(57)【要約】【課題】  血清中のＰＳＡを、遊離型ＰＳＡとα１アンチキモトリプシン複合型ＰＳＡの存在比に関係なく、精度良く測定できる新規な免疫学的凝集測定法および測定用試薬。【解決手段】  ラテックス等の不溶性担体粒子を使用した血清ＰＳＡの免疫学的凝集測定法において、遊離型ＰＳＡ及びα１アンチキモトリプシン複合型ＰＳＡの両方に反応し、かつ反応性の異なるモノクローナル抗体を利用した測定法およびそれに使用する測定試薬を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
不溶性担体粒子に感作した抗体を抗原と反応させ、抗原抗体反応によって生じる不溶性担体粒子の凝集を観察することによって抗原を検出または測定する方法であって、測定対象抗原の遊離型と、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の両方に反応し、かつ遊離型よりも複合型に対し結合力の強いモノクローナル抗体を感作した不溶性担体粒子を使用することを特徴とする免疫学的凝集測定法。
【請求項２】
前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）が、測定対象抗原の遊離型より、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の方が小さいことを特徴とする請求項１記載の測定法。
【請求項３】
前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）の、測定対象抗原の遊離型に対する、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の比率が０．１〜０．２５であることを特徴とする請求項１〜２記載の測定法。
【請求項４】
測定対象抗原が前立腺特異抗原である請求項１〜３記載の免疫学的凝集測定法。
【請求項５】
不溶性担体粒子に感作した抗体を抗原と反応させ、抗原抗体反応によって生じる不溶性担体粒子の凝集を観察することによって抗原を検出または測定する試薬であって、測定対象抗原の遊離型と、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の両方に反応し、かつ遊離型よりも複合型に対し結合力の強いモノクローナル抗体を感作した不溶性担体粒子を含む免疫学的凝集測定用試薬。
【請求項６】
前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）が、測定対象抗原の遊離型より、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の方が小さいことを特徴とする請求項５記載の測定用試薬。
【請求項７】
前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）の、測定対象抗原の遊離型に対する、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の比率が０．１〜０．２５であることを特徴とする請求項５〜６記載の測定用試薬。
【請求項８】
測定対象抗原が前立腺特異抗原である請求項５〜７記載の免疫学的凝集測定用試薬。
【請求項９】
不溶性担体粒子がラテックスである請求項５〜８記載の免疫学的凝集測定用試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、前立腺特異抗原の測定法に関し、さらに詳しくは免疫学的凝集法による前立腺特異抗原の測定法に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺特異抗原（以下「ＰＳＡ」と略）は、１９７９年Ｗａｎｇ等によって発見された前立腺上皮細胞より産生される分子量約３４，０００のセリン蛋白分解酵素であり、１９６４年原等により見出されたγ−セミノプロテインと、アミノ酸配列と蛋白分解酵素の機能から、同一物質であることが明らかとなった。ＰＳＡは、前立腺には特異的であるが、癌に特異的というわけではなく、正常な前立腺細胞でも産生されるため、前立腺肥大症や前立腺炎等の前立腺癌以外の前立腺疾患でも上昇することが報告されている。しかし、前立腺癌の各種治療の効果判定、治療後の再発・再燃の評価、さらには根治的前立腺全摘除術後の残存腫瘍の早期検出等その有用性に優れるため、それまでの前立腺酸性ホスファターゼに代わって、前立腺という臓器に特異的な腫瘍マーカーとして位置付けされている。
【０００３】
ＰＳＡは、成人男子では、血清中に精漿の約１０-6倍の濃度で放出されるが、前立腺疾患では、悪性、良性を問わず、一応に著しく多量のＰＳＡが血清中に検出される。そして、その大部分は、蛋白分解酵素による組織障害を防ぐ作用のあるα１−アンチキモトリプシン（以下「ＡＣＴ」と略）やα２−マクログロブリン（以下「α２Ｍ」と略）等の蛋白分解酵素阻害蛋白との複合型として存在しており、一部は、非複合型である遊離型ＰＳＡ（以下「Ｆ−ＰＳＡ」と略）として存在している。
【０００４】
通常ＰＳＡは、ＡＣＴ複合型のＰＳＡ（以下「ＡＣＴ−ＰＳＡ」と略）とＦ−ＰＳＡを併せた総ＰＳＡ（以下「Ｔ−ＰＳＡ」と略）として測定されており、その測定法は、放射免疫測定法（以下「ＩＲＭＡ法」と略）や酵素免疫測定法（以下「ＥＩＡ法」と略）等の免疫学的測定法が主流である。
【０００５】
ＰＳＡの臨床的意義は、前立腺癌ではＡＣＴ−ＰＳＡが増加するのに対し、前立腺肥大症等の非癌疾患ではＦ−ＰＳＡの割合が高いことが判明している。したがって、血清中のＴ−ＰＳＡ、ＡＣＴ−ＰＳＡおよびＦ−ＰＳＡの測定値より、前立腺癌と前立腺肥大症との鑑別ができるため、ひいては前立腺癌の早期発見が可能である。なお、α２Ｍと結合しているＰＳＡに関しては、ＰＳＡ分子全体がα２Ｍで覆われているため、抗ＰＳＡ抗体では認識されず、その結果、ＰＳＡとして免疫学的な測定はできないと言われている。したがって、免疫学的に測定される複合型ＰＳＡは、通常ＡＣＴ−ＰＳＡである。
【０００６】
ところで、生体試料特に血清中のＴ−ＰＳＡ測定の大きな問題点として、Ｔ−ＰＳＡを測定するために市販されている２０数種類の試薬キット間差、すなわちキットにより測定値が大きく異なることが挙げられる。これは、各試薬キットの、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡに対する反応性の違いによるところが大きい。特にＡＣＴ−ＰＳＡ／Ｆ−ＰＳＡ比が高くなるとその傾向は顕著になると報告されているが、これは、ＡＣＴ−ＰＳＡに対する反応性のバラツキが原因となっている。
【０００７】
１９９７年来、血清Ｔ−ＰＳＡの標準化を目指したサーベイが日本泌尿器科学会主催で行われており、臨床や検診の場でも最も問題となる２０ｎｇ／ｍＬ以下（特に４〜１０ｎｇ／ｍＬのグレーゾーン）できちんと測定でき、さらに精製された試料のみではなく、血清試料でも同じような反応性を示す試薬キットが要望されている。そのため、Ｔ−ＰＳＡを精度良く測定するためには、血清中のＦ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの存在比に関係なく、それぞれに対する反応性が等しくなるような（等モル反応）測定法が求められている。
【０００８】
ＩＲＭＡ法やＥＩＡ法においては、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡそれぞれのモノクローナル抗体を組み合わせて、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡは等モルで反応が起こることが報告されているが（非特許文献１）、ラテックス等を使用する免疫学的凝集測定法では、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの反応性を等しくすることが難しいと言われている。これは、ＥＩＡ等では、モノクローナル抗体の片方は、標識抗体として反応液中での自由に動き回れるため（自由度が高い）複合体との反応性が高くなるのに対し、凝集法では、モノクローナル抗体両方が固相化されているため、標識抗体単独より自由度が低くなり、その結果、複合体との反応性が制限されると推測されている。そこで、免疫学的凝集測定法において、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの反応性を等しくする方法が幾つか提案されている。
【０００９】
被検液にＡＣＴ−ＰＳＡとは反応しないＦ−ＰＳＡに対する抗体を添加し、ついでＰＳＡに対する抗体を感作した担体を添加する方法が提案されている。本技術は、Ｆ−ＰＳＡのＡＣＴと結合可能な領域にある程度大きな分子量の蛋白（抗体）を結合させることにより、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの分子量を近づけ、エピトープの数を揃えることでＰＳＡに対する抗体に対するＦ−ＰＳＡの反応性とＡＣＴ−ＰＳＡの反応性を近づけ、ＰＳＡに対する抗体を感作した担体と両者とを等モル反応で測定する方法である（特許文献１）。
【００１０】
Ｆ−ＰＳＡでもＡＣＴ−ＰＳＡでも反応するが競合しない２種のモノクローナル抗体と、さらにＦ−ＰＳＡでは反応せずＡＣＴ−ＰＳＡでは反応するモノクローナル抗体を、別々に不溶性担体に感作し、Ｔ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡを測定する免疫凝集測定法が開示されている（特許文献２）。本技術は、３種類のモノクローナル抗体を感作したラテックスを、それぞれ特定の２種類を組み合わせて（混合させて）用いることで、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの存在比に影響されることなく測定できる試薬と、複合体のみに特異的な試薬を完成させている。しかし、この方法においては、遊離型でも複合体でも結合力に変化のないモノクローナル抗体が選択されており、その結果、Ｆ−ＰＳＡの１００％に対し、ＡＣＴ−ＰＳＡは約８０％の反応性しか得られていない。
【００１１】
【非特許文献１】Ｓｔａｍｅｙ  ＴＡ「Ｕｒｏｌｏｇｙ」１９９５年、４５巻、ｐ７２９−７４４
【特許文献１】特開平２００１−３１１７３３号公報
【特許文献２】特開平２００１−１０８６８１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、生体試料特に血清中のＴ−ＰＳＡを、Ｆ−ＰＳＡおよびＡＣＴ−ＰＳＡの存在比に関係なく、精度良く測定できる新規な免疫学的凝集測定法および測定用試薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、ラテックス等の不溶性担体粒子を使用した免疫学的凝集測定法において、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡに対し、反応性の異なるモノクローナル抗体を利用した測定法およびそれに使用する測定試薬を見出し、本発明を完成した。
【００１４】
すなわち、本発明は以下の構成からなる。
（１）不溶性担体粒子に感作した抗体を抗原と反応させ、抗原抗体反応によって生じる不溶性担体粒子の凝集を観察することによって抗原を検出または測定する方法であって、測定対象抗原の遊離型と、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の両方に反応し、かつ遊離型よりも複合型に対し結合力の強いモノクローナル抗体を感作した不溶性担体粒子を使用することを特徴とする免疫学的凝集測定法。
（２）前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）が、測定対象抗原の遊離型より、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の方が小さいことを特徴とする（１）記載の測定法。
（３）前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）の、測定対象抗原の遊離型に対する、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の比率が０．１〜０．２５であることを特徴とする（１）〜（２）記載の測定法。
（４）測定対象抗原が前立腺特異抗原である（１）〜（３）記載の免疫学的凝集測定法。
（５）不溶性担体粒子に感作した抗体を抗原と反応させ、抗原抗体反応によって生じる不溶性担体粒子の凝集を観察することによって抗原を検出または測定する試薬であって、測定対象抗原の遊離型と、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の両方に反応し、かつ遊離型よりも複合型に対し結合力の強いモノクローナル抗体を感作した不溶性担体粒子を含む免疫学的凝集測定用試薬。
（６）前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）が、測定対象抗原の遊離型より、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の方が小さいことを特徴とする（５）記載の測定用試薬。
（７）前記モノクローナル抗体の解離定数（ＫＤ）の、測定対象抗原の遊離型に対する、その遊離型に結合可能な分子と結合している複合型の比率が０．１〜０．２５であることを特徴とする（５）〜（６）記載の測定用試薬。
（８）測定対象抗原が前立腺特異抗原である（５）〜（７）記載の免疫学的凝集測定用試薬。
（９）不溶性担体粒子がラテックスである（５）〜（８）記載の免疫学的凝集測定用試薬。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の方法により、生体試料特に血清中のＴ−ＰＳＡを、Ｆ−ＰＳＡおよびＡＣＴ−ＰＳＡの存在比に関係なく、精度良く測定することができる。以下、本発明についてさらに詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
測定対象物であるＰＳＡと結合するモノクローナル抗体は通常２種類が用意されるが、それらは、異なるエピトープを有し、かつＦ−ＰＳＡおよびＡＣＴ−ＰＳＡの両方に結合するモノクローナル抗体である。このとき、使用される第１のモノクローナル抗体は、Ｆ−ＰＳＡに比べＡＣＴ−ＰＳＡに特に結合力が強いもの、すなわちＦ−ＰＳＡに対する解離定数に比べＡＣＴ−ＰＳＡに対する解離定数の方が低く、ＡＣＴ−ＰＳＡ／Ｆ−ＰＳＡ（解離定数の比率）が０．２５以下のモノクローナル抗体が選択される。また、別に使用されるモノクローナル抗体のそれぞれに対する結合力は、両方に対して等しくても、また逆にＦ−ＰＳＡに強くてもよく、特に限定されない。
【００１７】
本発明に用いるモノクローナル抗体は、公知の方法によって得ることができる。すなわち、マウスやラット等の免疫動物をポリクローナル抗体の免疫操作と同じように免疫し、抗体価の上昇を確認したところでその抗体産生細胞を回収する。回収した抗体産生細胞は、ミエローマとの細胞融合でハイブリドーマとする、あるいはＥＢＶトランスフォーム等により形質転換させ不死化する。これを抗体産生能でスクリーニングし、更に必要な活性を持つ抗体を産生する株をクローニングすれば抗体産生株を樹立することができる。抗体産生株は、マウス等免疫動物の腹腔に接種して培養すれば腹水としてモノクローナル抗体を得られる。またｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗体産生株を大量に培養してモノクローナル抗体を製造することもできる。
【００１８】
本発明に用いるモノクローナル抗体を感作する不溶性担体粒子としては、測定が、生化学項目でも測定できるいわゆる汎用型、または専用型の自動分析装置で行われるのに適しているラテックス粒子が有用である。またラテックス粒子の材質としては、ポリスチレン、スチレン−ブタジエン重合体等が挙げられ、免疫学的凝集測定法で汎用されているポリスチレン製が好ましいが、抗体感作に適していれば特に限定されない。またラテックスの粒子径は、通常使用されている５０〜７００ｎｍが好ましい。さらに、粒子径の均一性に関しては、粒子径の均一なラテックス、あるいは異なる粒子径のラテックスを混合させたものが使用できるが、特に限定されない。
【００１９】
ラテックス粒子への抗体の感作は、公知の技術を利用して実施できる。通常は、ポリスチレンの表面は疎水性であるため、ラテックス表面への物理的吸着で可能である。また、表面にアミノ基やカルボキシル基を有するラテックス粒子を用いるのであれば、グルタルアルデヒド、カルボジイミド試薬を使用した化学的結合によって、ラテックス粒子表面に抗体を結合することができる。
【００２０】
本発明で利用される測定法は凝集測定法であるが、測定操作は公知の方法により行うことができる。例えば、光学的に測定する場合、血清等の生体試料と、担体粒子に感作させた抗体を反応させ、エンドポイント法またはレート法により、透過光や散乱光を測定することで達成できる。
【００２１】
本発明における測定法の実施形態の一例を示す。測定対象物であるＰＳＡと結合するモノクローナル抗体のうち、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの両方に結合し、かつＦ−ＰＳＡよりＡＣＴ−ＰＳＡに対して結合力の強いモノクローナル抗体を第１のモノクローナル抗体としてラテックス粒子に感作する。このラテックス粒子に感作された第１モノクローナル抗体と生体試料例えば血清とを接触させる。次いで、前記第１のモノクローナル抗体と異なる部位で、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの両方に結合する別のラテックス粒子に感作されたモノクローナル抗体を接触させる。生体試料中に測定対象物が存在すれば、抗原抗体反応によって生じるラテックス凝集が光学的に測定されることになる。
【実施例】
【００２２】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
【００２３】
実施例１．抗ＰＳＡモノクローナル抗体の抗原に対する結合力
（１）センサーチップ（ＣＭ５）への抗マウスＩｇＧＦｃウサギ抗体の固定化
アフィニティー測定用装置ＢｉａｃｏｒｅＸ（ ビアコア社製 ）のセンサーチップ上にあるカルボキシメチルデキストランのカルボキシル基をＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）で７分間活性化し、ＥＤＣ[Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドハイドロクロリド]を縮合剤として、抗マウスＩｇＧＦｃウサギ抗体を固定化した。
（２）サンプル抗体の結合
（１）で作製した抗マウスＩｇＧＦｃウサギ抗体固定化センサーチップに、定法通り得られた抗ＰＳＡ抗体Ｇ３（または抗ＰＳＡ抗体Ｐ２）５０μｇ／ｍＬの５μＬをアプライし、前記センサーチップに結合させた。
（３）ＰＳＡ抗原の結合
（２）で抗体を結合させたセンサーチップに、１０ｎＭのＰＳＡ抗原であるＦ−ＰＳＡ（またはＡＣＴ−ＰＳＡ）を５０μＬをアプライし、４分間のセンサーグラム（反応曲線）をモニターさせた。
（４）繰り返し操作
（３）で使用したセンサーチップに、１０ｍＭのＮａＯＨ水溶液を１０μＬアプライし、（２）および（３）の操作で結合させた抗ＰＳＡモノクローナル抗体およびＰＳＡ抗原をセンサーチップから剥離させ、洗浄後、再生した。次いで、２０、４０、８０、１６０ｎＭのＰＳＡ抗原について、（２）〜（４）の同様の操作を行った。
（５）アフィニティーの計算
前記（３）および（４）で得られたセンサーグラムを装置付属の解析ソフトで、解離定数すなわちアフィニティー（ＫＤ）を求めた。
【００２４】
（６）結果
その結果を表１に示す。ＫＤ値が小さい程、抗原に対する結合力が高いことを示す。ＫＤ値の比率より、モノクローナル抗体Ｇ３は、Ｆ−ＰＳＡよりもＡＣＴ−ＰＳＡに対し、結合力が約５倍高いことがわかる。一方、モノクローナル抗体Ｐ２は、ＡＣＴ−ＰＳＡよりもＦ−ＰＳＡに対し、結合力が約２倍高いことがわかる。
【００２５】
【表１】
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【００２６】
実施例２．抗ＰＳＡモノクローナル抗体を用いた免疫学的凝集測定および抗体の反応性の評価
１．試薬の調整
（１）抗ＰＳＡ(前立腺特異抗原)マウスモノクローナル抗体（Ｎｏ．Ｇ３）（以下「抗ＰＳＡ抗体Ｇ３」）担持ラテックス懸濁液の調製
平均粒径０．１６２μｍ、固形分１０％ｗ／ｖ（以下「％ｗ／ｖ」の濃度表示は「％」と略して表示）のポリスチレンラテックス溶液を精製水にて希釈し、０．２％ラテックス液を作製した。ラテックス感作用の抗体液は、抗ＰＳＡ抗体Ｇ３を、タンパク質濃度が１００μｇ／ｍＬとなるように抗体希釈用緩衝液で希釈して作製した。０．２％ラテックス溶液１ｍＬを室温下で攪拌しながら抗体液０．８ｍＬを素早く添加し、３７℃で１時間インキュベートした。その後、ブロッキング用緩衝液を０．２ｍＬ添加し、さらに３７℃で１時間インキュベートし、次いで、４℃、６０，０００ｒｐｍにて２０分間遠心分離を行った。未吸着の抗体を含む上清を除去し、得られた沈殿物に洗浄用緩衝液を２ｍＬ添加後攪拌洗浄し、以下同様に遠心分離および洗浄操作を２回繰り返すによって、沈殿物を洗浄した。最後に、この沈殿物にブロッキング用緩衝液を２ｍＬ添加し、よく攪拌後、超音波にて分散処理を行うことで、０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｇ３担持ラテックス懸濁液を作製した。
（２）抗ＰＳＡ(前立腺特異抗原)マウスモノクローナル抗体（Ｎｏ．Ｐ２）（以下「抗ＰＳＡ抗体Ｐ２」）担持ラテックス懸濁液の調製
（１）同様の方法にて、０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｐ２担持ラテックス懸濁液を作製した。
（３）ＰＳＡ測定用第１試薬の調製
検体希釈用希釈液にて、０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｇ３担持ラテックス懸濁液を４倍希釈（０．０２５％）した液をＲ（Ｇ３）−１とした。なお、比較例１として、前記希釈液のみ用いた液Ｒ（ＢＬ）−１、さらに比較例２として、０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｐ２担持ラテックス懸濁液を４倍希釈（０．０２５％）した液Ｒ（Ｐ２）−１を調製した。
（４）ＰＳＡ測定用第２試薬の調製
検体希釈用希釈液にて、０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｐ２担持ラテックス懸濁液を４倍希釈（０．０２５％）した液をＲ（Ｐ２）−２とした。なお、比較例１として、０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｇ３担持ラテックス懸濁液および０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｐ２担持ラテックス懸濁液を、各々希釈液にて２倍希釈して同量ずつ混合した液Ｒ（ＧＰ）−２、さらに比較例２として、０．１％抗ＰＳＡ抗体Ｇ３担持ラテックス懸濁液を前記希釈液にて４倍希釈（０．０２５％）した液Ｒ（Ｇ３）−２も調製した。
【００２７】
２．測定試薬の反応性の評価
既に述べたようにＰＳＡの測定においては、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡに等モルずつ反応することが重要である。ここで、Ｓｔａｎｆｏｒｄ大学より入手した精製Ｆ−ＰＳＡおよびＡＣＴ−ＰＳＡをそれぞれ１０ｎｇ／ｍＬとなるように希釈し、それぞれ異なる割合で混合した試料（Ｆ−ＰＳＡ：ＡＣＴ−ＰＳＡ＝１０：０、８：２、６：４、４：６、２：８および０：１０）について測定することにより、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの反応性を調べた。
（１）測定
測定は、自動分析装置ＴＢＡ−１２０ＦＲ（ 東芝メディカル社製 )を使用した。本装置では、検体（１２μＬ）と第１試薬（９０μＬ）が分注された後、約２９６秒後に第２試薬（９０μＬ）が分注されることによって測定が行われるが、測定値は、第１試薬分注後の５６９秒と５８７秒の吸光度（測定波長５７２ｎｍ）の平均値から、第１試薬分注後の３１７秒と３３５秒の吸光度（測定波長同）の平均値を差し引いた吸光度から算出される。
【００２８】
（２）結果
その結果を表２に示す。実施例は、第１試薬にＧ３担持ラテックス懸濁液Ｒ（Ｇ３）−１、第２試薬にＰ２担持ラテックス懸濁液Ｒ（Ｐ２）−２を使用した系である。比較例１は、第１試薬に希釈液Ｒ（ＢＬ）−１、第２試薬にＧ３およびＰ２担持ラテックス懸濁液の混合液Ｒ（ＧＰ）−２を使用した系であり、一方、比較例２は、実施例とは逆の試薬組成で、第１試薬にＰ２担持ラテックス懸濁液Ｒ（Ｐ２）−１、第２試薬にＧ３担持ラテックス懸濁液Ｒ（Ｇ３）−２を使用した系である。比較例１および２では、Ｆ−ＰＳＡが１００％濃度であれば１０〜１１ｎｇ／ｍＬと測定されるが、ＡＣＴ−ＰＳＡの比率が高くなるにつれて測定値は低下し、ＡＣＴ−ＰＳＡ１００％濃度のときは７〜８ｎｇ／ｍＬとなる。すなわち、Ｆ−ＰＳＡ１００％濃度に対する相対値として約６５〜７５％しか測定されてない。これは、いずれも第２試薬にＧ３担持ラテックスを使用しているが、ＡＣＴ−ＰＳＡと十分に反応するための時間が足りないことを示唆している。一方、実施例のように、第１試薬にＡＣＴ−ＰＳＡと高い結合力を有するモノクローナル抗体（Ｇ３）を担持したラテックス試薬を使用した系では、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡの混合比を問わず、ほぼ一定の値（前述相対値９０％以上）を示した。このことから、第１試薬にＡＣＴ−ＰＳＡに結合力が強い抗体を感作したラテックス試薬を用いることで、Ｆ−ＰＳＡとＡＣＴ−ＰＳＡにほぼ同じ反応性を示す測定系を完成させることができる。
【００２９】
【表２】
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