(57)【要約】【課題】  食品、医薬品、医薬部外品、化粧品等の分野において好適に使用できるシクロオキシゲナーゼ阻害剤を提供する。【解決手段】  本発明はアマチャズルから抽出されたダンマラン系化合物からなるシクロオキシゲナーゼ阻害剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）または（２）で示されるダンマラン系化合物を含有することを特徴とするシクロオキシゲナーゼ阻害剤。
【化１】
2005306785.tif 000009
（式中、Ｒ1〜Ｒ3は上記に示す通りであり、Glcはβ-D-glucopyranosylを、また、Rhaはα-L-rhamnopyranosylを示す。）
【請求項２】
式（１）または（２）で示されるダンマラン系化合物を含有することを特徴とするシクロオキシゲナーゼ−２選択的阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食品、医薬品、医薬部外品及び化粧品等の分野において好適に使用できるダンマラン系化合物からなるシクロオキシゲナーゼ阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生体内の様々な組織に存在し、細胞膜を構成する不飽和脂肪酸のアラキドン酸は、シクロオキシゲナーゼ（以下、ＣＯＸと略記する）又はリポキシゲナーゼが関与する代謝によって、ケミカルメディエーターであるプロスタグランジン（以下、ＰＧと略記する）やロイコトリエンなどを生成する。
【０００３】
ＣＯＸは２種類のアイソザイム（ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２）から構成されることが知られており（非特許文献１）、そのうちＣＯＸ−１は胃や腸等の消化管、腎臓、卵巣、精嚢及び血小板等に存在する構成酵素であり、胃液分泌、利尿、および血小板凝集等の生理的な役割を担っている。一方、ＣＯＸ−２はサイトカインや発癌プロモーター及びホルモン等の刺激により新たに産生される誘導酵素であり、炎症反応、血管新生、アポトーシス、発癌、排卵、分娩及び骨吸収等に関与している（例えば、非特許文献２など）。
ＣＯＸと疾患との関係では、例えば、リューマチや関節炎を起す一因子として、ＣＯＸの関与する代謝で生成するケミカルメディエーターが原因であるとの報告から、ＣＯＸを阻害する薬剤の研究・開発が行われている。さらに、上記のような疾患とＣＯＸとの関係の中で、特にＣＯＸ−２の関与が有力であることが判明している。また、近年の研究では、癌やアルツハイマー病においてもＣＯＸ−２の関与が報告されている（例えば、非特許文献３など）。
これまでのＣＯＸ阻害剤は、ＣＯＸ−１と同時にＣＯＸ−２も阻害してしまうため、ＣＯＸ−１の阻害は生理機能に必要なＰＧの合成も阻害してしまうこととなり、消化管障害等の種々の副作用を引き起こす危険を有していた。例えば、解熱鎮痛剤であるアスピリンは、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２を共に阻害するため胃腸障害を起すことが知られている。
【０００４】
そこで上記の問題を解決するための手段として、ＣＯＸ−１を阻害せずにＣＯＸ−２のみを選択的に阻害する薬剤が注目されている。即ち、ＣＯＸ−２の選択的阻害剤であれば、癌の増殖や転移および炎症等を少ない副作用で抑制する効果が期待できる。この代表的なものがＣｅｌｅｃｏｘｉｂ、Ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ等であり、更にその他のものも精力的に開発が行われている（例えば特許文献１、特許文献２参照。）。
【０００５】
一方、種々の植物やキノコ類に含まれる生理活性成分として、様々なトリテルペン骨格を有する化合物が抗腫瘍剤、血管新生抑制剤、抗アレルギー剤、養毛料やニキビ治療などの医薬品、医薬部外品や化粧品等の分野において報告されている（例えば、特許文献３〜５など）。さらに、トリテルペン骨格を有する化合物のうち、特にダンマラン系化合物が抗腫瘍効果を有することも知られている（特許文献６及び７）。しかしながら、ダンマラン系化合物（１）及び（２）について、ＣＯＸ阻害作用又はＣＯＸ−２選択的阻害作用に関する報告はない。
【０００６】
【特許文献１】特開２００３−１７６２６４号公報（特許請求の範囲）
【特許文献２】特開２００３−１６０５５４号公報（特許請求の範囲）
【特許文献３】特開２００３−３２１４９１号公報（課題を解決するための手段）
【特許文献４】特開２００３−２７７２６７号公報（発明の実施の形態）
【特許文献５】特開２０００−１６９４９７号公報（課題を解決するための手段）
【特許文献６】特公昭６３−１２４４５号公報（特許請求の範囲）
【特許文献７】特公昭６３−１２４４８号公報（特許請求の範囲）
【非特許文献１】平田結喜緒、森田育男編，「ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２」，メディカルレビュー社，１９９６年，ｐ１０５−１１８
【非特許文献２】中村秀夫，日薬理誌，２００１年，１１８巻，ｐ２１９−２３０
【非特許文献３】室田誠逸、山本尚三編，「現代化学増刊３８  プロスタグランジン研究の新展開」，東京化学同人，２００１年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、上述のような状況をふまえ、医薬品の分野で有用なシクロオキシゲナーゼ阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、これまでに発明者らがウリ科植物のアマチャズル（Gynostemma pentaphyllum MAKINO（Cucurbitaceae））より分離・同定したダンマラン系化合物が、優れたシクロオキシゲナーゼ阻害作用を有していることを見出し、本発明を完成したのである。
すなわち、本発明は下記一般式で表されるダンマラン系化合物（１）または（２）の少なくともいずれか１つを含有することを特徴とするシクロオキシゲナーゼ阻害剤である。
【０００９】
【化１】
2005306785.tif 000002
（式中、Ｒ1〜Ｒ3は上記に示す通りであり、Glcはβ-D-glucopyranosylを、また、Rhaはα-L-rhamnopyranosylを示す。）
【発明の効果】
【００１０】
本発明のダンマラン系化合物は優れたシクロオキシゲナーゼ阻害効果、特に選択的なシクロオキシゲナーゼ−２阻害効果を有しており、食品、医薬品、医薬部外品及び化粧品等の分野に利用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明のダンマラン系化合物は、化学合成によって得てもよいが、例えば、ウリ科植物のアマチャズル（Gynostemma pentaphyllum MAKINO（Cucurbitaceae））から抽出することができる。このアマチャズルは、アジア地域に広く分布する多年生つる性草本である。
【００１２】
アマチャズルから上記ダンマラン系化合物を抽出するには、乾燥させたアマチャズルを、抽出効率を向上させる観点から適当な大きさに細かく裁断して、例えば、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒を使用して室温（２０〜２５℃）程度の温度で浸漬し抽出処理するか、溶媒の沸点程度の温度で抽出処理する。親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。なお、水と親水性有機溶媒との混合系溶媒を使用する場合には、親水性有機溶媒の含有率が５０〜８０％（容積％）となるように調製することが好ましい。これをアンバーライトカラムに付し、吸着部を水などで洗浄した後メタノールで溶出し減圧濃縮する。
【００１３】
さらに、上記の操作で得られた抽出エキスを減圧濃縮し、適量のメタノールを加えて、例えばアルミナカラムに通導し、吸着部を水などで洗浄した後メタノールで溶出する。得られた溶液を減圧乾燥し粗精製物とする。これを、通常の分離に用いられるシリカゲルカラムクロマトグラフィーや分取高速液体クロマトグラフィー等を組み合わせて分画することにより、本発明のダンマラン系化合物（１）及び（２）を単離・精製することができる。これらの単離・精製・同定については、発明者らの報告に詳述している。（在原重信ら，薬学雑誌，１９８３年，１０３巻，ｐ１７３−１８５、在原重信ら，薬学雑誌，１９８４年，１０４巻，ｐ１０４３−１０４９）
【００１４】
上記のダンマラン系化合物（１）及び／又は（２）を、食品、医薬品、医薬部外品及び化粧品等として用いる場合、前記の如くしてアマチャズルから単離したものでも良いが、精製前の抽出物として用いても良い。抽出物としては、これらの化合物のうち少なくとも１種を含有する粗抽出物を用いても良いが、特に医薬品に用いる場合は純度の高い精製物を用いることが好ましい。
かくして得られるダンマラン系化合物（１）及び（２）は、後述の如くシクロオキシゲナーゼ阻害作用、特に選択的なシクロオキシゲナーゼ−２阻害作用を有するため、食品、医薬品、医薬部外品や化粧品等の処方に配合して使用することができる。
【００１５】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００１６】
（化合物の抽出・単離）
アマチャズルを出発原料として文献（在原重信ら，薬学雑誌，１９８３年，１０３巻，ｐ１７３−１８５、在原重信ら，薬学雑誌，１９８４年，１０４巻，ｐ１０４３−１０４９）に従い、化合物（１）及び（２）を抽出、単離した。単離した化合物は、核磁気共鳴スペクトル測定を主体とする各種スペクトルデータ、酸加水分解による糖の同定を行い、化合物（１）及び（２）の構造を確認した。
【００１７】
より詳細には、融点、旋光度、赤外吸収（以下、ＩＲと略記）スペクトル、核磁気共鳴（以下、ＮＭＲと略記）スペクトルを測定した。
融点は、柳本製微量融点測定装置により測定し、すべて未補正である。旋光度は、日本分光製ＤＩＰ−１８０型を用いてメタノール溶液で測定した。ＩＲスペクトルは、日立製ＥＰＩ−Ｇ３型を用いＫＢｒ法で測定した。ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ製ＸＬ−１００Ａ型を用い、重ピリジン（以下、C5D5Nと略記）を測定溶媒に、テトラメチルシランを内部標準として測定した。また、ＮＭＲスペクトル解析では、化学シフト（δ値）をｐｐｍ単位で、結合定数をＨｚ単位で示し、略号を使用し、各々 s; singlet, d; doublet, t; triplet, m; multiplet, br; broad, dd; double doublet, dt; double tripletで表した。さらに、ピークの帰属は、トリテルペン骨格や糖鎖の炭素番号をもとに表記した。
【００１８】
上記の操作及び構造解析から、アマチャズルから単離した化合物（１）及び（２）の構造式、並びに理化学的性質は以下の通りである。
【００１９】
化合物（１）の構造式
【化２】
2005306785.tif 000003
【００２０】
化合物（１）の理化学的性質
○融点：187 − 189 ℃
○旋光度：[α]25D +13.4 °（c 1.8，メタノール）
○ＩＲスペクトル：FT-IR （dry film） νmax 3375, 1635, 1165, 1070，1045，1020，990cm-1
○ＮＭＲスペクトル：
１）1H-NMR （C5D5N）；δ 0.81s, 0.92s, 0.95s, 0.95s, 1.28s，1.57s，1.60d(J=5Hz)，1.62s，1.62s，4.83d(J=7.5Hz)，5.10d(J=7.5Hz)，5.22m，5.42s
２）13C-NMR（C5D5N）；解析結果は表１〜３に示した。
【００２１】
化合物（２）の構造式
【化３】
2005306785.tif 000004
【００２２】
化合物（２）の理化学的性質
○融点：202 − 204 ℃
○旋光度：[α]22D +6.6 °（c 2.1, メタノール）
○ＩＲスペクトル：FT-IR （dry film）νmax 3375, 1640, 1150, 1075, 1040, 1015, 980 cm-1
○ＮＭＲスペクトル：
１）1H-NMR （C5D5N）；δ 0.90s，0.92s，0.96s，1.05s, 1.27s, 1.57s, 1.63s, 1.68s, 1.65d(J=6Hz), 3.15(J=9.5Hz), 4.94(J=6.5Hz), 5.06(J=6.5Hz), 5.47(J=7Hz), 5.37s
２）13C-NMR （C5D5N）；解析結果は表１〜３に示した。
【００２３】
【表１】
2005306785.tif 000005
【００２４】
【表２】
2005306785.tif 000006
【００２５】
【表３】
2005306785.tif 000007
【００２６】
（ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２阻害活性評価試験）
実施例１で取得したダンマラン系化合物（１）及び（２）の各々について、ＣＯＸ−１阻害活性及びＣＯＸ−２阻害活性を測定した。
酵素には、ＣＯＸ−１としてヒツジ精嚢ミクロソーム（カイマンケミカル社製）、ＣＯＸ−２としてヒツジ胎盤由来ＣＯＸ−２精製品（カイマンケミカル社製）を使用し、各酵素によるアラキドン酸からＰＧＥ2への転換率を酵素活性とした。この酵素反応系で、化合物の各々を被検試料として添加し、以下の通り操作してＣＯＸ−１阻害活性及びＣＯＸ−２阻害活性を算出した。
【００２７】
すなわち、２．９ｍＭフェノール及び１．４ｍＭのヘマチンを含む１４３ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．５）７０μＬに、１０％ジメチルスルホキシド水溶液に溶解させた被検試料（１×１０-3Ｍ、１０μＬ）を加えた後、ＣＯＸ−１あるいはＣＯＸ−２溶液（２ＩＵ、１０μＬ）を添加して混和した。これを３７℃で２分間プレインキュべートを行った。次いで、１００ｍＭトリス緩衝液で濃度を２５．５μＭに調整した放射性標識［1-14Ｃ］アラキドン酸（アマシャム・ファルマシア・バイオテク社製）を、１０μＬ（０．１４μＣｉ）加えて混和した。これを３７℃で２分間反応させた後、すぐに氷冷した。
【００２８】
ＣＯＸ活性の算出は、柳と小松の方法（Biochem. Pharmacol.,25，937-941,1976）を参考に行った。すなわち、反応液にｎ−ヘキサン：酢酸エチル（２：１）混合液を０．４ｍＬ加えて３０秒間撹拌した後、遠心分離して未反応のアラキドン酸を含む有機層を除去した。同様の抽出操作を２回繰り返した後、水層に５０μＬのエタノールを加えて３０秒間攪拌した。その後、２，０００×ｇで１分間遠心し、水層０．１ｍＬを液体シンチレーションカウンター用バイアルに移した。これにシンチレーターとしてクリアゾル１（ナカライテスク社製）を２ｍＬ加え、ＰＧＥ2分画カクテルとした。放射活性を液体シンチレ−ションカウンター（ＡＬＯＫＡ社製ＬＳＣ−１０００）で測定し、放射活性の割合を算出してＰＧＥ2転換率とした。
【００２９】
比較対照として、アスピリン（１×１０-2Ｍ、１０μＬ）を、被検試料の代わりに用いて同様に操作した。
被検試料を添加しなかった時のＰＧＥ2転換率を１００％とし、各被検試料を添加した時のＰＧＥ2転換率との差［１００（％）−ＰＧＥ2転換率（％）］をＣＯＸ阻害率（％）とした。その結果を表４に示す。
【００３０】
【表４】
2005306785.tif 000008
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明のダンマラン系化合物は優れたシクロオキシゲナーゼ阻害効果、特に選択的なシクロオキシゲナーゼ−２阻害効果を有しており、食品、医薬品、医薬部外品および化粧品等の分野に利用することができる。