(57)【要約】【課題】  病巣選択的に造影するためのリポソーム含有ヨード造影剤に適したヨード化合物を提供する。【解決手段】  下記の一般式（Ｉ）：【化１】2005247744.tif 000007［式中、Ａｒ1及びＡｒ2はそれぞれ独立に少なくとも１個のヨウ素原子を置換基として有する置換又は無置換のアリール基（好ましくはＡｒ1及びＡｒ2は少なくとも３個のヨウ素原子を置換基として有するフェニル基）を示し；Ｌ1及びＬ2はそれぞれ独立に主鎖が６個以上の炭素原子からなる２価の連結基を示し；Ｌ3は主鎖が２〜４個の炭素原子からなる２価の連結基を示す］で表される化合物又はその塩。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（Ｉ）：
【化１】
2005247744.tif 000006
［式中、Ａｒ1及びＡｒ2はそれぞれ独立に少なくとも１個のヨウ素原子を置換基として有する置換又は無置換のアリール基を示し；Ｌ1及びＬ2はそれぞれ独立に主鎖が６個以上の炭素原子からなる２価の連結基を示し；Ｌ3は主鎖が２〜４個の炭素原子からなる２価の連結基を示す］で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
Ａｒ1及びＡｒ2がそれぞれ独立に少なくとも３個のヨウ素原子を置換基として有するフェニル基である請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
請求項１又は２のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム。
【請求項４】
ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含む請求項３に記載のリポソーム。
【請求項５】
請求項３又は４に記載のリポソームを含むＸ線造影剤。
【請求項６】
血管疾患の造影に用いるための請求項５に記載のＸ線造影剤。
【請求項７】
泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項５に記載のＸ線造影剤。
【請求項８】
マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影のための請求項５に記載のＸ線造影剤。
【請求項９】
マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項５に記載のＸ線造影剤。
【請求項１０】
マクロファージが局在化する疾患部位が腫瘍、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる請求項５に記載のＸ線造影剤。
【請求項１１】
少なくとも１つのヨード原子が放射性同位体である請求項１又は２のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム。
【請求項１２】
請求項１１に記載のリポソームを含むシンチグラフィー造影剤。
【請求項１３】
泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項１４】
マクロファージが局在化している組織又は疾患部位の造影に用いるための請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項１５】
対象とする組織が血管、肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
【請求項１６】
腫瘍、動脈硬化、炎症、及び感染からなる群から選ばれる疾患部位の造影に用いるための請求項１２に記載のシンチグラフィー造影剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２個のヨードアリール基を有するジエステル化合物に関する。この化合物はリポソームの膜構成成分として利用することができ、このリポソームはＸ線造影剤として用いることができる。
【背景技術】
【０００２】
ヨード化合物を用いたＸ線血管造影の分野では、水溶性のヨード造影剤を投与することにより血液の流れを造影し、その流れが滞っている箇所をみつける技術がある。この方法は、ヨード造影剤が血流中にあり、血管内部の血流の変化を検出する方法であるところから、ヨード造影剤が病巣細胞に局在する場合に比べて正常組織との区別がつけにくい。このため、通常この方法では狭窄が５０％以上進んだ病巣しか検出することができず、虚血性疾患の発作が発症する前に病巣を検出することは困難である。
【０００３】
これとは別に、疎水性ヨード造影剤若しくは親水性造影剤を製剤化し、目的とする疾患部位に選択的に集積させる試みが報告されている。例えば、疎水性化合物であるCholesteryl Iopanoateの油滴分散液を注射することにより、該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている（非特許文献１参照）。また 、Cholesteryl IopanoateをアセチルＬＤＬに取り込ませて投与することによって該ヨード化合物が実験動物の動脈硬化部位に集積することが開示されている（非特許文献２参照）。
【０００４】
また、 Cholesteryl Iopanoateの油滴分散液を注射することによる肝臓や脾臓のX線造影の例（非特許文献３参照）や、diatrizoic acid のエステル体をリポソームに封入し、肝臓や脾臓の選択的造影を行う方法（特許文献１参照）、血管プールやリンパ系をイメージ化するための造影剤（特許文献２及び３参照）が開示されている。しかしながら、これらの製剤方法は、血管疾患を選択的に造影する目的のためには、効率及び選択性ともに十分でなく、Ｘ線照射により血管疾患を画像化した例も報告されていない。
【０００５】
一方、２個の３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル基を含むアルキルカルボン酸と飽和／不飽和脂肪酸からなるトリグリセリド化合物を、油滴分散（Lipid Emulsion）やTween20分散物として製剤化し、肝臓やBlood-poolの造影を目的として用いる方法が報告されている（例えば、非特許文献４参照）。また、疎水性、かつ加水分解抵抗性の放射性ヨード造影剤をマイクロエマルジョン製剤化し、又はアセチルＬＤＬに取り込ませて実験動物に投与して、動脈硬化巣部位を放射性造影する例が開示されている（特許文献４参照）。上述のCholesteryl Iopanoateを用いて動脈硬化巣部位をＸ線造影する例も開示されているが（特許文献５参照）、この化合物は生体内で分解されず、生体臓器、特に肝臓に蓄積することが報告されている（非特許文献５参照）。このような化合物の性質は生体内に長期留まることを示しており、例えば、Ｘ線造影剤のような診断への用途を考えた場合には好ましい性質とはいえない。
【０００６】
化合物の観点からは、２個の３−アミノ−２，４，６−トリヨードフェニル基を含むアルキルカルボン酸からなるジアシル−１，３−グリセリド化合物についての記載がある（特許文献６及び非特許文献６参照）。しかし、合成中間体としての使用以外の用途は示されていない。また、２個の２，４，６−トリヨードフェニル基を含むアルキルカルボン酸からなるジアシル−１，３−グリセリド化合物、およびその２位酸化体の記載がある（特許文献７）。
【特許文献１】米国特許第4567034号
【特許文献２】国際公開WO96/28414
【特許文献３】国際公開WO96/00089
【特許文献４】国際公開WO01/93918
【特許文献５】国際公開WO01/82977
【特許文献６】米国特許第4873075号
【特許文献７】国際公開WO03/18530
【非特許文献１】Pharmaceutical Research, 6(12), 1011, 1989
【非特許文献２】Pharmaceutical Research, 16(3), 420, 1999
【非特許文献３】Journal of Pharmaceutical Science, 72(8), 898, 1983
【非特許文献４】Radiology, 216(3), 865,2000
【非特許文献５】Journal of Medicinal Chemistry, 25, 1500, 1982
【非特許文献６】Journal of Medicinal Chemistry, 29, 2457, 1986
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、病巣選択的に造影するためのリポソーム含有ヨード造影剤に適したヨード化合物を提供することである。本発明者等は上記の課題を解決すべく研究を行った結果、２個のヨードアリール基を有するエステル化合物がＸ線造影剤としてのリポソームの構成成分として優れた性質を有しており、この化合物を含むリポソームを用いてＸ線造影することにより血管疾患の病巣を選択的に造影できることを見出した。また、この化合物は造影後に肝臓で代謝され、体内に蓄積しない性質を有すると同時に、その用途上好ましくない神経毒性も発現しない安全性の高い化合物であることを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成された。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）：
【化１】
2005247744.tif 000002
（式中、Ａｒ1及びＡｒ2はそれぞれ独立に少なくとも１個のヨウ素原子を置換基として有する置換又は無置換のアリール基を示し；Ｌ1及びＬ2はそれぞれ独立に主鎖が６個以上の炭素原子からなる２価の連結基を示し；Ｌ3は主鎖が２〜４個の炭素原子からなる２価の連結基を示す）で表される化合物又はその塩を提供するものである。この発明のさらに好ましい態様としては、Ａｒ1及びＡｒ2がそれぞれ独立に少なくとも３個のヨウ素原子を置換基として有するアリール基である一般式（Ｉ）に記載の化合物又はその塩；並びにＡｒ1及びＡｒ2がそれぞれ独立に少なくとも３個のヨウ素原子を置換基として有するフェニル基である一般式（Ｉ）に記載の化合物又はその塩が提供される。
【０００９】
別の観点からは、本発明により、上記の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソームが提供され、その好ましい態様によれば、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンを膜構成成分として含む上記リポソームが提供される。
また、本発明により、上記のリポソームを含むＸ線造影剤が提供される。この発明の好ましい態様によれば、血管疾患の造影に用いる上記Ｘ線造影剤；泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記Ｘ線造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のＸ線造影剤；マクロファージが局在化する組織が肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のＸ線造影剤が提供される。
さらに、上記Ｘ線造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用；Ｘ線造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームを、ヒトを含む哺乳類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームを、ヒトを含む哺乳類動物に投与した後にＸ線を照射する工程を含む方法が本発明により提供される。
【００１０】
また、別の観点からは、少なくとも１つのヨード原子が放射性同位体である上記の化合物又はその塩を膜構成成分として含むリポソーム、及び該リポソームを含むシンチグラフィー造影剤が本発明により提供される。この発明の好ましい態様によれば、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋細胞の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；マクロファージが局在化する組織又は疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤；造影対象の組織が血管、肝臓、脾臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、及び腎臓上皮からなる群から選ばれる上記のシンチグラフィー造影剤；腫瘍、動脈硬化巣、炎症部位、及び感染部位からなる群から選ばれる疾患部位の造影に用いる上記のシンチグラフィー造影剤が提供される。
さらに、上記シンチグラフィー造影剤の製造のための上記の化合物又はその塩の使用；シンチグラフィー造影法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームを、ヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法；血管疾患の病巣の造影方法であって、上記の化合物を膜構成成分として含むリポソームを、ヒトを含む哺乳類動物に投与した後に該リポソームが発生する放射線を検出する工程を含む方法も本発明により提供される。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の化合物は、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有しており、この化合物を含むリポソームを用いてＸ線造影することにより血管の病巣を選択的に造影できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本明細書において、ある官能基について「置換又は無置換」又は「置換基を有していてもよい」という場合には、その官能基が１又は２以上の置換基を有する場合があることを示しているが、特に言及しない場合には、結合する置換基の個数、置換位置、及び種類は特に限定されない。ある官能基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。本明細書において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、ハロゲン原子（本明細書において「ハロゲン原子」という場合にはフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素のいずれでもよい）、アルキル基（本明細書において「アルキル基」という場合には、直鎖状、分岐鎖状、環状、又はそれらの組み合わせのいずれでもよく、環状アルキル基にはビシクロアルキル基などの多環性アルキル基を含む。アルキル部分を含む他の置換基のアルキル部分についても同様である）、アルケニル基（シクロアルケニル基、ビシクロアルケニル基を含む）、アルキニル基、アリール基、ヘテロ環基、シアノ基、ヒドロキシル基、ニトロ基、カルボキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、シリルオキシ基、ヘテロ環オキシ基、アシルオキシ基、カルバモイルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシカルボニルオキシ基、アミノ基（アニリノ基を含む）、アシルアミノ基、アミノカルボニルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、アリールオキシカルボニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、アルキル及びアリールスルホニルアミノ基、メルカプト基、アルキルチオ基、アリールチオ基、ヘテロ環チオ基、スルファモイル基、スルホ基、アルキル及びアリールスルフィニル基、アルキル及びアリールスルホニル基、アシル基、アリールオキシカルボニル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、アリール及びヘテロ環アゾ基、イミド基、ホスフィノ基、ホスフィニル基、ホスフィニルオキシ基、ホスフィニルアミノ基、シリル基が挙げられる。
【００１３】
Ａｒ1及びＡｒ2が示す少なくとも１つのヨウ素原子で置換されたアリール基において、アリール環上のヨウ素原子の個数は２個以上であることが好ましく、３個以上である場合が特に好ましい。アリール基上のヨウ素原子の個数の上限は特に限定されないが、通常は５個以下である。Ａｒ1及びＡｒ2が示すアリール基の種類は特に限定されないが、アントラセン基、ナフタレン基、又はフェニル基などが好ましく、フェニル基が最も好ましい。Ａｒ1及びＡｒ2がモノ又はジヨードフェニル基を表す場合、ベンゼン環上におけるヨウ素原子の置換位置は特に規定されない。Ａｒ1及びＡｒ2がトリヨードフェニル基を表す場合、ベンゼン環上における３個のヨウ素原子の置換位置は特に規定されないが、例えば「２，４，６位」、「２，３，５位」、「３，４，５位」置換が好ましく、より好ましくは「２，４，６位」、「２，３，５位」置換であり、なかでも「２，４，６位」置換が最も好ましい。
【００１４】
Ａｒ1及びＡｒ2が示すアリール基は環上に置換基を有していてもよい。環上に存在する置換基の種類、個数、置換位置は特に限定されない。該アリール環が置換基を有する場合、好ましい置換基の例としては、ハロゲン原子、アルキル基、シアノ基、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、アシル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基が挙げられる。また、Ａｒ1及びＡｒ2が示すアリール環がヨウ素原子以外の置換基を有しない場合も好ましい。
【００１５】
Ｌ1及びＬ2は、それぞれ独立に、主鎖が６個以上の炭素原子で構成される二価の連結基を表す。本明細書においてＬ1及びＬ2についての「主鎖」とは−Ｏ−ＣＯ−と−Ｏ−Ａｒで表される基の間を最小個数で結ぶ原子群を意味する。該連結基は飽和の基であってもよいが、不飽和結合を含んでいてもよい。該連結基は主鎖中にヘテロ原子（本明細書において「ヘテロ原子」という場合には、窒素原子、酸素原子、硫黄原子など、炭素原子以外の任意の原子を意味する）を含んでいてもよい。該連結基がヘテロ原子を含む場合、その個数については特に規定されないが５個以下であることが好ましく、より好ましくは３個以下であり、１個以下であるときが最も好ましい。ヘテロ原子を含まない場合も好ましい。主鎖中のヘテロ原子の位置についても特に規定されないが、−Ｏ−Ａｒで表される基と隣接することはない。
【００１６】
該連結基は、ヘテロ原子と隣接する炭素原子を含む官能基を部分構造として含んでいてもよい。連結基中に含まれる不飽和部分及び／又はヘテロ原子を含む官能基としては、例えば、アルケニル基、アルキニル基、エステル基（カルボン酸エステル、炭酸エステル、スルホン酸エステル、スルフィン酸エステルを含む）、アミド基（カルボン酸アミド、ウレタン、スルホン酸アミド、スルフィン酸アミドを含む）、エーテル基、チオエーテル基、ジスルフィド基、アミノ基、イミド基などがあげられる。上記の官能基はさらに置換基を有していても良く、これらの置換基はＬ1及びＬ2にそれぞれ複数個存在してもよい。複数個存在する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。
【００１７】
Ｌ1及びＬ2で表される二価の連結基が含んでいてもよい部分構造として、好ましくはアルケニル基、エステル基、アミド基、エーテル基、チオエーテル基、ジスルフィド基又はアミノ基であり、さらに好ましくはアルケニル基、エステル基、エーテル基である。主鎖中に含まれるヘテロ原子は酸素原子又は硫黄原子が好ましく、酸素原子がもっとも好ましい。Ｌ1及びＬ2の炭素数は６〜３０が好ましく、８〜２５がより好ましく、最も好ましくは８〜１５である。Ｌ1及びＬ2は置換基を有していてもよい。置換基を有する場合、ハロゲン原子又はアルキル基が好ましい。また、無置換の場合も好ましい。
【００１８】
Ｌ3は主鎖が２〜４個の炭素原子からなる２価の連結基を表す。本明細書においてＬ3についての「主鎖」とは−ＣＯ−Ｏ−と−Ｏ−ＣＯ−で表される基の間を最小個数で結ぶ原子群を意味する。Ｌ3の炭素原子数は２〜３個の場合がより好ましい。該連結基は飽和の基であってもよいが、不飽和結合を含んでいてもよい。該連結基は置換基を有しないことが望ましい。
【００１９】
本発明の化合物は１以上の不斉中心を有する場合があるが、この場合、不斉中心に基づく光学活性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体が存在する。純粋な形態の任意の立体異性体、任意の立体異性体の混合物、ラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。また、本発明の化合物はオレフィン性の二重結合を有する場合があるが、その配置はＥ又はＺのいずれであってもよく、両者の混合物として存在していてもよい。本発明の化合物は互変異性体として存在する場合もあるが、任意の互変異性体、又はそれらの混合物は本発明の範囲に包含される。さらに、本発明の化合物は塩を形成する場合があり、遊離形態の化合物又は塩の形態の化合物が水和物又は溶媒和物を形成する場合もあるが、このような場合も本発明の範囲に包含される。塩の種類は特に限定されず、酸付加塩又は塩基付加塩のいずれであってもよい。
【００２０】
以下に本発明の化合物の好ましい例を示すが、本発明の化合物はこれらの例に限定されることはない。
【化２】
2005247744.tif 000003
【００２１】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の一般的な合成法について説明するが、本発明の化合物の合成法はこれらに限定されるものではない。本発明の化合物の部分構造であるヨードフェニル基、とりわけトリヨードフェニル基に関する合成原料としては、通常市販されているものを使用してもよく、あるいは用途に応じて適宜合成してもよい。市販品としては、例えば2,4,6-トリヨードフェノールや安息香酸誘導体（例えば、3-amino-2,4,6-triiodobenzoic acid, acetrizoic acid, iopipamide, diatrizoic acid, histodenz, 5-amino-2,4,6-triiodoisophthalic acid, 2,3,5-triiodobenzoic acid, tetraiodo-2-sulfobenzoic acid）、ヨードパン酸（iopanoic acid）、iophenoxic acidなどを用いることができる。合成により入手する場合には、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法により、芳香環上にヨード原子を導入し、原料として用いることができる。
【００２２】
上記のトリヨードフェニル誘導体は通常、部分構造として水酸基やアミノ基、チオール基、カルボキシル基等を含有する場合があるが、これらの官能基と二価カルボン酸、ハロゲン化脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸等をエーテル連結／エステル連結／アミノ連結／アミド連結等を介して縮合し、トリヨードフェニル基を有するカルボン酸として合成中間体として用いることもできる。これらの工程では、必要な場合には保護基を用いることもできるが、この場合の保護基とは、例えば、T. W. Green & P. G. M. Wuts著、Protecting groups in organic synthesis（John Wiley & sonc, inc.）に記載のものを適宜選択して用いることができる。二価カルボン酸としては、例えば、ドデカン二酸、テトラデカン二酸、ドコサンサン二酸、4,4'-ジチオジブタン酸が挙げられ、ハロゲン化脂肪酸としては、例えば、12-ブロモドデカン酸、16-ブロモヘキサデカン酸が挙げられ、ヒドロキシ脂肪酸としては、例えば、10-ヒドロキシデカン酸、12-ヒドロキシドデカン酸、12-ヒドロキシステアリン酸等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２３】
本発明の化合物は、Ｌ1、Ｌ2、及びＬ3が示す二価の連結基として任意の長さのアルキレン鎖を有することができるが、適当な合成原料が存在しない場合には適宜の原料化合物を用いて合成的に調製することができる。その合成法は、例えばWittig反応やBarbier-Wieland分解、Arndt-Eistert合成、アセチリドを用いる方法（例えば、Tetrahedron Lett. 35, 9501 (1994)に記載の方法を参照することができる）、クロロ蟻酸エステルを用いる方法（例えば、Synthesis 427 (1986)に記載された方法など）、マロン酸ジエチルを用いる方法（例えば、Arch. Pharm. (Weinheim) 328, 271 (1995)に記載された方法など）等が挙げられる。しかし、これらの方法は一例であり、これらに限定されるものではない。
【００２４】
上記のトリヨードフェニル基を有するカルボン酸と、エタンジオール等の２価アルコールまたは1,3−ジブロムプロパン等のジハロアルカンを用いて、例えばRichard C. Larock著、Comprehensive organic transformations（VCH）に記載の方法によりエステル形成することによって本発明の化合物に誘導することができる。しかし、これらの方法は一例であり、限定されるものではない。
【００２５】
本発明の化合物又はその塩はリポソームの膜構成成分として用いることができる。本発明の化合物又はその塩を用いてリポソームを調整する場合、本発明の化合物又はその塩の使用量は、膜構成成分の全質量に対して１０から９０質量％程度、好ましくは１０から８０質量％、さらに好ましくは２０から８０質量％である。本発明の化合物は膜構成成分として１種類を用いてもよいが、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。
リポソームの他の膜構成成分としては、リポソームの製造に通常用いられている脂質化合物をいずれも用いることが可能である。例えば、Biochim. Biophys. Acta 150(4), 44 (1982)、Adv. In Lipid. Res. 16(1), 1 (1978)、_RESEARCH IN LIPOSOMES_ (P. Machy, L. Leserman著、John Libbey EUROTEXT社)、「リポソーム」（野島、砂本、井上編、南江堂）等に記載されている。脂質化合物としてはリン脂質が好ましく、特に好ましいのはホスファチジルコリン（PC）類である。ホスファチジルコリン類の好ましい例としては、eggPC、ジミリストイルPC（DMPC）、ジパルミトイルPC（DPPC）、ジステアロイルPC（DSPC）、ジオレイルPC（DOPC）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２６】
本発明の好ましい態様では、リポソームの膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリン（PS）を組み合せて用いることができる。ホスファチジルセリンとしては、ホスファチジルコリンの好ましい例として挙げたリン脂質と同様の脂質部位を有する化合物が挙げられる。ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンを組み合せて用いる場合、PCとPSの好ましい使用モル比はPC：PS＝９０：１０から１０：９０の間であり、さらに好ましくは、３０：７０から７０：３０の間である。
本発明のリポソームにおける別の好ましい態様によると、膜構成成分として、ホスファチジルコリンとホスファチジルセリンを含み、さらにリン酸ジアルキルエステルを含むリポソームが挙げられる。リン酸ジアルキルエステルのジアルキルエステルを構成する２個のアルキル基は同一であることが好ましく、それぞれのアルキル基の炭素数は６以上であり、１０以上が好ましく、１２以上がさらに好ましい。好ましいリン酸ジアルキルエステルの例としては、ジラウリルフォスフェート、ジミリスチルフォスフェート、ジセチルフォスフェート等が挙げられるが、これに限定されることはない。この態様において、ホスファチジルコリン及びホスファチジルセリンの合計質量に対するリン酸ジアルキルエステルの好ましい使用量は１から５０質量％までであり、好ましくは１から３０質量％であり、さらに好ましくは１から２０質量％である。
【００２７】
ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、リン酸ジアルキルエステ及び本発明の化合物を膜構成成分として含むリポソームにおいて、上記成分の好ましい質量比はPC：PS：リン酸ジアルキルエステル：本発明の化合物が５〜４０質量％：５〜４０質量％：１〜１０質量％：１５〜８０質量％の間で選択することができる。
本発明のリポソームの構成成分は上記４者に限定されず、他の成分を加えることができる。その例としては、コレステロール、コレステロールエステル、スフィンゴエミリン、FEBS Lett. 223, 42 (1987); Proc. Natl. Acad. Sci., USA 85, 6949 (1988)等に記載のモノシアルガングリオキシドGM1誘導体、Chem. Lett. 2145 (1989); Biochim. Biophys. Acta 1148, 77 (1992)等に記載のグルクロン酸誘導体、Biochim. Biophys. Acta 1029, 91 (1990); FEBS Lett. 268, 235 (1990)等に記載のポリエチレングリコール誘導体が挙げられるが、これに限られるものではない。
【００２８】
本発明のリポソームは、当業者が利用可能ないかなる方法で製造してもよい。製造法の例としては、先に挙げたリポソームの総説成書類の他、Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9, 467 (1980)、Liposomes (M. J. Ostro編、MARCELL DEKKER、INC.)等に記載されている。具体例としては、超音波処理法、エタノール注入法、フレンチプレス法、エーテル注入法、コール酸法、カルシウム融合法、凍結融解法、逆相蒸発法等が挙げられるが、これに限られるものではない。本発明のリポソームのサイズは、上記の方法で作成できるサイズのいずれであっても構わないが、通常は平均が400nm以下であり、200nm以下が好ましい。リポソームの構造は特に限定されず、ユニラメラ又はマルチラメラなどのいずれの形態でもよい。また、リポソームの内部に適宜の薬物や他の造影剤の１種又は２種以上を配合することも可能である。
【００２９】
本発明のリポソームを造影剤として用いる場合には、好ましくは非経口的に投与することができ、より好ましくは静脈内投与することができる。例えば、注射剤や点滴剤などの形態の製剤を凍結乾燥形態の粉末状組成物として提供し、用事に水又は他の適当な媒体（例えば生理食塩水、ブドウ等輸液、緩衝液など）に溶解ないし再懸濁して用いることができる。本発明のリポソームを造影剤として用いる場合、投与量はリポソームのヨード含有量が従来のヨード造影剤のヨード含有量と同程度になるように適宜決定することが可能である。
【００３０】
いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、動脈硬化、若しくはPTCA後の再狭窄等の血管疾患においては、血管の中膜を形成する血管平滑筋細胞が異常増殖を起こすと同時に内膜に遊走し、血流路を狭くすることが知られている。正常の血管平滑筋細胞が異常増殖を始めるトリガーはまだ完全に明らかにされていないが、マクロファージの内膜への遊走と泡沫化が重要な要因であることが知られており、その後に血管平滑筋細胞がフェノタイプ変換（収縮型から合成型）をおこすことが報告されている。
【００３１】
本発明のリポソームを用いると、泡沫化マクロファージの影響で異常増殖した血管平滑筋に対して疎水性ヨード化合物を選択的に取り込ませることができる。その結果、病巣と非疾患部位とをコントラストをつけて造影することが可能である。従って、本発明の造影剤は、特に血管疾患のＸ線造影に好適に使用でき、例えば、動脈硬化巣やPTCA後の再狭窄等の造影を行うことができる。
【００３２】
また、例えばJ. Biol. Chem., 265, 5226 (1990)に記載されているように、リン脂質よりなるリポソーム、特にPCとPSから形成されるリポソームが、スカベンジャーレセプターを介してマクロファージに集積しやすいことが知られている。従って本発明のリポソームを使用することにより、本発明のヨード化合物をマクロファージが局在化している組織又は疾患部位に集積させることができる。本発明のリポソームを用いると、公知技術であるサスペンジョン又はオイルエマルジョンを用いる場合に比べて、より多くのヨード化合物をマクロファージに集積させることが可能である。
【００３３】
マクロファージの局在化が認められ、本発明の方法で好適に造影可能な組織としては、例えば、血管、肝臓、肺胞、リンパ節、リンパ管、腎臓上皮を挙げることができる。また、ある種の疾患においては、疾患部位にはマクロファージが集積していることが知られている。こうした疾患としては、腫瘍、動脈硬化、炎症、感染等を挙げることができる。従って、本発明のリポソームを用いることにより、これらの疾患部位を特定することができる。特に、アテローム性動脈硬化病変の初期過程において、スカベンジャーレセプターを介して変性LDLを大量に取り込んだ泡沫化マクロファージが集積していることが知られており（Am. J. Pathol., 103, 181(1981)、Annu. Rev. Biochem., 52, 223(1983)）、このマクロファージに本発明のリポソームを集積化させてＸ線造影をすることにより、他の手段では困難な動脈硬化初期病変の位置を特定することが可能である。
【００３４】
本発明のリポソームを用いた造影方法は特に限定されない。例えば、通常のＸ線造影剤を用いた造影方法と同様にしてＸ線を照射することにより造影を行うことができる。また、ヨードの放射線同位体を含む本発明の化合物を用いてリポソームを形成し、該リポソームをシンチグラフィー用造影剤として用いることにより、核医学的方法による造影を行うことも可能である。ヨードの放射性同位体は特に限定されないが、好ましい例としては122Ｉ、123Ｉ、125Ｉ及び131Ｉを挙げられ、特に好ましい例としては123Ｉ及び125Ｉをあげることができる。放射性ラベル化合物の合成は対応する非ラベル化合物を合成した後に、Appl. Radiat. Isot., 37(8), 907 (1986)等に記載されている既知の方法で実施することができる。疎水性化合物がトリヨードベンゼン誘導体である場合、同一ベンゼン環上の３個のヨード原子のうち少なくとも１個が放射線同位体化されていることが好ましい。好ましくは２個以上が放射線同位体化されていることであり、最も好ましいのは３個が同一の放射線同位体でラベル化されていることである。
【実施例】
【００３５】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。なお、下記の実施例中の化合物番号は上記に示した化合物例の番号に対応している。また、実施例中の化合物の構造はNMRスペクトルにより確認した。
例１
12-ブロモドデカン酸4.8gと2,4,6-トリヨードフェノール9.1gをエタノール70mLに加え、還流して溶解させた。水酸化カリウム2.2gを加えてさらに12時間攪拌を続けた。得られた沈殿を濾別、エタノールで洗浄した後、クロロホルムと１規定塩酸を加えて、クロロホルムで２回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、除媒し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して12-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ドデカン酸を7.0g（収率60%）得た。
16-ブロモヘキサデカン酸より、12-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ドデカン酸の合成法と同様に16-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘキサデカン酸を合成した。
【００３６】
7-ブロモヘプタン酸エチル4.7gと2,4,6-トリヨードフェノール2.4gをジメチルホルムアミド（DMF）20mLに加え、炭酸カリウム2.1gを加えて室温で１日攪拌した。水を加えて酢酸エチルで２回抽出し、有機層を３回水洗し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、除媒した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して7-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸エチルを6.0g（収率96%）得た。
7-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸エチル4.0gを95%エタノール30mLに加え、還流して溶解した後、水酸化ナトリウム0.5gを加えてさらに1.5時間還流を続けた。得られた結晶を濾別、エタノールで洗浄した後、ジクロロメタンと１規定塩酸を加えて、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、除媒し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して7-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸を3.4g（収率90%）得た。
11-ブロモウンデカン酸メチルより、7-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸と同様の手法で11-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ウンデカン酸を得た。
【００３７】
9-ヒドロキシノナン酸メチル2.1gとピリジン1.8gをジクロロメタン20mLに加え、０℃で攪拌し、メタンスルホニルクロリド1.3mLを加えて、徐々に室温まで昇温し、１日攪拌した。水を加えた後、ジクロロメタンで２回抽出し、得られた有機層を１規定塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、除媒し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して9-（メタンスルホニルオキシ）ノナン酸メチルを2.1g（収率68%）得た。
9-（メタンスルホニルオキシ）ノナン酸メチルを用いて、7-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタン酸と同様の手法で9-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ノナン酸を得た。
【００３８】
15-ペンタデカラクトン25.6gをメタノール150mLに加え、さらに28%ナトリウムメトキシド溶液を50mL加えて３時間還流した。１規定塩酸を加えて酢酸エチルで３回抽出し、有機相を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、除媒した。15-ヒドロキシペンタデカン酸メチルを28.5g（収率98%）得た。
15-ヒドロキシペンタデカン酸メチルを用いて、9-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ノナン酸と同様の手法で15-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ペンタデカン酸を得た。
トリデカン二酸を用いて、Synth. Commun., 17, 1339 (1987)に記載の方法に準拠して、トリデカン二酸モノメチルを得た。さらに、トリデカン二酸モノメチルを用いて、Aust. J. Chem., 48, 1893 (1995)に記載の方法に準拠して、13-ヒドロキシトリデカン酸メチルを得た。
13-ヒドロキシトリデカン酸メチルを用いて、9-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ノナン酸と同様の手法で13-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）トリデカン酸を得た。
テトラデカン二酸を用いて、13-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）トリデカン酸と同様の手法で14-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）テトラデカン酸を得た。
【００３９】
エイコサン二酸を用いて、13-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）トリデカン酸と同様の手法で20-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）エイコサン酸を得た。
15-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ペンタデカン酸とマロン酸ジエチルを用いて、Arch. Pharm. (Weinheim) 328, 271 (1995)の手法に準拠して２炭素増炭し、17-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸を得た。
17-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸を用いて、17-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸と同様の手法で、19-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ナノデカン酸を得た。
19-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ナノデカン酸を用いて、17-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘプタデカン酸と同様の手法で、21-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ヘンエイコサン酸を得た。
【００４０】
11-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ウンデカン酸1.85g、1,2-エタンジオール0.08g、ジメチルアミノピリジン32mgをジクロロメタン10mLに加え、さらにエチル N,N-ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩0.60gを加えて室温で一日撹拌した。反応液を濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して化合物２−３を1.4g（収率79%）得た。
化合物２−３：
1H-NMR (300MHz, CDCl3)・:  8.05 (4H, s)  4.28 (4H, s)  3.92 (4H, t, J=6.4Hz)  2.32 (4H, t, J = 6.4Hz)  1.89 (4H, quin, J = 6.4Hz)  1.64 (4H, quin, J = 6.4Hz)  1.58-1.48 (4H, m)  1.43-1.25 (20H, m)
【００４１】
それぞれ該当するジオールを用い、化合物２−３と同様の合成法により、化合物３−３、化合物４−３、及び化合物５−３を合成した。
化合物３−３：
1H-NMR (300MHz, CDCl3)・:  8.05 (4H, s)  4.26 (4H, t, J=6.4Hz )  3.93 (4H, t, J=6.4Hz)  2.30 (4H, t, J = 6.4Hz)  1.97 (2H, quin, J = 6.4Hz)  1.88 (4H, quin, J = 6.4Hz)  1.67-1.48 (8H, m)  1.43-1.25 (20H, m).
化合物４−３：
1H-NMR (300MHz, CDCl3)・:  8.05 (4H, s)  4.15-4.05 (4H, m)  3.93 (4H, t, J=6.4Hz)  2.30 (4H, t, J = 6.4Hz)  1.90 (4H, quin, J = 6.4Hz)  1.75-1.48 (12H, m)  1.43-1.25 (20H, m).
化合物５−３：
1H-NMR (300MHz, CDCl3)・:  8.05 (4H, s)  5.76-5.72 (2H, m)  4.72-4.64 (4H, m)  3.93 (4H, t, J=6.4Hz)  2.31 (4H, t, J = 6.4Hz)  1.89 (4H, quin, J = 6.4Hz)  1.66-1.48 (8H, m)  1.43-1.25 (20H, m).
【００４２】
12-（2,4,6-トリヨードフェノキシ）ドデカン酸を用い、化合物３−３と同様の合成法により、化合物３−４を合成した。
化合物３−４：
1H-NMR (300MHz, CDCl3)・:  8.05 (4H, s)  4.16 (4H, t, J=6.4Hz )  3.93 (4H, t, J=6.4Hz)  2.30 (4H, t, J = 6.4Hz)  1.97 (2H, quin, J = 6.4Hz)  1.89 (4H, quin, J = 6.4Hz)  1.67-1.48 (8H, m)  1.43-1.25 (24H, m).
【００４３】
試験例１：血管平滑筋細胞におけるヨード原子の取り込み量
下記に示した割合でジ・パルミトイル ＰＣ（フナコシ社製、No.1201-41-0225）、ジ・パルミトイル ＰＳ（フナコシ社製、No.1201-42-0237）をJ. Med. Chem., 25(12), 1500 (1982)記載の方法で、本発明のヨード化合物とナス型フラスコ内でクロロホルムに溶解して均一溶液とした後、溶媒を減圧で留去してフラスコ底面に薄膜を形成した。この薄膜を真空で乾燥後、0.9%生理食塩水（光製薬社製、No512）を適当量加え、超音波照射（Branson社製、No.3542プローブ型発振器、0.1mW）を氷冷下５分実施することにより、均一なリポソーム分散液を得た。得られた分散液の粒径をWBCアナライザー（日本光電社製、A-1042）で測定した結果、粒子径は40から65nmであった。この方法により調製した下記リポソーム製剤を日本国特許、特願２００１−０１８５７３記載の血管平滑筋細胞とマクロファージとの混合培養系に添加し、３７℃５％ＣＯ2で２４時間培養した後、血管平滑筋細胞に取り込まれたヨード化合物を定量した。このように本発明の化合物は効率よく血管平滑筋細胞に取り込ませることができ、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有することが明らかである。
取り込み量（トリヨードフェニル基換算）
PC 50nmol  ＋  PS 50nmol  ＋  化合物２−３    59 nmol/mg protein
PC 50nmol  ＋  PS 50nmol  ＋  化合物３−３    58 nmol/mg protein
PC 50nmol  ＋  PS 50nmol  ＋  化合物３−４    59 nmol/mg protein
PC 50nmol  ＋  PS 50nmol  ＋  比較化合物１    64 nmol/mg protein
【化３】
2005247744.tif 000004
【００４４】
試験例２： Ｓ９の作製及び分解試験
ＳＤラット雄６週齢（日本チャールスリバー社製）を購入し１週間馴化した。１週間馴化後、体重を測定し、断頭放血した。肝臓を摘出し、冷却した0.15M KClで３回洗浄した。洗浄後、肝臓の湿重量を測定し、その重量の３倍の冷却した0.15M KClを加え、ホモジナイザーに移した。氷冷中でホモジネイトし、その後、ホモジネイトを9000gで１０分間冷却遠心した。この上清をＳ９と呼び、−８０℃以下で保存した。
保存してあるＳ９を、流水中で溶解した。溶解したＳ９ 0.1mlに、0.4M MgCl2 0.02ml、1.65M KCl 0.02ml、0.2M Naりん酸緩衝液（pH 7.4） 0.5mlを加え、グルコース６りん酸（オリエンタル酵母社製）、NADPH（オリエンタル酵母社製）、NADH（オリエンタル酵母社製）を4・になる様に添加し蒸留水を加え、全量を１mlとした（これをＳ９Mixと呼ぶ）。Ｓ９Mix 1mlに被験物質を５μg/mlになる様添加し、３７℃で往復振盪した。Ｓ９Mix中の被験物質量（未変化体）を経時でHPLCを用い測定した。なお、被験物質はＤＭＳＯ（和光純薬社製）にて予め溶解した。結果には、S9Mixに添加直後の未変化体量を１００とし、30分後の未変化体量をその百分率に直して表記した。既知である比較化合物１〜３がＳ９分解試験において分解が全く認められないのに対し、本発明の化合物は効率的に分解されることが明らかであり、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有することが明らかである。
化合物２−３：34％    化合物３−３：42％    化合物３−４：38％
化合物４−３：42％    化合物５−３：44％    比較化合物１：100％
【００４５】
試験例３：マウス３日間連続投与毒性試験
ＩＣＲマウス雄６週齢（日本チャールスリバー）を購入し、１週間の検疫期間の後、クリーン動物舎内（空調：へパフィルター クラス1000、室温：２０℃〜２４℃ 湿度：３５％〜６０％）で１週間馴化した。その後、ＭＴＤ値を求めるため、尾静脈よりリポソーム製剤を投与した。リポソーム製剤は、生理食塩水（光製薬社製）又はグルコース溶液（大塚製薬社製）のいずれかを溶媒として投与した。次に求められたＭＴＤ値をもとに、その1/2量を３日間、尾静脈より３日間連続で投与した（ｎ＝３匹とする）。症状観察は各投与後６時間までとし、神経毒性を観察後、剖検を行ない、主要臓器について所見を取った。本発明の化合物は、既知である比較化合物２〜３とMTD値は同等でありながら、神経毒性を示さないことが明らかであり、Ｘ線造影剤のためのリポソームの構成脂質として優れた性質を有することが明らかである。
化合物：MTD(mg/kg)；神経毒性
化合物２−３：200mg/kg；−  化合物３−３：400mg/kg；−
化合物３−４：400mg/kg；−  化合物４−３：400mg/kg；−
化合物５−３：400mg/kg；−
比較化合物２：200mg/kg；＋  比較化合物３：400mg/kg；＋
【化４】
2005247744.tif 000005