(57)【要約】【課題】  リポソームの安定化およびヨウド化合物の保持安定性を図るとともに造影剤の効率的送達および良好なターゲティングを達成する、安全性が高いＸ線造影剤を提供すること。【解決手段】  本発明のＸ線造影剤は、含有するカチオン、特にナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムの量を規定することにより、水溶性非イオン性ヨウド化合物をリポソーム内にできるだけ多量に内包させることができ、リポソームの凝集性もほとんどない。そのリポソームに内包される造影物質は血中滞留性が良好であり、ＥＰＲ効果が発揮されて目的とする疾患部位または組織、とりわけ癌組織に選択的に集中し蓄積し、造影後は体外へ速やかに排泄される。さらに本発明のＸ線造影剤は、有毒な溶媒を使用せず、また製剤のカチオンの組成は、例えば心収縮力への悪影響、赤血球凝集作用または不整脈の発生の可能性といった副作用が少なくなるように設定されている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非イオン性ヨウド化合物を内包したリポソームならびにカチオンを含有する造影剤であって、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比（[Ｎａ+]／[Ｃａ2+]）が60
以上であり、さらにカリウムイオンおよびマグネシウムイオンも含んでもよいことを特徴とするＸ線造影剤。
【請求項２】
ナトリウムイオン濃度として、15〜75mMのナトリウム塩を含有する請求項1に記載のＸ
線造影剤。
【請求項３】
カルシウムイオン濃度として、0.05〜0.8mMのカルシウム塩を含有する請求項1に記載のＸ線造影剤。
【請求項４】
カリウムイオン濃度として、0.2〜2mMのカリウム塩を含有する請求項１に記載のＸ線造影剤。
【請求項５】
含有されるナトリウムイオン、カルシウムイオンおよびカリウムイオンの量が下記式：
[Ｎａ+]＋120・[Ｃａ2+]＋50・ [Ｋ+]≦130
（ただし、ナトリウムイオン量が20〜70mM、カルシウムイオン量が0.1〜0.6 mMおよびカ
リウムイオン量が0.4〜0.9 mMである。）
を満たすことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のＸ線造影剤。
【請求項６】
マグネシウムイオン濃度として、0.05〜0.8mMのマグネシウム塩を含有する請求項１〜
５のいずれかに記載のＸ線造影剤。
【請求項７】
上記塩は、塩化物、リン酸塩または炭酸水素塩である請求項１〜６のいずれかに記載のＸ線造影剤。
【請求項８】
前記リポソームは超臨界二酸化炭素を使用する方法により作製されたものであることを特徴とする請求項1に記載のＸ線造影剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｘ線造影剤に関し、詳しくはリポソーム内部に造影物質を内包したリポソーム含有Ｘ線造影剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｘ線を用いる単純撮影やＣＴ撮影法（コンピュータ断層撮影法）は、今日の画像診断の中核を占めている。臓器、管腔などの軟組織間ではＸ線吸収の差が小さいため高いコントラスト像を得ることは困難である。したがって、コントラストの高い画像を得るために、一般的には造影剤が使用される。現在実用化されているＸ線造影剤の大部分は、トリヨードフェニル基を含有し水溶性化した化合物を造影物質とするものである。これらの造影剤は、血管、尿管、輸卵管などの管腔部位に投与され、管腔の形状、狭窄などの診断に使用されている。しかしながら、これらの化合物は組織や疾患部位と相互作用をすることなく管腔部位から速やかに排出されるために、組織や疾患部位、特に癌組織をより詳細に診断する目的には役立たない。このため目標とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積し、その周囲またはその他の部位と明瞭なコントラストで区別できる画像を提供するＸ線造影剤もまた望まれている。そのようなＸ線検査用造影剤であれば、微細な癌組織であっても精度良く検出することも可能となるからである。
【０００３】
薬物投与の最適化を実現する基本的概念として薬物送達システムが導入されている。実用薬物の副作用、毒性を減らす努力も引き続き求められている。これらはＸ線造影剤についても例外ではない。造影剤を微粒子状にする方法として、生体膜類似の脂質から構成され、低い抗原性ゆえに安全性が高いとされているリポソームに造影化合物を内包させる手法も検討されてきた。例えば国際公開ＷＯ88/09165、同ＷＯ89/00988、同ＷＯ90/07491、特開平07-316079、特開2003-5596では、イオン性または非イオン性の造影剤を含有するリポソームが提案されている。これらの方法では、素材としての安全性が高く、生体内で適度な分解性を有するリポソームを使用するにもかかわらず、実用化に至っていない（例えば、特許文献１参照）。製造過程においてリポソーム膜を構成するリン脂質の溶剤として、有機溶媒、特にクロロホルム、ジクロロメタンといったクロル系溶剤を使用することから、どうしても残存する溶剤の毒性が懸念されるためである。
【０００４】
他方、脂質可溶性の薬剤は容易にリポソーム中に封入されるが、その封入量は他の要因にも左右されることから必ずしもそれほど多くはない。また水溶性電解質である薬剤は、その薬剤の電荷と荷電した脂質の電荷との相互作用を通じてリポソーム内部の水相に封入できるが、薬剤が水溶性の非電解質である場合には、そうした手段を採ることはできない。Ｘ線造影剤についても、一般にイオン性造影化合物よりも実質的に毒性の低い非イオン性ヨウド化合物をリポソーム内に封入することが望まれるが、上記の理由から容易ではない。さらに形成されたリポソームは多重層になりやすく、ヨウド化合物の内包率も低いために効率が悪くなる。このような水溶性の非電解質を効率的にリポソーム中に封入する手段として、逆相蒸発法、エーテル注入法が挙げられるが、有機溶剤を使用するためにやはり安全性の問題が残る。
【０００５】
特開2003-119120（特許文献２）では、超臨界二酸化炭素を用いて親水性薬効成分や親
油性薬効成分をリポソームに内包する皮膚外用剤の製造例が示されている。しかし、同法により水溶性非電解質をリポソームに効率よく内包できるか不明であった。さらに首尾良く造影物質をリポソーム内部に内包させても、時間経過とともに外部へ漏出する問題、あるいはリポソームそのものが、加工処理時または保存中に不安定になる事態も考慮されねばならない。リポソームを生体内へ投与しても、その多くが肝臓、脾臓などの網内系組織
で捕捉されるため、所期の効果が得られないことも指摘されている（Cancer Res., 43, 5328(1983)）。
【０００６】
造影剤は、造影薬物の化学毒性の他にも好ましくない副作用が認識され、検討されてきた。例えば冠血管造影において循環系への造影剤の注入により、造影剤の重量モル浸透圧濃度および造影剤のイオン組成アンバランスが、心機能に対し、その使用を制限するほどの重篤な作用を伴うことが報告されている。この操作においては、短時間ではあるが循環系中を血流ではなく造影剤のかたまり（ボーラス）が通ること、ならびに造影剤とそれが一時置換する血液との化学的及び物理化学的性質の相違が望ましくない作用、例えば不整脈、QT延長、そして特に、心収縮力の低下および心室細動の発生を起こす可能性があった。造影剤の循環系中への注入、例えば血管造影の間の心機能に対するこれらの負の作用を低下させる方策、あるいは排除する手段が広く求められている（特許文献３）。このように安全性から各種イオンの好ましい量があることが知られている。リポソーム化造影剤の場合、さらにリポソームの内包化率および凝集安定性の観点からも各種イオン量を規定しなくてはならない。
【特許文献１】特開平7-316079号公報
【特許文献２】特開2003-119120号公報
【特許文献３】特許第3215703号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、造影物質をリポソーム内にできるだけ多量に内包させ、良好に保持させた安全性の高いＸ線造影剤を提供することを目的とする。すなわち、イオン組成のバランスがとれ、しかも造影力にも優れたＸ線造影剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決する本発明は、以下の構成を有する。
【０００９】
本発明のＸ線造影剤は、非イオン性ヨウド化合物を内包したリポソームならびにカチオンを含有する造影剤であって、ナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比（[
Ｎａ+]／[Ｃａ2+]）が60以上であり、さらにカリウムイオンおよびマグネシウムイオンも含んでもよいことを特徴としている。
【００１０】
本発明の本発明のＸ線造影剤は、好ましくはナトリウムイオン濃度として、15〜75mMのナトリウム塩を含有する。
【００１１】
本発明の本発明のＸ線造影剤は、好ましくはカルシウムイオン濃度として、0.05〜0.8mMのカルシウム塩を含有する。
【００１２】
本発明の本発明のＸ線造影剤は、好ましくはカリウムイオン濃度として、0.2〜2mMのカリウム塩を含有する。
【００１３】
さらに含有されるナトリウムイオン、カルシウムイオンおよびカリウムイオンの量が、下記式：
[Ｎａ+]＋120・[Ｃａ2+]＋50・ [Ｋ+]≦130
（ただし、ナトリウムイオン量が20〜70mM、カルシウムイオン量が0.1〜0.6 mMおよびカ
リウムイオン量が0.4〜0.9 mMである。）
を満たすことが望ましい。
【００１４】
本発明の本発明のＸ線造影剤は、好ましくはマグネシウムイオン濃度として、0.05〜0.
8mMのマグネシウム塩を含有する。
【００１５】
上記塩は、塩化物、リン酸塩または炭酸水素塩を意味している。
【００１６】
前記リポソームは超臨界二酸化炭素を使用する方法により作製されたものである。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のＸ線造影剤では、含有するカチオンの量を規定することにより、非イオン性ヨウド化合物がリポソーム内にできるだけ多く内包され、リポソームの凝集性もほとんどない。そのリポソームに内包される造影物質は血中滞留性が良好であり、ＥＰＲ効果が発揮されて目的とする疾患部位または組織、とりわけ癌組織に選択的に集中し蓄積する。造影後は、該ヨウド化合物が水溶性であるため、体外へ速やかに排泄される。さらに本発明のＸ線造影剤は、有毒な溶媒、特に毒性の高いクロル系溶媒を使用せず、また製剤のカチオンの量および組成は、リポソームの分散安定性を向上させ、知られている副作用の発生の可能性が少なくなるように設定されている。
【００１８】
〔発明の具体的説明〕
本発明者らは、非イオン性ヨウド化合物が内包されたリポソームを含有し、かつカチオン量の適切な組合せによって望ましくない副作用が発生する可能性を一層低下させ、リポソームの内包化率および安定性を向上させたＸ線造影剤を提案する。
【００１９】
カチオン
昨今の非イオン性ヨウド系造影剤は、低モル浸透圧性であり、一般にイオン性ヨウド系造影剤ほどには毒性または好ましくない作用を示さないと考えられている。それでも前述のボーラス投与の場合のみならず、造影剤への組織の接触が長くなる可能性があるとき、具体的には、造影剤のプールが、例えば狭窄症、カテーテルの留置、PTCA（percutaneous
transluminal coronary angioplasty）介在による閉塞の結果として形成されることがある場合の使用には、イオン組成がバランス良く調整されている造影剤が特に望まれている。
【００２０】
非イオン性ヨウド系造影剤に基づく副作用の原因となる因子の一つとして、血漿における各イオンの存在割合からかけ離れた造影剤のイオン構成、あるいは造影剤中にイオンが全くないことが考えられる。イオン性ヨウド系造影剤では、必然的に対イオン、普通にはアニオンであるヨウ素含有イオンに対する対カチオンが含有されている。市販されているイオン性ヨウド系造影剤に含まれるカチオンは、ナトリウム（Na+）および／またはメグ
ルミン（Meg+）であることが多い。さらに必要であれば血漿イオンとして、カルシウム、カリウム及びマグネシウムも含められている。
【００２１】
造影剤のカチオン（すなわちナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびカルシウム）濃度が正常血漿イオン濃度にないことは、筋肉の収縮性に好ましくない影響を及ぼすことが示された（Acta Radiologica Diagnosis 17:439〜448（1976）参照）。造影剤中のナトリウムイオン濃度が約3.2〜2.6mMよりも低い場合いには心房細動が起こることが示唆されている（Morris,Investigative Radiology 23:S127〜S129（1988）参照）。また、非イオン造影剤による心房細動の発生もまた許容できないほど、高いかもしれないという懸念もあった（PiaoらInvestigative Radiology 23:466〜470（1988）参照）。反対に造影剤中
におけるナトリウムイオン濃度が増大すると、心筋収縮力の低下が、一層深刻化することが一般に認められている。
【００２２】
他方、造影剤中にナトリウムイオンが存在すると、ヒト血液中の赤血球凝集体形成の低下、または赤血球凝集の低下を招くことも見出されている。非イオン造影剤iohexolは、N
aClとして添加して15mMの濃度でナトリウムを含有するように処方すれば、モル浸透圧濃
度の著しい増大を同時に起こすことなく赤血球凝集を減少させることができるかもしれないことが示唆された（Investigative Radiology 23:S340〜S345（1988）参照）。
【００２３】
したがって、造影剤の場合には２種以上の血漿カチオンが使用されるとき、非イオン性造影剤に考えられる負の作用、特に不整脈（例えば心房細動）の発生、赤血球の凝集及び心収縮力の低下を、ナトリウムイオンの比較的低濃度、例えば約30mMの設定によって低下させることができ、これは造影剤が高張である場合ですらその添加が支持される（WO−Ａ−90/11094）。さらにカルシウムを包含させることにより、ナトリウム単独を用いて達成可能な程度を超えて、心収縮力に対する好ましくない作用を一層軽減させることが見出されている。とりわけ、ナトリウム含有造影剤を用いて起こる可能性がある冠状動脈灌流の間の初期心収縮力低下を減少または実質的に除くことができる（特許文献３）。
【００２４】
リポソーム化造影剤の場合には、さらにイオン、特にカチオンの種類と組成が、リポソームの内包化率およびリポソームの安定性、凝集性にも影響を及ぼすことが、本発明者らの研究により明らかとなった。したがって、これらの面についても考慮して各種イオン量を規定する必要がある。
【００２５】
以上の知見および議論を踏まえて、本発明のＸ線造影剤は、非イオン性ヨウド化合物を内包したリポソームを含み、カチオン、好ましくは４種の血漿カチオン、ナトリウム、カルシウム、カリウムおよびマグネシウムを、安全性の点から問題のないイオンの量とするとともに、リポソームの内包率および安定性が向上する組成で含有している。具体的には以下の濃度の条件および範囲内に含有するように設定される。
【００２６】
通常、ナトリウム対カルシウムの比は、血漿中のその比より上でなければならない。またカルシウムの添加は、心収縮力の望ましくない増大を避け、しかも不整脈の起こる可能性を回避するためにも、比較的少量でなければならない。このためナトリウムイオン濃度とカルシウムイオン濃度との比（[Ｎａ+]／[Ｃａ2+]）は、55より大きく、好ましくは60
より大きく、より好ましくは８０以上、特に100〜250である。
【００２７】
本発明のX線造影剤は、さらにカリウムイオンおよびマグネシウムイオンも含んでもよ
い。比較的少量のカリウムおよび／またはマグネシウムの包含によって不整脈（心房細動）の発生を一層低下させることができるためである。ナトリウムイオン対カリウムイオンの濃度比（[Ｎａ+]／[K+]）は、好ましくは15より大きく、さらに好ましくは20より大き
く、とりわけ30より大きく、例えば25〜80である。カルシウムおよびマグネシウム塩を含有する場合には、カルシウムイオン対マグネシウムイオンの濃度比（ [Ｃａ2+]／[Mg2+]
）は、好ましくは少なくとも約1.4、好ましくは少なくとも約1.5、可能性としては少なくとも正常血漿の比（約2.9）であるか、またはいくらか高く、例えば３〜８である。
【００２８】
本発明のＸ線造影剤において、ナトリウムイオンの濃度は、2〜100 mM、好ましくは15
〜75 mM、より好ましくは20〜70 mM、さらに特に好ましくは25〜35mMである。同様にカルシウムイオンの濃度は、3.0 mM以下、好ましくは0.01〜1.6 mM、より好ましくは0.05〜0.8 mM、さらに特に好ましくは0.1〜0.６mMである。
【００２９】
カリウムイオンの濃度は、2 mM以下、好ましくは0.2〜2mM、より好ましくは0.3〜1.2 mMさらに特に好ましくは0.4〜0.9mMである。
【００３０】
マグネシウムイオンは、0.8 mM以下、好ましくは0.05〜0.8 mM、より好ましくは0.05〜0.5 mMさらに特に好ましくは0.1〜0.25mMである。
【００３１】
これと類似のカチオン濃度の範囲が、血管造影剤用製剤の好ましいカチオン含量として、提案されていた（WO91/13636）。この場合、血管造影で頻用されるボーラス注射した後のイオン不均衡効果に起因する浸透圧効果を軽減するために添加するものであった。
【００３２】
本発明による造影剤は、ナトリウムおよびカルシウム、そして場合によってはさらにカリウムおよびマグネシウムとの組合せ、特にナトリウムおよびカルシウムを、例えば上記の範囲の濃度で使用してもよい。カルシウムは、ナトリウム含有造影剤の場合に起こる心収縮力の初期低下に対して抑制的に作用することが見出されている。他の血漿カチオンとのカルシウムの組合せは、カルシウムを単独で使用した場合より低いカルシウム濃度においてもこの抑制作用を達成することができ、さらに不整脈の発生をも低下させるという有益な作用も有する。
【００３３】
ヨウ素原子数／造影化合物分子の比が低い、例えば３である非イオン性造影剤の場合には、カチオンは上記に特定された各カチオンの濃度範囲のうち、特に好ましいものとされている範囲を採ることが望ましい（特許文献３）。
【００３４】
さらに本発明のX線造影剤は、非イオン性ヨウド化合物を内包したリポソームを含み、
ナトリウムイオン、カルシウムイオンおよびカリウムイオンの量の間に成立する関係として、好ましくは下記の条件に設定される。
【００３５】
ナトリウムイオン、カルシウムイオンおよびカリウムイオンの量が、下記式：
[Ｎａ+]＋120・[Ｃａ2+]＋50・ [Ｋ+]≦130
（ただし、ナトリウムイオン量が20〜70mM、カルシウムイオン量が0.1〜0.6 mMおよびカ
リウムイオン量が0.4〜0.9 mMである。）を満たすことが望ましい。ナトリウムイオン、
カルシウムイオンおよびカリウムイオンの量が上式を満たす造影剤では、後述の実施例に示されるようにリポソームの内包化率が高くなり、しかも凝集性が小さく凝集物の発生はほとんどないためである。
【００３６】
ナトリウム、カルシウム、カリウムおよびマグネシウムイオンは、生理的に許容される対イオンとの塩の形態で本発明の造影剤中に組み入れることができる。特に適している対イオンは、血漿アニオン、例えば塩化物、リン酸塩および炭酸水素イオンを包含する。しかし、そうしたカチオンは、少なくとも一部分、生理的に許容されるキレート剤の塩、例えばナトリウムEDTA又はカルシウムジナトリウムEDTAの形態で組み入れることができる。本発明の造影剤は、固体として、または既に溶液状態で、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウム塩、または塩混合物もしくはその溶液を添加することによって得ることができる。
【００３７】
造影化合物
本発明のＸ線造影剤の造影化合物として水溶性の非イオン性ヨウド系化合物が好ましく用いられる。これにはヨウ化フェニル基、例えば2,4,6−トリヨードフェニル基を少なく
とも1個有する非イオン性ヨウド化合物が好適である。
【００３８】
好ましい非イオン性ヨウド化合物として、具体的にはイオヘキソール、イオペントール、イオジキサノール、イオプロミド、イオトロラン、イオメプロール、N,N′−ビス〔２
−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）−エチル〕−５−〔〔（２−ヒドロキシ−１−オキソプピル）−アミノ〕−2,4,6−トリヨード−1,3−ベンゼン−ジカルボキシアミド（イオパミドール）；メトリザミドなどが挙げられる。
【００３９】
造影化合物はこれらの例示に限定されるものではない。また、造影化合物は単独で用いてもよく、あるいは２種以上を組み合わせて用いてもよい。なお本明細書において、化合
物は遊離形態の他に、その塩、水和物なども含めて言及することがある。
【００４０】
本発明造影剤に特に好適なヨウド系化合物として、高度に親水性であり、かつ高濃度でも浸透圧が高くならないイオメプロール、イオパミドール、イオトロラン、イオジキサノールなどが挙げられる。イオトラン、イオジキサノールといった二量体非イオン性ヨウド化合物では、ヨウ素担持効率が高く、同一ヨウド濃度の造影剤を調製しても全体のモル数が低いために浸透圧を低下させる利点がある。
【００４１】
本発明の造影剤における水溶性ヨウド系化合物の濃度は、該造影化合物の性質、意図する製剤の投与経路および臨床上の指標といった要因に基づき任意に設定することができる。リポソーム内に封入されたヨウド系化合物の量は、典型的にはＸ線造影剤における全ヨウド化合物の5〜40質量％、好ましくは5〜35質量％、より好ましくは10〜25質量％である。この内包率はリポソーム粒子の細密充填の限界を下回るために、リポソームにおける造影物質の保持安定性は損なわれない。
【００４２】
リポソーム
本発明のＸ線造影剤は、上記造影化合物を標的部位へ効率よく送達するために、マイクロキャリヤーであるリポソーム内部に封入した形態で使用される。優れた腫瘍描出性へ導くＥＰＲ（Enhanced permeability and retention、透過性の亢進および滞留）効果を生
じさせるために、リポソーム構造の安定性、封入物質の内包化の割合および保持性を改善させるとともに、血中安定性、血中滞留性といった特性を有することが造影剤には求められる。そこで本発明の造影剤は、経時安定性ならびに血中安定性が改善されたリポソームを用いることにより血中滞留性を向上させて、効率的な薬物送達ならびにターゲティングの実現を図っている。
【００４３】
本発明のＸ線造影剤では、造影化合物を内包するリポソームの粒子径およびその二分子膜を適切に設計することによりターゲティング機能を実現することができる。受動的ターゲティングおよび能動的ターゲティングいずれも考慮される。受動的ターゲティングでは、リポソームの粒子径、脂質組成、荷電などの調整を通じてその生体内挙動を制御することができる。リポソーム粒子径を狭い範囲に揃える調整は、後述する方法に基づき容易に行われる。さらにリポソーム膜表面の設計において、リン脂質の種類と組成、共存物質を変えることにより、内包物質の保持効率の向上、リポソームの安定化という要求をも満たすことができる。
【００４４】
造影剤のより高度な選択性と集積性を可能とする能動的ターゲティングの採用ならびに造影剤の安全性もまた検討されるべきである。例えばリポソーム表面にポリアルキレンオキシド高分子鎖またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を導入することは、標的部位までの誘導過程を制御し得るため、極めて有益な手法である。癌組織、疾患部位などに到達しなかったＸ線造影剤は、正常部位に集積することなく、リポソームが分解されて体外に排泄される。このことはリポソームを設計する際にその安定性を体外排出時間との関係で適切にコントロールすることにより可能となる。造影物質として水溶性ヨウド系化合物を使用するため、腎臓を経由して速やかに尿中に排泄される。したがって徒に体内に留まることによる弊害、遅発性の副作用などを防止できる。
【００４５】
リポソームは、通常、脂質二重膜から形成されている。その脂質膜の成分として、一般にリン脂質および／または糖脂質が好ましく使用される。
【００４６】
本発明において使用するリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、カルジオリピン、スフィンゴミエリンなどで代表されるリン
脂質である。卵黄、大豆その他の動植物材料に由来するリン脂質、それらの水素添加物、水酸化物の誘導体といった半合成のリン脂質、または合成加工品など、限定されることなく用いられる。リン脂質の構成脂肪酸も特に限定されることはなく、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸のどちらでもよい。
【００４７】
具体的な中性リン脂質の例として、ジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC）、ジステアロイルホスファチジルコリン（DSPC）、ジミリストリルホスファチジルコリン（DMPC）、ジオレイルホスファチジルコリン（DOPC）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミンなどが挙げられる。
【００４８】
上記中性リン脂質のほかに、アニオン性リン脂質、カチオン性リン脂質といった荷電リン脂質、さらには重合性リン脂質、ならびにカチオン性（正荷電）脂質を含んでもよい。負に荷電したリン脂質には、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（DPPG）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（DMPG）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（DSPＧ）、ジパルミトイルホスファチジルセリン（DPPS）、ジステアロイルホス
ファチジルセリン（DSPS）、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール（DPPI）、ジステアロイルホスファチジルイノシトール（DSPI）、ジステアロイルホスファチジン酸（DSPA）、ジパルミトイルホスファチジン酸（DPPA）、ジミリストイルホスファチジン酸(DMPA)などが挙げられる。
【００４９】
カチオン性リン脂質として、ホスファチジン酸とアミノアルコールとのエステル、例えばジパルミトイルホスファチジン酸（DPPA）もしくはジステアロイルホスファチジン酸（DSPA）とヒドロキシエチレンジアミンとのエステルなどが挙げられる。
【００５０】
これらのリン脂質は単独で使用してもよく、２種以上併用してもよい。ただし２種以上の荷電リン脂質を使用する場合には、負電荷のリン脂質同士または正電荷のリン脂質同士で使用することが、リポソームの凝集防止の観点から望ましい。
【００５１】
さらに、カチオン性物質、例えばステアリルアミンといった脂肪族アミン、カチオン性リン脂質、カチオン性脂質などがリポソームの膜構成成分として存在すると、水溶性ヨウド化合物のリポソーム内での保持効率もまた向上する。カチオン性物質がおそらくリン脂質分子の再配置を脂質膜内において促がし、その結果、膜構造が強化されてリポソーム構造全体も安定化されるためであろう。これにより造影物質の取り込みの効率が上昇するとともに、逆にリポソームからのその逸失も減少することとなる。カチオン性物質は、リン脂質量に対し0.1〜5質量％、好ましくは0.3〜3質量％、より好ましくは0.5〜2質量％の割合で含有するように添加すればよい。
【００５２】
糖脂質としては、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド硫酸エステルなどのグリセロ脂質、ガラクトシルセラミド、ガラクトシルセラミド硫酸エステル、ラクトシルセラミド、ガングリオシドG7、ガングリオシドG6、ガングリオシドG4などのスフィンゴ糖脂質などを挙げることができる。
【００５３】
上記脂質の他にリポソームの膜構成物質として、必要に応じ他の物質を加えることもできる。例えば、膜安定化剤として作用するコレステロール、ジヒドロコレステロール、コレステロールエステル、コレスタノールなどのステロール類などが挙げられる。これらのうち、コレステロールが特に好ましい。さらに、ステロール類がリポソームの膜構成成分として存在すると、水溶性ヨウド化合物のリポソーム内での保持効率もまた向上する。リポソーム膜中のコレステロールは、ポリアルキレンオキシド導入用のアンカーにもなり得る。リポソーム膜構成成分として膜中に含めるコレステロールには、必要に応じリンカー
を介してその先にポリアルキレンオキシド基を結合させてもよい。本発明の造影剤におけるステロール類の使用量として、リン脂質１重量部に対して0.05〜1.5重量部、好ましく
は0.2〜1重量部、より好ましくは0.3〜0.8重量部の割合が望ましい。0.05重量部より少ないと混合脂質の分散性を向上させるステロール類による安定化作用が発揮されず、1.5重
量部より多すぎるとリポソームの形成が阻害されるか、形成されても不安定となる。
【００５４】
上記ステロール類の他にリポソームの膜構成成分として、グリコール類を加えてもよい。リポソームを作製する際に、リン脂質などともにグリコール類を添加すると、リポソーム内での水溶性ヨウド系化合物の保持効率が上昇する。これは、ステロール類による保持効率の向上作用に類似して、リポソーム構造の安定化によるものと考えられる。そうしたグリコール類として、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、トリメチレングリコール、1,4-ブタンジオール、1,5-ペンタンジオール、ネオペンチルグリコールなどが挙げられる。本発明の造影剤におけるグリコール類の使用量として、リン脂質量に対して0.5〜20質量％
、好ましくは2〜10質量％の割合が望ましい。
【００５５】
上記のカチオン性物質、ステロール類、グリコール類などの化合物は単独で用いてもよく、あるいは２種以上を組み合わせて用いてもよい。これらの物質の使用により、超臨界二酸化炭素中へのリン脂質類の溶解・分散も促進されることから、リポソーム膜構造が効率的に形成され、水溶性ヨウド化合物のリポソーム内への内包化も良好となる。さらにリポソーム膜構造が安定的なものであれば、その保持効率も向上する。
【００５６】
他に添加できる化合物として、負荷電物質であるジセチルホスフェートといったリン酸ジアルキルエステルなども例示される。
【００５７】
本発明のＸ線造影剤において、リポソーム内における造影化合物の保持効率を向上させるために、高分子鎖であるポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）基またはまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基を有するリン脂質または化合物をリポソーム膜の一成分として使用してもよい。またこれにより新たな機能をリポソームに付与することができる。例えば、ＰＥＧ化リポソームには免疫系から認識されにくくなる（いわゆる「ステルス化」された状態である）効果が期待できる。あるいはＰＥＧの導入により水和層が形成され、リポソームが親水的傾向を持つことで血中安定性を増し、血中滞留性も向上する、すなわち長時間にわたり血液中の濃度を維持できることが明らかになっている（Biochim. Biophys. Acta., 1066, 29-36(1991)）。また、リポソームの血中滞留性を向上させるために、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質をリポソーム脂質膜に含有させる手法が開示された（特開2002−37883号公報）。そのようなリポソームでは経時安定性も改善されていること
が示されている。
【００５８】
これらの性質を利用してＸ線造影剤に特定臓器への指向性を与えることもできる。具体的には脂質成分は肝臓に貯まりやすいことから肝臓の選択的な造影を目的とする場合には、ＰＥＧ、すなわち−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）n−Ｈを使用しないか、あるいはＰＥＧ含有量の
少ないリポソームを用いるのが望ましい。また粒径を200nm以上に大きくすると、肝臓Kupffer細胞の食作用により速やかに取り込まれる可能性が高くなり、肝臓の該部位に集積する。肝臓癌の撮像においては、その癌組織には正常組織に比べてKupffer細胞が少ないた
めに、造影剤リポソームの取込み量は、相対的に少なくなりコントラストが鮮明となる。脾臓においても同様である。反対に他臓器の造影の場合、ＰＥＧを導入すればリポソームをステルス化して肝臓などに集まりにくくすることができるため、ＰＥＧ化リポソームの使用が推奨される。リポソームのＰＥＧ化は、公知の技術を利用することができる。
【００５９】
ＰＥＧのオキシエチレン単位の長さと導入する割合を適宜変えることにより、その機能
を調節することができる。ＰＥＧとして、オキシエチレン単位が10〜3500のポリエチレングリコールが好適である。またＰＥＧを使用する場合の使用量は、該リポソームを構成する脂質に対して0.1〜30質量％、好ましくは1〜15質量％程度含むのがよい。
【００６０】
上記ＰＥＧに代わり公知の各種ポリアルキレンオキシド基、−（ＡＯ）n−Ｙ（ＡＯは
炭素数２〜４のオキシアルキレン基、ｎはオキシアルキレン基の平均付加モル数、Ｙは水素原子、アルキル基または機能性官能基を表す。）をリポソーム表面に導入してもよい。
【００６１】
炭素数２〜４のオキシアルキレン基として、オキシエチレン基、オキシプロピレン基、オキシトリメチレン基、オキシテトラメチレン基、オキシ−１−エチルエチレン基、オキシ−１，２−ジメチルエチレン基などが挙げられる。これらのオキシアルキレン基は、エチレンオキシド、プロピレンオキシド、オキセタン、１−ブテンオキシド、２−ブテンオキシド、テトラヒドロフランなどのアルキレンオキシドを付加重合させた基である。
【００６２】
ｎは１〜２０００、好ましくは１０〜５００、さらに好ましくは２０〜２００の正数である。
【００６３】
ｎが２以上の場合、オキシアルキレン基の種類は、同一のものでも異なるものでもよい。後者の場合、ランダム状に付加していても、ブロック状に付加していてもよい。ポリアルキレンオキシド鎖に親水性を付与する場合、ＡＯとしてはエチレンオキシドが単独で付加したものが好ましく、この場合、ｎが１０以上のものが好ましい。また種類の異なるアルキレンオキシドを付加する場合、エチレンオキシドが２０モル％以上、好ましくは５０モル％以上付加しているのが望ましい。ポリアルキレンオキシド鎖に親油性を付与する場合はエチレンオキシド以外の付加モル数を多くする。例えばポリエチレンオキシドとポリプロピレンオキシドとのブロック共重合物を含有するリポソームが好ましい。
【００６４】
Ｙは、水素原子、アルキル基または機能性官能基である。アルキル基として、炭素数１〜５の、分岐していてもよい脂肪族炭化水素基が挙げられる。機能性官能基は、ポリアルキレンオキシド鎖の先端に糖、糖タンパク質、抗体、レクチン、細胞接着因子といった「機能性物質」を付するためのもので、例えばアミノ基、オキシカルボニルイミダゾール基、Ｎ-ヒドロキシコハク酸イミド基といった反応性に富む官能基が挙げられる。「機能性
物質」の機能は、「認識素子」として特定臓器指向性、癌組織指向性などを発揮する作用が例示される。
【００６５】
ポリアルキレンオキシド基を有するリン脂質または化合物は、一種類を単独で使用することができ、あるいは二種以上のものを組み合わせて使用することもできる。その含有量は、リポソーム膜形成成分の合計量に対し、0.001〜50モル％、好ましくは0.01〜25モル
％、より好ましくは0.1〜10モル％である。
【００６６】
リポソームへのポリアルキレンオキシド鎖の導入は、公知の技術を利用することができる。例えば、特開2002−37883号公報には、血中滞留性を高めた水溶性高分子修飾リポソ
ームを作製するための高純度ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質が開示されている。そうしたリポソームを作製する際にモノアシル体含量が低いポリアルキレンオキシド修飾リン脂質を使用すると、リポソーム分散液の経時安定性が良好であったことが記載されている。
・リポソームの作製
リポソームを作製する方法として、これまでに様々の方法が提案され、作製方法が異なると、最終的に出来上がったリポソームの形態および特性もまた著しく異なることが多い（特開平6-80560号公報）。そのため所望するリポソームの形態、特性に応じてその製造
方法を適宜選択することが一般に行なわれている。リポソームは、リン脂質、ステロール
、レシチンといった脂質成分を、ほとんど例外なくまず有機溶媒、例えばクロロホルム、ジクロロメタン、エチルエーテル、四塩化炭素、酢酸エチル、ジオキサン、THFなどとと
もに容器中で混合、溶解することにより調製されている。そうしたリポソームの調製品は、必ず有機溶媒を含んでいる。残留する有機溶媒、特にクロル系有機溶媒は完全に除去することが困難であり、生体に及ぼす悪影響が懸念される。
【００６７】
本発明に使用するリポソームを調製するには、上記の問題点を回避できる方法として、超臨界もしくは亜臨界の二酸化炭素を使用するリポソーム調製法を利用する。二酸化炭素の臨界温度が31.1℃、臨界圧力が75.3 kg/cm2と比較的扱いやすく、大気圧下で不活性な
ガスゆえ残存しても人体に無害であり、高純度流体が安価で容易に入手できるなどといった理由により好適である。本発明の製造方法で使用する超臨界状態（亜臨界状態を含む）の二酸化炭素の好適な圧力は、80〜500kg/cm2、好ましくは90〜400 kg/cm2、より好まし
くは100〜200 kg/cm2である。また好適な臨界状態の二酸化炭素ガスの温度としては、32
〜200℃、好ましくは35〜100℃、さらに好ましくは40〜80℃である。これらの範囲内で、温度および圧力を適宜選択して組み合わせることにより、超臨界状態（亜臨界状態を含む）とするのがよい。
【００６８】
本発明のＸ線造影剤に使用するリポソームの調製方法は、具体的に以下のようにして行なわれる。圧力容器に液体二酸化炭素を加え、上記の好適な圧力および温度のもとにある超臨界状態もしくは亜臨界状態にする。超臨界（もしくは亜臨界）状態の二酸化炭素にリポソーム膜構成物質を溶解する。膜脂質成分として上記リン脂質を、好ましくはカチオン性リン脂質、ポリアルキレンオキシド修飾リン脂質、ポリアルキレンオキシド基を有する化合物、ポリエチレングリコール基を有する化合物、ステロール類、グリコール類から少なくとも1種選ばれた化合物とともに混合して溶解する。あるいは予めこれらの化合物を
加えた圧力容器に液体二酸化炭素を加え、次いで温度、圧力を調整して超臨界状態にして溶解してもよい。
【００６９】
その際、溶解助剤を添加すると、膜脂質成分の超臨界二酸化炭素への溶解が短時間で充分に行われるため、形成されるリポソームにおける一枚膜リポソームの比率が高くなる。溶解助剤として、低級アルコール、グリコール、グリコールエーテルなどを1種または2種以上併用することが望ましい。例えばアルコール類を超臨界二酸化炭素の0.1〜10質量％
、好ましくは、1〜8質量％の割合で助溶媒として使用するのがよい。より好ましい溶解助剤としては、安全性の観点からエタノールである。
【００７０】
引き続き生成した脂質混合物に、ヨウド系化合物、必要に応じて後述の製剤助剤を含む水溶液を連続的に添加して、水相／二酸化炭素エマルジョンを形成する。系内を減圧して二酸化炭素を排出すると、ヨウド系化合物を内包するリポソームが分散している水性分散液が生成する。
【００７１】
上記ヨウド化合物のリポソーム内への内包化の割合は、リポソーム用脂質の総量とヨウド化合物（必要に応じてさらに製剤助剤）を含む水溶液との比率によっても左右される。リポソームの円滑な形成、ならびにその脂質膜内へのヨウド化合物の効率的な内包化には、使用する脂質総量と内包物質を含有する水溶液との比率もまた調整する必要がある。この脂質総量とは、リポソーム膜を構成するリン脂質類、ステロール類、その他の添加した脂質類すべてを対象とした総和の質量である。上記水溶液１リットル（Ｌ）に対して、脂質総量が5〜150ｍmolesの範囲、好ましくは30〜120ｍmolesの範囲、より好ましくは50〜100ｍmolesの範囲の割合でリポソーム膜構成物質を含む溶媒を混合する。そうした場合、
水溶性ヨウド化合物のリポソーム内への内包化は良好に進行し、結果的にそのヨウド化合物の保持効率も向上する。脂質量が150ｍmolesを超えると、水溶液との混和が不充分で、リポソーム化しない脂質となり、夾雑物としてこれは、出来上がったリポソームの凝集を
促進する。
【００７２】
超臨界もしくは亜臨界二酸化炭素を使用するリポソーム調製法は、従来法に比べてリポソームの生成率、封入する物質の内包率、リポソーム内の封入物質保持率が高いことが示されている（上記特許文献２参照）。さらに工業的スケールでの応用も可能であり、有機溶剤を使用せずに非イオン性かつ水溶性の物質を効率よくリポソームに封入することができる本法は、本発明のＸ線造影剤の製造には有用な方法である。
【００７３】
本発明の造影剤におけるリポソームは、通常、多重層膜リポソームとして存在するが、一枚膜リポソームもまた混在していてもよい。ここにいう一枚膜リポソームとは、リン脂質二重層が実質的に1つの層としてなる膜（unilamellar vesicle）で構成されるリポソームである。ここで「実質的に」とは、以下の凍結かつ断（Freeze fracture ）レプリカ法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察において、レプリカが概ね1つの層として認めら
れるリン脂質二重層によりリポソームが構成されていることをいう。多重層膜（multilamellar vesicles; ＭＬＶ）からなる大きいリポソームは、リポソーム膜の二分子膜を剥がしてその多重層をなるべく薄くすることが望ましい。多重層膜リポソームでは、ヨウド化合物の脂質重量当りの内包率は低く、反面、脂質の占める割合が相対的に大きいため、粘度上昇の原因にもなる。これを回避するためには、例えば作製後に引き続き超音波照射を行って、多重層膜の脂質膜枚数を減らし、サイズの比較的小さい粒子に整える。
【００７４】
これに代わって超臨界二酸化炭素にリポソーム膜構成物質を溶解する際、エタノールを溶解助剤として適宜添加することにより、超臨界二酸化炭素にリポソーム膜構成物質を充分に溶解させて、一枚膜リポソームの比率を高めることも好ましい。一枚膜リポソーム、特に大きい一枚膜リポソームであるＬＵＶ（Large unilamellar veislcles）は、多重層
膜リポソームに比べて大きい封入容量を提供し、リポソームの投与量、換言すると投与脂質量が大きくならないという利点もあるためである。
【００７５】
内包するヨウド化合物の重量が相対的に多過ぎるとリポソームの安定性は低下する。特にイオン強度の急激な変化には弱い傾向が観察されていた。そこで比較的小さい粒径に調整し、リポソーム膜にステロール類および/またはグリコール類を含有させ、あるいはカ
チオン性リン脂質、ポリアルキレンオキシド基を有するリン脂質またはカチオン性物質を含有させて、脂質膜の安定化を図ることもできる。実際、そうしたリポソームは、例えば塩ショックに対しても安定的であることが判明した。
【００７６】
リポソーム粒子のサイズおよびその分布は、本発明のＸ線造影剤が目指す、高い血中滞留性、ターゲティング性、送達効率と密接に関わっている。「中心粒径」とは、粒子分布で最も出現頻度の高い粒子径を指している。なお、粒子径または粒径は、粒子の直径を意味する。粒径の調整は、処方またはプロセス条件で行なうことができる。例えば、上記の超臨界の圧力を大きくすると形成されるリポソーム粒径は小さくなる。リポソームの粒子径の分布をより狭い範囲に揃えるには、作製されるリポソームの懸濁液を一定サイズの孔径を有する濾過膜、好ましくはポリカーボネート膜などに強制的に透過させてもよい。この場合、濾過膜として0.05〜0.4μm、好ましくは0.1〜0.4μm、さらに好ましくは0.15〜0.2μmの孔径のフィルターを装着した静圧式押出し装置に通すことにより、リポソーム多
重層膜の脂質膜枚数を減らすとともに、中心粒径として100〜300nmの最適寸法を有する均一なリポソームを効率よく調製することができる。具体的には、各種の静圧式押出し装置、例えば「エクストルーダー」（商品名、日油リポソーム製）などを使用して、フィルターを強制的に透過させる。フィルターは、ポリカーボネート系、セルロース系などのタイプを適宜使用することができる。このような「押出し」操作工程を取り入れることにより、上記サイジングに加えて、リポソーム分散液の交換、濾過滅菌も併せて可能になるという利点もある。引き続きリポソーム分散液を、遠心分離、ゲル濾過などの方法により未保
持の薬剤を除去して精製したり、濃縮、希釈、凍結乾燥などの操作を任意に行ってもよい。
【００７７】
リポソームに受動的ターゲティング能力を持たせるには、その粒径も考慮する必要がある。Ｘ線撮像の目的に応じて、粒径が適切に設定される。本発明の造影剤リポソームの中心粒径は、通常50〜300nm、好ましくは50〜200nm、より好ましくは50〜130nmである。例
えば腫瘍部分の選択的撮像目的の場合には、特に110〜130nmが好ましい。リポソームの粒径を100〜200nm、より好ましくは110〜130nmの範囲に揃えることにより癌組織へ選択的にＸ線造影剤を集中させることが可能となる（「ＥＰＲ効果」）。ＥＰＲ効果は、癌組織にある新生血管壁では、正常組織の微小血管壁より透過性が高いことによるものであるため、血中滞留性の向上が図られねばならない。本発明のＸ線造影剤は、細網系内皮細胞による捕獲の対象になりにくい。またリポソームがいわば赤血球類似の姿と挙動をしていて腎臓経由で速やかに排出されることはなく、血流中に比較的長くとどまる。
【００７８】
Ｘ線造影剤
本発明のＸ線造影剤は、上述のようにリポソーム自体の安定性を改善し、製剤のカチオン量をコントロールすることにより、リポソーム内外のイオン濃度を均衡させてリポソームの分散安定性を向上させている。このため、製剤工程における処理時、貯蔵・保管期間にも造影物質はリポソーム内に安定的に保持される。さらに造影剤の血中安定性も上記リポソーム内への内包により図られている。本発明のＸ線造影剤は製剤化に際し、必要に応じてさらに製剤助剤として薬理学的に許容される緩衝剤、安定化剤、α‐トコフェロールなどの抗酸化剤なども含めてもよい。
【００７９】
本発明造影剤のようにヨウド系化合物をリポソームというマイクロキャリヤーに封入する場合には、脂質の用量も考慮されねばならない。粘度上昇を抑えるには、脂質１ｇ当りのヨウド化合物の内包率を上げるとともに、ヨウド担持効率の高いヨウド化合物をリポソームに内包させることが好ましい。本発明製剤の粘度は、３７℃で、20 mPa・ｓ以下、好ましくは15 mPa・ｓ以下である。
【００８０】
リポソーム内へのヨウド系化合物の封入量については、ヨウド系化合物がリポソーム膜脂質重量に対して、1〜10、好ましくは2〜8、より好ましくは3〜6の重量比でリポソーム
内に封入された水溶液中に含有されていることが望ましい。リポソーム水相中にカプセル化されたヨウド系化合物の重量比が１未満であると、比較的多量の脂質を注入することが必要となり、多い脂質による弊害が現れるか、造影物質の送達効率が悪くなる。特許2619037号公報の記載によると、当該比が１でも当時の技術水準からは高い値とされていた。
反対にリポソーム膜脂質重量に対するヨウド系化合物の封入重量比が10を超えると、リポソームが構造的にも不安定となり、リポソーム膜外へのヨウド系化合物の拡散、漏出の発生は貯蔵中または生体内に注入された後でも避けられない。またリポソーム懸濁薬剤が製造され、分離した直後は100％の封入が達成されても、浸透圧効果による不安定化に基づ
いて、短時間に封入成分が減少していくことが記載されている（特表平9−505821号公報
）。
【００８１】
本発明の方法により製造されるＸ線造影剤は、含有するリポソームの脂質膜にもその内部水相にも有機溶媒が含まれていないことを特徴としている。さらにヨウド含有量として通常、想定される10〜300mlの製剤懸濁液の投与量では、100〜500mgI／mlであり、好ましくは、150〜300mgI／mlである。またＸ線造影剤に残存する遊離ヨウ素イオン量は、0.001mole／Ｌ造影剤 以下、好ましくは0.0001mole／Ｌ造影剤 以下にすべきである。遊離ヨウ素イオンのトラップ剤として機能するキレート化剤を加えることが好ましい。そのようなキレート剤としてＥＤＴＡNa2−Ca、ＥＤＴＡNa2などが挙げられる。
【００８２】
本発明のＸ線造影剤は、投与後にリポソームが体内に安定に維持されるように、体内の浸透圧に対し、等張の溶液または懸濁液の形でリポソーム中に封入される。そうした溶液もしくは懸濁液の媒質として、水、緩衝液、例えばトリス−塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液などを使用することができる。
【００８３】
上記溶液もしくは懸濁液の好ましいｐＨ範囲は、室温で6.5〜8.5、さらに好ましくは6.8〜7.8である。Ｘ線造影剤が多ヒドロキシル基を有する水溶性ヨウド系化合物である場合、好ましい緩衝液は、米国特許第4278654号に記載されているような負の温度係数を有す
る緩衝液である。アミン系緩衝液はこのような要求を満たす性質を有しており、特に好ましくはトリス（TRIS）である。このタイプの緩衝液は、オートクレーブ温度で低いｐＨを有し、このことがオートクレーブ中のＸ線造影剤の安定性を増し、他方、室温では生理的に許容されるｐＨに戻る。したがって、注射用無菌造影剤を製造するために、リポソーム調製物をオートクレーブ滅菌できることはあり、貯蔵安定性なども確保できる。
【００８４】
等張の懸濁液を得るには、等張液を提供する濃度で造影剤を媒質中に懸濁させる。例えば造影剤化合物の溶解性が低いために造影剤が単独では等張液を提供できない場合、等張の溶液もしくは懸濁液が形成されるように他の非毒性の水溶性物質、例えば塩化ナトリウムのごとき塩類、マンニトール、グルコース、ショ糖、ソルビトールなどの糖類を媒質中に添加してもよい。
【００８５】
本発明のＸ線造影剤は、注射剤または点滴注入剤として、非経口的に、具体的には血管内投与、好ましくは静脈内投与により被験者に投与されＸ線照射により撮像される。その用量は、従来のヨウド系造影剤に準じる。リポソーム内のヨウド総量、またはそれとリポソーム外のヨウド総量の和が、従来の投与量と同程度になるようにしてもよい。
【００８６】
〔実施例〕
以下、本発明を実施例に基づいてさらに具体的に説明する。本発明は、かかる実施例によりなんら限定されるものではない。
【００８７】
〔試験〕
ヨウド化合物の内包率の測定
試料（リポソーム分散液）を等張の食塩水で透析し、透析終了後にエタノールを添加してリポソームを破壊し、吸光度の測定によりリポソーム内のヨウド化合物量を求めた。試料中の全ヨウド化合物量に対する比率を内包率（質量％）として表した。
凝集物の発生
加圧濾過前の試料を目視で凝集物の発生状況を調べた。また発生したものについて加圧濾過して除去できるかを調べ、除去できるものは大きな問題ではない“極僅かに発生”と定義し、濾過圧力の上昇や目詰まりの発生したものは、“微量発生”および問題である“少量発生”と定義した。
【実施例１】
【００８８】
ジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC）86mgと、コレステロール38.4mg、PEG-リン脂質（日本油脂株式会社製、 SUNBRIGHT DSPE-020CN）19.2mgの混合物をステンレス製
の特製オートクレーブに仕込み、オートクレーブ内を60℃に加熱し、次いで液体二酸化炭素13gを加えた。撹拌を行いながら、50kg/cm2であったオートクレーブ内圧力を、オート
クレーブ内の体積を減ずることで120kg/cm2まで上げ、二酸化炭素を超臨界状態にし、撹
拌しながら、脂質類を分散・溶解させた。さらに撹拌しながら、原造影剤溶液（日局  イオパミドール306.2mg/ｍL,ヨウド含有量150mg/mL、トロメタモール1mg/mL、エデト酸カルシウム２ナトリウム0.1mg/mLを含有し、ｐＨを７前後に調整）10ｍLを定量ポンプで連続
的に90分かけて注入した。注入終了後、系内を減圧して二酸化炭素を排出し、造影剤溶液
を含有するリポソームの分散液を得た。得られた分散液を60℃まで加熱し、アドバンテック社製のセルロース系フィルター、1.0μmで加圧濾過した。得られたリポソーム含有造影剤を試料１とした。
【００８９】
塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化カリウム、塩化マグネシウムを、表１の各イオン濃度となるように原造影剤溶液に加えて溶解した以外は、上記試料1と同様にしてリポ
ソーム含有造影剤２〜１６を作製した。
【００９０】
各試料中のリポソームについて、測定結果を表１に示す。
【００９１】
表１の結果から明らかなように、ナトリウムイオン量が多くなると内包化率は向上する。しかしナトリウムイオン量が多くてもカルシウムイオン量が多く、Ｎａ/Ｃａイオン比
が60未満となる場合には、内包化率の向上効果は小さくなり、さらにリポソーム形成時の凝集物の発生量が増大する。また各種のイオン量が多くなると、リポソームの形成時における凝集物の発生量は多くなる傾向にあり、ナトリウムイオン量は75ｍＭ以下、カルシウムイオン量は0.8ｍＭ以下、カリウムイオン量は２ｍＭ以下、マグネシウムイオン量は0.8ｍＭ以下が好ましい。
【００９２】
上記「カチオン」の項に掲げた式で算出される値が130以下となる場合、リポソームの
内包化率が高く、かつ凝集性は小さいため好ましい。
【００９３】
【表１】
2005225822.tif 000002