(57)【要約】【課題】  薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分の口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量する方法を提供する。【解決手段】  本発明は、ケラチンパウダーを用いてトリメチルアミン、ジメチルスルフィド、ｐ−クレゾール、メチルメルカプタン、イソカプロン酸、フェニルプロピオン酸及びケイ皮酸などの口臭成分や、メントール、カルボン、アネトール、ピネン、リモネン、メチルサリシレート、シンナミックアルデヒド、シネオール、チモール、オイゲノール、イソプレゴール、メンチルアセテート、メンチルラクテートなどの香料成分が口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量する方法である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケラチンパウダーに対する薬効剤、殺菌剤、口臭成分又は香料成分の吸着量を測定する、当該成分の口腔粘膜における残留量又は吸着量の定量法。
【請求項２】
前記口臭成分が、トリメチルアミン、ジメチルスルフィド、ｐ−クレゾール及びスカトールからなる群より選ばれた少なくとも１つ以上である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記口臭成分が、メチルメルカプタン、ジメチルトリスルフィド、Ｓ−メチルチオアセテート、フェノール、インドール、プロピオン酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、カプロン酸、イソカプロン酸、フェニルプロピオン酸及びケイ皮酸からなる群より選ばれた少なくとも１つ以上である請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記香料成分が、メントール、カルボン、アネトール、ピネン、リモネン、メチルサリシレート、シンナミックアルデヒド、シネオール、チモール、オイゲノール、イソプレゴール、メンチルアセテート及びメンチルラクテートからなる群より選ばれた少なくとも１つ以上である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ケラチンパウダー０．５ｇに対する、前記薬効剤、殺菌剤、口臭成分又は香料成分の使用量が０．０１ｍｇから２００ｍｇである請求項１乃至４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬効剤、殺菌剤、口臭成分又は香料成分の口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
各種口腔用剤、経粘膜吸収製剤には、薬効剤、殺菌剤、香料成分等が配合されており、これらの成分の有効性を評価するには、これらの成分の口腔粘膜に対する吸着量又は残留量を測定することが必要である。また、口腔用組成物の口臭除去効果等を評価するには、口腔粘膜における口臭成分の残留量を測定することが必要である。これらの成分のヒト口腔粘膜における残留量や吸着量を測定するため、通常動物の口腔内組成物が用いられる。
【０００３】
従来、ラットの口腔粘膜やハムスターのチークポーチ（頬袋）は、その粘膜構造が人間の口腔粘膜に類似し（酷似し）ているため、人間の口腔粘膜への薬剤浸透量又は吸着量を調べるのにラットの口腔粘膜やハムスターのチークポーチ（頬袋）が使用されることが多い。
【０００４】
すなわち、ラットの口腔内あるいはハムスターのチークポーチに直接薬剤溶液を投入し、一定時間経過後、投入した薬剤溶液を取り出し、投入前後の薬剤溶液における薬剤の濃度変化から口腔粘膜への浸透または吸着量を算出するという方法である。又は、ハムスターからチークポーチを外科的手段によって取り出し、拡散セルにはさみ、口腔内のセル（ドナー）に薬剤溶液を入れ、血液側のセル（レセプター）への薬剤の移行量より口腔粘膜からの薬剤の浸透量を算出する方法である（非特許文献１）。
しかしながら、近年、動物愛護等の観点から必要以上に動物を使って実験を行うことが批判されることが多くなってきている。
【０００５】
【非特許文献１】経皮・経粘膜吸収製剤の開発と新しい試験・実験・評価法  日本科学技術協会著  テクノアイ出版部  （１９８６）ｐ５９２−５９９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ラットやハムスターなどの実験動物を使用することなく、薬効剤や殺菌剤、口臭成分、香料成分等の物質の口腔粘膜への吸着量や残留量を調べることができる方法を提供すると共に、安価で、かつ、多数の物質を同時に処理できる方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ケラチンパウダーを用いることにより、薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分の口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量することを可能にした。
すなわち、ケラチンパウダーに対する前記成分の残留量又は吸着量を定量した場合、ケラチンパウダーがハムスターのチークポーチと同様の吸着挙動を示すため、ハムスターのチークポーチの代わりに、ケラチンパウダーを用いて前記成分の口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量することが可能である。
【０００８】
具体的には、ハムスターのチークポーチ一片をｐＨ＝７に調整した人工だ液６ｍｌの中に浸し、これに種々濃度のスカトールを加えた後に口腔内の温度である３７℃にて保管し、経時的に人工だ液中のスカトール濃度を測定した結果と、ハムスターのチークポーチの代わりに、ケラチンパウダーを加えた系でも同様の実験を行った結果、ケラチンパウダーがハムスターのチークポーチと同様の吸着挙動を示していた。
【０００９】
本発明に係る方法を使用すれば、トリメチルアミン、ジメチルスルフィド、ｐ−クレゾール、メチルメルカプタン、ジメチルトリスルフィド、Ｓ−メチルチオアセテート、フェノール、インドール、プロピオン酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、カプロン酸、イソカプロン酸、フェニルプロピオン酸及びケイ皮酸などの口臭成分や、メントール、カルボン、アネトール、ピネン、リモネン、メチルサリシレート、シンナミックアルデヒド、シネオール、チモール、オイゲノール、イソプレゴール、メンチルアセテート、メンチルラクテートなどの香料成分の、口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量することができるようになる。
【発明の効果】
【００１０】
ケラチンパウダーに対する薬効剤、殺菌剤、口臭成分又は香料成分の吸着量を測定することにより、前記成分の口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量する方法は、チークポーチを用いた動物実験と同様の効果を得ることができ、従来のように実験動物を使う必要がなくなる。また、たとえ、最終的には動物実験が不可欠である場合であっても、事前にケラチンパウダーを用いて、調べたい薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分などの口腔粘膜における残留量又は吸着量を定量することによって、動物実験をを最小限に抑えることができる。
【００１１】
さらに、従来のチークポーチを使う方法では、チークポーチが１頭のハムスターから左右それぞれひとつずつしかないため、多数の薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分などの吸着量などを定量することがコスト的に、動物保護の観点からも困難であったが、本発明によるケラチンパウダーを用いた場合は、動物を使用することなく、かつ、ケラチンパウダー自身が入手容易で、安価な試薬であるため、上記従来の問題点を解決することができるのみならず、吸着量などを定量することが同時並行して大量に行うことができ、効率的な口腔粘膜における吸着量などの定量が可能になる。
【００１２】
さらに、口臭成分、香料成分が口腔粘膜へ残留または吸着した口腔内吸着モデルを動物実験や人を使った実験をせずに確認することができるため、口腔粘膜に吸着した口臭成分の洗浄効果素材の探索、または、香料成分を口腔粘膜に残留させるための吸着促進素材の探索などをするための時間を短縮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明に用いるケラチンパウダーは、薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分などを吸着することができるものであれば、特に限定しないが、例えば、羊毛を処理することによって得られたケラチンパウダーを挙げることができる。
【００１４】
本発明のケラチンパウダーを用いた口腔粘膜への各種物質の吸着量の定量方法においては、ケラチンパウダーを分散させるための溶媒を使用することができる。前記溶媒としては、イオン交換水、生理食塩水、人工だ液などが挙げられ、チークポーチと同様の吸着挙動を再現する正確さの観点から、人工だ液を用いることが好ましい。ここで、人工だ液とは、人のだ液中のミネラル成分などを模した緩衝液のことをいい、例えば塩化カルシウム１．５ｍＭ、リン酸二水素カリウム０．９ｍＭ、Ｈｅｐｅｓ（N-(2-Hydroxyethyl)piperazine-N'-2-ethane sulfonic acid）２０ｍＭでｐＨ＝７に調整したものなどが挙げられる。
【００１５】
本発明に係る薬効剤としては、血行促進剤、抗炎症剤、止血剤、鎮痛剤、抗ヒスタミン剤、更にこれらの作用を有する植物エキス等が挙げられる。血行促進剤としては、例えばビタミンＥ 、ニコチン酸dl −α−トコフェロール、塩化ナトリウム等が挙げられ；抗炎症剤としては、例えばアラントイン、β−グリチルレチン酸、グリチルリチン酸、エピジヒドロコレステリン、ジヒドロコレステロール、ε−アミノカプロン酸、ヒノキチオール、塩化リゾチーム、インドメタシン、イブプロフェン等が挙げられ；止血剤としては、例えばトラネキサム酸、トロンビン、アスコルビン酸、ルチン等が挙げられ；鎮痛剤としては、例えばアスピリン、アセトアミノフェン、サリチル酸メチル等が挙げられ；抗ヒスタミン剤としては、例えばシメチジン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸ジフェンヒドラミン、塩酸プロメタジン等が挙げられ；植物エキスとしては、例えばウイキョウエキス、ウコンエキス、オウゴンエキス、オトギリソウエキス、カモミラエキス、クマザサエキス、シソエキス、セージエキス、チョウジエキス、ニンジンエキス、ハマメリスエキス、ヒバマタエキス、マロニエエキス、モモ葉エキス、ローズマリーエキス、ユーカリエキス等が挙げられる。また、殺菌剤としては、例えば塩化ベンゼトニウム、塩酸クロルヘキシジン、トリクロサン、塩化セチルピリジニウム、イソプロピルメチルフェノール、塩化デカリニウム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン等が挙げられる。
【００１６】
また、本発明の方法において、前記溶媒、例えば人工だ液中から各種物質を抽出するために有機溶剤を使用することができる。吸着量などの定量したい物質が水に不溶なものである場合、溶剤はジエチルエーテルやヘキサン、ペンタンなど極性が低く、水よりも比重が小さいものを用いることができる。特に、薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分などに対して高い溶解性を示すジエチルエーテルが好ましい。一方、吸着量などの定量したい物質が水溶性のものである場合には、特に人工だ液中から薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分などを抽出する必要はなく、遠心分離機によって人工だ液とケラチンパウダーとを分離後、人工だ液層をフィルターに通したものをＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフ）などの分析機器にて分析することにより定量することができる。
【００１７】
ケラチンパウダーに対する吸着量などを定量したい物質の使用量は、その薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分などが水溶性であるか非水溶性であるかによって異なる。水溶性である場合は特に限定はしないが、非水溶性の液体である場合には、人工だ液中に分散できる量であることが好ましい。０．５ｇのケラチンパウダーを分散した人工だ液中では、吸着量などを定量したい物質を０．０１ｍｇから２００ｍｇ使用することができ、特に２〜１０ｍｇが好ましい。
【００１８】
本発明の口腔粘膜への薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分の吸着量の定量方法は、主にケラチンパウダーへの薬効剤、殺菌剤、口臭成分、香料成分がそれぞれの吸着の有無を確認することにより測定可能である。また、これらの成分を２種以上同時に混合して吸着量を測定し、それぞれの相互作用を調べることもできる。
【００１９】
口腔用組成物や洗口剤、チューインガム、キャンディーなどに配合されている研磨剤、界面活性剤、糖類などの原料が、薬効剤、殺菌剤、香料成分の口腔粘膜への吸着に与える影響を調べることができる。あるいは口腔用組成物等そのものが、薬効剤、殺菌剤、香料成分の口腔粘膜への吸着に与える影響を調べることができる。さらに、吸着した口臭成分の洗浄効果を調べることもできる。
本発明に係る方法を用いて、研磨剤などの非水溶性固体の洗浄効果を調べるために必要な研磨剤等の量は、ケラチンパウダー０．５ｇに対して２００ｍｇ以下が好ましい。
【００２０】
また、本発明に係る方法は、口臭成分であるスカトールの吸着量の測定、スカトールの口腔粘膜への吸着抑制又は促進効果を有する素材の評価、ケラチンパウダーに吸着したスカトールに対する歯磨剤の洗浄効果などに応用することができる。
【実施例】
【００２１】
＜実施例１＞口臭成分の残留量又は吸着量の確認
１．方法
チークポーチ、ケラチンパウダー０．５ｇをそれぞれ６ｍＬの人工だ液に浸し、さらにスカトール２ｍｇを添加する。それぞれの溶液を攪拌した後、３７℃にて保温した。所定時間経過したものにそれぞれジエチルエーテル４ｍＬを添加して攪拌する。ついで、遠心分離機にて人工だ液層とジエチルエーテル層を分離し、ジエチルエーテル層をＧＬＣにて分析した。
【００２２】
２．結果
図１にハムスターのチークポーチとケラチンパウダーのスカトールに対する吸着挙動の結果を示す。図１に示すとおり、チークポーチへのスカトールの吸着量の経時的変化がケラチンパウダーを用いた場合と同様であり、チークポーチとケラチンパウダーともにスカトールに対し同じ吸着挙動を示した。つまり、チークポーチを用いたスカトールの吸着試験の代わりに、ケラチンパウダーを用いてスカトールの吸着試験を行うことによっても同様の効果を得ることができることが実証された。
【００２３】
したがって、本発明にかかる方法により、口臭成分の１つであるスカトールの口腔粘膜への吸着量を定量することができるため、口腔粘膜に吸着されている口臭成分の１つであるスカトールを効果的に洗浄できる物質のスクリーニングに応用することができる。つまり、洗浄剤スクリーニングのための簡易口腔内モデルとして本発明に係る方法を使用することができる。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
＜実施例２＞二成分系での吸着量の測定
１．方法
ケラチンパウダー０．５ｇを人工だ液６ｍＬに分散し、スカトール２ｍｇ、リモネン２ｍｇを添加・攪拌した。３７℃の恒温槽にて３時間保温したのち、内部標準物質を加えたジエチルエーテル４ｍＬを添加・攪拌し、遠心分離後、ジエチルエーテル層をＧＬＣにて分析した。
【００２６】
２．結果
図２にスカトールとリモネンそれぞれの吸着量の経時的な変化を示し、図３にスカトールとリモネンとが共存した場合のスカトールの吸着量の経時的変化を示す。
図２に示された結果から、本発明に係る方法によって、スカトールとリモネンそれぞれが口腔粘膜へ吸着する能力を明らかにすることができた。
【００２７】
図３に示す両成分が共存した状態でのケラチンパウダーへのスカトールの吸着量の経時的変化と、図２に示すそれぞれの成分のケラチンパウダーへのスカトールの吸着量の経時的変化とを比較すると、図３に示す両成分の共存状態の場合、スカトールの吸着率が低く、リモネンの吸着率が高い。すなわち、前記両成分の共存状態の場合、スカトールのケラチンパウダーへの吸着、つまり口腔粘膜への吸着が抑制されたことから、リモネンは、スカトールの口腔粘膜への吸着抑制作用があることが明らかになった。
【００２８】
このように、本方法を用いることで口腔粘膜に対する物質の吸着挙動あるいは物質間の吸着抑制あるいは吸着促進効果を調べることができることが明らかになった。
【００２９】
＜実施例３＞歯磨剤の洗浄力測定
１．方法
ケラチンパウダー０．５ｇを人工だ液６ｍｌに分散し、スカトール２ｍｇを添加・攪拌した。３７℃の恒温槽にて３時間保温したのち、歯磨剤２００ｍｇを添加し攪拌した。ケラチンパウダーと人工だ液の混合物にスカトールを添加・攪拌した直後（初期）、３時間保温後、及び、洗浄剤添加後の各時点のサンプルに、内部標準物質を加えたジエチルエーテル４ｍＬを添加・攪拌し、遠心分離後、ジエチルエーテル層をＧＬＣ（ガスクロマトグラフ）にて分析した。スカトールの初期抽出量と３時間保温後の抽出量、さらに洗浄剤を添加した後の抽出量よりケラチンパウダーから洗浄されたスカトール量を計算した。
【００３０】
洗浄率（％）＝｛（洗浄剤添加後の抽出量）−（３時間後の抽出量）｝／｛（初期抽出量）−（３時間後の抽出量）｝×１００
【００３１】
２．結果
表１に、市販歯磨のケラチンパウダーに吸着したスカトールの洗浄率を示した。本発明にかかる方法により、口腔内に残留又は吸着したスカトールなどの口臭成分などを洗浄する効果を確認することができることが実証できた。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】ケラチンパウダー、チークポーチのスカトールの吸着挙動を示したグラフである。
【図２】リモネン、スカトールのそれぞれのケラチンパウダーへの吸着挙動を示したグラフである。
【図３】リモネン、スカトールの共存下でのリモネン、スカトールのケラチンパウダーへの吸着挙動を示したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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