(57)【要約】【課題】アレイ作成開始時と終了時で均一なスポットを行いアレイの品質を安定させることができるスポット液を提供すること。【解決手段】６０℃での蒸気圧が５ｍｍＨｇ以下であり、かつ固定用試料を０．００１％（Ｗ／Ｖ）以上溶解できる溶媒を５０質量％以上１００質量％以下含有する、試料を担体上に固定するためのスポット液。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
６０℃での蒸気圧が５ｍｍＨｇ以下であり、かつ固定用試料を０．００１％（Ｗ／Ｖ）以上溶解できる溶媒を５０質量％以上１００質量％以下含有する、試料を担体上に固定するためのスポット液。
【請求項２】
該溶媒を５５質量％以上９０質量％以下含有する、請求項１に記載のスポット液
【請求項３】
試料が核酸である、請求項１又は２に記載のスポット液。
【請求項４】
溶媒がホルムアミドである、請求項１から３の何れかに記載のスポット液。
【請求項５】
５０質量％以上１００質量％以下のホルムアミド溶液から成る、請求項１から４の何れかに記載のスポット液。
【請求項６】
多孔性の吸着性領域を有する生化学解析用ユニットから成る担体に試料を固定化するために使用する、請求項１から５の何れかに記載のスポット液。
【請求項７】
請求項１から６の何れかに記載のスポット液を使用して試料を担体上に固定化したアレイ。
【請求項８】
担体が多孔性の吸着性領域を有する生化学解析用ユニットである、請求項７に記載のアレイ。
【請求項９】
請求項１から６の何れかに記載のスポット液を使用して試料を担体上に固定化する工程を含む、試料を固定化したアレイの製造方法。
【請求項１０】
担体が多孔性の吸着性領域を有する生化学解析用ユニットである、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アレイの作成に用いる低揮発性スポット液に関する。より詳細には、本発明は、固定化する試料の溶媒として低揮発性溶媒を主成分とするスポット液に関する。
【０００２】
【従来の技術】
核酸の塩基配列の決定、試料中の標的核酸の検出、並びに各種細菌の同定などを迅速かつ正確に行うための技術の一つとして、例えば該標的核酸と特異的に結合し得るプローブを固相担体上に多数並べたアレイを使用する方法が知られている。特に、多数のプローブを固相担体上に固定化したマイクロアレイ  は、遺伝子の多型解析や遺伝子の発現解析などの目的で広く利用されている。固相担体上へのプローブ（例えば、核酸など）の固定化は、プローブと結合しうる適当な官能基を導入した固相担体上へ、ピンあるいはバブルジェットなどを用いてプローブ溶解液（スポット液）をスポッティングすることによって行われる。
【０００３】
スポット法によるＤＮＡアレイ作成の際に従来から用いられている溶液としては、固定化用のｃＤＮＡ、プラスミド又はオリゴＤＮＡの溶媒として、ＴＥや３×ＳＳＣ水溶液などの揮発性物質を主成分とする溶液が用いられてきた。アレイ作成において、その試料溶液のスポット作業が長時間にわたるような場合、マイクロタイタープレートに分注した極微量の試料溶液を長時間空気中にさらすことになる。このことにより、試料溶液が時間経時とともに蒸発し、試料濃度が上昇し、体積が減少することになる。そのため、アレイ作成開始時と終了時で均一なスポットができず、作成されたアレイの品質が安定しないという問題があった。例えば、固定化されるｃＤＮＡなどの固定化量に差が生じて性能差が生じるという問題などである。
【０００４】
この対策として、装置や環境を高湿度に保つなどの対策が取られてきたが、十分とは言い難く、また、特殊な装置や設置場所を必要とするため、高コストの原因でもあった（特開２００２−３６５３０２号公報、及び特表２００２−５０２９５５号公報）。
【０００５】
また、低揮発性の溶媒ＤＭＳＯをスポット液に添加し（例えば、５０％ＤＭＳＯ＋５０％イオン交換蒸留水）、蒸発量を抑える試みがなされているが、いまだ十分な対策とはなっていないのが現状である（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２９（３），５４８−５６２，２０００）。
【０００６】
さらに特開２００２−１８１８１７号公報には、ポリヌクレオチドを少なくとも水に約１０体積％ホルムアミドを添加した溶媒に溶解することによって調整したポリヌクレオチド溶液を用いてポリヌクレオチドアレイを作製する方法が記載されている。しかし、１０体積％ホルムアミドを含む試料溶液を使用するこの方法では、該試料溶液が時間経時とともに蒸発するという問題が依然として残っている。
【０００７】
【特許文献１】
米国特許第６，１１０，４２６号公報
【特許文献２】
特開２００２−３６５３０２号公報
【特許文献３】
特表２００２−５０２９５５号公報
【特許文献４】
特開２００２−１８１８１７号公報
【非特許文献１】
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２９（３），５４８−５６２，２０００
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記した従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。即ち、本発明は、アレイ作成開始時と終了時で均一なスポットを行いアレイの品質を安定させることができるスポット液を提供することを解決すべき課題とした。さらに本発明は、特殊な装置や設置場所を必要とすることなく、品質の安定したアレイを低コストで作成することができるスポット液を提供することを解決すべき課題とした。
【０００９】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、固定化する試料の溶媒として、試料を十分に溶解することができ、かつ低揮発性の溶媒（例えば、ホルムアミドなど）を使用することにより、固定化作業中の溶媒の蒸発を抑え、試料濃度の変化を防止することができることを見出した。これによれば、固定化用試料溶液の環境を厳密に管理するような特殊なアレイ作成装置を使用しなくても、蒸発による試料濃度変化が防止でき、同一試料からのアレイの作成枚数を格段に増加することができる。また、ホルムアミドによる固定化担体（ガラス、半導体基板、多孔質メンブレン等）へのスポッティングにおいては、スポット径が水溶液よりも小さくなる傾向がみられ、より高密度でのスポッティングが可能となる。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
【００１０】
即ち、本発明によれば、６０℃での蒸気圧が５ｍｍＨｇ以下であり、かつ固定用試料を０．００１％（Ｗ／Ｖ）以上溶解できる溶媒を５０質量％以上１００質量％以下含有する、試料を担体上に固定するためのスポット液が提供される。
好ましくは、該溶媒を５５質量％以上９０質量％以下含有するスポット液が提供される
好ましくは、試料は核酸である。
【００１１】
好ましくは、溶媒はホルムアミドである。
好ましくは、５０質量％以上１００質量％以下のホルムアミド溶液から成るスポット液が提供される。
好ましくは、多孔性の吸着性領域を有する生化学解析用ユニットから成る担体に試料を固定化するために使用するスポット液が提供される。
【００１２】
本発明の別の側面によれば、上記の何れかのスポット液を使用して試料を担体上に固定化したアレイが提供される。
上記のアレイにおいて、好ましくは、担体は多孔性の吸着性領域を有する生化学解析用ユニットである。
【００１３】
本発明のさらに別の側面によれば、上記の何れかに記載のスポット液を使用して試料を担体上に固定化する工程を含む、試料を固定化したアレイの製造方法が提供される。
上記の製造方法において、好ましくは、担体は多孔性の吸着性領域を有する生化学解析用ユニットである。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
本発明は、６０℃での蒸気圧が５ｍｍＨｇ以下であり、かつ固定用試料を０．００１％（Ｗ／Ｖ）以上溶解できる溶媒を使用して作製した、試料を担体上に固定するためのスポット液に関する。本発明におけるスポット液とは、アレイの作製の際に使用される、固定化試料を溶解するための（あるいは固定化試料を溶解した）液体組成物を言う。
【００１５】
本発明においては、６０℃での蒸気圧が５ｍｍＨｇ以下である溶媒を使用することにより、溶媒の蒸発を防止でき、これによりアレイ作成開始時と終了時で均一なスポットを行うことによりアレイの品質を安定させることができる。また、固定用試料を０．００１％（Ｗ／Ｖ）以上溶解できる溶媒を使用することにより、より高密度でのスポッティングが可能となる。
本発明で用いる溶媒の６０℃での蒸気圧は５ｍｍＨｇ以下、好ましくは３ｍｍＨｇ以下、さらに好ましくは０．１〜１ｍｍＨｇである。溶媒における固定用試料の溶解度は、０．００１〜１００％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜１００％（Ｗ／Ｖ）以上、さらに好ましくは０．１〜１００％（Ｗ／Ｖ）である。
【００１６】
本発明では、溶媒の濃度は５０質量％以上１００質量％以下であり、好ましくは５５質量％以上１００質量％以下であり、より好ましくは５５質量％以上９９質量％以下であり、特に好ましくは７０質量％以上８５質量％以下である。
本発明で用いる好ましい溶媒としては、ホルムアミドおよびテトラヒドロフルフリルアルコールなどがあげられ、その中でもホルムアミドが好ましい。
本発明の好ましい態様によれば、５０質量％以上１００質量％以下、さらに好ましくは８０質量％以上１００質量％以下であり、特に好ましくは１００質量％のホルムアミド溶液から成るスポット液が提供される。
【００１７】
本発明のスポット液において、上記溶媒の濃度が１００質量％未満である場合には、該スポット液には、上記溶媒以外の水又は緩衝液（例えば、ＳＳＣ緩衝液やＨＥＰＥＳ緩衝液など）などを混合することができる。
【００１８】
本発明において担体上に固定化する試料の種類は特に限定されず、任意の生体物質又は人工物質を使用することができる。好ましくは、固定化する試料は、核酸又はタンパク質であり、特に好ましくは核酸である。核酸の種類は特に限定されず、ＤＮＡでもＲＮＡでもよい。また、ＤＮＡ及びＲＮＡの種類も特には限定されず、ゲノムＤＮＡ又はその断片、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、合成ＲＮＡの何れでもよい。ＤＮＡとしては、大腸菌により増幅した組み換えＤＮＡでもよく、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉ（アマシャム社製）キットにより増幅したＤＮＡでもよい。
【００１９】
本発明で使用する核酸としては、任意の生物に由来するものを使用できる。また、特に好ましい態様によれば、本発明で使用する核酸としては、疾患と関連することが既知の染色体位置に由来するＤＮＡ断片、ｃＤＮＡ断片、又は合成ＤＮＡなどが挙げられる。
【００２０】
上記した固定化する試料（好ましくは、核酸）は、本発明の試料固定用スポット液に溶解し、このスポット液を担体上にスポットすることにより試料を該担体上に固定化する。スポット液中における試料の濃度は特に限定されないが、核酸の場合には、一般的には、０．１〜１００ｐｍｏｌ／μｌ程度、好ましくは０．５〜２０ｐｍｏｌ／μｌ程度である。
【００２１】
本発明はさらに、上記したスポット液を使用して試料を担体上に固定化したアレイ、並びに、上記したスポット液を使用して試料を担体上に固定化する工程を含む、試料固定化アレイの製造方法にも関する。
【００２２】
スポット液の担体へのスポット方法は特に限定されず、マイクロアレイ等のアレイを作製する方法として当業者に公知の方法あるいは今後開発される任意の方法を適宜使用することができ、例えば、ピンスポット法、インクジェット方式、バブルジェット方式などを使用することができる。例えば、ピンによるスポッティングは、例えば、Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社、日本レーザー電子社等のＤＮＡマイクロアレイ  作製装置によって行うことができる。インクジェット方式によるスポッティングは、特開２００１−１８６８８０号公報、特開２００１−１８６８８１号公報、特開２００２−２８６７２９号公報、特開２００２−２８６７３１号公報、米国特許６１２１０１１号公報、米国特許６２４２２６６号公報に記載の方法で行うことができる。また、バブルジェット方式によるスポッティングは、特開平１１−１８７９００号公報に記載の方法によって行うことができる。
【００２３】
本発明のスポット液をスポットする担体の具体例としては、ガラス基板、半導体基板、膜（例えば、多孔質膜など）、又はプラスチック（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン等）等が挙げられる。
【００２４】
本発明のスポット液の利用法の一つとして、特開２００２−３５５０３６号公報に記載のシステムでの利用が挙げられる。具体的には、多孔性の吸着性領域を有する生化学解析用ユニットを担体として使用し、この担体に本発明のスポット液をスポットすることができる。なお、特開２００２−３５５０３６号公報に記載の内容は全て本明細書の開示の一部として本明細書中に引用するものとする。
【００２５】
特開２００２−３５５０３６号公報には、具体的には、放射線を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板の前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成されて、形成された複数の吸着性領域に、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質を滴下し、放射性標識物質によって標識された生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットを、輝尽性蛍光体層が形成された蓄積性蛍光体シートに、前記輝尽性蛍光体層が前記複数の吸着性領域と対向するように、重ね合わせて、前記複数の吸着性領域に含まれた前記放射性標識物質によって、前記輝尽性蛍光体層を露光し、前記放射性標識物質によって露光された前記輝尽性蛍光体層に励起光を照射して、前記輝尽性蛍光体層に含まれた輝尽性蛍光体を励起し、前記輝尽性蛍光体層に含まれた輝尽性蛍光体から放出された輝尽光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法が記載されている。
【００２６】
上記の生化学解析方法における「生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質を滴下し、」という工程において、本発明のスポット液を使用することができる。即ち、上記した特異的結合物質を含む本発明のスポット液を、複数の吸着性領域に対して滴下することができる。
【００２７】
上記した特開２００２−３５５０３６号公報には、具体的には下記（１）から（２９）に記載の生化学解析用ユニットが記載されている。下記（１）から（２９）に記載の生化学解析用ユニットは、本発明において試料を固定するための担体として使用することができる。
【００２８】
（１）      放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニット。
（２）      放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成されるとともに、複数の孔が形成され、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成された基板を備え、前記基板の前記複数の孔内に形成された複数の吸着性領域に、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下され、放射性標識物質、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来の物質が、前記特異的結合物質に、特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識されていることを特徴とする生化学解析用ユニット。
（３）  前記生体由来の物質が、ハイブリダイゼーション、抗原抗体反応、リセプター・リガンドよりなる群から選ばれた反応によって、前記特異的結合物質と結合されていることを特徴とする（２）に記載の生化学解析用ユニット。
【００２９】
（４）      前記複数の吸着性領域が、前記基板に形成された前記複数の孔内に、吸着性材料が充填されて、形成されたことを特徴とする（１）ないし（３）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（５）      前記複数の孔が、それぞれ、貫通孔によって構成されたことを特徴とする（１）ないし（４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（６）      前記複数の孔が、それぞれ、凹部によって構成されたことを特徴とする（１）ないし（４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（７）    前記基板が可撓性材料によって形成されていることを特徴とする（１）ないし（６）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（８）    前記基板に、前記基板を保持可能な保持部が形成されたことを特徴とする（１）ないし（７）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
【００３０】
（９）    吸着性材料によって形成された吸着性基板と、複数の貫通した孔が形成され、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成された多孔板を備え、前記多孔板が、前記吸着性基板の少なくとも一方の面に密着され、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔内の前記吸着性基板によって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニット。
（１０）  前記吸着性基板の両面に、前記多孔板が密着されたことを特徴とする（９）に記載の生化学解析用ユニット。
（１１）  前記多孔板に、前記多孔板を保持可能な保持部が形成されたことを特徴とする（９）または（１０）に記載の生化学解析用ユニット。
（１２）    前記吸着性基板の前記複数の吸着性領域に、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下され、放射性標識物質、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来の物質が、前記特異的結合物質に、特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識されていることを特徴とする（９）ないし（１１）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
【００３１】
（１３）  前記孔が１０以上形成されたことを特徴とする（１）ないし（１２）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（１４）  前記孔が１０００以上形成されたことを特徴とする（１３）に記載の生化学解析用ユニット。
（１５）  前記孔が１００００以上形成されたことを特徴とする（１４）に記載の生化学解析用ユニット。
【００３２】
（１６）  前記孔のサイズが５平方ミリメートル未満であることを特徴とする（１）ないし（１５）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（１７）  前記孔のサイズが１平方ミリメートル未満であることを特徴とする（１６）に記載の生化学解析用ユニット。
（１８）  前記孔のサイズが０．０１平方ミリメートル未満であることを特徴とする（１７）に記載の生化学解析用ユニット。
【００３３】
（１９）  前記孔が、１０個／平方センチメートル以上の密度で、形成されたことを特徴とする（１）ないし（１８）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２０）  前記孔が、１０００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されたことを特徴とする（１９）に記載の生化学解析用ユニット。
（２１）  前記孔が、１００００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されたことを特徴とする（２０）に記載の生化学解析用ユニット。
【００３４】
（２２）  前記放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線および／または光が前記材料中を透過したときに、放射線および／または光のエネルギーを、１／５以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（１）ないし（２１）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２３）  前記放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線および／または光が前記材料中を透過したときに、放射線および／または光のエネルギーを、１／１０以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（２２）に記載の生化学解析用ユニット。
（２４）  前記放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線および／または光が前記材料中を透過したときに、放射線および／または光のエネルギーを、１／１００以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（２３）に記載の生化学解析用ユニット。
【００３５】
（２５）  前記基板が、金属材料、セラミック材料およびプラスチック材料よりなる群から選ばれる材料によって形成されたことを特徴とする（２２）ないし（２４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２６）  前記多孔板が、金属材料、セラミック材料およびプラスチック材料よりなる群から選ばれる材料によって形成されたことを特徴とする（２２）ないし（２４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２７）  前記吸着性材料が、多孔質材料よりなることを特徴とする（４）ないし（２６）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２８）  前記多孔質材料が、炭素材料またはメンブレンフィルタを形成可能な材料よりなることを特徴とする（２７）に記載の生化学解析用ユニット。
（２９）  前記吸着性材料が、繊維材料よりなることを特徴とする（４）ないし（２６）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
【００３６】
本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するための材料としては、放射線および／または光を減衰させる性質を有するものであれば、特に限定されるものではなく、無機化合物材料、有機化合物材料のいずれをも使用することができるが、金属材料、セラミック材料またはプラスチック材料が、好ましく使用される。
【００３７】
本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる無機化合物材料としては、たとえば、金、銀、銅、亜鉛、アルミニウム、チタン、タンタル、クロム、鉄、ニッケル、コバルト、鉛、錫、セレンなどの金属；真鍮、ステンレス、青銅などの合金；シリコン、アモルファスシリコン、ガラス、石英、炭化ケイ素、窒化ケイ素などの珪素材料；酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウムなどの金属酸化物；タングステンカーバイト、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、砒化ガリウムなどの無機塩を挙げることができる。これらは、単結晶、アモルファス、セラミックのような多結晶焼結体にいずれの構造を有していてもよい。
【００３８】
本発明において、放射線を減衰させることのできる有機化合物材料としては、高分子化合物が好ましく用いられ、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる高分子化合物としては、たとえば、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン；ポリメチルメタクリレート、ブチルアクリレート／メチルメタクリレート共重合体などのアクリル樹脂；ポリアクリロニトリル；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン；ポリテトラフルオロエチレン；ポリクロロトリフルオロエチレン；ポリカーボネート；ポリエチレンナフタレートやポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル；ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン；ポリイミド；ポリスルホン；ポリフェニレンサルファイド；ポリジフェニルシロキサンなどのケイ素樹脂；ノボラックなどのフェノール樹脂；エポキシ樹脂；ポリウレタン；ポリスチレン；ブタジエン−スチレン共重合体；セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロース、でん粉、アルギン酸カルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの多糖類；キチン；キトサン；ウルシ；ゼラチン、コラーゲン、ケラチンなどのポリアミドおよびこれら高分子化合物の共重合体などを挙げることができる。これらは、複合材料でもよく、必要に応じて、金属酸化物粒子やガラス繊維などを充填することもでき、また、有機化合物材料をブレンドして、使用することもできる。
【００３９】
一般に、比重が大きいほど、放射線の減衰能が高くなるので、本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を、放射線を減衰させる性質を有する材料によって形成する場合は、比重１．０ｇ／ｃｍ３以上の化合物材料または複合材料によって形成されることが好ましく、比重が１．５ｇ／ｃｍ３以上、２３ｇ／ｃｍ３以下の化合物材料または複合材料によって形成されることが、とくに好ましい。
【００４０】
本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能な光を減衰させることのできる無機化合物材料としては、たとえば、金、銀、銅、亜鉛、アルミニウム、チタン、タンタル、クロム、鉄、ニッケル、コバルト、鉛、錫、セレンなどの金属；真鍮、ステンレス、青銅などの合金；シリコン、アモルファスシリコン、ガラス、石英、炭化ケイ素、窒化ケイ素などの珪素材料；酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウムなどの金属酸化物；タングステンカーバイト、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、砒化ガリウムなどの無機塩を挙げることができる。これらは、単結晶、アモルファス、セラミックのような多結晶焼結体にいずれの構造を有していてもよい。
【００４１】
本発明において、光を減衰させることのできる有機化合物材料としては、高分子化合物が好ましく用いられ、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能な光を減衰させることのできる高分子化合物としては、たとえば、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン；ポリメチルメタクリレート、ブチルアクリレート／メチルメタクリレート共重合体などのアクリル樹脂；ポリアクリロニトリル；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン；ポリテトラフルオロエチレン；ポリクロロトリフルオロエチレン；ポリカーボネート；ポリエチレンナフタレートやポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル；ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン；ポリイミド；ポリスルホン；ポリフェニレンサルファイド；ポリジフェニルシロキサンなどのケイ素樹脂；ノボラックなどのフェノール樹脂；エポキシ樹脂；ポリウレタン；ポリスチレン；ブタジエン−スチレン共重合体；セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロース、でん粉、アルギン酸カルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの多糖類；キチン；キトサン；ウルシ；ゼラチン、コラーゲン、ケラチンなどのポリアミドおよびこれら高分子化合物の共重合体などを挙げることができる。これらは、複合材料でもよく、必要に応じて、金属酸化物粒子やガラス繊維などを充填することもでき、また、有機化合物材料をブレンドして、使用することもできる。
【００４２】
一般に、光の散乱および／または吸収が大きいほど、光の減衰能が高くなるので、本発明において、生化学解析用ユニットの基板および多孔板を、光を減衰させる性質を有する材料によって形成する場合は、厚さ１ｃｍあたりの吸光度が０．３以上であることが好ましく、厚さ１ｃｍあたりの吸光度が１以上であれば、さらに好ましい。ここに、吸光度は、厚さＴｃｍの板状体の直後に、積分球を置き、計測に利用するプローブ光またはエミッション光の波長における透過光量Ａを分光光度計によって測定し、Ａ／Ｔを算出することによって、求められる。
【００４３】
本発明において、光減衰能を向上させるために、光散乱体や光吸収体を、生化学解析用ユニットの基板および多孔板に含有させることもできる。光散乱体としては、生化学解析用ユニットの基板および多孔板を形成している材料と異なる材料の微粒子が用いられ、光吸収体としては、顔料または染料が用いられる。
【００４４】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板が可撓性材料によって形成されている。
本発明の好ましい実施態様によれば、生化学解析用ユニットの基板が可撓性材料によって形成されているため、生化学解析用ユニットを湾曲させて、ハイブリダイゼーション溶液を接触させ、特異的結合物質に生体由来の物質をハイブリダイズさせることができ、したがって、少量のハイブリダイゼーション溶液を用いて、所望のように、特異的結合物質に生体由来の物質をハイブリダイズさせることが可能になる。
【００４５】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板に、前記孔が規則的に形成されているか、前記孔がそれぞれ略円形に形成されているか、あるいは前記孔がそれぞれ略矩形状に形成されている。
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板に、１０以上、好ましくは５０以上、さらに好ましくは１００以上、さらに好ましくは１０００以上、さらに好ましくは１００００以上、さらに好ましくは１０００００以上の孔が形成されている。
【００４６】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成された前記複数の孔が、それぞれ、５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０１平方ミリメートル未満のサイズを有している。
【００４７】
本発明において、前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成される孔の密度は、基板の材質、基板の厚みおよび放射性標識物質から放出される電子線の種類あるいは蛍光物質から放出される蛍光の波長などに応じて、決定される。
本発明の好ましい実施態様においては、前記複数の孔が、前記生化学解析用ユニットの前記基板に、１０個／平方センチメートル以上、好ましくは５０個／平方センチメートル以上、  さらに好ましくは１００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１００００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されている。
【００４８】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に、貫通した孔が規則的に形成されているか、貫通した孔がそれぞれ略円形に形成されているか、あるいは、貫通した孔がそれぞれ略矩形状に形成されている。
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に、１０以上、好ましくは５０以上、さらに好ましくは１００以上、さらに好ましくは１０００以上、さらに好ましくは１００００以上、さらに好ましくは１０００００以上の貫通した孔が形成されている。
【００４９】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔が、それぞれ５平方ミリメートル未満、好ましくは１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０１平方ミリメートル未満のサイズを有している。
【００５０】
本発明において、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に形成される貫通した孔の密度は、多孔板の材質、基板の厚みおよび放射性標識物質から放出される電子線の種類あるいは蛍光物質から放出される蛍光の波長などに応じて、任意に決定することができる。
本発明の好ましい実施態様においては、前記複数の貫通した孔が、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に、１０個／平方センチメートル以上、好ましくは５０個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１００００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されている。
【００５１】
本発明において、吸着性領域を形成する吸着性材料としては、多孔質材料あるいは繊維材料が好ましく使用される。多孔質材料と繊維材料を併用して、吸着性領域を形成することもできる。
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される多孔質材料は、有機材料、無機材料のいずれでもよく、有機／無機複合体でもよい。
【００５２】
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される有機多孔質材料は、特に限定されるものではないが、活性炭などの炭素多孔質材料あるいはメンブレンフィルタを形成可能な多孔質材料が、好ましく用いられる。メンブレンフィルタを形成可能な多孔質材料としては、ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン類；ニトロセルロース、酢酸セルロース、酪酸酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；コラーゲン；アルギン酸、アルギン酸カルシウム、アルギン酸／ポリリシンポリイオンコンプレックスなどのアルギン酸類；ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン類；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオライドなどのポリフルオライドや、これらの共重合体または複合体が挙げられる。
【００５３】
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される無機多孔質材料は、とくに限定されるものではないが、好ましくは、たとえば、白金、金、鉄、銀、ニッケル、アルミニウムなどの金属；アルミナ、シリカ、チタニア、ゼオライトなどの金属酸化物；ヒドロキシアパタイト、硫酸カルシウムなどの金属塩やこれらの複合体などが挙げられる。
【００５４】
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される繊維材料は、とくに限定されるものではないが、好ましくは、たとえば、ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン類、ニトロセルロース、酢酸セルロース、酪酸酢酸セルロースなどのセルロース誘導体などが挙げられる。
本発明において、吸着性領域は、電解処理、プラズマ処理、アーク放電などの酸化処理；シランカップリング剤、チタンカップリング剤などを用いたプライマー処理；界面活性剤処理などの表面処理によって形成することもできる。
【００５５】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成する場合には、支持体の表面に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成しても、支持体に、複数の孔をドット状に形成し、ドット状に形成された複数の孔内に、輝尽性蛍光体層領域を形成するようにしてもよい。
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成する場合、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域は、生化学解析用ユニットに形成された吸着性領域と、同じパターンによって、形成される。
【００５６】
本発明の好ましい実施態様においては、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数の貫通孔が、ドット状に形成され、輝尽性蛍光体層領域が、複数の貫通孔内に形成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様においては、輝尽性蛍光体層領域が、複数の貫通孔内に、輝尽性蛍光体が充填されて、形成されている。
本発明の別の好ましい実施態様においては、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数の凹部が、ドット状に形成され、輝尽性蛍光体層領域が、複数の凹部内に形成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様においては、輝尽性蛍光体層領域が、複数の凹部内に、輝尽性蛍光体が充填されて、形成されている。
本発明の好ましい実施態様においては、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域が、規則的なパターンで、蓄積性蛍光体シートに形成されている。
【００５７】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成する場合には、蓄積性蛍光体シートの支持体を形成するための材料としては、放射線を減衰させる性質を有するものが好ましく、放射線を減衰させる性質を有する材料は、とくに限定されるものではなく、無機化合物材料、有機化合物材料のいずれをも使用することができるが、金属材料、セラミック材料またはプラスチック材料が、とくに好ましい。
【００５８】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる無機化合物材料としては、たとえば、金、銀、銅、亜鉛、アルミニウム、チタン、タンタル、クロム、鉄、ニッケル、コバルト、鉛、錫、セレンなどの金属；真鍮、ステンレス、青銅などの合金；シリコン、アモルファスシリコン、ガラス、石英、炭化ケイ素、窒化ケイ素などの珪素材料；酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウムなどの金属酸化物；タングステンカーバイト、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、砒化ガリウムなどの無機塩を挙げることができる。これらは、単結晶、アモルファス、セラミックのような多結晶焼結体にいずれの構造を有していてもよい。
【００５９】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる有機化合物材料としては、高分子化合物が好ましく用いられ、たとえば、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン；ポリメチルメタクリレート、ブチルアクリレート／メチルメタクリレート共重合体などのアクリル樹脂；ポリアクリロニトリル；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン；ポリテトラフルオロエチレン；ポリクロロトリフルオロエチレン；ポリカーボネート；ポリエチレンナフタレートやポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル；ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン；ポリイミド；ポリスルホン；ポリフェニレンサルファイド；ポリジフェニルシロキサンなどのケイ素樹脂；ノボラックなどのフェノール樹脂；エポキシ樹脂；ポリウレタン；ポリスチレン；ブタジエン−スチレン共重合体；セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロース、でん粉、アルギン酸カルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの多糖類；キチン；キトサン；ウルシ；ゼラチン、コラーゲン、ケラチンなどのポリアミドおよびこれら高分子化合物の共重合体などを挙げることができる。これらは、複合材料でもよく、必要に応じて、金属酸化物粒子やガラス繊維などを充填することもでき、また、有機化合物材料をブレンドして、使用することもできる。
【００６０】
一般に、比重が大きいほど、放射線の減衰能が高くなるので、蓄積性蛍光体シートの支持体は、比重１．０ｇ／ｃｍ３以上の化合物材料または複合材料によって形成されることが好ましく、比重が１．５ｇ／ｃｍ３以上、２３ｇ／ｃｍ３以下の化合物材料または複合材料によって形成されることが、とくに好ましい。
【００６１】
本発明の好ましい実施態様においては、蓄積性蛍光体シートの支持体が、隣り合うドット状の輝尽性蛍光体層領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線が前記支持体中を透過したときに、放射線のエネルギーを１／５以下、好ましくは１／１０以下、さらに好ましくは１／５０以下、さらに好ましくは１／１００以下、さらに好ましくは１／５００以下、さらに好ましくは１／１０００以下に減衰させる性質を有する材料によって形成されている。
【００６２】
本発明において使用される輝尽性蛍光体としては、放射線のエネルギーを蓄積可能で、電磁波によって励起され、蓄積している放射線のエネルギーを光の形で放出可能なものであればよく、とくに限定されるものではないが、可視光波長域の光により励起可能であるものが好ましい。具体的には、たとえば、米国特許第４，２３９，９６８号に開示されたアルカリ土類金属弗化ハロゲン化物系蛍光体（Ｂａ１−ｘＭ２＋ｘ）ＦＸ：ｙＡ（ここに、Ｍ２＋はＭｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＺｎおよびＣｄからなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類金属元素、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、ＡはＥｕ、Ｔｂ、Ｃｅ、Ｔｍ、Ｄｙ、Ｐｒ、Ｈｏ、Ｎｄ、ＹｂおよびＥｒからなる群より選ばれる少なくとも一種の３価金属元素、ｘは０≦ｘ≦０．６、ｙは０≦ｙ≦０．２である。）、特開平２−２７６９９７号公報に開示されたアルカリ土類金属弗化ハロゲン化物系蛍光体ＳｒＦＸ：Ｚ（ここに、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、ＺはＥｕまたはＣｅである。）、特開昭５９−５６４７９号公報に開示されたユーロピウム付活複合ハロゲン物系蛍光体ＢａＦＸ・ｘＮａＸ’：ａＥｕ２＋（ここに、ＸおよびＸ’はいずれも、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲンであり、ｘは０＜ｘ≦２、ａは０＜ａ≦０．２である。）、特開昭５８−６９２８１号公報に開示されたセリウム付活三価金属オキシハロゲン物系蛍光体であるＭＯＸ：ｘＣｅ（ここに、ＭはＰｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、ＹｂおよびＢｉからなる群より選ばれる少なくとも一種の三価金属元素、ＸはＢｒおよびＩのうちの一方あるいは双方、ｘは、０＜ｘ＜０．１である。）、米国特許第４，５３９，１３７号に開示されたセリウム付活希土類オキシハロゲン物系蛍光体であるＬｎＯＸ：ｘＣｅ（ここに、ＬｎはＹ、Ｌａ、ＧｄおよびＬｕからなる群より選ばれる少なくとも一種の希土類元素、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、ｘは、０＜ｘ≦０．１である。）および米国特許第４，９６２，０４７号に開示されたユーロピウム付活複合ハロゲン物系蛍光体ＭＩＩＦＸ・ａＭＩＸ’・ｂＭ’ＩＩＸ’’２・ｃＭＩＩＩ  Ｘ’’’３  ・ｘＡ：ｙＥｕ２＋（ここに、ＭＩＩはＢａ、ＳｒおよびＣａからなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類金属元素、ＭＩ  はＬｉ、Ｎａ、Ｋ、ＲｂおよびＣｓからなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属元素、Ｍ’  ＩＩはＢｅおよびＭｇからなる群より選ばれる少なくとも一種の二価金属元素、ＭＩＩＩはＡｌ、Ｇａ、ＩｎおよびＴｌからなる群より選ばれる少なくとも一種の三価金属元素、Ａは少なくとも一種の金属酸化物、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、Ｘ’、Ｘ’’およびＸ’’’  はＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲンであり、ａは、０≦ａ≦２、ｂは、０≦ｂ≦１０−２、ｃは、０≦ｃ≦１０−２で、かつ、ａ＋ｂ＋ｃ≧１０−２であり、ｘは、０＜ｘ≦０．５で、ｙは、０＜ｙ≦０．２である。）が、好ましく使用し得る��
【００６３】
本発明の好ましい実施態様においては、特異的結合物質は、スポッティング装置を用いて、生化学解析用ユニットの吸着性領域に滴下される。
本発明の好ましい実施態様においては、スポッティング装置は、特異的結合物質を滴下すべき担体が載置される基板と、特異的結合物質を滴下可能なスポッティングヘッドと、特異的結合物質を滴下すべき前記吸着性領域の基準位置を検出可能なセンサを備えている。
本発明の好ましい実施態様においては、スポッティング装置は、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、間欠的に移動させる駆動機構を備えている。
【００６４】
本発明の好ましい実施態様によれば、スポッティング装置が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、間欠的に移動させる駆動機構を備えているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構により、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、少なくとも１次元方向において、生化学解析用ユニットに形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【００６５】
本発明のさらに好ましい実施態様においては、前記駆動機構が、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、一定のピッチで移動させるように構成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、駆動機構が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、一定のピッチで移動させるように構成されているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構により、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、一定のピッチで間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、少なくとも一次元方向において、生化学解析用ユニットに形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【００６６】
本発明の好ましい実施態様においては、前記駆動機構が、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、二次元方向に、間欠的に移動させるように構成されている。
本発明の好ましい実施態様によれば、駆動機構が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、間欠的に移動させるように構成されているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構により、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、生化学解析用ユニットに二次元的に形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【００６７】
本発明のさらに好ましい実施態様においては、前記駆動機構が、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、二次元方向に、それぞれ、一定のピッチで移動させるように構成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、駆動機構が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、それぞれ、一定のピッチで移動させるように構成されているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構によって、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、一定のピッチで間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、生化学解析用ユニットに二次元的に形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【００６８】
本発明の好ましい実施態様においては、前記基板に、前記生化学解析用ユニットを位置決めするための少なくとも２つの位置決め部材が形成されている。
本発明の好ましい実施態様によれば、基板に、生化学解析用ユニットを位置決めするための少なくとも２つの位置決め部材が形成されているから、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットを、基板の所定の位置に位置決めして、載置することが可能になる。
本発明のさらに好ましい実施態様においては、前記位置決め部材が、前記基板に立設されたピンによって構成されている。
【００６９】
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、位置決め部材が、前記基板に立設されたピンによって構成されているから、生化学解析用ユニットに対応する位置決め用の貫通孔を形成することによって、簡易に、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットを、基板の所定の位置に位置決めして、載置することが可能になる。
【００７０】
本発明の好ましい実施態様においては、スポッティング装置は、前記センサによって検出された前記生化学解析用ユニットの少なくとも２つの基準位置に基づいて、特異的結合物質を滴下すべき前記生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを算出する位置データ算出手段と、前記位置データ算出手段によって算出された特異的結合物質を滴下すべき前記生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを記憶するメモリと、前記メモリに記憶された特異的結合物質を滴下すべき前記生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データにしたがって、前記駆動手段を制御する位置制御手段を備えている。
【００７１】
本発明の好ましい実施態様によれば、スポッティング装置が、センサによって検出された生化学解析用ユニットの少なくとも２つの基準位置に基づいて、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを算出する位置データ算出手段と、位置データ算出手段によって算出された特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを記憶するメモリと、メモリに記憶された特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データにしたがって、駆動手段を制御する位置制御手段を備えているから、自動的に、基板に、互いに離間して、ドット状に形成された複数の吸着性領域に、特異的結合物質を確実に滴下することが可能になる。
【００７２】
また、特開２００２−３５５０３６号公報の図１〜図２４には生化学解析用ユニットの具体例が記載されているが、上記図１〜図２４に記載の生化学解析用ユニットと同様の生化学解析用ユニットを本発明において使用することができる。以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【００７３】
【実施例】
実施例１：
表１に記載の各種の溶媒を５マイクロリットル、１０マイクロリットル、２０マイクロリットルずつ、それぞれ一晩（約１６時間）放置した後、残っている液量を測定した。容器にはＡＢ  ｇｅｎｅ社のＴｈｅｒｍｏＦａｓｔ３８４  ｐｌａｔｅを用いる。また、このとき、気温は２１．３℃から２４．６℃、湿度は３０％から４２％の間で変動した。これによると、ホルムアミドを主成分とする溶媒では容積変化が小さいのに対し、ＤＭＳＯ及び水を主成分とする溶媒ではすべて容積の著しい減少が見られる。実験はひとつのサンプルにつき５つずつ行い、その平均を求めた。結果を以下の表１に示す。
【００７４】
【表１】
2005037172.tif 000002
【００７５】
実施例２：
更に、ホルムアミド濃度をかえ、蒸発量を定量し、上記サンプル液２と比較した。実験方法は実施例１と同じで、スポット液量は５μｌとした。結果を表２に示す。その結果、ホルムアミド濃度５５質量％以上で、５０％ＤＭＳＯ液に比べ、蒸発量を抑えられることが判明した。また、ホルムアミド７０質量％以上でスポット液の変化が平均２割以内となった。１００質量％ホルムアミドでは溶媒自身が吸水してしまい、平均の変化量が２割以上となった。
【００７６】
【表２】
2005037172.tif 000003
【００７７】
実施例３：
ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋（ＳｔｒａｔａＧｅｎｅ社）を鋳型に用いて、ＴｅｍｐｌｉＰｈｉ  ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｔｅｍｐｌａｔｅ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  １００００  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（アマシャム社）キットにより増幅したものを下記の溶液条件に希釈したもの、及びｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋を０．１μｇ／μｌになるよう、下記の溶液条件に希釈したものをそれぞれＡＢｇｅｎｅ社製Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆａｓｔ  ３８４  ＰＣＲ  ｐｌａｔｅ  ＭａｒｋＩＩに分注し、スポッティングする。
【００７８】
溶液条件は、（１）８０％ホルムアミド／２０ｍＭ  ＥＤＴＡ  （２）０．２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液／２０ｍＭ  ＥＤＴＡ  の２種類である。ＴｅｍｐｌｉＰｈｉによる増幅は以下に示す。
５００ｐｇ／μｌの濃度のｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋（ＳｔｒａｔａＧｅｎｅ社）８０μｌを乾固して、４０μｌのＤｅｎａｔｕｒｅ  Ｂｕｆｆｅｒ（キット添付）に室温で各々溶解し、９５℃５分で変性、その後氷上に５分ほど放置する。そこに、４０μｌのＴｅｍｐｌｉＰｈｉ  Ｐｒｅｍｉｘ（キット添付）を氷上で加え、３４℃１６時間（一晩）放置し反応する。
【００７９】
９５℃３分で反応停止後、室温にて滅菌水を８０μｌ加え、撹拌後二等分して乾固する。各々に２０ｕｌの上記（１）及び（２）の溶液を加えて溶解、３８４ｗｅｌｌプレートに５μｌずつ分注してスポッティングする。
スポッティングはＧｅｎｏｍｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社製アレイヤーのＧｅｎｅＴＡＣ  ＲＡ１を用い、２００μｍ径ピン４８本（１２  ｘ  ４）にて、１パッチにつき９  ｘ  ９（５００μｍピッチ）の形状でアレイ化する。試料を上記２種の溶媒に溶解後すぐにスポットしたアレイと同一試料を溶解後５時間放置後スポットしたアレイについてその性能を比較する。
【００８０】
サポートのメンブレンとしてはＰａｌｌ社のＢｉｏｄｙｎｅ  Ｂ（０．４５ｕｍ孔径）を用いた。スライドグラス上に、同等の大きさに切ったこのメンブレンを貼り付け、ガラスサポートのマイクロアレイ作成と全く同様にスポッティングを行う。
スポットしたメンブレンアレイは、減圧下８０℃で２時間ベーキングして仮固定後、水浸してＵＶクロスリンクし完全固定、再度ベーキングにより乾燥する。
プローブの標識は、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋をランダムプライム法でラジオアイソトープ標識したものを用いる。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社のラベリングキット（ＲａｄＰｒｉｍｅ  ＤＮＡ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて５０ｎｇのｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋を３３Ｐ（［α−３３Ｐ］ｄＣＴＰ、アマシャム社、型番ＡＨ９９０５）で標識した。標識後のフリーのヌクレオチドをスピンカラム（アマシャム社、ＰｒｏｂｅＱｕａｎｔ  Ｇ−５０  ｍｉｃｒｏ  Ｃｏｌｕｍｎ）を用いて除去し、２５ｍｌの容量で６８℃一昼夜ハイブリダイゼーションを行う。ハイブリダイゼーションの溶液は、東洋紡のＰｅｒｆｅｃｔＨｙｂを用いる。
【００８１】
ハイブリダイゼーション終了後、２×ＳＳＣ／１％  ＳＤＳで１５分２回、０．１×ＳＳＣ／１％  ＳＤＳで３０分２回、いずれも６８℃で洗浄を行い、完全乾燥後、イメージングプレートＢＡＳ−ＳＲ０８１３（富士写真フイルム社）に直接コンタクトで３時間露出して記録する。ＦＬＡ−８０００（富士写真フイルム社）を用いて２０ｕｍの解像度でデジタル化し、ＡｒｒａｙＧａｕｇｅにて解析を行う。結果を表３に示す。溶媒に溶解後すぐにスポットしたアレイと同一試料を溶解後５時間放置後スポットしたアレイでのシグナル比を示す。表３に示すように、ホルムアミドを溶媒としてスポットした場合、経過時間によらず一定したシグナルが得られる。
【００８２】
【表３】
2005037172.tif 000004
【００８３】
表３において、０．２ＭＮａＯＨ／２０ｍＭＥＤＴＡ／Ｈ２Ｏを用いたサンプルは、揮発により試料濃度が上がるために、シグナル比は上昇すると思われるが、スポット液の粘度上昇等によって実験結果としてはシグナル比が低下した。
【００８４】
実施例４：
ＡＢｇｅｎｅ社製Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆａｓｔ  ３８４  ＰＣＲ  ｐｌａｔｅ  ＭａｒｋＩＩに、各溶液条件で０．１μｇ／μｌに調製したｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋（ＳｔｒａｔａＧｅｎｅ社）を２０μｌずつ分注したものからスポッティングする。溶液条件は、
（１）８０％ホルムアミド／２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、
（２）０．２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液／２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、及び
（３）８０％  グリセリン水溶液／２０ｍＭ  ＥＤＴＡ
の３種類である。
【００８５】
スポッティングはＧｅｎｏｍｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社製アレイヤーのＧｅｎｅＴＡＣ  ＲＡ１を用い、２００ｕｍ径ピン４８本（１２  ｘ  ４）にて、１パッチにつき９  ｘ  ９（５００μｍピッチ）の形状でアレイ化する。
サポートのメンブレンとしてはＰａｌｌ社のＢｉｏｄｙｎｅ  Ｂ（０．４５μｍ孔径）を用いた。スライドグラス上に、同等の大きさに切ったこのメンブレンを貼り付け、ガラスサポートのマイクロアレイ作成と全く同様にスポッティングを行う。
【００８６】
スポットしたメンブレンアレイは、減圧下８０℃で２時間ベーキングして仮固定後、水浸してＵＶクロスリンクし完全固定、再度ベーキングにより乾燥する。
プローブの標識は、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋をランダムプライム法でラジオアイソトープ標識したものを用いた。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社のラベリングキット（ＲａｄＰｒｉｍｅ  ＤＮＡ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて５０ｎｇのｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ  ＳＫ＋を３３Ｐ（［ａ−３３Ｐ］ｄＣＴＰ、アマシャム社、型番ＡＨ９９０５）で標識する。標識後のフリーのヌクレオチドをスピンカラム（アマシャム社、ＰｒｏｂｅＱｕａｎｔ  Ｇ−５０  ｍｉｃｒｏ  Ｃｏｌｕｍｎ）を用いて除去し、２５ｍｌの容量で６８℃一昼夜ハイブリダイゼーションを行った。ハイブリダイゼーションの溶液は、東洋紡のＰｅｒｆｅｃｔＨｙｂを用いる。
【００８７】
ハイブリダイゼーション終了後、２  ｘ  ＳＳＣ／１％  ＳＤＳで１５分２回、０．１  ｘ  ＳＳＣ／１％  ＳＤＳで３０分２回、いずれも６８℃で洗浄を行い、完全乾燥後、イメージングプレートＢＡＳ−ＳＲ０８１３（富士写真フイルム社）に直接コンタクトで３時間露出して記録する。ＦＬＡ−８０００（富士写真フイルム社）を用いて２０μｍの解像度でデジタル化し、ＡｒｒａｙＧａｕｇｅにて解析を行う。
結果を表４及び図１に示す。
【００８８】
【表４】
2005037172.tif 000005
【００８９】
表４及び図１に示すように、ホルムアミドを使用したスポットはそのスポット径が小さく、高密度でスポット可能なことが分かる。
【００９０】
【発明の効果】
本発明によれば、高密度ＤＮＡアレイの作成の際、固定化する試料の溶媒に低揮発性溶媒であるホルムアミドを主成分とする溶液を用いることにより、蒸発による試料濃度の変化を防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、各種の溶媒を用いて核酸をスポットしたメンブレンアレイを用いて核酸を検出した結果を示す。
【図１】
2005037172.tif 000006