(57)【要約】【課題】Edg（ endothelial differentiation gene、 血管内皮細胞分化遺伝子）受容体へ拮抗する医薬及びEdg受容体に作動する医薬を提供する。【解決手段】C3位の光学配置が非天然型の S型である事を特徴とする一般式Ｉ’化合物：【化１】2005112721.tif 000034を含有し、Edg受容体へ拮抗する医薬。また、式Ｉ’化合物に対してC3位の光学配置が天然型の R型である一般式Ｉ''で表わされる化合物を含有し、Edg受容体に作動する医薬。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ：
【化１】
2005112721.tif 000022
[式中、
Ｒは、置換されていてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)-（nは、4から 16の間のいずれかの整数、mは不飽和数を表わし 0から 2の間のいずれかの整数である）であるか、または、置換されていてもよいアリール基であり、Ｒ’は、水素、アルキル基またはアルキルカルボニル基である]で示される、含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩。
【請求項２】
一般式Ｉが下記一般式ＩＩＩ：
【化２】
2005112721.tif 000023
（Ｒ及びＲ’は請求項 1と同じ。）
で表わされる、請求項１に記載の化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩。
【請求項３】
一般式Ｉが下記一般式ＩＶ：
【化３】
2005112721.tif 000024
（Ｒ及びＲ’は請求項 1と同じ。）
で表わされる、請求項１に記載の化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩。
【請求項４】
一般式Ｉが下記式ＶＩ:
【化４】
2005112721.tif 000025
で表わされる、請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１〜請求項４のいずれか 1項に記載の化合物、またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
【請求項６】
一般式Ｉ’：
【化５】
2005112721.tif 000026
[式中、
【化６】
2005112721.tif 000027
は、実線と共に、単結合であるかまたは二重結合を示す；Ｎ−−−Ｃは、ＮとＣの間が結合しているかまたは開裂していることを示す、ただし、ＮとＣの間が開裂している場合には、ＮＲ’が結合するC２位はＲ型の光学配置をとる、Ｒは、置換されていてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)-（nは、 4から 16の間のいずれかの整数、mは不飽和数を表わし 0から 2の間のいずれかの整数である）であるか、または、置換されていてもよいアリール基であり、Ｒ’は、水素、アルキル基またはアルキルカルボニル基である]で示される、含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩を有効成分として含有するEdg受容体に拮抗する医薬。
【請求項７】
有効成分が、一般式ＩＩ：
【化７】
2005112721.tif 000028
（Ｒ及びＲ’は請求項６と同じ。）
で表わされる 2R, 3S - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシ− 4−エン化合物、
または、これらの製薬学的に許容される塩である請求項６に記載の医薬。
【請求項８】
有効成分が、式Ｖ：
【化８】
2005112721.tif 000029
で表わされる 2R, 3S - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシ− オクタデセン、
または、これらの製薬学的に許容される塩である請求項６に記載の医薬。
【請求項９】
一般式Ｉ’’：
【化９】
2005112721.tif 000030
[式中、
【化１０】
2005112721.tif 000031
は、実線と共に、単結合であるかまたは二重結合を示す；Ｎ−−−Ｃは、ＮとＣの間が結合しているかまたは開裂していることを示す、ただしＮとＣの間が開裂している場合には、ＮＲ’が結合するC２位はＳ型の光学配置をとる、また、ＮとＣの間が開裂していない場合の（C２位、C４位）光学配置の組み合わせは（Ｓ、Ｓ）をとる；
Ｒは、置換されていてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)-（nは、 4から 16の間のいずれかの整数、mは不飽和数を表わし 0から 2の間のいずれかの整数である）であるか、または、置換されていてもよいアリール基であり、Ｒ’は、水素、アルキル基またはアルキルカルボニル基である]で示される、含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩を有効成分として含有するEdg受容体に作動する医薬。
【請求項１０】
（１）  ＨＣ≡Ｃ−Ｒ（Ｒは請求項１で定義した通りである）と、下記式のＮ−保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体
【化１１】
2005112721.tif 000032
（式中ＡはＮの保護基であり、Ｂ及びＣはアルキル基である）
とを反応させること、
（２）  第（１）工程生成物の三重結合を二重結合に還元し、同時に、オキサゾリジンを開環しながら脱保護して、ＮＨ2基及びＯＨ基を有する下記式化合物を得ること、
【化１２】
2005112721.tif 000033
（３）  第（２）工程生成物の水酸基を保護し、アミノ基を保護した後に、
４位−５位の２重結合をエポキシ化し、次に所望の光学配置のエポキシを分離すること、
（４）  第（３）工程生成物のエポキシ環を開環して、４位に水酸基を有する化合物を得ること、
（５）  第（４）工程生成物において、２位のアミンの窒素と４位の炭素とで環を形成すること、
（６）  第（５）工程生成物において、ＯＨの保護基及び環上の窒素の保護基を脱保護することを含む、請求項１の化合物であって、Ｃ２位の光学配置がＲである化合物の製造方法。
【請求項１１】
循環器系疾患を予防または治療するための請求項５〜請求項８のいずれか 1項に記載の医薬。
【請求項１２】
循環器系疾患が動脈硬化症である請求項１１項に記載の医薬。
【請求項１３】
循環器系疾患が心臓疾患である請求項１１項に記載の医薬。
【請求項１４】
呼吸器系疾患を予防または治療するための請求項５〜請求項８のいずれか 1項に記載の医薬。
【請求項１５】
リウマチを予防または治療するための請求項５〜請求項８のいずれか 1項に記載の医薬。
【請求項１６】
がんを予防または治療するための請求項５〜請求項８のいずれか 1項に記載の医薬。
【請求項１７】
糖尿病性網膜症を予防または治療するための請求項５〜請求項８のいずれか 1項に記載の医薬。
【請求項１８】
ＮＯ産生を刺激することによって循環器系疾患を予防または治療するための請求項９に記載の医薬。
【請求項１９】
繊維化疾患を予防または治療するための請求項９に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、C3位の光学配置が非天然型の S型である事を特徴とする下記一般式Ｉで表わされる新規化合物、その類縁化合物を含めた一般式Ｉ’化合物を含有する、Edg（ endothelial differentiation gene、 血管内皮細胞分化遺伝子）受容体へ拮抗する医薬または循環器系疾患（例えば、動脈硬化症、心臓疾患（心筋梗塞、不整脈など））、呼吸器系疾患（喘息など）、リウマチ、がん、糖尿病性網膜症の予防もしくは治療するための医薬に関する。また、上記式Ｉ’化合物に対してC3位の光学配置が天然型の R型である下記一般式Ｉ''で表わされる化合物を含有するEdg受容体に作動する医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシオクタデセン−1リン酸 ( AHOP) は、血清中に数百 nM含有される事が確かめられており(J. Biochem. 121, p.969, '97)、また、損傷部位において活性化を受けた血小板より放出される alpha顆粒中にも、 ADP（アデニンヌクレオチドジリン酸）、 PDGF（ platelet derived growth factor、血小板由来増殖因子）、 5HT（セロトニン）などと共に、 AHOPは著量含まれており、 AHOPが生体の恒常性を維持するために何らかの役割を担っているものと考えられる。近年、ＡＨＯＰを内因性リガンドとする受容体である、血管内皮細胞分化遺伝子、Edg（ endothelial differentiation gene、 JBC, `90, 265, p. 9308）が見出され、ＡＨＯＰとEdg受容体との結合が、種々な生理作用を引き起こすことが示されている。
【０００３】
Edg受容体は、1990年に血管内皮細胞よりクローン化された （JBC, `90, 265, p. 9308）、GTP（グアニントリフォスフェート）結合タンパク質共役性の 7回細胞膜貫通型受容体で、1998年に AHOPが Edg受容体の特異的リガンドである可能性が指摘された（ `98 Science, 279, pp. 1552 - 1555）。その後、 AHOPをリガンドとする  3種類の亜種 Edg - 1、 Edg - 3、 Edg - 5 ( AGR 16 / H 218) 受容体がそれぞれ特異な細胞内情報伝達経路を使って生理作用を発現している可能性が示唆されている。
【０００４】
Edg受容体は、血小板においても発現していることが確認されているので、報告されているAHOPの血小板凝集作用（ `97 J. B. C. 272, 8, pp. 5291 - 5297）はEdg受容体経由である可能性が考えられる。
【０００５】
血小板凝集は動脈硬化症で病態を進行させるので、過剰の AHOPは動脈硬化症などの循環器系疾患を進行させる可能性も考える事ができる。
また、AHOPは、PDGFと同様、血管平滑筋細胞の遊走を促進し、血管を狭窄させる方向に作用するが、PDGF存在下で AHOPは PDGFと相乗的に血管平滑筋細胞を遊走させる ( `01 Science, 291, pp. 1800 - 1803)。従って、 AHOPは循環器系疾患を進行させる可能性が考えられる。
【０００６】
原虫トリパノゾーマの撲滅薬、スラミンがＥｄｇ−３特異的な拮抗性を示し、ＡＨＯＰとＥｄｇの結合のシグナルを阻止する事が報じられている（Ｊ．Ｂ．Ｃ．’９９，２７４，２７，ｐ．１８９９７）。スラミンは動脈硬化病態モデルに治癒的に奏効する事が示されている（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，’９９，１００，ｐ．８６１、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓ．，’９４，２８，ｐ．１１６６）が、この薬効の機作にＥｄｇ拮抗性が絡んでいる可能性が考えられる。
【０００７】
AHOPと同様に Edg - 3受容体に作動するスフィンゴシルフォスフォリルコリン (sphingosylphosphorylcholine、 SPC、 `99 BBRC, 260, p. 203)は用量依存的にラット腎毛細血管を収縮させ、この反応が GTP結合タンパク阻害剤パータシストキシン (PTX)感受性である事より、SPCが Edg受容体経由で血管を収縮させる可能性が示唆されている（ `00 British J. of Pharmacology, 130, pp. 1871 - 1877）。血管収縮に伴って、血流が遮断を受けると、虚血が進行し循環器病態が悪化する。Edg受容体拮抗物質が過剰な血圧上昇を抑え、循環器病態に奏効する可能性が考えられる。
【０００８】
ＡＨＯＰがムスカリン受容体内向き K+整流を活性化し、不整脈を引き起こす可能性が指摘されている ( `99 Pfugers Arch - Eur J Phisiol, 438, pp. 642 - 648)事より、Edg受容体拮抗物質が不整脈に奏効する可能性を考える事ができる。
【０００９】
Edg - 3受容体は GTP結合タンパク質のサブタイプ G13 / qタイプと共役していて ( `99 Cell, pp. 301 - 312)、Edg - 3と AHOPが結合すると G13 / qタンパク経由でイノシトール 3リン酸 ( IP3)が生成する。一方、心筋においてはアンジオテンシン受容体が Edg - 3と同様に IP3を動員するが、アンジオテンシン受容体拮抗薬が心肥大を強く抑制する。従って、Edg受容体拮抗物質が、アンジオテンシン受容体拮抗薬と同様に心肥大に奏効する可能性を考える事ができる。
【００１０】
血管内皮細胞に及ぼす AHOPの作用を、血管新生動物モデルを用いて検討した結果、 VEGF（ vascular endothelial growth factor、血管内皮細胞増殖因子）、や FGF - 2（ fibroblast growth factor、繊維芽細胞増殖因子）などの増殖因子による血管新生を、 AHOPが Edg - 1、 Edg - 3と結合する事によって相乗的に促進させ、 Edgがリウマチ、固形がんや糖尿病性網膜症の進行に作用している可能性が指摘されている ( Cell `99, p. 301)。
【００１１】
AHOPと Edg受容体の結合によって引き起こされる過剰な炎症や気道のリモデリングの結果、肺炎、慢性閉塞性気道疾患 ( COPD: chronic obstructive airway disease)、呼吸器系高血圧が進行する可能性が指摘されている ( Pulmonary Pharmacology & Therapeutics 2000, 13, p. 99)。
【００１２】
これらの知見を総合すると、ＡＨＯＰがＥｄｇと結合すると、炎症性細胞活性化や血管平滑筋細胞増殖、血行動態悪化など動脈硬化促進的に作用し、また、血管新生を促進し、リウマチ、固形がん、糖尿病性網膜症の進行の方向に作用する可能性が示されている事になる。更に、不整脈や心筋梗塞を進行させる可能性が考えられる。即ち、Ｅｄｇに拮抗する物質が、抗循環器系疾患性（例えば、抗動脈硬化性、抗心臓疾患性）、抗リウマチ性、抗がん性、抗糖尿病性網膜症性、抗呼吸器系疾患性を示す可能性が考えられる。
【００１３】
一方、血管内皮細胞カベリオラ内にはEdg受容体が発現しており、AHOPなど脂肪族がEdg受容体に作動する事によって血管内皮細胞の発生や分化が正常に行われると考えられる(J. Clin. Invest. 106, 8, p. 951, '00)。一方、血管内皮の健全性に関与する事が報告されている窒素酸化物（Nitric oxide, NO）合成酵素（endothelial NO synthase、eNOS）の発現が、AHOPによって誘導を受ける（`00 JBC, 275, p. 32363）と述べられている。血管内皮細胞内シグナルトランスダクションについて調べた研究報告では、AHOPとEdg受容体の結合のシグナルがGタンパク質の活性化を引き起こし、イノシトール3リン酸キナーゼを活性化してタンパク質リン酸化酵素Aktのリン酸化を経由してeNOSが発現した（`01 JBC, 276, p. 12420）。eNOSによって誘導されるNOは血小板凝集阻止、血管内皮細胞の恒常性維持、或いは血管平滑筋細胞の弛緩の作用を示し、血管の健全性に重要な役割を示す（`95 Prog. Cardiovasc. Dis. 38, p. 87）。つまり、Edg受容体作動物質をNO産生刺激物として利用すれば、循環器系疾患に対する予防若しくは治療剤として用いる事ができることが考えられる。
【００１４】
また、Edg受容体に作動する物質が臓器の繊維化を抑制し、肺繊維症、間質性肺炎、慢性肝炎、肝硬変、慢性腎不全または腎糸球体硬化症などの繊維化疾患に奏効することが知られている（国際特許ＷＯ０１／０３７３９）。
【００１５】
【発明の解決しようとする課題】
本発明者らは、上記の点に鑑み、鋭意研究を行った結果、C3位の光学配置が非天然型の S型である事を特徴とする下記一般式Ｉで表わされる新規化合物及びその類縁化合物を含めた一般式Ｉ’化合物が Edg受容体に拮抗する事を見い出した。また、一般式Ｉ’化合物に対してC3位の光学配置が天然型の R型である下記一般式Ｉ''で表わされる化合物がEdg受容体に作動する事を見い出した。本発明はこれらの知見に基づくものであり、その目的は新規な一般式Ｉ化合物、その製造方法、及び、一般式Ｉ化合物及びその類縁化合物を含めた一般式Ｉ’化合物の医薬、並びに、一般式Ｉ’’化合物の医薬を提供する事にある。（以下、一般式Ｉ、Ｉ’またはＩ’’化合物を「本発明化合物」という。）
【００１６】
【課題を解決するための手段】
本発明は C3位の光学配置が非天然型の S型である事を特徴とする、
一般式Ｉ：
【００１７】
【化１３】
2005112721.tif 000002
[式中、
Ｒは、置換されていてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)-（nは、4から 16の間のいずれかの整数、mは不飽和数を表わし 0から 2の間のいずれかの整数である）であるか、または、置換されていてもよいアリール基であり、Ｒ’は、水素、アルキル基またはアルキルカルボニル基である]で示される、含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩に関する。
【００１８】
また、本発明は、上記一般式Ｉで表わされる新規化合物及びその類縁化合物を含めた一般式Ｉ’：
【００１９】
【化１４】
2005112721.tif 000003
[式中、
【００２０】
【化１５】
2005112721.tif 000004
は、実線と共に、単結合であるかまたは二重結合を示す；Ｎ−−−Ｃは、ＮとＣの間が結合しているかまたは開裂していることを示す、
Ｒは、置換されていてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)-（nは、 4から 16の間のいずれかの整数、mは不飽和数を表わし 0から 2の間のいずれかの整数である）であるか、または、置換されていてもよいアリール基であり、Ｒ’は、水素、アルキル基またはアルキルカルボニル基である]で示される、含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩を有効成分として含有するEdg受容体に拮抗する医薬に関する。
【００２１】
さらに、本発明は、一般式Ｉ’’：
【００２２】
【化１６】
2005112721.tif 000005
[式中、
【００２３】
【化１７】
2005112721.tif 000006
は、実線と共に、単結合であるかまたは二重結合を示す；Ｎ−−−Ｃは、ＮとＣの間が結合しているかまたは開裂していることを示す、ただしＮとＣの間が開裂している場合には、ＮＲ’が結合するC２位はＳ型の光学配置をとる、また、ＮとＣの間が開裂していない場合の（C２位、C４位）光学配置の組み合わせは（Ｓ、Ｓ）をとる；
Ｒは、置換されていてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)-（nは、 4から 16の間のいずれかの整数、mは不飽和数を表わし 0から 2の間のいずれかの整数である）であるか、または、置換されていてもよいアリール基であり、Ｒ’は、水素、アルキル基またはアルキルカルボニル基である]で示される、含窒素化合物またはこれらの製薬学的に許容される塩を有効成分として含有するEdg受容体に作動する医薬に関する。
【００２４】
【発明の実施の形態】
前記式Ｉ、Ｉ’及びＩ’’における置換基について説明する。
「置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−」の置換されたＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−とは、例えば、水酸基、ハロゲン原子、炭素数１から６の直鎖でも分岐鎖でもよいアルキル基からなる群から選択される１つ以上で置換されたＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−をいう。
【００２５】
「アリール基」の具体例としては、フェニル基、１−ナフチル基および２−ナフチル基などがあげられる。
「置換されてもよいアリール基」の置換されたアリール基とは、例えば、炭素数１から１０のアルキル基、ニトロ基、炭素数１から１０のアルコキシ基及びハロゲン原子からなる群から選択される１つ以上で置換されたアリール基をいう。
【００２６】
また、置換位置はパラ位が好ましい。
「アルキル基」は、例えば、低級アルキル基（炭素数１〜６のアルキル基）であり、その具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−アミル基、３−メチルブチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、３，３−ジメチルブチル基、２−エチルブチル基などの直鎖または分枝鎖状のアルキル基があげられる。
【００２７】
「アルキルカルボニル基」は、例えば、炭素数２〜５のアルキルカルボニル基であり、その具体例としては、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基およびピバロイル基などがあげられる。
【００２８】
好ましい態様としては、以下のものがあげられる。
本発明は、前記式Ｉの化合物が一般式ＩＩＩ：
【００２９】
【化１８】
2005112721.tif 000007
（Ｒ及びＲ’は式Ｉと同じ。）
で表わされる 2R, 3S, 4S - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシペナレシジン化合物を提供する。
【００３０】
本発明は、前記式Ｉの化合物が一般式ＩＶ：
【００３１】
【化１９】
2005112721.tif 000008
（Ｒ及びＲ’は式Ｉと同じ。）で表わされる 2R, 3S, 4R - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシペナレシジン化合物を提供する。
【００３２】
本発明は、前記式Ｉの化合物が式ＶＩ：
【００３３】
【化２０】
2005112721.tif 000009
で表わされる 2R, 3S, 4S - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシオクタデセンペナレシジンを提供する。
【００３４】
本発明は、前記式Ｉ’の化合物が一般式ＩＩ：
【００３５】
【化２１】
2005112721.tif 000010
（Ｒ及びＲ’は前記式Ｉ’と同じ。）
で表わされる 2R, 3S - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシ− 4−エン化合物である前記医薬を提供する。
【００３６】
本発明は、前記式Ｉ’の化合物が式Ｖ：
【００３７】
【化２２】
2005112721.tif 000011
で表わされる 2R, 3S - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシ− 4−オクタデセンである前記医薬を提供する。
【００３８】
本発明の一般式Ｉ、Ｉ’、Ｉ’’、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶの置換基の好ましい態様について以下に説明する。
Ｒは、好ましくは、nが4から 12であり、さらに好ましくは、５から１１である。mは0である、特に好ましくは、Ｃ13Ｈ27−（ｎ＝１２、ｍ＝０）である。
【００３９】
Ｒ’の好ましい例は、メチル基、エチル基、アセチル基である。
一般式Ｉ’’は、下記式のものが好ましい。
【００４０】
【化２３】
2005112721.tif 000012
一般式Ｉ’’においてＲがＣ13Ｈ27−（ｎ＝１２、ｍ＝０）である化合物は、下記のように置換基を有していてもよい。
【００４１】
【化２４】
2005112721.tif 000013
化合物１０１〜１０２は、海綿（沖縄産）より単離生成された(J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1991, 1135)。
【００４２】
また、これらの化合物はセリンを出発原料としてＢｏｃ保護したアルデヒドなどを経由して合成することができる(Tetrahedron '98, 54, p.3141-3150、Liebigs Ann., 1996, 1083, part 18, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1 '97 p.97)。
【００４３】
本発明の化合物の塩としては、製薬学的に許容されるものであれば特に制限されず、例えば、フッ素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸鉛、リン酸塩、炭酸塩などの無機酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフロオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルキルスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、グリシン塩、アラニン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩などがあげられる。本発明の化合物の溶媒和物も本発明に包含されるものであり、溶媒和物としてはアセトン、２−ブタノール、２−プロパノール、エタノール、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどとの溶媒和物があげられる。
【００４４】
本発明の式Ｉ’化合物は、内皮分化遺伝子（Ｅｄｇ）受容体拮抗性を示し、Ｅｄｇ受容体に対するＡＨＯＰ、スフィンゴシルフォスフォリルコリンなどのＥｄｇ受容体作動物質の結合に拮抗し、これらによる細胞内シグナル伝達系を阻止することができる。本発明の式Ｉ’化合物は、以下の実施例に見られる様に陽性対照スラミンの約30倍も強い作用強度を示す。
【００４５】
従って、本発明は、本発明の式Ｉ’化合物を有効成分として含有する、内皮分化遺伝子（Edg）受容体に拮抗する医薬を提供する。
従って、本発明の式Ｉ’化合物を有効成分として含有する医薬は、炎症性細胞活性化や血管平滑筋増殖、血行動態悪化、さらに血管新生によって生じる疾患、例えば、循環器系疾患（例えば、動脈硬化、心臓疾患（例えば、心筋梗塞、不整脈））、リウマチ（例えば、慢性関節リウマチ）、がん、糖尿病性網膜症、呼吸器系疾患（例えば、肺炎、慢性閉塞性気道疾患、呼吸器系高血圧）を予防または治療に有効である。
【００４６】
ここで、「循環器系疾患」とは、血液、リンパなどの循環状態が障害され、組織や細胞に障害をおこしている疾患をいい、例としては、動脈硬化性疾患（例えば、アテローム（粥状）硬化症）、心臓疾患（例えば、心筋梗塞、不整脈）がある。
【００４７】
ここで、「呼吸器系疾患」とは、気管、気管支、肺などの呼吸器が障害されている疾患及びそれに関連した症候をいい、例としては、喘息（即時型、遅発型、アレルギー性喘息等）、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球浸潤、気管支炎（慢性気管支炎等）、気道炎症、肺気腫、肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群、呼吸器系高血圧、呼吸困難、疼痛、咳、痰、嘔吐、息切れがある。
【００４８】
また、本発明の式Ｉ’’化合物はＥｄｇ受容体に作動性を示し、ＮＯ産生を刺激し、血管内皮細胞の発生や分化を正常に保つまたは臓器の繊維化を抑制することができる。
【００４９】
従って、本発明の式Ｉ’’化合物を有効成分として含有する医薬は、循環器系疾患、繊維化疾患などの予防または治療に有効である。
ここで、「繊維化疾患」とは、肺繊維症、間質性肺炎、慢性肝炎、肝硬変、慢性腎不全または腎糸球体硬化症などがあげられる。
【００５０】
本発明における各化合物は経口、または非経口（注射剤、外用剤、坐剤など）で投与する事ができる。その投与量は約 0.0001〜約 1 g / kg体重 / 日を 1日 1回または複数回の範囲が好適であるが、この投与量は疾患の種類、患者の年齢、体重、症状により適宜増減する事ができる。
【００５１】
本発明の化合物を医薬として用いるためには、固体組成物、液体組成物、及びその他の組成物のいずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択される。医薬組成物は、本発明の化合物に、製薬学的に許容されるキャリヤー、すなわち常用の賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、 pH調整剤、溶解剤、などを添加し、常用の製剤技術によって、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤、などに調製する事ができる。賦形剤、増量剤としては、たとえば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげる事ができる。
【００５２】
製剤の酸化を防止するためには、酸化防止剤（トコフェロール等）を添加したり、シクロデキストリン等の包接剤で包接したり、ゼラチン等の皮膜でカプセル化することができる。
【００５３】
更に、前記化合物を、乳化剤として、リン脂質あるいは非イオン界面活性剤を用いて、Ｏ／Ｗ型製剤として、特開平６−２９８６４２に記載のように調製することができる。乳化剤は、単独あるいは２種以上組み合わせて使用でき、添加量は、適宜でよいが、０．００１〜１０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）である。
【００５４】
リン脂質としては、大豆由来リン脂質、卵黄由来リン脂質、リゾレシチン、フォスファチジルコリン（レシチン）、フォスファチジルセリンなどの単独あるいは組み合わせが使用可能である。非界面活性剤としては、分子量５００〜１５０００のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（例えば、プルロニックＦ−６８）、分子量１０００〜１００００のポリアルキレングリコール、分子量１０００〜２００００のポリオキシアルキレン共重合体、硬化ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体、ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルなどの単独あるいは組み合わせが好適に用いられるがこれに限定されない。
【００５５】
本発明の化合物は、以下の製造法によって製造することができる。
式Ｉ及びＩ’の化合物の製造法について、反応原料の調製例を含めて以下に説明する。
【００５６】
（合成例１）
最終生成物の光学配置が（２Ｒ，３Ｓ）である化合物の例を以下に示す（スキームは、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ））。
【００５７】
（１）反応原料の調製例
Ｎ−保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体の合成
下記式のＮ−保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体は従来法で合成することができ、例えば、（Ｒ）−セリンから森らの方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ｌ９８５、４１、２３７９−２３８６）によって合成することができる。
【００５８】
【化２５】
2005112721.tif 000014
（式中ＡはＮの保護基であり、Ｂ及びＣはアルキル基（例えば、メチル基）である）
ここで、Ｎの保護基Ａとしては、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミノオキシカルボニル（Ａｏｃ）、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフイノチオイルなどの基が挙げられる。好ましくはＢｏｃが用いられる。
【００５９】
（２）式Ｉの化合物の合成
式Ｉの化合物の合成スキームを以下に示す。
【００６０】
【化２６】
2005112721.tif 000015
第１工程：
ＨＣ≡Ｃ−Ｒ（Ｒは上記で定義した通りである）と、上記（１）で得たＮ−保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体とを反応させる。
【００６１】
第１工程の反応は、１当量の（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体に対し約０．５−３．０当量の塩基（例えば、ｎ−ブチルリチウム）下で、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）、氷冷下（例えば、−約２０℃）約５〜約２０時間で行うことができる。
【００６２】
第２工程：
第１工程生成物の三重結合を二重結合に還元し、同時に、オキサゾリジンを開環しながら脱保護して、ＮＨ2基及びＯＨ基を有する下記式化合物（一般式ＩＩにおいてＲ’が水素である化合物）を得る。また、一般式ＩＩにおいて、Ｒ’が水素以外である化合物については、ＮＨ2基をＲ’で置換する一般的方法で得ることができる。
【００６３】
【化２７】
2005112721.tif 000016
第２工程の反応は、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中アルカリ金属とアミン（例えば、エチルアミン存在下リチウム）で、約−５０℃以下の温度で、約２時間で行うことができる。
【００６４】
なお、第２工程生成物はシクロヘキサン cis -ジオールを出発原料とし、ウイティッヒ -オレフィネーション反応を経て、通常の方法によって合成する事もできる  ('98 J. Org. Chem. 63, p.510-520)。
【００６５】
第３工程：
（１）第２工程生成物を水酸基を保護する。
ここで、水酸基の保護剤としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルフォネート（ＴＢＳＯＴｆ）を用いることができ、この反応は、塩基（例えば、２，６−ルチジン）存在下、不活性溶媒（例えば、ジクロロメタン）中で行うことができる。
【００６６】
（２）上記（１）の生成物のアミノ基を保護する。
ここで、アミノ基の保護剤としては、例えば、ｐ−トルエンスルフォニル塩化物（ＴｓＣｌ）を用いることができ、この反応は、塩基（例えば、ピリジン）存在下で行うことができる。
【００６７】
（３）上記（２）の生成物の４位−５位の２重結合をエポキシ化し、次に、所望の光学配置のエポキシを分離する。
エポキシ化反応は、不活性溶媒（例えば、ヘキサン）中で、アルカリ（ｐＨ８−１１）（例えば、炭酸水素ナトリウム）条件下、１当量の（２）生成物に対し約２−５当量の酸化剤を加えて、約３時間−５日間激しく攪拌することによって行うことができる。ここで用いる酸化剤は、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）（例えば、７０％）、オスミウム、過酸化水素などが用いられる。
【００６８】
エポキシ化後に、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどのような一般的な分画法で所望の光学配置を有するエポキシを分離する。最終生成物のＣ４位の光学配置がＳの場合は、Ｃ３位の水酸基に対し、シンのエポキシを分離する（スキームではこちらを表示）。最終生成物のＣ４位の光学配置がＲの場合は、Ｃ３位の水酸基に対し、アンチのエポキシを分離する。
【００６９】
第４工程：
第３工程生成物のエポキシ環を開環して、４位に水酸基を有する化合物を得る。
【００７０】
第４工程の反応は、アルカリ（ｐＨ８−１０）条件下、例えば金属水素化物（例えば、ジイソブチルアルミニウム水素化物（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）共存下、不活性溶媒（例えば、トルエン）中で、約０℃以下の温度で、行うことができる。
【００７１】
さらに、必要に応じて上記生成物の水酸基を保護する。
ここで、水酸基の保護剤としては、例えば、メタンスルフォニル塩化物（ＭｓＣｌ）を用いることができ、この反応は、塩基（例えば、ピリジン）存在下で行うことができる。
【００７２】
第５工程：
第４工程生成物において、２位のアミンの窒素と４位炭素とで環を形成する。この反応は、不活性溶媒（例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ））中、１当量の第４工程生成物に対し約０．５−３当量の金属水素化物（例えば、ＮａＨ）の存在下、室温で行うことができる。
【００７３】
第６工程：
第５工程生成物において、ＯＨの保護基及び環上の窒素の保護基を脱保護することによって式Ｉ化合物（一般式ＩにおいてＲ’が水素である化合物）を得る。また、一般式Ｉにおいて、Ｒ’が水素以外である化合物については、ＮＨ2基をＲ’で置換する一般的方法で得ることができる。
【００７４】
環上の窒素の保護基の脱保護は、不活性溶媒（例えば、１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ））中、ナトリウムナフタレニドを用いて行い、ＯＨの保護基の脱保護は、不活性溶媒（例えば、アセトニトリル）中、弱酸（例えば、フッ化水素酸）を用いて行うことができる。
【００７５】
反応終了後、必要に応じて、常法（ろ過、溶媒抽出、再結晶、再沈殿、またはクロマトグラフィー）に従って、本発明の化合物を単離、精製する事ができる。
（合成例２）
最終生成物の光学配置が（２Ｓ，３Ｓ）である化合物の例を以下に説明する。
【００７６】
（１）反応原料の調製例
Ｎ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体の合成
上記と同様に、（Ｓ）−セリンから合成することができる。
【００７７】
（２）式Ｉの化合物の合成
第１工程：
ＨＣ≡Ｃ−Ｒ（Ｒは上記で定義した通りである）と、上記（１）で得たＮ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体とを反応させる。
【００７８】
第１工程の反応は、合成例１と同様に行う。
第２工程：
第１工程生成物の三重結合を二重結合に還元し、同時に、オキサゾリジンを開環しながら脱保護して、ＮＨ2基及びＯＨ基を有する化合物（式ＩＩ’に対して、Ｃ２位の光学配置がＳ、Ｃ３位の光学配置がＲ）を得る。この反応は、合成例１と同様に行う。
【００７９】
第３工程：
第２工程生成物のＣ３位の水酸基の光学配置をＲからＳへ反転させる。
この例として、光延反応があげられる。
【００８０】
この反応は、水酸基にアゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＥ）及びトリフェニルホスフィンを反応させた後に、安息香酸などのカルボン酸を反応させ、立体の反転したエステル体を得、これをアルカリ加水分解（例えば、Ｋ2ＣＯ3−ＭｅＯＨ）をすることによって行うことができる。
【００８１】
上記反応においては、必要に応じて、Ｃ１位の水酸基を保護する。
第４工程：
以下は、合成例１の第３工程〜第６工程と同様に行う。
【００８２】
式Ｉ’’の化合物は、所望の光学配置の化合物を用いて上記合成例１及び２と同様な反応によって合成することができる。
【００８３】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を詳細に説明するが、これは本発明の技術範囲を限定するものではない。
【００８４】
実施例の化合物の合成法について下記スキームに概略を示す。
【００８５】
【化２８】
2005112721.tif 000017
【００８６】
【化２９】
2005112721.tif 000018
反応原料の調製：Ｎ−Ｂｏｃ保護したホルミルオキサゾリジン誘導体の合成
窒素雰囲気下、ジオキサン  ( 220  ml)に溶解した  ( Boc)2O ( 62 g、 284 mmol)に、氷冷下にて 1 N - NaOH  ( 490  ml) に溶解した D - セリン  ( 25 g、 238 mmol)溶液を加え、室温にて 15時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、飽和クエン酸水に希釈し、酢酸エチルで 3回抽出した。あわせた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮し 49 gの無色油状物を得た。この無色油状物    ( 20 g、 0.1 mol)  の Et2O 200 ml溶液に氷冷にて 2M - TMS - CH2N2 （TMS:トリメチルシリル）の n - ヘキサン溶液   ( 50 ml、 0.1 mol)を加えた。 30分間、減圧濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー    ( 250 g、 n -ヘキサン / 酢酸エチル = 2 / 1)で精製して、 13 g（収率 60%）の化合物（１）を無色油状物として得た。
【００８７】
この化合物（１）( 12 g、 55 mmol)のトルエン溶液(200 ml)に 2, 2 -ジメトキシプロパン   ( 16 g、 150 mmol)、 p -トルエンスルフォン酸 1水和物 ( 100 mg)を加え、環流下 30分撹拌した。反応液を室温まで放冷し、飽和重曹水で希釈し、酢酸エチルで 3回抽出した。あわせた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー    ( 250 g、 n -ヘキサン / 酢酸エチル = 4 / 1)で精製して、 10 g（収率 70%）の化合物（２）を無色油状物として得た。
【００８８】
窒素雰囲気下、 300 ml1口フラスコに、化合物（２） ( 5.5 g、 21.1 mmol)を乾燥トルエン  ( 50 ml)に溶解して加え、 -70℃にて 1.0 M - 水素化ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液  ( 36.5 ml、 36.5 mmol、 1.7当量)を滴下し、反応液を -70℃以下で 2時間撹拌した。メタノール 3 mlを加え反応を終了した。その反応液を 1 M - HCl氷水にそそぎ、 15分間撹拌し、酢酸エチルで 3回抽出した。あわせた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー    ( 60 g、 n -ヘキサン / 酢酸エチル = 4 / 1)で精製して、 3.2 g（収率 66%）の標題化合物（３）の無色油状物を得た。
【００８９】
（実施例１）2R, 3S - 2−アミノ −1, 3−ジヒドロキシ−4−オクタデセン（化合物Ｖ）の合成
窒素雰囲気下、 300 ml 1口フラスコに、 1 -ペンタデシン ( 3.6 g、 17.3 mmol、 1.2当量)を乾燥 THF  ( 100 ml)に溶解して加え、 -20℃にて 1.59 M ｎ-ブチルリチウムの n -ヘキサン溶液  ( 14.3 ml、 22.7 mmol、 1.6当量)を滴下し、反応液を -20℃で 1時間撹拌し、さらに、化合物（３） ( 3.2 g、 13.9 mmol)の乾燥 THF  ( 6 ml)溶液を滴下し、氷冷下 15時間撹拌した。その反応液を飽和塩化アンモニウム水で希釈し、酢酸エチルで 3回抽出した。あわせた有機層を飽和塩化アンモニウム水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮して、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー    ( 150 g、 n -ヘキサン / 酢酸エチル = 10 / 1)で精製して、 3.4 g（収率 56%）の化合物（４）を淡黄色油状物として得た。
【００９０】
窒素雰囲気下、 300 ml 4つ口フラスコに、リチウム ( 0.74 g、 106.60 mmol、 14当量)の乾燥 THF  ( 30 ml)溶液を加え、 -50℃にて乾燥エチルアミン ( 48 g、 1.06 mol)を加え、 -50℃以下で 2時間撹拌した後、化合物（４）( 3.4 g、 7.77 mmol)の乾燥 THF溶液  ( 10 ml)を滴下した。反応液を室温まで徐々に昇温しながら 15時間撹拌した後 NH4Cl  ( 13 g)を加えた。そのまま減圧濃縮し、水で希釈し、酢酸エチルで 3回抽出した。あわせた有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮し、標題化合物（５）を粗精製淡黄色結晶（2.5 g）として得た。
【００９１】
（実施例２）2R, 3S, 4R - 2−アミノオクタデセン− 1, 3−ジヒドロキシペナレシジン（化合物ＶＩ）の合成
窒素雰囲気下、 100 ml 1口フラスコに、化合物（５） ( 2.5 g、 7.8 mmol)と 2, 6 -ルチジン ( 4.5 ml、 38.9 mmol、 5当量)を乾燥 CH2Cl2 ( 40 ml)に溶解して加え、氷冷下、 tert -ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルフォネート ( 7.1 ml、 31.1 mmol、 4当量)を滴下した。反応液を室温にて 90分撹拌した後、メタノール ( 1 ml)を加えた。混合液を水に注いで、酢酸エチルで 3回抽出し、併せた有機層を水、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー ( 100 g、 n -ヘキサン / 酢酸エチル = 20 / 1)で精製して、 3.4 g（収率 83%）の化合物（６）を黄色油状物として得た。
【００９２】
窒素雰囲気下、 100 ml 1口フラスコに化合物（６） 3.4 g、 6.4 mmol)を乾燥ピリジン ( 40 ml)に溶解して加え、氷冷下、 p -トルエンスルフォニル塩化物 ( 2.5 g、 12.9 mmol、 2当量)を加え、室温で 15時間撹拌した後、反応液を水で希釈し、酢酸エチルで 3回抽出した。併せた有機層を飽和クエン酸水、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー ( 100 g、 n -ヘキサン / 酢酸エチル = 20 / 1)で精製して、 4.0 g（収率 91%）の化合物（７）を無色油状物として得た。
【００９３】
300 ml 1口フラスコに化合物（７）( 4.0 g、 5.9 mmol)を乾燥ヘキサン ( 60 ml)に溶解して加え、氷冷下、炭酸水素ナトリウム ( 2.5 g、 29.3 mmol、 5当量)、 70%   m -クロロ過安息香酸 ( 2.9 g、 11.7 mmol、 2当量)を加え、室温にて 3日間激しく撹拌した。その反応液を水で希釈し、少量のチオ硫酸ナトリウムを加えてから酢酸エチルで 3回抽出した。併せた有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー ( 250 g、 n -ヘキサン /  Et2O = 35 / 1)で精製して、 1.7 g（収率 43%）の化合物（８）を無色油状物として得た。
【００９４】
窒素雰囲気下、 100 ml 1口フラスコに化合物（８） ( 1.7 g、 2.4 mmol)を乾燥トルエン ( 10 ml)に溶解して加え、 -78℃にて 1.0 M   水素化ジイソブチルアルミニウムのトルエン溶液 ( 7.3 ml、 7.3 mmol、 3当量)を滴下し、反応液を 0℃以下で 4時間撹拌した。メタノール ( 5 ml)を加え反応を終了し、 30分撹拌した後、セライトろ過した。セライトを THFで洗浄し、あわせた有機層を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー ( 200 g、 n -ヘキサン /  酢酸エチル = 20 / 1)で精製して、 570 mg（収率 33%）の化合物（９）を無色油状物として得た。
【００９５】
窒素雰囲気下、 50 ml 1口フラスコに化合物（９） ( 550 mg、 0.79 mmol)を乾燥ピリジン ( 6 ml)に溶解して加え、氷冷下、メタンスルフォニル塩化物 ( 0.18 ml、 2.35 mmol、 3当量)を加え、室温で 12時間撹拌した。反応液を水で希釈し、酢酸エチルで 3回抽出した。併せた有機層を飽和硫酸銅水、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮して、 550 mgの化合物（１０）を得た。得られた化合物（１０）を乾燥 THF ( 8 ml)に溶解し、氷冷下 60% 水素化ナトリウム ( 94 mg、 2.35 mmol、 3当量)を加え、室温にて 15時間撹拌した。反応液を水、飽和塩化アンモニア水で希釈し、酢酸エチルで 3回抽出した。あわせた有機層を飽和塩化アンモニウム水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー ( 50 g、 n -ヘキサン /  酢酸エチル = 50 / 1)で精製して、 470 mg（収率 88%）の化合物（１１）を無色油状物として得た。
【００９６】
窒素雰囲気下、 50 ml 1口フラスコに化合物（１１） ( 470 mg、 0.69 mmol)を乾燥 1, 2 -ジメトキシエタン（ＤＭＥ） ( 3 ml)に溶解して加え、 -78℃にて調製したナトリウムナフタレニドをシリンジで滴下した。反応液を 40分撹拌した後、水で希釈して 30分撹拌し、 CHCl3で 3回抽出した。あわせた有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー ( 50 g、 n -ヘキサン /  酢酸エチル = 15 / 1)で精製して、 290 mg（収率 80%）の化合物（１２）を無色油状物として得た。
【００９７】
ここで用いたナトリウムナフタレニドは、窒素雰囲気下、 30 ml 1口フラスコにナフタレン ( 883 mg、 6.89 mmol、 10当量)を乾燥1, 2 -ジメトキシエタン ( 8 ml)に溶解して加え、室温でナトリウム (127 mg、 5.51 mmol、 8当量)を加え、室温で3時間撹拌することによって調製した。
【００９８】
次に、 20 mlテフロン（登録商標）試験管に化合物（１２）( 280 mg、 0.53 mmol)、 CH3CN ( 9 ml)、 46% -フッ化水素酸 ( 0.23 ml、 5.30 mmol、 10当量)を加え、室温にて 15時間撹拌した。過剰の重曹を加えて反応を終了し、残渣をセライトろ過した。セライトをメタノールと CH2Cl2で洗浄し、あわせた有機層を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー ( 10 g、 CHCl3 / メタノール = 10 / 1)で精製し、得られた粗精製物を Sephadex R LH - 20 ( CH2Cl2 : メタノール = 1 : 1)でろ過して、 17 mg（収率 11%）の標題化合物を淡褐色蝋状結晶として得た。
1H-NMRスペクトル; VARIAN MERCURY 400VX (400 MHz) (CDCl3中, δ = 0.00においてTMSまたは( = 7.26においてCHCl3, 内部標準として)
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＨＣｌ３，  ４００  ＭＨｚ）  ：δ = 0.87 (3H, t, J = 6.9), 1.25 〜 1.56 (24H, m), 2.27 (1H, m), 2.98 〜 3.20 (6H, m), 3.45 (1H, dd, J = 10.4, 7.0), 3.59 (1H, dd, J = 10.9, 4.9), 4.11 (1H, d, J = 4.8)
（実施例 3）Edg受容体応答性試験
ＨＬ６０細胞を細胞銀行より入手し、ＢＢＲＣ’９８，２６３，ｐ．２５３記載の方法に従って、１０％ウシ胎児血清を含有したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）を用いて半年間５０継代前後培養し、Ｅｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株ＨＬ６０を調製した。このＥｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株 HL 60を用いて、被験物質の細胞応答性を検討した。細胞応答の指標として、細胞内 Ca2+濃度の上昇を測定した。なお、 HL 60細胞表面上の Edg受容体は、 AHOPと結合すると、 GTP結合タンパク質をリン酸化し、 IP 3キナーゼを活性化した後に細胞内 Ca2+濃度が上昇する事が報告されている ( FEBS Letter `96, 379, p. 260, BBRC `98, 253, p. 253)。また、血清存在下、長期間培養する事で、 HL 60細胞表面に Edg受容体が発現する様になる事が報告されている。
【００９９】
Ca2+キレート試薬 Fura - 2 AMを HL 60細胞に取り込ませた。
石英製セル内に細胞懸濁液 1.2 mlを充填し蛍光光度計（パーキンエルマー製、細胞測定用）に装着し、 0.5秒毎に励起波長を 340 nm（ Ca2+をキレートした Fura - 2を励起）と 380 nm（未反応 Fura - 2を励起）に交互に切り替え 510 nmの蛍光光度を測定した。
【０１００】
被験物質(化合物Ｖ或いは化合物ＶＩをそれぞれ 30 micro M終濃度で、マイクロシリンジを用いて加えた後蛍光光度を追跡して Ca2+が増加するかどうか検討した。また、被験物質添加後に AHOP（終濃度  １ micro M）を追加した際、 Ca2+が増加するかどうか確認し、各物質の AHOP拮抗性について検討した。
【０１０１】
化合物Ｖ、或いは化合物ＶＩを添加した後、 AHOP追加による細胞内 Ca2+濃度増加が阻止された事より、これら二物質が Edg拮抗性である可能性が示唆された。
【０１０２】
次に、拮抗の可能性が示唆された二物質による細胞内 Ca2+増加阻止作用の用量依存性を検討した。対照として、既に、Edg拮抗作用が確認されているスラミンを用いた。実験手法は、上記と同様に行い、評価については、Ca2+濃度増加について、陰性対照群（薬剤無添加）でのCa2+増加濃度に対する相対値（％）として表した。
【０１０３】
その結果、化合物Ｖと化合物ＶＩはどちらも 10〜100 nM域において用量依存的に AHOPによる HL 60細胞内 Ca2+濃度増加を阻止した。その結果を図１に示す。
【０１０４】
（実施例 4）3H - AHOPを用いた競合実験
実施例３と同じＥｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株ＨＬ６０を用いた。
【０１０５】
ＨＬ６０細胞を遠心分離によって回収後 F- 12培地（ 4℃保存、 10 ml）に懸濁し、 RI実験室に搬入した。細胞懸濁液 200 micro l（ 1×106 細胞/ml F- 12）に、終濃度 1 nMの 3H- AHOP( 10 micro Ci/1 mM)と終濃度 100 nMの非標識化合物（化合物Ｖ、ＶＩ）を加え、 4℃にて 30分間（時々撹拌して）結合試験を行った。 7分間 12,000 rpmにて遠心分離後、上澄を素早く（細胞ペレットを傷付けない様に）マイクロピペッターで捨て去り、細胞ペレットをレディソルブ(ベックマン) 1.5 mlで懸濁後バイアルに移し液体シンチレーションカウンター L 2100(ベックマン)で放射活性を測定した。
【０１０６】
その結果、 AHOPと同様、化合物Ｖ、ＶＩが、 3H - AHOPに競合した事より、これら二物質が Edg受容体と特異的に結合していると考えられた。
【０１０７】
【表１】
2005112721.tif 000019
（実施例 5）疑似血管モデルを用いた抗炎症試験
体内の損傷部位で、露出を受けたコラーゲン（細胞外マトリックス）が損傷シグナルとして標的になり、血小板が凝集してくるが、凝集して活性化した血小板から放出される PDGFなどの炎症性サイトカインは、炎症を進行させ、また重度の炎症は循環器の恒常性を破錠させ、動脈硬化を進行させると考えられている。AHOPも、PDGFと同様の作用を有すると考えられている。
【０１０８】
そこで、AHOPを炎症惹起剤として用いて、疑似血管 in vitroモデルを確立し、そのモデルを用いて、本願化合物が抗炎症作用を示すかどうか、それによって循環器の恒常性を維持し、病態を改善する方向に作用する可能性があるか否か検討した。
【０１０９】
（１）疑似血管in  vitro炎症モデルの確立
３μｍ孔の多孔膜により上室と下室とに区切られたトランスウェルを用い、トランスウェル上室底面の孔膜上に一層のウシ内皮細胞を培養し、トランスウェル上室に蛍光標識した(ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（同仁化学)）好中球浮遊液を加え、下室に AHOPを終濃度 0.1〜10 microMとなるように懸濁した。即ち、トランスウェルの上室と下室は内皮層を隔てて隔離され、上室が血管内部、下室が血管外の炎症部に対応する疑似血管 in  vitro炎症モデルとなっている。上室から内皮層を潜り抜けて下室へ透過した好中球数、及び、内皮層に粘着した好中球数を測定した。
【０１１０】
内皮層を抜け下室へ透過した好中球数及び内皮層に粘着した好中球数を測定し、相対的好中球数％を以下の式により算出した。
相対的好中球数％＝[実験群での好中球（透過及び粘着）数]／[コントロールでの好中球（透過及び粘着）数]ｘ１００
コントロールは、ＡＨＯＰ無添加の場合である。
【０１１１】
その結果、AHOP 10 microMにて、有意に好中球の内皮層透過、及び、粘着が促進を受けた（図２参照）。  つまり、 AHOPが炎症惹起物質として作用していると考えられた。
【０１１２】
（２）炎症細胞 - 血管内皮細胞相互作用に及ぼす本発明化合物の作用
次に、上記疑似血管in  vitro炎症モデルを用いて、好中球と血管内皮細胞との相互作用に、化合物Ｖまたは化合物ＶＩがどのように影響するか検討した。
【０１１３】
即ち、トランスウェル下室に化合物ＶＩを 0.01〜1 microMで添加し、 AHOP 10 micro Mを下室に入れて炎症を惹起した。コントロールは、薬剤無添加で上記と同様に炎症を惹起したものを用いた。
【０１１４】
内皮層に粘着した好中球数、或いは内皮層を抜け下室へ透過した好中球数を５３０ｎｍの蛍光強度で測定し、相対的好中球数％を上記と同様に算出した。
その結果、化合物ＶＩ 0.1、 1 microMにて、好中球透過、及び粘着が抑制を受けた。その結果を図３−１に示す。
【０１１５】
同様の実験を化合物Ｖにて実施した結果、好中球透過、及び粘着が抑制を受けた。その結果を図３−２に示す。
【０１１６】
従って、疑似血管 in vitroモデルに於て、 AHOPを炎症惹起剤として用いた場合、化合物Ｖ、ＶＩは抗炎症的に作用する事より、化合物Ｖ、ＶＩは循環器の恒常性を維持し、病態を改善する方向に作用する可能性が考えられる。
【０１１７】
（実施例 6）合成型血管平滑筋細胞増殖試験
被験物質について血管平滑筋細胞増殖への作用を検討した。
動脈硬化症の進行に伴って血管平滑筋細胞が収縮型から合成型に形質転換し、炎症性サイトカインを分泌しながら血管平滑筋細胞が増殖し動脈硬化巣が進展すると考えられている（ロスの仮説）。血管平滑筋細胞の表面には Edg受容体が発現している事が報告されており（ The American Society for Pharmacology and Experimental Therapeutics 00,Vol. 58, 449頁）、 AHOPと同様、 Edg受容体に作動するスフィンゴシルフォスフォリルコリン (SPC)に応答して血管平滑筋細胞が増殖する事が報じられている ( The American Physiological Society 98, C 1255頁)。
【０１１８】
従って、化合物Ｖによる血管平滑筋増殖への作用を以下のように測定した。陽性対照として、スラミンを用いた。
【０１１９】
ラット頚動脈内膜をバルーニングによって擦過し、 2週間後にエクスプラント法 ( Explant culture)によって調製した血管平滑筋細胞を 10%牛胎児血清を含んだDMEM培地 (Gibco)にて培養し、数回継代し安定させた後、 5× 103 細胞 / cm2の細胞密度に蒔種し実験に用いた。増殖因子 SPC ( 10 μＭ)と併せて化合物Ｖ、或いはスラミンを上述細胞に添加し、 24時間後、  BrdUアッセイ ( Science `82, 218, p. 474, Cytometry `85, 6, p. 584)によって細胞密度を測定した。 コントロールとして、薬剤無添加の場合の細胞密度を測定した。
【０１２０】
その結果、化合物Ｖは 0.3〜3 microM濃度において、用量依存的に血管平滑筋細胞増殖を抑制した。なお、陽性対照として用いたスラミンについては 30、 100 microM濃度において血管平滑筋細胞増殖を抑制した。その結果を図４に示す。相対的平滑筋細胞数％＝[実験群での細胞数]／[コントロールでの細胞数]ｘ１００
（実施例７）Edg作動性試験
実施例３と同じＥｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株ＨＬ６０を用いた。
【０１２１】
HL 60細胞（1×106細胞／ml）にFura-2AMを取り込ませ、蛍光光度計（Perkin Elmer LS 50 B）に装着した。340 nm / 380 nmにて励起し510 nmにて蛍光光度を測定した。
【０１２２】
化合物（ＡＨＯＰは1μM、化合物101〜102は30μM）添加後蛍光度比の上昇より、細胞内Ca2+増加濃度を算出した。細胞内Ca2+増加濃度は、予め確認した蛍光度とCa2+濃度との比例関係により算出した。
結果；
【０１２３】
【表２】
2005112721.tif 000020
化合物101、化合物102は細胞応答性を示した。
【０１２４】
（実施例８）Edg作動物質のNO産生刺激作用
ウシ血管内皮細胞（3.3×104細胞／ml）培養培地（ＤＭＥＭ培地'(Gibco)）に化合物101 1 micro Mを加えた30分後、培地中のNO2をNO2測定キット（カイマン社製）を用いて測定した結果、薬剤無添加（陰性対照）群でのNO2濃度103±10 nMに対し、化合物101群で180±15 nMと有意に増加した。つまり、Edg受容体作動物質である化合物101がNO2刺激剤として作用している事が解った事になり、化合物101が血小板凝集阻止、血管内皮細胞の恒常性維持、或いは血管平滑筋細胞の弛緩の作用を示しながら循環器系病態に奏効する可能性が示唆された。
【０１２５】
（実施例９）不整脈モデルに及ぼす影響
化合物VIの化合物を被験物質とし、ウサギ不整脈モデルに及ぼす影響を検討した。
【０１２６】
ウサギは、ＮＺＷ系雄性（体重２．８３−３．２０ｋｇ）を北山ラベス社より購入し、室温２０−２６℃、湿度４０−７０％、照明時間１２時間／日（７−１９時）の条件下で飼育し、飼料及び水を自由に摂取させ、２週間以上の検疫および馴化飼育した後、健康状態の良好なものを用いた。
【０１２７】
上記ウサギを麻酔下、化合物VI 10 mg/kg量を頚部静脈内投与し、その後化合物VI 6.9 micro g/kg/分 量を持続投与した。コントロールとして生理食塩水を実験群と同様に投与した。次に、冠動脈を３０分間結紮し、脈拍及び不整脈を測定した。脈拍は、投与前或いは結紮期間（１５分後及び３０分後）に測定した。不整脈数は、結紮期間（３０分間）に出現した期外収縮数を測定した。それらの結果を下記の表３に示す。
【０１２８】
その結果、化合物VIはウサギ不整脈モデルにおいて、結紮による脈拍低下を抑え、不整脈数を減少させる傾向を示した。
【０１２９】
【表３】
2005112721.tif 000021
【０１３０】
【発明の効果】
C3位の光学配置が非天然型の S型である事を特徴とする本発明の一般式Ｉ’化合物は、Edg（ endothelial differentiation gene、 血管内皮細胞分化遺伝子）受容体へ拮抗し、循環器系疾患（例えば、動脈硬化症、心臓疾患（心筋梗塞、不整脈など））、呼吸器系疾患（喘息など）、リウマチ、がん、糖尿病性網膜症の予防もしくは治療に対して優れた効果を有する。また、式Ｉ’化合物に対してC3位の光学配置が天然型の R型である一般式Ｉ''で表わされる本発明化合物は、Edg受容体に作動し、血管内皮細胞の発生や分化を正常に保ち、循環器系疾患、繊維化疾患の予防または治療に効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明化合物が用量依存的にＥｄｇ拮抗性を示すグラフである（スラミン：対照）。
【図２】内皮細胞-好中球相互作用に及ぼす AHOPの作用を示す。
*薬剤無添加のコントロールと比較して危険率 5%にて有意に促進
【図３】図３−１は、本発明化合物（化合物ＶＩ）が好中球の血管内皮細胞への移動に抑制的に作用していることを示すグラフである。図３−２は、本発明化合物（化合物Ｖ）が好中球の血管内皮細胞への移動に抑制的に作用していることを示すグラフである。
【図４】本発明の化合物が用量依存的に血管平滑筋細胞増殖の抑制作用を示すグラフである（スラミン：対照）。
【図１】
2005112721.tif 000035
【図２】
2005112721.tif 000036
【図３】
2005112721.tif 000037
【図４】
2005112721.tif 000038