(57)【要約】  【課題】  十分な免疫活性を発現できる免疫活性剤を提供する。  【解決手段】  β-グルコースがβ1→3結合したβ-1,3-グルコースオリゴマーからなる主鎖と、β-1,3-グルコースオリゴマーからなる１以上の側鎖とを含み、前記側鎖β-1,3-グルコースオリゴマーの末端グルコース残基の１位が、前記主鎖β-1,3-グルコースオリゴマーにおけるいずれかのグルコース残基の６位にβ1→6結合し、且つ、全グルコース残基数が６〜５６の範囲である多糖体を含有する免疫活性剤とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖体を含む免疫活性剤であって、
前記多糖体が、β-グルコースがβ1→3結合したβ-1,3-グルコースオリゴマーからなる主鎖と、β-1,3-グルコースオリゴマーからなる１以上の側鎖とを含み、前記側鎖β-1,3-グルコースオリゴマーの末端グルコース残基の１位が、前記主鎖β-1,3-グルコースオリゴマーにおけるいずれかのグルコース残基の６位にβ1→6結合し、且つ、全グルコース残基数が６〜５６の範囲であることを特徴とする免疫活性剤。
【請求項２】
主鎖であるβ-1,3-グルコースオリゴマーのグルコース残基数が、２〜７の範囲である請求項１記載の免疫活性剤。
【請求項３】
側鎖であるβ-1,3-グルコースオリゴマーのグルコース残基数が、３〜７の範囲である請求項１または２記載の免疫活性剤。
【請求項４】
前記主鎖に結合している側鎖の数が、２〜７の範囲である請求項１〜３のいずれか一項に記載の免疫活性剤。
【請求項５】
IL-6誘導活性を示す請求項１〜４のいずれか一項に記載の免疫活性剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の免疫活性剤を含む抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多糖体を含む免疫活性剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
古来、アガリスクやヤマブシタケ等は漢方薬として重宝されているが、現在では、これらに含まれるβ-グルカンが、免疫活性ひいては抗腫瘍活性を示すことが知られている（例えば、非特許文献１参照）。このβ-グルカンは、一般に、グルコースがβ1→3結合、β1→4結合、β1→6結合等によって多数結合した枝わかれ構造の多糖体であり、分離精製されたβ-グルカンの中には直径５μｍにおよぶ巨大分子も存在している。
【０００３】
しかしながら、β-グルカンは、前述のような薬効を示すものの、ヒトに投与する場合に、水に難溶であるとか、腸管等への吸収性が悪い等の問題があり、十分にその効果を発揮できていないのが現状である。
【非特許文献１】八木田旭邦、外７名、Biotherapy, 17(3), 257-266(2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで、本発明の目的は、例えば、水に対する溶解性や腸管吸収性に優れ、且つ、体内で十分な免疫活性を発現することができる免疫活性剤の提供である。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
前記目的を達成するために、本発明は、多糖体を含む免疫活性剤であって、
前記多糖体が、β-グルコースがβ1→3結合したβ-1,3-グルコースオリゴマーからなる主鎖と、β-1,3-グルコースオリゴマーからなる１以上の側鎖とを含み、前記側鎖β-1,3-グルコースオリゴマーの末端グルコース残基の１位が、前記主鎖β-1,3-グルコースオリゴマーにおけるいずれかのグルコース残基の６位にβ1→6結合し、且つ、全グルコース残基数が６〜５６の範囲であることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明者らは、鋭意研究の結果以下の点を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、従来、β-グルカンは、その免疫活性が知られているものの、厳密な構造・配列が明らかにされていないため、免疫活性を示す部分は全く特定されていなかった。そこで、本発明者らは、天然のβ-グルカンの低分子化を試みたのである。具体的には、天然のβ-グルカンを直鎖のβ-1,3-グルコースオリゴマーに分解し、これを主鎖の原料として再度β1→6結合により側鎖を結合させ、低分子の多糖体を生成させた。その結果、側鎖（β-1,3-グルコースオリゴマー）の末端グルコース残基の１位が、主鎖（β-1,3-グルコースオリゴマー）のグルコース残基の６位にβ1→6結合し、且つ、全グルコース残基数が６〜５６の範囲である多糖体であれば、天然のβ-グルカンと比較して低分子化されているにもかかわらず、免疫活性ひいては抗腫瘍活性を発揮することを見出したのである。このよう本発明の免疫活性剤は、含まれる前記多糖体が、天然β-グルカンと比較して低分子であるため、例えば、水への溶解性や体内での吸収性にも優れる。したがって、医薬品や機能性食品の分野において、新規の免疫活性剤として極めて有用であると言える。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の免疫活性剤は、β-グルコースがβ1→3結合したβ-1,3-グルコースオリゴマーからなる主鎖と、β-1,3-グルコースオリゴマーからなる１以上の側鎖とを含み、前記側鎖β-1,3-グルコースオリゴマーの末端グルコース残基の１位が、前記主鎖β-1,3-グルコースオリゴマーにおけるいずれかのグルコース残基の６位にβ1→6結合し、且つ、全グルコース残基数が６〜５６の範囲である多糖体を含むことを特徴とする。
【０００８】
前記多糖体の全グルコース残基数は、６〜５６の範囲であり、好ましくは６〜４５の範囲である、より好ましくは６〜３０のであり、特に好ましくは８〜１４の範囲である。
【０００９】
また、主鎖のグルコース残基数は、３〜７の範囲が好ましく、より好ましくは３〜６であり、特に好ましくは３〜４である。一方、側鎖のグルコース残基数は、１つの側鎖について、３〜７の範囲が好ましく、より好ましくは３〜６であり、特に好ましくは３〜４である。
【００１０】
前記多糖体（１分子）における側鎖の数は、特に制限されないが、例えば、２〜７の範囲であり、より好ましくは３〜６であり、特に好ましくは３〜５である。このように前記多糖体が２つ以上の側鎖を有する場合、各側鎖は同じグルコース残基数であってもよいし、異なっていてもよい。また、側鎖が２つ以上の場合、側鎖の結合部位、すなわち、主鎖のβ-1,3-グルコースオリゴマーにおいて何残基ごとにβ1→6結合しているかについては、特に制限されず、例えば、隣りあうグルコース残基に共に側鎖が結合していてもよいし、数残基ごとに側鎖が結合してもよい。
【００１１】
本発明において、前記多糖体を構成するグルコース残基は、免疫活性を示す限りにおいて、その水素や水酸基（-OH）の水素が、他の基に置換されていてもよい。置換基としては、例えば、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、メトキシメチル基、アリール基、トリメチルシリル基、メチル基等があげられる。
【００１２】
前記多糖体は、天然β-グルカンと比較して低分子であるが、例えば、IL-6誘導活性、TNF-α誘導活性、IL-12誘導活性、IL-18誘導活性、TFN-γ誘導活性等を奏するため、前記多糖体を含む本発明は、免疫活性剤、免疫増強機能性食品として使用できる。また、本発明の免疫活性剤を含む組成物は、本発明の抗腫瘍剤として使用できる。
【００１３】
本発明の免疫活性剤は、主成分あるいは有効成分として前記多糖体を含有すれば、その他の成分については、特に制限されず、その用途に応じ適宜決定される。その他の成分としては、例えば、乳糖、澱粉、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成若しくは天然ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母、酸化亜鉛、タルク、澱粉、カキリン、ホウ酸粉末、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸マグネシウム、次没食子酸ビスマス、硫酸アルミニウムカリウム末等；水、グリセリン、プロピレングリコール、シロップ、エタノール、脂肪酸、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール等；脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、グリセリン、ミツロウ、モクロウ、パラフィン、流動パラフィン樹脂、高級アルコール、プラスチック、グリコール類、水、界面活性剤等があげられる。
【００１４】
本発明の免疫活性剤において、前記多糖体の含有割合は、全体に対して、例えば、０．１〜１００重量％の範囲であり、好ましくは２０〜１００重量％の範囲である。
【００１５】
次に、本発明の免疫活性剤における前記多糖体の製造方法について説明する。なお、本発明において、前記多糖体はグルコース残基が６〜５６と低分子であるため、以下に示すような方法によって、構造が明らかな多糖体を調製することができる。
【００１６】
前記多糖体の製造方法は、特に制限されず、公知の合成方法によって、β-グルコースがβ1→3結合したβ-1,3-グルコースオリゴマーの合成、主鎖となるβ-1,3-グルコースオリゴマーと側鎖となるβ-1,3-グルコースオリゴマーとの結合を行うことができる。また、主鎖の任意のグルコース残基に側鎖をβ1→6結合させる方法も、例えば、従来公知の方法によって行うことができる。
【００１７】
前述のようにβ-1,3-グルコースオリゴマーは、従来公知の合成方法によっても調製できるが、例えば、原料として天然β-グルカンを使用し、これをアセトリシス反応で分解することによって調製することもできる。このアセトリシス反応によって、天然β-グルカンから、グルコース残基数が、２〜７であるβ-1,3-グルコースオリゴマーを得ることができる。
【００１８】
アセトリシス反応の条件は特に制限されないが、例えば、天然β-グルカン１ｇに対して、無水酢酸２０〜２５ｍｌ、酢酸２０〜２５ｍｌ、濃硫酸１〜２ｍｌを添加して、室温で、５〜９日攪拌すればよい。なお、アセトリシス反応の条件を適宜設定することによって、得られるβ-1,3-グルコースオリゴマーのグルコース残基数を調整することができる。
【００１９】
主鎖のβ-1,3-グルコースオリゴマーに、β1→6結合によって側鎖のβ-1,3-グルコースオリゴマーを結合させる一例を、下記スキームに基づいて説明する。この一例においては、主鎖および側鎖ともに３糖体のβ-1,3-グルコースオリゴマー（側鎖となるＡ、主鎖となるＢ）をあげているが、前述のように主鎖と側鎖とを有し、且つ、最終的に得られる多糖体のグルコース残基数が６〜５６であれば特に制限されない。
【化１】
2005225775.tif 000002
【００２０】
側鎖となるβ-1,3-グルコースオリゴマー（Ａ）は、その１位の水酸基と、主鎖となるβ-1,3-グルコースオリゴマーのいずれかのグルコース残基６位の水酸基との脱水素結合によって結合できる。この際、他の部位で結合が生じないよう、１位以外の水酸基に、水素に代えて保護基（前記スキームにおいてＸ）をつけておくことが好ましい。保護基Ｘとしては、例えば、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基等があげられる。また、β-1,3-グルコースオリゴマー（Ａ）の１位の水酸基には、水素に代えて、脱水素反応が起こり易い活性基（Ｚ）をつけておくことが好ましい。保護基Ｚとしては、例えば、-C(NH)CCl3、-F、-S-C6H5等があげられる。
【００２１】
一方、主鎖となるβ-1,3-グルコースオリゴマー（Ｂ）には、選択的に側鎖を結合させるために、側鎖を結合させないグルコース残基の６位に保護基をつけておくことが好ましい。例えば、前記スキームに示すように側鎖を結合させないグルコース残基については、その６位と４位の水酸基の両方を保護する保護基（Ｍ）をつけておくことが好ましい。保護基Ｍとしては、例えば、-CH(C6H5)-、-C（CH3）2等があげられる。また、末端グルコース残基の３位についても同様に、水酸基の水素に代えて保護基（Ｑ）をつけておくことが好ましく、保護機Ｑとしては、例えば、メトキシフェニルメチル基、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基等があげられる。また、その他の水酸基についても同様に、水酸基の水素に代えて保護基（Ｙ）をつけておくことが好ましく、保護機Ｙとしては、例えば、フェニル基、アリル基、アセチル基、ベンジル基等があげられる。
【００２２】
なお、上述した保護基（Ｚ、Ｍ、Ｑ）や活性基（Ｚ）としては、従来公知のものがあげられ、また、従来公知の方法によってβ-1,3-グルコースオリゴマーに導入することができる。
【００２３】
側鎖となるβ-1,3-グルコースオリゴマー（Ａ）と、主鎖となるβ-1,3-グルコースオリゴマー（Ｂ）とを脱水反応させて、側鎖をβ1→6結合によって主鎖に結合させ、多糖体の前駆体Ｃを生成する。この脱水反応の条件は特に制限されず、従来の条件と同様に行うことができる。一例としては、温度が−１５〜２５℃、反応時間が０．５〜１０時間であることが好ましく、また、反応温度を−１５〜−１０℃程度から徐々に昇温させ、最終的に０〜２５℃程度で反応させることがより好ましく、この際、昇温にかける時間は１〜３時間、昇温後の反応時間は７〜９時間程度であることが好ましい。
【００２４】
そして、最終的に前駆体Ｃから、各種保護基を除去して水素に置換することによって、多糖体Ｃ'が得られる。なお、多糖体のグルコース残基は、前述のように免疫活性を有する限り、その水酸基が置換されていてもよく、例えば、前駆体Ｃをそのまま多糖体として使用することも可能である。
【００２５】
以下、実施例及び比較例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、以下に示すスキームにおいて、化学構造式の下に化合物の整理番号を付している。
【実施例１】
【００２６】
Ｉ．  本発明の免疫活性剤における多糖体を調製するための原料として使用できるβ-1.3グルコースオリゴマーを調製した。
【００２７】
１．アセトリシスによる調製
下記スキーム（１）〜（３）に基づいて、β-グルカンから、３糖体(化合物１)、５糖体（化合物２）を調製した。
【００２８】
まず、下記スキーム（１）に示すように、β-グルカン（商品名マクロガード：Biotec社製）１ｇに対して無水酢酸２５ｍｌ、酢酸２５ｍｌおよび２％硫酸１ｍｌを加え、室温で５日間撹拌することによってアセトリシスを行った。この反応液を中和処理した後、水およびクロロホルムで分配を行い、得られたクロロホルム層をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。これによって、β-1,3結合の３糖体である化合物１（アセテート体）を４８ｍｇ（収率４.８％）、β-1,3結合の５糖体である化合物２（アセテート体）を３１ｍｇ（収率３.１％）得た。
【００２９】
【化２】
2005225775.tif 000003
【００３０】
そして、化合物１（３糖体）にピペリジン、酢酸、ＴＨＦを添加し、窒素雰囲気下、室温で約１日攪拌することにより一段階目の反応を行い、さらに、CCl3CN、CsCO3、CH2Cl2を添加して、窒素雰囲気下、室温で４時間攪拌することにより二段階目の反応を行った。これによって、末端（１位）の炭素が修飾された化合物３を得た（スキーム（２））。一方、化合物２にナトリウムメトキシド/ＭｅＯＨを添加し、脱アセチル化を行うことによって化合物４を定量的に得た（スキーム（３））。
【００３１】
【化３】
2005225775.tif 000004
【化４】
2005225775.tif 000005
【００３２】
得られたβ-1,3グルコースオリゴマーの３量体（化合物３）および５量体（化合物４）は、質量分析およびＮＭＲによって、その構造を確認した。質量分析およびＮＭＲ分析の結果、３糖体である化合物３は、MALDI-MS ; m/z = 990.12 [(M+Na)+] Exact Mass; 966.29、５糖体である化合物４は、MALDI-MS ; m/z = 1566.79 [(M+Na)+] Exact Mass; 1542.45となった。このように安価なβ-グルカンのアセトリシスによれば、多段階の合成を行うことなく、わずか２段階でβ-1,3グルコースオリゴマーを調製できるため、本発明の免疫活性剤における多糖体の原料として極めて有用である。
【００３３】
２．有機合成による調製
（ｉ）  単糖
【化５】
2005225775.tif 000006
【００３４】
前記スキーム（４）に従って各種単糖を調製した。まず、Ｄ−グルコース（化合物５）をアリルアルコール(AllylOH：50当量)に溶解してから、塩化トリメチルシリル(TMSCl：5当量)を加え、６０℃で７時間撹拌した。そして、未反応のAllylOHとTMSClとを除去した後、この反応物を未精製のままアセトニトリルに溶解した。この溶液に、さらに、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（PhCH2(OMe)2：1.5当量）とｐ−トルエンスルホン酸（p-TsOH：0.1当量）を加え、室温で３時間撹拌することによって化合物６を得た。２工程によって得られた化合物６の収率は、６８％であった。なお、「収率」とは、各反応における出発物質（化合物）を１００％とした際の収率であって、以下同様である。続いて、化合物６をジクロロメタン(CH2Cl2)に溶解してから、塩化ベンジル(BzCl：1.1当量)、トリエチルアミン(Et3N：2.2当量)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt：1.1当量)を加え、室温で１日撹拌することによって化合物７を得た。精製後の前記化合物７の収率は、化合物６を１００％として７６％であった。なお、化合物の精製は、特に言及しない限りシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって行った。次に、化合物７をジクロロメタン(CH2Cl2)に溶解してから、ｐ−メトキシフェニルメチルトリクロロメチルイミデート(MPMOC(NH)CCl3：2.0当量)、ルイス酸、モレキュラーシーブス（商品名MS4A、アルドリッチ社製、以下同じ）を加えて、この混合物を‐２０℃で攪拌した。ルイス酸として、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル(TMSOTf)を用いた場合、０.５時間の攪拌によって、６１％の収率で化合物８を得ることができた。また、ルイス酸としてトリフルオロメタルスルホン酸スズ（Sn(OTf)2）を用いた場合には、１７時間の攪拌によって、２８％の収率で化合物８が得られた。次に、化合物８をジクロロメタン(CH2Cl2)に溶解してから、ジメチルアミン・３水素化ホウ素付加物(HNMe2・BH3：2.5当量)、３フッ素化ホウ素ジエチルエーテル付加物(BF3・OEt2：1.8当量)、モレキュラーシーブスを加え、２時間攪拌して反応を行った。なお、反応温度は、−２０℃から２時間かけて室温にまで昇温させた。この反応によって、５５％の収率で化合物９を得た。他方、化合物７をジクロロメタン(CH2Cl2)に溶解してから、ジメチルアミン・３水素化ホウ素付加物(HNMe2・BH3：2.5当量)、３フッ素化ホウ素ジエチルエーテル付加物(BF3・OEt2：1.8当量)、モレキュラーシーブスを加え、１２時間攪拌して反応を行った。なお、反応温度は、反応液を‐２０℃にしてから室温に放置し（２時間で室温）、そのまま残りの１０時間は室温とした。この反応によって化合物１０（収率２４％）、化合物１０’（収率４３％）を得た。
【００３５】
（ii）２糖体の調製
【化６】
2005225775.tif 000007
【００３６】
前記スキーム（５）に従って２糖体を調製した。まず、得られた化合物７をジクロロメタン(CH2Cl2)に溶解してから、ｐ−メトキシフェニルメチルトリクロロメチルイミデート(MPMOC(NH)CCl3：2.0当量)、トリフルオロメタンスルホン酸t-ブチルジメチルシリル(TBDMSOTf：0.1当量)、モレキュラーシーブスを加え、３時間攪拌して反応を行い、化合物８を得た（収率６８％）。なお、反応温度は、−２０℃から３時間かけて室温にまで昇温させた。この化合物８を完全に精製せずに、イリジウム錯体([Ir(cod)(MePh2P)2]PF6：0.2当量)を加え、化合物８のアリル基を異性化させ、さらに、ヨウ素(I2：2.0当量)と水を加えて、化合物８の１位の保護基を除去することによって化合物１１を得た。なお、化合物１１は、化合物７を１００％とした場合の収率が７５％であった。化合物１１をジクロロメタンに溶解してから、トリクロロアセトニトリル(CCl3CN：5.0当量)と炭酸セシウム(CsCO3：0.5当量)を加えて室温で２時間撹拌することによって、定量的に化合物１２を得た。
【００３７】
他方、化合物１０をジクロロメタンに溶解してから、塩化t-ブチルジメチルシリル(TBDMSOTf：1.5当量)、４−ジメチルアミノピリジン(DMAP：1.3当量)、トリエチルアミン（1.5当量）を加え、室温で１８時間撹拌することによって、８３％の収率で化合物１３を得た。この際、化合物１０を１３％回収した。
【００３８】
そして、化合物１３および化合物１２（1.2当量）をジクロロメタンに溶解してから、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル(TMSOTf：0.1当量)、モレキュラーシーブスを加えて、１時間攪拌した。なお、反応温度は、−１０℃から１時間かけて０℃にまで昇温させた。これによって、７１％の収率で２糖体の化合物１４を得た。化合物１４は、質量分析およびＮＭＲ分析の結果、MALDI-TOF-MS  Exact Mass : 1002.42  m/z = 1025.88 ［M+Na+］となった。
【００３９】
（iii）３糖体の調製
【化７】
2005225775.tif 000008
【００４０】
次に、前記スキーム（６）に従って３糖体を調製した。まず、前記化合物１４を混合溶媒（トルエン：ジクロロメタン：水＝10：1：1）に溶解してから、2,3-ジクロロ-5,6-ジシアノ-1,4-ベンゾキノン（DDQ：１当量）を加え、室温で１時間撹拌することによって化合物１５を得た。化合物１５の収率は６７％であり、化合物１４の回収率は１８％であった。そして、この化合物１５と化合物１２（1.2当量）とをジクロロメタンに溶解してから、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル(TMSOTf：0.1当量)、モレキュラーシーブスを加えて、３時間攪拌した。なお、反応は、反応液の温度を−１０℃にしてから室温に放置し、３時間反応させた。これによって、２９％の収率で化合物１６を得た。この化合物１６を質量分析およびＮＭＲ分析した結果、MALDI-TOF-MS  Exact Mass : 1472.63  m/z = 1496.67 ［M+Na+］という結果であった。さらに化合物１６を混合溶媒（トルエン：ジクロロメタン：水＝10：1：1）に溶解してから、DDQ（1.0当量）を加え、室温で２４時間撹拌することによって化合物１７を得た。
【００４１】
II．  つぎに、前述のようにして調製したβ-1,3グルコースオリゴマーと単糖、β-1,3グルコースオリゴマー同士を、β-1,6結合によって結合させた。
【００４２】
１.  単糖と３糖体とのβ-1,6結合
【化８】
2005225775.tif 000009
【００４３】
前記スキーム（７）に従って、単糖の６位にβ-1,3グルコースオリゴマーがβ-1,6結合した化合物１８を合成した。まず、前記化合物１（３糖体）をテトラヒドロフラン(THF)に溶解してから、ピペリジン(piperidine：2当量)と酢酸(AcOH：1当量)を加え、室温で１日間撹拌することによって、１位のアセチル基が選択的に除去された化合物１’を得た。この化合物１’をジクロロメタンに溶解してから、トリクロロアセトニトリル(CCl3CN：5当量)と炭酸セシウム(CsCO3：0.5当量)を加え、室温で２時間撹拌することによって、定量的に化合物３を得た。そして、この化合物３と前記化合物９とをジクロロメタンに溶解し、さらにトリフルオロメタンスルホン酸t-ブチルジメチルシリル(TBDMSOTf：0.1当量)を加え、−１５℃で１時間撹拌することによって、前記化合物３と化合物９とがβ1,6結合した化合物１８が得られた（収率６２％）。なお、前記化合物３と化合物９との添加割合は、モル比１２：１とした。質量分析およびＮＭＲ分析の結果、化合物１８は、MALDI-MS ; m/z = 1463.72 [(M+Na)+]  Exact Mass; 1440.49であった。
【００４４】
２.  ２糖体と４糖体とのβ-1,6結合
【化９】
2005225775.tif 000010
前記スキーム（８）および下記スキーム（９）に従って、２糖体の６位に４糖体がβ-1,6結合した化合物２１を合成した。まず、前記化合物１４を混合溶媒（酢酸：テトラヒドロフラン：水＝３：１：１）に溶解し、この溶液を室温で３.５時間攪拌することによって、前記化合物１４の６位のt-ブチルジメチルシリル基を除去して、化合物１４’を得た（収率６９％）。なお、化合物１４の回収率は１９％であった。
【００４５】
一方、化合物１９をテトラヒドロフラン(THF)に溶解させてから、さらにピペリジン(piperidine：4.0当量)と酢酸(AcOH：2.0当量)とを加え、室温で１日撹拌することによって、前記化合物１９の１位のアセチル基を選択的に除去して化合物１９’を得た。この化合物１９’をジクロロメタンに溶解し、さらにトリクロロアセトニトリル(CCl3CN：5.0当量)と炭酸セシウム(CsCO3：0.5当量)を加えて室温で５時間撹拌することによって、定量的に化合物２０を得た。
【００４６】
【化１０】
2005225775.tif 000011
【００４７】
そして、前記スキーム（９）に従って、前記化合物１４’と前記化合物２０（1.08当量）とをジクロロメタンに溶解し、さらにトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル(TMSOTf)、トリフルオロメタンスルホン酸t-ブチルジメチルシリル(TBDMSOTf)およびモレキュラーシーブスを加え、１８時間攪拌して反応を行い、化合物２１を得た（収率７％）。なお、反応温度は、−１０℃から１時間かけて室温にまで昇温させた。また、前記化合物１４と化合物２０との添加割合は、モル比１．１：１とした。得られた化合物２１は、質量分析およびＮＭＲ分析の結果、MALDI-TOF-MS  Exact Mass : 2082.68  m/z = 2104.7 ［M+Na+］という結果であった。
【００４８】
３.  ３糖体と３糖体とのβ-1,6結合
【化１１】
2005225775.tif 000012
【００４９】
前記スキーム（１０）に従って、３糖体の両端グルコースの６位に３糖体がβ-1,6結合した化合物２３を合成した。まず、化合物３と化合物１７（0.1当量）とをジクロロメタンに溶解し、さらにトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル(TMSOTf)0.1当量およびモレキュラーシーブスを加え、攪拌して反応を行うことにより化合物２２を得た。得られた化合物２２のブロッキングをはずすことによって化合物２３を得た。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
以上のように本発明の免疫活性剤は、含有する多糖体が、従来の天然β-グルカンに比べて、低分子であるにもかかわらず十分な免疫活性能を示すだけでなく、水等に対する溶解性や体内吸収性にも優れるため、医療の分野において極めて有用であると言える。