(57)【要約】      （修正有）【課題】胃酸ｐＨで溶解可能なヘム鉄を得るための、大型ペプチドと錯体化されたペプチドを多く含んだペプチドフラクションを調整する生物学的方法の提供。【解決手段】血塊等製剤の最初のフラクションが、酵素加水分解のプロセスに掛けられ、大型ペプチドと錯体化したヘム鉄を含む、第１加水分解生成体を得る段階、−  該第１加水分解生成体が、限外濾過によって濃縮され、ヘム鉄ペプチド錯体により濃縮された加水分解溶液を得る段階、―  並行して、例えば動物の血液からの血塊等製剤の第２のフラクションが、酵素加水分解のプロセスに掛けられ、小型ペプチドと高度に錯体化した、外因性ヘム溶液を得る段階、―  ヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮された加水分解生成体溶液が、外因性ヘム溶液と混合され、該外因性ヘムを加水分解溶液の大型ペプチド上に固定することを可能にし、又該外因性ヘムを酸ｐＨに溶解可能な、高度に鉄を含有するヘムペプチドフラクションを得る。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘム鉄を基礎とし、鉄分欠乏症の治療に特に適した、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等血液製剤から、食物調製剤を得る生物学的方法において、
―  動物の血液の第１のフラクションが、制御された酵素加水分解プロセスに掛けられ、大型ペプチドと錯体化したヘム鉄を含む第１の加水分解生成体及びヘム鉄と錯体化しないペプチド集団を、得る段階、
―  このようにして得られた第１の加水分解生成体が濃縮され、ヘム鉄と錯体化しないペプチド集団を除去するために、限外濾過によってヘム鉄ペプチド錯体を得、ヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮された加水分解生成体溶液を得る段階、
―  並行して、動物の血液の第２のフラクションが、追って遂行される酵素加水分解プロセスに掛けられ、小型ペプチドと錯体化したヘム鉄を含む第２の加水分解生成体、及びヘム鉄と錯体化しないペプチド集団を得る段階、
―  ヘムと結合しない小型ペプチドの大部分を除去するために、又非常に高いヘム濃度を持つ遠心分離された残留物を得るために、このようにして得られた第２の加水分解生成体が、遠心分離される段階、
―  遠心分離された残留物が、特に炭酸ナトリウムを加えることにより、溶解可能となり、ヘムが小型ペプチドに結合しているヘムの外因性溶液を得る段階、―ヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮された加水分解生成体溶液が、外因性ヘム溶液と混合され、外因性ヘムが加水分解生成体溶液の大型ペプチド上に固定可能にし、又外因性ヘムが該外因性ヘムに結合している小型ペプチドを遊離可能にする段階、
―  結果として得られた混合体が、大型ペプチドに固定されなかった外因性ヘムを除去するために、遠心分離される段階、及び、
―  結果として得られた溶液が、該混合段階の間に遊離した小型ペプチドを除去するために、限外濾過によってヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮される段階、
より成る連続した段階によって特徴付けられた、食物調製剤を得る生物学的方法。
【請求項２】
高い鉄含有量を持つヘムペプチドのフラクションが乾燥され、鉄分欠乏症の治療に特に適した、粉末状の食物調製剤を得ることを特徴とする、請求項１に記載された方法。
【請求項３】
動物血液の２つのフラクションによる、最初の制御された酵素加水分解と、追って遂行される酵素加水分解が、酸ｐＨ、特に豚ペプシンにて活性する酵素にて行われることを特徴とする、請求項１及び２のいずれか一つに記載された方法。
【請求項４】
制御された酵素加水分解と、追って遂行される酵素加水分解が、ｐＨ６未満にて行われることを特徴とする、請求項３に記載された方法。
【請求項５】
もし最初の原材料が血塊であるならば、制御された酵素加水分解段階中の加水分解の程度は、５％或いはそれ以下に調整され、一方追って遂行される酵素加水分解段階での加水分解の程度は、少なくとも１５％に調整されることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一つに記載された方法。
【請求項６】
ヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮された加水分解生成体溶液と、外因性ヘム溶液を混合する段階の間、使用される溶液量は、外因性ヘム溶液によって寄与されるヘム量が、加水分解生成体溶液中のヘム量よりも１０倍高く及んでいるような状態である、ことを特徴とする、請求項１から５のいずれか一つに記載された方法。
【請求項７】
約１０ｋＤａの遮断限界を持つ親水性膜が、限外濾過による濃縮段階に使用されることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一つに記載された方法。
【請求項８】
ペプチドの除去を継続しつつ、加水分解生成体の濃縮を増加するために、同一の膜を用いての１回、好ましくは３回の完全な濾過段階が、各限外濾過濃縮段階の後に行われることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一つに記載された方法。
【請求項９】
遠心分離残留物が限界濾過により濃縮される前に、該遠心分離残留物中に蓄積する非溶解ペプチドを除去するために、第１の加水分解生成体が遠心分離されることを特徴とする、請求項１から８のいずれか一つに記載された方法。
【請求項１０】
鉄対ペプチド重量比が２％以上、好ましくは約３％によるヘムペプチドが、液状或いは粉末状に製造され、該ヘムペプチドにおいては８０％以上の鉄がペプチドと錯体化していることを特徴とする、請求項１から９のいずれか一つに記載された方法を実施することにより得られる、鉄欠乏症の治療に特に適した、ヘム鉄を基礎とした食品調製剤。
【請求項１１】
請求項１から９のいずれか一つに記載された方法を実施することにより得られる、鉄欠乏症の治療に特に適した、ヘム鉄を基礎とした食品調製剤であって、請求項１０に記載された粉末状ヘムペプチドにて満たされ、特に約０．５ｍｌの容積を持つ、キャプセルの形で準備されることを特徴とする食品調製剤。
【請求項１２】
該ゲルカプセルが胃液から保護されていることを特徴とする、請求項１１に記載された食品調製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、鉄分欠乏症の予防及び治療のための、酸性媒質に溶解可能な、ヘム鉄ペプチド錯体高含有食物調整剤、及び該調製剤を得ることを可能にする生物学的プロセスに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
鉄分欠乏症は重大な健康問題であり、産業隆盛国で普遍化し、国々に蔓延し、世界の人口の約２０％が冒されている。
【０００３】
鉄分は、数量面において生物体の中で最も重要な微量元素であり、細胞生命を維持するために必要不可欠である。鉄分は、酸素、電子、又ＤＮＡ結合の運搬に対し、特に重要であり、細胞機能の広範な役割の中、極めて重要な役割を演じる多くの分子の中で活性元素であり、ヘモグロビン（酸素を運搬）、シトクローム（呼吸器系での電子伝達体）及びヘム酵素（カタラーゼ、ペルオキシダーゼ）を包含している。
【０００４】
推奨される鉄分の摂取量は以下の表１の通りである。
【０００５】
【表１】
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【０００６】
食物中に含まれる鉄は二つの形態、非ヘム鉄及びヘム鉄にて存在し、該鉄分は異なった吸収メカニズムによって空腸の腸細胞によって吸収される。
【０００７】
ヘム鉄は、最初に赤肉中にて見つけられた、二つの食物タンパク質、ヘモグロビン中及びミオグロビン中に存在する。
【０００８】
ヘムは、非タンパク質、有機体、扁平環状構造、の中心に位置する鉄原子から成り立ち、メテニルブリッジと８個の側鎖によって結合された、４個のピロール核を包含している。
【０００９】
ヘム鉄の吸収（２０−３０％）は、非ヘム鉄の吸収よりも大きく優れており、その理由は、ヘム鉄が食餌性因子と胃液分泌から大きくは影響されないからである。
【００１０】
非ヘム鉄は食物中に存在する鉄分の約９０％を構成し、実際には動物性鉄分の６０％及び植物性鉄分の全ては非ヘム性であって、該非ヘム鉄は穀物、乾燥豆類、果物、乳製品、及び野菜の中に見つけられる。
【００１１】
吸収される非ヘム鉄の量は、ヘム鉄（２−２０％）量よりも少なく、食物の成分によって変化する。非ヘム鉄は或る種の食餌性因子により刺激され、或いは逆に他の因子によって抑制される。
【００１２】
当節、専門家達は鉄分欠乏症に対し様々な治療法を提供している（食餌の変化、食物に鉄分の添加、或いは鉄分補助剤）。
【００１３】
鉄塩（硫酸鉄、グルコネート鉄、フマル酸鉄等）を基にしたあらゆる範囲の調製品は、鉄分欠乏症の治療及び予防の手段として、現在、市場で利用可能である。
【００１４】
しかしながら、この非ヘム鉄の出所には、以下を含めて多くの欠点が生じている。  
−  その吸収は食餌の成分によって変化する。  
−  消化器系への狭い許容度（鉄塩の収斂性が、症例の２０％の率にて腸への問題を引き起こす。即ち治療の継続不可。）。  
−  酸化作用（結腸の本来の場所に遊離基を発生させる危険があり、その有害な影響は既に論証済み。）。
【００１５】
本発明の目的は、鉄分欠乏症の治療及び予防に特に適した、食物調製品を提供することであり、該食物調製品は、これらの障害を矯正し、優れた生物学的利用可能性を発揮する。
【００１６】
ヘム鉄は、最も容易に吸収可能であり、鉱物性の鉄よりも望ましくない影響をより少なくする、鉄の形態であることが見出された。
【００１７】
ヘモグロビンが、入手するのに容易な下位製品、かつ安価であれば、該ヘモグロビンは、ヘム鉄の重要な供給源である。
【００１８】
しかしヘモグロビンは、鉄を重量比で０．３４％しか含まず、残余はタンパク質であるので、補助剤にヘモグロビンを使用することは、食餌性の理由により、考えられない。
【００１９】
したがって、ヘモグロビンを治療上の用量に投与するには、タンパク質レベルで不均衡を引き起こし易く、特に食物中のタンパク質が既に豊富である先進産業国においては、特に不均衡を引き起こし易く、場合によってはタンパク質が豊富過ぎ、実際には、毎日の推奨される鉄分摂取を満たすためには純粋なヘモグロビンを６ｇ摂る必要があろう。
【００２０】
この状況を考慮して、０．３４％（ｗ／ｗ）をかなり上回る鉄分を含有するヘモグロビンから抽出された、鉄分欠乏症治療のための、ヘム鉄を基礎とした調製品を見つけることが望ましい。
【００２１】
そのような調製品を得る手段として、多くの方法が既に提案されてきた。
【００２２】
しかし、生物学的利用可能性の問題により、全てを満足するこれらの方法は、今日まで無かったことが判明している。
【００２３】
ヘモグロビン中の鉄含有量を増すために、或るチームは有機溶剤を用いた方法で、ヘム分をグロビンから分離したところ、その全ては高い濃度のヘム鉄を持つ調整品が得られるという結果となった。しかしこれら調製品におけるヘム鉄分の吸収には、限界がある。
【００２４】
非特許文献１によれば、もしヘム鉄が、グロビンから分離され投与されるならば、ヘムの吸収は非常に悪いということが、男性間で行われた調査から見つかった。グロビンによって運搬されなかった場合、ヘムは胃酸のｐＨにさらされて凝縮する凝集体を形成し、腸において吸収されないことが見つけられた。ヘモグロビンの分解より、結果として得られる産物、即ちペプチドは、それによって凝集化に歯止めを掛け、錯体化によるヘム鉄の吸収において役割を果たしているように思える。
【００２５】
非特許文献２によれば、ヘム投与時の、全タンパク質付加は生物学的利用可能性を増すものと思われる。
【００２６】
ヘム鉄が錯体化状態であり、分離されたヘム鉄が胃酸ｐＨに溶解不能な凝集体を形成し、したがって腸に吸収されず、一方タンパク質（ヘモグロビンの場合として）或いはペプチドにて錯体化したヘム鉄は、凝集体をより少なく形成し、胃酸ｐＨに完全に溶解可能であり、したがって吸収される、事実に結びついているように思えるヘム鉄の生物学的利用可能性が、これらそれぞれ異なった研究で打ち立てられた。
【００２７】
この状況を鑑みて、専門家達は、ペプチド或いはタンパク質を胃中に広がる胃酸ｐＨに溶解可能にするための、それらペプチド或いはタンパク質と錯体化したヘムを基礎とする調製剤を提案しようと試みてきた。
【００２８】
したがって、幾つかのチームは、ヘムペプチドのフラクションを調製することを目指して、この加水分解から得られるペプチド加水分解生成体の、限外濾過に続くヘモグロビンの酵素加水分解と、ヘモグロビンより高い濃度の鉄を結びつける、方法を開発した。
【００２９】
しかしながら今日まで、ヘム鉄対ペプチドが高い比率であるヘムペプチドのフラクションを調製可能にし、ヘムが、その凝集状態に限界を与え、又酸ｐＨ中で溶解可能にする、大型ペプチドと、錯体化することを可能にする、プロセスは提案されたことはない。
【００３０】
例として、ヘム鉄にて濃縮されたアミノ酸、及びヘム鉄にて濃縮されたアミノ酸調製剤のためのプロセス、と題する非特許文献３、及び特許文献１によれば、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等血液製剤である動物の血液を、用いた調製剤プロセスは、ヘモグロビンの場合より鉄対ペプチド比で１５倍に及ぶ高率である、ヘムと短ペプチド配列の複合体調製剤を得る手段として、提案されてきた。
【００３１】
この鉄分濃縮調製剤は変性ヘモグロビンの、追って遂行される加水分解プロセスの結果である。濃縮は遠心分離又は限外濾過にて、或いは遠心分離及び限外濾過の組み合わせによって得られる。
【００３２】
しかし、このフラクション中に存在するヘムは、非常に凝集された形をとっており、その吸収には限界がある。実際、該ヘムは非常に小型のペプチドと錯体化しており、該ヘムは酸ｐＨ中で大きなヘム凝集体の沈殿を阻止することはできない。
【００３３】
ヘモグロビンと比較して高濃縮度の鉄分（或る条件の下で１５倍に及ぶ）を得ることができることは判明したが、この鉄分は酸ｐＨ中で沈殿を阻止できない小型ペプチドと錯体化しているので、鉄分は潜在的にも生物学的利用可能性はない。
【００３４】
他の例として、特許文献２及び「ヘモグロビン酵素加水分解によるヘム濃縮ペプチドのプロセス開発」と題する非特許文献４には、ヘモグロビンから高い鉄分含有を持つペプチド留分を調製する、他の方法が記述されている。
【００３５】
この調製剤の方法は、プロテアーゼと限外濾過を混合することによる、非常に進化したヘモグロビン加水分解を基礎としたものである。
【００３６】
この方法によって得られる濃縮係数は、１４に及んでいるであろう。
【００３７】
不幸なことには、この調製剤のヘム鉄は、凝集体の形成を阻止できない、したがって酸媒体中に溶解状にて維持できない、小型ペプチドに結合されている。
【００３８】
「牛ヘモグロビン加水分解生成物による、有機膜を使用する限外濾過への分子相互作用の影響」と題する非特許文献５によれば、豚の血液、牛の血液等動物の血液から、或いは該豚の血液、牛の血液からの血塊など製剤から、ヘムペプチドの加水分解生成物を得ること可能にする方法が述べられており、該生成物はヘモグロビンより２．５倍多い鉄を含み、そこではヘムは大型ペプチドと結合している。
【００３９】
この方法によって得られた調製剤は、ヘムペプチド錯体を含んでおり、該錯体は酸ｐＨを含む広い範囲のｐＨ中で溶解可能であり、これらの大型ペプチドは、ヘモグロビン中のグロビンと同じ容量を持ち、ヘムの凝集を制限し、それを酸媒体中へと運搬する。
【００４０】
しかし、得られた鉄分の濃縮度は全く不適切である。
【００４１】
ついに、ＨＩＰの臨床研究：経口ヘム鉄製品と題する非特許文献６によれば、１％比の鉄を含むヘム鉄を基礎とした調製剤、換言すれば本来のヘモグロビンの３倍の鉄分を持つ調製剤は、人体にてテストされたが、酸ｐＨでは半分のみ溶解可能であった。この調製剤は、濃縮ヘムの生物学的利用可能性よりもずっと高い、それを人間に示すことが解った。
【００４２】
不幸なことには上述の全ての方法は、ヘム鉄は充分だが酸ｐＨには溶解不能である調製品であるか、或いはヘム鉄は溶解可能だが鉄分含有量が充分でない調整剤であるかの、結果となっている。
【００４３】
【特許文献１】米国特許（ＵＳ）４４１１９１５号明細書
【特許文献２】韓国特許（ＫＲ）１０−２０００−００５３７７８号明細書
【非特許文献１】Ｕｚｅｌ  Ｃ．及びＣｏｎｒａｄ  Ｍ．Ｅ．：「ヘム鉄の吸収」、Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３５、２７−３４（１９９８）
【非特許文献２】Ｓｃｈｕｅｍａｎｎ  Ｋ．、Ｅｌｓｅｎｈａｎｓ  Ｂ．及びＭａｅｕｒｅｒ  Ａ．：「鉄分補助」、Ｊ．Ｔｒａｃｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．１２、１２９−１４０（１９９８）
【非特許文献３】Ｅｒｉｋｓｓｏｎ  Ｃ．：「ヘム鉄にて濃縮されたアミノ酸、及びヘム鉄にて濃縮されたアミノ酸調製剤のためのプロセス」（１９８２）
【非特許文献４】Ｉｎ，Ｍ．Ｊ．、Ｃｈａｅ，Ｈ．Ｊ．及びＯｈ，Ｎ．Ｓ．：「ヘモグロビン酵素加水分解によるヘム濃縮ペプチドのプロセス開発」、Ｂｉｏｒｅｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．８４，６３−６８（Ｍ．Ｊ．）（２００２）
【非特許文献５】Ｌｅｂｒｕｎ  Ｆ．、Ｂａｚｕｓ  Ａ．、Ｄｈｕｌｓｔｅｒ  Ｐ．及びＧｕｉｌｌｏｃｈｏｎ  Ｄ：「牛ヘモグロビン加水分解生成物有機膜を使用する限外濾過への分子相互作用の影響」、Ｊ．Ｍｅｍｂｒ．Ｓｃｉ，１４６，１１３−１２４（１９９８）
【非特許文献６】Ｐ．Ａ．，Ｍｏｏｒｅ  Ｇ．Ｍ．及びＲｈｏｄａ  Ｂ．Ｓ．：「ＨＩＰの臨床研究：経口ヘム鉄製品」、Ｎｕｔｒ．２０、１２７９−１２８６（２０００）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４４】
この背景に対して、本発明の目的は、潜在的に生物学的利用可能性があり、特に鉄分欠乏症の治療に適切であり、この両者の隔たりを埋めるべく意図された、ヘム鉄を基礎とした食物調製剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００４５】
したがって、本発明は、大部分は大型ペプチドと錯体化されているヘム鉄を、多く含んだヘムペプチドのフラクションを調整する方法に関するものである。
【００４６】
この調製剤は、食餌補助剤として使用されるために意図されていることを考慮して、該方法は溶媒を使用しない、生物学的プロセスであるべきことが、非常に重要である。
【００４７】
本発明により提案されるこの方法は、以下の連続する段階によって特徴づけられる。 
―  例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等派生物の最初のフラクションが、制御された酵素加水分解のプロセスに掛けられ、大型ペプチドと錯体化したヘム鉄を含む最初の加水分解生成体、及び該ヘム鉄と錯体化しない小型ペプチドの集団を、得る段階、
―  このようにして得られた最初の加水分解生成体が、濃縮され、ヘム鉄と錯体化しないペプチド集団を除去するために、限外濾過によってヘム鉄ペプチド錯体を得て、又ヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮された加水分解生成体溶液を得る段階、なお該ヘム鉄は大型ペプチドにて錯体化され、それによって酸ｐＨに溶解可能となるのであるが、
―  並行して、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等製剤の第２のフラクションが、追って遂行される酵素加水分解のプロセスに掛けられ、小型ペプチドと錯体化したヘム鉄、及びヘム鉄と錯体化しない小型ペプチドの集団を含む、第２の加水分解生成体を得る段階、
―  このようにして得られた第２の加水分解生成体が、ヘムに結合しない小型ペプチドの大部分（約６０％）を除去するために、又非常に高濃度の、遠心分離された残留物を得るために、遠心分離される段階、
―  特に炭酸ナトリウムが加えられて、遠心分離された残留物が、溶解可能となり、ヘムが小型ペプチドと結合し、したがって酸ｐＨには全く溶解されないヘムの外因性溶液を得る段階、
―  ヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮された該加水分解溶液が、外因性ヘム溶液と混合され、濃縮加水分解溶液の大型ペプチド上に該外因性ヘムを固定させ、又外因性ヘムに結合された小型ペプチドを遊離させることを可能にする段階、
―  大型ペプチドに固定されなかった外因性ヘムを除去するために、結果として得られた混合体が、遠心分離される段階、そして、
―  該混合過程の間に遊離した小型ペプチドを除去するために、得られた溶液が、限外濾過によってヘム鉄ペプチド錯体にて凝縮される段階。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
本発明により提案された方法は、したがって更なるヘム量を固定すること可能な、或るヘム鉄ペプチド錯体の特異な性質を基礎としたものである。
【００４９】
したがってこの方法は、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等製剤、の二つのフラクションが、並行して酵素加水分解のプロセスに掛けられること、が含まれており、即ち一方では、最初のフラクションの制御された加水分解は、ペプチドフラクションを得て、その際ヘム鉄は大型ペプチドと錯体化し、その後酸ｐＨに溶解可能にし、他方、第２フラクションへの追って掛けられる加水分解は、小型ペプチドを含むペプチドフラクションが得られること可能にし、その内のいくつかはヘムと錯体化している。
【００５０】
追って遂行される加水分解は、次の段階へと続くが、その段階の間に、ヘムと錯体化しない小型ペプチドの約６０％は、高濃縮されたヘム鉄（外因性ヘム溶液）を持つペプチドフラクションを得るために、遠心分離によって除去される。このヘム鉄は次いで、制御された加水分解から得られた大型のペプチド上に固定される。
【００５１】
外因性ヘムは、疎水性相互作用によって、大型ペプチドに固定されるように思われる。
【００５２】
外因性ヘムは全く酸ｐＨに溶解不能だが、しかし続いて大型ペプチドに付着するので、溶解可能になることは指摘されるべきであろう。
【００５３】
精製後、この方法は食物調製剤を得ることができ、それはヘモグロビンに比し非常に高い鉄含有量を有し、それはｐＨ１とｐＨ３の間、及びｐＨ５．５とｐＨ１２の間で溶解可能であり、その場合鉄の８０％はペプチドと錯体化し、したがって潜在的には生物学的利用可能となる。
【００５４】
本発明の目的のために、究極的に高濃縮の鉄を持つヘムペプチドのフラクションは液状にて用意されてもよいが、しかし鉄分欠乏症の治療に適した粉末状での食物調製剤を得るために、乾燥化段階に掛けられるのが有利である。
【００５５】
そういった粉末がキャプセルの中に封入されることは有利であり、したがって食餌性補足材として吸収可能となる。
【００５６】
本発明の目的のための乾燥プロセス（真空オーブンにての粉砕、霧化或いは凍結乾燥にての粉砕）は、究極的に得られる粉末の特性（流動能力、分散能力等）を授けることとなる。
【００５７】
粉末が、続いてキャプセルに導かれる状態で、粉砕の直前の乾燥目的のために真空オーブンを使用することは、より有利であることが証明されている。
【００５８】
本発明の目的のために、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等製剤、の二つのフラクションによる、最初に制御される酵素加水分解と、追って遂行される酵素分解は、酸ｐＨで活発な酵素、特に豚ペプシンを使用して為されることが好ましい。
【００５９】
豚ペプシンは数多くの利点があること指摘されている。
【００６０】
実際、酸ｐＨでの加水分解を容認するのは消化酵素であり、それによってバクテリア汚染を防いでいる。更に、酵素反応は、特に希釈炭酸ナトリウムを加えることによりｐＨを８（該ｐＨでペプシンは変性する）に再度上げ、所定の段階で容易に休止することができる。
【００６１】
本発明にしたがえば、制御された酵素加水分解反応と、追って遂行される加水分解反応はｐＨ６未満で最良に作用されることが解った。
【００６２】
例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等製剤のｐＨは、塩酸を加えることにより所定値に調整される可能性がある。
【００６３】
例として、もし最初の原材料が血塊であるならば、制御された酵素加水分解段階での加水分解度は、５％或いはそれ以下の値に調整されるが、一方追って遂行される酵素加水分解段階での加水分解度は、１５％或いはそれ以上に調整される。
【００６４】
該加水分解度は、カットされるペプチド結合のパーセンテイジに対応し、専門家は、特に遊離したＮＨ２分子を測定することにより、パラメーターを制御する方法に精通している。
【００６５】
加水分解度の選択は、本発明により提案される方法の決定的な特質である。
【００６６】
実際、或るサイズ以下のペプチドは、酸ｐＨにてヘムを溶解させたり、或いは外因性ヘムに更に付加固定することが、もはや不可能となる。
【００６７】
したがって、制御された加水分解では、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等製剤の最初のフラクションにおいて、充分に高い鉄濃縮が達成されること、一方ヘムを錯体化するのに使用されるペプチドのサイズを極端に減ずることないよう注意が必要であること、を確実にすることが肝要である。
【００６８】
追って遂行される加水分解においては、充分に精製されてはいるが、しかし小型ペプチドに結合しているヘムを得ることが肝要であり、該ヘムが、制御された加水分解によって得られたフラクション中の大型ペプチド上に固定されることを可能にし、それによってこの固定プロセスに有害となり得る、高い凝集度になり過ぎることを防いでいる。
【００６９】
本発明による一つの好ましい特質にしたがって、ヘム鉄ペプチド錯体にて濃縮された加水分解溶液と、外因性ヘム溶液を混合する段階において、使用される溶液量は、外因性ヘム溶液によって寄与されたヘム量が、加水分解生成溶液中のヘム量の１０倍に及ぶような量である。
【００７０】
本発明の目的のために、該２つの溶液は、一般の方式通り、周囲温度にて、混合される。
【００７１】
次いで限外濾過による濃縮化の段階は、混合段階において遊離した小型ペプチドの除去を可能にさせる。
【００７２】
本発明の他の特色によれば、約１０ｋＤａの遮断限界を持つ親水性膜が、限界濾過による濃縮段階に使用される。
【００７３】
そのような膜の使用は、ヘムと錯体化しないペプチドの、１００％に近い保持率にて除去可能であることが解った。
【００７４】
本発明の目的のため、ペプチドの除去を続行しつつ加水分解生成体の濃縮を増加させるために、それぞれの限外濾過濃縮段階の後、同じ膜にて少なくとも１回、好ましくは３回の、完全濾過段階を進行することが、特に有利である。
【００７５】
３回或いはそれ以上の完全濾過段階にて得られる濃縮は、たいしたものではないことが、テストにて示された。
【００７６】
本発明にしたがって、遠心分離残留物中に蓄積する、非溶解性ペプチドを除去するために、限外濾過によるペプチドの濃縮前に、最初の加水分解生成体を遠心分離することは又、利点がある。
【００７７】
テストが示すには、この遠心分離はヘムの損失に繋がることはなく、特に限外濾過によって膜が詰まってしまう迄の時間を延ばすこととなる。
【００７８】
本発明は、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等製剤から得られるヘムを基礎とした食品調製剤を、初めて可能にする方法を提供するものであり、該ヘムは；
−  ヘモグロビン調製剤のそれよりも１０倍に及ぶであろう多量の鉄分、及び
−  容易に吸収できる形でのヘム鉄、
の両者を含んでいる。
【００７９】
更に、本発明は又、例えば豚の血液、牛の血液等動物の血液、或いは豚の血液、牛の血液からの血塊等製剤の、酵素加水分解生成体が１０倍の係数にて容易に吸収されるヘム鉄にて濃縮されること可能にする方法を、初めて提案するものである。
【００８０】
本発明は更に、鉄分欠乏症の治療に特に適し、特に前記方法を実施することにより得られた、ヘム鉄を基礎にする、食物調製剤に関するものである。
【００８１】
このような食品調製剤は、鉄対ペプチド比が２％以上、好ましくは３％以上によるヘムペプチドの、液状或いは粉末状にて、製造されてもよく、該ヘムペプチドにおいては８０％以上の鉄がペプチドと錯体化している。
【００８２】
このような粉末は、胃中に広がる酸ｐＨに溶解可能である。
【００８３】
したがって、本発明は、ヘモグロビンと比較し鉄分が非常に高く濃縮された、良好な生物学的利用可能性を示す、粉末状食餌補助材を提供する。
【００８４】
本発明による特に利点のある特質によって、圧縮された場合のこの粉末の体積重量は、１に近い。
【００８５】
本発明は更に、粉末状ヘムペプチドで満たされた、例えば約０．５ｍｌの体積容量のキャプセルの形での、食物調整剤に関するものである。
【００８６】
このようなキャプセルは、胃を守るのに有利であることもある。
【００８７】
この方式は、ヘムペプチドの調製剤が、制御されない胃中のペプシン加水分解から保護されること可能にしている。
【００８８】
そういった加水分解プロセスは、小型ペプチドとアミノ酸を効果的に形成するよう導き、該小型のペプチドとアミノ酸は、胃中に広がる酸ｐＨにヘム凝集体を溶かすことはできない。
【００８９】
したがって本発明は、消費者へ毎日の鉄分摂取を推薦提案するものであり、その目的のために一日当たり、約０．５ｍｌを収納するキャプセル３個を取り入れることが必要であろうし、これは受容可能な調合剤に相当する。
【００９０】
本発明によって提案される方法は、例えば真空オーブン中で高含有鉄分を持つヘムペプチドのフラクションを乾燥させる段階に続き、この事実は、粉末を得ることを可能にし、その物理化学特性は以下の表２に提示される。
【００９１】
【表２】
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【００９２】
ｐＨの関数としての、乾燥ヘムペプチドのこのフラクション中の、鉄溶解度曲線は、添付図（図１）に提示される。
【００９３】
この曲線を得るために、０．５％濃度溶液（ｗ／ｖ）が、ｐＨ範囲１から１２を有する緩衝溶液中で、該粉末を希釈することにより準備された。これらの溶液は遠心分離され、上澄み液中に存在した鉄量が測定された。この曲線は、このペプチドフラクション中の鉄がｐＨ酸範囲（ｐＨ１からｐＨ３）にて容易に溶解可能であることを論証しており、したがってペプチドがヘムを運搬することを確認している。該鉄が３．５から５までのｐＨ範囲では溶解されないことは、指摘されるべきである。この沈殿範囲はペプチドのｐＨに相当する。沈殿時、ペプチドは自身が運ぶペプチドにヘムを乗せる。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】ｐＨの関数としての、乾燥ヘムペプチドフラクション中の鉄の溶解度曲線を説明するのに使用される図を示す。
【図１】
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【外国語明細書】
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