(57)【要約】【課題】  安定した小胞体を形成し、血中滞留性が高く、またリポソーム膜層に高濃度に取り込まれるボロン化合物の提供。【解決手段】  一般式（１）【化１】2005343858.tif 000006（式中、Ｒ1及びＲ2は同一又は異なって炭素数６〜２４のアルキル基又はアルケニル基を示し、●はＢＨを示し、○は炭素原子を示す。）で表されるカルボラン脂質誘導体又はその塩。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2005343858.tif 000005
（式中、Ｒ1及びＲ2は同一又は異なって炭素数６〜２４のアルキル基又はアルケニル基を示し、●はＢＨを示し、○は炭素原子を示す。）
で表されるカルボラン脂質誘導体又はその塩。
【請求項２】
請求項１記載の化合物又はその塩を膜構成成分として含有するリポソーム。
【請求項３】
請求項１記載の化合物又はその塩及び脂質類を膜構成成分として含有するリポソーム。
【請求項４】
薬物が内封されているものである請求項２又は３記載のリポソーム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌などの標的細胞・組織を認識しホウ素化合物を選択的に集積させることができ、ドラッグキャリアーとして有用なカルボラン脂質誘導体及びそれを用いたリポソームに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌の中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）は、ホウ素（ボロン）化合物をがん細胞に集積させ、そこに熱中性子を照射して局所的にがん細胞を破壊する治療法で、その多くはボロカプテイト（BSH：borocaptate sodium）やパラボロノフェニルアラニン（BPA：p-boronophenylalaine）等のボロン化合物をリポソームに内封して行われている。しかし、これらの方法では、ボロン化合物をリポソームに高濃度に内封するという操作が必要であり、効率やコスト面から問題が多いのが実状である。
【０００３】
また、リポソームにボロンを内封するよりもリポソームの脂質二重膜内にボロンを取り込むことにより、腫瘍細胞組織へボロンを選択的に集積させることができ、癌の中性子捕捉療法にとって有効であることが知られている（非特許文献１，２参照）。
【０００４】
先に、下記一般式（Ａ）で表されるボロン化合物が小胞体を作り、また膜構成成分の一部として、ジステアロイルホスファチジルコリン（DSPC）とリポソーム膜を形成することが知られている（非特許文献３〜８参照）。しかしながら、小胞の安定性やリポソーム膜層のボロン濃度が十分ではなかった。
【０００５】
【化１】
2005343858.tif 000002
【０００６】
【非特許文献１】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92, 1367-1370
【非特許文献２】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, 95, 2531-2534
【非特許文献３】Angew. Chem., Int. Ed. Engl. 1993, 32, 950-984
【非特許文献４】Chem. Rev. 1998, 98, 1515-1562
【非特許文献５】Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999, 96, 238-241
【非特許文献６】J. Med. Chem. 1997, 40, 2825-2830
【非特許文献７】Bull. Chem. Soc. Jpn. 2000, 73, 231-235
【非特許文献８】Chem. Pharm. Bull. 2000, 48, 1034-1038
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の目的は、安定した小胞体を形成し、血中滞留性が高く、またリポソーム膜層に高濃度に取り込まれるボロン化合物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで、本発明者らは、種々検討した結果、一般式（１）で表される化合物が安定した小胞体を形成すること、また、膜構成成分として、リン脂質等の脂質類と安定したリポソームを形成し、リポソーム構成膜に高濃度に取り込まれることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の一般式（１）
【００１０】
【化２】
2005343858.tif 000003
【００１１】
（式中、Ｒ1及びＲ2は同一又は異なって炭素数６〜２４のアルキル基又はアルケニル基を示し、●はＢＨを示し、○は炭素原子を示す。）
で表されるカルボラン脂質誘導体又はその塩を提供するものである。
また、本発明は、一般式（１）で表されるカルボラン脂質誘導体又はその塩を膜構成成分として含有するリポソームを提供するものである。
また、本発明は、一般式（１）で表されるカルボラン脂質誘導体又はその塩及び脂質類を膜構成成分として含有するリポソームを提供するものである。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の化合物（１）は安定した小胞体を形成し、リポソームの脂質二重膜内に高濃度にボロンが取り込まれることにより、腫瘍細胞組織へボロンを選択的に集積させることができることから癌中性子捕捉療法剤として有用である。また、このリポソームには抗癌剤や遺伝子類等を内封することもでき、ドラッグキャリアーとしても有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
式（１）中、Ｒ1及びＲ2は同一又は異なった炭素数６〜２４のアルキル基又はアルケニル基を示すが、炭素数８〜２２のアルキル基又はアルケニル基、特に炭素数１０〜２０のアルキル基又はアルケニル基が好ましい。これらのアルキル基及びアルケニル基は分岐していてもよい。
かかるアルキル基又はアルケニル基としては、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、ｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−ヘプタデシル基、ｎ−オクタデシル基、オレイル基等が挙げられる。
【００１４】
本発明化合物（１）の塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。
【００１５】
本発明化合物（１）は、例えば以下の製造方法により得ることが出来る。
【００１６】
【化３】
2005343858.tif 000004
【００１７】
（式中、Ｘ1及びＸ2はそれぞれハロゲン原子を示し、Ｒ1、Ｒ2、●及び○は前記と同じ。）
【００１８】
すなわち、長鎖アルコール（２）に２−ハロゲノメチル−３−クロロ−１−プロペン（３）を反応させて化合物（４）を得、この化合物（４）をホウ水素化後、過酸を反応させて化合物（５）とし、次いで、化合物（５）にプロパギルハライド（６）を反応させて化合物（７）を得る。この化合物（７）にデカボランをカップリングさせることにより本発明化合物（１）が得られる。また本発明化合物（１）に、ナトリウムメトキシド等の塩基を反応させて、化合物（１）の塩を得ることができる。
以下、上記各反応工程毎に説明する。
【００１９】
長鎖アルコール（２）と２−ハロゲノメチル−３−クロロ−１−プロペン（３）との反応は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を溶媒とするか、又はそれとジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等との混合溶媒中、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化リチウム等の水素化アルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物；又は炭酸カリウム、炭酸ナトリウム等の炭酸アルカリ金属塩等の塩基の存在下、室温から還流温度で１時間〜１００時間、好ましくは還流温度で５０〜１００時間反応させることにより行なわれる。
【００２０】
化合物（４）から化合物（５）への反応は、ホウ水素化後、過酸を反応させることにより行われる。ホウ水素化は、例えば化合物（４）をジメチルエーテル、ＴＨＦ等の溶媒に溶解し、硫化ジメチル・水素化ホウ素等を室温から還流温度で２〜８時間反応させることにより行なわれる。過酸による反応は、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の塩基の存在下、過酸化水素等の過酸を加え、０度〜室温で５時間〜３６時間反応させることにより行われる。
【００２１】
化合物（５）とプロパギルハライド（６）との反応は、アルゴン雰囲気下、ＴＨＦ又はそれとＤＭＦ、ＤＭＳＯ等との混合溶媒中、水素化ナトリウム、水素化カリウム、水素化リチウム等の水素化アルカリ金属；水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物；又は炭酸カリウム、炭酸ナトリウム等の炭酸アルカリ金属塩等の塩基の存在下、室温から還流温度で１時間〜１０時間反応させることにより行なわれる。
【００２２】
化合物（７）とデカボランのカップリングは、アセトニトリル、トルエン等の溶媒に溶解し、還流温度で２時間〜２０時間反応させることにより行われる。
【００２３】
得られた本発明化合物（１）又はその塩の単離精製手段は、洗浄、抽出、各種クロマトグラフィー等を適宜組み合せて行なうことができる。
【００２４】
本発明化合物（１）又はその塩は、単独で小胞体を形成するが、通常のリポソーム形成性脂質類に加え、リポソームの膜構成成分の一部として用いることもできる。
【００２５】
ここで、本発明化合物（１）の他に、リポソームの膜構成成分として用いられる脂質類としては、リン脂質、グリセロ糖脂質及びスフィンゴ糖脂質の他、これらの脂質に、１級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基又は第４級アンモニウム基が導入されたカチオン性脂質、これらの脂質にポリアルキレングリコールが導入された脂質、さらに各種細胞、組織等に対するリガンドが結合した脂質類が挙げられる。
【００２６】
リン脂質としては、例えばホスファチジルコリン（大豆ホスファチジルコリン、卵黄ホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン等）、ホスファチジルエタノールアミン（ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン等）、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、水素添加リン脂質等の天然又は合成のリン脂質等が挙げられる。
【００２７】
グリセロ糖脂質としては、例えばスルホキシリボシルグリセリド、ジグリコシルジグリセリド、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド、グリコシルジグリセリド等が挙げられる。スフィンゴ糖脂質としては、例えばガラクトシルセレブロシド、ラクトシルセレブロシド、ガングリオシド等が挙げられる。
【００２８】
カチオン性脂質としては、上記リン脂質、グリセロ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質に、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアンモニウム基、モノアシルオキシアルキル−ジアルキルアンモニウム基、ジアシルオキシアルキル−モノアルキルアンモニウム基等の第４級アンモニウム基が導入された脂質が挙げられる。また、ポリアルキレングリコール修飾脂質としては、上記リン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質に、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール等が修飾した脂質、例えばジ−Ｃ12-24アシル−グリセロール−ホスファチジルエタノールアミン−Ｎ−ＰＥＧ等が挙げられる。
【００２９】
また必要に応じて膜安定化剤としてコレステロール類、抗酸化剤としてトコフェロール類、ステアリルアミン、ジセチルホスフェート、ガレグリオシドを用いてもよい。
【００３０】
また、標的細胞、標的組織、標的病巣に対するリガンドとしては、トランスフェリン、葉酸、ヒアルロン酸、ガラクトース、マンノースなどの癌細胞に対するリガンド等が挙げられる。また、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体もリガンドとして使用できる。
【００３１】
得られたリポソームは、安定で、かつリポソーム膜上高濃度にボランを含有しているので、癌中性子捕捉療法剤として使用できる。
また、作成されるリポソームの内部には、抗癌剤や遺伝子類等の薬物を含有させることもできる。これらの薬物を含有するリポソームは、化学療法剤としても、また癌中性子捕捉療法剤としても使用できる。
【００３２】
リポソームの製造には、公知のリポソームの調製法を適用することができ、例えばバンガム（Bangham）らのリポソーム調製法［ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー(J. Mol. Biol.), 13, 238(1965)］、エタノール注入法［ジャーナル・オブ・セル・バイオロジー(J. Cell. Biol.), 66, 621(1975)］、フレンチプレス法［フェブス・レター(FEBS Lett.), 99, 210(1979)］、凍結融解法［アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス(Arch. Biochem. Biophys.), 212, 186(1981)］、逆相蒸発法［プロシーディング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エー(Proc. Natl. Acad. Sci. USA), 75, 4194(1978)］等が挙げられる。
【００３３】
本発明化合物（１）又はその塩と脂質類との構成比は、質量比で１：１００〜１００：１、特に１：５０〜５０：１が好ましい。また、脂質類は２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【実施例】
【００３４】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明は何らこれらに限定されるものではない。
以下、実施例で用いる略語は次のとおりである。
ＤＳＰＣ：ジステアロイルホスファチジルコリン
ＤＳＰＥ：ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン
ＰＥＧ−ＤＳＰＥ:ポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン
【００３５】
実施例１
（１）３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロペンの製造；
水素化ナトリウム（16.0g, 0.34mol）のTHF（100mL）溶液に、アルゴン存在下０℃でヘキサデカノール(26.9g, 0.105mol)のTHF(100mL)溶液を加えた。室温に戻し、４時間攪拌した後、再度０℃に戻し２−クロロメチル−３−クロロ−１−プロペンを加えた。室温で１時間、還流温度で８９時間攪拌した。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液(50mL)で急冷し、エーテルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン：アセトン＝５０：１)にて精製し、３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−プロペン(25.1g, 44.3mmol, 収率93%)を白色結晶として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ：5.14 (s, 2H), 3.94 (s, 4H), 3.38 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 1.55 (m, 4H), 1.23 (brs, 56H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 6H)
13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ：143.3, 113.3, 71.5, 70.6, 31.9, 29.7, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 26.2, 22.7, 14.1
IR (KBr) 2916, 2848, 2804, 2731, 1666, 1473, 1380, 1109, 1078, 1045, 1010 cm-1; HRMS (ESI) m/z (M+Na)+ calcd for C38H76O2Na 587.5743, found 587.5795.
【００３６】
（２）３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−プロパン−１−オールの製造；
３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロペンのTHF（300mL）溶液にアルゴン雰囲気下０℃で硫化ジメチル水素化ホウ素(31.9mmol)を加えた。室温で６時間攪拌後、再び０℃に戻し水酸化ナトリウム水溶液(3M, 100mL)を加えた。次いで０℃で２４時間撹拌後、過酸化水素(30%, 100mL)を加えた。室温で２４時間撹拌後、反応液に炭酸カリウム(5.0g)を加えて、エーテルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣をヘキサン／エチル酢酸(30/1)溶媒に溶解し、二酸化ケイ素を充填したショートカラムクロマトグラフィーにかけ、ヘキサンより再結晶化して３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−プロパン−１−オール(13.3g, 22.8mmol, 収率71%)を透明結晶として得た。
1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ：3.74 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.50 (m, 4H), 3.38 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.07 (quint, J = 5.6 Hz, 1H), 1.53 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 1.23 (brs, 56H), 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 6H)
13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ：71.8, 71.2, 65.1, 41.4, 32.1, 29.9, 29.8, 29.7, 29.6, 26.3, 22.9, 14.3
IR (KBr) 3328, 2839, 2744, 1471, 1377, 1313, 1232, 1213, 1191, 1116, 1041 cm-1; HRMS (ESI) m/z (M+Na)+ calcd for C38H78O3Na 605.5848, found 605.5816.
【００３７】
（３）３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシ−１−プロパギルオキシプロパンの製造；
水素化ナトリウム（16.0g, 0.34mol）のTHF（100mL）溶液に、アルゴン雰囲気下０℃で３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−プロパン−１−オール(3.0g, 5.2mmol)のTHF(100mL)溶液を加えた。室温で３時間撹拌後、再び０℃に戻し、プロパギルブロマイド(1.6mL, 15.4mmol)を加えた。次いで室温で２０時間攪拌した。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液(20mL)で急冷し、エーテルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン：アセトン＝３０：１)にて精製し、３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシ−１−プロパギルオキシプロパン(1.87g, 3.0mmol, 収率58%)の黄色結晶を得た。
1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ：4.41 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.55 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.43 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 3.38 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.39 (s, 1H), 2.14 (m, 1H), 1.52 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 1.24 (brs, 56H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 6H)
13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ：74.2, 71.4, 69.2, 69.0, 58.6, 40.4, 32.1, 29.9, 29.8, 29.7, 29.6, 26.4, 22.9, 14.3
IR (KBr) 3249, 2912, 2848, 2798, 1508, 1473, 1458, 1359, 1087 cm-1;
HRMS (ESI) m/z (M+Na)+ calcd for C41H80O3Na 643.6005, found 643.5989.
【００３８】
（４）３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−カルボランの製造；
アセトニトリル(1.56mL, 29.6mmol)のトルエン(20mL)溶液に３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシ−１−プロパギルオキシプロパン(0.61g, 0.99mmol)とデカボラン(0.15g, 1.2mmol)を加え、還流温度で６時間攪拌した。反応液と減圧濾過し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン：アセトン＝３０：１)にて精製し、３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−カルボラン(0.61g, 0.83mmol, 収率80%)の白色結晶を得た。
1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ：3.97 (brs, 1H), 3.51 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.40-1.40 (m, 10H), 2.09 (quint, J = 6.0 Hz, 1H), 1.51 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 1.24 (brs, 56H), 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 6H)
13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ：72.3, 71.6, 70.4, 68.9, 57.7, 40.4, 32.1, 29.9, 29.8, 29.7, 29.6, 26.4, 22.9, 14.3
IR (KBr) 2918, 2850, 2572, 1465, 1377, 1112, 1095,1012 cm-1;
MS (MALDI) m/z (M+Na)+ C41H90O3B10Na 763.8.
【００３９】
実施例２
（３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−ニド−カルボランナトリウムの製造；
ナトリウムメチルアルコキシド(0.68g, 12.5mmol)のメタノール(15mL)溶液に３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−カルボラン(0.92g, 1.25mmol)を加え、還流温度で１４時間攪拌した。反応液を水(20mL)で希釈し、酢酸エチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル＝３０：１〜０：１)にて精製し、（３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−ニド−カルボランナトリウム塩の白色結晶を得た。
1H-NMR (CDCl3, 400MHz) δ：3.77(d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.52 (m, 6H), 3.40 (t, J = 6.4 Hz, 4H), 2.09 (m, 1H), 1.54 (m, 4H), 1.24 (brs, 56H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 6H)
13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ：41.05, 32.31, 29.93, 29.87, 29.57, 26.02, 22.90, 14.32
IR (KBr) 3419, 3251, 2850, 2520, 1714, 1614, 1456, 1373 cm-1;
MS (MALDI) m/z (M+Na)+ C41H89O3B9Na2 774.8.
【００４０】
実施例３
ホウ素イオンクラスターのリポソーム化；
（３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−ニド−カルボランナトリウム(1.0mg)をカルゼインを含む水(0.5mg/5mL)に懸濁し、懸濁液が透き通るまで熱した（およそ５０℃）。室温に冷却後、再び懸濁液をセファデックスG-７５カラムクロマトグラフィーにて水より溶出した。2mLずつ５分画をウラニルアセテートで染色し、透過型電子顕微鏡法で観察した。図１a及び図１bに１分画と２分画におけるリポソームの透過型電子顕微鏡写真を示す。１分画における小胞サイズは400〜600nm、２分画は150〜200nmと推定された。
【００４１】
実施例４
DSPC：コレステロール：（３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−ニド−カルボランナトリウム（１：１：Ｘ、Ｘ＝０〜１）と、DSPC：コレステロール：（３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−ニド−カルボランナトリウム：PEG-DSPE（１：１：Ｘ：０．１１，Ｘ＝０〜１）の脂質をそれぞれクロロホルム：ジエチルエーテル（１：１ v/v）の有機溶媒に溶解しエマルジョンとした。これを用いて逆相蒸発法（REV法）でリポソームを調製した。エマルジョンは１分間超音波処理し、真空下で６０℃、１時間ロータリーエバポレートで回転しながらエバポレートした。次いで、６０℃のエクストルーダーで100nmのポリカーボネート膜を通過させて粒径を揃えた。脂質濃度はリン検出法より概算した。ホウ素含有量は、ＩＣＰ原子発光分析法（ICP-AES）により測定した。結果を図２に示す。図２に示すとおり、本発明化合物（１）はリポソームの構成膜成分としてリポソームの脂質二重膜に高濃度に蓄積されることがわかった。
【００４２】
試験例１
牛胎児血清（FBS）中におけるリポソームの安定性を測定した。実施例３より得た２分画中のリポソーム水溶液に牛胎児血清（FBS）を水溶液の９倍容量加え、３７℃で攪拌しながらインキュベートした。牛胎児血清（FBS）溶液の蛍光度を０−１８時間測定した。結果を図３に示す。
図３に示すとおり、１８時間、牛胎児血清（FBS）中の蛍光強度の増加は見られず、またリポソームに内封されたカルゼインは溶出されなかった。その結果により、本発明化合物（１）より作成したリポソームは３７℃の牛胎児血清（FBS）溶液中で安定であることが確認された。
【００４３】
試験例２
（１）PEG-リポソームをDSPC:コレステロール：PEG-DSPE（１：１：０．１１）の脂質から、またホウ素イオンクラスターリポソームをDSPC：コレステロール：（３−ヘプタデシルオキシ−２−ヘプタデシルオキシメチル−１−プロポキシ）メチル−オルト−ニド−カルボランナトリウム：PEG-DSPE（１：１：１：０．１１）の脂質から、実施例３と同様にしてそれぞれ作製した。
【００４４】
（２）125I-チラミニルイヌリンで標識したリポソームをそれぞれ７週齢のBALB系雄性マウスの尾静脈より注入した。投与後、一定の時間に麻酔をして、眼球より血液を採取し、頸部脱臼により殺生し、各組織（血液、肺、肝臓、腎臓、腸、皮膚、筋肉、脳、心臓、脾臓）を摘出、各組織の放射能をオートウェルガンマシステム（ARC-370M；アロカ株式会社製）により測定した。各組織への放射能分布量は、投与全放射能に対する各組織1g 当たりの放射能の割合（％投与量/g組織 ）で表示した。
なお、全血液量はマウスの体重の７．３％とした。また、各器官の血液のコンタミは、51Ｃｒでラベルした赤血球の分布試験により修正した。
図４に示すとおり、ホウ素クラスターリポソームとPEG-リポソームは同じような分配傾向を示した。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】ホウ素イオンクラスターリポソームの透過型電子顕微鏡写真である。
【図２】カルボラン脂質のリポソーム構成膜中の割合を示す図である。
【図３】牛胎児血清（FBS）中におけるホウ素イオンクラスターリポソームの蛍光強度を示す図である。
【図４】ホウ素イオンクラスターリポソームとPEG-リポソームの静脈内投与後のマウス組織における分布量を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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