(57)【要約】【課題】安全で優れた、食品、医薬品、医薬部外品、医療用具、餌飼料、動物用医薬品、ペット用食品等に広く用いることが可能である免疫制御剤を提供する。【解決手段】酸性ムコ多糖類であるコンドロイチン硫酸の中でも、特定のコンドロイチン硫酸；コンドロイチン硫酸A、コンドロイチン硫酸C、コンドロイチン硫酸D、コンドロイチン硫酸E及び／又はこれらの誘導体の１種以上を有効成分として食品、医薬品、医薬部外品、医療用具、餌飼料、動物用医薬品、ペット用食品等に含有させることによって免疫制御を行う。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸性ムコ多糖類及び／又はその誘導体を有効成分として含むことを特徴とする免疫制御剤。
【請求項２】
酸性ムコ多糖類がコンドロイチン硫酸である請求項１に記載の免疫制御剤。
【請求項３】
請求項１に記載の誘導体が、コンドロイチン硫酸二糖ユニット当たりスルホン基を２個または４個有することを特徴とする請求項１又は２に記載の免疫制御剤。
【請求項４】
コンドロイチン硫酸が、コンドロイチン硫酸Ａ，コンドロイチン硫酸Ｃ，コンドロイチン硫酸Ｄ，コンドロイチン硫酸Ｅから選択される１種以上である請求項２または３に記載の免疫制御剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コンドロイチン硫酸を有効成分とする経口、経皮、静脈注射または経鰓による免疫制御機能を有する免疫制御剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
医学の進歩と共に、高度の治療に伴う免疫機能の低下または免疫機能の不全が原因とされる疾患が著しく増加している。一方、アトピー性皮膚炎や花粉症、食物成分等のアレルギー患者が増加の一途をたどり、深刻な社会問題となっている。
【０００３】
医薬品の分野では、免疫制御剤として、コルチコステロイド、インターフェロンが自己免疫疾患や多発性骨髄腫等の疾患に対する治療薬として用いられ、効果は認められているが、副作用が強く、使用上の制限を伴っているというのが現状である。
【０００４】
食品の分野においても、免疫制御機能をもつ成分の検索は広範囲に実施されており、茶、きのこ、野菜、果物、魚油等に免疫制御機能のあることが報告されているが、その機構は明らかではないものが多い。
【０００５】
一方、コンドロイチン硫酸は、生体内ではガラクトース2分子及びキシロース1分子の橋渡し構造を介してセリン残基に結合してタンパク質との複合体、プロテオグリカンを形成し、結合組織の主要構成成分として、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等と共に細胞外マトリックスの構成に関与しており、軟骨、骨、角膜、頸靱帯、腱、臍帯、皮膚、尿、血液など各種臓器や体液中に存在することが知られている。
【０００６】
Sakaiらはコンドロイチン硫酸に免疫制御機能のあることを既に見出している（非特許文献１参照）が、コンドロイチン硫酸の構造と免疫制御機能の関係については言及されていない。コンドロイチン硫酸は、鎖長、スルホン基結合数、スルホン基結合部位によって異なる種々の生理活性を有することが指摘されているが、生体内における生理的役割や存在状態に関しては依然として不明なことが多い。またKawashimaらは、コンドロイチン硫酸ＥがリガンドとしてL-セレクチン、P-セレクチン、CD44、ケモカインと結合することを報告している（非特許文献２参照）。
【０００７】
一方、多硫酸化ムコ多等糖類が、アレルギー性疾患の予防または治療薬（特許文献１参照）、カリクレインーキニン系阻害剤（特許文献２参照）としての機能を有することが記載されている。
【０００８】
【特許文献１】特開平１１−３３５２８８号公報
【特許文献２】特開平１１−１４７９０１号公報
【非特許文献１】Sakai, S., Akiyama, H., Harikai, N., Toyoda, H., Toida, T., Maitani, T., Imanari, I., (2002) Immunol. Lett., 84, 211-216.
【非特許文献２】Kawashima, H.,  Hirose, M., Hirose, J., Nagakubo, D., Plaas, A. H. K., and Miyasaka, M. (2000) J. Biol. Chem. 275, 35448-35456.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、安全で優れた、食品、医薬品、医薬部外品、医療用具、餌飼料、動物用医薬品、ペット用食品等に広く用いることが可能である免疫制御剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、副作用が弱い免疫制御剤の探索につき鋭意研究し、酸性ムコ多糖類であるコンドロイチン硫酸のスルホン基の位置及び数（構造）について詳細に検討した結果、特定のコンドロイチン硫酸が免疫制御機能（活性）を有することを見出し、本発明に至った。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｄ、コンドロイチン硫酸Ｅ及び／又はこれらの誘導体から選択される免疫制御剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の成分であるコンドロイチン硫酸は脊椎動物、環形動物、節足動物、軟体動物などに含まれる化合物である。または微生物によって生産される化合物である。
【００１３】
コンドロイチン硫酸は二糖ユニットから成る酸性ムコ多糖である。コンドロイチン硫酸Ａの構造は（→4GlcAβ1→3GalNAc4Sβ1→）n、コンドロイチン硫酸Ｃの構造は（→4GlcAβ1→3GalNAc6Sβ1→）n、コンドロイチン硫酸Ｄの構造は（→4GlcA2Sβ1→3GalNAc6Sβ1→）n、コンドロイチン硫酸Ｅの構造は（→4GlcAβ1→3GalNAc4S6Sβ1→）nである。ここでGlcAはD-グルクロン酸、βは結合様式、矢印の前後の数字は結合位、GALNAcはN-アセチル-D-ガラクトサミン、Sはスルホン基、Sの前の数字はスルホン基の数、nは重合度を示す。
【００１４】
近年、アレルギー反応の治療には、ヘルパーT細胞Th1細胞とヘルパーT細胞Th2細胞のバランスを正常に戻すことが重要であるということが明らかになってきた。即ち、Th2細胞がTh1細胞より優勢になると細胞性免疫が低下し、Th1細胞が優勢になると細胞性免疫が増大する。コンドロイチン硫酸及びこれら誘導体のTh1型サイトカイン（インターフェロンγ、インターロイキン2）産生、Th2型サイトカイン（インターロイキン5、インターロイキン10）産生を検討した。その結果、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｄ、コンドロイチン硫酸Ｅ及び誘導体が、Th1型サイトカイン産生を促進させ、Th2型サイトカイン産生を抑制する免疫制御機能を有することを見出した。
【００１５】
本発明において免疫制御剤の有効成分として用いられるコンドロイチン硫酸成分は、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｄ、コンドロイチン硫酸Ｅ及びこれらの誘導体を含有するものであればよく、市販のものや、動物から直接抽出・分離・精製したもの、微生物が生産したものを分離・精製したもの、あるいはこれらの化学的合成誘導体が利用できる。
【００１６】
本発明の免疫制御剤の希釈剤または担体としては、本発明の効果を妨げないものであれば特に制限されず、例えばスクロース、グルコース、デキストリン、水飴、液糖などの糖類；エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等のアルコール類；ソルビトール、マンニトール等の糖アルコール；アラビアガム等の多糖類；または水を挙げることができる。また添加剤としては、抗酸化剤、キレート剤等の助剤、香料、香辛料抽出物、防腐剤などを挙げることができる。
【００１７】
本発明の免疫制御剤が適用される具体的な製品としては、特に制限されないが、例えば、食品（飲食物）、化粧品、医薬品、医薬部外品、医療用品、餌飼料、動物用医薬品、ペット用食品等を挙げることができる。
【００１８】
本発明が対象とする食品としては、例えば乳飲料、乳酸菌飲料、果汁入り清涼飲料、清涼飲料、炭酸飲料、果汁飲料、野菜飲料、野菜・果実飲料、アルコール飲料、粉末飲料、コーヒー飲料、紅茶飲料などの飲料類；カスタードプリン、ミルクプリン、スフレプリン、果汁入りプリン等のプリン類、ゼリー、ババロア及びヨーグルト等のデザート類；アイスクリーム、アイスミルク、ラクトアイス、ミルクアイスクリーム、果汁入りアイスクリーム及びソフトクリーム、アイスキャンディー、シャーベット、氷菓等の冷菓類；チューインガムや風船ガム等のガム類（板ガム、糖衣状粒ガム）；マーブルチョコレート等のコーティングチョコレートの他、イチゴチョコレート、ブルーベリーチョコレート及びメロンチョコレート等の風味を付加したチョコレート等のチョコレート類；ハードキャンディー（ボンボン、バターボール、マーブル等を含む）、ソフトキャンディー（キャラメル、ヌガー、グミキャンディー、マシュマロ等を含む）、ドロップ、タフィ等のキャラメル類；ハードビスケット、クッキー、おかき、煎餅等の焼き菓子類（以上、菓子類）；コンソメスープ、ポタージュスープ等のスープ類；浅漬け、醤油漬け、塩漬け、味噌漬け、粕漬け、麹漬け、糠漬け、酢漬け、芥子漬、もろみ漬け、梅漬け、福神漬、しば漬、生姜漬、梅酢漬け等の漬物類；セパレートドレッシング、ノンオイルドレッシング、ケチャップ、たれ、ソースなどのソース類；ストロベリージャム、ブルーベリージャム、マーマレード、リンゴジャム、杏ジャム、プレザーブ等のジャム類；赤ワイン等の果実酒；シロップ漬のチェリー、アンズ、リンゴ、イチゴ、桃等の加工用果実；ハム、ソーセージ、焼き豚等の畜肉加工品；魚肉ハム、魚肉ソーセージ、魚肉すり身、蒲鉾、竹輪、はんぺん、薩摩揚げ、伊達巻き、鯨ベーコン等の水産練り製品；バター、マーガリン、チーズ、ホイップクリーム等の酪農・油脂製品類；うどん、冷麦、そうめん、ソバ、中華そば、スパゲッティ、マカロニ、ビーフン、はるさめ及びワンタン等の麺類；その他、各種総菜及び麩、田麩等の種々の加工食品を挙げることができる。好ましくは飲料及び菓子類である。
【００１９】
本発明の飲食物は、製造の任意の工程で本発明の免疫制御剤を配合することを除けば、各種飲食物の慣用の製造方法に従って製造することができる。免疫制御剤の配合方法やその順番に特に制限はない。
【００２０】
例えば、冷菓類の場合は、まず主原料としての牛乳、クリーム、練乳、粉乳、糖類、果実または餡等に本発明の免疫調節剤、酸類、乳化剤及び安定剤を加え、次いで香料を加えて冷菓ミックス液を調製し、このミックス液に色素を添加混合し、殺菌、冷却後フリージングして容器に充填し、冷却または凍結して最終製品を調製する方法を挙げることができる。
【００２１】
また、チューインガム類の場合は、加熱し柔らかくしたガムベースに砂糖、ブドウ糖、本発明の免疫制御剤、及びクエン酸等を加え、次いでその中に香料及び色素を加え練合し、次に圧延ローラーで適当な厚さにして、室温まで冷却後、切断して最終製品を調製する方法を挙げることができる。
【００２２】
また、デザート類の場合は、主原料の砂糖、水飴、本発明の免疫制御剤、クエン酸及び凝固剤（ペクチン、寒天、ゼラチン、カラギナンなど）を適当な割合で混合し、その中に香料並びに色素を加え、加熱溶解した後、容器に充填し、冷却して最終製品であるゼリーを調製する方法を挙げることができる。キャンディー類の場合は、例えば砂糖、水飴等の主原料に水を加え加熱し溶解した後放冷し、免疫制御剤を添加し、次いで香料及び色素を加え、成型し、室温まで冷却して最終キャンディーを調製する方法を挙げることができる。
【００２３】
また、飲料の場合は、主原料としての糖類、果汁または酸類等に本発明の免疫制御剤や安定剤等を加え、次いでこの飲料に香料及び必要に応じて色素を添加混合した後、殺菌、冷却して容器に充填する方法を挙げることができる。
【００２４】
漬物類の場合は、漬物とする野菜、海藻、キノコまたは果物等の主原料に、食塩や糖類等の各種調味料、保存料、及び本発明の免疫制御剤等の副原料を加えて漬物を調製し、この漬物に香料及び必要に応じて色素を添加混合した後、容器に充填し、殺菌、冷却し最終製品を調製する方法を挙げることができる。タレ類やドレッシング類の場合は、植物油、醤油、果汁、糖類、果汁、醸造酢または食塩等を主原料とし、これに本発明の免疫制御剤及び安定剤または乳化剤等を加え、このドレッシング液に香料及び必要により色素を添加混合した後、殺菌、冷却後容器に充填して最終製品を調製する方法を挙げることができる。
【００２５】
本発明が対象とする化粧品としては、スキン化粧料（ローション、乳液、クリームなど）、口紅、日焼け止め化粧品、メークアップ化粧品等を；医薬品としては、医薬組成物として従来からの免疫制御剤、抗癌剤、抗アレルギー剤等と一緒に用いてもよく、公知の方法により製剤化された、各種錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、ドリンク剤等の経口剤、あるいは座剤、軟膏、噴霧剤、注射剤、ハップ剤等の非経口剤を；医薬部外品としては歯磨き剤、ドリンク剤、口中清涼剤、口臭予防剤、ハップ剤、軟膏、石鹸、洗顔料、クリーム、乳液、シャンプー、リンス等を；また餌飼料としては、鑑賞魚用餌、養殖水産物用餌、家畜用飼料、鳥類用餌料、牧畜用餌料等を一例として挙げることができるが、これらに制限されるものではない。
【００２６】
これらの化粧品、医薬品、医薬部外品または餌飼料などの各種製品は、それら製造の任意の工程で本発明の免疫調節剤を配合することを除けば、各種製品の慣用方法に従って製造することができる。化粧品、医薬品、医薬部外品または餌飼料に対する免疫制御剤の配合時期は特に制限されない。
【００２７】
飲食物、化粧品、医薬品、医薬部外品または餌飼料等の各種製品に対する本発明の免疫制御剤の添加量は、特に制限されない。対象物の種類・用途及びそれに含まれる成分などを考慮して適宜選択、決定することができる。
【００２８】
本発明を実施例に基づいて更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００２９】
雌性マウスBALB/c マウス（７週齢）に20μgのovalbumin (OVA)を2mgの水酸化アルミニウムゲルと共に腹腔感作し、２次感作後に脾細胞懸濁液（5.0 × 106 cells/mL）を調製した。 in vitro においてOVAで刺激した後、最終濃度1ppm/wellとなるように、コンドロイチン硫酸A（牛気管軟骨由来）、コンドロイチン硫酸B（豚皮膚由来）、コンドロイチン硫酸C（サメ軟骨由来）を添加し、培養温度37℃、CO2濃度5%の条件下で培養し、上清中に産生される各種サイトカインをELISAで定量した。
【００３０】
図１は、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｂ、コンドロイチン硫酸Ｃを添加して上記条件で培養した時のTh1型サイトカインであるインターフェロンγ（INF-γ）、インターロイキン2（IL-2）、Th2型サイトカインであるインターロイキン5（IL-5）、インターロイキン10（IL-10）のコントロールに対する産生比を示している。図１において、Th1型サイトカイン産生比が増大すればTh1型サイトカイン産生が促進されたことを示し、Th2型サイトカイン産生比が減少すればTh2型サイトカイン産生が抑制されたことを示している。図１に示すように、コンドロイチン硫酸Ａ及びコンドロイチン硫酸ＣにTh1型サイトカイン産生の促進、Th2型サイトカイン産生の抑制が認められたが、コンドロイチン硫酸ＢにはTh1型サイトカイン産生の促進もTh2型サイトカイン産生の抑制も認められなかった。即ちコンドロイチン硫酸Ａ及びコンドロイチン硫酸Ｃには免疫制御機能が認められたが、コンドロイチン硫酸Ｂには免疫制御機能が認められなかった。
【実施例２】
【００３１】
実施例１と同様に、  雌性マウスBALB/c マウス（７週齢）に20μgのovalbumin (OVA)を2mgの水酸化アルミニウムゲルと共に腹腔感作し、２次感作後に脾細胞懸濁液（5.0 × 106 cells/mL）を調製した。 in vitro においてOVAで刺激した後、最終濃度1ppm/wellとなるように、スルホン化度の異なるコンドロイチン硫酸Ａ（牛気管軟骨由来）を添加し、培養温度37℃、CO2濃度5%の条件下で培養し、上清中に産生される各種サイトカインをELISAで定量した。スルホン化度の異なるコンドロイチン硫酸は化学的手法を用いて調製した。
【００３２】
図２において、pOS Chondroitinは、二糖ユニットあたりスルホン基を２個有するコンドロイチン硫酸、fOS Chondroitinは、二糖ユニットあたりスルホン基を４個有するコンドロイチン硫酸、de OS Chondroitinは、スルホン基を全くもたないコンドロイチン硫酸を示す。pOS Chondroitin及びfOS Chondroitinは、コンドロイチン硫酸Ａと同様に、Th1型サイトカイン産生の促進が認められたが、全くスルホン基をもたないde OS Chondroitinでは、Th1型サイトカイン産生の促進もTh2型サイトカイン産生の抑制も認められなかった。即ち二糖ユニットあたりスルホン基を２個有するコンドロイチン硫酸及び二糖ユニットあたりスルホン基を４個有するコンドロイチン硫酸には免疫制御機能が認められたが、全くスルホン基をもたないコンドロイチン硫酸には免疫制御機能が認められなかった。
【実施例３】
【００３３】
実施例１と同様に、雌性マウスBALB/c マウス（７週齢）に20μgのovalbumin (OVA)を2mgの水酸化アルミニウムゲルと共に腹腔感作し、２次感作後に脾細胞懸濁液（5.0 × 106 cells/mL）を調製した。 in vitro においてOVAで刺激した後、最終濃度1ppm/wellとなるように、二糖ユニットあたり２個のスルホン基を有する天然物由来コンドロイチン硫酸であるコンドロイチン硫酸Ｄ（サメ軟骨由来）及びコンドロイチン硫酸E（イカ軟骨由来）を添加し、培養温度37℃、CO2濃度5%の条件下で培養し、上清中に産生される各種サイトカインをELISAで定量した。
【００３４】
その結果、図３に示すように、コンドロイチン硫酸Ｄ及びコンドロイチン硫酸Ｅに、コンドロイチン硫酸Ａと同様、Th1型サイトカイン産生の促進、Th2型サイトカイン産生の抑制が認められた。即ち二糖ユニットあたり２個のスルホン基を有するコンドロイチン硫酸Ｄ及びコンドロイチン硫酸Ｅに免疫制御機能が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明によれば、コンドロイチン硫酸は安全で優れた免疫制御剤として、医薬品、食品、医薬部外品、医療用具、餌飼料、動物用医薬品、ペット用食品等に広く用いることが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】OVA免疫感作マウス由来脾臓細胞におけるTh1型サイトカインであるIFN-γ（インターフェロンγ）、IL-2（インターロイキン2）、Th2型サイトカインであるIL-5（インターロイキン5）、IL-10（インターロイキン10）産生に及ぼすコンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｂ、コンドロイチン硫酸Ｃの影響をみた。
【００３７】
【図２】OVA免疫感作マウス由来脾臓細胞におけるTh1型サイトカインであるIFN-γ（インターフェロンγ）、IL-2（インターロイキン2）、Th2型サイトカインであるIL-5（インターロイキン5）、IL-10（インターロイキン10）産生に及ぼすスルホン基数の影響をみた。
【００３８】
【図３】OVA免疫感作マウス由来脾臓細胞におけるTh1型サイトカインであるIFN-γ（インターフェロンγ）、IL-2（インターロイキン2）、Th2型サイトカインであるIL-5（インターロイキン5）、IL-10（インターロイキン10）産生に及ぼすコンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｄ、コンドロイチン硫酸Ｅの影響をみた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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