(57)【要約】【課題】  正確に且つ確実に核酸の精製の工程を実行することができるための手段を提供する。【解決手段】  ガイドシールは、核酸捕捉部材を有する核酸精製器具を用いて試料から核酸を分離して抽出する工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示する。このようなガイドシールを核酸精製器具に装着することにより、作業者は正確に且つ確実にプランジャを運動させることができる。【選択図】  図９
2005348666.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プランジャを備えたシリンジと、試料から核酸を分離して精製する工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示したガイドシールと、核酸捕捉部材とを有する核酸精製器具。
【請求項２】
請求項１記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールをシリンジ本体の外面に装着し、上記ガイドシールに対応した目印を上記プランジャに設けたことを特徴とする核酸精製器具。
【請求項３】
請求項１記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールをプランジャに装着し、上記ガイドシールに対応した目印をシリンジ本体の外面に設けたことを特徴とする核酸精製器具。
【請求項４】
請求項１記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールにはプランジャの往復運動の回数とストロークが、折れ線状のガイド線によって表示されていることを特徴とする核酸精製器具。
【請求項５】
請求項４記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールにはプランジャの往復運動の始点が、上記ガイド線の始点によって表示され、プランジャの往復運動の終点が、上記ガイド線の終点の矢印によって表示されていることを特徴とする核酸精製器具。
【請求項６】
請求項４記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールにはプランジャの往復運動の速度が上記ガイド線の太さによって表示されていることを特徴とする核酸精製器具。
【請求項７】
請求項１記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールには複数の工程が異なる色によって表示されていることを特徴とする核酸精製器具。
【請求項８】
請求項１記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールには複数の工程が複数の折れ線状のガイド線と該ガイド線の先端の矢印によって表示されていることを特徴とする核酸精製器具。
【請求項９】
請求項１記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールには複数の工程が１本の折れ線状のガイド線と該ガイド線の先端の矢印によって表示されていることを特徴とする核酸精製器具。
【請求項１０】
請求項１記載の核酸精製器具において、上記ガイドシールには複数の工程が、１本の線上に順に描かれた複数の模様又は色によって表示されていることを特徴とする核酸精製器具。
【請求項１１】
プランジャを備えたシリンジと、核酸捕捉部材とを有する核酸精製器具を用いて試料から核酸を分離して精製する工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示したことを特徴とするガイドシール。
【請求項１２】
請求項１１記載のガイドシールにおいて、プランジャの往復運動の回数とストロークが、折れ線状のガイド線によって表示されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項１３】
請求項１２記載のガイドシールにおいて、プランジャの往復運動の始点が、上記ガイド線の始点によって表示され、プランジャの往復運動の終点が、上記ガイド線の終点の矢印によって表示されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項１４】
請求項１２記載のガイドシールにおいて、プランジャの往復運動の速度が上記ガイド線の太さによって表示されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項１５】
請求項１１記載のガイドシールにおいて、複数の工程が異なる色によって表示されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項１６】
請求項１１記載のガイドシールにおいて、複数の工程が複数の折れ線状のガイド線と該ガイド線の先端の矢印によって表示されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項１７】
請求項１１記載のガイドシールにおいて、複数の工程が１本の折れ線状のガイド線と該ガイド線の先端の矢印によって表示されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項１８】
請求項１１記載のガイドシールにおいて、複数の工程が、１本の線上に順に描かれた複数の模様又は色によって表示されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項１９】
請求項１８記載のガイドシールにおいて、更に、工程の順番を示す番号が付されていることを特徴とするガイドシール。
【請求項２０】
プランジャを備えたシリンジと、核酸捕捉部材とを有する核酸精製器具を用いて試料から核酸を分離して精製する工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示したガイドシールを、核酸精製器具に装着することと、
プランジャに上記ガイドシールに対応した目印を装着することと、
上記ガイドシールに表示されたガイドに基づいて上記プランジャを往復運動させることと、
を含む核酸精製方法。
【請求項２１】
プランジャを備えたシリンジと、核酸捕捉部材とを有する核酸精製器具を用いて試料から核酸を分離して精製する工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示したガイドシールを容器に装着することと、
上記ガイドシールに表示されたガイドに基づいて上記プランジャを往復運動させることと、
を含む核酸精製方法。
【請求項２２】
プランジャを備えたシリンジと、核酸捕捉部材とを有する核酸精製器具を用いて試料から核酸を分離して精製する工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示したことを特徴とするガイドシールをシリンジの背後に装着することと、
プランジャに上記ガイドシールに対応した目印を装着することと、
上記ガイドシールに表示されたガイドに基づいて上記プランジャを往復運動させることと、
を含む核酸精製方法。
【請求項２３】
プランジャを備えたシリンジと、核酸捕捉部材とを有する核酸精製器具の外側にガイド部材を装着することと、
核酸精製器具を用いて試料から核酸を分離して精製する工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示したことを特徴とするガイドシールを上記ガイド部材に装着することと、
プランジャに上記ガイドシールに対応した目印を装着することと、
上記ガイドシールに表示されたガイドに基づいて上記プランジャを往復運動させることと、
を含む核酸精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シリンジを用いた核酸の精製に関する。
【背景技術】
【０００２】
分子生物学の進歩によって遺伝子に関する数々の技術が開発され、また、それらの技術により多くの疾患性の遺伝子が分離、同定された。その結果、医療の分野でも、診断、検査法等に分子生物学的な技法が取り入れられ、従来不可能であった診断が可能となり、検査日数の大幅な短縮が達成された。
【０００３】
このような遺伝子に関する研究及び技術では、血液等の生体試料に含まれる核酸を共存物質から分離して抽出する核酸の精製工程が必要である。従来、様々な核酸精製方法が提案されている。
【０００４】
特表２００３−５０１６４４号公報には、シリンジ型のサンプル処理装置が記載されている。この装置では、ＤＮＡ等の生物学的分子を結合させるための固相ビーズを充填したディスポーザブルのカートリッジを使用する。
【０００５】
【特許文献１】特開２０００−３３３９７１号公報
【特許文献２】特開２００３−１０３２５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
シリンジを使用して核酸を精製する場合、試薬の添加、撹拌、核酸の抽出、洗浄、分離等の多数の工程を行う。これらの工程では、作業者は、試薬毎に又は工程毎に異なる容量の試薬又は溶液等を正確に操作しなければならない。
【０００７】
しかしながら、従来、これらの複数の作業を正確に且つ確実に実行するための指針がなかった。作業者は、予め用意された作業手順表、ノート、メモ等を見ながら、操作を行っていた。
【０００８】
本発明の目的は、作業者の経験が浅くても正確に且つ確実に核酸の精製の工程を実行することができるための手段を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、核酸精製工程におけるプランジャの運動を視覚的に表示するガイドに関する。ガイドを参考にプランジャを動かすことにより、作業者は正確に且つ確実に核酸精製工程を実行できる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、たとえ経験の浅い作業者であっても、正確に且つ確実に核酸の精製工程を実行できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、上記及びその為の本発明の新規な特徴と効果について、図面を参酌して説明する。ただし、図面はもっぱら解説のためのものであって、この発明の範囲を限定するものではない。
【００１２】
本発明は、プランジャを備えたシリンジと、核酸捕捉部材とを有する核酸精製器具に用いるガイドシールに関するものである。先ず、このような核酸精製器具の一例として、シリカを含有する固相を備えた核酸抽出用シリンジについて説明する。
【００１３】
図１及び図２を参照してシリンジの第１の例を説明する。本例のシリンジは、シリンジ本体１０、プランジャ２０、ノズル３０及び核酸捕捉ユニット４０を含む。本例のシリンジは、通常、図１に示すように、ノズル３０が下側に配置された状態にて、直立状態にて使用される。本明細書では、以下に、シリンジは、図１に示すように、直立状態にて配置されていると仮定して説明する。従って、ノズル側を下側、プランジャ側を上側と称する。
【００１４】
シリンジ本体１０は、円筒状の円筒部１０１と、上端の開口部１０２と、下端の底部１０３と、開口部１０２の周囲に設けられた鍔形の保持部１０４と、底部１０３に設けられたノズルを接続するための接続部１０５とを有する。底部１０３は、円錐状に形成されてよい。
【００１５】
プランジャ２０は、プランジャ本体２０１とシールピース２０３とを有する。シールピース２０３は、プランジャ本体２０１とは別個の部材として形成され、プランジャ本体２０１の下端の取り付け部２０２に取り付けられる。シールピース２０３は、下端に円錐状の突起２０４を有する。
【００１６】
ノズル３０は、上端の接続部３０１とそれより下方に延びる筒状部３０２とを有する。筒状部３０２の下端は、液切れを促進するために、ナイフのように薄くしてよい。ノズルの接続部３０１とシリンジ本体の接続部１０５は、圧入、ねじ、接着材による接着、溶着等によって接続される。
【００１７】
シリンジ本体１０及びプランジャ本体２０１は、耐薬品性が高く且つ成形加工が容易な樹脂によって形成される。シリンジ本体及びプランジャ本体は、好ましくは透明な材料、例えば、ポリプロピレンにより形成される。シリンジ本体１０の円筒部１０１の外面には、目盛りが形成又は書き込まれる。シールピース２０３はゴム等の弾性材より形成される。ノズル３０は、耐薬品性が高く且つ成形加工が容易な樹脂によって形成されてよいが、ステンレス等の金属によって形成されてよい。
【００１８】
シリンジ本体、プランジャ及びノズルの寸法は、取り扱うサンプル量によって異なる。ここでは、３０ｍｌ用のシリンジについて説明する。
【００１９】
図２及び図３を参照して核酸捕捉ユニット４０の構成を説明する。図２及び図３Ａに示すように、本例の核酸捕捉ユニットは、シリカを含有する円板状の核酸捕捉材４１、核酸捕捉材４１の上側及び下側に配置された２つの円板状の保持部材４２、４３及び円筒状のホルダ４４を含む。
【００２０】
図３Ｂに示すように、ホルダ４４の内面は、上端のテーパ部４４１と、リング状の突起４４２と、円筒部４４３と、下端のリング状の突起４４４を有する。テーパ部４４１は、下方に向かって内径が小さくなる円錐面を有する。テーパ部４４１の下端から円筒部４４３への境界は、内径が大きくなるように括れている。この括れによって、突起４４２が形成されている。第１の突起４４２の内径は、保持部材４２、４３の外径より僅かに小さい。従って、保持部材４２、４３をホルダ４４に挿入する場合、保持部材４２、４３を、ホルダ４４の突起４４２より圧入する。圧入時に、ホルダ４４と保持部材４２の少なくとも一方は弾性変形する。ホルダ４４のテーパ部４４１によって、圧入作業が容易となる。
【００２１】
第２の突起４４４の内径は、保持部材４２、４３の外径より小さい。従って、核酸捕捉材４１及び保持部材４２、４３は、２つの突起４４２、４４４に挟まれて保持される。ホルダ４４の外面の下端には、テーパ又は面取り４４５が形成されている。
【００２２】
核酸捕捉材４１は、例えば、シリカを含有する多数の細かい繊維のメッシュによって構成されている。即ち、核酸捕捉材４１は、略平面に沿って、ランダムな方向に配置された多数の細かい繊維からなる。核酸捕捉材はシリカを含むものであればどのようなものであってもよく、グラスウール、石英焼結体、粒子等であってもよい。
【００２３】
核酸捕捉材は、バインダによって固形化されてよい。即ち、核酸捕捉材を構成する繊維はバインダによって互いに接着される。それにより、適当な強度が保持され、繊維が崩れることが防止され、核酸捕捉材をホルダに組み込む作業が容易になる。勿論、強度を必要としない場合には、バインダによる固形化を省略してよい。核酸捕捉材は、シリカを含有する繊維からなるシートを、ポンチ状のカッタによって打ち抜くことによって、又は、プレス切断することにより製造されてよい。核酸捕捉材の厚さは、１ｍｍ以下であることが望ましく、好ましくは、０．５ｍｍ以下である。実施例では、核酸捕捉材の厚さは、０．４ｍｍである。
【００２４】
シリカはカオトロピック物質の存在下にて核酸と結合する。シリカに対する核酸の結合効率を高くするためには、シリカ表面に対する核酸の接触率を増加させればよい。核酸捕捉材の内部には、核酸を含む試料（サンプル液）が通過するための多数の通路が形成されている。このような通路の内面の面積の合計値が大きいほど、シリカ表面に対する核酸の接触率が大きい。通路の内面の面積の合計値を大きくするためには、通路の数を増加させ、通路の平均孔径を小さくすればよい。
【００２５】
しかしながら、通路の平均孔径を小さくすると、試料が核酸捕捉材を通過するときの流体抵抗が増加する。通路の平均孔径が小さ過ぎると、試料に含まれる、血球、核酸等の生体物質によって、目詰まりが起きる。核酸捕捉材の最大孔径は、好ましくは、５０μｍである。核酸捕捉材の平均孔径は、５〜２０μｍ、好ましくは、１０〜２０μｍである。
【００２６】
核酸捕捉材の最大孔径は、バブルポイント法（ＪＩＳ  Ｋ  ３８３２）によって測定される。バブルポイント法によると、核酸捕捉材を、完全に濡れるように液体中に浸漬させ、核酸捕捉材から気泡が出始めた時の最低圧力を計測する。この最低圧力より、最大孔径を求める。平均孔径は、最大孔径から求められる。例えば、平均孔径は最大孔径の半分であると、仮定してよい。
【００２７】
保持部材４２、４３は、少なくとも、核酸捕捉材の流体抵抗より小さい流体抵抗を有する。即ち、保持部材は、少なくとも、核酸捕捉材より流れ易いように構成される。保持部材４２、４３の平均孔径は、例えば１００μｍである。保持部材は、核酸捕捉機能を有しない多孔質物質によって構成されてよい。例えば、多数の樹脂製のビーズを加熱成型することにより形成してよい。樹脂として例えばポリプロピレンがある。
【００２８】
図４を参照して、本例のシリンジの組み立て手順を説明する。先ず、ステップＳ１０１にて、下側の保持部材４３をホルダ４４に挿入する。保持部材４３の外径は、ホルダ４４の内面の突起４４２の内径より僅かに大きいから、保持部材４３をホルダ４４に圧入する。このとき、保持部材４３とホルダ４４の少なくとも一方は弾性変形する。
【００２９】
ステップＳ１０２にて、核酸捕捉材４１をホルダ４４に挿入する。核酸捕捉材４１を下側の保持部材４３の上に配置する。ステップＳ１０３にて、上側の保持部材４２をホルダ４４に挿入する。保持部材４２の外径は、ホルダ４４の内面の突起４４２の内径より僅かに大きいから、保持部材４２をホルダ４４に圧入する。こうして、ホルダ４４に、核酸捕捉材４１が２つの保持部材４２、４３の間にサンドイッチ状に挟まれた状態にて保持され、核酸捕捉ユニット４０が形成される。ステップＳ１０４にて、核酸捕捉ユニット４０を検査する。例えば、外観観察及び通液検査を行う。
【００３０】
ステップＳ１０５にて、核酸捕捉ユニット４０をシリンジのシリンジ本体１０に挿入する。核酸捕捉ユニット４０は、シリンジ本体１０の上端の開口部１０２付近に保持される。ステップＳ１０６にて、プランジャ２０をシリンジ本体１０に挿入する。プランジャ２０のシールピース２０３は、核酸捕捉ユニット４０に接触する。図３Ｂの破線にて示すように、シールピース２０３の突起２０４の円錐面は、ホルダ４４の上端の開口部の内縁に、線接触する。プランジャ２０をシリンジ本体１０内に押し込むと、プランジャ２０からの力は、線接触を介して、核酸捕捉ユニット４０に均等に加わる。プランジャ２０をシリンジ本体１０内に更に押し込むと、核酸捕捉ユニット４０はシリンジ本体１０の底部１０３に当接する。それにより、シリンジが完成する。ステップＳ１０７にて、包装し、ステップＳ１０８にて、滅菌処理を行い、出荷する。
【００３１】
図５を参照して、本例のシリンジを使用して試料（サンプル液）から核酸を抽出する手順を説明する。試料は例えば全血である。先ず、ステップＳ２０１にて、容器内に、第１試薬と試料を注入し撹拌する。第１試薬はタンパク質を破壊するための溶解酵素であり、主成分はプロテイナーゼＫ溶液である。ステップＳ２０２にて、試料に第２試薬を添加し、撹拌する。第２試薬は、タンパク質を変性するためのカオトロピック剤であり、グアニジン塩酸塩等を含む溶液である。ステップＳ２０３にて、これらの試薬を加えた試料を加熱する。加熱は、例えば、８０°Ｃ、２５分程度である。加熱中も撹拌することにより、加熱時間を短縮することができる。ステップＳ２０４にて、試料に第３試薬を添加し、３０°Ｃ付近まで冷却し、約１５分放置する。冷却方法は、自然冷却であってよいが、処理時間を短縮化するために強制冷却であってよい。第３試薬は、結合促進剤であり、ジエチレングリコールジメチルエーテルを含む溶液である。
【００３２】
ステップＳ２０５にて、本例のシリンジを用いて、核酸を捕捉する。プランジャ２０は、最初、シールピース２０３が核酸捕捉ユニット４０に接触するように、シリンジ本体１０内に挿入されている。従って、先ず、シールピース２０３が核酸捕捉ユニット４０より離れるように、プランジャ２０をシリンジ本体１０より所定量だけ引出す。それによって、シールピース２０３と核酸捕捉ユニット４０の間に空間が形成される。この空間に保持された空気は、最後に、試料をシリンジ本体１０から完全に吐き出すために使用する。次に、ノズル３０の先端を、ステップＳ２０４にて用意した試料に入れる。ノズル３０の外面に多量の試料が付着することを防止するために、好ましくは、ノズル３０の下端のみを試料に入れる。プランジャ２０を引き上げることにより、試料をシリンジ本体１０内に導入する。試料は核酸捕捉ユニット４０を通過し、核酸捕捉が開始する。プランジャ２０を所定位置まで引き上げたら停止する。試料の移動の停止を確認したら、今度は、プランジャ２０をシリンジ本体１０内に押し込む。プランジャ２０を押し込むことによって、試料は核酸捕捉ユニット４０を反対方向に通過し、核酸捕捉が継続する。このような、プランジャ２０の往復運動を数回繰り返す。最後に、プランジャ２０をシリンジ本体１０内に十分押し込み、試料を完全に排出する。上述のように、シリンジ本体１０内に予め空気が保持されているから、その空気を排出することによって、試料は完全に排出される。一定時間経過後、次に工程のために、プランジャ２０をシリンジ本体１０より所定量だけ引出し、シールピース２０３と核酸捕捉ユニット４０の間に空間を形成する。
【００３３】
プランジャ２０の往復運動中に、ノズル３０からシリンジ本体１０内に試料と共に空気が入らないように注意する。空気が混入すると、核酸捕捉ユニット４０に対する試料の通過性が低下し、核酸捕捉効率が低下する。本例では、上述のように、試料を吸引する前に、シリンジ本体１０内に所定量の空気を導入する。この空気量を十分少なくすることによって、プランジャ２０の運動に対する試料の吸引の追従性、即ち、液面の追従性が高くなる。特に、試料の粘性が高い場合でも、液面の追従性を確保することができるため、作業能率が向上する。
【００３４】
ステップＳ２０６にて、第１回目のシリンジの洗浄を行う。ノズル３０の先端を第４試薬に入れ、プランジャ２０を引き上げ、シリンジ本体１０内に導入する。第４試薬は、第１洗浄液であり、滅菌水を含む溶液である。プランジャ２０を所定位置まで引き上げたら、今度は、プランジャ２０をシリンジ本体１０内に押し込む。それにより、第１洗浄液は、核酸捕捉ユニット４０を往復する。第１洗浄液によって、シリンジ本体１０及び核酸捕捉ユニット４０に付着した夾雑物が洗い流され、核酸捕捉材４１には捕捉された核酸のみが残る。プランジャ２０をシリンジ本体１０内に十分押し込むことによって、第１洗浄液を完全に排出する。新たに第１洗浄液を使用して、これを繰り返す。同一の第１洗浄液を使用して、プランジャ２０の往復運動を数回繰り返してもよいが、使用済みの第１洗浄液には夾雑物が含まれるため、洗浄効果が低い。従って、好ましくは、新しい第１洗浄液を使用する。第１回目の洗浄が終わったら、次の工程のために、プランジャ２０をシリンジ本体１０より所定量だけ引出し、シールピース２０３と核酸捕捉ユニット４０の間に空間を形成する。
【００３５】
ステップＳ２０７にて、第２回目のシリンジの洗浄を行う。第２回目の洗浄は、シリンジに残った第１洗浄液を洗浄するために行う。ノズル３０の先端を第５試薬に入れ、プランジャ２０を引き上げ、シリンジ本体１０内に導入する。第５試薬は、第２洗浄液であり、エタノールを含む溶液である。プランジャ２０を所定位置まで引き上げたら、今度は、プランジャ２０をシリンジ本体１０内に押し込む。それにより、シリンジ本体１０及び核酸捕捉ユニット４０に付着した第１洗浄液が洗い流される。新たに第２洗浄液を使用して、これを繰り返す。第２洗浄液を完全に排出したら、最後に、空中にてプランジャ２０を高速で往復運動させる。それによって、シリンジ本体１０内に空気が高速で導入され高速で排出される。これを繰り返すことにより、第２洗浄液がシリンジ内より完全に排除される。第２洗浄液が残っていると、後の作業に影響を与える。第２回目の洗浄が終わったら、次の工程のために、プランジャ２０をシリンジ本体１０より所定量だけ引出し、シールピース２０３と核酸捕捉ユニット４０の間に空間を形成する。
【００３６】
ステップＳ２０８にて、核酸捕捉材４１より核酸を分離する。ノズル３０の先端を第６試薬に入れる。第６試薬は、核酸を分離させるためのトリス緩衝液である。プランジャ２０を往復運動させる。それにより、トリス緩衝液は、核酸捕捉ユニット４０を往復する。トリス緩衝液によって、核酸が核酸捕捉材４１から分離する。同一の第６試薬を使用してプランジャ２０の往復運動を行ってもよいが、新しい第６試薬を使用してプランジャ２０の往復運動を行ってもよい。第６試薬を交換して、核酸の分離を行った場合には、得られた複数の第６試薬を１つの容器に混合する。こうして短時間にて、核酸を得ることができる。
【００３７】
図６は本例によるシリンジの使用方法を示す。図示のように容器５０には、予め、試薬又は試料が分注されている。このように、試薬又は試料を収納した容器は必要な数だけ用意される。ノズル３０の先端を容器内の液に入れ、プランジャ２０を引き上げることにより、液はシリンジ本体１０内に導入される。
【００３８】
図７を参照してシリンジの更に他の例を説明する。本例のシリンジは、シリンジ本体１０、プランジャ２０、ノズル３０及び核酸捕捉ユニット６０を含む。本例のシリンジでは、核酸捕捉ユニット６０は、シリンジ本体１０とノズル３０の間に装着されている。即ち、核酸捕捉ユニット６０の上端には、シリンジ本体１０の接続部１０５に接続するための図示しない接続部が設けられ、核酸捕捉ユニット６０の下端には、ノズルの接続部３０１に接続するための図示しない接続部が設けられている。核酸捕捉ユニット６０の内部の構造は、図２に示した核酸捕捉ユニット４０と同様であってよいが、微細なシリカ含有粒子を焼結することにより形成された円柱状の多孔質材によって構成してよい。
【００３９】
一般に、試料の容量が変化する場合、それに応じて複数の容量のシリンジを用意する必要がある。本例では、複数の容量のシリンジ本体１０及びプランジャ２０を用意する必要があるが、１種類の核酸捕捉ユニット６０を用意すればよい。試料の容量に従ってシリンジ本体１０及びプランジャ２０のみを変化させればよい。一般に、試料の種類が変化する場合、それに応じて複数の種類のシリンジを用意する必要がある。しかしながら、本例では、複数の核酸捕捉ユニット６０を用意する必要があるが、１種類のシリンジ本体１０及びプランジャ２０を用意すればよい。試料の種類に従って核酸捕捉ユニット６０のみを変化させればよい。
【実施例１】
【００４０】
図８を参照して、本発明によるガイドシール及び目印の例を説明する。本例によるとシリンジ本体１０の外面にガイドシール８００が装着され、プランジャ２０に目印７００が設けられている。シリンジ本体におけるガイドシールの装着位置は、例えばシリンジ底部であるが、シリンジ本体に装着位置を示すための表示を設けてもよい。
【００４１】
尚、目印７００を使用する代わりにプランジャ２０の下端２０３を目印として利用してもよい。図５に示した核酸抽出手順では、結合・洗浄・溶離の各工程において、プランジャを所定のストロークにて往復させて吸引吐出動作を行う。本例のガイドシール８００及び目印７００は、吸引吐出動作を行うときに、ユーザにプランジャの移動経路を視覚的に示す機能を有する。従って、作業者は、経験及び熟練がなくとも、正確に且つ確実にプランジャの操作を行うことができる。
【００４２】
ガイドシール８００は耐水性の透明なシールからなり、その上には、始点８０１と終点（図９に図示）を有するガイド線８０２が描かれている。ガイドシール８００を使用する代わりに、ガイド線を直接シリンジの外面に印刷又は成型してもよい。しかしながら、ガイドシール８００を使用する場合、吸引・吐出液量の変化に応じて、異なるガイド線を有するガイドシールを使用すればよいというメリットがある。
【００４３】
目印７００は、ガイドシール８００のガイド線８０２よりも大きなサイズを有し、かつガイド線８０２と異なる色を有することが望ましい。本例では、プランジャ２０に目印７００を設けるため、シリンジを傾斜しても、液面によって目印７００が見えなくなることはない。目印７００を設ける方法として、目印のシールを貼り付けてよいが、プランジャ２０に直接目印を刻印又は描画してもよい。
【００４４】
図９は、ガイドシールの第１の例を示す。本例のガイドシール８００には、工程ごとに色分けされたガイド線８１１〜８１６が描かれている。各ガイド線は、丸印の始点８０１と折れ線８０２と矢印の終点８０３を有する。これらのガイド線８１１〜８１６又は矢印８０３は、各工程にて使用する試薬容器の色に対応した色によって着色されてよい。それにより、試薬の取り違えというミスを防ぐことができる。例えば、核酸捕捉工程のガイド線８１１は黒、第１洗浄液による１回目洗浄工程のガイド線８１２は赤、２回目洗浄工程のガイド線８１３は青、第２洗浄液による３回目洗浄工程のガイド線８１４は茶、４回目洗浄工程のガイド線８１５は緑、核酸分離工程のガイド線８１６は黄である。
【００４５】
始点８０１は、各工程におけるプランジャの初期位置を示し、終点８０３は各工程におけるプランジャの最終位置を示す。折れ線８０２は、プランジャの往復回数とストロークを表示する。折れ線８０２の折り返し数は、各工程における吸引・吐出の繰り返し回数を示す。折れ線８０２の上端と下端の間の幅は、プランジャのストローク、即ち、吸引・吐出の際の溶液量に対応している。各工程の終点の矢印は、折れ線の下端より更に下方の位置に配置されている。これは、プランジャを往復運動させた後にエアブローを行うことを示す。各工程の始点は前工程の終点の矢印より高い位置に配置されている。これは、エアブローを行った後に、プランジャを初期位置まで持ち上げる動作が必要であることを示す。
【００４６】
ガイド線の幅又は矢印の大きさを変化させることにより、プランジャの移動速度を表示させることができる。例えば、ガイド線の幅が大きい場合には、プランジャの移動速度は大きいことを示し、ガイド線の幅が小さい場合には、プランジャの移動速度は小さいことを示す。
【００４７】
図５および図９を参照して、30mLシリンジを用いた場合の、ガイドシール800の一例について説明する。ステップS205における試料溶液は約25mLであり、捕捉工程811におけるシリンジ下端から始点801までの容積は約10mL、始点801から折れ線802の上端までの容積は約23mL、折れ線802の上端と下端との間の容積は約20mL、折れ線802の折り返し回数は9回、折れ線802の上端から終点803までの容積は約25mLである。ステップS206およびステップS207における洗浄溶液はいずれも約25mLであり、第１洗浄工程812では、シリンジ下端から始点801までの容積は約10mL、始点801から折れ線802の上端までの容積は約23mL、折れ線802の上端から終点803までの容積は約25mLである。第２洗浄工程813、第３洗浄工程814および第４洗浄工程815では、シリンジ下端から始点801までの容積は約10mL、始点801から折れ線802の上端までの容積は約23mL、折れ線802の上端と下端との間の容積は約20mL、折れ線802の折り返し回数は4回、折れ線802の上端から終点803までの容積は約25mLである。ステップS208における分離溶液は約2mLであり、分離工程816では、シリンジ下端から始点801までの容積は約10mL、始点801から折れ線802の上端までの容積は約15mL、折れ線802の上端と下端との間の容積は約5mL、折れ線802の折り返し回数は9回、折れ線802の上端から終点803までの容積は約20mLである。
【００４８】
本例では、プランジャの移動、即ち、吸引・吐出の回数および容量が視覚的に示されるため、複雑な動作であっても、作業者は、容易に実行することができる。
【００４９】
図１０及び図１１は、ガイドシール８００及び目印７００が設けられたシリンジを用いて、核酸捕捉工程を実行した場合のプランジャの動作を模式的に示した図である。まず、図１０Ａに示すように、プランジャ２０上のガイド目印７００が、ガイドシール８００上のガイド線８０２の始点８０１に整合するように、プランジャを配置する。次に、図１０Ｂに示すように、ガイド目印７００がガイド線８０２に沿って移動するように、プランジャ２０を持ち上げる。それにより、試薬容器５０より所定量の試薬がシリンジ本体内に吸引される。次に図１１Ａに示すように、ガイド目印７００がガイド線８０２に沿って移動するように、プランジャ２０を押し込む。それにより、シリンジ本体より所定量の試薬が試薬容器５０に吐き出される。次に、図１１Ｂに示すように、再び、ガイド目印７００がガイド線８０２に沿って移動するように、プランジャ２０を持ち上げる。最後に、図１１Ｃに示すように、ガイド目印７００がガイド線８０２に沿って移動するように、プランジャ２０を押し込み、全ての試薬をシリンジより吐き出す。こうして、プランジャ２０を往復運動させることにより、試薬が核酸捕捉ユニット４０を通過し、核酸捕捉ユニット４０によって核酸が捕捉される。本例によると、プランジャの往復運動のストロークは一定となるから、誤って核酸捕捉ユニット４０が空気を吸引することが回避される。
【実施例２】
【００５０】
図１２は本発明によるガイドシールの他の例を示す。本例のガイドシールは、図９に示したガイドシールと比較して、複数の工程を示すガイド線が１本に繋がれている点が異なる。即ち、本例によると、各工程の終点を示すガイド用矢印から次の工程の始点を示す丸印までガイド線が描かれている。この終点から始点までのガイド線の幅は、各工程のガイド線の幅と同一であってもよいが、それより細くても良い。本例のガイドシールは、全ての工程にて同一の試薬を用いる場合に使用して好適である。
【実施例３】
【００５１】
図１３は本発明によるガイドシールの更に他の例を示す。本例のガイドシール１３００には、結合工程及び洗浄工程を示すガイド線１３０１と番号１３０２、及び、分離工程を示すガイド線１３０３と番号１３０４が描かれている。結合工程と洗浄工程では、図９及び図１２に示したように、プランジャのストロークは同一である。従って、結合工程と洗浄工程を１つのガイド線によって表す。ガイド線に沿って、プランジャの始点位置、往復運動の上端点及び下端点、終点位置を示す数字１〜５が付されている。尚、数字１〜５と共に、又は、数字１〜５の代わりに、図示のように、ガイド線の色、幅、模様等を変化させてもよい。
【００５２】
更に、プランジャの往復運動を示すように両端に矢印が付されたガイド線１３０５、１３０７が描かれてよい。この場合、プランジャの往復運動の回数を示す表示１３０６が記載される。図示の例では、核酸補足工程では、９回の往復運動が必要であり、洗浄工程では４回の往復運動が必要であることが示される。
【００５３】
本例では、２つのガイド線１３０１、１３０３が描かれているのみであり、ガイドシールの面積を小さくすることができる。従って、外径が小さい小容量のシリンジに使用して好適である。プランジャには、上述の例と同様な目印が付されてよい。しかしながら、プランジャの外周に沿って延びる環状の目印であってもよい。
【実施例４】
【００５４】
図１４は本発明によるガイドシールの更に他の例を示す。本例のガイドシール１４００は、プランジャ２０の外面に貼り付けられ、目印のシール１４０１は、シリンジ本体１０の外面に装着されている。ガイドシール１４００は、図１３のガイドシールに描かれたガイド線１３０１、１３０３と同様であってよい。本例の目印のシール１４０１は、丸印ではなく、短い横線であってよい。本例では、ガイドシールが直接手に触れない部分に装着されているため、手に触れて剥がれたり、印刷が消えることが回避される。
【００５５】
また、本例では、シリンジの外面には比較的小さな目印のシールが貼り付けられているため、シリンジの外面には、検体番号等を書き込むスペースを確保することができる。
【実施例５】
【００５６】
図１５に示す例では、ガイドシール８００を、試薬容器５０に貼り付ける。上述のように、シリンジの外面にガイドシールを貼り付けると、シリンジを手で握ったときに、ガイドシールが手で隠れる可能性がある。通常、試薬容器は容器ラック等に保持された状態にて、使用される。従って、ガイドシールが手で隠れることはない。また、また試薬容器は常に水平状態が保たれているため、液量の確認が容易である。更に、液面の移動を観察することにより、吸引した試薬容量を確認することができるから、目印を設ける必要がない。
【実施例６】
【００５７】
図１６に示す例では、ガイドシール１６００は、シリンジの背後のスタンド１６０１に装着されている。ガイドシール１６００は、図９、図１２又は図１３に示した例が使用される。目印をプランジャに装着してもよいが、図示のようにプランジャの下端を目印として利用してもよい。通常、試薬容器は容器ラック等に保持された状態にて、使用される。ガイドシールは、ノズルを試薬容器内の試薬内に挿入したとき、目印であるプランジャの下端の位置に対応する位置に、設けられる。本例では、ガイドシール１６００はスタンド１６０１に装着されているが、容器ラックの適当な位置に設けてもよい。本例では、多量の検体を処理する場合でも１つのガイドシールによって処理が可能である。即ち、シリンジ毎にガイドシール及び目印を設ける必要がない。
【実施例７】
【００５８】
図１７は、ガイド部材を使用する例を示す。ガイド部材１７０１、１７０２は、シリンジ本体を覆うような円筒状の構造を有し、例えば、２つの半円筒状部材からなる。ガイド部材１７０１の外面には、図９、図１２又は図１３に示すガイド線１７００が印刷又は形成されている。ガイド部材１７０２には、窓１７０３が設けられている。ガイド部材１７０１、１７０２が透明のプラスチック又は樹脂によって形成されている場合には、窓１７０３は省略してもよい。プランジャ２０には、目印１７０４が設けられている。本例では、多量の検体を処理する場合でも１つのガイド部材によって処理が可能である。即ち、シリンジ毎にガイドシール及び目印を設ける必要がない。尚、図１４の例のように、ガイド部材１７０１に目印を設け、プランジャにガイドシール１７００を設けてもよい。
【００５９】
以上本発明の例を説明したが本発明は上述の例に限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲にて様々な変更が可能であることは当業者に理解されよう。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明は、核酸の抽出用装置に係り、特に生物試料に含まれる核酸を共存物質から分離して取り出すのに適した装置に関する。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】図１は、シリカ含有の固相を有する核酸抽出シリンジの断面図である。
【図２】図２は、核酸抽出シリンジの構成を示す図である。
【図３】図３は、核酸捕捉ユニットの構造を示す図である。
【図４】図４は、核酸抽出シリンジの製造手順を示す図である。
【図５】図５は、核酸抽出装置による核酸抽出手順を示す図である。
【図６】図６は、核酸抽出装置の実使用状態を例示する図である。
【図７】図７は、シリカ含有の固相を有する核酸抽出シリンジの他の例の断面図である。
【図８】図８は、核酸抽出シリンジ上における、ガイドシールとガイド用目印を示す図である。
【図９】図９は、ガイドシールの第１の例を示す図である。
【図１０】図１０は、ガイドシールを貼り付けた核酸抽出シリンジの使用方法を例示する図である。
【図１１】図１１は、ガイドシールを貼り付けた核酸抽出シリンジの使用方法を例示する図である。
【図１２】図１２は、ガイドシールの第１の例の変形例を示す図である。
【図１３】図１３は、ガイドシールの第３の例を示す図である。
【図１４】図１４は、プランジャにガイドシールを表示したシリンジの例を示す図である。
【図１５】図１５は、試薬容器にガイドシールを貼り付けた場合を例示する図である。
【図１６】図１６は、スタンドにガイドシールを貼り付けた場合を例示する図である。
【図１７】図１７は、ガイド部材を使用する場合を示す図である。
【符号の説明】
【００６２】
１０…シリンジ本体、２０…プランジャ、３０…ノズル、４０…核酸捕捉ユニット、４１…核酸捕捉材、４２，４３…保持部材、４４…ホルダ、５０…容器、６０…核酸捕捉ユニット、１０１…円筒部、１０２…開口部、１０３…底部、１０４…保持部、１０５…接続部、２０１…プランジャ本体、２０２…取り付け部、２０３…シールピース、２０４…突起、３０１…接続部、３０２…筒状部、４４１…テーパ部、４４２…突起、４４３…円筒部、４４４…突起、４４５…テーパ又は面取り、700…目印、800…ガイドシール、801…始点、802…折れ線、803…終点、811…捕捉工程、812…第１洗浄工程、813…第２洗浄工程、814…第３洗浄工程、815…第４洗浄工程、816…分離工程、1301…ガイド線、1302…番号、1303…ガイド線、1304…番号、1305…矢印、1306…往復回数表示、1307…矢印、1400…ガイドシール、1401…目印、1600…ガイドシール、1601…スタンド、1700…ガイド線、1701…ガイド部材、1702…ガイド部材、1703…窓、1704…目印
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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