(57)【要約】【課題】  バッグ内に収容された核酸プローブを含有する溶液を強制的かつ効果的に流動させることにより、固定されたターゲット核酸と核酸プローブとの接触頻度を高めて検出感度を向上させ、例えば病因となるターゲット核酸が非常に微量であっても検出可能なハイブリダイゼーション促進器具およびハイブリダイゼーション装置ならびにハイブリダイゼーション促進方法を提供する。【解決手段】  ハイブリダイゼーション促進器具７Ａは、支持体２におけるターゲット核酸３の反応面の幅と同等若しくはそれ以上の幅を備えており、かつ、バッグ５表面上を転圧移動可能にバッグ５の長手方向に沿って湾曲面７１ａが形成された揺動体７１と、この揺動体７１を所定の揺動速度で揺動させるために湾曲面７１ａの背面側に設けられた速度制御錘７３とを有している。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ターゲット核酸を固定した支持体とともに核酸プローブを含有する溶液を封入したバッグをハイブリダイゼーション装置に装着し、前記バッグ内のハイブリダイゼーションを促進させる器具であって、
前記支持体におけるターゲット核酸の反応面の幅と同等若しくはそれ以上の幅を備えており、かつ、前記バッグ表面上を転圧移動可能に前記バッグの長手方向に沿って湾曲面が形成された揺動体と、この揺動体を所定の揺動速度で揺動させるために前記湾曲面の背面側に設けられた速度制御錘とを有することを特徴とするハイブリダイゼーション促進器具。
【請求項２】
請求項１において、前記速度制御錘は、前記揺動体の背面側で任意の高さに移動させて固定可能に取り付けられていることを特徴とするハイブリダイゼーション促進器具。
【請求項３】
請求項１において、前記速度制御錘は、前記揺動体の背面側で回動軸を中心に一定の周期運動を行う偏心振子として構成されていることを特徴とするハイブリダイゼーション促進器具。
【請求項４】
請求項１から請求項３のいずれかにおいて、前記揺動体の湾曲面には、長手方向の略中央位置に幅方向に沿って滑り止め部材が貼付されていることを特徴とするハイブリダイゼーション促進器具。
【請求項５】
支持体に固定されたターゲット核酸と、このターゲット核酸と相補的な核酸プローブにハイブリダイゼーションを行わせるハイブリダイゼーション装置であって、
前記支持体とともに前記核酸プローブを含有する溶液を封入したバッグを載置する載置板と、前記支持体におけるターゲット核酸の反応面の幅と同等若しくはそれ以上の幅を備えており、かつ、前記バッグ表面上を転動可能に前記バッグの長手方向に沿って湾曲面が形成された揺動体と、この揺動体を所定の揺動速度で揺動させるために前記湾曲面の背面側に設けられた速度制御錘と、前記載置板または前記揺動体を揺動させる揺動駆動部とを有しており、前記バッグ表面上で前記揺動体を転圧往復動させて前記バッグ内の溶液を流動させることを特徴とするハイブリダイゼーション装置。
【請求項６】
請求項５において、前記速度制御錘は、前記湾曲体の背面側で任意の高さに移動させて固定可能に取り付けられていることを特徴とするハイブリダイゼーション装置。
【請求項７】
ターゲット核酸を固定した支持体とともに核酸プローブを含有する溶液を封入したバッグ内のハイブリダイゼーションを促進させる方法であって、
載置板に載置したバッグの表面に前記支持体におけるターゲット核酸の反応面の幅と同等若しくはそれ以上の長さで線状または面状に接触して所定の圧力を付与し、この圧力を付与する接触部または前記バッグを長手方向に沿って往復移動させることにより前記バッグ内の溶液を流動させて前記ターゲット核酸と核酸プローブとの反応を促進させることを特徴とするハイブリダイゼーション促進方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＤＮＡやＲＮＡ等のターゲット核酸と、このターゲット核酸と相補的な核酸プローブにハイブリダイゼーションを行わせるハイブリダイゼーション促進器具およびハイブリダイゼーション装置ならびにハイブリダイゼーション促進方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来より、生物学や医学および農学等の様々な分野において、遺伝子の発現情報を解析する手段としてＤＮＡやＲＮＡのハイブリダイゼーションが行われている。このハイブリダイゼーションは、例えば、ターゲットとするＤＮＡ等を固定したマイクロアレイやメンブレンシート等の支持体を標識プローブを含有する反応液とともに容器に収容して反応させるようになっている。
【０００３】
上記ハイブリダイゼーションを行う装置として、例えば、特開平６−１０６０７８号公報に記載のハイブリダイゼーションオーブンは、偏心止孔付きの回転円板と、この回転円板に着脱されて容器を振とうさせるアタッチメントを備えている。そして、これらアタッチメントを切り換えることにより、バッグ式容器に対してはシーソー振とうやレシプロ振とうさせてハイブリダイゼーションを行い、あるいはボトル式容器に対してはローター振とうさせてハイブリダイゼーションを行わせるようになっている。（特許文献１）。
【０００４】
【特許文献１】特開平６−１０６０７８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら容器としてボトルを用いる場合、標識プローブの量がバッグ式に比べて大量に必要となるためコストが嵩んでしまう。また、支持体としてメンブレンシートを用いた場合、ボトル内に筒状に丸めて収容するためカール状のクセがついてしまい、反応シグナルの確認の際に不都合が生じる。さらに、ボトルが大きな空間を占めるために一度に実験可能な本数が少ないという欠点もある。
【０００６】
一方、バッグを使用すれば標識プローブを含む反応液が少量で済むため、高価な標識プローブや作成が困難な標識プローブを使用する場合に適している。しかし、単純に振とうさせているだけではバッグ内の反応液がほとんど流動せず、ターゲット核酸と標識プローブとの接触機会が少ないため検出感度が悪いという問題がある。特に、病因となるターゲット核酸が貴重であったり、入手が困難である等の理由で量（濃度）が少ないケースは多く存在するが、従来の技術では反応機会が少ないため検知できない可能性が高い。
【０００７】
本発明は、このような問題点を解決するためになされたものであって、バッグ内に収容された核酸プローブを含有する溶液を強制的かつ効果的に流動させることにより、固定されたターゲット核酸と核酸プローブとの接触頻度を高めて検出感度を向上させ、例えば病因となるターゲット核酸が非常に微量であっても検出可能なハイブリダイゼーション促進器具およびハイブリダイゼーション装置ならびにハイブリダイゼーション促進方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明に係るハイブリダイゼーション促進器具の特徴は、ターゲット核酸を固定した支持体とともに核酸プローブを含有する溶液を封入したバッグをハイブリダイゼーション装置に装着し、前記バッグ内のハイブリダイゼーションを促進させる器具であって、前記支持体におけるターゲット核酸の反応面の幅と同等若しくはそれ以上の幅を備えており、かつ、前記バッグ表面上を転圧移動可能に前記バッグの長手方向に沿って湾曲面が形成された揺動体と、この揺動体を所定の揺動速度で揺動させるために前記湾曲面の背面側に設けられた速度制御錘とを有する点にある。
【０００９】
また、本発明において、前記速度制御錘は、前記揺動体の背面側で任意の高さに移動させて固定可能に取り付けられていることが好ましい。
【００１０】
また、本発明において、前記速度制御錘は、前記揺動体の背面側で回動軸を中心に一定の周期運動を行う偏心振子として構成されていてもよい。
【００１１】
さらに、本発明において、前記湾曲体の湾曲面には、記揺動体の湾曲面には、長手方向の略中央位置に幅方向に沿って滑り止め部材が貼付されていることが好ましい。
【００１２】
また、本発明に係るハイブリダイゼーション装置の特徴は、支持体に固定されたターゲット核酸と、このターゲット核酸と相補的な核酸プローブにハイブリダイゼーションを行わせるハイブリダイゼーション装置であって、前記支持体とともに前記核酸プローブを含有する溶液を封入したバッグを載置する載置板と、前記支持体におけるターゲット核酸の反応面の幅と同等若しくはそれ以上の幅を備えており、かつ、前記バッグ表面上を転動可能に前記バッグの長手方向に沿って湾曲面が形成された揺動体と、この揺動体を所定の揺動速度で揺動させるために前記湾曲面の背面側に設けられた速度制御錘と、前記載置板または前記揺動体を揺動させる揺動駆動部とを有しており、前記バッグ表面上で前記揺動体を転圧往復動させて前記バッグ内の溶液を流動させる点にある。
【００１３】
また、本発明において、前記速度制御錘は、前記湾曲体の背面側で任意の高さに移動させて固定可能に取り付けられていることが好ましい。
【００１４】
また、本発明に係るハイブリダイゼーション促進方法の特徴は、ターゲット核酸を固定した支持体とともに核酸プローブを含有する溶液を封入したバッグ内のハイブリダイゼーションを促進させる方法であって、載置板に載置したバッグの表面に前記支持体におけるターゲット核酸の反応面の幅と同等若しくはそれ以上の長さで線状または面状に接触して所定の圧力を付与し、この圧力を付与する接触部または前記バッグを長手方向に沿って往復移動させることにより前記バッグ内の溶液を流動させて前記ターゲット核酸と核酸プローブとの反応を促進させる点にある。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、バッグ内に収容された核酸プローブを含有する溶液を単に揺らして流動化させるのではなく、積極的かつ効果的に流動させてターゲット核酸と核酸プローブとの接触頻度を高めて検出感度を向上させ、微量なターゲット核酸であっても高感度で検出することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明に係るハイブリダイゼーション促進器具およびこれを用いたハイブリダイゼーション装置ならびにハイブリダイゼーション促進方法の実施形態について図面を参照しつつ説明する。
【００１７】
『第１実施形態』
図１は、本発明に係るハイブリダイゼーション装置１の第１実施形態の主要構成部を示す図である。このハイブリダイゼーション装置１は、図２に示すように、ナイロン膜やスライドガラス等から構成される支持体２に固定されたターゲット核酸３と核酸プローブ４を含有した溶液とを封入したバッグ５内でハイブリダイゼーションを行う装置であり、前記バッグ５を載せて揺動可能に支持された揺動載置板６と、前記バッグ５の表面を転圧しながら揺動するハイブリダイゼーション促進器具７Ａとを備えている。また、本第１実施形態では、揺動力を発生する揺動駆動部８が揺動載置板６に連結されている。
【００１８】
前記揺動載置板６は、長手方向の中央位置を回動自在に支持され、いずれか一方の端部下方に揺動駆動部８のリンクアーム８１が回転自在に連結されており、シーソーのように上下に揺動するようになっている。このリンクアーム８１の端部は、駆動モータ（図示せず）の回転軸８２に固定された円盤８３の偏心位置に回転可能に連結されおり、前記駆動モータの回転力が前記揺動載置板６に揺動力として変換されて伝達される。
【００１９】
また、ハイブリダイゼーション促進器具７Ａは、バッグ５の表面上で転圧移動することによって前記バッグ５内の溶液を強制的に流動させるものである。ハイブリダイゼーション促進器具７Ａは、長手方向に沿って湾曲面７１ａが形成された揺動体７１と、この揺動体７１の湾曲面７１ａの背面側に延設された錘支持棒７２と、この錘支持棒７２の軸線方向に高さ位置を変更可能に取り付けられた速度制御錘７３とを有している。この速度制御錘７３は、揺動体７１の揺動速度を設定するものである。
【００２０】
揺動体７１は、規則的な揺動動作を繰り返すようにするため重心を中心として左右対称に形成されている。また、湾曲面７１ａの形状は、バッグ５表面で転圧しながら揺動できる曲線であれば多少歪曲していたり、波状に形成されていてもよいが、円滑な揺動動作を繰り返すこと、バッグ５内の溶液に適度な圧力を付与すること等を考慮すると、曲率の小さい円弧状に形成されることが好ましい。揺動体７１は、転圧移動によってバッグ５内の溶液を積極的かつ効果的に流動させるものであるから、その揺動体７１の湾曲面７１ａの大きさは、支持体２におけるターゲット核酸３の反応面Ｒをカバーし得るよう、反応面Ｒの幅および長さと同等若しくはそれ以上の幅および長さを備えていることが好ましい。
【００２１】
ここでいう反応面Ｒとは、図３の点線で示すように、支持体２上で縦横に整列固定された複数のターゲット核酸３のスポットＳをカバーする範囲面のことである。もし湾曲面７１ａが反応面Ｒより小さければ、反応させたいターゲット核酸３上において溶液が充分に流動しないおそれがある。そこで、より積極的かつ効果的に溶液を流動させることを考えれば、揺動体７１によってバッグ５内に封入されている溶液の領域全体がカバーされる方がより好ましく、湾曲面７１ａの幅および長さが溶液領域幅および長さと同等かそれ以上に形成されるとよい。
【００２２】
また、湾曲面７１ａの長手方向の略中央位置には、図４に示すように、幅方向に沿ってゴムシート等から構成される滑り止め部材７４が貼付されている。この滑り止め部材７４は、揺動体７１が揺動を繰り返すことによってバッグ５の表面上を滑って長手方向に位置がずれてしまうのを防止するためのものであるから、湾曲面７１ａの幅方向に沿って直線状あるいは波線状に配置されるのが好ましい。
【００２３】
錘支持棒７２は、金属棒等によって直線状に構成され、図１に示すように、湾曲面７１ａの背面側から鉛直方向上方に延出されている。また、速度制御錘７３は円盤状に形成されており、固定ネジ７５によって錘支持棒７２の任意の高さ位置で固定される。この高さは、揺動体７１が揺動する揺動速度を調整するものであるから、揺動載置板６の揺動周期に合わせて設定される。また、速度制御錘７３の高さは、揺動体７１の振幅も規制するので、湾曲面７１ａの端部がバッグ５の端部における溶液領域にまで圧接し得るように設定される。
【００２４】
なお、揺動体７１の湾曲面７１ａおよび揺動載置板６の載置面の少なくとも一方に、電熱線等から構成されるシート状ヒータを取り付けてもよい。このシート状ヒータは温度を検出する温度センサおよびこの温度センサの検出結果に基づいてシート状ヒータの温度を制御する温度制御部を備え、バッグ５内を適宜加熱して適当なハイブリダイゼーションの環境を整えることが可能である。
【００２５】
つぎに、本第１実施形態のハイブリダイゼーション装置１による作用を説明する。
【００２６】
まず、予めハイブリダイゼーション促進器具７Ａの速度制御錘７３の高さ位置を揺動載置板６の揺動周期およびバッグ５内の溶液範囲に合わせて適宜調整し設定しておく。そして、バッグ５を揺動載置板６上に載せ、このバッグ５の表面上にハイブリダイゼーション促進器具７Ａを載せる。このとき揺動体７１は湾曲面７１ａの中央部分をバッグ５表面に接触させて静止している。そして、揺動駆動部８の駆動モータを回転させて円盤８３、リンクアーム８１を介して揺動載置板６を上下方向に揺動させると、この揺動動作に従ってハイブリダイゼーション促進器具７Ａがバッグ５の長手方向（図１の左右方向）に沿って振子運動のごとく規則的に揺動する。このとき、揺動体７１はバッグ５表面上を転圧移動するため、バッグ５内の溶液には自重による圧力が付与され、この圧力付与面が長手方向に移動することで前記溶液が強制的に流動されて撹拌されるような現象が生じる。したがって、溶液中の核酸プローブ４は同じ場所に滞留せずに支持体２上を不規則的に流動するため、ターゲット核酸３との接触機会が格段に増え、相補的関係にある核酸同士の結合頻度が高められる。このことは、仮にターゲット核酸３あるいは核酸プローブ４が微量であったとしても、接触機会が増えることによって検出確率が高まることを示している。
【００２７】
また、揺動体７１は、揺動載置板６の上下動作を受けて揺動するため長手方向に移動しやすいが、湾曲面７１ａ中央の滑り止め部材７４によって位置ずれが防止されているため、溶液に対して隅々まで継続的に流動作用を及ぼすことができる。
【００２８】
したがって、本第１実施形態によれば、小さなバッグ５内に密封された核酸プローブ４を含有する溶液を積極的かつ効果的に流動させることにより、ターゲット核酸３と核酸プローブ４との接触頻度を高めて検出感度を向上させ、微量なターゲット核酸３であっても高感度で検出することができる。
【００２９】
また、ハイブリダイゼーション装置１によって揺動載置板６の揺動速度や周期が異なっていたり、あるいはバッグ５の大きさが異なっていたとしても、速度制御錘７３の高さを変更するだけで適当な揺動速度や振幅に簡単に変更することができるので、様々なハイブリダイゼーション装置１に適用できるし、マイクロアレイやメンブレムシート等から構成されるバッグ５に使用でき、柔軟に適用可能である。
【００３０】
『第２実施形態』
つぎに、本発明の第２実施形態について図面を参照しつつ説明する。なお、本第２実施形態の構成のうち、上述した第１実施形態の構成と同一若しくは相当する構成については同一の符号を付して再度の説明を省略する。
【００３１】
図５は、本発明に係るハイブリダイゼーション促進器具７Ｂの第２実施形態を示す正面図であり、図６はその平面図である。このハイブリダイゼーション促進器具７Ｂの特徴は、速度制御錘７３が偏心振子７６として構成されており、この偏心振子７６を回転駆動させることで独立して揺動可能となっている点にある。したがって、本第２実施形態では、バッグ５を載置する載置板９を揺動させる必要がない。
【００３２】
本第２実施形態のハイブリダイゼーション促進器具７Ｂの湾曲面７１ａの背面側には、振子モータ（図示せず）を備えた駆動ユニット７７が配置されており、この駆動ユニット７７の幅方向両側から突出された回転軸７８の両端部に２つの偏心振子７６が取り付けられている。偏心振子７６は、図５に示すように、回転軸７８から離れた外側が大きく形成されており、回転による遠心力を揺動力として揺動体７１に伝達するようになっている。また、振子モータは、正逆方向に回転可能なモータにより構成されている。
【００３３】
つぎに、本第２実施形態のハイブリダイゼーション促進器具７Ｂによる作用を説明する。
【００３４】
まず、バッグ５を載置板９上に載せ、このバッグ５の表面上にハイブリダイゼーション促進器具７Ｂを載せる。つづいて、振子モータを一定の周期で正逆回転させて偏心振子７６を左右方向に交互に回転させると、この回転動作に伴って遠心力が発生する。この発生した遠心力によりハイブリダイゼーション促進器具７Ｂがバッグ５の長手方向（図５の左右方向）に沿って振子運動のごとく規則的に揺動する。これにより、第１実施形態と同様、揺動体７１はバッグ５表面上を転圧移動するため、バッグ５内の溶液は強制的かつ効果的に流動されて撹拌される。
【００３５】
したがって、本第２実施形態によれば、小さなバッグ５内に密封された核酸プローブ４を含有する溶液を積極的かつ効果的に流動させることにより、ターゲット核酸３と核酸プローブ４との接触頻度を高めて検出感度を向上させ、微量なターゲット核酸３であっても高感度で検出することができる。
【００３６】
また、ハイブリダイゼーション促進器具７Ｂが独立して揺動するので、別途、揺動駆動するための装置を必要とせず、実験条件さえ整っていれば、バッグ５上に載置するだけで簡単にハイブリダイゼーションを促進させることができる。
【００３７】
次に、前述した第１実施形態におけるハイブリダイゼーション促進器具７Ａおよびこれを用いたハイブリダイゼーション装置１ならびにハイブリダイゼーション促進方法の作用・効果を実施例により説明する。
【実施例１】
【００３８】
実施例１では、支持体２としてマイクロアレイ２１を用いてハイブリダイゼーションを行った。
【００３９】
本実施例１の実験条件を説明する。本実施例１では、図７に示すように、４×４個のスポットＳからなるスポット群が縦方向に２段、横方向に６列の計１２群形成されたマイクロアレイ２１を使用しており、各スポットＳにターゲット核酸３を固定している。各スポット群には、縦方向の列ごとに感度の異なる４種類のターゲット核酸３が固定されており、本実施例では、左側からｂ−ａｃｔｉｎ（ベータアクチン）、ＧＡＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：グリセルアルデヒドリン酸脱水素酵素）、ａｌｐｈａ−ｔｕｂｕｌｉｎ（アルファチューブリン）、およびＰｘＦ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＰｘＦ  タンパク質）を使用している。また、各スポット群に使用したターゲット核酸溶液は、左側からそれぞれ２０ｎｇ／μｌ、４ｎｇ／μｌ、２ｎｇ／μｌ、０．４ｎｇ／μｌ、０．２ｎｇ／μｌ、および０．０４ｎｇ／μｌの濃度に調製されている。一方、核酸プローブ４としてはＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ：核酸増幅法）を２５サイクルさせ、東洋紡績株式会社のプロトコールに従ってＢｉｏｔｉｎラベルしたものを２５μｌ使用した。また、スポット群の上段と下段とでは、異なる溶液を使用しており、上段にはＴＥバッファ、下段にはＤＤＷ（蒸留水）を使用している。
【００４０】
このような実験処理系に対し、バッグ５内温度を６８℃に保持しつつ本第１実施形態のハイブリダイゼーション促進器具７Ａおよびハイブリダイゼーション装置１により１２時間かけてハイブリダイゼーションを行った。また、ハイブリダイゼーション促進器具７Ａの揺動回数は１分間に４５回に設定した。以上の条件下で実験を行った後、第一化学薬品社の化学発光検出試薬（Ｐｈｏｔｏｔｏｐｅ−Ｓｔａｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ ｆｏｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）を用いて核酸を検出し、ＢＩＯ  ＲＡＤ社の化学発光画像取込装置（Ｆｌｏｕｒ−Ｓ  Ｍａｘ）を用いて撮影を行った。
【００４１】
本実施例１の結果を図７に示す。また、ハイブリダイゼーション促進器具７Ａを使用しない結果を比較例１として図８に示す。図７および図８において、ハイブリダイゼーションによりターゲット核酸と反応した標識プローブが黒色で検出されており、黒色が濃いほどシグナル強度が高いことを示している。これらを比較すると、実施例１でのスポットは比較例１に比べて濃く強いシグナルが検出された。特に、低濃度スポットほどその差が顕著であり、０．２ｎｇ／μｌ以下の低濃度であっても、実施例１では検出シグナルが確認できる。
【００４２】
この結果を明確にするため、実施例１および比較例１における検出シグナルの強度を数値化したものを図９に示す。数値化に際しては、撮影画像上のスポットエリア内の各ピクセルの濃淡を分解し、スポットエリア内で平均した数値を採用した。図９からわかるように、比較例１に対する実施例１のシグナル強度比は総じて１以上となっており、ＤＤＷ溶液を使用した場合のシグナル強度比の平均値は１．４であり、ＴＥバッファを使用した場合のシグナル強度比の平均値は１．６であった。特に、ＤＤＷ溶液における０．０４ｎｇ／μｌのｂ−ａｃｔｉｎおよびＧＡＰＤＨに関しては、約３．１倍ものシグナル強度が検出され、低濃度のターゲット核酸に対する検出感度の向上が確認された。以上の結果より、本第１実施形態のハイブリダイゼーション促進器具７Ａを使用することにより、ハイブリダイゼーションが促進され、検出感度が向上することがわかる。なお、シグナル強度比が１を下回るケースも見受けられるが、これは個々の遺伝子の特性に起因する例外的な現象である。また、シグナル比のうち、「＊」を付した欄は、一方のシグナル値がバックグラウンドの影響でマイナスになってしまったものを示している。
【実施例２】
【００４３】
実施例２では、支持体２としてメンブレンシート２２を用いてハイブリダイゼーションを行った。
【００４４】
本実施例２の実験条件を説明する。本実施例２では、図１０に示すように、４×４個のスポットＳからなるスポット群が縦方向に２段、横方向に６列の計１２群形成されたメンブレンシート２２を使用した。なお、各スポットＳに固定したターゲット核酸３、各スポット群に使用したターゲット核酸溶液の濃度、核酸プローブ４および使用溶液は、上述した実施例１と同様であるため再度の説明を省略する。
【００４５】
このような実験処理系に対し、バッグ５内温度を６８℃に保持しつつ本第１実施形態のハイブリダイゼーション促進器具７Ａおよびハイブリダイゼーション装置１により１３．５時間かけてハイブリダイゼーションを行った。なお、ハイブリダイゼーション促進器具７Ａの揺動速度、使用した検出キットおよび撮影機器は上述した実施例１と同様である。
【００４６】
本実施例２の結果を図１０に示す。また、本第１実施形態のハイブリダイゼーション促進器具７Ａを使用しない結果を比較例２として図１１に示す。これらの図より、実施例１の実験結果と同様に、本実施例２ではターゲット核酸３および溶液の種類に関わらず、比較例２に対して各スポットＳにおけるシグナル強度が大きくなっており、検出感度が向上していることがわかる。特に、低濃度域のスポットであっても実施例２のスポットは検出されるメリットがある。
【００４７】
この結果を明確にするため、実施例２および比較例２における検出シグナルの強度を数値化したものを図１２に示す。なお、数値化に際しては、実施例１と同様の手法により計算した。図１２からわかるように、比較例２に対する実施例１のシグナル強度比は総じて１以上となっており、ＤＤＷ溶液を使用した場合のシグナル強度比の平均値は１．８であり、ＴＥバッファを使用した場合のシグナル強度比の平均値は２．１であった。以上の結果より、本第１実施形態のハイブリダイゼーション促進器具７Ａを使用することにより、ハイブリダイゼーションが促進され、検出感度が向上することがわかる。なお、シグナル強度比が１を下回るケースは、実施例１と同様に個々の遺伝子の特性に起因する例外的な現象である。また、シグナル比のうち、「＊＊」を付した欄は、一方のシグナル値が弱かったり、バックグラウンドの影響でマイナスになってしまったものを示しており、「＊＊＊」を付した欄は、バックグラウンドの影響を大きく受けてシグナル比を算出できないものを示している。
【００４８】
以上のような各実施形態によれば、ターゲット核酸３が微量であっても検出できるため、希少にしか存在しないターゲット核酸３であっても、その発現情報を正確に把握することができる。また、ハイブリダイゼーション促進器具７Ａ，７Ｂを単にバッグ５上に載置するだけであるため、従来のシーソー式のハイブリダイゼーション装置にも簡単に適用されて、ハイブリダイゼーションを促進することができる。
【００４９】
なお、本発明に係るハイブリダイゼーション促進器具７Ａ，７Ｂおよびこれを用いたハイブリダイゼーション装置１ならびにハイブリダイゼーション促進方法は、前述した実施形態に限定されるものではなく、適宜変更することができる。
【００５０】
例えば、上述した各実施形態では、平板を湾曲させて揺動体７１を形成しているが、これに限られるものではなく、図１３に示すように、略半月形状の揺動体７９を使用してもよい。
【００５１】
また、揺動体７１の幅を大きく形成し、複数の錘支持棒７２および速度制御錘７３を設けることにより、１つのハイブリダイゼーション促進器具７Ａで複数のバッグ２を処理するようにしてもよい。
【００５２】
さらに、上記各実施形態では、揺動体７１を有するハイブリダイゼーション促進器具７Ａ，７Ｂを揺動させることによって、バッグ５に圧力を付与しているが、これに限られるものではなく、図１４に示すように、円筒状のハイブリダイゼーション促進器具７Ｃをバッグ５の幅方向に渡って当接させて圧力付与部を形成し、この状態で器具７Ｃまたは載置板９を長手方向に往復移動させるようにしてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】本発明に係るハイブリダイゼーション促進器具およびハイブリダイゼーション装置の第１実施形態を示す斜視図である。
【図２】第１実施形態の処理によるバッグ内の状態を示す模式図である。
【図３】第１実施形態の揺動載置板上にバッグを載置した状態を示す平面図である。
【図４】第１実施形態の揺動体の湾曲面を示す正面図である。
【図５】本発明に係るハイブリダイゼーション促進器具の第２実施形態を示す正面図である。
【図６】図５の平面図である。
【図７】実施例１により得られたハイブリダイゼーション後のマイクロアレイ画像である。
【図８】比較例１により得られたハイブリダイゼーション後のマイクロアレイ画像である。
【図９】実施例１と比較例１における検出シグナルの強度を数値化した表である。
【図１０】実施例２により得られたハイブリダイゼーション後のメンブレンシート画像である。
【図１１】比較例２により得られたハイブリダイゼーション後のメンブレンシート画像である。
【図１２】実施例２と比較例２における検出シグナルの強度を数値化した表である。
【図１３】本発明に係る揺動体の他の実施形態を示す正面図である。
【図１４】本発明に係るハイブリダイゼーション促進器具の他の実施形態を示す概略模式図である。
【符号の説明】
【００５４】
１  ハイブリダイゼーション装置
２  支持体
３  ターゲット核酸
４  核酸プローブ
５  バッグ
６  揺動載置板
７Ａ，７Ｂ  ハイブリダイゼーション促進器具
８  揺動駆動部
９  載置板
２１  マイクロアレイ
２２  メンブレンシート
７１  揺動体
７１ａ  湾曲面
７２  錘支持棒
７３  速度制御錘
７４  滑り止め部材
７５  固定ネジ
７６  偏心振子
７７  駆動ユニット
７８  回転軸
７９  半月状揺動体
８１  リンクアーム
８２  回転軸
８３  円盤
Ｒ  反応面
Ｓ  スポット
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図９】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図７】
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【図８】
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【図１０】
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【図１１】
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