(57)【要約】 【課題】  抗アレルギー、抗酸化作用を発揮するヘスペリジン高含有食品を、面倒な抽出操作等を行うことなく、簡易かつ高収率で製造できる方法、及び当該方法により製造されたヘスペリジン高含有食品を提供する。【解決手段】  直径３８ｍｍ以下の温州ミカンを丸ごと、乾燥した後、粉砕してなる粉末を主成分とする。未熟ミカンを丸ごと粉末にした食品は、ヘスペリジン含有率が１．５％以上であり、さらにポリフェノール類、抗炎症性成分等の有効成分の含有量も高い。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
直径３８ｍｍ以下の温州ミカンの粉末を主成分とするヘスペリジン高含有食品。
【請求項２】
前記粉末は、前記ミカンの丸ごとを粉末化したものである請求項１に記載のヘスペリジン高含有食品。
【請求項３】
ヘスペリジン含有率が１．５％以上である請求項１又は２に記載のヘスペリジン高含有食品。
【請求項４】
さらに抗炎症性成分の含有量が高い請求項１〜３のいずれかに記載のヘスペリジン高含有食品。
【請求項５】
さらにポリフェノール類の含有量が高い請求項１〜４のいずれかに記載のヘスペリジン高含有食品。
【請求項６】
錠剤に加圧成形されている請求項１〜５のいずれかに記載のヘスペリジン高含有食品。
【請求項７】
直径３８ｍｍ以下の温州ミカンを、乾燥した後、粉砕して、温州ミカン粉末を得る工程を含むヘスペリジン高含有食品の製造方法。
【請求項８】
前記温州ミカンを冷凍後、荒破砕したものを乾燥する請求項７に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗アレルギー、抗酸化作用等の有用な効用を発揮できるヘスペリジンをはじめとする有効成分を高含有率で含有している美容健康食品、美容健康のために、食品に栄養強化用に添加される食品用添加剤等の食品及び当該食品の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘスペリジンは、ビタミンＰ類の一つで、近年、花粉症やアトピー等のアレルギーに対する抗アレルギー剤としての効用；紫外線吸収作用；糖質の吸収阻害；活性酸素除去による抗がん作用；肌の活性化などの種々の有益な作用を有することが報告されており、美容健康食品としての利用が高まっている。
【０００３】
ヘスペリジンは、レモン、ミカン等の柑橘類に含まれることが知られているが、その含有量は、柑橘類の種類により異なり、また同じ種類の柑橘類であっても果皮や実といった部位などによっても異なる。このため、ヘスペリジンを高濃度で含む食品の加工、製造方法が種々検討されている。
【０００４】
例えば、特許文献１には、未熟ミカンを乾燥、粉砕し、水又はアルコールによる抽出物を主成分とする化粧品、医薬部外品の添加物が開示されている。文献１は、成熟ミカンの収穫に先立って摘果される未熟ミカン（成熟する１〜３ヶ月前の物）を有効利用、さらにはこの未熟ミカンが成熟ミカンの１００〜１０００倍のヘスペリジンを含有していることに着目して発明されたものである。
【０００５】
また特許文献２には、柑橘類果物から汁を搾った残分固形物である果皮の有効利用として、果皮のエタノール抽出物又は汁を搾った残分固形物を乾燥粉末化して得たものが、アシルＣｏＡ−コレステロール−ｏ−アシルトランスフェラーゼの抑制活性を有するヘスペリジンやナリンジンが多く含まれることを見出し、これを食品類として使用することが提案されている。
【０００６】
また、特許文献３には、栄養価に優れた粉末食品として、レモン等の柑橘類の幼果を丸ごと刻んでチップ化し、熱風乾燥後、粉末化した食品が開示されている。ここでいう柑橘類としては、酵素作用が活発で品質がよいという観点から、柚子、カボス、レモン、からたち、ダイダイ、スダチを用いることが記載されており、特に柚子、カボス、レモンは薄皮の温州ミカンよりも品質が良いという理由で好ましいとされている。また、特許文献３にいう幼果とは、摘果期前１週間以内では果実の細胞膜が固くなって食味が低下すること、２週間以上前では果汁も酵素も不足して食味が低下することから、成熟果実の摘果期よりも１〜２週間前のものを使用することが開示されている。
【０００７】
柑橘類にヘスペリジンが含有されていると一般的にいわれているものの、その含有量、濃度は、柑橘類の種類によって異なり、さらには同種類の柑橘類であっても果皮、搾り粕、実など、部位によってヘスペリジン含有量は異なる。また、同じ部位であったとしても、成熟度によりヘスペリジンの含有量が変化していく。
【０００８】
上記文献１〜３は、いずれも、果汁搾り粕の有効利用、あるいは摘果された幼果の有効利用という点からの食品利用であるため、得られた食品について、ヘスペリジン本来の効果である抗アレルギー作用、抗酸化作用等を主目的とする健康食品として供給するには、まだ改善の余地があり、よりヘスペリジン含有率が高い食品を効率よく得られる方法が望まれている。
【０００９】
一方、温州ミカンを原料として、ヘスペリジン濃度が高い食品を得る方法としては、特許文献４に、柑橘類の搾汁粕にアルカリ土類金属化合物とｐＨ調整剤とを添加してｐＨをアルカリに調整し、圧搾により、高濃度のヘスペリジン抽出液を得る方法が開示されている。このような方法により、高濃度ヘスペリジン抽出液を得ることができるものの、面倒なヘスペリジン抽出操作が必要となる。
【００１０】
【特許文献１】特開平６−２１１６２４号
【特許文献２】特表２００１−５２１００３号
【特許文献３】特開平９−１４０３４７号
【特許文献４】特開平８−１８８５９３号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、以上のような事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、健康食品として抗アレルギー作用、抗酸化作用といったヘスペリジン本来の効果を発揮できるようなヘスペリジン高含有食品を、面倒な抽出操作等を行うことなく、簡易かつ高収率で製造できる方法、及び当該方法により製造されたヘスペリジン高含有食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、原料とする温州ミカンとヘスペリジン含有率の関係を鋭意検討した結果、本発明を完成した。
【００１３】
すなわち、本発明のヘスペリジン高含有食品は、直径３８ｍｍ以下の温州ミカンの粉末を主成分とする。前記粉末は、前記ミカンの丸ごとを粉末化したものであることが好ましく、ヘスペリジン含有率が１．５％以上であることが好ましい。さらにヘスペリジン以外の抗炎症性成分の含有量が高く、ポリフェノール類の含有量も高い。
【００１４】
本発明のヘスペリジン高含有食品は、粉末のままであってもよいが、粉末を錠剤に加圧成形されたものであってもよい。
【００１５】
本発明のヘスペリジン高含有食品の製造方法は、直径３８ｍｍ以下の温州ミカンを、乾燥した後、粉砕して、温州ミカン粉末を得る工程を含む。前記温州ミカンを冷凍後、荒破砕したものを乾燥することが好ましい。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のヘスペリジン高含有食品は、ヘスペリジン含有率が高い原料温州ミカンを、サイズ（直径）により判別しているので、簡易に選別することができる。そして、選別されたヘスペリジン高含有ミカンを使用することにより、丸ごと全部を原料として利用して、最終食品を製造できる。従って、本発明の方法によれば、簡易且つ無駄のない経済的な方法でヘスペリジン高含有食品、さらにはポリフェノール類の含有量も高く、抗炎症性成分及び神経保護作用成分も含み、脱顆粒抑制効果がある高機能食品を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
はじめに本発明のヘスペリジン高含有食品の製造方法について説明する。
本発明の製造方法で使用する原料は、直径３８ｍｍ以下、具体的には開花後、充実した実が得られるのは直径１０ｍｍ程度であるから、直径１０〜３８ｍｍ程度、好ましくは直径１０〜３５ｍｍの温州ミカン、より好ましくは直径２０〜３０ｍｍの温州ミカンである。温州ミカンには、産地和歌山県で、５月中旬に満開となって１０月頃に食用に収穫される極早生、５月中旬に満開となって11月頃に食用に収穫される早生、中生、５月中旬に満開となって１２月頃に食用に収穫される晩生があるが、いずれの温州ミカンであっても、直径が１０〜３８ｍｍの範囲内の温州ミカンを使用する。
【００１８】
本発明者らが温州ミカンのヘスペリジン含有量について鋭意検討した結果、以下のことが明らかになった。温州ミカンのヘスペリジン含有率は、温州ミカンの成長に反比例し、３８ｍｍを超えると、果肉部分が成熟しはじめ、水分量が増してくるため、ミカン全体としては、水分が多くなりすぎて、乾燥に時間がかかりすぎる。特に果肉部分には、ヘスペリジンをはじめとする種々の有効成分があまり含まれていないため、丸ごと使用した場合には、ヘスペリジンの含有率が低くなって、美容・健康食品用途としては不十分である。
【００１９】
また、ヘスペリジン以外に、温州ミカンには、種々の有効成分が含まれている。これらの有効成分含量は、ミカンのサイズが大きくなるにつれて減少し、特に果肉部分が成熟し始める直径３８ｍｍを越えると激減する。尚、有効成分としては、ルチン、ナリルチン、ノビレチン等のポリフェノール類、抗炎症性成分、神経保護成分、脱顆粒反応抑制成分などが挙げられる。
【００２０】
ここで、直径１０〜３８ｍｍの範囲にある温州ミカンとは、例えば、和歌山県有田郡金屋町で６月中旬から７月中旬に行なわれる摘果のものが挙げられる。和歌山県有田郡金屋町では、極早生、早生、中生、晩生は開花時期がほぼ同じで、いずれも摘果を６月中旬から７月中旬に摘果されたものは、直径１０〜３８ｍｍに該当する。一般に、果実数を減らすために行う摘果は、自然落果が終り果実が２Ｓサイズ（５０〜５５ｍｍ）になるまで順次行なわれ、ミカンの種類により異なるが、主として７月中旬から８月下旬に行う。７月中旬から８月下旬に摘果されたミカンのサイズは４０ｍｍ程度である。従って、本発明で使用する原料は、収穫果実数を調節するために行う摘果前に積極的に採取したものであることに特徴がある。
【００２１】
また、原料ミカンを時期で管理するのではなく、選択基準をサイズとすることにより、産地間の地域差、天候による時期のずれを気にすることなく、ヘスペリジン高含有のミカン加工食品を製造することが可能となる。
【００２２】
本発明の製造方法は、このようにサイズを基準に選別したミカンを、丸ごとのまま粉末化する方法である。果皮も含めて、丸ごとのまま使用することから、原料を全部使用できるので経済的であり、また廃棄物を生じないという点でも近年の環境に対する要求にマッチしている。さらに、果皮だけでなく丸ごと原料として使うことにより、ヘスペリジン以外の種々の有効成分による効果を得ることができる。例えば、カリウム濃度が低い環境に神経細胞が曝された場合、ヘスペリジン単独が供給されても変化はないが、丸ごとを原料とした有効成分存在下では神経細胞の死滅を防止することができる。
【００２３】
但し、丸ごとのまま使用することとの関係から、農薬等の薬剤散布が行われていない原料を用いることが好ましい。この点、開花後から未熟ミカン収穫までは、黒点病予防のために、ヒノキチオール等の天然の防虫、抗菌化合物を用いることにより、開花後、直径１０〜３８ｍｍの果実となるまでの間の薬剤散布を抑制することが可能となる。
【００２４】
粉末化は、一度の破砕で行うよりも、荒破砕した後、微粉砕という２回に分けて行うことが好ましい。
また、荒破砕に際しては、採取後、直ちに冷凍し、冷凍状態で行うことが好ましい。荒破砕工程における自己分解を防止できるからである。
【００２５】
粉末化に際しては、乾燥する必要がある。原料のサイズにもよるが、水分が８５〜７５％程度含まれているからである。乾燥工程は、荒破砕後、微粉砕前に行うことが好ましい。丸ごとのままの乾燥では時間がかかりすぎる一方、水分除去をしておかないと、微粉砕ができないからである。
【００２６】
乾燥は、５０〜７０℃程度で行うことが好ましい。５０℃未満では乾燥に時間がかかりすぎ、７０℃を超えると、有効成分の変性、分解されるおそれがあるからである。
粉砕は、粒径３００〜５００メッシュ程度にまで粉末化することが好ましい。
【００２７】
本発明のヘスペリジン高含有食品は、上記本発明の方法により得られる。
上記特定のサイズの温州ミカン（未熟ミカン）を原料として用いることにより、濃縮操作等をしなくても、ヘスペリジンを１．５％以上、好ましくは１．７％以上含む粉末食品を得ることができる。
また、本発明の食品は、ヘスペリジンに限らず、ポリフェノール類、抗炎症性成分、神経保護成分、脱顆粒反応抑制成分といった他の有効成分で、その含有割合がミカンサイズに依存する物質も高含有率で含まれている。
【００２８】
本発明のヘスペリジン高含有食品は、粉末化したものをそのまま利用してもよいし、加圧成形して錠剤や粒形としてもよいし、デンプンや寒天、ゼラチン、アルギン酸等の食用担体と混合して、ヘスペリジン含有ゼリーやグミとしてもよい。形状は特に限定せず、要求される最終食品の状態、用途に応じて適宜選択される。例えば、健康食品としてそのまま食する場合には、錠剤や顆粒、ゼリーやグミに混合して食しやすいものとすることが好ましい。また、食品添加剤として使用する場合には、粉末状として提供することが好ましい。本発明の粉末状食品添加剤を種々の食品に添加することにより、ビタミンＰ類強化食品を提供することができる。
【実施例】
【００２９】
〔原料温州ミカン粉末からの測定用ミカン抽出液の調製〕
以下に説明する有効成分量の測定にあたり、原料ミカン粉末から、測定用ミカン抽出液を調製した。
【００３０】
原料ミカンを丸ごとフードプロセッサーですりつぶす。すりつぶしたミカンを１ｇ秤量し、メタノール５ｍｌ加えて懸濁する。室温で６０時間振とうした後、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を別チューブに取った。
一方、上清を採取した残査を、室温で１時間振とうし、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、上清採取する操作を４回繰り返して、残査からの再抽出を行った。４回目に再抽出した後の残査については、１晩放置した後、振とう、遠心分離により上清を採取して、５回目の再抽出を行った。
このようにして測定用のミカンのメタノール抽出液を調製した。
【００３１】
〔原料温州ミカンのサイズとヘスぺリジン含有率の関係〕
原料温州ミカンとして、表１に示すサイズ及び重量を有するミカンを用いて、上記方法により各グループのミカンについて、測定用メタノール抽出液を得た。
【００３２】
尚、測定に用いた温州ミカンは、和歌山県有田郡金屋町の６月中旬〜８月末までに採取したもの（極早生、早生、中生、晩生）５０個を、２０〜２５ｍｍ（グループ１）、２５〜２８ｍｍ（グループ２）、２８〜３０ｍｍ（グループ３）、３０〜３３ｍｍ（グループ４）、３３〜３６ｍｍ（グループ５）、３６〜４０ｍｍ（グループ６）、４０〜４５ｍｍ（グループ７）に分類したものである。各グループに、６〜８個づつ分類された。
【００３３】
各グループＮｏ．１〜７のミカンメタノール抽出液を、ジメチルホルムアミドで１０倍希釈したもの１０μｌをＨＰＬＣ測定に供した。関東化学社製のマイティシルＲＰ１８ＧＰカラム（径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）を用いて、０．１％酢酸（溶媒Ａ）とアセトニトリルに酢酸１ｍｌを加えて０．１％酢酸とした溶媒Ｂを用いて、３５分間で溶媒Ａ１００％(溶媒Ｂ０％）から溶媒Ｂが１００％となるような勾配（最初の５分間で１７％、次の２０分間で２５％、次の５分間で５０％、次の５分で１００％）で溶出した。流速１ｍｌ／分とした。溶出液を、日本分光の紫外分光光度計検出器を用いて、２８０ｎｍで検出定量した。結果を表１に示す。また、ミカン重量（平均値）とヘスペリジン収量の関係を図１に、原料ミカンサイズ(各グループ直径)とへスぺリジン濃度との関係を図２に示す。尚、ヘスペリジン濃度は、下記式に基づいて算出した。
ヘスペリジン濃度（％）＝ヘスペリジン含有量／ミカン平均重量×１００
【００３４】
【表１】
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【００３５】
図１に示すように、原料ミカンが大きくなるほど、ヘスペリジン含有量は多くなる。しかしながら、表１及び図２からわかるように、原料ミカンのサイズが大きくなるにつれて、原料中のヘスペリジン濃度が低くなっていく。そして、ほぼ直径３８ｍｍを超えると、ミカンサイズが大きくなっても、ヘスペリジン収量はあまり増加しない。換言すると、ヘスペリジン含有率は低くなっていく。しかも、ミカンが大きくなるにつれて、水分率が高くなるため、乾燥に時間がかかりすぎる。従って、３８ｍｍ超の原料ミカンを丸ごと利用して、ヘスぺリジン高含有食品を簡易に得ることは困難である。
【００３６】
〔原料温州ミカンのサイズと抗炎症性の関係〕
マウスマクロファージ様細胞ＲＡＷ２６４．７を用いて、各サイズの原料温州ミカンの抗炎症性を調べた。マウスマクロファージ様細胞ＲＡＷ２６４．７を、９６穴プレートを用いて、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地で、炭酸ガスインキュベータ内（３７℃、５％二酸化炭素）で培養した。９０％コンフルエントの状態になったら培地を除去し、表２に示す添加成分０．２ｍｌを加えて、３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、大腸菌由来のリポ多糖（シグマ社Ｌ−３１２９）２．５μｇ／ｍｌを含む培地を０．０５ｍｌ加え、さらに３７℃でインキュベートした。７時間後に培養液０．１ｍｌを取り出して、別の９６穴プレートに移し、０．１ｍｌのグリース試薬（使用直前に、０．１％ナフチルエチレンジアミンと１％スルファニルアミド、４．２５％リン酸を混合したもの）を加え、バイオラッドの９６穴プレートリーダを用いて、５４０ｎｍの吸光度を測定した。
【００３７】
【表２】
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【００３８】
５４０ｎｍの吸光度は、産生した亜硝酸の量に比例し、産生亜硝酸量が少ない程（吸光度が小さい程）、炎症反応が抑制されていることを示す。結果を図３に示す。
サンプルＮｏ．１，２は、それぞれポジティブコントロール、ネガティブコントロールに該当し、Ｎｏ．４，５が本発明で原料に使用する未熟ミカン抽出液添加の場合、Ｎｏ．３が本発明の範囲外の未熟ミカン抽出液添加の場合、Ｎｏ．６〜８が市販のヘスペリジン（フナコシ社製）のみを添加した場合に該当する。
【００３９】
図３から、サンプルＮｏ．３では、同等以下のヘスペリジンを含有するサンプルＮｏ．６，７と比べて炎症反応が高かった。一方、サンプルＮｏ．４，５では、これらよりもヘスペリジン含有量が高いＮｏ．７，８よりも炎症反応が抑制されていた。本発明の直径３８ｍｍ以下の原料ミカン粉末には、有効成分として、ヘスペリジンの他に、抗炎症反応成分または炎症反応阻害成分が有意の量で含まれていることがわかる。
【００４０】
〔温州みかんの神経保護作用〕
７日齢ラットより調製した小脳顆粒細胞で、３７℃で１３日間培養したものを用いた。この小脳顆粒細胞を、ＭＥＭ培地０．４ｍｌに、表３に示す添加成分を２μｌ添加した培地で、３７℃で１時間培養した。培養液除去後、カリウム濃度を５ｍＭに低減したＭＥＭ培地に表３に示す成分を１／２００量だけ加えた培地０．４ｍｌと交換して、３７℃で２４時間培養し、細胞死を誘導した。コントロールとして、カリウム濃度２６ｍＭ及び１／２００量のジメチルスルホキシド（ナカライ社）を加えた培地で培養した。なお、ＭＥＭ培地としては、インビトロジェン社から販売されているものを用いた。ノビレチンはミカンに含有されている成分の１種で、本実験では、和光純薬の市販品を用いた。尚、表３中のミカンサイズは、直径を示す。
【００４１】
【表３】
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【００４２】
培養後、ＭＴＴアッセイ法で細胞数を定量した。すなわち、ＰＢＳに溶解したＭＴＴ（３ー（４，５−ジメチル−２−チアゾリ）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド）のイソプロパノール溶液５ｍｇ／ｍｌ：Ｄｏｊｉｎｄｏ社製）を培養液の１／１０量を添加混合した後、３７℃で３時間インキュベートした。培養液と等量の反応停止液（イソプロパノールで溶解した０．０４ＮのＨＣｌ）を添加することにより反応を停止させ、吸光度（５７０ｎｍ）を測定することにより生成ホルマザン量、すなわち生細胞数をしらべた。結果を図４に示す。
【００４３】
図４より、カリウム濃度が低い場合には細胞死が誘導され（サンプルＮｏ．１２）、ヘスペリジン（Ｎｏ．１３）、ノビレチン（Ｎｏ．１４）を含有していても細胞死を回避することはできなかったことがわかる。一方、未熟ミカン丸ごとの抽出液を含有する場合には（サンプルＮｏ．１５〜１７）、細胞死が抑制され、その抑制効果はミカンサイズが小さい程、高いことがわかる。
【００４４】
〔ミカンの直径とポリフェノール含量の関係〕
サイズが異なるミカンのメタノール抽出液を上記方法にて調製し、これをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、希釈して、ミカン抽出液５０μｇ／ｍｌのＤＭＦ溶液を調製した。
この溶液を、Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ  ＲＰ１８ＧＰ２５０−２カラムを用いて、ＨＰＬＣで分析した。溶出液には、溶媒Ａ（０．１％酢酸）と溶媒Ｂ（アセトニトリルに酢酸を添加した溶液（酢酸０．１％））の混合液を用いて、グラディエント溶出を行なった。
【００４５】
溶出液における溶媒Ｂの含有率０％の溶出液で平衡化してあるカラムに、サンプル１０μｌをインジェクションし、０〜５分間で溶媒Ｂの混合割合を１０％まで高め、次いで４０分までで溶媒Ｂの混合割合を２０％にまで高め、その後、７５分までで溶媒Ｂの混合割合を１００％にまで高めた。溶媒を、流速０．２ｍｌ ／ｍｉｎで、溶出した。
【００４６】
多波長検出器を用いて、各成分の溶出時間、吸収スペクトルを測定し、市販の各ポリフェノール標準物質と比較して同定した。ルチン、ナリルチン、ノビレチンについて、直径４５ｍｍのピーク面積を１００％としたときの他のグループの面積率（％）を算出した。
【００４７】
ルチン、ナリルチン、ノビレチンのいずれもミカンサイズが大きくなるにしたがって含有量は減少し、特にルチンについては、直径３８ｍｍ超で、急激に減少したことがわかる。
【００４８】
〔ミカン抽出液の脱顆粒反応抑制効果〕
上記方法で調製したミカンのメタノール抽出液の脱顆粒反応抑制効果について、ミカンサイズとの関係を調べるために、ラット好塩基性白血病細胞（ＲＢＬ細胞）を用いて、下記方法にしたがってβ−ヘキソサミニダーゼを指標とする脱顆粒反応を測定した。
【００４９】
ラット好塩基性白血病細胞を培地（ＲＰＭＩ培地−１６４０に１０％ウシ胎児血清添加）中に、１×１０６細胞／ｍｌの割合で懸濁した。細胞刺激として、１／２０００量のＳｉｇｍａ社製２，４−ジニトロフェノール特異的モノクローナル免疫グロブリンＥ（終濃度０．６μｇ／ｍｌ）を加え、２４穴培養プレートに、０．５ｍｌ／穴ずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で、一晩培養した。血球細胞はさまざまな刺激に応じて活性化され、脱顆粒反応により酵素を細胞外に放出する。β−ヘキソサミニダーゼは、放出される酵素の一つで、糖分解酵素である。
【００５０】
次いで、表４に示すミカンの抽出液を１／１００量含有する培地Ｎｏ．１〜４と培地交換し、３７℃、５％ＣＯ２下で、３０分間培養した。尚、培地Ｎｏ．１は、ミカン抽出液を含まないコントロールである。
【００５１】
【表４】
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【００５２】
培地を取り除いた後、ＰＩＰＥＳ生理食塩水（２５ｍＭ  ＰＩＰＥＳ−ＮａＯＨ、１５９ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＫＣｌ、０．４ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、５．６ｍＭグルコース、０．１％ウシ血清アルブミン、ｐＨ７．２）０．５ｍｌで、２回洗浄した後、ＰＩＰＥＳ生理食塩水を０．５ｍｌ／穴を加えた。
【００５３】
２，４−ジニトロフェノール結合ウシ血清アルブミン（１００μｇ／ｍｌ）を１０μｌ／穴を加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。上清５０μｌを採取し、これに酵素基質液（５ｍＭ  ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド、０．２Ｍクエン酸−ＮａＯＨ、ｐＨ４．５）５０μｌを加えて、３７℃で酵素反応させた。１時間後、反応停止液として、１Ｍ炭酸バッファー（ｐＨ９．５）１００μｌを加え、酵素反応により生成したｐ−ニトロフェノールの発色（４０５ｎｍ）を比色法により測定することにより、β−へキソサミニダーゼ活性を測定した。
【００５４】
コントロール（培地Ｎｏ．１）でのβヘキソサミニダーゼ活性を１００％とし、各サイズのミカン抽出液を含有する培地の活性を調べた。結果を図６に示す。脱顆粒反応が少ないと、放出されるβ−ヘキソサミニダーゼ量が少なくなるので、４０５ｎｍの吸光度が低くなり、グラフ縦軸の％値は低くなる。
【００５５】
図６から、ミカン直径４３ｍｍでは４３％に抑制され、直径２９ｍｍでは２７％に抑制され、２３ｍｍでは１７％に抑制された。従って、ミカンサイズが小さい程、顆粒反応抑制効果が大きいことがわかる。
【００５６】
〔未熟温州ミカンの直径と含水率及び粘度の関係〕
未熟温州ミカンの直径をノギスを用いて測定し、平均±１ｍｍ未満で、表５に示すような直径を有するグループＮｏ．１１〜２０に分類した。各グループには、４個以上のミカンが分類されている。
【００５７】
【表５】
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【００５８】
各グループのミカンをフードプロセッサーを用いて、均一な状態になるまで破砕し、得られたミカン破砕物を、重量既知の空の容積１５ｍｌのポリエチレンチューブに１ｇいれた。
遠心減圧濃縮機Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ  ＣＣ−１０１（株式会社トミー精工製）を用いて完全に減圧乾燥し、乾燥後の重量を測定し、下記式に基づいて、含水率を求めた。ミカン直径と含水率の関係を、図７に示す。
含水率（％）＝（乾燥前重量−乾燥後重量）÷乾燥前重量×１００
【００５９】
また、上記で得られた各グループのミカン破砕物を１５ｇづつ、１５ｍｌのポリエチレンチューブにいれ、スピンドルタイプ粘度計（ＶＩＳＣＯＭＥＴＥＲ  ＴＶ−２０東機産業株式会社）を用いて、スピンドルＮｏ．Ｈ７、回転数１ｒｐｍの条件で粘度を測定した。測定結果（粘度）と直径の関係を図８に示す。
【００６０】
図７及び図８からわかるように、グループ１５とグループ１６の間、換言すると、直径３８ｍｍを越えると、含水率が急激に上がるとともに、粘度が急激に下がっていた。このことから、ミカン全体を原料としてヘスペリジン及び他の有効成分の高含有率食品を得るためには、直径３８ｍｍ以下の未熟ミカンを原料として使用することが必要であり、さらに生産上効率がよいことがわかる。すなわち、直径３８ｍｍ以下のミカンでは含水率が低く粘度が高いので、短時間、低エネルギーで破砕、乾燥でき、作業効率が高まる。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明のヘスペリジン高含有の加工食品は、原料となるミカンの採集時期をサイズを指標として好適な採取時期を決めることができるので、天候による品質のバラツキを少なくすることができる。
【００６２】
また、収穫果実数を調節するために行なう一般的摘果前に積極的に回収したものを、丸ごと利用するので、ミカンの有効利用としても優れている。特に、原料サイズが特定範囲の幼果を使用することにより、ヘスペリジンをはじめとする有効成分が高含有で且つ含水率が低いミカンを原料とすることになるので、温風乾燥程度で、ヘスペリジンをはじめとする有効成分の高含有食品粉末を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】原料ミカンの重量とヘスペリジン含有量との関係を表すグラフである。
【図２】原料ミカンのサイズとヘスペリジン濃度との関係を表すグラフである。
【図３】炎症反応試験の結果を示すグラフである。
【図４】神経細胞死抑制効果の実験結果を示すグラフである。
【図５】原料ミカンのサイズとポリフェノール含量の関係を示すグラフである。
【図６】原料ミカンのサイズとβ−ヘキソサミニダーゼ活性の関係を示すグラフである。
【図７】原料ミカンのサイズと含水率の関係を示すグラフである。
【図８】原料ミカンのサイズと粘度の関係を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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