(57)【要約】【課題】安全かつ入手が容易で医薬品、化粧品、飲食品、食品添加物などとして利用価値のある、より抗酸化能の強い、有益な抗酸化剤を得ること。【解決手段】マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）から単離した4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（化合物Ｉ）に強い抗酸化作用を有することを見出し、これを含む抗酸化剤を提供する。【化１】2005171003.tif 000008【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式で表される
4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する抗酸化剤。
【化１】
2005171003.tif 000006
【請求項２】
下記式で表される
4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する植物の乾燥体又は抽出物を含む抗酸化剤。
【化２】
2005171003.tif 000007
【請求項３】
植物はマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）である請求項２に記載の抗酸化剤。
【請求項４】
請求項１〜３に記載の抗酸化剤を含有する食品。
【請求項５】
請求項１〜３に記載の抗酸化剤を有効成分とする医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜３に記載の抗酸化剤を含有する化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、成人病、悪性関節リウマチなどの、健康維持上障害となる諸疾患、火傷などの外傷、ニキビ、シミ、ソバカス、皮膚の炎症など、美容上の障害の予防、治療に効果を有する新規な抗酸化剤及びそれを使用した医薬、食品あるいは化粧料を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
活性酸素や不飽和脂質から生成する過酸化脂質が、老化や成人病の発症といった生体への悪影響を及ぼすことが近年明らかとなってきており、各種の研究がなされている。活性酸素消去作用や過酸化脂質の生成抑制作用を有する、いわゆる抗酸化物質の探索や、動脈硬化症、高脂血症、それより発症する脳梗塞、心疾患、およびそれらの後遺症やストレス性潰瘍などの虚血障害、癌、糖尿病などの成人病、悪性リウマチ、ベーチェット病、クーロン病、潰瘍性大腸炎、肝炎、腎炎、パーキンソン病などの難病、農薬などの化学物質により惹起される疾患、光線過敏症、放射線障害などに対する治療薬としてのそれらの応用が一部で試みられている。また、活性酸素や過酸化脂質はシミ、ソバカス、ニキビ、シワ、タルミ、皮膚の炎症などの成因となる他、食品を劣化させ嗜好的品質や栄養の低下を引き起こすことも知られてきている。
これらに対して、特許文献１では天然物であるレモンバームの抗酸化作用に着目し、これから抗酸化作用を有する新規化合物を単離し、医薬品等への応用を試みている。
また、同様に特許文献２ではサンペンズ、ゴカヒ、ジコッピ等の生薬の抽出物に活性酸素消去作用を見出し、これらを医薬品等へ応用しようとしている。
【特許文献１】特開平１１−１２２７０号公報
【特許文献２】特開平８−２８３１７２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
現在のところ、代表的な抗酸化剤としては、天然物であるα−トコフェロール、（ビタミンＥ）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、合成化合物であるＢＨＴ（3，5-tert-ブチル-4-ヒドロキシトルエン）、生体酵素であるスーパーオキサイドデイスムターゼ（以下、ＳＯＤという。）などが挙げられる。また、代表的な抗炎症剤として、天然物である甘草エキス、合成化合物であるインドメタシンなどが挙げられる。
しかし、生体酵素であるＳＯＤは、酵素蛋白質であるため、高純度に製造の収率を高くできないこと、生体内に投与した時の血中濃度の維持が困難であることなどの欠点を有している。
一方、ビタミンＥ、ビタミンＣは生体内における活性酸素消去の作用が十分でないなどの難点がある。
また、上記特許文献１、特許文献２に記載の抗酸化作用を示す化合物や活性酸素消去剤はその抗酸化能が十分とはいえない。特に特許文献２は、ある特定生薬のエタノール抽出物をそのまま用いているにすぎず、活性を有する化合物についての言及はない。
従って、安全かつ入手が容易で医薬品、化粧品、飲食品、食品添加物などとして利用価値のある、より抗酸化能の強い、有益な抗酸化剤を得ることを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、上記課題を解決するためのものであって、鋭意研究を重ねた結果、うこぎ科ウコギ属であるマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）から単離した4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（化合物Ｉ）に強い抗酸化作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、以下の構成を有する。
（１）下記式で表される
4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する抗酸化剤。
【化３】
2005171003.tif 000002
（２）下記式で表される
4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（化合物Ｉ）及び／又はその生理的に許容される塩を含有する植物の乾燥体又は抽出物を含む抗酸化剤。
【化４】
2005171003.tif 000003
（３）植物はマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）である上記（２）に記載の抗酸化剤。
（４）上記（１）〜（３）に記載の抗酸化剤を含有する食品。
（５）上記（１）〜（３）に記載の抗酸化剤を有効成分とする医薬組成物。
（６）上記（１）〜（３）に記載の抗酸化剤を含有する化粧料。
【発明の効果】
【０００５】
本発明の4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（以下「化合物I」という）は、強力な抗酸化作用を有する点で優れている。また、化合物Ｉは、天然物であり生薬として用いられているマンシュウウコギから得られたものであるため、生体系への影響が少ない点で好ましい。従って、本発明の化合物I及び／又はその生理的に許容される塩（以下、単に「化合物I等」ということがある）を含有する抗酸化剤は、医薬、食品、化粧品への応用が可能であり、特に、老化や成人病、シミ、ソバカス、ニキビ、皮膚の炎症などの予防・治療に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明に用いられる化合物Iは、うこぎ科ウコギ属であるマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉から得られたものであるが、これと同一の化合物を含有するのであれば、産地などは特に限定されるものではなく、また、本発明の化合物を含有する植物であれば、植物の種類も特に限定されるものではない。
本発明におけるマンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）とは、五加とも呼ばれ、その根皮は、滋養強壮や疲労回復などの漢方薬の原料として用いられているものである。
【０００７】
本発明において、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）は、本発明の化合物Iを含む全ての部位が使用可能である。葉、茎、芽、花、木質部、木皮部（樹皮）の地上部及び根、塊茎等の地下部、種子、果実、樹脂等全ての部位である。
【０００８】
また、植物自身を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、それら自身を圧搾抽出することにより得られる搾汁、水あるいはエチルアルコール、メチルアルコール、ジエチルエーテル、アセトン等の溶媒による粗抽出物、及び粗抽出物を分配、カラムクロマト等の各種クロマトグラフィー等で段階的に精製して得られた化合物Ｉ等を用いることができる。得られた抽出物画分は、適切な方法で濃縮したり、噴霧乾燥や凍結乾燥しても良い。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
例えば、マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の植物体乾燥物１ｋｇに９９．５％エタノール抽出液３Ｌを加え、室温で一晩浸漬することにより得た抽出液を、そのまま抗酸化剤及びそれらを含有する食品、医薬あるいは化粧料として使用しても良いし、各種クロマトグラフィーを組み合わせて、精製したものを使用しても良い。
【０００９】
化合物Ｉ等を含む抽出物は、望ましくは、マンシュウウコギの熱水抽出物を酢酸エチル／水を用いて液液分配を行って得られる酢酸エチル可溶画分である。
また、化合物Ｉ等は上記のとおり、マンシュウウコギの植物体から抽出、精製したものを用いてもよいが、化学合成により本化合物を得ることも出来る。例えば、本化合物は、下記参考文献にあるような公知の方法により合成することができる。
参考文献：Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃｔｒｙ、Ｖｏｌ．２８、Ｎｏ．３、ｐｐ８６７−８６９、１９８９
【００１０】
本発明による化合物Ｉ等が、抗酸化作用を有することは、今まで全く知られておらず、本発明により得られた新たな知見である。
また、化合物Ｉ等は、強い抗酸化作用を有しているため、抗酸化剤としての使用が可能である。また、これらを含有する食品、医薬あるいは化粧料として用いることで、老化や成人病、シミ、ソバカス、ニキビ、シワ、タルミ、皮膚の炎症などの予防・治療が可能である。
【００１１】
本発明の抗酸化剤には、上記の様にして得られる化合物Ｉの他にこの化合物の生理的に許容される塩を用いることもできる。この場合、化合物Ｉ及びその塩の１種を単独で用いても、又は２種以上を混合して用いてもよい。
また、この様な塩としては、生理的に許容されるものであれば特に限定はされないが、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アンモニア、トリエチルアミン、トリエタノールアミン等のアミン類との塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸類との塩等が例示できる。
また、化合物Ｉの修飾物を医薬品として用いた場合、人体に投与され、体内で代謝され、この代謝物が初めて薬効を発揮するような場合、その修飾物（プロドラッグ）も本発明の医薬品の範囲である。このような修飾物としては、化合物Ｉの塩やエステルがあげられる。
【００１２】
また、本発明の抗酸化剤は、化合物Ｉ及び／又はその生理的に許容される塩を含有する抗酸化剤であるが、化合物Ｉの代わりに以下の式であらわされる化合物ＩＩのような構造のものを用いることもできる。すなわち、化合物Ｉのナフタレン骨格の２位のカルボン酸基（−ＣＯＯＨ）につき、その水素原子を、他の基に置き換えたものである。例えば、Ｒはアルコール類、フェノール類から水酸基を除いた残基などがあげられる。特に、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基などの炭素数１０以下の炭化水素基が好ましく、フエニル基であってもよい。
【化５】
2005171003.tif 000004
【００１３】
本発明でいう、抗酸化剤とは、酸化防止剤とも言われるもので、酸素によって酸化されることによる劣化（抗酸化作用）を防ぐために添加される剤であり、生体内においては活性酸素を消去する作用を有する剤をいう。本発明では、この抗酸化作用を、後述する一重項酸素消去作用、スーパーオキシド消去作用、ヒドロキシラジカル消去作用の測定により評価することとした。
【００１４】
〔抗酸化剤、医薬〕
本発明の抗酸化剤またはこれらを含有する医薬は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用することができる。非経口投与の方法としては、経皮投与、直腸内投与、注射などが挙げられる。経口投与あるいは非経口投与それぞれの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と、本発明の抗酸化剤を混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、製剤上の常套手段により調製することができる。
【００１５】
上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００１６】
〔食品〕
食品としては、そのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは食品で通常用いられる任意成分と共に配合できる。例えば、菓子、ドリンク、パン等に含ませて、老化や成人病、シミ、ソバカス、ニキビ、皮膚の炎症などの予防・治療に有用な保健用食品又は食品素材として食される。例えば、化合物Ｉ等に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、茶、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。
【００１７】
本発明において、化合物Ｉ等の有効な摂取量は、摂取する者の年齢、体重、症状、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜選択・決定される。例えば、経口投与の場合、一般に１日当たり０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重程度とされ、数回に分けて投与してもよい。
【００１８】
本発明の化合物Ｉ等は、毒性が低く、例えば化合物Ｉを毎日１０００ｍｇ／ｋｇ、１００日間という長期間に亘ってラットに経口投与しても、死亡例は認められず、体重変化も観察されなかった。
【００１９】
〔化粧料〕
本発明の本発明の抗酸化剤を含有する化粧料は、老化、シミ、ソバカス、ニキビ、シワ、タルミ、皮膚の炎症等を防ぐために用いられる。本発明が適用される化粧料としては、剤型は特に限定されないが、例えば、以下の用途に用いることができる。化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック化粧料等の基礎化粧料、ファンデーション、アンダーメークアップ、白粉等のメークアップ化粧料、ハンドクリーム、ヘアトニック、ヘアリキッド、シャンプー、リンス等の頭髪用化粧料等である。これらの化粧料は、上記化合物Ｉを配合する以外は、通常の化粧料と同様の方法で製造することができる。
【００２０】
上記化粧料における本発明の化合物Ｉ等の配合量は特に限定されないが、化粧料全量に対して０．００１〜１０重量％の範囲で配合されることが好ましく、更に、０．０１〜１重量％の範囲で配合されることがより好ましい。化合物Ｉの配合量が０．００１％未満では、老化の防止、シワの防止、シミ、ニキビ、ソバカス、皮膚の炎症等の防止効果が十分に得られない場合があり、１０重量％を越えて配合した場合には、効果が頭打ちになり経済的でない場合が多い。
なお、抽出物の分画物を用いる場合には、上記濃度と同程度の効果が得られるように化合物濃度に換算しておくことで同様に用いることができる。
【００２１】
また、本発明の化粧料には、化合物Ｉ等を含む抗酸化剤の他に、化粧料に一般に用いられる各種成分を配合することができる。例えば、ワセリン、流動パラフィン等の炭化水素類、ホホバ油、カルナバワックス等のエステル類、オリーブ油、牛脂等のトリグリセライド類、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール類、ステアリン酸、ベヘン酸等の脂肪酸類、グリセリルモノステアレート、ポリオキシエチレンステアリン酸、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンステアリルエーテル等のノニオン界面活性剤、石鹸、硫酸エステル等のアニオン界面活性剤、ステアリルアミン等のカチオン界面活性剤、アルキルベタイン等の両性界面活性剤、グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコール類、各種粉末成分、保湿剤、増粘剤、色剤、香料、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐剤、あるいは紫外線防御剤、抗炎症剤、美白剤等である。
【００２２】
更に、本発明の化粧料には、化合物Ｉ等を含む抗酸化剤以外に他のこれらと同様な作用を示す物質と組み合わせて使用することもできる。
【実施例】
【００２３】
次に実施例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。
製造例
マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉からの抽出
マンシュウウコギ（Acanthopanax sessiliflorus）の葉は、中国 吉林省の長白山より採取したものを使用した。この葉の乾燥体１０ｋｇに水８０Ｌを加え、９０℃で1時間抽出し、抽出液を得た。この抽出液を６０ｍｅｓｈのフィルターを用いてろ過し、６０でBrix（可溶性固形分濃度）が約１０になるまで濃縮、２５０meshのフィルターにてろ過した。これを１３０℃で３０秒間殺菌したものを、噴霧乾燥（入口温度：１４０℃、出口温度：８０℃）し、３０ｍｅｓｈのフィルターにて篩過することにより、マンシュウウコギ葉熱水抽出物２．２ｋｇ（収率：２２％）を得た。
【００２４】
4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acidの単離・精製
本発明の化合物は、図１に示したように、各種カラムクロマトグラフィー（以下、c.c.と略す）を組合わせることにより得ることが出来る。
すなわち、上記により得られたマンシュウウコギの葉の熱水抽出物（1630.63g）を、酢酸エチルおよび水を用いて液−液分配を行い、得られた酢酸エチル可溶画分（21.27g）をSephadex LH-20（2−100μm、ファルマシア ファイン ケミカル社製） c.c.に供し、メタノールにて溶出することにより、L-1〜L-4の4つ画分（L-1：9.69g、L-2：5.69g、L-3：4.63g、L-4：0.25g）を得た。次に、L-4画分（0.25g）をODS（Chromatorex ODS：フジ化学社製）c.c.に供し、0.01％トリフルオロ酢酸（TFA）を含む５０％メタノールを用いて溶出し、O-1〜O-9の9つの画分（O-1：13.1mg、O-2：7.6mg、O-3：5.0mg、O-4：117.2mg、O-5：34.8mg、O-6：4.1mg、O-7：34.8mg、O-8：62.0mg、O-9：10.6mg）を得た。さらに、O-4及びO-5の画分を合わせたもの（152.0mg）を、Silica gel（Kieselgel 60 F254、メルク社製） c.c.に供し、クロロホルム：メタノール：水（80：20：2 v/v/v）混液を用いて溶出することにより、本発明の化合物である4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（68.1mg、収率：0.0042％）を得た。
【００２５】
スペクトルデータ
得られた本発明の化合物Iのスペクトルデータを取ったところ、以下に示す結果を得た。
白色（colorless）粉末
m.p.： 325−327°
分子式：C17H12O6 
分子量：312.2
分子組成：C 65.39、H 3.87、O 30.74
IR（KBr）：3440、3300、1705、1620、1530 cm-1
1H NMR（400 MHz、DMSO-d6）：
δ＝12.71、9.93、9.69（br s、1H）、9.08（br s、2H）、8.19、7.50（d、J=1.6 Hz；
1H）、7.30、7.23（ｓ、1H）、6.86（d、J=8.0 Hz；1H）、6.82（d、J=2.1 Hz；1H）、
6.69（dd、J1=2.1 Hz、J2＝8.0 Hz；1H）
13C NMR（400 MHz、DMSO-d6）：
δ＝167.8、149.0、147.2、145.0、144.7、137.9、131.4、129.4、128.4、127.4、
124.6、122.9、120.4、116.9、115.7、111.4、108.0 
UV（MeOH）：
λmax（logε）243（4.25）、293（sh、3.94）、312 nm（4.00）
MS（70eV）：
m/z（％）312（100、M+）、268（22）、266（10）、249（19）、221（36）、165（18）、164（10）、163（18）、88（10）、63（10）、45（17）、43（35）．
【００２６】
薬理試験
抗酸化作用の測定  「一重項酸素消去作用」
本発明の製造例に示した、化合物Iについて、一重項酸素消去作用の評価を行った。評価法は、2,2,6,6-tetramethyl-4-piperidinol（４−ＯＨ ＴＥＭＰ）をスピントラップ剤としたＥＳＲスピントラップ法により測定した。まず、市販の平底９６穴マイクロプレートに、任意の濃度に調製した一重項酸素消去剤（化合物I）の４０％（ｖ／ｖ）N,N-ジメチルホルムアミド水溶液０．１ｍＬを滴下した。続いて、蒸留水０．０２ｍL、１００ｍＭの４−ＯＨ ＴＥＭＰ水溶液０．０４ｍＬ、０．１ｍＭのローズベンガル水溶液０．０４ｍＬをこの順番で混合し、総量０．２ｍＬの混合液とした。これに光増感反応の光源としてマイクロプレートの背面より極大波長５３０nmの発光ダイオード（緑色ＬＥＤ)を２０分間照射して一重項酸素を発生させた。この混合液をＥＳＲ用扁平水溶液セルに移し、ＥＳＲスペクトルを測定した。ＥＳＲスペクトル強度から、一重項酸素消去率を求め、これを濃度に対してプロットし、５０％抑制濃度ＩＣ５０値を求めた。また、比較として、既存のポリフェノール化合物のＩＣ５０値を同時に求めた。その結果を表１に示す。化合物IのＩＣ５０値は９５．６８μＭであった。この結果から、化合物Ｉは、ポリフェノール化合物と比較して、より低濃度で一重項酸素を消去することが認められた。すなわち、化合物Iは、優れた一重項酸素消去作用を示すことが明らかとなった。
【００２７】
【表１】
2005171003.tif 000005
【００２８】
抗酸化作用の測定  「スーパーオキシド消去作用」
化合物Iについて、スーパーオキシド消去作用の評価を行った。評価法は、5,5-dimethyl-1-pyrroline-N-oxide（ＤＭＰＯ）をスピントラップ剤としたＥＳＲスピントラップ法により測定した。まず、２ｍＭヒポキサンチン０．１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）０．０５ｍLを、ポリプロピレン製チューブに加えた。続けて、２ｍＭ ジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’−５酢酸（ＤＥＴＡＰＡＣ）０．１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）０．０１５ｍＬ、原液のＤＭＰＯ ０．０１５ｍＬ、任意の濃度に調製した化合物（Ｉ）の２％（ｖ／ｖ）N,N-ジメチルホルムアミド水溶液０．１ｍＬを加え、最後に２００Ｕ／ｍＬキサンチンオキシダーゼ０．１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）０．０２ｍＬを添加し、この直後、試験管ミキサーを用いて５秒間攪拌した。この混合液をESR測定用扁平セルに移し、キサンチンオキシダーゼ添加1分後にＥＳＲスペクトルを測定した。ＥＳＲスペクトル強度から、スーパーオキシド消去率を求め、これを濃度に対してプロットすることで５０％抑制濃度値（ＩＣ５０）を求めた。また、比較として、既存のスーパーオキシド消去剤としてよく用いられるロズマリン酸のＩＣ５０を同時に求めた。その結果、化合物ＩのＩＣ５０は１７．９１μＭ、ロズマリン酸のＩＣ５０は３４．１８μＭであった。この結果から明らかなように、ロズマリン酸と比較して、化合物Ｉは、より低濃度でスーパーオキシドを消去することが認められた。すなわち、化合物Ｉは、優れたスーパーオキシド消去作用を示すことが明らかとなった。
【００２９】
抗酸化作用の測定  「ヒドロキシラジカル消去作用」
化合物Iについて、ヒドロキシラジカル消去作用の評価を行った。評価法はＤＭＰＯをスピントラップ剤としたＥＳＲスピントラップ法により測定した。まず、０．５ｍＭ硫酸鉄（II）水溶液０．０２ｍＬをポリプロピレン製チューブに加えた。続けて、０．２ｍＭ ＤＥＴＡＰＡＣ ０．１ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）０．１ｍＬ、１００ｍＭ ＤＭＰＯ水溶液０．０２ｍＬ、化合物Ｉの０．５％（ｖ／ｖ）N,N-ジメチルホルムアミド水溶液０．０４ｍＬを順次加え、続けて１ｍＭ 過酸化水素水溶液０．０２ｍLを添加直後、この混合液をＥＳＲ測定用扁平セルに移し、ＥＳＲスペクトルを測定した。化合物Ｉを含まない０．５％（ｖ／ｖ）N,N-ジメチルホルムアミド水溶液０．０４ｍＬを添加した検体をコントロールとして、ＥＳＲスペクトル強度からヒドロキシラジカル消去率を求め、これを濃度に対してプロットし、５０％抑制濃度値（ＩＣ５０）を求めた。また、比較として、既存のヒドロキシラジカル消去剤としてよく用いられるジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ)のＩＣ５０を同時に求めた。その結果、化合物ＩのＩＣ５０は２５４．８μＭ、ＤＭＳＯのＩＣ５０は２．４３４ｍＭであった。この結果から明らかなようにＤＭＳＯと比較して、化合物Ｉはより低濃度でヒドロキシラジカルを消去することが認められた。すなわち、化合物Ｉは、優れたヒドロキシラジカル消去作用を示すことが明らかとなった。
【００３０】
以下に処方例を示す。
処方例１
［錠剤の製造］
製造例で得られた4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic
acid（化合物Ｉ）を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
（組       成）                           （配合：重量％）
化合物Ｉ                                         24
乳糖                                             63
コーンスターチ                                   12
グァーガム                                        1
【００３１】
処方例２
［ジュースの製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
（組       成）                           （配合：重量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁                            5.0
果糖ブドウ糖液糖                                 11.0
クエン酸                                          0.2
Ｌ-アスコルビン酸                                 0.02
香料                                              0.2
色素                                              0.1
化合物Ｉ                                          0.2
水                                               83.28
【００３２】
処方例３
［化粧品（ハンドクリーム）の製造］
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成のハンドクリームを製造した。
（組       成）                           （配合：重量％）
セタノール                                        8.0                  
ステアリルアルコール                              2.0
ポリオキシエチレンラウリルエーテル                1.5 
プロピレングリコール                             6.0
ソルビトール                                      1.0
パラベン                                          0.4
化合物Ｉ                                          0.5
ビタミンE                                         0.5
香料                                              0.1
精製水                                           66.0
【００３３】
処方例４
〔化粧品（化粧水）の製造〕
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成の化粧水を製造した。
（組       成）                           （配合：重量％）
精製水                                            残余
１．３−ブチレングリコール                         8.5
グリセリン                                        1.5
L−セリン                                         0.1
混合異性化糖                                      1.0
パセリエキス                                      0.1
ローズマリーエキス                                0.3
化合物Ｉ                                          0.1
【００３４】
処方例５
〔化粧品（乳液）の製造〕
製造例で得られた化合物Iを用いて、常法に従って、下記の組成の乳液を製造した。
（組       成）                           （配合：重量％）
精製水                                            残余
１．３−ブチレングリコー                          8.0
カルボキシビニルポリマー                          0.12
グリセリン                                        3.0
混合異性化糖                                      0.5
L-トレオニン                                      0.1
ホホバ油                                          1.5
スクワラン                                        1.5
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                    1.0
パセリエキス                                      0.1
化合物Ｉ                                          0.2
水酸化カリウム                                    0.04
【００３５】
処方例６
〔化粧品（美容液）の製造〕  
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成の美容液を製造した。
（組       成）                           （配合：重量％）
精製水                                            残余
１．３−ブチレングリコール                         8.0
トリメチルグリシン                                 2.0
グリセリン                                        5.0
混合異性化糖                                      3.0
化合物Ｉ                                          0.2
カルボキシビニルポリマー                          0.15
水酸化カリウム                                    0.05
ヒアルロン酸ナトリウム（１％水溶液）              0.5
【００３６】
処方例７
〔化粧品（パック化粧料）の製造〕   
製造例で得られた化合物Ｉを用いて、常法に従って、下記の組成のパック化粧料を製造した。
（組       成）                           （配合：重量％）     
精製水                                             残余
デキストラン                                       11.5
カルボキシビニルポリマー                            0.3
ジグリセリン                                       17.0
トリメチルグリシン                                  2.0
L−セリン                                           0.1
混合異性化糖                                        0.5
化合物Ｉ                                            0.2
マルチトール                                        4.0
１．３−ブチレングリコール                         10.0
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                      0.5
カルボキシメチルセルロースナトリウム                1.4
水酸化カリウム                                      0.1
塩類含有カプセル                                    0.1
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明の抗酸化剤は、医薬、食品、化粧品への応用が可能であり、特に、老化や成人病、シミ、ソバカス、ニキビ、シワ、タルミ、皮膚の炎症などの予防・治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】4-(3,4-Dihydroxyphenyl)-6,7-dihydroxy-2-naphtalenecarboxylic acid（化合物Ｉ）の単離・精製方法を示す図である。
【図１】
2005171003.tif 000009