(57)【要約】【課題】  天然サイトカインの特定混合物の製造方法の提供。【解決手段】少なくとも一種のマイトジェンを組織培養容器中で固定する工程、好中球及び赤血球を含まないリンパ球の単離された集団を無血清培地中で懸濁させる工程、懸濁されたリンパ球を容器に入れる工程、リンパ球を培養する工程、培地を除去する工程及び培地をサイトカインの収率について特性決定する工程を含むとことを特徴とする天然サイトカイン混合物方法であって、１つの実施形態において、無血清培地がＸ  ｖｉｖｏ−１０及びＸ  ｖｉｖｏ−１５から選択される、方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然サイトカイン混合物の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はサイトカインの天然化合物の改良された製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
【数１】
2005245455.tif 000002
【０００３】
【数２】
2005245455.tif 000003
【０００４】
【数３】
2005245455.tif 000004
【０００５】
【数４】
2005245455.tif 000005
【０００６】
【数５】
2005245455.tif 000006
【０００７】
【数６−１】
2005245455.tif 000007
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
【数６−２】
2005245455.tif 000008
【０００９】
【数７−１】
2005245455.tif 000009
【００１０】
【数７Ａ】
2005245455.tif 000010
【００１１】
【数７Ｂ】
2005245455.tif 000011
【００１２】
【数８−２】
2005245455.tif 000012
【００１３】
【数９】
2005245455.tif 000013
【００１４】
【数１０】
2005245455.tif 000014
【００１５】
【数１１】
2005245455.tif 000015
【００１６】
【数１２】
2005245455.tif 000016
【００１７】
【数１３】
2005245455.tif 000017
【００１８】
【数１４】
2005245455.tif 000018
【００１９】
【数１５】
2005245455.tif 000019
【００２０】
【数１６】
2005245455.tif 000020
【００２１】
【数１７】
2005245455.tif 000021
【００２２】
【数１８】
2005245455.tif 000022
【００２３】
【数１９】
2005245455.tif 000023
【００２４】
【数２０】
2005245455.tif 000024
【００２５】
【数２１】
2005245455.tif 000025
【００２６】
【数２２】
2005245455.tif 000026
【００２７】
【数２３】
2005245455.tif 000027
【００２８】
【数２４】
2005245455.tif 000028
【００２９】
【数２５】
2005245455.tif 000029
【００３０】
【数２６】
2005245455.tif 000030
【００３１】
【数２７】
2005245455.tif 000031
【００３２】
【数２８】
2005245455.tif 000032
【００３３】
【数２９】
2005245455.tif 000033
【００３４】
【数３０】
2005245455.tif 000034
【００３５】
本発明のその他の利点が、図面に関して考慮される時に以下の詳細な説明を参考にして良く理解されるようになるので容易に認められるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、Ｘ−ｖｉｖｏ−１０（ＢＸ１０）、Ｘ−ｖｉｖｏ−１５（ＥＸ１５）、Ｘ−ｖｉｖｏ−２０（ＥＸ２０）及び最少必須培地（ＭＥＭ）中のＮＣＭのＩＬ含量（ＥＬＩＳＡにより測定されるＩＬ−１（ＩＬ２）の光学密度として表される）を示し、マイトジェンＰＨＡへの連続露出（開いたバー）をパルス化露出（クロスハッチ付き）と比較する棒グラフである。
【図２】図２は異なる培地、１×１０６／ｍｌの細胞（クロスハッチ付き）、２．５×１０６／の細胞（斜線）及び５×１０６／ｍｌの細胞（開いたバー）中１μｇ／ｍｌのＰＨＡによるＮＣＭ生成に関する細胞濃度の効果を示す棒グラフである。
【図３】図３は異なる培地、１×１０６／ｍｌの細胞（クロスハッチ付き）、２．５×１０６の細胞（斜線）及び５×１０６／ｍｌの細胞（開いたバー）中２μｇ／ｍｌのＰＨＡによるＮＣＭ生成に関する細胞濃度の効果を示す棒グラフである。
【図４】図４は、均等濃度のＩＬ−２における組換えＩＬ−２（破線）と比較したＮＣＭ（実線）によるナイーブマウスからの脾臓細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理のチミジンとり込み（ＣｏｎＡ刺激）に関する効果を示す投薬量応答グラフである。
【図５】図５は、均等濃度の１−２における組換えＩＬ−２（破線）と比較したＮＣＭ（実線）によるナイーブマウスからの胸腺細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理のチミジンとり込みに関する効果を示す投薬量応答グラフである。
【図６】図６は、ｒＩＬ−１、ｒＩＬ−２、ｒＩＬ−１＋ｒＩＬ−２またはＮＣＭによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理後のｒＩＬ−１（開いたバー）、ｒＩＬ−２（ソリッドバー）、ＮＣＭ（クロスハッチ付き）及びコンカナバリンＡ（斜線）に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏの脾臓細胞応答の棒グラフである。
【図７】図７は、図６のようなｉｎ  ｖｉｖｏ処理後のｒＩＬ−１、ｒＩＬ−２、ＮＣＭ及びＣｏｎＡに対するｉｎ  ｖｉｖｏの胸腺細胞応答の棒グラフである。
【図８】図８は、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びＣＤ４-／ＣＤ８-（--）細胞の脾臓細胞マーカーに関する対照（開いたバー）またはＮＣＭ（ソリッドバー）によるマウスのｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理の結果を示す棒グラフである。
【図９】図９は、ＣＤ４-／ＣＤ８-（--）、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋（＋＋）並びにＣＤ８＋細胞とＣＤ４＋細胞（ＣＤ４＋ＣＤ８）の胸腺細胞マーカーに関する対照（開いたバー）またはＮＣＭ（ソリッドバー）によるマウスのｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理の結果を示す棒グラフである。
【図１０】図１０は、対照培地（開いたバー）及びＮＣＭ（ソリッドバー）によるｉｎ  ｖｉｖｏ処現後のｌＬ−１、ＩＬ−２及びＮＣＭに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏの胸腺細胞応答の棒グラフである。
【図１１】図１１は、図１０と同様の脾臓細胞応答の捧グラフである。
【図１２】図１２は、対照培地（開いたバー）及びＮＣＭ（閉じたバー）によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ処理後のＣｏｎＡ及びＰＨＡに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏの胸腺細胞応答の棒グラフである。
【図１３】図１３は、図１２と同様の脾臓細胞応答の棒グラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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