(57)【要約】【課題】  3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を簡便な方法で、効率よく製造する技術を提供すること。【解決手段】  サツマイモ葉をアルコール、含水アルコール、水又は温水で抽出し、抽出液を濃縮後、水に溶解させ、次いで極性有機溶媒で分配し水層画分を得、当該画分を合成吸着剤に吸着させた後、５５〜６５％アルコールで処理して夾雑物を除去し、７５〜９０％アルコールで目的とする成分を溶出して得た溶出画分を、さらにカラムクロマトグラフィで分画、分取することを特徴とする3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の製造方法を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サツマイモ葉をアルコール、含水アルコール、水又は温水で抽出し、抽出液を濃縮後、水に溶解させ、次いで極性有機溶媒で分配し水層画分を得、当該画分を合成吸着剤に吸着させた後、５５〜６５％アルコールで処理して夾雑物を除去し、７５〜９０％アルコールで目的とする成分を溶出して得た溶出画分を、さらにカラムクロマトグラフィにより分画、分取することを特徴とする3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の製造方法。
【請求項２】
アルコールがメタノール又はエタノールである請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
極性有機溶媒がヘキサン又はトルエンである請求項１記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サツマイモ葉から3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸（化１）を製造する方法に関する。
【０００２】
【化１】
2005298382.tif 000002
【背景技術】
【０００３】
3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸は、抗酸化活性や抗エイズ活性を有することが知られている。これまで、この3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸は、ペルーなどの限られた国に生育する限られた植物（非特許文献１，２参照）およびレタス培養細胞（非特許文献３参照）に見出されているにすぎない。しかも、その含有量は僅かである。
従来、このような極微量の成分を植物から単離するためには、非特許文献１，２に記載されているように、高価な分取用カラムを装備した高速液体クロマトグラフィにより精製することが常法であり、生産量のスケールアップが困難であった。
さらに、当該化合物の化学的合成法も確立されていないことから、当該化合物を純粋に得るためには植物から抽出するしか手段がないのが現状である。
【０００４】
【非特許文献１】Mahmood, N. et al., Inhibition of HIV infection by caffeoylquinic acid derivatives. Antiviral Chem. Chemother., vol.4, pp.235-240 (1993)
【非特許文献２】Peluso, G. et al., Studies on the inhibitory effects of caffeoylquinic acids on monocyte migration and superoxide anion production, J. Nat. Prod., vol.58, pp.639-646 (1995)
【非特許文献３】田村  啓敏ら、レタス培養細胞の生産する3,4,5-tricaffeoylquinic acidの抗HIV活性、平成12年度日本農芸化学会全国大会（東京）要旨集、p.267
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者らは、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の効果的な取得方法について検討を重ね、その過程で当該化合物がサツマイモおよびパイナップルの葉に含有されていることを見出した。しかし、パイナップルにおける当該化合物の含有量は、他のポリフェノール類に比べて少なく、上記と同様に、極微量である。
従って、本発明の目的は、上記実状に鑑み、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を簡便な方法で、効率よく製造する技術を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行い、サツマイモ葉からオープンカラムにより3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を大量、簡易、かつ安価に製造できることを見出し、本発明に至った。
【０００７】
すなわち、請求項１に係る本発明は、サツマイモ葉をアルコール、含水アルコール、水又は温水で抽出し、抽出液を濃縮後、水に溶解させ、次いで極性有機溶媒で分配し水層画分を得、当該画分を合成吸着剤に吸着させた後、５５〜６５％アルコールで処理して夾雑物を除去し、７５〜９０％アルコールで目的とする成分を溶出して得た溶出画分を、さらにカラムクロマトグラフィにより分画、分取することを特徴とする3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の製造方法である。
【０００８】
次に、請求項２に係る本発明は、アルコールがメタノール又はエタノールである請求項１記載の製造方法である。
また、請求項３に係る本発明は、極性有機溶媒がヘキサン又はトルエンである請求項１記載の製造方法である。
【発明の効果】
【０００９】
3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸は、抗酸化能などに優れているばかりでなく、抗エイズ作用を有していることも報告されている。本発明によれば、身近な材料から当該化合物が大量に製造可能となり、当該化合物に関する試験研究に貢献できる。
また、本発明によれば、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の各種薬理効果の探索並びにそれを利用した試薬や医薬品、機能性食品などを安価に提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明における原材料はサツマイモ（Ipomoea batatas）の葉である。サツマイモの品種としては、コガネセンガン、スイオウ、アヤムラサキ、シモン１号など、通常栽培されている品種であれば特に制限はない。
サツマイモの葉としては、新鮮な葉の他に、葉を凍結又は凍結乾燥したもの、温風、天日もしくは遠赤外線により乾燥したもの、又は蒸煮したものなどを用いることができるが、特に乾燥粉末として用いると、抽出操作が容易で、効率よく抽出できるため好ましい。
【００１１】
次に、本発明によるサツマイモの葉からの3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の取得方法について説明する。まず、サツマイモの葉をアルコール、含水アルコール、水もしくは温水で抽出する。アルコールとしては、メタノール、エタノール等を用いることができ、特にメタノールが好ましい。アルコールを水と混合して用いるときの含水率は特に制限されない。アルコールや含水アルコールによる抽出は、室温で行うことができる。また、温水を用いる場合、水温は４０〜６５℃が適当であり、特に６０℃が好ましい。
抽出に用いるアルコールまたは水、温水の量は、原材料の重量に基づいて２０〜６０倍が適当であり、好ましくは４０〜５０倍である。抽出時間については、通常１〜２４時間であり、好ましくは８〜１２時間行う。抽出時間が１時間未満であると、抽出効率が低下するため好ましくなく、一方２４時間より長くなると、成分が褐変することがあるため好ましくない。
得られた抽出液をろ紙、布などのろ材でろ過した後、残渣に上記と同量のアルコール等又は水、温水を加えて上記条件で再抽出した後、抽出液をろ材でろ過する。ろ材としては、市販品を用いればよく、例えばチーズクロス、ガーゼなどが挙げられる。
【００１２】
得られたろ液を合わせてエバポレーター等で濃縮後、適当量の水に溶解し、これに等量の極性有機溶媒を加えて分配する。極性有機溶媒としては、ヘキサンやトルエン等が挙げられ、特にヘキサンが好ましい。次いで、分配して得た水層画分を合成吸着剤に吸着させる。ここで、合成吸着剤としては、MCI gel CHP20P（三菱化学（株）製）、セパビース  SP825（三菱化学（株）製）、アンバーライト  XAD2000（オルガノ製）、クロマトレックス  ODS（フジシリシア製）等が挙げられ、特にMCI gel CHP20Pが好ましい。
【００１３】
吸着樹脂容量の１．５〜２倍容量の５５〜６５％アルコール（メタノール、エタノール等）で溶出することにより、ジカフェオイルキナ酸を主成分とする夾雑物を除去する。次に、樹脂容量の１．５〜２倍容量の７５〜９０％アルコール（メタノール、エタノール等）で溶出し、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を主成分とする画分を得る。得られた８０％アルコールの画分をロータリーエバポレーター等で濃縮後、６０〜８０％の濃度のアルコール水溶液に溶解し、例えばセファデックス  LH-20カラムクロマトグラフィ（ファルマシア社製）により分取し、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を含有する画分を集める。
このようにして得られる3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の回収率及び純度は、サツマイモの葉をアルコール、含水アルコール、水もしくは温水で抽出した液中の当該成分と比較して、それぞれ５０〜７０％及び９５〜９９％である。所望により、常法にしたがって精製することができる。
【００１４】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
【実施例１】
【００１５】
図１に示した、本発明の3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の製造法のプロトコールの一具体例について説明する。
サツマイモ葉（品種名：スイオウ）の乾燥粉末１００ｇに、２０００ｍＬの１００％メタノールを加えて室温で一晩室温放置し、抽出した。これをろ紙（ADVANTEC社製）でろ過した後、残渣に２０００ｍＬの１００％メタノールを加え、再び一晩室温で抽出後、ろ紙（ADVANTEC社製）でろ過した。
得られたろ液を合わせてエバポレーターで濃縮し、５００ｍＬの蒸留水に溶解後、５００ｍＬのヘキサンで分配し、水層画分を得た。この水層画分をMCI gel CHP20Pカラムクロマトグラフィ（三菱化学（株）製）にて吸着剤に吸着させた後、樹脂容量の１．５倍の６０％メタノールで溶出することにより、ジカフェオイルキナ酸を主成分とする夾雑物(画分１）を除去した。次に、樹脂容量の１．５倍容量の８０％メタノールで溶出し、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を含有する画分２を得た。画分２をロータリーエバポレーターで濃縮後、７０％メタノールに溶解し、セファデックス  LH-20カラムクロマトグラフィ（ファルマシア社製）により分画した。フラクションコレクターを用いて3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を含有する画分３を集めた。
【００１６】
このようにして７０ｍｇの3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸が得られ、その回収率は６６％、純度は９８％以上であった。さらに、図２に上記の各工程における3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の精製状況を、高速液体クロマトグラフィ（島津製）で確認したクロマトグラムを示す。
【産業上の利用可能性】
【００１７】
本発明によれば、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸を簡便な方法で、大量、かつ安価に製造することができる。この化合物は、抗酸化能や抗エイズ活性などを有することが報告されているが、未だその研究報告は少なく、今後各種の薬理効果などが明らかにされることが予想される。例えば、抗糖尿病作用、抗腫瘍作用などが期待される。
本発明は、3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸に関する試験研究の促進に寄与するだけでなく、本化合物を含有する試薬や医薬品、機能性食品素材などの開発への利用が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明における3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の製造方法の１例を示したものである。
【図２】本発明の各製造工程における3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸の精製状況を、高速液体クロマトグラフィによるクロマトグラムで示したものである。ａは１００％メタノールによる粗抽出液、ｂはヘキサン分配で得られた水層、ｃはMCI gel CHP20Pカラムクロマトグラフィにより得られた画分、ｄはセファデックス  LH-20カラムクロマトグラフィにより得られた画分の結果を示す。
【符号の説明】
【００１９】
Ａ：カフェ酸
Ｂ：クロロゲン酸
Ｃ：4,5-ジ-Ｏ-カフェオイルキナ酸
Ｄ：3,5-ジ-Ｏ-カフェオイルキナ酸
Ｅ：3,4-ジ-Ｏ-カフェオイルキナ酸
Ｆ：3,4,5-トリ-Ｏ-カフェオイルキナ酸
【図１】
2005298382.tif 000003
【図２】
2005298382.tif 000004