(57)【要約】【課題】  本発明の課題は、新規な化合物を有効成分とする遺伝子導入ベクター、および、それを用いた遺伝子の細胞内導入法を提供することである。【解決手段】  アルギニンを連続して４残基以上含んだ２０残基以下のペプチドと脂質構造部分を含んだ化合物、およびこれらの化合物を有効成分とするナノパーティクル、リポソーム、またはミセル、およびこれらの化合物、ナノパーティクル、リポソーム、またはミセルを構成要素とする遺伝子導入ベクター、およびその遺伝子導入ベクターを用いた細胞内への遺伝子導入法であり、例えば、式（２）に示す化合物。2005278630.tif 000006（ただし、式中で、Ａｒｇはアルギニンを、ＬはＸ（ＣＨ2）yまたはＸＣＨ2（ＣＨ2ＯＣＨ2）zＣＨ2を、ＲはＨまたはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3を、ｍは４から１２の整数を、ｎは１１から１７の整数を表し、ＸはＮ、ＯまたはＳを、ｙは２から６までの整数を、ｚは１から１００までの整数を表す。）【選択図】            なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で示される化合物。
2005278630.tif 000004
（ただし、式中で、Ａはアルギニンを連続して４残基以上含んだ２０残基以下のペプチド
を表し、そのＮ端またはＣ端でＢと結合しており、Ｂは２本以上の長鎖アルキル基を有す
る天然または人工の脂質構造、または、それらの脂質構造とＡを結ぶリンカー構造を含んだ構造を表している。）
【請求項２】
式（２）で示される化合物。
2005278630.tif 000005
（ただし、式中で、Ａｒｇはアルギニンを、ＬはＸ（ＣＨ2）yまたはＸＣＨ2（ＣＨ2ＯＣ
Ｈ2）zＣＨ2を、ＲはＨまたはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3を、ｍは４から１２の整数を、ｎは１１
から１７の整数を表し、ＸはＮ、ＯまたはＳを、ｙは２から６までの整数を、ｚは１から
１００までの整数を表す。）
【請求項３】
請求項１または請求項２記載の化合物を有効成分とするナノパーティクル。
【請求項４】
請求項１または請求項２記載の化合物を有効成分とするリポソーム。
【請求項５】
請求項１または請求項２記載の化合物を有効成分とするミセル。
【請求項６】
請求項１の化合物、または、請求項２記載の化合物、または、請求項３記載のナノパーティクル、または、請求項４記載のリポソーム、または、請求項５記載のミセルを構成要素とする遺伝子導入ベクター。
【請求項７】
請求項６記載の遺伝子導入ベクターを用いた細胞内への遺伝子導入法。
【請求項８】
請求項７記載の遺伝子導入法によって遺伝子導入された細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルギニンのオリゴマーが脂質に結合した化合物、および、それを有効成分
とするナノパーティクルまたはリポソームまたはミセル、および、それらを用いた遺伝子
導入法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、遺伝子の異常に起因する疾患、あるいは癌等の治療法として、遺伝子治療が検討
されている。遺伝子治療を行うには、治療を目的として調製した遺伝子を細胞内に導入す
る必要がある。遺伝子を細胞内に導入する代表的な方法として、ウイルスを改良したベク
ターが用いられているが、免疫原性があること、安全性に問題があること等が指摘されて
いる。そこで、人工の遺伝子導入ベクターとして、ポリリジン、ポリエチレンイミン、Ｄ
ＥＡＥ−デキストラン、ポリアミンデンドリマー等のカチオン性のポリマー、あるいは、
カチオン性の界面活性剤を含有するリポソームやミセル等の会合体が提案されている。し
かし、これらの人工の遺伝子導入ベクターにも、遺伝子導入効率が必ずしも高くないこと
、細胞毒性が高いこと等の問題点が指摘されており、さらなる改良が期待されている。（
例えば、非特許文献１参照）。
最近、塩基性ペプチドを用いた蛋白質等の細胞内導入法が注目されている。ＨＩＶ−１
Ｔａｔ蛋白質やショウジョウバエＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ蛋白質由来の十数残基の塩基
性ペプチドを、導入しようとする蛋白質等に結合させ、細胞内に導入する方法である。こ
の方法を用いて、蛋白質ばかりでなく、オリゴ核酸、微小磁石、リポソーム等も細胞内に
導入できることが報告されている。さらに、塩基性ペプチドの配列は自由度が高いものの
、アルギニンのクラスターが重要であることが指摘されている。また、この塩基性ペプチ
ドによる細胞内導入のメカニズムは、これまでに報告されている人工遺伝子導入ベクター
の細胞内導入のメカニズムであるエンドサイトーシスとは異なった経路であることも知ら
れている（非特許文献２参照）。
しかし、ＨＩＶ−１Ｔａｔ由来ペプチドを表面に結合したリポソームを細胞内に導入し
た報告では、リポソームの形態を保ったままで細胞内に導入できたことが示されているだ
けで、遺伝子導入には用いられていない（非特許文献３参照）。また、アルギニンオリゴ
マーを１本の長鎖アルキル基を持つカルボン酸あるいはコレステロール等と結合させ、遺
伝子導入に用いた例が報告されている（非特許文献４参照）が、一般に、１本の長鎖アル
キル基を持つ脂質構造は、それ自体の水溶性が高い、会合体が不安定である等の問題を有
することが知られている。
【０００３】
我々はこれまでに、様々なペプチドを人工脂質に結合させた化合物を合成し、それらの
ペプチド脂質が細胞培養等に利用できることを示してきた。（特許文献１、非特許文献５
参照）。また、エチレングリコールのオリゴマーまたはポリマーが結合した人工脂質が生
体適合性付与剤として利用できることを示した（特願２００４−４２０１１）。しかし、
遺伝子の細胞内導入に用いるためには、新たな化合物を合成する必要があった。
【特許文献１】特開２００２−２６５４２７
【非特許文献１】アンゲバンテ・ヘミー・インターナショナル・エディション（Angew. Chem.Int. Ed.）、２００３年、４２巻、ｐ．１４４８−１４５７
【非特許文献２】蛋白質核酸酵素、２００２年、４７巻、ｐ．１４１５−１４１９
【非特許文献３】アメリカ国立科学会紀要（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.）、２００１年、９８巻、ｐ．８７８６−８７９１
【非特許文献４】バイオコンジュゲイト・ケミストリー（Bioconjugate Chem.）、２００１年、１２巻、ｐ．１００５−１０１１
【非特許文献５】サイトテクノロジー（Cytotechnology）、２００３年、４２巻、ｐ．１３−２０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、新規な化合物を有効成分とする遺伝子導入ベクター、および、それを
用いた遺伝子の細胞内導入法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題を鋭意検討した結果、本発明者らは、オリゴアルギニンが２本以上の長鎖アル
キル基を有する脂質に結合した化合物を合成し、まず、合成した化合物を有効成分とする
蛍光標識リポソーム調製して、そのリポソームが細胞内に導入されることを確認し、次に
、合成した化合物を有効成分とするナノパーティクルまたはミセルを調製し、そのナノパ
ーティクルまたはミセルがＤＮＡと複合体を作ることを確認し、さらに、そのＤＮＡとの
複合体が細胞内に導入され、蛋白質を発現することを、フローサイトメトリー、共焦点レ
ーザー顕微鏡解析、ルシフェラーゼ活性測定により確認して、本発明を完成するに至った
。
【０００６】
すなわち、式（１）で示される化合物、または、式（２）で示される化合物、および、
これらの化合物を有効成分とするナノパーティクル、リポソーム、または、ミセル、およ
び、これらを構成要素とする遺伝子導入ベクター、および、その遺伝子導入ベクターを用
いた細胞内への遺伝子導入法、および、この遺伝子導入法によって遺伝子導入された細胞
である。
2005278630.tif 000002
（ただし、式中で、Ａはアルギニンを連続して４残基以上含んだ２０残基以下のペプチド
を表し、そのＮ端またはＣ端でＢと結合しており、Ｂは２本以上の長鎖アルキル基を有す
る天然または人工の脂質構造、または、それらの脂質構造とＡを結ぶリンカー構造を含んだ構造を表している。）
2005278630.tif 000003
（ただし、式中で、ＬはＸ（ＣＨ2）yまたはＸＣＨ2（ＣＨ2ＯＣＨ2）zＣＨ2を、ＲはＨ
またはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3を、ｍは４から１２の整数を、ｎは１１から１７の整数を表し
、ＸはＮ、ＯまたはＳを、ｙは２から６までの整数を、ｚは１から１００までの整数を表
す。）
【発明の効果】
【０００７】
本発明は、これまでの遺伝子導入ベクターとは、化学構造も細胞内導入機構も異なる、
遺伝子の細胞内導入のための新規化合物、および、それを用いた遺伝子導入法を与える。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の化合物の合成は如何なる方法によっても構わない。
式（１）で示される化合物のペプチド部分は、４残基以上のアルギニンが連続する配列
を含み、全体が２０残基以下であれば、如何なる配列であっても構わないが、連続したア
ルギニン部分が必須であるので、経済的には４残基以上２０残基以下のアルギニンオリゴ
マーが好ましく、６残基以上１２残基以下のアルギニンオリゴマーがさらに好ましい。ペ
プチドの合成法には、一般的に用いられる手法（「ペプチド合成の基礎と実験」、泉屋他
著、丸善株式会社）を用いることができる。
式（１）で示される化合物の脂質部分は、天然由来の脂質でも、人工の脂質でも構わな
い。天然の脂質としては、例えば、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン
脂質、スフィンゴ糖脂質等の２本以上の長鎖アルキル基を持つ脂質が挙げられ、人工の脂
質としては、天然の脂質構造に類似した化合物を始めとして、２本以上の長鎖アルキル基
を有する疎水性の部分と親水性の部分を持った化合物一般を挙げることができる。また、
それらの脂質構造に、アルキル鎖、オリゴまたはポリエチレングリコール鎖等、ペプチド
部分との間に介在するリンカー構造を結合した構造であっても構わない。
式（１）で示される化合物のペプチド部分と脂質部分を結ぶ結合は、共有結合であれば
、如何なる結合であっても構わない。例えば、エステル結合、アミド結合、エーテル結合
、尿素結合、チオエステル結合、チオアミド結合、チオエーテル結合、チオ尿素結合、ジ
スルフィド結合等を挙げることができ、その生成には、それぞれの結合形成に通常使用さ
れる反応を用いることができる。
式（２）で示される化合物の合成手順は、如何なるものであっても構わない。例えば、
実施例に示すように、人工脂質を出発原料に、アミノ酸を１残基ずつ、逐次伸長すること
もできるし、ペプチド部分を予め合成してから脂質部分と結合させることもできるし、そ
れらを組合せた手法を用いることもできる。脂質部分の末端の官能基を、アミノ基、水酸
基、チオール基とすることで、ペプチド部分との結合を、それぞれ、アミド結合、エステ
ル結合、チオエステル結合とすることができる。
【０００９】
本発明の化合物を有効成分とするナノパーティクル、リポソーム、または、ミセルは、
その組成の一部として本発明の化合物を含んでいれば、他の成分は如何なるものであって
も構わない。
ナノパーティクルは、ナノスケール（１〜１０００ｎｍ）の微粒子を総称する用語であ
り、ナノスフェア等と称されることもある。また、その構成要素として、無機化合物、有
機化合物、あるいは無機−有機ハイブリッド化合物を含み、さらに、有機化合物としては
低分子からポリマーまで含んでいる（「Nanoparticles」、Vincent Rotello編、Kluwer A
cademic Publishers)。本発明のナノパーティクルは、本発明の化合物を有効成分として
含んでいれば、上記のナノパーティクルの如何なるものであっても構わない。
リポソームの調製には、多くの方法が知られ、また、その形状も一重膜、多重膜、巨大
リポソーム等が知られている（「ライフサイエンスにおけるリポソーム」、寺田弘、吉村
哲郎編、シュプリンガー・フェアラーク東京）が、本発明のリポソームは、本発明の化合
物を有効成分として含んでいれば、如何なる方法を用いて調製しても、如何なる形状をと
っていても構わない。
ミセルは、通常、限界ミセル濃度を越える濃度の化合物の水溶液中で形成されるが、化
合物を水に分散させるために、撹拌、加熱、超音波処理等の手段が必要な場合があるし、
必要に応じて、化合物の有機溶媒溶液を水に加えた後、有機溶媒を蒸発させることにより
調製される場合もある。本発明のミセルは、本発明の化合物を有効成分として含んでいれ
ば、如何なる方法によって調製しても構わない。
本発明の化合物、あるいは、本発明の化合物を有効成分とするナノパーティクル、リポソーム、または、ミセルを構成要素とする遺伝子導入ベクターの調製は如何なる方法によっても構わない。例えば、実施例に示す様に、導入遺伝子と本発明のナノパーティクル、リポソーム、または、ミセルを混合して複合体を形成することによって調製できる。また、ナノパーティクル、リポソーム、または、ミセルに、導入遺伝子を含む成分を内包させることによって調製することもできる。
本発明の遺伝子導入ベクターを用いた細胞内への遺伝子導入法は、遺伝子導入ベクター
と遺伝子を導入したい細胞が直接接触することができれば、如何なる方法によっても構わ
ない。また、この遺伝子導入法により、目的遺伝子が導入された細胞を調製することがで
きる。
【００１０】
以下に、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
なお、ＤＭＦはジメチルホルムアミド、Ａｒｇはアルギニン、Ｆｍｏｃは9-fluorenylmethoxycarbonyl、Ｐｍｃは2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl、Ｐｂｆは2,2,4,6,7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl、ＰｙＢＯＰはbenzotriazol-1-yl-oxy-tris-pyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphate、ＨＢＴＵは2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００は、それぞれ、東京化成から購入した平均分子量１０００、２０００のポリエチレングリコールまたはその末端誘導体、ＥＰＣは卵由来フォスファチジルコリン、Ｃｈｏｌはコレステロール、ＤＳＰＥはdistearoylphosphoethanolamine、ＤｉＩは1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyamine、ＦＩＴＣはfluorescein isothiocyanate、ＰＢＳはリン酸緩衝塩溶液、ＭＥＭは最小必須培地、ＧＦＰはgreen fluorescent proteinの略号である。
【実施例１】
【００１１】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ4−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズア
ミド（配列番号１）の合成）
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（1.02g, 1.54mmol）、ＨＢＴＵ（584mg, 1.54mmol
）、ジメチルアミノピリジン（20.0mg, 0.164mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹
拌した後、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（
600mg, 1.02mmol）を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え
、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。硫酸ナトリウムを
ろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン
：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ））−６−ア
ミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.20g, 0.969mmol, 95%
）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ））−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（
ドデシロキシ）ベンズアミド（1.15g, 0.933mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、
ピペリジン（1 ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  
ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍ
ｃ）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（905mg, 0.8
96mmol, 95%）を得た。
【００１２】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（690mg, 1.04mmol）、ＨＢＴＵ（394mg, 1.04mmol
）、ジメチルアミノピリジン（15.0mg, 0.123mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹
拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシ
ロキシ）ベンズアミド（700mg, 0.693mmol）を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了
後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥
させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（
クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐ
ｍｃ））2）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.0
6g, 0.638mmol, 92%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.00g, 0.604mmol）をジクロロメタン（2ml）に溶
解し、ピペリジン（1ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ））2−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド
（860mg, 0.600mmol, 99%）を得た。
【００１３】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（520mg, 0.785mmol）、ＨＢＴＵ（298mg, 0.785mm
ol）、ジメチルアミノピリジン（15.0 mg, 0.123 mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時
間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2−６−アミノヘキシル）−３，５−ビ
ス（ドデシロキシ）ベンズアミド（750mg, 0.523mmol）を加え、更に室温で一夜撹拌した
。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸ナトリウ
ムで乾燥させた。硫酸ナトリウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ
６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ））3）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミ
ド（1.03g, 0.496mmol, 95%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））3）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.00g, 0.481mmol）をジクロロメタン（2ml）に溶
解し、ピペリジン（1ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ））3−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド
（899 mg, 0.484 mmol, quant）を得た。
【００１４】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（450mg, 0.679mmol）、ＨＢＴＵ（258mg, 0.679mm
ol）、ジメチルアミノピリジン（15.0 mg, 0.123 mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時
間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））3−６−アミノヘキシル）−３，５−ビ
ス（ドデシロキシ）ベンズアミド（840mg, 0.452mmol）を加え、更に室温で一夜撹拌した
。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシ
ウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をＳｅｐｈ
ａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（
Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロ
キシ）ベンズアミド（1.08g, 0.433mmol, 96%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.00g, 0.400mmol）をジクロロメタン（2ml）に溶
解し、ピペリジン（1ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ））4−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド
（909mg, 0.399mmol, quant）を得た。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 2280.24 ([M+H]+)。
【００１５】
Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロ
キシ）ベンズアミド（88.0mg, 0.0386mmol）にトリフルオロ酢酸：水＝９：１（1 ml）を
加えて、３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を濃縮し、ジメチルスルホキシドを加え
て溶解し、さらにメタノールを加えた。生じた白色沈澱をろ取し、メタノールで洗浄して
、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ4−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズア
ミド（55.0mg, 0.0455mmol, 86%）を得た（配列番号１）。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1214.99 ([M+H]+)。
【実施例２】
【００１６】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ6−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズア
ミド（配列番号２）の合成）
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（387mg, 0.584mmol）、ＨＢＴＵ（221mg, 0.584mm
ol）、ジメチルアミノピリジン（15.0mg, 0.123mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間
撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミド（887 mg, 0.389 mmol）を加え、更に室温で一夜撹拌した
。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシ
ウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲ
ルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（
Ａｒｇ（Ｐｍｃ））5）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド（1.08g, 0.371mmol, 95%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））5）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.00g, 0.342mmol）をジクロロメタン（2ml）に溶
解し、ピペリジン（1ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ））5−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド
（903mg, 0.334mmol, 98%）を得た。
【００１７】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（325mg, 0.490mmol）、ＨＢＴＵ（338mg, 0.890mm
ol）、ジメチルアミノピリジン（15.0mg, 0.123mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間
撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））5−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミド（882mg, 0.326mmol）を加え、更に室温で3時間撹拌した
。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシ
ウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲ
ルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（
Ａｒｇ（Ｐｍｃ））6）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド（1.04g, 0.311mmol, 95%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））6）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.00g, 0.299mmol）をジクロロメタン（2ml）に溶
解し、ピペリジン（1ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒ
ｇ（Ｐｍｃ））6−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド
（906mg, 0.290mmol, 97%）を得た。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 2123.75 ([M+H]+)。
【００１８】
Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））6−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロ
キシ）ベンズアミド（500mg, 0.160mmol）にトリフルオロ酢酸：水＝９：１（1ml）を加
えて、３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を濃縮し、ジメチルスルホキシドを加えて
溶解し、さらにメタノールを加えた。生じた白色沈澱をろ取し、メタノールで洗浄し、Ｎ
−（Ｎ−Ａｒｇ6−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド
（208mg, 0.136mmol, 85%）を得た（配列番号２）。
【実施例３】
【００１９】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズア
ミド（配列番号３）の合成）
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（286mg, 0.432mmol）、ＰｙＢＯＰ（225mg, 0.432
mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））6−
６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（900mg, 0.288mmol
）を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離し
た。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒
を減圧下留去し、未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））7）−６−アミ
ノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））7）−６−アミノヘキシル）−
３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドをジクロロメタン（3ml）に溶解し、ピペリ
ジン（2ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−
２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ）
）7−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（950mg, 0.26
8mmol, 93%（2工程での収率））を得た。
【００２０】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（266 mg, 0.402 mmol）、ＰｙＢＯＰ（210mg, 0.4
02mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））
7−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（950mg, 0.268m
mol）を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分
離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、
溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２
）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））8）−６−アミノヘキシル）
−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.01g, 0.241mmol, 90%）を得た。
MALDI-TOFMS (Dithranol) 4192.80 ([M+H]+)。
【００２１】
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））8）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（350mg, 0.0835mmol）にトリフルオロ酢酸：水＝９
：１（2ml）を加えて、３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧下濃縮し、未精製
のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ8）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロ
キシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ8）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（
ドデシロキシ）ベンズアミドをジクロロメタン（1ml）に溶解し、ピペリジン（0.5ml）を
加えて、３０分撹拌した。反応溶液にメタノールを加え、生じた白色沈澱をろ取し、メタ
ノールで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロ
キシ）ベンズアミド（152mg, 0.0825mmol, 99%（2工程での収率））を得た（配列番号３
）。
【実施例４】
【００２２】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ10−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズア
ミド（配列番号４）の合成）
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））8）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.00g, 0.239mmol）をジクロロメタン（3ml）に溶
解し、ピペリジン（2ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製しＮ−（Ｎ−（Ａｒｇ
（Ｐｍｃ））8−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（9
26mg, 0.233mmol, 98%）を得た。
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（230mg, 0.348mmol）、ＰｙＢＯＰ（181mg, 0.348
mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））8
−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（920mg, 0.232mm
ol）を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離
した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶
媒を減圧下留去し、未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ））9）−６−アミ
ノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））9）−６−アミノヘキシル）−
３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドをジクロロメタン（2ml）に溶解し、ピペリ
ジン（1ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−
２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ）
）9−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（922mg, 0.20
9mmol, 90%（2工程での収率））を得た。
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（204mg, 0.307mmol）、ＰｙＢＯＰ（160mg, 0.307
mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））9
−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（900mg, 0.205mm
ol）を加え、更に室温で５時間撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分
離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、
溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２
）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））10）−６−アミノヘキシル）
−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（982mg, 0.195mmol, 95%）を得た。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 5036.4092 ([M+H]+)。
【００２３】
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））10）−６−アミノヘキシル）−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（200mg, 0.0397mmol）をジクロロメタン（2ml）に溶
解し、ピペリジン（1ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液はＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｌ
Ｈ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）により、ピペリジンを除去し、未精製
のＮ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））10−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロ
キシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））10−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（
ドデシロキシ）ベンズアミドに、トリフルオロ酢酸：水＝９：１（1ml）を加えて、５時
間撹拌した。反応終了後、反応溶液を濃縮し、ジメチルスルホキシドを加えて溶解し、さ
らにメタノールを加えた。生じた白色沈澱をろ取し、メタノールで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ａ
ｒｇ10−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（51.2 mg,
0.0238 mmol, 60%  ２工程での収率）を得た（配列番号４）。
【実施例５】
【００２４】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ4−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド（配列番号１）の合成）
３，５−ビス（ドデシロキシ）安息香酸（1.00g, 2.04mmol）、水溶性カルボジイミド
（480mg, 2.50mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（383mg, 2.50mmol）をＤＭＦ
に溶解し、室温で１時間撹拌した後、ジアミノポリエチレングリコール（ジアミノＰＥＧ
２０００）（5.00g, 2.50mmol）を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、クロロ
ホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。
硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロ
ホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−アミノＰＥＧ２０００−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.16g, 1.02mmol, 50%）を得た。
【００２５】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（1.07g, 1.62mmol）、ＰｙＢＯＰ（842mg, 1.62mm
ol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−アミノＰＥＧ２０００−３，５−
ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.00g, 0.808mmol）を加え、更に室温で一夜撹拌し
た。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネ
シウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカ
ゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｍｃ））−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズア
ミド（2.46g, 0.789mmol, 98%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ））−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.45g, 0.785mmol）をジクロロメタン（3ml）に溶解し
、ピペリジン（2ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐ
ｍｃ）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.23g,
0.770mmol, 98%）を得た。
【００２６】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（1.01g, 1.52mmol）、ＰｙＢＯＰ（790mg, 1.52mm
ol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−アミノ
ＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.20g, 0.759mmol）を
加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した
。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を
減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精
製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2）−アミノＰＥＧ２０００）−３
，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.47g, 0.698mmol, 92%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５
−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.40g, 0.678mmol）をジクロロメタン（3ml）に
溶解し、ピペリジン（2ml）を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａ
ｒｇ（Ｐｍｃ））2−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズア
ミド（2.26g, 0.678mmol, quant）を得た。
【００２７】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（880mg, 1.33mmol）、ＰｙＢＯＰ（690mg, 1.33mm
ol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2−
アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.20mg, 0.663m
mol）を加え、更に室温で５時間撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を
分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し
、溶媒を減圧下留去し、未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））3）−ア
ミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））3）−アミノＰＥＧ２０００）
−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（3ml）に溶解し、ピペリジン（2ml）を加
えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロメ
タン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））3−アミノＰＥ
Ｇ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.28g, 0.610mmol, 92%（
２工程での収率））を得た。
【００２８】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ（709mg, 1.07mmol）、ＰｙＢＯＰ（557mg, 1.07mm
ol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））3−
アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（2.00g, 0.535mm
ol）を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分
離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、
溶媒を減圧下留去し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4）−アミノＰＥＧ
２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（1.95g, 0.446mmol, 83%）を
粗生成物として得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５
−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（200mg, 0.0456mmol）にトリフルオロ酢酸：水＝
９：１（1ml）を加えて、３時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧下濃縮し、未精
製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ4）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデ
シロキシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ4）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミドをジクロロメタン（2ml）に溶解し、ピペリジン（1ml）を
加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロ
メタン：メタノール＝２：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ａｒｇ4−アミノＰＥＧ２０００）−
３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（102mg, 0.0326mmol, 68%（2工程での収率
））を得た（配列番号１）。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) m/z 3096.13, 3140.03, 3184.71 ([
M+H]+)。
【実施例６】
【００２９】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ6−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド（配列番号２）の合成）
ペプチド研究所から購入したＦｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｂｆ））6−ＯＨ（100mg, 0.0372
mmol）、ＰｙＢＯＰ（19.0mg, 0.0372mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後
、Ｎ−アミノＰＥＧ２０００−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（77.0mg, 0.
0310mmol）を加え、更に室温で２時間撹拌した。反応終了後、クロロホルムを加え、有機
層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ
別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９
８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｂｆ））6）−アミノＰＥＧ２
０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（112mg, 0.0218mmol, 70%）を得
た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｂｆ））6）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５
−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（110mg, 0.0214mmol）にトリフルオロ酢酸：水＝
９：１（1ml）を加えて、５時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を減圧下濃縮し、未精
製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ6）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデ
シロキシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ6）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミドをジクロロメタン（2ml）に溶解し、ピペリジン（1ml）を
加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロロ
メタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ6−アミノＰＥＧ２０００）
−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（70.2mg, 0.0205mmol, 96%（2工程での収
率））を得た（配列番号２）。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) m/z 3584.62, 3628.17, 3672.29 ([
M+H]+)。
【実施例７】
【００３０】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド（配列番号３）の合成）
ペプチド研究所から購入したＦｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｂｆ））6−ＯＨ（100mg, 0.0372
mmol）、ＰｙＢＯＰ（19.0mg, 0.0372mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌した後
、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシ
ロキシ）ベンズアミド（103mg, 0.0310mmol）を加え、更に室温で２時間撹拌した。反応
終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウムで
乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６
０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ
（Ｐｂｆ））6−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ド
デシロキシ）ベンズアミド（97.0mg, 0.0161mmol, 52%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｂｆ））6−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））2）−アミノＰ
ＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（95.0mg, 0.0158mmol）に
トリフルオロ酢酸：水＝９：１（1ml）を加えて、３時間撹拌した。反応終了後、反応溶
液を減圧下濃縮し、未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ8）−アミノＰＥＧ２０００
）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ8）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミドをジクロロメタン（1ml）に溶解し、ピペリジン（0.5ml）
を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロ
ロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００
）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（55.2mg, 0.0147mmol, 93%（２工程で
の収率））を得た（配列番号３）。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) m/z 3670.02, 3714.17, 3757.87 ([
M+H]+)。
【実施例８】
【００３１】
（Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ10−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド（配列番号４）の合成）
ペプチド研究所から購入したＦｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｂｆ））6−ＯＨ（100 mg, 0.037
2 mmol）、ＰｙＢＯＰ（23.0mg, 0.0442mmol）をＤＭＦに溶解し、室温で１時間撹拌し
た後、Ｎ−（Ｎ−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ド
デシロキシ）ベンズアミド（129 mg, 0.0310 mmol）を加え、更に室温で3時間撹拌した。
反応終了後、クロロホルムを加え、有機層を分離した。有機層を水洗し、硫酸マグネシウ
ムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲル
Ｎ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａ
ｒｇ（Ｐｂｆ））6−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビ
ス（ドデシロキシ）ベンズアミド（148mg, 0.0220mmol, 71%）を得た。
Ｎ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−（Ａｒｇ（Ｐｂｆ））6−（Ａｒｇ（Ｐｍｃ））4）−アミノＰ
ＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（140mg, 0.0208mmol）に
トリフルオロ酢酸：水＝９：１（1ml）を加えて、５時間撹拌した。反応終了後、反応溶
液を減圧下濃縮し、未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ10）−アミノＰＥＧ２０００
）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを得た。
未精製のＮ−（Ｎ−（Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ10）−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス
（ドデシロキシ）ベンズアミドをジクロロメタン（1ml）に溶解し、ピペリジン（0.5ml）
を加えて、３０分撹拌した。反応溶液を、直接、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（ジクロ
ロメタン：メタノール＝２：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ10−アミノＰＥＧ２０００
）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド（70.0mg, 0.0166mmol, 80%（２工程で
の収率））を得た（配列番号４）。
MALDI-TOFMS (α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) m/z 4123.36, 4166.18, 4209.92 ([
M+H]+)。
【実施例９】
【００３２】
（オリゴアルギニン脂質含有リポソームの細胞膜透過性）
リポソームの調製は、ドライフィルム法によって行った。Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ6−６−ア
ミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを、ＥＰＣ：Ｃｈｏｌ：オ
リゴアルギニン脂質＝７：３：０．０５（モル比）となるように、クロロホルム溶液とし
、ロータリーエバポレーターで溶媒を蒸発させて、乾燥したフィルムを作成した。これに
２０ｍＭカルセイン水溶液を加えて水和し、超音波処理によって、リポソームを作成した
（Ｌ−Ａｒｇ６と略記する）。対照として、オリゴアルギニン脂質を含まないリポソーム
を、ＥＰＣ：Ｃｈｏｌ＝７：３（モル比）を用いて同様に調製した（Ｌ−ＮｏｎＡｒｇと
略記する）。
レーザーゼータ電位計（ELS-800、大塚電子製)を用いて平均粒子径およびζポテンシャ
ルを測定すると、Ｌ−ＮｏｎＡｒｇは、それぞれ、４８３ｎｍ、−１２．８ｍＶ、Ｌ−Ａ
ｒｇ６は、それぞれ、１１６ｎｍ、−７．５１ｍＶであった。
【００３３】
各リポソームの細胞内への取り込みは、総脂質量０．２５〜２．５ｍｇ／ｍｌのリポソ
ーム溶液をＨｅＬａ細胞と１時間接触させた後、水洗してから共焦点レーザー顕微鏡で観
察した。対照のＬ−ＮｏｎＡｒｇにはほとんど蛍光が観察されなかったのに対し、Ｌ−Ａ
ｒｇ６では、全ての濃度で、また、３７℃でも４℃でも、ほぼ全ての細胞で蛍光が観察さ
れ、Ｌ−Ａｒｇ６が細胞膜を透過することが確認された。また、４℃でも膜透過が観察さ
れることから、その膜透過機構はエンドサイトーシスによらないものであることが示唆さ
れた。
【実施例１０】
【００３４】
（フローサイトメトリーを用いた細胞膜透過性の解析）
実施例９と同様の方法によって、Ｌ−Ａｒｇ６、Ｌ−ＮｏｎＡｒｇ、および、Ｎ−（Ｎ
−Ａｒｇ6−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミド、ま
たは、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベ
ンズアミドを含有するリポソーム（それぞれ、Ｌ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６、Ｌ−ＰＥＧ−Ａｒ
ｇ８と略記する。）を調製した。さらに、赤色蛍光色素ＤｉＩを含むエタノール溶液を全
脂質量に対し、０．０４ｍｏｌ％となるように添加して、カルセインとＤｉＩで２重に染
色されたリポソームとした。
平均粒子径は、Ｌ−ＮｏｎＡｒｇが１２９ｎｍ、Ｌ−Ａｒｇ６が２９１ｎｍ、Ｌ−ＰＥ
Ｇ−Ａｒｇ６が５７９ｎｍ、Ｌ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８が２２３ｎｍであった。
各リポソームの総脂質量２μｇ／ｍｌの濃度の溶液を、１ｍｌ／ウエルずつＨｅＬａ細
胞と接触させた。３時間の接触の後、リポソーム溶液を除き、リン酸バッファーで洗浄し
た。細胞を０．５ｍｌ／ウエルのフローサイトメトリー用バッファーに懸濁させ、フロー
サイトメトリーで解析した結果を図１に示す。この結果から、Ｌ−Ａｒｇ６>Ｌ−ＰＥＧ
−Ａｒｇ８>Ｌ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６の順に取り込み効率が高くなり、Ｌ−Ａｒｇ６が最も
高い取り込み効率を示すことが判った。
【実施例１１】
【００３５】
（オリゴアルギニン脂質含有ナノパーティクルの細胞膜透過性）
Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ6−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド、または、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシ
ロキシ）ベンズアミド、または、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥを含有するナノパーティクル
を、Ｃｈｏｌ：Ｔｗｅｅｎ８０：ＰＥＧ脂質誘導体＝９０：５：５（モル比）として、改
良エタノール注入法によって調製した（それぞれ、ＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６、ＮＰ−ＰＥ
Ｇ−Ａｒｇ８、ＮＰ−ＰＥＧと略記する。）。例えば、ＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６は、１０
ｍｇのＣｈｏｌ、１．９ｍｇのＴｗｅｅｎ８０、４．９ｍｇのＮ−（Ｎ−Ａｒｇ6−アミ
ノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを、ＮＰ−ＰＥＧ−Ａ
ｒｇ８は、１０ｍｇのＣｈｏｌ、１．９ｍｇのＴｗｅｅｎ８０、５．４ｍｇのＮ−（Ｎ−
Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドを、Ｎ
Ｐ−ＰＥＧは１０ｍｇのＣｈｏｌ、１．９ｍｇのＴｗｅｅｎ８０、３．９ｍｇのＰＥＧ２
０００−ＤＳＰＥをエタノールに溶解後、改良エタノール注入法によって１０ｍｌの溶液
として調製する。
調製直後および６日後の平均粒子径は、ＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６が、それぞれ、１３６
．７ｎｍ、１６２．８ｎｍ、ＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８が、それぞれ、１２３．１ｎｍ、１
４４．１ｎｍ、ＮＰ−ＰＥＧが、それぞれ、１７４．６ｎｍ、１３６．６ｎｍであった。
それぞれのナノパーティクル溶液１０μｌあたり２μｇのプラスミドＤＮＡを混合して
、ナノパーティクルとＤＮＡの複合体を形成させた。ＤＮＡ混合後の平均粒子径は、ＮＰ
−ＰＥＧ−Ａｒｇ６が３９６．３ｎｍ、ＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８が６４１．１ｎｍ、ＮＰ
−ＰＥＧが１１４．２ｎｍであり、ＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６とＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８は
ＤＮＡとの複合体を形成したが、ＮＰ−ＰＥＧはＤＮＡとの複合体を形成しないことが明
らかになった。
【００３６】
次に、フローサイトメトリーを用いて、遺伝子の細胞への取り込みを見るために、４μ
ｇのＦＩＴＣ標識オリゴＤＮＡ（３０ｍｅｒ）と各ナノパーティクル溶液２０μｌを混合
して、１０分間放置した。この溶液に１ｍｌの無血清ＭＥＭ培地を加え、３５ｍｍディッ
シュに培養したＨｅＬａ細胞に添加した。添加後、１時間後あるいは３時間後に、トリプ
シン／ＥＤＴＡを用いて細胞を回収し、洗浄の後、フローサイトメトリーによってＦＩＴ
Ｃ標識オリゴＤＮＡの細胞内取り込みを調べた結果を図２に示した。
ＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６およびＮＰ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８によるＦＩＴＣ標識ＤＮＡの細
胞内移行量の増加は3時間後において観察された。
【実施例１２】
【００３７】
（オリゴアルギニン脂質ミセルの細胞膜透過性）
Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ6−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド、または、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシ
ロキシ）ベンズアミド、または、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥを水に溶解させて２０ｍｇ／
ｍｌのミセル溶液とした（それぞれ、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８、Ｍ
−ＰＥＧと略記する。）。
４μｇのＦＩＴＣ標識オリゴＤＮＡ（３０ｍｅｒ）と各ミセル溶液１０μｌを混合して
、１０分間放置した。この溶液に１ｍｌの無血清ＭＥＭ培地を加え、３５ｍｍディッシュ
に培養したＨｅＬａ細胞に添加した。添加後、１時間後あるいは３時間後に、トリプシン
／ＥＤＴＡを用いて細胞を回収し、洗浄の後、フローサイトメトリーによってＦＩＴＣ標
識オリゴＤＮＡの細胞内取り込みを調べた結果を図３に示した。
Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６およびＭ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８によるＦＩＴＣ標識ＤＮＡの細胞内
移行は１時間後には観測され、細胞内移行量は、添加後1時間より3時間後の方が高かった
。
【実施例１３】
【００３８】
（オリゴアルギニン脂質ミセルの細胞膜透過能の共焦点レーザー顕微鏡解析）
実施例１２と同様に調製したＭ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６またはＭ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８の溶液
を、４μｇＦＩＴＣ標識オリゴＤＮＡ（３０ｍｅｒ）に対して各ミセル溶液１０μｌを混
合して、１０分間放置することにより、ＤＮＡとの複合体を調製した。これに１ｍｌ無血
清ＭＥＭ培地を加え、３５ｍｍディッシュに培養したＨｅＬａ細胞に添加した。添加後３
時間目にＨｅＬａ細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて洗浄し、１０％ホルマリンにて細胞を
固定した後、共焦点レーザー顕微鏡でＤＮＡの細胞内移行を観察した結果を図４に示した
。
Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６とＭ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８、どちらを用いた場合においても、細胞
内に広くＤＮＡの存在を示す蛍光が観察された。
【実施例１４】
【００３９】
（オリゴアルギニン脂質ミセルの細胞膜透過性）
Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド、または、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ10−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシ
ロキシ）ベンズアミドを水に溶解させて２０ｍｇ／ｍｌのミセル溶液とした（それぞれ、
Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ１０と略記する。）。
２μｇのＦＩＴＣ標識オリゴＤＮＡ（３０ｍｅｒ）と各ミセル溶液５μｌを混合して、
１０分間放置した。この溶液に１ｍｌの無血清ＭＥＭ培地を加え、３５ｍｍディッシュに
培養したＨｅＬａ細胞に添加した。添加後３時間後に、トリプシン／ＥＤＴＡを用いて細
胞を回収し、洗浄の後、フローサイトメトリーによってＦＩＴＣ標識オリゴＤＮＡの細胞
内取り込みを調べた結果を図５に示した。
Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８およびＭ−ＰＥＧ−Ａｒｇ１０によるＦＩＴＣ標識ＤＮＡの細胞
内移行が観測された。
【実施例１５】
【００４０】
（オリゴアルギニン脂質ミセルによって細胞内に導入された遺伝子の発現）
Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ4−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミド、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ6−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）
ベンズアミド、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ8−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロ
キシ）ベンズアミド、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ10−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（
ドデシロキシ）ベンズアミドを水に溶解させて２０ｍｇ／ｍｌのミセル溶液を調製した。
（それぞれ、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ４、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８、Ｍ
−ＰＥＧ−Ａｒｇ１０と略記する。）
サイトメガロウイルスのプロモーターの下流にルシフェラーゼ遺伝子を挿入したpCMV-l
ucプラスミドと各ミセル溶液を、プラスミド２μｇに対し、ミセル溶液５μｌ、チューブ
内で混合させ、１０分間室温にて放置した。
その後、チューブに１ｍｌ血清不含ＭＥＭ培地を加え混合させた後、６穴プレートにて
培養したＨｅＬａ細胞に添加した。３時間後に１ｍｌの５％血清含有ＭＥＭ培地を添加し
、さらに２１時間放置した。ＨｅＬａ細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて洗浄後、細胞溶解
液にて細胞を溶解させた。その後凍結融解を１回行い、１５，０００ｒｐｍ、 ５秒間、
遠心分離を行った。ルシフェラーゼ遺伝子の発現は、その上清を採取し、ピッカジーン（
東洋インキ製造株式会社製）を用いてルシフェラーゼ活性を測定することにより確認した
。各溶液の蛋白質濃度を測定し、ルシフェラーゼ値を、ｃｏｕｎｔ  ｐｅｒ  ｓｅｃ（ｃ
ｐｓ）／μｇ蛋白質に換算した結果を図６に示す。
Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ４、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ８、Ｍ−ＰＥＧ−
Ａｒｇ１０のいずれを用いた場合もルシフェラーゼ活性が観測された。特に、Ｍ−ＰＥＧ
−Ａｒｇ８、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ１０を用いた場合に高いルシフェラーゼ活性が得られた
。
【実施例１６】
【００４１】
（オリゴアルギニン脂質ミセルを用いたＧＦＰの細胞内での発現）
Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ10−アミノＰＥＧ２０００）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベンズ
アミドを水に溶解させて２０ｍｇ／ｍｌのミセル溶液とした（Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ１０と
略記する。）。
サイトメガロウイルスのプロモーターの下流にＧＦＰ遺伝子を挿入したpEGFPプラスミ
ド（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ社製）２μｇに対し、ミセル溶液５μｌをチューブ内で混合させ
、１０分間室温にて放置した。
その後、チューブに１ｍｌ血清不含ＭＥＭ培地を加え混合させた後、６穴プレートにて
培養したＨｅＬａ細胞に添加した。３時間後に１ｍｌの５％血清含有ＭＥＭ培地を添加し
、さらに２１時間放置した。
培地を除いて、ＨｅＬａ細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）にて洗浄し、１０％ホルマリンに
て細胞を固定した後、共焦点レーザー顕微鏡でＧＦＰの細胞内での発現を観察した結果を
図７に示した。また、トリプシン／ＥＤＴＡを用いて細胞を回収し、洗浄の後、フローサ
イトメトリーによってＧＦＰが発現した細胞を解析した結果を図８に示した。
上記２種の解析手法によって、Ｍ−ＰＥＧ−Ａｒｇ１０によって、細胞内にＧＦＰ遺伝
子が導入され、蛋白質として発現されることが明らかになった。
【００４２】
［参考例１］
（Ｎ−（８−アミノ−３，６−ジオキサオクチル）−３，５−ビス（ドデシロキシ）ベ
ンズアミドの合成）
３,５−ビス（ドデシロキシ）安息香酸（0.50g, 1.02mmol）をジクロロメタン（20ml）
に溶解し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（0.
23g, 1.22mmol）と１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（0.17g, 1.22mmol）を加え
、室温で１時間撹拌した。その後、１,８−ジアミノ−３,６−ジオキサオクタン（0.24ml
, 2.04mmol）を加え、室温で２時間撹拌した。反応終了後、反応液をクロロホルムで抽出
した後、有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水した。硫
酸ナトリウムをろ別した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（クロロホルム：メタノール＝5：1）により精製し、目的物（0.25g, 39%）を得た。
1H-NMR (CDCl3, 600MHz) δ 6.91 (s, 2H)、6.54 (d, 1H, J = 2.1Hz)、3.94 (t, 4H, 
J = 7.2Hz)、3.68 (m, 12H)、3.11 (s, 2H)、1.74 (m, 4H)、1.41 (m, 4H)、1.26 (m, 32
H)、0.88 (t, 6H, J = 7.2Hz)。
MALDI-TOFMS (2,5-Dihydroxybenzoic acid) m/z 622 ([M+H]+)。
【００４３】
［参考例２］
（Ｎ−（８−アミノ−３，６−ジオキサオクチル）−３，４，５−トリス（ドデシロキ
シ）ベンズアミドの合成）
３，４，５−トリス（ドデシロキシ）安息香酸（1.10g, 1.63mmol）をジクロロメタン
（100ml）に溶解し、水溶性カルボジイミド（0.381g, 1.96mmol）、１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（0.261g, 1.96mmol）を加え、室温で１時間撹拌した。その後、１，８−
ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン（1.21 g, 8.15 mmol）を加え、室温でさらに１時
間撹拌した。反応溶液は飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリ
ウムで脱水した。硫酸ナトリウムをろ別し、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１）により精製し、目的物（922mg,
1.14mmol, 70%）を得た。
1H-NMR (CDCl3, 600MHz) δ 6.99 (2H, s)、6.72 (1H, brs)、4.01 (4H, t, J = 6.5Hz
)、3.98 (2H, t, J = 6.5Hz)、3.66 (8H, m)、3.50 (2H, t, J = 5.5Hz)、2.84 (2H, t, 
J = 5.5Hz)、1.80 (4H, quint, J = 6.8Hz)、1.73 (2H, quint, J = 6.8Hz), 1.34-1.26 
(54H, m), 0.88 (9H, t, J = 6.8Hz)。
MALDI-TOFMS (Dithranol) calcd m/z 806.08 ([M+H]+)。
【００４４】
［参考例３］
（Ｎ−（１７−アミノ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデシル）−３，
５−ビス（ドデシロキシ）ベンズアミドの合成）
３,５−ビス（ドデシロキシ）安息香酸（0.58g, 1.19mmol）をジクロロメタン（30ml）
に溶解し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（0.
29g, 1.55mmol）と１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（0.21g, 1.55mmol）を加え
、室温で１時間撹拌した。その後、１,１７−ジアミノ−３,６９,１２,１５−ペンタオキ
サヘプタデカン（2.33g, 3.09mmol）を加え、室温で３時間撹拌した。反応終了後、反応
液をクロロホルムで抽出した後、有機層を飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムで脱水した。硫酸ナトリウムをろ別した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝9：1）により精製し、目的物（
0.33g, 37%）を得た。
1H-NMR (CD3OD, 600MHz) δ 6.96 (d, 2H, J = 2.1Hz)、6.62 (t, 1H, J = 2.1Hz)、3.
99 (t, 4H, J = 6.5 Hz)、3.70 (t, 2H, J = 5.2 Hz)、3.62 (m, 20H)、3.56 (t, 2H, J 
= 5.5 Hz)、3.09 (t, 2H, J = 5.2 Hz)、1.77 (m, 4H)、1.48 (m, 4H)、1.34 (m, 32H)、
0.89 (t, 6H, J = 7.2 Hz)。
MALDI-TOFMS (2,5-Dihydroxybenzoic acid) m/z 754 ([M+H]+)。
【００４５】
［参考例４］
（Ｎ−（１７−アミノ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデシル）−３，
４，５−トリス（ドデシロキシ）ベンズアミドの合成）
３，４，５−トリス（ドデシロキシ）安息香酸（250mg, 0.371mmol）をジクロロメタン
（20ml）に溶解し、  水溶性カルボジイミド（84.4mg, 0.440mmol）、１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（60.0mg, 0.440mmol）を加え、室温で１時間撹拌した。その後、１，
１７−ジアミノ−３，６，９，１２，１５−ペンタオキサヘプタデカン（415mg, 1.48mmo
l）を加え、室温でさらに１時間撹拌した。反応溶液は飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗
浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した。硫酸ナトリウムをろ別し、溶媒を留去し
、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１）
により精製し、目的物（184mg, 0.196mmol, 53%）を得た。
1H-NMR (CDCl3, 600MHz)δ7.01 (2H, s)、6.99 (1H, brs)、4.01 (4H, t, J = 6.5Hz)
、3.98 (2H, J = 6.5Hz)、3.75-3.60 (22H, m), 3.49 (2H, t, J = 5.1Hz)、2.84 (2H, t
, J = 5.1Hz)、1.80 (4H, quint, J = 6.8Hz)、1.73 (2H, quint, J = 6.8Hz)、1.29 (6H
, m)、1.28-1.26 (48H, m)、0.88 (9H, t, J = 7.2Hz)。
MALDI-TOFMS (Dithranol) m/z 938.85 ([M+H]+)。
【００４６】
［参考例５］
（Ｎ−（アミノＰＥＧ１０００）−３，４，５−トリス（ドデシロキシ）ベンズアミドの
合成）
３，４，５−トリス（ドデシロキシ）安息香酸（1.60g, 2.37mmol）をジクロロメタン
（100ml）に溶解し、水溶性カルボジイミド（736mg, 38.4mmol）、１−ヒドロキシベンゾ
トリアゾール（519mg, 38.4mmol）を加え、室温で１時間撹拌した。その後、ジアミノＰ
ＥＧ１０００（8.29g, 8.31mmol）を加え、室温でさらに１時間撹拌した。反応溶液は飽
和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水した。硫酸ナト
リウムをろ別し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロ
ホルム：メタノール＝50：1）により精製し、目的物（373mg, 0.231mmol, 9%）を得た。
1H-NMR (CDCl3, 600MHz)δ7.00 (2H, s)、6.73 (1H, brs)、4.01 (4H, t, J = 6.5Hz)
、3.98 (2H, t, J = 6.5Hz)、3.72-3.58 (m)、3.23 (2H, brs)、1.80 (4H, quint, J = 6
.8Hz)、1.72 (2H, quint, J = 6.8Hz)、1.46 (6H, quint, J = 6.8Hz)、1.35-1.26 (48H,
m)、0.88 (9H, t , J = 6.9Hz)。
MALDI-TOFMS (Dithranol) m/z 1333.30、1377.25、1422.30、1466.25、1509.25、1553.
20、1598.20、1642.23、1686.18 ([M+H]+)。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明は、新規な遺伝子導入ベクターを提供するものであり、遺伝性疾患、癌等の治療
薬、再生医療における細胞治療、細胞を用いた実験用試薬等としての利用が期待される。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】フローサイトメトリーを用いたオリゴアルギニン脂質含有リポソームの細胞膜透過性の解析結果を示す図である。
【図２】フローサイトメトリーを用いたオリゴアルギニン脂質含有ナノパーティクルの細胞膜透過性の解析結果を示す図である。
【図３】フローサイトメトリーを用いたオリゴアルギニン脂質含有ミセルの細胞膜透過性の解析結果を示す図である。
【図４】共焦点レーザー顕微鏡を用いたオリゴアルギニン脂質含有ミセルによるＦＩＴＣ標識オリゴＤＮＡの細胞内導入の解析結果を示す図である。
【図５】フローサイトメトリーを用いたオリゴアルギニン脂質含有ミセルの細胞膜透過性の解析結果を示す図である。
【図６】ルシフェラーゼ活性を用いたオリゴアルギニン脂質含有ミセルによる遺伝子細胞内導入の解析結果を示す図である。
【図７】共焦点レーザー顕微鏡を用いたオリゴアルギニン脂質含有ミセルによるＧＦＰの細胞内発現の解析結果を示す図である。
【図８】フローサイトメトリーを用いたオリゴアルギニン脂質含有ミセルによるＧＦＰの細胞内発現の解析結果を示す図である。
【符号の説明】
【００４９】
図１：Ａはカルセインの蛍光で測定した結果、ＢはＤｉＩの蛍光で測定した結果を示す。
また、１は細胞の自家蛍光、２はＬ−ＮｏｎＡｒｇ、３はＬ−ＰＥＧ−Ａｒｇ６、４はＬ
−ＰＥＧ−Ａｒｇ８、５はＬ−Ａｒｇ６と反応させた結果を示す。
図２：Ａは１時間後の、Ｂは３時間後の結果を示す。
図３：Ａは１時間後の、Ｂは３時間後の結果を示す。
図７：Ａはコントロール、ＢはＭ−ＰＥＧ−Ａｒｇ１０を３時間作用させた結果を示す。
【配列表フリーテキスト】
【００５０】
配列番号１〜４：オリゴアルギニン
【図５】
2005278630.tif 000007
【図６】
2005278630.tif 000008
【図８】
2005278630.tif 000009
【図１】
2005278630.tif 000010
【図２】
2005278630.tif 000011
【図３】
2005278630.tif 000012
【図４】
2005278630.tif 000013
【図７】
2005278630.tif 000014
【配列表】
2005278630000001.app