(57)【要約】    【課題】  自己免疫疾患の治療における免疫調整剤として有用な、Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を阻害する新規Ｂ細胞増殖阻害剤及びＴ細胞増殖阻害剤を提供すること。    【解決手段】  細胞壁を破砕したクロレラ・ピレノイドサ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ）の乾燥粉末を含有してなる、Ｂ細胞増殖阻害剤及びＴ細胞増殖阻害剤。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるＢ細胞増殖阻害剤。
【請求項２】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるＴ細胞増殖阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を阻害するためのＢ／Ｔ細胞増殖阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンパ球は小さな白色の血球であり、その主たる任務は免疫系の活動を実行することである。その数はおよそ１兆個である。リンパ球はＢ細胞とＴ細胞の二つに大きく分かれる。前者は胸腺と無関係に成熟し、後者は胸腺中で変化を遂げる。どちらも特定の抗原標的を認識する。
【０００３】
Ｂ細胞は主として体液内に抗体と呼ばれる溶解性物質を分泌することによってその任務を果たす（体液性免疫）。抗体は通常、細菌や毒性分子のような血液中の抗原と相互作用するが、生存細胞内に進入できない。対照的に、Ｔ細胞はその標的と直接相互作用し、ウイルスや悪性腫瘍によって占拠された体細胞を攻撃する（細胞性免疫）。Ｂ／Ｔ細胞増殖阻害は、自己免疫疾患の治療において免疫調整剤として有用であると考えられる。
【０００４】
Ｂ細胞の増殖を阻害する化合物としては、特許文献１記載のクレブシエラ・オキシトカ又はクレブシエラ・ニューモニアの莢膜成分等が知られており、Ｔ細胞の増殖を阻害する化合物としては、特許文献２記載の、２０アミノ酸以下を含み、Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、 Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ、Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ、Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ、Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ、Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ、Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ、ＳＥＱ ＩＤＮＯ：６６、Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ、及びＧｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏから成る群から選択される少なくとも１つのアミノ酸配列を含む化合物等が知られているが、多様な局面でＢ細胞及びＴ細胞の増殖を阻害する上で、更なるＢ細胞増殖阻害剤及びＴ細胞増殖阻害剤に対する要望は強い。
【特許文献１】特開平１１−２２８４２６号公報
【特許文献２】特表平８−５０３２２２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、従来技術に存した上記のような課題に鑑み行われたものであって、その目的とするところは、Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を阻害する新規Ｂ細胞増殖阻害剤及びＴ細胞増殖阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を阻害する上で有用な物質について研究を行った結果、本発明を完成したものである。
【０００７】
すなわち、上記目的を達成する本発明のＢ細胞増殖阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してＢ細胞の増殖を阻害する方法を提供するものである。
【０００８】
また本発明のＴ細胞増殖阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してＴ細胞の増殖を阻害する方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のＢ細胞増殖阻害剤及びＴ細胞増殖阻害剤は、自己免疫疾患の治療における免疫調整剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明におけるクロレラとは、クロレラ属(Chlorella) に属する単細胞緑藻類であって、例えば、Chlorella pyrenoidosa、Chlorella ellipsoidea 、Chlorella vulgaris 、Chlorella regularis 等を挙げることができる。本発明に最も適しているのは、クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）である。
【００１１】
本発明のＢ細胞増殖阻害剤及びＴ細胞増殖阻害剤におけるクロレラの細胞壁破砕物は、例えば次のようにして得ることができる。すなわち、先ずクロレラ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ粉体・水懸濁液を１０℃以下に調整する。次にこの懸濁液を、下記のような連続湿式微粉砕機に送入し、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕する。次いで、このようにして得られたクロレラスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却することにより、細胞壁が破砕されたクロレラを、品質劣化を生じさせることなく得ることができる。
【００１２】
上記連続湿式微粉砕機は、冷却外套を持つ密閉シリンダー中に多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されたものである。そのグラスビーズ容量は密閉シリンダー容量の８０乃至８５％であり、グラスビーズを流入液体と混和・回転することにより、流入液体中の物質を摩砕するものである。
【００１３】
このようにして細胞壁が破砕されたクロレラは、そのまま用いることもできるが、例えば、真空乾燥後粉砕を行う等の適宜の処理を施した後に使用してもよい。
【００１４】
本発明のＢ細胞増殖阻害剤及びＴ細胞増殖阻害剤は、経口適用が望ましい。経口適用の形態に特に限定はないが、好ましくは、栄養食品、栄養補助食品、粉末、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、又は飲料用液体の形態である。
【００１５】
また種々の形態を形成する上で、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、可塑剤等を適宜用いることができる。
【００１６】
賦形剤の例としては、糖類（乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール），デンプン（バレイショ，コムギ，トウモロコシ），無機物（炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，塩化ナトリウム），結晶セルロース，植物末（カンゾウ末，ゲンチアナ末）等を挙げることができる。
【００１７】
結合剤の例としては、デンプンのり液，アラビアゴム，ゼラチン，アルギン酸ナトリウム，メチ／レセルロース（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリビニルアルコール（ＰＶＡ），ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），カルポキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等を挙げることができる。
【００１８】
崩壊剤の例としては、デンプン，寒天，ゼラチン末，結晶セルロース，ＣＭＣ・Ｎａ，ＣＭＣ・Ｃａ，炭酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００１９】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム，タルク，水素添加植物油，マクロゴール，シリコーン油等を挙げることができる。
【００２０】
コーティング剤の例としては、糖衣（白糖，ＨＰＣ，セラック），膠衣（ゼラチン，グリセリン，ソルビトール），フイルムコーティング〔ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ＥＣ，ＨＰＣ，ＰＶＰ〕，腸溶性コーティング〔ヒドロキシプロビルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）〕等を挙げることができる。
【００２１】
着色剤の例としては、水溶性食用色素，レーキ色素）等を挙げることができる。矯味剤の例としては、乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール）等を挙げることができる。矯臭剤の例としては、芳香性精油類），光線遮断剤（酸化チタン）等を挙げることができる。可塑剤の例としては、フタル酸エステル類，植物油，ポリエチレングリコール）等を挙げることができる。
【実施例】
【００２２】
クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）乾燥粉末の製造
冷却外套を持つ密閉シリンダー中にその密閉シリンダー容量の８０乃至８５％の容量の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されており、そのグラスビーズを流入液体と混和・回転することにより流入液体中の物質を摩砕する連続湿式微粉砕機（商品名：ダイノーミル［KD型］  WAB, Inc.製）に、１０℃以下に調整されたクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を送入して、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕し、次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却し、真空乾燥後、粉砕することにより、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末（株式会社サン・クロレラ製の細胞壁破砕クロレラ粉末）が得られた。
【００２３】
Ｂ細胞増殖阻害活性の測定
クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末および／または溶媒を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓から分離した１０μｇ／ｍｌ（マイクログラム／ミリリットル）のリポ多糖 (LPS)-刺激Ｂ-リンパ球細胞（リポ多糖：Ｓｉｇｍａ［米国］から入手）と共に、[３Ｈ]チミジン（Perkin Elmer［米国］から入手）を添加して、３７℃で４８時間インキュベートした。
【００２４】
その後、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ［フィンランド］）を用いて、［３Ｈ］チミジン取り込みの定量を行ったところ、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ（乾燥粉末）によるリポ多糖-刺激Ｂ細胞増殖の５０％阻害濃度は１６．６μｇ／ｍｌであった。すなわち、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサはＢ細胞増殖阻害作用を有していた。
【００２５】
Ｔ細胞増殖阻害活性の測定
クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末および／または溶媒を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの胸腺から分離した３μｇ／ｍｌ（マイクログラム／ミリリットル）のコンカバナリンＡ(Concanavalin A)-刺激Ｔ-リンパ球細胞（コンカバナリンＡ：Ｓｉｇｍａ［米国］から入手）と共に、[３Ｈ]チミジン（Perkin Elmer［米国］から入手）を添加して、３７℃で４８時間インキュベートした。
【００２６】
その後、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ［フィンランド］）を用いて、［３Ｈ］チミジン取り込みの定量を行ったところ、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ（乾燥粉末）によるコンカバナリンＡ-刺激Ｔ-細胞増殖の５０％阻害濃度は５４．２μｇ／ｍｌであった。すなわち、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサはＴ細胞増殖阻害作用を有していた。