(57)【要約】【課題】本発明の目的は、リパーゼ活性に起因する疾患の有効な予防手段または治療手段を提供し、また当該治療手段となりうるリパーゼ阻害剤、脂肪吸収抑制剤、脂肪蓄積抑制剤、医薬組成物、食品および飲料、ならびに化粧料を提供することである。【解決手段】本発明により、杜仲葉粉砕物またはその水抽出物を含むリパーゼ阻害剤が提供される。また本発明により、リパーゼ阻害効果を有する医薬組成物、食品、飲料、化粧料などが提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
杜仲生葉を蒸熱する工程；杜仲葉を水により抽出する工程；および、当該抽出液を濃縮する工程を含む製造方法により得られる杜仲葉水抽出エキス。
【請求項２】
粉体である請求項１に記載の杜仲葉水抽出エキス。
【請求項３】
請求項１または２に記載の杜仲葉水抽出エキスを含むリパーゼ阻害剤。
【請求項４】
請求項３に記載のリパーゼ阻害剤を含む飲食物。
【請求項５】
請求項３に記載のリパーゼ阻害剤を含む医薬組成物。
【請求項６】
請求項３に記載のリパーゼ阻害剤を含む化粧料。
【請求項７】
請求項１または２に記載の杜仲葉水抽出エキスを含む脂肪吸収抑制剤。
【請求項８】
請求項７に記載の脂肪吸収抑制剤を含む飲食物。
【請求項９】
請求項７に記載の脂肪吸収抑制剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
請求項７に記載の脂肪吸収抑制剤を含む化粧料。
【請求項１１】
請求項１または２に記載の杜仲葉水抽出エキスを含む脂肪蓄積抑制剤。
【請求項１２】
請求項１１に記載の脂肪蓄積抑制剤を含む飲食物。
【請求項１３】
請求項１１に記載の脂肪蓄積抑制剤を含む医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１１に記載の脂肪蓄積抑制剤を含む化粧料。
【請求項１５】
杜仲生葉を蒸熱する工程；杜仲葉を水により抽出する工程；および、当該抽出液を濃縮する工程を含む、杜仲葉水抽出エキスの製造方法。
【請求項１６】
杜仲葉水抽出エキスが、当初の抽出液に対して容積比で５〜８％の濃縮エキスである、請求項１５に記載の杜仲葉水抽出エキスの製造方法。
【請求項１７】
杜仲葉を水により抽出する工程における抽出温度が８０〜１００℃であり；抽出液を濃縮する前に０〜１０℃で静置し、生じる沈殿物を除去する工程を含み；さらに抽出液の濃縮工程後に６８０〜８４０ｇのｇ値で２０〜３０分間遠心分離を行い、沈殿物を除去する工程を含む、請求項１５または１６に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本出願は、杜仲葉成分、特に杜仲葉水抽出物を含むリパーゼ阻害剤、脂肪蓄積抑制剤、および脂肪吸収抑制剤に関する。さらに本発明は、当該リパーゼ阻害剤、脂肪蓄積抑制剤、または脂肪吸収抑制剤を含む経口摂取用組成物、飲食物、医薬組成物、食品組成物、化粧料等に関する。
【背景技術】  肥満とは脂肪組織が過剰に蓄積された状態であり、医学的に特に肥満の治療が必要な状態を「肥満症」という。肥満症は、糖尿病、高血圧、高脂血症などの疾患における危険因子となり、近年、肥満症を伴う上記疾患の患者においての増加が問題となっている。肥満症を治療するための有効な手段の１つとして、生体内におけるリパーゼ阻害による脂肪吸収の抑制が注目されている。
摂取された食物中の長鎖の中性脂肪（トリアシルグリセロール）の主な消化酵素の１つである膵リパーゼは、トリアシルグリセロールの１位ないし３位のエステル結合を加水分解を触媒する。こうして生成した脂肪酸とモノアシルグリセロールは、消化管から吸収された後に、再びトリアシルグリセロールに変換される。血液を通して各組織に運ばれるトリアシルグリセロールはエネルギーとして消費されるが、消費量を上回る分の脂肪は脂肪組織に蓄積される。このような生体内での脂肪の吸収および蓄積の機構における膵リパーゼの役割に注目して、膵リパーゼの阻害剤を投与することにより脂肪の吸収を阻害する試みが行われている。しかし、現在までに肥満症治療のためのリパーゼ阻害剤が臨床で使用されている例はない。
また微生物性のリパーゼは特定の皮膚疾患に関与していることが知られている。すなわち、皮脂腺の肥大増殖や毛嚢孔の角化亢進などが原因となって皮脂が溜まると、毛嚢の毛漏斗に存在する皮膚常在菌のニキビ桿菌や皮膚ブドウ球菌が増殖し、これらのリパーゼが皮脂を構成しているトリアシルグリセロールを分解して、遊離脂肪酸が生成する。この遊離脂肪酸が上皮に作用し、各種の酵素を産生して、ニキビ、皮膚炎、フケなどの要因になるといわれている（非特許文献１を参照）。従って、当該微生物性のリパーゼを阻害することができれば、当該リパーゼに起因する特定の皮膚病についての治療・予防手段を提供することができると考えられる。
天然物由来の食品や漢方薬は、一般に副作用が少ないなどの利点を有することから、近年において発生が増加している各種難治疾患に対してのその有用性が注目されている。上述のリパーゼ関連疾患に関しても、天然物由来の食品成分においてリパーゼ活性阻害作用を有する物質の探索が行われている（特許文献１および２を参照）。
杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａ  ｕｌｍｏｉｄｅｓ  ｏｌｉｖｅｒ）は、中国中央部起源のトチュウ科トチュウ属の一科一属一種に分類される落葉性木本類で、樹高が２０ｍに達する喬木である。杜仲は、一般にお茶と称するツバキ科の植物と比較し、カフェインを全く含んでいないほか、含有物も異なる。例えば、杜仲の葉および樹皮には、引っ張るとさけ目から白く糸を引く成分が含まれている。これは温帯に分布する樹木ではほとんど確認されていないトランス型高分子イソプレノイド「グッタペルカ」と称せられる物質である。杜仲葉は、１９８０年代から飲料としての用途が普及している。杜仲の樹皮は医薬品として取り扱われており、中国では高血圧症、腰痛、関節痛、腎臓病、肝臓病、ストレス、精力減退、利尿困難、物忘れなどに有効な漢方薬として利用されている。
杜仲葉の成分のリパーゼ阻害活性について検討した例もいくつかの報告がされているが、十分な阻害活性を有する杜仲葉成分に関する報告は未だなされていない（特許文献３および４を参照）。
また、通常の杜仲茶葉の製造においては、天日乾燥や焙煎などの工程が含まれるため、生の杜仲葉に本来含まれる成分が当該工程において失われる場合があり、そのような成分の生理活性についてはほとんど知られていなかった。さらに、焙煎などの工程において安定な成分であっても、通常茶葉として用いられる形状の杜仲葉で水抽出した場合に、水抽出物にはほとんど含まれず、杜仲葉に残留する成分もあり、そのような成分についての生理活性についてもほとんど知られていなかった。
【特許文献１】      特開２００２−９７１４７号公報
【特許文献２】      特開２００１−３２１１６６号公報
【特許文献３】      特開２００２−１７９５８６号公報
【特許文献４】      特開２００２−２７５０７７号公報
【非特許文献１】      「新化粧品学」、光井武夫、第２９−３０頁、南山堂、東京、１９９３年。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】  本発明者は、かかる課題を解決する為に鋭意研究を進めたところ、特定の方法により調製した杜仲葉粉砕物、およびそれらから得られる水抽出物が、リパーゼ阻害剤、脂肪蓄積抑制剤、および脂肪吸収抑制剤を有することを発見して本発明を完成させた。
本発明の目的は、リパーゼ阻害活性、脂肪蓄積抑制活性、および脂肪吸収抑制活性を有する杜仲葉粉砕物および水抽出物、および当該粉砕物または水抽出物を含むリパーゼ阻害剤を提供することである。さらに本発明の目的は、当該リパーゼ阻害剤、脂肪蓄積抑制剤、または脂肪吸収抑制剤を含む、経口摂取用組成物、経皮吸収用組成物、医薬組成物、食品組成物、食品および飲料、ならびに化粧料を提供することである。
すなわち本発明の一つの側面によれば、杜仲生葉を蒸熱する工程；杜仲葉を揉捻する工程；杜仲葉を乾燥する工程；杜仲葉を焙煎する工程；杜仲葉を水により抽出する工程；および、当該抽出液を濃縮する工程を含む製造方法により得られる杜仲葉水抽出エキスが提供される。当該エキスは粉体であってもよい。
本発明の別の側面によれば、上記杜仲葉水抽出エキスを含むリパーゼ阻害剤が提供される。
本発明の別の側面によれば、前記リパーゼ阻害剤を含む飲食物、医薬組成物、および化粧料が提供される。
さらに本発明の別の側面によれば、上記杜仲葉水抽出エキスを含む脂肪吸収抑制剤が提供される。
本発明の別の側面によれば、前記の脂肪吸収抑制剤を含む飲食物、化粧料および医薬組成物が提供される。
さらに本発明の別の側面によれば、上記杜仲葉水抽出エキスを含む脂肪蓄積抑制剤が提供される。
本発明の別の側面によれば、前記の脂肪蓄積抑制剤を含む飲食物、化粧料および医薬組成物が提供される。
さらに本発明の別の側面によれば、杜仲生葉を蒸熱する工程；杜仲葉を揉捻する工程；杜仲葉を乾燥する工程；杜仲葉を焙煎する工程；杜仲葉を水により抽出する工程；および、当該抽出液を濃縮する工程を含む、杜仲葉水抽出エキスの製造方法もまた提供される。
さらに本発明の別の側面によれば、杜仲茶水抽出エキスが、当初の抽出液に対して容積比で５〜８％の濃縮エキスである、上記の杜仲葉水抽出エキスの製造方法もまた提供される。
さらに本発明の別の側面によれば、杜仲葉を水により抽出する工程における抽出温度が８０〜１００℃であり；抽出液を濃縮する前に０〜１０℃で静置し、生じる沈殿物を除去する工程を含み；さらに抽出液の濃縮工程後に６８０〜８４０ｇのｇ値で２０〜３０分間遠心分離を行い、沈殿物を除去する工程を含む、上記の製造方法もまた提供される。
以下、本発明をさらに具体的に説明する。
本発明における杜仲生葉は、収穫後乾燥前の杜仲葉を意味するものであり、栽培により生産されたものであっても天然より採取されたものであってもよい。例えば、当年葉で落葉前の生葉を用い、採取時期は４月から１０月、好ましくは５月から８月、より好ましくは７月から８月までの生葉を用いることができる。
本発明における杜仲生葉の蒸熱工程は、市販されている蒸し機またはオートクレーブなどを用いて、当該技術分野で通常行われている方法により実施することができる。例えば、ネットコンベア上に杜仲生葉を広げ、ボイラーから供給される無圧蒸気を充満させた処理室を通過させることにより、杜仲生葉を蒸熱処理することができる。蒸熱温度は、特に限定はされないが、例えば杜仲葉の大きさに応じて９０〜１２０℃、好ましくは９５〜１１０℃、より好ましくは１００〜１１０℃の範囲で適宜選択されうる。また蒸熱時間も、１０〜２４０秒間、好ましくは２０〜１８０秒間、より好ましくは２０〜１２０秒間の範囲で適宜選択されうる。また、使用する蒸気量は、例えば２００〜７０Ｌ／分、好ましくは１７０〜１００Ｌ／分の範囲で適宜選択されうる。蒸し葉の処理量は、生葉の水分率に応じて、特に限定はされないが、例えば３〜１０ｋｇ／分、好ましくは４〜８ｋｇ／分、より好ましくは５〜７ｋｇ／分の範囲で適宜選択されうる。この蒸熱工程は、杜仲葉を褐色に変色させる酵素が失活することにより杜仲生葉の成分が保たれやすくなる；および、杜仲葉が柔らかくなることで、その後の揉捻工程の実施が容易になる、などの効果をもたらす。
本発明における揉捻工程は、例えば市販されている揉捻機、粗揉機または中揉機を用いて行うことができる。例えば市販の揉捻機としては、株式会社寺田製作所製、揉捻機６０Ｋｇ型などを用いることができる。本工程により、余分な水分を取り除きつつ杜仲葉中の水分が均一に整えられ、さらに杜仲特有の成分が抽出しやすくなる。本工程は、必要に応じて加熱下で行うこともできるが、好ましくは加熱せずに行われる。また本工程に要する時間は、特に限定はされないが、例えば１０〜８０分間、好ましくは２０〜６０分間、より好ましくは２５〜３０分間の範囲で適宜選択されうる。揉捻葉の処理量は、特に限定はされないが、例えば水分率に応じて２５〜４０ｋｇ、好ましくは３０〜３５ｋｇ、より好ましくは３２〜３３ｋｇの範囲で適宜選択されうる。本工程を経て得られる杜仲葉の水分量は、例えば乾量基準で２５〜４０％、好ましくは２５〜３５％、より好ましくは２５〜３０％である。
本発明の杜仲葉を乾燥する工程は、例えば天日にさらすことにより行うことができる。ここで天日にさらす時間は、特に限定はされないが、例えば９６〜１２０時間、好ましくは９６〜１１４時間、より好ましくは９６〜１０２時間の範囲で適宜選択されうる。さらに当該乾燥工程は市販されている乾燥機を用いても行うことができる。乾燥機による乾燥方法は、特に限定はされないが、例えば、株式会社寺田製作所製、乾燥機ＮＤ１２０型により行われうる。ここで熱風の温度は、特に限定されないが、例えば７０〜１００℃、好ましくは８５〜９５℃の範囲から適宜選択されうる。また本工程に要する時間は、特に限定はされないが、５〜８０分間、好ましくは１０〜８０分間、より好ましくは２０〜８０分間の範囲で適宜選択されうる。本工程を経て得られる杜仲葉の水分量は、特に限定はされないが、例えば水分率５％以下、好ましくは水分率３％以下、より好ましくは水分率２％以下である。
本発明の杜仲葉を焙煎する工程は、特に限定はされないが、例えば市販されている焙煎機を用いて行うことができる。本工程における焙煎方法は、特には限定されないが、例えば、有限会社横山製作所製、熱風式回転乾燥火入機などにより行われうる。また本工程に要する時間は、特に限定はされないが、３０〜５０分間、好ましくは３０〜４５分間、より好ましくは３５〜４０分間の範囲で適宜選択されうる。また本工程の焙煎温度は、特に限定はされないが、例えば１００〜１４０℃、好ましくは１２０〜１４０℃、より好ましくは１３０〜１４０℃の範囲で適宜選択されうる。本工程を経て得られる杜仲葉の水分量は、例えば乾量基準で８％以下、好ましくは４％以下、より好ましくは２％以下である。
本発明の杜仲葉の水抽出物を得る工程において、杜仲茶葉１ｋｇに対して、例えば５〜５０ｋｇ、好ましくは１０〜３０ｋｇ、より好ましくは１５〜２０ｋｇから適宜選択されるの量の水が用いることができる。抽出温度は、例えば８５〜９８℃、好ましくは９０〜９５℃の範囲から適宜選択されうる。抽出時間は、特に限定はされないが、例えば１０〜１２０分、好ましくは２０〜９０分、より好ましくは３０〜６０分から適宜選択されうる。
抽出液の濾過は、例えば３０〜２００メッシュのフィルターなどを用いて行われうる。濾液は濃縮を行う前に一定時間静置してもよい。静置することにより発生する沈殿物を除去することにより、不要物を取り除くことができる。静置する時間は、特に限定はされないが、例えば１〜２４時間、好ましくは６〜２０時間、より好ましくは８〜１８時間から適宜選択されうる。静置する際の温度は、特に限定はされないが、例えば０〜３５℃、好ましくは０〜１６℃、より好ましくは２〜８℃から適宜選択されうる。
濾液として得られる抽出液の濃縮は、当該技術分野で通常用いられる方法により行われるが、例えばロータリーエバポレーターなど用いて行われうる。当該濃縮工程は、例えば２０〜１４０ｍｍＨｇ、好ましくは３０〜１２０ｍｍＨｇ、より好ましくは４０〜１００ｍｍＨｇの範囲から適宜選択されうる減圧条件下、例えば３０〜８０℃、好ましくは３５〜７０℃、より好ましくは４０〜６０℃の範囲から適宜選択されうる温度で行われうる。当該濃縮工程により、当初の抽出液との容積比で例えば５〜８％、好ましくは５．６〜７．５％、より好ましくは６〜６．６％に濃縮される。
得られる濃縮物を、そのまま本発明の杜仲葉水抽出エキス液として使用することができるが、さらに遠心分離、加熱殺菌などの処理を行うこともできる。遠心分離は、市販の遠心分離機を用いて、当該技術分野で通常行われている方法により行われうる。例えばバッチ式でいえばローターリー遠心分離機、流動式でいえば多室型遠心分離機またはデカンター式遠心分離機、チューブラー型遠心分離器などが用いて行えうる。遠心分離の条件は特に限定はされないが、例えばバッチ式円心機の場合、１０００〜３１００ｒｐｍ、好ましくは１５００〜２５００ｒｐｍ、より好ましくは１８００〜２０００ｒｐｍの回転数；例えば２１０〜２０１０ｇ、好ましくは４７０〜１３１０ｇ、より好ましくは６８０〜８４０ｇのｇ値；および、例えば１０〜６０分、好ましくは１５〜４０分、より好ましくは２０〜３０分の処理時間から適宜選択される条件で行われうる。連続通過式の遠心分離機を用いる場合、１００〜４００メッシュ、好ましくは１５０〜３５０メッシュ、より好ましくは２００〜３００メッシュから適宜選択される条件で行われうる。遠心分離後の上澄みの回収は給水機、濾過助剤として珪藻土による濾過などにより行われる。
加熱殺菌は、例えば７５〜１００℃、好ましくは８０〜９５℃、より好ましくは８５〜９０℃に加温することにより行われる。加熱殺菌のための処理時間は、例えば６０〜２４０分、好ましくは９０〜２２０分、より好ましくは１２０〜１８０分の範囲から適宜選択されうる。
得られる杜仲葉水抽出エキス液の濃縮率は、当初の抽出液に対して容積比で例えば５〜７．５％、好ましくは５．５〜７％、より好ましくは６〜６．５％、例えば６．５％である。
得られる杜仲葉水抽出エキス液のゲニポシド酸含量は、６〜４０ｍｇ／ｇ、好ましくは１５ｍｇ／ｇ〜４０ｍｇ／ｇ、より好ましくは２８〜３７ｍｇ／ｇ、例えば３０ｍｇ／ｇである。
当該濃縮エキス液を、スプレードライ、フリーズドライなどの当該技術分野で通常用いられる方法で乾燥し、杜仲葉水抽出エキスの粉体を得ることができる。当該エキス粉末は、焙煎工程後、水抽出前の杜仲葉１ｋｇから、例えば２００〜６００ｇ、好ましくは２００〜４００ｇ得られる。得られる杜仲葉水抽出エキス粉末のゲニポシド酸含量は、４０〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは５０ｍｇ／ｇ〜９０ｍｇ／ｇ、より好ましくは６０〜８０ｍｇ／ｇ、例えば７７ｍｇ／ｇである。得られる杜仲葉水抽出エキス粉末の杜仲葉配糖体の含量は、３０〜６０ｍｇ／１００ｇ、好ましくは３５〜５５ｍｇ／１００ｇ、より好ましくは４０〜５０ｍｇ／１００ｇ、例えば４７ｍｇ／１００ｇである。
本明細書で用いられる用語「リパーゼ阻害剤」とは、特に限定はされないが、例えば、トリアシルグリセロールから遊離脂肪酸が生産される酵素反応を阻害する化合物を意味する。ここでの「リパーゼ」には、リパーゼ活性を有するすべての酵素が含まれる。本発明のリパーゼ阻害剤が阻害するリパーゼの例としては、膵リパーゼの消化管における脂肪吸収に関連するリパーゼ、および皮膚表皮に常在する微生物プロピオニバクテリウム  アクネス（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、ピティロスポラム  オバール（Ｐｉｌｙｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｏｖａｌｅ）およびマイクロッカス属（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）などの皮膚常在菌が産生するリパーゼが挙げられる。特に対象となるリパーゼは、膵リパーゼである。
本明細書で用いられる用語「脂肪吸収抑制剤」とは、特に限定はされないが、例えば、腸管からの中性脂肪の吸収を抑制する化合物を意味し、例えば、リパーゼなどの消化酵素の阻害により脂肪の吸収を阻害するリパーゼ阻害剤などが含まれる。
本明細書で用いられる用語「脂肪蓄積抑制剤」とは、特に限定はされないが、例えば、腸管からの中性脂肪の吸収を抑制することにより生体内における脂肪の蓄積を抑制する化合物、脂肪細胞の分化もしくは増殖を抑制する化合物、または脂肪細胞の成熟もしくは肥大化に伴う脂肪細胞内への中性脂肪の取り込みを抑制する化合物などを意味する。脂肪蓄積抑制剤には、例えば、リパーゼ阻害剤、脂肪吸収抑制剤などが含まれる。
本発明のリパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤および脂肪蓄積阻害剤は、特に限定はされないが、他の脂肪吸収阻害剤、他の肥満症の治療剤または予防剤、抗脂血症の予防剤および治療剤、ならびに肥満症が危険因子となりうる疾患、例えば糖尿病、高血圧など治療剤または予防剤とともに使用されうる。またリパーゼ阻害剤によって治癒される病気として、動脈硬化、心筋梗塞、脂肪肝がありうる。
本発明のリパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤および脂肪蓄積阻害剤は、医薬組成物の有効成分として使用することができる。当該医薬組成物は、種々の剤形、例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁液、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤などとすることができ、例えば、局所投与のためにはクリーム、ゼリー、ゲル、ペースト、軟膏などとすることができるが、これらには限定されない。当該医薬組成物は、一般に用いられる各種成分を含みうるものであり、例えば、１種もしくはそれ以上の薬学的に許容され得る賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、コーティング剤等を含みうる。また本発明の医薬組成物は、持続性または徐放性剤形であってもよい。
本発明のリパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤および脂肪蓄積阻害剤の投与量は、患者の体型、年齢、体調、疾患の度合い、発症後の経過時間等により、適宜選択することができ、本発明の医薬組成物は、治療有効量および／または予防有効量のリパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤および脂肪蓄積阻害剤を含むことができる。例えば本発明の杜仲葉粉砕物またはその水抽出物として、一般に１０〜５００００ｍｇ／日／成人、好ましくは１００〜５０００ｍｇ／日／成人の用量で使用される。当該医薬組成物の投与は、単回投与または複数回投与であってもよく、たとえば他のリパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤および脂肪蓄積阻害剤などの他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。
本発明の飲食物は、機能性飲料などの液体飲料、機能性食品を含む。当該食品組成物は、医薬部外品、他の飲食物などの成分、食品添加物などとして使用することができる。また本明細書における経口摂取用組成物は、そのまま機能性食品として使用できるほか、医薬品、医薬部外品、飲食物等の成分、食品添加物などとして使用することができる。当該使用により、本発明のリパーゼ阻害効果、脂肪吸収阻害効果および脂肪蓄積阻害効果を有する当該食品組成物または経口摂取用組成物の日常的および継続的な摂取が可能となり、効果的な脂肪吸収抑制効果による肥満症の治療および予防が可能となる。
さらに、リパーゼ阻害剤が食品中に存在することにより、微生物由来のリパーゼによる食品中に含まれる脂肪の加水分解が抑制され、遊離脂肪酸に起因する食品の劣化が防止され、食品の品質が長期にわたって保持することも可能になる。従って、本発明のさらに別の側面によれば、上述の方法で製造された水抽出エキスを含む食品保存料もまた提供される。
本発明のリパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤および脂肪蓄積阻害剤を含む食品または飲料の例としては、リパーゼ阻害効果もしくは肥満抑制効果を有する機能性食品、健康食品、一般食品（ジュース、菓子、加工食品等）、栄養補助食品（栄養ドリンク等）などが含まれる。本明細書における食品または飲料は、限定はされないが、杜仲葉粉砕物または当該粉砕物の水抽出物の他に、鉄およびカルシウムなどの無機成分、種々のビタミン類、オリゴ糖およびキトサンなどの食物繊維、大豆抽出物などのタンパク質、レシチンなどの脂質、ショ糖および乳糖などの糖類を含むことができる。
本発明のリパーゼ阻害剤、脂肪吸収阻害剤および脂肪蓄積阻害剤を含む化粧料は、特に限定はされないが、例えば、乳液、化粧液、フェイスクリーム、ハンドクリーム、ローション、シャンプー、リンスなどを含む。
【発明の効果】  以下の実施例で示すように、本発明は、リパーゼ阻害作用、血中中性脂肪低下作用、脂肪蓄積抑制作用を有する。したがって本発明により、リパーゼ活性、血中中性脂肪およびに脂肪蓄積に起因する疾患に対する治療および／または予防のための有効な手段が提供される。
【実施例】  以下、本発明の好適な実施例についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
［実施例１］  早出し用杜仲茶葉エキスの調製
（１）早出し用杜仲茶葉の製造
早出し用杜仲茶葉の製造は、特開平８−１７３１１０号公報の実施例２の記載に基づいて行った。杜仲の生葉５ｋｇを、日本茶製造用の送帯蒸機により１１０℃で９０秒間蒸熱した。生葉を送帯蒸し機の投入口から機内に投入し、コンベヤ上を移動する間に上下スチーム供給装置からスチームを当て、１１０℃で９０秒間蒸熱した。ネットコンベア上に杜仲生葉を広げ、ボイラーから供給される無圧蒸気を充満させた処理室を通過させることにより、杜仲生葉を蒸熱処理することができる。例えば、宮村鉄工株式会社製、給葉機、地上型１５００およびネットコンベア、送帯式１０００を用いることができる。
次にこの蒸熱後の杜仲葉を揉捻機を用いて３０分間揉捻した後、揉捻物を乾燥機を用いて８０℃で５時間、水分量を５％まで乾燥させた。杜仲葉の色調は蒸熱後、緑褐色であったのが、乾燥に従い緑色を帯びた黒褐色へと変化した。その後、炒葉機（ＩＲ−１０ＳＰ型：寺田製作所）を用いて１１０℃で３０分間焙煎し、早出し用杜仲茶葉サンプル２ｋｇを得た。
（２）早出し用杜仲茶葉エキスの調製
早出し用杜仲茶葉サンプル１ｋｇを９０℃の熱水１５ｋｇに投入し、９０℃で３０分間抽出し１４ｋｇ得た。その後１５０メッシュのフィルターを用いて濾過し、濾液を５℃に冷却し一晩放置した。上澄み液を取り出し、減圧下５０℃で濾液を濃縮し１ｋｇ得た。
濃縮液をクボタ株式会社製、遠心分離器ＫＳ８０００で処理し、１８００ｒｐｍの回転速度により遠心分離により沈殿物を除去し、得られた上澄み液を加熱殺菌（８５℃、２時間）し、早出し用杜仲葉水抽出エキスを得た。当該濃縮エキス液をスプレードライ法により乾燥し、早出し用杜仲葉水抽出エキスの粉体（３００ｇ）を褐色の粉体として得た。
［比較例１］  煮出し用杜仲茶葉エキスの調製
煮出し用杜仲茶葉は、従来行われている方法により製造した。杜仲生葉を水分率が１１％以下となるまで天日乾燥し、粉砕機（（株）ホーライ  ＵＧＣ−２８０）により１２番篩以下となるまで粉砕した。その後、焙煎機（横山製作所  品温自動排出式排気乾燥火入れ機８０ｋｇ）を用いて１４０℃〜１７０℃で２０分間焙煎し、煮出し用杜仲茶葉を得た。当該茶葉を実施例１の（２）早出し用杜仲茶葉エキスの調製と同様の方法により水抽出エキスを調製した。
［実施例２］  ｉｎ  ｖｉｔｒｏリパーゼ阻害活性試験
被験物質の調製にあたっては、早出しエキスまたは煮出し用エキスを０．１Ｍ  ＮａＣｌを含む０．１Ｍ  ＴＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）で各最終濃度が１、５、１０、２０ｍｇ／ｍＬになるよう調整し、サンプル液とした。また基質溶液の調製には、トリオレイン８０ｍｇ、ホスファチジルコリン１０ｍｇ及びタウロコール酸ナトリウム５ｍｇを９ｍＬの０．１Ｍ緩衝液中で超音波処理したものを用い、これを基質溶液とした。酵素溶液として、ブタ膵臓由来リパーゼを最終濃度４μｇ／ｍＬに０．１Ｍ  ＴＥＳ緩衝液で調整したものを用いた。リパーゼ活性の測定は、基質溶液１００μＬに酵素溶液５０μＬ及びサンプル溶液５０μＬを加え、３７℃で３０分間反応させた後、遊離する脂肪酸量を市販のキット（和光純薬、ＮＥＦＡ  Ｃ−テスト  ワコー）を用いて定量した。
結果を図１に示す。早出し用エキスの添加により、膵リパーゼの濃度依存的な阻害作用が確認された。また当該阻害作用は、煮出し用エキスを添加した場合を大きく上回った。
［実施例３］  血清中性脂肪低下作用および脂肪蓄積抑制作用の評価試験
ＩＣＲ系雌性マウスに、牛脂と杜仲葉を配合した高脂肪食を摂取させて、血液中の中性脂肪量、脂肪組織重量、及び体重に対する影響を調べた。なお、実施例１で製造した焙煎後の早出し用杜仲茶葉（杜仲茶葉）は１０％（ｗ／ｗ）、早出し用杜仲葉エキスは２．５、５、７．５、１０％（ｗ／ｗ）となるように飼料に添加し、摂取させた。
具体的には、無作為に選択したＩＣＲ系雌性マウス（４週齢、体重２０〜２５ｇ）を３群に分けた（各群６匹）。第１群は杜仲茶葉、第２群には早出し用杜仲葉エキス及び４０％牛脂を含む飼料を４週間投与した（杜仲茶葉群、早出し用杜仲葉エキス群）。また第３群のマウスには、ネガティブコントロールとして、４０％牛脂のみを配合した飼料を４週間投与した（コントロール群）。なお試験中は、ラットに餌および水を自由に摂取させた。
上記飼料を投与してから４週間後、体重を測定した後に、マウスをエーテル麻酔によりと殺し、腹大静脈より採血し、血清中の中性脂肪を測定した。なお、血清中の中性脂肪は、トリグリセライドＥ−テストワコーを用いて測定した。また開腹後、生殖器周囲脂肪組織重量を秤量により測定した。
血清中性脂肪低下作用の評価試験結果を図２および図３に示す。杜仲茶葉およびの早出し杜仲葉エキスの摂取により、有意に血清中性脂肪量が低下することが確認された。
脂肪蓄積抑制作用の評価試験結果を図４および図５に示す。杜仲茶葉および早出し杜仲葉エキスの摂取群において、有意な脂肪蓄積の抑制が確認された。
さらに、体重変化の測定結果を図６に示す。特に早出し用杜仲葉エキスの摂取群において、有意な体重増加の抑制が確認された。
【図面の簡単な説明】
【図１】  早出し杜仲葉エキス液に関しての、膵リパーゼ活性阻害試験の結果の一例を示すものである。
【図２】  杜仲茶葉および早出し杜仲葉エキス液に関しての、血清中性脂肪量の抑制効果をについての試験結果の一例を示すものである。
【図３】  早出し杜仲葉エキス液に関しての、血清中性脂肪量の抑制効果をについての試験結果の一例を示すものである。
【図４】  杜仲茶葉および早出し杜仲葉エキス液に関しての、脂肪組織重量抑制効果および体脂肪率抑制効果の試験結果の一例を示すものである。
【図５】  早出し杜仲葉エキス液に関しての、脂肪組織重量抑制効果および体脂肪率抑制効果の試験結果の一例を示すものである。
【図６】  杜仲茶葉および早出し杜仲葉エキス液に関しての、体重増加抑制効果の試験結果の一例を示すものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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