ−ドーパ，ドーパキノン，ドーパクロム，５，６ジヒドロキシインドール，インドール−５，６−キノン，メラニンの過程で生成され、チロシナーゼは、チロシンからＬ−ドーパ，ドーパキノンの酸化過程に関与している。メラニンは毛髪や肌の色を決定している色素である。この色素は、皮膚では表皮基底層に存在するメラノサイトにおいて、光や紫外線に反応して生成される。皮膚におけるメラニン生成は、紫外線等による悪影響から人間を防御する役目を担っている。しかしながら、大量に光や紫外線を浴びるなどの刺激があると、メラニン生成機能が局部的に持続し、その部分の皮膚が黒化してしまう。その結果、色素が沈着するなど、しみ・そばかすを形成して、やがては皮膚の老化を促進してしまう。また、リンゴやヤマイモ、レタスなどの野菜・果物を切断すると、切断面が褐色変化する現象もメラニン色素が関与している。切断面が褐変した青果物は、商品価値が低下して長期間保存することは困難である。美白を促進したり、食品の褐変化を防止する目的で、従来、チロシナーゼの活性抑制剤が使用されてきている。チロシナーゼの活性抑制剤としては、例えば、ビタミンＣ（特許文献１参照）、アルブチン、植物などから抽出されたエキス（特許文献２参照）、および亜硫酸塩類などが知られている。しかしながら、ビタミンＣは自身の還元作用から酸化されやすく不安定で、保存上の問題がある。また、アルブチンは、耐熱安定性などに問題があり、これも取扱い上の問題がある。植物抽出物は、化学組成の同定が難しく、ロット間での品質のばらつきが懸念されている。亜硫酸塩類は、人体への皮膚刺激性が認められ、安全上の問題がある。一方、食品香料として用いられている芳香族アルデヒド類に、チロシナーゼ阻害活性を持つものが知られているが（非特許文献１参照）、それ自体のもつ色調によって食品等を着色してしまうなどの問題がある。
【０００３】
【特許文献１】特開平２-４５４０８号公報
【特許文献２】特開平６-４０８９６号公報
【非特許文献１】油化学、４３（７）、５７４〜５７８、１９９４年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明においては、上記のような問題点を解決し、人体への安全性が高く、高い効果を発揮するチロシナーゼ活性阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記の課題を解決するにあたり、種々検討を行ったところ、ネロール，バニリン，ヒドロキシシトロネラール，ヘプチンカルボン酸メチル，ベンジルアルコール，メチルナフチルケトン，ローズフェノン，酢酸イソボルニルの各化合物において、高いチロシナーゼ活性抑制作用を発揮することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
また本発明における皮膚外用剤は、上述のチロシナーゼ活性抑制剤を美白有効成分として含有することを特徴とする。
【０００７】
また、本発明における食品は、上述のチロシナーゼ活性抑制剤を褐変防止有効成分として適用することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００８】
本願発明のチロシナーゼ活性抑制剤の効果を以下の方法にて測定した。
【０００９】
ヒト表皮メラニン細胞チロシナーゼ活性阻害評価
クラボウ社製正常ヒト表皮メラニン細胞を１ウェル当り３．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはクラボウ社製Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓを用いた。２４時間後Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓによって各濃度に調整したサンプル液に交換しさらに４８時間培養した。次に１重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ含有リン酸緩衝液７５μＬに交換し細胞を完全に溶解させ内５０μＬを粗酵素液として使用した。粗酵素液に基質となる５０μＬの０．０５重量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液を加え３７℃で２時間静置した。マイクロプレートリーダーにて基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度を測定し生成されたドーパメラニン量は両測定値の差を次式に導入して求めた。
反応後４０５ｎｍ値−反応後４０５ｎｍ値 =  ５．２３８×（生成されたドーパメラニン量）＋２．１６６
又、PIERCE社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔにて各ウェルのタンパク量を測定し単位タンパク量当りのドーパメラニン生成量を求めた。評価はコントロールの値を１００とした時の相対値を求めて行った。結果を表１に示す
【００１０】
【表１】
2005089416.tif 000002
【００１１】
表１に示したように、本願発明の化合物は、全て高いヒト表皮メラニン細胞チロシナーゼ活性阻害効果を発揮した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のチロシナーゼ活性抑制剤は、ネロール，バニリン，ヒドロキシシトロネラール，ヘプチンカルボン酸メチル，ベンジルアルコール，メチルナフチルケトン，ローズフェノン，酢酸イソボルニルから選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分とする。
【００１３】
また上述のチロシナーゼ活性抑制剤を美白有効成分として、皮膚外用剤に配合する。皮膚外用剤に配合するチロシナーゼ活性抑制剤の配合量は、その美白効果を発揮する量目であれば、特に限定されないが、概ね０．０００１〜０．５重量％の範囲とすることが好ましい。０．５重量％を超えて配合すると、皮膚外用剤に好ましくない香気を付与する可能性がある。０．０００１重量％未満では、有効な美白効果を発揮することが困難となる場合がある。
【００１４】
本発明の皮膚外用剤の剤型としては、クリーム、乳液、ファウンデーション、パック、ローション、ゲル状、溶液状、スティック状等がある。また、これらには適宜の成分、例えば、油剤、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、顔料、pH調製剤、他の薬効成分、紫外線吸収剤、香料等など一般に用いられる各種成分を配合することもできる。
【００１５】
なお、本願発明における皮膚外用剤において，他の美白有効成分を併用して用いることも可能である。
【００１６】
さらには、上述のチロシナーゼ活性抑制剤を食品褐変防止有効成分として、食品に適用する。本発明のチロシナーゼ活性抑制剤を食品等に適用する場合は、野菜や果物等の青果物の切断面に適当量を噴霧、塗布、浸漬すればよい。
【実施例】
【００１７】
本発明の詳細について、実施例を用いて説明する。
【００１８】
［実施例１〜８，比較例］  美白美容液
(１)トリ2-エチルヘキサン酸グリセリル                    ７．８(重量％)
(２)ジステアリン酸ポリグリセリル                        ２．４
(３)水素添加大豆リン脂質                                ０．４
(４)バチルアルコール                                    ０．１
(５)精製水                                全量を１００とする量
(６)グリセリン                                          ７．５
(７)キサンタンガム                                      ０．４
(８)ジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム              ０．２
(９)1,3-ブチレングリコール                              ２．５
(10)パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
(11)エタノール                                          ４．０
(12)香料                                                ０．１
(13)表２に示すチロシナーゼ活性抑制剤              表２に示す量
製法：(１)〜(４)の油相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。一方、(５)〜(10)の水相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサーにて均一に乳化する。撹拌しながら冷却し、４０℃で(11)〜(13)を添加して、混合，均質化する。
【００１９】
【表２】
2005089416.tif 000003
【００２０】
［実施例９］  美白用クリーム
(１)1,3-ブチレングリコール                                  １０．００(重量％)
(２)パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．１０
(３)ショ糖ステアリン酸エステル                                ０．３５
(４)Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム              ０．３５
(５)カルボキシビニルポリマー(１重量％水溶液)                  ２．００
(６)２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・
メタクリル酸ブチル共重合体液モノラウリン酸ポリグリセリル  ０．５０
(７)精製水                                                  ６５．９６
(８)スクワラン                                                ３．００
(９)ミリスチン酸オクチルドデシル                              ３．００
(10)親油型モノステアリン酸グリセリン                          ３．００
(11)ミツロウ                                                  １．００
(12)ステアリン酸                                              １．００
(13)ベヘニルアルコール                                        ２．５０
(14)パーム硬化油                                              ２．００
(15)ホホバ油                                                  ０．１０
(16)グリチルレチン酸ステアリル                                ０．０５
(17)ジメチルシロキサン／ビニルジメチルシロキサン共重合体液    １．００
(18)エタノール                                                ３．００
(19)ネロール                                                  ０．０２
(20)バニリン                                                  ０．０２
(21)香料                                                      ０．０５
(22)アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩                ０．５０
(23)クエン酸ナトリウム                                        ０．５０
製法：(１)〜(７)の油性成分、及び(８)〜(17)の水性成分をそれぞれ混合均一化して７５℃に加熱する。水性成分に油性成分を添加して乳化後、(18)〜(23)の成分を添加する。
【００２１】
［実施例１０］  美白用ローション
(１)精製水                                                  ８６．５２
(２)グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．０５
(３)ポリエチレングリコール（４０００）                        １．００
(４)トリメチルグリシン                                        １．００
(５)紅藻抽出物                                                １．６０
(６)アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム塩                  ２．００
(７)水酸化ナトリウム(１０重量％水溶液)                        ２．２０
(８)クエン酸ナトリウム                                        ０．３０
(９)ジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム(４０重量％水溶液)  ０．２０
(10)ヒドロキシシトロネラール                                  ０．０１
(11)ヘプチンカルボン酸メチル                                  ０．０１
(12)ベンジルアルコール                                        ０．０１
(13)メチルナフチルケトン                                      ０．０１
(14)ローズフェノン                                            ０．０１
(15)エタノール                                                ５．００
(16)ポリオキシエチレン（６０ＥＯ）硬化ヒマシ油                ０．０２
(17)香料                                                      ０．０１
(18)パラオキシ安息香酸メチル                                  ０．０５
製法：(１)〜(18)を混合し、均一とする。
【００２２】
上記処方にて調製した本発明の実施例１〜実施例１０及び、比較例について、色素沈着症状の改善効果の評価を行った。色素沈着症状の改善効果は、顕著なしみ，ソバカス等の色素沈着症状を有する女性パネラー２０名を一群とし、各群に実施例又は比較例をそれぞれブラインドにて１日２回ずつ２ヶ月間使用させ、２ヶ月後の皮膚の色素沈着の状態を観察して使用前と比較して評価した。色素沈着の状態は、表３に示す判定基準にしたがって評価し、２０名の平均値を算出して表４に示した。
【００２３】
【表３】
2005089416.tif 000004
【００２４】
【表４】
2005089416.tif 000005
【００２５】
表４から明らかなように、本発明に係る実施例使用群では、全群で顕著な色素沈着症状の改善が認められており、使用試験終了後には、軽度の色素沈着が認められるにすぎない程度まで症状が改善されており、従来より美白剤として広く知られている乳酸ナトリウムを配合した比較例と同程度若しくは高い美白作用を示していた。
【００２６】
なお、本発明の実施例１〜実施例１０については、上記使用試験期間中に含有成分の析出，分離，凝集，変臭，変色といった製剤の状態変化は全く見られなかった。また、各実施例使用群において、皮膚刺激性反応や皮膚感作性反応を示したパネラーは存在しなかった。
【００２７】
つぎに、表５に示したチロシナーゼ活性抑制剤の０．１重量％エタノール溶液を調製し、八つ割にしたリンゴの表面に霧吹きで噴霧し、そのまま室温で静置した場合の褐変状態を観察した。その結果、エタノールを噴霧した比較例１においては褐変が認められたが、本願発明のチロシナーゼ活性抑制剤を噴霧した実施例１１〜１８においては、褐変が認められなかった。
【００２８】
【表５】
2005089416.tif 000006