(57)【要約】  【課題】  医薬、農薬等の中間体原料として産業上有用な化合物である６−ブロモニコチン酸を効率的に製造する方法を提供する。  【解決手段】  ２−ブロモ−５−シアノピリジンにロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物、例えば、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１５、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１６、ロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１３９９、及びロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１２１２２の菌体及び／又はそれらの処理物を作用させ、６−ブロモニコチン酸を生成させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）
【化１】
2005348605.tif 000005
で表される２−ブロモ−５−シアノピリジンにロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物の菌体及び／又はそれらの処理物を作用させ、下記式（ＩＩ）
【化２】
2005348605.tif 000006
で表される６−ブロモニコチン酸を生成させることを特徴とする６−ブロモニコチン酸の製造方法。
【請求項２】
微生物が、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１５、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１６、ロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１３９９、及びロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１２１２２からなる群より選ばれる微生物であることを特徴とする請求項１に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２−ブロモ−５−シアノピリジンから、該ニトリル基を微生物によりカルボン酸化することで６−ブロモニコチン酸を製造する方法に関する。
これにより得られる６−ブロモニコチン酸は医薬品又は農薬製造の重要な中間体である。
【背景技術】
【０００２】
ニコチン酸誘導体は、従来より、医農薬中間体として重要な化合物であり、これらを合成する方法としては、シアノピリジンをカルボン酸化する方法が知られていた。
生物学的にシアノピリジン類からニコチン酸類を生成する方法として、アグロバクテリウム属，アシネトバクター属，ミクロバクテリウム属，セルロモナス属，サイトファーガ属，オベサムバクテリウム属，ストレプトミセス属に属する微生物により３−シアノピリジンからニコチン酸を製造する方法が知られている（特許文献１）。また、有機合成的にシアノピリジン類からニコチン酸類を生成する方法が知られている（非特許文献１）。しかしながら、置換基を有するシアノピリジン類のニコチン酸類への変換に関する記載は全くなく、非特許文献１に記載の方法で、例えば２−ブロモ−５−シアノピリジンをカルボン酸化しようとすると置換基の臭素が脱離し収率が低減することが予想される。
【特許文献１】特開平３−２８０８９２号公報
【非特許文献１】Zhurnal Prikladnoj Khimii, No.45, p.2588, 1972年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
従って、２−ブロモ−５−シアノピリジンから、該ニトリル基を微生物によりカルボキシル基に変換することで６−ブロモニコチン酸を工業的に安価に生産できる新規な製造方法を提供することを本発明の課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題を解決するために、２−ブロモ−５−シアノピリジンのニトリル基の効率的なカルボン酸化法を開発すべく鋭意検討を行った結果、ロドコッカス属に属する微生物が本反応において優れた活性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明の要旨は、以下のとおりである。
（１）  下記式（Ｉ）
【０００５】
【化３】
2005348605.tif 000002
【０００６】
で表される２−ブロモ−５−シアノピリジンにロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する微生物の菌体及び／又はそれらの処理物を作用させ、下記式（ＩＩ）
【０００７】
【化４】
2005348605.tif 000003
【０００８】
で表される６−ブロモニコチン酸を生成させることを特徴とする６−ブロモニコチン酸の製造方法。
（２）  微生物が、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１５、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１６、ロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１３９９、及びロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１２１２２からなる群より選ばれる微生物であることを特徴とする（１）に記載の製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の方法により、２−ブロモ−５−シアノピリジンのニトリル基を微生物により効率的にカルボン酸へ変換することができ、医薬、農薬等の重要な中間体原料として産業的に有用な化合物である６−ブロモニコチン酸を高収率で得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の実施の形態につき詳細に説明する。
本発明は、２−ブロモ−５−シアノピリジンのニトリル基を微生物及び／又はその処理物を作用させることにより、６−ブロモニコチン酸を生成するものである。
本発明の製造方法に用いる微生物としては、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）に属する微生物が用いられるが、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１５、ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１６、ロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１３９９、ロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１２１２２が好ましく用いられる。ロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１５、及びロドコッカス  エスピー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）  ＮＣＩＭＢ１１２１６は、The National Collections of Industrial and Marine Bacteria Ltd.（NCIMB）のカタログ (1994)に記載されており、該NCIMBから入手することができる。ロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１３９９、及びロドコッカス  エリスロポリス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ）  ＩＡＭ１２１２２は、IAM Culture Collection（IAMCC）のカタログ
First edition(1993)に記載されており、東京大学分子細胞生物学研究所IAM Culture Collection (IAMCC)から入手することができる。
【００１１】
本発明の製造方法において用いられる上記微生物は、野生株だけでなく、ＵＶ照射やＮＴＧ処理等の通常の変異処理により得られる変異株、細胞融合などの遺伝学的手法により誘導されるいずれの株であってもよい。また、６−ブロモニコチン酸生成能を有するロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属微生物から、２−ブロモ−５−シアノピリジンから６−ブロモニコチン酸の生成に関わる酵素（以下、「６−ブロモニコチン酸生成酵素」と称する。）を精製し、該酵素をコードする遺伝子をロドコッカス属微生物から単離し、該遺伝子を遺伝子組み換え法等により適当な宿主中で発現させることにより誘導される遺伝子組み換え株であってもよい。
【００１２】
微生物の培養物からの６−ブロモニコチン酸生成酵素の取得方法としては、通常の酵素
の精製方法を用いることができ、例えば、以下の方法で行うことができる。上記微生物をロドッコカス属微生物の培養に用いられる一般的な培地で培養することで十分に増殖させた後に回収し、ＤＴＴ（dithiothreitol）等の還元剤や、フェニルメタンスルホニルフルオリド（phenylmethansulfonyl  fluoride；ＰＭＳＦ）の様なプロテアーゼ阻害剤を加えた緩衝液中で破砕して無細胞抽出液とする。無細胞抽出液から、タンパク質の溶解度による分画（有機溶媒による沈殿や硫安などによる塩析など）や、陽イオン交換、陰イオン交換、ゲル濾過、疎水、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、キレート、色素、抗体等を用いたアフィニティークロマトグラフィー等を適宜組み合わせることにより精製することが出来る。
【００１３】
６−ブロモニコチン酸生成酵素をコードするＤＮＡは、例えば、以下のような方法によって単離することができる。
まず、６−ブロモニコチン酸生成酵素を上記の方法等にて精製後、Ｎ末端アミノ酸配列を解析し、さらに、リジルエンドペプチダーゼ、Ｖ８プロテアーゼなどの酵素により切断し、逆相液体クロマトグラフィーなどによりペプチド断片を精製後、プロテインシーケンサーによりアミノ酸配列を解析することにより複数のアミノ酸配列を決めることができる。
【００１４】
決定したアミノ酸配列を元にＰＣＲ用のプライマーを設計し、６−ブロモニコチン酸生成酵素生産微生物株の染色体ＤＮＡもしくは、ｃＤＮＡライブラリーを鋳型とし、アミノ酸配列から設計したＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲを行うことにより本発明のＤＮＡの一部を得ることができる。さらに、得られたＤＮＡ断片をプローブとして、６−ブロモニコチン酸生成酵素生産微生物株の染色体ＤＮＡの制限酵素消化物をファージ、プラスミドなどに導入し、大腸菌を形質転換して得られたライブラリーやｃＤＮＡライブラリーを利用して、コロニーハイブリダイゼーション、プラークハイブリダイゼーションなどにより、６−ブロモニコチン酸生成酵素をコードするＤＮＡを得ることができる。
【００１５】
また、ＰＣＲにより得られたＤＮＡ断片の塩基配列を解析し、得られた配列から、既知のＤＮＡの外側に伸長させるためのＰＣＲプライマーを設計し、６−ブロモニコチン酸生成酵素生産微生物株のｃＤＮＡを用いてＲＡＣＥ（Rapid  amplification  of  cDNA  ends）法（Molecular  Cloning  ３rd  Ed.、Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press）により本発明のＤＮＡを得ることも可能である。
【００１６】
上記のようにして単離された、６−ブロモニコチン酸生成酵素をコードするＤＮＡを公知の発現ベクターに発現可能に挿入することにより、６−ブロモニコチン酸生成酵素発現ベクターが提供される。また、この発現ベクターで形質転換した形質転換体を培養することにより、６−ブロモニコチン酸生成酵素を該形質転換体から得ることができる。あるいは、形質転換体は、公知の宿主の染色体ＤＮＡに６−ブロモニコチン酸生成酵素をコードするＤＮＡを発現可能に組み込むことによっても得ることができる。
【００１７】
形質転換体の作製方法としては、具体的には、微生物中において安定に存在するプラスミドベクターやファージベクター中に、本発明のＤＮＡを導入し、構築された発現ベクターを該微生物中に導入するか、もしくは、直接宿主ゲノム中に６−ブロモニコチン酸生成酵素をコードするＤＮＡを導入し、その遺伝情報を転写・翻訳させる必要がある。
このとき、６−ブロモニコチン酸生成酵素をコードするＤＮＡが宿主微生物中で発現可能なプロモーターを含んでいない場合には、適当なプロモーターを本発明のＤＮＡ鎖の５'−側上流に、より好ましくはターミネーターを３'−側下流にそれぞれ組み込む必要がある。このプロモーター及びターミネーターとしては、宿主として利用する微生物中において機能することが知られているプロモーター及びターミネーターであれば特に限定されず、これら各種微生物において利用可能なベクター、プロモーター及びターミネーターなどに関しては、例えば「微生物学基礎講座８遺伝子工学・共立出版」、特に酵母に関しては、Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．  ４３，７５−１０２（１９９０）、Ｙｅａｓｔ  ８，４２３−４８８（１９９２）などに詳細に記述されている。
【００１８】
尚、上記遺伝子組み換え株の宿主としては、宿主自体が本反応に悪影響を与えない限り特に限定されることはなく、具体的には以下に示すような微生物を挙げることができる。
エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属などに属する宿主ベクター系の確立されている細菌。
【００１９】
ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属などに属する宿主ベクター系の確立されている放線菌。
サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、クルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、シゾサッカロマイセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、チゴサッカロマイセス（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、ヤロウイア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属、ロドスポリジウム（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）属、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属などに属するの宿主ベクター系の確立されている酵母。
【００２０】
ノイロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、セファロスポリウム（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属などに属するの宿主ベクター系の確立されているカビ。
上記微生物の中で宿主として好ましくは、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属であり、特に好ましくは、エシェリヒア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属である。
【００２１】
本発明の製造方法においては、上記微生物の菌体及び／またはそれらの処理物の形で用いられる。具体的には、前記微生物の培養液にそのまま添加する、あるいは遠心分離して得られた湿潤状態の菌体；該菌体をアセトン処理したもの、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵素的に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができる。また、これらの菌体または菌体処理物から、６−ブロモニコチン酸生成酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用いることも可能である。さらには、この様にして得られた菌体、菌体処理物、酵素画分等を通常の固定化技術を用いて、すなわち、ポリアクリルアミドゲル、カラギーナンゲル等に代表される担体に固定化したもの等を用いることも可能である。そこで、本明細書において「菌体及び／またはそれらの処理物」の用語は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられる。
【００２２】
また、上記微生物は、通常、培養して用いられるが、培地に用いる炭素源としてはパラフィン類を用いても良いが、パラフィン類以外の培養に使用する培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源及び無機イオン等が含まれる。炭素源としては、ガラクトース、ラクトース、グルコース、フルクトース、シュークロース、サッカロース等の炭水化物；グリセリン、マンニトール、キシリトール、リビトール等のポリアルコール類；クエン酸、フマル酸等の有機酸その他が適宜使用される。窒素源としては、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等の無機窒素源；カザミノ酸、大豆加水分解物、マルトエキス、トリプトース
、酵母エキス、ポリペプトン、尿素、肉エキス、コーンスティープリカー、大豆抽出物等の有機窒素源その他が適宜使用できる。無機イオンとしては、マグネシウム、カリウム、鉄、マンガン、モリブデン等の金属イオンやリン酸イオン等を含有したようなものを用いればよいが、それらを組み合わせた無機塩類を添加するのが簡便である。さらに、ビオチン，パントテン酸，イノシトール，ニコチン酸その他のビタミン類を必要に応じ添加することは有効である。
【００２３】
培養に用いる培地は、通常、０．１〜５．０重量％程度の炭素源と窒素源をそれぞれ含む。
培養は、好気的条件で培地のｐＨを３〜１０、好ましくは５〜９の範囲に調整し、温度１０〜４５℃、好ましくは２０〜３５℃、１〜１０日の範囲で活性が最大になるまで行うことが好ましい。
【００２４】
本発明の製造方法の具体的反応様式としては、反応基質となる２−ブロモ−５−シアノピリジンを上記微生物の培養液中に添加して反応させる方法、菌体及び/またはそれらの
処理物をは２−ブロモ−５−シアノピリジンを含有する水性媒体に作用させる方法が挙げられる。
ここで用いられる水性媒体としては、水、緩衝液等が挙げられるが、この水性媒体には、メタノール等の水溶性有機溶媒または酢酸エチル等の脂溶性有機溶媒を１〜５％程度適宜含有させることも可能である。
【００２５】
反応基質となる２−ブロモ−５−シアノピリジンの反応液への添加量としては、その反応液中の濃度が０．０１〜１重量％なる程度の量であり、これは水性媒体に必ずしも完全に溶解していなくてもよい。
また、蓄積量を向上させるに当たっては、反応にかかわる酵素に対して反応原料による基質阻害を防ぐため、基質濃度を高くするよりは反応基質である２−ブロモ−５−シアノピリジンを消費された量だけ連続的にあるいは間歇的に添加していくことも出来る。
【００２６】
反応液に添加する微生物の菌体及び／またはその処理物の量は，菌体を添加する場合は反応液にその菌体濃度が０．０１〜２０重量％程度となるように添加する。また、酵素のような処理物を用いる場合には、酵素の比活性を求め、添加したときに上記菌体濃度に相当する酵素濃度になるような量を添加する。
本反応における好ましい反応条件は、反応温度が氷点〜７０℃、好ましくは１０〜５０℃であり、ｐＨが２〜１２、好ましくは７〜１１であり、反応時間が１〜１００時間程度である。
【００２７】
反応終了後、反応液を遠心分離あるいはろ過等で除菌後、反応上清に酢酸エチル、メチルエチルケトン、クロロホルム、ジクロロメタン等の有機溶媒を添加して攪拌抽出し、溶媒を除去した後適当な担体を用いたカラムクロマトグラフィー等の公知の方法で単離・精製することが出来る。
抽出前に反応液は塩酸、硫酸等の酸を用い、あらかじめ酸性にしたほうが生成物の回収率がよい。
【実施例】
【００２８】
次に、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例の記載に限定されるものではない。
（１）２−ブロモ−５−シアノピリジンから６−ブロモニコチン酸を生成する微生物の単離
イーストエキス（オリエンタル酵母社製）  ２ｇ／Ｌ，ポリペプトン（日本製薬社製）８ｇ／Ｌ，グルタミン酸ソーダ（和光純薬社製）  １３ｇ／Ｌ、コーンティープリカー（
庄野澱粉工業社製）  ２ｇ／Ｌ，グルコース  １０ｇ／ｌ，Ｌ−ヒスチジン  １ｇ／ｌ，Ｌ−メチオニン  １ｇ／ｌ，硫酸マグネシウム７水和物  ０．５ｇ／ｌ，リン酸水素２カリウム  ２ｇ／ｌ，イソバレロニトリル  １．２ｍｌ／ｌの組成からなる液体培地３０ｍＬに、表１に示した各種の菌株を接種し、２８℃で４８時間好気的に培養した。得られた培養液から遠心分離によって菌体を集め、０．８５％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液０．５ｍｌに懸濁した。この懸濁液に、１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）を０．１ｍｌ、メタノールに溶解した６．０９ｇ／ｌの２−ブロモ−５−シアノピリジン溶液を０．３ｍｌ、蒸留水１．１ｍｌを添加し、３０℃で１０分間反応をおこなった。
メタノールを２ｍｌ添加し反応を終了させ、遠心分離によって菌体を除去し、６−ブロモニコチン酸を液体クロマトグラフィー（ＬＣ）を用いて測定した。ＬＣの条件は以下の通りである。
【００２９】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ  Ｓ  ５ＯＤＳ  （Ｗａｔｅｒｓ社製、１５０ｍｍ×４．６ｍｍＩＤ）
溶離液：０．０３％リン酸／アセトニトリル＝８／２
カラム温度：３０℃
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
生成した６−ブロモニコチン酸の定量結果を表１に示す。
【００３０】
【表１】
2005348605.tif 000004
【００３１】
（２）ロドコッカス  エスピー  ＮＣＩＭＢ１１２１５を用いた６−ブロモニコチン酸の生成
前記（１）で得られたをロドコッカス  エスピー  ＮＣＩＭＢ１１２１５の培養液２０ｍｌ分から得られた菌体を１ｍｌの０．８５％（ｗ／ｖ）塩化ナトリウム水溶液に懸濁した。この懸濁液に、１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）を１ｍｌ、２−ブロモ−５−シアノピリジン溶液を３．６６ｇ、蒸留水を１８ｍｌ添加し、３０℃で３時間反応をおこなった。
【００３２】
上記反応液にメタノール２０ｍｌを添加し反応を終了させ、６−ブロモニコチン酸の定量を実施例１と同様の方法で行った。
この結果、生成した６−ブロモニコチン酸の収量は１．１７ｇであった。得られた６−ブロモニコチン酸の物性は次のとおりである。
1H-NMR (400 MHz, TMS/CDCl3, d ppm) d: 7.64 (dd, J=8.32, 0.48 Hz, 1H), 8.19 (dd, J=8.32, 2.56 Hz, 1H), 9.04 (d, J=2.04, 1H)