(57)【要約】【課題】簡易な方法により短時間に蛍光寿命の分布画像を取得できる蛍光寿命測定装置を提供することを目的とする。【解決手段】試料に励起光を照射し、試料から発する蛍光光子を複数の時間帯において測定し、測定した蛍光光子から蛍光寿命を算出する蛍光寿命測定装置１において、励起光を制御する励起光制御部２Ｂと、励起光の走査領域を特定する領域特定部２Ｄと、領域特定部２Ｄが特定した領域からの蛍光光子をもとに蛍光寿命を算出する蛍光寿命算出部２Ｅと、励起光制御部２Ｂが励起光を試料広域に照射し、照射による蛍光をもとに領域特定部２Ｄが領域を特定し、励起光制御部２Ｂが特定した領域に励起光を照射し、蛍光寿命算出部２Ｅが蛍光寿命を算出させる制御を行う蛍光寿命算出制御部２Ａと、を備える。【選択図】        図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料に励起光を照射し、該試料が励起状態から基底状態に遷移する間に発する蛍光光子を測定し、該測定した蛍光光子から蛍光寿命を算出する蛍光寿命測定装置において、
前記試料に照射する励起光の走査を制御する励起光制御手段と、
前記励起光の走査領域を特定する領域特定手段と、
前記領域特定手段によって特定された走査領域からの蛍光光子をもとに前記蛍光寿命を算出する蛍光寿命算出手段と、
前記励起光制御手段が前記励起光を前記試料広域に照射し、この照射によって発する蛍光をもとに前記領域特定手段が蛍光寿命を算出する領域を特定し、前記励起光制御手段がこの特定した領域のみに励起光を照射し、前記蛍光寿命算出手段がこの照射した領域から放出される蛍光光子を測定し、この測定した蛍光光子にもとづいて蛍光寿命を算出させる制御を行う制御手段と、
を備えたことを特徴とする蛍光寿命測定装置。
【請求項２】
前記領域特定手段は、前記励起光によって蛍光を発する領域を前記走査領域として特定することを特徴とする請求項１に記載の蛍光寿命測定装置。
【請求項３】
前記領域特定手段は、前記励起光によって所定強度の蛍光を発する領域を前記走査領域として特定することを特徴とする請求項１または２に記載の蛍光寿命測定装置。
【請求項４】
前記領域特定手段は、前記励起光によって所定強度と所定面積の蛍光を発する領域を前記走査領域として特定することを特徴とする請求項１〜３のいずれか一つに記載の蛍光寿命測定装置。
【請求項５】
前記領域特定手段は、前記励起光によって蛍光を発する領域の少なくとも一部分を含む矩形状領域を前記走査領域として特定することを特徴とする請求項１〜４のいずれか一つに記載の蛍光寿命測定装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料に励起光を照射し、励起した試料が励起状態から基底状態に遷移する間に発する蛍光を測定し、蛍光寿命を算出する蛍光寿命測定装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、生物化学分野におけるゲノム、ＤＮＡ、遺伝子、タンパク質分子等の構造解析、また、環境変化に対する応答解析を調べる上で、走査型蛍光顕微鏡による蛍光観察が有効な手段となっている。その中において、蛍光寿命の測定は、蛍光色素濃度に無関係であること、また蛍光波長が分離できないような試料においてもその違いが観察できるなどの多くの利点を有している。本発明にかかる蛍光寿命の測定は、励起光を観察対象に照射し、観察対象から放出される蛍光光子を測定し、測定した蛍光光子にもとづいて蛍光寿命を算出するものである。従来は、全試料中を励起光により一様に走査し、観察対象の有無に係わりなく蛍光寿命を算出し、蛍光寿命の分布画像を作成していた。蛍光寿命の算出には多大な時間がかかるため、蛍光寿命の算出を高効率に行う方法が提示されている（特許文献１参照）。
【０００３】
【特許文献１】特開２００３−２０２２９２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、試料の全体を一様に励起光により照射し、蛍光寿命を算出することは、観察対象外の領域の蛍光寿命を算出することになり、このような励起光の照射は、時間の浪費になるばかりでなく、励起光源の寿命を縮め、また試料への不必要な損傷を招くという問題点があった。
【０００５】
特に、蛍光光子数を複数の時間帯で測定し、蛍光寿命を算出する方法（以下、時間ゲート法と称す。）においては、１つの蛍光寿命の分布画像を作成するために数十秒から数分という長時間を要する場合もあり、観察対象が短時間に移動する場合や、観察対象自体の蛍光寿命が変化したりする場合に蛍光寿命の分布画像の作成が迅速に対応できず、蛍光寿命の経時変化が観察できないという問題点があった。
【０００６】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであって、簡易な方法により短時間に蛍光寿命の分布画像を取得できる蛍光寿命測定装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上述した課題を解決し、目的を達成するために、請求項１にかかる蛍光寿命測定装置は、試料に励起光を照射し、該試料が励起状態から基底状態に遷移する間に発する蛍光光子を複数の時間帯において測定し、該複数の時間帯で測定した蛍光光子から蛍光寿命を算出する蛍光寿命測定装置において、前記試料に照射する励起光の走査を制御する励起光制御手段と、前記励起光の走査領域を特定する領域特定手段と、前記領域特定手段によって特定された走査領域からの蛍光光子をもとに前記蛍光寿命を算出する蛍光寿命算出手段と、前記励起光制御手段が前記励起光を前記試料広域に照射し、この照射によって発する蛍光をもとに前記領域特定手段が蛍光寿命を算出する領域を特定し、前記励起光制御手段がこの特定した領域のみに励起光を照射し、前記蛍光寿命算出手段がこの照射した領域から放出される蛍光光子を測定し、この測定した蛍光光子にもとづいて蛍光寿命を算出させる制御を行う制御手段と、を備えたことを特徴とする。
【０００８】
この請求項１の発明によれば、励起光を試料広域に走査させ、蛍光を発する領域を検知し、検知した領域にもとづいて蛍光寿命を算出する領域を特定し、この特定した領域のみに蛍光寿命算出のための励起光を照射し、短時間に蛍光寿命の分布画像が取得できる。
【０００９】
また、請求項２にかかる蛍光寿命測定装置は、上記発明において、前記領域特定手段は、前記励起光によって蛍光を発する領域を前記走査領域として特定することを特徴とする。
【００１０】
また、請求項３にかかる蛍光寿命測定装置は、上記発明において、前記領域特定手段は、前記励起光によって所定強度の蛍光を発する領域を前記走査領域として特定することを特徴とする。
【００１１】
また、請求項４にかかる蛍光寿命測定装置は、上記発明において、前記領域特定手段は、前記励起光によって所定強度と所定面積の蛍光を発する領域を前記走査領域として特定することを特徴とする。
【００１２】
また、請求項５にかかる蛍光寿命測定装置は、上記発明において、前記領域特定手段は、前記励起光によって蛍光を発する領域の少なくとも一部分を含む矩形状領域を前記走査領域として特定することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１３】
本発明にかかる蛍光寿命測定装置は、励起光を試料広域に走査させ、蛍光を発する領域を検知し、検知した領域にもとづいて蛍光寿命を算出する領域を特定し、この特定した領域のみに蛍光寿命算出のための励起光を照射し、短時間に蛍光寿命の分布画像が取得できるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（実施の形態）
以下に添付図面を参照して、この発明にかかる蛍光寿命測定装置の実施の形態を詳細に説明する。
【００１５】
図１は、この発明の実施の形態である蛍光寿命測定装置１の構成概要を示すブロック図である。制御部２からの制御信号により、レーザ光源３からパルス状、正弦波状、または連続な励起光が発振され、コリメータレンズ４とＮＤフィルタ５とを順次介し、ダイクロイックミラー６に入射する。ダイクロイックミラー６は、励起光の波長成分の光を反射し、蛍光の波長成分の光を透過するため、励起光はダイクロイックミラー６により反射され、ガルバノミラーユニット７に入射する。ガルバノミラ−ユニット７は、制御部２からの制御信号により、１対のミラーを可変に制御し入射した励起光を試料１４上の所定面を走査させる機能を有している。
【００１６】
ガルバノミラーユニット７に入射した励起光は、所定の光路に制御されて出射し、瞳投影レンズ８を介して反射ミラー９で反射される。反射ミラー９で反射した励起光は、観察鏡筒１０と結像レンズ１１とハーフミラー１２と対物レンズ１３とを順次介し、試料１４に集光する。ハーフミラー１２は、観察用照明ユニット１５からの照明光を反射させて試料１４を照明し、観察鏡筒１０から試料１４を目視観察できるようにしている。
【００１７】
試料１４に集光した励起光により試料１４は励起され、励起状態から基底状態に遷移する間に試料１４は蛍光を発する。試料１４から発した蛍光は、励起光が通る光路と同じ光路をダイクロイックミラー６まで逆行し、ダイクロイックミラー６を透過し、集光レンズ１６とピンホール１７と吸収フィルタ１８とを順次介して光検出器１９に入射する。
【００１８】
時間ゲート法では、前記励起光は、一般に低速繰返しのパルス波であり、光検出器１９に入射した蛍光は電気信号に変換され、複数の時間帯に設定された複数の時間ゲートからなるゲート回路２０を介して、前記複数の時間ゲートに対応した複数のカウンタからなるカウンタ２１により、それぞれ前記電気信号を蛍光光子数としてカウントする。カウントされた蛍光光子数は制御部２に出力される。制御部２は入力した蛍光光子数と蛍光光子数をカウントした複数の時間帯とにもとづいて蛍光寿命の算出を行い、算出した蛍光寿命を表示装置２２に出力し、表示装置２２は、入力した蛍光寿命にもとづいて蛍光寿命の分布画像を表示する。
【００１９】
図２は、制御部２の詳細を示す概要構成ブロック図である。制御部２は、蛍光寿命算出制御部２Ａと、励起光制御部２Ｂと、蛍光画像取得部２Ｃと、領域特定部２Ｄと、蛍光寿命算出部２Ｅとを有している。
【００２０】
蛍光寿命算出制御部２Ａは、励起光制御部２Ｂを制御して励起光の出射タイミングを制御し、蛍光寿命算出部２Ｅを制御して蛍光寿命の算出タイミングを制御するとともに、蛍光寿命算出部２Ｅが算出した蛍光寿命を入力し、表示装置２２に出力する。励起光制御部２Ｂは、レーザ光源３を制御して励起光であるレーザ光の出射を制御し、ガルバノミラーユニット７を制御して励起光の走査を制御するとともに、励起光の走査を制御している制御信号を蛍光画像取得部２Ｃに出力する。
【００２１】
蛍光寿命算出部２Ｅは、ゲート回路２０を制御して複数の時間ゲートを制御するとともに、カウンタ２１から蛍光光子数を入力して蛍光寿命を算出し、算出した蛍光寿命を蛍光寿命算出制御部２Ａに出力する。
【００２２】
蛍光画像取得部２Ｃは、光検出器１９が蛍光から電気信号に変換した電気信号と励起光制御部２Ｂが励起光の走査制御を行う制御信号とを入力し、２次元の蛍光画像を作成し、作成した２次元の蛍光画像を領域特定部２Ｄに出力する。領域特定部２Ｄは、入力した２次元の蛍光画像から蛍光寿命を算出すべき領域を特定し、特定した領域を蛍光寿命算出制御部２Ａに出力する。
【００２３】
まず、蛍光寿命算出制御部２Ａは、励起光制御部２Ｂに指示出力すると、励起光制御部２Ｂはレ−ザ光源３とガルバノミラーユニット７とに制御信号を出力し、レーザ光源３からは励起光であるレーザ光が発振され、ガルバノミラーユニット７は、励起光が試料１４の広域を走査するように励起光を制御する。この動作時の励起光は、連続光、もしくは高速繰返しのパルス光、および／または高パルス波高値の励起光であることが望ましい。
【００２４】
励起光が試料１４の広域を走査することによって、蛍光物質が存在する領域から蛍光が発せられ、蛍光は、励起光が通る光路と同じ光路を逆行してダイクロイックミラー６を透過し、光検出器１９に到達する。光検出器１９は、到達した蛍光をその蛍光強度に対応する電気信号に変換し、電気信号を蛍光画像取得部２Ｃに出力する。
【００２５】
蛍光画像取得部２Ｃは、光検出器１９からの電気信号と、励起光制御部２Ｂからの励起光の走査制御を行う制御信号とを入力し、励起光が試料１４の広域を走査した領域の２次元の蛍光画像を作成し、領域特定部２Ｄに出力する。領域特定部２Ｄは、入力した２次元画像から所定強度と所定面積とを満たす領域を特定し、この特定した領域を蛍光寿命算出制御部２Ａに出力する。ここまでの過程は、全画面の全ての点について蛍光寿命を算出する時間に比較して桁違いに速い速度で実行することができる。
【００２６】
図３は、励起光が試料広域３０を走査する様子を示した図であり、この時点では、蛍光寿命の算出対象である核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃとそれらを内包する蛍光寿命の算出対象外である細胞２５Ａ，２５Ｂ，２５Ｃの存在とその存在領域は分らない。従来、核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃの存在領域に係わらず試料広域３０の全域に対して蛍光寿命の算出を行っていたため、蛍光寿命の分布画像を得るために多大な時間を要していた。
【００２７】
図４は、蛍光画像取得部２Ｃが作成した２次元の蛍光画像を示している。この２次元の蛍光画像は、細胞２５Ａ，２５Ｂ，２５Ｃと内包される核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃとの存在とその存在領域とを示している。蛍光画像取得部２Ｃは、作成した２次元の蛍光画像を領域特定部２Ｄに出力する。領域特定部２Ｄは、入力した２次元の蛍光画像を蛍光強度とその蛍光強度を満たす面積とにより選別し、核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃを蛍光寿命の算出対象として特定し、その位置と領域とを蛍光寿命算出制御部２Ａに出力する。２次元の蛍光画像には、蛍光を発する細胞２５Ａ，２５Ｂ，２５Ｃも示されているが、これらは、所定の蛍光強度を満たさないことにより、蛍光寿命の算出の対象外としている。
【００２８】
蛍光寿命算出制御部２Ａは、核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃの領域にのみ励起光を照射し、蛍光寿命の算出を行うこととする。時間ゲート法による蛍光寿命の算出において励起光の照射は、上述の蛍光画像を取得するための照射方法と異なり、比較的低波高値のパルス光で、繰返し間隔の長い励起光を同じ点に相当数の所定回数照射する必要がある。この照射によって放出された蛍光光子数にもとづいて蛍光寿命の算出を行う。したがって、まず、蛍光寿命算出制御部２Ａは、蛍光寿命の算出のために核３１Ａの所定の点に励起光を照射するよう励起光制御部２Ｂに指示出力し、励起光制御部２Ｂは、レ−ザ光源３とガルバノミラーユニット７とに制御信号を出力し、レーザ光源から発振した励起光は核３１Ａの所定の点を照射する。
【００２９】
励起光が照射された核３１Ａの所定の点から発した蛍光は、光検出器１９まで到達し、光検出器１９により、蛍光が電気信号に変換され、変換された電気信号は、ゲート回路２０とカウンタ２１とを順次介することにより、設定された時間ゲートに入射した蛍光光子数がカウントされ、蛍光寿命算出部２Ｅに出力される。核３１Ａの所定の点に対する励起光の照射と蛍光光子数のカウントとを所定回繰り返し、蛍光寿命算出部２Ｅは、設定された時間ゲートに入射した蛍光光子数にもとづいて蛍光寿命の算出を行う。
【００３０】
核３１Ａの所定の点の蛍光寿命が算出されると蛍光寿命算出部２Ｅは、算出された蛍光寿命を蛍光寿命算出制御部２Ａに出力し、蛍光寿命算出制御部２Ａは、核３１Ａの所定の点の算出された蛍光寿命とその点の情報を表示装置２２に出力するとともに、核３１Ａの次の所定の点の蛍光寿命の算出のために上述と同様な指示出力を励起光制御部２Ｂに対して行う。このようにして、核３１Ａ全体の蛍光寿命の算出が終了したならば、蛍光寿命算出制御部２Ａは、核３１Ｂ全体の蛍光寿命の算出を行うよう励起光制御部２Ｂに指示出力を行い、核３１Ｂ全体の蛍光寿命の算出が終了したならば、同様に核３１Ｃ全体の蛍光寿命の算出を行うよう励起光制御部２Ｂに指示出力を行う。
【００３１】
図５は、蛍光寿命の算出対象である核３１Ａに励起光を照射し、核３１Ａの蛍光寿命の算出が終了次第、順次核３１Ｂ，３１Ｃに対して励起光の照射と蛍光寿命の算出とを行い、さらに、核３１Ｃの蛍光寿命の算出が終了次第、再び核３１Ａの蛍光寿命の算出を行うことを示している。
【００３２】
このようにして蛍光寿命算出制御部２Ａは、核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃ全体の蛍光寿命を入力するとともに、入力した蛍光寿命と位置の情報を表示装置２２に出力する。表示装置２２は、入力した蛍光寿命とその位置の情報にもとづいて、蛍光寿命の分布画像を作成して表示する。図６は、表示装置２２が表示した蛍光寿命の分布画像を示している。核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃに異なる蛍光寿命の成分が存在していることが分かる。さらに、上述したように、表示装置２２には全画面に対して、非常に限られた範囲にある核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃの蛍光寿命とその位置情報とが入力され、核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃの蛍光寿命の分布画像は、極めて高速に形成されるので、繰返し測定によりその蛍光寿命の比較的早い経時変化も表示できる。核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃの領域が移動するような場合は、核３１Ｃの蛍光寿命の算出が終了した時点で、試料広域３０の励起光の走査を行い領域の特定を再度行い、核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃの領域の移動に追随して蛍光寿命の分布画像を表示するようにしてもよい。
【００３３】
励起光は、蛍光寿命の算出対象外の領域をスキップし照射しているため、不必要な照射が避けられ、短時間に蛍光寿命分布が作成できるのみならず、不必要な励起光の照射が抑制できレーザ光源の寿命を延ばすこともできる。上述の実施の形態では、蛍光寿命の算出の順を核３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃとしたが、観察の重要度に対応して、あるいは技術的な難易度に対応してこれらの順を入れ替えてもよい。
【００３４】
図７は、蛍光寿命の分布画像を取得するまでの動作を説明するフローチャートである。まず、励起光制御部２Ｂは、励起光を制御して試料広域３０を走査させる（ステップＳ１０１）。次に、この励起光の走査によって蛍光画像取得部２Ｃは、２次元の蛍光画像を取得する（ステップＳ１０２）。次に、領域特定部２Ｄは、入力した２次元の蛍光画像に所定の蛍光強度を有する領域が有るかを判断する（ステップＳ１０３）。所定強度を満たす部分が無ければ（ステップＳ１０３，Ｎｏ）、蛍光寿命の算出対象が存在しないと判断し、再び励起光による試料広域３０の走査を行う（ステップＳ１０１）。この場合、所定強度を変化させることにより、蛍光寿命の算出対象を選別することができる。所定強度を満たす部分が有れば（ステップＳ１０３，Ｙｅｓ）、次に、所定面積を満たしているかを判断する（ステップＳ１０４）。所定面積を満たす部分が無ければ（ステップＳ１０４，Ｎｏ）、蛍光寿命の算出対象が存在しないと判断し、再び励起光による試料広域３０の走査を行う（ステップＳ１０１）。この所定面積を基準にすることで、ノイズや迷光による単なる輝点を除去できる。また、逆に、この判断（ステップＳ１０４）を除くことにより、新たな蛍光寿命の算出領域を発見することもできる。
【００３５】
所定面積を満たす部分が有れば（ステップＳ１０４，Ｙｅｓ）、蛍光寿命の算出対象が存在すると判断し、領域特定部２Ｄは蛍光寿命の算出領域を特定する（ステップＳ１０５）。次に、蛍光寿命算出制御部２Ａは、領域特定部２Ｄが特定した領域のみの蛍光寿命の算出を行うため、励起光制御部２Ｂに励起光の照射を指示出力し、励起光制御部２Ｂは、特定領域に励起光を照射する（ステップＳ１０６）。特定領域から発した蛍光にもとづいて蛍光寿命算出部２Ｅは、蛍光寿命の算出を行い、蛍光寿命算出制御部２Ａに出力する（ステップＳ１０７）。蛍光寿命算出制御部２Ａは、入力した蛍光寿命とその位置を表示装置２２に出力し（ステップＳ１０８）、表示装置２２は、蛍光寿命と位置とにもとづいて蛍光寿命の分布画像を表示する（ステップＳ１０９）。さらに、蛍光寿命の分布画像を表示した（ステップＳ１０９）後、蛍光寿命の算出対象の経時変化を観察するため、特定領域に励起光を照射する（ステップＳ１０６）動作に戻るようにする。また、蛍光寿命の算出対象の移動に対応するために、特定領域に励起光を照射する（ステップＳ１０６）と励起光による試料広域３０の走査（ステップＳ１０１）とを組み合わせるようにさせると、蛍光寿命の算出対象の経時変化と移動との両方が観察できる。
【００３６】
上述の実施の形態では、領域特定部２Ｄは、所定の基準として蛍光強度等にもとづいて領域を特定したが、観察状況に応じて、または技術上の観点に応じて変化させることが可能である。図８は、領域特定部２Ｄが、核３１Ａを含む矩形状領域を特定領域３２Ａとしていることを示している。これは、核３１Ａの形状が扁平であった場合、不規則な形状に沿って励起光を照射し、走査することにより不要な技術的過程を増やさずに、より簡易に蛍光寿命の分布画像を取得するためである。
【００３７】
図９は、核３１Ａのみならず細胞２５Ａ全体を含む矩形状に領域３３Ａを特定した場合を示している。このようにすると、細胞２５Ａと核３１Ａとの対比をも見ることができからである。
【００３８】
図１０は、核３１Ａに所定のマージンを含んだ領域３４Ａを特定した場合を示している。このようにすると、核３１Ａの領域が経時的に微妙に変化する場合にも対応することができるからである。
【００３９】
なお、上述の実施の形態では、領域特定部２Ｄは、所定の基準を用いて領域を自動的に特定するようにしていたが、蛍光画像取得部２Ｃが作成した２次元の蛍光画像を観察者が観察することにより、観察者が領域を特定するようにしてもよい。観察者の個々の要求に応じることができるからである。また、この実施の形態は、時間ゲート法で説明したが、本発明はすべての蛍光寿命の測定に有効であることは自明である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】この発明の実施の形態である蛍光寿命測定装置の概要構成を示すブロック図である。
【図２】この発明の実施の形態の制御部の概要構成を示すブロック図である。
【図３】この発明の実施の形態の励起光が試料広域を走査する様子を説明する説明図である。
【図４】この発明の実施の形態の蛍光画像取得部が取得する２次元の蛍光画像を示す説明図である。
【図５】この発明の実施の形態の励起光が特定領域のみを照射する様子を説明する説明図である。
【図６】この発明の実施の形態の表示装置が表示する蛍光寿命の分布画像を示す説明図である。
【図７】この発明の実施の形態の制御部の動作を示すフローチャートである。
【図８】この発明の実施の形態の領域特定部が特定する領域を示す説明図である。
【図９】この発明の実施の形態の領域特定部が特定する領域を示す説明図である。
【図１０】この発明の実施の形態の領域特定部が特定する領域を示す説明図である。
【符号の説明】
【００４１】
１  蛍光寿命測定装置
２  制御部
２Ａ  蛍光寿命算出制御部
２Ｂ  励起光制御部
２Ｃ  蛍光画像取得部
２Ｄ  領域特定部
２Ｅ  蛍光寿命算出部
３  レーザ光源
４  コリメータレンズ
５  ＮＤフィルタ
６  ダイクロイックミラー
７  ガルバノミラーユニット
８  瞳投影レンズ
９  反射ミラー
１０  観察鏡筒
１１  結像レンズ
１２  ハーフミラー
１３  対物レンズ
１４  試料
１５  観察用照明ユニット
１６  集光レンズ
１７  ピンホール
１８  吸収フィルタ
１９  光検出器
２０  ゲート回路
２１  カウンタ
２２  表示装置
２５Ａ，２５Ｂ，２５Ｃ  細胞
３０  試料広域
３１Ａ，３１Ｂ，３１Ｃ  核
３２Ａ，３３Ａ，３４Ａ  特定領域
【図１】
2005121602.tif 000003
【図２】
2005121602.tif 000004
【図３】
2005121602.tif 000005
【図４】
2005121602.tif 000006
【図５】
2005121602.tif 000007
【図６】
2005121602.tif 000008
【図７】
2005121602.tif 000009
【図８】
2005121602.tif 000010
【図９】
2005121602.tif 000011
【図１０】
2005121602.tif 000012