(57)【要約】【課題】真菌細胞壁へのGPIアンカー蛋白質の輸送を阻害して真菌細胞壁の合成を阻害するとともに、宿主細胞への付着を阻害して、病原性真菌が病原性を発揮できないようにする抗真菌剤を開発することにある。【解決手段】GWT1蛋白を発現した膜画分を用いた簡単なBinding assayにより、GPIアンカー蛋白質の真菌細胞壁への輸送を阻害する化合物がスクリーニング可能となった。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗真菌作用を有する化合物をスクリーニングする方法であって、
(1).下記（ａ）から（ｅ）のいずれかに記載のDNAによりコードされる蛋白質と、被検試料及び該蛋白質に結合活性を有する標識化合物とを接触させる工程、
（ａ）配列番号：２、４、６、２８、４０または５９に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
（ｂ）配列番号：１、３、５、２７、３９、４１、５４または５８に記載の塩基配列を含むDNA
（ｃ）配列番号：１、３、５、２７、３９、４１、５４または５８に記載の塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA
（ｄ）配列番号：２、４、６、２８、４０または５９に記載のアミノ酸配列において1若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失、置換および／または挿入されたアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
（ｅ）配列番号：２９及び３１あるいは配列番号：２９及び３０をプライマーとして増幅されるDNA
(2).該蛋白質に結合する標識化合物を検出する工程、
(3).該蛋白質に結合する標識化合物を減少させる被検試料を選択する工程、を含む方法。
【請求項２】
該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(I)
【化１】
2005168301.tif 000366
[式中R1aおよびR2aは同一または相異なってそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、置換されてもよいC1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、置換されてもよいC1-6アルコキシ基、または式
【化２】
2005168301.tif 000367
（式中X1は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5aおよびR6aは同一または相異なって、水素原子、または置換されていてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を示す。また、R1aとR2aは一緒になって、置換されていてもよいベンゼン環、置換されていてもよいピリジン環、置換されていてもよいピロール環、置換されていてもよいチオフェン環、置換されていてもよいフラン環、置換されていてもよいピリダジン環、置換されていてもよいピリミジン環、置換されていてもよいピラジン環、置換されていてもよいイミダゾール環、置換されていてもよいオキサゾール環、置換されていてもよいチアゾール環、置換されていてもよいピラゾール環、置換されていてもよいイソオキサゾール環、置換されていてもよいイソチアゾール環、置換されていてもよいシクロヘキサン環、および置換されていてもよいシクロペンタン環からなる群から選ばれる縮合環を形成してもよい；
R3a、およびR4aは同一または相異なってそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシル基、ホルミル基、ヒドロキシイミノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、C1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、式 -C(O)NR7aR7b （式中、R7aおよびR7bは同一または相異なってそれぞれ水素原子、またはC1-6アルキル基を意味する）、式 -CO2R7a （式中、R7aは前記定義と同意義を意味する）、式 -S(O)nR7a （式中、nは０ないし２の整数を意味する。R7aは前記定義と同意義を意味する）、式 -S(O)2NR7aR7b （式中、R7aおよびR7bは前記定義と同意義を意味する）、式
【化３】
2005168301.tif 000368
（式中X2は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5bおよびR6bは同一または相異なっていて、水素原子、置換されていてもよいC1-6アルキル基、または置換されていてもよいC6-14アリール基を意味する）で表わされる基、または式
【化４】
2005168301.tif 000369
（式中、Z1は単結合、酸素原子、ビニレン基、またはエチニレン基を意味する；
Z2は単結合、または０ないし４個の置換基で置換されてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を意味する。R3aとR4aは一緒になって、メチレンジオキシ基、または1,2-エチレンジオキシ基を意味してもよく、またR3aとR4aは一緒になって、置換されていてもよいベンゼン環、置換されていてもよいピリジン環、置換されていてもよいピロール環、置換されていてもよいチオフェン環、置換されていてもよいフラン環、置換されていてもよいピリダジン環、置換されていてもよいピリミジン環、置換されていてもよいピラジン環、置換されていてもよいイミダゾール環、置換されていてもよいオキサゾール環、置換されていてもよいチアゾール環、置換されていてもよいピラゾール環、置換されていてもよいイソオキサゾール環、置換されていてもよいイソチアゾール環、置換されていてもよいシクロヘキサン環および置換されていてもよいシクロペンタン環からなる群から選ばれる縮合環の形成を意味してもよい。ただし、R1aおよびR2aがともに水素原子を意味する場合は除く。〕で示される化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(II)
【化５】
2005168301.tif 000370
〔式中Arは下記式（IIIa）−（IIIf）からなる群
【化６】
2005168301.tif 000371
（式中、Kは硫黄原子、酸素原子、または式 -NH- で表わされる基を意味する；R1b、R2bは同一または相異なってそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、置換されていてもよいC1-6アルキル基、置換されていてもよいC1-6アルコキシ基、式
【化７】
2005168301.tif 000372
（式中X3は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5cおよびR6cは同一または相異なっていて、水素原子、置換されていてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基、または式 -X4-R8a（式中、 X4は、単結合、酸素原子、または硫黄原子を意味する；R8aはC1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、C3-8シクロアルキル基、またはC3-8シクロアルケニル基を意味する）で表わされる基を示す。また、 R1b、R2bは一緒になってメチレンジオキシ基、または1,2-エチレンジオキシ基を形成してもよい。)から選ばれる置換基を意味する；
R3b、およびR4bは同一または相異なってそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシル基、ホルミル基、ヒドロキシイミノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、C1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、または式、
【化８】
2005168301.tif 000373
（式中、Z1bは単結合、ビニレン基、またはエチニレン基を意味する；
Z2bは単結合、または０ないし４個の置換基で置換されてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を意味する。；
ただし（１） Arが、R1bおよびR2bがともに水素原子である前記式 (IIId) で表わされる場合、（２） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、メトキシ基、水酸基、メチル基、ベンジルオキシ基、またはハロゲン原子であり、 Arが、R1bおよびR2bがともに水素原子またはメトキシ基を意味する前記式 (IIIc) で表わされる場合、（３） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、水酸基、メトキシ基、またはベンジルオキシ基であり、 Arが、R1bおよびR2bがともに水酸基またはベンジルオキシ基を意味する前記式 (IIIc)で表わされる場合、または（４）Arが、R1bが水素原子でR2bがホルミル基、ヒドロキシメチル基またはメトキシカルボニル基である前記式 (IIId) で表わされる場合を除く。〕で示される化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(II)
【化９】
2005168301.tif 000374
〔式中Arが式、
【化１０】
2005168301.tif 000375
（式中、R1cが水素原子、置換されてもよいC1-6アルキル基、ベンジル基を意味する。）で表わされ、かつR3bが水素原子を意味する場合を除いた〕で表される化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(IIIc2)
【化１１】
2005168301.tif 000376
〔式中R1b、R2bは前記定義と同意義を意味する。ただし、（１）R1bが式R1c-O-（式中、 R1cは前記定義と同意義を意味する）で表わされる基であり、R2bが水素原子であり、 R3bが水素原子を意味する場合、（２）R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、メトキシ基、水酸基、メチル基、ベンジルオキシ基、またはハロゲン原子であり、R1bおよびR2bがともに水素原子またはメトキシ基を意味する場合、または（３） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、水酸基、メトキシ基、またはベンジルオキシ基であり、R1bおよびR2bがともに水酸基またはベンジルオキシ基を意味する場合を除く。〕で表される化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、式(Ia)
【化１２】
2005168301.tif 000377
で表される化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
さらに、(4)選択された被検試料が、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害するか否か、または、GPIアンカー蛋白質の真菌表層への発現を阻害するか否かを検定する工程、を含む、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術的な分野】
真菌の細胞壁合成に関与する蛋白質と結合する抗真菌剤をスクリーニングする方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本発明者らは、真菌が病原性を発揮するためには宿主細胞に付着することが重要であり、付着に関与する付着因子は一旦細胞膜にGPI（Glycosylphosphatidylinositol）アンカリングした後、細胞壁表層に輸送されることに着目した（Hamada K et al, Mol. Gen. Genet., 258: 53-59, 1998）。そしてGPIでアンカリングされた蛋白質（GPIアンカー蛋白質）が細胞壁に輸送される過程を阻害することにより、真菌細胞壁の合成を阻害し、同時に宿主細胞への付着も阻害する新規抗真菌剤が創出できると考えて研究に着手した。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、真菌細胞壁へのGPIアンカー蛋白質の輸送を阻害して真菌細胞壁の合成を阻害するとともに、宿主細胞への付着を阻害して、病原性真菌が病原性を発揮できないようにする抗真菌剤を開発することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、Saccharomyces cerevisiaeにおいて配列番号１に記載の塩基配列を有するDNAがコードする蛋白質が、Candida albicansにおいて配列番号３及び５に記載の塩基配列を有するDNAがコードする蛋白質が、Schizosaccharomyces pombeにおいて配列番号２７に記載の塩基配列を有するDNAがコードする蛋白質が、Aspergillus fumigatusにおいて配列番号３９及び４１に記載の塩基配列を有するDNAがコードする蛋白質が、Cryptococcus neoformansにおいて配列番号５４及び５８に記載の塩基配列を有するDNAがコードする蛋白質が、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に関与することを見出しGWT1遺伝子と命名した。更に、該遺伝子を欠失した真菌が細胞壁を合成できないこと、式(Ia)に示す化合物が該蛋白質と結合して、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送を阻害し、真菌の細胞壁合成を阻害することを見出した。
そして、標識した式(Ia)に示す化合物と拮抗して該蛋白質に結合する化合物が、真菌細胞壁の合成を阻害することを見出して、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち本発明は、下記１から７を提供するものである。
１．抗真菌作用を有する化合物をスクリーニングする方法であって、
(1).下記（ａ）から（ｅ）のいずれかに記載のDNAによりコードされる蛋白質と、被検試料及び該蛋白質に結合活性を有する標識化合物とを接触させる工程、
（ａ）配列番号：２、４、６、２８、４０または５９に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
（ｂ）配列番号：１、３、５、２７、３９、４１、５４または５８に記載の塩基配列を含むDNA
（ｃ）配列番号：１、３、５、２７、３９、４１、５４または５８に記載の塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA
（ｄ）配列番号：２、４、６、２８、４０または５９に記載のアミノ酸配列において1若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失、置換および／または挿入されたアミノ酸配列からなる蛋白質をコードするDNA
（ｅ）配列番号：２９及び３１あるいは配列番号：２９及び３０をプライマーとして増幅されるDNA、
(2).該蛋白質に結合する標識化合物を検出する工程、
(3).該蛋白質に結合する標識化合物を減少させる被検試料を選択する工程、を含む方法。
【０００６】
ここで、「ストリンジェントな条件」とは、例えば65℃ 4 x SSCにおけるハイブリダイゼーション、次いで65℃で１時間0.1 x SSC中での洗浄である。また別法としてストリンジェントな条件は、50%ホルムアミド中42℃ 4 x SSCである。また、PerfectHybTM（TOYOBO）溶液中65℃2.5時間ハイブリダイゼーション、次いで1).2xSSC, 0.05% SDS溶液：25℃5分、2).2xSSC, 0.05% SDS溶液：25℃15分、3).0.1xSSC, 0.1% SDS溶液50℃20分の洗浄といった条件も許される。
【０００７】
また、「1若しくは複数のアミノ酸が付加、欠失、置換および／または挿入されたアミノ酸配列からなる蛋白質」は、当業に公知の方法、例えば、部位特異的変異誘発法（Sambruck,J.,Fritsch,E.F.,and Maniatis,T.(1989) Molecular Cloning: A Laboratory,Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY）などを用いて調製することができる。また、このような変異は自然界において生じることもある。アミノ酸の変異数は、標識化合物との結合活性が保持される限り特に制限はない。典型的には、30アミノ酸以内であり、好ましくは、10アミノ酸以内であり、さらに好ましくは3アミノ酸以内である。アミノ酸の変異部位も、上記活性が保持される限り特に制限はない。
【０００８】
上記ハイブリダイゼーションを利用して調製される蛋白質や変異蛋白質は、通常、配列番号：２、４、６、２８、４０または５９に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質とそのアミノ酸配列において高い相同性（例えば、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、あるいは95％以上の相同性）を有する。アミノ酸配列の相同性は、BLASTx（アミノ酸レベル）のプログラム(Altschul et al. J. Mol. Biol.215:403-410, 1990)を利用して決定することができる。該プログラムは、Karlin and AltschulによるアルゴリズムBLAST(Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87:2264-2268, 1990、Proc.Natl. Acad. Sei. USA 90:5873-5877, 1993)に基づいている。BLASTXによってアミノ酸配列を解析する場合には、パラメーターは例えばscore = 50、wordlength = 3とする。また、Gapped BLASTプログラムを用いて、アミノ酸配列を解析する場合は、Altschulら（Nucleic. Acids. Res.25:3389-3402, 1997）に記載されているように行うことができる。BLASTとGapped BLASTプログラムを用いる場合には、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。これらの解析方法の具体的な手法は公知である(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)。
２．該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(I)
【０００９】
【化１３】
2005168301.tif 000002
【００１０】
[式中R1aおよびR2aは同一または相異なってそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、置換されてもよいC1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、置換されてもよいC1-6アルコキシ基、または式
【００１１】
【化１４】
2005168301.tif 000003
【００１２】
（式中X1は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5aおよびR6aは同一または相異なって、水素原子、または置換されていてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を示す。また、R1aとR2aは一緒になって、置換されていてもよいベンゼン環、置換されていてもよいピリジン環、置換されていてもよいピロール環、置換されていてもよいチオフェン環、置換されていてもよいフラン環、置換されていてもよいピリダジン環、置換されていてもよいピリミジン環、置換されていてもよいピラジン環、置換されていてもよいイミダゾール環、置換されていてもよいオキサゾール環、置換されていてもよいチアゾール環、置換されていてもよいピラゾール環、置換されていてもよいイソオキサゾール環、置換されていてもよいイソチアゾール環、置換されていてもよいシクロヘキサン環、および置換されていてもよいシクロペンタン環からなる群から選ばれる縮合環を形成してもよい；
R3a、およびR4aは同一または相異なってそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシル基、ホルミル基、ヒドロキシイミノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、C1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、式 -C(O)NR7aR7b （式中、R7aおよびR7bは同一または相異なってそれぞれ水素原子、またはC1-6アルキル基を意味する）、式 -CO2R7a （式中、R7aは前記定義と同意義を意味する）、式 -S(O)nR7a （式中、nは０ないし２の整数を意味する。R7aは前記定義と同意義を意味する）、式 -S(O)2NR7aR7b （式中、R7aおよびR7bは前記定義と同意義を意味する）、式
【００１３】
【化１５】
2005168301.tif 000004
【００１４】
（式中X2は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5bおよびR6bは同一または相異なっていて、水素原子、置換されていてもよいC1-6アルキル基、または置換されていてもよいC6-14アリール基を意味する）で表わされる基、または式
【００１５】
【化１６】
2005168301.tif 000005
【００１６】
（式中、Z1は単結合、酸素原子、ビニレン基、またはエチニレン基を意味する；
Z2は単結合、または０ないし４個の置換基で置換されてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を意味する。R3aとR4aは一緒になって、メチレンジオキシ基、または1,2-エチレンジオキシ基を意味してもよく、またR3aとR4aは一緒になって、置換されていてもよいベンゼン環、置換されていてもよいピリジン環、置換されていてもよいピロール環、置換されていてもよいチオフェン環、置換されていてもよいフラン環、置換されていてもよいピリダジン環、置換されていてもよいピリミジン環、置換されていてもよいピラジン環、置換されていてもよいイミダゾール環、置換されていてもよいオキサゾール環、置換されていてもよいチアゾール環、置換されていてもよいピラゾール環、置換されていてもよいイソオキサゾール環、置換されていてもよいイソチアゾール環、置換されていてもよいシクロヘキサン環および置換されていてもよいシクロペンタン環からなる群から選ばれる縮合環の形成を意味してもよい。ただし、R1aおよびR2aがともに水素原子を意味する場合は除く。〕で示される化合物である、１に記載の方法。
【００１７】
３．該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(II)
【００１８】
【化１７】
2005168301.tif 000006
【００１９】
〔式中Arは下記式（IIIa）−（IIIf）からなる群
【００２０】
【化１８】
2005168301.tif 000007
【００２１】
（式中、Kは硫黄原子、酸素原子、または式 -NH- で表わされる基を意味する；
R1b、R2bは同一または相異なってそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、置換されていてもよいC1-6アルキル基、置換されていてもよいC1-6アルコキシ基、式
【００２２】
【化１９】
2005168301.tif 000008
【００２３】
（式中X3は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5cおよびR6cは同一または相異なっていて、水素原子、置換されていてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基、または式 -X4-R8a（式中、 X4は、単結合、酸素原子、または硫黄原子を意味する；R8aはC1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、C3-8シクロアルキル基、またはC3-8シクロアルケニル基を意味する）で表わされる基を示す。また、R1b、R2bは一緒になってメチレンジオキシ基、または1,2-エチレンジオキシ基を形成してもよい。)から選ばれる置換基を意味する；
R3b、およびR4bは同一または相異なってそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシル基、ホルミル基、ヒドロキシイミノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、C1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、または式、
【００２４】
【化２０】
2005168301.tif 000009
【００２５】
（式中、Z1bは単結合、ビニレン基、またはエチニレン基を意味する；
Z2bは単結合、または０ないし４個の置換基で置換されてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を意味する。；
ただし（１） Arが、R1bおよびR2bがともに水素原子である前記式 (IIId) で表わされる場合、（２） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、メトキシ基、水酸基、メチル基、ベンジルオキシ基、またはハロゲン原子であり、Arが、R1bおよびR2bがともに水素原子またはメトキシ基を意味する前記式 (IIIc) で表わされる場合、（３） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、水酸基、メトキシ基、またはベンジルオキシ基であり、 Arが、R1bおよびR2bがともに水酸基またはベンジルオキシ基を意味する前記式 (IIIc)で表わされる場合、または（４）Arが、R1bが水素原子でR2bがホルミル基、ヒドロキシメチル基またはメトキシカルボニル基である前記式 (IIId) で表わされる場合を除く。〕で示される化合物である、１に記載の方法。
【００２６】
４．該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(II)
【００２７】
【化２１】
2005168301.tif 000010
【００２８】
〔式中Arが式、
【００２９】
【化２２】
2005168301.tif 000011
【００３０】
（式中、R1cが水素原子、置換されてもよいC1-6アルキル基、ベンジル基を意味する。）で表わされ、かつR3bが水素原子を意味する場合を除いた〕で表される化合物である、１に記載の方法。
【００３１】
５．該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、一般式(IIIc2)
【００３２】
【化２３】
2005168301.tif 000012
【００３３】
〔式中R1b、R2bは前記定義と同意義を意味する。ただし、（１）R1bが式R1c-O-（式中、 R1cは前記定義と同意義を意味する）で表わされる基であり、R2bが水素原子であり、 R3bが水素原子を意味する場合、（２）R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、メトキシ基、水酸基、メチル基、ベンジルオキシ基、またはハロゲン原子であり、R1bおよびR2bがともに水素原子またはメトキシ基を意味する場合、または（３） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、水酸基、メトキシ基、またはベンジルオキシ基であり、R1bおよびR2bがともに水酸基またはベンジルオキシ基を意味する場合を除く。〕で表される化合物である、１に記載の方法。
【００３４】
６．該蛋白質に結合活性を有する標識化合物が、式(Ia)
【００３５】
【化２４】
2005168301.tif 000013
【００３６】
で表される化合物である、１に記載の方法。
【００３７】
７．さらに、(4)選択された被検試料が、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害するか否か、または、GPIアンカー蛋白質の真菌表層への発現を阻害するか否かを検定する工程、を含む、１から６のいずれかに記載の方法。
【００３８】
【発明の実施の形態】
以下に、本願明細書において記載する用語、記号等の意義を説明し、本発明を詳細に説明する。
【００３９】
なお、本願明細書中においては、化合物の構造式が便宜上一定の異性体を表すことがあるが、本発明には化合物の構造上生ずる総ての幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体等の異性体および異性体混合物を含み、便宜上の式の記載に限定されるものではなく、いずれか一方の異性体でも混合物でもよい。従って、分子内に不斉炭素原子を有し光学活性体およびラセミ体が存在することがあり得るが、本発明においては特に限定されず、いずれの場合も含まれる。さらに結晶多形が存在することもあるが同様に限定されず、いずれかの結晶形単一または混合物であってもよく、また、無水物であっても水和物であってもどちらでもよい。
【００４０】
本明細書中において表される「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数１ないし６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を意味し、具体的には例えばメチル基、エチル基、ｎ-プロピル基、ｉ-プロピル基、ｎ-ブチル基、ｉ-ブチル基、tert-ブチル基、ｎ-ペンチル基、ｉ-ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ-ヘキシル基、1-メチルプロピル基、１,２-ジメチルプロピル基、２-エチルプロピル基、１-メチル-２-エチルプロピル基、１-エチル-２-メチルプロピル基、１,１,２-トリメチルプロピル基、１-メチルブチル基、２-メチルブチル基、１,１-ジメチルブチル基、２,２-ジメチルブチル基、２-エチルブチル基、１,３-ジメチルブチル基、２-メチルペンチル基、３-メチルペンチル基等があげられる。
【００４１】
本明細書中において表される「Ｃ２−６アルケニル基」とは、炭素数２ないし６個の直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基を意味し、具体的には例えばビニル基、アリル基、１-プロペニル基、イソプロペニル基、１-ブテン-１-イル基、１-ブテン-２-イル基、１-ブテン-３-イル基、２-ブテン-１-イル基、２-ブテン-２-イル基等があげられる。
【００４２】
本明細書中において表される「Ｃ２−６アルキニル基」とは、炭素数２ないし６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキニル基を意味し、具体的には例えば、エチニル基、１-プロピニル基、２-プロピニル基、ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基等があげられる。
【００４３】
本明細書中において表される「Ｃ１−６アルコキシ基」とは前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」が結合したオキシ基であることを意味し、具体的には、例えばメトキシ基、エトキシ基、n-プロポキシ基、i-プロポキシ基、n-ブトキシ基、i-ブトキシ基、sec-ブトキシ基、t-ブトキシ基、n-ペンチルオキシ基、i-ペンチルオキシ基、sec-ペンチルオキシ基、t-ペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、1-メチルブトキシ基、2-メチルブトキシ基、1,1-ジメチルプロポキシ基、1,2-ジメチルプロポキシ基、n-ヘキシルオキシ基、i-ヘキシルオキシ基、1-メチルペンチルオキシ基、2-メチルペンチルオキシ基、3-メチルペンチルオキシ基、1,1-ジメチルブトキシ基、1,2-ジメチルブトキシ基、2,2-ジメチルブトキシ基、1,3-ジメチルブトキシ基、2,3-ジメチルブトキシ基、3,3-ジメチルブトキシ基、1-エチルブトキシ基、2-エチルブトキシ基、1,1,2-トリメチルプロポキシ基、1,2,2-トリメチルプロポキシ基、1-エチル-1−メチルプロポキシ基、1-エチル-2−メチルプロポキシ基などが挙げられる。
【００４４】
本明細書中において表される「Ｃ６−１４アリール基」とは、炭素数6ないし14の芳香族環基をいい、具体的には例えば、フェニル基、1-ナフチル基、2-ナフチル基、as-インダセニル基、s-インダセニル基、アセナフチレニル基などが挙げられる。
【００４５】
本明細書中において表わされる「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を意味する。
【００４６】
本明細書中において表わされる「置換されていてもよい」とは、「置換可能な部位に、任意に組み合わせて１または複数個の置換基を有してもよい」と同意義であり、置換基は具体的には例えば、水素原子、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシル基、メルカプト基、ヒドロキシアルキル基、カルボキシル基、C1-6アルコキシカルボニル基、C2-7アシルアミノ基、C1-6アルキルアミノ基、ピリジル基、C1-6アルキルスルフィニル基、C1-6アルキルスルフォニル基、C1-6アルキルスルファモイル基、C1-6アルキルスルフィナモイル基、C1-6アルキルスルフェナモイル基、テトラヒドロピラニル基、C1-6アルキルカルバモイル基、または式 -X4-R8a（式中、X4は、単結合、酸素原子、または硫黄原子を意味する；R8aはC1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、C6-14アリール基、C3-8シクロアルキル基、またはC3-8シクロアルケニル基を意味する）などが挙げられる。
【００４７】
本明細書中において表わされる「０ないし４個の置換基で置換されていてもよい」とは、「置換可能な部位に、任意に組み合わせて１または４個の置換基を有してもよい」と同意義であり、置換基は前記定義と同意義である。
【００４８】
以下に本発明に記載された、１．GWT1遺伝子産物（以下GWT1蛋白）を調製する方法、２．標識化合物の結合実験（以下Binding assay）の方法、３．式(I)に記載の化合物を合成する方法について開示する。
【００４９】
１．GWT1蛋白を調製する方法
GWT1蛋白は、真菌、好ましくはS. cerevisiae、C. albicans、S. pombe、A. fumigatus、C. neoformans、更に好ましくはS. cerevisiaeの膜画分から調製する。Binding assayは、調製した膜画分をそのまま使用してもよいし、更に精製して用いてもよい。真菌に、配列番号１、３、５、２７、３９、４１、５４または５８に記載の塩基配列のDNAを導入して、GWT1蛋白を過剰発現させることにより、Binding assayをより容易に行うことが可能であるが、本発明はこれに限られない。以下にS. cerevisiaeの場合について具体的に説明する。
【００５０】
(1).GWT1遺伝子の導入
GWT1遺伝子は、配列番号１、３、５、２７、３９、４１、５４または５８に記載の塩基配列を基にプライマーを設計し、真菌のDNAを鋳型としてPCRを行うことにより得ることができる。
【００５１】
GWT1遺伝子をS. cerevisiaeで働く発現ベクター、例えばYEp352のマルチクローニングサイトに適当なプロモーター・ターミネーター、例えばpKT10（Tanaka et al, Mol. Cell Biol., 10:4303-4313, 1990）由来のGAPDHプロモーター及びGAPDHターミネーターを挿入した発現ベクターに挿入してGWT1発現プラスミドを作製する。S.cerevisiae例えばG2-10株を、適当な培地例えばYPD培地(Yeast extract-Polypeptone-Dextrose培地)にて、適当な温度例えば30℃で振とう培養し、対数増殖後期の時点で集菌する。洗浄後、例えば酢酸リチウム法によりGWT1発現プラスミドをS. cerevisiae に導入する。酢酸リチウム法についてはYEAST MAKERTM Yeast Transformation System (Clonetech社製) User Manualに記載されている。SD(ura-)培地で30℃、２日間培養することによりGWT1過剰発現株および空ベクター導入株を得ることができる。
【００５２】
S. cerevisiae以外の真菌の発現ベクター及び遺伝子導入法は、S. pombeの発現ベクターpcL等及びその導入法についてIgarashi et al, Nature 353:80-83, 1991に、C. albicansの発現ベクターpRM10等及びその導入法についてPla J et al, Yeast, 12: 1677-1702, 1996に、A. fumigatusの発現ベクターpAN7-1等及びその導入法についてPunt PJ et al, GENE, 56: 117-124, 1987に、C. neoformansの発現ベクターpPM8等及びその導入法についてMonden P et al, FEMS Microbiol. Lett., 187: 41-45, 2000に記載されている。
【００５３】
(2).膜画分の調製法
GWT1遺伝子を導入したS. cerevisiaeを、適当な培地例えばSD(ura-)液体培地にて、適当な温度例えば30℃で振とう培養し、対数増殖中期の時点で集菌する。菌体を洗浄した後、適量例えば菌体量の３倍量のHomogenization buffer（例えば50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM EDTA, CompleteTM（Roche社製））にて懸濁し、適量例えば菌体量の４倍量のガラスビーズを加える。これをボルテックスしては氷上に置く操作を数回繰り返して菌体を破砕する。
【００５４】
ここに1 mlのHomogenization bufferを加え、遠心例えば2,500 rpmで5分間遠心してガラスビーズおよび未破砕の菌体を沈殿させる。上清を別のチューブにとり、遠心例えば135,000 rpmで10分間遠心することによりオルガネラを含む膜画分（Total membrane fraction）を沈殿させる。沈殿を1 mlのBinding buffer（例えば0.1 M Phosphate buffer, pH 7.0, 0.05% Tween 20, CompleteTM（Roche社製））に懸濁し、遠心例えば2,500 rpm,で1分間遠心することにより懸濁されなかった部分を取り除き、上清を遠心例えば15,000 rpmで5分間遠心する。沈殿を150〜650μlのBinding bufferに再懸濁して膜画分とする。
【００５５】
S. cerevisiae以外の真菌の膜画分調製は、S. pombeについてはYoko-o et al, Eur. J. Biochem. 257:630-637 (1998)に、C. albicansについてはSentandreu M et al, J. Bacteriol., 180: 282-289, 1998に、A. fumigatusについてはMouyna I et al, J. Biol. Chem., 275: 14882-14889,2000に、C. neoformansについてはThompson JR et al, J. Bacteriol., 181: 444-453, 1999に記載の方法により行うことができる。
【００５６】
別法としてGWT1蛋白は、真菌以外の細胞、例えば哺乳類細胞、昆虫細胞、大腸菌等で発現させ、調製することができる。
【００５７】
哺乳類細胞では、例えばCMVプロモーターを持つ過剰発現用ベクターにつないだGWT1を哺乳類細胞に導入し、Petaja-Repo et al., J. Biol. Chem., 276:4416-23, 2001に記載の方法により膜画分を調製することができる。
【００５８】
昆虫細胞では、例えばBAC-TO-BAC Baculovirus Expression system（GIBCO BRL社製）等のバキュロウイルス発現キットを用いてGWT1発現昆虫細胞（Sf9細胞など）を作製し、ここからOkamoto et al., J. Biol. Chem., 276:742-751, 2001に記載の方法により膜画分を調製することができる。
【００５９】
大腸菌では、例えばpGEX（Pharmacia社製）の大腸菌発現用ベクターにGWT1をつなぎ、BL21などの大腸菌に導入しGWT1蛋白を調製することができる。
【００６０】
２．Binding assayの方法
(1).標識化合物の合成
標識化合物は、予めGWT1蛋白と結合することが確認された化合物である。GWT1蛋白と結合する性質を有すればいかなる化合物も許されるが、好ましくは一般式(I)
【００６１】
【化２５】
2005168301.tif 000014
【００６２】
[式中R1aおよびR2aは同一または相異なってそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、置換されてもよいC1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、置換されてもよいC1-6アルコキシ基、または式
【００６３】
【化２６】
2005168301.tif 000015
【００６４】
（式中X1は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5aおよびR6aは同一または相異なって、水素原子、または置換されていてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を示す。また、R1aとR2aは一緒になって、置換されていてもよいベンゼン環、置換されていてもよいピリジン環、置換されていてもよいピロール環、置換されていてもよいチオフェン環、置換されていてもよいフラン環、置換されていてもよいピリダジン環、置換されていてもよいピリミジン環、置換されていてもよいピラジン環、置換されていてもよいイミダゾール環、置換されていてもよいオキサゾール環、置換されていてもよいチアゾール環、置換されていてもよいピラゾール環、置換されていてもよいイソオキサゾール環、置換されていてもよいイソチアゾール環、置換されていてもよいシクロヘキサン環、および置換されていてもよいシクロペンタン環からなる群から選ばれる縮合環を形成してもよい；
R3a、およびR4aは同一または相異なってそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシル基、ホルミル基、ヒドロキシイミノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、C1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、式 -C(O)NR7aR7b （式中、R7aおよびR7bは同一または相異なってそれぞれ水素原子、またはC1-6アルキル基を意味する）、式 -CO2R7a （式中、R7aは前記定義と同意義を意味する）、式 -S(O)nR7a （式中、nは０ないし２の整数を意味する。R7aは前記定義と同意義を意味する）、式 -S(O)2NR7aR7b （式中、R7aおよびR7bは前記定義と同意義を意味する）、式
【００６５】
【化２７】
2005168301.tif 000016
【００６６】
（式中X2は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5bおよびR6bは同一または相異なっていて、水素原子、置換されていてもよいC1-6アルキル基、または置換されていてもよいC6-14アリール基を意味する）で表わされる基、または式
【００６７】
【化２８】
2005168301.tif 000017
【００６８】
（式中、Z1は単結合、酸素原子、ビニレン基、またはエチニレン基を意味する；
Z2は単結合、または０ないし４個の置換基で置換されてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を意味する。R3aとR4aは一緒になって、メチレンジオキシ基、または1,2-エチレンジオキシ基を意味してもよく、またR3aとR4aは一緒になって、置換されていてもよいベンゼン環、置換されていてもよいピリジン環、置換されていてもよいピロール環、置換されていてもよいチオフェン環、置換されていてもよいフラン環、置換されていてもよいピリダジン環、置換されていてもよいピリミジン環、置換されていてもよいピラジン環、置換されていてもよいイミダゾール環、置換されていてもよいオキサゾール環、置換されていてもよいチアゾール環、置換されていてもよいピラゾール環、置換されていてもよいイソオキサゾール環、置換されていてもよいイソチアゾール環、置換されていてもよいシクロヘキサン環および置換されていてもよいシクロペンタン環からなる群から選ばれる縮合環の形成を意味してもよい。ただし、R1aおよびR2aがともに水素原子を意味する場合は除く。〕で示される化合物
【００６９】
更に好ましくは一般式(II)
【００７０】
【化２９】
2005168301.tif 000018
【００７１】
〔式中Arは下記式（IIIa）−（IIIf）からなる群
【００７２】
【化３０】
2005168301.tif 000019
【００７３】
（式中、Kは硫黄原子、酸素原子、または式 -NH- で表わされる基を意味する；
R1b、R2bは同一または相異なってそれぞれ水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、置換されていてもよいC1-6アルキル基、置換されていてもよいC1-6アルコキシ基、式
【００７４】
【化３１】
2005168301.tif 000020
【００７５】
（式中X3は単結合、カルボニル基、または式 -S(O)2- で表わされる基を意味する；
R5cおよびR6cは同一または相異なっていて、水素原子、置換されていてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基、または式 -X4-R8a（式中、 X4は、単結合、酸素原子、または硫黄原子を意味する；R8aはC1-6アルキル基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、C3-8シクロアルキル基、またはC3-8シクロアルケニル基を意味する）で表わされる基を示す。また、R1b、R2bは一緒になってメチレンジオキシ基、または1,2-エチレンジオキシ基を形成してもよい。)から選ばれる置換基を意味する；
R3b、およびR4bは同一または相異なってそれぞれ、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシル基、ホルミル基、ヒドロキシイミノ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、C1-6アルキル基、C1-6アルコキシ基、C2-6アルケニル基、C2-6アルキニル基、または式、
【００７６】
【化３２】
2005168301.tif 000021
【００７７】
（式中、Z1bは単結合、ビニレン基、またはエチニレン基を意味する；
Z2bは単結合、または０ないし４個の置換基で置換されてもよいC1-6アルキル基を意味する）で表わされる基を意味する。；
ただし（１） Arが、R1bおよびR2bがともに水素原子である前記式 (IIId) で表わされる場合、（２） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、メトキシ基、水酸基、メチル基、ベンジルオキシ基、またはハロゲン原子であり、 Arが、R1bおよびR2bがともに水素原子またはメトキシ基を意味する前記式(IIIc)で表わされる場合、（３）R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、水酸基、メトキシ基、またはベンジルオキシ基であり、 Arが、R1bおよびR2bがともに水酸基またはベンジルオキシ基を意味する前記式 (IIIc)で表わされる場合、または（４）Arが、R1bが水素原子でR2bがホルミル基、ヒドロキシメチル基またはメトキシカルボニル基である前記式 (IIId) で表わされる場合を除く。〕で示される化合物、
【００７８】
更に好ましくは、一般式(II)
【００７９】
【化３３】
2005168301.tif 000022
【００８０】
〔式中Arが式、
【００８１】
【化３４】
2005168301.tif 000023
【００８２】
（式中、R1cが水素原子、置換されてもよいC1-6アルキル基、ベンジル基を意味する。）で表わされ、かつR3bが水素原子を意味する場合を除いた〕で表される化合物、
【００８３】
更に好ましくは、一般式(IIIc2)
【化３５】
2005168301.tif 000024
【００８４】
〔式中R1b、R2bは前記定義と同意義を意味する。ただし、（１）R1bが式R1c-O-（式中、 R1cは前記定義と同意義を意味する）で表わされる基であり、R2bが水素原子であり、 R3bが水素原子を意味する場合、（２）R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、メトキシ基、水酸基、メチル基、ベンジルオキシ基、またはハロゲン原子であり、R1bおよびR2bがともに水素原子またはメトキシ基を意味する場合、または（３） R3bまたはR4bの少なくとも一方が水素原子を示し、もう一方が水素原子、水酸基、メトキシ基、またはベンジルオキシ基であり、R1bおよびR2bがともに水酸基またはベンジルオキシ基を意味する場合を除く。〕で表される化合物、
【００８５】
更に好ましくは、式(Ia)
【００８６】
【化３６】
2005168301.tif 000025
【００８７】
で表される化合物の標識化合物である。
【００８８】
これら化合物の中で、GWT1蛋白質に結合活性を有する化合物が好適であり、実施例Ａ２に記載したS. cerevisiaeのレポータ系で活性を示す化合物が、標識化合物としてさらに好適である。また、本発明の方法により見出されたGWT1蛋白質に結合活性を有する化合物を標識し、標識化合物として用いることも可能である。
【００８９】
標識の方法はいかなる方法も許されるが、好ましくは放射性標識、更に好ましくは3H標識であることが望ましい。放射性標識化合物は、一般製造法に述べる製造の原料として、放射性化合物を用いる、あるいは3H標識の場合は3Hの交換反応により合成が可能である。
【００９０】
(2).特異的結合の確認
調製した膜画分に標識化合物を加え、氷上にて適当な時間例えば1〜2時間静置して、標識化合物と膜画分との結合反応を行う。その後遠心例えば15,000 rpm, 3分間遠心して膜画分を沈殿させる。沈殿をBinding bufferに再度懸濁し遠心する操作を適宜（２回）繰り返すことにより、結合していない標識化合物を除去する。沈殿をBinding bufferに懸濁し、放射能測定用バイアルに移してシンチレーターを加え、液体シンチレーションカウンターにて放射活性を測定する。
【００９１】
大過剰（10倍以上）の標識していない同化合物を加えることにより、標識化合物の結合が抑制されること、GWT1蛋白を発現させていない真菌から調製した膜画分への結合が無視しうる程度に少ないことにより、標識化合物がGWT1蛋白に特異的に結合していることが確かめられる。
【００９２】
(3).被検化合物による標識化合物の結合阻害実験
調製した膜画分に被検化合物及び標識化合物を加え、氷上にて適当な時間例えば1〜2時間静置して、膜画分との結合反応を行う。その後遠心例えば15,000 rpm, 3分間遠心して膜画分を沈殿させる。沈殿をBinding bufferに再度懸濁し遠心する操作を適宜（２回）繰り返すことにより、結合していない標識化合物を除去する。沈殿をBinding bufferに懸濁し、放射能測定用バイアルに移してシンチレーターを加え、液体シンチレーションカウンターにて放射活性を測定する。
【００９３】
被検化合物が存在する場合に、標識化合物の膜画分への結合が抑制されれば、被検化合物がGWT1蛋白に結合する活性があると判断される。
【００９４】
このような結合活性が検出された被検試料は、さらに、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害するか否か、または、GPIアンカー蛋白質の真菌表層への発現を阻害するか否かを検定することが好ましい。この検定の結果、被検試料が、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害、または、GPIアンカー蛋白質の真菌表層への発現を阻害した場合には、該試料は、抗真菌剤の有力な候補となる。
【００９５】
被検試料が、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害するか否か、あるいはGPIアンカー蛋白質の真菌表層への発現を阻害するか否かは、(1).レポータ酵素を用いる方法、(2).真菌細胞壁の表層糖蛋白質と反応する抗体を用いる方法、(3).動物細胞に対する付着能により検定する方法、(4).真菌を光学顕微鏡あるいは電子顕微鏡で観察する方法により検定できる。
【００９６】
以下に説明する(1)〜(4)の方法により、好ましくは(1)〜(4)の方法を組み合わせて用いることにより、被検試料がGPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害する、あるいはGPIアンカー蛋白質の真菌表層への発現を阻害すると判断され、しかも本件発明に記載のDNAがコードする蛋白質を、真菌に過剰発現させることにより、その阻害の程度が減弱する、あるいは阻害が見られなくなる場合に、被検試料は、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に影響を与えたと判断される。
【００９７】
以下、(1)〜(4)の方法を説明する。
(1).レポータ酵素を用いる方法
GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程は、例えばGPIアンカー蛋白質を放射性同位元素で標識し、真菌細胞壁画分を分画後、GPIアンカー蛋白質に対する抗体による免疫沈降を行うといったトレーサー実験により定量することが可能である。また、より容易には、GPIアンカー蛋白質に共通して見られ、輸送のシグナルとして働いていると考えられるＣ末端配列を、測定の容易な酵素との融合蛋白質（レポータ酵素）として発現させ、真菌細胞壁画分を分画後、各画分の酵素活性を測定するレポータ系により定量することが可能である（Van Berkel MAA et al, FEBS Letters, 349: 135-138, 1994）。以下にレポータ酵素を用いた方法について説明するが、これは本発明を限定するものではない。
【００９８】
先ず、レポータ遺伝子を構築し真菌に導入する。レポータ遺伝子は、真菌で働くプロモータ配列に続き、それぞれシグナル配列・レポータ酵素・GPIアンカー蛋白質Ｃ末端配列をコードするDNAを、reading frameを合わせてつなぎ合わせて構築する。プロモータ配列としては、例えばGAL10、ENO1のプロモータの配列等が挙げられる。シグナル配列としては、例えばα-ファクター、インべルターゼ、リゾチームのシグナル配列等が挙げられる。レポータ酵素としては、例えばβラクタマーゼ・リゾチーム・アルカリホスファターゼ・βガラクトシダーゼ等が挙げられる。酵素活性は持たないが容易に検出が可能なGreen Fluorescence Protein (GFP)を用いても良い。GPIアンカー蛋白質Ｃ末端配列としては、例えばα-agglutininＣ末端配列・CWP2Ｃ末端配列等が挙げられる。また、構築したレポータ遺伝子を含むベクター中に、適当な選択マーカ、例えばLEU2、URA3等を挿入しておくことが好ましい。
【００９９】
構築したレポータ遺伝子を適当な方法、例えば酢酸リチウム法（Gietz D et al, Nucl. Acids Res. 20: 1425, 1992）により真菌に導入し、必要であれば選択マーカに適した方法、LEU2であればLeu-の培地、URA3であればUra-の培地で培養し、DNAが導入された真菌を選択する。
【０１００】
被検試料がGPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に影響を与えるか否かは、以下の方法により検定する。
【０１０１】
レポータ遺伝子を導入した真菌を、被検試料の存在下、適当な条件、例えば30℃で48時間培養する。培養後、培養上清を遠心分離し、培養上清画分のレポータ酵素の活性を測定する。残された菌体画分は、洗浄後、適当な方法例えばグルカナーゼで細胞壁グルカンを分解することにより、細胞壁成分を分離し、細胞壁画分及び細胞質画分のレポータ酵素の活性を測定する。なおアッセイを簡便に行うため、遠心分離後、菌体の洗浄は行わずに、菌体画分中に残る培養上清画分由来のレポータ酵素量を比例計算により求め、菌体画分のレポータ酵素量から差し引いて菌体画分中のレポータ酵素量とすることも許される。
【０１０２】
被検試料に、一細胞当たりの培養上清画分中のレポータ酵素活性を上昇させる、あるいは一細胞当たりの細胞壁画分中のレポータ酵素活性を低下させる活性が認められれば、該被検試料はGPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に影響を与えたと判断される。
【０１０３】
(2).真菌細胞壁の表層糖蛋白質と反応する抗体を用いる方法
被検試料がGPIアンカー蛋白質の真菌表層での発現に影響を与えるか否かは、真菌細胞壁中のGPIアンカー蛋白質を、該蛋白質と反応する抗体によって定量することにより検出が可能である。
【０１０４】
抗体としては、例えばGPIアンカー蛋白質例えばα-agglutinin・Cwp2p・Als1p等のアミノ酸配列より抗原決定基を予想して（Chen MH et al, J. Biol. Chem., 270:26168-26177, 1995, Van Der Vaat JM et al, J. Bacteriol., 177:3104-3110,1995, Hoyer LL et al, Mol. Microbiol., 15:39-54, 1995）、その領域のペプチドを合成し、抗原性のある物質例えば異種蛋白質等に結合させて、家兎等に免疫してポリクローナル抗体を、マウス等に免疫してモノクローナル抗体を得ることが可能である。また、好ましくは、Als1pペプチドに対する家兎ポリクローナル抗体が望ましい。
【０１０５】
また別法として真菌、好ましくはGPIアンカー蛋白質例えばα-agglutinin・ Cwp2p・Als1p等を過剰発現させた真菌を、場合によっては更に部分精製したGPIアンカー蛋白質を、マウス等に免疫し、融合後得られたクローンを、その産生する抗体をELISA・Western blot解析等で選択することにより、GPIアンカー蛋白質に対するモノクローナル抗体を得ることが可能である。
【０１０６】
被検試料がGPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に影響を与え、細胞壁中のGPIアンカー由来蛋白質の量を減少させるか否かは、以下の方法により検定できる。
【０１０７】
真菌を、被検試料の存在下、適当な条件、例えば30℃、48時間培養する。培養した真菌を遠心により集菌し、菌体を好ましくはガラスビーズを用いて破砕する。洗浄した破砕菌体を、好ましくはSDSで抽出遠心後、沈殿を洗浄する。抽出後の破砕菌体を、グルカンを分解する酵素、好ましくはグルカナーゼで処理し、その遠心上清をGPIアンカー蛋白質サンプルとする。
【０１０８】
抗Als1pペプチド抗体を、96 wellプレートに4℃、overnightでコーティングする。洗浄液好ましくは0.05% Tween 20含有PBS(PBST)で洗浄後、96 wellプレートの非特異的吸着部位をブロックする試薬、好ましくはBSA・ゼラチン等の蛋白質、更に好ましくはブロックエースでブロッキングする。再度洗浄液好ましくはPBSTで洗浄後、場合によっては適当に希釈したGPIアンカー蛋白質サンプルを加え、適当な時間例えば室温で2時間反応させる。洗浄液好ましくはPBSTで洗浄後、酵素標識したC. albicansに対する抗体、好ましくはHRP標識抗カンジダ抗体を、適当な時間例えば室温で2時間反応させる。標識の方法は酵素標識であっても、放射性同位元素による標識であっても許される。洗浄液好ましくはPBSTで洗浄後、標識に適した方法、酵素標識であれば基質溶液を加え、反応停止後490 nmの吸光度を測定することにより、GPIアンカー蛋白質サンプル中のAls1p量を算出する。
【０１０９】
(3).動物細胞に対する付着能により検定する方法
被検試料がGPIアンカー蛋白質の真菌表層での発現に影響を与えるか否かは、真菌細胞壁中のGPIアンカー蛋白質の活性、好ましくは真菌の動物細胞への付着能等を測定することにより、検定が可能である。GPIアンカー蛋白質の活性としては、動物細胞への付着に関与するAls1p、Hwp1等の他に、matingに関与するα-agglutinin、酵母の凝集に関与するFlo1p等が知られている。以下に、真菌の動物細胞への付着能により検定する方法について具体的に記載するが、本発明はこれにより限定されるものではない。
【０１１０】
真菌としては、細胞に対する付着能を有する真菌を使用し、好ましくは真菌はC. albicansであることが望ましい。哺乳類細胞としては真菌が接着する性質を有する細胞を使用し、好ましくは細胞は腸管上皮細胞であることが望ましい。哺乳類細胞を培養し、適当な方法例えばエタノール固定により固定する。そこへ被検試料と適当な時間、例えば30℃で48時間インキュベートした真菌を接種し、一定時間例えば30℃で1時間培養後、培養上清を除去しバッファーで洗浄して寒天培地、例えばサブロー・デキストロース寒天培地（Difco）を重層する。30℃一晩培養後、コロニー数をカウントし、付着率を計算する。
【０１１１】
被検試料に、化合物処理を行わなかった真菌と比較して、細胞に付着することにより形成されたコロニー数を低下させる活性が認められれば、該被検試料はGPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に影響を与えたと判断される。
【０１１２】
(4).真菌を電子顕微鏡あるいは光学顕微鏡で観察する方法
被検試料がGPIアンカー蛋白質の真菌表層での発現に影響を与えるか否かは、真菌細胞壁の構造を電子顕微鏡により観察することにより検定が可能である。
【０１１３】
被検試料の存在下で、真菌例えばC. albicansを、一定時間例えば30℃で48時間培養し、透過型電子顕微鏡を用いて超微形態学的構造を観察する。ここで、透過型電子顕微鏡による観察は、例えば電子顕微鏡チャートマニュアル（医学出版センター）に記載の方法により行うことができる。透過型電子顕微鏡像で見られる、電子密度の高い菌体最外層の綿状線維構造は、GPIアンカー蛋白質を構成成分とする表層糖蛋白質層であると考えられ、既存の他の抗真菌剤では影響を受けない。無処置菌体と比較し、この電子密度の高い菌体最外層の綿状線維構造が、僅かな高電子密度の層を残して消失している場合は、該被検試料が、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に影響を与えたと判断される。
【０１１４】
また透過型電子顕微鏡に併せ、光学顕微鏡下による観察で、真菌細胞が大きく膨化し出芽（分裂）が阻害されている像が観察される場合、該被検試料が細胞壁に対して影響を与えていると判断される。
【０１１５】
３．式(I)に記載の化合物を合成する方法
式(Ｉ)
【０１１６】
【化３７】
2005168301.tif 000026
【０１１７】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)で表わされる本発明化合物は、これまでに知られている通常の有機化学反応などを利用して合成することができるが、例えば以下の方法で合成することができる。
【０１１８】
一般製造方法（１）
【０１１９】
【化３８】
2005168301.tif 000027
【０１２０】
(式中、Xはハロゲン基、アシル基などの脱離基を表す。Ｒ３cは、Ｒ３aと同意義を示す。式中のその他の記号は前記定義と同意義を意味する。)
【０１２１】
A1工程    ライセルト(Reissert)化合物（V）を製造する反応である。Org. Synth., VI, 115(1988)、Heterocycles, 36(11), 2489(1993)、J. Chem. Soc. (C), 666(1969)、またはJ. Heterocycl. Chem., 29(5), 1165(1992)などの文献に記載の反応条件に基づいて製造することができる。用いる試薬としては具体的には、例えばベンゾイルクロリドとシアン化カリウムの組み合わせの条件等があげられる。
A2工程    アルキル化の工程である。化合物(V)と置換基を有するベンジルハライド誘導体や置換基を有するベンジルメタンスルフォナート誘導体などと塩基存在下反応させることにより化合物(VI)を製造することができる。塩基としては具体的には、例えば水素化ナトリウム、水酸化ナトリウムなどを挙げることができる。
A3工程    加水分解反応の工程である。化合物(VI)を塩基存在下、加水分解することにより化合物(I)を製造することができる。
【０１２２】
A法とは、A1工程、A2工程そしてA3工程を経由して化合物(I)を製造する方法である。
【０１２３】
B1工程    化合物(V)から化合物(VII)への工程である。化合物(V)と置換基を有するベンズアルデヒドを塩基と相間移動触媒の存在下、反応させることにより化合物(VII)を製造することができる。例えば、塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどが挙げられる。相間移動触媒としては、トリエチルベンジルアンモニウムクロリドなどが挙げられる。
B2工程    アルコールからケトンへの酸化の工程である。アルコールからケトンへの酸化反応で一般に用いられる酸化剤、条件を用いることによりケトン体(VIII)を製造することができる。酸化剤としては具体的には、例えば二酸化マンガン、二酸化クロムまたはベンゾキノンなどが挙げられる。
B3工程    ケトンからメチレンへの還元の工程である。ケトン体(VIII)からメチレン体(I)への還元反応で一般に用いられる還元剤の条件を用いることによりメチレン体(I)を製造することができる。例えば、還元剤としては、ヒドラジン水和物と水酸化ナトリウムあるいは水酸化カリウム、トリエチルシランとボロントリフルオライドあるいはトリフルオロメタンスルフォン酸などが挙げられる。
【０１２４】
B法とは、A1工程、B1工程、B2工程そしてB3工程を経由して化合物(I)を製造する方法である。
【０１２５】
C1工程    水酸基のハロゲン化あるいはアシル化の工程である。化合物(VII)をハロゲン化剤あるいはアシル化剤を用いて化合物(IX)を製造することができる。ハロゲン化剤としては、例えば塩化チオニル、濃塩酸、三臭化リンなどがあげられる。また、アシル化剤としては、例えばアセチルクロリドなどの酸ハライド、無水酢酸などの酸無水物などが挙げられる。
C2工程    ハロゲン基あるいはアシル基の還元的脱離反応の工程である。化合物(IX)を触媒などを用いて水素化脱離することにより化合物(I)を製造することができる。
例えば、触媒としては、パラジウム−炭素などが挙げられる。
【０１２６】
C法とは、A1工程、B1工程、C1工程そしてC2工程を経由して化合物(I)を製造する方法である。
【０１２７】
一般製造方法（２）
一般式(Ｉ)で表わされる本発明化合物は、以下の方法でも合成することができる。
【０１２８】
【化３９】
2005168301.tif 000028
【０１２９】
(式中、Xはハロゲン基、アシル基などの脱離基を表す。式中のその他の記号は前記定義と同意義を意味する。)
【０１３０】
D1工程    グリニャール反応とそれに続く酸加水分解反応の工程である。化合物(X)と置換基を有していてもよいフェニルグリニャール試薬を反応させ、続いて酸存在下加水分解することにより化合物(VIII)を製造することができる。
D2工程    B3工程と同様な条件により、ケトン体(VIII)からメチレン体(I) を製造することができる。
【０１３１】
D法とは、D1工程とD2工程を経由して化合物(I)を製造する方法である。
【０１３２】
E1工程    ケトンからアルコールへの還元反応の工程である。ケトンからアルコールへの還元反応で一般に用いられる還元剤、条件を用いて化合物(VIII)から化合物(VII)を製造することができる。用いる還元剤としては具体的には、例えば水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウムなどが挙げられる。
E2工程    C1工程と同様な条件により、アルコール体(VII)からハロゲン化あるいはアシル化体(IX)を製造することができる。
E3工程    C2工程と同様な還元的脱離反応の条件で、化合物(IX)から化合物(I)を製造することができる。
【０１３３】
E法とは、D1工程、E1工程、E2工程そしてE3工程を経由して化合物(I)を製造する方法である。
【０１３４】
一般製造方法（３）
一般式(Ｉ)で表わされる本発明化合物は、以下の方法でも合成することができる。
【０１３５】
【化４０】
2005168301.tif 000029
【０１３６】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)
【０１３７】
F1工程    塩素化反応の工程である。化合物(XI)を塩素化剤用いることにより化合物(XII)を製造することができる。塩素化剤としては、例えばオキシ塩化リン、塩化チオニルなどが挙げられる。
F2工程    グリニャール試薬とのカップリング反応の工程である。Arch. Pharm, 314, 156(1981)などの文献に記載の反応条件に基づいて、化合物(XII)に置換基を有していても良いベンジルグリニャール試薬を触媒存在下反応させることにより化合物(I)を製造することができる。触媒としては、例えば、[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロニッケル(II)などが挙げられる。
【０１３８】
F法とは、F1工程とF2工程を経由して化合物(I)を製造する方法である。
【０１３９】
一般製造方法（４）
本発明化合物、一般式(Ｉ)のうち、R1aとR2aが一緒になってベンゼン環、ピリジン環、ピロール環、チオフェン環、フラン環、シクロヘキサン環、またはシクロペンタン環などの縮合環を形成する場合、以下の方法で合成することができる。
【０１４０】
【化４１】
2005168301.tif 000030
【０１４１】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)
【０１４２】
製造方法の例としてイソキノリン環を形成する場合の製造方法を示す。
G1工程    縮合反応とそれに続く還元反応の工程である。置換基を有していてもよいベンズアルデヒド誘導体(XIII)とニトロメタンとの縮合反応後、ニトロ基の還元を行うことにより化合物(XIV)を製造することができる。例えば、ニトロ基の還元に用いられる試薬としては、パラジウム−炭素とギ酸アンモニウム、水素化アルミニウムリチウムなどの組み合わせが挙げられる。
G2工程    アミド結合形成反応である。化合物(XIV)と置換基を有していても良いフェニル酢酸クロリドをアミド結合生成反応に用いるカップリング試薬を用いることにより化合物(XV)を製造することができる。例えば、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドとN-ヒドロキシスクシンイミド、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミドとN-ヒドロキシベンゾトリアゾール、1,1’-カルボニルジイミダゾールなどが挙げられる。
G3工程    環化反応の工程である。化合物(XV)をOrganic Reaction, 6, 74(1951)、J. Hetetocyclic Chem., 30, 1581(1993)などの文献に記載の反応条件に基づいて、製造することができる。例えば、試薬としてはオキシ塩化リン、ポリリン酸などが挙げられる。
【０１４３】
G法とは、G1工程、G2工程そしてG3工程を経由して化合物(I)を製造する方法である。
【０１４４】
一般製造方法（５−１）
前記の一般製造方法で合成した化合物(Ｉ)のR3a、R4aの置換基変換
（５−１）アミノ基、アミド基、スルホンアミド基等への置換基の変換
【０１４５】
【化４２】
2005168301.tif 000031
【０１４６】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)
【０１４７】
H1工程    ニトロ基の還元反応である。化合物(XVI)を一般的に利用されるニトロ基の還元法で還元することにより化合物(XVII)を製造することができる。例えば、ニトロ基の還元法としては、パラジウム−炭素、水酸化パラジウムよる接触水素化還元、鉄―塩化アンモニウム、鉄―塩酸、鉄―酢酸などによる還元が挙げられる。
H2工程    アシル化あるいはスルフォニル化反応の工程である。化合物(XVII)を酸クロリドあるいは酸無水物を用いることにより化合物(XVIII)を製造することができる。
【０１４８】
H法とは、H1工程とH2工程を経由して化合物(XVIII)を製造する方法である。
【０１４９】
【化４３】
2005168301.tif 000032
【０１５０】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)
【０１５１】
I1工程    還元的アミノ化反応の工程である。化合物(XIX)と置換基を有していても良いアルデヒドをJ. Am. Chem. Soc., 93, 2897(1971)、Comprehensive Organic Synthese, 8, 25(1991)、Tetrahedron, 40, 1783(1984)そしてTetrahedron, 41, 5307(1985)などの文献に記載の反応条件に基づいて、化合物(XX)を製造することができる。例えば、還元的アミノ化試薬としては、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、シアン水素化ホウ素ナトリウム、ボラン-ピリジン錯体、パラジウム-炭素／水素等が挙げられる。
I2工程    アシル化、スルフォニル化あるいは還元的アミノ化反応の工程である。化合物(XX)を酸クロリドあるいは酸無水物を用いることにより化合物(XXIa)あるいは化合物(XXIb)を製造することができる。または、還元的アミノ化反応をI1工程と同様に行うことにより化合物(XXIc)を製造することができる。
【０１５２】
I法とは、I1工程とI2工程を経由することにより化合物(XXIa)、化合物(XXIb)あるいは化合物(XXIc)を製造する方法である。
【０１５３】
一般製造方法（５−２）
前記の一般製造方法で合成した化合物(Ｉ)のR3a、R4aの置換基変換
（５−２）水酸基、アルコキシ基等への置換基の変換
【０１５４】
【化４４】
2005168301.tif 000033
【０１５５】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)
【０１５６】
J1工程    脱メチル化反応で、Bull. Chem. Soc. Jpn., 44, 1986(1971)、Org. Synth., Collect. Vol. V, 412(1073)、J. Am. Chem. Soc., 78, 1380(1956)、またはJ. Org. Chem., 42, 2761(1977)などの文献に記載の反応条件に基づいて、化合物(XXII)から化合物(XXIII)を製造することができる。例えば、脱メチル化反応に使用される試薬としては、47%臭化水素酸水溶液、ボロントリブロミド、ピリジン塩酸塩そしてヨードトリメチルシランなどが挙げられる。
J2工程    アルキル化反応の工程である。化合物(XXIII)を塩基存在下置換基されていても良いアルキルハライドあるいは置換基されていてもよいアルキルメタンスルフォネートなどと反応させることにより化合物(XXIV)を製造することができる。
【０１５７】
J法とは、J1工程とJ2工程を経由して化合物(XXIV)を製造する方法である。
【０１５８】
一般製造方法（５−３）
前記の一般製造方法で合成した化合物(Ｉ)のR3a、R4aの置換基変換
（５−３）ビニレン基またはエチニレン基、アルキル基等への置換基の変換
【０１５９】
【化４５】
2005168301.tif 000034
【０１６０】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)
【０１６１】
K1工程    トリフラート化反応の工程である。化合物(XXIII)を塩基存在下トリフルオロメタンスルフォン酸無水物と反応させることにより化合物(XXV)を製造することができる。
K2工程    アルキンとのカップリング反応の工程である。化合物(XXV)とアルキン誘導体をパラジウムのホスフィン錯体、ヨウ化銅そして塩基存在下、カップリングすることにより化合物(XXVI)を製造することができる。例えば、パラジウムのホスフィン錯体を系中で生成させる試薬としては、パラジウム−炭素とトリフェニルホスフィン、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム(0)とトリフェニルホスフィン、ジクロロビストリフェニルホスフィンパラジウム(II)、酢酸パラジウム(II)とトリ（ο-トリル）ホスフィン、酢酸パラジウム(II)と1,1’-ビス(ジフェニルフォスフィノ)フェロセンなどが挙げられる。塩基としては、トリエチルアミン、ピペリジン、ピリジン、炭酸カリウムなどが挙げられる。反応により塩化リチウムを使用することがある。
K3工程    不飽和炭化水素の還元反応の工程である。化合物(XXVI)を触媒を用いた接触水素化還元などにより化合物(XXVIIa)あるいは化合物(XXVIIb)を製造する方法である。例えば、触媒として用いられるものとしてはパラジウム−炭素、水酸化パラジウム、酸化白金、パラジウム−炭素―炭酸カルシウムなどが挙げられる。
【０１６２】
【化４６】
2005168301.tif 000035
【０１６３】
(式中の記号は前記定義に同意義を意味する。)
【０１６４】
L1工程    アルケンとのカップリング反応（ヘック（Heck）反応）の工程である。J. Org. Chem., 37, 2320(1972)、Org. Reactions., 27, 345(1982)、Comprehensive Organic Synthesis, Vol. 4, 833(1991)、Palladium Reagents and Catalysts, 125(1995)、Chem. Commun., 1287(1984)、Tetrahedron Lett, 26, 2667(1985)そしてTetrahedron Lett, 31, 2463(1990)などの文献に記載の反応条件に基づいて、触媒（パラジウム錯体と配位子など）を用いて、化合物(XXVIII)から化合物(XXVIIa)を製造することができる。この反応に用いる触媒（パラジウム錯体と配位子）の組み合わせとしては、例えば酢酸パラジウム(II)と1,1’-ビス(ジフェニルフォスフィノ)フェロセン、酢酸パラジウム(II)とトリ(ο-トリル)フォスフィンなどが挙げられる。用いられる3級塩基としてはトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンそして1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセンなどが挙げられる。化合物(XXVIII)のXは脱離基を意味し、例えばハロゲン基、トリフルオロメタンスルフォニルオキシ基などを挙げることができる。
L2工程    K3工程と同様な不飽和炭化水素の還元反応の条件により、化合物(XXVIIa)から化合物(XXVIIb)を製造することができる。
【０１６５】
L法とは、L1工程により化合物(XXVIIa)、続いてL2工程により化合物(XXVIIb)を製造する方法である。
【０１６６】
本発明にかかる前記式（Ｉ）で表わされる化合物について得られる種々の異性体は、通常の分離手段（例えば再結晶、クロマトグラフィー等）を用いることにより精製し、単離することができる。
【０１６７】
【実施例】
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
【０１６８】
実施例Ａ１  レポータ遺伝子の構築とS. cerevisiaeへの導入
(1).リゾチームをレポータ酵素とするレポータ遺伝子の構築
ENO1プロモーター＋分泌シグナル＋リゾチーム遺伝子を含むプラスミドpESH（Ichikawa K et al, Biosci. Biotech. Biochem., 57(10), 1686-1690, 1993）を鋳型に、配列番号８及び配列番号９に記載のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、プロモータ配列を含むリゾチーム遺伝子をPCRにより増幅し、pCR-Script SK(+)のSalI-EcoRI siteにサブクローニングした(a)。また、S. cerevisiae染色体DNAを鋳型に、配列番号１０及び配列番号１１に記載のオリゴヌクレオチドをプライマーとしてCWP2遺伝子をPCR増幅し、pUC19のEcoRI-HindIII siteにサブクローニングした(b)。同様に、pYES2（INVITROGEN）を鋳型に、配列番号１２及び配列番号１３に記載のオリゴヌクレオチドをプライマーとしてしてCYC1ターミネーターをPCR増幅し、pUC19の新たに導入したNotI-KpnI siteサブクローニングした(c)。
【０１６９】
次に、pESHのSalI-HindIII切断部分にSalI-EcoRIで切り出したリゾチーム遺伝子(a)およびEcoRI-HindIIIで切り出したCWP2遺伝子(b)を挿入した。最後に、ENO1プロモーター＋分泌シグナル＋リゾチーム遺伝子＋CWP2遺伝子を含む遺伝子をBamHI-HindIIIで切り出し、インテグレーション用ベクターpRS306（Sikorski RS et al, Genetics. 122(1):19-27, 1989）に挿入後、HindIII-KpnI切断部分にHindIII-KpnIで切り出したCYC1ターミネーター(c)を挿入し、pRLW63Tを作製した。
【０１７０】
(2).セファロスポリナーゼをレポータ酵素とするレポータ遺伝子の構築
上述のpESHを鋳型にして、ENO1プロモーターＣ末＋分泌シグナル部分(d)を鋳型にし、配列番号１４及び配列番号１５に記載のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、プロモータ配列・分泌シグナル部分を含むDNAをPCRにより増幅し、pUC19の新たに導入したBamHI-NotI siteににサブクローニングした(d)。また、Citrobacter freundii染色体DNAを鋳型にし、配列番号１６及び配列番号１７に記載のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、セファロスポリナーゼ遺伝子をPCR増幅し、pUC19の新たに導入したNspV-XbaI siteにサブクローニングした(e)。同様にS. cerevisiae染色体DNAを鋳型にし、配列番号１８及び配列番号１９に記載のオリゴヌクレオチドをプライマーとして、CWP2遺伝子PCR増幅し、pUC19のXbaI-HindIII siteにサブクローニングした(f)。
【０１７１】
(d)を挿入したプラスミドのBamHI-SalI切断部分にpESHのBamHI-SalI断片を挿入し、ENO1プロモーター全長＋分泌シグナル部分を作製後、NspV-HindIII切断部分にNspV-XbaIで切り出したセファロスポリナーゼ遺伝子およびXbaI-HindIIIで切り出したCWP2遺伝子を挿入した。次いで、EcoRI-HindIIIで切り出し、上述のpRS306に挿入後、HindIII-KpnI切断部分にCYC1ターミネーターを挿入して、pRCW63Tを作製した。
【０１７２】
(3).レポータ遺伝子のS. cerevisiaeへの導入
S. cerevisiae G2-10株を、10 mlのYPD培地にて30℃で振とう培養し、対数増殖後期(2〜5 x 107 cells/ml)の時点で集菌した。滅菌水で洗浄後、YEASTMAKERTM Yeast Transformation System(Clontech)を用いた酢酸リチウム法（YEASTMAKERTM Yeast Transformation System User Manualに記載）によって上述したpRLW63TおよびをpRCW63Tを導入した。pRLW63TはEcoRVで、pRCW63TはApaIでURA3遺伝子を切断したものを用いた。SD(Ura-)培地で30℃、3日間培養後、増殖したコロニーをYPD培地で培養した。
【０１７３】
リゾチームおよびセファロスポリナーゼ活性の局在を確認したところ、両活性共に主として細胞壁に局在し、CWP2のC端配列が細胞壁への輸送シグナルとして働いていることが確認された。
【０１７４】
実施例Ａ２  S. cerevisiaeレポータ系による薬剤のスクリーニング
リゾチームと比較して、セファロスポリナーゼの方が酵素反応の感度が良いことから、化合物のスクリーニングには、pRCW63Tを導入したS. cerevisiae（S. cerevisiae CW63株）を用いた。
YPD液体培地に30℃、48時間静置培養後、YPD液体培地で100倍希釈した菌液（3〜5 x 105 cells/ml）75μl/wellを、被検試料希釈液25μl/wellが入ったＶ底96 wellプレートに接種し、30℃で48時間静置培養した。プレートを遠心後、上清25μlを96 well平底プレートにサンプリングし、培養上清画分とした。
【０１７５】
沈殿した菌を懸濁し、2.4Mソルビトールで調整したザイモリエース（生化学工業）溶液75μl/wellを加え、30℃、1時間作用させた。プレートを遠心後、上清10μlを96 well平底プレートにサンプリングし、15μlのリン酸バッファーを加え、細胞壁画分とした。
【０１７６】
プールしたサンプルに200μMニトロセフィン溶液を加え、一定時間後にクエン酸バッファーで反応停止後、490 nmの吸光度を測定することにより、培地および細胞壁画分中のセファロスポリナーゼ活性を測定した。
また、被検試料存在下での菌の増殖は、肉眼による観察で判定した。
【０１７７】
図２には、前記式（Ｉａ）に記載の化合物の存在下では、0.39〜1.56μg/mlの濃度で培養上清画分中のセファロスポリナーゼ活性が上昇し、細胞壁画分中の活性が低下することを示した。この様に、培養上清画分中のセファロスポリナーゼ活性を上昇させ、かつ細胞壁画分中のセファロスポリナーゼ活性を減少させる化合物を、GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害する化合物とした。
【０１７８】
実施例Ａ３  カンジダの動物細胞への付着を指標とした薬剤のスクリーニング
6穴マルチウェルプレートの各穴に、10%牛胎児血清および2 mMグルタミンを含むD-MEM培地（日水製薬）で1 x 105個/mlに調整したIEC-18細胞を、3 mlずつ分注した。該プレートを炭酸ガスインキュベータ内で37℃、3日間培養後、培養上清を除去し、エタノール固定した。
【０１７９】
各濃度の被検試料を含有したサブロー・デキストロース液体培地で30℃・48時間培養したC. albicansを4 x 102個/mlに調整し、固定したIEC-18細胞を培養したプレートの各穴に、1 ml接種した。30℃・1時間培養後、培養上清を除去し、PBSで洗浄後、サブロー・デキストロース寒天培地（Difco）を2 ml重層した。30℃、一夜培養後、増殖してきたコロニー数（CFU）をカウントし、付着率を算出した。
【０１８０】
図３には前記式（Ｉａ）に記載の化合物で、増殖抑制の見られない1.56μg/mlの濃度でも、C. albicansの動物細胞への付着が半分程度にまで抑制されたことを示した。処理しないC.albicansと比較して、細胞に付着したCFUを減少させた被検試料を、C.albicansの動物細胞への付着を抑制する化合物とした。
【０１８１】
実施例Ａ４  ELISAによるGPIアンカー蛋白質の定量値を指標とした薬剤のスクリーニング
(1).抗Als1pペプチド抗体の作製
配列番号２０に記載の合成ペプチドをKLHとコンジュゲートし、家兎に免疫した。得られた抗血清をアフィニティ精製し、IgG画分を抗Als1pペプチド抗体とした。
【０１８２】
(2).抗Als1pペプチド抗体を用いたELISAによる薬剤のスクリーニング
C. albicansを、各濃度の被検薬剤を含有したサブロー・デキストロース液体培地中（5 ml）で30℃・48時間培養し、遠心による集菌、洗浄後、300μlのトリス塩酸バッファーに懸濁した。懸濁した菌体を、ガラスビーズを入れたマイクロチューブに移し、1分間の攪拌、1分間の氷冷を10回繰り返すことにより破砕した。洗浄した破砕菌体を2% SDSで95℃・10分間抽出し、遠心後、沈殿をリン酸バッファーで5回洗浄した。その沈殿に5μg/mlのザイモリエース溶液0.5 mlを加え37℃・1時間反応後、その遠心上清をGPIアンカー蛋白質サンプルとした。
【０１８３】
50μlの抗Als1pペプチド抗体(40μg/ml)を、96 wellプレートに4℃・overnightコーティングした。0.05% Tween 20含有PBS（PBST）で5回洗浄後、25%ブロックエースで室温、2時間ブロッキングした。PBSTで3回洗浄後、2倍階段希釈したGPIアンカー蛋白質サンプル50μlを室温、2時間反応させた。PBSTで5回洗浄後、1000倍希釈したHRP標識抗カンジダ抗体（ViroStat）100μlを室温、2時間反応させ、PBSTで5回洗浄後、基質溶液75μlを加えた。反応停止後、490 nmの吸光度を測定した。
【０１８４】
図４には、前記式（Ｉａ）に記載の化合物の存在下では、0.1〜0.39μg/mlの濃度で、培養上清画分中のAls1p抗原量が上昇し、細胞壁画分中の抗原量が低下していることを示した。この様に、化合物で処理しないC.albicansと比較して、ELISAで定量した培養上清画分中のAls1p量細を上昇させ、あるいは胞壁画分中のAls1p量を減少させた化合物を、C.albicansのGPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程を阻害する化合物とした。
【０１８５】
実施例Ａ５  被検試料の存在下で培養したC. albicans細胞壁の電子顕微鏡による観察
各濃度の被検薬剤を含有したサブロー・デキストロース液体培地中（5 ml）で30℃・48時間培養後、遠心、集菌したC. albicansを過マンガン酸カリ固定法により固定し、透過型電子顕微鏡像を観察した。
菌体最外層に電子密度の高い綿状線維構造が観察され、GPIアンカー蛋白質を構成成分とする表層糖蛋白質層であると考えらた。この綿状線維構造は既存の他の抗真菌剤では影響を受けなかった。
【０１８６】
前記式（Ｉａ）に記載の化合物の存在下で培養したC. albicansは、無処置菌体と比較し、電子密度の高い菌体最外層の綿状線維構造が、僅かな高電子密度の層を残して消失していた。この様に、電子密度の高い菌体最外層の綿状線維構造が消失している場合に、被検試料をGPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程に影響を与える化合物とした。
【０１８７】
実施例Ａ６  S. cerevisiaeの前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性遺伝子のスクリーニング
S. cerevisiae遺伝子のプラスミドライブラリーは、ATCC(Information for ATCC Number: 37323)から入手した。
S. cerevisiae G2-10株を、10 mlのYPD培地にて30℃で振とう培養し、対数増殖後期(1〜2 x 107 cells/ml)の時点で集菌した。滅菌水で洗浄後、YEASTMAKERTM Yeast Transformation System(Clontech)を用いた酢酸リチウム法（YEASTMAKERTM Yeast Transformation System User Manualに記載）によって、S. cerevisiae遺伝子のプラスミドライブラリーを導入し、SD（Leu-）プレート上にに撒いて、約80000個のコロニーを得た。コロニーを回収・希釈し、前記式（Ｉａ）に記載の化合物を 1.56μg/ml及び3.125μg/mlの濃度で含むSD（Leu-）プレートに、プレート当たり57万コロニーになるように撒いた。その後、37℃で72時間インキュベートして耐性クローンを獲得した。
【０１８８】
27個のクローンをピックアップし、METHODS IN ENZYMOLOGY, Vol. 194: 169-182 (1991)に記載の方法によりプラスミドを回収して、インサートを解析したところ、27個全てが同一のフラグメントを含んでいた。
ABI377 system（PE apllied Biosystems社製）を用いて塩基配列を決定した結果、配列番号１に記載のDNAが、前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性を付与するDNAであることが明らかとなりGWT1と命名した。
【０１８９】
実施例Ａ７  S. cerevisiae GWT1遺伝子の、C. albicansホモログのサザンブロット解析
25μgのC. albicansゲノムDNAを、EcoRI（TaKaRa）、HindIII（TaKaRa）、 BamHI（TOYOBO）、PstI（New England Biolabs）（２種類の酵素の組み合わせも含む）で16時間処理後、エタノール沈殿により濃縮し、25μlの滅菌水に溶解してサンプルとした。制限酵素消化した25μgのgenome DNAを、0.75％アガロースゲル電気泳動法により分離し、ナイロンメンブレン（GeneScreen PLUS /NEN）へトランスファーした。
プローブは、配列番号１に記載の約1.5 kbのDNAフラグメント20 ngを、ランダムプライマー法によりalpha33P-dCTPでラベルし、GeneQuantカラム（Amersham-Pharmacia）を用いて精製し作製した。
ハイブリダイゼーションは、メンブレンを、10 mlのPerfectHybTM（TOYOBO）溶液に浸し65℃で１時間プレインキュベーションをおこなった後、ラベルした上記プローブを添加し、65℃で更に2.5時間インキュベーションした。洗浄は、1).2xSSC, 0.05% SDS溶液：25℃5分、2).2xSSC, 0.05% SDS溶液：25℃15分、3).0.1xSSC, 0.1% SDS溶液50℃20分で行った。洗浄後のメンブレンをサランラップで包み、Imaging Plate（FUJI）と室温で12時間接触させ、Imaging Plateに転写されたイメージをBAS2000（FUJI）を用いて取り込み、画像解析をおこなった。
【０１９０】
その結果、EcoRIで6.5 kb、HindIIIで4.0 kb、EcoRI-HindIIIで2.0 kb、EcoRI-PstIで2.5 kbの単一のバンドが観察され（図５）、C. albicansの前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性遺伝子のホモログは、単一の遺伝子として存在することが予想された。
【０１９１】
実施例Ａ８  C. albicansの前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性遺伝子のスクリーニング
C. albicansのゲノムライブラリーは、Navaro-Garcia F et al, Mol. Cell. Biol., 15: 2197-2206, 1995に記載の方法により作製した。具体的には、C. albicansのゲノムDNAをSau3AIで部分消化した後、３〜５kb前後のDNAフラグメントを回収し、YEp352シャトルベクターのBamHIサイトに挿入した。
【０１９２】
S. cerevisiae G2-10株を、10 mlのYPD培地にて30℃で振とう培養し、対数増殖後期(2〜5 x 107 cells/ml)の時点で集菌した。滅菌水で洗浄後、YEASTMAKERTM Yeast Transformation System(Clontech)を用いた酢酸リチウム法（YEASTMAKERTM Yeast Transformation System User Manualに記載）によって、C. albicansのゲノムライブラリーを導入し、SD（Ura-）プレート上にに撒いて、約25000個のコロニーを得た。コロニーを回収・希釈し、前記式（Ｉａ）に記載の化合物を 1.56μg/mlの濃度で含むSDプレートに、プレート当たり50万コロニーになるように撒いた。その後、30℃で６時間、37℃へ移して66時間インキュベートして耐性クローンを獲得した。
【０１９３】
30個のクローンをピックアップし、METHODS IN ENZYMOLOGY, Vol. 194: 169-182 (1991)に記載の方法によりプラスミドを回収して、インサートを解析したところ、30個のうち28個が同一のフラグメントを含んでいた。
ABI377 system（PE apllied Biosystems社製）を用いて、塩基配列を決定した結果、配列番号３に記載のDNAが、前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性を付与するDNAであることが明らかとなった。
【０１９４】
実施例Ａ９  C. albicans臨床分離株からの前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性遺伝子ホモログのクローニング
発明者らが保存するC. albicans臨床分離株より精製した、ゲノムDNAを鋳型とし、配列番号２１及び配列番号２２をプライマーとしてPCRによる増幅を行った。独立した３本のPCRサンプルから、いずれも約1.6 kbのDNAフラグメントが増幅され、増幅されたフラグメントを精製し、pT7-Blueベクター（Novagen）にサブクローニングして塩基配列を決定したところ、配列番号５に示すDNA配列が見いだされた。実施例Ａ７に記載のDNA（配列番号３）との間で３箇所の配列が異なっていた。
【０１９５】
また、Stanford大のsequenceセンター(http://sequence-www.stanford.edu/)で決定されたC. albicans遺伝子塩基配列中にも、実施例Ａ７に記載のDNAのホモログが見出され（配列番号７）、実施例Ａ７に記載のDNA（配列番号３）との間で４箇所の配列が異なっていた。
【０１９６】
実施例Ａ１０  GWT1遺伝子産物を過剰発現したS. cerevisiaeの作製
実施例Ａ６で得られた前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性クローンより精製したプラスミドを鋳型とし、配列番号２３及び配列番号２４をプライマーとして、PCR増幅を行った。PvuIIで切断したPCR産物を、実施例Ａ1で作製したpRLW63TのSalI-HindIII切断部分に挿入した。BamHI-KpnIでインサート全体を切り出し、pRS304（Sikorski RS et al, Genetics. 122(1): 19-27, 1989）のMCSに挿入し、インテグレーション用ベクターを作製した。
【０１９７】
セファロスポリナーゼ遺伝子ををレポータ遺伝子として持つ、S. cerevisiae CW63株を実施例Ａ1に記載の方法で培養し、インテグレーション用ベクターのTRP1をEcoRVで切断後、実施例Ａ1に記載の方法で形質転換した。SD(Trp-)培地で30℃、3日間培養することによりGWT1過剰発現株を得た（S. cerevisiae CW63/GWT1株)。
【０１９８】
GWT1過剰発現株は、前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対して耐性を示す以外に、野生株との差異は見られず、他の抗真菌剤シクロヘキシミド、ベノミル、アンホテリシンＢに対して感受性であった。
【０１９９】
実施例Ａ１１  GWT1遺伝子を欠失したS. cerevisiaeの作製
S. pombeのhis5遺伝子（Longtine MS et al, Yeast, 14: 953-961, 1998）を鋳型とし、配列番号２５及び配列番号２６をプライマーとして、両端にGWT1配列を含むhis5カセットをPCRで増幅した。
S. cerevisiae G2-10を実施例Ａ1に記載の方法で培養、集菌し、上述のPCR産物を実施例Ａ1に記載の方法で形質転換した。SD(His-)培地で30℃、5〜7日間培養することによりGWT1欠失株を得た。
【０２００】
GWT1欠失株は生育が非常に遅いものの、その生育は前記式（Ｉａ）に記載の化合物の影響を受けず、GWT1遺伝子産物が該化合物の標的であることが示唆された。また、GWT1欠失株は、高温で生育できない、細胞が膨化しているといった特徴を示し、透過型電子顕微鏡による観察では、電子密度の高い菌体最外層の綿状線維構造が、消失していた。
【０２０１】
実施例Ａ１２  GWT1遺伝子産物を過剰発現したS. cerevisiaeにおける前記式（Ｉａ）に記載の化合物の活性
S. cerevisiae CW63株及びGWT1遺伝子を導入したS. cerevisiae CW63/GWT1を用い、実施例Ａ2に記載した方法に準じた方法で、前記式（Ｉａ）に記載の化合物の活性を検討した。
【０２０２】
その結果、S. cerevisiae CW63株では、培養上清画分中のセファロスポリナーゼ活性が上昇し、細胞壁画分中の活性が低下している前記式（Ｉａ）に記載の化合物濃度（0.39〜1.56μg/ml）でも、S. cerevisiae CW63/GWT1株では影響が見られず、またS. cerevisiae CW63株では増殖が抑制される前記式（Ｉａ）に記載の化合物濃度（> 3.13μg/ml）でも、S. cerevisiae CW63/GWT1株では増殖抑制が見られなかった（図６）。
【０２０３】
実施例Ａ１３  (4-ブチルフェニル)(1-イソキノリル)ケトンの合成
窒素雰囲気下、マグネシウム338 mg（13.9ミリモル）とテトラヒドロフラン6.5 mlの混合溶液に、１−ブロモ−４−ブチルベンゼン2.29 ml（13.0ミリモル）と開始剤として触媒量の１，２−ジブロモエタンを加え、１０分間還流下撹拌した。この溶液を０℃まで冷却し、１−イソキノリンカルボニトリル1.0 g（6.49ミリモル）のテトラヒドロフラン溶液を加え、さらに室温で１時間、70℃で３時間撹拌した。その後、再度０℃に冷却し、濃塩酸2.56 mlそしてメタノール11 mlを加えた後、２時間加熱還流した。濃縮後残渣を５規定水酸化ナトリウムとトルエンに溶解し、セライトで濾過した。濾液のトルエン層を分配し、水洗、硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物1.72 gを得た。
【０２０４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.93(3H, t), 1.32-1.43(2H, m), 1.58-1.66(2H, m), 2.68(2H, t), 7.28(2H, d), 7.61(1H, td), 7.74(1H, td), 7.80(1H, d), 7.87(2H, d), 7.92(1H, d), 8.20(1H, d), 8.60(1H, d)
【０２０５】
実施例Ａ１４  前記式（Ｉａ）に記載の化合物{1-(4-ブチルベンジル)イソキノリン}の合成
実施例Ａ１３の化合物1.72 g（5.95ミリモル）、ヒドラジン１水和物836 mg（16.7ミリモル）そして水酸化カリウム769 mg（13.7ミリモル）をジエチレングリコール8.5 mlに加え、80℃で１時間、160℃で３時間半そして200℃で１時間撹拌した。室温まで冷却後、氷水を加え酢酸エチルで抽出した。これを水洗後、硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、前記式（Ｉａ）に記載の化合物を914mgを得た。
【０２０６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.26-1.36(2H, m), 1.50-1.59(2H, m), 2.53(2H, t), 4.64(2H, s), 7.06(2H, d), 7.19(2H, d), 7.53(1H, td), 7.56(1H, d), 7.64(1H, td), 7.81(1H, d), 8.18(1H, dd,), 8.50(1H, d)
【０２０７】
実施例Ａ１５  前記式（Ｉａ）に記載の化合物{1-(4-ブチルベンジル)イソキノリン}の製造方法の別法
６０％水素化ナトリウム16 mg（0.40ミリモル）のジメチルホルムアミド（1.8 ml）溶液に窒素雰囲気下−１６℃で、Org.Synth.,VI,115(1988)の文献に基づいて合成した1-シアノ-2-ベンゾイル-1,2-ジヒドロイソキノリン100 mg（0.38ミリモル）と４−n-ブチルベンジルクロリド70 mg（0.38ミリモル）のジメチルホルムアミド（3.6 ml）溶液を滴下し、さらに室温で30分間撹拌した。水を加え、濃縮し、残渣にトルエンと水を加えた。トルエン層を水洗後、炭酸カリウムで乾燥後、濃縮した。残渣のエタノール(1.6 ml)溶液に50%水酸化ナトリウム水溶液（0.63 ml）を加え、２時間加熱還流した。濃縮後、トルエンと水を加えた。トルエン層を水洗後、炭酸カルシウムで乾燥後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、前記式（Ｉａ）に記載の化合物18 mgを得た。
【０２０８】
実施例Ａ１６  S. cereviciae GWT1遺伝子の、C. albicansホモログのクローニング
HindIII（TaKaRa）で16時間処理した25μgのC. albicansゲノムDNAを、0.75%アガロースゲル電気泳動法により分離し、約3.5から4.5 kbの大きさのDNAフラグメントをゲルから回収した。回収したDNAフラグメントをpKF3ベクター（TaKaRa）のHindIIIサイトに挿入して、カンジダゲノムライブラリを作製した。
作製したライブラリを用いて約１万個のコロニーをLB/Ampicillinプレートにdisplayした後、Colony/Plaque Screen（NEN）メンブレンを用いてコロニーリフトを行いハイブリダイゼーションに供した。プローブは、配列番号１に記載の約1.5 kbのDNAフラグメント20 ngを、ランダムプライマー法によりalpha33P-dCTPでラベルし、GeneQuantカラム（Amersham-Pharmacia）を用いて精製し作製した。
【０２０９】
ハイブリダイゼーションは、メンブレンをPerfectHybTM（TOYOBO）溶液に浸し65℃で１時間プレインキュベーションをおこなった後、ラベルした上記プローブを添加し、65℃で更に2.5時間インキュベーションした。洗浄は、1).2xSSC, 0.05% SDS溶液：25℃5分、2).2xSSC, 0.05% SDS溶液：25℃15分、3).0.1xSSC, 0.1% SDS溶液50℃20分で行った。洗浄後のメンブレンをサランラップで包み、X-RAY FILM（KONICA）に室温で24時間接触させた後現像した。感光したスポットに相当する大腸菌コロニーを分離して、２次スクリーニングに供した。分離したコロニーをLB/Ampicillinプレートに約200個づつdisplayし、１次スクリーニング同様にコロニーリフトをおこないハイブリダイゼーションに供した。ハイブリダイゼーションの条件は１次スクリーニングと同一の条件でおこなった。
【０２１０】
その結果、プローブと強く反応する大腸菌の単一なコロニーが分離された。このコロニーからプラスミドを回収し、含有する配列を決定したところ、実施例Ａ９で見出された配列（配列番号５）と同一の新規配列が見いだされ（カンジダGWT1の配列）、C. albicansホモログであることが予想された。
【０２１１】
実施例Ａ１７  S. cereviciae GWT1遺伝子の、S. Pombeホモログ
データベース検索により、S. cereviciae GWT1遺伝子とホモロジーを示すS. Pombe遺伝子（配列番号２７、及びその遺伝子産物のアミノ酸配列：配列番号２８）が見出され、GWT1のS. Pombeホモログであると考えられた。
【０２１２】
実施例Ａ１８  S. cereviciae GWT1遺伝子の、Aspergillus fumigatusホモログのクローニング
発明者らは遺伝子配列解析により、S.cerevisiae，S.pombe，C.albicansのGWT1遺伝子のコードする蛋白において高度に保存されている領域を２カ所見いだした（図７）。この保存領域のアミノ酸をコードするDNAの予測から、配列番号２９、配列番号３０及び配列番号３１のプライマーを設計した。STRATAGENE社から購入したライブラリ（Aspergillus fumigatus cDNA library:#937053）1μlを鋳型に用いて、配列番号２９および配列番号３１のプライマーを用いてPCR増幅をおこなった。さらにこの増幅サンプル1μlを鋳型に、配列番号２９および配列番号３０のプライマーでnested-PCRをおこなった結果、約250 bpの単一フラグメントの増幅が確認された。このフラグメントの配列を決定したところ配列番号３２に示す、S.cerevisiaeのGWT1遺伝子と相同性を有する新規の配列が得られ、これがA.fumigatusのホモログであることが予想された。
【０２１３】
全長のcDNAを獲得するために、増幅フラグメントの配列をもとに配列番号３３および配列番号３４のプライマーを設計した。また、ライブラリの遺伝子挿入部位の外側のプライマー配列番号３５および配列番号３６を設計した。A.fumigatus cDNAライブラリを鋳型にして、配列番号３３および配列番号３５のプライマーセット、または配列番号３４および配列番号３６のプライマーセットを用いてPCRをおこなった結果、両者から約1 kbのDNAフラグメントの増幅が確認された。これらのフラグメントの塩基配列を決定した結果、配列番号１に示すS.cerevisiaeのGWT1遺伝子と高い相同性を有する新規の配列が得られた。同配列はS.cerevisiae，S.pombe，C.albicansのGWT1遺伝子と全体を通じて高い相同性を有することから、この配列がA.fumigatusのホモログであることが強く示唆された。
【０２１４】
A.fumigatusのホモログ全体をクローニングするために、得られた配列をもとに、開始コドン上流に相当する配列番号３７に示すプライマーおよび終止コドン下流に相当するプライマー配列番号３８を新たに設計した。A.fumigatus cDNAライブラリ（STRATAGENE社）およびA.fumigatusゲノムライブラリ（STRATAGENE社）を鋳型に、配列番号３７および配列番号３８のプライマーで３５サイクルのＰＣＲをおこなった結果、両方の鋳型から約1.6kbの単一な増幅フラグメントが検出された。このフラグメントの塩基配列をダイレクトシークエンスによって決定した結果、cDNAライブラリからは配列番号３９に示す塩基配列が見いだされ、配列番号４０に示す501アミノ酸からなる蛋白をコードしていることが示唆された。また、ゲノムライブラリからは配列番号４１に示す塩基配列が見いだされ、77塩基対からなるイントロンを１カ所有していることが判った。
【０２１５】
実施例Ａ１９  S. cereviciae GWT1遺伝子の、Cryptococcusホモログのクローニング
1).データベースサーチ
データベースサーチによってS. cereviciae GWT1遺伝子と相同性のある遺伝子を検索した結果、スタンフォード大学のゲノムセンターのサーバー（http://baggage.stanford.edu/cgi-misc/cneoformans/）から、502042C05.x1の配列を見いだした。また、米国オクラホマ大学のサーバー（http://www.genome.ou.edu/cneo_blast.html）から、b6e06cn.f1の配列を見いだした。
【０２１６】
2).ゲノムDNAを鋳型としたPCR
502042C05.x1の配列をもとに配列番号４２のプライマーを作製し、またb6e06cn.f1の配列をもとに配列番号４３のプライマーを作製した。クリプトコッカス（Cryptococcus neoformans）のゲノムDNAを鋳型にして、配列番号４２のプライマーおよび配列番号４３のプライマーを用いてPCR増幅を行ったところ、約2 kbの増幅フラグメントが検出された。このフラグメントの塩基配列を決定したところ、配列番号４４に示す、S. cerevisiaeのGWT1遺伝子と相同性を有する新規の配列が得られた。
【０２１７】
クリプトコッカスGWT1遺伝子の開始コドン上流の配列を獲得するために、502042C05.x1の配列をもとに配列番号４５のプライマーを設計し、また配列番号４４の配列をもとに配列番号４６のプライマーを設計した。クリプトコッカスのゲノムDNAを鋳型にして、配列番号４５のプライマーおよび配列番号４６のプライマーを用いてPCR増幅を行ったところ、約500 bpの増幅フラグメントが検出された。このフラグメントの塩基配列を決定したところ、配列番号４７に示す配列が得られ、配列番号４４とオーバーラップすることが判った。
【０２１８】
3).3'-RACE
クリプトコッカスGWT1遺伝子の3'末端の配列を得るために、3'-RACEをおこなった。クリプトコッカスから抽出した16μgのtotal RNAをもとに配列番号４８で示すadaptor-primerでプライミングし、SuperScript II Reverse Transcriptase（GIBCO/BRL社製）を用いて逆転写反応をおこない、以降のRT-PCRの鋳型となる１本鎖cDNAを作製した。１本鎖cDNAを鋳型に、配列番号４９および配列番号５０に示すプライマーで35サイクルのPCRをおこなった結果、約1.2 kbの増幅フラグメントが検出された。このフラグメントの塩基配列をDirect-Sequence法によって解析したところ、配列番号５１に示す、S.cerevisiaeのGWT1遺伝子と相同性を有する新規の配列が得られた。
【０２１９】
4).全長ゲノムDNAのPCR
配列番号４７をもとに設計した配列番号５２のプライマーおよび、配列番号５１をもとに設計した配列番号５３のプライマーを用いて、クリプトコッカスのゲノムDNAを鋳型に独立した3本のpreparationで35サイクルのPCRをおこなった。その結果、独立した3本のtubeからはいずれも約2 kbの増幅フラグメントが検出されたので、それぞれ個別にDirect-Sequenceに供し、全塩基配列を決定した。その結果、3つの独立した配列は完全に一致し、配列番号５４に示すクリプトコッカスのGWT1遺伝子ホモログ全長を含む配列が得られた。
【０２２０】
5).cDNA配列の決定
配列番号５４に示すゲノム由来のクリプトコッカスGWT1遺伝子配列を、3'-RACEによって得られたcDNA配列５１と比較することにより、２カ所のイントロンの存在が示唆された。また、開始ATG以降のOpen Reading Frame が通っていないことから、さらにもう１カ所のイントロンの存在が示唆された。そこで、予想されるアミノ酸配列およびスプライシング・ドナー/アクセプター配列から、cDNA構造を予測し、エクソン間のジャンクションと予想される部位に、配列番号５５および配列番号５６で示すプライマーを設計した。クリプトコッカス由来の一本鎖cDNAをテンプレートに上記プライマーを用いて35サイクルのPCRをおこなった結果、約1.4 kbの増幅フラグメントが確認された。同フラグメントをDirect-Sequenceに供し塩基配列の決定をおこなった結果、配列番号５７に示す配列が得られ、配列番号５４と照合することにより、クリプトコッカスのGWT1遺伝子のcDNA配列が配列番号５８に示す構造であることが示唆された。同配列はS.cerevisiae，S.pombe，C.albicans，A.fumigatusのGWT1遺伝子と部分的に高い相同性を有することから、この配列がクリプトコッカスのホモログであることが強く示唆された。
【０２２１】
実施例Ａ２０  GWT1蛋白を発現した膜画分の調製
(1).GWT1発現ベクターの作製
S.cerevisiae で働く発現ベクターを作製するため、YEp352のマルチクローニングサイトにpKT10（Tanaka et al, Mol. Cell Biol., 10:4303-4313, 1990）由来のGAPDHプロモーターおよびGAPDHターミネーターを挿入し、更にマルチクローニングサイトをpUC18マルチクローニングサイトに置き換えてYEp352GAPIIを作製した。またGWT1遺伝子の挿入を容易にするため、マルチクローニングサイトに存在するSalIサイトをClaIサイトに変換したYEp352GAPIIClaIδSalを作製した。
配列番号１に記載の塩基配列を含むS.cerevisiae GWT1遺伝子を配列番号６４に記載のプライマーおよび配列番号６５に記載のプライマーを用いて増幅し、YEp352GAPIIClaIδSalベクターのマルチクローニングサイトに挿入してGWT1過剰発現プラスミドを作製した。
【０２２２】
(2). 膜画分の調製
S.cerevisiae G2-10株を、10 mlのYPD培地にて30℃で振とう培養し、対数増殖後期（OD600=2〜5）の時点で集菌した。滅菌水で洗浄後、YEAST MAKERTM Yeast Transformation System （Clonetech社製）を用いた酢酸リチウム法（YEAST MAKERTM Yeast Transformation System User Manualに記載）によって、上記プラスミドおよびGWT1を含まない空ベクターをS. cerevisiae G2-10株に導入した。SD（ura-）培地で30℃、２日間培養することによりGWT1または変異GWT1過剰発現株および空ベクター導入株を得た。これらの株をそれぞれSD（ura-）液体培地にて30℃で振とう培養し、対数増殖中期（OD600=1〜3）の時点で集菌した。菌体を10 mM NaN3で洗浄した後、菌体量の３倍量のHomogenization buffer（50 mM Tris-HCl, pH7.5, 10 mM EDTA, CompleteTM（Roche社製） 1 tablet / 25 ml）にて懸濁し、４倍量のガラスビーズを加えた。これを30秒間ボルテックスして30秒間氷上に置く操作を４回繰り返すことにより菌体を破砕した。ここに1 mlのHomogenization bufferを加え、4℃で2,500 rpm、5分間遠心してガラスビーズおよび未破砕の菌体を沈殿させた。上清を別のチューブにとり、4℃で135,000 rpm、10分間遠心することによりオルガネラを含む膜画分(Total membrane fraction)を沈殿させた。沈殿を1 mlのBinding buffer （0.1 M Phosphate buffer, pH 7.0, 0.05% Tween 20, CompleteTM（Roche社製）1 tablet / 50 ml）に懸濁し、4℃で2,500 rpm, 1分間遠心することにより懸濁されなかった部分を取り除き、上清を4℃で15,000 rpm, 5分間遠心した。沈殿を150〜650μlのBinding bufferに再懸濁し、膜画分とした。
【０２２３】
実施例Ａ２１  標識化合物の結合実験
(1).標識化合物の合成
実施例Ｂ２に記載の化合物（CompoundB2）10 mg(0.036 mmol)、酸化パラジウム20mgそしてパラジウム-炭素（10%）10 mgをメタノール1 mlに溶解し、10 Ciのトリチウムガスの下で50分間撹拌した。その後、反応混合物をろ過し、ろ液を濃縮乾固した。活性なトリチウムを除去するためにメタノールに溶解し、濃縮乾固を3回繰り返した。残渣をハイパフォーマンス液体クロマトグラフィーにより分離精製した。目的物のピークの画分を集め、濃縮乾固し、エタノールに溶解した。
【０２２４】
(2).結合実験
調製した膜画分100μlに1 ngの[3H]CompoundB2を加え、氷上にて1〜2時間静置することにより[3H]CompoundB2と膜画分との結合反応を行った。その後4℃で15,000 rpm, 3分間遠心し膜画分を沈殿させた。沈殿を150μlのBinding bufferにて懸濁し、4℃で15,000 rpm, 3分間遠心する操作を２回繰り返して、結合していない[3H]CompoundB2を除去した。沈殿を80μlのBinding bufferに懸濁し放射能測定用バイアルに移し、6 mlのシンチレーターを加えて、液体シンチレーションカウンター(Aloka)にて放射活性を測定した。
【０２２５】
その結果、図８に示すように、GWT1遺伝子を挿入していないベクターを導入した株（vector）の膜画分に対しては[3H]CompoundB2の結合がほとんど見られないのに対し、GWT1を過剰発現させた株（GWT1）では結合量が著しく増加した。またこの増加した結合は100倍量の非標識（cold）のCompoundB2を共存させることによって完全に阻害された。以上のことより、[3H]CompoundB2が膜画分中のGWT1蛋白に特異的に結合していることが示唆された。
【０２２６】
実施例Ａ２２  被検化合物による[3H]CompoundB2の結合阻害実験
本アッセイ系を用いて、[3H]CompoundB2とGWT1との結合を阻害する化合物をスクリーニングできるかを検討した。調製した膜画分100μlに100 ngの被検化合物（実施例Ｂ３２に記載の化合物：CompoundB32、または実施例Ｂ１６に記載の化合物：CompoundB16）及び1 ngの[3H]CompoundB2を加え、氷上にて1〜2時間静置して、被検化合物及び[3H]CompoundB2と膜画分との結合反応を行い、実施例Ａ２１の記載に従って洗浄・放射活性の測定を行った。
【０２２７】
図９に示すように、[3H]CompoundB2の膜画分への結合は、標識していないCompoundB2をそれぞれ1倍量、10倍量、100倍量共存させることにより濃度依存的に阻害された。また、この結合は実施例Ａ２に記載のレポーター系においてCompoundB2と同等の活性をもつ類縁体CompoundB32（IC50 =0.78μg/ml）を100倍量共存させることによっても阻害された。一方、レポーター系で全く活性を示さない類縁体CompoundB16（IC50 >200μg/ml）を100倍量共存させても全く阻害されなかった。以上のことから、本アッセイ系がGWT1タンパク質と結合する化合物を選択する手法として使用できることが示された。
【０２２８】
実施例Ｂ１
1-（クロロメチル）-4-n-ブチルベンゼン
【０２２９】
【化４７】
2005168301.tif 000036
【０２３０】
4-n-ブチルベンジルアルコール2.0g（12ミリモル）のエーテル（25ml）溶液に、塩化チオニル2.5ml（34ミリモル）を加え、室温で３時間撹拌した。濃縮後、ベンゼンによる共沸により過剰の塩化チオニルを除去し、表題化合物2.3gを得た。この化合物は精製することなく次の反応に用いた。
【０２３１】
実施例Ｂ２
1-（4-ブチルベンジル）イソキノリン
【０２３２】
【化４８】
2005168301.tif 000037
【０２３３】
６０％水素化ナトリウム16mg（0.40ミリモル）のジメチルホルムアミド（1.8ml）溶液に窒素雰囲気下−１６℃で、Org. Synth.,VI, 115(1988)の文献に基づいて合成した1-シアノ-2-ベンゾイル-1,2-ジヒドロイソキノリン100mg（0.38ミリモル）と４−n-ブチルベンジルクロリド70mg（0.38ミリモル）のジメチルホルムアミド（3.6ml）溶液を滴下し、さらに室温で３０分間撹拌した。水を加え、減圧濃縮し、残渣にトルエンと水を加えた。トルエン層を水洗後、炭酸カリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣のエタノール(1.6ml)溶液に５０％水酸化ナトリウム水溶液（0.63ml）を加え、２時間加熱還流した。濃縮後、トルエンと水を加えた。トルエン層を水洗後、炭酸カルシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物18mgを得た。
【０２３４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.26-1.36(2H, m), 1.50-1.59(2H, m), 2.53(2H, t), 4.64(2H, s), 7.06(2H, d), 7.19(2H, d), 7.53(1H, td), 7.56(1H, d), 7.64(1H, td), 7.81(1H, d), 8.18(1H, dd), 8.50(1H, d)
【０２３５】
実施例Ｂ３
（4-ブチルフェニル）（1-イソキノリル）ケトン
【０２３６】
【化４９】
2005168301.tif 000038
【０２３７】
窒素雰囲気下、マグネシウム338mg（14ミリモル）とテトラヒドロフラン6.5mlの混合溶液に、１−ブロモ−４−ブチルベンゼン2.29ml（13ミリモル）と開始剤として触媒量の１，２−ジブロモエタンを加え、１０分間還流下撹拌した。この溶液を０℃まで冷却し、１−イソキノリンカルボニトリル1.0g（6.5ミリモル）のテトラヒドロフラン溶液を加え、さらに室温で１時間、７０℃で３時間撹拌した。その後、再度０℃に冷却し、濃塩酸2.6mlそしてメタノール11mlを加えた後、２時間加熱還流した。濃縮後、残渣を５規定水酸化ナトリウムとトルエンに溶解し、セライトで濾過した。濾液のトルエン層を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物1.7gを得た。
【０２３８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.93(3H, t), 1.32-1.43(2H, m), 1.58-1.66(2H, m), 2.68(2H, t), 7.28(2H, d), 7.61(1H, td), 7.74(1H, td), 7.80(1H, d), 7.87(2H, d), 7.92(1H, d), 8.20(1H, d), 8.60(1H, d)
【０２３９】
実施例Ｂ４
1-（4-ブチルベンジル）イソキノリンの製造方法の別法
実施例Ｂ３の化合物1.7g（6.0ミリモル）、ヒドラジン１水和物836mg（17ミリモル）そして水酸化カリウム769mg（14ミリモル）をジエチレングリコール8.5mlに加え、８０℃で１時間、１６０℃で３時間半そして２００℃で１時間撹拌した。室温まで冷却後、氷水を加え酢酸エチルで抽出した。これを水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物914mgを得た。
【０２４０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.26-1.36(2H, m), 1.50-1.59(2H, m), 2.53(2H, t), 4.64(2H, s), 7.06(2H, d), 7.19(2H, d), 7.53(1H, td), 7.56(1H, d), 7.64(1H, td), 7.81(1H, d), 8.18(1H, dd), 8.50(1H, d)
【０２４１】
実施例Ｂ５
1-（4-エチルベンジル）イソキノリン
【０２４２】
【化５０】
2005168301.tif 000039
【０２４３】
p-エチルベンジルクロリドを用いて実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２４４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.18(3H, t), 2.57(2H, q), 4.64(2H, s), 7.08(2H, d), 7.20(2H, d), 7.50-7.55(2H, m),  7.61-7.65(1H, m), 7.80(1H, d), 8.16-8.18(1H, m), 8.49(1H, d)
【０２４５】
実施例Ｂ６
（4-プロピルフェニル）メタノール
【０２４６】
【化５１】
2005168301.tif 000040
【０２４７】
０℃まで冷却したp-n-プロピルベゾイックアシッド5.0g（32ミリモル）のテトラヒドロフラン（20ml）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム2.9g（76ミリモル）と濃硫酸のエーテル（エーテル4.0mlに濃硫酸2.0mlを加えて調製した。）溶液を反応系内の温度が２０℃以上に上昇しないように滴下し、室温で３時間撹拌した。氷冷後、メタノールと１規定水酸化ナトリウムを加え酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、表題化合物を4.33g 得た。この化合物は精製することなく次の反応に用いた。
【０２４８】
実施例Ｂ７
1-（クロロメチル）-4-プロピルベンゼン
【０２４９】
【化５２】
2005168301.tif 000041
【０２５０】
実施例Ｂ６の化合物を実施例Ｂ１と同様にして表題化合物を得た。この化合物はさらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２５１】
実施例Ｂ８
1-（4-プロピルベンジル）イソキノリン
【０２５２】
【化５３】
2005168301.tif 000042
【０２５３】
実施例Ｂ７の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２５４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.55-1.61(2H, m), 2.51(2H, t), 4.64(2H, s), 7.06(2H, d), 7.19(2H, d), 7.51-7.55(2H, m),  7.61-7.65(1H, m), 7.81(1H, d), 8.17(1H, dd), 8.49(1H, d)
【０２５５】
実施例Ｂ９
（4-ペンチルフェニル）メタノール
【０２５６】
【化５４】
2005168301.tif 000043
【０２５７】
4-n-アミルベンゾイックアシッドを実施例Ｂ６と同様に還元して表題化合物を得た。
【０２５８】
実施例Ｂ１０
1-（クロロメチル）-4-ペンチルベンゼン
【０２５９】
【化５５】
2005168301.tif 000044
【０２６０】
実施例Ｂ９の化合物を実施例Ｂ１と同様にして表題化合物を得た。この化合物はさらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２６１】
実施例Ｂ１１
1-（4-ペンチルベンジル）イソキノリン
【０２６２】
【化５６】
2005168301.tif 000045
【０２６３】
実施例Ｂ１０を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２６４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.86(3H, t), 1.26-1.33(4H, m), 1.52-1.59(2H, m), 2.52(2H, t), 4.64(2H, s), 7.06(2H, d), 7.18(2H, d), 7.50-7.55(2H, m), 7.61-7.65(1H, m), 7.80(1H, d), 8.17(1H, dd), 8.49(1H, d)
【０２６５】
実施例Ｂ１２
（4-ヘキシルフェニル）メタノール
【０２６６】
【化５７】
2005168301.tif 000046
【０２６７】
4-n-ヘキシルベンゾイックアシッドを実施例Ｂ６と同様に還元して表題化合物を得た。この化合物はさらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２６８】
実施例Ｂ１３
1-（クロロメチル）-4-ヘキシルベンゼン
【０２６９】
【化５８】
2005168301.tif 000047
【０２７０】
実施例Ｂ１２の化合物を実施例Ｂ１と同様にして表題化合物を得た。この化合物はさらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２７１】
実施例Ｂ１４
1-（4-ヘキシルベンジル）イソキノリン
【０２７２】
【化５９】
2005168301.tif 000048
【０２７３】
実施例Ｂ１３の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２７４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.86(3H, t), 1.26-1.31(6H, m), 1.51-1.58(2H, m), 2.52(2H, t), 4.63(2H, s), 7.06(2H, d), 7.18(2H, d), 7.50-7.55(2H, m), 7.61-7.65(1H, m), 7.80(1H, d), 8.17(1H, dd), 8.49(1H, d)
【０２７５】
実施例Ｂ１５
1-（4-イソプロピルベンジル）イソキノリン
【０２７６】
【化６０】
2005168301.tif 000049
【０２７７】
p-イソプロピルベンジルクロリドを実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２７８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.19(6H, d), 2.80-2.87(1H, m), 4.64(2H, s), 7.11(2H, d), 7.21(2H, d), 7.51-7.56(2H, m), 7.61-7.65(1H, m), 7.81(1H, d), 8.19(1H, dd), 8.50(1H, d)
【０２７９】
実施例Ｂ１６
1-[4-(tert-ブチル)ベンジル]イソキノリン
【０２８０】
【化６１】
2005168301.tif 000050
【０２８１】
4-tert-ブチルベンジルクロリドを実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２８２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.26(9H, s), 4.64(2H, s), 7.22(2H, d), 7.27(2H, d), 7.52-7.56(2H, m), 7.62-7.66(1H, m), 7.81(1H, d), 8.19(1H, dd), 8.50(1H, d)
【０２８３】
実施例Ｂ１７
(4-イソブチルフェニル)メタノール
【０２８４】
【化６２】
2005168301.tif 000051
【０２８５】
4-イソブチルベンゾイックアシッドを実施例Ｂ６と同様に還元して表題の化合物を得た。さらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２８６】
実施例Ｂ１８
1-(クロロメチル)-4-イソブチルベンゼン
【０２８７】
【化６３】
2005168301.tif 000052
【０２８８】
実施例Ｂ１７の化合物を実施例Ｂ１と同様にして表題化合物を得た。さらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２８９】
実施例Ｂ１９
1-(4-イソブチルベンジル)イソキノリン
【０２９０】
【化６４】
2005168301.tif 000053
【０２９１】
実施例Ｂ１８の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２９２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.86(6H, d), 1.75-1.83(1H, m), 2.39(2H, d), 4.66(2H, s), 7.02(2H, d), 7.18(2H, d), 7.52-7.58(2H, m), 7.63-7.67(1H, m), 7.82(1H, d), 8.18(1H, d), 8.50(1H, d)
【０２９３】
実施例Ｂ２０
1-(クロロメチル)-4-(トリフルオロメチル)ベンゼン
【０２９４】
【化６５】
2005168301.tif 000054
【０２９５】
4-トリフルオロメチルベンジルアルコールを実施例Ｂ１と同様にして表題化合物を得た。さらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２９６】
実施例Ｂ２１
1-[4-(トリフルオロメチル)ベンジル]イソキノリン
【０２９７】
【化６６】
2005168301.tif 000055
【０２９８】
実施例Ｂ２０の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０２９９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.73(2H, s), 7.39(2H, d), 7.51(2H, d), 7.54-7.60(2H, m), 7.65-7.69(1H, m), 7.84(1H, d), 8.09-8.10(1H, m), 8.51(1H, d)
【０３００】
実施例Ｂ２２
1-(クロロメチル)-4-(トリフルオロメトキシ)ベンゼン
【０３０１】
【化６７】
2005168301.tif 000056
【０３０２】
4-トリフルオロメトキシベンジルアルコールを実施例Ｂ１と同様にして表題化合物を得た。さらに精製することなく次の反応に用いた。
【０３０３】
実施例Ｂ２３
1-[4-(トリフルオロメトキシ)ベンジル]イソキノリン
【０３０４】
【化６８】
2005168301.tif 000057
【０３０５】
実施例Ｂ２２の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０３０６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.67(2H, s), 7.10(2H, d), 7.27(2H, d), 7.54-7.59(2H, m), 7.64-7.68(1H, m), 7.84(1H, d), 8.11(1H, dd), 8.50(1H, d)
【０３０７】
実施例Ｂ２４
1-(クロロメチル)-2-ヨードベンゼン
【０３０８】
【化６９】
2005168301.tif 000058
【０３０９】
０℃に冷却したo-ヨードベンジルアルコール5.0g（21ミリモル）の塩化メチレン（50ml）溶液に、メタンスルフォニルクロリド2.0ml（29ミリモル）とトリエチルアミン3.6ml（26ミリモル）を加え、その温度で１９時間撹拌した。５％炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出した。塩化メチレン層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、表題化合物を5.34g 得た。
【０３１０】
実施例Ｂ２５
1-(2-ヨードベンジル)イソキノリン
【０３１１】
【化７０】
2005168301.tif 000059
【０３１２】
実施例Ｂ２４の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０３１３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.74(2H, s), 6.81-6.84(1H, m), 6.87-6.92(1H, m), 7.11-7.15(1H, m), 7.55-7.57(1H, m), 7.60(1H, d), 7.64-7.68(1H, m), 7.83-7.86(1H, m), 7.89-7.91(1H, m), 8.00-8.02(1H, m), 8.50(1H, d)
【０３１４】
実施例Ｂ２６
1-[2-(2-フェニル-1-エチニル)ベンジル]イソキノリン
【０３１５】
【化７１】
2005168301.tif 000060
【０３１６】
窒素雰囲気下、実施例Ｂ２５の化合物345mg（1.07ミリモル）のピロリジン（1.5ml）溶液に、テトラキストリフェニルフォスフィンパラジウム58mg（0.05ミリモル）とエチニルベンゼン204mg（2.0ミリモル）のピロリジン（1.5ml）溶液を加え、８０℃で３時間撹拌した。室温まで冷却後、酢酸エチルで希釈後、飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、表題化合物280mgを得た。
【０３１７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.95(2H, s), 6.98-7.06(2H, m), 7.10-7.21(2H, m), 7.31-7.35(3H, m), 7.48-7.51(3H, m), 7.57-7.65(2H, m), 7.82(1H, d), 8.25(1H, d), 8.52(1H, d)
【０３１８】
実施例Ｂ２７
1-(2-フェニルエチルベンジル)イソキノリン
【０３１９】
【化７２】
2005168301.tif 000061
【０３２０】
実施例Ｂ２６の化合物280mg（0.88ミリモル）のテトラヒドロフラン（30ml）溶液に、パラジウム−炭素（10%）230mgを加え、室温で水素雰囲気下（1 atm）で３時間撹拌した。触媒を濾去し、得られた濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、表題化合物162mgを得た。
【０３２１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.90-2.94(2H, m), 3.07-3.10(2H, m), 4.67(2H, s), 6.80(1H, d), 7.02-7.06(1H, m), 7.15-7.30(7H, m), 7.49-7.53(1H, m), 7.58(1H, d), 7.64-7.68(1H, m), 7.84(1H, d), 7.95(1H, d), 8.50(1H, d)
【０３２２】
実施例Ｂ２８
1-{2-[4-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ブチニル]ベンジル}イソキノリン
【０３２３】
【化７３】
2005168301.tif 000062
【０３２４】
窒素雰囲気下、実施例Ｂ２５の化合物345mg（1.07ミリモル）のピロリジン（1.5ml）溶液に、テトラキストリフェニルフォスフィンパラジウム58mg（0.05ミリモル）と2-(3-ブチニルオキシ)-テトラヒドロ-2H-ピラン208mg（2.0ミリモル）のピロリジン（1.5ml）溶液を加え、４日間室温で撹拌し、さらに８０℃で３０分間撹拌した。室温まで冷却後、酢酸エチルで希釈後、飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、表題化合物277mgを得た。
【０３２５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.42-1.60(4H, m), 1.64-1.68(1H, m), 1.75-1.81(1H, m), 2.76-2.80(2H, m), 3.46-3.51(1H, m), 3.60-3.66(1H, m), 3.85-3.95(2H, m), 4.64-4.66(1H, m), 4.85(2H, s), 6.95-6.98(1H, m), 7.05-7.13(2H, m), 7.44-7.46(1H, m), 7.49-7.53(1H, m), 7.56(1H, d), 7.60-7.65(1H, m), 7.80-7.82(1H, m), 8.15-8.18(1H, m), 8.49-8.51(1H, m)
【０３２６】
実施例Ｂ２９
4-[2-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-3-ブチン-1-オール
【０３２７】
【化７４】
2005168301.tif 000063
【０３２８】
実施例Ｂ２８の化合物200mg（0.54ミリモル）を０℃まで冷却した後、塩酸―メタノール溶液（10%）を5ml加え、１５分間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、表題化合物86mgを得た。
【０３２９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.72(2H, t), 3.53-3.60(1H, brs), 3.85(2H, t), 4.85(2H, s), 7.12-7.15(2H, m), 7.22-7.24(1H, m), 7.42-7.44(1H, m), 7.55-7.59(2H, m), 7.63-7.67(1H, m), 7.81(1H, d), 8.30(1H, m), 8.46(1H, m)
【０３３０】
実施例Ｂ３０
4-[2-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-1-ブタノール
【０３３１】
【化７５】
2005168301.tif 000064
【０３３２】
実施例Ｂ２９の化合物44mg（0.15ミリモル）のテトラヒドロフラン（5ml）溶液に、パラジウム−炭素（10%）10mgを加え、室温で水素雰囲気下（1 atm）１時間撹拌した。触媒を濾去後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、表題化合物18mgを得た。
【０３３３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.61-1.75(4H, m), 2.33(1H, brs), 2.77(2H, t), 3.67(2H, t), 4.70(2H, s), 6.91(1H, d), 7.02-7.06(1H, m), 7.12-7.16(1H, m), 7.19-7.21(1H, m), 7.50-7.55(1H, m), 7.57(1H, d), 7.63-7.67(1H, d), 7.83(1H, d), 8.09(1H, d), 8.47(1H, d)
【０３３４】
実施例Ｂ３１
1-ブロモ-2-(クロロメチル)ベンゼン
【０３３５】
【化７６】
2005168301.tif 000065
【０３３６】
p-ブロモベンジルアルコールを実施例Ｂ１と同様にして表題化合物を得た。
【０３３７】
実施例Ｂ３２
1-(4-ブロモベンジル)イソキノリン
【化７７】
2005168301.tif 000066
【０３３８】
実施例Ｂ３１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０３３９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.61(2H, s), 7.14-7.16(2H, m), 7.35-7.39(2H, m), 7.52-7.58(2H, m), 7.63-7.67(1H, m), 7.82(1H, d), 8.07-8.10(1H, m), 8.49(1H, d)
【０３４０】
実施例Ｂ３３
エチル(E)-3-[4-(イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロペノエート
【０３４１】
【化７８】
2005168301.tif 000067
【０３４２】
窒素雰囲気下、実施例Ｂ３２の化合物100mg（0.34ミリモル）とプロピオン酸ビニルエステル73μl（0.67ミリモル）のジメチルホルムアミド1.0ml溶液に、トリス（2-メチルフェニル）ホスフィン20mg（0.067ミリモル）、パラジウム(II)アセテート7.5mg（0.034ミリモル）そしてトリエチルアミン70μl（0.50ミリモル）を加え、４時間１００℃で加熱撹拌した。この溶液を室温まで戻した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物74mgを得た。
【０３４３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.32(3H, t), 4.24(2H, q), 4.69(2H, s), 6.36(1H, d), 7.29(2H, d), 7.42(2H, d), 7.53-7.67(4H, m), 7.83(1H, d), 8.11-8.13(1H, m), 8.50(1H, d)
【０３４４】
実施例Ｂ３４
エチル3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロパノエート
【０３４５】
【化７９】
2005168301.tif 000068
【０３４６】
実施例Ｂ３３の化合物71mg（0.22ミリモル）のメタノール(5.0ml)溶液に、パラジウム-炭素（10％、20mg）を加え、室温で常圧水素雰囲気下、５時間半撹拌した。反応液より触媒を濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物52mgを得た。
【０３４７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.20(3H, t), 2.56(2H, t), 2.88(2H, t), 4.09(2H, q), 4.64(2H, s), 7.09(2H, d), 7.20(2H, d), 7.51-7.57(2H, m), 7.62-7.66(1H, m), 7.82(1H, d), 8.15(1H, dd), 8.50(1H, d)
【０３４８】
実施例Ｂ３５
3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-1-プロパノール
【０３４９】
【化８０】
2005168301.tif 000069
【０３５０】
窒素雰囲気下、０℃に冷却したテトラヒドロフラン1.0mlにリチウムアルミニウムヒドリド6mg（0.16ミリモル）を加えた。この溶液に実施例Ｂ３４の化合物46mg（0.14ミリモル）のテトラヒドロフラン（1.0ml）溶液を加え、その温度で３時間撹拌した。反応液にメタノールと水（9:1, 1.0ml）の混合液を加え、さらに飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた後、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物22mgを得た。
【０３５１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.30-1.35(1H, brs), 1.81-1.88(2H, m), 2.64(2H, t), 3.62-3.65(2H, m), 4.64(2H, s), 7.09(2H, d), 7.20(2H, d), 7.51-7.57(2H, m), 7.62-7.66(1H, m), 7.81(1H, d), 8.16-8.18(1H, m), 8.49(1H, d)
【０３５２】
実施例Ｂ３６
1-イソキノリル(4-メトキシフェニル)ケトン
【０３５３】
【化８１】
2005168301.tif 000070
【０３５４】
窒素雰囲気下、マグネシウム3059mg(125.8ミリモル）とテトラヒドロフラン(20ml)の混合溶液に、4-ブロモアニソール15.3ml（122ミリモル）と開始剤として触媒量の１，２−ジブロモエタンを加え、加熱還流下45分間撹拌した。この溶液を０℃まで冷却し、1-イソキノリンカルボニトリル10.78g（69.9ミリモル）のテトラヒドロフラン溶液(30ml)を滴下後、室温で2時間撹拌した。反応混合物を氷冷し、濃塩酸24mlとメタノール120mlを加え、1.5時間加熱還流した。氷冷後、水酸化ナトリウム水溶液を加えpH8とした後、エーテルで抽出し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物15.87gを得た。
【０３５５】
1H-NMR(CDCl3) δ(ppm):3.88(3H, s), 6.95(2H, d), 7.61(1H, dd), 7.74(1H, dd), 7.76(1H, d), 7.85(2H, d), 8.17(1H, dd), 8.60(1H, d).
【０３５６】
実施例Ｂ３７
1-イソキノリル(4-メトキシフェニル)メタノール
【０３５７】
【化８２】
2005168301.tif 000071
【０３５８】
氷冷した実施例Ｂ３６の化合物8608mgのエタノール(170ml)溶液に、水素化ホウ素ナトリウム1855mgを加え、室温で35分間撹拌した。さらに水素化ホウ素ナトリウム957mgを加え40℃で40分間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、水を加えエーテルで抽出した。有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた表題化合物7881mg はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０３５９】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):3.66(3H, s), 6.30-6.32(1H, brs), 6.81(2H, d), 7.28(2H, d), 7.54(1H, dd), 7.68(1H, dd), 7.76(1H, d), 7.94(1H, d), 8.37(1H, d), 8.47(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０３６０】
実施例Ｂ３８
1-イソキノリル(4-メトキシフェニル)メチルアセテート
【０３６１】
【化８３】
2005168301.tif 000072
【０３６２】
実施例Ｂ３７の化合物7881mgのピリジン(100ml)溶液に、無水酢酸20mlを加え、50℃で4時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、さらにトルエン共沸した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物8.79gを得た。
【０３６３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.22(3H, s), 3.76(3H, s), 6.84(2H, d), 7.39(2H, d), 7.54(1H, dd), 7.56(1H, s), 7.60(1H, d), 7.64(1H, dd), 7,82(1H, d), 8.19(1H, d), 8.57(1H, d).
【０３６４】
実施例Ｂ３９
1-(4-メトキシベンジル)イソキノリン
【０３６５】
【化８４】
2005168301.tif 000073
【０３６６】
実施例Ｂ３８の化合物8.79gのメタノール(150ml)溶液に、10%パラジウム-炭素4.0gを加え、室温で常圧水素雰囲気下5.5時間撹拌した。触媒をセライトで濾去し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物4.48gを得た。
【０３６７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.74(3H, s), 4.61(2H, s), 6.79(2H, d), 7.21(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.80(1H, d), 8.16(1H, d), 8.49(1H, d).
【０３６８】
実施例Ｂ４０
4-(1-イソキノリルメチル)フェノール
【０３６９】
【化８５】
2005168301.tif 000074
【０３７０】
実施例Ｂ３９の化合物2185mgに47%臭化水素酸水溶液40mlを加え、14時間加熱還流した。室温まで戻した後、さらに氷冷し50%水酸化ナトリウム水溶液で中和し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粉末を石油エーテルで洗浄し、表題化合物1822mgを得た。
【０３７１】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):4.48(2H, s), 6.61(2H, d), 7.07(2H, d), 7.60(1H, dd), 7.68(1H, d), 7.71(1H, dd), 7.92(1H, d), 8.27(1H, d), 8.41(1H, d), 9.19(1H, brs).
【０３７２】
実施例Ｂ４１
4-(1-イソキノリルメチル)フェニルトリフルオロメタンスルホネート
【０３７３】
【化８６】
2005168301.tif 000075
【０３７４】
氷冷した実施例Ｂ４０の化合物513mgのピリジン(10ml)溶液に、トリフルオロメタンスルフォン酸無水物0.55mlを滴下し、その温度で45分間撹拌した。その反応溶液に氷を加えエーテルで抽出した。有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物を546mgを得た。
【０３７５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.69(2H, s), 7.16(2H, d), 7.35(2H, d), 7.57(1H, dd), 7,60(1H, d), 7.68(1H, dd), 7.85(1H, d), 8.09(1H, d), 8.50(1H, d).
【０３７６】
実施例Ｂ４２
1-[4-(2-フェニル-1-エチニル)ベンジル]イソキノリン
【０３７７】
【化８７】
2005168301.tif 000076
【０３７８】
脱気した後、窒素置換した実施例Ｂ４１の化合物88mgのN,N-ジメチルホルムアミド(2.0ml)溶液に、フェニルアセチレン53μl、酢酸パラジウム9mg、1,1’-ビス(ジフェニルフォスフィノ)フェロセン67mg、ヨウ化銅(I)3mg、塩化リチウム20mgそしてトリエチルアミン50μlを加え、80℃で8時間撹拌した。室温まで戻した後、水を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物53mgを得た。
【０３７９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.69(2H, s), 7.12-7.32(3H, m), 7.25(2H, d), 7.42(2H, d),7.43-7.52(2H, m), 7.54(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.10(1H, d), 8.51(1H, d).
【０３８０】
実施例Ｂ４３
1-(4-フェネチルベンジル)イソキノリン
【０３８１】
【化８８】
2005168301.tif 000077
【０３８２】
実施例Ｂ４２の化合物45mgのテトラヒドロフラン(2ml)溶液に、10%パラジウム-炭素触媒20mgを加え、室温で常圧水素雰囲気下2時間撹拌した。触媒をセライトで濾去し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物23mgを得た。
【０３８３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.78-2.90(4H, m), 4.64(2H, s), 7.07(2H, d), 7.10-7.20(5H, m), 7.22(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.80(1H, d), 8.15(1H, d), 8.49(1H, d).
【０３８４】
実施例Ｂ４４
1-[4-(4-フェニル-1-ブチニル)ベンジル]イソキノリン
【化８９】
2005168301.tif 000078
【０３８５】
実施例Ｂ４１の化合物と4-フェニル-1-ブチンを用い、実施例Ｂ４２と同様に処理して表題化合物を得た。
【０３８６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.65(2H, t), 2.88(2H, t), 4.68(2H, s), 7.12-7.40(9H, m), 7.50-7.70(3H, m), 7.80-7.88(1H, m), 8.00-8.10(1H, m), 8.48-8.51(1H, m).
【０３８７】
実施例Ｂ４５
1-[4-(4-フェニル-1-ブチル)ベンジル]イソキノリン
【０３８８】
【化９０】
2005168301.tif 000079
【０３８９】
実施例Ｂ４４の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理して表題化合物を得た。
【０３９０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.55-1.80(4H, m), 2.50-2.65(4H, m), 4.68(2H, s), 7.00-7.30(9H, m), 7.52(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.15(1H, d), 8.50(1H, d).
【０３９１】
実施例Ｂ４６
1-{4-[4-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ブチニル]ベンジル}イソキノリン
【０３９２】
【化９１】
2005168301.tif 000080
【０３９３】
実施例Ｂ４１の化合物と2-(3-ブチニルオキシ)テトラヒドロ-2H-ピランを用い、実施例Ｂ４２と同様に処理して表題化合物を得た。
【０３９４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.48-1.90(6H, m), 2.67(2H, t), 3.49-3.55(1H, m), 3.60(1H, dd), 3.65-3.94(2H, m), 4.66(2H, s), 4.65-4.70(1H, m), 7.14-7.20(2H, m), 7.23-7.30(2H, m), 7.53(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.10(1H, d), 8.49(1H, d).
【０３９５】
実施例Ｂ４７
4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-3-ブチン-1-オール
【０３９６】
【化９２】
2005168301.tif 000081
【０３９７】
実施例Ｂ４６の化合物1048mgを10%塩酸-メタノール溶液50mlに溶解し、室温で1.5時間撹拌した。反応混合物を氷冷し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物666mgを得た。
【０３９８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.65(2H, t), 3.77(2H, t), 4.65(2H, s), 7.18(2H, d), 7.29(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.07(1H, d), 8.49(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０３９９】
実施例Ｂ４８
4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-1-ブタノール
【０４００】
【化９３】
2005168301.tif 000082
【０４０１】
実施例Ｂ４７の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４０２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.50-1.70(4H, m), 2.57(2H, t), 3.62(2H, t), 4.64(2H, s), 7.06(2H, d), 7.18(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.80(1H, d), 8.16(1H, d), 8.49(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０４０３】
実施例Ｂ４９
1-[4-(3-シクロペンチル-1-プロピニル)ベンジル]イソキノリン
【０４０４】
【化９４】
2005168301.tif 000083
【０４０５】
実施例Ｂ４１と3-シクロペンチル-1-プロピンを用い、実施例Ｂ４２と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４０６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.25-1.35(2H, m), 1.45-1.70(6H, m), 1.75-1.85(2H, m), 2.05-2.13(1H, m), 4.65(2H, s), 7.17(2H, d), 7.27(2H, d), 7.51(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.64(1H, dd),
7.81(1H, d), 8.08(1H, d), 8.49(1H, d).
【０４０７】
実施例Ｂ５０
1-[4-(3-シクロペンチルプロピル)ベンジル]イソキノリン
【０４０８】
【化９５】
2005168301.tif 000084
【０４０９】
実施例Ｂ４９を実施例Ｂ４３と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４１０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.25-1.74(13H, m), 2.49-2.54(2H, m), 4.64(2H, s), 7.06(2H, d), 7.18(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.80(1H, d), 8.17(1H, d), 8.49(1H, d).
【０４１１】
実施例Ｂ５１
4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-メチル-3-ブチン-2-オール
【０４１２】
【化９６】
2005168301.tif 000085
【０４１３】
実施例Ｂ４１の化合物と2-メチル-3-ブチン-2-オールを用いて実施例Ｂ４２と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４１４】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):1.35(1H, s), 1.40(6H, s), 4.62(2H, s), 7.20-7.30(4H, m), 7.61(1H, dd), 7.71(1H, d), 7.69-7.76(1H, m), 7.95(1H, d), 8.26(1H, d), 8.42(1H, d).
【０４１５】
実施例Ｂ５２
4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-メチル-2-ブタノール
【０４１６】
【化９７】
2005168301.tif 000086
【０４１７】
実施例Ｂ５１の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４１８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.25(6H, s), 1.70-1.77(2H, m), 2.60-2.67(2H, m), 4.64(2H, s), 7.08(2H, d), 7.19(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.80(1H, d), 8.16(1H, d), 8.49(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０４１９】
実施例Ｂ５３
1-[4-(3-メトキシ-1-プロピニル)ベンジル]イソキノリン
【０４２０】
【化９８】
2005168301.tif 000087
【０４２１】
実施例Ｂ４１の化合物とメチルプロパルギルエーテルを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４２２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.42(3H, s), 4.29(2H, s), 4.66(2H, s), 7.21 (2H, d), 7.34(2H, d), 7.54(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd) 7.82(1H, d), 8.10(1H, d) 8.49(1H, d).
【０４２３】
実施例Ｂ５４
1-[4-(3-メトキシプロピル)ベンジル]イソキノリン
【０４２４】
【化９９】
2005168301.tif 000088
【０４２５】
実施例Ｂ５３の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４２６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.78-1.87 (2H, m), 2.06(2H, t), 3.31(3H, s), 3.35(2H, t), 4.64(2H, s), 7.07(2H, d), 7.22(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.17(1H, d),8.49(1H, d).
【０４２７】
実施例Ｂ５５
1-{4-[2-(2-ピリジル)-1-エチニル]ベンジル}イソキノリン
【０４２８】
【化１００】
2005168301.tif 000089
【０４２９】
実施例Ｂ４１の化合物と2-エチニルピリジンを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４３０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.71(2H, s), 7.20-7.25(2H, m), 7.29(2H, d), 7.48-7.53(1H, m), 7.51(2H, d), 7.57(1H, dd), 7.61(1H, d), 7.67(1H, dd), 7.85(1H, d), 8.13(1H, d), 8.53(1H, d), 8.59-8.63(1H, m).
【０４３１】
実施例Ｂ５６
1-{4-[2-(2-ピリジル)エチル]ベンジル}イソキノリン
【０４３２】
【化１０１】
2005168301.tif 000090
【０４３３】
実施例Ｂ５５の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理して表題化合物を得た。
【０４３４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.94-3.06(4H, m), 4.64(2H, s), 7.04(1H, d), 7.09(1H, dd), 7.09(2H, d), 7.18(2H, d), 7.53(1H, ddd), 7.54(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.64(1H, d), 7.81(1H, d), 8.15(1H, d), 8.49(1H, d), 8.53(1H, dd).
【０４３５】
実施例Ｂ５７
1-{4-[2-(3-ピリジル)-1-エチニル]ベンジル}イソキノリン
【０４３６】
【化１０２】
2005168301.tif 000091
【０４３７】
実施例Ｂ４１の化合物と3-エチニルピリジンを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４３８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.69(2H, s), 7.27(2H, d), 7.31(1H, dd), 7.43(2H, d), 7.55(1H, dd), 7.59(1H, d), 7.66(1H, dd), 7.82(1H, ddd), 7.83(1H, d), 8.10(1H, d), 8.51(1H, d), 8.60(1H, dd), 8.77(1H, d).
【０４３９】
実施例Ｂ５８
1-{4-[2-(3-ピリジル)エチル]ベンジル}イソキノリン
【０４４０】
【化１０３】
2005168301.tif 000092
【０４４１】
実施例Ｂ５７を実施例Ｂ４３と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４４２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.80-2.90(4H, m), 4.65(2H, s),7.04(2H, d), 7.15(1H, dd), 7.19(2H, d), 7.39(1H, dd), 7.54(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.15(1H, d), 8.40(1H, d), 8.42(1H, d), 8.49(1H, d).
【０４４３】
実施例Ｂ５９
N-(2-プロピニル)アセトアミド
【０４４４】
【化１０４】
2005168301.tif 000093
【０４４５】
氷冷したプロパルギルアミン3023mgの塩化メチレン(30ml)溶液に、ピリジン16.3mlと無水酢酸10.4mlを加え、室温で1時間撹拌した。反応混合物を氷に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、1規定塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液そして飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、シリカゲルを用いて濾過した。減圧濃縮し、表題化合物743mg を得た。得られた化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０４４６】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):1.79(3H, s), 3.07(1H, t), 3.81(2H, d), 8.25(1H, brs).
【０４４７】
実施例Ｂ６０
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピニル}アセトアミド
【０４４８】
【化１０５】
2005168301.tif 000094
【０４４９】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ５９の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４５０】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):1.79(3H, s), 4.04(2H, s), 4.61(2H, s), 7.45-7.68(4H, m), 7.68-7.75(2H, m), 7.90-8.00(1H, m), 8.25-8.38(2H, m), 8.40-8.45(1H, m).
【０４５１】
実施例Ｂ６１
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロピル}アセトアミド
【０４５２】
【化１０６】
2005168301.tif 000095
【０４５３】
実施例Ｂ６０を実施例Ｂ４３と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４５４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.95(3H, s), 1.74-1.84(2H, m), 2.55(2H, t), 3.25(2H, dt), 4.68(2H, s), 7.10(2H, d), 7.18(2H, d), 7.20-7.28(1H, m), 7.50-7.58(2H, m), 7.60-7.68(1H, m), 7.75-7.85(1H, m), 8.10-8.16(1H, m), 8.45-8.50(1H, m).
【０４５５】
実施例Ｂ６２
N-(2-プロピニル)メタンスルホンアミド
【０４５６】
【化１０７】
2005168301.tif 000096
【０４５７】
氷冷したプロパルギルアミン3023mgの塩化メチレン(30ml)溶液に、トリエチルアミン9.77mlを加え、メタンスルホニルクロリド5.19mlを滴下した後、その温度で3時間撹拌し、その後室温に昇温し、さらに2時間撹拌した。反応混合物に氷を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をメタノール120mlに溶解し、炭酸カリウム11.7gを加え、室温で3時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮し、氷冷下希塩酸で中和した後、酢酸エチルで抽出した。飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物6.67gを得た。
【０４５８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.39(1H, t), 3.10(3H, s), 3.99(2H, dd), 4.60(1H, brs).
【０４５９】
実施例Ｂ６３
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピニル}メタンスルホンアミド
【０４６０】
【化１０８】
2005168301.tif 000097
【０４６１】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ６２の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４６２】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):2.97(3H, s), 4.00(2H, d), 4.63(2H, s), 7.25-7.37(4H, m), 7.57(1H, t), 7.62(1H, dd), 7.71(1H, d), 7.73(1H, dd), 7.94(1H, d), 8.28(1H, d), 8.42(1H, d).
【０４６３】
実施例Ｂ６４
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロピル}メタンスルホンアミド
【０４６４】
【化１０９】
2005168301.tif 000098
【０４６５】
実施例Ｂ６３の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４６６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.80-1.90(2H, m), 2.62(2H, t), 2.89(3H, s), 3.11(2H, dt), 4.25(1H, brs), 4.64(2H, s), 7.05(2H, d), 7.20(2H, d), 7.50(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.15(1H, d), 8.49(1H, d).
【０４６７】
実施例Ｂ６５
1-{4-[3-(エチルスルファニル)-1-プロピニル]ベンジル}イソキノリン
【０４６８】
【化１１０】
2005168301.tif 000099
【０４６９】
実施例Ｂ４１の化合物とプロパルギルエチルスルフィドを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４７０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.30(3H, t), 2.73(2H, q), 3.47(2H, s), 4.67(2H, s), 7.20-7.32(4H, m), 7.52(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.08(1H, d), 8.49(1H, d).
【０４７１】
実施例Ｂ６６
t-ブチルN-(2-プロピニル)カルバメート
【０４７２】
【化１１１】
2005168301.tif 000100
【０４７３】
氷冷したプロパルギルアミン3040mgのテトラヒドロフラン(20ml)溶液に、ジ-t-ブチル-ジカルボナート10.84gのテトラヒドロフラン溶液（20ml）を滴下し、徐々に室温まで昇温し、20時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、表題化合物9.34gを得た。得られた化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０４７４】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):1.36(9H, s),3.04(1H, t),3.62-3.70(2H, m),7.20-7.30(1H, m)
【０４７５】
実施例Ｂ６７
tert-ブチル  N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピニル}カルバメート
【０４７６】
【化１１２】
2005168301.tif 000101
【０４７７】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ６６の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４７８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.45(9H, s), 4.06-4.13(2H, m), 4.66(2H, s), 7.19(2H, d), 7.20-7.28(1H, m), 7.29(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.08(1H, d), 8.49(1H, d).
【０４７９】
実施例Ｂ６８
tert-ブチル  N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロピル}カルバメート
【０４８０】
【化１１３】
2005168301.tif 000102
【０４８１】
実施例Ｂ６７の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４８２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.43(9H, s), 1.70-1.81(2H, m), 2.54-2.60(2H, m), 3.01-3.20(2H, m), 4.47-4.57(1H, m), 4.65(2H, s), 7.07(2H, d), 7.21(2H, d), 7.55(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.18(1H, d), 8.51(1H, d).
【０４８３】
実施例Ｂ６９
3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピン-1-アミン
【０４８４】
【化１１４】
2005168301.tif 000103
【０４８５】
氷冷した実施例Ｂ６７の化合物4mgの塩化メチレン(0.6ml)溶液に、トリフルオロ酢酸0.3mlを加え、その温度で1時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物を4mgを得た。
【０４８６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.60-3.68(2H, m),4.66(2H, s),7.19(2H, d), 7.29(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.10(1H, d), 8.49(1H, d).
アミンのプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０４８７】
実施例Ｂ７０
3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-1-プロパンアミン
【０４８８】
【化１１５】
2005168301.tif 000104
【０４８９】
実施例Ｂ６８の化合物を実施例Ｂ６９と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４９０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.20-1.30(2H, m), 1.78-1.88(2H, m), 2.45-2.52(2H, m), 2.73-2.81(2H, m), 4.55(2H, s), 6.94(2H, d), 7.08(2H, d), 7.50(1H, dd), 7.51(1H, d), 7.61(1H, dd), 7.76(1H, d), 8.10(1H, d), 8.38(1H, d).
【０４９１】
実施例Ｂ７１
N-メチル-N-(2-プロピニル)アセトアミド
【０４９２】
【化１１６】
2005168301.tif 000105
【０４９３】
N-メチル-N-(2-プロピニル)アミンを実施例Ｂ５９と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４９４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.11(2.1H, s), 2.17(0.9H, s),2.21(0.7H, t), 2.31(0.3H, t), 3.00(0.9H, s), 3.08(2.1H, s), 4.04(0.6H, d), 4.23(1.4H, d).
なお、この化合物はアミド幾何異性体の7:3の混合物である。
【０４９５】
実施例Ｂ７２
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピニル} N-メチルアセトアミド
【０４９６】
【化１１７】
2005168301.tif 000106
【０４９７】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ７１の化合物を実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０４９８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.10(1.8H, s), 2.11(1.2H, s), 3.01(1.2H, s), 3.10(1.8H, s), 4.21(1.2H, s), 4.41(0.8H, s), 4.67(2H, s), 7.18-7.23(2H, m), 7.29-7.32(2H, m), 7.53(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.09(1H, d), 8.49(1H, d).
なお、この化合物はアミド幾何異性体の3:2の混合物である。
【０４９９】
実施例Ｂ７３
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロピル}- N1-メチルアセトアミド
【０５００】
【化１１８】
2005168301.tif 000107
【０５０１】
実施例Ｂ７２の化合物を実施例Ｂ４３と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５０２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.70-1.90(2H, m), 1.89(1.5H, s), 2.03(1.5H, s), 2.50-2.59(2H, m), 2.88(1.5H, s), 2.91(1.5H, s), 3.20-3.25(1H, m), 3.36-3.40(1H, m), 4.66(2H, s), 7.03-7.10(2H, m), 7.18-7.30(2H, m), 7.53(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.66(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.17(1H, d), 8.50(1H, d).
なお、この化合物はアミド幾何異性体の1:1の混合物である。
【０５０３】
実施例Ｂ７４
N-メチル- N-(2-プロピニル)メタンスルホンアミド
【０５０４】
【化１１９】
2005168301.tif 000108
【０５０５】
氷冷したN-メチル- N-(2-プロピニル)アミン2603mgの塩化メチレン(25ml)溶液に、トリエチルアミン6.55mlを加えた後、メタンスルホニルクロリド3.50mlを滴下後、その温度で1時間撹拌し、さらに室温で2時間撹拌した。反応混合物に氷を加え、酢酸エチルで抽出し、1規定塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液そして飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し後、シリカゲル濾過した。濾液を減圧濃縮し、表題化合物4522mgを得た。得られた化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０５０６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.41(1H, t), 2.93(3H, s), 2.96(3H, s), 4.09(2H, d).
【０５０７】
実施例Ｂ７５
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピニル}- N-メチルメタンスルホンアミド
【０５０８】
【化１２０】
2005168301.tif 000109
【０５０９】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ７４の化合物を実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５１０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.95(3H, s), 2.97(3H, s), 4.26(2H, s), 4.68(2H, s), 7.24(2H, d), 7.31(2H, d), 7.55(1H, dd), 7.59(1H, d), 7.66(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.10(1H, d), 8.49(1H, d).
【０５１１】
実施例Ｂ７６
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロピル}- N-メチルメタンスルホンアミド
【０５１２】
【化１２１】
2005168301.tif 000110
【０５１３】
実施例Ｂ７５の化合物を実施例Ｂ４３と同様に反応させ、残査はLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液=1：99〜100：0/20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM, 20mmΦx 50mm(long)]により分離精製し、表題化合物を得た。
【０５１４】
MS m/z(ESI:MH+):369.2
【０５１５】
実施例Ｂ７７
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-4-ペンチン-2-オール
【０５１６】
【化１２２】
2005168301.tif 000111
【０５１７】
実施例Ｂ４１の化合物と4-ペンチン-2-オールを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５１８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.27(3H, t), 2.38-2.62(2H, m), 3.95-4.03(1H, m), 4.65(2H, s), 7.19(2H, d), 7.29(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.08(1H, d), 8.48(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０５１９】
実施例Ｂ７８
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-ペンタノール
【０５２０】
【化１２３】
2005168301.tif 000112
【０５２１】
実施例Ｂ７７の化合物を実施例Ｂ４３と同様に反応させ、残査はLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液=1：99〜100：0/20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM, 20mmΦx 50mm(long)]により分離精製し、表題化合物を得た。
【０５２２】
MS m/z(ESI:MH+):306.2
【０５２３】
実施例Ｂ７９
3-ブチルフェノール
【０５２４】
【化１２４】
2005168301.tif 000113
【０５２５】
1-ブチル-3-メトキシベンゼンを実施例Ｂ４０と同様に処理し表題化合物を得た。
【０５２６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.94(3H, t), 1.30-1.55(2H, m), 1.55-1.62(2H, m), 2.56(2H, t), 4.76(1H, brs), 6.63(1H, dd), 6.66(1H, d), 6.75(1H, d), 7.12(1H, dd).
【０５２７】
実施例Ｂ８０
1-ブチル-3-(メトキシメトキシ)ベンゼン
【０５２８】
【化１２５】
2005168301.tif 000114
【０５２９】
氷冷した実施例Ｂ７９の化合物318mgのジメチルホルムアミド(5ml)溶液に、60%鉱油分散の水素化ナトリウム102mgを加え、室温で30分間撹拌した。再度氷冷し、クロロメチルメチルエーテル0.18mlを加え、室温で12時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、シリカゲル濾過した。濾液を減圧濃縮し、表題化合物341mgを得た。得られた化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０５３０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.94(3H, t), 1.30-1.42(2H, m), 1.55-2.04(2H, m), 2.58(2H, t), 3.49(3H, s), 5.17(2H, s), 6.80-6.87(3H, m), 7.18(1H, dd).
【０５３１】
実施例Ｂ８１
4-ブチル-2-(メトキシメトキシ)ベンズアルデヒド
【０５３２】
【化１２６】
2005168301.tif 000115
【０５３３】
-20℃に冷却した実施例Ｂ８０の化合物2396mgの石油エーテル溶液に、t-ブチルリチウムのペンタン溶液(1.51M)10.6mlを滴下し、-10℃から0℃の温度範囲で1.5時間撹拌した。その反応溶液を-70℃に冷却し、無水エーテル17ml、ジメチルホルムアミド1.91mlを加え、その温度で3時間撹拌し、室温でさらに1時間撹拌した。反応混合物を氷冷し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物1821mgを得た。
【０５３４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.94(3H, t), 1.32-1.42(2H, m), 1.57-1.65(2H, m), 2.64(2H, t), 3.54(3H, s), 5.29(2H, s), 6.91(1H, d), 7.01(1H, s),7.76(1H, d),10.44(1H, s).
【０５３５】
実施例Ｂ８２
[4-ブチル-2-(メトキシメトキシ)フェニル](1-イソキノリル)メタノール
【０５３６】
【化１２７】
2005168301.tif 000116
【０５３７】
Org. Synth.,IV, 115(1988)の文献に基づいて合成した1-シアノ-ベンゾイル-1,2-ジヒドロイソキノリン815mg、実施例Ｂ８１の化合物869mgそしてトリエチルベンジルアンモニウムクロリド7mgの塩化メチレン(1.6ml)溶液に、50%水酸化ナトリウム水溶液1.4mlを加え、10分間水浴中で超音波を照射した。反応混合物に塩化メチレン8.3mlとエタノール4.4mlを加え、さらに85分間水浴中で超音波を照射した。反応混合物に水を加え、塩化メチレンで抽出した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物1144mgを得た。
【０５３８】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):0.86(3H, t), 1.22-1.31(2H, m), 1.44-1.52(2H, m), 2.44-2.51(2H, m), 3.16(3H, s), 5.10(1H, d), 5.12(1H, d), 6.72(1H, s), 6.75(1H, d), 6.84(1H, s), 7.21(1H, d), 7.61(1H, dd), 7.72(1H, dd), 7.74(1H, d), 7.95(1H, d), 8.31(1H, d), 8.42(1H, d).水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０５３９】
実施例Ｂ８３
[4-ブチル-2-(メトキシメトキシ)フェニル](1-イソキノリル)メチル アセテート
【０５４０】
【化１２８】
2005168301.tif 000117
【０５４１】
実施例Ｂ８２の化合物を実施例Ｂ３８と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５４２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.28-1.40(2H, m), 1.50-1.60(2H, m), 2.22(3H, s), 2.54(2H, t), 3.41(3H, s), 5.22(1H, d), 5.26(1H, d), 6.77(1H, d), 6.94(1H, s), 7.29(1H, d), 7.55(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.70(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.05(1H, s), 8.35(1H, d), 8.55(1H, d).
【０５４３】
実施例Ｂ８４
1-[4-ブチル-2-(メトキシメトキシ)ベンジル]イソキノリン
【０５４４】
【化１２９】
2005168301.tif 000118
【０５４５】
実施例Ｂ８３の化合物を実施例Ｂ３９と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５４６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.28-1.37(2H, m), 1.50-1.58(2H, m), 2.53(2H, t), 3.46(3H, s), 4.65(2H, s), 5.24(2H, s), 6.66(1H, dd), 6.89(1H, d), 6.92(1H, d), 7.51(1H, dd), 7.53(1H, d), 7.62(1H, dd), 7.79(1H, d), 8.23(1H, d), 8.47(1H, d).
【０５４７】
実施例Ｂ８５
5-ブチル-2-(1-イソキノリルメチル)フェノール
【０５４８】
【化１３０】
2005168301.tif 000119
【０５４９】
実施例Ｂ８４の化合物88mgのメタノール(1.5ml)溶液に、5規定塩酸1.0mlを加え、室温で14時間撹拌した。5規定水酸化ナトリウム水溶液にて中和した後、リン酸緩衝液でpHを6.8に調整し酢酸エチルで抽出した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、表題化合物44mgを得た。
【０５５０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.23-1.37(2H, m), 1.48-1.60(2H, m), 2.51(2H, t), 4.56(2H, s), 6.65(1H, dd), 6.82(1H, d), 7.21(1H, d), 7.55(1H, d), 7.68(1H, dd), 7.72(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.35(1H, d), 8.44(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０５５１】
実施例Ｂ８６
N-{3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピニル}-N,N-ジメチルアミン
【０５５２】
【化１３１】
2005168301.tif 000120
【０５５３】
実施例Ｂ４１の化合物と1-ジメチルアミノ-2-プロピンを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５５４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.04(3H, s), 2.34(3H, s), 3.47(2H,s), 4.66(2H, s), 7.20(2H, d), 7.32(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.10(1H, d), 8.50(1H, d).
【０５５５】
実施例Ｂ８７
1-{4-[3-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-プロピニル]ベンジル}イソキノリン
【０５５６】
【化１３２】
2005168301.tif 000121
【０５５７】
実施例Ｂ４１の化合物とテトラヒドロ-2-(2-プロピニルオキシ)-2H-ピランを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５５８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.45-1.85(6H, m),3.50-3.60(1H, m), 3.84-3.90(1H, m), 4.42(1H, d), 4.48(1H, d), 4.66(2H, 8), 4.87(1H, dd), 7.15-7.21(2H, m), 7.33-7.36(2H, m), 7.50-7.70(3H, m), 7.81-7.86(1H, m), 8.07-8.10(1H, m), 8.48-8.51(1H, m).
【０５５９】
実施例Ｂ８８
3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロピン-1-オール
【０５６０】
【化１３３】
2005168301.tif 000122
【０５６１】
実施例Ｂ８７の化合物を実施例Ｂ４７と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５６２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.20-1.30(1H, m), 4.46(2H, s), 4.67(2H, s), 7.23(2H, d), 7.31(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.09(1H, d), 8.49(1H, d).
【０５６３】
実施例Ｂ８９
N,N-ジメチル-4-ペンチンアミド
【０５６４】
【化１３４】
2005168301.tif 000123
【０５６５】
4-ペンチノイック酸552mgの塩化メチレン(150ml)溶液に、ジメチルアミン(2Mテトラヒドロフラン溶液)8.53ml、トリエチルアミン2.59mlそして1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド3221mgを加え、室温で24時間撹拌した。反応混合物を1規定塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水そして飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、表題化合物129mg を得た。得られた化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０５６６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.96-1.99(1H, m), 2.50-2.60(4H, m), 2.96(3H, s), 3.02(3H, s).
【０５６７】
実施例Ｂ９０
N,N-ジメチル-5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-4-ペンチンアミド
【０５６８】
【化１３５】
2005168301.tif 000124
【０５６９】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ８９の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５７０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.59-2.64(2H, m), 2.71-2.75(2H, m), 2.96(3H, s), 3.03(3H, s), 4.66(2H, s), 7.18(2H, d), 7.28(2H, d), 7.43-7.70(3H, m), 7.90(1H, d), 8.09(1H, d), 8.50(1H, d).
【０５７１】
実施例Ｂ９１
1-メチル-2-プロピニルテトラヒドロ-2H-2-ピラニルエーテル
【０５７２】
【化１３６】
2005168301.tif 000125
【０５７３】
3-ブチン-2-オール3051mgのジクロロメタン(150ml)溶液に、3,4-ジヒドロ-2H-ピラン7.15mlとピリジニウムp-トルエンスルホン酸2187mgを加え、室温で29時間撹拌した。
【０５７４】
反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水そして飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物を4698mgを得た。
【０５７５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 1.45(1.05H, d),1.48(1.95H, d), 1.50-1.90(6H, m), 2.37(0.65H, d), 2.43(0.35H, d), 3.50-3.60(1.3H, m), 3.80-3.86(0.7H, m),4.4-3-4.50(0.35H, m), 4.52-4.60(0.65H, m), 4.77(0.35H, t), 4.94(0.65H, t).
【０５７６】
実施例Ｂ９２
1-{4-[3-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ブチニル]ベンジル}イソキノリン
【０５７７】
【化１３７】
2005168301.tif 000126
【０５７８】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ９１の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５７９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.40-1.80(6H, m), 1.49(1.05H, d), 1.52(1.95H, d), 3.49-3.60(1H, m), 3.80-3.88(0.65H, m), 3.99-4.06(0.35H, m), 4.65(2H, s), 4.74(1H, q), 4.83(0.35H, t), 4.97(0.65H, t), 7.18-7.22(2H, m), 7.32(2H, d), 7.54(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.08(1H, d), 8.49(1H, d).
【０５８０】
実施例Ｂ９３
4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-3-ブチン-2-オール
【０５８１】
【化１３８】
2005168301.tif 000127
【０５８２】
実施例Ｂ９２の化合物を実施例Ｂ４７と同様の方法で処理し、表題化合物を得た。
【０５８３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.53(3H, d), 2.15(1H, brs), 4.68(2H, s), 4.72(1H, q), 7.21(2H, d), 7.31(2H, d), 7.54(1H, dd), 7.59(1H, d), 7.66(1H, dd), 7.84(1H, d), 8.10(1H, d), 8.51(1H, d).
【０５８４】
実施例Ｂ９４
4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-ブタノール
【０５８５】
【化１３９】
2005168301.tif 000128
【０５８６】
実施例Ｂ９３の化合物を実施例Ｂ４３と同様に反応させ、残査はLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液=1：99〜100：0/20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM, 20mmΦx 50mm(long)]により分離精製し、表題化合物を得た。MS m/z(ESI:MH+):292.2
【０５８７】
実施例Ｂ９５
2-メチル-4-ペンチン-2-オール
【０５８８】
【化１４０】
2005168301.tif 000129
【０５８９】
0℃に冷却したイソブチレンオキシド1889mgのテトラヒドロフラン(13ml)とジメチルスルホキシド(20ml)の混合溶液に、リチウムアセチリド-エチレンジアミン錯体を少しずつ加え、0℃にて5時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、シリカゲルを用いて濾過した。濾液を減圧濃縮し、表題化合物3316mgを得た。このものはそれ以上精製することなく次反応に用いた。
【０５９０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.33(6H, s), 2.09(1H, t), 2.38(2H, t).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０５９１】
実施例Ｂ９６
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-メチル-4-ペンチン-2-オール
【０５９２】
【化１４１】
2005168301.tif 000130
【０５９３】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ９５の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０５９４】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):1.18(6H, s), 2.28(1H, s), 2.42(2H, s), 4.62(2H, s), 7.10-7.30(4H, m), 7.62(1H, dd), 7.71(1H, d), 7.72(1H, dd), 7.94(1H,
d), 8.27(1H, d), 8.42(1H, d).
【０５９５】
実施例Ｂ９７
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-メチル-2-ペンタノール
【０５９６】
【化１４２】
2005168301.tif 000131
【０５９７】
実施例Ｂ９６の化合物を実施例Ｂ４３と同様に反応させ、残査はLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液=1：99〜100：0/20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM, 20mmΦx 50mm(long)]により分離精製し、表題化合物を得た。
【０５９８】
MS m/z(ESI:MH+):320.2
【０５９９】
実施例Ｂ９８
4-ベンジルオキシ-2-(メトキシメトキシ)ベンズアルデヒド
【０６００】
【化１４３】
2005168301.tif 000132
【０６０１】
4-ベンジルオキシ-2-ヒドロキシベンズアルデヒド2071mgのテトラヒドロフラン(30ml)溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン1.98mlとクロロメチルメチルエーテル0.76mlを加え、加熱還流下19時間撹拌した。この反応溶液にN,N-ジイソプロピルエチルアミン2.7mlとクロロメチルメチルエーテル1.04mlを加え、加熱還流下さらに１0時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、シリカゲル及びアルミナを用いて濾過した。濾液を減圧濃縮し、表題化合物2470mg を得た。この化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０６０２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.52(3H, s), 5.12(2H, s), 5.27(2H, s), 6.68(1H, dd), 6.80(1H, d), 7.33-7.45(5H, m), 7.82(1H, d), 10.33(1H, s).
【０６０３】
実施例Ｂ９９
[4-(ベンジルオキシ)-2-(メトキシメトキシ)フェニル](1-イソキノリル)メタノール
【０６０４】
【化１４４】
2005168301.tif 000133
【０６０５】
実施例Ｂ９８の化合物を実施例Ｂ８２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６０６】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):3.16(3H, s), 5.01(2H, s), 5.11(1H, d), 5.14(1H, d), 6.59(1H, dd), 6.66-6.70(2H, m), 7.18(1H, d), 7.31(1H, d), 7.34-7.42(4H, m), 7.61(1H, dd), 7.71(1H, d), 7.75(1H, d), 7.95(1H, d), 8.28(1H, d), 8.43(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０６０７】
実施例Ｂ１００
[4-(ベンジルオキシ)-2-(メトキシメトキシ)フェニル](1-イソキノリル)メチル アセテート
【０６０８】
【化１４５】
2005168301.tif 000134
【０６０９】
実施例Ｂ９９の化合物を実施例Ｂ３８と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６１０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.21(3H, s), 3.42(3H, s), 4.98(1H, d), 5.00(1H, d),5.21-5.27(2H, m), 6.54(1H, dd), 6.81(1H, d), 7.25(1H, d), 7.30-7.41(5H, m), 7.53(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.80(1H, d), 8.00(1H, s), 8.29(1H, d), 8.55(1H, d).
【０６１１】
実施例Ｂ１０１
4-(1-イソキノリルメチル)-3-(メトキシメトキシ)フェノール
【０６１２】
【化１４６】
2005168301.tif 000135
【０６１３】
実施例Ｂ１００の化合物を実施例Ｂ３９と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６１４】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):3.36(3H, s), 4.44(2H, s), 5.17(2H, s), 6.22(1H, d), 6.52(1H, s), 6.67(1H, d), 7.57-7.76(3H, m), 7.92(1H, d), 8.22(1H, d), 8.37(1H, d), 9.24(1H, brs).
【０６１５】
実施例Ｂ１０２
4-(1-イソキノリルメチル)-3-(メトキシメトキシ)フェニルトリフルオロメタンスルホネート
【０６１６】
【化１４７】
2005168301.tif 000136
【０６１７】
実施例Ｂ１０１の化合物を実施例Ｂ４１と同様に処理して表題化合物を得た。
【０６１８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.43(3H, s), 4.65(2H, s), 5.24(2H, s), 6.77(1H, dd), 7.04(1H, d), 7.07(1H, d), 7.54-7.61(2H, m), 7.67(1H, dd), 7.84(1H, d), 8.16(1H, d), 8.47(1H, d).
【０６１９】
実施例Ｂ１０３
1-{2-(メトキシメトキシ)-[4-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ブチニル]ベンジル}イソキノリン
【０６２０】
【化１４８】
2005168301.tif 000137
【０６２１】
実施例Ｂ１０２の化合物と2-(3-ブチニルオキシ)テトラヒドロ-2H-ピランを用い、実施例Ｂ４２と同様に処理して表題化合物を得た。
【０６２２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.51-1.90(6H, m), 2.68(2H, t), 3.50(3H, s), 3.49-3.55(1H, m), 3.58-3.65(1H, m), 3.84-3.94(2H, m), 4.63-4.68(1H, m), 4.65(2H, s), 5.23(2H, s), 6.76(1H, dd), 7.04(1H, d), 7.07(1H, d), 7.49-7.69(3H, m), 7.81(1H, d), 8.14(1H, d), 8.47(1H, d).
【０６２３】
実施例Ｂ１０４
5-(4-ヒドロキシ-1-ブチニル)-2-(1-イソキノリルメチル)フェノール
【０６２４】
【化１４９】
2005168301.tif 000138
【０６２５】
実施例Ｂ１０３の化合物を実施例Ｂ８５と同様に処理して表題化合物を得た。
【０６２６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.80(1H, brs), 2.66(2H, t), 3.73-3.82(2H, m), 4.58(2H, s), 6.87(1H, d), 7.04(1H, s), 7.23(1H, d), 7.60(1H, d), 7.69-7.78(2H, m), 7.86(1H, d), 8.37(1H, d), 8.42(1H, d).フェノール性水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０６２７】
実施例Ｂ１０５
1-(t-ブチル)-1,1-ジメチルシリル{4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-メチル-3-ブチニル}エーテル
【０６２８】
【化１５０】
2005168301.tif 000139
【０６２９】
氷冷した四臭化炭素11.19gの塩化メチレン(60ml)溶液に、トリフェニルフォスフィン18.37gを加え、その温度で1時間撹拌した。この溶液にTetrahedron Lett.,4347 (1979)の文献に基づいて合成した3-{[1-(t-ブチル)-1,1-ジメチルシリル]オキシ}-2-メチルプロパナールの塩化メチレン溶液(14ml)を滴下し、さらに1時間撹拌した。反応混合物を塩化メチレンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化アンモニウム水溶液そして飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。このものにエーテルを加え不溶物を濾別し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、t-ブチル[(4,4-ジブロモ-2-メチル-3-ブテニル)オキシ]ジメチルシラン2385mgを得た。
【０６３０】
次いで、-70℃に冷却したt-ブチル[(4,4-ジブロモ-2-メチル-3-ブテニル)オキシ]ジメチルシラン1326mgのテトラヒドロフラン(10ml)溶液にn-ブチルリチウム2.47Mヘキサン溶液3.15mlを滴下し、その温度で1時間撹拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、室温に昇温した。反応混合物に水を加え、エーテルで抽出した。エーテル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、シリカゲル濾過し、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣と実施例Ｂ４１の化合物を実施例Ｂ４２と同様に処理して、表題化合物を得た。
【０６３１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.07(6H, s), 0.90(9H, s), 1.18(3H, d),2.70-2.80(1H, m), 3.47(1H, dd), 3.70(1H, dd), 4.65(2H, s), 7.16(2H, d), 7.27(2H, d), 7.51(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.07(1H, d), 8.49(1H, d).
【０６３２】
実施例Ｂ１０６
4-[4-(1--イソキノリルメチル)フェニル]-2-メチル-3-ブチン-1-オール
【０６３３】
【化１５１】
2005168301.tif 000140
【０６３４】
実施例Ｂ１０５の化合物を実施例Ｂ４７と同様に処理して表題化合物を得た。
【０６３５】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):1.11(3H, d), 2.60-2.70(1H, m), 3.28(1H, d), 3.44(1H, d), 4.58(2H, s), 4.85-4.90(1H, m), 7.23(4H, s), 7.61(1H, dd), 7.70(1H, d), 7.71(1H, dd), 7.93(1H, d), 8.25(1H, d), 8.42(1H, d).
【０６３６】
実施例Ｂ１０７
1-{[1-(t-ブチル)-1,1-ジメチルシリル]オキシ}-3-ブチン-2-オール
【０６３７】
【化１５２】
2005168301.tif 000141
【０６３８】
窒素雰囲気下、無水テトラヒドロフラン20mlを-78℃に冷却し、エチニルマグネシウムブロミド0.5モルのテトラヒドロフラン溶液90mlを加えた。この溶液にt-ブチルジメチルシロキシアセトアルデヒド6000mgのテトラヒドロフラン溶液(30ml)を滴下した。-78℃で45分間、室温に昇温し1時間40分撹拌した。反応混合物を氷冷し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、エーテルで抽出し、水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、シリカゲルを用いて濾過した。濾液を減圧濃縮し、表題化合物8.55gを得た。この化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０６３９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.08(6H, s), 0.91(9H, s), 2.43 (1H, d), 2.60-2.66(1H, m), 3.65-3.70(1H, m), 3.73-3.81(1H, m), 4.38-4.42(1H, m).
【０６４０】
実施例Ｂ１０８
1-{[1-(t-ブチル)-1,1-ジメチルシリル]オキシ}メチル)-2-プロピニル アセテート
【０６４１】
【化１５３】
2005168301.tif 000142
【０６４２】
実施例Ｂ１０７の化合物を実施例Ｂ３８と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６４３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.08(6H, s), 0.90(9H, s), 2.11(3H, s), 2.44(1H,d), 3.80-3.88(2H, m), 5.41-5.55(1H, m).
【０６４４】
実施例Ｂ１０９
4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-3-ブチン-1,2-ジオール
【０６４５】
【化１５４】
2005168301.tif 000143
【０６４６】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ１０８の化合物を用い、実施例Ｂ４２と同様に処理し、カップリング成績体を得た。さらにその成績体を実施例Ｂ４７と同様に水酸基保護基を脱保護し、表題化合物を得た。
【０６４７】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):3.40-3.45(1H, m), 3.70-3.82(1H, m), 4.30-4.35(1H, m), 4.63(2H, s), 4.90(1H, t), 5.46(1H, d), 7.25-7.30(4H, m), 7.62(1H, dd), 7.71(1H, d), 7.73(1H, dd), 7.94(1H, d), 8.28(1H, d), 8.43(1H, d).
【０６４８】
実施例Ｂ１１０
1-{4-[2-(2,2-ジメチル-1,3-ジオキソラン-4-イル)-1-エチニル]ベンジル}イソキノリン
【０６４９】
【化１５５】
2005168301.tif 000144
【０６５０】
実施例Ｂ１０９の化合物34mgのジメチルホルムアミド(2ml)溶液に、2,2-ジメトキシプロパン0.36ml、10-カンファースルホン酸43mgそしてモレキュラシーブ4Åを加え、75℃で9時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物を14mgを得た。
【０６５１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.40(3H, s), 1.50(3H, s), 3.97(1H, dd), 4.21(1H, dd), 4.66(2H, s), 4.91(1H, dd), 7.19(2H, d), 7.32(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.65-7.78(2H, m), 8.08(1H, d), 8.09(1H, d), 8.49(1H, d).
【０６５２】
実施例Ｂ１１１
t-ブチル{[2-(1-エトキシエトキシ)-3-ブチニル]オキシ}ジメチルシラン
【０６５３】
【化１５６】
2005168301.tif 000145
【０６５４】
1-{[1-(t-ブチル)-1,1-ジメチルシリル]オキシ}-3-ブチン-2-オール1687mgの塩化メチレン(90ml)溶液に、エチルビニルエーテル1.21mlとピリジニウムp-トルエンスルホン酸塩317mgを加え、室温で1時間撹拌した。塩化メチレン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、表題化合物1962mgを得た。この化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０６５５】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):0.00(6H, s), 0.81(9H, s), 1.01-1.07(3H, m), 1.10-1.20(1H, m), 1.18(3H, d), 3.35-3.63(4H, m), 4.18-4.27(1H, m), 4.74(0.5H, q), 4.81(0.5H, q).
【０６５６】
実施例Ｂ１１２
1-{4-[4-{[1-(t-ブチル)-1,1-ジメチルシリル]オキシ}-3-(1-エトキシエトキシ) -1-ブチニル]ベンジル}イソキノリン
【０６５７】
【化１５７】
2005168301.tif 000146
【０６５８】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ１１１の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６５９】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):0.00(6H, s), 0.80(9H, s), 1.01-1.05(3H, m), 1.19(3H, d), 3.39-3.70(4H, m), 4.41(0.5H, t), 4.48(0.5H, t), 4.59(2H, s), 4.79(0.5H, q), 4.87(0.5H, q), 7.20-7.30(4H, m), 7.58(1H, dd), 7.68(1H, d), 7.69(1H, dd), 7.91(1H, d), 8.24(1H, d), 8.38(1H, d).
【０６６０】
実施例Ｂ１１３
1-{[1-(t-ブチル)-1,1-ジメチルシリル]オキシ}4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-3-ブチン-2-オール
【０６６１】
【化１５８】
2005168301.tif 000147
【０６６２】
実施例Ｂ１１２の化合物474mgのメタノール(15ml)溶液に、ピリジニウムp-トルエンスルホン酸塩486mgを加え、室温で24時間撹拌した。反応混合物に酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物265mgを得た。
【０６６３】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):0.01(6H, s), 0.82(9H, s), 3.55-3.62(2H, m), 4.30-4.39(1H, m), 4.61(2H, s), 5.51(1H, d), 7.20-7.27(4H, m), 7.50-7.63(1H, m), 7.67-7.74(2H, m), 7.92(1H, d), 8.27(1H, d), 8.41(1H, d).
【０６６４】
実施例Ｂ１１４
1-(t-ブチル)- 1,1- ジメチルシリル{2-フルオロ-4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル] -3-ブチニル}エーテル
【０６６５】
【化１５９】
2005168301.tif 000148
【０６６６】
窒素雰囲気下、-78℃に冷却した(ジエチルアミノ)サルファートリフルオリド44μlの塩化メチレン(2ml)溶液に、実施例Ｂ１１３の化合物116mgの塩化メチレン溶液(2ml)を滴下し、15分間撹拌後、室温でさらに8時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出した。塩化メチレン層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物42mgを得た。
【０６６７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.10(6H, s), 0.91(9H, s), 3.83-4.00(2H, m), 4.67(2H, s), 5.17(1H, ddd), 7.22(2H, d), 7.34(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.08(1H, d), 8.50(1H, d).
【０６６８】
実施例Ｂ１１５
2-フルオロ-4-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-3-ブチン-1-オール
【０６６９】
【化１６０】
2005168301.tif 000149
【０６７０】
実施例Ｂ１１４の化合物を実施例Ｂ４７と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６７１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.31(1H, brs), 3.77-3.95(2H, m), 4.67(2H, s), 5.35(1H, ddd), 7.22(2H, d), 7.35(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.07(1H, d), 8.50(1H, d).
【０６７２】
実施例Ｂ１１６
1-(t-ブチル)- 1,1-ジメチルシリル{6- [4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-5-ヘキシニル}エーテル
【０６７３】
【化１６１】
2005168301.tif 000150
【０６７４】
実施例Ｂ４１の化合物とt-ブチル(5-ヘキシニルオキシ)ジメチルシランを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６７５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.04(6H, s), 0.88(9H, s), 1.55-1.70(4H, m), 2.39(2H, t), 3.64(2H, t), 4.65(2H, s), 7.17(2H, d), 7.27(2H, d), 7.51(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.08(1H, d), 8.49(1H, d).
【０６７６】
実施例Ｂ１１７
6-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-5-ヘキシン-1-オール
【０６７７】
【化１６２】
2005168301.tif 000151
【０６７８】
実施例Ｂ１１６の化合物実施例Ｂ４７と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６７９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.60-1.80(4H, m), 2.42(2H, t), 3.69(2H, t), 4.65(2H, s), 7.17(2H, d), 7.27(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.08(1H, d), 8.49(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０６８０】
実施例Ｂ１１８
6-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-1-ヘキサノール
【０６８１】
【化１６３】
2005168301.tif 000152
【０６８２】
実施例Ｂ１１７の化合物を実施例Ｂ４３と同様に反応させ、残査はLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液=1：99〜100：0/20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM, 20mmΦx 50mm(long)]により分離精製し、表題化合物を得た。
【０６８３】
MS m/z(ESI:MH+):320.2
実施例Ｂ１１９
2-(4-ペンチニルオキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン
【０６８４】
【化１６４】
2005168301.tif 000153
【０６８５】
4-ペンチン-1-オールを実施例Ｂ９１と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６８６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.50-1.90(8H, m), 1.95(1H, t), 2.30-2.35(2H, m), 3.46-3.54(2H, m), 3.80-3.90(2H, m), 4.60(1H, dd).
【０６８７】
実施例Ｂ１２０
1-{4-[5-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ペンチニル]ベンジル}イソキノリン
【０６８８】
【化１６５】
2005168301.tif 000154
【０６８９】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ１１９の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６９０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.49-1.90(8H, m), 2.49(2H, t), 3.47-3.54(2H, m), 3.82-3.90(2H, m), 4.60(1H, dd), 4.65(2H, s), 7.17(2H, d), 7.27(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.09(1H, d), 8.49(1H, d).
【０６９１】
実施例Ｂ１２１
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-4-ペンチン-1-オール
【０６９２】
【化１６６】
2005168301.tif 000155
【０６９３】
実施例Ｂ１２０の化合物を実施例Ｂ４７と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６９４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.80-1.88(2H, m), 2.51(2H, t), 3.80(2H, t), 4.65(2H, s), 7.18(2H, d), 7.29(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.09(1H, d), 8.49(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０６９５】
実施例Ｂ１２２
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-4-ペンチニルシアニド
【０６９６】
【化１６７】
2005168301.tif 000156
【０６９７】
実施例Ｂ４１の化合物と5-シアノ-1-ペンチンを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０６９８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.85-1.98(2H, m), 2.40-2.60(4H, m), 4.66(2H, s), 7.20(2H, d), 7.28(2H, d), 7.53(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.65(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.09(1H, d), 8.50(1H, d).
【０６９９】
実施例Ｂ１２３
1-[4-(3-メチル-1-ブチニル)ベンジル]イソキノリン
【０７００】
【化１６８】
2005168301.tif 000157
【０７０１】
実施例Ｂ４１の化合物と3-メチル-1-ブチンを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０７０２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.23(6H, d), 2.70-2.78(1H, m), 4.65(2H, s), 7.18(2H, d), 7.28(2H, d), 7.51(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.08(1H, d), 8.50(1H, d).
【０７０３】
実施例Ｂ１２４
1-[4-(5-メチル-1-ヘキシニル)ベンジル]イソキノリン
【０７０４】
【化１６９】
2005168301.tif 000158
【０７０５】
実施例Ｂ４１の化合物と5-メチル-1-ヘキシンを用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０７０６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.91(6H, d), 1.47(2H, dt), 1.68-1.77(1H, m), 2.37(2H, t), 4.65(2H, s), 7.17(2H, d), 7.28(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.09(1H, d), 8.49(1H, d).
【０７０７】
実施例Ｂ１２５
4-ペンチンアミド
【０７０８】
【化１７０】
2005168301.tif 000159
【０７０９】
4-ペンチノイック酸2446mgのクロロホルム(75ml)溶液に、1-エトキシカルボニル-2-エトキシ-1,2-ジヒドロキノリン6775mgと炭酸水素アンモニウム5905mgを加え、室温で17.5時間撹拌した。反応混合物をセライトを用いて濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物を249mgを得た。
【０７１０】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):2.21(2H, t), 2.29-2.33(2H, m), 2.73(1H, t), 6.78-6.88(1H, m), 7.28-7.38(1H, m).
【０７１１】
実施例Ｂ１２６
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-4-ペンチンアミド
【０７１２】
【化１７１】
2005168301.tif 000160
【０７１３】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ１２５の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０７１４】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):2.51(2H, t), 2.85(2H, t), 3.70(2H, brs), 4.59(2H, s), 7.05(2H, d), 7.23(2H, d), 7.61(1H, dd), 7.70(1H, d), 7.72(1H, dd), 7.94(1H, d), 8.30(1H, d), 8.43(1H, d).
【０７１５】
実施例Ｂ１２７
t-ブチル4-ペンチノエート
【０７１６】
【化１７２】
2005168301.tif 000161
【０７１７】
4-ペンチノイックアシッド2550mgのN,N-ジメチルアセトアミド(230ml)溶液に、ベンジルトリエチルアンモニウムクロリド5.92g、炭酸カリウム93.4gそしてt-ブチルブロミド143mlを加え、55℃にで24時間撹拌した。反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、シリカゲルを用いて濾過した。濾液を減圧濃縮し、表題化合物2.10gを得た。この化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【０７１８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.46(9H, s), 1.96-1.97(1H, m), 2.45-2.47(4H, m).
【０７１９】
実施例Ｂ１２８
t-ブチル5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-4-ペンチノエート
【０７２０】
【化１７３】
2005168301.tif 000162
【０７２１】
実施例Ｂ４１の化合物と実施例Ｂ１２７の化合物を用いて、実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０７２２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.45(9H, s), 2.49(2H, t), 2.64(2H, t), 4.64(2H, s), 7.21(2H, d), 7.26(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.57(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.09(1H, d), 8.49(1H, d).
【０７２３】
実施例Ｂ１２９
5-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-4-ペンチノイック酸
【０７２４】
【化１７４】
2005168301.tif 000163
【０７２５】
実施例Ｂ１２８の化合物を実施例Ｂ６９と同様に反応させ、残査はLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液=1：99〜100：0/20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM, 20mmΦx 50mm(long)]により分離精製し、表題化合物を得た。
【０７２６】
MS m/z(ESI:MH+):316.1
【０７２７】
以下の実施例の化合物は次の様に合成した。即ち実施例Ｂ３３に従い、実施例Ｂ４１の化合物と以下の各種反応剤を反応させ表題化合物を得た。各種反応剤とはアクリルアミド、N,N-ジメチルアクリルアミド、アクリル酸t-ブチルエステル、メチルビニルスルホンである。またその様にして得られたカップリング成績体を実施例Ｂ３９に従い還元するか、または実施例Ｂ４０に従いt-ブチルエステルを脱保護するか、またはその両方を行った。精製はシリカゲルカラムクロマトグラフィーもしくはLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液=1：99〜100：0/20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM, 20mmΦx 50mm(long)]により行った。
【０７２８】
実施例Ｂ１３０
(E)-3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロペンアミド
【０７２９】
【化１７５】
2005168301.tif 000164
【０７３０】
MS m/z(ESI:MH+):289.3
【０７３１】
実施例Ｂ１３１
3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロパンアミド
【０７３２】
【化１７６】
2005168301.tif 000165
【０７３３】
MS m/z(ESI:MH+):291.2
【０７３４】
実施例Ｂ１３２
N,N-ジメチル-(E)- 3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロペンアミド
【０７３５】
【化１７７】
2005168301.tif 000166
【０７３６】
MS m/z(ESI:MH+):317.3
【０７３７】
実施例Ｂ１３３
N,N-ジメチル3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロパンアミド
【０７３８】
【化１７８】
2005168301.tif 000167
【０７３９】
MS m/z(ESI:MH+):319.1
【０７４０】
実施例Ｂ１３４
t-ブチル(E)-3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロペノエート
【０７４１】
【化１７９】
2005168301.tif 000168
【０７４２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.51(9H, s), 4.68(2H, s), 6.28(1H, d), 7.27(2H, d), 7.39(2H, d), 7.49-7.60(3H, m), 7.65(1H, dd), 7.82(1H, d), 8.11(1H, d), 8.50(1H, d).
【０７４３】
実施例Ｂ１３５
(E)-3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-2-プロペノイック酸
【０７４４】
【化１８０】
2005168301.tif 000169
【０７４５】
MS m/z(ESI:MH+):290.2
【０７４６】
実施例Ｂ１３６
t-ブチル 3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロパノエート
【０７４７】
【化１８１】
2005168301.tif 000170
【０７４８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.37(9H, s), 2.47(2H, t), 2.83(2H, t), 4.64(2H, s), 7.07(2H, d), 7.19(2H, d), 7.52(1H, dd), 7.56(1H, d), 7.63(1H, dd), 7.81(1H, d), 8.14(1H, d), 8.49(1H, d).
【０７４９】
実施例Ｂ１３７
3-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]プロパノイック酸
【０７５０】
【化１８２】
2005168301.tif 000171
【０７５１】
MS m/z(ESI:MH+):292.1
【０７５２】
実施例Ｂ１３８
(E)-2-[4-(1-イソキノリルメチル)フェニル]-1-エテニルメチルスルホン
【０７５３】
【化１８３】
2005168301.tif 000172
【０７５４】
MS m/z(ESI:MH+):324.1
【０７５５】
実施例Ｂ１３９
1-{4-[2-(メチルスルホニル)エチル]ベンジル}イソキノリン
【０７５６】
【化１８４】
2005168301.tif 000173
【０７５７】
MS m/z(ESI:MH+):326.1
【０７５８】
実施例Ｂ１４０
2-ベンゾイル-6,7-ジメトキシ-1,2-ジヒドロ-1-イソキノリンカルボニトリル
【０７５９】
【化１８５】
2005168301.tif 000174
【０７６０】
Tetrahedron, 37(23), 3977(1981)に基づいて合成した6,7-ジメトキシイソキノリン1.0g（5.3ミリモル）の塩化メチレン（6.0ml）溶液にシアン化カリウム1.0g（16ミリモル）水溶液(2.3ml)と塩化ベンゾイル1.1ml（9.5ミリモル）を加え、加熱還流下２時間撹拌した。室温まで戻した後、セライトを用いて濾過を行い、塩化メチレンと水で洗浄した。得られた濾液を分離し、塩化メチレン層を水、２規定塩酸、水そして２規定水酸化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物573mgを得た。
【０７６１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.92(3H, s), 3.94(3H, s), 5.99(1H, d), 6.51-6.55(2H, m), 6.73(1H, s), 6.85(1H, s), 7.45-7.49(2H, m), 7.53-7.56(1H, m), 7.58-7.61(2H, m)
【０７６２】
実施例Ｂ１４１
1-(4-ブチルベンジル)-6,7-ジメトキシイソキノリン
【０７６３】
【化１８６】
2005168301.tif 000175
【０７６４】
実施例Ｂ１４０の化合物と実施例Ｂ１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０７６５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.51-1.58(2H, m), 2.54(2H, t), 3.88(3H, s), 4.01(3H, s), 4.57(2H, s), 7.05(1H, s), 7.07(2H, d), 7.19(2H, d), 7.32(1H, s), 7.43(1H, d), 8.37(1H, d)
【０７６６】
実施例Ｂ１４２
1-(3-メトキシフェニル)-2-ニトロ-1-エタノール
【０７６７】
【化１８７】
2005168301.tif 000176
【０７６８】
m-アニスアルデヒド5.0g（37ミリモル）とニトロメタン4.0ml（73ミリモル）のメタノール（50ml）溶液に、水酸化ナトリウム水溶液（水酸化ナトリウム1.5g（37ミリモル）を水15mlに溶解した。）を、溶液の温度が３０℃を越えないように滴下した。その後、室温で４時間撹拌した。氷冷後、酢酸水溶液（氷酢酸（37ミリモル）を水250mlに溶解した。）を反応溶液に加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を、水と５％炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物6.09g を得た。
【０７６９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.83(3H, s), 4.52(1H, dd), 4.61(1H, dd), 4.76-4.78(1H, m), 5.44-5.48(1H, m), 6.90(1H, dd), 6.96-6.98(2H, m), 7.25-7.34(1H, m)
【０７７０】
実施例Ｂ１４３
2-アミノ-1-(3-メトキシフェニル)-1-エタノール
【０７７１】
【化１８８】
2005168301.tif 000177
【０７７２】
実施例Ｂ１４２の化合物3.0g（15ミリモル）のテトラヒドロフラン（43ml）とメタノール（43ml）の混合溶液に、パラジウム−炭素（10%）0.64gとギ酸アンモニウム4.8gを加え、室温で１８時間撹拌した。触媒を濾去した後、濾液をエーテルで希釈し析出物を濾去し、得られた濾液を濃縮し、表題化合物を1.82g 得た。この化合物はさらに精製することなく次の反応に用いた。
【０７７３】
実施例Ｂ１４４
2-(4-ブチルフェニル)アセティックアシッド
【０７７４】
【化１８９】
2005168301.tif 000178
【０７７５】
4-n-ブチルベンジルアルコール9.6g（59ミリモル）のエーテル（120ml）溶液に塩化チオニル4.7ml（66ミリモル）を滴下し、室温で２時間撹拌した。減圧下、溶媒を除去し、過剰の塩化チオニルをベンゼンで共沸することにより除去した。残渣のジメチルスルフォキサイド（50ml）溶液に、シアン化ナトリウム86g（1.8モル）とヨウ化n-テトラブチルアンモニウム2.2g（5.9ミリモル）を加え、室温で１６時間撹拌した。水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を、水と飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、n-ブチルフェニルアセトニトリル8.2gを黄色油状物として得た。次に、水58mlに濃硫酸48mlを滴下し、その温度を５０℃まで冷却した。その溶液に、上記で得られたn-ブチルフェニルアセトニトリル8.2gを滴下し、加熱還流下１６時間撹拌した。室温まで冷却後、析出した結晶をろ取し、水で洗浄した。その結晶を0.1規定の水酸化ナトリウム水溶液（200ml）に溶解し、Norit5gを加え、還流下２時間撹拌した。セライトを用いてNoritを濾去し、濾液を室温まで冷却後、1規定塩酸を用いて濾液を酸性にすることにより、結晶が析出した。析出した結晶をろ取し、水で洗浄し、結晶を乾燥後、表題化合物3.5gを得た。
【０７７６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.93(3H, t), 1.30-1.40(2H, m), 1.53-1.62(2H, m), 2.59(2H, t), 3.62(2H, s), 7.15(2H, d), 7.20(2H, d)  但し、カルボキシル基のOHはNMRのチャート上は見えていない。
【０７７７】
実施例Ｂ１４５
N-[2-ヒドロキシ-2-(3-メトキシフェニル)エチル]-2-(4-ブチルフェニル)アセタミド
【０７７８】
【化１９０】
2005168301.tif 000179
【０７７９】
実施例Ｂ１４４の化合物1.0g（5.2ミリモル）のベンゼン（10ml）溶液に、塩化チオニル0.76ml（10ミリモル）を加え、還流下２時間撹拌した。濃縮後、さらにベンゼンと共沸させることにより過剰の塩化チオニルを除去した。得られた残渣と実施例Ｂ１４３の化合物0.87g（5.2ミリモル）のエーテル（5ml）溶液に、水酸化ナトリウム水溶液（水酸化ナトリウム0.21gを水4.2mlに溶解した。）を加え室温で３０分間激しく撹拌した。エーテル層を分離後、減圧濃縮し、表題化合物600mgを得た。
【０７８０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.94(3H, t), 1.31-1.40(2H, m), 1.57-1.63(2H, m), 2.60(2H, m), 3.30-3.37(1H, m), 3.56(2H, s), 3.60-3.66(1H, m), 3.80(3H, s), 3.81(1H, d), 4.79-4.81(1H, m), 6.80-6.89(3H, m), 7.10(2H, d), 7.16(2H, d), 7.20-7.25(1H, m)
【０７８１】
実施例Ｂ１４６
1-(4-ブチルベンジル)-6-メトキシイソキノリン
【０７８２】
【化１９１】
2005168301.tif 000180
【０７８３】
実施例Ｂ１４５の化合物600mg（1.7ミリモル）のアセトニトリル（15ml）溶液に、オキシ塩化リン1.6mlを加え、還流下１時間３０分間撹拌した。氷冷後、５％炭酸水素ナトリウム水溶液を用いてアルカリ性にした後、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物82mg を得た。
【０７８４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.58(2H, m), 2.53(2H, t), 3.92(3H, s), 4.57(2H, s), 7.05-7.07(3H, m), 7.13-7.18(3H, m), 7.45(1H, d), 8.06(1H, d), 8.41(1H, d)
【０７８５】
実施例Ｂ１４７
1-(4-ブチルベンジル)-6-イソキノリノール
【０７８６】
【化１９２】
2005168301.tif 000181
【０７８７】
実施例Ｂ１４６の化合物82mgに４７％臭化水素水を加え、還流下１９時間撹拌した。減圧濃縮した後、水を加え、炭酸ナトリウムで中和することにより結晶を析出させた。得られた結晶をろ取し、水で洗浄後、結晶を乾燥し、表題化合物74mg を得た。
【０７８８】
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.25-1.34(2H, m), 1.49-1.57(2H, m), 2.52(2H, t), 4.63(2H, s), 7.03-7.13(6H, m), 7.49(1H, d), 8.10(1H, d), 8.18(1H, d)
【０７８９】
実施例Ｂ１４８
1-(4-ブチルベンジル)-6-プロポキシイソキノリン
【０７９０】
【化１９３】
2005168301.tif 000182
【０７９１】
実施例Ｂ１４７の化合物20mg（0.069ミリモル）と1-ヨードプロパン0.4ml（4.1ミリモル）のトルエン（1.0ml）溶液に炭酸銀40mg（0.14ミリモル）を加え、遮光下５０℃で４時間撹拌した。室温まで冷却後、セライトを用いて濾過し、トルエン−メタノール（9:1）混合溶液で洗浄した。得られた濾液を減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物13mgを得た。
【０７９２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.08(3H, t), 1.30-1.33(2H, m), 1.51-1.57(2H, m), 1.86-1.91(2H, m), 2.54(2H, t), 4.05(2H, t), 4.58(2H, s), 7.05-7.07(3H, m), 7.14-7.18(3H, m), 7.43-7.44(1H, m), 8.05-8.07(1H, m), 8.40-8.41(1H, m)
【０７９３】
実施例Ｂ１４９
1-(4-ブチルベンジル)-6-(2-ピペリジノエトキシ)イソキノリン
【０７９４】
【化１９４】
2005168301.tif 000183
【０７９５】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０７９６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.26-1.36(2H, m), 1.46-1.57(8H, m), 2.50-2.54(6H, m), 2.83-2.86(2H, m), 4.23(2H, t), 4.56(2H, s), 7.04-7.06(3H, m), 7.13-7.17(3H, m), 7.43(1H, d), 8.04(1H, d), 8.40(1H, d)
【０７９７】
実施例Ｂ１５０
N-(-{[1-(4-ブチルベンジル)-6-イソキノリル]オキシ}エチル)-N,N-ジメチルアミン
【０７９８】
【化１９５】
2005168301.tif 000184
【０７９９】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.26-1.36(2H, m), 1.49-1.57(2H, m), 2.37(6H, s), 2.52(2H, t), 2.80(2H, t), 4.19(2H, t), 4.57(2H, s), 7.04-7.06(3H, m), 7.15-7.19(3H, m), 7.43(1H, d), 8.05(1H, d), 8.40(1H, d)
【０８００】
実施例Ｂ１５１
2-ベンゾイル-7-メトキシ-1,2-ジヒドロ-1-イソキノリンカルボニトリル
【０８０１】
【化１９６】
2005168301.tif 000185
【０８０２】
Tetrahedron, 27, 1253 (1971)に基づいて合成した7-メトキシイソキノリンを実施例Ｂ１４０と同様にして表題化合物を得た。
【０８０３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.87(3H, s), 6.03(1H, brd), 6.56-6.54(2H, m), 6.90(1H, s), 6.95(1H, dd), 7.17(1H, d), 7.46-7.50(2H, m), 7.54-7.62(3H, m)
【０８０４】
実施例Ｂ１５２
1-(4-ブチルベンジル)-7-メトキシイソキノリン
【０８０５】
【化１９７】
2005168301.tif 000186
【０８０６】
実施例Ｂ１の化合物と実施例Ｂ１５１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０８０７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.56-1.58(2H, m), 2.55(2H, t), 3.82(3H, s), 4.59(2H, s), 7.07(2H, d), 7.20(2H, d), 7.26-7.29(1H, m), 7.35(1H, d), 7.49(1H, d), 7.70(1H, d), 8.38-8.40(1H, m)
【０８０８】
実施例Ｂ１５３
1-(4-ブロモベンジル)-7-メトキシイソキノリン
【０８０９】
【化１９８】
2005168301.tif 000187
【０８１０】
実施例Ｂ３１の化合物と実施例Ｂ１５１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０８１１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.84(3H, s), 4.57(2H, s), 7.14-7.16(2H, m), 7.26(1H, s), 7.29-7.32(1H, m), 7.37-7.39(2H, m), 7.51(1H, d), 7.73(1H, d), 8.39(1H, d)
【０８１２】
実施例Ｂ１５４
1-(4-ブチルベンジル)-7-イソキノリノール
【０８１３】
【化１９９】
2005168301.tif 000188
【０８１４】
実施例Ｂ１５２の化合物を実施例Ｂ１４７と同様にして表題化合物を得た。
【０８１５】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm):0.83(3H, t), 1.21-1.26(2H, m), 1.44-1.48(2H, m), 4.68(2H, s), 7.11(2H, d), 7.18(2H, d), 7.59-7.62(2H, m), 8.10-8.17(2H, m), 8.38(1H, d), 10.9(1H, brs)  (但し、ブチル基のメチレンプロトン２個分がDMSOのシグナルに重なっていて見えない。)
【０８１６】
実施例Ｂ１５５
1-(4-ブチルベンジル)-7-イソキノリル トリフルオロメタンスルフォネート
【０８１７】
【化２００】
2005168301.tif 000189
【０８１８】
実施例Ｂ１５４の化合物1.0g（2.7ミリモル）のジメチルホルムアミド（30ml）溶液にJ. Org. Chem.,64, 7638(1999)に基づいて合成した4-ニトロフェノールトリフラート0.72g（2.7ミリモル）と炭酸カリウム1.1g（8.1ミリモル）を加え、室温で２時間撹拌した。水を加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を１規定水酸化ナトリウムと飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物1.0gを得た。
【０８１９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.27-1.37(2H, m), 1.51-1.59(2H, m), 2.54(2H, t), 5.10(2H, s), 6.38(1H, s), 6.95(2H, d), 7.04(2H, d), 7.44(1H, d), 7.55(1H, d), 7.75(1H, d), 8.45(1H, d)
【０８２０】
実施例Ｂ１５６
1-(4-ブチルベンジル)-7-イソキノリンカルボニトリル
【０８２１】
【化２０１】
2005168301.tif 000190
【０８２２】
窒素雰囲気下、実施例Ｂ１５５の化合物400mg（0.95ミリモル）のジメチルホルムアミド（2ml）溶液に、シアン化亜鉛215mg（1.8ミリモル）、テトラキストリフェニルフォスフィンパラジウム41mg（0.035ミリモル）そして塩化リチウム120mg（2.8ミリモル）を加え１２０℃で２時間撹拌した。室温まで冷却後、飽和炭酸水素ナトリウムを加え、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物71mgを得た。
【０８２３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.26-1.35(2H, m), 1.47-1.55(2H, m), 2.50(2H, t), 4.91(2H, s), 6.97(2H, d), 7.07(2H, d), 7.28-7.31(1H, m), 7.42(1H, d), 7.51(1H, d), 7.74(1H, d), 8.34(1H, d)
【０８２４】
実施例Ｂ１５７
1-(4-ブチルベンジル)-7-[2-(1,1,1-トリメチルシリル)-1-エチニル]イソキノリン
【０８２５】
【化２０２】
2005168301.tif 000191
【０８２６】
実施例Ｂ１５５の化合物100mg（0.24ミリモル）とトリメチルシリルアセチレン65μl（0.47ミリモル）のジメチルホルムアミド（3.0ml）溶液に、酢酸パラジウム11mg（0.047ミリモル）、1,1-ビスジフェニルフォスフィノフェロセン72mg（0.13ミリモル）そして塩化リチウム25mg（0.59ミリモル）を加え窒素置換した。この溶液にトリエチルアミン59μl（0.43ミリモル）とヨウ化銅2mg（0.018ミリモル）を加え、８０℃で２１時間撹拌した。室温まで冷却後、水と酢酸エチルを加え分配した。酢酸エチル層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物7.0mg を得た。
【０８２７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.28-0.32(9H, m), 0.92(3H, t), 1.32-1.38(2H, m), 1.54-1.57(2H, m), 2.57(2H, t), 4.63(2H, s), 7.10(2H, d), 7.20(2H, d), 7.52(1H, d), 7.67-7.69(1H, m), 7.75(1H, d), 8.34(1H, d), 8.51(1H, d)
【０８２８】
実施例Ｂ１５８
1-(4-ブチルベンジル)-7-(1-エチニル)イソキノリン
【０８２９】
【化２０３】
2005168301.tif 000192
【０８３０】
実施例Ｂ１５７の化合物6mg（0.016ミリモル）のメタノール(1.0ml)溶液に、炭酸カリウム13mg（0.094ミリモル）を加え室温で１時間撹拌した。減圧濃縮した後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物3.0mg を得た。
【０８３１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.91(3H, t), 1.29-1.38(2H, m), 1.52-1.57(2H, m), 2.55(2H, t), 3.19(1H, s), 4.62(2H, s), 7.09(2H, d), 7.20(2H, d), 7.53(1H, d), 7.67-7.69(1H, m), 7.77(1H, d), 8.36(1H, s), 8.52(1H, d)
【０８３２】
実施例Ｂ１５９
1-(4-ブチルベンジル)-7-エチルイソキノリン
【０８３３】
【化２０４】
2005168301.tif 000193
【０８３４】
実施例Ｂ１５８の化合物2.0mgのテトラヒドロフラン（2.0ml）溶液に、パラジウム−炭素5.0mg（10%）を加え、室温で窒素雰囲気下（1atom）１時間撹拌した。触媒を濾去し、濾液を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物0.21mgを得た。
【０８３５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(6H, t), 1.25-1.32(2H, m), 1.48-1.57(2H, m), 2.53(2H, t), 2.80(2H, q), 4.62(2H, s), 7.06(2H, d), 7.20(2H, d), 7.49-7.52(2H, m), 7.73(1H, d), 7.95(1H, s), 8.43(1H, d)
【０８３６】
実施例Ｂ１６０
1-(4-ブチルベンジル)-7-[4-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ブチニル]イソキノリン
【０８３７】
【化２０５】
2005168301.tif 000194
【０８３８】
実施例Ｂ１５５の化合物100mg（0.24ミリモル）と2-(3-ブチニルオキシ)テトラヒドロ-2H-ピラン73mg（0.47ミリモル）のジメチルホルムアミド（3.0ml）溶液に、酢酸パラジウム11mg（0.047ミリモル）、1,1-ビスジフェニルフォスフィノフェロセン72mg（0.13ミリモル）そして塩化リチウム25mg（0.59ミリモル）を加え系内を窒素置換した。さらに、トリエチルアミン59μl（0.43ミリモル）とヨウ化銅2mg（0.018ミリモル）を加え、８０℃で２４時間撹拌した。室温まで冷却後、水を加え酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物25mgを得た。
【０８３９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.28-1.38(2H, m), 1.52-1.67(6H, m), 1.72-1.79(1H, m), 1.79-1.88(1H, m), 2.54(2H, t), 2.78(2H, t), 3.53-3.56(1H, m), 3.66-3.72(1H,m), 3.91-3.99(2H, m), 4.60(2H, s), 4.71-4.73(1H, m), 7.08(2H, d), 7.19(2H, d), 7.50(1H, d), 7.59-7.62(1H, m), 7.72(1H, d), 8.24(1H, s), 8.48(1H, d)
【０８４０】
実施例Ｂ１６１
4-[1-(4-ブチルベンジル)-7-イソキノリル]-3-ブチン-1-オール
【０８４１】
【化２０６】
2005168301.tif 000195
【０８４２】
実施例Ｂ１６０の化合物を実施例Ｂ２９と同様にして表題化合物を得た。
【０８４３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.39(2H, m), 1.51-1.57(2H, m), 1.83(1H, brs), 2.55(2H, t), 2.75(2H, t), 3.84-3.89(2H, m), 4.60(2H, s), 7.08(2H, d), 7.18(2H, d), 7.50(1H, d), 7.60-7.62(1H, m), 7.73(1H, d), 8.25(1H, s), 8.48(1H, d)
【０８４４】
実施例Ｂ１６２
4-[1-(4-ブチルベンジル)-7-イソキノリル]-1-ブタノール
【０８４５】
【化２０７】
2005168301.tif 000196
【０８４６】
実施例Ｂ１６１の化合物を実施例Ｂ３０と同様にして表題化合物を得た。
【０８４７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.28-1.36(2H, m), 1.50-1.59(4H, m), 1.67-1.77(3H, m), 2.53(2H, t), 2.79(2H, t), 3.63(2H, t), 4.62(2H, s), 7.06(2H, d), 7.18(2H, d), 7.47-7.52(2H, m), 7.73(1H, d), 7.92(1H, s), 8.43(1H, d)
【０８４８】
実施例Ｂ１６３
1-(4-ブチルベンジル)-7-プロポキシイソキノリン
【０８４９】
【化２０８】
2005168301.tif 000197
【０８５０】
実施例Ｂ１５４の化合物を実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８５１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.05(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.56(2H, m), 1.76-1.84(2H, m), 2.53(2H, t), 3.92(2H, t), 4.58(2H, s), 7.06(2H, d), 7.19(2H, d), 7.26-7.29(1H, m), 7.34(1H, d), 7.48(1H, d), 7.70(1H, d), 8.38(1H, d)
【０８５２】
実施例Ｂ１６４
1-(4-ブチルベンジル)-7-(2-ピペリジノエトキシ)イソキノリン
【０８５３】
【化２０９】
2005168301.tif 000198
【０８５４】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８５５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.43-1.58(4H, m), 1.61-1.69(4H, m), 2.51-2.55(6H, m), 2.79(2H, t), 4.11(2H, t), 4.57(2H, s), 7.06(2H, d), 7.18(2H, d), 7.28-7.30(1H, m), 7.36(1H, d), 7.48(1H, d), 7.70(1H, d), 8.38(1H, d)
【０８５６】
実施例Ｂ１６５
N-(2-{[1-(4-ブチルベンジル)-7-イソキノリル]オキシ}エチル)-N,N-ジメチルアミン
【０８５７】
【化２１０】
2005168301.tif 000199
【０８５８】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８５９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.57(2H, m), 2.35(6H, s), 2.53(2H, t), 2.75(2H, t), 4.06(2H, t), 4.58(2H, s), 7.06(2H, d), 7.18(2H, d), 7.30-7.33(1H, m), 7.36(1H, d), 7.48(1H, d), 7.70(1H, d), 8.39(1H, d)
【０８６０】
実施例Ｂ１６６
1-(4-ブチルベンジル)-7-イソキノリル(2-モルフォリノエチル)エーテル
【０８６１】
【化２１１】
2005168301.tif 000200
【０８６２】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８６３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.58(2H, m), 2.51-2.58(6H, m), 2.81(2H, t), 3.75(4H, t), 4.11(2H, t), 4.58(2H, s), 7.06(2H, d), 7.17(2H, d), 7.28-7.31(1H, m), 7.35(1H, d), 7.49(1H, d), 7.71(1H, d), 8.39(1H, d)
【０８６４】
実施例Ｂ１６７
7-(ベンジルオキシ)-1-(4-ブチルベンジル)イソキノリン
【０８６５】
【化２１２】
2005168301.tif 000201
【０８６６】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８６７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.54(2H, m), 2.54(2H, t), 4.54(2H, s), 5.06(2H, s), 7.05(2H, d), 7.14(2H, d), 7.34-7.43(7H, m), 7.49(1H, d), 7.72(1H, d), 8.39(1H, d)
【０８６８】
実施例Ｂ１６８
1-(4-ブチルベンジル)-7-(2-ピリジルメトキシ)イソキノリン
【０８６９】
【化２１３】
2005168301.tif 000202
【０８７０】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８７１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.49-1.57(2H, m), 2.52(2H, t), 4.51(2H, s), 5.25(2H, s), 7.02(2H, d), 7.14(2H, d), 7.24-7.27(1H, m), 7.40(1H, dd), 7.47-7.50(3H, m), 7.68-7.72(1H, d), 7.74(1H, d), 8.39(1H, d), 8.64-8.66(1H, m)
【０８７２】
実施例Ｂ１６９
1-(4-ブチルベンジル)-7-(3-ピリジルメトキシ)イソキノリン
【０８７３】
【化２１４】
2005168301.tif 000203
【０８７４】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８７５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.58(2H, m), 2.54(2H, t), 4.57(2H, s), 5.06(2H, s), 7.07(2H, d), 7.15(2H, d), 7.31-7.36(2H, m), 7.42(1H, d), 7.51(1H, d), 7.74-7.76(2H, m), 8.42(1H, d), 8.61-8.62(1H, m), 8.69-8.70(1H, m)
【０８７６】
実施例Ｂ１７０
1-(4-ブチルベンジル)-7-(4-ピリジルメトキシ)イソキノリン
【０８７７】
【化２１５】
2005168301.tif 000204
【０８７８】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８７９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.56(2H, m), 2.54(2H, t), 4.53(2H, s), 5.09(2H, s), 7.04(2H, d), 7.09(2H, d), 7.33-7.39(4H, m), 7.51(1H, d), 7.76(1H, d), 8.41(1H, d), 8.63-8.64(2H, m)
【０８８０】
実施例Ｂ１７１
1-(4-ブチルベンジル)-7-[(2-メトキシベンジル)オキシ]イソキノリン
【０８８１】
【化２１６】
2005168301.tif 000205
【０８８２】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８８３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.57(2H, m), 2.53(2H, t), 3.82(3H, s), 4.52(2H, s), 5.04(2H, s), 6.88-6.91(1H, m), 6.99-7.02(2H, m), 7.05(2H, d), 7.14(2H, d), 7.32(1H, t), 7.36(1H, dd), 7.43(1H, d), 7.48(1H, d), 7.72(1H, d), 8.39(1H, d)
【０８８４】
実施例Ｂ１７２
1-(4-ブチルベンジル)-7-[(3-メトキシベンジル)オキシ]イソキノリン
【０８８５】
【化２１７】
2005168301.tif 000206
【０８８６】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８８７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.56(2H, m), 2.53(2H, t), 3.90(3H, s), 4.53(2H, s), 5.16(2H, s), 6.93-6.98(2H, m), 7.03(2H, d), 7.15(2H, d), 7.30-7.35(1H, m), 7.37(1H, dd), 7.41-7.43(1H, m), 7.47(1H, d), 7.51(1H, d), 7.71(1H, d), 8.37(1H, d)
【０８８８】
実施例Ｂ１７３
1-(4-ブチルベンジル)-7-[(4-メトキシベンジル)オキシ]イソキノリン
【０８８９】
【化２１８】
2005168301.tif 000207
【０８９０】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８９１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.37(2H, m), 1.51-1.57(2H, m), 2.54(2H, t), 3.83(3H, s), 4.55(2H, s), 4.99(2H, s), 6.93(2H, d), 7.06(2H, d), 7.15(2H, d), 7.32-7.36(3H, m), 7.44(1H, d), 7.48(1H, d), 7.71(1H, d), 8.38(1H, d)
【０８９２】
実施例Ｂ１７４
7-(1,3-ベンゾオキシオール-5-イルメトキシ)-1-(4-ブチルベンジル)イソキノリン
【０８９３】
【化２１９】
2005168301.tif 000208
【０８９４】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８９５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.37(2H, m), 1.51-1.57(2H, m), 2.54(2H, t), 4.55(2H, s), 4.95(2H, s), 5.98(2H, s), 6.82(1H, d), 6.88(1H, dd), 6.92(1H, d), 7.06(2H, d), 7.15(2H, d), 7.33(1H, dd), 7.42(1H, d), 7.48(1H, d), 7.72(1H, d), 8.39(1H, d)
【０８９６】
実施例Ｂ１７５
1-(4-ブチルベンジル)-7-[(2-ニトロベンジル)オキシ]イソキノリン
【０８９７】
【化２２０】
2005168301.tif 000209
【０８９８】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０８９９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.87(3H, t), 1.26-1.34(2H, m), 1.48-1.56(2H, m), 2.51(2H, t), 4.53(2H, s), 5.49(2H, s), 7.03(2H, d), 7.14(2H, d), 7.40(1H, dd), 7.430-7.434(1H, m), 7.45-7.49(1H, m), 7.51(1H, d), 7.64-7.68(1H, m), 7.76(1H, d), 7.85-7.87(1H, m), 8.22-8.24(1H, d), 8.41(1H, d)
【０９００】
実施例Ｂ１７６
1-(4-ブチルベンジル)-7-[(3-ニトロベンジル)オキシ]イソキノリン
【０９０１】
【化２２１】
2005168301.tif 000210
【０９０２】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０９０３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.56(2H, m), 2.54(2H, t), 4.55(2H, s), 5.14(2H, s), 7.05(2H, d), 7.11(2H, d), 7.37-7.40(2H, m), 7.51(1H, d), 7.55-7.59(1H, m), 7.73-7.78(2H, m), 8.19-8.22(1H, m), 8.32-8.33(1H, m), 8.42(1H, d)
【０９０４】
実施例Ｂ１７７
1-(4-ブチルベンジル)-7-(フェネチルオキシ)イソキノリン
【０９０５】
【化２２２】
2005168301.tif 000211
【０９０６】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０９０７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.26-1.36(2H, m), 1.49-1.57(2H, m), 2.52(2H, t), 3.10(2H, t), 4.18(2H, t), 4.56(2H, s), 7.04(2H, d), 7.16(2H, d), 7.26-7.28(4H, m), 7.33-7.35(3H, m), 7.48(1H, d), 7.70(1H, d), 8.38-8.39(1H, m)
【０９０８】
実施例Ｂ１７８
1-(4-ブチルベンジル)-7-(3-フェニルプロポキシ)イソキノリン
【０９０９】
【化２２３】
2005168301.tif 000212
【０９１０】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０９１１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.49-1.57(2H, m), 2.09-2.15(2H, m), 2.52(2H, t), 2.82(2H, t), 3.97(2H, t), 4.55(2H, s), 7.04(2H, d), 7.16(2H, d), 7.20-7.23(3H, m), 7.27-7.33(4H, m), 7.48(1H, d), 7.70(1H, d), 8.38(1H, d)
【０９１２】
実施例Ｂ１７９
1-(4-ブチルベンジル)-7-(2-シクロヘキシルエトキシ)イソキノリン
【０９１３】
【化２２４】
2005168301.tif 000213
【０９１４】
実施例Ｂ１４８と同様にして表題化合物を得た。
【０９１５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 0.94-1.02(2H, m), 1.17-1.36(4H, m), 1.36-1.57(4H, m), 1.65-1.76(7H, m), 2.53(2H, t), 3.98(2H, t), 4.58(2H, s), 7.06(2H, d), 7.19(2H, d), 7.25-7.28(1H, m), 7.33(1H, d), 7.47(1H, d), 7.69(1H, d), 8.37(1H, d)
【０９１６】
実施例Ｂ１８０
6-ベンゾイル-5,6-ジヒドロ[1,3]ジオキソロ[4,5-g]イソキノリン-5-カルボニトリル
【０９１７】
【化２２５】
2005168301.tif 000214
【０９１８】
[1,3]ジオキソロ[4,5-g]イソキノリンを実施例Ｂ１４０と同様にして表題化合物を得た。
【０９１９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):5.94-5.96(1H, m), 6.03(1H, d), 6.04(1H, d), 6.47-6.54(2H, m), 6.70(1H, s), 6.83(1H, s), 7.45-7.49(2H, m), 7.54-7.62(3H, m)
【０９２０】
実施例Ｂ１８１
5-(4-ブチルベンジル)[1,3]ジオキソロ[4,5-g]イソキノリン
【０９２１】
【化２２６】
2005168301.tif 000215
【０９２２】
実施例Ｂ１８０の化合物と実施例Ｂ１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９２３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.28-1.37(2H, m), 1.51-1.57(2H, m), 2.54(2H, t), 4.50(2H, s), 6.05(2H, s), 7.05-7.07(3H, m), 7.16(2H, d), 7.38(7.40(2H, m), 8.35(1H, d)
【０９２４】
実施例Ｂ１８２
2-ベンゾイル-6-ブロモ-1,2-ジヒドロ-1-イソキノリンカルボニトリル
【０９２５】
【化２２７】
2005168301.tif 000216
【０９２６】
J. Am. Chem. Soc., 183(1942)に基づいて合成した6-ブロモイソキノリンを実施例Ｂ１４０と同様にして表題化合物を得た。
【０９２７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):6.01(1H, d), 6.53(1H, brs), 6.70(1H, brd), 7.24(1H, d), 7.33(1H, d), 7.47-7.51(3H, m), 7.56(3H, m)
【０９２８】
実施例Ｂ１８３
6-ブロモ-1-(4-ブチルベンジル)イソキノリン
【０９２９】
【化２２８】
2005168301.tif 000217
【０９３０】
実施例Ｂ１８２の化合物と実施例Ｂ１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９３１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.89(3H, t), 1.27-1.36(2H, m), 1.50-1.58(2H, m), 2.53(2H, t), 4.60(2H, s), 7.06(2H, d), 7.15(2H, d), 7.46(1H, d), 7.59(1H, q), 7.98(1H, d), 8.02(1H, d), 8.51(1H, d)
【０９３２】
実施例Ｂ１８４
2-ベンゾイル-5-ブロモ-1,2-ジヒドロ-1-イソキノリンカルボニトリルと2-ベンゾイル-7-ブロモ-1,2-ジヒドロ-1-イソキノリンカルボニトリルの混合物
【０９３３】
【化２２９】
2005168301.tif 000218
【０９３４】
J. Am. Chem. Soc., 61, 183(1939)に基づいて合成した5-または7-ブロモイソキノリンを実施例Ｂ１４０と同様にして表題化合物を得た。得られた化合物は分離精製することなく次の反応に用いた。
【０９３５】
実施例Ｂ１８５
7-ブロモ-1-(4-ブチルベンジル)イソキノリン
【０９３６】
【化２３０】
2005168301.tif 000219
【０９３７】
実施例Ｂ１８４の化合物と実施例Ｂ１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９３８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.28-1.37(2H, m), 1.51-1.58(2H, m), 2.55(2H, t), 4.58(2H, s), 7.09(2H, d), 7.18(2H, d), 7.51-7.53(1H, m), 7.69-7.70(2H, m), 8.33-8.34(1H, m), 8.52(1H, d)
【０９３９】
実施例Ｂ１８６
5-ベンゾイル-4,5-ジヒドロチエノ[3,2-c]ピリジン-4-カルボニトリル
【０９４０】
【化２３１】
2005168301.tif 000220
【０９４１】
J. Heterocycl. Chem., 30, 183 (1993)に基づいて合成したチエノ[3,2-c]ピリジンを実施例Ｂ１４０と同様にして表題化合物を得た。
【０９４２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):6.05(1H, d), 6.57(1H, brd), 6.66(1H, s), 7.07(1H, d), 7.32(1H, d), 7.46-7.50(2H, m), 7.54-7.62(3H, m)
【０９４３】
実施例Ｂ１８７
4-(4-ブチルベンジル)チエノ[3,2-c]ピリジン
【０９４４】
【化２３２】
2005168301.tif 000221
【０９４５】
実施例Ｂ１８６の化合物と実施例Ｂ１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９４６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.27-1.37(2H, m), 1.51-1.59(2H, m), 2.54(2H, t), 4.47(2H, s), 7.07(2H, d), 7.19(2H, d), 7.42(1H, d), 7.47(1H, dd), 7.68(1H, d), 8.41(1H, d)
【０９４７】
実施例Ｂ１８８
4-(4-メトキシベンジル)チエノ[3,2-c]ピリジン
【０９４８】
【化２３３】
2005168301.tif 000222
【０９４９】
実施例Ｂ１８６の化合物と4-メトキシベンジルクロリドを実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９５０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.75(3H, s), 4.44(2H, s), 6.79-6.82(2H, m), 7.19-7.22(2H, m), 7.43(1H, d), 7.46(1H, dd), 7.68(1H, d), 8.41(1H, d)
【０９５１】
実施例Ｂ１８９
4-(チエノ[3,2-c]ピリジン-4-イルメチル)フェニル トリフルオロメタンスルフォネート
【０９５２】
【化２３４】
2005168301.tif 000223
【０９５３】
０℃に冷却した実施例Ｂ１８８の化合物510mg（2.0ミリモル）の塩化メチレン（10ml）溶液に、三臭化ホウ素の塩化メチレン溶液10ml（1.0M, 10ミリモル）を滴下し、その温度で１時間半撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え弱アルカリ性にした後、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた残渣をピリジンに溶解し、０℃に冷却した後、トリフルオロメタンスルフォニック アンハイドライド0.34ml（2.1ミリモル）を滴下し、その温度で２時間撹拌した。氷水に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、表題化合物312mg を得た。
【０９５４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.52(2H, s), 7.16-7.18(2H, m), 7.36(2H, m), 7.43-7.44(1H, m), 7.49(1H, d), 7.73(1H, d), 8.42(1H, d)
【０９５５】
実施例Ｂ１９０
4-(4-ブロモベンジル)チエノ[3,2-c]ピリジン
【０９５６】
【化２３５】
2005168301.tif 000224
【０９５７】
実施例Ｂ１８６の化合物と実施例Ｂ３１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９５８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.45(2H, s), 7.14-7.16(2H, m), 7.37-7.39(2H, m), 7.41-7.43(1H, m), 7.45(1H, d), 7.71(1H, d), 8.41(1H, d)
【０９５９】
実施例Ｂ１９１
4-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)チエノ[3,2-c]ピリジン
【０９６０】
【化２３６】
2005168301.tif 000225
【０９６１】
実施例Ｂ１８６の化合物と4-ブロモ2-フルオロベンジブロミドを実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９６２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.46(2H, s), 7.11(1H, t), 7.15-7.18(1H, m), 7.22-7.25(1H, m), 7.47(1H, d), 7.49(1H, d), 7.71(1H, d), 8.41(1H, d)
【０９６３】
実施例Ｂ１９２
4-{4-[4-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ブチニル]ベンジル}チエノ[3,2-c]ピリジン
【０９６４】
【化２３７】
2005168301.tif 000226
【０９６５】
実施例Ｂ１８９の化合物と2-(3-ブチニルオキシ)テトラヒドロ-2H-ピランを実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０９６６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.40-1.90(6H, m), 2.69(2H, t), 3.45-3.65(2H, m), 3.78-3.95(2H, m), 4.48(2H, s), 4.66-4.69(1H, m), 7.18(2H, d), 7.27(2H, d), 7.41(1H, d), 7.44(1H, d), 7.70(1H, d), 8.41(1H, d).
【０９６７】
実施例Ｂ１９３
4-[4-(チエノ[3,2-c]ピリジン-4-イルメチル)フェニル]-3-ブチン-1-オール
【０９６８】
【化２３８】
2005168301.tif 000227
【０９６９】
実施例Ｂ１９２の化合物を実施例Ｂ４７と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０９７０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.67(2H, t), 3.79(2H, t), 4.50(2H, s), 7.20(2H, d), 7.32(2H, d), 7.41(1H, d), 7.44(1H, d), 7.71(1H, d), 8.42(1H, d).
水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【０９７１】
実施例Ｂ１９４
6-ベンゾイル-6,7-ジヒドロチエノ[2,3-c]ピリジン-7-カルボニトリル
【０９７２】
【化２３９】
2005168301.tif 000228
【０９７３】
J. Heterocycl. Chem., 30, 183(1993)に基づいて合成したチエノ[2,3-c]ピリジンを実施例Ｂ１４０と同様にして表題化合物を得た。
【０９７４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):6.07(1H, d), 6.56(1H, brd), 6.75(1H, s), 6.97(1H, d), 7.37(1H, d), 7.46-7.51(2H, m), 7.54-7.64(3H, m)
【０９７５】
実施例Ｂ１９５
7-(4-ブチルベンジル)チエノ[2,3-c]ピリジン
【０９７６】
【化２４０】
2005168301.tif 000229
【０９７７】
実施例Ｂ１９４の化合物と実施例Ｂ１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９７８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):0.90(3H, t), 1.28-1.37(2H, m), 1.51-1.59(2H, m), 2.55(2H, t), 4.40(2H, s), 7.09(2H, d), 7.28(2H, d), 7.34(1H, d), 7.57(1H, d), 7.62(1H, d), 8.47(1H, d)
【０９７９】
実施例Ｂ１９６
7-(4-メトキシベンジル)チエノ[2,3-c]ピリジン
【０９８０】
【化２４１】
2005168301.tif 000230
【０９８１】
実施例Ｂ１９４の化合物と4-メトキシベンジルクロリドを実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９８２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.76(3H, s), 4.38(2H, s), 6.81-6.83(2H, m), 7.28-7.30(2H, m), 7.35(1H, d), 7.57(1H, d), 7.62(1H, d), 8.47(1H, d)
【０９８３】
実施例Ｂ１９７
4-(チエノ[2,3-c]ピリジン-7-イルメチル)フェニル トリフルオロメタンスルフォネート
【０９８４】
【化２４２】
2005168301.tif 000231
【０９８５】
実施例Ｂ１９６の化合物を実施例Ｂ１８９と同様にして表題化合物を得た。
【０９８６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.44(2H, s), 7.17-7.19(2H, m), 7.38-7.40(1H, m), 7.44-7.46(2H, m), 7.61(1H, d), 7.65-7.67(1H, m), 8.47-8.49(1H, m)
【０９８７】
実施例Ｂ１９８
7-(4-ブロモベンジル)チエノ[2,3-c]ピリジン
【０９８８】
【化２４３】
2005168301.tif 000232
【０９８９】
実施例Ｂ１９４の化合物と実施例Ｂ３１の化合物を実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９９０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.37(2H, s), 7.23-7.25(2H, m), 7.37(1H, d), 7.39-7.41(2H, m), 7.59(1H, d), 7.63-7.65(1H, m), 8.47(1H, d)
【０９９１】
実施例Ｂ１９９
7-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)チエノ[2,3-c]ピリジン
【０９９２】
【化２４４】
2005168301.tif 000233
【０９９３】
実施例Ｂ１９４の化合物と4-ブロモ2-フルオロベンジブロミドを実施例Ｂ２と同様にして表題化合物を得た。
【０９９４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.40-4.41(2H, m), 7.12-7.20(2H, m), 7.23-7.26(1H, m), 7.37-7.39(1H, m), 7.59-7.62(1H, m), 7.65-7.67(1H, m), 8.45-8.47(1H, m)
【０９９５】
実施例Ｂ２００
7-{4-[4-(テトラヒドロ-2H-2-ピラニルオキシ)-1-ブチニル]ベンジル}チエノ[2,3-c]ピリジン
【０９９６】
【化２４５】
2005168301.tif 000234
【０９９７】
実施例Ｂ１９７の化合物と2-(3-ブチニルオキシ)テトラヒドロ-2H-ピランを実施例Ｂ４２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【０９９８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.50-1.90(6H, m), 2.69(2H, t), 3.49-3.54(1H, m), 3.58-3.65(1H, m), 3.85-3.95(2H, m), 4.41(2H, s), 4.68(1H, t), 7.26-7.31(4H, m), 7.36(1H, d), 7.58(1H, d), 7.63(1H, d), 8.47(1H, d).
【０９９９】
実施例Ｂ２０１
4-[4-(チエノ[2,3-c]ピリジン-7-イルメチル)フェニル]-3-ブチン-1-オール
【１０００】
【化２４６】
2005168301.tif 000235
【１００１】
実施例Ｂ２００の化合物を実施例Ｂ４７と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１００２】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.99(1H, brs), 2.67(2H, t), 3.79(2H, t), 4.42(2H, s), 7.27-7.34(4H, m), 7.36(1H, d), 7.59(1H, d), 7.64(1H, d), 8.47(1H, d).
【１００３】
実施例Ｂ２０２
2-クロロ-3-(メトキシメトキシ)ピリジン
【１００４】
【化２４７】
2005168301.tif 000236
【１００５】
窒素雰囲気下、氷冷した2-クロロ-3-ヒドロキシピリジン2.05g (15.8ミリモル)のテトラヒドロフラン(30ml)溶液に、66%水素化ナトリウム633mg (17.4ミリモル)を加え、その温度で15分間攪拌した。その反応溶液にクロロメチルメチルエーテル1.32ml (17.4ミリモル)を加え、その温度で30分間攪拌後、さらに室温で2時間攪拌した。水を加え、酢酸エチルを用いて抽出し、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物2.44gを得た。
【１００６】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 3.53(3H, s), 5.28(2H, s), 7.19(1H, dd), 7.49(1H, dd), 8.06(1H, dd)
【１００７】
実施例Ｂ２０３
2-クロロ-4-ヨード-3-(メトキシメトキシ)ピリジン
【１００８】
【化２４８】
2005168301.tif 000237
【１００９】
窒素雰囲気下、−78℃に冷却した1.51M t-ブチルリチウム-n-ペンタン溶液8.01ml (12.1ミリモル)のジエチルエーテル(15ml)溶液に、実施例Ｂ２０２の化合物1.40g (8.06ミリモル)のジエチルエーテル8ml溶液を滴下し、その温度で15分間攪拌した。その反応溶液にヨウ素3.07g (12.1ミリモル)を加え、徐々に室温まで昇温させた。チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、ジエチルエーテル層を分配し、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物356mgを得た。
【１０１０】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 3.73(3H, s), 5.22(2H, s), 7.69(1H, d), 7.80(1H, d)
【１０１１】
実施例Ｂ２０４
7-クロロフロ[2,3-c]ピリジン
【１０１２】
【化２４９】
2005168301.tif 000238
【１０１３】
実施例Ｂ２０３の化合物36.6mg (0.143ミリモル)、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム16.5mg (0.0143ミリモル)そしてヨウ化第1銅2.7mg (0.014ミリモル)のジメチルホルムアミド(1.5ml)溶液に、トリメチルシリルアセチレン28.3μl(0.201ミリモル)とトリエチルアミン59.8μl(0.429ミリモル)を加え、50℃で4時間攪拌した。室温まで放冷後水を加え、酢酸エチルを用いて抽出し、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣のメタノール(5ml)溶液に、炭酸カリウム100mg(0.724ミリモル)を加え、室温で1時間攪拌した。水を加え、ジエチルエーテルを用いて抽出し、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物5.5mgを得た。
【１０１４】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 6.89(1H, d), 7.51(1H, d), 7.83(1H, d), 8.21(1H, d)
【１０１５】
実施例Ｂ２０５
4-ブチルベンジルマグネシウムクロリド
【１０１６】
【化２５０】
2005168301.tif 000239
【１０１７】
実施例Ｂ１の化合物1.04g (5.69ミリモル)、マグネシウム761mg (31.3ミリモル)そして触媒量の1,2-ジブロモエタンのジエチルエーテル(11ml)の混合液を加熱還流によりイニシエーションした後、熱源を除き、さらに実施例Ｂ１の化合物4.16g (22.8ミリモル)のジエチルエーテル60ml溶液を緩やかな還流を保つ速度で滴下し、30分間加熱還流した。室温まで放冷し表題化合物を0.4Mジエチルエーテル溶液として得、そのまま次の反応に用いた。
【１０１８】
実施例Ｂ２０６
7-(4-ブチルベンジル)フロ[2,3-c]ピリジン
【１０１９】
【化２５１】
2005168301.tif 000240
【１０２０】
実施例Ｂ２０４の化合物5.0mg (0.033ミリモル)と[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロニッケル(II)4.5mg (0.0065ミリモル)のテトラヒドロフラン(1ml)溶液に、実施例Ｂ２０５の化合物300μl(0.1ミリモル)を加え、50℃で1時間攪拌した。室温まで放冷後、酢酸エチルを加え、飽和塩化アンモニア水溶液と飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をNH-シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物2.9mgを得た。
【１０２１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.89(3H, t), 1.29-1.35(2H, m), 1.50-1.58(2H, m), 2.54(2H, t), 4.40(2H, s), 6.78(1H, d), 7.08(2H, d), 7.30(2H, d), 7.40(1H, d), 7.72(1H, d), 8.34(1H, d)
【１０２２】
実施例Ｂ２０７
7-(4-ブチルベンジル)-1H-ピロロ[2,3-c]ピリジン
【１０２３】
【化２５２】
2005168301.tif 000241
【１０２４】
氷冷下、2-クロロ-3-アミノピリジンから特開平7-165708に記載の方法に基づいて合成した1-クロロピロロピリジン19.4mg (0.127ミリモル)とジクロロ(ジフェニルホスフィノプロパン)ニッケル6.9mg(0.013ミリモル)のテトラヒドロフラン(1ml)溶液に、実施例Ｂ２０５の化合物800μl(0.3ミリモル)を加え、加熱還流下4時間撹拌した。室温まで放冷後、酢酸エチルを加え、飽和塩化アンモニア水溶液と飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物7.1mgを得た。
【１０２５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.91(3H, t), 1.31-1.37(2H, m), 1.55-1.59(2H, m), 2.58(2H, t), 4.44(2H, s), 6.50(1H, d), 7.12(2H, d), 7.18(1H, d), 7.22(2H, d), 7.45(1H, d), 8.21(1H, d)
NHのプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【１０２６】
実施例Ｂ２０８
4-(4-ブチルベンジル)-1-イミダゾ[4,5-c]ピリジン
【１０２７】
【化２５３】
2005168301.tif 000242
【１０２８】
4-アミノ-2-クロロピリジンからJ.Heterocycl.chem.,2,196(1965)の文献記載の方法に基づいて合成した1-クロロイミダゾピリジン88.6mg (0.577ミリモル)とジクロロ(ジフェニルホスフィノプロパン)ニッケル31.3mg (0.0577ミリモル)のテトラヒドロフラン(2ml)溶液に、実施例Ｂ２０５の化合物3.45ml(1.38ミリモル)を加え、加熱還流下2時間撹拌した。室温まで放冷後、酢酸エチルを加え、シリカゲルを用いて濾過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物64.2mgを得た。
【１０２９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.86(3H, t), 1.23-1.32(2H, m), 1.44-1.52(2H, m), 2.47(2H, t), 4.56(2H, s), 7.02(2H, d), 7.19(2H, d), 7.34(1H, d), 8.00(1H, s), 8.25-8.27(1H, m)
NHのプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【１０３０】
実施例Ｂ２０９
4-ブロモ-1-イソキノリノール
【１０３１】
【化２５４】
2005168301.tif 000243
【１０３２】
氷冷した1-ヒドロキシイソキノリン5.01g (34.5ミリモル)の酢酸(50ml)溶液に、臭素1.78ml (34.5ミリモル)を加え、室温で2時間攪拌した。その反応溶液に水、酢酸エチルそしてテトラヒドロフランを加え、濾紙を用いて濾過した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルとヘキサンを用いて再結晶し、表題化合物6.19gを得た。
【１０３３】
1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm): 7.56(1H, s), 7.59-7.63(1H, m), 7.76-7.78(1H, m), 7.84-7.89(1H, m), 8.23-8.26(1H, m), 11.59(1H, br s)
【１０３４】
実施例Ｂ２１０
1,4-ジブロモイソキノリン
【１０３５】
【化２５５】
2005168301.tif 000244
【１０３６】
実施例Ｂ２０９の化合物1.40g (8.06ミリモル)と3臭化リン6mlの混合液を150℃で１時間攪拌した後、さらに１時間加熱還流した。室温まで放冷後、その反応溶液を氷に注ぎ、室温まで昇温させた。酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物845mgを得た。
【１０３７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 7.76-7.80(1H, m), 7.86-7.90(1H, m), 8.19(1H, d), 8.31-8.34(1H, m), 8.48(1H, s)
【１０３８】
実施例Ｂ２１１
4-ブロモ-1-(4-ブチルベンジル)イソキノリン
【１０３９】
【化２５６】
2005168301.tif 000245
【１０４０】
実施例Ｂ２１０の化合物200mg (0.697ミリモル)と[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]ジクロロニッケル(II)75.6mg (0.139ミリモル)のテトラヒドロフラン(2ml)溶液に、実施例Ｂ２０５の化合物2.5ml(1ミリモル)を加え、室温で30分間攪拌した。酢酸エチルを加え、飽和塩化アンモニア水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液そして飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物98mgを得た。
【１０４１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.89(3H, t), 1.29-1.34(2H, m), 1.51-1.60(2H, m), 2.53(2H, t), 4.59(2H, s), 7.06(2H, d), 7.16(2H, d), 7.57-7.61(1H, m), 7.73-7.77(1H, m), 8.15-8.19(2H, m), 8.69(1H, s)
【１０４２】
実施例Ｂ２１２
1-(4-ブチルベンジル)-5,6,7,8-テトラヒドロイソキノリン
【１０４３】
【化２５７】
2005168301.tif 000246
【１０４４】
実施例Ｂ２１１の化合物13.0mg (0.0367ミリモル)を酢酸エチルとメタノールの混合液(1:1, 1ml)に溶解し、10%パラジウム−炭素(50%含水)13mgを加え、室温で常圧水素雰囲気下12時間攪拌した。反応系中を窒素置換した後、触媒をセライトを用いて濾去した。得られた濾液を減圧濃縮し、表題化合物8.8mgを得た。
【１０４５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.90(3H, t), 1.28-1.38(2H, m), 1.52-1.59(2H, m), 1.74-1.82(4H, m), 2.55(2H, t), 2.66(2H, t), 2.81(2H, t), 4.26(2H, s), 7.07-7.15(5H, m), 8.32(1H, d)
【１０４６】
実施例Ｂ２１３
1-[2-(フェニル)ベンジル]イソキノリン
【１０４７】
【化２５８】
2005168301.tif 000247
【１０４８】
n-ブチルベンジルクロリドの代わりに2-フェニルベンジルブロミドを用いて、実施例Ｂ２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１０４９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.62(2H, s), 7.05(1H, d), 7.16(1H, dd), 7.22-7.50(8H, m), 7.52(1H, d), 7.58(1H, dd), 7.65(1H, d), 7.76(1H, d), 8.47(1H, d).
【１０５０】
実施例Ｂ２１４
1-[4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジル] イソキノリン
【１０５１】
【化２５９】
2005168301.tif 000248
【１０５２】
n-ブチルベンジルクロリドの代わりに4-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)ベンジルメタンスルホナートを用いて、実施例Ｂ２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１０５３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.83(2H, s), 6.87(1H, dd), 7.01(1H, ddd), 7.43(1H, dd), 7.54(1H, dd), 7.61(1H, d), 7.67(1H, dd), 7.85(1H, d), 7.96(1H, d), 8.49(1H, d).
【１０５４】
実施例Ｂ２１５
1,3-ベンゾジオキソイル-4-イル(1-イソキノリル)メタノール
【１０５５】
【化２６０】
2005168301.tif 000249
【１０５６】
2,3-メチレンジオキシベンズアルデヒドを実施例Ｂ８２と様に処理し、表題化合物を得た。
【１０５７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):5.97-5.99(1H, m), 6.09(1H, brs), 6.20-6.40(1H, m), 6.54-6.60(2H, m), 6.65-6.70(2H, m), 7.52(1H, dd), 7.63(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.84(1H, d), 8.04(1H, d), 8.53(1H, d).
【１０５８】
実施例Ｂ２１６
1,3-ベンゾジオキソイル-4-イル(1-イソキノリル)メチル アセテート
【１０５９】
【化２６１】
2005168301.tif 000250
【１０６０】
実施例Ｂ２１５の化合物を実施例Ｂ３８と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１０６１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.23(3H, s), 5.98-6.02(2H, m), 6.74-6.79(1H, m), 6.90-6.93(1H, m), 7.15-7.19(1H, m), 7.23-7.28(1H, m), 7.58(1H, dd), 7.60(1H, d), 7.66(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.28(1H, d), 8.57(1H, d).
【１０６２】
実施例Ｂ２１７
1-(1,3-ベンゾジオキソイル-4-イルメチル)イソキノリン
【１０６３】
【化２６２】
2005168301.tif 000251
【１０６４】
実施例Ｂ２１６の化合物を実施例Ｂ３９と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１０６５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):4.62(2H, s), 6.02(2H, s), 6.64-6.70(3H, m), 7.57(1H, dd), 7.58(1H, d), 7.66(1H, dd), 7.83(1H, d), 8.23(1H, d), 8.50(1H, d).
【１０６６】
実施例Ｂ２１８
1-(1-ナフチルメチル)イソキノリン
【１０６７】
【化２６３】
2005168301.tif 000252
【１０６８】
n-ブチルベンジルクロリドの代わりに1-(クロロメチル)ナフタレンを用いて、実施例Ｂ２と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１０６９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):5.13(2H, s), 6.96(1H, d), 7.29(1H, d), 7.45-7.67(5H, m), 7.72(1H, d), 7.84-7.90(2H, m), 8.08(1H, d), 8.26(1H, d), 8.52(1H, d).
【１０７０】
実施例Ｂ２１９
3-ブロモフェニルブチレート
【１０７１】
【化２６４】
2005168301.tif 000253
【１０７２】
氷冷した3-ブロモフェノール10.0gのピリジン(50ml)溶液に、n-ブチリルクロリド7.25mlを加え、その温度で3時間撹拌した後、室温でさらに3.5時間撹拌した。反応混合物に氷を加え、酢酸エチルで抽出し、1規定塩酸と水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し表題化合物12.77gを得た。
【１０７３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 1.04(3H, t), 1.72-1.82(2H, m), 2.54(2H, t), 7.04(1H, dd), 7.22-7.29(2H, m), 7.36(1H, d).
【１０７４】
実施例Ｂ２２０
1-(4-ブロモ-2-ヒドロキシフェニル)-1-ブタノン
【１０７５】
【化２６５】
2005168301.tif 000254
【１０７６】
窒素雰囲気下、実施例Ｂ２１９の化合物12.77gのクロロベンゼン(70ml)溶液に塩化アルミニウム10.51gを加え、加熱還流下9時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、氷を加え酢酸エチルで抽出し、水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。この化合物はさらに精製することなく次反応に用いた。
【１０７７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.91(3H, t), 1.53-1.65(2H, m), 3.00(2H, t), 7.02(1H, dd), 7.19(1H, d), 7.78(1H, d), 12.50(1H, s).
【１０７８】
実施例Ｂ２２１
1-(4-ブロモ-2-メトキシフェニル)-1-ブタノン
【１０７９】
【化２６６】
2005168301.tif 000255
【１０８０】
実施例Ｂ２２０の化合物13.30gのアセトン(75ml)溶液に、炭酸カリウム9.07gとヨウ化メチル3.92mlを加え、加熱還流下4時間撹拌した。反応混合物をセライトを用いて濾過し、エーテルを加え不溶物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物9.52gを得た。
【１０８１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.95(3H, t), 1.64-1.74(2H, m), 2.91(2H, t), 3.90(3H, s), 7.10(1H, d), 7.14(1H, dd), 7.54(1H, d).
【１０８２】
実施例Ｂ２２２
4-ブロモ-1-ブチル-2-メトキシベンゼン
【１０８３】
【化２６７】
2005168301.tif 000256
【１０８４】
実施例Ｂ２２１の化合物を実施例Ｂ３と同様に還元し、表題化合物を得た。
【１０８５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.92(3H, t),1.29-1.39(2H, m), 1.48-1.56(2H, m), 2.54(2H, t), 3.81(3H, s), 6.95(1H, s), 6.96-7.02(2H, m).
【１０８６】
実施例Ｂ２２３
(4-ブチル-3-メトキシフェニル)(1-イソキノリル)ケトン
【１０８７】
【化２６８】
2005168301.tif 000257
【１０８８】
実施例Ｂ２２２の化合物を実施例Ｂ３６と同様に処理し、表題化合物を含む混合物として得た。
この混合物は分離精製することなく次の反応に用いた。
【１０８９】
実施例Ｂ２２４
(4-ブチル-3-メトキシフェニル)(1-イソキノリル)メタノール
【１０９０】
【化２６９】
2005168301.tif 000258
【１０９１】
実施例Ｂ２２３の化合物を実施例Ｂ３７と同様に処理し、表題化合物を含む混合物として得た。
この混合物は分離精製することなく次の反応に用いた。
【１０９２】
実施例Ｂ２２５
(4-ブチル-3-メトキシフェニル)(1-イソキノリル)メチル アセテート
【１０９３】
【化２７０】
2005168301.tif 000259
【１０９４】
実施例Ｂ２２４の化合物を実施例Ｂ３８と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１０９５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.90(3H, t), 1.24-1.38(2H, m), 1.46-1.60(2H, m), 2.24(3H, s), 2.54(2H, t), 3.76(3H, s), 6.97(1H, s), 6.98(1H, d), 7.06(1H, d), 7.53-7.67(4H, m), 7.83(1H, d), 8.26(1H, d), 8.58(1H, d).
【１０９６】
実施例Ｂ２２６
1-(4-ブチル-3-メトキシベンジル)イソキノリン
【１０９７】
【化２７１】
2005168301.tif 000260
【１０９８】
実施例Ｂ２２５の化合物を実施例Ｂ３９と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１０９９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.89(3H, t), 1.27-1.38(2H, t), 1.45-1.54(2H, t), 2.52(2H, t), 3.72(3H, s), 4.63(2H, s), 6.78(1H, d), 6.79(1H, s), 6.99(1H, d), 7.53(1H, dd), 7.55(1H, d), 7.64(1H, dd), 7.80(1H, d), 8.19(1H, d), 8.49(1H, d).
【１１００】
実施例Ｂ２２７
2-ブチル-5-(1-イソキノリルメチル)フェノール
【１１０１】
【化２７２】
2005168301.tif 000261
【１１０２】
実施例Ｂ２２６の化合物を実施例Ｂ４０と同様に処理し、表題化合物を得た。
【１１０３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.91(3H, t), 1.30-1.40(2H, m), 1.52-1.65(2H, m), 2.55(2H, t), 4.55(2H, s), 6.46(1H, brs), 6.85(1H, d), 7.03(1H, d), 7.32-7.40(1H, m), 7.55(1H, dd), 7.68(1H, dd), 7.81(1H, d), 7.94-8.05(1H, m), 8.14(1H, d).
フェノール性水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【１１０４】
実施例Ｂ２２８
2-ブロモ-3-(メトキシメトキシ)ピリジン
【１１０５】
【化２７３】
2005168301.tif 000262
【１１０６】
2-ブロモ-3-ヒドロキシピリジンを用い、実施例Ｂ２０２と同様に合成した。
【１１０７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 3.53(3H, s), 5.29(2H, s), 7.19-7.23(1H, m), 7.42-7.45(1H, m), 8.04-8.06(1H, m)
【１１０８】
実施例Ｂ２２９
2-(4-ブチルベンジル)-3-(メトキシメトキシ)ピリジン
【１１０９】
【化２７４】
2005168301.tif 000263
【１１１０】
氷冷した実施例Ｂ２２８の化合物524mg (2.40ミリモル)とジクロロ(ジフェニルホスフィノプロパン)ニッケル65.0mg (0.120ミリモル)のテトラヒドロフラン(10ml)混合溶液に、実施例Ｂ２０５の化合物7ml(3ミリモル)を加え、加熱還流下5時間撹拌した。室温まで放冷後、酢酸エチルを加え、飽和塩化アンモニア水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液そして飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をNH-シリカゲルを用いて濾過した。減圧濃縮した後、残渣をメタノール(15ml)に溶解し、トリエチルアミン500μl(3.59ミリモル)と10%パラジウム−炭素(50%含水)50mgを加え、室温で常圧水素雰囲気下3時間攪拌した。反応系中を窒素置換した後、セライトを用いて触媒を濾去し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物280mgを得た。
【１１１１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.89(3H, t), 1.28-1.34(2H, m), 1.52-1.58(2H, m), 2.53(2H, t), 3.33(3H, s), 4.16(2H, s), 5.16(2H, s), 7.04-7.10(3H, m), 7.20(2H, d), 7.33-7.35(1H, m), 8.19-8.20(1H, m)
【１１１２】
実施例Ｂ２３０
2-(4-ブチルベンジル)-3-ピリジノール
【１１１３】
【化２７５】
2005168301.tif 000264
【１１１４】
実施例Ｂ２２９の化合物256mg (0.849ミリモル)の塩化メチレン(5ml)溶液に、トリフルオロ酢酸1mlを加え、室温で終夜攪拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物182mgを得た。
【１１１５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.90(3H, t), 1.28-1.37(2H, m), 1.51-1.58(2H, m), 2.54(2H, t), 4.20(2H, s), 7.02-7.08(4H, m), 7.22(2H, d), 8.08-8.09(1H, m)
フェノール性水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
【１１１６】
実施例Ｂ２３１
2-(4-ブチルベンジル)-3-メトキシピリジン
【１１１７】
【化２７６】
2005168301.tif 000265
【１１１８】
実施例Ｂ２３０の化合物19.2mg (0.0796ミリモル)のアセトン(1ml)溶液に、炭酸カリウム33.0mg (0.239ミリモル)とヨウ化メチル14.9μl (0.239ミリモル)を加え、室温で3時間攪拌した。その反応溶液に酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物1.47mgを得た。
【１１１９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.90(3H, t), 1.32-1.34(2H, m), 1.53-1.57(2H, m), 2.54(2H, t), 3.82(3H, s), 4.14(2H, s), 7.06(2H, d), 7.10-7.11(2H, m), 7.21(2H, d), 8.12-8.14(1H, m)
【１１２０】
実施例Ｂ２３２
2-(4-ブチルベンジル)-3-クロロピリジン
【１１２１】
【化２７７】
2005168301.tif 000266
【１１２２】
氷冷した2,3-ジクロロピリジン525mg (3.55ミリモル)とジクロロ(ジフェニルホスフィノプロパン)ニッケル96.2mg (0.178ミリモル)のテトラヒドロフラン(4ml)混合液に、実施例Ｂ２０５の化合物12ml(5ミリモル)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に酢酸エチルを加え、飽和塩化アンモニア水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液そして飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物199mgを得た。
【１１２３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.91(3H, t), 1.29-1.38(2H, m), 1.52-1.60(2H, m), 2.56(2H, t), 4.28(2H, s), 7.08-7.13(3H, m), 7.21(2H, d), 7.64(1H, dd), 8.46(1H, dd)
【１１２４】
実施例Ｂ２３３
2-(4-ブチルベンジル)-3-エチルピリジン
【１１２５】
【化２７８】
2005168301.tif 000267
【１１２６】
実施例Ｂ２３２の化合物12.9mg (0.0496ミリモル)とジクロロ(ジフェニルホスフィノフェロセン)ニッケル3.4mg (0.0050ミリモル)のテトラヒドロフラン(1ml)混合液に、0.97Mエチルマグネシウムクロリド102μl(0.993ミリモル)を加え、50℃で1時間攪拌し、さらに2時間加熱還流した。室温まで放冷後、その反応溶液に酢酸エチルを加え、飽和塩化アンモニア水溶液と飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物3.29mgを得た。
【１１２７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.90-0.93(6H, m), 1.30-1.37(2H, m), 1.54-1.59(2H, m), 2.55-2.59(4H, m), 4.12(2H, s), 7.05-7.18(5H, m), 7.55-7.59(1H, m), 8.53-8.55(1H, m)
【１１２８】
実施例Ｂ２３４
tert-ブチル N-(2-ブロモ-3-ピリジル)カルバメート
【１１２９】
【化２７９】
2005168301.tif 000268
【１１３０】
氷冷した3-アミノピリジン3.97g (42.2ミリモル)のジメチルホルムアミド(25ml)混合液に、N-ブロモコハク酸イミド7.51g(42.2ミリモル)を加え、その温度で30分間攪拌した。その反応溶液に酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣の塩化メチレン(20ml)溶液を氷冷した後、トリエチルアミン3.74ml(26.8ミリモル)、触媒量のジメチルアミノピリジンそしてジ-t-ブチル ジカーボネート3.08ml(13.4ミリモル)を加え、室温で終夜攪拌した。減圧濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物344mgを得た。
【１１３１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 1.55(9H, s), 7.03(1H, brs), 7.25(1H, dd), 8.03(1H, dd), 8.46(1H, d)
【１１３２】
実施例Ｂ２３５
2-ブロモ-3-(N-t-ブトキシカルボニル-N-メチル)アミノピリジン
【１１３３】
【化２８０】
2005168301.tif 000269
【１１３４】
氷冷した実施例Ｂ２３４の化合物344mg (1.26ミリモル)のジメチルホルムアミド(5ml)溶液に、ヨウ化メチル157μl(2.52ミリモル)と66%水素化ナトリウム91.6mg (2.52ミリモル)を加え、その温度で40分間攪拌した。その反応溶液に酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄後、シリカゲルを用いて濾過した。有機層を減圧濃縮し、表題化合物356mgを得た。
【１１３５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 1.36(9H, s), 3.17(3H, s), 7.30(1H, dd), 7.55(1H, d), 8.30(1H, dd)
【１１３６】
実施例Ｂ２３６
N-[2-(4-ブチルベンジル)-3-ピリジル]-N-メチルアミン
【１１３７】
【化２８１】
2005168301.tif 000270
【１１３８】
実施例Ｂ２３５の化合物62.8mg (0.219ミリモル)を用い、実施例Ｂ２１１と同様にして4-ブチルベンジル基を導入することにより得られた化合物の塩化メチレン(2ml)溶液に、トリフルオロ酢酸2mlを加え、室温で1時間攪拌した。反応液を炭酸水素ナトリウム水溶液中に滴下し、酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物29.7mgを得た。
【１１３９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.91(3H, t), 1.29-1.38(2H, m), 1.53-1.60(2H, m), 2.56(2H, t), 2.72(3H, s), 3.63(1H, br s), 4.09(2H, s), 6.86(1H, d), 7.08-7.12(5H, m), 7.98(1H, dd)
【１１４０】
実施例Ｂ２３７
N-[2-(4-ブチルベンジル)-3ピリジル]-N,N-ジメチルアミン
【１１４１】
【化２８２】
2005168301.tif 000271
【１１４２】
氷冷した実施例Ｂ２３６の化合物26.8mg (0.105ミリモル)の塩化メチレン(2ml)溶液に、酢酸12.1μl(0.211ミリモル)、37%ホルマリン15.8μl(0.211ミリモル)そしてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム44.7mg (0.211ミリモル)を加え、室温で30分間攪拌した。酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物23.3mgを得た。
【１１４３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.91(3H, t), 1.30-1.36(2H, m), 1.52-1.59(2H, m), 2.55(2H, t), 2.67(6H, s), 4.24(2H, s), 7.06(2H, d), 7.10(1H, dd), 7.18(2H, d), 7.40(1H, dd), 8.27(1H, dd)
【１１４４】
実施例Ｂ２３８
2-(4-ブチルベンジル)-4-メトキシピリジン
【１１４５】
【化２８３】
2005168301.tif 000272
【１１４６】
2-クロロ-4-メトキシピリジンを用い、実施例Ｂ２１１と同様にして表題化合物を得た。
【１１４７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.91(3H, t), 1.31-1.37(2H, m), 1.53-1.59(2H, m), 2.57(2H, t), 3.78(3H, s), 4.06(2H, s), 6.61-6.65(2H, m), 7.11(2H, d), 7.17(2H, d), 8.36(1H, d)
【１１４８】
実施例Ｂ２３９
2-(4-ブチルベンジル)-4-クロロピリジン
【１１４９】
【化２８４】
2005168301.tif 000273
【１１５０】
氷冷した実施例Ｂ２３８の化合物52.0mg (0.204ミリモル)のジメチルホルムアミド(1ml)溶液に、オキシ塩化リン57.0μl(0.612ミリモル)を加え、100℃で8時間攪拌した。放冷後、その反応溶液を氷に注ぎ、室温まで昇温した後、酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物2.29mgを得た。
【１１５１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.92(3H, t), 1.31-1.38(2H, m), 1.53-1.61(2H, m), 2.59(2H, t), 4.10(2H, s), 7.12-.18(6H, m), 8.44(1H, d)
【１１５２】
実施例Ｂ２４０
2-クロロ-3-メトキシピリジン
【１１５３】
【化２８５】
2005168301.tif 000274
【１１５４】
2-クロロ-3-ヒドロキシピリジンを用い、実施例Ｂ２３１と同様にして表題化合物を得た。
【１１５５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 3.93(3H, s), 7.21-7.22(2H, m), 7.99-8.01(1H, m)
【１１５６】
実施例Ｂ２４１
2-クロロ-3,4-ジメトキシピリジン
【１１５７】
【化２８６】
2005168301.tif 000275
【１１５８】
窒素雰囲気下、−78℃に冷却した1.06Mフェニルリチウム シクロペンタン-ジエチルエーテル溶液のテトラヒドロフラン(11ml)溶液に、ジイソプロピルアミン84.0μl(0.599ミリモル)と実施例Ｂ２４０の化合物860mg (5.99ミリモル)のテトラヒドロフラン4ml溶液を加え、−40℃で1時間撹拌した後、さらに−18℃で20分間攪拌した。その反応溶液を−78℃に再冷却した後、トリメトキシボレート2.04ml(18.0ミリモル)を滴下し、0℃で20分間攪拌した。その温度で29%アンモニア水溶液30ml、塩化アンモニウム4.5gそして30%過酸化水素水12mlを順次加え、室温で2時間攪拌した。飽和チオ硫酸ナトリウム、酢酸そして酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄した。そしてシリカゲルを用いて濾過して得られた酢酸エチル層を、減圧濃縮した。残渣を用い、実施例Ｂ２３１と同様にして表題化合物31.3mgを得た。
【１１５９】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 3.89(3H, s), 3.94(3H, s), 6.82(1H, d), 8.05(1H, d)
【１１６０】
実施例Ｂ２４２
2-(4-ブチルベンジル)-3,4-ジメトキシピリジン
【１１６１】
【化２８７】
2005168301.tif 000276
【１１６２】
実施例Ｂ２４１の化合物を用い、実施例Ｂ２０６と同様にして表題化合物を得た。
【１１６３】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.90(3H, t), 1.26-1.35(2H, m), 1.53-1.57(2H, m), 2.54(2H, t), 3.70(3H, s), 3.89(3H, s), 4.12(2H, s), 6.72(1H, d), 7.06(2H, d), 7.21(2H, d), 8.20(1H, d)
【１１６４】
実施例Ｂ２４３
2,4-ジ(4-ブチルベンジル)-3-メトキシピリジン
【１１６５】
【化２８８】
2005168301.tif 000277
【１１６６】
窒素雰囲気下、−78℃に冷却した1.43M t-ブチルリチウムn-ペンタン溶液2.76ml(3.95ミリモル)のジエチルエーテル(5ml)溶液に、実施例Ｂ２４０の化合物436mg (3.04ミリモル)のジエチルエーテル(2ml)溶液を加え、その温度で30分間攪拌した。その反応溶液ににテトラメチルエチレンジアミン688μl(4.56ミリモル)とヘキサクロロエタン719mg(3.04ミリモル)のジエチルエーテル3ml溶液を加え、その温度でさらに1時間攪拌した。徐々に室温まで昇温した後、酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄した。そしてシリカゲルを用いて濾過して得られた酢酸エチル層を減圧濃縮した。残渣を用い、実施例Ｂ２０６と同様にして表題化合物10.1mgを得た。
【１１６７】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.89-0.94(6H, m), 1.31-1.37(4H, m), 1.52-1.62(4H, m), 2.53-2.59(4H, m), 3.74(3H, s), 4.07(2H, s), 4.13(2H, s), 6.84(1H, d), 6.98(1H, d), 7.04-7.22(8H, m)
【１１６８】
実施例Ｂ２４４
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-(メトキシメトキシ)ピリジン
【１１６９】
【化２８９】
2005168301.tif 000278
【１１７０】
窒素雰囲気下、−78℃に冷却した2.47M n-ブチルリチウムn-ヘキサン溶液862μl(2.13ミリモル)のテトラヒドロフラン(3ml)溶液に、実施例Ｂ２２８の化合物422mg (1.94ミリモル)のテトラヒドロフラン(3ml)溶液を加え、その温度で1時間攪拌した。その反応溶液に臭化第1銅139mg(0.968ミリモル)を加え、0℃で1時間攪拌した後、−78℃に再冷却し、4-ブロモ-2-フルオロベンジルブロミド259mg(0.968ミリモル)を加え、0℃で1時間攪拌した。その溶液にテトラメチルエチレンジアミン584μl(3.88ミリモル)を加え、その温度でさらに1時間攪拌した。反応液にジエチルエーテルとアンモニア水溶液を加え、有機層を飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物81.0mgを得た。
【１１７１】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 3.38(3H, s), 4.17(2H, s), 5.18(2H, s), 7.04(1H, t), 7.11-7.22(3H, m), 7.38(1H, dd), 8.19(1H, dd)
【１１７２】
実施例Ｂ２４５
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-ピリジノール
【１１７３】
【化２９０】
2005168301.tif 000279
【１１７４】
実施例Ｂ２４４の化合物134mg (0.411ミリモル)の塩化メチレン(4ml)にトリフルオロ酢酸1mlを加え、室温で終夜攪拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて中和後、酢酸エチルを加え、酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し表題化合物97.5mgを得た。
【１１７５】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 4.17(2H, s), 7.10-7.24(5H, m), 8.15(1H, t)
フェノール性水酸基のプロトンは、NMRのチャート上観測されていない。
実施例Ｂ２４６
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-メトキシピリジン
【１１７６】
【化２９１】
2005168301.tif 000280
【１１７７】
実施例Ｂ２４５の化合物15.8mg (0.0560ミリモル)のジメチルホルムアミド(1ml)溶液に、炭酸カリウム38.7mg (0.280ミリモル)とヨウ化メチル10.5μl (0.168ミリモル)を加え、室温で2時間攪拌した。反応液に酢酸エチルを加え、飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物14.0mgを得た。
【１１７８】
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 3.82(3H, s), 4.15(2H, s), 7.03(1H, t), 7.12-7.22(4H, m), 8.13(1H, dd)
【１１７９】
以下の実施例Ｂ化合物は、実施例Ｂ２４６と同様に合成し、精製はLC-MS[溶出溶媒：0.1%トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル溶液：0.1%トリフルオロ酢酸含有水溶液＝1:99〜100:0/ 20分サイクル、流速：20ml/分、カラム：YMC Combiprep ODS-AM、20mmΦx50mm(Long)]により行った。
【１１８０】
実施例Ｂ２４７
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-エトキシピリジン
【１１８１】
【化２９２】
2005168301.tif 000281
【１１８２】
MS m/z (ESI: MH+): 310.0
【１１８３】
実施例Ｂ２４８
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-プロポキシピリジン
【１１８４】
【化２９３】
2005168301.tif 000282
【１１８５】
MS m/z (ESI: MH+): 324.0
【１１８６】
実施例Ｂ２４９
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-ブトキシピリジン
【１１８７】
【化２９４】
2005168301.tif 000283
【１１８８】
MS m/z (ESI: MH+): 338.1
【１１８９】
実施例Ｂ２５０
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-(ペンチルオキシ)ピリジン
【１１９０】
【化２９５】
2005168301.tif 000284
【１１９１】
MS m/z (ESI: MH+): 352.1
【１１９２】
実施例Ｂ２５１
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-(ヘキシルオキシ)ピリジン
【１１９３】
【化２９６】
2005168301.tif 000285
【１１９４】
MS m/z (ESI: MH+): 366.0
【１１９５】
実施例Ｂ２５２
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-(2-フルオロエトキシ)ピリジン
【１１９６】
【化２９７】
2005168301.tif 000286
【１１９７】
MS m/z (ESI: MH+): 328.0
【１１９８】
実施例Ｂ２５３
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-(3-フルオロプロポキシ)ピリジン
【１１９９】
【化２９８】
2005168301.tif 000287
【１２００】
MS m/z (ESI: MH+): 342.0
【１２０１】
実施例Ｂ２５４
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-イソプロポキシピリジン
【１２０２】
【化２９９】
2005168301.tif 000288
【１２０３】
MS m/z (ESI: MH+): 324.0
【１２０４】
実施例Ｂ２５５
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-(2,2,2-トリフルオロエトキシ)ピリジン
【１２０５】
【化３００】
2005168301.tif 000289
【１２０６】
MS m/z (ESI: MH+): 364.0
【１２０７】
実施例Ｂ２５６
2-(4-ブロモ-2-フルオロベンジル)-3-(3,3,3-トリフルオロプロポキシ)ピリジン
【１２０８】
【化３０１】
2005168301.tif 000290
【１２０９】
MS m/z (ESI: MH+): 378.0
【１２１０】
実施例Ｂ２５７
［実施例Ａ２］に記載したS. cerevisiaeレポーター系を用いて化合物を評価した。細胞壁画分のセファロスポリナーゼ活性が化合物無処理時の50%以下になる最小濃度をIC50値とした。代表的な化合物の効果を表１に示す。
【１２１１】
【表１】
2005168301.tif 000291
【１２１２】
【発明の効果】
GPIアンカー蛋白質の真菌細胞壁への輸送を阻害する化合物が、簡単なBinding
assayによりスクリーニング可能となった。
【１２１３】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  GPIアンカー蛋白質の細胞壁への輸送過程の模式図である。GPIアンカー蛋白質は、一旦GPI（Glycosylphosphatidylinositol）にアンカーした後、細胞壁に輸送される。
【図２】  S. cerevisiaeレポータ系での前記式（Ｉａ）に記載の化合物の活性を示すグラフである。前記式（Ｉａ）に記載の化合物の存在下では、0.39〜1.56μg/mlの濃度で培養上清画分中のセファロスポリナーゼ活性が上昇、細胞壁画分中の活性が低下し、3.13μg/ml以上の濃度で増殖抑制が見られた。
【図３】  C. albicansの動物細胞付着への前記式（Ｉａ）に記載の化合物の影響を示すグラフである。増殖抑制の見られない1.56μg/mlの濃度でも、C. albicansの動物細胞への付着が半分程度にまで抑制された。
【図４】  C. albicansのAls1p抗原量への前記式（Ｉａ）に記載の化合物の影響を示すグラフである。前記式（Ｉａ）に記載の化合物の存在下では、0.1〜0.39μg/mlの濃度で、培養上清画分中のAls1p抗原量が上昇し、細胞壁画分中の抗原量が低下した。
【図５】  C. albicans遺伝子のGWT1遺伝子をプローブとしたサザンブロット解析を示す写真である。EcoRIで6.5 kb、HindIIIで4.0 kb、EcoRI-HindIIIで2.0 kb、EcoRI-PstIで2.5 kbの単一のバンドが観察され、C. albicansの前記式（Ｉａ）に記載の化合物に対する耐性遺伝子のホモログは、単一の遺伝子として存在することが予想された。
【図６】  GWT1遺伝子産物を過剰発現したS. cerevisiaeにおける前記式（Ｉａ）に記載の化合物の活性を示すグラフである。S. cerevisiae CW63株（図中の「W/T」）では、培養上清画分中のセファロスポリナーゼ活性が上昇し、細胞壁画分中の活性が低下している前記式（Ｉａ）に記載の化合物濃度（0.39〜1.56μg/ml）でも、S. cerevisiae CW63/GWT1株では影響が見られず、またS. cerevisiae CW63株では増殖が抑制される前記式（Ｉａ）に記載の化合物濃度（> 3.13μg/ml）でも、S. cerevisiae CW63/GWT1株（図中の「O/E」）では増殖抑制が見られなかった。
【図７】  S.cerevisiae，S.pombe，C.albicansのGWT1遺伝子のコードする蛋白において高度に保存されている領域を整列させた図である。
【図８】GWT1蛋白を発現した膜画分への標識CompoundB2の特異的結合の図である。
【図９】被検化合物による標識CompoundB2の膜画分への結合に対する阻害の図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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