(57)【要約】【課題】  本発明の目的は、ＤＨＮＡの安定向上のために、優れた安定化剤を提供することにある。【解決手段】  エリソルビン酸を、ＤＨＮＡとともに併用することで、ＤＨＮＡの安定化が可能となる。医薬品、飲食品として、ヒトや動物に直接投与ないしは摂取することで、ＤＨＮＡの種々の効果を期待することができる。また、ビフィズス菌数計測用の選択培地に利用することもできる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エリソルビン酸を有効成分とする１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸の安定化剤。
【請求項２】
エリソルビン酸が、遊離の酸、エステル、塩からなる群より選ばれる少なくとも１種であること、を特徴とする請求項１記載の安定化剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載の安定化剤を医薬品の容量に対し０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上含有してなること、を特徴とする１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸含有医薬品。
【請求項４】
請求項１又は２記載の安定化剤を飲食品の容量に対し０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上含有してなること、を特徴とする１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸含有飲食品。
【請求項５】
請求項１又は２記載の安定化剤を分析用剤の容量に対し０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上含有してなること、を特徴とする１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸含有分析用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸の安定化に関する技術に係わり、更に詳しくは、エリソルビン酸及びそのエステル又はそれらの塩が有する１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸の安定化作用に関するものであって、１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸とともに医薬品、飲食品等に添加することによって、１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸の活性維持に利用されるものである。
【背景技術】
【０００２】
本発明の出願人により、先にプロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属菌から１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸（以下、ＤＨＮＡと称す）を大量に産生させ、この培養物から採取したＤＨＮＡ含有組成物、又はＤＨＮＡもしくはその塩が、腸内フローラの改善や牛乳不耐症患者にみられる腹部不快症状を低減する作用を有し、さらには骨芽細胞の分化と機能発現を促進し、破骨細胞の形成を抑制することから、代謝性骨疾患の予防治療等にも有用であることが報告されている（特許文献１）。
【０００３】
一方、ＤＨＮＡのこれらの効果を期待し、飲食品、医薬品等に適用する場合、製造時や保存中、ＤＨＮＡの残存量が大幅に減少するという欠点がある。そこで、本発明の出願人は、ＤＨＮＡを含む溶液において、液中の溶存酸素を減少せしめることで、ＤＨＮＡを安定化する方法を既に出願している（特許文献２）。また、その他の方法として、アスコルビン酸、次亜硫酸、無水酢酸が有するプロピオニバクテリウム属菌に由来するビフィズス因子の活性増強・安定化効果（特許文献３）をＤＨＮＡの安定化に適用する方法も考えられるが、前者の場合、溶液が粘性の高い液状物になると、溶存酸素の除去が難しい、後者の場合には、使用することで食品が褐色化する、あるいはまた、食品添加物として認められていないため使用できない、などの問題が残されていた。
【特許文献１】ＷＯ０３／０１６５４４
【特許文献２】特願２００３−８４８２７
【特許文献３】特開平１０−１０８６７２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、取り扱いに優れ、特定の物に限定されることなく、各種食品、医薬品等に幅広く適用可能かつ優れた安定化作用を有するＤＨＮＡの安定化剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、上記した目的を達成するためになされたものであって、本発明者等は、ＤＨＮＡの安定化につき鋭意研究を重ねた結果、アスコルビン酸の異性体として知られるエリソルビン酸（イソアスコルビン酸と呼ぶ場合もある）に、ＤＨＮＡに対し優れた安定化作用を有することを見いだした。さらに、アスコルビン酸を添加した場合に生じる褐色化を、アスコルビン酸に代えエリソルビン酸を添加することで、低減もしくは抑制できることを見いだし、本発明を完成するに至った。なお、エリソルビン酸は、抗酸化剤として広く知られているが、エリソルビン酸をＤＨＮＡの安定化に用いるといった例は見当たらない。
【０００６】
本発明は以下の（１）から（５）に関するもので、本発明について詳しく説明する。
（１）エリソルビン酸を有効成分とする１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸の安定化剤。
（２）エリソルビン酸が、遊離の酸、エステル、塩からなる群より選ばれる少なくとも１種であること、を特徴とする前記（１）に記載の安定化剤。
（３）前記（１）又は（２）に記載の安定化剤を医薬品の容量に対し０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上含有してなること、を特徴とする１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸含有医薬品。
（４）前記（１）又は（２）に記載の安定化剤を飲食品の容量に対し０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上含有してなること、を特徴とする１，４−ジヒドロキシ−２−ナフトエ酸含有飲食品。
（５）前記（１）又は（２）に記載の安定化剤を分析用剤の容量に対し０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上含有してなること、を特徴とする１，４−ジヒロドキシ−２−ナフトエ酸含有分析用剤。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、エリソルビン酸をＤＨＮＡの安定化剤として提供することが可能となった。エリソルビン酸をＤＨＮＡとともに併用し、医薬品、飲食品の形態でヒトや動物に直接投与ないしは摂取することで、ＤＨＮＡの種々の効果を期待することができる。また、ＤＨＮＡを使用したビフィズス菌数計測用の選択培地に利用することもできる。
【０００８】
そして、エリソルビン酸は、ＤＨＮＡの安定化に加え、褐色化を低減できるという特徴を有し、さらにまた、アスコルビン酸より遙かに安価のため、経済的利点も非常に大きい。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明において使用する物質（本発明物質）は、エリソルビン酸があげられる。また、エリソルビン酸の遊離の酸のほか、脂肪酸エステルその他各種のエステル類、アルカリ（土類）金属塩（ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム塩その他）その他の塩類も同様に使用することができる。
【００１０】
本発明においてＤＨＮＡとは、有機化学合成法により得られたＤＨＮＡの他、プロピオニバクテリウム属に属する細菌を始め、ＤＨＮＡ産生菌によって菌体及び／又は菌体外に産生されるＤＨＮＡであってもよく、当該微生物の培養液から単離精製された純粋な化合物のほか、粗製物、含有物も含有され、更にまた、この微生物を培養して得られる微生物菌体、培養液（培養上清）、培養物、これらの処理物（濃縮物、ペースト化物、乾燥物、希釈物等）であってもよい。
【００１１】
本発明物質は、ＤＨＮＡの活性維持に対し、非常に安定した効果が得られることから、ＤＨＮＡと併用することで、例えば、腹部不耐症状改善組成物、骨代謝改善組成物として、医薬タイプ、飲食品タイプ、及び／又は、分析用剤タイプのそれぞれの形態で利用することができる。
【００１２】
本発明物質を医薬品として使用する場合には、本発明物質をＤＨＮＡと共に種々の形態にして投与する。その投与形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与をあげることができるが、特に腸溶性カプセル剤が有効である。これらの各種製剤は、常法にしたがって主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤等の医薬の製造技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００１３】
本発明物質は、経口投与によって所期の目的を達成しうるので、本発明物質を、飲食品タイプとして使用することができる。そのためには、本発明物質を通常飲食品に用いる各種補助剤、飲食品用原料を用いて、ドリンク、錠剤、その他の飲食品タイプにしたり、飲食品に直接添加する等、各種の方法を利用することができる。
【００１４】
飲食品としては、具体的に、乳、乳製品を含有する飲料、乳酸菌飲料、豆乳、野菜汁、果汁（これらを含有する飲料を含む）、緑茶、紅茶、烏龍茶等の茶飲料、コーヒー飲料、ココア飲料の他、アミノ酸、ビタミン等を含み、特にスポーツ時の水分補給や栄養補給に適したスポーツ飲料や、健康増進を目的とし栄養成分が強化された栄養飲料、炭酸飲料等の清涼飲料、アルコール飲料、スープ、味噌汁、澄まし汁などの汁物類を始め飲用として食すことができる食品の他、これらをゼリー状、ゲル状、フリーズドライ状等に加工したものやとろみをつけたもの、ヨーグルト、チーズ、クリーム、バター、アイスクリーム、調製粉乳等の乳製品、スプレッド、ジャム等のペースト類、ゼリー、プリン、ババロア等のデザート類、マヨネーズ、ドレッシング等の調味料類、流動食等をあげることができ、これらを摂取することで、ＤＨＮＡの種々の効果を期待することができる。そして、本発明物質は、長期保存の場合にも十分な効果を発揮するため、長期間熟成貯蔵するチーズに最適である。また、特定保健用食品、保健機能食品等の機能性食品を含む栄養食品として、栄養剤、健康食品等として市販に供することもできる。
【００１５】
さらに、ＤＨＮＡは、ビフィズス菌の増殖を特異的に促進しコロニーを形成させることから、ビフィズス菌選択用培地として、本発明物質及びＤＨＮＡを併用することで、ビフィズス菌のみのコロニーが速やかに形成され、ビフィズス菌含有試料中のビフィズス菌数を正確に計測することが可能となる。しかもこの効果は、選択剤として硫酸パロモマイシン、硫酸ネオマイシン等の抗生物質のほか、プロピオン酸塩、塩化リチウムその他既知のどのような選択剤を使用しても奏されるので、本発明物質及びＤＨＮＡを含有してなるビフィズス菌アッセイ用選択培地は広範なアッセイ用途に有効に利用することができる。このために、本発明物質、及び必要があれば培地成分、その他必要な試薬をセットにした分析キットを組み、これを市販に供することができる。
【００１６】
本発明物質の含有量は、ＤＨＮＡを含有する素材、医薬品、飲食品等の容量に対し、０．０１％（Ｗ／Ｖ）以上、好ましくは０．０４％（Ｗ／Ｖ）以上、より好ましくは０．１％（Ｗ／Ｖ）以上とすることが適切である。
【００１７】
このように、本発明物質は、ＤＨＮＡと併用し、種々の形態にして直接投与ないし摂取、ないしは培地等に用いることで、ＤＨＮＡを安定化することができる。これらには、ＤＨＮＡの製造工程において本発明物質を使用すること、また、得られたＤＨＮＡを本発明物質で安定化すること、さらにまた、ＤＨＮＡを含有する医薬品、飲食品の製造に本発明物質を使用することを含む。
【実施例】
【００１８】
以下、本発明を試験例、実施例を挙げて詳細に説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。
【００１９】
[試験例１]（チーズ中に含まれるＤＨＮＡ含量の測定法）
試料１０．０ｇをビーカーに採取する。１０％-アスコルビン酸ナトリウム水溶液１ｍｌ、イオン交換水１８．８ｍｌ、５３．５％ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ水溶液（W/V）０．１ｍｌ、１７．２％Ｋ4Ｆｅ（ＣＮ）6・３Ｈ2Ｏ水溶液０．１ｍｌ←林課長に確認しますを加え、撹拌する（ULTRA-TURRAX T-25,8000rpm×1min）。１Ｎ-ＨＣｌでｐＨ４．６に調整し、メタノールを３０ｇ添加する。一次ろ過後(ADVANTEC No.5A)、精密ろ過する(MILLIPORE0.45μmメンブランフィルター)。ろ液をＨＰＬＣ（カラム：Cadenza CD-C18（4.6×150mm、インタクト（社）製）、移動相：アセトニトリル、メタノール、蒸留水及び酢酸（15:25:190:0.1、vol/vol/vol/vol、アンモニア水溶液でｐＨ７に調整 )、検出器：ＵＶ検出器、検出波長：２５４ｎｍ、流速：１．０ｍｌ/ｍｉｎ、カラム温度：４５℃、試料注入量：１５０μｌ）に供する。検量線は、ＤＨＮＡ標品(046-22422、和光純薬工業（社）製）の1 ｍｇ／ｍｌ（メタノール溶液）標準原液を調製し、メタノールで適宜希釈した溶液を用いて作成する。
【００２０】
[試験例２]（プロピオン酸菌乳清発酵物に含まれるＤＨＮＡ含量の測定法）
試料１０ｍｌを４００ｍｌメスフラスコに採取する。１％-アスコルビン酸ナトリウム水溶液：メタノール＝１：１でメスアップする。５ｍｌ採取し、１０ｍｌ遠沈管に移し遠心分離する(久保田テーブルトップ遠心機KUBOTA5100,3000rpm×3min)。上清をろ過し(MILLIPORE0.45μmメンブランフィルター)、ＨＰＬＣサンプルとし、試験例１と同様の方法で測定する。
【００２１】
[実施例]
表１に示す配合で、ニュージーランドチェダーチーズを粉砕してチーズ溶融釜に入れ、プロピオン酸菌乳清発酵物（ホエー粉培地でWO03/016544-A1実施例２に準じて製造。DHNAとして10μg/ml含有）、チーズ乳化剤としてポリリン酸ナトリウム、安定化剤としてエリソルビン酸ナトリウムを１．０％、水をそれぞれ添加した後、常法にしたがって、チーズ溶融釜のジャケットに蒸気を通じて、２００ｍｍＨｇ/ｃｍ2の減圧下で脱気しつつ撹拌して、８７℃まで昇温して溶融した。溶融チーズを酸素透過度の低いプラスチックフィルム包材（旭化成プロダクツ製「飛竜」）に密封充填し、平板状に整形、冷却してＤＨＮＡ含有チーズを得た。これを５ヶ月間１０℃および３０℃で保存し、１ヶ月ごとにＤＨＮＡ含量を測定し、チーズ内部の色調の変化も観察した。
【００２２】
【表１】
2005225794.tif 000002
【００２３】
[比較例]
表１に示す配合で安定化剤としてエリソルビン酸ナトリウムの代わりにアスコルビン酸ナトリウムを１％添加する以外は実施例と同様の操作で比較例を得た。これを５ヶ月間１０℃および３０℃で保存し、１ヶ月ごとにＤＨＮＡ含量を測定し、実施例と比較した。
【００２４】
製造直後でエリソルビン酸ナトリウム添加で９７％、アスコルビン酸ナトリウム添加で９５％残存し、保存と共に徐々に減少したが、５ヶ月後エリソルビン添加１０℃保存で５６％、アスコルビン酸ナトリウム添加１０℃保存で４７％残存していた。この結果より、長期保存の場合、ＤＨＮＡの保存性向上に対して、実施例は比較例より効果が高いことが確認された（表２）。また、比較例は、３０℃保存の時、保存日数１ヶ月で褐色化がみられ、商品としての価値が低下したのに対し、実施例は比較例に比べ明らかに褐色化が抑えられた。
【００２５】
【表２】
2005225794.tif 000003
【産業上の利用可能性】
【００２６】
ＤＨＮＡ添加食品に、エリソルビン酸を使用することで、ＤＨＮＡの安定化に加え、保存時に起こりうる褐色化を抑制することができる。また、エリソルビン酸は、アスコルビン酸より供給が安定かつ安価なため、コストの軽減を図ることができる。