(57)【要約】【課題】簡便な方法でストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌の存在を確認する。【解決手段】(1) ストレプトコッカス属細菌選択培地にバシトラシンを添加したストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びに(2) ストレプトコッカス属細菌選択培地にモノバクタム系抗生物質を添加したストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地で試料を培養し、培養された培地を観察することにより、う蝕のなりやすさを判定する方法。また、前記(1)及び(2)の培地を含む、う蝕のなりやすさを判定するキット。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
(1) ストレプトコッカス属細菌選択培地にバシトラシンを添加したストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びに(2) ストレプトコッカス属細菌選択培地にモノバクタム系抗生物質を添加したストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地で試料を培養し、培養された培地を観察することにより、う蝕のなりやすさを判定する方法。
【請求項２】
モノバクタム系抗生物質が、アズトレオナムまたはカルモナムであることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
グラミシジンが、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地に添加されていることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ショ糖及び酵母エキスが、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地に添加されていることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
モノバクタム系抗生物質の培地中の濃度が０．０５〜１．０ｇ／Ｌであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
グラミシジンの培地中の濃度が０．１〜１０ｍｇ／Ｌであることを特徴とする、請求項３〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
試料が口腔内をブラッシングした後の含嗽液であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
(1) ストレプトコッカス属細菌選択培地にバシトラシンを添加したストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びに(2) ストレプトコッカス属細菌選択培地にモノバクタム系抗生物質を添加したストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地を含む、う蝕のなりやすさを判定するキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレプトコッカス属細菌を選択的に培養できる培地を使用したう蝕のなりやすさを判定する方法及びう蝕のなりやすさを判定するキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
ストレプトコッカス属細菌のうち、ミュータンス連鎖球菌（mutans streptococci）がう蝕の原因菌として知られている。ミュータンス連鎖球菌は血清型により８種に分類され、またその後のDNAの解析により、ストレプトコッカス・ミュータンス菌（Streptococcus mutans）（血清型c/e/f）、ストレプトコッカス・ソブリヌス菌（Streptococcus sobrinus）（血清型d/g）、ストレプトコッカス・クリセタス菌（Streptococcus cricetus）（血清型a）、ストレプトコッカス・ラタス菌（Streptococcus rattus）（血清型b）及びストレプトコッカス・ダウネイ菌（Streptococcus downei）（血清型h）に分類される。ストレプトコッカス属細菌を選択的に培養できる選択培地としては、ミティス・サリバリウス培地（Mitis Salivarius培地）が知られている（非特許文献１参照）。また、この培地にバシトラシンを添加したバシトラシン添加ミティス・サリバリウス培地がミュータンス連鎖球菌選択培地として使用され、この培地によって、ストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌を選択的に培養できることが報告されている（非特許文献２参照）。また、バシトラシン添加ミティス・サリバリウス培地にグラミシジンを添加した培地によって、バシトラシン添加ミティス・サリバリウス培地と比較して、より選択的にストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌を培養できることが報告されている（特許文献１参照）。さらに、バシトラシン添加ミティス・サリバリウス培地にアズトレオナムを添加した培地によって、ストレプトコッカス・ソブリヌス菌のみを選択的に培養できることが報告されている（特許文献２参照）。
【０００３】
最近の研究により、ストレプトコッカス・ミュータンス菌が単独で存在する場合より、ストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌が共に存在することによってより高頻度にう蝕が発生することが報告されている。従来の方法では、この二菌種を選択的に培養できるバシトラシン添加ミティス・サリバリウス培地に試料を播き、生育するコロニー数から求められる二菌種の合計菌数に基づき、う蝕になる程度を判定するキットが使用されている。しかしながら、このキットではストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌のコロニーを肉眼で判別することが困難であった。このため、上記のようにストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌が共に存在する場合にう蝕になりやすいにも関わらず、一方の菌のみが一定菌数以上生育した場合にう蝕になりやすいと誤って判定されてしまう。また、両方の菌が生育し、う蝕になりやすいにも関わらず、一定菌数未満しか生育しない場合、う蝕になりにくいと判定されてしまう。このように、従来のキットではストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌の合計菌数のみを判定指標としていたため、実際のう蝕のなりやすさと異なる判定となることがあり、より精度の高い判定方法が求められていた。
【特許文献１】特開平１４−２７９７５号公報
【特許文献２】国際公開第０３／０１２０７３号パンフレット
【非特許文献１】Chapman,G.H. 1946 . Am.J.Digest.Dis. 13:105-107
【非特許文献２】Gold,O.G.,H.V.Jordan, and J.van Houte 1973. Arch. Oral Biol. 18:1357-1364
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌の両菌種の存在を確認することによるう蝕のなりやすさを判定する方法及びう蝕のなりやすさを判定するキットの提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、上記従来技術の問題点に鑑み鋭意検討を重ねた結果、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地と、ストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地とを併用することによって、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌の存在を確認することを可能とし、より高い精度でう蝕のなりやすさを判定できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００６】
すなわち、本発明は、以下の方法及びキットを提供するものである。
項１．(1) ストレプトコッカス属細菌選択培地にバシトラシンを添加したストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びに(2) ミュータンス連鎖球菌選択培地にモノバクタム系抗生物質を添加したストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地で試料を培養し、培養された培地を観察することにより、う蝕のなりやすさを判定する方法。
項２．モノバクタム系抗生物質が、アズトレオナムまたはカルモナムであることを特徴とする、項１に記載の方法。
項３．グラミシジンが、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地に添加されていることを特徴とする、項１又は２に記載の方法。
項４．ショ糖及び酵母エキスが、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地に添加されていることを特徴とする、項１〜３のいずれかに記載の方法。
項５．モノバクタム系抗生物質の培地中の濃度が０．０５〜１．０ｇ／Ｌであることを特徴とする、項１〜４のいずれかに記載の方法。
項６．グラミシジンの培地中の濃度が０．１〜１０ｍｇ／Ｌであることを特徴とする、項３〜５のいずれかに記載の方法。
項７．試料が口腔内をブラッシングした後の含嗽液であることを特徴とする、項１〜６のいずれかに記載の方法。
項８．(1) ストレプトコッカス属細菌選択培地にバシトラシンを添加したストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びに(2) ミュータンス連鎖球菌選択培地にモノバクタム系抗生物質を添加したストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地を含む、う蝕のなりやすさを判定するキット。
【０００７】
さらに本発明は下記の方法及びキットも包含する。
項９．ショ糖の培地中の濃度が５０〜３００ｇ／Ｌで、酵母エキスの培地中の濃度が５〜１００ｇ／Ｌであることを特徴とする、項４〜６のいずれかに記載の方法。
項１０．ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地が下記の組成であることを特徴とする、項１〜７及び９のいずれかに記載の方法。
ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                     ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                          ５０〜３００ｇ／Ｌ
酵母エキス                               ５〜１００ｇ／Ｌ
バシトラシン                  ５０〜５００単位／Ｌ
グラミシジン                  ０．１〜１０ｍｇ／Ｌ
ストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                     ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                          ５０〜３００ｇ／Ｌ
酵母エキス                               ５〜１００ｇ／Ｌ
アズトレオナム              ０．０５〜１．０ｇ／Ｌ
バシトラシン                  ５０〜５００単位／Ｌ
グラミシジン                  ０．１〜１０ｍｇ／Ｌ
項１１．ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地が下記の組成であることを特徴とする、項１〜７、９及び１０のいずれかに記載の方法。
ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                 ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                            １５０ｇ／Ｌ
酵母エキス                                 ２０ｇ／Ｌ
バシトラシン                    ２００単位／Ｌ
グラミシジン                        ２ｍｇ／Ｌ
ストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                 ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                            １５０ｇ／Ｌ
酵母エキス                                 ２０ｇ／Ｌ
アズトレオナム                    ０．２ｇ／Ｌ
バシトラシン                    ２００単位／Ｌ
グラミシジン                        ２ｍｇ／Ｌ
項１２．モノバクタム系抗生物質が、アズトレオナムまたはカルモナムであることを特徴とする、項８に記載のキット。
項１３．グラミシジンが、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地に添加されていることを特徴とする、項８又は１２に記載のキット。
項１４．ショ糖及び酵母エキスが、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地に添加されていることを特徴とする、項８、１２又は１３のいずれかに記載のキット。
項１５．モノバクタム系抗生物質の培地中の濃度が０．０５〜１．０ｇ／Ｌであることを特徴とする、項８、１２〜１４のいずれかに記載のキット。
項１６．グラミシジンの培地中の濃度が０．１〜１０ｍｇ／Ｌであることを特徴とする、項１３〜１５のいずれかに記載のキット。
項１７．ショ糖の培地中の濃度が５０〜３００ｇ／Ｌで、酵母エキスの培地中の濃度が５〜１００ｇ／Ｌであることを特徴とする、項１４〜１６のいずれかに記載のキット。
項１８．試料が口腔内をブラッシングした後の含嗽液であることを特徴とする、項８、１２〜１７のいずれかに記載のキット。
項１９．ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地が下記の組成であることを特徴とする、項８、１２〜１８のいずれかに記載のキット。
ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                     ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                          ５０〜３００ｇ／Ｌ
酵母エキス                               ５〜１００ｇ／Ｌ
バシトラシン                  ５０〜５００単位／Ｌ
グラミシジン                  ０．１〜１０ｍｇ／Ｌ
ストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                     ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                          ５０〜３００ｇ／Ｌ
酵母エキス                               ５〜１００ｇ／Ｌ
アズトレオナム              ０．０５〜１．０ｇ／Ｌ
バシトラシン                  ５０〜５００単位／Ｌ
グラミシジン                  ０．１〜１０ｍｇ／Ｌ
項２０．ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地、並びにストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地が下記の組成であることを特徴とする、項８、１２〜１９のいずれかに記載のキット。
ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                 ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                            １５０ｇ／Ｌ
酵母エキス                                 ２０ｇ／Ｌ
バシトラシン                    ２００単位／Ｌ
グラミシジン                        ２ｍｇ／Ｌ
ストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地
ミティス・サリバリウス培地                 ９０ｇ／Ｌ
ショ糖                            １５０ｇ／Ｌ
酵母エキス                                 ２０ｇ／Ｌ
アズトレオナム                    ０．２ｇ／Ｌ
バシトラシン                    ２００単位／Ｌ
グラミシジン                        ２ｍｇ／Ｌ
【０００８】
本発明のう蝕のなりやすさを判定する方法は、ストレプトコッカス属細菌選択培地にバシトラシンを添加したストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地（以下、「ミュータンス／ソブリヌス選択培地」と呼ぶ）、並びにストレプトコッカス属細菌選択培地にモノバクタム系抗生物質を添加したストレプトコッカス・ソブリヌス菌選択培地（以下、「ソブリヌス選択培地」と呼ぶ）で試料を培養し、培養された培地を観察することを特徴とする。また、本発明のう蝕のなりやすさを判定するキットは、ミュータンス／ソブリヌス選択培地、並びにソブリヌス選択培地を含むことを特徴とする。
【０００９】
本発明において、ストレプトコッカス属細菌選択培地は、ストレプトコッカス属細菌を選択的に培養できる培地であれば特に制限されないが、例えばミティス・サリバリウス培地が使用できる。ミティス・サリバリウス培地は、Difco社にて製造されており、以下の表１に示す組成からなっている。なお、ｐＨは６．８〜７．２である。
【００１０】
【表１】
2005058153.tif 000002
本発明において、ミュータンス／ソブリヌス選択培地は、ストレプトコッカス属細菌選択培地をベースにバシトラシンを添加した培地であり、ストレプトコッカス・ミュータンス菌及びストレプトコッカス・ソブリヌス菌を選択的に培養できる限り特に制限されず、常法により製造することができる。さらに、必要に応じて、グラミシジン、コリスチン、ナリジキシン酸、ショ糖、酵母エキス、亜テルル酸カリウムなどを加えることができる。
【００１１】
好ましいミュータンス／ソブリヌス選択培地は、ミティス・サリバリウス培地（９０ｇ／Ｌ）に、バシトラシン（５０〜５００単位／Ｌ）、グラミシジン（０．１〜１０ｍｇ）、ショ糖（５０〜３００ｇ／Ｌ）、酵母エキス（５〜１００ｇ／Ｌ）を加えた培地である。
【００１２】
より好ましいミュータンス／ソブリヌス選択培地の組成を以下の表２に示す。
【００１３】
【表２】
2005058153.tif 000003
本発明においてソブリヌス選択培地は、ストレプトコッカス属細菌選択培地をベースにモノバクタム系抗生物質を加えた培地であり、ストレプトコッカス・ソブリヌス菌を選択的に培養できる限り特に制限されず、常法により製造できる。ここで、モノバクタム系抗生物質としては、アズトレオナム（Aztreonam）（ICNバイオメディカル社等より入手可能）、カルモナムなどが好ましく、アズトレオナムが特に好ましい。また、モノバクタム系抗生物質以外の物質としてバシトラシンを加えることが好ましい。さらに、必要に応じて、グラミシジン、ショ糖、酵母エキス、ホスフォマイシン、塩化ナトリウム、亜テルル酸カリウム（SIGMA社等より入手可能）などを加えることができる。好ましいソブリヌス選択培地は、ミティス・サリバリウス培地（９０ｇ／Ｌ）にアズトレオナム（０．０５〜１．０ｇ／Ｌ）、バシトラシン（５０〜５００単位／Ｌ）、グラミシジン（０．１〜１０ｍｇ）、ショ糖（５０〜３００ｇ／Ｌ）、酵母エキス（５〜１００ｇ／Ｌ）を加えた培地である。
【００１４】
より好ましいソブリヌス選択培地の組成を以下の表３に示す。
【００１５】
【表３】
2005058153.tif 000004
本発明において試料は、含嗽液、唾液、歯垢など口腔内より採取されるものをいい、う蝕のなりやすさを判定するのに利用できるものであれば特に限定されない。
【００１６】
本発明のう蝕のなりやすさを判定する方法を説明する。試料を採取し、そのまま、もしくは生理食塩水などで適当に希釈して、シャーレやプラスチック板などに設置したミュータンス／ソブリヌス選択培地とソブリヌス選択培地とに滅菌済みスポイト等で、それぞれ０．０１〜５ｍＬ、好ましくは０．０５〜０．２ｍＬ程度をかけて、培地上に広げ、３０〜４０℃程度、好ましくは３５〜３７℃程度で１〜７日間程度、好ましくは２〜３日間程度静置培養し、培地上に形成されるコロニーを観察する。コロニーの観察は肉眼により又は虫眼鏡使用等の簡便な方法で可能であり、あらかじめ用意された、菌数が計測された培養培地の写真見本と比較することにより、菌数の程度を評価することができる。従って、ソブリヌス選択培地上のコロニーを観察することにより試料中にストレプトコッカス・ソブリヌス菌が存在するか否か、存在する場合にはその菌数の程度を確認し、ミュータンス／ソブリヌス選択培地上のコロニーを観察することにより試料中にストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌の両方もしくは一方が存在するか否か、存在する場合にはその菌数の程度を確認することができる。両培地にコロニーが観察され、ミュータンス／ソブリヌス選択培地の方に、ソブリヌス選択培地よりも多数のコロニーが観察された場合には、試料中にストレプトコッカス・ミュータンス菌とストレプトコッカス・ソブリヌス菌が存在しており、う蝕になりやすいと判定される。ソブリヌス選択培地のみにコロニーが観察され、ミュータンス／ソブリヌス選択培地にも同等数のコロニーが観察された場合には、試料中にストレプトコッカス・ソブリヌス菌のみが存在しており、う蝕になりにくいと判定される。ソブリヌス選択培地にコロニーが観察されず、ミュータンス／ソブリヌス選択培地のみにコロニーが観察される場合には、試料中にストレプトコッカス・ミュータンス菌のみが存在しており、う蝕になりにくいと判定される。
【００１７】
本発明のう蝕のなりやすさを判定するキットについて説明する。本キットは、ミュータンス／ソブリヌス選択培地と、ソブリヌス選択培地とを備えており、さらに試料を採取するための道具（歯ブラシ、パラフィンワックス、ガムベース等）、試料を希釈するための道具（生理食塩水、緩衝液等）、培地に試料を播くための道具（スポイト等）を備えていることが好ましい。培地を入れる容器は、コロニーを観察することを考慮すると、プラスチック製又はガラス製シャーレ等の透明な容器であることが好ましい。培地を収容する容器は、培地毎に別々の容器であってもよいし、一つの容器中で両培地が接触しないように収容されていてもよい。例えば、一つのシャーレの中央にプラスチック製等の仕切を設けその左右両側に各々の培地を収容した容器や、一枚のプラスチック板の上下両面に培地収容部があり、各々の培地がプラスチック版の上下両面に設置される形態となる容器である。
また、培地の面積は、１〜４００平方センチメートルであることが好ましい。培地の面積がこの範囲にあると、コロニーの観察が容易である点や培地に播く試料を多量に必要としない点で有利である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、う蝕のなりやすさを高精度で判定することが可能となる。特に、う蝕になりにくい者をう蝕になりやすいと判定する誤判定が顕著に減少する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を実施例等を用いてより詳細に説明するが本発明はこれら実施例等に限定されない。
【実施例】
【００２０】
参考例１：ミュータンス／ソブリヌス選択培地の調製
１Ｌの水に、ミティス・サリバリウス培地９０ｇ、ショ糖１５０ｇ及び酵母エキス２０ｇを添加した。得られた培養液をオートクレーブにて１２１℃で１５分間滅菌後、５５℃程度に冷却し、２００単位のバシトラシン（SIGMA社製）及び２ｍｇのグラミシジン（SIGMA社製）を添加した。培養液を十分に攪拌した後、シャーレに分注し、ミュータンス／ソブリヌス選択培地を作製した。
【００２１】
参考例２：ソブリヌス選択培地の調製
１Ｌの水に、ミティス・サリバリウス培地９０ｇ、ショ糖１５０ｇ及び酵母エキス２０ｇを添加した。得られた培養液をオートクレーブにて１２１℃で１５分間滅菌後、５５℃程度に冷却し、２００単位のバシトラシン（SIGMA社製）、２ｍｇのグラミシジン（SIGMA社製）及び０．２ｇのアズトレオナム（ICNバイオメディカル社製）を添加した。培養液を十分に攪拌した後、シャーレに分注し、ソブリヌス選択培地を作製した。
【００２２】
実施例１
歯ブラシによるブラッシングを１分間行い、５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水で３０秒間含嗽し、含嗽液を回収して口腔試料とした。試料は６０名の被験者から回収した。リン酸緩衝生理食塩水で、口腔試料の１０倍段階希釈液を調製し、各希釈溶液を、参考例１で調製したミュータンス／ソブリヌス選択培地及び参考例２で調製したソブリヌス選択培地上に５０μＬずつ塗布した。これらの培地を３７℃で２日間嫌気的に培養した後、成育したコロニーの数から菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）を算出した。
【００２３】
なお、両菌種の存在が確認された場合を陽性（う蝕になりやすい）、一方の菌種のみの存在が確認された場合と両菌種の存在が確認されなかった場合を陰性（う蝕になりにくい）と判定した。また、６０名の被験者に対してう蝕罹患経験を調査し、う蝕歯数が１３本以上である高う蝕者群、う蝕歯数が６〜１２本である中う蝕者群及びう蝕歯数が５本以下である低う蝕者群にグループ分けし、う蝕罹患と判定結果の相関を調べた。
【００２４】
比較例１
１Ｌの水に、ミティス・サリバリウス培地９０ｇ、ショ糖１５０ｇ及び酵母エキス２０ｇを添加した。得られた培養液をオートクレーブにて１２１℃で１５分間滅菌後、５５℃程度に冷却し、２００単位のバシトラシン（SIGMA社製）、２ｍｇのグラミシジン（SIGMA社製）、１ｍＬの１％亜テルル酸カリウム溶液（Difco社製）、１０ｍｇのコリスチン（和光純薬工業社製）及び２ｍｇのナリジキシン酸（和光純薬工業社製）を添加した。培養液を十分に攪拌した後、シャーレに分注し、比較培地を作製した。この培地を用いて実施例１と同じ口腔試料を培養し、菌数を算出した。なお、菌数が１×１０5ＣＦＵ／ｍＬ以上の場合を陽性（う蝕になりやすい）、それ未満を陰性（う蝕になりにくい）と判定し、実施例１と同様にう蝕罹患経験との相関を調べた。
【００２５】
実施例１の結果を表４に示し、比較例１の結果を表５に示す。
【００２６】
【表４】
2005058153.tif 000005
【００２７】
【表５】
2005058153.tif 000006
従来法によれば、本来陰性、即ちう蝕になりにくいと考えられる低う蝕者群（う蝕歯数０〜５本）１９名のうち１６名が陽性として判定された。また、従来法では、被験者６０名のうち５３名が陽性と判定されたが、陽性と判定された被験者の中にはう蝕経験がほとんどない人も含まれていた。これに対し、本発明の方法によれば、低う蝕者群１９名のうち４名が陽性と判定された。本発明の方法は従来法と比較して誤った判定の割合が減少し、より正確な判定が可能であることが確認された。