(57)【要約】      （修正有）【課題】  種々の動植物遺伝子の生物発光系リポーターとしてまた観賞用きのことしても可能性がある発光きのこは限られた地域にしか自生していない。該発光きのこを安易かつ安価な方法で提供する。          【解決手段】  発光きのこの菌糸体を、堆肥，おが屑、腐葉土、土壌、枯れ枝若しくは天然高分子類、合成高分子を含む培地、各種栄養素を溶解した寒天培地、又は液体培地のいずれかの培地に接種し、温度２４〜３０℃、暗闇で２０日以上培養して、菌糸体が蔓延したら被覆材で覆い、この状態で７日以上、温度１５〜２４℃、照度１００ルクス以上、湿度８０％以上の梅雨環境で発光きのこの原基を形成させ、その原基を７日以上、温度１５〜２４℃、照度１００ルクス以上、湿度８０％以上の梅雨環境で発光きのこの子実体を発生させることを特徴とする発光きのこの栽培方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キシメジ科クヌギタケ属ヤコウタケ（Ｍｙｃｅｎａ  ｃｂｌｏｒｏｐｂｏｓ）やキシメジ科クヌギタケ属シイノトモシビタケ（Ｍｙｃｅｎａ  ｌｕｘ−ｃｏｅｌｉ）を原料とする発光きのこの栽培方法。
【請求項２】
菌糸体を培養する培地は、堆肥，おが屑、ウッドパルプ、ピートモス、水苔、腐葉土、土壌、枯れ枝（広葉樹、竹、椰子）若しくは天然高分子類（デンプン系、セルロース系、蛋白質、その他多糖類系）、合成高分子（ポリビニルアルコール系、アクリル系、ポリエーテル系、その他の付加重合体、縮合系ポリマー）等の高吸水ポリマーを含む培地、寒天培地、又は液体培地のいずれかを使用することを特徴とする発光きのこの栽培方法。
【請求項３】
発光きのこの菌糸体は、請求項１の培地（含水率６０％以上）に接種し、温度２４〜３０℃、暗闇の環境で１４日以上培養して得ることを特徴とする発光きのこの栽培方法。
【請求項４】
発光きのこの菌糸体から原基を形成する工程は、菌糸体が蔓延したら被覆材（含水率７０％以上）で覆い、この状態で温度１５〜２４℃、照度１００ルクス以上、湿度８０％以上の環境で７日以上培養し発光きのこの原基を形成させることを特徴とする発光きのこの栽培方法。
【請求項５】
請求項４に記載された発光きのこの栽培方法において、菌糸体を覆う被覆材は、堆肥，おが屑、ウッドパルプ、ピートモス腐葉土、土壌、水苔若しくは天然高分子類（デンプン系、セルロース系、蛋白質、その他多糖類系）、合成高分子類（ポリビニルアルコール系、アクリル系、ポリエーテル系、その他の付加重合体、縮合系ポリマー）等の高吸水ポリマーを含む保水性材料であることを特徴とする発光きのこの栽培方法。
【請求項６】
発光きのこの原基から子実体を発生させる工程は、発光きのこの原基を温度１５〜２４℃、照度１００ルクス以上、湿度８０％以上の環境で７日以上培養し、発光きのこの子実体を発生させることを特徴とする発光きのこの栽培方法。
【請求項７】
発光きのこの菌糸体から原基を形成する工程や発光きのこの原基から子実体を発生させる工程は、菌糸体を被覆材で覆った状態で照度１００ルクス以上を光照射、湿度８０％以上の水分補給、菌糸体の生育温度より４℃以上低い温度環境といった複合環境変化若しくは単一環境変化で、発光きのこの原基を形成し子実体を発生させることを特徴とする発光きのこの栽培方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【産業上の利用分野】
【０００１】  発光生物は動物界、植物界で存在している。しかし、その多くが動物であり、ほとんどの門に分布している。一方、植物では、一部の真菌類及びバクテリアにのみ分布している。また、発光生物は、海産と陸産のものがある。海産のものは陸産のものよりも多く、特に深海では未知の発光生物が多数生息していると考えられている。その中で発光きのこの発光は、他の発光生物と比較して特徴的である。ホタルやオワンクラゲなどの発光は、数秒から数分程度と短時間であるが、発光きのこの発光は、発光が強く、また数日間連続的である。発光機構がまったく解明されていないが、種々の動植物遺伝子の生物発光系リポーターとしての応用に非常に興味深く可能性がある発光生物であり、また観賞用きのことしても可能性がある。
【背景技術】
【０００２】  オワンクラゲ由来の動植物遺伝子のリポーターとしての蛍光蛋白質ＧＦＰは、生物発光の領域からすればＧＦＰの感度は、通常の発光測定と比較すると問題にならないくらい悪い。それはＧＦＰの蛍光は単なる吸収エネルギーの放出にすぎず、酵素反応のようにターンオーバーもないからである。また、生体成分には必ず蛍光成分が含まれるため自然発光が存在し、ＧＦＰ蛍光の検出限界に影響を与える。ＧＦＰの検出限度等を考慮すると、目的によっては、生物発光系に戻らざるを得ないと考えている。
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】  遺伝子の生物発光系リポーターとしての応用に非常に興味深く可能性がある発光生物であり、また観賞用きのことしても可能性がある。しかしながら発光きのこは小笠原諸島、八丈島等の限られた地域にしか自生していないうえ、発生時期も梅雨の頃に限られている。そのうえ、資源が枯渇してきているため、発光きのこを大量に入手することは非常に困難であり、発光きのこの人工栽培技術が要求されている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】  発光きのこの菌糸体は、堆肥，おが屑、腐葉土、土壌、枯れ枝（広葉樹、竹、椰子）若しくは天然高分子類（デンプン系、セルロース系、蛋白質、その他多糖類系）、合成高分子（ポリビニルアルコール系、アクリル系、ポリエーテル系、その他の付加重合体、縮合系ポリマー）を含む培地、各種栄養素を溶解した寒天培地、又は液体培地のいずれかの培地に接種し、温度２４〜３０℃、暗闇の環境で１４日以上培養し、菌糸体が蔓延したら被覆材で覆う。しかし、必ず被覆材で覆う必要はない。この状態で７日以上、温度１５〜２４℃、照度１００ルクス以上、湿度８０％以上の梅雨環境で発光きのこの原基を形成させ、その原基を７日以上、温度１５〜２４℃、照度１００ルクス以上、湿度８０％以上の梅雨環境で発光きのこの子実体を発生させることを特徴とする発光きのこの栽培方法。以上のような各工程を最適な環境条件で行うことにより、天然のものとほぼ同一の発光きのこを短期間で季節に関わらず大量に、安価に入手できる。
【作用と実施例】
【０００５】  次に、本発明の実施方法とその実験結果を例にあげて説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【０００６】  第１例
本発明では、発光きのこであるヤコウタケの種菌を電気通信大学電気通信学部電子物性工学科より提供いただき試験に供した。
クリーンベンチ内で種菌の菌糸体を約１ｃｍ２切り取り、下記のペプトン寒天平板培地の中心付近に植菌し、２７℃のインキュベーター内で培養しコロニーを形成させた。これらのコロニーを種菌として子実体の栽培や種菌の培養などに使用した。
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ＪＴアグリス製の特選園芸用土・落葉１００％完熟腐葉土を乾燥し、篩に掛けて１ｃｍ２程の乾燥腐葉土を得た。この乾燥腐葉土と米糠を９：１でよく混合し、そこに純水を加え含水率が６０％になるように調整し、さらに湿度維持のため純水を十分吸水したＰＶＡ系高吸水ポリマーを保水材として全体の１０％になるように量を調整し、よく混合してソフトタイプの堆肥培地とした。ｐＨは４．０程度であった。
クリーンベンチ内で１ｃｍ２程に切り取った種菌を堆肥培地に植菌した。２７℃のインキュベーター内で堆肥培地全体に菌糸体が蔓延するまで培養した。菌糸体は２２日経過後特殊フィルター付きポリ袋タイプ培養容器全体に白く菌糸体が蔓延したため、菌糸体を２〜５ｍｍの厚さに十分純水を吸水したＰＶＡ系高吸水ポリマーの被覆材で覆った。この状態で栽培温度を２１℃に落とし、湿度９０％、照度５００ルクスの環境で１０日経過後に菌糸体表面に微細な毛玉状のヤコウタケの原基が多数形成された。ヤコウタケの原基をそのままの環境で１１日目にヤコウタケの子実体１０個が発生した。発生したヤコウタケは天然のヤコウタケと同一の形状を有しており、開傘に伴い３日間、美しい緑色の発光が観察された。発光の最大波長は約５２０ｎｍ、ヤコウタケの傘１個の発する光の照度は０．２ルクス程度であった。
【０００７】  第２例
第１例と同じ堆肥培地を枯れた竹の筒に詰め込み、クリーンベンチ内で１ｃｍ２程に切り取った種菌を堆肥培地に植菌した。２７℃のインキュベーター内で堆肥培地全体に菌糸体が蔓延するまで培養した。菌糸体は２０日経過後竹筒培養容器全体に白く菌糸体が蔓延したため、十分純水を吸水した水苔の上に竹筒培養容器を置き、この状態で栽培温度を２１℃に落とし、湿度９０％、照度５００ルクスの環境で１４日経過後に菌糸体表面に微細な毛玉状のヤコウタケの原基が多数形成された。ヤコウタケの原基をそのままの環境で１２日目にヤコウタケの子実体２４個が発生した。
【発明の効果】
【０００８】  以上のように本発明の栽培方法によれば、天然のものとほぼ同一の発光きのこを短期間で季節に関わらず大量に、安価に入手でき、観賞用きのこや、生物発光系リポーターとしての可能性試験に材料として提供できる。