(57)【要約】【課題】  製剤化した場合に、安定で強い皮膚のメラニン産生阻害作用を有し、かつ皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題もない美白化粧料を提供する。【解決手段】  分子中にウロン酸残基を有する平均重合度５以下の酸性キシロオリゴ糖に、たとえばグアバ葉抽出物のようなケラチノサイトから産生される情報伝達物質の産生阻害剤、威霊仙抽出物のようなメラニン産生抑制剤、ｄ−δ−トコフェロールのような抗酸化剤、ＳＤＳのような抗炎症剤、ヒアルロン酸のような高分子化合物、１,３−ブチレングルコールのような多価アルコール類から選択される１種又は２種以上を併用する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子中にウロン酸残基を有する平均重合度５以下の酸性キシロオリゴ糖と、ケラチノサイトから産生される情報伝達物質産生阻害剤、酸性キシロオリゴ糖以外のメラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、高分子化合物および多価アルコールからなる群から選ばれた１種もしくは２種以上を有効成分として含有することを特徴とする美白化粧料。
【請求項２】
前記ケラチノサイトから産生される情報伝達物質産生阻害剤が、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド及びその誘導体、バンザクロ（Psidium）属植物抽出物、カメリア（Camellia）属植物抽物、ヘリアンタス（Helianthus）属植物抽出物、レオントポディウム (Leontopodium)属植物抽出物の中から選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とする請求項１に記載のメラニン産生阻害組成物。
【請求項３】
前記メラニン産生抑制剤が、クレマチス(Clematis)属植物抽出物、α-アルブチン、β-アルブチン、Ｌ-アスコルビン酸、Ｌ-アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸-２-硫酸ナトリウム、Ｌ-アスコルビン酸リン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸-２-グルコシド、ＤＬ-α-トコフェロール-Ｌ-アスコルビン酸リン酸ジエステルジカリウムの中から選ばれる１種または２種以上であることを特徴とする請求項１に記載の美白化粧料。
【請求項４】
前記抗酸化剤が、α-カロテン、β-カロテン、γ-カロテン、リコペン、クリプトキサンチン、ルテイン（キサントフィル）、フラボン、アピゲニン、ルテオリン及びその配糖体などのフラボン類、ケンフェロール，クェルセチン，ミリセチン，ルチン及びその配糖体、ダイゼイン，ゲニステイン及びその配糖体、フラバノン，ナリンゲニン，ヘスペレチン及びその配糖体、カルコン及びその配糖体、アントシアン及びその配糖体、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、ｄ-δ-トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ-α-トコフェロール、コハク酸ＤＬ-α-トコフェロールの中から選ばれる１種または２種以上であることを特徴とする請求項１に記載の美白化粧料。
【請求項５】
前記抗炎症剤がグリチルリチン酸及びグリチルリチン酸ジカリウム，グリチルリチン酸モノアンモニウム等のグリチルリチン酸の塩並びにその誘導体、グリチルレチン酸及びグリチルレチン酸ステアリル，ステアリン酸グリチルレチニル，３-サクシニルオキシグリチルレチン酸二ナトリウム等のグリチルレチン酸の塩並びにその誘導体、アラントイン、アロイン、シコニンの中から選ばれる１種または２種以上であることを特徴とする請求項１に記載の美白化粧料。
【請求項６】
前記高分子化合物がヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、アルゲコロイド，キサンタンガム，デキストラン，プルラン，メチルセルロース、エチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー（カーボポール）の中から選ばれる１種または２種であることを特徴とする請求項１に記載の美白化粧料。
【請求項７】
前記多価アルコールがポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１,３-ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、ソルビトール、マルチトールの中から選ばれる１種または２種以上であることを特徴とする請求項１に記載の美白化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は美白化粧料に関する。具体的には、メラニンの産生阻害作用が相乗的に増強され、日焼け後の色素沈着・しみ・ソバカス・紅斑等の予防及び改善に有効で、皮膚美白効果が著しく改良された安全性の高い美白化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
紫外線による皮膚の黒化や、シミ，ソバカスといった皮膚の色素沈着を防止又は改善するため、メラニン産生を阻害したり、生成したメラニン色素を還元する作用を有する数多くの成分がスクリーニングされ、美白化粧料に配合されてきた。例えば、アスコルビン酸やシステイン，ハイドロキノン及びこれらの誘導体、胎盤抽出物、植物や藻類よりの抽出物などである。
【０００３】
しかしながら、アスコルビン酸，システイン，ハイドロキノンは酸化還元反応を受けやすく不安定であり、胎盤抽出物や植物，藻類よりの抽出物は有効量を配合すると美白化粧料に好ましくない臭いや色を付与する等の問題点があった。
【０００４】
また、メラニン産生抑制効果を有する成分としてキシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖が報告されているが（特許文献１参照）、このものは上記問題点を有しないもののメラニン産生を抑制するには未だ十分なものであるとは言えず、安全でより強力な皮膚のメラニン産生阻害作用を有した化粧料が望まれている。
【特許文献１】特開２００３−２２１３０７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記従来技術の問題点に鑑みてなされたものであって、安定で強い皮膚のメラニン産生阻害作用を有し、かつ皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題がない美白化粧料を得ることを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは上記目的を達成するため種々の検討を行ったところ、分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖に、ケラチノサイトから産生される情報伝達物質産生阻害剤、メラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、高分子化合物、多価アルコールから選択される１種もしくは２種以上の成分を併用することにより、美白効果が相乗的に増強され、しかも皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題のない美白化粧料が得られることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の美白化粧料は、分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖と、ケラチノサイトから産生される情報伝達物質産生阻害剤、酸性キシロオリゴ糖以外のメラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、高分子化合物および多価アルコールからなる群から選ばれた１種もしくは２種以上を有効成分として含有しているので、それぞれの相乗効果により高いメラニン産生抑制効果を発揮し、有効性の高い美白化粧料が提供される。また、酸性キシロオリゴ糖と併用されるこれらの成分は高い安定性を有し、また、従来から汎用され安全性が高いものとしても知られており、安定性、安全性に優れた美白化粧料が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の美白化粧料は、分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖に、ケラチノサイトから産生される情報伝達物質産生阻害剤、酸性キシロオリゴ糖以外のメラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、高分子化合物、多価アルコールから選択される１種又は２種以上を有効成分として含有するものである。
【０００９】
本発明で用いる酸性キシロオリゴ糖は、キシロースのオリゴ糖の混合物であり、平均重合度が５以下のものであって、キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有するものである。このものは、天然物から調製され、具体的には、リグノセルロース材料を酵素的及び／又は物理化学的に処理してキシロオリゴ糖成分とリグニン成分の複合体を得、次いで該複合体を酸加水分解処理して得られたキシロオリゴ糖混合物から、１分子中に少なくとも１つ以上のウロン酸残基を側鎖として有するキシロオリゴ糖を分離して得たものである。また、このキシロオリゴ糖は天然物から製造されるため、キシロースの重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物として得られることが多く、重合度が異なるオリゴ糖の混合組成物を用いることもできる。本発明では、平均重合度、すなわち正規分布をとる酸性キシロオリゴ糖のキシロース鎖長の平均値が５以下のものを用いる（なお、平均重合度やウロン酸量の測定は下記公報の記載に準じる。）。ウロン酸は、天然では、ペクチン、ペクチン酸、アルギン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、コンドロイチン硫酸、デルタマン硫酸等の種々の生理活性を持つ多糖の構成成分として知られている。本発明に用いられる酸性キシロオリゴ糖では、ウロン酸はこれらの構成ウロン酸などに限られるものではないが、好ましくはグルクロン酸もしくは４-O-メチル-グルクロン酸である。より具体的には、特開２００３−２２１３０７号公報や特開２００３−１８３１３３号公報、特開２００３−２２１３３９号公報に開示されたウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖であって、さらに具体的に言うと当該特許公報の実施例として開示された糖組成物ＵＸ−２、特開２００３−１８３１３３号公報に開示された糖組成物ＵＸ−５などが好適に用いられる。
【００１０】
本発明において、ケラチノサイトから産生される情報伝達物質とは、紫外線照射時にケラチノサイトから産生され、メラノサイトに作用してメラノサイトのメラニン産生亢進を促す情報伝達物質（例えばチオレドキシン／ＡＤＦ）をいい、本発明において用いられる情報伝達物質産生阻害剤は、この情報伝達物質の産生を阻害する物質をいう。例えば、以下の実施例に示す方法にて効果を発揮する物質が好ましく用いられ、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド又はその誘導体、バンザクロ（Psidium）属植物抽出物、カメリア（Camellia）属植物抽物、ヘリアンタス（Helianthus）属植物抽出物、レオントポディウム (Leontopodium)属植物抽出物が例示される。
【００１１】
還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドは、その種類，基原は問われない。また、バンザクロ（Psidium）属植物抽出物としては、グアバ（Psidium guajava L.）葉抽出物、カメリア（Camellia）属植物抽出物としては茶（Camellia sinensis O.kuntze）抽出物、ヘリアンタス（Helianthus）属植物抽出物としてはひまわり(Helianthus annus L.)種子抽出物、レオントポディウム (Leontopodium)属植物抽出物としてはエーデルワイス(Leontopodium alpinum)抽出物が挙げられる。
【００１２】
本発明で用いられるメラニン産生抑制剤としては、クレマチス(Clematis)属植物の威霊仙(Clematis chinensis Osbeck.)抽出物、テッセン（Clematis florida Thunb.）抽出物、カザグルマ（Clematispatens Morr.et Decne）抽出物、センニンソウ（Sweet Autumn Clematis）抽出液物、さらにその種類，基原を問わずα-アルブチン、β-アルブチン、Ｌ-アスコルビン酸、Ｌ-アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸-２-硫酸ナトリウム、Ｌ-アスコルビン酸リン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸ステアリン酸エステル、Ｌ-アスコルビン酸-２-グルコシド、ＤＬ-α-トコフェロール-Ｌ-アスコルビン酸リン酸ジエステルジカリウムが挙げられる。
【００１３】
本発明で用いられる抗酸化剤としては、例えば、α-カロテン、β-カロテン、γ-カロテン、リコペン、クリプトキサンチン、ルテイン（キサントフィル）、フラボン、アピゲニン、ルテオリン及びその配糖体などのフラボン類、ケンフェロール，クェルセチン，ミリセチン，ルチン及びその配糖体、ダイゼイン，ゲニステイン及びその配糖体、フラバノン，ナリンゲニン，ヘスペレチン及びその配糖体、カルコン及びその配糖体、アントシアン及びその配糖体、α-トコフェロール、β-トコフェロール、γ-トコフェロール、ｄ-δ-トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ-α-トコフェロール、コハク酸ＤＬ-α-トコフェロールが挙げられる。
【００１４】
本発明で用いられる抗炎症剤としては、例えばグリチルリチン酸及びグリチルリチン酸ジカリウム，グリチルリチン酸モノアンモニウム等のグリチルリチン酸の塩並びにその誘導体、グリチルレチン酸及びグリチルレチン酸ステアリル，ステアリン酸グリチルレチニル，３-サクシニルオキシグリチルレチン酸二ナトリウム等のグリチルレチン酸の塩並びにその誘導体、アラントイン、アロイン、シコニンが挙げられる。
【００１５】
本発明で用いられる高分子化合物は、化粧料用組成物中に配合され、増粘・ゲル化剤、皮膜剤などの用途に用いられる有機性の水溶性高分子化合物をいい、この中でも主として増粘・ゲル化剤として用いられるものが好適である。また、高分子化合物は天然高分子、合成高分子、半合成高分子のいずれでもよい。具体的には、ヒアルロン酸、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、アルゲコロイド，キサンタンガム，デキストラン，プルラン，メチルセルロース、エチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ-Ｎａ）、アルギン酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー（カーボポール）が例示される。
【００１６】
本発明で用いられる多価アルコールとして、例えば、その種類，基原を問わずポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１.３-ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、ソルビトール、マルチトールが挙げられる。
【００１７】
上記情報伝達物質産生阻害剤またはメラニン産生抑制剤として使用される植物抽出物は、抽出液そのものの他抽出液を濃縮したエキス状のもの、さらには凍結乾燥などにより粉末状にしたものであっても支障なく使用できる。また、植物抽出物の調製法も特に限定されるものではなく、抽出するにあたっては種々の適当な抽出溶媒を用いて、それぞれの化合物を豊富に含む植物類から低温下及び／又は加温下で抽出することができる。
【００１８】
使用する抽出溶媒も特に限定されるものではなく、例えば、水、メチルアルコール，エチルアルコール等の低級１価アルコール、グリセリン，プロピレングリコール，１,３-ブチレングリコール等の液状多価アルコール、アセトン，メチルエチルケトン等のケトン、酢酸エチルなどの低級アルキルエステル、ベンゼン，ヘキサン等の炭化水素，ジエチルエーテル等のエーテル類，ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることが出来る。これらの中でも、水、エチルアルコール、１,３-ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適である。
【００１９】
植物抽出液は、生のままあるいは乾燥した植物体を重量比で１〜１０００倍量、好ましくは１０〜１００倍量の溶媒を用い、０℃以上、好ましくは２０℃〜４０℃で１時間以上、できれば３〜７日間行うのが好ましい。抽出部位は、どの部分を用いても良く、また全草を用いることもできる。
【００２０】
上記酸性キシロオリゴ糖の美白化粧料への配合量は、その効果や添加した際の臭い，色調の点から考え、０.００１〜２０重量％の濃度範囲とすることが好ましく、望ましくは０.１〜５.０重量％の範囲である。配合量が０.００１重量％未満であると充分な効果が発揮されず、２０.０重量％以上加えても効果はほぼ一定だからである。
【００２１】
また、酸性キシロオリゴ糖と供に配合される情報伝達物質産生阻害剤やメラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、高分子化合物、多価アルコールの添加量は、それぞれ０.０００１〜２０.０重量％が好ましく、望ましくは０.０１〜５.０重量％である。含有量が０.０００１重量％未満であると充分な相乗効果が発揮されず、２０.０重量％以上加えても効果に与える影響は少ない。なお、植物抽出物を添加する場合は、蒸発換算分に換算した値である。
【００２２】
また、本発明において酸性キシロオリゴ糖と他の有効成分との配合比は、配合する他の有効成分によっても異なるが、好ましくは１：１０〜１：０.１である。すなわち、酸性キシロオリゴ糖に対しておよそ１／１０〜１０倍量の情報伝達物質産生阻害剤等の添加が、酸性キシロオリゴ糖の効果を相乗的に発揮させる。より具体的に言うと、情報伝達物質産生阻害剤やメラニン産生抑制剤、抗炎症剤、抗酸化剤の場合には、酸性キシロオリゴ糖よりも少なくてよく、酸性キシロオリゴ糖の１／１０量〜等量の範囲で相乗的効果が発揮される。また、高分子化合物や多価アルコールの場合には、酸性キシロオリゴ糖の量よりも多く配合するのが好ましくその等量〜１０倍量の範囲で相乗的効果が効果的に発揮される。また、上記に挙げた他の有効成分は例示であって、本発明の目的を達成できる成分であれば、列記した以外の情報伝達物質産生阻害剤やメラニン産生抑制剤、抗酸化剤、抗炎症剤、高分子化合物、多価アルコールも好ましく用いられる。
【００２３】
本発明の化粧料は、上記の有効成分に、化粧料、医薬品を問わず皮膚に適用される製剤に用いられる水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、界面活性剤、粉体、油剤、アルコール、ｐＨ調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することにより調製される。また、本発明の化粧料の剤形も特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料等種々の剤形とすることができる。
【００２４】
次に以下の実施例に基づき、本発明についてさらに詳細に説明する。なお、本発明は、以下に記載された実施例に限定されないのは言うまでもない。
【実施例１】
【００２５】
まず、はじめに酸性キシロオリゴ糖とケラチノサイトから産生される情報伝達物質の産生阻害剤の併用作用について試験を行った。
Ａ．ケラチノサイト情報伝達物質産生阻害剤によるメラニン産生抑制効果
〔ケラチノサイト情報伝達物質の調製〕
バンザクロ（Psidium）属植物として、グアバ（Psidium guajava L.）の葉、カメリア（Camellia）属植物として、茶（Camellia sinensis O.kuntze）の葉、ヘリアンタス（Helianthus）属植物として、ひまわり(Helianthus annus L.)の種子、レオントポディウム (Leontopodium)属植物として、エーデルワイス(Leontopodium alpinum)の全草の各種植物体乾燥物それぞれの１０ｇに５０v／v％エタノール水溶液１００ｍｌを加え、室温でときどき撹拌しながら７日間抽出し、濾過して各抽出液を得た。これら各抽出液を減圧濃縮し、エキス状のケラチノサイト情報伝達物質産生阻害剤を得た。
【００２６】
〔ＡＤＦ産生抑制作用〕
上記で得た情報伝達物質産生阻害剤の作用として、人ケラチノサイトによるチオレドキシン／ＡＤＦの産生を測定することにより、ＡＤＦ産生抑制能を調べた
（１）試料溶液の調製
上記で調製したグアバ葉エキス、茶エキス、ヒマワリ種子エキス、エーデルワイスエキスを精製水にて１０ｍｇ／ｍｌの濃度に調製したものを試料溶液とした。
【００２７】
（２）人ケラチノサイトの培養
無菌的に採取した正常人皮膚から真皮、皮下組織をできるだけ削除した後、トリプシン／ＥＤＴＡ（０.２５％／０.２５％）ＰＢＳ（−）（リン酸緩衝液）を入れた無菌シャーレ内に表皮を上にして室温で１日放置し、その後ピンセットで表皮と真皮を分離した。次いで採集した表皮細胞を入れた遠心チューブにＰＢＳ（−）１０ｍｌを加え、ピペッティングにより細胞を分散させ、毎分１０００回転で５分間遠心した後上清を捨てた。さらにＰＢＳ（−）による細胞の洗浄を３回繰り返し、集まった細胞をケラチノサイト用無血清培地で分散し、コラーゲンコート（１型）シャーレにまいた後、３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で培養した。なお、培地には、ブレットキットＥＧＭ（改変ＭＣＤＢ１３１）培地に牛脳抽出物（ＢＢＥ）１２μｇ／ｍｌ、ｈ-ＥＧＦ０.０１μｇ／ｍｌ、ハイドロコルチゾン１μｇ／ｍｌ、ゲンタマイシン５０ｍｇ／ｍｌ、アンフォテリシン５０μｇ／ｍｌを添加したものを用いた。
【００２８】
（３）人ケラチノサイトによるチオレドキシン／ＡＤＦ産生量の測定
（ａ）人ケラチノサイトのチオレドキシン／ＡＤＦ誘導
上記（２）で得た表皮細胞を直径３６ｍｍシャーレにコンフルーエントになるまで培養した。これに（１）で調製した試料溶液を添加し、ＣＯ２インキュベーター中で３０分間インキュベートし培地を除去し、その後、ＰＢＳ（−）を０.５ｍｌ添加して、ＵＶ-Ｂを２０ｍＪ／ｃｍ２を照射してチオレドキシン／ＡＤＦを誘導させた。そして、ＰＢＳ（−）を除去した後にケラチノサイト用無血清培地２ｍｌを添加し、３時間インキュベートしてチオレドキシン／ＡＤＦの産生を行った。
インキュベートした後、トリプシン／ＥＤＴＡ（０.２５％／０.２５％）ＰＢＳ（−）１ｍｌで細胞をはがし、毎分３０００回転で５分間遠心分離して細胞を回収した。回収した細胞にlysis buffer（１０％ＮＰ-４０ ２.５ｍｌ；１００ｍＭＴｒｉｓ-ＨＣｌ（ｐＨ７.５） ５.０ｍｌ；３Ｍ-ＮａＣｌ ２.５ｍｌ；２００ｍＭフェニルメチルスルフォニルフロライド（ＰＭＳＦ）／ジメチルホルムアミド（ＤＭＦＡ） ２５０μｌ；０.１１１ＩＵ／ｍｌアプロチニン １８５μｌ；１０％アジ化ナトリウム １００μｌを蒸留水で５０ｍｌにしたもの）３０μｌを添加し、良く撹拌して溶解した。この細胞溶解液を毎分３０００回転５分間、続いて毎分１５，０００回転５分間遠心し、上澄液を新しいエッペンチューブに取り、タンパク量を測定した。タンパク量の測定はBio Rad社製のprotein assay Kitを用いて行った。
【００２９】
（ｂ）タンパク電気泳動（ＳＤＳ-ＰＡＧＥ）
アクリルアミド１５％濃度のlower gelおよび４.５％濃度のstacking gelを作製した。タンパク量３０μｇの試料に、それと同量の２倍濃度サンプリングバッファー（０.５Ｍ-Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ（ｐＨ６.８） ２ｍｌ；１０％ＳＤＳ ４ｍｌ；β-メルカプトエタノール １.２ｍｌ；グリセロール ２ｍｌ；蒸留水０.８ｍｌ；１％ ＢＰＢ適量）を添加し、１００℃，５分間加熱し、ゲルに添加する試料を調製した。Ｔｒｉｓ塩３０.３ｇ；グリシン １４４.０ｇ；ＳＤＳ １０.０ｇを蒸留水で１０ｌにしたランニングバッファー中で、３０ｍＡで電気泳動を行った。
【００３０】
（ｃ）ウエスタンブロッティング
電気泳動を行った上記ゲルとＰＶＤＦ膜をトランスファーバッファー（グリシン ７２.２５ｇ；Ｔｒｉｓ-ベース １５，ＳＤＳ ３.７５ｇ；蒸留水 ４Ｌ）中でセットし、５００ｍＡで９０分間トランスファーを行った。トランスファーした後、ＰＶＤＦ膜をブロッキング溶液（スキンミルク １０ｍｇ；仔牛血清 １０ｍｌ；０.０５％Ｔｗｅｅｎ２０ ＰＢＳ（−）溶液 ９０ｍｌ）に浸し、一晩冷蔵放置した。その後、ブロッキング溶液を除去し、０.０５％Ｔｗｅｅｎ２０ ＰＢＳ（−）溶液で洗浄を３回行った。次いで一次抗体としてＡＤＦ抗体（０.３５μｇ／ｍｌ）を０.０５％Ｔｗｅｅｎ２０ ＰＢＳ（−）溶液で１μｌ／７ｍｌに希釈し、ＰＶＤＦ膜を１時間処理した。次に、二次抗体として抗マウス抗体（１０μｌ／６ｍｌ ０.０５％Ｔｗｅｅｎ２０ＰＢＳ（−）溶液）でＰＶＤＦ膜を１時間処理した。その後０.０５％Ｔｗｅｅｎ２０ＰＢＳ（−）溶液で５回洗浄後、ImmunoStar(和光純薬工業株式会社製)で発色し、１３,０００Ｄａのバンドの濃淡でチオレドキシン/ＡＤＦにより産生されたタンパク量の確認を行った。このとき、表１に示す判定基準で、チオレドキシン/ＡＤＦの産生抑制効果を評価した。その結果を表２に示す。
【００３１】
【表１】
2005289880.tif 000002
【００３２】
【表２】
2005289880.tif 000003
【００３３】
ＵＶ-Ｂ照射時のチオレドキシン／ＡＤＦ産生量を４、非照射のチオレドキシン／ＡＤＦ産生量を０とした場合、表２に示したように還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＰＨ）は５０μＭの濃度で、グアバ葉抽出物、茶抽出物およびひまわり種子抽出物はそれぞれ１００ｐｐｍの濃度でＡＤＦ産生量が２となり、強いチオレドキシン／ＡＤＦ産生抑制が認められた。さらに、エーデルワイス抽出物は２００ｐｐｍの濃度でチオレドキシン／ＡＤＦ産生量が３となり、チオレドキシン／ＡＤＦの産生が抑えられることが認められた。
【００３４】
Ｂ．酸性キシロオリゴ糖のメラニン産生抑制効果
〔メラニン産生細胞の培養〕
メラニン細胞の培養液に牛胎児血清５.０％を加えたダルベッコＭＥＭ（Ｄ-ＭＥＭ）培地を用い、マウスメラノーマＢ-１ Ｆ-１０細胞を直径１２ｃｍのシャーレに植え付けた。植え付け量は４×１０３cells／ｃｍ２とした。植え付けの翌日、酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２を表３に示す濃度となるように添加し、添加後３日後に試験を終了した。この酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２は、特開２００３−２２１３０７号公報に開示されたものであって、その平均重合度は２.３、キシロース鎖長の上限と下限との鎖は２、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を一つ含む糖組成化合物であった。
【００３５】
〔メラニン産生抑制能の評価〕
メラニン量は培養後、細胞を２Ｎ-ＮａＯＨに溶解し、４０５ｎｍにおける吸光度を測定することにより求めた。また、細胞増殖度は２Ｎ-ＮａＯＨに溶解した細胞溶解液の一部をＢＣＡ法によるタンパク測定法に従って５４０ｎｍの吸光度で測定し、タンパク量に換算した。メラニン産生度（％）は、以下の式に基づき単位タンパク量あたりのメラニン量の割合で計算した。なお、美白効果の陽性対照物質としてβ-アルブチンを用いた。その結果を表３に示した。
メラニン産生度（％）＝
〔（試料添加区の４０５ｎｍの吸光度値／試料添加区の５４０ｎｍの吸光度値）／（無添加区の４０５ｎｍの吸光度値／無添加区の５４０ｎｍの吸光度値）〕×１００
【００３６】
【表３】
2005289880.tif 000004
【００３７】
表３によると、β-アルブチン５０ｐｐｍ添加において細胞増殖度が９１.２％で、メラニン産生度は６７.１％であり、１００ｐｐｍ添加においては細胞増殖度が８２.８％で、メラニン産生度は６０.５％であった。一方、酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２を１０００ｐｐｍ添加したものは細胞増殖度が７７.６％、メラニン産生度が８４.９％であった。同じく５００ｐｐｍ添加したものは、細胞増殖度が８１.５％、メラニン産生度が９４.６％であった。以上のように、酸性キシロオリゴ糖は弱いながらメラニン産生を抑制した。
【００３８】
Ｃ．塗布によるヒトでの効果確認試験
被験者として、２０〜５０歳の女性２０名に１日２回（朝、夜）連続２ヵ月間、本発明の実施品たる試験品と比較品１，２のそれぞれを使用してもらい、塗布部位の状態を試験前後で比較して改善効果を調べた。試験品として以下の処方例として示した化粧用クリームを用い、比較品１には当該クリームからヒマワリ種子エキスと還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを除いたクリームを、比較品２には前述の化粧用クリームから酸性キシロオリゴ糖を除いたクリームを用いた。塗布開始前及び２ヶ月間の塗布後における感触をアンケート集計し、表４に示す評価基準にて効果の確認を行った。その結果を表５に示す。表５に示したとおり、情報伝達物質産生阻害剤としてのヒマワリ種子エキスと還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドおよび酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２とを配合した試験品では評価点数の合計が１４２点であったのに対して、ヒマワリ種子エキスと還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを配合しなかった比較品２（酸性キシロオリゴ糖の配合品）では評価点数合計が１０２点であり、また酸性キシロオリゴ糖を配合しなかった比較品１（ヒマワリ種子エキスと還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの配合品）では評価点数合計が９０点であった。この結果から明らかなように、酸性キシロオリゴ糖の効果は、ケラチノサイトから産生される情報伝達物質産生阻害剤の効果よりも小さく、酸性キシロオリゴ糖のみでは十分な美白効果が得られず、ケラチノサイトから酸性される情報伝達物質産生阻害剤を併用することによって高い美白効果が得られることが認められた。
【００３９】
【表４】
2005289880.tif 000005
【００４０】
【表５】
2005289880.tif 000006
【実施例２】
【００４１】
次に酸性キシロオリゴ糖とメラニン産生抑制剤とを併用した効果を確かめた。試験方法および評価方法は、上記実施例１のＢ．酸性キシロオリゴ糖によるメラニン産生抑制効果の欄に記載の方法に準じて行った。メラニン産生抑制剤にはクレマチス(Clematis)属植物である威霊仙抽出物およびＬ-アスコルビン酸-２-グルコシドを用いて試験を行った。なお、威霊仙抽出物には、威霊仙(Clematis chinensis Osbeck)の根の乾燥物１０ｇに５０v／v％エタノール水溶液１００ｍｌを加え、室温でときどき撹拌しながら７日間抽出した後、濾過して得られた抽出液を減圧濃縮したものを用いた。その結果を表６に示す。
【００４２】
【表６】
2005289880.tif 000007
【００４３】
表６より、酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２単独（＋５.４％）やＬ-アスコルビン酸-２-グルコシド単独（＋１９.４％）、威霊仙抽出液単独（＋１７.０％）でもメラニン産生抑制効果は認められるが、酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２とＬ-アスコルビン酸-２-グルコシドとを併用した場合には＋３４.２％、酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２と威霊仙抽出液とを併用した場合には＋３６.３％もの優れたメラニン産生抑制効果が認められた。これらの効果は、それぞれの抑制効果を単に加算した効果＋２４.８％および＋２２.４％よりも１０％以上大きく、単なる相加効果でない相乗的な効果を示している。
【実施例３】
【００４４】
酸性キシロオリゴ糖と抗酸化剤との併用効果について確かめた。試験は、上記実施例１  Ｃ．塗布によるヒトでの効果確認試験に準じて行った。試験品には、抗酸化剤としてｄ-δ-トコフェロールを、酸性キシロオリゴ糖としてＵＸ−５を用い、両者を配合したものを試験品とし、比較品１には当該クリームからｄ-δ-トコフェロールを除いたクリームを、比較品２には前述の化粧用クリームから酸性キシロオリゴ糖を除いたクリームを用いた。なお、酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−５は、特開２００３−１８３１３３号公報に開示されたものであってその平均重合度は４.８、キシロース鎖長の上限と下限との鎖は９、酸性キシロオリゴ糖１分子あたりウロン酸残基を一つ含む糖組成化合物であった。
【００４５】
その結果を表７に示した。表７に示したとおり、ｄ-δ-トコフェロールと酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−５とを配合した試験品では評価点数の合計が１５０点であったのに対して、ｄ-δ-トコフェロールを配合しなかった場合（酸性キシロオリゴ糖の配合）にはその合計点数は９０点であり、酸性キシロオリゴ糖を配合しなかった場合（ｄ-δ-トコフェロールの配合）にはその合計点数は１１０点であった。この結果から明らかなように、実施例１の情報伝達物質産生阻害剤の場合と同様に、酸性キシロオリゴ糖と抗酸化剤としてｄ-δ-トコフェロールを併用することによって極めて高い美白効果が得られることが認められた。
【００４６】
【表７】
2005289880.tif 000008
【実施例４】
【００４７】
Ａ．塗布によるヒトでの効果確認試験
酸性キシロオリゴ糖と抗炎症剤との併用効果について確かめた。試験は、上記実施例１  Ｃ．塗布によるヒトでの効果確認試験に準じて行った。試験品には、抗炎症剤としてグリチルリチン酸ジカリウムを、酸性キシロオリゴ糖としてＵＸ−２を用いた。その結果を表８に示した。表８に示したとおり、グリチルリチン酸ジカリウムと酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２とを配合した試験品では評価点数の合計が１２８点であったのに対して、グリチルリチン酸ジカリウムを配合しなかった比較品１（酸性キシロオリゴ糖の配合）ではその合計点数は９０点であり、酸性キシロオリゴ糖を配合しなかった比較品２（グリチルリチン酸ジカリウムの配合）ではその合計点数は１００点であった。この結果から明らかなように、酸性キシロオリゴ糖と抗炎症剤としてグリチルリチン酸ジカリウムを併用することによって極めて高い美白効果が得られることが認められた。
【００４８】
【表８】
2005289880.tif 000009
【００４９】
Ｂ．抗炎症作用における併用効果
酸性キシロオリゴ糖の配合によって抗炎症作用が増強することが考えられたので、抗炎症作用における併用効果についても試験を行った。起炎剤として１０％ＳＤＳを用いて、消炎効果の確認を行った。表１０に示すように起炎剤およびグリチルリチン酸ジカリウムを含有する水溶液７μｌをヒトパッチ試験用貼付剤（「パッチ判ミニ」鳥居薬品株式会社製）に含浸させ、ヒト上腕内側に５時間貼付した。剥離後、表９に示す評価基準にしたがって、紅斑の観察を行い抗炎症効果の確認を行った。その結果を表１０に示す。表１０から明らかなように抗炎症剤としてのグリチルリチン酸ジカリウムおよび酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２とを組み合わせた試料では評価点数が１.０であった。一方、酸性キシロオリゴ糖を配合しなかった試料では評価点数が１.５点であり、グリチルリチン酸ジカリウムを配合しなかった試料では評価点数が２.０点であった。また、抗炎症剤を配合しないＳＤＳのみの試料では評価点数が２.５点であった。この結果から明らかなように、酸性キシロオリゴ糖の配合が抗炎症作用を増強させ、高い消炎効果が得られることが認められた。
【００５０】
【表９】
2005289880.tif 000010
【００５１】
【表１０】
2005289880.tif 000011
【実施例５】
【００５２】
酸性キシロオリゴ糖と高分子化合物との併用効果について確かめた。試験は、上記実施例１  Ｃ．塗布によるヒトでの効果確認試験に準じて行った。試験品には、高分子化合物としてヒアルロン酸を、酸性キシロオリゴ糖としてＵＸ−５を用いた。その結果を表１１に示した。表１１に示したとおり、ヒアルロン酸と酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−５とを配合した試験品では評価点数の合計が１１２点であったのに対して、ヒアルロン酸を配合しなかった比較品１（酸性キシロオリゴ糖の配合）ではその合計点数は９０点であり、酸性キシロオリゴ糖を配合しなかった比較品２（ヒアルロン酸の配合）ではその合計点数は９４点であった。この結果から明らかなように、酸性キシロオリゴ糖と高分子化合物であるヒアルロン酸を併用することによって極めて高い美白効果が得られることが認められた。
【００５３】
【表１１】
2005289880.tif 000012
【実施例６】
【００５４】
酸性キシロオリゴ糖と高価アルコールとの併用効果について確かめた。試験は、上記実施例１  Ｃ．塗布によるヒトでの効果確認試験に準じて行った。試験品には、多価アルコールとして１,３-ブチレングリコールを、酸性キシロオリゴ糖としてＵＸ−２を用いた。その結果を表１２に示した。表１２に示したとおり、１,３-ブチレングリコールと酸性キシロオリゴ糖ＵＸ−２を配合した試験品では評価点数の合計が１１６点であったのに対して、１,３-ブチレングリコールを配合しなかった比較品１（酸性キシロオリゴ糖の配合）ではその合計点数は９０点であり、酸性キシロオリゴ糖を配合しなかった比較品２（１,３-ブチレングリコールの配合）ではその合計点数は１００点であった。この結果から明らかなように、酸性キシロオリゴ糖と高価アルコールとして１,３-ブチレングリコールを併用することによって極めて高い美白効果が得られることが認められた。
【００５５】
【表１２】
2005289880.tif 000013
【実施例７】
【００５６】
次に、本発明の美白化粧料の処方例を示すが、本発明はこれに限定されるものでないのはいうまでもない。
（１）化粧用クリーム                                     （重量％）
ａ）ミツロウ                                              ２.０
ｂ）ステアリルアルコール                                  ５.０
ｃ）ステアリン酸                                          ８.０
ｄ）スクワラン                                          １０.０
ｅ）自己乳化型グリセリルモノステアレート                  ３.０
ｆ）ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ.Ｏ.）        １.０
ｇ）ヒマワリ種子エキス                                    ２.０
ｈ）酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ−２）                        ５.０
ｉ）水酸化カリウム                                        ０.３
ｊ）防腐剤・酸化防止剤                                    適 量
ｋ）精製水                                                残 部
ｌ）還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド            ０.１
製法ａ）〜ｆ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｇ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｆ）に加えて乳化する。５０℃でｌ）を添加し、４０℃まで撹拌しながら冷却する。
【００５７】
（２）乳液                                              （重量％）
ａ）ミツロウ                                              ０.５
ｂ）ワセリン                                              ２.０
ｃ）スクワラン                                            ８.０
ｄ）ソルビタンセスキオレエート                            ０.８
ｅ）ポリオキシエチレンオレイルエーテル（20E.O.）          １.２
ｆ）ｄ-δ-トコフェロール                                  １.０
ｇ）酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ−５）                        ２.０
ｈ）１,３-ブチレングリコール                              ７.０
ｉ）カルボキシビニルポリマー                              ０.２
ｊ）水酸化カリウム                                        ０.１
ｋ）精製水                                                残 部
ｌ）防腐剤・酸化防止剤                                    適 量
ｍ）エタノール                                            ７.０
製法ａ）〜ｅ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｆ）〜ｌ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｅ）に加えて乳化し、５０℃まで撹拌しながら冷却する。５０℃でm）を添加し、４０℃まで攪拌冷却する。
【００５８】
（３）乳液                                                （重量％）
ａ）ミツロウ                                              ０.５
ｂ）ワセリン                                              ２.０
ｃ）スクワラン                                            ８.０
ｄ）ソルビタンセスキオレエート                            ０.８
ｅ）ポリオキシエチレンオレイルエーテル（20E.O.）          １.２
ｆ）酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ−２）                        ３.０
ｇ）グリチルリチン酸ジカリウム                            ０.１
ｈ）１,３-ブチレングリコール                              ７.０
ｉ）カルボキシビニルポリマー                              ０.２
ｊ）水酸化カリウム                                        ０.１
ｋ）精製水                                                残 部
ｌ）防腐剤・酸化防止剤                                    適 量
ｍ）エタノール                                            ７.０
製法ａ）〜ｅ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｆ）〜ｌ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、ａ）〜ｅ）に加えて乳化し、５０℃まで撹拌しながら冷却する。５０℃でｍ）を添加し、４０℃まで攪拌冷却する。
【００５９】
（４）化粧水                                              (重量%)
ａ）酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ−５）                        １.０
ｂ）グリセリン                                            ５.０
ｃ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（20E.O.）  １.０
ｄ）エタノール                                            ６.０
ｅ）香料                                                  適 量
ｆ）防腐剤・酸化防止剤                                    適 量
ｇ）精製水                                                残 部
ｈ）ヒアルロン酸                                          ０.１
製法ａ），ｂ），ｇ），ｈ）を均一に混合する。ｃ）〜ｆ）を均一に混合し、ａ），ｂ），ｇ），ｈ）の混合物に加える。
【００６０】
（５）化粧水                                            （重量％）
ａ）酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ−２）                        ３.０
ｂ）１,３-ブチレングリコール                              ８.０
ｃ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（20E.O.）  １.０
ｄ）エタノール                                            ６.０
ｅ）香料                                                  適 量
ｆ）防腐剤・酸化防止剤                                    適 量
ｇ）精製水                                                残 部
製法ａ），ｂ），ｇ）を均一に混合する。ｃ）〜ｆ）を均一に混合し、ａ），ｂ），ｇ）の混合物に加える。
【００６１】
（５）洗顔剤                                            （重量％）
ａ）グリチルレチン酸ステアリル                            ０.１
ｂ）酸性キシロオリゴ糖（ＵＸ−５）                        ０.１
ｃ）タルク                                                残 部
ｄ）セルロース                                          ２０.０
ｅ）ミリスチン酸カリウム                                ３０.０
ｆ）ラウリルリン酸ナトリウム                            １０.０
ｇ）香料                                                  適 量
ｈ）防腐剤                                                適 量
製法ａ）〜ｈ）までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。