(57)【要約】      （修正有）【課題】本発明は、患者の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための、局所経路によるロディオラ・クレヌラタ抽出物の使用に関する。【解決手段】本発明は、特に、局所塗布用組成物であって、患者の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための活性物質を含み、上記活性物質はロディオラ・クレヌラタ抽出物であることを特徴とする局所塗布用組成物に関する。本発明により、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織の柔軟性の増加、抗皺効果、皺の出現の遅延及び予防、ニキビの出現に対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、並びに、皮膚組織の落屑促進（「ピーリング」）等の化粧処置を行うことができる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための局所塗布用組成物を製造する目的でのロディオラ・クレヌラタ抽出物の使用。
【請求項２】
前記皮膚組織は皮膚であり、好ましくは、前記皮膚組織は、特に人間の、表皮及び／又は真皮である
ことを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
角質細胞及び／又は繊維芽細胞のエネルギー代謝を増加させるための
請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記患者は哺乳動物、特に人間である
ことを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記局所塗布用組成物は、抽出物を０．０１％〜１０％（ｗ／ｗ）含む
ことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、ペンタン、デカン、シクロヘキサン、ヘキサン、石油エーテル、モノクロロメタン、ジクロロメタン、クロロホルム、イソプロパノール、プロパノール、酢酸エチル、エタノール、メタノール、アセトン、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ペンチレングリコール、グリセリン及び水、並びに、これら溶媒のうち少なくとも２種の混合物からなる群から選択される溶媒で抽出して得られる
ことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
前記溶媒は特に水−アルコール又は水−グリコールの混合物である
ことを特徴とする請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記抽出物は、ロディオラ・クレヌラタの根及び／又は茎の下部の抽出物である
ことを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記抽出物は、植物ロディオラ・クレヌラタの少なくとも一部、好ましくはロディオラ・クレヌラタの根及び／又は茎の下部を粉末状に粉砕して得られる
ことを特徴とする請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記抽出物は、クレヌラチン（ｃｒｅｎｕｌａｔｉｎｅ）、その塩の少なくとも１種、又は、その誘導体の少なくとも１種を含む
ことを特徴とする請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延若しくは予防、及び／又は、皮膚組織の柔軟性の増加、及び／又は、抗皺効果若しくは皺の出現の遅延若しくは予防、及び／又は、ニキビの出現に対する抵抗、遅延若しくは予防、及び／又は、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、及び／又は、皮膚組織の落屑を促進（「ピーリング」）するための
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
少なくとも組成物を塗布する部分の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための活性物質を含み、
前記活性物質は請求項１〜１１のいずれか１項に記載のロディオラ・クレヌラタ抽出物である
ことを特徴とする局所塗布用組成物。
【請求項１３】
患者の皮膚組織の少なくとも一部に請求項１２に記載の組成物を局所的に塗布して、患者の皮膚組織の少なくとも前記一部におけるエネルギー代謝を増加させる
ことを特徴とする化粧処置方法。
【請求項１４】
前記化粧処置は、これを必要とする患者に対して、特に、母集団から事前に前記患者を選択して行う
ことを特徴とする請求項１３に記載の化粧処置方法。
【請求項１５】
前記化粧処置は、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織の柔軟性の増加、抗皺効果、皺の出現の遅延及び予防、ニキビの出現に対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、並びに、皮膚組織の落屑促進（「ピーリング」）からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
皮膚組織の細胞の増殖能を増大できる、すなわち、これらの細胞、特に角質細胞及び／又は繊維芽細胞の増殖を増大できる
ことを特徴とする請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、患者の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための、局所経路によるロディオラ・クレヌラタ抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
この科の植物（ロディオラとも称される）は、高地で、好ましくない環境や適さない環境でも生育でき、強壮効果を有することが知られている。ロディオラ抽出物は、アルコール飲料の形態として経口経路で、様々な用途、すなわち心臓血管系に対する効果、記憶力に対する効果、抗ヒスタミン効果等が必要とされる用途に用いられてきた。しかしながら、これらの効果は生物学的機械論の観点からあまり研究されていない。また、ロディオラ・クレヌラタは発見が比較的困難な植物で、チベット高原の高所にしか生育せず、今まで研究対象にはほとんどならなかった。このため、上記効果は、主として岩弁慶（Ｒｈｏｄｉｏｌａ  ｒｏｓｅａ）、ロディオラ・キリローウィ（Ｒｈｏｄｉｏｌａ  ｋｉｒｉｌｏｗｉｉ）及びロディオラ・サハリネンシス（Ｒｈｏｄｉｏｌａ  ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ）に関して記載されたものである。
【０００３】
また、化粧用途に関しては、岩弁慶（特許文献１）又はロディオラ・サハリネンシス（特許文献２）についての記載があるが、その生物学的活性は直接証明されていない。
【０００４】
結論として、ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、その医薬品としての用途について、特に、血液中のテストステロン及びエストラジオールの量を増加させるための、又は、血液中の酸素の輸送を促進するための経口使用について記載がある（特許文献３）。この文献はまた、酸素が効率的に輸送されると筋繊維中のＡＴＰ量が増加し、これによって筋肉疲労が低減されることについても記載している。これより、筋肉疲労を低減できる。しかしながら、この研究は上記の範囲に限定されているため、当業者は、皮膚組織の細胞代謝を増加させるためにロディオラ・クレヌラタ抽出物を最終的に化粧品や皮膚医薬品に使用することに関して、この研究から教示を得ることができない。
【０００５】
現在までに、特に皮膚組織学の専門家らが、一般には極めて集中的な方法である皮膚組織「ピーリング」法により表面の皺を消してたるみに抵抗するという、特に皮膚組織のたるみと皺の出現を緩和できる方法を明らかにするために多くの研究を行った。
【０００６】
また、抗ニキビ効果に関する分野においても多くの研究がなされた。
【０００７】
同様に、皮膚組織、特に色素沈着した部位等の皮膚の様々な問題を緩和するために、多くの研究がなされた。
【０００８】
このように多くの研究が行われているにも関わらず、その解決法が不十分であるため、現在も上記の様々な問題は解決されていない。
【０００９】
また、化粧品使用者は、提案された組成物が植物起源であるかどうかに対して敏感であり、植物抽出物を含む組成物を使用することを好む。
【特許文献１】特開２００１−０４８７６８
【特許文献２】中国特許１３０６８１６
【特許文献３】米国特許２００２−０１２７２８５（米国特許Ｎｏ．６３９９１１６）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、本発明は、上記及び下記の様々な技術的問題の解決による、従来技術における欠陥の軽減に関する。
【００１１】
本発明の主要な目的は、特に、皺の出現の低減、遅延若しくは予防又は抗皺効果の観点から、及び／又は、皮膚組織の柔軟性増加の観点から、及び／又は、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延若しくは予防の観点から、及び／又は、ニキビの出現に対する抵抗、遅延若しくは予防の観点から、及び／又は、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果の観点から、及び／又は、皮膚組織の落屑促進（「ピーリング」）の観点から、患者の皮膚組織、特に皮膚におけるエネルギー代謝を増加させることができる新規の局所塗布用組成物を提供するという新しい技術的問題を解決することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記技術的問題は全て、特に産業規模で、とりわけ化粧品産業規模で使用できる方法で、本発明によって初めて解決できる。
【００１３】
第一の態様によれば、本発明は、患者の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための局所塗布用組成物を製造する目的でのロディオラ・クレヌラタ抽出物の使用に関する。
【００１４】
有利には、皮膚組織におけるエネルギー代謝は、細胞質ゾルのＡＴＰを測定することによって示される。
【００１５】
有利には、上記皮膚組織におけるエネルギー代謝は、ｉｎ  ｓｉｔｕにおいても、例えば（特にリン（Ｐ３１）の）ＮＭＲ（核磁気共鳴）分光法でも測定できる。
【００１６】
とりわけ、皮膚におけるエネルギー代謝の変化は、皮膚の主要なリン酸化代謝産物（無機リン酸塩（Ｐｉ）、ホスホクレアチン（ＰＣｒ）及びアデノシン三リン酸（ＡＴＰ））の相対濃度を測定することによるリン（Ｐ３１）ＮＭＲ分光法で測定できる。
【００１７】
ＡＴＰ分子は細胞や組織に必要なエネルギーを供給する。ホスホクレアチンは、即座に利用可能な貯蔵エネルギーを構成し、クレアチンホスホキナーゼが触媒する反応によってＡＤＰ分子にリン酸基を供給することにより、細胞が虚血状態になった際に消費される貯蔵ＡＴＰを再構成する作用がある。
ＡＤＰ＋ＰＣｒ⇔ＡＴＰ＋Ｃｒ
【００１８】
ＰＣｒ／Ｐｉ、ＡＴＰ／Ｐｉ、ＰＣｒ／ＡＴＰ及びＰＣｒ／全Ｐの比率の変化から、組織のエネルギー状態が分かる。
【００１９】
本発明はそれ自身、エネルギー代謝を評価できる特定の調査に限定されるものではないが、上記の方法は本発明において有利に使用でき、特に、所望の目的を達成するために迅速かつ正確な調査を可能にする。
【００２０】
ある実施形態によれば、上記皮膚組織は皮膚である。好ましくは、上記皮膚組織は、（特に人間の）表皮及び／又は真皮である。
【００２１】
有利には、この使用により、角質細胞及び／又は繊維芽細胞のエネルギー代謝を増加できる。
【００２２】
ある実施形態によれば、上記患者は哺乳動物、特に人間である。
【００２３】
有利には、上記局所塗布用組成物は、抽出物を０．０１％〜１０％（ｗ／ｗ）含む。
【００２４】
別の実施形態によれば、上記抽出物はｃｒｅｎｕｌａｔｉｎｅ、その塩の少なくとも１種、又は、その酸若しくはエステル誘導体等のその誘導体の少なくとも１種を含む。
【００２５】
また別の実施形態によれば、上記ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、根及び／又は茎の下部を溶媒で抽出し、その後必要に応じて分画して活性画分を分離することにより調製する。上記溶媒は、極性溶媒であっても非極性溶媒であってもよい。上記溶媒は、好ましくはペンタン、デカン、シクロヘキサン、ヘキサン、石油エーテル、モノクロロメタン、ジクロロメタン、クロロホルム、イソプロパノール、プロパノール、酢酸エチル、エタノール、メタノール、アセトン、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ペンチレングリコール、グリセリン及び水、並びに、これら溶媒のうち少なくとも２種の混合物、特に水−アルコール又は水−グリコールの混合物からなる群から選択される。
【００２６】
有利には、上記抽出物は精製したものである。
【００２７】
有利には、この使用により、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延若しくは予防、及び／又は、皮膚組織の柔軟性増加、及び／又は、抗皺効果、及び／又は、ニキビの出現に対する抵抗、遅延若しくは予防、及び／又は、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、及び／又は、皮膚組織の落屑促進（「ピーリング」）が可能になる。
【００２８】
特に本発明によって、皮膚組織の細胞の増殖能を増大できる、すなわち、これらの細胞、特に角質細胞や繊維芽細胞の増殖を増大できる。
【００２９】
有利には、このように表皮における細胞増殖を増大させることにより、表皮をより迅速に再生できる。
【００３０】
有利には、このようなより迅速な表皮の再生により、表皮中のメラニン量を変化させることができ、組織の色素沈着を変化させて皮膚組織の色素脱失効果を発揮することができる。この効果は、特に人間や動物の皮膚の色を明るくするために利用される。
【００３１】
有利には、このように細胞増殖を増大させることにより、例えば通常極めて薄い老化皮膚において、表皮を厚くして表皮のバリア効果機能を回復できる。
【００３２】
有利には、このように細胞増殖を増大させることにより、（例えば乾燥皮膚の場合には本質的に困難である）落屑を促進できる。
【００３３】
有利には、このように（特に真皮中の繊維芽細胞の）細胞増殖を増大させることにより、真皮を緻密にして柔軟性及び／又は堅さを回復させ、特に抗皺効果、又は、皺の出現に対する抵抗、遅延若しくは予防ができる。
【００３４】
第二の態様によれば、本発明は、局所塗布用組成物であって、少なくとも上記組成物を塗布する部分の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための活性物質を含み、上記活性物質は上述のようにロディオラ・クレヌラタ抽出物であることを特徴とする局所塗布用組成物に関する。
【００３５】
有利には、上記抽出物は、局所経路において許容される賦形剤、特に化粧学的又は皮膚科学的に許容される賦形剤との混合物とする。
【００３６】
これらの組成物について、上記賦形剤は、例えば、防腐剤、皮膚軟化剤、乳化剤、界面活性剤、保湿剤、濃化剤、調整剤、つや消し剤、安定剤、抗酸化剤、質感調整剤、増白剤、フィルム化剤（ｆｉｌｍｏｇｅｎｉｃ  ａｇｅｎｔ）、可溶化剤、顔料、色素、香料及びソーラーフィルターからなる群より選択される少なくとも１種の化合物を含む。これらの賦形剤は、好ましくは、アミノ酸及びその誘導体、ポリグリセリン、セルロースのエステル、ポリマー及び誘導体、ラノリン誘導体、リン脂質、ラクトフェリン、乳過酸化酵素、スクロース型安定剤、ビタミンＥ及びその誘導体、天然及び合成ワックス、植物油、トリグリセリド、不鹸化物、植物ステロール、植物エステル、シリコーン及びその誘導体、タンパク質加水分解物、ホホバ油及びその誘導体、脂溶性／水溶性エステル、ベタイン、アミン酸化物、植物抽出物、スクロースエステル、二酸化チタン、グリシン、並びに、パラベンからなる群より選択される。より好ましくは、ブチレングリコール、ステアレス−２、ステアレス−２１、グリコール−１５ステアリルエーテル、セテアリルアルコール、フェノキシエタノール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、ブチレングリコール、天然トコフェロール、グリセリン、ジヒドロキシセチルナトリウム、イソプロピルヒドロキシセチルエーテル、ステアリン酸グリコール、トリイソノナオイン（ｔｒｉｉｓｏｎｏｎａｏｉｎｅ）、ヤシ油脂肪酸オクチル、ポリアクリルアミド、イソパラフィン、ラウレス−７、カルボマー、プロピレングリコール、グリセリン、ビサボロール、ジメチコン、水酸化ナトリウム、ＰＥＧ３０−ジポリヒドロキシステアリン酸塩、トリ（カプリル／カプリン酸）グリセリル、オクタン酸セテアリル、アジピン酸ジブチル、ブドウ種子油、ホホバ油、硫酸マグネシウム、ＥＤＴＡ、シクロメチコン、キサンタンガム、クエン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、ミネラルワックス及び鉱物油、イソステアリン酸イソステアリル、プロピレングリコールジペラルゴン（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｐｅｌａｒｇｏｎａｔｅ）、イソステアリン酸プロピレングリコール、ＰＥＧ−８ミツロウ、水添パーム核脂肪酸グリセリド、水添パーム油脂肪酸グリセリド、ラノリン油、ゴマ油、乳酸セチル、ラノリンアルコール、ヒマシ油、二酸化チタン、ラクトース、スクロース、低密度ポリエチレン及び等張食塩水からなる群より選択される。
【００３７】
有利には、上記組成物は、特にビン又はチューブに入れた形での、水性若しくは油性の溶液、水性クリーム、水性ゲル又は油性ゲル、特にボディソープ、シャンプー；乳液；エマルション、マイクロエマルション又はナノエマルション、特に水中油又は油中水又は多相又はシリコーン含有マイクロエマルション又はナノエマルション；ローション、特にガラスビン、プラスチックビン若しくは計量ビンに入れた形の、又は、エアゾール状のローション；アンプル；液体セッケン；皮膚科学的な棒（ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｒ）；軟膏；フォーム；無水製品、好ましくは液状、糊状又は固体状の無水製品、例えばスティック状、特に口紅；からなる群より選択される形態で製剤される。
【００３８】
第三の態様によれば、本発明は、植物ロディオラ・クレヌラタの少なくとも一部、好ましくは根及び／又は茎の下部を、例えばすりつぶすことによって、粉末状に粉砕することを特徴とする上記ロディオラ・クレヌラタ抽出物の調製方法に関する。
【００３９】
当業者に公知のあらゆる方法を、上記抽出を行うために使用できる。
【００４０】
特に有利には、上記粉末を溶媒又は混合溶媒を用いて抽出し、得られた物質を必要に応じて分画して活性画分を分離する。有利には、上記活性画分を適切な膜を用いてろ過し、所望の目的について活性を有する物質を含む固形物を得る。上記粉末は、溶媒又は混合溶媒中に、例えば室温において又は溶媒を還流させながら、浸漬しておく。上記溶媒は、有利には上述のものから選択される。
【００４１】
有利には、ろ過して得られた活性物質は、局所経路において許容される少なくとも１種の上記賦形剤と混合される。
【００４２】
当業者であればその技術により、所望の目的において適切な製剤を有利に調製できる。
【００４３】
第四の態様によれば、本発明は、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を含む上記組成物を、患者の皮膚組織の少なくとも一部に局所的に塗布して、患者の皮膚組織の少なくとも一部におけるエネルギー代謝を増加させることを特徴とする化粧処置方法に関する。
【００４４】
有利には、上記化粧処置方法により、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織の柔軟性の増加、抗皺効果、皺の出現の遅延及び予防、ニキビの出現に対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、並びに、皮膚組織の落屑促進（「ピーリング」）からなる群より選択される処置を行うことができる。
【００４５】
特定の実施形態によれば、上記化粧処置方法により、皮膚組織の細胞の増殖能を増大させ、すなわち、これらの細胞、特に角質細胞及び／又は繊維芽細胞の増殖を増大させ、これによって特に上述の効果を得ることができる。
【００４６】
有利には、上記化粧処置は、これを必要とする患者に対して、特に母集団から事前に上記患者を選択して行う。
【００４７】
有利には、上記組成物を塗布する皮膚組織部分は、行う処置に応じて選択する。
【００４８】
第五の態様によれば、本発明は、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を含む上記組成物の治療上有効量を、患者の皮膚組織の少なくとも一部に局所的に塗布して、患者の皮膚組織の少なくとも上記一部におけるエネルギー代謝を増加させることを特徴とする治療処置方法に関する。
【００４９】
有利には、上記処置方法により、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織の柔軟性の増加、抗皺効果、皺の出現の遅延及び予防、ニキビの出現に対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、並びに、皮膚組織の落屑促進（「ピーリング」）からなる群より選択される処置を行うことができる。
【００５０】
特定の実施形態によれば、上記治療処置方法により、皮膚組織の細胞の増殖能を増大させ、すなわち、これらの細胞、特に角質細胞及び／又は繊維芽細胞の増殖を増大させ、これによって特に上述の効果を得ることができる。
【００５１】
有利には、上記処置方法は、この処置を必要とする患者に対して、特に母集団から事前に上記患者を選択して行う。
【００５２】
有利には、上記組成物を塗布する皮膚組織部分は、行う処置に応じて選択する。
【００５３】
通常、上記組織は好ましくは患者の皮膚又は粘膜である。
【００５４】
本発明の局所塗布用組成物により、特に塗布部分の皮膚組織において代謝が増加するという局所的な効果が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５５】
当業者には、本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の実施例を参照した説明から明らかであろう。実施例は単に説明のための記載であって、本発明の範囲を何ら制限するものではない。
【００５６】
実施例は本発明に不可欠であり、また、実施例を含む本明細書全体の中に記載される従来技術に照らして新規の特徴は全て、その機能、概略共に本発明に不可欠である。
【００５７】
上記より、実施例は全て、一般的な範囲を示す。
【００５８】
また、実施例において、特に指示のない限り、百分率は重量％で、温度は摂氏で、圧力は大気圧で表す。
【実施例１】
【００５９】
“ロディオラ・クレヌラタ抽出物の調製”
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末をエタノールと混合し、１０％（ｗ／ｗ）エタノール溶液を得た。この溶液を還流して１時間抽出し、室温にしてからろ過し、エタノールを除去した。得られたものを水／グリコールの７５／２５（ｗ／ｗ）混合液中に５％（ｗ／ｗ）で溶解した後、分離（ｃｕｔ−ｏｆｆ）閾値の異なるセラミックフィルター上で限外ろ過し、最終ろ過は０．４５μｍにおいて行った。
最後に、キサンタンゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを０．１％加えた。
【実施例２】
【００６０】
“ロディオラ・クレヌラタ抽出物の調製”
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末をシクロヘキサンと混合し、１０％（ｗ／ｗ）シクロヘキサン溶液を得た。この溶液を還流して２４時間抽出し、室温にしてからろ過し、シクロヘキサンを除去した。得られたものを水／グリコールの７５／２５（ｗ／ｗ）混合液中に５％（ｗ／ｗ）で溶解した後、分離閾値の異なるセラミックフィルター上で限外ろ過し、最終ろ過は０．４５μｍにおいて行った。
最後に、カルボマーゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを０．１％加えた。
【実施例３】
【００６１】
“ロディオラ・クレヌラタ抽出物の調製”
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末を水７５％とブチレングリコール２５％からなる溶媒中に混合し、１０％（ｗ／ｗ）の該溶媒溶液を得た。４５℃において１晩浸漬し、分離閾値の異なるセラミックフィルター上でこの溶液を限外ろ過し、最終ろ過は０．４５μｍにおいて行った。
最後に、セルロースゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを０．１％加えた。
【実施例４】
【００６２】
“ロディオラ・クレヌラタ抽出物の調製”
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末を水７５％とブチレングリコール２５％からなる溶媒中に混合し、１％（ｗ／ｗ）の該溶媒溶液を得た。４℃において１晩浸漬し、分離閾値の異なるセラミックフィルター上でこの溶液を限外ろ過し、最終ろ過は０．４５μｍにおいて行った。
最後に、キサンタンゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを０．１％加えた。
【実施例５】
【００６３】
“細胞毒性の試験”
実施例４で調製したロディオラ・クレヌラタ抽出物の角質細胞に対する細胞毒性を調べた（パラニトロフェニルリン酸（ＰＮＰＰ）を用いて測定した）。
正常なヒト角質細胞を腹部生検から抽出し、９６ウェル培養プレート中に播種した。細胞を一旦コンフルエントにした後、培地単独（コントロール）、又は、実施例４で調製したロディオラ・クレヌラタ抽出物を０．０１％、０．１％、１％、３％、５％若しくは１０％（ｗ／ｗ）含有する培地中で、３７℃において２４時間、５％ＣＯ２を含む雰囲気下で培養した。
【００６４】
培養後、細胞生存力を、ＰＮＰＰを用いた試験により評価した。この試験によって細胞内酸性ホスファターゼの活性を評価できるが、その結果は生存細胞の数に正比例する。
０．１％トリトンＸ１００（シグマ社）及び０．１Ｍ酢酸ナトリウム（シグマ社）を含むｐＨ５の脱塩水にＰＮＰＰ（シグマ社）を５ｍＭで溶解した溶液２００μｌを、各培養ウェル中に注入した。３７℃において２時間培養した後、１ＮのＮａＯＨ（メルク社）を添加して反応を終結させた。４０５ｎｍにおける吸光度を読み取り、結果をコントロール（活性物質なし）に対する生存細胞の比率で表す。
【００６５】
【表１】
2005075829.tif 000002
【実施例６】
【００６６】
“実施例４で得られた抽出物と共に培養したヒト角質細胞におけるエネルギー代謝の評価”
「細胞ＡＴＰ量の測定」
正常なヒト角質細胞を、１ウェル当たり１５×１０３個の割合で９６ウェルマイクロプレート中に播種する。３７℃において７２時間培養した後、培地を除去して異なる濃度の活性物質を含有する培地で置き換える。
細胞を連続３日間培養した後、ＰＢＳバッファーで洗浄する。細胞質ゾルのＡＴＰを、以下の反応に基づいて生物発光法で定量する。
ルシフェリン＋Ｏ２＋ルシフェラーゼ＋ＡＴＰ→オキシルシフェリン＋ＡＭＰ＋ＰＰｉ＋ＣＯ２＋ルシフェラーゼ＋光子
【００６７】
ＰＢＳで洗浄後、角質細胞をジギトニン含有透過処理バッファー中で５分間培養する。ＡＭＲ（ＡＴＰモニタリング試薬、ロシュ・ダイアグノスティックス社）の希釈液をマイクロプレート中に直接注入し、発光強度（ＲＬＵＴｏｔａｌ）を照度計（Ｌｕｍｉｎｏｓｃａｎ、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍ社）で測定する。１回目の読み取りの後、マイクロプレートウェル中にヘキソキナーゼ（シグマ社：ＡＴＰを消費する系）溶液を注入する。１０分間培養した後、２回目の発光測定（ＲＬＵ０）により、ＡＴＰ以外の分子に結合した発光を差し引きできる。
ＲＬＵＡＴＰ＝ＲＬＵＴｏｔａｌ−ＲＬＵ０
【００６８】
細胞質ゾルのＡＴＰ量は、ＡＴＰの標準濃度による標準範囲から測定する。
細胞質ゾルのＡＴＰ測定と平行して、別のマイクロプレート中でクマシーブルー（ＢｉｏＲａｄ社Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ）を用いた試験により細胞タンパク質を定量する。
【００６９】
「結果」
結果（ＡＴＰ量）を、タンパク質１μｇ当たりのＡＴＰ量（ｐｍｏｌｅ）で表す。下記の表は平均値（Ｎ＝４）をまとめたものである。
【００７０】
【表２】
2005075829.tif 000003
【００７１】
活性のあるロディオラ・クレヌラタ抽出物で処理した群においては、細胞増殖に変化は見られない。実際、細胞タンパク質量も、コントロール群（活性物質なし）の定量値と同一である。
一方、２％（ｗ／ｗ）ロディオラ・クレヌラタ抽出物で処理した細胞について、タンパク質量がわずかに減少（１１％）していることが分かる。
【００７２】
処理した細胞については、ＡＴＰ量は用量依存的に増加している。ロディオラ・クレヌラタ抽出物１％と２％との間には、統計的に有意差がある（ＳｔｕｄｅｎｔＴテスト）。
図１は、ロディオラ・クレヌラタ抽出物の濃度を変えた際の、ヒト角質細胞中のＡＴＰ量を表す。
【００７３】
「結論」
上述の実験条件下において、ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、ヒト角質細胞のエネルギー代謝を活性化できる。
実際に、試験した濃度範囲内において、細胞質ゾルのＡＴＰ量は用量依存的に増加した。
濃度２％（ｗ／ｗ）において、ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、角質細胞のＡＴＰ量を５９％増加できる。
【実施例７】
【００７４】
“皮膚組織におけるエネルギー代謝の向上”
皮膚組織におけるエネルギー代謝を、ＮＭＲ（核磁気共鳴）分光法によりｉｎ  ｓｉｔｕにおいて測定した。この試験は、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を３％（ｗ／ｗ）含有する製剤が皮膚におけるエネルギー代謝に及ぼす効果を、健康な志願者についてｉｎ  ｖｉｖｏ試験で評価するために行った。試験は、１８歳を超える健康な志願者１６人について行った。ロディオラ・クレヌラタ抽出物を３％（ｗ／ｗ）含有する製剤を、健康な志願者１６人の左右どちらかの前腕に１日２回、２８日間塗布した。この志願者のうち８人のもう一方の前腕に、プラセボ製剤を同一期間塗布した。残りの８人には、もう一方の前腕には何の処置も行わなかった（「コントロール」前腕）。
【００７５】
試験製剤を１日２回２８日間塗布する前と後に、志願者の両前腕皮膚におけるエネルギー代謝をＮＭＲ分光法で測定した。
皮膚におけるエネルギー代謝の変化は、皮膚の主要なリン酸化代謝産物（無機リン酸塩（Ｐｉ）、ホスホクレアチン（ＰＣｒ）及びアデノシン三リン酸（ＡＴＰ））の相対濃度を測定することによるリン（Ｐ３１）ＮＭＲ分光法で測定できる。
【００７６】
ＡＴＰ分子は細胞や組織に必要なエネルギーを供給する。ホスホクレアチンは、即座に利用可能な貯蔵エネルギーを構成し、クレアチンホスホキナーゼが触媒する反応によってＡＤＰ分子にリン酸基を供給することにより、細胞が虚血状態になった際に消費される貯蔵ＡＴＰを再構成する作用がある。
ＡＤＰ＋ＰＣｒ⇔ＡＴＰ＋Ｃｒ
【００７７】
ＰＣｒ／Ｐｉ、ＡＴＰ／Ｐｉ、ＰＣｒ／ＡＴＰ及びＰＣｒ／全Ｐの比率の変化から、組織におけるエネルギー状態が分かる。
下図の結果によって、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を含有する製剤を２８日間塗布すると、ＰＣｒ／Ｐｔｏｔａｌ比が著しく増加することが分かる。
【００７８】
また、「コントロール」前腕について測定したＰＣｒ／ＡＴＰ比は減少したが、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を含有する製剤を塗布した前腕のＰＣｒ／ＡＴＰ比は増加した。この差は有意であった。
プラセボ製剤を塗布した前腕においては、測定時間に関わらず、上記比率の向上は見られなかった。
【００７９】
図２は、Ｄ０（０日目＝組成物を塗布した日）に対する、ロディオラ・クレヌラタを３％含有する製剤を２８日間塗布した後のＰＣｒ／Ｐｔｏｔａｌ及びＰＣｒ／ＡＴＰの比率（％）の変化を表す。
図中で用いる記号は次のとおりである。
●：Ｄ０と有意差がある（ｐ＜０．０５）
ｎｓ：Ｄ０と有意差はない
＊：「コントロール」群と有意差がある（ｐ＜０．０５）
【００８０】
＜図２の数値＞
２８日後の「コントロール」及び「塗布」条件下におけるＰＣｒ／Ｐｔｏｔａｌ比の変化（％）：
【００８１】
【表３】
2005075829.tif 000004
【００８２】
２８日後の「コントロール」及び「塗布」条件下におけるＰＣｒ／ＡＴＰ比の変化（％）：
【００８３】
【表４】
2005075829.tif 000005
【００８４】
この試験から、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を３％（ｗ／ｗ）含有する製剤により、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、皮膚組織におけるエネルギー代謝を向上できることが分かった。実際に、１日２回２８日間塗布して得られた結果から、試験した物質がホスホクレアチンの代謝に対して顕著な効果を及ぼすことが分かる。
【実施例８】
【００８５】
“無害性の試験”
本発明の物質を含む製剤の化粧品としての許容性の評価
実施例４で得られたロディオラ・クレヌラタ抽出物について、これを純粋な状態で使用し、ウサギにおける眼刺激試験、ラットに１回経口投与した際に異常毒性がないことの確認試験、及び、モルモットにおける感作性試験によって毒性試験を行った。
【００８６】
Ａ）ウサギの皮膚における一次刺激の評価
上記製剤を、ウサギ３匹の皮膚に、≪皮膚に対する急性刺激／腐食性≫の研究に関するＯＥＣＤ推奨の方法に従って、希釈せずに０．５ｍｌずつ塗布した。
【００８７】
生成物を、１９８２年２月２１日のフランス共和国の公式機関紙で公表された、１９８２年２月１日の決議の中で定義された基準に従って分類した。
【００８８】
上記試験結果から、試験した製剤は、皮膚に対して「刺激がない」ものとして分類されることが分かる。
【００８９】
Ｂ）ウサギにおける眼刺激試験
上記製剤を純粋な状態で、≪眼に対する急性刺激／腐食性≫の研究に関して１９８７年２月２４日にＯＥＣＤ指令書４０５番によって公式に推奨されている方法に従い、０．１ｍｌを１回でウサギ３匹の眼中に滴下した。
この試験の結果から、これらの製剤は、純粋な状態で使用した場合、９１／３２６のＥＥＣの意味において、眼に対して「刺激がない」ものと考えられる。
【００９０】
Ｃ）ラットに１回経口投与した際に異常毒性がないことの確認試験
上記製剤を、１９８７年２月２４日のＯＥＣＤ指令書４０１番から着想して化粧品に適用したプロトコールに従って、雄ラット５匹及び雌ラット５匹に、５ｇ／体重１ｋｇの量を１回で経口投与した。
ＬＤ０及びＬＤ５０は、５０００ｍｇ／ｋｇを超えることが分かった。従って、試験した製剤は、経口摂取が危険な製剤には分類されない。
【００９１】
Ｄ）モルモットにおける潜在的皮膚感作性試験
上記製剤に対して、ＯＥＣＤ４０６番の指令書に従ったプロトコールであるＭａｇｎｕｓｓｏｎ−Ｋｌｉｇｍａｎｎ極大試験を行った。
これらの製剤は、皮膚との接触において「感作性がない」ものとして分類される。
【００９２】
以下の実施例においては、“本発明の生成物”は、（特に実施例１〜４の）本発明のロディオラ・クレヌラタ抽出物を表す。
【実施例９】
【００９３】
“「色移りしない」口紅”
水中油エマルション型の化粧品又は医薬品の製剤における本発明の生成物の使用
『製剤９ａ』
Ａ
水                                          ｑｓｐ  １００
ブチレングリコール                          ２
グリセリン                                  ３
ジヒドロキシセチルリン酸ナトリウム、        ２
イソプロピルヒドロキシセチルエーテル  
Ｂ
ステアリン酸グリコールＳＥ                  １４
トリイソノナオイン                          ５
（ｔｒｉｉｓｏｎｏｎａｏｉｎ）
ヤシ油脂肪酸オクチル                        ６
Ｃ
ｐＨ５．５に調節した                        ２
ブチレングリコール、
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
Ｄ
本発明の生成物                              ０．０１〜１０％
【００９４】
『製剤９ｂ』
Ａ
水                                          ｑｓｐ  １００
ブチレングリコール                          ２
グリセリン                                  ３
ポリアクリルアミド、イソパラフィン、        ２．８
ラウレス−７
Ｂ
ブチレングリコール、                        ２
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン；
２
フェノキシエタノール、
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン                              ０．５
ブチレングリコール
Ｄ
本発明の生成物                              ０．０１〜１０％
【００９５】
『製剤９ｃ』
Ａ
カルボマー                                  ０．５０
プロピレングリコール                        ３
グリセリン                                  ５
水                                          ｑｓｐ  １００
Ｂ
ヤシ油脂肪酸オクチル                        ５
ビサボロール                                ０．３０
ジメチコン                                  ０．３０
Ｃ
水酸化ナトリウム                            １．６０
Ｄ
フェノキシエタノール、                      ０．５０
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｅ
香料                                        ０．３０
Ｆ
本発明の生成物                              ０．０１〜１０％
【実施例１０】
【００９６】
“油中水型の製剤における本発明の生成物の使用”
Ａ
ＰＥＧ３０−ジポリヒドロキシステアリン酸    ３
カプリン酸トリグリセリド                    ３
オクタン酸セテアリル                        ４
アジピン酸ジブチル                          ３
ブドウ種子油                                １．５
ホホバ油                                    １．５
フェノキシエタノール、                      ０．５
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｂ
グリセリン                                  ３
ブチレングリコール                          ３
硫酸マグネシウム                            ０．５
ＥＤＴＡ                                    ０．０５
水                                          ｑｓｐ  １００
Ｃ
シクロメチコン                              １
ジメチコン                                  １
Ｄ
香料                                        ０．３
Ｅ
本発明の生成物                              ０．０１〜１０％
【実施例１１】
【００９７】
“シャンプー又はボディソープ状の製剤における本発明の生成物の使用”
Ａ
キサンタンガム                              ０．８
水                                          ｑｓｐ  １００
Ｂ
ブチレングリコール、                        ０．５
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
フェノキシエタノール、                      ０．５
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｃ
クエン酸                                    ０．８
Ｄ
ラウレス硫酸ナトリウム                      ４０．０
Ｅ
本発明の生成物                              ０．０１〜１０％  
【実施例１２】
【００９８】
“口紅等の無水製品状の製剤における本発明の生成物の使用”
Ａ
ミネラルワックス                            １７．０
イソステアリン酸イソステアリル              ３１．５
プロピレングリコールジペラルゴン            ２．６
（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｄｉｐｅｌａｒｇｏｎａｔｅ）
イソステアリン酸プロピレングリコール        １．７
ＰＥＧ−８ミツロウ                          ３．０
水添パーム核油脂肪酸グリセリド、            ３．４
水添パーム油脂肪酸グリセリド
ラノリン油                                  ３．４
ゴマ油                                      １．７
乳酸セチル                                  １．７
鉱物油、ラノリンアルコール                  ３．０
Ｂ
ヒマシ油                                    ｑｓｐ  １００
二酸化チタン                                ３．９
ＣＩ  １５８５０：１                        ０．６１６
ＣＩ  ４５４１０：１                        ０．２５６
ＣＩ  １９１４０：１                        ０．０４８
ＣＩ  ７７４９１                            ２．０４８
Ｃ
本発明の生成物                              ０．０１〜５％
【実施例１３】
【００９９】
“水性ゲル（アイライナー、痩身剤等）の製剤における本発明の生成物の使用”
Ａ
水                                          ｑｓｐ  １００
カルボマー                                  ０．５
ブチレングリコール                          １５
フェノキシエタノール、メチルパラベン、      ０．５
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｂ
本発明の生成物                              ０．０１〜１０％
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】ヒト角質細胞のＡＴＰ量に及ぼすロディオラ・クレヌラタ抽出物の効果
【図２】皮膚におけるエネルギー代謝に及ぼすロディオラ・クレヌラタ抽出物の効果
【図１】
2005075829.tif 000006
【図２】
2005075829.tif 000007