(57)【要約】【課題】    耐久性及び視認性に優れ、検体中のイオンの測定に利用可能な新規なイオン感応性色素及びそれを用いたイオンセンサーを提供すること。【解決手段】  下記一般式[I]【化１】2005139371.tif 000010（ただし、Ｒ１ないしＲ７のうち、少なくとも１つは目的イオンの存在により電子密度が変化する構造を有するイオン認識基、Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基は、互いに独立して水素又は該色素のイオン認識及び変色を阻害しない任意の置換基、Ｘ１及びＸ２はフッ素又はアルコキシル基を表す）で示される構造を有するイオン感応性色素、及び上記色素を含むイオンセンサーを提供した。【選択図】  図１
2005139371.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式[I]
【化１】
2005139371.tif 000007
（ただし、Ｒ１ないしＲ７のうち、少なくとも１つは目的イオンの存在により電子密度が変化する構造を有するイオン認識基、Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基は、互いに独立して水素又は該色素のイオン認識及び変色を阻害しない任意の置換基、Ｘ１及びＸ２はフッ素又はアルコキシル基を表す）
で示される構造を有するイオン感応性色素。
【請求項２】
前記イオン認識基が、下記一般式[II]
【化２】
2005139371.tif 000008
（ただし、Ｒ８及びＲ９は、互いに独立して、アルキル基若しくはアリール基を表し、又はＲ８とＲ９とＮが共働してクラウンエーテル様構造若しくはクリプタンドを形成する）
又は下記一般式[III] 
【化３】
2005139371.tif 000009
（ただし、Ｙ１及びＹ２は、互いに独立して-O-、-S-又は-NR-（ただしＲは水素又はアルキル基）を表し、Ｒ８及びＲ９は、互いに独立して、アルキル基若しくはアリール基を表し、又はＲ８とＲ９とＹ１とＹ２が共働してクラウンエーテル、クラウンエーテル様構造若しくはクリプタンドを形成する）
で示される構造を有する請求項１記載の色素。
【請求項３】
前記一般式[II]又は[III]において、Ｒ８及びＲ９は、互いに独立して、アルキル基若しくはアリール基である請求項２記載の色素。
【請求項４】
前記イオン認識基が、前記一般式[II]で表され、前記Ｒ８及びＲ９は、互いに独立して、アルキル基である請求項３記載の色素。
【請求項５】
Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基が、水素、アルキル基、アリール基、ハロゲン、アルコキシ、アリールアルキル、シクロアルキル、アシル、ホルミル、シアノ、アルケニル、ヘテロアリール、末端に不飽和結合を有するアルケニル基若しくはアルキニル基、末端にチオール基若しくはジスルフィド基を持つアルキル基若しくは末端にシリル基を持つアルキル基であり、又はＲ２とＲ３が共働して環を形成していてもよく、また、Ｒ５とＲ６が共働して環を形成していてもよい、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の色素。
【請求項６】
Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基が、水素、アルキル基、アリール基、末端に不飽和結合を有するアルケニル基若しくはアルキニル基、末端にチオール基若しくはジスルフィド基を持つアルキル基又は末端にシリル基を持つアルキル基である請求項５記載の色素。
【請求項７】
Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基が、水素、アルキル基又はアリール基である請求項６記載の色素。
【請求項８】
前記一般式[I]中、Ｒ１及び／又はＲ７が前記イオン認識基である請求項１ないし７のいずれか１項に記載の色素。
【請求項９】
前記一般式[I]、[II]又は[III]中のいずれかの基において、前記アルキル基若しくはアルケニル基又はアルキル部分を含む基中のアルキル基が炭素数１〜１０のアルキル基であり、前記一般式[I]、[II]又は[III]中のいずれかの基において、前記アリール基又はアリール基を含む基中のアリール基が、フェニル基、トリル基、キシリル基、ナフチル基、ビフェニル基、アントリル基又はフェナントリル基である請求項１ないし８のいずれか１項に記載の色素。
【請求項１０】
前記一般式[I]において、Ｒ１及び／又はＲ７が前記一般式[II]で示される基（ただし、Ｒ８及びＲ９は互いに独立して炭素数１〜１０のアルキル基）、これ以外のＲ１ないしＲ７が水素又は炭素数１〜１０のアルキル基である請求項４記載の色素。
【請求項１１】
前記イオンが水素イオンである請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の色素。
【請求項１２】
請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の色素を含むイオンセンサー。
【請求項１３】
請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の色素を、成形されたポリマー中に含む請求項１１記載のイオンセンサー。
【請求項１４】
成形されたポリマーがフィルム状である請求項１３記載のイオンセンサー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なイオン感応性色素およびそれを用いたイオンセンサーに関する。
【背景技術】
【０００２】
イオン認識により吸収もしくは蛍光スペクトルの変化する色素は、昔から数多く知られているが、一般的に光や化学反応に弱く、長期連続観測には向かない。また、これらの色素は、無色から可視色を非可逆的に呈色するものが多く、視認性が低い。近年、感度の面から、蛍光を発する色素の要望が、特にバイオテクノロジーの分野で高いが、単一色素ではイオン認識によって蛍光強度のみが変わるものが多く、実用性が低い。複数の色素を組み合わせ、蛍光波長の変わる実用的なプローブもいくつかあるが、分子が大きいため生体機能を阻害したり、工程数が多かったりと問題点も多い。イオン感応性色素は、水溶性のものが多いため、紙に染み込ませて試験紙の形で市販されることが多いが、色素が溶出するため一般的に使い捨てである。それを防ぐため、色素を化学修飾して膜に混入し、特定のイオンの取り込みをスペクトル変化で読み取るオプトードもあるが、耐久性は、色素自身の安定性に左右されるため、最高のものでも５０日程度である。耐久性の面では、イオン選択性電極（ＩＳＥ）が優れているが、機構上参照電極が必要なため、構造が複雑になり、物理的な衝撃に弱い。
【０００３】
一方、ボロン−ジピロメテン色素は、官能基変換によって吸収・蛍光発光波長が大きく変化することが知られている。しかしながら、ボロン−ジピロメテン色素を利用してイオンを測定するという思想は全く知られていない。
【０００４】
【特許文献１】米国特許第5,723,218
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、耐久性及び視認性に優れ、検体中のイオンの測定に利用可能な新規なイオン感応性色素及びそれを用いたイオンセンサーを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、ボロン−ジピロメテン色素にイオン認識基を結合したボロン−ジピロメテン色素誘導体の合成に成功し、これを用いて検体中のイオンを測定することに成功した。さらに、このイオン感応性色素が、視認性に優れるのみならず優れた耐久性を有し、多数回繰返しイオンの測定を行なうことが可能であることを実験的に確認し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、下記一般式[I]
【０００８】
【化１】
2005139371.tif 000003
（ただし、Ｒ１ないしＲ７のうち、少なくとも１つは目的イオンの存在により電子密度が変化する構造を有するイオン認識基、Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基は、互いに独立して水素又は該色素のイオン認識及び変色を阻害しない任意の置換基、Ｘ１及びＸ２はフッ素又はアルコキシル基を表す）
で示される構造を有するイオン感応性色素を提供する。また、本発明は、上記本発明の色素を含むイオンセンサーを提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、耐久性及び視認性に優れ、検体中のイオンの測定に利用可能な新規なイオン感応性色素が初めて提供された。本発明は、これまで呈色測定の大きな弱点であった耐久性を大きく改善するものであり、長期観測が必要だがコストの面で実現が難しかった酸性雨や鉄筋コンクリートの腐食のチェック等に優れた効果を発揮する。さらに、蛍光の感度の高さを利用して、少量の色素を基板やチューブなどに固定して、循環水を利用した装置や血液等のモニタリングなどにも優れた効果を発揮する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
上記の通り、本発明の色素は、上記一般式[I]に示す構造を有する。一般式[I]中、Ｒ１ないしＲ７のうち、少なくとも１つは目的イオンの存在により電子密度が変化する構造を有するイオン認識基であり、イオンと接触すると、本発明の色素の蛍光特性が変化するものである。イオン認識基としては、イオンと接触すると、本発明の色素の蛍光特性が変化するものであれば特に限定されないが、好ましい例として、先ず、下記一般式[II]で表される構造を有する基を挙げることができる。
【００１１】
【化２】
2005139371.tif 000004
（ただし、Ｒ８及びＲ９は、互いに独立して、アルキル基若しくはアリール基を表し、又はＲ８とＲ９とＮが共働してクラウンエーテル様構造若しくはクリプタンドを形成する）。
【００１２】
Ｒ８及びＲ９がアルキル基の場合、アルキル基としては、炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、さらに低級アルキル基（本明細書において、「低級アルキル基」は、特に断りがない限り炭素数１〜６のアルキル基を意味し、直鎖状及び分枝状のいずれをも包含する）が好ましい。また、アリール基としては、芳香族性を有する基であれば特に限定されないが、フェニル基、トリル基、キシリル基、ナフチル基、ビフェニル基、アントリル基及びフェナントリル基が好ましい。また、「クラウンエーテル様構造」とは、クラウンエーテルの１個の酸素原子が、一般式[II]中に示される窒素原子に置き換えられた構造を意味する。形成されるクラウンエーテル様構造やクリプタンドの環を構成する原子数は特に限定されず、目的のイオンに応じて適宜選択される。
【００１３】
また、イオン認識基の好ましい例として、下記一般式[II]で表される構造を有する基を挙げることができる。
【００１４】
【化３】
2005139371.tif 000005
（ただし、Ｙ１及びＹ２は、互いに独立して-O-、-S-又は-NR-（ただしＲは水素又はアルキル基）を表し、Ｒ８及びＲ９は、互いに独立して、アルキル基若しくはアリール基を表し、又はＲ８とＲ９とＹ１とＹ２が共働してクラウンエーテル、クラウンエーテル様構造若しくはクリプタンドを形成する）
【００１５】
Ｒ８及びＲ９がアルキル基の場合、アルキル基としては、炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、さらに低級アルキル基が好ましい。また、アリール基としては、芳香族性を有する基であれば特に限定されないが、フェニル基、トリル基、キシリル基、ナフチル基、ビフェニル基、アントリル基及びフェナントリル基が好ましい。また、Ｒがアルキル基である場合、アルキル基としては、炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、さらに低級アルキル基が好ましい。「クラウンエーテル様構造」は、Ｙ１又はＹ２が-S-又は-NR-である場合に、そのイオウ原子や窒素原子がクラウンエーテル中の酸素原子と置き換えられた構造を意味する。形成されるクラウンエーテル、クラウンエーテル様構造やクリプタンドの環を構成する原子数は特に限定されず、目的のイオンに応じて適宜選択される。なお、水素イオンを測定する場合、Ｒ８及びＲ９は両者ともアルキル基又はアリール基であることが好ましく、さらに炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、さらに低級アルキル基であることが好ましく、特にメチル基が好ましい。
【００１６】
イオン認識基は、Ｒ１及び／又はＲ７であることが好ましい。
【００１７】
一般式[I]中、Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基は、特に限定されるものではなく、互いに独立して水素又は該色素のイオン認識及び変色を阻害しない任意の置換基である。これらのうち、好ましい例として、水素、アルキル基、アリール基、ハロゲン、アルコキシ、アリールアルキル、シクロアルキル、アシル、ホルミル、シアノ、アルケニル、ヘテロアリール挙げることができ、また、Ｒ２とＲ３が共働して環を形成していてもよく、また、Ｒ５とＲ６が共働して環を形成していてもよい。これらのうち、アルキル基若しくはアルケニル基又はアルキル部分を含む基中のアルキル基が炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、さらに低級アルキル基であることが好ましく、アリール基又はアリール基を含む基中のアリール基は、フェニル基、トリル基、キシリル基、ナフチル基、ビフェニル基、アントリル基又はフェナントリル基であることが好ましい。シクロアルキルは、炭素数３〜７が好ましい。ヘテロアリール基は、アリール基を構成する環中の１個以上、好ましくは１個ないし３個の炭素原子が異原子に置き換えられたものであり、上記した好ましいアリール基に対応するヘテロアリール基が好ましい。Ｒ２とＲ３が共働して環を形成していてもよく、また、Ｒ５とＲ６が共働して環を形成していてもよく、これらの場合、環は５員環〜７員環が好ましい。環は炭素原子のみから成っていてもよいし、１個〜３個の異原子を含むヘテロ環であってもよい。Ｒ１ないしＲ７のいずれかが炭素数３以上のアルキル基である場合には、分枝アルキル基の方が合成収率が高くなり好ましい。また、R4にアリール基を導入する場合は、アリール基のオルト位（１個又は２個）に低級アルキル基（好ましくはメチル基）のような置換基があることが蛍光の量子収率向上のために好ましい。
【００１８】
また、色素を他の物質と結合させるために、Ｒ１ないしＲ７のうち前記イオン認識基以外の基の少なくとも１つは、末端に不飽和結合を有するアルケニル基若しくはアルキニル基、末端にチオール基若しくはジスルフィド基を持つアルキル基又は末端にシリル基を持つアルキル基であってもよい。これらの場合、アルキル基は炭素数１〜１０程度のものが好ましい。
【００１９】
水素イオンの測定のための色素としては、一般式[I]において、Ｒ１及び／又はＲ７が前記一般式[II]で示される基（ただし、Ｒ８及びＲ９は互いに独立して低級のアルキル基）、これ以外のＲ１ないしＲ７が水素又は炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、さらに低級アルキル基であるものが特に好ましい。
【００２０】
一般式[I]中、Ｘ１及びＸ２は、Ｘ１及びＸ２はフッ素又はアルコキシル基であり、アルコキシル基は、炭素数１〜６のものが好ましい。
【００２１】
一般式[I]に示す色素は、例えば、以下の反応式に従って製造することができる。
【００２２】
【化４】
2005139371.tif 000006
【００２３】
上記した各工程は、公知の方法に基づいて行うことができ、下記実施例に詳細な条件が記載されている。
【００２４】
本発明のイオン感応性色素は、イオン認識基を選択することにより各種イオンの測定に用いることができる。上記一般式[II]又は[III]が、クラウンエーテル、クラウンエーテル様構造又はクリプタンド部分を有していない場合には、一般式[II]又は[III]で表されるイオン認識基は、水素イオンの測定に好ましく用いることができる。また、上記一般式[II]又は[III]が、クラウンエーテル、クラウンエーテル様構造又はクリプタンド部分を有している場合には、クラウンエーテル等の環にイオンが捕捉されるので、各種金属イオン等の測定が可能である。どのような環がどのようなイオンを補足するかは公知であるので、目的とするイオンに応じてクラウンエーテル等の環を適宜選択することができる。なお、本発明において、「測定」という語は、検出、定量、半定量のいずれもを包含する意味で用いている。
【００２５】
上記本発明のイオン感応性色素は、イオンセンサーに利用することができる。ここで、イオンセンサーとは、検体中のイオンの存在又は濃度に応じて、測定可能な物性が変化することによりイオンの測定に用いられる器具や装置を意味する。本発明のイオン感応性色素は、溶液の形態で用いることもできるし（この場合には、溶液を収納した容器やそれを含む器具がイオンセンサーになる）、成形されたポリマー中に含めて用いることもできる。後者の方が取扱いや携帯に便利であるので好ましい。ポリマー中に含有させてイオンセンサーとする場合、ポリマーは、成形可能で透明なポリマーであれば特に限定されるものではなく、ポリマーにイオン感応性色素を配合した後、フィルム等の形態に成形することができる。ポリマーとしては、広く用いられているポリ塩化ビニル等のビニル系ポリマーや、ポリエステル系、ポリオレフィン系等のポリマーを用いることができる。ポリマーに配合する際、アニオン添加剤（溶液中でアニオンを生じるもの）および膜溶媒も配合することが、イオンの膜内への取り込みを容易にし輸送を円滑にして、応答速度を速くする理由で好ましい。このようなアニオン添加剤の好ましい例として、テトラキス[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]ホウ酸ナトリウム塩二水和物、テトラキス(p-クロロフェニル)ホウ酸カリウム塩等、膜溶媒の好ましい例として、セバシン酸ジ(2-エチルヘキシル)、o-ニトロフェニルオクチルエーテル等を挙げることができる。また、ポリマー中には、可塑剤等の常用される添加剤を配合してもよい。ポリマー中への色素の配合割合は、特に限定されないが、通常、ポリマーの重量に対して１％〜１０％程度が適当である。
【００２６】
また、一般式[I]中のＲ１〜Ｒ７のいずれかが、上記した末端にチオール基若しくはジスルフィド基を持つアルキル基又は末端にシリル基を持つアルキル基等の結合性の基や、炭素数の多い疎水性アルキル基（好ましくは炭素数７以上）又はアリール基等の疎水性基である場合には、疎水性膜や疎水性ポリマーならば重合部位や疎水部位、金基板や金微粒子ならばアルキルチオール、ガラス基板やシリカゲルならばアルキルシラン、水溶性ゲルならば両親媒性部位などを付与した色素（末端にスルホン酸塩、リン酸塩、カルボン酸塩、４級アンモニウム塩等の極性部位を持つアルキル基（好ましくは炭素数７以上）を用い、これらの構造体に結合させることができる。本発明のイオン感応性色素は、化学的に安定であり、強力な還元剤を用いた反応以外の反応であれば、その特性を損なうことなく他の物質に結合させることができる。
【００２７】
本発明のイオンセンサーは、目的イオンを含むかもしれない液体又は気体の検体と接触させ、色の変化を目視観察することにより、あるいは分光光度計で吸光度を測定することにより、検体中のイオンを測定することができる。蛍光測定の場合、その至適励起波長や最大蛍光波長は、常法によるスペクトル測定によって容易に調べることができ、蛍光スペクトロメーターで測定することもできるし、蛍光顕微鏡で観察することもできる。また、イオンセンサーに光源から光を照射したり、光学フィルターを通したりすることで、感度を上げることもできる。
【００２８】
本発明のイオンセンサーは、そのままでイオンの測定に用いることができるし、また、光ファイバーなどで連結して遠隔地でもメンテナンスフリーで連続測定が可能な測定システムを構築することもできる。
【００２９】
本発明のイオン感応性色素は、化学的に安定で、長期間に亘る反復的な使用にも耐える。本発明の色素可視領域に大きな吸収帯を持ち、イオン認識によってスペクトルが大きくシフトするため、色素が低濃度でもイオンの有無をはっきりと視認することが可能である。また、ボロン-ジピロメテン色素は蛍光の量子収率が高く、スペクトル幅が狭い上に、本発明の色素がイオン認識によって蛍光発光スペクトルも大きくシフトするため、サイズの小さな単一色素で、生体を蛍光顕微鏡観察することもできる。ボロン-ジピロメテン色素は、スペクトルに殆ど影響を与えない置換部位を複数持つので、イオン感応性を保ったまま、様々な構造体に取り込むことが容易である。実際にオプトードに用いた場合は、色素の堅牢性によって、オプトードの耐久性は大幅に向上した（下記実施例参照）。イオン濃度の測定法は、イオン感応性色素を、必要に応じて適切な添加剤と共に構造体に取り込み、視認もしくはスペクトル測定するだけなので、構造は簡便で、物理的な衝撃にも安定である。
【００３０】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３１】
イオン感応性色素の合成
上記反応式に従い、一般式[I]において、R1がメチル基、R2が水素原子, R3がメチル基R4が水素原子、R5 が水素原子、R6が水素原子、R7が4-ジメチルアミノフェニル基(以下、「4-Me2N-Ph」と略記することがある）である本発明の水素イオン感応性色素を合成した。詳細な手順を以下に記載する。なお、下記の記述中、化合物を番号で示しているものは、上記反応式中に示される同番号の化合物を意味している。
【００３２】
1.  N-ブトキシカルボニル-2-(4-ジメチルアミノ)フェニルピロール (3)（R5 = H, R6 = H, R7 = 4-Me2N-Ph）の合成  （反応条件としては、K. BurgessらのSynlett 1998, 1276-1278を参照）
Organic Synthesis 1991, 70, 151-156の方法により合成したN-ブトキシカルボニル-2-ブロモピロール (1) （R5 = H, R6 = H）（2.46 g, 10.0 mmol）と市販の4-(ジメチルアミノ)フェニルボロニックアシッド (2) （R7 = 4-Me2N-Ph）（1.65 g, 10.0 mmol）をトルエン50 mlとメタノール10 mlの混合溶媒に溶かし、真空脱気と窒素置換を３回繰り返した。その後、脱気した2.0 mol/Lの炭酸ナトリウム水溶液 7.0mlとテトラキス (トリフェニルホスフィン) パラジウム (0)（0.12 g, 0.12 mmol）を加え、窒素気流下80℃で20時間攪拌した。放冷後、有機層を抽出し、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（移動相：クロロホルム/ヘキサン = 1/1）により３番目のフラクションを分取し、溶媒留去することで目的物（3）の白色粉末（1.24 g, 4.3 mmol, 43 %）を得た。
【００３３】
2.  2-(4-ジメチルアミノ)フェニルピロール (4) (R5 = H, R6 = H, R7 = 4-Me2N-Ph) の合成
（反応条件としては、K. BurgessらのSynlett 1998, 1276-1278を参照）
N-ブトキシカルボニル体(3)（R5 = H, R6 = H, R7 = 4-Me2N-Ph）（500 mg, 1.75 mmol）を蒸留したTHF 10 mlに溶解し、ナトリウムメトキシドの28 %メタノール溶液 1.5 mlを加え、室温で15分攪拌した。その後、トルエンと水を加え有機層を抽出し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。最後に溶媒留去して、目的物（IV）の薄緑色粉末（312 mg, 1.67 mmol, 96 %）を得た。
【００３４】
3.  ボロン−ジピロメテン色素（7）（R1 = Me, R2 = H, R3 = Me, R4 = H, R5 = H, R6 = H, R7 = 4-Me2N-Ph）の合成  （反応条件としては、（6）までは、Y. MurakamiらのInorganic Chemistry, 1971, 10(8), 1728-1729を参照、（6）から(7)への変換は、K. BurgessらのSynlett 1998, 1276-1278を参照）
G. A. CordellのJournal of Organic Chemistry 1975, 40(22), 3161-3169の方法により合成した2,4-ジメチルピロール-5-カーボアルデヒド（5）（R1 = Me, R2 = H, R3 = Me, R4 = H）（69 mg, 0.56 mmol）と2-(4-ジメチルアミノ)フェニルピロール (4) (R5 = H, R6 = H, R7 = 4-Me2N-Ph)（106 mg, 0.56 mmol）をメタノール20 mlに溶解し、乾燥塩化水素ガスに接触させながら30分室温で攪拌し、溶媒留去して、赤褐色の中間体ジピロメテン（6）を得た。そのまま精製せずに、トルエン10 ml, トリエチルアミン（0.16 ml, 1.0 mmol）、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（0.24 ml, 1.9 mmol）を順次加え、１時間還流した。放冷後、有機層を炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒留去して、シリカゲルクロマトグラフィー（移動相：トルエン）により、濃い青色のフラクションを分取し、溶媒留去して目的物（7）の濃青色固体（40 mg, 0.12 mmol, 21 %）を得た。
【実施例２】
【００３５】
スペクトル測定用オプトードセンサー膜の作成
実施例１で作製したpH応答性色素（7）（0.68 mg, 2.04 μmol）、テトラキス[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]ホウ酸ナトリウム塩二水和物（1.84 mg, 2.04 μmol）、インヘレント粘度が1.02の高分子量ポリ塩化ビニル20 mg、セバシン酸 ジ(2-エチルヘキシル) 40 mgを乾燥THF 約1 mlに溶解した溶液を96穴マイクロタイタープレートに3mlずつ滴下し、デシケーターで乾燥させて目的のオプトードセンサー膜を得た。
【実施例３】
【００３６】
オプトードセンサー膜を用いたpH応答スペクトル測定
実施例２で作製したオプトードセンサー膜に、pH４〜５の希塩酸をそれぞれの穴に添加し、５分ほど静置した。マイクロプレートリーダーを用いて可視領域の吸収スペクトルを測定したところ、445 nmと540 nmに等吸収点を持つ滴定曲線が得られた（図１）。吸収の極大波長は、pH 4では540 nm、pH 5では596 nmと大きな差があるため、見た目でも識別することが可能である。また、蛍光発光の極大波長も、pH 4で645 nm、pH 5で660 nmと大きく異なるので、この色素が蛍光顕微鏡用のプローブとして有用であることが示された。
【実施例４】
【００３７】
目視型オプトードセンサープレートの作成
実施例１で作製したpH応答性色素（7）（1.72 mg, 5.07 μmol）、テトラキス[3,5-ビス(トリフルオロメチル)フェニル]ホウ酸ナトリウム塩二水和物（4.68 mg, 5.07 μmol）、ポリ塩化ビニルのコポリマー 10 mg、セバシン酸 ジ(2-エチルヘキシル) 20 mgを乾燥THF 0.364 mlに溶解した溶液をモノクロOHPフィルムの印刷面に溶液を約６滴滴下して、4000 rpmで５秒間スピンコートした。デシケーターで約２時間乾燥させて、目的のオプトードセンサープレートを得た。
【実施例５】
【００３８】
オプトードセンサープレートを用いたpH呈色実験
上記のセンサープレートを、炭酸飲料（pH 3.0）もしくは希塩酸（pH 4.0）に浸漬したところ、１秒以内で、プレートの色が青から赤紫に変わった。また、赤紫になったプレートを水酸化ナトリウム水溶液に浸漬すると、色が青色に戻った。これらの色変化は繰り返し行うことができ、酸に浸漬した状態でも９ヶ月以上呈色が識別できた。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】本発明の実施例において測定した、本発明の色素の１実施例の吸収スペクトル滴定曲線を示す。
【図１】
2005139371.tif 000011