(57)【要約】  【課題】糖尿病抑制組成物、糖尿病抑制食品、糖尿病抑制皮膚外用および糖尿病抑制薬を提供する。  【解決手段】糖尿病抑制組成物は、エルカンプーレを含有する。糖尿病抑制組成物は、２型糖尿病抑制作用、血清脂質改善作用、肝臓脂質改善作用、血清グルコース低下作用、遊離脂肪酸改善作用、インスリン抵抗性改善作用およびコレステロール減少作用を有する。糖尿病抑制組成物を含有する機能性食品、皮膚外用あるいは医薬として用いることもできる。  【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくともエルカンプーレを含有し、糖尿病抑制作用を有する
ことを特徴とした糖尿病抑制組成物。
【請求項２】
２型糖尿病抑制作用を有する
ことを特徴とした請求項１記載の糖尿病抑制組成物。
【請求項３】
血清脂質改善作用および肝臓脂質改善作用を有する
ことを特徴とした請求項１または２記載の糖尿病抑制組成物。
【請求項４】
血清グルコース低下作用を有する
ことを特徴とした請求項１ないし３いずれか記載の糖尿病抑制組成物。
【請求項５】
遊離脂肪酸改善作用を有する
ことを特徴とした請求項１ないし４いずれか記載の糖尿病抑制組成物。
【請求項６】
インスリン抵抗性改善作用を有する
ことを特徴とした請求項１ないし５いずれか記載の糖尿病抑制組成物。
【請求項７】
コレステロール減少作用を有する
ことを特徴とした請求項１ないし６いずれか記載の糖尿病抑制組成物。
【請求項８】
請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む
ことを特徴とした糖尿病抑制食品。
【請求項９】
請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む
ことを特徴とした糖尿病抑制皮膚外用。
【請求項１０】
請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む
ことを特徴とした糖尿病抑制薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくともエルカンプーレを含有する糖尿病抑制組成物、糖尿病抑制食品、糖尿病抑制皮膚外用および糖尿病抑制薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、わが国においては食生活の欧米化を始めとするライフスタイルの変化によって、脂肪やエネルギの摂取過剰の食生活が多く見られている。その結果として肥満、高脂血症、高血圧などといった生活習慣病の罷患率が急激に上昇している。これら生活習慣病の典型例である、高コレステロール、糖尿病の治療薬としては、多種多様なものが使用され、それぞれ一定の効果も認められている(例えば、特許文献１ないし３参照。)。
【０００３】
ところが、これらの治療薬剤は、疾病を有する人(病人)を対象とするものであると同時に、少なからず副作用を有しており、長期の服用には抵抗感も強い。そこで、薬剤ではなく、人体に安全でかつ境界域にある人を対象とし、生活習慣病予防・改善効果、特に糖尿病改善作用を有する組成物の開発が強く望まれている。
【０００４】
さらに、これら生活習慣病のうち、特に糖尿病は、最近急激に患者数や予備軍が増加している。具体的に、この糖尿病は、平成１４年糖尿病実態調査報告(速報)によると、「糖尿病が強く疑われる人」が約７４０万人存在し、「糖尿病の可能性を否定できない人」が約８８０万人存在すると報告されている。また、これらは年々明らかに増加している傾向がある。特に、この糖尿病のなかでも、肥満、インスリン抵抗性、高脂血症、高血圧が伴う２型糖尿病の増加が顕著である。
【０００５】
一方、従来から南米ペルーのアンデス地方の高地に生育している多年性の双子葉植物であるエルカンプーレが、インカ以前の時代より伝統的な薬草として服用されている。そして、このエルカンプーレは、ペルーを中心とするアンデス地方の伝承薬として、抗糖尿病作用をはじめ、腎・肝臓機能の再生、肝炎、マラリア熱の沈静化、浄血、胆汁分泌刺激等の効能があると伝えられている。
【０００６】
さらに、このエルカンプーレの主要成分の一つとしてキサントン誘導体が知られている。このキサントン誘導体の中で最も含量が多いのは、ベリジフォリン(Bellidifolin)である。そして、このベリジフォリンに関しては、ストレプトゾトシン(ＳＴＺ:Streptozotocin)誘導糖尿病ラットにおいて血糖値低下作用が認められることが知られている(例えば、非特許文献１および２参照。)。
【０００７】
また、このベリジフォリン以外のエルカンプーレに含有されているキサントン誘導体の一つとしてマンギフェリン(Mangeferin)が知られている。そして、このマンギフェリンに関しては、２型糖尿病のモデルとされるＫＫ−Ａｙマウスにおける血糖値低下作用とインスリン感受性上昇作用が知られている(例えば、非特許文献３参照。)。
【特許文献１】特開２００２−３６３０９５号公報（第３−５頁）
【特許文献２】特開平６−３４５６６４号公報（第２−３頁）
【特許文献３】特開平６−１３５８３９号公報（第２−７頁）
【非特許文献１】バスネット Ｐ(Basnet P)、外３名，「センブリ(Swertia japonica)より得られたベリジフォリン(Bellidifolin)は、ストレプトゾトシン(STZ:Streptozotocin)誘導糖尿病ラットにおいて強力な血糖値低下作用を有する」，(独国)，プランタメディカ(Planta Medica),１９９４年，第６０巻，ｐ．５０７−５１１
【非特許文献２】バスネット Ｐ(Basnet P)、外４名，「ベリジフォリン(Bellidifolin)は、ストレプトゾトシン(STZ:Streptozotocin)誘導糖尿病ラットにおいて、ラット線維芽細胞でのグルコース取り込みを促進し、高血糖値を改善する」，(独国)，プランタメディカ(Planta Medica),１９９５年，第６１巻，ｐ．４０１−４０５
【非特許文献３】イチキ Ｈ(Ichiki H)、外６名，「マンギフェリン(Mangeferin)とその配糖体は新規抗糖尿病化合物である」，(日本)，バイオロジカルファーマシューティカルブレティン(Biol.Pharm.Bul.l)，１９９８年，第２１巻，ｐ．１３８９−１３９０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、上述したエルカンプーレの糖尿病に対する諸機能については未だ明確に解明されていないという問題を有している。
【０００９】
本発明は、このような点に鑑みなされたもので、少なくともエルカンプーレを含有する糖尿病抑制組成物、糖尿病抑制食品、糖尿病抑制化粧料、糖尿病抑制皮膚外用および糖尿病抑制薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
請求項１記載の糖尿病抑制組成物は、少なくともエルカンプーレを含有し、糖尿病抑制作用を有するものである。
【００１１】
そして、少なくともエルカンプーレを含有することにより、糖尿病抑制作用を期待できる。
【００１２】
請求項２記載の糖尿病抑制組成物は、請求項１記載の糖尿病抑制組成物において、２型糖尿病抑制作用を有するものである。
【００１３】
そして、少なくともエルカンプーレを含有することにより、２型糖尿病抑制作用を期待できる。
【００１４】
請求項３記載の糖尿病抑制組成物は、請求項１または２記載の糖尿病抑制組成物において、血清脂質改善作用および肝臓脂質改善作用を有するものである。
【００１５】
そして、少なくともエルカンプーレを含有することにより、血清脂質改善作用および肝臓脂質改善作用を期待できる。
【００１６】
請求項４記載の糖尿病抑制組成物は、請求項１ないし３いずれか記載の糖尿病抑制組成物において、血清グルコース低下作用を有するものである。
【００１７】
そして、少なくともエルカンプーレを含有することにより、血清グルコース低下作用を期待できる。
【００１８】
請求項５記載の糖尿病抑制組成物は、請求項１ないし４いずれか記載の糖尿病抑制組成物において、遊離脂肪酸改善作用を有するものである。
【００１９】
そして、少なくともエルカンプーレを含有することにより、遊離脂肪酸改善作用を期待できる。
【００２０】
請求項６記載の糖尿病抑制組成物は、請求項１ないし５いずれか記載の糖尿病抑制組成物において、インスリン抵抗性改善作用を有するものである。
【００２１】
そして、少なくともエルカンプーレを含有することにより、インスリン抵抗性改善作用を期待できる。
【００２２】
請求項７記載の糖尿病抑制組成物は、請求項１ないし５いずれか記載の糖尿病抑制組成物において、コレステロール減少作用を有するものである。
【００２３】
そして、少なくともエルカンプーレを含有することにより、コレステロール減少作用を期待できる。
【００２４】
請求項８記載の糖尿病抑制食品は、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含むものである。
【００２５】
そして、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む食品を食することにより、糖尿病抑制作用を期待できる。
【００２６】
請求項９記載の糖尿病抑制皮膚外用は、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含むものである。
【００２７】
そして、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む皮膚外用を用いることにより、糖尿病抑制作用を期待できる。
【００２８】
請求項１０記載の糖尿病抑制薬は、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含むものである。
【００２９】
そして、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む薬を用いることにより、糖尿病抑制作用を期待できる。
【発明の効果】
【００３０】
請求項１記載の糖尿病抑制組成物によれば、少なくともエルカンプーレを含有するので、糖尿病抑制作用を期待できる。
【００３１】
請求項２記載の糖尿病抑制組成物によれば、請求項１記載の糖尿病抑制組成物の効果に加え、少なくともエルカンプーレを含有するので、２型糖尿病抑制作用を期待できる。
【００３２】
請求項３記載の糖尿病抑制組成物によれば、請求項１または２記載の糖尿病抑制組成物の効果に加え、少なくともエルカンプーレを含有するので、血清脂質改善作用および肝臓脂質改善作用を期待できる。
【００３３】
請求項４記載の糖尿病抑制組成物によれば、請求項１ないし３いずれか記載の糖尿病抑制組成物の効果に加え、少なくともエルカンプーレを含有するので、血清グルコース低下作用を期待できる。
【００３４】
請求項５記載の糖尿病抑制組成物によれば、請求項１ないし４いずれか記載の糖尿病抑制組成物の効果に加え、少なくともエルカンプーレを含有するので、遊離脂肪酸改善作用を期待できる。
【００３５】
請求項６記載の糖尿病抑制組成物によれば、請求項１ないし５いずれか記載の糖尿病抑制組成物の効果に加え、少なくともエルカンプーレを含有するので、インスリン改善作用を期待できる。
【００３６】
請求項７記載の糖尿病抑制組成物によれば、請求項１ないし５いずれか記載の糖尿病抑制組成物の効果に加え、少なくともエルカンプーレを含有するので、コレステロール減少作用を期待できる。
【００３７】
請求項８記載の糖尿病抑制食品によれば、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む食品を食することにより、糖尿病抑制作用を期待できる。
【００３８】
請求項９記載の糖尿病抑制皮膚外用によれば、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む皮膚外用を用いることにより、糖尿病抑制作用を期待できる。
【００３９】
請求項１０記載の糖尿病抑制薬によれば、請求項１ないし７いずれか記載の糖尿病抑制組成物を含む薬を用いることにより、糖尿病抑制作用を期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
以下、本発明の一実施の形態の糖尿病抑制組成物について説明する。
【００４１】
まず、この糖尿病抑制組成物としては、糖尿病、特に２型糖尿病抑制作用を有している。さらに、この糖尿病抑制組成物は、少なくともエルカンプーレ(Gentianella alborosea(Gilg)Fabris)を含有している。ここで、このエルカンプーレは、双子葉類、リンドウ科、リンドウ属の多年草の植物であり、南米ペルーのアンデス地方の標高３５００ｍ〜４０００ｍのプナと呼ばれる寒冷な高原地帯に生息している。
【００４２】
さらに、このエルカンプーレは、このエルカンプーレの乾燥全草(根・茎・葉)に５倍量の含水アルコールである７０％アルコールを加えてから浸漬抽出した溶液にデキストリンを加えた後に噴霧乾燥したエキス粉末であるエルカンプーレエキス末として糖尿病抑制組成物に含有されている。そして、このエルカンプーレエキス末には、キサントン誘導体が豊富に含有されている。
【００４３】
また、この糖尿病抑制組成物は、２型糖尿病抑制作用、すなわち血清脂質改善作用、肝臓脂質改善採用、血清グルコース低下作用、遊離脂肪酸改善作用、インスリン抵抗性改善作用、コレステロール減少作用のそれぞれを有している。さらに、この糖尿病抑制組成物を含有する機能性食品、化粧料、皮膚外用あるいは医薬として用いることもできる。したがって、この糖尿病抑制組成物としては、皮膚外用剤や、機能性食品、医薬品、化粧品として適宜用いることもできる。
【００４４】
そして、この糖尿病抑制組成物を提供する形態としては、散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、液剤、シロップ状のいずれであっても良く、これらは適宜助剤、賦香料とともに賦形されてもよい。用いられる賦形剤、希釈剤としては、ゼラチン、糖類、澱粉類、脂肪酸およびその塩、油脂、タルク、生理食塩水、その他のマスキング剤などが挙げられる。これらのものをそのまま服用してもよいが、各種料理品、菓子、キャンデなどの食品に混ぜて服用するのも好都合である。
【実施例】
【００４５】
次に、糖尿病発症期におけるエルカンプーレエキス末投与が糖および脂質代謝に及ぼす影響についての一実施例を説明する。
【００４６】
このとき、２型糖尿病のモデル動物であるＯＬＥＴＦ(Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty rats)ラットと、ＬＥＴＯ(Long-Evans Tokushima Otsuka rats)ラットとを用いて、エルカンプーレエキス末投与が２型糖尿病に及ぼす影響について、糖尿病治療薬であるアカルボースと比較して検討した。
【００４７】
ここで、このＯＬＥＴＦとは、非インスリン依存性糖尿病(２型糖尿病)を有する新規ラット系統である。また、このＯＬＥＴＦラットは、２型糖尿病のモデル動物として良く知られており、糖尿病発症を段階的に抑えることが可能である。
【００４８】
さらに、このＯＬＥＴＦラットの系統は、糖尿病症状を有する自然発症の長期高血糖ラットである。また、このＯＬＥＴＦラットは、インスリン抵抗性末発症の若齢期からインスリン抵抗性時期および糖尿病発症期それぞれの経過を観察できる特徴を有している。
【００４９】
また、ＬＥＴＯラットは、ＯＬＥＴＦラットの対照動物であり、このＯＬＥＴＦラットが由来した系統であるが糖尿病の発生がみられないものである。
【００５０】
まず、実験材料および実験方法について説明する。
【００５１】
(実験材料)
実験の対象とする試料であるエルカンプーレエキス末としては、エルカンプーレの乾燥全草(根・茎・葉)に５倍量の含水アルコールである７０％アルコールを加えてから浸漬抽出した溶液にデキストリンを加えた後、この溶液を噴霧乾燥させたエキスパウダとしてのエキス粉末(トワ商事株式会社製)を用いた。そして、このエキス末中に含まれるエキス含量は、質量比で約６０％であった。
【００５２】
また、このエキス末中に含まれる総キサントン化合物含量の指標の一つであるマンギフェリン(Mangeferin)含量は、８．０〜８．７％(ＨＰＬＣ法)であった。さらに、使用する高速液体クロマトグラフィ(High Performance Liquid Chromatography:ＨＰＬＣ)法には、ＨＰＬＣ用試薬(和光純薬工業株式会社製)を使用した。また、コレステロール・オキシダーゼ(cholesterol oxidase)(旭化成工業株式会社製)を使用した。その他の試薬は、試薬特級(和光純薬工業株式会社製)を使用した。
【００５３】
(飼料の調製)
実験の対象とする群を、対照食群としてコントロール(control)群と、エルカンプーレを与えて食させるエルカンプーレ(Hercampure)群と、アカルボース(Acarbose)を与えて食させるアカルボース群とした。そして、「リーブス Ｐ．Ｇ(Reeves P.G)、外２名「齧歯類目飼育のためのＡＩＮ−９３精製食」，(米国)，ジャーナルオブニュートリション(J.Nutr.)，１９９３年，第１２３巻，ｐ．１９２３−１９３１」に記載のＡＩＮ−９３組成に準拠した対照食とした。この対照食は、カゼインを蛋白質源とする純化飼料である。また、２％エルカンプーレエキス末を対照食に添加し調製した飼料をエルカンプーレ群のエルカンプーレ食とした。さらに、０．２％アカルボース(バイエル薬品株式会社製)を対照食に添加し調製した飼料をアカルボース群のアカルボース食とした。これらいずれの実験食も、試料の添加量をコーンスターチの量によって調整した。また、これら対照食と実験食のそれぞれは、表１に示す飼料組成であった。
【００５４】
【表１】
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【００５５】
(実験動物および飼育方法)
まず、実験動物として雄性のＯＬＥＴＦラットおよびＬＥＴＯラット(大塚製薬株式会社生物研究所より納入)を用いた。これらＯＬＥＴＦラット、およびＬＥＴＯラットのそれぞれは、２００２年６月１０日〜１３日生まれであった。さらに、これらＯＬＥＴＦラットおよびＬＥＴＯラットのそれぞれは、実験での使用開始まで、温度２２．０±２．０℃、湿度５５．０±５．０％、１２時間の明暗(明期はＡＭ７：００〜ＰＭ７：００、暗期はＰＭ７：００〜ＡＭ７：００)切り替えの動物室にて飼育し、飲水(水道水)、飼料(ＣＥ−２:日本クレア株式会社製)を自由摂取させた。
【００５６】
この後、プレテスト3aII(和光純薬工業株式会社製)で、ＯＬＥＴＦラットの尿中へのグルコース排泄を確認することのできた３３週齢のＯＬＥＴＦラットおよびＬＥＴＯラットのそれぞれを実験に供した。すなわち、糖尿病改善効果の比較対照用のコントロール群としてＯＬＥＴＦラットを、さらに正常ラットの対照用のコントロール群としてＬＥＴＯラットを、３３週齢でそれぞれ５匹ずつ使用した。
【００５７】
また、エルカンプーレ群、アカルボース群には、３３週齢のＯＬＥＴＦラットを、各群５匹ずつ使用した。そして、これらＯＬＥＴＦラットおよびＬＥＴＯラットそれぞれ飼育は、実験開始前と同様の条件で飼育し、飲水(水道水)とともに、これら各群に対する実験飼料を６週間自由摂取させた。そして、１日おきに体重および飼料摂取量を測定した。なお、この動物実験では、近畿大学医学部動物実験の指針を遵守して実施した。
【００５８】
(全血採血および血清の分離)
そして、実験開始６週間後、絶食させずにペントバルピタールナトリウム(大日本製薬株式会社製)を５０ｍｇ／ｋｇほど腹腔内投与麻酔した後、腹部大動脈より注射筒にて全血採血した。この採血を午前１０時から１２時の間にして、得られた血液を室温にて１時間放置してから４℃で１〜２時間放置した後、２５００rpm、４℃、１０minの条件で遠心して血清を分離した。
【００５９】
(血清より各リポ蛋白質分画の分離)
さらに、全血採血の時に得られた血清からの各リポ蛋白質分画を分離する。ここで、これら各リポ蛋白質分画としては、超低比重リポ蛋白質分画(very-low-density lipoprotein(ＶＬＤＬ；ｄ＜1.006))と、低比重リポ蛋白質分画(low-density lipoprotein(ＬＤＬ；ｄ：1.006〜1.063))と、高比重リポ蛋白質分画(high-density lipoprotein(ＨＤＬ；ｄ：1.063〜1210))と、非リポ蛋白質分画(lipo-free(Free；ｄ＞1.210))のそれぞれである。
【００６０】
また、このときの各リポ蛋白質分画を分離は、「ハッチ ＦＴ(Hatch FT)，「血漿リポ蛋白質分析法」，(米国)，アカデミックプレス(Academic Press)，１９６８年，第１巻，ｐ．１−６８」に記載の方法に準じた段階的密度勾配超遠心(ＴＬ-１００：Beckman社製 米国)により、アングルロータ(ＴＬＡ-１００．２：Beckman社製 米国)を用いた。
【００６１】
ここで、「ラスク Ｌ．Ｔ．(Lusk L.T.)、外３名,「ラット血漿よりも高比重リポ蛋白質１(ＨＤＬ１)の単離とその(部分的な)特徴」,(米国)，バイオケミカルジャーナル(Biochem.J)，１９７９年，第１８３巻，ｐ．８３−８９」に記載のように、ＯＬＥＴＦラットおよびＬＥＴＯラットの場合、ＨＤＬの亜分画、すなわちＨＤＬ１がＬＤＬ分画からＨＤＬ分画に亘って混在することが知られている。したがって、今回用いた投階的密度勾配超遠心法では、本来のＬＤＬのみの分離が不可能であり、ＬＤＬ分画がＬＤＬと混在するＨＤＬ１との和となってしまっている。
【００６２】
(血清および各リポ蛋白質分画中のコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量と、血清中のグルコースおよび遊離脂肪酸含量との測定)
そして、血清ならびに各リポ蛋白質分画中のコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量は、市販の酵素法によるキット(コレステロール Ｅ−テストワコー、リン脂質 Ｃ−テストワコー、トリグリセライド Ｅ−テストワコー：和光純薬工業株式会社製)を用いて測定した。
【００６３】
また、血清中のグルコースおよび遊離脂肪酸含量は、市販の酵素法によるキット(グルコース ＣＩＩ−テストワコー、ＮＥＦＡ Ｃ−テストワコー：和光純薬工業株式会社製)を用いて測定した。
【００６４】
(血清中のインスリン含量の測定)
さらに、血清中のインスリン含量は、レビス インスリン−ラット ＥＬＩＳＡ キット(株式会社シバヤギ製)を用いて、Sandwich ＥＬＩＳＡ(Enzyme-linked immunosorbent assay)法にて測定した。したがって、このインスリン含量は、Immuno-reactive insulin(ＩＲＩ，pg/mL)にて示した。
【００６５】
(血清中の各種アポ蛋白質含量の測定)
また、各種アポ蛋白質(ａｐｏＡ−Ｉ，ａｐｏＢ，ａｐｏＥ)含量ならびにＬＤＬおよびＨＤＬそれぞれの分画中に含まれるａｐｏＥ含量は、「小川博、外４名，「脳卒中易発症性高血圧自然発症ラットの血清アポ蛋白質Ａ−Ｉ，Ｅ，そしてＡ−ＩＶの加齢による変化」，(英国)，ジャーナルオブハイパーテンション(J.Hypertens)，１９８６年，第４巻，ｐ．４２９−４４３」の一部を改良した「ロウレル ＣＢ(Laurell CB)，「抗体含有アガロースゲルでの電気泳動による蛋白質の定量評価」，(米国)，アナリティカルバイオケミストリ(Anal.Biochem)，１９６６年，第１５巻，ｐ．４５−５２」に記載のロウレル法に準拠したロケット免疫電気泳動法にて測定した。このとき、抗体としては、ラット血清より分離して精製した各種アポ蛋白質を抗原とし、ウサギにて作成した特異抗体を使用した。また、ａｐｏＡ−ＩとａｐｏＢとのそれぞれの測定結果からａｐｏＢ／ａｐｏＡ−Ｉを求めた。
【００６６】
(肝臓摘出、肝臓比質量の測定、肝臓脂質抽出)
さらに、各群それぞれのラットの全血採血をした後、速やかに肝臓を摘出し、これら肝臓の湿重量を測定した。そして、これら肝臓の肝臓比質量は、処分時の単位体重(１００ｇ)あたりの肝臓質量の割合にて示した。またこのとき、フォルチ Ｊ(Folch J)、外２名，「動物組織よりの全脂質の簡単な単離と精製法」，(米国)，ジャーナルオブバイオロジカルケミストリ(J.Biol.Chem.),１９５７年，第２２６巻，ｐ．４９７−５０９」に記載の方法に準拠して肝臓中の脂質を抽出した。そして、これら脂質における抽出液の下層(クロロホルム層)の一部を取り、窒素気流下でクロロホルムを蒸発させて、肝臓脂質含量測定用の試料とした。
【００６７】
(肝臓中のコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量の測定)
そして、肝臓中のコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量は、市販の酵素法によるキット(コレステロール Ｅ−テストワコー、リン脂質 Ｃ−テストワコー、トリグリセライド Ｅ−テストワコー：和光純薬工業株式会社製)を用いて測定した。
【００６８】
(胆汁酸合成律速酵素７αヒドロキシラーゼ活性の測定)
また、常法により肝臓ミクロソーム画分を精製し、このミクロソーム画分中に存在するコレステロールを基質とした。さらに、「荻島正、外１名，「コレステロール７α−水酸化酵素活性の定量方法」，(米国)，アナリティカルバイオケミストリ(Anal.Biochem)，１９８６年，第１５８巻，ｐ．２２８−２３２」に記載の方法に準拠し、ＨＰＬＣにてコレステロール７αヒドロキシラーゼ(cholesterol 7α-hydroxylase(７αヒドロキシラーゼ：7α-hydroxylase))活性を測定した。ここで、この７αヒドロキシラーゼ活性は、ミクロソーム画分の蛋白質含量１ｍｇあたり１分間に生じるＨＣＯ:7α-hydroxy-4-cholesten-3-on(7α-ヒドロキシ-4-コレステン-3-オン)量(ｐｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍｇミクロソーム蛋白質)にて示した。
【００６９】
(統計処理)
実験値は、すべて平均値±標準誤差(The mean±standard error of the mean,Ｍ±ＳＥＭ)示した。また、有意差検定は、StatView(Ｖｅｒ．５，ＳＡＳ Institute Inc.USA)を用いて分散および分析した後、多重比較検定(Tukey’s multiple comparison test)をした。さらに危険率５％以下を有意とした。
【００７０】
次に、上記実験材料および実験方法での実験結果について説明する。
【００７１】
(体重および飼料摂取量に及ぼす影響)
実験期間中の対照食群２群(ＬＥＴＯラット群、ＯＬＥＴＦラット群)、エルカンプーレ群およびアカルボース群それぞれにおける体重の動態と飼料摂取量とを図２および図３に示した。そして、これら図２および図３に示すように、各群の体重は、すでに実験開始期よりＯＬＥＴＦラット群がＬＥＴＯラット群に比較して有意に高値であり、この有意な高値は実験終了時まで継続した。また、エルカンプーレ群もＯＬＥＴＦラット群とほぼ同様な体重の動向を示したが、アカルボース群では、投与６日目よりＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示し、投与終了時まで有意な低値が継続した。
【００７２】
さらに、各群の飼料摂取量も、すでに実験開始期よりＯＬＥＴＦラット群がＬＥＴＯラット群に比較して有意に高値であり、この有意な高値は実験終了日前まで継続した。そして、エルカンプーレ群は、ＯＬＥＴＦラット群とほぼ同様な動向を示したが、アカルボース群では、投与１２日日までＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示したが、その後上昇し、投与２０日目より投与終了日前までＯＬＥＴＦラット群より有意な高値を示した。
【００７３】
(血清コレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量に及ぼす影響)
実験終了時の最終体重および平均飼料摂取量と、実験終了時に得られた血清コレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量それぞれの動態を表２に示す。
【００７４】
【表２】
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【００７５】
そして、表２に示すように、実験終了時の最終体重および平均飼料摂取量のそれぞれは、ＬＥＴＯラット群のみが他の３群より有意な低値を示した。また、アカルボース群では、最終体重がＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示したが、エルカンプーレ群では差は認められなかった。
【００７６】
さらに、実験終了時に得られた血清コレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量はいずれも、アカルボース群ではＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示し、ＬＥＴＯラット群とほぼ同様な値を示した。これに対し、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較するといずれも低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。
【００７７】
(血清グルコース、遊離脂肪酸およびインスリン含量に及ぼす影響)
血清グルコース、遊離脂肪酸およびインスリン含量それぞれの動態を表３に示す。
【００７８】
【表３】
2005298358.tif 000005
【００７９】
そして、この表３に示すように、血清グルコース含量は、アカルボース群でＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示し、ＬＥＴＯラット群とほぼ同様な値を示した。また、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値(ｐ＜０．０８)を示した。さらに、血清遊離脂肪酸およびインスリンそれぞれの含量はともに、アカルボース群でＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示し、ＬＥＴＯラット群とほぼ同様な値を示した。一方、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。
【００８０】
(血清中の各種アポ蛋白質含量に及ぼす影響)
実験終了時に得られた血清中の各種アポ蛋白質(ａｐｏＡ−Ｉ，ａｐｏＢ，ａｐｏＥ)含量と、ａｐｏＢ／ａｐｏＡ−Ｉの動態とを表４に示す。
【００８１】
【表４】
2005298358.tif 000006
【００８２】
そして、この表４に示すように、血清中のａｐｏＡ−Ｉ含量は、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な低値を示した。一方、他の３群間に有意な差は認められなかった。また、血清中のａｐｏＢおよびａｐｏＥそれぞれの含量は、ａｐｏＡ−Ｉの含量と逆に、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な高値を示したが、残りの３群間に有意な差は認められなかった。さらに、ａｐｏＢ／ａｐｏＡ−Ｉは、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な高値を示し、アカルボース群でＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値が認められた。また、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し、ほとんど差が認められなかった。
【００８３】
(血清各リポ蛋白質分画におけるコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量に及ぼす影響)
血清各リポ蛋白質分画におけるコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量の分布を図４ないし図６に示す。
【００８４】
そして、図４に示すように、血清各リポ蛋白質分画におけるコレステロール含量は、ＶＬＤＬおよびＬＤＬ分画において、アカルボース群でＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示し、ＬＥＴＯラット群とほぼ同様な値(ＶＬＤＬ分画)および有意な低値(ＬＤＬ分画)を示した。これに対し、エルカンプーレ群では、いずれもＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。また、ＨＤＬ分画においては、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な低値を示し、これら他の３群間に有意な差は認められなかった。
【００８５】
また、図５に示すように、血清各リポ蛋白質分画におけるリン脂質含量は、コレステロール含量の分布と比較的類似した結果を示した。すなわち、ＶＬＤＬ分画およびＬＤＬ分画のそれぞれにおいて、アカルボース群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示し、ＬＥＴＯラット群とほぼ同様あるいは有意な低値を示した。これに対し、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。さらに、ＨＤＬ分画においては、ＬＥＴＯラット群が他の３群と比較して有意な低値を示し、アカルボース群でＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示した。そして、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。Ｆｒｅｅ分画においては、４群間でほとんど差はみられなかった。
【００８６】
さらに、図６に示すように、血清各リポ蛋白質分画におけるトリグリセライド含量は、ＶＬＤＬおよびＬＤＬ分画において、アカルボース群でＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示した。また、このアカルボース群では、ＬＥＴＯラット群と比較し、有意な低値(ＶＬＤＬ分画)あるいは、ほぼ同様な値(ＬＤＬ分画)を示した。さらに、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。さらに、ＨＤＬ分画において、アカルボース群でＯＬＥＴＦラット群およびＬＥＴＯラット群と比較し有意な低値を示し、エルカンプーレ群でＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示した。
【００８７】
(肝臓比質量、肝臓中のコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量に及ぼす影響)
肝臓比質量、肝臓中のコレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量の動態を表５に示す。
【００８８】
【表５】
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【００８９】
そして、肝臓比質量は、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な低値を示した。そして、アカルボース群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示した。さらに、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。また、肝臓中のコレステロール含量は、肝臓比質量とは逆に、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な高値を示した。そして、アカルボース群ではＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な高値を示した。また、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し高値(ｐ＜０．０９)を示した。
【００９０】
さらに、肝臓中のリン脂質含量は、４群間で有意な差はみられなかった。また、肝臓中のトリグリセライド含量は、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な低値を示した。そして、アカルボース群ではＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示した。また、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。
【００９１】
次に、肝臓全体の脂質含量を図１に示す。そして、この図１に示すように、肝臓全体のコレステロール含量は、４群間で有意な差はみられなかった。また、肝臓全体のリン脂質含量は、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な低値を示したが、残りの３群間には有意な差が認められなかった。
【００９２】
さらに、肝臓全体のトリグリセライド含量は、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な低値を示した。そして、アカルボース群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し有意な低値を示した。また、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し低値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。
【００９３】
(肝臓ミクロソーム画分における７αヒドロキシラーゼ活性に及ぼす影響)
肝臓ミクロソーム画分における７αヒドロキシラーゼ活性の動態を表５に示す。
【００９４】
そして、この表５に示すように、７αヒドロキシラーゼ活性は、ＬＥＴＯラット群で他の３群と比較して有意な低値を示した。また、アカルボース群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し高値(ｐ＜０．０８)を示した。さらに、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し高値傾向を示したが、有意な差は認められなかった。
【００９５】
(考察)
糖尿病とは、一般に空腹時の血糖値が７．０ｍｍｏｌ／Ｌ(１２６ｍｇ／ｄＬ)以上、あるいは７５ｇ経口糖負荷試験(ＯＧＴＴ：Oral Glucose Tolerance Test)後の２時間後の血糖値が１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ(２００ｍｇ／ｄＬ)以上の場合をいう(日本糖尿病学会)。そして、最近では、ヘモグロビンＡｌｃ(ＨｂＡｌｃ)値も診断に用いられる。このＨｂＡｌｃは、グリコヘモグロビンと言われ、ヘモグロビンにグルコースが結合したものである。したがって、このグリコヘモグロビンは、食事の影響を受けにくく、過去約４ケ月間の血糖値を良く反映する。なお、一般にＨｂＡｌｃが６．５％以上で糖尿病と判定される。
【００９６】
さらに、糖尿病には、インスリン絶対量不足による１型糖尿病と、インスリン抵抗性を主体とするインスリン相対的不足による２型糖尿病が存在する。この２型糖尿病は、日本人における糖尿病の大部分を占めている。そして、最近では、食生活の欧米化をはじめとする生活習慣の急激な変化による環境的要因が影響し、２型糖尿病発症が加速している。また、２型糖尿病には、肥満、インスリン抵抗性、高脂血症あるいは高血圧が伴っていることが多い。そして、これらの疾患は相互に密接に関与していることは明らかであるが、関与の詳細については未だ不明な点が多い。
【００９７】
上述したように、上記一実施例では、２型糖尿病のモデル動物として良く知られているＯＬＥＴＦラットと、このＯＬＥＴＦラットの対照動物であるＬＥＴＯラットとを使用して、キサントン誘導体が豊富に含有されたエルカンプーレエキス末の投与の影響を、糖尿病治療薬であるアカルボースと比較検討した。
【００９８】
この結果、成長への影響を見てみると、エルカンプーレ群では、成長曲線および飼料摂取量のそれぞれにおいてＯＬＥＴＦラット群とほとんど差はみられなかった。これに対し、アカルボース群では飼料摂取量の増加とともに、逆に体重が有意に減少し、ＬＥＴＯラット群に近い体重となった。これは、アカルボースのα−グルコシダーゼ阻害作用による強力な飼料摂取効率低下作用に基づくものと考えられる。
【００９９】
次に、血清脂質への影響について考察すると、アカルボース群では、血清コレステロール、リン脂質およびトリグリセライド含量のいずれにおいてもＬＥＴＯラット群とほぼ同様な値を示し、強力な改善効果が認められた。さらに、各脂質の血清リポ蛋白質への分配から詳細に検討すると、アカルボースは、ＯＬＥＴＦラットのＶＬＤＬ，ＬＤＬを有意に減少させることが明らかとなった。
【０１００】
しかし一方では、ＨＤＬは変化が無くＬＥＴＯラットより有意な高値を維持していた。一方、エルカンプーレ群では、ＯＬＥＴＦラット群と比較し、いずれの血清脂質含量も低値傾向を示し、改善効果が認められた。また、このエルカンプーレ群では、各脂質の血清リポ蛋白質への分配に対しても、アカルボース群と類似した作用を示し、ＶＬＤＬとＬＤＬとのそれぞれを減少させる一方、ＨＤＬの変化が無く、ＬＥＴＯラット群より有意な高値を維持していた。さらに、ＨＤＬの動態に関しては、ＨＤＬの主要構成蛋白質であるａｐｏＡ−Ｉ含量が、ＬＥＴＯラット群においてのみ他の３群と比較して有意な低値を示し、他の３群間に有意な差は認められなかったことからも裏付けられる。
【０１０１】
また、ＶＬＤＬおよびＬＤＬの主要構成蛋白質であるａｐｏＢ値が、アカルボース群とエルカンプーレ群とのそれぞれでＯＬＥＴＦラット群より低値傾向であることからも血清脂質の改善が支持される。しかし、これらＶＬＤＬおよびＨＤＬｌの主要構成蛋白質であるａｐｏＥに関しては明確な結果が得られなかった。したがって、エルカンプーレエキス末投与によりアカルボースと類似したＯＬＥＴＦラットの血清脂質の改善作用が認められることが明らかとなった。しかし、この作用はアカルボースと比較して弱いものであった。
【０１０２】
次に、血清グルコース、遊離脂肪酸およびインスリンヘの影響について考察すると、アカルボースは、ＯＬＥＴＦラットの血清グルコースをＬＥＴＯラットとほぼ同じレベルまで低下させ、エルカンプーレもかなり低下させた。さらに、遊離脂肪酸およびインスリンのそれぞれに対しても同様に、アカルボースは、ＯＬＥＴＦラットの血清遊離脂肪酸およびインスリンをＬＥＴＯラットとはぼ同じレベルまで低下させ、エルカンプーレもある程度低下させた。したがって、血清脂質への作用と同様に、エルカンプーレは、ＯＬＥＴＦラットの血清グルコース、遊離脂肪酸およびインスリンレベル改善作用が認められたが、この作用はアカルボースと比較して弱いものであった。
【０１０３】
次に、肝臓への影響について考察すると、アカルボースは、ＯＬＥＴＦラットにおける単位体重あたりの肝臓重量の有意な上昇と、トリグリセライド含量(ｍｇ／湿質量ｇ)の有意な上昇とのそれぞれを有意に抑制した。エルカンプーレも、アカルボースと類似した作用を示したが、いずれも有意ではなく、アカルボースと比較して弱いものであった。これに対して、コレステロール含量(ｍｇ／湿質量ｇ)の場合は、アカルボースおよびエルカンプーレともに、ＯＬＥＴＦラットにおける減少を有意に抑制した。この際、肝臓コレステロールの胆汁酸への異化律速酵素である７αヒドロキシラーゼ活性の上昇を伴っていた。ところが、肝臓全体では、４群間にコレステロール含量の差はなく、恒常性が良く保たれていた。
【０１０４】
さらに、リン脂質含量(ｍｇ／湿重量ｇ)の場合は、４群間にほとんど差は認められなかった。一方、肝臓全体では、ＬＥＴＯラット群のみ有意な低値であり、その他３群には差がなかったことから、アカルボースおよびエルカンプーレともに、ＯＬＥＴＦラットの肝臓リン脂質含量への影響は小さいと考えられた。これらの結果、肝臓脂質代謝においても、エルカンプーレはアカルボースと類似した作用を発揮することが明らかとなった。しかし、この作用は、アカルボースに比ベて弱いものであった。
【０１０５】
ここで、このエルカンプーレのエキス末の主要成分の一つとしてキサントン誘導体が知られている。そして、このキサントン誘導体のベリジフォリン(Bellidifolin)およびマンギフェリン(Mangeferin)に関しては、糖尿病モデル動物における血糖値低下作用とインスリン感受性上昇作用とが知られている。したがって、ＯＬＥＴＦラットにおけるエルカンプーレエキス末の有効作用は、ベリジフォリンおよびマンギフェリンをはじめとするキサントン誘導体の作用に基づく可能性が高い。
【０１０６】
全体的に考察して、今回のエルカンプーレエキス末の有効作用は、アカルボースに比べて弱いものであった。しかし、使用したエルカンプーレエキス未中の総キサントン誘導体含量の指標の一つであるマンギフェリン含量が、８．０〜８．７％であることを考慮すると、実験飼料中へのマンギフェリン添加量は０．１６〜０．１７４％となり、アカルボースの約０．８倍となることや、マンギフェリンのin vitroでのα−グルコシダーゼ阻害作用(ＩＤ５０)がアカルボースの約１／１００であること(近畿大学医学部衛生学教室測定)を考慮すると、有効作用の程度としては妥当な結果と考えられる。
【０１０７】
さらに、エルカンプーレエキス末は、食品区分に分類されており、このエルカンプーレエキス末の食品機能性は、治療薬であるアカルボースほど強力なものではなく、緩和なものであるべきであり、今回解明された新機能性である抗糖尿病作用も、この観点から有用性が高くかつ応用範囲も広いものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１】本発明の一実施例の各群の肝臓全体のコレステロール含量、リン脂質含量およびトリグリセライド含量を示すグラフである。
【図２】同上各群の体重の動態を示すグラフである。
【図３】同上各群の飼料摂取量を示すグラフである。
【図４】同上各群のコレステロール含量を示すグラフである。
【図５】同上各群のリン脂質含量を示すグラフである。
【図６】同上各群のトリグリセライド含量を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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