(57)【要約】【課題】本発明が解決しようとする課題は、新しい作用機作に基づく新規降圧薬の創出である。【解決手段】本発明者等はラットをモデル動物として用い、ラクトフェリンを投与すると、心拍数に影響を与えることなく用量依存性に血圧を有意に低下させることを発見した。ラクトフェリンの生理作用研究の一環をなすこの血圧降下作用は、これまでラクトフェリンに関する研究論文及び特許などに記載がない新しい知見であり、高血圧患者の血圧コントロールに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトフェリンを有効成分とする高血圧の治療／予防用の新規医薬組成物並びに新規加工食品
【請求項２】
ラクトフェリンにカルシウム塩、カリウム塩、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ニンニク及びその抽出物、銀杏葉及びその抽出物並びにγ−リノレイン酸、エイコサペンタデカノイン酸、ドコサヘキサエン酸等のω−３不飽和脂肪酸、あるいはω−３不飽和脂肪酸を含む魚油、月見草油、亜麻仁油、等々から選ばれた一つないし一つ以上混合することを特徴とする高血圧の治療／予防用の新規医薬組成物並びに加工食品
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【０００２】  本発明はラクトフェリンを有効成分とする高血圧治療用の新規医薬組成物並びに新規加工食品の製法に関する。
【背景技術】
【０００３】  高血圧は，脳卒中の最大の危険因子であるとともに，虚血性心疾患，腎硬化症，閉塞性動脈硬化症など各種循環器疾患の原因としても重要である。日本の高血圧症患者は３３００万人とされ，高齢社会を迎えた現在，生活の質（ＱＯＬ）を保った健やかな老後を迎えるためにも，重篤な循環器疾患予防を目的とする高血圧の予防と治療は極めて重要な課題となっている。高血圧患者は大変多いが、実はほとんどの患者で、その原因がはっきりとは分かっていない。現在の医学検査で血圧が上昇する明らかな原因が見つからない高血圧を本態性高血圧と呼び、高血圧の９５％以上を占めている。つまり、遺伝的素因と日常生活上の不摂生（塩分の過剰摂取、ストレス、運動不足、過度の飲酒、肥満など）以外に高血圧の原因が見つからない場合である。一方、残りの数％は臨床検査の結果、血圧を上げる原因が見つかり、このような高血圧を二次性あるいは症候性高血圧と呼ぶ。【０００４】  一般的に、両親とも本態性高血圧の場合、子供の約半数は本態性高血圧になる。遺伝的素因と日常生活上の不摂生は本態性高血圧の発症にそれぞれおよそ半分ずつ寄与していると考えられている。ただ、寄与の度合いには個人差が大きく、遺伝的素因の関与が圧倒的に大きい場合もあれば、逆に日常生活の関与が大きくライフスタイルの改善だけで血圧が完全に正常化する場合もある。【０００５】  血圧は年齢とともに上昇し、また、先にあげた日常生活の不摂生も血圧を上昇させるので、本態性高血圧は一般に中年以降に発症することが多く、糖尿病やその一歩手前である耐糖能障害、あるいは高脂血症・脂質代謝異常、肥満などの成人病を高頻度で随伴することが知られている。本態性高血圧の患者は正常血圧者に比べ、糖尿病を合併する頻度が２倍ほど高く、逆に、糖尿病患者は非糖尿病者に比べ、高血圧を合併する頻度がやはり２倍程度高い。これらのことから、本態性高血圧の遺伝的素因と糖尿病の遺伝的素因は一部では共通していると考えられるようになってきた。また、これらの素因は高脂血症・脂質代謝異常および肥満の素因とも関連している可能性が指摘されている。実際、高血圧、糖尿病、肥満、高脂血症など複数の成人病を合併する患者も多いが、これらの成人病をいくつか合併している患者では、高血圧、糖尿病、高脂血症などそれぞれの成人病の程度はあまりひどくないのがふつうである。そのため、健康診断などでも「要注意」に止まり、必ずしも「要医療」と指摘されないこともある。しかし、軽症でもこれらの成人病を複数併せ持つことは大変危険で、心筋梗塞や脳卒中の危険性が何倍も高まっているのである。このため、これらの成人病を併せ持つケースは、多重危険因子症候群、別名「シンドロームＸ症候群」や「死の四重奏」と呼ばれ大変恐れられている。【０００６】  現在の医学検査で血圧を上げる明らかな異常が見つかる場合、二次性（症候性）高血圧と呼ばれる。その一つは腎性高血圧と呼ばれ、糸球体腎炎、慢性腎盂腎炎、嚢胞腎などで腎臓全体の働きが低下すると、塩分（ナトリウム）や水分を排泄する腎臟の機能が低下し血圧が上昇する。また、腎臟に血液を供給する血管（腎動脈）が動脈硬化や、生まれつきの血管の異常また動脈の炎症などで狭くなると、腎臓から血���を上げる物質（レニン）が放出され高血圧となる。この結果、腎臓には充分に血液が流れるようになるが、その他の臟器では血圧が高すぎる状態となる。【０００７】  いま一つを内分泌性高血圧と言い、ホルモンの分泌異常によって起こる。ホルモンのなかには、心臓、血管、腎臓などに作用し血圧を維持し重要な臓器に血液を送り込み立ちくらみなどを防ぐ働きを持つものも何種類かある。しかし、これらの血圧上昇ホルモンが過剰に分泌されると高血圧が発症する。代表的な病気として、腎臓に作用し塩分（ナトリウム）・水分を身体にためることで血圧を維持するホルモンであるアルドステロンが過剰に分泌され高血圧となる原発性アルドステロン症や、心臓や血管に作用し血圧を上昇させるホルモン、カテコールアミン（アドレナリン、ノルアドレナリン）が過剰に分泌され高血圧となる褐色細胞腫などがある。ただ、本態性高血圧と異なり、これらの病気は手術などで比較的簡単に治癒させることができる。【０００８】  日本では軽症者も含めると６０才以上の高齢者の約半数が高血圧症であると考えられている。高血圧の治療は、脳卒中や心筋梗塞および心臓肥大などの高血圧に由来する重篤な合併症の予防が目的である。この目的のために血圧をどの程度まで下げたらよいかということについて、世界中の各国で基準がもうけられている。これらを総合的に判断すると、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上あるいは拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上の場合には治療が必要と考えられる。ただ、４０歳以下の若年者ややはり脳卒中や心筋梗塞の原因になる糖尿病を合併している患者ではもう少し厳しい基準、つまり収縮期血圧で１３０ｍｍＨｇ以上あるいは拡張期血圧で８５ｍｍＨｇ以上の場合治療が必要である。【０００９】  高血圧を治療／予防するには生活習慣を見直す必要がある。高血圧を引き起こす危険因子と手を切ることで、軽症の高血圧が解消することもあるからである。高血圧の治療は、緊急に血圧を下げる必要がある人以外は、高脂血症をはじめとする生活習慣病がそうであるように、まず食事療法と運動療法から始まる。食事療法のポイントとなるのは、塩分制限、カロリー制限、アルコール制限などで、高血圧の重症度に応じて期間や程度が定められる。運動療法ではウォーキング、ジョギング、水泳、サイクリングなどの、いわゆる有酸素運動が高血圧に好ましい運動とされている。運動中には交感神経の働きで一時的に血圧が上がるが、運動を継続することで血圧を下げる作用があるプロスタグランジンやタウリンが増え、逆に血圧を上げるカテコールアミンなどが減ることが報告されている。【００１０】  現代社会ではストレスのない生活は考えられない。過剰なストレス（特に精神的ストレス）や急激なストレスが加えられたとき、交感神経が過度に刺激され、血圧が驚くほど上昇し、それを契機に脳卒中や心臓病の発作が起こることも珍しくない。急激なストレスでなくても、ストレスが慢性的に持続することは、それだけ交感神経の興奮した状態が持続することなので、高血圧に悪影響を及ぼす。運動、趣味など、ストレス解消法を身につけ、ストレスを蓄積させないようにすることが大切とされている。【００１１】  食事療法や運動療法を続けても効果が不十分な場合や、なるべく早く血圧を下げる必要がある場合は降圧薬による治療を行う。降圧薬は高血圧を根治させる薬ではなく、血圧のコントロールを通じて動脈硬化や脳卒中、心臓病などを予防するための薬であり、血圧が下がってきたからといって勝手に服用をやめたり、服用量を減らしたりすることはすべきでない。また、薬をのんでいるからといって食事療法や運動療法を疎かにすることもできない。【００１２】  高血圧の治療薬にはカルシウム拮抗薬、アンジオテンシン（ＡＣＥ）変換酵素阻害薬、アンジオテンシンＩＩ（Ａ−ＩＩ）受容体拮抗薬、利尿薬、交感神経抑制薬等、五つのタイプがある。カルシウム拮抗薬は末梢血管を構成する平滑筋細胞にカルシウムが入り込むことを防ぎ、血管を拡張させて血圧を下げる。ＡＣＥ阻害薬は血圧を上昇させるＡ−ＩＩの産生を抑えることで血圧上昇を妨げる。Ａ−ＩＩ受容体拮抗薬は、Ａ−ＩＩ受容体に特異的に結合し、Ａ−ＩＩの作用である血管収縮、体液貯留、交感神経の興奮を抑制する。利尿剤は腎臓に作用してナトリウムと水分の排泄量を増加させ、体液量や循環血液量を減らすことで血圧を下げる。交感神経抑制薬にはα遮断剤とβ遮断剤の二つのタイプがある。α遮断薬は末梢血管の収縮を抑え、血管を拡張することで血圧を下げる。β遮断薬は心拍数と心拍出量を抑えることで血圧を下げる。
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】  降圧薬は薬の種類によって異なるが、頭痛、顔面潮紅・ほてり、倦怠感・脱力感、動悸、性機能低下、空咳などの副作用があらわれることがある。最近の降圧薬は一般に副作用が少ないといわれているが、降圧薬は生涯にわたる内服が必要なので、副作用は少なく降圧効果が高い薬ほど望ましい。また、従来の降圧薬とは異なる作用機作で降圧効果を示す薬物は、既存の降圧薬が耐薬性その他の理由で使用できない場合、高血圧患者にとって貴重な代替治療薬になりうる。そのため、新しい作用機作に基づく新規降圧薬は世界的に活発な研究の標的となり、バイオメディカルの研究機関が熾烈な開発競争を繰り広げている。本発明が解決しようとする課題は、新しい作用機作に基づく新規降圧薬の創出である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】  上記の課題を解決するための検討の過程で、本発明者等はラットをモデル動物として用い、麻酔下にラクトフェリンを投与すると用量依存性に血圧を有意に低下させることを発見した。ラクトフェリンの生理作用研究の一環をなすこの血圧降下作用は、これまでラクトフェリンに関する研究論文及び特許などに記載がない新しい知見である。
【００１５】  ラクトフェリンは哺乳動物の乳汁、好中球の分泌顆粒、涙、唾液、各種の粘液に存在する分子量約８万ダルトンの糖蛋白である。分子内に二つの３価鉄イオンをキレート結合する性質を持ち、その抗菌活性は病原菌の生育環境から３価鉄イオンを奪い生育のために利用できなくするためと考えられている。ラクトフェリンは生理的に多彩な作用を呈する多機能性タンパク質であり、これまでに抗菌作用（例えばＷｅｉｎｂｅｒｇ，Ｅ．Ｄ．１９９５，Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｒｏｎ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｐａｔｈｏｇｅｎｓ，２ｎｄｅｄ．，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｊ．Ａ．Ｒｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．ｐｐ．７９−９３）、抗ウイルス作用（Ａｎｄｅｒｓｅｎ，Ｊ．Ｈ．，Ｏｓｂａｋｋ，Ｓ．Ａ．，Ｖｏｒｌａｎｄ，Ｌ．Ｈ．，Ｔｒａａｖｉｋ，Ｔ．，ａｎｄ  Ｇｕｔｔｅｎｂｅｒｇ，Ｔ．Ｊ．２００１，Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ  ａｎｄ  ｃｙｃｌｉｃ  ｌａｃｏｆｅｒｒｉｃｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｔｈｅ  ｅｎｔｒｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．５１：１４１−１４９．）、発ガン予防作用（Ｔｓｕｄａ．Ｙ．，Ｓｅｋｉｎｅ，Ｋ．，Ｆｕｊｉｔａ，Ｋ−ｉ．，ａｎｄ  Ｉｉｇｏ，Ｍ．２００２．Ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｂｙ  ｂｏｖｉｎｅ  ｌａｃｔｏｆｅｒｒｕｎ  ａｎｄ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ−−−ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．８０：１３１−１３６．）、免疫賦活作用（Ｌｅｖａｙ，Ｐ．Ｆ．，ａｎｄ  Ｖｉｌｊｏｅｎ，Ｍ．１９９５．Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ：ａ  ｇｅｎｅｒｌ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，８０：２５２−２６７）、脂質代謝改善作用（２００３．ＪＭＳ．８１：ｐｐ６４−６７．）、鎮痛作用（Ｈａｙａｓｈｉｄａ．Ｋ．，Ｔａｋｅｕｃｈｉ．Ｔ．，Ｓｈｉｍｉｚｕ．Ｈ．，Ａｎｄｏ．Ｋ．，ａｎｄ  Ｈａｒａｄａ．Ｅ．２００３．Ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｏｐｉｏｉｄ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｎａｌｇｅｓｉａ  ｖｉａ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ．Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｉｎｔｅｒｇｒ．  Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８５：Ｒ３０６−Ｒ３１２）などが報告されている。
【００１６】すでに本発明者等はラクトフェリンが、（１）齧歯類動物に対し鎮痛効果を示すこと、（２）その鎮痛効果はモルヒネ拮抗物質であるナロキソンにより打ち消されること、（３）まったく鎮痛効果を示さない少量のラクトフェリンをモルヒネと併用すると鎮痛作用を１００倍も増強すること、（４）鎮痛効果は一酸化窒素合成阻害剤であるＮＧ−ｎｉｔｒｏ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（Ｌ−ＮＡＭＥ）により阻害されるが、光学異性体ＮＧ−ｎｉｔｒｏ−Ｄ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（Ｄ−ＮＡＭＥ）では阻害されないこと、（５）μ−オピオイド受容体に結合して鎮痛効果を示すエンドルフィン、エンケファリン等の内因性鎮痛ペプチドの拮抗阻害剤によりラクトフェリンの鎮痛効果が阻害されること、（６）ラクトフェリンとモルヒネをラットに持続点滴静注して経時的に鎮痛効果を比較すると、モルヒネは７２時間以内に耐薬性を生じ鎮痛効果を喪失するのに対しラクトフェリンの鎮痛作用は耐薬性を生ずることなく長期にわたり持続すること等々を報告している。以上の実験結果からラクトフェリンの鎮痛効果は、疼痛を伝達する神経節における一酸化窒素の産生を増加させ、内因性鎮痛ペプチドの効果を増強する点にあることが明らかにされている。
【００１７】  内因性鎮痛ペプチドは鎮痛効果とともにモルヒネと同様の多幸感、恍惚感をもたらし、ストレスを鎮静化する作用が知られている。高血圧の原因の一つにストレスを起因とする交感神経の緊張・興奮があげられているので、本発明者等はラクトフェリンが生体内で内因性鎮痛ペプチドの作用を増強することにより交感神経の緊張・興奮を鎮静化し、高血圧を改善するであろうと推定した。事実、ラクトフェリンが心循環系に作用している傍証として、その受容体は心臓及び血管系でも発現していることが知られている（Ｆａｕｃｈｅｕｘ．Ｂ．Ａ．，Ｎｉｌｌｅｓｓｅ．Ｎ．，Ｄａｍｉｅｒ．Ｐ．，Ｓｐｉｋ．Ｇ．，Ｍｏｕａｔｔ−Ｐｒｉｇｅｎｔ．Ａ．，Ｐｉｅｒｃｅ．Ａ．，Ｌｅｖｅｕｇｌｅ．Ｂ．，Ｋｕｂｉｓ．Ｎ．，Ｈａｕｗ．Ｊ．Ｊ．，Ａｇｉｄ．Ｙ．，ａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．１９９５．ＥＸｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｓ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｅｓｅｎｃｅｐｈａｌｏｎ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９２：９６０３−９６０７．）。
【００１８】ラット及びラットから切り出した胸部大動脈を使って明らかになったことは次のとおりである。（１）ラクトフェリンは用量依存性にラットの血圧を降下させる（２）血管内皮依存性に血管を弛緩させる、（３）血管弛緩効果はラクトフェリンが血管内皮細胞の一酸化窒素産生を増加させるためである、（４）一方、ラクトフェリンは中枢神経に作用し内因性ペプチド依存性に中枢性の降圧作用を示す。
【発明実施の形態】
【００１９】    本発明の実施態様は、経口剤及び注射剤が主要なものであるが、その他に座剤、貼付剤、点滴剤、含嗽剤、点眼剤、トローチなどの剤型で実用に供することができる。ラクトフェリンは分子量が８万ダルトン前後の高分子であり、比較的不安定なこと、胃内では酸性条件下でペプシンにより容易に分解されるので製剤化にあたって注意が必要である。例えば、経口剤はラクトフェリン顆粒ないしは錠剤の表面を胃では溶解せず、腸に流入して溶解する腸溶性の皮膜で被覆した製剤が望ましい。より詳細には、次のようなものである。牛乳由来ラクトフェリン凍結乾燥粉末は、カサ比重が非常に小さく、直接錠剤に打錠することは困難である。乾式で製造した穎粒を腸溶性皮膜で覆い、一定量をハードカプセルに充填して製品化することができる。錠剤として製品化する場合には、穎粒に滑沢剤を加えて打錠し、錠剤を腸溶性皮膜で覆って製品化することができる。
【００２０】本発明の腸溶性製剤を製造する際に用いる賦形剤としては、乳糖、庶糖、マルチトール、グルコースなどの単糖ないし二糖類、コーンスターチ、ポテトスターチのような澱粉類、結晶セルローズ、無機物としては軽質シリカゲル、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウムなどがある。また、結合剤としては澱粉類、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルローズ（ＨＰＣ）、カルボキシメチルセルロースーナトリウム塩、ポリビニルピロリドン等がある。また、下部消化管でもとの一次粒子にまで崩壊させることを目的として用いる崩壊剤としては、澱粉、カルボキシメチルセルロースーナトリウム塩、カルボキシメチルセルロースーカルシウム塩、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウムなどがある。錠剤ならびに穎粒を腸溶性に被覆するための皮膜剤としては、ＰＨ５〜６で溶解するヒドロキシプロピルメチルセルローズフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルローズ、メタクリル酸コポリマー、トウモロコシ穀粒に含まれるツェインや、アルカリ’性領域で溶解するシェラックなどがある。
【００２１】本発明の製剤は、一般的には、活性成分として１日あたり、約０．１ｍｇ〜約１００，０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約５０，０００ｍｇ、より好ましくは約１０ｍｇ〜約１０，０００ｍｇを一度に又は分割して、本発明の製剤による治療または状態の改善が必要とされている患者に投与することができる。投与量及び投与剤型は、個別に、投与される患者の年齢、体重、病態および投与目的に応じて定めることができる。ラクトフェリンとしては牛乳から抽出精製したウシラクトフェリン、ヒト及びその他の哺乳動物のラクトフェリン遺伝子を組み換えた微生物によってつくられる遺伝子組み換えラクトフェリンが含まれる。
【００２２】    実施例１；実験には生後８−９週、体重２５０−３３０ｇのウイスター・イマミチ系雄性ラットを用いた。ラットはウレタンで麻酔下に体温維持のために保温しつつ薬物投与ルートとして経静脈にカテーテルを挿入し、血圧測定用として頸動脈にカテーテルを挿入した。ウシ血清アルブミン（１５００ｎｍｏｌ／ｋｇ）ないしウシ・ラクトフェリン（３８．４−１２８０ｎｍｏｌ／ｋｇ）を頸静脈カテーテル経由で静脈内投与した。１群は５−６頭のラットが含まれている。血圧は投与直前と最大の血圧降下を記録した。最大の血圧下降を示すのは、モルヒネで投与１０秒後、ラクトフェリンで９０秒後である。図１は血圧（Ａ）及び投与直前と比べた血圧変化（Ｂ）を示す。図から明らかなようにラクトフェリンは用量依存性に血圧を降下させた。
【００２３】    実施例２；生後８−９週、体重２５０−３３０ｇのウイスター・イマミチ系雄性ラットを用いた。ラットはウレタンで麻酔下に体温維持のために保温しつつ薬物投与ルートとして経静脈にカテーテルを挿入し、血圧測定用として頸動脈にカテーテルを挿入した。モルヒネ（１３３ｎｍｏｌ／ｋｇ）ないしウシ・ラクトフェリン（３８４ｎｍｏｌ／ｋｇ）を静脈内投与すると、平均血圧（図２Ａ）、心拍数（図２Ｂ）が変化した。モルヒネ群は６頭、ラクトフェリン群は７頭のラットを使用し、平均血圧及び心拍数は平均値±標準誤差で示した。図から明らかなようにモルヒネは投与１０秒以内に心拍数が急速に減少するとともに血圧も急激に低下し、その時期を過ぎると血圧と心拍数は投与前値に復帰する傾向を示した。それに対し、ラクトフェリン群は心拍数には影響がなく、血圧のみが徐々に降下する傾向を示した。
【００２４】    実施例３；オピオイド拮抗物質、ナロキソン・塩酸塩及びナロキソン・メチオナイドのラクトフェリン及びモルヒネによる降圧作用に及ぼす影響を示したのが図３である。実施例１と同様の操作で作成したラット・モデルにモルヒネ（１３３ｎｍｏｌ／ｋｇ）ないしウシ・ラクトフェリン（３８４ｎｍｏｌ／ｋｇ）を静脈内投与した。１群あたりモルヒネ群は７頭、ラクトフェリン群は６−７頭のラットを使用した。ナロキソン・塩酸塩（ＮＬＸ−Ｈ）及びナロキソン・メチオナイド（ＮＬＸ−Ｍ）もラクトフェリンないしモルヒネと同時に投与した。静脈内投与したナロキソン・塩酸塩は脳血液関門を越えて脳内に取り込まれるが、ナロキソン・メチオナイドは脳血液関門を通過しない。図から明らかなようにラクトフェリンの降圧効果は、ＮＬＸ−Ｈ投与により打ち消されるが、ＮＬＸ−Ｍ投与では打ち消されない。モルヒネの降圧効果は、両拮抗剤により打ち消されることが判明した。つまり、モルヒネの作用は明らかに末梢性であるのに対し、ラクトフェリンの降圧効果には中枢神経が関与していることがわかる。
【００２５】    実施例４；実施例１と同様の動物モデルを用い、一酸化窒素合成系がラクトフェリンの降圧作用に及ぼす影響を検討したのが図４である。図４Ａに平均血圧、図４Ｂに平均血圧の変化率をパーセントで示した。それぞれの静脈内投与量はラクトフェリンが３８４ｎｍｏｌ／ｋｇ、アセチルコリンが１００ｎｇ／ｋｇ、モルヒネが１３３ｎｍｏｌ／ｋｇである。ＮＧ−ｎｉｔｒｏ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ（Ｌ−ＮＡＭＥ）とＮＧ−ｎｉｔｒｏ−Ｄ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ（Ｄ−ＮＡＭＥ）はそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇを同時に静脈内投与した。これらは一酸化窒素（ＮＯ）合成の阻害剤である。Ｌ−ＮＡＭＥはラクトフェリンの降圧効果を完全に打ち消すとともにＬ−ＮＡＭＥ非投与対照と比べ血圧を有意に上昇させる作用を示した。アセチルコリン及びモルヒネをＬ−ＮＡＭＥと同時に投与した場合、無投与対照群と比べ血圧の上昇が有意に抑制されいるが、Ｌ−ＮＡＭＥ投与群の血圧は非投与対照の血圧を超えて有意に上昇しており、アセチルコリン及びモルヒネはＮＯ合成阻害による昇圧を抑制する作用は示すが、降圧効果を示すとは云えない。一方、ＮＯ合成を阻害しない光学異性体Ｄ−ＮＡＭＥはラクトフェリンの降圧効果をまったく阻害しなかった。
【００２６】    実施例５；図５はラクトフェリン及びアセチルコリンの降圧作用に及ぼす厶スカリン性アセチルコリン受容体拮抗物質であるアトロピンの影響を示す。使用した動物実験系は実施例１と同様である。ラクトフェリンによる降圧効果は、アトロピンを同時に投与しても影響を受けないが、ムスカリン性アセチルコリン受容体のアゴニストであるアセチルコリンは、アトロピンの存在下で降圧効果を完全に喪失する。したがって、ラクトフェリンはムスカリン性のアセチルコリン受容体作動性降圧物質ではないと結論できる。
【００２７】    実施例６；ラットの胸部大動脈を約５ｍｍの長さに切り、９５％酸素と５％炭酸ガスからなる混合気体をバブリングした３７℃のクレーブス・リンガー液に浸して検討を行った。その結果、ラクトフェリンはラット胸部大動脈を弛緩させることが明らかになった（図６）。この弛緩作用はアセチルコリンに匹敵するほど強力である。血管内皮を剥離した動脈リングではラクトフェリンは血管を弛緩させないので、ラクトフェリンの血管弛緩作用が血管内皮細胞を介する作用であることは確実である。なお、強力なプロスタグランジン生合成阻害剤であるジクロフェナックは、ラクトフェリンによる血管弛緩を阻害しないので、ラクトフェリンによる作用がプロスタグランジンの生合成促進を通じて発現するものでない。
【００２８】    実施例７；ラクトフェリンにより誘発されるラット大動脈の弛緩に及ぼす一酸化窒素合成阻害剤及びＡＴＰ−感受性カリウム・チャンネル阻害剤の影響を示す。アセチルコリンの血管弛緩作用は、ＮＯ合成阻害剤のＬ−ＮＡＭＥ存在下で完全に阻害される。ラクトフェリンの血管弛緩作用も、Ｌ−ＮＡＭＥによりいずれのラクトフェリン濃度でも完全に阻害されるが、Ｄ−ＮＡＭＥの存在下ではまったく影響を受けない。したがって、ラクトフェリンによる血管弛緩はＮＯを介する作用である。一方、血管拡張剤、ピナシディルによる血管弛緩はＡＴＰ−感受性カリウム・チャンネル阻害剤であるグリベンクラミドにより完全に阻害されるが、ラクトフェリンによるそれはグリベンクラミド存在下でも用量依存性に認められるので、ＡＴＰ−感受性カリウム・チャンネルの開放が関与していないことが明らかになった。
【発明の効果】
【００２９】    以上説明したようにラクトフェリンは中枢神経に働きかけて血圧を降下させる一方、末梢血管内皮におけるＮＯ産生を増強することにより動脈平滑筋を弛緩させ、血管内腔を拡張する二つの作用により血圧を降下させる。牛乳から抽出されたラクトフェリンは安全性が非常に高いので、生涯にわたり血圧降下薬内服が必要な高血圧患者の治療に最適である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ラクトフェリンのラット平均血圧に及ぼす影響
【図２】  ラクトフェリン及びモルヒネの静脈内投与により誘発されるラット平均血圧及び心拍数の変化
【図３】  ラクトフェリンとモルヒネの降圧効果に及ぼすオピオイド拮抗物質の影響
【図４】  ラクトフェリン、アセチルコリン及びモルヒネの降圧作用に及ぼす一酸化窒素生合成阻害剤の影響
【図５】  ラクトフェリンとアセチルコリンの降圧作用に及ぼすムスカリン性アセチルコリン受容体拮抗物質の影響
【図６】  ラット胸部大動脈のラクトフェリン誘発性弛緩作用
【図７】  ラット胸部大動脈のラクトフェリン誘発性弛緩に及ぼす一酸化窒素生合成阻害剤とＡＴＰ感受性カリウムイオン・チャンネル遮断剤の影響
【符号の説明】
【図１】
Ｐｒｅ：ラクトフェリン及び対照物資ウシ血清アルブミンの投与前
Ｐｏｓｔ：ラクトフェリン及び対照物資ウシ血清アルブミンの投与後
ＭＢＰ（ｍｍＨｇ）：ラットの平均血圧（平均値±標準誤差であらわしている）
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ＢＬＦ：牛乳から抽出したラクトフェリン
Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００５：スチューデントｔ−ｔｅｓｔで検定した統計的有意差
Ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  ＭＢＰ（％）：パーセントであらわした平均血圧の変化率
【図２】
○実線；モルヒネ群
▲黒四角▼実線；ラクトフェリン群
Ａ：平均血圧の変化、Ｂ：心拍数の変化
【図３】
ＮＬＸ−Ｈ：ナロキソン塩酸塩
ＮＬＸ−Ｍ：ナロキソンメチオナイド
＊Ｐ＜０．０５ａｎｄ＊＊＊Ｐ＜０．００１，ｉｎ  Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔ
【図４】
Ａｃｈ：アセチルコリン
Ｌ−ＮＡＭＥ：ＮＧ−ｎｉｔｒｏ−Ｌ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ
Ｄ−ＮＡＭＥ：ＮＧ−ｎｉｔｒｏ−Ｄ−ａｒｇｉｎｉｎｅ  ｍｅｔｈｙｌ  ｅｓｔｅｒ
【図５】
Ａｔｒｏｐｉｎ：アトロピン
【図６】
ＳＮＰ：ニトロプルシッド・ナトリウム塩
Ｅ（＋）：血管内皮あり
Ｅ（−）：血管内皮剥離
【図７】
Ｇｌｉ：グリベンクラミド（経口糖尿尿薬）
Ｐｉｎ：ピナシディル（血管拡張剤）
【図１】
2005112835.tif 000002
【図２】
2005112835.tif 000003
【図３】
2005112835.tif 000004
【図４】
2005112835.tif 000005
【図５】
2005112835.tif 000006
【図６】
2005112835.tif 000007
【図７】
2005112835.tif 000008