(57)【要約】    【課題】  発癌物質であるホルボールエステルによる細胞形質転換を阻害することによるガン予防に有用な、ホルボールエステル受容体のホルボールエステルとの結合を阻害するためのホルボールエステル受容体結合阻害剤を提供すること。    【解決手段】  細胞壁を破砕したクロレラ・ピレノイドサ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ）の乾燥粉末を含有してなる、ホルボールブチレート等のホルボールエステル受容体結合阻害剤。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるホルボールエステル受容体結合阻害剤。
【請求項２】
ホルボールエステルがホルボールブチレートである請求項１記載のホルボールエステル受容体結合阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホルボールエステル受容体のホルボールエステルとの結合を阻害するためのホルボールエステル受容体結合阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホルボールエステル受容体結合に関して、ホルボールエステル受容体の活性は、細胞機能の変化を開始させるためにホルボールエステルを結合する機能を有している。典型的なホルボールエステルは、ＰＫＣ酵素（プロテインキナーゼＣ）によって仲介される多段発癌において確立された腫瘍プロモーターのパラダイムである。しかしながら、最近発見された新しいホルボールエステル受容体は、Rac-GAP活性を有し、Rasシグナル伝達を増強するRas グアニル放出（guanyl-releasing）タンパク質として同定された。ホルボールエステル受容体のホルボールエステルとの結合阻害は、細胞形質転換阻止剤として有用であると考えられる。なお、先行技術は特には発見されなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、従来技術に存した上記のような課題に鑑み行われたものであって、その目的とするところは、ホルボールエステル受容体のホルボールエステルとの結合を阻害するための新規なホルボールエステル受容体結合阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、ホルボールエステル受容体のホルボールエステルとの結合を阻害する上で有用な物質について研究を行った結果、本発明を完成したものである。
【０００５】
すなわち、上記目的を達成する本発明のホルボールエステル受容体結合阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してホルボールエステル受容体のホルボールエステルとの結合を阻害する方法を提供するものである。
【０００６】
また上記ホルボールエステルは、ホルボールブチレートであるものとすることができる。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のホルボールエステル受容体結合阻害剤は、発癌物質であるホルボールエステルの作用を抑制する細胞形質転換阻止剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明におけるクロレラとは、クロレラ属(Chlorella) に属する単細胞緑藻類であって、例えば、Chlorella pyrenoidosa、Chlorella ellipsoidea 、Chlorella vulga-ris 、Chlorella regularis 等を挙げることができる。本発明に最も適しているのは、クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）である。
【０００９】
本発明のホルボールエステル受容体結合阻害剤におけるクロレラの細胞壁破砕物は、例えば次のようにして得ることができる。すなわち、先ずクロレラ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ粉体・水懸濁液を１０℃以下に調整する。次にこの懸濁液を、下記のような連続湿式微粉砕機に送入し、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕する。次いで、このようにして得られたクロレラスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却することにより、細胞壁が破砕されたクロレラを、品質劣化を生じさせることなく得ることができる。
【００１０】
上記連続湿式微粉砕機は、冷却外套を持つ密閉シリンダー中に多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されたものである。そのグラスビーズ容量は密閉シリンダー容量の８０乃至８５％であり、グラスビーズを流入液体と混和・回転することにより、流入液体中の物質を摩砕するものである。
【００１１】
このようにして細胞壁が破砕されたクロレラは、そのまま用いることもできるが、例えば、真空乾燥後粉砕を行う等の適宜の処理を施した後に使用してもよい。
【００１２】
本発明のホルボールエステル受容体結合阻害剤は、経口適用が望ましい。経口適用の形態に特に限定はないが、好ましくは、栄養食品、栄養補助食品、粉末、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、又は飲料用液体の形態である。
【００１３】
また種々の形態を形成する上で、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、可塑剤等を適宜用いることができる。
【００１４】
賦形剤の例としては、糖類（乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール），デンプン（バレイショ，コムギ，トウモロコシ），無機物（炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，塩化ナトリウム），結晶セルロース，植物末（カンゾウ末，ゲンチアナ末）等を挙げることができる。
【００１５】
結合剤の例としては、デンプンのり液，アラビアゴム，ゼラチン，アルギン酸ナトリウム，メチ／レセルロース（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリビニルアルコール（ＰＶＡ），ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），カルポキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等を挙げることができる。
【００１６】
崩壊剤の例としては、デンプン，寒天，ゼラチン末，結晶セルロース，ＣＭＣ・Ｎａ，ＣＭＣ・Ｃａ，炭酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００１７】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム，タルク，水素添加植物油，マクロゴール，シリコーン油等を挙げることができる。
【００１８】
コーティング剤の例としては、糖衣（白糖，ＨＰＣ，セラック），膠衣（ゼラチン，グリセリン，ソルビトール），フイルムコーティング〔ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ＥＣ，ＨＰＣ，ＰＶＰ〕，腸溶性コーティング〔ヒドロキシプロビルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）〕等を挙げることができる。
【００１９】
着色剤の例としては、水溶性食用色素，レーキ色素）等を挙げることができる。矯味剤の例としては、乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール）等を挙げることができる。矯臭剤の例としては、芳香性精油類），光線遮断剤（酸化チタン）等を挙げることができる。可塑剤の例としては、フタル酸エステル類，植物油，ポリエチレングリコール）等を挙げることができる。
【実施例】
【００２０】
クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）乾燥粉末の製造
冷却外套を持つ密閉シリンダー中にその密閉シリンダー容量の８０乃至８５％の容量の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されており、そのグラスビーズを流入液体と混和・回転することにより流入液体中の物質を摩砕する連続湿式微粉砕機（商品名：ダイノーミル［KD型］  WAB, Inc.製）に、１０℃以下に調整されたクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を送入して、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕し、次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却し、真空乾燥後、粉砕することにより、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末（株式会社サン・クロレラ製の細胞壁破砕クロレラ粉末）が得られた。
【００２１】
ホルボールエステル受容体のホルボールエステルとの結合の測定
細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末及び溶媒（又は、対照として溶媒のみ）と、修飾Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中に調整したマウス脳膜の一定量を、３ｎＭ［３Ｈ］ＰＤＢｕ（ホルボール12,13-ジブチレート[phorbol 12,13-dibutyrate]）（Perkin Elmer［米国］から入手）と共に、２５℃で６０分間インキュベートした。１μＭのＰＤＢｕの存在下において、非特異的な結合を測定した。前記膜を濾過及び洗浄し、特異的に結合した［３Ｈ］ＰＤＢｕを測定するために、フィルタ上の残留物の放射線活性をカウントした。
【００２２】
特異的に結合した［３Ｈ］ＰＤＢｕを測定するために、前記膜を濾過及び洗浄し、Ｂｅｔａｐｌａｔｅシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ［フィンランド］）を用いて、フィルタ上の残留物の放射線活性をカウントしたところ、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ（乾燥粉末）による［３Ｈ］ＰＤＢｕの受容体結合の５０％阻害濃度は１５２μｇ／ｍｌであった。すなわち、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサはホルボールエステル受容体結合阻害作用を有していた。