(57)【要約】【課題】  安全性に懸念のない天然物であるゴマ種子由来のセサミノール３配糖体について新たな用途を提供する。【解決手段】  ゴマ種子から分離されるセサミノール３配糖体、すなわちセサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドを大腸癌抑制剤の有効成分として用いた。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴマ種子由来の下記の化１で示されるセサミノール３配糖体を有効成分とする大腸癌抑制剤。
【化１】
2005089349.tif 000006
【請求項２】
経口投与剤である請求項１記載の大腸癌抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は大腸癌抑制剤、更に詳しくはゴマ種子由来のセサミノール３配糖体を有効成分とする大腸癌抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ゴマ種子からセサミノールやその配糖体として１配糖体、２配糖体及び３配糖体が分離され、これらが抗酸化性を発揮することが知られている（例えば特許文献１〜４参照）。またセサミノールは油溶性（非油溶性）であり、したがってその使用に制約が伴うのに対し、セサミノール配糖体、なかでも３配糖体は水溶性に富み、したがってその使用に制約が伴わないという利点があることも知られている。
【０００３】
しかし、かかる利点を有するセサミノール３配糖体ではあるが、その抗酸化性による抗酸化剤としての用途以外に、新たな用途についての報告はない。
【特許文献１】特開平６−３０６０９３号公報
【特許文献２】特開平９−２０８９４９号公報
【特許文献３】特開平１０−９５７９５号公報
【特許文献４】特開平１０−２８７６９５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明が解決しようとする課題は、安全性に懸念のない天然物であるゴマ種子由来のセサミノール３配糖体について新たな用途を提供する処にある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
しかして本発明者らは上記の課題を解決するべく研究した結果、ゴマ種子由来のセサミノール３配糖体が大腸癌の発生に対して優れた抑制効果を有することを見出した。
【０００６】
すなわち本発明は、ゴマ種子由来の下記の化１で示されるセサミノール３配糖体を有効成分とする大腸癌抑制剤に係る。
【０００７】
【化１】
2005089349.tif 000002
【０００８】
本発明に用いるゴマ種子由来のセサミノール３配糖体は、化１で示されるところの、セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。かかるセサミノール３配糖体それ自体は、ゴマ種子から公知の方法により得ることができる。これには例えば、１）脱脂ゴマ種子を８０％エタノール水を用いて抽出処理し、その抽出物をビニル芳香族炭化水素系重合体製の高分子系吸着剤を用いて吸着処理した後、その吸着物をメタノール水溶液を用いて脱着溶出処理し、その溶出物を逆相クロマトグラフィーで分画する方法｛フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）３５巻，３号，７７３〜７７６頁｝、２）脱脂ゴマ種子を５０℃以上の熱水を用いて抽出処理し、その抽出物をビニル芳香族炭化水素系重合体製の高分子系吸着剤を用いて吸着処理した後、その吸着物を４０〜８０容量％のエタノール水溶液を用いて脱着溶出処理し、その溶出物を逆相クロマトグラフィーで分画する方法（特開平１０−９５７９５号公報）、３）脱脂ゴマ種子を水、エタノール又はエタノール水を用いて抽出処理し、その抽出物を活性炭を用いて吸着処理した後、その吸着物を脱着溶出処理し、その溶出物を逆相クロマトグラフィーで分画する方法（特開平１０−２８７６９５号公報）等が挙げられる。
【０００９】
前記１）〜３）の方法では、いずれの場合もゴマ種子として脱脂ゴマ種子を用いている。かかる脱脂ゴマ種子としては、１）ゴマ種子から油分を機械的に圧搾搾油した後の脱脂ゴマ種子、２）ゴマ種子をミル等で破砕し、その破砕物からヘキサン等の有機溶媒で油分を抽出した後の脱脂ゴマ種子等が挙げられるが、いずれの場合も原料のゴマ種子としては未焙煎のゴマ種子を用いるのが好ましい。
【００１０】
前記１）〜３）のなかでも、前記２）の方法が好ましいので、以下、前記２）の方法について詳しく説明する。前記２）の方法では先ず、脱脂ゴマ種子から熱水を用いて熱水可溶性成分を抽出する。抽出に用いる熱水の温度は５０℃以上とするが、６０℃以上とするのが好ましい。脱脂ゴマ種子に対する熱水の使用割合は特に制限されないが、通常は脱脂ゴマ種子１００重量部当たり熱水を５００〜１２００重量部とし、好ましくは脱脂ゴマ種子１００重量部当たり熱水を７００〜１０００重量部とする。得られる抽出液中にゴマ滓等の夾雑物が含まれてくる場合、このような夾雑物を遠心分離、加圧濾過、減圧濾過等の公知の分離手段で除去する。夾雑物を除去した抽出液は脱脂ゴマ種子に含まれる熱水可溶性成分が溶解したものとなる。
【００１１】
前記２）の方法では次に、得られた抽出液とビニル芳香族炭化水素系重合体製の高分子系吸着剤とを接触させて該抽出液に含まれる吸着性成分を該高分子系吸着剤に吸着させる。吸着に用いるビニル芳香族炭化水素系重合体製の高分子系吸着剤としては、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体製の高分子系吸着剤、炭素数４〜１８のアルキル基で置換されたアルキルスチレン−スチレン−ジビニルベンゼン３元共重合体製の高分子系吸着剤等が挙げられるが、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体製の高分子系吸着剤が有利に適用できる。スチレン−ジビニルベンゼン共重合体製の高分子系吸着剤を用いる場合、その粒子形状、粒子径等は特に制限されないが、ＢＥＴ表面積が５０ｍ２／ｇ以上であり且つ気孔率（ヘリウム気孔率、以下同じ）が０．１ml／ｇ以上であるものが好ましく、ＢＥＴ表面積が８０〜１０００ｍ２／ｇであり且つ気孔率が０．３〜１．５ml／ｇであるものがより好ましい。高分子系吸着剤の使用割合は、通常は抽出液の１／５〜１／５０倍量とするが、好ましくは抽出液の１／１０〜１／３０倍量とする。
【００１２】
抽出液と高分子系吸着剤とを接触させる方法としては、高分子系吸着剤を充填したカラムに抽出液を通液する方法、高分子系吸着剤を抽出液の中に加えて撹拌する方法等が挙げられるが、これらのなかでは後者の方法が好ましい。また抽出液と高分子系吸着剤とを接触させるときの温度は、通常は１００℃以下とするが、好ましくは３０〜７０℃とする。かくして抽出液と高分子系吸着剤とを接触させることにより、抽出液中の熱水可溶性成分に含まれる吸着性成分を高分子系吸着剤に吸着させる。後者の方法で双方を接触させた場合には、吸着性成分が吸着した高分子系吸着剤を、デカンテーション、遠心分離、濾過等の公知の手段で取り出す。
【００１３】
前記２）の方法では更に、以上で得た高分子系吸着剤からエタノール水を用いて該高分子系吸着剤に吸着した吸着性成分に含まれるセサミノール３配糖体を脱着溶出させる。脱着溶出に用いるエタノール水は４０〜８０容量％のエタノール水とするが、４５〜７５容量％のエタノール水とするのが好ましい。セサミノール３配糖体を脱着溶出させるときの温度は、通常は６０℃以下とするが、好ましくは１５〜５０℃とする。高分子系吸着剤に対するエタノール水の使用割合は、通常は高分子系吸着剤の１．５〜６倍量のエタノール水とするが、好ましくは高分子系吸着剤の２〜４倍量のエタノール水とする。高分子系吸着剤からセサミノール３配糖体を脱着溶出させる方法としては、吸着性成分が吸着した高分子系吸着剤を充填したカラムにエタノール水を常圧又は加圧下で通液する方法、吸着性成分が吸着した高分子系吸着剤をエタノール水中に加えて撹拌する方法等が挙げられる。後者の方法でセサミノール３配糖体を脱着溶出させた場合には、脱着溶出後の高分子系吸着剤を、デカンテーション、遠心分離、濾過等の公知の手段で分離する。かくして高分子系吸着剤からセサミノール３配糖体を脱着溶出させて、溶出物としてセサミノール３配糖体が溶解したエタノール水を得る。この溶出物からエタノール及び水を除いた固形分はセサミノール３配糖体を２０〜３０重量％含んでいる。
【００１４】
前記２）の方法では最後に、セサミノール３配糖体が溶解した溶出物からエタノール及び水を相応に留去してセサミノール３配糖体を高濃度で含有する溶出物とした後、この溶出物を逆相クロマトグラフィーで分画することによりセサミノール３配糖体を得る。かくして得られるセサミノール３配糖体は、化１で示されるところの、セサミノール２’−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであり、純度９８％以上のものとなる。
【００１５】
本発明に係る大腸癌抑制剤は、以上説明したようなゴマ種子由来の化１で示されるセサミノール３配糖体を有効成分とするものである。その１日当たりの投与量は、剤型の種類、患者の年齢や体重、症状の程度等を考慮して適宜決定されるが、通常は患者の体重１kg当たりセサミノール３配糖体として１０〜１００mgとなるようにし、好ましくは２０〜８０mgとなるようにする。
【００１６】
本発明に係る大腸癌抑制剤の剤型としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、軟・硬カプセル剤、ペレット剤、舌下剤、トローチ剤、各種液剤等が挙げられる。製剤化は常法にしたがえばよく、この際、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、その他の医薬として許容される常用の担体を適宜に使用できる。本発明に係る大腸癌抑制剤は、水溶性に富むセサミノール３配糖体を有効成分とするものであるため、経口投与剤として簡便に使用できる。
【発明の効果】
【００１７】
以上説明した本発明には、安全性に懸念のない天然物であるゴマ種子由来のセサミノール３配糖体を有効成分として、大腸癌の発生に対し優れた抑制作用を有するという効果がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明に係る大腸癌抑制剤の最良の形態としては、次の１）が挙げられる。
１）ゴマ種子由来の化１で示されるセサミノール３配糖体を有効成分とする経口投与用の大腸癌抑制剤。
【実施例】
【００１９】
以下、実施例を挙げて本発明の構成及び効果をより具体的にするが、本発明が該実施例に限定されるというものではない。
【００２０】
試験区分１（セサミノール３配糖体の調製）
中国産ゴマ種子２５０ｇをすりつぶしてフラスコに採り、ヘキサン１Ｌを加えて室温で５時間撹拌した後、濾過した。同様の操作を更に２回繰り返した後、濾別した固形物を室温で通風乾燥して、脱脂ゴマ種子１１５ｇ得た。この脱脂ゴマ種子１１５ｇをフラスコに採り、エタノール７３６ｇ及び水１８４ｇを加えて、室温で１５時間撹拌した後、濾過して、濾液３５５ｇを得た。この濾液を４０℃以下の温度で減圧下に８０ｇまで濃縮し、更に凍結乾燥して、抽出物２．７ｇを得た。この抽出物０．５ｇを８０％エタノール水溶液に溶解し、ポリスチレンゲル（商品名アンバーライトＸＡＤ−２、ロームアンドハース社製）を充填したガラス製カラムの上部より流入させて、ポリスチレンゲルに吸着させた。そして移動相として、水７５mlから始めて、２０％メタノール水溶液７５ml、４０％メタノール水溶液７５ml、６０％メタノール水溶液７５ml、８０％メタノール水溶液７５ml、メタノール７５mlと順次流し、６０％メタノール水溶液で溶出した溶出液を集め、濃縮した。この濃縮物を下記の条件で分取用液体クロマトグラフィーを用いて更に分画した。
固定相：デベロシルＯＤＳ−５（商品名、野村化学社製）
カラム径：２０mm
カラム長：２５０mm
移動相：メタノール／水＝１／１（ｖ／ｖ）
移動相流量：２．５ml／分
検出：ＵＶ２８０ｎｍ
ここで保持時間１５〜１７分で流出する区分を回収したものを合わせた後、４０℃以下の温度で減圧下に濃縮し、更に凍結乾燥して、固状体１９．４mgを得た。かくして得られた固状体が、純度９８％の化１で示されるセサミノール３配糖体であることを以下の各種分析結果により確定した。
【００２１】
１）マススペクトル
［Ｍ−Ｈ]−；ｍ／ｚ８５５
２）紫外線吸収スペクトル
λｍａｘ（ｌｏｇε）；２９０ｎｍ（３．８２），２３６ｎｍ（３．８０）
３）比旋光度［α]Ｄ；−９．７５
４）１ＨＮＭＲδケミカルシフト（帰属水素）
２．８８（Ｈ−１），４．６５（Ｈ−２），３．７６（Ｈ−４ａ），４．１６（Ｈ−４ｅ），２．８８（Ｈ−５），５．１６（Ｈ−６），３．９８（Ｈ−８ａ），４．１６（Ｈ−８ｅ），６．９１（Ｈ−３’），６．７５（Ｈ−６’），６．７５（Ｈ−２”），６．７７（Ｈ−５”）６．７５（Ｈ−６”），５．８７（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−），５．９１（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−），５．１９（Ｇ１），３．８４（Ｇ２），３．８１（Ｇ３），３．５０（Ｇ４），３．７２（Ｇ５），３．８０（Ｇ６ａ），４．０９（Ｇ６ｂ），４．８５（Ｇ１’），３．２９（Ｇ２’）３．４８（Ｇ３’），３．４０（Ｇ４’），３．３０（Ｇ５’），３．５８（Ｇ６ａ’），３．６５（Ｇ６ｂ’），４．３９（Ｇ１”），３．２１（Ｇ２”），３．３９（Ｇ３”），３．２９（Ｇ４”），３．１７（Ｇ５”），３．６０（Ｇ６ａ”），３．６２（Ｇ６ｂ”）
５）１３ＣＮＭＲδケミカルシフト（帰属炭素）
５５．４（Ｃ−１），８３．０（Ｃ−２），７３．５（Ｃ−４），５５．４（Ｃ−５），８７．４（Ｃ−６），７４．５（Ｃ−８），１２５．４（Ｃ−１’），１５０．０（Ｃ−２’），１００．４（Ｃ−３’），１４９．４（Ｃ−４’）１４４．８（Ｃ−５’），１０７．５（Ｃ−６’），１３６．３（Ｃ−１”），１０８．８（Ｃ−２”），１４９．６（Ｃ−３”），１４９．０（Ｃ−４”），１１０．５（Ｃ−５”），１２２．０（Ｃ−６”），１０３．４（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−），１０３．４（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−），１０１．１（Ｇ１），８２．４（Ｇ２），７７．７（Ｇ３），７１．４（Ｇ４），７７．４（Ｇ５），７０．５（Ｇ６），１０３．９（Ｇ１’），７６．０（Ｇ２’），７７．７（Ｇ３’），７１．４（Ｇ４’），７８．０（Ｇ５’），６３．０（Ｇ６’），１０４．７（Ｇ１”），７５．３（Ｇ２”），７７．９（Ｇ３”），７１．８（Ｇ４”），７８．１（Ｇ５”），６２．４（Ｇ６”）
【００２２】
試験区分２（評価）
・実験動物の飼育
５週齢雄Ｆ３４４ラット（商品名、日本ＳＬＣ社製）をＡ〜Ｅの５群に分け、Ａ〜Ｃ群はそれぞれ１０匹、Ｄ及びＥ群はそれぞれ５匹とした。各群に対して、表１に示すような飼育用餌をそれぞれ自由摂取させて飼育を開始した。６週齢時よりＡ〜Ｃ群のラットにアゾキシメタン（ａｚｏｘｙｍｅｔｈａｎｅ、シグマ社製、以下ＡＯＭという）を１５mg／kg体重の濃度で週１回３週間皮下投与した。ＡＯＭ投与終了後７週（１５週齢）で犠牲死とした。実験動物の体重を測定し、また実験動物を生体解剖して、肝重量を測定すると共に、下記の異型陰窩巣評価、ベータ・カテニン蓄積陰窩巣評価を行ない、結果を表２及び表３にまとめて示した。
【００２３】
【表１】
2005089349.tif 000003
【００２４】
表１において、
基礎食ＣＥ−２：商品名、日本ＣＬＥＡ社製
【００２５】
・異型陰窩巣評価（ａｂｅｒｒａｎｔ  ｃｒｙｐｔ  ｆｏｃｉ  ａｓｓａｙ）：
摘出した大腸をホルマリン固定した後、メチレンブルー染色して標本とした。メチレンブルー染色した標本について常法により検鏡下に異型陰窩巣を検索し、異型陰窩巣の頻度、陰窩巣内陰窩数（ｃｒｙｐｔ  ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ）及び陰窩巣サイズを測定した。
【００２６】
・ベータ・カテニン蓄積陰窩巣評価（ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ−ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ  ｃｒｙｐｔ  ａｓｓａｙ）：
前記の異型陰窩巣評価に使用した大腸を３等分し、口側（ｐｒｏｘｉｍａｌ側）を除いた２セグメントをパラフィン包埋後に大腸粘膜面に対して水平になるように連続切片して、１セグメント当たり連続切片１０枚を作製した。作製した連続切片のうちで、４枚を通常のヘマトキシリン・エオジン染色して標本とし、また２枚をベータ・カテニン免疫染色して標本とした。ベータ・カテニン蓄積陰窩巣評価に際して、まずヘマトキシリン・エオジン染色した標本について、核異型・構造異型・パネート細胞への分化、杯細胞の減少を示す陰窩を同定し、その後に同部位のベータ・カテニン免疫染色した標本で核若しくは胞体に陽性像を確認されたものをベータ・カテニン蓄積陰窩巣と判定した。ベータ・カテニン蓄積陰窩巣と判定した標本については、ベータ・カテニン蓄積陰窩巣の頻度、陰窩巣内陰窩数、陰窩巣サイズを測定した。但し、杯細胞の目立つ異型陰窩やリンパ濾胞周囲のものはベータ・カテニン蓄積陰窩巣判定から除外した。
【００２７】
【表２】
2005089349.tif 000004
【００２８】
表２において、
数値：平均±標準偏差
＊１：個／ラット１匹
＊２：陰窩数／１陰窩巣
＊３：陰窩巣の長径と短径の平均値のサイズ
＊４：スチューデントのｔ検定においてＣ群に比べてｐ＜０．０４で有意差あり
＊５：検索において陰窩巣内陰窩が確認されなかった
【００２９】
【表３】
2005089349.tif 000005
【００３０】
表３において、
数値：平均±標準偏差
＊６：個／ラット１匹
＊７：陰窩数／１陰窩巣
＊８：陰窩巣の長径と短径の平均値のサイズ
＊９：ウェルチのｔ検定においてＣ群に比べてｐ＜０．０００１で有意差あり
＊１０：検索において陰窩巣内陰窩が確認されなかった