(57)【要約】【課題】従来の抗癌剤の副作用や該抗癌剤に対する薬剤耐性癌細胞の出現により、新規な抗癌剤が要望されている。又、ある種の抗癌剤の副作用として知られている神経障害を軽減する低分子化合物が要望されている。【解決手段】下記式（Ｉ）2005080616.tif 000007で表される生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくは下記式（ＩＩ）2005080616.tif 000008で表される生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）
【化１】
2005080616.tif 000005
で表される生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくは下記式（ＩＩ）
【化２】
2005080616.tif 000006
で表される生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩。
【請求項２】
下記の理化学的性質をもつ生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩
ａ）ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ
１）外観： 赤色
２）分子式：Ｃ２７Ｈ３１ＮＯ１０（高分解能マススペクトル法により測定）
３）分子量：５２９（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ）−＝５２９、ＨＲＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ）−＝５２９．１９４８）
４）紫外線吸収スペクトル（溶媒メタノール）：２３３ｎｍ（ε１９２００）、２５２ｎｍ（ε１８８００）、２８９ｎｍ（ε９６００）、４９２ｎｍ（ε５３００）、５２５ｎｍ（ε３２００）
５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：３３３７、２９３５、１６５３、１６１４、１５８５ｃｍ−１に極大を示す
６）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ  （ｍｕｌｔ．，Ｊ（Ｈｚ））
７．９３（ｄ，７．１）、７．８３（ｄｄ，８．２，７．１）、７．７７（ｄ，８．２）、５．９５（ｂｒ  ｓ）、４．９５（ｂｒ  ｓ）、４．３２（ｄ，１０．１）、４．１２（ｂｒ  ｓ）、３．９７（ｑ，６．３）、３．８２（ｄ，１０．１）、２．９９（ｄ，１８．９）、２．８９（６Ｈ，ｓ）、２．５２（ｄ，１８．９）、２．０２（ｄ，１３．９）、１．８２（ｂｒ  ｄ，１３．９）、１．２９（３Ｈ，ｓ）、１．０２（３Ｈ，ｄ，６．３）
７）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＤＭＳＯ−ｄ６）
１８７．１、１８５．９、１５８．３、１５６．６、１５５．８、１３７．２、１３６．２、１３５．８、１３５．０、１２３．１、１２１．８、１２１．４、１１０．５、１１０．０、９９．８、６９．１、６８．２、６７．５、６５．４、６２．２、４１．２、４０．９、３８．０、３６．２、２９．１、１５．１
８）溶解性： 水、アセトン、メタノールに可溶
ｂ）ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ
１）外観：赤色
２）分子式：Ｃ１９Ｈ１６Ｏ７（高分解能マススペクトル法により測定）
３）分子量：３５６（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝３７９、ＨＲＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝３７９．０７９４）
４）紫外線吸収スペクトル（溶媒メタノール）：２３４ｎｍ（ε１５６００）、２４５ｎｍ（ε１２００）、２９２ｎｍ（ε３７００）、４９２ｎｍ（ε６２００）、５２６ｎｍ（ε４５００）、
５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：３３６２、２９２４、１７３６、１５９９ｃｍ−１に極大を示す
６）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤＣｌ３）
δ  （ｍｕｌｔ．，Ｊ（Ｈｚ））
１３．５０（ｓ）、１３．００（ｓ）、１２．１９（ｓ）、７．９９（ｄ，６．８）、７．３２（ｄ，８．０）、７．２２（ｄｄ、８．０，６．８）、５．２７（ｄ，５．５）、２．６１（ｄ，１８．９）、２．３８（ｄ，１８．９）、２．３６（ｄ，１４．９）、１．９３（ｄｄ，１４．９，５．５）、１．５１（３Ｈ，ｓ）
７）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤＣｌ３）
１８８．９、１８６．１、１６２．３、１５７．２、１５６．０、１３７．６、１３７．５、１３６．７、１３３．２、１２４．２、１１９．８、１１６．０、１１０．２、１１０．０、６８．２、６２．０、４０．３、３８．４、２９．８
８）溶解性： アセトン、酢酸エチルに可溶、水、メタノールに難溶
【請求項３】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする医薬。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする細胞増殖阻害剤。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする抗癌剤。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする神経細胞突起伸展剤。
【請求項７】
請求項１又は２に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする神経保護剤。
【請求項８】
ストレプトミセス属に属し、請求項１又は２に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを生産する能力を有する微生物を、栄養培地にて培養し、培養物中に生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの製造法。
【請求項９】
ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＫＳ３（独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター  寄託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５１４）株又はその変異株。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は海底堆積物中から見出された放線菌に属する一菌株が産生する生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及びｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、並びにそれらを用いた抗癌剤及び神経保護剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、抗癌剤としては、非特許文献１に示されているように、アドリアマイシン、シスプラチン、タキソール、ビンクリスチン等が知られている。特に、アドリアマイシンを始めとするアンスラサイクリン系化合物は代表的な抗癌剤として広く臨床で使用されているが、心毒性、骨髄抑制等の副作用や薬剤耐性癌細胞の出現により十分な治療が施せないケースが増加している。
又、タキソールやビンクリスチン等は神経障害の副作用も問題となっている。
【０００３】
【非特許文献１】塚越  茂著、癌化学療法の変遷、癌と化学療法、日本、癌と化学療法社、１９９９年、２６巻、Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １、ｐ．２３〜３１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
よって、これまでの抗癌剤では臨床現場で満足すべきものはなく、新しい抗癌剤が求められている。又、神経細胞に対する既存抗癌剤の神経毒性から神経を保護する神経成長因子（ＮＧＦ）の様な作用を有する低分子化合物が待たれている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するため微生物の代謝産物について種々検索した結果、放線菌に属する一菌株が産生する生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及びｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
即ち、本発明は
（１） 下記式（Ｉ）
【０００７】
【化１】
2005080616.tif 000002
【０００８】
で表される生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくは下記式（ＩＩ）
【０００９】
【化２】
2005080616.tif 000003
【００１０】
で表される生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩；
【００１１】
（２）下記の理化学的性質をもつ生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩
ａ）ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ
１）外観： 赤色
２）分子式：Ｃ２７Ｈ３１ＮＯ１０（高分解能マススペクトル法により測定）
３）分子量：５２９（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ）−＝５２９、ＨＲＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ）−＝５２９．１９４８）
４）紫外線吸収スペクトル（溶媒メタノール）：２３３ｎｍ（ε１９２００）、２５２ｎｍ（ε１８８００）、２８９ｎｍ（ε９６００）、４９２ｎｍ（ε５３００）、５２５ｎｍ（ε３２００）
５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：３３３７、２９３５、１６５３、１６１４、１５８５ｃｍ−１に極大を示す
６）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＤＭＳＯ−ｄ６）
δ  （ｍｕｌｔ．，Ｊ（Ｈｚ））
７．９３（ｄ，７．１）、７．８３（ｄｄ，８．２，７．１）、７．７７（ｄ，８．２）、５．９５（ｂｒ  ｓ）、４．９５（ｂｒ  ｓ）、４．３２（ｄ，１０．１）、４．１２（ｂｒ  ｓ）、３．９７（ｑ，６．３）、３．８２（ｄ，１０．１）、２．９９（ｄ，１８．９）、２．８９（６Ｈ，ｓ）、２．５２（ｄ，１８．９）、２．０２（ｄ，１３．９）、１．８２（ｂｒ  ｄ，１３．９）、１．２９（３Ｈ，ｓ）、１．０２（３Ｈ，ｄ，６．３）
７）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＤＭＳＯ−ｄ６）
１８７．１、１８５．９、１５８．３、１５６．６、１５５．８、１３７．２、１３６．２、１３５．８、１３５．０、１２３．１、１２１．８、１２１．４、１１０．５、１１０．０、９９．８、６９．１、６８．２、６７．５、６５．４、６２．２、４１．２、４０．９、３８．０、３６．２、２９．１、１５．１
８）溶解性： 水、アセトン、メタノールに可溶
【００１２】
ｂ）ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ
１）外観：赤色
２）分子式：Ｃ１９Ｈ１６Ｏ７（高分解能マススペクトル法により測定）
３）分子量：３５６（ＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝３７９、ＨＲＦＡＢ−ＭＳ法により測定した（Ｍ＋Ｎａ）＋＝３７９．０７９４）
４）紫外線吸収スペクトル（溶媒メタノール）：２３４ｎｍ（ε１５６００）、２４５ｎｍ（ε１２００）、２９２ｎｍ（ε３７００）、４９２ｎｍ（ε６２００）、５２６ｎｍ（ε４５００）、
５）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：３３６２、２９２４、１７３６、１５９９ｃｍ−１に極大を示す
６）水素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤＣｌ３）
δ  （ｍｕｌｔ．，Ｊ（Ｈｚ））
１３．５０（ｓ）、１３．００（ｓ）、１２．１９（ｓ）、７．９９（ｄ，６．８）、７．３２（ｄ，８．０）、７．２２（ｄｄ、８．０，６．８）、５．２７（ｄ，５．５）、２．６１（ｄ，１８．９）、２．３８（ｄ，１８．９）、２．３６（ｄ，１４．９）、１．９３（ｄｄ，１４．９，５．５）、１．５１（３Ｈ，ｓ）
７）炭素核磁気共鳴スペクトル（溶媒ＣＤＣｌ３）
１８８．９、１８６．１、１６２．３、１５７．２、１５６．０、１３７．６、１３７．５、１３６．７、１３３．２、１２４．２、１１９．８、１１６．０、１１０．２、１１０．０、６８．２、６２．０、４０．３、３８．４、２９．８
８）溶解性： アセトン、酢酸エチルに可溶、水、メタノールに難溶；
【００１３】
（３）上記（１）又は（２）に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする医薬；
（４）上記（１）又は（２）に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする細胞増殖阻害剤；
（５）上記（１）又は（２）に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする抗癌剤；
【００１４】
（６）上記（１）又は（２）に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする神経細胞突起伸展剤；
（７）上記（１）又は（２）に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする神経保護剤；
【００１５】
（８）ストレプトミセス属に属し、請求項１又は２に記載の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを生産する能力を有する微生物を、栄養培地にて培養し、培養物中に生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの製造法。
（９）ストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）  ＫＳ３（独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター  寄託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５１４）株又はその変異株；
に関する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ、又はそれらの薬理学上許容される塩は、細胞増殖抑制作用を示し、抗癌剤、特に多剤耐性能を示す癌に対する化学療法剤等として利用可能である。又、該化合物は抗癌剤の副作用である神経障害に対する保護剤としても利用可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明のｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａは上記の物理化学的性質を有し、上記式（Ｉ）の構造式を、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂは上記の物理化学的性質を有し、上記式（ＩＩ）の構造式を有する。物理化学的性質中の分子量において、ＦＡＢ−ＭＳはfast atom bombardment法による質量分析法を、ＨＲＦＡＢ−ＭＳは高分解能のＦＡＢ−ＭＳを表す。
【００１８】
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａの２次元核磁気共鳴スペクトルは以下の相関を示す。Ｎｏ．は炭素原子の番号、δＣはテトラメチルシランを内部標準とする炭素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト値（ｐｐｍ），δはテトラメチルシランを内部標準とする水素核磁気共鳴スペクトルの化学シフト値（ｐｐｍ），ＨＭＢＣは1H-detected Heteronuclear Multiple Bond Connectivityによる相関結果である。
Ｎｏ．        δＣ            δ            ＨＭＢＣ
１      １２１．４        ７．９３        Ｃ−３，Ｃ−４ａ，Ｃ−１２
２      １３６．２        ７．８３        Ｃ−４，Ｃ−１２ａ
３      １２３．１        ７．７７        Ｃ−１，Ｃ−４ａ
４      １５８．３
４ａ    １２１．８
５      １８７．１
５ａ    １１０．５
６      １５６．６
６ａ    １３７．２
７        ６２．２        ４．９５        Ｃ−６ａ
８        ４１．２        ２．０２
１．８２
９        ６７．５
１０        ３８．０        ２．９９        Ｃ−６，Ｃ−９，Ｃ−１０ａ，Ｃ−１１
２．５２
１０ａ    １３５．８
１１      １５５．８
１１ａ    １１０．０
１２      １８５．９
１２ａ    １３５．０
１３        ２９．１        １．２９
１’      ９９．８        ５．９５        Ｃ−２’，Ｃ−５’
２’      ６５．４        ４．３２
３’      ３６．２        ３．８２
４’      ６８．２        ４．１２        Ｃ−２’
５’      ６９．１        ３．９７
６’      １５．１        １．０２        Ｃ−４’，Ｃ−５’
Ｎ−ＣＨ３  ４０．９        ２．８９        Ｃ−３’，Ｎ−ＣＨ３
【００１９】
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの２次元核磁気共鳴スペクトルは以下の相関を示す。Ｎｏ．、δＣ、δは上記と同じ意味を表し、ｍｕｌｔ．として水素核磁気共鳴スペクトルにおける多重線を通常用いられる略号にて示し、Ｊはスピン結合定数（Ｈｚ）を表す。
（溶媒ＣＤＣｌ３）
Ｎｏ．          δＣ            δ  （ｍｕｌｔ．，Ｊ（Ｈｚ））
１          １１９．８      ７．９９（ｄ，６．８）
２          １３７．６      ７．２２（ｄｄ，８．０，６．８）
３          １２４．２      ７．３２（ｄ，８．０）
４          １６２．３
４ａ        １１６．０
５          １８８．９
５ａ        １１０．２
６          １５６．０
６ａ        １３６．７
７            ６２．０      ５．２７（ｄ，５．５）
８            ４０．３      ２．３６（ｄ，１４．９）
１．９３（ｄｄ，１４．９，５．５）
９            ６８．２
１０            ３８．４      ３．２８（ｄ，１８．９）
２．６１（ｄ，１８．９）
１０ａ        １３７．５
１１          １５７．２
１１ａ        １１０．０
１２          １８６．１
１２ａ        １３３．２
１３            ２９．８      １．５１（３Ｈ，ｓ）
４−ＯＨ                    １２．１９（ｓ）
６−ＯＨ                    １３．００（ｓ）
１１−ＯＨ                  １３．５０（ｓ）
【００２０】
（溶媒ＤＭＳＯ−ｄ６）
Ｎｏ．          δＣ            δ  （ｍｕｌｔ．，Ｊ（Ｈｚ））
１          １１９．０      ７．７３（ｄ，７．４）
２          １３７．７      ７．８０（ｄｄ，７．７，７．４）
３          １２５．０      ７．３６（ｄ，７．７）
４          １６２．２
４ａ        １１６．８
５          １８８．９
５ａ        １１１．９
６          １５７．８
６ａ        １３９．０
７            ６２．３      ４．９３（ｂｒ  ｓ）
８            ４１．２      ２．０４（ｄ，１３．８）
１．８６（ｂｒ  ｄ，１３．８）
９            ６８．２
１０            ３８．２      ３．０１（ｄ，１８．７）
２．５３（ｄ，１８．７）
１０ａ      １３７．６
１１        １５７．０
１１ａ      １１０．３
１２        １８６．１
１２ａ      １３３．７
１３          ３０．５    １．３２（３Ｈ，ｓ）
【００２１】
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａは、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの末端の芳香族環のフェノール性水酸基に、アミノ糖が脱水縮合した構造である。
【００２２】
本発明のｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及びｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの生産菌として代表的なものは、例えば、海底堆積物より分離されたストレプトミセス属に属するＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  ＫＳ３株が挙げられる。以下に、本菌株の菌学的性状を示す。
【００２３】
１）形態的性質
イースト・麦芽寒天培地で培養した結果、コロニーはｇｒａｙｉｓｈ  ｙｅｌｌｏｗｉｓｈ  ｐｉｎｋで、胞子形成に伴いｍｅｄｉｕｍ  ｇｒａｙを呈した。可溶性色素は認めず、基底菌糸は分枝し、幅は０．５〜１．０μｍで、分裂しない。胞子は気中菌糸より分枝した胞子柄の先端にらせん状の胞子鎖を形成した。電子顕微鏡による観察の結果、胞子は長さ０．８〜１．２μｍ、幅０．５〜１．０μｍの長円筒形で、その表面は平滑であった。胞子嚢、菌核はいずれも認められなかった。
【００２４】
２）各種培地における生育
2005080616.tif 000004
【００２５】
３）生理学的性質
生育温度範囲（ベンネット培地）  ：  １８〜３９℃
生育至適温度（ベンネット培地）  ：  ２５〜２８℃
耐塩性（ベンネット培地）        ：  ０％    ＋＋
４％    ＋
７％    ±
１０％    −
澱粉の加水分解                  ：          ＋
脱脂牛乳のペプトン化            ：  ２８℃  −
３７℃  −
チロシナーゼ反応                ：          −
メラニン様色素の産生            ：          ＋
【００２６】
４）炭素源の利用性
Ｌ−アラビノース          −
Ｄ−キシロース            ＋＋
Ｄ−グルコース            ＋＋
Ｄ−フルクトース          ＋
シュクロース              −
イノシトール              ＋＋
Ｌ−ラムノース            −
ラフィノース              −
Ｄ−マンニトール          −
【００２７】
５）菌体成分の化学的性状
イソプレノイド・キノン        ：    ＭＫ  ９（Ｈ６，Ｈ８）
細胞壁ジアミノピメリン酸      ：    ＬＬ型
６）１６ＳｒＤＮＡ塩基配列
１６ＳｒＤＮＡ塩基配列相同性の解析結果より、公知の１６ＳｒＤＮＡ塩基配列とは一致せず、Streptomyces pseudogriseolus NRRL 3985に対して９７．１％、Streptomyces mashuense DSM 40221Tに対して９７．１％、Streptomyces griseocarneum DSM 40004Tに対して９７．１％の相同性を示した。
【００２８】
以上の性質をもとにアール・イー・ブッファナン・アンド・エヌ・イー・ギボンズ編、バージーズ・マニュアル・オブ・デタミネーティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９７４年）に従って検索を行った結果、上記菌株はストレプトミセス属に属することが判明した。該菌株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに、寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５１４として寄託されている。
【００２９】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  ＫＳ３株を、例えば、紫外線、エックス線又は薬品等により変異したどの様な変異株であっても、生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの生産能を有するものは全て本発明に含まれ、該生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの製造に使用する事ができる。
【００３０】
本発明には、生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及び／又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを、それらの生産菌を培養し該化合物を生成せしめ、この培養物より採取する製造法も含まれる。生産菌の培養は、放線菌が利用し得る栄養源を含有する培地で好気的に行われる。
【００３１】
栄養源としては、米を用いることが有効であるが、従来から放線菌の培養に利用されている公知のものが使用でき、例えば炭素源としては、グルコース、グリセリン、ガラクトース、水飴、デキストリン、シュクロース、でんぷん、糖蜜、動・植物油等を単独か又は組み合わせて使用できる。又、窒素源としては、大豆粉、小麦、小麦胚芽、コーンスティープ・リカー、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を単独か又は組み合わせて用いることができる。その他必要に応じ、ナトリウム、コバルト、塩素、硫酸、燐酸及びその他のイオンを生成することのできる無機塩類を添加することは有効である。又、海水を適宜使用してもよく、海水としては、例えば、人工海水アクアマリン（八州薬品社製）等が挙げられる。
【００３２】
培養法としては固体培養法が適している。培養に適当な温度は１８〜３９℃であるが、好ましくは２５〜３０℃付近である。生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの生産は培地や培養条件により異なるが、通常１〜１４日の間でその蓄積が最高に達する。培養物中の生理活性物質ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの蓄積量が最高になった時に、培養を停止し培養液から目的物質を分離する。
【００３３】
上述の方法に加え、通常物質の採取に用いられる方法、たとえば吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組み合わせ、あるいは必要に応じてそれらを繰り返すことによってｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを純粋に単離することができる。
【００３４】
本発明において薬理学上許容される塩とは、通常取り得る塩であれば特に限定されないが、例えばアルカリ金属との塩、即ち、ナトリウム塩、カリウム塩等、又は酸との塩、即ち、塩酸塩、硫酸塩、燐酸塩等が好ましい。
【００３５】
医薬品として使用する場合の製剤化及び投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。即ち、投与方法としては例えば注射、経口又は直腸投与等が可能である。製剤形態としては、例えば注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、座剤又はカプセル剤等の形態を取り得る。
【００３６】
製剤化の際にｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ又はそれらの薬理学上許容される塩に悪影響を与えない限り、医薬用に用いられる種々の医薬用添加剤、即ち、担体やその他の助剤、例えば安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳化剤等を使用してもよい。製剤において、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ又はそれらの薬理学上許容される塩の含量は製剤形態等により広範囲に変えることが可能であり、一般には０．０１〜１００％（重量）、好ましくは０．１〜７０％（重量）含有する。
【００３７】
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、若しくはｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分とする医薬品は、好ましくは細胞増殖阻害剤若しくは神経突起伸展剤として使用できる。あるいは、好ましくは抗癌剤又は神経保護剤として使用される。
【００３８】
抗癌剤としての使用としては、例えば、胃癌、肺癌、大腸癌、膵臓癌、肝癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、脳腫瘍、白血病等の治療が挙げられる。
【００３９】
本発明において神経突起伸展剤とは、ＮＧＦと同様に神経細胞の分化誘導に関する活性を有し、神経細胞の存在又は生存を維持させるものである。神経細胞が内的又は外的要因により障害を受けた際、神経突起を進展させる活性を有する神経保護剤は、そうした障害を予防又は軽減したり、障害を受けた状態から回復せしめる。即ち、神経保護剤としては、例えば、抗癌剤、結核菌静菌薬、抗てんかん薬等の医薬品やヒ素等の化合物による神経障害や、癌、感染、アンギノパシイ、シェーグレン症候群、アルツハイマー病、遺伝性疾患等の疾患や老化により直接的又は間接的に誘導される神経障害、及び脳挫傷、脳梗塞、頭蓋内出血、脳虚血等の物理的要因により引き起こされる神経障害に対して使用できる。又、神経保護剤は予防的又は発症後の治療剤として使用が可能である。特に抗癌剤の副作用として知られる神経障害の予防・治療に使用される。
【００４０】
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂ又はそれらの薬理学上許容される塩の投与量は適応症、症状、投与方法等により異なるが、成人１人１日あたり０．０１〜８００ｍｇ程度である。
【００４１】
試験例
以下にｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの生理活性について述べる。
【００４２】
（ｉ）細胞増殖抑制作用
１０％牛胎児血清（Ｍｏｒｅｇａｔｅ社製）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地（イワキ社製）を用いて、ヒト腎癌細胞ＵＯ−３１、ヒト乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、又はヒト肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０を３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。これらの細胞を９６穴プレートへ播種し、１日間培養した後、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａを添加した。又対照としてアドリアマイシンを添加した。更に３日間培養した後、浮遊細胞を除去し、メタノールで固定し、メチレンブルー色素を用いて染色した。染色後色素を０．３％塩酸水にて抽出し、６６０ｎｍの吸光度を測定し、後述の方法によりＩＣ５０値を求めた。
１０％牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用いて、マウス白血病由来癌細胞Ｐ３８８又はアドリアマイシン耐性株Ｐ３８８／ＡＤＲを、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。この細胞を９６穴プレートへ播種し、１日間培養した後、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ又はアドリアマイシンを添加した。更に２日間培養した後、ＷＳＴ−１  ０．１６ｍｇ／ｍＬ及び１−ｍｅｔｈｏｘｙ−５−ｍｅｔｈｙｌ  ｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ  ３．３μｇ／ｍＬ）を培養液に加え、４時間培養した。４５０ｎｍの吸光度から６６０ｎｍの吸光度を減じた値を求めた。
【００４３】
増殖阻害活性は、化合物を添加しない細胞の吸光度に対する化合物添加群の吸光度の減少率で表し、用量−反応曲線からＩＣ５０値を求め、その値を表２に示した。
【００４４】
結果
表２
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及びアドリアマイシンの細胞増殖抑制作用
細胞名                                          ＩＣ５０（μＭ）
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ    アドリアマイシン
ＵＯ−３１                      ０．５６                      ０．４７
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１            ２．０                        ０．０９５
ＮＣＩ−Ｈ４６０                ２．１                        ０．００６１
Ｐ３８８                        ４．８                        ０．０１２
Ｐ３８８／ＡＤＲ                ３．９                        ２．６
以上の結果から明らかな様に、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａは、哺乳動物の癌細胞に対する細胞増殖抑制作用を有し、多剤耐性癌細胞（Ｐ３８８／ＡＤＲ）に対しても感受性細胞（Ｐ３８８）とほぼ同程度の細胞増殖阻害作用を示した。
【００４５】
（ｉｉ）神経突起伸展作用
１０％牛胎児血清を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏの改変ＭＥＭ培地を用いて、マウス神経芽細胞Ｎｅｕｒｏ  ２Ａを、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。この細胞を２４穴プレートへ播種し、１日間培養した後、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ又はｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを添加した。薬剤処理は２日間行い、検鏡により神経突起の伸張が認められるか判定した。
【００４６】
結果
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａは１μｇ／ｍＬで顕著な神経突起の出現を認め、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂは３０μｇ／ｍＬ以上で神経突起の伸張作用を示した。
【００４７】
以上の結果から明らかな様に、ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及びｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂは神経細胞の突起を伸展させるＮＧＦ様活性を示した。
【実施例】
【００４８】
以下に本発明の実施例を示すが、これは単なる一例示であって本発明を限定するものではなく、種々の変法が可能である。
【００４９】
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａ及びｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂの醗酵法による製造
（１）醗酵培養
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  ＫＳ３株の培養には、０．５％グルコース及び２％酵母エキスを含んだ人工海水アクアマリン（八州薬品社製）５０ｍＬ当たり２５ｇの米を加えた培地を用いた。５００ｍＬのフラスコに上記培地とＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．  ＫＳ３株を加えたもの５０本を３０℃で２週間静置培養した。
【００５０】
（２）精製
この培養物を集め、３Ｌのアセトンとクロロホルム、メタノール、アセトンを１：２：４に混合した溶液３Ｌで抽出した。抽出液から有機溶媒を留去し、得られた濃縮液を酢酸エチル−水の系で分配した。ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａを含む水層にダイアイオン  ＨＰ２０（三菱化成社製）を加えて１５分撹拌後、ろ過した。回収した樹脂よりメタノールにて化合物を溶出させた。溶出物を乾固し４．２ｇの残渣を得た。
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを含む酢酸エチル層から溶媒を留去し、残渣４．２ｇを得た。
このｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａを含む分画をクロロホルム−メタノール−水の下層を用いるシリカゲルクロマトグラフィー、次いで逆相カラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｐｈ  １０φｘ２５０ｍｍ、コスモテック社製）を用いるＨＰＬＣ（メタノール−水−クロロホルム＝７：３：０．５）により精製し、赤色のｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ａを２０ｍｇ得た。
ｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを含む酢酸エチル層の残渣４．２ｇを、ｎ−ヘキサン及び酢酸エチルを用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより分画・精製し、赤色のｋｏｍｏｄｏｑｕｉｎｏｎｅ  Ｂを１１０ｍｇ得た。