(57)【要約】【課題】一般生菌を損傷することなく精度良く芽胞菌数を測定できる芽胞菌処理方法を提供する。【解決手段】ペプトンを１％含む生理食塩水で高野豆腐サンプルをストマッキングした後に１０倍に希釈することにより、初期菌数が数百から数千程度のストマック液を作製した。そして、このストマック液を用いて、ＤＯＸによる電流値が飽和するまでの時間を測定した。図１に示される実験１においては、ストマック液をプラスチック製の５０ｍｌ遠沈管に１５ｍｌずつ取り分け、マイクロ波を照射した後にＤＯＸによる測定を行った。このマイクロ波としては、電子レンジを用いることにより、周波数２４５０ＭＨｚのものを照射した。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
芽胞菌を増殖させる前の工程であって、芽胞菌を含む培地にマイクロ波を照射するマイクロ波照射工程
を備える芽胞菌処理方法。
【請求項２】
芽胞菌を増殖させる前の工程であって、芽胞菌を含む培地にピルビン酸を加える工程
を備える芽胞菌処理方法。
【請求項３】
請求項１に記載の芽胞菌処理方法であって、
前記マイクロ波照射工程では２４５０ＭＨｚの入力を行う、
芽胞菌処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は芽胞菌処理方法に関し、被測定対象中の芽胞菌数の経時的変化を測定するための技術に関する。
【背景技術】
【０００２】
加熱製品や乾燥した食材（培地）などには芽胞菌が多く含まれている。従来から、酸素電極法（ＤＯＸ）等を用いて、食材中の芽胞菌数の測定が行われている。ＤＯＸは、微生物の呼吸に伴う酸素量の変化を検出することにより、微生物数を測定している。即ち、微生物を含む液体中において、酸素電極を用いて電流を流し、電流値が飽和するまでの時間（飽和時間）を測定することにより、微生物数が測定される。ＤＯＸを用いた微生物数の測定方法は、例えば、特許文献１〜５等に開示されている。
【０００３】
【特許文献１】特開２００１−２５２０６６号公報
【特許文献２】特許第３２４０９５３号公報
【特許文献３】特許第３２４０９５２号公報
【特許文献４】特許第３１８０７０９号公報
【特許文献５】特開２０００−２８７６９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
芽胞菌は、発芽しない芽胞の状態では、ほとんど呼吸を行わない。また、芽胞の状態から、増殖可能な状態になるまでには、ラグフェーズと呼ばれる所定の時間を要する。このラグフェースは、菌の種類や状態により異なる。そのため、ＤＯＸを用いて芽胞菌数を測定するときに、測定される飽和時間のばらつきが大きくなることにより測定精度が低下する場合があるという問題点があった。
【０００５】
また、培地を加温することにより芽胞菌を発芽させる、ヒートショックと呼ばれる手法も考えられているが、この場合、培地に含まれる一般生菌を損傷する場合があるという問題点があった。
【０００６】
本発明は以上の問題点を解決するためになされたものであり、一般生菌を損傷することなく精度良く芽胞菌数を測定できる芽胞菌処理方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の課題を解決するために、請求項１に記載の発明に係る芽胞菌処理方法は、芽胞菌を増殖させる前の工程であって、芽胞菌を含む培地にマイクロ波を照射するマイクロ波照射工程を備える。
【０００８】
また、請求項２に記載の発明に係る芽胞菌処理方法は、芽胞菌を増殖させる前の工程であって、芽胞菌を含む培地にピルビン酸を加える工程を備える。
【０００９】
また、請求項３に記載の発明に係る芽胞菌処理方法は、請求項１に記載の芽胞菌処理方法であって、前記マイクロ波照射工程では２４５０ＭＨｚの入力を行う。
【発明の効果】
【００１０】
請求項１，２に記載の発明に係る芽胞菌処理方法は、ヒートショックを与えることなくラグフェースのばらつきを低減する。よって、一般生菌を損傷することなく精度良く芽胞菌数を測定できる。また、ラグフェーズ自体も短縮されるので、測定時間を短縮できるという効果を有する。
【００１１】
また、請求項３に記載の発明に係る芽胞菌処理方法においては、マイクロ波照射工程では２４５０ＭＨｚの入力を行う。電磁波は法的規制があるため、自由な周波数を選択し利用することは難しいが、本周波数は、一般に電子レンジで使われており、利用が比較的容易である。また、本処理方法においては、既存の電子レンジの出力レベルでの効果が確認できているため、マイクロ波照射装置として、市販の装置が利用でき、マイクロ波照射を容易に行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
＜実施の形態１＞
図１〜３に、ＤＯＸを用いて芽胞菌による電流変化を測定した結果を示す。以下の説明においては、図１〜３に対応する実験をそれぞれ実験１〜３と呼ぶ。各実験においては、ペプトンを１％含む生理食塩水で高野豆腐サンプルをストマッキングした後に１０倍に希釈することにより、初期菌数が数百から数千程度のストマック液を作製した。そして、このストマック液を用いて、ＤＯＸによる電流値が飽和するまでの時間を測定した。このとき、図１，２に示されるように、実験１，２においては、それぞれ、２回ずつ測定を行った。また、図３に示されるように、実験３においては、５回の測定を行った。そして、互いに測定結果のばらつきの比較を行った。この比較に際しては、ＤＯＸによる電流値が３００ｎＡに下がるまでの時間を飽和時間の目安とした。
【００１３】
まず、図１，２に示される実験１，２を用いて、マイクロ波照射の有効性について説明する。
【００１４】
即ち、実験１においては芽胞菌を含む培地にマイクロ波を照射させた場合の測定を行い、実験２においては芽胞菌を含む培地にマイクロ波を照射させない場合の測定を行った。実験１，２においては、いずれもピルビン酸の添加は行わず、マイクロ波照射の有無以外はほぼ同一条件で測定を行った。
【００１５】
実験１においては、ストマック液をプラスチック製の５０ｍｌ遠沈管に１５ｍｌずつ取り分け、マイクロ波を照射した後にＤＯＸによる測定を行った。このマイクロ波としては、電子レンジを用いることにより、周波数が２４５０ＭＨｚのものを照射した。一方、実験２においては、マイクロ波をストマック液に照射することなく、ＤＯＸによる測定を行った。
【００１６】
図１と図２とを比較すると、実験２では、１回の測定においては、電流値が３００ｎＡに下がるまでの時間が測定できているが、他の１回の測定においては、電流値が３００ｎＡまで下がらず、誤判定されている。これに対し、実験１では、２回の測定全てにおいて、電流値が３００ｎＡに下がるまでの時間が測定できている。これは、マイクロ波を照射することにより芽胞菌の発芽が促進され発芽のタイミングが同調させられるので、ラグフェースのばらつきが小さくなったためと考えられる。即ち、マイクロ波を照射することにより、精度良く芽胞菌数を測定することが可能となる。また、ラグフェース自体も短縮されるので、測定時間を短縮することが可能となる。また、電磁波は法的規制があるため、自由な周波数を選択し利用することは難しいが、上記の２４５０ＭＨｚの周波数は、一般に電子レンジで使われており、利用が比較的容易である。また、本処理方法においては、既存の電子レンジの出力レベルでの効果が確認できているため、マイクロ波照射装置として、市販の装置が利用でき、マイクロ波照射を容易に行うことができる。この電子レンジの使用条件としては、５００Ｗで５秒間程度のマイクロ波照射を行った場合に、ばらつきが最も小さくなり再現性が向上することが確認されている。
【００１７】
次に、図３に示される実験３を用いて、ピルビン酸添加の有効性について説明する。
【００１８】
即ち、実験３においては、マイクロ波照射は行わず、１％のピルビン酸をＤＯＸ測定用セルの中に滴下することにより添加し、その後にＤＯＸによる測定を行った。実験３においては、ピルビン酸添加の有無以外は、実験２とほぼ同一条件で測定を行った。
【００１９】
図２と図３とを比較すると、実験３においては、実験２のように誤判定されることなく、５回の測定全てにおいて、電流値が３００ｎＡに下がるまでの時間が測定できている。これは、ピルビン酸を添加することにより芽胞菌の発芽が促進され発芽のタイミングが同調させられるので、ラグフェースのばらつきが小さくなったためと考えられる。即ち、ピルビン酸を添加することにより、精度良く芽胞菌数を測定することが可能となる。また、ラグフェース自体も短縮されるので、測定時間を短縮することが可能となる。
【００２０】
図４に、電子レンジを用いたマイクロ波照射に伴うストマック液の温度上昇を示す。このマイクロ波照射においては、ストマック液を、上述したようなプラスチック製の５０ｍｌ遠沈管に１５ｍｌずつ取り分け、レンジ皿中央に起立させた状態で、電子レンジ内にてマイクロ波を照射した。また、マイクロ波照射に先立ち、ストマック液を予め室温（２５℃）で放置することにより、液温が室温程度となるようにした。
【００２１】
図４に示されるように、電子レンジ内にて５００Ｗで５秒間程度のマイクロ波照射を行った場合には、液温の上昇は１．３℃であった（即ち、マイクロ波照射後の液温は２６．３℃であった）。一般的なヒートショックは、８０〜１００℃程度で１０〜３０分間加温されることにより与えられる。従って、上述したようなラグフェーズのばらつきの低減およびラグフェーズ自体の短縮は、ヒートショックによるものではないと考えられる。従って、このようなマイクロ波照射を行った場合においても、培地に含まれる一般生菌が損傷されることはない。
【００２２】
このように、本実施の形態に係る芽胞処理方法においては、マイクロ波照射やピルビン酸添加を行うことにより、ヒートショックを与えることなくラグフェースのばらつきを低減する。よって、一般生菌を損傷することなく精度良く芽胞菌数を測定できる。また、ラグフェーズ自体も短縮されるので、測定時間を短縮できるという効果を有する。
【００２３】
なお、上記においては、ＤＯＸを用いて芽胞菌数を測定する場合について説明したが、
ＤＯＸに限らず、他の手法においても、本発明は適用可能である。即ち、寒天平板法等の他の手法を用いた場合においても、マイクロ波照射やピルビン酸添加を行うことにより、一般生菌を損傷することなく精度良く芽胞菌数を測定でき、また、測定時間を短縮することができるという効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】実施の形態１に係る芽胞菌処理方法による測定結果を示すグラフである。
【図２】実施の形態１に係る芽胞菌処理方法による測定結果を示すグラフである。
【図３】実施の形態１に係る芽胞菌処理方法による測定結果を示すグラフである。
【図４】実施の形態１に係る芽胞菌処理方法による温度上昇を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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