(57)【要約】    【課題】  新規なレプトスピラタンパク質、及びこれをコードする遺伝子、レプトスピラ病に対する感染防御効果を持つ新規な薬剤、レプトスピラ病の診断キットを提供すること。    【解決手段】  レプトスピラタンパク質LigA-m又はレプトスピラタンパク質LigB-m、これをコードする遺伝子、並びに該レプトスピラタンパク質LigA-m又はLigB-mを有効成分とするレプトスピラ病に対する感染防御活性を有する薬剤及び診断キット。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（a）若しくは（b）のタンパク質、または下記（a）若しくは（b）のタンパク質の断片であって、（a）のタンパク質の感染防御活性を有するその断片。
（a）配列番号１のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigA-m
（b）配列番号１のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（a）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【請求項２】
下記（c）若しくは（d）のタンパク質、または下記（c）若しくは（d）のタンパク質の断片であって、（c）のタンパク質の感染防御活性を有するその断片。
（c）配列番号２のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigB-m
（d）配列番号２のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（c）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【請求項３】
下記（a）若しくは（b）のタンパク質、または下記（a）若しくは（b）のタンパク質の断片であって、（a）のタンパク質の感染防御活性を有する断片をコードするポリヌクレオチド。
（a）配列番号１のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigA-m
（b）配列番号１のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（a）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【請求項４】
下記（c）若しくは（d）のタンパク質、または下記（
c）若しくは（d）のタンパク質の断片であって、（c）のタンパク質の感染防御活性を有する断片をコードするポリヌクレオチド。
（c）配列番号２のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigB-m
（d）配列番号２のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（c）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【請求項５】
レプトスピラタンパク質LigA-mをコードする配列番号３の塩基配列を有する遺伝子。
【請求項６】
レプトスピラタンパク質LigB-mをコードする配列番号４の塩基配列を有する遺伝子。
【請求項７】
請求項１に記載されるタンパク質又は断片、あるいは請求項２に記載されるタンパク質又は断片を有効成分とすることを特徴とするレプトスピラ病に対する感染防御活性を有する薬剤。
【請求項８】
レプトスピラ感染を防ぐためのワクチンであることを特徴とする請求項７記載の薬剤。
【請求項９】
請求項１に記載されるタンパク質又は断片、あるいは請求項２に記載されるタンパク質又は断片を含有することを特徴とするレプトスピラ病の診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レプトスピラタンパク質、これをコードする遺伝子、レプトスピラ病に対する感染防御活性を有する薬剤、及びレプトスピラ病の診断キットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
レプトスピラは、ヒト及びその他動物にレプトスピラ病を引き起こすスピロヘータの一種である。病原性レプトスピラには２３０以上の血清型が存在し、これら血清型はレプトスピラ細胞表層のLPSの糖鎖構造によって規定されている。レプトスピラ病の予防には、ワクチンの接種が有効であることは明らかとなっている。
【０００３】
しかし、現行のワクチンでは、血清型に特異性が強く、複数の血清型のレプトスピラの感染を防御出来することが困難であることも明らかになっている。そのため、複数の血清型のレプトスピラ感染に効果のある、新たなワクチンの開発が急務となっている。
【０００４】
特開２００１−１９０２８４号公報（特許文献１）においては、レプトスピラの病原性菌株に関連した、免疫原性を有し病原性レプトスピラに対する免疫応答を誘発することができるレプトスピラ膜からのレプトスピラタンパク質を含有する抗原製剤が開示されている。しかしながら、複数の血清型のレプトスピラ感染に効果のある、新たなワクチンの開発は、まだ充分には行われておらず、さらなる新規な薬剤のスクリーニングが必要とされている。
【特許文献１】特開２００１−１９０２８４号（請求項１）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、本発明の目的は、新規なレプトスピラタンパク質、これをコードする遺伝子、レプトスピラ病に対する感染防御活性を有する新規な薬剤、及びレプトスピラ病の診断キットを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
かかる実情において、本発明者らは、レプトスピラに感染したマウスの回復期血清及びヒト患者の回復期血清を用いて、レプトスピラ染色体DNA発現ライブラリーから抗原タンパク質をスクリーニングして得られた２種類のレプトスピラタンパク質LigA-m及びLigB-mが、マウスにおいて、レプトスピラに対する感染防御活性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明（１）は、下記（a）若しくは（b）のタンパク質、または下記（a）若しくは（b）のタンパク質の断片であって、（a）のタンパク質の感染防御活性を有するその断片を提供するものである。
（a）配列番号１のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigA-m
（b）配列番号１のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（a）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【０００８】
また、本発明（２）は、下記（c）若しくは（d）のタンパク質、または下記（c）若しくは（d）のタンパク質の断片であって、（c）のタンパク質の感染防御活性を有するその断片を提供するものである。
（c）配列番号２のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigB-m
（d）配列番号２のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（c）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【０００９】
また、本発明（３）は、下記（a）若しくは（b）のタンパク質、または下記（a）若しくは（b）のタンパク質の断片であって、（a）のタンパク質の感染防御活性を有する断片をコードするポリヌクレオチドを提供するものである。
（a）配列番号１のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigA-m
（b）配列番号１のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（a）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【００１０】
また、本発明（４）は、下記（c）若しくは（d）のタンパク質、または下記（c）若しくは（d）のタンパク質の断片であって、（c）のタンパク質の感染防御活性を有する断片をコードするポリヌクレオチドを提供するものである。
（c）配列番号２のアミノ酸配列を有するレプトスピラタンパク質LigB-m
（d）配列番号２のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（c）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質
【００１１】
また、本発明（５）は、レプトスピラタンパク質LigA-mをコードする配列番号３の塩基配列を有する遺伝子を提供するものである。
【００１２】
また、本発明（６）は、レプトスピラタンパク質LigB-mをコードする配列番号４の塩基配列を有する遺伝子を提供するものである。
【００１３】
また、本発明（７）は、前記発明（１）に記載されるタンパク質又は断片、あるいは前記発明（２）に記載されるタンパク質又は断片を有効成分とするレプトスピラ病に対する感染防御活性を有する薬剤を提供するものである。
【００１４】
本発明（８）は、レプトスピラ感染を防ぐためのワクチンである前記発明（７）記載の薬剤を提供するものである。かかる構成を採用することにより、本発明（８）は、前記発明（７）が奏する効果に加えて、レプトスピラ感染を予防する薬剤を提供することができるという効果を奏する。
【００１５】
本発明（９）は、前記発明（１）に記載されるタンパク質又は断片、あるいは前記発明（２）に記載されるタンパク質又は断片を含有するレプトスピラ病の診断キットを提供するものである。かかる構成を採用することにより、本発明（９）は、レプトスピラ病に対する診断標的を提供することができるという効果を奏する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の薬剤は、レプトスピラ病に対する感染防御活性を有する薬剤を提供することができる。また、本発明の診断キットは、レプトスピラ病に対する診断標的を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明の薬剤は、前記（a）若しくは（b）のタンパク質、または前記（a）若しくは（b）のタンパク質の断片であって、（a）のタンパク質の感染防御活性を有するその断片、あるいは、前記（c）若しくは（d）のタンパク質、または前記（c）若しくは（d）のタンパク質の断片であって、（c）のタンパク質の感染防御活性を有するその断片を有効成分として含有するものである。
【００１８】
レプトスピラタンパク質LigA-m（以下単にLigA-mと述べることがある）及びレプトスピラタンパク質LigB-m（以下単にLigB-mと述べることがある）は、病原性レプトスピラの任意の菌株に由来すると考えられる。これらのタンパク質を取り出す病原性レプトスピラとしては、レプトスピラインテロガンス血清型マニレ（Leptospira interrogans serovar manilae）が好ましい。この菌株は、例えば静岡県立大学微生物学教室を通して入手可能である。
【００１９】
本発明にかかるLigA-m及びLigB-mは、例えば、上記の菌株を用いて調製されたレプトスピラ染色体DNA発現ライブラリーを用いて、レプトスピラに感染したマウスの回復期血清又はヒト患者の回復期血清を用いた抗体スクリーニングによって同定できる。また、これらのタンパク質又はその断片は、例えば、そのcDNAを、大腸菌発現系を用いて発現させて得られた生成物を、精製して得ることができる。
【００２０】
断片は、LigA-mについては，感染防御薬剤としては1,157残基（アミノ酸第68〜第1,224残基）を含有すると好ましく、診断用キットにはC末端側のアミノ酸517残基（アミノ酸第708〜第1,224残基）を含有すると好ましい。LigB-mについては、感染防御薬剤としては1,124残基（アミノ酸第68〜第1,191残基）を含有すると好ましく，診断用キットにはC末端側のアミノ酸522残基（アミノ酸第670〜第1,191残基）を含有すると好ましい。
【００２１】
レプトスピラ染色体DNA発現ライブラリーは、公知の方法により調製することができるが、例えば、Faineらの方法（Leptospira and Leptospirosis, 2nd edn. MediSci, Melbourne 1999）により培養したレプトスピラインテロガンス血清型マニレから、Ausubel らの方法（Current protocols in molecular biology. John Wiley & Sons, Inc., New York. 1993）により抽出した染色体DNAを用いて、Stratagene(R)の方法（ZAP Express(R) Predigested Vector Kit and ZAP Express(R) Predigested Gigapack(R) Cloning Kits  instruction manual, Stratagene(R)）により調製されたものを用いることができる。また、抗体スクリーニングの方法は、公知の方法を用いることができるが、例えば、マウスの回復期血清およびヒト患者回復期血清を用いて、Sambrookらの方法（Molecular cloning, 2nd edn. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989 ）により抗体スクリーニングを行うことによりレプトスピラタンパク質LigA-mをコードする配列番号３の塩基配列を有する遺伝子及びレプトスピラタンパク質LigB-mをコードする配列番号４の塩基配列を有する遺伝子を所得することができる。
【００２２】
大腸菌発現系を用いた配列番号３の塩基配列を有する遺伝子及び配列番号４の塩基配列を有する遺伝子の発現の方法としては、公知の方法を用いることができるが、例えば、Pharmacia Biotech (登録商標名)の方法（GST Gene Fusion System, 3rdEdition, Revision 1, Pharmacia Biotech (登録商標名), 1997）により行うことができる。発現させる際の大腸菌発現ベクターの発現要素は、プロモーターとして、tacプロモーター、T5プロモーター等を用いることができ、これらの断片を発現させる際の発現要素は、プロモーターとして、tacプロモーター、T5プロモーター等を用いることができる。
【００２３】
また、配列番号１のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（a）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質（前記（b）のタンパク質）、及び前記（a）若しくは（b）のタンパク質の断片であり、（a）のタンパク質の感染防御活性を有する断片は、通常の組換えタンパク質製造法により、例えば、対応する塩基配列を有するポリヌクレオチドを合成して上記した方法により発現することにより得ることができる。ここで、（a）のタンパク質の感染防御活性とは、下記する実施例の感染防御試験で測定されるレプトスピラ病に対する感染防御活性を示す。さらに、配列番号１のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ（c）のタンパク質の感染防御活性を有するタンパク質（前記（d）のタンパク質）、及び前記（c）若しくは（d）のタンパク質の断片であり、（c）のタンパク質の感染防御活性を有する断片も同様にして得ることができる。
【００２４】
また、生成物の精製法としては、アフィニティークロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法などの公知の方法を用いることができる。
【００２５】
本発明の薬剤は、病原性レプトスピラに対する免疫応答を誘導するための薬剤組成物に有用である。該薬剤組成物は、本発明の薬剤を免疫原的有効量含有するものである。ここで免疫原的有効量とは、レプトスピラに対する感染防御活性を動物又はヒトにおいて誘導するのに必要な本発明の薬剤の量を示すことを意味する。
【００２６】
本発明の薬剤は、注射、急速注入、鼻咽頭吸収、皮膚吸収により非経口的に、あるいは経口的に投与し得る。非経口投与のための製薬上許容可能な担体調製物としては、滅菌あるいは水性または非水性の溶液、懸濁液および乳濁液が挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、注射可能有機エステル、例えばエチルオレエートである。閉塞用包帯用の担体は、皮膚透過性を増大し、抗原吸収を増強するために用い得る。経口投与のための液体投薬形態は一般に、液体投薬形態を包含するリポソーム溶液を包含し得る。リポソームを懸濁するための適切な形態としては、当業界で一般に用いられている不活性希釈剤、例えば精製水を含有する乳濁液、懸濁液、溶液、シロップおよびエリキシルが挙げられる。不活性希釈剤の他に、このような組成物は、湿潤剤、乳化剤および沈殿防止剤、ならびに甘味剤、風味剤および香料も含有し得る。
【００２７】
本発明の薬剤を含有する抗原製剤がアジュバントを含有することも可能である。アジュバントおよび抗原は、免疫系への提示の前に混合されるか、あるいは別々に、免疫感作される動物（ヒトを含む）の同一部位に提示される。アジュバントは、それらの組成に基づいて、大まかにいくつかの群に分けられる。
【００２８】
これらの群としては、油アジュバント（例えば、フロイントの完全および不完全アジュバント）、無機塩（例えば、AlK(SO4)2、AlNH4(SO4)、シリカ、ミョウバン、Al(OH)3、Ca3(PO4)2、カオリンおよび炭素）、ポリヌクレオチド（例えばポリICおよびポリAU酸）、ならびにある種の天然物質（例えば、結核菌Mycobacterium tuberculosisからのロウD、ならびにCorynebacterium parvum、百日咳菌Bordetella pertussisおよびブルセラ族の成員に見出される物質）が挙げられる。
【００２９】
また、本発明の薬剤は、レプトスピラ病を予防するためのワクチンに用いることができる。
【００３０】
さらに、本発明はLigA-m又はその断片、あるいは、LigB-m又はその断片を含有するレプトスピラ病の診断キットを提供する。該診断キットは、例えば、動物又はヒトの血清を用いたIgG-ELISA法による抗体反応に用いることによって、レプトスピラ病の診断に用いることができる。
【００３１】
本発明の薬剤又は診断キットは、ヒトの他、家畜やペットなどの動物にも用いることができる。
【００３２】
以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、これは単に例示であって、本発明を制限するものではない。
＜実施例１及び２で用いた試料＞
・レプトスピラ染色体DNA発現ライブラリー：段落００１７に記載した方法により調製された発現ライブラリーを用いた。また、該発現ライブラリーの作製には、レプトスピラインテロガンス血清型マニレ（Leptospira interrogans serovar manilae）を用い、該菌の培養は、段落００１７に記載した方法に従って行った。
・マウスとしては日本エスエルシー株式会社から入手したC3H/HeJマウスを用いた。
・大腸菌発現系に用いる大腸菌菌株としては、JM109およびBL21株を用いた。
・大腸菌発現ベクターの発現要素：tacプロモーター及びT5プロモーターを用いた。
・Dipstick法のキット：Pan-Bio 社製のキットを用いた。
・マイクロカプセル凝集試験は、日本凍結乾燥社製のキットを用いて行った。
【実施例１】
【００３３】
＜LigA-mおよびLigB-mの同定＞
レプトスピラに感染したマウスの回復期血清およびヒト患者回復期血清を用いて、レプトスピラ染色体DNA発現ライブラリーの抗体スクリーニングを段落００１７に記載した方法により行い、それぞれの血清に反応した２種類のレプトスピラタンパク質LigA-mおよびLigB-mを同定し、レプトスピラタンパク質LigA-mをコードする配列番号３に記載される塩基配列を有する遺伝子、及びレプトスピラタンパク質LigB-mをコードする配列番号４に記載される塩基配列を有する遺伝子を特定した。
【００３４】
＜LigA-mおよびLigB-mの発現＞
大腸菌発現系において、LigA-mのC末端側残基517アミノ酸残基（約55kDa）とグルタチオントランスフェラーゼ（以下GSTと述べる）との融合タンパク質（以下LigA-m融合タンパク質と述べる）を発現するとともに、LigB-mのC末端側521アミノ酸残基（約55kDa）とGSTとの融合タンパク質（以下LigB-m融合タンパク質と述べる）およびGSTを発現し、それぞれを、グルタチオン‐セファロース4Bカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィー法に従って精製して、精製LigA-m融合タンパク質、並びに精製LigB-m融合タンパク質及びGSTを得た。
【００３５】
＜IgG-ELISA法によるレプトスピラ病の診断＞
精製LigA-m融合タンパク質， LigB-m融合タンパク質及びGST100μl/ウェル（120ng/ウェル）をそれぞれ96ウェルEIA/RIAプレート（COSTAR社製）に吸着させ、該プレートに200μlの2％BSA/0.05% Tween20加トリス/塩酸バッファー（BSA/TBST）を添加してブロッキングを行った後、BSA/TBSTで50倍に希釈したレプトスピラ血清型マニレ（manilae）に感染した患者血清100μl及びレプトスピラ病陰性のヒト血清100μl、並びにレプトスピラ血清型オータムナリス（autumnalis）、レプトスピラ血清型ヘブドマディス（hebdomadis）、レプトスピラ血清型イクテロヘモラジエ（icterohaemorrhagiae）、レプトスピラ血清型ジャバニカ（javanica）、及びレプトスピラ血清型ピロゲネス（pyrogenes）に感染した患者から得られた急性期及び回復期の患者血清100μlを、それぞれ添加して37℃で２時間反応させた。200μlの0.05％Tween20加トリス/塩酸バッファー（TBST）で洗浄後、2次抗体（抗ヒトIgG抗体）と反応させ，ABTS（2,2’-アジノビス(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホネート、Pierce社製)を用いて、特異反応の検出により抗体価を測定した。レプトスピラ病の患者については、顕微鏡下凝集試験（以下、MATと言うことがある）によってレプトスピラ病に感染したことを確認し、レプトスピラ陰性の患者については、MAT、マイクロカプセル凝集試験およびDipstick法によって、陰性であることを確認した。レプトスピラ血清型マニレ（manilae）に感染した患者血清及びレプトスピラ病陰性のヒト血清を用いた抗体価の測定結果を図１に示す。レプトスピラ血清型オータムナリス（autumnalis）、レプトスピラ血清型ヘブドマディス（hebdomadis）、レプトスピラ血清型イクテロヘモラジエ（icterohaemorrhagiae）、レプトスピラ血清型ジャバニ（javanica）、及びレプトスピラ血清型ピロゲネス（pyrogenes）に感染した急性期及び回復期のヒト血清を用いた抗体価の測定結果を図２に示す。
【００３６】
図１の結果から、染色体ライブラリー作製に用いた血清型マニレ（manilae）に感染した患者血清10検体は、精製LigA-m融合タンパク質及び精製LigB-m融合タンパク質対して、共に陰性患者の血清３検体に比べて高い抗体価を示すことがわかった。
【００３７】
図２の結果から、マニレ（manilae）以外の血清型に感染したことがMATにより証明されている患者の急性期と回復期の血清合計19検体の抗体価を比較した結果、回復期血清で抗体価の上昇が認められた。このことから、LigA-m（図２（Ａ））およびLigB-m（図２（Ｂ））は、複数のレストスピラの血清型に対して回復期に生じる抗体の抗原となる構造を保持していることが示唆された。
【実施例２】
【００３８】
＜感染防御試験＞
大腸菌発現系を用いて、LigA-mとヒスチジンタグ（His-tag）がN末端に付加された組換えタンパク質（以下His/LigA-mと述べる）、LigB-mとヒスチジンタグ（His-tag）がN末端に付加された融合した組換えタンパク質（以下His/LigB -mと述べる）、及びヒスチジンタグ（His-tag）がN末端に付加されたGST（以下、His/GSTと述べる）を発現し、Ni-NTAカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィー法に従ってそれぞれ精製した。
【００３９】
10μgの精製His/LigA-m及び10μgの精製His/LigB -mの組換えタンパク質合計20μgを完全フロイント・アジュバント（complete Freund’s adjuvant、以下FCAと述べる）と混合し、得られた混合物を、４週齢のC3H/HeJマウス５頭の皮下に注入するとともに、His/GST10μgをFCAと混合した後、得られた混合物を４週齢のC3H/HeJマウス５頭の皮下に注入し、さらに２週間後及び４週間後に、それぞれの組換えタンパク質10μgを４週齢のC3H/HeJマウス５頭の腹腔内に注入し、追加免疫を行った。2回目の追加免疫１週間後に、1×106細胞のレプトスピラ血清型マニレ（Leptospira interrogans strain UP-MMC-NIID）を腹腔内投与してレプトスピラに感染させ、その後３週間マウスの生死の確認を行った。また同時に、何も免疫していない９週齢のC3H/HeJマウスにも等量のレプトスピラ血清型マニレ（Leptospira interrogans strain UP-MMC-NIID）を投与し、感染後３週間マウスの生死の確認を行った。結果を、表１に示す。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
感染防御試験をマウスを用いて行ったところ、表１に記載されるように、何も免疫していないマウスでは５頭中４頭が、また、His/GSTを免疫したマウスでは５頭中５頭が、レプトスピラの感染によって感染後21日目までに死亡したが、LigA-mとLigB-mを同時に免疫したマウスは、５頭全てが感染後21日目まで生存した。この結果、レプトスピラのタンパク質抗原LigA-mおよびLigB-mは、マウスにおいて感染防御活性を誘導できることが明らかとなった。これらの結果は、LigA-m、LigB-mが、レプトスピラ感染を防御できるワクチン候補になり得ることを示している。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】レプトスピラ血清型マニレ（manilae）に感染した患者血清及びレプトスピラ病陰性のヒト血清を用いたIgG-ELISA法による抗体価の測定結果を示す図である。
【図２】レプトスピラ血清型オータムナリス（autumnalis）、レプトスピラ血清型ヘブドマディス（hebdomadis）、レプトスピラ血清型イクテロヘモラジエ（icterohaemorrhagiae）、レプトスピラ血清型ジャバニカ（javanica）、及びレプトスピラ血清型ピロゲネス（pyrogenes）型に感染した急性期及び回復期のヒト患者血清を用いたIgG-ELISA法による抗体価の測定結果を示す図であり、（Ａ）はLigA-mを、（Ｂ）はLigB-mを示す。
【配列表フリーテキスト】
【００４３】
配列番号１及び２は、それぞれ、レプトスピラタンパク質LigA-m及びレプトスピラタンパク質LigB-mのアミノ酸配列を示し、配列番号３及び４は、それぞれ、レプトスピラタンパク質LigA-mをコードする遺伝子及びレプトスピラタンパク質LigB-mをコードする遺伝子が有する塩基配列を示す。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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