(57)【要約】【課題】家畜の子宮内膜炎で子宮内の除菌・消毒で除菌、消毒効果の高い洗浄法を提供する。【解決手段】活性化二酸化塩素を含有する二酸化塩素剤で子宮炎罹患家畜の子宮内を洗浄する事により起炎菌の効率的に除菌する方法である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性化二酸化塩素並びに二酸化塩素剤を主成分とする家畜子宮炎の予防・治療剤。
【請求項２】
活性化二酸化塩素並びに二酸化塩素を含有する水溶液であって、ｐＨ７．０以下、好ましくはｐＨ６．０で使用することを特徴とする家畜子宮炎の予防・治療剤。
【請求項３】
活性化二酸化塩素並びに薬理学的に許容される担体の併用による家畜の子宮内に直接注入することを特徴とする家畜子宮炎の治療・予防法。
【請求項４】
前記二酸化塩素並びに二酸化塩素剤は、溶存二酸化塩素ガス水溶液、亜塩素酸及びその塩を含有することを特徴とする請求項１〜３に記載する家畜子宮炎の治療・予防剤。
【請求項５】
前記二酸化塩素並びに二酸化塩素は、安定化剤により安定化された安定化二酸化塩素から発生することを特徴とする請求項１〜３に記載する家畜子宮炎治療・予防剤。
【請求項６】
前記活性化二酸化塩素は、前記二酸化塩素剤を有機酸類、鉱物酸類及び過酸化水素及びアルコール類から選択される賦活剤により、二酸化塩素の発生を活性化した二酸化塩素剤から発生することを特徴とする家畜子宮炎の治療・予防剤。
【請求項７】
前記二酸化塩素剤における前記二酸化塩素の使用濃度は、０．１〜５００ｐｐｍである請求項１〜６のいずれかに記載する家畜子宮炎の治療・予防剤。
【請求項８】
前記活性化二酸化塩素を子宮洗浄嘴管を通し子宮内に注入し、子宮内微生物感染疾患部の消毒により疾患患部の治療を特徴とする子宮炎治療・予防法。
【請求項９】
前記家畜は、軽種馬である請求項１〜７のいずれかに記載する子宮炎の治療・予防剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】本発明は、活性化二酸化塩素による家畜の子宮炎の予防・治療に関する。
ここでいう家畜とは、有蹄類すなわちウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ等を包含し、その家畜の子宮内に安定および活性化された二酸化塩素を直接あるいは薬理学的に許容された担体と併用により注入し、子宮炎起炎菌の殺菌・除菌とそれらに随伴する腐敗性滲出物の消毒による子宮炎の治療・予防を特徴とする。
なお、本明細書で開示する殺菌・除菌には「滅菌」・「消毒」などの概念をも包含する。
【背景技術】
【０００２】子宮炎は粘膜から筋層に炎症性変化が及ぶ場合を指し、したがってその炎症の主座する部位により子宮内膜炎、子宮筋炎、子宮周囲炎に区別される。またこの炎症性変化は漿膜に達することがあり、多くの場合、敗血症に移行することより、敗血症子宮炎と呼ばれることがある。【０００３】この敗血症性子宮炎の主因が、ブドウ球菌、連鎖球菌、大腸菌、ＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒやＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ等腸内細菌科に属する細菌等で産期感染で発症する。【０００４】起炎菌により感染した子宮粘膜は壊死状態となり、粘膜は剥離し、膣内に壊死産物を含む腐敗性滲出物が排出する。筋層も水腫性で子宮壁全体に顆粒提出球浸潤があり、子宮静脈の炎症血栓の変化が見られる。【０００５】本子宮内膜炎はウマ、ウシ、ブタ、めん羊、ヤギ等の家畜および犬、などに発症し、不妊や流産の主要な原因ともなる。すなわち本症に罹患すると、精子の運動性が抑制され、子宮内の上行を妨げ、また受精卵の子宮内膜への着床を阻害し、着床しても胎芽が早期に死滅したり、流産及び早産を誘発する。【０００６】本病症は、子宮炎、肺炎、敗血症等の起因菌であるブドウ球菌、例えばＳ．ａｕｒｅｕｓや、腎炎、咽頭炎の起炎菌で、子宮炎罹患ウマの腐敗性滲出液に多頻度で検出される連鎖球菌、例えばＳ．ｅｑｕｉ，Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｓ，Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ，Ｓ．ｍｏｒｂｉｌｌｏｒｕｍ、あるいは腸内細菌科に属する菌属で子宮内膜症、牛乳房炎から検出される大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ），Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ，Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａまたは日和見感染や敗血症、褥創の主因となるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属菌などにより惹起する非伝染性の疾患である。特に、ＫｌｅｂｓｉｅｌｌａやＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓは抗生物質に対して抵抗機序の発現性が強く、過度の抗生物質の投薬は耐性菌による菌交代症の発症を伴い重篤な病症を呈する。【０００７】一方、監視伝染病の内、届出伝染病として指定されている馬伝染性子宮炎（Ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓ  Ｅｑｕｉｎｅ  Ｍｅｔｒｉｔｉｓ  ＣＥＭ）がある。本病症は、伝染性が強く、繁殖シリーズに流行し、牝ウマでは子宮内膜症、不妊症、流産を起こす生殖感染症である。【０００８】本病症の主起因菌であるＴｏｙｌｏｒｅｌｌａ  ｅｑｕｉｇｅｎｉｔａｌｉｓは、ウマの交尾、ヒトの手指、器具等により直接あるいは間接的に伝播し、２〜１４時間の潜伏期間後、頸管炎、膣炎を伴った子宮内膜炎を発症する。１９８０年にはわが国でも競走馬産地で大流行し、生産者に大きな被害を与えた。【０００９】伝染病および非伝染性子宮炎予防・治療法は消毒剤による子宮及び種牡馬の生殖器の洗浄消毒、次いで抗生物質の投与による起炎菌の殺菌である。【００１０】牝馬における伝染性および非伝染性の起炎菌の保菌部位は、主として陰核洞および陰核窩で、内部に蓄積された垢の中に起炎菌は棲息している。陰核窩および側陰核洞を洗浄によって蓄積された老廃物を除去し、消毒剤や抗生物質を注入し、浸透によって起炎菌を除去するのが常法手段である。【００１１】現時点では、交配時前後の軽種馬を消毒することを必須とし、微温湯下でのクロロヘキシジンや逆性石鹸などの低刺激性を常用としているが、この低刺激性の消毒剤ですら、陰茎���頻回消毒は粘膜の爛れが発症する。【００１２】また、クロロヘキシジンはロータウィルス、ヘルペスウィルス、アデノウィルスには全く効果を示さず、逆性石鹸はグラム陰性および芽胞菌およびウィルスに対して有効性を示さない。
今、ウマの生殖器に対する無ないしは低刺激で、ウィルスを含めた殺菌スペクトラム広域の薬剤が種馬業者にとって切望されている。【００１３】上述の子宮内洗浄は、まず３８℃〜４０℃に加温した滅菌生理食塩水やリンゲル液を大量に注入し、潅流（ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ）を繰り返して子宮内を洗浄する。注入薬剤として抗生物質及び消毒剤として前記記載薬剤の他ヨード剤が一般的に使用されているのが現状である。【００１４】抗生物質として一般的に使用されるクロラムフェニコールの頻回投与は骨髄抑制症候群の発症、既往免疫反応の抑制やまた急速静注により虚脱、溶血等の報告があり、また皮下及び筋注での４日以上の連用の禁止規制がとられている。またアミノグルコシド抗生物質（例えばゲンタマイシン）あるいはベータラクタム系抗生物質、キノロン系抗菌剤も副作用あるいは耐性菌の出現で頻回使用が規制されている。【００１５】一方、消毒剤による子宮内局所消毒は、その有効性と毒性との兼ね合いから消毒剤の選択を考えねばならない。すなわち、消毒対象物の清潔要求度、生体消毒と環境消毒、ｐＨ、作用時間、温度、濃度等の基本条件、消毒スペクトラムの範囲、消毒剤が生体に与える毒性、作用の持続性、吸収性と浸透性、有機物共存下での有効性、耐性菌の出現性、臭気及び色素の沈着性、使用方法の簡易性、排気処理方法の容易性等から選択しなければならない。【００１６】現在広く使用されている子宮洗浄消毒剤として消毒スペクトラムの広さからヨード剤、特にポピドンヨードが使用されている。一般にヨード剤は手指への消毒に用いられているが、腐食性が強く、下痢、下血、呼吸困難、頭痛などの副作用症状を呈し、環境一般金属器具、排出物による汚染物の消毒には不向きとされている。本薬剤を膣や口腔粘膜、熱傷部位及び新生児の正常な皮膚に対する皮膚炎の発症が報告されている。【００１７】ポピドンヨードの最小致死細菌濃度は大腸菌に対して１０ｐｐｍ以上、黒コウジカビに対しては１０００ｐｐｍであり、二酸化塩素はこの細菌力より１０〜１００倍も強烈な殺菌力（日本食品分析センター、１９９５年）を示し、しかも皮膚毒性が著しく低いとされている活性化二酸化塩素による子宮内洗浄除菌法について鋭意検討を行った。【００１８】活性化二酸化塩素による家畜の子宮洗浄については今まで開示された事例はない。しかも二酸化塩素は、その殺菌力の強さにも拘わらず、一般に反応が遅効性であるがため、消毒剤としては不向きで、むしろ消臭向きと従来考えられてきた。発明者らは二酸化塩素が有する遅効性という特性を改善し、即効的に作用を発現するように工夫を重ね、今までに報告事例がない活性化二酸化塩素による家畜の子宮洗浄剤の検討を重ねてきた。【００１９】活性化二酸化塩素は次亜塩素酸ソーダと異なり、血清蛋白あるいは他の有機物と反応して発癌性を有するトリハロメタン等の化合物を生成せず、またその作用はｐＨの影響を受けず、広いｐＨ値域で有効性を発揮する。【００２０】活性化二酸化塩素のヒトの皮膚に対する刺激性試験を検討したところ、高濃度一週間累積貼付で全く刺激性が認められず、実投与濃度でも子宮粘膜に対して何ら影響を示さない事を認めた。
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】かかる点を考慮して活性化二酸化塩素による家畜、特に軽種馬の子宮炎の予防・治療について鋭意検討を重ねてきた。
本発明である活性化二酸化塩素は、濃度管理を施す事によりヒトの皮膚や軽種馬の子宮膜に対して殆ど副作用を認めず、子宮起炎菌の二酸化塩素に対する耐性獲得もなく、しかも高蛋白下で、細菌・カビあるいはウイルスに対しても殺菌・消毒効力を示す。このような特性を踏まえ、活性化二酸化塩素を軽種馬子宮内に注入する治験を試みた。
【００２２】二酸化塩素の除菌・殺菌効力は、有機酸、鉱物酸、過酸化水素、アルコール類及びこれらを併用した賦活剤（例えば助川化学（株）製ＭＥシリーズ）から選択した化合物によりｐＨ３．５〜７．０、より好ましくはｐＨ４．０〜６．５に調製して二酸化塩素を活性する事が出来る。
【課題を解決するための手段】
【００２３】濃度管理を施された活性化二酸化塩素はヒトの皮膚に対して１０００ｐｐｍ、一週間の累積貼布で殆ど影響を認めない事、目の粘膜に対して刺激性が非常に弱い事、微生物に対して広い殺菌毒域を示す事、広いｐＨ範囲で活性が発現する事、高蛋白下でも活性を示す事、発癌性であるトリハロメタンの生成を認めない事、また塩素ガスの発生や有機物と結合して異臭を発生しない事など活性化二酸化塩素が有する優れた特性に注目し、鋭意検討を重ねた結果、家畜生産者にとって生産性を著しく阻害する子宮炎の治療・予防のための活性化二酸化塩素を子宮洗浄薬剤使用に初めて成功した。
【発明実施の形態】
【００２４】本願明細書における活性化二酸化塩素とは二酸化塩素を含有する物を言い、例えば亜塩素酸ナトリウム、亜塩素酸カリウム等の亜塩素酸に塩酸、硫酸などの無機酸を加えることにより発生させることができる。
【００２５】また、上記二酸化塩素は、亜塩素酸塩を安定化剤により安定化させた安定化二酸化塩素剤から発生させてもよい。ここで安定化剤としてＮａＣＯ３・３Ｈ２Ｏ、ＮａＨＣＯ３、ＮａＢＯ３等を挙げる事ができる。
【００２６】更に、上記活性化二酸化塩素は、上記二酸化塩素剤を有機酸、無機酸、過酸化水素およびアルコール類から選択される活性化剤により二酸化塩素を発生させてもよい。ここでいう有機酸類として、例えばクエン酸、酢酸などを代表例として挙げる事ができる。  また上記アルコール類としてエタノール、メタノールを挙げる事ができる・
【００２７】上記活性化二酸化塩素の一般細菌、大腸菌群（Ｃｏｌｉｆｏｒｍ  ｂａｃｔｅｒｉａ），黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ），Ａ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ  ＡＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）に対する除菌・殺菌効果を高めるためｐＨを７．０以下、より好ましくはｐＨ５．５〜６．５に調整する。
【００２８】本発明において、活性化二酸化塩素濃度は０．１〜１００ｐｐｍであり、より好ましい濃度は１０〜７５ｐｐｍで、さらに好ましくは２５〜５０ｐｐｍである。
【００２９】活性化二酸化塩素の除菌・殺菌機序は微生物の生育に関わる重要な代謝関連酵素および細胞膜組成中のチロシン、メチオニンおよびシスチン残基を特異的に酸化させ、その機能を不活化させる事により微生物を崩壊あるいは死滅させるものである。  この酸化能はオゾンより特異的で、そのため非常に優れた殺菌・除菌をもたらす。従って、それによる副作用が著しく弱い所以である。また、耐性菌の出現は殆ど見られない。  二酸化塩素は次亜塩素酸ナトリウムと異なり、有機物との結合が比較的緩慢なため、高蛋白下でもその効力を長時間保持する。
【００３０】本発明での活性化二酸化塩素による家畜の子宮内洗浄除菌方法は、ゴム製、プラスチックせいあるいは金属製の管状の器具（子宮洗浄嘴管）を子宮内に注意深く挿入する。この子宮洗浄嘴管は子宮および子宮頸などそれぞれの副生殖器の構造に合わせて使いやすく損傷を与えないよう工夫したもであれば良い。
更に、洗浄終了後薬剤が注入できるよう接続部を装着してもよい。
このように注入法は、自己製作品あるいは市販品に限定する物ではない。
また、注入法は落差注入あるいは電動注入でもよく、注入手段にとらわれるものではない。
【００３１】治療を目的とした洗浄時期は、産褥期感染時、種付後数時間後、腐敗性滲出時、子宮静脈の炎症性血栓異常診断時の微生物罹患部分内に注入洗浄消毒を行う。
【発明の実施形態】
【００３２】以下の具体的な実験例、実施例によって本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【実験例１】
【００３３】各微生物に対する活性化二酸化塩素の殺菌効力結果を表  １に示す。この際の反応条件は反応時間５分、２５℃である。
ウマ子宮炎の主要起炎菌であり、また子宮滲出液中からも多頻度によ検出される黄色ブドウ球菌、連鎖球菌、大腸菌および大腸菌群に包含されるＣｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａはすべて５分間の反応で完全に死滅する。
各微生物に対する活性化二酸化塩素の殺菌効力を表１に示す。
【００３４】
【表１】
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血清蛋白共存下での軽種馬子宮炎主要起炎菌に対する活性化二酸化塩素殺菌力について
【００３５】に記載する。
【実験例２】
【００３５】黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ），Ａ群連鎖球菌（ＧｒｏｕｐＡ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に対する牛血清アルブミン（ＢＳＡ  ０．５％  和光薬品株式会社）共存下での活性化二酸化塩素の殺菌効力試験結果を表２に示す。
【００３６】
【表２】
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この表が示すように、ＢＳＡの共存下での活性化二酸化塩素はＢＳＡフリーの場合とほぼ同じ活性を示す。  即ち、活性化二酸化塩素は、次亜塩素酸ナトリウムと異なり共存する蛋白と結合することなく、子宮内でも試験管レベル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）と同じ除菌・殺菌活性が生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）でも発現する事を示唆している。
【実験例３】
【００３７】活性化二酸化塩素のヒト皮膚に対する安全性試験を川村の方法（川村太郎貼布試験標準化の基礎的研究８０  ３０１  １９７０）に準拠して実施した。
貼布条件は、単回および１周間の連続貼布（累積貼布試験）であり、皮膚表面の変化は肉視観察し、上記文献記載の基準により評価した。実験方法として単回および累積貼布試験ではヒト上腕内側にパッチテスト用絆創膏（１．５ｘ１．５ｃｍ）に陰性対照としての水、被検体として活性化二酸化塩素２００ｐｐｍ、５００ｐｐｍおよび１０００ｐｐｍ各々１００μｌをしみ込ませ、単回試験での皮膚との接触時間を２４時間閉塞貼付し、累積貼付では２４時間閉塞貼付を１週間連続繰り返した。評価判定は絆創膏除去後、３０分静置して肉視観察した。
単回貼布刺激結果を表３に示す。
【００３８】
【表３】
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活性化二酸化塩素累積貼布によるヒト皮膚の刺激試験結果については
【００３９】で記述する。
【００３９】
【表４】
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【００４０】この際の評価判定基準を表５に示す。
【表５】
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この結果、活性化二酸化塩素の実使用濃度の１０〜２０倍の濃度で１〜７日間の単回および累積貼付で全くヒトの皮膚に対して刺激性は認められなかった。
【実施例】
【００４１】子宮内の滲出液が間歇的に会陰部から漏出した子宮内膜炎を発症および早期発情を繰り返す牝馬１３頭に対して子宮洗浄嘴管を挿入し、子宮内視鏡で観察しながら、加温滅菌生理食塩水１００〜２００ｍｌを子宮内に注入し、直腸から子宮角及び子宮体を軽く圧して回収し、その回収液を処理前検液として肉視および  顕微鏡で観察した。  次いで、活性化二酸化塩素（Ｂｉｏｓｕｋｅｇａｗａ  ｄｅｓｉｇｎ  ＃１０００）を滅菌生理食塩水で５０〜１０００ｐｐｍ、１〜１８Ｌを調整した後、イルリガートルに充填し、子宮内視鏡と子宮洗浄嘴管を用いて３８℃〜４０℃に保温しながら子宮内に注入した。１〜２日間放置後、同量の生理食塩水で１〜２回洗浄し、その洗浄液について微生物の検出を行った。対照検出微生物は子宮内膜炎の主起炎菌であるＥ．Ｃｏｌｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ，Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ，Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓの検出を行った。検出菌の分類同定は常法に従った。その結果を表６に示す。なお、効果判定は対象起菌炎菌の消失結果と滲出液外観より求め、その治療効果につては【００４４】に纏めた。【００４２】
【表６】
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【００４３】
【表６】
に示した活性化二酸化塩素の除菌・殺菌洗浄による軽種馬子宮内膜炎の治療効果を表７に示す。
【００４４】
【表７】
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有効率７６．９％と高い示し、活性化二酸化塩素の馬子宮洗浄・除菌の有効性が認められた。
【参考例１】
【００４５】活性化二酸化塩素でウマ子宮炎の洗浄・除菌を行なった際の活性化二酸化塩素によるウマ子宮内膜に対する刺激性の診断した結果を表８に示す。
【００４６】
【表８】
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この結果、活性化二酸化塩素１〜１０ｐｐｍ濃度、１８Ｌで子宮内を洗浄しても子宮内膜に何ら影響を与えないことを認めた。
この結果、活性化二酸化塩素１〜１０ｐｐｍ濃度、１８Ｌで子宮を洗浄しても子宮内膜に何ら影響を与えず、安全性が高い薬剤であることを認めた。
【発明の効果】
【００４７】以上説明したように、病原微生物に感染した馬子宮内膜を活性化二酸化塩素で洗浄除菌する事により、病症の改善を指標として７６．９％という有効率が示された。すなわち活性化二酸素の洗浄により馬子宮内膜炎の治療および予防が可能であることが示唆された。また、子宮洗浄に際し、活性化二酸化塩素による子宮内膜の紅斑、丘疹、浮腫、水泡等の副作用の発症症例は見られず、非常に安全で有効な洗浄・治療剤であることを確認した。
更に、家畜生産者の致命的な損害をもたらす監視伝染病に含まれている馬伝染性子宮炎（ＣＥＭ）に対しても効果的な感染治予防・療剤として曙光を意味するものである。
これにより、活性化二酸化塩素は軽種馬子宮炎の予防・治療にかかわらず、牛、豚等の家畜全般の子宮炎の予防・治療が可能となり、ひいては稀少動物の人工受精の際、殺菌・消毒剤として使用可能である。