(57)【要約】【課題】            ＴＬＲのリガンドである二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、ウイルスまたは病原菌に特異的な呼吸器粘膜組織における分泌型ＩｇＡ抗体の産生を誘導することからなる病原体による感染を防御する方法、さらには分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤を提供すること。【解決手段】        二本鎖または一本鎖ＲＮＡを有効成分とする分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤であり、また、二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、ウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法であり、分泌型ＩｇＡ抗体を誘導することからなることを特徴とする病原体による感染を防御する方法である。好ましい二本鎖ＲＮＡは、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）である分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤である。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
二本鎖または一本鎖ＲＮＡを有効成分とする分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤。
【請求項２】
二本鎖ＲＮＡがＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）である請求項１に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤。
【請求項３】
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である請求項２に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤。
【請求項４】
呼吸器粘膜に投与する請求項１、２または３に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤。
【請求項５】
ウイルスまたは病原菌由来の不活化抗原と共に投与される請求項１ないし４のいずれかに記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤。
【請求項６】
ウイルスが水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス（コロナウイルスの一種）およびＨＩＶウイルスであり、病原菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎菌およびコレラ菌である請求項５に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤。
【請求項７】
二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、ウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法。
【請求項８】
二本鎖ＲＮＡがＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）である請求項７に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法。
【請求項９】
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である請求項７または８に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法。
【請求項１０】
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の投与が、呼吸器粘膜に対する投与である請求項７ないし９のいずれかに記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法。
【請求項１１】
ウイルスまたは病原菌由来の不活化抗原と共に投与する請求項７ないし９のいずれかに記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法。
【請求項１２】
ウイルスが水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス（コロナウイルスの一種）およびＨＩＶウイルスであり、病原菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎菌およびコレラ菌である請求項１１に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法。
【請求項１３】
二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、分泌型ＩｇＡ抗体を誘導することからなることを特徴とする病原体による感染を防御する方法。
【請求項１４】
二本鎖ＲＮＡがＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）である、請求項１３に記載の病原体による感染を防御する方法。
【請求項１５】
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である請求項１３または１４に記載の病原体による感染を防御する方法。
【請求項１６】
病原体が、ウイルスまたは病原菌であり、当該ウイルスが水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス（コロナウイルスの一種）およびＨＩＶウイルスであり、当該病原菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎菌およびコレラ菌である請求項１１または１２に記載の感染を防御する方法。
【請求項１７】
呼吸器粘膜に投与することからなる請求項１３ないし１６のいずれかに記載の感染を防御する方法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の病原体由来の不活化抗原と共に投与する請求項１３ないし１７のいずれかに記載の感染を防御する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、ウイルスまたは病原菌に特異的なＩｇＡ抗体の産生を誘導することからなる病原体による感染を防御する方法、さらには分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトにはウイルス、細菌等の外部からの攻撃を防御する機能が備わっており、このような生体防御機能は、自然免疫と獲得免疫の協調作用により確立されている。すなわち、ヒトの免疫機構は、大きく自然免疫と獲得免疫に分けることができる。獲得免疫では、遺伝子再構成という方法で、Ｂ細胞やＴ細胞上に無数の個々に異なる抗原特異性をもつ受容体を作り出し、あらゆる外来抗原に対して対処していると考えられている。
【０００３】
一方、従来までの自然免疫は、主にマクロファージ、白血球などによる非特異的な貪食作用による外来異物や病原体の処理システムであると考えられていた。しかしながら、この自然免疫にかかわる免疫細胞も、ゲノム上にコード化された遺伝子再構成を伴わない特異的な受容体を用いて病原体の構成成分に共通のパターンを認識していることが、最近明らかになってきている。そのうち、自然免疫を担当するマクロファージ、樹状細胞などのいわゆる抗原提示細胞は、Ｔｏｌｌ様レセプター（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＴＬＲ）と呼ばれる一群の膜タンパクを介して病原体を認識しており、この一群の受容体が、病原体の認識とその後の免疫反応に必須の分子であることが判明している。また、ヒトを含む哺乳動物では、ＴＬＲを介して自然免疫が獲得免疫を支配していることが明らかになってきている。
【０００４】
ところで、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＬＲ）のリガンドは、宿主には存在せず、ウイルス、細菌などの微生物に必須の構成成分であることが判明しつつあり、微生物特有のＬＰＳ（リポポリサッカライド：リポ多糖類）、ＬＰ（リポプロテイン：リポ蛋白質）、ペプチドグルカン（ＰＧＮ）などは代表的なＴＬＲのリガンドと同定されてきている。
【０００５】
本発明者等は、生体の微生物成分を認識し、自然免疫系を刺激するＴＬＲのリガンドである２本鎖または一本鎖ＲＮＡについて種々研究を進めてきており、そのなかでも特に、イノシン酸とシチジル酸とからなるポリヌクレオチドコポリマーであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の免疫系に及ぼす影響を研究してきている。すなわち、ポリ  リシン（ｐｏｌｙ  ｌｙｓｉｎｅ）は、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と結合して安定化することから、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）はインフルエンザウイルスに対する免疫の有力なアジュバントとして知られていることより、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、各種病原菌あるいはウイルスに対する防御免疫獲得能を発揮し得るものと考えられる。したがって、これらの二本鎖または一本鎖ＲＮＡ、なかでも二本鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、自然免疫系を刺激するＴＬＲのリガンドとして、病原菌あるいはウイルス等の微生物の攻撃に対する防御免疫獲得能を発揮し得るものと考えられる。
【０００６】
事実、これまでにＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントとし、例えばインフルエンザワクチンなどと共に粘膜投与し、その効果を検討した報告が種々なされている。例えば、非特許文献１には、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントとする、ＵＶによる不活性化ｗｈｏｌｅ（全体）インフルエンザウイルスを気道経路で投与し、その効果を検討したことが開示されている。しかしＩｇＧ抗体の上昇にはＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を加えない場合と差がないことかがこの非特許文献１の図２に示されている。したがって、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）はアジュバントとしてはそれほど有効ではないと考えられていた。
【０００７】
また、非特許文献２および非特許文献３には、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントとする不活化ワクシニア・ウイルス（ｖａｃｃｉｎｉａ  ｖｉｒｕｓ）を経鼻接種することが記載されている。しかし、非特許文献２は、涙液中のＩｇＡ抗体産生が増加することを記載するが、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の感染予防効果には言及していない。
【０００８】
さらに、特許文献１は、吸着型アジュバントにポリヌクレオ（Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を含む）を加えることにより、インフルエンザワクチンの抗体反応を増進させることを開示している。しかし、特許文献１は、感染予防効果については言及していない。
【０００９】
非特許文献４は、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントとする不活化ワクチンを腹腔内接種後、ＩｇＧ、ＩｇＭの有為な上昇を報告するが、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の感染予防効果には言及していない。
【００１０】
非特許文献５は、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントとして羊赤血球に静注して免疫する時、血中抗体が上昇することを報告しているが、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の感染予防効果については言及していない。
【００１１】
【特許文献１】特公昭５０−２００９号公報
【非特許文献１】J. Clinical Investigation, 110(8), 1175-1184 (2002)
【非特許文献２】Invest. Ophtalmol., 10(10), 750-759 (1971)
【非特許文献３】Invest. Ophtalmol., 10(10), 760-769 (1971)
【非特許文献４】Veterinary Microbiology, 88(4), 325-338 (2002)
【非特許文献５】Pro. Soc. Exp. Biol. & Med., 133, 334-338 (1970)
【００１２】
本発明者等は、上記現状に鑑み、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を含むＴＬＲのリガンドである２本鎖または一本鎖ＲＮＡが、アジュバントとしてワクチンと共に投与された場合には、そのワクチン能を増強させるのではなく、二本鎖または一本鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）自体が、種々の病原菌あるいはウイルス等の病原体の攻撃に対する防御免疫能を増強せしめ、特にウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させることによって病原体による感染を防御し得るのではないかと考えた。
【００１３】
かかる考え方をベースに、二本鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を、種々の病原菌あるいはウイルス等のワクチンである不活化抗原と共に投与したところ、ウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体の産生を誘導することを確認し、本発明を完成させるに至った。また、一本鎖ＲＮＡについても同様のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体の産生を誘導することを確認し、本発明を完成させるに至った。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって本発明は、ＴＬＲのリガンドである二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、ウイルスまたは病原菌に特異的な呼吸器粘膜組織における分泌型ＩｇＡ抗体の産生を誘導することからなる病原体による感染を防御する方法、さらには分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
かかる課題を解決するための本発明は、具体的には、
（１）二本鎖または一本鎖ＲＮＡを有効成分とする分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤；
（２）二本鎖ＲＮＡがＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）である上記（１）に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤；
（３）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である上記（２）に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤；
（４）呼吸器粘膜に投与する上記（１）〜（３）に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤；
（５）ウイルスまたは病原菌由来の不活化抗原と共に投与される上記（１）〜（４）に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤；および、
（６）ウイルスが水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス（コロナウイルスの一種）およびＨＩＶウイルスであり、病原菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎菌およびコレラ菌である上記（５）に記載の分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤である。
【００１６】
また本発明は、病原菌特異的なＩｇＡ抗体を誘導させる方法にも関し、具体的には、
（７）二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、ウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法；
（８）二本鎖ＲＮＡがＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）である上記（７）に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法；
（９）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である上記（７）または（８）に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法；
（１０）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の投与が、呼吸器粘膜に対する投与である上記（７）〜（９）に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法；
（１１）ウイルスまたは病原菌由来の不活化抗原と共に投与する上記（７）〜（１０）に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法；および、
（１２）ウイルスが水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス（コロナウイルスの一種）およびＨＩＶウイルスであり、病原菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎菌およびコレラ菌である上記（１１）に記載のウイルスまたは病原菌特異的ＩｇＡ抗体を誘導させる方法；
である。
【００１７】
さらにまた本発明は、感染を防御する方法にも関り、より具体的には、
（１３）二本鎖または一本鎖ＲＮＡを投与することにより、分泌型ＩｇＡ抗体を誘導することからなることを特徴とする病原体による感染を防御する方法；
（１４）二本鎖ＲＮＡがＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）である上記（１３）に記載の病原体による感染を防御する方法；
（１５）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子サイズが３００ｂｐ以上である上記（１３）または（１４）に記載の病原体による感染を防御する方法；
（１６）病原体が、ウイルスまたは病原菌であり、当該ウイルスが水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス（コロナウイルスの一種）およびＨＩＶウイルスであり、当該病原菌が、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎菌およびコレラ菌である請求項１１または１２に記載の感染を防御する方法；
（１７）呼吸器粘膜に投与することからなる上記（１３）〜（１６）に記載の感染を防御する方法；および、
（１８）上記（１６）に記載の病原体由来の不活化抗原と共に投与する上記（１３）〜（１７）いずれかに記載の感染を防御する方法；
である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のＴＬＲのリガンドである二本鎖または一本鎖ＲＴＮＡ、特にＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を投与することにより、ウイルスまたは病原菌に特異的な呼吸器粘膜組織における分泌型ＩｇＡ抗体の産生が誘導される。分泌型ＩｇＡは、外分泌液中の主要な免疫グロブリンであり、粘膜表面の感染防御に役立っている病原菌特異的ＩｇＡ抗体であって、唾液、鼻汁、腸、気管などの分泌液中、あるいは初乳中に多くみられ、また血清中にも存在する。したがって、本発明が提供するＴＬＲのリガンドである二本鎖または一本鎖ＲＴＮＡ、特にＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、このＩｇＡ抗体の産生を誘導することにより、ウイルスまたは病原菌になどの病原体による感染を防御するものであり、また感染予防のための分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤となり得るものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下に本発明を、詳細に説明していく。
本発明において使用する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ（double-stranded ＲＮＡ））は、任意の二本鎖のＲＮＡをいい、そのような二本鎖ＲＮＡとしては、例えばＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、Ｐｏｌｙ（Ａ：Ｃ）、Ｐｏｌｙ（Ｇ：Ｃ）などをあげることができる。そのなかでも本発明は、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を用いることにより、分泌型ＩｇＡ抗体の産生について好結果を与えた。
【００２０】
本発明で使用する二本鎖ＲＮＡについて、その分子の大きさとしては、その塩基対（ｂｐ）として低〜高サイズの種々のものを用いることが可能であるが、免疫応答に対してより優れた応答を発揮するものは、３００ｂｐ以上の分子サイズを有することが必要であることが判明した。そのような分子サイズを有するものとして、例えば、１００〜１０００ｂｐのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、東レ株式会社から容易に入手することができる。
【００２１】
また、一本鎖ＲＮＡは、ゲノムを構成する二本鎖ＲＮＡから転写されたＲＮＡであり、ＲＮＡウイルスのなかでもポリオウイルス、レトロウイルス、インフルエンザウイルスなどのゲノムは一本鎖ＲＮＡであり、基本的には、ＲＮＡが二本鎖構造をとるのはゲノムである場合に限られ、それ以外の機能を果たしているＲＮＡでは一本鎖構造が基本であることより、一本鎖ＲＮＡも同様にＴＬＲのリガンドとして、ウイルスまたは病原菌に特異的な呼吸器粘膜組織における分泌型ＩｇＡ抗体の産生を誘導する。そのような一本鎖ＲＮＡとしては、Ｐｏｌｙ（Ａ，Ｕ）をあげることができる。
【００２２】
本発明においては、このような二本鎖または一本鎖ＲＮＡが、自然免疫系を刺激するＴｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＴＬＲ）のリガンドとして、病原菌あるいはウイルス等の微生物の攻撃に対する防御免疫獲得能を発揮し得るものであるが、特にこれら病原菌あるいはウイルス等の微生物の不活化抗原と共に投与されることにより、より良好な効果を発揮することが確認された。
【００２３】
そのような病原菌あるいはウイルス等の微生物の不活化抗原は、一般的にワクチンとしての作用を発揮するものである。したがって、本発明のＴＬＲのリガンドである二本鎖または一本鎖ＲＮＡは、その態様として、好ましくはワクチンと共に投与するのがよく、その場合には、本発明の二本鎖または一本鎖ＲＮＡは、ワクチンに対するアジュバントとしての作用を発揮することにもなる。
【００２４】
本発明の二本鎖または一本鎖ＲＮＡがアジュバントとして投与されるワクチンとは、身体中に接種されて、活性な免疫を生成する、通常感染性因子または感染因子のある部分を含む抗原性懸濁液または溶液である。ワクチンを構成する抗原性部分は、微生物（例えば、ウイルスまたは細菌など）または微生物から精製された天然の産生物、合成生成物または遺伝子操作したタンパク質、ペプチド、多糖または同様な産生物であってもよい。
【００２５】
例えば、生ワクチンとしては、具体的には、ＢＣＧ、種痘、ポリオ、はしか、風疹、おたふく風邪、牛痘、ＮＤＶ、マレック病などをあげることができる。また、不活化ワクチンとしては、百日咳、ジフテリア（トキソイド）、破傷風（トキソイド）、インフルエンザ（ＨＡ）、日本脳炎、リケッチアなどをあげることができる。
【００２６】
また、本発明にいう不活化抗原とは、感染能を失わせた抗原をいい、完全ウイルス粒子であるビリオン、不完全ウイルス粒子、ビリオン構成粒子、その翻訳後修飾体、ビリオン非構成タンパク質、その翻訳後修飾体、感染防御抗原、中和反応のエピトープなどを挙げられることができる。不活化は、例えば、物理的（例えば、Ｘ線照射、熱、超音波）、化学的（ホルマリン、水銀、アルコール、塩素）などの操作により行うことができる。
【００２７】
本発明が提供する二本鎖または一本鎖ＲＮＡの投与は、粘膜投与の形態により行うのが好ましい。脊椎動物における粘膜には、消化器、呼吸器、排出器、生殖器などの特に外通性の中腔器官の内壁が含まれる。したがって、本発明の好ましい投与形態である粘膜投与としては、例えば、鼻腔投与（経鼻投与）、口腔投与、膣内投与、上気道投与、肺胞投与などをあげることができる。そのなかでも鼻腔内粘膜投与が好まし。鼻腔は特に、インフルエンザウイルスなどによる呼吸器感染症疾患の感染経路の門戸であることから、粘膜投与により分泌型ＩｇＡ反応を引き起こし、粘膜上皮細胞中に分泌型ＩｇＡ抗体を産生させることは、呼吸器感染症の防御に結びつくものである。
【００２８】
なお、本発明の二本鎖または一本鎖ＲＮＡの投与は、上記の粘膜投与に限定されるものではなく、種々の投与形態をとり得ることはいうまでもない。
【００２９】
本発明の目的である分泌型ＩｇＡ抗体の産生が誘導され、免疫防御を発揮する対象としての病原体は、宿主に対して疾患または障害を発生し得る微生物である。具体的には、ヒトに対する病原体としては、例えば、ウイルス、細菌、真菌などをあげることができる。ウイルスはどのような種類のものでもよく、例えば、ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルスなどがあげることできる。より具体的には、例えば、水痘ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプウイルス、ポリオウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、重症急性呼吸器感染症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス（コロナウイルスンの一種）、ＨＩＶウイルスが挙げられるが、それらに限定されない。このようなウイルスは、好ましくはインフルエンザウイルスである。
【００３０】
また、本発明が対象とする細菌は、どのような細菌であってもよく、グラム陽性菌、グラム陰性菌があげられることができ、例えば、そのような細菌としては、百日咳菌、髄膜炎菌、インフルエンザｂ型菌、肺炎菌およびコレラ菌などがあげられる。
【００３１】
本発明が提供する二本鎖または一本鎖ＲＮＡは、薬剤学的に許容される種々のキャリヤとともに、組成物の形態、ワクチンの形態等により投与することができる。そのようなキャリヤとしては、希釈剤、乳化剤、懸濁剤、フィラー、増量剤、緩衝剤、賦形剤、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料等をあげることができる。
【００３２】
また、本発明の二本鎖または一本鎖ＲＮＡの投与量は、投与する対象者の年齢、体重、投与方法により一概に限定し得ないが、通常成人１日当たり、経口投与の場合には、１０〜５００ｍｇ程度であり、また粘膜投与、特に経鼻投与の場合には、０．１〜１０ｍｇ、好ましくは、０．１〜１ｍｇ程度である。
【実施例１】
【００３３】
以下に本発明を、さらに具体的な実施例により説明する。
なお、以下のヒトに対する実施例では、対象となる患者からは、事前にインフォームドコンセントによる同意をもらった上で行った。
実施例１：合成二本鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）のＩｇＡ、ＩｇＧ産生能
合成二本鎖ＲＮＡとしてＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントとして用いて、不活化抗原として不活化ウイルスまたはサブユニット抗原の中和抗体惹起能、ひいては抗病原体効果を確認した。
（材料）
マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）
ウイルス：インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１（Ａ／ＰＲ８）株（国立感染症研究所（東京）から入手した）。
ワクチン：インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１（Ａ／ＰＲ８）株Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ）株（国立感染症研究所）；Ｈ１Ｎ１（（Ａ／Ｙａｍａｇａｔａ）株（国立感染症研究所）；Ｈ３Ｎ２（Ａ／Ｇｕｉｚｏｕ）株（国立感染症研究所）；エーテル処理不活化ＨＡワクチン（財団法人  阪大微生物研究会、香川）
アジュバント：ポジティブコントロールとしてＣＴＢ＊［ＣＴＢ（コレラ毒素Ｂサブユニット）、０．１％ＣＴ（コレラ毒素）を含む］、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）
【００３４】
（方法）
６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（日本ＳＬＣ（株）、東京）各群５匹ずつ用いた。ＰＲ−８ＨＡワクチン（国立感染症研究所または財団法人  阪大微生物病研究会）１μｇをそれぞれのアジュバントとしてＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、０．１μｇ、１μｇ、３μｇ、１０μｇと共にマウスの鼻に５μＬを接種し、その３週間後同量のワクチンを、アジュバントなし、もしくはアジュバント有りのものとして経鼻接種し、さらに２週間後に１００ｐｆｕのＰＲ８インフルエンザウイルスを片鼻に１．２μＬずつ接種し感染を行った。
コントロールとしてＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）１０μｇおよび１μｇのみ、ＰＲ８ＨＡワクチンのみ、処置なしの群をおいた。
感染３日後に、鼻腔洗浄液、血清を回収し、鼻腔洗浄液中のＩｇＡおよび血清中のＩｇＧをＥＬＩＳＡ法により、また、鼻腔洗浄液中のウイルス価を、ＭＤＣＫ細胞を用いたプラークアッセイで測定した。
【００３５】
同様の方法で経鼻免疫したマウスに、４０ＬＤ５０の致死量（１０４．７ＥＩＯ５０（５０％の発育鶏卵において免疫性を示すウイルス量の約１００００倍量）のインフルエンザウイルスを２０μＬ感染させ、その生存を観察した。
【００３６】
また、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントに用いた経鼻インフルエンザワクチンの交叉防御をみるために、亜型の違うインフルエンザウイルスＨ１Ｎ１（Ａ／ＰＲ８）株Ｈ１Ｎ１（Ｂｅｉｊｉｎｇ）株、Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｙａｍａｇａｔａ）株、Ｈ３Ｎ２（Ａ／Ｇｕｉｚｏｕ）株のワクチンを３μｇのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）とともに経鼻接種し、３週間後ワクチンのみを接種、さらに２週間後に１００ｐｆｕのＰＲ８インフルエンザウイルスを片鼻１．２μＬずつ接種し、感染を行った。感染３日後に鼻腔洗浄液、血清を回収し、鼻腔洗浄液中のＩｇＡおよび血清中のＩｇＧをＥＬＩＳＡ法により、また、鼻腔洗浄液中のウイルス価を、ＭＤＣＫ細胞を用いたプラークアッセイで測定した。
【００３７】
さらに、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の中枢神経系への安全性を調べるため、０．２５μｇ、２．５μｇ、２５μｇのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を２５μＬのＰＢＳに溶解し、二段針を用いて脳内接種を行った。接種後の体重の変化を測定し、また生存を観察した。
なお、対照群として２．５μｇ、１０μｇ、２５μｇのＣＴＢ＊（ＣＴＢ、０．１％ＣＴを含む）を同様に２５μＬのＰＢＳに溶解した溶液を脳内に接種した群をおいた。
【００３８】
（結果）
（１）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）をアジュバントに用いた経鼻インフルエンザワクチンによる抗体誘導と感染防御について
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の粘膜アジュバント能を評価した。６週間前に１μｇのＰＲ８ワクチンを０．１μｇ〜１０μｇに量を振ったＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と共に経鼻接種し、さらに２週間前に同量のワクチンを、ワクチンのみまたはアジュバントと共に経鼻接種した。経鼻粘膜でのＩｇＡ抗体応答と、血中ＩｇＧ応答を表１にまとめた。
【００３９】
【表１】
2005082581.tif 000002
【００４０】
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の用量依存性のアジュバント効果をみるために、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の量は０．１μｇから１０μｇまで段階的に増やし、そのアジュバント作用をみた。
その結果、表１に示した結果からも判明するように、鼻腔粘膜にＩｇＡの応答のためには、最低で０．１μｇのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を初回免疫時に使用すると応答が認められることが判明した。
【００４１】
鼻腔粘膜に誘導されるＩｇＡの量は、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の量に依存的であり、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の量を増やせば増やすほどそのアジュバント効果が認められた。
２回の免疫ともに、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を用いると、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）１μｇの量で鼻腔洗浄液中に１００ｎｇ／ｍＬ以上のＩｇＡの分泌がみられ、初回のみの免疫の場合には３μｇのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）添加で、１００ｎｇ／ｍＬ以上の特異的ＩｇＡ抗体の誘導が認められた。
血清中のＩｇＧの産生も同時に検討したが、その産生は、ＩｇＡの分泌に相関するものであり、１μｇのＰＲ８ワクチンをＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と共に４週間間隔で２回免疫すると、１．６μｇ／ｍＬの血中ＩｇＧが得られた。
【００４２】
また、同様の免疫条件で２回目の免疫の２週間後に１００ｐｆｕのＰＲ８ウイルスを、片鼻１．２μＬずつ感染を行った場合には、ワクチンを接種しないコントロール群では、鼻腔洗浄液中に１０２ｐｆｕ／ｍＬ以上のウイルス価に、ウイルス増殖が認められた。
これに対し、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を併用して経鼻ワクチン接種を２回行った群では、完全にウイルス増殖が抑制されており、また、ワクチン単独で１μｇ以上を２回免疫した群、ならびに３μｇ以上のＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を初回免疫時のみ使用した群では、全くウイルス抑制効果は認められなかった。
【００４３】
また、１μｇ、０．１μｇのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を初回のみ併用接種した群においても、１００．８ｐｆｕ／ｍＬ、１０１．６ｐｆｕ／ｍＬと、顕著なウイルスの増殖抑制が認められた。なお、ワクチンのみの２回投与群では、ウイルスの増殖抑制は全く認められなかった。
これらの結果をまとめて表２に示した。
【００４４】
【表２】
2005082581.tif 000003
＊：ｐ＜０．００１
【００４５】
（２）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の作用発現には二本鎖ＲＮＡである構造が重要である点の確認
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の作用発現には二本鎖ＲＮＡである構造が重要であることを確認するため、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を１００℃で５分間加熱し、直ちに氷上で冷却して変性させ、その１μｇをワクチンと共に経鼻接種した。
その結果、熱変性をしなかったＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を経鼻接種したときに１２１μｇ／ｍＬみられていたＩｇＡ応答は、熱変性したＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を経鼻接種することにより、２１μｇ／ｍＬに激減し、血中のＩｇＧ応答も１．５μｇ／ｍＬから０．７μｇ／ｍＬに減少していた。
また、熱変性したＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の接種では、ウイルスの増殖抑制効果は認められなくなった。
以上の事実から、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の作用発現には、二本鎖ＲＮＡである構造が重要であることが確認された。
【００４６】
（３）Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の併用経鼻ワクチン接種による致死量のインフルエンザウイルス感染による肺炎の防御効果について
６週間前に１μｇのＰＲ８ワクチンとＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を１０μｇ、３μｇおよび１μｇ併用して経鼻接種し、２週間前にワクチンのみで追加免疫し、４０ＬＤ５０のＰＲ８ウイルス２０μＬを感染させ、肺炎の防御能を調べた。
ワクチンを接種しない群では、マウスは１週間以内に前例（５／５）が死亡し、ウイルス感染３日後の肺のウイルス価も１０６ｐｆｕ以上であった。
これに対してワクチン接種群では、１μｇ以上のＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を併用接種することで、全マウスは生存していた。この結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
2005082581.tif 000004
【００４８】
以上の事実から、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、感染防御に十分な分泌型ＩｇＡ抗体を産生しており、粘膜ＩｇＡ抗体応答を引き出すことが判明した。
【実施例２】
【００４９】
実施例２：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻ワクチンによる交叉防御
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻インフルエンザワクチンにより誘導されるインフルエンザ感染防御について、その交叉防御能について検討を行った。
ＰＲ８と亜型の違うインフルエンザウイルス株Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ）株、Ｈ１Ｎ１（Ｙａｍａｇａｔａ）株、Ｈ３Ｎ２（Ａ／Ｇｕｕｚｈｏｕ）株のワクチンを３μｇのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と初回免疫し、４週後に同じ株のワクチンのみを接種し、さらに２週間後に１００ｐｆｕのＨ１Ｎ１（Ａ／ＰＲ８）株を１００ｐｆｕ感染させ、その３日後に鼻腔洗浄液中のＰＲ８と交叉反応するＩｇＡ、血清中のＩｇＧを測定し、またＰＲ８ウイルスの交叉防御について検討した。
それらの結果を表４および表５に示した。
【００５０】
【表４】
2005082581.tif 000005
【００５１】
【表５】
2005082581.tif 000006
注：二次は、ワクチンのみ。
＊：Ｐ＜０．００１
【００５２】
各表中の結果から判明するように、同じ亜型のＨ１Ｎ１（Ａ／ｂｅｉｊｉｎｇ）株、Ｈ１Ｎ１（Ａ／Ｙａｍａｇａｔａ）に対しては、ＩｇＡ、ＩｇＧ応答ともに認められ、ウイルス感染も完全に抑制していた。
亜型の異なるＨ３Ｎ２（Ａ／Ｇｕｕｚｈｏｕ）株に対しては、交叉反応するＩｇＡ、ＩｇＧが少量認められ、ウイルス感染の部分防御がみられた。
以上の事実から、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻インフルエンザワクチンにより、交叉防御が確認された。
【実施例３】
【００５３】
実施例３：不活化ウイルス粒子をＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と併用する経鼻インフルエンザワクチンとして用いた時の予防効果
（材料）
ワクチン：エーテル処理ＨＡワクチン（阪大微研製）；ホルマリン不活化全ウイルス粒ワクチン（Inactivated whole particle vaccine）、Ａ／Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルス)（阪大微研製）
マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）
（方法）
Ａ／Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルスのホルマリン不活化全ウイルス粒子ワクチン（Inactivated whole particle vaccine）０．１μｇを、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）［１００−１０００ｂｐ：東レ］０．１μｇと併用経鼻インフルエンザワクチンのワクチン成分としてマウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）に投与し、３週間後に同じワクチンを２回目投与した。
その１週間後にマウスの鼻洗浄液と血清中のＨＡとＮＡに対する抗体応答を、それぞれ粘膜および全身の防御免疫の指標として測定した。
【００５４】
（結果）
それらの結果を表６に示した。
【００５５】
【表６】
2005082581.tif 000007
【００５６】
表中の結果から判明するように、不活化全ウイルス粒子をＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用インフルエンザワクチンのワクチン成分として用いたときも、粘膜の防御免疫および全身の防御免疫が高められていた。
しかも、ワクチンとＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）とをそれぞれ０．１μｇで用いたときであっても、ｓｐｉｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅをＣＴＢ＊と併用して安全なウイルス感染阻止が予測されるアジュバント活性の陽性対照群と同等の応答を示した。
さらにこれらの応答は、ｓｐｉｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅをＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と共に用いた場合よりも高かった。
以上の事実から、ｓｐｉｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅのみならず、他の形態のワクチンを使用した場合でも、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻ワクチンの有用性が確認された。
【実施例４】
【００５７】
実施例４：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子の大きさの確認
（材料）
ウイルス：Ａ／Ｎｅｗ  ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルス
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）：
サイズ（Ｌ）：１〜３００ｂｐ（Ｆｌｕｋａ）
サイズ（Ｍ）：１００〜１０００ｂｐ（東レ）
サイズ（Ｈ）：＞３．３×１０６ｂｐ（Ｆｌｕｋａ）
Ｐｏｌｙ（Ａ：Ｕ）
マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）
（方法）
Ａ／Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルスのｓｐｉｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅ（０．４μｇ）を、種々の大きさのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の０．１μｇと、ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）に経鼻投与し、３週間後に同じワクチンを２回目投与した。
その１週間後にマウスの鼻洗浄液と血清中のＨＡとＮＡに対する抗体応答を、それぞれ粘膜および全身の防御免疫の指標として測定した。
【００５８】
（結果）
その結果を表７に示した。
【００５９】
【表７】
2005082581.tif 000008
【００６０】
表中に示した結果から判明するように、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子の大きさが１０〜３００ｂｐを用いた実験群では、他の群よりも低い粘膜応答が認められた。したがって、アジュバントとして有用なＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の分子の大きさは、約３００ｂｐ以上と考えられた。
【実施例５】
【００６１】
実施例５：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）以外の２本鎖ＲＮＡの作用
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）の作用を、他の２本鎖ＲＮＡであるＰｏｌｙ（Ａ：Ｕ）および単鎖Ｐｏｌｙ（Ａ，Ｕ）と比較した。
（材料）
サブユニット：精製ＨＡ
アジュバント：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）、Ｐｏｌｙ（Ａ：Ｕ）、Ｐｏｌｙ（Ａ，Ｕ）
（方法）
Ａ／Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルスから経鼻的抗ＨＡモノクローナル抗体結合カラムを用いてＨＡ分子を精製し、その１μｇをＰｏｌｙ（Ａ：Ｕ）（東レ）および単鎖のＰｏｌｙ（Ａ，Ｕ）（東レ）の１μｇと一緒にＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）に経鼻投与し、３週間後にＨＡのみ２回目を投与した。その１週間後にマウスの鼻洗浄液および血清中のＨＡに対する抗体応答をそれぞれ粘膜および全身の防御免疫の指標として測定した。
【００６２】
（結果）
その結果を表８に示した。
【００６３】
【表８】
2005082581.tif 000009
【００６４】
表中に示した結果からも判明するように、二本鎖Ｐｏｌｙ（Ａ：Ｕ）および単鎖Ｐｏｌｙ（Ａ，Ｕ）にもアジュバント活性が認められた。Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）のアジュバント活性と比べると、二本鎖Ｐｏｌｙ（Ａ：Ｕ）、単鎖Ｐｏｌｙ（Ａ，Ｕ）の順に小さかった。
したがって、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）以外の二本鎖ＲＮＡまたは一本鎖ＲＮＡにも経鼻インフルエンザワクチンと併用するとアジュバント活性が認められることが判明した。
【実施例６】
【００６５】
実施例６：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻投与条件で、いくつかのインフルエンザウイルスのサブユニットによる防御免疫誘導の検討
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻投与条件で、いくつかのインフルエンザウイルスのサブユニットを、防御免疫を誘導することを確認した。
（材料）
サブユニット：ＨＡ、ＮＡおよびＮＰ
アジュバント：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）［１００−１０００ｂｐ：東レ］
マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）
（方法）
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）と一緒に経鼻投与されたインフルエンザウイルスのサブユニット、ＨＡ、ＮＡおよびＮＰの防御効果誘導能を比較した。すなわち、Ａ／Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルスから特異的抗モノクローナル結合カラムを用いてＨＡ、ＮＡおよびＮＰ分子を精製し、その１μｇをＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）（１００−１０００ｂｐ：東レ）の１μｇと一緒にＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）に経鼻投与し、３週間後にそれぞれの分子を２回目投与した。その１週間後にマウスの鼻洗浄液および血清中のそれぞれの分子に対する抗体応答反応を粘膜および全身の防御免疫の指標として測定した。
【００６６】
（結果）
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、どのサブユニットに対する粘膜および全身の免疫応答を増強することが示された。しかしながら、ＨＡおよびＮＡに対する液性免疫増強によって予防効果が高められたが、ＮＰに対する液性免疫増強によっては、予防効果は高められなかった。したがって、ＨＡおよびＮＡが強い防御抗原であり、サブユニットによって予防効果誘導能に違いがあることが判明した。
【実施例７】
【００６７】
実施例７：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻インフルエンザワクチンの有効性を高めるため投与回数と投与間隔の検討
（材料）
ワクチン：Ａ／Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルスのＳｐｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅ（１μｇ）
アジュバント：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）［１００−１０００ｂｐ：東レ］
マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）
（方法）
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用インフルエンザワクチンの有効性を高める投与回数と投与間隔を検討するために、Ａ／Ｎｅｗ  Ｃａｌｅｄｏｎｉａ／２０／９９（Ｈ１Ｎ１）ウイルスのＳｐｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅ（１μｇ）をＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）（１００−１０００ｂｐ：東レ）の１μｇと一緒にＢＡＬＢ／ｃマウス（６週齢、雌性）に経鼻投与し、１，３，４，６週間後に同じワクチンを２回目投与した。その１あるいは２週間後にマウスの鼻洗浄液および血清中のＨＡおよびＮＡに対する抗体応答をそれぞれ粘膜および全身の防御免疫の指標にして測定した。また、このとき１回投与のみで１および８週後の実験群もおいた。
【００６８】
（結果）
１週間以上の間隔で２回以上の投与がＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）平ｙ方経鼻インフルエンザワクチンの有効性を高めるのに有効であった。
【実施例８】
【００６９】
実施例８：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻インフルエンザワクチンのヒトでの予防効果
Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）併用経鼻インフルエンザワクチンのヒトでの安全性、有効性についてインフルエンザ感染予防効果抗体応答から確認した。
（材料）
ワクチン：ＨＡワクチン（Ｓｐｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅ）
アジュバント：Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）［１００−１０００ｂｐ：東レ］
（被験者）
健常人：２〜数名
（方法）
健康成人に４００μｇ／ｍＬの現行のＨＡワクチン（Ｓｐｌｉｔ−ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖａｃｃｉｎｅ）および７００μｇ／ｍＬのＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）［１００−１０００ｂｐ：東レ］を含むワクチン液を、３００μＬ（１５０μＬずつ左右の鼻腔に）噴霧投与した。４週間後再投与し、投与前、１回投与後、２回投与後の血清材料のＨＡおよびＮＡに対する抗体応答を測定することにより、予防効果を確認した。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明により、ＴＬＲのリガンドである二本鎖または一本鎖ＲＴＮＡ、特にＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）を投与することにより、ウイルスまたは病原菌に特異的な呼吸器粘膜組織における分泌型ＩｇＡ抗体の産生が誘導される。分泌型ＩｇＡは、外分泌液中の主要な免疫グロブリンであり、したがって、本発明が提供するＴＬＲのリガンドである二本鎖または一本鎖ＲＮＡ、特にＰｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）は、このＩｇＡ抗体の産生を誘導することにより、ウイルスまたは病原菌になどの病原体による感染を防御するものであり、また感染予防のための分泌型ＩｇＡ抗体誘導剤が提供される。