(57)【要約】【課題】本発明は高いミスマッチ塩基対形成能と蛍光特性を有する新規ヌクレオシドとそのホスホロアミダイト誘導体を創製し提供すること。【解決手段】【化１】2005015395.tif 000012一般式（ＩＩＩ）（式中、Ｘは水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表し、Ｒ２は水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルを表す）で表されるヌクレオシド誘導体。【選択図】  図４
2005015395.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2005015395.tif 000008
一般式（Ｉ）（式中、Ｘは、水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表す）で表されるヌクレオシド誘導体。
【請求項２】
ｎが１である、請求項１記載のヌクレオシド誘導体。
【請求項３】
Ｘ  が水素又は水酸基である、請求項１又は２記載のヌクレオシド誘導体。
【請求項４】
【化２】
2005015395.tif 000009
一般式ＩＩ（式中、Ｘは水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表し、Ｒ１は２−シアノエチル、４−ニトロフェニルエチル、２−トリメチルシチルエチル、又はメチルを表す）で表される、ホスホロアミダイト化合物。
【請求項５】
ｎが１である、請求項４記載のホスホロアミダイト化合物。
【請求項６】
Ｘが水素又は水酸基である、請求項４又は５記載のホスホロアミダイト化合物。
【請求項７】
【化３】
2005015395.tif 000010
一般式（ＩＩＩ）（式中、Ｘは水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表し、Ｒ２は水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルを表す）で表されるヌクレオシド誘導体。
【請求項８】
ｎが１である、請求項７記載のヌクレオシド誘導体。
【請求項９】
Ｘが水素又は水酸基である、請求項７又は８記載のヌクレオシド誘導体。
【請求項１０】
Ｒ２が水素である、請求項７、８又は９記載のヌクレオシド誘導体。
【請求項１１】
【化４】
2005015395.tif 000011
一般式（ＩＶ）（式中、Ｘは水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表し、Ｒ１は２−シアノエチル、４−ニトロフェニルエチル、２−トリメチルシチルエチル、又はメチルを表し、Ｒ２は水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルを表す）で表されるホスホロアミダイト化合物。
【請求項１２】
ｎが１である、請求項１１記載のホスホロアミダイト化合物。
【請求項１３】
Ｘが水素又は水酸基である、請求項１１又は１２記載のホスホロアミダイト化合物。
【請求項１４】
Ｒ２が水素である、請求項１１、１２又は１３記載のホスホロアミダイト化合物。
【請求項１５】
Ｒ１が２−シアノエチルである、請求項１１ないし１４のいずれか一項に記載のホスホロアミダイト化合物。
【請求項１６】
請求項１〜３及び請求項７〜１０のいずれか一項に記載のヌクレオシド誘導体から成る群から選択された少なくとも一種のヌクレオシド誘導体を含むオリゴ核酸。
【請求項１７】
オリゴ核酸がオリゴＤＮＡ又はオリゴＲＮＡである、請求項１６に記載のオリゴ核酸。
【請求項１８】
請求項４〜６及び請求項１１〜１５のいずれか一項に記載のホスホロアミダイト化合物を用いるオリゴ核酸の合成方法。
【請求項１９】
オリゴ核酸がオリゴＤＮＡ又はオリゴＲＮＡである、請求項１８に記載のオリゴ核酸の合成方法。
【請求項２０】
請求項１６若しくは１７記載のオリゴ核酸、又は請求項１８若しくは１９記載の合成方法で得られたオリゴ核酸から成る、遺伝子解析用プローブ。
【請求項２１】
請求項１６若しくは１７記載のオリゴ核酸、又は請求項１８若しくは１９記載の合成方法で得られたオリゴ核酸を用いることを特徴とする、核酸間のハイブリダイゼーション法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、天然型ヌクレオシドにはない有用な塩基配列認識能と蛍光特性を有する新規ヌクレオシド誘導体および、それらのヌクレオシドホスホロアミダイト化合物に関する。
【０００２】
本発明の化合物を含むように化学的に合成されたオリゴデオキシリボヌクレオチド（オリゴＤＮＡ）は、ＰＣＲ用のＤＮＡプローブ、ＤＮＡ医薬品素材（アンチセンスＤＮＡ、デコイＤＮＡ、オリゴＤＮＡを利用した遺伝子修復用の素材）、及び、遺伝子解析用プローブとして有用である。同様に、本発明の化合物を含むように化学的に合成されたオリゴリボヌクレオチド（オリゴＲＮＡ）は遺伝子解析のＲＮＡプローブ、ＲＮＡ医薬品素材（アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＲＮＡｉを利用した遺伝子発現制御）、人工酵素、アプタマーとして有用である。
【０００３】
【従来の技術】
ＤＮＡやＲＮＡの構成単位であるヌクレオシドは、リボースやデオキシリボースにアデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシルのいずれかが結合した化合物である。これら、アデニン、チミン、グアニン、シトシン、ウラシルは通常、核酸塩基と総称されるが、これらのうち、アデニンとチミン（ウラシル）もしくはグアニンとシトシンは互いに水素結合を介して結合する塩基対形成能を有しており、この塩基対形成能を用いたＤＮＡとＤＮＡ、ＲＮＡとＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡ同士の分子認識は生命体の遺伝情報の維持、発現、制御の分子メカニズムである。また、この分子認識現象は遺伝子解析、遺伝子増幅、クローニング、核酸医薬による遺伝子発現制御など、遺伝子工学、分子生物学、医学における人為的遺伝子制御の手法の基盤技術としても重要である。
【０００４】
最近、遺伝子解析、特にＳＮＰｓ解析の新しい手法として、ミスマッチ塩基対形成能と蛍光特性を有する人工ヌクレオシド類を用いる手法が注目されている。例えば、非特許文献１にはアデニン、グアニンの双方と安定な塩基対を形成することが既に知られている、文献公知の蛍光性化合物であるベンゾピリドピリミジンヌクレオシド（ＢＰＰ）をオリゴＤＮＡに導入し、そのオリゴＤＮＡを相補鎖ＤＮＡとハイブリダイゼーションさせることにより、その相補鎖中のグアニンとアデニンの識別ができることを報告している。
【０００５】
また、オリゴ核酸を医薬品として用いることを考えれば、ミスマッチ塩基対を形成する人工核酸塩基は、生体内のミスマッチ塩基対修復系を利用したジーンターゲッティング（非特許文献２）のための新素材としても有用であると考えられる。
【０００６】
【非特許文献１】
Ｓａｉｔｏ他、ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー、１２５巻、４９７２−４９７３頁、２００３
【非特許文献２】
モレキュラー・メディスン・トゥデイ、４巻、４３１−４３７頁、１９９８年
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、ＢＰＰは３つの芳香環が縮環した構造をとっているため、ＤＮＡ鎖中で、その５‘側および、３’側の近接塩基とのスタッキング相互作用が強すぎ、一部の塩基配列中でのグアニンとアデニンとの識別能力が低下する問題点を有していた。
【０００８】
そこで、本発明は高いミスマッチ塩基対形成能と蛍光特性を有する新規ヌクレオシドとそのホスホロアミダイト誘導体を創製し提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明は以下の各態様に係る発明を提供するものである。
【００１０】
本発明は第一の態様として、以下の一般式（Ｉ）（式中、Ｘは、水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表す）で表されるヌクレオシド誘導体に係る。
【００１１】
【化５】
2005015395.tif 000003
【００１２】
本発明は第二の態様として、以下の一般式（ＩＩ）（式中、Ｘは水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表し、Ｒ１は２−シアノエチル、４−ニトロフェニルエチル、２−トリメチルシチルエチル、又はメチルを表す）で表される、ホスホロアミダイト化合物に係る。
【００１３】
【化６】
2005015395.tif 000004
【００１４】
本発明は第三の態様として、以下の一般式（ＩＩＩ）（式中、Ｘは水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表し、Ｒ２は水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルを表す）で表されるヌクレオシド誘導体に係る。
【００１５】
【化７】
2005015395.tif 000005
【００１６】
本発明は第四の態様として、以下の一般式（ＩＶ）（式中、Ｘは水素、アルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、水酸基、又はハロゲンを表し、ｎは１から４の整数を表し、Ｒ１は２−シアノエチル、４−ニトロフェニルエチル、２−トリメチルシチルエチル、又はメチルを表し、Ｒ２は水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、又はヘテロアリールアルキルを表す）で表されるホスホロアミダイト化合物に係る。
【００１７】
【化８】
2005015395.tif 000006
【００１８】
更に、本発明は第五の態様として、以上のヌクレオシド誘導体から成る群から選択された少なくとも一種のヌクレオシド誘導体を含むオリゴＤＮＡ又はオリゴＲＮＡ等のオリゴ核酸に係る。更に、以上のホスホロアミダイト化合物を用いるオリゴ核酸の合成方法に係る。
【００１９】
尚、ここで、本発明のヌクレオシド誘導体を含むオリゴ核酸とは、ペントースの３’位と５’位でのホスホジエステル結合を介して核酸を構成する成分として該ヌクレオシド誘導体が導入されているオリゴ核酸を意味する。従って、本発明のオリゴ核酸において、ペントースはデオキシリボース及びリボース以外に、上記の各一般式における置換基（Ｘ）がアルコキシ、アルコキシアルキルオキシ、又はハロゲンであるようなペントースも含まれる。
【００２０】
更に、本発明は第六の態様として、上記のオリゴ核酸から成る遺伝子解析用プローブ、及びオリゴ核酸を用いることを特徴とする、核酸間のハイブリダイゼーション法に係る。
【００２１】
【発明の実施の形態】
上記一般（Ｉ）及び（ＩＩＩ）に示されるヌクレオシド誘導体の好適具体例として、例えば、ｎが１であるか、Ｘ  が水素又は水酸基であるか、及び／又は、Ｒ２が水素であるヌクレオシド誘導体を挙げることが出来る。
又、上記一般（ＩＩ）及び（ＩＶ）に示されるホスホロアミダイト化合物の好適具体例として、例えば、ｎが１であるか、Ｘ  が水素又は水酸基であるか、Ｒ１が２−シアノエチルであるか、及び／又は、Ｒ２が水素であるホスホロアミダイト化合物を挙げることが出来る。
【００２２】
以上の各化合物の各置換基において、アルコキシ及びアルキルに含まれる炭素数に特に制限はないが、通常、１〜５程度である。又、アリール及びヘテロアリールは当業者に公知の任意の基であり、代表的な例として、例えば、フェニル、１−ナフチル、２―ナフチル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、イミダゾール−２−イル、イミダゾール−４−イル、ピロール−２−イル、ピロール−３−イル等を挙げることが出来る。
【００２３】
本発明化合物は、当業者に公知の方法を用いて、例えば、本明細書の実施例に記載されている方法に従って合成することが出来る。
【００２４】
本発明のオリゴ核酸（オリゴＤＮＡ及びオリゴＲＮＡ等）も、本発明化合物を用いて当業者に公知の任意の方法で合成することが出来る。こうして調製されたオリゴ核酸は、そこに含まれる本発明のヌクレオシド誘導体の高いミスマッチ塩基対形成能と蛍光特性を利用して、遺伝子解析用プローブ、及び核酸間のハイブリダイゼーション法に使用することができる。このようなハイブリダイゼーションは、ＰＣＲ及びＤＮＡチップ等の当業者に公知の様々な測定手段において利用されている。
【００２５】
即ち、本発明のオリゴ核酸は、ＰＣＲ用のＤＮＡプローブ、ＤＮＡ医薬品素材（アンチセンスＤＮＡ、デコイＤＮＡ、オリゴＤＮＡを利用した遺伝子修復用の素材）、及び、遺伝子解析用プローブ、或いは、遺伝子解析のＲＮＡプローブ、ＲＮＡ医薬品素材（アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ＲＮＡｉを利用した遺伝子発現制御）、人工酵素、アプタマーとしてとして使用することできる。
【００２６】
このようなオリゴ核酸に含まれる塩基数（オリゴヌクレオチドの長さ）に特に制限はなく、使用目的及び用途等に応じて、当業者が適宜選択することが出来る。例えば、遺伝子解析用のプローブとしては、通常、１０〜１００個程度の塩基からなるものが使用される。
更に、本発明のオリゴＤＮＡ及びオリゴＲＮＡに含まれる本発明のヌクレオシド誘導体の種類、数、組み合わせ、及びその位置等も、それらの使用目的及び用途等に応じて、当業者が適宜選択することが出来る。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を詳述する。尚、これらの実施例は本発明の技術的範囲を何等限定するものではない。又、各化合物の番号は、図１及び図２において、各構造式に付した番号と一致する。
【００２８】
【実施例１】
２’−ｄｅｏｘｙ−５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ（２）の合成
２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（１０  ｇ，  ４３．８  ｍｍｏｌ）、ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ（２０  ｇ）を水酸化カリウム水溶液（２００  ｍＬ，  ０．５  Ｎ）に懸濁し、６５  ℃で撹拌した。系内のｐＨを保つように水酸化カリウム水溶液（１０  ｍＬ，  １．０  Ｎ）を加えつつ７日間撹拌した。反応系をＤｏｗｅｘ  ５０Ｗｘ８（ＯＨ−  ｆｏｒｍ）、およびＤｏｗｅｘ  ５０Ｗｘ８（Ｈ＋  ｆｏｒｍ）に通したのち、溶媒をあらかた減圧留去した。残渣にメタノールを加え完全に溶かし、６０Ｎ球状シリカゲル（６０  ｇ）を加え、溶媒を減圧留去した。クロロホルム−メタノールを溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し２’−ｄｅｏｘｙ−５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ（２）を６５％の収率で得た。（７．３５  ｇ，  ２８．５  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）δ２．０４−２．０９  （２Ｈ，  ｍ），  ３．５２−３．５５  （２Ｈ，  ｍ），  ３．７５−３．７９  （１Ｈ，  ｍ），  ４．１１  （１Ｈ，  ｓ），  ４，１２  （１Ｈ，  ｓ），  ４．１９−４．２３  （１Ｈ，  ｍ），  ４．８８  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ４．９４  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ５．２  Ｈｚ），  ５．２３  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ４．３  Ｈｚ），  ６．１７  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ），  ７．７１  （１Ｈ，  ｓ），  １１．３０  （１Ｈ，  ｂｒ）
【００２９】
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’，５’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（３）の合成
２’−ｄｅｏｘｙ−５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ（２）（２．２  ｇ，  ８．５  ｍｍｏｌ）を無水ジオキサンで５回共沸し、無水ジオキサン（４０  ｍＬ）に懸濁した。Ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ（５．４  ｍＬ，  ４３  ｍｍｏｌ）を加え、密栓し６５  ℃で一時間撹拌した。室温に戻し、溶媒を減圧留去したのち、残渣に無水ジメチルホルムアミド（４０  ｍＬ）を加えた。Ｓｏｄｉｕｍ  ａｚｉｄｏ（２．８  ｇ，  ４３  ｍｍｏｌ）を加え、室温で５分撹拌した。水（１００  ｍＬ）を加えたのち、クロロホルム−ピリジン（１：１，  ｖ／ｖ）を有機層として逆抽出を行った。有機層を回収し溶媒を減圧留去したのち、無水ジメチルホルムアミドで５回共沸し、残渣に無水ジメチルホルムアミド（１０  ｍＬ）を加えた。ｉｍｉｄａｚａｌｅ（３．５  ｇ，  ５１  ｍｍｏｌ）、ｔ−ｂｕｔｙｌｃｈｌｏｒｏｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ（３．８４  ｇ，  ２５．６  ｍｍｏｌ）を加え、室温で二時間撹拌した。酢酸エチル（１５０  ｍＬ）を加え、水（１００  ｍＬ）で一度、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００  ｍＬ）で有機層を二度洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。ヘキサン−クロロホルムを溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’，５’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（３）を９１％の収率で得た。（３．９５  ｇ，  ７．７  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ０．０９  （６Ｈ，  ｓ），  ０．１２  （６Ｈ，  ｓ），  ０．９０  （９Ｈ，  ｓ），  ０．９３  （９Ｈ，  ｓ），  １．９５−２．０６  （１Ｈ，  ｍ），  ２．２７−２．３４  （１Ｈ，  ｍ），  ３．７４−３．９０  （２Ｈ，  ｍ），  ３．９４−３．９８  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １４．８  Ｈｚ），  ４．１５  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １４．８  Ｈｚ），  ４．３９−４．４１  （１Ｈ，  ｍ），  ６．３０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．９  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ），  ７．７１  （１Ｈ，  ｓ），  ８．０３  （１Ｈ，  ｂｒ）；  １３Ｃ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  −５．５，  −４．９，  −４．７，  １７．９，  １８．３，  ２５．６，  ２５．８，  ４１．４，  ４６．９，  ６２．７，  ７１．９，  ８５．１，  ８７．８，  １０９．２，  １３８．１，  １４９．９，  １６２．８
【００３０】
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’，５’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ（４）の合成
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’，５’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（３）（２．１  ｇ，  ４  ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（４０  ｍＬ）に溶解させたのち、炭酸ナトリウム水溶液（０．１  Ｍ，  ８０  ｍＬ）を加えた。ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｍｏｎｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（６４４  ｍｇ，  ２  ｍｍｏｌ）、  ２，４，６−ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ（１．８６  ｇ，  ６．０  ｍｍｏｌ）を加え激しく一時間撹拌した。クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層を二度洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。残渣に無水ジオキサン（５０  ｍＬ）加え、アンモニアガス雰囲気下、六時間撹拌した。溶媒を減圧留去したのち、クロロホルムで希釈し飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層を二度洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、クロロホルム−メタノールを溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’，５’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ（４）を６４％の収率で得た。（１．３３  ｇ，  ２．７  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ０．０６  （６Ｈ，  ｓ），  ０．１１  （６Ｈ，  ｓ），  ０．８８  （９Ｈ，  ｓ），  ０．９３  （９Ｈ，  ｓ），  １．９２−２．０３  （１Ｈ，  ｍ），  ２．４１−２．５１  （１Ｈ，  ｍ），  ３．７３−３．９２  （２Ｈ，  ｍ），  ３．９４−３．９７  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０８  （２Ｈ，  ｓ），  ４．３２−４．３７  （１Ｈ，  ｍ），  ６．２６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．２  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ６．２  Ｈｚ），  ７．８１  （１Ｈ，  ｓ）
【００３１】
６−（２−ｄｅｏｘｙ−３，５−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（５）の合成
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’，５’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ（４）（１．３  ｇ，  ２．５５  ｍｍｏｌ）をメタノール（２０  ｍＬ）に溶解し、１０％  Ｐｄ−Ｃ（１２８  ｍｇ）を加え水素ガス雰囲気下四時間撹拌した。反応系をセライト濾過したのち、溶媒を減圧下留去した。残渣を無水ジメチルホルムアミドで５回共沸したのち、無水ジメチルホルムアミド（２００  ｍＬ）に溶解させた。１，１’−ｃａｒｂｏｎｙｌ−ｂｉｓ−１Ｈ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅ（４５５  ｍｇ，  ２．８  ｍｍｏｌ）を加え三時間撹拌した。酢酸エチルで希釈し水で一度、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で二度有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、クロロホルム−メタノールを溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し６−（２−ｄｅｏｘｙ−３，５−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（５）を８５％の収率で得た。（１．３３  ｇ，  ２．７  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ）δ０．０５  （６Ｈ，  ｓ），  ０．０７  （６Ｈ，  ｓ），  ０．８５  （１８Ｈ，  ｓ），  ２．０５−２．１１  （１Ｈ，  ｍ），  ２．１８−２．２７  （１Ｈ，  ｍ），  ３．７１−３．７３  （２Ｈ，  ｍ），  ３．８２−３．８８  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０５  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １４．１  Ｈｚ），  ４．０９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １４．１  Ｈｚ），  ４．２８−４．３４  （１Ｈ，  ｍ），  ６．０９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ６．６  Ｈｚ），  ７．３２  （１Ｈ，  ｓ），  ７．７９  （１Ｈ，  ｓ）  ，  １０．１０  （１Ｈ，  ｓ）；  １３Ｃ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ）  −５．４，  −５．４，  −４．９，  −４．７，  １７．７，  １８．０，  ２５．７，  ２５．７，  ３８．３，  ４０．５，  ６２．６，  ７２．０，  ８５．６，  ８７．２，  ９７．２，  １３７．９，  １５２．６，  １５４．０，  １６０．７
【００３２】
６−（２−ｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（６）の合成
６−（２−ｄｅｏｘｙ−３，５−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（５）（４０９  ｍｇ，  ０．８  ｍｍｏｌ）を無水アセトニリルで５回共沸したのち、ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ  ｈｙｄｒａｔｅ（６２７  ｍｇ，  ２．４  ｍｍｏｌ，無水テトラヒドロフラン溶液（１０  ｍＬ））を加え三時間撹拌した。水に希釈し、水層をクロロホルムで３回洗浄したのち、エタノールを用いて共沸しながら溶媒を減圧下留去した。メタノール−水から結晶化させ６−（２−ｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（６）を８９％の収率で得た。（２０４  ｍｇ，  ０．７１  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．９１−２．１０  （１Ｈ，  ｍ），  ２．１７−２．２３  （１Ｈ，  ｍ），  ３．５２−３．６３  （２Ｈ，  ｍ），  ３．７７−３．８３  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０９  （１Ｈ，  ｓ），  ４．１８−４．２２  （１Ｈ，  ｍ），  ５．００  （１Ｈ，  ｂｒ），  ５．２４  （１Ｈ，  ｂｒ），  ６．１０  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  ７．３３  （１Ｈ，  ｂｒ），  ８．０３  （１Ｈ，  ｓ），  １０．０７  （１Ｈ，  ｂｒ）
【００３３】
【実施例２】
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｕｒｉｄｉｎｅ（７）の合成
２’−ｄｅｏｘｙ−５−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌｕｒｉｄｉｎｅ（２）（３．１  ｇ，  １２  ｍｍｏｌ）を無水ジオキサンで５回共沸し、無水ジオキサン（６０  ｍＬ）に懸濁した。ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ（７．５８  ｍＬ，  ６０  ｍｍｏｌ）を加え、密栓し６５  ℃で一時間撹拌した。室温に戻し、溶媒を減圧留去したのち、残渣に無水ジメチルホルムアミド（６０  ｍＬ）を加えた。Ｓｏｄｉｕｍ  ａｚｉｄｏ（３．９  ｇ，  ６０  ｍｍｏｌ）を加え、室温で５分撹拌した。水（１５０  ｍＬ）を加えたのち、クロロホルム−ピリジン（１：１，  ｖ／ｖ）を有機層として逆抽出を行った。有機層を回収し溶媒を減圧留去したのち、無水ピリジンで５回共沸し、残渣に無水ピリジン（１２０  ｍＬ）を加えた。４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ（４．９  ｇ，  １４．４  ｍｍｏｌ）を加え、室温で二時間撹拌した。クロロホルムで希釈し、水（１００  ｍＬ）で一度、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００  ｍＬ）で有機層を二度洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。クロロホルム−メタノール（１％  ピリジン）を溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）−２’−ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（７）を６０％の収率で得た。（４．２２  ｇ，  ７．２  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ２．３１−２．４８  （２Ｈ，  ｍ），  ３．５９−３．８０  （４Ｈ，  ｍ），  ４．０７  （６Ｈ，  ｓ），  ４．０６−４．０９  （１Ｈ，  ｍ），  ４．５７−４．６２  （１Ｈ，  ｍ），  ６．３９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ），  ６．８５  （４Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ），  ７．２２−７．４０  （９Ｈ，  ｍ），  ７．８１  （１Ｈ，  ｓ），  ８．７７  （１Ｈ，  ｂｒ）
【００３４】
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｕｒｉｄｉｎｅ（８）の合成
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｕｒｉｄｉｎｅ（７）（３．８５  ｇ，  ６．６  ｍｍｏｌ）を無水ジメチルホルムアミドで５回共沸し、残渣に無水ジメチルホルムアミド（１０  ｍＬ）を加えた。ｉｍｉｄａｚａｌｅ（１．０７  ｇ，  １５．８  ｍｍｏｌ）、ｔ−ｂｕｔｙｌｃｈｌｏｒｏｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ（１．１８  ｇ，  ７．９  ｍｍｏｌ）を加え、室温で二時間撹拌した。酢酸エチルで希釈し、水（１００  ｍＬ）で一度、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００  ｍＬ）で有機層を二度洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。ヘキサン−酢酸エチル（１％  ピリジン）を溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｕｒｉｄｉｎｅ（８）を８２％の収率で得た。（３．７５  ｇ，  ５．４  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ−０．０２  （６Ｈ，  ｓ），  ０．０４  （６Ｈ，  ｓ），  ０．８０  （９Ｈ，  ｓ），  ０．８４  （９Ｈ，  ｓ），  ２．１８−２．２８  （１Ｈ，  ｍ），  ２．３３−２．４３  （１Ｈ，  ｍ），  ３．２７−３．６１  （４Ｈ，  ｍ），  ３．８０  （６Ｈ，  ｓ），  ３．９５−３．９９  （１Ｈ，  ｍ），  ４．５２−４．５８  （１Ｈ，  ｍ），  ６．３２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．２  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ６．２  Ｈｚ），  ６．８４  （４Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ），  ７．２６−７．４１  （９Ｈ，  ｍ），  ７．９０  （１Ｈ，  ｓ），  ８．３８  （１Ｈ，  ｂｒ）
【００３５】
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（９）の合成
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｕｒｉｄｉｎｅ（８）（２．１  ｇ，  ４．１  ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（３０  ｍＬ）に溶解させたのち、炭酸ナトリウム水溶液（０．１  Ｍ，  ６０  ｍＬ）を加えた。ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｍｏｎｉｕｍ  ｂｒｏｍｉｄｅ（６６１  ｍｇ，  ２．１  ｍｍｏｌ）、  ２，４，６−ｔｒｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ（１．８６  ｇ，  ６．２  ｍｍｏｌ）を加え激しく一時間撹拌した。クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層を二度洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。残渣に無水ジオキサン（６０  ｍＬ）加え、アンモニアガス雰囲気下、六時間撹拌した。溶媒を減圧留去したのち、クロロホルムで希釈し飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層を二度洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、クロロホルム−メタノール（１％  ピリジン）を溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（９）を６６％の収率で得た。（１．３４  ｇ，  １．９  ｍｍｏｌ）
【００３６】
６−（２−ｄｅｏｘｙ−３−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−５−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（１０）の合成
５−ａｚｉｄｏｍｅｔｈｙｌ−３’−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−２’−ｄｅｏｘｙ−５’−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）ｃｙｔｉｄｉｎｅ（９）（９８８  ｍｇ，  １．４１  ｍｍｏｌ）をメタノール（１５  ｍＬ）に溶解し、ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｏｒｍａｔｅ（２６７  ｍｇ，  ４．２  ｍｍｏｌ）、１０％  Ｐｄ−Ｃ（７０  ｍｇ）を加え四時間撹拌した。反応系をセライト濾過したのち、溶媒を減圧下留去した。残渣を無水ジメチルホルムアミドで５回共沸したのち、無水ジメチルホルムアミド（７０  ｍＬ）に溶解させた。１，１’−ｃａｒｂｏｎｙｌ−ｂｉｓ−１Ｈ−ｉｍｉｄａｚｏｌｅ（１６２  ｍｇ，  １．７  ｍｍｏｌ）を加え三時間撹拌した。酢酸エチルで希釈し水で一度、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で二度有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、ヘキサン−クロロホルム（１％  ピリジン）を溶出溶媒にシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し６−（２−ｄｅｏｘｙ−３−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−５−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（１０）を８６％の収率で得た。（８５２  ｍｇ，  １．２  ｍｍｏｌ）
【００３７】
６−（２−ｄｅｏｘｙ−５−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（１１）の合成
６−（２−ｄｅｏｘｙ−３−Ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙｌ−５−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）  −β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（１０）（７３０  ｍｇ，  １．０  ｍｍｏｌ）を無水アセトニリルで５回共沸したのち、ｔｅｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ  ｈｙｄｒａｔｅ（３２８  ｍｇ，  １．２５  ｍｍｏｌ，無水テトラヒドロフラン溶液（１０  ｍＬ））を加え三時間撹拌した。クロロホルムで希釈し水で一度、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で二度有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下留去し、クロロホルム−メタノールを溶出溶媒にＮＨシリカゲルを用いてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し６−（２−ｄｅｏｘｙ−５−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（１１）を７６％の収率で得た。（４６０  ｍｇ，  ０．７７  ｍｍｏｌ）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ２．０６−２．１８  （１Ｈ，  ｍ），  ２．２５−２．３４  （１Ｈ，  ｍ），  ３．２０−３．２３  （２Ｈ，  ｍ），  ３．５７−３．７６  （８Ｈ，  ｍ），  ３．９１−３．９４  （１Ｈ，  ｍ），  ４．２１−４．２９  （１Ｈ，  ｍ），  ５．３２  （１Ｈ，  ｂｒ），  ６．１３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ６．２  Ｈｚ，  Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ），  ６．８９  （４Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ８．９  Ｈｚ），  ７．２０−７．３７  （１０Ｈ，  ｍ），  ７．８９  （１Ｈ，  ｓ），  １０．００  （１Ｈ，  ｂｒ）
【００３８】
（１２）の合成
６−（２−ｄｅｏｘｙ−５−Ｏ−（４，４’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ）−β−Ｄ−ｒｉｂｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）−４，６−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ，３Ｈ−ｐｙｒｉｍｉｄｏ［４，５−ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ−２，７−ｄｉｏｎｅ（１１）（５８  ｍｇ，  ０．１  ｍｍｏｌ）を無水ジメチルホルムアミドにより３回共沸脱水したのち、無水ジメチルホルムアミド（１  ｍｌ）に溶解し、Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｅ（１４．１  μＬ，  ０．１  ｍｍｏｌ）、１Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｅ（７  ｍｇ，  ０．１  ｍｍｏｌ）、（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｏｘｙ）ｂｉｓ（Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏ）ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ（６４  μＬ，  ０．２  ｍｍｏｌ）を加え室温で三時間攪拌した。５％炭酸水素ナトリウム水溶液で有機層を二度洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧下留去した。クロロホルムで希釈し水で一度、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で二度有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。アセトニトリルを溶出溶媒にＬＣ−９０８を用いて精製し（１２）を８２％の収率で得た。（６４  ｍｇ，  ８２％）
化合物のＮＭＲデータ：
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ１．００−１．１６  （１２Ｈ，  ｍ），  ２．３６−２．７３  （４Ｈ，  ｍ），  ３．１３−３．８９  （１０Ｈ，  ｍ），  ４．１２−４．１９  （１Ｈ，  ｍ），  ４．６３−４．７２  （１Ｈ，  ｍ），  ５．９１，  ５．９５  （１Ｈ，  ２ｂｒ），  ６．２２  （１Ｈ，  ｍ），  ６．８０−６．８５  （４Ｈ，  ｍ），  ７．２０−７．８５  （９Ｈ，  ｍ），  ７．８５  （１Ｈ，  ｂｒ），  ８．１５，  ８．２０  （１Ｈ，  ２ｓ）；  １３Ｃ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  ２０．２，  ２０．３，  ２０．４，  ２４．６，  ３８．５，  ４０．９，  ４１．２，  ４３．１，  ４３．２，  ４３．３，  ４３．４，  ５５．３，  ５５．３，  ５８．０，  ５８．０，  ５８．２，  ５８．３，  ６１．９，  ６２．２，  ７１．３，  ７１．６，  ７２．１，  ７２．４，  ７６．５，  ８５．３，  ８５．４，  ８５．５，  ８５．６，  ８６．６，  ８６．７，  ８６．８９，  ９６．７，  ９６．８，  １１３．２，  １１７．３，  １１７．５，  １２７．２，  １２８．１，  １２８．２，  １３０．１，  １３０．１，  １３４．９，  １３４．９，  １３５．０，  １３５．０，  １３８．８，  １４４．０，  １５２．９，  １５４．６，  １５４．６，  １５８．６，  １５８．６，  １５９．８，  １５９．９
【００３９】
【実施例３】
Ｔｍ実験法
ＤＮＡ二本鎖の２μＭ  溶液を５０  ｍＭ  ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｐＨ７．０，  １００  ｍＭ  ＮａＣｌ，  ０．１  ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝液にて作成し、８０度で１０分保った後、０．５度毎分で降温（２０度まで）し、その後、０．５度／分で８０度まで昇温し、この過程におけるＵＶ吸光度の変化を２６０ナノメータにて測定した。Ｔｍ値は微分法にて求めた。この結果を表１及び図３に示す。この結果から、本発明化合物であるＣｈｐ（実施例１で合成した化合物（６）に相当する）はグアニン（Ｇ）と安定な塩基対を形成するのみならず、アデニン（Ａ）とも安定な塩基対を形成することがわかった。
【００４０】
【表１】
2005015395.tif 000007
【００４１】
【実施例４】
同様に実施例１で合成した化合物（６）を用いて、上記実施例３のＴｍ測定と同じ塩基配列を用いて、５μＭ  溶液（１０ｍＭ  ｓｏｄｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｐＨ７．０）、励起波長３００ｎｍで測定した。この結果、図４から明らかなように、本発明化合物の蛍光特性が、アデニンとのミスマッチ塩基対とグアニンとのマッチ塩基対の識別に有用であることが示された。
【００４２】
【実施例５】
化合物（１２）をアセトニトリル−ＤＭＦ（８：２，ｖ／ｖ）中、濃度が０．１Ｍになるように溶解し、市販のＤＮＡ自動合成装置を用いＤＮＡ鎖を伸長した後、濃アンモニア水で一晩処理することにより目的とするＤＮＡ鎖を以下の収率（ＸはｄＣｈｐを表す）で得た。
ＣＧＣＡＡＴＸＴＡＡＣＧＣ（４５％）
ＴＴＴＣＴＣＸＴＴＣＴＣＴ（４４％）
ＣＧＸＡＡＴＸＴＡＡＸＧＣ（３５％）
【００４３】
【発明の効果】
本発明のオリゴＤＮＡであるオリゴヌクレオチドプローブは、対応する塩基配列を有する天然型オリゴＤＮＡと比較して、グアニン（Ｇ）及びアデニン（Ａ）との間でより高い塩基対形成能（ハイブリダイゼーション能）を示し、そこに含まれるヌクレオシド誘導体自身が有する蛍光特性を利用して、アデニンとのミスマッチ塩基対とグアニンとのマッチ塩基対の識別能力（塩基配列認識能）を有することが示された。このように、本発明の化合物が発する蛍光を検出することでハイブリダイゼーションの様子を容易に検出することが可能である。従って、本発明のヌクレオシド誘導体及びオリゴ核酸は遺伝子検出及び遺伝子診断等の様々な分野で利用することが出来る。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のヌクレオシド誘導体（６）の合成手順及び条件（Ｓｃｈｅｍｅ  １）を示す。
【図２】本発明のホスホロアミダイト化合物（１２）の合成手順及び条件（Ｓｃｈｅｍｅ  ２）を示す。
【図３】本発明のオリゴＤＮＡを用いたハイブリダーゼーション実験におけるＴｍ測定の結果を示す。
【図４】本発明のオリゴＤＮＡの蛍光スペクトルを示す。
【図１】
2005015395.tif 000013
【図２】
2005015395.tif 000014
【図３】
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【図４】
2005015395.tif 000016