(57)【要約】【課題】  実験動物における薬物嚥下障害評価は、現場の臨床における薬物による嚥下障害を解決するための有益な予見として大いに期待される。よって、動物実験における薬物嚥下障害を簡単にかつ精度よく評価することができる方法の開発が望ましい。【解決手段】覚醒下動物実験における薬物嚥下障害を評価するであって、（１）予め被験薬物が投与された覚醒下動物を側臥位にて頚部側面より、咽頭及び上部食道の両部位にエックス線透視装置を用いてエックス線を連続照射しながら、当該動物に造影剤を咽頭内投与することにより嚥下反応を誘発させた状態でエックス線透視画像を動画として記録する第一工程、及び（２）収録された画像を解析することにより前記造影剤の嚥下障害を評価する第二工程、を有することを特徴とする方法等。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物実験における薬物嚥下障害を評価する方法であって、
（１）予め被験薬物が投与された覚醒下動物を側臥位にて頚部側面より、咽頭及び上部食道の両部位にエックス線装置を用いてエックス線を連続照射しながら、当該動物に造影剤を咽頭内投与することにより嚥下反応を誘発させた状態でエックス線透視画像を動画として記録する第一工程、及び
（２）収録された画像を解析することにより前記造影剤の嚥下障害を評価する第二工程、
を有することを特徴とする方法。
【請求項２】
第二工程における嚥下障害が、造影剤の食道内逆流又は造影剤の食道内滞留であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
第二工程における画像解析が、デジタル画像に基づいた画像解析であることを特徴とする請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
対照として、予め被験薬物が投与された覚醒下動物の代わりに、当該薬物が投与されていない動物を用いて第一工程を為し、対照との比較に基づき第二工程を為すことを特徴とする請求項１，２又は３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動物実験における薬物嚥下障害を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
嚥下反応を実験動物において検討している報告は極めてわずかである（非特許文献１参照）。近年、現場の臨床においては薬物による嚥下障害は問題視されている。
【０００３】
【非特許文献１】Rachel E. Pollard, Stanley L. Marks, AutumnDavidson, William J. Hornof (2000) Quantitative videofluoroscopic evaluation of pharyngeal function in the dog. Veterinary Radiology and Ultrasound 41, 409-412
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
実験動物における薬物嚥下障害評価は、前記の臨床での課題を解決するための有益な予見として大いに期待される。よって、動物実験における薬物嚥下障害を簡単にかつ精度よく評価することができる方法の開発が望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者等は、かかる状況下において鋭意検討した結果、本発明に至った。
即ち、本発明は、
１．動物実験における薬物嚥下障害を評価する方法であって、
（１）予め被験薬物が投与された覚醒下動物を側臥位にて頚部側面より、咽頭及び上部食道の両部位にエックス線透視装置を用いてエックス線を連続照射しながら、当該動物に造影剤を咽頭内投与することにより嚥下反応を誘発させた状態でエックス線透視画像を動画として記録する第一工程、及び
（２）収録された画像を解析することにより前記造影剤の嚥下障害を評価する第ニ工程、を有することを特徴とする方法（以下、本発明方法と記すこともある。）；
２．第二工程における嚥下障害が、造影剤の食道内滞留又は造影剤の食道内滞留であることを特徴とする前項１記載の方法；
３．第二工程における画像解析が、デジタル画像に基づいた画像解析であることを特徴とする前項１又は２記載の方法；
４．対照として、予め被験薬物が投与された覚醒下動物の代わりに、当該薬物が投与されていない動物を用いて第一工程を為し、対照との比較に基づき第二工程を為すことを特徴とする前項１、２又は３記載の方法；
等を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明により、動物実験における薬物嚥下障害を簡単にかつ精度よく評価することができる方法が提供可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明方法は、動物実験における薬物嚥下障害を評価する方法として極めて有効である。また、本発明方法は、嚥下障害改善薬等の薬物を探索するための試験としても有用であり、医薬品開発へも応用可能である。
【０００８】
本発明方法において対象となる動物としては、上記のような特徴的な工程を与えることができる動物であれば如何なるものであってもよいが、その操作性等の面から、例えば、イヌを好ましい。より好ましくはビーグル種のイヌが挙げられる。尚、これら動物、例えば、ビーグル種のイヌは、エルエスジー株式会社等から商業的に入手することができる。
【０００９】
本発明方法における覚醒下動物とは、麻酔薬の投与により動物が意識を喪失することなく、中枢・末梢神経が正常に機能しているような状態である被験動物である。麻酔薬の投与は通常の方法により行えばよい。
当該実験方法を行うに際し、予め当該実験方法を数週間経験させてトレーニングを施すことにより、被験動物が実験環境及び実験操作等に十分馴化し、苦痛やストレスを最大限感じないように措置しておくことが好ましい。
【００１０】
本発明方法において用いられるエックス線透視装置としては、生体を透過させるだけに十分な線量を連続的に発生するエックス線発生装置であって、エックス線透視画像を動画として記録できる機能を有し、かつ、動物を側臥位の姿勢で保定できる土台を据え付けた装置であればよい。具体的には、小動物専用エックス線システム（型式：VPX-20、東芝医療用品（株））等の市販品をあげることができる。
【００１１】
エックス線透視装置を用いてエックス線を連続照射するには、例えば、62 kW、5.0 mAs、0.03 sというエックス線発生電力下での連続エックス線を照射すればよい。尚、動物種、動物個体差等により、上記エックス線発生電力は、鮮明なエックス線透視画像を収録可能となるように適宜調節すればよい。
【００１２】
このようにエックス線を連続照射下しながら、覚醒下動物に、カテーテルをエックス線透視画像下で確認しながらその先端が咽頭内へと到達するように挿管し、カテーテルを介して硫酸バリウム等の造影剤をゆっくりと咽頭内投与すればよい。これにより嚥下反応を当該動物に誘発させる。
【００１３】
尚、造影剤として用いられる硫酸バリウムは、例えば、バリトップ150（堺化学工業）等があげられ、これを60%濃度に精製水で希釈したものを使用すればよいが、勿論これに相当する他の一般市販品を使用してもよい
【００１４】
本発明方法では、頚部側面より咽頭及び食道の両部位にエックス線を連続照射することが重要である。これにより、頚部側面より撮影することが可能となり、咽頭内投与された造影剤の咽頭及び食道の両部位での造影剤の移行の様子を詳細にかつ明確に把握することができる。
【００１５】
本発明方法においてエックス線透視画像を動画として記録するには、ビデオ装置を用いて記録すればよい。収録される画像は、アナログ画像であっても、アナログ画像から変換されたデジタル画像であっても、デジタル画像であってもよい。
アナログ画像をデジタル画像に変換するハードウェア／ソフトウェアとしては、例えば、TVキャプチャBOX（型式：PC-MV5/U2、メルコ）等があげられるが、これに相当するハードウェア／ソフトウェアであれば代替可能である。
【００１６】
本発明方法において造影剤の嚥下障害を評価するには、収録された画像を解析すればよい。咽頭内投与された造影剤の咽頭及び食道の両部位での造影剤の動態が確認される限り如何なるビデオ画像であってもよい。
デジタル画像に基づいた画像解析を行う場合には、例えば、デジタル画像（デジタル連続画像）をフレーム解析（コマ送り解析）することにより、咽頭内投与された造影剤の咽頭及び食道の両部位での造影剤の動態がより詳細かつ簡便に追跡することが可能となる。その結果として、例えば、（１）造影剤が咽頭から上部食道へ、次いで下部食道へと順次下行性に移行するが、薬物の作用により造影剤が上部食道から咽頭へ逆流したり、上部食道に溜まる画像が確認される場合には、造影剤の食道内滞留とみなすことにより、嚥下障害が存在するとして評価すればよい。また（２）造影剤が食道ではなく、気管内へ混入する画像が確認される場合には、造影剤の気管内誤嚥とみなすことにより、嚥下障害が存在するとして評価すればよい。
【００１７】
本発明方法では、対照として、予め被験薬物が投与された覚醒下動物の代わりに、当該薬物が投与されていない動物を用いて第一工程を為し、対照との比較に基づき第二工程を為すことにより、第二工程における造影剤の嚥下障害をより正確に評価することが可能となる。具体的には例えば、同一個体である動物を用いて、被験薬物の投与前後において、本発明方法に基づく造影剤の嚥下障害を評価すればよい。この場合には、造影剤の嚥下障害として、対照との比較において、造影剤の食道内滞留回数や造影剤の気管内誤嚥有無等の変化・差異等に基づき評価することにより被験薬物の嚥下障害作用を検出することが可能となる。
【００１８】
さらに、本発明方法では、動物の薬物レスポンスに基づき被験薬物の嚥下障害作用を検出することも可能である。具体的には例えば、本発明方法において、覚醒下動物に対して嚥下障害作用を有する薬物が有効量投与された場合には、本発明方法に基づく造影剤の嚥下反応を与えても、嚥下反応を誘発させることなく、造影剤の食道内滞留又は気管内誤嚥等の造影剤の嚥下障害を生じるような薬物レスポンスを生じる。一方、覚醒下動物に対して嚥下障害作用を有する薬物が非有効量投与された場合や、覚醒下動物に対して嚥下障害作用を有さない薬物が投与された場合には、本発明方法に基づく造影剤の嚥下反応を与えると、嚥下反応を生じる薬物レスポンスを生じる。
【００１９】
本発明方法において造影剤の嚥下障害が評価される被験薬物とは、如何なる薬物であってもよいが、好ましくは本発明方法により誘発される嚥下反応に対して動物の薬物レスポンスを与えるような薬物であって、例えば、当該嚥下反応を抑制するような薬物等をあげることができる。
【００２０】
予め被験薬物が投与された覚醒下動物を調製・準備するには、上記の被験薬物を覚醒下実験動物に通常の薬物投与方法を用いて投与することにより調製・準備すればよい。当該被験薬物の覚醒下動物への投与量は、薬物の種類に応じて適宜選択すればよいが、例えば、１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量をあげることができる。そして、このような投与量となるように、当該被験薬物を精製水又は生理食塩液にて適当な濃度に希釈し、これを覚醒下実験動物に経口投与又は皮下投与すればよい。
【００２１】
本発明方法を利用すれば、薬物による嚥下障害を動物実験の早期段階で発見することが可能となり、臨床上で誘発され得る薬物による嚥下障害（例えば、気管内誤嚥）、ひいてはそれにより発症され得る肺炎障害を事前に予見し、より安全な新薬開発、既存医薬品の副作用発現の警告が期待される。また、嚥下改善薬を見込む薬物のスクリーニングにも利用可能であり、嚥下改善治療薬の発見にも貢献が期待される。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明をより詳細に説明するため、実施例を挙げて説明するが本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００２３】
実施例１
本発明方法の実施態様の一つを図のとおり例示する。
実験動物としてイヌ（ビーグル種、１０ｋｇ程度）を用いた場合における具体例である。
雌雄ビーグル犬（日本エルエスジー）を検疫、馴化した後に実験に供給した。当該動物は室温２３±２℃、湿度４０〜８０％、換気回数１０回以上/時間、人工照明１２時間（８時〜２０時）に設定された飼育室で、ステンレス・アルミケージ（７００W×９００L×８００H mm）に１頭ずつ飼育した。飼育期間中に用いた飼料は、イヌ用固形飼料（TC−１、マルハペットフード）であり、これを１頭につき１日３００gずつを給餌した。健康状態が不良となった個体には補助食として動物用缶詰肉（健犬テシオ、マルハペットフード）を１頭あたり１日１００gずつ給餌する。また飼育期間中に用いた飲料水は水道水であり、これを自由摂取させた。
造影剤の嚥下障害を引き起こす被験薬物は、精製水に５、１５、４５mg/mLの濃度に溶解させたものを用いた。尚、当該実験では、対照として被験薬物が投与されていない覚醒下動物を用いた試験を実施した後に、同一個体である覚醒下動物に予め被験薬物が経口投与された覚醒下動物を用いた試験を実施した。
前記被験薬物による薬物レスポンスを観察するために、当該被験薬物の投与前及び投与開始から一定時間後に本発明方法に基づく被験薬物の嚥下障害作用を検出した。その結果、当該被験薬物の投与前と投与後との造影剤の嚥下障害が増大するような薬物レスポンスが観察された。さらに、十分な休息を与えることにより、前記覚醒下動物の造影剤の嚥下障害は、当該被験薬物の投与前における造影剤の嚥下障害と同等までに回復する現象が確認された。これに対して、対照（被験薬物が投与されていない覚醒下動物を用いた試験：前記被験薬物の代わりに精製水を用いること以外は同様な方法を用いた試験）では、造影剤の嚥下障害を増大させるような薬物レスポンスは観察されなかった。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明により、動物実験における薬物嚥下障害を簡単にかつ精度よく評価することができる方法が提供可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、本発明方法の実施態様の一つである、実験動物としてイヌを用いた場合における具体例を図示したものである。図中の左部分のように覚醒下イヌを側臥位にて造影剤を咽頭内投与する。イヌは造影剤を嚥下するが、この一連の嚥下反応をエックス線を連続照射しながら、図中の中央部に記載されるビデオレコーダーに録画する。これにより図中の右部分に記載されるような嚥下反応に係る画像が動画として得られる。
【図２】図２は、図１で示された本発明方法の実施態様の一つである、実験動物としてイヌを用いた場合における具体例において得られたアナログ画像をデジタル画像に変換した後、フレーム解析（コマ送り解析）を行った結果得られた写真である。造影剤が食道内を通過する嚥下反応が確認できる。即ち、エックス線透視画像では造影剤は陰影部として映し出され、写真では咽頭部内に溜まった造影剤の一部が上部食道の中央部を通過している瞬間が捉えられている。この陰影部、即ち、造影剤が下部へフレームアウトしており、これは胃内通過する場合には嚥下と判定できる。一方、陰影部が下部へフレームアウトすることなく、画面の食道部に滞留し続ける場合には造影剤の食道内滞留と判定できる。さらには陰影部の気管内混入や、逆流が確認される場合には気管内誤嚥と判定できる。
【図１】
2005304907.tif 000002
【図２】
2005304907.tif 000003