(57)【要約】【課題】            本発明は、優れた美白作用及び抗酸化作用を有する有効成分を見出し、美白剤及び抗酸化剤として提供することを目的とする。【解決手段】        優れた美白作用及び抗酸化作用を有するトリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物の抽出物を美白剤及び抗酸化剤として用いる。トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物の抽出物としては、特にトリブルス・テレストリス（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）の抽出物を用いることが望ましい。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする美白剤。
【請求項２】
トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物がトリブルス・テレストリス（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）である請求項１に記載の美白剤。
【請求項３】
トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする抗酸化剤。
【請求項４】
トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物がトリブルス・テレストリス（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）である請求項３に記載の抗酸化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美白剤及び抗酸化剤に関する。さらに詳しくは、トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする美白剤及び抗酸化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
シミ・ソバカスや日焼けによって生じる色素沈着症状は、紫外線、女性ホルモン、遺伝的要因などによって惹き起こされると考えられているが、その要因は個々人によって様々である。そのため、色素沈着症状を改善する方法として、色素沈着の原因となるメラニンの産生を抑制する方法、酵素チロシナーゼの活性を抑制する方法、あるいは抗酸化剤により紫外線による酸化を抑制する方法などが検討されており、これまでにも様々な美白剤や抗酸化剤が報告されている。これまでに報告されている美白剤としては、ヒノキチオールの誘導体（特許文献１参照），エルゴステロール誘導体（特許文献２参照），フェノキシ酢酸誘導体（特許文献３参照）が知られており、抗酸化剤としては、サルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献４参照）が知られている。しかし、これまでに報告されている美白剤及び抗酸化剤は、その効果が必ずしも十分でなかったり、安全性で問題があるために使用制限がなされていたり、製剤に好ましくない色や臭いを付与してしまう場合があるなど、効果、副作用、安定性などの点から未だ十分なものが得られていないのが現状であった。
【０００３】
なお、トリブルス属植物の抽出物を有効成分とする美白剤及び抗酸化剤に関する先行技術は認められなかった。
【０００４】
【特許文献１】特開２００２-０４７１６７号公報
【特許文献２】特開２００２−１１４６８５号公報
【特許文献３】特開２００１−３５４５１１号公報
【特許文献４】特開平１０−１８２４１３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現代においては、色素沈着症状を改善する美白に対しての人々の関心は非常に高く、より優れた美白剤及び抗酸化剤の開発が期待されており、本発明はこのような事情に鑑みてなされたものである。したがって、本発明の目的は、優れた効果を発揮する美白剤及び抗酸化剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、優れた効果を発揮する美白剤及び抗酸化剤を見出すために、種々の物質について美白効果と抗酸化作用に関する検討を行った。その結果、トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物が優れた美白効果や抗酸化効果を発揮することを見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする美白剤及び抗酸化剤に関するものである。トリブルス属植物より選ばれる植物の抽出物としては、トリブルス・テレストリス（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）の抽出物を好適に用いることができる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、優れた効果を有する美白剤及び抗酸化剤を提供することができ、該美白剤を使用することにより、シミ・ソバカスや紫外線等によって生じる色素沈着症状の防止・改善に優れた効果を発揮する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明に使用する植物は、ハマビシ科トリブルス属（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ）の植物であれば特に限定されない。トリブルス属植物としては、２０種余りが知られているが、入手が比較的容易なことや有効性などの理由により、トリブルス・テレストリス（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ），トリブルス・キストイデス（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ ｃｉｓｔｏｉｄｅｓ），トリブルス・マキシムス（Ｔｒｉｂｕｌｕｓ ｍａｘｉｍｕｓ）などを好適に用いることができ、特にトリブルス・テレストリスを用いることが有効性の点から好ましい。
【００１０】
これらトリブルス属植物を使用する際は、抽出物を用いるのが一般的である。抽出には、トリブルス属植物の植物の幹，枝，果実，葉，花，種子，樹皮，樹液，根，芽などのいずれの部位を用いても構わないが、種子を用いることが、有効性や簡便性の点から好ましい。
【００１１】
抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出方法は、常法であれば特に限定されないが、抽出溶媒に浸漬する方法や超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法を挙げることができる。抽出効率を上げるために、抽出溶媒中で撹拌やホモジナイズを行うこともできる。抽出温度は特に限定されないが、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるため、特に限定されないが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１２】
抽出溶媒は特に限定されないが、水、アルコール類（エタノール，メタノール，イソプロパノール，イソブタノール，ｎ−ヘキサノール，メチルアミルアルコール，２−エチルブタノール，ｎ−オクチルアルコール等の１価のアルコール、グリセリン，エチレングリコール，エチレングリコールモノメチルエーテル，プロピレングリコール，プロピレングリコールモノメチルエーテル，プロピレングリコールモノエチルエーテル，トリエチレングリコール，１，３−ブチレングリコール，ヘキシレングリコール等の多価アルコールまたはその誘導体）、ケトン類（アセトン，メチルエチルケトン，メチルイソブチルケトン，メチル−ｎ−プロピルケトン等）、エステル類（酢酸エチル，酢酸イソプロピル等）、エーテル類（エチルエーテル，イソプロピルエーテル，ｎ−ブチルエーテル等）、アセトニトリル等の極性溶媒、ｎ−ペンタン，ｎ−ヘキサンなどの液状炭化水素、二酸化炭素の超臨界流体などの無（低）極性溶媒、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を挙げることができ、これらを単独で又は２種以上を混合して使用することができる。前記溶媒としては、水やアルコール類（エタノール，メタノール，イソプロパノール，イソブタノール，ｎ−ヘキサノール，メチルアミルアルコール，２−エチルブタノール，ｎ−オクチルアルコール等の１価のアルコール、グリセリン，エチレングリコール，エチレングリコールモノメチルエーテル，プロピレングリコール，プロピレングリコールモノメチルエーテル，プロピレングリコールモノエチルエーテル，トリエチレングリコール，１，３−ブチレングリコール，ヘキシレングリコール等の多価アルコールまたはその誘導体）の１種又は２種以上を用いることが抽出の容易性や抽出物の有効性の点から好ましく、水とエタノールの混液を用いることが特に好ましい。
【００１３】
トリブルス属植物の前記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮，乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解したり、或いはこれらの生理作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。トリブルス属植物の前記抽出物やその処理物及び分画物は、各処理及び分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。
【００１４】
トリブルス属植物の抽出物を有効成分とする美白剤は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用やメラニンの産生抑制作用を有し、シミ・ソバカスをはじめとする種々の色素沈着症状の予防・改善に優れた効果を発揮する。
【００１５】
トリブルス属植物の抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、優れたラジカル消去作用を有し、酸化障害によって生じる種々の症状の予防・改善に優れた効果を発揮する。
【００１６】
また、トリブルス属植物の抽出物を有効成分とする美白剤及び抗酸化剤は、単独でも使用することができるが、美白成分あるいは抗酸化成分として医薬品，医薬部外品，飲食品，化粧品などの種々の組成物に配合することにより、美白効果や抗酸化効果を有する組成物を得ることが出来る。得られた美白効果及び抗酸化効果を有する組成物は、日焼けなどによるシミ・ソバカスといった色素沈着症状や酸化障害によって生じる症状の予防・改善に効果を発揮する。
【００１７】
トリブルス属植物の抽出物を有効成分とする美白剤及び抗酸化剤を配合する組成物の剤型は任意であるが、組成物が皮膚外用剤，洗浄剤，浴用剤などの場合には、ローションなどの可溶化系，乳液などの乳化系，カラミンローションなどの分散系，噴射剤と共に充填したエアゾール，軟膏剤，粉末，顆粒などの種々の剤型として提供することができる。また、組成物が経口用医薬品や飲食品の場合には、ドリンク剤・点滴剤などの液剤，ガム・飴のような固形剤，カプセル，粉末，顆粒，錠剤などの一般的な剤型とすることができる。
【００１８】
トリブルス属植物の抽出物を有効成分とする美白剤及び抗酸化剤を配合する組成物には、これらの他に、必要に応じて、通常医薬品，医薬部外品，皮膚化粧料，浴用剤，洗浄剤，食品などに配合される油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，アルコール類，栄養強化物質，調味料などを適宜配合することができ、さらに他の美白剤や抗酸化剤との併用も可能である。
【００１９】
トリブルス属植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とする美白剤及び抗酸化剤の種々の組成物への配合量は、組成物の種類や目的等によって調整することができるが、有効性や使用性などの点から、組成物の全量に対して０．０００１〜７５重量％が好ましく、より好ましくは０．００１〜５０重量％であり、最も好ましくは０．０１〜２５重量である。
【実施例】
【００２０】
以下に、トリブルス属植物の抽出物の製造例、各作用を評価するための試験について詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００２１】
［製造例１］
トリブルス属植物の種子の乾燥粉砕物に８０倍量の５０重量％エタノール水溶液を加え、室温で攪拌しながら４時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、トリブルス属植物抽出物を得た。
【００２２】
［製造例２］
トリブルス属植物の種子の乾燥粉砕物に１０倍量の水を加え、９０℃にて２時間還流して抽出した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、トリブルス属植物抽出物を得た。
【００２３】
［製造例３］
トリブルス属植物の種子の乾燥粉砕物に１０倍量のメタノールを加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、トリブルス属植物抽出物を得た。
【００２４】
［製造例４］
超臨界抽出装置にトリブルス属植物の種子を投入し、４０℃において１５ＭＰａの気圧下で二酸化炭素の超臨界流体を用いて抽出した。抽出物を回収し、トリブルス属植物抽出物を得た。
【００２５】
［メラニン産生抑制作用の評価］
次に、トリブルス属植物抽出物のメラニン産生抑制作用の評価について示す。試料には、トリブルス・テレストリスより製造例１を用いて抽出したトリブルス・テレストリス抽出物を用いた。
【００２６】
評価は、以下の手順で行った。Ｂ１６マウスメラノーマＦ０ストレイン（Ｂ１６Ｆ０）細胞を３５ｍｍディッシュに１ディッシュあたり２０００個にて播種した。２４時間培養後、任意の濃度の試料を添加した５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）添加ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に交換した。７日間培養後、０．２５％トリプシンを用いて細胞を回収し、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。さらに、試料を添加した培地の代わりに、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に５重量％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を添加したものをブランクとし、同様に目視判定を行った。また、目視判定は、表１に示す通り、５段階評価によって行った。表２に判定の結果を示した。
【００２７】
【表１】
2005089376.tif 000002
【００２８】
【表２】
2005089376.tif 000003
【００２９】
表２より明らかなように、トリブルス・テレストリス抽出物を添加した培地を用いた場合に、有意なメラニン産生抑制作用が認められた。特に、トリブルス・テレストリス抽出物を０．２５ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、全く黒化は認められなかった。このことから、トリブルス・テレストリス抽出物は、メラニン産生抑制作用に基づく高い美白作用を有することが明らかとなった。
【００３０】
［チロシナーゼ活性阻害作用の評価］
次に、トリブルス属植物抽出物のチロシナーゼ活性阻害作用の評価について示す。試料には、トリブルス・テレストリスより製造例１を用いて抽出したトリブルス・テレストリス抽出物を用いた。
【００３１】
評価は、以下の手順で行った。正常ヒト表皮メラニン細胞を１ウェル当り３．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはクラボウ社製Ｍｅｄｉｕｍ１５４Ｓを用いた。２４時間後に任意の濃度に調製した試料を添加した培地に交換し、さらに４８時間培養した。次に、１重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ含有リン酸緩衝液７５μＬに細胞を完全に溶解させ、その５０μＬを粗酵素液として使用した。粗酵素液に基質となる５０μＬの０．０５重量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液を加え、３７℃で２時間静置した。マイクロプレートリーダーにて基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度を測定し、生成したドーパメラニン量を測定した。同時に、各ウェルのタンパク量についても測定し、単位タンパク量当りのドーパメラニン生成量を求めた。試料無添加のブランクの値を１００とした時の相対値を求めて行った。評価結果を、試料無添加のブランクにおけるドーパメラニン生成量を１００とした相対値にて表３に示す。なお、表中の*及び**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を*で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を**で表したものである。
【００３２】
【表３】
2005089376.tif 000004
【００３３】
表３より明らかなように、トリブルス・テレストリス抽出物を添加した培地を用いた場合に、有意なチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。特に、トリブルス・テレストリス抽出物を０．５ｍｇ／ｍＬ添加した場合には、危険率１％未満で有意なチロシナーゼ活性阻害作用が認められた。このことから、トリブルス・テレストリス抽出物は、チロシナーゼ活性阻害作用に基づく高い美白作用を有することが明らかとなった。
【００３４】
［抗酸化作用の評価］
次に、トリブルス属植物抽出物の抗酸化作用について示す。試料には、トリブルス・テレストリスより製造例１を用いて抽出したトリブルス・テレストリス抽出物を用いた。
【００３５】
評価は、以下の手順で行った。５０重量％エタノール水溶液にて任意の濃度に希釈した試料溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。次に、０．２ｍＭの濃度になるようにエタノールにて調製した１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）溶液を９６穴マイクロプレートに１００μＬ添加した。攪拌しながら暗所に放置し、２４時間後に５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料が無添加のブランクの吸光度を（Ａ）、試料を添加したときの吸光度を（Ｂ）としたとき、式（１）の値をラジカル消去率とした。評価結果を表４に示した。
式（１）  ｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）
【００３６】
【表４】
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【００３７】
表４より明らかなように、トリブルス・テレストリス抽出物は、優れた抗酸化作用を有することが分かった。このことから、トリブルス・テレストリス抽出物は、ラジカル消去作用に基づく高い抗酸化作用を有することが明らかとなった。