(57)【要約】【課題】 シワや小ジワの低減に有効なシワ改善用皮膚外用剤を提供する。【解決手段】 線維芽細胞のコラーゲン産生能を高めるプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を皮膚に塗布することによりシワ改善効果に優れたシワ改善用皮膚外用剤に関する。      【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を配合したことを特徴とするシワ改善用皮膚外用剤。
【請求項２】
プロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩が、下記構造式で示されることを特徴とする請求項１記載のシワ改善用皮膚外用剤。
2005289873.tif 000007
（化１中、Ｒは、アルキル基を示す。）
【請求項３】
プロリンのＮ−アシル誘導体を全重量に対し０．０００１〜５．０重量％含有することを特徴とする請求項１乃至２記載のシワ改善用皮膚外用剤。
【請求項４】
プロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体であることを特徴とする請求項１乃至３記載のシワ改善用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、線維芽細胞のコラーゲン産生能を高める下記（化１）で示されるプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を皮膚に塗布することにより、シワや小ジワ改善効果に優れたシワ改善用皮膚外用剤に関する。
【化１】
2005289873.tif 000002
（化１中、Ｒは、アルキル基を示す。）
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会が進行するにつれて、美しく年を重ねるために、化粧品に求められる役割が大きくなってきている。ところが、肌は、加齢などの内的因子や紫外線、活性酸素などの外的因子によって、皮膚が本来維持している収縮性、柔軟性、保湿性等の機能が衰え、様々なトラブルを発生する。
【０００３】
これらのトラブルの一つであるシワは、真皮の細胞外マトリックスを産生する細胞数の減少、細胞分裂速度の衰えなどの細胞機能の老化や、コラーゲン線維の減少及び変性、皮下脂肪組織の減少等により、弾力性の損失が起こることが原因となって発生する。
【０００４】
従来、皮膚老化への対処法としては、老化によって失われるコラーゲン、ヒアルロン酸などの物質を直接皮膚に塗布し補う組成物や、紫外線や活性酸素から皮膚を守るための防御物質を配合した間接的な老化防止剤が主流であった。
【０００５】
また、生成したシワを根本的に改善しようとする試みとしては、レチノイン酸やグリコール酸に代表されるα-ヒドロキシ酸等がある。しかし、α-ヒドロキシ酸においては、高い配合量が必要となり、レチノイン酸においては、腫れを伴う炎症等を起こす等安全性に問題があり、長期使用に耐え得るものではなかった。尚、レチノイン酸の使用例としては下記の文献が見られる。
【０００６】
【非特許文献１】フレグランスジャーナル  １９９９年１月号  第３９頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
この点を考慮し、形成外科でシワの治療においてボツリヌス毒素が従来より利用されている。痙攣の低減に使用されていたボツリヌス毒素は、筋痙攣状態、及び瞼の間のシワであるみけんのシワに作用可能であることが示されている。さらにこのボツリヌス毒素は、シワの治療における形成外科においても従来から使用されている。従って、シワの神経筋成分に薬理学的に作用することが可能であるが、作用が強力であり、注射による痛みを伴うという欠点がある。また、ボツリヌス毒素は、分子量が大きく、皮膚からの吸収は見込めず皮膚外用剤への利用は困難である。従って、シワを改善し、しかも痛みを伴わず、皮膚に弊害がなく、安全に使用でき、更に変質の少ない老化防止に有効な皮膚外用剤の開発が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで本発明者らは、かかる実情に鑑み鋭意検討した結果、線維芽細胞のコラーゲン産生能を高めるプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を皮膚に塗布することにより、シワ改善効果に優れたシワ改善作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
従来、プロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩は、抗高血圧剤などの薬剤に利用されているが、本願のごとくシワ改善用皮膚外用剤に利用されている例はない。
【００１０】
【特許文献１】特開  昭５６−１３９４５６号
【００１１】
即ち、本発明は、皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生能を増進させるプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を配合してなることを特徴とするシワ改善用皮膚外用剤のことである。
【００１２】
シワ改善において、目元のシワは、笑うときの表情によって、同じ場所が繰り返し伸縮することでその部分に折り目の溝が形成されるため、伸縮を緩和することによってその形成を防ぎ、それと共に、真皮成分であるコラーゲンの産生能を向上させることは、真皮に張りを与え、皮膚の表面を伸ばすことによって更にシワの改善を早めることが期待できる。
【００１３】
以下、本発明の構成について詳述する。本発明に用いられる皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生能を増進させるプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩が利用される。
【００１４】
皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生能を増進させるプロリン のＮ−アシル誘導体は、公知の方法により調製することができる。例えば、プロリン のＮ−アシル誘導体は、直鎖または分岐状の炭素数１〜２４の飽和または不飽和の脂肪酸を塩化チオニル、ホスゲン等のハロゲン化剤を用いてクロライド、ブロマイド等のハロゲン化物に変換した後、前述のプロリン
と縮合させるか、または脂肪酸を酸無水物に変換した後、プロリン と反応させることにより得られる。
脂肪酸としては、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、ピバル酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸等の脂肪酸を単独もしくは組合したものがあげられる。
酸無水物を経由するプロリンのＮ−アシル誘導体の調整方法を、以下に例示する。
プロリンを溶媒に溶解または分散させ、得られた溶液を５〜７０℃に保ちながら、
酸無水物をプロリン対して０．３〜３．０倍当量加え、ソニックを用いて、
アシル化反応を行うことによりプロリンのＮ−アシル誘導体を得ることができる。
アシル化反応に用いられる溶媒としては、アセトン、トルエン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等があげられ、これらは単独あるいは混合して用いてもよい。
アシル化反応に用いられる酸無水物としては、無水酢酸、無水プロパン酸、無水プロピオン酸、無水イソ酪酸等があげられる。プロリン
のＮ−アシル誘導体の塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミンなどのアミンの付加塩およびアルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸の付加塩などがあげられる。
プロリン のＮ−アシル誘導体の塩を得たいとき、
プロリン のＮ−アシル誘導体が塩の形で得られる場合には、そのまま精製すればよく、遊離の形で得られる場合には、適当な溶媒に溶解または懸濁し、塩基を加えて塩を形成させればよい。
精製は、例えば再結晶、クロマトグラフィー等の簡便でかつ実用的な方法が用いられるが、特に限定するものではない。
【００１５】
本発明において、プロリン のＮ−アシル誘導体のシワ用皮膚外用剤への配合量は、皮膚外用剤全体に対して０．０００１〜５．０重量％が好ましく、０．００１〜１．０重％がより好ましい。０．０００１重量％未満では本発明の効果が十分ではなく、１０．０重量％を超えると効果の増大を期待できず、製剤の使用感を悪くするなどの不都合を生じる場合がある。
【００１６】
たとえば、この発明にかかる有効成分を各種化粧料基剤などに配合して、クリーム、乳液、化粧水、パック剤、洗顔料などの各種基礎化粧料、ファンデーション、口紅、ほほ紅、白粉などの各種メーキャップ料、洗髪料、養毛剤、シャンプー、リンスなどの各種頭髪用化粧料、石鹸、美爪料、オーデコロンなどその他化粧料に対して広範囲に適用できる。また、前記各種化粧料の実施態様は、溶液、エマルジョン、軟膏、ゾル、ゲル、パウダー、スプレーなどの各種態様で適用できる。
【発明の効果】
【００１７】
以上説明したように、本発明によれば、優れたシワや小ジワ改善効果を有する皮膚外用剤を提供することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
次に試験例および実施例をあげて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。また、配合量は特に断わらない限り、皮膚外用剤全体に対する重量％である。まず、本発明のシワ用皮膚外用剤の評価をするために用いた試験法・基準を記載する。
【００１９】
プロリンのＮ−アシル誘導体の調整方法を、以下に例示する。
プロリン０.１１５ｇを酢酸エチル２ｍＬに分散する。無水酢酸０.２０４ｇを溶液に加える。溶液を２５℃に保ちながら、ソニックを３５Hz、８０Wにて１０分間行い、アシル化反応を行った。
反応物の溶媒を減圧下、留去し、冷却することにより、固化させた残留物を少量のヘキサンで洗った。静置後、ヘキサンを除いたあと、酢酸エチルより再結晶行い、目的物を得た。（０.１５７ｇ、収量９４％）
【００２０】
構造解析
１Ｈ  ＮＭＲ  ：δ  ２．０４  （ｍ，  ３Ｈ，  ａｌｋｙｌ  Ｈ），  ２．１７  （ｓ，  ３Ｈ，  ＣＨ3ＣＯ），  ２．４７  （m，  １Ｈ，  ａｌｋｙｌ  Ｈ），  ３．４８  （ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ３．０，  ７．２，  １６．２Ｈｚ，  １Ｈ，  ＣＨ２Ｎ），  ３．５９  （ｂｒ  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．２，  ９．０Ｈｚ，１Ｈ，  ＣＨ２Ｎ），  ４．６０  （ｂｒ  ｔ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ４．１Ｈｚ  ＣＨＣＯＯＨ），  ８．３８  （ｂｒｓ，  １Ｈ，  ＣＯＯＨ）
ＩＲ（ＫＢｒ）：１２００，１４６０，１６１０（C＝O），１７２０（C=O）
ｍｐ：１１８℃
【００２１】
プロリンのＮ−アシル誘導体に対する線維芽細胞のコラーゲン産生作用
24wellシャレーに線維芽細胞（HFSKF-II）を１.０×１０５播種し、１５％FBS含有Ham’sF-１２培地でコンフルエントまで培養した。FBS不含Ham’sF-１２に各種試料を加え、４８時間培養を行った。合成されたコラーゲンをヒトI型コラーゲン測定用ELISAキット（Chondrex,Inc）で定量した。
【００２２】
線維芽細胞のコラーゲン産生作用
【表１】
2005289873.tif 000003
【００２３】
表１に示したようにプロリンのＮ−アシル誘導体であるアセチルプロリン及びプロピルプロリンは線維芽細胞のコラーゲン合成能を促進する働きがあることを見出した。
表１に示したようにプロリンと比べ、プロリンのＮ−アシル誘導体であるアセチルプロリン及びプロピルプロリンの方が顕著に高いことを見出した。
【００２４】
[プロリンのＮ−アシル誘導体の相溶性]
各種溶媒に溶解することを確認した。
【００２５】
【表２】
2005289873.tif 000004
【００２６】
表２に示したようにプロリンと比べ、プロリンのＮ−アシル誘導体であるアセチルプロリン及びプロピルプロリンの方が相溶性は顕著に高いことを見出した。
【００２７】
プロリンのＮ−アシル誘導体に対する経皮吸収率の測定
１％水溶液に調整した試料について、マイクロブタ皮膚を利用して経皮吸収率に関する試験を行なった。結果は次の通りである。ユカタンマイクロブタの皮膚（Ｙｕｃａｔａｎ
Ｍｉｃｒｏｐｉｇ Ｓｋｉｎ Ｓｅｔ：Ｃｈａｒｌｅｓ
Ｒｉｖｅｒ社）一定部位を切り取り、フランツタイプのグラス拡散器具の中間に角質層部分を仰向けにして皮膚試験片を設置した後、底部分の空間には８０体積％のエタノール−水混合溶液を入れて拡散器具の温度を３７°Ｃに保持した。レセプター溶液は一定の速度（６００ｒｐｍ）で攪拌した。この皮膚標本上に、被験試料３０μLを直径２．４ｃｍの円内に塗布した。
【００２８】
一定時間経過後、レセプター部分の溶液を採取し、採取した量だけの緩衝液を加えた。採取した試料については、定量は、液体クロマトグラフィーにより定量を行った。定量から計算された各有効成分の経皮吸収率は表3に示す通りである。カラムはダイソー製ＯＤＳのカラムのＤＡＩＳＯＰＡＣＫ  ＳＰ−１２０−５−ＯＤＳを用いた。溶媒はｐＨ２．６に調整した１０ｍＭリン酸バッファーに２０％量のエタノールを混合したものを用いた。流量は１ｍＬ／minに設定した。
【００２９】
【表３】
2005289873.tif 000005
【００３０】
表3に示したようにマイクロブタ皮膚を利用しての経皮吸収率の測定ではプロリンと比べ、プロリンのＮ−アシル誘導体であるアセチルプロリン及びプロピルプロリンの経皮吸収率が顕著に高いことを見出した。
【００３１】
ヒトに対するシワ改善使用試験
シワが気になる男女１3０名（１群１０名）に対して、洗顔料を用いて顔面をよく洗浄した後、全顔に各々表２に示した皮膚外用剤を１日に１回塗布して４週間後にシワの目視評価及びレプリカを採取し観察を行った。
【００３２】
改善度使用前に比較して使用薬剤により、症状が改善されたことを示す、不変または悪化したと大きく２段階に分け有用性の評価を行った。
【００３３】
有用性の評価
◎：改善度で１０名中、症状の改善が７名以上。
○：改善度で１０名中、症状の改善が５〜７名。
△：改善度で１０名中、症状の改善が２〜５名。
×：改善度で１０名中、症状の改善が２名以下。
【００３４】
実施例１〜１０、比較例１〜４、表１に示した処方のローションタイプの皮膚外用剤を調製して、上記の手法によりその有用性を評価した。その結果を併せて表４に示した。
【００３５】
【表４】
2005289873.tif 000006
【００３６】
表４に示すように、皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生能を増進させるプロリンのＮ−アシル誘導体であるアセチルプロリン及びプロピルプロリンを用いた本発明の皮膚外用剤は、各比較例の化粧水に比べシワ改善効果に優れていた。
【００３７】
以下に種々の剤型の本発明によるシワ改善用皮膚外用剤の実施例を示すが、各実施例の皮膚外用剤は、その具体的な剤型に応じて常法により製造した。また、各実施例で得られた外用剤に上記の試験・評価を施したところ、全て上記の有用性評価は「◎」であった。
【００３８】
次に本発明にかかるプロリンのＮ−アシル誘導体であるアセチルプロリン及びプロピルプロリンを用いた具体的な皮膚外用剤について説明する。
【００３９】
以下に本発明の処方例を挙げる。
＜処方例１＞化粧水（重量％）
アセチルプロリン・・・0.001
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.0.)・・・1.5
エタノール・・・10.0
防腐剤・酸化防止剤・・・適量
香料・・・適量
精製水・・・残部
【００４０】
＜処方例２＞化粧用クリーム（重量％）
アセチルプロリン・・・5.0
ミツロウ・・・2.0
ステアリルアルコール・・・5.0
ステアリン酸・・・8.0
スクワラン・・・10.0
自己乳化型グリセリルモノステアレート・・・3.0
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.0.）・・・1.0
プロピレングリコール・・・5.0
水酸化カリウム・・・0.3
香料・・・適量 
防腐剤・酸化防止剤・・・適量
精製水・・・残部
【００４１】
＜処方例３＞乳液（重量％）
アセチルプロリン・・・1.0
スクワラン・・・8.0
ワセリン・・・2.0
ミツロウ・・・0.5
ソルビタンセスキオレエート・・・0.8
ポリオキシエチレンオレイルエーテル（20E.0）・・・1.2
カルボキシビニルポリマー・・・0.2
プロピレングリコール・・・0.5
水酸化カリウム・・・0.1
エタノール・・・7.0
香料・・・適量
防腐剤・酸化防止剤・・・適量
精製水・・・残部
【００４２】
＜処方例４＞パック剤（重量％）
アセチルプロリン・・・0.01
酢酸ビニル樹脂エマルジョン・・・15.0
ポリビニルアルコール・・・10.0
ホホバ油・・・3.0
グリセリン・・・5.0
酸化チタン・・・8.0
カオリン・・・7.0
エタノール・・・5.0
香料・・・適量
防腐剤・酸化防止剤・・・適量
精製水・・・残部
【００４３】
＜処方例５＞軟膏（重量％）
プロピオニルプロリン・・・0.0001
パラジメチルアミノ安息香酸オクチル・・・4.0
ブチルメトキシベンゾイルメタン・・・4.0
ステアリルアルコール・・・18.0
モクロウ・・・20.0
グリセリンモノステアリン酸エステル・・・0.3
ワセリン・・・33.0
香料・・・適量
防腐剤・酸化防止剤・・・適量
精製水・・・残部