(57)【要約】【課題】炎症性伝達物質産生抑制活性を有する新規な化合物を提供すること。【解決手段】  下記一般式［１］【化１】2005200324.tif 000004@0010［式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基、Ｒ２は水素原子又は水酸基をそれぞれ示す。］で表される化合物又はその塩。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式［１］
【化１】
2005200324.tif 000003
［式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基、Ｒ２は水素原子又は水酸基をそれぞれ示す。］
で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
Ｒ１がメチル基であり且つＲ２が水酸基である、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
Ｒ１がメチル基であり且つＲ２が水素原子である、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
Ｒ１が水素原子であり且つＲ２が水酸基である、請求項１に記載の化合物又はその塩。
【請求項５】
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩：
１）性質：両性、無色粉末；
２）溶解性：ＤＭＳＯに可溶、水、メタノールに難溶；
３）分子式：Ｃ５３Ｈ８６Ｎ１２Ｏ１４（ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳスペクトルにより決定）；
４）分子量：１１１４（ＥＳＩ−ＭＳスペクトルにより決定）
５）紫外線吸収スペクトル：  λｍａｘ  ｎｍ（ε）
０．０１規定塩酸で測定した紫外線吸収スペクトルは、末端吸収であるが、２４０〜２５０ｎｍにショルダーを示す；
６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：  νｍａｘ  ｃｍ−１
ＫＢｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである。
３２９９、２９５７、１７３２、１６５２、１５３４、１３８８；
７）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
０．０１規定重塩酸−重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＨＯＤのシグナルを４．８０ｐｐｍとした。）
0.84 (6H, d, J=7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J=6.5 Hz), 0.97 (6H, d, J=5.5 Hz), 1.02 (3H, d, J=6.5 Hz), 1.07-1.20 (2H, m), 1.14 (3H, s), 1.22 (3H, s), 1.27 (2H, m), 1.50 (2H, m), 1.54-1.73 (5H, m), 1.75-1.82 (2H, m), 1.84 (3H, d, J=7.5 Hz), 1.91 (1H, m), 2.00 (1H, m), 2.46 (1H, dd, J=14.0, 3.5 Hz), 2.56 (1H, br.), 2.86 (3H, m), 3.01 (1H, dd, J=12.0, 11.5 Hz), 3.17-3.25 (2H, m), 3.30 (1H, t, J=10.5 Hz), 3.39 (1H, dd, J=13.0, 10.5 Hz), 3.53 (1H, dd, J=13.5, 3.0 Hz), 3.56 (1H, dd, J=14.0, 4.0 Hz), 4.24 (1H, dd, J=11.5, 2.5 Hz), 4.46 (1H, dd, J=12.0, 3.0 Hz), 4.56 (1H, dd, J=10.5, 5.0 Hz), 4.62 (1H, dd, J=10.0, 6.5 Hz), 4.68 (1H, dd, J=10.0, 4.5 Hz), 4.98 (1H, m), 5.12 (1H, d, J=8.5 Hz), 5.19 (1H, m), 5.65 (1H, q, J=7.0 Hz), 7.21 (1H, dd, J=7.5, 7.5 Hz), 7.25 (2H, d, J=7.5 Hz), 7.34 (2H, dd, J=7.5, 7.5 Hz)  
（ＨＯＤのシグナル中に１Ｈあり）；
８）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
０．０１規定重塩酸−重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、次の通りである。（ジオキサンのシグナルを６７．２ｐｐｍとした。）
13.1 (q), 20.1 (q), 20.6 (q), 22.4 (q), 22.5 (q), 23.1 (q), 23.2 (q), 23.6 (t), 25.0 (d), 25.3 (d), 25.8 (q), 27.0 (q), 27.9 (d), 29.1 (t), 32.3 (t), 36.4 (t), 36.8 (t), 38.3 (t), 39.4 (t), 39.9 (2シグナル, 各々t), 40.5 (t), 40.6 (t), 43.1 (t), 49.4 (d), 49.8 (d), 50.6 (d), 52.3 (d), 53.0 (d), 54.3 (d), 57.1 (d), 60.0 (d), 72.6 (s), 73.4 (d), 121.8 (d), 128.2 (d), 129.5 (2シグナル, 各々d), 129.8 (2シグナル, 各々d), 130.0 (s), 135.6 (s), 169.0 (s), 169.1 (s), 169.9 (s), 170.3 (s), 171.4 (s), 173.2 (s), 173.4 (s), 173.7 (s), 174.1 (s), 176.4 (s), 177.6 (s)；
９）高速液体クロマトグラフィー
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）＝３７：６３
流速：  １．０ｍｌ／分
検出波長：  ２１０  ｎｍ
保持時間：  ７．６分。
【請求項６】
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩：
１）性質：両性、無色粉末；
２）溶解性：ＤＭＳＯに可溶、水、メタノールに難溶；
３）分子式：Ｃ５３Ｈ８６Ｎ１２Ｏ１３（ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳスペクトルにより決定）；
４）分子量：１０９８（ＥＳＩ−ＭＳスペクトルにより決定）；
５）紫外線吸収スペクトル：  λｍａｘ  ｎｍ（ε）
０．０１規定塩酸で測定した紫外線吸収スペクトルは、末端吸収であるが、２４０〜２５０ｎｍにショルダーを示す；
６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：  νｍａｘ  ｃｍ−１
ＫＢｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである。
３２９８、２９５７、１７３７、１６５１、１５３７、１３８８；
７）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：  δ（ｐｐｍ）
重メタノール溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＴＭＳ内部基準 ）
0.72 (3H, d, J=5.5 Hz), 0.73 (3H, d, J=5.0 Hz), 0.85 (6H, d, J=6.5 Hz), 0.95 (3H, d, J=6.5 Hz), 0.98 (3H, d, J=6.0 Hz), 1.01 (6H, m), 1.06-1.23 (2H, m), 1.23-1.33 (2H, m), 1.42-1.58 (4H, m), 1.70-1.82 (4H, m), 1.84 (3H, d, J=7.5 Hz), 1.79-1.89 (2H, m), 1.92 (2H, m), 2.32 (1H, dd, J=13.5, 2.5 Hz), 2.39 (1H, dd, J=17.0, 4.0 Hz), 2.83 (2H, m), 2.92 (1H, dd, J=13.5, 3.5 Hz), 3.01 (1H, dd, J=14.0, 9.0 Hz), 3.13-3.27 (4H, m), 3.31-3.40 (2H, m), 4.25 (1H, dd, J=11.0, 4.0 Hz), 4.49 (1H, dd, J=10.5, 4.0 Hz), 4.54 (1H, t, J=7.0 Hz), 4.61 (2H, m), 4.68 (1H, t, J=7.5 Hz), 5.10 (1H, m), 5.64 (1H, q, J=7.5 Hz), 7.18 (1H, m), 7.27(4H, m)
（ＨＯＤのシグナル中に２Ｈあり）；
８）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
重メタノール溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＴＭＳ内部基準 ）
13.4 (q), 19.2 (q), 20.0 (q), 20.6 (q), 22.0 (q), 22.9 (q), 23.0 (q), 23.6 (q), 23.9 (q), 24.8 (t), 25.9 (d), 26.0 (d), 29.1 (d), 30.6 (t), 32.9 (d), 33.4 (t), 37.7 (t), 37.8 (t), 39.7 (t), 40.4 (t), 41.2 (t), 41.7 (t), 42.0 (t), 42.1 (t), 45.1 (t), 50.2 (d), 51.2 (d), 52.4 (d), 53.2 (d), 54.5 (d), 54.8 (d), 58.4 (d), 58.6 (d), 73.0 (d), 119.4 (d), 128.2 (d), 129.8 (2シグナル, 各々d), 130.1 (2シグナル, 各々d), 132.9 (s), 137.8 (s), 168.4 (s), 170.0 (s), 171.8 (2シグナル, 各々s), 172.1 (s), 172.7 (s), 172.7 (s), 174.0 (s), 175.3 (s), 175.4 (s), 178.1 (s) ；
９）高速液体クロマトグラフィー
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）＝４２：５８
流速：  １．０ｍｌ／分
検出波長：  ２１０  ｎｍ
保持時間：  ６．２分。
【請求項７】
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩：
１）性質：両性、無色粉末；
２）溶解性：ＤＭＳＯに可溶、水、メタノールに難溶；
３）分子式：Ｃ５２Ｈ８４Ｎ１２Ｏ１４（ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳスペクトルにより決定）；
４）分子量：１１００（ＥＳＩ−ＭＳスペクトルにより決定）；
５）紫外線吸収スペクトル：  λｍａｘ  ｎｍ（ε）
０．０１規定塩酸で測定した紫外線吸収スペクトルは、末端吸収であるが、２４０〜２５０ｎｍにショルダーを示す；
６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：  νｍａｘ  ｃｍ−１
ＫＢｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである。
３２９９、２９５８、１７３１、１６５１、１５３６、１３８９；
７）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル；  δ （ｐｐｍ）
重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＨＯＤのシグナルを４．８０ｐｐｍとした。 ）
0.84 (3H, t, J=6.5 Hz), 0.90 (3H, d, J=6.5 Hz), 0.97 (6H, d, J=6.5 Hz), 1.03 (3H, d, J=6.5 Hz), 1.13 (3H, s), 1.21(3H, s), 1.22-1.30 (6H, m), 1.50 (1H, m), 1.55-1.73 (5H, m), 1.73-1.82 (2H, m), 1.83 (3H, d, J=7.5 Hz), 1.91 (1H, m), 1.98 (1H, m), 2.43 (1H, m), 2.46 (1H, m), 2.85 (2H, t, J=7.5 Hz), 2.88 (1H, dd, J=14.0, 4.0 Hz), 3.01 (1H, dd, J=13.0, 11.0 Hz), 3.14-3.28 (3H, m), 3.32 (1H, dd, J=13.0, 10.5 Hz), 3.42 (1H, dd, J=13.5, 3.5 Hz), 3.48 (1H, dd, J=13.5, 4.5 Hz), 4.24 (1H, dd, J=12.0, 3.0 Hz), 4.47 (1H, dd, J=11.5, 3.0 Hz), 4.55 (1H, dd, J=10.5, 4.5 Hz), 4.57-4.62 (2H, m), 4.95 (1H, t, J=3.5 Hz), 5.06 (1H, dd, J=10.0, 3.0 Hz), 5.20 (1H, m), 5.63 (1H, q, J=7.5 Hz), 7.20 (1H, dd, 7.5, 7.5 Hz), 7.24 (2H, d, J=7.5 Hz), 7.33 (2H, dd, J=7.5, 7.5 Hz)
（ＨＯＤのシグナル中に１Ｈあり）；
８）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、次の通りである。（ジオキサンのシグナルを６７．２ｐｐｍとした。）
13.1 (q), 13.9 (q), 20.1 (q), 20.6 (q), 22.5 (t), 23.1 (q), 23.2 (q), 25.0 (d), 25.3 (d), 25.4 (t), 25.9 (q), 27.0 (q), 29.1 (t), 31.2 (t), 31.9 (t), 36.5 (t), 36.8 (t), 39.5 (t), 40.2 (t), 40.5 (3シグナル, 各々t), 43.7 (t), 49.6 (d), 49.9 (d), 51.5 (d), 52.9 (d), 53.2 (d), 54.3 (d), 57.2 (d), 59.9 (d), 72.6(s), 73.2 (d), 121.6 (d), 128.2 (d), 129.5 (2シグナル, 各々d), 129.8 (2シグナル, 各々d), 130.0 (s), 135.6 (s), 169.0 (s), 169.1 (s), 170.3 (s), 170.7 (s), 171.4 (s), 173.2 (s), 173.4 (s), 173.7(s), 174.2 (s), 176.4 (s), 178.1 (s)；
９）高速液体クロマトグラフィー
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）＝３７：６３
流速：  １．０ｍｌ／分
検出波長：  ２１０  ｎｍ
保持時間：  ５．１分。
【請求項８】
ペドバクター（Pedobacter）属に属する請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物を回収することを特徴とする、請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物の製造方法。
【請求項９】
ペドバクター（Pedobacter）属に属する請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物の生産菌がペドバクター・エスピー（Pedobacter sp.）  ＳＡＮＫ  ７２００３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５４９）であることを特徴とする、請求項８に記載の製造方法。
【請求項１０】
ペドバクター・エスピー（Pedobacter sp.）  ＳＡＮＫ  ７２００３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５４９）。
【請求項１１】
請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物又はその塩を含むことからなる医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物若しくはその塩を有効成分として含有する炎症性疾患治療または予防剤。
【請求項１３】
炎症性疾患が、敗血症およびそれに起因する疾患 、炎症性自己免疫疾患、炎症性血管疾患、炎症性心血管疾患、アレルギー性疾患、腫瘍、糖尿病、炎症性肝臓疾患、炎症性腎臓疾患、炎症性消化器疾患、炎症性心疾患、炎症性循環器疾患、感染症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性呼吸疾患症候群（ＡＲＤＳ）、発熱、移植片対宿主病、重症筋無力症、変形性関節症、痛風および火傷からなる群より選択される一つである、請求項１２に記載の治療または予防剤。
【請求項１４】
炎症性疾患が、敗血症およびそれに起因する疾患である、請求項１２に記載の治療または予防剤。
【請求項１５】
請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物又はその塩を有効成分として含有する抗炎症剤。
【請求項１６】
請求項１乃至７のいずれか一つに記載の化合物又はその塩を有効成分として含有する抗菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性伝達物質産生抑制活性を有する新規化合物又はその塩、該化合物又はその塩を含むことからなる医薬組成物、該化合物又はその塩を有効成分として含有する炎症性疾患治療又は予防剤、該化合物又はその塩を有効成分として含有する抗菌剤、該化合物の生産菌、該化合物の生産菌を培養し、次いでその培養物から該化合物を回収する工程を含むことかならる該化合物の製造方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症反応は、マクロファージや白血球、免疫担当細胞をはじめとする種々の細胞が活性化されることによって惹起される生体応答の一種であり、当該反応には細胞から放出された炎症性伝達物質が介在している。炎症性伝達物質としては、主に、蛋白質性あるいはペプチド性因子であるサイトカイン又はケモカイン、プロスタグランジンなどの脂質因子、一酸化窒素など他の低分子性因子を挙げることができる。炎症性伝達を担うサイトカインとしては、各種インターロイキン類、インターフェロン、ＴＧＦβ、ＴＮＦα等を挙げることができる。炎症性伝達物質のバランスの破綻や産生の亢進は、各種炎症性疾患の発症や進展をもたらす（非特許文献１）。炎症性疾患には、敗血症およびそれに起因する疾患、炎症性心疾患、炎症性自己免疫疾患等が含まれ、炎症性伝達物質の産生を抑制する物質は、それら炎症性疾患の治療または予防に有効とされている。
【０００３】
炎症性疾患のうち、敗血症およびそれに起因する疾患は、致死率が高いこと、患者数が多いこと等の理由により、治療法の確立が急務である。敗血症は、感染菌体から遊離したリポ多糖（ＬＰＳ）などのエンドトキシンが、マクロファージをはじめとする細胞へ作用することが引き金となって発症する疾患である。ＬＰＳは、細胞上のＣＤ１４抗原と結合することにより、当該細胞に刺激を伝達することが知られている。エンドトキシンの刺激を受けた細胞は、炎症性伝達物質を分泌し、それにより炎症反応が惹起される、次いで、組織障害、急激な血圧低下、汎発性血管内血液凝固症候群などを生じ、多臓器機能不全状態あるいはショック状態（敗血症性ショックと呼ばれる）に至る。このような敗血症およびそれに起因する疾患の治療には、炎症性伝達物質の産生を抑制する物質、特にエンドトキシン刺激による炎症性伝達物質の産生を抑制する物質が有効と期待されている。
【０００４】
炎症性疾患治療薬としては、現在、主に炎症性サイトカイン拮抗物質が使用されている。このうち、インフリキシマブ（infliximab）、アダリムマブ（adalimumab）等の抗ＴＮＦα抗体、エタネルセプト（etanercept）等の遊離型ＴＮＦα受容体ＩＩ、アナキンラ（anakinra）等のＩＬ−１受容体アンタゴニスト等は、クローン病、関節リューマチ等の治療を目的として臨床において使用されているものの（非特許文献２）、副作用、適用疾患の範囲、製剤、投与方法等の面から、炎症性疾患治療薬として十分満足できるものとは言い難い（非特許文献３乃至５）。
【０００５】
また、炎症性サイトカインの産生を抑制する物質としては、低分子化合物であるサリドマイドが知られている（非特許文献６及び７）。しかしながら、サリドマイドは、適用疾患が限定される上、副作用の懸念が大きい。
【０００６】
さらに、ＬＰＳ刺激による炎症性伝達物質産生を抑制する物質としては、ポリミキシンＢをはじめとするポリミキシン類・コリシン類等のペプチド性化合物を挙げることができる（非特許文献８乃至１１）。しかしながら、これらの化合物は副作用の懸念があり（非特許文献１２乃至１４）、抗炎症性疾患治療薬としては未だ臨床において使用されていない。
【０００７】
また、敗血症ショックの治療には、活性型プロテインＣ（drotrecogin alfa）が臨床において使用されている。しかしながら、活性型プロテインＣは、治療効果、適用可能な患者の範囲、副作用の懸念があり（非特許文献１５および１６）、敗血症およびそれに起因する疾患の治療薬として十分満足できるとは言い難い。
【非特許文献１】別冊・医学のあゆみ「サイトカインと疾患」編者今西二郎、医歯薬出版、３−７頁、２０００年７月１０日発行
【非特許文献２】ミクルス（T. R. Mikuls）及びウィーバー（A. L. Weaver）、カレント・リューマトロジカル・リポート（Curr. Rheumatol. Rep.）、５巻、２７０−２７７頁、２００３年刊行
【非特許文献３】ブレスニハン（B. Bresnihan）及びカナン（G. Cunnane）、リューマティック・ディジーズ・クリニクス・オブ・ノース・アメリカ（Rheumatic Disease Clinics of North America）、２９巻、１８５−２０２頁、２００３年刊行
【非特許文献４】フィッツチャールズ（M.-A. Fitzcharles）ら、ザ・ジャーナル・オブ・リューマトロジー（The Journal of Rheumatology）、２９巻、２５２５−２５３０頁、２００２年刊行
【非特許文献５】ロング（R. Long）及びガーダム（M. Gardam）、シー・エム・エー・ジェー（CMAJ）、１６８巻、１１５３−１１５６頁、２００３年刊行
【非特許文献６】オサンドン（A.  Ossandon）ら、クリニカル・アンド・エクスペリメンタル・リューマトロジー（Clin. Exp. Rheumatol.）、２０巻、７０９−７１８頁、２００２年刊行
【非特許文献７】マイヤーホーファー（C. Meierhofer）及びヴィーダーマン（C. J. Wiedermann）、カレント・オピニオン・オブ・ドラッグ・ディスカバリー・アンド・ディベロプメント（Curr. Opin. Drug Discov. Devel.）、６巻、９２−９９頁、２００３年刊行
【非特許文献８】リフキンド（D. Rifkind）、ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（ J. Bacteriol.）、９３巻、１４６３−６４頁、１９６７年刊行
【非特許文献９】ジェイコブス（D. M. Jacobs）及びモリソン（D. C. Morrison）、ジャーナル・オブ・イムノロジー（J. Immunol.）、１１８巻、２１−２７頁、１９７７年刊行
【非特許文献１０】バトラー（T. Butler）ら、インフェクション・アンド・イミューン（Infect. Immun.）、１６巻、４４９−４５５頁、１９７７年刊行
【非特許文献１１】フロム（A. H. From）ら、インフェクション・アンド・イミュニティー（Infect. Immun.）、２３巻、６６０−６６４頁、１９７９年刊行
【非特許文献１２】ヴィニコンベ（J. Vinnicombe） 及びステイミー（T. A. Stamey） 、インベスティゲイティブ・ウロロジー（Investigative Urology）、６巻、５０５−５１９頁、１９６９年刊行
【非特許文献１３】ペダーセン（M. F. Pedersen）ら、インベスティゲイティブ・ウロロジー（Investigative Urology）、９巻、２３４−２３７頁、１９７１年刊行
【非特許文献１４】シール（T. W. Seale）及びレンナート（O. M. Rennert）、アナルズ・オブ・クリニカル・アンド・ラボラトリー・サイエンス（Annals of Clinical and Laboratory Science）、１２巻、１−１０頁、１９８２年刊行
【非特許文献１５】ウォン−ベリンガー（A. Wong-Beringer）ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・ヘルス・システム・アンド・ファーマシー（Am. J. Health-Syst. Pharm.）、６０巻、１３４５頁、２００３年刊行
【非特許文献１６】マッコイ（C. McCoy）及びマシューズ（S. J. Matthews）、クリニカル・セラピューティクス（Clinical Therapeutics）、２５巻、３９６−４２１頁、２００３年刊行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは前述のような現状に鑑み、各種炎症性疾患および炎症の治療又は予防に有用な新規化合物を見出すべく、炎症性伝達物質産生抑制活性を有する化合物の探索研究を鋭意実施した。その結果、土壌より分離した細菌の培養物中に、炎症性伝達物質産生抑制活性を有する新規化合物を見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明は、該新規化合物、該化合物又はその塩を含むことからなる医薬組成物、該化合物又はその塩を有効成分として含有する炎症性疾患又は予防剤、該化合物又はその塩を有効成分として含有する抗炎症剤等を提供することをその目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、
（１）
下記一般式［１］
【００１１】
【化１】
2005200324.tif 000002
@0009
［式中、Ｒ１は水素原子又はメチル基、Ｒ２は水素原子又は水酸基をそれぞれ示す。］
で表される化合物又はその塩、
（２）
Ｒ１がメチル基であり且つＲ２が水酸基である、（１）に記載の化合物又はその塩、
（３）
Ｒ１がメチル基であり且つＲ２が水素原子である、（１）に記載の化合物又はその塩、
（４）
Ｒ１が水素原子であり且つＲ２が水酸基である、（１）に記載の化合物又はその塩、
（５）
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩：
１）性質：両性、無色粉末；
２）溶解性：ＤＭＳＯに可溶、水、メタノールに難溶；
３）分子式：Ｃ５３Ｈ８６Ｎ１２Ｏ１４（ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳスペクトルにより決定）；
４）分子量：１１１４（ＥＳＩ−ＭＳスペクトルにより決定）；
５）紫外線吸収スペクトル：  λｍａｘ  ｎｍ（ε）
０．０１規定塩酸で測定した紫外線吸収スペクトルは、末端吸収であるが、２４０〜２５０ｎｍにショルダーを示す；
６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：  νｍａｘ  ｃｍ−１
ＫＢｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである。
３２９９、２９５７、１７３２、１６５２、１５３４、１３８８；
７）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
０．０１規定重塩酸−重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＨＯＤのシグナルを４．８０ｐｐｍとした。）
0.84 (6H, d, J=7.0 Hz), 0.89 (3H, d, J=6.5 Hz), 0.97 (6H, d, J=5.5 Hz), 1.02 (3H, d, J=6.5 Hz), 1.07-1.20 (2H, m), 1.14 (3H, s), 1.22 (3H, s), 1.27 (2H, m), 1.50 (2H, m), 1.54-1.73 (5H, m), 1.75-1.82 (2H, m), 1.84 (3H, d, J=7.5 Hz), 1.91 (1H, m), 2.00 (1H, m), 2.46 (1H, dd, J=14.0, 3.5 Hz), 2.56 (1H, br.), 2.86 (3H, m), 3.01 (1H, dd, J=12.0, 11.5 Hz), 3.17-3.25 (2H, m), 3.30 (1H, t, J=10.5 Hz), 3.39 (1H, dd, J=13.0, 10.5 Hz), 3.53 (1H, dd, J=13.5, 3.0 Hz), 3.56 (1H, dd, J=14.0, 4.0 Hz), 4.24 (1H, dd, J=11.5, 2.5 Hz), 4.46 (1H, dd, J=12.0, 3.0 Hz), 4.56 (1H, dd, J=10.5, 5.0 Hz), 4.62 (1H, dd, J=10.0, 6.5 Hz), 4.68 (1H, dd, J=10.0, 4.5 Hz), 4.98 (1H, m), 5.12 (1H, d, J=8.5 Hz), 5.19 (1H, m), 5.65 (1H, q, J=7.0 Hz), 7.21 (1H, dd, J=7.5, 7.5 Hz), 7.25 (2H, d, J=7.5 Hz), 7.34 (2H, dd, J=7.5, 7.5 Hz)  
（ＨＯＤのシグナル中に１Ｈあり）；
８）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
０．０１規定重塩酸−重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、次の通りである。（ジオキサンのシグナルを６７．２ｐｐｍとした。）
13.1 (q), 20.1 (q), 20.6 (q), 22.4 (q), 22.5 (q), 23.1 (q), 23.2 (q), 23.6 (t), 25.0 (d), 25.3 (d), 25.8 (q), 27.0 (q), 27.9 (d), 29.1 (t), 32.3 (t), 36.4 (t), 36.8 (t), 38.3 (t), 39.4 (t), 39.9 (2シグナル, 各々t), 40.5 (t), 40.6 (t), 43.1 (t), 49.4 (d), 49.8 (d), 50.6 (d), 52.3 (d), 53.0 (d), 54.3 (d), 57.1 (d), 60.0 (d), 72.6 (s), 73.4 (d), 121.8 (d), 128.2 (d), 129.5 (2シグナル, 各々d), 129.8 (2シグナル, 各々d), 130.0 (s), 135.6 (s), 169.0 (s), 169.1 (s), 169.9 (s), 170.3 (s), 171.4 (s), 173.2 (s), 173.4 (s), 173.7 (s), 174.1 (s), 176.4 (s), 177.6 (s)；
９）高速液体クロマトグラフィー
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）＝３７：６３
流速：  １．０ｍｌ／分
検出波長：  ２１０  ｎｍ
保持時間：  ７．６分、
（６）
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩：
１）性質：両性、無色粉末；
２）溶解性：ＤＭＳＯに可溶、水、メタノールに難溶；
３）分子式：Ｃ５３Ｈ８６Ｎ１２Ｏ１３（ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳスペクトルにより決定）；
４）分子量：１０９８（ＥＳＩ−ＭＳスペクトルにより決定）；
５）紫外線吸収スペクトル：  λｍａｘ  ｎｍ（ε）
０．０１規定塩酸で測定した紫外線吸収スペクトルは、末端吸収であるが、２４０〜２５０ｎｍにショルダーを示す；
６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：  νｍａｘ  ｃｍ−１
ＫＢｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである。
３２９８、２９５７、１７３７、１６５１、１５３７、１３８８；
７）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：  δ（ｐｐｍ）
重メタノール溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＴＭＳ内部基準 ）
0.72 (3H, d, J=5.5 Hz), 0.73 (3H, d, J=5.0 Hz), 0.85 (6H, d, J=6.5 Hz), 0.95 (3H, d, J=6.5 Hz), 0.98 (3H, d, J=6.0 Hz), 1.01 (6H, m), 1.06-1.23 (2H, m), 1.23-1.33 (2H, m), 1.42-1.58 (4H, m), 1.70-1.82 (4H, m), 1.84 (3H, d, J=7.5 Hz), 1.79-1.89 (2H, m), 1.92 (2H, m), 2.32 (1H, dd, J=13.5, 2.5 Hz), 2.39 (1H, dd, J=17.0, 4.0 Hz), 2.83 (2H, m), 2.92 (1H, dd, J=13.5, 3.5 Hz), 3.01 (1H, dd, J=14.0, 9.0 Hz), 3.13-3.27 (4H, m), 3.31-3.40 (2H, m), 4.25 (1H, dd, J=11.0, 4.0 Hz), 4.49 (1H, dd, J=10.5, 4.0 Hz), 4.54 (1H, t, J=7.0 Hz), 4.61 (2H, m), 4.68 (1H, t, J=7.5 Hz), 5.10 (1H, m), 5.64 (1H, q, J=7.5 Hz), 7.18 (1H, m), 7.27(4H, m)
（ＨＯＤのシグナル中に２Ｈあり）；
８）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
重メタノール溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＴＭＳ内部基準 ）
13.4 (q), 19.2 (q), 20.0 (q), 20.6 (q), 22.0 (q), 22.9 (q), 23.0 (q), 23.6 (q), 23.9 (q), 24.8 (t), 25.9 (d), 26.0 (d), 29.1 (d), 30.6 (t), 32.9 (d), 33.4 (t), 37.7 (t), 37.8 (t), 39.7 (t), 40.4 (t), 41.2 (t), 41.7 (t), 42.0 (t), 42.1 (t), 45.1 (t), 50.2 (d), 51.2 (d), 52.4 (d), 53.2 (d), 54.5 (d), 54.8 (d), 58.4 (d), 58.6 (d), 73.0 (d), 119.4 (d), 128.2 (d), 129.8 (2シグナル, 各々d), 130.1 (2シグナル, 各々d), 132.9 (s), 137.8 (s), 168.4 (s), 170.0 (s), 171.8 (2シグナル, 各々s), 172.1 (s), 172.7 (s), 172.7 (s), 174.0 (s), 175.3 (s), 175.4 (s), 178.1 (s) ；
９）高速液体クロマトグラフィー
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）＝４２：５８
流速：  １．０ｍｌ／分
検出波長：  ２１０  ｎｍ
保持時間：  ６．２分、
（７）
下記の物理化学的性状を有する化合物又はその塩：
１）性質：両性、無色粉末；
２）溶解性：ＤＭＳＯに可溶、水、メタノールに難溶；
３）分子式：Ｃ５２Ｈ８４Ｎ１２Ｏ１４（ＥＳＩ−ＴＯＦＭＳスペクトルにより決定）；
４）分子量：１１００（ＥＳＩ−ＭＳスペクトルにより決定）；
５）紫外線吸収スペクトル：  λｍａｘ  ｎｍ（ε）
０．０１規定塩酸で測定した紫外線吸収スペクトルは、末端吸収であるが、２４０〜２５０ｎｍにショルダーを示す；
６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：  νｍａｘ  ｃｍ−１
ＫＢｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである。
３２９９、２９５８、１７３１、１６５１、１５３６、１３８９；
７）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル；  δ （ｐｐｍ）
重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）は、次の通りである。（ＨＯＤのシグナルを４．８０ｐｐｍとした。 ）
0.84 (3H, t, J=6.5 Hz), 0.90 (3H, d, J=6.5 Hz), 0.97 (6H, d, J=6.5 Hz), 1.03 (3H, d, J=6.5 Hz), 1.13 (3H, s), 1.21(3H, s), 1.22-1.30 (6H, m), 1.50 (1H, m), 1.55-1.73 (5H, m), 1.73-1.82 (2H, m), 1.83 (3H, d, J=7.5 Hz), 1.91 (1H, m), 1.98 (1H, m), 2.43 (1H, m), 2.46 (1H, m), 2.85 (2H, t, J=7.5 Hz), 2.88 (1H, dd, J=14.0, 4.0 Hz), 3.01 (1H, dd, J=13.0, 11.0 Hz), 3.14-3.28 (3H, m), 3.32 (1H, dd, J=13.0, 10.5 Hz), 3.42 (1H, dd, J=13.5, 3.5 Hz), 3.48 (1H, dd, J=13.5, 4.5 Hz), 4.24 (1H, dd, J=12.0, 3.0 Hz), 4.47 (1H, dd, J=11.5, 3.0 Hz), 4.55 (1H, dd, J=10.5, 4.5 Hz), 4.57-4.62 (2H, m), 4.95 (1H, t, J=3.5 Hz), 5.06 (1H, dd, J=10.0, 3.0 Hz), 5.20 (1H, m), 5.63 (1H, q, J=7.5 Hz), 7.20 (1H, dd, 7.5, 7.5 Hz), 7.24 (2H, d, J=7.5 Hz), 7.33 (2H, dd, J=7.5, 7.5 Hz)
（ＨＯＤのシグナル中に１Ｈあり）；
８）１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：  δ （ｐｐｍ）
重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５ＭＨｚ）は、次の通りである。（ジオキサンのシグナルを６７．２ｐｐｍとした。）
13.1 (q), 13.9 (q), 20.1 (q), 20.6 (q), 22.5 (t), 23.1 (q), 23.2 (q), 25.0 (d), 25.3 (d), 25.4 (t), 25.9 (q), 27.0 (q), 29.1 (t), 31.2 (t), 31.9 (t), 36.5 (t), 36.8 (t), 39.5 (t), 40.2 (t), 40.5 (3シグナル, 各々t), 43.7 (t), 49.6 (d), 49.9 (d), 51.5 (d), 52.9 (d), 53.2 (d), 54.3 (d), 57.2 (d), 59.9 (d), 72.6(s), 73.2 (d), 121.6 (d), 128.2 (d), 129.5 (2シグナル, 各々d), 129.8 (2シグナル, 各々d), 130.0 (s), 135.6 (s), 169.0 (s), 169.1 (s), 170.3 (s), 170.7 (s), 171.4 (s), 173.2 (s), 173.4 (s), 173.7(s), 174.2 (s), 176.4 (s), 178.1 (s)；
９）高速液体クロマトグラフィー
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）＝３７：６３
流速：  １．０ｍｌ／分
検出波長：  ２１０  ｎｍ
保持時間：  ５．１分、
（８）
ペドバクター（Pedobacter）属に属する（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物を回収することを特徴とする、（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物の製造方法、
（９）
ペドバクター（Pedobacter）属に属する（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物の生産菌がペドバクター・エスピー（Pedobacter sp.）  ＳＡＮＫ  ７２００３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５４９）であることを特徴とする、（８）に記載の製造方法、
（１０）
ペドバクター・エスピー（Pedobacter sp.）  ＳＡＮＫ  ７２００３（ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５４９）、
（１１）
（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物又はその塩を含むことからなる医薬組成物、
（１２）
（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物若しくはその塩を有効成分として含有する炎症性疾患治療または予防剤、
（１３）
炎症性疾患が、敗血症およびそれに起因する疾患 、炎症性自己免疫疾患、炎症性血管疾患、炎症性心血管疾患、アレルギー性疾患、腫瘍、糖尿病、炎症性肝臓疾患、炎症性腎臓疾患、炎症性消化器疾患、炎症性心疾患、炎症性循環器疾患、感染症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性呼吸疾患症候群（ＡＲＤＳ）、発熱、移植片対宿主病、重症筋無力症、変形性関節症、痛風および火傷からなる群より選択される一つである、（１２）に記載の治療または予防剤、
（１４）
炎症性疾患が、敗血症およびそれに起因する疾患である、（１２）に記載の治療または予防剤、
（１５）
（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物又はその塩を有効成分として含有する抗炎症剤、
（１６）
（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物又はその塩を有効成分として含有する抗菌剤、および
（１７）
（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の化合物若しくはその塩を炎症性伝達物質産生細胞と接触させる工程を含むことからなる、炎症性伝達物質産生細胞による炎症性伝達物質の産生を抑制する方法、
等に関する。
【００１２】
本発明の化合物又はその塩は、上記（１）乃至（７）に記載されている。本発明においては、該化合物又はその塩を「Ｂ−１２４８９物質」と呼ぶ。また、本発明においては、Ｂ−１２４８９物質のうち、上記（２）又は（５）に記載の化合物、（３）又は（６）に記載の化合物、ならびに、（４）又は（７）に記載の化合物を、それぞれ、化合物Ａ、化合物Ｂ、ならびに、化合物Ｃと呼ぶ。
【００１３】
本発明のＢ−１２４８９物質は、種々の異性体を有する。本発明においては、これらの異性体がすべて単一の式で表されているが、ラセミ化合物等それらの異性体ならびにそれらの異性体の混合物も全て本発明のＢ−１２４８９物質に含まれる。立体特異的合成法、あるいは光学活性化合物を原料化合物とする合成法により、本発明のＢ−１２４８９物質の各異性体を直接製造することができる。また、先ず各異性体の混合物を製造し、次いで該混合物より所望の各異性体を分離することができる。
【００１４】
本発明のＢ−１２４８９物質はアミノ基およびカルボン酸基等を有し、当業者に周知の方法を用いて塩にすることができる。本発明のＢ−１２４８９物質にはそのような塩も包含される。塩としては、医学的に使用され、薬理学的に許容されるものであれば特に限定はない。また、本発明のＢ−１２４８９物質の塩が医薬以外の用途に用いられる場合、例えば中間体として使用される場合には、該用途に用いることのできるものであれば特に限定されない。そのような塩としては、例えば、臭化物塩、塩化物塩、塩酸塩、臭酸塩、ヨウ化物塩、硫酸塩、リン酸塩、ニリン酸塩、アンモニウム塩のような無機塩；酢酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、パモ酸塩、酒石酸塩のような有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニア塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；および、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、アスパラギン塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。好適には、薬理学的に許容される塩として好ましく使用されるもの、すなわち、塩酸塩、パモ酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩等を挙げることができる。
【００１５】
また、本発明のＢ−１２４８９物質は溶剤和物になり得る。例えば、大気中での放置、再結晶などを経て、吸着水の付加、水和物化等が時に生じ得る。それらの溶剤和物も本発明に包含される。
【００１６】
さらに、本発明は、生体内において代謝されて本発明のＢ−１２４８９物質に変換される化合物、いわゆるプロドラッグも全て包含する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のＢ−１２４８９物質は、炎症性伝達物質産生抑制活性および抗菌活性を有しており、敗血症およびそれに起因する疾患など、各種炎症性疾患、炎症および感染症の予防または治療に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の化合物Ａ、化合物Ｂおよび化合物Ｃは、長野県菅平にて採取された土壌より分離されたペドバクター・エスピー（Pedobacter  sp.）  ＳＡＮＫ  ７２００３株（以下、単に「ＳＡＮＫ  ７２００３株」という。）の培養物中に見出された。
【００１９】
ＳＡＮＫ  ７２００３株について以下に記載する。
［１］形態学的性状
普通寒天培地（栄研化学製）上で２８℃、２日間培養後の観察では、細胞は直径０．４〜０．６μｍ、長さ３〜４μｍの長桿菌で、鞭毛運動をしない。胞子を形成せず、グラム染色は陰性である。
［２］普通寒天培地（栄研化学製）での生育状態
２８℃で２４時間培養したコロニーは不透明なクリームがかった白色を呈し、４８時間培養したコロニーはうすい黄色である。コロニーの形状は円形、全縁であり、表面は平滑、かつ扁平である。滑走運動によるコロニーの拡がりは観察されない。
［３］生理学的性状
（１）カタラーゼ    ：＋
（２）オキシダーゼ  ：＋
（３）Ｏ−Ｆ（オキシダティブ−ファーメンタティブ）テスト〔ヒュ−・レイフソン（Ｈｕｇｈ  Ｌｅｉｆｓｏｎ）法〕：Ｄ−グルコースから好気的に酸を生成する
（４）寒天の分解    ：−
（５）デンプンの分解：＋
（６）ＤＮａｓｅ    ：＋
（７）ウレアーゼ    ：−
（８）生育温度      ：１０〜３１℃
（９）炭素源の利用性（飯塚と駒形の培地〔長谷川武治編、「微生物の分類と同定（下）」、１３３−１３４頁、１９８５年刊〕で行った場合）：  
Ｄ‐グルコース  ：＋
Ｄ‐キシロース  ：＋
Ｌ‐アラビノース：−
セロビオース    ：＋
マルトース      ：＋
シュクロース    ：＋
グリセロール    ：−
クエン酸        ：−
エタノール      ：−
［４］遺伝学的性状
（１）Ｇ＋Ｃ含量：４０．６％
（２）１６Ｓ  ｒＤＮＡ解析：解読した塩基配列（１４０４  ｂｐ：配列表の配列番号１）をジーンバンク（GenBank）に登録されている細菌の各種の基準株のデータと比較したところ、ペドバクター・クリオコニティス・ディーエスエム１４８２５（Pedobacter cryoconitis DSM 14825）と最も高く、相同値は９８．６％であった。さらに、サイトウおよびネイらの近接結合法（Saitou N., and M. Nei, Mol. Bio．Evol.,  4,  p406-425(1987)）により系統解析し、図１に示す結果を得た。
【００２０】
以上の菌学的性状を有するＳＡＮＫ  ７２００３株の同定を、バージーズ・マニュアル・オブ・システマチック・バクテリオロジー（Bergey's Manual of Systematic Bacteriology）、１巻（１９８４年刊行）、ステイン（Steyn）らのインターナショナル・ジャーナル・オブ・システマチック・バクテリオロジー（International Journal of Systematic Bacteriology）、４８巻、１６５−１７７頁（１９９８年）などの最新の情報をもとに行った。１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列の解析結果から、ＳＡＮＫ  ７２００３株は、サイトファーガ−フレッキシバクター−バクテロイデス・グループ（Cytophaga-Flexibacter-Bacteroides Group）に属し、中でもペドバクター（Pedobacter）属の菌種と近い系統関係を示した。また、ＳＡＮＫ  ７２００３株の形態学性状、酸素に対する挙動やデンプン分解能は、ペドバクター（Pedobacter）のそれらと良く一致し、ＳＡＮＫ  ７２００３株はペドバクター（Pedobacter）属に属するものと同定された。１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列の解析において、ＳＡＮＫ  ７２００３株と最も近縁な系統関係を示したペドバクター・クリオコニティス（Pedobacter cryoconitis）は低温菌（生育温度は１〜２５℃）であり、中温菌のＳＡＮＫ  ７２００３株とは別種である。また、ＳＡＮＫ  ７２００３株は既知のペドバクター（Pedobacter）属細菌の種とは１６Ｓ  ｒＤＮＡの塩基配列から明確に区別できた。よって、ＳＡＮＫ  ７２００３株は、ペドバクター（Pedobacter）属に属するが、該属に属するいずれの既存種にも属さない株と同定された。
【００２１】
ＳＡＮＫ  ７２００３株は、「ペドバクター・エスピー（Pedobacter  sp.）  ＳＡＮＫ  ７２００３」として、２００３年１１月１２日、日本国茨城県つくば市東１−１−１中央第６の独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに国際寄託され、受託番号  ＦＥＲＭ  ＢＰ−０８５４９を付与された。
【００２２】
周知の通り、細菌類は自然界において、又は人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こしやすく、本発明のＳＡＮＫ  ７２００３株もそのような変異を起こすことがある。本発明において、ＳＡＮＫ  ７２００３株はその変異株も全て包含する。
【００２３】
また、これらの変異株の中には、遺伝的方法、たとえば組み換え、形質導入、形質転換等によりえられたものも包含される。即ち、本発明のＢ−１２４８９物質を生産するＳＡＮＫ  ７２００３株、それらの変異株およびそれらと明確に区別されない菌株は、全て本発明のＳＡＮＫ  ７２００３株に包含される。
本発明のＢ−１２４８９物質は、当該物質の生産菌を、通常微生物による発酵生産に使用されるような、微生物が同化できる炭素源、窒素源および無機塩を含有する培地を用いて生産菌を培養し、次いでその培養物からＢ−１２４８９物質を回収することにより、製造することができる。該製造方法、ならびに、Ｂ−１２４８９物質生産菌も本発明に包含される。
［Ａ］Ｂ−１２４８９物質生産菌
本発明のＢ−１２４８９物質生産菌としては、該物質を生産する微生物であれば特に限定されるものではないが、好適には該物質を生産する細菌であり、より好適には該物質を生産するペドバクター（Pedobacter）属の細菌であり、より一層好適には前記［１］乃至［４］の特性を有し且つ該物質を生産するペドバクター（Pedobacter）属の細菌であり、最適にはＳＡＮＫ  ７２００３株である。
［Ｂ］Ｂ−１２４８９物質生産菌の培養
Ｂ−１２４８９物質生産菌の培養に使用される培地について以下に記載する。
【００２４】
炭素源としては、グルコース、フルクトース、マルトース、シュークロース、マンニルトース、グリセリン、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウモロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等を単独で用いるか、あるいは２つ以上を併用することができる。炭素源の含有量は、通常、培地量の１〜１０重量％で変量する。
【００２５】
窒素源としては、蛋白質もしくはその加水分解物を含有する物質、無機塩等を用いることができる。そのような窒素源としては、大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実油、カゼイン加水分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等を例示することができる、それらは単独で用いるか、あるいは２つ以上を併用することができる。窒素源の含有量は、通常、培地量の０．１〜１０重量％の範囲で変量する。
【００２６】
栄養無機塩としては、イオンを得ることができる通常の塩類、金属等を用いることができる。塩類としては、ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サルフェート、クロライド、カーボネート等を例示することができる。金属としては、カリウム、カルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の金属を例示することができる。
【００２７】
Ｂ−１２４８９物質生産菌を液体培養するに際しては、シリコン油、植物油、界面活性剤等を消泡剤として使用することができる。化合物Ａ、化合物Ｂ又は化合物Ｃを製造する目的でＳＡＮＫ  ７２００３株を培養する際の培地のｐＨは、通常、４．０〜９．０の範囲で変化させ得る。
【００２８】
ＳＡＮＫ  ７２００３株の培養温度は、通常１０〜３１℃、好適には１２〜２８℃、より好適には２０〜２８℃に設定する。化合物Ａ、化合物Ｂ又は化合物Ｃを製造するためのＳＡＮＫ  ７２００３株の培養には、２０〜２８℃が好適である。当該化合物製造のための培養は、通常、固体培養法、振とう培養法、通気攪拌培養法等により好気的条件下で行う。
【００２９】
ＳＡＮＫ  ７２００３株を比較的小さな規模で培養する場合、例えば、２８℃にて数日間培養することができる。当該小規模培養は、通常三角フラスコを用い、１つ又は２つ以上の段階からなる種培養より開始し、インキュベーター中で、数日間あるいは充分に生長するまでの間、振とうして行う。得られた種培養物の一部または全部を、次段階の種培地または本培養培地に接種する。本培養培地を含むフラスコを、インキュベーター中で、数日間振とうすることにより、得られた本培養培地（培養物）中に所望のＢ−１２４８９物質を得ることができる。
【００３０】
一方、ＳＡＮＫ  ７２００３株を比較的大きな規模で培養する場合、攪拌機、通気装置、保温装置等をつけた適当なタンクを用いることが好ましい。該装置を用いることにより、培地を予め該タンクの中で作製することができる。例えば、本培養培地を１２１℃にて加熱滅菌し、冷却する。次いで、種培養物を接種し、２８℃にて通気攪拌しつつ本培養を行う。このような培養方法は、所望のＢ−１２４８９物質を大量に製造するのに適している。
【００３１】
本発明のＢ−１２４８９物質生産菌を培養して該物質を製造する場合、該培養物中のＢ−１２４８９物質の生産量は、後述する高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、生物活性試験等により、経時的に追跡することができる。ＨＰＬＣ分析又は生物活性試験にて追跡する場合、予め、培養物をアセトン等の親水性溶媒で抽出し、該親水性溶媒を留去した後、ｎ−ブタノール等の水と混和しない溶媒で抽出する。次いで、該水と混和しない溶媒を留去した後、適当な溶媒に再溶解したものを分析又は試験に供することが好ましい。生物活性試験としては、細胞によるＴＮＦα産生阻害試験、抗炎症試験、抗菌試験等を挙げることができる。
［Ｃ］抽出精製
培養終了後、珪藻土等を助剤とするろ過操作又は遠心分離操作により、培養物を可溶性画分（培養上清）および不溶性画分（菌体）に分別し、次いで得られた各画分中に存在するＢ−１２４８９物質を、その物理化学的性状を利用して抽出精製することができる。
【００３２】
例えば、培養上清を、ｎ−ブタノール、酢酸エチルなど水と混和しない有機溶媒の１つ又は２つ以上の混合物を用いて抽出することにより、該抽出物より、Ｂ−１２４８９物質を精製することができる。
【００３３】
得られた抽出物を、各種吸着用樹脂を用いたクロマトグラフィーに供することができる。吸着剤としては、活性炭、アンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（以上ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＨＰ−５０、ＣＨＰ２０Ｐ（以上三菱化学（株）社製）等を挙げることができる。前記の抽出物をこれらの吸着剤と接触させてＢ−１２４８９物質を吸着せしめた後、メタノール水、アセトン水等の含水溶媒を用いて所望のＢ−１２４８９物質を溶出することができる。反対に、前記の抽出物をこれらの吸着剤と接触させて不純物を吸着せしめ、所望のＢ−１２４８９物質を素通り画分中に回収することもできる。
【００３４】
得られたＢ−１２４８９含有画分を、イオン交換クロマトグラフィーに供することができる。イオン交換樹脂としては、ダウエックス  ５０Ｗｘ４、ダウエックス１ｘ２、ダウエックス  ＳＢＲ−Ｐ（以上、ダウ・ケミカル社製）等を挙げることができる。Ｂ−１２４８９含有画分をイオン交換樹脂と接触させてＢ−１２４８９物質を吸着せしめた後、塩酸、アンモニア等の溶媒を用いて所望のＢ−１２４８９物質を溶出することができる。反対に、前記の抽出物をこれらのイオン交換樹脂と接触させて不純物を吸着せしめ、所望のＢ−１２４８９物質を素通り画分中に回収することもできる。
【００３５】
得られたＢ−１２４８９含有画分を、さらに、シリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフロリジル等の担体を用いた吸着カラム・クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ＴＳＫゲルトヨパールＨＷ−４０Ｆ（登録商標、トーソー（株）社製）、セファデックスＬＨ−２０（登録商標、アマシャム バイオサイエンス社製）等を用いた分配カラムクロマトグラフィー、コスモシール１４０Ｃ１８（登録商標、ナカライテスク社製）等を用いた逆相カラムクロマトグラフィー、順相もしくは逆相カラムを用いたＨＰＬＣ等により精製し、所望のＢ−１２４８９物質を単離することができる。
【００３６】
本発明のＢ−１２４８９物質を精製する際の、各精製工程における該物質の挙動は、例えば、次の条件によるＨＰＬＣにより追跡することができる。
［Ｉ］化合物Ａを検出するためのＨＰＬＣの条件
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相    ：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）
＝３７：６３
流  速    ：  １．０ｍｌ／分
検出波長  ：  ２１０  ｎｍ
保持時間  ：  ７．６分
［ＩＩ］化合物Ｂを検出するためのＨＰＬＣの条件
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８（φ４．６×１５０ｍｍ）
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相    ：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）
＝４２：５８
流  速    ：  １．０ｍｌ／分
検出波長  ：  ２１０  ｎｍ
保持時間  ：  ６．２分
［ＩＩＩ］化合物Ｃを検出するためのＨＰＬＣの条件
分離カラム：  Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８（φ４．６×１５０ｍｍ）
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相    ：  アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）
＝３７：６３
流  速    ：  １．０ｍｌ／分
検出波長  ：  ２１０  ｎｍ
保持時間  ：  ５．１分
本発明のＢ−１２４８９物質は、炎症性伝達物質産生抑制活性を有し、炎症性疾患および炎症の治療または予防に有用である。本発明は、Ｂ−１２４８９物質を含むことからなる医薬組成物、並びに、該物質を有効成分として含有する炎症性疾患治療又は予防剤および抗炎症剤を提供する。
【００３７】
本発明において、「炎症性疾患」とは、その経過において持続性または一過性に炎症を呈し、且つその炎症を軽減することにより症状が改善され得る疾患を意味する。炎症性疾患としては、敗血症およびそれに起因する疾患 、炎症性自己免疫疾患、アレルギー性疾患、炎症性骨関節疾患、腫瘍、糖尿病、炎症性肝臓疾患、炎症性腎臓疾患、炎症性消化器疾患、炎症性心疾患、炎症性循環器疾患、感染症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、急性呼吸疾患症候群（ＡＲＤＳ）、発熱、移植片対宿主病、重症筋無力症、変形性関節症、痛風、火傷等を例示することができる。
【００３８】
敗血症およびそれに起因する疾患としては、敗血症、敗血症ショック、エンドトキシンショック、エキソトキシンショック、高血圧、低血圧、汎発性血管内血液凝固症候群（ＤＩＣ）に代表されるショック性血管塞栓、これらの病態に伴う臓器不全、多臓器不全（ＭＯＦ）等を例示することができる。
【００３９】
炎症性自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス、橋本病、シェーグレン症候群、悪性貧血、アジソン氏病、強皮症、グッドパスチャー症候群、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、自己免疫性溶血性貧血、自然不妊、多発性硬化症、バセドー病、突発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、インスリン依存性糖尿病等を例示することができる。
【００４０】
アレルギー性疾患としては、アトピー、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎等を例示することができる。
【００４１】
炎症性骨関節疾患としては、関節リウマチ、変形性関節炎、結晶誘発性関節炎等を例示することができる。
【００４２】
腫瘍としては、癌、癌転移、白血病、骨髄腫、リンパ腫等を例示することができる。
【００４３】
糖尿病としては、インスリン依存性糖尿病、インシュリン非依存性糖尿病、糖尿病性合併症等を例示することができる。
【００４４】
炎症性肝臓疾患としては、劇症肝炎、慢性肝炎、ウイルス性肝炎およびアルコール性肝炎に代表される肝炎、肝硬変、肝不全等を例示することができる。
【００４５】
炎症性腎臓疾患としては、腎炎、糸球体腎炎、腎不全等を例示することができる。
【００４６】
炎症性消化器疾患としては、胃炎、消化性潰瘍、膵炎、クローン病、潰瘍性大腸炎等を例示することができる。
【００４７】
炎症性心疾患としては、心血管塞栓性疾患、心筋梗塞および心筋梗塞後遺症に代表される炎症性心血管疾患、心不全、心弁膜症、心筋症等を例示することができる。
【００４８】
炎症性循環器疾患としては、低血圧、血管塞栓性疾患、動脈硬化症、再生不良性貧血、虚血再潅流障害、虚血性脳障害ショック性血管塞栓、汎発性血管内血液凝固症候群（ＤＩＣ）に代表されるショック性血管塞栓等を例示することができる。
【００４９】
また、本発明のＢ−１２４８９物質は抗菌活性を有し、感染症の治療または予防に有用である。本発明は、Ｂ−１２４８９物質を有効成分として含有する抗菌剤を提供する。
【００５０】
感染症としては、細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症等を挙げることができ、細菌感染症としては、ヘリコバクター・ピロリ感染症、侵襲性ブドウ状球菌感染症、急性バクテリア髄膜炎、結核等を、ウイルス感染症の原因となるウイルスとしては、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス、水痘ウイルス、パピローマウイルス、脳炎ウイルス等を、真菌感染症としては、カンジダ症、真菌症等をそれぞれ例示することができる。
【００５１】
本発明のＢ−１２４８９物質は、エンドトキシン刺激による炎症性サイトカイン産生を抑制する活性ならびに抗菌活性を併せ持つことから、上記の炎症性疾患のうち、特に、敗血症およびそれに起因する疾患の治療又は予防に好適である。
【００５２】
本発明のＢ−１２４８９物質は、医薬としてヒト又はヒト以外の動物に投与されるに際し、種々の形態をとり得る。その投与形態は、製剤、年齢、性別、疾患等に依存する。例えば、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等は経口投与される。注射剤等は静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、皮下投与又は腹腔内投与される。坐剤は直腸内投与される。軟膏等は外用剤として使用される。
【００５３】
Ｂ−１２４８９物質を有効成分として含有する医薬製剤は、常法に従い、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、矯味矯臭剤、コーティング剤等、医薬製剤分野において通常使用し得る公知の補助剤を用いて製造することができる。
【００５４】
錠剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用することができ、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、珪酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、澱粉等の保湿剤、澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状珪酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を挙げることができる。錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多重錠とすることができる。
【００５５】
丸剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用することができ、例えば、ブドウ糖、乳糖、澱粉、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤を挙げることができる。
【００５６】
注射剤として調製される場合、液剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であることが好ましく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に形成するに際しては、希釈剤として当該分野において公知のものを広く使用することができ、例えば、水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エポキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることができる。等張を維持するために充分な量の食塩、ブドウ糖又はグリセリンを含有せしめてもよい。溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤糖、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤、他の薬剤等を含有せしめてもよい。
【００５７】
なお、注射剤を静脈内投与する場合、単独で、ブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して、又は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等とのエマルジョンとして投与される。
【００５８】
坐剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用することができ、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等を挙げることができる。
【００５９】
軟膏等の外用剤の形態に成形するに際しては、賦型剤として、疎水性基剤（油脂性軟膏基剤）、吸水基剤、親水性基剤（クリーム）ならびに水溶性基剤（非グリース製軟膏基剤）のいずれか一つに属する、当該分野で公知のものを広く使用することができる。本発明の外用剤は、アトピー性皮膚炎や火傷の治療に好適に使用される。
【００６０】
上述の医薬製剤に含有せしめるＢ−１２４８９の量は、特に限定されないが、上限は３０乃至７０重量％、下限は１重量％であり、好適な範囲は１乃至３０重量％である。
【００６１】
Ｂ−１２４８９物質の投与量は、症状、年齢、体重、投与方法、剤形等に依存するが、通常成人に対して１日当たり投与するＢ−１２４８９物質の量は、上限が１００乃至１０００ｍｇ、下限が１乃至１０ｍｇであり、好適な範囲は１０乃至１００ｍｇである。
【００６２】
Ｂ−１２４８９の投与回数は、数日に１回、１日１回、又は１日複数回である。
【００６３】
本発明は、薬理上有効な量のＢ−１２４８９物質を投与することからなる炎症性疾患、炎症又は感染症の治療又は予防方法、それら疾患の治療又は予防のためのＢ−１２４８９物質の使用をも提供する。
【実施例】
【００６４】
次に、実施例、試験例、製剤例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。
実施例１．Ｂ−１２４８９物質生産菌の培養
［種培養］
２Ｌ容三角フラスコへ、普通ブイヨン（栄研化学社製）１．８％を含む培地３００ｍｌを分注し、１２１℃にて１５分間加熱滅菌した後、２８℃まで冷却した。次いで、ペドバクター・エスピー（Pedobacter sp.）  ＳＡＮＫ  ７２００３株のスラントへ、０．８５％食塩水５ｍｌを添加してホモジナイズしたもの１ｍｌを前記三角フラスコへ接種し、回転振盪培養機を用い、２１０ｒｐｍ、２８℃にて４７時間培養し、種培養液とした。
［本培養］
普通ブイヨン（栄研化学社製）１．８％を含む培地１５Ｌを、３０Ｌ容ジャー・ファーメンター中にて調製し、１２１℃にて１５分間加熱滅菌した後、２８℃まで冷却した。種培養液３００ｍｌをジャー・ファーメンターへ接種し、毎分７．５Ｌの空気を通気することにより溶存酸素量５．０ｐｐｍを保持させるべく、回転数を１００乃至２２０ｒｐｍの範囲内で調整しつつ、２８℃にて７０時間通気攪拌培養した。
実施例２．化合物Ａの単離
実施例１で得られた培養液６０Ｌを遠心分離し上清と菌体に分けた。上清を塩酸でｐＨ８．０に調整し、容積７．２ＬのＨＰ−２０カラム（三菱化成  ダイアイオンＨＰ−２０）に付した。該カラムを、水（２１Ｌ）、５０％アセトン水（２１Ｌ）で順に洗浄した後、６０％アセトン水−０．１％ギ酸（１７．４Ｌ）で溶出し、溶出画分Ｎｏ．１（４Ｌ）、Ｎｏ．２（１．４Ｌ）、ならびに、Ｎｏ．３乃至Ｎｏ．５（各４Ｌ）を回収した。化合物Ａを含むフラクションＮｏ．３およびＮｏ．４を合併し（計８Ｌ）、減圧下濃縮したのち凍結乾燥し、化合物Ａを含む褐色粉末６．５７ｇを得た。
【００６５】
次いで、コスモシルカラム・クロマトグラフィーを行った。すなわち、前記褐色粉末６．５７ｇをアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：９  ８００ｍｌに溶解し、予めアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：９で平衡化したコスモシルカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  １４０Ｃ１８−ＯＰＮ、容積２．４Ｌ）に付した。該カラムを、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：３（５Ｌ）、同＝３：７（８Ｌ）、同＝７：１３（１Ｌ）で順に洗浄した後、同＝７：１３（４．５Ｌ）、同＝２：３（３Ｌ）を用いて吸着画分を段階的に溶出させ、溶出液を３００ｍｌずつ２５個の画分として回収した。
【００６６】
化合物Ａを含む溶出画分Ｎｏ．７乃至Ｎｏ．１０を合併し（１３５０ｍｌ）、減圧下で濃縮することによりアセトニトリルを留去した後、１０％苛性ソーダ水でｐＨ６．０に調整した。これを、ＨＰ−２０カラム（容積３００ｍｌ）へ付し、水（１５００ｍｌ）で洗浄した後、６０％アセトン水−０．１％ギ酸（９００ｍｌ）で溶出した。得られた溶出液を減圧下で濃縮したのち凍結乾燥することにより、化合物Ａを無色粉末として１．３ｇ単離した。
【００６７】
単離された化合物Ａを下記条件のＨＰＬＣにて分析した：
分離カラム  ：Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相      ：アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）
＝３７：６３
流  速      ：  １．０ｍｌ／分
検出波長    ：  ２１０ｎｍ
保持時間    ：  ７．６分。
実施例３．化合物Ｂの単離
実施例１で得られた培養液６０Ｌを遠心分離し上清と菌体に分けた。上清を塩酸でｐＨ８．０に調整し、容積７．２ＬのＨＰ−２０カラム（三菱化成  ダイアイオンＨＰ−２０）に付した。該カラムを、水（２１Ｌ）、５０％アセトン水（２１Ｌ）で順に洗浄した後、６０％アセトン水−０．１％ギ酸（１７．４Ｌ）で溶出し、溶出画分Ｎｏ．１（４Ｌ）、Ｎｏ．２（１．４Ｌ）、ならびに、Ｎｏ．３乃至Ｎｏ．５（各４Ｌ）を回収した。化合物Ｂを含むフラクションＮｏ．３およびＮｏ．４を合併し（計８Ｌ）、減圧下濃縮したのち凍結乾燥し、化合物Ｂを含む褐色粉末６．５７ｇを得た。
【００６８】
次いで、コスモシルカラム・クロマトグラフィーを行った。すなわち、前記褐色粉末６．５７ｇをアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：９  ８００ｍｌに溶解し、予めアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：９で平衡化したコスモシルカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  １４０Ｃ１８−ＯＰＮ、容積２．４Ｌ）に付した。該カラムを、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：３（５Ｌ）、同＝３：７（８Ｌ）、同＝７：１３（１Ｌ）で順に洗浄した後、同＝７：１３（４．５Ｌ）、同＝２：３（３Ｌ）を用いて吸着画分を段階的に溶出させ、溶出液を３００ｍｌずつ２５個の画分として回収した。
【００６９】
化合物Ｂを含む溶出画分Ｎｏ．２３乃至Ｎｏ．２５を合併し（１０００ｍｌ）、減圧下で濃縮することによりアセトニトリルを留去した後、１０％苛性ソーダ水でｐＨ６．０に調整した。これを、ＨＰ−２０カラム（容積３０ｍｌ）へ付し、水（１５０ｍｌ）で洗浄した後、６０％アセトン水−０．１％ギ酸（１５０ｍｌ）で溶出した。得られた溶出液を減圧下で濃縮したのち凍結乾燥することにより、化合物Ｂを無色粉末として９８ｍｇ単離した。
【００７０】
単離された化合物Ｂを下記条件のＨＰＬＣにて分析した：
分離カラム  ：Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相      ：アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）
＝４２：５８
流  速      ：  １．０ｍｌ／分
検出波長    ：  ２１０ｎｍ
保持時間    ：  ６．２分。
実施例４．化合物Ｃの単離
実施例１で得られた培養液６０Ｌを遠心分離し上清と菌体に分けた。上清を塩酸でｐＨ８．０に調整し、容積７．２ＬのＨＰ−２０カラム（三菱化成  ダイアイオンＨＰ−２０）に付した。該カラムを、水（２１Ｌ）、５０％アセトン水（２１Ｌ）で順に洗浄した後、６０％アセトン水−０．１％ギ酸（１７．４Ｌ）で溶出し、溶出画分Ｎｏ．１（４Ｌ）、Ｎｏ．２（１．４Ｌ）、ならびに、Ｎｏ．３乃至Ｎｏ．５（各４Ｌ）を回収した。化合物Ｃを含むフラクションＮｏ．３およびＮｏ．４を合併し（計８Ｌ）、減圧下濃縮したのち凍結乾燥し、化合物Ｃを含む褐色粉末６．５７ｇを得た。
【００７１】
次いで、コスモシルカラム・クロマトグラフィーを行った。すなわち、前記褐色粉末６．５７ｇをアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：９  ８００ｍｌに溶解し、予めアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：９で平衡化したコスモシルカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  １４０Ｃ１８−ＯＰＮ、容積２．４Ｌ）に付した。該カラムを、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：３（５Ｌ）、同＝３：７（８Ｌ）、同＝７：１３（１Ｌ）で順に洗浄した後、同＝７：１３（４．５Ｌ）、同＝２：３（３Ｌ）を用いて吸着画分を段階的に溶出させ、溶出液を３００ｍｌずつ２５個の画分として回収した。
【００７２】
化合物Ｃを含む溶出画分Ｎｏ．４乃至Ｎｏ．６を合併し（１０００ｍｌ）、減圧下で濃縮することによりアセトニトリルを留去した後、１０％苛性ソーダ水でｐＨ６．０に調整した。これを、ＨＰ−２０カラム（容積３０ｍｌ）へ付し、水（１５０ｍｌ）で洗浄した後、６０％アセトン水−０．１％ギ酸（１５０ｍｌ）で溶出した。得られた溶出液を減圧下で濃縮したのち凍結乾燥することにより、化合物Ｃの部分精製画分１．１５ｇを得た。
【００７３】
次いで、再度コスモシルカラム（容積１００ｍｌ）・クロマトグラフィーを行った。すなわち、前記の部分精製画分１．１５ｇを、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：３  ５０ｍｌに溶解した。これを、予めアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：３で平衡化したコスモシルカラムに付し、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）＝１：３（３２０ｍｌ）、同＝３：７（６００ｍｌ）を用いて吸着画分を段階的に溶出させ、溶出液を２０ｍｌずつ４６個の画分として回収した。
【００７４】
化合物Ｃを含む溶出画分Ｎｏ．３６乃至Ｎｏ．３９を合併し（１００ｍｌ）、減圧下で濃縮することによりアセトニトリルを留去した後、１０％苛性ソーダ水でｐＨ６．０に調整した。これを、再度ＨＰ−２０カラム（８ｍｌ）へ付し、水（２４ｍｌ）で洗浄した後、６０％アセトン水−０．１％ギ酸（２４ｍｌ）で溶出した。得られた溶出液を減圧下で濃縮したのち凍結乾燥することにより、化合物Ｃを無色粉末として１３２ｍｇ単離した。
【００７５】
単離された化合物Ｃを下記条件のＨＰＬＣにて分析した：
分離カラム  ：Ｗａｔｅｒｓ  ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８
（φ４．６×１５０ｍｍ：ウォーターズ社製）
移動相      ：アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（pH3.0）
＝３７：６３
流  速      ：  １．０ｍｌ／分
検出波長    ：  ２１０ｎｍ
保持時間    ：  ５．１分。
試験例１．エンドトキシン刺激による細胞のＴＮＦα産生に対するＢ−１２４８９物質の効果
ヒト単球系細胞株Ｕ９３７をエンドトキシン刺激した際のＴＮＦα産生に対する実施例化合物の抑制率を測定した。すなわち、非働化新生仔牛血清を１０％（容積％）含むＲＰＭＩ１６４０培地に、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール１３−アセテートを終濃度３０ｎｇ／ｍｌとなるよう添加した。該培地にＵ９３７細胞を懸濁し、９６穴培養プレート（コーニング）へ、１穴あたりの細胞数／容量が２×１０４個／０．１ｍｌとなるように播き、３７℃にて、５％ＣＯ２、湿度１００％の炭酸ガスインキュベーター中で３日培養した。培養終了後、培養上清を除去した。各穴へ、ＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ  ０５５：Ｂ５、シグマ）を、終濃度３０ｎｇ／ｍｌとなるよう添加し、併せて種々の濃度の被検化合物Ａ、Ｂ又はＣを添加した。培養プレートを再び炭酸ガスインキュベーター中にて４．５時間培養した後、培養上清を回収した。９６半穴ブラックプレート（コーニング）ならびにシス  バイオ  インターナショナル社製のＨＴＲＦ定量キットを用い、培養上清中のＴＮＦα濃度をディスカバリー（パッカード社）にて時間分解蛍光として測定した。ＬＰＳ非存在下の測定値（Ｘ）、被検化合物非存在下の測定値（Ｙ）および被検化合物存在下の測定値（Ｚ）より、下記の計算式［Ｉ］を用いてＴＮＦα産生抑制率を求め、該抑制率５０％に相当する被検化合物濃度をＩＣ５０として表１にまとめた。
ＴＮＦα産生抑制率（％）＝｛１−（Ｚ−Ｘ）／（Ｙ−Ｘ）｝×１００    ［Ｉ］
［表１］ＴＮＦα産生に対する効果（１）
―――――――――――――――――――
化合物            ＩＣ５０（μＭ）
―――――――――――――――――――
化合物Ａ          ０．５
化合物Ｂ          ０．２
化合物Ｃ          ０．５
―――――――――――――――――――
試験例２．エンドトキシン刺激による血中ＴＮＦα濃度上昇に対するＢ−１２４８９物質の効果
雄性Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスをエンドトキシン刺激した際の血中ＴＮＦα濃度上昇に対するＢ−１２４８９物質の効果を検討した。エンドトキシン刺激による血中ＴＮＦα濃度上昇の惹起は、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（British Journal of Pharmacology）、第１２８巻、５−１２頁（１９９９年）に記載のＥｎｄｏらの方法を一部修正して行った。すなわち、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウス（７週齢、日本エスエルシー株式会社）１群５匹へ、１ｍｇ／体重ｋｇの化合物Ａ（実施例２にて単離）、化合物Ｂ（実施例３にて単離）又は化合物Ｃ（実施例４にて単離）を１０ｍｌ／ｋｇの割合で尾静脈より静脈内投与した。対照群には生理食塩液を１０ｍｌ／ｋｇの割合で尾静脈より静脈内投与した。該投与から５分が経過した時点で、ＬＰＳ（５０μｇ／ｋｇ、Ｅ．ｃｏｌｉ  ０１１１：Ｂ４、シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社）およびガラクトサミン（１ｇ／ｋｇ、シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社）の混合溶液を１０ｍｌ／体重ｋｇの割合で尾静脈より静脈内投与し、血漿ＴＮＦα濃度上昇を惹起した。ＬＰＳ投与から１時間が経過した時点で、抗凝固剤であるヘパリン（１０，０００単位／ｍｌ）を用いて採血し、遠心分離操作（１０，０００ｇ、５分間、４℃）により血漿を分離した。ＴＮＦα定量キット（バイオソース  インターナショナル社）を用い、該キットに添付された測定手順書に従って血漿中のＴＮＦα濃度を測定した。被検化合物投与群の測定値（Ｍ）および対照の被検化合物非投与群の測定値（Ｎ）より、下記の計算式［ＩＩ］を用いて血中ＴＮＦα濃度上昇抑制率を求め、結果を表２にまとめた。
血中ＴＮＦα濃度上昇抑制率（％）＝（１−Ｍ／Ｎ）×１００      ［ＩＩ］
［表２］ＴＮＦα産生に対する効果（２）
―――――――――――――――――――
化合物            抑制率
―――――――――――――――――――
化合物Ａ          ６６％
化合物Ｂ          ７２％
化合物Ｃ          ６０％
―――――――――――――――――――
試験例３．Ｂ−１２４８９物質の抗菌活性
寒天平板希釈法により、各種細菌の増殖に対するＢ−１２４８９物質の効果を検討した。すなわち、被検化合物Ａ、Ｂ又はＣを含む普通寒天培地（栄研）へ各種細菌を接種した後、３７℃にて１８〜２０時間培養した。次いで、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を判定し、結果を表３にまとめた。
［表３］抗菌活性
―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
被検菌                          ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）
――――――――――――――――――――――
化合物Ａ        化合物Ｂ        化合物Ｃ
―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
スタフィロコッカス・アウレウス
（２０９ＰＪＣ−１）                ６．２５        ６．２５        ２５
バチルス・ズブチリス
（ＡＴＣＣ６６３３）                ６．２５        ６．２５        ２５
エシェリシア・コリ
（ＮＩＨＪ  ＪＣ−２）              ６．２５        ６．２５      ≦１．５６
シゲラ・フレキシネリ
（ＩＩＤ  ６４２）                  ６．２５        ６．２５      ≦１．５６
―――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
製剤例１．経口用カプセル剤
化合物Ａ                      ３０ｍｇ
乳糖                        １７０ｍｇ
トウモロコシ澱粉            １５０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム        ２ｍｇ
―――――――――――――――――――――――
合計                        ３５２ｍｇ
上記処方の粉末を混合し、３０メッシュのふるいを通した後、この粉末をゼラチンカプセルに入れ、カプセル剤とする。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明の提供するＢ−１２４８９物質は、優れた炎症性伝達物質産生抑制活性ならびに抗菌活性を有し、敗血症およびそれに起因する疾患など、各種炎症性疾患、炎症および感染症の治療または予防に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】ＳＡＮＫ  ７２００３株の、細菌分類学上の系統解析を示す図。
【図２】実施例２で単離された化合物Ａの、０．０１規定重塩酸−重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）を示す図。
【図３】実施例３で単離された化合物Ｂの、重メタノール溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）を示す図。
【図４】実施例４で単離された化合物Ｃの、重水溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００ＭＨｚ）を示す図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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