(57)【要約】【課題】キンポウゲ科クロタネソウ属植物に含有される成分の詳細について解明し、その用途を開発することを目的とする。【解決手段】キンポウゲ科クロタネソウ属植物のアルコール抽出物あるいは該抽出物を酢酸エチルおよび水でさらに分配抽出し、該酢酸エチル可溶画分中に含まれる活性化合物を有効成分として含むＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物により、上記の課題を解決する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キンポウゲ科クロタネソウ属植物のアルコール抽出物を有効成分として含むことを特徴とするＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物。
【請求項２】
キンポウゲ科クロタネソウ属植物がセイヨウクロタネソウである請求項１に記載のＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物。
【請求項３】
アルコール抽出物が低級アルコール抽出物である請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
アルコール抽出物が、さらに酢酸エチルと水とによる分配抽出処理に付されている請求項１〜３のいずれか一つに記載のＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物。
【請求項５】
有効成分が、式（Ｉ）：
【化１】
2005068013.tif 000013
［式中、Ｒは水素原子または式：
【化２】
2005068013.tif 000014
であり、部分構造：
【化３】
2005068013.tif 000015
は、Ａが−ＯＯＨ基である場合には、エンド型二重結合を有する、式：
【化４】
2005068013.tif 000016
を意味し、Ａが存在しない場合には、エキソ型二重結合を有する、式：
【化５】
2005068013.tif 000017
を意味する］
で表される化合物である請求項１に記載のＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一つに記載の組成物を含むヒトまたは動物用の医薬または食品。
【請求項７】
式（Ｉａ）〜（Ｉｄ）：
【化６】
2005068013.tif 000018
で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、キンポウゲ科クロタネソウ属植物またはそのアルコール抽出物を有効成分として含む一酸化窒素（ＮＯ）産生抑制または脂質代謝促進用組成物に関するものである。より詳細には、本発明は、キンポウゲ科クロタネソウ属植物であるセイヨウクロタネソウまたはそのアルコール抽出物を有効成分として含むＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物、ならびに該アルコール抽出物に含まれる新規化合物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）クロタネソウ属（Ｎｉｇｅｌｌａ  Ｌ．）植物であるセイヨウクロタネソウ（Ｎｉｇｅｌｌａ  ｓａｔｉｖａ  Ｌ．）は、アジア南西部、地中海沿岸部およびヨーロッパ中部を原産とする双子葉植物であり、別名ブラッククミン、黒種草と呼ばれており、春から夏にかけて青、白、桃、紫色の綺麗な花を咲かせることから、日本では園芸植物として栽培されている。
その種子であるニゲラシードは、エジプトやトルコでなどでは一般的な食品として使われている以外に、古代エジプト時代より種々の疾患（風邪、喘息、結膜炎、小児麻痺など）に有効な民間薬として伝承されている（非特許文献１および２）。
【０００３】
また、セイヨウクロタネソウについての化学、薬理学の両面からの研究は数多くなされてきており、含有成分として精油、脂肪酸、ステロール、テルペノイド、サポニン、フラボノール配糖体、アルカロイドなどが単離され、エキスレベルでは抗腫瘍、気管支拡張、降圧、抗菌、抗真菌作用を有することが報告されている（非特許文献３）。
【０００４】
【非特許文献１】
Ｓ．Ａ．  Ｇｈａｚａｎｆｅｒ，  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＡＲＡＢＩＡＮ  ＭＥＤＩＣＩＮＡＬ  ＰＬＡＮＴＳ，  ＣＲＣ出版，  １９９４，  第１８０頁
【非特許文献２】
田端ら、  Ａ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｎ  Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｌａｎｔｓ  ｉｎ  Ｔｕｒｋｅｙ  （１９９０，  １９９１），  京都大学薬学部、１９９３，  ３月，  第２５，  １１６，  １２６，  １４０頁
【非特許文献３】
奥山ら、Ｂｉｏｌ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ２４（３），  ３０７−３１０  （２００１）
【０００５】
ＮＯは、血管内皮や神経系などで生成し、血管拡張作用、神経シナプスの興奮伝達調節など、種々の生理作用を示すことが知られている。一方、菌体膜成分であるリポ多糖（ＬＰＳ）や、ＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカイン刺激を受けたマクロファージなどが産生する誘導型ＮＯ合成酵素（ｉＮＯＳ）によって過剰に産生されるＮＯは、抗微生物作用や抗腫瘍作用などの生体防御としての働きを担う反面、肺血症性ショック、虚血性脳障害、自己免疫疾患、腎炎、肝炎、潰瘍性大腸炎、関節炎、心筋症およびインスリン依存性糖尿病等の発症および進展の原因物質の一つであることが知られている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、従来、トルコ、エジプト地方で上記のような症状の治療または緩解に広く用いられてきた民間伝承薬であるキンポウゲ科クロタネソウ属植物であるセイヨウクロタネソウおよび／またはニゲラシードに含まれる有効成分の特定、ならびに該植物のアルコール抽出物および該アルコール抽出物に含まれる成分の新規用途の開発を課題とする。
【０００７】
近年、食生活の欧米化に伴って、脂肪の摂取量が増加し、その結果、抗脂血症、肥満、糖尿病、高血圧症等の罹患率は急増している。このうち抗脂血症および肥満は、さらに虚血性心疾患または動脈硬化の発症や進展の主因子となっている。
これら高脂血症や肥満の予防および治療を目的とした医薬品開発は、最近、リガンド依存性転写因子であるペルオキシソーム増殖活性化受容体（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＰＰＡＲ）の３種のアイソフォーム（α、β、γ）のうちＰＰＡＲαを指標として行われている。このＰＰＡＲαは、脂肪酸の異化能が高い肝臓や腎臓等に分布しており、特に絶食時などのエネルギー枯渇時に、脂肪酸のβ酸化酵素の発現を介して脂質代謝を制御していることが明らかとなっている。本発明の組成物は、ＮＯ産生抑制のみならず、上記のＰＰＡＲαのリガンドとして作用し、肝細胞中の中性脂質量の低下作用を有することが見出された。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、キンポウゲ科クロタネソウ属植物であるセイヨウクロタネソウおよびニゲラシードに含まれる生理活性成分について鋭意研究を行った結果、いくつかの新規化合物が含まれることを見出した。さらに、意外にもこれら新規化合物を含む上記植物のアルコール抽出物が、従来知られている民間伝承薬とは全く異なる、ＮＯ産生抑制活性および肝細胞内脂質代謝促進活性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
したがって、本発明によれば、キンポウゲ科クロタネソウ属植物またはそのアルコール抽出物を有効成分として含むことを特徴とする、ＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物が提供される。
【００１０】
また、本発明によれば、次の式：
【化７】
2005068013.tif 000002
で表される新規化合物が提供される。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明のＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物は、キンポウゲ科クロタネソウ属植物からアルコールで抽出された抽出物または抽出エキスを有効成分として含有する。
キンポウゲ科クロタネソウ属植物としては、具体的には、セイヨウクロタネソウ（Ｎｉｇｅｌｌａ  ｓａｔｉｖａ  Ｌ．）およびクロタネソウ（Ｎｉｇｅｌｌａ  ｄａｍａｓｃｅｎａ  Ｌ．）などの同属植物が挙げられる。この同属植物に、後述される本願の新規化合物が含有される限り、当該同属植物は本願発明に利用することができる。
セイヨウクロタネソウの産地は特に限定されるものではないが、一般に、アジア南西部から地中海沿岸部に分布するものが好適に用いられ、トルコまたはエジプト産のものが特に好ましい。
アルコールでの抽出には、植物の全草もしくはその一部または種子が用いられる。また、全草またはその一部は乾燥したものであってもよいし、採取した新鮮なそのままの形態であってもよい。種子を用いる場合には、食品または民間薬として用いられているニゲラシードを用いると好都合である。
【００１２】
本発明の抽出物を得るのに用いられるアルコールとしては、炭素数１〜４の低級アルコール類が挙げられ、具体的には、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｔ−ブタノールもしくはこれらの混液または３０容量％程度までの水を含有するこれらの含水アルコール等が挙げられる。なかでも、メタノールが特に好ましい。
これらの抽出溶媒は、抽出材料に対して、１〜５０倍（容量）程度、好ましくは２〜１０倍（容量）程度用いられる。
【００１３】
抽出温度は、室温〜溶媒の沸点の間で任意に設定できるが、例えば５０℃〜抽出溶媒の沸点の温度で、振盪下もしくは非振盪下または還流下に、上記の抽出材料を上記の抽出溶媒に浸漬することによって行うのが適当である。抽出材料を振盪下に浸漬する場合には、３０分間〜１０時間程度行うのが適当であり、非振盪下に浸漬する場合には、１時間〜２０日間程度行うのが適当である。また、抽出溶媒の還流下に抽出するときは、３０分〜数時間加熱還流するのが好ましい。
なお、５０℃より低い温度で浸漬して抽出することも可能であるが、その場合には、上記の時間よりも長時間浸漬するのが好ましい。抽出操作は、同一材料について１回だけ行ってもよいが、複数回、例えば、２〜５回程度繰り返すのが好ましい。
【００１４】
抽出混合物から固形物を除去して得られる抽出液は、常法により濃縮して抽出エキスとしてもよい。濃縮は、低温で減圧下に行うのが好ましく、抽出液が乾固するまで行ってもよい。
抽出エキスは、そのまま本発明の組成物を調製するのに用いてもよいが、粉末状または凍結乾燥品等として用いてもよい。これらの固形物とする方法は、当該分野で公知の方法を採用することができる。
したがって、本発明における抽出物とは、抽出液、抽出エキス、およびそれらを固形化して得られる固形物のいずれをも包含する。
【００１５】
なお、抽出液は、濃縮する前後に精製処理に付してもよい。精製処理は、クロマトグラフ法、イオン交換クロマトグラフ法、溶媒による分配抽出等を単独または組み合わせて採用することができる。例えば、クロマトグラフ法としては、順相もしくは逆相担体またはイオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは遠心液体クロマトグラフィー等のいずれか、またはそれらを組み合わせて行う方法が挙げられる。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。
【００１６】
なかでも、抽出液を濃縮して抽出エキスとし、この抽出エキスを水と非水和性有機溶媒を用いて分配し、有機溶媒可溶画分として得ることが好ましい。非水和性有機溶媒としては、酢酸エチル、ｎ−ブタノール、ヘキサン、クロロホルムなどが挙げられるが、中でも酢酸エチルが好ましい。
すなわち、濃縮して得られた抽出エキスまたは濃縮乾固して得られた濃縮残渣を、酢酸エチルと水を用いて分配し、酢酸エチル可溶画分として得ることが好ましい。分配抽出は、当該分野で通常行われる撹拌もしくは振盪分配法または液滴向流分配法などの常法に従って行うことができる。例えば、室温下、振盪下または非振盪下に、抽出エキスなどに対して、酢酸エチルと水とを１〜１０倍（容量）程度（１：１０〜１０：１）加えて行うのが適当である。さらに、このようにして得られた有機溶媒可溶画分を上記のような精製処理に付してもよい。すなわち、上記で得られた有機溶媒可溶画分を、逆相クロマトグラフィーもしくは逆相高速クロマトグラフィー単独で、またはこれらを組合わせてさらに精製することもできる。
【００１７】
本発明の抽出物は、次に示す化合物を含有している。
式：
【化８】
2005068013.tif 000003
［式中、Ｒは水素原子または式：
【化９】
2005068013.tif 000004
であり、部分構造：
【００１８】
【化１０】
2005068013.tif 000005
は、Ａが−ＯＯＨ基である場合には、エンド型二重結合を有する、式：
【化１１】
2005068013.tif 000006
を意味し、Ａが存在しない場合には、エキソ型二重結合を有する、式：
【化１２】
2005068013.tif 000007
を意味する］
【００１９】
より具体的には、式：
【化１３】
2005068013.tif 000008
で表される化合物群を含む。
これらの化合物群は、いずれも新規化合物である。
上記の新規化合物は、いずれもＮＯ産生抑制および肝細胞内脂質代謝促進などの作用を有することも見出された。
【００２０】
したがって、上記の各化合物ならびに上記の各化合物を含むキンポウゲ科クロタネソウ属植物、そのアルコール抽出物および酢酸エチル可溶画分は、前記疾患の予防または治療を目的とするＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物の有効成分として用いることができる。
本発明のアルコール抽出物および／または酢酸エチル可溶画分は、そのままの状態、または適当な媒体で希釈して、あるいは医薬品の製造分野において公知の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤または液剤等、種々の医薬品の形態に製剤化して使用することができる。
上記の各化合物も、上記の抽出物と同様に製剤化して用いることができる。
【００２１】
製剤化に際しては、適当な媒体を添加してもよく、そのような媒体としては、医薬的に許容される賦形剤、例えば結合剤（例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガントまたはポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば乳糖、砂糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルクまたはポリエチレングリコール）、崩壊剤（例えば馬鈴薯澱粉）または湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）等が挙げられる。
錠剤は、通常の方法でコーティングしてもよい。液体製剤は、例えば水性または油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、使用前に水または他の適当な賦形剤で再生する乾燥製品として提供してもよい。
【００２２】
液体製剤は、通常の添加剤、例えば懸濁化剤（例えば、ソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン水添加食用脂）、乳化剤（例えば、レシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴム）、（食用脂を含んでいてもよい）非水性賦形剤（例えば、アーモンド油、分画ココヤシ油またはグリセリン、エチレングリコールもしくはプロピレングリコール）、保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、またはソルビン酸）、および所望により着色剤または香料等を含んでいてもよい。
【００２３】
上記の抽出物は単独で、または賦形剤などとの混合物として、また前記の個々の化合物（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）および（Ｉｄ）も単独で、または混合物として、食品および／または健康食品に利用することができる。健康食品とは、通常の食品よりも積極的な意味で保健、健康維持・増進等を目的とした食品を意味し、例えば、液体または半固形、固形の製品、具体的には、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤または液剤等のほか、クッキー、せんべい、ゼリー、ようかん、ヨーグルト、まんじゅう等の菓子類、清涼飲料、お茶類、栄養飲料、スープ等の形態が挙げられる。
これらの食品の製造工程において、あるいは最終製品に、上記の抽出物および／または化合物等を混合または噴霧などにより添加して、健康食品とすることができる。
【００２４】
ＮＯ産生抑制または脂質代謝促進用組成物のための、上記の抽出物および化合物の使用量としてはいずれも、抽出液の濃縮・精製の程度、疾患の重篤度、服用者の体重、年齢等によって適宜調節することができ、例えば、成人１回につき抽出物（固形分）として、０．５〜５ｇ程度が挙げられ、化合物としては５０〜５００ｍｇ程度が挙げられる。
また、健康食品としての使用時には、食品の味や外観に悪影響を及ぼさない量、例えば、対象となる食品１ｋｇに対して、上記の抽出物として２〜２０ｇ、または化物として、１００ｍｇ〜２ｇ程度の範囲で用いることが適当である。
【００２５】
【実施例】
以下、本発明の抽出物、化合物（Ｉａ）〜（Ｉｄ）の精製法およびそれらの作用についての実施例を具体的に説明する。
なお、実施例では、特に記載がない限り、以下の各種溶媒、ろ紙、クロマトグラフィー用担体およびＨＰＬＣカラムを用いた：
メタノール：ナカライテスク社、特級、
ｎ−へキサン：ナカライテスク社、特級、
酢酸エチル：ナカライテスク社、特級、
イオン交換樹脂：Ｄｉａｉｏｎ−ＨＰ２０、日本練水社製、
順相シリカゲル：富士シリシア社製、ＢＷ−２００、１５０〜３５０メッシュ、
逆相オクタデシルシリカゲル（以下、ＯＤＳ）：富士シリシア社製、Ｃｈｒｏｍａｔｒｅｘ      ＯＤＳ  ＤＭ１０２０Ｔ、１００〜２００メッシュ、
ＨＰＬＣカラム：ＹＭＣ社製、ＹＭＣ  Ｐａｃｋ  Ｒ＆Ｄ−ＯＤＳ−Ａ、２０ｍｍ（ｉ．ｄ．）×２５    ０ｍｍ。
【００２６】
実施例１
（１）ニゲラシードのメタノール抽出エキスの調製
エジプト産セイヨウクロタネソウの種子（９７２．４ｇ）をメタノール１０Ｌで加熱還流下に３時間抽出後ろ過し、ろ液から減圧下に溶媒を留去した。同様の操作を計３回繰り返してメタノールエキス１２２．０ｇ  （１２．５％）を得た。
（２）メタノール抽出エキスの酢酸エチルおよび水による分配抽出
次いで、このメタノールエキス１００ｇを酢酸エチル２Ｌと水２Ｌで分配抽出し、各抽出液から減圧下に溶媒を留去して、酢酸エチル可溶画分（５６．９ｇ，  ７．１％）と水可溶画分（３８．６ｇ，  ４．８％）を得た。
（３）水可溶画分の精製
水可溶画分をＤｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０カラムに付し、水、メタノールで順次溶出し、それぞれ水溶出部（１３．６ｇ，  １．７０％）とメタノール溶出部（２４．９ｇ，  ３．１３％）を得た。
【００２７】
ニゲラシードのメタノールエキスおよび画分のＮＯ産生抑制活性
上記（１）〜（３）得られたメタノールエキス、酢酸エチル可溶画分、水溶出部およびメタノール溶出部について、森川らの方法（Ｊ．  Ｎａｔ．  Ｐｒｏｄ．  ６６，  ６３８−６４５  （２００３））に従って、リポ多糖（ＬＰＳ）刺激による活性化マクロファージからのＮＯ産生に与える影響を検討し、表１の結果を得た。
【００２８】
表１：ニゲラシードから得られたメタノールエキス、酢酸エチル可溶画分、水溶出部およびメタノール溶出部の活性化マクロファージにおけるＮＯ産生に対する阻害活性
【表１】
2005068013.tif 000009
各値は平均±ＳＥＭ．  （Ｎ＝４）を示す。対照との有意差  ：  ＊：ｐ＜０．０５，  ＊＊：ｐ＜０．０１，  ▼：細胞毒性があることを示す
酢酸エチル可溶画分に強いＮＯ産生抑制活性が認められた。
【００２９】
（４）ニゲラシードの含有成分の単離と同定
上記で得られた酢酸エチル可溶画分５０ｇを、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１５／１、１０／１、３／１および１／１の濃度勾配）、酢酸エチルおよびメタノールの各溶媒で順次溶出する順相シリカゲルクロマトグラフィー（２ｋｇ）に付し、フラクション１〜１０を得た。
上記で得られたフラクション３  （１．０７ｇ）を、８０％水性メタノール〜１００％メタノールの濃度勾配で溶出する逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（１２ｇ）に付して既知のモノテルペンであるカルバクロール（１３６  ｍｇ）を得た。
上記で得られたフラクション４  （７．０２ｇ）を、８０％水性メタノール〜１００％メタノールの濃度勾配で溶出する逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（２１ｇ）に付してオレイン酸（１．４７ｇ）、リノール酸（３．５７  ｇ）およびリノール酸メチルエステル（７４．５  ｍｇ）を得た。
【００３０】
上記で得られたフラクション６  （３．５０ｇ）を、５５％、６０％および７０％水性メタノール〜１００％メタノールの濃度勾配で溶出する逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（４００ｇ）ならびに４３％水性メタノールを移動相とする逆相ＨＰＬＣに付して、既知のモノテルペンであるチモキノール（１３０．５ｍｇ）を得た。
上記で得られたフラクション９  （６４１．４ｍｇ）を、５０％、６０％、８０％および９０％水性メタノール〜１００％メタノールの濃度勾配で溶出する逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（５０ｇ）ならびに８５％水性メタノールを移動相とする逆相ＨＰＬＣに付して、化合物（Ｉａ）（３６．１  ｍｇ）、化合物（Ｉｂ）（６．２  ｍｇ）、化合物（Ｉｃ）（３．１ｍｇ）および化合物（Ｉｄ）（６．２ｍｇ）をそれぞれ得た。
ニゲラシードのメタノール抽出および含有成分の精製工程の概略図を図１に示す。
【００３１】
上記のようにして単離した各化合物を、以下に示す旋光度、各種質量分析、１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルなどの種々の物理化学データにより同定した。さらに、絶対構造を、２次元ＮＭＲ  １Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ、１３Ｃ−１Ｈ  ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣおよび位相検波ＮＯＥＳＹスペクトル等の種々の手法により決定した（２次元スペクトルデータは非表示）。
なお、既知化合物については、文献値との１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータの比較により同定した。
【００３２】
以下に、化合物（Ｉａ）〜（Ｉｄ）の諸物性値ならびに各種分析データを示す。
なお、以下の１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲによる構造解析に用いたナンバリングは、例えば、上記の化合物（Ｉａ）の構造式のナンバリングに基づいている。
【００３３】
化合物（Ｉａ）  ：  白色粉末
［α］Ｄ２１  −１７．９°  （ｃ＝０．６０，  ＭｅＯＨ）
高分解能ＦＡＢ−ＭＳ
計算値（Ｃ３９Ｈ４３Ｎ２Ｏ７  （Ｍ＋Ｈ）＋  ）    ：  ６５１．３０７１
実測値                                            ：  ６５１．３０６５
ＵＶ  ［ＭｅＯＨ，  ｎｍ  （ｌｏｇε）］  ：  ２２０  （４．５０），  ２６４  （３．８２）
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）  ：  １７１８，  １６５２，  １５９２，  １４５８，  １２８１，  １１１１，  １０２４
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  ５００  ＭＨｚ，  δ）  ：  １．５２，  １．６８，  １．８５，  １．９２  （各々３Ｈ，  全てｓ，  Ｈ３−１７，  ２０，  １６，  １９），  １．６４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １２．８，  １３．１  Ｈｚ，  Ｈ−９β），  １．７８（１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６α），  １．９５  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６β），  ２．２３（２Ｈ，  ｍ，  Ｈ２−１４），  ２．３０  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ２−１３），  ２．３７  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１４  Ｈｚ，  Ｈ−５α）  ２．５１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．１，  １３．１  Ｈｚ，  Ｈ−９α），  ２．５３  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．５，  １３．５，  １３．５  Ｈｚ，  Ｈ−５β），  ２．７５  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１１），  ３．１４  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ，  Ｈ−７），  ５．１０，  ５．２９  （２Ｈ，  ＡＢｑ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  Ｈ２−１５），  ５．５４  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ５．７６  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄｄ，  Ｊ  ＝  約６，  １３  Ｈｚ，  Ｈ−１０），  ５．８７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ７．１９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．０，  ７．８  Ｈｚ，  Ｈ−５’），  ７．３９  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．７，  ８．５  Ｈｚ，  Ｈ−３’’’，  ５’’’），  ７．５７  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−５’’），  ７．６０  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ，  Ｈ−４’’’），  ８．０７  （２Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−２’’’，  ６’’’），  ８．０７  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  １．８，  ７．８  Ｈｚ，  Ｈ−６’），  ８．４４  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  １．８，  ７．９  Ｈｚ，  Ｈ−６’’），  ８．６４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−４’），  ８．７４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−４’’），  ８．９８  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’），  ９．１７  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’’）
【００３４】
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  １２５  ＭＨｚ，  δＣ）  ：  表２に記載
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００  ＭＨｚ，  δ）  ：  １．５３，  １．６７，  １．８７，  １．８８  （各々３Ｈ，  全てｓ，  Ｈ３−１７，  ２０，  １６，  １９），  １．６１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １２．５，  １３．７  Ｈｚ，  Ｈ−９β），  １．６５  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６α），  ２．０２  （１Ｈ，  ｄ−ｌｉｋｅ，  Ｈ−６β），  ２．２３（１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１４α），  ２．３４  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１４β），  ２．３６  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ２−１３），  ２．３８  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−５α），  ２．４８  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．２，  １２．８，  １２．８  Ｈｚ，  Ｈ−５β），  ２．５９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．５，  １３．７  Ｈｚ，  Ｈ−９α），  ２．７１  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１１），  ３．０７  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約９  Ｈｚ，  Ｈ−７），  ４．９０  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  Ｈ−１５），  ５．３１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  Ｈ−１５），  ５．４８  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．３  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ５．７０  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄｄ，  Ｊ  ＝  約６，  １３  Ｈｚ，  Ｈ−１０），  ５．７３  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．３  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ６．９８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  ８．０  Ｈｚ，  Ｈ−５’），  ７．３９  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．８，  ７．９  Ｈｚ，  Ｈ−３’’’，  ５’’’），  ７．４１（１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−５’’），  ７．５８  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ，  Ｈ−４’’’），  ７．９６  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  １．８，  ８．０  Ｈｚ，  Ｈ−６’），  ８．１０  （２Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−２’’’，  ６’’’），  ８．３１  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １．８，  １．８，  ７．９  Ｈｚ，  Ｈ−６’’），  ８．６５  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約５  Ｈｚ，  Ｈ−４’），  ８．７９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約４，  Ｈ−４’’），  ９．１１  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’），  ９．２４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’’）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５  ＭＨｚ，  δＣ）  ：  表２に記載
ＦＡＢ−ＭＳ  ：  ｍ／ｚ  ６５１  （Ｍ＋Ｈ）＋，  １３０１  （２Ｍ＋Ｈ）＋
【００３５】
化合物（Ｉｂ）  ：  白色粉末
［α］Ｄ２１  ＋１０．９°  （ｃ＝０．３０，  ＭｅＯＨ），
［α］Ｄ２７  ＋２０．０°  （ｃ＝１．１０，  ＣＨＣｌ３）
高分解能ＥＩ−ＭＳ
計算値（Ｃ３９Ｈ４３Ｎ２Ｏ９  （Ｍ＋Ｈ）＋  ）        ：  ６８３．２９６９
実測値                              ：  ６８３．２９６５
ＵＶ  ［ＭｅＯＨ，  ｎｍ  （ｌｏｇε）］  ：  ２２１  （４．７１），  ２６４  （４．０９）
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）  ：  １７１７，  １６３６，  １５９２，  １４５６，  １２８１，  １１１３，  １０２６
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  ５００  ＭＨｚ，  δ）  ：  １．３５，  １．５４，  １．５８  （各々３Ｈ，  全てｓ，  Ｈ３−１９，  ２０，  １７），  １．６０  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−９β），  １．７６  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６α），  １．９２  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６α），  １．９５  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ０．９  Ｈｚ，  Ｈ３−１９），  ２．３６  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１３  Ｈｚ，  Ｈ−５α），  ２．５１  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．１，  １２．８，  １２．８  Ｈｚ，  Ｈ−５β），  ２．６９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．５，  １３．７  Ｈｚ，  Ｈ−９α），  ２．７２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ３．０，  １７．４  Ｈｚ，  Ｈ−１４α），  ２．８１  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１７  Ｈｚ，  Ｈ−１４β），  ３．０２  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１１），  ３．１４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１０  Ｈｚ，  Ｈ−７），  ５．２４，  ５．２８  （２Ｈ，  ＡＢｑ，  Ｊ  ＝  １１．３  Ｈｚ，  Ｈ２−１５），  ５．６４  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ５．７３  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１３），  ５．８９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１０  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ５．９２  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄｄ，  Ｊ  ＝  約６，  １３  Ｈｚ，  Ｈ−１０），  ７．１４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  ７．４  Ｈｚ，  Ｈ−５’），  ７．４３  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−３’’’，  ５’’’），  ７．５８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝４．９，  ７．３  Ｈｚ，  Ｈ−５’’），  ７．６３  （１Ｈ，  ｔ，  Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−４’’’），  ８．０４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−６’），  ８．０９  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １．２，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−２’’’，  ６’’’），  ８．４３  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ＝約８  Ｈｚ，  Ｈ−６’’），  ８．６２  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−４’），  ８．７４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−４’’），  ８．９６  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’），  ９．１５  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’’）
【００３６】
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  １２５  ＭＨｚ，  δＣ）  ：  表２に記載
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００  ＭＨｚ，  δ）  ：  １．４９，  １．５１，  １．５２  （各々３Ｈ，  全てｓ，  Ｈ３−１９，  ２０，  １７），  １．５８  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ＝１２．９，  １３．１  Ｈｚ，  Ｈ−９β），  １．６６  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６α），  １．９４  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ，  Ｈ３−１６），  ２．０２  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６β），  ２．３６  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１３  Ｈｚ，  Ｈ−５α），  ２．４７  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  １２．６，  １２．６  Ｈｚ，  Ｈ−５β），  ２．７１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．１，  １３．１  Ｈｚ，  Ｈ−９α），  ２．７４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ３．０，  １７．０  Ｈｚ，  Ｈ−１４α），  ２．７９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１７  Ｈｚ，  Ｈ−１４β），  ２．９９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１０  Ｈｚ，  Ｈ−７），  ５．１１，  ５．２８  （２Ｈ，  ＡＢｑ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  Ｈ２−１５），  ５．５９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．７  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ５．７９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．７  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ５．８１  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１３），  ５．９２  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄｄ，  Ｊ  ＝  約６，  １２  Ｈｚ，  Ｈ−１０），  ６．９６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−５’），  ７．４２  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−３’’’，  ５’’’），  ７．４３  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  ７．８  Ｈｚ，  Ｈ−５’’），  ７．６０  （１Ｈ，  ｂｒ．ｔ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−４’’’），  ７．９３  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−６’’），  ８．１１  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １．３，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−２’’’，  ６’’’），  ８．３１  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−６’），  ８．６６  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−４’），  ８．７４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−４’’），  ９．０９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’），  ９．２０  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’’）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５  ＭＨｚ，  δＣ）  ：  表２に記載
ポジティブＦＡＢ−ＭＳ  ：  ｍ／ｚ  ６８３  （Ｍ＋Ｈ）＋
【００３７】
化合物（Ｉｃ）  ：  白色粉末
［α］Ｄ２７  ＋２０．２°  （ｃ＝０．８０，  ＣＨＣｌ３）
高分解能ＥＩ−ＭＳ
計算値（Ｃ４０Ｈ４４ＮＯ９  （Ｍ＋Ｈ）＋）  ：  ６８２．３０１６
実測値                    ：  ６８２．３０１３
ＵＶ  ［ＭｅＯＨ，  ｎｍ  （ｌｏｇε）］  ：  ２２７  （４．７２），  ２６４  （３．９１）
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）  ：  １７１７，  １６０３，  １４５３，  １４２４，  １２７７，  １１１３，  １０２６１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００  ＭＨｚ，  δ）  ：  １．４９，  １．５０，  １．５２  （各３Ｈ，  全てｓ，  Ｈ３−１９，  ２０，  １７），  １．６１  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−９β），  １．６６  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６α），  １．９４  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ０．９  Ｈｚ，  Ｈ３−１６），  ２．０１  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６β），  ２．３５  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１３  Ｈｚ，  Ｈ−５α），  ２．４７  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  １２．８，  １２．８  Ｈｚ，  Ｈ−５β），  ２．７２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．８，  １３．７  Ｈｚ，  Ｈ−９α），  ２．７８  （２Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ２−１４），  ２．８４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１１），  ２．９９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１０  Ｈｚ，  Ｈ−７），  ５．１２，  ５．２７  （２Ｈ，  ＡＢｑ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  Ｈ２−１５），  ５．５７  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ５．７９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ５．８０  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１３），  ５．９２  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄｄ，  Ｊ  ＝  約６，  １２  Ｈｚ，  Ｈ−１０），  ６．９６  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  ７．８  Ｈｚ，  Ｈ−５’’），  ７．１２  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−３’，  ５’），  ７．４４  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．７，  ８．５  Ｈｚ，  Ｈ−３’’’，  ５’’’），  ７．４１  （１Ｈ，  ｂｒ．ｔ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−４’），  ７．６１  （１Ｈ，  ｂｒ．ｔ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−４’’’），  ７．８１  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １．３，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−２’，  ６’），  ８．１５  （２Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−２’’’，  ６’’’），  ８．３４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約８  Ｈｚ，  Ｈ−６’’），  ８．６６  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−４’’），  ９．０７  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−２’’）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５  ＭＨｚ，  δＣ）  ：  表２に記載
ＦＡＢ−ＭＳ  ：  ｍ／ｚ  ６８２  （Ｍ＋Ｈ）＋
【００３８】
化合物（Ｉｄ）  ：  白色粉末
［α］Ｄ２７  −２３．４°  （ｃ＝１．２０，  ＣＨＣｌ３）
高分解能ＦＡＢ−ＭＳ
計算値（Ｃ４０Ｈ４４ＮＯ７  （Ｍ＋Ｈ）＋）            ：  ６５０．３１１８
実測値                                              ：  ６５０．３１２３
ＵＶ  ［ＭｅＯＨ，  ｎｍ  （ｌｏｇ  ε）］  ：  ２２６  （４．６１），  ２６４  （３．７３）
ＩＲ  （ＫＢｒ，  ｃｍ−１）  ：  １７１７，  １５９２，  １５５９，  １５０９，  １４５１，  １２７７，  １１１１，  １０６９，  １０２６
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ５００  ＭＨｚ，  δ）  ：  １．５４，  １．６６，  １．８８  （各々３Ｈ，  全てｓ，  Ｈ３−１７，  ２０，  １９），  １．６２  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １２．５，  １３．８  Ｈｚ，  Ｈ−９β），  １．７２  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６α），  １．８７  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  ０．９  Ｈｚ，  Ｈ３−１６），  ２．０１  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−６β），  ２．２０  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１４α），  ２．３４  （１Ｈ，  ｍ，  Ｈ−１４β），  ２．３１  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ２−１３），  ２．３９  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１３  Ｈｚ，  Ｈ−５α），  ２．４７  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  １２．９，  １２．９  Ｈｚ，  Ｈ−５β），  ２．５９  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ５．５，  １３．８  Ｈｚ，  Ｈ−９α），  ２．７２  （１Ｈ，  ｂｒ．ｓ，  Ｈ−１１），  ３．０８  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約１０  Ｈｚ，  Ｈ−７），  ４．９３  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  Ｈ−１５），  ５．２９  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １１．０  Ｈｚ，  Ｈ−１５），  ５．４５  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ  ＝  １０．４  Ｈｚ，  Ｈ−２），  ５．７０  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄｄ，  Ｊ  ＝  約６，  １３  Ｈｚ，  Ｈ−１０），  ５．７４  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ０．９，  １０．４  Ｈｚ，  Ｈ−３），  ７．１３  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−３’，  ５’），  ７．３９  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ７．６，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−３’’’，  ５’’’），  ７．４１  （１Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  ４．９，  ８．０  Ｈｚ，  Ｈ−５’’），  ７．４４  （１Ｈ，  ｔｔ，  Ｊ  ＝  １．３，  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−４’），  ７．５８  （１Ｈ，  ｔｔ，  Ｊ  ＝  １．３，  ７．６  Ｈｚ，  Ｈ−４’’’），  ７．８４  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １．３，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−２’，  ６’），  ８．１０  （２Ｈ，  ｄｄ，  Ｊ  ＝  １．３，  ８．３  Ｈｚ，  Ｈ−２’’’，  ６’’’），  ８．３１  （１Ｈ，  ｄｄｄ，  Ｊ  ＝  １．９，  ２．２，  ８．０  Ｈｚ，  Ｈ−６’’），  ８．７８  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約５  Ｈｚ，  Ｈ−４’’），  ９．２４  （１Ｈ，  ｂｒ．ｄ，  Ｊ  ＝  約２  Ｈｚ，  Ｈ−２’’）
１３Ｃ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  １２５  ＭＨｚ，  δＣ）  ：  表２に記載
ＦＡＢ−ＭＳ  ：  ｍ／ｚ  ６５０  （Ｍ＋Ｈ）＋
【００３９】
表２：化合物（Ｉａ）〜（Ｉｄ）の１３Ｃ−ＮＭＲデータ（１２５ＭＨｚ）
【表２】
2005068013.tif 000010
ａ）：ＣＤ３ＯＤ、ｂ）：ＣＤＣｌ３で測定
【００４０】
Ｇｒｉｅｓｓ法によるＮＯの測定およびＭＴＴアッセイ法による毒性の判定
ｄｄＹ系雄性マウス（体重約３０ｇ）に、４％チオグリコレート培地（日水製薬社製）２ｍｌを腹腔内投与し、４日後に頚椎脱臼により致死させ、腹部の体皮を剥離し、氷冷したＣａ２＋、Ｍｇ２＋を含まないリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ（−））  ７ｍｌで腹腔内を洗浄して、洗浄液を回収した。
回収した洗浄液を遠心分離（１，０００ｒｐｍ，  １０分，  ４℃）し、ＰＢＳ（−）で２回洗浄した後に、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、１００単位／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン含有ＲＰＭＩ−１６４０培地（シグマ社製）に懸濁した。
次に、９６ウェル平底マイクロプレートに５．０×１０５個の細胞（１００μｌ培地／ウェル）を播種し、１時間前培養（５％，  ＣＯ２，  ３７℃）し、ＰＢＳ（−）で洗浄した後に、被験物質および１０μｌ／ｍｌ  ＬＰＳ（サルモネラ・エンテリティディス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）由来）を含む培地で２０時間培養した。
【００４１】
培養上清中に蓄積したＮＯ２−をＮＯとして、Ｇｒｉｅｓｓ法により定量した。すなわち、培養上清に同量のＧｒｉｅｓｓ試薬（１％スルファニルアミド／０．１％  Ｎ−１−ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩／２．５％リン酸）を加えて混和し、１０分間室温で放置した後に、マイクロプレートリーダー（モデル５５０、バイオラッド社）にて吸光度（測定波長５７０ｎｍ、参照波長６５５ｎｍ）を測定し、培地で希釈した。
ＮａＮＯ２を標準液として培養上清に蓄積したＮＯ２−を定量した。また、被験物質による細胞毒性についてはＭＴＴ  ［３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド］アッセイ法を用い、生成したホルマザンを０．０４Ｍ  ＨＣｌ含有２−プロパノールで溶解した後に、マイクロプレートリーダー（モデル５５０、バイオラッド社）にて吸光度（測定波長５７０ｎｍ、参照波長６５５ｎｍ）を測定した。
なお、被験物質にはＤＭＳＯに溶解し、培地に添加した（ＤＭＳＯの終濃度０．５％）。
表３に示す結果を得た。
【００４２】
表３：化合物（Ｉａ）、化合物（Ｉｂ）および化合物（Ｉｃ）のＬＰＳ刺激によるＮＯ産生抑制作用
【表３】
2005068013.tif 000011
各値は平均±ＳＥＭ．  （Ｎ＝４）を示す。＊；ｐ＜０．０５、＊＊；ｐ＜０．０１
【００４３】
化合物（Ｉａ）、化合物（Ｉｂ）および化合物（Ｉｃ）の肝細胞内脂質代謝促進活性
化合物（Ｉａ）〜（Ｉｃ）の肝細胞内脂質代謝促進活性を、以下のようにＰＰＡＲαを指標として、ＰＰＡＲαリガンドであり、抗脂血症治療薬として知られているクロフィブレートを用いて比較実験を行った。
【００４４】
ｄｄＹ系雄性マウス（体重３５〜４０ｇ）を用いてペントバルビタール麻酔下に、コラゲナーゼ潅流法によりマウス肝細胞を採取した。得られた細胞を４８ウェルマイクロプレートに８×１０４細胞／ウェル（培養液：ウィリアムのＥ培地に牛胎児血清を１０％添加、２００μｌ／ウェル）ずつ播種し、５％ＣＯ２の存在下に、３７℃で２時間、前培養した。これに、被験物質を含む培地２００μｌ／ウェル（被験物質をＤＭＳＯに溶解した、ＤＭＳＯの最終濃度；０．５容量％）を添加し、さらに２０時間培養した。培養後、マイクロプレートを遠心分離（２０００ｒｐｍ、１０分間、４℃）して、上清を除去した。各ウェルに水１２０μｌを添加し、次いでマイクロプレートミキサーで１０分間攪拌した後に、細胞を超音波処理により破砕した。破砕液を遠心分離し、上清液中の中性脂質濃度を市販キット（トリグリセライドＧテストワコー、和光純薬）で測定して、細胞中の中性脂質量を求めた。測定結果を表４に示す。表中、各被験物質濃度における測定結果を、薬物未処置群（０．５％ＤＭＳＯ）の平均値を１００として、これに対する相対値で示した。
【００４５】
表４：化合物（Ｉａ）、化合物（Ｉｂ）および化合物（Ｉｃ）の肝細胞中の中性脂質量に及ぼす影響
【表４】
2005068013.tif 000012
各値は平均±ＳＥＭ．  （Ｎ＝４）を示す。＊；ｐ＜０．０５、＊＊；ｐ＜０．０１
【００４６】
【発明の効果】
本発明によれば、キンポウゲ科クロタネソウ属植物またはその抽出物、あるいは該抽出物中に含まれる活性成分を、ＮＯ産生抑制剤用組成物ならびに脂質代謝促進剤用組成物として安全に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ニゲラシードのメタノール抽出および含有成分の精製工程の概略図を示す。
【図１】
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