(57)【要約】  【課題】  優れた抗腫瘍活性を有し、かつ安全性が高く副作用の少ない脂肪酸またはその誘導体を有効成分として含有する抗腫瘍剤及び抗腫瘍用飲食品及び飼料を提供する。  【解決手段】  9トランス, 11トランス-共役リノール酸を有効成分とする抗腫瘍剤及び抗腫瘍用飲食品及び飼料。9トランス, 11トランス-共役リノール酸は、例えば脂肪酸、または該脂肪酸のエステル、金属塩、その他の薬理学上許容される形態物またはこれらの混合物の形態である。上記の9トランス,11トランス-共役リノール酸を含有して成る、抗腫瘍作用を有する抗腫瘍剤及び抗腫瘍用飲食品及び飼料を提供する。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
9トランス,11トランス-共役リノール酸を有効成分とする抗腫瘍剤。
【請求項２】
9トランス,11トランス-共役リノール酸が、脂肪酸、脂肪酸エステルもしくは金属塩、またはその他の薬理学上許容される形態物のいずれかである、請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
9トランス,11トランス-共役リノール酸を配合した抗腫瘍用飲食品及び飼料。
【請求項４】
9トランス,11トランス-共役リノール酸が、脂肪酸、脂肪酸エステルもしくは金属塩、またはその他の薬理学上許容される形態物のいずれかである、請求項３に記載の抗腫瘍用飲食品及び飼料。
【請求項５】
9トランス,11トランス-共役リノール酸を通常の食品よりも高濃度で含有する油脂製品の形態である、請求項３〜４のいずれかに記載の抗腫瘍用飲食品及び飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、9トランス,11トランス-共役リノール酸を有効成分とする抗腫瘍剤に関する。また、9トランス,11トランス-共役リノール酸を有効成分として配合した抗腫瘍用飲食品及び飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
厚生労働省の「人口動態統計」における日本人の主要死因別年齢調整死亡率において、昭和５６年から現在に至るまで悪性新生物（癌）が第一位となっており、癌による死亡率は近年まで低下傾向を示さず、横ばいか、微増を示している。このため、癌の治療及び症状の軽減に適した治療方法を開発するために多くの研究が行われているが、化学治療の分野においては、抗生物質、代謝拮抗物質、アルキル化剤、ホルモン剤などが癌細胞に有効な抗腫瘍剤として見いだされているものの、これらの抗腫瘍剤は、癌細胞を攻撃するだけでなく、正常細胞にも作用することから、嘔吐、悪心、食欲不振、脱毛などの副作用を引き起こす問題が発生しており、これらの副作用が少ない新規な治療薬の開発が望まれている。
【０００３】
最近、合成の共役リノール酸が乳癌抑制作用を有する旨の報告がなされている（例えば、非特許文献1参照）。更に、共役リノール酸の異性体である、9シス,11トランス-共役リノール酸、および10トランス,12シス-共役リノール酸がいずれも同等の発ガン抑制効果を有する旨の報告（例えば、非特許文献2参照）や、10トランス,12シス-共役リノール酸が高い抗腫瘍活性を示すという報告（例えば、特許文献1参照）がなされている。一方、天然物中の共役リノール酸にはマイナーな9トランス, 11トランス-共役リノール酸が含まれるが、この9トランス, 11トランス-共役リノール酸の抗腫瘍効果に関しては全く知られていなかった。
【特許文献１】特開2003-171272号公報
【非特許文献１】Cancer Research, 51, 6118-6124, 1991
【非特許文献２】Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 223, 8-13, 2000
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、優れた抗腫瘍活性を有し、かつ安全性が高く副作用の少ない抗腫瘍剤、及び抗腫瘍用飲食品及び飼料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者等は抗腫瘍活性物質について鋭意研究を重ねた結果、共役リノール酸の異性体の中で優れた抗腫瘍活性を有するのは、既に高い抗腫瘍活性を示すと報告されている9シス, 11トランス-共役リノール酸や10トランス, 12シス-共役リノール酸ではなく、9トランス, 11トランス-共役リノール酸に高い抗腫瘍作用があることを見出し、この知見を基に本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、9トランス, 11トランス-共役リノール酸を有効成分とする抗腫瘍剤、さらに具体的には9トランス, 11トランス-共役リノール酸の脂肪酸、あるいは脂肪酸エステルもしくは金属塩、またはその他の薬理学上許容される形態物を有効成分とする抗腫瘍剤に関するものである。また、本発明は、9トランス, 11トランス-共役リノール酸を配合した抗腫瘍用飲食品及び飼料に関するものである。
【発明の効果】
【０００６】
従来、共役リノール酸の２種の異性体である9シス,11トランス-共役リノール酸及び10トランス, 12シス-共役リノール酸が生物活性を有すると報告されていたが、9トランス, 11トランス-共役リノール酸の方がこれらの異性体より顕著に高い抗腫瘍効果を示すことは想到し得なかったことである。本発明によれば、優れた抗腫瘍活性を有し、かつ安全性が高く副作用の少ない、種々のタイプの癌（由来する組織などが異なる）の治療に有効な抗腫瘍剤を提供することができる。また、9トランス, 11トランス-共役リノール酸を配合した抗腫瘍用飲食品及び飼料を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明においては、共役リノール酸の異性体の中で9トランス, 11トランス-共役リノール酸を有効成分とする抗腫瘍剤及び抗腫瘍用飲食品及び飼料である。9トランス, 11トランス-共役リノール酸は、食用油脂などのリノール酸あるいはリノール酸含有材料を原料とし、当分野では公知の方法を用いて目的の異性体を選択的に得るか、あるいは遊離の形態として高純度品が市販されているのでそれを使用することもできる。
【０００８】
9トランス, 11トランス-共役リノール酸の形態としては、脂肪酸のままでもよく、また脂肪酸エステルもしくは金属塩の形態であってもよい。エステルとしては、9トランス, 11トランス-共役リノール酸の脂肪酸と、炭素数1〜38、好ましくは1〜10のアルコール（例えば脂肪族アルコール、高級アルコールなど）、エチレングリコール、プロピレングリコールおよびグリセリンからなる群から選ばれた1種または2種以上のアルコール類、ポリグリセリン、ステロール類（β−シトステロールなど）、糖類（単糖、二糖、オリゴ糖、多糖など）、アスコルビン酸等とのエステルなどが挙げられる。また、金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩およびマグネシウム塩などからなる群から選ばれた1種又は2種以上の金属塩などが挙げられる。さらに、本発明に使用される9トランス, 11トランス-共役リノール酸は、上記のエステルもしくは金属塩の形態の他に、アミドやリン脂質など薬理学上許容される他の任意の形態物であってもよい。
本発明の抗腫瘍剤の有効成分の具体的態様の一例として、乳製品由来の油脂などの9トランス, 11トランス-共役リノール酸含有油脂をカラムクロマトグラフィーを用いることにより、9トランス, 11トランス-共役リノール酸高含有油脂を分離分取して得ることができる。もちろん、リノール酸含有油脂をアルカリ共役化反応によって、9トランス, 11トランス-共役リノール酸含有油脂を得てもよい。
【０００９】
本発明による抗腫瘍剤、抗腫瘍用飲食品及び飼料は、9トランス, 11トランス-共役リノール酸を含有してなるものであり、脂肪酸やグリセリドからなる油脂製品の形態が好ましい。脂肪酸の形態としては、上記のようにして得られた9トランス, 11トランス-共役リノール酸含有脂肪酸を使用することができ、グリセリドの形態としては上記のようにして得られた脂肪酸とグリセリンを通常の方法によりリパーゼを用いてエステル化したものを用いることができる。また本発明においては、9トランス, 11トランス-共役リノール酸が他の種々のエステル、金属塩、その他の薬理学上許容される形態物またはこれらの混合物の形態であってもよいことは前記した通りである。
【００１０】
本発明の抗腫瘍剤を医薬品として用いる場合、その形態は特に制限されるものではなく、投与方法や適用される腫瘍の種類、形状および存在部位などの条件に応じて、注射液、座薬、軟膏、錠剤、カプセル、散剤、顆粒剤、ドリンク剤などの種々の形態を適宜選択することができる。従って、上記したような本発明の抗腫瘍剤をそのまま医薬として用いることができるほか、必要に応じて担体、希釈剤もしくは賦形剤など通常の種々の添加物（例えば糖類、デンプン類、アルコール類、アラビアゴムなど）と組合せることができる。
【００１１】
本発明による抗腫瘍剤の摂取もしくは投与量は、治療上有効量であり、腫瘍の種類などにより一概に言えないが、体重60Kgの成人の場合、1日当たり上記9トランス, 11トランス-共役リノール酸の量として通常10〜5000mg、好ましくは20〜3000mgである。また本発明の抗腫瘍剤は公知の抗腫瘍剤あるいは他の治療剤と併用することもできる。
【００１２】
本発明の9トランス, 11トランス-共役リノール酸を飲食品に配合して抗腫瘍用飲食品とするには、例えば、食用油、マーガリン、バターその他の油脂に、9トランス, 11トランス-共役リノール酸を直接配合してもよく、また、9トランス, 11トランス-共役リノール酸を水と混合して乳化物を調製し、これをソース、ドレッシング、チーズフード、菓子、パン、麺類、飲料、スナック食品等の飲食品に配合してもよい。さらに、9トランス, 11トランス-共役リノール酸をゼラチン等を用いてカプセル化し、このカプセルをサプリメント食品として用いたり、飲料、菓子、ガム、キャンディー等に配合してもよい。このように、本発明による抗腫瘍剤、抗腫瘍用飲食品あるいは飼料（ペットフードを含む）は、上記に例示したような9トランス,11トランス-共役リノール酸含有油脂製品の形態で用いることができるほか、食用油脂組成物（植物性油脂、動物性油脂、加工油脂など）、食用乳化油脂組成物（マーガリン、マヨネーズなど）、ベーカリー製品（パン、ケーキ類）、調理食品（惣菜など）、飲料（ジュース、ソフトドリンク類）などの飲食品や飼料（サイレージ、ペットフードなど）に混合して用いてもよい。
【００１３】
本発明において、一般食品中に配合する場合は、配合量は飲食品中の油脂含量によって多少変動するが、食品中、9トランス, 11トランス-共役リノール酸の量として通常１〜５重量％程度である。1重量％に満たないと効果が弱く、5重量％を超えると常温乃至冷蔵庫中で脂質成分の酸化が起きることがある。
なお、本明細書において、％表示は特に断りのない限り重量％基準である。
【００１４】
以下の試験例、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこの試験例、実施例によって限定されるものではない。
【試験例１】
【００１５】
9トランス, 11トランス-共役リノール酸を用いてガン細胞の増殖抑制試験を行った。9トランス, 11トランス-共役リノール酸と比較するために、比較例として多くの論文で増殖抑制効果が報告されている9シス, 11トランス-共役リノール酸、9シス, 11シス-共役リノール酸、10トランス,12シス-共役リノール酸の3種の共役リノール酸異性体を用いた。MEM培地で24時間培養したヒト結腸癌Caco-2細胞に、9トランス, 11トランス-共役リノール酸、9シス, 11トランス-共役リノール酸、9シス, 11シス-共役リノール酸、10トランス,12シス-共役リノール酸をそれぞれ200μM添加し、添加後24時間、48時間、及び72時間培養し、ヒト結腸癌Caco-2細胞の生残率を測定した。
【００１６】
結果を図１に示す。試験の結果、何れの共役リノール酸（CLA）異性体も経時的に生残率の低下を引き起こしたが、中でも、9トランス, 11トランス-共役リノール酸を添加した培地は添加後24時間培養で、生残率が早くも30％強となり、添加後78時間培養では生残率が0％近くになり、顕著な増殖抑制効果を示している。比較した他の共役リノール酸異性体も経時的に生残率の低下を引き起こしてはいるものの、添加後24時間培養での生残率はいずれも60〜80％であり、添加後78時間培養での生残率は15〜55％にとどまっている。多くの論文で顕著な増殖抑制効果が報告されている9シス, 11トランス-共役リノール酸、9シス, 11シス-共役リノール酸、10トランス,12シス-共役リノール酸よりも、本発明で用いる9トランス, 11トランス-共役リノール酸の方が顕著な増殖抑制効果を持つことが明らかとなった。
【試験例２】
【００１７】
9トランス, 11トランス-共役リノール酸の増殖抑制効果を調べるために、その濃度依存性について調べた。試験例１と同様にMEM培地で24時間培養したヒト結腸癌Caco-2細胞を用い、9トランス, 11トランス-共役リノール酸をそれぞれ50μM、100μM、及び200μM添加し、増殖抑制試験を行った。添加後、24時間、48時間、及び72時間培養し、ヒト結腸癌Caco-2細胞の生残率を測定した。比較例として、多くの論文で顕著な増殖抑制効果が報告されている9シス, 11トランス-共役リノール酸を200μM添加したものと、共役リノール酸からの変換が予想されているフラニル環をもつ9, 12-epoxy-9, 11octadecanoic acidについても細胞生残率へ与える影響を調べた。
【００１８】
結果を図２に示す。試験の結果、9トランス, 11トランス-共役リノール酸のいずれについても、50μM〜200μMまで濃度依存的な効果が示された。一方、共役リノール酸からの変換が予想されている9, 12-epoxy-9, 11octadecanoic acidの効果は比較例として用いた9シス, 11トランス-共役リノール酸と同程度であり、本発明で用いる9トランス, 11トランス-共役リノール酸の効果には及ばなかった。
【００１９】
また、9シス, 11トランス-共役リノール酸よりもカルボキシル基側に炭素鎖長が２つ長い11シス,13トランス-eicosadienoic acidが細胞生残率へ与える影響についても調べたが、その効果は9シス, 11トランス-共役リノール酸と同程度であり、9トランス, 11トランス-共役リノール酸の効果には及ばなかった。したがって、Caco-2細胞生残率への影響は、共役脂肪酸の二重結合構造によって大きく異なり、特にトランス, トランス構造を持つ9トランス, 11トランス -共役リノール酸が効果的であることが明らかとなった。
【試験例３】
【００２０】
9トランス, 11トランス -共役リノール酸と9シス, 11トランス-共役リノール酸のアポトーシス誘導能を比較する試験を行った。試験例１と同様にMEM培地で24時間培養したヒト結腸癌Caco-2細胞の断片化DNAに、9トランス, 11トランス-共役リノール酸をそれぞれ50μM、100μM、200μM添加し、添加後、12時間、24時間、及び48時間後の断片化DNA量を測定した。ヒト結腸癌Caco-2細胞の断片化DNA量は、抗DNA抗体及び抗ヒストン抗体を用いた細胞死検出ELISAキット（ロシュ・ダイアグノスティック株式会社製）により測定した。比較例として、多くの論文で顕著な増殖抑制効果が報告されている9シス, 11トランス-共役リノール酸を100μM、及び200μM添加したものと、コントロールとしてCaco-2細胞の断片化DNAに共役リノール酸を添加しないものを用い、9トランス, 11トランス-共役リノール酸と同様に測定した。
【００２１】
結果を図３に示す。試験の結果、9トランス, 11トランス-共役リノール酸は、濃度依存的、経時的にDNA断片化を引き起こした。また、この効果は9シス, 11トランス-共役リノール酸よりもかなり顕著であった。従って、9シス, 11トランス-共役リノール酸よりも9トランス, 11トランス-共役リノール酸の方が顕著なアポトーシス誘導能を有することが明らかとなった。
【００２２】
以上の試験結果から明らかなように、9トランス, 11トランス -共役リノール酸
を添加した培地は添加後24時間培養で、ヒト結腸癌Caco-2細胞の生残率が早くも30％強となり、添加後78時間培養では生残率が0％近くになり、顕著な増殖抑制効果を示している。経時的な増殖抑制効果に加えて、濃度依存的な増殖抑制効果も確認することができた。さらに、ヒト結腸癌Caco-2細胞の断片化DNAに添加し経時的に断片化DNA量を測定した試験も、濃度依存的、経時的にDNA断片化を引き起こす結果となった。しかも、特筆すべきことに、多くの論文で顕著な増殖抑制効果が報告されている9シス, 11トランス-共役リノール酸、9シス, 11シス-共役リノール酸、10トランス,12シス-共役リノール酸よりも、本試験で用いた9トランス, 11トランス-共役リノール酸の方が、格別に顕著なCaco-2細胞の増殖抑制効果を持つことが明らかとなった。
【実施例１】
【００２３】
9トランス, 11トランス-共役リノール酸を用いて、表１に示す配合に従い、抗腫瘍剤を調製した。調製は、精製大豆油と9トランス, 11トランス-共役リノール酸以外の全原材料を、水に溶解後、攪拌羽根を用いて混合した。精製大豆油と9トランス, 11トランス-共役リノール酸を添加し、混合溶液を80℃まで加温した。その後、ホモミキサーを用いて、5000回転／分で10分間攪拌処理を行なった。次に150kg/cm２  にて均質化処理を行ない濃縮した後、噴霧乾燥して本発明の粉末状抗腫瘍剤を調製した。
【００２４】
【表１】
2005247754.tif 000002
【実施例２】
【００２５】
9トランス, 11トランス-共役リノール酸を用いて、表２に示す配合に従い、油脂含有食品を調製した。調製は、バターオイルと9トランス, 11トランス-共役リノール酸以外の全原材料を水に溶解し、攪拌羽根を用いて混合した。バターオイルと9トランス, 11トランス-共役リノール酸を添加し、混合溶液を80℃まで加温した。その後、ホモミキサーを用いて、5000回転／分で10分間攪拌処理を行なった。次いで150kg/cm２  にて均質化処理を行ない本発明の油脂含有食品を調製した。この油脂含有食品は、抗腫瘍用コーヒー用クリームとして用いられる。
【００２６】
【表２】
2005247754.tif 000003
【実施例３】
【００２７】
9トランス, 11トランス-共役リノール酸を用いて、表３に示す配合に従い、油脂含有食品を調製した。調製は、表３に示した配合で原料を混合した後、85℃で乳化して、本発明の抗腫瘍用プロセスチーズを製造した。
【００２８】
【表３】
2005247754.tif 000004
【実施例４】
【００２９】
表４に示した配合で原料を混合して、常法により、抗腫瘍用イヌ飼育用飼料（ドッグフード）を製造した。
【表４】
2005247754.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】４種の異なる共役リノール酸の、ヒト結腸癌Caco-2細胞の生残率に及ぼす影響を示す。
【図２】9トランス, 11トランス -共役リノール酸の、ヒト結腸癌Caco-2細胞の生残率に及ぼす影響の濃度依存性を示す。
【図３】9トランス, 11トランス -共役リノール酸と9シス,11トランス-共役リノール酸の、アポトーシス誘導能に及ぼす影響の濃度依存性を示す。
【符号の説明】
【００３１】
9ｔ11ｔCLA；9トランス, 11トランス-共役リノール酸
9ｃ11ｔCLA；9シス, 11トランス-共役リノール酸
9ｃ11ｃCLA；9シス, 11シス-共役リノール酸
10ｔ12ｃCLA；10トランス,12シス-共役リノール酸
図２のフラニル環は9, 12-epoxy-9,11octadecanoic acidを表す。
図３のコントロールは共役リノール酸無添加のものを表す。
【図１】
2005247754.tif 000006
【図２】
2005247754.tif 000007
【図３】
2005247754.tif 000008