(57)【要約】【課題】 分子内に化学式１で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロース構造を有する新規糖質３−α−グリコシルα，α−トレハロース類とその製造方法並びに用途を提供する。【解決手段】  分子内に化学式１で示されるα−グルコシルα，α−トレハロース構造を有するα−グリコシル α，α−トレハロース類とその製造方法並びに用途を提供することにより上記課題を解決する。化学式１：    【化１】2005035958.tif 000016【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子内に化学式１で示されるα−グルコシルα，α−トレハロース構造を有する３−α−グリコシルα，α−トレハロース類。
化学式１：
【化１】
2005035958.tif 000013
【請求項２】
３−α−グリコシルα，α−トレハロース類が、化学式２で示される３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースである請求項１記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類。
化学式２：
【化２】
2005035958.tif 000014
【請求項３】
３−α−グリコシルα，α−トレハロース類が、化学式３で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロースである請求項１記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類。
化学式３：
【化３】
2005035958.tif 000015
【請求項４】
非還元末端の結合様式としてα−１，６グルコシド結合を有し、この非還元末端以外の結合様式としてα−１，４グルコシド結合を有するグルコース重合度が３以上の糖質とα，α−トレハロースとを含有する水溶液にα−イソマルトシル転移酵素を作用させる工程を含むことを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の生成方法。
【請求項５】
非還元末端の結合様式としてα−１，６グルコシド結合を有し、この非還元末端以外の結合様式としてα−１，４グルコシド結合を有するグルコース重合度が３以上の糖質が、澱粉部分分解物にα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素を作用させることにより調製される請求項４記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の生成方法。
【請求項６】
更にグルコアミラーゼを作用させる工程を含むことを特徴とする請求項４又は５記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の生成方法。
【請求項７】
化学式２で示される３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース及び／又は化学式３で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロースと任意の他の糖質を含む水溶液に糖転移酵素を作用させて請求項１記載のα−グリコシルα，α−トレハロース類を生成せしめることを特徴とするα−グリコシルα，α−トレハロース類の生成方法。
【請求項８】
非還元末端の結合様式としてα−１，６グルコシド結合を有し、この非還元末端以外の結合様式としてα−１，４グルコシド結合を有するグルコース重合度が３以上の糖質とα，α−トレハロースとを含有する水溶液にα−イソマルトシル転移酵素を作用させて化学式２で示される３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースを生成せしめ、これを採取することを特徴とする請求項２記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の製造方法。
【請求項９】
非還元末端の結合様式としてα−１，６グルコシド結合を有し、この非還元末端以外の結合様式としてα−１，４グルコシド結合を有するグルコース重合度が３以上の糖質が、澱粉質にα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素を作用させることにより調製される請求項８記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の製造方法。
【請求項１０】
非還元末端の結合様式としてα−１，６グルコシド結合を有し、この非還元末端以外の結合様式としてα−１，４グルコシド結合を有するグルコース重合度が３以上の糖質とα，α−トレハロースとを含有する水溶液にα−イソマルトシル転移酵素を作用させて化学式２で示される３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースを生成せしめ、次いで、これにグルコアミラーゼを作用させて化学式３で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロースを生成せしめ、これを採取することを特徴とする請求項３記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の製造方法。
【請求項１１】
請求項２及び／又は請求項３記載の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類と任意の他の糖質を含む水溶液に糖転移酵素を作用させて請求項１記載のα−グリコシルα，α−トレハロース類を生成せしめ、これを採取することを特徴とするα−グリコシルα，α−トレハロース類の製造方法。
【請求項１２】
採取する方法が、塩型強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィーを用いることを特徴とする請求項８乃至１１のいずれかに記載のα−グリコシルα，α−トレハロース類の製造方法。
【請求項１３】
請求項１乃至３のいずれかに記載のα−グリコシルα，α−トレハロース類を含有せしめた組成物。
【請求項１４】
請求項１乃至３のいずれかに記載のα−グリコシルα，α−トレハロース類とともに、他の非還元糖、還元糖、糖アルコール及びミネラルから選ばれる１種以上の成分を含有せしめた請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
組成物が、口中使用物、飲食物、化粧品又は医薬品である請求項１３又は１４記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規糖質３−α−グリコシルα，α−トレハロース類とその製造方法並びに用途、詳細には、分子内に化学式１で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロース構造を有する３−α−グリコシルα，α−トレハロース類とその製造方法並びに用途に関する。
【０００２】
化学式１：
【化１】
2005035958.tif 000002
【背景技術】
【０００３】
α，α−トレハロースは、グルコース２分子がα，α−１，１結合で結合した非還元性二糖であり、少量ながら、カビ、酵母、細菌、きのこ、高等植物、昆虫など、広く天然界に存在している。α，α−トレハロースは、非還元性ゆえに、アミノ酸や蛋白質等のアミノ基を有する物質とメイラード反応（アミノカルボニル反応）を起こさず、アミノ酸含有物質を損なわないこと、しかも、それ自身安定な糖質であることから、褐変、劣化を懸念することなく、利用、加工でき、広範囲な用途が期待されてきた。α，α−トレハロースが有する機能に関する研究も進んでいるものの、α，α−トレハロースにない新たな機能が期待できる糖質としてα，α−トレハロースの糖誘導体に関する研究も活発に行われているのが現状である。
【０００４】
α，α−トレハロースの糖誘導体の酵素による合成例は、数多く報告されている。α，α−トレハロースにグルコースがα−１，２結合で付加した構造を有するオリゴ糖については、例えば、トレハロースホスホリラーゼとコージビオースホスホリラーゼの転移作用により、α，α−トレハロースから生成する２−Ｏ−α−グルコシルα，α−トレハロース（別名α−コージビオシルα−Ｄ−グルコシド又はセラギノース）が特許文献１及び非特許文献１に記載されている。
【０００５】
α，α−トレハロースにマルトース、マルトトリオースなどのマルトオリゴ糖がα−１，４結合で付加した構造を有するオリゴ糖については、例えば、特許文献２に、澱粉又は澱粉部分分解物（以下、単に「澱粉質」と略称する。）を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させることにより生成する、α−１，４結合様式の澱粉質構造を持つ分子の末端にトレハロース構造を有する４−α−グリコシルα，α−トレハロース類、例えば、４−α−Ｄ−グルコシルα，α−トレハロース、４−α−マルトシルα，α−トレハロース、４−α−マルトトリオシルα，α−トレハロース、４−α−マルトテトラオシルα，α−トレハロースなどが開示されており、さらに非特許文献２には、バチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）のサイクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（ＣＧＴａｓｅ）の糖転移作用により、α，α−トレハロースとサイクロマルトヘキサオースとから生成するα−マルトシルα−Ｄ−グルコシド、α−マルトトリオシルα−Ｄ−グルコシド、α−マルトシルα−マルトシド、α−マルトトリオシルα−マルトシド、α−マルトトリオシルα−マルトトリオシドなどが記載されている。
【０００６】
α，α−トレハロースにグルコースがα−１，６結合で付加した構造を有するオリゴ糖については、例えば、非特許文献３には、サッカロマイセス・スピーシーズ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）のα−グルコシダーゼ、あるいはリゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）のグルコアミラーゼによるα，α−トレハロースとグルコースとの縮合反応により生成するα−イソマルトシルα−Ｄ−グルコシドが記載されており、また、非特許文献４には、アルスロバクター・グロビホルミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ）Ｔ６のイソマルトデキストラナーゼの転移作用によりデキストランとα，α−トレハロースとから生成する、α−イソマルトトリオシルα−Ｄ−グルコシドが開示されており、また、非特許文献５及び特許文献３には、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）のα−グルコシダーゼの転移作用によりα，α−トレハロースとマルトテトラオースとから生成する、α−イソマルトシル  α−Ｄ−イソマルトシドが開示されている。
【０００７】
しかしながら、α，α−トレハロースにα−１，３結合で他の糖質が結合した構造を有する糖質はこれまで全く知られていなかった。
【０００８】
一方、α−１，３グルコシド結合を有するオリゴ糖としては、グルコース２分子がα−１，３結合した還元性二糖であるニゲロースや、マルトオリゴ糖の非還元末端グルコース残基にグルコースがα−１，３結合で付加した構造を有するニゲロオリゴ糖（特許文献４及び５を参照）が知られている。特許文献６に開示されているように、ニゲロースを構成単位として含有する糖質は低甘味、味質改善といった甘味料としての機能に加え、高い免疫賦活作用を持つことが知られている。しかしながら、ニゲロース及びニゲロオリゴ糖はいずれも還元性を示す糖質であり、アミノ酸との褐変反応を起こし易く、食品加工上、変質、劣化を招き易い欠点を有している。
【０００９】
このような状況下、α，α−トレハロースに他の糖質がα−１，３結合で付加した、例えば、３−α−グルコシルα，α−トレハロースや３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースなどの糖質、すなわち、分子内に化学式１で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロース構造を有する３−α−グリコシルα，α−トレハロース類のようなα，α−トレハロース構造とニゲロース構造とを併せ持つ非還元性のオリゴ糖の開発が望まれている。
【００１０】
【特許文献１】特開平１０−３０４８８２号公報
【特許文献２】欧州特許出願公開第０６０６７５３Ａ２号明細書
【特許文献３】特開平８−２１７７８４号公報
【特許文献４】特開平７−５９５５９号公報
【特許文献５】特開平９−２９９０９５号公報
【特許文献６】特開平９−５２８３４号公報
【非特許文献１】茶圓、『ジャーナル  オブ  アプライド  グリコサイエンス（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ）』、（日本）、１９９９年、第４６巻、第４号、第４２３頁乃至４２９頁
【非特許文献２】栗本、『バイオサイエンス  バイオテクノロジー  バイオケミストリー（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）』、（日本）、１９９７年、第６１巻、第７号、第１１４６頁乃至１１４９頁
【非特許文献３】鯵坂、『カーボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）』、（オランダ）、１９９０年、第１９９巻、第２２７乃至２３４頁
【非特許文献４】金、『澱粉科学』、（日本）、１９９３年、第４０巻、第３号、第３４９頁
【非特許文献５】栗本、『バイオサイエンス  バイオテクノロジー  バイオケミストリー（Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）』、（日本）、１９９７年、第６１巻、第４号、第６９９頁乃至７０３頁
【非特許文献６】エム・ステイシー（Ｍ．Ｓｔａｃｅｙ）、『メソッズ  イン  カーボハイドレイト  ケミストリー  （Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｏｒｙ）』、Ｉ、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）１９６２年、第３３９乃至３４１頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、分子内に化学式１で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロース構造を有する新規糖質３−α−グリコシルα，α−トレハロース類（以下、単に「３−α−グリコシルα，α−トレハロース類」と略称する。）とその製造方法を確立し、その用途を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者等は、上記課題を解決するため新規糖質３−α−グリコシルα，α−トレハロース類とその製造方法について鋭意研究した。その結果、化学式２で示される新規糖質３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース及び化学式３で示される新規糖質３−α−グルコシルα，α−トレハロースを見出し、また、これら新規糖質に対して更に他の糖質を結合させることにより、容易に他の種々の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類を合成できることを見出し、さらにはこれら３−α−グリコシルα，α−トレハロース類を含む糖質及びその製造方法を確立して本発明を完成した。併せて、これら糖質又はこれらを含む糖質組成物を含有せしめた飲食物、化粧品、医薬品などの組成物を確立して、本発明を完成した。
【００１３】
化学式２：
【化２】
2005035958.tif 000003
【００１４】
化学式３：
【化３】
2005035958.tif 000004
【発明の効果】
【００１５】
本発明の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類は従来未知の新規糖質であり、分子内にα，α−トレハロース構造とニゲロース構造を併せ持つ非還元性糖質であることから種々の機能が期待できる糖質である。加えて、３−α−グリコシルα，α−トレハロース類とその製造方法並びに用途を提供する本発明は斯界に大いに貢献する有用な発明である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明でいう３−α−グリコシルα，α−トレハロース類とは、分子内に化学式１で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロース構造を有する糖質全般を意味し、その分子内にα，α−トレハロース構造とニゲロース構造を併せ持つ非還元性糖質である。
【００１７】
本発明の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類は、分子内に前記化学式１で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロース構造を有する糖質でさえあればよく、その給源や製造方法によって制限されず、仮に天然物として存在する場合には天然由来のものであっても、また、化学的・酵素的に合成したものであってもよい。本発明における化学式２で示される３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース（以下、単に「３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース」と略称する。）及び化学式３で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロース（以下、単に「３−α−グルコシルα，α−トレハロース」と略称する。）は、いずれも上記３−α−グリコシルα，α−トレハロース類に含まれる糖質の具体例である。
【００１８】
本発明の３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースは、化学合成することもできるものの、酵素反応により、α，α−トレハロースにイソマルトースがα−１，３結合するよう糖転移させて生成させるのが好適である。酵素反応による３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースの生成方法としては、例えば、パノース（４−α−イソマルトシルＤ−グルコース）、４−α−イソマルトシルマルトース、４−α−イソマルトシルマルトトリオースなどの、非還元末端の結合様式としてα−１，６グルコシド結合を有し、この非還元末端以外の結合様式としてα−１，４グルコシド結合を有するグルコース重合度が３以上の糖質（以下、本明細書では「α−イソマルトシルグルコ糖質」と略称する。）とα，α−トレハロースとを含有する水溶液に、本出願人が国際特許出願公開ＷＯ  ０２／４０６５９  Ａ１に開示したバチルス・グロビスポルス  Ｃ９（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ  Ｃ９、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７１４３）、バチルス・グロビスポルス  Ｃ１１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ  Ｃ１１、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７１４４）、バチルス・グロビスポルス  Ｎ７５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ  Ｎ７５、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５９１）あるいはアルスロバクター・グロビホルミス  Ａ１９（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ  Ａ１９、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５９０）など微生物由来のα−イソマルトシル転移酵素を作用させて、α−イソマルトシルグルコ糖質のα−イソマルトシル部分とそれ以外のグルコ糖質部分との結合を特異的に切断し、このα−イソマルトシル部分をα，α−トレハロースにα−１，３転移させて生成させるのが有利である。
【００１９】
本発明において用いるα，α−トレハロースは、市販品を利用するのが好適である。α，α−トレハロースの市販品としては、高純度含水結晶α，α−トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』、α，α−トレハロース含量９８％以上）が有利に利用できる。また、必要に応じて、公知の方法、例えば、酵母から抽出するか、α，α−トレハロース生成能を有する細菌の培養液から分離するか、又は澱粉質に酵素を作用させるかなどして調製したα，α−トレハロースを利用することも有利に実施できる。
【００２０】
本発明において用いるα−イソマルトシルグルコ糖質としては、市販の試薬級パノース（（株）林原生物化学研究所販売）を利用することができる。また、必要に応じて、パノースを公知の方法、例えば、天然多糖プルランにサーモアクチノマイセス  ブルガリス（Ｔｈｅｒｍｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）などの微生物由来のパノース生成α−アミラーゼを作用させて調製することもできる。さらに、α−１，４グルコシド結合をα−１，６グルコシド結合に変換できるアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・サイトイ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓａｉｔｏｉ）、ムコール・ヤバニカス（Ｍｕｃｏｒ  ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、ペニシリウム・クリソゲナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｒｙｓｏｇｅｎｕｍ）、キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など微生物由来のα−グルコシダーゼを澱粉質に作用させてパノース、４−α−イソマルトシルマルトース、４−α−イソマルトシルマルトトリオースなどのα−イソマルトシルグルコ糖質を調製することもできる。さらには、本出願人が国際特許出願公開ＷＯ  ０２／０５５７０８  Ａ１に開示したバチルス・グロビスポルス  Ｃ９（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ  Ｃ９、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７１４３）、バチルス・グロビスポルス  Ｃ１１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ  Ｃ１１、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７１４４）、バチルス・グロビスポルス  Ｎ７５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ  Ｎ７５、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５９１）あるいはアルスロバクター・グロビホルミス  Ａ１９（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ  Ａ１９、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７５９０）など微生物由来のα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素を澱粉質に作用させて調製したα−イソマルトシルグルコ糖質も有利に利用できる。
【００２１】
３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースを生成させるための酵素反応の条件は、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースが生成する方法であればよく、通常、α，α−トレハロースとα−イソマルトシルグルコ糖質とを含有する水溶液に、α−イソマルトシル転移酵素をα−イソマルトシルグルコ糖質グラム当たり０．１単位以上、望ましくは１乃至１００単位を、温度２０乃至８０℃、ｐＨ３乃至９から選ばれる条件で、０．１乃至１００時間、望ましくは、１乃至７０時間程度作用させればよい。本発明に用いるα−イソマルトシル転移酵素の活性１単位は、１ｗ／ｖ％パノースを基質にして、３０℃、ｐＨ６．０の条件で、１分間に１μモルのグルコースを生成する酵素量と定義した。この酵素反応液には、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースとともに、これに、α−イソマルトシル基がα−１，３結合で１乃至数個結合したオリゴ糖などが生成する。この反応液には、通常、グルコース、マルトオリゴ糖などの還元性糖質、サイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（以下、本明細書では単に「環状四糖」と略称する。）、未反応のα，α−トレハロースなども含まれる。
【００２２】
本発明の３−α−グルコシルα，α−トレハロースは、化学的に合成することも可能であるが、上記で生成した３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有溶液に、さらにグルコアミラーゼ（ＥＣ３．２．１．３）を作用させ、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースのα−１，６グルコシド結合を特異的に切断することにより容易に生成させることができる。
【００２３】
本発明において、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースからの３−α−グルコシルα，α−トレハロースの調製に用いるグルコアミラーゼとしては、α−１，６グルコシル結合を容易に加水分解し、α−１，３グルコシル結合を加水分解しにくい酵素であればよく、例えばアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）やリゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ）など微生物由来のグルコアミラーゼが有利に利用できる。
【００２４】
グルコアミラーゼを作用させる酵素反応の条件は、３−α−グルコシルα，α−トレハロースが生成する方法であればよく、通常、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有溶液にグルコアミラーゼを糖質グラム当たり１０単位以上、望ましくは１００乃至５０００単位を、温度２０乃至８０℃、ｐＨ３乃至９から選ばれる条件で、０．１乃至１００時間、望ましくは、１乃至７０時間程度作用させればよい。本発明に用いるグルコアミラーゼの活性１単位は、１ｗ／ｖ％可溶性澱粉を基質にして、４０℃、ｐＨ４．５の条件で、３０分間に１０ｍｇのグルコースを生成する酵素量と定義した。この酵素反応により、３−α−グルコシルα，α−トレハロースとともに、これに、α−ニゲロシル基がα−１，６結合で１乃至数個結合したオリゴ糖などが生成する。この反応液には、通常、グルコース、ニゲロースなどの還元性糖質、環状四糖、未反応のα，α−トレハロースなども含まれる。
【００２５】
本発明の３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース及び／又は３−α−グルコシルα，α−トレハロースを含有する水溶液に、適宜の糖質とこれを糖供与体として糖転移反応を触媒する酵素、例えば、澱粉質とα−アミラーゼ、澱粉質とサイクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ、乳糖とβ−ガラクトシダーゼなどを共存させ、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース及び／又は３−α−グルコシルα，α−トレハロースを糖受容体として糖転移反応させることにより、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース及び／又は３−α−グルコシルα，α−トレハロースに更に他の糖質が結合した構造を有する種々の糖質誘導体、すなわち、前記した３−α−グリコシルα，α−トレハロース類を容易に酵素合成することができる。澱粉質とα−アミラーゼ又は澱粉質とサイクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼを共存させて反応させた場合には、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースのイソマルトシル残基又は３−α−グルコシルα，α−トレハロースのグルコシル残基、さらにはα，α−トレハロースを構成するグルコシル残基にマルトオリゴ糖がα結合で付加した構造を有する３−α−グリコシルα，α−トレハロース類を酵素合成することができる。また、乳糖とβ−ガラクトシダーゼを共存させて反応させた場合には、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースのイソマルトシル残基又は３−α−グルコシルα，α−トレハロースのグルコシル残基にガラクトースがβ結合で付加した、構成糖としてグルコース以外にガラクトースを有するヘテロな３−α−グリコシルα，α−トレハロース類を酵素合成することもできる。
【００２６】
以上述べたような酵素反応によって生成される３−α−グリコシルα，α−トレハロース類含有溶液は、通常、固形物当たり、３−α−グリコシルα，α−トレハロース類を５乃至１５ｗ／ｗ％（以下、本明細書では、特にことわらない限り、ｗ／ｗ％を％と略称する。）程度含有しており、これを濾過、精製して液状又はシラップ状で使用することも、更に、乾燥して固状で利用することも随意である。
【００２７】
必要ならば、３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の特徴を生かすために、上記含有溶液を、更に、分離・精製して３−α−グリコシルα，α−トレハロース類高含有物にして利用することもできる。分離・精製の方法としては、例えば、酵母発酵法、膜濾過法、分別沈殿法、アルカリ処理法、カラムクロマトグラフィーなどにより夾雑糖類を分離除去する方法が適宜採用できる。とりわけ、特公昭６２−５０４７７号公報、特公平４−５０３１９号公報などに開示されている塩型強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより、夾雑糖類を除去して、高含有画分を採取する方法を有利に実施できる。この際、固定床方式、移動床方式、擬似移動床方式のいずれの方式を採用することも随意である。
【００２８】
また、必要ならば、３−α−グリコシルα，α−トレハロース類含有糖質を、常法に従って、水素添加し、それらに含まれるグルコース、マルト−スなどの還元性糖質を糖アルコールにして還元力を消失させ、実質的に還元性を示さない３−α−グリコシルα，α−トレハロース類含有糖質を製造することも有利に実施できる。
【００２９】
本発明の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類は、それ自身が非還元性で、極めて安定であり、低甘味ではあるが良質で温和な甘味を有し、また、化学的に安定であり、糖類と褐変反応を起こし易いアミノ酸、オリゴペプチド、更には、有効成分、活性の失われやすい生理活性物質などを安定化し得ると共に、浸透圧調節性、賦形性、照り付与性、保湿性、粘性、他の糖質の晶出防止性、難発酵性、澱粉老化防止性などの性質を具備している。
【００３０】
３−α−グリコシルα，α−トレハロース類の持つこれらの諸性質は、飲食物、嗜好物、飼料、餌料などの口中使用物、飲食物、更には、化粧品、医薬品などの各種組成物に有利に使用できる。とりわけ、３−α−グリコシルα，α−トレハロース類を、他の非還元性オリゴ糖、還元性オリゴ糖、糖アルコール及びミネラルから選ばれる１種以上の成分とともに含有せしめて各種組成物を製造することも有利に実施できる。
【００３１】
本発明の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類含有糖質及びこれから分離し得られる３−α−グリコシルα，α−トレハロース類高含有物は、そのまま甘味付けのための調味料として使用することができる。必要ならば、例えば、粉飴、ブドウ糖、マルトース、α，α−トレハロース、蔗糖、ラクトスクロース、異性化糖、蜂蜜、メイプルシュガー、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、ジヒドロカルコン、ステビオシド、α−グリコシルステビオシド、レバウディオシド、グリチルリチン、Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル、サッカリン、グリシン、アラニンなどのような他の甘味料の１種又は２種以上の適量と混合して使用してもよく、また必要ならば、デキストリン、澱粉、乳糖などのような増量剤と混合して使用することもできる。
【００３２】
また、本発明の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類含有糖質及びこれから分離し得られる３−α−グリコシルα，α−トレハロース類高含有物の粉末状製品は、そのままで、又は必要に応じて、増量剤、賦形剤、結合剤などと混合して、顆粒、球状、短棒状、板状、立方体、錠剤など各種形状に成型して使用することも随意である。
【００３３】
また、本発明の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類含有糖質及びこれから分離し得られる３−α−グリコシルα，α−トレハロース類高含有物の甘味は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの他の呈味を有する各種物質とよく調和し、耐酸性、耐熱性も大きいので、一般の飲食物の甘味付け、呈味改良に、また品質改良などに有利に利用できる。
【００３４】
例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチャップ、たくあん漬の素、白菜漬の素、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなど各種調味料として有利に使用できる。
【００３５】
また、例えば、せんべい、あられ、おこし、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、パン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、キャンデーなどの洋菓子、アイスクリーム、シャーベットなどの氷菓、果実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプレッドなどのペースト類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、福神漬、べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、ハム、ソーセージなどの畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、天ぷらなどの魚肉製品、ウニ、イカの塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐみりん干しなどの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで製造されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こんぶ巻などの惣菜食品、乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜のビン詰、缶詰類、清酒、合成酒、リキュール、洋酒などの酒類、紅茶、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリンミックス、ホットケーキミックス、即席しるこ、即席スープなどの即席食品、更には、離乳食、治療食、ドリンク剤などの各種飲食物への甘味付に呈味改良に、また、品質改良などに有利に利用できる。
【００３６】
また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上させる目的で使用することもできる。その他、タバコ、練歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トローチ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤など各種固形物、ペースト状、液状などで嗜好物、化粧品、医薬品などの各種組成物への甘味剤として、又は呈味改良剤、矯味剤として、更には、品質改良剤として有利に利用できる。
【００３７】
品質改良剤、安定剤としては、有効成分、活性などを失い易い各種生理活性物質又はこれを含む健康食品、医薬品などに有利に適応できる。例えば、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、ツモア・ネクロシス・ファクター−α、ツモア・ネクロシス・ファクター−β、マクロファージ遊走阻止因子、コロニー刺激因子、トランスファーファクター、インターロイキン２などのリンホカイン含有液、インシュリン、成長ホルモン、プロラクチン、エリトロポエチン、卵細胞刺激ホルモン、胎盤ホルモンなどのホルモン含有液、ＢＣＧワクチン、日本脳炎ワクチン、はしかワクチン、ポリオ生ワクチン、痘苗、破傷風トキソイド、ハブ抗毒素、ヒト免疫グロブリンなどの生物製剤含有液、ペニシリン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、硫酸カナマイシンなどの抗生物質含有液、チアミン、リボフラビン、Ｌ−アスコルビン酸、肝油、カロチノイド、エルゴステロール、トコフェロールなどのビタミン含有液、リパーゼ、エラスターゼ、ウロキナーゼ、プロテアーゼ、β−アミラーゼ、イソアミラーゼ、グルカナーゼ、ラクターゼなどの酵素含有液、薬用人参エキス、スッポンエキス、クロレラエキス、アロエエキス、プロポリスエキスなどのエキス類、ウイルス、乳酸菌、酵母などの生菌、ロイヤルゼリーなどの各種生理活性物質も、その有効成分、活性を失うことなく、安定で高品質の健康食品や医薬品などを容易に製造できる。
【００３８】
以上述べたような各種組成物に３−α−グリコシルα，α−トレハロース類含有糖質又はこれから分離し得られる３−α−グリコシルα，α−トレハロース類高含有物を含有せしめる方法は、その製品が完成するまでの工程で含有せしめればよく、例えば、混和、溶解、融解、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、固化など公知の方法が適宜選ばれる。その量は、通常、０．１％以上、望ましくは、０．５％以上含有せしめるのが好適である。
【００３９】
次に実験により本発明をさらに具体的に説明する。
【００４０】
＜実験１：α−イソマルトシル転移酵素の調製＞
【００４１】
＜実験１−１：培養＞
澱粉部分分解物『パインデックス＃４』４．０％（ｗ／ｖ）、酵母抽出物『アサヒミースト』１．８％（ｗ／ｖ）、リン酸二カリウム０．１％（ｗ／ｖ）、リン酸一ナトリウム・１２水塩０．０６％（ｗ／ｖ）、硫酸マグネシウム・７水塩０．０５％（ｗ／ｖ）、及び水からなる液体培地を、５００ｍｌ容三角フラスコに１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分間滅菌し、冷却して、バチルス・グロビスポルス  Ｃ１１株を接種し、２７℃、２３０ｒｐｍで４８時間回転振盪培養したものを種培養とした。容量３０Ｌのファーメンターに種培養の場合と同組成の培地を約２０ｌ入れて、加熱滅菌、冷却して温度２７℃とした後、種培養液１％（ｖ／ｖ）を接種し、温度２７℃、ｐＨ６．０乃至８．０に保ちつつ、４８時間通気攪拌培養した。培養後、培養物中の酵素活性を測定したところ、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性は約０．５５単位／ｍｌで、α−イソマルトシル転移酵素活性は約１．８単位／ｍｌであった。この培養物を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）して回収した上清約１８Ｌの酵素活性を測定したところ、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性は約０．５１単位／ｍｌ（総活性約９，１８０単位）で、α−イソマルトシル転移酵素活性は約１．７単位／ｍｌ（総活性約３０，４００単位）であった。
【００４２】
尚、前記２種類の酵素活性は次のようにして測定した。即ち、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性の測定は、マルトトリオースを濃度２％（ｗ／ｖ）となるよう１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解させ基質液とし、その基質液０．５ｍｌに酵素液０．５ｍｌ加えて、３５℃で６０分間酵素反応し、その反応液を１０分間煮沸して反応を停止させた後、その反応液中のマルトース含量を高速液体クロマトグラフィー法（以下、「ＨＰＬＣ」と略称する。）で定量することによって行った。α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素の活性１単位は、上記の条件下で１分間に１μモルのマルトースを生成する酵素量と定義した。尚、ＨＰＬＣは、『Ｓｈｏｄｅｘ  ＫＳ−８０１』カラム（昭和電工（株）製)を用い、溶離液として水を用いて、カラム温度６０℃、流速０．５ｍｌ／ｍｉｎの条件で行い、検出は示差屈折計『ＲＩ−８０１２』（東ソー（株）製）を用いて行なった。
【００４３】
また、α−イソマルトシル転移酵素活性の測定は、パノースを濃度２％（ｗ／ｖ）となるように１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解させて基質液とし、その基質液０．５ｍｌに酵素液０．５ｍｌ加えて、３５℃で３０分間酵素反応し、その反応液を１０分間煮沸して反応を停止させた後、その反応停止液中のグルコース量をグルコースオキシダーゼ法で定量することにより行った。α−イソマルトシル転移酵素の活性１単位は、上記の条件下で１分間に１μモルのグルコースを生成する酵素量と定義した。
【００４４】
＜実験１−２：部分精製酵素標品の調製＞
実験１−１の方法で得た培養上清約１８Ｌを８０％飽和硫安液で塩析して４℃、２４時間放置した後、その塩析沈殿物を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）して回収し１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に溶解後、同緩衝液に対して透析して粗酵素液約４１６ｍｌを得た。この粗酵素液は、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性を約８，４４０単位、α−イソマルトシル転移酵素活性を約２８，０００単位含んでいた。この粗酵素液を『セパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）ＦＰ−ＤＡ１３』ゲル（三菱化学（株）製）を用いたイオン交換クロマトグラフィーに供した。α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性成分、α−イソマルトシル転移酵素活性成分は、何れも、『セパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）ＦＰ−ＤＡ１３』ゲルには吸着せずに、両酵素活性は非吸着画分に検出された。この非吸着画分を回収し、１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ） ＨＲ Ｓ−２００』ゲル（アマシャム・ファルマシア・バイオテク（株）製）を用いたアフィニティークロマトグラフィー（ゲル量５００ｍｌ）に供した。酵素活性成分は、『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ） ＨＲ   Ｓ−２００』ゲルに吸着し、硫安１Ｍから０Ｍに濃度低下するリニアグラジエント、これに続いて、マルトテトラオース０ｍＭから１００ｍＭに濃度上昇するリニアグラジエントで溶出させたところ、α−イソマルトシル転移酵素活性成分とα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性成分は分離して溶出し、α−イソマルトシル転移酵素活性は硫安リニアグラジエント濃度が約０．３Ｍ付近の画分に検出され、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性は、マルトテトラオースのリニアグラジエント濃度が約３０ｍＭ付近の画分に検出された。そこで、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性画分とα−イソマルトシル転移酵素活性画分とを個別に回収し、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性を有する部分精製酵素標品、α−イソマルトシル転移酵素活性を有する部分精製酵素標品としてそれぞれ回収し、これら酵素標品を別々に精製した。
【００４５】
＜実験１−３：α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素の精製＞
実験１−２の方法で得たα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性を有する部分精製酵素標品を、１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲル（東ソー（株）製）を用いた疎水クロマトグラフィー（ゲル量３５０ｍｌ）に供した。本酵素活性成分は、『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲルに吸着し、硫安１Ｍから０Ｍに濃度低下するリニアグラジエントで溶出させたところ、硫安濃度約０．３Ｍ付近で吸着した酵素活性成分が溶出し、本酵素活性を示す画分を回収した。再度、この回収画分を、１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ） ＨＲ   Ｓ−２００』ゲルを用いたアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。この精製の各ステップにおけるα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性を有する酵素標品の酵素活性量、比活性及び収率を表１に示す。
【００４６】
【表１】
2005035958.tif 000005
【００４７】
精製したα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素標品を７．５％（ｗ／ｖ）濃度ポリアクリルアミドを含むゲル電気泳動により酵素標品の純度を検定したところ、蛋白バンドは単一で純度の高い標品であった。
【００４８】
＜実験１−４：α−イソマルトシル転移酵素の精製＞
実験１−２の方法で得たα−イソマルトシル転移酵素活性を有する部分精製酵素標品を、１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に対して透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲル（東ソー（株）製）を用いた疎水クロマトグラフィー（ゲル量３５０ｍｌ）に供した。本酵素活性成分は、『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲルに吸着し、硫安１Ｍから０Ｍに濃度減少するリニアグラジエントで溶出させたところ、硫安濃度約０．３Ｍ付近で溶出した。この本酵素活性を示す画分を集め回収した。再度、この回収液を、１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ） ＨＲ  Ｓ−２００』ゲルを用いたアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。この精製の各ステップに於けるα−イソマルトシル転移酵素活性を有する酵素標品の酵素活性量、比活性及び収率を表２に示す。
【００４９】
【表２】
2005035958.tif 000006
【００５０】
精製したα−イソマルトシル転移酵素活性有する酵素標品を７．５％（ｗ／ｖ）濃度ポリアクリルアミドを含むゲル電気泳動によりその純度を検定したところ、その蛋白バンドは単一で純度の高い標品であった。
【００５１】
＜実験２：転移糖Ａの生成＞
固形物として１７．１グラムのα，α−トレハロース、固形物として６．３グラムのパノース及び５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）を含む水溶液１００ｍｌを３０℃に調整した後、実験１−４の方法で調製した精製α−イソマルトシル転移酵素をパノース１ｇ当たり５単位加えて、２４時間、３０℃に保温して転移反応を行った。次いで１００℃に１０分間加熱して酵素を失活させ、反応を停止した。得られた反応液の糖組成をＨＰＬＣで調べた。ＨＰＬＣの結果を表３に示す。
【００５２】
【表３】
2005035958.tif 000007
【００５３】
表３に示すように、未反応のα，α−トレハロース（溶出時間５１．５分）、α−イソマルトシル転移酵素がパノースに作用して生成するグルコース（溶出時間５８．９分）や環状四糖（溶出時間６２．０分）などの他に、α−イソマルトシル転移酵素がパノースとα，α−トレハロースに作用し生じたと考えられる転移糖Ａ（以下、単に「転移糖Ａ」と略称する。）（溶出時間４４．２分）が検出され、その生成量は糖組成として１３．７％であることがわかった。α−イソマルトシル転移酵素の反応特異性を考慮すると、生成した転移糖Ａは、α，α−トレハロースにα−イソマルトシル残基がα−１，３結合した構造を有する３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースと推定された。
【００５４】
なお、ＨＰＬＣは、『エムシーアイゲル（ＭＣＩ  ＧＥＬ）ＣＫ０４ＳＳカラム』（三菱化学株式会社製造）を２本直列につないだものを用い、溶離液として水を用いて、カラム温度８０℃、流速０．４ｍｌ／分の条件で行い、検出は示差屈折計『ＲＩ−８０１２』（東ソー株式会社製造）を用いて行なった。
【００５５】
＜実験３：転移糖Ａの精製＞
実験２の方法で得られた反応液（約１００ｍｌ）に水酸化ナトリウムを添加しｐＨを１２に調整した後、９８℃で２時間保持して、グルコースなどの還元糖を分解した。続いて、三菱化学製イオン交換樹脂『ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ』と『ダイヤイオンＷＡ３０』を用いて脱色、脱塩し、さらに、『ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ』とオルガノ製アニオン交換樹脂『ＩＲＡ４１１』を用いて再度脱塩し、常法に従って濾過しエバポレータで濃縮し、糖濃度を測定したところ固形物として１８．８グラムを含む濃縮液が得られた。この濃縮液をＨＰＬＣで分析したところ、糖組成として、転移糖Ａを１５．７％、α，α−トレハロースを７６．６％、環状四糖を７．２％、その他の糖質を０．５％含有していることがわかった。
【００５６】
次いで、得られた濃縮液を分取ＨＰＬＣに供したところ、α，α−トレハロースは溶出時間約３６乃至４３分に溶出し、転移糖Ａと環状四糖とがほぼ同じ溶出時間５３乃至６０分に溶出した。転移糖Ａと環状四糖を含有する画分を回収し、固形物として３．６グラムの転移糖Ａ部分精製物を得た。ＨＰＬＣで分析したところ、糖組成として、転移糖Ａが６０．２％で、環状四糖が３９．８％であった。なお、分取ＨＰＬＣは、『オーディーエスエイキュー（ＯＤＳ−ＡＱ）Ｒ３５５−１５ＡＱカラム』（株式会社ワイエムシィ製造）を用い、溶離液として水を用いて、カラム温度２５℃、流速２０ｍｌ／分の条件で行い、検出は示差屈折計『ＥＲＣ−７５３０』（エルマ光学株式会社製造）を用いて行なった。
【００５７】
続いて、転移糖Ａ部分精製物中の環状四糖をイソマルトースに分解するために、イソマルトデキストラナーゼ処理を行った。即ち、転移糖Ａ部分精製物を糖濃度として１％含有する水溶液をｐH５．０、温度５０℃に調整し、アルスロバクター・グロビフォルミス由来イソマルトデキストラナーゼを固形物グラム当り１，０００単位加え、５０℃で２４時間処理した後、１００℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、酵素処理を停止した。得られた処理液を脱塩、濃縮し、固形物として３．４グラムの処理物を得た。ＨＰＬＣで分析したところ、糖組成として、転移糖Ａが５６．７％で、イソマルトースが４３．３％であった。なお、アルスロバクター・グロビフォルミス由来イソマルトデキストラナーゼは、『アグリカルチュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）』、第５２巻、第４９５頁乃至第５０１頁（１９８８年）に記載の方法で調製した。
【００５８】
得られた処理物中の転移糖Ａとイソマルトースを上記の分取ＨＰＬＣで分離し、転移糖Ａを含有する画分を回収し、それを濾過、濃縮して、固形物として１．６グラムの転移糖Ａ精製物を得た。ＨＰＬＣで分析したところ、糖組成として、転移糖Ａが９９．９％以上であり、極めて高純度の転移糖Ａ標品であることがわかった。
【００５９】
＜実験４：転移糖Ａの構造解析＞
【００６０】
＜実験４−１：質量分析＞
実験３の方法で得られた転移糖Ａ精製物を、サーモエレクトロン社製質量分析装置『ＬＣＱ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ』を用いてエレクトロスプレーイオン化法により質量分析したところ、質量数６８９のナトリウム付加分子イオンが顕著に検出され、本糖質の質量数が６６６であることが判明した。
【００６１】
＜実験４−２：構成糖の分析＞
実験３の方法で得られた転移糖Ａ精製物について、常法に従い硫酸で加水分解した後、ガスクロマトグラフィー法で構成糖を調べたところ、Ｄ−グルコースのみが検出され、本糖質の構成糖はＤ−グルコースであることが判明した。
【００６２】
＜実験４−３：メチル化分析＞
実験３の方法で得られた転移糖Ａ精製物について、常法に従ってメチル化した後、酸により加水分解し、続いて還元、アセチル化し、得られた部分メチルヘキシトールアセテートをガスクロマトグラフィー法で調べた。その結果、２，３，４，６−テトラメチル−１，５−ジアセチルグルシトール、２，４，６−トリメチル−１，３，５−テトラアセチルグルシトール、及び２，３，４−トリメチル−１，５，６−テトラアセチルグルシトールが１．９  ：  １．１  ：  １．０の比率で検出され、本糖質は、１位が結合に関与したグルコース残基が２分子と、１位と３位が結合に関与したグルコース残基が１分子と、１位と６位が結合に関与したグルコース残基が１分子とからなることが判明した。
【００６３】
＜実験４−４：核磁気共鳴法（ＮＭＲ）＞
実験３の方法で得られた転移糖Ａ精製物について、ＪＥＯＬ社製ＮＭＲ装置『ＪＭＮ−ＡＬ３００』を用いてＮＭＲ分析したところ、図１に示す１Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び図２に示す１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルが得られ、これらスペクトルから本糖質における各炭素の化学シフト値の帰属を行なった。結果を表４に示す。
【００６４】
【表４】
2005035958.tif 000008
【００６５】
以上の構造解析データから、転移糖Ａは図３に示す構造を有する糖質、即ち、化学式２で示される３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースであることが判明した。
【００６６】
化学式２：
【化２】
2005035958.tif 000009
【００６７】
＜実験５：部分分解物Ｂの調製＞
実験３の方法で得られた３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース精製物の約半量（固形物として０．８ｇ）を用いて、糖濃度２％、ｐＨ４．５の水溶液を調製し、それにグルコアミラーゼ（商品名『グルコチーム＃１２０００』、ナガセ生化学工業株式会社販売）を固形物１グラム当り３，０００単位加え、５０℃で２４時間反応させた後、１００℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、反応を停止した。得られた反応液を濾過、脱塩した後、ＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣの結果を表５に示す。
【００６８】
【表５】
2005035958.tif 000010
【００６９】
表５に示すように、未反応の３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース（溶出時間４４．２分）、グルコアミラーゼが３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースに作用して生成するグルコース（溶出時間５８．９分）の他に、グルコアミラーゼが３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースに作用して生じたと考えられる部分分解物Ｂ（以下、単に「部分分解物Ｂ」と略称する。）（溶出時間４７．０分）が検出され、その生成量は糖組成として７１．７％であることがわかった。グルコアミラーゼの反応特異性を考慮すると、生成した部分分解物Ｂは、α，α−トレハロースにグルコース残基がα−１，３結合した構造を有する３−α−グルコシルα，α−トレハロースと推定された。得られた反応物を、実験３に記載の分取ＨＰＬＣに供したところ、グルコースは溶出時間約３４乃至４８分に溶出し、部分分解物Ｂは溶出時間約４４乃至４８分に溶出し、未反応の３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースが溶出時間５３乃至６０分に溶出した。部分分解物Ｂを含有する画分を回収し、濾過、濃縮して、固形物として０．４９グラムの部分分解物Ｂ精製物を得た。ＨＰＬＣで分析したところ、糖組成として、部分分解物Ｂが９９．９％以上であり、極めて高純度の部分分解物Ｂ標品であることがわかった。
【００７０】
＜実験６：部分分解物Ｂの構造解析＞
【００７１】
＜実験６−１：質量分析＞
実験５の方法で得られた部分分解物Ｂ精製物を、実験４−１に記載の方法で質量分析したところ、質量数５２７のナトリウム付加分子イオンが顕著に検出され、本糖質の質量数が５０４であることが判明した。
【００７２】
＜実験６−２：構成糖の分析＞
実験５の方法で得られた部分分解物Ｂ精製物について、常法に従って硫酸で加水分解した後、ガスクロマトグラフィー法で構成糖を調べたところ、Ｄ−グルコースのみが検出され、本糖質の構成糖はＤ−グルコースであることが判明した。
【００７３】
＜実験６−３：メチル化分析＞
実験５の方法で得られた部分分解物Ｂ精製物について、常法に従ってメチル化した後、酸により加水分解し、続いて還元、アセチル化し、得られた部分メチルヘキシトールアセテートをガスクロマトグラフィー法で調べた。その結果、２，３，４，６−テトラメチル−１，５−ジアセチルグルシトールと２，４，６−トリメチル−１，３，５−テトラアセチルグルシトールとが２．１  ：  １．０の比率で検出され、本糖質は、１位が結合に関与したグルコース残基が２分子と、１位と３位が結合に関与したグルコース残基が１分子とからなることが判明した。
【００７４】
＜実験６−４：核磁気共鳴法（ＮＭＲ）＞
実験５の方法で得られた部分分解物Ｂ精製物についてＮＭＲ分析したところ、図４に示す１Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び図５に示す１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルが得られ、これらスペクトルから本糖質における各炭素の化学シフト値の帰属を行なった。結果を表６に示す。
【００７５】
【表６】
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【００７６】
以上の構造解析データから、部分分解物Ｂは図６に示す構造を有する糖質、即ち、化学式３で示される３−α−グルコシルα，α−トレハロースであることが確認された。
【００７７】
化学式３：
【化３】
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【００７８】
以下、本発明の３−α−グリコシルα，α−トレハロース類及びそれを含む糖質の製造方法を実施例１乃至８で、また、３−α−グリコシルα，α−トレハロース類及びそれを含む糖質を含有せしめた組成物を実施例９乃至１９で示す。
【実施例１】
【００７９】
α，α−トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』）とパノース（（株）林原生物化学研究所製造）をそれぞれ２５％濃度と９．２％濃度になるように水に混合、溶解させた後、ｐＨ６．０、温度３５℃に調製し、これに実験１−２の方法で調製したα−イソマルトシル転移酵素活性を有する部分精製酵素標品をパノース１ｇ当たり２単位の割合になるように加え、４８時間反応させた。その反応液を９５℃に加熱し１０分間保った後、冷却し、濾過して得られる濾液を、常法に従って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に、濃縮し、乾燥し、粉砕して、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有粉末を固形物当たり収率約９１％で得た。
【００８０】
本品は、固形物当たり、グルコース８．０％、α，α−トレハロース６６．３％、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース１３．９％、環状四糖６．０％、及びその他の糖質を５．８％含有しており、温和な甘味、適度の粘度、保湿性、包接性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、包接剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例２】
【００８１】
実施例１の方法で得た３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有粉末を温水に溶解し、濃度６０％に調整した後、強酸性カチオン交換樹脂（アンバーライトＣＲ−１３１０、Ｎａ型、オルガノ株式会社製造）を用いたカラム分画を行なった。樹脂を内径５．４ｃｍのジャケット付きステンレス製カラム４本に充填し、直列につなぎ樹脂層全長２０ｍとした。カラム内温度６０℃に維持しつつ、糖液を樹脂に対して５ｖ／ｖ％加え、これに６０℃の温水をＳＶ０．１３で流して分画し、溶出液の糖組成をＨＰＬＣ法でモニターし、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有画分を採取し、脱塩し、濃縮して、濃度７０％の３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有シラップを固形物当たり収率約１６％で得た。
【００８２】
本品は、固形物当たり、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース６１．５％、環状四糖３８．３％、及びその他の糖質を０．２％含有しており、還元性をほとんど示さず、アミノカルボニル反応を起こしにくく、温和な甘味、適度の粘度、保湿性、包接性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、包接剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例３】
【００８３】
実施例２の方法で得た３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有シラップを濃度２％、ｐＨ５．０、温度５０℃に調整し、これに実験３に記載の方法で調製したイソマルトデキストラナーゼを固形物グラム当り５００単位の割合になるように加え、４８時間反応させた。その反応液を９５℃に加熱し１０分間保った後、冷却し、濾過して得られる濾液を、常法に従って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に、濃度６５％に濃縮した後、実施例２に記載の強酸性カチオン交換樹脂を用いたカラム分画を行ない、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース高含有画分を採取し、脱塩し、濃縮し、乾燥し、粉砕して、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース高含有粉末を固形物当たり収率約４８％で得た。
【００８４】
本品は、固形物当たり、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースを９８％含有しており、実質的に還元性を示さず、アミノカルボニル反応を起こしにくく、温和な低甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、風味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例４】
【００８５】
実施例１の方法で得た３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有粉末を温水に溶解し、濃度１０％、ｐＨ４．５、温度５０℃に調整し、これにグルコアミラーゼ剤（ナガセ生化学工業株式会社製造、商品名「グルコチーム」）を固形物１ｇ当たりそれぞれ１０００単位の割合になるように加え、４８時間反応させた。その反応液を９５℃に加熱し１０分間保った後、冷却し、濾過して得られる濾液を、常法に従って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に、濃度６５％に濃縮して、３−α−グルコシルα，α−トレハロース含有シラップを固形物当たり収率約９５％で得た。
【００８６】
本品は、固形物当たり、グルコース１４．７％、α，α−トレハロース６６．２％、３−α−グルコシルα，α−トレハロース１１．０％、環状四糖６．０％、及びその他の糖質を２．１％含有しており、温和な甘味、適度の粘度、保湿性、包接性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、包接剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例５】
【００８７】
実施例４の方法で得た３−α−グルコシルα，α−トレハロース含有シラップを原料に用いて、実施例２に記載の強酸性カチオン交換樹脂を用いたカラム分画を行ない、３−α−グルコシルα，α−トレハロース高含有画分を採取し、脱塩し、濃縮し、乾燥し、粉砕して、３−α−グルコシルα，α−トレハロース高含有粉末を固形物当たり収率約６％で得た。
【００８８】
本品は、固形物当たり、３−α−グルコシルα，α−トレハロースを９８％含有しており、実質的に還元性を示さず、アミノカルボニル反応を起こしにくく、温和な低甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、風味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例６】
【００８９】
実験１−１の方法で得た培養上清約１８ＬをＵＦ膜濃縮し、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素を７．７単位／ｍｌとα−イソマルトシル転移酵素を２５．３単位／ｍｌ含有する濃縮酵素液約１ｌを回収した。
【００９０】
α，α−トレハロース（株式会社林原商事販売、登録商標『トレハ』）とタピオカ澱粉をそれぞれ濃度約１２．５％含む澱粉乳とし、これにα−アミラーゼ（商品名『ネオスピターゼ』、ナガセ生化学工業（株）製）を澱粉固形物１ｇ当り０．２％加え、８５乃至９０℃で約２０分間反応させ、次いで１２０℃に２０分間オートクレーブし、更に約３５℃に急冷してＤＥ約２のα，α−トレハロース含有液化溶液を得、これに上記の濃縮酵素液を澱粉固形物１ｇ当り０．３ｍｌの割合になるように加え、ｐＨ６．０、温度３５℃で４８時間反応させた。その反応液を９５℃で３０分間保った後、冷却し、濾過して得られる濾液を、常法に従って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度７０％の３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有シラップを原料固形物当たり収率約９０％で得た。
【００９１】
本品は、固形物当たり、グルコース２．７％、α，α−トレハロース４０．２％、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース１８．２％、環状四糖９．８％、及びその他の糖質を２９．１％含有しており、温和な甘味、適度の粘度、保湿性、包接性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、包接剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例７】
【００９２】
実施例６の方法で得た３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有シラップを、濃度３０％、ｐＨ４．５、温度５０℃に調整し、これにグルコアミラーゼ剤（ナガセ生化学工業株式会社製造、商品名「グルコチーム」）を１ｇ当たりそれぞれ１，０００単位の割合になるように加え、４８時間反応させた。その反応液を９５℃に加熱し１０分間保った後、冷却し、濾過して得られる濾液を、常法に従って、活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、濃縮した後、常法に従って、水素添加して還元性糖を糖アルコール化し、再度、脱色し、脱塩し、濃縮し、乾燥し、粉砕して、３−α−グルコシルα，α−トレハロース含有粉末を固形物当たり収率約８５％で得た。
【００９３】
本品は、固形物当たり、ソルビトール１８．３％、α，α−トレハロース４２．１％、３−α−グルコシルα，α−トレハロース１３．７％、環状四糖９．９％、及びその他の糖アルコールなどを１６．０％含有しており、実質的に還元性を示さず、アミノカルボニル反応を起こしにくく、温和な甘味、適度の粘度、保湿性、包接性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、包接剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例８】
【００９４】
実施例５の方法により得た３−α−グルコシルα，α−トレハロース高含有粉末と乳糖をそれぞれ約２５％含む水溶液とし、これをｐＨ６．０、温度４０℃に調整した後、β−ガラクトシダーゼ剤（大和化成（株）製、商品名「ビオラクタ」）を乳糖固形物当たり３単位の割合になるように加え、ｐＨ６．０、温度４０℃で２４時間反応させた。その反応液を９５℃で３０分間保った後、冷却し、濾過して得られる濾液を、常法に従って活性炭で脱色し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度７０％の４−β−ガラクトシル−３−α−グルコシルα，α−トレハロース含有シラップを原料固形物当たり収率約９０％で得た。
【００９５】
本品は、固形物当たり、グルコース２２．７％、ガラクトース３．４％、乳糖５．９％、３−α−グルコシルα，α−トレハロース３５．１％、４−β−ガラクトシル−３−α−グルコシルα，α−トレハロース１３．５％、及びその他の糖質を１９．４％含有しており、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、離水防止剤、安定剤、賦形剤、粉末化基材などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。
【実施例９】
【００９６】
＜甘味料＞
実施例１の方法により得た粉末状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有物１重量部に、α−グリコシルステビオシド（商品名『αＧスイート』、東洋精糖株式会社販売）０．０１重量部、及びＬ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（商品名『アスパルテーム』）０．０１重量部を均一に混合し、顆粒成形機にかけて顆粒状甘味料を得た。本品は、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースを含有し、甘味の質に優れた、蔗糖の約２倍の甘味度を有する甘味料組成物である。又、本品は、室温保存下、変質劣化の懸念が無く、安定である。
【実施例１０】
【００９７】
＜ハードキャンディー＞
濃度５５％蔗糖溶液１００重量部に実施例６の方法で得たシラップ状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有物５０重量部を加熱混合し、次いで減圧下で水分２％未満になるまで加熱濃縮し、これにクエン酸０．６重量部及び適量のレモン香料と着色料とを混和し、常法に従って成形し、製品を得た。本品は歯切れ、呈味、風味とも良好で、蔗糖の晶出も起きず、吸湿性少ない安定で高品質のハードキャンディーである。
【実施例１１】
【００９８】
＜チューインガム＞
ガムベース３重量部を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これに無水結晶マルチトール２重量部、キシリトール２重量部、実施例４の方法で得たシラップ状３−α−グルコシルα，α−トレハロース含有物３重量部を加え、更に適量の香料と着色料とを混合し、常法に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包装して製品を得た。本品は、テクスチャー、呈味、風味良好で、低う蝕性、低カロリーのチューインガムとして好適である。
【実施例１２】
【００９９】
＜粉末ペプチド＞
４０％食品用大豆ペプチド溶液（商品名『ハイニュートＳ』、不二製油株式会社販売）１重量部に、実施例２の方法で得たシラップ状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有物２重量部を混合し、プラスチック製バットに入れ、５０℃で減圧乾燥し、粉砕して粉末ペプチドを得た。本品は風味良好で、プレミックス、冷菓などの低カロリー製菓材料として有用であるのみならず、経口流動食、経管流動食のための難消化性の食物繊維、整腸材料、健康食品材料としても有用である。
【実施例１３】
【０１００】
＜浴用剤＞
ユズの皮ジュース１重量部に対して、実施例２の方法で得たシラップ状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有物１０重量部の割合で混合し、噴霧乾燥して粉末化して、ユズの皮エキス含有３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有粉末を得た。
【０１０１】
本粉末５重量部に、焼塩９０重量部、α，α−トレハロース含水結晶２重量部、無水ケイ酸１重量部及びα−グルコシルヘスペリジン（商品名『αＧヘスペリジン』、株式会社林原販売）０．５重量部を混合して浴用剤を製造した。
【０１０２】
本品は、ユズの香りも豊かで、入浴用の湯に１００乃至１０、０００倍に希釈して利用すればよく、入浴後は、肌がしっとりしなめらかで、湯冷めしない高品質の浴用剤である。
【実施例１４】
【０１０３】
＜化粧用クリーム＞
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５重量部、実施例２の方法で得たシラップ状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース高含有物２重量部、α−グルコシルルチン（商品名『αＧルチン』、株式会社林原販売）１重量部、流動パラフィン１重量部、トリオクタン酸グリセリン１０重量部及び防腐剤の適量を常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸２重量部、１，３−ブチレングリコール５重量部及び精製水６６重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて撹拌混合し、化粧用クリームを製造した。本品は、抗酸化性を有し、安定性が高く、高品質の日焼け止め、美肌剤、色白剤などとして有利に利用できる。
【実施例１５】
【０１０４】
＜練歯磨＞
第二リン酸カルシウム４５重量部、ラウリル硫酸ナトリウム１．５重量部、グリセリン２５重量部、ポオキシエチレンソルビタンラウレート０．５重量部、実施例７の方法で得た粉末状３−α−グルコシルα，α−トレハロース含有物１３重量部、サッカリン０．０２重量部及び防腐剤０．０５重量部を水１５重量部と混合して練歯磨を得た。本品は、界面活性剤の洗浄力を落とすことなく、嫌味を改良し、使用後感も良好である。
【実施例１６】
【０１０５】
＜流動食用固体製剤＞
実施例１の方法で得た粉末状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース含有物２００重量部、α，α−トレハロース含水結晶１００重量部、マルトテトラオース高含有粉末２００重量部、粉末卵黄２７０重量部、脱脂粉乳２０９重量部、塩化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．８重量部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．０１重量部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、ビタミンＥアセテート０．６重量部及びニコチン酸アミド０．０４重量部からなる配合物を調製し、この配合物２５グラムずつ防湿性ラミネート小袋に充填し、ヒートシールして製品を得た。
【０１０６】
本品は、安定性に優れた流動食用固体製剤である。本品１袋分を約１５０乃至３００ｍｌの水に溶解して流動食とし、経口的、又は鼻腔、胃、腸などへ経管的使用方法により利用され、生体へのエネルギー補給用に有利に利用できる。
【実施例１７】
【０１０７】
＜錠剤＞
アスピリン５０重量部に実施例３の方法で得た粉末状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース高含有物１４重量部、コーンスターチ４重量部を充分に混合した後、常法に従って打錠機により打錠して厚さ５．２５ｍｍ、１錠６８０ｍｇの錠剤を製造した。
【０１０８】
本品は、３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースの賦形性を利用したもので、吸湿性がなく、物理的強度も充分にあり、しかも水中での崩壊はきわめて良好である。
【実施例１８】
【０１０９】
＜糖衣錠＞
重量１５０ｍｇの素錠を芯剤とし、これに実施例３の方法で得た粉末状３−α−イソマルトシルα，α−トレハロース高含有物４０重量部、プルラン（平均分子量２０万）２重量部、水３０重量部、タルク２５重量部及び酸化チタン３重量部からなる下掛け液を用いて、錠剤重量が約２３０ｍｇになるまで糖衣し、次いで、環状四糖結晶粉末６５重量部、プルラン１重量部及び水３４重量部からなる上掛け液を用いて、糖衣し、更に、ロウ液で艶出しして光沢のある外観の優れた糖衣錠を得た。本品は、耐衝撃性にも優れており、高品質を長期間維持する。
【実施例１９】
【０１１０】
＜外傷治療用膏薬＞
実施例５の方法で得た粉末状３−α−グルコシルα，α−トレハロース高含有物７０重量部、マルトース３００重量部、及び蒸留水３０重量部に、ヨウ素３重量部を溶解したメタノール５０重量部を加え混合し、更に１０ｗ／ｖ％プルラン水溶液２００重量部を加えて混合し、適度の延び、付着性を示す外傷治療用膏薬を得た。本品は、３−α−グルコシルα，α−トレハロースを含有する、経時変化の少ない商品価値の高い膏薬である。また、本品は、ヨウ素による殺菌作用のみならず、マルトースによる細胞へのエネルギー補給剤としても作用することから治癒期間が短縮され、創面もきれいに治る。
【産業上の利用可能性】
【０１１１】
本発明の新規３−α−グリコシルα，α−トレハロース類とその製造方法並びに用途の確立は、飲食物、化粧品、医薬品分野における工業的意義が極めて大きい。
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１】転移糖Ａ精製物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２】転移糖Ａ精製物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】３−α−イソマルトシルα，α−トレハロースの構造を示す図である。
【図４】部分分解物Ｂ精製物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図５】部分分解物Ｂ精製物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図６】３−α−グルコシルα，α−トレハロースの構造を示す図である。
【符号の説明】
【０１１３】
図３及び図６中のａ，ｂ，ｃ及びｄはグルコース残基を意味し、表４及び表６中のグルコース残基ａ，ｂ，ｃ及びｄに対応している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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