(57)【要約】【課題】            ニンニク中に含まれるアリシンとサポニンの一種であるスピロスタノールを同時に含有するニンニクエキスを提供する。【解決手段】        アリインとスピロスタノールを別々に抽出し、これらを併用して用いることにより、アリインとスピロスタノールの両方を含有するニンニクエキスを得た。かかるニンニクエキスは、血糖値上昇抑制効果と耐糖能改善効果を有していた。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アリインとスピロスタノールサポニンを含有する、ニンニクエキス。
【請求項２】
生のニンニクの酵素活性を失活させた後、溶媒で抽出して得られるアリインを含有して成る、請求項１に記載のニンニクエキス。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載のニンニクエキスを有効成分とする、糖尿病予防・改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、アリインとスピロスタノールを併用して含有するニンニクエキス、及びかかるニンニクエキスを有効成分とする、糖尿病予防・治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病とはインスリン作用の不足による慢性高血糖を主徴とし、種々の特徴的な代謝異常を伴う疾患群である。その発症には遺伝因子と環境因子がともに関与する。糖尿病は、インスリン依存性糖尿病（１型糖尿病）とインスリン非依存性糖尿病（２型糖尿病）に大別され、脳卒中や心臓病の危険因子となることが知られており、また、神経障害、網膜症、腎臓障害などの合併症による生活の質の低下も重大な問題である。さらに、糖尿病の患者数は、近年急激な増加を示しており、糖尿病が強く疑われる人は６９０万人、糖尿病の可能性を否定できない人を合わせると１３７０万人になるといわれている。これは、生活習慣病として、国民の最も重要な健康問題の一つとなっている。
【０００３】
糖尿病の治療に用いられる代表的な薬剤としてはインスリンがあり、これは一般的には静脈内注射で使用される。またこのほかに経口糖尿病薬としても、１）膵臓を刺激してインスリンの分泌を促す作用を有するスルホニル尿素剤、２）腸からのブドウ糖の吸収を抑制したり、また肝臓が血液中にブドウ糖を送り出すのを抑えたりする作用を有するビグアナイド剤、３）糖質分解酵素α−グルコシダーゼの働きを抑制し、炭水化物の消化を遅らせるα−グルコシダーゼ阻害剤、４）ブドウ糖が細胞に採り込まれ易くする作用を有するインスリン抵抗性改善薬などが知られている。そしてこれらの薬剤は、糖尿病の型により適宜選択され、単独あるいは併用により使用されている。
【０００４】
しかしながら、糖尿病は食物の豊富な時代環境に伴う現代病ともいわれる難治性の疾患であり、上記したインスリンを主体とした改善薬、および各種の経口糖尿病薬を長期間服用しつづける必要があった。そのため、好ましくない副作用が生じるという問題もあった。そこで、副作用のない天然物又はその分解物を用いる試みもなされ、例えば旋覆花・人参あるいは蒼朮の抽出エキス（特許文献１参照）、アガリクスタケ（特許文献２参照）、ザクロ，タラノキ，ホオキギ，紅景天属植物，サラシア属植物（特許文献３参照），ブナシメジ子実体（特許文献４参照）等多くの植物にその有効性が知られている。
【０００５】
しかしながら、これまでの糖尿病予防・治療剤は、安定性，安全性，有効性の全てを満足するものは、未だ得られておいないのが実状である。
【０００６】
本発明で用いるニンニクは、滋養強壮効果を有する食品として汎用されており、その薬理活性も数多く検討されている。例えば、ニンニク中に含まれているアリインには、ガン予防効果（特許文献５参照）、抗菌作用（特許文献６，７参照）、免疫賦活作用（特許文献８参照）等が、同じくニンニク中に含まれるサポニンには、抗真菌作用（特許文献９参照）、痴呆予防・治療剤（特許文献１０参照）等が知られている。
【０００７】
【特許文献１】特開２００１−３９８８２号公報
【特許文献２】特開２００１−２１３７７３号公報
【特許文献３】特開２００２−２０３０８号公報
【特許文献４】特開２００２−１８７８５１号公報
【特許文献５】特開２００１−３０２５３１号公報
【特許文献６】特表２００２−５２０３４３号公報
【特許文献７】特開平１０−２８５４６号公報
【特許文献８】特開平７−２４７２２０号公報
【特許文献９】特開平１−２２４３９６号公報
【特許文献１０】特開２００１−５１８４７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、アリインは酵素などによりアリシンに分解するため、サポニンと同時に抽出することが不可能であった。そこで本発明においては、ニンニク中に含まれるアリシンとサポニンの一種であるスピロスタノールを同時に含有するニンニクエキスを提供することを第一の目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
アリインとスピロスタノールを別々に抽出し、これらを併用して用いることにより、アリインとスピロスタノールの両方を含有するニンニクエキスを得、かかるニンニクエキスが、血糖値上昇抑制効果と耐糖能改善効果を有することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の糖尿病予防・改善用組成物は、天然物であるニンニクに由来し、安全性が高く、かつ血糖値上昇抑制作用と耐糖能改善作用を有するので、本発明の糖尿病予防・改善用組成物を摂取することにより、糖尿病の予防効果や糖尿病の治療効果が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において用いるニンニクは、アリウム(Allium)属に属すニンニク（Allium sativum L.）、及びこれらの類縁植物、変種並びに栽培用品種を用いることができる。ニンニクエキスを得る部位としては、鱗茎部が好ましい。
【００１２】
ニンニクからアリインを得るには、まずニンニクの酵素失活処理を行う。酵素失活処理は、ニンニクを熱、マイクロウエーブ、高圧処理、酵素、酸又はアルコールで処理することにより行うことができ、このうち熱処理が簡便であり好ましい。熱処理のための温度は、５０〜２００℃、１〜６０分が好ましく、特に９０〜１２１℃、１０〜３０分が好ましい。
【００１３】
ついで、酵素失活処理した原料ニンニクを破砕し、水を加えてアリインを抽出してニンニク粗抽出液とする。このニンニクの破砕には、高性能ミキサーやホモジナイザー等が好適に用いられる。また、粗抽出液中の原料にんにくの割合は、原料にんにくの濃度が１〜２０重量％の範囲とするのが好ましく、特に５重量％程度とするのが好ましい。破砕されたにんにくには不溶性繊維分などが含まれており、酵素失活処理ニンニクの破砕物に水を加え、攪拌した液は、ろ過或いは遠心分離によって不溶成分を取り除く。ニンニク粗抽出液は瓶に入れ、窒素ガス、炭酸ガス、ヘリウムガス、アルゴンガスなどの不活性ガスを満たし、２５℃以下、望ましくは４℃以下の冷暗所で保存するのが望ましい。かかる粗抽出物は、そのまま用いても良いが、以下に示す精製工程を経たものを用いても良い。
【００１４】
不溶成分を取り除いたニンニク粗抽出液を、逆相系カラムを用いた液体クロマトグラフィーによって分離し、アリインを分離精製する。ここで用いるカラムとしては、例えば、デュポン社製逆相カラムＺＯＲＢＡＸ ＴＭＳ等が好適に用いられる。この種の逆相系カラムを用いてにんにく粗抽出液のクロマトグラフィーを行う場合には、カラムににんにく粗抽出液を供給してアリインを吸着させた後、純水を溶離液として分離し、ＵＶ検出器を用い、アリインの特異吸収波長である２１０ｎｍ程度を測定波長として溶離液のＵＶ吸収率をモニタしておくことにより、アリイン含有フラクションを容易に得ることが可能である。
【００１５】
ニンニク粗抽出液を、逆相系カラムを用いた液体クロマトグラフィーによって分離する場合には、後述する実験例に詳細を記すが、アリインの流出画分には、アリイン以外の他の成分が殆ど存在せず、逆相系カラムを用いた液体クロマトグラフィーのみで精製アリインを分取することが可能である。
【００１６】
また、この液体クロマトグラフィーを実施する場合において、連続大量分取を行う場合には、ニンニク粗抽出液は不安定であり、空気中にさらされることにより不溶成分が析出して白濁しやすく、カラムの分離効率の低下を招くおそれがあるので、ニンニク粗抽出液は瓶に入れ、窒素ガス、炭酸ガス、ヘリウムガス、アルゴンガスなどの不活性ガスを満たしておく。これによってニンニク粗抽出液の白濁を防止でき、連続分取が可能となる。
【００１７】
ニンニクからスピロスタノールを得るには、例えば、特開平１−２２４３９号公報に記載された方法で得ることができる。具体的には、生のニンニクを酵素若しくは酸で加水分解してスピロスタノールを精製させた後抽出することもでき、またニンニクの酵素活性を失活させた後サポニン画分を抽出し、その後酸又は酵素で加水分解してえることもできる。なお、上述のアリインを得る際に抽出したニンニク粗抽出物を用いてスピロスタノールを得ることもできる。
【００１８】
本発明においては、アリインと、スピロスタノールを併用して配合する。配合比は特に限定されず１：１００〜１００：１程度の範囲で適宜することができる。
【実施例】
【００１９】
抽出例１  アリイン粗抽出液
ニンニク鱗茎の外皮を剥して４ｋｇ秤量した後、１５分間沸騰水中で煮沸して熱処理した後アリインをディスパーを用いて粉砕、ホモジナイズし、濾紙を用いて濾過し、この濾液を純水を用いて１００ｍＬに定容し、アリイン粗抽出液とした。
【００２０】
抽出例２  精製アリイン
抽出例１に示したアリイン粗抽出液を用い、これを逆相系カラムを用いた液体クロマトグラフィーによってアリイン画分を採取し、分離精製した。
液体クロマトグラフィー分取条件
・温度：２５℃
・流量：０.５ml/min.
・溶離液：純水
・カラム：ＺＯＲＢＡＸ ＴＭＳ（９.４ｍｍ×２５ｃｍ）
・検出器：ＵＶ検出器（測定波長；２１０ｎｍ）
【００２１】
抽出例３  スピロスタノール
ニンニク鱗茎2kgを水３Ｌ中にて破砕した後、室温にて一晩抽出し、この抽出液を実験例１と同様にMCI GELによるクロマトグラフィーに付し、粗サポニン画分5.0gを得た。この混合物について、シリカゲルクロマトグラフィー［溶離液：クロロホルム−メタノール−水（7:3:0.5）］、さらにMCI GEL CHP 20Pによる逆相クロマトグラフィー（溶離液:90％メタノール）に付し、スピロスタノール（26mg）を得た。
【００２２】
抽出例４  スピロスタノール２
ニンニク鱗茎4kgを凍結しメタノール６Ｌ中にて破砕した後、浴温約70℃にて加温抽出し、濾過後、残渣は更にメタノール２Ｌにて加熱抽出した。抽出液を合わせた後、メタノール留去し、水を加え全量約３ とした。この抽出液をMCI GEL CHP 20P（三菱化成）によるカラムクロマトグラフィーに付し、水、20％メタノール、メタノールで順次溶出を行い、メタノールで溶出される画分から粗サポニン画分8.6gを得た。この混合物についてシリカゲルクロマトグラフィー［溶離液：クロロホルム−メタノール−水（6:4:1）］を行ない、サポニンを含有する粗画分を得た（0.6g）。さらに、本画分につき、MCI GEL CHP 20Pによる逆相カラムクロマトグラフィーを行い（溶離液:80％メタノール）、得られた画分（0.49g）をアセトン：水（2:5）の溶液とし、95℃にて４時間加熱後、溶媒を留去して精製サポニン０.45gを得た。かかる精製サポニン0.25gをβ−グルコシダーゼ（0.25g,アーモンド由来,P.L.Bio Chemical）の0.1M酢酸緩衝液（pH4.3）50ml中37℃にて約二時間反応後、反応液に水50mlを加えMCI GEL CHP 20Pを加え充填したカラムに液を通じ、水、50％メタノール、メタノールにて順次溶出し、メタノールにて溶出した画分を減圧留去しスピロスタノールを得た（0.17g）。
【００２３】
抽出例1〜抽出例４に示した抽出物を表１に示す重量比にて混合し、本発明の実施例に係るニンニクエキスとした。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
【００２６】
１型糖尿病に対する効果
１型糖尿病モデル動物の一種であるストレプトゾトシン（ＳＴＺ）糖尿病モデルラットを用いて、本発明に係るニンニクエキスの糖尿病予防・改善効果を次のようにして調べた。約４週齢の雄のＳＤラットに６５ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシンを腹腔内に投与し、糖尿病を誘発させた。１週間後に高血糖，尿糖，多食，多飲を示したラットについて以下の実験に供した。作製したＳＴＺ糖尿病モデルラット１０匹を１群とし、基本食としてラット用固形飼料（日本チャールズリバー社製ＣＲＦ−１）を投与した基本食群と、基本食に５重量％となるように上記実施例１〜４記載のニンニクエキスを混合した実施例１〜４混合食群とに群分けした。また、比較のため基本食に５重量％となるように抽出例２若しくは抽出例３を混合した抽出例２，３混合食群も同時に試験を行った。これらは室温２３℃，１２時間明暗サイクルにて飼料と水を自由に摂取できる環境で４週間飼育した。飼育開始から１週間毎に２０時間絶食後のラット尾静脈から採血し、血糖値を測定した。さらに、０，２，４週目ではブドウ糖負荷試験を行った。すなわち、２０時間の絶食後、２ｇ／ｋｇのブドウ糖をゾンデを用いて経口投与した。ブドウ糖投与前（０時間）、投与０．５時間後，１時間後，１．５時間後，２時間後にそれぞれ尾静脈から採血し血糖値を測定し平均値を算出した。試験期間中の空腹時血糖値の変化を表２に、ブドウ糖負荷試験の結果を表３〜５にそれぞれ示す。
【００２７】
【表２】
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【００２８】
【表３】
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【００２９】
【表４】
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【００３０】
【表５】
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【００３１】
表２からわかるように、基本食群と比較して実施例混合食群では，空腹時血糖値の上昇が抑えられる傾向にあることが示された。抽出例混合食群では，基本食群よりは空腹時血糖値の上昇が抑えられる傾向にあることが示されたが，その効果は充分なものではなかった。また、糖負荷試験の結果では、表３に示したとおり試験開始時には基本食群と実施例混合食群，抽出例混合食群に差は認められなかったが、表４，表５に示した飼育２週目及び４週目では、ブドウ糖投与直後の血糖値の上昇が抑えられ、さらに血糖値の回復も早くなっていた。従って、基本食群と比較して実施例混合食群では、耐糖能が改善されていた。また抽出例混合食群の耐糖能は基本食群よりは優れている傾向が見られたが実施例混合食群ほどの改善効果は認められなかった。以上のことからアリインとスピロスタノールを含有するニンニクエキスには１型糖尿病の予防・改善効果があることが示された。
【００３２】
２型糖尿病に対する効果
２型糖尿病モデル動物の１種であるＫＫＡY糖尿病モデルマウスを用い１型糖尿病と同様にニンニクエキスの効果を次のようにして調べた。約４週齢のＫＫＡY／Ｔａ  Ｊｃｌマウスを１週間予備飼育した後、１０匹を一群として基本食群と実施例混合食群，抽出例混合食群に群分けして試験を開始した。マウスはケージに個別に入れて室温２３℃、１２時間明暗サイクルにて飼料と水を自由に摂取できる環境で５週間飼育した。飼育開始から１週間毎に、５時間絶食後のマウス眼底からキャピラリー採血管を用いて採血し、血糖値を測定した。さらに、飼育開始から３６日後にブドウ糖負荷試験を行った。すなわち、２０時間絶食した後、２ｇ／ｋｇのブドウ糖をゾンデを用いて経口投与した。ブドウ糖投与前（０時間），投与後０．５時間，１時間，１．５時，２時間後に眼底から採血し血糖値を測定し平均値を算出した。試験期間中の血糖値の変化を表６に、糖負荷試験の結果を表７に示す。
【００３３】
【表６】
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【００３４】
【表７】
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【００３５】
表６，表７に示したとおり、基本食群と比較して実施例混合食群では、ブドウ糖投与直後の血糖値上昇が抑制され、さらに血糖値の回復も早いことが確認された。なお、抽出例混合食群では、かかる効果が確認できなかった。以上のことから、アリインとスピロスタノールを併用して含有する本発明のニンニクエキスは、２型糖尿病の予防・改善効果を有することが示された。