(57)【要約】【課題】低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを生産する菌株の探索及びそれを用いた製造方法の確立。【解決手段】ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）またはその変異株を液体培地中で培養し、培養液中に生成蓄積した８〜２２量体の範囲にその最多含有率を有する低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジン混合物を採取することを特徴とする低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）。
【請求項２】
ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）の変異株。
【請求項３】
ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）を液体培地中で培養し、培養液中に生成蓄積したε−ポリ−Ｌ−リジンを採取することを特徴とするε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【請求項４】
ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）の変異株を液体培地中で培養し、培養液中に生成蓄積したε−ポリ−Ｌ−リジンを採取することを特徴とするε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【請求項５】
液体培地が有機酸またはその塩を炭素源とする請求項３または４に記載のε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【請求項６】
有機酸がクエン酸又はその塩である請求項５に記載のε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【請求項７】
ε−ポリ−Ｌ−リジンが、８〜２２量体の範囲にその最多含有率を有するε−ポリ−Ｌ−リジン混合物である請求項３または４に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを生産する菌株及びそれを用いた低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを著量含む低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ε−ポリ−Ｌ−リジンは、Ｌ−リジンのε位のアミノ基が、隣り合うＬ−リジンのカルボン酸基とアミド結合で結合した高分子化合物である。ε−ポリ−Ｌ−リジンは、必須アミノ酸であるＬ−リジンのポリマーであるため、人体に対する安全性が高く、また、カチオン含量が高いので特異な物性を有する。したがってトイレタリー用品、化粧品、飼料添加物、医薬、農薬、食品添加物、電子材料等の用途が期待できる。特に、食品添加物の分野では、天然物系の添加物として注目されている。
【０００３】
ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法としては、ε−ポリ−Ｌ−リジンを生産する菌株を培地にて培養し、得られた培養物からε−ポリ−Ｌ−リジンを採取する方法が知られている。このような方法に使用される菌株としては、ストレプトマイセス・アルブラス・サブスピーシズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｕｌｕｓ  ｓｕｂｓｐ．  ｌｙｓｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）  Ｎｏ．３４６−Ｄ株（微工研菌寄第３８３４号）（特許文献１参照）（以下、Ｎｏ．３４６−Ｄ株という。）、Ｎｏ．３４６−Ｄ株のＳ−アミノエチル−Ｌ−システイン耐性変異株である１１０１１Ａ−１株（微工研条寄第１１０９号）（特許文献２参照）、
【０００４】
Ｎｏ．３４６−Ｄ株のプラスミド増幅変異株である５０８３３株（微工研条寄第１１１０号）（特許文献３及び４参照）、高濃度のＳ−アミノエチル−Ｌ−システインに対して耐性を有する、１１０１１Ａ−１株の変異株であるＢ２１０２１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−５９２６）（特許文献５参照）、ストレプトマイセス・ノールセイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｕｒｓｅｉ）に属する菌株（ＦＥＲＭ  Ｐ−９７９７）（特許文献６参照）ストレプトマイセスｓｐ．ＳＰ−７２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６８１０）（特許文献７参照）およびストレプトマイセスｓｐ．ＳＰ−６６株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７２２３）（特許文献８参照）、ストレプトマイセス・ヘルバリカラー  ＳＰ−１３株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７８４５）（特許文献９参照）、ストレプトマイセス・アルブラス・サブスペシーズ  ＳＰ−２５株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７９９８）（特許文献１０参照）およびストレプトマイセス・ラベンデュラエ  ＵＳＥ−５３株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８３０５）（特許文献１１）が知られている。
【０００５】
【特許文献１】
特公昭５９−２０３５９号公報
【特許文献２】
特公平３−４２０７０号公報
【特許文献３】
特公平３−４２０７５号公報
【特許文献４】
特公平６−７５５０１号公報
【特許文献５】
特開平９−１７３０５７号公報
【特許文献６】
特開平１−１８７０９０号公報
【特許文献７】
特開２０００−０６９９８８号公報
【特許文献８】
特開２００１−０１７１５９号公報
【特許文献９】
特開２００２−９５４６６号公報
【特許文献１０】
特開２００２−９５４６７号公報
【特許文献１１】
特開２００３−５２３５８号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら前述の菌株を用いて生産したε−ポリ−Ｌ−リジンを食品添加物として使用する際、使用量に応じて苦みが増す傾向があった。そこで苦みを低減できる８量体から２２量体の低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンが好ましく、とりわけ１０量体から１９量体の低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを高い分率で含有する低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを生産する菌株並びに低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法が望まれていた。また、ε−ポリ−Ｌ−リジンを生成蓄積させるための液体培地の炭素源としてグルコース、フルクトース、グリセロール等が用いられてきたが、これらは緩衝作用能力がなく培養の途中でｐＨが上昇し、同時に生産されている分解酵素によってε−ポリ−Ｌ−リジンが分解されてしまう可能性があり、ｐＨの上昇しにくい炭素源でε−ポリ−Ｌ−リジンを生産する菌株が望まれていた。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は前述の従来技術の問題点に鑑み、鋭意研究を重ねた。その結果、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）およびその変異株であれば、著量の低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを生産することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成させた。
【０００８】
以上の記述から明らかなように本発明の目的は、８量体から２２量体の低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを高い分率で含有する低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンを生産する、新規な菌株および該菌株を用いた発酵法による該低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法を提供することである。
【０００９】
本発明は下記の（１）〜（７）の構成を有する。
（１）  ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）。
【００１０】
（２）  ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）の変異株。
【００１１】
（３）  ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）を液体培地中で培養し、培養液中に生成蓄積したε−ポリ−Ｌ−リジンを採取することを特徴とするε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【００１２】
（４）  ストレプトマイセス・属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２）の変異株を液体培地中で培養し、培養液中に生成蓄積したε−ポリ−Ｌ−リジンを採取することを特徴とするε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【００１３】
（５）  液体培地が有機酸またはその塩を炭素源とする（３）または（４）項に記載のε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【００１４】
（６）  有機酸がクエン酸又はその塩である（５）項に記載のε−ポリ−Ｌ−リジンの製造方法。
【００１５】
（７）  ε−ポリ−Ｌ−リジンが、８〜２２量体の範囲にその最多含有率を有するε−ポリ−Ｌ−リジン混合物である（３）または（４）項に記載の製造方法。
【００１６】
【発明の実施の形態】
＜１＞本発明菌株
本発明菌株は、炭素源としてクエン酸またはその塩を用いれば、８〜２２量体の範囲にその最多含有率を有する低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジン混合物（以下「低重合度ポリリジン」という。）を著量生産する性質を有する。低重合度ポリリジンを著量生産するとは、採取に十分な量の低重合度ポリリジンを生産することを意味する。
【００１７】
本発明で云う低重合度ポリリジンとは、Ｎｏ．３４６−Ｄ株を生産培地（２．０％グリセロール、２．０％クエン酸・Ｈ２Ｏ（ｐＨ  ４．５）、１．０％（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．２％Ｌ−リジン・ＨＣｌ）を用い、３０℃で培養してえられたポリリジンの重合度（２０数量体から３０数量体程度）より低い重合度の化合物である。即ち、８〜２２量体好ましくは１０〜１９量体の範囲にその最多含有率を有する低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジン混合物であり、且つ数平均分子量が２０００以上のポリリジンを云う。
【００１８】
ポリリジンを食品添加物として食品に添加した際の苦みの低減については、通常ポリリジンの生産菌として用いられるＮｏ．３４６−Ｄ株が生産するポリリジン（重合度１３−３５）よりも低い重合度のポリリジンを著量に含めば、苦み低減の効果が認められる。
【００１９】
本発明において炭素源として用いられる有機酸としてはクエン酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸等が挙げられ、これらの内ではクエン酸が特に好ましい。また、これら有機酸のＮａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｃａ等の金属塩も同様に使用することができる。
培養液中の低重合度ポリリジンは、後記実施例１（１）（ｃ）に記載した方法により測定することができる。
【００２０】
本発明菌株であるストレプトマイセス属  ＵＳＥ−５４株（以下、ＵＳＥ−５４株という）は、後記実施例１に示すスクリーニングによって低重合度ポリリジンの生産性を指標として土壌から単離されたものである。
【００２１】
ＵＳＥ−５４株の菌学的性質は以下の通りである。
（１）形態学的性質
酵母エキス・麦芽エキス寒天培地（ＩＳＰ  Ｍｅｄｉｕｍ  ２）上で２８℃、１〜２週間生育したＵＳＥ−５４株の気菌糸および基生菌糸を顕微鏡で観察した結果を以下に示す。胞子形成菌糸の分枝法および形態：屈曲点がある直状（ＲＦ型）。また、いくつかのオープンループ（ＲＡ型）が見られる。
【００２２】
（２）特定の培地における菌糸の色等の観察結果
２種培地における２８℃で２週間培養後の観察結果を下記表１に示す。
【００２３】
【表１】
2005006561.tif 000002
【００２４】
使用した培地組成は下記の通りである。
2005006561.tif 000003
【００２５】
2005006561.tif 000004
【００２６】
（３）生理的性質
▲１▼細胞壁組成：細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸の型についてスタネック（Ｓｔａｎｅｃｋ）らの方法（アプライド・マイクロバイオロジー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）第２８巻第２２６頁（１９７４年）参照）により分析した結果、Ｌ，Ｌ型であった。
【００２７】
▲２▼各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地上）を表２に示した。
【００２８】
【表２】
2005006561.tif 000005
注）＋：同化する、−：同化しない。
【００２９】
▲３▼黒色メラニン様色素の生成：ペプトン・鉄培地：なし、チロシン寒天培地：なし。
【００３０】
2005006561.tif 000006
【００３１】
2005006561.tif 000007
【００３２】
（４）酸の生産性
炭素源として下記表３の炭水化物を用いた場合の酸生産の有無を示す。
【００３３】
【表３】
2005006561.tif 000008
注）＋：生産する。−：生産しない。
【００３４】
上記の菌学的性質、特に形態学的性質および細胞壁のジアミノピメリン酸の型等から、ＵＳＥ−５４株はストレプトマイセス属に属すると判定される。ＵＳＥ−５４株の１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子をＰＣＲで増幅し、配列を調べたところ、ストレプトマイセス・ラベンデュラエ類縁の３種の配列と９９．７％前後の相同性を示した。しかし、ストレプトマイセス属の場合は他の多くの細菌と異なり、この方法だけでは同定できないことは良く知られているところである。事実、ＵＳＥ−５４株はストレプトマイセス・ラベンデュラエと異なり、上記のようにメラニン様色素を生産せず、表２の炭素源のうちＤ−グルコースのみを同化利用できる後者とは異なり、７種の炭素源を同化・利用できる点や胞子の形態も後者（ストレプトマイセス・ラベンデュラエ）と大いに異なる。Ｅ．キュスター（Ｅ．Ｋｕｓｔｅｒ）のインターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｊ．  Ｓｙｓｔ．  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．）第２２巻第１３９頁−１４８頁（１９７２年）並びにＰ．ケムファー（Ｐ．Ｋａｍｐｈｅｒ）らのジャーナル・オブ・ゼネラル・マイクロバイオロジー（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．）第１３７巻第１８３１頁−第１８９１頁（１９９１年）を参照して類縁菌種を検索し、更にバージェイズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第２４７６頁並びにＥ．Ｂ．シーリング（Ｅ．  Ｂ．  Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）及びＤ．ゴットリーブ（Ｄ．  Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）のインターナショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｊ．  Ｓｙｓｔ．  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．）第２２巻第２７１頁−第２７３頁（１９７２年）を参照して類縁菌種を検索したところ、本発明菌株はストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  ）の新種と同定し、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株と命名した。このストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株は、独立行政法人  産業技術総合研究所に２００１年１０月１１日に寄託され、受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２が付与されている。
【００３５】
また、本発明菌株には、ＵＳＥ−５４株と同等あるいはそれ以上に低重合度ポリリジンを生産する性質（好ましくは本発明菌株の上記の好ましい性質）を有する限り、ＵＳＥ−５４株の変異株も包含される。ＵＳＥ−５４株の変異株とは、ＵＳＥ−５４株に変異処理をして誘導することのできる低重合度ポリリジン生産性変異株またはＵＳＥ−５４株の自然突然変異株を意味する。
【００３６】
ＵＳＥ−５４株の変異株は、ＵＳＥ−５４株の細胞を変異誘発処理することによって得られる変異株やＵＳＥ−５４株の自然突然変異株を、ポリリジンを生産する性質などを指標としてスクリーニングすることによって得られる。変異誘発処理としては、紫外線照射やＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンなどの変異誘発物質による処理が挙げられる。ポリリジンを生産する性質などを指標とするスクリーニングは、例えば、後記実施例１に記載された方法によって行うことができる。
【００３７】
＜２＞本発明製造方法
本発明製造方法は、本発明菌株を液体培地中で培養し、培養液中に生成蓄積したポリリジンを採取することを特徴とする。本発明菌株であるＵＳＥ−５４株及びその変異株のうち、好ましくは、ＵＳＥ−５４株である。
【００３８】
液体培地は、炭素源、窒素源、無機塩及びその他の栄養物が含まれていれば、いかなるものでもよい。炭素源は特に限定されるものではないが、有機酸またはその塩であることが好ましく、特に好ましくはクエン酸またはその塩であり、その含有量は０．１〜１０％（ｗ／ｖ）が好ましい。０．５％（ｗ／ｖ）以下であれば、グルコース、フラクトース、グリセロール、スターチ等を含有していてもよい。窒素源としては、酵母エキス、ペプトン、カゼイン加水分解物、アミノ酸等の有機化合物や、硫酸アンモニウムなどの無機アンモニウム塩等が挙げられ、その含有量は０．１〜５％（ｗ／ｖ）が好ましい。液体培地は、好ましくは炭素源としてクエン酸を含み、窒素源として硫酸アンモニウムまたは酵母エキスもしくはペプトンを含むものである。無機塩としては、リン酸イオン、カリウムイオン、ナトリウムイオン、マグネシウムイオン、亜鉛イオン、鉄イオン、マンガンイオン、ニッケルイオン、硫酸イオン等を与えるものが挙げられる。
【００３９】
培養は、好気的条件下で振盪培養、攪拌培養等により行うことができる。培養温度は２０〜４０℃が好ましい。培地のｐＨは３〜９が好ましい。培養期間は、通常には、１〜１０日であるが、本発明菌株では、それ以上の期間、培養を続けることができる。培養途中で、炭素源、窒素源を逐次添加してもよい。また、Ｌ−リジンを液体培地に添加することが好ましく、その量は通常０．１〜２％（ｗ／ｖ）である。このような培養により、培養液中に低重合度ポリリジンが生成蓄積する。
【００４０】
培養液中に生成蓄積した低重合度ポリリジンの採取は、培養液から遠心分離やフィルター濾過で菌体を除き、得られる菌体除去液から公知の方法により低重合度ポリリジンを単離することによって行うことができる。具体的には、例えば、菌体除去液をアニオン交換樹脂のカラムを通して不純物の大部分を除き、さらにカチオン交換樹脂のカラムを通して精製し、濃縮する。得られる濃縮液からアセトン、エタノール等の有機溶媒で晶析することにより低重合度ポリリジンが得られる。
【００４１】
【実施例】
以下、実施例にて本発明を具体的に説明する。
実施例１  低重合度ポリリジン生産菌の取得
（１）  低重合度ポリリジン生産菌のスクリーニング
（ａ）  土壌からの分離方法
土壌１ｇ（湿重量）を滅菌した生理食塩水（１０ｍｌ）に懸濁し、３０℃で振とう（２００ｒｐｍで１０分間）、静置（３０分間）後、上澄液を生理食塩水で希釈し、この希釈液を放線菌分離用培地（培地１）に塗布した。これを２８℃で２週間程度培養し、生育した放線菌のコロニーを酵母エキス−麦芽エキス寒天培地（培地２）に植継ぎ、単離、保存した。
【００４２】
（ｂ）  低重合度ポリリジンの生産
分離・取得した放線菌について、まず生育培地（培地３）で菌体を十分に生育させた（３０℃、１〜１．５日）後、遠心分離で無菌的に培地を除き菌体を回収した。次に、回収した菌体を生産培地（培地４）に懸濁し、３０℃で振とう培養した。
【００４３】
（ｃ）  低重合度ポリリジンの検出・測定
分離・取得株を生産培地（培地４）を用い、３０℃で４日間培養後、培養液を遠心分離して菌体を除いた上澄液について、ポリリジンの検出・測定を行った。ポリリジンの検出はイツアキ（Ｉｔｚｈａｋｉ）（アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）第５０巻第５６９頁）の方法によった。すなわち、培養上澄液０．５  ｍｌと１ｍＭメチルオレンジ及び５０  ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ４（ｐＨ  ７．０）の水溶液２ｍｌとを混合し、室温で３０分間放置後、生じたポリリジン−メチルオレンジコンプレックスを遠心分離により除き、その上澄水の吸光度（４７０ｎｍ）を測定して、既知濃度のポリリジン溶液を用いて作成した標準曲線より培養液中のポリリジン量を求めた。
【００４４】
上記培地１〜４の組成を下記に示す。表中、「％」は、％（ｗ／ｖ）である。
培地１  放線菌分離用培地（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ−Ｃｚａｐｅｋ培地）
グリセロール  ０．３％
ＮａＮＯ３    ０．２％
Ｋ２ＨＰＯ４（ｐＨ  ７．０）    ０．１％
ＫＣｌ  ０．０５％
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．０５％
ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．００１％
寒天  １．５％
シクロヘキシミド  ５０μｇ／ｍｌ
ナイスタチン  ５０μｇ／ｍｌ
【００４５】
培地２  酵母エキス−麦芽エキス寒天培地（ＩＳＰ  ２）
酵母エキス  ０．４％
麦芽エキス  １．０％
グルコース  ０．４％
寒天  １．５％
ｐＨ  ７．２
【００４６】
培地３  生育培地
グリセロール  ２．０％
酵母エキス  ０．５％
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．０５％
ＫＨ２ＰＯ４−Ｎａ２ＨＰＯ４（ｐＨ  ６．８）  １／５０Ｍ
【００４７】
培地４  生産培地
グリセロール  ２．０％
クエン酸・Ｈ２Ｏ（ｐＨ  ４．５）  ２．０％
（ＮＨ４）２ＳＯ４                １．０％
Ｌ−リジン・ＨＣｌ  ０．２％
【００４８】
上記の検出方法によりポリリジン生産菌を土壌よりスクリーニングした結果、滋賀県多賀町の山地の土壌より、クエン酸あるいはその塩を炭素源として低重合度ポリリジンを生産するポリリジン生産菌を分離・取得した。
【００４９】
（２）取得株の菌学的性質
分離・取得株の形態学的性質、各種培地上における生育状態および生理的性質を調べたところ、上述のような性質が認められた。
本菌株は、形態学的特徴や細胞壁のジアミノピメリン酸タイプ等からストレプトマイセス属と判定された。また、類縁菌種を検索したところ本発明菌株はストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）の新種と同定した。本菌株は、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＵＳＥ−５４株と命名され、独立行政法人  産業技術総合研究所に２００１年１０月１１日に寄託され、受託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５６２が付与されている。
【００５０】
（３）ＵＳＥ−５４株の生産物の確認
ＵＳＥ−５４株を生産培地（培地４）を用い、３０℃で４日間培養後、培養ろ液をメタノール：アセトン（３：１）の混合液で沈殿させ回収した（４０〜６７％画分）。次に回収したメタノール：アセトン（３：１）の混合液沈殿画分を陽イオン交換カラム（ＴＳＫｇｅｌ  ＣＭ−５ＰＷ）を用いて精製し、精製物が電気泳動的に均一になることを確認した。次に、この精製物を６Ｍ塩酸で加水分解し、加水分解物についてアミノ酸分析を行った。アミノ酸分析の方法は、加水分解物のアミノ基を前もってＤＡＢＳ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏａｚｏｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ−）化し、液体クロマトグラフィー（アミノクロームアミノ酸分析システム）を用いて分析を行った。
【００５１】
アミノ酸分析の結果、ＵＳＥ−５４株の生産物はリジンを唯一の構成アミノ酸とするポリペプチドすなわちポリリジンであることが確認された。
また、ＵＳＥ−５４株の生産するポリリジンの重合度を高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）のイオン会合クロマトグラフィー法によって逆相カラム（ＴＳＫｇｅｌ  ＯＤＳ−８０Ｔｓ）を用いて、非水溶媒としてアセトニトリルを用いてグラジエントをかけながら測定した。その結果、１０量体から２０数量体程度の低重合度のポリリジンを高い分率で含有する低重合度ポリリジンであった。結果を図１に示す。
【００５２】
さらに、ＵＳＥ−５４株の生産するポリリジンは、ε−ポリ−Ｌ−リジンを加水分解するタンパク質分解酵素（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ由来のプロテアーゼＡ；天野製薬）により分解された。一方、α−ポリアミド結合したα−ポリ−Ｌ−リジンを加水分解する酵素トリプシンでは加水分解されなかった。
【００５３】
ＵＳＥ−５４株の生産する低重合度ポリリジンの抗菌活性をペーパーディスク法で調べたところ、グラム陽性細菌であるＢａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ（ＩＦＯ  ３３３１）及びグラム陰性細菌であるＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｋ−１２（ＩＦＯ  ３３０１）に対してＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｕｌｕｓ  Ｎｏ．３４６−Ｄ株やｓｐ−６６株由来のポリリジンと同程度の抗菌活性を有していた。
【００５４】
実施例２  ＵＳＥ−５４株の低重合度ポリリジン生産性
ＵＳＥ−５４株を生育培地（培地３）で坂口フラスコ（１００  ｍｌ培地／５００  ｍｌ容）を用いて３０℃で２８時間培養した後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体を生理的食塩水で１回洗浄後、生産培地（培地４）に移し、坂口フラスコ（１００  ｍｌ培地／５００  ｍｌ容）を用いて３０℃で培養した。この培養中に採取した培養上澄液の低重合度ポリリジン濃度を前記の方法により測定した。
４日間の培養では、ＵＳＥ−５４株は３２０ｍｇ／ｌの生産性を示した。
【００５５】
【発明の効果】
本発明の菌株は、８〜２２量体の範囲にその最多含有率を有する低重合度ε−ポリ−Ｌ−リジン混合物を生産することができる。該菌株を用いた本発明の製造方法であれば、高い収率で上記低重合度ポリリジンを得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＵＳＥ−５４株を用いて生産した低重合度ポリリジンのイオン会合クロマトグラムを示した図面である。
【図１】
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