(57)【要約】【課題】未成熟樹状細胞の成熟化調節剤およびそのスクリーニング方法を提供すること。【解決手段】Ｓｔａｔ３を介したシグナル伝達を促進する因子（Ｓｔａｔ３促進因子）またはＢｃｌ３の発現または機能促進物質を有効成分とする未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、前記Ｓｔａｔ３促進因子またはＢｃｌ３の発現または機能抑制物質を有効成分とする未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、若しくはこれらＳｔａｔ３促進因子またはＢｃｌ３を標的とした未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤／促進剤のスクリーニング方法等。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓｔａｔ３を介したシグナル伝達を促進する因子（以下Ｓｔａｔ３促進因子と略称する）の発現又は機能を促進する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤。
【請求項２】
Ｓｔａｔ３促進因子又はその均等物を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤。
【請求項３】
Ｓｔａｔ３促進因子又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤。
【請求項４】
Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、請求項１〜３いずれか記載の剤。
【請求項５】
ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、請求項４記載の剤。
【請求項６】
Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、請求項１〜３いずれか記載の剤。
【請求項７】
Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、請求項１〜３いずれか記載の剤。
【請求項８】
Ｂｃｌ３の発現又は機能を促進する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤。
【請求項９】
Ｂｃｌ３又はその均等物を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤。
【請求項１０】
Ｂｃｌ３又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤。
【請求項１１】
免疫活性化抑制剤である請求項１〜１０いずれか記載の剤。
【請求項１２】
自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤である請求項１１記載の剤。
【請求項１３】
Ｓｔａｔ３促進因子の発現または機能を抑制する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項１４】
以下の（ａ）又は（ｂ）の核酸：
（ａ）Ｓｔａｔ３促進因子をコードする塩基配列に相補的な塩基配列を含有する核酸、
（ｂ）Ｓｔａｔ３促進因子をコードする塩基配列からなる核酸もしくは転写後プロセッシングにより該塩基配列を生じる初期転写産物と、治療対象動物の生理的条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、且つハイブリダイズした状態で当該Ｓｔａｔ３促進因子の転写又は翻訳を抑制する核酸、
を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項１５】
請求項１４記載の核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項１６】
Ｓｔａｔ３促進因子に特異的親和性を有し、且つ当該物質の機能を抑制する抗体を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項１７】
Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、請求項１３〜１６いずれか記載の剤。
【請求項１８】
ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、請求項１７記載の剤。
【請求項１９】
Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、請求項１３〜１６いずれか記載の剤。
【請求項２０】
Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、請求項１３〜１６いずれか記載の剤。
【請求項２１】
Ｂｃｌ３の発現または機能を抑制する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項２２】
以下の（ａ）又は（ｂ）の核酸：
（ａ）Ｂｃｌ３をコードする塩基配列に相補的な塩基配列を含有する核酸、
（ｂ）Ｂｃｌ３をコードする塩基配列からなる核酸もしくは転写後プロセッシングにより該塩基配列を生じる初期転写産物と、治療対象動物の生理的条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、且つハイブリダイズした状態でＢｃｌ３の転写又は翻訳を抑制する核酸、
を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項２３】
請求項２２記載の核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項２４】
Ｂｃｌ３に特異的親和性を有し、且つＢｃｌ３の機能を抑制する抗体を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項２５】
免疫活性化剤である請求項１３〜２４いずれか記載の剤。
【請求項２６】
癌又は感染症の予防・治療剤である請求項２５記載の剤。
【請求項２７】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現を促進する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＳｔａｔ３促進因子遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞における前記遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における前記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現量を上昇させる被験物質を選択する工程。
【請求項２８】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子の活性促進物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＳｔａｔ３促進因子結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＳｔａｔ３促進因子の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＳｔａｔ３促進因子の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子の活性の上昇をもたらす被験物質を選択する工程。
【請求項２９】
Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、請求項２７または２８に記載のスクリーニング方法。
【請求項３０】
ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、請求項２９記載のスクリーニング方法。
【請求項３１】
Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、請求項２７または２８に記載のスクリーニング方法。
【請求項３２】
Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、請求項２７または２８に記載のスクリーニング方法。
【請求項３３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３遺伝子の発現を促進する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＢｃｌ３遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞におけるＢｃｌ３遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３遺伝子の発現量を上昇させる被験物質を選択する工程。
【請求項３４】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３の活性促進物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＢｃｌ３結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＢｃｌ３の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＢｃｌ３の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３の活性の上昇をもたらす被験物質を選択する工程。
【請求項３５】
未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤を探索するための方法である、請求項２７〜３４いずれか記載のスクリーニング方法。
【請求項３６】
自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤を探索するための方法である、請求項３５記載のスクリーニング方法。
【請求項３７】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＳｔａｔ３促進因子遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞における前記遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における前記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【請求項３８】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子の活性抑制物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＳｔａｔ３促進因子およびＳｔａｔ３促進因子結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＳｔａｔ３促進因子の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＳｔａｔ３促進因子の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子の活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
【請求項３９】
Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、請求項３７または３８に記載のスクリーニング方法。
【請求項４０】
ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、請求項３９記載のスクリーニング方法。
【請求項４１】
Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、請求項３７または３８に記載のスクリーニング方法。
【請求項４２】
Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、請求項３７または３８に記載のスクリーニング方法。
【請求項４３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３遺伝子の発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＢｃｌ３遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞におけるＢｃｌ３遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３遺伝子の発現量を減少させる被験物質を選択する工程。
【請求項４４】
下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３の活性抑制物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＢｃｌ３およびＢｃｌ３結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＢｃｌ３の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＢｃｌ３の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３の活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
【請求項４５】
未成熟樹状細胞の成熟化促進剤を探索するための方法である、請求項３７〜４４いずれか記載のスクリーニング方法。
【請求項４６】
癌又は感染症の予防・治療剤を探索するための方法である、請求項４５に記載のスクリーニング方法。
【請求項４７】
請求項３５記載のスクリーニング方法により得られる未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤。
【請求項４８】
請求項３６記載のスクリーニング方法により得られる自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤。
【請求項４９】
請求項４５記載のスクリーニング方法により得られる未成熟樹状細胞の成熟化促進剤。
【請求項５０】
請求項４６記載のスクリーニング方法により得られる癌又は感染症の予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、未成熟樹状細胞の成熟化調節剤に関する。さらに詳しくは、本発明は、Ｓｔａｔ３を介したシグナル伝達を促進する因子（以下、Ｓｔａｔ３促進因子と称する場合もある）の発現または機能促進物質、またはＢｃｌ３の発現または機能促進物質を有効成分とする未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、前記Ｓｔａｔ３促進因子またはＢｃｌ３の発現または機能抑制物質を有効成分とする未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、若しくはこれらＳｔａｔ３促進因子またはＢｃｌ３を標的とした未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤／促進剤のスクリーニング方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
未成熟樹状細胞はあらゆる正常組織に存在し、そこで抗原との出会いを待っている（非特許文献１および２を参照）。危険シグナルは定常状態においてさえも数多く存在するため、未成熟樹状細胞は環境を効果的にチェックするための多様な認識システムを備えている（非特許文献３、４および５を参照）。未成熟樹状細胞が活性化されることにより、樹状細胞の成熟が強く誘導される。抗原提示能を獲得した樹状細胞はリンパ節に移行し、Ｔ細胞を活性化する。成熟に伴い樹状細胞は抗原提示能を失うが、ＭＨＣクラスＩＩや共刺激分子ＣＤ８６、ＣＤ８０の誘導やＩＬ−１２の産生を行う（非特許文献１、６および７を参照）。
【０００３】
宿主への過剰な反応などの好ましくない免疫応答を避けるために、未成熟および成熟樹状細胞の成熟や機能は厳密に制御されなければならない。これまではＩＬ−１０が未成熟樹状細胞の成熟を抑制することができる主要なサイトカインであるといわれていた（非特許文献８および９を参照）。ＩＬ−１０で処理した樹状細胞はＴ細胞活性化能の低下がみとめられるとともに、抗原特異的な免疫寛容を誘導する（非特許文献１０、１１および１２を参照）。しかし他方では、ＩＬ−１０は成熟樹状細胞の抑制作用がないことも報告されており、宿主にとって適度の免疫応答を保つためには未成熟樹状細胞から成熟樹状細胞への成熟の段階の制御が非常に重要であると考えられている。ＩＬ−１０が定常状態における成熟段階の主要な役割を担うかどうかについては未だ不明であり、樹状細胞成熟の制御においていずれのサイトカインが重要であるかについては未だ分かっていない。
【０００４】
ＩＬ−６は当初Ｂ細胞分化因子として同定されたが（非特許文献１３および１４を参照）、現在では免疫応答において細胞増殖、分化、生存および移行、造血、炎症反応の調節などを行う多機能因子であることが分かっている（非特許文献１５を参照）。さらに、ＩＬ−６は樹状細胞の分化に影響を与えるという報告もある（非特許文献１６および１７を参照）。しかしながら、未成熟樹状細胞から樹状細胞への成熟段階に対するＩＬ−６の影響は不明である。これまでに我々は、ＩＬ−６が二つの主要なシグナル伝達経路、つまりＳＨＰ２／Ｇａｂ／ＭＡＰＫ経路および  Ｓｔａｔ３経路が、それぞれｇｐ１３０のＹ７５９（ｇｐ１３０の７５９番目のチロシン残基）およびＹｘｘＱモチーフ（Ｙはチロシン、Ｘは如何なるアミノ酸でも可、Ｑはグルタミン）のチロシン残基（Ｙ７６７、Ｙ８１４、Ｙ９０５およびＹ９１５）依存的に誘導されることを明らかにしている（非特許文献１８および１９を参照）。
【０００５】
Ｂｃｌ３は本来は発癌遺伝子の可能性があるものとして報告され、癌細胞の（１４：１９）転座における染色体区切り点からクローニングされた。Ｂｃｌ３はＩｋＢファミリーの一員であり、ＮＦｋＢ／Ｒｅｌ転写因子の活性化を調節している。Ｂｃｌ３の生理学的機能はＢｃｌ３−欠損マウスを用いた研究により開示されている。Ｂｃｌ３はＴ細胞依存性の免疫応答に必須である。Ｂｃｌ３−欠損マウスは抗原特異的抗体産生や胚中心形成が不可能となり、感染に対する抵抗性が損なわれる（非特許文献２０を参照）。Ｂｃｌ３の過剰発現は慢性リンパ球性白血病の発現の原因であると思われ、これはＮＦｋＢ部位を介した細胞増殖と分化に重要な遺伝子に対する調節障害により生じる。しかしながらＢｃｌ３と樹状細胞との関連性については、今まで何も知られていなかった。
【０００６】
【非特許文献１】
Ｍｅｌｌｍａｎ，  Ｉ．  ＆  Ｓｔｅｉｎｍａｎ，  Ｒ．  Ｍ．  Ｃｅｌｌ  １０６，  ２５５−２５８  （２００１）
【非特許文献２】
Ｓｔｅｉｎｍａｎ，  Ｒ．  Ｍ．  ＆  Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ，  Ｍ．  Ｃ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９９，  ３５１−３５８  （２００２）
【非特許文献３】
Ｓｔｅｉｎｍａｎ，  Ｒ．  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９８７，  １５−２５  （２００３）
【非特許文献４】
Ｓｔｅｉｎｍａｎ，  Ｒ．  Ｍ．，  Ｈａｗｉｇｅｒ，  Ｄ．  ＆  Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ，  Ｍ．  Ｃ．  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１，  ６８５−７１１  （２００３）
【非特許文献５】
Ｐｉｅｒｒｅ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３８８，  ７８７−７９２  （１９９７）
【非特許文献６】
Ｃｅｌｌａ，  Ｍ．，  Ｅｎｇｅｒｉｎｇ，  Ａ．，  Ｐｉｎｅｔ，  Ｖ．，  Ｐｉｅｔｅｒｓ，  Ｊ．  ＆  Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ，  Ａ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３８８，  ７８２−７８７  （１９９７）
【非特許文献７】
Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，  Ｊ．  ＆  Ｓｔｅｉｎｍａｎ，  Ｒ．  Ｍ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３９２，  ２４５−２５２  （１９９８）
【非特許文献８】
Ａｌｌａｖｅｎａ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８，  ３５９−３６９  （１９９８）
【非特許文献９】
ＭｃＢｒｉｄｅ，  Ｊ．  Ｍ．，  Ｊｕｎｇ，  Ｔ．，  ｄｅ  Ｖｒｉｅｓ，  Ｊ．  Ｅ．  ＆  Ａｖｅｒｓａ，  Ｇ．  Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１５，  １６２−１７２  （２００２）
【非特許文献１０】
Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｕｓｅｎ，  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０８，  ２４２−２４９  （２００１）
【非特許文献１１】
Ｓｔｅｉｎｂｒｉｎｋ，  Ｋ．，  Ｗｏｌｆｌ，  Ｍ．，  Ｊｏｎｕｌｅｉｔ，  Ｈ．，  Ｋｎｏｐ，  Ｊ．  ＆  Ｅｎｋ，  Ａ．  Ｈ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５９，  ４７７２−４７８０  （１９９７）
【非特許文献１２】
Ｉｇｉｅｔｓｅｍｅ，  Ｊ．  Ｕ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４，  ４２１２−４２１９  （２０００）
【非特許文献１３】
Ｔｅｒａｎｉｓｈｉ，  Ｔ．，  Ｈｉｒａｎｏ，  Ｔ．，  Ａｒｉｍａ，  Ｎ．  ＆  Ｏｎｏｕｅ，  Ｋ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２８，  １９０３−１９０８  （１９８２）
【非特許文献１４】
Ｈｉｒａｎｏ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ３２４，  ７３−７６  （１９８６）
【非特許文献１５】
Ｈｉｒａｎｏ，  Ｔ．  Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６，  ２４９−２８４  （１９９８）
【非特許文献１６】
Ｂｅｒｎｈａｒｄ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｘｐ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２８，  ３６５−３７２  （２０００）
【非特許文献１７】
Ｃｈｏｍａｒａｔ，  Ｐ．，  Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，  Ｊ．，  Ｄａｖｏｕｓｔ，  Ｊ．  ＆  Ｐａｌｕｃｋａ，  Ａ．  Ｋ．  Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １，  ５１０−５１４  （２０００）
【非特許文献１８】
Ｏｈｔａｎｉ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １２，  ９５−１０５  （２０００）
【非特許文献１９】
Ｈｉｒａｎｏ，  Ｔ．，  Ｉｓｈｉｈａｒａ，  Ｋ．  ＆  Ｈｉｂｉ，  Ｍ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，  ２５４８−２５５６  （２０００）
【非特許文献２０】
Ｐａｘｉａｎ，  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２２（７），  １８５３−１８６８  （２００２）
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤または促進剤を提供することを目的とする。また本発明は、未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤または促進剤のスクリーニング方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために鋭意検討した結果、本発明者らは、ＩＬ−６の作用により未成熟樹状細胞の成熟化が抑制されることを初めて見出した。
前述のように、ｇｐ１３０を介したＩＬ−６シグナル伝達経路は、ＳＨＰ−２／Ｇａｂ／ＭＡＰＫカスケード、およびＳｔａｔ３カスケードの２種類存在することが知られている。そこで本発明者らはいずれの伝達経路が未成熟細胞の成熟化に関与しているのかを、ＳＨＰ−２／Ｇａｂ／ＭＡＰＫシグナル伝達系に欠損が生じているｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス、およびＳｔａｔ３シグナル伝達系に欠損が生じているｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウスを用いて検討した。その結果、Ｓｔａｔ３を介したシグナルこそが重要であり、このシグナル伝達によって樹状細胞の成熟化が抑制されることを見出した。
【０００９】
さらに本発明者らは、ＩＬ−６により誘導される樹状細胞の成熟抑制に関与する遺伝子を解析したところ、ＩｋＢファミリー分子の１つであるＢｃｌ３が、ＩＬ−６刺激に伴い顕著に発現増大していることを見出した。そこでＢｃｌ３を未成熟樹状細胞に作用させた結果、ＬＰＳ（リポ多糖）により未成熟樹状細胞を成熟化した際に本来発現するＭＨＣクラスＩＩおよびＩＬ−１２が、Ｂｃｌ３の発現により阻害されることを見出した。このことから、Ｂｃｌ３が未成熟樹状細胞の成熟化を抑制する機能を有することが明らかとなった。
【００１０】
従って、（１）Ｓｔａｔ３を介したシグナル伝達を促進する因子、すなわちＩＬ−６ファミリーやその下流に存在するｇｐ１３０やＳｔａｔ３自身、（２）ＩＬ−６により発現誘導されるＢｃｌ３、若しくは（３）前記（１）及び（２）の発現または機能を促進する物質は、未成熟樹状細胞の成熟化を抑制することにより免疫系を抑制するため、自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤の有効成分とすることができる。また反対に、前記物質の発現または機能を抑制する物質は、未成熟樹状細胞の成熟化を促進することにより免疫系を活性化するため、癌や感染症の予防・治療剤の有効成分とすることができる。
【００１１】
さらに、前記のＳｔａｔ３を介したシグナル伝達を促進する物質（ＩＬ−６ファミリーやその下流に存在するｇｐ１３０やＳｔａｔ３自身）、若しくはＢｃｌ３を標的とし、その遺伝子発現や機能を促進または阻害する物質を探索することにより、前記の如き疾患の予防・治療剤の候補物質を選別することができる。
本発明は、以上のような知見に基づき完成するに至ったものである。
【００１２】
すなわち本発明は、
（１）  Ｓｔａｔ３促進因子の発現又は機能を促進する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、
（２）  Ｓｔａｔ３促進因子又はその均等物を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、
（３）  Ｓｔａｔ３促進因子又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、
（４）  Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、前記（１）〜（３）いずれか記載の剤、
（５）  ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、前記（４）記載の剤、
（６）  Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、前記（１）〜（３）いずれか記載の剤、
（７）  Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、前記（１）〜（３）いずれか記載の剤、
（８）  Ｂｃｌ３の発現又は機能を促進する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、
（９）  Ｂｃｌ３又はその均等物を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、
（１０）  Ｂｃｌ３又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、
（１１）  免疫活性化抑制剤である前記（１）〜（１０）いずれか記載の剤、
（１２）  自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤である前記（１１）記載の剤、
（１３）  Ｓｔａｔ３促進因子の発現または機能を抑制する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（１４）  以下の（ａ）又は（ｂ）の核酸：
（ａ）Ｓｔａｔ３促進因子をコードする塩基配列に相補的な塩基配列を含有する核酸、
（ｂ）Ｓｔａｔ３促進因子をコードする塩基配列からなる核酸もしくは転写後プロセッシングにより該塩基配列を生じる初期転写産物と、治療対象動物の生理的条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、且つハイブリダイズした状態で当該Ｓｔａｔ３促進因子の転写又は翻訳を抑制する核酸、
を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（１５）  前記（１４）記載の核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（１６）  Ｓｔａｔ３促進因子に特異的親和性を有し、且つ当該物質の機能を抑制する抗体を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（１７）  Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、前記（１３）〜（１６）いずれか記載の剤、
（１８）  ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、前記（１７）記載の剤、
（１９）  Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、前記（１３）〜（１６）いずれか記載の剤、
（２０）  Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、前記（１３）〜（１６）いずれか記載の剤、
（２１）  Ｂｃｌ３の発現または機能を抑制する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（２２）  以下の（ａ）又は（ｂ）の核酸：
（ａ）Ｂｃｌ３をコードする塩基配列に相補的な塩基配列を含有する核酸、
（ｂ）Ｂｃｌ３をコードする塩基配列からなる核酸もしくは転写後プロセッシングにより該塩基配列を生じる初期転写産物と、治療対象動物の生理的条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有し、且つハイブリダイズした状態でＢｃｌ３の転写又は翻訳を抑制する核酸、
を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（２３）  前記（２２）記載の核酸を含む発現ベクターを有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（２４）  Ｂｃｌ３に特異的親和性を有し、且つＢｃｌ３の機能を抑制する抗体を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、
（２５）  免疫活性化剤である前記（１３）〜（２４）いずれか記載の剤、
（２６）  癌又は感染症の予防・治療剤である前記（２５）記載の剤、
（２７）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現を促進する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＳｔａｔ３促進因子遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞における前記遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における前記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現量を上昇させる被験物質を選択する工程、
（２８）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子の活性促進物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＳｔａｔ３促進因子結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＳｔａｔ３促進因子の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＳｔａｔ３促進因子の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子の活性の上昇をもたらす被験物質を選択する工程、
（２９）  Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、前記（２７）または（２８）に記載のスクリーニング方法、
（３０）  ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、前記（２９）記載のスクリーニング方法、
（３１）  Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、前記（２７）または（２８）に記載のスクリーニング方法、
（３２）  Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、前記（２７）または（２８）に記載のスクリーニング方法、
（３３）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３遺伝子の発現を促進する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＢｃｌ３遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞におけるＢｃｌ３遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３遺伝子の発現量を上昇させる被験物質を選択する工程、
（３４）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３の活性促進物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＢｃｌ３結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＢｃｌ３の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＢｃｌ３の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３の活性の上昇をもたらす被験物質を選択する工程、
（３５）  未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤を探索するための方法である、前記（２７）〜（３４）いずれか記載のスクリーニング方法、
（３６）  自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤を探索するための方法である、前記（３５）記載のスクリーニング方法、
（３７）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＳｔａｔ３促進因子遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞における前記遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における前記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子の発現量を減少させる被験物質を選択する工程、
（３８）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｓｔａｔ３促進因子の活性抑制物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＳｔａｔ３促進因子およびＳｔａｔ３促進因子結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＳｔａｔ３促進因子の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＳｔａｔ３促進因子の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｓｔａｔ３促進因子の活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程、
（３９）  Ｓｔａｔ３促進因子がＩＬ−６ファミリーに属する因子である、前記（３７）または（３８）に記載のスクリーニング方法、
（４０）  ＩＬ−６ファミリーに属する因子がＩＬ−６である、前記（３９）記載のスクリーニング方法、
（４１）  Ｓｔａｔ３促進因子がｇｐ１３０である、前記（３７）または（３８）に記載のスクリーニング方法、
（４２）  Ｓｔａｔ３促進因子がＳｔａｔ３である、前記（３７）または（３８）に記載のスクリーニング方法、
（４３）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３遺伝子の発現を抑制する物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質とＢｃｌ３遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞におけるＢｃｌ３遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における上記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３遺伝子の発現量を減少させる被験物質を選択する工程、
（４４）  下記の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む、Ｂｃｌ３の活性抑制物質のスクリーニング方法：
（ａ）  被験物質をＢｃｌ３およびＢｃｌ３結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるＢｃｌ３の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のＢｃｌ３の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、Ｂｃｌ３の活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程、
（４５）  未成熟樹状細胞の成熟化促進剤を探索するための方法である、前記（３７〜４４いずれか記載のスクリーニング方法、
（４６）  癌又は感染症の予防・治療剤を探索するための方法である、前記（４５に記載のスクリーニング方法、
（４７）  前記（３５）記載のスクリーニング方法により得られる未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤、
（４８）  前記（３６）記載のスクリーニング方法により得られる自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤、
（４９）  前記（４５）記載のスクリーニング方法により得られる未成熟樹状細胞の成熟化促進剤、ならびに
（５０）  前記（４６）記載のスクリーニング方法により得られる癌又は感染症の予防・治療剤、に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明は、Ｓｔａｔ３を介したシグナル伝達を促進する因子（Ｓｔａｔ３促進因子）の発現または機能を促進する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤を提供する。また本発明は、Ｂｃｌ３の発現又は機能を促進する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤を提供する。
以下、これらＳｔａｔ３促進因子およびＢｃｌ３を併せて「本発明因子」と称する場合もある。
【００１４】
前記において「Ｓｔａｔ３促進因子」とは、Ｓｔａｔ３を介したシグナル伝達を促進する因子、すなわちＳｔａｔ３のシグナル伝達の上流および下流に位置する因子を指す。最も上流に位置する因子としてはＩＬ−６ファミリーに属する因子が挙げられ、具体的にはＩＬ−６、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ  Ｍ、ＩＬ−１１、ｃａｒｄｉｏｔｒｏｐｉｎ−１などが挙げられる。好ましくはＩＬ−６が例示される。
またＳｔａｔ３促進因子の別の態様として、前記ＩＬ−６ファミリー共通の受容体構成要素であるｇｐ１３０や、その下流に位置するＳｔａｔ３が挙げられる。
これらＳｔａｔ３促進因子は様々な機能を有することが知られているが、未成熟樹状細胞の成熟化を抑制することは今まで何も知られていなかった。
【００１５】
以下ＩＬ−６ファミリーの好ましい形態としてＩＬ−６を例にとり説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
ＩＬ−６は、Ｂ細胞の増殖・分化活性を有する因子であり（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２８，  １９０３−１９０８  （１９８２）、Ｎａｔｕｒｅ  ３２４，  ７３−７６  （１９８６））、現在では免疫応答において細胞増殖、分化、生存および移行、造血、炎症反応の調節などを行う多機能因子であることが分かっている（Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６，  ２４９−２８４  （１９９８））。ヒト型ＩＬ−６の塩基配列（配列番号：１）およびアミノ酸配列（配列番号：２）は公知であり、Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿０００６００  に開示されている。また、ヒト型ＩＬ−６に対応するホモログが他の哺乳動物にも存在することが知られている（例えば、マウスから、ヒトＩＬ−６とアミノ酸レベルで約７８％の同一性を有するマウス型ＩＬ−６が見出されている（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿０３１１６８））。以下、単に「ＩＬ−６」と記載される場合は、ヒト型ＩＬ−６とその他哺乳動物種由来のホモログとを包括的に称するものとする。
【００１６】
前記において「ｇｐ１３０」とはＩＬ−６ファミリー共通の受容体構成要素でありＩＬ−６ファミリーのシグナルを伝達する（Ｃｅｌｌ  ６３（６），  １１４９−１１５７  （１９９０）、Ｃｅｌｌ  ６９（７），  １１２１−１１３２  （１９９２））。ヒト型ｇｐ１３０の塩基配列（配列番号：３）およびアミノ酸配列（配列番号：４）は公知であり、Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿００２１８４（ｖａｒｉａｎｔ  １）やＮＭ＿１７５７６７（ｖａｒｉａｎｔ  ２）に開示されている。また、ヒト型ｇｐ１３０に対応するホモログが他の哺乳動物にも存在することが知られている（例えば、マウスから、ヒトｇｐ１３０とアミノ酸レベルで約７９％の同一性を有するマウス型ｇｐ１３０が見出されている（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿０１０５６０））。以下、単に「ｇｐ１３０」と記載される場合は、ヒト型ｇｐ１３０とその他哺乳動物種由来のホモログとを包括的に称するものとする。
【００１７】
前記において「Ｓｔａｔ３」とはｇｐ１３０に仲介されるシグナル伝達因子であり、Ｓｔａｔ３経路はＩＬ−６の２つの主要なシグナル伝達経路の１つである。Ｓｔａｔ３経路は、ＹｘｘＱモチーフ（Ｙはチロシン、Ｘは如何なるアミノ酸でも可、Ｑはグルタミン）のチロシン残基（Ｙ７６７、Ｙ８１４、Ｙ９０５およびＹ９１５）依存的に誘導されることが知られている（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １２，  ９５−１０５  （２０００）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９，  ２５４８−２５５６  （２０００））。ヒト型Ｓｔａｔ３の塩基配列（配列番号：５）およびアミノ酸配列（配列番号：６）は公知であり、Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿１３９２７６（ｖａｒｉａｎｔ  １）やＮＭ＿００３１５０（ｖａｒｉａｎｔ  ２）に開示されている。また、ヒト型Ｓｔａｔ３に対応するホモログが他の哺乳動物にも存在することが知られている（例えば、マウスから、ヒトＳｔａｔ３とアミノ酸レベルで約９０％の同一性を有するマウス型Ｓｔａｔ３が見出されている（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿０１１４８６））。以下、単に「Ｓｔａｔ３」と記載される場合は、ヒト型Ｓｔａｔ３とその他哺乳動物種由来のホモログとを包括的に称するものとする。
【００１８】
前記において「Ｂｃｌ３」とは、ＩｋＢファミリーの一員であり、ＮＦｋＢ／Ｒｅｌ転写因子の活性化を調節することが知られている（ＥＭＢＯ  Ｊ．，  Ｖｏｌ．１６，  Ｎｏ．１２，  ｐ３６０９  （１９９７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  Ｖｏｌ．１９，  ｐ１１２３  （２０００）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７６，  Ｎｏ．３４，ｐ３２０８０（２００１）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７４，  Ｎｏ．４０，  ｐ２８４９１  （１９９９）等）。ヒト型Ｂｃｌ３の塩基配列（配列番号：７）およびアミノ酸配列（配列番号：８）は公知であり、Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿００５１７８  に開示されている。また、ヒト型Ｂｃｌ３に対応するホモログが他の哺乳動物にも存在することが知られている（例えば、マウスから、ヒトＢｃｌ３とアミノ酸レベルで約８０％の同一性を有するマウス型Ｂｃｌ３が見出されている（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿０３３６０１））。以下、単に「Ｂｃｌ３」と記載される場合は、ヒト型Ｂｃｌ３とその他哺乳動物種由来のホモログとを包括的に称するものとする。
【００１９】
本発明の未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤は、本発明因子（Ｓｔａｔ３促進因子またはＢｃｌ３）の、発現または機能を促進する物質を有効成分として含有する。ここで「発現」とは、本発明因子（蛋白質）が産生されることをいう。従って「発現を促進する物質」は、本発明因子遺伝子の転写レベル、転写後調節のレベル、蛋白質への翻訳レベル又は翻訳後修飾のレベル等の、いかなる段階で作用するものであってもよい。一方、「機能を促進する物質」とは、本発明因子の機能を促進する物質を指し、具体的には、１）本発明因子又はその関連因子に作用することにより、最終的に本発明因子の機能である未成熟樹状細胞の成熟化抑制作用を促進する物質、および２）本発明因子と同等の作用を発揮することにより未成熟樹状細胞の成熟化を抑制する物質、が挙げられる。
【００２０】
本発明因子の発現を促進する物質としては、例えば、本発明因子遺伝子からのＲＮＡ転写を促進し得るトランス活性化因子、スプライシングやｍＲＮＡの細胞質移行を促進し得る因子、ｍＲＮＡの分解を抑制する因子、リボソームのｍＲＮＡへの結合を促進し得る因子、本発明因子（蛋白質）の分解を抑制する因子等が挙げられるが、より直接的且つ特異的な物質として、本発明因子遺伝子の発現制御領域に作用して本発明因子の転写を促進する因子が挙げられる。
ここでＩＬ−６の発現制御領域は文献（Ｏｌｏｍｏｌａｉｙｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．  ２５  （２−３），  ２６７  （１９９８）；  Ｒａｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８５  （１８），  ６７０１−６７０５  （１９８８））に記載されており、またｇｐ１３０の発現制御領域はＧｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  Ｕ７０６１７に記載されている。あるいは本発明因子の発現制御領域は、Ｓｔａｔ３促進因子（ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３）またはＢｃｌ３の転写開始部位上流約２ｋｂ、好ましくは約１ｋｂが挙げられる。
【００２１】
このような本発明因子の発現を促進する物質は、当該活性を有する限り、天然もしくは非天然の、ポリペプチド、核酸、有機化合物等公知化合物又は新規化合物のいずれであっても良い。具体的には、コンビナトリアルケミストリー技術を用いて作製された有機化合物ライブラリー、固相合成やファージディスプレー法により作製されたランダムペプチドライブラリー、あるいは微生物、動植物、海洋生物等由来の天然成分を後述するスクリーニング法に供すること等により選び出すことができる。
【００２２】
本発明因子の機能を促進する物質としては、本発明因子又はその関連因子に作用することにより、最終的に本発明因子の有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制作用を促進する物質、本発明因子と同等の作用を発揮することにより未成熟樹状細胞の成熟化を抑制する物質等が挙げられる。このような本発明因子の機能を促進する物質も、当該活性を有する限り、天然もしくは非天然の、ポリペプチド、核酸、有機化合物等公知化合物又は新規化合物のいずれであっても良い。具体的には、コンビナトリアルケミストリー技術を用いて作製された有機化合物ライブラリー、固相合成やファージディスプレー法により作製されたランダムペプチドライブラリー、あるいは微生物、動植物、海洋生物等由来の天然成分を後述するスクリーニング法に供すること等により選び出すことができる。
【００２３】
本発明因子の機能を促進するより直接的且つ特異的な物質としては、本発明因子又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含む発現ベクター、若しくは本発明因子（タンパク質）又はその均等物が好ましく例示される。
【００２４】
ここで「本発明因子をコードする塩基配列を含有する核酸」とはすなわち「Ｓｔａｔ３促進因子をコードする塩基配列を含有する核酸」および「Ｂｃｌ３をコードする塩基配列を含有する核酸」を指す。
「Ｓｔａｔ３促進因子をコードする塩基配列を含有する核酸」としては、具体的にはＩＬ−６をコードする塩基配列を含有する核酸、ｇｐ１３０をコードする塩基配列を含有する核酸、Ｓｔａｔ３をコードする塩基配列を含有する核酸が例示される。
【００２５】
ここで「ＩＬ−６をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の１−（ａ）および１−（ｂ）の核酸；
１−（ａ）  配列番号：１に記載の塩基配列を含有する核酸、
１−（ｂ）  配列番号：２に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸、が例示される。
【００２６】
また「ｇｐ１３０をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の２−（ａ）および２−（ｂ）の核酸；
２−（ａ）  配列番号：３に記載の塩基配列を含有する核酸、
２−（ｂ）  配列番号：４に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸、が例示される。
【００２７】
また「Ｓｔａｔ３をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の３−（ａ）および３−（ｂ）の核酸；
３−（ａ）  配列番号：５に記載の塩基配列を含有する核酸、
３−（ｂ）  配列番号：６に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸、が例示される。
【００２８】
また「Ｂｃｌ３をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の４−（ａ）および４−（ｂ）の核酸；
４−（ａ）  配列番号：７に記載の塩基配列を含有する核酸、
４−（ｂ）  配列番号：８に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸、が例示される。
【００２９】
また前記において「本発明因子の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」とはすなわち「Ｓｔａｔ３促進因子の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」および「Ｂｃｌ３の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」を指す。
「Ｓｔａｔ３促進因子の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」としては、具体的には、ＩＬ−６の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸、ｇｐ１３０の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸、Ｓｔａｔ３の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸が例示される。
【００３０】
ここで「ＩＬ−６の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の１−（ｃ）、１−（ｄ）または１−（ｅ）の核酸；
１−（ｃ）  配列番号：１に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＩＬ−６活性を有する核酸、
１−（ｄ）  配列番号：１に記載の塩基配列と７０％以上の配列同一性を示す塩基配列を含有する核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＩＬ−６活性を有する核酸、
１−（ｅ）  配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＩＬ−６活性を有する核酸、が例示される。
【００３１】
また「ｇｐ１３０の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の２−（ｃ）、２−（ｄ）または２−（ｅ）の核酸；
２−（ｃ）  配列番号：３に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がｇｐ１３０活性を有する核酸、
２−（ｄ）  配列番号：３に記載の塩基配列と７０％以上の配列同一性を示す塩基配列を含有する核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がｇｐ１３０活性を有する核酸、
２−（ｅ）  配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がｇｐ１３０活性を有する核酸、が例示される。
【００３２】
また「Ｓｔａｔ３の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の３−（ｃ）、３−（ｄ）または３−（ｅ）の核酸；
３−（ｃ）  配列番号：５に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＳｔａｔ３活性を有する核酸、
３−（ｄ）  配列番号：５に記載の塩基配列と７０％以上の配列同一性を示す塩基配列を含有する核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＳｔａｔ３活性を有する核酸、
３−（ｅ）  配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＳｔａｔ３活性を有する核酸、が例示される。
【００３３】
また「Ｂｃｌ３の均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」とは、以下の４−（ｃ）、４−（ｄ）または４−（ｅ）の核酸；
４−（ｃ）  配列番号：７に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＢｃｌ３活性を有する核酸、
４−（ｄ）  配列番号：７に記載の塩基配列と７０％以上の配列同一性を示す塩基配列を含有する核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＢｃｌ３活性を有する核酸、
４−（ｅ）  配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする核酸であって、かつ当該核酸によりコードされるタンパク質がＢｃｌ３活性を有する核酸、が例示される。
【００３４】
前記本発明の核酸は、種々の細胞や組織由来のｃＤＮＡやｍＲＮＡ、ｃＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、または合成ＤＮＡのいずれであっても良い。また本発明の核酸は１本鎖および２本鎖のいずれの形態もとることができる。
【００３５】
ここで配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列、配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列については前述したとおりである。
【００３６】
これら配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列を含有する核酸、若しくは配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸は、当該塩基配列の適当な部分をハイブリダイゼーションのプローブあるいはＰＣＲのプライマーに用いて、例えばリンパ球由来のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによりクローニングすることができる。該クローニングは、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｔ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）等の基本書に従い、当業者ならば容易に行うことができる。
【００３７】
前記（ｃ）（１−（ｃ）、２−（ｃ）、３−（ｃ）、４−（ｃ））における「配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸」とは、例えば配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列と約４０％以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の配列同一性を有する塩基配列を含有する核酸が挙げられる。具体的には、配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列の部分配列からなる核酸などが挙げられる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｔ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）等の基本書に記載の方法に従って行うことができる。また市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができる。
【００３８】
ここで「ストリンジェントな条件」とは、Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ  （１９８７，  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １５２，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）や前記Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｔ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）に教示されるように、複合体或いはプローブを結合する核酸の融解温度（Ｔｍ）に基づいて決定することができる。
ハイブリダイゼーションの条件としては、例えば、６×ＳＳＣ（２０×ＳＳＣは、３３３ｍＭ  Ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ、３３３ｍＭ  ＮａＣｌを示す）、０．５％ＳＤＳおよび５０％  ホルムアミドを含む溶液中で４２℃にてハイブリダイズさせる条件、または６×ＳＳＣを含む（５０％ホルムアミドは含まない）溶液中で６５℃にてハイブリダイズさせる条件などが挙げられる。
またハイブリダイゼーション後の洗浄の条件としては、「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度の条件を挙げることができる。相補鎖はかかる条件で洗浄しても対象とする正鎖とハイブリダイズ状態を維持するものであることが好ましい。特に制限されないが、より厳しいハイブリダイズ条件として「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度、さらに厳しいハイブリダイズ条件として「０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度の洗浄条件を挙げることができる。
【００３９】
前記（ｄ）（１−（ｄ）、２−（ｄ）、３−（ｄ）、４−（ｄ））における「配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列と７０％以上の配列同一性を示す塩基配列を含有する核酸」とは、例えば配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列と約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の配列同一性を示す塩基配列を含有する核酸が挙げられる。具体的には、配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列の部分配列からなる核酸などが挙げられる。
【００４０】
ここで「配列同一性」とは、２つの核酸間の、配列の同一性及び相同性をいう。当該「配列同一性」は、比較対象の配列の領域にわたって、最適な状態にアラインメントされた２つの配列を比較することにより決定される。ここで、比較対象の核酸は、２つの配列の最適なアラインメントにおいて、付加又は欠失（例えばギャップ等）を有していてもよい。このような配列同一性に関しては、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩを用いて、ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，２２（２２）：４６７３−４６８０（１９９４）を利用してアラインメントを作成することにより算出することができる。尚、配列同一性は、配列解析ソフト、具体的にはＶｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ、ＧＥＮＥＴＹＸ−ＭＡＣや公共のデータベースで提供される解析ツールを用いて測定される。前記公共データベースは、例えば、ホームページアドレスｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐにおいて、一般的に利用可能である。
このような配列同一性を有する核酸は、前述のハイブリダイゼーション反応や通常のＰＣＲ反応により、または後述する核酸の改変（欠失、付加、置換）反応により作製することができる。
【００４１】
前記（ｅ）（１−（ｅ）、２−（ｅ）、３−（ｅ）、４−（ｅ））における「配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする核酸」とは、人為的に作製したいわゆる改変タンパク質や、生体内に存在するアレル変異体等のタンパク質をコードする核酸を意味する。
【００４２】
ここでタンパク質におけるアミノ酸の変異数や変異部位は、前記各因子の活性が保持される限り制限はない。このように活性を喪失することなくアミノ酸残基が、どのように、何個欠失、置換及び／又は付加されればよいかを決定する指標は、当業者に周知のコンピュータプログラム、例えばＤＮＡ  Ｓｔａｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて見出すことができる。例えば変異数は、典型的には、全アミノ酸の１０％以内であり、好ましくは全アミノ酸の５％以内である。また置換されるアミノ酸は、タンパク質の構造保持の観点から、残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性並びに両親媒性など、置換前のアミノ酸と似た性質を有するアミノ酸であることが好ましい。例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ及びＴｒｐは互いに非極性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎは互いに非荷電性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ａｓｐ及びＧｌｕは互いに酸性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、またＬｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓは互いに塩基性アミノ酸に分類されるアミノ酸である。ゆえに、これらを指標として同群に属するアミノ酸を適宜選択することができる。
【００４３】
この改変タンパク質をコードする核酸は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｔ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）等の基本書に記載の種々の方法、例えば部位特異的変異誘発やＰＣＲ法等によって製造することができる。また市販のキットを用いて、Ｇａｐｐｅｄ  ｄｕｐｌｅｘ法やＫｕｎｋｅｌ法などの公知の方法に従って製造することもできる。
【００４４】
前記１−（ｃ）〜１−（ｅ）において「ＩＬ−６活性を有する」とは、ＩＬ−６と同等の活性を有することを意味する。
ＩＬ−６はＢ細胞の増殖活性（Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  １５１，  ３１  （２０００）、Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９，  ５０２  （１９８８）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １７９，  １３４３  （１９９４））、Ｂ細胞株からのＩｇＭ産生活性（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ８２，５４９０  （１９８５）、  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２４，  ７３  （１９８６）、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３，３１  （１９８３））、  滑膜細胞の増殖活性（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，  ３４，  ３２１  （１９９５））、Ｍ１細胞のマクロファージへの分化促進活性（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  ２３４，  １７  （１９８８）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９３，  ３９６３  （１９９６）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４））、ｇｐ１３０リン酸化活性（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５  （２０００）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９６，  ９７９  （２００２））、血管平滑筋細胞からのＭＣＰ−１の産生活性（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １６３，  ４５８３  （１９９９））、ミエローマ細胞のアポトーシス誘導活性（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７６，  １８，  １４７２８  （２００１））、ＩＬ−６応答性配列への結合活性（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，７３，２００９  （１９９９））等の種々の作用を有している。従って、これらの文献に記載の公知の活性に基づくアッセイ系を用いることにより、ＩＬ−６の均等物がＩＬ−６活性を有することを確認することができる。
【００４５】
前記２−（ｃ）〜２−（ｅ）において「ｇｐ１３０活性を有する」とは、ｇｐ１３０と同等の活性を有することを意味する。
ｇｐ１３０はＩＬ−６ファミリー共通の受容体の構成要素であり、Ｊａｋカイネースによりリン酸化されることによりＩＬ−６のシグナルを伝達することが知られている（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５  （２０００）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９６，  ９７９  （２００２））。従って、これらの文献に記載の公知の活性に基づくアッセイ系を用いることにより、ｇｐ１３０の均等物がｇｐ１３０活性を有することを確認することができる。
【００４６】
前記３−（ｃ）〜３−（ｅ）において「Ｓｔａｔ３活性を有する」とは、Ｓｔａｔ３と同等の活性を有することを意味する。
Ｓｔａｔ３は、ｇｐ１３０のＹｘｘＱモチーフ（Ｙはチロシン、Ｘは如何なるアミノ酸でも可、Ｑはグルタミン）のチロシン残基（Ｙ７６７、Ｙ８１４、Ｙ９０５およびＹ９１５）依存的に活性化され、核内に移行して転写因子として作用する。Ｓｔａｔ３はコンセンサスシークエンス（２×ＣＣＴＴＣＣＧＧＧＡＡＴＴＣ、配列番号：９）に結合することにより下流遺伝子の転写活性化することが知られている（Ｃｅｌｌ．，  ７７，  ６３  （１９９４）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７１，  １３２２１  （１９９６）、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｏｌ．，  ２１，  ４１４  （２００１）、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，  ７３，  ２００９  （１９９９）、ＥＭＢＯ  Ｊ．，  １９，  ５８４５  （２０００））。従って、このコンセンサスシークエンスへのバインディングアッセイやレポータージーンアッセイを行うことにより、Ｓｔａｔ３の均等物がＳｔａｔ３活性を有することを確認することができる。
【００４７】
前記４−（ｃ）〜４−（ｅ）において「Ｂｃｌ３活性を有する」とは、Ｂｃｌ３と同等の活性を有することを意味する。
Ｂｃｌ３はＮＦκＢ／Ｒｅｌ転写因子やＡＰ１転写因子の活性化を調節することが知られている。具体的には、Ｂｃｌ３は、ＮＦκＢの１形態であるｐ５０／ｐ５０による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒとして作用すること（ＥＭＢＯ  Ｊ．，  Ｖｏｌ．１６，  Ｎｏ．１２，  ｐ３６０９  （１９９７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  Ｖｏｌ．１９，  ｐ１１２３  （２０００））、ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１による転写のｒｅｐｒｅｓｓｏｒとして作用すること（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７６，  Ｎｏ．３４，ｐ３２０８０（２００１））、またＡＰ１による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒとして作用すること（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７４，  Ｎｏ．４０，  ｐ２８４９１  （１９９９））等が知られている。従って、これらの文献記載の手法（ゲルシフトアッセイ、レポータージーンアッセイ等）に基づき活性測定を行うことにより、Ｂｃｌ３の均等物がＢｃｌ３活性を有することを確認することができる。
【００４８】
前記本発明因子の均等物はまた、未成熟樹状細胞の成熟化を抑制する作用を有する。
本発明因子の均等物が、本発明因子と同様に未成熟樹状細胞の成熟化を抑制することは、以下の手法により確認することができる。
すなわちまず、マウス等の哺乳動物の脚の骨から骨髄細胞収穫し、ＮＨ４Ｃｌ処理して赤血球を除去し、培養する。浮遊細胞と接着の弱い細胞をピペッティングにより収集し、その結果得られた細胞をＢＭＤＣ培地（ＲＰＭＩ１０％、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭＣＳＦ）中で培養する。この細胞を無刺激または被験物質（本発明因子均等物）で２４時間程度前処理後、１００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳで２４時間刺激する。その後、文献（Ｉｓｈｉｈａｒａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ８，  １３９５，  １９９６；Ｉｔｏｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １６１，  ３９７４，  １９９８）等に記載の方法によりフローサイトメーターで解析する。ＬＰＳによる種々の成熟マーカー（ＭＨＣ  ｃｌａｓｓＩＩ、ＣＤ８６等）の発現誘導が抑制されるか否かにより、未成熟樹状細胞の成熟化の抑制を確認することができる。
【００４９】
前記において「本発明因子又はその均等物」とは、本発明因子又はその均等物をコードする核酸によりコードされるタンパク質である。
ここで「本発明因子」とはすなわち「Ｓｔａｔ３促進因子」および「Ｂｃｌ３」を指し、「Ｓｔａｔ３促進因子」としては、具体的にはＩＬ−６、ｇｐ１３０、およびＳｔａｔ３が例示される。
【００５０】
ここで「ＩＬ−６」とは、具体的には配列番号：２に記載のアミノ酸配列を含有するタンパク質が例示される。また「ｇｐ１３０」とは、具体的には配列番号：４に記載のアミノ酸配列を含有するタンパク質が例示される。また「Ｓｔａｔ３」とは、具体的には配列番号：６に記載のアミノ酸配列を含有するタンパク質が例示される。また「Ｂｃｌ３」とは、具体的には配列番号：８に記載のアミノ酸配列を含有するタンパク質が例示される。
【００５１】
また前記において「本発明因子の均等物」とはすなわち「Ｓｔａｔ３促進因子の均等物」および「Ｂｃｌ３の均等物」を指す。「Ｓｔａｔ３促進因子の均等物」としては、具体的には、ＩＬ−６の均等物、ｇｐ１３０の均等物、Ｓｔａｔ３の均等物が例示される。
前記で「ＩＬ−６の均等物」とは、以下の１−（ａ）、１−（ｂ）または１−（ｃ）；
１−（ａ）  配列番号：２に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつＩＬ−６活性を有するタンパク質、
１−（ｂ）  配列番号：２に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつＩＬ−６活性を有するタンパク質、
１−（ｃ）  配列番号：１に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつＩＬ−６活性を有するタンパク質、が例示される。
【００５２】
また「ｇｐ１３０の均等物」とは、以下の２−（ａ）、２−（ｂ）または２−（ｃ）；
２−（ａ）  配列番号：４に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつｇｐ１３０活性を有するタンパク質、
２−（ｂ）  配列番号：４に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつｇｐ１３０活性を有するタンパク質、
２−（ｃ）  配列番号：３に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつｇｐ１３０活性を有するタンパク質、が例示される。
【００５３】
また「Ｓｔａｔ３の均等物」とは、以下の３−（ａ）、３−（ｂ）または３−（ｃ）；
３−（ａ）  配列番号：６に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつＳｔａｔ３活性を有するタンパク質、
３−（ｂ）  配列番号：６に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつＳｔａｔ３活性を有するタンパク質、
３−（ｃ）  配列番号：５に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつＳｔａｔ３活性を有するタンパク質、が例示される。
【００５４】
また「Ｂｃｌ３の均等物」とは、以下の４−（ａ）、４−（ｂ）または４−（ｃ）；
４−（ａ）  配列番号：８に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつＢｃｌ３活性を有するタンパク質、
４−（ｂ）  配列番号：８に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含有するタンパク質であって、かつＢｃｌ３活性を有するタンパク質、
４−（ｃ）  配列番号：７に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列からなるタンパク質であって、かつＢｃｌ３活性を有するタンパク質、が例示される。
【００５５】
ここで配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列、配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列については前述したとおりである。
【００５６】
前記（ａ）（１−（ａ）、２−（ａ）、３−（ａ）、４−（ａ））における「配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列において１若しくは複数のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列を含有するタンパク質」とは、人為的に作製したいわゆる改変タンパク質や、生体内に存在するアレル変異体等のタンパク質を意味する。
【００５７】
ここでタンパク質におけるアミノ酸の変異数や変異部位は、前記本発明因子の活性が保持される限り制限はない。このように活性を喪失することなくアミノ酸残基が、どのように、何個欠失、置換及び／又は付加されればよいかを決定する指標は、当業者に周知のコンピュータプログラム、例えばＤＮＡ  Ｓｔａｒ  ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて見出すことができる。例えば変異数は、典型的には、全アミノ酸の１０％以内であり、好ましくは全アミノ酸の５％以内である。また置換されるアミノ酸は、タンパク質の構造保持の観点から、残基の極性、電荷、可溶性、疎水性、親水性並びに両親媒性など、置換前のアミノ酸と似た性質を有するアミノ酸であることが好ましい。例えば、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ及びＴｒｐは互いに非極性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ａｓｎ及びＧｌｎは互いに非荷電性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、Ａｓｐ及びＧｌｕは互いに酸性アミノ酸に分類されるアミノ酸であり、またＬｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓは互いに塩基性アミノ酸に分類されるアミノ酸である。ゆえに、これらを指標として同群に属するアミノ酸を適宜選択することができる。
【００５８】
前記（ｂ）（１−（ｂ）、２−（ｂ）、３−（ｂ）、４−（ｂ））における「配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含有するタンパク質」とは、例えば配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列と約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の配列同一性を示すアミノ酸配列を含有するタンパク質が挙げられる。具体的には、配列番号：２、４、６又は８に記載のアミノ酸配列の部分配列からなるタンパク質などが挙げられる。
【００５９】
ここで「配列同一性」とは、２つのタンパク質間の、配列の同一性及び相同性をいう。当該「配列同一性」は、比較対象の配列の領域にわたって、最適な状態にアラインメントされた２つの配列を比較することにより決定される。ここで、比較対象のタンパク質は、２つの配列の最適なアラインメントにおいて、付加又は欠失（例えばギャップ等）を有していてもよい。このような配列同一性に関しては、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩを用いて、ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，２２（２２）：４６７３−４６８０（１９９４）を利用してアラインメントを作成することにより算出することができる。尚、配列同一性は、配列解析ソフト、具体的にはＶｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ、ＧＥＮＥＴＹＸ−ＭＡＣや公共のデータベースで提供される解析ツールを用いて測定される。前記公共データベースは、例えば、ホームページアドレスｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐにおいて、一般的に利用可能である。
【００６０】
前記（ｃ）（１−（ｃ）、２−（ｃ）、３−（ｃ）、４−（ｃ））における「配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列の相補鎖に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸」とは、例えば配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列と約４０％以上、好ましくは約６０％以上、より好ましくは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の配列同一性を有する塩基配列を含有する核酸が挙げられる。具体的には、配列番号：１、３、５又は７に記載の塩基配列の部分配列からなる核酸などが挙げられる。
ハイブリダイゼーションは、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｔ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）等の基本書に記載の方法に従って行うことができる。また市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができる。
【００６１】
ここで「ストリンジェントな条件」とは、Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ  （１９８７，  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．  １５２，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）や前記Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｔ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８９）に教示されるように、複合体或いはプローブを結合する核酸の融解温度（Ｔｍ）に基づいて決定することができる。
【００６２】
ハイブリダイゼーションの条件としては、例えば、６×ＳＳＣ（２０×ＳＳＣは、３３３ｍＭ  Ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ、３３３ｍＭ  ＮａＣｌを示す）、０．５％ＳＤＳおよび５０％  ホルムアミドを含む溶液中で４２℃にてハイブリダイズさせる条件、または６×ＳＳＣを含む（５０％ホルムアミドは含まない）溶液中で６５℃にてハイブリダイズさせる条件などが挙げられる。
またハイブリダイゼーション後の洗浄の条件としては、「１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、３７℃」程度の条件を挙げることができる。相補鎖はかかる条件で洗浄しても対象とする正鎖とハイブリダイズ状態を維持するものであることが好ましい。特に制限されないが、より厳しいハイブリダイズ条件として「０．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、４２℃」程度、さらに厳しいハイブリダイズ条件として「０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、６５℃」程度の洗浄条件を挙げることができる。
【００６３】
前記（ａ）〜（ｃ）におけるＩＬ−６活性、ｇｐ１３０活性、Ｓｔａｔ３活性またはＢｃｌ３活性、及びその活性測定法については、前記「本発明因子またはその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸」の項に記載したとおりである。
【００６４】
本発明因子又はその均等物は、天然物から自体公知のタンパク質の精製方法によって製造することもできるし、また本発明因子又はその均等物をコードする核酸を含有する発現ベクターで宿主細胞を形質転換して作製された形質転換体を培養することによっても製造することができる。
以下、当該製造方法につき記述する。
【００６５】
本発明因子又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を発現ベクターに挿入することにより、本発明因子又はその均等物を発現するための組換え発現ベクターを作製することができる。
【００６６】
ここで用いる発現ベクターとしては、用いる宿主や目的等に応じて適宜選択することができ、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター等が挙げられる。
【００６７】
例えば、宿主が大腸菌の場合、ベクターとしては、ｐＵＣ１１８、ｐＵＣ１１９、ｐＢＲ３２２、ｐＣＲ３等のプラスミドベクター、λＺＡＰＩＩ、λｇｔ１１などのファージベクターが挙げられる。宿主が酵母の場合、ベクターとしては、ｐＹＥＳ２、ｐＹＥＵｒａ３などが挙げられる。宿主が昆虫細胞の場合には、ｐＡｃＳＧＨｉｓＮＴ−Ａなどが挙げられる。宿主が動物細胞の場合には、ｐＣＥＰ４、ｐＫＣＲ、ｐＣＤＭ８、ｐＧＬ２、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐＲｃ／ＣＭＶなどのプラスミドベクターや、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクターなどのウイルスベクターが挙げられる。
【００６８】
前記ベクターは、発現誘導可能なプロモーター、シグナル配列をコードする遺伝子、選択用マーカー遺伝子、ターミネーターなどの因子を適宜有していても良い。
また、単離精製が容易になるように、チオレドキシン、Ｈｉｓタグ、あるいはＧＳＴ（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）等との融合タンパク質として発現する配列が付加されていても良い。この場合、宿主細胞内で機能する適切なプロモーター（ｌａｃ、ｔａｃ、ｔｒｃ、ｔｒｐ、ＣＭＶ、ＳＶ４０初期プロモーターなど）を有するＧＳＴ融合タンパクベクター（ｐＧＥＸ４Ｔなど）や、Ｍｙｃ、Ｈｉｓなどのタグ配列を有するベクター（ｐｃＤＮＡ３．１／Ｍｙｃ−Ｈｉｓなど）、さらにはチオレドキシンおよびＨｉｓタグとの融合タンパク質を発現するベクター（ｐＥＴ３２ａ）などを用いることができる。
【００６９】
前記で作製された発現ベクターで宿主を形質転換することにより、当該発現ベクターを含有する形質転換細胞を作製することができる。
ここで用いられる宿主としては、大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられる。大腸菌としては、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋ−１２系統のＨＢ１０１株、Ｃ６００株、ＪＭ１０９株、ＤＨ５α株、ＡＤ４９４（ＤＥ３）株などが挙げられる。また酵母としては、サッカロミセス・セルビジエなどが挙げられる。動物細胞としては、Ｌ９２９細胞、ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３細胞、Ｃ１２７細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｈｅｌａ細胞、２９３−ＥＢＮＡ細胞などが挙げられる。昆虫細胞としてはｓｆ９などが挙げられる。
【００７０】
宿主細胞への発現ベクターの導入方法としては、前記宿主細胞に適合した通常の導入方法を用いれば良い。具体的にはリン酸カルシウム法、ＤＥＡＥ−デキストラン法、エレクトロポレーション法、遺伝子導入用リピッド（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ；  Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社）を用いる方法などが挙げられる。導入後、選択マーカーを含む通常の培地にて培養することにより、前記発現ベクターが宿主細胞中に導入された形質転換細胞を選択することができる。
【００７１】
以上のようにして得られた形質転換細胞を好適な条件下で培養し続けることにより、本発明因子又はその均等物を製造することができる。得られた本発明因子又はその均等物は、一般的な生化学的精製手段により、さらに単離・精製することができる。ここで精製手段としては、塩析、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー等が挙げられる。また本発明因子又はその均等物を、前述のチオレドキシンやＨｉｓタグ、ＧＳＴ等との融合タンパク質として発現させた場合は、これら融合タンパク質やタグの性質を利用した精製法により単離・精製することができる。
【００７２】
前記本発明因子の発現または機能を促進する物質は、未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤の有効成分とすることができる。
実施例で示されたように、未成熟樹状細胞に対してＳｔａｔ３促進因子（ＩＬ−６、Ｓｔａｔ３）、またはＢｃｌ３を作用させることにより樹状細胞の成熟化が抑制された。従ってこれら本発明因子の発現または機能を促進することにより、未成熟樹状細胞の成熟化を抑制することができる。
本発明因子の発現または機能促進物質が未成熟樹状細胞の成熟化を抑制することは、前述したアッセイ系（未成熟樹状細胞をＬＰＳ刺激等により成熟化誘導する系）に本発明因子の発現または機能促進物質を加え、成熟マーカーの発現が抑制されることなどにより確認することができる。
【００７３】
樹状細胞は成熟化に伴い、抗原提示能を獲得しＴ細胞を有効に刺激する。また高レベルのＭＨＣクラスＩＩやＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ４０などの共刺激分子を発現し、多量のＩＬ−１２を産生する。このため未成熟樹状細胞から成熟細胞への分化は、免疫活性化の重要な段階となっている。本発明の未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤は、このような免疫活性化を抑制する薬剤であるため、過剰な免疫反応を伴う疾患の予防または治療剤として有効に用いることができる。
【００７４】
ここで「過剰な免疫反応を伴う疾患」としては、具体的には自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患及び炎症性疾患が挙げられる。
すなわち自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患及び炎症性疾患は、Ｔ細胞の望ましくない活性化が、望ましくない臨床状態の誘導及び／又は進行に必要であると考えられる疾患状態である。したがって、Ｔ細胞の活性化を遮断する本発明の剤は、治療的に極めて価値があると考えられる（例えば、Ｊ．Ｈ．Ｈａｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ４４，ｐｐ．３５７−３７１，１９９５  を参照されたい）。
【００７５】
ここで「自己免疫疾患」とは、自己の組織を構成する成分に反応する抗体あるいはリンパ球が、体内で持続的に産生されることによって組織障害をきたす疾患であり、大別すると下記に掲げる臓器特異的自己免疫疾患と臓器非特異的自己免疫疾患の２つに分類することができる。
（１）  臓器特異的自己免疫疾患：橋本甲状腺炎、原発性粘液水腫、甲状腺中毒症、悪性貧血、Ｇｏｏｄ−ｐａｓｔｕｒｅ症候群、急性進行性糸球体腎炎、重傷筋無力症、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、インスリン抵抗性糖尿病、若年性糖尿病、アジソン病、萎縮性胃炎、男性不妊症、早発性更年期、水晶体原性ぶどう膜炎、交換性脈炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、発作性血色素尿症、突発性血小板減少性紫斑病、シェーグレン症候群。
（２）臓器非特異的自己免疫疾患：慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、多発性筋炎、強皮症、混合結合組織病。
【００７６】
また「アレルギー性疾患」とは、喘息、アレルギー性鼻炎及びアトピー性皮膚炎が含まれる。
また「炎症性疾患」とは、急性及び慢性の炎症性疾患のいずれをも含み、具体的には変形性関節症、成人呼吸窮迫症候群、幼児呼吸窮迫症候群、虚血性再灌流障害及び糸球体腎炎が含まれる。
【００７７】
本発明因子の発現または機能を促進する物質は、これらを医薬品として用いるにあたり、そのままもしくは公知の薬学的に許容される担体（賦形剤、希釈剤、増量剤、結合剤、滑沢剤、流動助剤、崩壊剤、界面活性剤等などが含まれる）や慣用の添加剤などと混合して医薬組成物として調製することができる。当該医薬組成物は、調製する形態（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤などの経口投与剤；注射剤、点滴剤、外用剤、坐剤などの非経口投与剤）等に応じて、全身的にまたは局所的に、経口投与または非経口投与することができる。非経口投与する場合には、静脈投与、動脈投与、筋肉内投与、腹腔内投与、皮内投与、皮下投与、又は膝関節もしくは股関節への関節内投与することが可能である。
【００７８】
また投与量は、有効成分の種類、投与経路、投与対象または患者の年齢、体重、症状などによって異なり一概に規定できないが、通常、１日投与用量として、数ｍｇ〜２ｇ程度、好ましくは数十ｍｇ程度を、１日１〜数回にわけて投与することができる。
【００７９】
以下、本発明因子の機能を促進する物質の代表例として、▲１▼本発明因子またはその均等物、若しくは▲２▼本発明因子又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含む発現ベクター、を有効成分として含有する薬剤の投与形態・投与方法等につき記述する。
【００８０】
▲１▼本発明因子またはその均等物を有効成分とする薬剤
本発明因子又はその均等物を有効成分とする未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤は、ポリＬ−リジン、アビジン、コレステロール又はリン脂質成分等の付属基を結合させることによって、細胞膜透過性を向上させることができる。あるいは、本治療薬は、Ｂｃｌ３又はその均等物をカチオン性リポソームに被包して製剤化することもできる。蛋白質はポリアニオン性であるので、カチオン性リポソームと混合することにより容易に複合体を形成する。また、リポソーム膜に樹状細胞で特異的に発現する細胞表面分子に対する抗体もしくはリガンドを組み込むことにより、細胞特異的なターゲッティングを行うこともできる。
本発明因子又はその均等物を有効成分とする未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤は、適当な無菌のビヒクルに溶解もしくは懸濁して、経口的又は非経口的に投与され得る。投与経路および投与量については、前項を参照されたい。
【００８１】
▲２▼本発明因子又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含む発現ベクターを有効成分とする薬剤
本発明因子又はその均等物をコードする塩基配列を含有する核酸を含有する発現ベクターを投与し細胞内に導入する方法としては、ウイルスベクターによる方法およびその他の方法（日経サイエンス，  １９９４年４月号，  ２０−４５頁、月刊薬事，  ３６（１），  ２３−４８（１９９４）、実験医学増刊，  １２（１５），  （１９９４）、およびこれらの引用文献等）のいずれの方法も適用することができる。
【００８２】
ウイルスベクターによる方法としては、例えばレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンビスウイルス等のＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルスに本発明のＤＮＡを組み込んで導入する方法が挙げられる。この中で、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワクシニアウイルス等を用いた方法が特に好ましい。
その他の方法としては、発現プラスミドを直接筋肉内に投与する方法（ＤＮＡワクチン法）、リポソーム法、リポフェクチン法、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法等が挙げられ、特にＤＮＡワクチン法、リポソーム法が好ましい。
【００８３】
前記核酸を含有する発現ベクターを実際に医薬として作用させるには、当該発現ベクターを直接体内に導入する  ｉｎ  ｖｉｖｏ法、およびヒトからある種の細胞を採集し体外で発現ベクターを該細胞に導入しその細胞を体内に戻す  ｅｘ  ｖｉｖｏ法がある（日経サイエンス，  １９９４年４月号，  ２０−４５頁、月刊薬事，  ３６（１），  ２３−４８（１９９４）、実験医学増刊，  １２（１５），  （１９９４）、およびこれらの引用文献等）。ｉｎ  ｖｉｖｏ法がより好ましい。
【００８４】
ｉｎ  ｖｉｖｏ法により投与する場合は、治療目的の疾患、症状等に応じた適当な投与経路により投与され得る。例えば、静脈、動脈、皮下、皮内、筋肉内等に投与することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ法により投与する場合は、例えば、液剤等の製剤形態をとりうるが、一般的には有効成分である本発明の核酸含有発現ベクターを含む注射剤等とされ、必要に応じて、医薬上許容されるキャリアー（担体）を加えてもよい。また、本発明の核酸を含有する発現ベクターを含むリポソームまたは膜融合リポソーム（センダイウイルス（ＨＶＪ）−リポソーム等）においては、懸濁剤、凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤等のリポソーム製剤の形態とすることができる。
製剤中の本発明の発現ベクターの含量は、治療目的の疾患、患者の年齢、体重等により適宜調整することができるが、通常、発現ベクター中の核酸の含量として、０．０００１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０．００１ｍｇ〜１０ｍｇの本発明の核酸を、数日ないし数月に１回投与するのが好ましい。
【００８５】
本発明は、本発明因子の発現または機能を抑制する物質を有効成分として含有する未成熟樹状細胞の成熟化促進剤を提供する。
ここで「本発明因子」とは、前記と同様にＳｔａｔ３促進因子およびＢｃｌ３を指し、Ｓｔａｔ３促進因子とは、具体的にはＩＬ−６ファミリー（好ましくはＩＬ−６）、ｇｐ１３０またはＳｔａｔ３が例示される。
【００８６】
前記で「発現を抑制する物質」は、本発明因子遺伝子の転写レベル、転写後調節のレベル、蛋白質への翻訳レベルまたは翻訳後修飾のレベル等の、いかなる段階で作用するものであってもよい。一方、「機能を抑制する物質」とは、機能的な状態で生体内に存在する本発明因子に作用して、その活性を抑制する物質を指す。
【００８７】
本発明因子の発現を抑制する物質としては、転写抑制因子、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、ＲＮＡ分解酵素、蛋白質合成阻害剤、蛋白質分解酵素、蛋白質変性剤等が例示され、当該活性を有する限り、天然もしくは非天然の、ポリペプチド、核酸、有機化合物等公知化合物又は新規化合物のいずれであっても良い。具体的には、コンビナトリアルケミストリー技術を用いて作製された有機化合物ライブラリー、固相合成やファージディスプレー法により作製されたランダムペプチドライブラリー、あるいは微生物、動植物、海洋生物等由来の天然成分を後述するスクリーニング法に供すること等により選び出すことができる。
【００８８】
本発明因子の発現を抑制する物質が細胞内で発現する他の遺伝子・蛋白質に及ぼす悪影響を最小限にするためには、標的分子に特異的に作用し得る物質であることが重要である。従って、本発明因子の発現を抑制する物質の好ましい一態様は、本発明因子のｍＲＮＡ（例えば配列番号１、３、５または７記載の塩基配列からなる）もしくは初期転写産物のアンチセンス核酸である。「アンチセンス核酸」とは、標的ｍＲＮＡ（初期転写産物）を発現する細胞の生理的条件下で該標的ｍＲＮＡ（初期転写産物）とハイブリダイズし得る塩基配列からなり、且つハイブリダイズした状態で該標的ｍＲＮＡ（初期転写産物）にコードされるタンパク質の翻訳を阻害し得る核酸をいう。アンチセンス核酸の種類はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよいし、あるいは  ＤＮＡ／ＲＮＡ  キメラであってもよい。また、天然型のアンチセンス核酸は、細胞中に存在する核酸分解酵素によってそのリン酸ジエステル結合が容易に分解されるので、本発明のアンチセンス核酸は、分解酵素に安定なチオリン酸型（リン酸結合のＰ＝ＯをＰ＝Ｓに置換）や２’−Ｏ−メチル型等の修飾ヌクレオチドを用いて合成することもできる。アンチセンス核酸の設計に重要な他の要素として、水溶性及び細胞膜透過性を高めること等が挙げられるが、これらはリポソームやマイクロスフェアを使用するなどの剤形の工夫によっても克服することができる。
【００８９】
本発明のアンチセンス核酸の長さは、本発明因子のｍＲＮＡもしくは初期転写産物と特異的にハイブリダイズし得る限り特に制限はない。短いもので約１５塩基程度、長いものでｍＲＮＡ（初期転写産物）の全配列に相補的な配列を含むような配列であってもよい。合成の容易さや抗原性の問題等から、好ましくは約１５〜約３０塩基からなるオリゴヌクレオチドが例示される。アンチセンス核酸が約２５ｍｅｒのオリゴＤＮＡの場合、生理条件下で本発明因子のｍＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列は、標的配列の塩基組成によっても異なるが、通常、約８０％以上の同一性を有するものであればよい。
【００９０】
本発明のアンチセンス核酸の標的配列は、アンチセンス核酸がハイブリダイズすることにより、本発明因子（タンパク質）もしくはその機能的断片の翻訳が阻害される配列であれば特に制限はなく、本発明因子のｍＲＮＡの全配列（例えば配列番号１、３、５または７記載の塩基配列からなる）であっても部分配列であってもよいし、あるいは初期転写産物のイントロン部分であってもよいが、アンチセンス核酸としてオリゴヌクレオチドを使用する場合は、標的配列は本発明因子のｍＲＮＡの５’末端からコード領域のＣ末端まで（配列番号：１記載の塩基配列中塩基番号１〜７０１、配列番号：３記載の塩基配列中塩基番号１〜３０１２、配列番号：５記載の塩基配列中塩基番号１〜２５５３、配列番号：７記載の塩基配列中塩基番号１〜１３８２など）に位置することが望ましい。好ましくは５’末端からコード領域のＮ末端側の領域であり、最も好ましくは開始コドン（配列番号：１記載の塩基配列においては塩基番号６３〜６５、配列番号：３記載の塩基配列においては塩基番号２５６〜２５８、配列番号：５記載の塩基配列においては塩基番号２４１〜２４３、配列番号：７記載の塩基配列においては塩基番号４２〜４４）近傍の塩基配列である。また標的配列は、それに相補的なアンチセンス核酸がヘアピン構造等の二次構造を形成しないようなものを選択することが好ましい。
【００９１】
さらに、本発明のアンチセンス核酸は、本発明因子のｍＲＮＡもしくは初期転写産物とハイブリダイズして翻訳を阻害するだけでなく、二本鎖ＤＮＡである本発明因子遺伝子と結合して三重鎖（トリプレックス）を形成し、ｍＲＮＡへの転写を阻害し得るものであってもよい。
【００９２】
本発明因子の発現を抑制する物質の別の好ましい一態様は、本発明因子のｍＲＮＡもしくは初期転写産物を、コード領域（配列番号：１記載の塩基配列中塩基番号６３〜７０１で示される塩基配列、配列番号：３記載の塩基配列中塩基番号２５６〜３０１２で示される塩基配列、配列番号：５記載の塩基配列中塩基番号２４１〜２５５３で示される塩基配列、配列番号：７記載の塩基配列中塩基番号４２〜１３８２で示される塩基配列）の内部（初期転写産物の場合はイントロン部分を含む）で特異的に切断し得るリボザイムである。「リボザイム」とは核酸を切断する酵素活性を有するＲＮＡをいうが、最近では当該酵素活性部位の塩基配列を有するオリゴＤＮＡも同様に核酸切断活性を有することが明らかになっているので、本発明では配列特異的な核酸切断活性を有する限りＤＮＡをも包含する概念として用いるものとする。リボザイムとして最も汎用性の高いものとしては、ウイロイドやウイルソイド等の感染性ＲＮＡに見られるセルフスプライシングＲＮＡがあり、ハンマーヘッド型やヘアピン型等が知られている。ハンマーヘッド型は約４０塩基程度で酵素活性を発揮し、ハンマーヘッド構造をとる部分に隣接する両端の数塩基ずつ（合わせて約１０塩基程度）をｍＲＮＡの所望の切断部位と相補的な配列にすることにより、標的ｍＲＮＡのみを特異的に切断することが可能である。このタイプのリボザイムは、ＲＮＡのみを基質とするので、ゲノムＤＮＡを攻撃することがないというさらなる利点を有する。本発明因子のｍＲＮＡが自身で二本鎖構造をとる場合には、ＲＮＡヘリカーゼと特異的に結合し得るウイルス核酸由来のＲＮＡモチーフを連結したハイブリッドリボザイムを用いることにより、標的配列を一本鎖にすることができる（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９８（１０）：  ５５７２−５５７７  （２００１））。さらに、リボザイムを、それをコードするＤＮＡを含む発現ベクターの形態で使用する場合には、細胞質への移行を促進するために、ｔＲＮＡを改変した配列をさらに連結したハイブリッドリボザイムとすることもできる（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２９（１３）：  ２７８０−２７８８  （２００１））。
【００９３】
本発明因子の発現を抑制する物質のさらに別の一態様は、本発明因子のｍＲＮＡもしくは初期転写産物のコード領域内の部分配列（初期転写産物の場合はイントロン部分を含む）に相補的な二本鎖オリゴＲＮＡである。短い二本鎖ＲＮＡを細胞内に導入するとそのＲＮＡに相補的なｍＲＮＡが分解される、いわゆるＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）と呼ばれる現象は、以前から線虫、昆虫、植物等で知られていたが、最近、この現象が動物細胞でも起こることが確認されたことから（Ｎａｔｕｒｅ，  ４１１（６８３６）：  ４９４−４９８  （２００１））、リボザイムの代替技術として注目されている。
【００９４】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド及びリボザイムは、本発明因子のｃＤＮＡ配列（例えば配列番号：１、３、５または７記載の塩基配列）もしくはゲノミックＤＮＡ配列に基づいてｍＲＮＡもしくは初期転写産物の標的配列を決定し、市販のＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機（アプライド・バイオシステムズ社、ベックマン社等）を用いて、これに相補的な配列を合成することにより調製することができる。ＲＮＡｉ  活性を有する二本鎖オリゴＲＮＡは、センス鎖及びアンチセンス鎖をＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機でそれぞれ合成し、適当なアニーリング緩衝液中、約９０〜約９５℃で約１分程度変性させた後、約３０〜約７０℃で約１〜約８時間アニーリングさせることにより調製することができる。また、相補的なオリゴヌクレオチド鎖を交互にオーバーラップするように合成して、これらをアニーリングさせた後リガーゼでライゲーションすることにより、より長い二本鎖ポリヌクレオチドを調製することもできる。
【００９５】
本発明因子の機能的な発現を翻訳後レベルで抑制する物質の別の好ましい態様は、本発明因子に特異的に結合してその機能的発現を阻害するオリゴヌクレオチド、即ちアプタマーである。本発明因子に対するアプタマーは、例えば、以下の手順により取得することができる。即ち、まず、ＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機を用いてランダムにオリゴヌクレオチド（例えば、約６０塩基）を合成し、オリゴヌクレオチドのプールを作製する。次に、目的の蛋白質、即ち本発明因子と結合するオリゴヌクレオチドをアフィニティーカラムで分離する。分離したオリゴヌクレオチドをＰＣＲで増幅し、前述の選抜プロセスで再度選抜する。この過程を約５回以上繰り返すことによって、本発明因子に親和性の強いアプタマーを選抜することができる。
【００９６】
本発明因子の発現を抑制する物質を有効成分とする未成熟樹状細胞の成熟化促進剤は、標的組織の細胞内に取り込まれて初めてその治療活性を発揮し得るが、有効成分である核酸は細胞内に吸収されにくく、しかも体内で速やかに分解されやすい。また、通常これらの分子の取り込みはエンドサイトーシスにより行われるので、リソソーム酵素による分解を受けやすい。従って、本発明因子の発現を抑制する物質を、標的細胞に安定な状態で送達し、細胞膜の透過性を向上させ、リソソーム／エンドソームからの薬剤の遊離を促進するようなドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の設計が重要である。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド等のオリゴ核酸分子の場合、上述のようにリン酸結合や糖部分（２’位、３’位等）を修飾した核酸の他、リン酸と糖部分をペプチド結合に置き換えたＰＮＡ、リン酸骨格の代わりにモルフィン骨格を有するオリゴヌクレオチド等、化学修飾により、ヌクレアーゼに対する安定性、細胞内移行、リソソーム／エンドソームからの遊離を改善させることが可能であり、これらの修飾オリゴ核酸はＤＮＡ／ＲＮＡ自動合成機を用いて容易に調製することができる。
【００９７】
本発明因子の発現を抑制する物質が、アンチセンス核酸、リボザイム又はアプタマーのような核酸分子（以下、有効核酸分子ともいう）である場合、本発明の未成熟樹状細胞の成熟化促進剤は、該有効核酸分子を含む発現ベクターを有効成分とすることもできる。当該発現ベクターは、上記の有効核酸分子をコードするオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチドが、投与対象である哺乳動物の標的細胞内でプロモーター活性を発揮し得るプロモーターに機能的に連結されているか、あるいは投与された動物の標的細胞で、一定の条件下に機能的に連結された形態に変化し得るような位置に配置されていれば、如何なる形態であっても良い。当該発現ベクターの詳細については、上記の未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤のそれぞれに関して例示したものを、同様に好ましく使用することができる。
【００９８】
前記において「本発明因子の機能を抑制する物質」とは、本発明因子に作用することにより、本発明因子の有する未成熟樹状細胞の成熟化抑制作用を抑制する物質を意味する。このような本発明因子の機能を抑制する物質は、当該活性を有する限り、天然もしくは非天然の、ポリペプチド、核酸、有機化合物等公知化合物又は新規化合物のいずれであっても良い。具体的には、コンビナトリアルケミストリー技術を用いて作製された有機化合物ライブラリー、固相合成やファージディスプレー法により作製されたランダムペプチドライブラリー、あるいは微生物、動植物、海洋生物等由来の天然成分を後述するスクリーニング法に供すること等により選び出すことができる。
【００９９】
本発明因子の機能を抑制するより直接的且つ特異的な物質としては、本発明因子に特異的親和性を有しかつ本発明因子の機能を抑制する抗体（中和抗体）もしくはそのフラグメントが好ましく例示される。該抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいずれであってもよく、周知の免疫学的手法により作製することができる。これら抗体のフラグメントは、本発明因子に対する抗原結合部位（ＣＤＲ）を有する限りいかなるものであってもよく、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＳｃＦｖ、ｍｉｎｉｂｏｄｙ等が挙げられる。
【０１００】
例えば、ポリクローナル抗体は、本発明因子あるいはそのフラグメント（必要に応じて、ウシ血清アルブミン、ＫＬＨ（Ｋｅｙｈｏｌｅ  Ｌｉｍｐｅｔ  Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）等のキャリア蛋白質に架橋した複合体とすることもできる）を抗原として、市販のアジュバント（例えば、完全または不完全フロイントアジュバント）とともに、動物の皮下あるいは腹腔内に２〜３週間おきに２〜４回程度投与し（部分採血した血清の抗体価を公知の抗原抗体反応により測定し、その上昇を確認しておく）、最終免疫から約３〜約１０日後に全血を採取して抗血清を精製することにより取得できる。抗原を投与する動物としては、ラット、マウス、ウサギ、ヤギ、モルモット、ハムスターなどの哺乳動物が挙げられる。
【０１０１】
また、モノクローナル抗体は、細胞融合法（例えば、渡邊武、細胞融合法の原理とモノクローナル抗体の作成、谷内昭、高橋利忠編、「モノクローナル抗体とがん−基礎と臨床−」、第２−１４頁、サイエンスフォーラム出版、１９８５年）により作製することができる。例えば、マウスに該因子を市販のアジュバントと共に２〜４回皮下あるいは腹腔内に投与し、最終投与の約３日後に脾臓あるいはリンパ節を採取し、白血球を採取する。この白血球と骨髄腫細胞（例えば、ＮＳ−１，  Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８など）を細胞融合して該因子に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得る。細胞融合はＰＥＧ法（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ８１（２）：  ２２３−２２８  （１９８５））でも電圧パルス法（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，  ７（６）：  ６２７−６３３  （１９８８））であってもよい。所望のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、周知のＥＩＡまたはＲＩＡ法等を用いて抗原と特異的に結合する抗体を、培養上清中から検出することにより選択できる。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの培養は、インビトロ、またはマウスもしくはラット、好ましくはマウス腹水中等のインビボで行うことができ、抗体はそれぞれハイブリドーマの培養上清および動物の腹水から取得することができる。
【０１０２】
しかしながら、ヒトにおける治療効果と安全性を考慮すると、本発明因子に対する抗体（例えば抗ＩＬ−６抗体、抗ｇｐ１３０抗体、抗Ｓｔａｔ３抗体、抗Ｂｃｌ３抗体）は、ヒトと他の動物（例えば、マウス等）のキメラ抗体であることが好ましく、ヒト化抗体であることがさらに好ましい。ここで「キメラ抗体」とは免疫動物由来の可変部（Ｖ領域）とヒト由来の定常部（Ｃ領域）を有する抗体をいい、「ヒト化抗体」とはＣＤＲを除いて他の領域をすべてヒト抗体に置き換えた抗体をいう。キメラ抗体やヒト化抗体は、例えば、上記と同様の方法により作製したマウスモノクローナル抗体の遺伝子からＶ領域もしくはＣＤＲをコードする配列を切り出し、ヒト骨髄腫由来の抗体のＣ領域をコードするＤＮＡと融合したキメラ遺伝子を適当な発現ベクター中にクローニングし、これを適当な宿主細胞に導入して該キメラ遺伝子を発現させることにより取得することができる。
【０１０３】
本発明因子の発現または機能を抑制する物質は、未成熟樹状細胞の成熟化促進剤の有効成分とすることができる。
実施例に示したように、未成熟樹状細胞に対してＳｔａｔ３促進因子（ＩＬ−６、Ｓｔａｔ３）またはＢｃｌ３を作用させることにより樹状細胞の成熟化が抑制された。このことからこれら因子の発現または機能を抑制することにより未成熟樹状細胞の成熟化が促進されると考えられる。
本発明因子の発現または機能抑制物質が未成熟樹状細胞の成熟化を促進することは、前述したアッセイ系（未成熟樹状細胞をＬＰＳ刺激等により成熟化誘導する系）に、本発明因子と共に本発明因子の発現または機能抑制物質を加え、本発明因子による成熟抑制が生じないことなどにより確認することができる。
【０１０４】
樹状細胞は成熟化に伴い、抗原提示能を獲得しＴ細胞を有効に刺激する。また高レベルのＭＨＣクラスＩＩやＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ４０などの共刺激分子を発現し、多量のＩＬ−１２を産生する。このため未成熟樹状細胞から成熟細胞への分化は、免疫活性化の重要な段階となっている。本発明の未成熟樹状細胞の成熟化促進剤は、このような免疫活性化を亢進する薬剤であるため、Ｔ細胞の誘導・活性化を要する疾患の予防または治療剤として有効に用いることができる。
【０１０５】
ここで「Ｔ細胞の誘導・活性化を要する疾患」としては、具体的には癌および感染症（ウイルス感染症、細菌感染症）が挙げられる。
本発明の未成熟樹状細胞の成熟化促進剤（癌または感染症の予防・治療剤）の投与形態、投与経路および投与量等については、前記本発明の未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤のそれぞれに関して例示したものを、同様に好ましく使用することができる。
【０１０６】
本発明は、本発明因子を標的とし、本発明の未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤または成熟化促進剤をスクリーニングする方法を提供する。具体的には本発明因子（ＩＬ−６ファミリー（ＩＬ−６）、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３またはＢｃｌ３等）を標的とした未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤または成熟化促進剤をスクリーニングする方法を提供する。
【０１０７】
１）本発明因子の遺伝子発現レベルを指標とするスクリーニング方法
本発明は、本発明因子遺伝子の発現を促進または抑制する物質のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む：
（ａ）  被験物質と本発明因子遺伝子（ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３またはＢｃｌ３をコードする遺伝子等）を発現可能な細胞とを接触させる工程、
（ｂ）  被験物質を接触させた細胞における前記遺伝子の発現量を測定し、該発現量を被験物質を接触させない対照細胞における前記遺伝子の発現量と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、本発明因子遺伝子（ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３またはＢｃｌ３をコードする遺伝子等）の発現量を上昇若しくは減少させる被験物質を選択する工程。
【０１０８】
かかるスクリーニングに用いられる細胞としては、内在性および外来性を問わず、本発明遺伝子を発現し得る細胞を挙げることができる。かかる細胞としては、具体的には、マウスミエローマ細胞Ｍ１（ＡＴＣＣ社）、ヒトＢ細胞株ＣＬ４  （Ｏ．  ＳＡＩＫＩら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３，３１（１９８３）、ＭＨ６０．ＢＳＦ２細胞（Ｍａｔｓｕｄａ  ら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８，９５１−９５６，１９８８）、若しくは通常遺伝子発現に用いられる細胞に本発明因子の遺伝子を組み込んだ細胞などが挙げられる。
さらに本発明のスクリーニングに用いられる細胞の範疇には、骨髄系樹状細胞などの組織由来培養細胞や細胞の集合体である組織も含まれる。
【０１０９】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質は、制限されないが、核酸、ペプチド、タンパク質、有機化合物、無機化合物などであり、スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を上記細胞及び／または組織と接触させることにより行われる。かかる被験試料としては、被験物質を含む細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物、およびこれらの混合物などが挙げられるが、これに制限されない。
【０１１０】
本発明スクリーニングに際して、被験物質と細胞とを接触させる条件は、特に制限されないが、該細胞が死滅せず且つ本発明因子遺伝子を発現できる培養条件（温度、ｐＨ、培地組成など）を選択するのが好ましい。
【０１１１】
前記スクリーニングにより得られた本発明因子遺伝子の発現促進物質は、未成熟樹状細胞の成熟化を抑制することにより、自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤の候補物質となる。一方、前記スクリーニングにより得られた本発明因子遺伝子の発現抑制物質は、未成熟樹状細胞の成熟化を促進することにより、癌又は感染症の予防・治療剤の候補物質となる。
【０１１２】
前記スクリーニング方法は、本発明因子遺伝子の発現量（発現レベル）を指標とするものであるが、当該遺伝子の発現レベルの検出および定量は、前記細胞から調製したＲＮＡまたはそれから転写された相補的なポリヌクレオチドと本発明因子の遺伝子断片（プローブ、プライマー等）とを用いて、ノーザンブロット法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ＤＮＡチップなどの公知の手法を利用して実施することができる。
【０１１３】
また、本発明因子遺伝子の発現レベルの検出および定量は、本発明因子遺伝子の発現を制御する遺伝子領域（発現制御領域）に、例えばルシフェラーゼ遺伝子などのマーカー遺伝子をつないだ融合遺伝子を導入した細胞株を用いて、マーカー遺伝子由来のタンパク質の活性を測定することによっても実施できる。本発明因子遺伝子の発現促進物質又は発現抑制物質のスクリーニング方法には、かかるマーカー遺伝子の発現量を指標として標的物質を探索する方法も包含される。この意味において、請求項２７で言う「Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子」、請求項３３で言う「Ｂｃｌ３遺伝子」、請求項３７で言う「Ｓｔａｔ３促進因子遺伝子」及び請求項４３で言う「Ｂｃｌ３遺伝子」の概念には、該遺伝子の発現制御領域とマーカー遺伝子との融合遺伝子が含まれる。
【０１１４】
上記マーカー遺伝子としては、発光反応や呈色反応を触媒する酵素の構造遺伝子が好ましい。具体的には、上記のルシフェラーゼ遺伝子のほか、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、βグルクロニダーゼ遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子、及びエクオリン遺伝子などのレポーター遺伝子を例示できる。
ＩＬ−６の発現制御領域は文献（Ｏｌｏｍｏｌａｉｙｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ．  ２５  （２−３），  ２６７  （１９９８）；  Ｒａｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８５  （１８），  ６７０１−６７０５  （１９８８））に記載されており、またｇｐ１３０の発現制御領域はＧｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  Ｕ７０６１７に記載されている。あるいは本発明因子の発現制御領域は、Ｓｔａｔ３促進因子（ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３）またはＢｃｌ３の転写開始部位上流約２ｋｂ、好ましくは約１ｋｂが挙げられる。融合遺伝子の作製、およびマーカー遺伝子由来の活性測定は公知の方法で行うことができる。
【０１１５】
２）本発明因子の活性（機能）を指標とするスクリーニング方法
本発明は、本発明因子の活性（機能）を促進または抑制する物質のスクリーニング方法を提供する。
【０１１６】
（２−１）本発明因子の活性を促進する物質のスクリーニング方法
本発明は、本発明因子の活性促進物質のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む：
（ａ）  被験物質を、本発明因子（ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３またはＢｃｌ３等）に対する結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じる前記本発明因子の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合の本発明因子の活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、本発明因子の活性の上昇をもたらす被験物質を選択する工程。
【０１１７】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質は、制限されないが、核酸、ペプチド、蛋白質、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を本発明因子に対する結合性物質と接触させることにより行われる。被験試料としては、被験物質を含む、細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１１８】
前記本発明のスクリーニング方法おいては、本発明因子の公知の活性に基づく如何なる活性測定方法をも利用することができる。すなわち、本発明因子の公知の活性測定系に被験物質を添加し、本発明因子の公知の活性を促進する被験物質を選択するスクリーニング方法であれば、本発明のスクリーニング方法の範疇に含まれる。
以下ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３およびＢｃｌ３を例にとり具体的なスクリーニング方法につき言及するが、本発明のスクリーニング方法はこれらに限定されるものではない。
【０１１９】
（２−１−１）  ＩＬ−６の活性を促進する物質のスクリーニング方法
本発明のＩＬ−６は、Ｂ細胞の増殖活性（Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  １５１，  ３１  （２０００）、Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９，  ５０２  （１９８８）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １７９，  １３４３  （１９９４））、Ｂ細胞株からのＩｇＭ産生活性（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ８２，５４９０  （１９８５）、  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２４，  ７３  （１９８６）、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３，３１  （１９８３））、  滑膜細胞の増殖活性（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，  ３４，  ３２１  （１９９５））、Ｍ１細胞のマクロファージへの分化促進活性（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  ２３４，  １７  （１９８８）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９３，  ３９６３  （１９９６）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４））、ｇｐ１３０リン酸化活性（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５  （２０００）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９６，  ９７９  （２００２））、血管平滑筋細胞からのＭＣＰ−１の産生活性（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １６３，  ４５８３  （１９９９））、ミエローマ細胞のアポトーシス誘導活性（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７６，  １８，  １４７２８  （２００１））、ＩＬ−６応答性配列への結合活性（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，７３，２００９  （１９９９））等の種々の作用を有している。従って、分子レベルではｇｐ１３０、若しくはＩＬ−６応答性配列といった「ＩＬ−６結合性因子／結合性配列」、また細胞レベルではＢ細胞、滑膜細胞、Ｍ１細胞といった「ＩＬ−６結合性細胞」（以上を総称して本発明においては「ＩＬ−６結合性物質」と呼ぶ）と被験物質とを接触させ、被験物質が前記ＩＬ−６活性（例えばＢ細胞の増殖作用、Ｂ細胞株からのＩｇＭ産生作用、滑膜細胞の増殖作用、Ｍ１細胞のマクロファージへの分化作用、ｇｐ１３０リン酸化作用、ＩＬ−６応答性配列結合作用）を促進するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
【０１２０】
具体的には、例えばＩＬ−６応答性配列を用いたスクリーニングを行う場合は、ゲルシフトアッセイ、ＩＬ−６応答性配列を有するレポーター遺伝子を用いたレポータージーンアッセイ、またはＩＬ−６と前記ＩＬ−６応答性配列との結合阻害アッセイ等により、前記本発明のスクリーニングを実施することができる。
【０１２１】
例えばＩＬ−６応答性配列を用いたレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含んで実施される：
（ａ）  被験物質とＩＬ−６応答性配列を含むレポーター遺伝子とを接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるレポーター活性を測定し、該活性を、被験物質を接触させない場合のレポーター活性、及び／又はＩＬ−６と前記ＩＬ−６応答性配列とを接触させた場合のレポーター活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、レポーター活性の上昇をもたらす被験物質を選択する工程。
このようなレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは、前記文献（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，７３，２００９  （１９９９））に記載の方法に基づき行うことができる。
【０１２２】
前記ＩＬ−６応答性配列を含むレポーター遺伝子は、ＩＬ−６応答性配列をルシフェラーゼ遺伝子、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、βグルクロニダーゼ遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子、またはエクオリン遺伝子などのレポーター遺伝子に挿入することにより（例えばｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ  Ｖｅｃｔｏｒ；プロメガ社等の市販のレポーターベクターを使用）作製することができる。
【０１２３】
（２−１−２）  ｇｐ１３０の活性を促進する物質のスクリーニング方法
本発明のｇｐ１３０はＩＬ−６ファミリー共通の受容体の構成要素であり、Ｊａｋカイネースによりリン酸化されることによりＩＬ−６のシグナルを伝達することが知られている（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５  （２０００）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９６，  ９７９  （２００２））。従って、ＩＬ−６やＳｔａｔ３のような「ｇｐ１３０結合性因子」と被験物質とを接触させ、被験物質がｇｐ１３０活性（リン酸化活性、Ｓｔａｔ３活性化活性）を促進するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
【０１２４】
（２−１−３）  Ｓｔａｔ３の活性を促進する物質のスクリーニング方法
本発明のＳｔａｔ３は、ｇｐ１３０のＹｘｘＱモチーフ（Ｙはチロシン、Ｘは如何なるアミノ酸でも可、Ｑはグルタミン）のチロシン残基（Ｙ７６７、Ｙ８１４、Ｙ９０５およびＹ９１５）依存的に活性化され、核内に移行して転写因子として作用する。Ｓｔａｔ３はコンセンサス配列（２×ＣＣＴＴＣＣＧＧＧＡＡＴＴＣ、配列番号：９）に結合することにより標的遺伝子の転写を活性化することが知られている（Ｃｅｌｌ．，  ７７，  ６３  （１９９４）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７１，  １３２２１  （１９９６）、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｏｌ．，  ２１，  ４１４  （２００１）、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，  ７３，  ２００９  （１９９９）、ＥＭＢＯ  Ｊ．，  １９，  ５８４５  （２０００））。従って、当該コンセンサス配列のような「Ｓｔａｔ３結合性物質（Ｓｔａｔ３結合配列）」と被験物質とを接触させ、被験物質が前記Ｓｔａｔ３活性（例えば前記コンセンサス配列への結合活性、結合による転写活性）を促進するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
【０１２５】
具体的にはゲルシフトアッセイ、前記コンセンサス配列を有するレポーター遺伝子を用いたレポータージーンアッセイ、またはＳｔａｔ３と前記コンセンサス配列との結合阻害アッセイ等により、前記本発明のスクリーニングを実施することができる。
【０１２６】
例えばレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含んで実施される：
（ａ）  被験物質とＳｔａｔ３結合性コンセンサス配列（２×ＣＣＴＴＣＣＧＧＧＡＡＴＴＣ、配列番号：９）を含むレポーター遺伝子とを接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるレポーター活性を測定し、該活性を、被験物質を接触させない場合のレポーター活性、及び／又はＳｔａｔ３と前記コンセンサス配列とを接触させた場合のレポーター活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、レポーター活性の上昇をもたらす被験物質を選択する工程。
このようなレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは、前記文献に記載の方法に基づき行うことができる。
コンセンサス配列を含むレポーター遺伝子の作製については前記（２−１−１）項に記載した通りである。
【０１２７】
（２−１−４）  Ｂｃｌ３の活性を促進する物質のスクリーニング方法
本発明のＢｃｌ３は、ＮＦκＢ／Ｒｅｌ転写因子やＡＰ１転写因子の活性化を調節することが知られている。具体的には、ＮＦκＢの１形態であるｐ５０／ｐ５０による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒとして作用すること（ＥＭＢＯ  Ｊ．，  Ｖｏｌ．１６，  Ｎｏ．１２，  ｐ３６０９  （１９９７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  Ｖｏｌ．１９，  ｐ１１２３  （２０００））、ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１による転写のｒｅｐｒｅｓｓｏｒとして作用すること（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７６，  Ｎｏ．３４，ｐ３２０８０（２００１））、またＡＰ１による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒとして作用すること（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７４，  Ｎｏ．４０，  ｐ２８４９１  （１９９９））等が知られている。従って、ｐ５０／ｐ５０、  ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１または  ＡＰ１といった「Ｂｃｌ３結合性因子」と被験物質とを接触させ、被験物質が前記Ｂｃｌ３活性（例えばｐ５０／ｐ５０による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ活性、ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１による転写のｒｅｐｒｅｓｓｏｒ活性、ＡＰ１による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ活性）を促進するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
【０１２８】
具体的には前記各文献に記載のゲルシフトアッセイ、ＮＫκＢ結合配列（Ｆｕｊｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  ７，  １３５４，  １９９３；  Ｂｒａｉｓｅｒ  ａｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７６，  ３２０８０，  ２００１；  Ｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７４，  ２８４９１，  １９９９）を有するレポーター遺伝子を用いたレポータージーンアッセイ、またはＢｃｌ３とＢｃｌ３結合性因子との結合阻害アッセイ（後述）等により、前記本発明のスクリーニングを実施することができる。
【０１２９】
例えばレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含んで実施される：
（ａ）  被験物質、Ｂｃｌ３結合性因子（ｐ５０／ｐ５０、  ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１、ＡＰ１等）およびＮＦκＢ結合配列を含むレポーター遺伝子を接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるレポーター活性を測定し、該活性を、被験物質を接触させない場合のレポーター活性及び／又はＢｃｌ３、Ｂｃｌ３結合性因子、ＮＦκＢ結合配列を含むレポーター遺伝子を接触させた場合のレポーター活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、レポーター活性の上昇（ｐ５０／ｐ５０、ＡＰ１の場合）または低下（ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１の場合）をもたらす被験物質を選択する工程。
このようなレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは、前記文献に記載の方法に基づき行うことができる。
【０１３０】
本発明スクリーニングで用いるＢｃｌ３結合性因子であるｐ５０／ｐ５０、  ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１（ｐ５０はＮＦｋＢ１と同じ転写産物の翻訳後プロセッシングによって生じる）またはＡＰ１  （ＪＵＮまたはＪＵＮＢとＦＯＳまたはＦＯＳＢのヘテロダイマー）は、いずれも公知の物質であり（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿００３９９８  （ｐ５０／ＮＦｋＢ１）、ＮＭ＿００２２２８  （ＪＵＮ）、ＮＭ＿００２２２９（ＪＵＮＢ）、ＮＭ＿００５２５２（ＦＯＳ）、ＮＭ＿００６７３２（ＦＯＳＢ）、これら公知の配列に基づき常法によりクローニング・単離することができる。またＮＦκＢ結合配列を含むレポーター遺伝子の作製については、前記（２−１−１）項に記載した通りである。
【０１３１】
前記スクリーニングにより得られたＢｃｌ３の活性促進物質は、未成熟樹状細胞の成熟化を抑制することにより、自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療剤の候補物質となる。
【０１３２】
（２−２）  本発明因子の活性を抑制する物質のスクリーニング方法
本発明は、本発明因子の活性抑制物質のスクリーニング方法を提供する。
本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む：
（ａ）  被験物質を本発明因子（ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３またはＢｃｌ３等）および本発明因子結合性物質に接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じる前記本発明因子の活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合の本発明因子の活性と比較する工程、
（ｃ）  上記（ｂ）の比較結果に基づいて、本発明因子の活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
【０１３３】
本発明スクリーニング方法によってスクリーニングされる被験物質は、制限されないが、核酸、ペプチド、蛋白質、有機化合物、無機化合物などであり、本発明スクリーニングは、具体的にはこれらの被験物質またはこれらを含む試料（被験試料）を本発明因子および本発明因子結合性物質と接触させることにより行われる。被験試料としては、被験物質を含む、細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物、合成低分子化合物、合成ペプチド、天然化合物などが挙げられるが、これらに制限されない。
【０１３４】
前記本発明のスクリーニング方法おいては、本発明因子の公知の活性に基づく如何なる活性測定方法をも利用することができる。すなわち、本発明因子の公知の活性測定系に被験物質を添加し、本発明因子の公知の活性を抑制する被験物質を選択するスクリーニング方法であれば、本発明のスクリーニング方法の範疇に含まれる。
以下ＩＬ−６、ｇｐ１３０、Ｓｔａｔ３およびＢｃｌ３を例にとり具体的なスクリーニング方法につき言及するが、本発明のスクリーニング方法はこれらに限定されるものではない。
【０１３５】
（２−２−１）  ＩＬ−６の活性を抑制する物質のスクリーニング方法
本発明のＩＬ−６は、Ｂ細胞の増殖活性（Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  １５１，  ３１  （２０００）、Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９，  ５０２  （１９８８）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １７９，  １３４３  （１９９４））、Ｂ細胞株からのＩｇＭ産生活性（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ８２，５４９０  （１９８５）、  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２４，  ７３  （１９８６）、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３，３１  （１９８３））、  滑膜細胞の増殖活性（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，  ３４，  ３２１  （１９９５））、Ｍ１細胞のマクロファージへの分化促進活性（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，  ２３４，  １７  （１９８８）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９３，  ３９６３  （１９９６）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４））、ｇｐ１３０リン酸化活性（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５  （２０００）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９６，  ９７９  （２００２））、血管平滑筋細胞からのＭＣＰ−１の産生活性（Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １６３，  ４５８３  （１９９９））、ミエローマ細胞のアポトーシス誘導活性（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７６，  １８，  １４７２８  （２００１））、ＩＬ−６応答性配列への結合活性（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，７３，２００９  （１９９９））等の種々の作用を有することが知られている。従って、分子レベルではｇｐ１３０、若しくはＩＬ−６応答性配列といった「ＩＬ−６結合性因子」、また細胞レベルではＢ細胞、滑膜細胞、Ｍ１細胞といった「ＩＬ−６結合性細胞」（以上を総称して本発明においては「ＩＬ−６結合性物質」と呼ぶ）とＩＬ−６とを被験物質に接触させ、被験物質が前記ＩＬ−６活性（例えばＢ細胞の増殖作用、Ｂ細胞株からのＩｇＭ産生作用、滑膜細胞の増殖作用、Ｍ１細胞のマクロファージへの分化作用、ｇｐ１３０リン酸化作用）を抑制するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
以下に、本発明のスクリーニング方法を例示する。
【０１３６】
▲１▼細胞を用いたスクリーニング
ＩＬ−６の活性の低下をもたらす被験物質のスクリーニングは、ＩＬ−６がもたらす各種細胞の反応性を被験物質が阻害するか否かを測定することによって行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）  被験物質、ＩＬ−６、ＩＬ−６反応性細胞（Ｂ細胞、滑膜細胞、Ｍ１細胞、ミエローマ細胞等）を接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じる各種活性（Ｂ細胞においては細胞増殖活性およびＩｇＭ産生活性、滑膜細胞においては増殖活性、Ｍ１細胞においてはマクロファージへの分化促進活性、血管平滑筋細胞においてはＭＣＰ−１の産生活性、ミエローマ細胞においてはアポトーシス誘導活性）を測定し、該活性を、被験物質を接触させない場合の前記活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、上記活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
このような細胞の反応性に基づくスクリーニングは、前記文献に記載の方法に基づき行うことができる。
【０１３７】
▲２▼レポータージーンアッセイに基づくスクリーニング
レポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含んで実施される：
（ａ）  被験物質、ＩＬ−６およびＩＬ−６応答性配列を含むレポーター遺伝子を接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるレポーター活性を測定し、該活性を、被験物質を接触させない場合のレポーター活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、レポーター活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
このようなレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは、前記文献（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，７３，２００９  （１９９９））に記載の方法に基づき行うことができる。
【０１３８】
前記ＩＬ−６応答性配列を含むレポーター遺伝子は、ＩＬ−６応答性配列をルシフェラーゼ遺伝子、クロラムフェニコール・アセチルトランスフェラーゼ遺伝子、βグルクロニダーゼ遺伝子、βガラクトシダーゼ遺伝子、またはエクオリン遺伝子などのレポーター遺伝子に挿入することにより（例えばｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ  Ｖｅｃｔｏｒ；プロメガ社等の市販のレポーターベクターを使用）作製することができる。
【０１３９】
（２−２−２）  ｇｐ１３０の活性を抑制する物質のスクリーニング方法
本発明のｇｐ１３０はＩＬ−６ファミリー共通の受容体の構成要素であり、Ｊａｋカイネースによりリン酸化されることによりＩＬ−６のシグナルを伝達することが知られている（Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．，  ９１，  ２２８５  （１９９４）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５  （２０００）、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９６，  ９７９  （２００２））。従って、ＩＬ−６やＳｔａｔ３のような「ｇｐ１３０結合性因子」とｇｐ１３０とを被験物質に接触させ、被験物質がｇｐ１３０活性を抑制するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
また以下に示す、ＩＬ−６とｇｐ１３０との結合阻害活性に基づくスクリーニングによっても、ｇｐ１３０の（同時にＩＬ−６の）活性抑制物質を見出すことができる。
【０１４０】
すなわちＩＬ−６−ｇｐ１３０間の結合の低下をもたらす被験物質のスクリーニングは、被験物質が、ＩＬ−６とｇｐ１３０との結合を阻害するか否かを測定することによって行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）  被験物質の存在下で、ＩＬ−６とｇｐ１３０とを接触させる工程、
（ｂ）  ｇｐ１３０に対するＩＬ−６の結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でｇｐ１３０とＩＬ−６とを接触させることによって得られるｇｐ１３０に対するＩＬ−６の結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）  上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１４１】
この場合、前記ｇｐ１３０とＩＬ−６との結合阻害は、▲１▼ｇｐ１３０に結合することによって、ＩＬ−６のｇｐ１３０への結合を阻害する態様のものであってもよいし、▲２▼ＩＬ−６に結合することによって、ＩＬ−６のｇｐ１３０への結合を阻害する態様のものであってもよい。但し、とりわけ▲１▼の態様の場合は、ｇｐ１３０に結合してもＩＬ−６と同じ作用を発揮しない被験物質を選択することが必要である。このため、上記のスクリーニング方法で選別された被験物質は更に、下記：
（ｄ）上記（ｃ）で選択された被験物質の中から、更にＩＬ−６と同じ作用を発揮しない被験物質を選択する工程、
に供することが好ましい。当該（ｄ）工程としては、例えば前記に示したリン酸化やＳｔａｔ３活性化活性測定が挙げられる（なお、上記「（２−１−２）  ｇｐ１３０の活性を促進する物質のスクリーニング方法」においては、逆にＩＬ−６と同じ作用を発揮する被験物質を選択する）。
【０１４２】
本発明スクリーニングで用いるＩＬ−６は、そのままで用いても良いし、任意の標識物質で標識されたものを用いることもできる。ここで標識物質としては、放射性同位体（３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１２５Ｉ等）、蛍光物質（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社Ａｌｅｘａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔｓ等）、化学発光物質（Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓ社Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ等）、ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ社ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔｓ等）、マーカータンパク質、またはペプチドタグなどを例示することができる。マーカータンパク質としては、例えばアルカリフォスファターゼ（Ｃｅｌｌ，  ６３，１８５−１９４，１９９０）、抗体のＦｃ領域（Ｇｅｎｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ  Ｍ８７７８９）、またはＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅ  ｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）などの従来公知のマーカータンパク質を挙げることができる。またペプチドタグとしては、例えばＭｙｃタグ、Ｈｉｓタグ、ＦＬＡＧタグなどの従来公知のペプチドタグを挙げることができる。
【０１４３】
ｇｐ１３０への結合阻害活性の測定は、具体的には、以下の方法が例示される。すなわち、前記ｇｐ１３０を含有する水溶液（通常緩衝液が用いられる）に、１０−３〜１０−１０Ｍの適当な濃度に調製した被験化合物溶液（通常溶媒には水もしくは緩衝液が用いられるが、溶解度に応じてエタノールやＤＭＳＯを添加することもできる）を加えた後、標識した前記ＩＬ−６を加え、一定時間（通常、１０分〜２時間）反応させる。その後遠心分離等により上清を単離して放射活性を測定し、上清中に含まれる標識したリガンド量を計測することができる。
【０１４４】
上記の数値を、被験化合物の代わりに溶媒をブランクとして用いて実施した場合の値（対照結合量）と比較することにより、被験化合物が、ｇｐ１３０と標識ＩＬ−６との結合を阻害するか否かを評価することができる。すなわち候補物質のスクリーニングは、被験物質存在下での結合量が、被験物質非存在下での結合量に比して、減少するか否かを指標にして行うことができる。
【０１４５】
（２−２−３）  Ｓｔａｔ３の活性を抑制する物質のスクリーニング方法
本発明のＳｔａｔ３は、ｇｐ１３０のＹｘｘＱモチーフ（Ｙはチロシン、Ｘは如何なるアミノ酸でも可、Ｑはグルタミン）のチロシン残基（Ｙ７６７、Ｙ８１４、Ｙ９０５およびＹ９１５）依存的にリン酸化され、核内に移行して転写因子として作用する。Ｓｔａｔ３はコンセンサスシークエンス（２×ＣＣＴＴＣＣＧＧＧＡＡＴＴＣ、配列番号：９）に結合することにより標的遺伝子の転写を活性化することが知られている（Ｃｅｌｌ．，  ７７，  ６３  （１９９４）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７１，  １３２２１  （１９９６）、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｏｌ．，  ２１，  ４１４  （２００１）、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，  ７３，  ２００９  （１９９９）、ＥＭＢＯ  Ｊ．，  １９，  ５８４５  （２０００））。従って、当該コンセンサス配列のような「Ｓｔａｔ３結合性物質（Ｓｔａｔ３結合配列）」とＳｔａｔ３とを被験物質に接触させ、被験物質が前記Ｓｔａｔ３活性（例えば前記コンセンサス配列への結合活性、結合による転写活性）を抑制するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
【０１４６】
具体的にはゲルシフトアッセイ、前記コンセンサス配列を有するレポーター遺伝子を用いたレポータージーンアッセイ、またはＳｔａｔ３と前記コンセンサス配列との結合阻害アッセイ（後述）等により、前記本発明のスクリーニングを実施することができる。
【０１４７】
例えばレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含んで実施される：
（ａ）  被験物質、Ｓｔａｔ３、Ｓｔａｔ３結合性コンセンサス配列（２×ＣＣＴＴＣＣＧＧＧＡＡＴＴＣ、配列番号：９）を含むレポーター遺伝子を接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるレポーター活性を測定し、該活性を、被験物質を接触させない場合のレポーター活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、レポーター活性の低下をもたらす被験物質を選択する工程。
ここでコンセンサス配列を含むレポーター遺伝子の作製は、前記（２−２−１）項に記載したとおりである。
【０１４８】
（２−２−４）  Ｂｃｌ３の活性を抑制する物質のスクリーニング方法
本発明のＢｃｌ３は、ＮＦκＢ／Ｒｅｌ転写因子やＡＰ１転写因子の活性化を調節することが知られている。具体的には、ＮＦκＢの１形態であるｐ５０／ｐ５０による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒとして作用すること（ＥＭＢＯ  Ｊ．，  Ｖｏｌ．１６，  Ｎｏ．１２，  ｐ３６０９  （１９９７）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，  Ｖｏｌ．１９，  ｐ１１２３  （２０００））、ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１による転写のｒｅｐｒｅｓｓｏｒとして作用すること（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７６，  Ｎｏ．３４，ｐ３２０８０（２００１））、またＡＰ１による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒとして作用すること（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，  Ｖｏｌ．２７４，  Ｎｏ．４０，  ｐ２８４９１  （１９９９））等が知られている。従って、ｐ５０／ｐ５０、  ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１または  ＡＰ１といった「Ｂｃｌ３結合性因子」とＢｃｌ３とを被験物質に接触させ、被験物質が前記Ｂｃｌ３活性（例えばｐ５０／ｐ５０による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ活性、ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１による転写のｒｅｐｒｅｓｓｏｒ活性、ＡＰ１による転写のｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ活性）を抑制するか否かを測定することにより、前記本発明のスクリーニングを行うことができる。
【０１４９】
具体的には前記各文献に記載のゲルシフトアッセイ、結合阻害アッセイ、またはＮＫκＢ結合配列を有するレポーター遺伝子を用いたレポータージーンアッセイ等を行うことにより、前記本発明のスクリーニングを実施することができる。
以下に、本発明のスクリーニング方法を例示する。
【０１５０】
▲１▼結合阻害活性に基づくスクリーニング
Ｂｃｌ３の活性の低下をもたらす被験物質のスクリーニングは、被験物質が、Ｂｃｌ３とＢｃｌ３結合性因子（ｐ５０／ｐ５０、  ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１、ＡＰ１等）との結合を阻害するか否かを測定することによって行うことができる。具体的には本発明のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）を含む：
（ａ）  被験物質の存在下で、Ｂｃｌ３とＢｃｌ３結合性因子とを接触させる工程、
（ｂ）  Ｂｃｌ３結合性因子に対するＢｃｌ３の結合量を測定し、当該結合量を、被験物質非存在下でＢｃｌ３結合性因子とＢｃｌ３とを接触させることによって得られるＢｃｌ３結合性因子に対するＢｃｌ３の結合量（対照結合量）と比較する工程、及び
（ｃ）  上記（ｂ）の結果に基づいて、対照結合量に比して結合量を低下させる被験物質を選択する工程。
【０１５１】
この場合、前記Ｂｃｌ３結合性因子とＢｃｌ３との結合阻害は、▲１▼Ｂｃｌ３結合性因子に結合することによって、Ｂｃｌ３のＢｃｌ３結合性因子への結合を阻害する態様のものであってもよいし、▲２▼Ｂｃｌ３に結合することによって、Ｂｃｌ３のＢｃｌ３結合性因子への結合を阻害する態様のものであってもよい。但し、とりわけ▲１▼の態様の場合は、Ｂｃｌ３結合性因子に結合してもＢｃｌ３と同じ作用を発揮しない被験物質を選択することが必要である。このため、上記のスクリーニング方法で選別された被験物質は更に、下記：
（ｄ）上記（ｃ）で選択された被験物質の中から、更にＢｃｌ３と同じ作用を発揮しない被験物質を選択する工程、
に供することが好ましい。当該（ｄ）工程としては、例えばＮＫκＢ結合配列を有するレポータージーンを用いたアッセイ等が挙げられる（なお、上記「（２−１−４）  Ｂｃｌ３の活性を促進する物質のスクリーニング方法」においては、逆にＢｃｌ３と同じ作用を発揮する被験物質を選択する）。
【０１５２】
本発明スクリーニングで用いるＢｃｌ３結合性因子であるｐ５０／ｐ５０、  ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１（ｐ５０はＮＦｋＢ１と同じ転写産物の翻訳後プロセッシングによって生じる）またはＡＰ１  （ＪＵＮまたはＪＵＮＢとＦＯＳまたはＦＯＳＢのヘテロダイマー）は、いずれも公知の物質であり（Ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｕｍｂｅｒ  ＮＭ＿００３９９８  （ｐ５０／ＮＦｋＢ１）、ＮＭ＿００２２２８（ＪＵＮ）、ＮＭ＿００２２２９（ＪＵＮＢ）、ＮＭ＿００５２５２（ＦＯＳ）、ＮＭ＿００６７３２（ＦＯＳＢ））、これら公知の配列に基づき常法によりクローニング・単離することができる。
本発明スクリーニングで用いるＢｃｌ３は、そのままで用いても良いし、任意の標識物質で標識されたものを用いることもできる。ここで標識物質としては、前記（２−２−２）項に挙げたものを例示することができる。
Ｂｃｌ３結合性因子への結合阻害活性の測定および評価についても、前記（２−２−２）に記載した方法により行うことができる。
【０１５３】
▲２▼レポータージーンアッセイに基づくスクリーニング
レポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含んで実施される：
（ａ）  被験物質、Ｂｃｌ３、Ｂｃｌ３結合性因子（ｐ５０／ｐ５０、  ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１、ＡＰ１等）およびＮＦκＢ結合配列を含むレポーター遺伝子を接触させる工程、
（ｂ）  上記（ａ）の工程に起因して生じるレポーター活性を測定し、該活性を被験物質を接触させない場合のレポーター活性と比較する工程、
（ｃ）上記（ｂ）の比較結果に基づいて、レポーター活性の低下（ｐ５０／ｐ５０、ＡＰ１の場合）または上昇（ＮＦκＢ１／ＮＫκＢ１の場合）をもたらす被験物質を選択する工程。
【０１５４】
ここでＮＦκＢ結合配列を含むレポーター遺伝子の作製は、前記（２−２−１）項に記載したとおりである。
このようなレポータージーンアッセイに基づくスクリーニングは、前記文献に記載の方法に基づき行うことができる。
【０１５５】
前記スクリーニングにより得られたＢｃｌ３の活性抑制物質は、未成熟樹状細胞の成熟化を促進することにより、癌又は感染症の候補物質となる。
【０１５６】
以上のスクリーニング系により選別された物質を、さらに前記した未成熟樹状細胞の成熟化のアッセイ系に供することにより、当該物質が成熟化を抑制若しくは促進することを評価することができる。さらに前記スクリーニング系により選別された物質を、本発明各疾患の既存の評価モデル等に供することにより、これら疾患の実用的な予防・治療剤になり得ることを評価することができる。
以上のスクリーニングにより得られた本発明の未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤および成熟化促進剤の投与形態、投与経路および投与量等については、前記に記載したおとりである。
【０１５７】
【実施例】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるものではない。
【０１５８】
実施例１
ＩＬ−６による樹状細胞の成熟抑制の解析
未成熟の骨髄系樹状細胞（ＢＭＤＣ）の成熟化がＩＬ−６によって直接的に抑制されるか調べるために、Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来のＢＭＤＣを無刺激または５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６で２４時間前処理後、１００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳで２４時間刺激したときの成熟マーカー（ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  Ｉ）の発現をフローサイトメーターで調べた。
１）骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）の調製と刺激
骨髄細胞はＣ５７ＢＬ／６マウス（ＳＬＣ、静岡、日本）の脚の骨から収穫し、ＮＨ４Ｃｌ処理して赤血球を除去した。細胞はＲＰＭＩ１０％（１０％ＦＣＳと抗生物質（ストレプトマイシンとペニシリン）を含むＲＰＭＩ１６４０培地）で洗浄し、３７℃で４時間にわたり培養した。浮遊細胞と接着の弱い細胞をピペッティングにより収集し、その結果得られた細胞をＢＭＤＣ培地（ＲＰＭＩ１０％、１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭＣＳＦ）中で６日間培養した。この細胞を無刺激または５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６で２４時間前処理後、１００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳで２４時間刺激した。
【０１５９】
２）フローサイトメーターによる解析
フローサイトメーター解析は文献（Ｉｓｈｉｈａｒａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ８，  １３９５，  １９９６；Ｉｔｏｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １６１，  ３９７４，  １９９８）に記載の方法で実施した。
まず前記１）のＢＭＤＣを回収し、氷冷したｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒ  （２％ＦＣＳおよび０．１％  ｓｏｄｉｕｍ  ａｚｉｄｅを含有するＰＢＳ（−））で洗浄し、２．４Ｇ２（ａｎｔｉ−Ｆｃγ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＩＩ／ＩＩＩ産生ｈｙｂｒｉｄｏｍａ；ＡＴＣＣ  Ｎｕｍｂｅｒ：  ＨＢ−１９７）培養上清と６％  ラット血清のｍｉｘｔｕｒｅで１０分間処理することにより染色用抗体の非特異的結合をブロッキングした。
【０１６０】
染色用の各抗体、すなわち  ＦＩＴＣ−抗マウスＭＨＣ  ｃｌａｓｓＩＩ（ＩＡｂ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ベクトンディッキンソン社））、ＰＥ−抗マウスＣＤ８６（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ベクトンディッキンソン社））、ＰＥ−抗マウスＣＤ８０（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ベクトンディッキンソン社））およびＦＩＴＣ−抗マウスＣｌａｓｓ  Ｉ−Ａｂ（（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ベクトンディッキンソン社））と、前記でブロッキングした細胞とを各々１５分間氷中にて反応させて細胞を染色した。染色後、サンプルをＦＡＣＳＣａｒｉｂｕｒ  フローサイトメーター  システム（Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて解析を行った。
【０１６１】
３）結果
結果を図１に示す。その結果、ＩＬ−６前処理なしの場合、ＬＰＳ刺激に応じてＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）、ＣＤ８６、ＣＤ８０の発現誘導がみとめられた。一方、ＩＬ−６前処理ありの場合、ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）、ＣＤ８６、ＣＤ８０の発現誘導の抑制がみとめられた。これらの結果から、ＩＬ−６は未成熟のＢＭＤＣの成熟化を抑制することが分かった。
【０１６２】
実施例２
ｇｐ１３０を介したシグナルによる樹状細胞の成熟抑制の解析
実施例１と同様のフローサイトメーター解析を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（コントロール）、ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウスおよびｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウス由来のＢＭＤＣで実施した。
ｇｐ１３０を介したＩＬ−６シグナル伝達経路は、ＳＨＰ−２／Ｇａｂ／ＭＡＰＫカスケード、およびＳＴＡＴ３カスケードの２種類存在することが知られている。
【０１６３】
ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウスは、ｇｐ１３０の７５９番目のチロシン残基をフェニルアラニンに置換した遺伝子をｇｐ１３０遺伝子座にノックインしたマウスである（Ｏｈｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５，  ２０００；  Ａｔｓｕｍｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １９６，  ９７９，  ２００２）。ｇｐ１３０の７５９番目のチロシン残基はＳＨＰ−２／Ｇａｂ／ＭＡＰＫシグナル伝達系に必須であるため、変異導入によりｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウスではＳＨＰ−２／Ｇａｂ／ＭＡＰＫシグナル伝達系に欠損が生じている。
またｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウスは、ｇｐ１３０の７６７、８１４、９０５および９１５番目のチロシン残基をフェニルアラニンに置換した遺伝子をｇｐ１３０遺伝子座にノックインしたマウスである（Ｏｈｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，  １２，  ９５，  ２０００）。ｇｐ１３０の７６７、８１４、９０５および９１５番目のチロシン残基はＳＴＡＴ３シグナル伝達系に必須であるため、変異導入によりｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウスではＳＴＡＴ３シグナル伝達系に欠損がみとめられる。
【０１６４】
これらのマウスより実施例１と同様にしてＢＤＭＣを調製し、無刺激または５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６で２４時間前処理後、１００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳで２４時間刺激した。その後成熟マーカー（ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）、ＣＤ８６）の発現を、実施例１と同様にしてフローサイトメーターで調べた。結果を図２（ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ））および図３（ＣＤ８６）に示す。その結果、ｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウス由来のＢＭＤＣでは、ＩＬ−６前処理した場合も、ＬＰＳ刺激に応じたＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）、ＣＤ８６の発現誘導の抑制がみとめられなかった。これらの結果から、ＳＴＡＴ３を介したシグナルによって樹状細胞の成熟抑制がおこることが分かった。
【０１６５】
実施例３
ドミナントネガティブＳＴＡＴ３レトロウイルス感染ＢＭＤＣを用いたＳＴＡＴ３を介したシグナルによる樹状細胞の成熟抑制の解析
ドミナントネガティブＳＴＡＴ３レトロウイルスをＢＭＤＣに感染させることにより、ＳＴＡＴ３を介したシグナルにより樹状細胞の成熟化が抑制されるか検討した。
１）ドミナントネガティブＳＴＡＴ３レトロウイルスベクターの作成
レトロウイルスベクターｐＤＯＮ−ＡＩ（タカラバイオ）にドミナントネガティブＳＴＡＴ３（Ｋａｗａｉ  ｅｔａｌ．，  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，  ４１，  ９５６，  ２００３）をクローニングし、ｐＤＯＮ−ＡＩ−ＤＮ−ＳＴＡＴ３を得た。
【０１６６】
２）ドミナントネガティブＳＴＡＴ３レトロウイルス溶液の作製
レトロウイルスパッケージング細胞・ＭＰ３４（タカラバイオ）をＦａｌｃｏｎ３００２培養皿（ファルコン社）に一皿あたり２．０×１０６細胞ずつ播種した。１０％（Ｗ／Ｖ）ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ製、以下、ＦＣＳと記すこともある。）が添加されたＤ−ＭＥＭ培地（高グルコース、Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ製）を用い、３７℃で５％（Ｖ／Ｖ）二酸化炭素存在下一晩培養した。次いで、ＦｕＧＥＮＥ６（ベーリンガーマンハイム社）６μＬとＤ−ＭＥＭ培地１００μＬとを混合し、５分間放置した。５分間後、当該混合物に上記で得られたｐＤＯＮ−ＡＩ−ＤＮ−ＳＴＡＴ３  ３μｇを混合し、これを１５分間放置した。１５分間後、当該混合物をＦａｌｃｏｎ３００２培養皿１枚分のトランスフェクション用ＤＮＡ液として、当該ＤＮＡ液を前記２９３細胞に添加し、さらに２晩培養した後、上清を回収した。回収された上清を０．４５μｍフィルターを用いて濾過することにより、ＤＮ−ＳＴＡＴ３のレトロウイルス溶液を得た。同様にインサートを持たないコントロールレトロウイルスの調製も行った。
【０１６７】
３）ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来のＢＭＤＣへのドミナントネガティブＳＴＡＴ３レトロウイルスの感染
ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来のＢＭＤＣの培養上清を除き、コントロールウイルスまたはＤＮ−ＳＴＡＴ３レトロウイルス溶液１ｍＬと、４μｇ／ｍＬのポリブレン（シグマ社）と１０ｎｇ／ｍｌ  ＧＭ−ＣＳＦとを含むＢＭＤＣ培地中で３７℃で培養し、レトロウイルス感染ＢＭＤＣを得た。
【０１６８】
４）ドミナントネガティブＳＴＡＴ３発現レトロウイルス感染樹状細胞のＩＬ−６による成熟抑制の解析
ＳＴＡＴ３を介したシグナルにより樹状細胞の成熟が抑制されるかを調べるために、前記で調製したコントロールレトロウイルスまたはＤＮ−ＳＴＡＴ３レトロウイルスを感染させたｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来のＢＭＤＣに対し、実施例１と同様のフローサイトメーター解析を実施した。成熟マーカーとしてＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩを用いた結果を図４に示す。
ＤＮ−ＳＴＡＴ３レトロウイルス感染ＢＭＤＣではＩＬ−６前処理した場合も、ＬＰＳ刺激に応じたＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）、ＣＤ８６、ＣＤ８０の発現誘導の抑制がみとめられなかった。一方、コントロールレトロウイルス感染ＢＭＤＣではＩＬ−６前処理した場合は、ＬＰＳ刺激に応じたＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）、ＣＤ８６、ＣＤ８０の発現誘導の抑制がみとめられた。これらの結果から、ＳＴＡＴ３を介したシグナルによって樹状細胞の成熟抑制がおこることが分かった。
【０１６９】
実施例４
ＩＬ−６に誘導される樹状細胞の成熟抑制に関する分子のＤＮＡチップを用いた解析
ＩＬ−６に誘導されるＢＭＤＣの成熟抑制に関する分子を解析するために、ＤＮＡチップを用いて、５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６刺激後６および１２時間のｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来ＢＭＤＣの遺伝子発現解析を行った。なお、ＤＮＡチップ解析はＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社Ｇｅｎｅ  Ｃｈｉｐ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｕ７４Ａを用いて行った。具体的には、解析は、（１）  ｔｏｔａｌ  ＲＮＡからｃＤＮＡの調製、（２）  該ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製、（３）  ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化、（４）  フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ、（５）  プローブアレイの染色、（６）  プローブアレイのスキャン、及び（７）  遺伝子発現解析、の手順で行った。
【０１７０】
１）  ｔｏｔａｌ  ＲＮＡからｃＤＮＡの調製
５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６刺激無し、若しくはＩＬ−６刺激後６時間および１２時間後のｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来ＢＭＤＣから、ＲＮｅａｓｙ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いて付属のプロトコールに従い  ｔｏｔａｌ  ＲＮＡを得た。各ｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  １０μｇとＴ７−（ｄＴ）２４プライマー（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）  １００ｐｍｏｌを含む１１μＬの混合液を、７０℃、１０分間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  Ｃｈｏｉｃｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｃＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）に含まれる５×Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  ｃＤＮＡ  Ｂｕｆｆｅｒ  ４μＬ、該キットに含まれる０．１Ｍ  ＤＴＴ  （ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）２μＬ、該キットに含まれる１０ｍＭ  ｄＮＴＰ  Ｍｉｘ  １μＬを添加し、４２℃で２分間加熱した。更に、該キットに含まれるＳｕｐｅｒ  ＳｃｒｉｐｔＩＩ  ＲＴ  ２μＬ（４００Ｕ）を添加し、４２℃で１時間加熱した後、氷上で冷却した。冷却後、ＤＥＰＣ処理水  ９１μＬ、該キットに含まれる５×Ｓｅｃｏｎｄ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ３０μＬ、１０ｍＭ  ｄＮＴＰ  Ｍｉｘ  ３μＬ、該キットに含まれるＥ．  ｃｏｌｉ  ＤＮＡ  Ｌｉｇａｓｅ  １μＬ（１０Ｕ）、該キットに含まれるＥ．  ｃｏｌｉ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ４μＬ（４０Ｕ）、該キットに含まれるＥ．  ｃｏｌｉ  ＲＮａｓｅＨ  １μＬ（２Ｕ）を添加し、１６℃で２時間反応させた。次いで、該キットに含まれるＴ４  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ２μＬ（１０Ｕ）を加え、１６℃で５分間反応させた後、０．５Ｍ  ＥＤＴＡ  １０μＬを添加した。次いで、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール溶液（ニッポンジーン社製）１６２μＬを添加し、混合した。該混合液を、予め室温、１４，０００ｒｐｍ、３０秒間遠心分離しておいたＰｈａｓｅ  Ｌｏｃｋ  Ｇｅｌ  Ｌｉｇｈｔ（エッペンドルフ社製）に移し、室温で１４，０００ｒｐｍ、２分間遠心分離した後、１４５μＬの水層をエッペンドルフチューブに移した。得られた溶液に、７．５Ｍ酢酸アンモニウム溶液７２．５μＬ、エタノール３６２．５μＬを加えて混合した後、４℃で１４，０００ｒｐｍ、２０分間遠心分離した。遠心分離後、上清を捨て、作製したｃＤＮＡを含むペレットを得た。その後、該ペレットに８０％エタノール０．５ｍＬを添加し、４℃で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離した後、上清を捨てた。再度同様の操作を行った後、該ペレットを乾燥させ、ＤＥＰＣ処理水１２μＬに溶解した。以上の操作により各ｃＤＮＡを取得した。
【０１７１】
２）  ｃＤＮＡからラベル化ｃＲＮＡの調製
各ｃＤＮＡ溶液５μＬに、ＤＥＰＣ処理水１７μＬ、ＢｉｏＡｒｒａｙ  Ｈｉｇｈ  Ｙｉｅｌｄ  ＲＮＡ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（ＥＮＺＯ社製）に含まれる１０×ＨＹ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ４μＬ、該キットに含まれる１０×Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｅｄ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ４μＬ、該キットに含まれる１０×ＤＴＴ  ４μＬ、該キットに含まれる１０×ＲＮａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｍｉｘ  ４μＬ、該キットに含まれる２０×Ｔ７  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ２μＬを混合し、３７℃で５時間反応させて、ラベル化ｃＲＮＡを調製した。反応後、該反応液にＤＥＰＣ処理水６０μＬを加えたのち、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＧＩＡＧＥＮ社製）を用いて添付プロトコールに従い、調製したラベル化ｃＲＮＡを精製した。
【０１７２】
３）  ラベル化ｃＲＮＡのフラグメント化
各ラベル化ｃＲＮＡ  ２０μｇを含む溶液に、５×Ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭトリス−酢酸  ｐＨ８．１（Ｓｉｇｍａ社製）、  ５００ｍＭ酢酸カリウム（Ｓｉｇｍａ社製）、１５０ｍＭ酢酸マグネシウム（Ｓｉｇｍａ社製））８μＬを加えた反応液４０μＬを、９４℃で３５分間加熱した後、氷中に置いた。これによって、ラベル化ｃＲＮＡをフラグメント化した。
【０１７３】
４）  フラグメント化ｃＲＮＡとプローブアレイとのハイブリダイズ
各フラグメント化ｃＲＮＡ  ４０μＬに、５ｎＭ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｏｌｉｇｏ  Ｂ２（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）４μＬ、１００×Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｃＲＮＡ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ  ４μＬ、Ｈｅｒｒｉｎｇ  ｓｐｅｒｍ  ＤＮＡ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）４０μｇ、Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ  ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）２００μｇ、２×ＭＥＳ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ（２００ｍＭ  ＭＥＳ、２Ｍ  ［Ｎａ＋］，  ４０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２％  Ｔｗｅｅｎ２０  （Ｐｉｅｒｃｅ社製）、ｐＨ６．５〜６．７）  ２００μＬ、及びＤＥＰＣ処理水１４４μＬを混合し、４００μＬのハイブリカクテルを得た。得られた各ハイブリカクテルを９９℃で５分間加熱し、更に４５℃で５分間加熱した。加熱後、室温で１４，０００ｒｐｍ、５分間遠心分離し、ハイブリカクテル上清を得た。
【０１７４】
一方、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーで満たしたＭｕｒｉｎｅ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｕ７４Ａｖ２プローブアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）を、ハイブリオーブン（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）内で、４５℃、６０ｒｐｍで１０分間回転させた後、１×ＭＥＳハイブリダイゼーションバッファーを除去してプローブアレイを調製した。上記で得られたハイブリカクテル上清２００μＬを該プローブアレイにそれぞれ添加し、ハイブリオーブン内で４５℃、６０ｒｐｍで１６時間回転させ、フラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを得た。
【０１７５】
５）  プローブアレイの染色
上記で得られたハイブリダイズ済みプローブアレイそれぞれからハイブリカクテルを回収除去した後、Ｎｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ  Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒ（６×ＳＳＰＥ（２０×ＳＳＰＥ（ナカライテスク社製）を希釈）、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０（Ｓｉｇｍａ社製））で満たした。次にＮｏｎ−Ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ  Ｗａｓｈ  ＢｕｆｆｅｒおよびＳｔｒｉｎｇｅｎｔ  Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒ（１００ｍＭ  ＭＥＳ、０．１Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）をセットしたＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｓｔａｔｉｏｎ  ４００（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）の所定の位置にフラグメント化ｃＲＮＡとハイブリダイズしたプローブアレイを装着した。その後染色プロトコールＥｕＫＧＥ−ＷＳ２に従って、１次染色液（１０μｇ／ｍＬ  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ  （ＳＡＰＥ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅ社製）、２ｍｇ／ｍＬ  Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ  ＢＳＡ、１００ｍＭ  ＭＥＳ（２−（Ｎ−Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ）、１Ｍ  ＮａＣｌ（Ａｍｂｉｏｎ社製）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）、  ２次染色液（１００μｇ／ｍＬ  Ｇｏａｔ  ＩｇＧ  （Ｓｉｇｍａ社製）、３μｇ／ｍＬ  Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ  Ａｎｔｉ−Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  （Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、２ｍｇ／ｍＬ  Ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ  ＢＳＡ、１００ｍＭ  ＭＥＳ、１Ｍ  ＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％Ａｎｔｉｆｏａｍ０−３０）により染色した。
【０１７６】
６）  プローブアレイのスキャン、及び  ７）  遺伝子発現解析
染色した各プローブアレイをＨＰ  ＧｅｎｅＡｒｒａｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）に供し、染色パターンを読み取った。染色パターンをもとにＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）によってプローブアレイ上の遺伝子の発現を解析した。次に、解析プロトコールに従ってＮｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ、遺伝子発現の比較解析を行った。
【０１７７】
その結果、ＩＬ−６処理ＢＭＤＣにおいては、ＩｋＢファミリー分子の一つであるＢｃｌ３が増加していることが分かった（表１）。なお表１中変動倍率は、ＩＬ−６刺激無しサンプルでのＢｃｌ３発現量に対するＩＬ−６刺激ありサンプルでのＢｃｌ３発現量の倍率を示す。
【０１７８】
【表１】
2005015413.tif 000002
【０１７９】
実施例５
Ｂｃｌ３発現レトロウイルス感染樹状細胞の成熟抑制の解析
Ｂｃｌ３発現レトロウイルスを感染させた樹状細胞における成熟化抑制作用につき検討した。
Ｂｃｌ３発現レトロウイルスの作成は実施例３と同様に実施した。ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来ＢＭＤＣにコントロールレトロウイルス（インサートを持たないレトロウイルス）あるいはＢｃｌ３発現レトロウイルスを感染し、その細胞を１００ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳで２４時間刺激した。その後成熟マーカー（ＩＬ−１２、ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ））の発現を、実施例１と同様にしてフローサイトメーターで調べた。なおＩＬ−１２の発現はビオチン標識抗マウスＩＬ−１２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて調べた。結果を図５（ＩＬ−１２）および図６（ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ））に示す。
【０１８０】
その結果、Ｂｃｌ３発現レトロウイルスを感染させたＢＭＤＣではＬＰＳにより誘導されるＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩおよびＩＬ−１２の発現が抑制されることが分かった。一方、コントロールレトロウイルスを感染させたＢＭＤＣではＬＰＳに誘導されるＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩおよびＩＬ−１２の発現抑制はみとめられなかった。
これらの結果から、Ｂｃｌ３がＬＰＳにより誘導されたＤＣ成熟を抑制することが分かった。
【０１８１】
【発明の効果】
本発明により、新たな未成熟樹状細胞の成熟化抑制剤および成熟化促進剤が提供される。本発明の成熟化抑制剤は自己免疫疾患、移植拒絶、アレルギー性疾患又は炎症性疾患の予防・治療に利用することができ、また本発明の成熟化促進剤は癌やウイルス感染症の予防・治療に利用することができる。
【０１８２】
【配列表】
2005015413.tif 000003
2005015413.tif 000004
2005015413.tif 000005
2005015413.tif 000006
2005015413.tif 000007
2005015413.tif 000008
2005015413.tif 000009
2005015413.tif 000010
2005015413.tif 000011
2005015413.tif 000012
2005015413.tif 000013
2005015413.tif 000014
2005015413.tif 000015
2005015413.tif 000016
2005015413.tif 000017
2005015413.tif 000018
2005015413.tif 000019
2005015413.tif 000020
2005015413.tif 000021
2005015413.tif 000022
2005015413.tif 000023
2005015413.tif 000024
2005015413.tif 000025
2005015413.tif 000026
2005015413.tif 000027
2005015413.tif 000028
2005015413.tif 000029
2005015413.tif 000030
2005015413.tif 000031
2005015413.tif 000032
2005015413.tif 000033
2005015413.tif 000034
2005015413.tif 000035
2005015413.tif 000036
2005015413.tif 000037
2005015413.tif 000038
2005015413.tif 000039
2005015413.tif 000040
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来の骨髄系樹状細胞（ＢＤＭＣ）の成熟化に対する、ＩＬ−６の作用を示したＦＡＣＳ解析の結果である。図中、Ｃｌａｓｓ  ＩＩ、ＣＤ８６、ＣＤ８０およびＣｌａｓｓ  Ｉは、これら成熟マーカーの発現をＦＡＣＳ解析した結果を示す。また図中、Ｎｏｎｅは処理無し、ＩＬ−６はＩＬ−６処理、ＬＰＳはＬＰＳ処理、ＩＬ−６＋ＬＰＳはＩＬ−６およびＬＰＳで処理した結果を示す。図中の数字は各細胞における各成熟マーカーの発現量を表す。
【図２】図２は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス、ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウスおよびｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウス由来のＢＤＭＣの成熟化に対する、ＩＬ−６の作用を示したＦＡＣＳ解析の結果である。成熟マーカーとしてＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）を用いた。図中、Ｆ７５９はｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウスの結果を示し、Ｃｏｎｔｒｏｌは対照として用いたＣ５７ＢＬ／６マウスの結果を示す。また図中、ＦｘｘＱ（Ｒｅ．）はｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウスの結果を示し、Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｒｅ．）は対照として用いたＣ５７ＢＬ／６マウスの結果を示す。また図中、Ｎｏｎｅは処理無し、ＩＬ−６はＩＬ−６処理、ＬＰＳはＬＰＳ処理、ＩＬ−６＋ＬＰＳはＩＬ−６およびＬＰＳで処理した結果を示す。図中の数字は各細胞におけるＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）の発現量を表す。
【図３】図３は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス、ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウスおよびｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウス由来のＢＤＭＣの成熟化に対する、ＩＬ−６の作用を示したＦＡＣＳ解析の結果である。成熟マーカーとしてＣＤ８６を用いた。図中、Ｆ７５９はｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウスの結果を示し、Ｃｏｎｔｒｏｌは対照として用いたＣ５７ＢＬ／６マウスの結果を示す。また図中、ＦｘｘＱ（Ｒｅ．）はｇｐ１３０ＦＸＸＱ／ＦＸＸＱマウスの結果を示し、Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｒｅ．）は対照として用いたＣ５７ＢＬ／６マウスの結果を示す。また図中、Ｎｏｎｅは処理無し、ＩＬ−６はＩＬ−６処理、ＬＰＳはＬＰＳ処理、ＩＬ−６＋ＬＰＳはＩＬ−６およびＬＰＳで処理した結果を示す。図中の数字は各細胞におけるＣＤ８６の発現量を表す。
【図４】図４は、ドミナントネガティブＳＴＡＴ３を発現するｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来のＢＭＤＣの成熟化に対する、ＩＬ−６の作用を示したＦＡＣＳ解析の結果である。成熟マーカーとしてＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ（ＩＡｂ）を用いた。図中、Ｃｏｎｔｒｏｌはインサートを持たないコントロールレトロウイルスを感染させた結果を、またＤＮ−ＳＴＡＴ３はドミナントネガティブＳＴＡＴ３を発現するレトロウイルスを感染させた結果を示す。また図中、Ｎｏｎｅは処理無し、ＩＬ−６はＩＬ−６処理、ＬＰＳはＬＰＳ処理、ＩＬ−６＋ＬＰＳはＩＬ−６およびＬＰＳで処理した結果を示す。図中の数字は各細胞におけるＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩの発現量を表す。
【図５】図５は、ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来ＢＭＤＣの成熟化に対するＢｃｌ３の作用を示したＦＡＣＳ解析の結果である。成熟マーカーとしてＩＬ−１２を用いた。左図はＢｃｌ３を発現しない対照レトロウイルスを感染させた結果を示す。また右図はＢｃｌ３発現レトロウイルスを感染させた結果を示す。点線はＬＰＳ刺激なしの結果を、また実線はＬＰＳ刺激ありの結果を示す。図中の数字は各細胞におけるＩＬ−１２の発現量を表す。
【図６】図６は、ｇｐ１３０Ｆ７５９／Ｆ７５９マウス由来ＢＭＤＣの成熟化に対するＢｃｌ３の作用を示したＦＡＣＳ解析の結果である。成熟マーカーとしてＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩを用いた。左上図はＢｃｌ３を発現しない対照レトロウイルスを感染させた結果（ＬＰＳ刺激なし）を示す。また右上図はＢｃｌ３を発現しない対照レトロウイルスを感染させた結果（ＬＰＳ刺激あり）を示す。また左下図はＢｃｌ３発現レトロウイルスを感染させた結果（ＬＰＳ刺激なし）を示す。また右下図はＢｃｌ３発現レトロウイルスを感染させた結果（ＬＰＳ刺激あり）を示す。図中の数字は各細胞におけるＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩの発現量を表す。
【図１】
2005015413.tif 000041
【図２】
2005015413.tif 000042
【図３】
2005015413.tif 000043
【図４】
2005015413.tif 000044
【図５】
2005015413.tif 000045
【図６】
2005015413.tif 000046