(57)【要約】【課題】  化学的に安定で、水溶性も良好であって、かつ優れたチロシナーゼ阻害活性を有する化合物及びこれを用いた美白剤を提供する。【解決手段】  一般式（１）【化１】2005112818.tif 000010（式中、Ｘ1はヒドロキシ基又はカルボキシル基を示し；Ｒ1は水素原子又は１〜３個のヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数２〜１２のアルキル基を示し；Ｒ2は１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２のアルキル基を示す）で表される置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2005112818.tif 000007
（式中、Ｘ1はヒドロキシ基又はカルボキシル基を示し；
Ｒ1は水素原子又は１〜３個のヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数２〜１２のアルキル基を示し；
Ｒ2は１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２のアルキル基を示す）で表される置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩。
【請求項２】
Ｒ1が、水素原子又は１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２のアルキル基であり、Ｒ2が、１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２のアルキル基である請求項１記載の置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩。
【請求項３】
請求項１又は２記載の置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩を含有する皮膚外用剤。
【請求項４】
請求項１又は２記載の置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩を含有する美白剤。
【請求項５】
一般式（２）
【化２】
2005112818.tif 000008
（式中、Ｘ2は保護されたヒドロキシ基又は保護されたカルボキシル基を示す）
で表されるオキシラン化合物に一般式（３）
【化３】
2005112818.tif 000009
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同じ）
で表されるアミン類を反応させ、次いでヒドロキシ基又はカルボキシル基の保護基を脱離させる、請求項１記載の置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れたチロシナーゼ阻害活性を有し、美白剤として有用な置換フェノキシプロパノールアミン類に関する。
【背景技術】
【０００２】
チロシナーゼ阻害活性を有する美白剤としては、各種ハイドロキノンアルキルエーテル類等（特許文献１〜６）が知られている。しかし、これらのハイドロキノンアルキルエーテル類は水に対する溶解性が低く、皮膚外用剤への高濃度配合が困難な場合がありうる。また、アルブチンは水に対する溶解性が高く、実際に化粧料に使用されている美白剤であるが、配糖体であり、配糖体は一般に化学的に不安定であるという懸念がある。
【特許文献１】特開平１−２６９４９８号公報
【特許文献２】特開平６−１９２０６２号公報
【特許文献３】特開昭６１−１５９９４３号公報
【特許文献４】特開昭６３−２４６３１１号公報
【特許文献５】特開平２−２７０８１２号公報
【特許文献６】特開平４−５４１０９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
従って本発明は、優れたチロシナーゼ阻害活性を有し、化学的に安定で、かつ水溶性も良好である化合物及びこれを用いた美白剤、これを含有した皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、チロシナーゼ阻害活性を指標として種々の化合物を合成してきたところ、下記式（１）で表される置換フェノキシプロパノールアミン類が、強いチロシナーゼ阻害活性を有し、化学的に安定であり、かつ水溶性も優れており、美白剤として有用であることを見出した。
【０００５】
すなわち、本発明は、一般式（１）
【０００６】
【化１】
2005112818.tif 000002
【０００７】
（式中、Ｘ1はヒドロキシ基又はカルボキシル基を示し；
Ｒ1は水素原子又は１〜３個のヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数２〜１２のアルキル基を示し；
Ｒ2は１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２のアルキル基を示す）で表される置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩、及びその製造法を提供するものである。
また本発明は、上記置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩を含有する皮膚外用剤及び美白剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩は、化学的に安定であり、水溶性も優れており、かつ優れたチロシナーゼ阻害活性を有することから、美白化粧料に代表される皮膚外用剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
一般式（１）中、Ｒ1で示される１〜３個のヒドロキシ基で置換されていてもよい炭素数２〜１２のアルキル基としては、炭素数２〜１２の直鎖又は分岐鎖のアルキル基、１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられる。ここで、炭素数２〜１２の直鎖又は分岐鎖のアルキル基及び１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２の直鎖又は分岐鎖のアルキル基のアルキル鎖部分としては、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、イソブチル基、sec−ブチル基、tert−ブチル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−オクチル基、ｎ−デシル基、ｎ−ドデシル基等が挙げられ、このうち炭素数２〜６の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が好ましく、さらに炭素数２〜４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が好ましい。
【００１０】
水溶性の点から、Ｒ2は１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜１２の直鎖又は分岐鎖のアルキル基であるのが好ましい。このようなヒドロキシ基で置換されているアルキル基としては、前記した直鎖又は分岐鎖のアルキル基に１〜３個のヒドロキシ基が置換したものが好ましく、具体的には、２−ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシ−１−メチルエチル基、３−ヒドロキシプロピル基、４−ヒドロキシブチル基、２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチルエチル基、２−ヒドロキシ−１，１−ビスヒドロキシメチルエチル基等が挙げられる。
【００１１】
また、Ｒ1が水素原子、又は１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜６のアルキル基であり、Ｒ2が１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜６のアルキル基である場合がより好ましい。
【００１２】
Ｒ1が水素原子、又は１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基であり、Ｒ2が１〜３個のヒドロキシ基で置換されている炭素数２〜４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基である場合がさらに好ましい。
【００１３】
さらには、下記の式で表される化合物が特に好ましい。
【００１４】
【化２】
2005112818.tif 000003
【００１５】
置換フェノキシプロパノールアミン類（１）の塩としては、リン酸、塩酸、硫酸、硝酸、等の鉱酸塩；クエン酸、酒石酸、乳酸、等の有機酸塩；ナトリウム、カリウム、カルシウム等のアルカリ金属、アルカリ土類金属塩；アルミニウム、亜鉛などの両性金属塩；アミノ酸塩；アミン塩等が挙げられる。また、Ｘ1のフェノール性水酸基又はカルボキシル基とアミノ基との両者を有することから、分子内塩も形成し得る。さらに、本発明化合物はＲ1及びＲ2の種類によって光学異性体を有する場合もあるが、本発明においては光学活性体及び光学不活性体のいずれも含まれる。
【００１６】
本発明の置換フェノキシプロパノールアミン類（１）又はその塩は、例えば次の反応式に従って製造することができる。
【００１７】
【化３】
2005112818.tif 000004
【００１８】
（式中、Ｘ2は保護されたヒドロキシ基又は保護されたカルボキシル基を示し、Ｒ1、Ｒ2及びＸ1は前記と同じ）
【００１９】
すなわち、一般式（２）で表されるオキシラン化合物にアミン類（３）を反応させ、次いでヒドロキシ基又はカルボキシル基の保護基を脱離させることにより、本発明の置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩が製造される。
【００２０】
Ｘ2で示される保護されたヒドロキシ基やカルボキシル基において、使用される保護基としては、オキシラン化合物とアミンの反応条件に耐えうるものであれば特に限定されず、ヒドロキシ基の保護基としては、ベンジル基等のアラルキル基、メトキシメチル基、エトキシメチル基などが、またカルボキシル基の保護基としては、ベンジルエステル基、メチル及びエチル等のアルキルエステル基等が挙げられる。
【００２１】
オキシラン化合物（２）とアミン類（３）との反応は、無溶媒又は低級アルコール等の溶媒中室温〜還流温度で１〜４８時間行えばよい。また、ヒドロキシ基又はカルボキシル基の保護基の脱離反応は、常法に従い行えばよく、たとえばヒドロキシ基の保護基としてベンジル基を使用した場合には通常の水素添加反応が好ましく、カルボキシル基の保護基としてアルキルエステル基を用いた場合には、アルカリ加水分解反応により行うのが好ましい。
【００２２】
反応終了後、反応混合物からの目的物の単離、精製は常法、例えば洗浄、抽出、蒸留又は再結晶、各種クロマトグラフィー等により行えばよい。また、所望の塩への変換も常法に従って行えばよい。
【００２３】
本発明の置換フェノキシプロパノールアミン類又はその塩は、チロシナーゼ活性阻害作用を有し、美白剤として有用である。また、中性又は酸性水溶液に対する溶解性も良好で、かつ化学的にも安定であり、種々の形態の皮膚外用剤に適用できる。
【００２４】
本発明の皮膚外用剤は、置換フェノキシプロパノールアミン類（１）又はその塩を含有するが、その含有量は美白効果の点から通常外用剤全量中の０．００１〜２０質量％、さらに０．００１〜１０質量％、特に０．００５〜５質量％が好ましい。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤には、上記成分以外に通常化粧品や医薬品に用いられる他の成分、例えば油分、紫外線吸収剤、酸化防止剤、界面活性剤、保湿剤、香料、水、アルコール、増粘剤、色材等を必要に応じて配合できる。その形態としては、特に限定されないが、化粧料、毛髪化粧料、医薬部外品、医薬品のいずれも挙げられる。
【実施例】
【００２６】
合成例１
４−［２−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−プロポキシ］−フェノールの合成：
（１）滴下ロートをつけた１００mL２口フラスコに２−アミノエタノール（１０．７ｇ，１７５．５mmol）とエタノール（６ｇ）を入れ、８０℃で攪拌しながら、そこへ２−（４−ベンジルオキシフェノキシメチル）オキシラン（３．０ｇ，１１．７mmol）をエタノール（３０ｇ）に溶かした溶液を１時間かけて滴下し、さらにその温度で１．５時間攪拌した。反応終了後、クーゲルロール（１４０℃／＜０．１mmHg）を用いて未反応の２−アミノエタノールを留去し、得られた残渣（３．６ｇ）をエタノール（２１．６ｇ）を用いた再結晶により精製し、１−（４−ベンジルオキシフェノキシ）−３−（２−ヒドロキシエチルアミノ）プロパン−２−オール（２．７ｇ，m.p. １１５．２℃）を白色結晶として得た。
【００２７】
1H-NMR(CDCl3, 200MHz)δ：2.29(br,3H),2.84(m,4H),3.70(t,2H, J=5.10Hz), 3.93(d, 2H, J=4.49Hz), 4.07(m,1H), 5.01(s, 2H), 6.81-6.93(m,4H), 7.31-7.44(m, 5H)
【００２８】
（２）次に、得られた１−（４−ベンジルオキシフェノキシ）−３−（２−ヒドロキシエチルアミノ）プロパン−２−オール（２．０ｇ）をメタノール（２０ｇ）に溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（０．２ｇ）を加え、水素雰囲気下室温で１２時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃをろ過して除去した後、減圧濃縮し、粗生成物（１．４ｇ）を得た。得られた粗生成物の一部（１．１ｇ）を、エタノール（５ｇ）を用いた再結晶により精製し、目的物（０．５ｇ，m.p. １２５．１℃）を黄色結晶として得た。
【００２９】
1H-NMR(CD3OD, 200MHz)δ：2.71-2.92(m,4H), 3.72(t,2H, J=5.48Hz), 3.91(d,2H, J=5.34Hz), 4.07(m,1H), 4.07(m,1H), 6.71-6.85(m,4H)
13C-NMR(CD3OD, 200MHz)δ：52.45, 53.27, 61.63, 69.95, 72.72, 116.77, 116.83, 152.59, 153.65
【００３０】
合成例２
４−｛３−［ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロポキシ｝−フェノールの合成：
（１）１００mL丸底フラスコに２−（４−ベンジルオキシフェノキシメチル）オキシラン（５．０ｇ，１９．５mmol）、ジエタノールアミン（４．２ｇ，４０mmol）及びｔ−ＢｕＯＨ（２０ｇ）を入れ、８０℃で６時間攪拌した。反応終了後、減圧下濃縮し、残渣に酢酸エチル（５０mL）を加え、飽和食塩水（５０mL×３）で酢酸エチル層を洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥・ろ過後、減圧下濃縮し、得られた残渣（５．８ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル〜ＣＨ3Ｃｌ：ＭｅＯＨ＝９：１）により精製し、１−（４−ベンジルオキシフェノキシ）−３−［ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミノ−プロパン−２−オール（４．６ｇ）を白色結晶として得た。
【００３１】
1H-NMR(CDCl3, 200MHz)δ：2.42-2.85(m, 6H), 3.52-3.79(m,4H),3.89(d,2H, J=4.93Hz), 4.11(m,1H), 4.84(br,3H), 4.99(s,2H), 6.80-6.91(m,4H), 7.27-7.43(m,5H)
【００３２】
（２）次に、得られた１−（４−ベンジルオキシフェノキシ）−３−［ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミノ−プロパン−２−オール（３．８ｇ）をメタノール３０ｇに溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（０．４ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１８時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃをろ過して除去した後、減圧濃縮することにより目的物（２．９ｇ，m.p. ８２．５℃）を固体として得た。
【００３３】
1H-NMR(CD3OD, 200MHz)δ：2.63-2.85(m,6H), 3.56-3.72(m, 4H), 3.75-4.07(m,3H), 6.71-6.86(m,4H)
13C-NMR(CD3OD, 200MHz)δ：58.70, 59.51, 60.85, 69.41, 72.20, 116.77, 116.80, 152.49, 153.70
【００３４】
合成例３
２−［２−ヒドロキシ−３−（４−ヒドロキシフェノキシ）プロピルアミノ］−２−ヒドロキシメチルプロパン−１，３−ジオールの合成：
（１）１００mL丸底フラスコに２−（４−ベンジルオキシフェノキシメチル）オキシラン（５ｇ，１９．５mmol）、２−アミノ−２−ヒドロキシメチルプロパン−１，３−ジオール（２．５ｇ，２０．５mmol）及びｔ−ＢｕＯＨ（２０ｇ）を入れ、８０℃で１５時間攪拌した。反応終了後、蒸留水５０mLを加え、酢酸エチルで抽出した（５０mL×３）。有機層を飽和食塩水（５０mL×３）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥・ろ過後、減圧下濃縮した。得られた残渣（７．２ｇ）を、エタノール（３．６ｇ）／酢酸エチル（２２ｇ）の混合溶媒を用いた再結晶により精製し、２−［３−（４−ベンジルオキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピルアミノ］−２−ヒドロキシメチルプロパン−１，３−ジオール（４．７ｇ）を白色結晶として得た。
【００３５】
1H-NMR(CD3OD, 200MHz)δ：2.76-2.97(m, 2H), 3.54-3.63(m,6H),3.94-4.06(m,3H), 5.05(s,2H), 6.88-6.98(m,4H), 7.32-7.48(m,5H)
【００３６】
（２）次に、得られた２−［３−（４−ベンジルオキシフェノキシ）−２−ヒドロキシプロピルアミノ］−２−ヒドロキシメチルプロパン−１，３−ジオール（４．０ｇ）をメタノール４０ｇに溶解し、５％Ｐｄ−Ｃ（０．４ｇ）を加え、水素雰囲気下室温で１８時間攪拌した。Ｐｄ−Ｃをろ過して除去した後、減圧濃縮することにより目的物（３．０ｇ）を油状物として得た。
【００３７】
1H-NMR(CD3OD, 200MHz)δ：2.76-2.97(m,2H), 3.54-3.66(m, 6H), 3.73-4.01(m,3H), 6.71-6.86(m,4H)
13C-NMR(CD3OD, 200MHz)δ：45.19, 61.05, 62.79, 71.03, 72.63, 116.80, 116.80, 152.47, 153.65
【００３８】
合成例４
４−［２−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−プロポキシ］−ベンゾイックアシッドの合成：
（１）滴下ロートをつけた１００mL２口フラスコに２−アミノエタノール（１３．２ｇ，２１６mmol）とエタノール（６ｇ）を入れ、８０℃で攪拌しながら４−オキシラニルメトキシベンゾイックアシッドメチルエステル（３．０ｇ，１４．４mmol）をエタノール（１８ｇ）に溶かした溶液を１時間かけて滴下し、さらにその温度で１．５時間攪拌した。反応終了後、減圧下、溶媒として使用したエタノールを留去した。得られた残渣からクーゲルロール（１４０℃／＜０．１mmHg）を用いて、未反応の２−アミノエタノールを留去し、得られた残渣（４．０ｇ）をエタノール（１２ｇ）を用いた再結晶により精製し、４−［２−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシエチルアミノ）プロポキシ］−ベンゾイックアシッドメチルエステル（２．４ｇ，m.p. １１７．９℃）を白色結晶として得た。
【００３９】
1H-NMR(CDCl3, 200MHz)δ：2.02(br,3H),2.76-2.95(m,4H), 3.71(t,2H, J=5.10Hz), 3.89(s, 3H), 4.02-4.14(m,3H), 6.93(d,2H, J=8.94Hz), 7.99(d, 2H, J=8.94Hz)
【００４０】
（２）次に、得られた４−［２−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシエチルアミノ）プロポキシ］−ベンゾイックアシッドメチルエステル（２．０ｇ）をメタノール８ｇに溶解し、これに１．１２５Ｍ−ＮａＯＨ水溶液（８ｇ）を添加し、５０℃で３時間攪拌した。加水分解終了後濃縮し、得られた残渣（３．１ｇ）に１Ｎ−ＨＣｌ（５０mL）を加えた後、陽イオン交換樹脂（三菱化学ＤＩＡＩＯＮ  ＳＫ１Ｂ  １５mL）を用いて精製し、粗生成物（１．２ｇ）を得た。粗生成物をエタノール（４．６ｇ）／蒸留水（２．３ｇ）の混合溶媒を用いた再結晶により精製し、目的物（０．４ｇ，m.p. １００．９℃）を白色結晶として得た。
【００４１】
1H-NMR(D2O, 200MHz)δ：3.10-3.25(m,4H), 3.74(t,2H, J=5.18Hz), 3.91-4.06(m,2H,), 4.18-4.25(m,1H), 6.84(d,2H, J=8.68Hz), 7.68(d, 2H, J=8.94Hz)
13C-NMR(D2O＋CD3OD, 200MHz)δ：50.28, 50.41, 57.42, 66.23, 70.45, 114.94, 130.39, 131.91, 161.24, 175.95
【００４２】
合成例５
４−［２−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシ−１，１−ビスヒドロキシメチル−エチルアミノ）−プロポキシ］−ベンゾイックアシッドの合成：
１００mL丸底フラスコに４−オキシラニルメトキシベンゾイックアシッドメチルエステル（３．５ｇ，１６．８mmol）、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−プロパン−１，３−ジオール（１．８ｇ，１５mmol）及びｔ−ＢｕＯＨ（１４ｇ）を入れ、１７時間還流した。その後、ＭｅＯＨ（２０ｇ）と１．５Ｍ−ＮａＯＨ水溶液（２０ｇ）を加え、室温で４８時間攪拌した。加水分解終了後、２Ｎ−ＨＣｌ（２５mL）で酸性化し、減圧下ＭｅＯＨ留去により析出した未反応の４−オキシラニルメトキシベンゾイックアシッドメチルエステル由来の副生成物をろ過して除去した。そのろ液を陽イオン交換樹脂（三菱化学ＤＩＡＩＯＮ  ＳＫ１Ｂ  １１５mL）を用いて精製し、粗生成物（４．６ｇ）を得た。粗生成物をメタノール（３０ｇ）を用いた再結晶により精製することにより得られた結晶（２．９ｇ）を、さらにもう一度メタノール（１８ｇ）を用いて再結晶により精製し、目的物（２．４ｇ，m.p. 約２５０℃で分解）を白色結晶として得た。
【００４３】
1H-NMR(D2O, 200MHz)δ：2.65-2.90(m,2H), 3.46-3.61(m, 6H), 3.99-4.11(m, 3H), 6.96(d,2H, J=8.61Hz), 7.79(d, 2H, J=8.55Hz)
13C-NMR(D2O＋CD3OD, 200MHz)δ：44.53, 60.74, 61.88, 70.50, 71.50, 114.84, 130.62, 131.94, 161.69, 175.64
【００４４】
試験例１（水溶性評価）
試料に対して蒸留水を加え、いずれの化合物の場合にも５、１０及び２０％（ｗ／ｗ（％））水溶液を作成した。約５０〜６５℃に加熱溶解後、一晩室温で静置しても、結晶が析出しないことを確認した最高濃度を表１にまとめて示した。
【００４５】
【表１】
2005112818.tif 000005
【００４６】
試験例２（チロシナーゼ阻害活性）
マッシュルームチロシナーゼを用いたチロシナーゼ阻害活性試験。
試験結果を表２にまとめて示した。
【００４７】
［試薬の調製］
（１）Ｌ−ＤＯＰＡ溶液
（Ａ）１０mgのＬ−ＤＯＰＡ（試薬特級）を（３）のリン酸緩衝液２０mLで用時溶解し、０．０５％のＬ−ＤＯＰＡ溶液とした。
（Ｂ）（Ａ）で調製した溶液２０mLを（３）のリン酸緩衝液で６０mLに希釈して使用した。
（２）チロシナーゼ溶液
マッシュルームチロシナーゼ（50,000単位/20mg protein, ＳＩＧＭＡ製）６．１mgを７．６２５mLの蒸留水で溶解し、２０００単位/mL溶液とした。
（３）０．１Ｍリン酸緩衝液
常法によりpH６．８に調製した。
【００４８】
［試料溶液の調製］
表１に示した各試料を３水準の濃度に蒸留水で希釈し、試料溶液とした。
［試験方法］基質としてＬ−ＤＯＰＡを用い、反応生成物であるドーパクロムに基づく４７５nmの吸光度を測定することにより行なった。合成例１〜３の試料を評価する際には、Ｌ−ＤＯＰＡ溶液（Ａ）を、アルブチン及び合成例４、５の試料を評価する際には、Ｌ−ＤＯＰＡ溶液（Ｂ）を使用した。すなわち、Ｌ−ＤＯＰＡ溶液１．０mLとリン酸緩衝液１．８mLをとり、これに試料溶液０．１mLを添加した。次いでチロシナーゼ溶液を加えて混合し、室温で１．５分間反応させた。分光光度計（日立製作所Spectrophotometer U-1100）を用いて４７５nmにおける吸光度を測定し、その値をＴとした。また試薬ブランクとしてＬ−ＤＯＰＡ溶液の代わりに蒸留水１．０mLを用い、これにリン酸緩衝液１．８mL及び試料試料溶液０．１mLを加えて混合し、以下同様に操作して吸光度を測定し、その値をＴ'とした。
コントロールは，Ｌ−ＤＯＰＡ溶液［（Ａ）又は（Ｂ）］１．０mLとリン酸緩衝液１．８mLに、試料溶液の代わりに蒸留水０．１mLを添加し、以下同様にして、その値をＣとした。コントロールの試薬ブランクは、Ｌ−ＤＯＰＡ溶液の代わりに蒸留水１．０mLを用い、これにリン酸緩衝液１．８mLと蒸留水０．１mLを添加し、以下同様にして、その値をＣ'とした。各試料濃度におけるチロシナーゼ活性阻害率を次式により計算し、片対数グラフの横軸に試料濃度（対数）、縦軸に活性阻害率をとり、このグラフからチロシナーゼ活性５０％阻害濃度（IC50）を求めた。
【００４９】
［チロシナーゼ活性阻害率算出式］
チロシナーゼ活性阻害率（％）＝１００×［１−（Ｔ−Ｔ'）／（Ｃ−Ｃ'）］
【００５０】
得られた結果を表２に示す。この評価系におけるアルブチンのチロシナーゼ活性５０％阻害濃度は１００mMよりも大きな値であり、評価した化合物は、いずれもアルブチンよりも強いチロシナーゼ阻害活性を示した。
【００５１】
【表２】
2005112818.tif 000006
【００５２】
処方例１（ローション）
以下に示す組成のローションを常法により製造した。
得られたローションは良好な使用感を有していた。
（成分）                                                  （重量％）
４−［２−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−プロポキシ］−フェノール                                                        ０．１
ポリエチレングリコール                                    １．０
１，３−ブタンジオール                                    ８．０
グリセリン                                                ４．０
ヒアルロン酸ナトリウム                                    ０．１
エタノール                                                ３．０
ポリオキシエチレン(２５)２−オクチルドデシルエーテル      ０．５
クエン酸三ナトリウム                                      ０．１
エデト酸二ナトリウム                                      ０．１
香料                                                      適  量
防腐剤（メチルパラベン）                                  適  量
イオン交換水                                              残  量
【００５３】
処方例２（ローション）
（成分）                                                  （重量％）
４−［２−ヒドロキシ−３−（２−ヒドロキシ−１，１−ビスヒドロキシメチル−エチルアミノ）−プロポキシ］−ベンゾイックアシッド              ０．１
ポリエチレングリコール                                    １．０
１，３−ブタンジオール                                    ８．０
グリセリン                                                ４．０
ヒアルロン酸ナトリウム                                    ０．１
エタノール                                                ３．０
ポリオキシエチレン(２５)２−オクチルドデシルエーテル      ０．５
クエン酸三ナトリウム                                      ０．１
エデト酸二ナトリウム                                      ０．１
香料                                                      適  量
防腐剤（メチルパラベン）                                  適  量
イオン交換水                                              残  量