(57)【要約】【課題】            天然物由来で副作用がなく、人体に対して安全であり、血圧低下作用の高いアンジオテンシン変換酵素阻害剤を提供すること。【解決手段】        マツタケをを有効成分として含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤。マツタケとしては、キシメジ科キシメジ属に属するマツタケ（Tricholoma matsutake (S. Ito et Imai) Singer）のほか、近縁種であるオウシュウマツタケ，アメリカマツタケを用いることもできる。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
マツタケを有効成分として含有する、アンジオテンシン変換酵素阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マツタケを有効成分として含有する、アンジオテンシン変換酵素阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧症は現代成人病の最大疾患ともいわれ、その治療あるいは予防は緊急かつ重大な課題となっている。生体の血圧上昇機構の一つであるレニン・アンジオテンシン系ではアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥと称することもある）は中心的な役割を果たしてい
る。すなわち、血圧上昇に不活性なアンジオテンシンＩはＡＣＥにより血管の筋肉を収縮させる作用のあるアンジオテンシンIIへと変換され血圧を上昇させる。一方、血管の筋肉を拡張させる作用があるブラジキニンはＡＣＥにより分解され、不活性化される。従って、このＡＣＥを阻害すれば、昇圧性ペプチドであるアンジオテンシンIIの生成を抑制し、降圧性ペプチドであるブラジキニンの分解も抑制して血圧の降下が可能である。
【０００３】
このＡＣＥの昇圧作用を阻害する治療薬として、例えば、カプトプリル（Ｄ−２−メチル−３−メルカプトプロパノイル−Ｌ−プロリン）などの合成治療薬が多数知られているが、これらはアレルギー症状、頭痛、めまい、ふらつき等の副作用をおこす場合がある。
【０００４】
一方、上述のような副作用のない天然物又はその分解物を用いる試みもなされ、例えば、牛乳カゼインをトリプシンで分解して得られるペプチド類（特許文献１〜４参照）、茶ポリフェノール（特許文献５参照）、豆科植物種子の抽出物（特許文献６参照）、米蛋白中のペプタイド（特許文献７参照）、そば脱穀種子及び／又はそば粉抽出物（特許文献８参照）、ニンニク抽出液（特許文献９参照）、ユーカリ属植物の抽出物（特許文献１０，１１参照）、果実ポリフェノール（特許文献１２，１３参照）、クロロゲン酸（非特許文献1参照）、アロニア果実の抽出物（特許文献１４参照）、ヨモギ、ウイキョウ、パパイヤ、アテモヤ、クダモノトケイソウ、春ウコン、ストレリチア（極楽鳥花）、カラシナ、ヘチマ、ホソバワダンおよびニガウリからなる群から選ばれた１種類以上の植物の乾燥粉末または抽出物（特許文献１５参照）、青麦若葉抽出物（特許文献１６参照）、ブナシメジ抽出物（特許文献１７参照）、バナバ葉（特許文献１８参照）等が提案されている。
【０００５】
本発明で用いるマツタケ（Tricholoma matsutake (S. Ito et Imai) Singer）は、キシメジ科キシメジ属に属する担子菌類で、特有の香りと歯切れのよさで、茸の王様ともいわれ、汎く食用に供されている。マツタケの含有成分及び有効性に関する研究もなされている。マツタケに含まれる、エルゴステロールはシクロデキストリンと併用して血管新生阻害作用を（特許文献１９参照）、β−グルカンは乳酸産生菌の加熱処理菌体と併用して感染抑制効果を（特許文献２０参照）、それぞれ発揮することが知られている。また、マツタケが、抗腫瘍効果を発揮することも知られている（特許文献２１〜２４参照）。しかしながら、これまでマツタケがアンジオテンシン変換酵素阻害効果を有することに関しては、全く知られていなかった。
【０００６】
【特許文献１】特開昭５９−４４３２３号公報
【特許文献２】特開昭５９−４４３２４号公報
【特許文献３】特開昭６１−３６２２６号公報
【特許文献４】特開昭６１−３６２２７号公報
【特許文献５】特開昭６３−２１４１８３号公報
【特許文献６】特開平４−２６１１２２号公報
【特許文献７】特開平５−２９４８４４号公報
【特許文献８】特開平５−９７７９８号公報
【特許文献９】特開平６−２５６３８７号公報
【特許文献１０】特開平６−１９９６７７号公報
【特許文献１１】特開平１１−６０４９８号公報
【特許文献１２】特開平７−２８５８７６号公報
【特許文献１３】特開平８−２５９４５３号公報
【特許文献１４】特開２００１−１７２１９１号公報
【特許文献１５】特開２００１−３３５４９４号公報
【特許文献１６】特開２００２−２２８号公報
【特許文献１７】特開２００２−２９９９５号公報
【特許文献１８】特開平１１−３３２５６１号公報
【特許文献１９】特開２００２−３０８７７７号公報
【特許文献２０】特開２００３−４０７８５号公報
【特許文献２１】特開２０００−１５９６８２号公報
【特許文献２２】特開平５−７０３６２号公報
【特許文献２３】特開平６−８０６９９号公報
【特許文献２４】特開平７−６７５７６号公報
【非特許文献１】食品研究成果情報，（９），２０−２１，１９９７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述した従来提案の天然物又はその分解物由来のＡＣＥ阻害剤は、合成のＡＣＥ阻害剤に比べ副作用の心配はないが、その効果は必ずしも満足できるものではない。従って本発明の目的は、天然物由来で副作用がなく、人体に対して安全であり、血圧低下作用の高いアンジオテンシン変換酵素阻害剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
先に述べた課題を解決するべく種々検討したところ、本発明者らは、マツタケが強力なアンジオテンシン変換酵素阻害作用があることを見出し本発明を完成した。
【０００９】
従って、本発明はマツタケを有効成分として含有するアンジオテンシン変換酵素阻害
剤を提供できる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害剤の有効成分であるマツタケは、血圧上昇因子であるアンジオテンシンIIを生成させ、降圧性ペプチドであるブラジキニンを分解させるアンジオテンシン変換酵素に対して高い阻害効果を有する。また、天然物であるため副作用の心配がなく、高血圧症の治療及び予防に極めて有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において用いるマツタケは、日本，朝鮮半島，沿海州，サハリン，千島列島に分布するキシメジ科キシメジ属に属するマツタケ（Tricholoma matsutake (S. Ito et Imai) Singer）のほか、近縁種であるオウシュウマツタケ，アメリカマツタケを用いることもできる。
【００１２】
マツタケは、担子菌に属するキノコの一種であり、一般に子実体が食用に供されており、本発明においてもその効果の点から子実体を用いることが好ましい。
【００１３】
マツタケは、子実体をそのまま若しくは乾燥させて用いても良い。またかかる子実体の抽出物を用いることもでき、またエタノールや水等の溶媒を用いて抽出して得られる抽出物を用いることもできる。本発明のアンジオテンシン変換酵素阻害効果の観点から、乾燥物特に凍結乾燥物を用いることが、最も好ましい。
【実施例】
【００１４】
実施例１〜３  マツタケ子実体の凍結乾燥粉末の調製
アメリカマツタケ子実体３ｋｇ，日本産マツタケ子実体３ｋｇ，オウシュウマツタケ子実体３ｋｇを、凍結乾燥機にて処理後、粉砕機にて粉砕し、マツタケ子実体の凍結乾燥粉末を調製した。アメリカマツタケ子実体乾燥物を実施例１、日本産マツタケ子実体乾燥物を実施例２、オウシュウマツタケ子実体乾燥物を実施例３とした。
【００１５】
比較例
市販のブナシメジ子実体１ｋｇを凍結乾燥機にて処理後、粉砕機にて粉砕し、比較例にかかるブナシメジ子実体乾燥物を調製した。
【００１６】
実施例４〜６  マツタケ子実体の超臨界二酸化炭素抽出物
実施例１〜３のマツタケ子実体乾燥物をそれぞれ超臨界抽出装置に投入し、４０℃において２５ＭＰａの圧力かで二酸化炭素の超臨界流体を用いて抽出した。４時間後に抽出物を回収し、それぞれ実施例４〜６にかかる超臨界二酸化炭素抽出物を得た。
【００１７】
実施例７〜９  マツタケ子実体の熱水抽出物
実施例１〜３のマツタケ子実体乾燥物各１ｋｇに水を２０Ｌ加え９０℃にて２０分間抽出した。その後抽出液をろ過してろ液を回収し、それぞれ実施例７〜９にかかる熱水抽出物を得た。
【００１８】
実施例１０〜１２  マツタケ子実体のエタノール抽出物
実施例１〜３のマツタケ子実体乾燥物各１ｋｇに５０容量％エタノール水溶液を２０Ｌ加え室温にて撹拌しながら２時間出した。その後抽出液をろ過してろ液を回収し、それぞれ実施例１０〜１２にかかるエタノール抽出物を得た。
【００１９】
試験例１  ＡＣＥ阻害活性
実施例１〜３のアンジオテンシン変換酵素阻害剤であるマツタケ子実体乾燥物と、比較例に示したブナシメジ子実体乾燥物についてアンジオテンシン変換酵素阻害効果を以下の方法により試験した。
【００２０】
［試験方法］
供試試料のＡＣＥ阻害活性は、基質として４−ヒプリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロ
イシン（和光純薬社製）を用い、これに供試試料溶液とＡＣＥ（和光純薬社製）液を加えて３７℃で反応し、生成するヒスチジルロイシンをＯ−フタルアルデヒドによって蛍光付与し、蛍光強度により測定することができる。具体的には、基質溶液（０．１ｍＬ，２ｍｇ／１ｍＬリン酸緩衝液ｐＨ８．５）にＡＣＥ液（０．１ｍＬ，０．２Ｕ／８ｍＬ）及び供試試料液０．０５ｍＬを加え、常法により反応させ（日本農芸化学会誌，Ｖｏｌ．５７，Ｎｏ．１１，１１４３−１１４６，１９８３年参照）、供試試料での蛍光強度をＢ、試料の代わりに水を加えたときの値をＡ、酵素の代わりに水を加えたときの値をＣとして供試試料のＡＣＥ阻害率を測定した。
【００２１】
ＡＣＥ活性（％）＝（Ｂ−Ｃ）×１００／Ａ
ＡＣＥ阻害率（％）＝１００−ＡＣＥ活性
【００２２】
［試験結果］
上述の方法により各試料のＡＣＥ阻害率を測定した。各試料のＡＣＥ阻害効果の比較は、求められる阻害率が５０％を示すときの阻害濃度（ＩＣ50 ｍｇ／ｍＬ）で示した。この結果を表１に示した。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
本発明のマツタケは、アンジオテンシン変換酵素阻害効果が知られているブナ子実体抽出物に比べアンジオテンシン変換酵素阻害活性が高く、アンジオテンシン変換酵素阻害物質として非常に有効であることが確認された。
【００２５】
試験例２  ＳＨＲでの血圧降下活性
実施例１〜３のマツタケ子実体乾燥物５００ｍｇ／ｋｇをＳＨＲ（自然発症高血圧ラット）に経口投与し、血圧降下活性を測定した。また対照区として蒸留水を用いた。そして、試験区、対照区ともに１群１０匹で実験を行い、血圧降下活性は次のようにして測定した。ＳＨＲの１２週齢の雄をチャールズリバー社から購入し、１週間予備飼育したのち、各濃度の試料又は対照をゾンデにより胃内経口投与し、一定時間ごとに３８℃で１０分間保温し、収縮期血圧を非観血式血圧測定装置（ソフトロン社製ＢＰ−９８）で測定した。結果を表２に示す。対照区では血圧の変化は認められないものの、試験区では投与後２時間から血圧が低下し始め、６時間後に最大の血圧降下活性（血圧変化量として−２３．４ｍｍＨｇ）を示した。また、血圧降下活性は２４時間後にも認められ、４８時間後にはもとの血圧にもどった。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
試験例３  健常ラットにおける血圧降下活性
実施例１から３のマツタケ子実体乾燥物５００ｍｇ／ｋｇをＷｉｓｔａｒ系ラットに経口投与し、血圧降下活性を測定した。また対照区として蒸留水を用いた。また、試験区、対照区ともに１群５匹で行い、１２週齢の雄のＷｉｓｔａｒ系ラットを用いる以外は実施例４と同様に血圧降下活性を測定した。結果を表３に示す。試験区、対照区ともに血圧の変化は見られなかった。このことから、マツタケの投与は、健常ラットの血圧に影響を与えないことが確かめられた。
【００２８】
【表３】
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