(57)【要約】【課題】  本発明は、骨塩減少によって生じる骨粗鬆症などの代謝性骨疾患の優れた骨改善作用、リウマチ改善作用および歯周病改善作用を有する治療剤を提供することを課題とする。【解決手段】  本発明者らは、誠意努力した結果、リミチン（Ｌｉｍｉｔｉｎ）に骨改善作用、リウマチ改善作用および歯周病改善作用を有することを発見し、本発明に至った。リミチンを有効成分とする骨量改善および骨強化剤、リウマチ改善剤、歯周病改善剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リミチンを有効成分とする骨量改善および骨強化剤
【請求項２】
リミチンを有効成分とするリウマチ改善剤
【請求項３】
リミチンを有効成分とする歯周病改善剤
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、新規な骨量改善および骨強化およびリウマチ改善剤に関する。詳しくは、リミチンを有効成分として含有する骨量改善および骨強化剤、リウマチ改善剤および歯周病に関する。
【背景技術】
【０００２】  近年、高齢化に伴い、骨粗鬆症、リウマチ等の骨関節疾患が増加している。骨組織においては、たえず骨形成と骨吸収が営まれており、若い時には骨形成と骨吸収のバランスがとれているが、加齢に伴い種々の原因からそのバランスが骨吸収に傾いてくる。この状態が長期間続くと、骨組織が脆くなり、骨粗鬆症、骨折、腰痛等の骨疾患を生じることになる。このアンカップリングを防ぐことができれば、骨粗鬆症、骨折、腰痛等を予防できると考えられている。【０００４】  従来より、アンカップリングを防ぎ骨疾患を予防・治療する方法として、（１）食事によるカルシウムの補給、（２）軽い運動、（３）日光浴、（４）薬物治療等が行われてきた。【０００５】  食事によるカルシウムの補給には炭酸カルシウム及びリン酸カルシウム等のカルシウム塩や牛骨粉、卵殻及び魚骨粉等の天然カルシウム剤が使われている。食品及び食品素材でのこれまでの使用目的は、全てカルシウムの補給である。【０００６】  軽い運動については、軽いランニングや散歩等が良いとされるが、体が弱っていると軽い運動もやっかいなものとなり、まして寝たきりの老人になると殆ど運動できなくなる。【０００７】  また、日光浴は活性化ビタミンＤ３の補給という点では良いとされているが、これだけでは不十分である。【０００８】  薬物治療としては、１α−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシトニン製剤等が骨粗鬆症の治療及び改善に有効であることが知られている。カルシトニン製剤は、医薬品としてのホルモン製剤である。しかしながら、破骨細胞に直接働きかけて、骨の減少を食い止めるような有効な薬剤は、まだまだ少ない。【０００９】  一方、関節疾患であるリウマチは、骨吸収を伴う疾患であることから、骨吸収を抑制することでリウマチを予防及び改善できると考えられる。【００１０】  また、近年、歯周病も大きな社会問題となっている。歯周病は、虫歯と異なり、歯の根元を弱らせて虫歯でない歯をも使えなくする病気である。最近では、多くの人が歯周病の兆候を示しており、むしろ虫歯よりも怖い病気であると言える。【００１１】  現在、歯周病の予防法としては、歯垢を除去することや、抗菌剤を含有するうがい剤（マウスウォッシュ）等を用いたうがい等、原因菌となる微生物の繁殖を防止する観点からの予防が行われているが、これらの方法は過度に進行が進んだ症状に対しては効果が小さいと考えられる。すなわち、歯周病の末期には、歯槽骨の減少がみられ、一度歯槽骨が失われると再生されにくい症状を示す。【００１２】  そして、歯周病により歯を失うと、食物が食べにくくなるほか、痛みを伴うこと等から生活に支障をきたすため、有効な予防・治療手段が求められている。しかしながら、現在のところ、歯槽骨の減少を抑制する効果を持つ歯周病の予防及び改善剤はない。
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】  このように、骨の疾患、リウマチ疾患、歯周病はとともに大きな社会問題になっており、これについても改善に効果があれば、人々の健康に大きなメリットがあると考えられ、歯周病を改善するものについても、かなり必要とされている。このような課題を解決するための新規で効果のある作用をもつ有効成分を見つけることが解決すべき課題である。すなわち、本発明は、骨塩減少によって生じる骨粗鬆症などの代謝性骨疾患の優れた骨改善作用、リウマチ改善作用および歯周病改善作用を有する治療剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】  本発明者らは、誠意努力した結果、リミチン（Ｌｉｍｉｔｉｎ）に骨改善作用、リウマチ改善作用および歯周病改善作用を有することを発見し、本発明に至った。すなわち、リミチンを有効成分とする骨量改善および骨強化剤、そして、リミチンを有効成分とするリウマチ改善剤、さらに、リミチンを有効成分とする歯周病改善剤である。
【００１５】  リミチンは、インターフェロン（以下ＩＦＮと略す）様タンパク質として、マウスにおいて３０％の構造的ホモロジーがあるが、ＩＦＮとは物質が異なる。また、ＩＦＮレセプターに結合し、ＩＦＮ調節因子を活性化する。ＩＦＮは、ウイルス感染を始めとする様々な要因で産生される物質であり、抗ウイルス作用、抗腫瘍作用、免疫調整作用などの生物活性を有するサイトカインの一種である。ＩＦＮには、α型、β型、γ型がある。
本発明で用いられるリミチンとしては、天然由来のもの、または遺伝子組換によるもののいずれをも用いることができる。
【００１６】  本発明の骨量増加剤において、リミチンは単独で使用してもよく、また他の骨量増加剤、骨吸収促進因子抑制剤、リウマチ改善剤および歯周病改善剤などと組み合わせて使用してもよい。組合せ方としては、例えば、合剤の形態でもよく、また単剤よりなる製剤を併用的に使用してもよい。
【００１７】  本発明の骨量増加剤は、経口的または非経口的に投与可能であり、例えば注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、トローチ剤、散剤、液剤などの形態に調製され、その投与形態に適した薬理学的に許容される媒体を含んでいてもよい。注射剤の場合には、ｐＨ緩衝剤、防腐剤、安定化剤、可溶化剤、滅菌等張食塩水、局所麻酔剤などが一般的に用いられる。また、製剤化は、公知の注射剤または点滴剤の処方に準じて行われ、例えばトリスグリシンバッファーなどの緩衝剤を用いることができる。
【００１８】  本発明で用いられるリミチンの投与量としては、その症状に応じた量を使用することが望ましく、一般には１０ｎｇ／日から１０ｍｇ／日程度を用いることが可能である。好ましくは、１μｇ／日から１００μｇ／日を用いることが望ましい。
【００１９】  投与期間としては、一般的には効果が認められるまで投与することが望ましく、好ましくは２週間〜１２週間である。また、その投与期間内に連続投与または間欠投与のいずれの態様も可能であり、適宜それらを組み合わせることができる。
【００２０】  本発明の骨量増加剤の投与方法としては、通常公知の態様が可能であり、注射剤の場合には、筋注、静注または皮下注にて一般的に投与される。また、ＩＦＮの徐放性製剤化を行って投与することも可能である。例えば、本発明の骨量増加剤をフィルム状として、口中で徐々に溶解または崩壊させて、口腔、咽頭などに適用することも可能である。
【実施例】
【００２１】  以下、本発明をより詳細に説明するために実施例および実験例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。【００２２】  実施例１  リミチンは、Ｏｒｉｔａｎｉ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６，６５９−６６６）に従って得た。
【試験例１】
リミチンの骨吸収抑制効果生後１０〜２０日齢のＩＣＲ系マウスの長管骨を摘出し、軟組織を除去した後、５％牛胎児血清を含むα−ＭＥＭ溶液中で骨を機械的に細切し、破骨細胞を含む全骨髄細胞を得た。この細胞約２×１０６を象牙片の上に５％牛胎児血清を含むα−ＭＥＭ溶液でスポットした。数時間後、牛乳由来塩基性シスタチン又は牛乳由来塩基性シスタチン分解物を５０ｎｇ／ｍｌとなるように添加した５％牛胎児血清を含むα−ＭＥＭ溶液を加え、５％ＣＯ２存在下、３７℃で５日間培養し、破骨細胞の骨吸収活性を調べ。
培養後、象牙片上の細胞を剥がしてヘマトキシリン染色し、画像解析装置（ＰＩＡＳＬＡ−５５５、ＰＩＡＳ社製）により画像解析して骨吸収窩（ｐｉｔ）数を測定した。測定結果から、次式で定義される骨吸収活性（％）を求め、骨吸収抑制効果を評価した。
骨吸収活性（％）
＝（試験試料添加群の骨吸収窩数／試験試料無添加群の骨吸収窩数）×１００
試験試料としては、リミチンを用いた。リミチンを添加することにより、濃度依存的に骨吸収が抑制された。結果を図１に示す。
【００２３】
【試験例２】
リミチンの骨粗鬆症モデルラットを用いた投与試験により骨量および骨強化効果を検討した。投与試験用の飼料として、ＡＩＮ−７６組成の飼料を用いた。
なお、飼料中のカルシウム量とリン量は共飼料１００ｇ当たり３００ｍｇになるようにし、カルシウム：リン比を１：１として調製した。実験動物としては、３２週齢のＳＤ系雌性ラットを用いた。このラットを、一週間予備飼育した後に卵巣摘出手術を施し、低カルシウム食で２カ月間飼育することにより、骨粗鬆症モデルラットを作成した。
投与試験は、前記ラットを、対照群、リミチン投与群６群（１試験群７匹）に分け、リミチンを１カ月間経口または静脈投与して行った。経口物としては、投与一回分のリミチンを適量の２％アテロコラーゲン水溶液、５％ゼラチン水溶液、０．５％ブドウ糖に溶解し、凍結乾燥したフイルム状経口製剤を得た。
試験飼料投与後、各試験群のラットの大腿骨を摘出し、骨塩量測定装置で骨塩量を測定し、破断特性測定装置で骨強度を測定した。結果を図２及び図３に示す。
【００２４】  図２に示したように、大腿骨の骨塩量は、対照群に比べてリミチンを経口または静脈注射した群において、高い値であった。さらに、図３に示したように、大腿骨破断力は、対照群に比べてリミチン群で統計的に有意に高い値を示した。このことから、リミチンには骨強化作用があることがわかった。前記の結果から、リミチンには骨吸収抑制効果及び骨強化作用があることがわかった。
【００２５】
【試験例３】
変形性関節症（関節の開裂の収縮）の患者２０人を１０人ずつ２群に分け、試験例２で得られた経口フィルムを１ヶ月間摂取し、飲用前と飲用後の関節の改善効果を調べた。その結果を表４に示す。図４に示すように、関節痛に対しても、各項目について痛みが軽減していることがわかった。
【００２６】
【試験例４】
６週齢のゴールデンハムスター２４匹を１週間予備飼育した後、エーテル麻酔下でＭ１の歯頸部に滅菌した手術用縫合絹糸Ｎｏ４を５重に巻き付け、Ｋｅｙｅｓらの飼料（Ｄ＃２０００：Ｋｅｙｅｓ，Ｐ．Ｈ．ａｎｄＪｏｒｄａｎ：Ａｒｃｈｓ．Ｏｒａｌ．Ｂｉｏｌ．９：３７７−４００，１９６４）で飼育することにより歯周病を発病させた。次いで、ゴールデンハムスターを、４群に分け、一日２回、各画分５μｇを適当に希釈した試験液で口腔内を約１０分間絶えず浸す処置を毎日継続して行った。処置開始から７日後に、各群につき６匹を選び、２．５％グルタルアルデヒド溶液（ｐＨ７．４）を用いて約２０分間固定灌流した後、下顎骨両側を摘出し、次の方法で歯槽骨減少量を評価した。すなわち、摘出された下顎骨両側を２．５％グルタルアルデヒド溶液で固定した後、軟Ｘ線撮影して、写真を画像解析装置（ＰＩＡＳＬＡ−５５５）を用いて解析し、Ｍ１付近のエナメルセメント境と歯槽骨頂間の面積を計測することによって、歯槽骨減少量を評価した。
【００２７】  結果を図５に示す。リミチン群のゴールデンハムスターは、対照群に比べて、歯槽骨減少量が有意に低かった。このことから、リミチンは、歯槽骨減少を抑制し、歯周病の予防及び改善に効果的であることがわかった。
【発明の効果】
【００２８】本発明の骨およびリウマチ改善剤は、骨吸収に対して抑制的に作用して骨量が増加させ、またリウマチの改善に効果があるので、骨塩減少によって生じる骨粗鬆症などの代謝性骨疾患の治療用および予防として、またリウマチ疾患の改善に有用である。さらに、歯周病予防にも有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】「リミチンと骨吸収活性の関係を示した図である。」
【図２】「リミチンと骨塩量の関係を示した図である。」
【図３】「リミチンと骨破断エネルギの関係を示した図である。」
【図４】「投与前後の各項目の関節痛者数（人）の関係を示した図である。」
【図５】「リミチンと歯槽骨免責減少量の関係を示した図である。」
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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