(57)【要約】    【課題】  癌、リューマチ様関節炎、自己免疫疾患、歯周炎、組織潰瘍形成、動脈硬化症、動脈瘤、及び心不全等の治療に有用な、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、及びＭＭＰ−９等のマトリックスメタロプロテアーゼを阻害する新規マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を提供すること。    【解決手段】  細胞壁を破砕したクロレラ・ピレノイドサ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ）の乾燥粉末を含有してなるＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、及びＭＭＰ−９等のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
【請求項２】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるＭＭＰ−１阻害剤。
【請求項３】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるＭＭＰ−３阻害剤。
【請求項４】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるＭＭＰ−７阻害剤。
【請求項５】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるＭＭＰ−９阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−９等のマトリックスメタロプロテアーゼを阻害するためのマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＭＰ類は互いに重要な配列相同性（sequence homology）を共有し、共通のマルチドメイン構造を持っている。基質に対するそれぞれの適性によって、主にコラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、ストロメリシン（stromelysins）、膜型ＭＭＰ（membrane-type MMPs）の４種類に分類される。これらの酵素の正常組織における活性は非常に低いことが示されているが、炎症や生理的再形成過程においては、サイトカイン、成長因子、細胞外基質相互作用を含む特定の刺激に反応して、受容体数が増加(up regulation)されおよび／または活性化される。マトリックスメタロプロテアーゼの阻害は、癌、リューマチ様関節炎、自己免疫疾患、歯周炎、組織潰瘍形成、動脈硬化症、動脈瘤、心不全等に対して有用と考えられる。
【０００３】
マトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用を有する化合物としては、特許文献１記載のエスクレチン誘導体のほか、特許文献２及び特許文献３にそれぞれ記載された化合物及び組成物等が知られているが、多様な局面でマトリックスメタロプロテアーゼ活性を阻害する上で、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−９等のマトリックスメタロプロテアーゼを阻害するための更なるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に対する要望は強い。
【特許文献１】特許第２９０２３１８号公報
【特許文献２】特許第２７３６２８５号公報
【特許文献３】特開２００２−１２１１８６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、従来技術に存した上記のような課題に鑑み行われたものであって、その目的とするところは、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−９等のマトリックスメタロプロテアーゼを阻害する新規マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−９等のマトリックスメタロプロテアーゼを阻害する上で有用な物質について研究を行った結果、本発明を完成したものである。
【０００６】
すなわち、上記目的を達成する本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してマトリックスメタロプロテアーゼを阻害する方法を提供するものである。
【０００７】
また本発明のＭＭＰ−１阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してＭＭＰ−１を阻害する方法を提供するものである。
【０００８】
更に、本発明のＭＭＰ−３阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してＭＭＰ−３を阻害する方法を提供するものである。
【０００９】
また更に、本発明のＭＭＰ−７阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してＭＭＰ−７を阻害する方法を提供するものである。
【００１０】
また本発明のＭＭＰ−９阻害剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。また本発明は、細胞壁破砕クロレラを使用してＭＭＰ−９を阻害する方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、癌、リューマチ様関節炎、自己免疫疾患、歯周炎、組織潰瘍形成、動脈硬化症、動脈瘤、心不全等の治療に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明におけるクロレラとは、クロレラ属(Chlorella) に属する単細胞緑藻類であって、例えば、Chlorella pyrenoidosa、Chlorella ellipsoidea 、Chlorella vulgaris 、Chlorella regularis 等を挙げることができる。本発明に最も適しているのは、クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）である。
【００１３】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（ＭＭＰ−１阻害剤、ＭＭＰ−３阻害剤、ＭＭＰ−７阻害剤、ＭＭＰ−９阻害剤を含む。以下同じ。）におけるクロレラの細胞壁破砕物は、例えば次のようにして得ることができる。すなわち、先ずクロレラ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ粉体・水懸濁液を１０℃以下に調整する。次にこの懸濁液を、下記のような連続湿式微粉砕機に送入し、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕する。次いで、このようにして得られたクロレラスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却することにより、細胞壁が破砕されたクロレラを、品質劣化を生じさせることなく得ることができる。
【００１４】
上記連続湿式微粉砕機は、冷却外套を持つ密閉シリンダー中に多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されたものである。そのグラスビーズ容量は密閉シリンダー容量の８０乃至８５％であり、グラスビーズを流入液体と混和・回転することにより、流入液体中の物質を摩砕するものである。
【００１５】
このようにして細胞壁が破砕されたクロレラは、そのまま用いることもできるが、例えば、真空乾燥後粉砕を行う等の適宜の処理を施した後に使用してもよい。
【００１６】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、経口適用が望ましい。経口適用の形態に特に限定はないが、好ましくは、栄養食品、栄養補助食品、粉末、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、又は飲料用液体の形態である。
【００１７】
また種々の形態を形成する上で、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、可塑剤等を適宜用いることができる。
【００１８】
賦形剤の例としては、糖類（乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール），デンプン（バレイショ，コムギ，トウモロコシ），無機物（炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，塩化ナトリウム），結晶セルロース，植物末（カンゾウ末，ゲンチアナ末）等を挙げることができる。
【００１９】
結合剤の例としては、デンプンのり液，アラビアゴム，ゼラチン，アルギン酸ナトリウム，メチ／レセルロース（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリビニルアルコール（ＰＶＡ），ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），カルポキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等を挙げることができる。
【００２０】
崩壊剤の例としては、デンプン，寒天，ゼラチン末，結晶セルロース，ＣＭＣ・Ｎａ，ＣＭＣ・Ｃａ，炭酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００２１】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム，タルク，水素添加植物油，マクロゴール，シリコーン油等を挙げることができる。
【００２２】
コーティング剤の例としては、糖衣（白糖，ＨＰＣ，セラック），膠衣（ゼラチン，グリセリン，ソルビトール），フイルムコーティング〔ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ＥＣ，ＨＰＣ，ＰＶＰ〕，腸溶性コーティング〔ヒドロキシプロビルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）〕等を挙げることができる。
【００２３】
着色剤の例としては、水溶性食用色素，レーキ色素）等を挙げることができる。矯味剤の例としては、乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール）等を挙げることができる。矯臭剤の例としては、芳香性精油類），光線遮断剤（酸化チタン）等を挙げることができる。可塑剤の例としては、フタル酸エステル類，植物油，ポリエチレングリコール）等を挙げることができる。
【実施例】
【００２４】
クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）乾燥粉末の製造
冷却外套を持つ密閉シリンダー中にその密閉シリンダー容量の８０乃至８５％の容量の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されており、そのグラスビーズを流入液体と混和・回転することにより流入液体中の物質を摩砕する連続湿式微粉砕機（商品名：ダイノーミル［KD型］  WAB, Inc.製）に、１０℃以下に調整されたクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を送入して、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕し、次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却し、真空乾燥後、粉砕することにより、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末（株式会社サン・クロレラ製の細胞壁破砕クロレラ粉末）が得られた。
【００２５】
ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−９阻害活性の測定
５０ｍＭ  ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）（Ｓｉｇｍａ［米国］から入手）を含有する反応混合液内で、クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末および／または溶媒を６０分間、３７℃で、活性酵素ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−９（Calbiochem［米国］から入手）と共にプレインキュベートした。反応はMca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2（Ｂａｃｈｅｍ［スイスから入手）］を添加して開始し、１２０分間３７℃でインキュベートした。
【００２６】
Spectrafluor Plus（Ｔｅｃａｎ［オーストリア］) を用いて蛍光分光測定法により励起４６０ｎｍ、放出５２０ｎｍで蛍光Mca-Pro-Leu-Glyの形成を測定することにより酵素活性を判定したところ、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ（乾燥粉末）による５０％阻害濃度は、ＭＭＰ−１が１２７μｇ／ｍｌ（マイクログラム／ミリリットル）、ＭＭＰ−３が１８５μｇ／ｍｌ、ＭＭＰ−７が１８．１μｇ／ｍｌ、ＭＭＰ−９が２３７μｇ／ｍｌであった。すなわち、細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサはＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、及びＭＭＰ−９の阻害作用を有していた。