(57)【要約】【課題】  哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン、家禽類の卵及び血液由来の免疫グロブリン、並びにそれらの酵素処理物を有効成分とする免疫賦活剤を提供する。【解決手段】  免疫賦活剤の有効成分として、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン、家禽類の卵及び血液由来の免疫グロブリン、並びにそれらの酵素処理物から選ばれた少なくとも１種を含有させる。哺乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又はその酵素処理物を有効成分として含有することが好ましい。また、前記酵素処理物は、哺乳動物の乳由来の免疫グロブリン及び／又は家禽類の卵由来の免疫グロブリンのＦａｂフラグメント及び／又はＦｃフラグメントを含むものであることが好ましい。この免疫賦活剤は、経口摂取することにより、サイトカインの発現を促進して免疫グロブリンの産生を促進し、免疫賦活効果が期待できる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン、家禽類の卵及び血液由来の免疫グロブリン、並びにそれらの酵素処理物から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする免疫調節剤。
【請求項２】
哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン及び／又はその酵素処理物を有効成分として含有する、請求項１に記載の免疫調節剤。
【請求項３】
前記酵素処理物は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン及び／又は家禽類の卵及び血液由来免疫グロブリンのＦａｂフラグメント及び／又はＦｃフラグメント及びその分解物を含むものである、請求項１又は２に記載の免疫調節剤。
【請求項４】
前記酵素処理物は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン及び／又は家禽類の卵及び血液由来免疫グロブリンのパパイン、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン及びパンクレアチン処理物である、請求項１〜３のいずれか一つに記載の免疫調節剤。
【請求項５】
前記哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリンは、反芻動物の初乳、又は任意の抗原で免疫された反芻動物の乳から調製されたものである、請求項１〜４のいずれか一つに記載の免疫調節剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の乳や家禽類の卵に含まれる免疫グロブリン及び／又はその酵素処理物を有効成分とし、経口摂取することにより、サイトカインの発現を調節して免疫グロブリンの産生を調節し、免疫賦活効果及び抗アレルギー効果が期待できる免疫調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳動物の初乳には、タンパク質等の栄養素の他に、ラクトフェリンやリゾチーム等の生理活性物質や免疫グロブリンが豊富に含まれており、生まれたばかりの赤ちゃんを病原菌等の感染から保護していることが知られている。
【０００３】
また、病原菌で免疫した乳牛から採取される牛乳（以下、免疫ミルクという）には、該病原菌に対する免疫グロブリンが含まれており、病原菌で免疫した家禽類の卵（以下、免疫卵という）にも該病原菌に対する免疫グロブリンが含まれていることが知られている。
【０００４】
従来より、上記のような免疫グロブリンを含む初乳や免疫ミルク、免疫卵、あるいはそれらから調製された免疫グロブリンを医薬品や健康食品等に利用しようとする試みが検討されている。
【０００５】
例えば、下記特許文献１には、ミュータンス連鎖球菌抗原に対し特異性の抗体を含有する牛乳免疫グロブリンを添加物として有することを特徴とする製薬上許容される賦形剤が開示されている。
【０００６】
下記特許文献２には、微生物性抗原で感作した雌乳牛から搾乳した、その抗体を含有する乳を有効成分としてなることを特徴とする自己免疫病の予防または治療用組成物が開示されている。
【０００７】
下記特許文献３には、細菌性抗原に対する抗体を含有する乳を有効成分として含有する経口日和見感染防止治療用組成物が開示されている。
【０００８】
下記特許文献４には、人間の消化器官内で増殖するヒトロタウイルスまたはヒトロタウイルスワクチンで免疫した採乳用動物から採取される常乳またはその乳成分からなるヒトロタウイルス下痢症に対する予防および治療薬が開示されている。
【０００９】
下記特許文献５には、豚流行性下痢ウイルスを免疫した牛から採取した牛乳又はその乳成分を含有することを特徴とする、豚流行性下痢ウイルスにより引き起こされる豚下痢症の予防治療剤について開示されている。
【特許文献１】特開昭５２−１０１４号公報
【特許文献２】特開平４−１９８１３６号公報
【特許文献３】特開平４−２１１６１３号公報
【特許文献４】特開平８−９２１０８号公報
【特許文献５】特開平１０−２６５３９３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、上記従来の免疫グロブリンを利用した健康食品や医薬品は、免疫グロブリンが抗原と特異的に結合する活性を利用して病原菌等の感染を防ぐものであり、これまで免疫グロブリンやその酵素処理物自体を経口摂取した場合に免疫賦活効果及び抗アレルギー効果があるという報告はなされておらず、免疫グロブリンやその酵素処理物を免疫調節剤として用いた例は知られていない。
【００１１】
したがって、本発明の目的は、哺乳動物の乳や家禽類の卵に含まれる免疫グロブリン及び／又はその酵素処理物を有効成分とする免疫調節剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、初乳や免疫ミルクに含まれる免疫グロブリンの生理活性を研究する過程で、免疫グロブリン及びその酵素処理物がサイトカイン遺伝子の発現を調節して免疫グロブリンの産生を調節することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明の免疫調節剤は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン、家禽類の卵及び血液由来の免疫グロブリン、並びにそれらの酵素処理物から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１４】
本発明の免疫調節剤は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン、家禽類の卵及び血液由来の免疫グロブリン、並びにそれらの酵素処理物から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することにより、サイトカイン遺伝子の発現を調節して免疫グロブリンの産生を調節することができるので、経口摂取することにより免疫賦活効果及び抗アレルギー効果が期待できる。また、免疫グロブリンを工業的に大量に調製することができるので、免疫調節剤を安価に提供することができる。
【００１５】
本発明の免疫調節剤は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン及び／又はその酵素処理物を有効成分として含有することが好ましい。
【００１６】
また、前記酵素処理物は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン及び／又は家禽類の卵及び血液由来免疫グロブリンのＦａｂフラグメント及び／又はＦｃフラグメント及びその分解物を含むものであることが好ましい。これによれば、免疫賦活能及び抗アレルギー能を損なうことなく、熱等に対して比較的安定性の高い免疫調節剤を提供することができる。
【００１７】
更に、前記酵素処理物は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン及び／又は家禽類の卵及び血液由来免疫グロブリンのパパイン、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン及びパンクレアチン処理物であることが好ましい。これによれば、免疫グロブリンをヒンジ部分で切断することができるので、効率よくＦａｂフラグメントとＦｃフラグメント及びその分解物を得ることができる。
【００１８】
更にまた、前記哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリンは、反芻動物の初乳、又は任意の抗原で免疫された反芻動物の乳から調製されたものであることが好ましい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の免疫調節剤は、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリン、家禽類の卵及び血液由来の免疫グロブリン、並びにそれらの酵素処理物から選ばれた少なくとも１種を有効成分として含有することにより、サイトカイン遺伝子の発現を促進し、免疫グロブリンの分泌を促進することができるので、経口摂取することにより、免疫賦活効果及び抗アレルギー効果が期待できる。また、この効果によって、例えば日和見感染症や、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、クローン病のような自己免疫疾患、癌や潰瘍性大腸炎のような疾患等の症状改善が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明において、哺乳動物の乳及び血液由来の免疫グロブリンとは、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ等の哺乳類の初乳（出産後０〜５日目頃までの乳）や、任意の抗原、例えば、細菌性、ウイルス性、毒素等の抗原で免疫した上記哺乳動物から採取される乳に含まれる免疫グロブリンを意味する。
【００２１】
本発明においては、ウシ、ヤギ、ヒツジ等の反芻動物、好ましくは乳牛の初乳、あるいは任意の抗原で免疫した乳牛から採取される乳に含まれる免疫グロブリン（ＩｇＧ）が好ましく用いられる。なお、牛乳中には、２つのサブクラスの免疫グロブリン（ＩｇＧ１及びＩｇＧ２）が含まれているが、本発明では、どちらの免疫グロブリンも用いることができる。
【００２２】
なお、牛乳中のＩｇＧはＩｇＧ1が殆どである。これは、既に教科書でも述べられている一般論である。したがって、牛乳中に含まれるＩｇＧ２は実際には、ウシの血液由来の抗体成分であると判断される。本発明では、哺乳動物の血液由来の免疫グロブリンを利用することもできる。
【００２３】
上記哺乳動物を任意の抗原で免疫して免疫グロブリンを含む乳を採取する方法は、特開昭５２−１０１４号公報、特開昭５４−１１３４２５号公報、特開昭５７−１８８５２３号公報等に記載された方法にしたがって行うことができる。例えば、表１に示す細菌をそれぞれ常法にしたがって培養し、加熱殺菌した後、各菌体を回収して凍結乾燥する。各凍結乾燥菌体を等量ずつ採取して混合し、滅菌した生理的食塩水に懸濁し、４×１０8細胞／ｍｌとなるように希釈してワクチンを調製する。雌乳牛に上記ワクチン５ｍｌ（２０×１０8細胞）を１週間に１回、連続８週間以上筋肉注射し、乳中に十分な量の免疫グロブリンが含まれているのを確認してから、乳を採取すればよい。なお、免疫反応状態を誘導した後は、２週間毎に同一量の上記ワクチンをブースター注射すればよい。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
本発明においては、免疫グロブリンを含む初乳や免疫ミルクから常法にしたがって分離膜やカラムクロマトグラフィー等を用いて精製した免疫グロブリンが好ましく用いられるが、免疫グロブリンを含む乳やその脱脂乳、あるいは乳清を用いることもできる。なお、免疫ミルクや免疫ミルクから調製された乳清は市販されており、例えば、商品名「スターリミルク」、商品名「スターリ乳清」（いずれも兼松ウェルネス株式会社製）等を用いることができる。
【００２６】
一方、家禽類の卵由来の免疫グロブリンとは、任意の抗原、例えば、細菌性、ウイルス性、毒素等の抗原で免疫した、鶏、アヒル、ウズラ等の家禽類の卵（免疫卵）の卵黄に含まれる免疫グロブリン（ＩｇＹ）を意味する。本発明においては、鶏卵由来の免疫グロブリンが好ましく用いられる。
【００２７】
上記家禽類を任意の抗原で免疫して免疫卵を得る方法及び該免疫卵から免疫グロブリンを調製する方法は、例えば、特開２００２−２９９９９号公報、特開平１０−２９８１０５号公報、特開平６−３２９７００号公報、特開平６−１２８２９８号公報等等に記載された方法にしたがって行うことができる。すなわち、産卵鶏に、抗原あるいは抗原と免疫増強活性を有する水酸化アルミニウムゲル又はフロイントアジュバンドとの混合液を、筋肉注射、皮下注射、静脈注射、腹腔注射等の方法により週１回、あるいは隔週１回の割合で合計２〜５回繰り返し投与することにより、卵黄中に免疫グロブリンを高濃度に蓄積させることができる。そして、免疫グロブリンを含む卵黄を回収して脂質成分を除去した後、塩析、エタノール沈殿等の公知のタンパク質精製法にしたがって免疫グロブリンを精製することができる。なお、本発明では、家禽類の血液由来の免疫グロブリンを利用することもできる。
【００２８】
本発明において、免疫グロブリンの酵素処理物とは、上記の初乳、免疫ミルク、免疫卵から調製された免疫グロブリンをプロテアーゼで処理した分解物を意味する。上記プロテアーゼとしては、免疫グロブリンのＦａｂフラグメント及び／又はＦｃフラグメント及びその分解物を生成するものが用いられる。このようなプロテアーゼとしては、パパイン、ペプシン、トリプシン、及びパンクレアチン等が例示できる。本発明においては、パパインとペプシンが特に好ましく用いられる。
【００２９】
免疫グロブリンの酵素処理物は、例えば、精製した免疫グロブリンを、システイン、ＥＤＴＡ及び塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）に溶解し、適量のパパインを添加して４０〜５５℃で６０〜１２０分間反応させた後、酵素を失活させることにより調製することができる。本発明においては、ＦａｂフラグメントとＦｃフラグメント及びその分解物との混合物のまま用いてもよく、上記パパイン消化物をゲル濾過クロマトグラフィー及びアフィニティクロマトグラフィーに供して、ＦａｂフラグメントとＦｃフラグメント及びその分解物とにそれぞれ分離してから用いてもよい。
【００３０】
本発明の免疫調節剤は、他の成分として、例えば、哺乳動物の乳や血液成分、鳥類の卵等を含むことができる。
【００３１】
また、製剤形態は、錠剤、粉末、顆粒、液体、カプセル剤等のいずれの形態であってもよい。
【００３２】
本発明の免疫調節剤の有効摂取量は、成人１日当り、免疫グロブリンあるいはその酵素処理物換算で４８〜１９２ｍｇ（抗体量換算）である。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。  
【００３４】
実施例
ホルスタイン種牛初乳のホエーに硫酸アンモニウムを３３質量％飽和濃度になるように加え、得られた沈殿を蒸留水に対して一晩透析して粗ＩｇＧ画分を調製した。この粗ＩｇＧ画分を、常法にしたがってイオン交換カラムクロマトグラフィー（商品名「DEAE Sephadex A-50」、Pharmacia社製）、プロテインＧカラムクロマトグラフィー（商品名「UltraLink Protein G plus」、Pierce社製）、プロテインＡカラムクロマトグラフィー（商品名「Shodex Afpak APA-894」、昭和電工株式会社製）に供し、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２を分離した。
【００３５】
ＩｇＧ１及びＩｇＧ２のパパイン消化は、システイン、ＥＤＴＡ及び塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．３）中で、基質：酵素＝５０：１にして、５５℃で２時間反応を行った。各パパイン消化物を、常法にしたがってゲル濾過クロマトグラフィー（商品名「Sephadex G-100」、Pharmacia社製）、プロテインＧカラムクロマトグラフィー（商品名「UltraLink Protein G plus」、Pierce社製）に供し、Ｆａｂフラグメント及びＦｃフラグメントをそれぞれ分離精製した。
【００３６】
得られたＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及び各Ｆａｂフラグメント、Ｆｃフラグメントを用いて以下の試験を行った。
【００３７】
（１）マウス脾臓細胞に対する増殖促進活性
６週齢のＣ３Ｈ／ＨｅＮ系雄マウスから無菌的に脾臓細胞を採取し、これを１００Ｕ／ｍｌのペニシリン及び１００μg／ｍｌのストレプトマイシンを含むＣｅｌｇｒｏｓｓｅｒ−Ｐ培地（またはＲＰＭＩ１６００培地）で培養した。
【００３８】
調製したマウス脾臓細胞１．０×１０5個をフラット型９６ウェルプレートに播種し、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１のＦｃフラグメント（ＩｇＧ１−Ｆｃ）、ＩｇＧ１のＦａｂフラグメント（ＩｇＧ１−Ｆａｂ）を、それぞれ０、５０、４００μｇ／ｍｌの濃度で添加して、３７℃、５％炭酸ガス下において培養した。
【００３９】
細胞の増殖活性は４８時間後の細胞数で評価した。培養終了後、免疫細胞の増殖を色素ＭＴＴ法（Mosman,T., J.Immunol. Method. 65(1983), PP55-63）により測定し、フォルマザンの生成は５７０ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー（商品名「Bio-Rad model 450」）で測定して求めた。具体的には、ＭＴＴ試薬（リン酸緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に５ｍｇ／ｍｌになるように臭化３−（４，５−ジメチル−２−チアソリル）−２，５−ジフエニル−２Ｈ−テトラゾリウム（ＭＴＴ）を溶解したもの）を９６ウェルプレートの各ウェルに１０μｌ加え、緩やかに撹拌した後、０．０４Ｎ ＨＣｌを含むイソプロパノール液０．１ｍｌを加え、生じた暗黒色の色素を溶解した後、ＥＬＩＳＡプレートリーダーで５７０ｎｍの吸光度を測定した。その結果を図１に示す。また、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２のＦｃフラグメント（ＩｇＧ２−Ｆｃ）、ＩｇＧ２のＦａｂフラグメント（ＩｇＧ２−Ｆａｂ）を用いて同様の試験を行った。その結果を図２に示す。
【００４０】
図１、２から分かるように、ＩｇＧ１及びＩｇＧ１のＦｃフラグメント、ＩｇＧ２のＦｃフラグメント及びＩｇＧ２のＦａｂフラグメントは濃度依存的にマウス脾臓細胞の増殖を促進しており、コントロールに対して有意差が認められた。
【００４１】
（２）ＩｇＧ、ＩｇＭ，ＩｇＡ産生に及ぼす影響
免疫グロブリンの量は、サンドイッチＥＬＩＳＡ法（Williams, D. J. L. et al., Vet. Immunol. Immunopath., 24(1990), pp267-283）により測定した。
【００４２】
具体的には、マウス脾臓細胞１×１０5個をフラット型９６ウェルプレートに播種し、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１−Ｆｃ、ＩｇＧ１−Ｆａｂ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２−Ｆｃ、ＩｇＧ２−Ｆａｂを、それぞれ０、５０、１００μｇ／ｍｌの濃度で添加して、３７℃、５％炭酸ガス下で４８時間培養し、その上清を回収した。
【００４３】
ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体、ヤギ抗マウスＩｇＭ抗体、ヤギ抗マウスＩｇＡ抗体（Organon TeKnika Corporation; Durham,NC, USA）をそれぞれコートしたマイクロタイタープレートのウェルに、上記回収した各上清を、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で希釈して加え、３７℃で１時間保温した。
【００４４】
各ウェルをリンスした後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎに溶解したペルオキシダーゼ標識ヒツジ抗マウスＩｇＧ抗血清（Cappel Laboratories, Pennsylvania，USA）を加えて２時間処理した。また、ＩｇＡ検出にはペルオキシダーゼ標識ヒツジ抗マウスＩｇＡ抗血清（Binding, Pennsylvania，USA）、ＩｇＭ検出にはペルオキシダーゼ標識ヒツジ抗マウスＩｇＭ抗血清（Binding, Pennsylvania，USA）を用いた。
【００４５】
基質として０．０３％過酸化水素を含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５．０）に溶解したｏ−フェニレンジアミン塩を加えて２０℃で２５分間静置した後、３Ｍ ＮａＯＨを加えて反応を停止し、４９０ｎｍの吸光度を測定し、各上清中におけるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡの産生量を測定した。その結果を図３、４に示す。
【００４６】
図３から分かるように、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１−Ｆｃ、ＩｇＧ１−ＦａｂのいずれもＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡの全ての免疫グロブリンの産生を促進していることが分かる。
【００４７】
図４から分かるように、ＩｇＧ２は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡの全ての免疫グロブリンの産生を促進しているが、ＩｇＧ２−Ｆｃ及びＩｇＧ２−Ｆａｂは、ＩｇＡの産生にはほとんど影響を及ぼさず、ＩｇＧ及びＩｇＭの産生を促進していることが分かる。
【００４８】
一般に，消化管や気管などの粘膜組織に存在するＩｇＡは、それらの器官に侵入したアレルゲンと特異的に結合し，それらアレルゲンに対するＩｇＥ抗体の産生を抑制することや，肥満細胞に結合したＩｇＥ抗体へのアレルゲンの結合を阻害することにより，アレルギーの発症を抑えることが報告されている（「化学と生物」、Vol.41, No.7, 2003、４２８〜４３０頁）。したがって、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１−Ｆｃ、ＩｇＧ１−Ｆａｂ及びＩｇＧ２は、ＩｇＡの産生を促進することから、抗アレルギー効果を有すると考えられる。
【００４９】
（３）サイトカイン遺伝子の発現
マウス脾臓細胞の培養の方法にしたがい１２時間及び３６時間培養したマウス脾臓細胞を１５００ｒｐｍ、５分間遠心分離し回収した。回収したマウス脾臓細胞はＰＢＳで１５００ｒｐｍ、５分間の遠心洗浄を２回行った。洗浄したマウス脾臓細胞は１ｍｌのTRzol試薬（Invitrogen Japan K.K., 東京, 日本）に溶解し、５分間室温で静置した。その後、２００μｌのクロロフォルムを加え、１５秒間強く撹拌した後、３分間静置した。静置した後、１３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、水層を回収した。回収した水層に５００μｌのイソプロピルアルコールを加え、１５秒間強く撹拌後、１０分間静置した。その後、１３００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上清を完全に取り除いた。７５％エタノール１ｍｌを加え、１３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して上清を完全に取り除き、得られた沈殿を総ＲＮＡとした。得られた総ＲＮＡは２０μｌのDiethylpyrocarbonate処理水（ＤＥＰＣ処理水）に溶解した。なお、ＲＮＡ濃度の測定は２６０ｎｍでの吸光度を測定し、以下の式より算出した。
【００５０】
（数１）
ＲＮＡ濃度(μｇ／μｌ)＝２６０ｎｍにおける吸光度×０．０４×希釈倍率
【００５１】
逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）は１μｇの総ＲＮＡに対して５００ｎｇのOlig(ｄT)18を加え、７０℃で１０分間加熱し、直ちに氷冷することでＲＮＡとOlig(ｄT)18の会合を行った。その後、１μｌのSuperScriptII（Invitrogen Japan K.K., 東京, 日本）を加え、４２℃で５０分間保温し、逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを調製した。
【００５２】
得られたｃＤＮＡ １μｌと、配列番号１、２に示すプライマーとTaq DNAポリメラーゼ（Qiagen Inc., Valencia, USA）を用いてＰＣＲ（９４℃：１分、６０℃：１分、７２℃：２分の条件で３０サイクル）を行った。ＰＣＲ後のＤＮＡは、常法にしたがってアガロースゲル電気泳動を行った後、エチジウムブロマイドで染色を行い、ＩＬ−１２ｐ４０遺伝子の相対的な発現量を測定した。
【００５３】
また、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＩＬ−２、ＩＦＮγについても配列番号３〜１６に示すプライマーを用いてＰＣＲ（９４℃：５０秒、６０℃：５０秒、７２℃：１分の条件で３０サイクル）を行い、上記と同様にして各サイトカイン遺伝子の相対的な発現量を測定した。それらの結果を図５に示す。
【００５４】
図５から、ＩｇＧ１は、Ｉｌ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＦＮ−γの発現を促進しており、ＩｇＧ１−Ｆｃは、ＩＬ−５，ＩＬ−６、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γの発現を促進しており、ＩｇＧ１−Ｆａｂは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ―２、ＩＦＮ−γの発現を促進していることが分かる。なお、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６等はＴｈ２細胞の生産するサイトカインとして知られており、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２等はＴｈ１細胞の生産するサイトカインとして知られている。
【００５５】
一方、ＩｇＧ２はいずれのサイトカインの発現に影響を及ぼさないが、その分解物であるＩｇＧ２−Ｆｃ及びＩｇＧ２−Ｆａｂは、ＩＬ−４、ＩＬ−１０の発現を促進していることが分かる。
【００５６】
この結果から、哺乳動物の乳に含まれる免疫グロブリン、及びその分解物であるＦａｂ、Ｆｃフラグメントが、サイトカインの発現を促進して免疫グロブリンの産生を促進する効果を有することが分かる。
【００５７】
なお、本発明者らは、ミルク蛋白質の消化物であるカゼインフォスホペプチド（ＣＰＰ）がin vitro試験において同様の免疫賦活効果及び抗アレルギー効果を有することを見出し、ＣＰＰを仔豚に与えることにより、糞便内ＩｇＡ抗体量が増加すること、ヒトにＣＰＰを投与することにより、腸管ＩｇＡレベルが向上することを確認しており（ＷＯ ０１／１３７３９ Ａ１、ＷＯ ０２／０７２６２９ Ａ１、特願２００２−１９９９７５号等参照）、乳及び血液由来の免疫グロブリン、及びその分解物であるＦａｂ、Ｆｃフラグメントを経口摂取した場合も免疫調節剤として十分機能するものと思われる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】ＩｇＧ１、ＩｇＧ１のＦａｂフラグメント、ＩｇＧ１のＦｃフラグメントのマウス脾臓細胞に対する増殖促進活性をＭＴＴ法により測定した結果を示す図である。
【図２】ＩｇＧ２、ＩｇＧ２のＦａｂフラグメント、ＩｇＧ２のＦｃフラグメントのマウス脾臓細胞に対する増殖促進活性をＭＴＴ法により測定した結果を示す図である。
【図３】ＩｇＧ１、ＩｇＧ１のＦａｂフラグメント、ＩｇＧ１のＦｃフラグメントをマウス脾臓細胞に添加した際の、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ産生に及ぼす影響をＥＬＩＳＡ法により調べた結果を示す図である。
【図４】ＩｇＧ２、ＩｇＧ２のＦａｂフラグメント、ＩｇＧ２のＦｃフラグメントをマウス脾臓細胞に添加した際の、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ産生に及ぼす影響をＥＬＩＳＡ法により調べた結果を示す図である。
【図５】ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びそれらのＦａｂ、Ｆｃフラグメントをマウス脾臓細胞に添加した際の、サイトカイン遺伝子の発現をＲＴ−ＰＣＲ法により調べた結果を示す図である。
【配列表フリーテキスト】
【００５９】
配列番号１：IL-4遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号２：IL-4遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
配列番号３：IL-5遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号４：IL-5遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
配列番号５：IL-6遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号６：IL-6遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
配列番号７：IL-10遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号８：IL-10遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
配列番号９：TGF-β遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号１０：TGF-β遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
配列番号１１：IL-12p40遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号１２：IL-12p40遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
配列番号１３：IL-2遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号１４：IL-2遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
配列番号１５：INF-γ遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(forward)
配列番号１６：IFN-γ遺伝子を検出するために用いたPCR用プライマー(reverse)
【図１】
2005068090.tif 000003
【図２】
2005068090.tif 000004
【図３】
2005068090.tif 000005
【図４】
2005068090.tif 000006
【図５】
2005068090.tif 000007
【配列表】
2005068090000001.app