(57)【要約】      （修正有）【課題】本発明は、エラスチンのみに含まれるアミノ酸であるデスモシン及びイソデスモシンを高濃度に含むことを特徴とし、コラーゲンペプチドとは明確に区別されるペプチドを提供する。【解決手段】エラスチン含有量の高い魚類の弾性繊維により構成される組織、特に動脈球を酵素、酸又はアルカリにより分解して得られるペプチド又はその水溶液を提供する。本発明は、更に、エラスチン含有量の高い魚類の弾性繊維により構成される組織を酵素、酸又はアルカリにより分解することからなるペプチドの製造方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エラスチン含有量の高い魚類の弾性繊維により構成される組織を酵素、酸又はアルカリにより分解して得られるペプチド又はその水溶液。
【請求項２】
魚類の弾性繊維により構成される組織は、魚類の動脈球又は他の動脈組織である、請求項１に記載のペプチド又はその水溶液。
【請求項３】
エラスチンに特有のアミノ酸組成を持ち、エラスチンのみに含まれるアミノ酸であるデスモシン、イソデスモシンを、魚皮中に含まれる量より高濃度で含有する、請求項１に記載の魚類由来のペプチド又はその水溶液。
【請求項４】
エラスチン含有量の高い魚類の弾性繊維により構成される組織を酵素、酸又はアルカリにより分解することからなるペプチドの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚類の弾性繊維により構成される組織、特に、心臓動脈球もしくは他の動脈組織を原料として得られる、魚特有の味や臭いがない分解物（ペプチド）及びその製造方法に関する。この分解物は各種医療用生体素材、化粧品素材及び健康食品素材等として有用な可溶性のエラスチンペプチドを高濃度で含有している。
【背景技術】
【０００２】
エラスチンは動物組織中では項靭帯や動脈のような常に伸縮性、弾力性が求められる組織に存在している。また、僅かではあるが皮膚にも弾性に関与する成分としてコラーゲンと共に真皮結合組織に存在している。加齢や紫外線により皮膚中のエラスチンは減少し、またエラスチン自体が変性して本来の弾性を保てなくなり、シワ、タルミの原因となる。このためエラスチンは化粧品や健康食品分野への応用が有効とされ、現在多くの製品に適用されている。
【０００３】
また、エラスチンは血管構成成分として重要な役割を担っていることから各種血管病変に関与していると考えられ、医薬品分野での利用も検討されている。
【０００４】
エラスチンはその性質から、酸、アルカリ等の各種溶媒に対して強い抵抗性を示すため、化粧品や食品で利用するためには可溶化する必要がある。低分子化することで水や各種溶媒への溶解度を高め、生体内での吸収率が高くなると考えられ、生理活性を有することが期待できる。
【０００５】
エラスチンの生理的効果としては、外用剤の効果として、皮膚や頭髪に適用することで、質感の改善が見られること(特開昭60-258107号公報)、また、コラーゲン、コンドロイチンと共に使用することで、創傷治癒にも効果があること(特開昭60-64909号公報)が知られている。さらにこのコラーゲン、コンドロイチン、エラスチンの3種の成分は、経口摂取することでもその効果が認められること（特開2003-55255公報）が知られている。以上のような背景から、現在では機能性素材として、飲食品や化粧品分野で盛んに利用されるようになっている。
【０００６】
エラスチン高含有組織としては牛項靭帯が知られているが、日本国内で狂牛病感染の牛が発見され、また豚口蹄疫のような家畜疫病の発生によって、哺乳類由来のエラスチンは敬遠される傾向にある。健康食品素材として既に市場の構築されたコラーゲンペプチドでも、殆どが海洋性素材を利用した製品が主流になっており、畜産物由来素材の市場は次第に縮小しつつある。エラスチンペプチドについても同様のことが考えられ、牛項靭帯を原料としたエラスチンペプチドに代わる素材が必要になっている。
【０００７】
以上のような理由から、より安全な魚類由来のエラスチンペプチドが注目されるようになっている。
【０００８】
エラスチンを可溶化する方法は、例えば、特開昭53-101592号公報や特開昭60-258107号公報に記載されているが、これらの方法はエラスチンを豊富に含む牛や豚などの哺乳類の項靭帯を原料としたものである。
【０００９】
魚類素材を原料としてエラスチンペプチドを得る従来の方法は、魚皮を原料として使用するものであり、洗浄した魚皮から酸性水溶液を使用してコラーゲンと共に魚皮中に微量に含まれるエラスチンを抽出する方法（特開平5−202097号公報）、洗浄した魚皮をエラスターゼ処理する方法（特開平2001−72572号公報）等が知られている。
【００１０】
しかしながら、本来、皮膚はコラーゲンをはじめとする膠原繊維が主体であり、エラスチンは極微量しか含まれていないことが知られている。ヒトの場合、乾燥皮膚真皮中にコラーゲンは約80％含まれるのに対して、エラスチンは4％程度とされている。
【００１１】
同様に、魚皮の主成分も膠原繊維であり、アミノ酸組成からも魚皮の主成分は、ほぼコラーゲンであることが認められる。さらにエラスチンを含有する証明となるデスモシン、イソデスモシンは殆ど含まれていない。以上のことから、魚由来の高濃度のエラスチンを得るための原料として、魚皮は不適当である。
【００１２】
これに対し主成分が弾性繊維である動脈球はエラスチンタンパク質としての特徴を持ち、またデスモシン、イソデスモシン含量も、通常の魚エラスチン中に含まれる量とほぼ同じである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、魚類由来弾性繊維を原料として、エラスチンに特有のアミノ酸であるデスモシン、イソデスモシンを高濃度に含有し、健康食品や化粧品等にも好適に使用でき、魚特有の味や臭いが少なく、安全性に優れた魚類弾性繊維由来ペプチド及びその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明によれば、エラスチン含有量の高い魚類の弾性繊維により構成される組織を酵素、酸又はアルカリにより分解して得られるペプチド又はその水溶液が提供される。
【００１５】
本発明によれば、更に、エラスチン含有量の高い魚類の弾性繊維により構成される組織を酵素、酸又はアルカリにより分解することからなるペプチドの製造方法が提供される。
【００１６】
上記目的を達成するために、本発明によれば、弾性繊維により構成される組織として、特に、エラスチンを高濃度で含有する（通常全タンパク質中30〜50％）弾性繊維より構成される組織、特に、心臓周辺の血管、好ましくは動脈球が原料として用いられる。
【００１７】
上記原料より血液、脂質、可溶性タンパク質、コラーゲン質を除去し、回収した不溶性タンパク質を酵素、もしくは、酸又はアルカリで分解して可溶性のペプチドを得ることができる。
【００１８】
本発明によれば、従来の魚皮由来の、コラーゲンを主体とするエラスチン含有ペプチドと比較して、エラスチンに特有のアミノ酸構成を持ち、更にエラスチンに特有のアミノ酸であるデスモシン、イソデスモシンを魚皮中に含まれる量より多く含むペプチドを得ることができる。
【００１９】
本発明による魚由来ペプチドは、上記した通り、エラスチン特有のアミノ酸組成を持ち、エラスチンにのみ含まれるアミノ酸であるデスモシン、イソデスモシンを魚皮よりはるかに多く含有し、かつヒドロキシプロリンを1％以下、ヒドロキシリジンを１％以下の量で含有している。
【００２０】
本発明において用いられる魚動脈球の起源は特に制限はないが、心臓より動脈球を回収するためにある程度の大きさが必要であり、例えば、カツオ、マグロ、カジキ、タラ、ハマチ、ブリ、サケ、マス等から得られる魚類原料を用いることができる。中でも、大量かつ安定的に入手できる魚種として、カツオ、マグロ、タラ、ハマチ、サケから得られる動脈球が好ましい。
【００２１】
本発明のペプチドは、慣用の化粧料成分中に配合することにより化粧料の有効成分として、また、健康食品中に配合することにより健康食品の有効成分として使用することができる。本発明の弾性繊維由来魚類ペプチドを含有する化粧料を皮膚に塗布することにより、皮膚の弾力性、保水性等の質感の改善が期待され、また、本発明のペプチドを含有する健康食品を摂取することにより、同様に、皮膚の質感等の改善が期待される。
【００２２】
本発明のペプチドを化粧料の有効成分として使用する場合には、該ペプチドは、通常、化粧料成分の合計重量の0.01％〜1％の量で使用され、また、本発明のペプチドを健康食品の有効成分として使用する場合には、該ペプチドは、通常、健康食品の構成成分の合計重量の1％〜5％の量で使用されるのが好ましい。またいずれもこれより高濃度もしくは低濃度でも使用することが可能である。
【００２３】
本発明の魚類由来のエラスチン含有ペプチドは、以下に例示する製造法により製造することができるが、これに限定されるものではなく、通常の硬タンパク質可溶化方法であるアルカリ-エタノール法、酸分解法等も使用できる。
【００２４】
製造法1
心臓より動脈球を採取し、流水洗浄にて血液を除去する。原料の前処理としては、原料の洗浄及びその後の抽出操作を容易にするために、アルカリに組織を浸漬する。この場合のアルカリは、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、好ましくは水酸化ナトリウムの溶液である。濃度は0.01Nから0.1N、好ましくは0.02Nである。浸漬温度は20℃以下、期間は12時間〜5日間程度であり、好ましくは3日間である。また浸漬中は溶媒を1日につき2回以上取り替えることが好ましい。なおこれらの前処理の条件は魚種により原料組織の溶媒に対する抵抗性が異なる為、これに限定されるものではなく、原料魚種により事前に検討することが望ましい。
【００２５】
浸漬後、流水洗浄により過剰のアルカリを除去し、原料の中和を行う。洗浄後、これに蒸留水を加え、95℃に加熱し、コラーゲン質及び脂質の除去を行う。これを抽出原料として酵素分解し、可溶性エラスチンを得る。分解に使用する酵素としては、食品、医薬品、化粧品業界にて使用できるものであれば全て使用できるが、力価の大きいものが好ましく、例えばAlcalase2.4L  FG（Nnovozymes製）、プロチンAC-10F（大和化成製）、プロテアーゼN「アマノ」G、ペプシン（天野エンザイム製）等が望ましく、分解条件はこれらの使用酵素ごとに決定される。添加量としては通常当業界でタンパク質分解に用いられる量であり、例えば酵素と基質の重量比は1：5000〜1：10,000である。またこれらの酵素は単独で使用するよりも、2種を組み合わせて使用することが好ましい。反応終了後、加熱失活を行い、化粧品原料として好ましいpHである4付近に調整した後、濾過により残渣を分離する。このとき必要であれば活性炭、濾過助剤等を用いて不溶物を取り除き、エラスチン含有ペプチド溶液を得る。溶液で使用する場合は、ここでメンブレンフィルターを使用して、除菌濾過を行う。
【００２６】
酵素分解物はさらに濃縮し噴霧乾燥することで、化粧品原料だけでなく、健康食品原料としても使用可能である。
【００２７】
製造法２
製造法1と同様にアルカリにて前処理を行った原料を用いて、無機酸溶液中にて加熱して、酸可溶性エラスチンペプチドを得る。使用する酸としては、塩酸、シュウ酸が好ましく、塩酸では1N、80℃、シュウ酸では0.25M、90℃での処理が好ましい。可溶化後、アルカリにて中和を行う。このとき使用するアルカリとしては水酸化ナトリウム、水酸化カルシウムが好ましく、特にシュウ酸を用いて可溶化した場合には、これを完全に除去するために、水酸化カルシウムでの中和が必須である。ろ過により残渣および生成した塩を除去し、必要であれば脱塩を行い、エラスチン含有ペプチド溶液を得る。
【００２８】
製造法３
製造法1と同様にアルカリにて前処理を行った原料を用いて、1N-NaOH、80％EtOH溶液にて室温におき、可溶化する。濾過により残渣を除去したのち、pH4附近に調整し、必要であれば脱塩を行い、エラスチン含有ペプチド溶液を得る。
【００２９】
本発明の実施例を以下に示す。
【００３０】
実施例１
新鮮なカツオ心臓動脈球100gを蒸留水にて流水洗浄し、内部の血液を除去する。洗浄した動脈球を0.02N水酸化ナトリウム溶液にて常温で3日間浸漬し、残存する血液を除去する。流水洗浄後、塩酸にて中和し、3倍容の蒸留水を加えて95℃にて加熱殺菌する。上清を取り除き、脂質と共にコラーゲン質を除去する。これを抽出原料とし、フードカッターにて細片化し、酵素Alcalase2.4L  FGを1.0％加え、水酸化ナトリウムにてpH8.5とした溶液中で6時間分解する。分解物に塩酸を加えてpH3とし、ペプシン（天野エンサ゛イム製）を1：10,000となるよう添加し、16時間分解する。pH4に調整し、85℃以上達温で酵素失活を行い、層濾過にて精製後噴霧乾燥し、可溶性ペプチド粉末12gを得る。
【００３１】
実施例２
新鮮なハマチ心臓動脈球100gを蒸留水にて流水洗浄し、内部の血液を除去する。洗浄した動脈球を0.01N水酸化ナトリウム溶液にて常温で3日間浸漬し、残存する血液を除去する。流水洗浄後、3倍容の蒸留水を加えて95℃にて加熱殺菌する。上清を取り除き、脂質と共にコラーゲン質を除去する。これを抽出原料とし、フードカッターにて細片化し、酵素プロチンAC-10F（大和化成製）を0.5％加え、2時間分解、さらに酵素プロテアーゼN「アマノ」G（天野エンサ゛イム製）を0.1％添加し、5時間分解する。85℃以上達温で酵素失活を行い、層濾過にて精製後噴霧乾燥し、可溶性ペプチド粉末7.3gを得る。
【００３２】
実施例３
新鮮なカツオ心臓動脈球100gを蒸留水にて流水洗浄し、内部の血液を除去する。洗浄した動脈球を0.02N水酸化ナトリウム溶液にて常温で3日間浸漬し、残存する血液を除去する。流水洗浄後、3倍容の蒸留水を加えて95℃にて加熱殺菌する。上清を取り除き、脂質と共にコラーゲン質を除去する。0.2Nの塩酸に5日間浸漬し、上清除去後、ペプシンを0.1％添加して37℃にて24時間分解する。NaOHにてpH4とし、85℃以上達温で酵素失活を行い、層濾過にて精製後噴霧乾燥し、可溶性ペプチド粉末10gを得る。
【発明の効果】
【００３３】
従来の魚皮由来エラスチンペプチドと比較して、エラスチンの特徴であるデスモシン、イソデスモシン含量の高い酵素分解物を得ることが出来る。また魚コラーゲンとも異なる組成を持つことも確認された。
【００３４】
実施例1及び2に従って調製された酵素分解物のアミノ酸組成(mol/1000mol)を下記の表に示す。また比較対照として、マグロ皮より抽出されたペプチドのアミノ酸組成も示した。
【００３５】
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