(57)【要約】【課題】  本発明の目的は、優れた生体調節機能や生理活性機能を有するβグルカンおよびβグルカン複合体を提供することであり、さらに、食品や医薬品、化粧品の製造に供しても安全で、生産時や使用時において増粘等の問題を抑えることによって非常に扱いやすく、しかも粉末化や濃縮が容易であって目的とする配合量が実質的に制限されない低分子化されたβグルカンの製造方法を提供することにある。【解決手段】  本発明は、微生物類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカン、さらにはそれらβグルカンの二種以上を含有するβグルカン複合体を提供するものである。さらに、微生物類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカンのいずれかに、加水分解酵素を作用させる工程を有する、低分子化βグルカンの製造方法を提供するものである。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物類由来のβグルカン。
【請求項２】
β１−３，１−６グルカンであることを特徴とする請求項１記載の微生物類由来のβグルカン。
【請求項３】
穀物由来のβグルカン。
【請求項４】
β１−３，１−４グルカンであることを特徴とする請求項３記載の穀物由来のβグルカン。
【請求項５】
担子菌類由来のβグルカン。
【請求項６】
β１−３，１−６グルカンであることを特徴とする請求項５記載の担子菌類由来のβグルカン。
【請求項７】
β１−３，１−６グルカンおよびβ１−３，１−４グルカンを含有するβグルカン複合体。
【請求項８】
微生物類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカンのいずれか二種以上を含有するβグルカン複合体。
【請求項９】
微生物類由来のβ１−３，１−６グルカン、穀物由来のβ１−３，１−４グルカン、担子菌類由来のβ１−３，１−６グルカンのいずれか二種以上を含有するβグルカン複合体。
【請求項１０】
穀物及び／または穀物由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化して得られた水溶性βグルカン。
【請求項１１】
ヘミセルロースを含有する穀物、及び／またはヘミセルロースを含有する穀物由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化して得られた請求項１０記載の水溶性βグルカン。
【請求項１２】
大麦若しくはオーツ麦、及び／または大麦若しくはオーツ麦由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化して得られた請求項１０または１１記載の水溶性βグルカン。
【請求項１３】
穀物及び／または穀物由来のβグルカンが、穀物から抽出された抽出物または分画物である請求項１０〜１２のいずれかに記載の水溶性βグルカン。
【請求項１４】
重量平均分子量６万以下に低分子化されている請求項１０〜１３のいずれかに記載の水溶性βグルカン。
【請求項１５】
添加し作用させる酵素が、β−Ｄ−グルコース結合間を加水分解する反応を触媒する酵素である請求項１０〜１４のいずれかに記載の水溶性βグルカン。
【請求項１６】
加水分解酵素を作用させる工程を有する微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法。
【請求項１７】
加水分解酵素を作用させる工程を有する穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法。
【請求項１８】
加水分解酵素を作用させる工程を有する担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、βグルカンおよびβグルカンの製造方法に関するものである。また、本発明は、穀物由来の水溶性βグルカンに関する。
【背景技術】
【０００２】
βグルカンは、近年その優れた生体調節機能や生理活性機能、例えば、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制作用、コレステロール低下作用、血糖値低下作用、抗腫瘍作用、免疫増強作用、免疫賦活作用、腸管免疫増強作用、皮膚免疫増強作用、生活習慣病予防・改善作用等が解析され、その利用が注目されている素材である。
【０００３】
βグルカンは、多くの生物体、例えば、微生物類、担子菌類、穀物等の植物に含まれており、主にこれらの細胞壁を構成する成分として存在している（微生物によっては菌体外にβグルカンを分泌するものも知られている）。その構造は、１−２−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−３−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−４−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−６−β−Ｄ−グルコピラノース結合の少なくとも二種類以上を有するグルコースの重合体を主成分とする。
【０００４】
従来、βグルカンを利用する場合、一種類のβグルカンについてのみであり、二種類以上のβグルカンの利用による相乗効果についてはまったく考えられていなかった。
【０００５】
また、担子菌（キノコ）の子実体や菌糸体に含有されているβグルカンは、免疫増強活性が高く、シイタケ子実体より抽出されるレンチナンのように、医薬品として利用されているものもある。しかし、一般的に担子菌（キノコ）の子実体や菌糸体に含有されているβグルカンは、その生育・栽培条件により含まれるβグルカン量が大きく変動し、抽出操作でβグルカンを分離する必要があり、結果として得られるβグルカンが複雑多岐の分子種にわたり、高分子体と低分子体とが混在する等、品質が不安定なものとなっている。このように担子菌（キノコ）では、高活性を有した一定のβグルカンを安定的に製造することが困難である。
【０００６】
また、一般的に微生物菌体の細胞壁成分にはβグルカンが含まれ、免疫活性増強作用があることがよく知られており（特許文献１〜５）、βグルカンの供給源として興味深い。しかし、微生物菌体の細胞壁はβグルカン以外の成分を含み、また水に不溶であるため、効果の高い水溶性で且つ高純度のβグルカンを得るためには、抽出や精製操作が必要である。そのために、微生物菌体をホモジナイズして自己消化させる、あるいは酵素を加えるなどして細胞壁を分解した後、抽出する操作が必要となる。溶菌による菌体内成分や細胞壁由来のβグルカン以外の成分も含まれるため、分離、精製操作が煩雑になる上、一定の品質のβグルカンを安定的に抽出する方法の確立が課題であるといえる。
【０００７】
一方、免疫活性を増強する機能を有するβグルカンを菌体外に分泌生産する微生物が知られている。マクロフォモプシス（Macrophomopsis）属（特許文献６）やアウレオバシジウム  プルランス（Aureobasidium pullulans）（非特許文献２、特許文献７）、あるいはアルカリゲネス属の生産するカードラン（非特許文献１）もその例に挙げられる。このような微生物を用いてβグルカンを発酵生産することができれば、均一で、水溶性が高く、且つ強い免疫活性増強活性を有するβグルカンを得ることが可能であり、極めて有効な方法であることから、高活性なβグルカンを菌体外に分泌生産することが知られているアウレオバシジウム属の微生物を用いたβグルカンの製造方法が提案されてきた。（特許文献１１、１２、１３）
【０００８】
アウレオバシジウム属の生産するβグルカンは分子量、分岐密度共に高い性質を持っている。抗腫瘍活性を示すβグルカンは分岐構造を持っていることが知られ、分子量、分岐密度、分岐鎖長などに由来する高次構造が関係していることが示唆されており（非特許文献３、７ページ）、機能面でも非常に期待できるβグルカンと言える。そして、分岐密度が高い故と推察されるが、例えばβ−１，３結合のみで構成されるカードランに比べるとはるかに高い水溶性を示し、物性的には好ましい性質と言える。一方で、分子量、分岐密度共に高い故と推察されるが、非常に粘度が高く、しかもチキソトロピックな性質を示す。この性質はユーザーの立場からすれば、食品や医薬品、化粧品等の原料あるいは素材として利用する上でハンドリング性が悪いため使用し難く、生産者の立場からも製造工程におけるバンドリング性が悪いため生産効率面で非常に問題であった。
【０００９】
したがって、βグルカンの機能を維持したまま、適度な分子量に低分子化する技術が期待されている。βグルカンを低分子化する方法として、酸やアルカリで加水分解する方法、加熱する方法、超音波処理をする方法、高剪断力処理をする方法、高速噴射による方法、ガンマ線を照射する方法、酸化還元する方法が提案されている（特許文献８〜１０、非特許文献３、１１ページ、非特許文献４、５）。アウレオバシジウムの生産するβグルカンは加熱や超音波処理、高剪断力処理、高速噴射処理等の物理的処理では加水分解され難いことや、ガンマ線照射処理や高速噴射処理は装置が大掛かりになり、時間も要することから、特に食品用途に求められる安価な原料、素材を供給する上では必ずしも優れた方法とは言えなかった。一方、酸やアルカリによる処理では分解部位の選択性が低く、単糖の生成が著しいことや、発酵培養液をそのまま用いた場合には共存するタンパク質などに起因する着色などが起こり好ましいとは言えない。また、酸化還元処理には化学薬品を使用するため、食品や医薬品、化粧品の原料として用いる上で好ましいとは言えなかった。
【００１０】
一方、グルカナーゼやセルラーゼ等の酵素を用いる方法も考え得るが、アウレオバシジウムの生産するβグルカンは市販の食品産業用酵素による作用を殆ど受けず、報告例は認められない。（これは、恐らく分岐密度が高いため、立体障害によって酵素の作用が妨げられているためと推察される。）したがって、これまでに酵素による方法を実施した例としては、アルカリ溶液や有機溶媒、尿素等の助剤を使用した条件において酵素を作用させた例（特許文献１４）が認められるに過ぎない。また、特許文献１５には担子菌由来のβグルカンを酵素処理する記述があるが、具体例は開示されていない。また、特許文献１６にはアガリクスの菌糸体、子実体からβグルカンを抽出する際に、ヘミセルラーゼもしくはヘミセルラーゼとペクチナーゼを併用する例が開示されているが、これは細胞壁成分から標記酵素によって不必要な成分を酵素により除去し、目的のβグルカンを得る方法であり、本発明のβグルカンを加水分解する方法とは全く異なるものである。
【００１１】
また、βグルカンは、Ｄ−グルコースがβ結合によって重合した高分子多糖体であり、キノコに含まれる抗腫瘍性多糖の主成分であることや、穀物に含まれるβグルカンはコレステロール低減作用に優れていることが知られている。近年では、その穀物由来のβグルカンの低分子化物（分子量を１０万以下となるように低分子化して抽出したもの）に免疫増強作用も認められており（特許文献１７）、各種食品へ添加した場合に優れた物性改良効果を発揮することから、応用技術が提案されている（特許文献１８〜２２）。
【００１２】
このβグルカンは、大麦やオーツ麦に比較的多く存在し、その含有量は６％とされる（非特許文献６）。大麦やオーツ麦において、βグルカンは、デンプン貯蔵細胞の細胞壁成分として存在し、その分子量は数百万ともいわれる。大麦やオーツ麦に水などの溶媒を添加し抽出によって得られるβグルカンは、穀粒内に元々存在する酵素や物理的作用により穀粒の中で存在するよりも低分子化され、その分子量は数十万〜数万となる（特許文献２３、２４）。
【００１３】
これらのβグルカンは、上述のように優れた健康機能性（生理機能性）を有しているが、水への溶解性には難点がある。具体的には、抽出されたβグルカンは温水には易溶性を示すが、冷水には難溶である。また、βグルカンが溶解している水溶液も、冷凍・解凍によってβグルカンが沈殿する性質がある。また、比較的高濃度の場合には、βグルカンを溶解させた水溶液が冷蔵（１０℃以下への冷却）によってゲル化したり、沈殿を生じる場合がある。
【００１４】
これに対し、βグルカンの健康機能性は、βグルカンのもつ優れた水溶性に起因している。従って、βグルカンを摂食して、そのβグルカンに生体内で機能性を発揮させるためには、摂食時にβグルカンが溶解した状態あるいは溶解しやすい状態となっていることが必要である。穀物由来のβグルカンは、前述の通り、保存や加工形態によっては沈殿・凝集する場合があり、本来の機能性を発揮させるため、摂食時に、この難溶性となったβグルカンを、再度加熱によって水和した状態にして、溶解性を高める、あるいは溶解性を回復させる必要があった。また、飲料などにおいては、生じたβグルカンの沈殿は、品質低下の一因となっていた。このような欠点を解決するため、冷凍／解凍を繰り返しても沈殿しない、あるいは冷水に溶解する性質を保持したβグルカンの創製が望まれていた。
【００１５】
【特許文献１】特開昭５４−１３８１１５号公報
【特許文献２】特開平０９−１０３２６６号公報
【特許文献３】特開平０３−２２９７０２号公報
【特許文献４】特開平１０−１６７９７２号公報
【特許文献５】特公平０６−９２４４１号公報
【特許文献６】特開平０３−２２０２号公報
【特許文献７】特開平６−３４０７０１号公報
【特許文献８】特開昭６３−７７９０１号公報
【特許文献９】特開平５−２６２６５４号公報
【特許文献１０】特開昭５５−７１７０１号公報
【特許文献１１】特許第３４４４６２４号公報
【特許文献１２】特開平７−５１０８０号公報
【特許文献１３】特開２００４−４９０１３号公報
【特許文献１４】特開平６−２７７０８５号公報
【特許文献１５】特開昭６３−７７９０１号公報
【特許文献１６】特許第３４２８３５６号公報
【特許文献１７】特開２００１−３２３００１号公報
【特許文献１８】特開２００２−２４１７８４号公報
【特許文献１９】特開２００２−３０６０５６号公報
【特許文献２０】特開２００２−３０６１２４号公報
【特許文献２１】特開２００２−３０６０６４号公報
【特許文献２２】特開２００２−３０６０９４号公報
【特許文献２３】特表２００１−５０１９９６号公報
【特許文献２４】特開２００２−１０５１０３号公報
【非特許文献１】食物繊維の科学、ｐ１０８、朝倉書店（１９９７年）
【非特許文献２】Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．；４７（６）,１１６７−１１７２（１９８３）
【非特許文献３】多糖類の構造と生理活性、朝倉書店（１９９０年）
【非特許文献４】Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．；４８（４）,９１５−９１２（１９８４）
【非特許文献５】日本農芸化学会誌；６６（１１），１６３３−１６４０（１９９２）
【非特許文献６】最新食品標準成分表、全国調理師養成施設協会
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
従って本発明の目的は、優れた生体調節機能や生理活性機能を有するβグルカンおよびβグルカン複合体を提供することであり、さらに、食品や医薬品、化粧品の製造に供しても安全で、生産時や使用時において増粘等の問題を抑えることによって非常に扱いやすく、しかも粉末化や濃縮が容易であって目的とする配合量が実質的に制限されない低分子化されたβグルカンの製造方法を提供することにある。
また、さらなる本発明の目的は、水への溶解性に優れ、水溶液のまま保存しても沈殿や濁りなどの経時変化が生じず安定で、冷凍／解凍を繰り返しても沈殿せず、また、冷水にも優れた溶解性を有する、水溶性βグルカンを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、鋭意検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、微生物類由来のβグルカンを提供するものである。
【００１８】
また、本発明は、β１−３，１−６グルカンであることを特徴とする前記微生物類由来のβグルカンを提供するものである。
【００１９】
また、本発明は、穀物由来のβグルカンを提供するものである。
【００２０】
また、本発明は、β１−３，１−４グルカンであることを特徴とする前記穀物由来のβグルカンを提供するものである。
【００２１】
また、本発明は、担子菌類由来のβグルカンを提供するものである。
【００２２】
また、本発明は、β１−３，１−６グルカンであることを特徴とする前記担子菌類由来のβグルカンを提供するものである。
【００２３】
また、本発明は、β１−３，１−６グルカンおよびβ１−３，１−４グルカンを含有するβグルカン複合体を提供するものである。
【００２４】
また、本発明は、微生物類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカンのいずれか二種以上を含有するβグルカン複合体を提供するものである。
【００２５】
また、本発明は、微生物類由来のβ１−３，１−６グルカン、穀物由来のβ１−３，１−４グルカン、担子菌類由来のβ１−３，１−６グルカンのいずれか二種以上を含有するβグルカン複合体を提供するものである。
【００２６】
また、本発明は、加水分解酵素を作用させる工程を有する微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法を提供するものである。
【００２７】
また、本発明は、加水分解酵素を作用させる工程を有する穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法を提供するものである。
【００２８】
また、本発明は、加水分解酵素を作用させる工程を有する担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法を提供するものである。
【００２９】
また、本発明者らは、穀物由来のβグルカンの水への溶解性について鋭意検討した結果、穀物由来のβグルカンの溶解性は、その分子量と密接な関係にあり、特定の分子量にβグルカンの分子量を制御することで、優れたβグルカンを創製できることを知見した。本発明者らは、さらに検討を進めた結果、大麦若しくはオーツ麦等の穀物又は該穀物由来のβグルカンに対し、加水分解活性を有する酵素を作用させて限定的に加水分解反応を施し、βグルカンの分子量を調節することで、βグルカンの溶解性を改変し、優れたβグルカンを創製できることを知見した。
【００３０】
本発明は、上記知見に基づきなされたもので、穀物及び／または穀物由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化して得られた水溶性βグルカンを提供するものである。
【００３１】
また、本発明は、ヘミセルロースを含有する穀物、及び／またはヘミセルロースを含有する穀物由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化して得られた前記水溶性βグルカンを提供するものである。
【００３２】
また、本発明は、大麦若しくはオーツ麦、及び／または大麦若しくはオーツ麦由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化して得られた前記水溶性βグルカンを提供するものである。
【００３３】
また、本発明は、穀物由来のβグルカンが、穀物から抽出された抽出物または分画物である前記水溶性βグルカンを提供するものである。
【００３４】
また、本発明は、重量平均分子量６万以下に低分子化されていること前記水溶性βグルカンを提供するものである。
【００３５】
また、本発明は、添加し作用させる酵素が、β−Ｄ−グルコース結合間を加水分解する反応を触媒する酵素である前記水溶性βグルカンを提供するものである。
【発明の効果】
【００３６】
本発明の効果は、優れた生体調節機能や生理活性機能を有するβグルカンおよびβグルカン複合体を提供することができることにある。さらに、食品や医薬品、化粧品の製造に供しても安全で、生産時や使用時において増粘等の問題を抑えることによって非常に扱いやすく、しかも粉末化や濃縮が容易であって目的とする配合量が実質的に制限されない低分子化されたβグルカンを提供することができる。
また、本発明によれば、水への溶解性に優れ、水溶液のまま保存しても沈殿や濁りなどの経時変化が生じず安定で、冷凍／解凍を繰り返しても沈殿せず、また、冷水にも優れた溶解性を有する、水溶性βグルカンを提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
以下、本発明を詳細に説明する。
まず本発明のβグルカンについて説明する。
【００３８】
本発明のβグルカンは、微生物類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカンである。
【００３９】
次に、本発明で用いられる微生物類由来のβグルカンについて説明する。
【００４０】
微生物類は、細胞自身がその細胞壁に多量のβグルカンを含有しているので、微生物類由来のβグルカンとしては、微生物類をそれぞれの増殖培地に接種し菌体を増殖させることで得られる培養細胞をそのまま、また該培養細胞を破砕し内容物を除去して得られた培養細胞壁残査を用いることができる。また、上記培養細胞または上記培養細胞壁残査より抽出されたβグルカンをそのまま、あるいは該抽出βグルカンを精製したもののいずれも用いることができる。また、微生物類を培養することによって菌体外に分泌生産されたβグルカンを利用することも可能であり、その場合は、培養終了後の培養液をそのまま、あるいは培養液から単離・精製されたβグルカンを用いることができる。
【００４１】
これらのうち、微生物類をそれぞれの増殖培地に接種し菌体を増殖させることで得られる培養細胞をそのまま使用した場合、細胞内容物が混入するので、該培養細胞を破砕し内容物を除去して得られた培養細胞壁残査を用いるのが好ましく、さらに、上記培養細胞または上記培養細胞壁残査より抽出されたβグルカンをそのまま、あるいは精製して用いるのがさらに好ましく、さらに、菌体外に分泌生産されたβグルカンを培養液とともに、あるいは培養液から精製したものを用いるのが最も好ましい。
【００４２】
上記βグルカンを得るのに適した微生物類は、従来より食用に供せられている微生物類が安全性が高く適している。即ち、酵母菌、乳酸菌、納豆菌、酢酸菌、麹菌、クロレラやスピルリナ等の藻類、アウレオバシジウム(Aureobasidium)属に属する微生物等である。これらは、環境中（例えば食品、土壌、室内等）より分離された当該微生物を用いることができる。また、単菌分離された保存株あるいは分離株、さらにはそれらを常法に従い変異操作を実施した変異株を用いることができる。変異操作の例としては、例えばＵＶ照射、あるいはニトロソグアニジン、エチジウムブロマイド、メタンスルホン酸エチル、亜硝酸ナトリウム等による化学処理等が挙げられる。
【００４３】
上記酵母菌としては、ビール、発泡酒、焼酎、日本酒、ワイン、ウイスキー等のアルコール醸造や製パン工程で使用されるサッカロマイセス(Saccharomyces)属に分類される酵母類で、例えば、サッカロマイセスセレビシエ（S.cerevisiae）、サッカロマイセスサケ（S.sake）、サッカロマイセスロゼイ（S.rosei）、その他、サッカロマイセスルキシー（S.rouxii）、サッカロマイセスビスポラス（S.bisporus）、サッカロマイセスバイリ（S.baillii）、サッカロマイセスバヤナス（S.bayanus）、サッカロマイセスカペニシス（S.capenisis）などや、シゾサッカロマイセス（Syzosaccharomyces）属、例えば、シゾサッカロマイセスポンベ（S.pombe）、トルロプシス（Torulopsis）属、例えば、トルロプシスエトケルシ（T.etchelsii）、トルロプシスベルサチルス（T.versatilis）、トルロプシスホルミ（T.holmii）や、ハンゼニアスポラ（Hanseniaspora）属、ハンゼヌラ（Hansenula）属、例えば、ハンゼヌラスブペリクローサ（H. subpelliculosa）、デバリオマイセス（Debaryomyces）属、例えば、デバリオマイセスハンセニ（D.hansenii）、サッカロマイコプシス（Saccharomycopsis）属 例えば、サッカロマイコプシスフィブリゲラ（S.fibuligera）、サッカロマイコデス（Saccharomycodes）属、ピヒア（Pichia）属、パキィソレン（Pachysolen）属、微生物タンパク質生産に使用されるキャンディダ(Candida) 属の酵母菌等が挙げられ、例えば、キャンディダユチリス（C.utilis）、キャンディダミレリ（C.milleri）、キャンディダトロピカリス（C.tropicalis）、キャンディダマルトーサ（C.maltosa）、キャンディダリポリティカ（C.lipolytica）である。その他、ロドトルラ属の酵母である。
【００４４】
上記乳酸菌としては、桿菌のラクトバシラス(Lactobacillus)属やビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属、球菌のロイコノストック(Leuconostoc)属、ペディオコッカス(Pediococcus)属、ストレプトコッカス(Streptococcus)属、ラクトコッカス(Lactococcus)属の乳酸菌が通常使用されるが、その他、エンテロコッカス（Enterococcus）属、バゴコッカス(Vagococcus)属、カルノバクテリウム(Carnobacterium)属、アエロコッカス(Aerococcus)属、テトラゲノコッカス(Tetragenococcus)属の乳酸菌を利用することができる。具体的な乳酸菌株としては、ラクトバシルスブルガリス(Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバシルスヘルベティカス(L.helveticus)、ラクトバシルスアシドフィルス(L.acidophilus) 、ラクトバシルスラクティス(L.lactis)、ラクトバシルスカゼイ(L.casei)、ラクトバシルスブレビス(L.brevis)、ラクトバシルスプランタラム(L.plantarum)、ラクトバシルスサケ(L.sake)、ストレプトコッカスサーモフィルス(Streptococcus thermophilus)、ストレプトコッカスラクティス(S.lactis)、ストレプトコッカスクレモリス(S.cremoris)、ビィフィドバクテリウムロンガム(Bifidobacterium longum)、ビィフィドバクテリウムビィフィダム(B.bifidum) 、ビィフィドバクテリウムブレーベ(B.breve) 、ビィフィドバクテリウムインファンティス(B.infantis)、ロイコノストッククレモリス(Leuconostoc cremoris)、ロイコノストックメセンテロイデス(Ln.mesenteroides)、ロイコノストックオクノス(Ln.ocnos)、ペディオコッカスアシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)、ペディオコッカスセレビシエ(P.cerevisiae)、ペディオコッカスペントサセウス(P.pentosaceus)等の従来使用されている乳酸菌の１種類または２種類以上を使用できる。これらは単品で使用してもよく、２種類以上を共生させてもよい。また、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属の乳酸菌の培養とその他の乳酸菌の培養とを別々に行い、これらを混合してもよい。
【００４５】
上記アウレオバシジウム(Aureobasidium)属に属する微生物としては、当該微生物を培養することによって菌体外にβ結合を有するグルコース重合体を生産する菌株であるならばいずれでもよく、その例としてはアウレオバシジウムプルランス(Aureobasidium pullulans)の菌株であり、具体的にはIFO4464、IFO4466、IFO6353、IFO7757、ATCC9348、ATCC3092、ATCC42023、ATCC433023、FERM BP-8391等を用いることができる。その他、環境中（例えば食品、土壌、室内等）により分離された当該微生物を用いることができる。また、単菌分離された保存株あるいは分離株、さらにはそれらを常法に従い変異操作を実施した変異株を用いることができる。変異操作の例としては、例えばＵＶ照射、あるいはニトロソグアニジン、エチジウムブロマイド、メタンスルホン酸エチル、亜硝酸ナトリウム等による化学処理等が挙げられる。
【００４６】
その他、納豆菌であるバシルス(Bacillus)属の菌株、酢酸菌であるアセトバクター(Acetobactor)属の菌株、麹菌類であるアスペルギルス(Aspergillus)属やペニシリウム(Penicillium)属の菌株、クロレラやスピルリナ等の藻類、乾燥クロレラ粉末、プルランを菌体外に分泌生産することが知られているアウレオバシジウム(Aureobasidium)属の菌株、その他食品添加物として使用される増粘多糖類を生産することが知られているキサントモナス(Xanthomonas)属、アエロモナス(Aeromonas)属、アゾトバクター(Azotobactor)属、アルカリゲネス(Alcaligenes)属、エルウィナ(Erwinia)属、エンテロバクター(Enterobactor)属、スクレロティウム(Sclerotium)属、シュードモナス(Pseudomonas)属、アグロバクテリウム(Agrobacterium)属、マクロホモプシス(Macrophomopsis)属の菌株を用いることができる。
【００４７】
上記の微生物類の培養細胞壁残査をβグルカンとして単離する方法としては、培養した微生物類、菌体、菌株に適当量の溶媒を加え、自己消化あるいは加水分解酵素の添加により細胞壁の一部を破壊し内容物を流去させて、残査成分を回収することで培養細胞壁残査をβグルカンとして単離する方法が挙げられる。また、フレンチプレスや超音波破砕機等の物理的力により微生物類や担子菌類の細胞にダメージを与え一部を破壊し、内容物を除去し、残査を回収することでβグルカンとして得る方法もある。
【００４８】
βグルカンの抽出方法は、特に制限はなく、抽出原料となる微生物類に、抽出溶媒を添加し抽出すればよい。抽出溶媒は、水、塩溶液、酸水溶液、アルカリ水溶液、有機性溶媒等の一種または二種以上の混合溶媒等を用いることができる。また、細胞壁を分解する酵素を併用することで抽出効率を高めることができる。抽出物は、固液分離された場合の抽出液そのもの、あるいは抽出液より公知の方法で抽出されたβグルカンを濃縮した液体や固体状のもの、あるいは抽出液より公知の方法で精製し純度を上げた液体や固体状のもの等、いずれの製造方法で得たものでも、いずれの形態のものでも、いずれの純度のものでも使用可能である。もちろんβグルカン以外の抽出された成分が混合しているものを使用することも可能である。本発明では、これら全てを微生物類から抽出されたβグルカンという。
【００４９】
さらに、βグルカンの微生物類からの抽出方法を説明すると、本発明で用いられるβグルカンは、水溶性高分子として水等の溶媒に溶解させることができ、例えば菌体の細胞壁成分を調整し、凍結乾燥した粉末に、水、温水、熱水あるいは塩溶液、さらには酸、アルカリ性の水溶液、有機溶媒等を用いて、対粉２〜１００倍量の溶媒にて任意の時間、任意の温度で抽出することができる。さらに抽出液を固液分離してβグルカンを得ることができる。これらの中でも、水、温水または熱水で抽出されたβグルカンが好ましく、温度９０℃以下４℃以上の水で抽出されたβグルカンがより好ましい。さらに抽出時に酵素溶液等の抽出促進剤等を加えて、低分子化しながら抽出してもよい。
【００５０】
本発明の微生物由来のβグルカンは、１−２−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−３−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−４−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−６−β−Ｄ−グルコピラノース結合を少なくとも２種類以上有するβグルカンが好ましく、特に１−３−β−Ｄ−グルコピラノース結合および１−６−β−Ｄ−グルコピラノース結合よりなるβグルカンが好ましく、いわゆるβ１−３，１−６グルカンが好ましい。
【００５１】
なお、微生物類からの抽出液を精製を行わずそのまま、あるいは該抽出液を粉体化、固体化処理のみを行なったものをそのまま使用する場合、該成分中のβグルカンの純度は、１〜１００％、好ましくは１０〜１００％、さらに好ましくは２０〜１００％であれば良く、高純度であればある程良い。
【００５２】
本発明の微生物類のβグルカンは、高分子体で、いずれの重量平均分子量を持つβグルカンも使用可能であるが、分子量の低下と共に水溶性が増すため、分子量３００万以下、好ましくは５０万以下、更に好ましくは１０万以下のものがよい。例えば微生物類から抽出して得たβグルカンは、水溶性が良くなるように、公知の方法で低分子化してもよく、直接低分子量のβグルカンを抽出してもよい。
【００５３】
次に穀物由来のβグルカンについて説明する。穀物としては、イネ科植物が好ましい。イネ科植物の例としては、米類、小麦類、トウモロコシ類、モロコシ類、ヒエ類、アワ類、キビ類、大麦類、オーツ麦類（カラス麦類）、ライ麦類等の穀類を挙げることができ、特に大麦由来のものが好ましい。また、特にこれらイネ科植物から抽出によって得られたβグルカンが好ましい。本発明では、この抽出によって得られたβグルカンを抽出βグルカンともいう。
【００５４】
このイネ科植物から抽出されたβグルカンは、その抽出方法に特に制限はなく、抽出原料となるイネ科植物に、抽出溶媒を添加し抽出すればよい。また、固液分離された場合の抽出液そのもの、あるいは、抽出液より公知の方法で抽出されたβグルカンを濃縮した液体や固体状のもの、あるいは、抽出液より公知の方法で精製し純度を上げた液体や固体状のもの等、いずれの製造方法で得たものでも、いずれの形態のものでも、いずれの純度のものでも使用可能である。もちろんβグルカン以外の抽出された成分が混合しているものを使用してもよい。本発明では、これらを全てイネ科植物から抽出されたβグルカンという。
【００５５】
抽出には、植物全体を原料とできるが、βグルカンの含有量の比較的高い種子を用いるのが好ましい。全体を粉砕したもの（全粒粉）をはじめ、穀類の精製工程で得られる糠、フスマ、麦芽、胚芽、胚乳部位のいずれを用いてもよい。好ましくは大麦類やオーツ麦類の全粒粉や穀粒を外周部より搗精した胚乳部分やその際発生する糠、米糠、小麦やトウモロコシ類のフスマや胚芽等であり、更に好ましくは大麦類やオーツ麦類の全粒粉や穀粒を外周部より搗精した胚乳部分やその際発生する糠である。
【００５６】
また、イネ科植物から抽出されたβグルカンは、１−２−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−３−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−４−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−６−β−Ｄ−グルコピラノース結合を少なくとも２種類以上有するβグルカンが好ましく、１−３−β−Ｄ−グルコピラノース結合および１−４−β−Ｄ−グルコピラノース結合よりなるβグルカンが好ましく、いわゆるβ１−３，１−４グルカンが好ましい。
【００５７】
βグルカンのイネ科植物からの抽出方法を説明すると、イネ科植物中のβグルカンは、水溶性高分子として水溶液として溶解させることができ、例えばイネ科植物の穀類粉末に水、温水、熱水あるいは塩溶液、更には酸、アルカリ性の水溶液、有機溶媒等を用いて、対粉２〜１００倍量の溶媒にて任意の時間、任意の温度で抽出することができる。更に抽出液を固液分離してβグルカンを得ることができる。これらの中でも、水、温水又は熱水で抽出されたβグルカンが好ましく、温度８０℃以下４℃以上の温水で抽出されたβグルカンがより好ましい。更に抽出時に抽出促進剤等を加えてもよい。
【００５８】
具体的には、大麦から高分子量のβグルカンを得る方法としては、例えば、多ろう質大麦を原料とし、水抽出により製造する方法（特公平４−１１１９７号公報）、あるいは、大麦、オーツ麦を原料として、アルカリ抽出、中和、アルコール沈殿により、重量平均分子量１０万〜１００万のβグルカンを得る方法（特公平６−８３６５２号公報）、搗精歩留まり８２％以下の大麦糠類を原料として、８０〜９０℃の熱水にてβグルカンを抽出する方法（特開平１１−２２５７０６号公報）等が挙げられ、またこれらの製造方法で得られたβグルカンを更に公知の方法で低分子化βグルカンとすることもできる。例えば低分子化の方法としては、公知である多糖類の加水分解反応のいずれもが利用可能である。例えば、水溶性多糖類は、酸存在下に加圧加熱により加水分解することが知られており、これを利用して低分子化することができる。また、酵素による加水分解反応を利用した低分子化も有効で、酵素としては、１，３−βグルカナーゼ等を用いることができる。更にまた、ＷＯ９８／１３０５６号公報、特開２００２−９７２０３号公報等の方法により、原料穀物から直接抽出して得たβグルカンも用いることができる。また、特開２００２−１０５１０３号公報に記載の抽出促進剤等を使用してもよい。
【００５９】
本発明に用いられる穀物由来のβグルカンは、高分子体で、いずれの重量平均分子量を持つβグルカンも使用可能であるが、分子量の低下と共に水溶性が増すため、分子量３００万以下、好ましくは５０万以下、更に好ましくは１０万以下のものがよい。例えばイネ科植物から抽出して得たβグルカンは、水溶性が良くなるように、公知の方法で低分子化してもよく、直接低分子量のβグルカンを抽出してもよい。
【００６０】
次に、担子菌類由来のβグルカンについて説明する。
【００６１】
担子菌類は、子実体や菌糸が塊状に集合した菌核に多量のβグルカンを含有しているので、子実体や菌核を微粉砕したもの、あるいは粉砕物から抽出された抽出物、あるいは抽出物からβグルカンを精製したもの等、いずれのものも担子菌類由来のβグルカンとして用いることができる。また、担子菌類の胞子を発芽させ、菌糸体をそれぞれの増殖培地に接種し菌体を増殖させることで得られる培養細胞をそのまま、また該培養細胞を破砕し内容物を除去して得られた培養細胞壁残査を用いることができる。また、上記培養細胞または上記培養細胞壁残査より抽出されたβグルカンをそのまま、あるいは該抽出βグルカンを精製したもののいずれも担子菌類由来のβグルカンとして用いることができる。また、担子菌類を培養することによって菌体外に分泌生産されたβグルカンを利用することも可能であり、その場合は、培養終了後の培養液をそのまま、あるいは培養液から分離・精製されたβグルカンを担子菌由来のβグルカンとして用いることができる。
【００６２】
これらのうち、子実体や菌核を微破砕したものをそのまま、胞子や菌糸体をそれぞれの増殖培地に接種し菌体を増殖させることで得られる培養細胞をそのまま使用した場合は、細胞内容物が、混入するので、該培養細胞を破砕し内容物を除去して得られた培養細胞壁残査を用いるのが好ましく、さらに、上記培養細胞または上記培養細胞壁残査より抽出されたβグルカンをそのまま、あるいは精製して用いるのがさらに好ましく、さらに、菌体外に分泌生産されたβグルカンを培養液とともに、あるいは培養液から精製したものを用いるのが最も好ましい。
【００６３】
担子菌類としては栽培品種が最も好ましいが、商業生産に供せられていない担子菌類由来のものでもよい。例としては、アガリクス・ブラゼイ、アミガサタケ、アミタケ、エゾハリタケ、エノキタケ、カンゾウタケ、キクラゲ、キヌガサタケ、クリタケ、サケツバタケ、ササクレヒトヨタケ、サンゴハリタケ、シイタケ、ショウロ、シロキクラゲ、シロタモギタケ、スギヒラタケ、タモギタケ、チョレイマイタケ、ツバヒラタケ、冬中夏草、ナメコ、ナラタケ、ナラタケモドキ、ニオウシメジ、ニカワウロコタケ、ニカワハリタケ、ヌメリスギタケ、ヌメリスギタケモドキ、ハツタケ、ヒラタケ、ブクリョウ、フクロタケ、ブナシメジ、ブナハリタケ、ホンシメジ、マイタケ、マスタケ、マツオウジ、マッシュルーム、マツタケ、マンネンタケ、ムキタケ、ムラサキシメジ、ヤマドリタケ、ヤマブシタケ、ヤナギマツタケ、ハナビラタケ、メシマコブ等が挙げられる。
【００６４】
上記担子菌類の培養細胞壁残査をβグルカンとして単離する方法としては、培養した菌糸体あるいは栽培した菌核や子実体に適当量の溶媒を加え、自己消化あるいは加水分解酵素の添加により細胞壁の一部を破壊し内容物を流去させて、残査成分を回収することで培養細胞壁残査をβグルカンとして単離する方法が挙げられる。また、フレンチプレスや超音波破砕機等の物理的力により担子菌類の細胞にダメージを与え一部を破壊し、内容物を除去し、残査を回収することでβグルカンとして得る方法もある。
【００６５】
βグルカンの抽出方法は、特に制限はなく、抽出原料となる担子菌類に、抽出溶媒を添加し抽出すればよい。抽出溶媒は、水、塩溶液、酸水溶液、アルカリ水溶液、有機性溶媒等の一種または二種以上の混合溶媒等を用いることができる。また、細胞壁を分解する酵素を併用することで抽出効率を高めることができる。抽出物は、固液分離された場合の抽出液そのもの、あるいは抽出液より公知の方法で抽出されたβグルカンを濃縮した液体や固体状のもの、あるいは抽出液より公知の方法で精製し純度を上げた液体や固体状のもの等、いずれの製造方法で得たものでも、いずれの形態のものでも、いずれの純度のものでも使用可能である。もちろんβグルカン以外の抽出された成分が混合しているものを使用することも可能である。本発明では、これら全てを担子菌類から抽出されたβグルカンという。
【００６６】
さらに、βグルカンの担子菌類からの抽出方法を説明すると、本発明で用いられるβグルカンは、水溶性高分子として水等の溶媒に溶解させることができ、例えば担子菌である一般に市販されているキノコを乾燥させ、粉砕した粉末に、水、温水、熱水あるいは塩溶液、さらには酸、アルカリ性の水溶液、有機溶媒等を用いて、対粉２〜１００倍量の溶媒にて任意の時間、任意の温度で抽出することができる。さらに抽出液を固液分離してβグルカンを得ることができる。これらの中でも、水、温水または熱水で抽出されたβグルカンが好ましく、温度９０℃以下４℃以上の水で抽出されたβグルカンがより好ましい。さらに抽出時に酵素溶液等の抽出促進剤等を加えてもよい。
【００６７】
本発明に用いられるβグルカンは、１−２−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−３−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−４−β−Ｄ−グルコピラノース結合、１−６−β−Ｄ−グルコピラノース結合を少なくとも２種類以上有するβグルカンが好ましく、特に１−３−β−Ｄ−グルコピラノース結合および１−６−β−Ｄ−グルコピラノース結合よりなるβグルカンが好ましく、いわゆるβ１−３，１−６グルカンが好ましい。
【００６８】
なお、担子菌類からの抽出液を精製を行わずそのまま、あるいは該抽出液を粉体化、固体化処理のみを行なったものをそのまま使用する場合、該成分中のβグルカンの純度は、１〜１００％、好ましくは１０〜１００％、さらに好ましくは２０〜１００％であれば良く、高純度であればある程良い。
【００６９】
本発明に用いられる担子菌類由来のβグルカンは、高分子体で、いずれの重量平均分子量を持つβグルカンも使用可能であるが、分子量の低下と共に水溶性が増すため、分子量３００万以下、好ましくは５０万以下、更に好ましくは１０万以下のものがよい。例えば担子菌類から抽出して得たβグルカンは、水溶性が良くなるように、公知の方法で低分子化してもよく、直接低分子量のβグルカンを抽出してもよい。
【００７０】
上記、本発明の微生物類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカンおよび担子菌類由来のβグルカンは、生体調節機能性や生理活性機能、例えば、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制作用、コレステロール低下作用、血糖値低下作用、抗腫瘍作用、免疫増強作用、免疫賦活作用、腸管免疫増強作用、皮膚免疫増強作用、生活習慣病予防・改善作用等を有する。
【００７１】
次に本発明のβグルカン複合体について説明する。
【００７２】
本発明の微生物類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカンは、それぞれ単独で使用してもよいが、いずれか二種類以上を含有するβグルカン複合体とすることで、相乗効果を生じ、生体調節機能性や生理活性機能等にさらに優れた素材となる。
【００７３】
βグルカン複合体を得るためには、二種類以上のβグルカンを配合すればよく、例えば微生物類由来のβグルカンと穀物由来のβグルカンの複合体、微生物由来のβグルカンと担子菌類由来のβグルカンの複合体、穀物由来のβグルカンと担子菌類由来のβグルカンの複合体、微生物類由来のβグルカンと穀物由来のβグルカンと担子菌類由来のβグルカンの複合体があげられ、さらには、β１−３，１−６グルカンとβ１−３，１−４グルカンの複合体があげられる。
【００７４】
二種類以上のβグルカンを配合し、βグルカン複合体を得る方法は特に限定されず、例えば固体、粉末、液状、スラリー状、水溶液、溶液等の状態のβグルカンを混合すればよい。混合時には攪拌をしてもよく、一定の温度で混合してもよい。（攪拌）混合温度は３０〜１３０℃が好ましく、より好ましくは、５０〜７０℃、あるいは１１０〜１３０℃である。また、攪拌混合終了後、一定時間（例えば１０分〜１時間）静置するのも好ましい。また、それぞれのβグルカンの添加順序は特に限定されず、βグルカンの加工物を混合してもよい。
【００７５】
βグルカンの配合比率は、特に限定されないが、例えばβ１−３，１−６グルカンとβ１−３，１−４グルカンの比率で、０．１：９９．９〜９９．９：０．１が好ましく、１０〜９０：９０〜１０がより好ましい。
【００７６】
本発明のβグルカン複合体は、任意成分として、αグルカンを混合してもよい。
【００７７】
本発明のβグルカン複合体は、生体調節機能性や生理活性機能、例えば、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制作用、コレステロール低下作用、血糖値低下作用、抗腫瘍作用、免疫増強作用、免疫賦活作用、腸管免疫増強作用、皮膚免疫増強作用、生活習慣病予防・改善作用等を有し、さらに優れた乳化作用、食味、呈味性を有する。
【００７８】
次に低分子化βグルカンの製造方法について説明する。本発明の低分子化βグルカンは水溶性であり、水溶性βグルカンともいう。
【００７９】
まず、加水分解酵素を作用させる工程を有する微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法について説明する。
【００８０】
本発明の、微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法に使用される微生物類は、前記βグルカンを得ることができる前記微生物類のいずれでもよいが、特にアウレオバシジウム属に属する微生物類が好ましい。以下、アウレオバシジウム属に属する微生物を使用した場合を例に説明する。
【００８１】
本発明の微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法は、加水分解酵素を作用させる工程を含んでいればよい。すなわち、微生物によってβグルカンを生産させながら、すなわちβグルカンの生産工程中に加水分解酵素を作用させてもよいし、得られた微生物由来のβグルカンに加水分解酵素を作用させて低分子化してもよい。
【００８２】
βグルカンの生産工程を説明すると、アウレオバシジウム属に属する微生物菌株を該微生物が生育可能な培地に作用させ、菌体外の培地中にβグルカンを生産させればよい。また、アウレオバシジウム属に属する微生物菌株を培養して得られた培養菌体を分離し、該培養菌体をβグルカンの基質である糖類を含んだ溶液あるいは培地に作用させて、菌体外にβグルカンを生産させてもよい。ただし、菌体外への分泌が準備された分泌型のβグルカンを菌体内に内包している場合もあるので、このように菌体内に分泌のため準備蓄積されているβグルカンも、本発明においては菌体外に分泌されるβグルカンとする。
【００８３】
本発明における低分子化βグルカンの製造方法において、本発明における微生物菌株を培養する培地としては、アウレオバシジウム属に属する微生物が通常利用できる栄養源（炭素源、窒素源、無機塩類）を含有し、さらに必要に応じて有機栄養原を含む通常の培地を用いることができ、これらの培地としては、各種の合成培地、半合成培地、天然培地等いずれも利用可能であり、該微生物が良好に成育しうる条件下において通気撹拌、振とう等による好気的条件下で行えばよい。
【００８４】
また、本発明における微生物菌株を培養することによって得られた培養菌体を分離して、該培養菌体あるいは該培養菌体の抽出液を触媒として低分子化βグルカンを製造する場合は、培養菌体、培養菌体調製物又は培養菌体処理物の懸濁液に、基質である糖類溶液あるいは培地を添加し、公知の発酵生産方法にて、適宜適切な条件を決め、低分子化βグルカンを生産させればよい。上記培養菌体調製物としては、該培養菌体を例えばホモジナイズした細胞破砕液等が挙げられ、また、上記培養菌体処理物としては、培養菌体あるいは細胞破砕液をアルギン酸ゲル中、イオン交換樹脂、セラミック、キトサン等に固定化した固定化菌体等が挙げられる。
【００８５】
前記の方法で得た菌体外に分泌生産されたβグルカンは、菌体を分離する前、分離中あるいは分離した後に酵素処理することにより、改質（低分子化）することができる。すなわち、酵素処理の対象となるβグルカンは、本発明における微生物菌株を培養することによって得られた高分子量のβグルカンを含む培養液、培養液の乾燥物、培養液から単離したβグルカンを含有する溶液や乾燥物等であり、βグルカン単体でもβグルカン以外の成分を含むもののでも特に問題はなく、溶液や乾燥物等の状態も特に限定されない。乾燥物は適宜溶解して酵素を作用させればよい。但し、前記の如く、アウレオバシジウム属に属する微生物が生産した直後のβグルカンの抽出は、粘性やチキソトロピー性のために工業的には非常に難しく、酵素を作用させてから又はさせながら抽出することが好ましい。また、微生物菌体外にβグルカンを分泌生産させる工程と本発明における酵素処理を平行して行うこともできる。
【００８６】
菌体を分離する方法は常法に従えば良い。具体的には、培養液から遠心分離、濾過等により菌体等の固形物を分離除去する方法、活性炭、イオン交換樹脂等により不純物や塩類を除去する方法、あるいは水、塩溶液、酸水溶液、アルカリ水溶液、有機性溶媒等の一種または二種以上の混合溶媒等を用いて抽出する方法等、種々の既知の精製手段を選択、組合せて行うことができる。さらに、例えば、疎水性樹脂への吸着・溶出、エタノール、メタノール、酢酸エチル、ｎ−ブタノール等を用いた溶媒沈降、シリカゲル等によるカラム法あるいは薄層クロマトグラフィー、逆相カラムを用いた分取用高速液体クロマトグラフィー等を、単独あるいは適宜組合せ、場合により反復使用することにより、分離精製することができる。また、細胞内に蓄積されているβグルカン、あるいは細胞壁を構成するβグルカンをも抽出対象とする場合は、予め、自己消化あるいは加水分解酵素の添加により微生物菌体の細胞壁の一部を破壊し内容物を流出させたり、フレンチプレスや超音波破砕機等の物理的力により微生物細胞の一部を破壊し、内容物を流出させたり、セルラーゼ、グルカナーゼ等を加えて細胞壁を部分的に分解しておくことも可能である。
【００８７】
また、菌体外に分泌生産されたβグルカンを上記の方法で分離する前後において、菌体の殺菌を実施してもよい。殺菌温度は、菌体が死滅する温度であれば特に限定されるものではないが、好ましくは５０℃以上、さらに好ましくは６０℃、最も好ましくは８０℃以上である。また、さらに温度を上げて、例えば、９０℃以上、あるいは加圧下１２１℃にて、菌体内に準備されている分泌型のβグルカンを熱水抽出することができる。殺菌時間及び熱水抽出時間は、任意の時間を設定できるが、好ましくは１０分以上８時間以下、さらに好ましくは１５分以上６時間以下、最も好ましくは３０分以上２時間以下とすると、不純物の混入が抑えられ、βグルカンが劣化しないので好適である。
【００８８】
本発明における酵素処理は、前記方法によってβグルカンを生産する工程によって得られたβグルカンに前記の酵素を接触させることができれば方法は特に限定されず、例えば、βグルカンに酵素を添加し、撹拌羽根や振盪機によって撹拌すればよい。もちろん既に得られているβグルカンに酵素を接触させてもよい。また、酵素処理を行う前、酵素処理中、酵素処理終了後の何れか一つもしくは二つ以上の段階において、超音波処理やホモジナイズ処理、超高圧処理、加熱処理等をするとより効果的で好ましい。
【００８９】
本発明における酵素処理によって低分子化したβグルカンを単離する方法としてはとくに制限はなく、水、塩溶液、酸水溶液、アルカリ水溶液、有機性溶媒等の一種または二種以上の混合溶媒等を用いることができる。特に有機性溶媒による沈殿法や分子ふるい式（ゲル濾過）カラムによる単離が有効である。
【００９０】
本発明の酵素処理に用いる酵素はβ−Ｄ−グルコシド結合を加水分解する活性を有する酵素を用いることが出来るが、多糖鎖の末端から順次加水分解するエキソ型の酵素では単糖が生成してしまい、本発明の目的には向いておらず、多糖鎖の末端以外の結合を加水分解するエンド型に加水分解する酵素が好ましく、Ｅｎｄｏ−１,３−β−Ｄ−グルカナーゼ(ＥＣ３．２．１．６)が特に好ましい。また、本発明における微生物菌株が生産するβグルカンは分岐構造を多く持つことから、１,３−β−Ｄ−グルコシド結合を分解する酵素に加え、１,２−β−Ｄ−グルコシド結合を分解する酵素（ＥＣ３．２．１．７１）、１,４−β−Ｄ−グルコシド結合を分解する酵素（ＥＣ３．２．１．４）、１,６−β−Ｄ−グルコシド結合を分解する酵素（ＥＣ３．２．１．７５）を併用するとより効果的である。また、これらの酵素を生産する微生物を培養したときの菌体の抽出物もしくは培地中に得られる成分をそのまま、あるいは精製したものも本発明における酵素として用いることができ、その微生物としては、アスペルギルス（Aspergillus）属、フミコーラ（Humicola）属、リゾプス（Rhizopus）属、トリコデルマ（Trichoderma）属、アクレモニウム（Acremonium）属に属する糸状菌、ピクノポラス（Pycnoporus）属、コルチシウム（Corticium）属、イルペックス（Irpex）属、リゾクトニア（Rhizoctonia）属に属する担子菌、アースロバクター（Arthrobacter）属、バチルス（Bacillus）属、シュードモナス（Pseudomonas）属に属する細菌、アクチノマイセス（Actinomyces）属、ストレプトマイセス（Streptomyces）属、ペニシリウム（Penicillium）属に属する放線菌、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、トリコスポロン（Trichosporon）属に属する酵母が好ましく、特に、アスペルギルス・アクレタス（Aspergillus aculeatus）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・アリアセウス（Aspergillus alliaceus）、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス・ウサミ（Aspergillus usamii）、アスペルギルス・ジャポニカス（Aspergillus japonicus）、アスペルギルス・プルベルレンタス（Aspergillus pulverulentus）、フミコーラ・インソレンス（Humicola insolens）リゾプス・デレマー（Rhizopus delemar）、リゾプス・オリゼ（Rhizopus  oryzae）、トリコデルマ・ハルジアナム（Trichoderma harzianum）、トリコデルマ・ロンギプラチアタム（Trichoderma longibrachiatum）、トリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）、トリコデルマ・インソレンス（Trichoderma insolens）、トリコデルマ・コニンギ（Trichoderma koningii）、トリコデルマ・レーセイ（Trichoderma reesei）、アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）、ピクノポラス・コキネウス（Pycnoporus coccineus）、イルペックス・ラクテウス（Irpex lacteus）、リゾクトニア ソラニー（Rhizoctonia solani）、バチルス・サブチリス（Bacillus subtilis）、バチルス・サーキュランス（Bacillus circulans）、バチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）、シュードモナス・パウチモビリス（Pseudomonas paucimobilis ）、ペニシリウム・エマゾーニ（Penicillium emersonii）、ペニシリウム・フニコロサム（Penicillium funicolosum）が好ましい。
【００９１】
なお、市販あるいは上記微生物の生産する酵素もしくは酵素を含む物質の一種または二種以上併用して用いるとより効果的である。
【００９２】
本発明における酵素処理の条件は用いる酵素の性質によって適宜決定すれば良いが、好ましい条件を例示すれば、βグルカンに対し、酵素を０．００１乃至１０％添加し、ｐＨ２乃至９にて５乃至６０℃で１０分乃至４８時間であり、特に好ましい条件としては、βグルカンに対し、酵素を０．０１乃至１％添加し、ｐＨ３乃至７にて２５乃至４５℃で１乃至２４時間である。
【００９３】
また、酵素処理の前及び／または後に酸による処理を行うことができる。酸としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ポリリン酸等の無機酸及び、クエン酸、乳酸、コハク酸、酢酸、リンゴ酸、グルコン酸等の有機酸、あるいはこれらの塩類で目的のｐＨが達成できるもの、さらには酸性電解水等が挙げられ、なかでも有機酸が好ましく、特にクエン酸、酢酸、乳酸が好ましい。アルカリとしては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等、アルカリ金属及びアルカリ土類金属の水酸化物や塩類、アンモニア等で目的のｐＨが達成できるもの、さらにはアルカリ性電解水等が挙げられる。
【００９４】
本発明における酵素処理には、固定化酵素を用いることができる。固定化に用いることのできる担体の種類としては、陽イオン又は陰イオン交換樹脂、キトサン、セルロース、セラミック、ヒドロキシアパタイト、活性炭、多孔性ガラス、アルミナ、シリカゲル等の固形状担体、ポリアクリルアミド、κ-カラギーナン、アルギン酸などのゲル化剤をゲル化させたものなど、水不溶性担体であれば種類を問わないが、特に多孔質に加工された水不溶性多孔性担体が好ましい。これらの担体は二種以上組合せて用いることもできる。担体の形状としては特に限定されないが、ビーズ状のものが好ましい。また、サイズは任意のものを用いることが出来る。
【００９５】
固定化酵素の調製方法としては、用いる担体の性質により適切な任意の方法を用いることができ、具体的には共有結合法、イオン結合法、物理的吸着法のような担体結合法、あるいは架橋法、包括法などが挙げられる。即ち、担体結合法で固定化する場合は、必要に応じて活性化処理を行った担体と酵素溶液を接触させることができれば特に方法は限定されず、単体と酵素溶液を混合、撹拌する方法、あるいはカラムに詰めた単体に酵素溶液を通液する方法などが挙げられる。架橋法で固定化する場合には担体にグルタールアルデヒドなどの多官能性架橋剤を、酵素溶液を混合する前、酵素溶液と同時、あるいは酵素溶液を混合した後に添加することによって行えばよい。包括法で固定化する場合はポリアクリルアミド、κ-カラギーナン、アルギン酸などのゲル化剤と酵素溶液を混合し、所定の方法でゲル化し、必要に応じてビーズ状などの形状に加工すればよい。なお、固定化酵素処理によって改質されたβグルカンを食品、医薬品、化粧品等、人体に使用する目的の場合は担体の活性化試薬や架橋試薬の必要のないイオン結合法や物理吸着法、包括法で固定化されたものが好ましい。
【００９６】
本発明の微生物由来の低分子化βグルカンは生体調節機能性や生理活性機能、例えば、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制作用、コレステロール低下作用、血糖値低下作用、抗腫瘍作用、免疫増強作用、免疫賦活作用、腸管免疫増強作用、皮膚免疫増強作用、生活習慣病予防・改善作用等を有し、さらに優れた乳化作用、食味、呈味性を有する。
【００９７】
次に、加水分解酵素を作用させる工程を有する担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法について説明する。
【００９８】
本発明の担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法は、加水分解酵素を作用させる工程を含んでいればよい。すなわち、担子菌類によってβグルカンを生産させながら、すなわちβグルカンの生産工程中に加水分解酵素を作用させてもよいし、得られた担子菌類由来のβグルカンに加水分解酵素を作用させて低分子化してもよい。さらにはβグルカンを抽出しながら作用させてもよい。
【００９９】
担子菌類は、子実体や菌糸が塊状に集合した菌核に多量のβグルカンを含有しているので、子実体や菌核を微粉砕したもの、あるいは粉砕物から抽出された抽出物、あるいは抽出物からβグルカンを精製したもの等、いずれのものも用いることができる。また、担子菌類の胞子を発芽させ、菌糸体をそれぞれの増殖培地に接種し菌体を増殖させることで得られる培養細胞をそのまま、また該培養細胞を破砕し内容物を除去して得られた培養細胞壁残査を用いることができる。また、上記培養細胞または上記培養細胞壁残査より抽出されたβグルカンをそのまま、あるいは該抽出βグルカンを精製したもののいずれも用いることができる。また、担子菌類を培養することによって菌体外に分泌生産されたβグルカンを利用することも可能であり、その場合は、培養終了後の培養液をそのまま、あるいは培養中に、あるいは培養液から分離・精製されたβグルカンを用いることができる。
【０１００】
これらのうち、子実体や菌核を微破砕したものをそのまま、胞子や菌糸体をそれぞれの増殖培地に接種し菌体を増殖させることで得られる培養細胞をそのまま使用した場合は、細胞内容物が、混入するので、該培養細胞を破砕し内容物を除去して得られた培養細胞壁残査を用いるのが好ましく、さらに、上記培養細胞または上記培養細胞壁残査より抽出されたβグルカンをそのまま、あるいは抽出中に、あるいは精製したものを用いることができる。さらに、菌体外に分泌生産されたβグルカンを培養液とともに、あるいは分泌生産中に、あるいは培養液から精製したものを用いることもできる。
【０１０１】
酵素処理の条件や、酵素の種類等は、前記微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法と同様に行なえばよい。
【０１０２】
次に、加水分解酵素を作用させる工程を有する穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法について説明する。
【０１０３】
先ず、本発明の製造方法において原料として用いることができる、穀物及び／または穀物由来のβグルカンについて説明する。
【０１０４】
上記穀物としては、ヘミセルロースを含有する穀物、特にイネ科植物が好ましく、具体的には、大麦、オーツ麦、大麦ぬか、小麦胚芽、米ぬか、トウモロコシ外皮などが挙げられるが、βグルカンの含有量の比較的多い大麦、オーツ麦、大麦ぬか、オーツ麦の精麦粕、大麦外皮、オーツ麦外皮が好ましい。
【０１０５】
また、本発明の製造方法においては、原料として穀物由来のβグルカンを原料とすることもできる。穀物由来のβグルカンとは、穀物から抽出・分画等の操作により得られたβグルカンであり、βグルカンが含まれていれば、精製物、粗精製物、抽出物、濃縮物、溶液、粉末状、液状、ゲル状等のいずれでもよく、穀物に含まれる他の成分等が混入している混合物でもよく、これら全てを本発明では穀物由来のβグルカンという。
【０１０６】
本発明では、原料として、抽出等の操作により得られたβグルカンを使用するのが好ましく、また、あらかじめβグルカンの含有量が高められるよう処理されたものを原料とするのが調製効率の点でさらに好ましい。原料として用いる穀物由来のβグルカンとしては、βグルカンが穀粒よりも濃縮された抽出物又は分画物が特に好ましく、そのβグルカン含有量は高含有であればあるほどよい。また、原料としては、水分を１０重量％以下とした穀物および／または穀物由来のβグルカン中、βグルカンの割合が７重量％以上、好ましくは３０重量％以上、さらに好ましくは５０重量％以上の原料を用いるのがよい。尚、本発明では、βグルカン含有量が高められた分画物や濃縮物、抽出物も穀物由来のβグルカンに含めるものとする。また、βグルカンを濃縮することを意図せず調製され、結果としてβグルカンが濃縮されている抽出物あるいは分画物、その他加工品も原料として使用できる。特に、βグルカンが高い濃度で濃縮されている抽出物や分画物の使用が好ましい。
【０１０７】
次に、本発明で使用する酵素について説明する。
【０１０８】
本発明で使用する酵素としては、βグルカンを加水分解する活性を有している酵素、すなわち、β−Ｄ−グルコース間の結合を加水分解する活性を有する酵素が好ましく用いられる。具体的には、セルラーゼ、βグルカナーゼ、１，３−β−Ｄ−グルカナーゼ、１，４−β−Ｄ−グルカナーゼ、１，６−β−Ｄ−グルカナーゼや、これらの複合酵素などが挙げられる。また、市販の酵素製剤には、これらの活性を含むがβグルカン以外の多糖類分解を目的に開発された酵素や酵素製剤もあり、ペクチナーゼ、キシラナーゼ、ヘミセルラーゼ、細胞壁溶解酵素、抽出物の粘度低減作用を示す酵素、果汁の成分の沈降防止用酵素製剤、ビールや果汁などの粘度を低下させる目的や濾過速度を促進するための目的で使用する酵素など、実質的に前記の穀物由来のβグルカンを低分子化し、本発明の水溶性βグルカンを調製することのできる酵素や酵素製剤ならば、いずれでも使用できる。本発明で使用できる酵素の市販品としては、例えば、リケナーゼ（日本バイオコン社製）、セレミックス（ノボザイム社製）、グレイナーゼ（大和化成工業社製）、フィニザイム（ノボザイム社製）、セレクラスト（ノボザイム社製）が挙げられる。特に好ましい酵素は、リケナーゼ、セレミックス、グレイナーゼである。
【０１０９】
また、上記酵素との反応時に、αアミラーゼ、蛋白質分解酵素及びグルコアミラーゼから選択される一種以上を添加して、本発明の水溶性βグルカンの調製を促進することができる。αアミラーゼとは、糊化でんぷんやグリコーゲン等のα１−４グリコシド結合を任意の位置で加水分解し、分解生成物としてデキストリンやオリゴ糖、グルコースを生じるものである。また、グリコアミラーゼとは、可溶性でんぷんのα１−４グリコシド結合を非還元末端より順次グルコース単位で分解するものである。蛋白質分解酵素は、βグルカンを調製時に同時に抽出される可溶性の蛋白質や、βグルカンと複合化しているペプチド類を分解して、本発明の水溶性βグルカンの調製を促進するために使用できる。促進反応を行なうこれらの酵素は、前記βグルカンを加水分解する活性を有している酵素と同時に添加して使用してもよいし、穀物から穀物由来のβグルカンを濃縮、抽出、分画するときに使用してもよい。
【０１１０】
次に、酵素の反応条件について説明する。
【０１１１】
本発明では、穀物及び／または穀物由来のβグルカンに上記酵素を添加し、作用させることにより、βグルカンを低分子化し、水溶性βグルカンを得る。
本発明における酵素反応条件は、通常の酵素反応に使用する条件であれはいずれでも使用可能である。酵素活性を最適に維持するため、温度は８０℃以下１０℃以上がよい。酵素の特性によっては、８０℃以上、１０℃以下での実施が好ましい場合もある。ｐＨは、中性付近がよく、通常ｐＨ１０〜ｐＨ４、好ましくはｐＨ９〜ｐＨ５、さらに好ましくはｐＨ８〜ｐＨ６である。酵素反応には、酵素やβグルカンの安定性を保持するため、必要に応じて、塩類、酸・アルカリ類を添加して用いることができる。
【０１１２】
上記酵素を作用させる際には、穀物及び／または穀物由来のβグルカン１００重量部に、水１０〜２０００重量部及び酵素０．００１〜２０重量部を加え、０．５〜２４時間、好ましくは１〜１２時間、さらに好ましくは１．５〜６時間、撹拌しながら反応させるのが望ましい。水の使用量は、５０〜１０００重量部がさらに好ましく、１００〜５００重量部が最も好ましい。
【０１１３】
βグルカンは、酵素反応溶液中で必ずしも完全溶解している必要はなく、酵素反応の進行とともに溶解性が増大し、反応溶液中に溶解していくので、酵素反応させる時の初期のβグルカン溶液の状態は、完全溶解物、スラリー状態、沈殿状態などのいずれでもよく、βグルカン溶液が透明・均一である必要はない。なお、酵素反応させている時に、酵素が失活しない範囲において、連続的に穀物や穀物由来のβグルカン（精製βグルカン溶液、スラリー状態のβグルカン溶液、βグルカン粉末等）を適宜添加して酵素反応を続けることができ、また、酵素や酵素溶液を連続的に添加して酵素反応を連続させることもできる。
【０１１４】
一定時間の酵素反応後の酵素反応液は、そのまま、水溶性βグルカンを含んだ組成物・混合物として用いることができる。また、一定時間の酵素反応後の酵素反応液に必要に応じて固液分離、精製等の工程を加えて、水溶性βグルカンあるいは水溶性βグルカンを含んだ組成物・混合物を得ることもできる。酵素の失活操作は、酵素反応終了後であれば、いずれの時点で行っても良い。失活方法は、常法が使用可能であり、加熱処理が好ましい。また、酵素としては、固定化酵素使用するのが好ましく、固定化酵素を穀物及び／または穀物由来のβグルカンに作用させて、水溶性βグルカン中に酵素が混入しないよう処理することが更に好ましい。
【０１１５】
本発明の低分子化（水溶性）βグルカンの製造方法で得られる低分子化（水溶性）βグルカンは、食品中への配合性が良く、従来から知られている穀類由来のβグルカンに比較して水溶性が改善されていることから、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制等の生体調節機能を有し、且つ優れた乳化作用、食味、呈味性を有するので、これらの機能を生かし、乳化剤、食品改質剤、添加剤、保湿剤、油脂代替物、低カロリー食品素材として食品、化粧品、化学品、医薬品への使用が好ましい。
【０１１６】
次に、穀物及び／または穀物由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化して得られた本発明の水溶性βグルカンについて説明する。
本発明の水溶性βグルカンは、穀物及び／または穀物由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて、低分子化したものであり、本発明の穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法により得ることができるものである。本発明でいう水溶性βグルカンとは、水への溶解性を有するβグルカンのことであり、酵素を添加し作用させることにより、水への溶解性がそれ以前よりも上がったものである。本発明でいう水への溶解性とは、水に対する溶解度のみならず、過度の攪拌などを必要とせずに溶解すること、低温で溶解すること、一度溶解したものが、温度が下がったり冷蔵保存してもゲル化や沈殿、濁りを生じないこと、一度溶解したものが、時間が経過しても、ゲル化や沈殿、濁りを生じないこと、冷凍と解凍を繰り返しても、ゲル化や沈殿、濁りを生じないこと等の性能のことをいい、本発明の水溶性βグルカンは、このような水への溶解性に優れている。
【０１１７】
水への溶解性の観点から本発明の水溶性βグルカンについてさらに具体的に説明すると、本発明の水溶性βグルカンは、２５℃の水への溶解度が、１ｍｇ／ｍｌ以上であることが好ましく、１０ｍｇ／ｍｌ以上であることがさらに好ましく、５０ｍｇ／ｍｌ以上であることが最も好ましい。
また、本発明の水溶性βグルカンは、２５℃で５０ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で水に溶解させて水溶液とし、この水溶液を室温保存、冷蔵保存（４℃）、あるいは冷凍と解凍を繰り返した場合に、ゲル化や沈殿、濁り等の水溶性が改善されているものであることが好ましい。
また、本発明の水溶性βグルカンは、８０℃以上、特に７０℃以上、とりわけ６０℃以上に加温し、３０ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で水に攪拌溶解させたときに、水和・溶解し、沈殿を生じないことが好ましい。
また、本発明の水溶性βグルカンは、８０℃以上、特に７０℃以上、とりわけ６０℃以上に加温し、５０ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で水に溶解させて水溶液とし、この水溶液を室温保存、冷蔵保存（４℃）、あるいは冷凍と解凍を繰り返した場合に、ゲル化や沈殿、濁り等の水溶性が改善されているものであることが好ましい。
また、本発明の水溶性βグルカンは、水に対して５０ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で添加した場合に、水の温度が３０℃以下でも溶解し沈殿が認められず、冷蔵保存中、あるいは冷凍と解凍を繰り返しても、沈殿を生じないことが好ましい。
【０１１８】
水溶性βグルカンの水への溶解性の試験方法については、後述の試験例１〜４で記載の通り、ゲル化や溶解の状態を目視で確認する方法、溶液の６６０ｎｍにおける吸光度を測定する方法などが利用でき、その他、一般的な物性試験や物理化学的な性質を調べる方法、例えば、粘度測定、ゲル化物の物性測定（レオメーターによる破断強度測定、ゲル強度）、ゲルの溶融試験などの、増粘剤やゲル化剤の評価方法あるいは物質の溶解状態を試験する方法など、いかなる方法を用いて試験してもよい。試験における比較対照としては、酵素を添加し作用させる前のβグルカンを用いればよく、また、市販されている大麦βグルカンの標準品などと比較してもよい。
【０１１９】
本発明の水溶性βグルカンの構造は、Ｄ−グルコースを主成分とし、その結合は、主に１，３結合及び１，４結合である、すなわち、グルコース同士がβ−１，３結合又はβ−１，４結合で直鎖に結合し、その比率（前者：後者）がおおよそ１：２〜１：４である、いわゆる１，３、１，４−β−Ｄ−グルカンである。もちろん、穀物由来及び／または穀物由来のβグルカンに、酵素を添加し作用させて得られたものであれば、β−１，２結合、β−１，６結合などを有していてもよい。
【０１２０】
βグルカンの溶解性は分子量と相関があり、特定分子量の範囲では低分子量であるほどよい。本発明の水溶性βグルカンは、重量平均分子量６万以下４００以上が好ましく、さらに好ましくは４万以下４００以上、一層好ましくは３万以下４００以上、さらに一層好ましくは２万以下４００以上、最も好ましくは１万以下５００以上である。これらの範囲の重量平均分子量になるように、酵素を用いて、穀物由来及び／または穀物由来のβグルカンを低分子化するのが好ましい。
【０１２１】
本発明の水溶性βグルカンは、精製して単独で用いてもよいし、他の通常のβグルカンと一緒に用いてもよい。あるいは、穀物に通常含まれる炭水化物（でんぷん、αグルカン）、蛋白質、脂質、アミノ酸、ペプチド、核酸、糖類（単糖、オリゴ糖）などや、その他の成分を含んだまま用いてもよい。
【０１２２】
次に、本発明の水溶性βグルカンの形状について説明する。
【０１２３】
本発明の水溶性βグルカンの形状は、固体（粉末）、液体、スラリー状のいずれでもよく、酵素反応に引き続き酵素を失活した後、反応物をそのまま用いてもよいし、また、反応物を固化したもの、あるいは固化したものを粉砕したものなど、いずれの形状にもできる。また、遠心分離、濾過分離、膜分離、自然沈降等の固液分離方法として知られる任意の方法で反応物を固液分離し、水溶性βグルカン液を得ることもできる。また、酵素反応終了後に反応物に水を添加し、溶解性の改善された水溶性βグルカンを抽出することもできる。
【０１２４】
さらに、上記水溶性βグルカン液は、膜濃縮法、凍結濃縮法、減圧濃縮法、塩析沈殿法、有機溶媒沈殿法等の液体の濃縮方法として知られる任意の方法で濃縮することができ、また、加熱して水分を蒸発させ、固形化したり、粉砕して粉末化して水溶性βグルカンや水溶性βグルカンを含んだ組成物や混合物とすることができる。
【０１２５】
また、βグルカンの一種として、１，３、１，６−β−Ｄ−グルカンがあり、該１，３、１，６−β−Ｄ−グルカンは、微生物類や担子菌類から得ることができる。この１，３、１，６−β−Ｄ−グルカン、あるいは微生物類由来または担子菌類由来のβグルカンは、免疫増強作用や抗腫瘍活性作用等の生理機能性を有している。本発明の水溶性βグルカンを、これらのβグルカンと併用し、βグルカン複合体として使用すると、それぞれの有する生理機能性が増強され、相乗効果を生じるため好ましく、また、１，３、１，６−β−Ｄ−グルカン、あるいは微生物類由来または担子菌類由来のβグルカンの水への溶解性も改善されるため好ましい。このβグルカン複合体を得るためには、１，３、１，６−β−Ｄ−グルカン、あるいは微生物類由来または担子菌類由来のβグルカンと、本発明の水溶性βグルカンとを任意の割合で混合すればよい。
【０１２６】
本発明の水溶性βグルカンは、優れた生体調節機能性や生理活性機能、例えば、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制作用、コレステロール低下作用、血糖値低下作用、抗腫瘍作用、免疫増強作用、免疫賦活作用、腸管免疫増強作用、皮膚免疫増強作用、生活習慣病予防・改善作用等を有し、水への溶解性に優れ、さらには、乳化性、増粘性等を有し、食品、医薬品、化粧品、飼料、化成品等に好ましく使用できる。使用する場合は、本発明の水溶性βグルカン単独で使用してもよいし、本発明の水溶性βグルカンを他の成分に配合して使用してもよい。本発明の水溶性βグルカンは、特に水溶性に優れているため、扱いやすく、他の成分に配合しやすい。
【０１２７】
本発明の微生物類由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、βグルカン複合体、微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、および水溶性βグルカンは、優れた生体調節機能性や生理活性機能、例えば、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制作用、コレステロール低下作用、血糖値低下作用、抗腫瘍作用、免疫増強作用、免疫賦活作用、腸管免疫増強作用、皮膚免疫増強作用、生活習慣病予防・改善作用等を有し、さらには、乳化性、増粘性等を有し、食品、医薬品、化粧品、飼料、化成品等に配合することにより、好ましく使用できる。
【０１２８】
使用もしくは配合できる食品の例としては、油脂食品、ベーカリー製品、製菓類、めん類、米加工品、小麦加工品、とうもろこし加工品、豆（大豆、小豆等）加工品、穀物（蕎麦、ひえ、あわ、きび）加工品、農産物(ジャガイモ、サツマイモ、サトイモ、トロロイモ等）加工品、乳製品、スープ類、飲料、調味料類、畜肉加工品、水産加工品、調理・惣菜、健康食品、低カロリー食品、アレルギー患者用食品、乳児用食品、老人用食品、美容食品、薬用食品等が挙げられ、さらにはそれらの冷凍食品、レトルト食品、インスタント食品、缶詰等が挙げられる。
【０１２９】
上記油脂食品の例としては、マーガリン、ショートニング、ホイップクリーム、クリーム、サラダオイル、カスタードクリーム、ディップクリーム、ファットスプレッド、マヨネーズ、タルタルソース、ドレッシング、揚油等が挙げられる。
【０１３０】
上記ベーカリー製品の例としては、パン、食パン、菓子パン、惣菜パン、フランスパン、クロワッサン、パイ、カステラ、スポンジケーキ、バターケーキ、シュー菓子、ワッフル、蒸しパン、発酵菓子等が挙げられる。
【０１３１】
上記製菓類の例としては、スナック菓子、ドーナッツ、ビスケット、クラッカー、饅頭、和菓子、ようかん、最中、ういろう、団子、大福餅、キャンデー、ガム、チョコレート、飴、アイスクリーム、ソフトクリーム、シャーベット、アイスキャンデー、ラクトアイス、氷菓、ゼリー、プリン、デザート、トッピング等が挙げられる。
【０１３２】
上記米加工品の例としては、米飯類（冷凍米飯、無菌米飯等を含む）、おにぎり、にぎり鮨、巻き鮨、ちらし鮨、餅、炒飯、ピラフ、お茶漬け、ドリア、ビーフン、あられ、せんべい等が挙げられる。
【０１３３】
上記小麦加工品の例としては、シリアル、うどん、ピザ、パスタ、ほうとう、中華そば、焼きそば、ちゃんぽん、お好み焼き、もんじゃ焼き、ピロキシ、饅頭、カップ麺及びその具等があげられる。
【０１３４】
上記とうもろこし加工品の例としては、コーンフレーク、コーンスナック、ポップコーン等が挙げられる。
【０１３５】
上記大豆加工品の例としては、豆腐、豆乳、豆乳飲料、湯葉、油揚げ、厚揚げ、がんもどき、あん、みそ、各種豆料理等が挙げられる。
【０１３６】
上記穀物（蕎麦、ひえ、あわ、きび）加工品、農産物(ジャガイモ、サツマイモ、サトイモ、トロロイモ等）加工品の例としては、蕎麦、ポテトスナック、ポテトチップ、スイートポテト、ポテトフライ、各種いも料理等が挙げられる。
【０１３７】
上記乳製品の例としては、牛乳、加工乳、ヨーグルト、乳清飲料、乳酸菌飲料、バター、チーズ、コーヒーホワイトナー等が挙げられる。
【０１３８】
上記スープ類としては、ポタージュスープ、コンソメスープ、シチュー、味噌汁、お吸い物、雑煮、カレー等が挙げられ、これらの具材の中に添加してもよい。あるいは、クルトンのように、これらのスープ類に直接添加する食品中に添加してもよい。
【０１３９】
上記飲料の例としては、清涼飲料水、炭酸飲料水、コーラ、ジュース、果汁、野菜ジュース、トマトジュース、シェーク、日本酒、ビール、発泡酒、洋酒、ワイン、果実酒、カクテル、茶、紅茶、コーヒー、カフェオレ、ウーロン茶、青汁、ミネラルウオーター、水等が挙げられる。
【０１４０】
上記調味料類の例としては、醤油、魚醤（いかなご醤油、いわし醤油、塩汁、ナンプラー等）、味噌、ジャム、ソース、ウスターソース、トマトソース、トマトケチャップ、トマトペースト、トマトピューレ、チリソース、たれ、胡椒、トウガラシ、ニンニク、ショウガ、食酢、ラー油、タバスコ、食塩、各種香辛料等が挙げられる。
【０１４１】
上記畜肉加工品の例としては、ハンバーグ、ソーセージ、サラミソーセージ、ハム、ミートボール、肉団子、肉まん、餃子、シュウマイ、各種肉料理等が挙げられる。
【０１４２】
上記水産加工品の例としては、かまぼこ、さつま揚げ、つみれ、練り製品等が挙げられる。
【０１４３】
上記健康食品または薬用食品の例としては、サプリメント、錠剤、ドリンク剤、スポーツドリンク等が挙げられる。
【０１４４】
食品へ配合する場合は、その目的に応じて配合量を決めればよいが、例えば食品の全体量に対して８０〜０．０１重量％、特に５〜０．５重量％配合することが好ましい。
【０１４５】
また、使用もしくは配合できる医薬品の例としては、脂質代謝改善作用、整腸作用、血糖値上昇抑制作用、コレステロール低下作用、血糖値低下作用、抗腫瘍作用、免疫増強作用、免疫賦活作用、腸管免疫増強作用、皮膚免疫増強作用、生活習慣病予防・改善作用等を有する医薬品、癌予防あるいは治療薬、感染症予防あるいは治療薬など、さらには皮膚用治療薬、軟膏剤、貼り薬、鼻腔用剤、点耳剤、点眼剤等が挙げられる。さらには、軟膏の基材、錠剤、顆粒、粉末製剤用の賦形剤、内服用、液体の分散剤としても有用である。
【０１４６】
医薬品へ配合する場合は、その目的に応じて配合量を決めればよいが、例えば医薬品の全体量に対して１００〜０．０１重量％、特に８０〜０．１重量％配合することが好ましい。
【０１４７】
使用もしくは配合できる飼料の例としては、家畜用飼料、ペット用飼料、魚介類用飼料、養殖魚用飼料、家畜用治療薬あるいは予防薬、ペット用治療薬あるいは予防薬、魚介類用治療薬あるいは予防薬、養殖魚用治療薬あるいは予防薬、感染症予防薬等が挙げられる。
【０１４８】
飼料へ配合する場合は、その目的に応じて配合量を決めればよいが、例えば飼料の全体量に対して８０〜０．０１重量％、特に５〜０．５重量％配合することが好ましい。
【０１４９】
本発明の微生物類由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、βグルカン複合体、微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、および水溶性βグルカンを、食品、医薬品、飼料などに使用する場合、更に、摂取した場合に身体に何らかの生理活性を与える物質を配合してもよい。例えば、コレステロール上昇抑制剤、血圧上昇抑制剤、血中コレステロール調節機能剤、血糖値上昇抑制作用剤、腸内細菌叢改善剤、整腸作用剤、免疫増強作用剤、抗ガン作用剤、抗アレルギー作用剤、消化吸収調節作用剤、老化防止剤、抗酸化剤、血行促進剤、アミノ酸、ペプチド、脂質、多糖類、オリゴ糖類、タンパク質、糖質、食物繊維、酵素成分等が挙げられる。
【０１５０】
これら生理活性を与える物質の具体的な例としては、血中脂質濃度を適正化する高度不飽和脂肪酸（ＥＰＡ、ＤＨＡ）、血清コレステロールを調節する植物ステロール、およびそのエステル化物、ジアシルグリセロール、γリノレン酸、αリノレン酸、リノール酸、共役リノール酸等の不飽和脂肪酸、ビートファイバー、コーンファイバー、サイリウム種皮、茶ポリフェノール、レシチン、血圧降下に有効なカツオ節ペプチド、イワシペプチド、カゼインドデカペプチド、大豆分離蛋白質等、腸内環境を改善して整腸作用に働く乳酸菌、グルコン酸、オリゴ糖、各種食物繊維等を含む食品や医薬品である。その他、健康機能性を有することが知られている成分として、具体例を列挙すると、クロレラ、スピルリナ、プロポリス、キチン、キトサン、デオキシリボ核酸、リボ核酸、霊芝、アガリクス、銀杏葉エキス、らかん果、ウコン、ガルシニア、アップルファイバー、ギムネマ、コラーゲン、ブルーベリー、アロエ、ノコギリヤシ、カプサンチン、ルテイン、β−クリプトキサンチン、レニン、タウリン、カゼイン、コラーゲン、グルコサミン、カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）、ミルクベーシックプロテイン（ＭＢＰ）、ラクトフェリン、グルタチオン、テアニン、ギャバ、アスパルテーム、キシリトール、リカルデント、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、フコイダン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、セルロース、ペクチン、難消化デキストリン、グルコマンナン、イヌリン、フラクタン、シクロフラクタン、ジフラクトース、レバン、ムチン、フラボノイド、ポリフェノール、カテキン、タンニン、アントシアニン、ルチン、ケルセチン、大豆イソフラボン、大豆サポニン、大豆グロブリン、クロロゲン酸、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、カプサイシン、ゴマリグナン、アリシン、カフェイン、クロロフィル、ナツトウキナーゼ、βラクトグロブリン、植物発酵酵素、メバロン酸、葉緑素、ローヤルゼリー、高麗人参、プルーン、カモミール、タイム、セージ、ペパーミント、レモンバーム、マロウ、オレガノ、キャットニップティー、ヤロー、ハイピスカス、エキネシア等のハーブ類、ビタミン類、カルシウム含有化合物等のカルシウム強化剤、鉄含有化合物等の鉄分強化剤、必須ミネラルを含有するミネラル強化剤、さらには動植物抽出成分、海藻抽出成分、生薬成分等の天然由来成分の生理活性成分等が挙げられる。
【０１５１】
配合できるビタミン類としては、食品添加物中で強化剤として挙げられているものを使用することができ、例えばビタミンＡまたはβカロチン、ビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12、葉酸、パントテン酸、ナイアシン、ビオチン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、これらの誘導体、油脂コーティングしたビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12、葉酸、パントテン酸、ナイアシン、ビオチン、ビタミンＣ、コエンザイムＱ１０（ビタミンＱ）などがある。ビタミン類の誘導体の具体例には、ビタミンＢ１としてチアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩、ジベンゾイルチアミン、ジベンゾイルチアミン塩酸塩、チアミン硝酸塩、チアミンラウリル硫酸塩、ビスベンチアミンなど、ビタミンＢ2としてリボフラビン酪酸エステル、リボフラビン5'-リン酸エステルナトリウムなど、ビタミンＢ6としてピリドキシン塩酸塩、ビタミンＣとしてL-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、L-アスコルビン酸ナトリウムなどが挙げられる。
【０１５２】
配合できるカルシウム含有化合物としては、食品添加物中でカルシウム強化剤として挙げられているものを使用でき、例えば塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、酸性ピロリン酸カルシウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、乳酸カルシウム、硫酸カルシウム、第一リン酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、第三リン酸カルシウム、パントテン酸カルシウム、ピロリン酸二水素カルシウム、サンゴカルシウム、ドロマイト、卵殻カルシウム、牛骨粉カルシウム、ほたて貝殻カルシウム、ミルクカルシウムなどが挙げられる。
【０１５３】
配合できる鉄含有化合物としては、食品添加物中で鉄強化剤として挙げられているものを使用でき、例えば塩化第二鉄、クエン酸鉄、クエン酸鉄アンモニウム、コハク酸クエン酸鉄ナトリウム、乳酸鉄、ピロリン酸第一鉄、ピロリン酸第二鉄、硫酸第一鉄、グルコン酸第一鉄、ヘム鉄、レバー粉末、油脂コーティングした鉄などがあげられる。
【０１５４】
本発明の食用成形加工物は、必須ミネラルを含むようにしてもよく、必須ミネラルとして例えば亜鉛、カリウム、マグネシウム、マンガン、リン、ナトリウム、セレン、ヨウ素、モリブデンなどが挙げられる。このような必須ミネラルを供給する源として、例えば小麦エキス、小麦胚芽、小麦若葉、クロレラ、カキ肉エキス、海水濃縮物、ナッツ類、魚粉、レバー粉末、玄米粉末、ビール酵母などが挙げられる。
【０１５５】
配合できる動植物抽出成分、海藻抽出成分、生薬成分等の天然由来成分の生理活性成分としては、アシタバエキス、アボガドエキス、アマチャエキス、アルテアエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アンズエキス、アンズ核エキス、イチョウエキス、ウイキョウエキス、ウコンエキス、ウーロン茶エキス、エイジツエキス、エチナシ葉エキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オオムギエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オランダカラシエキス、オレンジエキス、海水乾燥物、海藻エキス、加水分解エラスチン、加水分解コムギ末、加水分解シルク、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、甘草エキス、油溶性甘草エキス、カルカデエキス、カキョクエキス、キウイエキス、キナエキス、キューカンバーエキス、グアノシン、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、クレマティスエキス、クロレラエキス、クワエキス、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、酵母エキス、ゴボウエキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コンフリーエキス、コラーゲン、コケモモエキス、サイシンエキス、サイコエキス、サイタイ抽出液、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、茶エキス、チョウジエキス、チガヤエキス、チンピエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、パセリエキス、蜂蜜、ハマメリスエキス、パリエタリアエキス、ヒキオコシエキス、ビサボロール、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、プラセンタエキス、プロポリス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、リンゴエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス等を挙げることができる。
【０１５６】
さらに、上記の各成分以外に、通常食品に用いられる甘味剤、着色料、調味料、苦味料、強化剤、界面活性剤、可溶化剤、増粘剤、糊料、賦形剤、防腐剤、香料、抗菌剤、殺菌剤、塩類、溶媒、キレート剤、中和剤、酸味料、ｐＨ調整剤、保存剤、緩衝剤、油脂、油脂加工品、澱粉、小麦粉、そば粉、穀粉、卵、乳製品、乳加工品、等の成分を使用することができる。
【０１５７】
好ましく用いられる賦形剤の例としては、寒天、ゼラチン、グアーガム、デンプン、デキストリン、セルロース、チョコレート、カカオ脂、ヤシ油、パーム核油、硬化油などの油脂、各種タンパク質、あるいは、小麦粉、米粉、小豆粉、大豆粉、小麦胚芽などの穀粉、大豆たん白、脱脂粉乳、カゼイン、アルブミン、グロブリン、チーズなどの乳製品や乳加工品、卵白、卵黄などの卵加工品、砂糖、ブドウ糖、麦芽糖、乳糖などの糖類、塩化ナトリウム、炭酸カルシウム等の塩類などが挙げられ、これらの混合物や複合素材でもよい。
【０１５８】
さらに、本発明の微生物類由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、βグルカン複合体、微生物由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、および水溶性βグルカンを使用もしくは配合できる化粧品の例としては、化粧水、乳液、スキンミルク、クリーム、軟膏、外用剤、ローション、カラミンローション、サンスクリーン剤、サンタン剤、アフターシェーブローション、プレシェーブローション、化粧下地料、パック料、クレンジング料、洗顔料、アクネ対策化粧料、エッセンス等の基礎化粧料；ファンデーション、白粉、アイシャドウ、アイライナー、アイブロー、チーク、口紅、ネイルカラー等のメイクアップ化粧料；シャンプー、リンス、コンディショナー、ヘアカラー、ヘアトニック、セット剤、整髪料、育毛料、ボディパウダー、デオドラント、脱毛剤、マッサージ用の化粧料、ボディ化粧料、皮膚化粧料、エステティック化粧料、花粉症やアレルギー等の改善剤、抗アレルギー剤、肌荒れ防止剤、皮膚疾患改善剤、皮膚損傷修復剤、瞼保護剤、冷湿布剤、温湿布剤、湿布剤、貼布剤、スクラブ化粧料、石鹸、ティッシュペーパー、ボディシャンプー、ハンドソープ、香水、歯磨き、口腔ケア製品、マウスウォッシュ、歯肉マッサージクリーム、入浴剤等が挙げられる。
【０１５９】
上記化粧品に配合する場合、更に皮膚に何らかの生理活性を与える物質を配合してもよい。例えば、美白成分、抗炎症剤、老化防止剤、スリミング剤、ひきしめ剤、抗酸化剤、発毛剤、育毛剤、血行促進剤、多価アルコール又は糖類以外の保湿成分、乾燥剤、冷感剤、温感剤、アミノ酸、創傷治癒促進剤、刺激緩和剤、鎮痛剤、細胞賦活剤、抗アレルギー剤、肌荒れ防止剤、皮膚損傷修復剤、酵素成分等が挙げられる。
【０１６０】
皮膚に生理活性を与える物質としては、動植物抽出成分、海藻抽出成分、生薬成分等の天然由来成分の生理活性成分として、例えば、アシタバエキス、アボガドエキス、アマチャエキス、アルテアエキス、アルニカエキス、アロエエキス、アンズエキス、アンズ核エキス、イチョウエキス、ウイキョウエキス、ウコンエキス、ウーロン茶エキス、エイジツエキス、エチナシ葉エキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オオムギエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オランダカラシエキス、オレンジエキス、海水乾燥物、海藻エキス、加水分解エラスチン、加水分解コムギ末、加水分解シルク、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、甘草エキス、油溶性甘草エキス、カルカデエキス、カキョクエキス、キウイエキス、キナエキス、キューカンバーエキス、グアノシン、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、クレマティスエキス、クロレラエキス、クワエキス、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、酵母エキス、ゴボウエキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コンフリーエキス、コラーゲン、コケモモエキス、サイシンエキス、サイコエキス、サイタイ抽出液、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、スギナエキス、セイヨウキズタエキス、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、茶エキス、チョウジエキス、チガヤエキス、チンピエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、パセリエキス、蜂蜜、ハマメリスエキス、パリエタリアエキス、ヒキオコシエキス、ビサボロール、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、プラセンタエキス、プロポリス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、メリッサエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、リンゴエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス等を挙げることができる。
【０１６１】
また、他の天然由来成分等の好ましい生理活性成分の具体例としては、デオキシリボ核酸、ラフィノース、ムコ多糖類、ヒアルロン酸又はヒアルロン酸ナトリウム等のその塩、コンドロイチン硫酸ナトリウム、コラーゲン、エラスチン、キチン、キトサン、加水分解卵殻膜等の生体高分子；アミノ酸、ザルコシン、Ｎ−メチル−Ｌ−セリン等のアミノ酸誘導体；エチルグルコース、乳酸ナトリウム、尿素、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、ベタイン、ホエイ等の多価アルコール又は糖類以外の保湿成分；スフィンゴ脂質、セラミド、コレステロール、コレステロール誘導体、リン脂質等の油性成分；ε−アミノカプロン酸、グリチルリチン酸、β−グリチルレチン酸、塩化リゾチーム、グアイアズレン、ヒドロコルチゾン等の抗炎症剤；ビタミンＡ，Ｂ2，Ｂ6，Ｄ、パントテン酸カルシウム、ビオチン、ニコチン酸アミド、ビタミンＥ等のビタミン類；アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロ酢酸、４−アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸等の活性成分；カロチノイド、フラボノイド、タンニン、リグナン、サポニン等の抗酸化剤；α−ヒドロキシ酸、β−ヒドロキシ酸、メバロン酸等の細胞賦活剤、γ−オリザノール等の血行促進剤、レチノール、レチノール誘導体等の創傷治癒剤；アスコルビン酸類、アルブチン、コウジ酸、プラセンタエキス、イオウ、エラグ酸、リノール酸、トラネキサム酸、グルタチオン等の美白剤；セファランチン、カンゾウ抽出物、トウガラシチンキ、ヒノキチオール、ヨウ化ニンニクエキス、塩酸ピリドキシン、ニコチン酸、ニコチン酸誘導体、パントテン酸カルシウム、Ｄ−パントテニルアルコール、アセチルパントテニルエチルエーテル、ビオチン、アラントイン、イソプロピルメチルフェノール、エストラジオール、エチニルエステラジオール、塩化カプロニウム、塩化ベンザルコニウム、塩酸ジフェンヒドラミン、タカナール、カンフル、サリチル酸、ノニル酸バニリルアミド、ノナン酸バニリルアミド、ピロクトンオラミン、ペンタデカン酸グリセリル、ｌ−メントール、モノニトログアヤコール、レゾルシン、γ−アミノ酪酸、塩化ベンゼトニウム、塩酸メキシレチン、オーキシン、女性ホルモン、カンタリスチンキ、シクロスポリン、ジンクピリチオン、ヒドロコルチゾン、ミノキシジル、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ハッカ油、ササニシキエキス等の育毛剤、フコイダン、エキネシアなどのハーブ類が挙げられる。
【０１６２】
上記のアスコルビン酸類としては、アスコルビン酸、アスコルビン酸硫酸エステル、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸高級脂肪酸エステル、及びそれらの塩である。それらの塩とは、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、バリウム塩、アンモニウム塩、モノエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、モノイソプロパノールアミン塩、ジイソプロパノールアミン塩、トリイソプロパノールアミン塩等が挙げられる。上記のアスコルビン酸硫酸エステルとしては、例えば、アスコルビン酸−２−硫酸エステル、アスコルビン酸−３−硫酸エステルであり、アスコルビン酸リン酸エステルとしては、例えば、アスコルビン酸−２−リン酸エステル、アスコルビン酸−３−リン酸エステルであり、これらは公知の物質であって特公昭４４−３１２３７号公報、特公昭５４−２１４１５号公報に記載されている。また、アスコルビン酸高級脂肪酸エステルとしては、例えば、アスコルビン酸−２−パルミチン酸モノエステル、アスコルビン酸−２，６−パルミチン酸ジエステル、アスコルビン酸−２−ステアリン酸エステル等である。
【０１６３】
さらには、上記の各成分以外に、通常化粧料に用いられる油剤、粉体（顔料、色素、樹脂）、フッ素化合物、樹脂、界面活性剤、粘剤、防腐剤、香料、抗菌剤、殺菌剤、塩類、溶媒、キレート剤、中和剤、ｐＨ調整剤、昆虫忌避剤等の成分を使用することができる。
【０１６４】
上記の粉体の例としては、赤色１０４号、赤色２０１号、黄色４号、青色１号、黒色４０１号等の色素、黄色４号Ａｌレーキ、黄色２０３号Ｂａレーキ等のレーキ色素；ナイロンパウダー、シルクパウダー、ウレタンパウダー、テフロン（登録商標）パウダー、シリコーンパウダー、ポリメタクリル酸メチルパウダー、セルロースパウダー、シリコーンエラストマー球状粉体、ポリエチレン末等の高分子；黄酸化鉄、赤色酸化鉄、黒酸化鉄、酸化クロム、カーボンブラック、群青、紺青等の有色顔料；酸化亜鉛、酸化チタン、酸化セリウム等の白色顔料；タルク、マイカ、セリサイト、カオリン、板状硫酸バリウム等の体質顔料；雲母チタン等のパール顔料；硫酸バリウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、珪酸アルミニウム、珪酸マグネシウム等の金属塩；シリカ、アルミナ等の無機粉体；ベントナイト、スメクタイト、窒化ホウ素等が挙げられる。これらの粉体の形状としては、球状、棒状、針状、板状、不定形状、燐片状、紡錘状等である。
【０１６５】
これらの粉体は、従来公知の表面処理、例えば、フッ素化合物処理、シリコーン処理、シリコーン樹脂処理、ペンダント処理、シランカップリング剤処理、チタンカップリング剤処理、油剤処理、Ｎ−アシル化リジン処理、ポリアクリル酸処理、金属石鹸処理、アミノ酸処理、無機化合物処理、プラズマ処理、メカノケミカル処理等によって事前に表面処理されていてもいなくても構わない。
【０１６６】
これらの粉体の内、シリコーンエラストマー球状粉体、ポリエチレン末、ポリプロピレン末、テフロン（登録商標）末、シリコーンゴム、ウレタンパウダー、ポリアルキルシルセスキオキサン、ナイロン、シリカビーズ、アルミナビーズ、アパタイト、アリル化アクリルビーズ等の球状粉体（中空樹脂粉末を含む）は、生理活性成分を保持し、徐放する効果に優れることから配合されていることが好ましい。
【０１６７】
油剤としては、通常皮膚化粧料に用いられる揮発性及び不揮発性の油剤及び溶剤及び樹脂が挙げられ、常温で液体、ペースト、固体であっても構わないが、ハンドリングに優れる液体が好ましい。油剤の例としては、例えば、セチルアルコール、イソステアリルアルコール、ラウリルアルコール、ヘキサデシルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール；イソステアリン酸、ウンデシレン酸、オレイン酸等の脂肪酸；グリセリン、ソルビトール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の多価アルコールや糖類；ミリスチン酸ミリスチル、ラウリン酸ヘキシル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸イソプロピル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、モノステアリン酸グリセリン、フタル酸ジエチル、モノステアリン酸エチレングリコール、オキシステアリン酸オクチル等のエステル類；流動パラフィン、ワセリン、スクワラン等の炭化水素；ラノリン、還元ラノリン、カルナバロウ等のロウ；ミンク油、カカオ脂、ヤシ油、パーム核油、ツバキ油、ゴマ油、ヒマシ油、オリーブ油等の油脂；エチレン・α−オレフィン・コオリゴマー等が挙げられる。
【０１６８】
また、別の形態の油剤の例としては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ポリエーテル変性オルガノポリシロキサン、フルオロアルキル・ポリオキシアルキレン共変性オルガノポリシロキサン、アルキル変性オルガノポリシロキサン、末端変性オルガノポリシロキサン、フッ素変性オルガノポリシロキサン、アモジメチコーン、アミノ変性オルガノポリシロキサン、シリコーンゲル、アクリルシリコーン、トリメチルシロキシケイ酸、シリコーンＲＴＶゴム等のシリコーン化合物；パーフルオロポリエーテル、フッ化ピッチ、フルオロカーボン、フルオロアルコール等のフッ素化合物が挙げられる。
【０１６９】
溶媒の例としては、精製水、環状シリコーン、エタノール、軽質流動イソパラフィン、低級アルコール、エーテル類、ＬＰＧ、フルオロカーボン、Ｎ−メチルピロリドン、フルオロアルコール、揮発性直鎖状シリコーン、次世代フロン等が挙げられる。
【０１７０】
界面活性剤としては、例えば、アニオン型界面活性剤、カチオン型界面活性剤、ノニオン型界面活性剤、ベタイン型界面活性剤を用いることができる。
【０１７１】
粘剤、樹脂の例としては、ポリアクリル酸ナトリウム、セルロースエーテル、アルギン酸カルシウム、カルボキシビニルポリマー、エチレン／アクリル酸共重合体、ビニルピロリドン系ポリマー、ビニルアルコール／ビニルピロリドン共重合体、窒素置換アクリルアミド系ポリマー、ポリアクリルアミド、カチオン化ガーガム等のカチオン系ポリマー、ジメチルアクリルアンモニウム系ポリマー、アクリル酸メタクリル酸アクリル共重合体、ＰＯＥ／ＰＯＰ共重合体、ポリビニルアルコール、プルラン、寒天、ゼラチン、タマリンド種子多糖類、キサンタンガム、カラギーナン、ハイメトキシルペクチン、ローメトキシルペクチン、ガーガム、アラビアゴム、結晶セルロース、アラビノガラクタン、カラヤガム、トラガカントガム、アルギン酸、アルブミン、カゼイン、カードラン、ジェランガム、デキストラン、セルロース、ポリエチレンイミン、高重合ポリエチレングリコール、カチオン化シリコーン重合体、合成ラテックス等が挙げられる。
【０１７２】
また化粧品に、紫外線防御効果を付与することも好ましい。この場合は、以下に示すような紫外線防御剤（紫外線吸収剤ともいう）を配合することが好ましい。
【０１７３】
紫外線防御剤（有機系、無機系を含む。ＵＶ−Ａ、Ｂのいずれに対応していても構わない）としては、無機系では微粒子酸化チタンや微粒子酸化亜鉛等が挙げられる。有機系紫外線防御剤としては、例えば、パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−硫酸、２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、ｐ−メトキシハイドロケイ皮酸ジエタノールアミン塩、パラアミノ安息香酸（以後、ＰＡＢＡと略す）、エチルジヒドロキシプロピルＰＡＢＡ、グリセリルＰＡＢＡ、サリチル酸ホモメンチル、メチル−Ｏ−アミノベンゾエート、２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート、オクチルジメチルＰＡＢＡ、メトキシケイ皮酸オクチル、サリチル酸オクチル、２−フェニル−ベンズイミダゾール−５−硫酸、サリチル酸トリエタノールアミン、３−（４−メチルベンジリデン）カンフル、２，４−ジヒドロキシベンゾフェニン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４，４’−ジメトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−Ｎ−オクトキシベンゾフェノン、４−イソプロピルジベンゾイルメタン、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン、４−（３，４−ジメトキシフェニルメチレン）−２，５−ジオキソ−１−イミダゾリジンプロピオン酸２−エチルヘキシル、これらの高分子誘導体、シラン誘導体等が挙げられる。さらに、これらをポリマー中に封止したものでもよい。
【０１７４】
また、本発明の微生物類由来のβグルカン、担子菌類由来のβグルカン、穀物由来のβグルカン、βグルカン複合体、微生物類由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、穀物由来の低分子化βグルカンの製造方法で得られた低分子化βグルカン、および本発明の水溶性βグルカンを使用もしくは配合できる化成品の例としては、医療用洗剤、衣料用洗剤、コンタクトレンズ保存液、コンタクトレンズ洗浄液、消毒剤、石鹸、衛生用品、医療用品、トイレタリー用品、増粘剤、粘性調整剤等が挙げられる。
【０１７５】
化成品へ配合する場合は、その目的に応じて配合量を決めればよいが、例えば化成品の全体量に対して１００〜０．０１重量％、特に５０〜０．０１重量％配合することが好ましい。
【実施例】
【０１７６】
以下、実施例を示して本発明を更に具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。なお、「部」及び「％」は特記しない限り重量基準である。
【０１７７】
実施例１  微生物由来の低分子化βグルカンの製造例１
Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ  ＩＦＯ−６３５３株をＹＭ培地に植菌し、２６℃にて３日間培養して、３００ｍＬの種培養液を得た。フルゾーン翼を搭載した５Ｌジャーファーメンター（丸菱バイオエンジ社）に、クザペック培地３Ｌ及びシュークロース３００ｇを入れ、滅菌・冷却後、１００ｍＬの種培養液を植菌し、２６℃にて７２時間の培養を実施し、培養液３Ｌを得た。培養液を８０℃にて３０分間加熱殺菌し、培養液を得た。
【０１７８】
本培養液１Ｌに対し、セルラーゼ製剤セルラーゼＡ「アマノ」３（アマノエンザイム）を１０ｇ添加し、４０℃で２０時間撹拌し、酵素処理を行い、低分子化βグルカン水溶液を得た。
【０１７９】
実施例２  微生物由来の低分子化βグルカンの製造例２
菌株をＡｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ  ｐｕｌｌｕｌａｎｓ  ＡＤＫ−３４（寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１８９３２）株として、実施例１と同様に培養を行った。
【０１８０】
本培養液にクエン酸を少量添加してｐＨを５に調整したもの１Ｌに対し、セルラーゼ製剤セルラーゼＡ「アマノ」３および、セルラーゼ製剤セルロシンＡＣ４０（エイチ・ビィ・アイ）各５ｇ及び、プロテアーゼ製剤ＸＰ−４５１（ナガセケムテックス）２ｇ加え、５０℃にて８時間撹拌し、酵素処理を行った。酵素処理終了後、セライトによって加圧濾過し、低分子化βグルカン水溶液を得た。
【０１８１】
実施例３  微生物由来の低分子化βグルカンの製造例３
実施例２と同様に培養を行った後、遠心分離（５０００ｒｐｍ、２０分）し、菌体を分離した。
【０１８２】
本培養濾液にクエン酸を加え、ｐＨを４に調整したもの１Ｌに対し、グルカナーゼ製剤セルレースナガセ（ナガセケムテックス）８ｇ及びセルラーゼ製剤セルラーゼＹ−ＮＣ（ヤクルト）５ｇ加え、圧力式ホモジナイーザー（ＬＡＢ１０００型、ＡＰＶ）にて５０ＭＰａにおけるホモジナイズ処理を２回繰り返した後、５０℃で６時間撹拌し、酵素処理を行った。その後、水酸化ナトリウムでｐＨを７に調整し、低分子化βグルカン水溶液を得た。
【０１８３】
実施例４  微生物由来の低分子化βグルカンの製造例４
実施例２において種培養液を植菌後２４時間経過した時点で濾過滅菌したペクチナーゼ製剤ペクチナーゼＧ「アマノ」１５ｇ相当を添加し、さらに２４時間経過した時点で濾過滅菌したセルラーゼ製剤セルラーゼＹ−ＮＣ（ヤクルト）２０ｇ相当添加し、さらに２４時間培養を続け、最終的に７２時間の培養としたこと以外、実施例２と同様にして培養し、培養終了と同時に改質βグルカンを調製し、さらに実施例２と同様に濾過し、低分子化βグルカン水溶液を得た。
【０１８４】
実施例５  微生物由来の低分子化βグルカンの製造例５
実施例１と同様の方法で得られた培養液を遠心分離によって菌体を分離し、培養液と等量の水を加えた培養希釈液２Ｌに４Ｌのエタノールを添加し、沈殿を得た。沈殿のみ分離し、水１Ｌに溶解した後、再度に２Ｌのエタノールを加えて再度沈殿させた。再度沈殿に対して同様の操作をした後、得られた沈殿を水１．５Ｌに溶解させた。これを凍結乾燥し、βグルカンの凍結乾燥品を得た。
【０１８５】
得られた乾燥品のβグルカンを水５００ｍＬに溶解し、乳酸でｐＨ５に調整した後、セルラーゼ製剤セルロシンＡＣ４０（エイチ・ビィ・アイ）及びグルカナーゼ製剤セルレースナガセ（ナガセケムテックス）各５ｇを添加し、４０℃で１６時間撹拌し、低分子化βグルカンを得た。
【０１８６】
実施例６  微生物由来の低分子化βグルカンの製造例６
実施例２と同様に培養を行った後、遠心分離（５０００ｒｐｍ、２０分）し、菌体を分離した。
【０１８７】
本培養濾液１Ｌにクエン酸濃度５％となるようにクエン酸を加え、１００℃で４時間加熱した後、水酸化ナトリウムでｐＨを５に調整し、グルカナーゼ製剤セルレースナガセ（ナガセケムテックス）８ｇ及びセルラーゼ製剤セルラーゼＹ−ＮＣ（ヤクルト）５ｇ加え、５０℃で３時間撹拌し、酵素処理を行った。この溶液に水２Ｌを加え、続いてエタノール３Ｌを加え、沈殿を回収した後、沈殿を水１Ｌに溶解し、再度エタノールを２Ｌ加え、得られた沈殿を風乾した後、粉砕し、低分子化βグルカン粉末を得た。
【０１８８】
比較例１
酵素を添加し、４０℃で２０時間撹拌する操作をしなかったこと以外実施例１と同様の操作をし、βグルカン溶液を得た。
【０１８９】
比較例２
酵素を添加し、５０℃で８時間撹拌する操作をしなかったこと以外実施例２と同様の操作をし、βグルカン溶液を得た。
【０１９０】
比較例３
酵素を添加し、５０℃で６時間撹拌する操作をしなかったこと以外実施例３と同様の操作をし、βグルカン溶液を得た。
【０１９１】
比較例４
酵素を添加し、４０℃で１６時間撹拌する操作をしなかったこと以外実施例５と同様の操作をし、βグルカン溶液を得た。
【０１９２】
比較例５
酵素を添加し、５０℃で３時間撹拌する工操作をしなかったこと以外、実施例６と同様の操作を行い、βグルカン粉末を得た。
【０１９３】
分析例１（βグルカンの確認方法とβグルカン量の測定方法）
多糖中のβグルカンの分析は、アルコールによって沈殿する全多糖量をフェノール硫酸法にて測定し、引き続き、沈殿させた多糖中のβグルカンの確認・定量を生化学工業（株）のβ−１，３−Ｄ−グルコピラノース結合を含むβグルカンの検出・測定用キットを用いて行った。以下にその手順を説明する。
【０１９４】
先ず、測定サンプル中の全多糖量をフェノール硫酸法にて測定した。即ち、サンプル溶液３０μＬに蒸留水３０μＬを加え、ここに３００ｍＭのＮａＣＬを含むリン酸緩衝液（ｐＨ６．９）を１２０μＬ加え、さらにエタノール５４０μＬ（３倍量）を添加し、−１５℃に１０分間放置して多糖を沈殿させた。上清を除去後、１００μＬの蒸留水を添加して沈殿を溶解させた。ここに５重量％フェノール水溶液１００μＬ及び硫酸５００μＬを加えて反応させた後、該溶液の４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、サンプルを加えず蒸留水１００μＬに５重量％フェノール水溶液１００μＬ及び硫酸５００μＬを加えたものをブランクとして、該ブランクの４９０ｎｍにおける吸光度を測定した。プルランの１０ｍｇ／ｍＬから２倍希釈系列を作成して標準サンプルとし、該標準サンプルを使用して検量線を作成し、該検量線と上記吸光度とから、サンプル中の全多糖量の定量を実施した。
【０１９５】
次に、全多糖量が０．１〜１ｍｇ／ｍＬ前後の溶液を、先ず１．０ＭのＮａＯＨにて１０倍希釈し、引き続きβグルカンフリーの蒸留水にて希釈し、１０10倍まで希釈し、βグルカン希釈液を調製した。βグルカン希釈液５０μＬをチューブにとり、主反応試薬５０μＬを添加して、３７℃にて３０分間インキュベートした。続いて、亜硝酸ナトリウム溶液５０μＬ、スルファミン酸アンモニウム５０μＬ、及びＮメチル２ピロリドン溶液５０μＬを加え、反応させた後、溶液の５４５ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）における吸光度を測定した。また、添付のβグルカン標準品を用いて７．５〜６０ｐｇ／ｍＬのβグルカン溶液を調製し、検量線を得た。該検量線と上記吸光度とから、各βグルカン希釈液の濃度を算出し、サンプル中のβグルカン量を求めた。
【０１９６】
その結果、実施例１〜５の低分子化βグルカンの含量はそれぞれ順に０．７２、１．０１、０．９３、０．９６、１．７８％であり、比較例１〜４のβグルカンの含量はそれぞれ順に０．７７、１．０５、０．９８、１．８０％であった。
【０１９７】
評価例１（製造時のハンドリング性）
実施例２及び比較例２におけるセライト濾過に要した時間はそれぞれ、１０分及び４０分であり、本発明の改質効果によって製造工程が大幅に短縮できることが判明した。
【０１９８】
評価例２（製造時のハンドリング性）
実施例１〜５及び比較例１〜４で得られたβグルカンを噴霧乾燥（アシザワスプレープラント製ラボラス−１型）した。各実施例で得られたβグルカンはきれいな噴霧乾燥品が得られ、収率９０〜９３％であったが、比較例で得たβグルカンは噴霧時の糸引きによる髭状の乾燥物の混入が目立ち、また、未乾燥品の壁への付着が多く、収率は４９〜５３％であった。したがって、製造時のハンドリング性が極めて良好になることが明らかになった。
【０１９９】
評価例３（製造時のハンドリング性）
実施例１〜５及び比較例１〜４で得られたβグルカンをロータリーエバポレーターにて濃縮し、濃縮液を調製した。その結果、流動性を失わない濃縮率として、実施例が１から順に６、８、９、５、１０倍であったのに対し、比較例では１から順に３、３、４、３倍であった。したがって、製造時のハンドリング性が極めて良好になることが明らかになった。
【０２００】
評価例４（製パン試験）
６枚切り食パン１枚（６０ｇ）あたり、５０ｍｇのβグルカンを配合することを目標に、食パンの焼成試験を行った。パンの焼成結果にはある程度のばらつきが出るため、焼成後の１斤の重量が平均的に４００ｇとなる配合に対し３３３ｍｇ（５０／６０×４００）のβグルカンが添加されるような配合を組み立て、製パン試験を行った。
【０２０１】
配合は、小麦粉２５４ｇ、イースト７．６ｇ、砂糖１０ｇ、食塩５ｇ、ショートニング１０ｇ、実施例１〜５及び比較例１〜４で得られたβグルカン及び水併せて１６０ｇとし、この内、分析例１の結果から計算されるβグルカン水溶液の添加量は、実施例１〜５はそれぞれ順に４６．３ 、３３．０、３５．８、３４．７、１８．７ｇ、比較例１〜４はそれぞれ順に４３．２、３１．７、３４．０、１８．５ｇである。これらの検量を加え、捏ね上げ温度２８℃にて、ホッパーミキサーで低速２分、高速４分ミキシングしてパン生地を調製した。２８℃で６０分間発酵させた後、丸め、ねかし（２８℃、２０分）、シーターに３回通して整形後、ワンローフタイプの型に挿入した。３８℃で相対湿度９０％の条件下、生地が型上縁２ｃｍに達するまで焙炉工程を行った後、２２０℃にて２３分間焼成した。
【０２０２】
パン生地作成時のミキシングにおける生地の均一性と、ミキサーの羽根への付着から製パン時のハンドリング性を５点満点で評価すると共に、焼成後のパンの内相、風味、口溶け、弾力性について、５人のパネラーによる評価を各１０点満点で行い、その平均点を表１に示した。その結果、概して比較例の酵素処理していないβグルカンを添加したものはミキシング時に生地が不均一となり、その結果焼成後のパンの内相の状態も悪く、食味や食感も著しく劣る結果となった。
【０２０３】
【表１】
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【０２０４】
評価例５（紅茶飲料の作成）
市販の紅茶飲料（レモンティー）に実施例６及び比較例５で得た粉末βグルカンと、評価例２で得た実施例３及び比較例３に由来する粉末βグルカンをそれぞれ２重量％となるように添加し、風味とのどごしについて５人のパネラーによる評価を各１０点満点で行い、その平均点を表２に示した。その結果、酵素処理をしていないβグルカンでは、風味はそれほど損なうことは無いが、さらっとしたのどごしが得られず、酵素処理によって食感も全く損なわれない結果が得られた。
【０２０５】
【表２】
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【０２０６】
実施例７  大麦由来のβグルカンの製造例
もち性裸大麦を研削式搗精機により削り、歩留まり８２％まで精麦した。このとき発生した糠を糠−１とした。歩留まり８２％まで精麦した大麦は、さらに研削式搗精機により削り、歩留まり５５％まで精麦した。このとき発生した糠を粉砕物−１とした。容器（５０Ｌ）に水道水２０Ｌを加え、撹拌しながら、１５℃に調温した。これに糠−１の６ｋｇを加え、２時間撹拌抽出し、連続遠心機にて固液分離後、上清を凍結乾燥し、抽出促進剤４５０ｇを得た。容器（７０Ｌ）に水道水３０Ｌを加え、撹拌しながら、上記抽出促進剤を１５０ｇ加え、溶解後、上記粉砕物−１の７．５ｋｇを加えた。２時間、５０℃で撹拌抽出してから連続遠心機にて固液分離後、上清を得た。得られた上清を煮沸し、冷却後に１５Ｌの僅かに粘調なβグルカン液を得た。得られたβグルカン液に２倍量のエタノールを加えて沈殿を回収、乾燥させて、大麦から抽出されたβグルカン４６０ｇを得た（サンプルＡ）。サンプルＡの重量平均分子量は１０万であった。
【０２０７】
実施例８  微生物類由来（微生物菌体外産生）βグルカンの製造例
寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３９１のアウレオバシジウムプルランス(Aureobasidium pullulans)菌株であるＡＤＫ−３４株を、ポテトデキストロース寒天斜面培地で培養して保存菌株とし、ＹＭ液体培地（ディフコ社製）１００ｍｌを入れた５００ｍｌ容三角フラスコに接種して、２８℃にて３日間前培養した。本培養は、フルゾーン翼を搭載した３０リットル容発酵槽に、クザペック(Czapeak's) 培地（ディフコ社製）１５リットル、得られた前培養物を添加して２８℃にて３日間培養した。なお培養中、ｐＨは５．０となるように調整し、通気は１ｖｖｍとなるように通気量と回転数をシーケンス制御した。培養液１５リットルを９０℃にて３０分間加熱殺菌した後、等量の水を加えてから遠心分離によって菌体を除去し、得られた培養上清をそのままUF膜分離装置（ＵＦＰ−１０Ｃ−８Ａ、アマシャムバイオサイエンス社製）に循環させ脱塩した。脱塩後の培養上清を凍結乾燥して１１０ｇのβグルカンの凍結乾燥物を得た（Aureobasidium 培養物：サンプルＢ）。サンプルＢの重量平均分子量は２００万であった。
【０２０８】
実施例９  担子菌類由来βグルカンの製造例
カワリハラタケの子実体を破砕し、粉砕して、その粉砕物１０ｋｇに熱水５０リットルを加え、煮沸条件下で穏やかに撹拌しながら３時間、熱水抽出処理した。熱水抽出処理した後、遠心分離して、その分離液を得た。分離液に３倍量の９９％エチルアルコールを加えて、沈殿物を得、凍結乾燥して、βグルカン１２００ｇを得た（サンプルＣ）。サンプルＣの重量平均分子量は１００万であった。
【０２０９】
実施例１０  βグルカン複合体
実施例７で得られた大麦由来βグルカン（サンプルＡ）５０部と実施例８で得られた微生物類由来βグルカン（サンプルＢ）５０部を混合して、βグルカン複合体（サンプルＤ）を得た。
【０２１０】
実施例１１  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例１０で得られたβグルカン複合体（サンプルＤ）の８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２１１】
実施例１２  βグルカン複合体
実施例７で得られた大麦由来水溶性βグルカン（サンプルＡ）５０部と実施例９で得られた担子菌類由来βグルカン（サンプルＣ）５０部を混合して、βグルカン複合体（サンプルＥ）を得た。
【０２１２】
実施例１３  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例１２で得られたβグルカン複合体（サンプルＥ）の８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２１３】
実施例１４  βグルカン複合体
実施例８で得られた微生物類由来βグルカン（サンプルＢ）５０部と実施例９で得られた担子菌類由来βグルカン（サンプルＣ）５０部を混合して、βグルカン複合体（サンプルＦ）を得た。
【０２１４】
実施例１５  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例１４で得られたβグルカン複合体（サンプルＦ）の８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２１５】
実施例１６  βグルカン複合体
実施例７で得られた大麦由来水溶性βグルカン（サンプルＡ）４０部と実施例８で得られた微生物類由来βグルカン（サンプルＢ）３０部と担子菌類由来βグルカン（サンプルＣ）を混合して、βグルカン複合体（サンプルＧ）を得た。
【０２１６】
実施例１７  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例１６で得られたβグルカン複合体（サンプルＧ）の８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２１７】
実施例１８  大麦由来の低分子化（水溶性）βグルカンの製造例
もち性裸大麦を研削式搗精機により削り、歩留まり８２％まで精麦した。このとき発生した糠を糠−１とした。歩留まり８２％まで精麦した大麦は、さらに研削式搗精機により削り、歩留まり５５％まで精麦した。このとき発生した糠を粉砕物−１とした。容器（７０Ｌ）に水道水３０Ｌを加え、撹拌しながら、上記粉砕物−１の７．５ｋｇを加え、セルラーゼ製剤セルラーゼＡ「アマノ」３（アマノエンザイム）を３００ｇ添加し、２時間、５０℃で撹拌抽出してから連続遠心機にて固液分離後、上清を得た。得られた上清を煮沸し、冷却後に１５Ｌの僅かに粘調なβグルカン液を得た。得られたβグルカン液に２倍量のエタノールを加えて沈殿を回収、乾燥させて、大麦由来の低分子化（水溶性）βグルカン６００ｇを得た。
【０２１８】
実施例１９  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例１８で得られた大麦から抽出された低分子化（水溶性）βグルカンの８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２１９】
実施例２０  βグルカン複合体
実施例６で得られた微生物類由来の低分子化βグルカン粉末５０部と実施例１８で得られた大麦由来の低分子化（水溶性）βグルカン５０部を混合しβグルカン複合体（サンプルＨ）を得た。
【０２２０】
実施例２１  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例２０で得られたβグルカン複合体（サンプルＨ）の８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２２１】
実施例２２  担子菌類由来の低分子化βグルカンの製造例
カワリハラタケの子実体を破砕し、粉砕して、その粉砕物１０ｋｇに水５０リットル、セルラーゼ製剤セルラーゼＡ「アマノ」３（アマノエンザイム）を４００ｇ添加し、２時間、５０℃で撹拌抽出してから連続遠心機にて固液分離後、その分離液を得た。分離液に３倍量の９９％エチルアルコールを加えて、沈殿物を得、凍結乾燥して、担子菌類由来の低分子化βグルカン１３００ｇを得た。
【０２２２】
実施例２３  βグルカン複合体
実施例２２で得られた担子菌類由来の低分子化βグルカン５０部と実施例１８で得られた大麦由来の低分子化（水溶性）βグルカン５０部を混合しβグルカン複合体（サンプルＩ）を得た。
【０２２３】
実施例２４  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例２３で得られたβグルカン複合体（サンプルＩ）の８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２２４】
実施例２５  βグルカン複合体
実施例８で得られた微生物類由来βグルカン（サンプルＢ）５０部と実施例１８で得られた大麦由来の低分子化（水溶性）βグルカン５０部を混合しβグルカン複合体（サンプルＪ）を得た。
【０２２５】
実施例２６  マーガリンの製造例
パーム油：パーム硬化油：菜種油：ソルビタン脂肪酸エステルを、３０：５０：２０：０．３の割合（重量比）で含有する食用油脂１００部を７０℃で融解し、これに前記実施例２５で得られたβグルカン複合体（サンプルＪ）の８部を添加し、６５℃にて３０分間放置した後、ホモミキサーで撹拌しながら、７０℃に加温した水１６部に脱脂粉乳０．５部および食塩１部を溶解させた溶液を徐々に添加、混合した後、急冷可塑化を行い、２５℃で一晩調温後、５℃まで冷却し、マーガリンを得た。βグルカン複合体は均一に分散していた。得られたマーガリンは、風味に優れ、きめの細かい滑らかな食感のよいものであった。
【０２２６】
以下の実施例において、βグルカンの分子量及びβグルカン含有量の測定は、それぞれ下記分析例２及び３に従って行なった。尚、以下の実施例において、分子量は重量平均分子量を示す。
【０２２７】
分析例２（βグルカンの分子量測定法）
βグルカンの分子量測定は、以下の通りとした。
すなわち、βグルカンの５ｍｇをチューブに取り、１ｍｌの蒸留水を加えて、沸騰水中で溶解させた。０．４５μｍのフィルターを通してＨＰＬＣ用のサンプルとした。分離にはＨＰＬＣゲル濾過カラムであるＳｈｏｄｅｘのパックドカラムＫＳ−８０４（昭和電工社製）を用い、流速０．６ｍｌ／ｍｉｎ．、温度８０℃にて、検出にはＲＩ検出器、分離溶媒には水を用いて実施した。分子量マーカーとしてはＳｈｏｄｅｘプルラン標準液Ｐ−５〜Ｐ１６０（昭和電工社製）を用いて測定した。
【０２２８】
分析例３（βグルカン含有量の測定方法）
βグルカン含有量の測定は、メガザイム社のβグルカン測定キットを用いて、McCleary法（酵素法）により、以下のようにして行った。
まず、５００μｍ（３０メッシュ）のふるいにかけた各分画物の水分含量を測定し、その１０ｍｇを１７ｍｌチューブに取り、５０％エタノール溶液を２００μｌ加え、分散させた。次に４ｍｌの２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．５) を加え、よく混合した後、煮沸した湯浴中にて１分間加温した。よく混合し、さらに２分間、湯浴中で加熱した。５０℃に冷却後、５分間放置してから、各チューブにリケナーゼ酵素溶液（キットに付属するバイアルを２０ｍｌの２０ｍＭリン酸緩衝液で希釈、残量は凍結保存）の２００μｌ（１０Ｕ）を加え、１時間、５０℃にて反応させた。チューブに２００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を５ｍｌ加えて、静かに混合した。室温に５分間放置し、遠心分離にて上清を得た。１００μｌを３本のチューブに取り、１本には１００μｌの５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）を、他の２本には１００μｌ（０．２Ｕ）のβグルコシターゼ溶液（キットに付属するバイアルを２０ｍｌの５０ｍＭ酢酸緩衝液で希釈、残量は凍結保存）を加え、５０℃にて１０分間反応させた。３ｍｌのグルコースオキシターゼ／ペルオキシターゼ溶液を加えて、５０℃にて２０分間反応させ、各サンプルの５１０ｎｍにおける吸光度（ＥＡ）を測定した。βグルカン含有量は、次式により求めた。
βグルカン（％，ｗ／ｗ）＝（ＥＡ）×（Ｆ／Ｗ）×８．４６
Ｆ＝（１００）／（グルコース１００μgの吸光度）
Ｗ＝算出された無水物重量（ｍｇ）
【０２２９】
実施例２７（酵素処理物の調製）
まず、特開２００２−１０５１０３号公報に従い、βグルカンの抽出を実施した。
すなわち、もち性裸大麦を研削式搗精機により削り、１０％（搗精歩留まり９０％）まで精麦した。このとき発生した糠の粉砕物２００ｇをビーカーにとり、１Ｌの蒸留水を加えて２５℃にて１０分間撹拌抽出した。抽出後、遠心分離、ろ過にて得た上清を抽出液−１とした。
【０２３０】
市販の大麦粒（搗精歩留まり５０％）を粉砕し大麦粉とした。大麦粉２ｋｇに８Ｌの水道水を添加し、撹拌しながら抽出液−１の８００ｍｌを加え、５５℃にて２時間撹拌抽出した。抽出後、遠心分離し上清を得て、エバポレーターにて濃縮液１Ｌを得た。等量のエタノールを加え、１時間放置後、遠心分離にて沈殿を回収した。凍結乾燥機で、エタノール・水分を除去し、大麦からのβグルカン抽出物−１（分子量６万、βグルカン含量６６％）を得た。これを原料とし、酵素を添加して、以下のようにして低分子化βグルカンを調製した。なお、βグルカン抽出物−１の成分組成を表３に示す。
【０２３１】
【表３】
2005307150.tif 000004
【０２３２】
βグルカン抽出物−１の２０ｇに水３８０ｍｌを加えて温度６０℃にて溶解させ、温度を５０℃に保ちながら、酵素溶液（セレミックス、０．１％水溶液）の２０ｍｌを添加してよく混合した後、経時的に反応液２０ｍｌを採取（サンプリング時間は、０．１〜２４時間）して、１２１℃、２０分間の処理で酵素を失活させた。各反応液は、凍結乾燥し、酵素処理物とした。経時的にサンプリングして得た酵素処理物の分子量を分析例２に従って測定した。原料であるサンプルＫ０（分子量６万）、並びに本発明の水溶性βグルカンである各酵素処理物、即ち、サンプルＫ１（分子量３万）、サンプルＫ２（分子量１．５万）、サンプルＫ３（分子量８０００）、サンプルＫ４（分子量６０００）、サンプルＫ５（分子量４０００）、サンプルＫ６（分子量２０００）及びサンプルＫ７（分子量８００）を、以下の試験例１で使用した。なお、セレミックスは、αアミラーゼ、βグルカナーゼ、プロテアーゼが混合した液体プロテアーゼ製剤酵素であり、Bacillus amyloliquefaciensが生産する酵素である。
【０２３３】
実施例２８（酵素処理物の調製）
大麦から抽出された大麦抽出物−２（分子量４万、βグルカン含量７４％）を用い、低分子化する酵素をグレイナーゼ（大和化成工業社製）に代えた以外は、実施例２７と同様にして、酵素処理物を得た。原料であるサンプルＬ０（分子量４万）、並びに本発明の水溶性βグルカンである各酵素処理物、即ち、サンプルＬ１（分子量２万）、サンプルＬ２（分子量１万）、サンプルＬ３（分子量７０００）、サンプルＬ４（分子量５０００）、サンプルＬ５（分子量３０００）、サンプルＬ６（分子量２０００）及びサンプルＬ７（分子量１０００）を、以下の試験例２で使用した。なお、グレイナーゼは、βグルカナーゼ製剤であり、Bacillus subtilisが生産する酵素である。
【０２３４】
実施例２９（酵素処理物の調製）
オーツ麦から精製したβグルカン（日本バイオコン社製、純度９７％）の１ｇに水１００ｍｌを加えて６０℃にて溶解させ、セレクラスト（ノボザイム社製）を５μｌ添加して、５０℃にて０．５時間反応させた後、凍結乾燥して本発明の水溶性βグルカンである酵素処理物の粉末（サンプルＭ）を得た。なお、セレクラストは、βグルカナーゼ製剤であり、Trichoderma reeseiが生産する酵素である。
【０２３５】
実施例３０（酵素処理物の調製）
大麦から精製したβグルカン（日本バイオコン社製、低粘度品）の１ｇに水１００ｍｌを加えて６０℃にて溶解させ、グレイナーゼ（大和化成社製）を１μｌ添加して、３０℃にて２４時間反応させた後、凍結乾燥して本発明の水溶性βグルカンである酵素処理物の粉末（サンプルＮ）を得た。
【０２３６】
実施例３１
市販の大麦を粉砕して大麦粉とした。該大麦粉のβグルカン含量は４．６％であった。大麦粉１００ｇに５倍量の水を加え４０℃にて４時間静かに撹拌し、遠心分離にて上清を得た。この溶液をエバポレーターにて２００ｍｌに濃縮して、−３０℃までゆっくりと冷却、凍結させ、２日後に自然解凍し、沈殿を回収し凍結乾燥して大麦抽出物−３を３．２ｇ得た。大麦抽出物−３を再度５００ｍｌの蒸留水に溶解させ、−３０℃までゆっくりと冷却、凍結させ、２日後に自然解凍し、沈殿を回収し凍結乾燥して、大麦抽出物−４を２．１ｇ得た。再度同様の操作を行い、沈殿を回収し、その半分は蒸留水の２０ｍｌに懸濁して大麦抽出液−１とした。残りの半分を凍結乾燥させ、大麦抽出物−５を０．８ｇ得た。分析例に従ってβグルカン含有量及び分子量を測定したところ、大麦抽出物−５のβグルカン含有量は８９％であり、分子量は１３万であった。この大麦抽出物−５の１００ｍｇにリケナーゼ（日本バイオコン社製）の１０Ｕを添加し、５時間反応させた後、９０℃、２時間の加熱処理で酵素を失活させて、本発明の水溶性βグルカンである酵素処理物（サンプルＯ）を得た。また、大麦抽出液−１の１ｍｌにリケナーゼ２Ｕを添加し、５０℃にて沈殿が消失するまで酵素反応させた後、９０℃、２時間の加熱処理で酵素を失活させて、本発明の水溶性βグルカンである酵素処理物（サンプルＰ）を得た。
なお、リケナーゼは、Bacillus subtilisが生産する酵素であり、endo-β-D-グルカナーゼ（EC3.2.1.73）である。
【０２３７】
実施例３２
βグルカン含量８０％の大麦抽出物−６（分子量８万）の１０ｇに酵素溶液３０ｍｌを添加し、乳鉢でよく撹拌混合し、５０℃で２時間放置した。反応終了後、９０℃、３時間で酵素を失活させ、次いで凍結乾燥して本発明の水溶性βグルカンである酵素処理物（サンプルＱ）を得た。酵素溶液はグレイナーゼ（大和化成社製）の０．０１％水溶液を用いた。
【０２３８】
実施例３３
市販のオーツ麦フレーク（クエーカーオートミール：雪印社製）の５０ｇに蒸留水５００ｍｌを加え、１時間撹拌後、−３０℃までゆっくりと冷却、凍結させ、２日後に自然解凍し、遠心分離して沈殿を回収した。これを凍結乾燥したもの１０ｇに８０ｍｌの蒸留水を添加し、撹拌しながらリケナーゼ（日本バイオコン社製）の５Ｕを添加して、４０℃にて３時間反応させた後、９０℃、１時間で酵素を失活させ、凍結乾燥して本発明の水溶性βグルカンである酵素処理物（サンプルＲ）を得た。
【０２３９】
実施例３４
０．５％酵素製剤水溶液（セレミックス：ノボザイム社製）の１００ｍｌに大麦抽出物−６の３ｇを添加し、５０℃で撹拌しながら反応させ、さらに２時間後、４時間後、６時間後、８時間後に大麦抽出物−６の３ｇを添加し、２４時間反応させた。次いで、９０℃、２時間で酵素を失活させた後、凍結乾燥して、本発明の水溶性βグルカンである酵素処理物（サンプルＳ）を得た。
【０２４０】
試験例１（溶解性試験）
試験対象サンプル：
市販のβグルカン及び実施例２７、２８で得たβグルカンの酵素処理物（サンプルＫ０〜Ｋ７、Ｌ０〜Ｌ７）を試験対象サンプルとして用いた。尚、市販のβグルカンは、分子量２４万のもの（サンプルａ）及び１２．５万のもの（サンプルｂ）を用いた（日本バイオコン社製）。
試験方法：
各サンプルを２０ｍｇ／ｍｌの濃度となるように２５℃に調温した蒸留水に添加し、室温にて１０分間撹拌して溶解させた。この溶液を４℃で３日間放置した。室温溶解時並びに４℃での放置開始から１日経過後及び３日経過後の３点で、溶液中の沈殿の有無を目視にて確認した。それらの結果を表４に示す。溶解性の評価は、溶解せず沈殿が認められる（×）、水和して分散状態となり、沈殿が認められない（〇）、溶解し沈殿が認められない（◎）とした。表４の結果から明らかなように、分子量の低下とともに溶解性は増し、分子量１万以下では完全溶解し、また、４℃における保存において、分子量２万以下で沈殿は認められなかった。
【０２４１】
【表４】
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【０２４２】
試験例２（溶解性試験）
試験対象サンフ゜ル：
市販のβグルカン及び実施例２７で得たβグルカンの酵素処理物（サンプルＫ０〜Ｋ７）を試験対象サンプルとして用いた。尚、市販のβグルカンは、分子量２４万のもの（サンプルａ）及び１２．５万のもの（サンプルｂ）を用いた（日本バイオコン社製）。
試験方法：
各サンプルを５０ｍｇ／ｍｌの濃度となるように蒸留水に添加し、６０℃で完全溶解させた。サンプル溶液を室温、４℃又は−３０℃に一昼夜放置後、サンプルを室温にして、性状観察、及び溶液の６６０ｎｍにおける吸光度測定を行なった。性状観察では、ゲル化の有無と粘性について観察し、完全にゲル化した状態（+++）、もろく崩れるゲル状態（++）、ゲル化せずに粘調な液体状態（+）、粘性が低い液体状態（±）として各サンプルの状態を評価した。６６０ｎｍの吸光度測定は、室温にした溶液をよく混合して、その２００μｌを使用して、９６ウェルのマイクロプレートリーダー（バイオラッド社製）にて行なった。吸光値の最も高かったサンプルを１００として各サンプルの濁度を相対値で示した。それらの結果を表５に示す。
【０２４３】
【表５】
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【０２４４】
表５から明らかなように、性状は、室温保存と４℃保存の両者で同様の傾向が認められ、分子量２４．５万、１２．８万のサンプルａ、ｂでは強固なゲル化が認められ、溶解液は固化した状態であった。分子量６万ではソフトなゲル状態となり、分子量３万では粘調な液体であった。分子量１万以下ではゲル化は全く認めず溶液状態であった。また、−３０℃にて保存したサンプルでは、室温に戻した後でも、分子量２４万、１２．８万のサンプルａ、ｂで強固なゲル化が認められ、分子量６万でソフトなゲル状態となり、分子量３万のサンプルで粘調な液体であった。分子量６０００以下のサンプルでは粘性のない液体となった。
【０２４５】
また、吸光度を測定した結果、表５から明らかなように、室温および４℃保存のサンプルでは、分子量６万のサンプルが吸光度が０．３と最も高く、これを１００とすると、分子量１．５万で５０、分子量８０００以下のサンプルでは５以下であり、肉眼観察ではほとんど透明で濁りは全く認めなかった。なお、サンプルａ、ｂは完全にゲル化しており測定不能であった。また、−３０℃にて保存したサンプルでは、分子量６万のサンプルの吸光度が１．５と最も高く、分子量の低下とともに吸光度も低下し、分子量６万のサンプルの吸光度を相対吸光度１００とすると、分子量６０００以下では相対吸光度１以下であり、肉眼観察ではほとんど透明で濁りは全く認めなかった。
【０２４６】
試験例３（溶解性試験）
試験対象サンフ゜ル：
市販のβグルカン及び実施例２８で得たβグルカンの酵素処理物（サンプルＬ０〜Ｌ７）を試験対象サンプルとして用いた。尚、市販のβグルカンは、大麦βグルカン（日本バイオコン社製）の分子量２４万のもの（サンプルａ）、１２．５万のもの（サンプルｂ）を対照品として使用した。
試験方法：
各サンプルを１０ｍｇ／ｍｌの濃度となるように蒸留水に添加し、６０℃で溶解した。サンプル溶液を−３０℃に一昼夜放置後、サンプルを室温に戻して、性状観察と溶液の６６０ｎｍにおける吸光度を測定した。評価は試験例２と同様とした。すなわち、性状観察では、ゲル化の有無と粘性について観察し、完全にゲル化した状態（+++）、もろく崩れるゲル状態（++）、ゲル化せずに粘調な液体状態（+）、粘性が低い液体状態（±）として各サンプルの状態を評価した。６６０ｎｍの吸光度測定は、室温に戻した溶液をよく混合して、その２００μｌを使用して、９６ウェルのマイクロプレートリーダー（バイオラッド社製）にて測定した。吸光値の最も高かったサンプルを１００として各サンプルの濁度を相対値で示した。それらの結果を表６に示す。
【０２４７】
【表６】
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【０２４８】
表６から明らかなように、−３０℃で放置後、分子量４万〜１万でのサンプルでは粘調な液体となり、分子量７０００以下のサンプルでは粘性が低い液体となった。
また、吸光度を測定した結果、分子量４万のサンプルの吸光度が０．８０１と最も高く、分子量の低下とともに吸光度も低下し、分子量４万のサンプルの吸光度を相対吸光度１００とすると、分子量１万以下では相対吸光度１０以下であり、肉眼観察ではほとんど透明で濁りは全く認められなかった。
【０２４９】
試験例４
実施例２９〜実施例３４で得られたサンプル中のβグルカン含有量と分子量を調べた。
また、各サンプルを３０ｍｇ／ｍｌとなるように蒸留水に溶解し、４℃にて一昼夜保存した後、ゲル化、沈殿の状態を観察した。対照として上記サンプルａ及び上記サンプルｂを合わせて評価した。性状観察では、ゲル化の有無と粘性について観察し、完全にゲル化した状態（＋＋＋）、もろく崩れるゲル状態（＋＋）、ゲル化せずに粘調な液体状態（＋）、粘性が低い液体状態（±）として、各サンプルの状態を評価した。なお、サンプルＲは、１０倍量の蒸留水を添加し、１０分間抽出した後、遠心分離で得た上清を凍結乾燥したものをサンプルＲ２として、これを評価した。それらの結果を表７に示す。酵素処理物はいずれも、溶解性がよく、保存安定性にも優れていることが判った。
【０２５０】
【表７】
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