(57)【要約】【課題】重症性急性呼吸器症候群の新規診断法を提供する。【解決手段】本方法は、長期免疫によって認識される重症性急性呼吸器症候群コロナウィルス由来ペプチド、および／またはそれに対する抗体の使用を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
長期免疫によって認識される重症急性呼吸器症候群コロナウィルス由来ペプチド。
【請求項２】
配列番号：１、２または３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１記載のペプチド。
【請求項３】
配列番号：１、２または３に示されるアミノ酸配列より成るペプチド。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか記載のペプチドに対する抗体。
【請求項５】
重症急性呼吸器症候群コロナウィルスの感染の有無を測定する方法であって、その感染が疑われる被験者から血液試料を採取し、請求項１から３のいずれか記載のペプチドに対する抗体を使用してコロナウィルスを検出することを含む方法。
【請求項６】
請求項１から３のいずれか記載のペプチドおよび／または請求項４記載の抗体を含む、重症急性呼吸器症候群コロナウィルスの感染の有無を測定するキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、重症急性呼吸器症候群コロナウィルス由来ペプチドの評価に関し、特にそのようなペプチド、それに対する抗体、および重症急性呼吸器症候群の診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
2003年3月に、新規のコロナウィルスが生命に関わる重症急性呼吸器症候群（SARS）の症例に関連して発見され(非特許文献1:Drosten C,; 非特許文献2:Ksiazek TG)、そのコロナウィルスは重症急性呼吸器症候群コロナウィルス（SARS-CoV）と命名された。SARS-CoVのゲノムは長さ29,727ヌクレオチドで11のオープンリーディングフレームを有し、そのゲノム構成は他のコロナウィルスのものと近似している(非特許文献3: Rota PAら、2003)。その後、SARS-CoVの治療法および診断法の両方を新しく開発することが緊急に必要であったため、免疫原性エピトープを決定する研究が短期間の間に精力的に行われた(非特許文献4:Wang J; 非特許文献5:Cavanagh D; 非特許文献6:Gao W; 非特許文献7:Li W; 非特許文献8:He W)。それらの結果はSARS-CoVのスパイク（S)およびヌクレオキャプシド（N)タンパク質がそのような免疫原性領域を含むことを示すが、世界中の多くの人々のために診断および治療手段を開発するのに用いるより重要な領域を提示するには、更なる研究が必要とされる。
【０００３】
Gao W.ら(非特許文献6:Gao, 2003)は、アデノウィルスをベクターとして用いたワクチンがサルにおいて強いSARS-CoV特異的免疫応答を誘導でき、SARS病原に対する予防ワクチンの開発が期待できることを報告した。しかしながらそのような予防ワクチンを開発するには、基礎および臨床研究を通して、安全性、有効性、費用便益、および持続性の観点から多くの障害を乗り越えなければならない。重要な基礎研究の一つは長期免疫を誘導できる免疫原性領域を同定することであろうし、従って本研究に示される結果は、適したワクチン候補の決定に新しい情報を提供し得る。
【０００４】
【非特許文献１】Drosten C, Gunther S, Preiser W, et al., Identification of a novel coronavirus in patients with severe acute respiratory syndrome.  N Engl J Med, 2003, 348:1967-76.;
【非特許文献２】Ksiazek TG, Erdman D, Goldsmith CS, et al., A novel coronavirus associated with severe acute respiratory syndrome.  N Engl J Med, 2003, 348:1953-66
【非特許文献３】Rota PA, Oberste MS, Monroe SS, et al.  Characterization of a novel coronavirus associated with severe acute respiratory syndrome.  Science, 2003, 300:1394-1399
【非特許文献４】Wang J, Wen J, Li J, et al.  Assessment of immunoreactive synthetic peptides from the structural proteins of severe acute respiratory syndrome coronavirus.  Clin Chem, 2003, 49(12), 1989-96).
【非特許文献５】CavanaghD.  Severe acute respiratory syndrome vaccine development: experiences of vaccination ageinst avian infectious bronchitis coronavirus.  Avian Pathol, 2003, 32(6):567-582.
【非特許文献６】Gao W, Tamin A, Soloff A, et al.  Effects of a SARS-associated coronavirus vaccine in monkeys.  Lancet, 2003, 362(9399):1895-6.
【非特許文献７】Li W, Moore MJ, Vasilieva N, et al.  Angiotensin-converting enzyme 2 is a functional receptor for the SARS coronavirus.  Nature, 2003, 426(6965):450-4
【非特許文献８】He L, Ding YQ, Che XY, et al.  Expression of the monoclonal antibody against nucleocapsid antigen of SARS-associated coronavirus in autopsy tissues from SARS patients.  Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao, 2003, 23(11):1128-30
【非特許文献９】Gordon RF and McDade RL, Multiplexed quantification of human IgG, IgA, and IgM with the FlowMetrixTM system.  Clin Chem, 1997, 43:1799-1801
【非特許文献１０】Kawamoto N, Yamada A, Ohkouchi S, et al.  IgG reactive to CTL-directed epitopes of self-antigens is either lacking or unbalanced in atopic dermatitis patients.  Tissue Antigens 2003; 61:1-10
【非特許文献１１】Wang YS, Shen H, Sun SH, et al.  Analysis of false-positive associated with antibody tests for SARS-CoV in SLE patients.  Shi Yan Sheng Wu Xue Bao, 2003, 36(4):314-7
【非特許文献１２】Pearson H., Antibodies to SARS-like virus hint at repeated infections.  Science, 2004, 427;185
【非特許文献１３】Zhuang JH, Huang XZ, Zhou Q, Lin LY, and Lin L.  Dybamic observation IgG and IgM antibodies in patients with severe acute respiratory syndrome.  Ahongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue, 2003, 15(10): 579-81
【非特許文献１４】Hsueh PR, Hsiao CH, Yeh Sh, et al.  Microbiologic characteristics, serologic responses, and clinical manifestations in severe acute respiratory syndrome, Taiwan.  Emerg Infect Dis, 2003, 9(9), 1163-7.
【非特許文献１５】Drosten C, Gunther S, Preiser W, et al., Identification of a novel coronavirus in patients with severe acute respiratory syndrome.  N Eng J Med, 2003, 348:1967-76.
【非特許文献１６】Wang HB, Liu JH, Ouyang XL, et al.  Detection of the anti-SARS- coronavirus specific antibody levels in 156 SARS patients.  Zhongguo shi Yan Xue Ye Xue Za Ahi, 2003, 11(5):441-3
【発明の概要】
【０００５】
免疫原性の高い領域を決定するため、本研究では長期免疫を誘導できるSARS-CoVエピトープペプチドについて調べ、3つの候補ペプチドを報告した。
候補ペプチドを決定するため、我々は始めに、3人の感染患者の血清において、SARS-CoVタンパク質に由来する相異なる197個の、重複のある15merペプチドに反応するIgG抗体をスクリーニングした。それらのうち42ペプチド、即ちスパイク（S）タンパク質由来の相異なる125ペプチドのうち20ペプチド、ヌクレオキャプシド（N）タンパク質由来の43ペプチドのうち15ペプチド、膜（M）タンパク質由来の22ペプチドのうち7ペプチド、および7個のエンベロープタンパク質のうち0個が、上記全ての血清に強く反応した。その後、感染後（6ヶ月）の患者血清に対する反応性を調べるためこれら42ペプチドを用いた。42ペプチドのうち3ペプチド（S791、Ｍ207、およびN161）に特異的なIgG抗体が、それぞれ、患者45人のうち23人（51％）、27（60％）または19人（42％）から得たこれらの感染後血清中、並びにこれら患者に接触した医療従事者230人のうち18人（7.8％）、10人（4.3%）、または21人（9.1％）の血清中に検出できた。ベトナム健常人（V-HD）50人においては、それぞれ4人（8％）、３人（6％）および2人（4％）の血清中に検出された。それに対し、これらIgG活性は、試験した限り他の感染性疾患または自己免疫疾患の日本人患者の血清中には全く検出できなかった。長期免疫によって認識されるこれら三つのペプチドは、SARS-CoVの免疫原性の理解を深め得る。
【発明の詳しい説明】
【０００６】
本研究において我々は、SARS-CoVによってコードされる構造タンパク質の全ての領域に由来する15merペプチドに反応するIgG抗体をスクリーニングし、感染後（6ヶ月）血清によって認識されるペプチドを決定し、長期免疫を誘導できる可能性のある候補ペプチドとしてS791、M207およびN161ペプチドを報告した。
従って、本発明は以下のものを提供する：
（１）長期免疫によって認識される重症急性呼吸器症候群コロナウィルス由来ペプチド、
（２）配列番号：１、２または３に示されるアミノ酸配列を含む、上記（１）記載のペプチド、
（３）配列番号：１、２または３に示されるアミノ酸配列より成るペプチド、
（４）上記（１）から（３）のいずれか記載のペプチドに対する抗体、
（５）重症急性呼吸器症候群コロナウィルスの感染の有無を測定する方法であって、その感染が疑われる被験者から血液試料を採取し、上記（１）から（３）のいずれか記載のペプチドに対する抗体を使用してコロナウィルスを検出することを含む方法、および
（６）上記（１）から（３）のいずれか記載のペプチドおよび／または上記（４）記載の抗体を含む、重症急性呼吸器症候群コロナウィルスの感染の有無を測定するキット。
【０００７】
本発明は、長期免疫によって認識される重症急性呼吸器症候群コロナウィルス由来ペプチド、好ましくは配列番号：１、２または３に示されるアミノ酸配列を含む該ペプチド、および配列番号：１、２または３に示されるアミノ酸配列より成るペプチド、を提供する。本明細書で用いる場合、重症急性呼吸器症候群コロナウィルス（SARS-CoV)は、急性呼吸困難および時として死をもたらす重症型肺炎であるSARSの誘発に関与する。SARS-CoVの完全長アミノ酸配列は、非特許文献３：Rota PA ら、2003、に記載され、またジーンバンクに寄託番号AY278741で登録されている。
【０００８】
本明細書で用いられる場合、「長期免疫」なる用語は、免疫原、例えばウィルスおよび一部の病原体、に対する生体内における免疫学的応答であって、５ヶ月またはそれ以上持続するものを意味する。一般的に、感染を予防するためのワクチンは、効果的なワクチンの特徴の一つである、持続性ある防御効果を与えることが望ましい。感染の初期段階の間、感染性物質由来の様々なペプチドに対する抗体が生体内で産生されるが、その後通常抗体価は減少する。本発明のペプチドは感染後6ヶ月の血清に認識される。これらのペプチドは、長期IgGを誘導するのに好都合であることがわかる。これに関して、長期免疫によって認識される本発明のペプチドは、持続的防御効果を与えることが望ましいSARSのための効果的ワクチンの候補として、およびSARS感染の有無を測定するのに、有用であろう。
【０００９】
本発明の長期免疫によって認識されるペプチドは、SARS-CoVの一部を含む候補ペプチドを合成し、該候補ペプチドが5ヶ月またはそれ以上の期間生体内に存在する抗体によって認識されるか否かを測定することにより同定できる。
【００１０】
ペプチド合成は、ペプチド化学において通常用いられる方法に従って行うことができる。既知の方法の例は、「Peptide Synthesis」, Interscience, New York, 1966;「The Protein」, vol. 2, Academic Press Inc., New York, 1976; 「ペプチド合成」、丸善株式会社、1975を含む、文献に記載されているものである。
本発明のペプチドの同定は、後述する実施例の説明に従い行うことができる。
【００１１】
本発明はまた、本発明のペプチドに対する抗体を提供する。本発明の抗体は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。本発明はまた、本発明のペプチドを認識する限り、Fab、F(ab')2、およびFvのような抗体断片をも包含する。抗体は、例えば「Antibodies: A Laboratory Manual」, Lane, H. D. et al. eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989に記載される方法に従い容易に調製される。具体的には、本発明のペプチドを認識する抗体は、該ペプチドを使用し通常の方法で適切に動物を免疫して、容易に調製可能である。このような抗体は、アフィニティークロマトグラフィー、免疫学的診断などに使用可能である。免疫学的診断は、イムノブロッティング、ラジオイムノアッセイ（RIA）、固相化酵素抗体法（ELISA)、蛍光または発光アッセイなどから適宜選択することができる。
【００１２】
本発明のペプチドおよびそれに対する抗体はまた、SARSの診断にも使用可能である。具体的には、本発明のペプチドに対する抗体は、試料、例えばSARS感染が疑われる患者から得た血液の中のSARC-CoVの存在を検出するのに使用され、SARSの早期検出を可能とする。このような診断は、本発明のペプチド自身を参考として使用することによって、イムノブロッティング、RIA、ELISA、または蛍光もしくは発光アッセイを用いて行うことができる。
【００１３】
これに関し、本発明はまた、重症急性呼吸器症候群コロナウィルスの感染の有無を測定する方法であって、その感染が疑われる被験者から血液試料を採取し、本発明のペプチドに対する抗体を使用してコロナウィルスを検出することを含む方法、および、該方法を行うためのキットであって本発明のペプチドおよび／または本発明の抗体を含むキット、を提供する。
【実施例】
【００１４】
本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、本発明はいかなる意味においてもこれら実施例に限定されない。データは９５％信頼区間（CI）の中央値として示し、分布はノンパラメトリック(Mann-Whitney U test)解析を使用し有意差検定した。吸収試験の結果は、両側Student's t-testによって解析した。全ての有意差試験は両側であった。
【００１５】
実施例１
SARSペプチドに反応するIgG抗体の検出
１．１  ペプチド
スパイク(S)-、ヌクレオキャプシド(N)-、膜(M)-、およびエンベロープ(E)-タンパク質を含むSARS-CoVの完全長ゲノム配列(非特許文献3:Rota PA)に基づいた、5アミノ酸重複配列を有する全部で197個の相異なる15merペプチドを使用した。SARS-CoVに感染した三人の患者由来の血清IgGに反応するペプチドをスクリーニングするのに、これら197ペプチド（Sタンパク質由来125ペプチド、Nタンパク質由来43ペプチド、Mタンパク質由来22ペプチド、およびEタンパク質由来７ペプチド）を、脱塩グレードレベル（＞７０％）で使用し、一方さらなる研究には純度＞９０％の3ペプチドを使用した。純度は逆相高圧液体クロマトグラフィー解析およびマススペクトロメトリー法によって解析した。各ペプチドはジメチルスルホキシド（DMSO)に溶解し、その後使用するまで−２０℃で保存した。これらペプチドは、American Peptide Company, INC.  (Vista, CA)より購入した。
【００１６】
１．２  患者試料
三人の台湾人SARS-CoV患者の初期段階の血清は、Jen-Ai municipal Hospital, SaAn District, Taipei, Taiwan 106 R.O.C.;5)より提供された。これら患者は、以下の表にある臨床学的知見に基づいて、SARSウィルスに感染していると診断した。
【表１】
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インフルエンザ (Flu, n=12)、C型肝炎ウィルス (HCV) (n=12)、慢性関節リウマチ(n=15)、全身性エリテマトーデス (n=7)を患う日本人患者、および日本人健常人(J-HD, n=27)由来の血清は、久留米大学病院および久留米医療センターにおいてインフォームドコンセントを得た後採取した。SARS-CoV患者のベトナム人45人の感染後血清(6ヶ月, n=45) および接触者230人 (医療従事者)の血清は、ベトナムのFrench Hospitalで採血されたものを提供された。それら患者はまた、上記臨床学的知見に基づいてSARSウィルスに感染していると診断された。さらに50人のベトナム健常人（V-HD）からの血清を陰性対照として用いた。
【００１７】
１．３  SARSペプチドに反応するIgG抗体の検出
三人の台湾人SARS-CoV感染患者の血清中の抗体のSARS-CoV由来ペプチドに対する反応性について、197種類の一部重複ペプチドをLuminexTM を用いるフローメトリー解析によって試験した。
製造元説明書 (Luminex Corp., Austin, Texas)を部分的に変更して、ペプチドをカラーコードビーズ（Luminex xMAPTM Carboxylated Microspheres）と結合させた。簡単に説明すると、カラーコードビーズ浮遊液100 μlを、0.1 M 2-モルフォリーノエタンスルホン酸 (MES)緩衝液, pH 4.5で洗浄し、その後ペプチド溶液100 μlと混合した (1 mg/ml、0.1 M MES緩衝液, pH 4.5)。そのペプチド結合ビーズを1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド塩酸塩(EDC)溶液 (1mg/ ml)と室温暗所において30分間インキュベートし、該ビーズをTween 20-PBSで洗浄した。 ビースを2-アミノエタノールで室温暗所において10分間処置し、その後2回洗浄し、その後0.05% Block Ace (Yukijirushi, Tokyo, Japan) Tween  20-PBS  １mlに再懸濁した。プレートシェーカー（300rpmに設定）上で、96ウェルフィルタープレート中、100から10,000倍希釈の血清100μlをペプチド結合カラーコードビーズと室温で2時間インキュベートした。インキュベーション後、フィルタープレートを真空マニホールド装置を用いて吸引洗浄し、プレートシェーカー（300rpmに設定）上でビオチン化ヤギ抗ヒトIgG抗体（γ鎖特異的） [Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA] 100μlと室温で1時間インキュベートした。プレートをその後洗浄し、ストレプトアビジン−PE (Molecular Probes, Eugene, OR) 100μlをウェルに添加し、プレートシェーカー（300rpmに設定）上で室温で30分間インキュベートした。結合ビーズを3回洗浄し、その後Tween 20-PBS 100μlを各ウェルに添加し、プレートをプレートシェーカー（300rpmに設定）上に3分間置いた。試料５０μlをLuminexTM システムを用いて以前に報告した方法で解析した (非特許文献9:Gordon RF and McDade RL, )。他でも報告されているように、この新しい方法により、血清試料わずか2μlで、100種類の相異なるペプチドに対する抗体が測定可能になる(Komatsu N, Shichijo S, Nakagawa M, and Itoh K. New multiplexed flow cytometric assay to measure anti-peptide antibody: A novel tool for monitoring immune responses to peptides used for immunization. Scand J Clin Labo Invest, 2004,in press)。
【００１８】
上記のように我々は、台湾人SARS-CoV感染患者（n=3）および陰性対照としての日本人健常人、J-HD（n=3）の血清中の、197種類のペプチドのそれぞれに反応するIgG抗体のレベルを測定した。患者血清は、試験した197ペプチドのうち42ペプチド（スパイク(S)（20）、膜(M)（7）、およびヌクレオキャプシド(N)（15）由来ペプチドを含む）に対して有意に高いレベルの抗ペプチド活性（P＜少なくとも0.05）を示した。結果は図１に示す。
【００１９】
3人の患者の血清（100倍希釈）の蛍光強度（FI）スコアの平均（黒バー）を、3人のJ-HDのもの(白バー)と比較した。例えば、抗SARS-CoVスパイクタンパク質由来ペプチド、S791（位置791−855）（抗S791と呼ぶ）のFIのスコアが試験した中で最も高く、3人の患者血清においてそれぞれ1,813、22,964および11,240であり、一方対照のスコアは207、58、および210であった。同様に抗ヌクレオキャプシドタンパク質N161（位置161-175）（抗N161と呼ぶ）のスコアは、それぞれ697、815、および14,084であり、一方対照のスコアは、それぞれ0、11、及び129であった。42ペプチドの全てにおいて、三つの異なる血清希釈（100-、1,000-、および10,000-倍）で用量依存曲線の結果を観察した。抗S791および抗N161抗体の代表的結果を図2に示した。
【００２０】
次に、ベトナムSARS-CoV感染患者の感染後（6ヶ月）血清（n＝45）およびベトナムSARS患者接触者（n=230）の血清の両方に対するそれらの反応性を調べるため、これら42ペプチドを用いた。陰性対照としてベトナム人HD（V-HD、n=50）の血清を用いた。結果は表２に示す。
【表２】
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【００２１】
血清希釈1：100における抗S791ペプチド活性についてのFIスコアのカットオフ値を970と定めた（V-HD 50人の平均＜199＞＋2SD＜386ｘ2＞）。有意なレベル（血清希釈1：100において＞970）の抗S791活性が、SARS-CoV感染患者45人のうち23人（51％）、接触者230人のうち18人（7.8％）、およびV-HD 50人のうち4人の血清において検出された。また、血清希釈1：100における抗M207ペプチド活性についてのFIスコアのカットオフ値を896と定めた（V-HD 50人の平均＜356＞＋2SD＜270ｘ2＞）。有意なレベル（血清希釈1：100において＞896）の抗S791活性が、SARS-CoV感染患者45人のうち27人（60％）、接触者230人のうち10人（4.3％）、およびV-HD（n=50）人のうち3人の血清において検出された。同様に、抗N161活性のカットオフ値を2705（V-HD 50人の平均＜525＞＋2SD<1090ｘ2＞）と定めた場合、有意なレベル（＞2705）の抗N161活性が、SARS-CoV感染患者45人のうち19人（42％）、接触者230人のうち21人（9.1％）、およびV-HD 50人のうち2人の血清においてそれぞれ検出された。それに対し、残りの39ペプチドに反応する有意なレベルのIgGは、数人の患者において検出されたか、または230人のいずれの接触者においても検出されなかったかのいずれかであった（データ非提示）。以降、これら3個のペプチド； S791、Ｍ207、およびN161ペプチド（純度90％以上）に対する反応性を以下の実験においてさらに検討した。
【００２２】
実施例２
吸収試験
これら活性のペプチド特異性を吸収試験によって確認した。3回の測定によって、Ｓ791、N161、およびＭ207ペプチドの各々に対するIgG活性を、固相化対応ペプチドおよび3つの異なる無関係なペプチドで吸収した。
抗体吸収試験のためのペプチド固相化ELISAプレートを調製するため、以前に報告したように（非特許文献10:Kawamoto, 2003）、S231、S611、S791、Ｍ207およびN161ペプチドを、0.1M炭酸塩緩衝液（化学架橋剤、ジスクシニミジルスベリン酸塩（DSS） (PIERCE, Rockford, IL)含有）に希釈した。ELISAプレートを標的ペプチド（20μg／ウェル）を用いて4℃で一晩コートした。そのウェルを５％Block Ace（Yukijirushi, Tokyo, Japan）で4℃で一晩ブロッキングした。血清試料中における抗ペプチドIgGの特異性を試験するため、血清試料（0.05％PBSTを用いて１：100希釈）100μl／ウェルを、室温で2時間置いてウェル中の固相化ペプチド（20μg／ウェル）で吸収した。吸収を3回繰り返し、その結果生じる上清中のペプチド特異的IgGのレベルを測定した。
予想されたように、その反応性は対応ペプチドによる吸収によって大部分が減少したが、試験したすべてのケースにおいて、試験に用いた無関係なペプチドによっては減少しなかった（図５）。
【００２３】
実施例３
抗ペプチド活性の特異性
我々は次に、HCV-およびインフルエンザウィルス（Flu）-感染患者血清のSARS-CoV由来ペプチドに対する交差反応性について検討した。SARS-CoV患者、接触者、およびJ-HDの血清もまた、血清希釈100倍で同時に試験した。抗ペプチド活性について、各群につき12人の血清を試験した。SARS-CoV患者の血清における抗S791、M207、およびN161活性のレベルは、試験したいずれの群の血清のものよりも有意に高かった（図３）。慢性関節リウマチ（n＝15）および全身性エリテマトーデス（n＝7）から得た血清も本研究のため提供されたが、試験した血清はすべてこれら3ペプチドのいずれに対しても健常人と比較して有意な反応性は認められなかった（図３）。
【００２４】
考察
Wangら(非特許文献4:Wang J, 2003)は、SARS-CoV患者の血清によって認識される4つのエピトープペプチドを報告しており、それらの一つ、N66（位置161-182におけるヌクレオキャプシドタンパク質）ペプチドは、本発明のN161（位置161-175）ペプチドよりC末が7アミノ酸長い。これらの知見は、ヌクレオキャプシドタンパク質のこの領域が、SARS-CoVの免疫原性の高いエピトープの一つであることを示唆している。本研究で使用したS611ペプチドはまた、Wang ら(非特許文献4:Wang J, 2003)によって報告されたS599ペプチドと同じ配列を共有しているが、それは、一部のHCV感染患者の血清に対して交差反応性を示した（データ非表示）。それに対し、Wangらの研究では比較的高い親水性を有するペプチドが選択されていたため、本発明のS791ペプチドは免疫原性ペプチドの他の候補として試験されていなかった。未精製抗原でコートしたELISAキットを用いた研究において、SARS-CoVおよび全身性エリテマトーデスの間の交差反応性が示唆されていたが(非特許文献11：Wang YS, 2003)、本研究で使用した3つのペプチドはいずれも、慢性関節リウマチまたは全身性エリテマトーデスの患者血清に対して反応しなかった。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、SARS患者由来血清によって認識される42ペプチドを示すグラフである。
【図２】図２は、抗S791およびN161活性の用量依存曲線の代表的結果を示す。IgGのレベルは、それぞれ黒丸（患者）、および白丸、白四角、並びに白三角（J-HD３人）として示した。
【図３】図３は、HCV-およびインフルエンザウィルス（Flu）-感染患者血清のSARS-CoV由来ペプチドに対する交差反応性を検討した結果を示すグラフである。HCVまたはインフルエンザウィルス（Flu）を有する患者、SARS-CoV患者（S）、慢性関節リウマチ患者（RA）、全身性エリテマトーデス患者（SLE）、およびHD由来の血清の結果を示す。
【図４】図４は、感染後（６ヶ月）血清中のIgGのLuminexTMによる測定結果を、通常用いられているELISAによる測定結果と比較したものである。
【図５】図５は、吸収試験の結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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