(57)【要約】  【課題】  被検者への負担が少なく、迅速、安全、簡便にパーキンソン病とパーキンソン病類似疾患を鑑別することを可能にするパーキンソン病診断用キット、およびこれを用いた診断方法を提供する。  【解決手段】  αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤A、ならびにノルアドレナリン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤Bを被検者に点眼し、両者の散瞳量を比較することによって、パーキンソン病を特異的に診断することが可能なパーキンソン病診断キットおよびパーキンソン病診断方法。   【特許請求の範囲】
【請求項１】
αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤A、ならびにノルアドレナリン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤Bを含むパーキンソン病診断キット。
【請求項２】
さらに微量点眼装置を含む請求項１に記載のパーキンソン病診断キット。
【請求項３】
さらに正常者散瞳量の基準を含む請求項１または２に記載のパーキンソン病診断キット。
【請求項４】
αアドレナリン受容体作動薬が、フェニレフリン、エチレフリン、メトキサミン、ミドドリン、アドレナリンおよびノルアドレナリンからなる群より選択される少なくとも一種である請求項１〜３のいずれかに記載のパーキンソン病診断キット。
【請求項５】
ノルアドレナリン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬がコカイン、イミプラミン、チラミン、エフェドリンおよびアンフェタミンからなる群より選択される少なくとも一種である請求項１〜３のいずれかに記載のパーキンソン病診断キット。
【請求項６】
（１）被検者の瞳孔の大きさを計測する工程
（２）点眼剤Aおよび点眼剤Bを点眼する工程
（３）両側瞳孔の大きさを計測して散瞳量を算出する工程
を、この順に含む、請求項１に記載のパーキンソン病診断方法。
【請求項７】
αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤Aを点眼することができる第一点眼装置、ノルアドレナリン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤Bを点眼することができる第二点眼装置、瞳孔画像記録手段ならびに瞳孔の大きさを計測する装置を含むパーキンソン病診断装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パーキンソン病診断キットおよびパーキンソン病診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
パーキンソン病は、振戦、筋固縮、無動、姿勢反射障害、仮面様顔貌、小刻み歩行等の錐体外路系の運動障害を主症状とし、脳内のドーパミン作動性神経の脱落を特徴とする脳神経変性疾患である。また、パーキンソン病患者では、心臓交感神経の神経終末が脱落することが知られている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
パーキンソン病の診断は、基本的には脳神経専門医によって行われ、神経学的所見、および抗パーキンソン病薬の投与によって症状が改善されること等を診断基準としている。近年の画像技術の進歩により、β-CITをリガンドとしたsingle photon emission CT （SPECT）、フルオロドーパをリガンドとしたpositron emission CT（PET）、およびMIBGをリガンドとした心筋シンチグラム等が行われるようになったが、診断に数時間を要する。また、MIBG心筋シンチグラムは、偽陰性が多く診断が困難である。さらに、これらはいずれも放射性同位体を使用しており、実施可能な施設が限られる上、検者、被検者ともに放射線を被曝する問題がある （例えば、非特許文献2参照）。
【非特許文献１】Yoshita M., Journal of Neurological Science; 155, pp. 60-67, 1998.
【非特許文献２】Goldstein DS, Holmes C, Cannon III RO, Eisenhofer G, Kopin IJ., New Engl J Med; 336, pp. 696-702, 1997.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って、本発明は、被検者への負担が少なく、迅速、安全、簡便にパーキンソン病とパーキンソン病類似疾患を鑑別することを可能にするパーキンソン病の診断キットおよび診断方法の提供を主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、パーキンソン病患者において交感神経節に異常が認められることから、二種の薬剤を用いて散瞳量を観察することによって、パーキンソン病の診断ができることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明は、以下のパーキンソン病診断キットおよびパーキンソン病診断方法を提供する。
項１．αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤A、ならびにノルアドレナリ
ン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤Bを含むパーキンソン病診断キット。
項２．さらに微量点眼装置を含む項１に記載のパーキンソン病診断キット。
項３．さらに正常者散瞳量の基準を含む項１または２に記載のパーキンソン病診断キット。
項４．αアドレナリン受容体作動薬が、フェニレフリン、エチレフリン、メトキサミン、ミドドリン、アドレナリンおよびノルアドレナリンからなる群より選択される少なくとも一種である項１〜3のいずれかに記載のパーキンソン病診断キット。
項５．ノルアドレナリン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬がコカイン、イミプラミン、チラミン、エフェドリンおよびアンフェタミンからなる群より選択される少なくとも一種である項１〜3のいずれかに記載のパーキンソン病診断キット。
項６．
（１）被検者の瞳孔の大きさを計測する工程
（２）点眼剤Aおよび点眼剤Bを点眼する工程
（３）両側瞳孔の大きさを計測して散瞳量を算出する工程
を、この順に含む、項１に記載のパーキンソン病診断方法。
項７．αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤Aを点眼することができる第一点眼装置、ノルアドレナリン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤B を点眼することができる第二点眼装置、瞳孔画像記録手段ならびに瞳孔の大きさを計測する装置を含むパーキンソン病診断装置。
【０００７】
本発明の限定的解釈を望むものではないが、本発明の作用機序について、本発明者は以下のように考える。
【０００８】
パーキンソン病患者では、瞳孔散大筋の交感神経終末の異常から、該神経終末の脱落がおこり、αアドレナリン受容体が脱神経による過敏状態を呈する。このため、正常者では無散瞳または弱散瞳を示す程度の低濃度αアドレナリン受容体作動薬を、パーキンソン病患者に点眼すると、顕著な散瞳を示す。一方、ノルアドレナリン再取り込み阻害薬またはノルアドレナリン放出薬を点眼すると、正常であれば、瞳孔散大筋にノルアドレナリン過剰状態をもたらして散瞳するのに対し、パーキンソン病患者では、交感神経終末の脱落によってノルアドレナリンの分泌量が減少しているため、上記の点眼薬を点眼しても無散瞳または弱散瞳にとどまる。
【０００９】
したがって、パーキンソン病患者では、αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤（点眼剤A）による散瞳量（A散瞳量）が、ノルアドレナリン再取り込み阻害薬またはノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤（点眼剤B）による散瞳量（B散瞳量）よりも大きくなり、正常者またはパーキンソン病類似疾患では瞳孔節後神経脱落がないため、A散瞳量がB散瞳量に比べて同等または小さくなることから鑑別が可能である。
【００１０】
ただし、上記の各薬剤に対する散瞳量の変化は、若年の正常者には当てはめることができるが、高齢者では当てはまらないこともある。本明細書中において、若年者とは30〜40歳代を指す。
【００１１】
本発明に係るパーキンソン病診断キットは、αアドレナリン受容体作動薬を有効成分とする点眼剤A、ならびにノルアドレナリン再取り込み阻害薬および／またはノルアドレナリン放出薬を有効成分とする点眼剤Bを必須とする。
【００１２】
点眼剤Aに使用される薬剤は、αアドレナリン受容体作動薬であれば特に限定されないが、例えば、フェニレフリン、エチレフリン、メトキサミン、ミドドリン、アドレナリンまたはノルアドレナリン等があげられる。
【００１３】
点眼剤Aは、フェニレフリンの場合、5％以上の濃度では正常者でも散瞳作用を示すため、正常者では散瞳作用が軽度にとどまり、且つ交感神経の脱落があった場合は脱神経過敏性を示す程度に低濃度であることが好ましい。点眼剤Aにフェニレフリンを単独で用いた場合の濃度は、0.01〜4.00％程度、好ましくは0.5〜1.5％程度である。フェニレフリン以外の成分を用いる場合には、フェニレフリン量を参考にして当業者は容易に適切な濃度を決定できる。点眼剤Aの濃度としては、通常0.005〜4.5%程度、好ましくは0.2〜2.5%程度、より好ましくは0.5〜1.5％程度である。
【００１４】
点眼剤Aの点眼量は1%フェニレフリンの場合、1回10〜100μl程度、好ましくは15〜80μl程度、より好ましくは40μl程度である。
【００１５】
点眼剤Bに使用される薬剤は、ノルアドレナリン再取り込み阻害薬またはノルアドレナリン放出薬であれば特に限定されず、前者としてコカイン、イミプラミン等、後者としてチラミン、エフェドリン、アンフェタミン等があげられる。点眼剤Bがノルアドレナリン放出薬である場合、ノルアドレナリン神経の脱落の程度により散瞳効果が変化する程度の濃度、すなわち過剰量でない濃度であることが好ましい。点眼剤Bにコカインを単独で用いた場合の濃度は、1〜20％程度、好ましくは3〜10％程度、より好ましくは5％程度である。コカイン以外の成分を用いる場合には、コカイン量を参考にして当業者は容易に適切な濃度を決定できる。点眼剤Bの濃度としては、通常0.5〜20%程度、好ましくは2〜15%程度、より好ましくは3〜8％程度である。
【００１６】
点眼剤Bの点眼量は5%コカインの場合、1回10〜100μl程度、好ましくは15〜80μl程度、より好ましくは40μl程度である。
【００１７】
また、αアドレナリン受容体作動薬、ならびにノルアドレナリン再取り込み阻害薬また
はノルアドレナリン放出薬は、塩として用いることもできる。塩の種類としては、塩酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩等の無機塩および酒石酸塩、マレイン酸塩等の有機塩をあげることができる。さらに、これらの薬剤は、単独または２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００１８】
上記の点眼剤Aおよび点眼剤Bは、賦形剤、担体または添加剤を含んでいても良い。賦形剤、担体および添加剤としては、通常使用され、かつ薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、その種類および組成は、適宜変更が可能である。
【００１９】
賦形剤としては、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム等があげられ、担体としては、滅菌水、生理食塩水、および各種緩衝溶液等があげられる。添加剤としては、粘稠剤、緩衝剤、保存剤または防腐剤、香料または清涼化剤等があげられる。
【００２０】
粘稠剤としては、メチルセルロース（MC）、カルメロースナトリウム（CMC-Na）、コンドロイチン硫酸等があげられる。
【００２１】
緩衝剤としては、ホウ酸、ポリリン酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸二カリウム、マレイン酸、無水クエン酸、乾燥炭酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸ナトリウム等があげられる。
【００２２】
保存剤または防腐剤としては、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル、ベンジルアルコール、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム等があげられる。
【００２３】
香料または清涼化剤としては、d−カンフル、dl−カンフル、l−メントール、サリチル酸メチル等があげられる。
【００２４】
点眼剤Aおよび点眼剤Bは、pH3.5〜9.0程度、好ましくはpH7.4程度に調製される。
【００２５】
点眼剤Aおよび点眼剤Bは、ともに角膜浸透率が維持されているものであることが好ましい。また、角膜浸透率を調節する薬剤を点眼剤Aおよび点眼剤Bの点眼前に、または同時に点眼することによって、個体差または年齢差による誤差を少なくすることができる。角膜浸透率を調節する薬剤としては、サポニン、EDTA、塩酸ベンザルコニウム、パラベン等があげられる。これらの角膜浸透率を調節する薬剤の濃度は、通常0.01〜5％程度、好ましくは0.1〜2％程度である。また角膜浸透率を調節する薬剤の使用量は、通常用いられる点眼剤の量を参考に、当業者によって容易に決定することができる。
【００２６】
また、点眼剤Aおよび点眼剤Bは、有効成分の薬剤を溶媒に溶解しておくこともでき、点眼時に調製することもできる。
【００２７】
本発明に係るパーキンソン病の診断方法は、好ましい実施態様として以下のプロセスを含む。該診断方法は、両眼を用いた場合または単眼を用いた場合のいずれにも適用できるが、ここでは両眼を用いた場合について説明する。両眼を用いた場合および単眼を用いた場合の変更点は、当業者であれば容易に想到し得るものである。
【００２８】
プロセス１（点眼前の瞳孔の大きさの計測）
プロセス１では、パーキンソン病が疑われる被検者の瞳孔の大きさを計測する。
【００２９】
計測は、赤外線カメラ、ビデオカメラ、デジタルカメラ等の通常使用される画像記録媒体を用いて被検者の瞳孔画像を記録し、グリッド線等を用いて行う。この場合、記録された画像情報（信号）をコンピューターに送り、ソフトウェアで瞳孔の大きさを計測することもできる。
【００３０】
計測は、瞳孔画像をカメラ等で記録して行うことが好ましいが、散瞳量が1mm以上の典型的な場合には肉眼で行ってもよい。この場合、簡便な方法として、瞳孔径の大きさを直接、定規等で計測することができる。
【００３１】
瞳孔の大きさの測定は、暗室等の中で測定を行うと、特に若年者では散瞳量が多くなる傾向にあるため、通常の室内光くらいの明るさで、一定の照度を保持することができる条件下で行うことが好ましい。また、交感神経を刺激すると散瞳量に影響があるため、被検者を緊張状態にしないことが好ましい。
【００３２】
プロセス２（点眼）
プロセス２では、通常は、点眼剤Aおよび点眼剤Bの一定量を、微量点眼装置を用いて点眼する。
【００３３】
両眼を用いた診断では、一側眼に点眼剤Aを、他側眼に点眼剤Bを同時に、または連続的に点眼して診断することができる。また、両眼に点眼剤Aまたは点眼剤Bのうち一種類を点眼し、１日以上おいて、両眼にもう一種類の点眼剤を点眼して診断を行ってもよい。点眼剤Aおよび点眼剤Bを別々の日に点眼する場合、A散瞳量およびB散瞳量のどちらから測定するかは、臨床医が自由に決定することができる。
【００３４】
本発明に係る微量点眼装置は、一定量の点眼剤を点眼できるものであれば特に限定されず、例えば、シリンジ、スポイト、ピペットまたは通常用いられる点眼容器等があげられる。ただし、該微量点眼装置は、厳密に一定量を点眼できるものでなくてもよく、診断に必要な量の点眼剤を点眼できればよい。また、該微量点眼装置は、衛生上の観点から、滅菌され、ディスポーザブルであることが好ましい。
【００３５】
点眼剤Aおよび点眼剤Bを点眼する際の患者の姿勢は、臥位が好ましいが、座位であってもよい。点眼剤Aおよび点眼剤Bは、鼻側強膜の近傍に点眼することが好ましく、点眼後は、まばたきをせずに軽く閉眼したまま1〜5分程度おくことが好ましい。
【００３６】
プロセス３（散瞳量の算出）
プロセス３では、所定時間後に再度、両側の瞳孔の大きさを計測してA散瞳量およびB散瞳量を求める。
【００３７】
点眼を行ってから瞳孔の大きさを計測するまでの時間は、30〜90分程度、好ましくは45〜75分程度、最も好ましくは60分程度である。
【００３８】
瞳孔の大きさの計測は、プロセス１と同様に行う。得られた点眼後の瞳孔の大きさの値から、プロセス１で得られた点眼前の瞳孔の大きさの値を引いて、散瞳量とする。このとき、点眼剤Aによる散瞳量をA散瞳量、点眼剤Bによる散瞳量をB散瞳量とする。
【００３９】
好ましい実施態様の１つとして、各散瞳量の値から算出されるSR値（SR: Sympathetic Ratio）を用いたパーキンソン病の診断方法があげられる。
【００４０】
A散瞳量およびB散瞳量は、ともに年齢に依存する（図１−aおよび図1−b）。従って、各散瞳量を年齢補正すると、正常者ではA散瞳量がB散瞳量を下回るか、または同程度と期待され、パーキンソン病患者のように、瞳孔散大筋の交感神経支配が低下した場合には、A散瞳量がB散瞳量を上回ることが期待される。本明細書中において、正常者とは、交感神経節に異常がみられないことを意味する。
【００４１】
このことから、パーキンソン病の診断は、下記式（I）から求められるSR値を用いて行うことができる。
[数１] 
SR値＝（B散瞳量−b）／（A散瞳量−a）    式（I）
aは、正常者におけるA散瞳量と年齢に表される回帰直線のY軸切片の値を示す。
ｂは、正常者におけるB散瞳量と年齢に表される回帰直線のY軸切片の値を示す。
【００４２】
例えば、カットオフ値を0.5としたとき、SR値が0.5以下の場合にパーキンソン病であると診断できる。カットオフ値を仮に0.5とした場合、本発明に係るパーキンソン病の診断は、感受性78%および特異性100%の高い診断率を示す。若年者の場合は角膜浸透率が低いため、SR値を用いた診断を行うことが好ましい。なお、カットオフ値は、臨床医によって通常決定される方法で決めることができる。
【００４３】
また、被検者のSR値は、正常者の値と比較することによってパーキンソン病の重症度を知る指標として利用することができる。
【００４４】
さらに、本発明の他の好ましい実施態様として、A散瞳量値からB散瞳量値を引いた値によってパーキンソン病を診断する方法があげられる。すなわち、A散瞳量がB散瞳量よりも0.5mm程度以上、好ましくは1.5mm程度以上、最も好ましくは2mm程度以上大きい場合に、パーキンソン病と診断する。被検者が50歳代以上の高齢者である場合は、一般的に角膜浸透率が高いため、この方法を用いてもよい。
【００４５】
また、最も簡便には、A散瞳量またはB散瞳量のみからパーキンソン病の診断が可能である。このとき、前述の角膜浸透率を調節する薬剤を用いることが好ましい。例えば、点眼剤Bに5%コカインを使用した場合では、散瞳量が1mm程度以下、好ましくは0.5mm程度以下であるとき、パーキンソン病であると診断する。この方法は、パーキンソン病を予備的に診断する方法であるため、他の診断方法と組み合わせて使用することが好ましい。
【００４６】
本発明のパーキンソン病診断キットを使用した場合、同一被検者において計測したA散瞳量およびB散瞳量を比較するため、角膜浸透率および神経終末受容体の感受性等の個体差を考慮する必要はないが、正常者散瞳量の基準を参照することが好ましい。特に、若年性パーキンソン病のような角膜浸透率によるばらつきが予想される場合には、該正常者散瞳量の基準を参照することが好ましい。ここで、若年性パーキンソン病とは、パーキンソン病を発症する年齢が、40歳未満の症例を指す。
【００４７】
散瞳量の算出の方法は、特に限定されず、瞳孔の直径から求める方法の他に、画像処理技術の利用等によって、瞳孔の半径または面積を求めて算出することもできる。また、瞳孔と光彩の比からも散瞳量を算出することができる。
【００４８】
本発明に係る正常者散瞳の基準は、正常者に点眼剤Aまたは点眼剤Bを点眼した際の散瞳量を示したものであれば特に限定されず、例えばグラフ、分布図、表またはカットオフ値等があげられる。
【００４９】
分布図としては、例えばX軸をA散瞳量、Y軸をB散瞳量とし、正常者およびパーキンソン病患者の各散瞳量をプロットすることで作成できる。簡便な方法の１つとして、該分布図に被検者の散瞳量をプロットして診断する方法があげられる。
【００５０】
本発明のパーキンソン病診断キットは、進行性核上麻痺、血管性パーキンソニズム等のパーキンソン病類似疾患とパーキンソン病を鑑別するために使用することができ、これらの疾患の早期から末期にかけてひろく適用することが可能である。また、本発明に係る診断用キットを用いて、大脳皮質・基底核・間脳・脳幹型レビー小体病、び漫型レビー小体病、および脳幹型レビー小体病などのレビー小体病を含む、パーキンソン症状を伴うレボドパを有効な治療薬とする疾患の診断が可能である。また、パーキンソン病類縁疾患である純粋自律神経不全症（pure automatic failure : PAF）の診断に用いることもできる。
【００５１】
本発明の適用対象は、パーキンソン病が疑われる被験体であれば特に限定されない。ただし、緑内障の患者には、適用ができない場合がある。また、角膜炎、角膜損傷、白内障、Horner症候群等の場合にも症状によっては、適用ができない場合がある。しかし、これらの症状が一側にだけみられる場合は、単眼のみでも適用は可能である。このとき、点眼剤Aおよび点眼剤Bを同日に点眼するのではなく、少なくとも1日以上あけて点眼を行うことが好ましい。また、点眼前の瞳孔径は、毎回計測することが好ましい。
【００５２】
本発明に係るパーキンソン病診断装置に含まれる第一点眼装置および第二点眼装置は、一定量の点眼剤を点眼できるものであれば特に限定されない。また、瞳孔画像記録手段としては、赤外線カメラ、ビデオカメラ、デジタルカメラ等の通常使用される画像記録手段を利用することができる。さらに、瞳孔の大きさを計測する装置としては、画像記録手段から送信された画像情報（信号）より瞳孔の大きさを計測できるソフトウェア、およびそのソフトウェアを作動させるコンピューター等があげられる。画像記録装置および計測装置は、各点眼装置に組み込んで使用することができ、または、それぞれを各点眼装置と組み合わせて使用することもできる。
【００５３】
本発明のパーキンソン病診断キットは、公知の画像診断、生化学的検査、問診等と組み合わせて使用することができる。
【発明の効果】
【００５４】
本発明のパーキンソン病診断キットによれば、従来、鑑別が困難であったパーキンソン病類似疾患とパーキンソン病を迅速、安全、簡単に鑑別することができる。特に、軽症例および長期臥床状態にあり、従来の方法では診断が困難であった症例に対してはきわめて有効である。
【００５５】
本発明に係る診断キットによる診断では、一側眼に点眼剤Aを、他側眼に点眼剤Bを点眼する方法をとった場合、診断にかかる時間は、待機時間を含めても１時間程度であり、従来の方法に比べて短時間で診断が可能である。また、この場合、実際に被検者が検査されている時間は、３分程度×２回の計６分程度である。さらに、本発明によるパーキンソン病診断は、放射線被曝がなく、特別な装置を必要としないため、患者の身体的および経済的負担を軽減することができる。したがって、一般的にひろく使用できることから、パーキンソン病の早期発見が可能である。
【００５６】
本発明によれば、従来、鑑別が困難であったパーキンソン病およびパーキンソン病類似疾患に対して適切な処置を行うことができる。すなわち、パーキンソン病と診断されれば、レボドパ（L-DOPA）等のパーキンソン病治療薬の服用により生活の質を改善させることができる。また、レボドパが有効でない疾患であるにも関わらず、パーキンソン病と診断される恐れのあるパーキンソン病類似疾患患者においては、レボドパを服用することによるせん妄、幻覚、消化器障害等の無用な副作用を回避することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５７】
以下、実施例をあげて説明する。
【００５８】
本実施例では、両眼に点眼剤Bを点眼してその散瞳量を決定し、１日以上あけて両眼に点眼剤Aを点眼し、その散瞳量を決定する方法をとった。散瞳量は、瞳孔の直径から求めた。
【実施例１】
【００５９】
正常者12人（本実施例においては、本態性振戦患者５人を正常者に含んだ。）の両側の瞳孔径を、室内光のもと、ビデオカメラを用いて計測した。ついで、両眼に点眼剤B（5%コカイン）を点眼容器を用いて40μl点眼した。点眼後60分の後、再度、室内光のもとでビデオカメラを用いて瞳孔径を計測し、点眼前の瞳孔径の値を引いて散瞳量（B散瞳量）を求めた。
【００６０】
B散瞳量計測後、１日以上あけて、室内光のもとでビデオカメラを用いて両眼瞳孔径を測定した。ついで、両眼に点眼剤A（1%フェニレフリン）を点眼容器を用いて40μl点眼した。点眼後60分の後、再度、室内光のもとでビデオカメラを用いて瞳孔径を計測し、点眼前の瞳孔径の値を引いて散瞳量（A散瞳量）を求めた。
【００６１】
本実施例を通して、瞳孔径の計測は、以下のように行った。
【００６２】
あらかじめ用意した、1cm間隔の縦10本、横10本の直線からなるグリッド模様を赤外線ビデオカメラのレンズ部分から100cmのところに設置し、これを赤外線ビデオカメラで記録した。その際、赤外線ビデオカメラのモニタ上に映し出されたグリッド模様の間隔が0.5 cmになるように（つまり、実物の0.5倍となる様に）ズーム倍率を慎重に調整した。ついで、被験者の瞳孔と赤外線ビデオカメラのレンズ部分との距離が100cmになるように距離を調節した状態で、窓のない一定照度の部屋で両眼のビデオ映像を録画した。撮影後、ビデオを再生し、ビデオカメラモニタの再生ズームを２倍にして（すなわち、モニタ上の像は、実物の1.0倍）撮影されているグリッド模様の間隔をモニタ上に再生、一時停止し、モニタにあてたスケールで1cm間隔であることを確認した。その後、モニタに映し出された両眼の画像を一時停止し、モニタ上にスケールをあて瞳孔径を測定した
各被検者の散瞳量を、図1−aおよび図1−bに示す。結果より、A散瞳量およびB散瞳量は、共に年齢と正相関関係にあることがわかった。したがって、パーキンソン病の診断において、年齢の要因を無視できる値を算出するための式（IV）を、以下のように導いた。
【００６３】
計測されたA散瞳量およびB散瞳量から、それぞれ下記式（II）および式（III）を得た。
［数２］A散瞳量＝−1.788＋0.055×Age        式（II）
［数３］B散瞳量＝−0.664＋0.035×Age        式（III）
ここで、式（I）の傾き0.055および式（II）の傾き0.035は、年齢による点眼剤Aおよび点眼剤Bへの反応増大を示し、正常者では、年齢が１歳増すごとに、それぞれ、0.055ｍｍ、0.035mmずつ散瞳量が増大することを表す。
【００６４】
点眼剤Aおよび点眼剤Bによる散瞳量から、下記式（IV）に示されるSR値が求められる。
［数４］SR値＝（B散瞳量＋0.664）／（A散瞳量＋1.788）    式（IV）
式（IV）において、（A散瞳量＋1.788）および（B散瞳量＋0.664）は、それぞれ、正常者群のA散瞳量、B散瞳量より求めた回帰直線の年齢（歳）あたりの傾きで、両者の比（B散瞳量＋0.664）／（A散瞳量＋1.788）は、正常者群では年齢によらず、一定の値に収束する。正常者に比して、パーキンソン病患者ではA散瞳量が同等または大きく、B散瞳量が小さくなる傾向があるため、この値が正常者の値より小さくなるとパーキンソン病の可能性が高くなる。
【実施例２】
【００６５】
正常者12人（本実施例においては、本態性振戦患者５人を正常者に含んだ。）およびパーキンソン病患者18人の両側瞳孔径を、室内光のもと、ビデオカメラを用いて計測した。ついで、両眼に点眼剤B（5%コカイン）を点眼容器を用いて40μl点眼した。点眼後60分の後、再度、室内光のもとでビデオカメラを用いて瞳孔径を計測し、点眼前の瞳孔径の値を引いて散瞳量（B散瞳量）を求めた。
【００６６】
B散瞳量計測後、１日以上あけて、室内光のもとでビデオカメラを用いて両眼瞳孔径を測定した。ついで、両眼に点眼剤A（１％フェニレフリン）を点眼容器を用いて40μl点眼した。点眼後60分の後、再度、室内光のもとでビデオカメラを用いて瞳孔径を計測し、点眼前の瞳孔径の値を引いて散瞳量（A散瞳量）を求めた（表１）。なお、瞳孔径の測定は、実施例１と同様に行った。
【００６７】
【表１】
2005162693.tif 000002
【００６８】
表中に示される点眼液Aは1%フェニレフリン、点眼液Bは5%コカインである。この場合、点眼液Aによる散瞳量（A散瞳量）が点眼液Bによる散瞳量（B散瞳量）を上回っているのは、1%フェニレフリンを用いたためであり、さらに低濃度のフェニレフリンでは、B散瞳量がA散瞳量を上回ると考えられる。なお、表１には、A液のみの検査を施行した４名が含まれる。
【００６９】
計測されたA散瞳量およびB散瞳量より、式（IV）を用いてSR値を求めた。正常者のSR値およびパーキンソン病患者のSR値を比較すると、正常者では0.640±0.101（平均±標準偏差）であるのに対し、パーキンソン病患者では0.350±0.146と低いことがわかった（図２−a、および図２−b）。本実施例で得られた、正常者およびパーキンソン病患者の瞳孔写真の代表例を図3に示す。また図２−bより、仮に正常値のカットオフ値を0.5以上とすると、本発明に係る診断キットを用いたパーキンソン病の診断方法は、感受性78%、特異性100%、偽陰性率22%、偽陽性率0%となり、高い信頼性を示した（表２）。
【００７０】
【表２】
2005162693.tif 000003
【実施例３】
【００７１】
本態性振戦患者5人およびパーキンソン病患者30人に対し、従来使用されてきた検査方法であるMIBG心筋シンチグラムを行った。本態性振戦患者は、交感神経終末の脱落がみられないため、MIBG心筋シンチグラムにおいて正常者と同様の結果が得られる。
【００７２】
MIBG心筋シンチグラムとは、MIBG（iodine-131-meta-iodobenzylguanidine、noradorenalineの類縁体）を静脈注射して約４時間後にγカメラで胸部を撮影する方法である。MIBGは、交感神経終末に取り込まれることが周知である。心臓交感神経終末に取り込まれたMIBGの値、および縦隔の交感神経終末に取り込まれたMIBGの値の比（H/M比：late heart／mediastinum）を求めることによって、パーキンソン病の診断が可能である。パーキンソン病患者では、心臓交感神経終末の脱落が見られるため、H/M比が低い値を示す。
【００７３】
本実施例で得られたH/M比および実施例２で得られたSR値を、それぞれ被検者の年齢に着目して比較した。図4より、正常者では、相関係数-0.020、p=0.9976（Bartlett検定）、パーキンソン病患者では、相関係数-0.035、p=0.9888（Bartlett検定）を示し、正常者およびパーキンソン病患者ともSR値は、年齢の影響を受けにくいことがわかった。
【００７４】
これに対し、図5より、H/M比は、正常者では年齢と共に低下する傾向が見られた。H/M比の値の正常下限を２とした場合でも、診断の感受性73%、特異性100%、偽陰性率27%および偽陽性率0%であり、SR値による診断は、H/M比により診断と同等の特異性および高い感受性を有することがわかった（表３）。
【００７５】
【表３】
2005162693.tif 000004
【００７６】
また、図6に示されるように、SR値およびH/M比のあいだには、統計的に有意な正相関（相関係数0.637；p=0.0010：Bartlett検定）がみられた。なお、図６には、実施例２および実施例３の両評価を受けた被検者の値をプロットした。
【実施例４】
【００７７】
パーキンソン病患者では、ドーパミンの前駆体であるレボドパ（L-DOPA）を内服していることが多い。レボドパは、一部末梢血中でノルエピネフリンに変換されるため、内服レボドパ量の本発明の診断成績への影響を検討した。
【００７８】
レボドパを服用していないパーキンソン病患者４人およびレボドパを服用しているパーキンソン病患者12人の両側瞳孔径を、室内光のもと、ビデオカメラを用いて計測した。
ついで、両眼に点眼剤B（5%コカイン）を点眼容器を用いて40μl点眼した。点眼後60分の後、再度、室内光のもとでビデオカメラを用いて瞳孔径を計測し、点眼前の瞳孔径の値を引いてB散瞳量を求めた。
【００７９】
B散瞳量計測後、１日以上あけて、室内光のもとでビデオカメラを用いて両眼瞳孔径を測定した。ついで、両眼に点眼剤A（1%フェニレフリン）を点眼容器を用いて40μl点眼した。点眼後60分の後、再度、室内光のもとでビデオカメラを用いて瞳孔径を計測し、点眼前の瞳孔径の値を引いて散瞳量（A散瞳量）を求めた。なお、瞳孔径の測定は、実施例１と同様に行った。
【００８０】
計測されたA散瞳量およびB散瞳量より、式（IV）を用いてSR値を求めたところ、SR値およびレボドパ内服量との間には、有意な相関はみられなかった（相関係数-0.365；p=0.3176：Bartlett検定）（図7）。
【００８１】
本実施例において使用した、被検者の生データを表4に示す。
【００８２】
【表４】
2005162693.tif 000005
Ｍ：男性    ＥＴ：本態性振戦          ｕｎｋｏｗｎ：Ｌ−ＤＯＰＡ服用不明
Ｆ：女性    Ｎｏｒｍａｌ：正常者      ｎｔ：試験せず
ＰＤ：パーキンソン病患者  
【００８３】
本実施例より、本発明の診断キットを用いたパーキンソン病の診断方法は、迅速、安全かつ簡便であって、高い診断率を提供できることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１−ａ】正常者１２人におけるA散瞳量と年齢との関係を表す。A散瞳量は、年齢と共に増大し、両者には正相関（相関係数0.774, p=0.0041; Bartlett検定）が見られた。回帰直線を図中に示す。図中、R＾2は、回帰モデルのR2乗値を示す。
【図１−ｂ】正常者１２人におけるB散瞳量と年齢との関係を示す。B散瞳量は、年齢と共に増大し、両者には正相関（相関係数0.833, p=0.0013; Bartlett検定）が見られた。回帰直線を図中に示す。図中、R＾2は、回帰モデルのR2乗値を示す。
【図２−ａ】正常者（normal）１２人、およびパーキンソン患者（PD）１８人のSR値を比較した箱ひげ図を表す。箱ひげ図の中央は、中央線を、箱の上端、下端は、それぞれ上下25パーセンタイル値を表す。上下の誤差線は、それぞれ、上下10パーセンタイル値を表す。
【図２−ｂ】正常者（normal）１２人、およびパーキンソン病患者（PD）１８人のSR値の分布図を表す。
【図３】正常者（normal）およびパーキンソン病患者（PD）に1%フェニレフリンおよび5%コカインを点眼する前および点眼した後の瞳孔写真の代表例を示す。
【図４】正常者（normal）１２人、およびパーキンソン病患者（PD）１８人のSR値および年齢との関係を表す。
【図５】MIBG心筋シンチグラムにおけるH/M比と年齢との関係を表す。
【図６】MIBG心筋シンチグラムにおけるH/M比とSR値との関係を表す。図中、R＾2は、回帰モデルのR2乗値を示す。
【図７】パーキンソン病患者におけるSR値とレボドパ（L-DOPA）内服量との関係を表す。
【図１−ａ】
2005162693.tif 000006
【図１−ｂ】
2005162693.tif 000007
【図２−ａ】
2005162693.tif 000008
【図２−ｂ】
2005162693.tif 000009
【図３】
2005162693.tif 000010
【図４】
2005162693.tif 000011
【図５】
2005162693.tif 000012
【図６】
2005162693.tif 000013
【図７】
2005162693.tif 000014