(57)【要約】【課題】  眼障害を予防および／または治療するための眼科用組成物を提供する。【解決手段】  本発明の眼科用組成物は、３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を有効成分として含有することにより達成できる。さらには、本発明の眼科用組成物を用いることで、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療することができる。さらに詳しくは、本発明の眼科用組成物を用いることで、ドライアイにより生じる、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常を、正常な状態に維持および／または回復することにより、ドライアイによる眼障害を予防および／または治療することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を有効成分とする眼科用組成物であって、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療することを目的とする眼科用組成物。
【請求項２】
眼障害が、ドライアイにより生じる眼障害であることを特徴とする請求項１記載の眼科用組成物。
【請求項３】
眼障害が、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項４】
３−ヒドロキシ酪酸の塩類が、ナトリウム塩、カリウム塩、Ｌ−リジン塩、Ｌ−ヒスチジン塩およびＬ−アルギニン塩からなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１記載の眼科用組成物。
【請求項５】
３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の濃度が、０．０１２５〜１２．５ｗ／ｖ％である請求項１記載の眼科用組成物。
【請求項６】
３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の濃度が、０．１２５〜１．８７５ｗ／ｖ％である請求項１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を有効成分とする眼科用組成物に関する。さらには、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療するための眼科用組成物に関する。さらに詳しくは、ドライアイにより生じる、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常を、正常な状態に維持および／または回復することにより、ドライアイによる眼障害を予防および／または治療するための眼科用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、急速に増加してきた眼障害の１つとして、ドライアイ（眼乾燥症）がある。ドライアイとは、一般に、涙液の減少または質的な異常そのもののみでなく、涙液の量的・質的異常によって角結膜に障害をきたした状態をも意味する。現在、ドライアイは、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群、角結膜炎など様々な疾患と関連性があることが知られているが、特に近年ではパソコンやビデオ等によるＶＤＴ作業に伴う発症が増加している。
【０００３】
ところで、現在、ドライアイの診断にあたって、一般的には、涙液の減少または質的な異常とともに、点状表層角膜炎（以下、ＳＰＫとする）等の、外見的に観察できる角結膜障害の観察も併用して診断されている。
【０００４】
しかしながら、眼障害、特には角結膜の障害について、本発明者らが鋭意研究した結果、ドライアイによる角結膜の障害は、単に角膜上にＳＰＫといった障害を生じるだけでなく、例えば角結膜の菲薄化や角結膜の細胞の形態変化といった、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態に変化・異常を生じることがあることが分かった。
【０００５】
それゆえ、本発明者らは、この角結膜の形態、特には、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態を、正常な状態に維持および／または回復することにより、ドライアイにより生じる眼障害を予防および／または治療することができると考え、本発明を達成するに至った。
【０００６】
一方、これまで、ドライアイの治療を目的とするものとして、角膜に着目した発明も数多く開示されている（例えば、特許文献１参照）。しかしながら、これらの発明は、そのほとんどが角膜のキズの修復を目的としたものであった。これは言い換えれば、いわゆる組織の修復であり、角膜の細胞が通常有する修復機能、すなわち細胞の正常な機能をより活性化するものであり、眼、特には、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態を正常な状態に維持および／または回復することは意味を異にする。
【０００７】
これに対し、上記のような、角結膜が菲薄化したり、角結膜の細胞の形態が変化するといった現象は、角結膜の形態、特には角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常によるものであり、組織の修復とは異なる治療が必要となる。すなわち、このような障害に対しては、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態を正常な状態に維持および／または回復する必要がある。
【０００８】
ここで、本発明において有効成分として用いられる３−ヒドロキシ酪酸は、生体成分として知られており、肝臓で脂肪酸が酸化されることにより生成され、抹消組織においてエネルギー源として用いられることが知られている（例えば、非特許文献１参照）。これまで出願人は３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を含む角膜に適用する治療剤として、角膜上皮損傷治療剤（例えば、特許文献２参照）および角膜混濁抑制剤（例えば、特許文献３参照）を提案している。しかしながら、３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類が、角結膜の形態、特には、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態を正常な状態に維持および／または回復することへの適用については知られていない。
【０００９】
【特許文献１】特開平１０−２２６７０４号公報
【特許文献２】特開平１０−２６５３７８号公報
【特許文献３】特開２００１−８９３６６号公報
【非特許文献１】山科郁男監修、「レーニンジャーの新生化学（上）」、第２版、廣川書店、  １９９３年４月１５日、ｐ６２５−６２６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を有効成分とする眼科用組成物を提供することにある。さらには、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療するための眼科用組成物を提供することにある。さらに詳しくは、ドライアイにより生じる、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常を、正常な状態に維持および／または回復することにより、ドライアイによる眼障害を予防および／または治療するための眼科用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明によれば、本発明の上記目的および利点は、以下により達成される。
（１）３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を有効成分とする眼科用組成物であって、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療することを目的とする眼科用組成物。
（２）眼障害が、ドライアイにより生じる眼障害であることを特徴とする上記（１）に記載の眼科用組成物。
（３）眼障害が、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常であることを特徴とする上記（１）に記載の組成物。
（４）３−ヒドロキシ酪酸の塩類が、ナトリウム塩、カリウム塩、Ｌ−リジン塩、Ｌ−ヒスチジン塩およびＬ−アルギニン塩からなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする上記（１）に記載の眼科用組成物。
（５）３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の濃度が、０．０１２５〜１２．５ｗ／ｖ％である上記（１）に記載の眼科用組成物。
（６）３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の濃度が、０．１２５〜１．８７５ｗ／ｖ％である上記（１）に記載の組成物。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の眼科用組成物を用いることにより、眼障害を予防および／または治療することができる。さらには、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療することができる。さらに詳しくは、ドライアイにより生じる、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常を、正常な状態に維持および／または回復することにより、ドライアイによる眼障害を予防および／または治療することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の眼科用組成物は、該眼科用組成物を用いることにより、眼障害を予防および／または治療するのに有効である。具体的には、ドライアイにより生じる、角結膜の組織学的および／または細胞学的形態の変化・異常を、正常な状態に維持および／または回復することにより、ドライアイによる眼障害を予防および／または治療することを期待して利用することができる。
【００１４】
本発明において、有効成分である３−ヒドロキシ酪酸の化学構造式のＣ３位の立体配置に関しては、Ｄ−体、Ｄ，Ｌ−ラセミ体およびＬ−体が知られている。本発明においては、これら全てを使用することができる。また３−ヒドロキシ酪酸の塩類は、好ましくは、ナトリウム塩、カリウム塩、Ｌ−リジン塩、Ｌ−ヒスチジン塩およびＬ−アルギニン塩よりなる群から少なくとも１種が適宜選択される。これら３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類は、適宜単独であるいは２種類以上併用することができる。本発明の点眼剤における３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の濃度は、患者の年齢や症状等に応じて０．０１２５〜１２．５ｗ／ｖ％、より好ましくは０．０６２５〜６．２５ｗ／ｖ％、さらには０．１２５〜１．８７５ｗ／ｖ％の範囲にあるのが特に好ましい。
【００１５】
本発明における眼科用組成物の剤型としては、非経口投与製剤である点眼剤、洗眼剤および眼軟膏剤等から選ばれるいずれかの剤型が好ましく、特には点眼剤とするのが好ましい。なお、それ以外にも、眼局所の疾患の治療や予防を目的として投与されるものであれば、例えば、経口投与製剤のような眼局所に直接投与しない製剤であっても特に差し支えない。
【００１６】
本発明の眼科用組成物は、有効成分として３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類を含有していればよく、３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類による眼障害の予防および／または治療する効果、特には、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復する効果を妨げない限り、さらに必要に応じて、各種成分を含有させることができる。そのような成分としては、例えば、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合には、点眼剤の安定性およびさし心地の良さを得ることを目的として、必要に応じて緩衝剤、等張化剤、安定化剤、粘稠化剤、ｐＨ調整剤等の各種添加物およびその他の成分等を含有することができる。なお、これらの各種成分は単独であるいは２種類以上適宜含有することができ、多くの場合その方が好ましい。なお、本発明の眼科用組成物を点眼剤以外の剤型とする場合には、その剤型において一般的に用いられる成分等を含有することができる。以下に、本発明の眼科用組成物を点眼剤とした場合について説明する。
【００１７】
上記緩衝剤は、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合に、該点眼剤のｐＨを安定化する目的等で含有することができる。該緩衝剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、ホウ酸、クエン酸、リン酸、酒石酸、グルコン酸、酢酸、炭酸およびそれらの塩等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら緩衝剤の濃度としては、０．００１〜５ｗ／ｖ％であるのが好ましく、０．０１〜１ｗ／ｖ％であるのがより好ましい。
【００１８】
上記等張化剤は、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合に、該点眼剤の浸透圧を調整する目的等で含有することができる。該等張化剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウムおよび硫酸マグネシウム等からなるアルカリまたはアルカリ土類金属塩の如き無機塩、およびグルコース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、デキストランおよびグリセリン等の糖質等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら等張化剤の濃度としては、０．００１〜５ｗ／ｖ％であるのが好ましく、０．０１〜３ｗ／ｖ％であるのがより好ましい。
【００１９】
上記安定化剤は、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合に、該点眼剤の有効成分を安定化する目的等で含有することができる。該安定化剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、エデト酸ナトリウム、シクロデキストリン、亜硫酸塩、クエン酸／塩、およびジブチルヒドロキシトルエン等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら安定化剤の濃度としては、０．００１〜５ｗ／ｖ％であるのが好ましく、０．０１〜１ｗ／ｖ％であるのがより好ましい。
【００２０】
上記粘稠化剤は、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合に、該点眼剤の粘度を調整する目的等で含有することができる。該粘稠化剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよびポリビニルアルコールなどのポリオール類、トレハロース、シュクロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびシクロデキストリン等の糖質類、カルボキシビニルポリマー、クエン酸塩およびエデト酸塩等のポリカルボン酸／塩等が挙げられ、その他キサンタンガム、ローカーストビーンガム、ゲランガムおよびカラギーナン類等の多糖類、ヒアルロン酸／塩、ポビドンおよびヒマシ油等も含有することができる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら粘稠化剤の濃度としては、０．００１〜１０ｗ／ｖ％であるのが好ましく、０．０１〜５ｗ／ｖ％であるのがより好ましい。
【００２１】
上記ｐＨ調整剤は、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合に、該点眼剤のｐＨを調整する目的等で含有することができる。該ｐＨ調整剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩酸、クエン酸、ホウ酸、リン酸、酢酸、酒石酸およびそれらの塩等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。本発明の眼科用組成物は、これらｐＨ調整剤を適量添加し、目的のｐＨに調整する。
【００２２】
上記その他の成分は、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合に、各成分に応じた効果を付与する目的等で含有することができる。その他の成分としては、一般に眼科用剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、充血除去剤、消炎・収斂剤、抗ヒスタミン剤、局所麻酔剤、ビタミン類、アミノ酸類、サルファ剤、清涼化剤および縮瞳剤等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。なお、これらの成分を含有する際には、患者の年齢や症状等に応じて、本発明の有効成分である３−ヒドロキシ酪酸および／またはその塩類の、眼障害の予防および／または治療する効果、特には、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復する効果に影響がでない成分・濃度であることを確認して使用するのが好ましい。
【００２３】
一方、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合には、該点眼剤に防腐効果を持たせる目的で防腐剤を含有することもできる。該防腐剤としては、一般に点眼剤として用いられているものであれば特に差し支えなく、例えば、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベンもしくはブチルパラベン等のパラベン類、グルコン酸クロルヘキシジン、クロロブタノール、フェニルエチルアルコール、ベンジルアルコール、デヒドロ酢酸ナトリウム、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、第４級アンモニウム性陽イオン界面活性剤および塩酸クロルヘキシジン等のカチオン系防腐剤等が挙げられる。第４級アンモニウム性陽イオン界面活性剤としては、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムおよび塩化セチルピリジニウム等が挙げられる。これらは単独で使用してもよく、２種類以上併用することもできる。これら防腐剤の濃度としては、０．０００１〜０．１ｗ／ｖ％であるのが好ましく、０．００１〜０．０５ｗ／ｖ％であるのがより好ましい。
【００２４】
しかしながら、一般に眼障害がある場合には、防腐剤を含有する点眼剤を点眼することにより、さらに障害が悪化する可能性があるため、防腐剤は含有しない方がより好ましい。また、眼障害を生じていない場合であっても、頻回点眼を必要とする場合には、同様に防腐剤により眼障害を生じる可能性があるため、防腐剤を含有しない方がより好ましい。なお、防腐剤を含有しない場合には、本発明の点眼剤を、１回の使用で使い捨てるタイプの容器、いわゆる「ディスポ容器」に充填するのが好ましい。
【００２５】
また、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合には、各種配合成分を組み合わせた後、ｐＨを調整することが好ましい。ｐＨの範囲としては、点眼剤として許容される範囲であれば特に制限はなく、例えば、ｐＨ４〜１０とするのが好ましく、ｐＨ６〜８．５がより好ましい。ｐＨ４以下の酸性およびｐＨ１０以上のアルカリ性領域では眼刺激や眼障害を生じる可能性があるので好ましくない。
【００２６】
また、本発明の眼科用組成物を点眼剤とする場合、該眼科用組成物の浸透圧としては、点眼剤として許容される範囲であれば特に制限はなく、例えば、１００〜６００ｍＯｓｍ．が好ましく、１５０〜５００ｍＯｓｍ．がより好ましい。
【００２７】
本発明の眼科用組成物は、一般に知られている方法に従って調製することができる。通常、上記各種配合成分等を精製水（必要に応じて滅菌精製水）に順次溶解して調製することができる。例えば、点眼剤とする場合であれば、まず、粘稠剤を含有する場合には粘稠剤を滅菌精製水に溶解し、次いで有効成分および各種配合成分を溶解し、必要な場合はｐＨを調整した後、ポリエチレンテレフタレート製の容器等に無菌充填することにより得られる。  
【００２８】
本発明の眼科用組成物は、眼科的に許容される範囲であれば投与量が特に制限されるものではない。例えば、上記の如き点眼剤の形態で用いる場合には、通常１回につき１〜３滴を１日１回〜２０回、特には１回〜１０回投与することが好ましい。
【００２９】
ここで、本発明における眼障害の予防および／または治療とは、いわゆる角結膜のキズの修復を意味するものではなく、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復する効果を意味する。そして、ここでいう、角結膜の形態とは、各種学術的側面から見た形態を意味するが、特には、組織学的および／または細胞学的側面から見た形態を意味する。
【００３０】
なお、本発明の角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療することを目的とする、本発明の眼科用組成物において、対象となる角結膜の組織としては、角結膜の菲薄化といった、角結膜の組織の形態に変化・異常を生じた組織であれば、特に問題はなく、どの組織であっても対象とすることができるが、特には、角膜上皮を対象とするのが好ましい。さらには、角膜上皮のうちでも、表層部位を対象とするのが最も好ましい。
【００３１】
また、本発明の角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復することにより、眼障害を予防および／または治療することを目的とする、本発明の眼科用組成物において、対象となる角結膜の細胞としては、角結膜の細胞の形態に変化・異常を生じた細胞であれば、特に問題はなく、どの細胞であっても対象とすることができるが、特には、角膜上皮細胞を対象とするのが好ましい。さらには、角膜上皮細胞のうちでも、最も表層に存在する角膜上皮細胞を対象とするのが最も好ましい。
【００３２】
以下、本発明を実施例、比較例および参考例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００３３】
ラットドライアイモデルを用いて、３−ヒドロキシ酪酸を有効成分とする本発明の眼科用組成物の、眼障害を予防および／または治療する効果、特には、角結膜の形態を正常な状態に維持および／または回復する効果について調査した。
【００３４】
ラットドライアイモデルは以下のようにして作製した。まず、８週齢の雌性ＳＤラットを、温度２０℃、湿度２０％の環境下にて飼育した。なお、飼育期間中、１日８時間を、高所に配置する工程で飼育し、残りの１６時間をケージにて飼育した。なおこの飼育期間中、ラットに向かい、送風が直接目にあたるようにして、風速２〜４ｍ／ｓの送風を行った。この条件を基本として、以下の２つの実験系により、３−ヒドロキシ酪酸（以下、ＨＢＡと略す）の効果を調査した。  
【００３５】
（１）角結膜の形態を正常な状態に維持する効果
ラットを高所に配置する工程において、０時間をスタートとし、１時間おきに計８回、片眼に１．０ｗ／ｖ％ＨＢＡを、もう片眼にリン酸緩衝塩類溶液（以下、ＰＢＳとする）をそれぞれ５μＬずつ点眼した。これを５日間繰り返し、５日後の角膜組織を光学顕微鏡にて観察した。なお角膜組織標本は以下の方法にて作成した。
【００３６】
まず、ラットより眼球を摘出し、ＰＢＳにて洗浄した。洗浄後のラットの視神経部位周辺に割を入れ、眼球ごとブアン溶液にて室温で一晩固定した。固定した眼球より、角膜を切り出し、０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝溶液で洗浄後、エタノール上昇系列にて浸漬し、その後キシレン、パラフィンにてそれぞれ３回ずつ浸漬し、最後にパラフィンにて包埋した。包埋した組織を４μｍの厚さに薄切し、２日間乾燥させ、最後にヘマトキシリンエオシン染色を施した。この方法にて作製した切片を組織標本とし、顕微鏡にて観察した。
【００３７】
通常環境下で飼育したラットの角膜上皮の組織切片をコントロールとし、図１に示す。これに対し、本実験の環境下で点眼を行うことなく１日、５日、１０日飼育したラットの角膜上皮の組織切片を図２、図３、図４にそれぞれ示す。これらの図より、本実験の環境下で飼育した場合に、飼育期間が長くなれば長くなるほど、角膜上皮が菲薄化されており、特に角膜上皮の中でも、表層部位が菲薄化していることが明らかとなった。また、これら図からも明らかなように、本実験系において用いるラットドライアイモデルは、角膜組織に変化・異常を生じており、本発明の眼科用組成物の、角結膜の形態を正常な状態に維持する効果、すなわち眼障害を予防する効果を調査する上で、有用なモデルである。
【００３８】
一方、本発明の眼科用組成物であるＨＢＡを５日間点眼した角膜上皮の組織切片を図５に、対照としてＰＢＳを５日間点眼した角膜上皮の組織切片を図６に示す。また、これらを７個体で行い、それぞれの角膜上皮厚を測定した結果を図７に示す。なおラットの角膜上皮厚は通常約４０μｍ程度である。
【００３９】
図５および図６より、点眼を行うことで、角膜上皮の菲薄化を抑制していることが分かった。さらに、図７より、ＨＢＡを点眼した角膜上皮厚は、約４０μｍであり、角膜上皮の形態を正常な状態に維持していた。これに対し、ＰＢＳを点眼した角膜上皮厚は、ＨＢＡを点眼した角膜上皮厚に比べ、有意（有意水準１％、ｔ検定）に菲薄化されていた。このことより、ＨＢＡは、角結膜の形態、特には角膜上皮の形態を正常な状態に維持する効果、すなわち眼障害を予防する効果を有していることが分かった。
【実施例２】
【００４０】
（２）角結膜の形態を正常な状態に回復する効果１
ラットを１日８時間高所に配置、１６時間ケージで飼育をサイクルとして、５日間飼育した。この処理により、図３に示したとおり、５日後には、ラットの角膜上皮が菲薄化している。その後、高所に配置する工程において、０時間をスタートとし、２時間おきに計４回、片眼に１．０ｗ／ｖ％ＨＢＡを、もう片眼にＰＢＳをそれぞれ５μＬずつ点眼した。これを１０日間繰り返し、１０日後（計１５日後）の角膜組織を光学顕微鏡にて観察した。なお角膜組織標本の作製は上記の方法に従った。
【００４１】
上記の結果、ＨＢＡを点眼した角膜上皮厚は、ＰＢＳを点眼した角膜上皮厚に比べ、有意（有意水準５％、ｔ検定）に角膜上皮の形態を正常な状態に回復していた。このことより、ＨＢＡは、角結膜の形態、特には角膜上皮の形態を正常な状態に回復する効果、眼障害を治療する効果を有していることが分かった。このことより、本実験系において用いるラットドライアイモデルは、本発明の眼科用組成物の、角結膜の形態を正常な状態に回復する効果、すなわち眼障害を治療する効果を調査する上で、有用なモデルである。
【実施例３】
【００４２】
（３）角結膜の形態を正常な状態に回復する効果２
ＨＢＡが、角結膜の形態、特には細胞学的形態を正常な状態に回復する効果について調査した。本調査においては、フルオレセイン染色を用いて調査した。ここで、フルオレセイン染色は、角結膜上皮の細胞間隙に入り込み染色することが知られている。これはすなわち、例えば、角結膜の細胞が縮小するといった変化・異常をおこすことにより、細胞間隙ができ、その細胞間隙に、フルオレセインが入り込むことを意味している。つまり、フルオレセインによる、角結膜の染色程度が低くなることは、すなわち、角結膜細胞の形態が正常な状態に回復していることを意味する。
【００４３】
まず、ラットを１日８時間高所に配置、１６時間ケージで飼育をサイクルとして、５日間飼育した。その後、高所に配置する工程において、０時間をスタートとし、２時間おきに計４回、片眼に１．０ｗ／ｖ％ＨＢＡを、もう片眼にＰＢＳをそれぞれ５μＬずつ点眼した。これを１０日間繰り返した。このモデルおいて、点眼開始前（５日後）および点眼開始１０日後（１５日後）にそれぞれフルオレセイン染色を施し、その染色の程度について、以下の分類に従って評価した。その結果を図８に示す。
１点：角膜がフルオレセイン染色にてわずかに染色される。
２点：角膜がフルオレセイン染色にて中程度に染色される。
３点：角膜がフルオレセイン染色にて強く染色させれる。
【００４４】
図８より、ＨＢＡを点眼した角膜では、フルオレセイン染色の程度が点眼開始前より有意（有意水準５％、Ｗｉｌｃｏｘｓｏｎの符号付順位和検定）に低下していた。このことは、すなわち、角結膜細胞の形態が正常な状態に回復していることを意味する。これに対し、ＰＢＳを点眼した角膜では、フルオレセイン染色の程度が点眼開始前より低下していたものの、有意ではなかった。このことより、ＨＢＡは、角結膜の形態、特には角膜上皮細胞の形態を正常な状態に回復する効果を有していることが分かった。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】コントロールの角膜上皮の組織切片である。
【図２】本実験における環境下１日後の角膜上皮の組織切片である。
【図３】本実験における環境下５日後の角膜上皮の組織切片である。
【図４】本実験における環境下１０日後の角膜上皮の組織切片である。
【図５】本発明の眼科用組成物であるＨＢＡ５日間点眼後の角膜上皮の組織切片である。
【図６】コントロールであるＰＢＳ５日間点眼後の角膜上皮の組織切片である。
【図７】本発明の眼科用組成物であるＨＢＡとコントロールであるＰＢＳにおける角膜上皮の菲薄化について比較したグラフである。
【図８】本発明の眼科用組成物であるＨＢＡとコントロールであるＰＢＳにおけるフルオレセイン染色の程度について比較したグラフである。
【図７】
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【図８】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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