(57)【要約】【課題】医薬品の中間体、例えば抗ＨＩＶ薬として有用なことが知られている薬剤（ＷＯ０１／４０２２７）の中間体である光学活性−エリスロ−3−シクロヘキシルセリン若しくはそのＢｏｃ体を簡単かつ効率よく取得する方法を提供する。【解決手段】一般式（１）：【化１】2005278401.tif 000028（式（１）中、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を表し、Ｒ2はフェニル基もしくはシクロヘキシル基を意味する。）で示されるＤＬ−エリスロ−３−置換セリンのＮ−アシル体をＬ−アミノアシラーゼもしくは同酵素を固定化したものにより不斉加水分解することを特徴とする、一般式（２）：【化２】2005278401.tif 000029（式（２）中、Ｒ1、Ｒ2は、式（１）と同じ意味を表す。）で示されるＮ−アシル−Ｄ−エリスロ−３−置換セリンの製造方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）：
【化１】
2005278401.tif 000017
（式（１）中、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を表し、Ｒ2はフェニル基もしくはシクロヘキシル基を意味する。）
で示されるＤＬ−エリスロ−３−置換セリンのＮ−アシル体をＬ−アミノアシラーゼもしくは同酵素を固定化したものにより不斉加水分解することを特徴とする、一般式（２）：
【化２】
2005278401.tif 000018
（式（２）中、Ｒ1、Ｒ2は、式（１）と同じ意味を表す。）
で示されるＮ−アシル−Ｄ−エリスロ−３−置換セリンの製造方法。
【請求項２】
Ｒ1が炭素数１ないし５のアルカノイル基である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
Ｒ1がアセチル基である請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
一般式（１）
【化３】
2005278401.tif 000019
（式（１）中、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を表し、Ｒ2はフェニル基もしくはシクロヘキシル基を意味する。）
で示されるＤＬ−エリスロ−３−置換セリンのＮ−アシル体をＤ−アミノアシラーゼもしくは同酵素を固定化したものを作用させて加水分解することを特徴とする、一般式（３）：
【化４】
2005278401.tif 000020
（式（３）中、Ｒ2はフェニル基もしくはシクロヘキシル基を意味する。）
で示されるＤ−エリスロ−３−置換セリンの製造方法。
【請求項５】
Ｒ1が炭素数１ないし５のアルカノイル基である請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
Ｒ1がアセチル基である請求項４又は５に記載の製造方法。
【請求項７】
請求項１ないし３のいずれか一項に記載の製造方法で得られた下記式（Ｃ）：
【化５】
2005278401.tif 000021
（式（Ｃ）中、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を表す。）
で示されるＮ−アシル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンを、ロジウム−カーボンにより接触水素還元して下記式（Ｄ）：
【化６】
2005278401.tif 000022
（式（Ｄ）中、Ｒ1は、式（Ｃ）と同じ意味を示す。）
で示されるＮ−アシル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンとし、さらに上記式（Ｄ）を加水分解することを特徴とする、下記式（Ｅ）：
【化７】
2005278401.tif 000023
で示されるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンの製造方法。
【請求項８】
請求項４ないし６のいずれか一項に記載の方法で得られた下記式（Ｇ）：
【化８】
2005278401.tif 000024
で示されるＤ−エリスロ−３−フェニルセリンを、ジ−ｔ−ブチルジカルボナートによりＢｏｃ化して下記式（Ｈ）：
【化９】
2005278401.tif 000025
で示されるＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンとし、さらに上記式（Ｈ）をロジウム−カーボンにより接触水素還元することを特徴とする、下記式（Ｆ）：
【化１０】
2005278401.tif 000026
で示されるＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンの製造方法。
【請求項９】
下記式（Ｄ）'：
【化１１】
2005278401.tif 000027
で示されるＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬品の中間体、例えば抗ＨＩＶ薬として有用なことが知られている薬剤（ＷＯ０１／４０２２７）の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン若しくはそのＮ−ｔ−ブトキシカルボニル体（以下、Ｂｏｃ体という）を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１９５３，７５，３４１７．，１９５３，７５，３４２１．（非特許文献１）には、ベンズアルデヒドとグリシンを強アルカリ存在下で縮合させることによりＤＬ−スレオ／エリスロ−３−フェニルセリンを得、スレオ／エリスロ体の相互分離処理を行う方法が開示されている。そこで、光学活性−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得る方法としては、シクロヘキシルアルデヒドとグリシンを強アルカリ存在下で縮合させることによりＤＬ−スレオ／エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得た後、スレオ／エリスロ体の相互分離処理を行う方法が採用されることが考えられる。
【０００３】
しかし、上記方法では、シクロヘキシルアルデヒドとグリシンを縮合して３−シクロヘキシルセリンを合成すると、反応の立体選択性が低いために、スレオ／エリスロ、Ｄ／Ｌの組み合わせで４種類の異性体が不可逆的に生成する上に、スレオ体の方がエリスロ体よりも優先的に生成する。それ故Ｌ−またはＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンの合成に当たっては、これら異性体を分離するための繁雑な工程を必要とし、工業的製造法を開発する上で大きな問題となっていた。特に、エリスロ体はスレオ体よりも生成比が少ないことが問題となり、また、従来のＤ／Ｌ体の光学分割法は試用する光学分割剤が高価であるだけでなく、工程及びその制御が複雑で収率も低いという問題があった。
【０００４】
上記以外の方法として、不斉合成法を用いる方法が知られている（ジャーナルオブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）１９９８，６３，３６３１−３６４６；非特許文献２）。即ち、Ｌ−セリンを出発物質としカルボン酸部分を保護基により保護した後、水酸基をアルデヒドへ酸化し、さらにグリニャール不斉付加反応により光学活性−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得る方法である。しかし、この方法は工程が非常に長く、収率も低いので、工業的製造法とは言い難い。一方、Ｄ−スレオニンアルドラーゼを用いる酵素的分割法が知られている（特開平０６−１２５７８７；特許文献１）。即ち、Ｄ−スレオニンアルドラーゼにより一方の３−シクロヘキシルセリンをグリシンとシクロヘキシルアルデヒドに分解し、もう一方の必要な３−シクロヘキシルセリンを得る方法である。しかし、この方法は反応の基質の濃度が限定される上、得られる生成物の単離が難しく、これも工業的製造法とは言い難い。
【０００５】
【特許文献１】
特開平０６−１２５７８７号公報（第２、５−１４頁）
【非特許文献１】
ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１９５３年，７５巻，ｐ３４１７．，１９５３年，７５巻，ｐ３４２１．
【非特許文献２】
ジャーナルオブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）１９９８年，６３巻，ｐ３６３１−３６４６
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
光学活性−エリスロ−3−シクロヘキシルセリン若しくはそのＢｏｃ体の効率的、且つ工業的な製法の開発が望まれている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、光学活性−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得る方法に関し鋭意検討を行った結果、Ｌ／Ｄ−アミノアシラーゼがＮ−アシル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンに作用し、目的とする光学活性−エリスロ−３−フェニルセリンを高効率かつ高光学活性で得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
即ち、本発明は、
【０００８】
（１）一般式（１）：
【０００９】
【化１２】
2005278401.tif 000002
【００１０】
（式（１）中、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を表し、Ｒ2はフェニル基もしくはシクロヘキシル基を意味する。）
で示されるＤＬ−エリスロ−３−置換セリンのＮ−アシル体をＬ−アミノアシラーゼもしくは同酵素を固定化したものにより不斉加水分解することを特徴とする、一般式（２）：
【００１１】
【化１３】
2005278401.tif 000003
【００１２】
（式（２）中、Ｒ1、Ｒ2は、式（１）と同じ意味を表す。）
で示されるＮ−アシル−Ｄ−エリスロ−３−置換セリンの製造方法、
（２）Ｒ1が炭素数１ないし５のアルカノイル基である前項（１）記載の製造方法、
（３）Ｒ1がアセチル基である前項（１）又は（２）記載の製造方法、
（４）一般式（１）
【００１３】
【化１４】
2005278401.tif 000004
【００１４】
（式（１）中、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を表し、Ｒ2はフェニル基もしくはシクロヘキシル基を意味する。）
で示されるＤＬ−エリスロ−３−置換セリンのＮ−アシル体をＤ−アミノアシラーゼもしくは同酵素を固定化したものを作用させて加水分解することを特徴とする、一般式（３）：
【００１５】
【化１５】
2005278401.tif 000005
【００１６】
（式（３）中、Ｒ2はフェニル基もしくはシクロヘキシル基を意味する。）
で示されるＤ−エリスロ−３−置換セリンの製造方法、
（５）Ｒ1が炭素数１ないし５のアルカノイル基である前項（４）記載の製造方法、
（６）Ｒ1がアセチル基である前項（４）又は（５）に記載の製造方法、
（７）前項（１）ないし（３）のいずれか一項に記載の製造方法で得られた下記式（Ｃ）：
【００１７】
【化１６】
2005278401.tif 000006
【００１８】
（式（Ｃ）中、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を表す。）
で示されるＮ−アシル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンを、ロジウム−カーボンにより接触水素還元して下記式（Ｄ）：
【００１９】
【化１７】
2005278401.tif 000007
【００２０】
（式（Ｄ）中、Ｒ1は、式（Ｃ）と同じ意味を示す。）
で示されるＮ−アシル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンとし、さらに上記式（Ｄ）を加水分解することを特徴とする、下記式（Ｅ）：
【００２１】
【化１８】
2005278401.tif 000008
【００２２】
で示されるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンの製造方法、
（８）前項（４）ないし（６）のいずれか一項に記載の方法で得られた下記式（Ｇ）：
【００２３】
【化１９】
2005278401.tif 000009
【００２４】
で示されるＤ−エリスロ−３−フェニルセリンを、ジ−ｔ−ブチルジカルボナートによりＢｏｃ化して下記式（Ｈ）：
【００２５】
【化２０】
2005278401.tif 000010
【００２６】
で示されるＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンとし、さらに上記式（Ｈ）をロジウム−カーボンにより接触水素還元することを特徴とする、下記式（Ｆ）：
【００２７】
【化２１】
2005278401.tif 000011
【００２８】
で示されるＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンの製造方法、
（９）下記式（Ｄ）'：
【００２９】
【化２２】
2005278401.tif 000012
【００３０】
で示されるＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン、
に関する。
【００３１】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の製造方法において用いられる前記一般式（１）は、たとえばジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１９５３，７５，２３８．，１９５３，７５，８９．に記載の方法に準じて得ることが出来る。
【００３２】
本発明の製造方法で用いられるＬ／Ｄアミノアシラーゼとは、動物由来、微生物由来、及び菌体由来のものがあり、特に規制はなく使用できるが、例えばアシラーゼアマノ（商品名、天野エンザイム株式会社製）等が挙げられ、これら容易に市場にて購入する事ができる。
また固定化とは酵素や菌体等を高分子担体等に保持し回収再利用できるように加工することであり、担体結合法や架橋重合法、ゲル包括法などあるが、特に規制はなく、利用できる。
【００３３】
本発明の製造方法において、前記一般式（１）、（２）、（３）及び前記式（Ｃ）、（Ｄ）において、Ｒ1は、炭素数１ないし１０のアルカノイル基、ベンゾイル基、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基又はハロゲン原子により置換されたベンゾイル基を意味する。
Ｒ1としての炭素数１ないし１０のアルカノイル基の具体例としては、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、i−ブチリル基、n−ペンタノイル基、i−ペンタノイル基等が挙げられる。また、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基におけるハロゲン原子としては塩素、臭素原子等が挙げられ、ハロゲン原子により置換された炭素数１ないし５のアルカノイル基の具体例としてはクロロアセチル基、クロロプロピオニル基、クロロブチリル基等が挙げられる。そして、ハロゲン原子により置換されたベンゾイル基におけるハロゲン原子としては塩素、臭素原子等が挙げられ、ハロゲン原子により置換されたベンゾイル基の具体例としてはクロロベンゾイル基、ブロモベンゾイル基等が挙げられる。しかしながら、Ｒ1は、本酵素で離脱されてＤＬ−エリスロ−３−置換セリンを生成し得る置換カルボニル基であればどのような基であってもよい。
本発明の製造方法においては、Ｒ1としては、上記官能基の中で、好ましくは炭素数１ないし５のアルカノイル基が挙げられ、特に好ましくはアセチル基である。
【００３４】
次いで、本発明の製造方法を、つぎに示される反応図式（１）、（２）、（３）および（４）によって具体的に説明する。以下においてはＲ1＝アセチル基の例を用いて説明するが、その他のＲ1としての官能基についても同様に適用出来る。
【００３５】
【化２３】
2005278401.tif 000013
【００３６】
本発明の製造方法の１ルートである上記反応図式（１）は、式（Ａ）のＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンをアセチル化する第１工程、ついで式（Ｂ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンをＬ−アミノアシラーゼにより不用な立体のものを加水分解して除去し、式（Ｃ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンを得る第２工程、さらに第３工程では式（Ｃ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンをロジウム−カーボンにより接触水素還元し、式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得、ついで第４工程では式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを塩酸により加水分解し、式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得、さらに、第５工程では式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンをジ−ｔ−ブチルジカルボナートによりＢｏｃ化し式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを製造する方法である。
【００３７】
なお第２工程では式（Ｂ）の化合物をＬ−アミノアシラーゼにより不用な立体のものを加水分解して除去し、式（Ｃ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−3−フェニルセリンを得て、さらに第３工程で式（Ｃ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−3−フェニルセリンをロジウム−カーボンにより接触水素還元し、式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンをえているが、この２つの工程は前後入れ替わっても構わない。しかしながら、接触水素還元で用いるロジウム−カーボンの価格が高価であるため、経済的にこの順番が望ましい。
【００３８】
尚、上記反応図式（１）においては、第２工程における式（Ｃ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−3−フェニルセリンを得た後、加水分解を行い式（Ｇ）のＤ−エリスロ−３−フェニルセリンを得、ついで下記反応図式（２）に示した第３工程へと続くような合成ルートを辿っても構わない。
【００３９】
【化２４】
2005278401.tif 000014
【００４０】
本発明の製造方法の別ルートである上記反応図式（２）は、式（Ａ）のＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンをアセチル化する第１工程、ついで式（Ｂ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンをＤ−アミノアシラーゼにより不用な立体のものを加水分解して除去し、式（Ｇ）のＤ−エリスロ−３−フェニルセリンを得る第２工程、さらに第３工程では式（Ｇ）のＤ−エリスロ−３−フェニルセリンをジ−ｔ−ブチルジカルボナートによりＢｏｃ化し式（Ｈ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンを得ついで第４工程では式（Ｈ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンをロジウム−カーボンにより接触水素還元し、式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを製造する方法である。
【００４１】
【化２５】
2005278401.tif 000015
【００４２】
本発明における製造方法の他のルートである上記反応図式（３）は、式（Ｉ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンをＬ−アミノアシラーゼにより不用な立体のものを加水分解して除去し、式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得る第１工程、さらに第２工程では式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを加水分解し、式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得、続いて第３工程では式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンをジ−ｔ−ブチルジカルボナートによりＢｏｃ化し式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを製造する方法である。
【００４３】
【化２６】
2005278401.tif 000016
【００４４】
本発明における製造方法の他のルートである上記反応図式（４）は、式（Ｉ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンをＤ−アミノアシラーゼにより不用な立体のものを加水分解して除去し、式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得る第１工程、さらに第２工程では式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンをジ−ｔ−ブチルジカルボナートによりＢｏｃ化し式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを製造する方法である。
【００４５】
更に各工程を詳しく説明する。
まず、本発明の製造方法における前記反応図式（１）について具体的に説明する。
前記反応図式（１）の式（Ａ）のＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンは次のようにして調製できる。たとえば（ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１９５３，７５，２３８．，１９５３，７５，８９．）に記載の方法により、エチルベンゾイルアセテートからエチルベンゾイルオキシイミノアセテートを経てこれをパラジウム−カーボンにより接触水素還元し得られたＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンエチルエステルを加水分解することにより得ることが出来る。
【００４６】
前記反応図式（１）の第１工程におけるアセチル化は一般的な手法により調整できる。たとえば、セオドア  ダブリュー  グリーン（Ｔｈｅｏｄｏｒ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎ）著、「プロテクティブ・グループ・イン・オーガニック・シンセシス（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”）」（ジョーン  ウィリー  アンド  サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｌｅｙ＆  Ｓｏｎｓ）出版、（１９８１））の５５０項から５６３項に記載されているような各種の手法が挙げられる。すなわち式（Ａ）のＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンを水など一般的に用いられる溶媒に溶解し水酸化ナトリウムと無水酢酸を同時に滴下することにより、目的とする式（Ｂ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンを得ることが出来る。
【００４７】
前記反応図式（１）の第２工程におけるエステル加水分解酵素としてはＬ−アミノアシラーゼを挙げることができ、これを用い式（Ｂ）で示されるＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンを不斉加水分解すると、式（Ｃ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンを得ることが出来る。
アセチル加水分解酵素を用い、本発明の方法を実施する場合には、式（Ｂ）で示されるＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンをｐＨ４〜１０、好ましくはｐＨ６〜１０に調整した水溶液または緩衝溶液に懸濁するか溶解し、式（Ｂ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンに対して酵素を好ましくは０．００１〜０．１重量比添加し、０〜８０℃、好ましくは２０〜６０℃で撹拌することにより反応を進行せしめる。反応は通常１時間〜数日間で完了する。反応が完了するまでの間、反応液をｐＨ６〜１０に保つことが好ましい。
上記の水溶液としては硫酸、塩酸、リン酸等の鉱酸、酢酸、クエン酸等の有機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム等の無機塩基、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等の塩を添加した水溶液を用いる事が出来る。緩衝溶液としてはリン酸二水素カリウム−水酸化ナトリウム、リン酸二水素カリウム−リン酸二水素ナトリウム、フタル酸水素カリウム−塩酸、グリシン−塩化ナトリウム−水酸化ナトリウム等の一般的緩衝溶液が用いられるが、反応を妨げるもの以外は特に制限はない。また、本発明を実施する場合、必要に応じてメタノール、エタノール、n−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノールの如きアルコール系溶媒、エーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサンの如きエーテル系溶媒、ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン等のケトン系溶媒、トリエチルアミン、ピリジン等のアミン系溶媒、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等の極性溶媒またはソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノラウレート等の如き界面活性剤を添加することもできる。
【００４８】
前記反応図式（１）の第３工程における接触水素還元は一般的な手法により調整できる。たとえば日本化学会編「新実験化学講座１５[ＩＩ]」（丸善株式会社出版、１９７７年）の３３３項から４４８項に記載されているような接触水素添加の方法を用いれば良い。すなわち式（Ｃ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンをメタノールなどのアルコール系溶媒に溶解し、水素添加触媒として、たとえばロジウム−カーボンなどの触媒を用い接触水素還元を行うと目的とする式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。さらに式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンは新規な化学物質であり、目的とする式（Ｅ）を得るための重要な化合物である。
【００４９】
前記反応図式（１）の第４工程における加水分解反応は一般的な手法により調整できる。たとえば、セオドア  ダブリュー  グリーン（Ｔｈｅｏｄｏｒ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎ）著、「プロテクティブ・グループ・イン・オーガニック・シンセシス（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”）」（ジョーン  ウィリー  アンド  サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）出版、（１９８１））の５５０項から５６３に記載されているような各種の手法が挙げられる。すなわち式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを水など一般的に用いられる溶媒に溶解し、酸としてたとえば塩酸などを加え加熱還流させることにより目的とする式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
【００５０】
前記反応図式（１）の第５工程におけるＮ−ｔ−ブトキシ化は一般的な手法により調整できる。たとえば、セオドア  ダブリュー  グリーン（ＴｈｅｏｄｏｒＷ．Ｇｒｅｅｎ）著、「プロテクティブ・グループ・イン・オーガニック・シンセシス（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”）」（ジョーン  ウィリー  アンド  サンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）出版、（１９８１））の５０３項から５４９項に記載されているような各種の手法が挙げられる。すなわち式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンにたとえばジ−ｔ−ブチルカルバマートを作用させることにより、目的とする式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
【００５１】
ついで、本発明の製造方法における前記反応図式（２）について具体的に説明する。
【００５２】
本発明の製造方法における前記反応図式（２）の式（Ａ）のＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンは、前記の反応図式（１）における式（Ａ）の合成法と同様な方法で目的とするＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンを得ることが出来る。
【００５３】
前記反応図式（２）の第１工程は、前記反応図式（１）の第１工程と同様な方法で目的とする式（Ｂ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンを得ることが出来る。
【００５４】
前記反応図式（２）の第２工程におけるエステル加水分解酵素としてはＤ−アミノアシラーゼを挙げることができ、これを用い、式（Ｂ）で示されるＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンを不斉加水分解すると、式（Ｇ）のＤ−エリスロ−３−フェニルセリンを得ることが出来る。
アセチル加水分解酵素を用いる条件としては、前記反応図式（１）の第２工程と同様である。
【００５５】
前記反応図式（２）の第３工程におけるＮ−ｔ−ブトキシ化は、前記反応図式（１）の第５工程で示した方法により、目的とする式（Ｈ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリンを得ることが出来る。
【００５６】
前記反応図式（２）の第４工程における接触水素還元は、前記反応図式（１）の第３工程で示した方法により、目的とする式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
【００５７】
ついで、本発明の製造方法における反応図式（３）について、具体的に説明する。
【００５８】
本発明の製造方法における反応図式（３）の式（Ｎ）のＤＬ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンは次のようにして調製できる。たとえば（ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１９５３，７５，２３８．，１９５３，７５，８９．）に記載の方法により、エチルベンゾイルアセテートからエチルベンゾイルオキシイミノアセテートを経てこれをパラジウム−カーボンにより接触水素還元し得られたＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンエチルエステルを加水分解することにより得、さらにこれを前記反応図式（１）の第１工程と同様の合成法によりアセチル化し、前記反応図式（１）の第３工程と同様の方法により接触水素還元することにより、目的とする式（Ｉ）のＤＬ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
【００５９】
前記反応図式（３）の第１工程におけるエステル加水分解酵素としてはＬ−アミノアシラーゼを挙げることができ、これを用い式（Ｉ）で示されるＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを不斉加水分解すると、式（Ｄ）'のＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
アセチル加水分解酵素を用いる条件としては、前記反応図式（１）の第２工程と同様である。
【００６０】
前記反応図式（３）の第２工程における加水分解は、前記反応図式（１）の第４工程で示した方法により、目的とする式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
【００６１】
前記反応図式（３）の第３工程におけるＮ−ｔ−ブトキシ化は、前記反応図式（１）の第５工程と同様の方法により、目的とする式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
【００６２】
ついで、本発明の製造方法における反応図式（４）について、具体的に説明する。
【００６３】
本発明の製造方法における反応図式（４）の式（Ｉ）のＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンは、前記反応図式（３）と同様な方法により得ることが出来る。
【００６４】
前記反応図式（４）の第１工程におけるエステル加水分解酵素としてはＤ−アミノアシラーゼを挙げることができ、これを用い、式（Ｉ）で示されるＮ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを不斉加水分解すると、式（Ｅ）のＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
アセチル加水分解酵素を用いる条件としては、前記反応図式（１）の第２工程と同様である。
【００６５】
前記反応図式（４）の第２工程におけるＮ−ｔ−ブトキシ化は、前記反応図式（１）の第５工程に記載の方法により、目的とする式（Ｆ）のＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンを得ることが出来る。
【００６６】
なお、本願発明の方法で得られた光学活性−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン若しくはそのＢｏｃ体を用いてＷＯ０１／４０２２７の実施例４５，４６等に記載の方法で抗ＨＩＶ薬として有用な薬剤が得られる。
【００６７】
【実施例】
以下、実施例により本発明の方法をさらに詳しく説明するが、本発明は実施例により限定されるものではない。例中％は重量％を示す。
【００６８】
参考例１
Ｎ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリン（式（Ｂ））の製造
ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリンエチルエステル１１．０ｇを水３０ｍｌに懸濁させ４０℃に加温させたのち、１０%水酸化ナトリウム水溶液４２ｍｌを滴下後、さらに６５℃に加温し２時間撹拌した。この溶液を５℃に冷却したのち、無水酢酸４．６ｇと１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を同時にｐＨ１０〜１３、１０℃以下を保ちながら滴下し、その後室温で一晩撹拌した。
この溶液を塩酸によりｐＨ１とした後、酢酸エチルにより抽出を行い、得られた有機層を飽和食塩水により洗浄し、硫酸マグネシウムにより乾燥後、減圧濃縮し、酢酸エチルとｎ−ヘキサンにより晶析し得られた結晶を濾過後、真空乾燥し、Ｎ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリン（式（Ｂ））５．７９ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ：δ７．４２−７．２８（ｍ，５Ｈ），δ４．９７（ｄ，１Ｈ）δ４．７６（ｄ，１Ｈ）δ１．８６（ｓ，３Ｈ）
【００６９】
実施例１
Ｎ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリン（式（Ｃ）'）の製造
Ｎ−アセチル−ＤＬ−エリスロ−３−フェニルセリン（式（Ｂ））２．２３ｇに水１００ｍｌを加え懸濁しアンモニア水にてｐＨ８に調整し、水浴バスにより内温を３７℃±５℃に設定した。これにＬ−アミノアシラーゼ（アミノアシラーゼ「アマノ」、天野エンザイム株式会社製）２００ｍｇを加え３７℃±５℃にて６８時間撹拌した後、さらにL−アミノアシラーゼ１００ｍｇを加えアンモニア水にてｐＨ８に調整し２４時間反応した。
この反応液に酢酸を加えｐＨ５とした後、６０℃に加温し１時間撹拌後、不溶物を濾過・除去した。これを減圧濃縮し後、１Ｎ−塩酸水溶液によりｐＨ３とし、食塩を加え酢酸エチルにより抽出を行い、得られた有機層を飽和食塩水により洗浄し、硫酸マグネシウムにより乾燥後、減圧濃縮し、Ｎ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリン（式（Ｃ）'）０．９ｇを得た。
【００７０】
実施例２
（１）Ｎ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン（式（Ｄ）'）の製造
実施例１で得られたＮ−アセチル−Ｄ−エリスロ−３−フェニルセリン（式（Ｃ）'）０．９ｇをメタノール２０ｍｌに溶解し５%ロジウム−カーボンを加え、０．９Ｍｐａの水素圧下、５０℃で４時間撹拌した。得られた混合物を濾過したのち減圧濃縮し、Ｎ−アセチル−Ｄ−エリスロ−シクロヘキシルセリン（式（Ｄ）'）１．０ｇを得た。
【００７１】
（２）Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン（式（Ｅ））の製造
Ｎ−アセチル−Ｄ−３−エリスロ−シクロヘキシルセリン（式（Ｄ）'）１．０ｇを水１０ｍｌ、塩酸３ｍｌに懸濁させ、３時間加熱還流させその後、減圧濃縮し得られた残渣に水４０ｍｌを加え、２８%アンモニア水によりｐＨ７として晶析させ、結晶を濾過しＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン（式（Ｅ））０．４６ｇを得た。
【００７２】
（３）Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−３−エリスロ−シクロヘキシルセリン（式（Ｆ））の製造
Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン（式（Ｅ））０．４６ｇを水１０ｍｌに懸濁し、水酸化ナトリウム０．１１ｇを加え１０℃以下に冷却した。その後、アセトン１０ｍｌを加えジ−ｔ−ブチルジカルボナート０．５４ｇをアセトン１０ｍｌに溶解したものを滴下し、室温で一晩撹拌した。反応液を塩酸により酸性としたのち、酢酸エチルにより抽出を行い、得られた有機層を飽和食塩水により洗浄し、硫酸マグネシウムにより乾燥後、減圧濃縮し、残渣にｎ−ヘプタンを加え晶析後、濾過しＮ−ブトキシカルボニル−Ｄ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン（式（Ｆ））０．６５ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ：δ４．３３（ｄ，１Ｈ），δ３．７２（ｄｄ，１Ｈ），δ１．０５（ｓ，９Ｈ），δ２．０７−０．９４（ｍ，１１Ｈ）
【００７３】
【発明の効果】
本発明の製造方法は、化学合成法や光学分割剤を用いる方法に比し、安価かつ簡便かつ高効率、さらに有機溶媒の使用量を押さえることが出来るため、低環境負荷で、且つ工業的な製造方法である。