(57)【要約】【課題】  微生物が生産し、医薬用、動物薬用、水産用、又は農園芸用薬剤として使用可能な、抗菌活性を有する新規抗生物質又はその薬理学上許容される塩、更には、該化合物の製造方法、及び該化合物を有効成分とする抗菌剤等を提供すること【解決手段】  新しく天然界から分離した、セペドニウム属（Sepedonium属）に属する菌株が、グラム陽性細菌、特にミクロコッカス・ルテウス（Micrococcus luteus）ＡＴＣＣ９３４３のようなグラム陽性細菌に対する抗細菌活性を有する新規抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する。本発明の該新規抗生物質及びその薬理学上許容される塩は、医薬用、動物薬用、水産用、或いは農園芸用等の広い範囲の抗菌剤として用いることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
2005225783.tif 000003
で表される抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１、又はその薬理学上許容される塩。
【請求項２】
下記の理化学的性質をもつ抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１、又はその薬理学上許容される塩。
１）分子量、分子式：分子量３２６、分子式（Ｃ13Ｈ14Ｎ2Ｏ4Ｓ2）
２）マススペクトル：FAB-MS(NBA)；m/z 349[M+Na]+, 327[M+H]+, 262[M-2S]+
３）紫外線吸収スペクトル：(max nm(() in MeOH; 232 weak shoulder (4270)
４）赤外線吸収スペクトル：(max cm-1 in KBr; 3360, 1680, 1670, 1400, 1360, 1060, 1020, 875, 740, 620
５）核磁気共鳴スペクトル：1H-NMR(400 MHz, CDCl3) ( (ppm): 2.00 (3H, s), 2.83 (1H, m), 3.08 (3H, s), 3.60 (1H, m), 3.65 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.44 (1H, m), 4.63 (1H, m), 5.96 (1H, m)；13C-NMR(100.5 MHz, CDCl3) ( (ppm): 18.3, 27.6, 37.7, 53.7, 55.9, 56.9, 62.2, 73.6, 74.2, 124.2, 134.4, 163.0, 165.8
６）旋光度：[α] D -240( (c=0.38, CHCl3)
７）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシドに易溶、n-ヘキサン、四塩化炭素、水に難溶
【請求項３】
請求項１又は２記載の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１、又はその薬理学上許容される塩を有効成分とする医薬。
【請求項４】
請求項１又は２記載の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１、又はその薬理学上許容される塩を有効成分とする抗菌剤。
【請求項５】
抗菌剤が、医薬用、動物薬用、水産用、又は農園芸用抗菌剤であることを特徴とする請求項４記載の抗菌剤。
【請求項６】
セペドニウム属に属し、抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する能力を有する微生物を培養し、培養物から抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を採取することを特徴とする抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１の製造方法。
【請求項７】
セペドニウム属に属し、抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する能力を有する微生物が、セペドニウム・クロリヌム  ＴＡＭＡ７３株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９６１７）であることを特徴とする請求項６記載の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１の製造方法。
【請求項８】
抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する能力を有するセペドニウム・クロリヌム  ＴＡＭＡ７３株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９６１７）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セペドニウム属に属する微生物が生産する新規エピジチオジケトピペラジン系抗生物質又はその薬理学上許容される塩、該化合物の製造方法、及び該化合物を有効成分とする抗菌剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、微生物が生産する抗生物質には、ペニシリン、セファロスポリン、カルバペネム等のβラクタム系抗生物質、エリスロマイシン、ジョサマイシン、ロキタマイシン等のマクロライド系抗生物質、カナマイシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン等のアミノグコシド系抗生物質など種々の抗生物質が知られている。これらの抗生物質及びそれらを化学合成的手法により改良した化合物は、臨床上非常に有用な抗生物質として利用されてきた。しかし、これらの抗生物質は種々の感染症の治療に高頻度で用いられているため、それらの抗生物質に耐性を示す病原菌が出現して、問題化している。そこで、この病原菌の耐性の問題を解決するために、及び、更により有効で安全な抗生物質を提供するために、新しい抗菌活性等を有する抗生物質の開発が求められている。
【０００３】
各種、抗生物質が知られている中で、エピジチオ構造を有するエピジチオジケトピペラジン系抗生物質が知られている。例えば、グリオクラディウム・ビレンス（Gliocladium・virens）等の微生物が産生する抗菌活性を有するグリオトキシン等（Journal of General Microbiology,134:2067-2075,1988；特開平７−２２７２９３号公報）や、ディコトモマイセス・シェジピィ(Dichotomomyces cejpii)等の微生物が産生する、グリオトキシンのアセチル誘導体に相当するアセチルグリオトキシン（J. Amer. Chem. Soc.,75:2110-2112,1953）等が知られている。そして、エピジチオジケトピペラジン系抗生物質の中で、アセチルグリオトキシンについては、その抗腫瘍活性も見い出されており（ＷＯ９８／２４９２６）、該化合物のアセチル基のアルコオキシ基、アシルオキシ基等の置換誘導体が合成されている。
【特許文献１】特開平７−２２７２９３号公報。
【特許文献２】ＷＯ９８／２４９２６。
【非特許許文献１】
【０００４】
Journal of General Microbiology,134:2067-2075,1988。
【非特許許文献２】
【０００５】
J. Amer. Chem. Soc.,75:2110-2112,1953。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、微生物が生産し、医薬用、動物薬用、水産用、又は農園芸用薬剤として使用可能な、抗菌活性を有する新規抗生物質又はその薬理学上許容される塩、更には、該化合物の製造方法、及び該化合物を有効成分とする抗菌剤等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記課題を解決すべく、鋭意探索の結果、本発明者が新しく天然界から分離した、セペドニウム属（Sepedonium属）に属する菌株が、グラム陽性細菌、特にミクロコッカス・ルテウス(Micrococcus luteus) ＡＴＣＣ９３４３のようなグラム陽性細菌に対する抗細菌活性を有する新規抗生物質を生産することを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明者は天然界の植物標本から数多くの微生物を単離し、それらの生産物について種々研究を行った結果、神奈川県秦野市弘法山にて採集したイグチの仲間の子実体より分離した糸状菌は、抗菌性を有する新規な抗細菌抗生物質を生産することを見い出した。該新規な抗細菌抗生物質を、ＭＭＲＣ０３−０００１と命名した。ＭＭＲＣ０３−０００１抗生物質は、エピジチオ構造を有するエピジチオジケトピペラジン系の新規抗生物質で、該抗生物質の化学構造は、以下の式（１）で表される。
【０００９】
【化１】
2005225783.tif 000002
本発明の抗生物質は、該構造で表される化合物、及び、その薬理学上許容される塩からなる。
【００１０】
本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する微生物は、セペドニウム属に属する新規な菌株で、セペドニウム・クロリヌム（Sepedonium  chlorinum）TAMA７３株と命名され、該菌株は、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターにＦＥＲＭ  Ｐ−１９６１７として寄託された。本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を製造するには、本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する能力を有する微生物を培養し、培養物から該抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を採取することによって製造することができる。本発明の抗生物質は、特に、ミクロコッカスのようなグラム陽性細菌に対して強い抗細菌活性を有し、医薬用、動物薬用、水産用、或いは農園芸用等の広い範囲の抗菌剤の有効成分として用いることができる。
【００１１】
すなわち具体的には本発明は、確定したクレームを記載します。からなる。
【００１２】
また本発明は、確定したクレームを記載します。からなる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の新規抗生物質は、特に、ミクロコッカスのようなグラム陽性細菌に対して強い抗細菌活性を有し、医薬用、動物薬用、水産用、或いは農園芸用等の広い範囲に有効な抗菌剤として用いることができる。また、本発明の新規抗生物質は、本発明の菌株を用い、簡便かつ効率の良い方法で製造することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明は、グラム陽性細菌に対して強い抗細菌活性を有するエピジチオジケトピペラジン系の新規抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１、及び、その薬理学上許容される塩からなる。該本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を取得するには、セペドニウム属に属する該本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する能力を有する微生物を培養し、培養物から該抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を採取することによって行うことができる。
【００１５】
（本発明で使用する微生物）
本発明で、本発明の抗生物質を製造するために使用する微生物は、天然界の植物標本から数多くの微生物を単離し、それらの生産物について種々研究を行った結果、抗菌性を有する本発明の新規な抗細菌抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産することを見い出したことにより取得した新規な菌株であり、以下のように同定された。
【００１６】
本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産するＴＡＭＡ７３株は、次のような菌学的性状を有する：麦芽エキス寒天、三浦培地、オートミール寒天などの上において生育は早く拡散し、２５℃、７日間でコロニーは６０ｍｍに達するが、その菌叢は疎らで、綿毛状、厚壁胞子を形成する場合は表面、裏面とも鮮黄色を呈する。分生子柄は気菌糸上に形成され、フィアライドは規則正しく数個の輪生状に形成、１１．９−７０．６×２．３−４．０μｍ（平均４３．４×３．０μｍ）、Ｌ／Ｗ  ３．８−２４．７（平均１４．５）、先端は直径１．９−２．３μｍに細くなり不明瞭なカラーを有し分生子を塊状に形成し、分生子は楕円形、円筒形、倒卵形など様々で、無色、平滑、１．９−１３．４×１．４−４．５μｍ（平均５．６×２．１μｍ）、Ｌ／Ｗ  １．０４−６．１８（平均２．７７）、厚壁胞子は気菌糸あるいは基生菌糸に側生する無色の矩形細胞上に生じ、倒卵形、ボート形あるいは先端がとがった楕円形、黄金色で、顕著な縦の縞模様をもち、３４．７−５１．７×１４．５−２１．５μｍ（平均４２．８×１７．４μｍ）、Ｌ／Ｗ  ２．１０−３．０４（平均２．４８）となる。
【００１７】
本菌株は、担子菌子実体上より得られ、生育が早く、綿毛状、鮮黄色で、無色の規則正く輪生するVerticillium型のフィアロ型分生子と鮮黄色大型のアレウロ型分生子（厚壁胞子）を形成することからセペドニウム（Sepedonium）属に属することは明らかである。菌類寄生菌として知られる本属の中からは、倒卵形で顕著な縞模様を有する厚壁胞子を作ることから本菌は容易にセペドニウム・クロリヌム（Sepedonium chlorinum ）(Tul. & C. Tul.) Damonに属することがわかる。そこで本菌株をセペドニウム・クロリヌム(Tul. & C. Tul.) Damon ＴＡＭＡ７３と同定した。なお本菌株は独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにＦＥＲＭ  Ｐ−１９６１７として寄託されている。
【００１８】
ＴＡＭＡ７３株は、一般の糸状菌同様、変異しやすい性質を有している。例えば、ＴＡＭＡ７３株あるいはこの株由来の突然変異株、形質接合株、遺伝子組換体であってもＭＭＲＣ０３−０００１を生産する菌株はすべて本発明に使用できる。またセペドニウム・クロリヌムのテレオモルフはヒポミセス・クロリゲヌム（Hypomyces chlorinigenus）  Rogerson & Samuelsであるとされている。そこで、セペドニウムのみならずヒポミセス属菌株でも本物質を生産する菌株はすべて本発明に使用できる。
【００１９】
（本発明の微生物の培養、抗生物質の採取）
本発明で、抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を製造するには、セペドニウム属に属し、抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産する能力を有する本発明の微生物を培養し、培養物中に抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を生産、蓄積する。ＭＭＲＣ０３−０００１生産菌の培養には、通常の微生物が利用できる栄養物を含有する培地が利用できる。栄養源としては、従来糸状菌の培養に利用されている公知のものが使用できる。たとえば、炭素源としてはブドウ糖、蔗糖、グリセリン、澱粉、麦芽糖、乳糖、糖蜜、動植物油脂、デキストリンなどが利用可能である。窒素源としては大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープリカー，綿実粕，肉エキス、酵母エキス、ペプトン、硝酸態あるいはアンモニウム態窒素などが利用可能である。必要に応じ、塩類、金属イオンを含む無機塩類を添加することが可能である。また生産菌の生育あるいはＭＭＲＣ０３−０００１の生産を向上させるために有機あるいは無機物を添加することができる。
【００２０】
培養法としては好気的条件での培養法、固体基質上での固体静置培養あるいは液体培地による深部培養が可能である。培養に適当な温度は１０〜３２℃であるが、通常は２０〜３０℃で培養する。培養日数は培養方法と培地の種類によっても異なるが、数日から数１０日で目的物質ＭＭＲＣ０３−０００１は生産される。
抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１の検定にあたっては以下の方法が用いられる。すなわち、培養液からｎ−ブタノールなどの有機溶媒粗抽出液中のＭＭＲＣ０３−０００１或いは精製されたＭＭＲＣ０３−０００１は病原細菌ミクロコッカス・ルテウスＡＴＣＣ  ９３４３を被検菌とした生物学的方法により検出される。或いは、Ｃ１８逆層カラムを接続し、フォトダイオードアレー検出器を装着した高速液体クロマトグラフィーさらには質量分析計を直結した高速液体クロマトグラフ・質量分析装置などの化学的方法によってもＭＭＲＣ０３−０００１の検出を行うことができる。
【００２１】
抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を培養液から採取するにあたっては活性炭、アルミナ、シリカゲルなどの吸着剤、ゲルろ過剤などが使用されうるが、次に示す方法がより効果的である：培養液から目的物をｎ−ブタノールで抽出し、ｎ−ブタノール層を減圧下で濃縮することにより、ＭＭＲＣ０３−０００１を含有するオイル状物質を得る。更に、目的物以外の物質を除くため、以下に示す前処理を行うことができる。すなわち、ｎ−ブタノール濃縮物に水を加えた後、酢酸エチルで再抽出し、得られた酢酸エチル層を再び減圧下で濃縮してオイル状物質を得る。
【００２２】
更に、酢酸エチル濃縮物に９０％メタノール溶液を加え、等倍容のｎ−ヘキサンを加え、撹拌後、９０％メタノール溶液を集める。更に、９０％メタノール溶液層を７５％メタノール溶液となるよう水を加えた後、等倍容の四塩化炭素を加え、撹拌後、７５％メタノール溶液層を集め、減圧下で濃縮することにより目的物を含む固形物を得る。これをシリカゲルのカラムに吸着させ、ｎ−ヘキサン、アセトン、酢酸エチル、メタノールなどの有機溶媒の混合液で目的物の溶出を行う。目的物はさらに種々のクロマト担体と溶媒を組み合わせて薄層クロマトグラフ、低圧カラムクロマトグラフ、高速液体クロマトグラフなどを行い、ＭＭＲＣ０３−０００１を単離する。単離された本化合物の構造は化合物の種々なスペクトル特性、特にその核磁気共鳴、質量、紫外部、赤外部スペクトルを詳細な解析により決定される。
【００２３】
（ＭＭＲＣ０３−０００１の理化学的性質）
抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１は次の理化学的性質を有する。
１）分子量：３２６
２）マススペクトル：FAB-MS(NBA)；m/z 349[M+Na]+, 327[M+H]+, 262[M-2S]+
分子式（C13H14N2O4S2）
３）紫外線吸収スペクトル：(max nm(() in MeOH; 232 weak shoulder (4270)
４）赤外線吸収スペクトル：(max cm-1 in KBr; 3360, 1680, 1670, 1400, 1                        360, 1060, 1020, 875, 740, 620
５）核磁気共鳴スペクトル：1H-NMR(400 MHz, CDCl3) ( (ppm): 2.00 (3H, s                        ), 2.83 (1H, m), 3.08 (3H, s), 3.60 (1H, m), 3.6                        5 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.44 (1H, m), 4.63 (1H,                         m), 5.96 (1H, m)
13C-NMR(100.5 MHz, CDCl3) ( (ppm): 18.3, 27.6, 37.7, 53.7, 55.                        9, 56.9, 62.2, 73.6, 74.2, 124.2, 134.4, 163.0,                         165.8
６）旋光度：[a] D −２４０°(c=0.38, CHCl3)
７）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、メタノー            ル、エタノール、ジメチルスルホキシドに易溶、n-ヘキサン、四塩            化炭素、水に難溶
８）化学構造式：前述の通り
（ＭＭＲＣ０３−０００１の抗菌剤としての利用）
本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１は、医薬用、動物薬用、水産用、或いは農園芸用等の広い範囲の抗菌剤として用いることができる。
本発明の抗生物質を抗菌剤の有効成分として用いる場合は、本発明のＭＭＲＣ０３−０００１生産菌株を培養して得た培養物から、本発明のＭＭＲＣ０３−０００１を上記のような手段で、精製して用いることができる。また、抗菌剤の利用分野によっては、粗精製物の状態で用いることもできる。
【００２４】
本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を、医薬等として用いる場合には、該化合物を、薬理学上許容される塩の形で用いることができる。かかる薬理学上許容される塩は、薬理学上公知のものを用いることができるが、例えば、薬理学上許容される金属塩、アンモニウム塩、含有アミン付加塩、アミノ酸付加塩等を用いることができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられ、有機アミン付加塩としてはモルホリン、ピペリジン等の付加塩、アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン等の付加塩が挙げられる。本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１、又は、該化合物の薬理学上許容される塩を医薬として投与するには、該有効成分を、製薬上用いられる適宜の形態に製剤化して、全身又は局所的に、経口又は非経口の形で投与することができる。製剤形態としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏等を挙げることができる。該製剤化に際しては、例えば、各種の賦形剤、潤沢剤、結合剤、崩壊剤、懸濁化剤、乳化剤等の補助剤を用いることができる。
【００２５】
本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を、農園芸用等の抗菌剤として用いる場合には、該化合物又はその塩を、適宜の補助剤とともに製剤化して、例えば、粉剤、粒剤、乳化剤、水和剤のような形で用いることができる。また、本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を、動物薬用の抗菌剤として用いる場合には、該化合物又はその塩を適宜の投与形態で、動物医薬として、或いは、該薬剤を飼料等に混合した形で投与することができる。また、本発明の抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１を、水産用等の抗菌剤として用いる場合には、該化合物又はその塩を、慣用の希釈剤、担体、増量剤、添加剤等を用いて製剤化し、養魚用の水等の抗菌処理に用いることができる。また、該抗菌剤を養魚用飼料等に添加して用いることもできる。更に、該抗菌剤を塗布剤の形に製剤化し、魚網等の漁労用具や漁労施設の抗菌処理に用いることができる。
【００２６】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２７】
（抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１の調製及び生物試験）
セペドニウム・クロリヌム  ＴＡＭＡ７３株を麦芽エキス寒天斜面培地上において２５℃、１０日間培養した。この斜面培養で得られた菌糸体を２０ｍｌの生産培地（ブドウ糖２％、グリセリン３％、ポリペプトン（日本製薬）０．５％、酵母エキス（日本製薬）０．２％、食塩０．３％、炭酸カルシウム１％）を含む２５０ｍｌ容の三角フラスコ５０本に植菌して、２５℃、２２０ｒｐｍにて回転振盪培養を行った。培養液のｐＨは培養に伴い上昇し、同時にＭＭＲＣ０３−０００１の生産性も１２日でピークに到達した。こうして、約２１ｍｇのＭＭＲＣ０３−０００１を含む培養液１０００ｍｌを得た。１２日目の培養物に７５０ｍｌのｎ−ブタノールを加え撹拌後、冷蔵庫内（５℃）で一晩、保存した。その後、ｎ−ブタノールを集め、減圧下で濃縮し、２．３ｇのオイル状物質を得た。
【００２８】
そのオイル状物質に２５０ｍｌ酢酸エチルと同量の水を加え撹拌後、酢酸エチル層と水層に分けた。さらに水層は２５０ｍｌの酢酸エチルを加え、撹拌後、再び酢酸エチル層と水層に分けた。それぞれの酢酸エチル層を併せて減圧下で濃縮後、１．９ｇのオイル状物質を得た。そのオイル状物質に２５０ｍｌの９０％メタノール溶液と同量のｎ−ヘキサンを加え、撹拌後、ｎ−ヘキサン層と９０％メタノール溶液層に分けた。得られた２５０ｍｌの９０％メタノール溶液層に５０ｍｌの水を加え、更に３００ｍｌの四塩化炭素を加え、７５％メタノール溶液層と四塩化炭素に分けた。得られた３００ｍｌの７５％メタノール溶液を減圧下で濃縮後、約３００ｍｇの固形物を得た。その固形物は少量の酢酸エチルに溶かし、あらかじめシリカゲルをｎ−ヘキサンでつめたカラム（外径２．５ｃｍ×長さ２０ｃｍ）に吸着させ、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの系で酢酸エチルを段階的に高めていくことにより目的物質を溶出させた。この結果、ＭＭＲＣ０３−０００１を含有するフラクション４００ｍｌを得た。
【００２９】
そのフラクションは減圧下で濃縮後、ＭＭＲＣ０３−０００１を含む１２６ｍｇの固形物を得た。得られた固形物はクロロホルム：メタノール＝１：１の混液２ｍｌに溶かし、その１ｍｌを逆相カラム（資生堂カプセルパックＣ１８、ＳＧ１２０、５μｍ、外径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）を接続した高速液体クロマトグラフにて分取を行った。移動層溶媒にはアセトニトリル：水の系を用い、流速７ｍｌ／分でアセトニトリルを６０分間で５％から５０％へ直線的に高めることで溶出を行った。目的のＭＭＲＣ０３−０００１は４１分で溶出され、ＭＭＲＣ０３−０００１を含有する２１ｍｌのフラクションを得た。そのフラクションを減圧下で濃縮後、２６ｍｇの固形物を得た。
【００３０】
その固形物はクロロホルム：メタノール＝１：１の混液１ｍｌに溶かし、逆相カラム（資生堂カプセルパックＣ１８、ＳＧ１２０、５μｍ、外径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）を接続した高速液体クロマトグラフにより再分取を行った。移動層溶媒にはアセトニトリル：水の系を用い、流速７ｍｌ／分でアセトニトリルを６０分間で５％から３０％へ直線的に高め、３０％で３０分間保持し、その後３０分間で３０％から５０％へ直線的に高めて溶出を行った。目的のＭＭＲＣ０３−０００１は約５８分で溶出され、ＭＭＲＣ０３−０００１を含有する２１ｍｌのフラクションを得た。そのフラクションを減圧下で濃縮後、８ｍｇの無晶形白色粉末を得た。
【００３１】
得られたＭＭＲＣ０３−０００１の種々の量を含む検定培地１ｍｌに、１０4個のミクロコッカス・ルテウス  ＡＴＣＣ９３４３の細胞を接種し、３７℃で２日間培養後、それぞれの濁度を測定して、ミクロコッカス・ルテウス  ＡＴＣＣ９３４３に対する最小阻止濃度（ＭＩＣ100）を求めた。その結果、ＭＭＲＣ０３−０００１のミクロコッカス・ルテウス  ＡＴＣＣ９３４３に対するＭＩＣ100は２．５μｇ／ｍｌであった。このように、本発明による抗菌剤ＭＭＲＣ０３−０００１はグラム陽性細菌、特にミクロコッカス・ルテウス  ＡＴＣＣ９３４３に対して優れた抗菌活性を示すことから、グラム陽性細菌感染症に対する有効な治療薬、消毒薬、動物薬、水産用薬品、農薬となる。
【実施例２】
【００３２】
（抗生物質ＭＭＲＣ０３−０００１の製造）
よく生育したセペドニウム・クロリヌム  ＴＡＭＡ７３株の麦芽エキス寒天斜面培養から１白金耳の菌糸体を７０ｍｌの種培地（グリセリン２％、ブドウ糖０．５％、大豆粉１％、酵母エキス０．２％、食塩０．２５％、炭酸カルシウム０．４％）を含む５００ｍｌ容の三角フラスコ５本に植菌して２５℃、２２０ｒｐｍにて３日間、回転振盪機上で培養した。得られた種培養を３５０ｍｌを５０Ｌジャー培養の種母として用いた。ジャー培養は、本培養培地３０Ｌ（グリセリン２％、ブドウ糖０．５％、大豆粉２％、酵母エキス０．２％、食塩０．２５％、炭酸カルシウム０．４％、消泡剤（ＣＣ−４３８、日本油脂）０．０３％）を含む５０Ｌジャーファーメンター１基に植菌して、２７℃、通気量１５Ｌ／ｍｉｎ(０．５ＶＶＭ)、圧力０．５ｋｇ／ｃｍ2・Ｇ、初期攪拌２００ｒｐｍにて培養を開始し、攪拌は２００〜６００ｒｐｍの間で溶存酸素量１０％以上に調節した。培養開始直後のｐＨは７付近であったが、７２時間後に８．０に到達し、菌体量はほぼ定常状態となった。１００時間培養後、ｐＨは８．５となり、７１０ｍｇのＭＭＲＣ０３−０００１を含む培養液２７Ｌを得た。
【００３３】
得られた培養液をブフナーロートで減圧濾過し、約５ｋｇのケーキと２７Ｌのロ液に分けた。得られたケーキは１０Ｌのメタノールで抽出し、メタノール溶液と菌体に濾別した。一方、培養ロ液は２７Ｌの酢酸エチルで抽出した。得られたケーキのメタノール抽出液は減圧下で濃縮後、１０Ｌの酢酸エチルと同量の水を加え撹拌後、酢酸エチル層と水層に分けた。得られた酢酸エチル層は培養ロ液の酢酸エチル抽出液と併せて、減圧下で濃縮後、約６３ｇのオイル状物質を得た。そのオイル状物質に７．５Ｌの９０％メタノール溶液と同量のｎ−ヘキサンを加え、撹拌後、ｎ−ヘキサン層と９０％メタノール溶液層に分けた。得られた７．５Ｌの９０％メタノール溶液層に１．５Ｌの水を加え、更に９Ｌの四塩化炭素を加え７５％メタノール溶液層と四塩化炭素に分けた。
【００３４】
得られた９Ｌの７５％メタノール溶液を減圧下で濃縮後、約１１ｇの固形物を得た。得られた固形物は４０ｍｌの酢酸エチルに溶かし、あらかじめシリカゲルをｎ−ヘキサンでつめたカラム（外径８ｃｍ×長さ３４ｃｍ）に吸着させ、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの系で酢酸エチルを段階的に高めて目的物質を溶出させた。この結果、ＭＭＲＣ０３−０００１を含有するフラクション８．５Ｌを得た。そのフラクションは減圧下で濃縮後、ＭＭＲＣ０３−０００１を含む約３．８ｇの固形物を得た。
【００３５】
得られた固形物はクロロホルム：メタノール＝１：１の混液４３ｍｌに溶かし、その溶液を５００ｇワコーゲル５０Ｃ１８を１０％アセトニトリル水溶液でつめたカラムに吸着させ、アセトニトリルを段階的に高めていくことにより目的物質のＭＭＲＣ０３−０００１を溶出させた。その結果、ＭＭＲＣ０３−０００１を含有するフラクション０．６Ｌを得た。そのフラクションは減圧下で濃縮後、ＭＭＲＣ０３−０００１を含む約１．６ｇの固形物を得た。得られた固形物はクロロホルム：メタノール＝１：１の混液１０ｍｌに溶かし、その溶液を２００ｇワコーゲル５０Ｃ１８を１０％アセトニトリル水溶液でつめたカラムに吸着させ、流速８ｍｌ／分でアセトニトリルを８時間で１０％から５０％へ直線的に高めることにより目的物質のＭＭＲＣ０３−０００１を溶出させた。その結果、ＭＭＲＣ０３−０００１を含有するフラクション２４０ｍｌを得た。そのフラクションは減圧下で濃縮後、ＭＭＲＣ０３−０００１の５２４ｍｇの無晶形白色粉末を得た。