(57)【要約】【課題】  天然物由来のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γ（ＰＰＡＲγ）リガンド剤、及びそれを有効成分として含有するメタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝の予防及び改善する作用を有する組成物を提供することを課題とする。【解決手段】  本発明のＰＰＡＲγリガンド剤は、デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸、及びこれらの化合物の医薬上又は飲食上許容される塩である。本発明のＰＰＡＲγリガンド剤を有効成分とする組成物は、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝の予防及び改善する上で有用である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸、及び医薬上若しくは飲食上許容されるこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤。
【請求項２】
デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸、及び医薬上若しくは飲食上許容されるこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物を、単独で又はその総和として１重量％以上含有する請求項１記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤。
【請求項３】
請求項１記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤を有効成分とするメタボリックシンドロームを予防及び／又は改善する作用を有する組成物。
【請求項４】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤を１重量％以上９９重量％以下含有する請求項３記載のメタボリックシンドロームを予防及び／又は改善する作用を有する組成物。
【請求項５】
請求項１記載のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤を有効成分とする、インスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群から選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物。
【請求項６】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤を１重量％以上９９重量％以下含有する請求項５記載のインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群から選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤、及びペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤を有効成分とするメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善する作用を有する組成物、さらにインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群より選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（Peroxisome Proliferator-activated receptor:ＰＰＡＲ）は、脂質及び糖代謝を維持する遺伝子群の発現制御を担う核内受容体ファミリーに属するリガンド依存性転写制御因子である。哺乳動物ではＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ（ＰＰＡＲβ、ＮＵＣ−１、ＦＡＡＲ）、ＰＰＡＲγの３種のサブタイプの存在が知られており、ＰＰＡＲαは主に肝臓で、ＰＰＡＲδは普遍的に発現している。ＰＰＡＲγにはＰＰＡＲγ１とＰＰＡＲγ２の２種のアイソフォームが存在しており、ＰＰＡＲγ１は脂肪組織の他に免疫系臓器や副腎、小腸で発現している。ＰＰＡＲγ２は脂肪組織で特異的に発現しており、脂肪細胞の分化・成熟を制御するマスターレギュレーターである（非特許文献１を参照）。
【０００３】
ＰＰＡＲγリガンドとしては、１５−デオキシ−Δ12,14−プロスタグランジンＪ２やΔ12−プロスタグランジンＪ２などのアラキドン酸代謝物、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの不飽和脂肪酸、９−ヒドロキシオクタデカジエン酸や１３−ヒドロキシオクタデカジエン酸などのエイコサノイド類が知られている（非特許文献２を参照）。また、共役トリエン構造または共役テトラエン構造を有する炭素数１０〜２６の共役不飽和脂肪酸などがＰＰＡＲγリガンドであることが開示されている（特許文献１を参照）。さらに、合成化合物では、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンなどのチアゾリジン誘導体がＰＰＡＲγリガンドであることが知られている。
【０００４】
ＰＰＡＲγリガンドであるチアゾリジン誘導体は、ＰＰＡＲγを活性化することにより、前駆脂肪細胞から分化した正常機能を有する小型脂肪細胞を増加させ、またインスリン抵抗性を惹起するＴＮＦαや遊離脂肪酸の産生や分泌が亢進している肥大脂肪細胞をアポトーシスにより減少させることで、インスリン抵抗性を改善する（非特許文献３を参照）。さらにインスリン抵抗性を改善することにより、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝などの症状の予防及び改善にも有効である。よって、ＰＰＡＲγリガンドは、インスリン抵抗性を基盤とする一連の病態群、すなわちメタボリックシンドロームの予防及び改善に有効である。
デヒドロジオイゲノールＡは、ナツメグなどに含まれるフェニルプロパノイド誘導体の一つであり（非特許文献４）、藤田らの方法（非特許文献５を参照）などで合成できる。デヒドロジオイゲノールＡには、チロシナーゼ活性阻害効果（特許文献２を参照）や紫外線誘発突然変異抑制効果（特許文献３を参照）などがあることが知られている。
【０００５】
デヒドロジオイゲノールＢは、クローブ油などから見い出されているフェニルプロパノイド誘導体の一つである。デヒドロジオイゲノールＢには、活性酸素消去効果（特許文献４を参照）や抗菌・抗カビ・抗炎症効果（特許文献５を参照）などがあることが知られている。
【０００６】
マグノロールは、厚朴などに含まれているフェニルプロパノイド誘導体の一つである（非特許文献６を参照）。マグノロールには、コレステロール吸収抑制効果（特許文献６を参照）や活性酸素消去効果（特許文献７を参照）などがあることが知られている。
オレアノール酸は、オリーブ葉（非特許文献７を参照）やクローブ（非特許文献８を参照）などに含まれているβ−アミリン系トリテルペンの一種である。オレアノール酸には、リパーゼ阻害活性（特許文献８を参照）や抗糖尿病効果（特許文献９を参照）などがあることが知られている。
【０００７】
ベツリン酸は、クローブ（非特許文献９を参照）などに含まれているルペオール系トリテルペンの一種である。ベツリン酸には、抗ＨＩＶ効果（非特許文献１０を参照）、抗マラリア効果（非特許文献１０を参照）などがあることが知られている。
【０００８】
しかし、上記の化合物がＰＰＡＲγリガンド活性を有していることは未だ知られていない。
【特許文献１】特開２０００−３５５５３８号
【特許文献２】特許２８０４８５０号
【特許文献３】特許２８８３７５８号
【特許文献４】特許２８１０２２０号
【特許文献５】特開平０９−１７６０７４号
【特許文献６】特開平０８−００３０３３号
【特許文献７】特開平０５−０５１３１６号
【特許文献８】特開平１０−２６５３２８号
【特許文献９】特許１４８２２６０号
【非特許文献１】医学のあゆみ，１９９８年，１８４巻，５１９〜５２３頁
【非特許文献２】Diabetologia，１９９９年，４２巻，１０３３〜１０４９頁
【非特許文献３】The Journal of Clinical Investigation，１９９８年，１０１巻，１３５４〜１３６１頁
【非特許文献４】Agricultural and Biological Chemistry，１９７３年，３７巻，８８９〜８９５頁
【非特許文献５】日本化学雑誌，１９６６年，８７巻，１１０〜１１２頁
【非特許文献６】Journal of Pharmaceutical Sciences，１９８１年，７０巻，９５１〜９５２頁
【非特許文献７】Journal of Ethnopharmacology，２００３年，８４巻，２９９〜３０５頁
【非特許文献８】Journal of Natural Products，１９９６年，５９巻，９８７〜９９０頁
【非特許文献９】Journal of Natural Products，１９９４年，５７巻，２４３〜２４７頁
【非特許文献１０】Phytotherapy Research，１９９９年，１３巻，１１５〜１１９頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上記に鑑み、ＰＰＡＲγリガンドはインスリン抵抗性を改善することから、メタボリックシンドロームを予防及び／又は改善する効果や、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群より選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／または改善する効果が期待される。よって、本発明は、天然物由来のＰＰＡＲγリガンド、及びそれを有効成分とするメタボリックシンドロームを予防及び／又は改善する組成物、さらにインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群より選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、クローブ抽出物や生薬として知られる厚朴抽出物にＰＰＡＲγリガンド活性を見出し、さらに鋭意研究を重ねた結果、これらの抽出物に含まれる特定成分がＰＰＡＲγリガンド活性を有し、その特定成分がデヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸、及び医薬上若しくは飲食上許容されるこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤に関する。
また、本発明は、上記のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤を有効成分とするメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善する作用を有する組成物に関する。
【００１２】
さらに、本発明は、上記のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド剤を有効成分とするインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群から選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物に関する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、天然物由来のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体γリガンド、及びそれを有効成分として含有する組成物が提供される。本発明の組成物は、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝などを予防及び／又は改善する上で、有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。本発明のＰＰＡＲγリガンド剤は、デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸、及び医薬上若しくは飲食上許容されるこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物である。
【００１５】
本発明でいうＰＰＡＲγリガンド剤とは、ＰＰＡＲγリガンド活性を有する化合物を含む物質、すなわちＰＰＡＲγのリガンド結合領域に結合する能力を有する化合物を含む物質である。ＰＰＡＲγリガンド活性は、例えば、ＰＰＡＲγリガンド結合領域とＧＡＬ４との融合タンパクに対する結合をルシフェラーゼの発現で評価するレポーター・アッセイ（Cell，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁）や、ＰＰＡＲγリガンド結合領域を含むタンパクを用いたコンペティション・バインディング・アッセイ（Cell，１９９５年，８３巻，８１３〜８１９頁）などにより測定することができる。これらのアッセイにおいて、サンプルの活性は一般に溶媒対照と比較し、溶媒対照よりも高い活性を示し、なおかつ用量依存性が認められるサンプルを「ＰＰＡＲγリガンド活性あり」と評価する。
本発明に用いるデヒドロジオイゲノールＡは、下記化学式（１）で表される化合物である。
【００１６】
【化１】
2005097216.tif 000002
本発明に用いるデヒドロジオイゲノールＢは、下記化学式（２）で表される化合物である。
【００１７】
【化２】
2005097216.tif 000003
本発明に用いるマグノロールは、下記化学式（３）で表される化合物である。
【００１８】
【化３】
2005097216.tif 000004
本発明に用いるオレアノール酸は、下記化学式（４）で表される化合物である。
【００１９】
【化４】
2005097216.tif 000005
本発明に用いるベツリン酸は、下記化学式（５）で表される化合物である。
【００２０】
【化５】
2005097216.tif 000006
本発明に用いるデヒドロジオイゲノールＡは、クローブ、ナツメグなどから抽出調製したものでもよいし、藤田らの方法（日本化学雑誌，１９６６年，８７巻，１１０〜１１２頁）やオイゲノールを二量化させる方法（Chemical & pharmaceutical bulletin，２０００年，４８巻，１４６７〜１４６９頁、特開平０９−１７６０７４号）などにより合成したものも使用できる。
【００２１】
本発明に用いるデヒドロジオイゲノールＢは、クローブなどから抽出調製したものでもよいし、オイゲノールを二量化させる方法（特開平０９−１７６０７４号）などにより合成したものも使用できる。
本発明に用いるマグノロールは、厚朴などから抽出調製したものでもよいし、化学合成したものや市販品なども使用できる。
【００２２】
本発明に用いるオレアノール酸は、クローブ、オリーブ、センブリ、ゲンチアナ、カリン、ウメ、タイム、なつめ、キンモクセイ、ネズミモチ、サンシュユ、柿、ビワ、レンギョウ、サンザシ、ブドウなどの植物から抽出調製してもよいし、チクセツニンジン、サトウダイコンなどの抽出物を酸加水分解して得たものや市販品なども使用できる。
【００２３】
本発明に用いるベツリン酸は、クローブ、タイソウ、ナツメ、カキ、カバノキ科植物などから抽出調製してもよいし、ベツリンから合成する方法（Synthet. Commun.，１９９７年，２７巻，１６０７〜１６１２頁）などにより合成したものや市販品なども使用できる。
【００２４】
本発明に用いるデヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸は、純粋な化合物を使用できるが、医薬品や食品として不適切な不純物を含有しない限り半精製のものでも使用することができる。
【００２５】
医薬上若しくは飲食上許容される塩とは、医薬若しくは飲食物に使用する上で不適当なものでなければ特に限定されず、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ（又は土類）金属塩、アミン塩、ピリジニウム塩といった有機塩等の医薬若しくは飲食物において常用される塩類が広く包含される。
【００２６】
本発明においてデヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸、及び医薬上若しくは飲食上許容されるこれらの塩からなる群より選ばれる少なくとも１種以上の化合物のPPARγリガンド剤中の含有量は、PPARγリガンド活性を失わない範囲であればよく、１重量％以上である。PPARγリガンド活性の強さから好ましくは、５重量％以上である。PPARγリガンド剤の物性からさらに好ましくは、１０重量％以上５０重量％以下である。
【００２７】
単独で又は総和として１重量％以上含有するとは、デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸、及び医薬上若しくは飲食上許容されるこれらの塩からなる群より選ばれる化合物の単独での含有量が１重量％以上である、又は２種以上の化合物の各含有量の総和が１重量％以上であることを指す。
【００２８】
本発明のメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善する作用を有する組成物、及びインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群から選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物は、前記ＰＰＡＲγリガンド剤を有効成分として含有することを特徴とする。組成物中のＰＰＡＲγリガンド剤含有量としては、上記の効果を失わない範囲であればよく、１重量％以上９９重量％以下である。好ましくは５重量％以上８０重量％以下である。さらに好ましくは、１０％重量％以上５０重量％以下である。
【００２９】
メタボリックシンドロームとは、インスリン抵抗性を基盤とする２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝などの一連の病態群を合併した状態を表し、シンドロームＸ、インスリン抵抗性症候群、内臓脂肪症候群、マルチプルリスクファクター症候群などの呼称で知られている。本発明において、メタボリックシンドロームの予防とは、上記の病態群より選ばれる少なくとも２つ以上の病態において、その症状になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。本発明において、メタボリックシンドロームの改善とは、上記の病態群より選ばれる少なくとも２つ以上の病態において、その症状を緩和又は治癒することを指す。
【００３０】
本発明のインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群より選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物は、上記の各症状のうち、２つ以上を併発している状態に対しての予防及び／又は改善剤として用いることができる。
【００３１】
本発明において、インスリン抵抗性とは、骨格筋・脂肪細胞・肝臓で、インスリンの主な作用である糖の吸収促進作用が弱っている状態を指す。インスリン抵抗性の予防とは、ＳＳＰＧ（steady-state plasma glucose）法などによるインスリン抵抗性の指標となる値がより悪化するのを防ぐ又は遅らせることを指す。インスリン抵抗性の改善とは、上記のインスリン抵抗性の指標となる値をより改善することを指す。
【００３２】
本発明において、２型糖尿病の予防とは、日本糖尿病学会が糖尿病治療ガイド２００２−２００３（２００２年５月発行）にて定義している糖尿病の状態または境界域の状態になるのを防ぐまたは遅らせることを指す。また、糖尿病の改善とは、上記の糖尿病の状態または境界域の状態から、上記ガイドにて正常域と定義している状態に近づけることを指す。
【００３３】
本発明において、高脂血の予防とは、日本動脈硬化学会が動脈硬化性疾患診療ガイドライン（２００２年９月発行）にて定義している高脂血症の状態または境界域の状態になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。また、高脂血の改善とは、上記に示す高脂血症の状態または境界域の状態から、上記ガイドラインにて正常域と定義している状態に近づけることを指す。
【００３４】
本発明において、高血圧の予防とは、日本高血圧学会が高血圧治療ガイドライン（２０００年６月発行）にて、高血圧と定義している状態になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。また、高血圧の改善とは、上記ガイドラインで高血圧と定義されている状態から、上記ガイドラインにて正常域と定義している状態に近づけることを指す。
【００３５】
本発明において、内臓脂肪型肥満の予防とは、ＭＲＩで臍の位置の断面像にて見られる内臓脂肪面積が増加することを防ぐ又は遅らせることを指す。内臓脂肪型肥満の改善とは、ＭＲＩで臍の位置の断面像にて見られる内臓脂肪面積を減少させることを指す。
【００３６】
本発明において、脂肪肝とは、肝臓内に脂質、主にトリグリセリドなどの中性脂肪が過剰に蓄積した状態、すなわち、肝細胞のほぼ半数以上に脂肪空胞が認められる状態を指す。脂肪肝の予防とは、上記の状態になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。脂肪肝の改善とは、上記の状態から正常な肝臓に近づけることを指す。
【００３７】
本発明のＰＰＡＲγリガンド剤、及びこれを有効成分とするメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善する作用を有する組成物、さらに上記のＰＰＡＲγリガンド剤を有効成分とするインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群より選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物は、飲食用および医薬用として利用することができ、その形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品などの飲食品、あるいはＯＴＣなど容易に入手可能な医薬品または医薬部外品などとして利用できる。
【００３８】
飲食品として用いる場合は、そのまま直接摂取することができ、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することができる。また、栄養強化を目的として、ビタミンＡ、Ｃ、Ｄ、Ｅなどの各種ビタミン類を添加、併用して用いることもできる。これらの成型剤における本発明のメタボリックシンドロームの予防及び／又は改善する作用を有する組成物、及びインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群から選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物の含有量は、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは１０〜９０重量％である。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、はんぺんなどの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用メタボリックシンドロームの予防及び／又は改善する作用を有する組成物、及びインスリン抵抗性、２型糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝からなる群から選ばれる２つ以上の状態又は症状を予防及び／又は改善する作用を有する組成物を摂取する場合、その摂取量は当該抽出物として成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００３９】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、座薬、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、当該抽出物換算で成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【００４０】
医薬部外品として用いる場合は、必要に応じて他の添加剤などを添加して、例えば、軟膏、リニメント剤、エアゾール剤、クリーム、石鹸、洗顔料、全身洗浄料、化粧水、ローション、入浴剤などに使用することができ、局所的に用いることができる。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４２】
（実施例１）ＰＰＡＲγリガンド活性
ＣＶ−１細胞（雄性アフリカミドリザル腎臓由来の培養細胞）を９６穴培養プレートに６ｘ１０3ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように植え込み、３７℃、５％ＣＯ2条件下で２４時間培養した。培地には、１０％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）、１０ｍｌ／Ｌペニシリン・ストレプトマイシン溶液（それぞれ５０００ＩＵ／ｍｌ、５０００μｇ／ｍｌ、ＧＩＢＣＯ社）、３７ｍｇ／Ｌアスコルビン酸（和光純薬工業株式会社）を含むＤＭＥＭ（Dulbeccos Modified Eagle Medium：ＧＩＢＣＯ社）を用いた。細胞をＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ社）で洗浄した後、ｐＭ−ＰＰＡＲγと４ｘＵＡＳｇ−ｌｕｃをリポフェクトアミン・プラス（ＧＩＢＣＯ社）を用いてトランスフェクションした。なお、ｐＭ−ＰＰＡＲγは、哺乳類発現プラスミドであるｐＭ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社）に酵母由来転写因子ＧＡＬ４遺伝子（アミノ酸配列１〜１４７）とヒトＰＰＡＲγリガンド結合部位遺伝子（アミノ酸配列１７４〜４７５）を結合したキメラタンパクの遺伝子を挿入したプラスミドであり、４ｘＵＡＳｇ−ｌｕｃはルシフェラーゼ遺伝子の上流にＧＡＬ４の応答配列（ＵＡＳｇ）を４回組み込んだレポーター・プラスミドである（Cell，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁などに記載の方法で作成可能）。トランスフェクションの約２４時間後、サンプルを含む培地に交換し（ｎ＝４）、２４時間培養した。サンプルはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解したものを、無処置対照にはＤＭＳＯを用い、培地に１／１０００量添加した。細胞をＣａ、Ｍｇ含有リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ＋）で洗浄した後、ルックライト（Ｐａｃｋａｒｄ社）を添加し、トップカウント・マイクロプレートシンチレーション／ルミネッセンスカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。
測定群と同様に、コントロール群としてｐＭ−ＰＰＡＲγの代わりにｐＭを用いて測定した。各サンプルについて、測定群及びコントロール群の発光強度の平均値（ｎ＝４）の比（測定群／コントロール群）を算出し、無処置対照に対する比活性をサンプルのＰＰＡＲγリガンド活性とした。
上記の方法を用い、デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸のＰＰＡＲγリガンド活性を測定した。その結果を表１及び表２に示す。
【００４３】
【表１】
2005097216.tif 000007
【００４４】
【表２】
2005097216.tif 000008
陽性対照としてトログリタゾン（三共株式会社）を用い、各化合物のＰＰＡＲγリガンド活性を比較した。表１及び表２から明らかなように、デヒドロジオイゲノールＡ、デヒドロジオイゲノールＢ、マグノロール、オレアノール酸、ベツリン酸に、濃度依存的にＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。
【００４５】
（比較例１）
上記の化合物と構造が類似している厚朴やクローブに含まれる化合物について、実施例１と同様にして、ＰＰＡＲγリガンド活性を測定した。その結果を表１及び表２に示す。検討した化合物において、ＰＰＡＲγリガンド活性は見られなかった。