(57)【要約】【課題】現在、手技による高分子多孔質膜での微量蛋白質電気泳動分析は操作手順が複雑なため、多大な労力と時間がかかってしまい、ルーチン作業で分析を行うことはできないという問題点があった。本発明は、このような問題点を解決するために、高分子多孔質膜での微量蛋白質電気泳動による分離分析を自動的にかつ１度に多数の検体に対して行う  ことができる自動微量蛋白質電気泳動装置を提供することを目的としている。【解決手段】装置をスタートすると支持体を装置にセットすると、支持体上の蛋白質を固定し、支持体中に含まれている蛋白質固定液を洗浄し、洗浄された支持体上の泳動像を銀染色し、染色された支持体を脱色し、脱色された支持体上の泳動像に銀を固着を行う。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持体上の蛋白質を固定する手段と、支持体中に含まれている蛋白質固定液を洗浄する手段と、支持体上の蛋白質を銀染色液中で染色する手段と、染色された支持体を脱色する手段とを具える微量蛋白質染色装置。
【請求項２】
請求項１の微量蛋白質染色装置において、脱色された支持体上の蛋白質に銀を固着する手段を具える微量蛋白質染色装置。
【請求項３】
請求項１、または２の微量蛋白質染色装置において、支持体上の蛋白質を銀染色液中で染色する際に蛋白質に銀を充分結合させるため、銀染色液を攪拌する、または支持体を液中で動かす事を特徴とする微量蛋白質染色装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
臨床検査分野において、尿中にある蛋白質には、Ｍ蛋白（ベンスジョーンズ蛋白、多発性骨髄腫などの腫瘍細胞が産生する蛋白）やＩｇＧ（非選択的糸球体性蛋白尿）、α１ミクログロブリンおよびβ２ミクログロブリン（尿細管性蛋白尿、糸球体、混合性蛋白尿）などがある。本発明は、これらの蛋白質などを特定するために尿蛋白質をはじめとする蛋白質濃度の低い検体の分離分析を目的として、電気泳動を終えた支持体上の蛋白質を固定し、支持体中に含まれている蛋白質固定液を洗浄、支持体上の蛋白質を銀染色液中で染色、染色された支持体の脱色を自動で行う銀染色装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
蛋白質濃度の低い検体、例えば尿蛋白質を分離分析する場合、従来の電気泳動装置では検体を濃縮する必要がある。しかしながら、検体を濃縮して泳動すると泳動像に歪みが生じ、血清蛋白分画のようにきれいなパターンが得られずに判定不能となることがほとんどである。この理由としては、尿蛋白質は血清に比べて、蛋白質や種々の成分が幅広い濃度で存在するということや、腎尿細管から分泌されるＴａｍｍＨｏｒｓｅｆａｌｌ蛋白の影響を受けやすいことなどが挙げられている。
【０００３】
健常人の尿蛋白質濃度は６４±４０ｍｇ／Ｌで、例えばＡｃｉｄＶｉｏｌｅｔ１７の染色液を用いた場合ではおよそ１０倍の濃縮が必要になってしまう。原尿のままで電気泳動ができれば、きれいなパターンが得られ、その病態把握が簡便になり、臨床応用されると考えられていた。
【０００４】
最近、高分子多孔質膜での銀染色法により、尿蛋白質など蛋白質濃度の低い検体を濃縮せずに電気泳動しても歪みのない泳動像が得られ、治療効果の判断や病勢の消長を知るのに欠かせないベンスジョーンズ蛋白などを示唆するバンドを検出することが可能になった。しかし、高分子多孔質膜での微量蛋白質電気泳動による分離分析は熟練者の手技にて実施している。
【特許文献１】特開２００２−２３６１２７
【特許文献２】特開２００３−２１５１３０
【特許文献３】特開２００２−２１５０９８
【非特許文献１】芝  紀代子、平塚  信夫  "銀染色法による尿蛋白分画法"  臨床検査  Ｖｏｌ．４２、Ｎｏ．１０、１１０６−１１０９、１９９８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来の技術で述べたように現在、高分子多孔質膜での微量蛋白質電気泳動による分離分析は、熟練者の手技にて実施している。しかしながら、操作手順が複雑なため、多大な労力と時間がかかってしまい、ルーチン作業で分析を行うことはできないという問題点があった。
【０００６】
本発明は、このような問題点を解決するために、自動で支持体上の蛋白質の固定、支持体中に含まれている蛋白質固定液の洗浄、支持体上の蛋白質を銀染色液中で染色、染色された支持体の脱色を行う銀染色装置を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
装置をスタートすると自動で、支持体上の蛋白質を固定し、支持体中に含まれている蛋白質固定液を洗浄し、洗浄された支持体上の蛋白質を銀染色し、染色された支持体を脱色し、脱色された支持体上の泳動像に付着している銀の固着を行う。
【発明の効果】
【０００８】
１回に多数の微量蛋白質を自動処理することにより、簡便（濃縮なし）かつ安価で分画分析することが可能となった。この発明を尿検体に活用し、健常人の尿と疾患尿との相違をパターン分けする事により、Ｍ蛋白（ベンスジョーンズ蛋白、多発性骨髄腫などの腫瘍細胞が産生する蛋白）や糸球体疾患、尿細管疾患を特定できる可能性がある。また、一度に多数の検体を分析することで医療費を大幅に減少させることが出来るので社会に大きく貢献できることになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
電磁弁とポンプを用い、蛋白固定液、前処理液、銀染色液、洗浄液、定着液を順番に注排水し、銀染色された蛋白質が出現した支持体を得る。
【実施例１】
【００１０】
図１は本発明の銀染色法による微量蛋白質染色装置の構成の例を示す模式図であり、この微量蛋白質染色装置について例にとって詳しく説明する。
【００１１】
電気泳動を終えた支持体１は、人手により染色槽２に供給される。
【００１２】
装置をスタートすると染色槽２に、自動で蛋白質固定液が注入され待機する。支持体１を供給してキーを押すとすると、蛋白質を支持体上に固定する。蛋白質の固定が終わると蛋白質固定液が排出され、洗浄液が注入されて支持体中に含まれている蛋白質固定液を洗浄する。支持体の洗浄が終わると洗浄液が排出され、銀染色液が注入されて支持体上の蛋白質を銀染色する。この時、蛋白質に銀を充分結合させるため、染色槽２を搭載しているテーブル３を揺動して液の攪拌を行う。蛋白質の銀染色が終わると銀染色液が排出され、脱色液が注入されて染色された支持体を脱色する。この時にも染色された支持体を充分脱色するために染色槽２を搭載しているテーブル３を揺動して液の攪拌を行う。支持体の脱色が終わると脱色液が排出され、固着液が注入されて蛋白質に付着している銀を固着する。蛋白質に付着している銀の固着が終わると固着液が排出される。使用される液は５種類の液を収容しているタンク４からポンプ５および電磁弁６を介して試薬注入口７より注入され、使用後、試薬排出口８より排出される。以上のようにして、銀染色された蛋白質が出現した支持体を得ることができる。
【００１３】
本発明は、上述した実施例だけに限定されるものではなく、幾多の変形が可能である。例えば、上述した実施例では支持体にセルロースアセテート膜を使用したが、その他の高分子多孔質膜である濾紙、ナイロン膜、ニトロセルロース膜およびポリスルホン膜などを用いることもできる。また、上述した実施例では検体に尿を使用したが、蛋白質濃度の低い例えば脳脊髄液、涙、唾液、血漿の希釈検体および他の動植物の微量蛋白質なども分析する事ができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の構成の例を示す模式図である。
【図２】染色槽への液の注入、排出の構成を示す模式図である。
【符号の説明】
【００１５】
１  支持体
２  染色槽
３  テーブル
４  タンク
５  ポンプ
６  電磁弁
７  試薬注入口
８  試薬排出口
【図１】
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【図２】
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