(57)【要約】    【課題】  ボツリヌス毒素を経皮的に作用させる顔面用シワ治療剤を提供する。    【解決手段】  シート状基材にボツリヌス毒素が含有させた顔面用シワ治療剤で、シート状基材は、ゲル状、スポンジ状又はフィルム状のいずれかから選ばれ、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、キチン、キトサン又はそれらの混合物からなる群より選ばれる１種以上である。シート状基材に皮膚透過性亢進薬剤が含有され、皮膚透過性亢進薬剤はリパーゼ、プロテアーゼ、アセトン／エーテル溶液のうち、少なくとも１種以上選択される【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シート状基材にボツリヌス毒素が含有されたことを特徴とする顔面用シワ治療剤。
【請求項２】
前記シート状基材が、ゲル状、スポンジ状又はフィルム状のいずれか一つから選ばれたことを特徴とする請求項１に記載の顔面用シワ治療剤。
【請求項３】
前記シート状基材が、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、キチン、キトサン又はそれらの混合物からなる群より選ばれる１種以上であることを特徴とする請求項１または２に記載の顔面用シワ治療剤。
【請求項４】
前記シート状基材に皮膚透過性亢進薬剤が含有されたことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の顔面用シワ治療剤。
【請求項５】
前記皮膚透過性亢進薬剤は、リパーゼ、プロテアーゼ及びアセトン／エーテル溶液のうち、少なくとも１種以上選択されたことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の顔面用シワ治療剤。
【請求項６】
前記皮膚透過性亢進薬剤が予め細胞間隙を拡げる処置が施された皮膚部位に皮膚透過性亢進するための薬剤であることを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の顔面用シワ治療剤。
【請求項７】
前記ボツリヌス毒素がＡ型ボツリヌス毒素であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の顔面用シワ治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、美容目的の治療における顔面用シワ治療剤に関し、詳しくは、ボツリヌス毒素を経皮的に作用させる顔面用シワ治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般に、シワは、肌の乾燥、紫外線による日焼け、加齢による老化、表情の変化、体調の変化等が要因となってできると考えられている。
【０００３】
特に、表情シワは、笑ったり、怒ったり、泣いたりした時の表情の変化によって顔の眉間、目尻、額などに現れて出来る深く長いシワである。
【０００４】
最近の美容・形成外科の分野では、この表情シワをなくしたいという美容・形成の患者の要望に対して、顔面を中心とした表情シワ治療にボツリヌス毒素注射を使用した治療法が実施されている。
【０００５】
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ又はＧ型のボツリヌス菌のボツリヌス毒素の１種類又はこれらの神経毒の２種以上の混合物を含有する医薬製剤を美容治療のための用途に使用された治療薬が知られている（特許文献１参照）。
【０００６】
一方、皮膚のしわ、かさつき、ざらつき等を改善するために、α−ヒドロキシ酸、これらの塩及び誘導体よりなる群より選んだ１種以上と、ムコ多糖類とを併用して配合した皮膚外用剤が知られている（特許文献２参照）。
【０００７】
また、しわを防止し、改善し、減少させるために、レチノキシトリメチルシランの組成物、およびその使用方法が知られている（特許文献３参照）。
【０００８】
さらに、皮膚しわを改善するためのものとしては、ヒアルロン酸蓄積促進剤が知られている（特許文献４参照）。
【特許文献１】特表２００３−５０５３４３号公報
【特許文献２】特開２００２−２０５９３４号公報
【特許文献３】特開２００３−１８３１６４号公報
【特許文献４】特開２００３−２３８４３２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、上記治療薬は、ジストニー又は痙攣筋肉に直接投与する注射溶液として使用したものであった。また、美容・形成の患者は、シワ治療の施術に対して、注射投与による苦痛や恐怖感を伴い、さらに注射投与によってできる注射針の損傷が残るため、実際に治療を受ける際の躊躇や不安感は非常に大きかった。
【００１０】
本発明の目的は、特に、顔面の表情シワ治療に有効であり、注射を投与することなく、ボツリヌス毒素を経皮的に作用させる顔面用シワ治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
これらの問題点を解決すべく本発明者が鋭意研究を重ねた結果、ボツリヌス毒素が含有されたシート状基材を患部に貼付することすなわち、シート状基材を用いてボツリヌス毒素を経皮的に投与させることで、皮膚からの優れた吸収性を示し、かつ、血中薬物濃度を長時間維持することができ、生物学的半減期が延長され、徐放的に顔面のシワの治療効果に顕著に作用することを見出し、本発明の顔面用シワ治療剤を完成するに至った。
【００１２】
本発明の第一の構成は、シート状基材にボツリヌス毒素が含有された顔面用シワ治療剤を要旨とする。
【００１３】
本発明の第二の構成は、上記第一の構成において、前記シート状基材が、ゲル状、スポンジ状又はフィルム状のいずれか一つから選ばれたことを特徴とする。
【００１４】
本発明の第三の構成は、上記第一または第二の構成において、前記シート状基材が、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、キチン、キトサン又はそれらの混合物からなる群より選ばれる１種以上であることを特徴とする。
【００１５】
本発明の第四の構成は、上記第一乃至第三のいずれか１の構成において、前記シート状基材に皮膚透過性亢進薬剤が含有されたことを特徴とする。
【００１６】
本発明の第五の構成は、上記第一乃至第四のいずれか１の構成において、前記皮膚透過性亢進薬剤は、リパーゼ、プロテアーゼ及びアセトン／エーテル溶液のうち、少なくとも１種以上選択されたことを特徴とする。
【００１７】
本発明の第六の構成は、上記第一乃至第五のいずれか１の構成において、前記皮膚透過性亢進薬剤が予め細胞間隙を拡げる処置が施された皮膚部位に皮膚透過性亢進するための薬剤であることを特徴とする。
【００１８】
本発明の第七の構成は、上記第一乃至第六のいずれか１の構成において、前記ボツリヌス毒素がＡ型ボツリヌス毒素であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の顔面用シワ治療剤は、ボツリヌス毒素が含有されたシート状基材を患者のシワ部分に貼付することすなわち、シート状基材を用いてボツリヌス毒素を経皮的に投与させることで体内に吸収される。
【００２０】
ボツリヌス毒素をシート状基材で経皮的に投与させることが、皮膚からの優れた吸収性を示し、血中薬物濃度を長時間維持することができ、生物学的半減期が延長され、徐放的に顔面のシワの治療効果に顕著に作用する。
【００２１】
また、本発明の顔面用シワ治療剤は、従来の注射投与による苦痛や恐怖感を取り除くことができ、さらには注射投与によってできる注射針の損傷も発生することがないので、患者の躊躇や不安が解消される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
【００２３】
一般に、ボツリヌス毒素は、既知の方法で、ボツリヌス菌を発酵槽内で増殖させ、次いで、発酵混合物を採り、精製することによって商業的に得ることが可能である。
【００２４】
そのうち、Ａ型ボツリヌス毒素は、単離精製度が最も高く、安定しており、かつ、最も効力が強いとされている。ボツリヌス菌が産生する毒素、すなわち、ボツリヌストキシンが筋肉の収縮時に産生されるアセチルコリンという物質の働きをブロックする働きをもち、これによって筋肉の働きを局所的に抑制することができる。
【００２５】
Ａ型ボツリヌス毒素は、現在複数の会社から市販され、例えば、米国のアラーガン社からは、商品名「ボトックス（登録商標「ＢＯＴＯＸ」）として販売されている。また、商業的に入手することができる毒素製品の各バイアルは、１００単位の毒素を含むように調製されている。
【００２６】
本発明のＡ型ボツリヌス毒素の濃度は、厳密なものではなく、広範囲にて選択できるものであり、通常、美容・形成の患者に投与するＡ型ボツリヌス毒素の投与量は、シート状基材のサイズ、厚み、デリバリ・スピードや美容・形成の患者の年齢、体重、部位、シワの深さ等の形態により適宜選択決定されるが、通常の美容・形成の患者のシワ治療に対しては、１人当たり合計５００単位を上限に投与する。ただし、１ヶ月以内の再投与は避けるべきである。
【００２７】
特に、Ａ型ボツリヌス毒素は、表情筋が収縮することによって、生じる表情シワに有効である。ボツリヌス毒素を顔面の表情シワに経皮的に作用させることにより、筋肉の働きを局所的に抑制することができる。
【００２８】
本発明の顔面用シワ治療剤は、ボツリヌス毒素を経皮的に導入するシート状基材であって、シート状基材の構造は、実質的にゲル状、スポンジ状又はフィルム状の構造を有するものである。また、２層以上の複層構造や多孔質構造を有するものであってもよい。
【００２９】
本発明で用いられるシート状基材の形状、厚さおよび大きさは、適用される顔面のシワの形状や深さによって適宜選択して成形されるが、例えば、眼周囲用に貼付する場合には、シート状基材の厚さは、０．５〜５ｍｍが好ましく、０．５〜１．５ｍｍがより好ましい。また、大きさは、２０×２０ｍｍなどに成形する。
【００３０】
ゲル状、スポンジ状又はフィルム状の基材は、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、キチン、キトサン又はそれらの混合物を用いることができ、これらの中で顔面周辺の線維芽細胞の活性化を促し、顔面のシワ治療を促進するには、コラーゲンがより好ましい。特にコラーゲンは、例えば、アテロコラーゲンなどのように生体適合性を有するものであることが好ましい。
【００３１】
適用部位でのボツリヌス毒素の放出は、ボツリヌス毒素の拡散に基づくものであるが、ボツリヌス毒素の放出速度は、シート状基材の溶解性によって調節することができる。本発明のシート状基材は、紫外線の照射時間を変化させることで溶解性を調節することができる。
【００３２】
すなわち、初期に大量にシワ部分にボツリヌス毒素を放出させるには、紫外線の照射時間を短くして架橋することで、シート状基材の溶解性を高めてボツリヌス毒素の放出を促進することができる。
【００３３】
シート状基材に用いられるヒアルロン酸は、創傷などを負った場合に、初期の段階で細胞から産生される生理活性物質であり、顔面のシワ治療過程において表皮細胞および線維芽細胞のいずれもがコラーゲンシート状基材上で良好に移動する上で必要なものであるといわれている。ヒアルロン酸は、細胞の足場をゆるやかにすることにより細胞を移動しやすくするという機能を果たしていると考えられている。
【００３４】
ヒアルロン酸は、コラーゲンシート状基材を作製する際にコラーゲンの０．１ｗ／ｗ％〜５ｗ／ｗ％の濃度で用いられる。
【００３５】
一方、ボツリヌス毒素の放出速度を遅くして徐放的に用いる場合には、紫外線の照射時間を長くして架橋することで、シート状基材の溶解性を低下させることができる。
【００３６】
シート状基材を一定の溶解性を持たせるためには、紫外線の照射が必要である。その紫外線の照射は、紫外線に感度のあるアミノ酸を持ったコラーゲン同士で架橋させる目的で行う。架橋に用いる紫外線の主波長は、特に限定しないが、効果的に架橋する観点から、２５０〜２７０ｎｍが好ましい。有効な耐水性、物理的強度が得られるシート状基材として、単位面積当たりの紫外線量は、１０００〜５０００ｍＷｓｅｃ／ｃｍ2の範囲が好ましい。また、有効な溶解性が得られるシート状基材として、架橋に用いる紫外線の照射時間は、５〜２０分間がより好ましい。
【００３７】
具体的に、架橋剤の例としては、たとえば、グルタルアルデヒド、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリグリセロールポリグリシジルエーテル，グリセロールポリグリシジルエーテル、ヘキサメチレンジイソシアネートなどが挙げられる。
【００３８】
皮膚透過性亢進薬剤として、角質層間脂質を分解する酵素であるリパーゼ、デスモゾームを消化するプロテアーゼ、角質バリアを破壊するアセトン／エーテル溶液を使用することにより、Ａ型ボツリヌス毒素がいっそう皮膚に浸透しやすくなり、効力を発揮することができる。
【００３９】
２層以上の複層構造からなるシート状基材においては、皮膚接触面であるシート状基材の表面には皮膚透過性亢進薬剤を、またシート状基材の裏面にはＡ型ボツリヌス毒素を塗布して保持させることも可能である。
【００４０】
さらに、Ａ型ボツリヌス毒素と皮膚透過性亢進薬剤は、所望の機能が発揮するのであれば、ゲル状、スポンジ状又はフィルム状からなるシート状基材の皮膚接触面、すなわち同一面に含有されていても構わない。
【００４１】
特に、皮膚透過性亢進薬剤として揮発性物質であるアセトン／エーテル溶液を使用する場合、皮膚への貼付直前に、シート状基材の皮膚接触面側に含有させるようにする。
【００４２】
ボツリヌス毒素単独の治療剤を使用する際には、好ましくは、貼付前にシート状基材の皮膚接触面に皮膚透過性亢進薬剤を含有させて湿潤状態または濡れ状態とした後に、シワ部分に貼り付けるか、あるいは、シワ部分に予め皮膚透過性亢進薬剤を塗布した後に、ボツリヌス毒素単独の治療剤を、当該シワ部分に貼り付ける。
【００４３】
さらに、皮膚透過性亢進薬剤で皮膚透過性を亢進させた後も治療剤のシート状基材で顔面のシワ部分を覆う続けることにより、皮膚を物理化学的障害から守り、皮膚の機能である感染防御機構を維持することができる。
【００４４】
Ａ型ボツリヌス毒素を皮膚に浸透させる前に皮膚透過性亢進薬剤で皮膚透過性を亢進させることにより、Ａ型ボツリヌス毒素がいっそう皮膚に浸透しやすくなり、効力を発揮する。
【００４５】
簡便さについては、従来方法によるマーキングやボトックス注射をする前に、ボトックス注射の痛みを和らげるために麻酔クリームを付ける等の必要性が無く、細い注射針でボトックスを表情筋に注入するリスクや美容・形成の患者への整形費用を低減することができる。
【００４６】
講習を受け、ボツリヌス毒素の安全性及び有効性を理解し、施注手技に関する十分な知識・経験のある医師のみが行うことができるなどという施術者の技量に関する制限が無くなる。
【００４７】
また、従来方法のマーキングによる適用部位の特定をなくすることができる。安全性については、シート状基材も形成外科及び皮膚科で利用されている材料から構成されるものを使用し、シート状基材内に含有させる薬剤も人体に対する無毒性や無アレルギー性などの安全性が確認できるものを使用する。
【００４８】
ボツリヌス毒素を含浸させたシート状基材を、ゲル状、スポンジ状又はフィルム状のいずれかに選択されることにより、ボツリヌス毒素の放出性、すなわち、皮膚へのボツリヌス毒素の浸透性を制御することができる。
【００４９】
さらに、所望に応じ、ボツリヌス毒素及び皮膚透過性亢進薬剤の作用を損なわない範囲で、薬理上許容される各種添加剤、例えば、安定剤、酸化防止剤、香料、充填剤、あるいは他の経皮吸収促進剤などを添加することができる。
【００５０】
顔面のシワとしては、例えば、額の横シワ、眉間のシワ、鼻の付け根のシワ、目尻のシワ、ほうれい線（鼻の脇から口元にかけてのシワ）、おとがい線（あご先のシワ）、首の加齢によるシワ及び下まぶたのシワを挙げることができる。
【００５１】
本発明は、ボツリヌス毒素又は皮膚透過性亢進薬剤をシート状基材に含有させて経皮的に導入する顔面用シワ治療剤であるが、別の用途である、例えば、擦過傷、皮膚剥脱、外傷性皮膚欠損創、分層採皮創、熱傷、皮膚潰瘍及び褥瘡用の皮膚適用薬剤としてのドラッグデリバリシステム（ＤＤＳ）のキャリアー等としても利用することができる。
【実施例】
【００５２】
初めに、顔面用シワ治療剤の好適な製造方法について詳細に説明する。
【００５３】
（実施例１）ゲルシート状基材の作製
室温にてアテロコラーゲン粉末をイオン交換水に溶解させて、アテロコラーゲン溶液の最終濃度を１ｗ／ｖ％にした。次に、プラスチックケース（幅１９０ｍｍ×奥行き９０ｍｍ×高さ２５ｍｍ）に厚さ１ｍｍになるように１ｗ／ｖ％のアテロコラーゲンイオン交換水溶液を流し込んだ。このプラスチックケースをアンモニアガス雰囲気に晒して、白色のアテロコラーゲンゲルを得た。このゲル化したアテロコラーゲンを、−８０℃以下の温度に保たれた冷凍庫で凍結せしめ、アテロコラーゲンゲルシート状基材を作製した。アテロコラーゲンゲルシート状基材の一面に凍結乾燥粉末として市販されているボトックスを滅菌生理学的食塩水で希釈したＡ型ボツリヌス毒素溶液１単位／０．１ｍｌにして塗布した。次に、アテロコラーゲンゲルシート状基材の裏面に１％濃度の皮膚透過性亢進薬剤（リパーゼ）１ｍｌを塗布して試料１の顔面用シワ治療剤を作製した。
【００５４】
（実施例２）スポンジシート状基材の作製
実施例１と同様の方法でゲル化したアテロコラーゲンゲルを凍結乾燥機にて水分を昇華させることにより、アテロコラーゲンスポンジシート状基材を得た。さらに、得られたアテロコラーゲンスポンジシート状基材に対して、主波長が２５４ｎｍの紫外線（３６００ｍＷ／ｃｍ2）を１５分間表裏に照射させることにより、スポンジシート状基材を架橋した。次いで、このように成形して得られたアテロコラーゲンスポンジシート状基材から８０ｍｍ×１００ｍｍ×２ｍｍの大きさの試料を作製した。さらに、電子線やエチレンオキサイドガス（ＥＯＧ）により、減菌処理を行った。アテロコラーゲンスポンジシート状基材の一面を滅菌生理学的食塩水で希釈したＡ型ボツリヌス毒素溶液１単位／０．１ｍｌに浸漬し、含浸させた。次に、アテロコラーゲンスポンジシート状基材の裏面を１％濃度の皮膚透過性亢進薬剤（プロテアーゼ）１ｍｌに含浸させて試料２の顔面用シワ治療剤を作製した。
【００５５】
（実施例３）ヒアルロン酸を含有するスポンジシート状基材の作製
アテロコラーゲン１ｇを塩酸でｐＨ３に調製した蒸留水に溶解した後、水酸化ナトリウム水溶液で調製した水溶液を得た。次いで、ヒアルロン酸ナトリウム０．０１ｇをこのアテロコラーゲン水溶液に加え、これにｐＨ４．５調製した蒸留水を加えて１００ｍｌとした（アテロコラーゲン１ｗ／ｖ％、ヒアルロン酸０．０１ｗ／ｖ％）。これを１分間ホモジナイズした後、実施例１と同様にしてヒアルロン酸を含むアテロコラーゲン−ヒアルロン酸スポンジシート状基材を作製した。ヒアルロン酸を含有するアテロコラーゲンゲルシート状基材の一面に滅菌生理学的食塩水で希釈したＡ型ボツリヌス毒素溶液１単位／０．１ｍｌを塗布した。次に、２層アテロコラーゲンゲルシート状基材の裏面を１％濃度の皮膚透過性亢進薬剤（アセトン／エーテル溶液）１ｍｌに含浸させて試料３の顔面用シワ治療剤を作製した。
【００５６】
（実施例４）２層構造のスポンジシート状基材の作製
実施例２と同様の方法で作製したアテロコラーゲンスポンジシート状基材に未架橋のアテロコラーゲンスポンジシート状基材を積層させ、前記と同様にして凍結乾燥させ、２層構造のスポンジシート状基材を作製した。
【００５７】
このようにして作製されたアテロコラーゲンゲルシート及びアテロコラーゲンスポンジシート状基材は、それ自体は水不溶性であるが、高空隙率のスポンジ構造を有することから高い吸水性と保水性を有し、細胞が産生する生理活性物質の水溶液を多量に保持することが可能である。
【００５８】
（比較例１）Ａ型ボツリヌス毒素注射溶液の調製
滅菌生理学的食塩水で希釈してＡ型ボツリヌス毒素注射溶液（１単位／０．１ｍｌ）を調製した。
【００５９】
なお、以下の表１は、実施例１〜３のシート状基材及び比較例１の注射溶液の組成をまとめたものである。
【００６０】
【表１】
2005306746.tif 000002
【００６１】
次に、上記実施例１〜３および比較例１で処方された顔面用シワ治療剤及び注射液について、以下に示す患者の顔面のシワ部位に貼付または注射して、顔面用シワ治療効果を評価した。
【００６２】
（治療例１）
約３ｃｍ角に切取ったアテロコラーゲンゲルシート状基材の試料１（実施例１）を１回／日の頻度で３０代の女性の顔面の額にあるシワに貼付し、その上からガーゼをのせて弾性包帯で固定した処置を３週間続けた。最初に貼付してから約６週間後の観察でシワは完全に消失した。
【００６３】
（治療例２）
実施例１と同様にして、アテロコラーゲンスポンジシート状基材の試料２（実施例２）を１回／日の頻度で４０代の女性の顔面の目尻にあるシワに貼付し、その上からガーゼをのせて弾性包帯で固定した処置を３週間続けた。最初に貼付してから約６週間後の観察でシワは完全に消失した。
【００６４】
（治療例３）
実施例１と同様にして、２層構造のアテロコラーゲンスポンジシート状基材の試料３（実施例３）を１回／日の頻度で５０代の男性の顔面の頬にあるシワに貼付し、その上からガーゼをのせて弾性包帯で固定した処置を１ヶ月続けた。最初に貼付してから約２ヶ月後の観察でシワは完全に消失した。
【００６５】
（治療例４）
まず、３０代の女性の顔面の額にあるシワ部分を消毒して、注射注入する部分をマーキングした。次に、滅菌生理学的食塩水で薄めたＡ型ボツリヌス毒素注射溶液（１単位／ｍｌ）の比較例１を１ｍｌ／回の量で皮下注射した。そして、注射した部位にガーゼをのせて弾性包帯で止血し固定した。最初に投与してから約２ヶ月後もシワは一部が残っており、完全には消失していない状態であった。
【００６６】
結果として、試料１〜３の顔面用シワ治療剤を適用した女性又は男性は、適用約２ヶ月後の観察で、血管新生に富む顕著な肉芽組織形成とそれに伴うシワ面積の著しい減少が認められた。比較例１の注射投与による顔面用シワ治療剤を適用した女性は、シワ消失の程度は明らかに低かった。適用２〜３ヶ月後でも、顔面の一部にシワが消失していない部位が残っていた。
【００６７】
これらの結果から、シート状基材にボツリヌス毒素及び皮膚透過性亢進薬剤を含有させた顔面用シワ治療剤は、ボツリヌス毒素による注射投与よりも極めて優れたシワ消失能力を有することが明らかになった。