(57)【要約】      （修正有）【課題】１５−リポオキシゲナーゼを阻害し、心臓血管疾患の危険性を処置または低減するために使用される薬学的組成物または食品組成物を提供する。【解決手段】発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物、特に発酵黒色ダイズの抽出物の使用であって、ここで、この発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、少なくとも１種の乳酸細菌と少なくとも１種の酵母と共に用いて水性Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を発酵させることによって調製される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における１５−リポオキシゲナーゼの阻害において使用するための組成物の生成のための発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の使用であって、該発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、少なくとも１種の乳酸細菌を少なくとも１種の酵母と一緒に用いて、水性Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を発酵することによって調製され、そして該１５−リポオキシゲナーゼの阻害は、心臓血管疾患の危険性を処置または低減するめに使用される、使用。
【請求項２】
前記Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）が、黒色ダイズである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記乳酸細菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記酵母が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記心臓血管疾患が、アテローム硬化症である、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、薬学的組成物または食品組成物である、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１５−リポオキシゲナーゼを阻害すること、１５−リポオキシゲナーゼの阻害が被験体において意図される疾患（例えば、心臓血管疾患、免疫障害（例えば、喘息および／または炎症））を予防および／または処置すること、ならびに免疫系を調節することにおける、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（グリシンマックス）（Ｌ．）抽出物の使用に関する。本発明はまた、微生物感染の予防および／または処置における発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
リポオキシゲナーゼ（ＬＯＸ）は、リポタンパク質のような特定のポリ不飽和脂肪酸の酸化を触媒する、非ヘム鉄含有酵素である。いくつかの異なるリポオキシゲナーゼ酵素（例えば、ＬＯＸ−５、ＬＯＸ−１２およびＬＯＸ−１５）が公知であり、各々が特徴的な酸化作用を有する。ＬＯＸ−１５は、アラキドン酸およびリノレン酸の酸化を触媒し、そして低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の酸化的修飾に関与する。多数の研究により、ＬＯＸ−１５が冠状動脈疾患およびアテローム硬化症（Ｓｈｅｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６、Ｖｏｌ．９８、Ｎｏ．１０，ｐｐ．２２０１−２２０８；Ｔｉｍｏら、１９９５、Ｖｏｌ．９２（１１）、ｐｐ．３２９７−３３０３；Ｒａｖａｌｌｉら、１９９５、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１５、Ｎｏ．３、ｐｐ．３４０−３４８；ならびにＫｕｈｎら、１９９７、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、Ｖｏｌ．９９、Ｎｏ．５、ｐｐ．８８８−８９３）、癌および炎症疾患（米国特許第６，００１，８６６号；Ｍｏｇｕｌら、２００１、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４０、４３９１−４３９７；Ｗａｌｔｈｅｒら、１９９９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、５６：１９６−２０３；およびＫａｍｉｔａｎｉら、１９９８、ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ．２７３、Ｎｏ．３４、ｐｐ．２１５６９−２１５７７）、ならびに免疫応答（Ｋｒｕｉｓｓｅｌｂｒｉｎｋら、２００１、Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２６：２−８）に関連することが報告されている。従って、ＬＯＸを阻害する効力を有する物質は、ＬＯＸ関連疾患を予防または処置するための薬剤として有用である。
【０００３】
ダイズは、ヒトの食事におけるイソフラボンの濃縮供給源の１つである。ダイズはまた、多数の化合物（サポニン、フィトステロール、ダイズフィチン酸塩、プロテアーゼインヒビター、フェノール酸、複合糖、ホウ素、レシチン、ω−３脂肪酸および葉酸を含む）を含む。ダイズは、健康的利益を付与し得る。多くの確立された伝統食（例えば、テンベ（ｔｅｍｂｅ）および納豆）は、ダイズの発酵から生産される。例えば、テンベは、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ、Ｒ．ｏｒｙｚａｅ、Ｒ．ａｒｒｉｈｉｚｕｓおよびＲ．ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒを用いて大豆を発酵させることによって生産される。納豆は、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｎａｔｔｏを用いて大豆を発酵させることによって生産される。伝統的な発酵食は、優れたタンパク質供給源として使用され得る。しかし、任意の既知の発酵ダイズ食品およびダイズが、１５−リポオキシゲナーゼ（ＬＯＸ−１５）を阻害することに効力を有することを開示した先行技術は存在しない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
（発明の要旨）
（１）被験体における１５−リポオキシゲナーゼの阻害において使用するための組成物の生成のための発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の使用であって、上記発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、少なくとも１種の乳酸細菌を少なくとも１種の酵母と一緒に用いて、水性Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を発酵することによって調製され、そして上記１５−リポオキシゲナーゼの阻害は、心臓血管疾患の危険性を処置または低減するめに使用される、使用。
（２）上記Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）が、黒色ダイズである、項目１に記載の使用。
（３）上記乳酸細菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種である、項目１に記載の使用。
（４）上記酵母が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種である、項目１に記載の使用。
（５）上記心臓血管疾患が、アテローム硬化症である、項目１に記載の使用。
（６）上記組成物が、薬学的組成物または食品組成物である、項目１に記載の使用。
【０００５】
本発明は、１５−リポオキシゲナーゼ（ＬＯＸ−１５）を阻害する際の、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の使用に関し、この発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、水性Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を、少なくとも１種の乳酸細菌と少なくとも１種の酵母と共に用いて発酵させることによって調製される。特に、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）は、ダイズまたは黒色ダイズ（ｂｌａｃｋ  ｓｏｙｂｅａｎ）である。より具体的には、本発明の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、発酵ダイズ抽出物および発酵黒色ダイズ抽出物を含む。
【０００６】
本発明の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、１５−リポオキシゲナーゼの阻害が被験体において意図される疾患（例えば、心臓血管疾患、免疫障害（例えば、喘息および炎症））を予防および／または処置する際、および免疫系を調節する際に使用され得る。
【０００７】
本発明の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物はまた、被験体における微生物感染を予防および／または処置する際に使用され得る。
【０００８】
（発明の詳細な説明）
本発明は、１５−リポオキシゲナーゼ（ＬＯＸ−１５）および１５−リポオキシゲナーゼが関与する疾患の阻害における使用のための組成物を生成するための、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の新たな使用に関し、ここで、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、水性Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を、少なくとも１種の乳酸細菌と少なくとも１種の酵母と共に用いて発酵させることによって調製される。この発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物が、低レベルで１５−リポオキシゲナーゼを有効に阻害し得ることが、予期せず見出されている。
【０００９】
特に、本発明の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を含む組成物は、１５−リポオキシゲナーゼの阻害が被験体において意図される疾患（例えば、心臓血管疾患、免疫障害（例えば、喘息および炎症））を予防および／または処置すること、ならびに免疫系を調節することにおいて使用され得る。さらに、本発明の発酵ダイズ抽出物はまた、微生物感染を処置および／または予防する際に使用され得る。
【００１０】
本発明の組成物は、薬学的組成物または食品組成物であり得る。
【００１１】
（発酵ダイズ抽出物を生成するためのプロセス）
発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、水性Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を、少なくとも１種の乳酸細菌と少なくとも１種の酵母と共に用いて発酵させ、その後、必要に応じて濾過および濃縮した発酵液を（例えば、熱による）滅菌することによって作製される。
【００１２】
本発明に従って、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の調製において使用される好ましいＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）は、ダイズおよび黒色ダイズからなる群より選択される。より具体的には、本発明の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、発酵ダイズ抽出物または発酵黒色ダイズ抽出物である。
【００１３】
発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を、少なくとも１種の乳酸細菌（例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種の１以上の株または多数のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種のいくつかの株）と少なくとも１種の酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種の１以上の株または多数のＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種のいくつかの株）とを共に用いて発酵させることによって生成される。１種以上の乳酸細菌および必要に応じてＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種を用いる水性Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の発酵は、任意の順番で連続的にかまたは同時に、好ましくは同時に実行され得る。
【００１４】
１種より多い微生物が発酵において使用される場合、発酵は、微生物を連続的または同時に用いて実行され得る。好ましくは、選択されたグレードの非遺伝子改変生物のＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）水性抽出物が、出発材料として使用される。好ましくは、発酵は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓの異種培養物（例えば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓの５、１０、１５、２０、２５または３０種の株の培養物）を使用して実行され、そして少なくとも１種の酵母が、このＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓの異種培養物に添加される。使用され得るＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ株としては、例えば、以下が挙げられる：Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ  ＣＣＲＣ  １０６９５、１４０２６、１４０６４、１４０６５および／または１４０７９、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ  ＣＣＲＣ  １０６９６、１４００７、１４００９、１４０１０、１４０６９、１４０７１、１４０９８および／または１６０５４、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ｌａｃｔｉｓ  ＣＣＲＣ  １０７９１、１２２６７、１２３０６、１２３１２、１２３１５、１２３２３、１４０１６、１４０１５、および／または１４１１７、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒ  ＣＣＲＣ  １４０１１ならびに／あるいはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋｅｆｉｒａｎｏｆａｃｉｅｎｓ  ＣＣＲＣ  １６０５９。使用され得る酵母としては、例えば、以下が挙げられる：Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＣＣＲＣ  ２０５７７、２０５７８、２０５８１、２１４９４、２１５５０、２１７９７、２１８０５、２２１３８、２２２３４、２２３３７、２２７３１および／または２２７２８、ならびに／あるいはＣａｎｄｉｄａ  ｋｅｆｙｒ  ＣＣＲＣ  ２１２６９、２１７４２および／または２２０５７。発酵後、発酵液を、例えば、熱または照射によって（好ましくは、熱によって）滅菌して、滅菌液を得る。好ましくは、この滅菌液を、濾過または遠心分離し、好ましくは濾過して、ほとんどまたは全ての死んだ微生物を除去して、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を得る。より好ましくは、この濾過工程後に、この濾液からいくらかの水を除去して発酵液を濃縮して、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を得る。他に特定されない限り、この適用において実行される試験は、濃縮工程後の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を含んだ。必要に応じて、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、例えば、凍結乾燥によって乾燥されて、粉末形態の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を得得る。
【００１５】
このプロセスは、（脂肪除去した）有機Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）を、１：１０の比で蒸留水と混合することによって実行され得る。この混合物を１００℃で３０分間加熱し、次いで濾過してＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を得る。牛肉および昆布を３０分間蒸留水中で煮沸して、ブロスを得る。塩、糖および寒天を添加して、特別な寒天培地を生成する。乳酸細菌株および酵母株をこの特別な寒天培地に添加する。培地中の、必要に応じて酵母を含んだこの乳酸細菌を、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物に移し、そして３６〜４３℃にて４５〜５０時間インキュベートする。好ましくは、種々の微生物株は、類似の増殖特性（例えば、独自の栄養培地の任意の要件、これらの微生物株が発酵後によい匂いを生じ得るか否か、そして独自の条件で分類された微生物が生存し得るか否か）に従って分類され、その結果、微生物の群が、インキュベーション前にＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物に別個に添加される。この工程の目的は、種々の株間の任意の負の相互作用を減少させることである。また好ましくは、等しい割合の異なる群の微生物株が、インキュベーション前にＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物に添加され、得られた抽出物は、４０℃で４５〜４７時間インキュベートされる。インキュベーション期間の終了時に、異種培養物は、次いでＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物に再び移され、そして３６〜４３℃で１００〜１５０時間インキュベートされる。最終発酵抽出物を加熱滅菌および濾過し；そして水含量の濾液の９５％を、濃縮において除去して、濃縮形態または凝縮形態の発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を得る。次いで、上層を磁器を介して濾過し、その後容器に分配して密封する。
【００１６】
ダイズを中国の薬草と置換して、上記記載のプロセスと類似のプロセスで調製された中国の薬草の発酵抽出物は、本発明の範囲内である。中国の薬草の発酵抽出物は、以下であり得る：Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓ  Ｆｉｓｈ、Ｌｙｃｉｕｍ  ｂａｒｂａｒｕｍ、Ｃｏｉｘ  ｌａｃｒｙｍａ−ｊｏｂｉ  Ｌ  ｖａｒ．、ｍａ−ｙｕｎｅ  Ｓｔａｐｆ、Ｓｏｐｈｏｒａ  ｔｏｎｋｉｎｅｎｓｉｓ  ｇａｐｎｅｐ．、Ｃａｓｓｉａ  ｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ．、Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ  Ｇｅｏｒｇｉ、Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｃａｐｉｌｌａｒｉｅｓ  Ｔｈｕｎｂ．、Ｃｏｐｔｉｓ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ  Ｆｒｓｎｃｈ．、Ｇｅｎｔｉａｎａ  ｓｃａｂｒａ  Ｂｇｅ．、Ｎｅｌｕｍｂｏ  ｎｕｃｉｆｅｒａ  Ｇａｅｒｔｎ．、Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｉｆｅｒａ  ｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ  Ｒａｍａｔ．、Ｇａｒｄｅｎｉａ  ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ  Ｅｌｌｉｓ、Ｈｏｒｄｅｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ  Ｌ．、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｃａｓｓｉａ  Ｐｒｅｓｌ、Ｒａｐｈ、ａｎｕｓ  ｓａｔｉｖｕｓ  Ｌ．、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｏｐｐｏｓｉｔａ  Ｔｈｕｎｂ．、Ａｎｇｅｌｉｃａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｏｌｉｖ．）、Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ  ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ  Ｈｏｒｔ．，  Ｎｏｔｏｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｉｎｃｉｓｕｍ、Ｐａｅｏｎｉａ  ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ  Ｐａｌｌ．、Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｕｍ  Ｌ．、Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｔｕｒｃｚ．）Ｂａｉｌｌ、Ｒｅｈｍａｎｎｉａ  ｇｌｕｔｉｎｏｓａ  Ｌｉｂｏｓｃｈ．、Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ  ｇｒａｃｉｌｉｓｔｙｌｕｓ  Ｗ．Ｗ．Ｓｍｉｔｈ、Ｅｑｕｕｓ  ａｓｉｎｕｓ  Ｌ．、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ  ｌｕｃｉｄｕｍ  Ａｉｔ．、Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｒａｄｉａｔｕｓ  Ｌ．、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ  Ｌ．、Ｄｏｌｉｃｈｏｓ  ｌａｂｌａｂ  Ｌ．、Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ  ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌａ  Ｋｏｉｄｚ．、Ｓａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａ  ｄｉｖａｒｉｃａｔａ、Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｔｈｕｎｄ．、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｃａｓｓｉａ  Ｐｒｅｓｌ、Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ  Ｒｏｓｃ．、Ｇａｓｔｒｏｄｉａ  ｅｌａｔａ  Ｂｌ．、Ａｓｐａｒａｇｕｓ  ｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌｉｕｒ．）Ｍｅｒｒ．、Ｄｅｎｄｒｏｂｉｕｎ  ｌｏｄｄｉｇｅｓｉｉ  Ｒｏｌｆｅ．およびＳｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ  Ｌ。
【００１７】
（１５−リポキシゲナーゼの阻害における使用）
１５−リポキシゲナーゼは、リポタンパク質のような特定のポリ不飽和脂肪酸の酸化を触媒する非ヘム鉄含有酵素である。１５−リポキシゲナーゼ酵素の作用を阻害する化合物は、哺乳動物（ヒトを含む）における、炎症疾患、アレルギー、心臓血管疾患および免疫疾患の処置または緩和において有用であることは公知である。
【００１８】
本発明における研究は、本発明の発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物が、公知の発酵した大豆食品および発酵していない大豆よりも優勢に１５−リポキシゲナーゼを阻害し得ることを証明した。
【００１９】
（酸化防止剤の使用）
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、顕著な酸化防止活性およびフリーラジカルスカベンジャー活性を有する。この発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、スーパーオキシドフリーラジカル（例えば、Ｏ２・−、Ｈ２Ｏ２およびＲＯＯ・）を除去し得、そして不飽和脂肪酸および脂肪に対する酸化防止剤として作用し得る。この発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、細胞を酸化的損傷から防ぐために、過剰な酸素アニオンを除去する顕著な能力、およびエネルギー減少手順を用いてフリーラジカルを害のない物質に変化させる顕著な能力を有する。
【００２０】
（心臓血管疾患に対する薬剤の使用）
多くの研究は、炎症およびアテローム性動脈硬化症の処置および予防におけるＬＯＸ−１５のインヒビターを示している（Ｃｏｒｎｉｃｅｌｌｉら、米国特許第６，００１，８６６号；Ｂｏｃａｎら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１３６，２０３−２１６，１９９８およびＴｉｍｏら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，ｃｏｌ．９２（１）、１９９５年１２月１日、３２９７−３３０３頁）。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、アロテーム性動脈硬化症のような心臓血管疾患の予防および／または処置のために有用であることが予測される。
【００２１】
（免疫機能を増進するための使用）
インビトロ研究は、本発明の発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物が免疫機能を改善することを示した。動物（Ｂａｌａ／ｃマウス）の免疫の調節に対する発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の効果は、リポ多糖、コンカナバリンＡおよびフィトヘマグルチニン凝集を含む種々のマイトジュエンを用いたチャレンジと組み合わせるかまたは組み合わせない、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を用いて動物を処置することによって研究された。脾細胞の増殖アッセイは、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物が免疫調節におけるＴ細胞およびＢ細胞相互作用に関連することを示した。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物はまた、抗免疫応答に関連し得る。Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物はまた、マクロファージの貪食活性を７１％まで増大させた。類似の結果は、マウスのインビボ研究において見いだされた。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の抗腫瘍効果は、サイトカイン放出によって媒介されることもまた実証された。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物で刺激した末梢血単核細胞に由来する馴化培地は、４５〜５６％。インターロイキン−１β、インターロイキン−βおよび腫瘍壊死因子−αのレベルは、未処置のコントロールのレベルよりも非常に高かった。未処置のマクロファージおよびＴリンパ球はほとんどまたは全くサイトカインを生成せず、正常な単核細胞は白血球細胞の増殖を抑制したので、抗腫瘍活性は増強されたレベルのサイトカインから誘導されることが推測される。
【００２２】
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、喘息持ちの子供に有益である。例えば、毎日３ｍｌの発酵した大豆抽出物を４ヶ月間にわたって投与した場合、喘息を有する子供の群において有意な体重増加が示されたという結果を得た。血液検査は、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の摂取が、これらの喘息持ちの子供達においてＲＢＣレベルおよびＨｂレベルを増加させることを示した。
【００２３】
（抗炎症剤としての使用）
本発明はまた、被験体における炎症を処置および／または予防するための方法に関し、この方法は、それらを必要とする被験体に、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の有効量を投与する工程を包含し、ここで、この発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、少なくとも１つの酵母と一緒に、少なくとも１つの乳酸菌を用いて水性のＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を発酵させることによって調製される。
【００２４】
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、ラットにおけるカラゲーニン誘導性の後肢の浮腫の減少、ならびにアジュバント関節炎試験における急性関節炎および慢性関節炎に対する抗炎症効果に対して、１０ｍｌ／ｋｇの投薬量で抗炎症効果を実証した。
【００２５】
（感染を予防または処置するための使用）
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、インビトロおよびインビボで抗菌活性を実証している。これは、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、アンピシリンおよびメチシリン（ｍｅｔｈｙｃｉｌｌｉｎ）耐性のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓならびにバンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉの増殖を阻害する。好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ａｖｉｕｍ、Ｅ．ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ、Ｅ．ｄｕｒａｎｓ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ａｖｉｕｍ、Ｅ．ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ、Ｅ．ｄｕｒａｎｓおよびＥ．ｆａｅｃａｌｉからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ｄｕｒａｎｓ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ａｖｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。最も好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓである。
【００２６】
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の効果的な濃度は、一般的に１〜１０％の範囲である。患者（抗癌化学療法の併用処置に起因する好中球減少を発症する危険性のある）における細菌感染予防のための、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の選択的な抗菌的汚染除去効果はまた、１００人の患者において実証されている。好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ａｖｉｕｍ、Ｅ．ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ、Ｅ．ｄｕｒａｎｓ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ａｖｉｕｍ、Ｅ．ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ、Ｅ．ｄｕｒａｎｓおよびＥ．ｆａｅｃａｌｉからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ｄｕｒａｎｓ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ａｖｉｕｍ、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。より好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓは、Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓおよびＥ．ｆａｅｃｉｕｍからなる群より選択される。最も好ましくは、バンコマイシン耐性のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓはＥ．ｆａｅｃａｌｉｓである。
【００２７】
（発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の投与）
本発明において、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、単独か、あるいは発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物ならびに薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤および／または賦形剤を含む組成物において投与され得る。好ましくは、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、発酵した大豆抽出物または発酵した黒大豆抽出物である。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、約０．００１〜４０ｍｌ／ｋｇ体重（１回の投与あたり、１人あたり２０００ｍｌの最大用量）の用量で投与され得る。好ましくは、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の用量は、被験体の０．０１〜２０ｍｌ／ｋｇ、より好ましくは、０．１〜５ｍｌ／ｋｇ体重である。これらの用量は、濃縮形態における発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物に基づくが、濃縮されていない形態または乾燥粉末形態における発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の適切な用量は、それに応じて計算され得る。この用量は、被験体の健康状態または予防もしくは処置されるべき疾患に基づいて調整され得る。
【００２８】
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、げっ歯類の６ヶ月間の慢性毒性研究において長期を基礎に、毎日１〜１０ｍｌの摂取について、高い安全性が実証された。２８日間にわたって１０ｍｌ／ｋｇおよび１ｍｌ／ｋｇの用量を受けたマウスは、亜急性経口毒性試験において、いかなる有意な差異も異常な症状も呈さなかった。げっ歯類の亜急性経口毒性試験において、２０ｍｌ／ｋｇおよび１ｍｌ／ｋｇを投与された試験動物の２群において、ひどい毒性の徴候も死亡率も観察されなかった。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、Ａｍｅｓ試験における非変異促進性であり、インビトロでの哺乳動物細胞において染色体損傷を引き起こさず、かつ試験したＩＣＲマウスの骨髄細胞において微小核を誘導しないことを実証した。
【００２９】
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物が妊娠した女性に投与される場合、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の投薬量は、一日あたりの摂取が１２ｍｌに達するまで妊娠中に増加され得る。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、妊娠初期および中期ならびに出産時において投与され得る。この結果は、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物が、妊娠において一般的に見られる症状（便秘、悪心、嘔吐および胃腸の不快感を含む）を改善し得ることを示した。さらに、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の投与は、妊娠期間および出産時の異常を減少させ得る。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、妊娠期間の健康の改善に良いだけでなく、長期間の栄養補助食品として有害な効果を生まない。発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の、新生児または乳児に対する毎日の投与は、新生児または乳児の体重を増加させる。同様に、増加した体重は、発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物を持続的に摂取している育児中の母親の乳児において達成され得る。
【００３０】
発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物はまた、手術の日および手術の数日後を除く入院の後に手術を受けた、女性への他の治療製品と一緒に、１ｍｌの発酵したＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の毎日投与を通して実証されるように、外科手術後の造血機能および肝機能を増進させ得る。
【００３１】
本発明は、ここで、以下の非限定的な実施例を参照して記載される。
【実施例１】
【００３２】
ＬＯＸ−１５は、アラキドン酸（ＡＡ）代謝における主要な代謝酵素である。ＡＡの代謝経路のうち１つは、１５−リポキシゲナーゼであるＬＯＸ−５に関し、これは、ＨＥＴＥ（ヒドロキシエイコサテトラエン酸）の形成を導く。ＨＥＴＥは、癌細胞転移において重要な役割を果たすことが報告されている。ＨＥＴＥは、癌細胞転移を生じるプロテインキナーゼＣ活性を誘導し得る。ＨＥＴＥはまた、癌細胞の新脈管形成を生じる分裂促進因子である。ＬＯＸ−１５を、ウサギ網状赤血球から単離した。リノール酸を、発酵した大豆抽出物を伴ってか、または伴わずにＬＯＸ−１５の基質として使用した。形成されたＨＥＴＥの量を、分光光度計で決定した。このデータは、発行した大豆抽出物がＬＯＸ−１５に対する阻害効果を有することを示す（図１を参照のこと）。この結果は、発酵した大豆抽出物が癌細胞の新血管新生および転移を阻害し、そして癌細胞のアポトーシスを誘導することを示した。
【００３３】
さらなるＬＯＸ−１５阻害試験を、発酵していない大豆抽出物と発酵した大豆抽出物との間でのＬＯＸ−１５の阻害効果を比較するために、上記の方法に従って実行した。これらの結果は、発酵した大豆抽出物の阻害効果が、発酵していない大豆抽出物の４倍以上であったことを示す。
【実施例２】
【００３４】
発酵した黒大豆抽出物を、ＬＯＸ−１５に対する阻害効果についてウサギ網状赤血球において試験した。この試験方法は、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９２，２０１，３７５−３８０において記載されている方法を参照する。１％、０．５％、０．１％、０．０５％および０．０１％（ｖ／ｖ）の黒大豆抽出物を、４℃で、１０分間の網状赤血球のインキュベートにおいて使用した。インキュベーション緩衝液は、０．０５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．９）である。得られた１３−ＨＰＯＤＥを、分光光度計によって定量する。
【００３５】
黒大豆の濃度とそのＬＯＸ−１５に対する阻害率の関係を図２に示した。
【００３６】
さらなるＬＯＸ−１５阻害試験を、発酵していない黒大豆抽出物と発酵した黒大豆抽出物との間でのＬＯＸ−１５の阻害効果を比較するために、上記の方法に従って実行した。発酵していない黒大豆のＬＯＸ−１５阻害率を、以下の表１に示した：
【００３７】
【表１】
2005075787.tif 000002
発酵黒ダイズ抽出物のＬＯＸ−１５阻害率を、以下の表２に示した。
【００３８】
【表２】
2005075787.tif 000003
上記の表に示される結果は、発酵黒ダイズ抽出物が、ＬＯＸ−１５の阻害において予期せぬ優れた効果を有することを示す。
【実施例３】
【００３９】
発酵ダイズ抽出物は、抗酸化剤として、および遊離ラジカルの除去において機能した。以前に公開されたいくつかのモデルを使用して、発酵ダイズ抽出物の抗酸化剤能を研究した（ビタミンＣおよびＴｒｏｌｏｘをポジティブコントロールとして使用した）。以下の方法を、抗酸化活性を決定するために使用した：（１）ＮＢＴ法（２）Ｈ２Ｏ２還元法（３）ＤＰＰＨ還元（４）ＴＲＡＰ還元法（５）結合体化ジエン（６）脂質の過酸化（７）活性酸素の存在下での化学発光（図３、４、および５を参照のこと）。全ての結果は、発酵ダイズ抽出物が、ビタミンＣおよびＴｒｏｌｏｘと比較して、不飽和脂肪酸および過酸化物に対して最も高い抗酸化活性を有することを実証した。
【００４０】
発酵ダイズ抽出物は、活性酸素の存在下での化学発光アクセプターについての大久保試験系において抗酸化剤および遊離ラジカルアクセプターとして機能することを、実験により実証した。この実験を、アセトアルデヒドを含む過酸化水素の液体、またはアセトアルデヒドを含まない過酸化水素の液体中での化学発光を測定することにより実施した。公知の抗酸化剤（例えば、没食子酸（図３（ｂ）を参照のこと）、ＥＧＣ、茶、およびビタミンＣ（図４（ａ）〜（ｃ）を参照のこと））または発酵ダイズ抽出物（図５を参照のこと）を、２００秒で添加した。このデータを、図３〜５に示す。図３（ｂ）は、過酸化水素とアセトアルデヒドとの混合物に没食子酸を添加した場合、化学発光が、２００秒で増加したことを示す。図４は、ＥＧＣ、茶、またはビタミンＣを、２００秒で添加した場合、化学発光は、アセトアルデヒドが存在する場合に増加したことを示す。しかし、化学発光はまた、ビタミンＣを２００秒で添加した場合に、アセトアルデヒドの非存在下で増加した（図４（ｃ）を参照のこと）。このことは、ビタミンＣの抗酸化機構が、おそらく、ＥＧＣおよび茶の抗酸化機構と異なることを実証する。図５は、２００秒で発酵ダイズ抽出物を添加した後、化学発光が増加したことを示し、このことは、発酵ダイズ抽出物が、強力な抗酸化剤であることを示す。発酵ダイズ抽出物の抗酸化活性は、発酵ダイズ抽出物が、遊離ラジカルを除去する上で機能し得ることを意味する。抗酸化機能および遊離ラジカル除去機能によって、発酵ダイズ抽出物は、個体の全体的な健康を促進する上で、または健康改善の必要性を有する被験体の健康を改善する上で有用である。なぜならば、酸化ストレス（例えば、反応性酸素種および脂質過酸化物の過剰な存在）は、身体に有害であることが知られているからである。
【実施例４】
【００４１】
発酵ダイズ抽出物の抗微生物活性を、インビトロ方法を用いて決定することにより実証した。第１の実験において、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉの３株（ＴＭＵ−Ｃ７４、ＴＭＵ−Ｄ１６、およびＴＭＵ−Ｅ８６）、およびバンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｅａｃａｌｉｓを、栄養ブロスまたはＢＨＩブロス中で培養し、そしてＭｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ寒天プレートまたはチョコレート寒天プレートに移した。この寒天プレート上で、発酵ダイズ抽出物をペーパーディスクの上にのせ、そして阻害領域の大きさを、３７℃でのインキュベーション後に測定した。これらのデータを、以下の表３に示す。
【００４２】
【表３】
2005075787.tif 000004
別の実験において、発酵ダイズ抽出物の最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（ＡＴＣＣ  １４０２８）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（ＣＲＣＣ  １０４４７）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ  ２５９２３）、およびバンコマイシン耐性Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｅａｃａｌｉｓにおいて決定した。これらの細菌の懸濁物を、３×１０５ＣＦＵ／ｍｌに調整した。調整した細菌懸濁物を、種々の濃度（すなわち、１０％、５％、２．５％、１．２５％、０．６５％、または０．３２％）の発酵ダイズ抽出物と共に、または発酵ダイズ抽出物を加えずに９６ウェルプレートに添加した。このプレートを、３７℃にて１５時間インキュベートした。ＭＩＣを、インキュベーション後に決定し、そしてこれを以下の表４に示す。
【００４３】
【表４】
2005075787.tif 000005
発酵黒ダイズ抽出物もまた、抗微生物活性を試験するのに使用した。このＭＩＣを決定し、そしてこれを以下の表５に示す。
【００４４】
【表５】
2005075787.tif 000006
【実施例５】
【００４５】
免疫調節に対する発酵ダイズ抽出物の効果を研究した。
（Ａ）インビトロ研究
（脾臓細胞増殖アッセイ（ＭＴＴ法））
脾臓細胞をマウスから単離し、そして数種のマイトジェン（すなわち、リポ多糖（ＬＰＳ）、コンカバリンＡ（Ｃｏｎ  Ａ）、および植物性血球凝集素（ＰＨＡ））のうちの１つを含むＲＰＭＩ培地またはそれを含まないＲＰＭＩ培地中に２×１０６細胞／ｍｌで、培養フラスコに入れた。脾臓細胞培養物を、ＭＴＴアッセイのために一晩インキュベートした。
【００４６】
１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％の発酵ダイズ抽出物と混合した最適濃度未満の５μｇ／ｍｌのＬＰＳは、脾臓細胞（特に、Ｂ細胞）増殖に対して効果を有さなかった。０．０５％の発酵ダイズ抽出物と混合した５μｇ／ｍｌの濃度のＰＨＡは、脾臓細胞（特に、Ｔ細胞）数を増加させ、これは、ＰＨＡ単独で得られた脾臓細胞数の２．３２倍であった。この結果に従うと、発酵ダイズ抽出物は、免疫調節において、Ｔ細胞およびＢ細胞の相互作用に対する効果を有する。０．０５％の発酵ダイズ抽出物と混合した５μｇ／ｍｌの濃度のＣｏｎ  Ａは、Ｃｏｎ  Ａ単独で得られた脾臓細胞数より約２０％少ない脾臓細胞数を生じた。この結果に従うと、発酵ダイズ抽出物は、抗炎症反応において役割を果たし得る。
【００４７】
（マクロファージ活性アッセイ）
Ｂａｌｂ／ｃマウスにチオガレート（ｔｈｉｏｇｌｌａｔｅ）を注射した。注射の３〜４日後に、マウスの腹腔からマクロファージを単離し、そして発酵ダイズ抽出物と共にか、それを加えずに３７℃で３０分間インキュベートした。蛍光プローブを結合させたＥ．ｃｏｌｉ細胞をマクロファージ懸濁物に添加し、そして３７℃にて２時間インキュベートした。貪食作用アッセイを、フローサイトメトリーを用いて実施した。このデータは、０．０５％の発酵ダイズ抽出物が、発酵ダイズ抽出物で処理していないマクロファージと比較して、マクロファージの貪食作用活性を約７１％増強したことを示した。
【００４８】
（Ｂ）インビボ研究
雄性ＩＣＲアルビノマウスに、ビヒクル、１匹のマウスあたり０．８ｍｌの１％発酵ダイズ抽出物、１匹のマウスあたり０．８ｍｌの０．１％発酵ダイズ抽出物、３０ｍｇ／ｋｇのレバミゾール、または１００ｍｇ／ｋｇのアジメキソンを腹腔内注射した。腹腔内注射の１時間後、１．５〜２×１０７ＣＦＵ／マウスのＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎ（ＡＴＣＣ  １０２３１）を、マウスに腹腔内注射した。マウスの死亡率を、１０日間毎日決定した（表６を参照のこと）。
【００４９】
表６に示されるように、発酵ダイズ抽出物は、マウスにおけるＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎの死亡率を減少させた。発酵ダイズ抽出物の死亡率減少効果は、レバミゾールの効果よりも目立っていた。
【００５０】
雄性ＩＣＲアルビノマウスを、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎの腹腔内注射の５日前、３日前、および１日前に、３０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドで前処置した。Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎの腹腔内注射の６日前、４日前、および２日前に、マウスを、ビヒクル、０．１％発酵ダイズ抽出物、１％発酵ダイズ抽出物、または１００ｍｇ／ｋｇのアジメキソンで処置した。マウスの死亡率を、１０日間毎日決定した（表７を参照のこと）。表７に示されるように、シクロホスファミドの前処置によって、発酵ダイズ抽出物は、マウスにおけるＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎの死亡率を減少させた。この発酵ダイズ抽出物の死亡率減少効果は、アジメキソンの効果に匹敵していた。
【００５１】
【表６】
2005075787.tif 000007
試験サンプルのｉ．ｐ．投与の１時間後、動物に、１．５〜２×１０７ＣＦＵ／マウスのＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（ＡＴＣＣ  １０２３１）を腹腔内に感染させた。フィッシャーの正確検定を用いて統計学的有意性を決定した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
注記：０．８ｍｌ／マウスにおける１％は、最初の発酵ダイズ抽出物（１００％）における０．４ｍｇ／ｋｇに相当し、０．８ｍｌ／マウスにおける０．１％は、最初の発酵ダイズ抽出物（１００％）における０．０４ｍｇ／ｋｇに相当する。
【００５２】
【表７】
2005075787.tif 000008
ａ：ビヒクル：シクロホスファミドで前処理していないＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）
ｂ：ＣＹ：注射の５日前、３日前、および１日前にｐ．ｏ．投与したシクロホスファミド３０ｍｇ／ｋｇ。発酵ダイズ抽出物またはアジメキソンを、注射の６日前、４日前および２日前に０．８ｍｌでｉ．ｐ．投与した。
第０日に、６〜８×１０６ＣＦＵ／マウスのＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（ＡＴＣＣ  １０２３１）でマウスをｉ．ｖ．チャレンジした。フィッシャーの正確検定を用いて統計学的有意性を決定した：＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【実施例６】
【００５３】
発酵ダイズ抽出物を、心臓血管性疾患の処置における効果を評価するために。ａｐｏＥ欠損マウス（これは、ヒトに類似する高コレステロール血症およびアテローム性動脈硬化症性損傷を同時に有する）中で試験した。ＡｐｏＥ欠損マウスに、３ヶ月の間、１０ｍｌ／ｇの発酵ダイズ抽出産物（濃度１５％）を与え、次いで、血漿コレステロールのレベルおよびアテローム性動脈硬化症性損傷の範囲を測定した。本発明の発酵ダイズ抽出産物を使用する処置は、血漿コレステロールのレベルに有意な影響を与えないことが見出されたが、本発明の発酵ダイズ抽出産物を摂取したマウスにおいてアテローム性動脈硬化症性損傷が、コントロールと比較して有意に減少した（図６、図７および図８を参照のこと）。これらの結果に従って、本発明の発酵ダイズ抽出産物の、心臓血管性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）を処置する効果は、血漿コレステロールレベルを低減するというよりは、１５−リポキシゲナーゼを阻害する機構によって達成される。
【００５４】
本発明は、１５−リポキシゲナーゼを阻害する際に、少なくとも１種の酵母を伴った少なくとも１種の乳酸細菌と共にＧｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出水溶液を発酵することによって調製される発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の使用に関する。特に、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物は、被験体中で１５−リポキシゲナーゼの阻害が関連する疾患（例えば、心臓血管性疾患、免疫障害（例えば、喘息および炎症）を予防し、そして／または処置する際、ならびに免疫系を調節する際に使用され得る。本発明はまた、細菌感染を処置および／または予防する際の、発酵Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）抽出物の使用に関する。
【００５５】
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【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】図１は、発酵ダイズ抽出物を用いたＬＯＸ−１５の阻害を示す。
【図２】図２は、クロダイズ（ｂｌａｃｋ  ｓｏｙｂｅａｎ）の濃度とＬＯＸ−１５に対する阻害の割合との関係を示す。
【図３ａ】図３は、没食子酸の抗酸化の効果を示す。温度３７℃で、過酸化物（Ｘ）としてＨ２Ｏ２、抗酸化剤（Ｙ）として没食子酸、および／またはラジカルレセプター（Ｚ）としてアセトアルデヒドを添加した後に、化学発光のＣＬ計数を、測定した。図３（ａ）において、曲線Ａは、ＸおよびＹを一緒に添加した後の化学発光を表し；曲線Ｂは、ＹおよびＺを一緒に添加した後の化学発光を表し；そして、曲線Ｃは、ＸおよびＺを一緒に添加した後の化学発光を表す。図３（ｂ）は、没食子酸を、２００秒において、ＸおよびＺの混合物に添加した場合に、化学発光が増大した（すなわち、Ｘ，ＹおよびＺの全てがともに存在するときのみ、化学発光が起った）ことを示す。
【図３ｂ】図３は、没食子酸の抗酸化の効果を示す。温度３７℃で、過酸化物（Ｘ）としてＨ２Ｏ２、抗酸化剤（Ｙ）として没食子酸、および／またはラジカルレセプター（Ｚ）としてアセトアルデヒドを添加した後に、化学発光のＣＬ計数を、測定した。図３（ａ）において、曲線Ａは、ＸおよびＹを一緒に添加した後の化学発光を表し；曲線Ｂは、ＹおよびＺを一緒に添加した後の化学発光を表し；そして、曲線Ｃは、ＸおよびＺを一緒に添加した後の化学発光を表す。図３（ｂ）は、没食子酸を、２００秒において、ＸおよびＺの混合物に添加した場合に、化学発光が増大した（すなわち、Ｘ，ＹおよびＺの全てがともに存在するときのみ、化学発光が起った）ことを示す。
【図４ａ】図４は、茶およびビタミンＣの抗酸化効果を示す。温度３７℃において、化学発光（ＣＬ計数）を、ラジカルレセプターとして、アセトアルデヒド（Ｚ）が存在している場合、またはアセトアルデヒド（Ｚ）が存在していない場合における、過酸化物としてのＨ２Ｏ２の存在下で、いくつかの抗酸化剤（すなわち、ＥＧＣ、茶およびビタミンＣ）のうちの１つを２００秒で添加して測定した。図４（ａ）は、ポリフェノールであるＥＧＣ（すなわち、エピガロカテキン（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ））が、アセトアルデヒドを伴って、抗酸化剤として２００秒で添加されたときに、または伴わずに、決定した化学発光を示す。図４（ｂ）は、２００秒で抗酸化剤として茶を添加したときの、アセトアルデヒド（＋Ｚ）の非存在下で放射される化学発光が、アセトアルデヒドの存在下の化学発光の５．７９％であることを示す。図４（ｃ）は、ビタミンＣが抗酸化剤として使用されたときの、アセトアルデヒド非存在下での化学発光強度が、アセトアルヒドの存在下での検出される強度の６４．１３％であったことを示している。
【図４ｂ】図４は、茶およびビタミンＣの抗酸化効果を示す。温度３７℃において、化学発光（ＣＬ計数）を、ラジカルレセプターとして、アセトアルデヒド（Ｚ）が存在している場合、またはアセトアルデヒド（Ｚ）が存在していない場合における、過酸化物としてのＨ２Ｏ２の存在下で、いくつかの抗酸化剤（すなわち、ＥＧＣ、茶およびビタミンＣ）のうちの１つを２００秒で添加して測定した。図４（ａ）は、ポリフェノールであるＥＧＣ（すなわち、エピガロカテキン（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ））が、アセトアルデヒドを伴って、抗酸化剤として２００秒で添加されたときに、または伴わずに、決定した化学発光を示す。図４（ｂ）は、２００秒で抗酸化剤として茶を添加したときの、アセトアルデヒド（＋Ｚ）の非存在下で放射される化学発光が、アセトアルデヒドの存在下の化学発光の５．７９％であることを示す。図４（ｃ）は、ビタミンＣが抗酸化剤として使用されたときの、アセトアルデヒド非存在下での化学発光強度が、アセトアルヒドの存在下での検出される強度の６４．１３％であったことを示している。
【図４ｃ】図４は、茶およびビタミンＣの抗酸化効果を示す。温度３７℃において、化学発光（ＣＬ計数）を、ラジカルレセプターとして、アセトアルデヒド（Ｚ）が存在している場合、またはアセトアルデヒド（Ｚ）が存在していない場合における、過酸化物としてのＨ２Ｏ２の存在下で、いくつかの抗酸化剤（すなわち、ＥＧＣ、茶およびビタミンＣ）のうちの１つを２００秒で添加して測定した。図４（ａ）は、ポリフェノールであるＥＧＣ（すなわち、エピガロカテキン（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ））が、アセトアルデヒドを伴って、抗酸化剤として２００秒で添加されたときに、または伴わずに、決定した化学発光を示す。図４（ｂ）は、２００秒で抗酸化剤として茶を添加したときの、アセトアルデヒド（＋Ｚ）の非存在下で放射される化学発光が、アセトアルデヒドの存在下の化学発光の５．７９％であることを示す。図４（ｃ）は、ビタミンＣが抗酸化剤として使用されたときの、アセトアルデヒド非存在下での化学発光強度が、アセトアルヒドの存在下での検出される強度の６４．１３％であったことを示している。
【図５ａ】図５は、発酵ダイズ抽出物（ＦＳＥ）の様々な濃度におけう抗酸化効果を示す。温度３７℃において、ラジカルレセプター（Ｚ）としてアセトアルデヒドの存在下またはその非存在下で、過酸化物としてＨ２Ｏ２を使用して、化学発光を測定し、様々な濃度における発酵ダイズ抽出物を、２００秒で添加した。図５（ａ）は、１：１のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の４４．１３％であったことを示している。図５（ｂ）は、１：１０のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での強度の６３．６４％であったことを示している。図５（ｃ）および図５（ｄ）は、１：１００または１；５００のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の少なくとも９０％であったことを示している。
【図５ｂ】図５は、発酵ダイズ抽出物（ＦＳＥ）の様々な濃度におけう抗酸化効果を示す。温度３７℃において、ラジカルレセプター（Ｚ）としてアセトアルデヒドの存在下またはその非存在下で、過酸化物としてＨ２Ｏ２を使用して、化学発光を測定し、様々な濃度における発酵ダイズ抽出物を、２００秒で添加した。図５（ａ）は、１：１のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の４４．１３％であったことを示している。図５（ｂ）は、１：１０のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での強度の６３．６４％であったことを示している。図５（ｃ）および図５（ｄ）は、１：１００または１；５００のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の少なくとも９０％であったことを示している。
【図５ｃ】図５は、発酵ダイズ抽出物（ＦＳＥ）の様々な濃度におけう抗酸化効果を示す。温度３７℃において、ラジカルレセプター（Ｚ）としてアセトアルデヒドの存在下またはその非存在下で、過酸化物としてＨ２Ｏ２を使用して、化学発光を測定し、様々な濃度における発酵ダイズ抽出物を、２００秒で添加した。図５（ａ）は、１：１のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の４４．１３％であったことを示している。図５（ｂ）は、１：１０のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での強度の６３．６４％であったことを示している。図５（ｃ）および図５（ｄ）は、１：１００または１；５００のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の少なくとも９０％であったことを示している。
【図５ｄ】図５は、発酵ダイズ抽出物（ＦＳＥ）の様々な濃度におけう抗酸化効果を示す。温度３７℃において、ラジカルレセプター（Ｚ）としてアセトアルデヒドの存在下またはその非存在下で、過酸化物としてＨ２Ｏ２を使用して、化学発光を測定し、様々な濃度における発酵ダイズ抽出物を、２００秒で添加した。図５（ａ）は、１：１のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の４４．１３％であったことを示している。図５（ｂ）は、１：１０のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での強度の６３．６４％であったことを示している。図５（ｃ）および図５（ｄ）は、１：１００または１；５００のＦＳＥ濃度において、アセトアルデヒドの非存在下での化学発光強度が、アセトアルデヒドの存在下での発光強度の少なくとも９０％であったことを示している。
【図６】図６は、ａｐｏＥ欠損マウスにおける総血漿コレステロールレベルに対する発酵ダイズ抽出物の効果を示している。
【図７】図７は、ＡｐｏＥ欠損マウスにおける損傷形成に対する発酵ダイズ抽出物の効果を示している。
【図８】図８は、ＡｐｏＥ欠損マウス由来の大動脈損傷の染色結果を示している。
【図１】
2005075787.tif 000009
【図２】
2005075787.tif 000010
【図３ａ】
2005075787.tif 000011
【図３ｂ】
2005075787.tif 000012
【図４ａ】
2005075787.tif 000013
【図４ｂ】
2005075787.tif 000014
【図４ｃ】
2005075787.tif 000015
【図５ａ】
2005075787.tif 000016
【図５ｂ】
2005075787.tif 000017
【図５ｃ】
2005075787.tif 000018
【図５ｄ】
2005075787.tif 000019
【図６】
2005075787.tif 000020
【図７】
2005075787.tif 000021
【図８】
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【外国語明細書】
1. Title ofInvention
USE OF FERMENTED Glycine max(L.) EXTRACTIN INHIBITING 15-LIPOXYGENASE
2. DetailedDescription of Invention
TECHNICAL FIELD
This inventionrelates to a use of a fermented Glycine max (L.) extract in inhibiting15-lipoxygenase, preventing and/or treating a disease in which 15-lipoxygenaseinhibition is implicated in a subject, such as cardiovascular diseases, immunedisorders (e.g., asthma and or inflammation), and modulating the immune system.  The invention also relates to a use of the fermented Glycine max (L.)extract in preventing and/or treating a microbe infection.
BACKGROUND OFTHE INVENTION
Lipoxygenases(LOX) are nonheme iron-containing enzyme that catalyze the oxygenation ofcertain polyunsaturated fatty acids such as lipoproteins.   Several differentlipoxygenase enzymes, e.g. LOX-5, LOX-12 and LOX-15, are known, each having acharacteristic oxidation action.   LOX-15 catalyzes the oxygenation ofarachidonic and linoleic acids and has been implicated in the oxidativemodification of low-density lipoproteins (LDL).   Many researches reported thatthe LOX-15 is associated with coronary artery disease and atherosclerosis (Shenet al., J. Clin. Invest. 1996, Vol. 98, No. 10, pp. 2201-2208; Timo etal., 1995, Vol. 92 (11), pp. 3297-3303; Ravalli et al., 1995,Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology, Vol. 15, No. 3, pp. 340-348;and Kuhn et al., 1997, J. Clin. Invest., Vol. 99, No. 5, pp. 888-893),cancer and inflammatory diseases (USP 6,001,866; Mogul et al., 2001,Biochemistry, 40, 4391-4397; Walther et al., 1999, MolecularPharmacology, 56: 196-203; and Kamitani et al., 1998, the Journal ofBiological Chemistry, Vol. 273, No. 34, pp. 21569-21577 ), and immune response(Kruisselbrink et al., 2001, Clin Exp Immunol, 126:2-8).   Therefore, asubstance having an efficacy in inhibiting LOX is useful as an agent forpreventing or treating diseases associated with LOX.
Soybeans areone concentrated source of isoflavones in human diet.   They also contain manycompounds including saponins, phytosterols, soybean phytates, proteaseinhibitors, phenolic acids, complex sugars, boron, lecithin, omega-3 fattyacids and folic acid.   They can impart health benefits.   Many easterntraditional foods, such as tembe and natto, are produced from the fermentationof soybeans.   For example, tembe is produced by fermenting soybean with Rhizopusoligosporus, R. oryzae, R. arrihizus and R. stolonifer.  Natto is produced by fermenting soybean with Bacillus natto.   Thetraditional fermented foods can be used as a superior protein origin.   However,none of the prior art discloses that any known fermented soybean foods andsoybeans have an efficacy in inhibiting 15-lipoxygenase LOX-15.
SUMMARY OF THEINVENTION
1.     Use offermented Glycine max (L.) extract for the production of a compositionfor use in the inhibition of 15-lipoxygenase in a subject, wherein thefermented Glycine max (L.) extract is prepared by fermenting an aqueous Glycinemax (L.) extract with at least one lactic acid bacteria together with atleast one yeast, and the inhibition of 15-lipoxygenase is used in treating orreducing the risk of cardiovascular disease.
2.     The use ofitem 1, wherein the Glycine max (L.) is black soybean.
3.     The use ofitem 1, wherein the lactic acid bacteria is a Lactobacillus species.
4.    The use ofitem 1, wherein the yeast is a Saccharomyces species.
5.    The use ofitem 1, wherein said cardiovascular disease is atherosclearosis.
6.     The use ofitem 1, wherein the composition is a pharmaceutical composition or a foodcomposition.
This inventionrelates to a use of a fermented Glycine max (L.) extract, which isprepared by fermenting an aqueous Glycine max (L.) extract with at leastone lactic acid bacteria together with at least one yeast, in inhibiting15-lipoxygenase (LOX-15).   Particularly, Glycine max (L.) is soybean orblack soybean.   More particularly, the fermented Glycine max (L.)extract of the invention include the fermented soybean extract and fermentedblack soybean extract.
The fermented Glycinemax (L.) extract of the invention can be used in preventing and/or treatinga disease in which 15-lipoxygenase inhibition is implicated in a subject, suchas cardiovascular diseases, immune disorders (e.g., asthma and inflammation),and modulating the immune system.   
The fermented Glycinemax (L.) extract of the invention can also be used in preventing and/ortreating a microbe infection in a subject.
DETAILEDDESCRIPTION OF THE INVENTION
The inventionrelates to a new use of a fermented Glycine max (L.) extract for theproduction of a composition for use in the inhibition of 15-lipoxygenase (LOX-15)and the diseases implicated in the 15-lipoxygenase, wherein the fermented Glycinemax (L.) extract is prepared by fermenting an aqueous Glycine max(L.) extract with at least one lactic acid bacteria together with at least oneyeast.   It is unexpectedly found that the fermented Glycine max (L.)extract can effectively inhibit 15-lipoxygenase in a low level.   
In particular,the composition comprising the fermented Glycine max (L.) extract of theinvention can be used in preventing and/or treating a disease in which15-lipoxygenase inhibition is implicated in a subject, such as cardiovasculardiseases, immune disorders (e.g., asthma and inflammation), and modulating theimmune system.   In addition, the fermented soybean extract of the invention canalso be used in treating and/or preventing a microbe infection.   
The compositionof the present invention can be a pharmaceutical composition or a foodcomposition.
Process forProducing the Fermented Soybean Extract
The fermented Glycinemax (L.) extract is made by fermentation of an aqueous Glycine max(L.) extract with at least one lactic acid bacteria together with at least oneyeast, followed by sterilization, e.g. by heat, of the fermented liquid withoptional filtration and concentration. 
According tothe invention, the preferred Glycine max (L.) used in the preparation ofthe fermented Glycine max (L.) extract is selected from the groupconsisting of soybean and black soybean.   More particularly, the fermented Glycinemax (L.) extract of the invention is the fermented soybean extract orfermented black soybean extract.     
The fermented Glycinemax (L.) extract is produced by fermentation of Glycine max (L.)extract with at least one lactic acid bacteria, e.g. one or more strains of a Lactobacillusspecies or several strains of a number of Lactobacillus species,together with at least one yeast, e.g. one or more strains of a Saccharomycesspecies or several strains of a number of Saccharomyces species.   Thefermentation of the aqueous Glycine max (L.) extract with one or morelactic acid bacteria and the optional Saccharomyces species can becarried out sequentially in any order or simultaneously, preferablysimultaneously.
If more thanone microbe is used in the fermentation, the fermentation can be conducted withthe microbes sequentially or simultaneously.   Preferably, an aqueous extract ofnon-genetically modified organic Glycine max (L.) of selected grade isused as a starting material.   Preferably, the fermentation is carried out usinga heterogeneous culture of Lactobacillus, for example, a culture of 5,10, 15, 20, 25 or 30 strains of Lactobacillus and at least one yeast isadded to the heterogeneous culture of Lactobacillus.   The strains of Lactobacillusthat can be used include, for examples, Lactobacillus acidophilus CCRC10695, 14026, 14064, 14065 and/or 14079, Lactobacillus delbrueckiibulgaricus CCRC 10696, 14007, 14009, 14010, 14069, 14071, 14098 and/or16054, Lactobacillus lactis lactis CCRC 10791, 12267, 12306, 12312,12315, 12323, 14016, 14015 and/or 14117, Lactobacillus kefir CCRC 14011,and/or Lactobacillus kefiranofaciens CCRC 16059.   The yeast that can beused include, for example, Saccharomyces cerevisiae CCRC 20577, 20578,20581, 21494, 21550, 21797, 21805, 22138, 22234, 22337, 22731 and/or 22728,and/or Candida kefyr CCRC 21269, 21742 and/or 22057.   Afterfermentation, the fermented liquid is sterilized, e.g. by heat or irradiation,preferably by heat, to obtain a sterilized liquid.   Preferably, the sterilizedliquid is filtered or centrifuged, preferably filtered, to remove most or allof the dead microbes to obtain the fermented Glycine max (L.) extract.  More preferably, the filtration step is followed by removal of some of thewater from the filtrate to concentrate the fermented liquid to obtain thefermented Glycine max (L.) extract.   Unless otherwise specified, thetests performed in this application involved the fermented Glycine max(L.) extract after the concentration step.   Optionally, the fermented Glycinemax (L.) extract can be dried, e.g. via lyophilization, to obtain thefermented Glycine max (L.) extract in a powder form. 
The process canbe carried out by mixing organic Glycine max (L.) (with fat removed)with distilled water at a ratio of 1: 10.   The mixture is heated at 100oC for 30 minutes and then filtered to obtain a Glycine max (L.) extract.  Beef and kelp are boiled in distilled water for 30 minutes to obtain a broth.  Salt, sugar and agar are added to produce a special agar medium.   The lacticacid bacteria and yeast strains are added to the special agar medium.   Thelactic acid bacteria with the optional inclusion of the yeast in the medium aretransferred to the Glycine max (L.) extract and incubated at 36-43oC for 45-50 hours.   Preferably, the various strains of the microbes are groupedaccording to similar growth characteristics, e.g. any requirements of uniquenutrient medium, whether the microbial strains could produce a good smell afterfermentation and whether the grouped microbes can survive in the uniquecondition, so that groups of the microbes are added to the Glycine max(L.) extract separately before the incubation.   The purpose of this step is toreduce any negative interaction among the various strains.   Also preferably,equal proportion of the different groups of microbial strains are added to the Glycinemax (L.) extract before the incubation and the resulting extract isincubated at 40o C for 45-47 hours.   Upon completion of theincubation period, the heterogeneous culture is then transferred to the Glycinemax (L.) extract again and incubated at 36-43o C for 100-150hours.   The final fermented extract is heat sterilized and filtered; and 95% ofthe water content of the filtrate is removed in a concentrator to obtain afermented Glycine max (L.) extract in a concentrated or condensed form.  The upper layer is then filtered through porcelain, and thereafter dispensed incontainers and sealed. 
Within thescope of the present invention is a fermented extract of a Chinese herbprepared in a process similar to the one described above with the substitutionof the soybean with the Chinese herb.   The fermented extract of the Chineseherbs can be Glycyrrhiza uralensis Fish, Lycium barbarum, Coix lacryma-jobiL   var.,   ma-yune Stapf, Sophora tonkinensis gapnep., Cassia btusifolia.,Scutellaria baicalensis Georgi, Artemisia capillaries Thunb., Coptis chinensisFrsnch., Gentiana scabra Bge., Nelumbo nucifera Gaertn., Chrysantheiferamummorifolium Ramat., Gardenia jasminoides Ellis, Hordeum vulgare L., Cinnamomumcassia Presl, Raph, anus sativus L., Dioscorea opposita Thunb., Angelicasinensis (Oliv.), Ligusticum chuanxiong Hort., Notopterygium incisum, Paeonialactiflora Pall., Allium satium L., Schisandra chinensis(Turcz.)Baill,Rehmannia glutinosa Libosch., Acanthopanax gracilistylus W.W.Smith, Equusasinus L., Ligustrum lucidum Ait., Phaseolus radiatus L., Triticum aestivum L.,Dolichos lablab L., Atractylodes macrocephala Koidz., Saposhnikovia divaricata,Lonicera japonica Thund., Cinnamomum cassia Presl, Zingiber officinale Rosc.,Gastrodia elata Bl., Asparagus cochinchinensis(Liur.)Merr., Dendrobiunloddigesii Rolfe., and Sesamum indicum L. 
Use in theInhibition of 15-lipoxygenase
15-lipoxygenasesare nonheme iron-containing enzymes that catalyze the oxygenation of certainpolyunsaturated fatty acids such as lipoproteins.   It is known that compoundsinhibit the action of 15-lipoxygenase enzyme are useful in the treatment oralleviation of inflammatory diseases, allergy, cardiovascular diseases and immunedisorders in mammals including humans.
Studies in theinvention have demonstrated that the fermented Glycine max (L.) extractof the present invention can inhibit 15-lipoxygenases superior than the knownfermented soybean foods and the unfermented soybean.
Use as anAntioxidant
The fermented Glycinemax (L.) extract has prominent antioxidant and free radical scavengeractivities.   The fermented Glycine max (L.) extract can removesuperoxide free radicals, e.g., O2.-, H2O2and ROO., and can act as an antioxidant for unsaturatedfatty acid and fat.   The fermented Glycine max (L.) extract has aprominent ability to eliminate hyper oxygen anions to protect the cell fromoxidative injury and change free radicals to harmless substances with an energydecreasing procedure.   
Use as Agentagainst Cardiovascular Diseases
Many studiesshows that the inhibitors of LOX-15 in the treatment and prevention ofinflammation and atherosclerosis (Cornicelli et al., USP 6,001,866;Bocan et al., Atherosclerosis, 136, 203-216, 1998 and Timo et al.,Circulation, col. 92 (1), 1 December 1995, pp. 3297-3303).   It is expected thatthe fermented Glycine max (L.) extract is useful for preventing and/ortreating cardiovascular diseases, such as atherosclearosis. 
Use for PromotingImmune Function
In vitro study indicated that the fermented Glycinemax (L.) extract of the invention improved immune function.   The effect ofthe fermented Glycine max (L.) extract on modulation of the immunity ofanimals (Bala/c mice) was studied by treating the animal with the fermented Glycinemax (L.) extract combined with or without a challenge with various mitogensincluding lipopolysachrride, concanavalin A and phytohaemagglutilin.   Spleencell proliferation assay indicated that the fermented Glycine max (L.)extract could be related with T & B cell interaction in immunitymodulation.   The fermented Glycine max (L.) extract can also becorrelated with anti-inflammation reaction.   The Glycine max (L.)extract also enhanced phagocytosis activity of macrophages by 71%.   Similarresults were found with in vivo studies in mice.   It was also demonstrated thatthe anti-tumor effect of fermented Glycine max (L.) extract is mediatedby cytokines released.   Conditioned medium from fermented Glycine max (L.)extract-stimulated peripheral blood mononuclear cells by 45-56%. Levels ofinterleukin-1b, interleukin-b and tumor necrosis factor-a were much higher thanthose of untreated control.   Since untreated Macrophages and T Lymphocytesproduced little or no cytokine and normal mononuclear cells did not suppressleukemic cell growth, the anti-tumor activity is speculated to be derived fromelevated level of cytokine. 
The fermented Glycinemax (L.) extract is beneficial to asthmatic children.   For example, resultsobtained also showed significant body weight gain in a group of children withasthma when administered with 3 ml of the fermented soybean extract daily for 4months.   Blood tests showed that taking fermented Glycine max (L.)extract increase the RBC and Hb levels in these asthmatic children.
Use asAnti-Inflammation Agent
The inventionalso relates to a method for treating and/or preventing inflammation in asubject, comprising administering an effective amount of a fermented Glycinemax (L.) extract to the subject in need of thereof, wherein the fermented Glycinemax (L.) extract is prepared by fermenting an aqueous Glycine max(L.) extract with at least one lactic acid bacteria together with at least oneyeast.
The fermented Glycinemax (L.) extract has demonstrated anti-inflammatory effect at dosage of10ml/kg on the reduction of carrageenan induced hind paw edema in rats andanti-inflammatory effect on acute and chronic arthritis in adjuvant arthritistest.
Use forPreventing or Treating Infections
The fermented Glycinemax (L.) extract has demonstrated antimicrobial activity in vitroand in vivo.   It inhibits the growth of Helicobacter pylori,ampicillin and methycillin resistant Staphylococcus aureus, Salmonellatyphimurium, Bacillus subtilis, E.coli, Proteus vulgarisand Vancomycin resistant Enterococci.   Preferably, the Vancomycinresistant Enterococcus is selected from the group consisting of E.avium, E. casseliflavus, E. durans, E .faecalis and E. faecium.  More Preferably, the Vancomycin resistant Enterococcus is selected fromthe group consisting of E. avium, E. casseliflavus, E. durans and E.faecali.   More Preferably, the Vancomycin resistant Enterococcus isselected from the group consisting of E. durans, E. faecalis and E.faecium.   More Preferably, the Vancomycin resistant Enterococcus isselected from the group consisting of E. avium, E .faecalis and E.faecium.   More Preferably, the Vancomycin resistant Enterococcus isselected from the group consisting of E .faecalis and E. faecium.  Most preferably, the Vancomycin resistant Enterococcus is E .faecalis.  
The effectiveconcentration of fermented Glycine max (L.) extract is generally in therange of 1- 10%.   The selective antimicrobial decontamination effect of fermentedGlycine max (L.) extract for prophylaxis of bacterial infection inpatients who are under risk of developing neutropenia due to the concurrenttreatment of anti-cancer chemotherapy is also demonstrated in 100 patients.  Preferably, the vancomycin resistant Enterococcus is selected from thegroup consisting of E. avium, E. casseliflavus, E. durans, E .faecalisand E. faecium.   More Preferably, the vancomycin resistant Enterococcusis selected from the group consisting of E. avium, E. casseliflavus, E. duransand E .faecali.   More Preferably, the vancomycin resistant Enterococcusis selected from the group consisting of E. durans, E. faecalis and E.faecium.   More Preferably, the vancomycin resistant Enterococcus isselected from the group consisting of E. avium, E .faecalis and E.faecium.   More Preferably, the vancomycin resistant Enterococcus isselected from the group consisting of E .faecalis and E. faecium.  Most preferably, the vancomycin resistant Enterococcus is E .faecalis.
Administrationof the Fermented Glycine max (L.) Extract
In thisinvention, the fermented Glycine max (L.) extract may be administeredalone or in a composition comprising the fermented Glycine max (L.)extract and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent and/or excipient.  Preferably, the fermented Glycine max (L.) extract is fermented soybeanextract or fermented black soybean extract.   The fermented Glycine max(L.) extract may be administered at a dose of about 0.001 to 40 ml/kg bodyweight, with a maximum dose of 2000 ml per person per administration.  Preferably, the dose of the fermented Glycine max (L.) extract is 0.01to 20 ml/kg, more preferably 0.1 to 5 ml/kg, body weight of the subject.   Thesedoses are based on the fermented Glycine max (L.) extract in theconcentrated form, but appropriate doses of the fermented Glycine max(L.) extract in the unconcentrated form or dry powder form can be calculatedaccordingly.   The dose can be adjusted based on the health condition of thesubject or the disease to be prevented or treated. 
The fermented Glycinemax (L.) extract was demonstrated to be highly safe for daily intake of1-10 ml on a long-term basis in a 6 months chronic toxicity study of rodents.  Mice receiving a dose of 10 ml/kg and 1 ml/kg for 28 days did not exhibit anysignificant difference or abnormal symptom in a subacute oral toxicity study.  No signs of gross toxicity or mortality were observed in two groups of testedanimals administered 20 ml/kg and 1 ml/kg in an acute oral toxicity study ofrodents.   The fermented Glycine max (L.) extract was demonstrated to benon-mutagenic in Ames test, to not cause chromosomal damage in mammalian cellsin vitro and to not induce micronuclei in bone marrow cells in ICR mice tested.
When the fermentedGlycine max (L.) extract is administered in pregnant women, the dosageof the fermented Glycine max (L.) extract can be increased duringpregnancy until the daily intake reaches 12 ml.   The fermented Glycine max(L.) extract can be administered at early and midstage pregnancy, as well asdelivery.   The results showed that the fermented Glycine max (L.)extract could improve symptoms, including constipation, nausea, vomiting, andgastrointestinal discomfort, commonly found in pregnancy.   In addition, theadministration of the fermented Glycine max (L.) extract can reduceabnormalities during pregnancy and at delivery.   The fermented Glycine max(L.) extract is not only good for health improvement during pregnancy, but italso produces no adverse effect as a long-term dietary supplement.   Dailyadministration of the fermented Glycine max (L.) extract to newborns orinfants daily increases weight gain of the babies or infants.   Similarly,increased weight gain can be achieved in infants of nursing mothers continuouslytaking the fermented Glycine max (L.) extract. 
The fermented Glycinemax (L.) extract can also enhance hemopoeitic and liver functions after asurgical operation as demonstrated through daily administration of 1 ml of thefermented Glycine max (L.) extract along with other therapeutic productsto women undergoing operation after hospital admission except for the surgeryday and several post-surgery days. 
This inventionwill now be described with reference to the following non-limiting examples.
Example 1
LOX-15 is themain metabolizing enzyme in arachidonate acid (AA) metabolism.   One of themetabolic pathways of AA involves 15-lipoxygenase, LOX-15, which leads to theformation of HETE (hydroxyeicosatetraenoic acid).   HETE has been reported toplay an important role in cancer cell metastasis.   HETE can induce proteinkinase C activity to result in cancer cell metastasis.   HETE is also amitogenic factor, which results in angiogenesis of cancer cells.   LOX-15 wasisolated from rabbit reticulocytes.   Linoleic acid was used as a substrate ofLOX-15 with or without the fermented soybean extract.   The amount of HETEformed was determined spectrophotometrically.   The data show that the fermentedsoybean extract had an inhibitory effect on LOX-15 (see Figure 1).   The resultindicated that the fermented soybean extract inhibits angiogenesis andmetastasis of cancer cells and induce apoptosis of cancer cells.
A furtherLOX-15 inhibition test was conducted according to the above-mentioned method tocompare the inhibition efficacy of LOX-15 between the unfermented soybean andthe fermented soybean extract.   The results show that the inhibition efficacyof the fermented soybean extract was over four times of the unfermented soybeanextract.
Example 2
The fermentedblack soybean extract was tested in rabbit reticulocytes for the inhibitoryeffect on LOX-15.   The test method refers to the method described in AnalyticalBiochemistry, 1992, 201, 375-380.   The 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% and 0.01% (v/v) ofblack soybean extracts were used in incubating the reticulocytes at 4℃ for 10minutes.   The incubation buffer is 0.05 M potassium phosphate buffer (pH5.9).  The resulting 13-HPODE is quantified by Spectrophotometer.   
The relation ofthe concentration of the black soybean and its inhibition rate to LOX-15 wasshown in Figure 2.   
A furtherLOX-15 inhibition test was conducted according to the above-mentioned method tocompare the inhibition efficacy of LOX-15 between the unfermented black soybeanand the fermented black soybean extract.   The LOX-15 inhibition rate of theunfermented black soybean was shown in below Table 1:
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The LOX-15inhibition rate of the fermented black soybean extract was shown in below Table2:
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The resultsshown in the above tables show that the fermented black soybean extract has anunexpected superior efficacy in inhibiting LOX-15.
Example 3
The fermentedsoybean extract functioned as an antioxidant and in the removal of freeradicals.   Several models published previously were used to study theantioxidant capacity of the fermented soybean extract, with Vitamin C andTrolox used as positive controls.   The following methods were used for determiningthe antioxidant activity: (1) NBT method (2) H2O2 reductionmethod (3) DPPH reduction (4) TRAP reduction method (5) Conjugated diene (6)Lipid peroxidation (7) Chemiluminescence (see Figures 3, 4 and 5) in the presenceof active oxygen.   All results demonstrated that the fermented soybean extracthas the highest antioxidant activity against unsaturated fatty acid andperoxidation compared with Vitamin C and Trolox. 
Experimentsdemonstrated that the fermented soybean extract functions both as a antioxidantand free radical acceptor in the Okubo test system for chemiluminescenceacceptor in the presence of active oxygen.     The experiments were performed bymeasuring chemiluminescence in a liquid of hydrogen peroxide with or withoutacetaldehyde.   Known antioxidants, e.g. gallic acid (see Figure 3(b)), EGC, teaand vitamin C (see Figures 4(a)-(c)) or the fermented soybean extract (seeFigure 5) was added at 200 seconds.   The data are shown in Figures 3-5.   Figure3(b) shows that chemiluminescence was increased at 200 seconds when gallic acidwas added to a mixture of hydrogen peroxide and acetaldehyde.   Figure 4 showsthat when EGC, tea or vitamin C was added at 200 seconds, the chemiluminescencewas increased when acetaldehyde was present.   However, the chemiluminescencewas also increased in the absence of acetaldehyde when vitamin C was added at200 seconds (see Figure 4(c)) demonstrating that the anti-oxidant mechanism ofvitamin C probably differs from that of EGC and tea.   Figure 5 shows that,after the addition of the fermented soybean extract at 200 seconds, thechemiluminescence increased indicating that the fermented soybean extract was apowerful anti-oxidant.   The anti-oxidant activity of the fermented soybeanextract means that the fermented soybean extract can function in removing freeradicals.   With anti-oxidant and free radical removing functions, the fermentedsoybean extract is useful in promoting the general health of individuals orimproving the health of subjects in need of health improvement becauseoxidative stresses, such as excessive presence of reactive oxygen species andlipid peroxidation, are known to be harmful to the body. 
Example 4
Theanti-microbial activities of the fermented soybean extract were demonstrated bydetermining with in vitro methods.   In the first experiment, Salmonellatyphimurium, Bacillus subtilis, three strains (TMU-C74, TMU-D16 andTMU-E86) of Helicobacter pylori and vancomycin resistant Enterococcusfeacalis were cultured in nutrient broth or BHI broth and transferred toMueller Hinton agar plates or chocolate agar plates.   The fermented soybeanextract was put on a paper disk on the agar plate and the size of an inhibitionzone was measured after incubation at 37o C.   The data are shown inbelow Table 3:
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In anotherexperiment, the minimal inhibitory concentrations (MICs) of the fermentedsoybean extract were determined in Salmonella typhimurium (ATCC 14028), Bacillussubtilis (CRCC 10447), Staphylococcus aureus (ATCC 25923) andvancomycin resistant Enterococcus feacalis.   Suspensions of thesebacteria were adjusted to 3 x 105 CFU/ml.   The adjusted bacteriasuspensions were added to a 96-well plate with or without variousconcentrations, i.e. 10%, 5%, 2.5%, 1.25%, 0.65%, or 0.32%, of the fermentedsoybean extract.   The plate was incubated at 37o C for 15 hours.  The MICs were determined after incubation and shown in below Table 4:
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The fermentedblack soybean extract was also used in testing the anti-microbial activities.  The MICs were determined and shown in below Table 5:
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Example 5
The effects ofthe fermented soybean extract on immunity modulation were studied.   
(A) In vitroStudies:
Spleen CellProliferation Assay (MTT Method)
Spleen cellswere isolated from mice and put in a culture flask at 2 x 106cells/ml in a RPMI medium with or without one of several mitogens, i.e.lipopolysaccharide (LPS), concavalin A (Con A) and phytohemagglutinin (PHA).  The spleen cell cultures were incubated overnight for MTT assay
A sub-optimalconcentration of 5 ug/ml of LPS combined with the fermented soybean extract at1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% or 0.01%, had no effect on spleen cell proliferation,especially for B cells.   A concentration of 5 ug/ml of PHA combined with 0.05%of the fermented soybean extract increased the spleen cell number, especiallyfor T cells, which was 2.32 fold of the spleen cell number obtained with PHAalone.   According to this result, the fermented soybean extract has an effecton T and B cell interaction in immunity modulation.   A concentration of 5 ug/mlof Con A combined with 0.05% of the fermented soybean extract produced a spleencell number which was about 20% less than the spleen cell number obtained withCon A alone.   According to this result, the fermented soybean extract couldplay a role in anti-inflammation reactions.
MacrophageActivity Assay.
Balb/c micewere injected with thiogllate. Three to four days after the injection,macrophages were isolated from the peritoneal cavity of the mouse and incubatedwith or without the fermented soybean extract at 37o C for 30minutes.   E. coli cells conjugated with a fluorescence probe were addedto the macrophage suspension and incubated at 37o C for 2 hours.   Aphagocytosis assay was conducted with flow cytometry.   The data showed that thefermented soybean extract at 0.05% enhanced the phagocytosis activity of themacrophage by about 71% compared with macrophages not treated with thefermented soybean extract.
(B) In vivoStudies
Male ICR albinomice were injected intraperitoneally with vehicle, 0.8 ml of 1% of thefermented soybean extract per mouse, 0.8 ml of 0.1% of the fermented soybeanextract per mouse, Levamisole at 30 mg/kg, or azimexone at 100 mg/kg.   One hourafter the intraperitoneal injection, Candida albican (ATCC 10231) wasinjected intravenously into the mouse at 1.5 to 2 x 107 CFU permouse.   The mortality of the mouse was determined daily for 10 days (see Table6).   
As shown inTable 6, the fermented soybean extract reduced the mortality of Candidaalbican in the mouse.   The mortality reductive effect of the fermentedsoybean extract was more pronounced than that of levamisole.
Male ICR albinomice were pretreated with cyclophosphamide at 30 mg/kg on days 5, 3 and 1before injected intravenously with Candida albican.   On days 6, 4 and 2before the intravenous injection of Candida albican, the mouse wastreated with vehicle, 0.1% of the fermented soybean extract, 1% of thefermented soybean extract or azimexone at 100 mg/kg.   The mortality of themouse was determined daily for 10 days (see Table 7).   As shown in Table 7,with cyclophosphamide pretreatment, the fermented soybean extract reduced themortality of Candida albican in the mouse.   The mortality reductiveeffect of the fermented soybean extract was comparable to that of azimexone.
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Example 6
The fermentedsoybean extract was tested in apoE-deficient mice (with spontaneouslyhypercholesterolemia and atherosclerosis lesions similar to humans) forevaluating the effect in treating cardiovascular diseases.   ApoE-deficient micewere fed with 10 ml/g of fermented soybean extract product (15% in concentration)for 3 months, and then the level of plasma cholesterol and the extent ofatherosclerosis lesion were measured.   It is found that the treatment with thefermented soybean extract product of the present invention does notsignificantly affect the level of plasma cholesterol, but the lesion ofarherosclerosis in mice receiving the fermented soybean extract product of thepresent invention is substantially reduced in comparison with the control (seeFigures 6, 7 and 8).   According to the results, the efficacy of treatingcardiovascular disease such as arteriosclerosis of the fermented soybeanextract product of the present invention is achieved by the mechanism ofinhibiting 15-lipoxygenase, rather than lowering the level of plasmacholesterol.
This inventionrelates to a use of a fermented Glycine max (L.) extract prepared byfermenting an aqueous Glycine max (L.) extract with at least one lacticacid bacteria together with at least one yeast, in inhibiting 15-lipoxygenase.  In particular, the fermented Glycine max (L.) extract can be used inpreventing and/or treating a disease in which 15-lipoxygenase inhibition isimplicated in a subject, such as cardiovascular diseases, immunedisorders(e.g., asthma and inflammation), and modulating the immune system.  The invention also relates to a use of the fermented Glycine max (L.)extract in treating and/or preventing a microbe infection.
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3. BriefDescription of Drawings
Figure 1 showsthe inhibition of LOX-15 with the fermented soybean extract. 
Figure 2 showsthe relation of the concentration of the black soybean and its inhibition rateto LOX-15.
Figure 3 showsthe antioxidant effect of gallic acid.   At a temperature of 37oC,chemiluminescence, CL Counts, was measured after the addition of H2O2as a peroxide (X), gallic acid as an antioxidant (Y) and/or acetaldehyde as aradical receptor (Z).   In Figure 3(a), curve A refers to the chemiluminescenceafter the addition of X and Y together; curve B refers to the chemiluminescenceafter the addition of Y and Z together; and curve C refers to thechemiluminescence after the addition of X and Z together. Figure 3(b) showsthat, when gallic acid was added into a mixture of X and Z at 200 seconds, thechemiluminescence was increased (i.e. the chemiluminescence occurred only inthe presence of X, Y and Z all together).   
Figure 4 showsthe antioxidant effects of tea and Vitamin C.   At a temperature of 37oC,chemiluminescence, in CL Counts, was measured in the presence of H2O2as a peroxide with the presence or absence acetaldehyde (Z) as a radicalreceptor, and an addition of one of several antioxidants, i.e. EGC, tea andvitamin C, at 200 seconds.   Figure 4(a) shows the chemiluminescence determinedwith or without acetaldehyde when EGC, i.e. epigallocatechin which is apolyphenol, was added as the antioxidant at 200 seconds.   Figure 4(b) showsthat when tea was added as the antioxidant at 200 seconds, itschemiluminescence emitted in the absence of acetaldehyde (+Z) is 5.79% of thatin the presence of acetaldehyde.   Figure 4(c) shows that, when vitamin C wasused as the antioxidant, the chemiluminescence intensity in the absence ofacetaldehyde was 64.13% of that detected in the presence of acetaldehyde. 
Figure 5 showsthe antioxidant effect of different concentrations of the fermented soybeanextract, FSE.   At a temperature of 37oC, with H2O2 usedas a peroxide in the presence or absence of acetaldehyde as a radical receptor(Z), the chemiluminescence was measured and the fermented soybean extract atdifferent concentrations was added at 200 seconds.   Figure 5(a) shows that, ata FSE concentration of 1:1, the chemiluminescence intensity in the absence ofacetaldehyde was 44.13% of that in the presence of acetaldehyde.   Figure 5(b)shows that, at a FSE concentration of 1:10, the chemiluminescence intensity inthe absence of acetaldehyde was 63.64% of that in the presence of acetaldehyde.  Figures 5(c) and (d) show that, at a FSE concentration of 1:100 or 1:500, thechemiluminescence intensity in the absence of acetaldehyde was at least 90% ofthat in the presence of acetaldehyde. 
Figure 6 showsthe effect of the fermented soybean extract on the total plasma cholesterollevels in apoE-deficient mice.
Figure 7 showsthe effect of the fermented soybean extract on the lesion formation inapoE-deficient mice.
Figure 8 showsthe staining of aortic lesions from apoE-deficient mice.
1.     Use offermented Glycine max (L.) extract for the production of a compositionfor use in the inhibition of 15-lipoxygenase in a subject, wherein thefermented Glycine max (L.) extract is prepared by fermenting an aqueous Glycinemax (L.) extract with at least one lactic acid bacteria together with atleast one yeast, and the inhibition of 15-lipoxygenase is used in treating orreducing the risk of cardiovascular disease.
2.     The use ofclaim 1, wherein the Glycine max (L.) is black soybean.
3.     The use ofclaim 1, wherein the lactic acid bacteria is a Lactobacillus species.
4.    The use ofclaim 1, wherein the yeast is a Saccharomyces species.
5.    The use ofclaim 1, wherein said cardiovascular disease is atherosclearosis.
6.     The use ofClaim 1, wherein the composition is a pharmaceutical composition or a foodcomposition.
1. Abstract 
Use offermented Glycine max (L.) extract for the production of a compositionfor use in the inhibition of 15-lipoxygenase in a subject, wherein thefermented Glycine max (L.) extract is prepared by fermenting an aqueous Glycinemax (L.) extract with at least one lactic acid bacteria together with atleast one yeast, and the inhibition of 15-lipoxygenase is used in treating orreducing the risk of cardiovascular disease.
2.Representative Drawing 
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