(57)【要約】【課題】オキナワモズクから、免疫賦活作用を有する新規な３種のオキナワモズク由来フコイダンを提供する。【解決手段】オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た免疫賦活作用を有する新規なオキナワモズク由来フコイダンであり、生体内で免疫賦活作用を有し、毒性も極めて低い。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール分画処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量５．８万、フコース３０．１％、ガラクトース２７．６％、ウロン酸８．７％、硫酸基７．５％、灰分２６．１％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
【請求項２】
オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量５．８万、フコース３０．１％、ガラクトース２７．６％、ウロン酸８．７％、硫酸基７．５％、灰分２６．１％を有効成分とする新規なオキナワモズク由来フコイダンを含有することを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項３】
オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１２．１万、フコース２２．３％、ガラクトース２９．２％、ウロン酸４．６％、硫酸基２１．４％、灰分２２．５％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
【請求項４】
オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１２．１万、フコース２２．３％、ガラクトース２９．２％、ウロン酸４．６％、硫酸基２１．４％、灰分２２．５％を有効成分とする新規なオキナワモズク由来フコイダンを含有することを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項５】
オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１６．２万、フコース１０．６％、ガラクトース３０．４％、ウロン酸３．２％、硫酸基３２．６％、灰分２３．２％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
【請求項６】
オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１６．２万、フコース１０．６％、ガラクトース３０．４％、ウロン酸３．２％、硫酸基３２．６％、灰分２３．２％を有効成分とする新規なオキナワモズク由来フコイダンを含有することを特徴とする免疫賦活剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】本発明は、新規なオキナワモズク由来フコイダン及び免疫賦活剤に関する。
【背景技術】
【０００２】食品蛋白質を酵素分解して得られるペプチドは、免疫賦活剤としての利点を持つ。
【特許文献１】特開平０６−２５６３８９号公報
【特許文献２】特開平０７−１３８２８７号公報
【特許文献３】特開平０８−２２５５９４号公報
【特許文献４】特開平０８−２３１５８９号公報
【特許文献５】特開２００２−２６５３７０号公報
【特許文献６】特開２００２−２６５４９６号公報
【非特許文献１】Ｊ．Ｌ．Ｄｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．：Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．，１０１，８１０−８２４（１９８４）
【非特許文献２】Ｆ．Ｐａｒｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．：Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４５，６７７−６８２（１９８４）
【非特許文献３】Ｊ．Ｂｅｒｔｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．：ＦＡＢＳ  Ｌｅｔｔ．，２１８，５５−５８（１９８７）
【非特許文献４】Ａ．Ｊ．Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４，５９９（１９６８）
【非特許文献５】藤原ら：栄食誌，４３（３），２０３−２０８（１９９０）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】摂取された食品は消化管の中で分解、吸収される過程で宿主免疫系への種々の影響を与えることが知られている〔非特許文献１〕。宿主の免疫反応は免疫担当細胞であるリンパ球及びマクロファージから分泌される生理活性物質によって調節、制御されていることが知られているが、かたや、食品成分中にも宿主免疫系を調節する物質の存在が知られている。その中には、食品蛋白質を酵素分解したペプチドとして、ヒトカゼイン由来Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ、ウシカゼイン由来Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ、ヒトβカゼイン由来Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒのものが知られておりいずれもマクロファージの活性を上昇させることが見出されている〔非特許文献２，３〕。これらを例にとるまでもなく、生体内に摂取された食品成分はそのままの形かあるいは分解された形で免疫応答系細胞と接する。このような食品成分と免疫応答系細胞との相互作用は、これまで知られているところでは、たとえば免疫系の異常状態である食品アレルギーを引き起こす場合があり、免疫系の賦活あるいは抑制という形となって観察されている。免疫応答系を調節する本来の生体内物質としてインターロイキンをはじめとするサイトカイニンと呼ばれる一群のポリペプチドであり、その機能及び構造について多くの情報が集積しつつある中で、発明者らは多くの免疫賦活ペプチド［特許文献１，２，３，４，５］を報告してきた。一方、海洋生物由来の生理活性物質で免疫調節機能を持つもの、更に、これを食品素材及び健康補助食品としての免疫調節機能を持つものは少なく、未だ医薬品としての開発が進んでいるとの報告はないという状況の中で［特許文献６］、特に、オキナワモズク由来フコイダンに免疫賦活作用を持つことは未だ知られていない。
【課題を解決するための手段】
【０００４】本発明者は、オキナワモズク粉末から薬理作用を有する物質を検索し、新規な３種のオキナワモズク由来フコイダンが強い免疫賦活作用を有することを見出した。そして、これらオキナワモズク由来フコイダンを医薬品として実用化するための研究を鋭意行った。その結果、これらオキナワモズク由来フコイダンが免疫賦活活性を有し、天然物由来の免疫賦活剤としての有用性を見出した。本発明は係る知見に基づくものである。以下に本発明を詳細に説明する。本発明に係る新規な３種のオキナワモズク由来フコイダンは、
（１）オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量５．８万、フコース３０．１％、ガラクトース２７．６％、ウロン酸８．７％、硫酸基７．５％、灰分２６．１％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
（２）オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１２．１万、フコース２２．３％、ガラクトース２９．２％、ウロン酸４．６％、硫酸基２１．４％、灰分２２．５％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
（３）オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１６．２万、フコース１０．６％、ガラクトース３０．４％、ウロン酸３．２％、硫酸基３２．６％、灰分２３．２％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
であり、常温における性状は白色の粉末である。【０００５】本発明に係る新規な３種のオキナワモズク由来フコイダンは、オキナワモズクから分離分画する場合には、これらオキナワモズク由来フコイダンを含有している生オキナワモズクを用い凍結乾燥し、凍結乾燥されたオキナワモズクを微粉砕した後、加水してオキナワモズクのホモジネイトを作製する。更に、このオキナワモズクのホモジネイトを塩酸にてｐＨ２．０に調整し、生じる沈殿物を超遠心分離機（例えば、シャープレス）を用いて回転数１０，０００ｒｐｍ〜１５，０００ｒｐｍで遠心し、沈殿物（主にアルギン酸など）を取り除く。その後、この遠心上清液をアルコール類（例えば、イソプロピルアルコール）で分画する。オキナワモズク由来フコイダンを多く含む分画部分を、弱塩基性陰イオン交換ゲル（例えば、ファルマシア製のＤＥＡＥ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ａ−５０）に負荷した後、その吸着溶出された分画部分から免液賦活活性を含有する分画部分としてオキナワモズク由来フコイダン分画部分を得ることができる。更に、得られた各分画部分をゲルろ過（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２００）によって分画し、分画分子量６万〜１７万を分画する。【０００６】本発明に係る新規な３種のオキナワモズク由来フコイダンは、静脈内への繰り返し投与を行った場合、抗体産生を惹起せず、アナフィラキシーショックを起こさせない。又、これらフコイダンは投与後、生体内の分解酵素により徐々に分解される為、毒性は極めて低く安全性は極めて高い（ＬＤ５０＞５０００ｍｇ／ｋｇ：ラット経口投与）。
これらオキナワモズク由来フコイダンは、通常用いられる賦形剤等の添加物を用いて注射剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等に調整することができる。投与法としては、通常は免疫不全症を有している哺乳類（例えば、ヒト、イヌ、ラット等）に注射すること、あるいは経口投与することがあげられる。投与量は、例えば、動物体重１ｋｇ当たりこれらオキナワモズク由来フコイダンを０．１〜１００ｍｇの量である。投与回数は、通常、１日１〜４回程度であるが、投与経路によって、適宜、調整することができる。上記の各種製剤において用いられる賦形剤、結合剤、滑沢剤の種類は、特に限定されず、通常の注射剤、散剤、顆粒剤、錠剤あるいはカプセル剤に用いられるものを使用することができる。【０００７】錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤に用いる添加剤としては、下記のものをあげることができる。賦形剤としては、結晶セルロース等の糖類、マンニトール等の糖アルコール類、でんぷん類、無水リン酸カルシウム等；結合材としてはでんぷん類、ヒドロキシルプロピルメチルセルローズ等；崩壊剤としてはカルボキシメチルセルロース及びそのカリウム塩類；滑沢剤としてはステアリン酸及びその塩類、タルク、ワックス類をあげることができる。又、製剤の調整にあたっては、必要に応じメントール、クエン酸およびその塩類、香料等の矯臭剤を用いることができる。注射用の無菌組成物は、常法により、これらフコイダンを、注射用水、生理食塩液及びキシリトールやマンニトールなどの糖アルコール注射液、プロピレングリコールやポリエチレングリコール等のグリコールに溶解又は懸濁させて注射剤とすることができる。この際、緩衝液、防腐剤、酸化防止剤等を必要に応じて添加することができる。これらオキナワモズク由来フコイダンを含有する製剤は凍結乾燥品又は乾燥粉末の形とし、用時、通常の溶解剤、例えば、水又は生理食塩液にて溶解して用いることもできる。
【発明の効果】
【０００８】本発明に係る新規な３種のオキナワモズク由来フコイダンは、優れた免疫賦活作用を有し、これらオキナワモズク由来フコイダンをウサギに経口投与すると、末梢血リンパ球のコンカナバリンＡ（以下、ＣｏｎＡと略記する）刺激に対する幼若化反応が有意に上昇し、又、これらオキナワモズク由来フコイダンをＣ５７ＢＬ／６マウスに経口投与すると抗体産生能が上昇した。更に、これらオキナワモズク由来フコイダンのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける優れた免疫賦活作用として、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスより得た脾細胞に対してこれらオキナワモズク由来フコイダンは強い幼若化能（マイトジェン活性）を示した。
【発明を実施するための最良の形態・実施例】
【０００９】本発明は、医薬品として有用性を有する下記のオキナワモズク由来フコイダン及びそのオキナワモズク由来フコイダンを有効成分とする免疫賦活剤に関する。
（１）オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量５．８万、フコース３０．１％、ガラクトース２７．６％、ウロン酸８．７％、硫酸基７．５％、灰分２６．１％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
（２）オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１２．１万、フコース２２．３％、ガラクトース２９．２％、ウロン酸４．６％、硫酸基２１．４％、灰分２２．５％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
（３）オキナワモズクを凍結乾燥、更に微粉砕した後、イソプロピルアルコール処理し、弱塩基性イオン交換ゲルで分離分画して得た平均分子量１６．２万、フコース１０．６％、ガラクトース３０．４％、ウロン酸３．２％、硫酸基３２．６％、灰分２３．２％を有効成分として含有することを特徴とする新規なオキナワモズク由来フコイダン。
以下に実施例として、製造例及び試験例を記載し本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１０】製造例１
生オキナワモズク３ｋｇを凍結乾燥にかけ、凍結乾燥オキナワモズクを得、更に、ジェットミルを用い凍結乾燥したオキナワモズクを微粉砕化し、メッシュ２００以上のオキナワモズク粉末１４０ｇを得た。微粉砕化されたオキナワモズク粉末に３倍量の清水を加え撹拌しホモジネイト液を得た。このホモジネイト液を１規定の塩酸にてｐＨ２．０に調整して、生じる沈殿物（主に、アルギン酸）を超遠心分離機（シャープレス）にて遠心分離（１０，０００〜１５，０００ｒｐｍ）し、沈殿物（主に、アルギン酸）を除去した。次に、アルギン酸除去された遠心上清液に対し、冷所（５℃）にて５％〜９５％のイソプロピルアルコール分画を行った。その後、再度、遠心分離（１０，０００〜１５，０００ｒｐｍ）し沈殿物３０ｇを得た。このようにして、イソプロピルアルコール分画によって得られた沈殿物３ｇを、再度、清水にて溶解した後、予め０．０５規定塩酸水で緩衝化したＤＥＡＥ  ＳｅｐｈａｄｅｘＡ−５０カラム（カラムサイズ；６０Ｘ１００ｃｍ）に負荷し、溶出液として１モル食塩水を用いて、流速６０ｍＬ／ｈｒ、各分画量１０ｍＬでイオン交換ゲルクロマトグラフィーした。その結果は図１に示すとおりである。上記クロマトグラフ中、分画番号５〜５４をＡ分画部分、分画番号５７〜６１をＢ分画部分及び分画番号６５〜７０をＣ分画部分とし、これらオキナワモズク由来フコイダンの各分画部分（Ａ、Ｂ及びＣ分画部分）を集めて、各々をＳｅｐａｈｄｅｘ  Ｇ−２００カラム（カラムサイズ；３０Ｘ２００ｃｍ）に負荷し、流速３０ｍＬ／ｈｒ、各分画量１０ｍＬでゲル濾過した。その結果を図２に示すが、３種のオキナワモズク由来フコイダン各分画部分（Ａ、Ｂ及びＣ分画部分）の分子量分布は以下の通りである。
（１）Ａ分画；分子量５．８万
（２）Ｂ分画；分子量１２．１万
（３）Ｃ分画；分子量１６．２万
これらＤＥＡＥ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ａ−５０、Ｓｅｐａｈｄｅｘ  Ｇ−２００カラムクロマトグラフィーを繰り返して大量取得した免疫賦活作用の強い分画部分（Ａ、Ｂ及びＣ分画部分）を集め、凍結乾燥して３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画粉末）を得た。
これら分離精製によって得られた本発明に係る３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画粉末）の成分分析を行った。Ａ、Ｂ及びＣ分画粉末１０ｍｇを１規定の硫酸約３ｍＬに溶かし、１００℃、２時間、加水分解した後ＮａＨＣＯ３で中和した。フコース含量はシステイン硫酸法を適応して、及びガラクトース含量はアンスロン法で定量した。又、ウロン酸含量は、１．７５規定の硫酸で１００℃、２時間、加水分解した液に、カルバゾール硫酸を適用して定量した。この加水分解液は、ナフトレゾルシン反応、カルバゾール硫酸反応ともに陽性であるが、アミノ糖の存在は認められなかった。更に、硫酸根（硫酸基）は試料を硝酸と過塩素酸で湿式灰化した後、ＢａＳＯ４重量法により定量した。上記の成分分析の結果、オキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画粉末）の成分分析は以下の通りである。
（１）Ａ分画粉末：フコース；３０．１％、ガラクトース；２７．６％、ウロン酸；８．７％、硫酸基；７．５％、灰分；２６．１％
（２）Ｂ分画粉末：フコース；２２．３％、ガラクトース；２９．２％、ウロン酸；４．６％、硫酸基；２１．４％、灰分；２２．５％
（３）Ｃ分画粉末：フコース；１０．６％、ガラクトース；３０．４％、ウロン酸；３．２％、硫酸基；３２．６％、灰分；２３．２％
これら分離精製によって得られた本発明に係る３種のオキナワモズク由来フコイダンは、以下に示す試験によって薬理効果が確認された
【００１１】試験例１
（ウサギ末梢血リンパ球のコンカナバリンＡ刺激に対する幼若化反応の測定）ウサギは成熟雄性日本白色種（ＫＢＬ：ＪＷ、ＳＰＦ、体重２．０ｋｇ）を（株）北山ラベスより購入し、１週間予備飼育を行った後、健常な動物を試験に供した。飼育は温度２３±２℃、湿度５５±１０％に保った飼育室内の金属製個別ゲージで行った。飼料はオリエンタル酵母社製ＲＣ４を１日１２０ｇ給餌し、水は自家揚水（水道法、水質基準適合）を自由に摂取させた。１群３例のウサギを用い、製造例１におけるオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画粉末）２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを体重１ｋｇ当たり５ｍｌの割合で３０日間連続投与した。対照群には同容量の溶媒を投与した。投与開始日並びに最終投与の翌日、各ウサギの耳静脈からヘパリン処理した注射器で１０ｍｌの血液を採取し、３時間以内に、リンパ球分離並びに３Ｈ−サイミジン取り込み能測定法による幼若化反応を実施した。各リンパ球の取り込んだ放射能から次式により刺激指数（Ｓ．Ｉ．）を算出した。
Ｓ．Ｉ．＝（Ｃｏｎ  Ａを加えた培養系）／（Ｃｏｎ  Ａを加えない培養系）
本発明に係る３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末（２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を３０日間経口投与した後の、ウサギ末梢血リンパ球のＣｏｎ  Ａ刺激による幼若化反応（Ｓ．Ｉ．値）で表わし、その結果を図３に示した。
【００１２】試験例２
（マウス脾細胞の抗体産生能測定）マウスは雄性、５週齢（Ｓｌｃ：Ｃ５７ＢＬ／６、ＳＰＦ）を日本エスエルシー（株）より購入し、１週間予備飼育を行った後、健常な動物を試験に供した。マウスの飼育は温度２３±２℃、湿度５５±１０％に保った飼育室内のエアコンゲージで行った。飼料はオリエンタル酵母社製ＭＦ、水は自家揚水（水道法、水質基準適合）を自由に摂取させた。１群３例のマウスを用い、製造例１におけるオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画粉末）２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙを体重１０ｇ当たり０．１ｍｌの割合で１０日間連続経口投与した。投与開始から５日後、それぞれのマウスの尾静脈にヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ、デンカ生研社製）５×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍｌを０．２ｍｌ投与して免疫した。免疫の５日後、各群のマウスから脾臓を採取し、Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｍｅｄｉｕｍ（ＥＭＥＭ、日水製薬社製）を入れたシャーレ内で脾細胞を遊離させた。リン酸緩衝液（ＰＢＳ）で３回洗浄した後、ＥＭＥＭで２．５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整した脾細胞と５０％ＳＲＢＣ浮遊液及びモルモット乾燥補体（デンカ生研社製）を８：１：１の割合で混合した。Ａ．Ｊ．Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍらの方法〔非特許文献４〕に準じて３７℃で９０分反応後、溶血斑（ＰＦＣ；ｐｌａｑｕｅ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｃｅｌｌ）を計測した。
本発明に係る３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末（２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を１０日間経口投与したマウス脾細胞での抗体産生能を抗体産生細胞数で表わし、その結果を図４に示した。
【００１３】試験例３
（マウス脾細胞幼若化能の測定）藤原らの方法〔非特許文献５〕に準じて脾細胞の幼若化反応（マイトジェン活性）を測定した。製造例１における３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画粉末）を、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＲＰＭＩ  １６４０培地（日水製薬社製）に対して溶解（最大濃度１ｍｇ／ｍｌ）し、０．２μのフィルター濾過滅菌後、同培地により２倍ごと段階希釈を行ったものを供試サンプルとした。
Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウス（６週齢、雄性）の脾臓を無菌的に摘出し、ワイヤーメッシュ上で２５ｍＭＨＥＰＥＳ−ＲＰＭＩ  １６４０培地を滴下しながら穏やかに磨砕し、通過液をさらにもう一組のワイヤーメッシュを通すことにより単一細胞浮遊液を調製した。脾細胞は同培地にて３回洗浄後、牛胎児血清１０％を含む２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＲＰＭＩ  １６４０培地に浮遊させ、９６ウェルマイクロプレートに５×１０５個／１００μｌ／ウェルとなるように分注した。その後、前記の供試サンプル１０μｌを加え、５％Ｃ０２雰囲気下、３７℃で培養した。尚、陰性対照には２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＲＰＭＩ  １６４０培地１０μｌを、陽性対照にはコンカナバリンＡ（Ｃｏｎ  Ａ、終濃度１μｇ／ｍｌ）並びにリポポリサッカライド（ＬＰＳ、終濃度１００μｇ／ｍｌ）を供試サンプルの代わりに加えている。その後、０．５％の３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５ジフェニル−２Ｈテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）溶液を１０μｌ加え、さらに３時間培養を行い、しかる後、生じたＭＴＴ−フォルマザンを酸−イソプロパノール溶液（０．０４Ｎ濃度に塩酸を添加）１００μｌを加えて溶解し、ＥＩＡリーダーにて５９５ｎｍの吸光度を測定した。データは陰性対照の値を１００とした相対値にて表示している。マイトジェン活性の結果は図５に示すとおりである。
【００１４】  以上の試験の結果、本発明に係る新規な３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて有意に免疫機能に影響を及ぼすことが確認された。さらに、本発明に係る新規な３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて有意にマイトジェン活性を示すことが確認され、免疫賦活剤として有用である。
尚、本発明に係る新規な３種のオキナワモズク由来フコイダン粉末は、構造的にその粘質多糖類において、構造中に採用することもできる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係るオキナワモズク由来フコイダンの、製造例１におけるＤＥＡＥ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ａ−５０カラムクロマトグラフィーによる免疫賦活フコイダンの分離精製の結果を示す図である。
【図２】本発明に係るオキナワモズク由来フコイダンの、製造例１におけるＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２００カラムクロマトグラフィーによる免疫賦活フコイダンの分子量分布の結果を示す図である。
【図３】本発明に係るオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画部分）投与時の、ウサギ末梢血リンパ球のコンカナバリンＡ刺激による幼若化反応を示す図である。
【図４】本発明に係るオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画部分）投与時の、マウス脾細胞での抗体産生能を示す図である。
【図５】本発明に係るオキナワモズク由来フコイダン粉末（Ａ、Ｂ及びＣ分画部分）投与時の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるマイトジェン活性を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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