(57)【要約】【課題】正常細胞を損傷する抗がん剤を使用せずに安全かつ効率的なＩＶＲ治療を実施する。【解決手段】アポトーシス誘導活性を有し、あるいはビスフォスフォネート若しくはビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体のうち、少なくとも１種である細胞増殖阻害剤、および活性化リンパ球あるいはAHCC、溶連菌などの死菌体あるいはその抽出物、丸山ワクチン、アガリクス茸などのキノコやその抽出物等のうち、１種又は２種以上である免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分とした治療剤を投与することにより、さらに好ましくはこれらの治療剤投与をＩＶＲ治療と併用することにより悪性腫瘍の治療に大きな効果をもたらす。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分とする悪性腫瘍の治療剤。
【請求項２】
細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分としたＩＶＲ治療と併用するための請求項１に記載の悪性腫瘍の治療剤。
【請求項３】
細胞増殖阻害剤がアポトーシス誘導活性を有するものである請求項１又は請求項２に記載の悪性腫瘍の治療剤。
【請求項４】
細胞増殖阻害剤がビスフォスフォネート若しくはビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体のうち、少なくとも１種である請求項１又は請求項２に記載の悪性腫瘍の治療剤。
【請求項５】
免疫賦活剤が活性化リンパ球であるところの請求項１又は請求項２に記載の悪性腫瘍の治療剤。
【請求項６】
免疫賦活剤が、AHCC、溶連菌などの死菌体あるいはその抽出物、丸山ワクチン、アガリクス茸などのキノコやその抽出物等のうち、１種又は２種以上であるところの請求項１〜４のいずれか１に記載の悪性腫瘍の治療剤。
【請求項７】
悪性腫瘍の治療に際して、細胞増殖阻害剤投与および免疫賦活剤投与のうち、少なくとも一方を併用するようにした悪性腫瘍の治療法。
【請求項８】
細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方をＩＶＲ治療と併用投与するようにした悪性腫瘍の治療法。
【請求項９】
細胞増殖阻害剤が、ビスフォスフォネート若しくはビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体のうち、少なくとも１種であるところの請求項７又は請求項８に記載の悪性腫瘍の治療法。
【請求項１０】
免疫賦活剤が活性化リンパ球であるところの請求項７又は請求項８に記載の悪性腫瘍の治療法。
【請求項１１】
免疫賦活剤が、AHCC、溶連菌などの死菌体あるいはその抽出物、丸山ワクチン、アガリクス茸などのキノコやその抽出物等のうち、１種又は２種以上であるところの請求項７又は請求項８に記載の悪性腫瘍の治療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、悪性腫瘍の治療剤および治療方法に関し、特に固形癌を中心としたＩＶＲ血管塞栓術を主体とした固形腫瘍の低侵襲治療との併用に際し、また血液癌など全身治療に際して正常細胞を損傷する抗癌剤投与をおこなわずに腫瘍細胞を合理的かつ速やかに消失させる画期的な治療手段を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
身体への負担をできるだけ軽くし、生体が持つ免疫能力を手術ほど低下させることなく、しかも手術をした時と同程度の治療効果をあげようとする治療法（低侵襲治療）のひとつの新しい医学分野としてインターベンショナル・ラジオロジー（Interventional Radiology；以下単に「ＩＶＲ」と略す）治療がある。  これは放射線診断学の技術を病気治療に転用したもので、その代表例が血管塞栓術であり、正常部位に比して血流が多い悪性腫瘍に対して、血管造影の技術を使って動脈血流の遮断（阻血）を行ない腫瘍の虚血を引き起こす手法である。
【０００３】
固形腫瘍に対する血管塞栓術は、とくに腫瘍への血流が多い多血性腫瘍が塞栓による阻血に弱く良い適応となる。  一般的にはこの血管塞栓術を血管内治療といい、その多くは抗癌剤を併用し、抗癌剤と塞栓物質を同時に動脈内に投与することによって、腫瘍内に停滞した抗癌剤の徐放効果と動脈血流遮断による腫瘍の虚血とを相乗的に作用させている。
【０００４】
また抗ＣＤ３抗体あるいはＩＬ２により末梢血等に由来するリンパ球を増殖させることができることが知られ、また自己由来のリンパ球を固相化抗ＣＤ３抗体とＩＬ（インターロイキン）２により増殖し、これを体内に投与することにより抗腫瘍効果があることもすでに公開されている（特開平３−８００７６号公報）。  さらに抗ＣＤ３抗体とＩＬ２により増殖させた自己由来リンパ球が先天性免疫不全患者のウイルス感染症に有効であることも報告されている〔伊藤仁也、関根暉彬；医学のあゆみ、１８１巻、６号、４２６〜４２７頁（１９９７年）〕。
【特許文献１】特開平３−８００７６号公報
【非特許文献１】伊藤仁也、関根暉彬；医学のあゆみ、１８１巻、６号、４２６〜４２７頁（１９９７年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来の固形悪性腫瘍治療に使用される薬剤は、5-FU誘導体などの核酸アナログやシスプラチンやマイトマイシンと言った薬剤が使用されるが、これらは癌細胞だけを殺傷するのではなく正常細胞に対しても悪影響を与えることから重篤な副作用をもたらすことが知られている。  またこれまでの血管内治療では抗癌剤を併用するために、周囲の組織にも大きなダメージを与えることが多い。  さらにリンパ球を用いた腫瘍の治療についても、リンパ球投与による単独治療によっては、その効果はそれほど高くはない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明は、正常細胞を損傷するような危険な抗癌剤投与をおこなうことなく、腫瘍細胞を合理的かつ速やかに消失させようとするもので、固形腫瘍に対する直接効果は低いものの人体が有する免疫力との相乗作用によって悪性腫瘍を死滅させることができるような悪性腫瘍の治療剤および治療法に関する。  また特に血管塞栓術を主体としたＩＶＲ治療と併用することによって、抗癌剤投与をおこなわずに効率的な腫瘍の治療を可能としたものである。
【０００７】
具体的には、請求項１の発明は、細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分とする悪性腫瘍の治療剤に関する。  また請求項２の発明は、細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分としたＩＶＲ治療と併用するための請求項１に記載の悪性腫瘍の治療剤に関する。  さらに請求項３の発明は、細胞増殖阻害剤がアポトーシス誘導活性を有するものである請求項１又は請求項２に記載の悪性腫瘍の治療剤に関する。
【０００８】
さらに請求項４の発明は、細胞増殖阻害剤がビスフォスフォネート若しくはビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体のうち、少なくとも１種である請求項１又は請求項２に記載の悪性腫瘍の治療剤に関する。  さらに請求項５の発明は、免疫賦活剤が活性化リンパ球であるところの請求項１又は請求項２に記載の悪性腫瘍の治療剤に関する。
【０００９】
さらに請求項６の発明は、免疫賦活剤が、AHCC、溶連菌などの死菌体あるいはその抽出物、丸山ワクチン、アガリクス茸などのキノコやその抽出物等のうち、１種又は２種以上であるところの請求項１〜４のいずれか１に記載の悪性腫瘍の治療剤に関する。
【００１０】
さらに請求項７の発明は、悪性腫瘍の治療に際して、細胞増殖阻害剤投与および免疫賦活剤投与のうち、少なくとも一方を併用するようにした悪性腫瘍の治療法に関する。  さらに請求項８の発明は、細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方をＩＶＲ治療と併用投与するようにした悪性腫瘍の治療法に関する。
【００１１】
さらに請求項９の発明は、細胞増殖阻害剤が、ビスフォスフォネート若しくはビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体のうち、少なくとも１種であるところの請求項７又は請求項８に記載の悪性腫瘍の治療法に関する。  さらに請求項１０の発明は、免疫賦活剤が活性化リンパ球であるところの請求項７又は請求項８に記載の悪性腫瘍の治療法に関する。
【００１２】
さらに請求項１１の発明は、免疫賦活剤が、AHCC、溶連菌などの死菌体あるいはその抽出物、丸山ワクチン、アガリクス茸などのキノコやその抽出物等のうち、１種又は２種以上であるところの請求項７又は請求項８に記載の悪性腫瘍の治療法に関する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明は、細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分とした治療剤を投与することにより悪性腫瘍の治療に大きな効果をもたらす。  とくにこれらの治療剤をＩＶＲ血管塞栓療法と併用して投与することにより、その抗腫瘍効果をより一層高めることができる。
【００１４】
さらに、細胞増殖阻害剤、特にビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２に比べて、より低濃度で細胞増殖阻害活性を有するビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２誘導体は、血管塞栓療法のような局所治療のみならず全身投与による固形腫瘍治療を行うことができる。
【００１５】
また、ビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２は、高濃度で心臓への影響があることから、心臓へなどへの影響の小さいビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２の誘導体は、血管塞栓療法のような局所治療のみならず全身投与による固形腫瘍治療を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下において本発明の具体的な内容について説明をすると、本発明は細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分とする悪性腫瘍の治療剤、ならびに細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分としたＩＶＲ治療と併用するための悪性腫瘍の治療剤、およびそれらの投与方法に主たる要旨が存する。
【００１７】
なお以下の実施例においては望ましい実施例として、細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の少なくとも一方を主成分とする悪性腫瘍の治療剤をＩＶＲ治療（血管塞栓術）と併用する場合について説明をしているが、細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の投与は単独投与でもよく、上記ＩＶＲ治療との併用に限られるものではない。
【００１８】
細胞増殖阻害剤およびアポトーシス誘導剤、ならびに免疫賦活剤、さらにはＩＶＲ治療についての具体的な内容を説明すると、次の通りである
〔細胞増殖阻害剤、アポトーシス誘導剤〕
本発明において用いられる細胞増殖阻害剤としては、固形腫瘍細胞に対して細胞増殖阻害活性を有する製剤である。  この場合、癌細胞を殺傷するのではなく、癌細胞の増殖を阻害できれば良い。  細胞増殖阻害剤としては、ビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２があげられる。
【００１９】
ビスフォスフォネート及びビタミンＫ２は一般的には骨粗鬆症の治療薬として知られる。  ビスフォスフォネートはインビボにおける効果については全く知られていない。  またビタミンＫ２は、癌細胞の増殖阻害効果やアポトーシスの誘導や抑制効果の点で近時注目に値する。  一般的にいかなる物質も動物実験やインビトロ試験において抗腫瘍効果が知られていたとしても実際の臨床において必ずしも抗腫瘍効果が求められるとは限らない。
【００２０】
これは、動物実験は、純化された特定の遺伝子のみしかもたない動物を使用するのに対して、臨床適用されるヒトは、多種多様の遺伝子を持っているためである。  また、インビトロの試験系は特定の細胞あるいは酵素系だけを体外に取り出して試験を行うのに対して体内には種々の細胞や代謝経路などが存在するために、インビトロでの効果があっても臨床において必ずしも効果があるとは限らず、その効果の有無を推測することも困難である。
【００２１】
そのため、動物実験やインビトロ試験において抗腫瘍効果を有する化合物が臨床において抗腫瘍効果を有するとは限らない。現在、薬剤は最終的にヒトへの臨床投与を行うことにより効果を確かめている段階である。  ビスフォスフォネートについて、in vivo 特に血管塞栓術においての単独あるいはこれら薬剤の併用による治療で悪性腫瘍が退縮したとする報告はない。
【００２２】
ビスフォスフォネートには、アレンドロネート、イパンドロネート、イカンドロネート、エチドロネート、オルパドロネート、クロドロネート、ゾレドロネート、チルドロネード、ネリドロネート、パミドロネート、リセドロネートなどが知られている。  腫瘍にアポトーシスを誘導できるものであれば、いずれのビスフォスフォネートでも使用できる。
【００２３】
本発明においては、アレンドロネート、パミドロネートを使用しており、1mg／投与から300mg/投与の範囲で使用できるが、好ましくは、15mg/投与から60mg/投与の範囲で使用できる。  またビタミンＫ２は一般名「メナテトレノン」とも呼ばれ、化学名は「メナキノン」である。  市販品としては SUNTORYほかが発売し、またエーザイの glakay（商品名）などがある。  メナキノンは１〜１４までの１４種類が存在する。
【００２４】
またビタミンＫは、元来は血液凝固に必要な因子として発見された脂溶性のビタミンでありＫ１（フィロキノン）とＫ２（メナキノン）の２種類が存在し、一般的にはカルシウムを骨に付着させる接着剤のような役割を果たすことで知られる。  食品中でビタミンＫ２「メナキノン」が含まれるのは唯一納豆であり、納豆に含まれるビタミンＫ２はメナキノンー７である。  またこれら以外のものであっても、腫瘍にアポトーシスを誘導できるものであれば、いずれのビタミンＫ２誘導体でも使用できる。
【００２５】
ビタミンＫ２は、1mg/投与から300mg/投与の範囲で使用できるが、好ましくは、30mg/投与から120mg/投与の範囲で使用できる。  また薬剤の投与は、動脈内投与が推奨される。  ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２は、これら化合物の基本骨格に対して、メチル基、エチル基、フェニル基、クロル基などの種々の官能基を導入することにより合成することができる。  これら誘導体は、共通の基本骨格を有することからビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２と同様の抗腫瘍活性を有する。  また、その毒性がより減弱されたものを合成することができる。
【００２６】
またアポトーシス誘導製剤としては固形腫瘍細胞に対してアポトーシス誘導効果を与えることができる製剤である。  アポトーシスは、腫瘍細胞の壊死や他殺死など細胞の受動的な死（necrosis）とは異なり、生理的および病理的諸要因により、不要となった細胞や損傷細胞などを積極的に排除するための、いわば自殺過程を意味するもので、寧ろ自殺死であるといえる。  アポトーシスは形態的にもネクローシスと異なるばかりでなく、その発現は遺伝子にプログラムされ、ホメオスタチスなど多岐にわたる生命現象に重要な役割を果たしているといわれる。
【００２７】
アポトーシス誘導製剤の具体例としては、例えば特開平１０−２７９５７４号や特開２００１−２２６２８３号公報、あるいは特開２００２−３５６４２８号公報などにあらわされたアポトーシス誘導剤、その他土中に含まれる放線菌から見出されたものでCaspase やリン酸化酵素などを活性化して癌細胞にアポトーシスを誘導することが可能なサイトトリエニン（Cytotrieninn）や、低分子の乳酸重合体で天然型の乳酸オリゴマー構造をもつ「ＣＰＬ」（環状重合乳酸）、エトポシド（ＶＰ−１６）、三酸化二ヒ素、キナーゼカスケードなどがある。
【００２８】
上記したアポトーシス誘導製剤のほかに、同じアポトーシス誘導製剤の仲間としてビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２がある。  これらは前記した細胞増殖阻害剤として取り上げたものであるが、在来型のアポトーシス誘導製剤よりもアポトーシス作用が格段に大きく、とくにＩＶＲ治療に際してこれを併用することによって極めて画期的な腫瘍の治療効果を発揮することができる。
【００２９】
〔免疫賦活剤〕
免疫賦活剤とは、免疫系に適度の刺激を与えて、からだの免疫機能を活性化させることのできるすべての物質を意味する。  したがって体外でインビトロ下において活性化させたリンパ球も含まれる。  その他の免疫賦活剤としては、例えば、AHCC、溶連菌などの死菌体あるいはその抽出物などの白血球介在型のもの、あるいはＣＰＬ（環状重合乳酸）などの酵素介在型のもの、さらに各種活性化リンパ球、丸山ワクチン等の使用が効果的である。
【００３０】
これらの免疫賦活剤は、単独使用によってもある程度の効果が期待できるが、寧ろ細胞増殖阻害剤もしくはアポトーシス誘導剤、あるいはＩＶＲ血管塞栓術治療と併用することによりきわめて大きな効果を得ることができる。  細胞増殖阻害剤もしくはアポトーシス誘導剤を単独で使用して治療する場合は、生体が本来有している免疫能によって細胞増殖阻害剤によって増殖を止められた固形腫瘍が排除される。
【００３１】
しかしながら、免疫能には個人差、日差などがあり、治療時に必ずしも高い免疫能を有しているとは限らず、特に抗癌剤を使用した後では抗癌剤の副作用により免疫能が低下している場合が多いことから、体外で活性化増殖させたリンパ球などの免疫賦活剤投与との併用が好ましい。
【００３２】
白血球介在型の免疫賦活は、機能成分が白血球の膜表面にある受容体に結合し、その細胞を活性化させる。  例えば、ＮＫ細胞が活性化すると、パーフォリンが癌細胞の膜に穴をあけて消滅させる。  一方、酵素介在型の免疫賦活食品は、癌細胞の細胞死をもたらす自然の過程を増強して抗癌作用を発揮するものである。
【００３３】
癌細胞は酸素不足であり、嫌気的解糖系によってエネルギーを産生しているが、ＣＰＬはそのキー酵素となるＬＤＨ（乳酸脱水素酵素）を特異的に阻害することができ、これによってがん細胞はエネルギーを産生できずに死に至るわけである。  上記した各種の免疫賦活剤のうち、活性化リンパ球の併用投与がきわめて有効である。  なお免疫賦活剤は、後記するＩＶＲ血管塞栓術実施の前や実施後に使用することにより血管塞栓術との相乗的効果を高めることができる。
【００３４】
〔ＩＶＲ治療〕
鼠径部をキシロカインなどで局所麻酔を行い、穿刺針を大腿動脈内に穿刺し、動脈に添って癌の近傍の動脈までカテーテルを挿入し、抗腫瘍活性を有する薬剤、イオン性造影剤、ゼラチンスポンジを注入し血管塞栓が実施される。
【００３５】
血管の塞栓は、ゼラチンスポンジの量などによって調節する事ができき、数分から数十分間行う。血管塞栓術の時間は、好ましくは５分間から４０分間程度であるが、さらに好ましくは１０分間から２０分間程度の時間がよい。  カテーテルは、大腿動脈からだけでなく腕の動脈などから挿入することが可能であり、カテーテルの導入部位は特に限定されない。
【００３６】
さらに既述した免疫賦活剤の一例として活性化リンパ球を用い、これを上記したＩＶＲ血管塞栓術治療と併用する場合について順次以下に説明する。  なお活性化リンパ球は、抗腫瘍あるいは抗ウイルス効果を有し、活性化リンパ球による癌の治療方法についてはこれまでに報告されているが細胞増殖阻害剤との併用、あるいはＩＶＲ血管塞栓療法との併用による腫瘍の治療に関する報告はない。
【００３７】
〔リンパ球細胞の採取〕
リンパ球細胞は、一般的には末梢血から分離して簡単に採取することができる。  末梢血からの採血方法としては、静脈からの採血が好ましく、また一回に採血する量としては、０．０１ｍｌ〜１００ｍｌ程度であり、特に、その量に限定されない。  しかしながら、ドナーの肉体的な負担、採血の手間、リンパ球細胞の分離操作を考えた場合、５ｍｌ〜５０ｍｌ程度の範囲内であるのが好ましく、より好ましくは１０ｍｌ〜２０ｍｌの採血量がよい。
【００３８】
なおこの場合に、血液の凝固が起こらないように、採血した血液にヘパリンやクエン酸を加えることができる。  また上記採取した血液からのリンパ球細胞の分離は、蔗糖や市販のリンパ球分離剤等を用いる不連続密度勾配遠心法などの周知のリンパ球細胞の分離法によっても操作して採取することができる。
【００３９】
〔リンパ球細胞の増殖・活性化〕
上記により採取した末梢血中などに含まれるリンパ球細胞は、これを抗ＣＤ３とインターロイキン２で増殖・活性化させることによって調製することができる。  具体的には抗ＣＤ３抗体あるいはインターロイキン２の単独あるいは組み合わせることにより行える。  あるいは各種のマイトージェン増殖因子、活性化因子、抗ＣＤ２８抗体などのモノクローナル抗体を使用して細胞の増殖・活性化をおこなうことも可能である。  また必要により癌細胞や癌抗原により活性化させたり、あるいは特異性を上昇させた活性化リンパ球を使用することもできる。
【００４０】
増殖・活性化の方法は特に限定されない。  本実施例ではインターロイキン２と抗ＣＤ３抗体との組み合わせ存在のもとに増殖培養および活性化を実施している。  具体的には、例えばインターロイキン２を含む培養用培地液にリンパ球細胞を浮遊させ、これを抗ＣＤ３抗体を固相化した培養容器に入れて培養を開始することができる。
【００４１】
抗ＣＤ３抗体としては、リンパ球細胞の増殖・活性化を促進できる抗体であれば、特に限定されるものではない。  またリンパ球細胞の刺激に用いる抗ＣＤ３抗体は、精製したＣＤ３分子を用いて動物又は細胞に産生させることもできるが、安定性やコスト面等において優れた市販のＯＫＴ−３抗体（製造元：オーソファーマスーティカル）が使用できる。
【００４２】
また抗ＣＤ３抗体は、リンパ球細胞の増殖の効率、操作の容易性の観点から、固相化して用いることが好ましい。  抗体を固相化するための器具としては、ガラス、ポリウレタン、ポリオレフィン、ポリスチレン等の材質の培養容器が挙げられる。  この場合、入手が容易であることから市販のプラスチック製の滅菌済み細胞培養フラスコ等を使用することもでき、その大きさは適宜選択できる。
【００４３】
さらに固相化は、前記抗ＣＤ３抗体の希釈液を固相化する器具に添加し、例えば、４℃〜３７℃の温度で２〜２４時間、静置することによって行うことができる。  この抗ＣＤ３抗体の固相化には、抗ＣＤ３抗体を滅菌したダルベッコりん酸緩衝液等の生理的な緩衝液中に１〜３０μｇ／ｍｌの濃度に希釈して用いることが好ましい。  固相化後、使用時までコールドルームや冷蔵庫（４℃）で保存することができる。  この場合使用時に液を除去し、また必要あれば常温のダルベッコりん酸緩衝液等の生理的な緩衝液で洗浄できる。
【００４４】
またインターロイキン２は、市販されているものを用いることができ、培養用培地液１〜２０００Ｕ／ｍｌの濃度となるように用いるのが好ましい。  さらにインターロイキン２は、水、生理食塩液、ダルベッコりん酸緩衝液、ＲＰＭＩ−１６４０、ＤＭＥＭ、ＩＭＤＭ、ＡＩＭ−Ｖ等の一般に広く用いられる細胞培養用培地液等に溶解して使用することができる。なお一度溶解したものは、活性の低下を防ぐため、冷蔵保存することが好ましい。
【００４５】
この場合に使用される培養用培地液としては、リンパ球細胞の培養に適したものであれば特に制限されず、血清等の生物由来の培養液、平衡塩類溶液にアミノ酸、ビタミン、核酸塩基などを加えた合成培地などが使用でき、ＲＰＭＩ−１６４０、ＡＩＭ−Ｖ、ＤＭＥＭ、ＩＭＤＭ等が好ましいものとして挙げられ、なかでもＲＰＭＩ−１６４０が特に好ましいものとして挙げられる。
【００４６】
また培養用培地は、正常ヒト血清を添加したものが増殖効果に優れて好ましい。  なお、これらの培地は市販品を用いることができる。  また培養については、例えば、ＣＯ２インキュベータ内で行う等、一般的な細胞培養の方法に従うことができる。  この場合、ＣＯ２濃度は１〜１０％、特に５％前後が好ましく、また温度については３０〜４０℃、特に３７℃前後の温度が好ましい。  また、上記のほか種々の抗体やサイトカインにより刺激を行う事によっても活性化リンパ球の調製を行うことができる。
【００４７】
〔活性化リンパ球の投与〕
活性化リンパ球の投与は、血管塞栓術の実施前あるいは実施後、または血管塞栓術実施中に行うことが望ましい。  便宜性と効果を考えた場合、１回から１０回程度が望ましく、またその投与頻度が高ければ高いほど、より多くの効果が望めるが、一般的には１回から数回の投与をおこなう。  本実施例では血管塞栓術後４回の活性化リンパ球投与を１クールとして実施しているが、これに限定されない。
【００４８】
また活性化リンパ球の投与は、血管塞栓術前のみ、あるいは血管塞栓術施術当日のみ、また血管塞栓後のみの投与のいずれでも効果がみられ、さらに好ましくは血管塞栓術の前後それぞれ１ヶ月から６ヶ月間にわたり、あるいは血管塞栓術施術の前・当日・施術後にわたって複数回投与するのがよい。  また１回の血管塞栓術と活性化リンパ球の治療だけでなく、血管塞栓術と活性化リンパ球投与の併用を何度か繰り返すこともできる。
【００４９】
さらに繰り返す場合には、血管塞栓術の単独あるいは活性化リンパ球投与の単独、あるいは両者の併用のいずれの組み合わせで行ってもよい。  さらに血管塞栓術あるいは活性化リンパ球投与療法を互いに異なった時点において繰り返して行なう場合においては、その実効性を確保するために、いずれか一方の療法実施後６ヶ月の期間を経過する前におこなうことが望ましい。
【００５０】
なお、本発明が適応される癌の種類としては、肝臓癌、すい臓癌、胆のう癌、胆道癌、肺癌、脳腫瘍、大腸癌、胃癌などが挙げられる。  また癌の種類は限定されないが、とくに血管が多数通っている癌に対して有効である。  転移性の癌や肉腫、さらには血液癌などにも適応可能である。
【００５１】
なお本発明の上記実施例では固形腫瘍の治療方法として細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤のいずれかを主成分とした治療剤を単独で悪性腫瘍の治療に用いる場合について説明しているが、細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の両方を投与することにより、より大きな抗癌作用を発揮することができる。  さらに細胞増殖阻害剤および免疫賦活剤の一方又は両方を、ＩＶＲ治療と併用することにより、さらにより大きな抗癌効果を期待することができる。
【実施例１】
【００５２】
［患者］
転移性肝臓癌患者    ８４歳  女性
第１回目治療        平成１２年１０月２７日
鼠径部をキシロカイン10mlにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。  カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、肝臓右葉Ｓ８に腫瘍の存在を確認した。
【００５３】
次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。  そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の質的診断と腫瘍血管の多寡を判断した。  パミドロネート（商品名；アレディア、日本化薬社製）60mg/2Ｖを20mlの注射筒で注射用蒸留水14mlにて溶解し、100cc の薬杯に注入した。  ビタミンＫ２（商品名；ケーフィー、小林化工社製）60mgを10mlの注射筒で 6mlとって同薬杯に注入した。
【００５４】
さらにスフェレックス（ヤクルト社製）600mg を10mlの注射筒で10mlとって同薬杯に注入した。  上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、イオキサグル酸（商品名；ヘキサブリックス、田辺製薬社製）30mlを混和した。  カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓右葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を 10ml/分の速度で全量注入した。  最後にゼラチンスポンジ 2.5ｘ 4ｃｍを１mm角に裁断し、その２分の１量にて肝動脈右葉枝の塞栓を施行した。
【００５５】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年１１月２７日）
肝臓：右葉全域を占める腫瘍は横径10cmでやや縮小し、内部の gasは残存。  造影剤の残留はない。  Dynamic Study にて腫瘍の横隔膜側Ｓ７に早期相より辺縁が不均一にエンハンスされ、後期相まで持続する alive tumorを認める。  腫瘍内部にも一部 Alive tumor有り。  癌細胞９５％壊死。  右側胸水の貯溜も消失。  診断：転移性肝癌TAE後１ヶ月follow。  ９５％ Necrosis。  ＰＲ（Partial Response）部分寛解・有効 。
【００５６】
第２回目治療（平成１２年１２月２２日）
鼠径部をキシロカイン10mlにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。  カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、腫瘍の存在を確認した。  次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。  そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の残存域診断と腫瘍血管の多寡を判断した。  下横隔膜動脈からもＣＴ下動脈造影を行い、肝右葉の腫瘍への側副血行路からの栄養血管の供給を確認した。
【００５７】
パミドロネート 30mg/Ｖを10mlの注射筒で注射用蒸留水7mlにて溶解し、100ccの薬杯に注入した。  ビタミンＫ２ 30mgを10mlの注射筒で3mlとって同薬杯に注入した。  さらにスフェレックス 300mgを5mlの注射筒で5mlとって同薬杯に注入した。  上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス15mlを混和した。  カテーテルを肝臓右葉の腫瘍の一部への栄養血管である下横隔膜動脈の末梢にまで挿入し、そこよりパミドロネート 15mg、ビタミンＫ２ 15mgとスフェレックス 150mg相当量の混和薬剤を5ml/分の速度で注入した。
【００５８】
さらにゼラチンスポンジ2.5ｘ4ｃｍを１mm角に裁断し、その２０分の１量にて下横隔膜動脈末梢の塞栓を施行した。  続いて、カテーテルを腫瘍存在部位である肝右葉枝の栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を5ml/分の速度で残りの全量を注入した。  最後に１mm角に裁断した2.5ｘ4ｃｍのゼラチンスポンジを、その８分の１量を投与し肝動脈右葉枝の塞栓を施行した。
【００５９】
第２回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年１月２２日）
肝臓右葉の SOLは low density化を見る。  造影にて異常な染まり（腫瘍濃染）は認めない。  周囲肝実質の萎縮なし。  胸水・腹水の貯溜を認めない。  診断：転移性肝癌追加 TAE後１か月 follow 。  現時点でＣＲ（Complete Response） 完全寛解・著効   すべての病変の１００％縮小（消失）が４週間以上持続。
【００６０】
腫瘍マーカーの経時的変化  CEA(ng/ml)
平成１２年１０月２５日    493.7
平成１２年１１月２７日    119.8
平成１２年１２月２１日     54.9
平成１３年  １月２２日      9.2
平成１３年  ２月２１日      4.6
平成１３年  ３月１９日      3.8
平成１３年  ４月２３日      6.3
平成１３年  ５月２１日      5.4
平成１３年  ６月２５日      7.8
平成１３年  ８月  １日      7.8
平成１３年  ８月３１日      9.4
平成１３年１０月２９日     19.6
【００６１】
認定：１回目の血管内治療により癌の退縮が認められ、２回目の血管内治療により転移性肝臓癌の消失が認められた。  また、癌マーカーである CEAも１回目の血管内治療により明瞭に低下した。  このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、転移性肝臓癌を退縮させる大きな効果があることを明らかとした。
【実施例２】
【００６２】
［患者］
肝細胞癌患者    ６１歳  女性
第１回目治療    平成１３年３月１３日
鼠径部をキシロカイン10mlにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。  カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、肝臓右葉Ｓ５および左葉Ｓ２に腫瘍の存在を確認した。  次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。  そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の質的診断と腫瘍血管の多寡を判断した。
【００６３】
パミドロネート 30mg/Ｖを10mlの注射筒で注射用蒸留水7mlにて溶解し、100ccの薬杯に注入した。  さらにスフェレックス 300mgを 10mlの注射筒で5mlとって同薬杯に注入した。  上記二剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス12mlを混和した。  カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓左葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を5ml/分の速度で全量注入した。
【００６４】
ビタミンＫ２ 30mg を10mlの注射筒で 3mlとって同薬杯に注入した。  さらにスフェレックス 300mgを10mlの注射筒で 5mlとって同薬杯に注入した。  上記二剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス 8mlを混和した。  カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓右葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を5ml/分の速度で全量注入した。  最後にゼラチンスポンジ2.5ｘ4ｃｍを１mm角に裁断し、その８分の１量にて肝動脈右葉枝の塞栓を、さらに８分の１量にて肝動脈左葉枝の塞栓を施行した。
【００６５】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年４月１１日）
肝臓Ｓ２の前回のCTAPにて径 43×30mmであった腫瘍は径 2.5cmまで縮小し、早期相での濃染はみとめず中心の LDAは最後まで濃染を受けない。  癌細胞は完全壊死と思われる。  Ｓ６の前回のCTAPにて径21mmであった腫瘍は径 1.5cmまで縮小し、これも早期相での濃染はみとめない。  門脈は求肝性で閉塞・途絶を認めないが、一部は遠肝性で側副血行路として胃静脈、食道静脈瘤を認める。  診断：肝細胞癌。 TAE後１ヶ月  ほぼＣＲ（Complete Response）である。
【００６６】
第２回目治療    平成１３年４月１７日
鼠径部をキシロカイン10mlにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。  カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、腫瘍の存在を確認した。次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。  そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の残存域診断と腫瘍血管の多寡を判断した。  Ｓ２の枝は細くなっているが、その末梢に細い屈曲蛇行する腫瘍血管と腫瘍のごく一部の濃染を認めた。  Ｓ６の枝は完全閉塞でみとめられず、Ｓ５の枝よりリング状の腫瘍濃染を認め、側副血行路からの栄養血管の供給を確認した。
【００６７】
パミドロネート30mg/Ｖを10mlの注射筒で注射用蒸留水7mlにて溶解し、100ccの薬杯に注入した。  ビタミンＫ２ 30mgを10mlの注射筒で3mlとって同薬杯に注入した。  さらにスフェレックス 300mgを 5mlの注射筒で 5mlとって同薬杯に注入した。  上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス15mlを混和した。  カテーテルを右肝動脈にまで挿入し、そこよりパミドロネート20mg、ビタミンＫ２ 20mgとスフェレックス200mg相当量の混和薬剤を5ml/分の速度で注入した。
【００６８】
さらにゼラチンスポンジ2.5×4ｃｍを１mm角に裁断し、その２０分の１量にて塞栓を施行した。  続いて、カテーテルを肝左葉枝まで挿入し、同混和薬剤を5ml/分の速度で残りの全量を注入した。  最後に１mm角に裁断した2.5ｘ4ｃｍのゼラチンスポンジを、その２０分の１量を投与し左肝動脈の塞栓を施行した。
【００６９】
第２回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年５月１７日）
肝臓Ｓ２の前回の CTAPにて径 43×30mmであった腫瘍はさらに径1.7cmまで縮小し、早期相での濃染はみとめず中心の LDAは最後まで濃染を受けない。  癌細胞は完全壊死と思われる。  Ｓ６の前回の CTAPにて径 21mmであった腫瘍も同様にさらに径 0.7cmまで縮小し、これも早期相での濃染はみとめない。  門脈は求肝性で閉塞・途絶を認めないが、一部は遠肝性で側副血行路として胃静脈、食道静脈瘤を認める。  診断：肝細胞癌。  初回TAE後２ヶ月  ２回目TAE後  １ヶ月    ＣＲ（Complete Response）である。
【００７０】
腫瘍マーカーの経時的変化  AFP（ng/ml）
平成１３年  ３月１２日    2475.38
平成１３年  ３月２０日     809.3
平成１３年  ４月１１日     114.78
平成１３年  ５月  １日      26.72
平成１３年  ５月１７日       8.9
平成１３年  ６月１１日       6.42
平成１３年  ７月１４日       5.93
平成１３年  ９月１４日       8.54
平成１３年１０月１７日      13.02
【００７１】
認定：１回目および２回目の血管内治療により肝細胞癌の退縮が認められ、癌はほぼ消失している。  また、癌マーカーである AFPも血管内治療により明瞭に低下した。  このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、肝細胞癌を退縮させる効果があることを明らかとした。
【実施例３】
【００７２】
《ＩＶＲ治療と活性化リンパ球療法の併用例》
［患者］
胃癌患者    ７３歳  女性
第１回目血管内治療    平成１４年１０月３１日
実施例１、２と同じくセルディンガー法にてカテーテルを挿入した。  カテーテルを腹腔動脈に挿入し造影を行い、胃体部から前庭部にかけて腫瘍の存在を確認し、その質的診断と腫瘍血管の多寡の判断を行った。  パミドロネート60mg/2Ｖを20mlの注射筒で注射用蒸留水14mlにて溶解し、これを100ccの薬杯に注入した。  ビタミンＫ２  120mgを20mlの注射筒で12mlとって同薬杯に注入した。
【００７３】
さらにスフェレックス1200mgを 20mlの注射筒で 20mlとって同薬杯に注入した。  上記三剤を混合したのちこれにイオン性造影剤、ヘキサブリックスを30mlを混和した。  カテーテルを腫瘍存在部位である胃大網動脈まで挿入し、パミドロネート15mg、ビタミンＫ２30mgとスフェレックス 300mg相当量の同混和薬剤を5ml/分の速度で注入した。  １mm角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。
【００７４】
続いて右胃動脈までカテーテルを挿入し、同混和薬剤の１２分の１量を1ml/分の速度で注入した。  さらに１mm角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。  最後に左胃動脈にカテーテルを挿入し、パミドロネート 15mg、ビタミンＫ２ 30mgとスフェレックス 300mg相当量の同混和薬剤を5ml/分の速度で注入した。
【００７５】
第１回血管内治療後および活性化リンパ球治療前のＣＴ所見
（平成１４年１１月２６日）：
胃の癌病巣部の厚みが手術前と比較して、約半分の厚さに減少、また広がりも減少し、腫瘍量が２分の１以下になっている。所属リンパ節の腫大も軽減している。  腹壁への直接浸潤部もすこし隙間があき出している。
【００７６】
『活性化リンパ球の投与』
《１》リンパ球の分離
平成１４年１１月６日、癌患者の静脈から末梢血５０ｍｌをヘパリン加採血した。  採血後、これをクリーンベンチ内で無菌的に上記により採血した注射筒の注射針を、接合部近くを触らないようにはずし１９Ｇ×１  １／２注射針につけ替えた。  別に５０ｍｌ遠沈管２本に、洗浄用培地（ＲＰＭＩ１６４０＋６）５００ｍｌを１５ｍｌずつ注ぎ込んだ遠沈管内に、上記により採血した血液全てを２本共に等量になるようにゆっくりと注いだ。  遠沈管の蓋を完全に閉めた後、２〜３回転倒混和した。
【００７７】
これを１０ｍｌピペットでリンホセパールＩを１５ｍｌ遠沈管６本に各３ｍｌずつ入れ、さらに培地で希釈した血液１０ｍｌをそれぞれの遠沈管に、液面を乱さないようにゆっくり重層した。  その後、これを遠心分離機を用いて回転数１，８００ｒｐｍ、遠心分離温度２０℃、ブレーキをＯＦＦの状態で１５分間遠心した。  遠心後、吸引機により無菌的に遠沈管内のリンパ球層の約１ｃｍ上までリンパ球細胞を吸い取らないようにゆっくり吸い取った。
【００７８】
さらに５ｍｌピペットマンで血餅の層を吸い取らないようにリンパ球細胞の層をとり、これをあらかじめ、洗浄用培地（ＲＰＭＩ１６４０＋６）を２５ｍｌ入れておいた５０ｍｌ遠沈管内に回収した。  遠沈管の蓋を閉め２〜３回転倒混和した後、さらに遠心分離機により、回転数１，８００ｒｐｍ、遠心分離温度２０℃の状態で１０分間遠心した。  遠心後、上清みを捨て、細胞沈渣をボルテックスにかけて良くほぐした。
【００７９】
さらにこれを、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋７）４４ｍｌに、３５，０００Ｕ／ｍｌ  ＩＬ（インターロイキン）−２  １ｍｌと、ヒト血清５ｍｌを含む培養用培地（以下、単に「培養用培地」と略す）５０ｍｌに入れ、良く転倒混和して細胞懸濁液を調製した。  この細胞懸濁液１０μｌをチューブにとり、これを４０μｌのチュルク液と混合し、血球計算版に１０μｌアプライし、顕微鏡下で細胞数を測定した結果、総細胞数は７．６×１０７個だった。
【００８０】
《２》ＯＫＴ３固相化フラスコの調製
ＰＢＳ（−）で５μｇ／ｍｌに調製しておいたＯＫＴ３溶液を、底面積２２５ｃｍ２の培養用フラスコに１０ｍｌ入れ、底面に溶液を均一になるよう浸した。  翌日、フラスコのＯＫＴ３溶液を吸引機で吸い取り、ＰＢＳ（−）５０ｍｌをフラスコに注ぎ込みフラスコの蓋を閉めて激しく振った後、蓋を開け、液を捨てた。  再度、無菌的にＰＢＳ（−）５０ｍｌをフラスコに注ぎ込みフラスコの蓋を閉めて激しく振った後、蓋を開け、液を捨てた。  フラスコ内と蓋に残っている液を吸引機で丁寧に吸い取り、ＯＫＴ３固相化フラスコの調製を行った。
【００８１】
《３》リンパ球の活性化培養
前記《１》において調製した細胞懸濁液５０ｍｌを、《２》で調整したＯＫＴ３固相化フラスコに分注し、３７℃、５％濃度の炭酸ガス存在下において培養を開始した。  ３日後に培養用培地５０ｍｌを加え、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続した。  さらに４日後、培養用培地１５０ｍｌを加え、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続した。
【００８２】
さらに２日間、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続することにより活性化リンパ球を得、このうちの一部の細胞を凍結保存液に懸濁し、３本のチューブにて液体窒素下、凍結保存した（３．６×１０７個／チューブ）。  また残りの細胞を以下のように拡大培養した。
【００８３】
《４》リンパ球の拡大培養（１回目）
上記《３》で調整したリンパ球をＬＬ−７培地、あるいはＭｅｄｉｕｍ９３０  ７５０ｍｌを含むガス透過性培養バッグに移し、炭酸ガスインキュベーター中で３７℃、５％炭酸ガス下で培養をおこなった。  ３日後、細胞を含むガス透過性培養バッグと新たな培地を含むガス透過性培養バッグを無菌接合装置により連結し、両ガス透過性培養バッグ中の培地を良く混合した後、これを２分割し、再度その結合を切除し、接合部分を無菌的にシールした後、３７℃、５％炭酸ガス下で培養を継続した。
【００８４】
《５》投与製剤の調整
上記《４》で調製した２バッグのうち１バッグ中の細胞を含む培地を２５０ｍｌ遠心管内に移し、これを遠心分離機による遠心により細胞の分離をおこなった。  デカンテーションにより培養液を除去し、細胞ペレットに０．１％のヒトアルブミンを含む生理食塩水を加えて遠心分離することにより洗浄操作をおこなって細胞ペレットを調整した。  さらに上記細胞ペレットに１％のヒトアルブミンを含む生理食塩水２００ｍｌを加えて懸濁し、これを１００μのステンレス金網にて濾過後、輸血用のバッグに詰めて投与用製剤とした。  なおこの場合の輸血用バッグに含まれる細胞数は、９．２×１０９個であった。本リンパ球は、平成１４年１１月２６日に患者の静脈より注入投与した。
【００８５】
《６》凍結保存細胞からの調整
前記《３》で調製した凍結細胞を３７℃で融解させるとともに、これを培養液で３回洗浄した。  本細胞を使用して《３》、《４》、《５》に示されると同様な方法で投与製剤リンパ球製剤を調整し、４．４×１０９個の活性化リンパ球を調製した。本リンパ球は、平成１４年１２月１０日に患者の静脈より注入投与した。  上記と同様にして凍結細胞を融解し、６．７×１０９個の活性化リンパ球を調製した。本リンパ球は、平成１４年１２月２４日に患者の静脈より注入投与した。  上記と同様にして凍結細胞を融解し、３．７×１０９個の活性化リンパ球を調製し、これを平成１５年１月７日に患者の静脈より注入投与した。
【００８６】
〔活性化リンパ球療法のスケジュール〕
採血  平成１４年１１月８日
投与  １回目（02/11/26）−８回目（03/4/1）
活性化リンパ球治療            １クール目
平成１４年１１月  ８日      培養用血液採取  50mlの注射筒で50ml採血
平成１４年１１月２６日      第１回目活性化リンパ球投与
平成１４年１２月１０日      第２回目活性化リンパ球投与
平成１４年１２月２４日      第３回目活性化リンパ球投与
平成１５年  １月  ７日      第４回目活性化リンパ球投与
【００８７】
認定：第１回目ＩＶＲ治療の後に活性化リンパ球治療を行うことにより腫瘍量の減少を認めた（平成１５年１月２３日）。  このことにより、本発明の血管塞栓療法と活性化リンパ球治療を併用することにより腫瘍の治療に大きな相乗効果があることを明らかとした。
【００８８】
第２回目治療    平成１５年１月２３日
第１回目治療と同じくセルディンガー法にてカテーテルを挿入、胃体部から前庭部にかけて腫瘍の存在を確認した。腫瘍量の減少を認めたが、腫瘍血管は多く残存していた。パミドロネート60mg/2Ｖを20mlの注射筒で注射用蒸留水14mlにて溶解し、これを 100ccの薬杯に注入した。  さらにビタミンＫ２ 120mgを20mlの注射筒で12mlとって同薬杯に注入した。  さらにスフェレックス 600mgを20mlの注射筒で10mlとって同薬杯に注入した。  上記三剤を混合したのち、これにイオン性造影剤、ヘキサブリックス30mlを混和した。
【００８９】
カテーテルを腫瘍存在部位である胃大網動脈まで挿入するとともに、さらに腫瘍への栄養血管を供給している分枝に選択的に挿入し、そこよりパミドロネート15mg、ビタミンＫ２ 30mgとスフェレックス 150mg相当量の同混和薬剤を 3ml/分の速度で注入した。  そして１mm角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。  最後に左胃動脈にカテーテルを挿入し、これを介してパミドロネート 40mg、ビタミンＫ２ 80mgとスフェレックス 400mg相当量の同混和薬剤を3ml/分の速度で注入した。  さらに１mm角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。
【００９０】
上記と同様にして調製した活性化リンパ球を以下のようなスケジュールで投与を行った。  なおリンパ球の調製は、実施例１と同様にして調製しておこなった
平成１５年  １月３１日      培養用血液採取  50mlの注射筒で50ml採血
平成１５年  ２月１８日      第１回目活性化リンパ球投与
平成１５年  ３月  ４日      第２回目活性化リンパ球投与
平成１５年  ３月１８日      第３回目活性化リンパ球投与
平成１５年  ４月  １日      第４回目活性化リンパ球投与
【００９１】
上記スケジュールのように、
平成１５年  ２月１８日      ４．３×１０９個
平成１５年  ３月  ４日      ４．６×１０９個
平成１５年  ３月１８日      ２．５×１０９個
平成１５年  ４月  １日      ５．０×１０９個
上記のようにそれぞれ活性化リンパ球を患者の静脈より注入投与した。
【００９２】
第２回ＩＶＲ治療後および活性化リンパ球治療中のＣＴ所見（平成１５年２月２５日）：
胃癌部の壁肥厚は第２回ＩＶＲ血管内治療時の厚みよりもさらに軽減している。  胃体下部前壁のPolyp状の隆起も直径1.5cmにまで縮小している。  また所属リンパ節も縮小し、直径 1.2cmとなっている。  現時点でＰＲ（Partial Response）である。
【００９３】
認定：１回目および２回目のＩＶＲ血管内治療により胃がんの縮小が認められ、特に活性化リンパ球治療を併用することによりがんの退縮効果が確実に増強されることを明らかとした。
【実施例４】
【００９４】
［患者］
肺癌患者    ９４歳  男性
第１回目ＩＶＲ治療    平成１２年８月２８日
実施例１〜３と同様にセルディンガー法にて患者の静脈にカテーテルを挿入し、動脈造影を行った。  肺癌は左気管支動脈の血管により栄養され、屈曲蛇行する腫瘍血管を認め、腫瘍の下半分が濃染されていた。  左鎖骨下動脈の造影にて内胸動脈、胸肩峰動脈のいずれからも栄養血管は認めなかった。
【００９５】
パミドロネート30mg/Ｖを10mlの注射筒で注射用蒸留水 7mlにて溶解し、これを100ccの薬杯に注入した。  さらにビタミンＫ２ 30mgを10mlの注射筒で3mlとって同薬杯に注入した。  さらにスフェレックス 300mgを10mlの注射筒で 5mlとって同薬杯に注入し、上記三剤を混合したのち、これにイオン性造影剤ヘキサブリックス15mlを混和した。  カテーテルを栄養血管である左気管支動脈にまで挿入し、そこよりパミドロネート20mg、ビタミンＫ２ 20mgとスフェレックス 200mg相当量の同混和薬剤を 5ml/分の速度で注入し、さらに１mm角裁断ゼラチンスポンジを数片投与して塞栓を施行した。
【００９６】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年９月２９日）：
左肺上葉の腫瘍は横径でTAE前8.5cmからTAE後１ヶ月で7.0cmにまで縮小している。  また内部は空洞化している。  診断：Lung Cancerの TAE後（治療効果ＰＲ以上）再TAEを要す。
【００９７】
第２回目治療    平成１２年１０月１６日
第１回目治療と同じく、肺癌は左気管支動脈の血管により栄養され、腫瘍の下半分が濃染された。  パミドロネート 30mg/Ｖを10mlの注射筒で注射用蒸留水 7mlにて溶解し、これを100ccの薬杯に注入した。  ビタミンＫ２ 30mgを10mlの注射筒で 3mlとって同薬杯に注入した。  さらにスフェレックス300mgを5mlの注射筒で 5mlとって同薬杯に注入した。上記三剤を混合したのちイオン性造影剤、ヘキサブリックス15mlを混和した。  カテーテルを左気管支動脈にまで挿入し、そこより同混和薬剤を5ml/分の速度で全量を注入するとともに、さらに１mm角裁断ゼラチンスポンジを数片投与して塞栓を施行した。
【００９８】
第２回ＩＶＲ血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年１０月３０日）：
左肺上葉の腫瘍は横径で、TAE前 8.5cm → TAE後１ヶ月 7.0cm → TAE後２ヶ月（再TAE後１ヶ月）→ 7.5cmと逐次変化している。  肺尖よりの部分と胸膜よりの部分は縮小しているが、肺門側がやや増大している。  内部の空洞化も大きな変化はない。  肺門よりの TAEの効果は不十分で別の血流が関与している可能性が大きい。  しかしＩＶＲ血管内治療によりがんの退縮が認められた。  このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、肺がんを退縮させる効果があることが明らかとなった。
【００９９】
なお、上記各実施例においては、ビスフォスフォネートならびにビタミンＫ２およびそれらの誘導体の投与方として、ＩＶＲ血管塞栓療法と併用して局所への投与を行っているが、全身性に投与することもできる。