(57)【要約】【課題】実際の培地に、食品添加用色素あるいは微生物を添加することによって、培養・増殖に影響を与えずに実態に即した培養・増殖タンク内の微生物懸濁液の均一性を少量のサンプルによって評価する方法を提供することを課題とする。【解決手段】食品添加用色素、培養・増殖あるいは保存対象の微生物と性質を異にする微生物、蛍光物質を取り込ませた培養・増殖あるいは保存対象の微生物のいずれかを、微生物培養・増殖あるいは保存用のタンクに添加することにより、微生物の培養・増殖に影響を与えずにタンク内の微生物懸濁液の均一性が評価する方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に食品添加用色素を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液の均一性を評価する方法。
【請求項２】
微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に微生物を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液の均一性を評価する方法。
【請求項３】
微生物が培養・増殖あるいは保存用の対象微生物とは性質を異にすることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
微生物が培養・増殖あるいは保存用の対象微生物の変異株である請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
微生物が培養・増殖あるいは保存用の対象微生物に蛍光物質を取り込ませたものである請求項２記載の方法。
【請求項６】
微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に食品添加用色素水溶液を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液に液体物質が分散、均一化していく状況を評価する方法。
【請求項７】
微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に微生物を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液に固体物質が分散、均一化していく状況を評価する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内の微生物懸濁液の均一性評価に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から微生物を効率的に培養・増殖する方法の検討が盛んに行われている。効率的に微生物の培養・増殖をおこなわせるには、培養・増殖タンクの中で、微生物が均一化した状態にあることが望ましい。また、広く実施されている流加培養・増殖においては、微生物懸濁液に液体あるいは固体状の栄養成分を添加するが、これらの栄養成分を効率的に付与するためには、これらが均一に分散していくことが必要である。一方、微生物の保存の際にはタンク内に保存されている微生物の温度をコントロールするために、緩やかな撹拌を行いながら、保存することが望ましく、適切な撹拌を行うために、タンク内の微生物懸濁液の均一性を確認することが望ましい。
【０００３】
また、これら培養・増殖や保存用のタンクの新設あるいは改良を行った際に、目的の能力を持っているのかを判断する必要がある。しかしながら、従来の技術はタンク内に水を充填した後に、色素液などの化学物質を添加してその希釈状況を判断するなどといった方法がとられている。そのため、実際には粘性があるような培地中に高濃度の微生物が含まれる培養・増殖や保存の状態にあるタンク内の微生物懸濁液の均一性と、水試験による均一性確認試験とが一致しないことが懸念されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明では実際の培地に、食品添加用色素あるいは微生物を添加することによって、培養・増殖に影響を与えずに実態に即した培養・増殖タンク内の微生物懸濁液の均一性を少量のサンプルによって評価する方法を提供することを課題とする。さらに微生物培養の目的によってはこれらの均一性を評価した培養液あるいは微生物をそのまま次工程に展開することが出来るようにすることを課題とする。                                                                                  
【課題を解決するための手段】
【０００５】
食品添加用色素、培養・増殖あるいは保存対象の微生物と性質を異にする微生物、蛍光物質を取り込ませた培養・増殖あるいは保存対象の微生物のいずれかを、微生物培養・増殖あるいは保存用のタンクに添加することにより、微生物の培養・増殖に影響を与えずにタンク内の微生物懸濁液の均一性が評価できることを見出し、本発明を完成した。また、上記色素あるいは微生物の添加時期を変えることによって、タンク内の微生物懸濁液の均一性だけではなく、培養・増殖に必要な液状あるいは固体状の栄養成分を添加したときにタンク内に拡散する状況を評価することが出来る。  
【０００６】
すなわち、本発明は微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に食品添加用色素を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液の均一性を評価する方法である。
また、本発明は微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に微生物を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液の均一性を評価する方法である。添加する微生物は、培養・増殖あるいは保存対象微生物とは性質を異にすることが好ましい。また、添加する微生物は、培養・増殖あるいは保存対象微生物の変異株であることが好ましい。あるいは、添加する微生物は培養・増殖あるいは保存用の対象微生物に蛍光物質を取り込ませたものであることが好ましい。
【０００７】
さらに、本発明は微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に食品添加用色素水溶液を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液に液体物質が分散、均一化していく状況を評価する方法である。また、本発明は微生物培養・増殖あるいは保存用のタンク内に微生物を添加することを特徴とする前記タンク内の微生物懸濁液に固体物質が分散、均一化していく状況を評価する方法である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、培養・増殖ならびに保存用のタンク内の微生物懸濁液の均一性、ならびに液体状あるいは固体状の物質を添加した時の物質の拡散、均一化状況を、微生物の生育を阻害せずに、実態に則して評価することが可能になる。また、微生物培養・増殖ならびに保存後の目的によってはこれらの均一性を評価した培養・増殖液あるいは微生物をそのまま次工程に展開することが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は、食品添加用色素、培養・増殖あるいは保存対象微生物と性質を異にする微生物、蛍光物質を取り込ませた培養・増殖あるいは保存対象微生物のいずれかを、微生物培養・増殖あるいは保存用のタンクに添加することにより、微生物の培養・増殖に影響を与えずにタンク内の微生物懸濁液の均一性を評価する方法を提供する。どの方法を採用するかは均一化を測定する目的、あるいは評価をするための実験設備や作業性によって選択すればよい。
【００１０】
以下に本発明を詳しく説明する。評価対象となるタンク類は微生物用の培養・増殖や保存用などいかなる形状に対しても対応可能である。この方法は下記のいずれかの物質あるいは微生物をタンク内に投入し、その後の検出状況を経時的に追跡調査することによって、タンク内での拡散状況や、種々の撹拌や循環方法による均一化の評価を行うことができる。いずれの方法とも評価用サンプルとなる培養液は５ｍｌ程度あれば十分である。
【００１１】
１．食品添加用色素を使用する方法  
この方法には、低濃度の物質を容易に定量することができ、食品用に使用することが認められており、微生物の生育を阻害しないものが、使用する色素として安全性が高いことから望ましい。例えば食品添加用色素である赤色106号を用いて、高速液体クロマトグラフィーによって検出する方法があげられる。特に、タンク内での液体状物質の均一化の評価に有用である。
【００１２】
２．培養・増殖あるいは保存用の対象微生物と性質を異にする微生物を使用する方法
培養・増殖あるいは保存用の対象微生物と近縁あるいは同一種であり、性質がやや異なる微生物を用いることが望ましい。例えば、温度や薬剤耐性、コロニーの呈色などの性質があげられ、容易に性質の違いに基づいて寒天平板上で検出できることが必要である。また、これらの微生物は食品用に使用することができるよう、安全性が高いことが望ましい、なお、上記の性質を持った培養・増殖あるいは保存用の対象微生物の変異株を用いても良い。特別な器具・装置類を使用せずに評価できるメリットがある。
【００１３】
３．蛍光物質を取り込ませた培養・増殖あるいは保存用の対象微生物を使用する方法  
微生物菌体内に取り込まれ、安定的に保持される蛍光色素をあらかじめ培養・増殖あるいは保存用の対象微生物に取り込ませておく。取り込ませる方法は色素によって異なるが、一般的に報告されている方法で構わない。余分な蛍光色素を洗浄によって除去した後、タンク内に添加する。当該の色素に対応した励起波長を用いてフローサイトメトリーにより検出する。
【実施例１】
【００１４】
酵母培養タンクに液体状物質を添加したときの均一化確認試験
酵母を培養しているタンクに、食品添加物である赤色色素、赤色106号の水溶液を培養液中の最終濃度が約500pptになるように添加する。エアレーションを開始し、経時的にサンプリングコックから培養液をとり、培養液中の赤色106号の濃度を高速液体クロマトグラフを用いて定量する。その結果を表１に示すが、エアレーションにより培養液が均一化して行く状況を確認でき、さらにその後も十分に均一化していることを確認することが可能であった。
【００１５】
【表１】
2005253369.tif 000002
【実施例２】
【００１６】
酵母培養タンクに温度耐性の異なる酵母を添加したときの均一化確認試験  
酵母を培養しているタンクに、培養中の酵母と同一種の温度耐性の高い酵母（37℃生育能のある酵母）を培養液中の最終濃度が約1×105cells／mlになるように添加する。培養液の撹拌を開始し、経時的にサンプリングコックから培養液をとり、それぞれのサンプルについて滅菌水を用いて100倍に希釈した後、寒天培地に100μ1ずつとり、コンラージ棒を用いてスプレッドする。培養酵母に比べて、添加した酵母は温度耐性が高いことを利用し、37℃にて3日間培養する。培養酵母は37℃で生育できないため、生育してきたコロニーはすべて後から添加した酵母であり、その生育コロニー数を計数する。その結果を表２に示すが、酵母添加後の均一化に必要な時間を判断することが出来た。この知見から酵母と同じようなサイズの固形物の均一化時間を判断することも十分可能である。
【００１７】
【表２】
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【実施例３】
【００１８】
酵母培養タンクに蛍光物質をあらかじめ取り込ませた同一酵母を添加した時の均一化確認試験  
合成培地を用いて酵母を培養しているタンクにあらかじめNile
Redで染色した同一酵母を約1／100の濃度になるように添加する。経時的にサンプリングコックから培養液をとり、Nile Redに対応した励起波長を用いてフローサイトメトリーでサンプルを測定する。図１に示すように培養酵母と添加した蛍光染色酵母では蛍光強度が異なることから、添加した酵母のピークエリアの推移から均一化の状況を判断することが可能であった。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】培養酵母と蛍光色素取り込み酵母のフローサイトメトリーピークの違いを示す図である。
【図１】
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