(57)【要約】【課題】  メラノサイトのアポトーシスを抑制し、白髪や皮膚白斑症の発症予防又はその改善に有効な医薬、化粧料等を提供する。【解決手段】  下記一般式（１）：【化１】   2005068061.tif 000011  〔式中、ＡはＣ＝Ｏ又はＣＨ−ＯＨを示し、Ｒ1は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＯＯＨを示し、Ｒ2は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＨ3を示し、Ｒ3は−Ｈ又は−ＯＨを示す。〕で表されるラノスタン型トリテルペノイド誘導体を有効成分とするアポトーシス抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）：
【化１】
2005068061.tif 000007
〔式中、ＡはＣ＝Ｏ又はＣＨ−ＯＨを示し、Ｒ1は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＯＯＨを示し、Ｒ2は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＨ3を示し、Ｒ3は−Ｈ又は−ＯＨを示す。〕
で表されるラノスタン型トリテルペノイド誘導体を有効成分とするアポトーシス抑制剤。
【請求項２】
下記一般式（１）：
【化２】
2005068061.tif 000008
〔式中、ＡはＣ＝Ｏ又はＣＨ−ＯＨを示し、Ｒ1は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＯＯＨを示し、Ｒ2は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＨ3を示し、Ｒ3は−Ｈ又は−ＯＨを示す。〕
で表されるラノスタン型トリテルペノイド誘導体を有効成分とする白髪予防・改善剤。
【請求項３】
下記一般式（１）：
【化３】
2005068061.tif 000009
〔式中、ＡはＣ＝Ｏ又はＣＨ−ＯＨを示し、Ｒ1は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＯＯＨを示し、Ｒ2は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＨ3を示し、Ｒ3は−Ｈ又は−ＯＨを示す。〕
で表されるラノスタン型トリテルペノイド誘導体を有効成分とする皮膚白斑症の予防・改善剤。
【請求項４】
下記式（２）：
【化４】
2005068061.tif 000010
で表されるラノスタン型トリテルペノイド化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラノスタン型トリテルペノイド誘導体を有効成分とするアポトーシス抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、アポトーシスは発生・分化、細胞のターンオーバー等の生理的機構に加え、老化や癌等の様々な病態や疾患にも関与することが明らかにされ、これを制御する物質の開発が進められている。
ヒトの老化現象の一つである白髪は、メラニン産生細胞であるメラノサイトが大きく関わっているが、近年、メラノサイトのアポトーシスによってメラノサイトが欠如することが、その発症要因の一つとして考えられている（例えば特許文献１参照）。
【０００３】
従来、抗白髪剤としては、メラノサイトのｃＡＭＰ産性能を向上させてメラノサイトの機能低下を抑えるもの（例えば、特許文献２参照）、メラノサイトのメラニン生成の活性化を図るもの（例えば、特許文献３、特許文献４、特許文献５参照）、そして、メラノサイトのアポトーシスを抑制するもの（例えば、特許文献６参照）等、多種多様な成分が見出されている。しかしながら、実用上十分に満足できるものは未だ得られていない。
【０００４】
一方、ラノスタン型トリテルペノイド誘導体は、マンネンタケ属（Ganoderma）植物に含まれるトリテルペノイドであり、これまでにガノデリック酸α、β、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｔ、Ｍｆ、ガノデリオールＡ、Ｂ、Ｆなど１１９種類の化合物の化学構造が決定されている。斯かるトリテルペノイドには、抗ＨＩＶ作用、抗高血圧作用、細胞毒性作用、酵素阻害作用（FPT、PLA-2、DNA pol.β）、肝保護作用、ヒスタミン遊離阻害作用、低コレステロール化作用、血小板凝集阻害作用等があることが報告されているが（非特許文献１）、アポトーシス抑制作用があることは全く知られていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、メラノサイトのアポトーシスを抑制し、白髪や皮膚白斑症の発症予防又はその改善に有効な医薬、化粧料等を提供することを目的とする。
【特許文献１】米国特許第６１０３６８９号明細書
【特許文献２】特開平４−１２４１２２号公報
【特許文献３】特開平５−７８２２２号公報
【特許文献４】特開平７−２８５８７４号公報
【特許文献５】特開平７−３１６０２６号公報
【特許文献６】特開２００２−８０３８２号公報
【非特許文献１】H. W. Kimら, International Journal of Medicinal Mushrooms, 121, 1999
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、メラノサイトのアポトーシスを抑制する天然成分について検討したところ、下記の一般式（１）で表されるラノスタン型トリテルペノイド誘導体（以下、「ラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）」という）に、優れたアポトーシス抑制作用があり、白髪や皮膚白斑症の予防・改善に有効であることを見出した。
【０００７】
また、このうち下記のラノスタン型トリテルペノイド化合物（２）が新規化合物であることを見出した。
【０００８】
すなわち本発明は、下記一般式（１）：
【化１】
2005068061.tif 000002
【０００９】
〔式中、ＡはＣ＝Ｏ又はＣＨ−ＯＨを示し、Ｒ1は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＯＯＨを示し、Ｒ2は−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ又は−ＣＨ3を示し、Ｒ3は−Ｈ又は−ＯＨを示す。〕
で表されるラノスタン型トリテルペノイド誘導体を有効成分とするアポトーシス抑制剤、白髪予防・改善剤及び皮膚白斑症の予防・改善剤を提供するものである。
【００１０】
また本発明は、下記式（２）：
【００１１】
【化２】
2005068061.tif 000003
【００１２】
で表されるラノスタン型トリテルペノイド化合物を提供するものである。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、優れたメラノサイトのアポトーシス抑制作用を有し、白髪や皮膚白斑症の発症予防又は改善に有効な医薬、化粧料等を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明のラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）のうち、ＡがＣ＝Ｏ、Ｒ1が−ＣＯＯＨ、Ｒ2が−ＣＨ3、Ｒ3が−ＯＨである化合物（２）は新規化合物であり、それ以外はいずれも既知化合物である。尚、Ｒ3が−ＯＨである化合物においては、１５位の炭素原子は不斉炭素となり立体異性体（Ｒ体、Ｓ体）が存在する。本発明はそれらの立体異性体のいずれをも包含するものであり、光学活性体であってもラセミ体であってもよいが、好ましくはＳ体である。
【００１５】
本発明のラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）は、化合物（２）を含め、マンネンタケ属（Ganoderma）菌類から抽出することにより、或いは抽出された誘導体を常法によりアセチル化又は還元処理することにより得ることができる。
【００１６】
マンネンタケ属菌類からの抽出は、例えば霊芝（Ganoderma lucidum (Fr.) Karst.、サルノコシカケ科（Polyporaceae）マンネンタケ属（Ganoderma））の菌体の任意の部分、好ましくは子実体を、そのまま又は紛砕した後、更に必要に応じて予め水蒸気蒸留や低極性溶媒処理により精油成分を除去した後、常温下又は加温下で溶剤を加えることにより行えばよい。
【００１７】
抽出溶剤には、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、１，３−ブタンジオール、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、水等の極性溶剤が好適に用いられ、これらは単独又は混合して用いてもよい。
【００１８】
本発明のラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）の取得は、抽出過程において、濃縮、希釈、濾過等の処理をして得ることでもよく、また得られた抽出物を更にカラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を用いて分離精製することでもよい。
クロマトグラフィーの充填剤としては、シリカゲル、アルミナ、セルロース、デキストラン等を用いることができ、展開溶媒としては、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、メタノール、酢酸、アセトニトリル等を単独又は混合して用いることができる。斯かる抽出によれば、ラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）が、単独のみならず、数種の混合物として取得される場合があるが、本発明のアポトーシス抑制剤、白髪又は皮膚白斑症の予防・改善剤においては、これらの何れをも用いることができる。
【００１９】
ラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）のうち、Ｒ1及び／又はＲ2が−ＣＨ2ＯＡｃであるものは、対応する−ＯＨ体を例えばＡｃ2Ｏ／Ｐｙ等によりアセチル化すればよく、またＡがＣＨ−ＯＨであるものは、対応するカルボニル体をＮａＢＨ4等により還元することにより得ることができる。
【００２０】
かくして得られるラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）は、後記実施例に示すように、メラノサイトにおいて、アポトーシス抑制作用を有する。そして、メラノサイトのアポトーシスが抑制されれば、メラノサイトの欠如が抑えられ、白髪や皮膚白斑症の発症を予防し又はそれらを改善できる。
従って、上記ラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）を有効量含有する製剤は、アポトーシスの抑制、白髪や皮膚白斑症の予防・改善のための医薬品、医薬部外品、化粧料等として有用である。
【００２１】
斯かる医薬品、医薬部外品、化粧料等は、種々の剤形、例えば注射剤、吸入剤、坐剤、経口剤、軟膏、クリーム、ローション、乳剤、ゲル等の製剤とすることができる。特に、毛髪、頭皮又は皮膚に効果的に塗布できる剤形が好ましく、例えば、ヘアトニック、ヘアリキッド、リニメント、ヘアーリンス、ヘアーシャンプー、ヘアートリートメント、ヘアーコンディショナー、軟膏、クリーム、ローリョン、化粧水、油性化粧料、パック剤、ファンデーション等が好適なものとして挙げられる。
【００２２】
また、当該製剤には、白髪又は皮膚白斑症の予防・改善効果の増強を図る点から、ラノスタン型トリテルペノイド誘導体（１）の他に、例えば、クロモン誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤、スギナエキス、スイカズラエキス、ヒキオコシエキス、ブドウエキス、ヘチマエキス、セイヨウニワトコエキス、ブッチャーブルームエキス、タイソウエキス、イタヤカエデエキス、ソテツエキス、アマチャエキス、ベニバナエキス、オタネニンジンエキス、パセリエキス、レイシエキス、オノニスエキス、ウイキョウエキス、ボウイエキス、ｃＡＭＰ誘導体、ＰＫＣ阻害剤、テオフィリン、ビタミンＤ３、サンショウエキス、サフランエキス、パラメリア属エキス、ワタ属エキス、デイゴ属エキス、メントゼリア属エキス、タカサブロウ属エキス、インドジャボク属エキス、アキノタムラソウ属エキス、ハナスゲ属エキス、サツマイモ属エキス、ミカニア属エキス、ウワウルシ属エキス、アカザ属エキス、ポテリウム属エキス、シラタマノキ属エキス、キサンチン、ニコチン酸アミド、コパイバエキス、ぺチコペタルム属エキス、不飽和脂肪酸、チオール化合物、オウレンエキス、酵母培養液、basicＦＧＦ等の薬効成分を配合することもできる。
【００２３】
また、上記製剤には、通常、化粧料、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種成分を配合することができる。例えば、毛髪化粧料とする場合には、一般的な基材成分として、油性基材、ポリマー、ゲル化剤、活性剤、香料、着色剤等を添加配合することができる。
【００２４】
本発明のアポトーシス抑制剤、白髪又は皮膚白斑症の予防・改善剤におけるラノスタン型トリテルペノイド誘導体（1）の含有量は、通常全組成の０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．００１〜５重量％、より好ましくは０．０１〜２重量％、特に、０．１〜１重量％であるのが好ましい。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
【００２６】
製造例１
霊芝（Ganoderma lucidum (Fr.) Karst.）の子実体の刻み６ｋｇに、エタノールと水の混液（７５：２５）６０Ｌを加え、室温下１２日間浸漬の後、濾過し、濃縮物２３９ｇを得た。得られた濃縮物２３９ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム−メタノール（２０：１）混液にて溶出したところ、混合物８．９ｇが得られた。得られた混合物８．９ｇをＯＤＳカラムクロマトグラフィーに供し、メタノールにて溶出したところ、混合物２．１ｇが得られた。得られた混合物２．１ｇをゲルろ過クロマトグラフィー（セファデックスＬＨ−２０）に供し、メタノールにて溶出したところ、トリテルペノイド誘導体を含有する混合物０．３ｇが得られた。得られた混合物を高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ、メタノール水混液、アセトニトリル水混液）で繰り返し精製し、下記の化合物（２）及び化合物（３）（Ganoderiol F）を得た。ここで、化合物（２）は、文献未記載の新規化合物であり、以下の物性を有する。
【００２７】
性状：淡黄色油状
1H-NMR(CDCl3)δ：6.883(t-br, 1H), 5.903(d, 1H, J=6.7Hz), 5.387(d, 1H, J=6.4Hz) , 4.201(dd, 1H, J=9.8, 5.8Hz), 2.36(m, 1H),2.770（ddd, 1H, J=14.7, 14.7, 5.8）, 2.10(m, 1H),2.32(m, 1H) , 2.08(m, 1H),2.28(m, 1H), 2.07(m, 1H),2.20(m, 1H), 1.841(s, 3H) , 1.77(m, 1H),2.26(m, 1H), 1.74(m, 1H),1.97(m, 1H), 1.67(m, 1H) , 1.546(dd, 1H, J=11.6, 4.0Hz), 1.39(br, 1H), 1.197(s, 3H), 1.18(m, 1H),1.51(m, 1H), 1.128(s, 3H), 1.087(s, 3H), 0.941(s, 3H), 0.919(d, 3H, J=6.4Hz), 0.641(s, 3H).
【００２８】
13C-NMR(CDCl3)δ：216.63(s), 172.61(s), 145.05(s), 144.78(d), 140.95(s), 126.95(s), 121.16(d), 116.94(d), 74.55(d), 51.96(s), 50.54(d), 48.34(d), 47.43(s), 44.36(s), 40.03(t), 38.50(t), 37.27(s), 36.63(t), 35.91(d), 34.80(t), 34.73(t), 25.83(t), 25.44(q), 23.62(t), 22.45(q), 22.17(q), 18.29(q), 17.03(q), 16.02(q), 12.06(q).
【００２９】
【化３】
2005068061.tif 000004
【００３０】
製造例２
１０ｍＬフラスコ中、上記の化合物（３）１．７ｍｇに、無水酢酸０．５ｍＬとピリジン０．５ｍＬを加え、室温下一夜攪拌した。減圧濃縮後、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製することで、下記の化合物（４）を1.5ｍｇ得た。
【００３１】
【化４】
2005068061.tif 000005
【００３２】
製造例３
１０ｍＬフラスコ中、上記の化合物（３）２．４ｍｇにメタノール１ｍＬと水素化ホウ素ナトリウム０．５ｍｇを加え、室温下３時間攪拌した。塩酸で酸性化した後、クロロホルム抽出した。減圧濃縮後、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製することで、下記の化合物（５）を1.９ｍｇ得た。
【００３３】
【化５】
2005068061.tif 000006
【００３４】
試験例１  メラノサイトのアポトーシスに対する効果
96ウェルのプレートに、ウェル当り５×１０4cellsずつヒト表皮正常メラノサイト（クラボウ）を播種し、Medium 154S培地（クラボウ）にて３７℃、５％CO2の条件下２４時間培養した。サプリメントを添加していないDefined ケラチノサイト−SFM培地（ギブコBRL）１００μｌに培地交換後、化合物（２）〜（５）を終濃度1.4μＭになるように添加し、３７℃、５％CO2の条件下３日間培養を続けた。その後、0.1ｍＭ過酸化水素を１０μｌ添加しアポトーシスを誘導した。アポトーシス誘導後１２時間後に、TaKaRa社より市販されているLDH detection kitを用いて、アポトーシス細胞を定量化した。実験は、kitの説明書に従い行った。また、コントロールとして、被験物質非存在下で培養したヒト表皮正常メラノサイトに過酸化水素を加えたもの（コントロール-アポトーシスあり）と加えないもの（コントロール−アポトーシスなし）を用意した。生細胞数（％）は、コントロール-アポトーシスありを０％とし、コントロール-アポトーシスなしを１００％として定義し、被験物質存在下での生細胞数の割合を算出した。被験物質存在下での生細胞数の割合が高いほどアポトーシス抑制活性が高いことを示す。結果を図１に示す。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、メラノサイトのアポトーシス抑制効果を示した図である。
【図１】
2005068061.tif 000012