(57)【要約】【課題】  少量の投与でも効果的に薬効を発揮し、副作用の少ない製剤、特にはアレルギー、喘息又は鼻炎等の治療に有用な製剤を提供する。【解決手段】  下記式Ｉ：【化１】2005298347.tif 000014の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する吸入製剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉ：
【化１】
2005298347.tif 000011
の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する吸入製剤。
【請求項２】
式Ｉの化合物が平均粒子径250〜400ｎｍのナノパーティクルである請求項１記載の吸入製剤。
【請求項３】
式Ｉの化合物が：
ａ）原料の式Ｉの化合物を良溶媒に溶解し、次いでこの溶液を水溶性高分子が溶解した貧溶媒と混合して式Ｉの化合物の懸濁液を得る工程；
ｂ）前記懸濁液を凍結乾燥又は噴霧乾燥することにより式Ｉの化合物の粉末を得る工程；
を含む工程により得られるナノパーティクルである請求項１又は２記載の吸入製剤。
【請求項４】
式Ｉの化合物と薬学的に許容されるキャリアとを含有し、式Ｉの化合物が前記キャリアの表面に付着している請求項１〜３のいずれか１項記載の吸入製剤。
【請求項５】
アレルギー、喘息又は鼻炎治療用である請求項１〜４のいずれか１項記載の吸入製剤。
【請求項６】
下記式Ｉ：
【化２】
2005298347.tif 000012
の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する吸入製剤の製造方法であって、原料の式Ｉの化合物を機械粉砕して粉末とし、得られた粉末を薬学的に許容される賦形剤又は担体と混合することを含む前記製造方法。
【請求項７】
機械粉砕がジェットミル、ナノマイザー、ボールミル又はロッドミルを用いて行なわれる請求項６記載の製造方法。
【請求項８】
下記式Ｉ：
【化３】
2005298347.tif 000013
の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する吸入製剤の製造方法であって、以下の工程：
ａ）原料の式Ｉの化合物を良溶媒に溶解し、次いでこの溶液を水溶性高分子が溶解した貧溶媒と混合して式Ｉの化合物の懸濁液を得る工程；
ｂ）前記懸濁液を凍結乾燥又は噴霧乾燥することにより式Ｉの化合物の粉末を得る工程；
を含む前記製造方法。
【請求項９】
良溶媒が低級アルコールと水との混合溶媒である請求項８記載の製造方法。
【請求項１０】
水溶性高分子がポリビニルアルコールである請求項８又は９記載の製造方法。
【請求項１１】
工程ｂ）に続いて、以下の工程ｃ）：
ｃ）式Ｉの化合物の粉末と薬学的に許容されるキャリアとを混合攪拌し、式Ｉの化合物の粉末を前記キャリアの表面に付着させる工程；
をさらに含む請求項８〜１０のいずれか１項記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は公知のピペリジン化合物を含有する吸入製剤及びその製造方法に関する。より詳しくは、前記式（Ｉ）の化合物がナノパーティクルである吸入製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明で使用される下記式（Ｉ）：
【化１】
2005298347.tif 000002
の化合物又はその薬学的に許容される塩は公知であり、喘息等の治療に有用であることが知られている（例えば、特開平０４−３６４１５６号公報）。
【０００３】
従来は式（Ｉ）の化合物は経口で投与されていた。しかしながら、経口投与の場合では十分な濃度の薬剤が患部に移行せず治療効果が低かったり、あるいは薬効が発現するまでに時間がかかったりするなどの問題があった。
【０００４】
これらの問題は薬剤を大量に投与することである程度解消するものの、それでも薬剤の患部への移行が十分でなかったり、また、薬剤の大量投与は副作用の発現という危険を伴う。
【０００５】
【特許文献１】特開平０４−３６４１５６号公報
【特許文献２】特開平０８−１５７３９１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、少量の投与でも効果的に薬効を発揮し、また副作用の少ない製剤、特にはアレルギー、喘息又は鼻炎等の治療に有用な製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、公知のピペリジン化合物又はその薬学的に許容される塩（以下、本明細書において「SOA-132」と呼ぶ）を有効成分として含有する吸入製剤は少量投与でも効率的に吸収されて極めて高い治療効果を示し、また副作用が軽減できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
即ち、本発明は以下の発明を包含する。
【０００８】
（１）下記式Ｉ：
【化２】
2005298347.tif 000003
の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する吸入製剤。
【０００９】
（２）式Ｉの化合物が平均粒子径250〜400ｎｍのナノパーティクルである前記（１）記載の吸入製剤。
（３）式Ｉの化合物が：
ａ）原料の式Ｉの化合物を良溶媒に溶解し、次いでこの溶液を水溶性高分子が溶解した貧溶媒と混合して式Ｉの化合物の懸濁液を得る工程；
ｂ）前記懸濁液を凍結乾燥又は噴霧乾燥することにより式Ｉの化合物の粉末を得る工程；
を含む工程により得られるナノパーティクルである前記（１）又は（２）記載の吸入製剤。
【００１０】
（４）式Ｉの化合物と薬学的に許容されるキャリアとを含有し、式Ｉの化合物が前記キャリアの表面に付着している前記（１）〜（３）のいずれかに記載の吸入製剤。
（５）アレルギー、喘息又は鼻炎治療用である前記（１）〜（４）のいずれかに記載の吸入製剤。
【００１１】
（６）下記式Ｉ：
【化３】
2005298347.tif 000004
の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する吸入製剤の製造方法であって、原料の式Ｉの化合物を機械粉砕して粉末とし、得られた粉末を薬学的に許容される賦形剤又は担体と混合することを含む前記製造方法。
【００１２】
（７）機械粉砕がジェットミル、ナノマイザー、ボールミル又はロッドミルを用いて行なわれる前記（６）記載の製造方法。
【００１３】
（８）下記式Ｉ：
【化４】
2005298347.tif 000005
の化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する吸入製剤の製造方法であって、以下の工程：
ａ）原料の式Ｉの化合物を良溶媒に溶解し、次いでこの溶液を水溶性高分子が溶解した貧溶媒と混合して式Ｉの化合物の懸濁液を得る工程；
ｂ）前記懸濁液を凍結乾燥又は噴霧乾燥することにより式Ｉの化合物の粉末を得る工程；
を含む前記製造方法。
【００１４】
（９）良溶媒が低級アルコールと水との混合溶媒である前記（８）記載の製造方法。
（１０）水溶性高分子がポリビニルアルコールである前記（８）又は（９）記載の製造方法。
（１１）工程ｂ）に続いて、以下の工程ｃ）：
ｃ）式Ｉの化合物の粉末と薬学的に許容されるキャリアとを混合攪拌し、式Ｉの化合物の粉末を前記キャリアの表面に付着させる工程；
をさらに含む前記（８）〜（１０）のいずれかに記載の製造方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明により、投与後の吸収性がよく、迅速に薬効が発現される吸入製剤が提供される。また、本発明の吸入製剤は少量投与でも効果的に薬効が発現するため、薬剤の大量投与による副作用に危険性を大幅に低減できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下に本発明について詳細に説明する。
本発明の吸入製剤では有効成分として下記式（Ｉ）：
【化５】
2005298347.tif 000006
の化合物又はその薬学的に許容される塩を用いる。SOA-132は公知であり、以下のような理化学的性質を有する。
【００１７】
［化学名］  4-ベンジルヒドロキシ-1-[2-(3-ヒドロキシ-5-ピリジルメトキシ-2-ナフトイル)-アミノエチル]ピペリジン
［分子式］  Ｃ３７Ｈ３７Ｎ３Ｏ４
［分子量］  587.72
［外観・性状］  微黄白色〜灰白色の結晶性の粉末。無臭。
［溶解性］
1gを溶解するのに必要な溶媒量：
ジメチルホルムアミド  2ml
氷酢酸                2ml
無水酢酸              7ml
クロロホルム          3ml
メタノール          300ml
無水エタノール      640ml
アセトニトリル      800ml
ジエチルエーテル  10000ml以上
水                10000ml以上
第１液(pH1.2)     10000ml以上
酢酸緩衝液(pH4.0) 10000ml以上
第２液(pH6.8)     10000ml以上
10％乳酸水溶液       35ml
［融点］  約134℃
［解離定数(pKa)］  4.4
［分配係数］
n-オクチルアルコール/Robinson Buffer(pH2)        3.0
n-オクチルアルコール/リン酸緩衝液(pH6.8)     999以上
n-オクチルアルコール/Robinson Buffer(pH10)   999以上
［吸湿性］  なし
［安定性］  気密、遮光、室温条件下で12ヶ月間安定。また密閉、遮光、加温・加湿下（40℃・75％RH）で6ヶ月間安定。白色蛍光灯下で2ヶ月間安定。
【００１８】
また、SOA-132の薬学的に許容される塩としては特に限定されるものではないが、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等）及びアルカリ土金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩等）のような金属塩、アンモニウム塩（例えば、トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩等）、ピリジン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩及びＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等の有機塩基塩、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩及びトルエンスルホン酸塩等の有機酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩及び燐酸塩等の無機酸塩、その他、アルギニン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等のアミノ酸との塩等が挙げられる。
【００１９】
吸入製剤を設計する上で、有効成分であるSOA-132を気管支、肺胞等に到達させるためには、その所定の範囲内の粒径を有する粉末とすることが望ましい。そのため本発明の吸入製剤で有効成分として用いられるSOA-132はその形態が微粒子状であることが好ましく、さらには吸入特性を向上させるためにサブミクロンサイズの粒子であるナノパーティクル（以下、「NP」とも言う。）であることが好ましい。該微粒子の粒径としては吸入に支障のない程度であれば特に限定されるものではないが、例えば、その平均粒径が250〜400ｎｍであることが好ましく、300〜400ｎｍであることがさらに好ましい。また、全微粒子のうちの90重量％以上が粒径300〜400ｎｍの範囲内のものであることが好ましい。
【００２０】
このようなSOA-132の微粒子（NP）は、例えば、SOA-132原末を機械的に粉砕したり、または水中溶媒拡散法により得ることができる。機械的に粉砕する方法としては、例えば、ジェットミル、ナノマイザー、ボールミル（振動ボールミル）又はロッドミル等を用いて微粒子化する方法が挙げられる。
【００２１】
水中溶媒拡散法とは、SOA-132を良溶媒となる溶媒（例えば、有機溶媒と水との混合溶媒）に溶解し、この溶液を水溶性高分子が溶解した水溶液（SOA-132に関して貧溶媒となる）に混合攪拌してSOA-132を析出させる方法である。SOA-132が溶解した溶液と水溶性高分子が溶解した水溶液とを混合攪拌すると、良溶媒が水相に急速に拡散移行し、油相と水相との界面が乱れて自己乳化を起こし、サブミクロンサイズのＯ／Ｗ型エマルションが形成される。このとき、貧溶媒中の水溶性高分子がエマルション表面に吸着してエマルション滴を分散安定化させる。その後、良溶媒がさらに拡散移行すると、溶解度の低下に伴ってサブミクロンサイズのSOA-132微粒子が析出し、SOA-132の懸濁液が得られる。この水中溶媒拡散法については後で詳述する。次いで、所望により、水中溶媒拡散法により生じたSOA-132の懸濁液を凍結乾燥又は噴霧乾燥してSOA-132のNPを得る。
【００２２】
ところで、上記のような微粒子化により、場合によっては有効成分微粒子の付着凝集性が増して吸入用デバイスやカプセルの内壁に付着残留したり、取扱い性が悪化するなどの問題が生じる場合がある。そのような場合には、キャリアとなる粗粒子表面に上記SOA-132微粒子を付着させたもの（複合化粒子）を用いるとよい。
【００２３】
キャリア粒子の材料としては製薬分野で公知の固体担体又は賦形剤等を用いることができ、例えば、乳糖、マンニトール、グルコース、ソルビトール等が挙げられる。キャリア粒子の粒径は10〜100μｍであることが好ましく、40〜70μｍであることがさらに好ましい。また、キャリア粒子とSOA-132との重量比は10：0.5〜10：4が好ましく、10：1〜10：3がさらに好ましい。
【００２４】
本発明の吸入製剤には、有効成分であるSOA-132の他に、所望により、等張化剤（例えば塩化ナトリウム等）、緩衝剤（例えばホウ酸、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等）、保存剤（例えば塩化ベンザルコニウム等）、増粘剤（例えばカルボキシビニルポリマー等）のような通常用いられる添加剤を加えてもよい。そして、本発明の吸入製剤中に含有されるSOA-132の量は、好ましくは5〜30重量％、さらに好ましくは10〜25重量％である。
【００２５】
本発明の吸入製剤の形態としては特に限定されるものではないが、例えば、粉末状吸入製剤、液（液滴）状吸入製剤又はエアゾール吸入製剤等の形態が挙げられる。液状の吸入製剤はネブライザー（登録商標名）等の吸入器具を用いて投与することができる。粉末状の吸入製剤はスピンヘラー（登録商標名）等の吸入用器具を用いて投与することができる。
【００２６】
本発明の吸入製剤は、SOA-132を口腔、鼻腔、気管、気管支、肺胞等の下気道へ投与するのに有用である。ここでいう下気道とは気道の内、気管、気管支、細気管支、肺胞等をいう。本発明の吸入製剤は直接上記器官にSOA-132を送達することができるため、それらの器官が関与する疾患（例えば、アレルギー、喘息又は鼻炎等）の治療に有用である。
【００２７】
次に、本発明の吸入製剤の製造方法について説明する。
先にも述べたように、本発明の吸入製剤ではSOA-132のNPを用いることが好ましい。SOA-132のNPの製造方法としてはSOA-132を機械的粉砕により微粉砕する方法、又は水中溶媒拡散法による方法等が挙げられる。
【００２８】
機械的粉砕による方法としては、ジェットミル、ナノマイザー、ボールミル（振動ボールミル）又はロッドミル等を用いる方法が挙げられる。
【００２９】
なお、原料として用いられるSOA-132としては、化学合成により得られたSOA-132粗生成物を単離精製せずにそのまま用いてもよいし、あるいは通常の方法（例えば、晶析／ろ過／乾燥等）により精製したものを用いてもよい。
【００３０】
水中溶媒拡散法とは先にも述べたようにSOA-132の良溶媒と貧溶媒とを用いる方法である。水中溶媒拡散法の一般的な手順は以下のとおりである。まず良溶媒にSOA-132を溶解し、次いでこの溶液を水溶性高分子が溶解した貧溶媒と混合攪拌する。しばらくすると、SOA-132が析出し始めて溶液が白濁してくる。この白濁懸濁液を乾燥して溶媒を除去することにより粒径250〜400ｎｍのSOA-132のNPが得られる。
【００３１】
良溶媒としては特に限定されるものではないが、低級アルコール、或いは低級アルコールと水との混合溶媒が好ましい。低級アルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のＣ１−６アルコールが挙げられる。また、低級アルコールと水との混合比率（容量比）は、100：0〜16：5が好ましく、16：3〜16：5がさらに好ましい。
【００３２】
貧溶媒としては水が好ましい。また、水溶性高分子としてはポリビニルアルコール（以下、「ＰＶＡ」とも言う）（例えば、PVA205、PVA405、PVAL-8等）、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、信越化学工業製HPC-L）、デキストラン、プルロニック（例えば、旭電化工業製PF-68）等が挙げられ、とりわけＰＶＡが好ましい。ＰＶＡとしては重合度（又は分子量）が400〜600のものが好ましく、またけん化度が71〜88％のものが好ましい。
【００３３】
けん化度が低いＰＶＡ（即ち、水溶性高分子の疎水性が高いＰＶＡ）を用いると、得られるSOA-132NPの粒径は小さくなる。また、一般に高分子水溶液中の高分子濃度が高くなるに従って、得られるSOA-132NPの粒径も大きくなる傾向がある。
【００３４】
次いで、上述のようにして生成されたSOA-132のNPの懸濁液から溶媒を除去して乾燥することによりSOA-132のNP粉末を得ることができる。
【００３５】
SOA-132懸濁液を乾燥する方法としては、例えば、凍結乾燥法又は噴霧乾燥法等が挙げられる。
【００３６】
凍結乾燥法は、懸濁液を凍結して高度に減圧し、この状態で水分を昇華させる乾燥法である。このように凍結乾燥法は比較的緩やかな条件下で乾燥が進行するので、不安定薬物の粉末化や生物試料の乾燥に適している。
【００３７】
噴霧乾燥法は、懸濁液を、例えば、ノズル方式の噴霧乾燥機で噴霧乾燥する方法である。噴霧乾燥機の噴霧圧、ノズル口径及び、試料溶液の濃度を調節することにより、NPの粒径等を調整することができる。噴霧乾燥法は一度に大量の処理が行なえるため工業的な大量生産に適する。
【００３８】
上述の水中溶媒拡散法によりSOA-132の懸濁液を得て、これを凍結乾燥法又は噴霧乾燥法で乾燥することにより、SOA-132の表面に水溶性高分子（例えばＰＶＡ）が吸着したSOA-132のNPを得ることができる。なお、水溶性高分子が吸着したSOA-132のNPに占めるSOA-132含量（薬物含有率）は約75〜99重量％程度とすることが好ましい。
【００３９】
また、水中溶媒拡散法後に凍結乾燥又は噴霧乾燥して製造されるSOA-132NPは非晶質であることが確認された。これは、NP調製時に溶液状態の薬物が急激に析出することにより分子配列が不規則になって非晶質化したものと考えられる。一方、ナノマイザーやジェットミル等により機械的に粉砕して調製したSOA-132NP粒子は粉末Ｘ線回折により結晶ピークが観察され、結晶であることが確認された。
【００４０】
水溶性高分子が吸着したSOA-132NPは、表面の「ぬれ性（親水性）」が改善されて水になじみやすくなっているため体内に投与された場合にSOA-132が素早く溶解し、迅速な薬効の発現が可能となる。
【００４１】
本発明者らは、機械的粉砕により調製したSOA-132NP、又は水中溶媒拡散法と凍結乾燥法又は噴霧乾燥法とを組み合わせて調製したSOA-132NPは、未加工のSOA-132原料粉末と比較して吸入特性、体内への吸収特性が向上することを見出した。本発明者らは、これらのSOA-132NPの取扱い性及び吸入特性の更なる向上について検討した結果、キャリア粒子表面にSOA-132NPを吸着させて複合化粒子とすることにより、取扱い性や吸入特性に優れたSOA-132NP吸入製剤を提供できることを見出した。以下に、SOA-132NPとキャリア粒子との複合化粒子の製造方法について説明する。
【００４２】
SOA-132NPとしては、上記のような機械的粉砕により調製したSOA-132NP、又は水中溶媒拡散法と凍結乾燥法又は噴霧乾燥法とを組み合わせて調製したSOA-132NP等を用いることができる。また、キャリア原料としては製薬分野で通常用いられる賦形剤又は担体の固体材料であれば特に限定されないが、例えば、乳糖、マンニトール、グルコース、ソルビトール等が挙げられる。キャリア粒子の粒径は10〜100μｍであることが好ましく、30〜70μｍであることがさらに好ましい。
【００４３】
上記のSOA-132NPとキャリア粒子とを混合することにより本発明の複合化粒子を得ることができる。混合するキャリア粒子とSOA-132NPとの重量比は10：0.5〜10：4が好ましく、10：1〜10：3がさらに好ましい。混合は、例えば、タッチミキサー、シータコンポーザー、V型ミキサー、メカノフュージョン等の混合機を用いることにより行うことができる。
【００４４】
本発明の吸入製剤には、上記のようにして得られるSOA-132NP又はSOA-132NPとキャリアとの複合化粒子に加えて、例えば、賦形剤、担体、等張化剤（例えば塩化ナトリウム等）、緩衝剤（例えばホウ酸、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等）、保存剤（例えば塩化ベンザルコニウム等）、増粘剤（例えばカルボキシビニルポリマー等）のような通常用いられる添加剤を混合して製剤化してもよい。
【００４５】
本発明の吸入製剤中に配合されるべきSOA-132の量は、これを適用すべき患者の症状等により適宜設定できるが、一般に投与単位あたり約0.1〜1000mgとするのが望ましい。
【００４６】
また、本発明の吸入製剤の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別、その他の条件等に応じて適宜選択されるが、通常成人１日あたり約0.1〜1000mg/kg、好ましくは約1〜100mg/kgとすれば良く、これを１日１回又は複数回（例えば、2〜4回程度）に分けて投与することができる。
【実施例】
【００４７】
以下、本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４８】
（実施例１）水中溶媒拡散法によるSOA-132NP懸濁液の調製
メタノール8mlと水2.5mlとを混合し、これにSOA-132原料粉末50mgを溶解してSOA-132溶液を調製した。次いでこのSOA-132水溶液を、ペリスターポンプ(PERISTA、アトー（株）)を用いて、水溶性高分子（100mg又は500mg）を精製水50mlに溶解した溶液に2又は8ml/minの割合で滴下添加し、攪拌してSOA-132NPの懸濁液を調製した。この懸濁液中のSOA-132NPの粒径をゼータサイザー（Zetasizer 3000HS、Malvern）で測定した結果を以下の表に示す。
【００４９】
【表１】
2005298347.tif 000007
【００５０】
上記の結果に示されるとおり、本発明で用いられるSOA-132NPはナノオーダーの粒径を有する。
【００５１】
（実施例２）凍結乾燥法によるSOA-132NP粉末の調製
実施例１により得られたSOA-132NP懸濁液中のSOA-132に吸着しなかった水溶性高分子を取り除くため、SOA-132NP懸濁液を遠心分離(20,000rpm、10min、Kubota7800)した。形成されたペレット(沈降NP)表面を精製水により洗浄した。洗浄後、適量の水を加え、超音波によりNPを懸濁させた。この洗浄操作を2回繰り返し、最終的に得られた懸濁液を凍結乾燥(NEOCOOL、ヤマト科学、-90℃、24時間)して水溶性高分子が吸着したSOA-132NP凍結乾燥粉末（以下、「ＦＤ−ＮＰ」とも言う）を得た。
【００５２】
（実施例３）噴霧乾燥法によるSOA-132NP粉末の調製
実施例１により得られたSOA-132NP懸濁液を、噴霧乾燥機（Pulvis mini spray GS31、Yamato）を用いて以下に示す条件下で噴霧乾燥して水溶性高分子が吸着したSOA-132NP噴霧乾燥粉末（以下、「ＳＤ−ＮＰ」とも言う）を得た。
噴霧乾燥条件
吸入温度          １５０℃
吐出温度            ８０℃
噴霧圧      ０．１３ＭＰａ
供給速度  １０ｍｌ／ｍｉｎ
ノズル径        ４０６μｍ
【００５３】
（実施例４）SOA-132NP粉末の粒径及び薬物含有率の測定
実施例２及び３で得られたＦＤ−ＮＰ又はＳＤ−ＮＰに水を加えて超音波を印加して分散させてSOA-132NP懸濁液を調製した。ゼータサイザー（Zetasizer 3000HS、Malvern）を用いてSOA-132NPの粒径を測定した。その結果を薬物含有率（試料5mgをメタノールに溶解して吸光度(吸収波長257nm)を測定）と併せて以下の表に示す。
【００５４】
【表２】
2005298347.tif 000008
【００５５】
上記の結果に示されるように、本発明の方法により得られるSOA-132NP粉末を水に再分散した場合でも、ナノオーダーにSOA-132粒子が分散することが分かる。
【００５６】
（実施例５）SOA-132NPの結晶化度
SOA-132原末、ジェットミルにより粉砕したSOA-132NP、ナノマイザーにより粉砕したSOA-132NP、FD-NP（PVA205 1wt％）及びSD-NP（PVA205 1wt％）について、粉末Ｘ線回折装置(GElGERFLEX RAD-C、リガク)を用いて測定した。その結果を図１に示す。図１に示されるとおり、SOA-132原末、ジェットミル粉砕粒子及びナノマイザー粉砕粒子では結晶ピークが確認されたが、FD-NP及びSD-NPでは結晶ピークは観察されず、いずれも非晶質であることが確認された。
【００５７】
（実施例６）SOA-132NPの溶解性
SOA-132原末、ジェットミルにより粉砕したSOA-132NP、ナノマイザーにより粉砕したSOA-132NP、FD-NP（PVA205 1wt％）及びSD-NP（PVA205 1wt％）のそれぞれについて以下のようにして溶解性を測定した。
【００５８】
Tween80を0.05％加えた日本薬局方第14改正第2液(pH6.8)20mL中に、試料粉末4mgを入れ、恒温水浴(TAIYO incubator M-100D,TAITEC)中にて振とう(37℃、60ストローク/min)した。経時的に1mLずつサンプリングし、遠心分離(10,000rpm,7min)した。溶解した薬物量を、上清を蛍光光度計(F-3010、日立製作所)で測定することにより定量した。測定条件は以下のとおりである。
蛍光光度測定条件
EX波長：          262nm
EM波長：          496nm
タイムアベレージ：10sec
EXバンド幅：      3mm
EMバンド幅：      5mm
【００５９】
溶解性評価の結果を図２に示す。図２より、ジェットミルにより粉砕したSOA-132NP、ナノマイザーにより粉砕したSOA-132NP、FD-NP及びSD-NPは、SOA-132原末と比較して溶出速度が早くなることが示された。また、FD-NP及びSD-NPの場合では溶出ピーク濃度が極めて高いことが分かる。これは、FD-NP及びSD-NPが非晶質であるためと考えられる。
【００６０】
（実施例７）モルモットを用いたSOA-132NPの肺内沈着分布評価
粉末経気管支投与（シリンジ法）
モルモットへの投与は図３に示す器具を用いて以下に示す粉末経気管支投与（シリンジ法）により行なった。Hartley系雄性モルモット(5〜6週齢、325〜390g)をカルバミン酸エチルにより麻酔し(1g/Ml、1.5mL/kg、i.p.)、気管を露出し、カテーテルを挿入した。カテーテルに接続したチップ内に試料粉末(薬物としてO.5mg)を充填した。チップに接続したシリンジ内において2mLの空気をO.2mLに圧縮し、三方活栓にて圧を開放することで薬物粉末の経気管支投与を行った。
【００６１】
肺内沈着分布評価
Hartley系雄性モルモットに、SOA-132原末、ジェットミルにより粉砕したSOA-132NP(D50、4.1μm)、FD-NP（PVA205 1wt％）及びSD-NP（PVA205 1wt％）(薬物として0.5mg)を上記のシリンジ法にて経気管支投与した。投与10分後、モルモットを脱血死させ、気管および気管支、細気管支及び肺胞を摘出した。各部位に沈着した薬物を抽出するため、生理食塩水を2mL加えてホモジナイスした。得られたホモジネート液にジクロロメタンを2mL加え、タッチミキサーにて撹拝し、薬物をジクロロメタン中に抽出した。懸濁組織を遠心分離(5,OOOrpm,10min)し、ジクロロメタン相をO.2mL採取した。これを遠心エバポレータ(VEC-310,IWAKI)にて減圧乾固(50℃、60min)し、得られた残渣をアセトニトリルO.8mLに溶解した。これに蒸留水1.2mLを加え、前処理カラム(Sep Pak PS-1 vac 100mg、Waters(商標))に通した。前処理カラムは、予め2mLのアセトニトリル及び溶出液(O.1％トリフルオロ酢酸：アセトニトリル＝4：6)で前処理したものを用いた。添加後、前処理カラムを2mLの40％アセトニトリルで洗浄し、さらに1mLの溶出液で溶出した。これを遠心エバポレータにて減圧乾固し、得られた残渣を50％メタノール2mLで溶解し、以下に示す条件でHPLCにて測定した。
HPLC測定条件
カラム：        symmetry C8 4.6mm I.D.×150mm(Waters(商標))
カラム温度：    40℃
移動相：        TFAaq.(pH4.0)/メタノール＝7/8
流速：          1.0ml/min
ループ容量：    20μL
波長：          254nm
【００６２】
肺内沈着分布の測定結果を図４に示す。また、カテーテルに充填された薬物量に対する放出薬物の割合及び回収薬物量に対する細気管支より先への沈着（到達）割合を、それぞれO.E.値(％)、FPF値(％)と定義し、in vivoにおける吸入特性評価の指標として用いた。O.E.値(％)、FPF値(％)を以下の表に示す。
【００６３】
【表３】
2005298347.tif 000009
【００６４】
上記の表及び図４に示されるように、本発明のSOA-132のNP、特にFD-NP（PVA205 1wt％）及びSD-NP（PVA205 1wt％）を用いた場合には細気管支及び肺胞等の肺の深部にまで効率よく到達することが分かる。
【００６５】
（実施例８）SOA-132NPの経気管支投与による薬理効果
サクシニルコリン溶液及びヒスタミン溶液は、サクシニルコリン及びヒスタミン二塩酸塩をそれぞれ1.2mg/mL、9μg/mLとなるように生理食塩水中に溶解して調製した。インドメタシン溶液は、インドメタシン50mgあたりに150μLの1N水酸化ナトリウム水溶液を加えて溶解し、生理食塩水により10mL(5mg/mL)とした。 薬理効果の測定は、Konzett-Roslerの方法に従った。Hartley系雄性モルモット(5〜6週齢、325〜390g)をカルバミン酸エチルにより麻酔し(1g/mL、1.5mL/kg,i.p.)、気管を露出した。露出後、レスピレータに接続したY宇カニューレを挿管し、5mLの換気量で、1分間当たり60回の換気回数で強制的に呼吸させた。その後、直ちにサクシニルコリン溶液(1mL/kg、i.v.)及びインドメタシン溶液(1mL/kg、i.v.)を投与した。強制換気下における気道抵抗の変化は、気管カニューレに接続したトランスデューサー(Bronchospasm Transducer7020、Ugo Basil)にて測定した。サクシニルコリン投与10分後、ヒスタミン二塩酸塩溶液(1mL/kg、i.v.)を投与し、この時の気道収縮率曲線のべ一スラインから最高値までの高さ(mm)を薬物非投与時気道抵抗値とした。
図３に示したシリンジを用いて、SOA-132原末、ジェットミルにより粉砕したSOA-132NP(D50、4.1μm)、FD-NP（PVA205 1wt％）及びSD-NP（PVA205 1wt％）をそれぞれモルモット1匹当り薬物量0.5mgとなるように経気管支投与した。所定の時間経過後にヒスタミン二塩酸塩溶液(1mL/kg、i.v.)を投与した。この時の気道収縮率曲線のベ一スラインから最高値までの高さ(mm)を、薬物投与後気道抵抗値とした。気道収縮抑制率は下記式に示した通り、薬物非投与時気道抵抗値に対する薬物投与後気道抵抗値の割合とした。
【００６６】
【数１】
2005298347.tif 000010
【００６７】
薬理効果試験の結果を図５に示す。
経気管支投与後ヒスタミンに対する拮抗作用を測定したところ、図５に示されるように、FD-NP及びSD-NPはSOA-132原末に比べ薬効が現れる速度が速く、強い拮抗作用を示した。これは、FD-NP及びSD-NPが非晶質で、かつその粒子表面に存在する水溶性高分子によりぬれ性が改善されていることから、溶解性が向上したことによると考えられる。また、原末とジェットミル粉砕粒子を比較すると、粉砕粒子の方が強い抑制効果を示していることから、比表面積の増大による溶解速度の向上も、高い薬理効果を示す１つの要因であると考えられる。
【００６８】
（実施例９）SOA-132NPとキャリア粒子とによる複合化粒子の調製
SOA-132NPとしてFD-NPを用いた。またキャリア粒子として乳糖（Pharmatose325M(商標)(DMV)）を用いた。
【００６９】
複合化粒子の調製は以下のタッチミキサーによる方法か、又は高速楕円ロータ型粉体複合化装置による方法のいずれかで行った。
【００７０】
タッチミキサーによる複合化粒子の製造方法
吸入用乳糖(Pharmatose325M(商標)(DMV))200mg及びFD-NP20mgを直径25mm、高さ50mmの瓶の中に入れ、タッチミキサー(MT-31,Yamato)にて10分間混合し、複合化粒子（以下、「ＰＭ−ＮＰ」とも言う）を調製した。
【００７１】
高速楕円ロータ型粉体複合化装置による複合化粒子の製造方法
吸入用乳糖(Pharmatose325M(商標)(DMV))7g、FD-NP0.35gを高速楕円ロータ型複合化装置(シータコンポーザーTHC-70ラボ、徳寿製作所)に充填し、ロータ回転数1000rpm、ベッセル回転数20rpm、クリアランス0.5mmの条件で5分間処理した。処理後、さらにFD-NPを0.35g充填して5分間処理を行い、複合化粒子（以下、「θ−ＮＰ」とも言う）を調製した。
【００７２】
（実施例１０）複合化粒子の薬理効果
投与収入製剤として、薬物原末、ジェットミル粉砕粒子(D50：4.1μm)、シータコンポーザーを用いPharmatose325Mとジェットミル粉砕粒子粉砕粒子(D50：4.1μm)とを複合化した粒子、FD-NP(PVA205 1％)及びPM-NPを用いた。これらの吸入製剤を用いて、先の実施例８と同様にして薬理効果を測定した。
その結果を図６に示す。経気管支投与後、ヒスタミンに対する拮抗作用を測定したところ、図６に示されるように、PM-NPはFD-NPに比較して薬効が現れる速度が速い傾向にあった。FD-NPと乳糖と混合して複合化粒子とすると、その複合化工程においてFD-NPの凝集体が微細な凝集体へと解砕される。このためFD-NPをそのまま吸入する場合に比べて、より肺の深部へとSOA-132を到達させることが可能となる。また、凝集体が微細化されることで比表面積が増え、肺内での溶解速度が増加し、薬効が現れる速度が速くなったと考えられる。
【００７３】
シータコンポーザーにて325Mとジェットミル粉砕粒子とを混合した複合化粒子は、ジェットミル粉砕粒子単独の場合と比較して薬効が現れる速度に差は見られなかったが、ヒスタミンに対する拮抗作用は、複合化粒子の方が強く現れる傾向にあった。これは吸入特性の向上により、より多くの薬物が肺内深部へ沈着したためと考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明の吸入製剤は吸入特性に優れ、または肺の深部にまで有効成分を効率的に送達することができる。本発明の吸入製剤はアレルギー、喘息、鼻炎等の治療に有用である。本発明の吸入製剤は従来の経口製剤等と比較して、患部に効率的に有効成分を送達でき、また体内への吸収性に優れているので、少量の投与でも優れた薬効を発現し、そのため薬剤の大量投与による副作用の危険性も大幅に低減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】図１は、粉末Ｘ線回折の結果を示す図である。
【図２】図２は、SOA-132NPの溶解性試験の結果を示す図である。
【図３】図３は、実施例の粉末経気管支投与（シリンジ法）で用いた投与器具の模式図である。
【図４】図４は、実施例７のモルモットを用いたSOA-132NPの肺内沈着分布評価試験の結果を示す図である。
【図５】図５は、実施例８のSOA-132NPの経気管支投与による薬理効果試験の結果を示す図である。
【図６】図６は、実施例１０の経気管支投与によるSOA-132複合化粒子の薬理効果試験の結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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