(57)【要約】【課題】  本発明の課題は、不安定な糖アミンを経由することなく、簡便に収率良くＮ−グリコシルアミドを得ることにある。【解決手段】  糖供与体としてイミデート糖を選択し、糖受容体としてアミドを選択し、アミドに直接Ｎ−グリコシル化する方法を選択した。そして、良好な収率でＮ−グリコシルアミドを得るために、トリアルキルシリルトリフラートとモレキュラーシーブスを用いた。これにより上記課題を解決した。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式
【化１】
2005187441.tif 000004
（Ｒ１は水酸基が保護されているグルコシル基、ガラクトシル基、マンノシル基、シアリル基、または水酸基、アミノ基が保護されているグルコサミニル基から選択され、Ｒ２は水素、置換基を有していても良いアルキル基、アリール基から選択され、ＸはＦ、Ｃｌから選択される）で示されるイミデート糖にルイス酸とモレキュラーシーブスの存在下、下記構造式
【化２】
2005187441.tif 000005
（Ｒ３は水素、トリメチルシリル基から選択され、Ｒ４は置換基を有していても良いアルキル基、アリール基、アミノ基とカルボキシル基が保護されている２−アミノ−２−カルボキシエチル基から選択される）で示されるアミドを反応させることを特徴とするＮ−グリコシルアミドを製造する方法。
【請求項２】
ルイス酸がトリメチルシリルトリフラート、トリエチルシリルトリフラート、トリブチルシリルトリフラートである請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、アミドのＮ−グリコシル化に関するものであって、医薬、農薬などに利用されるグリコシルアスパラギン誘導体を始めとするＮ−グリコシルアミドを製造する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】  糖は動植物の生命維持において極めて重要な役割を演じており、生体内で種々の形で存在する。近年、糖鎖がタンパク質あるいは脂質と結合した糖タンパク質、糖脂質の機能が注目されている。ことに、糖タンパク質は生体内の基本的な生理現象である造血機能を担っており、多方面で研究されつつある。この糖タンパク質の一つとして糖とアスパラギンがアミド結合により結合したアスパラギン結合型糖タンパク質がある。アスパラギン結合型糖タンパク質は比較的長い糖鎖で、１０〜２０残基の糖が連なっており、多様な構造を有している。したがって、構造が解明されていて、しかも純粋な糖タンパク質を天然から得ることは非常に難しい。そのため、この糖タンパク質を化学合成によって得ようという試みがなされている。アスパラギン結合型糖タンパク質を化学合成する方法は糖アミノ酸にアミノ酸をアミド化していくステップワイズ法を用いるのが一般的である。ペプチド部位と糖鎖部位は従来法で合成することが可能であるが、キーとなるＮ−グリコシルアミドの構築が課題となっており、Ｎ−グリコシルアミドの簡便な合成法が求められている。【０００３】  従来Ｎ−グリコシルアミドを合成する方法として、糖アミンとカルボン酸の縮合によりＮ−グリコシルアミドを合成する方法（例えば、非特許文献１参照）が報告されている。また、ペンテニルグリコシド（例えば、非特許文献２参照）や、糖イソシアネート（例えば、非特許文献３参照）を用いてＮ−グリコシルアミドを合成する方法が報告されている。そして、フェニル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−Ｄ−グルコピラノシドＳ−オキシドを糖供与体としＮ−トリメチルシリルアミドと反応させてＮ−グルコシルアミドを合成する方法（例えば、非特許文献４参照）が報告されている。【０００４】
【非特許文献１】Ｇ．Ｓ．Ｍａｒｋｓ，Ａ．Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６１，４８７２
【非特許文献２】Ａ．Ｌ．Ｈａｎｄｌｏｎ，Ｂ．Ｆｒａｓｅｒ−Ｒｅｉｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１５，３７９６（１９９３）
【非特許文献３】Ａ．Ｙ．Ｋｈｏｌｒｌｉｎ，Ｓ．Ｅ．Ｚｕｒａｂｙａｎ，Ｒ．Ｇ．Ｍａｃｈａｒａｄｚｅ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，８５，２０１（１９８０）
【非特許文献４】Ｄ．Ｋａｈｎｅ，Ｓ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｙ．Ｃｈｅｎｇ，Ｄ．Ｖ．Ｅｎｇｅｎ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１１，６８８１（１９８９）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  しかしながら、糖アミンとカルボン酸の縮合によりＮ−グリコシルアミドを合成する方法は、糖のアノマー化、糖の二量化、アミノ酸のエピマー化、βペプチドの副生という問題点を有している。ペンテニルグリコシドを糖供与体として用いる方法は、グリコシルアミドを得るために、まずＮ−アセチル−Ｎ−グリコシルアミドを合成した後、脱アセチル化するという２段階の反応を行わなければならない。糖イソシアネートを糖供与体として用いる方法は高い収率でＮ−グリコシルアミドを合成することができるが、３日間という非常に長い反応時間が必要であるという問題点を有している。そして、フェニル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−Ｄ−グルコピラノシドＳ−オキシドを糖供与体としＮ−トリメチルシリルアミドと反応させてグルコシルアミドを合成する方法は、１２時間の反応で収率６６％であり、到底満足できるものではない。以上のことから、簡便に収率良く行えるＮ−グリコシルアミドの合成法が強く求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】  そこで，発明者らは鋭意研究を重ね，本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、ルイス酸とモレキュラーシーブスの存在下、イミデート糖にアミドを反応させることによりＮ−グリコシルアミドを合成する方法である。【０００７】  本発明の代表的な例として１−Ｎ−アセチル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アミンの製造法を示す。これは本発明の有用性を明らかにするための例示であって、本発明を限定するものではない。【０００８】  本発明は、下記反応式【０００９】
【化１】
2005187441.tif 000002
【００１０】で示すことができる。Ｎ−グリコシルアミドは、ルイス酸とモレキュラーシーブスの存在下、トリクロロアセトイミデートを脱離基とするガラクトースとＮ−トリメチルシリルアセトアミドの反応により合成することができる。ここで用いるルイス酸はトリメチルシリルトリフラート（ＴＭＳＯＴｆ）、トリエチルシリルトリフラート（ＴＥＳＯＴｆ）、トリブチルシリルトリフラート（ＴＢＳＯＴｆ）等である。使用する溶媒は塩化メチレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、トルエン等の有機溶媒やこれらの混合溶媒である。ことにアセトニトリル中、ＴＭＳＯＴｆの存在下では、８６％という高い収率で反応が進行する。【００１１】  本発明に係るＮ−グリコシルアミドの合成法は自動合成装置に適用でき、複数の化合物を一度に合成することができる。以下に自動合成装置によるＮ−グリコシルアミドの合成の例を示す。アセトニトリル中、ＴＭＳＯＴｆとモレキュラーシーブスの存在下、糖供与体として１位にトリクロロアセトイミデート基を有するガラクトース、グルコース、マンノース誘導体を、糖受容体としてアセトアミド、カプロン酸アミド、ベンズアミド、Ｎ−アリルオキシカルボニル−Ｌ−アスパラギンベンジルエステルを用い、グリコシル化反応を行った。その結果、得られたＮ−グリコシルアミドの収率を以下に示す。【００１２】
【表１】
2005187441.tif 000003
【００１３】  以上のように本発明に関するＮ−グリコシルアミドの合成法は、脱離基としてイミデートを有するガラクトース、グルコース、マンノース誘導体と様々なアミドに適用することができる。そして、簡便で収率良くＮ−グリコシルアミドを合成することができる。
【発明の効果】
【００１４】  以上のように本発明は、ルイス酸とモレキュラーシーブスの存在下、イミデート糖とアミドを反応させることにより温和な条件で、収率良くＮ−グリコシルアミドを合成することができる。そして、様々なイミデート糖とアミドに適用することができる。この反応は極めて重要で、アスパラギン結合型糖タンパク質の合成に必要不可欠である糖アミノ酸を提供することができる。
【実施例】
【００１５】実施例１
１−Ｎ−アセチル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アミンの合成法
２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロイミデート２２．６ｍｇ（０．０３２３ｍｍｏｌ）とモレキュラーシーブ４Ａを塩化メチレン（０．６５０ｍｌ）中で混合し、室温で１時間攪拌した。この混合物にＮ−トリメチルシリルアセトアミド１２．６ｍｇ（０．０９７０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下１０分間攪拌した後、混合物を０℃まで冷却し、その混合物にトリブチルシリルトリフラート３．７５μｌ（０．０３２３ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を０℃で２時間攪拌し、室温まで暖めた。室温で３時間攪拌した後、その反応混合物にトリエチルアミン４．４６μｌ（０．０３２３ｍｍｏｌ）を加えてクエンチし、吸引ろ過し、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４８：５２）で精製し、１−Ｎ−アセチル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アミンを１１．２ｍｇ（収率５９％）得た。【００１６】  以下に得られた１−Ｎ−アセチル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アミンの物性値を示す。
ＩＲ（ｎｅａｔ）：３３４８，２８７３，１７１３，１６８５，１２５７，１０６３，７５０，７００ｃｍ−１．
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，ａｒｏｍａｔｉｃ），７．６１−７．２０（ｍ，１８Ｈ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊｂ，１＝９．２Ｈｚ，Ｈ−ｂ），５．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ１，２＝Ｊ２，３＝９．７Ｈｚ，Ｈ−２），５．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊｂ，１＝９．２Ｈｚ，Ｊ１，２＝９．７Ｈｚ，Ｈ−１），４．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ＝１１．１Ｈｚ，ｂｅｎｚｙｌｉｃ−Ｈ），４．６６（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ＝１２．１Ｈｚ，ｂｅｎｚｙｌｉｃ−Ｈ），４．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ＝１１．１Ｈｚ，ｂｅｎｚｙｌｉｃ−Ｈ），４．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ＝１２．１Ｈｚ，ｂｅｎｚｙｌｉｃ−Ｈ），４．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ＝１１．６Ｈｚ，ｂｅｎｚｙｌｉｃ−Ｈ），４．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊｇｅｍ＝１１．６Ｈｚ，ｂｅｎｚｙｌｉｃ−Ｈ），４．０９（ｂｒ−ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，Ｈ−４），３．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ２，３＝９．７Ｈｚ，Ｊ３，４＝２．９Ｈｚ，Ｈ−３），３．８０−３．７５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５），３．６６−３．５８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６，６’）．
１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１７０．４，１６６．９，１３８．２，１３７．６，１３３．４，１２９．８，１２９．２，１２８．４，１２８．３，１２８．０，１２７．８，１２７．７，７９．９，７８．６，７４．８ｘ２，７３．５，７２．８，７２．０，７１．５，６７．７，２３．３．
ＭＳ（ＥＳＩ−ＴＯＦ）：ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３６Ｈ３７ＮＯ７（Ｍ＋Ｈ）５９６．２６，ｆｏｕｎｄ５９６．３４．【００１７】実施例２
自動合成装置によるＮ−グリコシルアミドの合成
１２個の反応容器と８個の試薬容器を準備し、反応容器にはそれぞれモレキュラーシーブスＡＷ３００２０ｍｇ（１．４ｇ／ｍｍｏｌ）と攪拌子を入れ、全ての容器をアルゴンガスで置換した。糖供与体２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセトイミデート、２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル  トリクロロアセトイミデート、２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルトリクロロアセトイミデートの０．１００Ｍアセトニトリル溶液、糖受容体アセトアミド、ｎ−カプロン酸アミド、ベンズアミド、Ｎ−（アリルオキシカルボニル）−Ｌ−アスパラギンベンジルエステルの０．１４３Ｍアセトニトリル溶液、ＴＭＳＯＴｆの０．０４５Ｍアセトニトリル溶液、トリエチルアミンを試薬容器に入れ、自動合成装置にセットした。反応容器は０℃に冷却し、糖供与体の溶液１．４３ｍｌ（０．１４３ｍｍｏｌ）と糖受容体の溶液３．００ｍｌ（０．４２９ｍｍｏｌ）を反応容器に加えた。０℃で１時間攪拌し、それぞれの反応容器にＴＭＳＯＴｆ溶液０．４３ｍｌ（０．１４３ｍｍｏｌ）を加え、さらに０℃で１時間攪拌し、その反応混合物は１時間かけて２５℃に加熱した。その後、反応混合物は０℃まで冷却し、トリエチルアミン０．２０ｍｌ（１．４３ｍｍｏｌ）でクエンチし、２０分攪拌し、Ｎ−グリコシルアミドを得た。【００１８】  以下に得られたＮ−グリコシルアミドの収量を示す。
１−Ｎ−アセチル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アミン４８．１ｍｇ（収率５６％）
１−Ｎ−ヘキサノイル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アミン７６．４ｍｇ（収率８２％）
１−Ｎ−ベンゾイル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アミン６２．６ｍｇ（収率６７％）
Ｎα−アリルオキシカルボニル−Ｎω−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）アスパラギンベンジルエステル３２．０ｍｇ（収率２６％）
１−Ｎ−アセチル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）アミン３１．４ｍｇ（収率３７％）
１−Ｎ−ヘキサノイル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）アミン２．７ｍｇ（収率３％）
１−Ｎ−ベンゾイル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）アミン８０．２ｍｇ（収率８５％）
Ｎα−アリルオキシカルボニル−Ｎω−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−グルコピラノシル）アスパラギンベンジルエステル４０．９ｍｇ（収率３４％）
１−Ｎ−アセチル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）アミン０ｍｇ（収率０％）
１−Ｎ−ヘキサノイル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）アミン１２．３ｍｇ（収率１３％）
１−Ｎ−ベンゾイル−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）アミン５８．８ｍｇ（収率６３％）
Ｎα−アリルオキシカルボニル−Ｎω−（２−Ｏ−ベンゾイル−３，４，６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル）アスパラギンベンジルエステル２６．０ｍｇ（収率２２％）