(57)【要約】【課題】  生体内への鉄の吸収率が高い鉄補給剤、鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤、食品添加剤、及び食品組成物を提供する。【解決手段】  本発明者らは、シデロフォアと３価鉄イオンとのキレート錯体が生体内への吸収率が高いこと、生体内に吸収されて、血中ヘモグロビン濃度、血清中鉄濃度、及び肝臓における貯蔵鉄濃度を有意に増加させること、及び生体機能に悪影響を及ぼさないことを見出した。この知見に基づき、本発明は、シデロフォアと３価鉄イオンとを、好ましくはキレート錯体の形態で含む鉄補給剤、鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤、食品添加剤、及び食品組成物を提供するものである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄補給剤。
【請求項２】
シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体の形態で含まれている請求項１に記載の鉄補給剤。
【請求項３】
シデロフォアがヒドロキサム酸を含むものである請求項１又は２に記載の鉄補給剤。
【請求項４】
上記キレート錯体がフェリクローム類である請求項３に記載の鉄補給剤。
【請求項５】
フェリクローム類がフェリクリシンである請求項４に記載の鉄補給剤。
【請求項６】
シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【請求項７】
シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体の形態で含まれている請求項６に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【請求項８】
シデロフォアがヒドロキサム酸を含むものである請求項６又は７に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【請求項９】
上記キレート錯体がフェリクローム類である請求項８に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【請求項１０】
フェリクローム類がフェリクリシンである請求項９に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【請求項１１】
シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄補給用食品添加剤。
【請求項１２】
シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄欠乏性貧血の予防又は改善用食品添加剤。
【請求項１３】
シデロフォアと３価鉄イオンとを含む食品組成物。
【請求項１４】
シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体の形態で含まれている請求項１３に記載の食品組成物。
【請求項１５】
固形状の食品組成物中に、シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体に換算して０．１〜５ｍｇ／ｇ含まれている請求項１３又は１４に記載の食品組成物。
【請求項１６】
液体状の食品組成物中に、シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体に換算して０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌ含まれている請求項１３又は１４に記載の食品組成物。
【請求項１７】
食品が、酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、清涼飲料水、乳飲料、及びスープからなる群より選ばれる飲料である請求項１６に記載の食品組成物。
【請求項１８】
鉄補給用の請求項１３〜１７のいずれかに記載の食品組成物。
【請求項１９】
鉄欠乏性貧血の予防又は改善用の請求項１３〜１７のいずれかに記載の食品組成物。
【請求項２０】
シデロフォアと３価鉄イオンとを含む、以下の(i)〜(vi)のいずれかの食品組成物。
(i)  鉄を補給する作用を有することを特徴とし、鉄を補給するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(ii)  鉄を補助する作用を有することを特徴とし、鉄を補助するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(iii)   鉄を強化する作用を有することを特徴とし、鉄を強化するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(iv)  鉄を付加する作用を有することを特徴とし、鉄を付加するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(v)  体内の鉄含量を正常に保つ作用を有することを特徴とし、体内の鉄含量を正常に保つために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(vi)  体内の鉄不足を解消又は軽減する作用を有することを特徴とし、体内の鉄不足を解消又は軽減するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シデロフォアを利用した鉄補給剤、鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤、食品添加剤、及び食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本人の食生活及び健康に対する意識は高くなり、食品に安全性及び機能性が求められるようになってきた。通常の食事で不足する成分を補うため栄養補助食品などを摂取する人の割合もますます増えてきている。一方、国民栄養調査によると、鉄の平均摂取量は性別や年代に関係なく、所要量を下回る状態が続いている。また、鉄は吸収率が低く、摂取した量のほとんどが排泄されてしまうことが知られている。このことから、鉄は積極的に摂取する必要がある栄養素のひとつである。
鉄が不足した状態が長く続くと鉄欠乏性貧血になるばかりでなく、運動及び学習能力が低下したり、免疫力が低下したりするなど、人体に様々な悪影響を及ぼす。鉄欠乏性貧血を改善するには、一般に、ヒトが吸収し易いヘム鉄を多く含む畜肉又は魚類を摂取することが有効といわれている。しかし、畜肉又は魚類を多量に摂取するには食習慣を大きく変える必要があり、またこれらを過剰に摂取すると栄養のバランスが悪くなる。一方、野菜などの植物に含まれる鉄は非ヘム鉄であり、非ヘム鉄の吸収率はヘム鉄の吸収率の１／２から１／５程度である。さらに非ヘム鉄は食物繊維や緑茶に含まれるカテキン等によって吸収が阻害され易い。従って、植物から充分量の鉄を摂ることは現実的でない。
【０００３】
従来、鉄の補給により貧血を予防又は治療するために、ピロリン酸鉄、クエン酸鉄、硫酸鉄等の各種鉄剤が用いられている。しかし、これらの鉄剤に含まれる鉄は一般に生体内で利用率が低いため、貧血の予防又は治療効果を得るためには、多量を摂取する必要がある。しかし、これらの鉄塩は多量の摂取により胃腸粘膜障害又は嘔吐などを引き起こす恐れがあるため、短期間に多量を摂取することは難しい。従って、貧血予防又は治療効果を得るためには、これらの鉄塩を長期間に亘り摂取する必要がある。
従来使用されているその他の鉄補給剤としては、乳汁に含まれるラクトフェリンが挙げられる。ラクトフェリンは鉄結合能を持つ糖タンパクであることが知られている。特許文献１は、鉄−ラクトフェリン複合体の増血効果及びその製造方法を開示している。しかし、鉄−ラクトフェリン複合体は、溶解性が悪く、また鉄の所要量に対し多量のラクトフェリンを摂取する必要があることから、鉄剤としては実用化するには多くの課題が残されている。
また非特許文献１は、ＥＤＴＡ−ＦｅＮａを有効成分とする鉄強化剤の吸収の検討結果を開示している。しかし、ＥＤＴＡは生体内の多くの微量金属に対し強いキレート化作用を有するため、生体内の必要金属をキレート化により不活性化する可能性があることから、ＥＤＴＡ−ＦｅＮａを有効成分とする鉄強化剤の長期継続摂取は健康面で懸念される。
一方、清酒の醸造においては、カビの一種である麹菌（アスペルギルス・オリゼ；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）を蒸米上に生育させて「麹」を作製し、清酒醸造の副原料として利用している。この麹造りにおいて、麹菌が大量のフェリクローム類、主にデフェリフェリクリシンを生産し、このフェリクローム類が酒造用水由来の鉄イオンをキレート化することにより清酒が着色することが古くから知られている。このように、麹菌は多量のフェリクローム類を生産することが知られているが、清酒醸造においてはフェリクローム類は清酒の品質劣化の原因であることから、その有効利用は全く考えられていない。
【特許文献１】日本国特許第２８８４０４５号
【非特許文献１】「微量栄養素研究」、第１８集、第２５〜２８頁（２００１）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、生体内への鉄の吸収率が高い鉄補給剤、鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤、食品添加剤、及び食品組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題を解決するために本発明者は研究を重ね、以下の知見を得た。
(1)  鉄欠乏による貧血は、肝臓の貯蔵鉄が欠乏する第１段階、血清中の鉄が欠乏する第２段階、及び、ヘモグロビン合成能が低下して貧血症状が現れる第３段階を経て進行する。また鉄欠乏性貧血はこの逆の段階を経て快復する。
【０００６】
シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、鉄欠乏性貧血ラットに摂取させた場合、生体内に効率的に吸収されて血清中の鉄濃度及び血中ヘモグロビン濃度を増加させ、さらに肝臓の貯蔵鉄も増加させる。従って、シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、鉄欠乏による各種症状、特に鉄欠乏性貧血の予防、改善又は治療剤として有用である。
(2)  シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、ラットに摂取させた場合、体重増加量、摂食量、肝機能及び腎機能に悪影響を与えないため、安全な鉄補給剤である。
(3)  シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、水に対する溶解性が高く、鉄化合物が沈殿することがある酸性条件下でも高い水溶性を示すため、液状食品への添加剤として使用し易い。
(4)  シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、広いｐＨ範囲の下での加熱加圧に対して極めて安定であり、変性しない。従って、医薬組成物又は食品組成物の成分として使用する場合に、これらの組成物を加熱加圧滅菌できる。
(5)  シデロフォアの３価鉄キレート錯体を０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌ含む液体状食品組成物は、無理のない摂取スケジュールで鉄欠乏性貧血を効果的に予防又は改善できるとともに、副作用が生じない。
(6)   シデロフォアの３価鉄キレート錯体を０．１〜５ｍｇ／ｇ含む固体状食品組成物は、無理のない摂取スケジュールで鉄欠乏性貧血を効果的に予防又は改善できるとともに、副作用が生じない。
【０００７】
本発明は上記知見に基づき完成されたものであり、以下の鉄補給剤などを提供する。
【０００８】
項１．  シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄補給剤。
【０００９】
項２．  シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体の形態で含まれている項１に記載の鉄補給剤。
【００１０】
項３．  シデロフォアがヒドロキサム酸を含むものである項１又は２に記載の鉄補給剤。
【００１１】
項４．  上記キレート錯体がフェリクローム類である項３に記載の鉄補給剤。
【００１２】
項５．  フェリクローム類がフェリクリシンである項４に記載の鉄補給剤。
【００１３】
項６．  シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【００１４】
項７．  シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体の形態で含まれている項６に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【００１５】
項８．  シデロフォアがヒドロキサム酸を含むものである項６又は７に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【００１６】
項９．  上記キレート錯体がフェリクローム類である項８に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【００１７】
項１０．  フェリクローム類がフェリクリシンである項９に記載の鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤。
【００１８】
項１１．  シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄補給用食品添加剤。
【００１９】
項１２．  シデロフォアと３価鉄イオンとを含む鉄欠乏性貧血の予防又は改善用食品添加剤。
【００２０】
項１３．  シデロフォアと３価鉄イオンとを含む食品組成物。
【００２１】
項１４．  シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体の形態で含まれている項１３に記載の食品組成物。
【００２２】
項１５．  固形状の食品組成物中に、シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体に換算して０．１〜５ｍｇ／ｇ含まれている項１３又は１４に記載の食品組成物。
【００２３】
項１６．  液体状の食品組成物中に、シデロフォアと３価鉄イオンとがキレート錯体に換算して０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌ含まれている項１３又は１４に記載の食品組成物。
【００２４】
項１７．  食品が、酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、清涼飲料水、乳飲料、及びスープからなる群より選ばれる飲料である項１６に記載の食品組成物。
【００２５】
項１８．  鉄補給用の項１３〜１７のいずれかに記載の食品組成物。
【００２６】
項１９．   鉄欠乏性貧血の予防又は改善用の項１３〜１７のいずれかに記載の食品組成物。
【００２７】
項２０．  シデロフォアと３価鉄イオンとを含む、以下の(i)〜(vi)のいずれかの食品組成物。
(i)  鉄を補給する作用を有することを特徴とし、鉄を補給するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(ii)  鉄を補助する作用を有することを特徴とし、鉄を補助するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(iii)   鉄を強化する作用を有することを特徴とし、鉄を強化するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(iv)  鉄を付加する作用を有することを特徴とし、鉄を付加するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(v)  体内の鉄含量を正常に保つ作用を有することを特徴とし、体内の鉄含量を正常に保つために用いられる旨の表示を付した食品組成物
(vi)  体内の鉄不足を解消又は軽減する作用を有することを特徴とし、体内の鉄不足を解消又は軽減するために用いられる旨の表示を付した食品組成物
【発明の効果】
【００２８】
従来２価鉄イオンの方が生体内への吸収率が高いといわれているが、本発明者により、シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、生体内に効率的に吸収されて、血清中の鉄濃度、血中ヘモグロビン濃度、及び肝臓中の貯蔵鉄濃度を増加させることが始めて見出された。
【００２９】
従って、シデロフォアと３価鉄イオンとを含む組成物は、鉄補給剤、又は鉄欠乏性貧血の予防若しくは治療剤のような医薬製剤として好適に使用できる。また、シデロフォアと３価鉄イオンとを含む食品組成物は、鉄を補給し、鉄欠乏性貧血を予防又は改善することができる。また、シデロフォアと３価鉄イオンとを含む組成物は、食品に添加することにより、食品に、鉄補給作用や鉄欠乏性貧血の予防又は改善作用を与えることができる。
【００３０】
この鉄キレート錯体は、清酒や酒粕のような麹を用いた食品に元来含まれていることから、その安全性は歴史的に証明されている。また後述するように、肝機能・腎機能、体重増加量、摂食量などを低下させず、生体に悪影響を及ぼさないことが判明した。従って、鉄欠乏による各種症状の改善又は治療のためのみならず、予防のために継続的に使用するのに適している。同様に、健常人が摂取する機能性食品又は特定保健用食品などとしても好適である。
【００３１】
また、シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、麹を用いた食品に元来含まれていることからも分かるように、強い味や臭いを有さないため、医薬品や食品の成分、特に食品添加物として使用し易い。
また、水に溶解し易いため、シロップ剤のような剤型に成型し易く、また液状食品の添加物として使用し易い。また低ｐＨの溶液にも溶解し易いため、ドレッシングのような酸性液状食品にも添加できる。特に、鉄化合物のいくつかはｐＨ＝４以下の溶液中で沈殿を生じることがあるが、シデロフォアはこのような酸性溶液中でも高い水溶性を示すことが特長の一つである。
【００３２】
また、高温高圧処理に対して耐性を示し、高温高圧滅菌によっても変性しない又は変性し難いため、医薬品又は食品の成分として使用する場合に、加熱加圧滅菌できる。特に加圧処理に耐性を示すことから、殺菌条件の厳しいレトルト食品への添加剤としても利用できる。さらに、広いｐＨ範囲で熱及び圧力に耐性を示すことから、医薬又は食品に添加する場合に、医薬又は食品の製造工程を制限せず、多様な製造工程が可能になる。
【００３３】
さらに、一般に配位子と金属イオンとが別個に存在するより錯体を形成する方が低エネルギー状態、即ち化学的に安定な状態になる。このことから、シデロフォアには鉄イオンが示す過酸化物生成反応の促進作用が見られない。（Ｍｅｔａｌ．Ｌｏｎｓ  Ｂｉｏｌ．Ｓｙｓｔ．，Ｖｏｌ３５，ｐ３７）このように、生体に有害な過酸化物生成を促進しない点でも、シデロフォアは食品や医薬品として利用価値が高い。
【００３４】
さらに、シデロフォアと３価鉄イオンとのキレート錯体は、一般に鉄を不溶化させる食品成分として知られているフィチン酸やタンニン酸のような物質の存在下でも不溶化され難いことから、シデロフォア及び３価鉄イオンはどのような食品に含まれる場合にも、鉄補給効果や鉄欠乏性貧血の予防又は治療効果が効率的に得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
以下、本発明を詳細に説明する。
(I)鉄補給剤・鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤
本発明の鉄補給剤及び鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤は、シデロフォアと３価鉄イオンとを含み、特にこれを有効成分として含む。シデロフォアと３価鉄イオンとは別々に含まれていてもよく、又は、キレート錯体として含まれていてもよい。
シデロフォア
「シデロフォア」には、３価鉄イオンをキレート化できる化合物が含まれる。
【００３６】
シデロフォアの由来は特に限定されず、どのような生物に由来するものであってもよい。多くの微生物は、外界の鉄濃度が低いときに必須成分である鉄を効率的に取り込むためにシデロフォアを生産する。微生物は容易に増殖させることができるため、微生物を用いることによりシデロフォアを容易に大量生産することができる。この点で微生物に由来するシデロフォアが好ましい。さらに、シデロフォア合成酵素群をコードする遺伝子の組換えによりシデロフォアを多量に生産する宿主を容易に作製できる点でも、微生物に由来するシデロフォアが好ましい。
【００３７】
微生物由来のシデロフォアの種類は特に限定されない。例えば、シデロフォアと３価鉄イオンとのキレート錯体として、エンテロバクチン、ビブリオバクチン、アグロバクチン、アングイバクチンのようなカテコール類；コプロゲン、フェリクローム類、フェリオキサミン、Ｎ，Ｎ'，Ｎ''―トリアセチルフザリニンＣのようなヒドロキサメート類；及びリゾフェリンのようなポリカルボキシレート類などが挙げられる。
【００３８】
特に、鉄キレート力の点で、ヒドロキサメート類（ヒドロキサム酸を含むシデロフォア）が好ましい。その中でも安定性の点で、環状であるフェリクローム類がより好ましい。
【００３９】
フェリクローム類は、３個のヒドロキサム酸を含む環状ペプチド化合物の総称であり、下記一般式(1)で表される化合物を含む。
【００４０】
【化１】
2005225874.tif 000002
（式中、R1は水素原子、又はヒドロキシメチル基を示し；Ｒ2は水素原子、メチル基又はヒドロキシメチル基を示し；Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5は、同一又は異なって、メチル基、Ｎ5−（トランス−５−ヒドロキシ−３−メチルペント−２−エノイル）基、Ｎ5−（シス−５−ヒドロキシ−３−メチルペント−２−エノイル）基、又はＮ5−（トランス−４−カルボキシ−３−メチルペント−２−エノイル）基を示す。）
一般式（１）の化合物の中では、フェリクローム、ジグリシルフェリクローム、フェリクリシン、フェリクロームＣ、フェリクロシン、アスペルクロームＤ１、アスペルクロームＢ１、フェリブリン、フェリロジン、フェリクロームＡ、デス（ジセリルグリシル）フェリロジン（フェリロジンにおいて＝Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−を除いた化合物）が好ましく、フェリクリシンが最も好ましい。
【００４１】
これらの化合物の一般式(1)における官能基であるＲ1〜Ｒ5を以下の表１にまとめて示す。
【００４２】
【表１】
2005225874.tif 000003
これらのフェリクローム類は、アスペルギルス属、ニューロスポラ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）属、ウスティラゴ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ）属などの真菌により生産される。アスペルギルス属糸状菌であるアスペルギルス・オリゼは、清酒、味噌、醤油などの生産において使用されてきたため、ヒトは古くからフェリクローム類を摂取してきた。従って、フェリクロームは、その安全性が歴史的に確認されている点で好ましい。麹菌が生産するフェリクローム類の中でもフェリクリシンは、アスペルギルス・オリゼが比較的多量に生産するため、生産性がよい点で好ましい。
【００４３】
本発明において、シデロフォアは、天然型シデロフォアの他、第二鉄のキレート化作用を有する天然型シデロフォアの誘導体も使用できる。天然型シデロフォアの誘導体としては、アセチル化、ニトロ化したものや、アミノ酸の一部が置換されたもの等が挙げられる。
【００４４】
シデロフォアは、生物から回収することにより製造できる。生物を鉄制限下で生育させると、鉄を含まないデフェリ体（シデロフォア）が生成される。このデフェリ体に鉄を加えることにより通常３価鉄イオンをキレート化した錯体となる。生物から回収されたシデロフォアは粗標品のままであってもよく、精製されたものであってもよい。
【００４５】
シデロフォアの精製は、公知の精製方法、例えばイオン交換、疎水、ゲルろ過、アフィニティのような各種クロマトグラフィー等により行えばよい。例えば、糸状菌からシデロフォアを回収する場合は、液体培養して上清中に生産されたものを回収してもよく、固体培養して固体培養物から水又は緩衝液を用いて抽出した抽出液から回収してもよい。いずれにしても本発明の鉄補給剤及び鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤には、例えば生物由来の夾雑物が含まれる場合がある。
【００４６】
またシデロフォアは、市販品を購入することもできる。また、これらのシデロフォアの混合物であってもよい。
フェリクリシン
フェリクリシンを構成する配位子であるデフェリフェリクリシンは、麹造り(固体培養）においてアスペルギルス・オリゼが多量に生産することが知られているフェリクローム類の１種である。アスペルギルス・オリゼが生産するフェリクローム類の殆どがデフェリフェリクリシンである。デフェリフェリクリシンは３価鉄イオンをキレート化してフェリクリシンになる。
【００４７】
デフェリフェリクリシンは、例えば以下の方法でアスペルギルス・オリゼから回収することができる。即ち、アスペルギルス・オリゼを培養する培地として、例えばポテトデキストロース培地（ニッスイ社）または最少培地（２％グルコース（又はスターチ）、０．３％ＮａＮＯ3、０．２％ＫＣｌ、０．１％Ｋ2ＨＰＯ4、０．０５％ＭｇＳＯ4、ｐＨ６．０）等を使用できる。培地は、固体培地でも液体培地でもよいが、デフェリフェリクリシンを回収し易い点で、液体培地を使用することが好ましい。また、米麹のような固体培地も、そこからデフェリフェリクリシンを回収、精製することなく、そのまま食品組成物に使用できる点で好ましい。
【００４８】
培養温度は、アスペルギルス・オリゼの生育可能温度範囲であればよく、例えば２５〜４２℃程度が挙げられる。培養時間は、その他の条件によって異なるが、通常２〜７日間程度とすればよい。
【００４９】
培養終了後、菌体をろ過後、培養液からフェリクリシンを回収する。さらに、この培養上清を、公知のタンパク質精製方法、例えばイオン交換、疎水、ゲルろ過、アフィニティなどの各種クロマトグラフィーに供することにより精製デフェリフェリクリシンが得られる。
３価鉄イオン
シデロフォア（デフェリ体）と３価鉄イオンとが混合されることにより、通常、速やかにキレート錯体が生成する。本発明の鉄補給剤又は鉄欠乏性貧血の予防若しくは治療剤が投与されると、３価鉄イオンは、シデロフォアとのキレート錯体の形態で、血中ヘモグロビン濃度、血清中鉄濃度、及び肝臓中鉄濃度を効果的に向上させる。
【００５０】
鉄補給剤及び鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤中に含まれるシデロフォアと３価鉄イオンとの比率は、モル比で、通常１〜５：１程度が好ましく、１〜２：１程度がより好ましい。シデロフォアと３価鉄イオンとは同モル程度含まれることが通常最も好ましい。
製造方法
本発明の鉄補給剤及び鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤は、シデロフォアと３価鉄イオンとを混合すること、又は、組み合わせることにより製造できる。
製剤
本発明の鉄補給剤及び鉄欠乏性貧血の予防又は治療剤において、シデロフォア及び３価鉄イオン、好ましくはこれらのキレート錯体は、薬学的に許容される各種担体（賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、付湿剤等が含まれる）と配合して、適当な製剤とされる。また、この製剤には慣用の添加剤が含まれていてよい。
【００５１】
製剤形態は、特に限定されず、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤、点滴剤、外用剤、座剤等の非経口投与剤などの各種製剤形態を挙げることができる。経口投与剤の方が、非経口投与剤に比べて患者への負担が小さいために、使用し易い。この点、シデロフォア及び３価鉄イオンは、これらを組み合わせて経口投与する場合に、効果的に血清中鉄濃度、血中鉄濃度、及び肝臓中貯蔵鉄濃度などを増加させることができるため、経口投与剤の形態で好適に使用できる。
【００５２】
賦形剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、乳糖、ショ糖、ブドウ糖等の各種の糖類、バレイショデンプン、コムギデンプン、トウモロコシデンプン等の各種デンプン類、結晶セルロース等の各種セルロース類、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等の各種無機塩類等が挙げられる。
【００５３】
結合剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、結晶セルロース、プルラン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等が挙げられる。
【００５４】
崩壊剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、デンプン、アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。
【００５５】
潤沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油などが挙げられる。
【００５６】
付湿剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、大豆リン脂質、グリセリン、ソルビトールなどが挙げられる。
【００５７】
製剤中のシデロフォア及び３価鉄イオンの含有量は、シデロフォアの種類、投与経路、投与対象又は患者の年齢、体重、症状等によって異なり一概に規定できないが、３価鉄キレート錯体の形態での１日投与量が通常２０〜１７０ｍｇ程度、より好ましくは４０〜８０ｍｇ程度になる量とすればよい。１日１回投与する場合は、１製剤中にこの量が含まれていればよく、１日３回投与する場合は、１製剤中にこの３分の１量が含まれていればよい。
【００５８】
また、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤のような固形製剤の場合は、製剤中にシデロフォアと３価鉄とがキレート錯体に換算して５〜３０重量％程度含まれていればよい。また、シロップ剤のような液体製剤の場合は、シデロフォアと３価鉄とがキレート錯体に換算して０．２〜１重量％程度含まれていればよい。また、注射剤、点滴剤の場合は、シデロフォアと３価鉄とがキレート錯体に換算して０．４〜２重量％程度含まれていればよい。外用剤の場合は、シデロフォアと３価鉄とがキレート錯体に換算して１〜１０重量％程度含まれていればよい。座剤の場合は、シデロフォアと３価鉄とがキレート錯体に換算して２〜２０重量％程度含まれていればよい。上記の含有量の範囲であれば、鉄補給効果、又は鉄欠乏性貧血の予防又は治療効果が十分に得られるとともに、副作用が現れることがない。
【００５９】
シデロフォアは高温（例えば１２０℃程度）高圧（例えば２００ｋＰａ程度）処理によっても変性しない又は変性し難いことから、医薬組成物の成分として用いる場合に、加熱加圧滅菌できるという利点を有する。またシデロフォアは、従来麹を用いた食品に含まれていることから、その安全性が歴史的に確認されており、医薬組成物の成分として使用する場合に副作用が生じない又は適性用量では副作用が生じない。
(II)食品添加剤
本発明の食品添加剤は、シデロフォアと３価鉄イオンとを含む添加剤である。これらはキレート錯体の形態で含まれていてもよい。この添加剤は、食品に、鉄補給作用、又は鉄欠乏性貧血の予防若しくは改善作用を与えるための添加剤として好適に使用できる。
【００６０】
食品添加剤には、シデロフォア及び３価鉄イオンの他に、糖類、デンプン類、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、植物油などの担体や、添加剤が含まれていてもよい。食品添加剤中に担体や添加剤が含まれる場合のシデロフォア及び３価鉄イオンの含有量は、キレート錯体に換算して、固形製剤の場合は０．４〜４重量％程度とすることができ、液体製剤の場合は０．０４〜０．４重量％程度とすることができる。シデロフォアと３価鉄イオンとの好ましい比率は、医薬製剤について説明した通りである。
【００６１】
食品添加剤の剤形は、特に限定されないが、例えば、粉状、顆粒状、液体状のような剤形とすることができる。
(III)食品組成物
本発明の食品組成物は、シデロフォアと３価鉄イオンとを、好ましくはキレート錯体として含む組成物である。
【００６２】
この食品組成物は、鉄補給（言い換えれば、鉄補助、鉄強化、鉄付加、体内鉄含量を正常に保つこと、体内の鉄不足の解消又は軽減）作用や、鉄欠乏性貧血の予防又は改善作用を有することから、これらの目的で用いられる旨の表示を付した食品組成物とすることができる。この食品組成物は、機能性食品、又は特定保健用食品などとして好適に使用できる。この場合、上記錯体は有効成分として含まれている。
【００６３】
シデロフォアの３価鉄錯体は従来清酒に含まれている成分であり、食品の風味を損ねるような味や匂いを有さない。従って、食品の種類は特に限定されない。例えば、飴、ガム、ケーキ、パイ、クッキー、クラッカー、ゼリー、チョコレート、プディング、アイスクリーム、ポテトチップス、羊羹、煎餅、饅頭、中華饅頭のような菓子；酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、清涼飲料水、スープ、乳飲料のような飲料；ヨーグルト、バター、チーズのような乳製品；ハム、ソーセージ、蒲鉾、竹輪のような練り物；ソース、ドレッシング、マヨネーズ、醤油、味噌、酢、味醂、トマト加工品（ケチャップ、トマトペースト、トマトピューレ）、カレールウ、酒粕、顆粒だしのような調味料；ふりかけ、漬物、佃煮、塩昆布のような常備惣菜類；惣菜；麺、米飯、粥のような主食類などが挙げられる。
【００６４】
シデロフォアは、高い水溶性を有しているため、飲料や、ソース、ドレッシング、醤油、酢、味醂のような液状調味料のような液状食品が好ましく、酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、清涼飲料水、乳飲料、及びスープのような飲料がより好ましい。最も好ましいのは、酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、及び清涼飲料水である。また、鉄化合物の水溶性が低くなることがある低ｐＨ条件下でも高い水溶性を示すため、マヨネーズやドレッシングのような液状酸性食品の添加剤としても好適に使用できるという利点がある。また前述したように高温高圧処理に耐えるため、本発明の鉄補給剤を添加した食品の加熱加圧滅菌を行えるとともに、レトルト処理のような特殊な製造工程を経ることもできる。さらにシデロフォアは、従来麹を用いた食品に含まれていることから、その安全性が歴史的に確認されている点でも、食品添加物として好適である。
【００６５】
食品組成物中のシデロフォア及び３価鉄イオンの含有量は、シデロフォアの種類、投与対象又は患者の年齢、体重、症状等によって異なり一概に規定できないが、キレート錯体の形態での１日摂取量が、２０〜１７０ｍｇ程度、特に４０〜８０ｍｇ程度になる量とすればよい。
【００６６】
また、食品中のシデロフォア及び３価鉄イオンの濃度は、食品の種類などによって異なるが、固体状食品の場合は、キレート錯体に換算して０．１〜５ｍｇ／ｇ程度が好ましく、０．２〜３ｍｇ／ｇ程度がより好ましく、０．２５〜１．５ｍｇ／ｇ程度がさらにより好ましい。液状食品の場合は、キレート錯体に換算して０．０５〜１０ｍｇ／ｍｌ程度が好ましく、０．１〜５ｍｇ／ｍｌ程度がより好ましく、０．２〜１ｍｇ／ｍｌ程度がさらに好ましい。食品の形態によって異なるが、一般的な固形状食品の１回の摂取量は１０〜５０ｇ程度であり、液体形状の食品の１回摂取量は５０ｍｌ〜５００ｍｌ程度であることから、上記の摂取量で１日に必要な鉄イオンを補給することができる。上記範囲であれば、十分な鉄補給効果、又は鉄欠乏性貧血の予防若しくは改善効果が得られるとともに、鉄過剰症になる恐れがない。
【００６７】
液体状食品の中でも、酒類、特に日本酒にシデロフォア及び３価鉄イオンが上記比率で含まれることにより、鉄欠乏性貧血に有効であり、かつ副作用を生じず、さらに飲むときに不快感を抱かせることがない。
【００６８】
本発明の食品組成物には、食品組成物の調製に当たり慣用されている各種添加剤を添加配合することができる。添加剤としては、例えば、安定化剤、ｐＨ調整剤、糖類、甘味料、香料、各種ビタミン類、ミネラル類、抗酸化剤、賦形剤、可溶化剤、結合剤、滑沢剤、懸濁剤、湿潤剤、皮膜形成物質、矯味剤、矯臭剤、着色料、保存剤等を例示することができる。
【００６９】
また、本発明の食品組成物は、鉄補給のため、又は、鉄欠乏性貧血の予防若しくは改善のための栄養補助食品、即ちサプリメントとしても好適に使用できる。この場合の食品組成物中には、シデロフォア及び３価鉄イオンの他に、サプリメントの担体として公知の成分が含まれていればよい。このような担体として、例えば糖類、デンプン類、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、植物油が挙げられる。
【００７０】
サプリメント中のシデロフォア及び３価鉄イオンの含有量は、キレート錯体に換算して、３０ｍｇ〜３００ｍｇ程度であることが好ましく、６０ｍｇ〜２００ｍｇ程度であることがより好ましい。上記範囲であれば、十分に鉄補給効果や鉄欠乏性貧血の予防若しくは改善効果が得られるとともに、多すぎて副作用が現れることがない。
【００７１】
サプリメントの形状は特に限定されないが、例えば、錠剤状、粉状、顆粒状などの形状が挙げられる。
(IV)鉄補給方法・鉄欠乏性貧血の予防、改善又は治療方法
シデロフォアの３価鉄キレート錯体は、生体内への鉄の吸収率が高いため、シデロフォアと３価鉄イオンとをヒトに投与することにより、鉄を補給し、鉄の欠乏による、貧血、運動・学習能力低下、免疫力低下等を効果的に予防、改善又は治療することができる。特に、鉄欠乏性貧血を効果的に予防、改善又は治療できる。
【００７２】
鉄補給剤及び鉄補給用組成物の投与対象は、鉄欠乏による症状が現れているヒト又は健常人のいずれであってもよい。また、鉄が欠乏し易い成長期の子供や成人女性も好適な投与対象である。
【００７３】
投与量は、シデロフォアの種類、投与対象の症状、年齢、体重などによって異なるが、キレート錯体の形態での１日投与量が２０〜１７０ｍｇ程度、特に４０〜８０ｍｇ程度となる量を１日１回又は数回に分けて投与すればよい。
【００７４】
投与経路は、経口又は非経口のいずれであってもよいが、経口投与する場合にも効果的に血清中鉄濃度を向上させることができることから、簡便な経口投与が好ましい。
実施例
以下、本発明を実施例及び試験例を示してより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
フェリクリシンの調製
米麹を水で抽出した抽出液（デフェリフェリクリシン含有）に、デフェリフェリクリシンと等モルの塩化第二鉄を加えてフェリクリシン溶液を作製した後、限外濾過膜を用いて分子量５０００以上のタンパク質などの高分子を除去し、ろ液をカラムクロマトにより濃縮した。フェリクリシンは４３０ｎｍに極大吸収を示す性質が知られている（Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．１２，ｐ１４８２）ため、上記の手法で調製された溶液をＨＰＬＣ分析し、４３０ｎｍの吸収を示す物質の大半がフェリクリシンであることを確認した。
【００７５】
ラットに与えた飼料の鉄濃度はフェリクリシン、水溶性ヘム鉄、クエン酸第二鉄すべてＨＰＬＣでなく原子吸光により３５ｐｐｍに調製した。フェリクリシンのＨＰＬＣ分析は、４３０ｎｍに吸収を示す物質がほとんどフェリクリシンであったことを示す定性分析である。
【実施例１】
【００７６】
４週齢のＳＤ系雄ラット１５匹に、鉄欠乏飼料を３５日間自由摂取させて、血液中の平均ヘモグロビン値が６．５ｇ／ｄｌまで低下した鉄欠乏性貧血ラットを作製した。また、対照群の４週齢のＳＤ系雄ラット５匹には鉄含有飼料１を与えた。対照群に与えた鉄含有飼料１の鉄源は通常ラットの飼育飼料に使用されているクエン酸第二鉄であり、その鉄含量はラットの生育に最適とされている３５ｐｐｍである。
【００７７】
【表２】
2005225874.tif 000004
上記の表２における塩類混合１及び塩類混合２は、ハーパーミネラル混合に準じて調製したものであり、以下の表３に組成を示す混合物である。
【００７８】
【表３】
2005225874.tif 000005
また表２におけるビタミン混合は、ＡＩＮ−７６ビタミン(コリン添加)に準じて調製したものであり、下記の表４の組成を有する混合物である。
【００７９】
【表４】
2005225874.tif 000006
次いで、１５匹の鉄欠乏性貧血のラットを３群に分け、それぞれ、以下の鉄含有飼料１、２及び３を３週間自由摂食させた。鉄含有飼料１は鉄源としてクエン酸第二鉄を含み、鉄含有飼料２は鉄源として水溶性ヘム鉄を含み、鉄含有飼料３は鉄源としてフェリクリシンを含む。鉄含有飼料１、２及び３の組成を以下の表５に示す。なお、鉄含有飼料１は表２に示したものと同じである。
【００８０】
【表５】
2005225874.tif 000007
表５における塩類混合２、３及び４は以下の表６に組成を示す混合物である。また表５におけるビタミン混合は上記表４に組成を示す混合物である。
【００８１】
【表６】
2005225874.tif 000008
血中ヘモグロビン濃度の測定
鉄欠乏性貧血にした後に、それぞれ鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）、鉄含有飼料２（ヘム鉄）及び鉄含有飼料３（フェリクリシン）を投与した各群のラットについて、飼料の投与前と投与３週間後に採血をそれぞれ行い、常法により血液中のヘモグロビン濃度を測定した。また、当初から鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）を投与した対照群ラットについては、鉄含有飼料１を投与した。結果を以下の表７に示す。表７中の値は、各群５匹のヘモグロビン濃度の平均値±標準偏差値を示す。
【００８２】
【表７】
2005225874.tif 000009
表７から明らかなように、鉄源としてクエン酸第二鉄又はフェリクリシンを含む飼料を摂食した群では、対照群と同じレベルにまでヘモグロビン値が増加した。これに対して、水溶性ヘム鉄を摂取した群では血中ヘモグロビン濃度の回復は認められず、鉄含有飼料摂取後には、ヘム鉄摂取群とフェリクリシン摂取群の間には危険率５％の水準で有意差が認められた。このように、鉄欠乏性貧血症の第３ステップであるヘモグロビン合成能の低下に対して、フェリクリシンを摂取した群ではクエン酸第二鉄と同等の改善効果が認められ、またヘム鉄に較べて有意に優れた改善効果が認められた。
血清中鉄濃度の測定
また、鉄含有飼料投与後に各群ラットから全採血した血液より血清を調整し、常法に従い血清鉄濃度を測定した。結果を以下の表８に示す。表８中の値は、各群５匹の血清鉄濃度の平均値±標準偏差値である。
【００８３】
【表８】
2005225874.tif 000010
表８から明らかなように、鉄源としてクエン酸第二鉄またはフェリクリシンを含む飼料を摂取した群では、対照群と同じレベルにまで血清鉄濃度が増加した。これに対して、水溶性ヘム鉄を摂取した群では著しく血清鉄が減少しており対照群と比較して危険率１％の水準で有意差が認められた。このように、鉄欠乏性貧血症の第２ステップである循環鉄濃度の低下に対して、フェリクリシンを摂取した群ではクエン酸第二鉄と同等の改善効果が認められ、またヘム鉄に較べて有意に優れた改善効果が認められた。
肝臓中鉄濃度の測定
鉄欠乏性貧血にした後に、それぞれ鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）、鉄含有飼料２（ヘム鉄）及び鉄含有飼料３（フェリクリシン）を投与した群のラット、及び、当初から鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）を摂食させた対照群ラットについて、鉄含有飼料の３週間の摂食終了後時に肝臓を脱血潅流して摘出し、重量を測定した後、凍結乾燥を行った。また、乾燥肝臓を灰化し原子吸光に供して鉄濃度を測定した。さらに、肝臓の水分含量を計算し、乾燥肝臓における鉄濃度と肝臓の水分含量とから生体内の肝臓に貯蔵されている鉄濃度を求めた。結果を以下の表９に示す。表９中の値は、各群５匹のラットについての肝臓鉄濃度の平均値±標準偏差である。
【００８４】
【表９】
2005225874.tif 000011
表９から明らかなように、鉄欠乏飼料を摂食させた群では重度の鉄欠乏性貧血を発症させたため、どの鉄摂取群も対照群と比較して肝臓に貯蔵されている鉄量は減少していた。しかし、各群間に危険率１％の有意差が認められ、鉄源の違いによる貯蔵鉄改善効果の優劣が明らかとなった。即ち、貧血症の第３ステップである貯蔵鉄濃度の低下に対して、フェリクリシンを摂取した群はクエン酸第二鉄摂取群および水溶性ヘム鉄摂取群と比較して有意に優れた改善効果が認められた。
肝臓機能・腎臓機能に与える影響の検討
鉄欠乏性貧血にした後に、それぞれ鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）、鉄含有飼料２（ヘム鉄）及び鉄含有飼料３（フェリクリシン）を投与した各群のラット、及び、当初から鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）を摂食させた対照群ラットについて、常法に従い血清中のタンパク質濃度、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）濃度、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）濃度、クレアチニン濃度を測定した。結果を以下の表１０に示す。表１０中の値は、各群５匹のラットについての平均値±標準偏差である。ａを付した数値とｂを付した数値との間には有意差があることを示す。
【００８５】
【表１０】
2005225874.tif 000012
表１０から明らかなように、いずれの群においても、血清分析値は正常範囲内にあり、肝機能および腎機能の異常を示唆する結果は認められなかった。このことから、鉄源の違いによる臓器機能への影響はなかったものと考えられる。鉄源としてフェリクリシンを摂取した群は全ての検査項目において良好な値を示し、フェリクリシンを摂取することで生体に有害な副作用が生じないことが明らかとなった。
体重増加量・摂食量に及ぼす影響の検討
鉄欠乏性貧血にした後に、それぞれ鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）、鉄含有飼料２（ヘム鉄）及び鉄含有飼料３（フェリクリシン）を投与した各群のラット、及び、当初から鉄含有飼料１（クエン酸第二鉄）を摂食させた対照群ラットについて、１匹あたりの体重増加量および摂餌量を以下の表１１に示す。体重増加量は各群５匹の平均値±標準偏差である。
【００８６】
【表１１】
2005225874.tif 000013
表１１から明らかなように、水溶性へム鉄を摂取した群は体重増加量が低下したが、対照群に対して有意差は認められなかった。水溶性ヘム鉄摂取群では、貧血による体重増加量の抑制および摂餌量の減少が発生したと考えられる。一方、クエン酸第二鉄摂取群およびフェリクリシン摂取群では、対照群よりも体重増加量および摂餌量が増大していた。このことから、フェリクリシン摂取により、体重増加の抑制および摂食障害などの生体の生育に及ぼす有害な副作用は発生しないと考えられる。
【実施例２】
【００８７】
フェリクリシンの水への溶解性の検討
フェリクリシンの溶解性を他の鉄化合物と比較した。鉄化合物としては実施例1で用いた水溶性へム鉄、クエン酸第二鉄及びフェリクリシンを用いた。これらの鉄化合物の各０．１ｇをそれぞれｐＨ＝２およびｐＨ＝７の緩衝液１ｍｌに溶解し３７℃で９０分間保温した。ｐＨ＝２の緩衝液としてはグリシン-塩酸緩衝液を使用し、ｐＨ＝７の緩衝液としてはリン酸緩衝液を使用した。各緩衝液中の緩衝剤の濃度は０．１モル／Ｌとした。各緩衝液を保温後、遠心分離し、沈殿の有無を目視で確認した。また、上清の鉄濃度を原子吸光法により測定した。結果を以下の表１２に示す。
【００８８】
【表１２】
2005225874.tif 000014
表１２から明らかなように、フェリクリシンは極めて水溶性が高かった。鉄化合物の中には酸性条件下で沈殿を生じるものがあることが知られている。また上記の結果から明らかなように、塩化第二鉄及びヘム鉄も酸性条件下で沈殿を生じている。これに対して、フェリクリシンは、酸性条件下でも高い水溶性を示した。フェリクリシンの鉄は３価であるが、錯体となることにより高い水溶性を獲得したと考えられる。これにより、生体内で利用しやすい性質となった。
【実施例３】
【００８９】
フェリクリシンの熱安定性・ｐＨ安定性の検討
フェリクリシンは４３０ｎｍに吸収極大を示すことが知られている。この特徴を利用してフェリクリシンのｐＨおよび熱安定性を試験した。
上述したようにして米麹抽出液から調製したフェリクリシンを２.５ｍｇ／ｍｌとなるように超純水に溶解した。さらに以下の各緩衝液を用いてフェリクリシン濃度が０．２５ｍｇ／ｍｌとなるように希釈した。ｐＨ＝２及び３の各緩衝液としてはグリシン-塩酸緩衝液を使用し、ｐＨ＝４及び５の各緩衝液は酢酸緩衝液を使用し、ｐＨ＝６及び７の緩衝液としてはリン酸緩衝液を使用し、ｐＨ＝８の緩衝液としてはトリス-塩酸緩衝液を使用し、ｐＨ＝９及び１０の緩衝液としてはグリシン-水酸化ナトリウム緩衝液を使用した。各緩衝液中の緩衝剤の濃度は０．１モル／Ｌとした。
各フェリクリシン溶液をネジ付き試験管に入れて試験管を密閉した後、温度１２０℃、圧力２００ｋＰａの条件で ２０分間  加圧加熱殺菌した。加熱加圧殺菌の前後で、各溶液の４３０ｎｍにおける吸光度を測定した。結果を以下の表１３に示す。
【００９０】
【表１３】
2005225874.tif 000015
表１３から明らかなように、フェリクリシン溶液中のフェリクリシン濃度はｐＨ＝３．０〜１０．０の広いｐＨ範囲において高圧加熱殺菌後も低下しなかった。このことから、フェリクリシンは、ｐＨ＝３．０〜１０．０の広いｐＨ範囲において高い熱安定性を有することが分かる。
【実施例４】
【００９１】
フェリクリシンの食品成分との反応性の検討
鉄化合物は食品中のさまざまな成分と結合して不溶化される性質を持ち、これが鉄の吸収率を低下させる原因のひとつといわれている。代表的な鉄吸収阻害成分として知られているタンニン酸、及びフィチン酸とフェリクリシンとの反応性を試験し、これらの鉄吸収阻害成分と他の鉄化合物との反応性と比較した。
上述の方法で調製したフェリクリシン、クエン酸第２鉄およびクエン酸第１鉄ナトリウムをそれぞれ鉄として１０ｍｇ／ｍｌとなるように超純水に溶解した。一方、タンニン酸、及びフィチン酸の０．６％水溶液を作成した。この水溶液のｐＨを塩酸あるいは水酸化ナトリウムで２．０、４．０、６．０、及び８．０に調整したものをそれぞれ調製した。
上記鉄化合物溶液とタンニン酸水溶液あるいはフィチン酸水溶液とを１：９の体積比で混合し３７℃で３時間保温することにより、鉄化合物とこれらの鉄吸収阻害成分とを反応させた。この液を１５０００ｒｐｍで５分間、遠心分離し、その上清を分画分子量１００００の膜を用いて限外ろ過した。ろ過液の鉄濃度を原子吸光法で測定した。反応液中の最初の鉄濃度（１ｍｇ／ｍｌ）に対する、反応後の鉄濃度の割合を％で表示したものを以下の表１４に示す。
【００９２】
【表１４】
2005225874.tif 000016
表１４から分かるように、鉄の不溶化に関係する上記２成分とフェリクリシンンとの反応性は低く、鉄の高い溶解性が維持された。この現象はｐＨ２．０から８．０においてほぼ一定であり、他の鉄化合物と比較して有意に高い値であった。これはフェリクリシンが鉄を含む錯体であるため化学的安定性が非常に高く、他の食品成分と反応し難いことが寄与していると思われる。この結果は、フェリクリシンを鉄不溶化作用を持つ食品とともに摂取した場合においても、鉄が効率よく吸収されることを示唆するものである。
【実施例５】
【００９３】
酒類(液体状食品)への配合量の検討
清酒１００ｍｌに、フェリクリシンを、それぞれ１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ添加して鉄強化清酒を調製した。得られた鉄強化清酒中のフェリクリシン濃度は、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌである。
【００９４】
各鉄補強清酒について、２５人のパネラーにより官能試験を行った。結果を以下の表１５に示す。表１５中、＋＋＋は２０人以上のパネラーが美味しいと感じたことを示し、＋＋は７〜１９人のパネラーが美味しいと感じたことを示し、＋は１〜６人のパネラーが美味しいと感じたことを示し、−は美味しいと感じたパネラーがいなかったことを示す。
【００９５】
【表１５】
2005225874.tif 000017
表１５から明らかなように、酒類にフェリクリシンを１ｍｇ／ｍｌ（０．１重量％）以下、特に０．５ｍｇ／ｍｌ（０．０５重量％）以下、さらに特に０．２ｍｇ／ｍｌ（０．０２重量％）以下の範囲で添加した場合に官能評価が良好であった。
【実施例６】
【００９６】
菓子(固形状食品)への配合量の検討
クッキー１００ｇに、フェリクリシンを、それぞれ５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、５０ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ、２０００ｍｇ添加して鉄強化クッキーを調製した。得られた鉄強化クッキー中のフェリクリシン濃度は、０．０５ｍｇ／ｇ、０．１ｍｇ／ｇ、０．２ｍｇ／ｇ、０．５ｍｇ／ｇ、１．５ｍｇ／ｇ、３．０ｍｇ／ｇ、５．０ｍｇ／ｇ、１０ｍｇ／ｇ、２０ｍｇ／ｇである。
【００９７】
各鉄補強クッキーについて、２５人のパネラーにより官能試験を行った。結果を以下の表１６に示す。表１６中、＋＋＋は２０人以上のパネラーが美味しいと感じたことを示し、＋＋は７〜１９人のパネラーが美味しいと感じたことを示し、＋は１〜６人のパネラーが美味しいと感じたことを示し、−は美味しいと感じたパネラーがいなかったことを示す。
【００９８】
【表１６】
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表１６から明らかなように、クッキーにフェリクリシンを３ｍｇ／ｇ（０．３重量％）以下、特に１．５ｍｇ／ｇ（０．１５重量％）以下、さらに特に０．５ｍｇ／ｇ（０.０５重量％）以下の範囲で添加した場合に官能評価が良好であった。
処方例
以下に、本発明の食品組成物の処方例を示す。
＜処方例１  クッキー＞
小麦粉（薄力粉）１００ｇ、ベーキングパウダー２．５ｇ、食塩１．５ｇ、フェリクリシン２００ｍｇを混合し、これにバター４０ｇとミルク５０ｇを加え、これをオーブンで１８０℃、１０分間焼き上げ、鉄強化クッキーを得た。得られたクッキーには、フェリクリシンが１．５ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例２  ゼリー＞
ゼラチン５ｇ、ショ糖２０ｇ、水５０ｇから膨潤ゼラチンを作る。プレーンヨーグルト１４０ｇにフェリクリシン１６０ｍｇを加え、上記膨潤ゼラチンを加えて冷やす。これを固めて鉄強化ゼリーを得た。得られたゼリーには、フェリクリシンが０．７５ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例３  飴＞
上白糖５００ｇ、水飴４４０ｇを少量の水に溶解し、さらにフェリクリシン４ｇを添加して減圧下１３０℃で煮詰めた。その後、クエン酸３．５ｇ、酒石酸１．５ｇ、脱脂卵黄蛋白分解物１ｇを添加した。これを冷却して鉄強化飴を得た。得られた飴には、フェリクリシンが５ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例４  アイスクリーム＞
牛乳１２００ｇ、生クリーム３１０ｇ、上白糖３００ｇ、脱脂粉乳６０ｇ、脱脂卵黄蛋白分解物１ｇ、増粘安定剤６ｇ、フェリクリシン８００ｍｇに水を加えて全量２０００ｍｌにして溶解した。これを８０℃まで加熱した後、ホモミキサーで予備乳化し、引き続きホモゲナイズした。冷却し熟成させた後バニラエッセンス２ｇを加えフリージングを行った。その後−４０℃まで急冷して鉄強化アイスクリームを得た。得られたアイスクリームには、フェリクリシンが０．４ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例５  羊羹＞
糸寒天７．５ｇを溶かし、これに小豆漉し餡６６０ｇ、グラニュー糖３００ｇ、水５５０ｍｌ、フェリクリシン２ｇを混ぜて溶かして煮詰め、冷やして鉄強化羊羹を得た。得られた羊羹には、フェリクリシンが２ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例６  ヨーグルト＞
２０％脱脂乳を１２０℃で、３秒間殺菌した後、ストレプトコッカス・サーモフィルス及びラクトバチルス・カゼイの種菌を培養してヨーグルトベース４００ｇを得た。さらに、砂糖７０ｇ、ペクチン３ｇ、フェリクリシン８００ｍｇを水に溶解させ、水を加え全量を６００ｇとした。この溶液を１２０℃で、３秒間殺菌してシロップを得た。上記のヨーグルトベースとシロップを混合し、香料を１ｇ添加した後、均質化して、鉄強化ヨーグルトを得た。得られたヨーグルトには、フェリクリシンが０．８ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例７  牛乳＞
牛乳１００ｍｌにフェリクリシン４０ｍｇを入れてよく撹拌し、鉄強化牛乳を得た。得られた牛乳には、フェリクリシンが０．４ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例８  チョコレート＞
カカオマス２５ｇ、カカオバター１５ｇ、全脂粉乳１５ｇ、粉砂糖３０ｇ、粉ミルク１５ｇとフェリクリシン２５０ｍｇを混和し、４５℃で暖めた後に冷却し、鉄強化チョコレートを得た。得られたチョコレートには、フェリクリシンが２．５ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例９  マヨネーズ＞
卵黄２０ｇに食塩２．５ｇ、蔗糖１．５ｇ、マスタード１．５ｇ、胡椒０．１ｇ、レモン汁５ｇ、フェリクリシン３．２ｇを加え、これに酢１０ｇとサラダ油１６０ｇとを加えてよく攪拌して鉄強化マヨネーズを得た。得られたマヨネーズには、フェリクリシンが１６ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１０  ケチャップ＞
トマト１ｋｇを皮をむいてミキサーにかけ、加熱して煮詰めた後、すりおろしたタマネギ１０ｇ、ニンニク３ｇを加え、さらに砂糖１０ｇ、塩２ｇ、フェリクリシン４．８ｇを加える。弱火にして香辛料（シナモンスティック、クローブ、胡椒、唐辛子）１ｇ、酢を３０ｇ加え、一度加熱した後、冷まして鉄強化ケチャップを得た。得られたケチャップには、フェリクリシンが１６ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１１  カレールウ＞
小麦粉（薄力粉）１２５ｇ、バター１００ｇ、カレー粉２０ｇとフェリクリシン１．０ｇに、少量の水を加えて混和し、固めて鉄強化カレールウを得た。得られたカレールウには、フェリクリシンが４ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１２  蒲鉾＞
魚のすり身１００ｇ、粉末マッシュポテト１０ｇ、小麦粉５ｇ、卵白５０ｇ、塩２ｇ、砂糖０．２ｇ、みりん１０ｇ、フェリクリシン１．３ｇを加え、これらを混ぜてペースト状にし、蒸し器で蒸して鉄強化蒲鉾を得た。得られた蒲鉾には、フェリクリシンが７ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１３  佃煮＞
戻した昆布２５ｇ、かつおだし１５０ｍｌ、砂糖１５ｇ、醤油１５ｇ、酢１０ｇ、フェリクリシン４００ｍｇを混合し、沸騰させてから中火で煮詰めて鉄強化佃煮を得た。得られた佃煮には、フェリクリシンが５ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１４  ふりかけ＞
いりごま１５ｇ、味付けごま２０ｇ、味付け削り節１０ｇ、味付けかつお塩顆粒１０ｇ、味付けのり顆粒１０ｇ、フェリクリシン１．６ｇをよく混合して、鉄強化ふりかけを得た。得られたふりかけには、フェリクリシンが２５ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１５  米飯＞
白米１５０ｇ、水２２０ｇとフェリクリシン１６０ｍｇを混合し、炊飯器で炊き上げ、鉄強化米飯を得た。得られた米飯には、フェリクリシンが０．５ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１６  うどん麺＞
水４００ｇ、塩５０ｇを混合して塩を溶かし、これに小麦粉（中力粉）１０００ｇ、フェリクリシン１．６ｇを混ぜ、よくこねた。固まったらこれをよく伸ばし、５ｍｍ幅に切った。これを１０分茹でて、その後冷やして鉄強化うどん麺を得た。得られたうどん麺にはフェリクリシンが３ｍｇ／ｇ含まれていた。
＜処方例１７  清酒＞
清酒１００ｍｌにフェリクリシン２０ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化清酒を得た。得られた清酒には、フェリクリシンが０．２ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例１８  焼酎＞
焼酎１００ｍｌにフェリクリシン４０ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化焼酎を得た。得られた焼酎には、フェリクリシンが０．４ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例１９  ワイン＞
ワイン１００ｍｌにフェリクリシン２０ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化ワインを得た。得られたワインには、フェリクリシンが０．２ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２０  ビール＞
ビール１００ｍｌにフェリクリシン１２ｍｇを加え、撹拌して鉄強化ビールを得た。得られたビールには、フェリクリシンが０．１２ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２１  ウィスキー＞
ウィスキー１００ｍｌにフェリクリシン１００ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化ウィスキーを得た。得られたウィスキーには、フェリクリシンが１ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２２  ブランデー＞
ブランデー１００ｍｌにフェリクリシン１００ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化ブランデーを得た。得られたブランデーには、フェリクリシンが１ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２３  スピリッツ＞
スピリッツ１００ｍｌにフェリクリシン１００ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化スピリッツを得た。得られたスピリッツには、フェリクリシンが１ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２４  リキュール＞
リキュ−ル１００ｍｌにフェリクリシン１００ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化リキュールを得た。得られたリキュールには、フェリクリシンが１ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２５  みりん＞
みりん１００ｍｌにフェリクリシン４００ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化みりんを得た。得られたみりんには、フェリクリシンが４ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２６  茶＞
お茶１００ｍｌにフェリクリシン４０ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化茶を得た。得られた茶には、フェリクリシンが０．４ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２７  コーヒー＞
コーヒー１００ｍｌにフェリクリシン４０ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化コーヒーを得た。得られたコーヒーには、フェリクリシンが０．４ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２８  スポーツドリンク＞
水１００ｍｌ、果糖５ｇ、ショ糖２ｇ、クエン酸０．３ｇ、ナトリウム２０ｍｇ、カルシウム２ｍｇ、カリウム２０ｍｇ、アルギニン２０ｍｇ、イソロイシン１０ｍｇ、バリン１０ｍｇ、ロイシン１０ｍｇ、ビタミンＣ１００ｍｇ、β−カロチン１ｍｇにフェリクリシン１５ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化スポーツドリンクを得た。得られたスポーツドリンクには、フェリクリシンが０．１５ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例２９  清涼飲料水＞
バレンシアオレンジ果汁３０ｍｌ、レモン果汁３ｍｌ、果糖１．５ｇ、クエン酸０．５ｇ、ビタミンＣ０．１ｇにフェリクリシン１５ｍｇを加え、これに水を加えて１００ｍｌとし、よく撹拌した後に炭酸ガスを封入し、鉄強化清涼飲料水を得た。得られた清涼飲料水には、フェリクリシンが０．１５ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
＜処方例３０  スープ＞
ポタージュスープ１００ｍｌにフェリクリシン４０ｍｇを加え、よく撹拌して鉄強化スープを得た。得られたスープには、フェリクリシンが０．４ｍｇ／ｍｌ含まれていた。
【産業上の利用可能性】
【００９９】
本発明の鉄補給剤は、鉄欠乏性貧血を始めとする鉄欠乏による症状の予防、改善又は治療のために好適に使用できる。また、本発明の食品添加剤は、鉄補給のため、又は鉄欠乏性貧血の予防又は改善のための機能性食品、又は特定保健用食品への添加剤として好適に使用できる。