(57)【要約】【課題】  患者の１以上の抗炎症性サイトカインの放出に比べて４以上の炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害するのにあるいは患者のＮＦ−κＢ活性を阻害するのに有効な化合物を提供する。【解決手段】  患者の１以上の抗炎症性サイトカインの放出に比べて４以上の炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害するためのまたは患者のＮＦ−κＢ活性に阻害するための薬剤組成物であって、  下記式：    【化１】2005263802.tif 000023で表される化合物を含む、薬剤組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の１以上の抗炎症性サイトカインの放出に比べて４以上の炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害する薬剤組成物であって、
下記式：
【化１】
2005263802.tif 000014
式中、Ａは、Ｒまたは下記式：
【化２】
2005263802.tif 000015
の基であり、
上記式中、Ｒは、水素原子、アルキル、アリール、シクリル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであり；
Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３は、それぞれ独立して、フェニル、チエニル、フリル、またはピロリルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、それぞれ独立して、Ｒ’、ニトロ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ’Ｒ”、−（ＣＨ２）ｍＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＳＲ’、−（ＣＨ２）ｍＮＲ’Ｒ”、−（ＣＨ２）ｍＣＮ、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−ＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｈである、または、Ｒ１およびＲ２はともに、Ｒ３およびＲ４はともに、もしくはＲ５およびＲ６はともに、−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−であり、この際、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、シクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルであり；およびｍは、０、１、２、３、４、５、または６であり、並びに、
ｎは、１、２、または３である、
で表される化合物を含む、薬剤組成物。
【請求項２】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項３】
Ａは、下記式：
【化３】
2005263802.tif 000016
の基である、請求項１または２に記載の薬剤組成物。
【請求項４】
Ｒ５およびＲ６が、それぞれ水素原子であり、Ａｒ３がフェニルであり、ｎが１である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項５】
Ｒ３がＣＨ２ＯＨであり、フリルの２位で置換され、さらに、Ｒ４が水素原子である、請求項２〜４のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項６】
Ａｒ１がフェニルである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項７】
Ａｒ１がチエニルである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項８】
Ａが水素原子である、請求項２に記載の薬剤組成物。
【請求項９】
Ｒ３がＣＯ２ＣＨ３であり、フリルの２位で置換され、さらに、Ｒ４が水素原子である、請求項８に記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
患者の２以上の抗炎症性サイトカインの放出に比べて５以上の炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害する薬剤組成物であって、
下記式：
【化４】
2005263802.tif 000017
式中、Ａは、Ｒまたは下記式：
【化５】
2005263802.tif 000018
の基であり、
上記式中、Ｒは、水素原子、アルキル、アリール、シクリル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであり；
Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３は、それぞれ独立して、フェニル、チエニル、フリル、またはピロリルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、それぞれ独立して、Ｒ’、ニトロ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ’Ｒ”、−（ＣＨ２）ｍＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＳＲ’、−（ＣＨ２）ｍＮＲ’Ｒ”、−（ＣＨ２）ｍＣＮ、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−ＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｈである、または、Ｒ１およびＲ２はともに、Ｒ３およびＲ４はともに、もしくはＲ５およびＲ６はともに、−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−であり、この際、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、シクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルであり；およびｍは、０、１、２、３、４、５、または６であり、並びに、
ｎは、１、２、または３である、
で表される化合物を含む、薬剤組成物。
【請求項１１】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項１０に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
Ａは、下記式：
【化６】
2005263802.tif 000019
の基である、請求項１０または１１に記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
Ｒ５およびＲ６が、それぞれ水素原子であり、Ａｒ３がフェニルであり、ｎが１である、請求項１１〜１２のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１４】
Ｒ３がＣＨ２ＯＨであり、フリルの２位で置換され、さらに、Ｒ４が水素原子である、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１５】
Ａｒ１がフェニルである、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１６】
Ａｒ１がチエニルである、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１７】
Ａが水素原子である、請求項１１に記載の薬剤組成物。
【請求項１８】
Ｒ３がＣＯ２ＣＨ３であり、フリルの２位で置換され、さらに、Ｒ４が水素原子である、請求項１７に記載の薬剤組成物。
【請求項１９】
５つの炎症性サイトカインは、インターロイキン１β、インターロイキン６、インターロイキン８、インターフェロンγ及びＴＮＦ−αであり；および２つの抗炎症性サイトカインは、インターロイキン４及びインターロイキン１０である、請求項１０〜１８のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項２０】
患者のＮＦ−κＢ活性に阻害するための薬剤組成物であって、
下記式：
【化７】
2005263802.tif 000020
式中、Ａは、Ｒまたは下記式：
【化８】
2005263802.tif 000021
の基であり、
上記式中、Ｒは、水素原子、アルキル、アリール、シクリル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであり；
Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３は、それぞれ独立して、フェニル、チエニル、フリル、またはピロリルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、それぞれ独立して、Ｒ’、ニトロ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ’Ｒ”、−（ＣＨ２）ｍＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＳＲ’、−（ＣＨ２）ｍＮＲ’Ｒ”、−（ＣＨ２）ｍＣＮ、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−ＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｈである、または、Ｒ１およびＲ２はともに、Ｒ３およびＲ４はともに、もしくはＲ５およびＲ６はともに、−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−であり、この際、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、シクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルであり；およびｍは、０、１、２、３、４、５、または６であり、並びに、
ｎは、１、２、または３である、
で表される化合物を含む、薬剤組成物。
【請求項２１】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項２０に記載の薬剤組成物。
【請求項２２】
Ａは、下記式：
【化９】
2005263802.tif 000022
の基である、請求項２０または２１に記載の薬剤組成物。
【請求項２３】
Ｒ５およびＲ６が、それぞれ水素原子であり、Ａｒ３がフェニルであり、ｎが１である、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項２４】
Ａｒ１がフェニルである、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項２５】
Ａｒ１がチエニルである、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項２６】
Ａが水素原子である、請求項２０または２１に記載の薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、その内容が参照により本願中に組み込まれる、２００４年３月１５日に出願された、米国仮出願第６０／５５３，３０２号の優先権を主張する。そして本発明は、炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害するための薬剤組成物／方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
サイトカインは、増殖因子の特定のファミリーである。サイトカインは、炎症性シグナル伝達の調節する内因性メディエーターとして作用する（Ｒｏｍａｇｎａｎｉ  Ｓ．，  Ａｎｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２０００，  ８５：  ９−２１）。
【０００３】
炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、並びにインターロイキン１β、２、および８）は、その大部分が活性化マクロファージにより産生され、外因性病原体に対する炎症性応答を誘発する。しかしながら、炎症性サイトカインの過剰産生は、重要な臓器にとっては有害である。抗炎症性サイトカイン（例えば、インターロイキン４および１０）は、重要な臓器の機能を維持する目的で、炎症の進行を中断させ、または減弱させる（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  １９９９，  ２７：  １２６２−１２６４；およびＫａｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  Ｍｏｌ．  Ｐａｔｈｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９７，  ９８：  ３４−４２２０）。
【０００４】
炎症性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインの産生は、複雑なメカニズムを介して厳しく制御されている。これらの２種のサイトカインの産生のバランスが崩れると、多くの疾患、例えば、関節炎、腎疾患、骨異常、喘息、癌、敗血症、神経変性、好中球性肺胞炎、肝炎、虚血／再灌流、および炎症性腸疾患が発症する（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  １９９９，  ２７：  １２６２−１２６４；およびＫａｓａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  Ｍｏｌ．  Ｐａｔｈｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９７，  ９８：  ３４−４２）。
【０００５】
ＮＦ−κＢは、サイトカインの放出を調節し、炎症性応答の調節に重要な役割を果たす転写因子である。ＮＦ−κＢは、関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、喘息、敗血症性ショック、自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス）、神経変性、アテローム性動脈硬化症、腫瘍形成、毛細血管拡張性運動失調症、肺疾患（例えば、ＡＲＤＳ、全身性炎症反応症候群、呼吸器系ウイルス感染、職業性および環境性肺疾患、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、原発性肺高血圧症）、ＨＩＶ、およびインフルエンザのような疾患の治療の潜在的な標的である（Ｋｒｉｓｔｍａｎ  ＪＷ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｓｔ  ２０００，  １１７：  １４８２−１４８７；およびＢａｌｄｗｉｎ，  ＡＳ．Ｊｒ．，Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９６，  １４：  ６４９−６８３）。
【発明の開示】
【０００６】
要約
本発明は、融合ピラゾリル化合物が、抗炎症性サイトカインの放出に比べて炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害し、そしてこの化合物はＮＦ−κＢの活性をも阻害するという驚くべき知見に基づくものである。
【０００７】
よって、本発明の一形態は、患者の１以上の抗炎症性サイトカインの放出に比べて４以上の炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害するための薬剤組成物に関する。また本発明の一形態は、患者の１以上の抗炎症性サイトカインの放出に比べて４以上の炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害する方法に関する。本発明の薬剤組成物は、下記式（Ｉ）：
【０００８】
【化１】
2005263802.tif 000002
【０００９】
式中、Ａは、Ｒまたは下記式：
【００１０】
【化２】
2005263802.tif 000003
【００１１】
の基（「（ＣＨ２）ｎＡｒ３（Ｒ５）（Ｒ６）」とも称する）であり、ここでＲは、水素、アルキル、アリール、シクリル、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクリルであり；Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３は、それぞれ、フェニル、チエニル、フリル、またはピロリルであり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、それぞれ、Ｒ’、ニトロ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＳＲ’、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ’、−（ＣＨ２）ｍＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＳＲ’、−（ＣＨ２）ｍＮＲ’Ｒ”、−（ＣＨ２）ｍＣＮ、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−ＯＲ’、−（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）Ｈであるか、または、Ｒ１およびＲ２はともに、Ｒ３およびＲ４はともに、もしくはＲ５およびＲ６はともに、−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−であり、この際、Ｒ’およびＲ”は、それぞれ、水素、アルキル、シクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルであり；並びに、ｍは０、１、２、３、４、５、または６であり、並びに、ｎは、１、２、または３である、
で表される１以上の融合ピラゾリル化合物を含む。また本発明の阻害方法は、本発明の薬剤組成物の有効量を患者に投与することを含む。
【００１２】
式（Ｉ）について、融合ピラゾリル化合物のサブセットは、Ａｒ２が５’−フリルであり、Ａが（ＣＨ２）ｎＡｒ３（Ｒ５）（Ｒ６）であるものである。いくつかの化合物では、Ａｒ１がチエニルもしくはフェニルであり、Ａｒ３がフェニルであり、ｎが１であるか、あるいは、Ｒ３がＣＨ２ＯＨまたはＣＯ２Ｈであり、フリルの２位で置換される。
【００１３】
融合ピラゾリル化合物の他のサブセットは、Ａｒ２が５’−フリルであり、Ａが水素であるものである。いくつかの化合物において、Ｒ３は、ＣＯ２ＣＨ３であり、フリルの２位で置換され、Ａｒ１がフェニルであり、あるいは、Ｒ１およびＲ２が水素である。
【００１４】
上述した組成物／方法の好ましい実施形態において、融合ピラゾリル化合物は、患者中の２以上（好ましくは２つ）の抗炎症性サイトカインの放出に比べて５以上の炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害する。この炎症性サイトカインは、インターロイキン１β、インターロイキン６、インターロイキン８、インターフェロンγ、およびＴＮＦ−αであってもよく；並びに、抗炎症性サイトカインは、インターロイキン４およびインターロイキン１０であってもよい。
【００１５】
本発明の他の形態は、１以上の融合ピラゾリル化合物の有効量を患者に投与することにより、ＮＦ−κＢの活性を阻害する方法に関する。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物は、抗炎症性サイトカインに比べて炎症性サイトカインを優先的に阻害し、ＮＦ−κＢの活性を阻害することから、炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインとの産生のアンバランス、またはＮＦ−κＢの過剰な活性に関連する疾患の治療に有用である。
【００１７】
本明細書中、「アルキル」の語は、１〜１０個の炭素原子を含有する、直鎖状または分枝鎖状の炭化水素を意味する。アルキル基の例としては、以下に制限されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、およびｔ−ブチルが挙げられる。
【００１８】
「アリール」の語は、６炭素の単環、１０炭素の二環、１４炭素の三環の、芳香族性環状システムを意味し、この際それぞれの環は、１〜４個の置換基を有してもよい。アリール基の例としては、以下に制限されないが、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられる。
【００１９】
「シクリル」の語は、３〜１２個の炭素原子を有する飽和および部分的に不飽和の環状炭化水素基を意味する。シクリル基の例としては、いかに制限されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。
【００２０】
「ヘテロアリール」の語は、１以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、またはＳ）を有する、芳香族性の、５〜８員の単環、８〜１２員の二環、または１１〜１４員の三環の環状システムを意味する。ヘテロアリール基の例としては、以下に制限されないが、ピリジル、フリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリミジニル、チエニル、キノリニル、インドリル、およびチアゾリルが挙げられる。「ヘテロアラルキル」の語は、ヘテロリール基で置換されたアルキル基を意味する。
【００２１】
「ヘテロシクリル」の語は、１以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、またはＳ）を有する、非芳香族性の、５〜８員の単環、８〜１２員の二環、または１１〜１４員の三環の環状システムを意味する。ヘテロシクリル基の例としては、以下に制限されないが、ピペラジニル、ピロリジニル、ジオキサニル、モルフォリニル、およびテトラヒドロフラニルが挙げられる。
【００２２】
本明細書中に記載のアルキル、シクリル、ヘテロシクリル、およびアリールとしては、置換体および非置換体の双方を含む。置換基の例としては、以下に制限されないが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、メルカプト、アルコキシカルボニル、アミド、カルボキシ、アルカンスルホニル、アルキルカルボニル、カルバミド、カルバミル、カルボキシル、チオウレイド、チオシアナート、スルホンアミド、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シクリル、ヘテロシクリルが挙げられ、この際、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シクリル、およびヘテロシクリルは、さらに置換されていてもよい。
【００２３】
本発明の組成物／方法の実施に用いられうる融合ピラゾリル化合物の例を以下に示す：
【００２４】
【化３】
2005263802.tif 000004
【００２５】
上記の融合ピラゾリル化合物は、化合物それ自体に加えて、場合によっては、当該化合物の塩および当該化合物のプロドラッグをも含む。例えば、かような塩は、融合ピラゾリル化合物上の負に荷電した置換基（例えば、カルボキシレート）とカチオンとの間で形成されうる。適当なカチオンとしては、以下に制限されないが、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、およびテトラメチルアンモニウムイオンのようなアンモニウムカチオンが挙げられる。同様に、正に荷電した置換基（例えば、アンモニウム）は、負に荷電した対イオンと塩を形成しうる。適当な対イオンとしては、以下に制限されないが、クロライド、ブロマイド、イオダイド、サルフェート、ニトレート、ホスフェート、またはアセテートが挙げられる。プロドラッグは、患者に投与されて上記の融合ピラゾリル化合物を提供しうる、エステルおよび他の製薬上許容されうる誘導体を含む（Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ，  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ８ｔｈ  ｅｄ．，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．  １９９２，  “Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ”を参照）。
【００２６】
本発明の他の特徴、目的、および利点は、詳細な説明および図面から、並びに特許請求の範囲から明らかであろう。
【００２７】
詳細な説明
上記「要約」の欄に記載の融合ピラゾリル化合物はいずれも、本技術分野の当業者に周知の手法により調製されうる（例えば、米国特許第５，５７４，１６８号および米国特許第６，１６２，８１９号を参照）。これらには、以下の合成経路が含まれる。
【００２８】
まず、アリールカルボニルクロライドを他のアリール化合物とカップリングすることによって、アリールアリールケトンを調製する。この際、アリール化合物は、必要であれば、１置換または複数置換されたものであってもよい。次に、このケトンを、アリールアルキルヒドラジン（またはアルキルヒドラジン、ヒドラジン）と反応させて、３個（または２個）のアリール基を含むヒドラゾンを形成する。この際、アリールアルキルヒドラジン中のアリール基は、必要であれば、１置換または複数置換されたものであってもよい。ヒドラゾン基をアルキレンリンカーを介して融合ピラゾリルコアに変換し、他のアリール基をピラゾリルコアの４−Ｃおよび５−Ｃで融合し、さらに第三のアリール基をピラゾリルコアの３−Ｃに直接連結する。いずれかのアリール基の置換基を修飾することによって、融合ピラゾリル化合物の誘導体を得てもよい。
【００２９】
上記合成経路で使用される化学物質としては、例えば、溶剤、試薬、触媒、並びに保護基および脱保護基試薬があるが、これらは公知の物質が使用でき、特に制限されない。上記方法は、本明細書に記載される段階の前または後に、融合ピラゾリル化合物の合成を最終的に行なうために適当な保護基を付加あるいは除去する段階をさらに有してもよい。加えて、様々な合成段階を、所望の化合物を得るために、別の配列または順序で行なってもよい。適当な融合ピラゾリル化合物を合成するのに使用できる合成化学変換および保護基の方法（保護および脱保護）は、本技術分野において周知であり、例えば、Ｒ．  Ｌａｒｏｃｋ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  （１９８９）；  Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ３ｒｄ．  Ｅｄ．，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９９）；  Ｌ．  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．  Ｆｉｅｓｅｒ，  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９４）；  ａｎｄ  Ｌ．  Ｐａｑｕｅｔｔｅ，  ｅｄ．，  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９５）、並びにこれらの続きの版に記載のものがある。
【００３０】
このようにして合成された融合ピラゾリル化合物は、さらに精製されてもよく、この際使用できる精製方法は、特に制限されず、公知の精製方法が使用できるが、例えば、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、および再結晶化などが挙げられる。
【００３１】
本発明は、抗炎症性サイトカインに比べて炎症性サイトカインを優先的に阻害する組成物／方法に特徴を有する。本方法は、１以上の上記の融合ピラゾリル化合物の有効量および製薬上許容されうる担体を、投与を必要とする患者に投与することを含む。本明細書中で用いられる「抗炎症性サイトカインに比べて炎症性サイトカインの放出を優先的に阻害する」の語は、化合物によって、同一の化合物により抗炎症性サイトカインの放出が阻害される速度の少なくとも３倍の速度で炎症性サイトカインの放出を阻害することを意味する。「有効量」とは、投与を必要とする患者に投与されて患者で上記の阻害効果を発揮するのに必要な融合ピラゾリル化合物の量である。当業者には認識されるように、有効量は、投与経路、賦形剤の使用、および他の薬剤の併用の可能性に応じて変動しうる。
【００３２】
本発明はまた、ＮＦ−κＢの活性を阻害する組成物／方法をも特徴とする。本方法は、１以上の上記の融合ピラゾリル化合物の有効量および製薬上許容されうる担体を、投与を必要とする患者に投与することを含む。
【００３３】
本発明の方法を実施するにあたって、融合ピラゾリル化合物は、経口で、非経口で、吸入スプレーによって、または埋込リザーバーを介して投与されうる。本明細書において、「非経口」は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、腹腔内、関節内、動脈内、滑液包内、胸骨内、鞘内、病巣内および頭蓋内注射／注入または輸注技術によるなどの公知の非経口経路を包含する。
【００３４】
経口投与用の組成物は、経口で許容できる投与形態であればいずれの形態であってもよく、特に制限されないが、例えば、カプセル、錠剤、エマルジョン、水性懸濁液、水性分散液および水溶液などが挙げられる。経口で使用される錠剤の場合、一般的に使用される担体は、特に制限されず、公知の担体が使用できるが、ラクトースおよびトウモロコシデンプンなどがある。また、ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤もまた、一般的に添加される。カプセル形態での経口投与では、希釈剤が使用できるが、この際使用できる希釈剤としては、特に制限されず、公知の希釈剤が使用できるが、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥トウモロコシデンプンなどがある。水性懸濁液またはエマルジョンを経口で投与する場合には、活性成分を、乳化剤または懸濁化剤と混合した油相中に懸濁あるいは溶解する。必要であれば、甘味剤、着香剤、または着色剤などの公知の添加剤を添加してもよい。
【００３５】
滅菌注射用組成物（例えば、水性または油性の懸濁液）を、適当な分散剤または湿潤化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０など）および懸濁化剤を用いて、本技術分野において周知の技術に従って、配合してもよい。滅菌注射用製剤はまた、無毒な、非経口投与可能な希釈剤または溶剤中の滅菌注射用溶液または懸濁液であってもよく、このような例としては、例えば、１，３−ブタンジオールの溶液がある。用いられうる許容されうるベヒクルおよび溶剤としては、特に制限されず、公知のものが使用できるが、マンニトール、水、リンガー液および等張食塩液などがある。さらに、滅菌された不揮発性油を、溶剤または懸濁媒体として公知と同様にして使用してもよく、このような不揮発性油としては、特に制限されず、公知のものが使用できるが、例えば、合成モノ−またはジ−グリセリドなどがある。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体等の脂肪酸を、注射剤の調製に使用してもよく、また、オリーブ油またはヒマシ油等の、製薬上許容されうる天然の油、特にポリオキシエチレン化されたものを使用してもよい。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖のアルコール希釈剤若しくは分散剤、またはカルボキシメチルセルロースもしくは同様の分散剤を含んでもよい。
【００３６】
吸入用組成物は、製薬分野において周知の技術に従って調製でき、ベンジルアルコールまたは他の適当な保存剤、バイオアベイラビリティーを向上するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または当該分野において周知の他の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水の溶液として調製されてもよい。
【００３７】
薬剤組成物における担体は、配合物の活性成分と適合でき（および好ましくは、安定化でき）、かつ処置される患者に有害ではないという点で「許容されうる」ものでなければならない。例えば、シクロデキストリン（これは、融合ピラゾリル化合物と特定の、より可溶性のある複合体を形成する）等の、可溶化剤、または１以上の可溶化剤を、融合ピラゾリル化合物のデリバリー用の賦形剤として使用してもよい。他の担体の例としては、特に制限されず、公知の担体が使用できるが、例えば、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウム、およびＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  ＃  １０などが挙げられる。
【００３８】
ヒト末梢血の単核白血球において、融合ピラゾリル化合物が抗炎症性サイトカインに比べて炎症性サイトカインを優先的に阻害し、ＮＦ−κＢの活性を阻害する有効性を予め評価するために、適当なインビトロアッセイが用いられうる。本技術分野において周知の以下の手法に従って、インビボスクリーニングもまた、行われうる。例えば、融合ピラゾリル化合物を動物モデル（例えば、マウス）に投与し、血液を回収して種々のサイトカインのレベルを評価する。その結果に基づき、適切な投与量範囲および投与経路が決定されうる。
【００３９】
さらに労力を払うことなく、上記説明により本発明を適切に実施できるものと考えられる。したがって、下記特定の実施態様は、単に詳細に説明するものであり、他の開示部分を制限するものではないと解される。特許を含め、本明細書で列挙される、すべての文献や公報は、参考のために完全に本明細書中に引用される。
【実施例】
【００４０】
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。
【００４１】
実施例１：３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−１−ベンジル−インダゾール（化合物１）の合成
（ａ）５−メトキシカルボニル−２−フリルフェニルケトンの合成
無水塩化第二鉄（０．４２ｇ、２．６ミリモル）および塩化ベンゾイル（２９．６ｇ、０．２１モル）を、ＣＣｌ４（４０ｍＬ）に溶かし、これにメチル−２−フロエート(methyl-2-furoate)（２５．２ｇ、０．２０ミリモル）を１０分かけて滴下した。次に、この反応混合物を還流しながら３６時間加熱し、冷却した後、水（１２０ｍＬ）を加えた。この混合物を１時間攪拌した後、２層に分かれるまで放置した。水層および沈殿物をクロロホルムで抽出した。クロロホルム抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、濾過した。濾液を溶剤を減圧下で除去した；残渣をイソプロパノールで再結晶化することによって、２８．４ｇの５−メトキシカルボニル−２−フリルフェニルケトンを６５．０％の収率で得た。
【００４２】
融点：７０〜７３℃
【００４３】
【化４】
2005263802.tif 000005
【００４４】
（ｂ）１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）インダゾールの合成
５−メトキシカルボニル−２−フリルフェニルケトン（５．５ｇ、０．０２４モル）を、メタノール（６０ｍＬ）に溶かして、これにベンジルヒドラジン（９ｇ、０．０７モル）および酢酸（０．５ｍＬ）を加えた後、反応が完了するまで還流しながら加熱した。冷却した後、溶剤を蒸発させた。得られた残渣をクロロホルムで抽出し、希ＨＣｌ溶液、さらに水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、濾過した。濾液を溶剤を除去することによって、５−メトキシカルボニルフリルフェニルケトンベンジルヒドラゾンを得た。
【００４５】
このようにして得られたヒドラゾンのジクロロメタン（１００ｍＬ）における溶液を、ジクロロメタン（４００ｍＬ）におけるＰｂ（ＯＡｃ）４（２８．２ｇ、０．０６モル）の溶液に滴下した。添加後、混合物を３０±２℃で３０分間反応させ、ＢＦ３／Ｅｔ２Ｏ（４７％のＢＦ３を含む、１２２ｍＬ）を添加した。この混合物を３０分間還流しながら加熱した後、氷水（１０００ｍＬ）に注いで、反応を終了させた。有機層を分離して、水および１０％炭酸ナトリウム溶液で順次洗浄した後、水で洗浄することによって中和した。これを無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空中で濃縮することによって、油状の未精製産物を得た。次に、エタノールをこの未精製産物に添加して、混合物を一晩凍結によって沈殿させた。この固体沈殿物を集めて、エタノールで再結晶化することによって、３．７ｇの１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）インダゾールを４７．０％の流失で得た。
【００４６】
融点：１１７〜１１８℃
【００４７】
【化５】
2005263802.tif 000006
【００４８】
（ｃ）１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−インダゾールの合成
まず、無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中で水素化硼素ナトリウム（６０ｍｇ、１．６ミリモル）と一緒に無水塩化カルシウム（８８．８ｍｇ、０．８ミリモル）を４時間攪拌することによって、水素化硼素カルシウムを調製した。次に、８８．０ｍｇの１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）インダゾール（０．２７ミリモル）を含むＴＨＦ溶液  ３０ｍＬを、３０±２℃で上記水素化硼素カルシウム溶液に滴下した。この混合物を還流しながら６時間加熱し、冷却し、クラッシュアイス中で急冷却して、減圧下において、ＴＨＦを除去し、さらに濾過することによって固体産物を得た。この固体をジクロロメタンで抽出した。抽出物を５０ｍＬにまで濃縮して、固体を石油エーテルを添加した後沈殿させた。この沈殿物を集めて、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル−ベンゼン）で精製することによって、７０．０ｍｇの１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−インダゾールを８７％の収率で得た。
【００４９】
融点：１０８〜１０９℃
【００５０】
【化６】
2005263802.tif 000007
【００５１】
実施例２：１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）−６−フルオロインダゾール（化合物２）の合成
４’−フルオロフェニル５−メトキシカルボニル−２−フリルケトン（５．９６ｇ、２４ミリモル）を実施例１（ａ）と同様にして調製し、さらにこれを出発材料として使用して、実施例１（ｂ）に記載の方法と同様に従って処理して、４．１ｇの１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）−６−フルオロインダゾールを４８．８％の収率で得た。
【００５２】
融点：１０８〜１０９℃
【００５３】
【化７】
2005263802.tif 000008
【００５４】
実施例３：１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−６−フルオロインダゾール（化合物３）の合成
１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）−６−フルオロインダゾール（９３ｍｇ、０．２７ミリモル）を出発材料として使用して、実施例１（ｃ）に記載の方法と同様の方法に従って処理して、７５．０ｍｇの１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−６−フルオロインダゾールを８８．０％の収率で得た。
【００５５】
融点：１１０〜１１２℃
【００５６】
【化８】
2005263802.tif 000009
【００５７】
実施例４：１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−６−メチルインダゾール（化合物４）の合成
１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）−６−メチルインダゾール（９２ｍｇ、０．２７ミリモル）を出発材料として使用して、実施例１（ｃ）に記載の方法と同様の方法に従って処理して、７４．０ｍｇの１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−６−メチルインダゾールを８８％の収率で得た。
【００５８】
融点：１１２〜１１４℃
【００５９】
【化９】
2005263802.tif 000010
【００６０】
実施例５：１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）チエノ［３，２−ｃ］ピラゾール（化合物５）の合成
（ａ）５−メトキシカルボニルクロライド−２−フリル２’−チエニルケトンの合成
２−チオフェンカルボニルクロライド（３０．５ｇ、０．２１モル）、メチル２−フロエート（２４ｇ、０．１９モル）、および無水塩化第二鉄（０．４２ｇ、２．６ミリモル）を、実施例１に記載の方法と同様にして反応させることによって、２８．７ｇの５−メトキシカルボニルクロライド−２−フリル２’−チエニルケトンを６３．８％の収率で得た。
【００６１】
融点：１０３〜１０６℃
【００６２】
【化１０】
2005263802.tif 000011
【００６３】
（ｂ）１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）チエノ［３，２−ｃ］ピラゾールの合成
５−メトキシカルボニルクロライド−２−フリル２’−チエニルケトンの（５．７ｇ、０．０２４モル）を出発材料として用いて、実施例１に記載の方法と同様の方法に従って処理することによって、１．２ｇの１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）チエノ［３，２−ｃ］ピラゾールを１４．８％の収率で得た。
【００６４】
融点：１４２〜１４３℃
【００６５】
【化１１】
2005263802.tif 000012
【００６６】
（ｃ）表題の化合物の合成
１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）チエノ［３，２−ｃ］ピラゾール（９０ｍｇ、０．２７モル）を、実施例１に記載の方法に従って処理することによって、６３．４ｍｇの１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）−６−メチルインダゾールを６９．３％の収率で得た。
【００６７】
融点：１０３〜１０４℃
【００６８】
【化１２】
2005263802.tif 000013
【００６９】
実施例６：生物学的アッセイ
in vitroアッセイ
約４５０ｍＬの血液を、健常なヒトボランティアから得て、これをＲＰＭＩ  １６４０培地で希釈した。Ｆｉｃｏｌｌのグラジエント（ＭＳＬ；Eurobio, les Ulis, France）を用いて、ヒト末梢血単核白血球（ＰＢＭＣ）を単離した。血液、ＲＰＭＩ  １６４０培地およびＭＳＬの溶液比は、２：４：１であった。ＰＢＭＣを、上記で希釈した血液を１５℃で２０分間５００×ｇで遠心することによって得、これをＲＰＭＩ  １６４０培地で１回洗った。この細胞ペレットを、５％熱不活化正常ヒト血清（健常なヒトボランティアから得た血清プール）および抗生物質（ペニシリン  １００ＵＩ／ｍｌおよびストレプトマイシン  １００μｇ／ｍｌ）を添加したＲＰＭＩ  １６４０培地に、最終濃度が６×１０６細胞／ｍｌになるように再懸濁した。この細胞懸濁液の５００μｌのアリコートを、２４ウェルプレートの各ウェルに分注して、湿潤化環境中で５％ＣＯ２−９５％空気のインキュベーター中で３７℃でインキュベートした。各ウェルに、スムース大腸菌  ０１１１：Ｂ４(smooth E. coli 0111:B4)由来のリポ多糖（ＬＰＳ、２５μｇ／ｍｌ）単独、あるいはＬＰＳおよび化合物１（１０μＭ）を一緒に添加した。２４時間後、上清を集めて、１５℃で１０分間、４００×ｇで遠心した後、−２０℃で貯蔵した。Ｒ＆Ｄシステムズ(R & D Systems)(Abingdon, UK)製の市販のキットを用いて、サイトカインをアッセイした。製造社の指示に従って、内部標準物質を用いて、サイトカイン濃度を測定した。
【００７０】
化合物１は、ＴＮＦ−α並びにインターロイキン１βおよび８の放出を８０％超阻害し、インターロイキン−２およびインターロイキン−γの放出を３０％超阻害した。これに対して、化合物１は、抗炎症性サイトカイン（インターロイキン−４および１０）の放出は１０％未満した阻害しなかった。これらの結果から、化合物１は、抗炎症性サイトカイン放出よりも炎症性サイトカイン放出をかなりより効果的に阻害することが分かった。
【００７１】
in vivoアッセイ
マウス（２５〜３０ｇ、ＩＣＲストレイン）に、ＬＰＳ（６０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。これらのうち、大部分のマウスには、０．５％カルボキシメチルセルロースにおける化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）を経口で与え、残りのマウス（コントロールマウス）には、ベヒクルを経口で与えた。コントロールマウスは、ＬＰＳを投与してから７２時間以内に死亡した。ＬＰＳを投与してから様々な所定の間隔で、ペントバルビタールを腹腔内投与することによって、これらのマウスを安楽死させた。肺、脾臓および腎臓組織の核抽出物を標準的な方法によって調製した。
【００７２】
Pan et al., J. Biomed. Sci., 2002, 9: 622-630に記載の方法に従って、電気泳動移動度のシフトアッセイによって、ＮＦ−κＢ  ＤＮＡ結合活性を評価した。簡単にいうと、肺組織の核抽出物（２μｇ）を、室温で３０分間、結合緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、４０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ジチオトレイトール、１％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０、１％  デオキシコレート、３μｇ／ｍｌ  ポリデオキシイノシン酸−デオキシシチジル酸(polydeoxyinosinic-deoxycytidylic acid)）中で、κＢ共通配列をコードする３５塩基対の２本鎖の３２Ｐで標識されたプローブ（５’−ＡＧＴ  ＴＧＡ  ＧＧＧ  ＧＡＴ  ＣＣＣ  ＣＣＣ  ＡＧＧ  Ｃ−３’）と一緒にインキュベートした。次に、サンプルを、ネイティブな５％ポリアクリルアミドゲルにチャージして、オートラジオグラフィーによって分析した。競合アッセイでは、２０倍モル超の標識されていない共通オリゴヌクレオチドを、標識ｓあれたプローブを添加する３０分前に添加した。ＮＦ−κＢタンパク質の成分を、ｐ６５抗体に対する抗体を用いたスーパーシフトアッセイ(supershift assay)によって同定した。
【００７３】
また、製造社の指示に従って、ＥＬＩＳＡによるトランス−ＡＭ  ＮＦ−κＢ  ｐ６５転写因子アッセイキット(Active Motif Europe, Rixensart, Belgium)を用いて、ＮＦ−κＢ  ＤＮＡ結合活性を評価した。肺、脾臓または腎臓組織の組織抽出物（５μｇ）を、ＮＦ−κＢ共通部位を含むオリゴヌクレオチドで被覆した９６ウェルプレートに添加した。このＤＮＡへのＮＦ−κＢの結合を、活性化ＮＦ−κＢを特異的に認識する抗ｐ６５抗体によって視覚化した。キットと一緒に提供されるＮＦ−κＢ  野生型および変異型の共通オリゴヌクレオチドを用いた競合実験によって、ＮＦ−κＢ活性化の特異性を測定した。
【００７４】
結果から、ＮＦ−κＢ／ＤＮＡ複合体のレベルは、ＬＰＳを投与した後は有意に上昇し、６時間たつと減少し始めるが、化合物１で処置すると、ＬＰＳによって誘導されるＮＦ−κＢ／ＤＮＡ複合体のレベルの上昇が阻害されることが示された。
【００７５】
他の実施態様
本明細書に記載されるすべての態様はいずれの組み合わせで使用されてもよい。本明細書に記載される各態様は、同じ、等価のあるいは類似の目的を達成する別の態様で置換されてもよい。ゆえに、特記しない限り、本明細書に記載される各態様は一連の等価のあるいは類似の態様の一例である。
【００７６】
上記から、当業者は、本発明の必須の特徴を容易に確認でき、本発明の精神および範囲を逸脱せずに、本発明の様々な変更および修飾を様々な用途や条件に適用できる。例えば、融合ピラゾリル化合物に構造が類似した化合物を本発明を実施するにあたって使用できる。ゆえに、他の実施態様もまた本特許請求の範囲に包含される。
【配列表】
2005263802000001.app