(57)【要約】【課題】  食品としての適合性の高いＤ−キロ−イノシトール含有抽出物、特に高含有の抽出物を製造する方法を全く新規に提供する。【解決手段】  サトウダイコンから得た糖液又は糖蜜中の糖を資化又は／及び除去した後、その処理液からクロマトグラフィー分離によってＤ−キロ−イノシトール含有画分を回収し、分別晶析と陰イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィーにより分画する操作を組み合わせて実施することとした。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サトウダイコンから得た糖液又は糖蜜中の糖を資化又は／及び除去した後、その処理液からクロマトグラフィー分離によってＤ−キロ−イノシトール含有画分を回収することを特徴とするＤ−キロ−イノシトール含有抽出物の製造方法。
【請求項２】
サトウダイコンから得た糖液又は糖蜜中の糖を資化又は／及び除去した後、その処理液からクロマトグラフィー分離によってイノシトール含有画分を回収し、さらに、該含有画分から分別晶析によりミオイノシトールを主成分とする結晶分を除去することを特徴とするＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法。
【請求項３】
請求項１の製造方法により得たＤ−キロ−イノシトール含有抽出物又は請求項２の製造方法により得たＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物に、有機溶媒を加え可溶化分を分離する操作を１回以上行うことを特徴とするＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法。
【請求項４】
請求項１の製造方法により得たＤ−キロ−イノシトール含有抽出物又は請求項２若しくは３のいずれかの製造方法により得たＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物を、Ｄ−キロ−イノシトールの濃度を高めるためのイオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィー分離により分離することを特徴とするＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の製造方法により得られることを特徴とするサトウダイコン由来のＤ−キロ−イノシトール含有抽出物。
【請求項６】
請求項５に記載のＤ−キロ−イノシトール含有抽出物を主成分として含有することを特徴とするイノシトール含有飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物の製造方法、Ｄ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法、Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物及びイノシトール含有飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｄ−キロ−イノシトールは近年、インシュリン非依存性糖尿病の治療薬として公知であり（例えば、特許文献１参照）、また、多嚢胞性卵巣症候群の治療薬としても知られている（例えば、非特許文献１参照）。また、これに類似した物質にもいくつか糖尿病に効果があるといわれているものがある。Ｄ−キロ−イノシトールのメチルエーテル体であるピニトールは文献にその糖尿病に対する効果が記載されており（例えば、非特許文献２参照）、ミオ−イノシトールも特許にその効果が記載されている（例えば、特許文献２参照）。
【０００３】
ここで、アカザ科サトウダイコンからイノシトールを製造する方法が知られている。この製造法は、脱塩処理した甜菜糖液をイースト処理等の脱糖手段を用い、含有している糖を可能な限り少なくし、次に、この脱糖した甜菜糖液をクロマトグラフィーで処理し、得られたイノシトールの画分を濃縮、冷却結晶化することにより、イノシトールの結晶を製造している（例えば、特許文献３、特許文献４、特許文献５参照）。ただし、得られるものはミオ−イノシトールのみであると認識されていた。
【０００４】
すなわち、Ｄ−キロ−イノシトールは、サトウダイコン中又は糖液及び糖蜜中には、存在しないものと認識されていた。ここで、Ｄ−キロ−イノシトールの製造方法の代表例については次の（ａ）〜（ｅ）の方法が知られている。
（ａ）抗生物質のカスガマイシンの加水分解によって、その分子構成部分であるＤ−キロ−イノシトールを得る３つの方法、すなわち（ｉ）カスガマイシンの強酸による加水分解法（例えば、特許文献７参照）、（ｉｉ）カスガマイシンをアセチル化した後に加水分解する方法（例えば、特許文献６参照）、及び（ｉｉｉ）強酸性イオン交換樹脂によるカスガマイシンの加水分解法（例えば、特許文献７参照）。
【０００５】
（ｂ）グルクロン酸を原料として１０段階以上の化学合成ステップを経て、Ｄ−キロ−イノシトールを合成する方法（例えば、特許文献８参照）。
（ｃ）ブーゲンビリア等の植物中に含まれるピニトールを、脱メチル化してＤ−キロ−イノシトールを調製する方法（例えば、特許文献９、特許文献１０参照）。
【０００６】
（ｄ）アグロバクテリウム・ツメファシエンス、アグロバクテリウム・ラジオバクター、アグロバクテリウム・リゾゲネス又はアグロバクテリウム・ルビの細胞を、ミオ−イノシトールに作用させて、これから、Ｄ−キロ−イノシトール、Ｌ−キロ−イノシトール、シロ−イノシトール、ネオ−イノシトールの混合物を製造する方法（例えば、特許文献１１参照）。
（ｅ）ミオ−イノシトールを原料として1Ｄ−２，３−ジ−Ｏ−アセタール化ミオ−イノシトールを経て、Ｄ−キロ−イノシトールを合成する方法（例えば、特許文献１２参照）。
【０００７】
しかしながら、上記（ａ）〜（ｅ）の方法は、得られる製品の食品としての適合性、又は収率において満足されるものではなかった。
他方で、近年、糖尿病患者及び糖尿病予備軍と呼ばれる人が増加しており、安全かつ手軽に飲食用に供することができ、糖尿病に対して予防を含む効果のある健康食品が常に求められている。また、少子化が進む中、不妊に悩む女性も多く、不妊の一因である多嚢胞性卵巣症候群に対し、予防を含む効果のある健康食品に関しても多くの関心が持たれている。
【０００８】
したがって、前記した効能を有するＤ−キロ−イノシトールを、食品としての適合性が高くなるように、通常食される天然物から得ることができれば、抗糖尿病や糖尿病予防のため等にそのまま食品として供することができ、極めて有用である。
【特許文献１】国際公開第９０／１０４３９号パンフレット
【特許文献２】特開平７−２２３９３９号公報
【特許文献３】特開２０００−２３６８９０号公報
【特許文献４】特開昭４８−２３５６号公報
【特許文献５】特開昭５３−２８９９３号公報
【特許文献６】米国特許第５４６３１４２号明細書
【特許文献７】米国特許第５７１４６４３号明細書
【特許文献８】米国特許第５４０６００５号明細書
【特許文献９】米国特許第５８２７８９６号明細書
【特許文献１０】特開２００１−２６１６００号公報
【特許文献１１】特開平９−１４０３８８号公報
【特許文献１２】特開２００１−１６３８１０号公報
【非特許文献１】ザ・ニュウ・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ），（米国），１９９９，３４０，ｐ．１３１４−１３２０
【非特許文献２】ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ），（英国），２０００，１３０，ｐ．１９４４−１９４８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたもので、食品としての適合性の高いＤ−キロ−イノシトール含有抽出物、特に高含有の抽出物を製造する方法を全く新規に提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、前記した課題を達成するために特に、自然界に存在するＤ−キロ−イノシトールに着目して種々検討を重ねた。その結果、本発明者らは、アカザ科サトウダイコンにＤ−キロ−イノシトールが微量ながら存在するとの知見を得た。そして、サトウダイコンの糖液又は糖蜜からＤ−キロ−イノシトールを高含有する抽出物又はＤ−キロ−イノシトール高含有のイノシトール飲食物を製造することができることを知見するに至った。
【００１１】
すなわち、上記目的を達成するために、本発明は、Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物の製造方法であって、サトウダイコンから得た糖液又は糖蜜中の糖を資化又は／及び除去した後、その処理液からクロマトグラフィー分離によってＤ−キロ−イノシトール含有画分を回収することを特徴とする。なお、ここでいう糖とは、イノシトール以外の、スクロース、グルコース、フルクトース等をいう。
【００１２】
本発明は、別の形態で、Ｄ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法であり、サトウダイコンから得た糖液又は糖蜜中の糖を資化又は／及び除去した後、その処理液からクロマトグラフィー分離によってイノシトール含有画分を回収し、さらに、該含有画分から分別晶析により、ミオ−イノシトールを主成分とする結晶分を除去することを特徴とする。
【００１３】
また、本発明は、別の形態で、Ｄ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法であり、以上の製造方法により得たＤ−キロ−イノシトール含有抽出物又はＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物に、有機溶媒を加え可溶化分を分離する操作を１回以上行うことを特徴とする。
さらにまた、本発明は、さらに別の形態で、Ｄ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法であり、以上の製造方法により得たＤ−キロ−イノシトール含有抽出物又はＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物を、Ｄ−キロ−イノシトールの濃度を高めるためのイオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィー分離により分離することを特徴とする。
【００１４】
本発明は、別の側面において、サトウダイコン由来のＤ−キロ−イノシトール含有抽出物であり、Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物は、上記いずれかの製造方法により得られることを特徴とする。また、本発明は、さらに別の側面において、イノシトール含有飲食物であり、該イノシトール含有飲食物は、上記Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物を主成分として含有することを特徴とする。
なお、本発明で、「Ｄ−キロ−イノシトール高含有」とは、抽出物又は飲食物１００ｇ当り５００ｍｇ以上のＤ−キロ−イノシトールを含むことを示す。
【発明の効果】
【００１５】
このように、サトウダイコン中に微量のＤ−キロ−イノシトールが存在することを本発明者らは初めて見出したものであり、本発明によれば、Ｄ−キロ−イノシトール高含有の抽出物を得ることができ、所望の含量のＤ−キロ−イノシトールを含むイノシトール含有飲食物を製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下に、本発明に係るＤ−キロ−イノシトール含有抽出物の製造方法、Ｄ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法、Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物及びイノシトール含有飲食物について、その実施の形態を参照しながらさらに詳細に説明する。
【００１７】
本発明に係るＤ−キロ−イノシトール含有抽出物の製造方法又はＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物の製造方法は、その一形態として以下に記載する原料及び手順に従って実施される。
【００１８】
１）原料のサトウダイコン
サトウダイコンとは、アカザ科フダンソウ属サトウダイコンのことである。種類は特に限定されるものではなく、通常甜菜、ビートとも呼ばれるものであり、砂糖を得る目的で栽培されているものが広く使用できる。
【００１９】
２）糖液、糖蜜
また、サトウダイコンの糖液からショ糖を製造した後に残る糖蜜を原料として用いるのが望ましい。
【００２０】
３）糖の除去方法
サトウダイコンの糖液又は糖蜜に含まれる多量のグルコースやショ糖は、菌による資化や晶析法、クロマトグラフィー法等により除くことができる。
【００２１】
菌による資化を行う場合、菌の培養条件は、菌の種類によって異なるが、一般的な条件、例えば通気条件や微通気条件で、２０〜３７℃、攪拌もしくは静置培養等で行えば良い。好ましくは、少スケールでの培養条件検討を行って、培養条件を決めることが望ましい。
上記で用いる、糖を資化する微生物としては、例えば、酵母（イースト）、乳酸菌、ビフィズス菌、枯草菌、酢酸菌等の菌を用いることができるが、食品を製造するために用いることが可能な菌であれば、どのような種類の菌でもよい。
【００２２】
４）Ｄ−キロ−イノシトール高含有抽出物又はＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物を主成分とするイノシトール含有飲食物の製造方法
サトウダイコンの糖液又は糖蜜に含まれる多量のグルコースやショ糖を除去した後、Ｄ−キロ−イノシトールを高含有した画分（抽出物）を製造するために、粗精製操作及びＤ−キロ−イノシトールの濃縮操作を行なう。
【００２３】
粗精製操作は、一般的な方法で行えばよいが、その方法として、例えば、遠心やろ過による不溶物除去、活性炭による精製、陰イオン交換樹脂による精製、陽イオン交換樹脂による精製、限外ろ過等の組み合わせによる精製法が挙げられる。
さらに例を挙げれば、イーストにより糖を除去した糖蜜を遠心し、上清を、活性炭、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂のそれぞれにより処理することにより、大部分の不純物は除去される。
その結果、典型的には、粗精製操作後の粗精製画分は、Ｄ−キロ−イノシトール、ミオ−イノシトール、グリセロール、ベタインその他の糖類といった組成となっている。
もちろん、抽出による精製、膜分離、クロマトグラフィー分離、晶析、凍結分離等の一般的に使用されている精製法を使用することも可能である。
【００２４】
Ｄ−キロ−イノシトールの含量を高めるためには、得られた粗精製画分に対し、晶析法及びイオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィー法を実施する。好適には、分別晶析と陰イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィーにより分画する操作を組み合わせて実施する。実用面を考慮すると以下の形態がさらに好適である。
【００２５】
１．粗精製画分に対し、分別晶析を行い、結晶を除去する。この場合の分別晶析として、好適には有機溶媒を加えることによる分別晶析である。すなわち、分別晶析としては、請求項３でいう有機溶媒を加え可溶化分を分離する操作が好適である。より好適には、有機溶媒としてエタノールを加えることによる分別晶析である。これは、後述する実施例２に対応する製造方法である。
この分別晶析は、別の表現では、ミオ−イノシトールとＤ−キロ−イノシトールの結晶性の違いを利用して、結晶成分にミオ−イノシトール、可溶化成分にＤ−キロ−イノシトールを濃縮させ、可溶化成分を分離する操作である。
上記粗精製画分は、本発明では、Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物として把握している。例えば、特開平１２−２３６８９０号公報に記載の方法では、糖を除去した後の処理液をクロマトグラフィー分離にかけ、イノシトール画分を回収している。このイノシトール画分を本発明では、粗精製画分、すなわち、Ｄ−キロ−イノシトール含有抽出物として把握している。
【００２６】
特開平１２−２３６８９０号公報に記載の方法では、この粗精製画分を分別晶析し、結晶成分をイノシトールとして把握し、これを精製されたイノシトールとして回収している。この結晶成分は、大部分がミオイノシトールである。これに対し、本発明では、除去・廃棄されるものと考えられていた可溶化分が、実はＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物であることを全く新規な知見として得た。
【００２７】
なお、特開平１２−２３６８９０号公報に記載の方法に従って、粗精製画分を得る手法は、本発明でも採用することができる。この手法では、サトウダイコンから得た糖液又は糖蜜を強酸性陽イオン交換樹脂（Ｈ+型）及び強塩基性陰イオン交換樹脂（ＯＨ-型）に通液する等のようにして脱塩処理し、該糖液又は糖蜜をイーストで通気培養処理して、イノシトールを残存したままスクロース、フルクトース、グルコース等の糖を資化させる。すなわち、ここでの処理対象は、イノシトール以外の糖である。なお、上記脱塩処理は、資化操作の後であってもよい（実施例４参照）。
【００２８】
この資化により、糖の代わりにグリセロール、エタノール、有機酸等が生成する。糖を資化した糖液又は糖蜜を、塩型陽イオン交換樹脂のクロマトグラフィーにかけ、イノシトールをグリセロール、有機酸から分離する。エタノールはクロマトフィード前の濃縮時、あるいはイノシトール画分を結晶化のために濃縮する時に蒸発除去される。
【００２９】
糖液又は糖蜜中の糖（イノシトールを除く）の資化に用いられるイーストはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅに属するものであればよく、生イースト、乾燥イーストが利用される。イースト通気培養処理に供される糖液又は糖蜜の濃度は高ければ高い程、後工程のクロマトグラフィー分離に供される原液の濃度が上がり、濃縮費用が少なくなるので好ましい。イーストを生産する場合には、通常、培養槽の濃度は固形分０．０１ｗ／ｗ％程度に保持されるが、培養槽の糖液又は糖蜜の濃度は固形分１０から６０ｗ／ｗ％の範囲でイースト処理されること、好ましくは、３０から５０ｗ／ｗ％が良く、イースト処理の際の濃度を高くすることができる。なお、糖液又は糖蜜のイーストの処理温度は、３０〜３７゜Ｃでおこなわれ、糖液又は糖蜜へのイースト添加量とその処理時間は大略比例関係にあり、その添加量と処理時間は適宜選択されるものである。
【００３０】
また、クロマトグラフィーの処理に使用する塩型陽イオン交換樹脂として、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ型の樹脂が用いられるが、この場合、分離性能からいうと、Ｃａ型が最も好適である。特に、Ｃａ型陽イオン交換樹脂を用いた際には、イノシトールとグリセロールを良好に分離することができ、より高純度のイノシトール液を得ることが可能である。クロマト分離法としては、モノベット方式、擬似移動方式、前記の中間の方法等があるがいずれの方法でも使用することができる。得られるイノシトール画分の純度及び回収率を上げるためには、モノベット方式においては、得られた画分を再度クロマトグラフィーにかける等の方法も有効である。また、擬似移動方式では、その設定パラメータ（サンプル負荷量、通液量、サンプル回収量等）の設定をより適切なものへ変更することが有効である。もし、糖液又は糖蜜中にベタインが含有されている場合には疑似移動床による３成分分離を実施することによって、イノシトールだけではなく、現在需要の高まりつつあるベタインを分離することも可能である。
【００３１】
２．粗精製画分に対し、有機溶媒（好適にはエタノール）を用いた分別晶析を２回以上行い、結晶を除去する。これは、後述する実施例５に相当する製造方法である。２回以上分別晶析を行うことによって、さらにＤ−キロ−イノシトール高含有の抽出物を得ることができる。実用的には、２回の分別晶析が好ましい。
なお、この実施の形態で、前提となる粗精製画分を得るための粗精製操作は、一般的な方法で行えばよいが、前記したような特開平１２−２３６８９０号公報に記載の手法に従って、粗精製操作を実施することもできる。
【００３２】
３．粗精製画分に対し、有機溶媒（好適にはエタノール）を用いた分別晶析を２回以上行い、結晶を除去し、さらに、陰イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィーにより分画する。これは、後述する実施例６に相当する製造方法である。２回以上分別晶析を行い、さらに陰イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィーにより分画することによって、さらにＤ−キロ−イノシトール高含有の抽出物を得ることができる。実用的には、２回の分別晶析が好ましい。
なお、この実施の形態で、前提となる粗精製画分を得るための粗精製操作は、一般的な方法で行えばよいが、前記したような特開平１２−２３６８９０号公報に記載の手法に従って、粗精製操作を実施することもできる。
【００３３】
なお、Ｄ−キロ−イノシトールの含量分析は、高速液体クロマトグラフィー分析により行うことができる。
【００３４】
以下に本発明の実施例を挙げるが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３５】
フィチン酸由来イノシトール及びサトウダイコン由来イノシトールの分析
市販されているイノシトールは、フィチン酸由来イノシトール及びサトウダイコン由来イノシトールの２種類である。サトウダイコン由来イノシトールが、既にＤ−キロ−イノシトールを高含有している場合、本発明に係る飲食物は既に製造されているものとなるため、調査を行った。
市販されているフィチン酸由来イノシトール及びサトウダイコン由来イノシトールを、それぞれイオン交換水に２０％の濃度で溶解し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析を行った。
【００３６】
結果、どちらのイノシトールもミオ−イノシトールと一致する１成分のみが検出され、Ｄ−キロ−イノシトール及びその他イノシトール異性体は、検出されなかった。
なお、この条件によるＤ−キロ−イノシトールの検出限界は、０．０２ｍｇ／ｍｌであった。（２０％のサンプルを分析しているので、０．０１％分析可能である。）したがって、両イノシトールのイノシトール純度は、ミオ−イノシトール９９．９９％以上であった。
【００３７】
高速液体クロマトグラフィーの分析条件は以下の通りであった。
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ  ５ＮＨ２（４．６×２５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
検出器：ＲＩ  ＤＥＴＥＣＴＯＲ  ＲＩ−１５３０（日本分光株式会社）
注入量：２０μｌ
溶媒：アセトニトリル−水＝４：１
流量：２  ｍｌ／ｍｉｎ
以下、特に条件を記さない高速液体クロマトグラフィーの分析は、すべて同条件で行った。
【実施例２】
【００３８】
サトウダイコン糖蜜中のＤ−キロ−イノシトールの検出
サトウダイコンより得られた糖蜜１０ｇをイオン交換水で１０倍に希釈し、オートクレーブにかけ滅菌した。
該希釈液にイーストを植菌し、通気条件下、良く撹拌しながら３０度で３日間培養した。
【００３９】
グルコース、フルクトース、スクロースがほとんど資化されていることを、高速液体クロマトグラフィーで確認した後、培養液を８０００ｒｐｍで１０分間遠心し、菌体等の不溶物を沈殿除去した。培養上清液を強酸性陽イオン交換樹脂デュオライト（登録商標）Ｃ−２０（Ｈ+型）３０ｍｌを充填したカラムに通過させ、その後このカラムに９０ｍｌのイオン交換水を通過させて洗浄した。この通過液及び洗浄液を、強塩基性陰イオン交換樹脂デュオライト（登録商標）Ａ１１６（ＯＨ-型）  ４０ｍｌを充填したカラムに通過させ、その後、このカラムに１２０ｍｌのイオン交換水を通過させて洗浄した。得られた通過液及び水洗浄液中を減圧下で１０ｍｌまで濃縮し、高速液体クロマトグラフィーで分析した。標準品のＤ−キロ−イノシトールと同じ溶出時間に溶出される成分の旋光度をＯＲデテクターで調査した結果、Ｄ−キロ−イノシトールと一致した。サトウダイコン糖蜜中にＤ−キロ−イノシトールを検出した。
【実施例３】
【００４０】
サトウダイコン由来イノシトールの分析２
市販されているサトウダイコン由来イノシトール１００ｇを、エタノールを用いて分別晶析し、結晶として高純度で得られるミオ−イノシトールを除去する操作を数回繰り返し、ミオ−イノシトール以外の成分が濃縮された画分１００ｍｇを得た。
上記成分を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析を行った。結果、Ｄ−キロ−イノシトール５０μｇが検出された。（０．５ｐｐｍ）
【実施例４】
【００４１】
サトウダイコン糖蜜を原料とした抽出物の製造
サトウダイコンより得られた糖蜜１Ｋｇをイオン交換水で１０倍に希釈し、オートクレーブにかけ滅菌した。
該希釈液にイーストを植菌し、通気条件下、良く撹拌しながら３０度で３日間培養した。
グルコース、フルクトース、スクロースがほとんど資化されていることを、高速液体クロマトグラフィーで確認した後（条件は実施例１と同様）、培養液を８０００ｒｐｍで１０分間遠心し、菌体等の不溶物を沈殿除去した。
次いで脱塩処理をおこなった。すなわちまず、培養上清液を強酸性陽イオン交換樹脂デュオライト（登録商標）Ｃ−２０（Ｈ+型）３００ｍｌを充填したカラムに通過させ、その後、このカラムに９００ｍｌのイオン交換水を通過させて洗浄した。この通過液及び洗浄液を、強塩基性陰イオン交換樹脂デュオライト（登録商標）Ａ１１６（ＯＨ-型）  ４００ｍｌを充填したカラムに通過させ、その後このカラムに１２００ｍｌのイオン交換水を通過させて洗浄した。得られた通過液及び水洗浄液中を減圧下で５００ｍｌまで濃縮した。
その後、カルシウムイオン形陽イオン交換樹脂デュオライト（登録商標）Ｃ−２０（Ｃａ型）２０Ｌを充填したカラムを用いてクロマトグラフィーを行い、イノシトールを、グリセロール等の他の糖分から分離するための分画を行った。分画は０．５Ｌずつの分画とした。得られた画分をそれぞれ高速液体クロマトグラフィーで分析し、イノシトールを多く含む画分のみを回収した。回収された画分を一つにまとめ、濃縮し、さらに同じカルシウムイオン形陽イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィー操作を繰り返した。得られた画分をそれぞれ高速液体クロマトグラフィーで分析し、イノシトールを多く含む画分のみを回収した。回収された画分を一つにまとめ、エバポレーターを用いて濃縮した。これらの操作により、イノシトールを多く含む画分を得ることができた。その結果、Ｄ−キロ−イノシトールを含むイノシトール粗精製画分約２０ｇ（シロップ状）を得た。その画分中のイノシトール類成分比は、Ｄ−キロ−イノシトール、１．５％、ミオ−イノシトール、９８．５％であった。イノシトール類の合計濃度は約４５％であった。
【００４２】
この粗精製画分は、Ｄ−キロ−イノシトールを１．５％含んではいたが、さらに、Ｄ−キロ−イノシトールの濃度を３倍以上に高めることを目的に、この粗精製画分を、エタノールを用いて分別晶析した。この粗精製画分を２倍に希釈し、その後、結晶化が急激に起こらないように良く観察しながら、良く攪拌し少しずつ合計約４倍量のエタノールを加えた。その後１日間室温に静置し結晶をゆっくりと成長させた。さらに、４℃に１日間静置し、結晶をさらに成長させた。結晶を十分に成長させた後、結晶をろ過により取り除き、エタノール・水混合溶液としての抽出物を得た。得られた抽出物を、エバポレーターを用いてエタノール臭が完全になくなるまで濃縮した。その結果、Ｄ−キロ−イノシトールに富んだ抽出物約３ｇ（シロップ状）を得た。この抽出物中のイノシトール類成分比は、Ｄ−キロ−イノシトール、６．６％、ミオ−イノシトール、９３．４％であった。イノシトール類の合計濃度は約５０％であった。
【実施例５】
【００４３】
Ｄ−キロ−イノシトール含有量を高めた抽出物の製造
実施例４で得られた抽出物のうち１．５ｇを用いて、Ｄ−キロ−イノシトール含有量を高めた抽出物の製造を行った。Ｄ−キロ−イノシトールの含有量を高めるための方法は、実施例４と同じくエタノールを用いた分別晶析とした。先の分別晶析と同様、実施例４で得られた抽出物を２倍に希釈し、その後、結晶化が急激に起こらないように良く観察しながら、良く攪拌し少しずつ合計約４倍量のエタノールを加えた。その後１日間室温に静置し結晶をゆっくりと成長させた。さらに、４℃に１日間静置し、結晶をさらに成長させた。結晶を十分に成長させた後、結晶をろ過により取り除き、エタノール・水混合溶液としての抽出物を得た。得られた抽出物をエバポレーターを用いてエタノール臭が完全になくなるまで濃縮した。その結果、Ｄ−キロ−イノシトールに富んだ抽出物約０．３ｇ（シロップ状）を得た。この抽出物中のイノシトール類成分比は、Ｄ−キロ−イノシトール、２４％、ミオ−イノシトール、７６％であった。イノシトール類の合計濃度は約５０％であった。
【実施例６】
【００４４】
高純度のＤ−キロ−イノシトールを含む抽出物の製造
実施例５で得られた抽出物を、強塩基性陰イオン交換樹脂アンバーライト（登録商標）ＣＧ−４００（ＯＨ-型）１００ｍｌを充填したカラムを用いてクロマトグラフィーを行い、分画した。分画は２ｍｌずつの分画とした。得られた画分をそれぞれ高速液体クロマトグラフィーで分析し、Ｄ−キロ−イノシトールを高純度（９５〜１００％）で含む画分のみを回収した。回収された画分を一つにまとめ、濃縮した。その結果、９７％純度のＤ−キロ−イノシトールを１０．５ｍｇ（粉末）得た。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
以上の実施例等の説明から了解されるように、本発明では、従来、イノシトール（ミオ−イノシトール）製造上、廃液として除去されていた成分をＤ−キロ−イノシトール含有抽出物として積極的に活用し、飲食物として好適なＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物を製造することを可能としている。係るＤ−キロ−イノシトール高含有抽出物は、高機能食品等の飲食物として供することができる。