(57)【要約】【課題】              無臭ニンニクの加工処理工程で廃棄されている成分について新規な生理作用を見出して、健康食品、薬剤又はそれらに使用可能な組成物を開発することを目的とする。【解決手段】          無臭ニンニクとして知られているジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)の水溶性抽出物から回収される泡成分（泡立ち画分）を含有してなる肝障害改善用組成物を提供する。上記肝障害とは、種々の原因により引き起こされた肝障害を含むが、例えば、肝炎ウイルス、アルコール、ストレス、薬剤又は免疫異常により引き起こされる肝障害であり、特に好ましい実施形態において、アルコール性肝障害の予防及び／又は治療剤として使用することができる。【選択図】            なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)の水溶性抽出物から回収される泡成分を含有してなることを特徴とする肝障害の改善用組成物。
【請求項２】
前記泡成分が、ジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)の水溶性抽出物を加熱することにより回収される請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記肝障害が肝炎ウイルス、アルコール、ストレス、薬剤又は免疫異常により引き起こされる肝障害である請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
アルコール性肝障害の予防及び／又は治療剤である請求項１〜３何れか一項に記載の組成物。
【請求項５】
有効成分としてサポニンを含有する請求項１〜４何れか一項に記載の組成物。
【請求項６】
ジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)を粉砕及び／又は圧搾する工程、
前記粉砕及び／又は圧搾物から、水又は親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒で抽出物を得る工程、
前記抽出液を加熱する工程、及び
前記加熱された抽出液より泡成分を回収する工程、
を含むことを特徴とする肝障害改善用組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はジャンボリーキ（Jumbo leek:巨大ニラネギ、又は大粒ニラネギ）から得られる肝障害の改善用組成物、特に、その水溶性抽出物から回収される泡成分を含有することを特徴とする肝障害の改善用組成物、及びその製造方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニンニクは紀元前から、生理作用が期待されるスパイスとして知られ、ガーリックスパイスとしての脱臭、矯臭用途や民間伝承的な医学的用途、例えば、喘息、関節炎、動脈硬化、気管支炎等に効果があるといわれている。また、ニンニクの生理作用、抗菌性等の有用性については主に特有のニオイの原因物質であるアリイン(Allylcysteine sulfoxides)由来のアリシン(Allyl 2-propenethiosulfinate)を中心にしている記載のものが多い。アリインはネギ類に含有される有機硫黄化合物でありニンニク球に特に多い無臭の物質である。細胞内のアリインはすり潰す、刻むことにより酵素の作用により有臭物質のアリシンに変化する。従って、ニンニク特有のニオイと生理作用は表裏一体の関係にあると考えられてきた。
【０００３】
このニオイの原因物質であるアリインを多く含有しながら、臭量（同一閾値濃度）は通常のニンニクに比べて１／１４と低い無臭ニンニクが知られている。この無臭ニンニクはニンニクの亜種と考えられており、通常のニンニクと比較すると、刺激臭が少なく、非常に食べやすいという特徴がある。また、通常のニンニクの約８倍もの大きさを持ち、ニンニクの有効成分の一つであるスコルヂニンを約２倍含んでいる。この無臭ニンニクから抽出したエキス粉末を使用して生理活性作用を調べたところ、白血球（好中球）の増加作用、ＴＮＦ誘導prining作用、マクロファージ増殖誘導作用等の生体防御機能を有することが分かった（例えば、非特許文献１参照）。
【０００４】
また、この無臭ニンニクから抽出されたエキス成分には、尿中の8-OHdG値を指標として調べた結果、酢酸トコフェロールを対照として強い抗酸化活性のあることも認められている（例えば、非特許文献２参照）。これらの結果は、通常のニンニクよりも刺激臭が少なく食べやすい無臭ニンニクが健康食品あるいは食品素材として有用であることを示しており、例えば、大蔵製薬株式会社ヘルスウェイ事業部から、ムシューリックPSII（登録商標）として販売されている。
【０００５】
現在、上記無臭ニンニクエキス成分は、無臭ニンニクを破砕し、抽出の後、精密に濾過したものを凍結乾燥して使用しているが、製造工程において発生する泡や抽出残渣等が廃棄成分として残存している。しかし、このような廃棄成分の中にも有効成分であるスコルヂニンがある程度残存しておりその有効利用を行うと共に、副生物として得られる新たな組成物について、新たな薬効の探索が強く望まれている。
【０００６】
【非特許文献１】内田あゆみ、「天然ニンニク様植物（無臭ニンニク）の生体防御機構の活性化作用」、ＦＯＯＤ  Ｓｔｙｌｅ  ２１、１９９８年７月、第２巻、第７号、ｐ．４５−４８
【非特許文献２】吉田光夫、外３名、「ムシューリック（登録商標）(Allium sativum LINNE Shiro)の抗酸化活性」医学と薬学、自然科学社、２００１年９月、第４６巻、第３号、ｐ．３６５−３７０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、民間伝承薬的な効果が認知されている「有臭ニンニク」よりも刺激臭が少なく摂取しやすい無臭ニンニクの有効利用を図ること、特に、加工処理工程で廃棄されている成分について新規な生理作用を見出して、健康食品、薬剤又はそれらに使用可能な組成物を開発することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題に鑑みて、本発明者らは無臭ニンニクの加工処理プロセスにおいて発生する泡成分に着目してその生理作用を研究した結果、種々の肝障害を著しく改善する作用を有することを見出して本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明の肝障害改善用組成物は、無臭ニンニクとして知られているジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)の水溶性抽出物からから回収される泡成分（泡立ち画分）を含有してなることを特徴とする。
【００１０】
好ましい実施形態において、上記泡成分はジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)の水溶性抽出物を加熱することにより回収されることを特徴とする。上記肝障害とは、種々の原因により引き起こされた肝障害を含むが、例えば、肝炎ウイルス、アルコール、ストレス、薬剤又は免疫異常により引き起こされる肝障害であり、特に好ましい実施形態において、アルコール性肝障害の予防及び／又は治療剤として使用することができる。また、上記組成物は有効成分としてサポニンを含有することが好ましい。
【００１１】
本発明の異なる視点において、ジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)を粉砕及び／又は圧搾する工程、前記粉砕及び／又は圧搾物から、水又は親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒で抽出物を得る工程、前記抽出液を加熱する工程、及び前記加熱された抽出液より泡成分を回収する工程、を含むことを特徴とする肝障害改善用組成物の製造方法が提供される。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の肝障害改善用組成物は、アルコールやストレス、種々の薬剤等による肝臓の障害を予防し、又は障害を受けた肝臓を治療し改善することができる。その薬理作用のメカニズムは必ずしも明らかではないが、上記の各要因によって肝細胞が傷害を受けることを抑止すること、例えば、ＴＮＦ−αによって活性化されたマクロファージによる活性酸素の発生を抑えて肝細胞の障害を防御するためではないかと考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の肝障害改善用組成物（以下「本発明の組成物」という。）は、いわゆる無臭ニンニクと呼ばれる食材から調製される。無臭ニンニクには人為的操作で低臭化されたものも存在するが、本発明に係る無臭ニンニクは、ニンニクの亜種と考えられている天然の無臭ニンニク、ジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)である。この植物は、草丈、鱗茎ともに通常のニンニクより大きく、鱗片は花茎に密着して鱗茎を形成する大型のものと、鱗茎の辺縁に付着する小型のものがあり、これらの数は２０に及ぶ。染色体ＤＮＡやアイソザイム分析等の結果、この植物は、リーキと極めて近縁の植物であり、Allium ampeloprasum L.の中に分類することができると考えられる（園学雑(J. Japan. Soc. Hort. Sci.）第71巻、362〜369頁、2002年)。
【００１４】
このジャンボリーキ(Allium ampeloprasum LINNE Shiro)の株は、南米原産であり、我が国では十数年前に長野で栽培が始められ、今日では、富山、茨城、岐阜等で生産されている。本発明の組成物は、長野や富山で有機農法により生産された無臭ニンニクであるジャンボリーキ「ムシューリック（登録商標）」を用いて製造することが特に好ましい。なお、ジャンボリーキの学名については、Allium sativum LINNE Shiroと称される場合もある。
【００１５】
本発明の組成物は、このジャンボリーキ(Allium ampeloprasum)から種々の方法により製造することができるが、例えば、ジャンボリーキを抽出原料とし、水、若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒に投入し、室温又は溶媒の沸点以下の温度で任意の抽出装置を用いて抽出した後、その抽出液、すなわち水溶性抽出物から泡成分を回収して得ることができる。前記抽出溶媒としては、水又は親水性有機溶媒であればどのようなものであってもよいが、例えば、水道水、イオン交換水、蒸留水、生理食塩水、リン酸緩衝液等が含まれる。水溶性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール、アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等が挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒等を用いることもできる。なお、抽出用の水には、当該植物細胞中の水も含まれ、ジャンボリーキ生燐片を圧搾して得られる圧搾液をそのまま用いることも可能である。続いて、好ましくは前記抽出液から濾過や遠心分離等の方法により残渣を分離除去する。分離された残渣を再度水で抽出し前記抽出液と混合して用いてもよい。
【００１６】
次に上記抽出液から種々の方法により泡成分を回収する。一般的に、ある種の植物の抽出液は加熱により容易に発泡する（泡立つ）ことが知られている。アスパラガス、エレファントガーリック、大豆等のサポニンを含有する植物の抽出液は泡立ちやすいことから本発明に係る泡成分もサポニンを含有すると考えられる。サポニンとは、植物界に広く分布する配糖体で、ステロイドやトリテルペノイドを非糖部とする一群の化合物の総称である。共通した性質として、その水溶液が著しい起泡性をもち、溶血作用を示すといわれている。本発明に係る泡成分に含まれるサポニンは他の食材とは異なり特有の含有量、及び組成比を有する。
【００１７】
回収された泡成分は、当業者に公知の任意の方法により乾燥し粉末状の組成物とすることができる。例えば、凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥等の方法を用いることができるが、有効成分の活性を損なわないためには低温で操作することが好ましい。なお、本発明の目的達成を妨げない場合には、活性炭処理や吸着樹脂処理等の方法により精製工程を加えても構わない。
【００１８】
本発明の組成物は、飲食品又は健康補助食品の形態として投与、又は摂取することが可能であり、例えば錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む）、シロップ剤、液剤等として、経口的に安全に投与することができる。経口投与用製剤とするには、公知の方法に従い、有効成分であるサポニンを例えば、賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプン等）、崩壊剤（例、デンプン、炭酸カルシウム等）、結合剤（例、デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース等）又は滑沢剤（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール ６０００等）等を添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング、腸溶性あるいは持続性の目的のため公知の方法でコーティングすることにより経口投与製剤とすることができる。そのコーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリオキシエチレングリコール、ツイーン ８０、プルロニック Ｆ６８、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートサクシネート、オイドラギット（ローム社製、ドイツ、メタアクリル酸・アクリル酸共重合）及び色素（例、ベンガラ、二酸化チタン等）等が用いられる。経口投与用製剤は速放性製剤、徐放性製剤のいずれであってもよい。あるいは、一般の飲食品の形態として摂取することができ、例えば、清涼飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料、ゼリー、菓子、ジャム、クリーム等の菓子類、かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産、畜産加工食品、その他種々の形態の健康、栄養補助食品等が考えられるがこれらに限定されるものではない。
【００１９】
本発明の組成物を肝障害の予防又は治療剤として用いる場合の投与量は、患者の年齢、疾病の種類、程度などにより変動し、一概に規定することはできないが、一般成人に対して、経口投与の場合は、１日量０．１〜１００ｇ、好ましくは１〜１０ｇである。非経口投与の場合は、１日量２０〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇであり、症状に応じて必要により１〜３回に分けて投与することが好ましい。
【００２０】
（肝臓障害のメカニズムと本発明の組成物の作用機序）
肝臓は、ウイルス、薬物、アルコール等の様々な因子により障害を受け、急性肝炎、慢性肝炎、脂肪肝、黄疸、肝硬変等の肝臓疾患を起こす。現在これらの肝臓疾患治療剤として臨床的に使用されているのは、マロチラートやプレドニゾロン等数種にとどまっている。インターフェロンをはじめとする抗ウイルス剤においても、肝炎ウイルスを確実に排除するには至っておらず、発熱等の副作用も報告されている。ヒトのウイルス肝炎に類似した急性肝障害モデルとして、Ｄ−ガラクトサミン（GalN）誘発肝障害ラットが知られている。GalNをラットに過剰投与すると劇症肝炎の病態（食欲不振、吐き気、虚脱感、黄疸等）を示す。一方、アルコール性肝炎は、常用飲酒者がアルコール摂取量を急に増やすと発症しやすいといわれている。これらの原因によって障害を受けた肝細は、細胞内の酵素が血液中に流出するため血中ＡＬＴ、ＡＳＴ、γ−ＧＴＰ等が上昇する。なお、本発明の以下の実施例で肝障害の指標として測定する血中マーカーの略号は次の通りである。ＡＳＴ：アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ＡＬＴ：アラニンアミノトランスフェラーゼ、ＧＧＴ：γ-グルタミルトランスペプチダーゼ、ＬＤＬ：乳酸脱水素酵素(Lactate Dehydrogenase)である。
【実施例】
【００２１】
以下に本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００２２】
（製造例１）
ジャンボリーキの生燐片１ｋｇに１Ｌの純水を加え、ミキサーで粉砕後、ガーゼでろ過した。得られたろ液は鍋で加熱し、発生した多量の泡成分を柄杓で回収した。冷却後、ろ液は凍結乾燥して白色粉末１５ｇ（収率１．５％）を得た。
【００２３】
（製造例２）
ジャンボリーキ生燐片４０ｋｇを粉砕・圧搾し、圧搾液と残渣とを得た。次に圧搾液に２倍量の水を加えて泡回収装置（１００℃、２時間）にかけ、泡成分を液体として回収し、凍結乾燥器（ＦＤ）で粉末化した。得られた粉末は、白色で吸湿性があり、収率０．１４％（５５ｇ）であった。一方、残渣と泡回収後エキスは混合し、１５Ｌの水を加えて、泡回収装置で泡成分を再抽出し、凍結乾燥加工した。収率は０．１５％（６１ｇ）であった。これらを混合した結果、収率０．２９％で合計１１６ｇの凍結乾燥粉末が得られた。
【００２４】
（試験例１）ガラクトサミン処理肝障害モデルラットによる肝障害改善効果の測定
雄性ＳＤラット（５週齢、体重１１０〜１３０ｇ）７匹を一群として試験に供した。７００ｍｇ／ｋｇのＤ−ガラクトサミンを腹腔内に注射し、肝障害を誘発した。Ｄ−ガラクトサミン投与後８、２４、及び３２時間の３回（Ｃ群）、又はＤ−ガラクトサミン投与前１５時間、投与後８、２４、及び３２時間の４回（Ｄ群）に、製造例２により調製したジャンボリーキ泡粉末０．０６ｇ／ｋｇ体重当たりを胃ゾンデを用いてラットに経口投与した。なお、上記Ｄ−ガラクトサミン及びジャンボリーキ泡粉末の何れも投与しない無処理群（Ａ群）、Ｄ−ガラクトサミン投与のみ行った群（Ｂ群）をそれぞれ対照とした。Ｄ−ガラクトサミン投与と同時及び４８時間後に採血し、遠心分離後血漿ＡＳＴ、ＡＬＴ、総ビリルビン、ＧＧＴ、及びＬＤＬを測定した。なお、これらの測定には、「スポットケムＴＭII  肝機能−２[Liver-II]」キット（アークレイ株式会社製）を用い、キットに添付された取扱説明書の記載に従って行った。
【００２５】
その結果を表１、２及び図１〜６に示した。これらの結果より分かるように、GalN処理後４８時間のラット血漿中には、極めて高いＡＳＴ、ＡＬＴ、ＧＧＴ及びＬＤＬ活性が認められ、総ビリルビン量も顕著に増加しているが、ジャンボリーキ泡粉末を投与した群（Ｃ群及びＤ群）では有意にこれらの活性が低下していることが分かる。また、３回投与（Ｃ群）と４回投与（Ｄ群）のいずれの群もほぼ同等の効果であった。なお、投与量については、５０ｋｇのヒトが１日当たり１００ｇの生ジャンボリーキを摂食したとすると２ｇ／ｋｇとなり、泡成分の含有量は全体の３％程度であるから、０．０６ｇ／ｋｇと設定した。
【００２６】
【表１】
2005194216.tif 000002
【００２７】
【表２】
2005194216.tif 000003
【００２８】
（試験例２）アルコール摂取ラットによる肝機能改善効果の測定
（試料）製造例２により調製したジャンボリーキ泡粉末、ジャンボリーキ粉末（ムシューリックパウダーＰＳII）及びウコン粉末を、それぞれ０．００２ｇ／ｍｌ、０．００２ｇ／ｍｌ及び０．０１２ｇ／ｍｌとなるように、４０％エタノール及び９０％エタノールにそれぞれ溶解した。
【００２９】
（試験方法）雄性ＳＤラット（５週齢、体重１１０〜１３０ｇ）７匹を一群として試験に供した。７日間の予備飼育の後、上記各試料を含む４０％エタノール溶液を胃ゾンデを用いて１日に１ｍｌ、２５日間投与した。投与開始２６日目に上記各試料を含む９０％エタノール溶液１ｍｌを最終投与し、投与開始後２８日目に採血した。採取した血液を遠心分離後、血漿ＡＳＴ、ＡＬＴ、総ビリルビン、ＧＧＴ、及びＬＤＬを測定した。なお、上記試料溶液の代わりに、生理食塩水、又は４０％及び９０％エタノールを投与した群をそれぞれ無処理群、コントロール群とした。測定方法は、試験例１と同様に、「スポットケムＴＭII  肝機能−２[Liver-II]」キット（アークレイ株式会社製）を用いて行った。その結果を表３、４及び図７〜９に示した。なお、試料の投与量については、泡粉末、ジャンボリーキ粉末は５００ｍｇ／日／人、ウコン粉末は３ｇ／日／人となるように換算した。
【００３０】
【表３】
2005194216.tif 000004
【００３１】
【表４】
2005194216.tif 000005
【００３２】
表３及び４、並びに図７〜９に示された結果から明らかなように、アルコール投与によって、肝機能の指標としての血中ＡＳＴ及びＡＬＴ活性が上昇し、血漿中の総ビリルビン量は顕著に増加するが、ジャンボリーキ泡粉末成分を同時に投与することでこれらの酵素活性は有意に低下することが分かる。また、ウコン粉末と比較しても本発明の組成物であるジャンボリーキ泡粉末成分の効果が優れていることが分かる。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明の肝障害の改善用組成物は、Ｄ−ガラクトサミン及びアルコールで誘発された実験的肝障害ラットに対して血漿ＡＬＴ及びＡＳＴ等の上昇を抑制し、肝障害の予防あるいは治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ＧａｌＮ処理ラットのＡＳＴ活性に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を表したグラフである。
【図２】ＧａｌＮ処理ラットのＡＬＴ活性に対するジャンボリーキ泡粉の効果を表したグラフである。
【図３】ＧａｌＮ処理ラットの総ビリルビンに対するジャンボリーキ泡粉の効果を表したグラフである。
【図４】ＧａｌＮ処理ラットのＧＧＴ活性に対するジャンボリーキ泡粉の効果を表したグラフである。
【図５】ＧａｌＮ処理ラットのＬＤＬ活性に対するジャンボリーキ泡粉の効果を表したグラフである。
【図６】アルコール摂取ラットのＡＳＴ活性に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を表したグラフである。
【図７】アルコール摂取ラットのＡＬＴ活性に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を表したグラフである。
【図８】アルコール摂取ラットの総ビリルビン量に対するジャンボリーキ泡粉末の効果を表したグラフである。
【図１】
2005194216.tif 000006
【図２】
2005194216.tif 000007
【図３】
2005194216.tif 000008
【図４】
2005194216.tif 000009
【図５】
2005194216.tif 000010
【図６】
2005194216.tif 000011
【図７】
2005194216.tif 000012
【図８】
2005194216.tif 000013