(57)【要約】      （修正有）【課題】  抗体を直接蛍光物質で標識することなく、高感度な均一系による蛍光免疫測定法を提供する。【解決手段】  抗原又は抗体である測定対象物に対する抗体又は抗原が結合した凝集可能な担体と、蛍光物質とが分散した溶液中に、前記測定対象物を含有する試料を添加し、前記溶液の蛍光強度の減少を測定する蛍光免疫測定法。【効果】抗体を直接蛍光物質で標識することなく、かつ、測定において分離洗浄操作を必要とせず、更に高感度である蛍光免疫測定法を提供することができる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原又は抗体である測定対象物に対する抗体又は抗原が結合した凝集可能な担体と、蛍光
物質とが分散した溶液中に、前記測定対象物を含有する試料を添加し、前記溶液の蛍光強
度の減少を測定することを特徴とする蛍光免疫測定法。
【請求項２】
担体は、有機高分子、無機酸化物、脂質重合物、生体成分、金属コロイド粒子及び炭素粉
末からなる群より選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１記載の蛍光免
疫測定法。
【請求項３】
担体は、ポリスチレンラテックスであることを特徴とする請求項２又は３記載の蛍光免疫
測定法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、溶液中の測定対象物を測定又は検出する手段として利用することができ、特に
医療、環境及び食品の分野に有用である蛍光免疫測定法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、抗原抗体反応を利用した免疫測定方法が、種々の疾病の早期検出や極微量の物
質の検出に用いられている。免疫測定法には種々の方法があり、抗原又は抗体に標識物質
として放射性同位体（ＲＩ）、酵素、蛍光物質及び化学発光物質等を結合するラジオイム
ノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、蛍光イムノアッセイ（ＦＩＡ）
、化学発光イムノアッセイ（ＣＬＩＡ）等が知られている。これらの方法は一般に高感度
であるが、いくつかの問題を持つ。ＲＩＡは放射性同位体を使用するので取り扱い、廃棄
に制約がある。またこれらの方法は全て反応物と未反応物とを分離、洗浄する操作を必要
とする不均一系である。分離洗浄操作を必要としない均一系が、簡便性、操作性の点で望
まれているが、均一系で簡便でありながら高感度である測定系は少ない。
【０００３】
これらの問題を克服するものとして、特許文献１では、蛍光物質で標識した抗体を用いて
、測定対象物と標識抗体が抗原抗体反応により凝集することにより起こる蛍光強度の減少
を測定することを特徴とする蛍光免疫測定法が開示されている。この方法では抗原を標識
するのではなく抗体を標識しているため、抗原を標識した場合起こりやすい抗原性の変化
を防ぐことができるという利点がある。しかしながら、抗体を蛍光物質で標識する作業は
煩雑であり、また標識抗体の活性が低下し、抗原抗体反応に悪影響を及ぼすという問題が
依然としてある。また多種類の測定を行なう場合、そのたびに個々の抗体を標識するのは
非常に煩雑である。
【０００４】
【特許文献１】特開平１０−２８２０９８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記現状に鑑み、抗体を直接蛍光物質で標識することなく、かつ、測定におい
て分離洗浄操作を必要とせず、更に高感度である蛍光免疫測定法を提供することを目的と
する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、抗原又は抗体である測定対象物に対する抗体又は抗原が結合した凝集可能な担
体と、蛍光物質とが分散した溶液中に、上記測定対象物を含有する試料を添加し、上記溶
液の蛍光強度の減少を測定する蛍光免疫測定法である。
以下に本発明を詳述する。
【０００７】
上記測定対象物としては抗原又は抗体であれば特に限定されない。本発明の蛍光免疫測定
法が医療分野で使用される場合、このような測定対象物としては、抗原としては、例えば
、Ｃ反応性蛋白質（ＣＲＰ）、ヒトフィブリノーゲン、フィブリン及びフィブリノーゲン
分解産物（ＦＤＰ）、リウマチ因子、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＨＢｓ抗原、Ｈ
Ｂｅ抗原等が挙げられ、抗体としては、例えば、抗ストレプトリジンＯ抗体、梅毒トレポ
ネーマ抗体、梅毒脂質抗原に対する抗体、ＨＢｓ抗体、ＨＢｅ抗体等が挙げられる。
【０００８】
上記測定対象物である抗原に対する抗体としては特に限定されず、モノクローナル抗体で
あってもポリクローナル抗体であってもよく、また、その由来も限定されない。更に、Ｆ
（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ＳｃＦｖ（１本鎖抗体）等であってもよい。
上記測定対象物である抗体に対する抗原としては特に限定されず、免疫原性を有する物質
以外にハプテンであってもよい。
また、上記抗体に対しては抗原を用いるのが好ましいが、凝集するものであれば、上記抗
体に対し、上記抗体に対する抗体（所謂、二次抗体）を用いても良い。
【０００９】
上記担体としては、例えば、有機高分子のラテックス；シリカ：シリカ−アルミナ等の無
機酸化物；リポソーム等の脂質重合物；赤血球等の生体成分；金コロイド等の金属コロイ
ド粒子；活性炭等の炭素粉末等が挙げられ、中でもポリスチレンラテックスが好ましい。
上記担体の大きさとしては、溶液中で分散でき、かつ、凝集できるものであれば特に限定
されない。
【００１０】
上記蛍光物質としては、溶液中に溶解又は分散する物質であれば特に限定されず、例えば
、カドミウムセレン、硫化カドミウム等の量子ドット；ユーロピウム、テルビウム等の希
土類蛍光物質；フルオレセイン、ローダミン等の有機蛍光物質；ＧＦＰ（Ｇｒｅｅｎ  Ｆ
ｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＢＦＰ（Ｂｌｕｅ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
Ｐｒｏｔｅｉｎ）等の蛍光蛋白質等が挙げられる。
上記蛍光物質は担体に担持されていてもよいが、担持されていなくともよい。
【００１１】
本発明の免疫測定法では、試料を反応系に添加すると、反応系中で測定対象物である抗原
又は抗体と、担体に固定された抗体又は抗原とが抗原抗体反応を起こすことにより、凝集
反応が起こる。或いは、反応系中で、測定対象物である抗体と、抗体に固定された、上記
抗体に対する抗体（所謂、二次抗体）とが反応し、凝集反応が起こる。反応系中に共存す
る蛍光物質はこの凝集反応により自己消光作用を生じる。このため、溶液の蛍光強度は測
定対象物がない場合と比較して減少する。その減少度合いを測定することにより、反応物
と未反応物とを分離、洗浄する操作を必要とせず、かつ、高感度な免疫測定が可能となる
。
【００１２】
本発明の免疫測定法の用途としては特に限定されないが、医療、環境及び食品の分野で好
適に使用される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、上述の構成よりなるので、反応物と未反応物とを分離、洗浄する操作を必要と
せず、かつ、高感度な免疫測定を行なうことができ、溶液中の測定対象物を測定又は検出
する手段として好適に用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定
されるものではない。
（実施例１）
抗ＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白質）モノクローナル抗体を感作させた平均粒径１００ｎｍのポリ
スチレンラテックスに緩衝溶液、ブロッキング剤ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）を加えた
ラテックス溶液２５ｍｌに、５ｍｇ／ｍｌのＣｄＳｅ−ＺｎＳ粒子の精製水分散液を１ｍ
ｌ加えた。このラテックス−ＣｄＳｅ分散液１００μｌに、各種濃度のＣＲＰのＰＢＳ溶
液を５μｌ加え、３７℃で５分インキュベート後、蛍光強度（励起波長３５５ｎｍ、蛍光
波長５３５ｎｍ）の測定を行った。コントロールとしてＣＲＰ濃度が０ｍｇ／ｄｌの場合
の蛍光強度も測定し、各種ＣＲＰ濃度の場合の蛍光強度と、ＣＲＰ濃度０ｍｇ／ｄｌの場
合の蛍光強度との差を算出した。
横軸にＣＲＰ濃度、縦軸にＣＲＰ濃度０ｍｇ／ｄｌの蛍光強度との差（Ｃｏｕｎｔ）をプ
ロットしたグラフを図１に示した。
図１に示した結果より、ＣＲＰ濃度が高くなるにつれて蛍光強度が減少することがわかっ
た。
【産業上の利用可能性】
【００１５】
本発明によれば、抗体を直接蛍光物質で標識することなく、かつ、測定において分離洗浄
操作を必要とせず、更に高感度である蛍光免疫測定法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】横軸にＣＲＰ濃度を、縦軸にＣＲＰ濃度０ｍｇ／ｄｌの蛍光強度との差（Ｃｏｕｎｔ）をプロットしたグラフである。
【図１】
2005049276.tif 000002