(57)【要約】【課題】  清酒や焼酎等酒類の製造において原料使用率を高め、製造コストの低減を図る。【解決手段】  ポリガラクツロナーゼを高生産する酵母を利用して酒類を製造する。該酵母としては、例えばＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｋａｗａｃｈｉｉ  由来のポリガラクツロナーゼ遺伝子をベクターにつなぎ、得られた組換えベクターをＳａｃｃｈａｒｏｍｙｓｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのトリプトファン要求性株に形質転換した株（例えば、ＴＩＰｇａＡ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５２）、ＴＩＰｇａＢ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５３）が使用できる。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１で示される塩基配列を含むＤＮＡであって、ポリガラクツロナーゼをコードする遺伝子ＰｇａＡのＤＮＡ。
【請求項２】
配列番号２で示される塩基配列を含むＤＮＡであって、ポリガラクツロナーゼ遺伝子をコードするＰｇａＢのＤＮＡ。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のＤＮＡの内、少なくともコーディング領域を含んでなる組換えベクター。
【請求項４】
ＰｇａＡ遺伝子のＤＮＡを含んでなる組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＡ。
【請求項５】
ＰｇａＢのＤＮＡを含んでなる組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＢ。
【請求項６】
請求項３〜５のいずれか１項に記載の組換えベクターを酵母に導入してなる形質転換体。
【請求項７】
組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＡを酵母に導入してなる形質転換体Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＴＩＰｇａＡ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５２）。
【請求項８】
組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＢを酵母に導入してなる形質転換体Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＴＩＰｇａＢ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５３）。
【請求項９】
ポリガラクツロナーゼ高生産酵母を使用すること、を特徴とする酒類の製造方法。
【請求項１０】
ポリガラクツロナーゼ高生産酵母として、請求項６〜８のいずれか１項に記載の形質転換体を使用すること、を特徴とする酒類の製造方法。
【請求項１１】
酒類の製造において、原料利用率を向上し、又はアルコール含量を高め、又はカプロン酸エチル含量を高めること、を特徴とする請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
酒類が、清酒、焼酎製造用もろみ、アルコール飲料製造用もろみ、アルコール製造用もろみ、食酢製造用もろみの少なくともひとつであること、を特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項６〜８のいずれか１項に記載の形質転換体を使用すること、を特徴とするポリガラクツロナーゼの製造方法。
【請求項１４】
請求項６〜８のいずれか１項に記載の形質転換体の培養物又はその処理物を含有してなること、を特徴とするポリガラクツロナーゼ酵素剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリガラクツロナーゼを利用した焼酎や清酒等酒類の製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より酒類の製造には各種の工夫や改良が取り入れられており、例えば、吟醸酒や純米酒などは、モロミを低温長期発酵を行って高品質の清酒を製造している。しかし、このために原料利用率が低く、多くの清酒粕が生じている。更に、原料米の高度精白と相まって製造コストが高いといった問題点が認められる。他方、焼酎では原料利用率を高めて製造コストを低くするために、様々な製造管理が行なわれている。
【０００３】
一方、ポリガラクツロナーゼ（ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ）は、ペクチナーゼ（ｐｅｃｔｉｎａｓｅ）ともいわれ、高等植物の細胞壁中層に存在する多糖類であっていわゆる細胞間接着剤としての役割を果たしているペクチンやポリガラクツロン酸を分解する酵素である。ポリガラクツロナーゼは、果汁やワインの清澄化、大豆やコーヒー豆の脱皮、ラミーの精練などセルロースの精製に実用ないし実用が提案されている（例えば、非特許文献１、特許文献１参照）。本発明はポリガラクツロナーゼを清酒や焼酎等の製造に利用するものであるが、この点については従来何も報告されていないし、ましてやポリガラクツロナーゼ高生産酵母を利用する点については全く報告されていない。
【非特許文献１】バイオテクノロジー事典、株式会社シーエムシー、ｐ．９８０−９８１（１９８６年１０月９日）
【特許文献１】特開平６−２２０７７２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、上記した技術の現状に鑑み、清酒や焼酎等の酒類の製造において、原料利用率を向上させ、もって製造コストを大幅に低減させることのできる方法を新規に開発する目的でなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、上記目的達成のためになされたものであって、各方面から検討の結果、本発明者らは酵素に着目した。そこで、本発明者らは、原料利用率を向上することにより、清酒及び焼酎の製造コストを下げ得る酵素について研究した。その結果、多くの酵素の中でポリガラクツロナーゼを高生産する酵母により清酒及び焼酎を仕込むことで、製造酒量の増加、粕重量の減少、アルコール生産の向上が可能となることを見いだし、本発明を完成させた。
【０００６】
すなわち、本発明は、ポリガラクツロナーゼを高生産する酵母を用いて清酒及び焼酎等酒類を仕込むことで、原料利用率を向上させる製造法に関するものである。
【０００７】
本発明者らは、酒類の製造におけるポリガラクツロナーゼの重要性、有用性に着目し、ポリガラクツロナーゼを添加して酒類を製造するだけでなく、効率化や製造コストの低減の面から、アルコール発酵等を行う酵母にポリガラクツロナーゼ生産性を付与して、本来有しているアルコール発酵性等の機能のほか更にポリガラクツロナーゼ生産性をも有する酵母が新たに育種できれば別途ポリガラクツロナーゼを添加しなくても、この新規酵母を利用するだけで原料利用率を向上させた効率的な酒類の製造が可能になるのではないかという新規着想を得た。
【０００８】
そこで本発明者らは、ポリガラクツロナーゼ生産性酵母の育種という新規技術課題を設定し、鋭意研究の結果、目的酵母の育種にはじめて成功しただけでなく、更に、この新規酵母を用いて高品質の清酒や焼酎もろみを効率的に製造できることも実際に確認して、本発明に係る新規酵母が、酒類の製造において、本来の作用には何らの影響も受けることなくポリガラクツロナーゼを生産して有用な機能を果たすことも確認し、これらの有用新知見に基づいて更に研究検討の結果、上記新規着想の実現にはじめて成功した。
【０００９】
ポリガラクツロナーゼ高生産酵母の創製は、例えば次のようにして行うことができる。
先ずはじめに、アスペルギルス・カワチ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｋａｗａｃｈｉｉ）等ポリガラクツロナーゼ高生産菌のＤＮＡからＰＣＲ法等によってポリガラクツロナーゼ遺伝子を増幅させ、シグナル配列に相当するＤＮＡ配列を除き、ポリガラクツロナーゼ遺伝子を含有する成熟タンパク質に相当する配列（ＰｇａＡ、ＰｇａＢ）をポリガラクツロナーゼ遺伝子として得る。ポリガラクツロナーゼ遺伝子ＰｇａＡ及びＰｇａＢの塩基配列を、それぞれ、配列表の配列番号１及び２に示し、また図３及び図４にも示した。
【００１０】
ポリガラクツロナーゼ遺伝子（ＰｇａＡ、ＰｇａＢ）をベクター（例えば、Ｓｉｇｍａ社から市販されているベクターＹＥｐＦＬＡＧ−１を加工したもの）につないで、それぞれ、組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＡ及びＹＩｐ−ＰｇａＢを作成する。ＰｇａＡ遺伝子を含有する組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＡの構造図を図１に示し、ＰｇａＢ遺伝子を含有する組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＢの構造図を図２に示す。
【００１１】
組換えベクター（ＹＩｐ−ＰｇａＡ、ＹＩｐ−ＰｇａＢ）を塩化リチウム法、ワンステップ法等の常法にしたがって宿主サッカロマイセス・セレビシエー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に導入する。宿主酵母としては、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＹＰＨ４９９（ＭＡＴａ，ｕｒａ３、ｌｙｓ２、ａｄｅ２、ｔｒｐ１、ｈｉｓ３、ｌｅｕ２）やＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＵＴ−１（ＭＡＴａ／ａ、ｕｒａ３、ｔｒｐ１）等が使用でき、必要に応じて更に加工して使用してもよい。
【００１２】
このようにして組換えプラスミドＹＩｐ−ＰｇａＡ及びＹＩｐ−ＰｇａＢを例えばトリプトファン要求性酵母ＴＩ株に、それぞれ、形質転換し、得られた形質転換体は、前者については、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＴＩＰｇａＡと命名して、ＴＩＰｇａＡの記号表示にて独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センターにＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５２として寄託し、後者については、Ｓａｃｃａｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＴＩＰｇａＢと命名して、ＴＩＰｇａＢの記号表示にて同寄託センターにＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５３として寄託した。
【００１３】
そして、このようにして形質転換した酵母が、ポリガラクツロナーゼを生産することを確認し、ポリガラツロナーゼ生産酵母の育種を確認した。
【００１４】
このようにして形質転換した酵母は、通常の酒造用酵母や各種もろみ製造用酵母と同様に使用することができるので、アルコール発酵等の通常の酒類製造機能のほか更に、ポリガラクツナローゼによる機能も併用することとなり、本酵母の使用のみで、酒類の製造、及び、ポリガラクツロナーゼによる著効な効果（原料利用率の向上、それによる粕重量の減少、液量の増加、アルコール濃度の向上、製造コストの低下のほか、カプロン酸エチル含量の増加といった風味品質の改善効果）を同時に達成することができる。
【００１５】
本発明において酒類とは、エチルアルコール（以下、アルコール）含有物を広く包含するものであって、例えば、清酒、焼酎製造用もろみ、泡盛製造用もろみ、アルコール飲料製造用もろみ、食酢製造用もろみの少なくともひとつが挙げられる。
【００１６】
このようにして得たポリガラクツロナーゼ生産酵母は、酒類の製造に利用できることはもちろんのこと、本酵母を培養することによってポリガラクツナローゼを生産することもできる。したがって、本発明は、本酵母を利用することによるポリガラクツロナーゼの製造方法を提供するものである。
【００１７】
また、本発明によれば、ポリガラクツロナーゼ生産酵母の培養物には同酵素が多量に含まれているので、この培養物又はその処理物をポリガラクツロナーゼ含有酵素製剤として利用することが可能であり、更に硫安処理、クロマトグラフィー処理等の常法にしたがって精製することにより、精製酵素を得ることもできる。
【００１８】
培養物の処理物とは、培養物から菌体等を除去した培養液ないし培養上清、濃縮物（例えば、ＭＩＣＲＯＣＯＮ  ＹＭ−３（ミリポア社製）等による限外濾過処理物）、ペースト化物、乾燥物等が例示される。
【００１９】
以上、ポリガラクツロナーゼ生産酵母の利用について述べたが、ポリガラクツロナーゼ酵素自体を利用することによっても上記と同じ効果が奏される。したがって精製ポリガラクツロナーゼ酵素、ポリガラクツロナーゼ生産酵母の培養上清、その処理物の少なくともひとつを利用することによって、通常の酵母を使用した場合であっても、ポリガラクツロナーゼ生産酵母を使用した場合と同様の効果を得ることができる。
【００２０】
ポリガラクツロナーゼ生産酵母に関して、遺伝子操作による作成について主に述べてきたが、放射線や紫外線照射、変異剤処理等既知の突然変異処理によってポリガラクツロナーゼ生産酵母を分離することも充分に可能である。
【発明の効果】
【００２１】
本発明にしたがって、清酒及び焼酎等酒類の仕込みに、ポリガラクツロナーゼ生産酵母を利用することにより原料利用率の向上が可能となった。また、清酒の場合、ポリガラクツロナーゼ生産酵母の利用により、製成酒のカプロン酸エチルを増加させることができた。以上のことからポリガラクツロナーゼの使用により製造コストを下げ、更に清酒の中に含まれるカプロン酸エチル含量を高める効果が達成され、香気にすぐれた清酒が得られる等、酒類の風味、品質が改善される。
【００２２】
また、精製ポリガラクツロナーゼ酵素を焼酎や清酒等酒類モロミに直接添加することによっても同等の効果が期待できることから、ポリガラクツロナーゼ生産酵母の培養上清液をポリガラクツロナーゼを含む酵素剤として利用することも可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下に本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２４】
（ポリガラクツロナーゼ生産酵母の育種）
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｋａｗａｃｈｉｉ  ＩＦＯ４３０８のゲノムＤＮＡをテンプレートとし、ポリガラクツロナーゼ遺伝子ＰｇａＡについては、ＰｇａＡプライマー１（配列番号３：図５上段）及びＰｇａＡプライマー２（配列番号４：図５下段）を用いて、下記のＰＣＲ条件にてＰＣＲを行い、ポリガラクツロナーゼ遺伝子ＰｇａＢについては、ＰｇａＢプライマー１（配列番号５：図６上段）及びＰｇａＢプライマー２（配列番号６：図６下段）を用いて、同じく下記のＰＣＲ条件にてＰＣＲを行い、それぞれ、ポリガラクツロナーゼ遺伝子を増幅した。
【００２５】
（ＰＣＲ条件）
９４℃    ３分
以下２５サイクル
９４℃    １ｍｉｎ
６０℃    １ｍｉｎ
７２℃    １．５ｍｉｎ
以下１サイクル
７２℃    ５ｍｉｎ
【００２６】
上記によりＰＣＲ法によってポリガラクツロナーゼ遺伝子をそれぞれ増幅させた後、シグナル配列に相当するＤＮＡ配列を除き、成熟タン白質に相当する配列ＰｇａＡ（配列番号１：図３）及びＰｇａＢ（配列番号２：図４）をそれぞれ得た。
【００２７】
ポリガラクツロナーゼ遺伝子ＰｇａＡ及びＰｇａＢをベクターにつないで、組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＡ（図１）及びＹＩｐ−ＰｇａＢ（図２）を、それぞれ、作成した。
【００２８】
ベクターとしては、Ｓｉｇｍａ社より市販されているＹＥｐＦＬＡＧ−１を加工して用いた。
先ず、Ｐｒｉｍｅｒ１（配列番号７：図７上段）及びＰｒｉｍｅｒ２（配列番号８：図７下段）を用い、ＹＥｐＦＬＡＧ−１を鋳型としたＰＣＲ反応（下記のＰＣＲ条件）を行い、Ｌｉｇａｔｉｏｎさせた。これにより、酵母での複製に必要なＤＮＡ領域を除いた。
【００２９】
９４℃    ３分
以下２５サイクル
９４℃  １ｍｉｎ
６０℃  １ｍｉｎ
７２℃  ８ｍｉｎ
以下１サイクル
７２℃  ５ｍｉｎ
【００３０】
次に、上記によって調製したＤＮＡを鋳型とし、Ｐｒｉｍｅｒ３（配列番号９：図８上段）及びＰｒｉｍｅｒ４（配列番号１０：図８下段）を用いてＰＣＲ反応（ＰＣＲ条件は上記と同じ）を行った。増幅したＤＮＡ断片に先に得たＰｇａＡ及びＰｇａＢの増幅断片をライゲーション反応によって挿入し、組換えプラスミドＹＩｐ−ＰｇａＡ及びＹＩｐ−ＰｇａＢをそれぞれ得た。これらのプラスミド図を、それぞれ図１及び図２に示す。
【００３１】
組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＡ及びＹＩｐ−ＰｇａＢを、それぞれ、ＬｉＣｌ法にて宿主（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  Ｔ１）に形質転換し、形質転換体Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＴＩＰｇａＡ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５２）及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＴＩＰｇａＢ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５３）をそれぞれ得た。
【００３２】
宿主としては、トリプトファン要求性酵母を使用した。具体的には、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＵＴ−１株にｐＲＳ４０６（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製品）を遺伝子導入したものをＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  Ｔ１株として、宿主に使用した。
【００３３】
このようにして、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｋａｗａｃｈｉｉのＤＮＡよりＰＣＲ法によりポリガラクツロナーゼ遺伝子を増幅させ、シグナル配列に相当するＤＮＡ配列を除く、成熟タンパク質に相当する配列をベクターにつないだＹＩｐ−ＰｇａＡとＹＩＰ−ＰｇａＢ（図１、図２）を作成し、トリプトファン要求性酵母に形質転換した。形質転換した酵母が、ポリガラクツロナーゼを生産することを確認し、ポリガラクツロナーゼ生産酵母の育種を確認した。
【００３４】
ポリガラクツロナーゼの活性は、次のようにして測定した。
【００３５】
（活性測定法）
０．５％ポリガラクツロン酸  酢酸緩衝剤（ｐＨ４．０）に酵素液を添加し、４０℃、３０分間反応させる。
反応後、Ｂｅｍｆｅｌｄ試薬（Ｃｈａｐｌｉｎ，ＭＦ.  １９８６  Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．Ｉｎ：  Ｃｈａｐｌｉｎ，ＭＦ．Ｋｅｎｎｅｄｙ，ＪＦ．（ｅｄｓ）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ．ＩＲＬ．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ．ｐｐｌ−３６）３ｍｌに反応液０．１ｍｌを加えて１００℃  １０分間反応。その後、氷冷し、５３０ｎｍで吸光度測定する。
【実施例２】
【００３６】
（ポリガラクツロナーゼ生産酵母による清酒製造）
清酒製造におけるポリガラクツロナーゼ生産酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、ＴＩＰｇａＡ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５２）及び、同ＴＩＰｇａＢ（ＦＥＲＭ  Ｐ―１９５５３））の効果を調べた。精米歩合６０％のα米を使用し、表１に示した仕込配合で総米４００ｇの３段仕込みで行った。酵母には酵母懸濁液を用い（仕込水１ｍｌ当たり５×１０6個）、添えは１５℃、仲は１２℃、留は９℃で行い、温度経過は、翌日より１０℃一定で発酵させた。発酵終了後、遠心分離で固液分離を行い、清酒粕重量及び製成酒の成分を分析した。その結果を表２に示す。
【００３７】
（表１）
清酒の仕込配合表（ｇ）
―――――――――――――――――――――
添え        仲          留
―――――――――――――――――――――
総米      ６８      １２８      ２０４
掛米      ４８      １００      １７２
麹米      ２０        ２８        ３２
汲米    １３６      ２５９      ４０１
乳酸等      ４．４
―――――――――――――――――――――
乳酸等：乳酸６ｍｌ・ＫＨ2ＰＯ4 ０．６５ｇ・ＮaＣｌ ０．２５ｇ・ＭｇＳＯ4 ０．６６ｇ／１００ｍｌ  Ｈ2Ｏ
【００３８】
（表２）
製成酒の分析結果
――――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ｃｏｎｔｒｏｌ      ＴＩＰｇａＡ      ＴＩＰｇａＢ
――――――――――――――――――――――――――――――――――――
アルコール（％）      １２．０          １４．０          １３．６
酸度（ｍｌ）            １．２            １．９            １．９
アミノ濃度（ｍｌ）      １．０            １．０            １．０
液量（ｍｌ）            ６３０            ６６０            ６６０
粕重量（ｇ）            ４５０            ４１３            ４１３
ｉ−ＡｍＯＨ（ｐｐｍ）  １３７            １４３            １３８
ＥｔＯＣａｐ（ｐｐｍ）      ２．５            ４．５            ４．６
――――――――――――――――――――――――――――――――――――
Ｃｏｎｔｒｏｌはポリガラクツロナーゼ非生産酵母
ｉ−ＡｍＯＨはイソアミルアルコール
ＥｔＯＣａｐはカプロン酸エチル
【００３９】
上記表２から明らかなように、ポリガラクツロナーゼ生産酵母（ＴＩＰｇａＡ株、ＴＩＰｇａＢ株）の利用により粕重量は減少し、得られたモロミ上清の液量の増加、アルコール濃度の向上及びカプロン酸エチル含量を高める効果が達成された。
【実施例３】
【００４０】
（ポリガラクツロナーゼ生産酵母による焼酎製造）
焼酎モロミ製造におけるポリガラクツロナーゼ生産酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＴＩＰｇａＡ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５２）、同ＴＩＰｇａＢ（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５５３））の効果を調べた。表３に示した仕込配合で総麦４００ｇの２段仕込みで行った。酵母には酵母懸濁液を用い（仕込水１ｍｌ当たり５×１０6個）、品温は２３℃一定で発酵させた。発酵終了後、遠心分離で固液分離を行い、焼酎粕重量及びモロミ上清の成分を分析した。その結果を表４に示す。
【００４１】
（表３）
焼酎の仕込配合表（ｇ）
―――――――――――――――――――――
一次        二次          計
―――――――――――――――――――――
麦麹    １５０                  １５０
掛麦                ３５０      ３５０
汲水    １８０      ５７０      ７５０
―――――――――――――――――――――
【００４２】
（表４）
上清の分析結果
―――――――――――――――――――――――――――――――――
Control        TIPgaA        TIPgaB
―――――――――――――――――――――――――――――――――
アルコール（％）           15.4           15.9          15.6
液量（ｍｌ）              870            885           885
粕重量（ｇ）              383            376           376
ＥｔＯＣａｐ（ｐｐｍ）      6.0            6.5           6.4
―――――――――――――――――――――――――――――――――
Controlはポリガラクッロナーゼ非生産酵母（宿主酵母）      
【００４３】
表３及び表４から明らかなように、ポリガラクツロナーゼ生産酵母（ＴＩＰｇａＡ株、ＴＩＰｇａＢ株）を利用することで粕重量は減少し、得られたモロミ上清は、液量の増加及びアルコール濃度の向上を認めることができた。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＡを示す。
【図２】組換えベクターＹＩｐ−ＰｇａＢを示す。
【図３】ポリガラクツロナーゼをコードするＰｇａＡ遺伝子の塩基配列を示す。
【図４】ポリガラクツロナーゼをコードするＰｇａＢ遺伝子の塩基配列を示す。
【図５】プライマーＰｇａＡ１（上段）及びプライマーＰｇａＡ２（下段）を示す。
【図６】プライマーＰｇａＢ１（上段）及びプライマーＰｇａＢ２（下段）を示す。
【図７】Ｐｒｉｍｅｒ１（上段）及びＰｒｉｍｅｒ２（下段）を示す。
【図８】Ｐｒｉｍｅｒ３（上段）及びＰｒｉｍｅｒ４（下段）を示す。
【配列表フリーテキスト】
【００４５】
＜110＞        National Research Institute of Brewing 
＜120＞        Producing Method of Japanese Sakes by Utilizing of Polygalacturonase
＜130＞        6783
＜140＞        2004-3-30
＜160＞          10
【図１】
2005278575.tif 000002
【図２】
2005278575.tif 000003
【図３】
2005278575.tif 000004
【図４】
2005278575.tif 000005
【図５】
2005278575.tif 000006
【図６】
2005278575.tif 000007
【図７】
2005278575.tif 000008
【図８】
2005278575.tif 000009
【配列表】
2005278575000001.xml