(57)【要約】【課題】  茶抽出物を用いてグルタミン酸含量が高いグルタミン酸含有食品素材を提供する。【解決手段】  除タンニン処理により茶抽出物のカテキンを除去した後、グルタミナーゼを作用させて茶抽出物に含まれるテア二ンをグルタミン酸に変換することによりグルタミン酸が効率的に生成し、グルタミン酸含量が高くγ−アミノ酪酸の製造原料や食品の旨味を増強する食品添加剤などとして有用なグルタミン酸含有食品素材が得られる。【選択図】    図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
茶抽出物に含まれるテアニンにグルタミナーゼを作用させてグルタミン酸を生成することを特徴とするグルタミン酸含有食品素材の製造方法。
【請求項２】
前記茶抽出物は、グルタミナーゼを作用させる前に、除タンニン処理を経ることを特徴とする請求項１記載のグルタミン酸含有食品素材の製造方法。
【請求項３】
前記除タンニン処理は、ポリフェノールに吸着性を有する吸着剤を前記茶抽出物を含有する溶液に接触させて、前記茶抽出物に含まれるカテキンを吸着する工程と、前記溶液から前記吸着剤を除去する工程とを有する請求項２記載のグルタミン酸含有食品素材の製造方法。
【請求項４】
前記吸着剤は、ポリビニルポリピロリドン、ポリビニルピロリドン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体、メタクリル酸エステル、架橋デキストランゲル、親水性ビニルポリマー及びシリカゲルからなる群より選択される素材からなる請求項３記載のグルタミン酸含有食品素材の製造方法。
【請求項５】
前記茶抽出物を含有する溶液は、水を用いて茶葉を抽出した茶抽出液である請求項３又は４記載のグルタミン酸含有食品素材の製造方法。
【請求項６】
茶葉及び水を用いて茶抽出液を調製する工程と、前記茶抽出液に除タンニン処理を施す工程と、除タンニン処理後の茶抽出液にグルタミナーゼを作用させて該茶抽出液中のグルタミン酸量を増加させる工程を有することを特徴とするグルタミン酸含有食品素材の製造方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の製造方法により得られるグルタミン酸含有食品素材。
【請求項８】
飲料茶素材、食品の旨味を増強するための食品添加剤、又は、γ−アミノ酪酸含有食品素材の製造原料として使用される請求項７記載のグルタミン酸含有食品素材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然食品素材から得られ、グルタミン酸の含有量が高いグルタミン酸含有食品素材及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタミン酸は、コンブやお茶等の種々の食品素材に含まれる旨味成分として知られているアミノ酸の一種であり、最近では、γ−アミノ酪酸(GABA)の前駆物質としても注目されている。γ−アミノ酪酸は、血圧降下物質として知られているアミノ酸であり、γ−アミノ酪酸を含有した食品素材として、GABA富化コメ胚芽（オリザ油化（株）製）やギャバロン茶（下記特許文献１参照）が知られている。これらの食品素材は、天然原料中のγ−アミノ酪酸濃度を高めたものであるが、その含有量は低い。
【０００３】
一方、微生物が有するグルタミン酸脱炭酸酵素を利用してグルタミン酸からγ−アミノ酪酸が生産されることが報告されて以来、食品又は食品素材に含まれるグルタミン酸をγ−アミノ酪酸に変換してγ−アミノ酪酸濃度を高めることが研究されている。例えば、トマト果汁を乳酸菌で醗酵させてγ−アミノ酪酸を生産する方法（下記特許文献２参照）や、グルタミン酸を構成アミノ酸とするタンパク質にプロテアーゼおよびグルタミン酸脱炭酸酵素生産能をあわせもつ乳酸菌を生育させてγ−アミノ酪酸を製造する方法（下記特許文献３参照）などが知られている。しかし、これらの製造方法でも、原料に本来含有されるグルタミン酸が少ないため、グルタミン脱炭酸酵素を用いてγ−アミノ酪酸の含有率を高めるには限界があった。
【０００４】
また、グルタミン酸を別途添加する方法（下記特許文献４参照）も提案されているが、味のバランスが悪くなったり、消費者の天然物指向という風潮に合わないという面もあった。
【０００５】
つまり、γ−アミノ酪酸を多く含む機能性食品やγ−アミノ酪酸製剤を提供する上で、グルタミン酸の含有量が高い天然食品素材を得ることが極めて重要である。
【特許文献１】実開昭６３−１０３２８５号公報
【特許文献２】特開２０００−３０８４５７号公報
【特許文献３】特開２０００−１４３５６号公報
【特許文献４】特開平７−２２７２４５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記のように、グルタミン酸の含有量が高い天然食品素材は、旨味増強を目的とする従来の食品添加物や食品素材としての用途だけではなく、γ−アミノ酪酸を含有する機能性食品の原料として重要な素材であり、その開発が急務とされている。
【０００７】
本発明の課題は、別途製造されたグルタミン酸を添加することなく、天然食品素材から効率的にグルタミン酸を生成し、グルタミン酸の濃度が高いグルタミン酸含有食品素材及びその製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、天然の茶抽出液からグルタミン酸を多く含有する食品素材を効率的に生産することができることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明の一態様によれば、グルタミン酸含有食品素材の製造方法は、茶抽出物に含まれるテアニンにグルタミナーゼを作用させてグルタミン酸を生成することを要旨とする。
【００１０】
又、本発明の一態様によれば、グルタミン酸含有食品素材の製造方法は、茶葉及び水を用いて茶抽出液を調製する工程と、前記茶抽出液に除タンニン処理を施す工程と、除タンニン処理後の茶抽出液にグルタミナーゼを作用させて該茶抽出液中のグルタミン酸量を増加させる工程を有することを要旨とする。
【００１１】
本発明のグルタミン酸含有食品素材は、上記製造方法によって得られ、飲料茶素材、食品の旨味を増強するための食品添加剤、又は、γ−アミノ酪酸含有食品素材の製造原料として使用することができる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、別途製造されたグルタミン酸を添加することなく、天然食品素材から効率的にグルタミン酸を生成し、グルタミン酸の濃度が高いグルタミン酸含有食品素材を提供することができ、食品の旨味を増強する食品添加物やγ−アミノ酪酸含有食品素材の製造原料として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
茶飲料の成分である茶抽出物には、カフェイン、カテキン類（タンニンに属するポリフェノール化合物）や、グルタミン酸を含むアミノ酸類などの様々な物質が含まれている。これらの物質の中にはテアニン（グルタミン酸エチルアミド）も含まれ、テアニンにグルタミナーゼを作用させることによりグルタミン酸が生成する。従って、茶抽出物をグルタミナーゼで処理すればグルタミン酸含有量の高い食品素材が得られると予想されるが、実際には、グルタミナーゼ処理を施しても期待されるような結果は得られない。この理由は、茶に含まれるカテキン類がグルタミナーゼの酵素活性を阻害することにある。
【００１４】
本発明では、除タンニン処理により茶抽出物からカテキン類を除いた後にグルタミナーゼを作用させることによって茶抽出物に含まれるテア二ンから効率的にグルタミン酸を生成し、グルタミン酸の含有量を茶抽出物に元々含まれていた量より飛躍的に増加させる。これにより、天然の茶抽出液を用いて、外部からグルタミン酸を添加することなく、グルタミン酸含有量が高い食品素材を製造することができる。得られたグルタミン酸含有食品素材を用いて、既知の方法に従って微生物や酵素によりグルタミン酸をγ−アミノ酪酸に変換することにより、γ−アミノ酪酸含有機能性食品素材を製造することができる。また、グルタミナーゼによる酵素処理後の茶抽出液は、旨味を増強した茶飲料として提供することができる。
【００１５】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１６】
本発明において用いられる茶抽出物は、抽出溶媒（水又は有機溶媒）を用いて茶葉から抽出される茶由来成分であり、抽出に用いる茶葉は、緑茶、紅茶、ウーロン茶やプアール茶等の中国茶など、茶樹の葉、茎等から製造される茶葉であれば何れでもよく、製造工程での発酵の有無を問わない。これらの茶葉には、何れもグルタミン酸及びテアニンが含まれており、茶抽出物からグルタミン酸の含有量が高い食品素材を調製することができる。異なる種類の茶葉を混合して用いてもよい。茶葉のテアニン含有量（乾燥茶葉中の質量％）は、概して、玉露（上級）では２．４７％、玉露（並級）では２．０１％、煎茶（上級）では１．５０％、煎茶（並級）では０．６５％、番茶では０．４２％、ほうじ茶では０．０２％と報告されている（日本茶業技術協会、「茶業研究報告」、No.40.65(1973)）。抽出に用いる溶媒は、グルタミン酸及びテアニンが効率よく抽出されるものであればよく、水又は有機溶媒を用いることができ、水（熱水）又はエタノール、イソプロパノール等の親水性溶媒に茶葉を接触させることにより抽出するのが最も一般的である。水性の茶抽出液には、テアニンやカテキンと共に、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アスパラギン、セリン等のアミノ酸、リンゴ酸等の有機酸、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ−、ＳＯ４２−、アルコール不溶性の高分子成分などが溶解している。抽出に使用する茶葉の質量、茶葉単位当りの溶媒量及び抽出温度も特に限定されるものではなく、一般には、茶葉１ｇに対して３〜１００ｇ程度の溶媒を用い、３０〜１００℃程度の温度で０．５〜３０分程度の接触により抽出する。
【００１７】
上記のような茶抽出物の組成は抽出条件によって異なるが、緑茶５ｇ、湯量１５０ml、浸出時間６０秒の場合、茶葉１ｇ当りの浸出成分は、カテキン類（エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキン、エピカテキンガレート、ガロカテキン、ガロカテキンガレート、カテキン及びカテキンガレート）を３８．７〜４２．７mg程度、テアニンを６．６mg程度、グルタミン酸を１．７〜１．８mg程度含んている（農林水産消費技術センター広報誌「大きな目小さな目」、１９９９年７月第４６号）。このような茶抽出物の酵素処理においてグルタミナーゼの酵素活性を阻害しないために、除タンニン処理を施して茶抽出物からカテキン類を除去する。除タンニン処理は、任意の既知の手法を利用することができる。例えば、吸着剤を用いた選択吸着や液−液分配によって行うことができる。
【００１８】
具体的には、選択吸着の場合、ポリフェノールに吸着性を有する吸着剤を茶抽出物水溶液に接触させてカテキン類を吸着剤に吸着させた後、吸着剤を分離除去して茶抽出物水溶液を回収する。従って、茶抽出物の調製において水を溶媒として用いた場合は、抽出液をそのまま除タンニン処理することができる。水以外の抽出溶媒を用いた場合は、一旦抽出溶媒を除去して得られた茶抽出物を水に溶解することにより除タンニン処理を施す。処理手順の詳細については、例えば特開平１−２１８５５０号公報を参照してもよい。吸着剤の例としては、ポリビニルポリピロリドン、ポリビニルピロリドン、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体系合成吸着剤（例えば、三菱化学（株）製ダイヤイオン、セパビーズ等）、メタクリル酸エステル系吸着剤（例えば、三菱化学（株）製ダイヤイオン、セパビーズ等）、架橋デキストランゲル（例えば、ファルマシア製セファデックスＬＨ−２０等）、親水性ビニルポリマー系吸着剤（例えば、東ソー製トヨパール等）、逆相系吸着剤（例えば、和光純薬工業製ワコーパックＣ１８等）、順相系吸着剤（例えば、シリカゲル等）などが挙げられ、異なる種類の吸着剤を組み合わせて用いてもよい。特にポリビニルポリピロリドンは、ポリフェノール類に対して高い親和性を示し、ポリフェノール類とそれ以外との分離性が高いだけでなく、安定性が高く飲料原料の清澄剤として使用可能であるので使用し易い。
【００１９】
除タンニン処理を液−液分配によって行う場合、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸メチル、酢酸エチル、ｎ−ブタノール等の有機溶媒を使用し、詳細な手順等については特開昭６１−１３０２８５号公報、特開平１−１７５９７８を参照することができる。
【００２０】
グルタミナーゼの酵素活性を茶抽出物に十分に発揮させる上で、除タンニン処理後のカテキン類の残存量はできる限り少ないことが望ましいが、完全に除去することは必須ではなく、除タンニン処理後のカテキン類の残存率が５０％以下、好ましくは１５％以下となるように処理条件を設定すると効率的である。例えば吸着剤を用いた除タンニン処理の場合では、カテキン残存率は、使用する吸着剤の吸着能及び使用量、茶抽出物中のカテキン含有割合などの要素に依存するので、これらの要素を考慮して処理条件を設定する。
【００２１】
上述の除タンニン処理によってカテキン類を除去した茶抽出物水溶液は、グルタミナーゼによる酵素処理を施して、テアニンをグルタミン酸に変換する。具体的には、グルタミナーゼを添加し、常法に従って温置してグルタミナーゼをテアニンに作用させる。酵素処理温度が高いほど、テアニンからグルタミン酸への反応速度が速くなり、グルタミナーゼの至適温度が約６５℃であるので、酵素処理温度は７０℃以下が望ましく、好ましい処理温度の範囲は約４０〜７０℃である。酵素反応は、基質濃度及び酵素濃度が高いほど反応速度が大きく、グルタミナーゼの濃度が約０．０５mg／ml以上であることが好ましく、この場合、除タンニン処理した茶抽出物水溶液の濃度が０．８ｇ／mlの場合に含まれるテアニンの殆どをグルタミン酸に変換するのに要する処理時間は約５時間以内である。グルタミナーゼ濃度が約０．１０mg／ml以上であれば、同上の茶抽出物水溶液の処理に要する時間は約３時間以下となるので、処理時間をも考慮すると、テアニンの変化に基づくグルタミナーゼ濃度の好ましい範囲は約０．１０mg／ml以上となる。
【００２２】
酵素処理後の茶抽出物含有液は、酵素を失活させ、必要に応じて濁りを除去する。酵素の失活は加熱によって行うことができ、例えば１００℃の状態で５〜１０分間程度放置すればよい。この後、用途によって濃度の調節を行って、高グルタミン酸食品素材として利用すればよい。例えば、処理後の茶抽出物含有液を茶飲料素材として用い、水による希釈で適切な濃度に調節することにより、グルタミン酸濃度の高い茶飲料を提供することができる。この場合、カテキン類が過度に除去されていると風味のバランスが悪くなるので、除タンニン処理においてカテキン類の残存率が１０％程度となるように処理することが好ましい。あるいは、減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥等により溶媒を除去して、グルタミン酸の増量により旨味を増強するための食品添加剤あるいはγ−アミノ酪酸含有食品素材の製造原料として使用できる。酵素処理後の茶抽出物含有液のグルタミン酸の含有割合は、元々茶抽出物に含まれていた割合より飛躍的に高いので、γ−アミノ酪酸を効率的に生成できる。
【００２３】
グルタミン酸からγ−アミノ酪酸の生成は、例えば乳酸菌を用いた発酵によって行うことができる。この場合の乳酸菌は、糖を乳酸発酵可能な細菌であれば特に限定されず、ラクトバチルス属等の１種あるいは２種以上の乳酸菌を組み合せて用いることができる。特に、ラクトバチルス・ブレビスが好ましく、詳細については特開２０００−２１００７５号公報の記載を参照することができる。乳酸発酵は、高グルタミン酸食品素材の溶液に乳酸菌を植菌して、約２０〜４０℃で１６〜７２時間程度乳酸菌を静置培養することにより進行し、培養開始後約４０時間以降にγ−アミノ酪酸の濃度が高くなる。培養液は、遠心分離濾過を施して菌体及び濁りを除去し、必要に応じて濃縮・乾燥することにより、濃縮エキス、粉体などの任意の形態のγ−アミノ酪酸含有食品素材が得られる。
【００２４】
前述の吸着剤による除タンニン処理は、茶抽出物からカテキン製剤を製造する際のカテキン分取手段として有効な手段であり、吸着したカテキン類はアルコール水溶液等の溶離液を用いて容易に回収することができる。従って、本発明は、食品添加物や化粧品、健康食品等の分野で利用価値の高いカテキン製剤を製造する際の残余成分を有効利用できる有用な方法でもある。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例を参照して本発明について更に詳細に説明する。
【００２６】
（実施例１）：グルタミナーゼ活性に及ぼすカテキンの影響
［除タンニン処理］
緑茶抽出物（カテキン類含有割合約３０質量％、テアニン含有割合約２．０質量％、商品名：テアフラン３０Ｅ、（株）伊藤園製）５ｇを６０℃の温水５００mLに溶解して試料１Ａの茶抽出物水溶液（濃度１質量％、Brix＝１．０°）を調製した。
【００２７】
更に、試料１Ａと同様の茶抽出物水溶液を調製し、これに対して０．５質量％のポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）を添加し、５分間攪拌してカテキン類をＰＶＰＰに吸着させた後にＰＶＰＰを除去して試料１Ｂの茶抽出物水溶液を得た。
【００２８】
また、添加したＰＶＰＰ量を１質量％（試料１Ｃ）、２質量％（試料１Ｄ）又は３質量％（試料１Ｅ）に変更したこと以外は試料１Ｂと同じ操作を行って試料１Ｃ〜１Ｅの茶抽出物水溶液を得た。
【００２９】
上記試料１Ａ〜１Ｅの茶抽出物水溶液のカテキン含有量を高速液体クロマトグラフにより分析した。この結果を図１のグラフに示す（図１中、ＥＧＣはエピガロカテキン、ＥＧＣｇはエピガロカテキンガレート、ＥＣはエピカテキン、ＥＣｇはエピカテキンガレート、ＧＣはガロカテキン、ＧＣｇはガロカテキンガレート、Ｃはカテキン、Ｃｇはカテキンガレートである）。
【００３０】
図１によれば、ＰＶＰＰによる除タンニン処理を施さない試料１Ａの茶抽出物水溶液のカテキン含有量を１００％とすると、試料１Ｂ〜１Ｅのカテキン残存率は、６７．７％（試料１Ｂ）、４４．２％（試料１Ｃ）、１２．４％（試料１Ｄ）及び３．７％（試料１Ｅ）であり、ＰＶＰＰの添加量の増加によってカテキンの除去量が増加することが明らかである。
【００３１】
［グルタミナーゼによる酵素処理］
グルタミナーゼ（ダイワＹ６００Ｓ、大和化成株式会社製 、デキストリン含量：７０％、力価：６００ＧＴＵ／mg）を温度４５℃の水に溶解して、濃度が０．１mg／mL、０．２５mg／mL、０．５０mg／mL、１．０mg／mL及び２．５mg／mLのグルタミナーゼ溶液を各々調製した。尚、グルタミナーゼの力価を示す１ＧＴＵは、ｐＨ６．０、温度３７℃でＬ−グルタミン（濃度１％）に作用する場合に、反応初期の１分間に１μmolのＬ−グルタミン酸を生成するのに必要な酵素量である。
【００３２】
上記試料１Ａ〜１Ｅの各々において、茶抽出物水溶液２７mLに濃度が０．１mg／mLのグルタミナーゼ溶液３mLを加えて（グルタミナーゼ最終濃度０．０１mg／mL）、６mLづつ５つの容器に分け入れて、各々、５０℃のエアーバス中で１時間、２時間、３時間、４時間又は５時間振篩して酵素処理を行った。処理後の容器を沸騰水中に入れ、１０分間放置して酵素を失活させた後、冷却して被処理液を得た。又、予め失活処理をしたグルタミナーゼ溶液を茶抽出物水溶液に添加したものを同様に沸騰水で１０分間失活処理し、酵素処理０時間の被処理液とした。各被処理液のグルタミン酸含有量及びテアニン含有量を高速液体クロマトグラフにより分析した。この結果に基づき、酵素処理０時間の被処理液のグルタミン酸及びテアニンの含有量を１００％として処理時間とグルタミン酸含有量及びテアニン含有量との関係を図２（ａ）及び図３（ａ）のグラフに示す。
【００３３】
更に、０．２５mg／mL、０．５０mg／mL、１．０mg／mL及び２．５mg／mLの各濃度のグルタミナーゼ溶液を用いて、上記と同様にして、酵素処理時間が０〜５時間の被処理液（最終グルタミナーゼ濃度０．０２５mg／mL、０．０５mg／mL、０．１mg／mL及び０．２５mg／mL）を作成し、各グルタミナーゼ濃度におけるグルタミン酸含有量及びテアニン含有量を分析した。この結果に基づき、処理時間とグルタミン酸含有量及びテアニン含有量との関係を図２（ｂ）〜（ｅ）及び図３（ｂ）〜（ｅ）のグラフに示す。
【００３４】
図２の結果から、何れのグルタミナーゼ濃度においても、ＰＶＰＰの添加量が少ない時、即ち、カテキンの残存率が高い時、グルタミン酸の生成は抑制されている。従って、グルタミン酸の生成量を考慮すると、ＰＶＰＰ添加比率は茶抽出物に対して１質量％以上（従って、カテキンの残存率５０％以下）とするのが良く、より好ましい添加比率は２％以上（カテキンの残存率１５％以下）と見なせる。また、グルタミナーゼの濃度は、０．０５mg／mL以上が好ましいと言える。
【００３５】
又、図３のテアニンの含有量の結果においても、グルタミン酸含有量の結果と同様、何れのグルタミナーゼ濃度においてもＰＶＰＰ添加量が少ない時、即ち、カテキンの残存率が高い時、テア二ンの減少が抑制される。即ち、テア二ンからグルタミン酸への変換が抑制されていると考えられる。従って、テア二ンの変換を考慮した場合も、ＰＶＰＰの添加比率は１質量％以上（カテキンの残存率５０％以下）、好ましくは２質量％以上（カテキンの残存率１５％以下）にするのが良い。また、テア二ンの変化に基づいた場合の好ましいグルタミナーゼ濃度は、０．０５mg／mL以上となる。
【００３６】
（実施例２）：グルタミナーゼ処理条件
カテキン類を完全に除去した緑茶抽出物のグルタミナーゼ処理における好適な条件を以下のように調べた。
【００３７】
［グルタミナーゼ濃度］
緑茶抽出物（商品名：テアフラン３０Ｅ、（株）伊藤園製）を６０℃の温水に溶解して茶抽出物溶液を調製し、水に浸したスチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着剤（商品名：ダイヤイオンＨＰ２０、三菱化学（株）製））を充填したカラムに茶抽出物溶液を通水して、カラムから溶出される非吸着部の溶液を回収し、水を除去して非吸着部エキス（粉体）を得た。この非吸着部エキスは、高速液体クロマトグラフによる分析でカテキン類が検出されないことを確認した。
【００３８】
上記非吸着部エキス０．７８ｇを蒸留水１００mLに溶解して試料溶液とした（濃度０．７８質量％、Brix＝０．７９２°）。
【００３９】
更に、実施例１と同じグルタミナーゼを温度４５℃の水に溶解して、濃度が０．２５mg／mL、０．５０mg／mL、１．０mg／mL、２．０mg／mL及び４．０mg／mLのグルタミナーゼ溶液を各々調製した。
【００４０】
上記０．２５mg／mL、０．５０mg／mL、１．０mg／mL、２．０mg／mL及び４．０mg／mLの各濃度のグルタミナーゼ溶液について、上記試料溶液２７mLにグルタミナーゼ溶液３mLを加えて（グルタミナーゼ最終濃度０．０２５mg／mL、０．０５mg／mL、０．１０mg／mL、０．２０mg／mL及び０．４０mg／mL）、６mLづつ５つの容器に分け入れて、各々、４５℃のエアーバス中で１時間、２時間、３時間、４時間又は５時間振篩して酵素処理を行った。処理後の容器を沸騰水中に入れ、１０分間放置して酵素を失活させた後冷却して被処理液を得た。又、予め失活処理をしたグルタミナーゼ溶液を試料溶液に添加したものを同様に沸騰水で１０分間失活処理し、酵素処理０時間の被処理液とした。各被処理液のグルタミン酸含有量及びテアニン含有量を高速液体クロマトグラフにより分析した。この結果に基づき、酵素処理０時間の被処理液の含有量を１００％として処理時間とグルタミン酸含有量及びテアニン含有量との関係を図４（ａ）及（ｂ）のグラフに示す。
【００４１】
図４（ａ）及び（ｂ）によれば、被処理液のグルタミン酸含有量は、被処理液のグルタミナーゼ濃度に依存して増加し、グルタミナーゼ濃度が０．０５mg／mL以上の場合、初期含有量の約５倍量に至った。また、テアニン含有量も被処理液のグルタミナーゼ濃度に依存して減少し、グルタミナーゼ濃度が０．０５mg／mL以上の場合、ほぼ１００％のテアニンがグルタミン酸へ変換された。これらの結果から、培養温度が４５℃の条件下では、被処理液のグルタミナーゼ濃度は０．０５mg／mL以上が好ましく、更に反応速度も考慮すると、０．１０mg／mL以上の濃度であれば２時間以内の処理で効率よくテアニンをグルタミン酸へ変換できる。
【００４２】
［処理温度］
更に、上記グルタミナーゼ溶液のうちの０．２５mg／mL、０．５０mg／mL及び１．０mg／mLの各濃度のグルタミナーゼ溶液を用いて、酵素処理温度を３５℃、４０℃、４５℃、５０℃又は５５℃に変更したこと以外は上記と同じ操作を繰り返して、酵素処理時間が０〜５時間の被処理液（最終グルタミナーゼ濃度０．０２５mg／mL、０．０５mg／mL及び０．１０mg／mL）を作成し、各グルタミナーゼ濃度におけるグルタミン酸含有量及びテアニン含有量を分析した。この結果に基づき、処理時間とグルタミン酸含有量との関係を図５（ａ）〜（ｃ）のグラフに、処理時間とテアニン含有量との関係を図５（ｄ）〜（ｆ）のグラフに示す。
【００４３】
図５（ａ）〜（ｆ）の結果から、何れのグルタミナーゼ濃度においても、酵素処理温度が高いほど、グルタミン酸含有量が増加し、テア二ン含有量の減少も顕著である。これらの結果から、培養温度が高いほどテア二ンからグルタミン酸への変換は促進されるものと思われる。但し、グルタミナーゼの至適温度は６５℃であるので、培養温度は７０℃以下が望ましい。また、グルタミナーゼの添加量が０．０５mg／mL又は０．１０mg／mLの時、グルタミン酸含有量は、約５倍まで増加しているが、処理時間の短縮を考慮すると、グルタミナーゼ濃度が０．１０mg／mL以上であるとより効率的である。
【００４４】
従って、テア二ンからグルタミン酸の生成量及び処理時間を考慮すると、培養温度は高い方が望ましく、グルタミナーゼ濃度が０．０５mg／mLでは、培養温度は４５℃以上、０．１mg／mLでは、培養温度は４０℃以上が好ましい。
【００４５】
（実施例３）： 添加物としての利用
実施例２と同様の調製方法によって、緑茶抽出物から非吸着部エキス（テアニン含有量：１．９５質量％、グルタミン酸含有量：０．４６質量％）を調製した。この非吸着部エキス（粉体）９．５ｇを６０℃の温水１００mLに溶解してグルタミナーゼ（ダイワＹ６００Ｓ）８０mgを添加し、５０℃のエアーバス中で５時間攪拌して酵素処理を施した後、沸騰水中で１０分間放置して酵素を失活させ、冷却後、凍結乾燥することにより高グルタミン酸含有食品素材を得た。この高グルタミン酸含有食品素材のテアニン含有量は０．０７質量％であり、グルタミン酸含有量は５．０２質量％であった。
【００４６】
緑茶茶葉６ｇを７３℃の温水７００mLに加えて４分３０秒間の抽出を行い、茶葉を除去して４０℃以下に冷却した。その後、この抽出液にアスコルビン酸３００mg、重曹及び蒸留水を加えてｐＨ値を６．１に調整した後、液量を１Ｌに調整した。これに０．１質量％又は０．２５質量％の上記高グルタミン酸含有食品素材を添加して９５℃に加熱し、窒素フロー中で缶に充填して１２３℃で７分間レトルト殺菌し、茶飲料を得た。
【００４７】
専門のパネラー８名により上記茶飲料の官能試験を行って、旨味、渋み及び総合評価を調べた。官能試験においては、高グルタミン酸含有食品素材を添加しない茶飲料を基準（０点）として上下３段階（±３点）評価で採点し、８名の採点の平均値を取った。その結果、高グルタミン酸含有食品素材の添加量が０．１質量％では、旨味＋０．７９点、渋み＋０．５点、総合評価＋１．０６点であり、添加量が０．２５質量％では、旨味＋２．５０点、渋み＋０．８８点、総合評価＋２．１３点であり、高グルタミン酸含有食品素材の添加により茶飲料の旨味を増強し、商品価値を高めることができた。同様に、種々の食品について旨味を増強する添加剤として上記高グルタミン酸含有食品素材を利用できることが明らかである。
【００４８】
（実施例４）： 高グルタミン酸茶飲料
緑茶抽出物（商品名：テアフラン３０Ｅ、（株）伊藤園製）５ｇを６０℃の温水５００mLに溶解して試料４Ａの茶抽出物溶液を調製した。
【００４９】
更に、試料４Ａと同様の茶抽出物溶液を調製し、これに対して０．５質量％のポリビニルポリピロリドン（ＰＶＰＰ）を添加し、５分間攪拌してカテキン類をＰＶＰＰに吸着させた後にＰＶＰＰを除去して試料４Ｂの茶抽出物溶液を得た。
【００５０】
また、添加したＰＶＰＰ量を１質量％（試料４Ｃ）、２質量％（試料４Ｄ）又は３質量％（試料４Ｅ）に変更したこと以外は試料４Ｂと同じ操作を行って試料４Ｃ〜４Ｅの茶抽出物溶液を得た。
【００５１】
上記試料４Ａ〜４Ｅの茶抽出物溶液のカテキン含有量を高速液体クロマトグラフにより分析した。この結果を表１に示す。
【００５２】
実施例１と同じグルタミナーゼを温度５０℃の水に溶解して、濃度が１．０mg／mLのグルタミナーゼ溶液を調製し、上記試料４Ａ〜４Ｅの茶抽出物溶液の各々について、茶抽出物液１８０mLに上記グルタミナーゼ溶液２０mLを加えて（グルタミナーゼ最終濃度０．１mg／mL）、これを封入した容器を５０℃のエアーバス中で３時間振篩して酵素処理を行った。処理後の容器を沸騰水中に入れて１０分間放置して酵素を失活させた後冷却した。尚、酵素処理前後のテアニン含有量及びグルタミン酸含有量を高速液体クロマトグラフにより分析した。この結果を表１に示す。
【００５３】
（表１）
酵素処理前後の含有量              
試料    カテキン  テアニン(ppm)   グルタミン酸(ppm)
(ppm)     処理前  処理後    処理前  処理後
４Ａ    2723.2    175.1   71.6      40.5    149.4
４Ｂ    1858.9    176.3   39.1      40.7    188.1
４Ｃ    1027.7    176.5   15.8      41.6    212.9
４Ｄ     225.3    176.2    -        41.0    219.3
４Ｅ     149.0    172.0    -        41.2    225.6 
酵素処理後の茶抽出物溶液を蒸留水で２倍に希釈して試料４Ａ〜４Ｅの茶飲料を得た。
【００５４】
専門のパネラー８名により試料４Ａ〜４Ｅの茶飲料の官能評価を行った。官能評価では、旨味、渋みの強度及び総合評価を５点満点（０〜５の整数評価）で採点し、８名の採点の平均値を取った。評価結果を表２に示す。
【００５５】
（表２）
茶飲料の官能評価         
試料      旨味      渋味    総合評価
４Ａ    ０．８８  ４．８８  ０．８８
４Ｂ    １．６３  ４．００  １．６３
４Ｃ    ２．７５  ２．８８  ３．１３
４Ｄ    ４．００  １．５０  ４．３８
４Ｅ    ３．８８  ０．７５  ３．７５
表１から解るように、除タンニン処理におけるＰＶＰＰ添加量が多くなると、カテキンの残存量は低下し、これに伴ってグルタミン酸含有量は増加する。これに対応して、表２に示すように官能評価の採点結果も高くなる。但し、最もグルタミン酸含有量が高い試料４Ｅよりも試料４Ｄの方が高い評価を得ている。これは、旨味と渋味とのバランスが総合的な風味の印象において重要であり、茶飲料の風味においては試料４Ｄ程度の残存カテキンが必要であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】茶抽出物からカテキンを除去する除タンニン処理の効果を示すグラフである。
【図２】グルタミナーゼの酵素活性に対するカテキンの影響を説明するための、酵素処理におけるグルタミン酸含有量の変化を示すグラフである。
【図３】グルタミナーゼの酵素活性に対するカテキンの影響を説明するための、酵素処理におけるテアニン含有量の変化を示すグラフである。
【図４】酵素処理におけるグルタミナーゼ濃度の影響を説明するための、酵素処理におけるグルタミン酸含有量及びテアニン含有量の変化を示すグラフである。
【図５】酵素処理における温度の影響を説明するための、酵素処理におけるグルタミン酸含有量及びテアニン含有量の変化を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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