(57)【要約】【課題】            皮膚や腸内の常在菌叢に影響を与えることなく、黄色ブドウ球菌によるエンテロトキシンの産生を有効に抑制し、アトピー性皮膚炎の増悪など、スーパー抗原の関与するアレルギー性疾患の増悪防止又は症状緩和や、食中毒の予防に有用で、安定性及び安全性に優れる黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤を得る。【解決手段】        ウミブドウ抽出物を含有して成る、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤。またさらにホップ，レンギョウ，シナレンギョウ，チョウセンレンギョウ，トウキンセンカ，キンセンカ，スイカズラ，ウグイスカグラ，サルビア及びその変種，クチナシ及びその同属植物，クマザサ，イラクサ，ミヤマイラクサ，ヒキオコシ，クロバナヒキオコシより選択した１種又は２種以上の植物の抽出物を、ウミブドウ抽出物と併用して担体又は基剤に含有させる。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウミブドウ抽出物を含有して成る、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤。
【請求項２】
さらに、ホップ（Humulus lupulus L.），レンギョウ（Forsythia suspensa Vahl），シナレンギョウ（Forsythia viridissima Lindl.），チョウセンレンギョウ（Forsythia koreana Nakai），トウキンセンカ（Calendula officinalis L.），キンセンカ（Calendula arvensis L.），スイカズラ（Lonicera japonica Thunb.），ウグイスカグラ（Lonicera gracilipes Miq. var.glabra Miq.），サルビア（Salvia officinalis L.）及びその変種，クチナシ（Gardenia jasminoides Ellis）及びその同属植物，クマザサ（Sasa veitchii Rehd.），イラクサ（Urtica thunbergiana Sieb. et Zucc.），ミヤマイラクサ（Laportea macrostachya Ohwi），ヒキオコシ（Isodon japonicus Hara），クロバナヒキオコシ（Isodon trichocarpus Kudo）より選択した１種又は２種以上の植物の抽出物を併用して成る、請求項１に記載の黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載の黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤を含有して成る、アトピー性皮膚炎増悪防止又は緩和剤。
【請求項４】
請求項１又は請求項２に記載の黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤を含有して成る、食中毒予防剤。
【請求項５】
請求項１又は請求項２に記載の黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤を含有して成る、食品添加物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚や腸内における細菌叢に影響を与えることなく、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）によるエンテロトキシン産生を特異的に抑制することができ、これらがスーパー抗原として関与するアレルギー性疾患の増悪防止又は軽減や、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）による食中毒の予防に有用な黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤、並びにこれを含有して成るアトピー性皮膚炎増悪防止又は緩和剤、食中毒予防剤、及び食品添加物に関する。
【背景技術】
【０００２】
黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）は、嘔吐を伴う食中毒や各種膿瘍の原因となるグラム陽性菌である。これにより産生されるエンテロトキシン（腸管毒）は食中毒の原因となる他、エンテロトキシンＢや毒性ショック症候群毒素（toxic shock syndrome toxin-1，ＴＳＳＴ-1）のようにスーパー抗原として、アトピー性皮膚炎の増悪などアレルギー性疾患に関与するものが知られている。エンテロトキシンＢはスーパー抗原として、抗原提示細胞によるプロセッシングを受けることなく、抗原提示細胞上の主要組織適合遺伝子複合体のクラスII分子と、Ｔ細胞受容体のＶβ領域とに直接結合する特性を有し、そのスーパー抗原と結合する特定のＶβを表現するＴ細胞群を一気に活性化して大量のサイトカインの産生を促し、生体の免疫反応に顕著な影響を与えるものと考えられている。黄色ブドウ球菌のスーパー抗原であるエンテロトキシンＢやＴＳＳＴ-1は、皮膚のランゲルハンス細胞やマクロファージを刺激して、インターロイキン-1，腫瘍壊死因子，インターロイキン-12を産生させ、インターロイキン-12は活性化されたＴ細胞に皮膚ホーミングレセプター（homing receptor）の皮膚リンパ球結合抗原（ＣＬＡ）の発現を誘導する。
【０００３】
上記のように、黄色ブドウ球菌により産生されたエンテロトキシンが食中毒の他にアレルギー性疾患にも関与することが明らかになるにつれ、黄色ブドウ球菌に対し抗菌もしくは殺菌作用を有する薬剤のスクリーニングが活発に行われてきた。かかる薬剤として、最近ではマンネンタケ子実体傘部抽出物（特許文献１参照）、クローブ，オールスパイス，オレガノ等の抗菌性香辛料（特許文献２参照）、クジン抽出物（特許文献３参照）、ジャックフルーツ抽出物（特許文献４参照）、アルトカルピン及びソフォラフラバノンＧ（特許文献５参照）、キサントン誘導体（特許文献６参照）、カバノタケ抽出物（特許文献７参照）、キトサン誘導体（特許文献８参照）、光触媒活性を有する微粒子酸化チタン（特許文献９参照）、ステビア抽出物（特許文献１０参照）、アルケニルイソチオシアナート化合物（特許文献１１参照）、ホップ，レンギョウ，シナレンギョウ，チョウセンレンギョウ，トウキンセンカ，キンセンカ，スイカズラ，ウグイスカグラ，サルビア及びその変種，クチナシ及びその同属植物，クマザサ，イラクサ，ミヤマイラクサ，ヒキオコシ，クロバナヒキオコシより選択した１種又は２種以上の植物の抽出物（特許文献１２参照）などが開示されている。
【０００４】
また、黄色ブドウ球菌の除去を目的とするN-アシルグルタミン酸塩を含有する洗浄剤（特許文献１３参照）や、鉄結合型ラクトフェリンを含有する細菌性エンテロトキシン中和剤（特許文献１４参照）も知られている。
【０００５】
しかしながら上記した技術は、ほとんどが黄色ブドウ球菌の静菌又は殺菌もしくは除去を図るもので、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Staphylococcus epidermidis），バクテイオイズ属（Bacteroides属），エウバクテリウム属（Eubacterium属），連鎖状球菌（Streptococcus）属，ビフィズス属（Bifidobacterium属）といった皮膚や腸内における常在菌にも静菌，殺菌作用を及ぼしたり、これらを除去してしまうため、常在菌叢の変化をきたして、皮膚や腸のホメオスタシスに影響を及ぼし、日和見感染を招く危険性の生じることがあった。また、ラクトフェリンを主成分とするエンテロトキシン中和剤はタンパク質製剤であるため、安定な製剤を得る上で制約も多く、感作性の発現も危惧される。
【０００６】
ウミブドウは、緑藻綱（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）イワヅタ科（Ｃａｕｒｅｌｐａｃｅａｅ）イワヅタ属（Ｃａｕｌｅｒｐａ）に属する海藻であり、本州の太平洋南部，九州，南西諸島，太平洋熱帯域，インド洋に広く分布しており、シーグレープ，グリーンキャビアなどと言われる場合もある。沖縄などで養殖もされており、食用で酢の物などに用いられている。またウミブドウ抽出物の有効性に関しては、様々な検討が行われており、ウミブドウの属するイワヅタ科の海藻の利用としては、ヒアルロニダーゼ阻害剤（特許文献１５参照），スリミング剤（特許文献１６参照），育毛剤（特許文献１７参照）がこれまでに開示されている。また、ウミブドウの有効性としては、ヒアルロン酸産生効果（特許文献１８参照）等が知られている
【０００７】
【特許文献１】特開平６−１１６１６２号公報
【特許文献２】特開平７−２６７８７３号公報
【特許文献３】特開平８−７３３６４号公報
【特許文献４】特開平８−７３３６８号公報
【特許文献５】特開平８−７３３７２号公報
【特許文献６】特開平９−１１０６８８号公報
【特許文献７】特開平１０−１２０５８９号公報
【特許文献８】特開平１０−１５８３０５号公報
【特許文献９】特開平１１−５７２９号公報
【特許文献１０】特開平１１−４３４４３号公報
【特許文献１１】特開平１１−１３７９４９号公報
【特許文献１２】特開２００１−２２６２８０
【特許文献１３】特開平１１−８０７８１号公報
【特許文献１４】特開平１１−２７９０７６号公報
【特許文献１５】特開平０９−６７２６６号公報
【特許文献１６】特開２０００−７２６４２号公報
【特許文献１７】特開２００１−５５３１４号公報
【特許文献１８】特開２００３−１２８５７３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで本発明においては、皮膚や腸内の常在菌叢に影響を与えることなく、黄色ブドウ球菌によるエンテロトキシンの産生を有効に抑制し、アトピー性皮膚炎の増悪など、スーパー抗原の関与するアレルギー性疾患の増悪防止又は症状緩和や、食中毒の予防に有用で、安定性及び安全性に優れる黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤を得ることを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の課題を解決するべく種々検討した結果、ウミブドウ抽出物において特異的な黄色ブドウ球菌のエンテロトキシン産生抑制作用を見いだし、さらに前記作用が様々な製剤系においても安定に維持され、しかも有効濃度において、経口毒性，皮膚刺激性，感作性，催奇形性等を全く示さないことを確認して、本発明を完成するに至った。
【００１０】
またさらに、ウミブドウ抽出物とホップ（Humulus lupulus L.），レンギョウ（Forsythia suspensa Vahl），シナレンギョウ（Forsythia viridissima Lindl.），チョウセンレンギョウ（Forsythia koreana Nakai），トウキンセンカ（Calendula officinalis L.），キンセンカ（Calendula arvensis L.），スイカズラ（Lonicera japonica Thunb.），ウグイスカグラ（Lonicera gracilipes Miq. var.glabra Miq.），サルビア（Salvia officinalis L.）及びその変種，クチナシ（Gardenia jasminoides Ellis）及びその同属植物，クマザサ（Sasa veitchii Rehd.），イラクサ（Urtica thunbergiana Sieb. et Zucc.），ミヤマイラクサ（Laportea macrostachya Ohwi），ヒキオコシ（Isodon japonicus Hara），クロバナヒキオコシ（Isodon trichocarpus Kudo）より選択した１種又は２種以上の植物の抽出物を、併用して配合することにより、特異的な黄色ブドウ球菌のエンテロトキシン産生抑制作用が相乗的に向上することを見いだしたものであります。
【００１１】
すなわち本発明においては、ウミブドウ抽出物を単独で、若しくは上述の植物抽出物と併用して、担体又は基剤に含有させて黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤とし、さらに前記エンテロトキシン産生抑制剤を担体等に含有させて、アトピー性皮膚炎増悪防止又は緩和剤、食中毒予防剤及び食中毒防止用の食品添加物を得る。
【発明の効果】
【００１２】
以上詳述したように、本発明により、皮膚や腸内の常在菌叢に影響を与えることなく、黄色ブドウ球菌によるエンテロトキシンの産生を有効に抑制し、安定性及び安全性に優れる黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤を得ることができた。この黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤は、アトピー性皮膚炎の増悪など、スーパー抗原の関与するアレルギー性疾患の増悪防止又は症状緩和や、食中毒の予防に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
まず、本発明において抽出物を得るのに用いるウミブドウ及び植物について説明する。
【００１４】
ウミブドウ抽出物を得る際のウミブドウとしては、ウミブドウ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｌｅｎｔｉｌｌｉｆｅｒａ）、及びカウレルパ  ラセモサ（Ｃａｕｌｅｒｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ）藻類を用いることができる。カウレルパ  ラセモサ（Ｃａｕｌｅｒｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ）藻類には、カウレルパ  ラセモサ（Ｃａｕｌｅｒｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ）以外に多数の変種が存在することが知られており、その変種として、センナリヅタ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ  ｖａｒ.  ｃｌａｖｉｆｅｒａ  ｆ.  ｍａｃｒｏｐｈｙｓａ），スリコギヅタ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ  ｖａｒ.  ｌａｅｔｅ−ｖｉｒｅｎｓ），ヒラエヅタ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ  ｖａｒ.  ｌａｍｏｕｒｏｕｘｉｉ），エツキヅタ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ  ｖａｒ.  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ），タカツキヅタ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ  ｖａｒ.  ｐｅｌｔａｔａ），コハギヅタ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ  ｖａｒ.  ｕｖｉｆｅｒａ），カウレルパ  ラセモサ  ツルビナタ（Ｃａｕｌｅｒｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ  ｖａｒ.  ｔｕｒｂｉｎａｔａ）などが知られている。ウミブドウは、これら、ウミブドウ（Ｃａｕｒｅｌｐａ ｌｅｎｔｉｌｌｉｆｅｒａ）、及びカウレルパ  ラセモサ（Ｃａｕｌｅｒｐａ ｒａｃｅｍｏｓａ）藻類の総称として用いられ、本発明においても特にその種の区別なく用いることができる。なお、抽出には全藻を用いることができる。これらは塩抜きを行った後、生のまま抽出操作に供してもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後抽出を行うことが好ましい。
【００１５】
ホップ（Humulus lupulus L.）は、生薬「ホップ」（Lupuli Strobilus）の基原植物であり、クワ科（Moraceae）に属する蔓性多年草である。花，葉，茎，果実等各部位を用いることができるが、雌花穂を用いることが特に好ましい。
【００１６】
レンギョウ（Forsythia suspensa Vahl），シナレンギョウ（Forsythia viridissima Lindl.）及びチョウセンレンギョウ（Forsythia koreana Nakai）は、生薬「レンギョウ」（Forsythiae Fructus）の基原植物であり、モクセイ科（Oleaceae）に属する落葉低木である。花，葉，枝，幹，果実等の各部位を用いることができるが、果実を用いることが特に好ましい。
【００１７】
トウキンセンカ（Calendula officinalis L.）は、キク科（Compositae）に属する一年生或いは二年生草本で、キンセンカ（Calendula arvensis L.）はこの近縁種である。花，葉，茎等各部位を用いることができるが、花を用いることが特に好ましい。
【００１８】
スイカズラ（Lonicera japonica Thunb.）は、スイカズラ科（Caprifoliaceae）に属する常緑蔓性植物で、ニンドウとも呼ばれる。ウグイスカグラ（Lonicera gracilipes Miq. var.glabra Miq.）はこの近縁種である。花，葉，茎，枝，果実等の各部位を用いることができるが、葉及び茎を用いることが特に好ましい。
【００１９】
サルビア（Salvia officinalis L.）は、シソ科（Labiatae）に属する多年草で、その変種としてはSalvia officinalis var.tenuiorが挙げられる。花，葉，茎及び全草を用いることができる。
【００２０】
クチナシ（Gardenia jasminoides Ellis）及びその同属植物は、アカネ科（Rubiaceae）に属する常緑低木で、生薬「サンシシ」（Gardeniae Fructus）の基原植物である。同属植物としては、Gardenia jasminoides var. grandiflora Nakai），コクチナシ（Gardenia radicans Thunb.）が挙げられる。花，葉，枝，幹，果実等の各部位を用いることができるが、果実を用いることが特に好ましい。
【００２１】
クマザサ（Sasa veitchii Rehd.）は、イネ科（Gramineae）に属する常緑の単子葉植物であり、花，葉，枝，稈，地下茎，根等の各部位を用いることができるが、葉を用いることが特に好ましい。
【００２２】
イラクサ（Urtica thunbergiana Sieb. et Zucc.）及びミヤマイラクサ（Laportea macrostachya Ohwi）は、イラクサ科（Urticaceae）に属する多年草であり、花，葉，茎等の各部位を用いることができるが、葉を用いることが特に好ましい。
【００２３】
ヒキオコシ（Isodon japonicus Hara）及びクロバナヒキオコシ（Isodon trichocarpus Kudo）は、シソ科（Labiatae）に属する多年草で、生薬「エンメイソウ」（Isodonis Herba）の基原植物である。花，葉，茎，根等の各部位を用いることができるが、地上部を用いることが特に好ましい。
【００２４】
本発明において、上記ウミブドウ及び上記植物は生のまま抽出に供してもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬して行う。抽出効率を上げるため撹拌を行ったり、抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、４時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００２５】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール，エタノール，プロパノール，イソプロパノール等の低級アルコール、1,3-ブチレングリコール，プロピレングリコール，ジプロピレングリコール，グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル，プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル，酢酸ブチル等のエステル類、アセトン，エチルメチルケトン等のケトン類などの極性有機溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。
【００２６】
上記ウミブドウ及び植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも本発明に係る黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤として用いることができるが、濃縮，乾固したものを水や極性溶媒に再度溶解したり、或いは黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィーによる分画処理を行った後に用いてもよい。また保存のため、精製処理の後凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。本発明においては、ウミブドウ及びホップ等の植物の上記溶媒による抽出物又は前記処理物をそのまま、或いは水，低級アルコール等の水性担体、乳剤，ゲル，クリーム，軟膏等の基剤に含有させたり、粉末化或いは顆粒化して黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤とする。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させることもできる。
【００２７】
従って、本発明に係る黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤は、必要に応じてデンプン，乳糖，微結晶セルロース，メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等の賦形剤、ステアリン酸マグネシウム，タルク等の滑沢剤、ゼラチン，セラック，ポリビニルピロリドン，メチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース等の結合剤、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤、ソルビトール，グリセリン等の保湿剤、ジブチルヒドロキシトルエン，ブチルヒドロキシアニソール，トコフェロール等の抗酸化剤、吸収促進剤、界面活性剤、等張化剤等とともに公知の方法によって、軟カプセル剤，硬カプセル剤，錠剤，丸剤，顆粒剤，散剤，懸濁剤，液剤，シロップ剤，乳濁剤，エリキシル剤等の経口剤、注射剤、坐剤、ペッサリー又は外用剤として提供され得る。
【００２８】
本発明に係る黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤は、低刺激性で毒性及び感作性を示さないため、特に経口的に服用したり、又は皮膚において局所的に外用するのに適しており、アトピー性皮膚炎の増悪など、スーパー抗原の関与するアレルギー性疾患の増悪防止又は症状緩和や、食中毒の予防を目的とした経口剤又は食品添加物として有用で、さらに安定性にも優れるものである。
【実施例】
【００２９】
さらに本発明の特徴について、実施例により詳細に説明する。
【００３０】
［抽出物１］
ウミブドウ（パラオ諸島産）乾燥物５０ｇを精製水９５０ｇに分散させる。８０℃にて１時間静置し、上清をガーゼでろ別し、さらにそのろ液を０．４５μｍポアのフィルターを用いて、滅菌ろ過した後、減圧濃縮を行い、抽出物１に係る水性製剤１００ｇを得た。
【００３１】
［抽出物２］
ウミブドウ（パラオ諸島産）乾燥粉砕物１０ｇを精製水９９０ｇに分散させる。上清をガーゼでろ過し、さらにそのろ液を０．４５μｍポアのフィルターを用いて、滅菌ろ過した後、減圧濃縮を行い、抽出物２に係る水性製剤１００ｇを得た。
【００３２】
［抽出物３〜抽出物１１］
表１に示す植物各２５０ｇを乾燥，粉砕し、５０容量％エタノール水溶液１．０リットル中に浸漬して、２５℃で７日間静置して抽出した。抽出物をろ過してろ液を回収し、ミリポアフィルターにて除菌して、抽出物３〜抽出物１１を得た。
【００３３】
【表１】
2005139074.tif 000002
【００３４】
［実施例１〜実施例２０，比較例１〜９］
表２に示した抽出物を用いて、実施例１〜実施例２０に係る水性製剤を得た。なお、実施例３〜実施例２０は２種類の抽出物を等量混合することにより調製した。また表３に示した抽出物を比較例１〜比較例９とし、下記の黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制効果測定に供した。
【００３５】
【表２】
2005139074.tif 000003
【００３６】
【表３】
2005139074.tif 000004
【００３７】
上記の実施例１〜実施例２０及び比較例１〜比較例９について、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制効果を評価した。評価は、９６穴マイクロプレートに、各実施例をＢＨＩ（Brain Heart Infusion Broth）培地にて最終濃度が１．０重量％及び２．０重量％となるように希釈して調製した試料液を注入し、アトピー性皮膚炎患者の患部皮膚より分離したエンテロトキシン産生陽性の黄色ブドウ球菌（Staphylococcus  aureus）を１００００ｃｆｕ／ｍＬとなるように播種し、３５℃で２０時間培養した後、１，６００回転／分にて１５分間遠心分離して上清を回収し、新垣らによる逆受身ラテックス凝集法（デンカ生研製の検出キット）を用い、感作ラテックスの凝集の程度からエンテロトキシンの産生を確認した。結果を表４〜６に示す。
【００３８】
【表４】
2005139074.tif 000005
【００３９】
【表５】
2005139074.tif 000006
【００４０】
【表６】
2005139074.tif 000007
【００４１】
表４〜６より明らかなように、本発明の実施例１〜実施例２０は、いずれも０．２５重量％の濃度でエンテロトキシン産生抑制効果を示していた。特に、ウミブドウ抽出物とホップ抽出物，レンギョウ抽出物，クチナシ抽出物，ヒキオコシ抽出物を併用した実施例３，４，５，６，１３，１４，１９，２０においては、０．５０重量％の添加でも、高いエンテロトキシン産生抑制効果が認められていた。
【００４２】
続いて本発明の他の実施例を示す。
【００４３】
［実施例２１］  実施例１を、減圧濃縮して乾固した後、乾固物を凍結乾燥して粉末剤である実施例２１を得た。      
【００４４】
［実施例２２］  実施例２，１００ｍＬに大豆レシチン８０ｇを添加して６５℃で懸濁し、次いで超音波処理してリポソームを調製し、遠心分離により回収して、リポソーム製剤である実施例２２を得た。      
【００４５】
［実施例２３］  実施例１に、アルギン酸ナトリウム０．６重量％，ポリビニルアルコール１２．０重量％，グリセリン１２．０重量％及び精製水７５．４重量％より成る皮膜物質溶液を用い、流動パラフィンを芯物質として塩化カルシウム水溶液で硬化させ、次いでアセトンにより流動パラフィンを除去して成るマイクロカプセル２００ｇを浸漬し、実施例１を内包させた後、遠心分離により回収して、マイクロカプセル製剤である実施例２３を得た。
【００４６】
［実施例２４］  アトピー性皮膚炎増悪防止剤１（１）ジプロピレングリコール                    １０．０（重量％）（２）カルボキシビニルポリマー                    ０．５（３）水酸化カリウム                              ０．１（４）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１（５）実施例２                                    ２．０（６）精製水                                    ８７．３製法：（６）に（２）を均一に溶解した後、（１）に（４）を溶解して添加し、次いで（５）及び（３）を順次添加して均一化する。      
【００４７】
［実施例２５］  アトピー性皮膚炎増悪防止剤２（１）ミツロウ                                    ６．０（重量％）（２）セタノール                                  ５．０（３）還元ラノリン                                ８．０（４）スクワラン                                ２７．５（５）グリセリル脂肪酸エステル                    ４．０（６）親油型グリセリルモノステアリン酸エステル    ２．０（７）ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン        ５．０      モノラウリン酸エステル（８）1,3-ブチレングリコール                      ５．０（９）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１（10）精製水                                    ３６．４（11）実施例１                                    １．０製法：（１）〜（７）の油相成分を混合，溶解して７５℃とする。一方、（８）〜（10）の水相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。次いで、この水相成分に前記油相成分を添加して予備乳化した後ホモミキサーにて均一に乳化し、冷却後４０℃で（11）を添加する。      
【００４８】
［実施例２６］  アトピー性皮膚炎緩和剤１  実施例１を濃縮，乾固した後凍結乾燥した。前記乾燥粉末０．２ｇ，乳糖５２．０ｇ，コーンスターチ２２．８ｇ，カルボキシメチルセルロースカルシウム５．０ｇ，セルロース２０．０ｇを混合し、顆粒化した後打錠して、一錠０．２ｇの錠剤を得て、経口のアトピー性皮膚炎緩和剤１とした。      
【００４９】
［実施例２７］  アトピー性皮膚炎緩和剤２  実施例２１５０ｍＬに単シロップ２００ｍＬを加え、次いで精製水を加えて１．０リットルとし、経口のアトピー性皮膚炎緩和剤２を得た。      
【００５０】
［実施例２８］  食品添加物１  実施例１の溶媒を留去した後凍結乾燥して、食品添加物１を得た。      
【００５１】
［実施例２９］  食品添加物２  実施例２の溶媒を留去した後凍結乾燥して、食品添加物２を得た。      
【００５２】
本発明の上記実施例２４〜実施例２７について臨床試験を行った。掻痒感及び皮疹等の皮膚症状を呈するアトピー性皮膚炎患者２０名を１群とし、各群に実施例及び比較例をブラインドにて、実施例２４及び実施例２５については１日２回、３日間患部に塗布させ、実施例２６及び実施例２７については１日３回、３日間内服させて、掻痒感及び皮膚症状の改善状況を評価した。比較例としては、実施例２４及び実施例２５において、本発明に係る黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤をグルコン酸クロルヘキシジン液に代替したものを比較例１０，比較例１１、実施例２６及び実施例２７において、本発明に係る黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制剤をブドウ糖液に代替したものを比較例１２及び比較例１３とした。掻痒感及び皮膚症状の改善状況は、使用開始前の状態に比べて、それぞれ「改善」，「やや改善」，「変化なし」，「悪化」の４段階にて評価し、各評価を得たパネラー数にて表７に示した。      
【００５３】
さらに上記臨床試験に際し、皮膚及び腸内の細菌叢の調査を行い、その変動の程度について、「○；ほとんど変動を認めない」，「△；若干の変動を認める」，「×；顕著な変動を認める」として、表７に併せて示した。      
【００５４】
【表７】
2005139074.tif 000008
【００５５】
表７より明らかなように、本発明の実施例２４，実施例２５使用群においては、全群で掻痒感及び皮膚症状の悪化を示したパネラーは存在せず、これら症状の改善傾向も見られていた。また、皮膚細菌叢において変化は認められていなかった。さらに、経口製剤である実施例２６及び実施例２７服用群においても、掻痒感及び皮膚症状の悪化を示したパネラーは存在せず、掻痒感については両群で７５％、皮膚症状については６５％及び７０％のパネラーにおいて改善傾向が認められていた。腸内細菌叢の変化も認められていなかった。      
【００５６】
これに対し、比較例１０〜比較例１３使用群では、掻痒感及び皮膚症状の改善傾向を示すパネラーも相当数認められたが、症状の悪化したパネラーも少数存在していた。さらに、皮膚細菌叢の変化は顕著に認められていた。また、比較例１２及び比較例１３使用群では、皮膚細菌叢の変化は認められないものの、掻痒感及び皮膚症状の改善傾向はほとんど認められず、５５％以上のパネラーにおいて症状の悪化を認めていた。      
【００５７】
次に、実施例２８及び実施例２９について、食品に添加した場合の黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制効果を評価した。評価は、実施例２８及び実施例２９を、生クリーム及び和菓子各１００ｇ中に２００ｍｇ及び５００ｍｇを添加して混練したものに、７．５(w/v)％の塩化ナトリウムを含むＢＨＩ培地にて培養したエンテロトキシン産生陽性黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus ATCC14458）を１．０×１０5ＣＦＵ／ｍＬ含む滅菌リン酸緩衝液１００μＬを噴霧し、３７℃で１０時間静置した後、前記食品をホモジナイズし、適宜希釈してＲＰＬＡ法により食品中に産生されたエンテロトキシン量を測定して行った。いずれの実施例をも添加しない対照についても同様に評価を行い、食品１００ｇ中に検出されたエンテロトキシン量にて表８に示した。      
【００５８】
【表８】
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【００５９】
表８より明らかなように、対照においては生クリーム，和菓子のいずれにおいても１００ｇ当たり２０．０μｇのエンテロトキシンの産生が認められたが、本発明の実施例２８及び実施例２９を５００ｍｇ添加した場合には、エンテロトキシン量は０．６μｇ未満であり、各２００ｍｇの添加によっても、生クリームで２５％、和菓子で１２．５％及び６．５％までエンテロトキシン量は減少していた。従って、本発明の食品添加物は、黄色ブドウ球菌の混入による食中毒発生を有効に防止し得ることが示された。      
【００６０】
なお、上記実施例１４〜実施例１８については、皮膚一次刺激性及び皮膚感作性は全く認められず、実施例１９〜実施例２２についても、経口毒性，感作性及び催奇形性は認められなかった。また、本発明の実施例１〜実施例２２は、２５℃で６カ月間保存した場合においても製剤の状態変化は認められず、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン産生抑制作用の低下も認められなかった。