(57)【要約】【課題】経口投与が可能で、学習記憶向上作用を有する機能性ペプチドを提供することが本発明の課題である。【解決手段】テトラペプチドHIRLを有効成分として含有する学習記憶低下の予防剤又は症状改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列表の配列番号１のアミノ酸配列で示されるペプチドを有効成分とする学習記憶向上剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、学習記憶能向上作用を有するペプチドに関するものである。
本発明に係るペプチドは、学習記憶向上剤として、医薬品用途に使用する他、学習記憶能を向上させたい人用の特別用途食品、栄養食品、機能性食品、特定保健用食品、学習記憶向上作用を標榜可能な飲食品等として使用し、学習記憶能低下の予防等に広く利用できるものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会の到来により、老人性痴呆症等による学習記憶低下を、治療ないし予防することが求められている。従来、学習記憶低下を抑制有する物質として、鎮痛、麻酔等のオピオイド活性を有するペプチド（特許文献１）、プロリルプロリン誘導体（特許文献２）、プロリルエンドペプチダーゼ阻害活性を有するストレプトミセス属生物の発酵生産物ＢＵ−４１６４ＥＡ及びＢ（特許文献３）、プロリルエンドペプチダーゼ阻害作用を有するエンジュラシジンＡ（特許文献４）、アセチルコリンエステラーゼ阻害活性を有し、スコポラミン誘発健忘症モデルに対して活性を有するキノリン誘導体（特許文献５）、プロリルエンドペプチーゼ阻害作用を有し、ミクロビスボラ属微生物の発酵産生物であるペプチドＳＮＡ−１１５（特許文献６）等が知られている。
他方、種々の疾病の予防あるいは治療に有用な機能性ペプチドについて様々な報告も近年数多くあり、本発明者らもＧｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇで示される、米蛋白質に含まれる機能性ペプチドであるオリザテンシンが抗オピオイド活性、ファゴサイトーシス活性、インターロイキン１産生促進活性をもつことを報告した（特許文献７）。また、本発明者らは、牛乳カゼイン（κ−ｃａｓｅｉｎ）のトリプシン消化物から得られ、補体Ｃ３ａレセプターを介して回腸収縮活性、免疫促進活性を示す、抗オピオイドペプチドとして知られている、Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇで表されるカソキシン（Ｃａｓｏｘｉｎ）Ｃの側脳室内投与によって、オピオイドの鎮痛作用を抑制すること、またスコポラミン誘発及び脳虚血による健忘にたいして改善効果示すことが報告されている（非特許文献１）。
【特許文献１】特開平９−２２７５９０号公報
【特許文献２】特開平８−３１３２号公報
【特許文献３】特開平６−２７９４１３号公報
【特許文献４】特開平５−３０１８２６号公報
【特許文献５】特開平５−２７９３５５号公報
【特許文献６】特開平５−２６２７９５号公報
【特許文献７】特開平７−２５８２８８号公報
【非特許文献１】Ｏｐｉｏｉｄ Ｓｉｍｐｏｓｉｕｍ １７，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，９６−１００
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
これらの知見にも関わらず、学習記憶低下の病態や発現態様には個人差が大きい事を考えると、より多くの学習記憶向上作用を有する物質を得る事には意義がある。また、経口投与が可能であることが望ましく、そのような特性を有する機能性ペプチドを提供することが本発明の課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題を解決するために各方面から検討の結果、ペプチド、特にオリゴペプチドに着目して数多くのペプチド素材から単離し、得られたペプチドについてスクリーニングを行った。その結果、回腸収縮作用や平滑筋収縮作用を有するテトラペプチドHIRLを見出し、in vivo試験を行った結果、本ペプチドが優れた学習記憶向上作用を有し、学習記憶向上剤として使用できることを確認して、本発明を完成した。
【０００５】
本発明は、
（１）配列表の配列番号１のアミノ酸配列で示されるペプチドを有効成分とする学習記憶向上剤、
に係るものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明のペプチドによれば、高い学習記憶向上効果を発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明に係るペプチドHIRLは、配列表の配列番号1に示されるアミノ酸配列から成り、下記に示され、通常塩酸塩、酢酸塩、硫酸塩、コハク酸塩、りん酸塩、および酒石酸塩等の工業上使用される塩を付加したペプチドであっても良い。
テトラペプチドHIRL：（一文字表記の場合）；His-Ile-Arg-Leu（三文字表記の場合）
このペプチドは、単独若しくは他の学習記憶向上剤との混合物で使用することができる。
【０００８】
本発明のペプチドを調製するには、公知のペプチド合成法により製造出来るほか、β−ラクトグロブリン等の乳タンパク質をキモトリプシン等を用いた酵素的若しくは化学的加水分解することによっても製造できる。
本発明のペプチドは、医薬品又は飲食品いずれの形態でも利用することができる。例えば、医薬品として直接投与することにより、又は特定保健用食品等の特別用途食品や栄養機能食品として直接摂取することにより各種の学習記憶低下を治療及び／又は予防することが期待される。また、各種食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト等）に添加し、これを摂取してもよい。
【０００９】
本発明のペプチドを含有する食品には、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を主成分として使用することができる。タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α―カゼイン、β―カゼイン、β―ラクトグロブリン、α―ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これら加水分解物；バター、乳性ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分などが挙げられる。糖類、加工澱粉（テキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維などが挙げられる、脂質としては、例えば、ラード、魚油等の動物性油脂；パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水添油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンA、ビタミンB群、ビタミンC、ビタミンD群、ビタミンE、ビタミンK群、ビタミンP、ビタミンQ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用することができ、合成品及び／又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。
【００１０】
次に医薬品として用いる場合について説明する。本発明で使用するペプチドの投与経路としては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでもよい。本発明の抗脱毛症剤は、経口的あるいは非経口的に投与することが可能である。本ペプチドの投与量は化合物の種類、投与方法、患者の症状、年齢等により異なるが、１日あたり通常は０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が用いられる。
【００１１】
具体的には、その様な物質の例として乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングルコール、水等が挙げられる。
【００１２】
剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、座剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解または懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
【００１３】
これらの製剤は、本発明のペプチドを０．０１％〜１００重量％、好ましくは１〜９０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上価値のある他の成分を含有していてもよい。
【００１４】
経口投与用の固形製剤を製造するには、有効成分と賦形剤成分例えば乳糖、澱粉、結晶セルロース、乳酸カルシウム、無水ケイ酸などと混合して散剤とするか、さらに必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムなどの崩壊剤などを加えて湿式又は乾式造粒して顆粒剤とする。錠剤を製造するには、これらの散剤及び顆粒剤をそのまま或いはステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤を加えて打錠すればよい。これらの顆粒又は錠剤はヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メタクリル酸−メタクリル酸メチルポリマーなどの腸溶剤基剤で被覆して腸溶剤製剤、あるいはエチルセルロース、カルナウバロウ、硬化油などで被覆して持続性製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造するには、散剤又は顆粒剤を硬カプセルに充填するか、有効成分をそのまま或いはグリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オリーブ油などに溶解した後ゼラチン膜で被覆し軟カプセルとすることができる。
【００１５】
経口投与用の液状製剤を製造するには、有効成分と白糖、ソルビトール、グリセリンなどの甘味剤とを水に溶解して透明なシロップ剤、更に精油、エタノールなどを加えてエリキシル剤とするか、アラビアゴム、トラガント、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどを加えて乳剤又は懸濁剤としてもよい。これらの液状製剤には所望により矯味剤、着色剤、保存剤などを加えてもよい。
【００１６】
注射剤を製造するには、有効成分を必要に応じて塩酸、水酸化ナトリウム、乳糖、乳酸、ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ぶどう糖などの等張化剤と共に注射用蒸留水に溶解し、無菌濾過してアンプルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空凍結乾燥し、用事溶解型の注射剤としてもよい。また、有効成分にレチシン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などを加えて水中で乳化せしめ注射剤用乳剤とすることもできる。
【００１７】
直腸投与剤を製造するには、有効成分をカカオ脂、脂肪酸のトリ、ジ及びモノグリセリド、ポリエチレングリコールなどの座剤用基材と共に加湿して溶解し型に流し込んで冷却するか、有効成分をポリエチレングリコール、大豆油などに溶解した後、ゼラチン膜で被覆すればよい。
【００１８】
皮膚用外用剤を製造するには、有効成分を白色ワセリン、ミツロウ、流動パラフィン、ポリエチレングリコールなどに加えて必要ならば加湿して練合し軟膏剤とするか、ロジン、アクリル酸アルキルエステル重合体などの粘着剤と練合した後ポリアルキルなどの不織布に展延してテープ剤とする。
【００１９】
以下、本発明の実施例について述べるが、本願発明は実施例に限定されない。
【実施例】
【００２０】
[実施例１]β−ラクトテンシンの学習促進作用：脳室内投与
学習能に対するペプチドの効果を、ステップスル−装置を用いた受動的回避実験により検討した。ｄｄｙマウス（オス、体重２５±１ｇ）を明暗２室に分かれた装置の明室に入れると、マウスは暗いところを好ことから暗室に入る。暗室に入ると床から電気ショック（２８−２９Ｖ、５ｓｅｃ ｄｕｒａｔｉｏｎ）を与えて、暗室が危険なことを教育する。教育直後にHIRLを側脳室内に投与し、２４時間後にマウスを再び同じ装置に入れ明室にに止まっている時間を測定することにより、学習効果の評価をした。尚、有意検定はMann-WhitneyのＵ検定によって行った。結果を図１に示す。
この結果、60 nmol/body（約1 mg/kg）の投与により明室に滞在する時間が有意に延長することが確かめられた。
【００２１】
[実施例２]β−ラクトテンシンの学習促進作用：経口投与
ペプチドを脳室内投与する代わりに経口投与した以外は、実施例１と同様に試験を行った。結果を図２に示す。
この結果、ペプチド300 mg/kgの投与により明室に滞在する時間が有意に延長することが確かめられた。
【産業上の利用可能性】
【００２２】
テトラペプチドHIRLは学習記憶向上作用を有しており、学習記憶低下の予防剤又は症状改善剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】β−ラクトテンシンの脳室内投与による学習促進作用を示す図である。
【図２】β−ラクトテンシンの経口投与による学習促進作用を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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