(57)【要約】【課題】  放射性物質を腫瘍細胞に運ぶために、それを運ぶ物質及びその物質と放射性物質とを結合する結合剤が必要であるが、これらの運ぶ物質及び結合剤によっては生体に悪影響を与える場合もある。【解決手段】  放射性物質をそれを運ぶ物質である化学物質、抗体、タンパク質、脂質等により腫瘍細胞に沈着させるのではなく、９０ＹＣＬ３溶液の希釈液中の放射性物質の９０Ｙ３＋を単独に血液を経て腫瘍細胞に沈着させ、その細胞の細胞分裂を停止することができる治療剤。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
９０ＹＣＬ３を溶解したことからなる、９０Ｙ３＋を単独で使用することによる腫瘍細胞に治療効果を有する治療剤。
【請求項２】
９９．５％以上の９０Ｙ３＋を含有する塩化イットリウム溶液をクエン酸等の有機酸緩衝液又はリン酸等の無機酸緩衝液を用いてｐＨ調整したことからなる請求項１記載の治療剤。
【請求項３】
体重１Ｋｇ当たり、１４８ｋＢｑ（４μＣｉ）〜１４．８ＭＢｑ（４００μＣｉ）の
９０Ｙ３＋を含む９０ＹＣＬ３溶液の希釈液が静脈から注入される請求項１又は２記載の治療剤。
【請求項４】
血液循環だけで腫瘍等に集積する特性を有する９０Ｙ３＋を含んだ塩化イットリウム溶液からなる請求項１乃至請求項３のいずれかに記載の治療剤。
【請求項５】
血管内注射後３０分以内に効果を表す即効性を有する９０Ｙ３＋を含んだ塩化イットリウム溶液からなる請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、９０ＹＣＬ３溶液の放射性物質９０Ｙ３＋を単独で使用することにより、腫瘍細胞の増殖抑止効果を示す治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、放射性物質を用いた新生物増殖阻害については、外部から放射線を照射する方法、又は対象となる部位に放射性物質を運ぶ物質と放射性物質とを結合させ、限定された対象部位に直接障害を与える対象部位投与方法が知られている（例えば、非特許文献１）。
【０００３】
対象部位細胞に放射性物質を運ぶ物質としては、生体外化学物質、抗体等のたんぱく質、脂質等が知られているが、これらの物質を使用する場合には、その物質と放射性物質とを結合する結合剤が必要である。しかし、これらの運ぶ物質及び結合剤によっては生体に悪影響を与える場合もあるので、これらの運ぶ物質及び結合剤の探索が困難であり、なかなか目的とするものを見出せないという問題がある。
【０００４】
これらの具体的な治療剤として、肝癌等の治療において、優れた腫瘍集積性と腫瘍細胞殺傷能力を有し、生体に投与しても問題がなく、簡便に調合し得る腫瘍治療剤として、（ａ）９０Ｙ放射性金属元素等の放射性物質、（ｂ）ナフチリジン誘導体、ピリドピリミジン誘導体及びクペロン同族体から選ばれる金属キレート試薬、並びに（ｃ）腫瘍集積性油性溶媒からなる治療剤が知られている（例えば、特許文献１）。
【０００５】
更に又、９０Ｙ等の放射性金属を哺乳動物宿主内の標的部位に送達する治療剤として、置換金属キレート有機化合物が使用されることも知られている（例えば、特許文献２）。
【非特許文献１】国際放射線防護委員会（ICRP）のICRP刊行物、ICRP pub．30
【特許文献１】特開平9−169668号公報
【特許文献２】特公表2002−500629号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、骨肉腫等の腫瘍細胞の治療において、従来のように放射性物質とそれを運ぶ物質、結合剤等とを結合させずに、腫瘍細胞に放射性物質を単独に沈着させ、その細胞の分裂を阻害させる腫瘍治療剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一般的に、腫瘍細胞に限らず、細胞は放射線を受けることによりＤＮＡ等が損傷して細胞分裂を停止するが、本発明の治療剤は、希釈された９０ＹＣＬ３溶液を単独で静脈血管から注射することにより、腫瘍細胞の細胞分裂を阻害することができるものである。
【０００８】
即ち、従来のように、放射性物質とそれを運ぶ物質である化学物質、抗体、タンパク質、脂質等により腫瘍細胞に沈着させるのではなく、本発明においては、９０ＹＣＬ３溶液中の放射性物質の９０Ｙ３＋を単独に血液を経て腫瘍細胞に沈着させ、その細胞の細胞分裂を阻害させるものである。
【０００９】
又、本発明の治療剤による細胞分裂の阻害は、注射後３０分以内に即効性が認められ、その際の細胞分裂の阻害割合は、９０ＹＣＬ３溶液の放射能濃度が高いほど、又静脈注射してからの経過時間が長い程その効果が認められる。更に又、本発明の治療剤は、９０Ｙ３＋を含有する塩化イットリウム溶液をクエン酸等の緩衝液を用いて希釈することにより得られる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の治療剤を血管に注射することにより、骨肉腫細胞等の分裂阻害を行うことができ、又９０Ｙの半減期が64.1時間と極めて短いことにより、本発明の治療剤の投与後における正常細胞の放射線障害からの回復が可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
（９０ＹＣＬ３溶液の調整）
塩化イットリウム（９０ＹＣＬ３）溶液は、ＡＥＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＱＳＡ  Ｇｍｂｈ（ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ  ｇｅｒｍａｎｙ）製でコード番号ＹＡＳＢ１１３２３のものを使用した。この９０ＹＣＬ３は、その半減期が６４．１時間であり、そのベータ線最大エネルギーが２．２８ＭｅＶである純ベータ線放出核種である。この塩化イットリウム溶液は、ｐＨ２．０〜３．０有機酸緩衝液（０．０５ｍｏｌ/Ｌ）を用いて種々の濃度に希釈されることにより、本発明の細胞分裂停止剤の治療剤溶液が調整される。
【００１２】
（細胞分裂阻害能力の判定）
本発明の治療剤を使用した場合の細胞分裂阻害能力の判定は、［２−１４Ｃ］Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（１４Ｃチミジン）を用いて行われた。この［２−１４Ｃ］Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅは、アマシャムファルマシアバイオテク社製で、コード番号ＣＦＡ２１８９  ｂａｔｃｈ  ２６６で市販されている。
【００１３】
即ち、本発明の治療剤がマウスに注射された後に、前記チミジンがと殺１０分前に注射される。がん細胞の細胞分裂が活発であればこのチミジンがその分裂細胞に取り込まれる。チミジン投与後マウスをと殺し、マウスから腫瘍組織細胞を摘出する。その分裂細胞に取り込まれたチミジンの１４Ｃをミクロオートラジオグラフィを用いて、その１４Ｃの強度を確認することによりがん細胞の分裂阻害効果を判定した。
【００１４】
この判定は、（株）生体科学研究所が開発した２次元迅速判定法（特願２００２−５３４８２７号）により行われ、この方法により判定される細胞分裂阻害率（％）は、次の式により示される。
分裂阻害率（％）＝（１−（９０Ｙ投与群での銀粒子数/対象群での銀粒子数））×１００
（植え付けられるがん細胞の種類：ヒト骨肉腫由来細胞株：Ｈｕ０９）
このＨｕ０９は、財団法人ヒューマンサイエンス振興財団から購入された。この細胞株をねずみに植え付ける際には、Ｈｕ０９をＫａｗａｉの方法に従って培養した。即ち、培養液ＲＰＭＩ−１６４０（１０％牛胎児血清入り）を用いて３７℃の５％ＣＯ２インキュベータ内で単層培養し、その培養されたがん細胞懸濁液が使用された。
【００１５】
（細胞分裂阻害剤を含有した治療剤の効果を評価した写真）
図１は、腫瘍細胞に９０ＹＣＬ３が１０μＣｉ投与された結果、腫瘍細胞の分裂が阻害されていることを示す写真であり、この場合は、腫瘍細胞の分裂が阻害されているので、
１４ＣチミジンがＤＮＡに取り込まれていないことを示している。これにより、本発明の治療剤の投与により腫瘍細胞の分裂が阻害されることを示している。
【００１６】
図２は、腫瘍細胞に９０ＹＣＬ３が投与されていない結果、腫瘍細胞の細胞分裂が活発に行われているのを示す写真であり、この場合は、１４ＣチミジンがＤＮＡに取り込まれていることを示している。これにより、本発明の治療剤が投与されていない場合には腫瘍細胞が細胞分裂（増殖）していることを示している。即ち、図２は本発明の治療剤が投与されていない場合の写真であり、この場合には、腫瘍細胞の細胞分裂が活発に行われているので、１４ＣチミジンがＤＮＡに取り込まれていることにより銀粒子（黒点）が形成される。この銀粒子は、チミジンに含まれる１４Ｃからの放射線が写真乳剤上のハロゲン化銀を還元させて析出した銀粒子であり、この銀粒子を見ることにより間接的にチミジンが存在することが判断できる。
【００１７】
（試験動物の飼育）
ＢＡＬＢ/ｃ系ヌードマウスを日本クレア株式会社から４〜５週齢で購入し、予備飼育後、健康状態の良好なものを試験に使用した。予備飼育中及び試験中における飼料（日本クレア社製ＣＥ−２）及び水は自由摂取とした。飼育は温度２０．７〜２３．５℃、湿度４３〜７２％ＲＨ、明暗サイクル１２時間/１２時間の環境下で行った。ケージ及び床敷きの交換、飼育室の清掃は３回/週定期的に行った。
【実施例】
【００１８】
以下、本発明を実施例に基づいて説明する。
（実施例１）
４〜５週齢で購入したＢＡＬＢ/ｃヌードマウスに人がん細胞（Ｈｕ０９）１０７個を背部皮下に植え付け、２週間飼育した。このマウスに尾静脈から９０ＹＣＬ３のクエン酸希釈溶液を０．１ｍｌ注射し、０．５時間後のがん細胞の状態を観察した。この希釈溶液
０．１ｍｌとしては、９０ＹＣＬ３が、それぞれ、３．７ｋＢｑ（０．１μＣｉ）、３７ｋＢｑ（１μＣｉ）、３７０ｋＢｑ（１０μＣｉ）、３．７ＭＢｑ（１００μＣｉ）、及び３７ＭＢｑ（１，０００μＣｉ）含有されたものを使用した。
【００１９】
上記５種類の９０ＹＣＬ３を含有した希釈液を上記マウスに注射した後の０．５時間後の細胞阻害効果を、上記（株）生体科学研究所が開発した２次元迅速判定法を実施して測定し、その分裂阻害率式を使用して判定した結果は、次のとおりである。
【００２０】
投与後０．５時間の細胞分裂阻害効果
９０ＹＣＬ３の３．７ｋＢｑ（０．１μＣｉ）  投与      ：３７％
９０ＹＣＬ３の３７ｋＢｑ（１μＣｉ）        投与      ：４１％
９０ＹＣＬ３の３７０ｋＢｑ（１０μＣｉ）    投与      ：５９％
９０ＹＣＬ３の３．７ＭＢｑ（１００μＣｉ）  投与      ：５８％
９０ＹＣＬ３の３７ＭＢｑ（１，０００μＣｉ）投与      ：１００％
（実施例２）
４〜５週齢で購入したＢＡＬＢ/ｃヌードマウスに人がん細胞（Ｈｕ０９）１０７個を背部皮下に植え付け、２週間飼育した。このマウスに尾静脈から９０ＹＣＬ３のクエン酸希釈溶液を０．１ｍｌ注射し、６時間後のがん細胞の状態を観察した。この希釈溶液０．１ｍｌとしては、９０ＹＣＬ３が、それぞれ、３．７ｋＢｑ（０．１μＣｉ）、３７ｋＢｑ（１μＣｉ）、３７０ＭＢｑ（１０μＣｉ）、３．７ＭＢｑ（１００μＣｉ）、及び３７０ＭＢｑ（１，０００μＣｉ）含有されたものを使用した。
【００２１】
上記５種類の９０ＹＣＬ３を含有した希釈液を上記マウスに注射した後の６時間後の細胞阻害効果を、上記（株）生体科学研究所が開発した２次元迅速判定法を実施して測定し、その分裂阻害率式を使用して判定した結果は、次のとおりである。
【００２２】
投与後６時間の細胞分裂阻害効果
９０ＹＣＬ３の３．７ｋＢｑ（０．１μＣｉ）  投与      ：４９％
９０ＹＣＬ３の３７  ｋＢｑ（１μＣｉ）      投与      ：５７％
９０ＹＣＬ３の３７０ｋＢｑ（１０μＣｉ）    投与      ：７７％
９０ＹＣＬ３の３．７ＭＢｑ（１００μＣｉ）  投与      ：８３％
９０ＹＣＬ３の３７ＭＢｑ（１，０００μＣｉ）投与      ：１００％
（実施例３）
４〜５週齢で購入したＢＡＬＢ/ｃヌードマウスに人がん細胞（Ｈｕ０９）１０７個を背部皮下に植え付け、２週間飼育した。このマウスに尾静脈から９０ＹＣＬ３のクエン酸希釈溶液を０．１ｍｌ注射し、２４時間後のがん細胞の状態を観察した。この希釈溶液０．１ｍｌには、９０ＹＣＬ３が、それぞれ、３．７ｋＢｑ（０．１μＣｉ）、３７ｋＢｑ（１μＣｉ）、３７０ｋＢｑ（１０μＣｉ）、３．７ＭＢｑ（１００μＣｉ）、及び３７ＭＢｑ（１，０００μＣｉ）含有されたものを使用した。
【００２３】
上記５種類の９０ＹＣＬ３を含有した希釈液を上記マウスに注射した後の２４時間後の細胞阻害効果を、上記（株）生体科学研究所が開発した２次元迅速判定法を実施して測定し、その分裂阻害率式を使用して判定した結果は、次のとおりである。
【００２４】
投与後２４時間の細胞分裂阻害効果
９０ＹＣＬ３の３．７ｋＢｑ（０．１μＣｉ）    投与      ：５３％
９０ＹＣＬ３の３７ｋＢｑ（１μＣｉ）          投与      ：２９％
９０ＹＣＬ３の３７０ｋＢｑ（１０μＣｉ）      投与      ：１００％
９０ＹＣＬ３の３．７ＭＢｑ（１００μＣｉ）  投与      ：９７％
９０ＹＣＬ３の３７０ＭＢｑ（１，０００μＣｉ）投与      ：１００％
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】本発明の治療剤の効果を評価した写真である（細胞分裂が停止しているので、１４ＣチミジンがＤＮＡに取り込まれていないことを示している）。
【図２】本発明の治療剤が投与されていない場合の写真である（腫瘍細胞の細胞分裂が活発に行われているので、１４ＣチミジンがＤＮＡに取り込まれていること（銀粒子が見える）を示している）。
【図１】
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【図２】
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