(57)【要約】【解決手段】  式（１）で示されるオフロキサシン及び式（２）で示されるクロサンテルから選ばれるヒスチジンキナーゼ阻害剤を組成物全体に対して０．０００１〜１０質量％の濃度で含有し、フェノール性殺菌剤と界面活性剤及びアルコール類のうちの１種又は２種以上とを含有してなることを特徴とする口腔バイオフィルム抑制組成物。【化１】2005187377.tif 000006【効果】  本発明の口腔バイオフィルム抑制組成物は、口腔疾患の原因である口腔バイオフィルム抑制効果に優れ、歯肉炎、歯周病、う蝕、口臭の低減及び予防に有効である。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で示されるオフロキサシン及び下記式（２）で示されるクロサンテルから選ばれるヒスチジンキナーゼ阻害剤を組成物全体に対して０．０００１〜１０質量％の濃度で含有し、フェノール性殺菌剤と界面活性剤及びアルコール類のうちの１種又は２種以上とを含有してなることを特徴とする口腔バイオフィルム抑制組成物。
【化１】
2005187377.tif 000005
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、口腔疾患の原因である口腔バイオフィルム抑制効果に優れ、歯肉炎、歯周病、う蝕、口臭の低減及び予防を効果的に行うことができる、革新的な口腔バイオフィルム抑制組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、デンタルプラークはバイオフィルムとして捉えられ（非特許文献１参照）、バイオフィルム中の細菌は、浮遊性細菌と比較すると細菌のタンパク質発現パターン（非特許文献２、３参照）や薬剤耐性（非特許文献４、５参照）が大きく異なることが明らかになってきた。これまで、細菌を殺菌するためにフェノール性殺菌剤（特許文献１参照）などが開発されてきたが、バイオフィルム中の細菌は強力な薬剤耐性メカニズムを有するため、これだけではバイオフィルム抑制効果は不充分であり、口腔疾患のリスクをゼロにすることは困難であった。
【０００３】
また、これらの殺菌力を増強するため、殺菌剤の滞留性向上技術が提案された（特許文献２参照）が、バイオフィルムの薬剤浸透性の低さなどにより、著効は期待できなかった。このような現状から、バイオフィルム中の細菌に対しても有効なバイオフィルム抑制組成物の開発が強く望まれている。
【０００４】
一方、近年、ヒスチジンキナーゼは、ブドウ球菌などの外的環境認知システム（２成分制御系）の一部として機能し、その阻害剤は感染症予防・治療に効果がある可能性が示唆された（非特許文献６参照）。また、グラム陽性細菌の抗菌のため、特定の構造を有するヒスチジンキナーゼ阻害剤が開発された（特許文献３参照）。
【０００５】
しかしながら、ヒスチジンキナーゼ阻害剤単独では、薬剤耐性を有するバイオフィルムに対しては充分なバイオフィルム抑制効果を期待できなかった。また、口腔バイオフィルムは、他のバイオフィルムとは異なり、３００〜４００種類もの菌種が存在するため（非特許文献７参照）、ヒスチジンキナーゼ阻害剤の口腔バイオフィルムに対する抑制効果は十分満足できるものではなかった。このような現状から、口腔バイオフィルムに対してより有効な口腔バイオフィルム抑制組成物の開発が強く望まれている。
【０００６】
【非特許文献１】Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，  Ｊ．  Ｗ．，  Ｓｔｅｗａｒｔ，  Ｐ．  Ｓ．  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，  Ｅ．  Ｐ．  ：  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｂｉｏｆｉｌｍｓ：  ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｃａｕｓｅ  ｏｆ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８４  ：  １３１８−１３２２，  １９９９．
【非特許文献２】Ｃｏｓｔｅｒｔｏｎ，  Ｊ．  Ｗ．，  Ｌｅｗａｎｄｏｗｓｋｉ，  Ｚ．，  Ｃａｌｄｗｅｌｌ，  Ｄ．  Ｅ．，  Ｋｏｒｂｅｒ，  Ｄ．  Ｒ．  ａｎｄ  Ｌａｐｐｉｎ−Ｓｃｏｔｔ，  Ｈ．  Ｍ．  ：  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｂｉｏｆｉｌｍｓ．  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ４９  ：  ７１１−７４５，  １９９５．
【非特許文献３】Ｈｕｄｓｏｎ，  Ｍ．  Ｃ．，  Ｃｕｒｔｉｓｓ，  Ｒ．  ＩＩＩ  ：  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ  ｇｅｎｅｓ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｔｏ  ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．  Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｉｍｍｕｎ．  ５８  ：  ４６４−４７０，  １９９０．
【非特許文献４】Ｓｔｅｗａｒｔ，  Ｐ．  Ｓ．  ：  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｂｉｏｆｉｌｍｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  ２９２  ：  １０７−１１３，  ２００２．
【非特許文献５】Ｐｈｉｌｉｐ  Ｍａｒｓｈ  ａｎｄ  Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｖ．  Ｍａｒｔｉｎ著「Ｏｒａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｗｒｉｇｈｔ出版、２０００年、ｐ．５８−８１（Ｄｅｎｔａｌ  ｐｌａｑｕｅ）
【非特許文献６】Ｈｉｌｌｉａｒｄ，  Ｊ．  Ｊ．，  Ｇｏｌｄｓｃｈｍｉｄｔ，  Ｒ．Ｍ．，  Ｌｉｃａｔａ，  Ｌ．，  Ｂａｕｍ，  Ｅ．  Ｚ．  ａｎｄ  Ｂｕｓｈ，  Ｋ．  ：  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅｓ  ｆｒｏｍ  ｂａｃｔｅｒｉａｌ  ｔｗｏ−ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ．  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ４３  ：  １６９３−１６９９，  １９９９．
【非特許文献７】奥田  克爾著「デンタルプラーク細菌  命さえ狙うミクロの世界」、医歯薬出版、１９９９年、ｐ．１−２６（第一章  武器を備えて逆転に転じた細菌）
【特許文献１】特開平０２−１１５１１号公報
【特許文献２】特開平０４−１３９１１９号公報
【特許文献３】特開２００２−６９０３４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、口腔疾患の原因である口腔バイオフィルム抑制効果に優れ、歯肉炎、歯周病、う蝕、口臭の低減及び予防を効果的に行うことができる口腔バイオフィルム抑制組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記目的を達成するため鋭意研究を重ねた結果、ヒスチジンキナーゼ阻害剤単独、或いはフェノール性殺菌剤単独では、顕著な口腔バイオフィルム抑制活性を示さないのに対して、下記式（１）で示されるオフロキサシン及び下記式（２）で示されるクロサンテルから選ばれるヒスチジンキナーゼ阻害剤とフェノール性殺菌剤と界面活性剤及び/又はアルコール類とを組み合わせて配合することにより、上記ヒスチジンキナーゼ阻害剤とフェノール性殺菌剤とが相乗的に作用して、薬剤耐性により抑制効果が低下することもほとんどなく、非常に優れた口腔バイオフィルム抑制効果を示すことを初めて知見し、本発明をなすに至った。
【０００９】
従って、本発明は、下記式（１）で示されるオフロキサシン及び下記式（２）で示されるクロサンテルから選ばれるヒスチジンキナーゼ阻害剤を組成物全体に対して０．０００１〜１０質量％の濃度で含有し、フェノール性殺菌剤と界面活性剤及びアルコール類のうちの１種又は２種以上とを含有してなることを特徴とする口腔バイオフィルム抑制組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の口腔バイオフィルム抑制組成物は、口腔疾患の原因である口腔バイオフィルム抑制効果に優れ、歯肉炎、歯周病、う蝕、口臭の低減及び予防に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明につき更に詳細に説明すると、本発明の口腔バイオフィルム抑制組成物は、特定のヒスチジンキナーゼ阻害剤、フェノール性殺菌剤、界面活性剤及び／又はアルコール類等を含有するもので、固体、固形物、液体、液状、ゲル体、ペースト状、ガム状等の種々の形状に常法により製造、調製でき、例えば練歯磨、液状歯磨等の歯磨剤、洗口剤、マウスウォッシュ、ガム等の口腔用に使用することができる各種剤型に調製することができるものである。
【００１２】
本発明において、ヒスチジンキナーゼ阻害剤としては、下記式（１）で示されるオフロキサシン、下記式（２）で示されるクロサンテルが使用され、これらは塩として存在して良い。上記ヒスチジンキナーゼ阻害剤は、１種類を単独で使用しても、２種類を併用してもよい。
【００１３】
【化１】
2005187377.tif 000002
【００１４】
ヒスチジンキナーゼ阻害剤の配合量は、組成物全体に対して０．０００１〜１０％（質量％、以下同様。）が好ましく、より好ましくは０．０００１〜５％、とりわけ０．００１〜１％である。配合量が０．０００１％未満の場合は、充分なバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、１０％を超えるとコストや嗜好性等の点で製剤化において問題となる場合がある。
【００１５】
フェノール性殺菌剤としては、例えばトリクロサン、３−メチル−４−イソプロピルフェノール（ビオゾール）、２−イソプロピル−５−メチルフェノール（チモール）、フェノキシエタノール、フェノール等を挙げることができる。なお、安全性を考慮すると、特にトリクロサン、３−メチル−４−イソプロピルフェノール、２−イソプロピル−５−メチルフェノール、フェノキシエタノールを使用することが好ましい。これらのフェノール性殺菌剤は、１種を単独で、又は２種以上を組み合わせて配合することが可能である。
【００１６】
フェノール性殺菌剤の配合量は、組成物全体の０．０００１〜１０％が好ましく、より好ましくは０．０００１〜５％である。配合量が０．０００１％未満の場合は満足なバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、１０％を超えると嗜好性やコスト等の点で製剤化において問題となる場合がある。
【００１７】
本発明においては、ヒスチジンキナーゼ阻害剤とフェノール性殺菌剤の両方を含有することが必須であり、ヒスチジンキナーゼ阻害剤とフェノール性殺菌剤との配合比（質量比）は、効果の面から１：１０００００〜１００：１が好ましく、より望ましくは１：１００００〜１０：１である。配合比が上記範囲外であると満足なバイオフィルム抑制効果が得られない場合がある。
【００１８】
なお、ヒスチジンキナーゼ阻害剤及びフェノール性殺菌剤の組合せに関する制限は特にないが、安全性の点からオフロキサシン及び／又はクロサンテルと、トリクロサン、３−メチル−４−イソプロピルフェノール、２−イソプロピル−５−メチルフェノール、フェノキシエタノールから選ばれる１種又は２種以上とを組み合わせることが望ましい。
【００１９】
また、本発明では、上記ヒスチジンキナーゼ阻害剤とフェノール性殺菌剤を可溶化して充分なバイオフィルム抑制効果を発揮させるため、界面活性剤及び／又はアルコール類を配合することが必須である。
【００２０】
界面活性剤としては、陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤及び両性イオン界面活性剤の１種又は２種以上を配合し得る。陰イオン界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウムなどのアルキル硫酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−ミリストイルザルコシン酸ナトリウムなどのＮ−アシルザルコシン酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−パルミトイルグルタミン酸ナトリウムなどのＮ−アシルグルタミン酸塩、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルタウリンナトリウム、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルアラニンナトリウム、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム等が用いられる。また、非イオン界面活性剤としては、ショ糖脂肪酸エステル、マルトース脂肪酸エステル、ラクトース脂肪酸エステルなどの糖脂肪酸エステル、マルチトール脂肪酸エステル、ラクチトール脂肪酸エステルなどの糖アルコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートなどのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などのポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ラウリン酸モノ又はジエタノールアミド、ミリスチン酸モノ又はジエタノールアミドなどの脂肪酸ジエタノールアミド、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン脂肪酸エステル等が用いられる。両性イオン界面活性剤としては、Ｎ−ラウリルジアミノエチルグリシン、Ｎ−ミリスチルジアミノエチルグリシンなどのＮ−アルキルジアミノエチルグリシン、Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニウムベタイン、２−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリンベタインナトリウムなどが用いられる。
【００２１】
界面活性剤の配合量は、組成物全体の好ましくは０．０１〜３０％、より好ましくは０．１〜１０％である。配合量が０．０１％未満の場合はヒスチジンキナーゼ阻害剤及び／又はフェノール性殺菌剤を可溶化することができず、充分なバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、３０％を超えると嗜好性等の点で製剤化において問題となる場合がある。
【００２２】
アルコール類としては、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、プロパノール、それにグリセリン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ヘキシレングリコール、ブチレングリコール、ペンタンジオール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビット、ポリエチレングリコール２００〜２０，０００、ポリプロピレングリコール３００〜４，０００の多価アルコールなどを挙げることができ、これらの１種を単独で又は２種以上を併用して使用することが可能である。
【００２３】
アルコール類の配合量は、組成物全体に対して好ましくは０．０１〜７０％、より好ましくは０．１〜５０％である。配合量が０．０１％未満の場合は、ヒスチジンキナーゼ阻害剤及び／又はフェノール性殺菌剤を可溶化することができず、充分なバイオフィルム抑制効果が得られない場合があり、７０％を超えると嗜好性等の点で製剤化において問題となる場合がある。
【００２４】
本発明においては、界面活性剤又はアルコール類を単独配合（界面活性剤のみを配合、又はアルコール類のみを配合）しても、あるいは界面活性剤及びアルコール類を併用して配合してもよく、界面活性剤及び/又はアルコール類の配合は、組成物の形状、剤型、配合組成等に応じて適宜調整して使い分けることができ、ヒスチジンキナーゼ阻害剤及びフェノール性殺菌剤を可溶化できるように配合すれば良い。例えば、本発明のバイオフィルム抑制組成物が歯磨組成物として調製される場合には、界面活性剤の単独使用が好ましく、洗口剤組成物として調製される場合には、アルコール類単独、あるいは界面活性剤及びアルコール類を併用して配合することができる。
【００２５】
本発明に係わる口腔バイオフィルム抑制組成物には、上述した成分に加えて、更にその使用目的、組成物の剤型等に応じた適宜な成分を配合することができる。
【００２６】
例えば、歯磨類として調製される場合には、第２リン酸カルシウム・２水和物及び無水物、第１リン酸カルシウム、第３リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、水酸化アルミニウム、アルミナ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、第３リン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸カルシウム、ポリメタクリル酸メチル、ベントナイト、ケイ酸ジルコニウム、合成樹脂等の１種又は２種以上を配合し得る（配合量通常５〜９０％、練歯磨の場合には１０〜６０％）。
【００２７】
また、練歯磨等のペースト状組成物の場合には、粘結剤としてカラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロースナトリウムなどのセルロース誘導体、アルギン酸塩、アルギン酸プロピレングリコールエステル、キサンタンガム、トラガカントガム、カラヤガム、アラビヤガムなどのガム類、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドンなどの合成粘結剤、シリカゲル、アルミニウムシリカゲル、ビーガム、ラポナイトなどの無機粘結剤等の１種又は２種以上が配合され得る（配合量通常０．３〜１０％）。
【００２８】
更に、歯磨類などのペースト状や液状口腔用組成物として調製される場合において、粘稠剤としてキシリトール、マルチトール、ラクチトール、或いは本発明で可溶化剤として用いた多価アルコール（ソルビット、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール２００〜２０，０００、ポリプロピレングリコール３００〜４，０００）を１種又は２種以上配合し得る（配合量通常１０〜７０％）。
【００２９】
また、香料として、ペパーミント油、スペアミント油、アニス油、ユーカリ油、ウィンターグリーン油、カシア油、クローブ油、タイム油、セージ油、レモン油、オレンジ油、ハッカ油、カルダモン油、コリアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローズマリー油、ローレル油、カモミル油、キャラウェイ油、マジョラム油、ベイ油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ネロリ油、ローズ油、ジャスミン油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワー等の天然香料、及びこれら天然香料の加工処理（前留部カット、後留部カット、分留、液液抽出、エッセンス化、粉末香料化等）した香料、及び、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、オイゲノール、３−ｌ−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ピネン、オクチルアルデヒド、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルフェニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、エチルアルコール、プロピルアルコール、ブタノール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラジン、エチルラクテート、エチルチオアセテート等の単品香料、更に、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツミックスフレーバー、トロピカルフルーツフレーバー等の調合香料等、口腔用組成物に用いられる公知の香料素材を使用することができ、実施例の香料に限定されない。
【００３０】
また、香料の配合量は特に限定されないが、上記の香料素材は、製剤組成中に０．０００００１〜１％使用するのが好ましい。また、上記香料素材を使用した賦香用香料としては、製剤組成中に０．１〜２．０％使用するのが好ましい。
【００３１】
なお、本発明においては、有効成分として、クロルヘキシジン、ベンゼトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド、セチルピリジニウムクロライド、デカリニウムクロライドなどの陽イオン性殺菌剤、ヒノキチオール等のフェノール性化合物、デキストラナーゼ、ムタナーゼ、リゾチーム、アミラーゼ、プロテアーゼ、溶菌酵素、スーパーオキサイド、ムターゼなどの酵素、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウムなどのアルカリ金属モノフルオロホスフェート、フッ化ナトリウム、フッ化第１錫などのフッ化物、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレスタノール、グリチルリチン酸類、グリチルレチン酸、ビサボロール、グリセロホスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、水溶性無機リン酸化合物等の有効成分を１種又は２種以上配合し得る。
【実施例】
【００３２】
以下、実験例及び実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるものではない。なお、以下の例において配合量はいずれも質量％である。
〔実験例〕
【００３３】
凍結保存してあったアクチノマイセス  ビスコーサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｖｉｓｃｏｓｕｓ），フゾバクテリウム  ニュークレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ），ポルフィロモーナス  ジンジバリス（Ｐｏｒｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）培養液４０μＬをそれぞれ５ｍｇ／Ｌ  ヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）及び１ｍｇ／Ｌ  ビタミンＫ（和光純薬工業社製）を含むトッドへーウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＨＭ）４ｍＬに添加し、３７℃で一晩嫌気培養（８０ｖｏｌ％  窒素、１０ｖｏｌ％  二酸化炭素、１０ｖｏｌ％水素）した。凍結保存してあったベイヨネラ  パービューラ（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａ  ｐａｒｖｕｌａ）培養液８０μＬを１．２６％乳酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社製）を含むトッドへーウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）培養液（ＴＨＢＬ）４ｍＬに添加し、同様に培養した。
【００３４】
培養後、ベイヨネラ  パービューラを除く３菌種の菌液からそれぞれ３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＨＭに添加し、さらに一晩培養した。ベイヨネラ  パービューラの菌液から同様に３００μＬを採取し、３０ｍＬのＴＨＢＬに添加し、一晩培養した。再培養後、各菌液を遠心分離（１００００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）し、上清を廃棄した。各沈査（細菌）に対して、吸光度（５５０ｎｍ）がおおよそ０．１になるように、ベイサルメディウムムチン培養液（ＢＭＭ）*を添加し、再懸濁した。４種の菌液を等量混合し、攪拌後、２４穴マルチディッシュ（住友ベークライト社製、１ウェル当りの培養面積；約１．９ｃｍ2）の各ウェルに１ｍＬづつ分注した。一日間の嫌気培養を行った後、培養液全量を排出し、１ｍＬのＢＭＭ*を添加した。同操作を６日間継続し、プレート上にバイオフィルムを形成させた。
【００３５】
培養６日目に表１に示した組成の水溶液を添加し、３分間放置した。その後、生理食塩水で１２回洗浄し、１ｍＬのＢＭＭを添加し再び嫌気培養した。培養７日目にも同様の処置を行い、残存したバイオフィルムを４ｍＬのＴＨＢＨＭ中で分散し、試験管（直径１．３ｃｍ×１０ｃｍ）に移した。
【００３６】
本実験ではバイオフィルム抑制効果を評価するため、薬剤処置後のバイオフィルムの残存生菌数を測定した。上記バイオフィルムを超音波破砕後（１０秒、２００μＡ）、段階希釈（×１０）を行い、各菌溶液を血液寒天平板**に塗沫した。平板は、肉眼でコロニーが確認できるまで嫌気培養した。各平板のコロニー数をカウント後、定法により生菌数（単位；ｃｆｕ／ウェル、ｃｆｕ：  ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔの略）を算出した。結果を表１に示す。
【００３７】
＊ＢＭＭの組成：１リットル中の質量で表す。
プロテオースペプトン（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
５ｇ／Ｌ    
イーストエキス（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：２．５ｇ／Ｌ
トリプトン（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：    ２．５ｇ／Ｌ
ムチン（Ｓｉｇｍａ社製）：                                      ６．２５ｇ／Ｌ
ヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）：                                      ２．５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）：                                ０．５ｍｇ／Ｌ
ＫＣｌ（和光純薬工業社製）：                                    １．２５ｇ／Ｌ
システイン（和光純薬工業社製）：                                ０．２５ｇ／Ｌ
蒸留水：                      残（全量が１リットルになるようにメスアップした。）
＊＊血液寒天平板培地の組成：１リットル中の質量で表す。
トッドへーウィットブロース（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：
３０ｇ／Ｌ
寒天（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）：        １５ｇ／Ｌ
ヘミン（Ｓｉｇｍａ社製）：                                      ５ｍｇ／Ｌ
ビタミンＫ（和光純薬工業社製）：                                １ｍｇ／Ｌ
蒸留水：                      残（全量が１リットルになるようにメスアップした。）
【００３８】
【表１】
2005187377.tif 000003
【００３９】
上記表１中の比較例及び実施例の水溶液の調製法：１．５ｍｇ／ｍＬアルブミン水溶液は、ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ社製）０．１５ｇを蒸留水１００ｍＬに溶解させ調製した。エタノール（和光純薬工業社製）に、トリクロサン（和光純薬工業社製）、３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）、ヒスチジンキナーゼ阻害剤を表１に示す配合割合で添加した後、全量が１００ｍＬになるように１．５ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ社製）水溶液でメスアップした。ヒスチジンキナーゼ阻害剤としては、クロサンテル（和光純薬工業社製）、オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）を用いた。
【００４０】
上記の結果より、比較例であるヒスチジンキナーゼ阻害剤単独、或いはフェノール性殺菌剤単独では、６．０×１０7ｃｆｕ／ウェル以上の細菌が生存するが、本発明にかかわるヒスチジンキナーゼ阻害剤とフェノール性殺菌剤を組み合わせると、いずれも６．０×１０6ｃｆｕ／ウェル以下になり、最も効果のあった比較例３（バイオフィルム残存生菌数６．８×１０7ｃｆｕ／ウェル）に比べてバイオフィルム中の細菌を９０％以上死滅させることが分かった。
【００４１】
〔実施例６〕    練歯磨
第２リン酸カルシウム                                        ４７．０％
無水ケイ酸                                                    ２．５
ソルビット液（７０％水溶液、花王社製）                      ２４．０
プロピレングリコール（ダウケミカル社製）                      ３．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          １．０
アルギン酸ナトリウム                                          ０．２
ラウリル硫酸ナトリウム（日本サーファクタント工業社製）        １．５
サッカリンナトリウム                                          １．０
パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．１
香料Ａ                                                        １．０
クロサンテル（和光純薬工業社製）                              ０．０５
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．１
トリクロサン                                                  ０．１
（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製）
塩化アンモニウム                                              ０．５
精製水                                                        残        
計                                                        １００．０％
【００４２】
〔実施例７〕    練歯磨
水酸化アルミニウム                                          ５０．０％
グリセリン（ライオン社製）                                    ８．０
ソルビット液（７０％水溶液、日研化成社製）                  １５．０
プロピレングリコール（昭和電工社製）                          ２．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          １．０
アルギン酸ナトリウム                                          ０．２
ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業社製）                    １．８
サッカリンナトリウム                                          ０．２
パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．２
香料Ｂ                                                        １．０
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．０１
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．１
塩化セチルピリジニウム                                        ０．１
硫酸アンモニウム                                              １．０
精製水                                                        残      
計                                                        １００．０％
【００４３】
〔実施例８〕    練歯磨
中性化処理水酸化アルミニウム                                ４２．０％
無水ケイ酸                                                    ２．５
ソルビット液（７０％水溶液、花王社製）                      ２３．０
カラギーナン                                                  ０．５
ミリスチル硫酸ナトリウム（ワコーケミカル社製）                １．３
アルギン酸ナトリウム                                          ０．５
グリセロールリン酸カルシウム                                  ０．８
サッカリンナトリウム                                          ０．１
パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．０５
デキストラナーゼ（１７．５ｕ／ｇ）                            ０．１
トリクロサン                                                  ０．０５
（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製）
モノフルオロリン酸ナトリウム                                  ０．７５
香料Ｃ                                                        １．０
硝酸カリウム                                                  ５．０
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．１
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．０１
精製水                                                        残      
計                                                        １００．０％
【００４４】
〔実施例９〕    練歯磨
グリセリン（ライオン社製）                                  ２０．０％
無水ケイ酸                                                  ２０．０
ソルビット液（７０％水溶液、東和化成工業社製）              ４０．０
プロピレングリコール（旭硝子社製）                            ２．５
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          １．０
ゼラチン                                                      ０．３
ラウリル硫酸ナトリウム（花王社製）                            １．２
サッカリンナトリウム                                          １．０
フィチン酸５ナトリウム                                        ０．８
香料Ｄ                                                        １．０
硝酸カリウム                                                  ３．３
トリクロサン（Ｐｒｏｍｏｃｈｅｍ社製）                        ０．３
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．０５
クロサンテル（和光純薬工業社製）                              ０．００５
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．０５
硫酸アンモニウム                                              ２．０
精製水                                                        残        
計                                                        １００．０％
【００４５】
〔実施例１０〕  練歯磨
ジルコノシリケート                                          ２５．０％
無水ケイ酸                                                    ２．０
ソルビット液（７０％水溶液、日研化成社製）                  ４０．０
ポリエチレングリコール４００（ライオン社製）                  ５．０
ポリアクリル酸ナトリウム                                      １．０
ラウリル硫酸ナトリウム（花王社製）                            １．０
サッカリンナトリウム                                          ０．１
香料Ｅ                                                        １．１
パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
パラオキシ安息香酸ブチル                                      ０．１
グルコン酸クロルヘキシジン                                    ０．０５
硝酸カリウム                                                  １．０
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．１
２−イソプロピル−５−メチルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．０５
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．０１
精製水                                                        残      
計                                                        １００．０％
【００４６】
〔実施例１１〕    練歯磨
無水ケイ酸                                                  ２０．０％
ソルビット液（７０％水溶液、参松工業社製）                  ２２．０
プロピレングリコール（旭電化社製）                            ３．５
α−オレフィンスルホン酸ナトリウム（ライオン社製）            １．８
サッカリンナトリウム                                          １．０
パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
香料Ｆ                                                        １．０
アラントイン                                                  ０．０５
ゼオライト                                                    ０．１
フッ化ナトリウム                                              ０．０２
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．１
硝酸カリウム                                                  ５．０
トラネキサム酸                                                １．０
フェノキシエタノール（和光純薬工業社製）                      ０．５
硫酸アンモニウム                                              １．５
精製水                                                        残      
計                                                        １００．０％
【００４７】
〔実施例１２〕    練歯磨
炭酸カルシウム                                              ４０．０％
プロピレングリコール（旭電化社製）                            ３．０
グリセリン（坂本薬品工業社製）                              ２０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          １．５
酸化チタン                                                    ０．５
ラウリル硫酸ナトリウム（日本サーファクタント工業社製）        ０．２
サッカリンナトリウム                                          ０．１
パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．１
香料Ｇ                                                        １．０
フェノキシエタノール                                          ０．７５
（Ａｖｏｃａｄｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）
クロサンテル（和光純薬工業社製）                              ０．１
グリセロールリン酸カルシウム                                  １．２
精製水                                                        残      
計                                                        １００．０％
【００４８】
〔実施例１３〕    練歯磨
炭酸カルシウム                                              ４０．０％
プロピレングリコール（旭硝子社製）                            ３．０
グリセリン（ライオン社製）                                  ２０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                          １．５
酸化チタン                                                    ０．２
ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業社製）                    ２．５
サッカリンナトリウム                                          １．０
パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．１
香料Ａ                                                        １．０
塩化ナトリウム                                                １．０
硝酸カリウム                                                  ５．０
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．００５
塩化ベンゼトニウム                                            ０．１
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．００５
精製水                                                        残        
計                                                        １００．０％
【００４９】
〔実施例１４〕    練歯磨
沈降性シリカ                                                ２０．０％
増粘性シリカ                                                  ３．０
ソルビット液（参松工業社製）                                ３５．０
プロピレングリコール（昭和電工社製）                          ２．０
グリセリン（ライオン社製）                                  １０．０
二酸化チタン                                                  ０．５
カラギーナン                                                  １．０
ビニルメチルエーテル・マレイン酸共重合体                      １．０
（Ｇａｎｔｒｅｚ  ＥＳ−２２５）
ラウリル硫酸ナトリウム（花王社製）                            １．５
サッカリンナトリウム                                          １．０
パラオキシ安息香酸エチル                                      ０．１
香料Ｂ                                                        １．０
硝酸カリウム                                                  ５．０
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）    ０．０２
トリクロサン（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ社製）                      ０．０５
クロサンテル（和光純薬工業社製）                              ０．０１
精製水                                                        残      
計                                                        １００．０％
【００５０】
〔実施例１５〕  液状歯磨
グリセリン（坂本製品工業社製）                              ３５．０％
プロピレングリコール（ダウケミカル社製）                      ５．０
ポリアクリル酸ナトリウム                                      ０．５
無水ケイ酸                                                  １５．０
ラウリル硫酸ナトリウム（東邦化学工業社製）                    １．０
サッカリンナトリウム                                          ０．３
安息香酸ナトリウム                                            ０．３
トリクロサン（Ｐｒｏｍｏｃｈｅｍ社製）                        ０．１
β−グリチルレチン酸                                          ０．０５
香料Ｃ                                                        ４．０
硝酸カリウム                                                  ３．０
トラネキサム酸                                                ０．１
トリプトファン                                                ０．５
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．０５
精製水                                                        残      
計                                                        １００．０％
【００５１】
〔実施例１６〕  マウスウォッシュ
グリセリン（ライオン社製）                                  １５．０％
エタノール（新エネルギー・産業技術総合開発機構製）          １５．０
ポリオキシエチレン（２０）硬化ヒマシ油                        １．０
（日本サーファクタント工業社製）
サッカリンナトリウム                                          ０．０１
安息香酸ナトリウム                                            ０．３
香料Ｄ                                                        ４．０
色素                                                          ０．００４
モノグリセリド硫酸ナトリウム                                  ０．３
リン酸２ナトリウム                                            ０．０５
硝酸カリウム                                                  １．０
イノシン酸ナトリウム                                          １．０
グリセロールリン酸ナトリウム                                  １．５
トリクロサン                                                  ０．１５
（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製）
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．００１
精製水                                                        残        
計                                                        １００．０％
【００５２】
〔実施例１７〕  洗口剤
エタノール（新エネルギー・産業技術総合開発機構製）          ５０．０％
グリセリン（ライオン社製）                                  ３０．０
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油（ワコーケミカル社製）  １．０
サッカリンナトリウム                                          ０．３
色素                                                          ０．０００２
香料Ｅ                                                        ３．０
塩化リゾチーム                                                ０．３
硝酸カリウム                                                  ５．０
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                              ０．００５
トリクロサン（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ社製）                      ０．０１
硫酸アンモニウム                                              ０．２
精製水                                                        残          
計                                                        １００．０％
【００５３】
〔実施例１８〕  ガム
ガム剤
キシリトール                                            ３０％
マルチトール                                            ３０
リゾチーム                                                ０．１
オフロキサシン（Ｓｉｇｍａ社製）                          ０．０１５
３−メチル−４−イソプロピルフェノール（和光純薬工業社製）０．０５
香料Ｆ                                                    ２        
ガムベース                                                残        
計                                                        １００．０％
【００５４】
なお、香料Ａ〜Ｇは下記の通りである。
【００５５】
【表２】
2005187377.tif 000004
【００５６】
＊フルーツミックスフレーバーＦＭ３０００（調合香料）
ストロベリーフレーバー                                    ４０％
アップルフレーバー                                        １５
メロンフレーバー                                          １７
バナナフレーバー                                          １０
ピーチフレーバー                                            ５
オレンジ油                                                  ２．５
ラズベリーフレーバー                                        ２．０
パイナップルフレーバー                                    １５
グレープフレーバー                                          １．０
トロピカルフルーツフレーバー                                １．５
ミルクフレーバー                                            １．０
グレープフルーツ油                                          ０．５
レモン油                                                    ０．５
ローズ油                                                    ０．２
エタノール＊＊                                              残    
合計                                                    １００％  
＊＊新エネルギー・産業技術総合開発機構製
【００５７】
以上、実施例６〜１８に対して実験例と同様な評価を行った結果、バイオフィルム残存生菌数はいずれも６．０×１０6ｃｆｕ／ウェル以下であり、良好な結果が得られた。