(57)【要約】【課題】  新規な抗菌・抗腫瘍性物質及びその製造法の提供。【解決手段】  下記の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）で表される化合物、並びに微生物を用いる該化合物の製造方法。【化１】2005247737.tif 000009【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）：
【化１】
2005247737.tif 000006
で表される化合物。
【請求項２】
下記式（ＩＩ）：
【化２】
2005247737.tif 000007
で表される化合物。
【請求項３】
下記式（ＩＩＩ）：
【化３】
2005247737.tif 000008
で表される化合物。
【請求項４】
アクレモニウム属に属し、請求項１又は２記載の化合物を生産する能力を有する微生物を培養し、得られる培養物から該化合物を単離することを特徴とする請求項１又は２記載の化合物の製造方法。
【請求項５】
請求項２記載の化合物を酸性溶液中にて化学的に変換することにより、請求項３記載の化合物を得ることを特徴とする請求項３記載の化合物の製造方法。
【請求項６】
請求項１、２及び３に記載の化合物の少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤。
【請求項７】
請求項１、２及び３に記載の化合物の少なくとも１つを有効成分として含有することを特徴とする抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物が生産する新規な化合物及びその製造方法、並びにその化合物を含む抗菌剤及び抗腫瘍剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトは、感染症の治療のためにペニシリンやストレプトマイシン等多くの抗生物質や抗菌剤を利用してきた。しかしながら、医療現場における抗生物質の頻繁な使用によって、被使用菌が薬剤耐性を獲得し、使用抗生物質が効かなくなるという問題がある。また、癌などの腫瘍に対しても、抗生物質の使用を継続すると、使用抗生物質に対して耐性が生じる。
【０００３】
また現在、先に述べたペニシリンやストレプトマイシンに代表されるように、微生物代謝産物から有用な抗生物質を探索するという試みが行われている（特許文献１、２及び３参照）。また、生理活性物質の探索資源として真菌類や海洋性生物が着目されつつある（非特許文献１、２）。
【０００４】
上記で述べたような既存の抗生物質に耐性を獲得した病原菌に対して有効な、また、既存の抗癌剤では十分な治療効果が得られないような腫瘍に対する効果を有するような新しい抗生物質の発見が常に望まれている。特に、抗腫瘍活性を有する新規抗生物質の発見が望まれている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−２５７４５４号公報
【特許文献２】特開２０００−１８９１８２号公報
【特許文献３】特開平０５−２４７０１８号公報
【非特許文献１】供田  洋、化学と生物、Vol.40、No.11、p.757-764, 2002年
【非特許文献２】John W. Blunt, Brent R. Copp, Murray H. G. Munro, Peter T. Northcote and Michele R. Prinsep; Natural Products Report, 20, p.1-48, 2003年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、本発明は、抗菌活性又は抗腫瘍活性を有する新規な抗生物質を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、アクレモニウム属に属する微生物の培養液から得られた化合物が、新規であり、かつ抗菌活性及び抗腫瘍活性を示す有用な化合物であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、下記式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表される化合物である。
【０００９】
【化４】
2005247737.tif 000002
【００１０】
また、本発明は、アクレモニウム属に属し、上記式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物を生産する能力を有する微生物を培養し、得られる培養物から該化合物を単離することを特徴とする式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物の製造方法である。
【００１１】
本発明はまた、上記式（ＩＩ）の化合物を酸性溶液中で化学変換し、上記式（ＩＩＩ）の化合物を得ることを特徴とする式（ＩＩＩ）の化合物の製造方法である。
【００１２】
さらに本発明は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、及び／又は（ＩＩＩ）の化合物を有効成分として含む抗菌剤である。
また本発明は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、及び／又は（ＩＩＩ）の化合物を有効成分として含む抗腫瘍剤である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、上記の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）で表される新規な抗菌・抗腫瘍性化合物、並びに微生物を用いた該化合物の製造方法が提供される。本発明の化合物は、医薬品、医薬品原料、農薬及び農薬原料として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に本発明を詳細に説明する。
【００１５】
本発明の化合物は、最初に海洋性糸状菌（アクレモニウム・スピーシーズＨＪＫ−９株）から単離・精製された化合物であり、抗菌活性及び抗腫瘍活性を有するものである。従って、本発明の化合物は抗菌剤及び抗腫瘍剤としての用途を有する。本発明の化合物の性質及びその製造方法について以下に詳述する。
【００１６】
１．本発明の化合物の性質
本発明の化合物は、下記式（Ｉ）により表される化合物である。
【００１７】
【化５】
2005247737.tif 000003
【００１８】
上記式（Ｉ）で表される化合物の構造式及び理化学的性質は以下のとおりである：
（１）物質の色  ：無色
（２）分子量    ：２８２
（３）分子式    ：Ｃ１４Ｈ１８Ｏ５
（４）質量分析  ：高分解能ＦＡＢＭＳ（高速中性粒子衝突イオン化質量分析）
実測値  283.1154  （M + H）+
計算値  283.1182  （C14H19O5）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中） λmax（ε）  210nm (17000)
（６）１Ｈ ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中で測定、５００ＭＨｚ）
δppm  1.21(3H, d, J=6.0Hz), 1.50(3H, d, J=7.5Hz), 1.51(1H, m), 1.55(1H, m), 1.70(1H, m), 1.89(1H, m), 4.36(1H, m), 4.92(1H, m), 5.16(1H, q, J=7.5Hz), 5.94(1H, dd, J=16, 2Hz), 6.38(1H, d, J=16Hz), 7.19(1H, dd, J=16, 3Hz), 7.37(1H, d, J=16Hz)
（７）１３Ｃ ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中で測定、１２５ＭＨｚ）
δppm   15.90,  18.54, 27.58, 30.41, 68.55, 71.87, 75.21, 117.93, 129.64, 136.59, 154.17, 163.71, 165.51, 199.71
（８）溶解性    ：メタノール、酢酸エチル、クロロホルムに可溶。ヘキサンに難溶。
（９）抗菌活性  ：ペーパーディスク法にて、３０μｇの式（Ｉ）の化合物を直径８ｍｍのペーパーディスクに加えた時、バシラス・サブティリス（Bacillus subtilis IFO3134）に対して直径３０ｍｍの阻止円が形成された。
（１０）ヒト肺癌由来細胞株Ａ５４９細胞を、５０μｇ／ｍＬ濃度の式（Ｉ）の化合物の存在下で４８時間培養したところ、Ａ５４９細胞を完全に死滅させた。
【００１９】
また本発明の化合物は、下記式（ＩＩ）により表される化合物である。
【００２０】
【化６】
2005247737.tif 000004
【００２１】
上記式（ＩＩ）で表される化合物の構造式及び理化学的性質は以下のとおりである：
（１）物質の色  ：無色
（２）分子量    ：２８６
（３）分子式    ：Ｃ１４Ｈ２２Ｏ５
（４）質量分析  ：高分解能ＦＡＢＭＳ  実測値  287.1459  （M + H）+
計算値  287.1495  （C14H23O5）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中） λmax（ε）  203 nm(15000)
（６）１Ｈ ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中で測定、５００ＭＨｚ）
δppm  1.05(3H, d, J=6.5Hz), 1.20(3H, d, J=6Hz), 1.42(1H, m), 1.66-1.76(3H, m), 1.88(1H, m), 2.38(1H, m), 2.44(1H, m), 3.33(1H, m), 4.44(1H, m), 4.47 (1H, m), 4.61(1H, m), 4.99 (1H, d, J=6.5Hz), 5.12(1H, d, J=4Hz), 5.73(1H, dd, J=16, 2.5Hz), 6.79(1H, dd, J=16, 2.5Hz)
（７）１３Ｃ ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中で測定、１２５ＭＨｚ）
δppm   18.25, 19.71, 28.14, 28.26, 29.68, 30.53, 67.15, 68.58, 73.36, 74.84, 118.03, 152.54, 164.05, 172.15
（８）溶解性    ：メタノール、酢酸エチル、クロロホルムに可溶。ヘキサンに難溶。
（９）抗菌活性  ：ペーパーディスク法にて、３０μｇの式（ＩＩ）の化合物を直径８ｍｍのペーパーディスクに加えた時、バシラス・サブティリス（Bacillus subtilis IFO3134）に対して直径１５ｍｍの薄い阻止円が形成された。
（１０）ヒト肺癌由来細胞株Ａ５４９細胞を、５０μｇ／ｍＬ濃度の式（ＩＩ）の化合物の存在下で４８時間培養したところ、化合物無添加の細胞と比べて、Ａ５４９細胞の増殖を２０％阻害した。
【００２２】
また本発明の化合物は、下記式（ＩＩＩ）により表される化合物である。
【００２３】
【化７】
2005247737.tif 000005
【００２４】
上記式（ＩＩＩ）で表される化合物の構造式及び理化学的性質は以下のとおりである：
（１）物質の色  ：無色
（２）分子量    ：２８６
（３）分子式    ：Ｃ１４Ｈ２２Ｏ５
（４）質量分析  ：高分解能ＦＡＢＭＳ  実測値  287.1466  （M + H）+
計算値  287.1495  （C14H23O5）
（５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中） λmax（ε）  203nm (14000)
（６）１Ｈ ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中で測定、５００ＭＨｚ）
δppm  1.03(3H, d, J=6.5Hz), 1.19(3H, d, J=6.5Hz), 1.31-1.43(2H, m), 1.58(1H, m), 1.88(1H, m), 2.25(1H, m), 2.44-2.58(2H, m), 3.56(1H, m), 4.15(1H, m), 4.36(1H, d, J=4.5Hz), 4.62(1H, m), 5.07(1H, m), 5.08(1H, d, J=5Hz), 5.95(1H, dd, J=16, 1.5Hz), 6.90(1H, dd, J=16, 5Hz)
（７）１３Ｃ ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中で測定、１２５ＭＨｚ）
δppm   14.65, 21.68, 23.55, 27.63, 32.58, 34.70, 65.80, 69.23, 70.05, 80.17, 118.31, 153.02, 164.84, 176.52
（８）溶解性    ：メタノール、酢酸エチル、クロロホルムに可溶。ヘキサンに難溶。
（９）抗菌活性  ：ペーパーディスク法にて、３０μｇの式（ＩＩＩ）の化合物を直径８ｍｍのペーパーディスクに加えた時、バシラス・サブティリス（Bacillus subtilis IFO3134）に対して直径１２ｍｍの薄い阻止円が形成された。
（１０）ヒト肺癌由来細胞株Ａ５４９細胞を、５０μｇ／ｍＬ濃度の式（ＩＩ）の化合物の存在下で４８時間培養したところ、化合物無添加の細胞と比べて、Ａ５４９細胞の増殖を１５％阻害した。
【００２５】
２．本発明の化合物の製造
２．１．式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物の製造
本発明の式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物は、微生物を培地に培養し、培養物中に該化合物を生成蓄積させ、該培養物から該化合物を単離することにより製造することができる。
【００２６】
（１）微生物
本発明の製造方法において用いることのできる微生物としては、アクレモニウム属（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）に属し、かつ上記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物を生産することが可能な微生物であれば特に限定されない。そのような微生物としては、例えば、アクレモニウム・スピーシーズＨＪＫ−９株、及び該菌株に由来する変異株を挙げることができる。なお、アクレモニウム・スピーシーズＨＪＫ−９株は、独立行政法人  産業技術総合研究所特許生物寄託センター（茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６）に、平成１５年２月１７日に、寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１９２１５として寄託されている。
【００２７】
（２）微生物の培養
本発明における微生物の培養は、通常の微生物の培養方法が用いられる。培地としては、資化可能な炭素源、窒素源、無機物及び必要な生育・生産促進物質を適宜含有する培地であれば、合成培地又は天然培地のいずれでも使用可能である。炭素源としては、グルコース、澱粉、デキストリン、マンノース、フラクトース、シュクロース、ラクトース、キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などを単独又は組み合わせて用いられる。さらに、必要に応じて炭化水素、アルコール類、有機酸、アミノ酸（トリプトファン等）なども用いられる。窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実かす、カザミノ酸などが単独又は組み合わせて用いられる。そのほか、必要に応じて食塩、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛などの無機塩類を加える。さらに使用する微生物の生育や本発明の化合物の生産を促進する微量成分を適当に添加することができ、そのような成分は当業者であれば適当なものを選択することができる。
【００２８】
培養法としては、液体培養が適しているが、これに限定されるものではない。培養温度は、２５〜３５℃が適当であり、培養中の培地のｐＨは６〜８に維持することが望ましく、震盪速度が３０〜１２０ｒｐｍで回転又は往復震盪培養することが望ましい。液体培養で通常５〜１４日間培養を行うと、目的化合物が培養液中ならびに菌体中に生成蓄積される。培養物中の生成量が最大に達した時に培養を停止する。
【００２９】
（３）化合物の単離・精製
培養物から本発明の化合物を単離・精製するには、微生物代謝生産物をその培養物から単離・精製するために常用される方法に従って行われる。ここで、「培養物」とは、培養上清、培養菌体、又は菌体の破砕物のいずれをも意味するものである。例えば培養物を濾過や遠心分離により培養瀘液と菌体に分け、菌体をクロロホルム／メタノール（９／１）混合溶媒などで抽出する。また培養濾液は酢酸エチル、クロロホルムなどで抽出する。ついで、菌体抽出液と培養瀘液若しくは培養瀘液の抽出物とを合わせて濃縮し、カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどにより精製を行い、本発明の化合物を得る。得られた化合物は、ＮＭＲ解析などの通常の化学的手法により、上記「１．本発明の化合物の性質」に記載した性質を示すか否かを調べることにより、本発明の化合物であることを確認することができる。
【００３０】
培養物からの本発明の式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物の単離精製は、微生物代謝生産物をその培養物から単離精製するために常用される方法に従って行われる。
【００３１】
また、得られた化合物が抗菌活性を有することを確認するには、例えば、得られた化合物を含む溶液をそのまま使用するか又はメタノールなどの適当な溶媒で希釈した溶液を調製し、その溶液をペーパーディスクにしみ込ませ、あらかじめ微生物（細菌、真菌など）を植菌しておいた栄養寒天培地上にのせ、培養する。培養後、ペーパーディスク周辺に阻止円（ハロー）が形成されるか否かを観察する。
【００３２】
一方、得られた化合物が抗腫瘍活性を有することを確認するには、例えば、癌細胞を播種したマイクロプレートに、得られた化合物を適当な濃度で添加し、培養する。培養後に例えばアラマーブルーを用いて生存癌細胞数を測定し、対照の化合物無添加群における細胞数と比較して、その癌細胞の増殖が抑制されたか否かを観察する。
【００３３】
２．２．式（ＩＩＩ）の化合物の製造
また、本発明の式（ＩＩＩ）の化合物は、本発明の式（ＩＩ）の化合物を酸性溶液中で変換反応をおこなうことによって得られる。本発明において、酸性溶液としては、酢酸、塩酸、トリフルオロ酢酸などを用いることができるが、これらに限定されるものではない。例えば、式（ＩＩ）の化合物を０．１％トリフルオロ酢酸を含む６０％アセトニトリル−水に溶かすことにより変換反応を開始し、反応終了後に、前項（３）に記載のような適当な精製を行うことによって式（ＩＩＩ）の化合物を得ることができる。
【００３４】
３．本発明の化合物の用途
（１）抗菌剤
本発明の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物は、優れた抗菌活性を有するため抗菌剤として有用であり、ヒト及び動物用医薬品、医薬品原料、農薬、食品の保存剤等として使用することができる。
【００３５】
すなわち本発明の抗菌剤は、上記式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物を有効成分として含むものである。本発明の抗菌剤は、上記化合物のうちの１種のみ（例えば式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表される化合物）を単独で含有してもよいし、複数種を含有してもよい。また本発明の抗菌剤は、上記「２．本発明の化合物の製造」の項に記載の方法に従って調製される、上記（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表される化合物を含有する培養物を含むものであってもよい。さらに本発明の抗菌剤は、他の抗菌剤及び／又は添加剤などをさらに含有するものであってもよい。このような他の抗菌剤及び添加剤は、本発明の化合物の抗菌活性を低減させるものでなければ任意のものを使用することができ、例えば、抗生物質（ペニシリン類、アミノグリコシド類、セファロスポリン類等）などが挙げられる。
【００３６】
本発明の抗菌剤は、使用する対象が特に限定されるものではなく、例えば、化膿性疾患、呼吸器感染症、胆道感染症、尿路感染症などの感染症（特に細菌感染症）の予防及び治療に有用である。
【００３７】
本発明の抗菌剤を適用する対象としては、哺乳動物、例えば、ヒト、家畜（ウシ、ウマ等）、愛玩動物（イヌ、ネコ等）、実験動物（マウス、ラット、ハムスター等）が含まれるが、特に限定されるものではない。
【００３８】
（２）抗腫瘍剤
本発明の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物は、優れた抗腫瘍活性を有するため抗腫瘍剤として有用であり、ヒト及び動物用医薬品、医薬品原料等として使用することができる。
【００３９】
本発明の抗腫瘍剤は、上記式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物を有効成分として含むものである。本発明の抗腫瘍剤は、上記化合物のうちの１種のみ（例えば式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表される化合物）を単独で含有してもよいし、複数種を含有してもよい。また本発明の抗腫瘍剤は、上記「２．本発明の化合物の製造」の項に記載の方法に従って調製される、上記（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表される化合物を含有する培養物を含むものであってもよい。さらに本発明の抗腫瘍剤は、他の抗腫瘍剤及び／又は添加剤などをさらに含有するものであってもよい。このような他の抗腫瘍剤及び添加剤は、本発明の化合物の抗腫瘍活性を低減させるものでなければ任意のものを使用することができ、例えば、アドリアマイシン、シスプラチン、タキソール、ハーセプチンなどが挙げられる。
【００４０】
本発明の抗腫瘍剤を腫瘍の予防又は治療目的で使用する場合は、使用する対象を特に限定するものではない。例えば、癌、肉腫、良性腫瘍などの少なくとも一種の腫瘍について予防又は治療を特異目的として用いることができる。これらの疾病は、単独であっても、併発したものであっても、上記以外の他の疾病を併発したものであっても、使用の対象とすることができる。これらの癌腫は特に限定されるものではなく、例えば脳腫瘍、上咽頭癌、舌癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、肝癌、直腸癌、結腸癌、子宮癌、卵巣癌、精巣癌、骨肉腫及び白血病からなる群から選択される少なくとも一種などが挙げられる。但し、単一の癌のみならず複数の癌が併発したものも含まれる。
【００４１】
本発明の抗腫瘍剤を投与する対象としては、限定するものではないが、哺乳動物、例えば、ヒト、家畜（ウシ、ウマ等）、愛玩動物（イヌ、ネコ等）、実験動物（マウス、ラット、ハムスター等）でありうる。
【００４２】
（３）投与
本発明の抗菌剤及び抗腫瘍剤を哺乳動物に投与する場合には、これらの医薬製剤は、医薬的に許容される担体又は添加物を共に含むものであってもよい。このような担体及び添加物の例として、水、医薬的に許容される有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、医薬添加物として許容される界面活性剤などの他、リポゾームなどの人工細胞構造物などが挙げられる。使用される添加物は、医薬組成物の剤形に応じて上記の中から適宜又は組み合わせて選択される。
【００４３】
本発明の抗菌剤及び抗腫瘍剤は、経口経路又は非経口経路のいずれでも投与することができる。
【００４４】
本発明の抗菌剤及び抗腫瘍剤を経口的に投与する場合は、それに適用される錠剤、顆粒剤、散剤、丸剤などの固形製剤、あるいは液剤、シロップ剤などの液体製剤等とすればよい。特に顆粒剤及び散剤は、カプセル剤として単位投与剤形とすることができ、液体製剤の場合は使用する際に再溶解させる乾燥生成物にしてもよい。
【００４５】
これら剤形のうち経口用固形剤は、通常それらの組成物中に製剤上一般に使用される結合剤、賦形剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤などの添加剤を含有する。また、経口用液体製剤は、通常それらの組成物中に製剤上一般に使用される安定剤、緩衝剤、矯味剤、保存剤、芳香剤、着色剤などの添加剤を含有する。
【００４６】
また非経口的に投与する場合は、注射剤又は坐剤などの剤形とすることができる。例えば注射剤は、ポリアルコキシフラボノイドを溶液、懸濁液、乳液などに溶解又は懸濁して調製されるものであり、通常単位投与量アンプル又は多投与量容器の形態で提供される。また注射剤は、使用する際に適当な担体、例えば発熱物質不含の滅菌水に再溶解させる粉剤であってもよい。注射手法としては、例えば点滴静脈内注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、皮内注射が挙げられる。これらの非経口投与剤形は、通常それらの組成物中に薬学上一般的に使用される乳化剤、懸濁剤などの添加剤を含有する。
【００４７】
上記抗菌剤及び抗腫瘍剤における本発明の化合物の量は、用途、剤形及び投与経路などにより異なるが、総重量を基準として１〜５重量％、好ましくは２〜３重量％である。また、本発明の化合物の有効量と適切な希釈剤及び薬理学的に使用しうる担体との組み合わせとして投与される有効量は、投与対象の年齢、投与経路、投与回数により異なり、広範囲に変えることができる。例えば、１日につき体重１ｋｇ当たり１〜１０００ｍｇであり、１日数回から数週間の間隔で投与することができる。
【００４８】
以下に本発明を実施例により具体的に説明する。ただし、本発明は実施例によりその技術的範囲が限定されるものではない。
【実施例１】
【００４９】
式（Ｉ）及び式（ＩＩ）の化合物の製造
種菌としてアクレモニウム・スピーシーズＨＪＫ−９株を用いた。該菌株を、１Ｌの液体培地（ポテトデキストロースブロース（Ｄｉｆｃｏ）２４ｇ、自然界水５００ｍＬ、蒸留水５００ｍＬ、ｐＨ６．８）を入れた３Ｌ三角フラスコ中で、３０℃にて７日間回転振盪（１００ｒｐｍ）培養した。培養中、培地のｐＨは特に制御しなかった。
【００５０】
このようにして得られた培養液４Ｌを濾紙（アドバンテック２番）にて濾過し、濾液（ｐＨ７，未調整）を酢酸エチルで抽出した。菌体は、クロロホルム／メタノール（９／１）で抽出し、濾液の酢酸エチル抽出物とあわせ減圧濃縮した。得られた濃縮抽出物２５０ｍｇはシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ワコーゲルＣ２００  ２５ｇ）を担体として用い、移動層として、まず、クロロホルム２５０ｍＬにて溶出した。次に、クロロホルム／メタノール（１００：１）にて溶出し、ついでクロロホルム／メタノール（１０：１）にて溶出した。クロロホルム／メタノール（１００：１）にて溶出した画分に抗菌活性と抗腫瘍活性が認められた。
【００５１】
次に、抗菌活性と抗腫瘍活性が認められたクロロホルム／メタノール（１００：１）にて溶出した画分を高速液体クロマトグラフィー（カラム：コスモシル５Ｃ１８−ＡＲ（直径１０ｍｍ長さ２５０ｍｍ）、移動相：５０％アセトニトリル−水、流速３ｍＬ／ｍｉｎ）にて精製し、本発明の式（Ｉ）の化合物を２ｍｇ、本発明の式（ＩＩ）の化合物を８ｍｇ得た。
【実施例２】
【００５２】
式（ＩＩＩ）の化合物の製造
式（ＩＩ）の化合物４ｍｇを１０ｍＬの０．１％トリフルオロ酢酸を含む６０％アセトニトリル−水に溶かし、４０℃にて２時間放置後、減圧濃縮、及び凍結乾燥を行い、溶媒を除き、高速液体クロマトグラフィー（カラム：コスモシル５Ｃ１８−ＡＲ（直径１０ｍｍ長さ２５０ｍｍ）を用いて移動相：５０％アセトニトリル−水、流速３ｍＬ／ｍｉｎ）にて精製し、本発明の式（ＩＩＩ）の化合物を２ｍｇ得た。
【実施例３】
【００５３】
抗腫瘍活性の評価
本発明の化合物の抗腫瘍活性を以下の様に評価した。ヒト肺癌由来細胞Ａ５４９細胞を９６穴マイクロプレートに８×１０３個／２００μＬ／ｗｅｌｌの濃度で播種し、１４時間、ＣＯ２インキュベーター（５％二酸化炭素、３７℃）にて前培養した。ここに、式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の各化合物を５０μｇ／ｍＬの濃度になるように添加し、４８時間培養した。４８時間後にアラマーブルー（関東化学株式会社）を用いて生存細胞数を測定した。その結果、式（Ｉ）の化合物は、５０μｇ／ｍＬの濃度でＡ５４９細胞を完全に死滅させた。式（ＩＩ）の化合物は５０μｇ／ｍＬの濃度でＡ５４９細胞の増殖を、薬剤無添加群の８０％に抑制した。また、式（ＩＩＩ）の化合物は５０μｇ／ｍＬの濃度でＡ５４９細胞の増殖を、薬剤無添加群の８５％に抑制した。
【実施例４】
【００５４】
抗菌活性の評価
本発明の化合物の抗菌活性を以下の様に評価した。本発明の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物を、２ｍｇ／ｍＬの濃度のメタノール溶液となるように調整した。この溶液から１５μＬをとって、ペーパーディスク（東洋ろ紙株式会社製、Ｔｈｉｎタイプ、直径８ｍｍ）にしみ込ませた。クリーンベンチ中で１５分間放置し、メタノールを蒸発させ除去した。このペーパーディスクを、あらかじめバシラス・サブティリス（Bacillus subtilis IFO3134）を植菌しておいた栄養寒天培地（日水製薬株式会社製）上にのせ、３０℃にて、２４時間培養した。２４時間後、ペーパーディスク周辺に直径３０ｍｍの阻止円（ハロー）が形成された。本発明の式（ＩＩ）の化合物及び式（ＩＩＩ）の化合物についても、同様に行った結果、式（ＩＩ）の化合物には、直径１５ｍｍの薄い阻止円が、式（ＩＩＩ）の化合物には、直径１２ｍｍの薄い阻止円が形成された。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明により、上記の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）で表される新規な抗菌・抗腫瘍性化合物、並びに微生物を用いた該化合物の製造方法が提供される。本発明の化合物は、医薬品、医薬品原料、農薬及び農薬原料として有用である。