(57)【要約】【課題】本発明の目的は過敏性肌の被刺激性に対する緩解（予防および改善）及び様々の要因によるかぶれ、皮膚炎、肌荒れ、日焼け後の炎症等の軽減及び修復効果があり、且つ安全性に優れた皮膚外用剤を提供することである。【解決手段】有効成分として水面下２５００〜３０００メーターで生存する微小生物であるＡｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉから得られる外分泌性ポリサッカライド、アルテロモナス発酵エキスを含有してなることを特徴とする皮膚外用剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
過敏性抑制有効成分として水深２５００〜３０００メーターで生存する微小生物であるＡｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉが生成、分泌する外分泌性ポリサッカライド、アルテロモナス発酵エキスを含有してなることを特徴とする皮膚外用剤
【請求項２】
皮膚刺激緩和剤である請求項１記載の皮膚外用剤
【請求項３】
外分泌性ポリサッカライド、アルテロモナス発酵エキスを０．０１重量％から８．０重量％含有する皮膚外用剤
【請求項４】
請求項  １のＡｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉが生成、分泌する外分泌性ポリサッカライドであるアルテロモナス発酵エキスにレチノイド、トコフェロール、Ｌ−アスコルビン酸塩およびＬ−アスコルビン酸誘導体、インドメタシン、アラントイン、グリチルリチン酸およびその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、ヒアルロン酸類及びコラーゲンやコンドロイチン硫酸塩類から選ばれる一種または二種以上を含有する皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する分野】
本発明は各種成分による皮膚、頭皮および粘膜への刺激を緩和したり抑制したりする皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
生活環境の変化により人間は常に各種刺激物質に曝されている。このため鼻炎、アトピー性皮膚炎や花粉症、喘息など患者の増大、また過去に存在しなかったような疾患などが増えてきており大きな社会問題となっている。我々は各種刺激物質に曝されているため皮膚が過敏になり、また今まで刺激を起こさなかった物質などに敏感に反応してしまう人や、また皮膚外用剤の有効成分として配合された物質などによる炎症が報告されており、皮膚科学分野において問題となっている。
【０００３】
従来はこれまで使用してきた商品の使用を中止したり、これら炎症に対して炎症がおこってから抗炎症剤配合の外用剤を塗布して炎症を鎮めたり、あるいは予防を目的として、各種の保湿剤を使用することにより表皮を保護して皮膚機能を高めたりする対策がとられている。
【０００４】
一方、これらの目的のためにさまざまな試みがなされている。例をあげるならば炎症を抑制したり、緩和させたりする目的でクララ、ホウセンカなど多様な植物抽出物が利用されている（特許公開公報２０００−０４４４８１号、特許公開公報  平１１−１８０８５２号、特許公開公報  平１１−０１２１２２号）。また多価アルコールの利用についてはポリプロピレングリコール、ポリアルキレングリコール、ポリエチレングリコールによる効果も提案されている（特許公開公報２０００−２８４７０５号、特許公開公報２０００−２１２０４４号）。また、ヒアルロン酸やトレハロースなどによる糖の刺激抑制も行なわれている（特許公開公報  平１０−０１７４３０号、特許公開公報平１０−０４５５６０号、特許公開公報  平１０−０１７４２７号）。また、副腎皮質ホルモンなどのステロイド剤や各種抗炎症剤（消炎剤）の使用も市販外用剤中や皮膚科などの医療現場などの場で繁用されている。しかしながら安全性はもちろんのこと、得られる効果もまた未だ理想的に満足できるものではなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記従来からの技術の課題に鑑みて、その目的は皮膚の炎症や刺激を抑制したり軽減する効果に優れた皮膚外用剤を提供するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等はこのような事情に鑑み、鋭意検討した結果、水深２５００〜３０００メーターで生存する微小生物であるＡｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉが生成、分泌する外分泌性ポリサッカライド、アルテロモナス発酵エキスが皮膚炎症や刺激を抑制したり軽減する効果についての知見を得て、本発明を完成するに至った。以下、本発明について詳細に説明する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉは暗黒、寒冷、超高圧条件下の深海に生息する適応力をもち、非病原性の菌であり、可動性で色素を含まないグラム陰性菌で、大きさは約１μｍであり、外分泌性ポリサッカライド複合体を分泌する性質を有する。ポリサッカライド複合体の化学構造式を下記に示す。
【０００８】
【化１】
2005015375.tif 000002
ポリサッカライド複合体の化学構造式
【０００９】
ポリサッカライド複合体の製造法はＡｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉ菌（グラム陰性菌）を培養して、分泌させ、これらを集め、特殊な方法により沈殿、精製、乾燥して製造する。皮膚外用剤に使用する際には取り扱いや剤型中への配合性を良くする目的で上記で得たアルテロモナス発酵エキス０．３ｇ、ブチレングリコール４．０ｇ、防腐剤０．５ｇおよび精製水９５．２ｇ  の組成物を含有した皮膚刺激緩和剤を使用した。この組成物の比重は１．００±０．０１、ｐＨは５．７±１．０であり透明な液状である。
【００１０】
本発明の皮膚外用剤に使用する皮膚刺激緩和剤の好ましい濃度は０．０１％から８．０％であり、より好ましい使用濃度は０．５％から５．０％である。皮膚外用剤の含有量が０．０１％より少ないと皮膚炎症や刺激を抑制したり軽減する効果を発揮することは困難であり、８．０％以上の含有量では見合うような著しい効果の増大は期待できない。
【００１１】
本発明の成分は化粧料、医薬品、医薬部外品など外皮に適用される皮膚外用剤として用いることができる。したがってその剤型として水溶性系（ローション系）、可溶化系、乳化系（Ｗ／Ｏ型、Ｏ／Ｗ型）、粉末系、軟膏系、油液系、ジェル系、水−油二層系、水−油−粉末三層系など幅広い形態に使用することができる。
【００１２】
本発明の皮膚外用剤の製剤化は上記物質に加えて本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の医薬品等の皮膚外用剤、医薬部外品や化粧品に用いられる他の成分、例えば陰イオン（高級脂肪酸アルカリ金属塩、高級脂肪酸アミン塩、アミノ酸系界面活性剤）や非イオン界面活性剤、リン脂質ステロールエステルなどの界面活性剤、炭化水素（流動パラフィン、スクワラン、ワセリンなど）、油脂（動植物油、トリグリセリド、ワックスエステル、高級アルコール、高級脂肪酸、シリコーン、エステル油、ロウ類など）など、湿潤剤（多価アルコール、糖類、生体高分子、アミノ酸、ペプチド類など）、アルコール（エチルアルコール）、皮膜形成剤（ポリビニルアルコール、ペクチン）や水溶性ないし油溶性高分子、樹脂、紫外線吸収剤、殺菌防腐剤、抗酸化剤、金属封鎖剤、着色剤（天然色素、合成色素）、各種香料の他、各種の植物および動物抽出物、油溶性ビタミン、水溶性ビタミンや美白剤として、アスコルビン酸誘導体、アルブチン、エラグ酸、胎盤抽出液、肌荒れ防止剤としてアラントイン、抗炎症剤としてグルチルレチン酸、グリチルリチン酸、アズレン、ヒスタミン剤など、抗老化剤としてビタミンＡパルミテートなど、収斂剤としてパラフェノールスルフォン酸亜鉛や、クエン酸およびその塩などを含めた有機酸類とその塩等、そして紫外線散乱剤として有機あるいは無機系粉体等を、必要に応じて適宜配合もしくは併用することができる。
【００１３】
本発明の皮膚外用剤は必要によりさらに公知の炎症効果のある薬剤を添加してもよい。これらの薬剤としては副腎皮質ホルモン類、レチノイド、トコフェロール、Ｌ−アスコルビン酸塩およびＬ−アスコルビン酸誘導体を含むビタミン類、インドメタシン、アラントイン、グリチルリチン酸およびその誘導体、グリチレレチン酸およびその誘導体、ヒアルロン酸類およびコラーゲンやコンドロイチン硫酸塩類や植物抽出液、ビオチン、パントテン酸誘導体などがあげられる。
【００１４】
一方、本品の安全性については皮膚一次刺激性試験、皮膚感作性試験、急性経口毒性試験、眼粘膜刺激性試験、光毒性試験、光感作性試験、変異原性試験およびヒトパッチテスト（皮膚貼付試験）を実施し、いずれも問題はなかった。
【００１５】
以下に実験例および実施例をあげて本発明について更に説明するが、本発明がこれら例に何ら限定するものではない。
【００１６】
【実験例１】培養ヒトケラチノサイトによるＩＣＡＭ−１の抑制率測定）
ＩＣＡＭ−１（Ｉｎｔｅｒ  Ｃｅｌｌｕａｒ  Ａｄｅｈｅｓｉｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１）、細胞間接着分子は皮膚の反応性に関する最適マーカーである。皮膚などの組織では隣接した細胞同士は互いに接着している。この細胞間接着は接着分子と呼ばれる数郡の膜貫通型たんぱく質ファミリーにより仲介される。これらの接着分子は細胞を接着するだけでなく、様々な免疫細胞と組織細胞の接着やそのための情報伝達に非常に重要な役割を担っている。通常ＩＣＡＭ−１の発現は低いが、アレルゲンや炎症誘導物質などによりその発現レベルは明らかに増加するため、皮膚病理学の分野では皮膚の炎症反応などのマーカーとして利用されている。接触性アレルゲン、炎症性前駆物質により荒れ肌となった皮膚で、このＩＭＣＡＭ−１の増加を放置することにより、皮膚はアレルギー、過敏症など、不快感を伴う状態となる。皮膚刺激緩和剤はこのＩＣＡＭ−１の上昇を抑制するに極めて有効であり、肌に快適な状態をもたらす。そこでヒトケラチノサイト細胞に対し、対照（単独）、２．０％および５．０％皮膚刺激緩和剤を２４時間処理後、ＩＣＡＭ−１の測定をおこなった。結果は図１に示した。
【００１７】
図１から対照（単独）のＩＣＡＭ−１量が１００に対し、２．０％皮膚刺激緩和剤でのＩＣＡＭ−１量は２４で、７６％の抑制を示し、５．０％皮膚刺激緩和剤のＩＣＡＭ−１量は１５で８５％の抑制であった。すなわち、ヒトケラチノサイトに対して  ＩＣＡＭ−１の極めて有意な減少がみられた。皮膚刺激緩和剤はＩＣＡＭ−１の上昇を抑制するのに極めて有効であり、肌に快適な状態をもたらすことが判明した。
【００１８】
【実験例２】培養ヒト皮膚繊維芽細胞によるコラーゲンのマトリックス化（ゲル化）の定量試験
ヒト繊維芽細胞懸濁液、コラーゲン溶液、被験物質を混合したコラーゲン溶液を調整して、培養皿に入れ、湿潤条件下で、インキューベートを行った。被験物質として、０．０３％皮膚刺激緩和剤、レチノイン酸を用い、被験物質を含まないものをコントロールとした。コラーゲンマトリックス形成による収縮をマトリックスの直径を測定して比較した。
【００１９】
コラーゲン溶液は、繊維芽細胞存在下でマトリックス化するとゲル状になり、溶液の体積は収縮する。図２に示したとおり、本試験により、０．０３％皮膚刺激緩和剤は低濃度においてもコラーゲンマトリックスの形成を改善することがわかる。この結果は皮膚障害における組織の再構築に有効であることを示している。また、コラーゲンとの同時投与が有効であることを示唆している。
【００２０】
以下に記載の実施例および比較例に使用するクリームは下記の表にしめす組成にしたがって調整した。量は重量％をしめす。
【００２１】
【表１】
2005015375.tif 000003
（製法）（２），（３），（４），（５），（６），（７），（１０），（１３）を秤量し７５℃に加温、混合し（油相）、（８），（９），（１１），（１２），（１４）  を秤量し、同様に７５℃に加温、混合し（水相）、水相、油相を混合乳化し、その後冷却し、３５℃で（１），（１５）を加えクリームを調整する。
【００２２】
上記クリームを以下の実験例に使用した。
【実験例３】髭剃り後皮膚評価試験
毎日、手で髭を剃る過敏肌７７名の男性に２週間、髭剃り後に皮膚刺激緩和剤３．０％配合の軟膏（アフターシェーブクリーム剤を顔の片側に、比較例のクリームを他方の顔に）を使用して、最後に各人に両側の顔の皮膚についての質問をおこなった。その程度について「かなり効果あり」、「よい効果あり」、「まあまあ効果あり」、「ほとんど効果なし」、「効果なし」のうちのどれかを選択するよう依頼した。  表２に示す（１）から（４）の四項目の質問回答のうち、「かなり効果あり」、  「よい効果あり」、「まあまあ効果あり」と回答したヒトの割合の集計結果によると７７名のうち
【表２】
2005015375.tif 000004
の回答がそれぞれあり、全体の効果を認めるという評価は実施例が８０．１％であるのに対し比較例の場合は４２．２％の効果があるという結果であった。結論として皮膚刺激緩和剤３．０％配合の軟膏（アフターシェーブクリーム剤）は皮膚の柔軟性、なめらかさの向上、切り傷の回復などの効果をしめし、極めて優れた評価を得た。
【００２３】
【実験例４】紫外線−Ｂのランゲルハンス細胞に対する有害作用からの保護
培養ヒト細胞上に皮膚刺激緩和剤３．０％配合の軟膏（クリーム）を２４時間及び４８時間塗布した後７２時間目に紫外線−Ｂを照射した。９６時間目に塗布部を凍結し、皮膚断面切片を作製し単位面積当たりのランゲルハンス細胞を観察した。特異マーカーとして抗ＣＤ１ａを用い蛍光顕微鏡にて蛍光ランゲルハンス細胞数を測定した。その結果、ランゲルハンス細胞数は表３のとおりであった。
【００２４】
【表３】
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皮膚刺激緩和剤３．０％配合クリームは皮膚の防御システムであるランゲルハンス細胞を保護する結果を得た。
【００２５】
【実験例５】ビタミンＡ投与で惹起された皮膚の不快症状の改善試験
ビタミンＡ経口投与を開始した若年成人（Ａグループ）および過去に同剤を投与された経験のある被験者（Ｂグループ）の皮膚不快感に対する皮膚刺激緩和剤３．０％配合のクリームを塗布し、その効果の度合いを複数の評価機関にて評価を実施した。上記経験の被験者４０名に対して当該クリームを１日２回、２８日間使用させた。その結果、Ａグループの使用試験の結果、４０名のうち１０名（２５％）のみが不快感を訴えただけであった。通常は８５．２％のヒトが不快感を呈するという統計結果がある。一方４０名のうち１２名のＢグループについては２名だけが不快症状を訴えただけであった。以上の結果から皮膚刺激緩和剤３．０％配合のクリームは、ビタミンＡ経口投与によって引き起こされた不快症状をもつ被験者に対しその症状の発生抑制に極て有効であることが示された。
【００２６】
つぎに示す処方および下記製法による乳液を得た。本発明の乳液は炎症や刺激を抑制する効果を有するものであった。
｛乳液組成物｝乳液は下記の表にしめす組成にしたがって調整した。
【表４】
2005015375.tif 000006
（製法）油相である（１），（２），（３），（４），（５），（６）を秤量し、７５℃に加温、混合し、水相である（７），（８），（９），（１０），（１２）を同様に秤量し、７５℃に加温、混合した後、水相、油相を混合、乳化物を得た。その後冷却して３５℃で（１１）を加えて乳液を調整する。
【００２７】
つぎに示す処方および下記製法によるローションを得た。本発明のローションは炎症や刺激を抑制する効果を有するものであった。
｛ローション組成物｝ローションは下記の表にしめす組成にしたがって調整した。
【表５】
2005015375.tif 000007
（製法）水相である（８），（１０）およびアルコール相である（１），（２），（３），（４），（５），（６），（７）をそれぞれ秤量、加温、均一に溶解して、両者を可溶化した後（９）を加えてローションを調整する。
【００２８】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明によれば  水深２５００〜３０００メーターで生存する微小生物であるＡｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉが生成、分泌する外分泌性ポリサッカライド、アルテロモナス発酵エキスを含有してなる皮膚炎症や刺激を抑制したり軽減する効果を有し、且つ安全性が高い皮膚外用剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【図１】培養ヒトケラチノサイトによるＩＣＡＭ−１の濃度と抑制率
【図２】時経によるゲル化（収縮）率
【図１】
2005015375.tif 000008
【図２】
2005015375.tif 000009