(57)【要約】【課題】  人間を含む哺乳動物における真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の状態を治療するためにＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を使用する方法。当該状態として、乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、真菌性ポリープ等の皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕性疱瘡および蕁麻疹が含まれる。【解決手段】  真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により特徴付けられる、ヒトの皮膚症状を含む哺乳動物の皮膚症状の予防または治療のための医薬の製造方法であって、該方法は、該医薬に抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体の抗原結合部分を含むことを特徴とする、方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により特徴付けられる、ヒトの皮膚症状を含む哺乳動物の皮膚症状の予防または治療のための医薬の製造方法であって、該方法は、該医薬に抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体の抗原結合部分を含ませることを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体の抗原結合部分は、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ組換え抗体およびヒト化組換え抗体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体の抗原結合部分は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマー、Ｈ鎖ダイマー、Ｌ鎖モノマー、Ｌ鎖ダイマー、ならびに１個のＨ鎖および１個のＬ鎖からなるダイマーからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記皮膚症状が乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫アレルギー性および皮膚Ｔ細胞リンパ腫刺激性接触皮膚炎、扁平苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕性疱瘡ならびにび蕁麻疹からなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記症状が乾癬であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記医薬がヒトの皮膚症状の予防に適した医薬であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記医薬が前記抗体または抗体の抗原結合部分を体重１ｋｇ当たり０．００１および５０ｍｇの間の投薬量で投与するための医薬であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記医薬が前記抗体または抗体の抗原結合部分を体重１ｋｇ当たり０．０１および１０ｍｇの間の投薬量で投与するように処方されることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記医薬が前記抗体または抗体の抗原結合部分を体重１ｋｇ当たり０．１および４ｍｇの間の投薬量で投与するように処方されることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記医薬が前記抗体または抗体の抗原結合部分を１週間に１回〜３回投与するように処方されることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記医薬が前記抗体または抗体の抗原結合部分を１日に１回〜３回投与するように処方されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記医薬が前記抗体または抗体の抗原結合部分を３日および７日の間で毎日１回〜３回投与するように処方されることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記医薬が前記抗体または抗体の抗原結合部分を毎月３日および７日の間で毎日１回〜３回投与するための医薬であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記医薬が注入によって静脈内、筋肉内、皮下、関節内、髄膜内、骨膜、腫瘍部内、障害部内、障害部周辺、経口、局所的または吸収投与用として処方されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記医薬が筋肉内、静脈内または皮下投与用として処方されることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記症状がＵＶ障害であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体の抗原結合部分を含むことを特徴とする、真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原呈示により特徴付けられる、哺乳動物の皮膚症状の予防または治療のための医薬。
【請求項１８】
前記抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体の抗原結合部分は、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ組換え抗体およびヒト化組換え抗体からなる群より選択される、請求項１７に記載の医薬。
【請求項１９】
前記抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体の抗原結合部分は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマー、Ｈ鎖ダイマー、Ｌ鎖モノマー、Ｌ鎖ダイマー、ならびに１個のＨ鎖および１個のＬ鎖からなるダイマーからなる群より選択される、請求項１７に記載の医薬。
【請求項２０】
前記皮膚症状が乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫アレルギー性および皮膚Ｔ細胞リンパ腫刺激性接触皮膚炎、扁平苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕性疱瘡および蕁麻疹からなる群から選択されることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれかに記載の医薬。
【請求項２１】
前記皮膚症状が乾癬であることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれかに記載の医薬。
【請求項２２】
前記皮膚症状がＵＶ障害であることを特徴とする請求項１７〜１９のいずれかに記載の医薬。
【請求項２３】
前記哺乳動物がヒトであることを特徴とする請求項１７に記載の医薬。
【請求項２４】
前記医薬がメトトレキサートと組み合わせて使用することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項２５】
前記医薬がシクロスポリンＡと組み合わせて使用することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項２６】
前記医薬がＵＶ照射と組み合わせて使用することを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項２７】
前記医薬がメトトレキサートと組み合わせて使用することを特徴とする請求項２０に記載の医薬。
【請求項２８】
前記医薬がシクロスポリンＡと組み合わせて使用することを特徴とする請求項２０に記載の医薬。
【請求項２９】
前記医薬がＵＶ照射と組み合わせて使用することを特徴とする請求項２０に記載の医薬。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は人間を含む哺乳動物における真皮および表皮内のＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の状態の治療においてＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を用いる方法に関する。なお、このような状態として、乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡および蕁麻疹などが挙げられる。
【背景技術】
【０００２】
真皮および表皮内のＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の障害が数多くある。このような炎症プロセスの進展に関係する病態生理学的機構はまだよく理解されていない。しかしながら、皮膚の炎症性の応答の発生において皮膚細胞が重要な関わりをもっていることが明らかになってきている（Ｋｕｐｐｅｒ、「皮膚組織における免疫および炎症プロセス」（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８６，ｐｐ．１７８３−８９（１９９０）））。
【０００３】
正常な成人の表皮には１−２％のランゲルハンス細胞と９８％のケラチン細胞が含まれている。このケラチン細胞とその他の非造血的に派生する細胞が皮膚内に存在すると、免疫性血流停止や種々の細胞分裂を引き起こしてＴ細胞の移動や付着分子の発現に影響を及ぼす。
【０００４】
抗原提示細胞として、ランゲルハンス細胞は当該細胞表面上において高濃度のクラスＩＩ（Ｃｌａｓｓ  ＩＩ）主要組織適合複合体（ＭＨＣ）を発現する。該ＭＨＣクラスＩＩ分子はエンドサイトーシスされた抗原から派生するペプチドを結合し、主にヘルパーＴリンパ球により認識される。Ｔ細胞上のＴ細胞受容体は抗原を当該ＭＨＣによりコードされた細胞表面分子に結合したペプチドフラグメントとして認識する（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、「免疫システムの付着受容体」（Ｎａｔｕｒｅ，３４６，ｐｐ．４２５−２７（１９９０）））。
【０００５】
このようなＴ細胞受容体／ＭＨＣ相互作用に加えて、ランゲルハンス細胞やＴ細胞の表面上で発現される分子間の相互作用が数多くある。これらの表面分子はしばしば付着分子と呼ばれ、細胞付着、抗原認識、Ｔ細胞活性化における相互刺激的伝達およびＴ細胞細胞毒性のエフェクタの刺激を含む多くの機能に関係する（「特性における付着分子および炎症性の病気の治療」（Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，３３６，ｐｐ．１３５１−５２（１９９０）））。また、このような細胞付着は免疫応答の発生におけるＴ細胞増殖の活性化に関与すると思われる（Ｈｕｇｈｅｓ他、「Ｔ細胞機能のレギュレータとしての内皮細胞」（Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１１７，ｐｐ．８５−１０２（１９９０）））。
【０００６】
また、真皮および表皮におけるＴ細胞活性および異常な抗原の提示によって種々の皮膚の病状が特徴付けられている（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ  Ｖｏｌｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９，ｐｐ．６９−８０，ａｔ  ｐｐ．７３，７４，７６（１９９０）））。例えば、接触アレルギー性皮膚炎においては、皮膚内Ｔ細胞の活性化が観られる。また、アトピー性皮膚炎の患者から得た皮膚には増加したランゲルハンス細胞が含まれていることが知られている（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ  Ｖｏｌｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９，ａｔ  ｐ．７４（１９９０）））。さらに、乾癬症の皮膚には、ランゲルハンス細胞と非ランゲルハンス細胞のクラスＩＩＭＨＣ担持抗原提示細胞の両方から成る抗原提示細胞の増加が観られる（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ  Ｖｏｌｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９，ｐｐ．６９−８０，ａｔ  ｐ．７５（１９９０）））。
【０００７】
紫外線暴露した皮膚はランゲルハンス細胞の全体的な減少と非ランゲルハンス細胞の抗体提示細胞集団の表皮内への移動によって特徴付けられ、自己のＴ細胞を活性化して増殖する（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ  Ｖｏｌｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９，ａｔ  ｐｐ．７５−７６（１９９０）））。例えば、人間の皮膚において、ＵＶ  Ｂの最小の紅斑線量を４回照射後に、ランゲルハンス細胞（構成抗原提示細胞集団）が約３日間不活性になる（Ｃｏｏｐｅｒ他、「人間の表皮細胞アロ抗原提示についての紫外線放射の影響：ランゲルハンス細胞依存型機能の初期的低下の後、表皮アロ抗原提示を高めるＴ６−ＤＲ＋細胞が現れる」（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３４，ｐｐ．１２９−３７（１９８５）））。この種のＵＶによる損傷を受けた皮膚においては、ＣＤ１ａＤＲ＋マクロファージ集団（抗原提示細胞の集団）が全体の表皮細胞集団の０％（正常な皮膚）から約２−１０％に増加して、Ｔ細胞の増殖を誘発してアロ抗体にするべく作用する（Ｃｏｏｐｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（同上）、Ｂａａｄｓｇａａｒｄ他、「インビボで紫外線暴露した人間の表皮細胞はＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋サプレッサー−インデュサーＴ細胞を含むＴサプレッサー細胞経路を活性化する」（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４５，ｐｐ．２８４５−６１（１９９０）））。
【０００８】
また、皮膚のＴ細胞リンパ球は真皮および表皮におけるＴ細胞の悪性クローナル集団の拡張によって特徴付けられる。この場合、障害のある表皮細胞は増加したＣＤ１＋ＤＲ＋抗原提示細胞を含む（Ｃｏｏｐｅｒ、「皮膚における免疫調節」（Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｅｄｓ．ｖａｎ  Ｖｏｌｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９，ａｔ  ｐｐ．７６−７７（１９９０）））。
【０００９】
上述の皮膚の状態に対して、現在知られている治療法は十分ではない。例えば、乾癬、苔蘚、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、ＵＶ障害、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡、円形脱毛症、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎および皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療においては、ステロイドやシクロスポリンＡが一般に使用されている。加えて、これらの皮膚障害のいくつかについては、レチノイド、ＰＵＶＡ、ナイトロジェンマスタード、インターフェロン、化学療法、メトトレキセート、ＵＶ光、抗生物質および抗ヒスタミン薬等による種々の療法がある（参照：Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ、（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３ｒｄ  Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ（１９８７）））。
【００１０】
また、これらの療法についての副作用も知られている。例えば、シクロスポリンＡの場合の最も一般的に見られる欠陥は免疫抑制による毒性および腎臓毒や神経毒が挙げられる。ステロイドもクッシング症候群の誘発を含む副作用が知られている。さらに、上述の他の治療法のいくつかにおける副作用として、皮膚癌、骨髄毒および体質性毒性、靭帯の石灰化、肝臓線維症および他の疾患が挙げられる。
【００１１】
Ｔ細胞は標的細胞や抗原提示細胞と相互作用して免疫応答における主要な役割を担っている。例えば、Ｔ細胞媒介による標的細胞の消滅は、まず、細胞溶解Ｔ細胞（エフェクター細胞）が標的細胞に付着することから始まる、多段階のプロセスから成っている。また、ヘルパーＴ細胞は抗原提示細胞への付着によって当該免疫応答の開始を補助する。
【００１２】
これらのＴ細胞の標的細胞および抗原提示細胞との相互作用は、当該Ｔ細胞の表面上の多くの特異的抗原受容体の一による標的細胞や抗原提示細胞の表面上の抗原の認識に高度に特異的でありかつこれに依存している。
【００１３】
また、該Ｔ細胞の他の細胞との受容体−抗原相互作用も、例えば、抗原−受容体複合体ＣＤ３およびＣＤ４、ＬＦＡ−１、ＣＤ８およびＣＤ２等の補助付着分子を含む種々のＴ細胞表面蛋白質によって容易化される。さらに、当該相互作用は、上記の標的細胞や抗原提示細胞の表面上で発現される、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ−１およびＭＨＣ等の補助付着分子によっても容易化される。例えば、ＬＦＡ−１およびそのカウンター受容体ＩＣＡＭ−１またはＩＣＡＭ−２並びにＣＤ２およびそのカウンター受容体ＬＦＡ−３は細胞付着やＴ細胞活性化において関係があると考えられている。また、ＬＦＡ−１／ＩＣＡＭおよびＣＤ２／ＬＦＡ−３の相互作用は互いに独立していることも知られている。
【００１４】
さらに、Ｔ細胞を休止する際に存在する他の多くの分子もまた当該Ｔ細胞の付着に関与していると考えられている。このような物質としては、Ｅ２（ＭＩＣ２）、ＶＬＡ−４（ＣＤ４９ｄ）、ＣＤ４４（Ｈｅｒｍｅｓ，Ｐｇｐ−１，ＥＣＭＲＩＩＩ）およびＨ１９（Ｎ４）が挙げられる（参照：Ｍａｋｇｏｂａ他、「ＣＤ２−ＬＦＡ−３およびＬＦＡ−１−ＩＣＡＭ経路：Ｔ細胞認識への関連性」（Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１０，ｐｐ．４１７−２２（１９８９）））。
【００１５】
Ｔ細胞を活性化する一方法として、抗原特異性のＴ細胞受容体をマクロファージ等の抗原提示細胞の表面上のペプチドーＭＨＣ複合体に結合する方法がある。Ｔ細胞が活性化すると、２種類の機能的Ｔ細胞、すなわち、抗体生成性Ｂリンパ球の増殖および熟成を促進するヘルパー細胞と、標的細胞を溶解するキラー細胞の増殖と分化が刺激される（Ｂｉｅｒｅｒ他、「ＬＦＡ−３に対するモノクローナル抗体であるＣＤ２リガンドは主要組織適合複合体蛋白質を特異的に固定化する」（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９，ｐｐ．６６１−６５（１９８９））、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、「免疫システムの付着受容体」（Ｎａｔｕｒｅ，３４６，ｐｐ．４２５−３４（１９９０）））。
【００１６】
Ｔ細胞の活性化については、ＣＤ２とＬＦＡ−３の相互作用はまだよく理解されていないが、最近の研究では、Ｔ細胞の標的細胞や抗原提示細胞への付着の媒介において、当該ＣＤ２（Ｔ細胞付着分子）とＬＦＡ−３（標的細胞や抗原提示細胞付着分子）との間には特異的な相互作用があると示唆されている。このような細胞間付着はＴ細胞の機能的応答の開始において考えられていたことである（Ｄｕｓｔｉｎ他、「精製リンパ球機能を伴う抗原３はＣＤ２に結合し、Ｔリンパ球の付着を媒介する」（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６５，ｐｐ．６７７−９２（１９８７））、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ他、「リンパ球機能を伴うＬＦＡ−１、ＣＤ２およびＬＦＡ−３分子：免疫システムの細胞付着受容体」（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，ｐｐ．２２３−５２（１９８７）））。
【００１７】
人間の赤血球を含む広範な細胞の表面上に見い出されるＬＦＡ−３はＴ細胞の種々の相互作用におけるその役割をさらに明らかにするために多大な研究がおこなわれてきた（参照例：Ｋｒｅｎｓｙ他、「ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３の機能的意義、分布および構造：ＣＴＬ標的相互作用を伴う細胞表面抗原」（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３１（２），ｐｐ．６１１−１６（１９８３）、Ｓｈａｗ他、「人間の細胞障害性Ｔ細胞クローンにより用いられる２種の抗原非依存型付着経路」（Ｎａｔｕｒｅ，３２３，ｐｐ．２６２−６４（１９８６）））。これまでに、ＬＦＡ−３の天然の形態が２種類同定されている。その内の一つの形態（「トランスメンブランＬＦＡ−３」）はトランスメンブラン疎水性ドメインにより細胞膜内に連結する。このＬＦＡ−３の形態をコードするｃＤＮＡはクローン化されシーケンス化されている（参照例：Ｗａｌｌｎｅｒ他、「リンパ球機能を伴う抗原−３（ＬＦＡ−３）の主構造」（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６６，ｐｐ．９２３−３２（１９８７）））。また、当該ＬＦＡ−３の他の形態は糖脂質を含むフォスファチジルイノシトール（「ＰＩ」）に対する共有連結を介して細胞膜に結合する。この後者の形態は「ＰＩ連結ＬＦＡ−３」として示され、当該ＬＦＡ−３の形態をコードするｃＤＮＡもまたクローン化されシーケンス化されている（Ｗａｌｌｎｅｒ他、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９０／０２１８１）。
【００１８】
人間のＣＤ２（Ｔ１１）分子は９５％以上のリンパ球および実質的にすべての末梢Ｔリンパ球上に発現される５０ｋＤ表面糖蛋白質である。特異的なモノクローナル抗体を用いる生化学的分析によって、該ＣＤ２がＴリネージ特異性を有しており、数種の異なるクリコシル化形態において該細胞表面上に存在することが示されている（Ｈｏｗａｒｄ他、「Ｅ−ロゼット形成を阻止するモノクローナル抗体により定義された人間のＴリンパ球弁別標識」（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２６，ｐｐ．２１１７−２２（１９８１）、Ｂｒｏｗｎ他、（Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  III，ｅｄ．Ｍｃｍｉｃｈａｅｌ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１１０−１２（１９８７）、Ｓａｙｒｅ他、「Ｔ１１ｃＤＮＡの分子クローニングおよび発現は人間のＴリンパ球上の受容体類似構造を提示する」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）））。
【００１９】
人間のＣＤ２遺伝子の配列は既に報告されている（ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆｏ、「高速免疫選択手法によるＣＤ２抗原、Ｔ細胞赤血球受容体、の分子クローニング」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．３３６５−６９（１９８７）、Ｓａｙｒｅ他、「Ｔ１１ｃＤＮＡの分子クローニングおよび発現は人間のＴリンパ球上の受容体類似構造を提示する」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）））。ＣＤ２ｃＤＮＡのクローンにより、２４個のアミノ酸残基から成る開裂信号ペプチド、１８５個の残基から成る細胞外セグメント、２５個の残基から成るトランスメンブランドメインおよび１１７個の残基から成る細胞質領域が予見されている（Ｓａｙｒｅ他、（同上）、Ｓｅｗｅｌｌ他、「人間のＴ−リンパ球表面ＣＤ２（Ｔ１１）抗原の分子クローニング」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３，ｐｐ．８７１８−２２（１９８６））、ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆｏ、（同上）、Ｃｌａｙｔｏｎ他、（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７，ｐｐ．１３６７−７０（１９８７）））。
【００２０】
また、ＬＦＡ−３結合ドメインを有する可溶性ＣＤ２ポリペプチドが報告されている（ＰＣＴ特許公報ＷＯ９０／０８１８７）。
【００２１】
ＴＳ２／１８、Ｔ１１１、Ｔ１１２、Ｔ１１３等のＣＤ２に対するモノクローナル抗体およびＴＳ２／９等のＬＦＡ−３に対するモノクローナル抗体もまた報告されている（参照例：Ｈｕｇｈｅｓ他、「Ｔ−細胞機能のレギュレータとしての内皮細胞」（Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｉｅｗｓ，１１７，ｐｐ．８５−１０２（１９９０））、Ｍｅｕｅｒ、「Ｔ−細胞活性化の別経路：５０ｋｄＴ１１羊赤血球受容体蛋白質に対する機能的役割」（Ｃｅｌｌ，３６，ｐｐ．８９７−９０６（１９８４）））。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
現在、増加したＴ細胞活性および異常な抗原提示を示す皮膚の状態を防止しかつ治療するための改善された方法が依然として要望されている。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明は上述の問題の大部分を概ね解消する。すなわち、本発明は、哺乳動物における真皮および表皮内の増加したＴ細胞活性および異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の状態を防止または治療するための方法を提供し、この結果、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤が哺乳動物に投与される。而して、本発明の方法は、従前の治療法に比して、免疫抑制を低減し、毒性の少ないより特異的な治療を提供する等の多くの理由により、上記の皮膚障害に対して優れた治療法である。
【００２４】
好ましくは、本発明の方法は乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡および蕁麻疹等の皮膚障害の治療または予防に使用され、とりわけ、乾癬またはＵＶ障害に対して用いられるのが好ましい。
【００２５】
本発明の方法において使用可能な阻害剤としては、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害するいかなる分子でもよい。好ましくは、該阻害剤は抗ＬＦＡ−３抗体の同族体、抗ＣＤ２抗体の同族体、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、ＣＤ２またはＬＦＡ−３擬態物質およびこれらの派生体から成る群から選ばれる。
【００２６】
従って、本発明は以下を提供する。  
（１）  真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原提示により特徴付けられる、ヒトの皮膚症状を含む哺乳動物の皮膚症状の予防または治療のための医薬の製造方法であって、該方法は、該医薬にＣＤ２ポリペプチド、抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体同族体および抗ＬＦＡ−３抗体または抗ＬＦＡ−３抗体同族体からなる群から選択されるＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を包含させる行程を含み、ただし該抗体同族体はモノクローナル抗体、組換抗体、キメラ組換抗体、ヒト化組換抗体およびそれらの抗原結合部位からなる群から選択される、前記方法。  
（２）  前記皮膚症状がアトピー性皮膚炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕性疱瘡および蕁麻疹から成る群から選択されることを特徴とする項１に記載の方法。  
（３）  前記症状が乾癬であることを特徴とする項１に記載の方法。  
（４）  前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族体または抗ＣＤ２抗体同族体であることを特徴とする項１に記載の方法。  
（５）  前記阻害剤がモノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体またはモノクローナル抗ＣＤ２抗体であることを特徴とする項４に記載の方法。  
（６）  前記阻害剤が、受入番号ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９４  （ＨＣ−１Ｂ１１）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９６（８Ｂ８）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブリドーマにより生成されたモノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体、あるいは、モノクローナル抗体ＴＳ２／９であることを特徴とする項５に記載の方法。  
（７）  前記モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体が受入番号ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３（１Ｅ６）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブリドーマにより生成されたことを特徴とする項６に記載の方法。  
（８）  前記阻害剤がキメラ組換え抗ＬＦＡ−３抗体同族体またはキメラ組換え抗ＣＤ２抗体同族体であることを特徴とする項４に記載の方法。  
（９）  前記阻害剤がヒト化組換え抗ＬＦＡ−３抗体同族体またはヒト化組換え抗ＣＤ２抗体同族体であることを特徴とする項４に記載の方法。  
（１０）  前記阻害剤がＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメントおよび抗ＬＦＡ−３抗体同族体または抗ＣＤ２抗体同族体の完全な免疫グロブリンＨ鎖から選択されることを特徴とする項４に記載の方法。  
（１１）  前記阻害剤が可溶性ＣＤ２ポリペプチドであることを特徴とする項１に記載の方法。  
（１２）  前記哺乳動物が人間であることを特徴とする項１に記載の方法。  
（１３）  前記医薬が前記阻害剤を体重１ｋｇ当たり０．００１および５０ｍｇの間の投薬量で投与するための医薬であることを特徴とする項１に記載の方法。  
（１４）  前記医薬が前記阻害剤を体重１ｋｇ当たり０．０１および１０ｍｇの間の投薬量で投与するための医薬であることを特徴とする項１３に記載の方法。  
（１５）  前記医薬が前記阻害剤を体重１ｋｇ当たり０．１および４ｍｇの間の投薬量で投与するための医薬であることを特徴とする項１３に記載の方法。  
（１６）  前記医薬が前記阻害剤を１週間に１回ないし３回投与するための医薬であることを特徴とする項１３に記載の方法。  
（１７）  前記医薬が前記阻害剤を１日に１回ないし３回投与するための医薬であることを特徴とする項１３に記載の方法。  
（１８）  前記医薬が前記阻害剤を３日および７日の間で毎日１回ないし３回投与するための医薬であることを特徴とする項１７に記載の方法。  
（１９）  前記医薬が前記阻害剤を毎月３日および７日の間で毎日１回ないし３回投与するための医薬であることを特徴とする項１８に記載の方法。  
（２０）  前記医薬が静脈内、筋肉内、皮下、関節内、髄膜内、骨膜、腫瘍部内、障害部内、障害部周辺、経口、局所的または吸入投与用として処方されることを特徴とする項１に記載の方法。  
（２１）  前記医薬が筋肉内、静脈内または皮下投与用として処方されることを特徴とする項２０に記載の方法。  
（２２）  前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、細胞障害性物質および薬剤から成る群から独立して選択される１種以上の物質に連結することを特徴とする項１に記載の方法であって、ただし該抗体同族体はモノクローナル抗体、組換抗体、キメラ組換抗体、ヒト化組換抗体およびそれらの抗原結合部位からなる群から選択される、前記方法。  
（２３）  前記症状がＵＶ障害であることを特徴とする項１に記載の方法。  
（２４）  ＣＤ２ポリペプチド、抗ＣＤ２抗体または抗ＣＤ２抗体同族体および抗ＬＦＡ−３抗体または抗ＬＦＡ−３抗体同族体からなる群から選択されるＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を含むことを特徴とする、真皮および表皮におけるＴ細胞活性の増加および異常な抗原呈示により特徴付けられる、ヒトの皮膚症状を含む哺乳動物の皮膚症状の予防または治療のための医薬であって、ただし該抗体同族体はモノクローナル抗体、組換抗体、キメラ組換抗体、ヒト化組換抗体およびそれらの抗原結合部位からなる群から選択される、前記医薬。  
（２５）  前記皮膚症状がアトピー性皮膚炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕性疱瘡および蕁麻疹から成る群から選択されることを特徴とする項２４に記載の医薬。  
（２６）  前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体および可溶性ＣＤ２ポリペプチドから成る群から選択されることを特徴とする項２４に記載の医薬。  
（２７）  前記阻害剤が、受入番号ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９４  （ＨＣ−１Ｂ１１）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９６（８Ｂ８）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブリドーマにより生成されたモノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体、あるいは、モノクローナル抗体ＴＳ２／９であることを特徴とする項２４に記載の医薬。  
（２８）  前記哺乳動物が人間であることを特徴とする項２４に記載の医薬。  
（２９）  前記阻害剤が抗ＬＦＡ−３抗体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、細胞障害性物質および薬剤から成る群から独立して選択される１種以上の物質に連結することを特徴とする項２４に記載の医薬であって、ただし該抗体同族体はモノクローナル抗体、組換抗体、キメラ組換抗体、ヒト化組換抗体およびそれらの抗原結合部位からなる群から選択される、前記医薬。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
「ＣＤ２」とは、天然のＬＦＡ−３ポリペプチドに結合するＣＤ２ポリペプチドを意味し、（ａ）天然の哺乳類のＣＤ２ＤＮＡ配列（例：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）、（ｂ）天然のＣＤ２ＤＮＡ配列に縮重するＤＮＡ配列、または（ｃ）Ｔｍ以下の約２０℃ないし２７℃で１Ｍ塩化ナトリウムに匹敵する条件下で上記ＤＮＡ配列の一に対合するＤＮＡ配列によりコードされるものである。
【００２８】
「ＬＦＡ−３」とは、天然のＣＤ２ポリペプチドに結合するＬＦＡ−３ポリペプチドを意味し、（ａ）天然の哺乳類のＬＦＡ−３ＤＮＡ配列（例：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）、（ｂ）天然のＬＦＡ−３ＤＮＡ配列に縮重するＤＮＡ配列、または（ｃ）Ｔｍ以下の約２０℃ないし２７℃で１Ｍ塩化ナトリウムに匹敵する条件下で上記ＤＮＡ配列の一に対合するＤＮＡ配列によりコードされるものである。
【００２９】
「可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド」または「可溶性ＣＤ２ポリペプチド」とは、細胞膜内にそれ自体で連結不可能なＬＦＡ−３またはＣＤ２ポリペプチドである。このような可溶性ポリペプチドとしては、当該ポリペプチドを連結するための膜連結ドメインの領域を十分に有していないか、あるいは、当該膜連結ドメインが非機能的となるように改質されているＣＤ２およびＬＦＡ−３ポリペプチドが挙げられる。さらに、ここで言う可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドには完全長または部分切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）した（例：内部欠失）ＰＩ連結ＬＦＡ−３等が含まれる。
【００３０】
「抗体同族体」とは、１種以上の抗原に結合可能な免疫グロブリンＬ鎖、免疫グロブリンＨ鎖およびこれらの抗原結合性フラグメントから選択される１種以上のポリペプチドから成る蛋白質である。なお、２種以上のポリペプチドから成る抗体同族体の構成ポリペプチドは必要に応じてジスルフィド結合していてもよく、また、共有的に架橋していてもよい。而して、当該抗体同族体にはＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（およびこれらのサブタイプ）の完全な免疫グロブリンが含まれ、当該免疫グロブリンのＬ鎖はκまたはλタイプでよい。さらに、該抗体同族体には、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマーまたはダイマー、Ｌ鎖モノマーまたはダイマー、１種のＨ鎖および１種のＬ鎖から成るダイマー等の抗原結合特異性を保有する完全な免疫グロブリンの部分も含まれる。
【００３１】
「人間化した組換え抗体同族体」とは、組換えＤＮＡ技法により生成された抗体同族体であり、抗原結合に要さない人間の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖のアミノ酸の全部または一部が対応する人間以外の哺乳動物の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖のアミノ酸に置き換えられている。
【００３２】
「キメラ組換え抗体同族体」とは、組換えＤＮＡ技法により生成された抗体同族体であり、免疫グロブリンＬ鎖、Ｈ鎖またはその両方のヒンジ領域および不変領域の全部または一部が別の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖の対応する領域に置き換えられている。
【００３３】
皮膚の状態
本発明の方法は、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤を投与することによって、真皮および表皮において増加したＴ細胞活性と異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚の状態を人間を含む哺乳類動物を対象に防止または治療するのに有用である。このような病状としては、乾癬、ＵＶ障害、アトピー性皮膚炎、真菌症ポリープ等の皮膚Ｔ細胞リンパ腫、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、苔蘚、円形脱毛症、膿皮性壊疽、白斑、眼球瘢痕状疱瘡および蕁麻疹等が含まれる。なお、膿皮性壊疽および蕁麻疹等の皮膚障害の治療および予防が本発明の範囲に含まれることは明らかに理解されると考える。すなわち、これら後者の皮膚障害はシクロスポリンＡ感応性の皮膚病であるため、Ｔ細胞の活性化に関与するものである。ただし、本発明の方法は乾癬およびＵＶ障害の予防または治療に使用されるのがより好ましい。また、本発明の方法はいかなる哺乳動物体にも実施可能であるが、人間を対象に使用するのがより好ましい。
【００３４】
本発明者は、理論的に限定するものではないが、本発明の方法にしたがって使用するＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤がＴ細胞と抗原提示細胞との間の相互作用を阻害し、とりわけ、当該Ｔ細胞の増殖および活性化を阻害するので、上記皮膚障害の予防および治療に有効であると考えている。また、本発明者はこの種の病気の逆の作用がこのようなＴ細胞の増殖や活性化によるものと考えている。さらに、本発明者は本発明の方法が、すべての抗原提示に対する抗原特異性相互作用の阻害、Ｔ細胞を減少させることなく当該細胞の活性化を阻害すること、一般的な免疫抑制作用がなんら関与しないこと、さらに、寛容性の誘因の可能性等を含む多くの理由により、これらの病気に対して従前実施されていた治療法に比して優れていると考える。
【００３５】
特に、本発明者は本発明の方法の使用が多形核白血球またはマクロファージ媒介のエフェクター機構上になんら影響を及ぼすことなく当該病変の初期段階において実際にＴ細胞に対してより特異的に作用すると考える。したがって、患者に対する影響をステロイドあるいはその他の一般的な免疫抑制剤を使用する場合に比べてより低減することができる。それゆえ、本発明により提供されるＴ細胞活性化を阻害する方法は上記の皮膚障害に対して有効な予防法かつ治療法である。
【００３６】
ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤
ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤は本発明の方法において有用である。このような阻害剤としては、抗ＬＦＡ−３抗体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、ＬＦＡ−３およびＣＤ２擬態物質およびこれらの派生体が挙げられる。これらの阻害剤の中で、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドおよび抗ＬＦＡ−３抗体同族体がより好ましい。
【００３７】
さらに、当該特定の可溶性ＣＤ２ポリペプチド、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、抗ＬＦＡ−３抗体同族体、抗ＣＤ２抗体同族体、または、ＬＦＡ−３およびＣＤ２擬態物質等の本発明の方法における有用性はこれらのＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害能力をアッセイすることにより容易に決定することができる。例えば、該能力のアッセイは、当該阻害剤におけるＬＦＡ−３およびＣＤ２を担持する細胞上でのこれら物質間の相互作用を阻害する能力の目視評価（拡大処理下）を可能にする単純な細胞結合アッセイを用いて行うことができる。この場合、ジュルカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞がＣＤ２＋基質として好ましく、羊の赤血球細胞または人間のＪＹ細胞がＬＦＡ−３＋基質として好ましい。また、本発明において有用なこれらの可溶性ポリペプチド、抗体同族体および擬態物質の結合特性は、該抗体同族体、ポリペプチドまたは物質を放射性ラベリング（例：３５Ｓまたは１２５Ｉ）した後、これらラベル処理したポリペプチド、擬態物質または抗体同族体を適当にＣＤ２＋またはＬＦＡ−３＋細胞と接触させる等の幾つかの既知の方法によりアッセイすることができる。また、該結合特性は適当な酵素的にラベル化した二次抗体を用いてもアッセイすることができる。また、Ｓｅｅｄ他（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．３３６５−６９（１９８７））において記載されるようなロゼット形成競合アッセイも使用することができる。
【００３８】
Ａ．抗ＬＦＡ−３および抗ＣＤ２抗体同族体
多くの種類の抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体同族体が本発明の方法において有用である。これらには、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ組換え抗体、人間化組換え抗体並びにこれらの抗体結合性部位が含まれる。
【００３９】
これらの抗ＬＦＡ−３抗体同族体の中では、モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体を用いることが好ましい。さらに、受入番号ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９４（ＨＣ−１Ｂ１１）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９６（８Ｂ８）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブリドーマにより生成されるモノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体、あるいは、ＴＳ２／９として知られるモノクローナル抗体を用いるのがより好ましい（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔ−リンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種類の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１９８２）））。さらに、該モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体が上記受入番号ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３（１Ｅ６）を有するハイブリドーマの群から選択されたハイブリドーマにより生成されることが最も好ましい。
【００４０】
また、上述の抗ＣＤ２抗体同族体の中では、ＴＳ２／１８を含むＴ１１１エピトープ抗体として知られる抗ＣＤ２モノクローナル抗体等のモノクローナル抗ＣＤ２抗体を用いることが好ましい。（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔ−リンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種類の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１９８２）））  これらのモノクローナル抗体を生成する技法は周知である。簡単にいえば、特定の不死細胞系（骨髄腫細胞が典型的）を任意の抗原から成る標品（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）により免疫化した哺乳類から得たリンパ球（脾臓細胞が典型的）に融合し、次いで、生じたハイブリドーマ細胞の培養上澄み液を当該抗原に対する抗体についてスクリーニングする（参照：Ｋｏｈｌｅｒ他、「所定の特異性を有する抗体を分泌する融合細胞の連続的培養」（Ｎａｔｕｒｅ，２５６，ｐｐ．４９５−９７（１９７５）））。なお、本発明の目的において有用な免疫原としては、ＣＤ２またはＬＦＡ−３担持細胞並びにＬＦＡ−３、ＣＤ２またはこれらのカウンター受容体結合性フラグメント（例：ＬＦＡ−３に結合するＣＤ２フラグメントまたはＣＤ２に結合するＬＦＡ−３フラグメント）を含む無細胞標品などが挙げられる。
【００４１】
また、上記の免疫化は標準的な手法を用いることにより行える。なお、当該免疫化の様式およびその単位投与量は対象となる哺乳動物の種、免疫状態、体重等に依存する。一般に、免疫化された哺乳動物は採血されて、適当なスクリーニングアッセイにより、特定の抗体について各血液サンプルから血清がアッセイされる。例えば、有用な抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体がジュルカット細胞の羊赤血球細胞ロゼット形成を阻止する免疫血清の能力を調べることにより同定でき、このことはこれらの細胞のそれぞれの表面上にＬＦＡ−３およびＣＤ２が存在することに起因する。而して、上記のハイブリドーマ細胞の生成に用いるリンパ球は、一般に、当該スクリーニングアッセイにより所望の抗体の存在が既に確認済みの血清を有する免疫化した哺乳動物から単離される。
【００４２】
一般に、不死細胞系列（例：骨髄腫細胞系列）はリンパ球と同一の哺乳類種から派生する。この場合、好ましい不死細胞系列は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む培養地（「ＨＡＴ培地」）に対して感応性を示すマウスの骨髄腫細胞である。
【００４３】
該ＨＡＴ感応性マウス骨髄腫細胞は一般にポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）３３５０を用いてマウスの脾臓細胞に融合する。その後、当該融合により生じたハイブリドーマ細胞はＨＡＴ培地を用いて選択され、未融合および未生成の融合骨髄腫細胞が消滅除去される（未融合の脾臓細胞は形質転換しないために数日後に死滅する）。その後、所望の抗体を生成するハイブリドーマが、当該ハイブリドーマの培養上澄み液における、例えば、カウンタ受容体への結合性やジュルカット細胞の羊赤血球細胞への付着能力についてスクリーニングすることにより検出される。さらに、限界希釈によるハイブリドーマ培養のサブクローニングがモノクローナル性を確保するために一般に行われる。
【００４４】
さらに、抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２モノクローナル抗体を生成するために、上記スクリーニングにおいて陽性と判定されたハイブリドーマが、当該ハイブリドーマ細胞が所定の栄養培養液中にモノクローナル抗体を分泌する条件下においてこれに要する十分な時間で培養される。なお、このようなハイブリドーマ細胞に適する組織培養技法や培地は周知である。また、必要に応じて、該条件付ハイブリドーマ培養の上澄み液を収集して、周知の方法によって所望の抗体をさらに精製することが可能である。
【００４５】
また、当該所望の抗体は上記ハイブリドーマをプリスタン注入した（ｐｒｉｓｔａｎｅ−ｐｒｉｍｅｄ）マウスの腹膜腔内に注射することによっても生成できる。この結果、該ハイブリドーマ細胞は当該腹膜腔内において増殖して上述の抗体を分泌し、該分泌液は腹水として蓄積する。したがって、この腹水液を注射器により該腹膜腔内から取り出すことにより、目的の抗体を得ることができる。
【００４６】
さらに、本発明において有用な抗ＣＤ２および抗ＬＦＡ−３抗体同族体は所望の抗体の免疫グロブリンＬ鎖およびＨ鎖をコードするＤＮＡにより形質転換した宿主細胞によって生成した組換え抗体でもよい。この組換え抗体は既知の遺伝工学的技法により生成できる（参照例：米国特許第４８１６３９７号、同文献は本明細書の参考文献である）。
【００４７】
例えば、該組換え抗体は、本発明において有用な抗体同族体を生成するハイブリドーマ細胞から得た所望の抗体の免疫グロブリンＬ鎖およびＨ鎖をコードするクローニングｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡによって生成することができる。その後、これらのポリペプチドをコードするｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡは発現ベクター内に挿入されて、両方の遺伝子がそれらの転写および翻訳発現制御配列に効果的に連結する。さらに、該発現ベクターおよび発現制御配列が使用した発現宿主細胞に適合するように選択される。なお、一般には、当該両方の遺伝子は同一の発現ベクターに挿入されている。
【００４８】
この場合、真核または原核宿主細胞を用いることができる。ただし、真核細胞は原核細胞に比して組み合わせが容易であり、また、適当に折りたたまれかつ免疫学的に活性な抗体を分泌しやすいという理由から、真核宿主細胞における発現の方が好ましい。しかしながら、不適当な折りたたみにより不活性となったいかなる抗体も周知の方法で再生することが可能である（ＫｉｍおよびＢａｌｄｗｉｎ、「小蛋白質の折りたたみ反応における特異的中間体および蛋白質の折りたたみの機構」（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５１，ｐｐ．４５９−８９（１９８２）））。なお、該宿主細胞は、本発明による抗体同族体でもあるＬ鎖ダイマーやＨ鎖ダイマー等の完全な抗体の部分を生成することも可能である。
【００４９】
上述の手法の変形もまた本発明において有用であることが理解されると考える。例えば、特定の抗体同族体のＬ鎖またはＨ鎖（両方ではない）をコードするＤＮＡを用いて宿主細胞を形質転換することが望ましい場合が考えられる。また、組換えＤＮＡ技法により、ＣＤ２またはＬＦＡ−３カウンタ受容体結合のために必要でないＬ鎖およびＨ鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの全部または一部を除去するようにすることもできる。すなわち、このように部分的に削除したＤＮＡ分子から発現される分子もまた本発明の方法において有用である。加えて、１個のＨ鎖と１個のＬ鎖が抗ＣＤ２または抗ＬＦＡ−３抗体同族体であり、他の１個のＨ鎖および１個のＬ鎖がＣＤ２またはＬＦＡ−３以外の抗原、若しくは、ＣＤ２またはＬＦＡ−３の他のエピトープに対して特異的であるような二官能性の抗体を生成することもできる。
【００５０】
キメラ組換え抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体同族体は宿主細胞を所望の免疫グロブリンＬ鎖およびＨ鎖をコードするＤＮＡから成る適当な発現ベクターにより形質転換することによって生成することができ、この場合、当該Ｈ鎖および／またはＬ鎖のヒンジ領域および不変領域をコードするＤＮＡの全部または一部が異なる種の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖の対応領域から得たＤＮＡで既に置き換えられている。このとき、元の組換え抗体が人間のものでなく、また、上記の阻害剤が人間に投与される場合、対応する人間の配列の置き換えが好ましい。例示的なキメラ組換え抗体としては、マウスの可変領域と人間のヒンジ領域および不変領域を有しているものが挙げられる（参照：米国特許第４８１６３９７号、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ他、「キメラ人間抗体分子：人間の不変領域ドメインを伴うマウス抗体結合性ドメイン」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１，ｐｐ．６８５１−５５（１９８４）））。
【００５１】
また、人間化した組換え抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体は所望の人間でない免疫グロブリンＬ鎖およびＨ鎖をコードするＤＮＡから成る適当な発現ベクターにより宿主細胞を形質転換することによって生成することができる。この際、抗原結合に関与しないアミノ酸をコードするＤＮＡの全部または一部が所望の人間の免疫グロブリンＬ鎖またはＨ鎖の対応領域から得たＤＮＡで置き換えられている（参照例：Ｊｏｎｅ他、「人間の抗体における相補性決定領域とマウスの領域との置き換え」（Ｎａｔｕｒｅ，３２１，ｐｐ．５２２−２５（１９８６）））。
【００５２】
完全な抗体でない抗ＣＤ２および抗ＬＦＡ−３抗体同族体もまた本発明において有用である。このような同族体は上述の抗体同族体のいずれかから誘導することができる。例えば、抗体結合性フラグメント並びに上述の抗体から誘導できる完全長モノマー、ダイマーまたはトリマーポリペプチドはそれ自体で有用である。この種の有用な抗体同族体としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、Ｈ鎖モノマーまたはダイマー、Ｌ鎖モノマーまたはダイマー、１個のＨ鎖および１個のＬ鎖から成るダイマー等が含まれる。抗ＬＦＡ−３Ｈ鎖は好ましい抗ＬＦＡ−３抗体フラグメントである。
【００５３】
該抗体フラグメントはまた、例えば、ペプシンまたはパパイン（ｐａｐａｉｎ）等のプロテアーゼを用いる完全な抗体の開裂や、当該開裂生成物を必要に応じて還元剤で処理する等の化学的方法によって生成することもできる。また、有用なフラグメントを宿主細胞の部分切除したＨおよび／またはＬ鎖遺伝子による形質転換によって生成することも可能である。また、Ｈ鎖およびＬ鎖モノマーは、完全な抗体をジチオトレイトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）等の還元剤で処理した後、生成して当該鎖状体を分離することにより生成できる。さらに、該Ｈ鎖およびＬ鎖モノマーは所望のＨ鎖またはＬ鎖（両方ではない）のいずれか一方をコードするＤＮＡを用いて形質転換した宿主細胞によっても生成することができる（参照例：Ｗａｒｄ他、「大腸菌から分泌される単一免疫グロブリン可変領域の範囲における結合活性」（Ｎａｔｕｒｅ，３４１，ｐｐ．５４４−４６（１９８９））、Ｓａｓｔｒｙ他、「モノクローナル接触抗体の発生のための大腸菌における免疫学的領域のクローニング：Ｈ鎖可変領域特異性ｃＤＮＡライブラリの構造」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，ｐｐ．５７２８−３２（１９８９）））。
【００５４】
Ｂ．可溶性ＣＤ２およびＬＦＡ−３ポリペプチド
ＬＦＡ−３およびＣＤ２の相互作用を阻害する可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドは本発明の方法において有用である。これらのうち、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドの方が好ましい。
【００５５】
可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはＬＦＡ−３のトランスメンブラン形態、特に、細胞外ドメイン（例：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のＡＡ１−ＡＡ１８７）から誘導することができる。このようなポリペプチドは米国特許第４９５６２８１号および同時係属の米国特許出願０７／６６７９７１号（本出願と譲渡人を共通にする）に記載されており、これらは本明細書の参考文献である。好ましい可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のＡＡ１−ＡＡ９２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のＡＡ１−ＡＡ８０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のＡＡ５０−ＡＡ６５およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のＡＡ２０−ＡＡ８０から成るポリペプチドを含む。また、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２をコードするＤＮＡ配列（すなわち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）から成るベクターはアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に受入番号７５１０７で寄託されている。
【００５６】
また、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはＰＣＴ特許出願ＷＯ９０／０２１８１に記載されているようなＬＦＡ−３のＰＩ連結形態から誘導することもできる。このＰＩ連結ＬＦＡ−３をコードするＤＮＡ配列（すなわちＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）から成るベクターはアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）に受入番号６８７８８で寄託されている。なお、該ＬＦＡ−３のＰＩ連結形態とＬＦＡ−３のトランスメンブラン形態が全細胞外ドメインを通して同一のアミノ酸配列を有することは当然理解されると考える。したがって、好ましいＰＩ連結ＬＦＡ−３ポリペプチドは上記ＬＦＡ−３のトランスメンブラン形態の場合と同一である。
【００５７】
可溶性ＣＤ２ポリペプチドは完全長ＣＤ２、特に、細胞外ドメイン（例：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６のＡＡ１−ＡＡ１８５）から誘導できる。また、このようなポリペプチドは当該ＣＤ２の完全長ドメインの全部または一部から構成できる。例示的な可溶性ＣＤ２ポリペプチドが参考文献ＰＣＴ  ＷＯ９０／０８１８７に記載されている。  本発明において有用な可溶性ポリペプチドの生成は当業界において知られる種々の方法によって行うことができる。例えば、該ポリペプチドは完全なトランスメンブランＬＦＡ−３またはＣＤ２分子、あるいは、完全なＰＩ連結ＬＦＡ−３分子から、エクソペプチダーゼと組み合わせた特異的なエンドペプチダーゼを用いる蛋白質分解、エドマン分解またはこれらの両方によって誘導することができる。一方、完全なＬＦＡ−３分子または完全なＣＤ２分子は従来法によりその天然供給源から精製できる。また、該完全なＬＦＡ−３またはＣＤ２はｃＤＮＡを用いる既知の組換えＤＮＡ技法により生成することもできる（参照例：Ｗａｌｌｎｅｒ他の米国特許第４９５６２８１号、ＡｒｕｆｆｏおよびＳｅｅｄ：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）、Ｓａｙｒｅ他：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）。
【００５８】
好ましくは、本発明に有用な可溶性ポリペプチドを直接的に生成して、完全なＬＦＡ−３分子や完全なＣＤ２分子を出発原料とする必要性を省く。このことは、従来の化学的合成技法や、所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列のみを形質転換した宿主内に発現する周知の組換えＤＮＡ技法によって行うことができる。例えば、所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコードする遺伝子はオリゴヌクレオチドシンセサイザーを用いる化学的手段により合成することができる。すなわち、このようなオリゴヌクレオチドは所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドのアミノ酸配列に基づいて設計される。また、該所望のペプチドに対応する特異的なＤＮＡ配列のコード化は、特異的な制限エンドヌクレアーゼフラグメントの単離や当該特異的領域のＰＣＲ合成によって完全長のＤＮＡ配列から誘導することもできる。
【００５９】
本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコードする遺伝子の合成には標準的な手法が適用できる。例えば、完全なアミノ酸配列を逆翻訳した（ｂａｃｋ−ｔｒａｎｓｌａｔｅｄ）遺伝子を構成するために用いることができる。また、本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドや可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコーディングするヌクレオチド配列を含むＤＮＡオリゴマーは単一ステップで合成することができる。さらに、当該所望のポリペプチドの部分をコーディングするいくつかの短いオリゴヌクレオチドを合成して連結することも可能である。好ましくは、本発明において有用な可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドをいくつかの分離したオリゴヌクレオチドとして合成し、その後、連結する。このような個々のオリゴヌクレオチドは一般に５’または３’方向の補足的な組合せ部分に対応する延出部（ｏｖｅｒｈａｎｇｓ）を含んでいる。
【００６０】
このようにして組み合わされた所望の遺伝子は、制限エンドヌクレアーゼにより認識される配列（クローニングまたは発現ベクターへの直接的組合せに対応する特異的制限部位を含む）、使用の宿主発現システムを考慮した上での好ましいコドン、および、転写される際に安定で効果的に翻訳されるｍＲＮＡを生成する配列によって特徴付けられる。適切な組合せについてはヌクレオチド配列決定、制限マッピング、および、適当な宿主における生物学的に活性なポリペプチドの発現により確認できる。
【００６１】
なお、上述の特異的なＤＮＡ配列によりコードされる可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ２ポリペプチドは、遺伝子コードの縮退により、他の多くのヌクレオチド配列から成るＤＮＡ分子によってもコードすることが可能であることは当業者において明らかである。これらの縮退配列はまた本発明において有用なポリペプチドをコード化する。
【００６２】
上記のＤＮＡ配列は単細胞宿主において発現可能である。当業界において周知の如く、宿主内において形質転換した遺伝子の高い発現レベルを得るためには、当該遺伝子は該選択された発現宿主において機能的な転写および翻訳発現制御配列に有効に連結される必要がある。好ましくは、該発現制御配列および関係する遺伝子は、さらにバクテリア選択マーカーおよび複製開始点から成る発現ベクターに含まれる。もしも該発現宿主が真核細胞であれば、当該発現ベクターは当該発現宿主において有用であるさらに付加的な発現マーカーから構成されていなければならない。
【００６３】
上記の所望の可溶性ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列はシグナル配列をコードしてもしなくてもよい。ただし、上記の発現宿主が原核細胞である場合は、当該ＤＮＡ配列はシグナル配列をコードしない方が一般的に好ましい。逆に、該発現宿主が真核細胞である場合は、シグナル配列がコードされる方が一般的に好ましい。
【００６４】
また、アミノ末端メチオニンは上記の発現生成物上に存在していてもいなくてもよい。ただし、該末端メチオニンが発現宿主によって開裂していない場合は、必要に応じて、これを標準的な技法により化学的に除去することができる。
【００６５】
また、種々の発現宿主／ベクターの組み合わせが使用できる。真核宿主細胞に対して有用な発現ベクターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウィルス、アデノウィルスおよびサイトメガロウィルスから得られる発現制御配列から成るベクターがある。また、細菌の宿主細胞に対して有用な発現ベクターとしては、ｃｏｌ  Ｅ１含む大腸菌のプラスミド、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２およびこれらの派生体等のような既知の細菌のプラスミド、さらに、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、例えば、ファージλの多種派生体、例えば、ＮＭ９８９、およびＭ１３および線状一本鎖ＤＮＡファージ等の他のＤＮＡファージ等のより広い宿主範囲を有するプラスミドが挙げられる。また、酵母細胞に対して有用な発現ベクターとしては、２μプラスミドおよびその派生体が挙げられる。さらに、昆虫細胞に有用なベクターとしてはｐＶＬ９４１がある。
【００６６】
加えて、広範な発現制御配列のいずれもがこれらのベクターにおいて使用することができる。このような有用な発現制御配列には、上述の発現ベクターの構造遺伝子を伴う発現制御配列を含まれる。例えば、当該有効発現制御配列としては、ＳＶ４０またはアデノウィルスの初期および後期プロモーター、ラクトース（ｌａｃ）システム、トリプロファン（ｔｒｐ）システム、ＴＡＣまたはＴＲＣシステム、ファージλの主要オペレーターおよびプロモーター領域、ｆｄコート蛋白質の制御領域、３−ホスフォグリセレートキナーゼまたは他の解糖酵素に対するプロモーター、酸ホスファターゼ、例、Ｐｈｏ５のプロモーター、酵母α接合システムおよび真核または原核細胞の遺伝子発現を制御することで知られる他の配列のプロモーター、およびこれらの種々の組み合わせが挙げられる。
【００６７】
また、広範な単細胞宿主細胞が有用である。これらの宿主細胞としては、大腸菌株、プソイドモナス属、バチルス属、ストレプトミセス属、真菌類、酵母、スポドプテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（ＳＦ９）等の昆虫細胞、ＣＨＯおよびマウス細胞等の動物細胞、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０およびＢＭＴ１０等のアフリカミドリザル（Ａｆｒｉｃａｎ  ｇｒｅｅｎ  ｍｏｎｋｅｙ）細胞、人間の細胞、並びに、組織培養における植物細胞等が挙げられる。なお、動物細胞の発現においては、本発明者はＣＨＯ細胞およびＣＨＯ７細胞が好ましいと考える。
【００６８】
ただし、ここに記載するＤＮＡを発現する上で、これらすべてのベクターおよび発現制御配列が一様に機能するとは限らないことは勿論のことである。また、すべての宿主細胞の当該同一発現システムにおける機能も同様である。しかしながら、当業者においては、過度の実験を要することなく、これらのベクター、発現制御配列および宿主細胞からの選定を行うことが可能である。例えば、ベクターの選択においては、該ベクターが宿主細胞内で複製されるため、当該宿主細胞が考慮される必要がある。また、該ベクターのコピー番号、当該コピー番号を制御する能力、および、抗体マーカー等、当該ベクターによりコードされる他の任意の蛋白質の発現も考慮する必要がある。
【００６９】
また、発現制御配列を選択する場合には、種々の因子を考慮する必要がある。例えば、該因子としては、配列の相対的強度、制御の可能性、上記ＤＮＡ配列特に潜在的二次構造との適合性が挙げられる。また、単細胞宿主は、選択されたベクターとの適合性、該ＤＮＡ配列によりコード化した生成物の毒性、分泌特性、可溶性ポリペプチドを正確に折りたたむ能力、発酵または培養の必要性、および、当該ＤＮＡ配列によりコード化した生成物の精製の容易さを考慮した上で選択する必要がある。
【００７０】
なお、これらのパラメータの範囲内において、当業者においては、発酵や例えばＣＨＯ細胞やＣＯＳ７細胞等の大規模な動物細胞の培養において必要なＤＮＡ配列を発現する種々のベクター／発現制御配列／宿主細胞の組み合わせを選択することが可能である。
【００７１】
さらに、当該可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ２ポリペプチドは従来の種々の方法のいずれかを使用することにより上記の発酵や細胞培養から単離し精製することができる。当業者においては、これらの中で、最適の単離および精製法を選択することが可能である。
【００７２】
組換えＤＮＡ技法は２０個以上のアミノ酸配列を有する有用な可溶性ＣＤ２ポリペプチドや可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドを生成する好ましい方法であるが、約２０個以下のアミノ酸を有する短めのＣＤ２やＬＦＡ−３ポリペプチドは従来の化学的な合成法により生成する方が好ましい。なお、本発明において有用な合成的に生成されるポリペプチドは極めて高収率であり容易に精製できる点で有利である。
【００７３】
好ましくは、このような可溶性ＣＤ２ポリペプチドまたは可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドは液相または固相のポリペプチド合成法により合成され、必要に応じて、カルボキシペプチダーゼにより（Ｃ末端アミノ酸を除去するために）消化されるか、手動式エドマン分解法により（Ｎ末端アミノ酸を除去するために）分解される。また、ポリペプチドの適切な折りたたみはＫｅｎｔ（「ポリペプチドおよび蛋白質の化学的合成」（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７，ｐｐ．９５７−８９（１９８８）））において記載されるようなジスルフィド架橋の形成に好適な酸化条件下で行うことができる。その後、このようにして生成したポリペプチドは当業界において広く知られる分離技法、好ましくは逆相ＨＰＬＣを利用することにより、精製することができる。なお、液相合成法の使用はチロシンのいわゆるＯ−硫酸エステル等の成長過程のポリペプチド鎖に特定の派生アミノ酸を直接付加することを可能にする点で有利である。これにより、本発明において有用なポリペプチドの任意の残基を改変するための後続の処理が不要になる。
【００７４】
Ｃ．ＬＦＡ−３およびＣＤ２擬態物質
本発明の方法においては、ＬＦＡ−３およびＣＤ２擬態物質もまた有用である。これらの物質はＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の阻害剤であり、ペプチド、半ペプチド化合物または非ペプチド化合物のいずれでもよい。なお、最も好ましいＣＤ２およびＬＦＡ−３擬態物質は該ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害すると共に、少なくとも抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体７Ａ６または抗ＣＤ２モノクローナル抗体ＴＳ２／１８（上述）を阻害する。
【００７５】
このような擬態物質は多種類のペプチド（例：５−２０個のアミノ酸の長さのもの）、半ペプチド化合物または非ペプチド化合物および有機化合物を合成し、次いで、当該ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を阻害する能力についてスクリーニングすることにより生成することができる（参照：本明細書における参考文献としての、米国特許第４８３３０９２号、ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ、「エピトープライブラリによるペプチドリガンドについてのサーチ」（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，ｐｐ．３８６−９０（１９９０））、およびＤｅｖｌｉｎ他、「ランダムペプチドライブラリ：特異的蛋白質結合分子の供給源」（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９，ｐｐ．４０４−０７（１９９０）））。
【００７６】
Ｄ．派生阻害剤
本発明の方法においてはＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の派生阻害剤もまた有用である。この場合、例えば、ここに記載の抗体同族体、可溶性ＣＤ２およびＬＦＡ−３ポリペプチド、あるいは、ＣＤ２およびＬＦＡ−３擬態物質のいずれかが、抗ＬＦＡ−３および抗ＣＤ２抗体同族体、可溶性ＬＦＡ−３およびＣＤ２ポリペプチド、ＣＤ２およびＬＦＡ−３擬態物質、細胞障害性物質および薬剤から成る群から独立に選択した１種以上の物質に機能的に連結（化学的結合、遺伝的融合等により）している。
【００７７】
このような派生的阻害剤の１種は２種以上の阻害剤（同一種または異種）を架橋することにより生成できる。この場合の、適当な架橋剤としては、ヘテロ二官能的な、適当なスペーサにより分離される２個の異なる反応基を有するもの（例：ｍ−マレイミドベンゾイルーＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、あるいは、ホモ二官能性のもの（例：スベリン酸ジスクシンイミジル）が挙げられる。なお、このような架橋剤はピアスケミカル社（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から市販されている。
【００７８】
他の可能な架橋処理としては、ＰＩ連結ＬＦＡ−３におけるＰＩ連結信号配列やそのフラグメントを利用する方法がある。特に、該ＰＩ連結信号配列（例：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４のＡＡ１６２−ＡＡ２１２）をコードするＤＮＡは所望のポリペプチド、好ましくは、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドをコードするＤＮＡの下流側で連結する。もしもこのような構造が適当な真核細胞内において発現されると、該細胞は当該ＰＩ連結信号配列を認識してＰＩを対応するポリペプチドに共有的に連結する。その後、該ＰＩの疎水性により、当該ポリペプチドのミセル凝集体が形成される。
【００７９】
また、１種以上の細胞障害性細胞または薬剤物質に連結した阻害剤も有用である。この場合の有用な薬剤としては、ＣＤ２またはＬＦＡ−３以外の人間のポリペプチドに特異的な抗体同族体またはその一部分等の生物学的に活性なペプチド、ポリペプチドおよび蛋白質が挙げられる。さらに、当該有用な薬剤および細胞障害性物質として、シクロスポリンＡ、プレドニソン、ＦＫ５０６、メトトレキセート、ステロイド、レチノイド、インターフェロンおよびナイトロジェンマスタードが挙げられる。
【００８０】
また、薬剤により派生した好ましい阻害剤としては、組換え的に生成したポリペプチドが挙げられ、この場合、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチドまたはペプチジルＣＤ２やペプチジルＬＦＡ−３擬態物質が免疫グロブリンＨ鎖のヒンジ領域の全部または一部および該Ｈ鎖の不変領域の全部または一部に融合している。なお、このような融合蛋白質を作成するために好ましいポリペプチドは可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドである。さらに、最も好ましいものは、人間のＩｇＧ１ヒンジ領域の一部分（内鎖ジスルフィド結合に関与すると考えられる２種のシステイン残基を含むヒンジ領域のＣ末端の１０個のアミノ酸を含む）および該ＩｇＧ１Ｈ鎖の不変ドメインにおけるＣＨ２およびＣＨ３領域に融合したＬＦＡ−３のＡＡ１−ＡＡ９２（例：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を含む融合蛋白質である。このような融合蛋白質は血清の半減期を延長し、阻害剤の二量化を可能にすることが期待できる。
【００８１】
薬剤組成物および本発明による方法
本発明はＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の１種以上の阻害剤またはその派生形態を哺乳動物に投与することによって当該哺乳動物における上述の皮膚障害を防止あるいは治療するための方法を提供する。
【００８２】
好ましくは、該阻害剤またはその派生形態の効果量が投与される。この「効果量」とは、本書に記載した皮膚障害の範囲または程度を低減し得る量を意味する。
【００８３】
当業者においては、当該効果量の阻害剤が、とりわけ、投与スケジュール、単位投薬量、該阻害剤の投与における他の治療剤との組み合わせ、患者の免疫状態および健康状態、投与した特定阻害剤の治療および予防における活性、および、血清の半減期に依存することは明らかである。
【００８４】
好ましくは、該阻害剤は体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇおよび約５０ｍｇの間で、より好ましくは体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇおよび約１０ｍｇの間で、最も好ましくは体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇおよび約４ｍｇの間で投与される。
【００８５】
単位投薬量は効果が現れるまで投与される。なお、この効果はインビトロなＴ細胞活性アッセイおよび影響を受けた皮膚領域の除去（ｃｌｅａｒｉｎｇ）を含む種々の方法によって計測できる。好ましくは、該単位投薬量の投与が１週間に１ないし３回または１日に１ないし３回行われる。より好ましくは、当該投与が約３日から７日の間で１日に１ないし３回または１カ月毎に約３日および７日の間で１日に１ないし３回行われる。なお、これよりも低いまたは高い投薬量および他の投与スケジュールを用いることもできる。
【００８６】
さらに、当該阻害剤およびその派生形態は薬剤として許容可能なキャリヤを含む組成物中において投与されることが好ましい。この「薬剤として許容可能なキャリヤ」とは、投与を受ける患者においてアレルギー反応や他の不都合な作用を生じないキャリヤを意味する。
【００８７】
適当な薬剤として許容可能なキャリヤは、例えば、水、生理食塩水、リン酸塩バッファー処理した生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、並びにこれらの組み合わせの１種またはそれ以上である。さらに、該薬剤として許容可能なキャリヤは、湿潤剤または乳化剤、貯蔵寿命や阻害剤の効果を向上するための防腐剤やバッファー等の少量の補助的物質を含んでいてもよい。
【００８８】
また、該薬剤組成物または阻害剤は他の治療剤または予防剤と共に投与することができる。これらの薬剤としては、例えば、シクロスポリンＡ、ステロイド、レチノイド、ナイトロジェンマスタード、インターフェロン、メトトレキセート、抗体および抗ヒスタミン剤がある。
【００８９】
なお、これらの薬剤は阻害剤と共に単一の投与形態（すなわち、同一の薬剤組成物の一部として）、該阻害剤とは別でかつ同時の複数の投与形態、あるいは、これら二成分が別々にかつ連続的に投与される複数の投与形態において投与できる。また、該阻害剤およびその他の活性薬剤を単一の複合分子の形態とすることができる。なお、このような二成分の複合化は当業界において周知の標準的な架橋技法により行うことができる。さらに、単一分子は組換え融合蛋白質の形態を採ることもできる。加えて、本発明において有用な当該阻害剤または薬剤組成物はＰＵＶＡ、化学療法およびＵＶ照射等の他の療法との組み合わせで使用することもできる。このような組合せ療法は当該治療剤または予防剤の投薬量を低減できる点で有利である。
【００９０】
さらに、該阻害剤または薬剤組成物は種々の形態を採り得る。これらは、例えば、錠剤、丸薬、粉体、溶液、分散液または懸濁液、リポソーム、座薬など注射可能、注入可能および局所投与可能な標品の固体、半固体および液体の投与形態である。なお、好ましい形態は投与の態様や治療の適用性に依存するが、注射可能または注入可能な溶液がより好ましい。
【００９１】
さらに、当該阻害剤または薬剤組成物は静脈内、筋肉内、皮下、関節内、髄膜内、骨膜、腫瘍内、障害部内または障害部周囲に、注入、経口、局所的投与または吸入により投与できる。好ましくは、皮下、筋肉内または静脈内に投与する。また、最も好ましくは、皮下に投与する。
【００９２】
本発明をさらによく理解するために以下の実験例を説明する。なお、当該実験例は例示のためのみのものであり、これらによって本発明の範囲をいかなる意味においても限定するものではない。
【実施例】
【００９３】
実験例１
実験対象
６人の成人の患者について調査した。プロトコルについて国内検閲局の認可を得た後、情報公開の同意を得た。また、すべての患者は乾癬すなわち特徴的形態および分布の慢性丘疹状鱗苞プラークに対する主要診断基準を満たしていた。これらの患者には局所的なコルチコステロイドの断続的投与を共通に行い、当該調査に入る前の２週間これを中断した。また、乾癬症や他の皮膚障害の経験のない健康的なボランティアの一群を正常な対照群とした。
【００９４】
表皮細胞サスペンションの標品
皮膚のバイオプシー試料を角質部を用いて正常および障害のある皮膚の両方から得た後、５０ユニット／ｍｌのディスパーゼ（ｄｉｓｐａｓｅ）（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を含有するダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）のリン酸塩生理食塩水（「ＰＢＳ」）（Ｇｉｂｃｏ  Ｌａｂｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）に浸漬した。その後、該試料を４℃で１８時間培養し、表皮部を内皮から除去した。
【００９５】
これらの表皮シートを０．５％トリプシン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有するダルベッコＰＢＳに浸漬し、３７℃で３０分培養した。
【００９６】
このようにトリプシンで処理した表皮シートを０．０５％のデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）（Ｓｉｇｍａ）を含むダルベッコＰＢＳ中に移して細胞サスペンションにした。ウシ胎児血清（「ＦＢＳ」）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を不活性な残余トリプシンに加えた後、当該表皮細胞サスペンションを１１２μｍナイロンフィルタ（Ｔｅｔｋｏ，Ｅｌｍｓｆｏｒｄ，ＮＹ）に通した。この概ね単一細胞のサスペンションを１％ＦＢＳを含むダルベッコＰＢＳ中において３回洗浄した後、当該細胞を１％のペニシリンおよびストレプトマイシン、１％グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）および１０％人間ＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ）を含有するＲＰＭＩ１６４０（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  ＭＡ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗａｋｅｒｆｉｅｌｄ，ＭＤ）から成る培養液中において再懸濁した。
【００９７】
Ｔ細胞の単離および減少処理（Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）
末梢血液単核細胞（「ＭＮＣ」）をフィコールハイパーク（Ｆｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ：Ｐｈａｒｍａｃｉａ）密度勾配遠心分離を用いて当該製造者の指示するプロトコルにしたがってペパリンで凝血防止した血液から単離した。マクロファージを３７℃で１時間のプラスチック付着により除去した。次いで、非付着のマクロファージ減少されたＭＮＣを洗浄した後、ＣＤ８＋Ｔリンパ球、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞およびＮＫ細胞を、ＣＤ８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８０１４）、ＨＬＡ−ＤＲ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  Ｈ３５５）およびＣＤ１１（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８０２６）に対するモノクローナル抗体の存在下インキュベーションすることにより減少させた。これらの抗体はプリスタン注入したマウスの腹水液のＰＢＳ（１：２００）における希釈液として用いた。
【００９８】
この抗体処理したＭＮＣを４℃で４．５ｎｍの磁気粒子コートを用いて山羊の抗マウスＩｇＧの存在下に（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−４５０，Ｄｙｎａｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）１細胞当たり３ビーズの比率で培養した。次いで、抗体陽性細胞を磁石（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に引き付けて減少させた。この場合、当該磁石を試験管の側方に配して懸濁液中の残存細胞のデカンテーションを可能にした。さらに、デカンテーション処理した細胞懸濁液を再度磁石で処理してから残存細胞を収集した。その後、残存する抗体陽性細胞をさらに減少するために新鮮な山羊の抗マウスＩｇＧビーズを再び収集した細胞の懸濁液に加え、このような磁気除去処理を繰り返した。次いで、細胞をＰＢＳ中で洗浄した後、使用する前に、培養液において再び懸濁した。このようにして、９９％純度に濃縮したＣＤ４＋Ｔリンパ球を含有し、固有の抗原提示活性のない標品を作成した。
【００９９】
自己の乾癬細胞に対するＴリンパ球の増殖応答
１０万個のＣＤ４＋Ｔ細胞を丸底のマイクロタイターウェル（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に１０％人間ＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含む０．２ｍｌのＲＰＭＩ中の８万個の乾癬表皮細胞と共に加えた。該１ウェル当たりの乾癬表皮細胞の数は当該数によりＴ細胞の自己反応的応答が誘引できたとするそれまでの実験結果から選択した。５％ＣＯ２／９５％空気において３７℃で６日間インキュベーションした後、１ウェル当たり１μＣｉの［３Ｈ］ＴｄＲ（ＩＣＮ  Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）を加え、１８時間後に当該細胞をＰＨＤセルハーベスタ上に収集した（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）。この［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みはパッカード（Ｐａｃｋａｒｄ）シンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅｒ，ＩＬ）上で計測した。なお、当該［３Ｈ］ＴｄＲ取み込み量はＴ細胞の増殖量に相当する。
【０１００】
また、該Ｔ細胞（「ＴＣ」）のみまたは表皮細胞（「ＥＣ」）のみに対応する適当な対照の処理を上述のプロトコルを用いて行った。この結果、これらのアッセイにおいては［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みが全く見られなかった。一方、乾癬表皮細胞に応じた自己Ｔ細胞の活発な増殖が見られた（データ示さず）。
【０１０１】
加えて、正常な皮膚に対する同種異系応答を試験するために、上述のプロトコルを１０万個の同種異系Ｔ細胞および８万個の正常な皮膚細胞を用いて行った。この結果、これらの条件下において、当該同種異系Ｔ細胞の活発な増殖が見られた（データ示さず）。
【０１０２】
自己Ｔリンパ球増殖を刺激する乾癬表皮細胞の能力の阻止
抗ＣＤ２モノクローナル抗体（ＴＳ２／１８）（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔリンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１９８２）））、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体（７Ａ６）（ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５）または無関係な特異性のイソタイプ適合型対照モノクローナル抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の［３Ｈ］ＴｄＲ取り込み効果を、上述の如きプロトコルを用いて５０μｇ／ｍｌのそれぞれの抗体の存在下で計測した。
【０１０３】
第１図は、イソタイプ適合型対照抗体の存在下における増殖に対比した場合の、抗ＣＤ２または抗ＬＦＡ−３の添加による障害乾癬表皮に対応する自己Ｔ細胞増殖の一貫した（ｎ＝４）実質的（約６０％）阻害効果を示している。
【０１０４】
第１図は４人の患者のみのデータを示しているが、これら４人の患者は、なんらの抗原も当該システムに加えられていないにもかかわらず、自らの障害表皮に対する血液ＣＤ４＋Ｔ細胞の自己反応性を示している。このことは異常な結果である。すなわち、正常な固体の同種異系血液Ｔ細胞の共通培養体および表皮細胞は反応しないからである。このような反応は当該皮膚内において生じた自己免疫反応のインビトロモデルであると考えられる。なお、他の二人の患者のＥＣ標品は参考にならなかった。すなわち、これらのＥＣ標品の一つはバクテリアにより汚染され、他の一つは自己反応性Ｔ細胞応答を誘発しない抗原提示細胞を含んでいたからである。
【０１０５】
また、５０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２または抗ＬＦＡ−３抗体を上述の同種異系の正常皮膚アッセイに加えても、同種異系Ｔ細胞の活性化を阻止することがわかった。ただし、この場合の阻害の程度は乾癬障害の表皮細胞を用いた自己抗原提示細胞の活性に見られた結果（データ示さず）に比して実質的ではなかった（約４０％）。
【０１０６】
また、イソタイプ適合型対照抗体（無関係な抗原に対して特異的）の添加は乾癬障害の表皮細胞により誘発した自己Ｔ細胞のＴ細胞増殖（データ示さず）の程度を実質的に変化させなかった。
【０１０７】
実験例２
実験対象
本調査には１人の成人を実験対象とした。プロトコルについて国内検閲局の認可を得た後、情報公開の同意を得た。当該実験に先立って、対象体において皮膚紅斑を誘発するに要する一組みの蛍光管（ＦＳ４０）からのＵＶ  Ｂの最小照射量を決定した。適度な日焼け（４個の最小の紅斑を生じる量）の照射を左の臀部に対して行い、３日後にＵＶ障害の皮膚供給源とした。また、右臀部の未照射の皮膚を対照とした。
【０１０８】
表皮細胞サスペンションの標品
角質部を用いて当該正常および日焼けの皮膚から皮膚バイオプシー試料を得た。次いで、実験例１と実質的同一のプロトコルを用いてこれらの試料より表皮細胞のサスペンションを作成した。
【０１０９】
Ｔ細胞の単離および減少処理
末梢血液単核細胞（「ＭＮＣ」）をフィコールハイパーク（Ｆｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ：Ｐｈａｒｍａｃｉａ）密度勾配遠心分離を用いて当該製造者の指示するプロトコルにしたがって他の人間のペパリン凝血防止した血液から単離した。次いで、ＣＤ４＋Ｔリンパ球を実験例１と概ね同様に作成した。
【０１１０】
同種異系のＵＶ障害皮膚細胞に対するＴリンパ球の増殖応答
他の個体から得た１０万個のＣＤ４＋Ｔ細胞を丸底のマイクロタイターウェル（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）に当該対象体から得たＵＶ障害の表皮細胞とともに加えて［３Ｈ］ＴｄＲの存在下でインキュベ−ションした後、収集した。その後、該［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みを実験例１と概ね同様に計測した。なお、当該実験は抗原刺激が乾癬刺激性の自己抗原ではなくアロ抗原である点で実験例１と異なる。したがって、自己Ｔ細胞ではなく、同種異系のＴ細胞が使用されている。
【０１１１】
第２図は、ＵＶ障害表皮細胞（「ＥＣ＋ＴＣ」）を用いてインキュベ−ションした場合の同種異系Ｔ細胞の活発な増殖の程度（［３Ｈ］ＴｄＲ取り込みによる計測値として）を示している。
【０１１２】
同種異系Ｔリンパ球増殖を刺激するＵＶ障害表皮細胞の能力の阻止
抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体（１Ｅ６）（ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３）、抗ＣＤ２モノクローナル抗体（ＴＳ２／１８）（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄ他、「人間Ｔリンパ球媒介の細胞溶解を伴う３種の異なる抗原：ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−２およびＬＦＡ−３」（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，ｐｐ．７４８９−９３（１９８２）））または無関係な特異性のイソタイプ適合型対照モノクローナル抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の［３Ｈ］ＴｄＲ取り込み効果を、上述の如きプロトコルを用いて５０μｇ／ｍｌのそれぞれの抗体の存在下で計測した。
【０１１３】
第２図は、当該無関係な特異性のモノクローナル抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）の存在下における［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みが幾分減少していることを示している。しかしながら、抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体１Ｅ６または抗ＣＤ２モノクローナル抗体ＴＳ２／１８を添加すると、上記対照抗体の存在下における増殖に比して、実質的なＴ細胞増殖の阻害が生じた。
【０１１４】
寄託
本発明において有用なマウスのハイブリドーマ細胞および抗ＬＦＡ−３抗体は１９９１年３月５日にブダペスト条約に基づきアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）に寄託された培養体により例示され，以下の如く同定される。
【０１１５】
指定名 ＡＴＣＣ受入番号
１Ｅ６                  ＨＢ  １０３９３
ＨＣ−１Ｂ１１          ＨＢ  １０６９４
７Ａ６                  ＨＢ  １０６９５
８Ｂ８                  ＨＢ  １０６９６
トランスメンブランＬＦＡ−３をコードするプラスミドのキャリヤであるバクテリオファージは１９８７年５月２８日にブダペスト条約に基づきインビトロインターナショナル（Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｌｉｎｔｈｉｃｕｍ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）に受入番号ＩＶＩ−１０１３３で寄託された。その後、当該寄託は１９９１年６月２０日にアメリカンタイプカルチャーコレクションに移され，以下の如く同定される。
【０１１６】
指定名 ＡＴＣＣ受入番号
λＨＴ１６［λｇｔ１０／ＬＦＡ−３］  ７５１０７
ＰＩ連結ＬＦＡ−３をコードするプラスミドにより形質転換した大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は１９８８年７月２２日にブダペスト条約に基づきインビトロインターナショナル（Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．，Ｌｉｎｔｈｉｃｕｍ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）に受入番号ＩＶＩ−１０１８０で寄託された。その後、当該寄託は１９９１年６月２０日にアメリカンタイプカルチャーコレクションに移され，以下の如く同定される。
【０１１７】
指定名 ＡＴＣＣ受入番号
ｐ２４                  ６８７８８
配列
以下は、配列リストにおいて述べた配列の概要である。
【０１１８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１  トランスメンブランＬＦＡ−３のＤＮＡ配列
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２  トランスメンブランＬＦＡ−３のアミノ酸配列
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３  ＰＩ連結ＬＦＡ−３のＤＮＡ配列
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４  ＰＩ連結ＬＦＡ−３のアミノ酸配列
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５  ＣＤ２のＤＮＡ配列
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６  ＣＤ２のアミノ酸配列
上述の如く本発明の数多くの実施態様を説明したが、これらの基本的実施態様は変更可能であり、したがって、本発明の手法を利用する他の実施態様を当該変更によって提供することも可能である。それゆえ、本発明の範囲は本明細書における上記の記載とこれに添付した請求の範囲とにおいて定めることのできるすべての変更態様および変形例を含むと解されるべきである。すなわち、本発明は、例示の目的で上述した当該特定の実施態様によって制限されるものではない。
【０１１９】
（配列表）
2005015493.tif 000002
【０１２０】
2005015493.tif 000003
【０１２１】
2005015493.tif 000004
【０１２２】
2005015493.tif 000005
【０１２３】
2005015493.tif 000006
【０１２４】
2005015493.tif 000007
【０１２５】
2005015493.tif 000008
【０１２６】
2005015493.tif 000009
【０１２７】
2005015493.tif 000010
【０１２８】
2005015493.tif 000011
【０１２９】
2005015493.tif 000012
【０１３０】
2005015493.tif 000013
【０１３１】
2005015493.tif 000014
【０１３２】
2005015493.tif 000015
【０１３３】
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【０１３４】
2005015493.tif 000017
【０１３５】
2005015493.tif 000018
【図面の簡単な説明】
【０１３６】
【図１】図１は、イソタイプ適合型対照抗体の存在下における増殖に対比した場合の、抗ＣＤ２または抗ＬＦＡ−３の添加による障害乾癬表皮に対応する自己Ｔ細胞増殖の一貫した（ｎ＝４）実質的（約６０％）阻害効果を示している。
【図２】図２は、当該無関係な特異性のモノクローナル抗体（ＭＯＰＣ２１，Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）の存在下における［３Ｈ］ＴｄＲの取り込みが幾分減少していることを示している。
【図１】
2005015493.tif 000019
【図２】
2005015493.tif 000020