(57)【要約】【課題】  齲蝕治療の歯髄処置に際し、露出した歯髄面を保護すると共に象牙質の形成を促進することのできる薬剤を提供すること。【解決手段】  ポリリン酸、特に一般式Hn+2(PnO3n+1)（式中、ｎは３〜８００の整数を表す）で表される直鎖状リン酸の1種又は2種以上の混合物を有効成分として含有する象牙質形成覆髄剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリリン酸を有効成分として含有する象牙質形成覆髄剤。
【請求項２】
ポリリン酸が、下記一般式(I)：
Hn+2(PnO3n+1)    (I)
（式中、ｎは３〜８００の整数を表す）で表される直鎖状リン酸の1種又は2種以上の混合物である、請求項１に記載の象牙質形成覆髄剤。
【請求項３】
式中のｎが４０〜１５０の整数である、請求項２に記載の象牙質形成覆髄剤。
【請求項４】
ポリリン酸がポリリン酸塩である、請求項１から３のいずれか１項に記載の象牙質形成覆髄剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、露出した歯髄面を保護し、かつ象牙質形成を促進する作用を有する象牙質形成覆髄剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯髄は、歯の内部にある歯髄腔という空洞を満たしている血管性の結合組織であり、中胚葉由来の歯乳頭より形成された非石灰化組織である。これに対し、象牙質は歯髄腔の周囲にある硬い石灰化組織である。従来から、歯髄は軟組織、象牙質は硬組織という構造的特徴から両者はまったく別のものとして取り扱われてきた。しかし近年、歯髄と象牙質は発生学的にも機能的にも相同の組織であり、臨床においても「Dentin-Pulp Complex（象牙質・歯髄複合体）」として捉えられている傾向が強い。
【０００３】
歯髄は、感染などの外来刺激に対する防御機能、感覚器官としての知覚の受容と伝達機能、象牙質恒常性の維持（象牙質形成と栄養供給など）機能、歯根の形成等、さまざまな機能をもつ重要な組織である。
【０００４】
歯が齲蝕に罹患すると、その程度により、歯髄を除去しないで保護する処置（直接歯髄覆罩）、歯髄の一部（冠部歯髄）のみを除去し、根部歯髄を保存する処置（生活歯髄切断）、歯髄の全部を除去して空洞を金属やレジンで封鎖する処置（抜髄）などが施される。しかしながら、歯髄除去後は、歯への栄養の供給が絶たれるため象牙質の脆弱化が起こり、また痛みを伝える神経がないため、再び齲蝕が進行した場合に自覚症状が得られず悪化するという問題がある。従って、近年では、歯の健康状態を維持するためにはできるだけ歯髄を保存するのが好ましいと考えられている。歯髄を保存し、その機能を維持するためには、象牙質の破損状態と歯髄の病理学的状態に応じて、間接覆髄剤または直接覆髄剤が用いられる。間接覆髄剤は、象牙質は破損しているが歯髄が露出していない状態に用いられ、また、直接覆髄剤は、歯髄が露出している場合や治療により歯髄の一部を切断した場合に用いられる。直接覆髄剤としては、従来、水酸化カルシウム製剤、ホルムクレゾール製剤が用いられている。しかしながら、水酸化カルシウムには、象牙芽細胞誘導作用はなく、象牙質形成促進は望めない。これまで、象牙質形成促進作用を有するものとして、ウシの血液抽出物（特許文献１）、N-アセチル-グルコサミンなどの多糖類（特許文献２）、骨形成因子（特許文献３）などが報告されている。しかしながら、ウシの血液抽出物を用いた場合、用いる抽出物を介した狂牛病等のプリオン感染、未知のウイルス感染等の可能性が否定できず、安全性の面で実際に人に用いることは困難である。また、N-アセチルグルコサミンを用いた場合も、上記ウシ血液抽出物よりは安全性は高いと考えられるが、昆虫や甲殻類の殻といった生体組織が原料をなるため、未知の感染源や汚染物質による影響は否定できない。BMP（骨形成タンパク質）等の骨形成因子を用いる方法では、ヒト由来の組換えタンパク質が有効成分であり、その調製法が複雑で有効成分の収率が悪く、極めて製造コストの高い製品になる可能性が高い。また、BMPには象牙質再生以外の生理機能もあり、局所的な大量投与による未知の副作用が生じることも否定できない。
【０００５】
一方、ポリリン酸はもともと多くの生物種の組織内及び細胞内に含有されており、生体内で常に合成されている物質である（非特許文献１参照）。また、ポリリン酸の生体に対する安全性は古くから確かめられており、生体内で無毒なリン酸に分解される生分解性物質であることがわかっている。また、ポリリン酸は容易に化学合成でき、純度の高い原料から非常に安価に入手できる。ポリリン酸の生理機能は未知の部分が多いが、本発明者らのポリリン酸に関する一連の研究によって、ポリリン酸にはFGF等の細胞増殖因子のような生理活性タンパク質を安定化し、細胞の生理活動をコントロールする機能があることが見出された。具体的には培養細胞増殖促進作用、組織再生促進作用（特許文献４、非特許文献２）や、石灰化促進作用、骨分化誘導促進作用（特許文献５）が確認されている。また、さらなる研究の結果、ポリリン酸の組織再生促進作用を有効に発揮させるために、コラーゲンとの複合体にすることが提案されている（特許文献６）。しかしながら、これまでポリリン酸の石灰化促進作用、骨分化誘導促進作用に関する歯科領域における研究は主に歯糟骨又は顎骨の修復に関することのみであり、歯（象牙質）そのものの組織修復や再生に関する報告はない。
【０００６】
【特許文献１】特開2002-363084号公報
【特許文献２】特開平06-256132号公報
【特許文献３】特開平06-340555号公報
【特許文献４】特開2000-069961号公報
【特許文献５】特開2000-79161号公報
【特許文献６】特開2004-000543号公報
【非特許文献１】H. C. Schroder et al., Inorganic polyphosphate in eukaryotes: Enzymes, metabolism and function, Progress in Molecular and Subcellular Biology, Vol. 23, 45-81, 1999
【非特許文献２】T.Shiba et al., Modulation of Mitogenic activity of fibroblast growth factors by inorganic polyphosphate, The Journal of Biological Chemistry, Vol. 278, pp.26788-26792, 2003
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、齲蝕治療の歯髄処置に際し、露出した歯髄面を保護すると共に象牙質の形成を促進することのできる薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、生体適合性があり、安全性の高いポリリン酸が、露出した歯髄に適用した時に象牙質の形成を促進する効果を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の発明を包含する。
(1)ポリリン酸を有効成分として含有する象牙質形成覆髄剤。
(2)ポリリン酸が、下記一般式(I)：
Hn+2(PnO3n+1)    (I)
（式中、ｎは３〜８００の整数を表す）で表される直鎖状リン酸の1種又は2種以上の混合物である、(1)に記載の象牙質形成覆髄剤。
(3)式中のｎが４０〜１５０の整数である、(2)に記載の象牙質形成覆髄剤。
(4)ポリリン酸がポリリン酸塩である、(1)から(3)のいずれかに記載の象牙質形成覆髄剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、齲蝕治療における歯髄処置後に露出した歯髄面に適用すると、歯髄を保護するだけでなく、象牙質の形成を促進することができる象牙質形成覆髄剤が提供される。本発明の象牙質形成覆髄剤は、生体適合性、生分解性があり、安全面においても優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明は、露出した歯髄に適用した時に、歯髄の保護だけでなく象牙質の形成を促進することのできる薬剤（以下、「象牙質形成覆髄剤」という）を提供する。本発明において、「象牙質形成」とは、象牙質の再生及び新生の両方を含む。また、「象牙質」とは、第二象牙質および第三象牙質(修復象牙質）の両方を含むが、主には第二象牙質をいう。
【００１２】
本発明の象牙質形成覆髄剤は、ポリリン酸を有効成分として含む。
本発明において使用されるポリリン酸は、代表的にはオルトリン酸の脱水縮合によって２個以上のPO４四面体が頂点の酸素原子を共有して直鎖状に連なった構造を有する直鎖状ポリリン酸であるが、側鎖に有機基が導入された側鎖状ポリリン酸、環状ポリリン酸、枝分かれ状のリン酸重合体であるポリリン酸（ウルトラポリリン酸）であってもよい。
【００１３】
本発明において特に好適に使用されるポリリン酸は、一般式(I)：
Hn+2(PnO3n+1)    (I)
（式中、ｎは３〜８００の整数を表す）で表される直鎖状リン酸から選ばれる1種又は2種以上の混合物が挙げられる。
【００１４】
上記一般式中のｎは３〜８００、好ましくは３０〜５００、より好ましくは４０〜１５０の整数である。
【００１５】
なお、鎖長が１０００以上のポリリン酸は水溶液の形で存在することが確認できておらず、水に難溶性であると考えられるので好ましくない。また、生体内でポリリン酸の鎖長は約８００であるから、鎖長が８００以下のポリリン酸が、生体内で種々の生理機能に関する高い有効性を持つと考えられる(K.D.Kumble and A.Kornberg, Inorganic polyphosphate in mammalian cells and tissues, The Journal of Biological Chemistry, Vol.270, pp.5818-5822, 1995)。
【００１６】
また、本発明においては、上記のポリリン酸の水酸基の水素が金属と置換した分子構造を有するポリリン酸塩を使用してもよく、金属としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等が挙げられる。
【００１７】
本発明に使用するポリリン酸又はその塩は、１種類であってもよいが、複数種の混合物であってもよい。複数種のポリリン酸又はその塩には、重合度の異なるポリリン酸又はその塩、分子構造の異なるポリリン酸又はその塩、及び金属イオンの異なるポリリン酸塩を包含する。またポリリン酸とその塩とを両方包含してもよい。
【００１８】
上記のポリリン酸は、リン酸を加熱する方法、リン酸に五酸化リンを添加溶解する方法など、通常用いられる製法により製造することができる。
【００１９】
また、特に鎖長が２０以上の中長鎖ポリリン酸は、本発明者らにより開発された以下の方法により製造することができる。まず、ヘキサメタリン酸塩を０．１〜１０重量％、好ましくは１０重量％となるように水に溶解する。このヘキサメタリン酸水溶液に、８７〜１００％エタノール、好ましくは９６％エタノールを、ヘキサメタリン酸溶液とエタノールとの混合後の全体液量の１／１０〜１／３量で、すなわちヘキサメタリン酸水溶液：エタノールが２：１〜９：１の体積比となる量で添加する。この混合溶液を十分に攪拌し、その結果析出する沈殿物を、限定するものではないが、遠心分離またはフィルター濾過等の分離方法を用いて水溶液成分と分離する。このようにして分離した沈殿物が中長鎖ポリリン酸である。このポリリン酸を続いて70％エタノールにより洗浄し、その後乾燥させる。このような分離操作で得られるポリリン酸の平均鎖長は６０から７０であり、１０以下の短鎖ポリリン酸はほとんど含まれていない。従って、その分子量分布はリン酸残基数で１０から１５０程度である。
【００２０】
本発明の象牙質形成覆髄剤におけるポリリン酸の含有量は、特に限定はされないが、例えば0.001〜20重量％、好ましくは0.01〜10重量％、より好ましく0.1〜5重量％、最も好ましくは0.2〜2重量％とすればよい。
【００２１】
ポリリン酸又はその塩は、それ単体で、あるいは薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物と混合し、患部に適用するのに適した形態の各種製剤に製剤化することができる。本発明の象牙質形成覆髄剤に適した製剤形態としては、例えば、注射剤、外用液剤（注入剤、塗布剤）、固形製剤（顆粒剤、細粒剤、散剤 、軟膏剤、錠剤）、軟膏剤などの形態に公知の方法により適宜調製することが出来る。
【００２２】
薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤又は崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤又は溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、保存剤、分散剤、乳化剤、ゲル化剤、増粘剤粘着剤、矯味剤等を用いることができる。
【００２３】
ゲル化剤は、例えば、歯の浸出液を吸収してゲル化するものでもよい。また、粉剤と液剤からなる形態として、用時混合及び混練して用いてもよい。
【００２４】
本発明の象牙質形成覆髄剤は、さらに、殺菌剤、抗生物質、抗炎症剤等の他の有効成分を含んでいてもよい。
【００２５】
本発明の象牙質覆髄剤は、通常の齲蝕処置、例えば、髄腔開拡、抜髄後の窩洞部歯髄切断面上に塗布又は充填することにより使用できる。
【００２６】
本発明の象牙質形成覆髄剤は、直接覆髄剤または間接覆髄剤と併用して、その適用前または適用後に適用しても、直接覆髄剤または間接覆髄剤に混合して適用してもよい。本明細書において「直接覆髄剤」とは、歯髄の一部が露出している場合に歯髄組織を保護する薬剤であり、例えば水酸化カルシウム製剤等が用いられている。「間接覆髄剤」とは、象牙質が薄くなっているが歯髄が露出していない場合に外来刺激の遮断、殺菌等の目的で用いられる薬剤であり、例えば酸化亜鉛ユージノール製剤、酸化亜鉛クレオソート製剤等が用いられている。
【００２７】
本発明の象牙質形成覆髄剤は、薬剤の有効成分の患部への適用を容易にし、象牙質の形成に十分な期間、有効成分を患部に保持することを可能にする上で、担体に担持されていてもよい。従って、本発明の象牙質形成覆髄剤は、ポリリン酸を適当な補助剤と共にモノフィラメント、フィルム、繊維集合体、スポンジ、微小粒などの形状を有する構造体に固定化または含浸させた歯科材料の形態であってもよい。
【００２８】
本発明の象牙質形成覆髄剤の用量は、特に限定はされず、患者の症状（齲歯の進行度）、年齢、剤形等により適宜調整されるが、例えば、有効成分であるポリリン酸を、乾燥重量として１ng〜100μg、好ましくは10ng〜10μgを１回あたりに使用すればよい。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３０】
（実施例１）
ポリリン酸ナトリウム原体（平均鎖長40）51mgを、1mlの滅菌水に溶解して500mMポリリン酸ナトリウム溶液を調製した。
【００３１】
（比較例１）
500mMリン酸２水素ナトリウムと同濃度のリン酸水素２ナトリウムをpH7.0になるようにて適度に混合して500mMリン酸ナトリウム緩衝液溶液を調製した。
【００３２】
（比較例２）
β-グリセロリン酸108mg及びアスコルビン酸125mgを、それぞれ1mlの滅菌水に溶解して、2.5M β-グリセロリン酸溶液及び1.25％アスコルビン酸溶液を得た。
【００３３】
（試験例１）ヒト象牙芽細胞の石灰化誘導試験
ヒト（８歳男児）乳歯歯髄より単離した象牙芽細胞を用いて、上記で調製した各組成物を被験物質とし、これらによる象牙芽細胞石灰化誘導効果について調べた。象牙芽細胞を直径60 mmの細胞培養用ディッシュ上に播種し、10％ウシ血清を含むα-MEM培地を用いてコンフルエント状態まで培養を行った。その後1％ウシ血清を含むα-MEM培地に、実施例１で調製したポリリン酸ナトリウム溶液、比較例１で調製したリン酸ナトリウム緩衝液溶液を培養液1mlあたりそれぞれ2μl、比較例２で調製したグリセロリン酸溶液とアスコルビン酸溶液を培養液1mlあたりそれぞれ4μl添加し、象牙芽細胞の石灰化誘導処理を行った。培地交換は４日ごとに行い、(1)細胞石灰化マーカー遺伝子（オステオポンチン（OPN)、オステオカルシン（OC)）のmRNA量変化、(2)Ｉ型コラーゲン蛋白の発現量変化、(3)細胞の石灰化を直接評価するためのアリザリンレッド染色の３項目について評価を行った。
【００３４】
(1)石灰化マーカー遺伝子の発現量評価
各日における細胞をディッシュより回収し、RNA抽出精製キット（SV Total RNA Isolation System、プロメガ社製）を用いて全RNAを抽出精製し、石灰化の指標として一般的に用いられているオステオポンチン（OPN)、オステオカルシン（OC)両遺伝子の発現量（mRNA量）を定量PCR法により測定した。このとき、定量PCRのテンプレートとなるｃDNAの作製には、オリゴdT20プライマーを用い、下記表１に示す反応系によって行った。また逆転写酵素にはリバトラエース（東洋紡社製）を用いた。
【００３５】
【表１】
2005263681.tif 000002
【００３６】
上記反応系により42℃で1時間反応を行い、cDNAを作製した。このcDNAを鋳型として用いて、下記表２に示すプライマーセットとアニーリング温度により定量PCRを行った。尚、定量PCRの反応はSYBR Green PCR Master Mix（アプライドバイオシステムス社製）を用い、反応条件は上記キットのプロトコールに従った。またインターナルコントロールとしてそれぞれのサンプルにおけるGAPDH遺伝子の発現量をGAPDH control reagents（アプライドバイオシステムス社製）を用いて測定した。反応と検出はABI Prizm 7000シークエンスディテクションシステム（アプライドバイオシステムス社製）を用いた。各サンプルにおける発現量は、GAPDH遺伝子の発現量で各遺伝子の発現量を割った値（相対値）で示した。
【００３７】
【表２】
2005263681.tif 000003
【００３８】
図１にオステオポンチン遺伝子の、図２にオステオカルシン遺伝子の象牙芽細胞における発現量の経時的変化をそれぞれ示した。図１に示されるように、石灰化誘導処理後21日目よりオステオポンチン遺伝子の発現がポリリン酸処理（実施例１）によって顕著に誘導され、21日目には無処理（対照）の約72倍に上昇し、35日目には約120倍に上昇した。また、図２に示されるように、オステオカルシン遺伝子の発現もまたポリリン酸処理（実施例１）によって処理後21日目以降で誘導され、21日目と35日目に発現上昇のピークが観察された。発現量は21日目で無処理（対照）の約18倍、35日目で約30倍になった。リン酸処理（比較例１）においては、無処理（対照）と同様に発現量の上昇は見られなかった。また細胞石灰化の陽性コントロールであるグリセロリン酸＋アスコルビン酸処理（比較例２）と比較しても、両遺伝子に関してポリリン酸処理の方が早期に発現が上昇し、21日目以降の発現上昇レベルを総計するとポリリン酸処理の方が大きかった。これらの結果より、ポリリン酸が象牙芽細胞において細胞石灰化に関与する遺伝子発現を積極的に誘導し、象牙芽細胞の石灰化を顕著に促進することが明らかとなった。
【００３９】
（２）Ｉ型コラーゲン蛋白の発現
各被験物質による石灰化誘導処理後５日目における象牙芽細胞のＩ型コラーゲン蛋白の発現量を免疫染色法により調べた。石灰化誘導処理後の細胞を、4％パラホルムアルデヒドを用いて固定した後5％スキムミルクでブロッキングを行った。続いてウサギ抗ヒトＩ型コラーゲン抗体、蛍光（FITC）標識化された抗ウサギIgG抗体を用いて遮光下で抗原抗体反応を行った。DAPIを用いて核染色を行った後、0.1％PPDA溶液を用いて細胞を封入し、蛍光顕微鏡を用いてＩ型コラーゲン蛋白の発現を確認した。各被験物質による処理後のFITCとDAPIの蛍光強度の数値解析を顕微鏡のイメージをもとにImage Gauge（富士フィルム社製の画像解析ソフト）を用いて行った。数値化した蛍光強度をもとに単位細胞数当たりの蛋白発現量を相対値として算出し、各処理によるＩ型コラーゲン蛋白発現量の比較を行った。結果を図３に示す。ポリリン酸処理（実施例）では、無処理(対照）、リン酸処理（比較例１）、グリセロリン酸＋アスコルビン酸処理（比較例２）のいずれと比べても発現量が増加した。特に、無処理と比較してポリリン酸処理ではＩ型コラーゲン蛋白発現量が約２倍となった。このことより、ポリリン酸がＩ型コラーゲンの発現を促進していることが示された。
【００４０】
（３）アリザリンレッド染色による石灰化評価
各被験物質による石灰化誘導処理後29日目における象牙芽細胞石灰化の様子を、アリザリンレッド染色により観察した。細胞を10％リン酸緩衝ホルマリンにより固定した後、石灰化の際に形成されるリン酸カルシウムをアリザリンレッドで染色し、顕微鏡によってその染色像を観察した。結果を図４に示す。無処理（対照）およびリン酸処理（比較例１）では石灰化物の形成を示すオレンジ色の染色像は全くみられず、細胞石灰化は起こっていなかった。これに対してポリリン酸処理（実施例１）では顕著な染色像がみられた。このことから、細胞石灰化がポリリン酸により誘導されることが確認された。
【００４１】
（試験例２）ポリリン酸による二次象牙質の形成促進
ポリリン酸の生体内における象牙質形成促進効果を確かめる目的で、ラットを用いて、人工的に形成した露髄窩洞における二次象牙質形成を観察する実験を行った。６週齢のWister系ラットを麻酔し、１／４ラウンドバーを用いて上顎第一臼歯の咬合面にＩ級窩洞を形成後、探針を用いて点状露髄させ、露髄窩洞を形成した。形成した露髄窩洞を次亜塩素酸及び過酸化水素水を用いて交互に洗浄した後、生理食塩水を用いて洗浄し、滅菌綿球による乾燥を行った。止血を確認後、製剤例１で調製した本発明製剤、又は比較として一般的に直接覆髄剤として用いられている水酸化カルシウム製剤（ダイカル；デンツプライ三金製）にてそれぞれ被覆し、窩洞をFuji III（GC社製）によって仮封した。
【００４２】
処置後一定期間経過したラットを吸入麻酔法（エーテル）にて安楽死させ、上顎骨を切断し、10％中性緩衝ホルマリン液（pH7.4）を用いた浸漬固定により１日間組織の固定を行った。その後、室温で約２日間酸脱灰を行った。脱灰終了後、第二臼歯で切除することによって標本のトリミングを行い、割面を下にしてパラフィン包埋した。組織切片を作製し、HE染色して観察を行った。
【００４３】
図５に、ポリリン酸ナトリウム（本発明製剤）、水酸化カルシウム（比較製剤）の各処置後３日目における組織標本から抜粋した染色像を示した（図中、円で囲った部位は処置部及びその周辺を示し、矢印は歯髄が壊死した部位を示す。Dは象牙質、DPは歯髄、ABは歯槽骨を示す）。水酸化カルシウム処置では、被覆した材料の直下に壊死層が認められ、続いて好中球を主体とした炎症性細胞浸潤及び血管の拡張が認められた。これに対してポリリン酸ナトリウム処置では歯髄に壊死層はほとんどみられず、炎症性細胞の浸潤もごく浅部に限局していた。このことから、ポリリン酸によって損傷部位の治癒が促進されたことがわかる。
【００４４】
図６Ａに、ポリリン酸ナトリウム処置後７日目における組織標本から抜粋した染色像を示した（図６Ａ中、円で囲った部位は処置部位及びその周辺を示し、四角で囲った部位は二次象牙質及びデンチンブリッジの新生が見られる場所を示す。Dは象牙質、DPは歯髄を示す）。また図６Ｂ及び図６Ｃに、染色像の拡大図を示す（図６Ｃ中、▲印は形成されたデンチンブリッジを示す）。
【００４５】
水酸化カルシウム処置では引き続き歯髄への炎症性細胞浸潤がみられ、損傷部における組織修復はほとんど認められなかった。これに対しポリリン酸ナトリウム処置では炎症反応は完全に消失し、歯髄における組織修復が進み、露髄した歯髄表層において骨様象牙質の新生がさかんに起こっている様子が認められた。また骨様象牙質と象牙細管構造を有する象牙質からなるデンチンブリッジの形成がみられ、ポリリン酸によって二次象牙質の形成が促進されることが確認された。
【００４６】
（製造例）ポリリン酸（中長鎖ポリリン酸）の製造
食品添加物規格のヘキサメタリン酸ナトリウム20ｇを精製水200mlに溶解し、これに96％のエタノール32mlを徐々に加えた。これをよく攪拌し室温で30分ほど放置した後，遠心分離（10,000×ｇ、20分、25℃）を行い、水溶液成分と沈殿物とを分離した。水溶液成分を廃棄し、回収した沈殿物に70％エタノールを加えて洗浄し、真空乾燥した。このようにして、9.2ｇの中長鎖（平均鎖長60以上）ポリリン酸塩を沈殿物として得た（収量46.0％）。
【００４７】
（製剤例）
製造例に従って得たポリリン酸ナトリウム（平均鎖長60）を、4％ゼラチン（新田ゼラチン製）中に1％濃度で混合してゲル状の象牙質形成覆髄剤を得た。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】オステオポンチン遺伝子の象牙芽細胞における発現量の経時的変化を示す。
【図２】オステオカルシン遺伝子の象牙芽細胞における発現量の経時的変化を示す。
【図３】Ｉ型コラーゲン蛋白の象牙芽細胞における発現量を示す。
【図４】象牙芽細胞石灰化の様子をアリザリンレッド染色により調べた結果を示す。
【図５】ポリリン酸ナトリウム、水酸化カルシウムの各処置後３日目における組織標本から抜粋した染色像を示す。
【図６】ポリリン酸ナトリウム処置後７日目における組織標本から抜粋した染色像、およびその拡大図を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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