(57)【要約】【課題】  抗バベシア剤、特に、副作用の少ない化学療法薬剤として用いることができ、しかも抗バベシア活性の高いバベシアの予防及び／又は治療剤を提供すること。【解決手段】  アルカンゲリシア  フラバから抽出分離されたパルマチン、ベルベリン、ジャトリジン、ジヒドロベルベリン、ヒドロアルセトピン、及びヒドロキシエクジソン、及びその薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗バベシア剤からなる。本発明の有効成分は、高い抗バベシア活性を有しながら、副作用の殆どない有効成分である。本発明の抗バベシア剤は、ヒト及び動物のバベシア感染症の予防及び／又は治療薬として用いることができ、特に、現在その感染が拡大しているイヌのバベシア感染の予防及び治療薬としての利用が期待し得るものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
パルマチン、ベルベリン、ジャトリジン、ジヒドロベルベリン、ヒドロアルセトピン、及びヒドロキシエクジソンの１又は２以上、又はそれらの化合物の薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗バベシア剤。
【請求項２】
パルマチンが、式（１）
【化１】
2005247767.tif 000015
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項３】
ベルベリンが、式（２）
【化２】
2005247767.tif 000016
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項４】
ジャトリジンが、式（３）
【化３】
2005247767.tif 000017
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項５】
ジヒドロベルベリンが、式（４）
【化４】
2005247767.tif 000018
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項６】
ヒドロアルセトピンが、式（５）
【化５】
2005247767.tif 000019
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項７】
ヒドロキシエクジソンが、式（６）
【化６】
2005247767.tif 000020
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤。
【請求項８】
アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia  flava）の植物から抽出され、かつ請求項１〜７のいずれか記載の化合物を含有する抽出物を有効成分とする抗バベシア剤。
【請求項９】
抗バベシア剤が、バベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜８のいずれか記載の抗バベシア剤。
【請求項１０】
抗バベシア剤が、医薬用又は動物薬用予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜９のいずれか記載の抗バベシア剤。
【請求項１１】
動物薬用予防及び／又は治療薬が、イヌのバベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１０記載の抗バベシア剤。
【請求項１２】
アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia  flava）の植物を水又は水性溶媒で抽出し、該抽出液を精製、分離することを特徴とする請求項１〜７のいずれか記載の化合物の抽出、分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗バベシア剤、特に、アルカンゲシア  フラバ（（Arcangesia  flava）の植物から抽出することができる化合物を有効成分とするバベシアの予防及び／又は治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
バベシア・ギブソニ（Babesia gibsoni）は、野生及び飼育下のイヌに溶血性貧血を引き起こす赤血球寄生虫である（J. Am. Vet. Med. Assoc. 180, 507-511, 1982; J. Protozool. Res. 3, 111-125, 1993）。バベシア・ギブソニのイヌへの感染は、日本の、特に関西において、長く問題になっている。最近では、この感染の地理的分布が更に拡大している。更に、他の動物での感染の拡大やヒトへの感染も危惧されている。従来、バベシア・ギブソニの感染の治療のために、ジミナゼン・アセチュレート(Diminazene aceturate)（ガナゼッグ：Ganazeg））、フェナミジン  イセチアネート(phenamidine  isethionate)（ロマディン：Lomadine）及びイセチオン酸ペンタミジン（pentamidine  isethionate）(ロミディン：Lomidine)が開発され、バベシア・ギブソニ感染に対して効能を示してきた（Treatment of Babesia gibsoni infection with Phenamidine isethionate. Vet.Rec．86,8-10,1970;J.Am.Vet.Med.Assoc.180,507-511, 1982）。
【０００３】
しかしながら日本においては、ジミナゼン・アセチュレートのみが、バベシア・ギブソニ感染の治療に用いられてきた。ジミナゼン・アセチュレートは、バベシア・ギブソニに対して有効であるが、衰弱、過敏症、麻痺、刺激への無反応、及び中枢神経系の致命的な出血（fatal central nervous system haemorrhage）といった副作用を誘導することがある（Greene C．E． ed.B.W.Saunders Philadelphia.796-803, 1990）。しかし、この薬剤の製造は最近になって停止された。したがって、バベシア・ギブソニに感染したイヌの治療については、代わりとなる、副作用の少ない化学療法薬剤が用意できない状況にあり、その開発が急務となっている。
【０００４】
近年、抗バベシア作用を有するいくつかの化合物や物質が開示されている（特開平２００１−８１０３４号公報、特表平８−５０２６４６号公報、特表平１０−５０７４４６号公報、特表平１０−５１１３４５号公報、特表２０００−５１５８７７号公報、特表平２００１−５１７２２３号公報、特表２００３−５０３０３９号公報、特表２００３−５０５３５７号公報、及び特表２００３−５３４０１６号公報、）。しかし、これらのものもまだ開発途中のものであり、副作用の少ない化学療法薬剤で、しかもバベシアに有効な薬剤は開発されていない。
【０００５】
一方、アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia flava）Merr（ツツジフジ科）は、インドネシアの中央カリマンタンで見られるつる性植物であり、現地では「akar kuning」と呼ばれている。この植物は、現地住民によって、マラリア、赤痢、熱の治療に、及び強壮剤として、伝統的に使われてきた。アルカンゲリシア  フラバの植物化学物質を以前調査したところ、タリフェンジン（thalifendine）、デヒドロコリダルミン（dehydrocorydalmine）、ジャトロリジン（jatrorrhizine）、ピクナリン（pycnarrhine）、ベルベリン、パルマチン、ヒドロキシベルベリン、リマシン（limacine）、ホモアロモリン（homoaromoline）及びフラノジテルペネス（furanoditerpenes）の存在が判明している（Phytochemistry 9, 663-664, 1970; Chem. Pharm. Bull. 33, 479-487, 1985; J. Nat. Prod. 45, 582-584, 1982）。一部の化合物は、マラリアの治療、抗菌性及び抗腫瘍性の点で、治療上の有用性があると言われている（Life Sci. 54, 2099-2107, 1994; Parasitol. Today 2, 309-312, 1986; J. Med. Chem. 31, 1084-1087, 1988）。
【０００６】
また、パルマチンやベルベリンのようなアルカロイドは、ミカン科のキハダ（Phellodendron amurense）、キンポウゲ科のオウレン(Coptis japonica)、メギ科のセイヨウメギ（Berberis wilsoniae）等に含まれ、健胃薬、整腸薬、消炎収斂薬等の漢方薬として用いられており、近年これらのアルカロイド及びその誘導体を種々の医薬用途に用いることの開示がなされている。例えば、特開平７−１０９２７６号公報には、該アルカロイド及びその誘導体を、心筋性虚血を治療するための抗不整脈薬として用いることについて、特開平７−３１６０５１号公報には、該アルカロイドを免疫抑制剤として用いることについて、特開平９−９５４５２号公報には、該アルカロイドを脂肪分解剤として用いることについて、特開平１１−３０２２８２号公報には、該アルカロイドを抗真菌剤として用いることについて、それぞれ開示されている。また、エクジソンのようなエクジステロイド（ecdysteroid）類も、フシグロセンノウ（Lychnis miqueliana）のような植物から抽出されることが報告されている（日本生薬学会第33回年会講演要旨集、７２頁、１９８６）。しかし、これらのアルカロイドやステロイドの抗バベシア作用については今まで報告されていない。
【特許文献１】特開平７−１０９２７６号公報。
【特許文献２】特開平７−３１６０５１号公報。
【特許文献３】特開平９−９５４５２号公報。
【特許文献４】特開平１１−３０２２８２号公報。
【特許文献５】特開平２００１−８１０３４号公報。
【特許文献６】特表平８−５０２６４６号公報。
【特許文献７】特表平１０−５０７４４６号公報。
【特許文献８】特表平１０−５１１３４５号公報。
【特許文献９】特表２０００−５１５８７７号公報。
【特許文献１０】特表２００１−５１７２２３号公報。
【特許文献１１】特表２００３−５０３０３９号公報。
【特許文献１２】特表２００３−５０５３５７号公報。
【特許文献１３】特表２００３−５３４０１６号公報。
【非特許文献１】J. Am. Vet. Med. Assoc. 180, 507-511, 1982。
【非特許文献２】J. Protozool. Res. 3, 111-125, 1993。
【非特許文献３】Treatment of Babesia gibsoni infection with Phenamidine isethionate. Vet.Rec．86,8-10,1970。
【非特許文献４】J.Am.Vet.Med.Assoc.180,507-511, 1982。
【非特許文献５】Greene C．E． ed.B.W.Saunders Philadelphia.796-803, 1990。
【非特許文献６】J. Nat. Prod. 45, 582-584, 1982。
【非特許文献７】Phytochemistry 9, 663-664, 1970。
【非特許文献８】Chem. Pharm. Bull. 33, 479-487, 1985。
【非特許文献９】Life Sci. 54, 2099-2107, 1994。
【非特許文献１０】Parasitol. Today 2, 309-312, 1986。
【非特許文献１１】J. Med. Chem. 31, 1084-1087, 1988。
【非特許文献１２】日本生薬学会第33回年会講演要旨集、72頁、1986。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、抗バベシア剤、特に、副作用の少ない化学療法薬剤として用いることができ、しかも抗バベシア活性の高いバベシアの予防及び／又は治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決すべく、イヌ等の動物或いはヒトのバベシア感染症の予防及び／又は治療剤として、副作用が殆どない化学療法薬剤としての使用の可能性がある植物成分について鋭意探索の結果、アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia flava）（ツツジフジ科）から抽出した成分、すなわち、パルマチン、ベルベリン、ジャトリジン、ジヒドロベルベリン、ヒドロアルセトピン、及びヒドロキシエクジソンが顕著な抗バベシア活性を有することを見い出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、アルカンゲリシア  フラバから抽出分離されたパルマチン、ベルベリン、ジャトリジン、ジヒドロベルベリン、ヒドロアルセトピン、及びヒドロキシエクジソン、及びその薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗バベシア剤からなるものである。また、本発明の抗バベシア剤の有効成分としては、上記抗バベシア活性を有する成分を含有するアルカンゲリシア  フラバからの抽出物という形態の利用も包含するものである。本発明のこれらの有効成分は、副作用が殆どなく、ヒトや動物のバベシア感染症の予防及び／又は治療薬として用いることが可能である。
【０００９】
すなわち具体的には本発明は、パルマチン、ベルベリン、ジャトリジン、ジヒドロベルベリン、ヒドロアルセトピン、及びヒドロキシエクジソンの１又は２以上、又はそれらの化合物の薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗バベシア剤（請求項１）や、パルマチンが、式（１）
【００１０】
【化１】
2005247767.tif 000002
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項２）や、ベルベリンが、式（２）
【００１１】
【化２】
2005247767.tif 000003
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項３）や、ジャトリジンが、式（３）
【００１２】
【化３】
2005247767.tif 000004
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項４）や、ジヒドロベルベリンが、式（４）
【００１３】
【化４】
2005247767.tif 000005
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項５）や、ヒドロアルセトピンが、式（５）
【００１４】
【化５】
2005247767.tif 000006
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項６）や、ヒドロキシエクジソンが、式（６）
【００１５】
【化６】
2005247767.tif 000007
で示される化合物であることを特徴とする請求項１記載の抗バベシア剤（請求項７）や、アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia  flava）の植物から抽出され、かつ請求項１〜７のいずれか記載の化合物を含有する抽出物を有効成分とする抗バベシア剤（請求項８）や、抗バベシア剤が、バベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜８のいずれか記載の抗バベシア剤（請求項９）や、抗バベシア剤が、医薬用又は動物薬用予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１〜９のいずれか記載の抗バベシア剤（請求項１０）や、動物薬用予防及び／又は治療薬が、イヌのバベシア・ギブソニの予防及び／又は治療薬であることを特徴とする請求項１０記載の抗バベシア剤
（請求項１１）や、アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia  flava）の植物を水又は水性溶媒で抽出し、該抽出液を精製、分離することを特徴とする請求項１〜７のいずれか記載の化合物の抽出、分離方法（請求項１２）からなる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の活性成分は、その抗バベシア活性が、従来使用されていたガナゼック（ジナミゼン・アセチュレート）に匹敵し、また、漢方薬として使用されてきたアルカンゲリシア  フラバの植物体から抽出される成分であることからも、その副作用の殆どない有効成分であり、ヒトや動物のバベシア感染症の予防及び／又は治療薬として用いることが可能であり、また、高い抗バベシア活性を有しながら、その副作用のために製造が中止されたガナゼックに代わって、有力な抗バベシア剤としての実用化が可能なものである。本発明の抗バベシア剤は、特に、現在その感染が拡大しているイヌのバベシア感染の予防及び治療薬として、大きな期待が寄せられるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明は、パルマチン、ベルベリン、ジャトリジン、ジヒドロベルベリン、ヒドロアルセトピン、及びヒドロキシエクジソンの１又は２以上、又はそれらの化合物の薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗バベシア剤からなる。該本発明の化合物は以下の構造式で示される：すなわち、式（１）で示されるパルマチン：
【００１８】
【化７】
2005247767.tif 000008
式（２）で示されるベルベリン：
【００１９】
【化８】
2005247767.tif 000009
式（３）で示されるジャトリジン：
【００２０】
【化９】
2005247767.tif 000010
式（４）で示されるジヒドロベルベリン：
【００２１】
【化１０】
2005247767.tif 000011
式（５）で示されるヒドロアルセトピン：
【００２２】
【化１１】
2005247767.tif 000012
式（６）で示されるヒドロキシエクジソン：
【００２３】
【化１２】
2005247767.tif 000013
からなる。
【００２４】
本発明の有効成分である化合物は、アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia  flava）の植物を水又は水性溶媒で抽出し、該抽出液を精製、分離することにより製造することができる。また、本発明の有効成分である化合物は、パルマチンやベルベリンのようなアルカロイドのように、ミカン科のキハダ（Phellodendron amurense）、キンポウゲ科のオウレン(Coptis japonica)、メギ科のセイヨウメギ（Berberis wilsoniae）等、アルカンゲリシア  フラバ以外の植物から抽出、分離し、製造することもできる。該有効成分の抽出、分離手段としては、抽出溶媒として、水又は水性溶媒等、植物成分の抽出溶媒として公知の抽出溶媒を用いることができ、また、精製、分離手段としても適宜公知の精製、分離手段を用いることができる。本発明においては、有効成分として、該有効成分化合物を精製、分離した形で用いることができるが、例えば、アルカンゲリシア  フラバ（Arcangelisia  flava）のような植物から、抽出し、かつ本発明の有効成分化合物のいずれか或いは複数の化合物を含有する抽出物の形で用いることもできる。
【００２５】
本発明の有効成分である化合物や、該化合物を含有する抽出物等を医薬等として用いる場合には、本発明の有効成分である化合物を薬理学的に許容される塩の形で用いることができる。かかる薬理学上許容される塩としては、薬理学上公知のものを用いることができるが、例えば、薬理学上許容される金属塩、アンモニウム塩、含有アミン付加塩、アミノ酸付加塩等を適宜用いることができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられ、有機アミン付加塩としてはモルホリン、ピペリジン等の付加塩、アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン等の付加塩が挙げられる。
【００２６】
本発明の有効成分を医薬として投与するには、該有効成分を、製薬上用いられる適宜の形態に製剤化して、全身又は局所的に、経口又は非経口の形で投与することができる。製剤形態としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏等適宜の形態を挙げることができる。該製剤化に際しては、例えば、各種の賦形剤、潤沢剤、結合剤、崩壊剤、懸濁化剤、乳化剤等の補助剤を用いることができる。本発明の有効成分を、動物用医薬として用いる場合には、本発明の有効成分を適宜の投与形態に製剤化して用いることができる。また、本発明の有効成分を飼料等に混合した形で投与することができる。
【００２７】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２８】
［本発明の有効成分化合物の精製、分離及び同定］
（材料及び方法）
１．一般
融点を、Yanaco社製の微量融点装置（micro melting point apparatus）で測定した。ＩＲスペクトルを、Perkin Elmer社製system2000 FT-IR spectrometerで測定した。マススペクトル、ＦＡＢＭＳ及びＦＡＢＨＲＭＳを、ＪＥＯＬ（日本電子社）社製JMS-SX102 spectrometer及びＪＥＯＬ社製JMS-AX500 spectrometerで記録した。NMEデータは、Bruker社製 AM-500 FT-NMR spectrometer及びJEOL社製JNN-EX 270FT-NMR spectrometerで分析した。カラムクロマトグラフィーは、シリカゲル６０（球状、７０−１４０メッシュＡＳＴＭ、関東化学社製）、Sephadex LH-20（ファルマシア社製）、及びDiaion HP-20（三菱化学社製）を用いて行った。Silica gel 60F254 pre-coated plates（メルク社製）を分析的ＴＬＣ及び予備的ＴＬＣ（prep.TLC）に用いた。
【００２９】
２．植物材料
アルカンゲリシア  フラバの茎を、インドネシアの中央カリマンタンで収集した。この植物は、インドネシア・ボゴール・植物標本室（the Herbarium Bogoriense Indonesia）にて同定された。証拠標本は、ボゴールのインドネシア化学研究所、生物学研究開発（the Research and Development for Biology, Indonesian Institute of Sciences, Bogor）に委託した。
【００３０】
３．インビトロ抗バベシア  アッセイ
Brockelman及びTanariyaの方法（J.Parasitol.77,994-997,1991）を改良した方法に従い、インビトロで、B．ギブソニに対してアッセイを行った。化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かし、更に、ピルビン酸ナトリウム（０．１ｍｇ／ｍｌ）、グルタミン（０．３ｍｇ／ｍｌ）、炭酸水素ナトリウム（２ｍｇ／ｍｌ）、ペニシリン（１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を補足したＲＰＭＩ１６４０媒体で希釈した。最終ＤＭＳＯ濃度は０．１％以下であった。バベシア．ギブソニ寄生虫の培養は、Murase らの方法（J．Vet. Sci. 53,759-760., 1991）を改良して行った。正常なイヌの静脈血液にヘパリンを加え、Vega y Martinez（ＶＹＭ）溶液で３回洗浄し（J. Vet. Res.46,416-420, 1985）、更に、ＲＰＭＩ１６４０で２回洗浄した。洗浄後、赤血球を、６０％ＲＰＭＩ１６４０及び４０％正常イヌ血清からなる培養媒体において、６％の最終赤血球沈層容積（packed cell volume）まで再び懸濁した。赤血球懸濁液を、インキュベーションの開始時点で、０．５％〜１．０％の寄生虫血症に寄生された赤血球と混合した。
【００３１】
テストは、９６−ウェル培養プレートを用いて行われ、各ウェルには寄生赤血球懸濁液２５μｌ及び各化合物の個別濃度を含有する化合物溶液２５μｌが含まれていた。化合物の最終濃度は、０．０１、０．０６、０．２４、０．９８、３．９１、１５．６２、６２．５０、２５０及び１０００μｇ／ｍｌであった。全てのテストは２回にわたって行われた。プレートは、３７℃の５％ＣＯ2、５％O2及び９０％N2の湿った空気中で３日間にわたり、インキュベータにインキュベートされた。ギームザ染色（Giemsa-stained）された血液塗抹標本（blood smear）を各ウェルから用意し、寄生虫の比率は１０００細胞毎の寄生された細胞の数を数えることによって計算した。
バベシア．ギブソニの培養は同様の培養条件を適用して、本発明者らの研究所にて継続された。７日毎に同量の非感染赤血球を、感染培養赤血球と混合した。
【００３２】
（抽出及び単離）
活性化合物（active compound）の抽出及び単離を、抗バベシア活性アッセイにより監視した。アルカンゲシア  フラバの風乾茎（５０ｇ）を１ｌの水で３０分間、2回にわたり煮沸した。濾過後、抽出液を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ×４）で抽出し、水層（aqueous…layer）及びＥｔＯＡｃ層を得た。蒸発後、水層の残基をDiaion HP-20カラムクロマトグラフィーにかけ、Ｈ2Ｏ（１ｌ）、３０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１ｌ）、７０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１ｌ）、及びＭｅＯＨ(１ｌ)で連続的に溶出（elute）した。７０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏの残基（１２８ｍｇ）は、溶媒システム２０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3でSephadex LH-20カラムのクロマトグラフィーにかけ、３種の画分（fraction）、すなわち、Ｆｒ．Ｉ（７７．４ｍｇ）、Ｆｒ．ＩＩ（１８．４ｍｇ）、及びＦｒ．ＩＩＩ（２６．３ｍｇ）を得た。Ｆｒ．Ｉ及びＦｒ．ＩＩは２０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3で発生した（developed）予備的ＴＬＣ によって精製され、それぞれ化合物１（５０．６ｍｇ）及び２（１２．８ｍｇ）が得られた。
【００３３】
Ｆｒ．ＩＩＩは、Sephadex LH-20カラムクロマトグラフィーにかけ、ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（８０：１８：２）で溶出し、Ｆｒ．ＩＩＩ−１（１８．２ｍｇ）を得、さらに溶媒システムＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（８０：１８：２）を用いて予備的ＴＬＣにより精製し、化合物３（１１．２ｍｇ）を得た。ＭｅＯＨ溶出液（eluate）の残基（７１．０ｍｇ）を、ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（５０：４０：１０）を溶出液として用いて、Sephadex LH-20カラムクロマトグラフィーにかけ、２種の画分、すなわち、Ｆｒ．ＩＶ（２１．６ｍｇ）及びＦｒ．Ｖ（２８．２ｍｇ）を得た。化合物４（１１．９ｍｇ）及び５（１６．６ｍｇ）は、Ｆｒ．ＩＶ及びＦｒ．Ｖを溶媒システムＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（５０：４０：１０）を用いた予備的ＴＬＣによって精製した後にそれぞれ得られた。
【００３４】
ＥｔＯＡｃ層の残基を、シリカゲルクロマトグラフィーにかけ、ＣＨＣｌ3（５００ｍｌ）、３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3（５００ｍｌ）、２０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3（５００ｍｌ）及びＭｅＯＨ（５００ｍｌ）で連続的に溶出した。ＭｅＯＨ溶出液の残基（９３．０ｍｇ）をSephadex LH-20カラムクロマトグラフィーにかけ、ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（５０：４１：９）で溶出し、Ｆｒ．ＶＩ（１３．６ｍｇ）を得、さらに溶媒システムＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ（５０：４１：９）を用いた予備的ＴＬＣによりさらに精製し、化合物６（８．４ｍｇ）を得た。
【００３５】
（化合物の同定）
化合物１：
化合物１を、黄色アモルファス粉末（yellow amorphous powder）として得た：ｍｐ２４７−２４９o；ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ （rel. int.）：３５２［Ｍ+］（１００％）。ＦＡＢＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３５２．１５６５（Ｃ21Ｈ22Ｏ4Ｎ：３５２．１５５０として計算（calcd.for））。ＭＳ及びＮＭＲデータは文献データ（Phytochemistry, 50,279-281.,1999）と合致した。
【００３６】
化合物２：
化合物２を、黄色アモルファス粉末として得た：ｍｐ２０４−２０５o；ＦＤＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３３６［Ｍ+］（１００％）。ｍ／ｚ（rel. int.）：３３６．１２４５（Ｃ20Ｈ18Ｏ4Ｎ：３３６．１２３６として計算）。ＭＳ及びＮＭＲデータは文献データ（Phytochemistry, 28, 2833-2839,., 1989）と合致した。
【００３７】
化合物３：
化合物３を、黄色アモルファス粉末として得た：ｍｐ２０４−２０６o；ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３３８［Ｍ+］（１００％）。ＦＡＢＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３３８．１４１１（Ｃ20Ｈ20Ｏ4Ｎ：３３８．１３９３として計算）。ＭＳ及びＮＭＲデータは文献データ（Phytochemistry, 22, 1671-1673, 1983）と合致した。
【００３８】
化合物４：
化合物４を、黄色アモルファス粉末として得た：ｍｐ１８３−１８５o；ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３３６［Ｍ+−Ｈ ］（１００％）。ＦＡＢＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３３６．１２６４（Ｃ20Ｈ18Ｏ4Ｎ：３３６．１２３６として計算）。1Ｈ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ７．２８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１）、６．７４（１Ｈ、ｓ、Ｈ−４）、２．４９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、Ｈ−５）、２．７８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、Ｈ−６）、４．１９（１Ｈ、ｓ、Ｈ−８）、６．７９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、Ｈ−１１）、６．６９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、Ｈ−１２）、６．０３（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１３）、３．７５（３Ｈ、ｓ、９−ＯＣＨ3）、３．７０（３Ｈ、ｓ、１０−ＯＣＨ3）及び５．９９（２Ｈ、ｓ、Ｏ−ＣＨ2−Ｏ）；13Ｃ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１０３．５（Ｃ−１）、１４６．４（Ｃ−２）、１４６．９（Ｃ−３）、１０７．９（Ｃ−４）、１２８．６（Ｃ−４ａ）、２８．９（Ｃ−５）、４８．３（Ｃ−６）、４８．８（Ｃ−８）、１２１．６（Ｃ−８ａ）、１４３．９（Ｃ−９）、１４９．９（Ｃ−１０）、１１１．７（Ｃ−１１）、１１８．４（Ｃ−１２）、１２８．３（Ｃ−１２ａ）、９５．９（Ｃ−１３）、１４１．０（Ｃ−１３ａ）、１２３．９（Ｃ−１３ｂ）、６０．１（９−ＯＣＨ3）、５５．７（１０−ＯＣＨ3）及び１０１．０（Ｏ−ＣＨ2−Ｏ）。
【００３９】
化合物５：
化合物５を、黄色アモルファス粉末として得た：ｍｐ１５５−１５７o；ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３５２［Ｍ+−Ｈ−１７ ］（１００％）。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３６８（０．４）、３５２（８．３）、３．６（１４．１）２７８（７．７）、２３４（６．０）、２１９（６．５）、１８０（９．３）、１４９（１９．０）、１１１（１２．７）、１０５（２８．８）、９１（４３．１）、５７（４１．３）、及び４４（１００）。ＦＡＢＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：３５２．１６２７（Ｃ21Ｈ22Ｏ4Ｎ：３５２．１５５０として計算）。ＩＲνKBrmaxｃｍ-1：３４２０、１６０５、１５１１、１４９０、１３４３、１３１６、１１９０、１０３６、１００１、９７４及び８５１．1Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ７．７８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１）、７．０７（１Ｈ、ｓ、Ｈ−４）、３．１９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、Ｈ−５）、４．９３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２  Ｈｚ、Ｈ−６）、９．８９（１Ｈ、ｓ、Ｈ−８）、８．１８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、Ｈ−１１）、８．００（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２  Ｈｚ、Ｈ−１２）、８．９６（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１３）、４．０８（３Ｈ、ｓ、９−ＯＣＨ3）、４．０５（３Ｈ、ｓ、１０−ＯＣＨ3）、６．１５（２Ｈ、ｓ、Ｏ−ＣＨ2−Ｏ）及び３．１４（３Ｈ、ｓ、Ｎ−ＣＨ3）；13Ｃ−ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ１０５．４（Ｃ−１）、１４７．６（Ｃ−２）、１４９．８（Ｃ−３）、１０８．４（Ｃ−４）、１３０．６（Ｃ−４ａ）、２６．３（Ｃ−５）、５５．１（Ｃ−６）、１４５．４（Ｃ−８）、１２１．４（Ｃ−８ａ）、１４３．６（Ｃ−９）、１５０．４（Ｃ−１０）、１２６．７（Ｃ−１１）、１２３．５（Ｃ−１２）、１３２．９（Ｃ−１２ａ）、１２０．２（Ｃ−１３）、１３７．４（Ｃ−１３ａ）、１２０．４（Ｃ−１３ｂ）、６１．９（９−ＯＣＨ3）、５７．０（１０−ＯＣＨ3）、１０２．０（Ｏ−ＣＨ2−Ｏ）及び４８．５（Ｎ−ＣＨ3）。
【００４０】
化合物６：
化合物６を、ｍｐ２３１−２３３oで無色の針状（colorless needle）で得た；ＦＡＢＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：４７９［Ｍ+−Ｈ ］（１００％）。ＦＡＢＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（rel. int.）：４７９．２９７１（Ｃ27Ｈ43Ｏ7：４７９．３０１０として計算）。ＭＳ及びＮＭＲデータは文献データ（Phytochemistry, 49,2109-2114, 1998）と合致した。
【００４１】
［結果及び考察］
水（aqueous）及びＥｔＯＡｃ画分の、生物検定を目的とした(bioassay-directed)単離法を用いて６種の活性化合物１−６が得られた。化合物５を除いて、他の５種の化合物は既にツヅラフシ科植物及びキノコから単離された、既知のアルカロイド及びステロイドであることが分かった。既知の化合物は、その質量（mass）及びＮＭＲスペクトルを、既に報告されている文献データ（Phytochemistry, 50,279-281.,1999；Phytochemistry, 28, 2833-2839,1989；  Phytochemistry, 22, 1671-1673, 1983；J. Chem. Soc. ,911-918, 1980；及び 49,2109-2114, 1998）と比較することにより、以下の通りに同定された：１、パルマチン（palmatine）；２、ベルベリン（Berberine）；３、ジャトリジン（jatrorrhizine）；４、ジヒドロベルベリン（dihydroberberine）；５、ヒドロアルセトピン（hydroarcetopine）；６、２０−ヒドロキシエクジソン（ 20-hydroxyecdysone）。各同定された各化合物の構造を、図１に示す。
【００４２】
（考察）
化合物について、質量、プロトン、及び炭素ＮＭＲスペクトルデータの共同分析（combination analysis）、並びに類似アルカロイドのそれらとの比較により、プロトベルベリン型骨格を有することが提示されている（Phytochemistry, 22,627-628, 1983；Phytochemistry, 28, 2833-2839,1989；Magn.Reson. Chem.,37,195-202,1999）。５のＦＡＢＭＳは、ｍ／ｚ  ３５２［Ｍ+−１７＋Ｈ ］で準分子を示した。ｍ／ｚ  ２３６［Ｍ+−Ｍｅ］、３２１［Ｍ+−２×Ｍｅ］、３０６［Ｍ+−ＯＭｅ−Ｍｅ＋Ｈ］、２７８［Ｍ+−２×ＯＭｅ−Ｍｅ＋４Ｈ］で、有意にマス・フラグメント（mass fragment）が現れたが、このことは２種のメトキシ基の存在を示唆している。ＩＲスペクトルは３４２０、１６０５、１５１１、９７４、及び８５１ｃｍ-1で吸収を示しており、ヒドロキシ基及び芳香核を示唆する。
【００４３】
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは以下のものを示した：δ６．１５（２Ｈ、ｓ、Ｏ−ＣＨ2−Ｏ）で出現するメチレンジオキシ基（methylenedioxy group）、及びＡ環のδ７．７８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−１）及びδ７．０７（１Ｈ、ｓ、４−Ｈ）で出現する２種のパラ位のプロトン（para protons）を有する１種のフェニル環；Ｄ環のδ８．１８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）及びδ８．００（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）の２種のオルトプロトン（ortho-protons）に加えて、δ４．０８（３Ｈ、ｓ、９−ＯＣＨ3）及びδ４．０５（３Ｈ、ｓ、１０−ＯＣＨ3）の２種のメトキシ基を有するさらなる１種のフェニル環；δ３．１４（３Ｈ、ｓ）のＮ−メチル基；及びδ３．１９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）及びδ４．９３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）の２種のメチレン基。５の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、４要素からなる炭素原子であって、酸素機能に関連し、δ１４３．６、１５０．４及び１３７．４で出現する炭素原子を３種示した（showed three quaternary carbon atoms…）。
【００４４】
２Ｄ−ＮＭＲ技術（ＨＭＢＣ及びＮＯＥＳＹ実験を含む）を利用して、骨格上の機能基（functional groups）の置換位置（substitution position）を固定した。ＨＭＢＣ実験からの主要な相関性（correlation）、すなわち、Ｈ−１及びＣ−２／Ｃ−３間、Ｈ−４及びＣ−３間、Ｈ−６及びＣ−８間、Ｈ−８及びＣ−８ａ間、ＯＣＨ3（Ｃ−９）及びＣ−９間、ＯＣＨ3（Ｃ−１０）及びＣ−１０間、Ｈ−１２及びＣ−１１／Ｃ−１２ａ間、Ｈ−１３及びＣ−１３ａ間の相関性から、１種のメチレンジオキシ基がＡ環のＣ−２及びＣ−３に固定され、２種のメトキシ基がＤ環のＣ−９及びＣ−１０に位置することが示唆された。ＮＯＥＳＹスペクトルから観察された主要な相関性、すなわち、Ｈ−１及びＨ−１３間、Ｈ−４及びＨ−５間、Ｈ−５及びＨ−６間、Ｈ−１１及び１種のメトキシ、Ｈ−１２及びＨ−１３間の相関性はメトキシ基の置換位置を固定した。従って、ヒドロキシ基は必ずＣ−１３ａに位置する。hydroarcetopineと呼ばれる、化合物５の構造が証明された（図１）。
【実施例２】
【００４５】
（本発明の有効成分化合物の抗バベシア活性の測定−１）
本発明において単離されたアルカロイド１−５及びステロイド６について、インビトロでのバベシア．ギブソニの成長に対する抗バベシア活性をテストした。結果を表１に示す。アルカロイド１−５は、ジミナゼン・アセチュレートの標準的薬剤よりも、活発にバベシア．ギブソニの成長を阻害したが、ステロイド６は活発性が劣っていた。アルカロイド活性の類似性は、主に化学構造の類似性によるものと推測される。Ａ及びＤ環の酸素置換基の位置及び型は、抗バベシア活性に影響を与えるようである。アルカンゲシア  フラバから分離された高抗バベシア活性を有する各成分の発見は、新たな抗バベシア薬剤を得るための有効成分として、十分期待しうるものであり、それらの合成、毒性評価、及び作用メカニズムについての研究にむける努力に拍車をかけることが期待される。
【００４６】
【表１】
2005247767.tif 000014
【実施例３】
【００４７】
［本発明の有効成分化合物の抗バベシア活性の測定−２］
本発明において、アルカンゲシア  フラバの茎から単離したパルマチン、ベルベリン、ジャトロリジン、ジヒドロベルベリン、ヒドロアルセトピン及びヒドロキシエクジソンの、培養中のバベシア・ギブソニの成長に対する抗バベシア作用を評価した。かかる化合物の作用は、濃度１００μｇ／ｍｌのヒドロキシエクジソンの場合を除いて、濃度１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、及び１μｇ／ｍｌで用量依存的な効果を示した。完全な阻害効果が増殖から２日目の１００μｇ／ｍｌで、３日目及び４日目又は５日目の１０μｇ／ｍｌでそれぞれ観察されたのに対し、１μｇ／ｍｌでは完全なものではなかった。かかる阻害効果は、ガナゼックにより生じる効果と類似している。しかし、０．１μｇ／ｍｌ及び０．０１μｇ／ｍｌでは、化合物は阻害効果を全く示さなかった。
【００４８】
（材料及び方法）
１．化合物の調製
インドネシア、中央カリマンタンのパランカラヤ地区に茂っている森から、アルカンゲシア  フラバの茎を採取した。抽出と精製により、アルカンゲシア  フラバの化学成分を得た。風乾したアルカンゲシア  フラバの茎（５０ｇ）を１Lの湯で３０分間、２回煮沸した。かかる熱湯を濃縮した後、ＥｔＯＡｃで抽出し、水層及びＥｔＯＡｃ層を得た。水層の乾燥残留物をdiaionＨＰ−２０カラムでクロマトグラフィーにかけ、Ｈ2Ｏ、ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（３０：７０）、ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（７０：３０）及びＭｅＯＨで続けて溶出した。ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（７０：３０）のフラクションからパルマチン（１）、ベルベリン（２）及びジャトロリジン（３）が得られた。
【００４９】
一方、ＭｅＯＨのフラクションからはジヒドロベルベリン（４）及びヒドロアルセトピン（５）が得られた。ＥｔＯＡｃ層の乾燥残留物をシリカゲルカラムでクロマトグラフィーにかけ、ＣＨＣｌ3、ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ3（３：９７）、ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ3（２０：８０）及びＭｅＯＨで続けて溶出した。断片ＭｅＯＨからヒドロキシエクジソン（６）を得た。これらすべての化合物をその分光分析データに基づいて確立し、既知の関連化合物と比較した（Phytochemistry 22, 1671-1673, 1983; Phytochemistry 28, 2833-2839, 1989; J. Chem. Soc. 911-918, 1980; Phytochemistry 49, 2109-2114, 1998; Phytochemistry 50, 279-281, 1999）。
【００５０】
２．バベシア・ギブソニの調製
本研究で用いるバベシア・ギブソニという寄生虫を、文献（Am. J. Vet. Res. 61, 1520-1524, 2000）記載の培地に若干の改良を施した培地で保持した。健常なイヌのヘパリン化静脈血を、Vega y Martinez溶液（Am. J. Vet. Res. 46, 416-420, 1985）で３回洗浄した後、ＲＰＭＩ１６４０で２回洗浄した。洗浄後、最終赤血球沈層容積が３％になるように、６０％のＲＰＭＩ１６４０にピルビン酸ナトリウム（０．１ｍｇ／ｍｌ）、グルタミン（０．３ｍｇ／ｍｌ）、重炭酸ナトリウム（２ｍｇ／ｍｌ）、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）及び４０％の健常なイヌ血清を添加して構成された培養培地に、赤血球を再懸濁した。かかる赤血球懸濁液をB. gibsoni感染赤血球と混合し、５％のＣＯ2、５％のＯ2及び９０％のＮ2の加湿雰囲気下にて、３７℃でインキュベーションを行った。２４時間毎に、沈殿した赤血球を乱さないように培養上清の６０％を除去し、等量の新鮮な培地と交換した。
【００５１】
３．抗バベシア作用の評価
アルカンゲシア  フラバの成分の抗バベシア作用を評価するため、被験物質を少量のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、更に、ＲＰＭＩ１６４０培地で稀釈した。バベシア・ギブソニ感染赤血球を、未感染赤血球を含む培養培地と混合し、インキュベーション開始時の寄生虫血症を０．５−１．０％となるようにした。２４ウェルの培養プレートを用いて実験を行い、９００μｌの感染赤血球懸濁液、及び、各化合物をそれぞれの濃度で含む１００μｌの化合物溶液を各ウェルに入れた。化合物の最終濃度は、１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、及び０．０１μｇ／ｍｌであった。かかるプレートを、５％のＣＯ2、５％のＯ2及び９０％のＮ2の加湿雰囲気下にて、３７℃で７日間インキュベーションした。すべての実験を３回行った。毎日、各ウェルの培地を吸引し、適切な被験化合物濃縮物を含む新鮮な培地１ｍｌを添加した。ギムザ染色した薄切り塗抹標本を各ウェルから毎日作製し、赤血球１０００個中の感染細胞数を計測して、寄生虫血症の程度を測定した。
【００５２】
（結果）
培養中のバベシア・ギブソニの成長に対するアルカンゲシア  フラバ成分の効果を図２に示す。パルマチン、ベルベリン、ジャトロリジン、ジヒドロベルベリン及びヒドロアルセトピンは、濃度１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌで非常に効果的に成長を阻害し、これはガナゼックにより生じる効果と類似していた。濃度１００μｇ／ｍｌのヒドロキシエクジソンでは、寄生虫血症の程度は、初回処理時と相対的に変わらず、さらに希釈した際に上昇した。しかし、０．１μｇ／ｍｌ及び０．０１μｇ／ｍｌの化合物は、阻害効果を全く示さなかった。
【００５３】
バベシア・ギブソニの成長に対するアルカンゲシア  フラバ成分の実際の効果を確認するため、感染後２日目まで寄生虫を増殖させ、２日目に培地を交換し、その後で１ｍｌの化合物溶液を添加した。パルマチン、ベルベリン、ジャトロリジン、ジヒドロベルベリン及びヒドロアルセトピンは、特に濃度１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌでは、コントロールと比較して、寄生虫の増殖に対して顕著な効果を示した（図３）。３日目では、濃度１００μｇ／ｍｌの化合物には寄生虫が全く見られなかったのに対し、濃度１０μｇ／ｍｌでは、前日の寄生虫血症の程度が５．０８−５．２０％であったのと比較して、約２．１７−３．２９％を示しており、４日目では約０−１．２６％に低下した。かかる化合物の阻害効果は、ガナゼックにより生じる効果と類似していた。これに対し、０．１μｇ／ｍｌ及び０．０１μｇ／ｍｌの化合物は、阻害効果を全く示さなかった。
【００５４】
濃度１００μｇ／ｍｌ又は１０μｇ／ｍｌで培養物に添加された場合には、B. gibsoniに対するパルマチン、ベルベリン、ジャトロリジン、ジヒドロベルベリン及びヒドロアルセトピンの完全な阻害効果が観察されたが、１μｇ／ｍｌでは初回処理時と相対的に変わらず、培養日数の経過とともに次第に低下していった。かかる阻害効果は、ガナゼックにより生じる効果と類似していた（図２）。特に濃度１００μｇ／ｍｌ又は１０μｇ／ｍｌでは、寄生虫血症の程度がかなりのものになった後でさえ、かかる阻害効果は依然として効果的であった（図３）。B. gibsoniに対するアルカンゲシア  フラバ成分の実際の作用機構は、解明されていない。一つの可能性として、P. falciparumにおいて記載されたように（Trans. Royal Soc. Trop. Med. Hyg. 88, 686-687, 1994）、メロゾイトの赤血球への侵入が、成分によって干渉されるのかもしれないということが挙げられる。
【００５５】
マラリア寄生虫による赤血球への侵入は、寄生虫リガンド及びシアル酸の赤血球レセプターが必要である（J. Cell Biol. 116, 901-909, 1992; Science 264, 1941-1944, 1994）。シアル酸は、イヌ科の動物の赤血球にも見られており（J. Appl. Anim. Res. 20, 125-128, 2001）、バベシア・ギブソニのメロゾイトが赤血球へ侵入する場合と同じような役割を果たしているのかもしれない。したがって、アルカンゲシア  フラバの成分も、バベシア・ギブソニのメロゾイトに結合し、赤血球上のシアル酸レセプターにメロゾイトが付着するのをブロックすることによって、赤血球への侵入を阻止しているという可能性がある。もう一つの可能性は、赤血球に侵入した寄生虫の増殖に、アルカンゲシア  フラバの成分が直接的又は間接的に影響を及ぼしている、というものである。その有効性を充分に開発できるように、これらの成分がバベシア・ギブソニの成長に及ぼす作用の正確な機構を確認する必要がある。
【００５６】
（図の説明）
図２中、A〜Gは、パルマチン（Ａ）、ベルベリン（Ｂ）、ジャトロリジン（Ｃ）、ジヒドロベルベリン（Ｄ）、ヒドロアルセトピン（Ｅ）、ヒドロキシエクジソン（Ｆ）及びガナゼック（Ｇ）の存在下での、バベシア・ギブソニの成長を示す。データは、別個に行った３回の実験の代表値である。濃度◆は１００μｇ／ｍｌ、■は１０μｇ／ｍｌ、▲は１μｇ／ｍｌ、□は０．１μｇ／ｍｌ、＊は０．０１μｇ／ｍｌ。
図３中、A〜Gは、培養物の感染後２日目に化合物を添加した場合の、バベシア・ギブソニの成長に対するパルマチン（Ａ）、ベルベリン（Ｂ）、ジャトロリジン（Ｃ）、ジヒドロベルベリン（Ｄ）、ヒドロアルセトピン（Ｅ）、ヒドロキシエクジソン（Ｆ）及びガナゼック（Ｇ）の効果について示す。データは、別個に行った３回の実験の代表値である。濃度◆は１００μｇ／ｍｌ、■は１０μｇ／ｍｌ、▲は１μｇ／ｍｌ、□は０．１μｇ／ｍｌ、＊は０．１μｇ／ｍｌ。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】本発明の実施例において、アルカンゲシア  フラバから抽出、精製、分離した化合物の構造を示す図である。
【図２】本発明の実施例における、本発明の有効成分化合物の抗バベシア活性の測定において、培養中のバベシア・ギブソニの成長に対するアルカンゲシア  フラバ成分の効果を示す図である。
【図３】本発明の実施例における、本発明の有効成分化合物の抗バベシア活性の測定において、バベシア・ギブソニの成長に対するアルカンゲシア  フラバ成分の実際の効果を確認するため、感染後２日目まで寄生虫を増殖させ、２日目に培地を交換し、その後で１ｍｌの化合物溶液を添加して、培養中のバベシア・ギブソニの成長に対するアルカンゲシア  フラバ成分の効果を測定した結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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