(57)【要約】    【課題】  細菌感染のリスクを低減させ、しかも安全な微生物を使用した感染防御剤、及び細菌感染のリスクを低減させ、しかも安全な微生物を使用した感染防御作用を有することを特徴とする飲食品又は飼料を提供する。    【解決手段】  細胞外マトリックスの構成成分であるフィブロネクチンに結合性を有し、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）に属する微生物の生菌体、死菌体、または菌体破砕物を有効成分とする感染防御剤。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィブロネクチン結合性を有し、ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)に属する微生物の生菌体、死菌体、または菌体破砕物を有効成分とする感染防御剤。
【請求項２】
感染防御の対象とする病原体が、フィブロネクチン結合性を有する微生物である請求項1記載の感染防御剤。
【請求項３】
感染防御の対象とする病原体が、フィブロネクチン結合性を有し、スタフィロコッカス(Staphylococcus)属、ストレプトコッカス(Streptococcus)属、マイコバクテリウム(Mycobacterium)属に属する微生物である請求項1または2記載の感染防御剤。
【請求項４】
身体ないし体腔の表面における創傷部での病原体感染を予防するものである請求項1〜3のいずれかに記載の感染防御剤。
【請求項５】
ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)に属し、フィブロネクチン結合性を有する微生物の生菌体、死菌体、または菌体破砕物を添加した、感染防御作用を有することを特徴とする飲食品又は飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フィブロネクチン結合性を有し、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）に属する微生物を使用した感染防御剤に関する。また、フィブロネクチン結合性を有し、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）に属する微生物を添加した、感染防御作用を有することを特徴とする飲食品又は飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗生物質の登場により感染症の件数は激減し、感染症は制圧できると考えられてきたが、近年は新しいタイプの感染症の問題が生じている。それは、抗生物質等の薬剤に耐性を有し、薬剤が効かなくなった病原体による感染である。その代表的な例として、メチシリン耐性黄色ぶどう球菌（Meticillin resistant Staphylococcus aureus : MRSA）やバンコマイシン耐性腸球菌（Vancomycin resistant Enterococci: VRE）が知られ、とくに、免疫力の低下した患者が多い病院での院内感染が大きな問題として取り上げられている。これらの新しいタイプの病原体は、抗生物質を頻繁に使用した結果、抗生物質等の薬剤に耐性を有する菌が選択的に濃縮され、増加してきたものと考えられている。
【０００３】
従来、感染症を起こす病原菌に対しては、抗生物質で治療を行ってきたし、上記の薬剤耐性菌に対しても、さらに作用の強い新たな薬剤を投与して治療を行ってきた。しかし、それらの薬剤を使用することによってさらに高い耐性を持つ菌が出現してきており、強い薬剤がより高い耐性を持つ菌を生じさせるという矛盾が生じている。また、抗菌作用の強い薬剤は副作用も強い場合が多く、患者の肝機能、腎機能等に負担を与える点からも懸念がもたれている。そのようなことから現在、従来の薬剤とは違った視点からの感染防御が期待されている。
【０００４】
感染という現象を考えたとき、病原体はいきなり体の中に入り込むわけではない。まず感染する生物の組織に接着し、足場を作ることが必要である。そこで病原体の多くは、効率よく接着するために組織表面の特定の分子に結合する蛋白質を有している。近年、このような接着の標的となる特定の分子群が明らかにされてきており、その標的は糖蛋白質や糖脂質など病原体によって様々であることがわかってきている。それらの中で多くの病原体の標的とされる代表的な分子として細胞外マトリックスが挙げられる。細胞外マトリックスは、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミニンなどで構成されており、組織の細胞間を満たしている高分子群である。
【０００５】
細胞外マトリックスは通常の組織表面でも発現しているが、傷口などでは顕著に露出される。スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）等のブドウ球菌、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptcoccus pyogenes）等の連鎖球菌は傷口にて増殖し、化膿性の炎症を引き起こす菌として知られているが、その感染のきっかけとして傷口に露出したフィブロネクチンに接着することが知られている。このような炎症を引き起こす菌として、他にもスタフィロコッカス・エピデミディス（S. epidemidis）、スタフィロコッカス・ハエモリティカス（S. haemolyticus）、スタフィロコッカス・ヒーカス（S. hycus）、ストレプトコッカス・アガラクティア（S. agalactiea）、ストレプトコッカス・ディスガラクティー（S. disgalactie）などスタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属の多くの菌が知られており、これらは家畜の乳房炎を引き起こす菌としても知られている。また、結核を起こすマイコバクテリウム・ツベルクロシス（Mycobacterium tuberculosis）、牛の法定伝染病として知られるヨーネ病の病原体であるマイコバクテリウム・アビウム・サブスピーシーズ・パラツベルクロシス（Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis）など、マイコバクテリウム属に属する一部の菌種もフィブロネクチンへの接着が認められている。
【０００６】
上記に示した病原体の感染を考えた場合、フィブロネクチンへの接着を抑えることができれば感染を抑制できると考えられるが、現在までフィブロネクチン等の細胞外マトリックスを標的とし、病原体の接着を抑える薬剤は見出されていない。フィブロネクチン結合蛋白質を用いる方法として、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）から抽出したフィブロネクチン結合蛋白質自体を傷口の感染予防に使用する方法が公開されている（例えば、特許文献1参照）。しかし、蛋白質自体を利用する方法では経口投与の場合に胃酸等で分解される恐れがあり、特に腸管からの感染予防に使用することは不適当である。またスタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）は黄色ブドウ球菌とよばれMRSAを引き起こす代表的な悪玉菌であり、病原性を有するため、生菌としての利用が極めて不適当であることは言うまでもない。
【０００７】
一方、体表面や消化管等の体腔内には、病原性を有さない多くの細菌が定着し生息している。腸内乳酸菌はその代表的なものである。それらの菌も組織表面に定着するためには、病原体と同様に組織上の分子に結合することが必要である。したがって、それらの無害な菌の中にフィブロネクチンに結合する種類があれば、上記の病原体と結合部位を奪い合うことで、病原体の接着を抑制し、感染を予防することが可能になる。
【０００８】
乳酸菌に着目した場合、乳酸菌が病原菌の増殖を抑える報告は多く見られる。しかし、それらの多くは現象面だけをとらえたものであり、病原菌の増殖を抑制する作用物質が検討されていても、乳酸菌が産生する有機酸やバクテリオシンの作用に着目したものがほとんどである。一方で、乳酸桿菌のフィブロネクチン結合性についてはラクトバチルス・ロイテリ（Lactobacillus reuteri）、ラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）で報告されている（例えば、非特許文献1及び2参照）。しかし、それぞれの乳酸桿菌のフィブロネクチン結合性について報告したものであって、スタフィロコッカス等の病原体の抑制効果を検討したものではない。また、ラクトバチルス・ブレビスは腸管には到達するが、腸内常在菌ではなく、ヒト腸管に多く棲息して安全性の高いラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）を用いて、このような接着性は検討されていないし、まして細胞外マトリックスを介した病原菌抑制の検討例はない。
【特許文献１】特公平7-47541号公報
【非特許文献１】エス  イー  リングドレン（S.E. Lindgren）外6名、Zentralbl Bakteriol．Vol.277，NO.4、519-28、1992
【非特許文献２】ウッラ ハイノネン(Ulla Hynonen) 外3名、J.Bacteriol. Vol.184、3360-67、2002
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、体表面や消化管等の体腔内における細菌感染のリスクを低減させ、しかも安全な微生物を使用した感染防御剤を提供することを課題とする。また、細菌感染のリスクを低減させ、しかも安全な微生物を添加した、感染防御作用を有することを特徴とする飲食品又は飼料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ヒト腸管の常在菌で無害であるラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)に分類される乳酸菌がフィブロネクチンに強く結合することを明らかにした。そこで、新たな薬剤耐性菌を発生させず、副作用の少ない、接着を介した新しい感染防御剤としての利用について、鋭意研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。したがって本発明は、細胞外マトリックスの構成成分であるフィブロネクチン結合性を有し、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）に属する微生物の生菌体、死菌体、または菌体破砕物を有効成分とする感染防御剤である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、細胞外マトリックスの構成成分であるフィブロネクチン結合性を有し、ラクトバチルス・ガセリに属する微生物の生菌体、死菌体、または菌体破砕物を有効成分とする感染防御剤であって、病原体と体表面や消化管等の体腔内における結合部位を奪い合うことで、病原体の接着を抑制し、感染を予防することが可能になる。
本発明の有効成分であるラクトバチルス・ガセリは、経口投与において安全性の面で大変優れているので、本発明の感染防御剤は、新たな薬剤耐性菌を発生させず、細菌感染のリスクを低減させることを特徴とする。
本発明の感染防御剤は、糖衣錠やタブレットなどの錠剤、顆粒剤、液剤、カプセルなどの形態として利用可能であり、また飲食品や飼料の製造工程中に原材料として添加することもでき、様々な飲食品に利用可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の感染防御剤の特徴は、フィブロネクチンに結合性を有し、ラクトバチルス・ガセリに属する微生物の生菌体、死菌体、または菌体破砕物を有効成分とすることにある。
以下、本発明について詳細に記述する。
【００１３】
乳酸菌は、古来より食品の製造に広く利用されており、チーズ、発酵乳、乳酸菌飲料、発酵バター等の乳製品、キムチや漬物といった食品、発酵ソーセージや発酵サラミなどの畜肉製品を製造する際に用いられている。また、パンのスターターやサイレージのスターターとしても利用されている。さらに最近では、乳酸菌の有する整腸効果等の生理効果が次々と明らかとなり、乳酸菌の菌体自体や乳酸菌培養物等を健康食品や医薬品等の素材として利用するための開発がなされている。このように、乳酸菌の利用は多岐にわたっており、特に、本発明品であるラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）も、近年プロバイオティクス乳酸菌として注目を集めている。
【００１４】
本発明の有効成分であるラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）は、フィブロネクチン接着性を有する菌株であれば、どのような菌株でもよいが、特にラクトバチルス・ガセリSBT2055株はそのフィブロネクチン接着性の高さから最も好ましい。ラクトバチルス・ガセリSBT1848株もフィブロネクチン接着性が高く好ましい。ラクトバチルス・ガセリSBT2055株は工業技術院生命工学工業技術研究所に受託番号FERM P-15535として寄託しており入手可能である。  
【００１５】
菌体の調製方法としては、脱脂乳を基本とした培地、あるいはMRS培地、GYP培地、ブリックス肝臓培地などの公知の半合成培地で当該微生物を培養することにより得ることができる。培養温度は当該微生物が生育可能な温度であれば何℃でも良いが、一般的には37℃が培養に好ましい温度としてあげることができ、この場合には16時間程度の培養で最大量の菌体を得ることができる。
【００１６】
培養方法は、静置培養またはｐHを一定にした中和培養や、回分培養および連続培養など、菌体が良好に生育する条件であれば、特に制限はない。
【００１７】
脱脂乳を基本とした培地で培養した場合は、有効成分の菌体を発酵乳様の発酵物として直接摂取することができる。もちろん凍結乾燥、噴霧乾燥等で乾燥させた後に摂取してもよい。乾燥物の場合、各種食品に練り込むことで利用範囲を広げることができる。また、半合成培地にて培養した場合は、遠心分離にて簡単に菌体のみを調製できる利点がある。この回収菌体をそのまま使用してもよいが、洗浄することにより、培地成分を除去してより純粋な菌体を得ることもできる。そのまま、あるいは凍結乾燥した上で食品に練りこむことも可能であるし、乾燥菌体を使用して直接錠剤を作成することもできる。必要があれば紫外線、ガンマ線等の物理的処理、抗生物質等の化学的処理によって殺菌し、取り扱いの簡単な死菌体の形で使用してもよい。
【００１８】
本発明の感染防御剤は、ラクトバチルス・ガセリの菌体表層に強固に結合して存在する。したがって、菌体を破砕した場合でも遊離することなく破砕物中に残り、感染防御剤として利用することができる。菌体破砕物は例えば半合成培地にて培養後、遠心分離して得た菌体を用いて、超音波、フレンチプレス、アルミナ磨砕等による物理的な処理によって調製することができる。
【００１９】
本発明の有効成分であるラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）は、発酵乳の乳酸菌スターターや整腸剤として既に多く利用されている菌種である。したがって、安全性の面で大変優れていることは明らかである。また、有効成分である生菌体を2週間ラットに摂取させ、急性毒性試験を行った結果でも、LD50は1g/kg以上であり、極めて安全性が高いという結果が得られている。
【００２０】
体表面や消化管等の体腔内に創傷ができると、組織の細胞間を満たしているフィブロネクチン、コラーゲン、ラミニンなどで構成される高分子群である細胞外マトリックスが創傷組織に接触する。この細胞外マトリックスが、結合組織や上皮細胞の基盤となる構造を提供し、創傷が自然治癒するが、ここに化膿球菌などの病原体が取り付くと自然治癒が妨げられる。消化管等の体腔内の創傷に対しては本発明の感染防御剤を経口投与して用いるが、体表面の創傷に対しては、本発明の感染防御剤を液剤やローションとして、傷口に塗布して用いることができる。
【００２１】
本発明の感染防御剤は、糖衣錠やタブレットなどの錠剤、顆粒剤、液剤、カプセルなどの形態として利用可能である。
【００２２】
さらにまた、本発明は、紅茶、緑茶、果汁飲料、野菜飲料等の様々な飲料や乳製品、食肉製品、水産練製品、デザート類、ドレッシング類、健康食品類、麺類等の様々な飲食品に利用可能であり、本発明の有効成分は、飲食品や飼料の製造工程中に原材料として添加することもできる。
【００２３】
本発明の感染防御剤は、通常飲食品中に0.01-10％、好ましくは0.1-1％配合すると良い。0.01％未満であると、感染防御の効果を発揮できないし、一方、フィブロネクチン接着面が限定されるので10％を超えた量を摂取しても効果は変わらない。
【００２４】
本発明の詳細な説明においては、フィブロネクチンに接着する病原菌の代表としてスタフィロコッカス属の菌種、特にスタフィロコッカス・アウレウス(Staphylococcus aureus)を中心に説明するが、本発明はフィブロネクチンに結合性を有する菌であれば、特にこの菌種にこだわるものではない。フィブロネクチンに結合する菌としては、これまでスタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、マイコバクテリウム属に属するものが知られている。
【００２５】
以下に試験例を示す。なお試験例中、特に記載のない試薬については、市販の試薬特級品を使用した。
【試験例１】
【００２６】
（ガセリ菌の腸管細胞Caco-2への接着性）
腸管組織上で接着拮抗が起きるための条件として、ガセリ菌が腸管の表面に接着できることが必要である。そこで、ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株の腸管細胞への接着性について検討した。なお、対照として、ラクトバチルス・ブルガリクス基準株（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus JCM 1002）を使用した。
【００２７】
（実験方法）
ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株をMRS培地（Difco社製）にて37℃で16時間培養した。培養物を遠心分離して菌体を集め、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄した後、10８cfu/mlとなるようにHEPES緩衝化HANK’S balanced salt solution (Sigma社製)に懸濁した。一方、8ウエルのスライドガラス（Nunc：ナルジェ ヌンク インターナショナル社製）上で、ヒト大腸癌由来の上皮細胞Caco-2（ATCC HTB-37）をコンフリュエントになるまで培養し、培養上清を除いた後、HEPES緩衝化HANK'S balanced salt solutionにて2回洗浄した。上記のガセリ菌懸濁液をスライドガラス上の各ウエルに0.2ml添加し、炭酸ガスインキュベーター内で30分間保温して菌を接着させた。PBSで3回洗浄し、未接着の菌体を除去した後、-20℃に冷却したメタノールを0.3ml加えて固定し、グラム染色を行った。顕微鏡観察を行ってランダムに4視野撮影し、細胞に接着している菌数を計測して平均値を求めた。対照として、同様の実験をラクトバチルス・ブルガリクス（JCM1002）にても実施し、結果を比較した。
【００２８】
（結果）
腸管細胞への接着性についての試験結果を図１に示した。ガセリ菌SBT2055株は、腸管由来細胞Caco-2に非常によく接着した。一方、対照としたラクトバチルス・ブルガリクス（JCM1002）では、細胞上に付着した菌はほとんど検出されなかった。わずかに見られた菌も、洗浄しきれなかったものがそのまま固定されて残存したものと考えられる。
【試験例２】
【００２９】
（ガセリ菌株の細胞外マトリックスへの接着性）
ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）5菌株（Lane 1:SBT2055、Lane 2:SBT0290、Lane 3:SBT1702、Lane 4:SBT1848、Lane 5:SBT2439）を用いて、腸管細胞中のどの因子によく接着するのか調べるため、細菌が接着するターゲットとしてよく知られている細胞外マトリックス構成成分との接着性について検討を行った。なお、対象としてラクトバチルス・クリスパトス（L.crispatus JCM5810:Lane 6）を使用した。
【００３０】
（実験方法）
コラーゲン（Sigma製）、フィブロネクチン（BD Biosciences製）等の細胞外マトリックス蛋白質を８ウエルスライドガラス（Erie Scientific Co. USA製）の各ウエルに2.5pmol固定化されるように加えた。モイスチャーチャンバー内で一晩静置した後、スライドガラスを0.1％BSAを含有するリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で緩やかに撹拌しながら洗浄した。ついで２％BSAを含有するPBSで２時間放置することにより、ブロッキングを行った。ウエルを乾燥させたのち、各ウエルに40μlずつ菌液を加え、モイスチャーチャンバー内で２時間静置した。スライドガラスを0.1％BSAを含有するPBSで３回洗浄し、乾燥後、メチレンブルーで染色し、顕微鏡で一定面積に付着している菌数を計数した。
なお、実験に用いたタイプ4コラーゲンは上皮細胞層を支持する、基底膜の主要構成成分で、基底膜の主要構造である、ゆるやかな網目構造のシートを形成し、その上にラミニンなどの他のマトリックス構成蛋白質が結合することで上皮細胞の基底膜への接着を助けているといわれている。また、上皮が傷害を受けたり、老化した細胞がはがれた時に露出し、菌の定着の場になると考えられている。
【００３１】
（結果）
フィブロネクチン接着性の試験結果を図２に、タイプ4コラーゲン接着性の試験結果を図３に示した。供試したラクトバチルス・ガセリ5株中4株はフィブロネクチンに接着性を示した。中でも、SBT2055株、SBT1848株は良好な接着性を示した。タイプ4コラーゲンに対しては、ラクトバチルス・ガセリ5株は接着しなかった。一方、コントロールとしたラクトバチルス・クリスパトス（L.crispatus JCM5810）は、ラクトバチルス・ガセリと性質が異なり、フィブロネクチンよりもタイプ4コラーゲンによく接着した。このことから、少なくとも菌種によって細胞外マトリックス構成蛋白質のどの成分に接着しやすいのかは異なっており、ガセリ菌は特にフィブロネクチンに接着しやすいことが判明した。
【試験例３】
【００３２】
（ガセリ菌のフィブロネクチン接着因子の性質）
これまでの実験結果から、ラクトバチルス・ガセリ菌の表面にフィブロネクチンに接着する因子が存在していると考えられる。実際に利用を考える場合、このフィブロネクチン接着因子が菌体から簡単に離れてしまう性質であれば、作用にばらつきが出て利用しにくい。菌体への結合強度を簡単に評価する方法として、カオトロピック塩で処理することにより、菌体表面に緩やかに疎水結合している蛋白質を菌体表層から遊離させる方法が知られている。そこでラクトバチルス・ガセリSBT2055株に、カオトロピック塩処理を行い、フィブロネクチン接着能が低下するかどうかを検討した。
【００３３】
（実験方法）
カオトロピック塩として2M塩酸グアニジン（GHCl）および5M塩化リチウム（LiCl）を用いた。ラクトバチルス・ガセリSBT2055株の洗浄菌体1×10９あたり1mlの各カオトロピック塩溶液を加え、室温で30分間撹拌した。次いでPBSで３回洗浄後、菌数を調整し、実施例2と同様の試験を実施した。対照としてはPBSで処理した菌体を用いた。
【００３４】
（結果）
フィブロネクチン接着因子の性質についての試験結果を図４に示した。2M塩酸グアニジン（GHCl）および5M塩化リチウム（LiCl）のカオトロピック塩を用いて菌体を処理した場合でも、SBT2055株のフィブロネクチン接着性に変化はみられなかった。したがって、フィブロネクチン接着に関与している因子の性質として、菌体の細胞壁に強固に結合しているものであることが示された。
【試験例４】
【００３５】
（ヒトでの摂取試験）
ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株のスタフィロコッカス抑制作用を調べるため、健康成人を使って以下の摂取試験を実施した。
【００３６】
（凍結乾燥菌末の作製）    
ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株を20LのMRS培地（Difco社製）にて37℃、１晩培養し、遠心分離にて菌体を集菌した。得られた菌体を、滅菌蒸留水にて3回洗浄した後、10％の還元脱脂乳に懸濁した。懸濁物を凍結乾燥した後、乳鉢で軽く粉砕し、凍結乾燥菌末を得た。
【００３７】
（摂取試験）
得られた凍結乾燥菌末を1日1回2g、1週間、ボランティア被験者に摂取してもらい、試験開始前と、試験開始1週後の糞便を採取した。糞便を希釈水にて段階的に希釈した後、M110寒天培地（BBL）に塗抹し、培養することによって糞便中のスタフィロコッカス属の菌数を選択的に計測した。培養は好気性条件下で37℃、48時間行った。
【００３８】
（統計解析）
得られた測定値について、試験開始前と試験開始1週後の測定値に対して、対応のあるt検定を実施し、統計的な有意差を確認した。
【００３９】
（試験結果）
試験の結果を図５に示した。程度の差はあるが、ガセリ菌2055株の摂取1週間後では8名全ての被験者でスタフィロコッカス属の菌数が減少した。対応のあるt検定を行った結果、この減少は危険率1％で有意であった。
【００４０】
（摂取試験結果のまとめ）
スタフィロコッカス属の菌はフィブロネクチン結合性を有し、組織に接着することが知られている。上記の摂取試験の結果、フィブロネクチン結合性を有するラクトバチルス・ガセリSBT2055株の凍結乾燥菌末を摂取した場合、1週間後の糞便中のスタフィロコッカス属菌数は有意に減少した。このことから、フィブロネクチン結合性を有するラクトバチルス・ガセリSBT2055株がスタフィロコッカスのフィブロネクチン結合の阻害に関与し、スタフィロコッカス属菌数を減少させていることが示された。
以下に実施例を示す。
【実施例１】
【００４１】
ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株をMRS液体培地（Difco社製）５Lに５重量％接種後、37℃、18時間静置培養を行った。培養終了後、遠心分離を行い、培養液の1／50量の濃縮菌体を得た。次いで、この濃縮菌体を脱脂粉乳10％、グルタミン酸ソーダ１％からなる分散媒と同量混合し、pH7.0に調整後、凍結乾燥を行った。得られた凍結乾燥物を60メッシュのふるいを通して粉体化し、本発明の凍結乾燥菌末（本発明品Ａ）を得た。この凍結乾燥菌末（本発明品Ａ）におけるラクトバチルス・ガセリSBT2055株の菌数は、1×1011／ｇであった。
【実施例２】
【００４２】
ラクトバチルス・ガセリSBT-2055（FERM P-15535）株をヨーグルトミックス（生乳に２％脱脂粉乳を添加し溶解した後、ホモジナイザーで均質化し、100℃、10分間加熱した後、41℃まで冷却）に５重量％接種し、100ｇずつカップに充填後、37℃で６時間培養し、本発明の発酵乳（本発明品Ｂ）を調製した。
【実施例３】
【００４３】
ラクトバチルス・ガセリSBT-2055（FERM P-15535）株を食用可能な合成培地（酵母エキス0.5％、トリプチケースペプトン0.1％添加）1Lに3重量％接種し、37℃で16時間培養した。遠心分離で菌体を回収し、200mlの蒸留水に懸濁した後、超音波破砕機（TOMY製、UD200）を用いて、出力7、30秒処理を10回繰り返し菌体を破砕した。破砕物を遠心分離にて集め、凍結乾燥を行って本発明の菌体破砕物粉末（本発明品Ｃ）を調製した。
【実施例４】
【００４４】
10％脱脂乳培地にてそれぞれ継代培養を行った、ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株、ラクトバチルス・ブルガリクス基準株、ストレプトコッカス・サーモフィルスSBT1035（FERM P-16945）株を、各５重量％ずつ95℃、10分間殺菌したヨーグルトミックス（乳脂肪0.5％の脱脂乳）に接種して混合し、100ｇずつカップに分注した後、37〜40℃にて発酵させた。乳酸酸度が0.7％になった時点で発酵を終了し、10℃以下で1晩冷却して本発明の発酵乳を調製した。
【実施例５】
【００４５】
ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株を食用可能な合成培地（0.5％酵母エキス、0.1％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、38℃で15時間培養後、遠心分離で菌体を回収した。この菌体１ｇを乳糖５ｇと混合し顆粒状に成形して本発明の顆粒剤を得た。この顆粒剤におけるラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株の菌数は、約2×1010/gであった。
【実施例６】
【００４６】
第13改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株の凍結乾燥菌末（本発明品Ａ）10ｇにラクトース（日局）400ｇ、バレイショデンプン（日局）600ｇを加えて均一に混合し、本発明の散剤を製造した。
【実施例７】
【００４７】
第13改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例３で得られたラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株の菌体破砕物粉末（本発明品Ｃ）10ｇにラクトース（日局）400ｇ、バレイショデンプン（日局）600ｇを加えて均一に混合し、本発明の散剤を製造した。
【実施例８】
【００４８】
10％脱脂乳溶液を85℃で25分間殺菌した後、ホモゲナイズし、冷却した。これにスターターとしてラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM   P-15535）株の純培養物を3.5％加え、38℃で16時間発酵させ、乳酸含量２％の酸乳（脱脂乳培地における培養物）を得た。ついで、生じたカードを砕きながら、５℃に冷却し、これを酸乳とした。別に、蔗糖 15％のほかに適量の酸味料、香料、色素を含有する糖液を調合し、ホモジナイズし、80℃で25分間殺菌した後、５℃に冷却し、糖液とした。このようにして得た酸乳30部に対して糖液70部の割合で混合して本発明の酸乳飲料を得た。
【実施例９】
【００４９】
ビタミンＣ40ｇまたはビタミンＣとクエン酸の等量混合物40ｇ、グラニュー糖100ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物60ｇに、上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株の凍結乾燥菌末（本発明品Ａ）40ｇを加えて混合した。混合物を１袋1.5ｇずつ袋に詰め、本発明のスティック状栄養健康食品を150袋製造した。
【実施例１０】
【００５０】
上記実施例１で得られたラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM  P-15535）株の凍結乾燥菌末（本発明品Ａ）50ｇ、ラクトース140ｇ、シュガーエステル８ｇ、カルボキシメチルセルロース２ｇを混合し、圧縮錠剤機（富士薬品機械 Y-5010-Q）により圧縮して(条件１〜４ton)、本発明の錠剤200個を製造した。
【実施例１１】
【００５１】
上記実施例３で得られたラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株の菌体破砕物粉末（本発明品Ｃ）を用いて、表１に示す組成の本発明の化粧水を常法により製造した。単位は重量％である。
【００５２】
〔表１〕
──────────────────────────────    
グリセリン                                         3 
1,3−ブチレングリコール                            3
モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン         0.5
パラオキシ安息香酸メチル                           0.15
クエン酸                                           0.1
クエン酸ソーダ                                     1
香料                                               0.05
菌体破砕物粉末（本発明品Ｃ）                       0.2
精製水                                            92
─────────────────────────────
【実施例１２】
【００５３】
上記実施例３で得られたラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株の菌体破砕物粉末（本発明品Ｃ）を用いて、表２に示す組成の本発明のクリームを常法により製造した。単位は重量％である。  
【００５４】
〔表２〕
─────────────────────────────
サラシミツロウ                                      4
セタノール                                          3
スクワラン                                         10
ラノリン                                            2
ステアリン酸                                        1
モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン          1.5
モノステアリン酸グリセリル                          3
1,3−ブチレングリコール                             6
パラオキシ安息香酸メチル                            1.5
香料                                                0.1
菌体破砕物粉末（本発明品Ｃ）                        0.5
精製水                                             67.4
──────────────────────────────
【実施例１３】
【００５５】
収穫したアルファルファ材料草を軽く乾燥し、マウントカッターで15〜25ｍｍに切断し、ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM  P-15535）株の純培養物を10５cfu/材料草gとなるように接種した。サイレージ用フィルムで包装し、30℃で10日間貯蔵して、本発明のサイレージを調製した。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株及びラクトバチルス・ブルガリクス基準株（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus JCM 1002）の腸管細胞への接着性についての試験結果を示す。
【図２】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）5菌株及びラクトバチルス・クリスパトス（L.crispatus JCM5810）のフィブロネクチン接着性の試験結果を示す。
【図３】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）5菌株及びラクトバチルス・クリスパトス（L.crispatus JCM5810）のタイプ4コラーゲン接着性の試験結果を示す。
【図４】カオトロピック塩を用いてラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）菌体を処理したフィブロネクチン接着因子の性質についての試験結果を示す。
【図５】ラクトバチルス・ガセリSBT2055（FERM P-15535）株のスタフィロコッカス抑制作用についての試験結果を示す。
【符号の説明】
【００５７】
(図４)
PBS  ：リン酸緩衝生理食塩水
LiCl ：5M塩化リチウム
GHCl ：2M塩酸グアニジン
(図５）
AからHは被験者を表す。
【図１】
2005225841.tif 000002
【図２】
2005225841.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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