(57)【要約】      （修正有）【課題】安価に供給することのできる新しいタイプの抗炎症外用薬として有用な化合物を提供する。【解決手段】  下記式１で示されるオレイン酸アルキルエステルオゾニド。2005112799.tif 000003（式中、Ｒは炭素数１〜１２のアルキル基を示し、アルキル基としては、メチル，エチル，プロピル，ブチル基等を示す。）【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オレイン酸アルキルエステルオゾニド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトや各種動物に対する抗炎症外用薬等として有用なオレイン酸アルキルエステルオゾニドに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
組織の傷害や細菌感染あるいは酸化ストレスなどの外部刺激に対して生体は免疫系を作動させ、各種の炎症性サイトカインやケミカルメディエーターを産生して応答する。しかし、これらが過剰産生されると炎症が過度に進行し（発熱、発痛、浮腫、潰瘍、アレルギー、関節痛など）、種々の疾患の引き金となる。このような症状に使用されている医薬品が抗炎症剤であり、その代表例が副腎皮質ホルモンなどのステロイド系抗炎症剤とアスピリンなどの非ステロイド系抗炎症剤である。数ある医薬品の中で抗炎症剤の需要は高いが、アスピリンには消化器障害や腎障害などの副作用があり、ステロイド系抗炎症剤は感染症誘発、消化器潰瘍、下垂体−副腎機能抑制などの重篤な副作用があるため、安全で治療効果の高い抗炎症剤の開発が求められていた。
１９９０年代に入って、アスピリンやステロイド系抗炎症剤の作用メカニズムについての研究が進むとともに、シクロオキシゲナーゼ−２の選択的阻害薬が理想的な抗炎症剤の有力な候補として登場してきた。シクロオキシゲナーゼ−２は炎症時に誘導産生され、炎症反応の促進に関与するプロスタグランジン類を生成する酵素である。したがって、この酵素の発現や活性を選択的に抑制する薬剤は、他の組織に影響することなく、炎症局所に選択的に作用して過度の炎症反応を沈静化することができる。
炎症局所でシクロオキシゲナーゼ−２が生合成される仕組みも次第に明らかになっており、その阻害薬もいくつか開発されているが、この種の薬剤の開発は現在も活発に展開されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、安価に供給することのできる新しいタイプの抗炎症外用薬として有用な化合物を提供することをその課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、オレイン酸アルキルエステルオゾニドがシクロオキシゲナーゼ−２の遺伝子発現を効率的に抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明によれば、オレイン酸アルキルエステルオゾニドが提供される。
【発明の効果】
【０００５】
本発明のオレイン酸アルキルエステルオゾンニドは、安全性が高く、かつ安価であり、ヒト及び各種の動物（牛、馬、豚等の家畜動物や、犬猫等のペット動物等）に対する抗炎症外用薬等として適用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明者らは、オレイン酸アルキルエステルオゾニドが、シクロオキシゲナーゼ−２の遺伝子発現を効率的に抑制することを明らかにした。シクロオキシゲナーゼ−２の遺伝子は、種々の遺伝子の転写調節において中心的な役割を演じているＮＦκＢという転写因子（Ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  κ  ｃｈａｉｎ  ｇｅｎｅ  ｉｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ）が活性化されて核内に移行することによって発現する。ＮＦκＢは非炎症時には細胞内でＩκＢという因子と結合した状態で活性が抑えられているが、炎症性サイトカインなどの外部刺激によってＩκＢがリン酸化されると、ＩκＢとの結合から解き放されて核内に移行する。本発明者らは、オレイン酸アルキルエステルオゾニドがこのＩκＢのリン酸化を阻害することによってＮＦκＢの活性化を阻害し、その結果、シクロオキシゲナーゼ−２の産生を抑制することを明らかにした。
【０００７】
オレイン酸アルキルエステルオゾニドは、オレイン酸アルキルエステルにオゾンを反応させることによって製造することができる。
【０００８】
オレイン酸アルキルエステルオゾニドを構成するアルコール成分は低級アルコールに限られないが、低級アルコールのオレイン酸エステルオゾニドにおいては、該アルキル基の炭素数は、１〜１２、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜３である。該オゾニドの具体例としては、オレイン酸メチルオゾニド、オレイン酸エチルオゾニド、オレイン酸プロピルオゾニド等が挙げられる。
【０００９】
オレイン酸アルキルエステルオゾニドは、下記式（１）で表される。
【化１】
2005112799.tif 000002
前記式中、Ｒは炭素数１〜１２、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜３のアルキル基を示す。アルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル等を挙げることができる。
【００１０】
オレイン酸アルキルオゾニド、たとえばオレイン酸メチルオゾニドは室温では一部固形化した油状物質であり、外用薬として適用する場合、そのまま適用することができるし、また、希釈剤を用いて希釈して適用することができる。希釈剤としては、オリーブ油等の植物油や、ワセリン、流動パラフィン、多価アルコール（グリセリン、ポリエチレングリコール等）等が挙げられる。
【００１１】
本発明のオレイン酸アルキルエステルオゾンニドを外用薬として適用する場合、その形態は、特に制約されず、従来一般に適用されている形態であることができる。このような外用薬の形態には、軟こう、クリーム、ゼリー、乳液等が包含される。
【００１２】
オレイン酸アルキルエステルオゾニドを外用薬として投与する場合、その投与量は、患者の年齢、症状等により適宜選定されるが、例えば、一回当り１〜１００ｍｇ、好ましくは３〜５０ｍｇを、１日１〜数回、患部に塗布または充填することにより、行うことができる。
【００１３】
本発明のオレイン酸アルキルエステルオゾニドは、各種の体表性炎症性疾患に対して適用されるが、この場合の炎症性疾患には、ヒトの場合では、細菌感染症、真菌感染症、単純ヘルペス感染症、瘻孔、下肢潰瘍、褥創、歯肉炎、痔瘻、外陰部膣炎、創傷、蜂や昆虫による刺創、挫創などが含まれ、ウシなどの家畜動物やイヌ、ネコ等の小動物では乳房炎、皮膚真菌症、角膜揚傷、角膜炎、皮下膿瘍の自壊創、潰瘍性乳頭炎、不良肉芽の増生等、が包含される。
【実施例】
【００１４】
次に本発明を実施例により詳述する。
【００１５】
参考例１
（オレイン酸メチルオゾニドの合成）
オレイン酸メチルを以下のようにオゾンと反応させ、反応混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離してオレイン酸メチルオゾニドを得た。
オレイン酸メチル５ｇを約３０〜４０℃に加温し、これにオゾン−酸素混合ガス（オゾン濃度８０μｇ／ｍｌ、ガス流量８０ｍｌ／分）を導通した。反応容器からのガスの出口に１０％ヨウ化カリウム（ＫＩ）水溶液を入れたガス洗浄瓶を連結し、ＫＩ溶液が黄色を呈するまでオゾン−酸素混合ガスの導通を続けたところ、オレイン酸メチルが約８００ｍｇのオゾンを吸収したところでＫＩ溶液が黄色を呈した。得られた反応混合物を１１０ｇのシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン２．２Ｌ、１０％ベンゼン含有ヘキサン１．６Ｌ、５０％ベンゼン含有ヘキサン１．６Ｌで順次展開した後、５０％ベンゼン含有ヘキサン２．９Ｌおよびベンゼン１．４Ｌの溶出画分を減圧濃縮乾固することによってオレイン酸メチルオゾニドのシスとトランス異性体混合物を油状物質（一部固形化）として３．２ｇ得た。その構造は以下の機器データにより確認した。
【００１６】
１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（ｉｎ  ＣＤＣｌ３）：
１０４ｐｐｍ（Ｏ−Ｃ−Ｏ、オゾニド環の炭素）
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（ｉｎ  ＣＤＣｌ３）：
５．１８ｐｐｍ（Ｃ−９−Ｈ及びＣ−１０−Ｈ、シス型）
５．１３ｐｐｍ（Ｃ−９−Ｈ及びＣ−１０−Ｈ、トランス型）
赤外線吸収スペクトル（ｎｅａｔ）：
１１００ｃｍ−１（Ｏ−Ｃ−Ｏ）
質量スペクトル（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）：
ｍ／ｚ３６７（Ｍ＋Ｎａ＋）
【００１７】
参考例２
（シクロオキシゲナーゼ−２の発現阻害活性の評価）
オレイン酸メチルオゾニドによるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の発現阻害活性は以下のようにして評価した。
ヒト急性単球性白血病細胞であるＴＨＰ−１細胞をホルボールエステルおよび１０％非動化ウシ胎児血清を含む培地を用いて培養し、マクロファージ様細胞に分化させた後、１μｇ／ｍｌのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）添加してさらに６時間培養を続けるとＣＯＸ−２の発現誘導が観察された。ＣＯＸ−２の発現量は、細胞可溶化液をＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動法により分離後、ウサギ抗ＣＯＸ−２抗体を用いるウエスタンブロット法によって定量した。同様な条件下で、オレイン酸メチルオゾニドを共存させてＬＰＳを添加すると、ＣＯＸ−２の発現量はオレイン酸メチルオゾニド３μＭおよび３０μＭの共存下でそれぞれ対照（オゾニド無添加）の９０％および６５％にまで低下した。
【００１８】
（治療例１）
５０％オレイン酸メチルオゾニド含有オリーブ油（クリ−ム）を、牛に対して適用した。この場合の牛は、炎症、即ち、真菌が感染し皮膚炎を起こし、強い掻痒と脱毛、皮膚の肥厚を主徴としたものである。
この牛の炎症部に対して、該クリーム１ｇないし１０ｇを患部がしっとりと濡れる程度に１日１回塗布した。このような処理を１０日間にわたって行った結果、初回の塗布によって翌日には掻痒感がほぼ消失し、１０日目までには皮膚の肥厚が減少し発毛が始まり、塗布を止めて１ヶ月経過したところで完全に治癒されていることが確認された。
この場合の特筆すべき効果は、真菌性皮膚炎の特徴的な症状である掻痒の軽減あるいは消失であった。
【００１９】
（治療例２）
５０％オレイン酸メチルオゾニド含有オリーブ油（クリ−ム）を、牛に対して適用した。この場合の牛は、炎症、即ち、角膜損傷および角膜炎を有していた。角膜は突出した釘によって受傷し、眼瞼の腫脹と著しい疼痛のため目を開けることができず流涙と羞明を主徴とし、細菌の２次感染によって角膜炎を併発したものである。
この牛の炎症部に対して、該クリーム１ｇ程度を眼瞼裏に塗布し角膜表面に浸潤させるように１日１回塗布した。このような処理を１０日間にわたって行った結果、初回の塗布によって翌日には眼の疼痛がほぼなくなり、同時に流涙や眼瞼の腫れが消失していた。角膜はひとたび白濁した後に徐々に修復された。塗布中止後、視力の回復までには１ヶ月を要したが、完全な治癒を得た。
この場合の特筆すべき効果は、眼の疼痛からの開放であった。疼痛の軽減または消失は、クリームを牛に対して適用した時の特徴的効果である。