(57)【要約】      （修正有）【課題】  ナノダイヤモンドの生物バイオ活性促進効果を応用した細胞培養培地を開発し、安定な培養プロセスが可能な細胞増殖培地増殖システムを開発する。【解決手段】  ナノダイヤモンドの生物バイオ活性促進効果を細胞増殖培地増殖システムに応用、利用すべく、しかるべき形態の細胞増殖培地増殖システムに、ナノダイヤモンドの水分散懸濁液を適宜、他の通常の細胞増殖補助剤と共に増殖培地へ添加、含有せしめる事により、目的とする細胞増殖培地増殖システムにおいて動植物の細胞や酵素、菌類、その他の微生物への培養増殖の促進効果を得る事が可能となった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞増殖培地増殖システムを構成する培養液であって、表面活性超微粒ダイヤモンドの含有を特徴とする細胞増殖培地培養液およびその培地培養液を培養手段とする細胞増殖培地増殖システム。
【請求項２】
請求項１の細胞増殖培地培養液を構成する表面活性超微粒ダイヤモンドは、２００ナノメートル（ｎｍ）以下であり、水分散懸濁形態の特徴を手段とした少なくともその他の培地培養補助添加剤を含有する、細胞増殖培地培養液。
【請求項３】
請求項２の細胞増殖培地培養液を用いる測定法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】この出願の発明は、細胞培養促進を目的とする培地培養液に関するものである。さらに詳しくは、この出願の発明は、細胞増殖の促進ができ、安定な培養プロセスが可能な細胞増殖培地増殖システムおよびその培地培養液に関するものである。
【背景技術】
【０００２】細胞工学技術の進歩に伴い、これまでに様々の多くの細胞が単離され、これらの細胞は、更なる研究や応用のために培養、増殖されているが、これまでの培地培養液に関しては、ナノダイヤモンドの添加、応用により増殖を促進するものは殆どなく、ここに、ナノダイヤモンドの添加、応用による細胞の増殖、培養促進の新しい可能性を提供するものである。【０００３】このように、動植物の細胞、酵母、菌類などその他微生物の増殖培養には、一般には培地培養液として、寒天、ゼラチン、その他無機、有機ケミカルや培養増殖栄養剤添加補助剤等多くあり、その目的に応じて適当に選択されている。しかし、ナノダイヤモンドを応用しての細胞増殖促進培養に関する細胞増殖培地増殖システムおよび培地培養液についての応用研究開発はない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】解決しようとする問題点は、ナノダイヤモンドの生物バイオ活性促進効果を応用して、細胞培養増殖の更なる促進効果を得んとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】ダイヤモンドおよびナノダイヤモンドは、これまで既に工業的に製造され、多くの産業分野に応用されてきているのが現状であるが、最近ではバイオマテリアルとして、生体へのインプラント等やその他バイオ領域へ応用開発が検討されている。
本発明に応用されたナノダイヤモンドは、ナノダイヤモンドとしての取扱い上、水分散懸濁形態であり、例えば水分散懸濁液ナノダイヤモンドには特許番号２６９１８８４号があるが、ここでは特開１５−１４６６３７に準じて製造されたナノダイヤモンドの水分散懸濁液が使用された。【０００６】本発明のナノダイヤモンドは水分散懸濁形態であるため、取扱いが簡便明確で、他のケミカル、補助添加剤溶液との配合も容易に行われ、培養条件を設定して培養プロセスを制御する事が可能である。【０００７】既に細胞増殖用の培地培養液への応用ケミカル材料に関しては既に市場に多くあるが、本発明に関しては、特開１５−１４６６３７に準じて製造されたナノダイヤモンド水分散懸濁液を応用し、細胞増殖促進の為の応用開発が実施された。【０００８】この出願の発明は、動植物の細胞、酵母、菌類などその池の微生物の増殖を促進するナノダイヤモンドとその他補助添加剤からなることを特徴とする細胞増殖培地増殖システムおよび培地培養液を提供する。
【発明の効果】
【０００９】本発明は、ナノダイヤモンドの水分散懸濁液を、適宜、細胞増殖培地培養液に、その他の通常の増殖補助添加剤と共に添加せしめる事により、然るべき環境条件の下に、生物のバイオ活性促進効果を付与して、選ばれた目的とする動植物の細胞や酵母、菌類、その他の微生物の増殖を促進する事が可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】この出願の発明の細胞増殖培地増殖システムおよび培地培養液は、ナノダイヤモンドを応用するものであるが、このナノダイヤモンドは特開１５−１４６６３７に準じて製造された水分散懸濁液のもので、その他通常の細胞増殖培地培養液の構成剤と同様の取扱いで処理され、培地培養液およびシステムが配合形成される。【００１１】この出願の発明の細胞増殖培地増殖システムおよび培地培養液への応用に提示されるナノダイヤモンドは、特開１５−１４６６３７に於いて示される如くであるが、水分散状のナノダイヤモンドとしての微細粒子の大きさは、光散乱法等で測定された楕円タイプ粒子形状の球状換算で平均粒径２０００−０ナノメートル（ｎｍ）レベルであるが、凝集体や多結晶体となった６０００ナノメートル（ｎｍ）のものも含有されることがある。ナノダイヤモンドの水分散タイプとしての濃度は、特に限定されることはない。【００１２】この出願の発明により使用されるナノダイヤモンド以外に、細胞増殖培地増殖システム及び培地培養液に応用されるものは既に多くあり、例えば通常の寒天、ゼラチンやその池無機、有機ケミカル、有機ポリマー、細胞や微生物の培養増殖補助剤、蛋白質エキス、ポリビニ−ルアルコ−ルやポリビニ−ルピロリドンがある。そのシステムもビーカースケールの小さいものから、バイオリアクター、バイオマス、バイオポリマー、再生医療システム等のバイオテクノロジーの大きいスケールのものまであるが、先ずは、ビーカースケールでこの出願の発明が実施された。【００１３】この出願の発明により使用されるナノダイヤモンド以外の培地培養液に添加されるものは、培地培養液やその応用条件と適合性のあるものであれば、どのようなものであってもよい。
【実施例１】
【００１４】先ず、細胞培地培養の作成の為に、市販（和光純薬製品）のゼラチン濃度１５．２％の水溶液を５０ｃｃ準備し、径５０ｃｍのガラスのシャーレの中に固化層を形成せしめ、この上に、培養増殖補助剤としての市販の食品スープの素（味の素コンソメ）１個（５．３ｇ）を水１００ｃｃに溶かしたものを常温で１ｃｃ添加する。【００１５】この培地の上に、特開１５−１４６６３７に準じて製造されたナノダイヤモンドの平均粒径２００ナノメートル（ｎｍ）、濃度３．８％、ｐＨ６．３の水分散懸濁液を２倍に希釈したものを１ｃｃ添加する。【００１６】この様にして出来た培地の上に、培養増殖を目的とする市販のイースト菌（日清製粉酵製）２ｇを２０ｃｃの水に常温で分散懸濁せしめたものを１ｃｃ添加して、出来上った培地培養層のシャーレを適当に傾け振った後、常温にて放置して、イースト菌を培養増殖せしめ結果を確認した。このシステムに於いて、イースト菌は濃度０．０６６ｇ／ｌ、ナノダイヤモンドは濃度０．００６３ｇ／ｌ、培養増殖補助剤は濃度０．０１７ｇ／ｌであり、全体として実際的な、培養増殖に関与する培養層は高さ０．１５ｃｍである。【００１７】この培地増殖システムを常温にての放置後のイースト菌の増殖が確認され、１３８時間後には増殖用の透明ゼラチン層の上に点在するイースト菌が径約５ｍｍの傘状の島となって広がり、培養面の約６０％を覆い、１８６時間後には、それらが繋がりながら培養面の８０％までに増殖した。【００１８】（比較例）比較のために、この培地増殖システムにナノダイヤモンドの水分散懸濁液を添加せず、他の条件がすべて同一で、ナノダイヤモンドの濃度０％、イースト菌の濃度は０．０６６ｇ／ｌ、培養増殖補助剤０．０１７ｇ／ｌの場合には、イ−スト菌は１３８時間後では殆ど増殖せず、１８６時間後で培養増殖面の約８％を覆う程度であった。
【実施例２】
【００１９】細胞培地培養の作成に、市販（和光純薬）の寒天濃度３．２％の水溶液７５ｃｃを準備し、径５０ｃｍのガラスのシャーレの中に固化層を形成せしめ、この上に、実施例１と同じ条件の培養増殖補助剤及びナノダイヤモンド水分散懸濁液をそれぞれ同一量添加し、同一処理のイースト菌を同一量加えて、この培地増殖システムを常温にての放置後のイースト菌の増殖が確認され、１３８時間後には増殖用の白色寒天層上に点在するイースト菌が、径１−２ｍｍの傘上の島となって培養面の約１０％を覆い、１８６時間後にはイースト菌が径３−４ｍｍとなって培養面の約３０％を覆った。【００２０】（比較例）比較のために、この培地増殖システムにナノダイヤモンドの水分散懸濁液を添加せず、他の条件がすべて同一で、ナノダイヤモンドの濃度０％、イースト菌の濃度は０．０６６ｇ／ｌ、培養増殖補助剤０．０１７ｇ／ｌの場合には、イースト菌は１３８時間後では増殖せず、１８６時間後に於いても、殆ど増殖は見られなかった。
【実施例３】
【００２１】植物の細胞増殖発芽促進培地の作成に、水系の培地として、径５ｃｍのシャーレの底に多い目のちり紙を敷き、２０ｃｃの水をいれ取り、この中にＰＶＡ１ｇ／ｌの溶液１ｃｃ及びポリビニールピロリドン１ｇ／ｌの溶液１ｃｃを添加する。【００２２】この水層培地に，特開１５−１４６６３７に準じて製造されたナノダイヤモンドの平均粒径２００ナノメートル（ｎｍ）、濃度３．８％、ｐＨ６．３の水分散懸濁液を２倍に希釈したものを１ｃｃ添加する。混合によりナノダイヤモンドは大きな凝集体になるが、この懸濁液を適当に振って静置して増殖培地にし、自然食品くらかけ豆の４粒を添加し、常温にての放置後の発芽成長結果を確認した。【００２３】この培地発芽システムの常温３日後の結果は、いずれも長さ５−６ｍｍのくらかけ豆の発芽成長となった。６日後も尚僅かながら成長を保った。【００２４】（比較例）この水層培地での水のみの場合、添加した４粒のくらかけ豆は３日経過しても発芽せず、６日後は腐り始めた。
【産業上の利用の可能性】
【００２５】本発明は、ナノダイヤモンドの水分散懸濁液を適宜、しかるべき形態の細胞増殖培地培養液およびシステムに添加する事により、バイオマス、バイオリアクター、バイオポリマー、バイオ農業、再生医療などの各種のバイオテクノロジーの分野に、適宜、目的とする動植物の細胞や酵母、菌類、その他の微生物の増殖の促進に利用する事が可能である。