(57)【要約】【課題】  角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うに有用な角結膜障害モデル動物、その作製方法およびその使用を提供する。【解決手段】  ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物であって、該モデル動物を相対湿度３５％以下の低湿度環境下で作製することにより達成される。また、本発明の作製方法を用いることで、恒常的に角結膜障害モデル動物を作製することができる。さらには、角結膜障害モデル動物を、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行う際に、有用なモデル動物として使用することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うに有用な角結膜障害モデル動物であって、該モデル動物を相対湿度３５％以下の低湿度環境下で作製することを特徴とする角結膜障害モデル動物の作製方法。
【請求項２】
低湿度環境下が、相対湿度３０％以下である請求項１記載の作製方法。
【請求項３】
角結膜障害が、ドライアイ、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群および角結膜炎からなる群より選択される少なくとも１種より生じる角結膜障害である請求項１記載の作製方法。
【請求項４】
作製する角結膜障害モデル動物に向けて、送風する工程を行うことを特徴とする請求項１記載の作製方法。
【請求項５】
作製する角結膜障害モデル動物を、高所に配置する工程を行うことを特徴とする請求項１記載の作製方法。
【請求項６】
作製する角結膜障害モデル動物を高所に配置し、さらに該モデル動物に向けて送風する工程を行うことを特徴とする請求項１記載の作製方法。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれかに記載の作製方法にて作製された、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うに有用な角結膜障害モデル動物。
【請求項８】
請求項１〜請求項６のいずれかに記載の作製方法にて作製された角結膜障害モデル動物の、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うに有用な角結膜障害モデル動物、その作製方法およびその使用に関する。さらに詳しくは、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物であって、該モデル動物を相対湿度３５％以下の低湿度環境下で作製することを特徴とする角結膜障害モデル動物およびその作製方法に関する。さらには、該モデル動物の、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、急速に増加してきた眼障害の１つとしてドライアイがある。ドライアイとは、一般に、涙液の量的・質的異常をきたした状態を示し、特に最近では、パソコンやビデオ等によるＶＤＴ作業や、冷暖房による部屋の乾燥等によるドライアイ患者が増加している。
【０００３】
また、このドライアイ、ドライアイに関連性があるとされるシェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群および角結膜炎等により、角結膜に障害をきたす場合がある。このような障害としては、例えば、点状表層角膜炎（ＳＰＫ）、角膜びらんおよび結膜充血等が挙げられる。
【０００４】
現在、ドライアイに対する治療法としては、主に自覚症状を軽減させる対症療法が行われている。そのような対症療法としては、例えば、人工涙液（ヒアルロン酸ナトリウム含有人工涙液等）や自己血清点等の頻回点眼、涙点閉鎖およびドライアイ保護用眼鏡の使用といった方法等が挙げられる。しかしながら、これらの対症療法は、一時的な症状軽減といった効果はあるものの、患者の負担が大きいこと、さらには、ドライアイそのものの治療効果はなく、根治的な治療ができるものではないといった欠点がある。それゆえ、ドライアイ、特にはドライアイによる角結膜障害に対し、より患者の負担が少ない対症療法や根治的な治療ができる薬剤の開発が求められている。
【０００５】
一方、薬剤の開発において、その薬剤の有効性を判断・確認する際、該薬剤が有効に作用する箇所の細胞を培養し、その培養細胞を用いて行う方法や、モデル動物を作製し、そのモデル動物に該薬剤を投与する方法等が利用されている。しかしながら、培養細胞を用いる方法は、薬剤を生体に直接投与しているわけではないため、実際に患者等に投与した場合に期待される効果が得られるかどうか判断できず、培養細胞には効果があっても、生体に投与した場合に効果が得られないという可能性がある。
【０００６】
それゆえ、近年、各種様々なモデル動物の作製が行われており、そのモデル動物により、薬剤の有効性を判断・確認することが多い。例えば、眼科に関するモデル動物としては、緑内障に関するモデル動物（例えば、特許文献１参照）や、アレルギー性結膜炎に関するモデル動物（例えば、特許文献２参照）等が開示されている。
【０００７】
さらに、本発明の目的の１つであるドライアイ治療剤の有効性を判断・確認するにあたり、モデル動物を使用する方法も開示されている（例えば、特許文献３参照）。その方法としては、目的とする治療剤を動物に点眼し、その後致死せしめ、角膜への浸透性にて判断する方法が記載されている。
【０００８】
しかしながら、該特許文献３に記載されている方法では、モデル動物を致死させるため、ドライアイ治療剤の有効性を判断・確認するにあたり、生体における治癒過程を観察することができないといった問題がある。それゆえ、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物または該モデル動物を恒常的に作製するための方法が必要であった。
【特許文献１】特開２００２−１１２６６４号公報
【特許文献２】特開平７−１６３２７０号公報（第４頁）
【特許文献３】特開２０００−３１９１９４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、上記のような欠点を改善した角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うに有用な角結膜障害モデル動物、その作製方法およびその使用を提供することにある。さらに詳しくは、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物であって、該モデル動物を相対湿度３５％以下の低湿度環境下で作製することを特徴とする角結膜障害モデル動物およびその作製方法を提供することにある。さらには、該モデル動物の、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うための使用を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明によれば、本発明の上記目的および利点は、以下により達成される。
（１）角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うに有用な角結膜障害モデル動物であって、該モデル動物を相対湿度３５％以下の低湿度環境下で作製することを特徴とする角結膜障害モデル動物の作製方法。
（２）低湿度環境下が、相対湿度３０％以下である上記（１）記載の作製方法。
（３）角結膜障害が、ドライアイ、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群および角結膜炎からなる群より選択される少なくとも１種より生じる角結膜障害である上記（１）記載の作製方法。
（４）作製する角結膜障害モデル動物に向けて、送風する工程を行うことを特徴とする上記（１）記載の作製方法。
（５）作製する角結膜障害モデル動物を、高所に配置する工程を行うことを特徴とする上記（１）記載の作製方法。
（６）作製する角結膜障害モデル動物を高所に配置し、さらに該モデル動物に向けて送風する工程を行うことを特徴とする上記（１）記載の作製方法。
（７）上記（１）〜上記（６）のいずれかに記載の作製方法にて作製された、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うに有用な角結膜障害モデル動物。
（８）上記（１）〜上記（６）のいずれかに記載の作製方法にて作製された角結膜障害モデル動物の、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うための使用。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の作製方法を用いることにより、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物を作製することができる。さらには、本発明の角結膜障害モデル動物は、相対湿度３５％以下の低湿度環境下で作製されることで、恒常的に作製される。また、本発明の作製方法にて作製されたモデル動物を、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うために使用することで、該医薬品等の評価を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の角結膜障害モデル動物の作製方法は、低湿度環境下で作製することを特徴とする。湿度環境を高湿度環境とした場合にも、角結膜障害モデル動物を得ることができる場合もあるが、恒常的に該モデル動物を得ることができるよう、低湿度環境下で作製するのが好ましい。本発明における低湿度環境は、相対湿度３５％以下とするのが好ましく、特には、相対湿度３０％以下とするのが好ましい。なお、本発明の角結膜障害モデル動物を作製するにあたり、作製期間中、この湿度を維持できる環境とするのが好ましい。
【００１３】
なお、本発明の角結膜障害モデル動物を作製する環境においては、温度環境も一定に保ち作製するのが好ましい。特に温度が、極端に低温および高温である場合、該モデル動物が致死する場合があるため注意が必要である。本発明における温度環境としては、１０℃〜３５℃とするのが好ましく、より好ましい温度環境は１５℃〜３０℃の範囲であり、特に好ましい温度環境は１８℃〜２８℃である。
【００１４】
一方、本発明者らが鋭意研究した結果、角結膜障害モデル動物の作製方法において、低湿度環境下での作製を必須として、さらに、該モデル動物にストレスを負荷することで、該モデル動物を恒常的に作製することができることが分かった。すなわち、本発明では、さらに、該モデル動物にストレスを負荷する工程を組み合わせて行うのが好ましい。該ストレスとしては、例えば、該モデル動物が、涙液の蒸発が促進される状態、身動きできない緊張状態および瞬き回数が減少する状態等になるものであるのが好ましい。
【００１５】
そのようなストレスを負荷する工程としては、例えば、（１）該モデル動物に向けて送風する工程および／または（２）該モデル動物を高所に配置する工程、等の工程を適宜組み合わせて行う方法が好ましく、特には（１）および（２）を組み合わせて行う方法がより好ましい。なお、該モデル動物にストレスを負荷する工程としては、上記に挙げた工程以外にも、例えば、該モデル動物の足をテープ等を用いて接地面に固定する工程および該モデル動物の体におもりを付ける工程等が挙げられるが、その他の方法であっても、該モデル動物が涙液の蒸発が促進される状態、身動きできない緊張状態および瞬き回数が減少する状態等になるものであれば特に制限されるものではない。本発明の角結膜障害モデル動物の作製方法においては、このように、低湿度環境下での作製に加え、さらに工程（１）および／または工程（２）を組み合わせて該モデル動物を作製することにより、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物を作製することが可能となる。以下に上記工程（１）および（２）について説明する。
【００１６】
上記の工程（１）における該モデル動物に向けての送風は、該モデル動物に対して連続して送風できるものであることが好ましく、さらには、該モデル動物の目に直接送風できるものであることが好ましい。このように、作製するモデル動物の目に直接送風することにより、該モデル動物にストレスを与えることが可能となり、さらには、該モデル動物の涙液の蒸発を促進させることが可能である。それゆえ、該モデル動物に向けて送風する工程を組み合わせることにより、本発明の角結膜障害モデル動物は、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物となりうる。また、送風を行うための道具としては、例えば扇風機等が挙げられるが、該工程を行っている間、連続して送風することができるものであれば特に制限はない。なお、送風する際の好ましい風速としては、０．０１ｍ／ｓ〜１０ｍ／ｓであるのが好ましく、より好ましくは、０．０５ｍ／ｓ〜８ｍ／ｓであり、特に好ましくは０．１ｍ／ｓ〜５ｍ／ｓである。
【００１７】
上記の工程（２）における該モデル動物を高所に配置する工程では、作製するモデル動物の目に連続して直接送風することができるよう、該モデル動物が眠らず、さらに、自ら飛び降りることができない程度の高さに該モデル動物を配置することが好ましい。このように、作製するモデル動物を高所に配置することにより、該モデル動物にストレスを与えることが可能となり、該モデル動物の瞬き回数を減少させることが可能である。本発明でいう高所とは、使用するモデル動物の体長によるが、一般的に作業がしやすい程度の高さであるのが好ましく、約５０ｃｍ〜約２ｍ程度の高さに配置するのが好ましい。さらに、該モデル動物を配置する足場の面積としては、該モデル動物が自由に向きを変えることができない程度の大きさとするのが好ましく、且つ、該モデル動物が足場から落下しない程度の大きさがあれば差し支えない。具体的には、該モデル動物を、天井から吊設されたパイプ状の物品や地面に設置された止まり木状物品等の上に、しがみつかせる状態で配置するのが好ましい。このような工程を行うことにより、該モデル動物にストレスを与えることが可能となり、該モデル動物の瞬き回数は減少する。
【００１８】
本発明の角結膜障害モデル動物の作製方法においては、相対湿度３５％以下の低湿度環境下にて、該モデル動物を１日〜３０日間処理するのが好ましい。また、処理期間はより好ましくは１日〜２０日間であり、特に好ましくは２日〜１５日間である。なお、上記工程（１）および（２）の処理を組み合わせる場合も、上記の期間処理するのが好ましい。
【００１９】
本発明の角結膜障害モデル動物の作製方法において、そのモデル動物の材料としては、一般的に実験動物として用いられているものであれば特に制限はない。好ましい実験動物としては、ラット、マウス、ウサギおよびモルモット等が挙げられるが、ウサギのような瞬膜を有する動物においては、瞬膜を切除した後に角結膜障害モデル動物の作製を行うことが好ましい。このようにして作製された角結膜障害モデル動物は、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うために有用なモデル動物となりえる。
【００２０】
上述のごとき作製方法にて作製された本発明の角結膜障害モデル動物は、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うために使用できる。具体的には、ドライアイ、シェーグレン症候群、スティーブンス・ジョンソン症候群および角結膜炎からなる群より選択される少なくとも１種より生じる角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うために使用することが好ましい。以下に、特に有用な２通りの使用を説明する。
【００２１】
第１の使用としては、本発明の角結膜障害モデル動物の作製開始時と同時に、評価を行う医薬品等の点眼等を行うことにある。本発明の角結膜障害モデル動物は、作製過程でその角結膜障害が拡大する。それゆえ、作製開始時に評価を行う医薬品等の点眼等を行うことにより、その角結膜障害の拡大を抑制または角結膜障害が治癒した場合に、その医薬品はドライアイ等による角結膜障害に対して、抑制効果を有することが明らかとなる。
【００２２】
第２の使用としては、本発明の角結膜障害モデル動物の作製完了後に、評価を行う医薬品の点眼等を行うことにある。本発明の角結膜障害モデル動物は、作製完了時に角結膜障害を有する。それゆえ、その角結膜障害モデル動物の作製完了後に、評価を行う医薬品の点眼等を行うことにより、その角結膜障害が縮小または治癒した場合に、その医薬品はドライアイ等による角結膜障害に対して、治癒効果を有することが明らかとなる。
【００２３】
本発明の作製方法にて作製された角結膜障害モデル動物は、角結膜障害の抑制または治療に用いる医薬品等の評価を行うための使用においては、上記に挙げた作製開始時または作製完了後に評価を行う医薬品の点眼等を行う他、作製過程の途中において評価を行う医薬品の点眼等を行い、その医薬品等の評価を行うことも可能である。
【００２４】
以下、本発明を実施例および比較例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２５】
以下のように、角結膜障害モデル動物を作製した。
（１）使用動物
被験動物として、照明１２時間、室温２３±２℃、相対湿度６０±１０％の環境を維持した飼育室にて、４日間馴化させた８週齢の雌性ＳＤラットを用いた。  
【００２６】
（２）モデル動物の作製方法
馴化飼育後、ラットを室温２０±１℃、相対湿度２０±５％に維持した低湿度環境下に搬入し、天井から吊設されたパイプ状の物品の上にラットを配置した。この状態にラットを配置し、さらに、ラットの正面から目に直接風が当たるよう、扇風機にて風速２〜４ｍ／ｓの送風を行った。なお、パイプ状の物品は、ラットが向きを変えることができず、且つ、落下しない程度の大きさとし、該物品の上にラットを配置した状態では、常にラットの正面から目に直接送風を受けるようにした。また、ラットは、パイプ状物品の上に、８時間配置した。なお、４時間経過後、３０分間インターバルとして、ラットをパイプ状の物品から下ろし、ケージ内に移す操作を行った。ラットを８時間パイプ状の物品上に配置した後、該ラットをパイプ状の物品から下ろし、ケージ内にて１５．５時間飼育した。なお、ラットをケージ内に移した時も、ケージに向けて風速２〜４ｍ／ｓの送風を行った。これを連続して１０日間行ったものをモデル動物とした。一方、上記の条件のうち、相対湿度のみを６０±１０％に設定し飼育したものを比較例１とした。
【００２７】
（３）障害の評価方法
モデル動物および比較例１のラットを用いて、以下の方法にて、角結膜上皮障害の１つである点状表層角膜炎（以下、ＳＰＫと略す）の評価を行った。
モデル動物および比較例１のラットをジエチルエーテルによって全身麻酔した。該ラットの前眼部に、リン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと略す）に溶解した３％フルオレセインナトリウム溶液１μＬを点眼し、強制的に瞬目させた後、１ｍＬのＰＢＳで前眼部を２回洗浄し、余分なフルオレセインナトリウムを洗い流した。その後、コバルトブルーライトを照射し、スリットランプで観察後、写真撮影を行った。撮影した角膜上皮のフルオレセイン染色のパターンについて、ＡＤ分類を参考に設定した以下の分類を用いて、フルオレセインスコアを判定した。その結果を表１に示す。また、試験後のフルオレセインスコアを評価するために、試験開始前のフルオレセインスコアも測定した。なお、それぞれの条件につき１１匹２２眼を作製し、評価を行った。
１点：弱いＳＰＫが角膜の一部に見られる
２点：弱いＳＰＫが角膜全体に見られるまたは強いＳＰＫが角膜の一部に見られる
３点：強いＳＰＫが角膜全体に見られる
【００２８】
【表１】
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【００２９】
表１の結果より、相対湿度６０±１０％の高湿度環境下にて飼育した比較例１のラットにおいては、試験開始前のフルオレセインスコアと比較して、ほとんど変化が見られないことが分かった。この結果は、本発明の角結膜障害モデル動物の作製方法の付加的条件である送風を行っても、湿度条件が低湿度条件下でなければ、医薬品等の評価を行う際に、有用となるモデル動物を恒常的に作製することができないことを意味する。一方、これに対して、相対湿度２０±５％の低湿度環境下にて飼育したモデル動物においては、１０日間飼育後、フルオレセインスコアは約６倍となっており、試験開始前と比較すると、より重篤なＳＰＫが生じていることが確認された。この結果は、すなわち、以下の２点が示されることを意味する。（１）低湿度環境下において、本発明の角結膜障害モデル動物の作製方法の付加的条件である送風をさらに行うことで、医薬品等の評価を行う際に、有用となるモデル動物を恒常的に作製することができる。（２）本実施例により作製された角結膜障害モデル動物は、一般的に、ヒトドライアイ疾患の診断基準として用いられているＳＰＫが生じたことから、本発明の角結膜障害モデル動物は、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物であると考えられる。
【実施例２】
【００３０】
上記の方法にて作製したモデル動物を用いて、以下の方法にて、涙液量の測定を行った。
上記の方法にて作製したラットに塩酸オキシブブロカインを点眼し麻酔した後、綿糸を眼瞼と眼球の間に６０秒挿入し、涙液を採取した。涙液量は、綿糸が濡れた長さ（ｍｍ）を測定することで評価した。涙液量の測定は、ラットを上記低湿度環境下に搬入する前日（ｂｅｆｏｒｅ）、飼育１日目、５日目および１０日目に実施した。なお、飼育１日目については、ラットをパイプ状の物品上へ配置し、８時間経過時（８ｈ）のみ測定し、飼育５日目および１０日目については、配置した直後（０ｈ）および８時間経過時（８ｈ）の２回測定した。また、測定は１６眼について行い、ｂｅｆｏｒｅの結果に対して、対応あるｔ−検定を行った。結果を図１に示す。
【００３１】
図１より、低湿度環境下にラットを搬入し送風を行うと共に、ラットをパイプ状の物品の上に配置して、ラットの正面から目に直接送風するようにしたものでは、飼育１日目以降、すべての測定日において、涙液量は飼育前と比較して有意に低いことが分かった。また、飼育５日目および飼育１０日目に、ラットをパイプ状の物品上に配置する直前においても、涙液量は元の状態に戻っていないことが分かった。この結果から、本発明の条件にて、角結膜障害モデル動物を作製することで、該モデル動物を恒常的に作製できることが分かった。また、本実施例により作製された角結膜障害モデル動物は、一般的に、ヒトドライアイ疾患の診断基準として用いられている涙液量の低下が生じたことから、本発明の角結膜障害モデル動物は、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物であると考えられる。
【実施例３】
【００３２】
上記の方法にて作製したモデル動物を用いて、以下の方法にて、角膜上皮のバリア機能の変化を調べた。
上記の方法にて作製したラットをペントバルビタールナトリウムよって全身麻酔した。該ラットの前眼部に、ＰＢＳに溶解した０．５％フルオレセインナトリウム溶液を５μＬ点眼し、強制的に瞬目させた。その後、１０分間、強制的に閉眼させ、ＰＢＳで前眼部を洗浄し、余分なフルオレセインナトリウムを洗い流した。続いて、２０分間、強制的に閉眼させ、スリットランプフルオロフォトメーター（ＦＬ−５００  興和（株））で、フルオレセイン蛍光透過性（ｐｈｏｔｏｎ／ｍｓｅｃ）を調べた。測定は、上記低湿度環境下に搬入する前日（ｂｅｆｏｒｅ）、飼育５日目および１０日目に実施した。なお、飼育５日目および１０日目の測定は、ラットをパイプ状の物品上へ配置し、８時間経過時（８ｈ）に測定した。また、測定は１１眼行い、ｂｅｆｏｒｅの結果に対して、対応あるｔ−検定を行った。結果を図２に示す。
【００３３】
図２より、低湿度環境下にラットを搬入し送風を行うと共に、ラットをパイプ状の物品の上に配置して、ラットの正面から目に直接送風を受ける工程を行ったものでは、飼育５日目では飼育前と比較して有意に、また、飼育１０日目においても、飼育前よりも角膜バリア機能が低下している傾向が認められた。この結果から、本発明の角結膜障害モデル動物は、ドライアイになる要因の１つとして考えられる角膜バリア機能の低下が見られたことから、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物であると考えられる。
【実施例４】
【００３４】
上記の方法にて作製したモデル動物を用いて、以下に示す瞬き回数および涙液クリアランステストを行った。
（４）瞬き回数の測定
上記の方法にて作製したラットを、ビデオを用いて１時間撮影し、瞬き回数を測定した。瞬目回数は、１時間を１２ポイントに区切り、５分ごとの回数をカウントし平均値を求めた。測定は、ラットを上記低湿度環境下に搬入する前日（ｂｅｆｏｒｅ）、飼育１日目、５日目および１０日目に実施した。なお、飼育１日目、５日目および１０日目については、ラットをパイプ状の物品上へ配置直後（０ｈ）および７時間経過時（７ｈ）に測定を開始した。また、測定は４眼行い、ｂｅｆｏｒｅの結果に対して、対応あるｔ−検定を行った。結果を図３に示す。
【００３５】
（５）涙液クリアランステスト
上記の方法にて作製したラットに、１％フルオレセインナトリウム溶液２μＬ点眼し、２時間後、綿糸を眼瞼と眼球の間に１５秒挿入し、涙液を採取した。この採取した涙液について、蛍光強度を測定した。測定は、ラットを上記低湿度環境下に搬入する前日（ｂｅｆｏｒｅ）、飼育１日目、５日目および１０日目に実施した。なお、飼育１日目、５日目および１０日目については、ラットをパイプ状の物品上へ配置２時間後（２ｈ）および８時間経過時（８ｈ）の２回実施した。また、測定は８眼行い、ｂｅｆｏｒｅの結果に対して、対応あるｔ−検定を行った。結果を図４に示す。
【００３６】
図３より、低湿度環境下にラットを搬入し送風を行うと共に、ラットをパイプ状の物品の上に配置して、ラットの正面から目に直接送風する工程を行ったものでは、飼育１日目以降、すべての測定時において、瞬き回数は飼育前と比較して有意に低いことが分かった。また、図４より、低湿度環境下に搬入したラットでは、飼育５日目および飼育１０日目の配置終了時において、飼育前よりも有意に、また、その他の測定時においても、飼育前よりも涙液中の蛍光強度が大きくなっている傾向にあることが分かった。この結果は、飼育前よりも、涙液のクリアランスが悪化していることを意味している。また、図１の結果から、本発明の方法にて作製したモデル動物は、涙液量も減少していたことから、涙液クリアランスの悪化は、涙液量の減少と瞬き回数の減少の両方の要因が影響しているものと考えられる。以上のことから、本発明の角結膜障害モデル動物は、ドライアイを生じている可能性が高く、事実、ドライアイの疑いがあると考えられている涙液クリアランスの悪化の傾向が見られたことから、ドライアイ等により生じる角結膜障害に、より類似した障害を有する角結膜障害モデル動物であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】ラットの涙液量を測定した図である。
【図２】ラットの角膜上皮のバリア機能を測定した図である。
【図３】ラットの瞬き回数を測定した図である。
【図４】ラットの涙液クリアランスを測定した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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