(57)【要約】  【課題】  エレクトロポレーション法の操作性を高め、導入効率を向上する。  【解決手段】  緩衝液容器１２の液溜部１３に緩衝液１６を溜め、目的細胞を含む培地３を坦持する多孔性シート２を、緩衝液１６中に略水平に支持し、多孔性シート２の上下を、一対の平板電極１４、２３で挟み、一対の平板電極１４、２３に電気パルスを印加する。良好な操作性が得られるだけでなく、細胞へのダメージを抑制し電気パルスによる作用を均一にし、導入効率を向上できる。【選択図】  図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
緩衝液容器の液溜部に緩衝液を溜め、
目的細胞を含む培地を坦持する多孔性シートを、前記緩衝液中に略水平に支持し、
前記多孔性シートの上下を、一対の平板電極で挟み、
前記一対の平板電極に電気パルスを印加するエレクトロポレーション方法。
【請求項２】
液溜部に緩衝液が溜められる緩衝液容器と、
前記緩衝液中に略水平に支持され、かつ目的細胞を含む培地を坦持する多孔性シートと、
前記多孔性シートの上下を挟むように配設される一対の平板電極と、
前記一対の平板電極に電気パルスを印加する印加装置とを備えるエレクトロポレーション装置。
【請求項３】
前記液溜部には、前記緩衝液中の空気を抜く空気抜が形成されている請求項２記載のエレクトロポレーション装置。
【請求項４】
上部と下部とが開口しており略筒状をなす容器本体を備え、
前記容器本体の内部であって、前記上部よりも下方で前記下部よりも上方の位置において、目的細胞を含む培地を坦持する多孔性シートを、略水平に支持した保持容器。
【請求項５】
前記容器本体は、前記上部が幅広で前記下部が幅狭のテーパ状に形成されている請求項４記載の保持容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エレクトロポレーション方法及びその関連技術に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
目的細胞（本明細書では、器官や組織等細胞の集合を含めて単に「細胞」という）に、所望の遺伝子や抗ガン剤等の薬剤を導入するために、エレクトロポレーション法が注目を集めている。
【０００３】
ところで、従来のエレクトロポレーションは、次の（１）又は（２）のように実施される。
【０００４】
（１）まず、シャーレ内に培地を設け、培地上で目的細胞を増殖させる。次に、培地の一部を、ナイフやピンセット等を用いて、削り取り、これを緩衝液を満たしたキュベット内に、入れ、電気パルスを印加する。
【０００５】
しかしながら、これでは、培地の一部を削り取る必要があり、特に、多量の対象を次々に処理する場合において、操作性が悪いという問題点がある。
【０００６】
（２）培地の一部を削り取らずに、針状の電極を、培地に接触させ、電気パルスを印加する。
【０００７】
しかしながら、これでは、電極が、細胞に直接接触することになり、細胞へのダメージが大きく、細胞が死滅してしまうなど、導入効率が低いという問題点がある。
【特許文献１】特開平１１−２９００５８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで本発明は、操作性が良く、かつ細胞へのダメージが少ないエレクトロポレーション方法及びその関連技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
請求項１記載のエレクトロポレーション方法は、緩衝液容器の液溜部に緩衝液を溜め、目的細胞を含む培地を坦持する多孔性シートを、緩衝液中に略水平に支持し、多孔性シートの上下を、一対の平板電極で挟み、一対の平板電極に電気パルスを印加する。
【００１０】
この構成において、多孔性シートに坦持された培地を削り取る必要がないので、操作性が向上する。即ち、培地による培養が完了したら、直ちにエレクトロポレーションに移行できる。
【００１１】
また、一対の平板電極で培地を挟んで電気パルスを印加するため、電極が細胞に直接接触することはなく、細胞のダメージを抑制して、導入効率を向上できる。しかも、平板電極を用いているため、電気パルスが均等に作用し、電気パルスの印加具合をコントロールしやすい。
【発明の効果】
【００１２】
本発明は、以上のように構成したので、良好な操作性が得られるだけでなく、細胞へのダメージを抑制し電気パルスによる作用を均一にし、導入効率を向上できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、図面を参照しながら、本発明の実施の形態を説明する。図１は、本発明の一実施の形態における保持容器の縦断面図である。
【００１４】
図１に示すように、保持容器５の容器本体１は、上部１ａと下部１ｂが開口する略筒状をなす。
【００１５】
また、上部１ａよりも下部１ｂが幅狭になるように、テーパがかけられている。
【００１６】
容器本体１は、例えば、アクリル樹脂等のように、絶縁体で構成し、内部を目視できるように、透明又は半透明にすることが望ましい。
【００１７】
容器本体１の内部において、上部１ａと下部１ｂの中程よりもやや下側に、多孔性シート２が水平に支持される。この多孔性シート２としては、適当なポアサイズを有するものであれば、導電体でも絶縁体でも良い。
【００１８】
本発明者らの実験によれば、多孔性シート２として、Ｎｕｎｃ社製  Ａｎｐｏｒｅ（登録商標）メンブレン、カタログＮｏ．１６１３９５（ポアサイズ０．０２μｍ）によると、良好な結果が得られた。但し、同種のポアサイズの多孔性シートであれば、実用十分な結果が得られると考えられる。
【００１９】
さて、多孔性シート２上には、目的細胞を含む培地３が担持される。培地３の成分は、培養の常法に従って、細胞に合わせて適宜選択すれば良い。
【００２０】
図２は、容器本体１をセットする前であって、緩衝液を入れていない状態におけるエレクトロポレーション装置を示す。図２に示しているように、この装置は、大別して、電極ベース部１０と、電極ボディ部２０と、印加装置３０からなる。
【００２１】
電極ベース部１０は、次のように構成される。まずガラスシャーレ１１（容器であって絶縁を持つものなら任意に変更してよい）の中央に、丸盆状の緩衝液容器１２を配置する。緩衝液容器１２の中央部は、略円形状に凹んでおり、液溜部１３となっている。緩衝液容器１２は、シリコン板、アクリル板、テフロン（登録商標）板等の絶縁性材料をくり抜いて形成すると良い。
【００２２】
液溜部１３には、後で緩衝液１６が溜められる（図３参照）が、液溜部１３の縁部を一部切り欠いて空気抜１３ａを形成するのが望ましい。こうすると、電極ボディ部２０の下端部が緩衝液１２に浸される際、緩衝液１６中の空気が抜けて、緩衝液１６の組成を本来のものとできるからである。緩衝液１６としては、従来のエレクトロポレーション法で使用されるものをそのまま使用できる。
【００２３】
下部平板電極１４を、液溜部１３の底部から、上方に露呈するように、配設する。下部平板電極１４としては、白金板、あるいはアルミニューム、ステンレス鋼等に白金メッキを施したものが望ましい。
【００２４】
なお端子１５は、印加装置３０の第１端子３１に電気的に接続される。
【００２５】
次に、電極ボディ部２０は、次のように構成される。上方筒体２１と下方筒体２２とは、それぞれテフロン（登録商標）樹脂等の絶縁体で構成され、上下に同軸上に連設される。ここで、上方筒体２１は、下方筒体２２よりも大径に形成され、下方筒体２２の上端縁の周囲において、上方筒体２１の底面２１ａ（円環状）が下方に露呈する。
【００２６】
また、上方筒体２１の上面中心には、つまみ２５が設けられ、つまみ２５をつかめば、電極ボディ部２０を把持できるようになっている。
【００２７】
さらに、下方筒体２２の下端面には、電極ベース部１０の下部平板電極１４に対面する上部平板電極２３が配設される。上部平板電極２３は、下部平板電極１４と同様に構成する。
【００２８】
そして、上部平板電極２３は、端子２４を介して印加装置３０の第２端子３２に電気的に接続される。なお、印加装置３０としては、市販品を利用できる。
【００２９】
本装置は、以上のような構成よりなり、次に図３を用いて本装置によるエレクトロポレーション法を説明する。
【００３０】
まず図１を用いて上述したように、保持容器５を用いて細胞の培養を行う。但し、培養を省略する場合もあり得る。
【００３１】
次に、液溜部１３に調整した緩衝液１６を入れる。
【００３２】
次に、保持容器５を液溜部１３の下部平板電極２３上に載置する。これにより、多孔性シート２及び細胞を含む培地３は、緩衝液内の所定高さに水平に位置することになる。
【００３３】
次に、つまみ２５を持ち、電極ボディ部２０を、保持容器５上に載置する。これにより、上方筒体２１の底面２１ａが容器本体１の上縁部に当接すると共に、下方筒体２２の下端に位置する上部平板電極２３が、緩衝液１６の上部に水平に浸される。
【００３４】
その結果、細胞を含む培地３は、上部平板電極２３と下方平板電極１４とに、平行に挟まれることになる。各寸法を工夫すれば、上部平板電極２３と培地３との間隔及び培地３と下部平板電極１４との間隔を調整できる。
【００３５】
そして、印加装置３０により、上部平板電極２３と下部平板電極１４とにポレーションする。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】本発明の一実施の形態における保持容器の縦断面図
【図２】本発明の一実施の形態におけるエレクトロポレーション装置の斜視図
【図３】本発明の一実施の形態におけるエレクトロポレーション装置の断面図
【符号の説明】
【００３７】
１  容器本体
２  多孔性シート
３  培地
５  保持容器
１０  電極ベース部
１２  緩衝液容器
１３  液溜部
１４  下部平板電極
１６  緩衝液
２０  電極ボディ部
２３  上部平板電極
３０  印加装置
【図１】
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【図２】
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【図３】
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