(57)【要約】【課題】  海水の塩濃度からそれ以下の幅広い塩濃度において石油類の分解活性に優れた微生物、およびその微生物を用いた石油類の処理方法を提供する。【解決手段】  低塩濃度から海水塩濃度までの環境において石油類の分解活性を有する、ハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）に属するＭＳ０２−０６３菌株、特には赤色色素を産生するハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）に属するＭＳ０２−０６３菌株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９６３５）であるＭＳ０２−０６３菌株、およびそれを用いて石油類を分解する石油類の処理方法である。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
低塩濃度から海水塩濃度までの環境において石油類の分解活性を有する、ハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）に属するＭＳ０２−０６３菌株。
【請求項２】
赤色色素を産生するハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）に属するＭＳ０２−０６３菌株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９６３５）である請求項１記載のＭＳ０２−０６３菌株。
【請求項３】
請求項１または２記載のＭＳ０２−０６３菌株を用いて石油類を分解することを特徴とする石油類の処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海水の塩濃度からそれ以下の幅広い塩濃度において石油類の分解活性に優れた微生物、およびその微生物を用いた石油類の処理方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
大型タンカーの海難事故や油田事故または石油類を使用する工事等からの含油廃水の流出は、海洋などの汚染として非常に深刻な環境問題である。いったん莫大な量の油が環境へ流出してしまうと、海洋沿岸はもちろん、汽水域である河川口など広範囲にわたり環境破壊をもたらす。
【０００３】
従来、このような流出油の除去に、もっぱら高コストでメンテナンスを必要とする膜分離法や燃焼法などの処理が施されてきた。しかし、かかる処理方法では完全に流出油を取り除くことは困難であり、今日、より有効な処理方法の確立が非常に重要な課題となってきている。
【０００４】
ところで、流出事故や工場からの含油廃水等による油汚染は、主に沿岸部分であり、詳細には海岸や河川口といった部分である。従来から、このような流出事故の石油除去処理や含油廃水を処理するため、石油分解能を有する微生物を用いるバイオレメディエーションも数多く提案され、試みられてきた。
【０００５】
例えば、特許文献１には、高温で石油類の分解活性を有する新菌株ロドコッカス  ｓｐ．Ｉ−７−２株、およびこの菌株を用いた石油類の処理方法が開示されており、微生物による石油汚染の効率的な分解除去が可能であると述べられている。
【０００６】
また、特許文献２には、石油分解微生物及びその栄養源を、水浮遊性支持体に担持させた石油分解材と、それを用いて石油により汚染されている水面から石油を除去する方法が開示されており、この方法によると、海洋表面などに浮遊している石油を、海洋生物に悪影響を与えることなく分解除去することができる上、生分解性の素材を用いれば、自然界に二次的公害を与えることがないと述べられている。
【０００７】
さらに、特許文献３には、重油分解能を有する、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）に属するＦＥＲＭＢＰ−７０４６菌株が、安価に調製でき、分解除去作業および保存・輸送等が簡便に行える重油分解菌として開示されている。その他にも、海洋汚染の原因である流出した石油類を微生物にり分解除去する技術は多数提案されている（特許文献４、５等）
【０００８】
【特許文献１】特開平７−３１３１４４号公報
【特許文献２】特開平７−１４４１９９号公報
【特許文献３】特開２０００−３４２２５０号公報
【特許文献４】特開平１１−９２７５５号公報
【特許文献５】特開２０００−２６２３００号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、これまでに提案された微生物による石油類の分解処理には実用化に至るまでに解決しなければならない課題も多く含まれている。例えば、近海領域でタンカーからの石油流出事故が生じた場合、事故現場に近い沿岸や河川口が汚染され、沿岸ではもちろん海水の塩濃度が約３％であるが、河川口では河川からの真水の流入により塩濃度が低下している。よって、このように海水の塩濃度を上限として、河川口付近での低塩濃度でも石油類分解活性を有する微生物が望まれているが、かかる特性を十分に備えた微生物は未だ知られていないのが実状である。
【００１０】
そこで本発明の目的は、海水の塩濃度からそれ以下の幅広い塩濃度において石油類の分解活性に優れた微生物、およびその微生物を用いた石油類の処理方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、海水の塩濃度からそれ以下の幅広い塩濃度において石油類分解能を有する微生物を求めて鋭意研究努力を重ねた結果、特有な赤色色素の産生を持ち合わせた石油類分解活性を有する微生物を発見し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
即ち、本発明は、低塩濃度から海水塩濃度までの環境において石油類の分解活性を有するハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）に属するＭＳ０２−０６３菌株である。  
【００１３】
また、本発明は、上記ＭＳ０２−０６３菌株を用いて石油類を分解することを特徴とする石油類の処理方法である。
【００１４】
本発明者らは、有用な環境微生物を探索することを目的として環境微生物の分離培養・石油類分解活性能のスクリーニングをしたところ、特有な赤色色素の産生能を持ち合わせた石油類分解活性を有するＭＳ０２−０６３菌株を発見するに至った。このＭＳ０２−０６３菌株は、特有な色素を産生する微生物であるため、これをバイオレメディエーションとして散布してモニタリングすることにより、汚染現場における流出石油類の残存率等の測定が可能となる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の新規微生物ＭＳ０２−０６３菌株は、約３％程度の海水の塩濃度からそれ以下の幅広い塩濃度において石油類の分解活性に優れた効果を奏する。また、石油類分解能とともに、赤色色素産生能をも有するため、石油類処理において赤色色素を観察することにより、廃油処理のモニタリングが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の微生物ＭＳ０２−０６３菌株は、大村湾喜々津における汽水域より得られた泥土より、イースト・麦芽寒天海水培地（酵母エキス０．４％、麦芽エキス１％、デキストロース０．４％、寒天１．５％、５０％人工海水）で培養し、形成されたコロニーを分離することにより取得したものである。
【００１７】
このようにして得られた石油類分解能を有する赤色色素産生微生物、ハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）ＭＳ０２−０６３菌株は、非発酵性陰性桿菌で、運動性はないことを特徴とする。また、本菌株は、寒天培地上で赤色のコロニーとして生育し、液体培地では懸濁状の赤色を呈し、３日から７日間培養することで遊走子を有する細胞を産する能力を有することを特徴とする。さらに、生育には約０．５％以上の塩が必要であることを特徴する。その菌学的性質を下記の表１に示す。
【００１８】
【表１】
2005261310.tif 000002
＊炭素源の資化性試験はバイオログシステムを使用した。
【００１９】
以上の菌学的性質及び１６ｓＲＮＡの解析結果から、本発明の微生物はハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）に属することが分かった。ハヘラ属（Ｈａｈｅｌｌａ）の菌で遊走子を有する細胞を産生し海水中で容易に拡散し、顕著な石油類分解活性を示す性質を有するものは従来全く知られていない。本発明のプロジギオシン産生微生物ＭＳ０２−０６３菌株は、文献未掲載の新規な菌であり、特許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９６３５として寄託されている。
【００２０】
かかる微生物ＭＳ０２−０６３菌株を培養する方法は、特に制限されるべきものではなく、例えば、固体培地にコロニーを作らせて、そのコロニーを液体培地で培養してもよい。本発明に用いる培地は、一般的な栄養培地であれば使用でき、例えば、ＹＧＰ培地−３０％人工海水（イースト抽出物  １．２５％、ペプトン  １．２５％、グルコース  ３％）を好適に使用することができる。
【００２１】
培養温度は、１５℃〜３７℃までの培養が可能であるが、好ましくは２０℃〜３０℃である。また、培養時のｐＨは、５．５〜１０、好ましくはｐＨ６．０〜９．０である。さらに、培地の塩濃度は、ＮａＣｌ量として０．５〜３．０％において増殖可能であるが、好ましくは０．５〜１．５％であり、より好ましくは約１％である。
【００２２】
本菌株は、流出油や工場からの含油廃水の処理等に使用でき、特に、河川口付近の汽水域から海洋および／またはその沿岸域での石油類の分解処理に好適に利用することができる。本菌株の使用形態にあっては、その生細胞、凍結物、凍結乾燥物等があるが、これに制限されるものではない。
【実施例】
【００２３】
以下に、実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明するが、本発明がかかる実施例のみに限定されないことは言うまでもない。
実験例１
ＹＰＧ寒天培地−３０％人工海水（イースト抽出物  １．２５％、ペプトン  １．２５％、グルコース  ３％、寒天２％）の入ったシャーレにＭＳ０２−０６３菌株を１エーゼ植え付け、２８℃で、７日間培養し、コロニーを形成させた。このコロニーを滅菌綿棒でかき集め、３０％滅菌人工海水に懸濁させ、本菌株懸濁液を作製した。０．５％硫酸アンモニウム、０．５％β−ビタミン、１０％灯油、３０％人工海水から構成される液体培地に本菌株懸濁液を接種した。培養容器は灯油の蒸散を防ぐ目的で、５０ｍｌ容器に１０ｍｌの培地を入れ、密栓して培養した。これを２８℃で振盪培養し、経時的菌量の変化および灯油減少率を測定した。なお、灯油の減少率は培養容器を遠心し（３０００ｒｐｍ、１０分間）、灯油部分をピペットで回収し、その体積の減少率を微生物消費量とした。
【００２４】
このようにして得られた灯油含有培地中での生菌数および灯油減少率を図１に示す。なお、菌体が赤色色素を呈するため、簡単に本菌をモニタリングすることができた。
【００２５】
実験例２
また、ＮａＣｌ濃度を変化させ、ＭＳ０２−０６３菌株の培養を行った。１５０ｍｌのＹＰＧ培地−３０％人工海水（イースト抽出物  １．２５％、ペプトン  １．２５％、グルコース  ３％）の入った５００ｍｌバッフルフラスコ４本に、すでにＹＰＧ寒天培地−３０％人工海水で前培養したＭＳ０２−０６３菌株を１エーゼ植え付け、２８℃で振盪培養した。２日後、培地は鮮明な赤色を呈していた。培養液を遠心管に集め、３０００ｒｐｍ、２０分間遠心することにより、上清を回収した。この培養上清を凍結乾燥により、濃縮乾固した。各ＮａＣｌ濃度における生物体量の乾燥重量を測定した結果を図２に示す。図２に示す結果より、培養ＮａＣｌ濃度が０．５％という低濃度から培養が可能であることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
本発明の、赤色色素を産生するとともに石油類分解能を有するＭＳ０２−０６３菌株は、特に海洋沿岸域の廃油処理において有用である。また、本菌株をモニタリングすることにより、簡単に廃油処理の進行程度を知ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】ＭＳ０２−０６３菌株の灯油含有培地中における生菌数および灯油減少率を示すグラフである。
【図２】ＭＳ０２−０６３菌株の培養ＮａＣｌ濃度と生物体量の関係を示すグラフである。
【図１】
2005261310.tif 000003
【図２】
2005261310.tif 000004