(57)【要約】【課題】  本発明では乾燥皮膚において生じる加温処理による痒みを評価するモデル動物を作製することを課題とする。【解決手段】  試験動物の無毛皮膚を乾燥皮膚とし、前記乾燥皮膚に物理的な刺激を与えることにより掻痒が惹起され、乾燥による掻痒を試験するモデル動物を作製できることを見出した。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理することを特徴とする皮膚掻痒モデル動物を作製する方法。  
【請求項２】
加温処理として、３０℃〜７０℃の恒温室に１分間〜６０分間試験動物を放置することを特徴とする請求項１に記載のモデル動物を作製する方法。  
【請求項３】
動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に加温処理をした皮膚掻痒モデル動物。  
【請求項４】
試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物に加温処理をして又は加温処理をしないでスクラッチ行動回数を計測し、加温処理をした試験動物のスクラッチ行動回数と加温処理をしなかった試験動物のスクラッチ行動回数を比較することを特徴とする乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みを評価する方法。
【請求項５】
試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理をした皮膚掻痒モデル動物を用いて、加温処理前に試験動物に試験薬剤を適用または適用しないで、加温処理試験動物のスクラッチ行動を計測し、試験薬剤適用群のスクラッチ行動回数と試験薬剤無適用群のスクラッチ行動回数とを比較することにより、乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価する方法。
【請求項６】
試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理をした皮膚掻痒モデル動物を用いて、加温処理後に試験動物に試験薬剤を適用または適用しないでスクラッチ行動を計測し、試験薬剤適用群のスクラッチ行動回数と試験薬剤無適用群のスクラッチ行動回数とを比較することにより、乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚掻痒モデル動物及びその作製方法、また、かかるモデル動物を用いて乾燥皮膚に生じる痒みを評価する方法及び試験薬剤の乾燥皮膚に生じる痒みに対する鎮痒効果を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
痒みは、大別すると末梢性と中枢性とに分けられる。末梢性の痒みは、皮膚表皮と真皮の境界部に存在する神経終末に作用して生じた痒みのインパルスが、求心性Ｃ繊維により伝達され脳に到達することで痒みとして認識されると考えられている。かかる痒みのメディエーターとしては、ヒスタミンが中心的起痒物質と考えられているが、その他にもプロスタグランジン、セロトニン、インターロイキン６、トリペプターゼ等がある。中枢性の痒みは、慢性腎疾患、肝疾患等の患者にみられ、内因性のモルヒネ様オピオイドペプチドがメディエーターとなって中枢神経組織に作用すると考えられている。
【０００３】
ところで、乾燥した皮膚には高い確率で痒みが発生することが判っている（非特許文献１）。乾燥した皮膚とは、皮膚のバリア機能の低下、角質層の水分保持機能の低下、水分蒸散量の増加等により、角層中の水分量が低下した潤いのないかさついた肌の状態の皮膚をいう。このような皮膚は、アトピー性皮膚炎、乾皮症（皮脂減少症）、胆汁うっ滞性肝障害、尿毒症等で観察され、弱い皮膚刺激に敏感に反応し、容易に痒みをきたすことになる。
【０００４】
乾燥した皮膚に痒みを引き起こす原因としては、服ズレ、下着によるしめつけ、気温の変化、日光等の外的刺激やアレルゲン（ハウスダスト、花粉、動物のフケや毛等）、内的因子等の刺激がある。かかる乾燥した皮膚に生じる痒みには抗ヒスタミン薬が効きにくく、ヒスタミン以外の痒み誘発物質の関与が指摘されているがメカニズムは未だ不明である。ヒスタミン感受性の神経経路がこれらの刺激には反応しないことから別のメカニズムの関与が示唆されている。最近の研究によって、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症等の難治性の痒みを伴う乾燥皮膚疾患者の皮膚では、求心性Ｃ繊維が表皮面にまで侵入して痒みの閾値の低下をもたらすことによって、弱い外的刺激にも敏感に反応して容易に掻痒が惹起されることが報告されている（非特許文献２）。ドライスキンでは、外的刺激が角層直下にまで侵入している求心性Ｃ繊維（知覚神経繊維）を直接刺激し、生じた活動電位がヒスタミン等のケミカルメディエーターを介さずに中枢と抹消に伝達され痒みが惹起されるものと思われる。
【０００５】
皮膚科領域の掻痒評価では、一般的にcompound48/80などの掻痒惹起物質を動物の皮下若しくは皮内に直接投与することで試験的に掻痒を生じたモデル動物のスクラッチ行動を観察している。スクラッチ行動はかゆみの程度に比例するということが実験的に確立しているので、掻痒惹起物質を用いることにより、痒みのメカニズム解明が進み鎮痒効果の高い薬剤のスクリーニングにも役立っている。ところが、乾燥皮膚に生じる痒みには、ヒスタミン以外の痒み誘発物質の関与が指摘され、また、メカニズムも未だ不明であることからモデル動物が十分に確立されていないのが現状である。
【０００６】
乾燥皮膚に生じる痒みを評価する方法は未だ確立しているとはいえないが、バリア破壊に伴う皮膚乾燥性掻痒モデルを用いて、皮膚バリアー機能を破壊した乾燥皮膚に生じる痒みの評価方法が知られている（特許文献１）。かかる方法は、皮膚の乾燥症状が、生活習慣、季節、環境あるいは皮膚疾患等の因子に依存して憎悪・寛解を繰り返す慢性的経過をとると考えて、有機溶媒処理と水処理を数日間繰り返し行うことによって、皮膚をバリア破綻させ慢性的乾燥状態に類似したモデルを作成し、皮膚の乾燥それ自体により生じる痒みを測定し評価する方法である。
【０００７】
しかしながらこの方法では、皮膚の乾燥が進み乾燥それ自体によって引き起こされる痒みの解明に役立つものの、乾燥した皮膚に日常的に生じる痒みを評価することができず、乾燥した皮膚に刺激によって引き起こされる痒みを評価する方法が求められていた。
すなわち、乾燥した皮膚では、例えば発汗、外気温の変化、化学繊維やウール、衣ズレ、衣服によるしめつけ、ダニやハウスダスト等の抗原物質、ある種の化学物質、入浴などの日常的に避けて生活することが困難な刺激によって、日常的に痒みが生じているのである。
【０００８】
そこで、乾燥した皮膚に外的刺激が加わって生じる痒みを確実に再現できる動物モデルの作製方法及び動物モデル、及び優れた鎮痒効果をもった外用剤を評価する方法が必要であった。
【０００９】
【特許文献１】特開２００１−３２１０１６号公報
【非特許文献１】原等、皮膚病診療１３、ｐ２１１−２１３、１９９１年
【非特許文献２】高森等、アレルギー・免疫、Ｖｏｌ．１０、Ｎｏ．５、２００３年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、乾燥した皮膚に加温処理をすることによって掻痒を生じるモデル動物及びその作製方法、また、かかるモデル動物を用いて乾燥皮膚に加温処理することによって生じる痒みを評価する方法及び乾燥皮膚に加温処理することによって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価する方法に関する。また、乾燥を伴う多くの皮膚疾患において、痒みは主要な症状の一つであり、それを客観的に評価・解明できる方法を提供することは非常に重要な課題である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明はかかる知見に基づいて開発されたものである。
すなわち本発明は、下記（１）〜（６）に掲げる方法またはモデル動物である：
（１）試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理することを特徴とする皮膚掻痒モデル動物を作製する方法、
（２）加温処理として、３０℃〜７０℃の恒温室に１分間〜６０分間試験動物を放置することを特徴とする（１）に記載の方法、
（３）動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に加温処理をした皮膚掻痒モデル動物、
（４）試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物に加温処理をして又は加温処理をしないでスクラッチ行動回数を計測し、加温処理をした試験動物のスクラッチ行動回数と加温処理をしなかった試験動物のスクラッチ行動回数を比較することを特徴とする乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みを評価する方法、
（５）試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理をした皮膚掻痒モデル動物を用いて、加温処理前に試験動物に試験薬剤を適用または適用しないで、加温処理試験動物のスクラッチ行動を計測し、試験薬剤適用群のスクラッチ行動回数と試験薬剤無適用群のスクラッチ行動回数とを比較することにより、乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価する方法、  
（６）試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理をした皮膚掻痒モデル動物を用いて、加温処理後に試験動物に試験薬剤を適用または適用しないでスクラッチ行動を計測し、試験薬剤適用群のスクラッチ行動回数と試験薬剤無適用群のスクラッチ行動回数とを比較することにより、乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価する方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理することにより掻痒が惹起されることを特徴とするモデル動物を作製する方法である。また、本発明は、かかる方法により作製された乾燥皮膚掻痒モデル動物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明で用いられる試験動物としては、特に制限されないが、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、ウサギ等の実験用動物が挙げられる。扱いやすさの観点からマウス、モルモット、ラット等の小動物がよく、特に好ましくはマウスである。また、商業的に入手できるものを用いることができ、種類（Ｃ３Ｈ系、ＢＡＬＢ／ｃ系など）や雌雄の別は問わない。試験動物の週齡としては、特に制限されないが、４〜１５週齡の動物が好ましい。
【００１４】
本発明で用いられる試験動物の無毛皮膚は、遺伝的ヘアレス動物の皮膚でもよく、あるいは、除毛・剃毛によって部分的に無毛状態とした皮膚であってもよい。試験動物のスクラッチ行動計測は、試験動物の後足によるスクラッチ行動を観察することによって行うため、動物が後肢で掻痒可能な範囲の皮膚が好ましく、背部や腹側部の皮膚を試験に用いるのが好ましい。
【００１５】
本発明において、試験動物の無毛皮膚には、テープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施す。これらの処理方法は、皮膚のバリアを破綻または皮膚に乾燥を引き起こすことが確立している公知の処理方法である。これらの処理は１種または２種以上の処理を組み合わせてもよく、１種の処理を適宜複数回繰り返してもよく、引き続く加温処理の前処理として施される。
【００１６】
各処理の具体的方法を述べると、テープストリッピングによる処理方法としては、粘着テープや接着剤を試験動物の無毛皮膚に貼り付けておき、その後剥がすことにより実施することができる。貼り付けるときには粘着力の高いテープや接着剤を用いて皮膚に密着するとバリア破綻を引き起こしやすい。粘着テープや接着剤の種類は特に限定されるものではなく市販のものを用いることができるが、粘着テープとしてはニチバン株式会社のセロテープ（登録商標）等、接着剤としてはシアノアクリレート系の接着剤等が好ましい。剥離回数は動物種やその体長に応じて適宜選択でき限定されないが、好ましくは１〜１０回、より好ましくは３〜６回である。
【００１７】
紫外線照射による処理方法としては、ソーラシュミレータ（擬似太陽装置）あるいは紫外線ランプ下に動物を放置することにより実施することができる。紫外線の種類は特に限定されるものではないが、UVBが好ましい。照射量も動物種やその体長に応じて適宜変更が可能であるが、最小紅斑量すなわち紫外線照射24時間後に紅斑はかろうじて確認できる程度の紫外線量が好ましく、例えば、１０ｍＪ／ｃｍ２〜５００ｍＪ／ｃｍ２、、好ましくは２５ｍＪ／ｃｍ２〜３００ｍＪ／ｃｍ２である。特に好ましくは５０ｍＪ／ｃｍ２〜１００ｍＪ／ｃｍ２である。また、紫外線照射回数は限定されるものではなく、適宜１日あたり１回〜数回、１日〜数日にわたり照射してもよい。
【００１８】
有機溶媒による処理方法は、有機溶媒を動物に直接塗布、あるいは有機溶媒を脱脂綿等含ませて無毛皮膚を被覆するなどして実施することができるが、脱脂綿等で被覆するのが好ましい。被覆する場合、脱脂綿等を無毛皮膚に被覆しておく時間は、使用する動物および使用する有機溶媒によって変動し得るが、一般には１秒間〜５分間、好ましくは５秒間〜３分間、特に好ましくは１０秒間〜６０秒程度である。処理に用いる有機溶媒は、それ自体が皮膚に対する腐蝕性の強いものを除いて特に限定されないが、アルコール類、ケトン類、エーテル類、ジメチルスルフォキシド等が例示され、なかでも、アセトンまたはアセトンとエーテル類の混合溶液が好ましく、アセトン：ジエチルエーテル１：１混合溶液の使用が特により好ましい。
【００１９】
界面活性剤による処理方法は、界面活性剤の水溶液またはアルコール溶液を動物に直接塗布、あるいは有機溶媒を脱脂綿等に含ませて無毛皮膚を被覆するなどして実施することができるが、直接塗布するのが好ましい。界面活性剤の種類は特に制限されず、陽イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤を用いることができる。なかでも、皮脂除去効果の高い陽イオン性界面活性が好ましく、ラウリル硫酸またはその塩がより好ましい。処理する場合の界面活性剤濃度は、水溶液またはアルコール溶液中の濃度として、動物皮膚への塗布が可能であれば特に限定されるものではないが、１％〜３０％、好ましくは３％から２０％、特に好ましくは５％〜１０％である。
【００２０】
本発明の試験動物には加温処理によって、試験動物に確実に掻痒が惹起される。乾燥した皮膚に痒みを生じさせる原因としては、衣服との摩擦や衣服の締めつけ、抗原への曝露等があるが、加温処理は特定の処理を施した無毛皮膚に痒みを確実に生じることができるという点で優れている。試験動物の無毛皮膚に前処理を施した後、加温処理を施すまでの時間は、最後の乾燥皮膚処理（テープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理）直後から４８時間後、好ましくは６時間後から３６時間後であり、特に好ましくは１２時間後から２４時間後である。
【００２１】
加温処理方法としては、恒温室（試験動物を飼育している通常室温より高い例えば室内温度３０℃〜７０℃程度、好ましくは４０℃〜６０℃程度）内に試験動物を１分〜６０分間程度好ましくは３分〜２０分間程度放置、ホットプレート（例えば、プレート温度３０℃〜４５℃程度）上に試験動物を１分〜６０分間程度好ましくは３分〜２０分間程度放置、赤外線照射（例えば、１分〜６０分間程度）、足浴（例えば、水温が３０℃〜４２℃程度の湯）させて１０分〜３０分間程度放置、試験動物の皮膚にホットカイロを貼付（例えば、５分〜３０分間程度）するなどの方法で行うことができる。
【００２２】
さらなる本発明は、試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に加温処理することにより生じた試験動物のスクラッチ行動回数と加温処理を与えなかった試験動物のスクラッチ行動回数を計測し、それらを比較することにより乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みを評価する方法である。
【００２３】
試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施した後に当該試験動物を加温処理すると、掻痒が惹起されて自発的に後肢でスクラッチ行動を行う。加温処理直後から３０分以内に、スクラッチ行動の計測を開始することが好ましく、さらに好ましくは１０分以内、特に好ましくは５分以内に計測を開始する。加温処理をしたままにスクラッチ行動回数の計測を開始してもよい。例えば、４０℃の恒温室に試験動物を放置して１５分間の加温した後、試験動物を室温に戻すことなく４０℃の恒温室中でスクラッチ行動の計測を行ってもよく、６０℃の恒温室に試験動物を放置して５分間加温した後、試験動物を３０℃の恒温室中でスクラッチ行動の計測を行ってもよい。
【００２４】
本発明の試験動物に惹起されたスクラッチ行動（引っ掻き行動）を計測する場合、直接目視で行ってもよいが、無人環境下においてビデオカメラ等によって記録ならびに観察、計測を行うことが好ましい。計測は試験動物が後肢で掻痒する回数を計測することによって行う。スクラッチ行動の回数を計測する時間については、乾燥皮膚の状態や加温処理の程度によっても異なるため、限定されるものではないが、通常計測時間は５〜９０分間、好ましくは２０〜６０分間の計測を行う。
【００２５】
本発明の方法によれば、試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物に加温処理をして又は加温処理をしないでスクラッチ行動回数を計測し、加温処理をした試験動物のスクラッチ行動回数と加温処理をしなかった試験動物のスクラッチ行動回数を比較することを特徴とする乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みを評価することができる。掻痒の程度は、テープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理の処理手法や処理回数といった条件や加温処理の時間や温度といった条件により変動する。
【００２６】
なお、試験動物は平常時においても、すなわちテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施さない場合であっても、試験動物は若干のスクラッチ行動を行っている。また、テープストリッピング処理、有機溶媒（アセトン：エーテルの１：１混液）処理または界面活性剤処理では乾燥それ自体による掻痒は生じないが、有機溶媒処理と水処理を組み合わせて複数回処理した乾燥皮膚には、皮膚の乾燥それ自体により痒みが生じることがわかっている（皮膚の科学、第１巻、増刊２号、2002年12月、宮本隆行  医学のあゆみ  Vol.197、No.8、p614-615、2001年参照）。そこで、平常時のスクラッチ回数を相殺しつつ比較したり、熱処理を行わない試験動物のスクラッチ行動回数が平常時のスクラッチ行動回数を上回るような条件下では、かかる乾燥それ自体による痒みのスクラッチ行動回数を相殺しつつ比較することで、より正確に本発明により惹起される乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みを評価することができる。
【００２７】
また本発明の方法は、試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理をした皮膚掻痒モデル動物を用いて、加温処理前に試験動物に試験薬剤を適用または適用しないで、加温処理試験動物のスクラッチ行動を計測し、試験薬剤適用群のスクラッチ行動回数と試験薬剤無適用群のスクラッチ行動回数とを比較することにより、乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価する方法である。さらに、本発明の方法は、試験動物の無毛皮膚にテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施し、その後に試験動物を加温処理をした皮膚掻痒モデル動物を用いて、加温処理後に試験動物に試験薬剤を適用または適用しないでスクラッチ行動を計測し、試験薬剤適用群のスクラッチ行動回数と試験薬剤無適用群のスクラッチ行動回数とを比較することにより、乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価する方法である。試験薬剤適用群のスクラッチ行動回数が試験薬剤無適用群よりも有意に少なければ、該試験薬剤が鎮痒剤として有効であり、鎮痒効果があると評価することができる。
【００２８】
本発明の動物モデルによって評価することができる試験薬剤としては、単一あるいは複数の成分を含有する薬剤が挙げられる。試験対象となる成分に特に制限はないが、例えば抗ヒスタミン成分、保湿成分、抗炎症成分等が挙げられ、保湿成分が好適な試験薬剤である。また、試験薬剤は、製剤の形態で試験に供してもよく、例えば、乳剤、クリーム剤、液剤、ゲル剤等様々な形態の製剤が挙げられる。投与方法としては、経皮投与、経口投与等の方法を適宜選択することができ、試験動物の体重、年齢、性別等に応じて投与量を適宜調整することができる。
試験薬剤の投与時期としては、加温処理前に適用してもよいし加温処理後に適用してもよい。加温処理前に適用する場合には、試験薬剤の薬効発現時間を考慮して試験薬剤適用から加温処理までの時間を適宜調整することができる。例えば、経口投与で試験薬剤を投与した場合などは効果発現までに時間が必要なのでテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理前から数日間にわたり適用してもよく、経皮投与で試験薬剤を投与する場合であれば、テープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理の後に、該処理部位に試験薬剤を適用してすぐに加温処理をしてもよい。
また、加温処理後に適用する場合には、加温処理をしながら試験薬剤を適用してもよく、掻痒の発生程度を考慮して加温処理から試験薬剤適用までの時間を適宜調整することができる。例えば、６０℃の恒温室で５分間の加温処理をする場合、試験動物を室温に戻した直後に試験薬剤を適用してもよく、４２℃の湯で試験動物を足浴させながらテープストリッピング処理等の処理部位に試験薬剤を適用してもよい。
【００２９】
なお、試験動物は平常時においても、すなわちテープストリッピング処理、紫外線照射処理、有機溶媒処理または界面活性剤処理を施さない場合であっても、試験動物は若干のスクラッチ行動を行っている。また、テープストリッピング処理、有機溶媒（アセトン：エーテルの１：１混液）処理または界面活性剤処理では乾燥それ自体による掻痒は生じないが、有機溶媒処理と水処理を組み合わせて複数回処理した乾燥皮膚には、皮膚の乾燥それ自体により痒みが生じることがわかっている（皮膚の科学、第１巻、増刊２号、2002年12月、宮本隆行  医学のあゆみ  Vol.197、No.8、p614-615、2001年参照）。そこで、平常時のスクラッチ回数を相殺しつつ比較したり、加温処理を行わない試験動物のスクラッチ行動回数が平常時のスクラッチ行動回数を上回るような条件下では、かかる乾燥それ自体による痒みのスクラッチ行動回数を相殺しつつ比較することで、より正確に本発明により惹起される乾燥皮膚に加温処理によって生じる痒みに対する試験薬剤の鎮痒効果を評価することができる。
【実施例】
【００３０】
以下に本発明を実施例及び試験例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例等に限定されるものではない。
【００３１】
試験例１  紫外線照射処理した乾燥皮膚に加温処理をした掻痒惹起試験
試験動物としては雌性ヘアレスマウスＨＯＳ：ＨＲ−１を用いた。動物飼育室の飼育条件は、室温２３±２℃、湿度５５±１５%、換気回数は１５回／１時間、照明時間は１日１２時間（７：００〜１９：００）とした。また、固形飼料および水は自由に摂取させ、１週間以上の馴化飼育後動物の一般状態に問題のない個体を試験に供した。
試験には、試験時６週齡の雌性ヘアレスマウスＨＯＳ：ＨＲ−１を1群あたり６匹使用した。２群のへアレスマウス背部に、１ｍＷ／ｃｍ２のＵＶＢを９０秒間照射（ＵＶＢ線量９０ｍＪ／ｃｍ２）した（ＵＶＢ照射回数１回）。また、２群のヘアレスマウス背部には、１ｍＷ／ｃｍ２のＵＶＢを９０秒間照射（ＵＶＢ線量９０ｍＪ／ｃｍ２）処理を１日１回行ない、このＵＶＢ照射処理を連続して３日間実施した（ＵＶＢ照射回数３回）。
【００３２】
次に、最後のＵＶＢ照射から１６時間後にヘアレスマウスを６０℃の恒温室に５分間保持して加温処理を行った。恒温室からヘアレスマウスを出して室温に放置し、２分後にスクラッチ回数の計測を開始し２０分間のスクラッチ回数をカウントした。対照として、未処理ヘアレスマウス、ＵＶＢ処理のみのヘアレスマウス、加温処理のみのヘアレスマウスについてスクラッチ回数をカウントした。掻痒発生率（％）は、ＵＶＢ照射を１回行いかつ熱処理をしたヘアレスマウスのスクラッチ回数を１００として算出した。
結果は表１に示す。
【００３３】
【表１】
2005143502.tif 000002
【００３４】
試験に使用したヘアレスマウスは、平常時においても２０分間に４．７回のスクラッチ行動を行っていた。ＵＶＢ照射処理のみ実施したヘアレスマウスは、平常時のスクラッチ回数とほぼ同程度のスクラッチ行動を行い、皮膚が乾燥したことそれ自体による掻痒は生じていないことがわかった。また、加温処理のみ実施したヘアレスマウスは、平常時のスクラッチ回数とほぼ同程度のスクラッチ行動を行い、加温処理したことそれ自体による掻痒は生じていないことがわかった。  
一方、ＵＶＢ照射処理したヘアレスマウスに更に加温処理を施したヘアレスマウスでは掻痒が発生し、スクラッチ回数が顕著に増大することが確認された。また、ＵＶＢ照射処理の回数が１回、３回では加温処理による掻痒が同程度に発生することが判った。
以上のことから、ＵＶＢ照射処理したヘアレスマウスの無毛皮膚に、さらに加温処理を施したヘアレスマウスが、乾燥皮膚に生じる掻痒モデル動物として有用であることが示された。また、無毛皮膚に簡便な処理工程を経た後に加温処理を行うことで、平常時の８倍のスクラッチ行動を確実に惹起させることができ、痒みを感度よく評価することができ有用である。
【００３５】
試験例２  界面活性剤処理した乾燥皮膚に加温処理をした掻痒惹起試験
試験動物としては雌性ヘアレスマウスＨＯＳ−ＨＲ−１を用いた。動物飼育室の飼育条件は、室温２３±２℃、湿度５５±１５%、換気回数は１５回／１時間、照明時間は1日１２時間（７：００〜１９：００）とした。また、固形飼料および水は自由に摂取させ、１週間以上の馴化飼育後動物の一般状態に問題のない個体を試験に供した。
試験には、試験時６週齡の雌性ヘアレスマウスＨＯＳ−ＨＲ−１を1群あたり６匹使用した。２群のへアレスマウス背部に、７．５％ＳＤＳ（和光純薬工業株式会社製）−５０％エタノール水溶液１００μｌを塗布（ＳＤＳ塗布回数１回）。また、２群のヘアレスマウス背部には、７．５％ＳＤＳ−５０％エタノール水溶液１００μｌ塗布処理を１日１回行ない、このＳＤＳ塗布を連続して３日間実施した（ＳＤＳ塗布回数３回）。
【００３６】
次に、最後のＵＶＢ照射から１６時間後にヘアレスマウスを６０℃の恒温室に５分間保持して加温処理を行った。恒温室からヘアレスマウスを出して室温に放置し、２分後にスクラッチ回数の計測を開始し２０分間のスクラッチ回数をカウントした。対照として、未処理ヘアレスマウス、ＳＤＳ処理のみのヘアレスマウス、加温処理のみのヘアレスマウスについてスクラッチ回数をカウントした。掻痒発生率（％）は、ＵＶＢ照射を１回行いかつ熱処理をしたヘアレスマウスのスクラッチ回数を１００として算出した。
結果は表２に示す。
【００３７】
【表２】
2005143502.tif 000003
【００３８】
試験に使用したヘアレスマウスは、平常時においても２０分間に５．９回のスクラッチ行動を行っていた。ＳＤＳ塗布処理（１回または３回）のみ実施したヘアレスマウスは、平常時のスクラッチ回数とほぼ同程度のスクラッチ行動を行い、皮膚が乾燥したことそれ自体による掻痒は生じていないことがわかった。また、加温処理のみ実施したヘアレスマウスは、平常時のスクラッチ回数とほぼ同程度のスクラッチ行動を行い、加温処理したことそれ自体による掻痒は生じていないことがわかった。  
一方、ＳＤＳ塗布処理したヘアレスマウスに更に加温処理を施したヘアレスマウスでは掻痒が発生し、スクラッチ回数が顕著に増大することが確認された。また、ＳＤＳ塗布処理の回数が１回、３回では加温処理による掻痒が同程度に発生することが判った。
以上のことから、ＳＤＳ塗布処理したヘアレスマウスの無毛皮膚に、さらに加温処理を施したヘアレスマウスが、乾燥皮膚に生じる掻痒モデル動物として有用であることが示された。また、無毛皮膚に簡便な処理工程を経た後に加温処理を行うことで、平常時の７倍のスクラッチ行動を確実に惹起させることができ、痒みを感度よく評価することができ有用である。
【００３９】
試験例３  有機溶媒処理した乾燥皮膚に加温処理をした掻痒惹起試験
試験動物としては雌性ヘアレスマウスＨＯＳ−ＨＲ−１を用いた。動物飼育室の飼育条件は、室温２３±２℃、湿度５５±１５%、換気回数は１５回／１時間、照明時間は1日１２時間（７：００〜１９：００）とした。また、固形飼料および水は自由に摂取させ、１週間以上の馴化飼育後動物の一般状態に問題のない個体を試験に供した。
試験には、試験時６週齡の雌性ヘアレスマウスＨＯＳ−ＨＲ−１を1群あたり６匹使用した。２群のへアレスマウス背部に、アセトン：エーテル＝１：１混和溶液を含ませた脱脂綿を押し当て30秒間保持した（アセトン：エーテル処理回数１回）。また、２群のへアレレスマウス背部には、アセトン：エーテル＝１：１混和溶液を含ませた脱脂綿を押し当て30秒間保持した直後に、同じ部位に蒸留水を含ませた脱脂綿を30秒間保持した（アセトン：エーテル＋水処理回数１回）。
【００４０】
次に、最後のアセトン処理または水処理から１６時間後にヘアレスマウスを６０℃の恒温室に５分間保持して加温処理を行った。恒温室からヘアレスマウスを出して、室温に放置し、２分後にスクラッチ回数の計測を開始し２０分間のスクラッチ回数をカウントした。対照として、未処理ヘアレスマウス、有機溶媒（または、有機溶媒＋水）処理のみのヘアレスマウス、加温処理のみのヘアレスマウスについてスクラッチ回数をカウントした。掻痒発生率（％）は、アセトン処理を１回行いかつ熱処理をしたヘアレスマウスのスクラッチ回数を１００として算出した。
結果は表３に示す。
【００４１】
【表３】
2005143502.tif 000004
【００４２】
試験に使用したヘアレスマウスは、平常時においても２０分間に５．２回のスクラッチ行動を行っていた。アセトン：エーテル処理またはアセトン：エーテル＋水処理のみ実施したヘアレスマウスは、平常時のスクラッチ回数とほぼ同程度のスクラッチ行動を行い、皮膚が乾燥したことそれ自体による掻痒は生じていないことがわかった。また、加温処理のみ実施したヘアレスマウスは、平常時のスクラッチ回数とほぼ同程度のスクラッチ行動を行い、加温処理したことそれ自体による掻痒は生じていないことがわかった。  
一方、アセトン：エーテル処理またはアセトン：エーテル＋水処理したヘアレスマウスに更に加温処理を施したヘアレスマウスでは掻痒が発生し、スクラッチ回数が顕著に増大することが確認された。また、アセトン：エーテル単独処理及びアセトン：エーテルと水の併用処理では、加温処理による掻痒が同程度に発生することが判った。
以上のことから、アセトン：エーテル処理またはアセトン：エーテル＋水処理したヘアレスマウスの無毛皮膚に、さらに加温処理を施したヘアレスマウスが、乾燥皮膚に生じる掻痒モデル動物として有用であることが示された。また、無毛皮膚に簡便な処理工程を経た後に加温処理を行うことで、平常時の７倍のスクラッチ行動を確実に惹起させることができ、痒みを感度よく評価することができ有用である。
【００４３】
試験例４  乾燥皮膚の掻痒動物モデルを用いた試験薬剤の評価試験
試験動物としては雌性ヘアレスマウスＨＯＳ−ＨＲ−１を用いた。動物飼育室の飼育条件は、室温２３±２℃、湿度５５±１５%、換気回数は１５回／１時間、照明時間は1日１２時間（７：００〜１９：００）とした。また、固形飼料および水は自由に摂取させ、１週間以上の馴化飼育後動物の一般状態に問題のない個体を試験に供した。
試験には、試験時６週齡の雌性ヘアレスマウスＨＯＳ−ＨＲ−１を1群あたり６匹使用した。６群のへアレスマウス背部に、へアレスマウス背部に、１ｍＷ／ｃｍ２のＵＶＢを９０秒間照射（ＵＶＢ線量９０ｍＪ／ｃｍ２）した（ＵＶＢ照射回数１回）。また、６群のへアレスマウス背部に、７．５％ＳＤＳ（和光純薬工業株式会社製）−５０％エタノール水溶液１００μｌを塗布（ＳＤＳ塗布回数１回）。ＵＶＢ照射またはＳＤＳ処理の１６時間後に、３％１，３ブチレングリコール水溶液、１０％尿素（和光純薬工業株式会社製）−３％１，３ブチレングリコール水溶液、２％グリシン（和光純薬工業株式会社製）−３％１，３ブチレングリコール水溶液、０．３％ヘパリン類似物質（共和薬品工業株式会社製）−３％１，３ブチレングリコール水溶液、１％ジフェンヒドラミン（金剛化学株式会社製）−３％１，３ブチレングリコール水溶液１００μｌを塗布した。塗布後に、３０分間飼育室にてヘアレスマウスを放置した。
【００４４】
次に、ヘアレスマウスを６０℃の恒温室に５分間保持して加温処理を行った。恒温室からヘアレスマウスを出して、室温に放置し、２分後にスクラッチ回数の計測を開始し２０分間のスクラッチ回数をカウントした。対照として、未処理ヘアレスマウス、有機溶媒（または、有機溶媒＋水）処理のみのヘアレスマウス、加温処理のみのヘアレスマウスについてスクラッチ回数をカウントした。掻痒発生率（％）は、アセトン処理を１回行いかつ熱処理をしたヘアレスマウスのスクラッチ回数を１００として算出した。
対照としては、同様にＵＶＢ照射後に試験薬剤を塗布せずに加温処理を行ったヘアレスマウス（試験薬剤無塗布群）についてスクラッチ回数をカウントした。
以下の式から掻痒抑制率（％）を算出した。
掻痒抑制率（％）＝（試験薬剤無塗布群のスクラッチ回数−試験薬剤塗布群のスクラッチ回数）÷（試験薬剤無塗布群のスクラッチ回数）×100
結果は表４に示す。
【００４５】
【表４】
2005143502.tif 000005
【００４６】
臨床的に乾燥によって生じる痒みに有効だといわれている薬剤には、尿素、ヘパリン類似物質がある（「皮膚科診療プラクティス」文光堂、ｐ９−１８参照）。一方、抗ヒスタミン剤（ジフェンヒドラミンなど）は、乾燥によって生じる痒みには有効に働かないことが知られている。試験の結果、尿素及びヘパリン類似物質には、無毛皮膚に簡便な処理（ＵＶＢ照射処理またはＳＤＳ処理）工程を経た後に加温処理した皮膚に生じる掻痒に高い鎮痒効果があることが確認された。反対に、強い抗ヒスタミン作用を有するジフェンヒドラミンの鎮痒効果が弱いことが確認された。従って、ＵＶＢ照射処理したヘアレスマウスに熱処理を施すことによって掻痒を惹起する系を用いてスクラッチ行動を計測することで、試験薬剤の掻痒改善効果を評価することができることが確認された。
また、１，３−ブチレングリコール、グリシンの乾燥による痒みに対する効果はこれまで検討されていなかったが、ＵＶＢ照射またはＳＤＳ処理し、さらに加温処理を施したヘアレスマウスを掻痒のモデル動物として試験を行ったところ、１，３−ブチレングリコールには鎮痒効果がないが、グリシンには高い鎮痒効果があることが確認された。
以上のことから、ＵＶＢ照射処理またはＳＤＳ処理したヘアレスマウスに加温処理を施したヘアレスマウスに生じるスクラッチ行動を計測することで、１，３−ブチレングリコール、グリシンのほかにも試験薬剤の掻痒改善効果を評価できることが示された。