(57)【要約】【課題】魚介肉を加熱処理し、水溶性蛋白質を抽出除去して熱水抽出残渣を酵素プロテアーゼで加水分解して生成するペプチド混合物は、血圧降下作用を有するものの苦味を呈するものが多いため風味は概して良好とは言えない。生活習慣病の予防や治療は、長期に継続使用できるよう風味に優れ食生活の中で種々の形で摂取できる食品の形態が望ましい。【解決手段】鰹節の粉砕物からアルコール水可溶物質をアルコール水抽出し（Ｐ１）、そのアルコール水抽出残渣Ｂに温水を加え、ペニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢで加水分解して（Ｐ３）得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合して（Ｐ８）、血圧降下作用のある鰹節エキスを生成し、この鰹節エキスを噴霧乾燥して（Ｐ１０）鰹節エキス粉末とする。【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚類の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣に、温水を加え、ぺニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢ、リゾープス・ニベウス起源のニューラーゼＦ、バチルス・リッケニフォルミス起源のアルカラーゼ、バチルス・リッケニフォルミス起源のスミチームＢＰＬ、リゾープス・オリーゼ起源のペプチターゼＲから選ばれる少なくとも１種類の酵素で加水分解して得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合して血圧降下作用のあるエキスを製造することを特徴とする血圧降下作用のある魚類エキスの製造方法。
【請求項２】
前記魚類の粉砕物として魚類の乾燥物の粉砕物を用いることを特徴とする請求項１に記載の血圧降下作用のある魚類エキスの製造方法。
【請求項３】
魚類の乾燥物として鰹節、鯖節、鮪節、宗田鰹節、鰯節から選ばれる少なくとも１種類のものを原料として用いることを特徴とする請求項２に記載の血圧降下作用のある魚類エキスの製造方法。
【請求項４】
請求項１の製造方法で製造された血圧降下作用のあるエキスを主成分とする血圧降下作用のある魚類エキス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血圧降下作用のある魚類エキスとその製造方法に関し、特に、魚類の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣を蛋白質分解酵素で加水分解して得られたエキスに前記アルコール水可溶性物質を混合して製造する血圧降下作用のある魚類エキスとその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、生活習慣病が増加して、平均寿命の伸長によって医療費の高騰を招き大きな社会問題となっている。中でも高血圧は、患者数が３，０００万人と言われ国民病となっている。高血圧は、脳卒中あるいは虚血性心疾患の発生・進展因子等として重要視されており、高血圧に対する対策は重要課題となっている。その為、高血圧に有効な血圧降下薬としてカルシウム拮抗薬や利尿薬を始め多くの医薬品が開発され使用されているが、生活習慣病の性格上、食生活等の改善による治療や予防が望まれる。
【０００３】
厚生労働省では、「身体の調子を整える」などの食品の健康訴求機能を表示した特定保健用食品を認可しその普及に努めている。高血圧分野でも軽症高血圧患者の血圧を降下させる食品が幾つか開発され、飲料水、錠剤、スープ類などの血圧降下食品として販売されている。
これらの食品は、食品由来の蛋白質を蛋白質分解酵素で加水分解した組成物中に存在するペプチド混合物を原料としている。ペプチド混合物は、生体内でアンジオテンシンI を動脈収縮や血圧上昇作用を有するアンジオテンシンIIに変換するアンジオテンシン変換酵素を阻害して血圧降下の作用をもつとされている。蛋白質を蛋白質分解酵素で加水分解して得られるペプチドは、苦味を呈するものが多いため生成するペプチド混合物の風味は概して良好とは言えない。生活習慣病の予防や治療は、長期に継続使用できるよう風味に優れ食生活の中で種々の形で摂取できる食品の形態が望ましい。
【０００４】
魚類エキスは、和食の基本味とも言えるだし汁であり、日本人の食生活に深く関わり、種々の食品の調味料として広く使われている。この魚類エキスが健康訴求機能を持つと、日本人の健康の維持増進の点で好ましいので、これまでに種々の開発が試みられている。  特許文献１には、鰹節、鰯又は鶏肉を酵素サーモリシンで加水分解するアンジオテンシン変換酵素を阻害するペプチド混合物の製造方法について開示されている。
【０００５】
特許文献２には、魚介肉を５０℃以上の水中で加熱処理し、水溶性蛋白質を抽出除去した熱水抽出残渣を酵素プロテアーゼで加水分解して、アンジオテンシン変換酵素阻害作用のあるぺプチド混合物を製造する製造方法が開示されている。
【特許文献１】特許３０７３７６２号公報
【特許文献２】特許３０９３３７８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１のアンジオテンシン変換酵素阻害作用のあるペプチド混合物の製造技術は、鰹節、鰯又は鶏肉を蛋白質分解酵素としてサーモリシンで酵素分解処理し、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン等の蛋白質分解酵素では得られない強いアンジオテンシン変換酵素阻害活性を有するエキスを得るとしている。
【０００７】
上記サーモリシン分解ペプチド混合物のアンジオテンシン変換酵素阻害活性は、CheungとCushman の方法〔Biochemical Pharmacology，２０，１６３７，（１９７１）〕に準じて測定され、アンジオテンシン変換酵素の活性を５０％阻害する事を示すＩＣ50値は、サーモリシン分解物では、０．０１ｍｇ蛋白／ｍｌ、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン等の分解物では、０．０３〜０．７１ｍｇ蛋白／ｍｌ、酵素分解を行わないものでは、３．１〜５．３ｍｇ蛋白／ｍｌであった事が例示されている。しかし、サーモリシン分解ペプチド混合物は血圧降下作用を有するものの、疎水性アミノ酸を末端に持つ部分が多く苦味が強くなるので、これらのペプチド混合物を原料として製造された食品を摂取すると、風味の面で問題があって食生活において継続摂取するのが困難である。
【０００８】
特許文献２のアンジオテンシン変換酵素阻害作用のあるぺプチド混合物の製造技術は、ペプチド混合物を生成するために、魚介肉を５０℃以上の高温条件下で加熱処理した熱水抽出残渣に含まれる不溶性の蛋白質を原料とするので、５０℃以下の条件下でアルコール水抽出した不溶性蛋白質と水溶性蛋白質とを含むアルコール水抽出残渣に適用できない。  
【０００９】
本発明の目的は、魚類の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣を種々の酵素で加水分解して得られた酵素分解エキスにアルコール水可溶性物質を混合した血圧降下作用のあるエキスを製造する方法を提供すること、その製造方法で製造した血圧降下作用のあるエキスを主成分とする魚類エキスを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
請求項１の発明は、魚類の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣に、温水を加え、ぺニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢ、リゾープス・ニベウス起源のニューラーゼＦ、バチルス・リッケニフォルミス起源のアルカラーゼ、バチルス・リッケニフォルミス起源のスミチームＢＰＬ、リゾープス・オリーゼ起源のペプチターゼＲから選ばれる少なくとも１種類の酵素で加水分解して得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合して血圧降下作用のあるエキスを製造することを特徴とするものである。  
【００１１】
この魚類エキスの製造方法においては、最初に、魚類の粉砕物からアルコール水可溶性物質とアルコール水に溶解されずにアルコール水抽出した抽出残渣とを準備する。次に、そのアルコール水抽出残渣に、残渣量に応じて調製した下記の１種類又は複数種の酵素と温水とを加えて適当な温度下に、アルコール水抽出残渣を酵素で加水分解し、酵素分解エキスを生成する。次に、その酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合し、血圧降下作用のあるエキスを製造する。
【００１２】
ここで、上記の酵素としては、ぺニシリウム・シトリナム（Penicillium citrinum）起源のプロテアーゼＢ、リゾープス・ニベウス（Rhizopus niveus ）起源のニューラーゼＦ、バチルス・リッケニフォルミス(Bacillus licheniformis ）起源のアルカラーゼ、バチルス・リッケニフォルミス(Bacillus licheniformis ）起源のスミチームＢＰＬ、リゾープス・オリーゼ（Rhizopus oryzae ）起源のペプチターゼＲから選ばれる少なくとも１種類の酵素が採用される。
こうして製造される血圧降下作用のあるエキスは、香気成分としてのアルコール水可溶性物質が酵素分解エキスに混合されたものであるため、魚類エキスの風味が高められる。  
【００１３】
請求項２の発明は、請求項１の発明において、魚類の粉砕物として魚類の乾燥物の粉砕物を用いることを特徴とするものである。魚類の乾燥物は粉砕が容易でより微細にできるためアルコール水抽出を効率的になし得る。
【００１４】
請求項３の発明は、請求項２の発明において、魚類の乾燥物として鰹節、鯖節、鮪節、宗田鰹節、鰯節から選ばれる少なくとも１種類のものを原料として用いることを特徴とするものである。これら鯖節、鮪節、宗田鰹節、鰯節は、鰹と類縁の魚を原料とするため、鰹同様の血圧降下作用のある前記のエキスを製造するのに適している。
【００１５】
請求項４の発明は、請求項１の製造方法で製造された血圧降下作用のあるエキスを主成分とする血圧降下作用のある魚類エキスであることを特徴とするものである。この魚類エキスは、請求項１の製造方法の欄で説明したように、血圧降下作用を有し、風味に優れ、調味料、その原料、健康食品や飲料の添加剤、サプリメント類などに活用するに好適のものである。
【発明の効果】
【００１６】
請求項１の発明によれば、魚類のアルコール水抽出残渣を有効利用して、アルコール水抽出残渣を酵素で加水分解して得られる酵素分解エキスを作り、この酵素分解エキスにアルコール水可溶性物質を混合して血圧降下作用のある魚類エキスを製造することができる。この魚類エキスは、血圧降下作用を奏するため、調味料、その原料、健康食品や飲料の添加剤、サプリメント類などに活用するのに好適のものであるが、この魚類エキスを簡単な処理により経済的に製造することができる。  
【００１７】
また、魚類エキスには、香気成分を主体とするアルコール水可溶性物質が混合されているので、この魚類エキスには魚肉本来の上品な風味が含まれ、食品としての安全性も高く、食生活において摂取しやすく、高血圧症の治療や予防に活用することができる。
【００１８】
請求項２の発明によれば、魚類の粉砕物は乾燥した魚類を用いているので、粉砕が容易でより微細にできるためアルコール水抽出効率を高めることができる。
【００１９】
請求項３の発明によれば、魚類の乾燥物として、鰹節、鯖節、鮪節、宗田鰹節、鰯節の節類から選ばれる少なくとも１種類のものを用いるが、鯖節、鮪節、宗田鰹節、鰯節は、鰹に類縁の魚を原料とするため、鰹同様の血圧降下作用のある魚類エキスを製造するのに適している。
【００２０】
請求項４の発明の魚類エキスは、血圧降下作用のあるエキスを主成分とするものであるので、調味料、その原料、健康食品や飲料の添加剤、サプリメント類などに活用するのに好適のものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明に係る血圧降下作用のある魚類エキスの製造方法は、魚類の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣に、温水を加え、ぺニシリウム・シトリナム（Penicillium citrinum）起源のプロテアーゼＢ、リゾープス・ニベウス（Rhizopus niveus ）起源のニューラーゼＦ、バチルス・リッケニフォルミス（Bacillus licheniformis）起源のアルカラーゼ、バチルス・リッケニフォルミス（Bacillus licheniformis）起源のスミチームＢＰＬ、リゾープス・オリーゼ（Rhizopus oryzae)起源のペプチターゼＲから選ばれる少なくとも１種類の酵素で加水分解して得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合して血圧降下作用のあるエキスを製造するものである。アルコール水抽出で使用されるアルコールは、食品に使用可能なアルコールであればよいが、通常エチルアルコール（エタノール）が好ましい。本発明に係る魚類エキスは、上記の製造方法によって製造された血圧降下作用のあるエキスを主成分とする魚類エキスである。
【実施例１】
【００２２】
以下、本発明の実施例を図面及び表に基づいて説明する。
本実施例は、鰹節の乾燥物の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出したアルコール水抽出残渣を１種類又は複数種の酵素で加水分解して得られる酵素分解エキスにアルコール水可溶性物質を混合してなる血圧降下作用のある鰹節エキスと、その鰹節エキスを製造する製造方法に本発明を適用した一例である。図１は、鰹節粉砕物をアルコール水抽出する方法と、そのアルコール水抽出の残渣を酵素を用いて加水分解して得られた酵素分解エキスにアルコール水可溶性物質を混合して鰹節エキスを製造する方法と、その鰹節エキスから鰹節エキス粉末を製造する方法とを示すもので、図１において、符号Ｐｉ（ｉ＝１，２，・・）は各工程を示す。
【００２３】
最初に、図１に示すように、４０℃に加温された４０％アルコール水（エタノール水）２００ｋｇに鰹節の粉砕物１００ｋｇを加え、その粉砕物とアルコール水を温度３０℃で２時間攪拌して、アルコール水中にアルコール水可溶性物質を溶解させるアルコール水抽出を行なう（Ｐ１）。次に、アルコール水可溶性物質が溶解されたアルコール水抽出液Ａ１３０ｋｇとアルコール水に不溶性の抽出残渣Ｂ１５０ｋｇとをフィルタープレスによって固液分離する（Ｐ２）。次に、抽出残渣Ｂ１５０ｋｇに、５０℃の温水７００ｋｇとペニシリウム・シトリナムを起源とするプロテアーゼＢ（天野エンザイム（株）製）５５０ｇとを加え、抽出残渣Ｂに含まれる蛋白質とプロテアーゼＢとを酵素反応させて加水分解し（Ｐ３）、血圧降下作用のあるペプチド混合物を生成しつつ、４５℃の条件下で２時間攪拌し、ペプチド混合物を温水に溶解させて酵素分解物Ｃを抽出する（Ｐ４）。
【００２４】
次に、上記のペプチド混合物が溶解された酵素分解物Ｃを酵素分解抽出液Ｄ（酵素分解エキスに相当する）と酵素反応されずに残った抽出残渣Ｅとをフィルタープレスによって固液分離し（Ｐ５）、抽出残渣Ｅが除去された酵素分解抽出液Ｄ６９０ｋｇを９０℃まで加温し酵素を失活させる（Ｐ６）。この酵素分解抽出液Ｄから減圧濃縮によって水分を蒸発させ、血圧降下作用のあるペプチド混合物を含む濃縮液Ｆ３７０ｋｇを生成する（Ｐ７）。
【００２５】
次に、前記濃縮液Ｆ３７０ｋｇにＰ２において抽出したアルコール水抽出液Ａ１３０ｋｇを混合して（Ｐ８）セライト濾過し（Ｐ９）、残渣Ｇを除去した血圧降下作用のある鰹節エキス４９０ｋｇを得る。この鰹節エキス４９０ｋｇに乾燥助剤としてデキストリン（商品名：ＢＬＤ：参松工業（株）製）１０５ｋｇを溶解させて、熱風温度１３０℃、チャンバー温度９０℃の条件下で噴霧乾燥し（Ｐ１０）、鰹節エキス粉末約１３０ｋｇを製造する。この鰹節エキス粉末は、前記の鰹節エキスと同様に、血圧降下作用を有するものである。
【００２６】
以上の製造方法で製造された鰹節エキス及び鰹節エキス粉末は、調味料や健康飲料などの食品、食品原料、サプリメント（栄養補助食品）、医薬品、医薬品原料などに適用することができる。医薬品に適用する場合には、鰹節エキス自体単独で、或いは鰹節エキスと反応しない製剤用担体（乳糖、ブドウ糖、蔗糖等）と混合して調製された血圧降下剤の形で使用される。剤型としては、錠剤、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、注射剤等が挙げらる。また、食品や食品原料に適用する場合には、農水産加工品、乳製品、菓子、調味料、飲料、フリーズドライ食品、レトルト食品等の血圧降下作用をもつ食品や食品原料として使用される。
【００２７】
さらに、血圧降下作用をもつ鰹節エキスはアルコール水抽出液Ａを混合しているので、鰹節の香気成分に富み、味噌汁、うどんのスープや煮物等の料理で利用される即席だし食品、めんつゆ類や風味用調味料等に鰹節等本来の上品な風味成分を含んだ食品原料として用いるのに好適である。
【００２８】
次に、鰹節の乾燥物の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣をペニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢで加水分解して得られた酵素分解エキスにアルコール水可溶性物質を混合した鰹節エキスを噴霧乾燥して製造した鰹節エキス粉末の血圧降下作用を測定するため自然発症高血圧ラットと、ヒトについて試験した結果について以下に説明する。なお、拡張期血圧については、低下傾向がみられるものの統計学的に有意差はなかった（データ非表示）。
【００２９】
上記の試験用の鰹節エキス粉末（ＳＨ−１１という）０．２５ｇ（蛋白質として４５ｍｇ）を体重１ｋｇの自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）に単回経口投与し、ＳＨＲに対するＳＨ−１１の示す血圧降下作用効果の有無及び心機能への影響について試験した。尚、今回の試験で使用したＳＨＲは、遺伝的に高血圧を発症するラットで、薬物や食品の試験に多用されている。
【００３０】
試験方法は、９週齢のＳＨＲ（（株）船橋農場（ＳＨＲ等疾患モデル共同研究会）社製）をさらに１週間の予備飼育を行い、一般状態に異常が検出されなかったＳＨＲを、１群５匹のＳＨ−１１群と１群５匹の対照群とに群分けを行なった。ＳＨ−１１群は、ＳＨ−１１、０．２５ｇを注射用水（（株）大塚製薬社製蒸留水）に溶解し、その０．２５ｇ相当分を４ｍＩ／ｋｇで単回経口投与されたＳＨＲ群である。
【００３１】
一方、対照群は、前記注射用水を４ｍＩ／ｋｇで単回経口投与されたＳＨＲ群である。群分け後、ＳＨ−１１群と対照群とのそれぞれの血圧及び心拍数を測定し、血圧降下作用についての比較、検討を行なった。
【００３２】
ここで、得られた数値（収縮期血圧、心拍数）は、各群で平均値及び標準誤差を算出した。統計処理は各測定時間で、対照群とＳＨ−１１群間の有意差検定を確認した。なお、各群の有意差は、Ｆ検定で分散の検定を行い、等分散の場合Student のｔ検定を用いて検定し、不等分散の場合Aspin-Welch のｔ検定を用いて検定した。危険率５％未満を有意とした。  
【００３３】
表１は、ＳＨ−１１群と対照群との経口投与前０時間及び経口投与２，４，８，１２，２４時間後の収縮期血圧の平均値（mmHg）及び標準誤差を示している。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
表１と図２から判るように、対照群では投与前に１８４mmHgを示し、以後２４時間まで略一定の値で推移した。これに対して、ＳＨ−１１群では、投与前１８５mmHgを示し、以後投与８時間後には１５７mmHgまで低下する推移を示した。特に、投与２，４時間後では、それぞれ１５８mmHg、１５５mmHgまで低下し、対照群と比較して統計学的に有意な差が認められた。図２において、＊は有意差ｐ＜０．０５となることを示し、＊＊は有意差ｐ＜０．０１となることを示す。上記結果から、ＳＨ−１１をＳＨＲに単回経口投与して血圧降下作用を検討した結果、投与２，４時間後に収縮期血圧において明確な血圧降下作用が認められた。  
【００３６】
次に、表２は、ＳＨ−１１群と対照群との経口投与前０時間及び経口投与２，４，８，１２，２４時間後の各群の心拍数の平均値（beats/min ）及び標準誤差を示している。
【００３７】
【表２】
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【００３８】
表２と図３から判るように、対照群では、投与前に４４９beats/min を示し、以後投与２４時間後には４４２beats/min で略一定の値で推移した。ＳＨ−１１群についても投与前４５３beats/min を示し、投与２４時間後では４５６beats/min で対照群と略同様の値で推移した。上記結果から、ＳＨ−１１をＳＨＲに単回経口投与して心拍数を検討した結果、ＳＨ−１１は心機能に対して影響を及ぼさないと認められた。
【００３９】
上記試験結果からＳＨ−１１群では、投与後より収縮期血圧の低下が認められ、投与２及び４時間後においては、対照群に対して統計学的に有意な低下が認められた。一方、心拍数では、ＳＨ−１１群は対照群と同様の値で推移したので、統計学的に有意差はなく、ＳＨ−１１群は心機能に対して影響を及ぼさないことが認められた。
従って、ＳＨ−１１は血圧降下作用を有し、心機能には影響を及ぼさない安全性の高い食品であることが証明された。実施例１の鰹節エキスにおいて前記CheungとCushman の方法に準じて測定したアンジオテンシン変換酵素阻害率ＩＣ50は、１．５３ｍｇ蛋白／ｍｌであるので、実施例１の鰹節エキスの主たる血圧降下作用は、アンジオテンシン変換酵素阻害作用によるものとは考えられない。
【００４０】
上記ＳＨＲに対するＳＨ−１１の血圧降下作用の試験結果から、鰹節の粉砕物からアルコール水可溶物質をアルコール水抽出した抽出残渣に、温水を加え、ペニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢで加水分解して得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合した血圧降下作用のある鰹節エキスは、安全性の面で問題がなく血圧降下作用のある食品や食品原料として有用である。
【００４１】
次に、上記製造方法で製造された鰹節エキス粉末のヒトに対する血圧降下作用を検討するため、ヒトを被験者とした臨床試験を実施した。
試験方法は、スクリーニング試験を行なった結果、収縮期血圧が約１４０mmHg以上を示し、血圧降下薬による治療を受けていない血圧の高めな成人男性９名に対して試験食品である鰹節エキス粉末（ヒトの臨床試験において摂取される鰹節エキス粉末は、前記ＳＨＲの経口投与試験でＳＨＲが摂取したＳＨ−１１と同一物質であるがここではＳＨ−１Ｎと記載する）或いはプラセボ食品を摂取させ、８週間にわたりクロスオーバー試験を行ない、高血圧に対する効果等を調査した。
【００４２】
具体的には、被験者９名をＡ群とＢ群との２群に分け、Ａ群（５名）には最初の４週間ＳＨ−１Ｎを摂取させ、Ｂ群（４名）にはプラセボ食品を摂取させた。４週間の摂取期間終了後、５週間の休薬期間を設けた後、次にＡ群にはプラセボ食品を、Ｂ群にはＳＨ−１Ｎを４週間摂取させ、８週間にわたる交差試験を行なった。
試験食品及びプラセボ食品は、各食品５ｇの粉末をお湯や味噌汁又は水１５０ｍＬに溶解させ、１日３回（朝，昼，夕のそれぞれ食後）摂取させた。試験食品５ｇに含まれる蛋白質は０．９ｇであった。摂取期間中、１回／週の割合で被験者９名の血圧及び心拍数を測定した。なお、試験期間中、原則として被験者には、血圧に影響を及ぼすと考えられる薬剤を服用させなかった。
【００４３】
表３には、ＳＨ−１Ｎ摂取とプラセボ食品摂取のそれぞれの食品摂取による被験者９名の収縮期血圧（mmHg）と収縮期血圧変化値（ΔmmHg）の平均値及び標準誤差を示し、収縮期血圧を図４に示した。なお、各検査データは検査時期及び群ごとの基本統計量（平均値，標準誤差）を算出し、Student のｔ検定を行なった。有意水準は危険率５％及び１％とした。摂取開始時のデータについては、摂取開始時を含む３回の数値の平均値を採用した。図４において、＊＊はプラセボ食品と比較してF-t 検定を行なった有意差ｐ＜０．０１を示し、＃は摂取前と比較してPaired-t検定をおこなった有意差ｐ＜０．０５、＃＃は摂取前と比較してPaired-t検定をおこなった有意差ｐ＜０．０１となることを示す。
【００４４】
【表３】
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【００４５】
表３より、プラセボ食品摂取期間中の収縮期血圧の推移は、摂取開始前の平均値１５２mmHgに対して、摂取開始後１，２，３及び４週目はそれぞれ平均値１５５，１５４，１５４，１５６mmHgを示し、いずれの測定時においても摂取前値に対する有意差は認められなかった。摂取前値に対する変化値は、それぞれ平均値２，２，２，３mmHgであった。
【００４６】
一方、表３よりＳＨ−１Ｎ摂取期間中の収縮期血圧の推移は、摂取開始前平均値１５８mmHgに対して、摂取開始後１，２，３，４週目はそれぞれ平均値１５６，１５５，１４９，１４９mmHgを示し、３及び４週目で、摂取前値に対して有意な血圧降下作用が認められた。摂取前値に対する変化値は、それぞれ平均値−２，−３，−８，−９mmHgを示し、３，４週目でＳＨ−１Ｎ投与群とプラセボ食品投与群との間に有意差が認められた。
【００４７】
表４には、ＳＨ−１Ｎ摂取とプラセボ食品摂取のそれぞれの食品摂取による被験者９名の心拍数（拍／回）と心拍数変化値（Δ拍／回）の平均値及び標準誤差を示し、心拍数を図５に示した。
【００４８】
【表４】
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【００４９】
表４より、プラセボ食品摂取期間中の心拍数の推移は、摂取開始前の平均値７６拍／回に対して、摂取開始後１，２，３，４週目はそれぞれ平均値７９，８１，８０，７９拍／回を示し、摂取前値に対する心拍数変化値は、それぞれ平均値３，５，４，４Δ拍／回であった。摂取前値に対する有意差は認められなかった。
【００５０】
一方、表４よりＳＨ−１Ｎ摂取期間中の心拍数の推移は、摂取開始前の平均値７８拍／回に対して、摂取開始後１，２，３及び４週目はそれぞれ平均値７９，７７，７７，７７拍／回を示し、摂取前値に対する心拍数変化値は、それぞれ平均値１，０，−１，０Δ拍／回を示し、いずれの測定時においても摂取前値或いはプラセボ食品投与に対する有意差なく、ＳＨ−１はヒトの心機能に対して影響を及ぼさないことが認められた。
【００５１】
以上の結果より、ヒトによるＳＨ−１Ｎ摂取において、摂取開始より血圧の低下がみられ、３，４週目では、摂取前値及びプラセボ食品摂取群と比較して、統計学的に有意な血圧の低下が認められた。被験者ごとに収縮期血圧の推移を観察すると、１０mmHg以上の低下を示した被験者が、プラセボ食品摂取群においては９名中１名であったが、ＳＨ−１Ｎ摂取群においては９名中７名認められた（データ非表示）。これらの結果より、ＳＮ−１Ｎは、ヒトにおいて経口摂取されると血圧降下作用を有し、安全性の高いものであることが証明された。
【００５２】
従って、上記ヒトに対する鰹節エキス粉末の血圧降下作用の試験結果から、本発明における鰹節の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣に、温水を加え、ペニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢで加水分解して得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合した血圧降下作用のある鰹節エキスは、安全性の面で問題なく、且つ血圧降下作用のある食品や食品原料として有用である。
その他、魚類の乾燥物の粉砕物を鯖節、鮪節、宗田鰹節、鰯節とした請求項１の製造方法から製造されたエキスについても、人間との相関が証明されているＳＨＲへのエキス粉末を経口投与した試験より、血圧降下作用を有し、心機能に影響を及ぼさない安全性の高い魚類エキスであることが言える。
【００５３】
図６、図７は、４週目までは前記と同様の投与を行い、その後９〜１３周目にかけては４週目までとは逆の投与を行ったクロスオーバー試験の収縮期血圧と、クロスオーバー試験の心拍数を示すもので、収縮期血圧において有意な差が認められる。Ａ群は０〜４週はＳＨ−１Ｎ、９〜１３週はプラセボ食品を摂取。Ｂ群は０〜４週はプラセボ食品を摂取、９〜１３週はＳＨ−１Ｎを摂取していることを示している。
【実施例２】
【００５４】
この実施例２は、前記実施例１とは異なる２種類の酵素を用いて鰹節の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出したアルコール水抽出残渣を加水分解する例である。まず、４０℃に加温された４０％アルコール水（エタノール水）２０ｋｇに鰹節の粉砕物１０ｋｇを加え、温度３５℃で２時間攪拌抽出した後、フィルタープレスによって固液分離を行いアルコール水抽出液Ａ１３ｋｇと抽出残渣Ｂ１５ｋｇとを得る。次に、抽出残渣Ｂ１５ｋｇに５０℃の温水７０ｋｇを加え、酵素反応のため、リゾープス・ニベウス起源のニューラーゼＦ（天野エンザイム（株）製）を３０ｇとリゾープス・オリーゼ起源のペプチターゼＲ（天野エンザイム（株）製）を３０ｇ混合し、４５℃の条件下で４時間攪拌し、ペプチド混合物を温水に溶解させて酵素分解物Ｃを抽出する。
【００５５】
次に、酵素分解物Ｃをフィルタープレスによって固液分離を行って得た酵素分解抽出液Ｄ７５ｋｇを９０℃まで加温し酵素を失活させ、図１のアルコール水抽出液Ａ１３ｋｇを混合してセライト濾過した血圧降下作用のある鰹節エキス８７．５ｋｇを得る。この鰹節エキス８７．５ｋｇから試験用の鰹節エキス５００ｇを取り出して凍結乾燥し、得られた乾燥物である鰹節エキス粉末の血圧降下作用を測定するため自然発症高血圧ラットに単回経口投与試験した結果について以下に説明する。
【００５６】
上記の試験用鰹節エキス粉末（ＳＨ−７０Ｔという）（蛋白質として１００ｍｇ）を体重１ｋｇの自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）に単回経口投与し、投与４時間後のＳＨＲに対するＳＨ−７０Ｔの示す血圧降下作用の有無及び心機能への影響について試験した。尚、今回の試験で使用したＳＨＲは、遺伝的に高血圧を発症するラットで、薬物や食品の試験に多用されている。
【００５７】
試験方法は、１０週齢のＳＨＲ（日本エスエルシー（株）社製）を、１群４匹のＳＨー７０Ｔ群と１群４匹の対照群とに群分けを行なった。ＳＨ−７０Ｔ群は、ＳＨー７０Ｔを前記注射用水に溶解し、蛋白質１００ｍｇ相当分を４ｍｌ／ｋｇで単回経口投与されたＳＨＲ群である。
【００５８】
一方、対照群は、前記注射用水を４ｍｌ／ｋｇで単回経口投与されたＳＨＲ群である。群分け後、ＳＨ−７０Ｔ群と対照群とのそれぞれの経口投与４時間後の血圧及び心拍数を測定し、血圧降下作用についての比較、検討を行なった。
【００５９】
ここで、得られた数値（収縮期血圧、拡張期血圧、心拍数）は、各群で平均値及び標準誤差を算出した。統計処理は、対照群とＳＨ−７０Ｔ群間の有意差検定を確認した。なお、各群間の有意差は、Ｆ-t検定により検定を行なった。
【００６０】
表５は、ＳＨ−７０Ｔ群と対照群との経口投与前０時間及び経口投与４時間後の収縮期血圧の平均値（mmHg）及び標準誤差を示している。
【００６１】
【表５】
2005187395.tif 000007
【００６２】
表５と図８から判るように、対照群では投与前に１８５mmHgで、投与４時間後は１８６mmHgを示した。これに対して、ＳＨ−７０Ｔ群では、投与前１８５mmHgで、投与４時間後には、１６０mmHgまで低下し、著しい血圧の低下がみられ、対照群と比較して統計学的に有意な差が認められた。図８において、＊＊は有意差ｐ＜０．０１となることを示す。上記結果から、ＳＨ−７０ＴをＳＨＲに単回経口投与して血圧降下作用を検討した結果、投与４時間後に収縮期血圧において明確な血圧降下作用が認められた。
【００６３】
表６は、ＳＨ−７０Ｔ群と対照群との経口投与前０時間及び経口投与４時間後の拡張期血圧の平均値（mmHg）及び標準誤差を示している。  
【００６４】
【表６】
2005187395.tif 000008
【００６５】
表６と図９から判るように、対照群では投与前に１４３mmHgで、投与４時間後は１４２mmHgを示した。これに対して、ＳＨ−７０Ｔ群では、投与前１４４mmHgで、投与４時間後には、１２４mmまで低下し、対照群と比較して統計学的に有意な差が認められた。図９において、＊は有意差ｐ＜０．０５となることを示す。上記結果から、ＳＨ−７０ＴをＳＨＲに単回経口投与して血圧降下作用を検討した結果、投与４時間後に拡張期血圧において血圧降下作用が認められた。
【００６６】
表７は、ＳＨ−７０Ｔ群と対照群との経口投与前０時間及び経口投与４時間後の心拍数の平均値（beats ／min ）及び標準誤差を示している。
【００６７】
【表７】
2005187395.tif 000009
【００６８】
表７と図１０から判るように、対照群では投与前３９５beats/min を示し、投与４時間後は４３６beats/min を示した。ＳＨー７０Ｔ群についても投与前４０４beats/min で、投与４時間後では４６０beats/min を示し、対照群と略同様の心拍数を示した。上記結果から、ＳＨー７０ＴをＳＨＲに単回経口投与して心拍数を検討した結果、ＳＨ−７０Ｔは心機能に対して影響を及ぼさないと認められた。
【００６９】
上記試験結果からＳＨ−７０Ｔ群では、収縮期血圧及び拡張期血圧ともに、投与４時間後に対照群と比較して統計学的に有意な低下が認められた。一方、心拍数では、ＳＨ−７０Ｔ群は、対照群と同様の値で推移したので、統計学的に有意差はなく、ＳＨ−７０Ｔ群は心機能に対して影響を及ぼさないことが認められた。
従って、ＳＨ−７０Ｔは血圧降下を有し、心機能には影響を及ぼさない安全性の高い食品であることが証明された。実施例２の鰹節エキスにおいて前記実施例１と同様の方法で測定したアンジオテンシン変換酵素阻害率ＩＣ50は、２．７５ｍｇ蛋白／ｍｌであるので、実施例２の鰹節エキスの主たる血圧降下作用は、アンジオテンシン変換酵素阻害作用によるものとは考えられない。
【００７０】
上記ＳＨＲに対するＳＨ−７０Ｔの血圧降下作用の試験結果から、鰹節の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣に、温水を加え、リゾープス・ニベウス起源のニューラーゼＦとリゾープス・オリーゼ起源のペプチターゼＲとを混合した酵素で加水分解して得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合した血圧降下作用のある鰹節エキスは、安全性の面で問題がなく血圧降下作用のある食品や食品原料として有用である。
【実施例３】
【００７１】
この実施例３は、前記実施例１の鰹節の代わりに鯖節を用いる点で異なるのみで、製造工程自体は基本的に実施例１と同様であるので簡単に説明する。まず、４０℃に加温された４０％アルコール水（エタノール水）２０ｋｇに鯖節の粉砕物１０ｋｇを加え、温度３５℃で２時間攪拌抽出した後、フィルタープレスによって固液分離を行いアルコール水抽出液Ａ１３ｋｇと抽出残渣Ｂ１５ｋｇとを得る。次に、抽出残渣Ｂ１５ｋｇに６５℃の温水８０ｋｇとペニシリウム・シトリナムを起源とするプロテアーゼＢ（天野エンザイム（株）製）１５ｇとを加え、６０℃の条件下で４時間攪拌し、ペプチド混合物を温水に溶解させて酵素分解物Ｃを抽出する。
【００７２】
次に、酵素分解物Ｃをフィルタープレスによって固液分離を行って得た酵素分解抽出液Ｄ８０ｋｇを８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、図１のアルコール水抽出液Ａ１３ｋｇを混合してセライト濾過した血圧降下作用のある鯖節エキスを９２ｋｇ得る。この鯖節エキス９２ｋｇから試験用の鯖節エキス５００ｇを取り出して凍結乾燥した鯖節エキス粉末の血圧降下作用を測定するため自然発症高血圧ラットに単回経口投与試験した。なお、拡張期血圧については、低下傾向がみられるものの統計学的に有意差はなかった（データ非表示）。この鯖節エキス粉末（ＴＳＡという）（蛋白質として１００ｍｇ）を体重１ｋｇの自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）に単回経口投与２時間後、４時間後の血圧降下作用を測定する実験を行なった。試験方法については、実施例２と同様の方法で試験した。表８は、ＴＳＡ群と対照群との経口投与前０時間及び経口投与２，４時間後の各群の収縮期血圧の平均値（mmHg）及び標準誤差を示している。
【００７３】
【表８】
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【００７４】
表８と図１１から判るように、対照群では、投与前１８０．５mmHgを示し、以後２，４時間後では、それぞれ１８３．０，１７９．８mmHgを示し、略一定の値で推移した。これに対してＴＳＡ群は、投与前は１８０．５mmHgを示し、投与２，４時間後には、それぞれ１７６．５，１７０．３mmHgまで低下し、対照群と比較して２，４時間後ともに統計学的に有意な差が認められた。図１１において、＊は有意差ｐ＜０．０５となることを示し、＊＊は有意差ｐ＜０．０１となることを示す。上記結果から、ＴＳＡをＳＨＲに単回経口投与して血圧降下作用を検討した結果、投与２，４時間後に収縮期血圧において明確な血圧降下作用が認められた。  
【００７５】
次に、表９は、ＴＳＡ群と対照群との経口投与前０時間及び経口投与２，４時間後の各群の心拍数の平均値（beats/min ）及び標準誤差を示している。
【００７６】
【表９】
2005187395.tif 000011
【００７７】
表９と図１２から判るように、対照群では、投与前に４２３．８beats/min を示し、以後２，４時間後では、それぞれ４２３．５，４１７．８beats/min を示し、略一定の値で推移した。これに対してＴＳＡ群は、投与前に４１７．８beats/min を示し、以後２，４時間後では、４０４．８，４１０．５beats/min で対照群と略同様の値で推移した。上記結果から、ＴＳＡをＳＨＲに単回経口投与して心拍数を検討した結果、ＴＳＡは心機能に対して影響を及ぼさないと認められた。  
【００７８】
上記試験結果からＴＳＡ群では、投与２，４時間後に収縮期血圧の低下が認められ、対照群に対して統計学的に有意な低下が認められた。一方、心拍数では、ＴＳＡ群は対照群と同様の値で推移したので、統計学的に有意差はないと認められた。従って、ＴＳＡは血圧降下作用を有し、心機能には影響を及ぼさない安全性の高い食品であることが証明された。実施例３の鯖節エキスにおいて前記実施例１と同様の方法で測定したアンジオテンシン変換酵素阻害率ＩＣ50は、２．７７ｍｇ蛋白／ｍｌであるので、実施例３の鯖節エキスの主たる血圧降下作用は、アンジオテンシン変換酵素阻害作用によるものとは考えられない。
【００７９】
上記ＳＨＲに対するＴＳＡの血圧降下作用の試験結果から、鯖節の粉砕物からアルコール水可溶性物質をアルコール水抽出した抽出残渣に、温水を加え、ペニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢで加水分解して得られた酵素分解エキスに前記アルコール水可溶性物質を混合した血圧降下作用のある鯖節エキスは、安全性の面で問題がなく血圧降下作用のある食品や食品原料として有用である。
【００８０】
以下、前記実施形態を部分的に変更する変更例について説明する。
１）前記実施例１〜３では、魚類の粉砕物として、鰹節、鯖節粉砕物を採用した例について説明したが、鰹節、鯖節、鮪節、宗田鰹節、鰯節のうちの何れか１種類又は複数種類の節の粉砕物を適用しても良い。粉砕物は、前記のような乾燥体の粉砕物に限定されるものではなく、半乾燥体、或いは、生もの状態の粉砕物も適用可能である。
【００８１】
２）魚類の粉砕物にアルコール水を加え、アルコール水中にアルコール水可溶性物質を溶解させるアルコール水抽出において使用するアルコール水は、５〜５０％のアルコール水を使用し、３５〜４０％のアルコール水が最も好ましい。また、アルコール水加温温度については常温〜５０℃で、３５〜４０℃が最も好ましい。加温攪拌時間については３０分間〜５時間攪拌し、２時間前後が最も好ましい。
【００８２】
３）前記酵素としては、実施例１〜３に記載の酵素に限定される訳ではなく、ぺニシリウム・シトリナム起源のプロテアーゼＢ、リゾープス・ニベウス起源のニューラーゼＦ、バチルス・リッケニフォルミス起源のアルカラーゼ、バチルス・リッケニフォルミス起源のスミチームＢＰＬ、リゾープス・オリーゼ起源のペプチターゼＲから選ばれる少なくとも１種類の酵素、或いは複数種類の酵素を採用してもよい。
４）鰹節エキスを生成するための濃縮方法については、加熱濃縮、膜濃縮その他の方法であっても特に限定されるものではない。
５）鰹節エキス粉末を製造するための乾燥方法については、真空乾燥その他の方法であっても特に限定されるものではない。更に、噴霧乾燥時の乾燥助剤として、デキストリンの他に、澱粉、乳糖等を使用してもよい。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】本発明の実施例の鰹節エキスと鰹節エキス粉末を製造する製造工程図である。
【図２】ＳＨＲの２つの群に鰹節エキス粉末を単回経口投与した試験結果の収縮期血圧のグラフである。
【図３】上記の試験結果の心拍数のグラフである。
【図４】ヒトの２つの群に鰹節エキス粉末を単回経口投与した試験結果の収縮期血圧のグラフである。
【図５】上記の試験結果の心拍数のグラフである。
【図６】ヒトの２つの群に鰹節エキス粉末を経口投与したクロスオーバー試験結果の収縮期血圧のグラフである。
【図７】上記のクロスオーバー試験結果の心拍数のグラフである。
【図８】ＳＨＲの２つの群に鰹節エキス粉末を単回経口投与した試験結果の収縮期血圧のグラフである。
【図９】上記の試験結果の拡張期血圧のグラフである。
【図１０】上記の試験結果の心拍数のグラフである。
【図１１】ＳＨＲの２つの群に鯖節エキス粉末を単回経口投与した試験結果の収縮期血圧のグラフである。
【図１２】上記の試験結果の心拍数のグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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