(57)【要約】【課題】本発明は、カンナビノイドレセプター調節物質、特に末梢細胞型カンナビノイドレセプター（ＣＢ２）に選択的な調節物質、特にインバースアゴニストを有効成分とする新規な非即時型アレルギー疾患治療剤を提供することを課題とする。【解決手段】本発明により、カンナビノイドレセプター調節物質、特に末梢細胞型カンナビノイドレセプターに選択的に作用するインバースアゴニスト、具体的にはＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−７−メトキシ−２−オキソ−８−ペンチルオキシ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド等、又はその医薬上許容される塩を含んでなる非即時型アレルギー疾患治療剤が提供された。本発明の治療剤は、例えば、喘息、アトピー性皮膚炎等の難治性のアレルギー疾患に対し効果を示す。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンナビノイド末梢細胞型レセプターインバースアゴニストを有効成分として含有してなる非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項２】
インバースアゴニストが、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）及び／又は２−アラキドノイルグリセロールエーテル（２−ＡＧ−Ｅ）のアゴニスト作用に拮抗して、インバースアゴニスト作用を示す化合物である請求項１記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項３】
インバースアゴニストが、以下の化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ、化合物Ｉ、ＳＲ１４４５２８又はその医薬上許容される塩から選ばれる化合物である請求項１記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【化１】
（化合物Ａ）
2005015422.tif 000030
【化２】
（化合物Ｂ）
2005015422.tif 000031
【化３】
（化合物Ｃ）
2005015422.tif 000032
【化４】
（化合物Ｄ）
2005015422.tif 000033
【化５】
（化合物Ｅ）
2005015422.tif 000034
【化６】
（化合物Ｆ）
2005015422.tif 000035
【化７】
（化合物Ｇ）
2005015422.tif 000036
【化８】
（化合物Ｈ）
2005015422.tif 000037
【化９】
（化合物Ｉ）
2005015422.tif 000038
【化１０】
2005015422.tif 000039
【請求項４】
非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎及び／又はアレルギー性結膜炎である請求項１記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項５】
非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性皮膚炎である請求項４記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項６】
非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性喘息である請求項４記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項７】
アレルギー性喘息が、遅発型喘息反応、及び／又は、気道過敏症である請求項６記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項８】
非即時型アレルギー疾患が、遅発型アレルギー反応、及び／又は、遅延型アレルギー反応を伴う疾患である請求項１記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項９】
カンナビノイド末梢細胞型レセプターインバースアゴニストが、ロイコトリエン阻害作用を併せ持つ化合物である請求項１記載のアレルギー疾患治療剤。
【請求項１０】
非即時型アレルギー疾患が、２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患である請求項１記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【請求項１１】
非即時型アレルギー疾患治療剤の候補化合物を同定する方法であって、以下の工程（ａ）から（ｃ）を含む。
（ａ）カンナビノイドレセプター、内因性カンナビノイド、及び、被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）カンナビノイドレセプターと内因性カンナビノイドとの結合能を測定する工程、
（ｃ）被験化合物の非存在下と比較し、工程（ｂ）で測定した結合能を低下させる化合物を選択する工程。
【請求項１２】
カンナビノイドレセプターがＣＢ２であり、内因性カンナビノイドが２−ＡＧ又は２−ＡＧ−Ｅである請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
非即時型アレルギー疾患治療剤の候補化合物を同定する方法であって、以下の工程（ａ）から（ｃ）を含む。
（ａ）  ＣＢ２に選択的に結合する候補化合物を選定する工程、
（ｂ）  工程（ａ）で選定された化合物から、ＣＢ２インバースアゴニストである化合物を選定する工程、
（ｃ）  工程（ｂ）で選定された化合物の抗アレルギー作用を測定する工程。
【請求項１４】
非即時型アレルギー疾患を患う患者に、有効量のＣＢ２インバースアゴニストを含む製剤を投与することからなる非即時型アレルギー疾患の治療方法。
【請求項１５】
インバースアゴニストが、２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅのアゴニスト作用に拮抗して、インバースアゴニスト作用を示す化合物である請求項１４記載の非即時型アレルギー疾患の治療方法。
【請求項１６】
インバースアゴニストが、以下の化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ、化合物Ｉ、ＳＲ１４４５２８又はその医薬上許容される塩から選ばれる化合物である請求項１４記載の非即時型アレルギー疾患の治療方法。
【化１１】
（化合物Ａ）
2005015422.tif 000040
【化１２】
（化合物Ｂ）
2005015422.tif 000041
【化１３】
（化合物Ｃ）
2005015422.tif 000042
【化１４】
（化合物Ｄ）
2005015422.tif 000043
【化１５】
（化合物Ｅ）
2005015422.tif 000044
【化１６】
（化合物Ｆ）
2005015422.tif 000045
【化１７】
（化合物Ｇ）
2005015422.tif 000046
【化１８】
（化合物Ｈ）
2005015422.tif 000047
【化１９】
（化合物Ｉ）
2005015422.tif 000048
【化２０】
2005015422.tif 000049
【請求項１７】
非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎又は及びアレルギー性結膜炎から選ばれる疾患である請求項１４記載の非即時型アレルギー疾患の治療方法。
【請求項１８】
カンナビノイド末梢細胞型レセプターインバースアゴニストを有効成分として含有してなる２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患の治療剤。
【請求項１９】
２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患が、血液癌、敗血症、及び、循環器疾患から選ばれる疾患である請求項１８記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、カンナビノイドレセプターインバースアゴニストの新規用途に関する。より詳しくは、カンナビノイドレセプター、特に末梢細胞型レセプター（ＣＢ２とも言う。）に選択的に作用するインバースアゴニストの非即時型アレルギー疾患治療剤としての用途に関し、また、該インバースアゴニストを用いた非即時型アレルギー疾患治療方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
＜大麻及びカンナビノイドについて＞
大麻は古代から鎮痛、解熱、催眠等に用いられ、薬として利用されてきた。日本では、１８８６−１９５１年まで薬局方に印度大麻として収載され、鎮痛・麻酔剤として使用された。また、アメリカ合衆国では、１８５０−１９４２年まで薬局方でリウマチ、喘息、扁桃炎などの薬として大麻のアルコール溶剤が認められていた。
【０００３】
一方、大麻あるいはその精神作用発現の主要成分と考えられるΔ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）は、視覚・聴覚の異常、時間・空間的認知の異常、被暗示性の増大、思考能力・自発性の低下ならび記憶障害を誘発し、精神機能に著明な変化を起こすことが知られる。その他の薬理作用も極めて多様であり運動失調、被刺激性の増大、体温低下、呼吸抑制、心拍数増大、カタレプシー惹起作用、血圧上昇、血管拡張作用、免疫抑制作用、口渇等が報告されており、現在では、その使用に制限が設けられている。
【０００４】
大麻に含まれる一連の幻覚発現物質はカンノビノイドと総称され、現在、ＴＨＣをはじめと６０種以上のカンナビノイドが見出されている。
【０００５】
天然のカンナビノイドよりも強力な種々の人工的リガンドが開発され、そのレセプターが探索された。結果、１９８８年にラット脳の膜成分にカンナビノイドレセプターの存在が示され、その後１９９１年にはヒトｃＤＮＡがクローニングされた。一方、それと４４％の相同性を有する蛋白質が、ヒト前骨髄性白血病細胞ＨＬ６０から見出され、その後、脾臓などの末梢組織で分布することが確認された。１９９３年、脳の受容体をＣＢ１、末梢組織に見出される受容体をＣＢ２と呼ぶことがＭｕｎｒｏらによって提唱され、現在はこの名称が一般に使われている。
【０００６】
ＣＢ１の体内分布は脳以外に、ヒト精巣、ヒト前立腺・卵巣・子宮・骨髄・胸腺・扁桃・下垂体・副腎・心・肺・胃・大腸・胆管・白血球などの多くの組織で探知されているがそのレベルは脳よりもはるかに低い。これに対しＣＢ２はラット脳には存在せずに脾の辺縁帯の単球に見出された。ヒトの脾・白血球・扁桃・胸腺・膵では、ＣＢ２はＣＢ１よりはるかに高いレベルで存在する。
【０００７】
受容体の２つのサブタイプ（ＣＢ１とＣＢ２）の実体と、アナンダミド、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）、２−アラキドノイルグリセロールエーテル（２−ＡＧ−Ｅ；２−ＡＧの還元体であって２−ＡＧと同様の作用を示すと考えられる。）等の内因性リガンドの存在が確認され、その生理的役割についての検討がなされた。その結果、ＣＢ２がＴ細胞及びＢ細胞の増殖を抑えてアポトーシスを誘導し免疫抑制作用を示すこと、ＣＢ１欠損のノックアウトマウスではカンナビノイド投与で見られる中枢作用が示されないこと、ＣＢ２欠損のノックアウトマウスではカンナビノイドによるヘルパーＴ細胞活性化抑制がみられないこと等様々な知見が得られつつある。
【０００８】
【化２１】
2005015422.tif 000002
【０００９】
現在、これらの知見からＣＢ１とＣＢ２の分布と機能の違いを考え、それぞれに特異的なアゴニスト、アンタゴニスト、或いはインバースアゴニストの医薬品への応用が試みられている。ＣＢ１と関連してパーキンソン病、アルツハイマー病、記憶障害、老人性痴呆、多発性硬化症、食欲減退、疼痛など、ＣＢ２関連として免疫疾患、リウマチ、炎症などが、創薬開発の対象として考えられている。中でも、ＣＢ２に選択的に作用する薬剤、すなわち末梢細胞型（末梢型、末梢性とも言う。）カンナビノイドレセプターに選択的な調節物質は、中枢作用を示さない安全な薬剤として期待されている。ここで、カンナビノイドが極めて低濃度でＣＢ１への中枢作用を示すことから、ＣＢ２選択的調節物質の中でも、よりＣＢ１作用が少ないことが望まれる。
【００１０】
なお、現在、非選択的カンナビノイドレセプターリガンドとして、Δ９−ＴＨＣ、ＣＰ５５９４０、ＷＩＮ５５２１２−２、ＨＵ−２４３、ＨＵ−２１０等が、ＣＢ１選択的リガンドとして、ＳＲ１４１７１６Ａ、ＬＹ３２０１３５、アラキドノイル−２’−クロロエチルアミド、ＣＰ５６６６７等が、ＣＢ２選択的リガンドとして、ＳＲ１４４５２８、ＡＭ６３０、ＨＵ−３０８、ＪＷＨ−０５１、Ｌ−７６８２４２等が知られている（例えば、非特許文献１及び非特許文献２参照。）。
【００１１】
＜アレルギーについて＞
ここで、アレルギー疾患、特にアレルギー性皮膚炎及びアレルギー性喘息について説明をする。
アレルギーとは、抗原抗体反応に基づく生体の過敏性の反応として認識され、単球・マクロファージ・好中球のなどの集積を特徴とする通常の炎症反応とは異なり、アレルギー反応では、好酸球・好塩基球・肥満細胞の寄与するところが大きい。
【００１２】
アレルギー反応は、現在、一般的に４つの型に分類され、生体ではこれら４つの反応が互いに独立して起こるのではなく、いくつかの型の反応が同時に起こっていることもある。
【００１３】
抗原（アレルゲン）が体内に侵入すると、まずマクロファージ等の抗原提示細胞に取り込まれる。抗原提示細胞は、取り込んだ抗原の情報をＴ細胞に伝える。さらにＴ細胞はＢ細胞に対して抗原特異的ＩｇＥ抗体を作るように命じる。ＩｇＥ抗体は肥満細胞と結合し、これにより肥満細胞は感作状態となる。
【００１４】
再び抗原が侵入し、肥満細胞上のＩｇＥ抗体と抗原とが結合すると、肥満細胞からヒスタミン、好酸球走化因子、ロイコトリエンなどの様々な化学伝達物質やインターロイキンなどのサイトカインが放出される。
【００１５】
例えば、化学伝達物質が気管支に作用すれば、気管支平滑筋が収縮し、粘膜の腫れ、痰の分泌などによって気道が狭くなり喘息発作を起こす。皮膚に作用すると炎症や腫れ、痒みが起き、蕁麻疹等の皮膚疾患を起こす。鼻の粘膜に作用すると血管透過性が亢進し、血液中の水分が集まり鼻粘膜が腫れて鼻づまりを起こしたり、神経刺激によってクシャミ、鼻汁が大量に出るアレルギー性鼻炎をもたらす。消化管でこの反応が起こると腸の平滑筋が収縮して腸の動き（蠕動）が異常に高まり、腹痛、嘔吐、下痢などの消化管アレルギーをもたらす。
【００１６】
この反応は抗原が侵入して３０分以内におこるため、即時型アレルギー反応或いはＩ型アレルギー反応と言われる。通常、即時型反応は１時間ほどで収まる。代表的な疾患としてはアナフィラキシー、アレルギー性鼻炎、花粉症、蕁麻疹、アレルギー性胃腸症等が挙げられる。
【００１７】
しかし、数時間から数日後には肥満細胞から放出された好酸球走化因子やサイトカインに引き寄せられて、毒性の強い化学物質を持つ好酸球がアレルギー反応の部位に集まり、化学物質を放出して組織障害を引き起こす。これを「遅発型アレルギー反応」という。この反応が気管支で起これば粘膜上皮が剥離して、抗原がさらに容易に侵入できるようになり、アレルギー反応が長引き、気道の過敏性が亢進し、喘息が難治化する。これを遅発型喘息反応という。例えば、この遅発型反応は、喘息においては主に４−８時間後であり、アトピー性皮膚炎においては主に１２−４８時間後に起こる。
【００１８】
ＩＩ型アレルギー反応は細胞溶解型ともいわれ、抗原に結合したＩｇＭまたはＩｇＧ抗体に補体が作用し、細胞膜に穴を開けて細胞を溶かす反応である。これとは別に抗体の結合をうけた細胞にマクロファージやキラー細胞が作用して傷害物質を放出し、細胞や組織を破壊する反応もある。代表的な疾患として溶血性貧血、血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、グッドパスチェア症候群などが挙げられる。
【００１９】
ＩＩＩ型アレルギー反応は、抗原と抗体（ＩｇＧ抗体）が結合した抗原抗体複合体が食細胞に処理されきれずに組織に沈着し、そこへ補体やマクロファージ、好中球が集まって炎症を起こし、組織を障害する。代表的な疾患として溶連菌による急性糸球体腎炎、関節リウマチや膠原病、血清病、ウイルス性肝炎、アレルギー性肺胞炎などが挙げられる。
【００２０】
ＩＶ型アレルギー反応は、１−３型と異なり抗体は関与しない。感作が成立した状態で再度抗原が侵入すると、Ｔ細胞はサイトカインを放出して、リンパ球、好中球、マクロファージなどの免疫細胞を遊走し抗原を破壊するが、同時に炎症を起こし組織破壊を引き起こす。侵入した抗原が細胞であれば、キラーＴ細胞が抗原を破壊する。反応が完了するのには通常１−２日かかり、「遅延型アレルギー反応」とも呼ばれる。ツベルクリン反応、結核病変、臓器移植後の拒絶反応、うるしかぶれ、化粧品かぶれ等の皮膚炎などはＩＶ型アレルギー反応である。
【００２１】
アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎およびアレルギー性結膜炎などの一般的アレルギー疾患の急性症状は、大部分が即時型反応であるとされてきた。しかし近年、アレルギー性喘息は一過性の即時型過敏症ではなく、慢性炎症に本体があるとの認識がなされてきた。
【００２２】
喘息にはアレルゲンにより誘発される「アレルギー性喘息」と、特定アレルゲンによらず、寒冷、運動、等に誘発される非アレルギー性喘息が知られる。
【００２３】
「喘息」すなわち「気管支喘息」は、かつて可逆性の気流制限（気道閉塞）と気道の過敏性が特徴とされていたが、喘息の気道には、気道上皮の剥離、基底膜直下の繊維化（基底膜部の肥厚）、好酸球の集簇を特徴とする慢性の炎症が存在することが明らかになり、今日では慢性炎症性疾患と認識されている。気道炎症には、好酸球、Ｔ細胞、肥満細胞など多くの炎症細胞が関与すると見られ、即時型反応では肥満細胞、遅発型反応では好酸球、遅延型反応では好酸球及びＣＤ４陽性ヘルパーＴ細胞の関与が重要と考えられる。
【００２４】
抗喘息薬は、可逆的気道閉塞に対する気管支拡張薬中心の治療から、慢性炎症に対する抗炎症薬中心の治療へと移行してきた。発作時の治療としては、その症状に応じ、短時間作用性β２刺激薬、短時間作用性テオフィリン薬、吸入抗コリン薬、注射・経口ステロイド剤等が用いられる。また、長期管理に際しては、吸入・経口ステロイド薬、除放性テオフィリン薬、長期作用性β２刺激薬の他、抗アレルギー剤（メディエーター遊離抑制薬、ヒスタミンＨ１拮抗薬、ロイコトリエン拮抗薬、トロンボキサンＡ２阻害・拮抗薬、Ｔｈ２サイトカイン阻害薬）が用いられている。しかし、ステロイド剤に見られる副腎機能抑制等の副作用、ステロイド、ロイコトリエン拮抗薬等の効果の低い症状（抵抗性）も知られ、更なる抗喘息薬が期待されている。
【００２５】
アトピー性喘息あるいはアトピー性皮膚炎は、家族歴あるいは既往歴でアレルギー疾患を認める症状である。アトピー型の喘息、皮膚炎は小児に多いこともあり、特により副作用の少ない治療薬が望まれる。
【００２６】
「『アトピー性皮膚炎』は、増悪・寛解を繰り返す、掻痒のある湿疹を主病変とする疾患であり、患者の多くはアトピー素因を持つ。
【００２７】
アトピー素因：（１）家族歴、既往歴（気管支喘息、アレルギー性鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎のうちいずれか、或いは複数の疾患）、または（２）ＩｇＥ抗体を産生しやすい素因」と定義され、他の炎症性皮膚疾患とは区別される。
【００２８】
症状として皮膚の過敏性および乾燥を有し、特徴的な皮疹（紅斑、丘疹、痂皮、鱗屑、苔癬化病変、痒疹等）は、慢性・反復性経過をたどる。また、カポジ水痘用発疹症、ウイルス感染症（単純ヘルペスウイルス感染症等）、膿痂疹、伝染性軟属種（白内障、網膜剥離等）等の合併症を引き起こす。
【００２９】
アトピー性皮膚炎でもまた、その病変には、ＩｇＥ・肥満細胞による即時型・遅発型アレルギー反応に加え、ランゲルハンス細胞・Ｔ細胞による遅延型アレルギー反応が係わると考えられる。
【００３０】
その治療には、食物・ダニ等の原因・増悪因子の除去、スキンケア（皮膚を清潔に保つ、皮膚の乾燥を防ぐため保湿剤を用いる等）とあわせ、症状に応じて薬物療法が用いられる。
【００３１】
掻痒に対しては抗ヒスタミン剤が用いられるが、その効果は蕁麻疹の場合とは異なり顕著ではない。
【００３２】
炎症に対しては原則としてプレドニゾロン、吉草酸ベタメサゾン等のステロイド外用剤が用いられる。補助的に抗ヒスタミン剤あるいは抗アレルギー剤の内服薬が用いられるが、それらのみで皮膚炎をコントロールすることは困難とされる。一般的にアトピー性皮膚炎は難治であり、副作用からステロイド剤を忌避する声も多いため、新薬の開発が望まれている。近年、免疫抑制剤のタクロリムス軟膏剤が用いられ効果を上げているものの、これもその副作用が懸念され、使用に制限が設けられている。また、皮膚疾患部の損傷が激しく外用が困難である症状、顔・粘膜等もともと表皮が薄く敏感な箇所におこる症状、表皮の内層部・体の広範囲に及ぶ疾患の治療等のため、取扱いが容易で安全な経口剤の開発も望まれている。
【００３３】
本出願人の出願に係る特開２０００−２５６３２３号（ＷＯ００／４０５６２）には、カンナビノイドレセプター調節物質として下記一般式で表される２−オキソキノリン化合物が開示されている。
【００３４】
【化２２】
2005015422.tif 000003
【００３５】
（式中、各記号は前述の通り。）
また、その例として２−オキソキノリン化合物としてＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−７−メトキシ−２−オキソ−８−ペンチルオキシ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（以下、化合物Ａという。）等が開示されている。
【００３６】
【化２３】
2005015422.tif 000004
【００３７】
また、同公報には、カンナビノイドレセプター調節物質の利用について、「末梢細胞型レセプター、例えばマクロファージ上のレセプターの発見（非特許文献６参照）によって、免疫反応を調節することにより、抗炎症作用、抗アレルギー作用を有し、もとより免疫調節作用を併せ持つ、末梢細胞型レセプターのアゴニストの開発が進められている。」こと、「末梢細胞型カンナビノイドレセプターに選択的に作用する薬剤は、副作用となる体温低下、カタレプシー等の中枢作用を示さない、安全な薬剤となり得るため、特に、末梢細胞型レセプター選択的調節剤の開発が期待されている。」こと、及び「カンナビノイドレセプター（特に末梢型カンナビノイドレセプター）調節剤、免疫調節剤、自己免疫疾患治療剤、抗炎症剤及び抗アレルギー剤として有用である。」旨が記載されている。
【００３８】
加えて、同公報には、薬理試験として、末梢細胞型カンナビノイドレセプター（ＣＢ２）に対する選択的結合試験、カラゲニン誘発足浮腫モデル試験、及び、ラットタウロコール膵炎モデルによる炎症及び出血の抑制試験について記載されている（特許文献１参照。）。
【００３９】
しかし、当該公報には抗炎症作用についての具体的な開示が見られるものの、アレルギー疾患に関する具体的な試験例やデータは開示されていない。また、アトピー性皮膚炎・アレルギー性喘息等の特定アレルギー疾患についての具体的教示も見あたらない。
【００４０】
また、先行文献には上記化合物Ａ及び下記ＳＲ１４４５２８がＣＢ２選択的リガンドであること、及び、それらがＣＢ２インバースアゴニストとして作用することが記載されている。詳しくは、ＣＢ２発現ＣＨＯ細胞において、化合物Ａ及び下記ＳＲ１４４５２８が、アデニル酸シクラーゼ活性化剤であるフォルスコリンの刺激による環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）産生を、増加させること、すなわち、化合物Ａ及びＳＲ１４４５２８がＣＢ２インバースアゴニストとして作用することが記載されている。当文献では同試験においてＴＨＣがｃＡＭＰ産生を低減させるという一般的な知見についても併記している（非特許文献３参照）。
【００４１】
【化２４】
2005015422.tif 000005
【００４２】
既知のいくつかの特許公報（或いは文献）には、カンナビノイド調節物質の抗アレルギー効果についての記載が見られる。
【００４３】
特開昭５２−１１３９７６号（ＵＳ４１７９５１７号）には、ＴＨＣ誘導体の喘息発作の予防効果について記載されており、適応症として喘息、アレルギー等が記載されている（特許文献２参照）。
【００４４】
特表２００２−５１１４１１号（ＷＯ９９／５２５２４号）には、カンナビジオール等のカンナビノイドが、喘息等の炎症性疾患の治療に用いられることが示されている。しかし、カンナビジオールはＣＢ１とＣＢ２には結合をしないとする文献が引用されている（特許文献３参照）。
【００４５】
ＷＯ０１／６４２１２号には、カンナビノイド調節物質が、好ましくはＣＢ１アゴニストが、筋疾患、例えば喘息、気管支炎等の治療に用いられることが示されている（特許文献４参照）。
【００４６】
ＷＯ０１／９５８９９号には、アラキドン酸誘発耳浮腫に対するカンナビジオール誘導体の抗炎症作用が記載されている（特許文献５参照）。
【００４７】
ＷＯ０１／８９５８９号には、カンナビノイドを局所投与することにより末梢細胞に存在するＣＢ１レセプターを調節し、咳を改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）する方法が記されている（特許文献６参照）。
【００４８】
ＷＯ００／１６７５６号には、カンナビノイド調節物質が開示され、適応症として皮膚疾患（アトピー性皮膚炎等）、呼吸器疾患（喘息等）、アレルギー性鼻炎等が述べられている。しかし、該化合物が、ＣＢ１選択的であること、末梢細胞に存在するＣＢ１レセプターを調節することが述べられている（特許文献７参照）。
【００４９】
特表平８−５０４１９５号（ＷＯ９４／１２４６６号）には、カンナビノイドレセプターに対するリガンドが、抗炎症、抗喘息等に活性を示すことが記載されている（特許文献８参照）。
【００５０】
特開平６−７３０１４号（ＵＳ５６２４９４１号）及び特開平７−３２４０７６号（ＵＳ５４６２９６０号）には、カンナビノイドレセプターに対するリガンドが、胸腺障害、喘息、免疫調節等の治療に使用され得ることが記載されている（特許文献９及び特許文献１０参照）。
【００５１】
ＷＯ０１／９８２８９号には、Δ６テトラヒドロカンナビノールタイプの化合物が、炎症、喘息・慢性閉塞性肺疾患等の肺疾患、自己免疫疾患等の治療に使用され得ることが記載されている。しかし、その作用は、ＮメチルＤアスパラギン酸受容体の遮断と抗酸化活性に加えて、プロスタグランジン合成阻害、腫瘍壊死因子産生阻害、シクロオキゲナーゼ阻害、一酸化窒素産生阻害によるものであることが記載されている（特許文献１１参照）。
【００５２】
ＷＯ０２／２６７０２号には、カンナビノイドレセプター調節物質、特にアゴニストが、喘息、アレルギー、皮膚疾患等に有効であることが記載されている（特許文献１２参照）。
【００５３】
ＷＯ０１／８７２９７号には、ＣＢ１調節物質が、乾癬の様な皮膚壊死等の治療に用いられることが記載されている（特許文献１３参照）。
【００５４】
ＷＯ０２／４２２４８号には、カンナビノイドレセプター結合剤、特にＣＢ１アゴニストが、喘息、鼻炎、炎症性皮膚疾患に使用されることが記載されている（特許文献１４参照）。
【００５５】
ＷＯ０２／４７６９１号には、カンナビノイドレセプターアゴニストが、炎症等の治療に用いられることが記載されている（特許文献１５参照）。
【００５６】
しかし、これら化合物が、真にアレルギー疾患の治療効果、特にアトピー性疾患への治療効果を有するか否かは、いまだ実験的に明らかにされていない。
【００５７】
また、いくつかの公報にはＣＢ２選択的なカンナビノイド調節物質による薬理作用について記載が見られる。
【００５８】
特表１１−５００４１１号（ＷＯ９６／１８３９１号）には、ＣＢ２調節物質が、免疫系障害、慢性呼吸器障害（喘息等）等の治療に用いられることが示されている。また、マストセル、非免疫セル（例えば、小脳顆粒、小脳、心臓）にＣＢ２が発現することを見出した旨が記載されている（特許文献１６参照）。
【００５９】
特表１１−５０１６１５号（ＷＯ９６／１８６００号）には、ＣＢ２調節物質が、自己免疫疾患、慢性炎症、呼吸器障害（喘息等）等の治療に用いられることが示されている（特許文献１７参照）。
【００６０】
特表１０−５０８８７０号（ＷＯ９６／２５３９７号）には、ＣＢ２調節物質が、肺障害（喘息、慢性気管支炎等）、アレルギー性反応（鼻炎、接触性皮膚炎、結膜炎等）、免疫系障害の治療に用いられることが示されている（特許文献１８参照）。
【００６１】
特表平１１−５０７９３７号（ＵＳ６０１３６４８）には、ＣＢ２作用薬が開示されており、該作用薬の適応症として、自己免疫疾患、感染性疾患、アレルギー疾患（具体的には、急性過敏症、喘息）が記載されている。しかし、該作用薬はＣＢ２に対し選択性を有するが、フォルスコリン刺激によるｃＡＭＰ産生を抑制する旨が記載されている（特許文献１９参照）。
【００６２】
特表２０００−５０２０８０号（ＵＳ５９２５７６８号）には、ＣＢ２受容体への親和性を有する化合物が開示されており、適応症として免疫疾患、例えばアレルギー疾患（即時型過敏症又は喘息）等が記載されている。しかし、該化合物がＣＢ２受容体アンタゴニストであることが記載されている（特許文献２０参照）。
【００６３】
特表２００１−５０８７９９号（ＷＯ９８／３１２２７号）には、ＣＢ２調節物質、特にアンタゴニストが、免疫疾患、炎症等の治療に用いられることが示されている（特許文献２１参照）。
【００６４】
特表２００１−５１６３６１号（ＷＯ９８／４１５１９号）には、ＣＢ２調節物質、特にアゴニストが、免疫疾患、炎症等の治療に用いられることが示されている（特許文献２２参照）。
【００６５】
特表２００１−５１５４７０号（ＵＳ６２６２１１２号）には、カンナビノイドアゴニスト、特にＣＢ１アゴニストが、アレルギー性疾患、喘息、炎症性及び／又は免疫学原因の皮膚疾患等の治療に有効であることが記載されている。また、当該化合物のいくつかはＣＢ２に有効であることが記載されている（特許文献２３参照）。
【００６６】
ＷＯ９９／５７１０７号には、ＣＢ２選択的調節物質が、抗炎症、免疫調節に用いられることが示されている（特許文献２４参照）。
【００６７】
特表２００２−５２３３９５号（ＷＯ００／１０９６７号）及び特表２００２−５２３３９６号（ＷＯ００／１０９６８号）には、ＣＢ１アゴニスト、ＣＢ２アゴニストが、それぞれ皮膚疾患等の治療に用いられることが示されている（特許文献２５及び特許文献２６参照）。
【００６８】
特表２００２−５３９２４６号（ＷＯ００／５６３０３号）には、ＣＢ２選択的アゴニストが、免疫疾患の治療に用いられることが示されている（特許文献２７参照）。
【００６９】
ＷＯ０１／４０８３号には、ＣＢ２選択的調節物質、特にアゴニストが、炎症、免疫性疾患、例えばアトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、喘息等の治療に用いられることが示されている。しかし、該化はｃＡＭＰ上昇を抑制する旨が記載されている。（特許文献２８参照）。
【００７０】
ＷＯ０１／１９８０７号には、ＣＢ２選択的調節物質、特にアゴニストが、抗炎症、免疫抑制作用を有することが記載されており、ヒツジ赤血球誘発遅延型過敏反応モデル実験による試験結果が記載されている。しかし、該化合物はｃＡＭＰ上昇を抑制する旨が記載されている。（特許文献２９参照）。
【００７１】
ＷＯ０１／２９００７号には、カンナビノイド調製物質が、抗炎症、免疫系の調節等に用いられることが示されている。該化合物のいくつかはアンタゴニストであり、その他がアゴニストであることが記載され、また、バインディングアッセイの結果によりＣＢ２選択的な調節物質も示されている（特許文献３０参照）。
【００７２】
ＷＯ０１／２８４９７号には、ＣＢ２選択的調節物質、特にアゴニストが、抗炎症作用等を有することが示されている（特許文献３１参照）。
【００７３】
ＷＯ０１／３２１６９号には、ＣＢ２選択的アゴニストが、抗炎症、自己免疫疾患等の治療に用いられることが示されている（特許文献３２参照）。
【００７４】
ＷＯ０１／２８３２９号には、ＣＢ２選択的調節物質が、抗炎症、自己免疫疾患等の治療に用いられることが示されている（特許文献３３参照）。
【００７５】
ＷＯ０１／２８５５７号には、カンナビノイドレセプター調節物質が、抗炎症、自己免疫疾患等の治療に用いられることが示されており、該化合物のうちいくつかはＣＢ２選択的な調節物質である試験データが開示されている（特許文献３４参照）。
【００７６】
ＷＯ０１／３２６２９号には、ＣＢ２アンタゴニストが、抗炎症、免疫疾患等の治療に用いられることが示されている（特許文献３５参照）。
【００７７】
ＷＯ０１／５８８６９号には、ＣＢアゴニスト、特にＣＢ２アゴニストが、呼吸器疾患特に、喘息、気管支炎等の治療に用いられることが示されている。また、該アゴニストが肺上皮細胞からのムチン産生を抑制することが記載されている（特許文献３６参照）。
【００７８】
ＷＯ０１／９６３３０号には、ＣＢ２に結合する化合物が開示され、適応症として、呼吸器疾患、例えば喘息・気管支炎等、炎症性疾患等が挙げられている（特許文献３７参照）。
【００７９】
ＷＯ０２／１０１３５号には、ＣＢ２アゴニストが、喘息、鼻アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫疾患等の治療に有効であることが記載されている。また、該化合物がｃＡＭＰ産生を抑制することをしめす試験結果が示されている（特許文献３８参照）。
【００８０】
ＷＯ０２／４２２６９号には、ＣＢ２アゴニストが、乾癬等の免疫系疾患、過敏症・喘息・アレルギー性鼻炎、接触性皮膚炎等のアレルギー性疾患、関節炎等の炎症性疾患等の治療に有効であることが記載されている（特許文献３９参照）。
【００８１】
ＷＯ０２／５８６３６号には、カンナビ様化合物、特にＣＢ２選択的化合物が、抗炎症、免疫系の調節等に用いられることが記載されている。また、該化合物がｃＡＭＰ産生を抑制するアゴニストであることが記載されている（特許文献４０参照）。
【００８２】
ＷＯ０２／６０４４７号には、ＣＢ１選択的調節物質、ＣＢ２選択的調節物質が記載されている。また、ＣＢ２選択的調節物質、特にアンタゴニストが、抗炎症、免疫系の調節等に用いられることが記載されている（特許文献４１参照）。
【００８３】
ＷＯ０２／５３５４３号には、ＣＢ２親和性化合物が、抗炎症剤、免疫抑制剤等として用いられることが示されている。また、フォルスコリン刺激によるｃＡＭＰ生成量を測定し、いくつかの化合物がアゴニスト作用を示すこと、及び、ヒツジ赤血球誘発遅延型過敏反応モデルを用いた試験方法を記載している（特許文献４２参照）。
【００８４】
ＷＯ０２／７２５６２号には、ＣＢ２親和性化合物、特にアゴニストが、抗炎症剤、免疫抑制剤等として用いられることが示されている。また、フォルスコリン刺激によるｃＡＭＰ生成量を測定し、いくつかの化合物がアゴニスト作用を示すこと、及び、ヒツジ赤血球誘発遅延型過敏反応モデルを用いた試験方法を記載している（特許文献４３参照）。
【００８５】
ＷＯ０２／６２７５０号には、カンナビノイド調節物質、特にＣＢ２に結合する化合物が、アトピー性皮膚炎、アレルギー、喘息、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎等の治療に有効であることが記載されている（特許文献４４参照）。
【００８６】
ＷＯ０２／８５８６６号には、ＣＢ２選択的アゴニストが、痛みの治療に有効であることが記載されている（特許文献４５参照）。
【００８７】
しかしながら、これら化合物がＣＢ２に選択的に作用することは、依然として実証されておらず、いまだ、これら化合物がアレルギー疾患、特に非即時型アレルギー疾患治療剤として、真に有効であるか否かについて、確かな実験に基づいて、或いは、理論的証拠を持って確認されていない。ましてや、これら化合物が、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、即時型喘息反応、遅発型喘息反応、気道過敏症に有効であるという確証もなされてはいない。また、ＣＢ２インバースアゴニスト作用によって治療効果を示すことも示されておらず、それを示唆する記載も見られない。
【００８８】
このように、カンナビノイドレセプターへの作用と病理との関係についての知見は様々であり、特にＣＢ２選択的な調節物質の臨床への応用について、アゴニストであるべきか、アンタゴニストであるべきか、或いはインバースアゴニストであるべきかの統一した見解は得られていない。
【００８９】
これら事情の下、抗アレルギー剤として用いられるカンナビノイド調節剤、特にインバースアゴニストについては、今だ開発されるに至っていない。
【００９０】
なお、本発明者らは、本出願に係る薬理作用を評価するに際し、抗アレルギー効果の判断に有効な病態モデル動物として、アトピー性皮膚炎類似の炎症を誘導させたＤＮＦＢ誘発アレルギー性皮膚炎マウス（非特許文献４参照。）、（即時相・遅発相・後遅発相）の皮膚炎を惹起させたＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎マウス（非特許文献５参照。）等を使用した。これら病態モデルは抗アレルギー作用、特にアトピー性皮膚炎の薬理作用を評価するのに適したモデルとして用いられている。
【００９１】
【特許文献１】
特開２０００−２５６３２３号（２９頁実施例３−５、及び、６頁右４２行から７頁左１行、６５頁右４３行から４６行、６３頁左１６行から６５頁左３７行）
【００９２】
【特許文献２】
特開昭５２−１１３９７６号（３頁右下１行から４行、８頁右上１２行から１７行）
【００９３】
【特許文献３】
特表２００２−５１１４１１号（６頁段落番号０００５、７頁段落番号０００９）
【００９４】
【特許文献４】
ＷＯ０１／６４２１２号（４頁１行から２９行）
【００９５】
【特許文献５】
ＷＯ０１／９５８９９号（２０頁７行から２３頁２３行）
【００９６】
【特許文献６】
ＷＯ０１／８９５８９号（２頁１５行から４頁２行、図２Ｂ、２Ｃ）
【００９７】
【特許文献７】
ＷＯ００／１６７５６号（１３頁１８行から１５頁１４行、３０頁１３行から３２頁表、４３頁４行から４４頁行）
【００９８】
【特許文献８】
特表平８−５０４１９５号（１２頁表ＩＩ、１６頁）
【００９９】
【特許文献９】
特開平６−７３０１４号（６頁左２８行から５０行）
【０１００】
【特許文献１０】
特開平７−３２４０７６号（８頁左４行から３４行）
【０１０１】
【特許文献１１】
ＷＯ０１／９８２８９号（５頁下１３行から７頁１１行、１２頁７行から１３行）
【０１０２】
【特許文献１２】
ＷＯ０２／２６７０２号
【０１０３】
【特許文献１３】
ＷＯ０１／８７２９７号（３頁９行から１５行、１０頁７行から１３行）
【０１０４】
【特許文献１４】
ＷＯ０２／４２２４８号（６頁下５行から７頁２０行、１２頁１４行から１７行）
【０１０５】
【特許文献１５】
ＷＯ０２／４７６９１号（２頁段落番号０００６、３頁４行から最終行）
【０１０６】
【特許文献１６】
特表１１−５００４１１号（９頁１２行から１１頁１２行、６５頁２２行から６７頁６行）
【０１０７】
【特許文献１７】
特表１１−５０１６１５号（１６頁１６行から２１行、５２頁１４行から５４頁７行）
【０１０８】
【特許文献１８】
特表１０−５０８８７０号（１３頁１１行から１２行、３４頁７行から２２行）
【０１０９】
【特許文献１９】
特表平１１−５０７９３７号（１３頁１０行から２２行、６６頁１４行から６７頁５行）
【０１１０】
【特許文献２０】
特表２０００−５０２０８０号（４２頁１９行から４４頁２行）
【０１１１】
【特許文献２１】
特表２００１−５０８７９９号（１４頁５行から１４行、２７頁９行から１８行）
【０１１２】
【特許文献２２】
特表２００１−５１６３６１号（６頁１８行７頁２行、１４頁１７行から１８行）
【０１１３】
【特許文献２３】
特表２００１−５１５４７０号（８６頁７行から８７頁１４行）
【０１１４】
【特許文献２４】
ＷＯ９９／５７１０７号（１頁１行から２頁１３行、２２頁表）
【０１１５】
【特許文献２５】
特表２００２−５２３３９５号（６５頁９行から６６頁２０行）
【０１１６】
【特許文献２６】
特表２００２−５２３３９６号（７８頁下３行から８０頁８行）
【０１１７】
【特許文献２７】
特表２００２−５３９２４６号（５３頁５行から５４頁２３頁、６４頁下９行から６５頁５行）
【０１１８】
【特許文献２８】
ＷＯ０１／４０８３号（５０頁９行から５６頁１２行）
【０１１９】
【特許文献２９】
ＷＯ０１／１９８０７号（２７頁１１行から２８頁８行、１３４頁下７行から１３８頁最終行）
【０１２０】
【特許文献３０】
ＷＯ０１／２９００７号（４頁６行から２５行、８頁表１）
【０１２１】
【特許文献３１】
ＷＯ０１／２８４９７号（１頁下４行から３頁６行、９頁２１行から２６行）
【０１２２】
【特許文献３２】
ＷＯ０１／３２１６９号（３頁１８行から４頁最終行）
【０１２３】
【特許文献３３】
ＷＯ０１／２８３２９号（２頁１行から３頁１４行）
【０１２４】
【特許文献３４】
ＷＯ０１／２８５５７号（２頁５行から５頁１５行、７頁表）
【０１２５】
【特許文献３５】
ＷＯ０１／３２６２９号
【０１２６】
【特許文献３６】
ＷＯ０１／５８８６９号（２頁１行から８行、４４頁下４行から４６頁１５行）
【０１２７】
【特許文献３７】
ＷＯ０１／９６３３０号（７頁２７行から８頁９行、５６頁９行から２９行）
【０１２８】
【特許文献３８】
ＷＯ０２／１０１３５号（７１頁１０行から７２頁１１行）
【０１２９】
【特許文献３９】
ＷＯ０２／４２２６９号
【０１３０】
【特許文献４０】
ＷＯ０２／５８６３６号（７頁５行から８頁２５行、２９頁１８行から２５行）
【０１３１】
【特許文献４１】
ＷＯ０２／６０４４７号（６頁１行から７頁２行、８頁７行から１７行、９頁表１）
【０１３２】
【特許文献４２】
ＷＯ０２／５３５４３号（８５頁４行から最終行、２７８頁４行から２８１頁１５行）
【０１３３】
【特許文献４３】
ＷＯ０２／７２５６２号（２９頁２２行から３０頁１８行、１２０頁５行から１２３頁１９行）
【０１３４】
【特許文献４４】
ＷＯ０２／６２７５０号（３頁１４行から４頁最終行）
【０１３５】
【特許文献４５】
ＷＯ０２／８５８６６号（１頁４行８行、８頁３１行から９頁３行）
【０１３６】
【非特許文献１】
山本尚三ら著，生物と化学，ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．５，ｐｐ２９３から３００，２００１年
【０１３７】
【非特許文献２】
Ｅｘｐａｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．１０，１４７５−１４８９，２００２
【０１３８】
【非特許文献３】
Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ｖｏｌ．２９６，  Ｎｏ．２，  ｐｐ４２０から４２５，２００１年（４２２頁表１、４２３頁表３）
【０１３９】
【非特許文献４】
Ｊａｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．１００，  Ｎｏ．６，  Ｐａｒｔ２，  ｐｐ．３９−４４，Ｄｅｃ．１９９７
【０１４０】
【非特許文献５】
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  Ｖｏｌ．６０，  Ｎｏ．２，  ｐｐ．９７−１０４，  Ｆｅｂ．２０００
【０１４１】
【非特許文献６】
Ｍｕｎｒｏら，  Ｎａｔｕｒｅ，  Ｖｏｌ．３６５，ｐｐ．６１−６５，  １９９３
【０１４２】
【発明が解決しようとする課題】
上記の通りカンナビノイドレセプター調節物質は未だ医薬品として成功を収めておらず、その効果的な用途が模索されている。
従って、本発明は、カンナビノイドレセプター調節物質、特に末梢細胞型カンナビノイドレセプター（ＣＢ２）に選択的な調節物質、特にインバースアゴニストを有効成分とする新規な非即時型アレルギー疾患治療剤を提供することを課題とする。
【０１４３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、選択的ＣＢ２調節物質、特に特にインバースアゴニストがアレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性結膜炎等のアレルギー疾患に対して、極めて有効に作用することを初めて実験的に確認するとともに理論付けをすることによって、本発明を完成した。本発明の医薬は、特に、アレルギー性喘息及びアトピー性皮膚炎の治療剤として有効である。この事実、即ち本発明の効果は、先述の特開２０００−２５６３２３（ＷＯ００／４０５６２）から予測不可能なものであり、発明者自身をして驚くべきものであった。
【０１４４】
より詳しくは下記〔１〕乃至〔１９〕に示す通りである。
〔１〕  カンナビノイド末梢細胞型レセプターインバースアゴニストを有効成分として含有してなる非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔２〕  インバースアゴニストが、２−アラキドノイルグリセロール（２−ＡＧ）及び／又は２−アラキドノイルグリセロールエーテル（２−ＡＧ−Ｅ）のアゴニスト作用に拮抗して、インバースアゴニスト作用を示す化合物である〔１〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔３〕  インバースアゴニストが、以下の化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ、化合物Ｉ、ＳＲ１４４５２８又はその医薬上許容される塩から選ばれる化合物である〔１〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
【０１４５】
【化２５】
（化合物Ａ）
2005015422.tif 000006
【０１４６】
【化２６】
（化合物Ｂ）
2005015422.tif 000007
【０１４７】
【化２７】
（化合物Ｃ）
2005015422.tif 000008
【０１４８】
【化２８】
（化合物Ｄ）
2005015422.tif 000009
【０１４９】
【化２９】
（化合物Ｅ）
2005015422.tif 000010
【０１５０】
【化３０】
（化合物Ｆ）
2005015422.tif 000011
【０１５１】
【化３１】
（化合物Ｇ）
2005015422.tif 000012
【０１５２】
【化３２】
（化合物Ｈ）
2005015422.tif 000013
【０１５３】
【化３３】
（化合物Ｉ）
2005015422.tif 000014
【０１５４】
【化３４】
2005015422.tif 000015
【０１５５】
〔４〕  非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎及び／又はアレルギー性結膜炎である〔１〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔５〕  非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性皮膚炎である〔４〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔６〕  非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性喘息である〔４〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔７〕  アレルギー性喘息が、遅発型喘息反応、及び／又は、気道過敏症である〔６〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔８〕  非即時型アレルギー疾患が、遅発型アレルギー反応、及び／又は、遅延型アレルギー反応を伴う疾患である〔１〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔９〕  カンナビノイド末梢細胞型レセプターインバースアゴニストが、ロイコトリエン阻害作用を併せ持つ化合物である〔１〕記載のアレルギー疾患治療剤。
〔１０〕  非即時型アレルギー疾患が、２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患である〔１〕記載の非即時型アレルギー疾患治療剤。
〔１１〕  非即時型アレルギー疾患治療剤の候補化合物を同定する方法であって、以下の工程（ａ）から（ｃ）を含む。
（ａ）カンナビノイドレセプター、内因性カンナビノイド、及び、被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）カンナビノイドレセプターと内因性カンナビノイドとの結合能を測定する工程、
（ｃ）被験化合物の非存在下と比較し、工程（ｂ）で測定した結合能を低下させる化合物を選択する工程。
〔１２〕  カンナビノイドレセプターがＣＢ２であり、内因性カンナビノイドが２−ＡＧ又は２−ＡＧ−Ｅである〔１１〕記載の方法。
〔１３〕  非即時型アレルギー疾患治療剤の候補化合物を同定する方法であって、以下の工程（ａ）から（ｃ）を含む。
（ａ）  ＣＢ２に選択的に結合する候補化合物を選定する工程、
（ｂ）  工程（ａ）で選定された化合物から、ＣＢ２インバースアゴニストである化合物を選定する工程、
（ｃ）  工程（ｂ）で選定された化合物の抗アレルギー作用を測定する工程。
〔１４〕  非即時型アレルギー疾患を患う患者に、有効量のＣＢ２インバースアゴニストを含む製剤を投与することからなる非即時型アレルギー疾患の治療方法。
〔１５〕  インバースアゴニストが、２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅのアゴニスト作用に拮抗して、インバースアゴニスト作用を示す化合物である〔１４〕記載の非即時型アレルギー疾患の治療方法。
〔１６〕  インバースアゴニストが、以下の化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ、化合物Ｉ、ＳＲ１４４５２８又はその医薬上許容される塩から選ばれる化合物である〔１４〕記載の非即時型アレルギー疾患の治療方法。
【０１５６】
【化３５】
（化合物Ａ）
2005015422.tif 000016
【０１５７】
【化３６】
（化合物Ｂ）
2005015422.tif 000017
【０１５８】
【化３７】
（化合物Ｃ）
2005015422.tif 000018
【０１５９】
【化３８】
（化合物Ｄ）
2005015422.tif 000019
【０１６０】
【化３９】
（化合物Ｅ）
2005015422.tif 000020
【０１６１】
【化４０】
（化合物Ｆ）
2005015422.tif 000021
【０１６２】
【化４１】
（化合物Ｇ）
2005015422.tif 000022
【０１６３】
【化４２】
（化合物Ｈ）
2005015422.tif 000023
【０１６４】
【化４３】
（化合物Ｉ）
2005015422.tif 000024
【０１６５】
【化４４】
2005015422.tif 000025
【０１６６】
〔１７〕  非即時型アレルギー疾患が、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎又は及びアレルギー性結膜炎から選ばれる疾患である〔１４〕記載の非即時型アレルギー疾患の治療方法。
〔１８〕  カンナビノイド末梢細胞型レセプターインバースアゴニストを有効成分として含有してなる２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患の治療剤。
〔１９〕  ２−ＡＧ及び／又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患が、血液癌、敗血症、及び、循環器疾患から選ばれる疾患である〔１８〕記載の治療剤。
【０１６７】
【発明の実施の形態】
次に、本明細書において使用する語句の説明を行なう。
【０１６８】
「カンナビノイドレセプター調節物質」及び「カンナビノイドレセプター調節剤」とは、カンナビノイドレセプターの生物活性を調節する物質、若しくはカンナビノイドレセプターの発現を調節する物質であり、前者としては、アゴニスト、アンタゴニスト、インバースアゴニスト、その他カンナビノイドレセプターの感受性を増強する或は低減する物質が挙げられ、後者としては、カンナビノイドレセプターの遺伝子発現を増強或は抑制する物質等が挙げられる。
【０１６９】
アゴニストとは受容体を介して細胞内シグナル伝達を引き起こす物質であり、アゴニストに拮抗してその作用を減弱させる物質をアンタゴニストという。
【０１７０】
インバースアゴニストとは、レセプターのアゴニスト本来の作用とは逆の作用を来すものである。内因性リガンドや薬物に拮抗して逆作動剤として働くものや、内因性リガンドや薬物の影響を受けずに逆作動剤として働くものも見られる。例えば、カンナビノイドレセプターにおいてｃＡＭＰレベルの観点からすると、カンナビノイドがその上昇を抑えるのに比し、化合物ＡはｃＡＭＰレベルを上昇させるという知見が得られている。さらに具体的には、内因性カンナビノイドである２−ＡＧ又は２−ＡＧ−Ｅ（非選択的ＣＢアゴニスト）は、フォルスコリン刺激によるｈＣＢ２発現ＣＨＯ細胞においてｃＡＭＰ産生を抑制するが、ここでｃＡＭＰ産生を増加させる働きを示すものはインバースアゴニストであると言える。インバースアゴニストして具体的には、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ、化合物Ｉ、ＳＲ１４４５２８、ＡＭ６３０が挙げられ、好ましくは化合物Ａ及びＳＲ１４４５２８である。
【０１７１】
カンナビノイドレセプター調節物質として具体的には、特開２０００−２５６３２３（ＷＯ００／４０５６２）に一般式［Ｉ］により表される化合物、より具体的にはＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−７−メトキシ−２−オキソ−８−ペンチルオキシ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）等の２−オキソキノリン化合物等が挙げられ、その他、Δ９−ＴＨＣ、Ｎａｂｉｌｏｎｅ（ＬＹ−１０９５１４）、ＣＰ−５５９４０、ＰＲＳ−２１１０９６、ＰＲＳ−２１１３３５、ＰＲＳ−２１１３５９、ＳＲ１４４５２８、ＳＲ１４１７１６、Ｒｉｍｏｎａｂａｎｔ（ＳＲ１４１７１６Ａ）、ＳＲ１４７７８、ＡＭＧ−３、ＳＬＶ−３１９、ＡＭ−２５１、ＡＭ−２８１、ＡＭ３７４、ＡＭ４０４、ＡＭ６３０、ＡＭ−６９４、ＡＭ２２３３、ＡＭ２２３０、ＡＭ１２２１等のＷＯ０１／２８５５７記載の化合物、ＡＭ１７０３等のＷＯ０１／２８４９７記載の化合物、ＡＭ１７１０等のＷＯ０１／２８３２９記載の化合物、ＨＵ−３０８等のＷＯ０１／３２１６９記載の化合物、ＨＵ−３１０等のＷＯ９９／５１５６０記載の化合物、ＪＷＨ−０５１、ＪＷＨ−１６１、Ｏ−１２３６、Ｏ−１０５７、Ｏ−２０９３、Ｌ−７５９６３３、Ｌ−７５９６５６、Ｌ−７６８２４２、ＬＹ３２０１３５等のＷＯ９６／０２２４８記載の化合物、ＢＡＹ−３８−７２７１、ＷＯ０２／２４６３０記載の化合物、ＷＯ０２／１０１３５記載の化合物、ＷＯ０１／９６３３０記載の化合物、ＷＯ０１／８５０９２記載の化合物、ＷＯ０１／７４７６３記載の化合物、ＷＯ０１／７０７００記載の化合物、ＷＯ０１／６４６３４記載の化合物、ＷＯ０１／６４６３３記載の化合物、ＷＯ０１／６４６３２記載の化合物、ＷＯ０１／５８８６９記載の化合物、ＷＯ０１／５８４４５記載の化合物、ＷＯ０１／０４０８３記載の化合物、ＷＯ０１／３２６２９記載の化合物、ＷＯ０１／２９００７記載の化合物、ＷＯ０１／２８５８８記載の化合物、特表２００１−５１５４７０号（ＵＳ６２６２１１２号）記載の化合物、特表２００２−５３９２４６（ＷＯ００／５６３０３）記載の化合物、ＷＯ００／４６２０９記載の化合物、ＷＯ００／３２２００記載の化合物、ＷＯ００／１６７５６記載の化合物、ＷＯ００／１５６０９記載の化合物、特表２００２−５２３３９６（ＷＯ００／１０９６８）記載の化合物、特表２００２−５２３３９５（ＷＯ００／１０９６７）記載の化合物、ＷＯ９９／６０９８７記載の化合物、ＷＯ９９／５７１０７記載の化合物、ＷＯ９９／５７１０６記載の化合物、ＷＯ９９／５２５２４記載の化合物、ＷＯ９９／２６６１２記載の化合物、ＷＯ９９／２４４７１記載の化合物、ＷＯ９９／２４９９記載の化合物、特表２００１−５１６３６１（ＷＯ９８／４１５１９）記載の化合物、ＷＯ９８／３７０６１記載の化合物、ＷＯ９８／３２４４１記載の化合物、特表２００１−５０８７９９（ＷＯ９８／３１２２７）記載の化合物、ＷＯ９７／２９０７９記載の化合物、特表２０００−５０２０８０（ＷＯ９７／２１６８２）記載の化合物、ＷＯ９７／１９０６３記載の化合物、特表平１１−５０７９３７（ＷＯ９７／８６０）記載の化合物、ＷＯ９６／２０２６８記載���化合物、特表１０−５０８８７０（ＷＯ９６／２５３９７）記載の化合物、特表１１−５０１６１５（ＷＯ９６／１８６００）記載の化合物、特表１１−５００４１１（ＷＯ９６／１８３９１）記載の化合物、ＷＯ９４／１２４６６記載の化合物、ＵＳ６２８４７８８記載の化合物、ＵＳ５９３９４２９記載の化合物、ＵＳ５８０４５９２記載の化合物、ＵＳ５６０５９０６記載の化合物、ＵＳ５６２４９４１記載の化合物、ＵＳ５４６２９６０記載の化合物、ＵＳ５０８１１２２記載の化合物、ＵＳ５０１３８３７記載の化合物、ＤＥ１００１５８６６記載の化合物、ＤＥ１９８３７６２７記載の化合物、ＤＥ１９８３７６３８記載の化合物、ＷＯ０１／５８４５０記載の化合物、ＷＯ０１／３２６６３記載の化合物、ＷＯ０１／２８４９８記載の化合物、ＷＯ０１／２４７９８記載の化合物、ＦＲ２８０５８１８記載の化合物、ＦＲ２８０５８１７記載の化合物、ＦＲ２８０５８１０記載の化合物、ＦＲ２７９９１２記載の化合物、ＦＲ２７８９０７９記載の化合物、ＦＲ２７８９０７８記載、ＷＯ０１／８９５８９記載の化合物、ＷＯ０１／９５８８９記載の化合物、ＷＯ０１／９８２８９記載の化合物、ＷＯ０２／１９３８３記載の化合物、ＷＯ０２／２６７０２記載の化合物、ＷＯ０２／２８３４６記載の化合物、ＷＯ０１／８７２９７記載の化合物、ＷＯ０２／３６５９０記載の化合物、ＷＯ０２／４２２６９記載の化合物、ＷＯ０２／４２２４８記載の化合物、ＷＯ０２／４７６９１記載の化合物、ＷＯ０２／５８６３６記載の化合物、ＷＯ０２／６０４４７記載の化合物、ＷＯ０２／６５９９７記載の化合物、ＷＯ０２／５３５４３記載の化合物、ＷＯ０２／７２５６２記載の化合物、ＷＯ０２／６２７５０記載の化合物、ＷＯ０２／８０９０３記載の化合物、ＷＯ０２／８５８６６記載の化合物等が挙げられる。
【０１７２】
好ましくは、末梢細胞型カンナビノイドレセプターに選択的に作用する調節物質であり、特開２０００−２５６３２３（ＷＯ００／４０５６２）記載の化合物、ＷＯ０２／１０１３５記載の化合物、ＳＲ１４４５２８、ＡＭ６３０、ＡＭ１２２１等のＷＯ０１／２８５５７記載の化合物、ＡＭ１７０３等のＷＯ０１／２８４９７記載の化合物、ＡＭ１７１０等のＷＯ０１／２８３２９記載の化合物、ＨＵ−３０８等のＷＯ０１／３２１６９記載の化合物、ＪＷＨ−０５１、Ｌ−７５９６３３、Ｌ−７５９６５６、Ｌ−７６８２４２、ＷＯ０１／７４７６３記載の化合物、ＷＯ０１／３２６２９記載の化合物、ＷＯ０１／２９００７記載の化合物、ＷＯ０１／１９８０７記載の化合物、ＷＯ０１／４０８３記載の化合物、特表２００２−５３９２４６（ＷＯ００／５６３０３）記載の化合物、特表２００２−５２３３９６（ＷＯ００／１０９６８）記載の化合物、特表２００２−５２３３９５（ＷＯ００／１０９６７）記載の化合物、ＷＯ９９／５７１０７記載の化合物、ＷＯ９９／２４９９記載の化合物、特表２００１−５１６３６１（ＷＯ９８／４１５１９）記載の化合物、特表２００１−５１５４７０号（ＵＳ６２６２１１２号）記載の化合物、特表２００１−５０８７９９（ＷＯ９８／３１２２７）記載の化合物、ＷＯ９７／２９０７９記載の化合物、特表２０００−５０２０８０（ＷＯ９７／２１６８２）記載の化合物、特表平１１−５０７９３７（ＷＯ９７／８６０）記載の化合物、特表１０−５０８８７０（ＷＯ９６／２５３９７）記載の化合物、特表１１−５０１６１５（ＷＯ９６／１８６００）記載の化合物、特表１１−５００４１１（ＷＯ９６／１８３９１）記載の化合物、ＵＳ５６０５９０６記載の化合物、ＷＯ０１／５８８６９記載の化合物、ＷＯ０１／９６３３０記載の化合物、ＷＯ０２／１０１３５記載の化合物、ＷＯ０２／４２２６９記載の化合物、ＷＯ０２／５８６３６記載の化合物、ＷＯ０２／６０４４７記載の化合物、ＷＯ０２／５３５４３記載の化合物、ＷＯ０２／７２５６２記載の化合物、ＷＯ０２／６２７５０記載の化合物、ＷＯ０２／８５８６６記載の化合物であり、更に好ましくは、特開２０００−２５６３２３（ＷＯ００／４０５６２）記載の化合物、ＳＲ１４４５２８、ＡＭ６３０、ＡＭ１２２１等のＷＯ０１／２８５５７記載の化合物、ＡＭ１７０３等のＷＯ０１／２８４９７記載の化合物、ＡＭ１７１０等のＷＯ０１／２８３２９記載の化合物、ＨＵ−３０８等のＷＯ０１／３２１６９記載の化合物、ＪＷＨ−０５１、Ｌ−７５９６３３、Ｌ−７５９６５６、Ｌ−７６８２４２、ＷＯ０１／３２６２９記載の化合物、ＷＯ０１／２９００７記載の化合物、ＷＯ９８／４１５１９記載の化合物であり、特に好ましくは２−オキソキノリン化合物としてＮ−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イルメチル）−７−メトキシ−２−オキソ−８−ペンチルオキシ−１，２−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物Ａ）を挙げることができる。更に好ましくは、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ、化合物Ｉ、ＳＲ１４４５２８、ＡＭ６３０であり、更に好ましくは化合物Ａ及びＳＲ１４４５２８であり、最も好ましくは化合物Ａである。
【０１７３】
「アレルギー疾患」としては、アナフィラキシー、消化管アレルギー、アレルギー性胃腸症、アレルギー性皮膚炎、うるしかぶれ・化粧品かぶれ等の皮膚炎、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー性喘息、アトピー性喘息、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、薬剤アレルギー、血清病、結核病変、臓器移植後の拒絶反応、結核病変、臓器移植後の拒絶反応等が挙げられるがこれに限定されず、アレルギーに関係する疾患であれば、何れにも適用可能である。より好ましくは、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー性喘息、アトピー性喘息、アレルギー性鼻炎及びアレルギー性結膜炎を挙げることができる。特に好ましくは、皮膚若しくは呼吸器に関するアレルギー疾患を挙げることができ、より具体的な適応症としては、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息及びアトピー性喘息である。
【０１７４】
「非即時型アレルギー疾患」としては、遅発型アレルギー反応、及び／又は遅延型アレルギー反応を伴う疾患であり、即時型アレルギー反応を伴ってもよい。例えば、遅延型アレルギー反応のみに係わる疾患、遅発型及び遅延型アレルギー反応に係わる疾患、即時型、遅発型及び遅延型アレルギー反応に係わる疾患等が挙げられる。
【０１７５】
ここで、即時型アレルギー反応とは、抗原が侵入し３０分以内、遅くとも２時間以内に引き起こされるアレルギー反応である。
【０１７６】
また、遅発型アレルギー反応とは、数時間から数日後、より具体的には２時間より後から２，３日後に引き起こされるアレルギー反応である。
【０１７７】
また、遅延型アレルギー反応とは、数日後からそれ以降に引き起こされるアレルギー反応である。
【０１７８】
また、三相性皮膚炎モデルにおいて、即時相、遅発相とは、時間的経過の点から見ると、それぞれ、即時型アレルギー反応、遅発型アレルギー反応の発症時間に相応し、後遅発相とは、４日後以降、好ましくは６日から８日後のアレルギー反応に相応する。
【０１７９】
非即時型アレルギー疾患として、具体的には、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アトピー性喘息の他、溶血性貧血、血小板減少性紫斑病、重症筋無力症、グッドパスチェア症候群、溶連菌による急性糸球体腎炎、関節リウマチや膠原病、血清病、ウイルス性肝炎、アレルギー性肺胞炎、ツベルクリン反応、結核病変、臓器移植後の拒絶反応、うるしかぶれ、化粧品かぶれ等の皮膚炎、遅発型喘息などが挙げられ、遅発型及び／又は遅延型アレルギー反応の伴ったアナフィラキシー、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、花粉症、蕁麻疹、アレルギー性胃腸症、掻痒が挙げられる。特に、治療及び予防が期待される疾患としては、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性喘息、アトピー性喘息が挙げられる。
【０１８０】
「アレルギー性皮膚炎」とは、アレルギー反応に関係する皮膚炎を示し、例えばアトピー性皮膚炎を含む。創傷による皮膚炎の様な非アレルギー性皮膚炎と区別される。「アトピー性皮膚炎治療薬」としては、アトピー性皮膚炎のアレルギー反応に作用することにより治療効果を上げるものが好ましい。また、そのアレルギー反応の遅発型反応、遅延型反応、若しくは、遅発型反応かつ遅延型反応に効果を有することが好ましく、更に好ましくは、即時型反応に加え、遅発型反応、遅延型反応、若しくは、遅発型反応かつ遅延型反応に効果を有する治療剤である。
【０１８１】
「アレルギー性喘息」とは、喘息症状のなかでのアレルギー的側面を示し、例えば混合型喘息、アトピー性喘息を含む。アスピリン喘息等の非アレルギー性喘息とは区別される。「喘息治療薬」としては、喘息のアレルギー反応に作用することにより治療効果を上げるものが好ましい。また、慢性気管支炎又は気道過敏症に対し効果を有することが好ましく、更に好ましくは慢性気管支炎かつ気道過敏症に効果を有する治療剤である。また、そのアレルギー反応の遅発型反応、遅延型反応、若しくは、遅発型反応かつ遅延型反応に効果を有することが好ましく、更に好ましくは、即時型反応に加え、遅発型反応、遅延型反応、若しくは、遅発型反応かつ遅延型反応に効果を有する治療剤である。
【０１８２】
「２−ＡＧ  及び／又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患」とは、２−ＡＧ  及び／又は２−ＡＧ−Ｅが疾患の原因であるものや、症状の増悪に関与するものであり、例えば、上記の非即時型アレルギー疾患が挙げられる。その他、血液癌、敗血症、循環器疾患等が挙げられる。
【０１８３】
「鎮痒作用」とは、痒みを低減させる或いは痒みを取り除くことにより、掻痒反応を減少させ、痒みからの精神的ストレスを低減させる効果をいう。中枢作用ではなく、例えば抗ヒスタミン作用、抗サブスタンスＰ作用の様に、痛みの原因を取り除くことが好ましい。また、上記のアレルギー疾患、特にアトピー性皮膚炎に対し、鎮痒作用を有することが好ましい。
【０１８４】
本発明の「カンノビノイドレセプター調節物質」、「カンノビノイドレセプターインバースアゴニスト」、「カンノビノイドレセプターアンタゴニスト」は、ステロイド剤、免疫抑制剤の様な「副作用となる免疫抑制作用」を持たない安全な薬剤となり得る。「副作用となる免疫抑制作用」としては、腎臓・脾臓の機能障害による、高カリウム血症、白血球・血小板減少等が挙げられ、例えば、脾臓重量の減少がその指標となるが、本発明の「カンノビノイドレセプターインバースアゴニスト」には、これら副作用は見られなかった。
【０１８５】
著しい副作用が認められないことで「経口投与が可能」な薬剤であれば、軟膏剤、注射剤等に比べ取扱いが容易となる。
【０１８６】
ここで、アレルギー疾患の「治療」とは、アレルギー反応を抑制すること或いはアレルギー疾患の症状を改善することを意味し、起こり得るアレルギー反応或いはアレルギー疾患を予防すること、その増悪を予防することも含む。
【０１８７】
「製薬上許容されるその塩」とは、化合物と無毒の塩を形成するものであればいかなる塩でもよく、例えば塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸；又はシュウ酸、マロン酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、アスコルビン酸、メチルスルホン酸、ベンジルスルホン酸等の有機酸；又は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化アンモニウム等の無機塩基；又はメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、グアニジン、コリン、シンコニン等の有機塩基；又はリジン、アルギニン、アラニン等のアミノ酸と反応させることにより得ることができる。また、化合物の含水物或るいは水和物及び溶媒和物も包含される。
【０１８８】
また本発明は、非即時型アレルギー疾患治療剤の候補化合物を同定する方法であって、以下の工程（ａ）から（ｃ）を含む方法を提供する。
（ａ）カンナビノイドレセプター、内因性カンナビノイド、及び、被験化合物を接触させる工程、
（ｂ）カンナビノイドレセプターと内因性カンナビノイドとの結合能を測定する工程、
（ｃ）被験化合物の非存在下と比較し、工程（ｂ）で測定した結合能を低下させる化合物を選択する工程。
【０１８９】
上記工程（ｂ）の結合能の測定は、当業者においては、一般的な方法、例えば、Ｂｉｎｄｉｎｇアッセイを行なう、ｃＡＭＰ濃度を測定する等の方法によって適宜実施することができる。より具体的には、後述の実施例に記載の方法によって、前記結合能を測定することができる。
【０１９０】
また被検化合物としては、特に制限はなく、例えば、種々の天然・人工化合物やタンパク質あるいはファージ・ディスプレイ法などを応用して作成されたランダム・ペプチド群を用いることができる。また、微生物の培養上清や、植物、海洋生物由来の天然成分なども本発明の方法に供することができる。その他、生体組織抽出物、細胞抽出液、遺伝子ライブラリーの発現産物などが挙げられるが、これらに特に制限されない。
【０１９１】
上記方法におけるカンナビノイドレセプターは好ましくはＣＢ２であり、内因性カンナビノイドは好ましくは２−ＡＧ又は２−ＡＧ−Ｅであるが、これらに特に制限されない。
【０１９２】
さらに本発明は、非即時型アレルギー疾患治療剤の候補化合物を同定する方法であって、以下の工程（ａ）から（ｃ）を含む方法を提供する。
（ａ）  ＣＢ２に選択的に結合する候補化合物を選定する工程、
（ｂ）  工程（ａ）で選定された化合物から、ＣＢ２インバースアゴニストである化合物を選定する工程、
（ｃ）  工程（ｂ）で選定された化合物の抗アレルギー作用を測定する工程。
【０１９３】
上記工程（ｃ）において、化合物の抗アレルギー作用は、当業者においては、アレルギーの種類に応じて、適宜測定することが可能である。
【０１９４】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【０１９５】
2005015422.tif 000026
１）、２）、３）及び４）を混合して、ゼラチンカプセルに充填する。
【０１９６】
2005015422.tif 000027
１）、２）、３）の全量及び３０ｇの４）を水で連合し、真空乾燥後、製粒を行なう。この製粒粉末に１４ｇの４）及び５）を混同し、打錠機で打錠する。１錠あたり化合物Ａを３０ｍｇ含有する錠剤１０００錠を得る。
【０１９７】
本発明における化合物を医薬組成物として使用する場合には、化合物自体を直接患者に投与する以外に、公知の製剤学的方法により製剤化して投与を行うことも可能である。例えば必要に応じて上記製剤例１（カプセル剤）および２（錠剤）以外に、マイクロカプセル剤、軟・硬カプセル剤、丸剤、液剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、フィルムコーティング剤、ペレット剤、トローチ剤、舌下剤、咀嚼剤、バッカル剤、ペースト剤、シロップ剤、懸濁剤、エリキシル剤、乳剤、点眼剤、点耳剤、塗布剤、軟膏剤、硬膏剤、パップ剤、ＴＴＳ剤、ローション剤、吸引剤、エアゾール剤として経口的あるいは非経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁・乳濁状溶液を注射剤の形で非経口的に使用できる。非経口投与のためのその他の形態としては、一つまたはそれ以上の活性物質を含み、常法により処方される外用液剤、腸溶内投与のための坐剤、ペッサリー、乳剤性発泡剤などが含まれる。また、例えば薬理学上許容される担体もしくは媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、溶剤、基剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、芳香剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤、希釈剤、等張化剤、無痛化剤、増量剤、崩壊剤、緩衝剤、コーティング剤、滑沢剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することが考えられる。
【０１９８】
錠剤、カプセル剤に混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガントガム、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤が用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記の材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
【０１９９】
注射用の水溶液としては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０と併用してもよい。
【０２００】
油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
【０２０１】
投与量は、疾患の種類及び程度、投与する化合物並びに投与経路、患者の年齢、性別、体重等により変わり得る。経口投与の場合、通常、成人１日当たり化合物Ａ  ０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜３００ｍｇを、１〜数回にわけて投与する。
【０２０２】
なお、本発明化合物は動物用医薬としても適応することができる。
【０２０３】
薬理試験
１）アレルギー性皮膚炎モデル動物を用いた治療効果
アトピー性皮膚炎はＩ型及びＩＶ型アレルギー反応が複雑に絡み合ったものと考えられており、Ｉ型及びＩＶ型が単独若しくは複合的に発症するモデルが有用である。
【０２０４】
１．マウスＤＮＦＢ誘発アレルギー性皮膚炎に対する効果
本モデルは、マウスを抗原によって感作後、誘発を繰り返すことにより、ＩｇＥ抗体価の上昇を伴う接触性皮膚炎、すなわちアトピー性皮膚炎類似の炎症を誘導させたモデルである（Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １００（６Ｐｔ２），  ３９−４４，  Ｄｅｃ．  １９９７）。本モデルは、Ｔ細胞による遅延型アレルギー反応及び肥満細胞による遅発型アレルギー反応により炎症を起こすと考えられる。また、本試験において同時に、試験化合物の全身性免疫抑制作用を検討するため脾臓重量を測定した。
【０２０５】
試験方法
・試験化合物の調製
溶媒の調製：メチルセルロース（以下ＭＣ）を蒸留水で溶解し、０．５％（ｗ／ｖ）ＭＣ水溶液とした。
試験化合物の調製：特開２０００−２５６３２３号の実施例３−５に従い化合物を合成した。所定量の化合物Ａを上記溶媒により懸濁し、１ｍｇ／ｍＬ懸濁液とした。さらに希釈により、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．０１  ｍｇ／ｍＬ懸濁液に調製した。また、陽性対照薬としてプレドニゾロン（Ｓｉｇｍａ）を同様に０．５ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬに調製した。プレドニゾロンはアトピー性皮膚炎の治療に有効とされる副腎皮質ステロイド剤のひとつである。
【０２０６】
・抗原の調製及び塗布
抗原の調製：ＤＮＦＢ（２，４−ジニトロフルオロベンゼン）をアセトンとオリーブオイルの混液（３：１、ｖ／ｖ）にて、０．１５％（ｗ／ｖ）になるように用時調製した。
抗原塗布：９週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃ系マウス（日本ＳＬＣ株式会社）の両耳介の表裏に、上記抗原を２５μＬずつ、１週間に１回の割合で計５回塗布した。
【０２０７】
・試験化合物の投与
３回目に抗原塗布した翌日より５回目に抗原塗布した翌日までの間、１日に１回の割合で合計１５回上記試験化合物を１０ｍＬ／ｋｇ投与した。なお、抗原塗布日には抗原塗布の１時間前に、抗原塗布翌日には抗原塗布の２３時間後に投与した。
【０２０８】
・耳介腫脹の測定
抗原塗布前及び２４時間後に、ダイヤルシックネスゲージ（株式会社ミツトヨ）を用いて耳介の厚みを測定し、その差を腫脹の指標とした。４回目抗原塗布及び５回目抗原塗布の際の測定結果を陽性対照の結果と合わせ図１及び図２に示す。
【０２０９】
・脾臓重量の測定
５回目抗原塗布２４時間後に、エーテル麻酔し放血させたマウスより脾臓を摘出し、湿重量を測定した。測定結果を図３に示す。
【０２１０】
・結果
永井らは本モデルにおいて、５回目の抗原塗布後には、遅発型反応（Ｉ型アレルギー反応）及び遅延型反応（ＩＶ型アレルギー反応）が複合した耳介の腫脹が発現することを報告している。
化合物Ａは、本アレルギー性皮膚炎モデルにおいて、耳介の腫脹を有意に抑制した。また、３回目の抗原塗布後の投与開始において、その効果を示した。その際プレドニゾロンに認められる脾臓重量の低下は示さなかった。
【０２１１】
２．マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応に対する効果
本モデルは、マウスをＩｇＥで受動感作した後、抗原による誘発を繰り返すことにより、三相性（即時相・遅発相・後遅発相）の皮膚炎を惹起させたモデルである（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ６０（２），  ９７−１０４，  Ｆｅｂ．  ２０００）。それら反応は、肥満細胞及びＴ細胞の関与、炎症局所での好酸球の浸潤が確認されていることから、アトピー性皮膚炎症状の一部を反映した反応と考えられる。
【０２１２】
試験方法
・試験化合物の調製
溶媒の調製：ＭＣを蒸留水で溶解し、０．５％ＭＣ水溶液とした。
試験化合物の調製：所定量の化合物Ａを上記溶媒により懸濁し、１ｍｇ／ｍＬ懸濁液とした。
また、陽性対照薬として上記と同様にフマル酸ケトチフェン（Ｓｉｇｍａ）１ｍｇ／ｍＬ及びプランルカスト水和物（商標名オノン錠（小野薬品工業）より抽出。）３ｍｇ／ｍＬを調製した。プランルカスト水和物はロイコトリエン阻害剤として、喘息治療剤及びアレルギー性鼻炎治療剤として用いられており、フマル酸ケトチフェンはケミカルメディエーター遊離抑制剤として、喘息、アレルギー性鼻炎、湿疹、皮膚炎、蕁麻疹、皮膚掻痒症、アレルギー性結膜炎に用いられている。
【０２１３】
・受動感作
ａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥ（ＤＮＰに対する抗体、ヤマサ醤油）を生理食塩液で１５μｇ／ｍＬに調製し、９週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃ系マウス（日本ＳＬＣ株式会社）に０．２ｍＬ尾静脈内より投与した。
【０２１４】
・抗原の調製及び塗布
抗原の調製：ＤＮＦＢ（２，４−ジニトロフルオロベンゼン）をアセトンとオリーブオイルの混液（３：１、ｖ／ｖ）にて、０．１５％（ｗ／ｖ）になるように用時調製した。
抗原塗布：上記ａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥの投与より２４時間後に、両耳介の表裏に、上記抗原を２５μＬずつ塗布した。
【０２１５】
・試験化合物の投与
抗原塗布日より抗原塗布後８日目まで計９回、１日に１回の割合で１０ｍｌ／ｋｇを経口投与した。また他のマウスには抗原塗布１日後より抗原塗布後８日目まで計８、１日に１回の割合で１０ｍｌ／ｋｇを経口投与した。他のマウスにも同様に、抗原塗布２、４、６日後より抗原塗布後８日目までそれぞれ計７、５、３回、１日に１回の割合で１０ｍｌ／ｋｇを経口投与した。抗原塗布日より試験化合物の投与開始までの期間は、試験化合物に代えて溶媒のみ１０ｍｌ／ｋｇを１日に１回の割合で経口投与した。なお、抗原塗布日には抗原塗布の１時間前に、抗原塗布後８日目には耳介の厚さを測定する１時間前に投与した。
【０２１６】
・耳介腫脹の測定
抗原塗布前、１時間後、２４時間後及び８日後に、ダイヤルシックネスゲージ（株式会社ミツトヨ）を用いて耳介の厚みを測定し、抗原塗布前の値と各時間の値との差を腫脹の指標とした。それぞれの測定結果を図４乃至図６に示す。また、抗原塗布８日後の腫脹抑制効果に対する塗布開始時期の影響を図７に示す。
【０２１７】
・結果
化合物Ａは、本ＩｇＥ依存性皮膚炎モデルにおける即時相（塗布１時間後）、遅発相（塗布２４時間後）、後遅発相（塗布８日後）に対して、いずれも有意に耳介の腫脹を抑制した。また、後遅発相における化合物Ａの効果は、遅発相が惹起した後より投薬を開始した場合においても認められた。
【０２１８】
２）喘息モデルを用いた治療効果
モルモットにおける抗原誘発即時型喘息、遅発型喘息、気道過敏性に対する効果
試験方法
・試験化合物の調製
所定量の化合物Ａを、０．５％ＭＣ水溶液に懸濁し、６０ｍｇ／ｍＬとした。試験化合物はさらに希釈し、２０、６、２ｍｇ／ｍＬに用時調製した。同様に、陽性対照として、プランルカスト水和物（商標名オノン錠（小野薬品工業）より抽出。）及びプレドニゾロン（Ｓｉｇｍａ）を６ｍｇ／ｍＬ調製した。
【０２１９】
・能動感作及び抗原誘発
感作：超音波ネブライザー（ＮＥ−Ｕ１２、オムロン社）を用い、６週齢雄性Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモット（九動（株））に１％ＯＶＡ（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ、Ｓｉｇｍａ）含有生理食塩液を１日に１０分間、連続８日間吸入させた。
抗原誘発：最終感作の１週間後、同様に２％ＯＶＡを５分間吸入させた。ＯＶＡ誘発２４時間前及び１時間前にｍｅｔｙｒａｐｏｎｅ含有生理食塩液（Ａｌｄｒｉｃｈ、１０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内に、ＯＶＡ誘発３０分前にｐｙｒｉｌａｍｉｎｅ含有生理食塩液（Ｓｉｇｍａ、１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に投与した。
【０２２０】
・試験化合物の投与
感作開始から抗原誘発まで１５日間、１日１回５ｍＬ／ｋｇ経口投与した。感作の８日間は、感作１時間前に、抗原誘発の日は誘発１時間前に投与した。溶媒対照として、ＯＶＡ誘発及び生理食塩液誘発への投与も同様に行なった。
陽性対照としてプランルカスト水和物は誘発１時間前に、プレドニゾロンは誘発１６時間前及び２時間前に投与した。なお、動物は経口投与１６〜１８時間前から絶食状態とした。
【０２２１】
・気道抵抗性の測定
総合呼吸機能解析システム（Ｐｕｌｍｏｓ−Ｉ，Ｍ．Ｉ．Ｐ．Ｓ．社）を用い，ｐｒｅ値を測定した後、ＯＶＡ誘発１分後、２、４、５、６、７および８時間後、更に２２〜２６時間後に１回、それぞれ１００呼吸分の気道抵抗（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｉｒｗａｙ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ、以下ｓＲａｗ）を測定し、その平均値を各測定時間のｓＲａｗとした。ｓＲａｗの増加率の計算式は以下に示す。
ｓＲａｗの増加率（％）＝（（各測定時間のｓＲａｗ  −  誘発前のｓＲａｗ）／（誘発前のｓＲａｗ））×  １００
ＯＶＡ誘発１分後のｓＲａｗの増加率を図８に、誘発４乃至８時間後におけるｓＲａｗの増加率（曲線下面積：ＡＵＣ４−８ｈｒ）を図９に示す。
【０２２２】
・気道反応性の測定
抗原誘発２２〜２６時間後、生理食塩液及びアセチルコリン（以下ＡＣｈ）の０．０６２５、０．１２５、０．２５、０．５、１及び２ｍｇ／ｍＬ溶液を順次各１分間ずつ吸入させ、ｓＲａｗがｂａｓｅｌｉｎｅ  ｓＲａｗ  （生理食塩液吸入後のｓＲａｗ）の２倍以上になるまで続けた。ＡＣｈ濃度とｓＲａｗの濃度−抵抗曲線から、ｓＲａｗが  ｂａｓｅｌｉｎｅ  ｓＲａｗから１００％上昇するのに必要なＡＣｈの濃度ＰＣ１００ＡＣｈを求めた。測定結果を図１０に示す。
【０２２３】
・結果
本モデルにおいて、化合物Ａは、抗原誘発即時型喘息反応（抗原誘発直後のｓＲａｗ）、遅発型喘息反応（抗原誘発４から８時間後のｓＲａｗ）、気道過敏性の何れをも抑制した。陽性対照のプランルカスト水和物及びプレドニゾロンもまた、抗原誘発即時型喘息、遅発型喘息、気道過敏性の何れをも抑制した。
【０２２４】
３）ロイコトリエン産生に対する作用
ロイコトリエン（以下ＬＴｓ）は好塩基球および肥満細胞等より産生し、アレルギー疾患、特にアレルギー性気管支喘息において増悪に関与していることが知られている。
【０２２５】
１．ヒト好塩基球からのロイコトリエン産生に対する作用
・試験化合物の調製
所定量の化合物ＡをＤＭＳＯ（Ｄｉｍｅｔｈｙｌ  Ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）で０．０１ｍＭとした後、タイロード液（Ｓｉｇｍａ）にて希釈し、１００μＭから０．１μＭまで調製した（１％ＤＭＳＯ溶液）。細胞に作用するときは更に希釈され、１０μＭから０．０１μＭ（０．１％ＤＭＳＯ溶液）となった。
【０２２６】
・好塩基球の高純度化
ヒト血液より３．８％クエン酸ナトリウム液を入れたシリンジを用いて１００ｍＬの血液を得た。
１０×ＨＢＳＳ（−）（１０倍  Ｈａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、ＧＩＢＣＯ）、ｐｅｒｃｏｌｌ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）、ミリＱ水にて調製した１．０７０ｇ／ｍＬ、１．０７９ｇ／ｍＬ、１．０８８ｇ／ｍＬ  Ｐｒｅｃｏｌｌ−ＨＢＳＳ（−）を重層し、上記血液を重層した。３００×ｇで２５分間遠心し、１．０７０ｇ／ｍＬ  Ｐｅｒｃｏｌｌ−ＨＢＳＳ（−）層と１．０７９ｇ／ｍＬ  Ｐｅｒｃｏｌｌ−ＨＢＳＳ（−）層の間に存在した細胞画分を回収した。回収した細胞懸濁液に対して３倍量のＨＢＳＳ（−）を添加し、３００×ｇで４℃にて７分間遠心した。遠心後、上清を除去し、細胞をＨＢＳＳ（−）で１回洗浄した。以上より得られた細胞群を好塩基球と見なした。
【０２２７】
・プレインキュベーション
上記好塩基球をタイロード液で２．５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、１０μｇ／ｍＬ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＩＬ−３（Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｔｅｃｈｎｅ）にて最終濃度１００ｎｇ／ｍＬとなるように添加した。直ちに丸底９６穴プレートに８０μＬ／ｗｅｌｌ（２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）播種し、３７℃、５％ＣＯ２で３０分間インキュベートした。
【０２２８】
・試験化合物及の添加
プレインキュベーションの後、上記試験化合物１０μＬ／ｗｅｌｌを添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１０分間インキュベートした。溶媒対照群には１％ＤＭＳＯを含むタイロード液を１０μＬ／ｗｅｌｌ加えた。
【０２２９】
・抗ヒトＩｇＥ抗体の添加
タイロード液で１、３、１０、３０、１００μｇ／ｍＬに希釈した抗ヒトＩｇＥ抗体を１０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃、５％  ＣＯ２で３０分間インキュベートした（最終濃度はそれぞれ０．１、０．３、１、３、１０μｇ／ｍＬ）。
【０２３０】
・ＬＴｓの定量
刺激から３０分後、３０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ、４℃で遠心し、上清を８０μＬ／ｗｅｌｌ回収した。上清のＬＴｓ  量をＬＴｓ  ＥＩＡ  Ｋｉｔ  （Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｐｈａｒｍａｃｉａ）のメーカープロトコールに従って測定した。サンプルはタイロード液で３倍および２４倍希釈し測定した。測定結果を図１１に示す。
【０２３１】
・結果
本試験において、化合物Ａは、ヒト好塩基球からのロイコトリエン（Ｃ４／Ｄ４／Ｅ４）産生に対して抑制作用を示した。
【０２３２】
２．ラット肥満細胞株からのロイコトリエン産生に対する作用
・試験化合物の調製
所定量の化合物ＡをＤＭＳＯにて希釈し、３、１、０．３、０．１ｍＭに調節した（１００％ＤＭＳＯ溶液）。さらに、Ｅ−ＭＥＭ（ＥＡＧＬＥ−ＭＥＭ、日研生物研究所）培地にて希釈し、それぞれ１００から１μＭに調節した（１％ＤＭＳＯ溶液）。細胞に作用するときは更に希釈され、１０μＭから０．１μＭ（０．１％ＤＭＳＯ溶液）となった。
【０２３３】
・ＰＩＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒの調製
１ｍＭ  ＰＩＰＥＳ（同仁化学研究所）、１４ｍＭ  ＮａＣｌ、０．５ｍＭ  ＫＣｌ、０．０６ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．５５ｍＭ  Ｇｌｕｃｏｓｅ、０．１％ＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ、Ｓｉｇｍａ）を精製水で調製し、ＮａＯＨでｐＨ  ７．４とした。
【０２３４】
・ａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥの調製
１ｍｇ／ｍＬ  ａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥ（モノクローナルマウス抗ＤＮＰ−ＩｇＥ、Ｙａｍａｓａ）を上記ＰＩＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒで１０００倍希釈することにより１μｇ／ｍＬ溶液に調製した。
【０２３５】
・ＤＮＰ−ＢＳＡの調製
１０ｍｇ／ｍＬ  ＤＮＰ−ＢＳＡを上記ＰＩＰＥＳ  Ｂｕｆｆｅｒで１０μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。
【０２３６】
・ラット肥満細胞株の培養方法
培地：非働化済１０％ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｃａｌｆ  Ｓｅｒｕｍ、Ｍｏｒｇａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ  Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，  １００μｇ／ｍＬ  Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎとして、ＧＩＢＣＯ）を含むＥ−ＭＥＭ培地。
【０２３７】
・細胞の調製
ラット肥満細胞株ＲＢＬ−２Ｈ３（ヒューマンサイエンス  １ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬ／ｔｕｂｅ）を上記培地で遠心洗浄後、同培地で再懸濁し、７５ｃｍ２フラスコ（Ｆａｌｃｏｎ  ３５３１３６）で３日間培養した。継代後、さらに２２５ｃｍ２フラスコ（ＣＯＲＮＩＮＧ  ４３１０８２）で２日間培養した。セミコンフルエント（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ  ６０−７０％）な状態を確認し、ＨＢＳＳでリンス後、Ｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡではがした。細胞を回収後、上記培地で遠心洗浄し、同培地で再懸濁した。２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、２５０μＬ／ｗｅｌｌで９６ｗｅｌｌ  ｆｌａｔ  ｂｏｔｔｏｍ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅ（Ｆａｌｃｏｎ  ３０７２）に播種し、５％ＣＯ２、３７℃で２０時間培養した。
【０２３８】
・抗原感作
ｐｌａｔｅの培地を除きＨＢＳＳで洗浄後、上記培地に溶解した  １５０ｎｇ／ｍＬのａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥを１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃で３０分間インキュベートし、細胞を感作した。
【０２３９】
・試験化合物の添加
ｐｌａｔｅの培地を除きＨＢＳＳで洗浄後、上記培地を８０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、さらに、上記培地で１、３、１０、３０、１００μＭに希釈した化合物Ａを１０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃で１０分間インキュベートした（最終濃度はそれぞれ  ０．１、０．３、１、３、１０μＭ、最終ＤＭＳＯ濃度０．１％）。
【０２４０】
・抗原刺激
上記培地で１５０、５００、１５００、５０００ｎｇ／ｍＬに希釈したＤＮＰ−ＢＳＡを１０μＬ／ｗｅｌｌ添加し（最終濃度はそれぞれ  １５、５０、１５０、５００ｎｇ／ｍＬ）、３７℃で３０分間インキュベートした。
【０２４１】
・ＬＴｓの定量
抗原刺激から３０分後、上清を２０μＬ／ｗｅｌｌ回収し、ＬＴｓ  量をＬＴｓ  ＥＩＡ  Ｋｉｔ  （Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）のメーカープロトコールに従って測定した。測定結果を図１２に示す。
【０２４２】
・結果
本試験において、化合物Ａは、ラット肥満細胞株からのロイコトリエン（Ｃ４／Ｄ４／Ｅ４）産生に対して抑制作用を示した。
【０２４３】
４）カンナビノイドレセプターに対するＢｉｎｄｉｎｇ  Ａｓｓａｙ
化合物Ａは、末梢細胞型カンナビノイドレセプター選択的な調節物質（ＣＢ１に対するＩＣ５０が３４３６ｎＭ、ＣＢ２に対するＩＣ５０が０．０８７ｎＭ）であることが公知である（特開２０００−２５６３２３号記載の薬理試験結果、表３３、実施例番号３−５）。
【０２４４】
３．マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応に対するＣＢ２インバースアゴニストおよびＣＢ２アゴニストの作用
マウスをＩｇＥで受動感作した後抗原により誘発される三相性皮膚炎モデルを用いて、ＣＢ２インバースアゴニストおよびＣＢ２アゴニストの作用を検討した。
【０２４５】
試験方法
・動物：８〜１０週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃ系マウス（日本ＳＬＣ株式会社）を用いた。
【０２４６】
・試験化合物の調製
溶媒の調製：ＭＣを蒸留水で溶解し、０．５％ＭＣ水溶液とした。
試験化合物の調製：所定量の化合物Ａを上記溶媒により懸濁し、０．０１，  ０．１および１  ｍｇ／ｍＬ懸濁液を調整した。
また、陽性対照薬としてプレドニゾロン（Ｓｉｇｍａ）の０．５ｍｇ／ｍＬを、比較対照薬としてＣＢ２特異的なアゴニストであるＨＵ−３０８の１，  ５  ｍｇ／ｍＬおよびＣＢ２特異的なインバースアゴニストであるＳＲ１４４５２８の０．０１，  ０．１および１  ｍｇ／ｍＬを上記と同様ＭＣ懸濁液として調製した。
【０２４７】
・受動感作
Ａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥ（ＤＮＰに対する抗体、ヤマサ醤油）を生理食塩液で１５μｇ／ｍＬに調製し、マウスにその０．２ｍＬを尾静脈内より投与した。
【０２４８】
・抗原の調製及び塗布
抗原の調製：ＤＮＦＢ（２，４−ジニトロフルオロベンゼン）をアセトンとオリーブオイルの混液（３：１、ｖ／ｖ）にて、０．１５％（ｗ／ｖ）になるように用時調製した。
抗原塗布：上記ａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥの投与より２４時間後に、両耳介の表裏に、上記抗原を２５μＬずつ塗布した。
【０２４９】
・試験化合物の投与
抗原塗布日より抗原塗布後８日目まで計９回、１日に１回１０  ｍＬ／ｋｇで経口投与した。なお、抗原塗布日には抗原塗布の１時間前に、抗原塗布後８日目には耳介の厚さを測定する１時間前に投与した。
【０２５０】
・耳介腫脹の測定
抗原塗布前及び８日後に、ダイヤルシックネスゲージ（株式会社ミツトヨ）を用いて耳介の厚みを測定し、抗原塗布前の値と各時間の値との差を腫脹の指標とした。測定結果を図１３に示す。
【０２５１】
・臓器重量の測定
耳介腫脹を測定した後脾臓と胸腺を取り出し、それらの湿重量を測定した。それぞれの測定結果を図１４および図１５に示す。
【０２５２】
・結果
化合物Ａは、後遅発相（塗布８日後）において、０．１，  １，  １０  ｍｇ／ｋｇのいずれの用量とも有意に耳介の腫脹を抑制した。また、ＣＢ２インバースアゴニストであるＳＲ１４４５２８も０．１  ｍｇ／ｋｇから有意な効果を示した。それに対して、ＣＢ２アゴニストであるＨＵ−３０８は１０および５０  ｍｇ／ｋｇのいずれにおいて薬効は認められなかった。脾臓および胸腺の重量を測定した結果は、プレドニゾロンが両臓器重量を有意に抑制したのに対し、化合物ＡおよびＳＲ１４４５２８では明らかな変化は認められなかった。ＨＵ−３０８を投与した動物では脾臓重量の有意な減少が認められた。
【０２５３】
４．ＣＢ２アゴニストによって誘発される耳介腫脹と化合物Ａの作用
ＣＢ２インバースアゴニストがＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎モデルにおいて有効性を示したことから、内因性リガンド候補の２−アラキドノイルグリセロールの安定体である２−アラキドノイルグリセロールエーテル（２−ＡＧ−Ｅ）および特異的ＣＢ２アゴニストであるＨＵ−３０８が直接耳介腫脹を誘発するかどうかを検討し、アラキドン酸（ＡＡ）によって誘発される耳介腫脹と比較した。また、ＣＢ２アゴニストの耳介への影響に対する化合物Ａの作用についても検討した。
【０２５４】
試験方法
・動物：８〜１０週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃ系マウス（日本ＳＬＣ株式会社）を用いた。
【０２５５】
・試験物質の調製及び塗布
合成した２−ＡＧ−ＥおよびＨＵ−３０８は、それぞれ１，  １０  ％（ｗ／ｖ）および１０  ％（ｗ／ｖ）に、ＡＡ（Ｓｉｇｍａ）は１．２５  ％（ｗ／ｖ）になるようにアセトンにて用時調製し、左耳介の表裏に各々１０μＬずつ塗布した。
【０２５６】
・溶媒および化合物Ａの調製
溶媒の調製：ＭＣを蒸留水で溶解し、０．５％ＭＣ水溶液とした。
化合物Ａの調製：所定量の化合物Ａを上記溶媒により懸濁し、０．００１，  ０．０１，  ０．１および１  ｍｇ／ｍＬ懸濁液を調整した。
【０２５７】
・化合物Ａの投与
溶媒または化合物Ａを１０  ｍＬ／ｋｇで経口投与し、その１時間後に１０  ％（ｗ／ｖ）の２−ＡＧ−Ｅを左耳介の表裏に各々１０μＬずつ塗布した。
【０２５８】
・耳介腫脹の測定
試験物質の塗布前、塗布後１、２、３、６、９、２４時間後及び２、３、８日後に、ダイヤルシックネスゲージ（株式会社ミツトヨ）を用いて耳介の厚みを測定し、塗布前の値と各時間の値との差を腫脹の指標とした。化合物Ａの評価には、２−ＡＧ−Ｅ塗布後８日目までの耳介腫脹の経時変化から得られる曲線下面積を算出した値を用いた。それぞれの測定結果を図１６および図１７に示す。
【０２５９】
・結果
２−ＡＧ−Ｅを塗布することにより、２−ＡＧ−Ｅ濃度に依存した１時間から２時間をピークとする耳介の腫脹が認められ（即時相）、その後２４時間後の遅発相・後遅発相に相応する持続的な腫脹が認められた。ＨＵ−３０８も同様の持続的な耳介の腫脹を誘発した。一方、ＡＡは塗布１時間後をピークに１０％  ２−ＡＧ−Ｅと同程度の腫脹を示したが、２日後にはもとのレベルまで回復した。
１０％  ２−ＡＧ−Ｅ塗布による耳介の腫脹に対し、化合物Ａは投与量に依存して腫脹を抑制し、１および１０  ｍｇ／ｋｇで有意な効果を示した。
この結果よりＣＢアゴニストであるＨＵ−３０８、及び、内因性のＣＢアゴニストである２−ＡＧ−Ｅ（２−ＡＧのエーテル体であって、２−ＡＧと同様の作用と考えられる）は、動物モデルにおいて皮膚炎を引き起こした。かつ、ＣＢ結合能を示さないＡＡと比較して、その皮膚炎症状は持続的であり、遅発相及び後遅発相に相応すると考えられる強い皮膚炎を発症させた。
さらに、ＣＢ２インバースアゴニストである化合物Ａが、用量依存的にアレルギーに起因する炎症の抑制作用を示した。
これら結果は、ＣＢ２インバースアゴニストがＣＢアゴニストに起因する疾患の治療に用いられることを示す。
副作用の懸念される、ステロイド化合物及び免疫抑制剤と同等、若しくはそれ以上の効果を示したことは、ＣＢ２インバースアゴニストが安全な薬剤となり得ることを支持する結果である。
【０２６０】
５．ＮＣ系マウスの自発的掻痒反応に対する効果
痒みは、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、接触性皮膚炎などの皮膚科領域における疾患の主要な症状の一つである。しかしながら、その発生機序については未だ不明な点が多く、痒みを劇的に抑制しかつ副作用の少ない薬物は開発されていない。
現在、アトピー性皮膚炎の動物モデルとしてＮＣ系マウスが用いられている。空気中の微生物の制御を行っている環境下（ＳＰＦ環境下）で飼育しても、皮膚炎や掻き動作は観察されない。しかし、通常の環境下（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ環境下）で飼育すると８週目頃から皮膚炎の発症と共に掻き動作が観察されるようになり、その症状は慢性化することが知られる（Ｊ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  Ｓｃｉ．，  ２５，  ２０−２８，  ２００１）。
【０２６１】
試験方法
・試験化合物の調製
溶媒の調製：ＭＣを水道水で溶解し、０．５％（ｗ／ｖ）ＭＣ水溶液とした。
試験化合物の調製：所定量の化合物Ａを上記溶媒により懸濁し、１ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ懸濁液に調製した。また、陽性対照薬として吉草酸ベタメサゾン（Ｓｉｇｍａ）及びタクロリムス水和物（プログラフ（藤沢薬品）より抽出。）を同様に１ｍｇ／ｍＬに調製した。吉草酸ベタメタゾンはアトピー性皮膚炎の治療に有効とされる副腎皮質ステロイド剤のひとつであり、タクロリムス水和物は上記の様に免疫抑制剤として知られるアトピー性皮膚炎治療剤である。
【０２６２】
・動物飼育及び選択方法
４週齢雄性ＮＣ／Ｊｉｃ系マウス（日本クレア）をｒｏｄｅｎｔ  ｍｉｔｅ（Ｍｙｏｂｉａ  ｍｕｓｃｕｌｉ）に感染した重度の皮膚病変を発症したマウス（Ａ）と同じ飼育ケージで１２日間飼育し、その後、飼育ケージからマウス（Ａ）を除き１６週齢で使用した。
飼育条件：温度  ２２±２℃、湿度  ５５±１０％、照明時間  ８：００−２０：００、飼料  固型飼料ＣＡ−１（日本クレア）を自由摂餌、飲料水  水道水を自由摂水。
実験開始１０日前から２日間もしくは３日間に渡り、マウスの後肢による掻き動作の回数（２０分間、１日１回）を目視により数え、測定した複数マウスの中から、掻き動作数回数が１日当たりの平均で５０回以上のマウスを選択し使用した。
【０２６３】
・試験化合物の投与
上記マウスに３週間に渡り１日１回、１０ｍＬ／ｋｇにて経口投与した。
【０２６４】
・試験方法
無人環境下で上記マウスの行動をビデオカメラに撮影し、１時間中の後肢による掻き動作を数えた。マウスは通常約１秒間に数回の掻き動作を示すが、この一連の動作を一回の掻き動作として、掻き部位の区別なく全て数えた。測定は投与開始日、１、３、６、１０、１３、１７、２０日後に行なった。陽性対照とあわせ結果を図１８に記載する。
【０２６５】
・結果
本掻痒反応モデルにおいて、溶媒のみを投与した対照と比較し、化合物Ａは掻き動作の回数を抑制した。また、陽性対照のタクロリムス水和物及び吉草酸ベタメタゾンも掻き動作の回数を抑制した。
【０２６６】
６．ｃＡＭＰ産生における化合物の作用
Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ｖｏｌ．２９６，  Ｎｏ．２，ｐｐ４２０から４２５，２００１年（非特許文献３）と同様にして、フォルスコリンで刺激したｈＣＢ２発現ＣＨＯ細胞でのｃＡＭＰ産生における化合物の影響を検討した。測定結果を表１に示す。
【０２６７】
・結果
【０２６８】
【表１】
2005015422.tif 000028
2005015422.tif 000029
【０２６９】
上記化合物Ａから化合物Ｉは、ＣＢ２インバースアゴニストであることが判明し、ＷＩＮ５５２１２−２及び２−ＡＧ−Ｅはアゴニストであることが確認された。
また、本試験において、２−ＡＧ−Ｅと化合物Ａの共存下、化合物Ａは２−ＡＧ−Ｅのアゴニスト作用を抑制することが判明した。このことは、ＣＢ２インバースアゴニストが、ＣＢ２を介して２−ＡＧ或いは２−ＡＧ−Ｅ等のＣＢ２アゴニストと拮抗することを示す。
【０２７０】
７．ＣＢ２欠損マウスにおけるＩｇＥ依存性耳介腫脹
ＣＢ２欠損マウスにおいて、野生型マウスと同様なアレルギー症状が誘発されるかどうかを試験した。
【０２７１】
方法
・動物
動物は、雌性ＣＢ２欠損（ＣＢ２−ＫＯ）マウスおよび雌性野生型（ＷＴ）マウス（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ系）を使用した。（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｂｏｎｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ、  Ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ．  Ａ．  Ｚｉｍｍｅｒより入手；Ｅｕｒｏｐ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  ３９６，  １４１−１４９，  ２０００）。
【０２７２】
・抗原の塗布
実験初日にａｎｔｉ−ＤＮＰ  ＩｇＥ（５μｇ／ｍＬ生理食塩液、ヤマサ醤油）を、１匹あたり０．２ｍＬずつ尾静脈内より投与して動物を感作し、２４時間後にアセトンとオリーブオイルの混液（３：１，  ｖｏｌｕｍｅ／ｖｏｌｕｍｅ）にて０．１５％  （ｗｅｉｇｈｔ／ｖｏｌｕｍｅ）になるように用時調製した抗原（ＤＮＦＢ  （２，４−ｄｉｎｉｔｒｏｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｅｎｅ；  ナカライテスク））を、右耳介の表裏に２５μＬずつ塗布した。
【０２７３】
・耳介腫脹の測定
耳介の腫脹は、抗原塗布前および塗布後より経時的にダイヤルシックネスゲージ（株式会社ミツトヨ）を用いて測定した。成績は、抗原塗布前の値と抗原塗布後の値との差を耳介の腫脹として、平均値±標準誤差  （Ｓ．Ｅ．）で表示した。統計処理はＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔを用いて行い、危険率が５％未満をもって有意であるとした。測定結果を図１９に示す。
【０２７４】
・結果
野生型マウスが三相性（即時相、遅発相、後遅発相）の皮膚炎を示すのに比べ、ＣＢ２欠損マウスでは顕著な皮膚炎を示さなかった。特に、後遅発相においては、ＣＢ２欠損マウスでは皮膚炎は見られず、野生型マウスとＣＢ２欠損マウスでは明らかな差が見られた。
この結果は、ＣＢ２が、三相性のアレルギー症状、得に遅発相及び後遅発相におけるアレルギー症状に深く係わることを示す。すなわち、ＣＢ２アンタゴニスト或いはインバースアゴニストを有効成分とする薬剤が、非即時性アレルギー疾患、例えばアトピー性皮膚炎の治療剤となることを裏付ける試験結果である。
【０２７５】
８．ＣＢ２欠損マウスにおける２−ＡＧ−Ｅ誘発耳介腫脹
内因性のＣＢアゴニストであると考えられる２−ＡＧ−Ｅ（２−ＡＧの還元体であって２−ＡＧと同様の作用を示すと考えられる。）を用いて、ＣＢ２欠損マウスでアレルギー反応が誘発されるかどうかを試験した。
【０２７６】
方法
・動物
動物は、上記試験「７．ＣＢ２  欠損マウスにおけるＩｇＥ依存性耳介腫脹」と同様の雌性ＣＢ２−ＫＯマウスおよび雌性ＷＴマウスを使用した。
【０２７７】
・抗原の塗布
実験初日に２−ＡＧ−Ｅ（１００  ｍｇ／ｍＬ  ａｃｅｔｏｎｅ）を、マウス左耳介の表裏に１０μＬずつ塗布した。
【０２７８】
・耳介腫脹の測定
耳介の腫脹は、２−ＡＧ−Ｅの塗布前および塗布後より経時的にダイヤルシックネスゲージを用いて測定した。成績は、抗原塗布前の値と抗原塗布後の値との差を耳介の腫脹として、また、耳介腫脹の経時変化からＡＵＣ（ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｕｒｖｅ，  耳介腫脹×時間）を算出し、平均値±標準誤差  （Ｓ．Ｅ．）で表示した。統計処理はＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔを用いて行い、危険率が５％未満をもって有意であるとした。測定結果を図２０、２１に示す。
【０２７９】
・結果
野生型マウスは即時相、遅発相に加え後遅発相での皮膚炎を示した。一方、ＣＢ２欠損マウスでは、即時相においては皮膚炎を示したものの、遅発相においては野生型に比べその炎症の程度は弱く、後遅発相においては顕著な炎症は示さなかった。
この結果は、複数知られる内因性アゴニストの中で、少なくとも２−ＡＧ及び２−ＡＧ−Ｅが、ＣＢ２を介してアレルギー症状に深く係わることを示し、特に、遅発相及び後遅発相でその影響が大きいことを示す。したがって、２−ＡＧ及び２−ＡＧ−Ｅのアゴニスト作用を抑制するアンタゴニスト又はインバースアゴニストは、非即時型アレルギー疾患、例えばアトピー性皮膚炎の治療剤となることを裏付ける試験結果である。
【０２８０】
９．肥満細胞欠損マウスにおける２−ＡＧ−Ｅ誘発耳介腫脹
アレルギー反応への寄与が大きいと考えられる肥満細胞の欠損マウス（一部欠損）におけるアレルギー症状の程度を比較した。
【０２８１】
方法
・動物
動物は、雌性ＷＢＢ６Ｆ１−＋／＋（正常マウス）および雌性ＷＢＢ６Ｆ１−Ｗ／Ｗｖ（肥満細胞欠損マウス）系マウスを日本ＳＬＣ株式会社より入手し使用した。
【０２８２】
・抗原の塗布
実験初日に２−ＡＧ−Ｅ（１００  ｍｇ／ｍＬ  ａｃｅｔｏｎｅ）を、マウス左耳介の表裏に１０μＬずつ塗布した。
【０２８３】
・耳介腫脹の測定
耳介の腫脹は、２−ＡＧ−Ｅの塗布前および塗布後より経時的にダイヤルシックネスゲージを用いて測定した。成績は、抗原塗布前の値と抗原塗布後の値との差を耳介の腫脹として、また、耳介腫脹の経時変化からＡＵＣを算出し、平均値±標準誤差  （Ｓ．Ｅ．）で表示した。統計処理はＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔを用いて行い、危険率が５％未満をもって有意であるとした。測定結果を図２２、２３に示す。
【０２８４】
・結果
野生型マウス及び肥満細胞欠損マウスの両者に皮膚炎がみられたものの、その程度差は歴然であり、野生型マウスの皮膚炎がより重症であった。さらに、即時相と比べ、特に、遅発相および後遅発相において炎症の程度に差が見られた。
この結果は、アレルギー症状、特に、遅発相および後遅発相において、２−ＡＧ及び２−ＡＧ−Ｅと肥満細胞との関連を示すものであり、アレルギー反応における肥満細胞の寄与には、内因性アゴニストである２−ＡＧ又は２−ＡＧ−Ｅが深く係わることが判明した。したがって、この結果もまた、２−ＡＧ及び２−ＡＧ−Ｅのアゴニスト作用を抑制するアンタゴニスト又はインバースアゴニストが、非即時型アレルギー疾患、例えばアトピー性皮膚炎の治療剤となることを裏付ける。
【０２８５】
以上の結果より、末梢細胞型カンナビノイドレセプター（ＣＢ２）選択的インバースアゴニストは、アレルギー疾患の治療剤として有効であることが認められた。
【０２８６】
特に、非即時型アレルギー疾患、例えば、即時型・遅発型・遅延型アレルギー反応が複合しておこる喘息及びアトピー性皮膚炎の治療に有効であった。また、遅発相及び後遅発相においてアレルギー性皮膚炎を抑制する効果は、慢性化した皮膚炎に有効であることが期待される。また、ＣＢ２選択的インバースアゴニストは、現在、ステロイド剤及び免疫抑制剤タクロリムス水和物でしか著しい効果の認められない難治性のアレルギー性皮膚炎、特にアトピー性皮膚炎にも有効であると考えられる。
【０２８７】
また、アレルギー性喘息においては抗原誘発即時型喘息、遅発型喘息、気道過敏性の何れの症状をも軽減する抗喘息剤として有効であることが認められ、難治性の喘息にも有効であると考えられる。
【０２８８】
また、ＣＢ２選択的インバースアゴニストは、マウス掻痒反応試験において、アレルギー反応に起因すると考えられる掻き動作を減少させることが認められた。よって、アレルギー疾患に伴う掻痒治療剤としても有効であると考えられる。
【０２８９】
更に、全身性免疫抑制を示さない安全な薬剤となり得、経口剤としての利用可能性も示された。
【０２９０】
化合物Ａ及びＳＲ１４４５２８は、ＣＢ２選択的インバースアゴニストであることが知られる。ＣＢ２選択的アゴニストＨＵ−３０８、及び、非選択的ＣＢアゴニスト２−ＡＧ−Ｅでは、抗アレルギー作用が見られないばかりか、逆に、２−ＡＧ−Ｅによりアレルギー反応が誘発されることが判明した。かつ、２−ＡＧ−Ｅにより誘発されるそのアレルギー反応を、化合物Ａが抑制することも判明した。これら結果は、ＣＢ２選択的インバースアゴニストが抗アレルギー剤として有用であることを直接的に実証する試験結果である。
【０２９１】
また、ＣＢ２欠損マウスを用いたアレルギー反応試験で、遅発相、後遅発相において皮膚炎が見られなかったことは、ＣＢ２とアレルギーの関与を裏付け、ＣＢ２アンタゴニスト或いはインバースアゴニストを有効成分とする薬剤が、非即時性アレルギー疾患治療剤となることを裏付ける試験結果である。
【０２９２】
同じくＣＢ２欠損マウスを用いたアレルギー反応試験で、２−ＡＧ−Ｅが、ＣＢ２を介してアレルギー症状に深く係わることが示されたことは、２−ＡＧ及び２−ＡＧ−Ｅのアゴニスト作用を抑制するアンタゴニスト或いはインバースアゴニストが、非即時型アレルギー疾患治療剤となることを裏付ける試験結果である。
肥満細胞欠損マウスを用いたアレルギー反応試験の結果もまた、肥満細胞、２−ＡＧ及び２−ＡＧ−Ｅ、ＣＢ２との強い関係を支持するものであり、ＣＢ２アンタゴニスト又はインバースアゴニストが、非即時型アレルギー疾患治療剤となることを支持する。
【０２９３】
よって、化合物Ａ及びＳＲ１４４５２８等の非即時型アレルギー疾患治療効果は、ＣＢ２の作用によるものと考えられ、特に、既存のアレルギー疾患治療剤とは異なる作用機序を有する薬剤として、例えば、既存の薬剤に耐性を示す症状にも有効であると考えられる。また、化合物Ａのロイコトリエン阻害作用が、それらの治療効果を増強している可能性も認められた。
【０２９４】
化学構造的な特徴を異にする化合物ＡからＨ、化合物Ｉ、及び、ＳＲ１４４５２８は、その薬理作用においてはＣＢ２選択的インバースアゴニストという共通点を持ち、これらの事実はＣＢ２選択的インバースアゴニストがアレルギー疾患治療剤として有効であることを支持するものである。
【０２９５】
また、ＣＢ２と２−ＡＧ及び２−ＡＧ−Ｅの相互作用から、ＣＢ２アンタゴニスト又はＣＢ２インバースアゴニストは、非即時型アレルギー疾患以外の２−ＡＧ又は２−ＡＧ−Ｅに関連する疾患に対し治療及び予防効果を期待できる。
【０２９６】
【発明の効果】
カンナビノイドレセプターインバースアゴニストは、喘息及びアトピー性皮膚炎等のアレルギー疾患治療剤として有効である。特に、末梢細胞型カンナビノイドレセプター（ＣＢ２）に選択的に作用するインバースアゴニストは、既存のアレルギー疾患治療剤では効果の低い、慢性・難治性のアレルギー疾患、非即時型アレルギー疾患に有効であり、かつ安全な薬剤となり得る。
【０２９７】
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、マウスＤＮＦＢ誘発アレルギー性皮膚炎における４回目抗原塗布後の試験化合物の耳介腫脹への影響を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の厚みの増加（×１０−２ｍｍ）」を表す。左からそれぞれ偽処置、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として１、２、５ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図２】図２は、マウスＤＮＦＢ誘発アレルギー性皮膚炎における５回目抗原塗布後の試験化合物の耳介腫脹への影響を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の厚みの増加（×１０−２ｍｍ）」を表す。左からそれぞれ偽処置、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として１、２、５ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図３】図３は、ＤＮＦＢ誘発アレルギー性皮膚炎モデルにおける試験化合物の脾臓湿重量への影響を示す図である。縦軸は、脾臓湿重量（ｍｇ）を表す。左からそれぞれ偽処置、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として１、２、５ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図４】図４は、マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応における即時相（抗原塗布１時間後）での試験化合物の耳介腫脹への影響を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の厚みの増加（×１０−２ｍｍ）」を表す。左からそれぞれ、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、フマル酸ケトチフェン（陽性対照として１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プランルカスト水和物（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図５】図５は、マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応における遅発相（抗原塗布２４時間後）での試験化合物の耳介腫脹への影響を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の厚みの増加（×１０−２ｍｍ）」を表す。左からそれぞれ、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、フマル酸ケトチフェン（陽性対照として１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プランルカスト水和物（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図６】図６は、マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応における後遅発相（抗原塗布８日後）での試験化合物の耳介腫脹への影響を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の厚みの増加（×１０−２ｍｍ）」を表す。左からそれぞれ、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、フマル酸ケトチフェン（陽性対照として１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プランルカスト水和物（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図７】図７は、マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応における試験化合物の投与期間の影響を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の厚みの増加（×１０−２ｍｍ）」を表す。０−８は、抗原塗布日から８日後までの投与期間を示す。左からそれぞれ溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを９日間経口投与。）、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇを９、８、７、５、３日間経口投与。）の結果を示す。
【図８】図８は、モルモット抗原誘発喘息における即時型喘息（抗原誘発１分後）での試験化合物の呼吸抵抗への影響を示す図である。縦軸は気道抵抗（ｓＲａｗ）の増加率（％）を示す。左からそれぞれ偽処置、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プランルカスト（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図９】図９は、モルモット抗原誘発喘息における遅発型喘息（抗原誘発４〜８時間後）での試験化合物の呼吸抵抗への影響を示す図である。縦軸はＡＵＣ４−８ｈｒ（％・ｈｒ）を示す。ＡＵＣ４−８ｈｒとは、抗原誘発４乃至８時間後の気道抵抗（ｓＲａｗ）の増加率（曲線下面積比）である。左からそれぞれ偽処置、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プランルカスト（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図１０】図１０は、モルモット気道反応における試験化合物の影響を示す図である。縦軸はＰＣ１００ＡＣｈ（ｍｇ／ｍｌ）を示す。ＰＣ１００ＡＣｈとは、アセチルコリン吸入後の気道抵抗（ｓＲａｗ）が生理食塩液吸入後のｓＲａｗから１００％上昇するのに必要なアセチルコリン濃度である。左からそれぞれ偽処置、溶媒（溶媒のみ１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０、３０、１００ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プランルカスト（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として３０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図１１】図１１は、ヒト好塩基球からのロイコトリエン産生に対する試験化合物の影響を示す図である。
縦軸にロイコトリエン（Ｃ４／Ｄ４／Ｅ４）量（ｐｇ／ｍＬ）、横軸には抗ＩｇＥ抗体量（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図１２】図１２は、ラット肥満細胞からのロイコトリエン産生に対する試験化合物の影響を示す図である。
縦軸にロイコトリエン（Ｃ４／Ｄ４／Ｅ４）量（ｐｇ／ｍＬ）、横軸にはＤＮＰ−ＢＳＡ量（ｎｇ／ｍＬ）を示す。
【図１３】図１３は、マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応における後遅発相（抗原塗布８日後）での試験化合物の耳介腫脹への影響を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の肥厚（×１０−２ｍｍ）」を表す。上図の左からそれぞれ、非感作群、感作群、ＨＵ−３０８（１０、５０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として５ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。下図の左からそれぞれ、非感作群、感作群、ＳＲ１４４５２８（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（陽性対照として５ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。平均値  ±    標準誤差  （ｎ＝８）、＊＊：ｐ＜０．０１，  ＊＊＊：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  感作群  Ｄｕｎｎｅｔｔ  ｔｅｓｔ），  ＃＃＃：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  感作群  Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔ），  ＄＄＄：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  非感作群  Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔ）
【図１４】図１４は、マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応における後遅発相（抗原塗布８日後）での試験化合物の脾臓および胸腺湿重量への影響を示す図である。上図の縦軸は、脾臓湿重量（ｍｇ）を表す。下図の縦軸は、胸腺湿重量（ｍｇ）を表す。左からそれぞれ非感作群、感作群、ＨＵ−３０８（１０、５０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（５ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。平均値  ±    標準誤差  （ｎ＝８）、＊：ｐ＜０．０５，  ＊＊＊：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  感作群  Ｄｕｎｎｅｔｔ  ｔｅｓｔ），  ＃＃：ｐ＜０．０１，  ＃＃＃：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  感作群  Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔ），  ＄＄：ｐ＜０．０１  （ｖｓ  非感作群    Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔ）
【図１５】図１５は、マウスＩｇＥ依存性アレルギー性皮膚炎反応における後遅発相（抗原塗布８日後）での試験化合物の脾臓および胸腺湿重量への影響を示す図である。上図の縦軸は、脾臓湿重量（ｍｇ）を表す。下図の縦軸は、胸腺湿重量（ｍｇ）を表す。左からそれぞれ非感作群、感作群、ＳＲ１４４５２８（０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、プレドニゾロン（５ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。平均値  ±    標準誤差  （ｎ＝８）、＃＃＃：ｐ＜０．００１  （ｖｓ感作群  Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔ）
【図１６】図１６は、２−ＡＧ等によって誘発される耳介腫脹の経時変化を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの「耳介の肥厚（×１０−２ｍｍ）」を表す。左から、化合物塗布後の時間を表わす。平均値  ±  標準誤差、（ｎ＝６）
【図１７】図１７は、２−アラキドノイルグリセロールエーテル（２−ＡＧ−Ｅ）によって誘発される耳介浮腫に対する化合物Ａの効果を示す図である。縦軸はＡＵＣ（０乃至８日目）を表わす。左からそれぞれ、偽処置、溶媒（溶媒のみ１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、化合物Ａ（０．０１、０．１、１、１０ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。平均値  ±    標準誤差  （ｎ＝８）、＊＊：ｐ＜０．０１，  ＊＊＊：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  溶媒群  Ｄｕｎｎｅｔｔ  ｔｅｓｔ），  ＄＄＄：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  偽処置群  Ｓｔｕｄｅｎｔ−ｔ  ｔｅｓｔ）
【図１８】図１８は、ＮＣ系マウスの自発的掻痒反応に対する試験化合物の効果を示す図である。縦軸は、試験化合物投与前後におけるマウスの引っ掻き回数（回／時間）を表わす。左からそれぞれ、溶媒（溶媒のみ経口投与。）、化合物Ａ（１、１０ｍＬ／ｋｇを経口投与。）、タクロリムス水和物（１ｍｇ／ｋｇを経口投与。）、吉草酸ベタメサゾン（１ｍｇ／ｋｇを経口投与。）の結果を示す。
【図１９】野生型およびＣＢ２ノックアウトマウスにおけるＩｇＥ依存性三相性耳介腫脹を示す図である。縦軸は縦軸は耳介厚みの増加（１０−２ｍｍ）を表す。横軸は試験後の時間を表す。各ポイントはマウス８匹における標準±  標準誤差を示す。＊：ｐ＜０．０５，  ＊＊：ｐ＜０．０１，  ＊＊＊：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  野生型Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔ）、＃＃：ｐ＜０．０１，  ＃＃＃：ｐ＜０．００１，    （ｖｓ  ｎｏｎ−ｓｅｎｓ  Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔ）。
【図２０】野生型およびＣＢ２ノックアウトマウスにおける２−ＡＧ−Ｅ誘発耳介腫脹を示す図である。縦軸は耳介厚みの増加（１０−２ｍｍ）を表す。横軸は２−ＡＧ−Ｅ処理後の時間を表す。耳介腫脹は、右耳の両側に１０μＬ／部位の２−ＡＧ−Ｅ（１００ｍｇ／ｍＬ）を局所塗布して誘導した。各ポイントはマウス８匹における平均±標準誤差を示す。＊＊：ｐ＜０．０１、ＮＳ：有意差なし（ｖｓ野生型マウス  Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔ）。
【図２１】野生型およびＣＢ２ノックアウトマウスにおける２−ＡＧ−Ｅ誘発耳介腫脹を示す図である。上段の図が処理後０−２４時間、下段の図が１−８日の結果を示す。縦軸はＡＵＣ（時間ｘ１０−２ｍｍ）を表す。左から野生型、ＣＢ２ノックアウトマウスの結果を示す。＊＊：ｐ＜０．０１、ＮＳ：有意差なし（ｖｓ野生型マウス  Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔ）。
【図２２】野生型および肥満細胞欠損マウス（ＷＢＢ６Ｆ１−Ｗ／Ｗｖ）における２−ＡＧ−Ｅ誘発耳介腫脹を示す図である。縦軸は縦軸は耳介厚みの増加（１０−２ｍｍ）を表す。横軸は２−ＡＧ−Ｅ処理後の時間を表す。耳介腫脹は、右耳の両側に１０μＬ／部位の２−ＡＧ−Ｅ  （１００ｍｇ／ｍＬ）  を局所塗布して誘導した。各ポイントはマウス８匹における標準±  標準誤差を示す。＊：ｐ＜０．０５，  ＊＊：ｐ＜０．０１，  ＊＊＊：ｐ＜０．００１  （ｖｓ  ＷＢＢ６Ｆ１−＋／＋  マウスＳｔｕｄｅｎｔ  ｔ−ｔｅｓｔ）。
【図２３】正常マウスおよび肥満細胞欠損マウス（ＷＢＢ６Ｆ１−Ｗ／Ｗｖ）における２−ＡＧ−Ｅ誘発耳介腫脹を示す図である。上段の図が処理後０−２４時間、下段の図が１−８日の結果を示す。縦軸はＡＵＣ（時間ｘ１０−２ｍｍ）を表す。左からＷＢＢ６Ｆ１−＋／＋（アセトン、２−ＡＧ−Ｅ）、ＷＢＢ６Ｆ１−Ｗ／Ｗｖ（アセトン、２−ＡＧ−Ｅ）の結果を示す。
【図１】
2005015422.tif 000050
【図２】
2005015422.tif 000051
【図３】
2005015422.tif 000052
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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