(57)【要約】【課題】より精密に着色試料中の着色原因となる着色成分を分析する方法および分析装置を提供すること。【解決手段】（ａ）フォトダイオードアレイ検出器を用いて、着色試料および無着色試料を液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析して得られる着色試料および無着色試料のそれぞれの時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムデータから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間と吸収強度の二次元クロマトグラムを作成するステップと、（ｂ）前記着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択するステップと、（ｃ）前記選択した成分ピークについて、前記三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度の吸収スペクトルを作成するステップと、（ｄ）前記吸収スペクトルから、前記選択した成分の表色値を算出するステップを含むことを特徴とする着色試料の分析方法。【選択図】図１
2005091068.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）フォトダイオードアレイ検出器を用いて、着色試料および無着色試料を液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析して得られる着色試料および無着色試料のそれぞれの時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムデータから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間と吸収強度の二次元クロマトグラムを作成するステップと、
（ｂ）前記着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択するステップと、
（ｃ）前記選択した成分ピークについて、前記三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度の吸収スペクトルを作成するステップと、
（ｄ）前記吸収スペクトルから、前記選択した成分の表色値を算出するステップを含むことを特徴とする着色試料の分析方法。
【請求項２】
前記ステップ（ｂ）が、
（ｂ’）着色試料および無着色試料の可視光もしくは紫外線・可視光吸光度スペクトルを取得し、該スペクトルを比較して、吸収強度に差がある波長領域を選択し、前記選択した波長領域における前記（ａ）で得られた着色試料および無着色試料の二次元クロマトグラムを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択するステップである請求項１に記載の着色試料の分析方法。
【請求項３】
（ｅ）着色試料および無着色試料の可視光もしくは紫外線・可視光吸収スペクトルから算出される着色試料および無着色試料の表色値と前記（ｄ）で算出された成分の表色値とを比較するステップを、さらに含む請求項１または２に記載の着色試料の分析方法。
【請求項４】
（Ａ）フォトダイオードアレイ検出器を用いて、着色試料および無着色試料を液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析して得られる着色試料および無着色試料のそれぞれの時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間と吸収強度の二次元クロマトグラムを作成する二次元クロマトグラム作成手段と、
（Ｂ）前記二次元クロマトグラム作成手段にて作成された着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択する成分選択手段と、
（Ｃ）前記成分選択手段にて選択された成分ピークについて、三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度の吸収スペクトルを作成する吸収スペクトル作成手段と、
（Ｄ）前記吸収スペクトル作成手段にて作成された吸収スペクトルから、前記成分選択手段にて選択された成分ピークの表色値を算出する表色値算出手段とを備えてなることを特徴とする着色試料の分析装置。
【請求項５】
（Ｅ）着色試料および無着色試料の可視光もしくは紫外線・可視光吸収スペクトルから算出された着色試料および無着色試料の表色値と成分ピークの表色値とを比較する比較手段を、さらに備えてなる請求項４に記載の着色試料の分析装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、着色試料の分析方法および分析装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬、農薬、化成品等の製造工程においては、例えば他成分の混入、熱劣化等種々の原因により、本来の色相とは異なった色相を示す中間体や製品が得られることがある。本来の色相とは異なった色相を示す中間体や製品が得られた場合には、かかる色相の変化の原因となった成分が何であるかを究明し、該成分の生成原因等の検討が行われ、その結果を、製造工程に反映させて、本来の色相とは異なった色相の中間体や製品が再度得られないようにしている。
【０００３】
色相の変化の原因となった成分の究明は、通常色相が変化した試料（以下、着色試料と称す。）を採取し、該着色試料を吸光度分析し、紫外線・可視光吸光度スペクトルを得、着色試料の紫外線・可視光吸光度スペクトルと、本来の色相を示す試料（以下、無着色試料と称す。）の紫外線・可視光吸光度スペクトルとを比較し、吸収強度に差がある波長領域を選定するとともに、着色試料と無着色試料の表色値を算出し、着色の基礎データとする一方、着色試料をフォトダイオードアレイ検出器を用いてクロマトグラフィ分析し、前記選定した波長領域に吸収を有する成分であって、且つ、着色試料にのみ存在する成分について、波長と吸収強度の吸収スペクトルにおいて、前記選定した波長領域に吸収を有することを確認することで、前記成分が着色原因成分であると分析、判断していた。
【０００４】
しかしながら、かかる分析方法では、前記波長領域に吸収を有する成分が、着色原因成分であることを前提にしたものであり、前記波長領域に吸収を有する成分であっても、当該成分が着色への影響がないか、もしくは小さい成分である場合には、着色原因の究明にはつながらず、また前記波長領域に吸収を有する成分が複数存在した場合には、そのうちのどの成分が着色原因成分であるのか、あるいはそれぞれの成分のうち、着色への影響が大きいものはどれであるのか等についての情報は得られず、着色原因の究明が不十分である場合があり、より精密に着色試料を分析する方法が必要であった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような状況のもと、本発明者らは、より精密に着色試料中の着色原因となる着色成分を分析する方法および分析装置を開発すべく鋭意検討したところ、フォトダイオードアレイ検出器を用いて、着色試料および無着色試料を液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析して得られる着色試料および無着色試料のそれぞれの時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムデータから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間と吸収強度の二次元クロマトグラムを作成し、前記着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択し、前記選択した成分ピークについて、前記三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度の吸収スペクトルを作成し、前記吸収スペクトルから、前記選択した成分の表色値を算出することにより、着色試料中の着色原因となる着色成分が、複数存在した場合であっても、各着色成分の表色値が算出できるため、各着色成分の着色への影響の大きさ等が分かり、より精密な分析が可能となることを見出し、本発明に至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち本発明は、（ａ）フォトダイオードアレイ検出器を用いて、着色試料および無着色試料を液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析して得られる着色試料および無着色試料のそれぞれの時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムデータから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間と吸収強度の二次元クロマトグラムを作成するステップと、
（ｂ）前記着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択するステップと、
（ｃ）前記選択した成分ピークについて、前記三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度の吸収スペクトルを作成するステップと、
（ｄ）前記吸収スペクトルから、前記選択した成分の表色値を算出するステップを含むことを特徴とする着色試料の分析方法および（Ａ）フォトダイオードアレイ検出器を用いて、着色試料および無着色試料を液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析して得られる着色試料および無着色試料のそれぞれの時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間と吸収強度の二次元クロマトグラムを作成する二次元クロマトグラム作成手段と、
（Ｂ）前記二次元クロマトグラム作成手段にて作成された着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択する成分選択手段と、
（Ｃ）前記成分選択手段にて選択された成分ピークについて、三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度の吸収スペクトルを作成する吸収スペクトル作成手段と、
（Ｄ）前記吸収スペクトル作成手段にて作成された吸収スペクトルから、前記成分選択手段にて選択された成分ピークの表色値を算出する表色値算出手段とを備えてなることを特徴とする着色試料の分析装置を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、着色試料中の着色成分に関してより精密な分析ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明において、無着色試料とは、その試料の本来の色相を示す試料をいい、着色試料とは、無着色試料とは異なった色相を示す試料をいう。例えば本来無色透明を示す試料が黄色に着色した場合、無色透明の試料が無着色試料であり、黄色に着色した試料が着色試料になる。また、例えば本来黄色を示す試料が、緑色に着色した場合、黄色の試料が無着色試料であり、緑色の試料が着色試料になる。
【０００９】
本発明の着色試料の分析方法および分析装置について図面を用いて説明する。本発明の分析方法のフロー図を図１に、本発明の分析装置の一例の構成を機能的に示した図を図１４にそれぞれ示した。
【００１０】
まず（ａ）フォトダイオードアレイ検出器を用いて、着色試料および無着色試料を液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析して得られる着色試料および無着色試料のそれぞれの保持時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間と吸収強度の二次元クロマトグラムを作成するステップについて説明する（図１  Ｓ１）。
【００１１】
ステップ（ａ）で行われる液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析は、通常フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器１を備えた市販の液体クロマトグラフィ装置もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ装置が用いられる。液体クロマトグラフィ装置、ゲルパーミエーションクロマトグラフィ装置のいずれを用いるかは、適宜選択すればよいが、より高い分離能を有すると考えられている液体クロマトグラフィ装置を用いることが好ましい。かかる分析は、着色試料および無着色試料に含まれる成分を分離できる条件で行われ、用いる溶離液、カラム、温度等の分析条件は試料に応じて適宜選択すればよい。
【００１２】
着色試料および無着色試料は、そのまま分析してもよいし、例えば溶媒で希釈した後分析してもよい。溶媒で希釈した後分析する場合、着色試料の希釈率と無着色試料の希釈率は、通常略同一とされる。
【００１３】
フォトダイオードアレイ検出器１は、多数の小さなフォトダイオードを直線的に配列した検出器であり、複数の波長の光強度を同時に測定することができるため、フォトダイオードアレイ検出器１を用いて、着色試料と無着色試料のそれぞれを液体クロマトグラフィ分析もしくはゲルパーミエーションクロマトグラフィ分析することにより、それぞれの試料についての時間、波長および吸収強度の三次元クロマトグラムを得ることができる。分析する波長領域は、通常２００〜８００ｎｍの範囲である。
【００１４】
得られた三次元クロマトグラムは、例えばメモリ等の記憶手段７に通常記憶される。得られる三次元クロマトグラムの一例を、図４に示す。
【００１５】
二次元クロマトグラム作成手段２は、得られた三次元クロマトグラムから、各波長毎に、着色試料および無着色試料のそれぞれの時間データと吸収強度データを切り出して、時間と吸収強度のデータテーブルを作成し、該データテーブルをもとに二次元クロマトグラムを作成する。かかる二次元クロマトグラムとしては、得られた三次元クロマトグラムを時間軸と吸収強度軸を含む平面からみて、クロマトグラムを該平面に投射した図５に示すような二次元クロマトグラムが作成される。作成された二次元クロマトグラムは、例えばメモリ等の記憶手段７に記憶されるようにしてもよい。二次元クロマトグラムが作成されば、次ステップ（ｂ）に進む。
【００１６】
ステップ（ｂ）は、前記ステップ（ａ）で作成された着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択するステップ（図１  Ｓ２）であり、前記ステップ（ａ）で作成された着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムを各波長毎に比較し、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークが成分選択手段３により選択される。
【００１７】
着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択する基準としては、例えば着色試料と無着色試料の二次元クロマトグラムのカーブの傾斜値を比較し、着色試料の二次元クロマトグラムのカーブの傾斜値と無着色試料の二次元クロマトグラムのカーブの傾斜値の差を算出し、該傾斜値の差が所定値以上であるピークを着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークとする方法が挙げられる。また、例えば着色試料と無着色試料の二次元クロマトグラムを、並列させるか、あるいは重ね合わせて、着色試料の二次元ロマトグラムにのみ存在する成分ピークを選択するようにしてもよい。
【００１８】
この場合、前記ステップ（ａ）で作成された全ての測定波長における二次元クロマトグラムを比較してもよいが、予め比較する二次元クロマトグラムの波長もしくは波長領域を決めておき、決めておいた波長もしくは波長領域の二次元クロマトグラムを比較してもよい。より短時間で着色試料と無着色試料の二次元クロマトグラムを比較し、着色試料のみに存在する成分ピークを選択可能であるという点で、後者の予め比較する二次元クロマトグラムの波長もしくは波長領域を決めておき、決めておいた波長もしくは波長領域の二次元クロマトグラムを比較することが好ましい。
【００１９】
着色試料の可視光もしくは紫外線・可視光吸光度スペクトルと無着色試料の可視光もしくは紫外線・可視光吸光度スペクトルとを比較し、吸収強度に差がある波長もしくは波長領域には、かかる波長もしくは波長領域に吸収を有する成分が、着色試料にのみ存在する可能性が高いため、かかる波長もしくは波長領域を、予め比較する二次元クロマトグラムの波長もしくは波長領域としておいてもよい。また、吸収強度に差がある波長もしくは波長領域が複数存在する場合には、例えば着色試料の色相に近い色相の吸収波長領域を選んでもよいし、吸収強度の差が大きい波長領域を選んでもよい。
【００２０】
かかるステップ（ｂ）で選択された成分ピークの波長もしくは波長領域、吸収強度等の情報は、例えばメモリ等の記憶手段７に記憶されるようにしてもよい。着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークの選択が終了（図１  Ｓ３）すれば、次ステップ（ｃ）に進む。
【００２１】
ステップ（ｃ）は、前記ステップ（ｂ）で選択した成分ピークについて、前記三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度の吸収スペクトルデータを作成するステップ（図１  Ｓ４）であり、吸収スペクトル作成手段４が、記憶手段７に記憶された前記ステップ（ａ）で得られた三次元クロマトグラムから、前記ステップ（ｂ）で選択された成分ピークの情報に基づき、前記成分ピークの三次元クロマトグラムを読み出し、読み出した三次元クロマトグラムから波長データと吸収強度データを切り出し、波長と吸収強度のデータテーブルを作成し、該データテーブルにもとに吸収スペクトルを作成する。作成された吸収スペクトルは、通常、例えばメモリ等の記憶手段７に記憶される。前記で選択したすべての成分ピークについて、吸収スペクトルの作成が終了（図１  Ｓ５）すれば、次ステップ（ｄ）に進む。
【００２２】
ステップ（ｄ）は、前記ステップ（ｃ）で作成された吸収スペクトルから、前記選択した成分の表色値を算出するステップ（図１  Ｓ６）であり、前記ステップ（ｃ）で作成された吸収スペクトルから、表色値算出手段５が、表色値を算出する。算出された表色値は、例えばメモリ等の記憶手段７に記憶される。
【００２３】
表色値としては、例えばＬ*ａ*ｂ*表色系の明度Ｌ*および色相・彩度を表わす色座標ａ*、ｂ*（ＪＩＳ  Ｚ  ８７２９参照。）、Ｌ*ｕ*ｖ*表色系の明度Ｌ*および色相・彩度を表わす色座標ｕ*、ｖ*（ＪＩＳ  Ｚ  ８７２９参照。）、マンセル表色系の色相Ｈ、明度Ｖおよび彩度Ｃ（ＪＩＳ  Ｚ  ８７２１参照。）等の２°視野に基づくＸＹＺ表色系の三刺激値（ＪＩＳ  Ｚ  ８７０１参照。）や１０°視野に基づくＸ10Ｙ10Ｚ10表色系の三刺激値（ＪＩＳ  Ｚ  ８７２２参照。）から算出される種々の表色値が挙げられ、好ましくはＬ*ａ*ｂ*表色系の表色値が挙げられる。標準の光としては、標準の光Ａ、標準の光Ｂ，標準の光Ｃ、標準の光Ｄ65のいずれでもよい（ＪＩＳ  Ｚ  ８７２０参照。）。
【００２４】
ＸＹＺ表色系の三刺激値Ｘ、ＹおよびＺの算出式を、以下に示す。
2005091068.tif 000003
（式中、Ｓ（λ）は、標準の光の分光分布の波長λにおける値を表わし、ｘ（λ）、ｙ（λ）およびｚ（λ）は、ＸＹＺ表色系における等色関数の値を表わし、τ（λ）は、標準溶液の分光反射率または分光透過率を表わす。）
【００２５】
かかる三刺激値は、通常前記ステップ（ｃ）で作成された吸収スペクトルの吸光度の値を透過率もしくは反射率に変換し、算出される。例えば吸光度の値の透過率への変換は、例えば吸光度と透過率の関係式（下記式（５））に基づき実施される。
2005091068.tif 000004
（式中、Ａは吸光度を、Ｔは透過率をそれぞれ表わす。）
【００２６】
三刺激値の算出においては、必要に応じて標準白板補正等の補正を行ってもよい。
【００２７】
例えばＬ*ａ*ｂ*表色系の表色値は、前記式（１）〜（４）で算出されたＸＹＺ表色系の三刺激値Ｘ、ＹおよびＺから、以下に示す算出式（５）〜（７）に従い、算出される（ただし、Ｘ／Ｘn＞０．００８８５６、Ｙ／Ｙn＞０．００８８５６およびＺ／Ｚn＞０．００８８５６の場合）。
2005091068.tif 000005
（式中、Ｘn、ＹnおよびＺnは、完全拡散反射面の三刺激値を表わす。）
【００２８】
かかる表色値を算出することにより、成分自身の色相が数値として把握できるため、かかる表色値と着色試料の表色値を比較することにより、該成分が着色試料の色相に影響を及ぼす成分であるか否かが判断でき、より精密な分析が可能となる。
【００２９】
前記で選択したすべての成分ピークについて、表色値の算出が終了（図１  Ｓ７）すれば、次ステップ（ｅ）に進む。
【００３０】
ステップ（ｅ）は、着色試料および無着色試料の可視光もしくは紫外線・可視光吸光度スペクトルデータから算出される着色試料および無着色試料の表色値と前記ステップ（ｄ）で算出された成分の表色値とを比較するステップ（図１  Ｓ８）であり、これにより、その成分が、着色試料の着色原因であるかどうかだけでなく、着色試料の着色への影響が大きいか小さいか等も判断することができる。
【００３１】
Ｌ*ａ*ｂ*表色系を例にとり、説明する。まず、着色試料のＬ*、ａ*およびｂ*と無着色試料のＬ*、ａ*およびｂ*とを比較し、数値が大きく異なる表色値をピックアップするとともに、着色試料の当該表色値と無着色試料の当該表色値とを比較し、どちらの値が大きいかを決定する。例えば着色試料の表色値が無着色試料の表色値よりも大きい場合を、＋（プラス）とし、着色試料の表色値が無着色試料の表色値よりも小さい場合を、−（マイナス）とする。
【００３２】
続いて成分のＬ*、ａ*およびｂ*のうち、前記ピックアップした表色値に着目し、成分の当該表色値と無着色試料の当該表色値と比較し、どちらの値が大きいかを決定する。この場合も前記と同様に、例えば成分の表色値が無着色試料の表色値よりも大きい場合を、＋（プラス）とし、成分の表色値が無着色試料の表色値よりも小さい場合を、−（マイナス）とする。着色試料と無着色試料の表色値の比較結果と、成分と無着色試料の表色値の比較結果とを比較し、同じ（＋（プラス）同士、あるいは−（マイナス）同士）であれば、該成分が着色原因である可能性が高いと判断され、異なる場合は、該成分は着色への影響は小さいか、あるいは着色原因でない可能性が高いと判断される。さらに、着色原因である可能性が高いと判断された成分が複数あった場合には、該成分の前記表色値を比較し、値が大きい成分ほど、着色への影響度が大きいと判断できる。
【００３３】
この場合、例えば着色試料および無着色試料の可視光もしくは紫外線・可視光吸光度スペクトルデータから算出される着色試料および無着色試料の表色値を、メモリ等の記憶手段７に記憶しておき、前記（ｄ）で算出された成分の表色値と前記記憶した着色試料および無着色試料の表色値とを比較手段６が比較し、着色原因である可能性の高い成分をピックアップするようにしてもよい。
【実施例】
【００３４】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
【００３５】
実施例１
通常白色結晶として得られていたＮ−（３，５−ジクロロフェニル）−１，２−ジメチルシクロプロパン−１，２−ジカルボン酸イミドが、淡褐色結晶として得られたため、着色成分の分析を行った。
【００３６】
まず、Ｎ−（３，５−ジクロロフェニル）−１，２−ジメチルシクロプロパン−１，２−ジカルボン酸イミドの白色結晶（以下、無着色試料と略記する。）とＮ−（３，５−ジクロロフェニル）−１，２−ジメチルシクロプロパン−１，２−ジカルボン酸イミドの淡褐色結晶（以下、着色試料と略記する。）について、以下に示す条件で、それぞれ紫外線・可視光吸光度測定を行い、図２に示す吸光度スペクトルを得た。得られた吸光度スペクトルから、３００〜５００ｎｍに着色試料に特有の吸収ピークがあることがわかった。
【００３７】
＜測定条件＞
装置：紫外線・可視光分光光度計（島津製作所製、ＵＶ−２４００ＰＣ）
測定波長：２００〜８００ｎｍ
希釈溶媒：アセトニトリル
測定試料濃度：１０ｍｇ／ｍＬ
【００３８】
さらに、かかる吸光度スペクトルから、Ｌ*ａ*ｂ*表色系における表色値を算出した。算出した表色値および比較値（着色試料の表色値と無着色試料の表色値の差）を表１に示した。表色値の算出条件は、以下のとおりであった。
【００３９】
＜表色値の算出条件＞
波長：３８０〜７８０ｎｍ
標準の光：標準の光Ａ
視野：２°
【００４０】
【表１】
2005091068.tif 000006
【００４１】
この結果から、着色試料と無着色試料の表色値のうち、最も差の大きいｂ*をピックアップし、着色試料のｂ*が無着色試料のｂ*よりも大きいことから、比較結果を＋とした。
【００４２】
着色試料および無着色試料について、フォトダイオードアレイ検出器を備えたゲルパーミエーションクロマトグラフィ装置を用いて、以下に示す条件で分析を行い、三次元クロマトグラムを得た。得られた三次元クロマトグラムを図３（無着色試料）および図４（着色試料）に示した。得られた三次元クロマトグラムから、各波長毎にデータを切り出し、着色試料および無着色試料の二次元クロマトグラムを作成した。作成した二次元クロマトグラムのうち、波長２５４ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍおよび４５０ｎｍの二次元クロマトグラムを図５（無着色試料）および図６（着色試料）に示した。
【００４３】
＜分析条件＞
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ２０００ＨHR＋ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ１０００ＨHR＋ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ１０００ＨHR（各々φ７．８ｍｍ×３０ｃｍ、５μｍ）
恒温槽温度：４０℃
移動相：テトラヒドロフラン（１ｍＬ／ｍｉｎ．）
検出波長：２００〜８００ｎｍ
測定試料濃度：３０ｍｇ／ｍＬ
【００４４】
続いて、作成した着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較したところ、波長領域３５０〜４００ｎｍにおいて、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークとして、保持時間約２１分の成分（以下、この成分をＲＴ２１成分と略記する。）、保持時間約２２分の成分（以下、この成分をＲＴ２２成分と略記する。）および保持時間約２４分の成分（以下、この成分をＲＴ２４成分と略記する。）の三成分を検出した。
【００４５】
かかる三成分について、それぞれの三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度のデータを切り出し、波長と吸収強度のデータテーブルを作成し、該データテーブルをもとに吸収スペクトルを作成した。該吸収スペクトルから、Ｌ*ａ*ｂ*表色系における表色値を算出した（表色値の算出にあたり、標準の光Ａを用い、２°視野とした。）。ＲＴ２２成分について作成された、切り出した波長と吸収強度のデータテーブルの一部を図７に、吸収スペクトルを図８に示した。また、各成分の表色値を表２に示した。
【００４６】
【表２】
2005091068.tif 000007
【００４７】
各成分のｂ*と無着色試料のｂ*とを比較し、その結果を下記表３に示した。
【００４８】
【表３】
2005091068.tif 000008
【００４９】
表３に示した比較結果と前記表１に示した比較結果から、上記三成分のうち、ＲＴ２４成分の着色への影響は小さいか、またはほとんどなく、ＲＴ２１成分およびＲＴ２２成分の二成分が着色に影響を及ぼしており、その中でも、ｂ*が大きいＲＴ２２成分の影響が大きいことがわかった。
【００５０】
実施例２
通常淡黄白色固体として得られていたＮ，Ｎ’−ジベンジル−２，３−ジアミノブタン−２，３−ジカルボン酸が、淡黄色固体として得られたため、着色成分の分析を行った。
【００５１】
まず、Ｎ，Ｎ’−ジベンジル−２，３−ジアミノブタン−２，３−ジカルボン酸の淡黄白色固体（以下、無着色試料と略記する。）とＮ，Ｎ’−ジベンジル−２，３−ジアミノブタン−２，３−ジカルボン酸の淡黄色固体（以下、着色試料と略記する。）について、以下に示す条件で、それぞれ紫外線・可視光吸光度測定を行い、図９に示す吸光度スペクトルを得た。得られた吸光度スペクトルから、３００〜５００ｎｍに着色試料に特有の吸収ピークがあることがわかった。
【００５２】
＜測定条件＞
装置：紫外可視分光光度計（島津製作所製、ＵＶ−２４００ＰＣ）
測定波長：２００〜８００ｎｍ
希釈溶媒：５重量％炭酸ナトリウム水溶液／メタノール（１／１体積比）
測定試料濃度：１０ｍｇ／ｍＬ
【００５３】
さらに、かかる吸光度スペクトルから、Ｌ*ａ*ｂ*表色系における表色値を算出した。算出した表色値および比較値（着色試料の表色値と無着色試料の表色値の差）を表４に示した。表色値の算出条件は、以下のとおりであった。
【００５４】
＜表色値の算出条件＞
波長：３８０〜７８０ｎｍ
標準の光：標準の光Ａ
視野：２°
【００５５】
【表４】
2005091068.tif 000009
【００５６】
この結果から、着色試料と無着色試料の表色値のうち、最も差の大きいｂ*をピックアップし、着色試料のｂ*が無着色試料のｂ*よりも大きいことから、比較結果を＋とした。
【００５７】
着色試料および無着色試料について、フォトダイオードアレイ検出器を備えた液体クロマトグラフィ装置を用いて、以下に示す条件で分析を行い、三次元クロマトグラムを得た。得られた三次元クロマトグラムから、各波長毎にデータを切り出し、着色試料および無着色試料の二次元クロマトグラムを作成した。作成した二次元クロマトグラムのうち、波長２５４ｎｍ、４００ｎｍおよび４５０ｎｍの二次元クロマトグラムを図１０（無着色試料）および図１１（着色試料）に示した。
【００５８】
＜分析条件＞
カラム：ＳＵＭＩＰＡＸ  ＯＤＳ  Ａ２１２（φ６ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ）
恒温槽温度：４０℃
移動相：Ａ液  １．４体積％酢酸水  Ｂ液  メタノール
１０％Ｂ液／９０％Ａ液−（４５分）→１００％Ｂ液（１５分保持）
検出波長：２００〜８００ｎｍ
流量：１ｍＬ／分
測定試料濃度：１０ｍｇ／ｍＬ
【００５９】
続いて、作成した着色試料の二次元クロマトグラムと無着色試料の二次元クロマトグラムとを比較したところ、波長４００ｎｍにおいて、着色試料の二次元クロマトグラムにのみ存在する成分ピークとして、保持時間約３７分の成分（以下、この成分をＲＴ３７成分と略記する。）、保持時間約４１分の成分（以下、この成分をＲＴ４１成分と略記する。）および保持時間約４３分の成分（以下、この成分をＲＴ４３成分と略記する。）の三成分を検出した。
【００６０】
かかる三成分について、それぞれの三次元クロマトグラムから、波長と吸収強度のデータを切り出し、波長と吸収強度のデータテーブルを作成し、該データテーブルをもとに吸収スペクトルを作成した。該吸収スペクトルから、Ｌ*ａ*ｂ*表色系における表色値を算出した（表色値の算出にあたっては、標準の光Ａを用い、２°視野とした。）。ＲＴ４３成分について作成した、切り出した波長と吸収強度のデータテーブルの一部を図１２に、吸収スペクトルを図１３に示した。各成分の表色値を表５に示した。
【００６１】
【表５】
2005091068.tif 000010
【００６２】
各成分のｂ*と無着色試料のｂ*とを比較し、その結果を下記表６に示した。
【００６３】
【表６】
2005091068.tif 000011
【００６４】
表６に示した比較結果と前記表４に示した比較結果から、上記三成分のいずれも着色に影響を及ぼしており、中でも、ｂ*が最も大きいＲＴ４３成分が、着色に対して、最も影響を及ぼしており、次いでＲＴ４１成分が着色に影響を及ぼしているということがわかった。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】本発明の分析方法のフロー図である。
【図２】実施例１の無着色試料と着色試料の吸光度スペクトルである。
【図３】実施例１の無着色試料の三次元クロマトグラムである。
【図４】実施例１の着色試料の三次元クロマトグラムである。
【図５】実施例１の無着色試料の保持時間と吸収強度の二次元クロマトグラムである。
【図６】実施例１の着色試料の保持時間と吸収強度の二次元クロマトグラムである。
【図７】実施例１のＲＴ２２成分の三次元クロマトグラムから波長と吸収強度のデータを切り出したデータテーブルの一部である。
【図８】実施例１のＲＴ２２成分の吸収スペクトルである。
【図９】実施例２の無着色試料と着色試料の吸光度スペクトルである。
【図１０】実施例２の無着色試料の保持時間と吸収強度の二次元クロマトグラムである。
【図１１】実施例２の着色試料の保持時間と吸収強度の二次元クロマトグラムである。
【図１２】実施例２のＲＴ４３成分の三次元クロマトグラムから波長と吸収強度のデータを切り出したデータテーブルの一部である。
【図１３】実施例２のＲＴ４３成分の吸収スペクトルである。
【図１４】本発明の分析装置の一例の構成を機能的に示した図である。
【符号の説明】
【００６６】
１    フォトダイオードアレイ検出器
２    二次元クロマトグラム作成手段
３    成分選択手段
４    吸収スペクトル作成手段
５    表色値算出手段
６    比較手段
７    記憶手段
【図１】
2005091068.tif 000012
【図２】
2005091068.tif 000013
【図３】
2005091068.tif 000014
【図４】
2005091068.tif 000015
【図５】
2005091068.tif 000016
【図６】
2005091068.tif 000017
【図７】
2005091068.tif 000018
【図８】
2005091068.tif 000019
【図９】
2005091068.tif 000020
【図１０】
2005091068.tif 000021
【図１１】
2005091068.tif 000022
【図１２】
2005091068.tif 000023
【図１３】
2005091068.tif 000024
【図１４】
2005091068.tif 000025