(57)【要約】【課題】            鮮やかな赤色を呈するフィコエリスリン色素液を得るためのフィコエリスリン色素液の精製方法を提供すること。【解決手段】        フィコエリスリン色素の夾雑色素を含有する藻類由来のフィコエリスリン色素液（Ａ）と前記夾雑色素を凝集させるアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）とを混合し、前記フィコエリスリン色素液（Ａ）中の夾雑色素を凝集させて凝集物としたのち、前記凝集物を除去することを特徴とするフィコエリスリン色素液の精製方法。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
夾雑色素を含有する藻類由来のフィコエリスリン色素液（Ａ）とアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）とを混合し、前記フィコエリスリン色素液（Ａ）中の夾雑色素を凝集させて凝集物としたのち、前記凝集物を除去することを特徴とするフィコエリスリン色素液の精製方法。
【請求項２】
前記アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）がリン酸水素カルシウムである請求項１記載のフィコエリスリン色素液の精製方法。
【請求項３】
前記アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）が前記フィコエリスリン色素液中でリン酸塩とカルシウム塩とを反応させて得られたものである請求項１記載のフィコエリスリン色素液の精製方法。
【請求項４】
前記アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）が前記フィコエリスリン色素液（Ａ）としてカルシウム塩を含有するフィコエリスリン色素液を用い、前記カルシウム塩を含有するフィコエリスリン色素液にリン酸塩を添加して得られたもの、および／または、前記フィコエリスリン色素液（Ａ）としてリン酸塩を含有するフィコエリスリン色素液を用い、前記リン酸塩を含有するフィコエリスリン色素液にカルシウム塩を添加して得られたものである請求項４記載のフィコエリスリン色素液の精製方法。
【請求項５】
前記アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）の使用量が前記フィコエリスリン色素液（Ａ）１００重量部に対して１〜５重量部である請求項１記載のフィコエリスリン色素液の精製方法。
【請求項６】
前記フィコエリスリン色素液（Ａ）が藻類中のフィコエリスリン色素を水中に抽出させた水抽出液を４０〜７０℃で３〜１５分間加熱処理したものである請求項１〜５のいずれか１項記載のフィコエリスリン色素液の精製方法。
【請求項７】
前記フィコエリスリン色素液（Ａ）がポルフィラ属に属する紅藻類を用いて得られるフィコエリスリン色素液である請求項６項記載のフィコエリスリン色素液の精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鮮明な赤色を呈するフィコエリスリン色素液を得るための精製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
紅藻類等の藻類には赤色を呈するフィコエリスリン色素が含まれており、このフィコエリスリン色素は天然由来の食品用着色料として利用されている。このような中で、より鮮明な赤色を呈するフィコエリスリン色素が求められている。
【０００３】
より鮮明な赤色を呈するフィコエリスリン色素を得るための製造方法として、例えば、紅藻類をホモジナイザー等を用いて破砕した破砕物に水を加えて攪拌することにより水中に紅藻類中のフィコエリスリン色素を抽出させた水抽出液を得た後、この水抽出液を加熱、例えば４０〜７０℃で加熱することにより藻類の残渣やフィコエリスリン色素の夾雑色素であるクロロフィルやフィコシアニン等を凝集変性させて凝集物とした後、この凝集物を除去するフィコエリスリン色素の製造方法がある（例えば、特許文献１参照。）。しかしながら、前記特許文献１により得られるフィコエリスリン色素液は、フィコエリスリン色素に対する夾雑色素が除去しきれておらず市場の要求を満足する鮮明さを有していない。
【０００４】
【特許文献１】特開平７−１１８５５５号公報（第２−４頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、鮮明な赤色を呈するフィコエリスリン色素液を得るためのフィコエリスリン色素液の精製方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、夾雑色素を含有する藻類由来のフィコエリスリン色素液に、アルカリ土類金属のリン酸塩を添加することにより該夾雑色素が凝集した凝集物が形成され、該凝集物は遠心分離法、濾過法等により除去できることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
即ち、本発明は、夾雑色素を含有する藻類由来のフィコエリスリン色素液（Ａ）とアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）とを混合し、前記フィコエリスリン色素液（Ａ）中の夾雑色素を凝集させて凝集物としたのち、前記凝集物を除去することを特徴とするフィコエリスリン色素液の精製方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明はフィコエリスリンの夾雑色素を含有する色素液にアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を添加することにより前記夾雑色素を凝集させ除去する精製方法であり、鮮やかな赤色を呈するフィコエリスリン色素液を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明で用いるフィコエリスリン色素液（Ａ）は、藻類由来で、かつ、フィコエリスリンに対する夾雑色素を含有していれば、藻類の種類や製造方法等に制限はない。前記フィコエリスリン色素液を得るのに用いる藻類としては、例えば、紅藻類や藍藻類等が挙げられる。前記紅藻類としては、例えば、ポルフィラ属（アマノリ）、ポルフィロプシス属、ポルフィリディウム属、ゴニオトリクム属、ロリシフォニア属、カルポポルチス属等が挙げられる。前記藍藻類としては、カロスリクス属、アナベナ属、シリンドロスペルム、アファノテセ属、ホルミディウム属、ノストク属、トリポスリクス属等が挙げられる。前記藻類は、フィコエリスリン色素を豊富に含有するので紅藻類が好ましく、中でも、ポルフィラ属がより好ましい。前記ポルフィラ属としては、例えば、ポルフィラ・テネラ等がある。
【００１０】
本発明で用いるフィコエリスリン色素液は、その製造方法には制限はないが、例えば、前記特許文献１として挙げた特開平７−１１８５５５号公報に記載された方法に準じて好ましく製造することが出来る。以下に、特開平７−１１８５５５号公報に記載された方法に準じた製造方法について詳細に述べる。
【００１１】
始めに、藻類を水に懸濁した懸濁液を作製する。用いる藻類は、例えば、生の状態の藻類や乾燥させた藻類を用いることができるが、生の藻類が、赤色がより鮮やかなフィコエリスリン色素液が得られることから好ましい。生の藻類は、例えば、水中で培養された藻類を遠心分離、濾過等の方法により収穫され、通常水分を７０〜９０重量％含有している。藻類は、通常水中で自然光、又は人工光により培養されるが、光が照射され光合成を行っている状態の藻類を収穫するのが好ましい。特に自然光下の屋外培養槽で培養されている藻類においては、夜間若しくは光照射が始まった直後に収穫された藻類よりは、光合成が継続して行われ、水温も上昇してくる午前１０時以降から日没までに収穫された藻類がより好ましい。
【００１２】
乾燥処理した藻類としては、例えば、前記の方法で収穫した生の藻類を、凍結乾燥処理したものや、スプレー乾燥処理したもの等が挙げられる。
【００１３】
藻類の懸濁液を作製する際は、懸濁液中の藻類の濃度が乾燥固形分として０．１〜２０．０重量％となる範囲で水に藻類を懸濁するのが好ましく、２．０〜８．０重量％となる範囲がより好ましい。
【００１４】
懸濁液の調製は、懸濁液の温度が４〜４５℃となる範囲で行うのが好ましく、１５〜３５℃がより好ましい。
【００１５】
この懸濁液中の藻類の細胞を破砕し藻類中のフィコエリスリン色素を水中に抽出させる。このフィコエリスリン色素の水中への抽出作業は懸濁液の調製後すぐに行っても良いが、懸濁液を調製後静置してから抽出作業を行うのが好ましい。静置時間は、５分〜８時間が好ましく、１０分〜１時間がより好ましい。
【００１６】
藻類中のフィコエリスリン色素を水中に抽出させる方法としては、例えば、塩基性化合物を前記懸濁液に添加して藻類の細胞壁に穴をあけることにより抽出する方法や、超音波照射処理等の機械的手段により藻類を破砕することにより抽出する方法等が挙げられる。
藻類中のフィコエリスリン色素を水中に抽出させる方法は単独で行っても良いし、２種類以上の方法を組み合わせて行っても良い。また、１つの種類を複数回繰り返しても良い。２種以上の方法を組み合わせて抽出する際の順序には制限は無く、例えば、前記塩基性化合物を添加する方法と前記機械的手段とを組み合わせて抽出させる時は、前記機械的手段を行った後、塩基性化合物を添加しても良いし、塩基性化合物を添加した後、機械的手段を行っても良い。
【００１７】
前記塩基性化合物としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等のアルカリ金属の水酸化物；炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸リチウム等のアルカリ金属の炭酸塩；炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素リチウム等のアルカリ金属の炭酸水素塩；酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸リチウム等のアルカリ金属の酢酸塩等が好ましく使用できる。
【００１８】
前記懸濁液に塩基性化合物を添加して処理するには、塩基性化合物の水溶液とした上で懸濁液に加えても良いし、固体の塩基性化合物を直接懸濁液に加えても良いが、塩基性化合物の水溶液とした上で懸濁液に加えるのが好ましい。塩基性化合物の水溶液のｐＨは、８．０〜１２．０の範囲が好ましく、９．０〜１１．０がより好ましい。塩基性化合物としては、炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムが好ましく、炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムを両方用いるのがより好ましい。炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムの使用割合（炭酸ナトリウム：炭酸水素ナトリウム）は、１：９０〜１１０：１が好ましく、１：８〜１３：１がより好ましい。
【００１９】
上記懸濁液に塩基性化合物を混合する際は、懸濁液中の塩基性化合物の濃度が０．００１〜０．１モル／リットルとなる様に混合するのが好ましく、０．００５〜０．０５モル／リットルがより好ましい。塩基性化合物を添加した直後の懸濁液のｐＨは、７．５〜１０．０の範囲が好ましく、８．５〜９．５がより好ましい。
【００２０】
懸濁液に塩基性化合物等の化合物を添加した後は、攪拌等により均質にする。懸濁液の温度は、４〜４５℃の範囲が好ましく、１５〜３５℃の範囲がより好ましい。懸濁液へ塩基性化合物等の化合物を添加した後は、更に攪拌または静置するのが、フィコエリスリンが藻類細胞から懸濁液と塩基性化合物等の化合物の混合液中に移行しやすくなるので好ましい。攪拌、静置の時間は、１０分間〜８時間で良く、２〜５時間が好ましい。
【００２１】
前記懸濁液の機械的処理は、藻類の細胞を破砕し、細胞中のフィコエリスリン色素が懸濁液に移行できる方法であれば制限はないが、細胞内に含まれるフィコエリスリン色素以外の夾雑成分の懸濁液への移行が少なく、且つフィコエリスリン色素の懸濁液への移行が多い方法が好ましい。機械的処理の方法としては、例えば、超音波照射処理法、バイオミキサー等のプロペラ型高速ホモゲナイザー法、湿式ボールミル法、高圧ホモゲナイザー法等が挙げられる。
【００２２】
前記超音波照射処理を行う際の照射方法は、藻類の細胞を破壊し、フィコエリスリン色素を懸濁液中に抽出させることができれば制限はなく、バッチ式や連続式等が挙げられるが、なかでも、連続的に超音波を照射する連続式が好ましい。連続式の超音波照射処理装置としては、例えば（株）日本精機製作所製の生産用多連式超音波分散装置等が挙げられる。
【００２３】
前記超音波照射処理は、懸濁液中の藻類からフィコエリスリン色素を抽出させることができるような条件で行えば良いが、懸濁液中に藻類のフィコエリスリン色素を抽出させるのに超音波照射処理のみを行う時の超音波照射により懸濁液に与えられる仕事量としては、懸濁液１リットルに対して、１００〜３０００ｋＪが好ましく、２００〜２０００ｋＪがより好ましく、３００〜１０００ｋＪが特に好ましい。
【００２４】
前記超音波照射処理のみを行う時の超音波照射処理の条件としては出力、周波数、照射時間等が挙げられる。超音波の周波数は１０〜１００ｋＨｚの領域で行うことが好ましく、１５〜５０ｋＨｚの領域がより好ましく、１５〜３０ｋＨｚの領域が特に好ましい。超音波照射装置の出力は、１００〜３０００Ｗが好ましく、２００〜２０００Ｗがより好ましく、３００〜１０００Ｗが特に好ましい。
【００２５】
前記仕事量を与える超音波照射処理を行うには、出力と照射時間とを適宜調整すればよいが、懸濁液１リットルを超音波処理する時には、例えば、周波数２０ｋＨｚにおいて、出力が１００Ｗの時は、１７〜５００分の照射時間が好ましく、３５〜３４０分がより好ましく、５０〜１７０分が特に好ましい。出力が６００Ｗの時は、３〜８５分の照射時間が好ましく、５分３０秒〜６０分がより好ましく、８分３０秒〜３０分が特に好ましい。出力が１０００Ｗの時は、２〜５０分の照射時間が好ましく、３分３０秒〜３４分がより好ましく、５分〜１７分が特に好ましい。具体的には、例えば、後述する実施例２に示すように、周波数が１９．５ｋＨｚ、超音波照射部の容積が２０ｍＬ、出力が６００Ｗの連続式超音波破砕装置を用いて破砕処理するには、懸濁液を３ｍＬ／秒の速度で超音波照射部に送り破砕処理を行う工程を２回行えば良い。
【００２６】
懸濁液中に藻類のフィコエリスリン色素を抽出させるのに超音波照射処理と塩基性化合物の添加とを行う時の超音波照射により懸濁液に与えられる仕事量としては、懸濁液１リットルに対して、１〜３００ｋＪが好ましく、５〜２００ｋＪがより好ましく、１０〜１００ｋＪが特に好ましい。
【００２７】
前記懸濁液中に藻類のフィコエリスリン色素を抽出させるのに超音波照射処理と塩基性化合物の添加とを行う時の超音波照射処理の条件としては出力、周波数、照射時間等が挙げられる。超音波の周波数としては、１０〜１００ｋＨｚが好ましく、１０〜５０ｋＨｚがより好ましく、１５〜３０ｋＨｚが特に好ましい。超音波照射の出力は、５０〜６００Ｗが好ましく、１００〜４００Ｗがより好ましく、２００〜４００Ｗが特に好ましくい。
【００２８】
前記仕事量を与える超音波照射処理を行うには、出力と照射時間とを適宜調整すればよいが、懸濁液１リットルを超音波処理する時には、例えば、周波数２０ｋＨｚにおいて、出力が５０Ｗの時は、２０秒〜１００分の照射時間が好ましく、２分〜７０分がより好ましく、３分３０秒〜３５分が特に好ましい。出力が３００Ｗの時は、３秒〜２０分の照射時間が好ましく、２０秒〜１２分がより好ましく、３０秒〜７分が特に好ましい。出力が５００Ｗの時は、２秒〜１０分の照射時間が好ましく、１０秒〜７分がより好ましく、２０秒〜４分が特に好ましい。具体的には、例えば、後述する実施例１に示すように、周波数が１９．５ｋＨｚ、超音波照射部の容積が１０ｍＬ、出力が３００Ｗの連続式超音波破砕装置を用いて破砕処理するには、懸濁液を５ｍＬ／秒の速度で超音波照射部に送り破砕処理すればよい。
【００２９】
前記のようにして得られたフィコエリスリン色素液は、そのまま本発明で用いるフィコエリスリン色素液（Ａ）としてでも用いることができるが、色素液中の藻類の残渣を分離除去して用いるのが好ましい。残渣を分離除去する手段としては、固液分離できる手段であれば制限は無く、例えば、ろ紙やろ布等のろ材を用いたろ過方法や、上澄を回収するデカンテーション法、フィルタープレス法、遠心分離方法等が挙げられる。なかでも、工業的に大量処理の可能な遠心分離法、フィルタープレス法等の上澄を回収する方法が好ましく、特に遠心分離法が好ましい。
【００３０】
遠心分離は、懸濁液から残渣を除去できる条件であれば良いが、重力加速度が１，０００〜３０，０００Ｇで１０秒〜２時間の条件が好ましく、重力加速度が３，０００〜１５，０００Ｇで１〜３０分間の条件がより好ましい。遠心分離機としては、ディスラッジ型遠心分離機、アルファ型遠心分離機、シャープレス型遠心分離機があるが、作業性が向上することから、ディスラッジ型遠心分離機とアルファ型遠心分離機の組み合わせによる連続遠心分離が好ましい。
【００３１】
本発明で用いるフィコエリスリン色素液（Ａ）としては、例えば、前記したような方法で製造したフィコエリスリン色素液をフィコエリスリン水抽出液として用い、このフィコエリスリン水抽出液を加熱処理して得られるフィコエリスリン色素液が、色素液中のフィコエリスリン色素に対する夾雑色素が凝集し、後述するアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）の添加によりより効率良く凝集物とすることができ、より鮮明な赤色を呈するフィコエリスリン色素液が得られるので好ましい。加熱処理は、例えば、前記した製造方法において塩基性化合物の添加や機械的処理による藻類のフィコシアニン色素を懸濁液中への抽出を行った後や、藻類の残渣を除去した後等に行えばよい。加熱処理する時の加熱温度は、３５〜８０℃が好ましく、４０〜７０℃がより好ましく、４５〜６０℃が最も好ましい。加熱する時間は、２〜３０分が好ましく、３〜２０分がより好ましい。加熱処理が終了した後は、室温に放置し色素液が冷却するのを待ってもよいし、例えば冷水や氷水等につけて強制的に冷却しても良い。また、加熱処理すると、凝集物ができることがあり、遠心分離等を行い凝集物を除去しても良い。更に、この加熱処理は、後述するフィコエリスリン色素液（Ａ）にアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を加えてから行っても良い。
【００３２】
前記アルカリ土類のリン酸塩（Ｂ）としては、例えば、アルカリ土類のリン酸塩やアルカリ土類のリン酸水素塩等が挙げられる。前記アルカリ土類のリン酸塩としては、例えば、リン酸マグネシウム、リン酸カルシウム、リン酸バリウム等が挙げられる。前記アルカリ土類のリン酸水素塩としては、例えば、リン酸水素マグネシウム、リン酸二水素マグネシウム等のリン酸水素マグネシウム；リン酸１水素カルシウム、リン酸二水素カルシウム等のリン酸水素カルシウム；リン酸水素バリウム、リン酸二水素バリウム等のリン酸水素バリウム等のアルカリ土類のリン酸水素塩が挙げられる。アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）としてはリン酸水素カルシウムが好ましい。
【００３３】
前記アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）の添加量は、夾雑色素を凝集させるに十分な量を適宜添加すればよいが、フィコエリスリン色素液（Ａ）１００重量部に対して、０．１〜１０重量部が好ましく、１〜５重量部がより好ましい。
【００３４】
フィコエリスリン色素液（Ａ）とアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を混合するには、例えば、得られたフィコエリスリン色素液（Ａ）とアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を混合しても良いし、フィコエリスリン色素液（Ａ）の製造中にアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を混合しても良い。アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）は固体の状態で加えても良いし、溶液とした上で加えても良い。
【００３５】
また、フィコエリスリン色素液（Ａ）とアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）とを混合するには、例えば、フィコエリスリン色素液（Ａ）にアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を添加しても良いし、フィコエリスリン色素液（Ａ）に前記アルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）の原料となる化合物を添加し、該色素液中でアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）としても良い。なかでも、フィコエリスリン色素液（Ａ）にアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）の原料となる化合物を添加し、該色素液中でアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）とするのが、アルカリ土類金属のリン酸塩が形成される際に夾雑色素の巻き込みが起こり、夾雑色素の凝集効果が増加するので好ましい。
【００３６】
前記フィコエリスリン色素液（Ａ）中でアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を製造するには、例えば原料としてフィコエリスリン色素液（Ａ）にアルカリ土類金属塩とリン酸塩とを添加する方法等が挙げられる。
【００３７】
前記アルカリ土類金属塩としては、例えば、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、亜硝酸カルシウム等のカルシウム塩、塩化マグネシウム、硝酸マグネシウム等のマグネシウム塩、塩化バリウム、硝酸バリウム等のバリウム塩等が挙げられる。アルカリ土類金属塩は、カルシウム塩が好ましく、なかでも、塩化カルシウムが好ましい。また、アルカリ土類金属塩は固体の状態で用いても良いし、水溶液とした状態で用いても良い。
【００３８】
前記アルカリ土類金属塩はフィコエリスリン色素液（Ａ）中の濃度が０．０１〜２．０モル／リットルとなる様に添加するのが好ましく、０．１〜０．５モル／リットルとなる様に添加するのがより好ましい。
【００３９】
前記リン酸塩としては、例えば、リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム等のリン酸ナトリウム；リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム等のリン酸カリウム；リン酸マグネシウム；リン酸二水素アンモニウム等の水溶性無機塩が挙げられるが、中でも、リン酸ナトリウム、リン酸カリウムが好ましく、リン酸ナトリウムが特に好ましい。更に、リン酸塩は、リン酸二水素ナトリウムとリン酸水素二ナトリウムを併用することがｐＨを調節しやすいので好ましい。また、リン酸塩は固体の状態で用いても良いし、水溶液とした状態で用いても良い。
【００４０】
前記リン酸塩はフィコエリスリン中での濃度が０．００１〜０．５モル/リットルとなる様に添加するのが好ましく、０．０１〜０．１モル/リットルとなるように添加するのがより好ましい。また、リン酸塩を水溶液の状態で懸濁液に添加するときは、リン酸塩の水溶液のｐＨは、５．０〜８．０の範囲が好ましく、５．２〜６．６がより好ましい。
【００４１】
フィコエリスリン色素液（Ａ）にアルカリ土類金属塩とリン酸塩とを添加してアルカリ土類金属のリン酸塩（Ｂ）を製造するには、例えば、（１）フィコエリスリン色素液（Ａ）を製造中にリン酸塩とアルカリ土類金属塩を添加しても良いし、（２）フィコエリスリン色素液（Ａ）を製造後にリン酸塩とアルカリ土類金属塩を添加しても良いし、（３）フィコエリスリン色素液（Ａ）を製造中にアルカリ土類金属塩を添加して得られるアルカリ土類金属塩を含有するフィコエリスリン色素液を用い、この色素液にリン酸塩を添加しても良いし、（４）フィコエリスリン色素液（Ａ）を製造中にリン酸塩を添加して得られるリン酸塩含有フィコエリスリン色素液を用い、この色素液にアルカリ土類金属塩を添加しても良いが、（３）の方法が、夾雑色素の凝集効果が高いことから好ましく、（４）の方法が、夾雑色素の凝集効果が高いこと、リン酸塩が、製造中のフィコエリスリン色素液のｐＨを安定させる緩衝作用を有することから好ましい。
【００４２】
（３）または（４）の方法において、フィコエリスリン色素液（Ａ）を調製後にリン酸塩またはアルカリ金属塩を添加した後は、すぐ次の工程に進めるが、攪拌または攪拌後静置するのが、効果的に夾雑色素を凝集するので好ましい。静置時間は、５分〜２４時間が好ましく、３０分〜２０時間がより好ましい。また、色素液の温度は４〜４５℃が好ましく、４〜２５℃がより好ましい。
【００４３】
（３）または（４）の方法において、フィコエリスリン色素液（Ａ）を調製後にリン酸塩またはアルカリ金属塩を添加した後のｐＨは、ｐＨは５．０〜７．０が好ましい。リン酸塩とカルシウム塩を含有した後は、色素液中でリン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム及び水素イオンを生じ、その結果、抽出液のｐＨが５．０未満に低下することがある。ｐＨが５．０未満になると、フィコエリスリンの回収率が低下することがあることから、この段階でさらにリン酸塩を加えて色素液のｐＨを５．０〜７．０に調整するのが好ましい。
【００４４】
次に、色素液中の凝集物の分離処理を行い、フィコエリスリン色素液中に含まれる夾雑色素の凝集物や、藍藻類の残渣を分離除去する。分離処理を行う手段としては、種々の方法が挙げられ、例えば、ろ紙やろ布等のろ材を用いたろ過方法や、沈殿から上澄を回収することにより行うデカンテーション法、遠心分離方法等が挙げられる。なかでも、遠心分離による分離が好ましい。
【００４５】
遠心分離は、色素液から残渣を除去できる条件であれば良いが、重力加速度が１，０００〜３０，０００Ｇで１０秒〜２時間の遠心分離条件が好ましく、重力加速度が３，０００〜１０，０００Ｇで１〜３０分間の遠心分離条件が、より好ましい。遠心分離機としては、ディスラッジ型遠心分離機、アルファ型遠心分離機、シャープレス型遠心分離機があるが、作業性が向上することから、ディスラッジ型遠心分離機とアルファ型遠心分離機の組み合わせによる連続遠心分離が好ましい。
【００４６】
分離処理により得られたフィコエリスリン色素液は、この状態でフィコエリスリン色素液として使用に供することも可能であるが、更に、濃縮しても良い。濃縮方法としては限外濾過による濃縮が好ましい。限外濾過に用いる限外濾過膜は、分画分子量が１，０００〜３０，０００のものが好ましく、５，０００〜２０，０００のものがより好ましい。
【００４７】
本発明の精製方法で得られるフィコエリスリン抽出液は、糖類、塩類等、例えばグリセロール、クエン酸ナトリウム等を加えて安定化させ溶液状の色素液としても提供可能である。さらにこのフィコエリスリン色素液は、乾燥工程を経ることにより、乾燥粉末にすることもできる。乾燥方法は、フィコエリスリン色素が変性劣化しない条件であれば何れでも良いが、熱風噴霧乾燥、凍結乾燥が特に好ましく用いられる。
【００４８】
本発明の精製方法によれば鮮やかな赤色のフィコエリスリン色素液が容易に得ることができる。フィコエリスリン色素中のフィコエリスリン色素は、例えば色差計を使用した色調測定においても、従来の工業的抽出方法で得られた色素と明確に区別することができ、食品、飲料等の着色剤として好ましく使用できる。
【実施例】
【００４９】
次に実施例、比較例により本発明を具体的に説明する。例中において、「部」「％」は特に断りのない限り、重量基準である。
【００５０】
参考例１
板状に乾燥した紅藻類のポルフィラ・テネラ５ｇを０．１モル／ｌのリン酸二水素ナトリウム−リン酸水素二ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）２００ｍｌに浸漬し懸濁液を調製した。バイオミキサーにて５分間、ポルフィラ・テネラの細胞を破砕処理後、その後５℃にて１６時間静置し、ポルフィラ・テネラの細胞に含まれる色素を懸濁液中に抽出させた。この懸濁液を５０℃で５分間の条件で加熱し、その後氷水中につけて急速冷却した。この懸濁液を８０００ｒｐｍ（７０００Ｇ）の条件で３０分間遠心分離し上清を回収した。更に上清を東洋No5A濾紙にて濾過してフィコエリスリン色素の夾雑色素を含有するフィコエリスリン色素液を１７０ｍｌ得た。これをフィコエリスリン粗精製液と略記する。得られたフィコエリスリン粗精製液中のフィコエリスリン色素の濃度と夾雑色素としての青色色素であるフィコシアニン色素の濃度、および粗精製液中のフィコエリスリン色素の純度を下記の方法により求めた。尚、下記式中、Ａ５６５とは波長５６５ｎｍにおける吸光度を、Ａ６２０とは波長５６５ｎｍにおける吸光度をそれぞれ表す。結果を第１表に示す。
【００５１】
＜フィコエリスリン色素およびフィコシアニン色素の濃度測定方法＞
西沢一俊・千原光男編集「藻類研究法」(共立出版、昭和５４年)の５０５頁に記載された下記の式によりそれぞれ求めた。尚、測定しやすくするために、フィコエリスリン粗精製液を水で２５倍に希釈した希釈液を測定サンプルとして用いた。また、ブランクは水を用いた。
フィコエリスリン色素（ｍｇ／ｍｌ）＝（０．０８８０×Ａ５６５−（０．０４１５×Ａ６２０）。
フィコシアニン色素（ｍｇ／ｍｌ）＝（０．１９８０×Ａ６２０）−（０．００１９×Ａ５６５）。
【００５２】
＜粗精製液中のフィコエリスリン色素の純度測定方法＞
Ａ５６５とＡ６２０との比（Ａ５６５／Ａ６２０）の比を求め、これをフィコエリスリン色素の純度とした。この値が高い程、色素液中のフィコエリスリン色素の純度が高く、夾雑色素の影響を受けず、鮮明な赤色を呈する色素である。
【００５３】
実施例１
参考例１で得たフィコエリスリン粗精製液５ｍｌに１０％濃度の塩化カルシウム溶液０．５ｍｌを添加し、攪拌した後５℃の暗室に３０分間静置した。静置後、８０００ｒｐｍ（７０００Ｇ）の条件で遠心分離し、精製した凝集物を沈殿させ、デカンテーションにより上清を回収した。これをフィコエリスリン色素精製色素液１と略記する。参考例１と同様にしてフィコエリスリン色素精製色素液１中のフィコエリスリン色素とフィコシアニン色素の量をそれぞれ測定し、また、フィコシアニン色素の純度を測定した。測定にはフィコエリスリン精製液１を水で２７．５倍に希釈した希釈液を測定サンプルとして用いた。また、ブランクは水を用いた。
【００５４】
実施例２
１０％濃度の塩化カルシウム溶液０．５ｍｌの換わりにリン酸１水素カルシウム（関東化学株式会社製）を０．５ｇ用いる以外は実施例１と同様にしてフィコエリスリン色素精製色素液２を調製した。参考例１と同様にしてフィコエリスリン色素精製色素液２中のフィコエリスリン色素とフィコシアニン色素の量をそれぞれ測定し、また、フィコシアニン色素の純度を測定した。測定にはフィコエリスリン精製液２を水で２７．５倍に希釈した希釈液を測定サンプルとして用いた。また、ブランクは水を用いた。
【００５５】
【表１】
2005075851.tif 000002
※：前記式にて計算すると計算濃度がマイナスとなってしまうので算出不能とした。
【００５６】
試験例１、２および比較試験例１
得られたフィコエリスリン精製色素液１および２をラボＵＦ装置にて約１０倍濃縮し、本液を着色料として、Ａ５６５が０．６の光学濃度の清涼飲料水１および清涼飲料水２を製造した。参考例１で製造したフィコエリスリン粗精製液についても同様の内容にて、清涼飲料水１′を製造した。清涼飲料水１および２と清涼飲料水１′の色を肉眼で確認したところ、やや青みがあり暗い赤色を呈する清涼飲料水１′に対して、清涼飲料水１および２は見た目が爽やかな鮮やかな赤色を呈していた。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明のフィコエリスリン色素液の精製方法によれば鮮やかな赤色を呈するフィコエリスリン色素液を得ることができる。得られたフィコエリスリン色素液は飲食物の着色に好ましく使用することができる。