(57)【要約】  【課題】      インテグリンα５β１の子宮内発現を増強する医薬を提供する。  【解決手段】  ダナゾールを有効成分とするインテグリンα５β１子宮内発現増強剤。【選択図】  図1
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダナゾールを有効成分とするインテグリンα５β１子宮内発現増強剤。
【請求項２】
ダナゾールを有効成分とするインテグリンα５β１子宮内発現低下に起因する不妊症の治療剤。
【請求項３】
ダナゾールを有効成分とする妊娠率向上剤。
【請求項４】
妊娠が自然妊娠であることを特徴とする請求項３記載の妊娠率向上剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞接着分子であるインテグリンα５β１の子宮内発現を増強する医薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
インテグリンは、細胞外基質と接着する分子として同定された。その後の検討により、インテグリンが細胞表面での細胞外基質との接着のみならず、細胞内に存在する多くの細胞内骨格分子と相互作用すること、さらに細胞内へのシグナル伝達にも関与し、細胞機能の制御因子としても重要な役割を果たしていることが判明した。
【０００３】
インテグリンは、細胞体の発生および分化、組織の支持および構築、白血球等の血管内から組織内への遊出に代表される細胞の移動、組織内における細胞の認識と情報伝達等に関与し、生体内の基本的な機能全般にわたって中心的な役割を担っており、さらに、自己免疫や細菌感染等によってもたらされる炎症や血液凝固、腫瘍転移などでも重要な役割をも担っている（非特許文献１）。
【０００４】
インテグリンについては、その発現を抑制することによる白血球接着抑制、血小板凝集阻害、癌転移抑制、心筋梗塞、動脈硬化症、骨溶解性疾患の治療への応用が検討されている。またその発現を増強することによっても癌転移抑制、動脈硬化症の治療などに有効であると期待されている（特許文献１）。
【０００５】
また、インテグリン活性化作用を有する生理活性ペプチドを、創傷治癒、手術等の組織修復や肥満の改善等に利用することも報告されている（特許文献２）
インテグリンは、α鎖とβ鎖とからなるヘテロダイマーを形成した膜貫通型蛋白質であり、１５種類のα鎖と8種類のβ鎖との組み合わせにより、これまでに約２０種類が報告されている。それぞれの組み合わせによって、結合する細胞外基質が異なり、例えば、インテグリンα５β１はフィブロネクチンに、インテグリンα６β１はラミニンに、インテグリンαｖβ３はビトロネクチンと結合することが知られている。一方、インテグリンα２β１は１および４型コラーゲン、ラミニンおよびフィブロネクチン等の複数の細胞外基質と結合する。これらのうち、インテグリンα５β１は、受精卵の着床に深く関与していることが知られている（非特許文献2）。
【０００６】
ダナゾールは、抗ゴナドトロピン放出因子作用を示し（非特許文献３）、子宮内膜症や乳腺症の治療に供されている。ダナゾールを不妊症患者に投与することや、体外授精の前処置としてダナゾールを投与することは知られているが、この場合のダナゾールは、不妊症患者でよく発症している子宮内膜症を治療するために投与されるものである。しかしながら、ダナゾールとインテグリンとの具体的な関係については知られておらず、さらにダナゾールが受精卵の着床率を向上させて妊娠成功率を上昇させることも知られていない。
【非特許文献１】田中良哉、臨床免疫、第２９巻第７号第８２３−８３１頁、１９９７年
【特許文献１】特開平１１−２４６４２８号公報
【特許文献２】特開２００１−２１３８９８号公報
【非特許文献２】小沢政之、臨床免疫、第２５巻第９号第１１５９−１１６４頁、１９９３年
【非特許文献３】THE MERCK INDEX THIRTEENTH EDITION, 2838, P. 493, 2001
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、インテグリンα５β１の子宮内発現を増強することにより不妊症の治療に用いることができる医薬、またはインテグリンα５β１の機能を解析するための試薬を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は上記課題を解決すべく鋭意努力した結果、ダナゾールがインテグリンα５β１の子宮内発現を増強することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明の要旨は、ダナゾールを有効成分とすることを特徴とするインテグリンα５β１の子宮内発現増強剤、不妊症の治療剤、および妊娠率向上剤にある。本発明における妊娠率向上剤の好ましい態様は、人工授精や体外受精・胚移植という一連の人工操作を経ない自然妊娠における妊娠率向上剤である。
【発明の効果】
【００１０】
ダナゾールは、インテグリンα５β１の子宮内発現を増強させる作用、インテグリンα５β１子宮内発現低下に起因する不妊症を治療する作用及び妊娠率を向上させる作用を有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明に係るインテグリンα５β１子宮内発現増強剤を不妊治療に用いる場合の投与形態は任意である。例えば、ダナゾールに、薬理学的及び製剤学的に許容される添加物を加えて調製される当業者に周知な形態の製剤を、錠剤、カプセル剤等により経口投与、又は注射剤、坐剤等により非経口投与する方法が挙げられる。
【００１２】
薬理学的及び製剤学的に許容される添加物としては、例えば、ブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水又はハードファット等の基剤；注射用蒸留水、生理食塩水若しくはプロピレングリコール等の水性又は用時溶解型注射剤を調製することができる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール、又はグリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調節剤；色素；希釈剤；安定化剤；噴射剤及び粘着剤などが挙げられる。
【００１３】
投与量は、患者に応じて適宜選択すればよい。例えば、１日あたり、経口では１０〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜６００ｍｇを、注射投与では１〜１００ｍｇ、好ましくは５〜６０ｍｇを投与する。
【００１４】
なお、ダナゾール投与中は排卵が抑制されることがあるので、自然妊娠の妊娠率を向上させるには、少なくとも１回の性周期に相当する期間、ダナゾールの投与を休止する必要がある。このような場合、１〜１８０日間、好ましくは３０〜１２０日間ダナゾールを継続投与する期間、および３０〜１８０日間、好ましくは９０〜１８０日間の休薬期間からなるサイクルを繰り返せばよい。
【実施例】
【００１５】
以下に、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されることはない。
【００１６】
なお、ダナゾールは、７週齢のメスのＢａｌｂ／ｃマウス（日本ＳＬＣ社）を、通常の条件下で1週間環境に慣らした後、マウスの背部皮下に１０％エタノールを含む綿実油に溶解し、1日1回、２週間連続投与した。２週間は、マウスの性周期はおよそ４日（発情前期、発情期、発情後期、発情休止期）であるため、３回の性周期にわたるように継続的に投与する期間である。
（実施例１）
１群１０匹のＢａｌｂ／ｃマウスに、それぞれ０または７．５ｍｇ／ｋｇ（ＢＷ）のダナゾールを投与した。投与終了後、１回の性周期に相当する４日間の安静期間を設けた後の夕方にオスと同居させ、翌朝に膣栓をみることにより交配成立の有無を観察した。膣栓を観察した日を妊娠０日とし、着床期である妊娠５日目にエバンスブルー１０ｍｇ／ｍＬを尾静脈から注射した。３０分後に解剖し、子宮が肥厚し、かつエバンスブルーで着色されている部位を着床部位とした。着床部位の数は、ダナゾール投与群と対照群（ダナゾール非投与）とでほぼ同じであった。また、着床部位の有無から算出した妊娠成功率は、ダナゾール投与群では８４.６％、対照群では４６．２％であった。このことから、ダナゾールはマウスの自然妊娠を向上させる効果を有することがわかる。
（実施例２）
１群１５匹のＢａｌｂ／ｃマウスに、それぞれ０または７．５ｍｇ／ｋｇ（ＢＷ）のダナゾールを投与した。ダナゾール投与後、定法に従ってホルマリン固定／パラフィン包埋した子宮から切片を作成し、免疫組織化学的手法でインテグリンα５陽性細胞の子宮内局在を調べた。一次抗体はインテグリンα５抗体（Ｃ−１９、Santa Cruz, Biotech）を用いた。二次抗体以降の過程は、Vectastain Elite ABCキット（Vector Lab.）を用いた。発色はＤＡＢキット（Vector Lab.）を使用した。免疫組織化学の結果を図１に示す。図１から、ダナゾールはインテグリンα５β１の子宮内発現を増強していることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００１７】
ダナゾールは、インテグリンα５β１の子宮内発現を増強させる作用を有するので、単独でまたはインテグリン活性化作用を有する化合物と組み合わせて不妊治療に用いることができる。
【００１８】
また、ダナゾールは、インテグリンα５β１の機能解析に用いることもできる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ダナゾール投与が、インテグリンα５β１の子宮内発現に与える影響を示す図である。
【図１】
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