(57)【要約】【課題】  入手しやすい原料から製造することができ、しかも効果的にＡＬＳの病状の進行を阻止することができる新規な運動神経細胞減少抑制剤を得ることを目的とする。【解決手段】  一般式【化１】2005306794.tif 000005  （Ｒ1は炭素数１５の飽和又は不飽和脂肪族直鎖状炭化水素基、Ｒ2は水素原子又はアシル基）で表わされるフェノール誘導体の少なくとも１種を有効成分としてなる運動神経細胞減少抑制剤とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式
【化１】
2005306794.tif 000004
（式中のＲ1は炭素数１５の飽和又は不飽和脂肪族直鎖状炭化水素基、Ｒ2は水素原子又はアシル基である）
で表わされるフェノール誘導体の少なくとも１種を有効成分としてなる運動神経細胞減少抑制剤。
【請求項２】
式中のＲ1がペンタデシル基である請求項１記載の運動神経細胞減少抑制剤。
【請求項３】
式中のＲ1がペンタデセニル基である請求項１記載の運動神経細胞減少抑制剤。
【請求項４】
式中のＲ1がペンタデカジエニル基である請求項１記載の運動神経細胞減少抑制剤。
【請求項５】
式中のＲ1がペンタデカトリエニル基である請求項１記載の運動神経細胞減少抑制剤。
【請求項６】
式中のＲ2が水素原子である請求項１ないし５のいずれかに記載の運動神経細胞減少抑制剤。
【請求項７】
式中のＲ2がアシル基である請求項１ないし５のいずれかに記載の運動神経細胞減少抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、難病の１種である筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，以下ＡＬＳと略記する）の治療に有効な運動神経細胞減少抑制剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＡＬＳは、運動ニューロンの変性に起因し、上位及び下位運動神経細胞の選択的変性をもたらす難病である。そして、この中には、上位運動神経のみが変性する原発性側索硬化症と下位運動神経のみ変性する脊髄性進行性筋萎縮症が包含される。
【０００３】
この疾患は、上肢遠位筋の障害で初発することが多く、その後、舌の萎縮と繊維束性攣縮、嚥下困難、言語障害、四肢遠位筋の筋萎縮・筋力低下・繊維束性攣縮、四肢腱反射亢進、病的反射などの症状が現れるようになる。これらの症状は、初期には非対称性のことが多いが、やがて全身に及ぶようになる。
【０００４】
また、この疾患では、脊髄、特に頚髄では前根の萎縮が目立ち、脊髄の割面において錐体側索路の変色が認められ、頚髄前角は背腹方向に萎縮している。
この疾患を組織学的に考察すると、下位運動ニューロンの著しい脱落が認められ、この傾向は脊髄では頚髄で、脳神経運動核では舌下神経核で最も強い。
【０００５】
ＡＬＳの発症の原因としては、グルタミン酸代謝異常、特に高親和性グルタミン酸トランスポーターの減少、欠損による細胞外すなわちシナプス間隙のグルタミン酸濃度の上昇などが考えられるが、まだはっきりしていないため、ＡＬＳに対する治療法は確立していない。
【０００６】
しかしながら、ＡＬＳについては、運動神経細胞の著しい減少や脱落を生じることが知られており、これを阻止することにより、症状の進行を抑制し得ることが期待されるが、最近、マウスの脊髄運動神経細胞とマウス神経芽細胞とを融合することにより、不死化した運動神経細胞ＮＳＣ−１９及び３４の調製が成功したことにより（非特許文献１参照）、運動神経の死滅が可及的に防止し、その進行を阻止する研究がかなり活発に行われるようになり、種々のＡＬＳ治療薬も提案されている。
【０００７】
例えば、グルタミン酸による細胞死を抑制するメチルコバラミンを有効成分とするＡＬＳ治療剤（特許文献１参照）、ＡＬＳの運動機能を改善する効果をもつＨＧＦ又はＨＧＦ遺伝子を有効成分とするＡＬＳ治療剤（特許文献２参照）、オロチル‐Ｌ‐ヒスチジル‐Ｌ‐プロリンアミドのようなジペプチド誘導体を含有するＡＬＳ治療剤（特許文献３参照）などのほか、１‐（２‐ナフタ‐２‐イルエチル）‐４‐（３‐トリフルオロメチルフェニル）‐１，２，３，６‐テトラヒドロピリジン（特許文献４参照）、トリエチレンテトラミン（特許文献５参照）、３‐メチル‐１‐フェニル‐２‐ピラゾリン‐５‐オン（特許文献６参照）などを有効成分としたＡＬＳ治療薬が提案されている。
【０００８】
他方、植物抽出物や生薬成分を有効成分とするＡＬＳ治療薬も知られており、例えばイチョウ抽出物、特にフラボングリコシド類、ギンコライド類、ビロバライド及びプロアントシアニジン類を主成分としたもの（特許文献７参照）や、ツボクサに含まれるトリテルペン配糖体を有効成分とする運動神経細胞減少抑制剤（特許文献８参照）が提案されている。
しかしながら、これらのＡＬＳ治療薬は、いずれもまだその薬効が十分ではなく、これまでＡＬＳ治療薬として実用に供し得るものは皆無である。
【０００９】
【特許文献１】特開平１０−２１８７７５号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献２】特開２００２−８７９８３号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献３】特公平６−３７３９５号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献４】特表平１１−５１５０１２号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献５】特開２０００−２０４０３７号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献６】国際公開第２００２／０３４２６４号パンフレット（特許請求の範囲その他）
【特許文献７】特表平２００２−５２２３８７号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献８】特開２００４−５９４５５号公報（特許請求の範囲その他）
【非特許文献１】「デベロップメンタル・ダイナミックス（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）」、第１９４巻、１９９２年、ｐ．２０９−２２１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、このような事情のもとで、入手しやすい原料から製造することができ、しかも効果的にＡＬＳの病状の進行を阻止することができる新規な運動神経細胞減少抑制剤を得ることを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、運動神経細胞に作用する化合物を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、フェノール誘導体であるカルダノール（ｃａｒｄａｎｏｌ）の存在下で、運動神経細胞に類似する融合細胞ＮＳＣ−３４を培養すると、０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度において生存細胞が増加すること、したがって、これらを組織学的に運動神経の著しい減少や脱落がみられるＡＬＳの患者に投与すれば、その運動神経細胞の減少を抑制しうることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、一般式
【化１】
2005306794.tif 000002
（式中のＲ1は炭素数１５の飽和又は不飽和脂肪族直鎖状炭化水素基、Ｒ2は水素原子又はアシル基である）
で表わされるフェノール誘導体の少なくとも１種を有効成分としてなる運動神経細胞減少抑制剤を提供するものである。
【００１３】
上記一般式（Ｉ）で表わされるフェノール誘導体のうち、Ｒ2が水素原子でＲ1がペンタデシル基のもの、Ｒ2が水素原子でＲ1が８‐ペンタデセニル基のもの、Ｒ2が水素原子でＲ1が８，１１‐ペンタデカジエニル基のもの、Ｒ2が水素原子でＲ1が８，１１，１４‐ペンタデカトリエニル基のものは、ガンダノールとして知られ、カシュナッツ（Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｅ  Ｌ．）の殻に含まれる油を加熱分解することによって得ることができる。
【００１４】
上記のＲ2が水素原子でＲ1が８‐ペンタデセニル基のものは、イチョウ（Ｇｉｎｇｏ  ｂｉｌｏｂａ  Ｌ．）の葉に含まれるギンゴールとして知られており、これを原料として得ることができる。
カシュナッツの殻の油からカルダノールを得るには、例えばこの油を２００℃において１〜１０時間加熱分解したのち、クロロホルムのような有機溶媒で抽出し、これをシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーで処理することにより次式で示される、カルダノール（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）の混合物として得られる。このようにして得られる混合物は、無色液体である。
【化２】
2005306794.tif 000003
【００１５】
一般式（Ｉ）中のＲ2がアシル基の化合物は、上記のようにして得たＲ2が水素原子の化合物を、例えばピリジンのような有機塩基の存在下、カルボン酸無水物、カルボン酸ハライドのようなアシル化剤を反応させたのち、例えばクロロホルム−ヘキサンの等容混合物からなる溶媒とシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィ処理で精製することによって無色液体として得ることができる。
【００１６】
本発明の運動神経細胞減少抑制剤は、前記一般式（Ｉ）のフェノール誘導体を単独で含むものでもよいし、２種以上の混合物として含むものでもよい。
【００１７】
このようにして得られる、一般式（Ｉ）のフェノール誘導体又はそのアシル化物は、赤外吸収スペクトル及び1Ｈ又は13Ｃ核磁気共鳴スペクトルにより同定することができる。例えば図１にカルダノールの赤外吸収スペクトルを、図２にカルダノールの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを、また図３にカルダノールの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを、図４にカルダノールアセテートの赤外吸収スペクトルを、図５にカルダノールアセテートの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを、図６にカルダノールアセテートの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ示す。
【００１８】
これらのカルダノール及びカルダノールアセテートは、マウス脊髄運動神経細胞とマウス神経芽腫細胞とを融合して不死化した融合細胞ＮＳＣ−１９又はＮＳＣ−３４を用いて行った培養試験において、０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度で生存細胞を増加させる効果を示す。
【００１９】
そして、これらの融合細胞は、ＡＬＳ患者の運動神経と類似する挙動を示すことから、上記の試験で生存細胞が増加することは、ＡＬＳ患者の運動神経の減少や脱落が抑制される効果を有することを意味する。換言すれば、ＡＬＳ患者に投与することにより組織学的にその症状の進行を阻止しうるということになる。
【００２０】
したがって、これらのカルダノール及びカルダノールアセテートは、ＡＬＳ患者の治療に有効であるが、これをＡＬＳ患者に投与する場合、経口的又は非経口的のいずれでもよい。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によると、新規な運動神経細胞減少抑制剤が提供され、これを用いることにより、有効な治療を施すことができなかったＡＬＳ患者の症状の進行を阻止しうるという顕著な効果が奏される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
次に実施例により本発明を実施するための最良の形態を説明するが、本発明はこれによってなんら限定されるものではない。
【００２３】
参考例１
市販品として入手したカシュナッツ殻油［ボーラ・ラグハベンドラ・カマス・アンド・サンズ（Ｂｏｌａ  Ｒａｇｈａｖｅｎｄｒａ  Ｋａｍａｔｈ  ＆  Ｓｏｎｓ）社］の加熱分解物３０ｇをシリカゲル（和光純薬社製、商品名「ワコーゲル」）３００ｇに吸着させ、クロロホルムにより溶出させ、最初の留分を捕集し、溶媒を留出することによりカルダノール約２１ｇを無色液体として得た。このものの赤外吸収スペクトル、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル及び13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ図１、図２及び図３に示す。
【００２４】
参考例２
参考例１で得たカルダノール３ｇをピリジン９ｍｌに溶かし、これに無水酢酸１５ｍｌを加えて、１昼夜放置する。この溶液に氷水を加えて、無水酢酸を分解し、エーテルで抽出、エーテル層を飽和重曹水で洗い、次いで５％塩酸水で洗い、エーテルを除去して得られた液体をシリカゲル・カラムクロマトグラフィーで処理し、クロロホルム／ヘキサン（体積比１：１）で溶出させ、所望のカルダノールアセテート３ｇを得た。ここで得られた液体の赤外吸収スペクトル、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル及び13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルをそれぞれ図４、図５及び図６に示す。
【実施例１】
【００２５】
ダルベッコス・モディファイド・イーグルズ・メディアム（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ｀ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ｀ｓ  ｍｅｄｉｕｍ）中に、牛胎児血漿を１０％濃度で加えた９６穴組織培養プレートに、ＮＳＣ−３４細胞１００００個ずつを分注し、これに参考例１で調製したカルダノール０〜１００μｇ／ｍｌの濃度で加え、３７℃、５％ＣＯ2含有空気気流中で３日間培養した。
次いで、細胞比色試験キット（同仁化学研究所製、セルカウンティングキット−８）を用いてその生存率を測定した。その結果をグラフとして図７（Ａ）に示す。
【実施例２】
【００２６】
参考例２で調製したカルダノールアセテートを用い、実施例１と同様にして培養試験を行った。その結果をグラフとして図７（Ｂ）に示す。
これらの図から明らかなように、いずれの場合も０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度において、生存率の顕著な向上が認められる。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明の運動神経細胞減少抑制剤は、ＡＬＳの治療薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】参考例１で得たカルダノールの赤外吸収スペクトル図。
【図２】参考例１で得たカルダノールの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図３】参考例１で得たカルダノールの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図４】参考例２で得たカルダノールアセテートの赤外吸収スペクトル図。
【図５】参考例２で得たカルダノールアセテートの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図６】参考例２で得たカルダノールアセテートの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図７】カルダノール及びカルダノールアセテートの濃度と生存率の関係を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
2005306794.tif 000009
【図５】
2005306794.tif 000010
【図６】
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【図７】
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