(57)【要約】【課題】質量分析計で分析される測定試料の脱塩処理を低コストで迅速かつ感度向上に役立つ微小結晶化が可能なピンスポット用プレートカラム装置を実現する。【解決手段】減圧箱３は上面側が開放された状態であり下部側面は減圧器具に接続される。プレートカラム１はサンプルプレート２のサンプル塗布位置に合わせたサンプル脱塩処理用の穴が形成され、これら複数の穴は焼結フィルタ、充填材を有する。測定対象物の液をカラム１の複数の穴に減圧して流し複数の穴内に対象物を保持させ０．１％トリクロロ酢酸を１０〜２０μｌ加え脱塩処理を行う。サンプルプレート２を箱３に設置し７５％メタノール等をカラム１に加え測定目的物をサンプルプレート２上に溶出させる。このとき、減圧具合を変化させ、ゆっくりと目的物がサンプルプレート２上に滴下するようにし、サンプルプレート２上で自然乾燥させて微小な結晶を大量に形成させることが可能となる。【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
質量分析計により分析される測定試料の脱塩前処理を行うピンスポット用プレートカラム装置であって、
脱塩処理を行う充填材が保持された複数の脱塩処理部が形成されたプレートカラムと、
上記プレートカラムに形成された脱塩処理部により脱塩処理された測定試料をスポット状に保持するサンプルプレートと、
上記プレートカラムとサンプルプレートを支持し、その内部が外部に対して減圧される減圧箱と、
上記減圧箱の内部を外部に対して減圧する減圧手段と、
を備えることを特徴とするピンスポット用プレートカラム装置。
【請求項２】
請求項１記載のピンスポット用プレートカラム装置において、上記減圧手段は、減圧箱の内部圧力減圧速度を調整できることを特徴とするピンスポット用プレートカラム装置。
【請求項３】
質量分析計により分析される測定試料の脱塩処理を行うピンスポット用プレートカラムであって、
複数の穴を形成し、これら形成した穴のそれぞれに、フィルタと、脱塩処理用の充填材を配置して脱塩処理部とし、これら複数の脱塩処理部に測定試料液体を供給し、脱塩処理部から滴下することにより測定試料の脱塩処理を行うことを特徴とするピンスポット用プレートカラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、質量分析計による測定試料の調製に係り、測定試料の脱塩を行い、サンプルプレートに微小なスポットを結晶化させる装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
例えば、MALDI （Matrix-assisted Laser desorption ionization）をイオン源とする質量分析計でタンパク質や糖鎖試料を測定する場合には、図４に示すように、サンプルプレート１５に脱塩処理された測定対象物を塗布したものが使用される。
【０００３】
サンプルプレート１５へのサンプルの塗布は次のようにして行われる。
【０００４】
つまり、図３に示すように、使い捨ての先端の細いチップにODS系のカラム充填材を充填したチップ（脱塩カラムチップ）１０を、プッシュ式液体用微量体積計９に装着する。
【０００５】
そして、カラムの活性化を行うために、容器に収容されたアセトニトリル１１をチップ１０内に吸引し、チップ１１のカラム内をアセトニトリル１１で満たす。カラム内をアセトニトリル１１で満たした後の数分後、容器に収容されたアセトニトリル１１の５倍量程度の０．１％トリクロロ酢酸（TFA）水溶液１２を、チップ１０に吸引吐出してカラム内を洗浄する。
【０００６】
次に、容器に収容された測定試料１３を数回（１０回程度）、チップ１０内に出し入れして、チップ１０内に測定目的のペプチドを吸着させる。
【０００７】
その後、０．１％TFA水溶液１２で、チップ１０内を数回洗浄して測定サンプル内の塩類を除去しておく。この塩類は、質量分析を行うためのイオン化を阻害し感度を低下させるため、脱塩処理は、必要不可欠な操作である。
【０００８】
脱塩処理後、７０％（５０〜１００％）アセトニトリル、０．１％TFA水溶液１４を、０．２〜５μｌだけチップ１０内に吸い込み、図４に示すように、ゆっくりとサンプルプレート１５に塗布する。
【０００９】
この時、ステンレス製のサンプルプレート１５になるべく、測定対象物が小さな結晶となるように、数回にわけて微量０．１〜０．５μｌを塗布していく。
【００１０】
以上説明したような、試料の脱塩処理、サンプルプレートへの塗布処理は、検査者等の手作業により、測定サンプル１つ１つ行なう場合は、非常に煩雑な作業であり、サンプルの測定処理全体の作業効率を低下させていた。
【００１１】
そこで、最近では、例えば、特許文献１に記載されているようなピペット、サンプルスライドに、脱塩カラムチップを使用して、脱塩処理、サンプルプレートへの塗布処理を、ロボット化して連続的に行う装置が開発されている。
【００１２】
【特許文献１】特開平１０-４８１１０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
しかしながら、上記従来技術のように、脱塩処理、サンプルプレートへの塗布処理をロボット化する場合には、その装置価格が非常に高い。また、駆動系のミスが発生する場合も考えられ、脱塩処理やサンプルプレートへの正確な塗布に対する信頼性が低くかった。
【００１４】
本発明の目的は、低コストで、質量分析計により分析される測定試料の脱塩処理を迅速にかつ感度向上に役立つ微小結晶化が可能なピンスポット用プレートカラム装置を実現することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記目的を達成するため、本発明は次のように構成される。  
（１）質量分析計により分析される測定試料の脱塩前処理を行うピンスポット用プレートカラム装置であって、脱塩処理を行う充填材が保持された複数の脱塩処理部が形成されたプレートカラムと、上記プレートカラムに形成された脱塩処理部により脱塩処理された測定試料をスポット状に保持するサンプルプレートと、上記プレートカラムとサンプルプレートを支持し、その内部が外部に対して減圧される減圧箱と、上記減圧箱の内部を外部に対して減圧する減圧手段と、を備える。
【００１６】
（２）好ましくは、上記（１）において、上記減圧手段は、減圧箱の内部圧力減圧速度を調整できる。
【００１７】
（３）質量分析計により分析される測定試料の脱塩処理を行うピンスポット用プレートカラムであって、複数の穴を形成し、これら形成した穴のそれぞれに、フィルタと、脱塩処理用の充填材を配置して脱塩処理部とし、これら複数の脱塩処理部に測定試料液体を供給し、脱塩処理部から滴下することにより測定試料の脱塩処理を行う。
【００１８】
減圧箱は上面側が開放された状態であり下部側面は減圧手段に接続される。プレートカラムはサンプルプレートのサンプル保持位置に合わせたサンプル脱塩処理用部が形成され、これら複数の脱塩処理部はフィルタ、充填材を有する。測定対象物の液をプレートカラムの複数の脱塩処理部に減圧して流し対象物を保持させ脱塩処理を行う。サンプルプレートを減圧箱に設置し溶出液をプレートカラムに加え、測定目的物をサンプルプレート上に溶出させる。
【００１９】
このとき、減圧具合を変化させ、ゆっくりと目的物がサンプルプレート上に滴下するようにし、サンプルプレート上で自然乾燥させて微小な結晶を大量に形成させる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、質量分析計により分析される測定試料の脱塩処理を低コストで迅速にかつ感度向上に役立つ微小結晶化が可能なピンスポット用プレートカラム装置を実現することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明の実施形態について添付図面を参照して説明する。  
図１は，本発明の一実施形態であるピンスポット用プレートカラム装置の概略外観斜視図であり、図２は、プレートカラム１の説明図である。
【００２２】
図１において、減圧箱３は、厚さ５ｍｍ程度のアクリル板で形成され、立方体の６面のうち、一面（上面）側が開放された状態となっている。また、この箱３の下部側面には、水道水による減圧器具（アスピレータ）に接続できる管６が形成されている。
【００２３】
この箱３の上方開放部から、プレートカラム１及びサンプルプレート２が、取り付け取り出しされる。プレートカラム１及びサンプルプレート２は、棚４及び５のそれぞれにより、箱３の内部上方部に支持される。
【００２４】
プレートカラム１は、厚さ５〜１５ｍｍのアクリル板もしくは金属板を５７ｍｍ片の正方形に成型されたものである。また、プレートカラム１は、サンプルプレート２のサンプル塗布位置に合わせた、複数の穴（サンプル脱塩処理用の穴であり、脱塩処理部を形成する）が形成されている。
【００２５】
これら複数の穴は、次のようにして形成される。  
つまり、プレートカラム１に、直径２ｍｍの穴を１１８〜１２０度のドリルで貫通手前1〜２ｍｍまでの位置まで形成する。次に、０．１〜０．３ｍｍのドリルで、上記穴の未貫通部分の中心部を貫通させる。これにより、プレートカラム１の表側と裏側には大径の穴と小径の穴とが形成される。
【００２６】
図２に示すように、穴の底（小径側）９に焼結フィルタ７を装着し、その上から、ポアーサイズ１０〜２５nmのODS充填材（タンパク質のみ捕捉するためのもの）２〜５μｍをプレート表面より１〜３ｍｍくらいまで充填する。
【００２７】
充填材の充填方法は、サンプルプレート２は未装着とし、プレートカラム１を箱３に装着した状態で、ODS充填材をプレートカラム１の穴に０．１％トリクロロ酢酸を含む７５％のメタノールもしくはアセトニトリルで分散した液体（スラリー液）を少量（１〜５μｌ）分注器でいれる。
【００２８】
ピンポイント用プレートカラム１の下方部は、菅６を介して水道水をゆっくり流してアスピレータ等により減圧して（減圧速度を調節する）、効率良くカラム１内のスラリー液が流れるようにする。
【００２９】
このようにして、図２に示すように、充填材８がカラム１の複数の穴に充填される。
【００３０】
カラムの活性化は、１００％のメタノール、または０．１％トリクロロ酢酸を含む７５％メタノール、またはアセトニトリルを複数の穴にゆっくり流して行う。
【００３１】
カラムの平衡化は、カラム活性化後の状態でプレートカラム１に０．１％トリクロロ酢酸を1〜５μｌを加え減圧して複数の穴にゆっくり流す。
【００３２】
次に、測定対象物である酵素消化物の濃縮された１〜５μｌの液を、カラム１の複数の穴に、減圧してゆっくり流し、カラム１の複数の穴内に目的物であるペプチドを保持させる。
【００３３】
続いて、カラム１の複数の穴に０．１％トリクロロ酢酸を１０〜２０μｌ加え塩類を溶出させ、脱塩処理を行う。
【００３４】
次に、サンプルプレート２にマトリックス（質量分析用の化学物質）を塗布して、箱３に設置し、その上方１〜２ｍｍ程度距離をおいて、上記プレートカラム１を設置する。その後、０．１％トリクロロ酢酸を含む７５％メタノールもしくはアセトニトリルを１〜５μｌ、プレートカラム１の複数の穴に加え測定目的物であるペプチドをサンプルプレート２上に溶出させる。
【００３５】
このとき、減圧具合（水道水の流量を調節）を変化させ、ゆっくりと目的物がサンプルプレート２上に滴下するようにし、サンプルプレート２上で自然乾燥させて、微小な結晶を大量に形成させることが可能となる。
【００３６】
以上のように、フィルタ７及びカラム充填材８が設置された複数の穴を有するプレートカラム１の上方から、上記複数の穴に測定対象物の溶液を流し、これら複数の穴内に保持した後、脱塩処理液を複数の穴に流して脱塩処理し、次に、溶出液を複数の穴に流して、プレートカラム１の下方部に配置されたサンプルプレート２に滴下するように構成したので、液体用微量体積計や、使い捨ての脱塩カラムチップが不要であり、構成簡単な低コストで、質量分析計により分析される測定試料の脱塩処理を迅速にかつ感度向上に役立つ微小結晶化が可能なピンスポット用プレートカラム装置を実現することができる。
【００３７】
なお、上述した実施形態においては、アスピレータを用いて、箱３内を減圧するように構成したが、アスピレータには限らず減圧速度を調節可能な他の減圧手段を使用することも可能である。
【００３８】
また、プレートカラム１はフィルタ７、カラム充填材８を有する複数の穴が既に形成されたものの、一穴づつ、別個にシールを施して閉鎖状態としておき、使用するときに、必要部分のシールを除去するように構成することもできる。
【００３９】
また、上述した例においては、箱３は、上方部のみが開放状態となっている箱であるが、一側面に扉を形成し、その一側面を開放及び閉鎖可能とすることもできる。このように構成すれば、プレートカラム１や、サンプルプレート２の箱３内部からの出し入れを容易とすることができる。
【００４０】
また、プレートカラム１とサンプルプレート２との両方が箱３内に設置された状態で箱３内を減圧する場合、プレートカラム１とサンプルプレート２との間の空間が減圧されるように、サンプルプレート１には、連通孔等が形成されている。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】本発明の一実施形態ピンスポット用プレートカラム装置の概略外観斜視図である。
【図２】図１の例におけるプレートカラム１の説明図である。
【図３】従来技術におけるサンプルの脱塩処理の説明図である。
【図４】従来技術におけるサンプルプレートへのサンプルの塗布作業の説明図である。
【符号の説明】
【００４２】
１            ピンポイント用プレートカラム
２            サンプルプレート
３            減圧箱
４            ピンポイント用プレートカラムの棚
５            サンプルプレート用棚
６            水道水アスピレータ用パイプ（菅）
７            焼結フィルタ
８            カラム充填剤
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
2005091007.tif 000006