(57)【要約】【課題】  大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７が産生するベロ毒素のＳＴＸ１およびＳＴＸ２のいずれに対しても細胞接着を競合的に阻害する作用に優れ、かつ水溶性で経口投与も可能なものとする。【解決手段】  次式    【化１】2005289907.tif 000020（式中のＸおよびＹは直鎖高分子の構成ユニットの割合を示し、Ｘは整数、Ｙは０または整数であり、Ｒは、異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖を示す）で表わされ、ＳＴＸ１およびＳＴＸ２の各々のＢサブユニットの結合サイトの選択性を有するグロボ３糖（Ｇｂ3）高分子を有効成分とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式
【化１】
2005289907.tif 000016
（式中のＸおよびＹは直鎖高分子の構成ユニットの割合を示し、Ｘは整数、Ｙは０または整数であって、Ｒは、異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖を示す）
で表わされ、ベロ毒素ＳＴＸ１のＢサブユニットに存在するサイト２またはサイト３に結合するグロボ３糖（Ｇｂ3）高分子を有効成分とすることを特徴とするベロ毒素中和剤。
【請求項２】
次式
【化２】
2005289907.tif 000017
（式中のＸおよびＹは直鎖高分子の構成ユニットの割合を示し、Ｘは整数、Ｙは０または整数であって、Ｙ／Ｘが７以下であり、Ｒは、異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖を示す）
で表わされ、ベロ毒素ＳＴＸ２のＢサブユニットに存在するサイト３またはサイト（１＋２）に結合するグロボ３糖（Ｇｂ3）高分子を有効成分とすることを特徴とするベロ毒素中和剤。
【請求項３】
重量平均分子量が３０，０００以上６０，０００以下であることを特徴とする請求項２のベロ毒素中和剤。
【請求項４】
次式
【化３】
2005289907.tif 000018
（式中のＸおよびＹは直鎖高分子の構成ユニットの割合を示し、ＸおよびＹは各々整数であって、Ｙ／Ｘは８〜３０であり、Ｒは、異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖を示す）
で表わされ、ベロ毒素ＳＴＸ２のＢサブユニットに存在するサイト（１＋３）に結合するグロボ３糖（Ｇｂ3）高分子を有効成分とすることを特徴とするベロ毒素中和剤。
【請求項５】
重量平均分子量が５０，０００以上２００，０００以下であることを特徴とする請求項４のベロ毒素中和剤。
【請求項６】
式中の符号Ｒが次式
【化４】
2005289907.tif 000019
（ＡおよびＢは、各々、Ｓ，Ｏ，ＮＨ，ＣＯＮＨ，ＮＨＣＯ，ＣＯＯ，ＯＣＯのうちのいずれかのものを示し、ｎは１〜１０の整数を、ｍは０または１〜６の整数を示す）
で表わされるもののいずれかであることを特徴とする請求項１から５のうちのいずれかのベロ毒素中和剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願の発明はベロ毒素中和剤に関するものである。さらに詳しくは、この出願発明は、ベロ毒素の細胞への接着を競合的に阻害してベロ毒素を効果的に阻害することのできる、経口投与可能な新しいベロ毒素中和剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
腸管出血性大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７が産生するベロ毒素は、赤痢菌由来志賀毒素と類似した細菌毒素のＡＢ5ファミリーに属するタンパク質であって、これらの毒素は、腎臓細胞上のグロボトリオシルセラミド（Ｇｂ3，Ｇａｌα１−４Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃβ１−Ｃｅｒ）中のグロボ３糖部分を認識し、接着することにより細胞内に取込まれ毒性を示すことが知られている。
【０００３】
そして、このような志賀様毒素は二種類存在し、これらの毒素が出血性大腸炎やその後の一連の微小欠陥障害である重症合併症〔たとえば、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）〕などを引き起こす。Ｓｔｘ１として表記される毒素は、志賀赤痢菌(Shigella dysenreriae TypeＩ）の産生する志賀毒素とアミノ酸配列が同一である。一方、Ｓｔｘ２と表記される毒素は、Ｓｔｘ１とアミノ酸配列が５０〜６０％の相同性が認められている。これらの毒素は、そのアミノ酸配列のわずかな違いがあるものの、タンパク質合成阻害による細胞毒性や腸管毒性などの活性を示す。Ｓｔｘは、二種類のサブユニット（ＡとＢ）から構成されるＡＢ5型の毒素であり、Ａサブユニット１分子の周りにＢサブユニット５分子が疎水性結合により取り囲んでいる。毒素を担っているのがＡサブユニットであり、Ｂサブユニットは、細胞表層上に存在する糖鎖受容体に結合する役目を担っている。毒素のＸ線結晶構造解析などによる詳細な検討により、Ｂサブユニット１分子中に糖鎖の結合部位が３ヶ所存在していることが解明されてきている。すなわち、１分子中のＳｔｘ中には、５分子のＢサブユニットが存在することから、合計１５箇所の結合部位を提示していると推定される。
【０００４】
このような毒素のサブユニット構成とその機能が解明されるにともなって、細胞表層上の糖鎖受容体への結合機能を有しているＢサブユニットの結合を選択的に阻害する方法が注目され、様々な観点からの検討が進められている。
【０００５】
この出願の発明者も上記のような毒素の糖鎖結合部位に対して効果的に糖鎖を結合させ、毒素の宿主細胞への接着を阻害する人工糖鎖クラスターの構築を行ってきた。そして、これまでに、カルボシランを糖鎖担持骨格としたデンドリマー型化合物群を提案している（特許文献１、非特許文献１）。
【０００６】
このような発明者の検討においては、一方で、経口投与も可能なベロ毒素中和剤の開発も大きな課題となっていた。すなわち、上記ＳＴＸ１およびＳＴＸ２のいずれの毒素においても細胞接着機能を有するＢサブユニットでの細胞接着を効果的に阻害し、しかも経口投与も可能とされる水溶性物質からなる新しいベロ毒素中和剤を開発することである。
【０００７】
このような状況において、この出願の発明者は、毒素ＳＴＸのレセプターとしての前記のグロボ３糖部を有する新しい処分物質として、水溶性の高分子として人工糖鎖クラスターを構築すべく検討を進めてきた。
【特許文献１】ＷＯ  ０２／０２５８８
【非特許文献１】Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2002; 99: 7669-74
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
この出願の発明は、以上のとおりの背景から、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７が産生するベロ毒素のＳＴＸ１およびＳＴＸ２のいずれに対しても細胞接着を競合的に阻害する作用に優れ、かつ水溶性で経口投与も可能とされる、新しいベロ毒素中和剤を提供することを課題としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この出願は、上記の課題を解決するものとして、以下の発明を提供する。
〔１〕次式
【００１０】
【化１】
2005289907.tif 000002
【００１１】
（式中のＸおよびＹは直鎖高分子の構成ユニットの割合を示し、Ｘは整数、Ｙは０または整数であって、Ｒは、異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖を示す）
で表わされ、ベロ毒素ＳＴＸ１のＢサブユニットに存在するサイト２またはサイト３に結合するグロボ３糖（Ｇｂ3）高分子を有効成分とすることを特徴とするベロ毒素中和剤。
〔２〕  次式
【００１２】
【化２】
2005289907.tif 000003
【００１３】
（式中のＸおよびＹは直鎖高分子の構成ユニットの割合を示し、Ｘは整数、Ｙは０または整数であって、Ｙ／Ｘが７以下であり、Ｒは、異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖を示す）
で表わされ、ベロ毒素ＳＴＸ２のＢサブユニットに存在するサイト３またはサイト（１＋２）に結合するグロボ３糖（Ｇｂ3）高分子を有効成分とすることを特徴とするベロ毒素中和剤。
〔３〕  重量平均分子量が３０，０００以上６０，０００以下であることを特徴とするベロ毒素中和剤。
〔４〕  次式
【００１４】
【化３】
2005289907.tif 000004
【００１５】
（式中のＸおよびＹは直鎖高分子の構成ユニットの割合を示し、ＸおよびＹは各々整数であって、Ｙ／Ｘは８〜３０であり、Ｒは、異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖を示す）
で表わされ、ベロ毒素ＳＴＸ２のＢサブユニットに存在するサイト（１＋３）に結合するグロボ３糖（Ｇｂ3）高分子を有効成分とすることを特徴とするベロ毒素中和剤。
〔５〕  重量平均分子量が５０，０００以上２００，０００以下であることを特徴とする上記のベロ毒素中和剤を提供する。
〔６〕  上記
式中の符号Ｒが次式
【００１６】
【化４】
2005289907.tif 000005
【００１７】
（ＡおよびＢは、各々、Ｓ，Ｏ，ＮＨ，ＣＯＮＨ，ＮＨＣＯ，ＣＯＯ，ＯＣＯのうちのいずれかのものを示し、ｎは１〜１０の整数を、ｍは０または１〜６の整数を示す）
で表わされるもののいずれかであることを特徴とするベロ毒素中和剤。
【発明の効果】
【００１８】
この出願の発明によれば、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７が産生するベロ毒素のＳＴＸ１およびＳＴＸ２のいずれに対しても、各々選択的な対応によって、より効果的に、細胞接着を競合的に阻害する作用に優れ、かつ水溶性で経口投与も可能とされる、新しいベロ毒素中和剤を提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
上記のとおりの特徴をもつこの出願の発明は、発明者による、アクリルアミド系の水溶性の高分子に注目して、グロボ３糖（Ｇｂ3）による作用効果をより顕著なものとして発現させ、しかも経口投与によって腸管内でのベロ毒素の細胞接着を阻害することのできる手段の検討の結果から導かれたものである。
【００２０】
この検討の結果として特に重要なことは、ベロ毒素の２種類の毒素ＳＴＸ１およびＳＴＸ２のいずれの場合も細胞接着機能を有するＢサブユニットが、サイト１〜３の３つのサイトを有し、このサイトに対して選択的に結合することができる化学物質がベロ毒素阻害のための有効成分として特定されたことである。このようなことはこれまで全く予期できないことであった。このサイト１〜３への結合の選択性がこの出願の発明においては技術的に確立されており、このことは、Ｇｂ3−ポリマー化合物の分子設計、その合成、そしてその使用を画期的に飛躍させることを意味している。
【００２１】
なお、ここで、サイト１〜３の区別、確認の手段、そして定義については、Ling H. et
al., Biochemistry, 1998,37,1777-1788の論文において、グロボ３糖の誘導体のＳＴＸ１Ｂ−サブユニットとのコンプレックスの、Ｘ線による結晶構造の解析によって明らかにされたことに従うものとする。各々のサイトで、グロボ３糖との結合様式、結合に関与しているアミノ酸が相違している。
【００２２】
この出願の第１の発明においては、ベロ毒素中和剤のための有効成分は、前記式におけるＹ／Ｘの比率、つまり、グロボ３糖（Ｇｂ3）部の分子構造においての存在密度にあまり依存することなしにベロ毒素ＳＴＸ１のＢサブユニットに存在するサイト２またはサイト３、特にサイト３に選択的に結合する。
【００２３】
一方、第２および第３の発明においては、前記式におけるＹ／Ｘが７以下、つまりグロボ３糖（Ｇｂ3）部が密に存在しているものはＳＴＸ２のＢサブユニットにあるサイト３またはサイト（１＋２）に結合する。第４および第５の発明においては、Ｙ／Ｘが８〜３０の範囲であって、グロボ３糖（Ｇｂ3）部が分子構造において比較的粗に存在している。このものはＳＴＸ２のＢサブユニットのサイト（１＋３）に選択的に結合する。
【００２４】
上記のグロボ３糖（Ｇｂ3）が密に存在する物質の場合には平均分子量は３０，０００〜６０，０００と比較的小さいことが、また逆に粗に存在する物質の場合には５０，０００〜２００，０００の範囲にあることが好適である。
そして、この出願の発明の有効成分化合物においては前記式の符号Ｒが前記のとおりの特定のものであることが好ましい。ここで、符号Ｒとして規定される異種原子を介在させてもよい炭化水素鎖は、スペーサー分子鎖と定義してよいものであって、このスペーサー子鎖長は、特に、第４および第５の発明のようにグロボ３糖（Ｇｂ3）部の存在密度が粗のものにおいては、結合サイトの選択を左右することはないが、アフィニティー(affinity)に影響を与えるものとして重要となる。このスペーサー分子鎖長を短くするとアフィニティーが低下する傾向となる。
【００２５】
たとえば、このような有効成分化合物のＲの代表例としては、次式
【００２６】
【化５】
2005289907.tif 000006
【００２７】
の化合物の構造として例示することができる。この化合物については、後述の試験例でベロ毒素の阻害活性が評価されている。
【００２８】
たとえば上記のような有効成分化合物として水溶性糖質高分子については、その製造を以下のように行うことができる。すなわち、まず、双方のＳｔｘが共通に認識する糖鎖構造であるグロボ３糖（Ｇａｌα−４Ｇａｌβ１−４Ｇｌｃ）をガラクトースとラクトースから構築し、その還元末端側に重合性置換基を導入した糖質モノマーを調製する。また、このグロボ３糖由来の糖質モノマーの重合効率の向上を期待して、さらに化学修飾を施す。このグロボ３糖由来の糖質モノマーを水系で、ラジカル重合させる。この際、糖鎖間距離（糖鎖密度）と重合度を制御するために、共重合物としてアクリルアミドを添加した化合物も調製する。
【００２９】
このような製造については実施例中の合成例において詳しく説明する。
【００３０】
上記の高分子有効成分は水溶性であることから、ベロ毒素中和剤としての経口投与が可能とされる。もちろん他の剤型であってもよい。
【００３１】
経口投与では、賦型剤等とともに成形して、錠剤や粉末としてもよいし、精製水等との組成物として液剤としてもよい。これらの組成物や剤型については従来公知のものをはじめとする各種の配合成分が用いられてよいし、そのための各種の方法が採用されてもよい。
【００３２】
ベロ毒素中和剤としての投与量については、大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７感染が発見されてから、一般的には５〜５００ｍｇ／ｋｇ−体重程度となるように処方することが考慮されてよい。もちろん症状によって適宜としてよい。
【００３３】
そこで以下に実施例としての合成例と試験例を示し、さらに詳しく説明する。もちろん以下の例によって発明が限定されることはない。
＜合成例＞
次の反応式に従って、この出願の発明の有効成分としてのグロボ３糖（Ｇｂ3）含有糖質高分子を合成した
【００３４】
【化６】
2005289907.tif 000007
【００３５】
１）5-[2-(N-Acryloylamino)ethylthio]penryl 4-O-[4-O-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-galactopyranosyl)-2,3,6-tri-O-actyl-β-D-galactopyranosyl]-2,3,6-tri-O-acetyl-β-D-glucopyranoside(3)の合成
n-Pentenyl 4-O-[4-O(α-D-galactopyranosyl)-β-D-galactopyranosyl]-β-D-gluco pyranoside(1)(２００ｍｇ,０.３４９ｍｍｏｌ)を蒸留水（２．０ｍｌ）に溶かし、アミノエタンチオール塩酸塩（１９８．５ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間半、ＵＶを照射した。ＴＬＣで反応の終了を確認し、5-(Aminocthanethionyl)pcntyl 4-O-[4-O-(α-D-galactopyranosyl)-β-D-galactopyranosyl]-β-D-glucopyranoside hydrochloride(2)を得た。この塩酸塩は、精製せずに、そのまま次の反応に用いた。
【００３６】
この（２）を蒸留水（３ｍｌ）に溶解させ、炭酸ナトリウム（７４０ｍｇ，６．９８ｍｍｏｌ）を加え、攪拌した。この溶液に、アクリル酸クロリド（０．２３７ｍｌ，２．６２ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２ｍｌ）溶液を滴下した。反応終了後、大量に析出した塩を綿ろ過により除去した。ろ液を濃縮し、新たに析出してきた塩を再度、綿ろ過によって取り除いた。さらに濃縮後、メタノールにより希釈し、ゲルろ過（ＬＨ−２０）で脱塩を行い、組成生物を得た。さらに、精製を行うため、水酸基のアセチル化を行った。シリカゲルクロマトグラフにより精製を行い、目的化合物（３）（２１５ｍｇ，５４．８％：３steps)を得た。
【００３７】
【表１】
2005289907.tif 000008
【００３８】
２）5-[2-(N-Acryloylamino)ethylthio]pentyl 4-O-[4-O-(α-D-galactopyranosyl)-β-D-galactopyranosyl]-β-D-glucopyranoside(4)の合成
窒素雰囲気下、エステル化合物（３）（２１５ｍｇ，１９１ｍｍｏｌ）をメタノール（２．２ｍｌ）に溶かし、ナトリウムメトキシド（１０．３３ｍｇ，１９１ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間攪拌した。反応終了後、Dowex 50Wx8（Ｈ+）を加えて中和した。反応混合物からDowexをろ別した後、ろ液を濃縮し、アモルファス状の化合物（４）（１３１ｍｇ，９７％）を得た。
【００３９】
３）Copolymerization of 5-[2-(N-Acryloylamino)ethylthio]pentyl 4-O-[4-O-(α-D-galactopyranosyl)-β-D-glucopyranoside with Acrylamide(5)
窒素雰囲気下、化合物（４）（５７ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ）とアクリルアミド（５７．５７ｍｇ，０．８１ｍｍｏｌ）を蒸留水（０．５ｍｌ）に溶かした。この水溶液に減圧下、ＴＥＭＥＤ（１．２μ１，０．００８１ｍｍｏｌ）とＡＰＳ（０．７４ｍｇ，０．００３２４ｍｍｏｌ）を加え、密栓をして終夜攪拌した。反応溶液を０．１Ｍのピリジン−酢酸緩衝溶液で希釈し、ゲルろ過（Sephadex  Ｇ−５０）により精製し、凍結乾燥することによりパウダー状の化合物（５）（５５ｍｇ，４８．０１％）を得た。
【００４０】
分子量：７３１００
糖ユニット：アクリルアミドユニット＝１：１２
４）Polymerization of 5-[2-(N-Acryloylamino)ethylthio]pentyl 4-O-[4-O-(α-D-galactopyranosyl)-β-D-galactopyranosyl]-β-D-glucopyranoside(6)
窒素雰囲気下、化合物（４）（１００ｍｇ，０．１４２ｍｍｏｌ）を蒸留水（０．５ｍｌ）に溶かした。この水溶液に減圧下、ＴＥＭＥＤ（２．１２μ１，０．０１４２ｍｍｏｌ）とＡＰＳ（１．３０ｍｇ，０．００５６８ｍｍｏｌ）を加え、密栓をして５時間攪拌した。反応溶液を０．１Ｍピリジン−酢酸緩衝溶液で希釈し、ゲルろ過（Sephadex  Ｇ−５０）により精製し、凍結乾燥することによりパウダー状の化合物（６）（８０ｍｇ，８０．０％）を得た。
【００４１】
分子量：３６０００
重合度：５１
糖ユニット：アクリルアミドユニット＝１：０
５）Copolymerization of n-Pentenyl 4-O-[4-O-(α-D-galactopyranosyl)- β-D-galactopyranosyl]-β-D-glucopyranoside with Acrylamide(7)
窒素雰囲気下、既知のペンテニルグリコシド（１）（１００ｍｇ，０．１７５ｍｍｏｌ）とアクリルアミド（５０ｍｇ，０．０６９９ｍｍｏｌ）を蒸留水（１ｍｌ）に溶解させた。この溶液に減圧下、ＴＥＭＥＤ（３．０μ１，０．０２０ｍｍｏｌ）とＡＰＳ（２．０ｍｇ，０．００８８ｍｍｏｌ）を加え、密栓をして１時間半攪拌した。反応溶液を０．１Ｍのピリジン−酢酸緩衝溶液で希釈し、ゲルろ過（Sephadex  Ｇ−５０）により精製し、凍結乾燥することによりパウダー状の化合物（７）（６０ｍｇ，４０．０％）を得た。
【００４２】
分子量：１４７００
糖ユニット：アクリルアミドユニット＝１：１７
＜試験例＞
上記の方法に従って合成した次式
【００４３】
【化７】
2005289907.tif 000009
【００４４】
の高分子化合物についての評価試験を行った。
【００４５】
グロボ３糖（Ｇｂ3）保有ニユットとアクリルアミドユニットとの比Ｘ：Ｙについて、グロボ３糖（Ｇｂ3）部の分子量密度を次の表２に例示した。
【００４６】
【表２】
2005289907.tif 000010
【００４７】
１）これらの物質について、in vitroでBIA coreシステムを用い、His-tagged  ＳＴｘのＢサブユニットへの結合を、解離定数（Ｋｄ）値として評価した。その結果を表３に示した。
【００４８】
【表３】
2005289907.tif 000011
【００４９】
この表３の結果から、アクリルアミド骨格にグロボ３糖を最も高密度に集積させたＸ：Ｙ＝１：０の化合物のＳＴＸ１のＢサブユニットおよびＳＴＸ２のＢサブユニットに対するＫｄ値は、グロボ３糖のモル濃度に換算してそれぞれ、０．３４μＭ、０．６８μＭであり、この化合物が両Ｂサブユニットに対し高い親和性で結合することが明らかになった。
【００５０】
また、表４には、ＩＣ50の評価として、ＳＴＸ１，ＳＴＸ２の標的細胞への結合と細胞障害活性の試験結果を示した。
【００５１】
【表４】
2005289907.tif 000012
【００５２】
この表４の結果からもＸ：Ｙ＝１：０の糖密度を有する物質が、標的細胞への結合（０．３３μＭ，０．３４μＭ）および細胞障害活性（０．０５μＭ，０．８２μＭ）と低濃度で阻害し、高い活性を有していることがわかる。
【００５３】
一方、いずれかの系においてもＳＴＸ１と比較してＳＴＸ２に対しては、各ポリマーのグロボ３糖の集積度が、その阻害活性に大きく影響を及ぼすことが明らかとなった。
【００５４】
２）in vivoにおいて、マウスのＯ１５７：Ｈ７感染：Ｎ−９（２×１０6ｃｆｕ）の実験を行った。Ｘ：Ｙが各種の上記の高分子化合物を、各々、２５μｇ／ｇ−体重で投与し、その生存日数を評価した。その結果を示したものが図１である。いずれの化合物の場合にも感染による致死性が抑制され、３０日以上生存することが確認された。
【００５５】
このことは、有効成分化合物においては、グロボ３糖（Ｇｂ3）部の存在が粗で希薄な物質であっても極めて有効であることを意味している。経済性に優れた処方剤の実現が可能であることを示している。
【００５６】
３）マウスを用いたＯ１５７：Ｈ７感染実験において、上記化合物投与群はいずれも顕著にＯ１５７：Ｈ７感染による致死性を抑制することが明らかとなったが、感染後４日目において、糞便中及び血中のＳＴＸ濃度を測定した。その結果を表５に示した。化合物投与群では、前者は約半分に、後者は検出限界以下にそれぞれ減少していることが示された。以上のことから、上記化合物は腸管内においてＳＴＸ２を強力に吸着し、血中へのＳＴＸ２の侵入を阻害することにより感染に伴う致死的な障害を抑制していると判断される。
【００５７】
【表５】
2005289907.tif 000013
【００５８】
４）ＳＴＸ１およびＳＴＸ２のＢサブユニットへの結合について、各種化合物のＢサブユニットへの結合に必要なサイトを検証した。
【００５９】
このための方法としては、BIA core３０００を用いＮＴＡセンサーチップにＳＴＸのＢサブユニットミュータントを固定し、各濃度の化合物を流して結合量を測定した。
【００６０】
その結果をＫｄ値として例示したものが表６（ＳＴＸ１Ｂ）と表７（ＳＴＸ２Ｂ）である。この表において、単位はグロボ３糖（Ｇｂ3）のμＭ（マイクロモル）を示している。またポリマーはＸ：Ｙの比を示している。
【００６１】
また、１：１７ｐの表記は、Ｘ：Ｙ＝１：１７であって、スペーサー分子鎖が前記の
−(ＣＨ2)5−Ｓ−(ＣＨ2)2−ＮＨＣＯ−の場合よりも長い−(ＣＨ2)8−Ｓ−(ＣＨ2)2−ＮＨＣＯ−のものを示している。
【００６２】
ＳＴＸ１Ｂに対する結合に関して、次のことがわかる。
【００６３】
polymer（１：０）はwild Stx1Bに対するＫｄ値は０．３４ microM of globosugar、結合サイトはサイト２またはサイト３。
【００６４】
polymer（１：１２）はwild Stx1Bに対するＫｄ値は０．６３ microM of globosugar、結合サイトはサイト２またはサイト３。
【００６５】
polymer（１：１７ｐ）はwild Stx1Bに対するＫｄ値は０．４５ microM of globosugar、結合サイトはサイト２またはサイト３。
【００６６】
糖鎖密度、スペーサー長、いずれの影響もさほど受けることはない。
【００６７】
ＳＴＸ２Ｂに対する結合に関して、次のことがわかる。
【００６８】
polymer（１：０）はwild Stx1Bに対するＫｄ値は０．６８ microM of globosugar、結合サイトはサイト３またはサイト（１＋２）。
【００６９】
polymer（１：１２）はwild Stx1Bに対するＫｄ値は１．１ microM of globosugar、結合サイトはサイト（１＋３）。
【００７０】
polymer（１：１７ｐ）はwild Stx1Bに対するＫｄ値は３９ microM of globosugar、結合サイトはサイト（１＋３）。
【００７１】
このように、糖鎖密度を減らすと、affinityはほとんど変わらないが、結合サイトが変化する。そして、スペーサー長を短くすると結合サイトは変わらないがaffinityが低下することも確認されている。
【００７２】
【表６】
2005289907.tif 000014
【００７３】
【表７】
2005289907.tif 000015
【００７４】
以上のことから、次のように結論される。ＳＴＸ１のＢサブユニットでは、Ｇｂ3−ポリマーの糖鎖密度、スペーサー長にさほど左右されずにサイト２または３に結合する。
【００７５】
一方、ＳＴＸ２のＢサブユニットでは、Ｇｂ3−ポリマーの糖鎖密度（Ｙ／Ｘ）が比較的大きい（Ｙ／Ｘが７以下）場合にはサイト３またはサイト（１＋２）に結合すること、つまりサイト３に結合するか、あるいはサイト１とサイト２の両方が存在してはじめて結合する。また、糖鎖密度（Ｙ／Ｘ）が比較的小さく、粗に存在する（Ｙ／Ｘ＝８〜３０）場合にはサイト（１＋３）に結合する。
【００７６】
このことから、Ｂサブユニットについての結合サイトの選択性から、有効成分としてのＧｂ3−ポリマー化合物の分子設計、その合成、そして使用が可能になることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】感染後の生存日数を示した図である。
【図１】
2005289907.tif 000021