(57)【要約】【課題】植物の組織片の切断面に膨潤した綿状カルスを発生増殖させることなく、あらゆる植物の組織片の切断面である発根部からの発根を可能とする。【解決手段】発根阻害物質を有する植物の組織片又は発根阻害物質は有さないが生理的に発根が困難な植物の組織片を、組織片のうち切断面である発根部を培地と接触せず空気と接触するように空中に配設する。植物の組織片のうち切断面でない葉、葉柄の発根部以外の部分のうち少なくとも１ヶ所は培地に挿入配設し、培地の養分や植物ホルモンを葉、葉柄から吸収可能に置床する。植物の組織片の切断面である発根部は乾燥しこの発根部からカルスを経ることなく発根する。発根後、根を適正培地又は土壌に埋設して移植し活着順化後、圃場定植する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
発根阻害物質を有する植物の組織片又は発根阻害物質は有さないが生理的に発根が困難な植物の組織片を、この植物の組織片のうち切断面である発根部を培地と接触せず空気と接触するように空中に配設し、植物の組織片のうち切断面でない葉、葉柄の発根部以外の部分のうち少なくとも１ヶ所を培地に接触した状態で培地に置床し、培養して前記植物の組織片の発根部からカルスを経ることなく、発根を誘導し、次に空中に配設された発根部から誘導された根を適正培地又は土壌に移植埋設し、活着順化後、圃場定植し、植物体を再生する幼苗の生産方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、幼苗の生産方法に関し、詳しくは植物の組織片の切断面からの発根阻害物質の影響を受けることなく、又、培地の成分にも影響を与えることなく切断面から発根させ健全な発根苗を生産し得る幼苗の生産方法に関する。
【背景技術】
【０００２】  従来、植物体の組織切片を培地上で培養させる場合、組織切片の切断面を培地と接触させて置床し培養していた。発根阻害物質を有する植物の組織片は、切断面からフェノールやアルカロイド等の発根阻害物質を発生し、発生した発根阻害物質は切断面から培地に浸透して培地を黒変させ、組織片は発根しない状態で水浸状になって死滅する事態が発生していた。
又、発根阻害物質を有さない植物の組織片の培養に関しても、密閉された培養環境や高濃度の植物ホルモンを培地に添加して培養した場合、置床された植物の組織片は正常な苗条の生育をせず、組織片細胞は膨潤し水浸状になって発達し、発根や生育が困難になることがある。
又、環境条件や培地成分が適切であっても、培地と接触している切断面に膨潤した綿状のカルスが形成され、このカルスが形成層を覆い、発根は阻害される。
ところで、植物は発根すれば、フェノールやアルカロイド物質を有していても健全な生育をする。しかしながら、植物の組織片を培地に置床し培養すると、切断面にカルスが発生増殖し発根を阻害するため、この増殖カルスを利用してカルス経由の育苗方法が提案されている（例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５及び非特許文献１参照）。
又、特許文献６には西洋わさびの根の生長点組織を培地に置床し、２〜３ヶ月後に葉及び根が形成された幼植物体をバーミュキュライトに植え、活根させる方法が記載されているが、現実には生長点組織の切断面にカルスが発生増殖し、置床後２〜３ヶ月後には発根することなく死滅する。
【特許文献１】特公平７−１０６１１２号公報
【特許文献２】特開平６−３０６７０号公報
【特許文献３】特開平２−２３１０２３号公報
【特許文献４】特開平６−３０６７１号公報
【特許文献５】特開平５−１８４２５２号公報
【特許文献６】特公平３−６７６５０号公報
【非特許文献１】大澤勝次著「植物バイテクの基礎知識」社団法人農山漁村文化協会発行  ２００３年７月１５日
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】  上記カルス経由の育苗方法であると、変異発生率が高く、健全な苗を生育できない。
そこで、本願発明は植物の組織片を空中に配設した状態で置床し培養させることにより、組織片の切断面に膨潤した綿状カルスを発生増殖させることなく、発根阻害物質を有している植物や生理的に発根が困難な植物等、あらゆる植物に関し、その組織片の切断面である発根部から発根を可能とし、発根した根を適正培地又は土壌に埋設して活着順化することにより、健全な発根苗を得る幼苗の生産方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】  本願発明は、発根阻害物質を有する植物の組織片又は発根阻害物質は有さないが生理的に発根が困難な植物の組織片を、この植物の組織片のうち切断面である発根部を培地と接触せず空気と接触するように空中に配設し、植物の組織片のうち切断面でない葉、葉柄の発根部以外の部分のうち少なくとも１ヶ所を培地に接触した状態で培地に置床し、培養して前記植物の組織片の発根部からカルスを経ることなく、発根を誘導し、次に空中に配設された発根部から誘導された根を適正培地又は土壌に移植埋設し、活着順化後、圃場定植し、植物体を再生することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００５】  本願発明は発根部を培地と接触することなく置床し培養するので、培地が発根阻害物質により黒変することがない。又、組織片の切断面である発根部が空中に配設されている状態で培養されるので、切断面は乾燥し、発根部に膨潤した綿状のカルスが発生増殖せず、切断面の形成層から発根されるので正常かつ健全な苗の生育が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】  本発明はフェノールやアルカロイド物質の発根阻害物質を有する植物の組織片若しくは発根阻害物質は有さないが生理的に発根が困難な植物の組織片を用いる。本発明に使用可能な植物組織片、つまり培養植物体は特に限定されない。具体的には、例えばデルフィニウム等のキンポウゲ科植物、スターチス等のイソマツ科植物、カスミソウ、カーネーション等のナデシコ科植物、グラジオラス等のアヤメ科植物、キク等のキク科植物、スウィートピー等のマメ科植物、イチゴ、サクラ等のバラ科植物を挙げることができる。
これらの植物の適宜の器官の組織片を滅菌処理したものをＭＳ培地に置床する。置床方法は、切断面が必ず空中に配設され、葉や葉柄のような切断面のない発根部以外の組織片のうち少なくとも１ヶ所を培地と接触するようにする。置床後、切断面から発根させた植物体を、根を土壌に埋設して活着順化させ圃場定植する。
【実施例１】
【０００７】  植物体の組織片としてはキンポウゲ科植物のデルフィニウムの腋芽を用いる。開花を終えた親株の塊根部を水洗し、腋芽をナイフで切り離す。脇芽の葉身及び黒い鞘葉を除去し、７０％エタノールで１０秒間表面を殺菌し、さらに有効塩素０．５％の次亜塩素酸ナトリウム溶液中に撹拌しながら１０分間殺菌消毒を行う。実体顕微鏡下で無菌的に生長点を有する小苗条を摘出する。【０００８】  培地として下記の表１に示す組成からなる培地を用いる。この培地はＭｕｒａｓｈｉｇｅ  ａｎｄ  Ｓｋｏｏｇ培地の成分で、ビタミン類以外を１／２濃度に希釈した１／２ＭＳ培地を基本培地としている。【０００９】
【表１】
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前述の１／２ＭＳ培地にポリビニールピロリドンを５００ｍｇ／ｌ添加し、ＰＨを５．７に調整している。植物ホルモンはサイトカイニンとしてベンジルアデニンを０．１ｍｇ／ｌを、オーキシンとしてナフタレン酢酸を０．０１ｍｇ／ｌを添加し、さらに、ゲランガム３０００ｍｇ／ｌを適量加えて、加熱溶解した培地を、ポリカーボネイト製の直径８ｃｍの培養管に５０ｇ分注し、テフロン製のメンブレンフィルターシールをセットして通気性をもたせた状態でアルミフォイルに包んでオートクレーブで１２１℃５〜１０分間高圧滅菌後、静置放冷して固化したものを使用に供した。
組織切片の生長点側に付随する葉と葉柄部分を培地と接触させ、これと反対位置の切断面を上方にし空中に配設して置床し、培養した。培養は１８〜２１℃の温度環境下で照度３０００ルックス光を１日に１０〜１２時間照射することにより行った。約１ヶ月後に発根し、発根した苗を培養管から取り出して、土壌に根を埋設して活着順化し、圃場定植した。【００１０】  置床後の培養管内での発根状態を調査した。まず、表２は置床日が２００３年１２月２１日で、置床後３７日目の発根状態を示したものである。比較のために切断面を培地と接触して置床する以外は同一培養条件による従来方法の培養結果も示す。【００１１】
【表２】
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実施例１の方法により再生した植物体は、健全な苗条及び根を有することが肉眼で確認できた。これに対し、従来方法によるものは、極めて発根率が低く、発根はしても苗が水浸状で生育は悪く、健全な苗条ではないことが確認できた。
又、表３はキンポウゲ科デルフィニウムの異なる品種についても同一培養条件で培養し、置床後４８日目の生育状態を示したものである。【００１２】
【表３】
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水浸状の苗は全く発見されず、良好な生育状態であった。いずれの品種であっても高発根率であることが判明した。【００１３】  比較のために、植物ホルモン無添加でＭＳ培地にシネンシスＡ、シネンシスＢ、シネンシスＣの組織片を置床し、置床後２４日目の発根状態を表４に、シネンシスＢについて１／２ＭＳ培地で植物ホルモン無添加の培地とナフタレン酢酸を０．０２ｍｇ／ｌ添加した培地に夫々置床し３５日目の発根状態を表５に示す。【００１４】
【表４】
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いずれの苗条も水浸状で生育が極めて悪いことが確認できた。【００１５】
【表５】
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いずれの苗条も水浸状で、生育が極めて悪かった。【００１６】  以上の発根状態調査結果より、実施例１による幼苗の生産方法は、発根率が高く健全な苗を生産し得るという効果がある。
【実施例２】
【００１７】  葉柄を有し未発根の植物の組織片については、実施例１に記載の培地に葉や葉柄のうちの少なくとも１ヶ所を培地に挿入配設し、組織片の切断面は空中に配設した状態で置床し培養する。培地との接触部である葉や葉柄から養分や植物ホルモンが吸収される。切断面は水浸状にならず、乾燥状態となり、切断面から発根する。発根後、苗条を培養管より取り出し、根を土壌に埋設し圃場定植する。
実施例２では、オーキシン濃度が適正であれば、最も高発根率を得ることができる。切断面が空中に配設されているため、切断面に膨潤したカルスが増殖されず形成層から容易に発根し、健苗率を高めることができる。