(57)【要約】【課題】（−）−ビボ−クエルシトールを簡便な操作で大量かつ選択的に製造する。【解決手段】エンテロバクター属に属する微生物であって、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する能力を有する微生物にミオ−イノシトールを作用させて、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エンテロバクター属に属する微生物であって、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する能力を有する微生物にミオ−イノシトールを作用させて、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換することを特徴とする、（−）−ビボ−クエルシトールの製造方法。
【請求項２】
ミオ−イノシトールを含有する液体培地中で前記微生物を培養して、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換し、得られた（−）−ビボ−クエルシトールを液体培地中に蓄積させて、該液体培地から（−）−ビボ−クエルシトールを採取することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記微生物を培養することにより得られた菌体またはその破砕物を、ミオ−イノシトールを含む溶液中でミオ−イノシトールに作用させることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記微生物がエンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３１９）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する能力を有する、エンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３１９）またはその変異株。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医農薬品の製造原料として有用な（−）−ビボ−クエルシトールの新規な製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
クエルシトールは狭義には（＋）−プロト−クエルシトールを指すが、広義にはシクロヘキサンペントールの総称であって、理論的には４種類のメソ体と６対の光学異性体からなる計１６種類の異性体が存在しうる。そのうち次の３種類、すなわちドングリなど広く植物界に存在する（＋）−プロト−クエルシトール、ユーカリの葉に存在する（−）−プロト−クエルシトール、及びガガイモ科の葉から単離された（−）−ビボ−クエルシトールが植物界から見出されている。その他では１０種類の光学活性体と４種のラセミ体が化学的に合成されている。
【０００３】
上記の広義のクエルシトール、すなわちシクロヘキサンペントール類の薬理作用としては、肺結核患者の心臓障害改善（例えば、非特許文献１参照）あるいは抗結核剤の心毒作用の改善（例えば、非特許文献２参照）などが報告されている。また、水酸遊離基補足作用を有する（例えば、非特許文献３参照）との報告もある。
【０００４】
クエルシトールの中でもビボ−クエルシトールは、各種の医農薬の合成用中間体として有用性が期待されるデオキシイノサミンあるいはデオキシイノサミジンの合成原料として知られており（例えば、非特許文献４、非特許文献５参照。）、また光学活性体の（−）−ビボ−クエルシトールはそれ自体が血糖値低下効果を有することも知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００５】
（−）−ビボ−クエルシトールを得る方法としては、次の２つの方法が知られている。第１にはガガイモ科等の植物の葉に微量に含まれている（−）−ビボ−クエルシトールを抽出し精製する方法（例えば、非特許文献６参照。）が知られている。第２にはミオ−イノシトールにアグロバクテリウム属またはサルモネラ属に属する微生物を作用させて、前記ミオ−イノシトールをクエルシトール（（＋）−プロト−クエルシトール、（−）−ビボ−クエルシトール、及び（＋）−エピ−クエルシトールからなる群から選ばれるもの）へ変換させる方法が知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００６】
しかし、上記第１の植物から（−）−ビボ−クエルシトールを抽出する方法は、植物体中における含有量が少ないため、抽出と精製が困難であり、収率も低かった。具体的には、ガガイモ科植物の葉１ｋｇからメタノール抽出、クロロホルム抽出、カラムクロマトグラフィー及び高速液体クロマトグラフィーを経て、２２ｍｇの（−）−ビボ−クエルシトールが得られたに過ぎなかった。
【０００７】
また、上記第２の方法は、副生成物として（＋）−プロト−クエルシトール及び（＋）−エピ−クエルシトールが生産されるため、（−）−ビボ−クエルシトールのみを得るためには精製操作が必要であり、また（−）−ビボ−クエルシトールの収量の面においても改善の余地があった。
【０００８】
一方で、（−）−ビボ−クエルシトールの光学異性体である（＋）−ビボ−クエルシトールの合成法として、Ｌ−ミオ−イノソースを出発原料とする方法（例えば、非特許文献７参照。）が知られている。しかし、かかる方法では、光学異性体の（＋）−ビボ−クエルシトールが得られるものの、（＋）体を（−）体に変換する方法は知られていない。また、ラセミ体である（±）−ビボ−クエルシトールについては、ミオ−イノシトールを出発原料として合成する方法が知られている（例えば、非特許文献８参照。）。かかる方法では、ラセミ体が得られるが、このラセミ体を光学活性体に変える方法及びラセミ体を光学分割する方法は知られていない。
【０００９】
【特許文献１】
特開平１１−１２２１０号公報
【非特許文献１】
「プロブレミー・ツベルクレザ（Ｐｒｏｂｌｅｍｙ  Ｔｕｂｅｒｋｕｌｅｚａ）」，（ロシア），  １９８６年，  第６４巻，第１２号，  ｐ．３５−３８
【非特許文献２】
「パトロジチェスカヤ・フィジオロジヤ・イ・エクスペリメンタルナヤ・テラピヤ（Ｐａｔｏｌｏｇｉｃｈｅｓｋａｙａ  Ｆｉｚｉｏｌｏｇｉｙａ  ｉ  Ｅｋｓｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｎａｙａ  Ｔｅｒａｐｉｙａ）」，（ロシア），  １９８６年，  第３０巻，  第２号，  ｐ．６８−７１
【非特許文献３】
「プロシーディング・オブ・ザ・ロイヤル・ソサエティー・オブ・エジンバラ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ）」，（英国），  １９９４年，  第１０２Ｂ巻，  ｐ．２６９−２７２
【非特許文献４】
「ブレティン・オブ・ザ・ケミカル・ソサエティー・オブ・ジャパン（Ｂｕｌｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ）」，  １９６６年，  第３９巻，  ｐ．１９３１
【非特許文献５】
「ブレティン・オブ・ザ・ケミカル・ソサエティー・オブ・ジャパン（Ｂｕｌｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ）」，  １９７１年，  第４４巻，  ｐ．２８０４−２８０７
【非特許文献６】
「フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」，（英国），  １９９８年，  第４７巻，  ｐ．１２９７−１３０１
【非特許文献７】
「ヘルヴェティカ・チミカ・アクタ（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ）」，（スイス），  １９５０年，  第３３巻，  ｐ．１５９４
【非特許文献８】
「ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）」，（米国），  １９５３年，  第７５巻，  ｐ．４０２Ｏ−４０２６
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、それ自体が医薬品として有用であり、また医農薬品の製造原料としても有用な（−）−ビボ−クエルシトールを簡単な操作で大量かつ選択的に製造することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記目的を達成するため鋭意検討を行った。その結果、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換することのできる微生物を土壌から多数分離し、その中でも特に変換能の高い微生物を選抜し、その微生物を用いて（−）−ビボ−クエルシトールを効率よく製造する方法を確立することに成功して、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）  エンテロバクター属に属する微生物であって、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する能力を有する微生物にミオ−イノシトールを作用させて、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換することを特徴とする、（−）−ビボ−クエルシトールの製造方法。
（２）  ミオ−イノシトールを含有する液体培地中で前記微生物を培養して、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換し、得られた（−）−ビボ−クエルシトールを液体培地中に蓄積させて、該液体培地から（−）−ビボ−クエルシトールを採取することを特徴とする、（１）の方法。
（３）  前記微生物を培養することにより得られた菌体またはその破砕物を、ミオ−イノシトールを含む溶液中でミオ−イノシトールに作用させることを特徴とする、（１）の方法。
（４）  前記微生物がエンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３１９）である、（１）〜（３）のいずれかの方法。
（５）  ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する能力を有する、エンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３１９）またはその変異株。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明の実施の形態を説明する。
【００１４】
本発明の（−）−ビボ−クエルシトールの製造方法は、エンテロバクター属に属する微生物であって、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する能力を有する微生物にミオ−イノシトールを作用させて、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換することを特徴とする製造方法である。
【００１５】
本製造方法によって得られる生成物は、（−）−ビボ−クエルシトールが１００％である必要はないが、全生成物中の（−）−ビボ−クエルシトールの割合が７０％以上であることが好ましく、８０％以上であることがより好ましい。
【００１６】
製造原料であるミオ−イノシトールは、動植物および微生物に広く分布しているもので、特に、穀物中に六燐酸エステルのＣａ、Ｍｇ塩であるフィチン酸として多量に存在している。したがって、例えば、公知の方法（ジャパンフードサイエンス、１９８５年、第２４巻、第３号、ｐ．７３−８０）により米糠等をアルカリ加水分解し、精製することによって得ることができる。
【００１７】
本発明において使用する微生物は、エンテロバクター属に属する微生物であって、該微生物をミオ−イノシトールを含有する液体培地中で培養した場合に、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換することができ、培養後に、全生成クエルシトール量に対して７０％以上、好ましくは８０％以上の量の（−）−ビボ−クエルシトールを含む培養液を提供できる菌株であればいずれの菌株でもよい。微生物は菌体そのものを用いてもよいし、菌体の破砕物を用いてもよい。
【００１８】
ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換することのできるエンテロバクター属に属する微生物は多種存在するが、例えば、本発明者らによって同定された、以下のエンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９３１９）は、本発明において好適に用いることのできる菌株の例である。
【００１９】
尚、菌株の同定の当たっては、新細菌培地学講座（第２版、近代出版）、医学細菌同定の手引き（第２版、近代出版）、細菌学実習提要（丸善）に準じて実験を行い、そして得られた実験結果を「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ」第１巻（１９８４年）を参考に判断して、細菌の同定を行った。
【００２０】
ＡＢ１０１１４株の菌学的性質は以下の通り。
【００２１】
Ａ．形態的特徴
2005000070.tif 000002
【００２２】
Ｂ．生理生化学的性状
2005000070.tif 000003
【００２３】
（２４）各種糖から酸の生成：
Ｄ−グルコース              ＋
Ｄ−キシロース              ＋
Ｌ−アラビノース            ＋
ソルボース                  −
Ｌ−ラムノース              ＋
マンニトール                ＋
シュークロース              −
アドニトール                ＋
ズルシトール                ＋
ミオ−イノシトール          ＋
ソルビトール                ＋
トレハロース                ＋
Ｄ−セロビオース            ＋
マルトース                  ＋
グリセロール                −
ラクトース                  ＋
リボース                    ＋
ラフィノース                −
サリシン                    ＋
メリビオース                ＋
α−メチル−グルコース      ＋
【００２４】
（２５）炭素源の資化性
Ｄ−グルコース              ＋
Ｄ−マンノース              ＋
Ｄ−ガラクトース            ＋
Ｄ−フルクトース            ＋
Ｌ−アラビノース            ＋
Ｄ−キシロース              ＋
グリセロール                ＋
エリスリトール              −
Ｄ−アラビトール            ＋
アドニトール                ＋
Ｄ−マンニトール            ＋
Ｄ−ソルビトール            ＋
ミオ‐イノシトール          ＋
Ｌ−ラムノース              ＋
トレハロース                ＋
Ｄ−セロビオース            ＋
シュークロース              −
ラフィノース                ＋
ラクトース                  ＋
プロピレングリコール        −
Ｄ−リボース                ＋
Ｌ−アラニン                ＋
Ｌ−ヒスチジン              −
Ｌ−バリン                  −
Ｌ−アルギニン              −
Ｌ−セリン                  −
（２６）ユビキノンの分子種：ユビキノン８（Ｑ８）
（２７）ＤＮＡのＧＣ含量：          ５５％
【００２５】
以上の通り、ＡＢ１０１１４株の主性状は、グラム陰性の運動性短桿菌で、大きさは０．５〜０．８×０．７〜４．０μｍである。嫌気条件下でも生育し、発酵的に糖から酸を産生し、オキシダーゼ陰性、カタラーゼ陽性という性質からＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科に属する細菌と判断される。さらに硫化水素を産生せず、アミノ酸デカルボキシラーゼが陰性という性質から、本細菌はエンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属に属する一菌株であると判断される。
【００２６】
「Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ」第１巻（１９８４年）４６５頁〜４６９頁によると、エンテロバクター属はエンテロバクター・クロアカエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ）、エンテロバクター・サカザキイ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓａｋａｚａｋｉｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エンテロバクター・ゲーゴビアエ（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｇｅｒｇｏｖｉａｅ）、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）の５つの種（ｓｐｅｃｉｅｓ）から構成されている。ＡＢ１０１１４株の菌学的性状を上記の既知の種と比較検討すると、ＡＢ１０１１４株はエンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）に最も近縁の種とであると考えられる。しかし、糖から酸の生成試験において、アドニトール及びミオーイノシトールから酸を生成する点など、本菌株の有するいくつかの菌学的性質において、エンテロバクター・アグロメランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）の性状とは一致しないので、公知のものと区別するために、本ＡＢ１０１１４株は、エンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株と命名され、産業技術総合研究所特許生物寄託センターにＦＥＲＭ  Ｐ−１９３１９として寄託されている（寄託日は平成１５年４月１８日）。
【００２７】
尚、本発明においては、ミオ−イノシトールを（−）−ビボ−クエルシトールに変換する能力を有する限り、エンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株の変異株も好適に用いることができる。変異株は、例えば、エンテロバクター・エスピーＡＢ１０１１４株を紫外線照射、または、ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）、エチルメタンスルフォネート（ＥＭＳ）、メチルメタンスルフォネート（ＭＭＳ）等によって処理することによって得ることができる。
【００２８】
本発明の製造方法おけるミオ−イノシトールの（−）−ビボ−クエルシトールへの変換は、例えば、以下で述べるように、ミオ−イノシトールを含有する液体培地中で前記微生物を培養することによって行うことができる。培養によって生成し、液体培地中に蓄積した（−）−ビボ−クエルシトールを、該液体培地から採取することにより、（−）−ビボ−クエルシトールを製造することができる。
【００２９】
ここで、用いる液体培地の組成は、目的を達することができる限り何等特別の制限はなく、合成培地・天然培地のいずれであってもよいが、炭素源、窒素源、有機栄養源、無機塩類等を含有する培地が好ましい。液体培地には炭素源として、原料のミオ−イノシトールを０．１〜２０％、好ましくは５〜２０％添加し、窒素源としては、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、あるいは尿素等を０．０１％〜１．０％、好ましくは０．０５〜０．５％添加するのが望ましい。また、有機栄養源として、酵母エキス、ペプトン、カザミノ酸を適量（０．００５〜１．０％）添加すると、菌株によっては有効な場合がある。
【００３０】
その他必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コバルト、マンガン、亜鉛、鉄、銅、モリブデン、リン酸、硫酸等のイオンを生成することができる無機塩類を培地中に添加することが有効である。培養液の水素イオン濃度は特に調整せずとも培養できる場合が多いが、ｐＨ６〜１０、好ましくはｐＨ７〜９に調整して培養すると、効率よく（−）−ビボ−クエルシトールを得ることができる。
【００３１】
培養条件は、菌株や培地の種類によっても異なるが、培養温度は５〜４０℃、好ましくは２０〜３８℃であり、培養期間は通常１〜７日、好ましくは２〜５日である。また、培養は液体培地を振とうしたり、液体培地中に空気を吹き込むなどして好気的に行うことが好ましい。
【００３２】
培養液から目的物を採取する方法は、通常の水溶性中性物質を単離精製する一般的な方法を応用することができる。例えば、培養液を活性炭やイオン交換樹脂などで処理することにより、クエルシトール異性体以外の不純物のほとんどを除くことができる。その後、再結晶法等の方法を用いることにより、目的物を単離することができる。
【００３３】
本発明において主に用いる再結晶法に関しては、再結晶法に用いる溶媒等の種類によって結晶化の条件は異なるが、例えば、クエルシトールを水に溶解し、低級アルコールを上記０．５〜２倍の量加えることによって、混合溶媒系中で容易に結晶化することができる。具体的には、エタノールを用いて結晶化を行なう場合、温度や不純物の量により多少条件は変化するが、（−）−ビボ−クエルシトールの濃度を２０〜５０％に調製し、該溶液の体積に対し、０．５〜２倍のエタノールを加えればよい。生じた結晶は、ガラスフィルターや濾紙で母液より分離することができる。
【００３４】
本発明の方法によれば、（−）−ビボ−クエルシトール以外のクエルシトールの量は非常に少なく、再結晶法により簡単にのぞくことができるが、設備等の事情により、イオン交換樹脂のカラムクロマトグラフィーを用いる方法などを用いてもよい。この場合、例えば、カーボハイドレイト  リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第１６６巻、第１７１頁〜第１８０頁（１９８７年）や、ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサエティー（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）、第７３巻、第２３９９頁〜第２３４０頁（１９５１）に記載されている手法、すなわちホウ酸型強塩基性イオン交換樹脂カラムを調製し、ホウ酸の濃度を徐々に高めて流すことにより、クエルシトール異性体の各成分を分離する方法を応用することが有効である。このカラムを用いて、（＋）−プロト−クエルシトール、（−）−ビボ−クエルシトール、及び（＋）−エピ−クエルシトールなどのクエルシトール立体異性体の混合物をカラムに供すると、（＋）−プロト−クエルシトール及び（−）−ビボ−クエルシトールは樹脂に保持されることなくカラムを素通りし、（＋）−エピ−クエルシトールは、０．５Ｍ程度のホウ酸溶液を流すことにより溶出する。
【００３５】
また、強塩基性陰イオン交換樹脂（ＯＨ−型）のカラムクロマトグラフィーもクエルシトール分離に有効である。例えば、（＋）−プロト−クエルシトール及び（−）−ビボ−クエルシトールの混合溶液を本カラムに供し、イオン交換水を流すと、まず、（−）−ビボ−クエルシトールが溶出し、次いで、（＋）−プロト−クエルシトールが溶出する。このようにしてカラムクロマトグラフィーで得られる溶出液を任意に分画し、カラムクロマトグラフィーを幾度か繰り返すか、または組み合わせることにより、純粋な（−）−ビボ−クエルシトール溶液を得ることができる。この（−）−ビボ−クエルシトール溶液から、上述のように再結晶させることにより、純粋な（−）−ビボ−クエルシトール結晶を得ることができる。
【００３６】
生成するクエルシトール立体異性体の量および存在比は、菌の種類や培養日数により異なるが、上述した分離方法を単独あるいは組み合わせて、必要に応じて繰り返し用いることにより、培養液または反応液からクエルシトール立体異性体を適宜純粋な物質として単離することができる。
【００３７】
本発明の製造方法におけるミオ−イノシトールの（−）−ビボ−クエルシトールへの変換はまた、前記微生物を培養することにより得られた菌体またはその破砕物を、ミオ−イノシトールを含む溶液中でミオ−イノシトールに作用させることによっても行うことができる。かかる反応により生成し、溶液中に蓄積した（−）−ビボ−クエルシトールを該溶液から採取することにより、（−）−ビボ−クエルシトールを製造することができる。
【００３８】
ここで、菌体としては、（−）−ビボ−クエルシトールの製造に用いられた微生物を培養液から分離して集めた菌体を再度用いてもよく、また、前記微生物を別途適当な培養条件で培養して得たものを用いてもよい。集菌は、培養液から遠心分離、濾過など公知の方法により行えばよい。破砕物としては、培養によって得られた菌体を緩衝液中で超音波破砕等により破砕したものを使用することができる。
【００３９】
ミオ−イノシトールを含む溶液としては、ミオ−イノシトールを含む液体培地または緩衝液などを挙げることができる。ミオ−イノシトールを含む液体培地としては、前記微生物を培養することによって（−）−ビボ−クエルシトールを製造した際に用いた培地と同様のものを用いてもよく、また別途前記微生物を培養した液体培地にミオ−イノシトールを加えて用いてもよい。ミオ−イノシトールを含む緩衝液としてはリン酸緩衝液、トリス緩衝液、グッド（Ｇｏｏｄ’ｓ）のＣＨＥＳ緩衝液などを１０〜５００ｍＭ、好ましくは２０〜１００ｍＭの濃度で用い、溶液中のミオ−イノシトールの濃度は０．１〜５％程度とするのが好ましい。反応条件は、菌株や培地、緩衝液の種類によって異なるが、反応温度は１５〜６０℃、好ましくは２５〜５５℃であり、反応時間は１〜５０時間、好ましくは３〜４８時間であり、液体培地または緩衝液のｐＨは６〜１０、好ましくは７〜９である。液体培地または緩衝液からの（−）−ビボ−クエルシトールの採取は、前記の培養液からの採取と同様の方法で行うことができる。
【００４０】
【実施例】
以下に本発明の実施例を示してより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。尚、生成物の構造確認はＮＭＲによって行った。また、生成物の純度は、一定濃度の溶液を作成し、高速液体クロマトグラフィーにより分析して、標準品と比較することにより算出した。
【００４１】
【実施例１】（−）−ビボ−クエルシトールの製造例
ミオ−イノシトール  １０．０％（４０００ｇ）、酵母エキス１％、（ＮＨ４）２ＳＯ４  ０．１％、Ｋ２ＨＰＯ４  ０．７％、ＫＨ２ＰＯ４  ０．２％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．０１％を含むｐＨ無調整の液体培地４０Ｌを、ジャーファンメーターでオートクレーブ滅菌した。該ジャーファンメーターにＡＢ１０１１４株を接種し、２７℃で３日間培養した。培養液を連続遠心分離（８０００ｒｐｍ）し、上清を培養上清液とした。
【００４２】
培養上清液を強酸性陽イオン交換樹脂デュオライト（登録商標）Ｃ−２０（Ｈ＋型）（住友化学社製）４Ｌを充填したカラムに通過させ、その後このカラムに１２Ｌのイオン交換水を通過させて洗浄した。この通過液および洗浄液を、強塩基性陰イオン交換樹脂デュオライト（登録商標）Ａ１１６（ＯＨ−型）（住友化学社製）  ８Ｌを充填したカラムに通過させ、その後このカラムに２４Ｌのイオン交換水を通過させて洗浄した。
【００４３】
得られた通過液および水洗浄液中を減圧下で３Ｌまで濃縮し、エタノール３Ｌを加え、（−）−ビボ−クエルシトール粗結晶（１１９０ｇ、純度９８％以上、ペールホワイト）を得た。該粗結晶をイオン交換水２５Ｌに再溶解し、エタノール２．５Ｌを加え、（−）−ビボ−クエルシトール結晶（１０４０ｇ、純度９８％以上、白色）を得た。
【００４４】
【発明の効果】
本発明によれば、医農薬品の製造原料として有用な（−）−ビボ−クエルシトールを、簡便な操作で大量かつ選択的に製造することができる。