(57)【要約】 【課題】 水溶性プロポリスプロポリスの製造方法を提供する。【解決手段】 プロポリス原料塊をアルコールに浸漬した後、イオン化エネルギーを照射して抽出して無アルコールプロポリス抽出粉末に製造し、そこにアルカリ及び有機酸を添加して凍結乾燥して高水溶性のプロポリスを製造する。 本発明のプロポリスは、抽出率及び有効成分であるプラボノイドの含量が改善されただけではなく、プロポリス抽出物固有の粘着性による使用上の不便さを解消して飲用が容易で水に完全に溶解して沈殿物が生じない物性を持つことによって健康機能食品及び加工食品の原料として容易に使用できる。 【選択図】  図2
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
1) プロポリス原料塊を粉砕してアルコールに溶解した後、イオン化エネルギーを照射して抽出する工程(第1工程)、及び 
2) 前記第1工程で製造したプロポリス抽出粉末に水を加えた後、アルカリと有機酸を添加して水溶化する工程(第2工程)からなる水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項２】
第1工程でアルコールが、80%酒精(エタノール)であることを特徴とする、請求項1に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項３】
第1工程でイオン化エネルギーが、アルファ(α)線、ベータ(β)線、ガンマー(γ)線を含むことを特徴とする、請求項1に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項４】
イオン化エネルギーが、ガンマー線で、3〜30kGy照射することを特徴とする、請求項3に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項５】
第2工程で水、プロポリス抽出粉末、アルカリの容積比率が、10〜15：1：0.1〜0.8であることを特徴とする、請求項1に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項６】
アルカリが、水酸化ナトリウム、エタノールアミン、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムからなる群から選択されることを特徴とする、請求項5に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項７】
アルカリが、炭酸ナトリウムであることを特徴とする、請求項6に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項８】
第2工程で有機酸が、ギ酸、乳酸、クエン酸、酢酸からなる群から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項９】
有機酸が、クエン酸であることを特徴とする、請求項8に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【請求項１０】
第2工程でpHが、6.0〜7.0であることを特徴とする、請求項1に記載の水溶性プロポリスの製造方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水溶性プロポリスの製造方法に関するものである。詳細には、プロポリス原料塊をアルコールに浸漬した後、イオン化エネルギーを照射して抽出し、無アルコールプロポリス抽出粉末に製造し、そこにアルカリ及び有機酸を添加し、凍結乾燥して高水溶性のプロポリスを製造するものである 
【背景技術】
【０００２】
プロポリス(Propolis)は、ミツバチが植物から樹脂(resin)を収集してミツバチ自身が分泌する唾液とワックスを混合して作る物質であり、植物性樹脂、ワックス、精油、花粉、プラボノイド及びその他有機物とミネラル等で構成されている。プロポリスは、抗菌・抗炎症作用、鎮痛・痲酔作用、免疫作用、抗酸化作用、抗ウイルス作用、抗癌作用、抗HIV・抗AIDS作用等の生体免疫機能活性化作用等、多様な生理活性機能を持っていて、それはプロポリスに含有された植物由来のフェノール性化合物であるプラボノイドに起因すると報告されている。 
【０００３】
東医宝鑑には、プロポリスが「露蜂房」という名前で記録され喘息等に効果があることが説明されている。現代に至っては、風邪、アレルギー、アトピー、喘息、火傷、皮膚美容、老化抑制等各種の免疫性疾患に民間医薬として多く使用されている。最近では、健康及び老化に対する関心の高まりと健康機能食品法令にプロポリスが公示原料として公布(2004年 1月 31日)されたことにより、需要がさらに増加するものと予想されている。 
【０００４】
上記のようなプロポリスの人体有益性による需要増加が予想されるが、プロポリスの抽出方法と製造後の使用上の不便さ及び非水溶性のため、多様な用途に使用するのには多くの問題点が提示されている。 
【０００５】
従来のプロポリス抽出方法は、酒精(エタノール)と水、グリセリン等を利用したもので、水によく溶解せず、水に溶解しても脂肪成分の乳化剤を使用するため吸収率が低く、消化障害が起きるため大衆性がほとんどない。即ち、従来の酒精で抽出したプロポリスは、消化性及び吸収率が低く水によく溶解せず、粘性が高く一旦皮膚に付くと取れない。また食味が悪く臭いがきついため、一般人は容易に摂取できなかった。また、水で抽出したものは、プロポリスの有効成分であるプラボノイドの含量が約0.2%程度と低く、プロポリス本来の機能である抗菌作用及び抗酸化作用がほとんど発揮されていない。それで、このような問題点を改善するために多くの研究が進められている。 
【０００６】
大韓民国特許公開第1999-75441号公報(特許文献１)には、プロポリス原料塊を95%エタノールで抽出して減圧濃縮した後、原料重量の5〜10倍の水を加えて全体重量の10〜20%の乳化剤を添加して均質になるように混合した後、減圧濃縮して水溶性ゲル状態のプロポリスを製造する方法が記載されている。大韓民国特許公開第2002-76979号公報(特許文献２)には、プロポリス原料塊を95%エタノールで抽出して65〜70%の溶液になるように水を加えた後、クエン酸ナトリウムでpHが6〜7になるように混合してワックスを除去して減圧濃縮後、プロピレングリコールで水溶性プロポリスを製造する方法が記載されている。日本特許公開第2001-275587号公報(特許文献３）には、低温で遠赤外線を利用してプロポリス原液を抽出及び製造する方法が記載されている。 
【０００７】
しかし、前記大韓民国特許公開第1999-75441号公報(特許文献１)は、製造工程の簡潔性は認められるが、10〜20%の脂肪成分の乳化剤(ポリソルベイト、モノグリセリンアセタート、レシチン)の使用により吸収率低下と消化障害の問題点があり、大韓民国特許公開第2002-76979号公報(特許文献２)は、実施例A-1でプロポリスの水溶化溶剤としてプロピレングリコールを使用しているが、これは長期保管時、脂肪成分の不安定さによる層分離が物性の変化を誘発させ、実施例A-2で脂肪成分の安定化を考慮して添加された乳化剤(グリセリン)は、プロポリス抽出物の活性効果と人体の吸収率を阻害するため大衆性が考慮されていない方法である。併せて、このような問題点を補完するために添加された活性化剤及び非甘味料剤の使用は多少非経済的なものであると判断される。また、日本特許公開第2001-275587号公報(特許文献３)は、短時間にプロポリス原液を抽出できる経済的な抽出方法ではあるけれど、非水溶性のプロポリス原液であるため服用時の吸収率の低下が予想される。 
【０００８】
以上のことを鑑みて、本発明者らは、前記問題点を解決するためにプロポリス原料塊にイオン化エネルギーを照射して抽出した後、乳化剤を全く使用しないで水溶性プロポリスを製造した。このプロポリス抽出物において該抽出率と含有されているプラボノイドの含量が増加し、脂質過酸化抑制効果があることを確認して本発明を完成した。 
【特許文献１】大韓民国特許公開第1999-75441号公報
【特許文献２】大韓民国特許公開第2002-76979号公報
【特許文献３】日本特許公開第2001-275587号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、プロポリス原料塊にイオン化エネルギーを照射して抽出した後、乳化剤をまったく使用しないで水溶性プロポリスを製造する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、水溶性プロポリスの製造方法を提供する。 
【００１１】
以下、本発明を詳細に説明する。  
本発明の製造方法は、 
1) プロポリス原料塊を粉砕してアルコールに溶解した後、イオン化エネルギーを照射して抽出する工程(第1工程)、及び 
2) 前記第1工程で製造したプロポリス抽出粉末に水を加えた後、アルカリと有機酸を添加して水溶化する工程(第2工程)からなる。 
【００１２】
第1工程は、粉砕したプロポリス原料塊をアルコールに溶解浸漬させた後、1〜2時間撹拌する。その溶液にイオン化エネルギーを室温で分当り10〜20Gyにして3〜30kGyを照射して35〜40℃で4〜6時間抽出した後、ろ過、濃縮及び凍結乾燥して無アルコールプロポリス抽出粉末に製造する。前記アルコールは、80%酒精(エタノール)であることが好ましく、前記イオン化エネルギーは、α、β、γ線などを含み、本発明ではγ線が最も好ましい。 
【００１３】
第2工程では、水、プロポリス粉末及びアルカリの容積比率、10〜15：1：0.1〜0.8にして室温で1〜2時間撹拌する。アルカリは、プロポリスの疎水性基を親水性基に転換して水溶性プロポリスを作る役割をし、アルカリとしては水酸化ナトリウム、エタノールアミン、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム等が挙げられ、本発明では炭酸ナトリウムが最も好ましい。 
【００１４】
ここに、1〜6%の有機酸を1〜10ml程度加え室温で2〜3時間撹拌することにより溶液のpHを6.0〜7.0に調節する。有機酸は、プロポリス溶液のpHを中性に調節するために使用する。有機酸としては、ギ酸、乳酸、クエン酸、酢酸等が挙げられ、本発明ではクエン酸が好ましい。 
【００１５】
前記溶液を濃縮及び凍結乾燥して無アルコール水溶性プロポリス抽出粉末を得た。 
【発明の効果】
【００１６】
本発明のプロポリスは、抽出率及び有効成分であるプラボノイドの含量が改善されただけではなく、プロポリス抽出物固有の粘着性による使用上の不便を解消し、飲用が容易で水に完全に溶解して沈殿物が生じない物性を持つことによって健康機能食品及び加工食品の原料として容易に使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明では、アルカリとクエン酸の比率により水溶化される程度が異なる。即ち、水溶化させるために使用するアルカリの量をプロポリス抽出粉末より少ない比率で添加すると溶解する程度が減少し、反面アルカリとプロポリス抽出粉末の比率を適切に組合わせて水溶化した後、pH調節剤であるクエン酸を過量添加すると溶解程度が減少する。これは、水溶性プロポリスが非水溶性プロポリスに還元されるためである。 
【００１８】
本発明のプロポリス抽出物の抽出率は、イオン化エネルギーを照射していないもの(0kGy)が42%、3〜30kGy照射したものは60〜62%で、イオン化エネルギーを照射したプロポリスの抽出率がイオン化エネルギーを照射していないものより18〜20%高く現れた。 
【００１９】
また、本発明のプロポリス抽出物のプラボノイド含量は、3〜7kGyのイオン化エネルギーを照射したものがイオン化エネルギーを照射していないものより4.6mg/g高く現れたが、8〜15kGyと20〜30kGyのイオン化エネルギーを照射したプロポリス抽出物のプラボノイド含量はイオン化エネルギーを照射していないものより各々4.4mg/g、7.3mg/g低く現れた。 
【００２０】
また、本発明のプロポリス抽出物のCCl4投与による生体組織内脂質の過酸化程度は、非照射非水溶性プロポリス試料、照射水溶性及び非水溶性プロポリス試料(3〜7kGy)の2mg/マウス、投与群でCCl4対照群に比べて顕著に抑制され、照射水溶性プロポリス試料は非照射及び照射非水溶性プロポリス試料より5〜17%低い抑制効果を示した。また、照射水溶性プロポリスの濃度を二倍(4mg/マウス)にした時、2mg/マウス、投与した照射水溶性プロポリス試料より12%高い抑制効果を示した。 
【００２１】
したがって、本発明のプロポリス抽出物の抽出率は、イオン化エネルギー照射量に比例し、有効成分であるプラボノイドの含量は3〜7kGyのイオン化エネルギーを照射した時、最適の含量であり、マウスの肝組織で脂質過酸化抑制効果を示すため、抗酸化剤として有用に使用できる。 
【００２２】
以下、本発明を実施例にもとづいてさらに詳細に説明する。 
但し、下記の実施例は本発明を例示するだけのものであり、本発明が下記の実施例により限定されるものではない。 
実施例１
【００２３】
水溶性プロポリスの製造方法 
1.プロポリスの抽出方法 
冷凍保管された樹脂状態のプロポリス原料塊(中国産)を粉砕器で細かく粉砕した後、イオン化エネルギー照射及び水溶性プロポリス製造の試料に使用した。
【００２４】
反応混合器内に粉砕したプロポリス原料塊と80%酒精を1：10の容積比率で入れ、室温で1時間撹拌した後、60Coガンマー放射線照射装置を利用して総10kGy(10Gy/分)のイオン化エネルギーを室温で反応混合器に照射した。照射後付加的に40℃で4時間抽出して常温まで冷却した後、ろ過及び濃縮して凍結乾燥し、無アルコールプロポリス抽出粉末を製造した。 
【００２５】
2. プロポリス粉末の水溶化 
前記1で製造したプロポリス抽出粉末を水溶化させるために、水、プロポリス抽出粉末、炭酸ナトリウムの容積比率を12 : 1 : 0.3にして室温で2時間激しく撹拌した。そこに3%のクエン酸を6ml添加して室温で3時間さらに撹拌した。前記溶液を濃縮及び凍結乾燥して無アルコール水溶性プロポリス抽出粉末に製造した。 
【００２６】
前記製造した水溶性プロポリス抽出粉末の水に対する溶解程度を調べるために溶解程度を測定した結果、99%以上の溶解程度を示した。 
【００２７】
したがって、本発明のプロポリス抽出物を水溶化するために使用した炭酸ナトリウムとpH調節剤として使用したクエン酸の比率が最も大きい影響を及ぼすことが分かった。 
【００２８】
本発明のエタノール抽出工程は図1に示し、本発明の水溶性プロポリスの製造過程は図2に示した。 
【００２９】
<実験例 1> プロポリスの抽出率 
イオン化エネルギーに対する本発明のプロポリスの抽出率増加効果を調べるために、下記の実験を行なった。 
【００３０】
プロポリス原料塊1gを粉砕して80%エタノール15mlを加えてイオン化エネルギーを照射した後、24時間定置した。10分間撹拌して遠心分離(3000rpm, 10分)して上澄み液を確保して残余物を80%エタノール10mlで稀釈し、上記と同じ方法を3回繰り返した。抽出液を集めて全量が50mlになるようにした。この溶液10mlを105℃で4時間乾燥してプロポリス抽出物にし、試料から下記数式1のように計算して80%エタノールでの抽出率を求めた。 
【００３１】
数式 1 
抽出率(%) ＝ [10ml抽出溶液の乾燥残余分(g)×5/試料量(g)]×100 
【００３２】
結果は、表1及び図3に示した。
【表１】
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【００３３】
表1及び図3に示したように、本発明のプロポリス抽出物の抽出率はイオン化エネルギーを照射していないもの(0kGy)が42%、3〜7kGy及び8〜15kGy照射したものが60%、20〜30kGy照射したものは62%で、イオン化エネルギーを照射したプロポリスの抽出率がイオン化エネルギーを照射していないものより18〜20%高く現れた。 
【００３４】
これは、プロポリスの樹脂内に含まれているテルペンとフラボン化合物が縮合して生成された縮合物がイオン化エネルギーとの相互作用により樹脂から加水分解されたもので、イオン化エネルギーの適用量が増加するほど抽出率がさらに高く現れることが分かる。 
【００３５】
したがって、本発明のプロポリス抽出物の抽出率は、イオン化エネルギーの照射量に比例することが分かる。 
【００３６】
<実験例 2> プロポリス抽出物のプラボノイド含量 
本発明のプロポリス抽出物のプラボノイド含量を調べるために、下記の実験を行なった。
【００３７】
下記でクエルセチン(Quercetin,特級)、エタノール(特級)、10%硝酸アルミニウム溶液、0.1M 酢酸カリウム溶液を試薬に使用した。 
【００３８】
クエルセチン(Quercetin)50mgを正確に測定して80%エタノールで溶解して容積が5mlになるようにした。前記溶液にエタノールを加えて100、20、10倍に稀釈した後、0.01、0.05、0.1mg/mlの標準溶液を各々製造して吸光度を求めて検量線を作成した。前記実施例で得たプロポリス抽出粉末10mgに80%エタノール1mlを加えて溶解することにより試験溶液を製造し、該試験溶液0.05mlに10%硝酸アルミニウム溶液0.1mlと0.1M 酢酸カリウム0.1mlを加えた後、80%エタノールで全体容積が5mlになるようにして充分に撹拌して室温で40分間定置した。水を対照液として410nmで吸光度を測定した。測定した試料の吸光度から硝酸アルミニウムの代りに水0.1mlを加えた吸光度を測定して差し引いた値を検量式に代入してプラボノイド含量(mg/g)を計算した。 
【００３９】
結果は、表2及び図4に示した。 
【表２】
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【００４０】
表2及び図4に示したように、本発明のプロポリス抽出物のプラボノイド含量は、イオン化エネルギーを照射していないもの(0kGy)では100.9mg/g、3〜7kGy照射したものは105.5mg/g、8〜15kGy照射したものは96.5mg/g、20〜30kGy照射したものは 93.6mg/gと現れた。特に、3〜7kGyのイオン化エネルギーを照射したプロポリス抽出物のプラボノイド含量は、イオン化エネルギーを照射していないものより4.6mg/gさらに高く現れた。しかし、8〜15kGyと20〜30kGyのイオン化エネルギーを照射したプロポリス抽出物のプラボノイド含量は、イオン化エネルギーを照射していないものより各々4.4 mg/g、7.3 mg/g低く現れた。  
【００４１】
これは、8〜15kGyや20〜30kGyの過量のイオン化エネルギーが照射されるとプロポリスの有効成分であるプラボノイドは、イオン化エネルギーとの相互作用によるラジカル反応によりキノン化合物が誘導され、むしろプラボノイド含量を減少させるためである。 
【００４２】
したがって、本発明のプロポリス抽出物のプラボノイド含量は、3〜7kGyのイオン化エネルギーを照射した時が最適の含量状態であることが分かる。 
【００４３】
<実験例 3> プロポリスの脂質過酸化程度抑制効果 
本発明の水溶性及び非水溶性プロポリス粉末試料が化学的要因により生体組織が脂質過酸化される程度を抑制するかどうかを調べるために、マウスに試料を投与して化学物質を処理した後、肝を摘出して組織内脂質の過酸化程度を測定した。 
【００４４】
生体膜に存在する脂質は、化学物質、X-線及び放射線により酸化された二次副産物としてマロンジアルデヒド(malondialdehyde; MDA)を作り出し、該MDAはチオバルビツール酸(thiobarbituric acid; TBA)と反応して発色を示すためこれを紫外線分光光度計で測定した。 
【００４５】
マウスの肝の脂質過酸化程度を測定するために各実験群当り4匹のマウスを使用した。CCl4はマウス一匹当り2mgを経口投与した。非水溶性及び水溶性プロポリスの経口投与は、CCl4投与27時間前、3時間前に経口投与した。CCl4投与1日後、一定量の肝組織を1.15%KClでホモゲナイザー(homogenizer)を利用して均質化させた後、遠心分離により蛋白質を分離定量して3mgになるように取った後、8.1%ドデシル硫酸ナトリウム(sodiumdodecyl sulfate; SDS)0.2ml、20%酢酸(pH3.0)1.5ml、0.8% TBA溶液1.5mlを入れてよく混合した後、最終容積が4mlになるように蒸溜水を加えた。95℃で30分間湯煎した後、常温に冷やした後、3500rpmで10分間遠心分離して上澄み液を取って532nmで吸光度を測定した。
【００４６】
結果は、表3及び図5に示した。 
【表３】
2005336149.tif 000005
【００４７】
表3及び図5に示したように、CCl4投与による生体組織内脂質の過酸化程度は、非照射非水溶性プロポリス試料(0kGy)、照射水溶性プロポリス試料(3〜7kGy)及び照射 非水溶性プロポリス試料(3〜7kGy)の2mg/マウス、投与群でCCl4対照群に比べて顕著に44〜61%抑制されることが分かり、照射水溶性プロポリス試料は非照射及び照射非水溶性プロポリス試料より5〜17%程度低い抑制効果を示した。また、照射水溶性プロポリスの濃度を二倍(4mg/マウス)にした時、2mg/マウス、投与した照射水溶性プロポリス試料より12%高い抑制効果を示した。 
【００４８】
したがって、本発明のイオン化エネルギーを照射した非水溶性及び水溶性プロポリスは、脂質の酸化的損傷を抑制する効果があるのでマウスを保護するのに有用な抗酸化剤として利用できる。二試料間の抑制効果の差は、5〜17%で全体的に標準誤差の範囲が大きく現れるため大差がないものとみなされる。 
【産業上の利用可能性】
【００４９】
本発明のプロポリスは、抽出率及び有効成分であるプラボノイドの含量が改善されただけではなく、プロポリス抽出物固有の粘着性による使用上の不便さを解消して飲用が容易で水に完全に溶解して沈殿物が生じない物性を持つことによって健康機能食品及び加工食品の原料として容易に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】本発明のエタノール抽出工程を示した図である。
【図２】本発明の水溶性プロポリスの製造過程を示した図である。
【図３】本発明のプロポリス原料塊の酒精溶液に3〜30kGyのイオン化エネルギーを照射した後、抽出したプロポリスの抽出率を示したグラフである。
【図４】本発明のプロポリス原料塊の酒精溶液に3〜30kGyのイオン化エネルギーを照射した後、抽出したプロポリスの有効成分(プラボノイド)の含量を示したグラフである。
【図５】本発明の3〜7kGyのイオン化エネルギーを照射した非水溶性プロポリスと水溶性プロポリスに対するマウスの肝組織で脂質過酸化抑制効果を示したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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