(57)【要約】【課題】  比較的低濃度で広範囲にわたり芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された土壌や、低濃度の芳香族有機ハロゲン化合物を含む多量の焼却灰など、大量の被処理物質中に含まれる芳香族有機ハロゲン化合物を効率良く分解、除去する。【解決手段】芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を浄化するために用いられる微生物剤は、該微生物剤からＤＮＡを抽出し、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマーを用いて、３００塩基以上の長さで前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を、制限酵素ＨｈａＩで断片化して得られるフラグメントを検出したとき、５’末端側のフラグメント長として、少なくとも次の領域１；２００ｂａｓｅ〜２５０ｂａｓｅに入る長さのフラグメントを有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を浄化するために用いられる微生物剤であって、
該微生物剤からＤＮＡを抽出し、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマーを用いて、３００塩基以上の長さで前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を制限酵素ＨｈａＩで断片化し、フラグメントを検出したとき、５’末端側のフラグメント長として、少なくとも次の領域１；
領域１  ２００ｂａｓｅ〜２５０ｂａｓｅ
に入る長さのフラグメントを有することを特徴とする、微生物剤。
【請求項２】
請求項１に記載の微生物剤を、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された被処理物質に混合し、
微生物剤由来の嫌気性微生物および好気性微生物を芳香族有機ハロゲン化合物に作用させて分解処理することを特徴とする、
芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質の浄化方法。
【請求項３】
芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を微生物の作用により浄化する微生物浄化系における芳香族有機ハロゲン化合物分解能の評価方法であって、
前記微生物浄化系に存在する微生物群からＤＮＡを抽出し、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマーを用いて、３００塩基以上の長さで前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を制限酵素ＨｈａＩで断片化したフラグメントの中で５’末端側のフラグメントを検出し、次の領域１；
領域１  ２００ｂａｓｅ〜２５０ｂａｓｅ
に該当するフラグメントの比率を測定することを特徴とする、微生物浄化系における芳香族有機ハロゲン化合物分解能の評価方法。
【請求項４】
請求項３に記載の評価方法により、微生物浄化系の芳香族有機ハロゲン化合物分解能を評価するとともに、該評価結果に基づき、前記領域１のフラグメントが検出されるように微生物浄化系の微生物群の構成および／またはその生育条件を制御しながら、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を処理することを特徴とする、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質の浄化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、土壌や灰等の浄化に際し使用できる微生物剤およびその利用に関し、詳細には、ダイオキシン類等の芳香族有機ハロゲン化合物によって汚染された土壌や灰等の被処理物質を浄化するための微生物剤、およびこれを用いる汚染物質の浄化方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
ダイオキシン類等の芳香族有機ハロゲン化合物による土壌汚染は、発生源付近の高濃度で狭い範囲の汚染と、発生源から離れた、低濃度で広範囲の汚染の二つが想定され、それぞれに適した浄化技術が必要と考えられる。例えば、ダイオキシン類発生源付近の高濃度で狭い範囲の汚染は、溶融法、熱分解法、超臨界抽出法等による分解・浄化方法が適当と考えられる。一方、広範囲で低濃度の汚染土壌の浄化や環境修復には、経済性及び技術面から生物的方法が妥当と考えられる。以下、芳香族有機ハロゲン化合物の生物的処理方法の従来例を記す。
【０００３】
好気性細菌、嫌気性細菌、担子菌などを用いる技術として、特許文献１（ダイオキシン類の低減剤及びそれを用いるダイオキシン類の低減方法）では、至適温度を８５℃とする好気性コンポストによるダイオキシン類の分解処理が提案されている。特許文献２（複合有効微生物群含有資材）では、ダイオキシン類の分解を想定した微生物が多数列挙され、複合有効微生物群含有資材として土壌等へ散布することが記載されている。
【０００４】
ところで、ダイオキシン類の毒性は、塩素数により大きく変化するため、これらすべての種類のダイオキシン類を分解できる方法でなければ意味がない。しかし、前記特許文献１、２の技術は、ダイオキシン類の一部だけを分解できる方法に過ぎないと判断される。例えば、ダイオキシン類で最も毒性が強いのは４塩素化ダイオキシンであるため、これを分解できる方法であれば毒性等量換算でのダイオキシン濃度は大きく低下する。しかし、塩素数が７や８のダイオキシン類が分解されずに土壌等に残留した場合、微生物等の作用により脱塩素化が進行するに従い、４塩素化ダイオキシンに変化し、処理後相当時間を経過してから急激に毒性等量ベースでの濃度が上昇する、といった事態も予想されるのである。
【０００５】
一方、担子菌、特に白色腐朽菌は、単独で１〜８塩素化ダイオキシン類を分解し、かつ好気性細菌、嫌気性細菌より速い分解速度を有する。しかし、土壌中では土着菌が優占するため、担子菌の増殖は抑制され、ダイオキシン類を円滑に分解できない。このため土壌の加熱処理、コンポスト化等の前処理が考案されている。
【０００６】
担子菌を用い、前処理を取り入れたダイオキシン類の分解法として、特許文献３（ダイオキシン類汚染土壌の浄化方法）では、担子菌により木材をコンポスト化したものを用いたダイオキシン類分解法が、また、特許文献４（塩素化ダイオキシン類汚染土壌の浄化法）では、ダイオキシン類汚染土壌中の土着菌の増殖を抑制処理した後、担子菌を添加するダイオキシン類分解法が提案されている。
【０００７】
ダイオキシン類汚染土壌を原位置で処理することを前提とすると、装置はある程度の閉鎖性が必要とされる。しかし、無菌室を構築するレベルまで遮断性を高めることは、汚染土壌の処理規模を考えるとコスト的にも困難が伴う。汚染土壌では、本来、土壌菌が優先種であるから、上記特許文献４に記載の方法では一時的に土着菌を抑制、または死滅させるものと推定される。このため実験室レベルでは高いダイオキシン類分解能を有する担子菌でも、原位置における実用規模では効率的にダイオキシン類を分解するのは困難と考えられる。また、特許文献３に記載の方法のように、土着菌が基質として利用しにくい木材を添加したコンポスト化は、土壌中に他の有機物がない場合は担子菌が優先種となる方法である。しかし、担子菌は木材を用いた場合、増殖速度が遅いため、分解処理に時間がかかり、かつ、順調に生育しにくいことが指摘されている。さらに、担子菌を利用する場合、担子菌の増殖速度が遅いことから大量の種菌を確保するのが困難であり、時間的な面だけでなく、量的にも大きな制約があると考えられる。
【０００８】
また、特許文献５（水または土壌の浄化方法及び該方法に使用される微生物群）、特許文献６（有機塩素化合物汚染土壌の微生物処理方法）では、いずれも嫌気性処理後、好気性処理を行うことにより、テトラクロロエチレンなどの有機塩素化合物で汚染された土壌を浄化する方法が提案されている。これらは比較的塩素数の小さな（塩素数４以下）揮発性有機塩素化合物の分解方法として考案されたものであり、塩素数１〜８を有するダイオキシン類の分解には適用できない。
【０００９】
また、特許文献１〜６のように微生物を用いた微生物浄化系においては、適用対象における微生物群の群集構造や生育条件が変動することにより、芳香族有機ハロゲン化合物の分解能が低下し易いという課題がある。
【００１０】
【特許文献１】特開２００１−２９９１５号公報
【特許文献２】特開２０００−２３２８７６号公報
【特許文献３】特開２０００−１０７７４２号公報
【特許文献４】特開２００１−１６２２６３号公報
【特許文献５】特開２０００−１０２３７７号公報
【特許文献６】特開平１０−３４１２８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って、広範囲の土壌等に汚染物質として含まれるダイオキシン類等の芳香族有機ハロゲン化合物を微生物の作用によって効率良く分解し、その環境毒性を低減できる実用性に優れた浄化技術の開発が望まれていた。
【００１２】
本発明の課題は、比較的低濃度で広範囲にわたり芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された土壌や、低濃度の芳香族有機ハロゲン化合物を含む多量の焼却灰など、大量の被処理物質中に含まれる芳香族有機ハロゲン化合物を効率良く分解、除去するための微生物剤、および浄化方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記課題を解決するため、本発明の第１の態様は、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を浄化するために用いられる微生物剤であって、該微生物剤からＤＮＡを抽出し、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマーを用いて、３００塩基以上の長さで前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を制限酵素ＨｈａＩで断片化し、フラグメントを検出したとき、５’末端側のフラグメント長として、少なくとも次の領域１；
領域１  ２００ｂａｓｅ〜２５０ｂａｓｅ
に入る長さのフラグメントを有することを特徴とする、微生物剤である。この微生物剤は、芳香族有機ハロゲン化合物に対して特異的に作用し、優れた分解性能を有する。
【００１４】
また、本発明の第２の態様は、第１の態様の微生物剤を、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された被処理物質に混合し、微生物剤由来の嫌気性微生物および好気性微生物を芳香族有機ハロゲン化合物に作用させて分解処理することを特徴とする、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質の浄化方法である。
【００１５】
この第２の態様の浄化方法では、第１の態様の微生物剤を使用して、例えば微好気条件を維持するか、あるいは嫌気条件および好気条件を繰返しながら、微生物を作用させることにより、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された土壌、飛灰などの物質を効率よく浄化できる。
【００１６】
本発明の第３の態様は、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を微生物の作用により浄化する微生物浄化系における芳香族有機ハロゲン化合物分解能の評価方法であって、前記微生物浄化系に存在する微生物群からＤＮＡを抽出し、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマーを用いて、３００塩基以上の長さで前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を制限酵素ＨｈａＩで断片化したフラグメントの中で、５’末端側のフラグメントを検出し、次の領域１；
領域１  ２００ｂａｓｅ〜２５０ｂａｓｅ
に該当するフラグメントの比率を測定することを特徴とする、微生物浄化系における芳香族有機ハロゲン化合物分解能の評価方法である。  
第３の態様の評価方法を利用することによって、簡易かつ迅速に微生物浄化系における芳香族有機ハロゲン化合物の分解活性をモニタリングすることができる。
【００１７】
本発明の第４の態様は、第３の態様の評価方法により、微生物浄化系の芳香族有機ハロゲン化合物分解能を評価するとともに、該評価結果に基づき、前記領域１のフラグメントが検出されるように微生物浄化系の微生物群の構成および／またはその生育条件を制御しながら、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を処理することを特徴とする、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質の浄化方法である。
【００１８】
第４の態様に係る浄化方法では、第３の態様の評価方法を利用することにより、微生物浄化系の芳香族有機ハロゲン化合物に対する分解活性を検知し、常に高い分解活性を維持できるように制御するので、汚染物質を効率よく浄化できる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明により、ダイオキシン類等の芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された土壌や飛灰などの物質を効率良く浄化することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、発明の実施の形態を挙げ、本発明を説明する。
＜被処理物質＞
本発明の微生物剤を使用して浄化する対象となる被処理物質としては、芳香族有機ハロゲン化合物を含む土壌、焼却灰、汚泥などが挙げられる。微生物剤を使用して分解・除去できる芳香族有機ハロゲン化合物としては、例えば、ポリ塩化ジベンゾダイオキシン類（ＰＣＤＤ）、ポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦ）などのダイオキシン類や、コプラナーＰＣＢ（Ｃｏ−ＰＣＢ）をはじめとするＰＣＢ類などが挙げられる。
【００２１】
＜微生物剤＞
本発明の微生物剤は、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を浄化するために用いられる微生物剤であって、以下の条件により特徴付けられるものである。  
すなわち、該微生物剤からＤＮＡを抽出し、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の（５’末端側から）少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマーを用いて、３００塩基以上の長さで前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を制限酵素ＨｈａＩで断片化し、フラグメントを検出したとき、５’末端側のフラグメント長として、少なくとも次の領域１；
領域１  ２００ｂａｓｅ〜２５０ｂａｓｅ
に入る長さのフラグメントを有する。
【００２２】
また、本発明の微生物剤は、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の（５’末端側から）少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマーを用いて、６００塩基以上の長さで前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を制限酵素ＨｈａＩで断片化し、フラグメントを検出したとき、５’末端側のフラグメント長として、上記領域１に加え、次の領域２〜４のいずれか１つまたは２つ以上の領域に入るフラグメントを有することが好ましい。  
領域２  ３６０ｂａｓｅ〜３７０ｂａｓｅ
領域３  ４６０ｂａｓｅ〜４７０ｂａｓｅ
領域４  ５００ｂａｓｅ〜５８０ｂａｓｅ
微生物剤を特定するための要素である５’末端のフラグメント長は、Ｔ−ＲＦＬＰ法（Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism）によって測定できる。その際に実施するＤＮＡ抽出、ＰＣＲ法による増幅、制限酵素による切断などの条件については、以下のとおりである。
【００２３】
微生物剤からＤＮＡの抽出は、常法により行うことが可能であり、例えば、ＱＩＡＧＥＮ
ＤＮｅａｓｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ（商品名；ＱＩＡＧＥＮ社製）を使用して実施できる。
【００２４】
ＰＣＲ法による増幅対象となる１６ＳｒＲＮＡ遺伝子は、１６ＳｒＲＮＡに対応する遺伝子（以下、「１６ＳｒＤＮＡ」と表記することがある）を意味するものであり、この１６ＳｒＤＮＡは、微生物種に応じて可変部塩基配列が異なるため、微生物分類上の指標として利用されているものである。
【００２５】
「大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマー」としては、例えば、２７Ｆ：５'−ａｇａｇｔｔｔｇａｔｃｍｔｇｇｃｔｃａｇ：ｍはａまたはｃ（配列番号１）を挙げることが可能である。
【００２６】
また、逆向きプライマーとしては、正向きプライマーとの組合せにおいて、３００塩基以上、好ましくは６００塩基以上、望ましくは６００〜９００塩基程度の長さで１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片の増幅を行うことが可能なプライマーを選定することができる。好適な逆向きプライマーとしては、例えば、９０７Ｒ：５'−ｃｃｇｔｃａａｔｔｃａｔｔｔｇａｇｔｔｔ（配列番号２）を挙げることができる。
【００２７】
上記プライマーを用いてＰＣＲ法による増幅を行う場合の条件は、後記実施例に準じて選択することができる。例えば鋳型となるＤＮＡを、５×１０５個／μｌとなるように予め希釈しておき、その数μｌ（例えば４μｌ）を使用する。ＰＣＲ法による増幅は、例えば変性９５℃・１分、アニーリング４７℃・１分、伸長７２℃・１分３０秒を１サイクルとして２０〜３０サイクルまで行う条件、またはこれと同等の条件で実施できる。
【００２８】
ＰＣＲ法によって得られたＰＣＲ産物は、制限酵素ＨｈａＩで断片化する。この制限酵素ＨｈａＩとしては、市販品を利用することができ、例えばＴＡＫＡＲＡ社製のものを用いることができる。制限酵素ＨｈａＩを用いると他の制限酵素を用いる場合よりフラグメント数が多くなるので、多くのバクテリアの検出が容易に行える。
【００２９】
フラグメントの測定方法は、特に限定されるものではないが、例えば、標識したフラグメントを電気泳動によって分離した後、蛍光イメージアナライザ等を用いて検出することができる。  
以上のようにして解析される５’末端側のフラグメント長として、少なくとも上記領域１を有するものが本発明の微生物剤として特定されるものである。
【００３０】
＜本発明微生物剤の製造と浄化方法＞
図１は、本発明の微生物剤の製造と、それを用いた浄化方法の概要を示す図面である。本発明微生物剤は、種々の方法により得ることができるが、好ましい製造方法の一例として、図１に示すように、嫌気性微生物や好気性微生物を、微好気条件や、嫌気的条件と好気的条件を交互に切替るサイクル（嫌気−好気サイクル）で有機物とともに培養・増殖させることにより製造する方法が挙げられる。この培養・増殖過程で、芳香族有機ハロゲン化合物（目的とする汚染物質と同じでなくてもよい）を共存させると、微生物剤に含まれる嫌気性微生物および好気性微生物が十分に馴致された状態になるのでより好ましい。
【００３１】
微生物剤の原料となる有機物は、プロトンを供給するものであればよく、例えば、残飯や野菜くずなどの生ごみ、下水処理汚泥や底泥、澱粉粕、牛や豚などの家畜糞尿、食品、ペットフード等の有機物を挙げることができる。
【００３２】
微生物剤に含まれる嫌気性微生物や好気性微生物としては、芳香族有機ハロゲン化合物に対する分解能を有するものであれば、特に制限はない。芳香族有機ハロゲン化合物の分解能を有する嫌気性微生物あるいは好気性微生物としては、複数の種や菌株を含む微生物群を用いる。これらの微生物は、芳香族有機ハロゲン化合物に汚染された土壌などから既知のスクリーニング方法により採取することができるので、それを培養して種菌として使用できる。また、本発明方法に適合する範囲で、ダイオキシン類等に対する分解活性を持つことが知られている公知の微生物種、菌株、菌群等を使用できることは言うまでもない。
【００３３】
芳香族有機ハロゲン化合物の分解能を有する嫌気性微生物の代表的な例としては、メタノバクテリウム（Methanobacterium）属、メタノサルシナ（Methanosarcina）属、メタノロブス（Methanolobus）属等の嫌気性古細菌、アセトバクテリウム（Acetobacterium）属、デスルフォバクテリウム（Desulfobacterium）属、デスルフォモニル（Desulfomonile）属、デハロスピリルム（Dehalospirillum）属、デハロバクター（Dehalobacter）属、デハロバクテリウム（Dehalobacterium）属、デハロコッコイデス（Dehalococcoides）属、クロストリジウム（Clostridium）属等の嫌気性細菌のほか、シトロバクター（Citrobacter）属、エシェリキア（Escherichia）属、エンテロバクター（Enterobacter）属、セラチア（Serratia）属、プロテウス（Proteus）属、シュワネラ（Shewanella）属、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属等の通性嫌気性細菌を挙げることができる。
【００３４】
また、芳香族有機ハロゲン化合物の分解能を有する好気性微生物の代表的な例としては、スフィンゴモナス（Sphingomonas）属、バークホリデリア（Burkholderia）属、ラルストニア（Ralstonia）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、ノカルジオイデス（Nocardioides）属、ロドコッカス（Rhodococcus）属、テラバクター（Terrabacter）属、ジャニバクター（Janibacter）属、バチルス（Bacillus）属等の好気性微生物を挙げることができる。
【００３５】
微生物剤の製造に際し添加できる芳香族有機ハロゲン化合物としては、浄化段階で分解・除去の対象となる汚染物質の芳香族有機ハロゲン化合物と同じものを使用できるほか、芳香族有機ハロゲン化合物の代替となる多環芳香族化合物、ヘテロ原子を含む多環芳香族化合物、農薬などを使用することができる。農薬は、入手が容易であるため、汚染物質の芳香族有機ハロゲン化合物が特定できない場合に有利に使用可能である。馴養に使用可能な農薬としては、有機塩素系農薬として、例えばＤＤＴ、ＤＤＥ、ＤＤＤ、ＢＨＣ、アルドリン、エンドリン、ディルドリン、エンドスルファン、ヘプタクロル、ポリハロアルキル剤、ＰＣＮＢ剤、Ｄ−Ｄ剤、ＤＣＩＰ剤、クロロタロニル、ジコホール、フサライド、テトラジフォン等を使用できるほか、有機リン系農薬も使用可能であり、その例として、ＥＰＮ、メチルジメトン、メチルパラチオン、パラチオン等を挙げることができる。
【００３６】
また、微生物剤の製造は、油脂および／または界面活性剤の存在下で行うことが好ましい。微生物剤を用いて土壌や灰などの被処理物質を処理する過程で、油脂および／または界面活性剤を添加すると、土壌や灰などの中に含まれ、もしくは付着した状態の芳香族有機ハロゲン化合物を遊離させ、微生物による分解作用を受け易くすることができるが、微生物剤を製造する段階でも油脂および／または界面活性剤で馴致しておくことにより、浄化段階で微生物の代謝活動を低下させずに効率良く芳香族有機ハロゲン化合物に作用させることが可能となる。油脂としては、例えば植物油などの食用油や、その廃油等を使用できる。界面活性剤は、汚染物質の溶解度を増加させ、微生物が汚染物を摂取・分解するのを促進させるように作用する。界面活性剤の種類は、被処理物質の状態に適合し、かつ微生物の増殖を阻害しないものが選ばれ、例えば２−ブトキシエタノール等を使用することができる。
【００３７】
微生物剤の製造は、図１に示すように、微生物剤製造装置を用いて行うことができる。微生物剤製造装置は、単一槽または複数に分割された槽で構成され、コンポスト化処理法により、定期的に追加送入される生ごみ等の有機物を連続的にコンポスト化処理する。この微生物剤の調製には、ダイオキシン類で汚染された土壌、底泥、コンポスト等またはダイオキシン類に汚染されていない土壌、底泥、コンポスト等を採取し、生ごみ等の有機物により馴致したものを種菌として使用できる。
【００３８】
コンポスト化処理中、微生物剤製造装置内の雰囲気は、微好気状態に調整するか、あるいは交互に嫌気的状態と好気的状態にして、嫌気性微生物と好気性微生物の両方を増殖させるとともに、活発化させることが好ましい。
【００３９】
微好気条件は、リアクター内にＮ２ガスを通気することや、攪拌頻度のコントロール、あるいは、密閉状態の装置を定期的（例えば１日１回）に開放することによって維持できる。例えば、微好気条件は、適度に攪拌しながらＮ２ガスを吹き込み、微生物剤製造装置内の酸素濃度を０．０５〜０．１v/v％に調整することによって実現できる。なお、微好気条件であるか否かは、例えば嫌気指示薬（アネロパック；三菱瓦斯化学社製など）を使用して微生物剤製造装置内の酸素濃度の測定を行った場合に０.１５〜０．５v/v％程度の酸素濃度であることを一応の目安として判定できる（実施例６参照）。
【００４０】
嫌気的条件にするためには、脱気を行ってもよいが、通常は一定時間静置することによって嫌気状態を作り出すことができる。一方、好気的条件は、攪拌やエアレーション等の操作によって作り出すことができる。したがって、好気的条件を作り出すための操作を間欠的に実施することによって、嫌気的条件と好気的条件を交互に繰り返す処理環境を作ることができる。より具体的には、例えば１時間あたり５〜２０分程度攪拌を行い、残りの５５〜４０分間を静置する、という操作によって嫌気的条件と好気的条件を交互に繰り返す環境を作ることができる。
【００４１】
また、嫌気−好気サイクルのタイミングは、有機物の添加方法に応じて適宜設定することが好ましい。以下、有機物の添加方法として、毎日有機物を添加する方法（方法Ａ）と、約１週間おきに有機物を添加する方法（方法Ｂ）との二通りの例を挙げて説明する。なお、前者（方法Ａ）は微生物剤を大量に生成させることを意図する場合、後者は少量の微生物剤を生成させる場合に適している。
【００４２】
＜方法Ａ＞
（１）１日１回、微生物剤製造装置の内容物１０ｋｇあたり０．３〜１．０ｋｇの有機物（含水率８０重量％）を投入する。
（２）有機物の投入直後に５分間機械的攪拌を行い、内容物とよく混合する。
（３）その後、嫌気−好気サイクルにてバッチ運転を行う。
（４）嫌気−好気の１サイクルにおいて、嫌気時間／好気時間の比が１２〜６０の間になるように設定する。例えば、嫌気時間を５５〜５９分間とすれば、好気時間は５〜１分に設定する。
（５）１サイクルの嫌気時間は１〜６時間とする。
【００４３】
＜方法Ｂ＞
（１）１週間毎に、微生物剤製造装置の内容物１０ｋｇあたり１．０ｋｇの有機物（含水率８０重量％）を投入する。
（２）有機物の投入直後に５分間機械的攪拌を行い、内容物とよく混合する。
（３）その後、嫌気−好気サイクルにてバッチ運転を行う。
（４）嫌気−好気の１サイクルにおいて、嫌気時間／好気時間の比が１２〜６０の間になるように設定する。例えば、嫌気時間を５５〜５９分間とすれば、好気時間は５〜１分に設定する。
（５）１サイクルの嫌気時間は３〜１２時間とする。
【００４４】
上記方法Ａ、方法Ｂのいずれの場合も好気的条件は機械的攪拌で達成できる。このとき同時に空気を吹き込むこともできる。また、適宜温風を吹き込んで水分を飛ばし、適度な含水率を維持するように調整することが好ましい。微生物剤製造装置内で処理する混合物の含水率は、例えば３０〜６０重量％となるように設定することが好ましく、最適範囲は３５〜４５重量％である。また、処理中は微生物剤製造装置内の温度が、例えば１０〜５０℃となるようにすることが好ましく、最適範囲は２５〜４５℃である。さらに、微生物剤製造装置で処理する混合物のｐＨは、例えばｐＨ６〜９となるように調整することが好ましく、最適範囲はｐＨ７.５〜８.５である。なお、有機物を添加している間は、初期にｐＨ低下（ｐＨ６程度）が見られるが、日数が経過するにつれてｐＨ７〜９の間で安定するようになる。従って、特にｐＨ調節をする必要はないが、仮にｐＨがｐＨ６〜９の範囲を超えて変化した場合には、適宜６Ｎ−希硫酸や４Ｎ−苛性ソーダ液等でｐＨを調整するか、あるいは、有機物投入量を前記した量に比べ１／１０程度に減らすことでｐＨ低下を抑制することができる。微生物生育における基本的な条件である水分、温度およびｐＨを上記範囲に調整することにより、活発な増殖と代謝活動を維持できる。
【００４５】
以上のような処理により、微生物剤中において、種菌である嫌気性および好気性微生物を大量に培養、増殖させる効果があるので、以後の芳香族有機ハロゲン化合物の分解処理における初発菌数を飛躍的に増大させることが可能となる。また、種菌は自然界や汚染土壌中の複合微生物系を利用することから、土壌中の土着菌に駆逐されることがない。
【００４６】
また、前記したように微生物剤の調製は、ダイオキシン類等の芳香族有機ハロゲン化合物や農薬、油脂としての食品廃油および／または界面活性剤を添加して行うことが可能である。これらの添加により、芳香族有機ハロゲン化合物馴養、農薬馴養または油馴養した微生物剤を得ることができる。
【００４７】
本発明の浄化方法は、以上のようにして得られる微生物剤を、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された被処理物質に混合し、微好気条件を維持したり、嫌気的条件および好気的条件を交互に繰り返したりしながら、微生物剤由来の嫌気性微生物および好気性微生物を芳香族有機ハロゲン化合物に作用させる。微生物剤を汚染土壌等の被処理物質に添加し、浄化を行う際に、嫌気的条件の下では、嫌気性微生物が活発な増殖と代謝を行うため、２〜８塩素化ダイオキシン類が特異的に還元的脱塩素化される。好気的条件では、好気性微生物が活発な増殖と代謝を行うため、１〜３塩素化ダイオキシン類が特異的に酸化分解・無機化する。この操作を所定時間ごとに交互に繰り返すことによって、嫌気性および好気性の両方の微生物の代謝活性を高い状態に維持しながら、芳香族有機ハロゲン化合物に作用させることが可能になり、異なる塩素数を持つダイオキシン類についても効率的に分解、除去することができる。なお、微好気条件においても、前記嫌気条件と好気条件の繰返しと同様に、嫌気性微生物と好気性微生物の両方が、高い代謝活動を行い得る。
【００４８】
本発明の浄化方法の好ましい態様では、図１に示すように、微生物剤を環境修復装置に送入することができる。環境修復装置は、微生物剤製造装置と同様に単一槽または複数に分割された槽で構成される。この環境修復装置では、微生物剤と、ダイオキシン類で汚染された土壌等の被処理物質とを混合する。ここで、被処理物質と微生物剤との混合比は、被処理物質：微生物剤＝１：１〜１：３程度の比率とすることが好ましく、被処理物質と微生物剤が同量程度（例えば、汚染された土壌：微生物剤＝１：１）であればより好ましい。この段階で油脂としての食品廃油および／または界面活性剤を添加することも可能である。前記したように油馴養した微生物剤を用いる場合には、環境修復装置での油脂の添加は、いっそう効果的なものとなる。この場合、油脂の添加は、環境修復装置の運転開始時、およびその後の運転期間中は１週間に１回程度でよく、１回の添加量は２００〜３００ｍｌ／内容物１０ｋｇ程度とすることが適当である。
【００４９】
また、環境修復装置においては、適宜、微生物活動の基材となる木材チップ等を分解基材として被処理物質と微生物剤とに混合することも可能である。また、被処理物質が焼却灰である場合は、本来アルカリ性であるため、添加前にｐＨ９以下、好ましくはｐＨ７.５〜８.５に調整しておくことが好ましい。
【００５０】
環境修復装置における処理中は、微好気条件または嫌気的条件と好気的条件を交互に繰り返しながら、芳香族有機ハロゲン化合物に嫌気性および好気性微生物を作用させる。また、装置内の混合物に対して、所定時間毎に適量の油脂および／または界面活性剤を追加投入することが好ましい。これは、油脂および／または界面活性剤の作用により、土壌や灰などの中に含まれ、もしくは付着した状態の芳香族有機ハロゲン化合物を遊離させ、微生物による分解作用を受け易くすることができるからである。
【００５１】
また、芳香族有機ハロゲン化合物の分解処理は、中和剤の存在下で行うことが好ましい。これは、脱塩素化により生成する塩化水素を中和することによって、処理装置内のｐＨの低下を防ぎ、塩化水素による微生物への悪影響を抑制することが可能になるためである。中和剤としては、炭酸カルシウム等のアルカリ性物質を直接使用してもよいが、例えば卵殻等のように炭酸カルシウムを多く含む廃棄物を用いることができる。このように中和剤として廃棄物を使用することは、その有効利用を図ることにもなり、さらに、投入する有機物量の低減も可能になる。
【００５２】
環境修復装置での処理における微好気条件、または嫌気的条件と好気的条件の設定は、微生物剤製造装置での処理と同様に実施できる。すなわち、環境修復装置における嫌気−好気サイクルのタイミングは、微生物剤の添加方法に応じて適宜設定することが好ましい。例えば、微生物剤を毎日添加して処理する場合（前記方法Ａを参照）や、約１週間おきに微生物剤を添加する場合（前記方法Ｂを参照）等に応じて、前記微生物剤製造装置について述べた内容に準じて嫌気−好気サイクルを設定できる。さらに、内容物の含水率やｐＨ、処理温度などは、微生物剤製造装置での処理と同様に実施できる。
【００５３】
また、浄化処理中は、例えば処理前半又は後半に、特定された汚染物質に対する分解能を有する数種類の腐朽菌や、嫌気性微生物、好気性微生物を追加混合することができる。さらに、微生物の性質に応じて、微好気条件や、嫌気−好気サイクル運転条件を選択するとともに、例えば、万一処理前半において、微生物剤の活性が充分でない場合には、芳香族有機ハロゲン化合物の分解能を有する微生物を追加混合したり、処理後半において、被処理物質中の芳香族有機ハロゲン化合物の濃度が減少することに伴い、分解速度が低下した場合には、芳香族有機ハロゲン化合物分解能を有する微生物を追加混合したりすることができる。
【００５４】
以上の操作を被処理物質中の汚染物質の濃度が環境基準以下になるまで継続することによって、芳香族有機ハロゲン化合物を分解し、被処理物質を確実に浄化することができる。
【００５５】
＜芳香族有機ハロゲン化合物分解能の評価方法、微生物浄化方法＞
次に、本発明に係る微生物浄化系における芳香族有機ハロゲン化合物分解能の評価方法、およびこれを利用した浄化方法について説明する。「微生物浄化系」とは、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を微生物の作用により浄化する系であり、例えば前記した本発明の微生物剤を現実の汚染土壌などに適用する場合がこれに該当する。
【００５６】
本発明に係る浄化能力の評価方法は、微生物浄化系に存在する微生物群からＤＮＡを抽出し、前記ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子について、その５’末端側から３００塩基以上９００塩基程度（好ましくは６００塩基以上９００塩基程度）の塩基配列を増幅し得るプライマーを用いて、ＰＣＲ増幅を行い、得られるＰＣＲ産物を、制限酵素ＨｈａＩで断片化して得られるフラグメントの中で、５’末端側のフラグメントを検出し、検出されたフラグメントが次の領域１；
領域１  ２００ｂａｓｅ〜２５０ｂａｓｅ
に該当する度合いを測定することによって、分解能を評価するものである。
【００５７】
ここで、より好ましくは、上記領域１に加え、同様の条件で、６００塩基以上９００塩基程度の長さで抽出ＤＮＡ中の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片のＰＣＲ増幅および制限酵素処理を行い、次の領域２〜４のいずれか１つまたは２つ以上の領域に入るフラグメントを有する度合いについても測定を行うことが好ましい。領域１に加え、領域２〜４のいずれか、またはすべての領域にフラグメントを有する微生物浄化系は、特に優れた浄化性能を有するものと認められる。  
領域２  ３６０ｂａｓｅ〜３７０ｂａｓｅ
領域３  ４６０ｂａｓｅ〜４７０ｂａｓｅ
領域４  ５００ｂａｓｅ〜５８０ｂａｓｅ
この評価方法に用いる好適な正向きプライマーとしては、大腸菌１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の（５’末端側から）少なくとも第８番目から第２７番目までの塩基配列に適合し得る正向きプライマー（例えば、前掲の２７Ｆなど）を挙げることができる。また、逆向きプライマーとしては、正向きプライマーとの組合せにおいて、３００塩基以上、好ましくは６００塩基以上の長さで１６ＳｒＲＮＡ遺伝子断片の増幅を行うことが可能なプライマー（例えば前掲の９０７Ｒなど）を選定することができる。
【００５８】
ここで、フラグメントの解析は、Ｔ−ＲＦＬＰ法に従い実施できる。つまりＤＮＡ抽出、ＰＣＲ法による増幅、制限酵素による切断などの条件については、前記した本発明微生物剤の場合と同様に実施できる。
【００５９】
また、微生物浄化系を使用した本発明の浄化方法は、上記評価方法により、微生物浄化系の芳香族有機ハロゲン化合物分解能を評価するとともに、該評価結果に基づき、前記領域１のフラグメント（好ましくは、領域１に加え、領域２〜４のいずれか、またはすべての領域のフラグメント）が検出されるように微生物浄化系の微生物群の構成および／またはその生育条件を制御しながら、芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された物質を処理する。これによって微生物浄化系を適正に管理しながら、芳香族有機ハロゲン化合物の分解を行うことが可能になる。ここで、微生物群の構成を制御するには、芳香族有機ハロゲン化合物分解能をもつ前記微生物種を添加する方法、芳香族有機ハロゲン化合物分解能をもつ前記微生物剤やこれらを含む土壌や培地を添加する方法などが挙げられる。また、微生物群の生育条件の制御は、前記したように、微好気条件や嫌気条件と好気条件のサイクル、含水率、ｐＨ、温度などを調節することによって可能となる。
【００６０】
以下、実施例および比較例を挙げ、本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれにより何ら制約されるものではない。
【００６１】
実施例１
（１）微生物剤の調製：
嫌気性微生物と好気性微生物を含む微生物群を嫌気的条件と好気的条件を交互に切り替えるサイクル（嫌気・好気サイクル）で有機物とともに培養し、十分に馴養し、微生物剤を調製した。馴養は、生ゴミ処理法で調製されたコンポスト（土壌微生物を含む）と分解基材（木材チップ）とダイオキシン含有物として、焼却灰を等量ずつ混合したものを、家庭用生ゴミ処理機に入れ、１ヶ月間処理することによって行った。
【００６２】
すなわち、コンポスト、ダイオキシンを含有する焼却灰および分解基材（木材チップ）を各２ｋｇづつ、重量比１：１：１で家庭用生ゴミ処理機に送入・混合後、水を添加し、含水率４０重量％に調製した。次に、６規定硫酸を添加し、ｐＨ８．５以下に調製して微生物剤とした。
【００６３】
（２）フラグメント解析
上記のようにして得られた微生物剤について、以下の手順によりフラグメント解析を実施した。すなわち、得られた微生物剤から公知の方法によってＤＮＡを抽出し、テキサスレッドで修飾した正向きプライマー［２７Ｆ：５'−ａｇａｇｔｔｔｇａｔｃｍｔｇｇｃｔｃａｇ：ｍはａまたはｃ（配列番号１）］と逆向きプライマー［９０７Ｒ：５'−ｃｃｇｔｃａａｔｔｃａｔｔｔｇａｇｔｔｔ（配列番号２）］を用い、以下の条件でＰＣＲ法による増幅をおこなった。
【００６４】
＜液組成＞
ＱＩＡＧＥＮ  ＰＣＲ  ミックスキット    ５０μｌ
４ｐｍｏｌプライマー                    １０μｌ
ミリＱ水（Milli Ｑ water）              ２６μｌ
鋳型ＤＮＡ                                ４μｌ
全量                                    １００μｌ
＜温度・時間・回数＞
変性                                    ９５°、１分
アニーリング                            ４７℃、１分
伸長                                    ７２℃、１．５分
繰返し回数                              ２１回
得られたＰＣＲ産物について、Ｈｈａｌ Ｉによる制限酵素処理を行い断片化した後、常法に従い電気泳動にてフラグメントサイズごとに分離し、蛍光イメージアナライザで標識したフラグメントを検出した。その結果を表１に示した。
【００６５】
【表１】
2005269912.tif 000002
【００６６】
実施例２
実施例１に対し、焼却灰の代わりにダイオキシン含有物として汚染土壌を加えた以外は同様の手順で微生物剤を調製し、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、断片化、フラグメント検出を実施した。その結果を表２に示した。
【００６７】
【表２】
2005269912.tif 000003
【００６８】
実施例３
実施例１で得た微生物剤を使用し、ダイオキシン類を含む焼却灰を処理し、ダイオキシン類の分解率を測定した。
＜処理装置＞
図１に示す試験装置１０を使用した。この試験装置１０は、温度センサー１１と湿度センサー１２を備え、内部の温度および湿度を制御できるともに、装置外部のヒーター１３によって内容物を間接的に加温できるように構成されている。また、装置内部には攪拌翼１４が備えられ、その回転によって内容物を攪拌できる。また、エアーポンプ１５により空気を吹き込み、通風を制御できるとともに、酸素センサー１６によって内部の嫌気状態を検知することができる。
【００６９】
＜初期条件＞
１．焼却灰、微生物剤、および分解基材として市販の木材チップを重量比で１:１:１に混合する（各４００ｇづつ）。
２.水道水および６規定塩酸を加えて、ｐＨ８．５、水分含量４０％に調整する。
３.２日に一度、生ごみ１００ｇ（湿重量）を添加して運転を開始する。
【００７０】
＜運転条件＞
駆動条件：１時間あたり５分間撹拌、５５分間停止の繰り返しによる好気・嫌気（静止）条件で行った。  
温度：２５℃
通風・排気：４リットル／分
生ごみ：一日１回５０ｇ（湿重量）を添加した。
水分含量：４０％を保持するように調節した。
【００７１】
＜分析＞
７日毎に内容物を採取し、ＧＣ／ＭＳ法でダイオキシン類を分析した。その結果、初期ダイオキシン量は、４１,０００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）であったのに対し、２８日後のダイオキシン量は２６,０００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）まで減少させることができた。これはＴＥＱに換算すると４５０ｐｇ−ＴＥＱ／ｇ（乾燥重量）が、２７０ｐｇ−ＴＥＱ／ｇ（乾燥重量）まで減少したことに相当する。これは、自然界でのダイオキシン分解速度の約１０倍であった。
【００７２】
また、実験後の微生物剤を含むコンポストの微生物群集構造を実施例１と同様の方法で分析した。すなわち、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、断片化、フラグメント検出を実施した。その結果を表３に示した。
【００７３】
比較例１
比較例として通常のコンポストについて、実施例３と同様の条件で焼却灰に適用した。その結果、初期ダイオキシン量４１,０００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）が２６,０００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）まで減少するのに２５０日を要した。
【００７４】
また、実験後のコンポストの微生物群集構造を実施例１と同様の方法で分析した。すなわち、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、断片化、フラグメント検出を実施した。その結果を表３に併せて示した。
【００７５】
【表３】
2005269912.tif 000004
【００７６】
表３の結果から、比較例１（通常のコンポスト）では領域１に相当するフラグメントは検出されず、この領域１のフラグメントが本発明の微生物剤に特有のものであることが示された。
【００７７】
実施例４
実施例１で得た微生物剤を使用し、実施例３における初期条件を下記のように調整するとともに、運転条件の含水率を４０％から５０％に変更した以外は実施例３と同様にしてダイオキシン類を含む焼却灰を処理し、ダイオキシン類の分解率を測定した。
【００７８】
＜初期条件＞
１．焼却灰、微生物剤、および分解基材として市販の木材チップを重量比で１:１:１に混合する（各４００ｇづつ）。
２.水道水および６規定塩酸を加えて、ｐＨ８．５、水分含量５０％に調整する。
３.２日に一度、生ごみ１００ｇ（湿重量）を添加して運転を開始する。
【００７９】
＜運転条件＞
駆動条件：１時間あたり５分間撹拌、５５分間停止の繰り返しによる好気・嫌気（静止）条件で行った。
温度：２５℃
通風・排気：４リットル／分
生ごみ：一日１回５０ｇ（湿重量）を添加した。
水分含量：５０％を保持するように調節した。
【００８０】
＜分析＞
７日毎に内容物を採取し、ＧＣ／ＭＳ法でダイオキシン類を分析した。その結果、初期ダイオキシン量は、７３,６００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）であったのに対し、２８日後のダイオキシン量は４６,０００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）まで減少させることができた。これはＴＥＱに換算すると９２０ｐｇ−ＴＥＱ／ｇ（乾燥重量）が、６１０ｐｇ−ＴＥＱ／ｇ（乾燥重量）まで減少したことに相当する。これは、自然界でのダイオキシン分解速度の約１２倍であった。
【００８１】
また、実験後の微生物剤を含むコンポストの微生物群集構造を実施例１と同様の方法で分析した。すなわち、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、断片化、フラグメント検出を実施した。その結果を表４に示した。
【００８２】
【表４】
2005269912.tif 000005
【００８３】
実施例５
実施例１で得た微生物剤を使用し、実施例３における初期条件を下記のように調整するとともに、運転条件の好気条件・嫌気条件の割合および含水率を４０％から５０％に変更した以外は実施例３と同様にしてダイオキシン類を含む焼却灰を処理し、ダイオキシン類の分解率を測定した。
【００８４】
＜初期条件＞
１．焼却灰、微生物剤、および分解基材として市販の木材チップを重量比で１:１:１に混合する（各４００ｇづつ）。
２.水道水および６規定塩酸を加えて、ｐＨ８．５、水分含量５０％に調整する。
３.２日に一度、生ごみ１００ｇ（湿重量）を添加して運転を開始する。
【００８５】
＜運転条件＞
駆動条件：１時間あたり２０分間撹拌、４０分間停止の繰り返しによる好気・嫌気（静止）条件で行った。
温度：２５℃
通風・排気：４リットル／分
生ごみ：一日１回５０ｇ（湿重量）を添加した。
水分含量：５０％を保持するように調節した。
【００８６】
＜分析＞
７日毎に内容物を採取し、ＧＣ／ＭＳ法でダイオキシン類を分析した。その結果、初期ダイオキシン量は、７８,０００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）であったのに対し、１２０日後のダイオキシン量は４９,０００ｐｇ／ｇ（乾燥重量）まで減少させることができた。これはＴＥＱに換算すると９２０ｐｇ−ＴＥＱ／ｇ（乾燥重量）が、６１０ｐｇ−ＴＥＱ／ｇ（乾燥重量）まで減少したことに相当する。これは、自然界でのダイオキシン分解速度の約１２倍であった。
【００８７】
また、実験後の微生物剤を含むコンポストの微生物群集構造を実施例１と同様の方法で分析した。すなわち、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、断片化、フラグメント検出を実施した。その結果を表５に示した。
【００８８】
【表５】
2005269912.tif 000006
【００８９】
実施例６
実施例１で得た微生物剤と、分解基材と、ダイオキシンと、を含む土壌を等量（４００ｇ）ずつ混合し、実施例３と同様に、図１に示す試験装置にて運転を行った。運転条件は、温度を２５℃以上になるように制御し、９９．５％の窒素ガスを２リットル／分の流速で通気した。２日に一度ペットフード（サイエンス・ダイエット；登録商標、日本ヒルズ・コルゲート株式会社製）を含水率８０％になるように調整したものを１０ｇ添加した。
【００９０】
リアクター内の混合物の水分含量は４０％になるよう適宜水分を添加して調整した。攪拌は５分間攪拌／５５分間停止の小サイクルを１２時間繰返し行い、次の１２時間は静置する、という大サイクルを繰返し実施した。この操作によって、微好気条件を維持した。このようにして維持した微好気条件での図１に示す装置内雰囲気の酸素の濃度は、アネロパック（商品名；三菱瓦斯化学社製）の嫌気指示薬の呈色状況から０．１５〜０．５v/v％の酸素含有量と判断された。
【００９１】
実施例３と同様にして内容物を採取し、ＧＣ／ＭＳ法でダイオキシン類を分析した。その結果、初期ダイオキシン量は、８４,０００ｐｇ／ｇ・乾燥重量であったのに対し、９０日後のダイオキシン量は、３９,０００ｐｇ／ｇ・乾燥重量まで減少させることができた。これは、ＴＥＱに換算すると１,３００ｐｇ・ＴＥＱ／ｇ・乾燥重量が、６２０ｐｇ・ＴＥＱ／ｇ・乾燥重量まで減少したことになる。
【００９２】
また、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出し、断片化し、フラグメント検出を実施した。その結果を表６に示す。
【００９３】
【表６】
2005269912.tif 000007
【００９４】
以上、本発明を種々の実施形態に関して述べたが、本発明は上記実施形態に制約されるものではなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲内で、他の実施形態についても適用可能である。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明は、ダイオキシン類等の芳香族有機ハロゲン化合物で汚染された土壌や飛灰等の物質の浄化に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】本発明微生物剤の製造と本発明浄化方法の概要を示す図面である。
【図２】試験装置の概要を示す図面である。
【符号の説明】
【００９７】
１０  試験装置
１１  温度センサー
１２  湿度センサー
１３  ヒーター
１４  攪拌翼
１５  エアーポンプ
１６  酸素センサー
【配列表フリーテキスト】
【００９８】
配列番号１
ＰＣＲのために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー。  
配列番号２
ＰＣＲのために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー。  
【図１】
2005269912.tif 000008
【図２】
2005269912.tif 000009
【配列表】
2005269912000001.app