(57)【要約】【課題】ポリウレタンを生分解する方法を提供すること【解決手段】ペシロマイセス属またはアルタナリア属に属し、ポリウレタンを分解する能力を有する微生物とポリウレタンとを接触させて、ポリウレタンを分解する方法が提供される。好ましい微生物は、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）またはアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）である。これらの微生物は、ポリエーテル型のポリウレタンを分解することができる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリウレタンを分解するための方法であって、ペシロマイセス属またはアルタナリア属に属し、ポリウレタンを分解する能力を有する微生物とポリウレタンとを接触させる工程を含む、方法。
【請求項２】
前記微生物が、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）またはアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリウレタンが、ポリエーテル型ポリウレタンである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ペシロマイセス属またはアルタナリア属に属し、ポリウレタンを分解する能力を有する微生物。
【請求項５】
ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）。
【請求項６】
アルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）。
【請求項７】
基材とポリウレタンとを貼り合わせてなる複合材から該基材とポリウレタンとを分離する方法であって、該複合材を構成するポリウレタン部分とペシロマイセス属またはアルタナリア属に属しポリウレタンを分解する能力を有する微生物とを接触させる工程を含む、方法。
【請求項８】
前記基材が再利用可能な形態で回収される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記微生物が、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）またはアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリウレタンが、ポリエーテル型ポリウレタンである、請求項７から９のいずれかの項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ポリウレタンの分解方法に関する。さらに詳しくは、ポリウレタンを分解し得る生物、この微生物を用いてポリウレタンを分解する方法、並びに基材とポリウレタン材とを貼り合わせてなる複合材から該基材とポリウレタンとを分離する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ポリウレタンは、主鎖中にウレタン結合を有する高分子化合物の総称であり、一般的には、主原料であるジイソシアナートと硬化剤であるポリオールとを反応させることにより生産されている。ポリウレタンには、ポリオール部分がポリエーテルである場合とポリエステルである場合とがあり、前者はポリエーテル型ポリウレタン、後者はポリエステル型ポリウレタンと呼ばれている。ポリウレタンには、熱可塑性樹脂、ウレタンフォーム（発泡ポリウレタン）、エラストマーが含まれ、これらはそれぞれの特性に応じた用途に用いられている。特に、ウレタンフォームは加工性に優れ、腐敗あるいは変質しにくく、比重も軽いことから、冷蔵庫などの家電製品の断熱材、家具の弾性体などに幅広く利用されている。
【０００３】
しかし、ポリウレタンは、腐敗あるいは変質しにくい。そのため、ポリウレタン、特にウレタンフォームを断熱材あるいは弾性体として用いた家電製品、家具などを廃棄する場合、環境問題を引き起こす。そこで、近年の環境問題を考慮して、ポリウレタンの回収および再利用（リサイクル）が図られている。
【０００４】
ポリウレタンのリサイクル方法としては、主に、マテリアルリサイクル、ケミカルリサイクルなどの方法が挙げられる。マテリアルリサイクルは、回収されたポリウレタン製品を破砕機で破砕してチップ化し、これに接着剤を加えて加熱成形する方法である。ケミカルリサイクルは、化学反応によってポリウレタンをモノマーおよびオリゴマーに戻して、原料として再利用する方法である。
【０００５】
マテリアルリサイクルの場合について、ウレタンフォームを例に説明する。まず、家電製品や家具などからウレタンフォームを回収することが必要となる。ウレタンフォームは、家電製品や家具などを構成する基材（例えば、スチール、木材、硬質プラスチックなど）に、リベット、接着剤などを用いる接着方法で貼り合わされ、基材とポリウレタン材とが複合材を形成している。この複合材からのウレタンフォームの回収は、リベットをはずす、無理やりに剥がすなど、剥離に手間がかかり、さらに、回収が不充分になるおそれがある。
【０００６】
そこで、ポリウレタンを効率良く回収する方法が望まれており、微生物を用いるポリウレタンの分解が検討されている。ポリウレタンを分解し得る微生物としては、アスペルギルス属、ペニシリウム属などの糸状菌、セラチア属、コリ値バクテリア属に属する細菌などが報告されている（非特許文献１および２参照）。
【０００７】
しかし、これらの微生物は、ポリウレタンの分解活性が高いとはいえない。
【０００８】
【非特許文献１】
ナカジマ−カンベら、アプライド  マイクロバイオロジー  アンド  バイオテクノロジー（Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）５１巻、１３４−１４０（１９９９年）
【非特許文献２】
機能性ポリウレタンの基礎と応用、２９０−３０１頁、松永勝治監修、シーエムシー発行（２０００年）
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ポリウレタンを効率良く分解する微生物およびそのような微生物を用いるポリウレタンの分解方法を提供すること、さらには、基材とポリウレタン材とを貼り合わせてなる複合材から該基材とポリウレタンとを分離する方法を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は、ポリウレタンを分解するための方法であって、ペシロマイセス属またはアルタナリア属に属し、ポリウレタンを分解する能力を有する微生物とポリウレタンとを接触させる工程を含む方法を提供する。
【００１１】
好ましい実施態様においては、前記微生物が、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）またはアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）である。
【００１２】
好ましい実施態様においては、前記ポリウレタンが、ポリエーテル型ポリウレタンである。
【００１３】
また、本発明は、ペシロマイセス属またはアルタナリア属に属し、ポリウレタンを分解する能力を有する微生物を提供する。このような微生物は、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）またはアルタナリアアルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）である。
【００１４】
本発明は、さらに、基材とポリウレタンとを貼り合わせてなる複合材から該基材とポリウレタンとを分離する方法であって、該複合材を構成するポリウレタン部分とペシロマイセス属またはアルタナリア属に属しポリウレタンを分解する能力を有する微生物とを接触させる工程を含む方法を提供する。
【００１５】
好ましい実施態様においては、前記基材が再利用可能な形態で回収される。
【００１６】
好ましい実施態様においては、前記微生物がペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）またはアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）である。
【００１７】
また、別の好ましい実施態様においては、前記ポリウレタンが、ポリエーテル型ポリウレタンである。
【００１８】
【発明の実施の形態】
本明細書において、ポリウレタンというときには、ポリエーテル型ポリウレタンおよびポリエステル型ポリウレタンの両者を含み、ポリウレタン樹脂（熱可塑性樹脂）、ウレタンフォーム（発泡ポリウレタン）、およびポリウレタンエラストマーが含まれる。
【００１９】
本明細書において、基材とは、ポリウレタンを分解する微生物で分解されない材料（例えば、スチール、木材、硬質プラスチックなど）を用いて製造された家電製品や家具を構成する部分をいうが、これに制限されない。
【００２０】
また、複合材は、基材とポリウレタンとが貼り合わされた材料をいう。貼り合わせの方法に特に制限はない。例えば、スチール、木材、硬質プラスチックなどの材料で構成された基材に、リベット、接着剤などでポリウレタン（ウレタンフォーム）を固定、結合あるいは接着する方法が例示される。
【００２１】
本発明に用いる微生物は、ペシロマイセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）属またはアルタナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属に属する微生物であって、ポリウレタンを分解する能力を有する微生物であれば、特に制限はない。中でも、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）またはアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）として寄託されている微生物が、好ましく用いられる。このような微生物は、土壌から、後述の実施例に記載された方法で、取得された。
【００２２】
なお、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）およびアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）の菌学的性質をそれぞれ、表１および表２に示す。
【００２３】
【表１】
2005046009.tif 000002
【００２４】
【表２】
2005046009.tif 000003
【００２５】
また、ペシロマイセス属またはアルタナリア属に属する微生物の中から、以下に記述する方法でスクリーニングされる、ポリウレタン分解能を有する微生物も、本発明に用いられる。
【００２６】
まず、適切な大きさ（例えば、５ｍｍ角の立方体）に裁断したポリウレタンとペシロマイセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）属またはアルタナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属に属する微生物とを、適切な培地（例えば、ポリペプトン１ｗ／ｖ％、グルコース０．５ｗ／ｖ％、イーストエキス０．５ｗ／ｖ％、および食塩０．５ｗ／ｖ％を含有する培地（以下、ＬＢ＋グルコース培地））で、適切な温度（例えば、２０〜４０℃）で適切な期間（１〜２週間）培養する。周囲に微生物の生育が見られたポリウレタンを、適切な寒天培地（例えば、２％の寒天を含有するＬＢ＋グルコース寒天培地）に移し、適切な温度と適切な期間、静置培養する。そして、微生物が生育した寒天培地からポリウレタンを取り出し、イオン交換水で２回、メタノールで１回洗浄し、一昼夜乾燥させて、形状変化を観察する。そして、ポリウレタン片が小さくなった（重量が減少した）プレート、あるいはポリウレタン片の形状が変化したプレートに生育した微生物を単離することにより、ポリウレタン分解能を有する微生物が単離できる。
【００２７】
あるいは、粉末状ポリウレタンを適切な濃度（例えば、０．０５〜０．５ｗ／ｖ％、好ましくは０．１ｗ／ｖ％）となるように、上記ＬＢ＋グルコース寒天培地に添加し、微生物を播種して生育させ、ハロが形成される微生物を、ポリウレタン分解活性能を有する微生物として、単離できる。
【００２８】
本発明に用いられるペシロマイセス属またはアルタナリア属に属し、ポリウレタン分解能を有する微生物、特に、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）およびアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）は、従来、微生物では分解されないとされていたポリエーテル型ポリウレタンを分解し得る点で、特に有用性が大きい。以下、これらを総称して、本発明の微生物という場合がある。
【００２９】
本発明の微生物を用いるポリウレタンの分解は、特別な条件で行う必要はない。本発明の微生物とポリウレタンとを接触させることにより、ポリウレタンが分解される。適切な液体培地で培養した本発明の微生物を、ポリウレタンの表面に散布してもよく、ポリウレタンの内部に注入してもよい。
【００３０】
本発明のポリウレタンの微生物による分解は、基材とポリウレタンとを貼り合わせてなる複合材から、基材とポリウレタンとを分離し、基材を再利用可能な形態で回収する方法に適用される。再利用可能な形態とは、回収された基材自体がそのままリサイクルされる場合、および、少し手を加えれば再利用（リサイクル）できるような状態を包含する。以下、冷蔵庫を例に、基材とウレタンフォームとを貼り合わせた複合材から基材を回収する例について説明するが、あくまでも例示であり、本発明を制限する意図はない。
【００３１】
ウレタンフォームは、断熱材として、冷蔵庫の外壁と内壁との間に充填されている。この外壁あるいは内壁を構成する基材は、硬質プラスチックで形成されている場合が多い。この外壁あるいは内壁のいずれか一方または両方にウレタンフォームがリベットであるいは接着剤で貼り合わされ（固定され）て複合材とされる。この複合材を組立てることによって、外壁と内壁との間にウレタンフォームが充填された形の冷蔵庫が製造される。この冷蔵庫を廃棄するに際し、冷蔵庫を分解することによって、基材とウレタンフォームとを貼り合わせてなる複合材が生じる。そこで、この複合材に、ポリウレタン（ウレタンフォーム）を分解し得る微生物を作用させることにより、実質的に再利用可能な状態で、基材が回収できる。
【００３２】
基材の回収に際して、ウレタンフォームは分解（溶解）してもよいし、ウレタンフォームを回収して、ウレタンフォームが再利用できるようにしてもよい。
【００３３】
基材とウレタンフォームとを貼り合わせてなる複合材から、ウレタンフォームを分解（溶解）する方法としては、複合材を本発明の微生物を含有する液体培地に浸漬し、適切な温度で放置する方法、複合材のウレタンフォーム部分に本発明の微生物を含有する液体培地を散布する方法、あるいは、本発明の微生物を直接ポリウレタンフォーム上に塗布する方法などが採用される。これらの方法により、ウレタンフォームが分解（溶解）され、基材が回収される。回収された基材は、再利用可能な状態となる。
【００３４】
基材の回収と同時にウレタンフォームを回収して、基材およびウレタンフォームの両方が再利用できるようにする場合は、例えば、冷蔵庫壁（基材）とウレタンフォームとの貼り合わせ部分に、本発明の微生物の培養液をそのまま、あるいは生育培地に懸濁して注入し、適切な温度で放置（培養）する。この方法により、基材とウレタンフォームとの貼り合わせ部位において本発明の微生物が生育し、貼り合わせ部分のウレタンフォームを分解（溶解）することにより、基材とウレタンフォームとが容易に剥離される。これに加えて、本発明の微生物をウレタンフォームの表面に適切な間隔で線状に塗布するか、あるいは、微生物を塗布した後、塗布部位にさらに液体培地（例えば、ＬＢ＋グルコース培地など）を塗布あるいは注入するなどの方法を採用し、その微生物の生育に最適な温度で放置することにより、ウレタンフォーム上あるいはウレタンフォーム中の所望の位置で微生物を増殖させ、その部位でポリウレタンを分解（溶解）して、所望の大きさのウレタンフォームを回収することができる。
【００３５】
本発明の微生物を増殖させるための培地の組成には特に制限がなく、一般にペシロマイセス属またはアルタナリア属に属する微生物の増殖に用いられる培地が、用いられる。これらの培地は、使用する微生物に応じて、適宜最適な炭素源（例えば、グルコース、シュークロース、マルトースなど）、窒素源（ポリペプトン、麦芽エキス、肉エキス、アンモニウムなど）、無機（金属）化合物（硝酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、塩化カリウム、食塩、硫酸マグネシウム、硫酸鉄など）などの一般に微生物の培養に使用するものを組み合わせて、最適な培地とすることができる。
【００３６】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されない。
【００３７】
【実施例】
（実施例１  ポリウレタン分解能を有する微生物の単離）
廃棄された冷蔵庫の壁からポリウレタンを取り出し、５ｍｍ角の立方体に裁断して試験管に入れた。この試験管に、ＫＨ２ＰＯ４を０．１ｗ／ｖ％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏを０．０５ｗ／ｖ％、ポリペプトンを０．５ｗ／ｖ％、グルコースを１．５ｗ／ｖ％、および細菌類の生育を阻害するためのローズベンガルを０．００３ｗ／ｖ％含有する培地（以下、選択培地という）を５ｍｌ注入して、１２１℃、１５分間殺菌した。冷却後、この試験管に土壌サンプルを１ｇ投入して、３０℃で１５日間、振盪培養した。周囲に微生物の生育が見られたポリウレタン片を、２％の寒天を含有するＬＢ＋グルコース寒天培地に移して、３０℃で７日間、静置培養した。微生物が生育した寒天培地からポリウレタン片を取り出し、イオン交換水で２回、ついでメタノールで１回洗浄し、５０℃で一昼夜乾燥させて、形状変化を観察した。ポリウレタン片が小さくなった（重量が減少した）プレート、あるいはポリウレタン片の形状が変化したプレートに生育した微生物を単離して、ポリウレタン分解能を有する微生物を２株取得した。
【００３８】
得られた微生物は、それぞれ、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株およびアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株と同定された。それぞれの微生物は、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４４）およびアルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）として、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託されている。
【００３９】
以下、本実施例において、ペシロマイセス  ｓｐ．ＰＵＲＤＫ１株（ＦＥＲＭＰ−１９４４４）をＰＵＲＤＫ１株と称し、アルタナリア  アルタネート（Ｆｒ．）カイスラー  ＰＵＲＤＫ２株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４４５）株をＰＵＲＤＫ２株と称する。
【００４０】
（実施例２  ＰＵＲＤＫ１株の最適培地の検討）
以下の組成を有する、４種の培地を調製した。
【００４１】
【表３】
2005046009.tif 000004
【００４２】
実施例１で得たＰＵＲＤＫ１株を上記選択培地で３０℃、３日間前培養し、それぞれの培地１００ｍｌに１ｍｌ接種して、３０℃、４日間振盪培養し、遠心分離（１０，０００ｇ×２０分）により菌体を集め、イオン交換水で２回、エタノールで１回洗浄して、得られた菌体をシャーレに置き、常圧、５０℃の恒温槽で一昼夜乾燥して乾燥重量を測定した。結果を表４に示す。表４における数値は、１０個の平均値である。
【００４３】
【表４】
2005046009.tif 000005
【００４４】
この結果から、ＬＢ＋グルコース培地が最も生育がよいことが判明した。
【００４５】
次に、このＬＢ＋グルコース培地を基本とし、さらに最適生育培地を検討した。ＬＢ＋グルコース培地のうち、一つの成分の濃度を表５に記載のように変え、他の成分は同じにして培養した結果を表５に示す。
【００４６】
【表５】
2005046009.tif 000006
【００４７】
以上の結果から、ＰＵＲＤＫ１株の生育培地を以下の表６のように決定した。
【００４８】
【表６】
2005046009.tif 000007
【００４９】
表６に記載の組成のＬＢ＋グルコース培地（以下、ＰＵＲＤＫ１用培地）と基本としたＬＢ＋グルコース培地との生育を比較すると、約２０％の乾燥菌体量の増加が認められた。
【００５０】
（実施例３  ＰＵＲＤＫ２株の最適培地の検討）
実施例２のＰＵＲＤＫ１株に代えてＰＵＲＤＫ２株を用いた以外は同様にして、最適培地の検討を行った。結果を表７に示す。
【００５１】
【表７】
2005046009.tif 000008
【００５２】
以上の結果から、ＰＵＲＤＫ１株の生育培地（以下、ＰＵＲＤＫ２用培地という）を以下の表８のように決定した。
【００５３】
【表８】
2005046009.tif 000009
【００５４】
ＰＵＲＤＫ１用培地と基本としたＬＢ＋グルコース培地との生育を比較すると、約４６％の乾燥菌体量の増加が認められた。
【００５５】
（実施例４  ＰＵＲＤＫ１株を用いるポリウレタンの分解）
廃ポリウレタンを５ｍｍ角の立方体に裁断して試験管に入れた。この試験管に、ＰＵＲＤＫ１用培地を５ｍｌ注入して、１２１℃、１５分間殺菌した。冷却後、この試験管に、同じ培地で３０℃、２日間前培養したＰＵＲＤＫ１株を植菌して、３０℃で１５日間、振盪培養した。ポリウレタンの周囲にＰＵＲＤＫ１株が生育したことを確認して、２％の寒天を含有するＬＢ＋グルコース寒天培地に移して、３０℃で７日間、静置培養した。培養後、微生物が生育したポリウレタン片を取り出し、イオン交換水で２回、メタノールで１回洗浄し、５０℃で一昼夜乾燥させて、ポリウレタン片の形状変化を観察した。
【００５６】
ポリウレタン片にはＰＵＲＤＫ１株が付着し、ポリウレタン片の角張った部分が丸みを帯びていた。ＰＵＲＤＫ１株を添加せず、同様の処理を行った比較例ではポリウレタン片の形状変化は見られず、角張った部分の形状も保たれていた。このことは、ＰＵＲＤＫ１株により、ポリウレタン片が分解されたことを示している。
【００５７】
回収したポリウレタン片の薄片サンプルを電子顕微鏡（ＨＩＴＡＣＨＩ  走査電子顕微鏡  Ｓ−８００）で観察した結果、ＰＵＲＤＫ１株は、菌糸がポリウレタンの格子構造に沿って生育していることが確認された（図１参照）。
【００５８】
（実施例５  ＰＵＲＤＫ２株を用いるポリウレタンの分解−１）
廃ポリウレタンを５ｍｍ角の立方体に裁断し、その２０個を、ＰＵＲＤＫ２用の培地を１００ｍｌ含有する５００ｍｌフラスコに投入して、１２１℃、１５分間殺菌した。冷却後、このフラスコに、同じ培地で３０℃、２日間前培養したＰＵＲＤＫ２株を１ｍｌ植菌して、３０℃で７日間、１２０ｒｐｍで振盪培養した。培養後、微生物が生育したポリウレタン片を取り出し、イオン交換水で２回、メタノールで１回洗浄し、一昼夜乾燥させて、ポリウレタンの形状変化を観察した。ＰＵＲＤＫ２株はポリウレタン片上で良く生育し、取り除くことが困難であったため、ポリウレタン片の重量変化は確認できなかったが、形状は崩れていた。
【００５９】
（実施例６  ＰＵＲＤＫ２株を用いるポリウレタンの分解−２）
ポリウレタンの薄片（縦２０ｍｍ×横２０ｍｍ×厚さ１ｍｍ）を作成し、エタノール殺菌して、シャーレ上に静置した。この薄片にＰＵＲＤＫ２株を植菌し、薄片にＰＵＲＤＫ２用培地を添加して、薄片の乾燥を防止しながら、３０℃および３７℃で静置培養した。
【００６０】
３０℃で培養した場合、３日後にＰＵＲＤＫ２株が生育を開始し、シャーレを裏面から観察し、生育した個所のポリウレタンが薄くなっていることを確認した。培養開始６日後には、ポリウレタンの全面を覆うようにＰＵＲＤＫ２株が生育し、この生育個所のポリウレタンも薄くなっていることが確認された。
【００６１】
回収したポリウレタンの薄片サンプルを、実施例５と同じ走査型電子顕微鏡で観察した結果、ＰＵＲＤＫ２株は、菌糸が格子構造に食い込むような形で生育したことが確認された（図２参照）。
【００６２】
３７℃で培養した場合、菌糸の色がオレンジ色に変わった以外は、３０℃の場合と同様にポリウレタンを分解した。３７℃で培養した場合においても、ＰＵＲＤＫ２株はポリウレタンに食い込むように生育し、ポリウレタンを分解した（図示せず）。
【００６３】
また、いずれの温度においても、乾燥防止のためにＰＵＲＤＫ２用培地を添加しながら培養することにより、ポリウレタン上でのＰＵＲＤＫ２株の生育が促進された。
【００６４】
（実施例７  ポリエーテル型ポリウレタンの分解の確認）
粉末状のポリエーテル型ポリウレタンを、それぞれ、０．０５、０．１、０．２５および０．５ｗ／ｖ％含有するＰＵＲＤＫ２用寒天培地を作成した。それぞれの培地に、ＰＵＲＤＫ２株を播種し、生育を観察した。０．１％の粉末状のポリエーテル型ポリウレタンを含有するプレートが、最も観察に適しており、３０℃、３日間の培養で、ハロ（透過孔）が形成したことが確認された。比較として、エステル結合を分解するバシラス  サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）ＨＡ１２株を播種したプレートおよびコントロールとして微生物を添加しないプレートを作成したが、いずれもハロは形成されなかった。
【００６５】
このことから、ＰＵＲＤＫ２株は、ポリエーテル型ポリウレタンを分解することが明かとなった。
【００６６】
（実施例８  ポリエーテル型ポリウレタンモデル化合物を用いる、ポリエーテル結合の分解の確認）
ポリエーテル型ポリウレタンモデル化合物として、以下の化合物を用いた。
【００６７】
【化１】
2005046009.tif 000010
【００６８】
ポリウレタンは非常に軽く、カビがポリウレタンの格子構造に沿ってあるいは侵入して生育すること、並びに、水性溶媒、有機溶媒にも溶解しにくいことから、ポリウレタン片の重量変化による定量分析は困難である。そこで、モデル化合物を用いて定量分析する方法を検討した。使用したモデル化合物は、アルコール（メタノール、エタノール）に溶解可能であり、高温の水性溶媒にも溶解可能である。
【００６９】
ＰＵＲＤＫ１株およびＰＵＲＤＫ２株を、それぞれの最適培地（ＰＵＲＤＫ１用培地およびＰＵＲＤＫ２用培地）で、３０℃、２００ｒｐｍで２４時間、振盪培養し、この１ｍｌを０．０５ｇのモデル化合物を含有する１００ｍｌの培地を含む坂口フラスコに接種して、３０℃、２００ｒｐｍで７日間、振盪培養した。培養液にクロロホルム−メタノール（容量比で３：１）を４０ｍｌ添加し、４０００ｇで１５分の遠心分離処理を行った。分離したクロロホルム層をさらに１０，０００ｇ×１５分の遠心分離処理を行い、クロロホルム層をガスクロマトグラフィーにより解析した。なお、クロロホルム−メタノール（容量比で３：１）で、モデル化合物がほぼ定量的に回収されることを確認している。
【００７０】
ガスクロマトグラフィーの分析条件は以下の通りである。
2005046009.tif 000011
【００７１】
ガスクロマトグラフィーの結果を図３に示す。ピーク表面積から求めたモデル化合物の分解率は、２５．７％であった。この結果は、ポリウレタンモデル化合物を用いることにより、ポリウレタン分解が定量的に測定されることを示唆する。
【００７２】
【発明の効果】
本発明により、ポリウレタン、特にポリエーテル型ポリウレタンを分解するペシロマイセス属またはアルタナリア属に属し、ポリウレタンを分解する能力を有する微生物が提供される。このような微生物とポリウレタンとを接触させることにより、ポリウレタンが効率的に分解される。家電製品あるいは家具などから、基材を容易に回収できると共に、ポリウレタンの最利用も図れる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＰＵＲＤＫ１株のポリウレタン上での生育の様子を示す電子顕微鏡写真である。
【図２】ＰＵＲＤＫ２株のポリウレタン上での生育の様子を示す電子顕微鏡写真である。
【図３】モデル化合物およびそのＰＵＲＤＫ２株による分解物のガスクロマトグラフィーである。
【図１】
2005046009.tif 000012
【図２】
2005046009.tif 000013
【図３】
2005046009.tif 000014