(57)【要約】      （修正有）【課題】  本発明は持続放出複合体を提供すること。【解決手段】  前記複合体は、吸収可能なポリマーコーティングを有する吸収可能なポリマーマイクロ粒子上に固定化された生理活性ペプチド類を含む。本発明のマイクロ粒子複合体は、一分子当たり少なくとも一個のアミノ基及び／又はカルボキシル基を有するペプチド類を結合するのに足る量の表面及び表面下にカルボキシル基又はアミノ基を有する固体吸収可能なポリエステルマイクロ粒子を含み、固定化された一つ以上のペプチド類の放出をさらに調節する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアと、当該吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコア上に固定化された一つ以上のペプチド、一つ以上のタンパク質又はそれらの組合せとを含む結合マイクロ粒子であって、各ペプチドは、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン、ボンベシン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルシトニン、ブラジキニン、ガラニン、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、アミリン、タキキニン類、セクレチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、エンケファリン、エンドセリン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、ニューロメジン類、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、グルカゴン、ニューロテンシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン放出ペプチド（ＧＬＰ）、バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、下垂体細胞アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、モチリン、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、ＴＳＨ、並びにそれらの類似体及びフラグメント、又はそれらの製薬学的に許容しうる塩からなる群から独立して選ばれ；各タンパク質は、成長ホルモン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びインターフェロンからなる群から独立して選ばれる、前記結合マイクロ粒子。
【請求項２】
前記ペプチド、タンパク質若しくはそれらの組合せ又はそれらの製薬学的に許容できる塩が、結合マクロ粒子全質量の０．1％〜３０％を含む、請求項１に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項３】
前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがグリコール酸単位を含む、請求項２に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項４】
前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがさらにクエン酸残基を含む、請求項３に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項５】
グリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１である、請求項４に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項６】
吸収可能なポリマーコアがさらに酒石酸残基を含む、請求項３に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項７】
グリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１である、請求項６に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項８】
吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがさらにリンゴ酸残基を含む、請求項３に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項９】
グリコール酸単位対リンゴ酸残基の比が約７：１〜約２０：１である、請求項８に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項１０】
前記グリコール酸単位がカルボキシル成分で末端を形成する、請求項３に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項１１】
前記グリコール酸単位がアミン成分で末端を形成する、請求項３に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項１２】
吸収可能な被包用ポリマー内に被包された一つ以上の結合マイクロ粒子を含む被包マイクロ粒子であって、前記結合マイクロ粒子が吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアと、当該吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコア上に固定化された一つ以上のペプチド、一つ以上のタンパク質又はそれらの組合せとを含み、各ペプチドは、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン、ボンベシン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルシトニン、ブラジキニン、ガラニン、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、アミリン、タキキニン類、セクレチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、エンケファリン、エンドセリン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、ニューロメジン類、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、グルカゴン、ニューロテンシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン放出ペプチド（ＧＬＰ）、バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、下垂体細胞アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、モチリン、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、ＴＳＨ、並びにそれらの類似体及びフラグメント、又はそれらの製薬学的に許容しうる塩からなる群から独立して選ばれ；各タンパク質は、成長ホルモン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びインターフェロンからなる群から独立して選ばれ、前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアが、グリコール酸単位を含む、前記被包マイクロ粒子。
【請求項１３】
前記ペプチド、タンパク質若しくはそれらの組合せ又はそれらの製薬学的に許容できる塩が、結合マクロ粒子全質量の０．1％〜３０％を含み、前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがさらにクエン酸残基、酒石酸残基又はリンゴ酸残基を含む、請求項１２に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項１４】
グリコール酸単位対クエン酸残基、酒石酸残基又はリンゴ酸残基の比がそれぞれ約７：１〜約２０：１であり、前記グリコール酸単位がカルボキシル成分又はアミン成分で末端を形成する請求項１３に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項１５】
前記吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む、請求項１４に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項１６】
ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０である、請求項１５に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項１７】
ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０である、請求項１５に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項１８】
ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比は約７５：２５〜約９０：１０である、請求項１５に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項１９】
吸収可能な被包用ポリマーが被包マイクロ粒子の全質量の５〜７０％を占める、請求項１４に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項２０】
吸収可能な被包用ポリマーが被包マイクロ粒子の全質量の２０〜６０％を占める、請求項１９に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項２１】
吸収可能な被包用ポリマーが被包マイクロ粒子の全質量の３０〜５０％を占める、請求項２０に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項２２】
請求項１に記載の結合マイクロ粒子及び製薬学的に許容できるキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１に記載の結合マイクロ粒子、非水性吸収可能なゲル形成性液体ポリエステル及び場合により製薬学的に許容できるキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１２に記載の被包マイクロ粒子及び製薬学的に許容できるキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１２に記載の被包マイクロ粒子、非水性吸収可能なゲル形成性液体ポリエステル及び場合により製薬学的に許容できるキャリアを含む医薬組成物。
【請求項２６】
ペプチドがＬＨＲＨ類似体である、請求項４に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項２７】
前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアのグリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ＬＨＲＨ類似体が、ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2である、請求項２６に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項２８】
ペプチドがＬＨＲＨ類似体である、請求項６に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項２９】
グリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ＬＨＲＨ類似体が、ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2である、請求項２８に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項３０】
ペプチドがソマトスタチン類似体である、請求項４に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項３１】
グリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合している、請求項３０に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項３２】
ペプチドがソマトスタチン類似体である、請求項６に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項３３】
グリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合している、請求項３２に記載の結合マイクロ粒子。
【請求項３４】
吸収可能な被包用ポリマー内に被包されている請求項２６に記載の一つ以上の結合マイクロ粒子を含む被包マイクロ粒子であって、前記吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む、被包マイクロ粒子。
【請求項３５】
前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ＬＨＲＨ類似体が、ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2であり、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０である、請求項３４に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項３６】
吸収可能な被包用ポリマー内に被包されている請求項２８に記載の一つ以上の結合マイクロ粒子を含む被包マイクロ粒子であって、前記吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む、被包マイクロ粒子。
【請求項３７】
前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ＬＨＲＨ類似体が、ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2であり、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０である、請求項３６に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項３８】
吸収可能な被包用ポリマー内に被包されている請求項３０に記載の一つ以上の結合マイクロ粒子を含む被包マイクロ粒子であって、前記吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む、被包マイクロ粒子。
【請求項３９】
前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合し、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０である、請求項３８に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項４０】
請求項３２に記載の一つ以上の結合マイクロ粒子および吸収可能な被包用ポリマーを含む被包マイクロ粒子であって、前記吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む、被包マイクロ粒子。
【請求項４１】
前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合し、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０である、請求項４０に記載の被包マイクロ粒子。
【請求項４２】
結合マイクロ粒子を吸収可能な被包用ポリマーで被包する工程を含む、請求項１２に記載の被包マイクロ粒子の製造法。
【請求項４３】
前記吸収可能な被包用ポリマーと溶媒とを含む溶液中の前記結合マイクロ粒子からなる分散物を予備冷却した媒体上に滴下することを含み、当該媒体が前記吸収可能な被包用ポリマーの溶媒ではない、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記吸収可能な被包用ポリマーの溶液が約５％〜３０％の当該吸収可能な被包用ポリマーから構成され、予備冷却した媒体が２個以上の炭素原子を有するアルコールであり、媒体の温度が室温〜約−８０℃である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記予備冷却媒体の温度が約−６０℃〜−８０℃であり、媒体がイソプロピルアルコールである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
エマルション技術を使用して結合マイクロ粒子を吸収可能な被包用ポリマーで被包する工程を含む、請求項１２に記載の被包マイクロ粒子の製造法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
本発明は、吸収可能なポリマーマイクロ粒子（場合により、吸収可能なポリマーコーティングを有する）上に固定化された一つ以上のペプチド、一つ以上のタンパク質又はそれらの組合せの徐放性複合体に関する。本発明のマイクロ粒子複合体は、分子当たり少なくとも１個のアミノ基及び／又は少なくとも１個のカルボキシル基を有する一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質と、表面及び表面下のカルボン酸基又はアミノ基を一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質を結合するに足る量有し、その結果、固定化された一つ以上のペプチド又は一つ以上のタンパク質がマイクロ粒子複合体の全質量の０．１％〜３０％を示す。固定化された一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質をもつマイクロ粒子複合体は、場合により、個々に又は吸収可能なポリマーを持つ基中でさらに被包され、固定化された一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質の放出をさらに制御する。固定化された一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質の放出をさらに制御するために、被包マイクロ粒子を、生物学的環境中の水と接触すると軟質ゲル又は半固体に変態する吸収可能なゲル形成性液体を含有組成物中に配合することができる。
【０００２】
多くの薬物送達システムが開発され、試験されて薬剤組成物のインビボにおける制御放出に利用されている。例えば、ポリ（ＤＬ−乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（ε−カプロラクトン）及び様々な他のコポリマー類のようなポリエステル類が、プロゲステロンのような生物学的に活性な分子の放出に使用されてきた。これらはマイクロカプセル、フィルム又はロッドの形態であった （Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ及びＲ．Ｌａｎｇｅｒ、編集者、薬物送達システムとしての生分解性ポリマー(Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems)、Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ  １９９０）。ポリマー／治療薬組成物を、例えば皮下又は筋肉内に埋め込むと、治療薬が所定の時間にわたって放出される。このような生体適合性のある生分解性ポリマーシステムは、捉え込んだ治療薬をポリマーマトリックスから拡散させるように設計されている。治療薬が放出されると、ポリマーはインビボで分解するのでインプラントの外科的除去が不要となる。ポリマーの分解に寄与する要因はよくわかっていないが、ポリエステルに関するそのような分解は、ポリマー成分の非酵素的自己触媒加水分解にエステル結合が利用されることで調節されているのだろうと考えられている。
【０００３】
幾つかのＥＰＯ公報及び米国特許が、インビボにおける治療薬剤の放出の速度及び程度を調節することについてポリマーマトリックスの設計及びその役割の問題について取り扱ってきた。
【０００４】
例えば、Ｄｅｌｕｃａ（ＥＰＯ公開公報０４６７３８９  Ａ２）は、疎水性の生分解性ポリマーとタンパク質又はポリペプチドとの物理的相互作用について記述している。形成された組成物は治療薬と患者の体内に導入後マトリックスから治療薬の拡散放出を持続させる疎水性ポリマーとの混合物であった。
【０００５】
Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ（米国特許第４，７６７，６２８号）は、治療薬の放出を、ポリマーデバイス中に均一に分散させることによって制御した。該製剤は、二相の重複によって制御された連続放出を提供すると開示されている。すなわち、第一相が製剤表面からの薬物の拡散依存性の浸出、第二相がポリマーの分解によって誘発される水性チャンネルによる放出である。
【０００６】
その他の現場形成(in-situ forming)生分解性インプラント及びそれらの形成法は、Ｄｕｎｎらの米国特許第５，２７８，２０１号（’２０１特許）及び米国特許第５，０７７，０４９号（’０４９特許）に記述されている。Ｄｕｎｎらの特許は、歯周ポケットにおける歯周組織の修復を補助し、歯根表面に沿った上皮細胞の移動を遅延させる方法を開示している。’０４９特許は、現場形成の生分解性バリアを歯の表面に隣接して配置することに関する方法を開示している。バリアは細孔性で、所定の大きさの孔を含んでおり、生物的に活性な薬剤を含有することができる。バリアの形成は、（約５０％の典型的ポリマー濃度を達成するために）Ｎ−メチルピロリドンのような水混和性非毒性有機溶媒中ポリ（ｄｌ−ラクチド−コ−グリコリド）水凝固性サーモプラスチックのような生分解性ポリマーの液体溶液を歯周ポケットに配置することによって達成される。有機溶媒は歯周液中に散逸し、生分解性水凝固性ポリマーが現場で固体の生分解性インプラントを形成する。溶媒の散逸によって固体の生分解性インプラント内に孔が形成され、細胞の内部成長が促進される。’８５９特許も、同様に、生分解性の硬化可能な熱硬化性プレポリマーと、硬化剤と、水溶性材料、例えば塩、砂糖、水溶性ポリマーとの液体混合物からの生分解性バリアの形成に関する同じ適応のための方法を開示している。硬化可能な熱硬化性プレポリマーは、アクリル−エステル末端の吸収可能なポリマーと記載されている。
【０００７】
さらに、生物的に活性な化合物を様々な部位に制御送達するためのいくつかのシステムが文献に開示されている。例えば、Ｆｕｊｉｏｋａらの米国特許第５，０１１，６９２号には、薬物を含有するポリマー材料層を含む持続性のパルス式放出製剤が開示されている。ポリマー材料層は、薬物を極微量含むか、全く含まない。貫層方向面に延びる全面を、水に不溶性のポリマー材料で被覆されている。このような型のパルス式放出薬剤投与形は皮下に埋め込むのに適している。
【０００８】
Ｃｈｅｓｔｅｒｆｉｅｌｄらの米国特許第５，３６６，７５６号は、多孔性の生体吸収性外科用インプラント材料の製造法を記載している。該製造法は、ある量の生体吸収性インプラント材料の粒子を提供し、生体吸収性インプラント材料を少なくとも一つの成長因子で被覆することを含む。該インプラントは抗菌剤を含むこともできる。
【０００９】
Ｙａｍｈｉｒａらの米国特許第５，３８５，７３８号は、粉末の懸濁液を含む持続放出注入システムを開示している。粉末の懸濁液は、注入のために、粘性溶媒（例えば、植物油類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、シリコーン油、及び中鎖脂肪酸トリグリセリド類）中、活性成分及び製薬学的に許容しうる生分解性担体（例えば、タンパク質類、多糖類、及び合成高分子量化合物、好ましくは、コラーゲン、アテロコラーゲン、ゼラチン、及びそれらの混合物）を含む。製剤中の活性成分は生分解性担体中に以下の状態で配合される。（ｉ）活性成分が担体マトリックスに化学的に結合する；（ii）活性成分が担体マトリックスに分子間作用によって結合する；又は（iii）活性成分が担体マトリックス内に物理的に包含される。
【００１０】
さらに、文献にある前述のようなシステム、例えばＤｕｎｎら（米国特許第４，９３８，７６３号）によるシステムは、Ｎ−メチル−２−ピロリドンのような有機溶媒中のポリマー溶液の凝固を通して、生体に生分解性の細孔性固体インプラントを現場形成する方法を教示している。しかしながら、低分子有機溶媒を含む溶媒の使用は、適用部位から溶液の移動を容易にし、それによって細胞の脱水や壊死など、生きた組織に損傷を生ずる。溶媒質量の損失は凝固物の萎縮と周辺組織からの分離を引き起こしかねない。
【００１１】
米国特許第５，６１２，０５２号は、標準的にはカルボキシルを持つポリエステル鎖で作られた陽イオン交換マイクロ粒子について記載している。これは、ポリエステル鎖上に塩基性の生物活性薬剤を固定化し、吸収可能なゲル形成液体ポリエステル内での制御放出システムを提供するものである。米国特許第５，６１２，０５２号の内容は、参照により本発明に取り込まれる。カルボキシル含有物質と塩基性ポリペプチドとのイオン的な結合は、米国特許第５，６７２，６５９号及び米国特許第５，６６５，７０２号に記載されているように先行技術中に示されている。しかしながら、これらの複合体は、物理化学的特性を有する新たな化学物質として明確に定義されたイオン結合体を形成する目的で、それぞれ溶液状の個々の塩基性成分とカルボキシル成分とが分子的に反応することによって形成された可溶性の化学物質である。これは、複合体形成が主として表面複合体形成に関連する不均一系で起こる本発明と相違する。
【００１２】
発明の概要
本発明は、吸収可能なヘテロ鎖コアポリマーと、当該吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコア上に固定化された一つ以上のペプチド、一つ以上のタンパク質又はそれらの組合せとを含む結合マイクロ粒子に関し、各ペプチドは、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン、ボンベシン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルシトニン、ブラジキニン、ガラニン、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、アミリン、タキキニン類、セクレチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、エンケファリン、エンドセリン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、ニューロメジン類、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、グルカゴン、ニューロテンシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン放出ペプチド（ＧＬＰ）、バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、下垂体細胞アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、モチリン、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、ＴＳＨ、並びにそれらの類似体及びフラグメント、又はそれらの製薬学的に許容しうる塩から独立して選ばれ；各タンパク質は、成長ホルモン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びインターフェロンから独立して選ばれる。
【００１３】
上述の好適な結合マイクロ粒子（グループＢと表示する）は、前記ペプチド、タンパク質若しくはそれらの組合せ又はそれらの製薬学的に許容できる塩が結合マクロ粒子全質量の０．1％〜３０％を含む場合である。
【００１４】
上述の好適な結合マイクロ粒子（グループＣと表示する）は、前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがグリコール酸単位を含む場合である。
上述の好適な結合マイクロ粒子（グループＤと表示する）は、前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがさらにクエン酸残基、酒石酸残基又はリンゴ酸残基を含む場合である。
【００１５】
上述の好適な結合マイクロ粒子（グループＥと表示する）は、グリコール酸単位対クエン酸残基、酒石酸残基又はリンゴ酸残基の比が約７：１〜約２０：１である場合である。
グループＣの別の好適な結合マイクロ粒子はグリコール酸単位がカルボキシル成分で末端を形成する場合である。
【００１６】
グループＣのさらに別の好適な結合マイクロ粒子はグリコール酸単位がアミン成分で末端を形成する場合である。
別の態様では、本発明は吸収可能な被包用ポリマー内の一つ以上の結合マイクロ粒子を含む被包マイクロ粒子を提供し、当該結合マイクロ粒子は吸収可能なヘテロ鎖コアポリマーと、当該吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコア上に固定化された一つ以上のペプチド、一つ以上のタンパク質又はそれらの組合せとを含み、各ペプチドは、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン、ボンベシン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルシトニン、ブラジキニン、ガラニン、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、アミリン、タキキニン類、セクレチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、エンケファリン、エンドセリン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、ニューロメジン類、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、グルカゴン、ニューロテンシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン放出ペプチド（ＧＬＰ）、バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、下垂体細胞アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、モチリン、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、ＴＳＨ、並びにそれらの類似体及びフラグメント、又はそれらの製薬学的に許容しうる塩から独立して選ばれ；各タンパク質は、成長ホルモン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びインターフェロンから独立して選ばれ、前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアはグリコール酸単位を含む。
【００１７】
上述の好適な被包マイクロ粒子は、前記ペプチド、タンパク質若しくはそれらの組合せ又はそれらの製薬学的に許容できる塩が結合マクロ粒子全質量の０．1％〜３０％を含み、前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがさらにクエン酸残基、酒石酸残基又はリンゴ酸残基を含む場合である。
【００１８】
上述の好適な被包マイクロ粒子（グループＦと表示する）は、グリコール酸単位対クエン酸残基、酒石酸残基又はリンゴ酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記グリコール酸単位がカルボキシル成分又はアミン成分で末端を形成す
上述の好適な被包マイクロ粒子は、吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む場合である。
【００１９】
上述の好適な被包マイクロ粒子は、ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０であり、そしてｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０である場合である。
【００２０】
グループＦの好適な被包マイクロ粒子は、吸収可能な被包用ポリマーが被包マイクロ粒子の全質量の５〜７０％をなす。
上述の好適な被包マイクロ粒子は、吸収可能な被包用ポリマーが被包マイクロ粒子の全質量の２０〜６０％をなす。
【００２１】
上述の好適な被包マイクロ粒子は、吸収可能な被包用ポリマーが被包マイクロ粒子の全質量の３０〜５０％をなす。
別の態様では、本発明は上述の結合マイクロ粒子と製薬学的に許容できるキャリアとを含む医薬組成物を提供することである。
【００２２】
別の態様では、本発明は上述の結合マイクロ粒子、非水性吸収可能なゲル形成性液体ポリエステル及び場合により製薬学的に許容できるキャリアとを含む医薬組成物を提供することである。
【００２３】
別の態様では、本発明は上述の被包マイクロ粒子と製薬学的に許容できるキャリアとを含む医薬組成物を提供することである。
別の態様では、本発明は上述の被包マイクロ粒子、非水性吸収可能なゲル形成性液体ポリエステル及び場合により製薬学的に許容できるキャリアとを含む医薬組成物を提供することである。
【００２４】
グループＤの別の好適な結合マイクロ粒子（グループＧと表示する）は、吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがクエン酸残基を含み、ペプチドがＬＨＲＰ類似体である場合である。
【００２５】
上述の好適な結合マイクロ粒子は、前記吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアのグリコール酸単位対クエン酸残基の比約７：１〜約２０：１であり、ＬＨＲＨ類似体がｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2である場合である。
【００２６】
グループＤの別の好適な結合マイクロ粒子（グループＨと表示する）は、吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアが酒石酸残基を含み、ペプチドがＬＨＲＨ類似体である場合である。
上述の好適な結合マイクロ粒子は、グリコール酸単位対酒石酸残基の比約７：１〜約２０：１であり、ＬＨＲＨ類似体がｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2である場合である。
【００２７】
グループＤのさらに別の好適な結合マイクロ粒子（グループＩと表示する）は、吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアがクエン酸残基を含み、ペプチドがソマトスタチン類似体である場合である。
【００２８】
上述の好適な結合マイクロ粒子は、グリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合している場合である。
【００２９】
グループＤのさらに別の好適な結合マイクロ粒子（グループＪと表示する）は、吸収可能なヘテロ鎖ポリマーコアが酒石酸残基を含み、ペプチドがソマトスタチン類似体である場合である。
【００３０】
上述の好適な結合マイクロ粒子は、グリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合している場合である。
【００３１】
本発明の好適な被包マイクロ粒子は吸収可能な被包用ポリマー内に被包されたグループＧの一つ以上の結合マイクロ粒子を含む被包マイクロ粒子であり、吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
である。
【００３２】
上述の好適な被包マイクロ粒子は、前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、ＬＨＲＨ類似体がｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2であり、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０
である場合である。
【００３３】
別の好適な被包マイクロ粒子は吸収可能な被包用ポリマー内に被包されたグループＨの一つ以上の結合マイクロ粒子を含み、当該吸収可能な被包用ポリマーが
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む。
【００３４】
上述の好適な被包マイクロ粒子は、前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、ＬＨＲＨ類似体がｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2であり、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０
である場合である。
【００３５】
別の好適な被包マイクロ粒子は吸収可能な被包用ポリマー内に被包されたグループＩの一つ以上の結合マイクロ粒子を含む被包マイクロ粒子であり、吸収可能な被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む。
【００３６】
上述の好適な被包マイクロ粒子は、前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対クエン酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合し、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０である場合である。
【００３７】
別の好適な被包マイクロ粒子はグループＪの一つ以上の結合マイクロ粒子及び吸収可能な被包用ポリマーを含み、当該被包用ポリマーが、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位とグリコリドベースの単位、
（ｃ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位、又は
（ｄ）ｌ−ラクチドベースの単位とｄ，ｌ−ラクチドベースの単位
を含む。
【００３８】
上述の好適な被包マイクロ粒子は、前記吸収可能なポリマーコアのグリコール酸単位対酒石酸残基の比が約７：１〜約２０：１であり、前記ソマトスタチン類似体が、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合しているか又はＮ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2であり、２個のＣｙｓ残基がジスルフィド結合によって結合し、
（ａ）ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、
（ｂ）ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位対グリコリドベースの単位の比が約７５：２５〜約９０：１０であり、そして
（ｃ）ｌ−ラクチドベースの単位対ｄ，ｌ−ラクチドベースの単位の比が約８０：２０である場合である。
【００３９】
別の態様では、本発明は上述の被包マイクロ粒子の製造法を提供し、当該方法は、結合マイクロ粒子を吸収可能な被包用ポリマーで被包する工程を含む。
上述の好適な方法は、前記吸収可能な被包用ポリマーと溶媒とを含む溶液中の前記結合マイクロ粒子の分散物を予備冷却した媒体に滴下することを含み、当該媒体が当該吸収可能な被包用ポリマーの溶媒でない場合である。
【００４０】
上述の好適な方法は、前記吸収可能な被包用ポリマーの溶液が約５％〜３０％の吸収可能な被包用ポリマーから構成され、前記予備冷却媒体が２個以上の炭素原子を持つアルコールであり、当該媒体の温度が室温〜約−８０℃である場合である。
【００４１】
上述の好適な方法は、前記予備冷却媒体の温度が約−６０℃〜−８０℃であり、当該媒体がイソプロピルアルコールである場合である。
さらに別の態様では、本発明は上述の被包マイクロ粒子の製造法を提供し、当該方法は、エマルション技術を使用して結合マイクロ粒子を吸収可能な被包用ポリマーで被包する工程を含む。
【００４２】
詳細な記述
本明細書中で使用している用語“吸収可能”とは、生物的環境中で鎖の解離を受けて水溶性の副産物になるポリマーのような水不溶性材料を意味する。
【００４３】
本明細書中で使用している用語“マイクロ粒子”とは、吸収可能なポリエステルの粒子（好ましくは本質的に球形）のことである。
本明細書中で使用している用語“結合マイクロ粒子”とは、マイクロ粒子上にイオン的に固定化された一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質を有するマイクロ粒子のことである。
【００４４】
本明細書中で使用している用語“被包されたマイクロ粒子”とは、ポリマーのコーティングを有する結合マイクロ粒子のことであり、ポリマーコーティングは必ずしも完全に密閉性でなくてもよい。
【００４５】
本明細書中で使用している用語“ポリマーコア”とは、マイクロ粒子の別の言い方である。
本明細書中で使用している用語“被包ポリマー”とは、結合マイクロ粒子を被包するのに使用されるポリマーのことである。
【００４６】
本明細書中で使用している用語“ゲル形成液体ポリエステル”とは、水のような溶媒を吸収し、相転移を受け、可逆的変形が可能な三次元ネットワークを維持する材料のことである。
【００４７】
本願においてはアミノ酸を当業者に公知の標準三文字略語を用いて示す。例えばＡｌａ＝アラニン。
本発明のマイクロ粒子は結晶性で、吸収可能なポリエステルで作られる。例えば個々の鎖上に一つ以上のカルボキシル基を有するポリグリコリドである。この結果、マイクロ粒子の表面上及びマイクロ粒子の表面直下に、一つ以上の塩基性基を有する一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質を結合しイオン的に固定化するに足る濃度のカルボキシル基がもたらされる。あるいは、ポリグリコリドのカルボキシル基は、例えばジアミン、好ましくは第一級もしくは第二級アミン又はそれらの混合物によってアミド化することもできる。この場合、アミンは、一つ以上の酸性基を有する一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質をイオン的に固定化する複合体を形成する。マイクロ粒子の表面は必ずしも均質でないので、用語“表面下”は、マイクロ粒子表面にみられる割れ目などのことをいう。結合マイクロ粒子は、患者の体内で一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質を制御放出するための手段を提供する。固定化された一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質の放出をさらに制御するために、結合マイクロ粒子を個々に又は集団で吸収可能なポリマーを用いて被包することができる。結合マイクロ粒子は、一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質を、患者の体内で約２日間〜約３ヶ月間、好ましくは約１週間〜約３ヶ月間にわたって放出する。被包されたマイクロ粒子は、一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質を、患者の体内で約３日間〜約６ヶ月間、好ましくは約２週間〜約５ヶ月間にわたって放出する。
【００４８】
マイクロ粒子上に固定化されうるペプチドの典型例は、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン、ボンベシン、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルシトニン、ブラジキニン、ガラニン、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、アミリン、タキキニン類、セクレチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、エンケファリン、エンドセリン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）、ニューロメジン類、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、グルカゴン、ニューロテンシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン放出ペプチド（ＧＬＰ）、バソアクティブ・インテスティナル・ペプチド（ＶＩＰ）、下垂体細胞アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、モチリン、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、ＴＳＨ、及びそれらの類似体並びにフラグメントなどであるがこれらに限定されない。マイクロ粒子上に固定化されうるタンパク質の例は、成長ホルモン、エリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びインターフェロンである。
【００４９】
マイクロ粒子は、ラクチドベースのポリマー又は固体の半結晶性ポリラクトンから製造できる。例えば、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸及びクエン酸のような、酸を持つヒドロキシル開始剤の開環重合によって形成できるポリグリコリドである。本発明のマイクロ粒子は以下の手順に従って合成できる。反応容器中に、ラクチドベースのモノマー及び／又はラクトン（例えばグリコリド）と、酒石酸、リンゴ酸又はクエン酸のような開始剤を混合する。反応容器を約３５〜４５℃、好ましくは４０℃に温め、真空下に約２０〜６０分間、好ましくは３０分間置く。反応容器の温度を約１０５〜１１５℃、好ましくは１１０℃に上げる。この温度に達したら、容器を酸素除去した窒素雰囲気下に置き、混合物を攪拌する。混合物が溶融したら、開環重合に適切な触媒量の有機金属触媒、例えばトルエンのような非プロトン性溶媒中２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液を加える。再度、真空を約３０〜９０秒間適用し、モノマーをあまり除去せずにトルエンを除去する。混合物の温度を約１１５〜１２５℃、好ましくは１２０℃に５〜１０分間上げ、その後さらに約１４５〜１５０℃に上げる。一定の機械的攪拌下でこの温度に約３〜５時間、好ましくは４時間保った。
【００５０】
得られたポリマーを、まずＫｎｉｆｅグラインダーを用いて粉砕することにより、微粉状にする。次にポリマーをＡｌｊｅｔ  Ｍｉｃｒｏｎｉｚｅｒ中で加圧乾燥窒素流を用いて微粉状にする。平均粒径をＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ／Ｅ中で体積分布モデルと分散剤として２００／５  ｃＳ  シリコーン油を用いて分析する。
【００５１】
ポリマーを精製し、微粉化ポリマーをアセトンに分散し、ソニケーター(sonicator)中に好ましくは約３０分間置くことによってそのナトリウム塩を形成する。この間、分散物はホモジナイザを用いて約８，０００〜２４，０００ｒｐｍ、好ましくは９，５００ｒｐｍでホモジナイズもされた。この音波処理／均質化ステップの後、分散物を約３，０００〜７，０００ｒｐｍ、好ましくは５，０００ｒｐｍで好ましくは約３０分間遠心機中で遠心分離する。上澄みを廃棄し、遠心分離ケーキを新鮮なアセトン中に再懸濁し、音波処理／均質化ステップを繰り返す。二回目の遠心分離が完了したら、上澄みを廃棄し、ケーキを脱イオン水中に再懸濁した。次に、最後の音波処理／均質化ステップを１回実施して残りのアセトンをすべて除去し、分散物を再度約５，０００ｒｐｍで約３０分間遠心分離する。
【００５２】
遠心分離ケーキを新鮮な脱イオン水中に再懸濁し、分散物のｐＨをモニタする。０．２Ｍ炭酸ナトリウム溶液のような弱塩基を、ｐＨをｐＨ約８〜ｐＨ約９に上げるに足る量攪拌しながら加える。分散物を約３０分間攪拌した後、ろ紙上に真空ろ過する。ろ過ケーキをさらに脱イオン水で濯ぎ、凍結し、凍結乾燥させる。
【００５３】
示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）により、加熱速度約５℃／分〜１５℃／分、好ましくは１０℃／分で純度をモニタする。
陰イオン交換体マイクロ粒子は、陽イオン交換体マイクロ粒子を取り、それをジアミンの熱希釈溶液（〜８０℃）中でインキュベートすることによって得る。そのアミン部は、アルゴンのような不活性ガス下、ジオキサン又はＴＨＦ中公知濃度の、どちらも第一級アミン又はどちらも第二級アミン又は第一級アミンと第二級アミンとの混合であり得ることが好適である。ジオキサン又はＴＨＦ中のジアミン濃度は酸滴定によって測定する。反応が実質的に起こらなくなったら、アミド化されたマイクロ粒子をろ過によって分離し、ジオキサン又はＴＨＦで濯ぎ、減圧下で乾燥する。
【００５４】
一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質は、マイクロ粒子上に以下の方法に従って固定化できる。マイクロ粒子のナトリウム塩を、水に溶解した一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質の遊離塩基を含む溶液中に分散する。分散物を室温で攪拌しながら約２時間インキュベートした後、結合マイクロ粒子をろ過して取り出す。ろ過ケーキは、脱イオン水でさらに濯ぎ、凍結し、凍結乾燥させる。次にサンプルを元素分析によって窒素について分析し、固定化された一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質の量を測定する。
【００５５】
マイクロ粒子の粒径は、本発明のマイクロ粒子が固定化できるペプチド及び／又はタンパク質の量に役割を果たしている。マイクロ粒子の粒径が小さければある質量のマイクロ粒子の有する表面積は大きくなり、従ってより多くのペプチド及び／又はタンパク質がマイクロ粒子質量当たりに固定化できる。マイクロ粒子の粒径をミクロン又はミクロン未満の寸法に減少させるのは前述のようにして達成できる。マイクロ粒子の直径は、約０．５μｍ〜１００μｍ、好ましくは１μｍ〜１５μｍ、更に好ましくは３μｍ〜１０μｍの範囲であり得る。
【００５６】
吸収可能な被包ポリマーは、従来の有機溶媒、例えばクロロホルム、塩化メチレン、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチル及びギ酸エチルに可溶な結晶性又は非結晶性のラクチド／グリコリドコポリマー、アモルファスｌ−ラクチド／ｄ，ｌ−ラクチドコポリマー、カプロラクトン／グリコリドコポリマー又はトリメチレンカーボネート／グリコリドコポリマーである。これらの吸収可能な被包ポリマーの非溶媒は、水、低沸点アルコール類及び炭化水素類などである。吸収可能な被包ポリマーは、ラクトン類の接触開環重合、又はヒドロキシポリカルボン酸のような連鎖開始剤の存在下、ε−カプロラクトン、ｐ−ジオキサノン、トリメチレンカーボネート、１，５−ジオキセパン−２−オン又は１，４−ジオキセパン−２−オンのような環状モノマーの重合によって合成できる。別の方法は、有機ポリカルボン酸を予備形成したポリエステルと反応させることに関し、米国特許第５，６１２，０５２号に開示されている。この内容は参照により本発明に取り込まれる。
【００５７】
結合マイクロ粒子の被包は、エマルションの相分離によって達成できる。別の被包方法には、超音波アトマイザを使用するものが含まれ、吸収可能な被包用ポリマー溶液中の結合マイクロ粒子分散物をマイクロ滴として冷却された非溶媒媒体中に導入する方法である。結合マイクロ粒子は、ラクチド及びグリコリドからなる吸収可能なコポリマーを用い、米国特許出願番号ＵＳＳＮ：０８／４６７，３６１号に開示されているような硫酸バリウムマイクロ粒子を被包するためのＨ．Ｄｅｍｉａｎ及びＳ．Ｗ．Ｓｈａｌａｂｙにより記載されたエマルション蒸発方法のような固体粒子の伝統的なマイクロカプセル化又は被覆技術を使用して被包される（当該特許出願を本明細書中に含める）。あるいは、ポリマー溶液中で被包された固体マイクロ粒子の凝固を用いて吸収可能なラクチド及びグリコリドの被包コポリマーで被包され、超音波アトマイザ（ネブライザ）を通して被包用ポリマーの非溶媒である液体媒体中に送達される。しかし、ここで液体媒体の非溶媒は、被包固体マイクロ粒子周辺の被包用ポリマー溶液の溶媒を抽出することができる。マイクロ粒子を被包するポリマー溶液の濃度によって、被包マイクロ粒子中の元の結合マイクロ粒子の数は、被包マイクロ粒子の平均直径０．５μｍ〜１００μｍと共に１〜数百の間で変化しうる。
【００５８】
以下の方法は、噴霧(nebulization)による被包されたペプチド付加及び／又はタンパク質付加（以後ペプチド付加）陽イオン交換体の製造に関する。興味の対象である被包用コポリマーを、アセトニトリル、酢酸エチル又はギ酸エチルのいずれかの溶媒に１０〜３０％（Ｗ／Ｗ）の濃度で溶解する。この溶液をペプチド付加ＣＥの分散に使用するが、その量はペプチド付加ＣＥ対被包コポリマーの重量比が約３０：７０〜約８０：２０となるに足る量である。分散は高速均質化(homogenization)によって達成される。分散物は１ｍｌ／分〜１０ｍｌ／分の流量で超音波噴霧ノズルに可変周波数（この周波数は１２ｋＨｚ〜３５ｋＨｚで変化させることができる）で供給される。周波数が高ければ粒子特性は維持されつつ高流量が可能となる。このようにして分散物は、（用いられた被包用コポリマーの溶媒量に比べて）少なくとも１〜１０倍過剰のイソプロパノール又はエタノールからなる捕集シンク中に噴霧される。前記イソプロパノール又はエタノールは充分な量のドライアイスペレット（１リットルのＩＰＡ当たり通常０．５〜１Ｋｇ）を含有し、その結果、スラリーの温度が噴霧の間中−７０℃〜−８０℃に保たれる。このスラリーは、体積によって３００〜７００ｒｐｍで攪拌される。溶媒がアセトニトリルの場合、噴霧滴はスラリーに接触するとすぐに凍結する。噴霧が完了すると、全分散物を１０℃〜室温で自然解凍させ、その後真空ろ過する。ろ過ケーキは脱イオン水で濯ぎ、過剰の非溶媒を除去する。得られた粒子の外観は、主にｄ，ｌ−ラクチドの被包コポリマーの場合滑らかな微小球（マイクロスフェア）で、被包コポリマーが主にｌ−ラクチドベースの場合、わずかに皺が寄っているように見える。
【００５９】
マイクロ粒子イオン交換体の結合能は、以下のようにして測定できる。例えば、陽イオン交換体マイクロ粒子の場合、予め決められたマイクロ粒子質量中の利用可能なカルボキシル基を規定度のわかっている炭酸ナトリウムの冷希釈水溶液を用いて中和する。中和されたマイクロ粒子をろ過して単離し、冷脱イオン水を用いて完璧に濯ぐ。そして空気乾燥する。次に、固体のマイクロ粒子を既知濃度のピロカルピン塩酸塩の希釈溶液中でインキュベートし、結合能データから予測されるよりわずかに過剰の塩基性薬物を提供するようにする。水性媒体中の残りのピロカルピンＨＣｌ濃度を、マイクロ粒子による塩基の取込みに有意の変化が記録されなくなるまでの間モニタする。マイクロ粒子上に固定化された塩基のパーセントは消費データから決定し、次いで窒素についての元素分析によって確認する。
【００６０】
陰イオン交換体（アミド化粒子）の結合能は、（１）窒素についての元素分析、及び（２）ナプロキセン(Naproxen)に結合する程度（ＨＰＬＣを用いて希釈溶液から除去されるナプロキセンの程度を測定する）、によって測定される。後者は、既知濃度の希水酸化ナトリウム溶液を用いて固定化されたナプロキセンを放出させることによって確認される。
【００６１】
本発明の結合マイクロ粒子又は被包マイクロ粒子は、当業者に周知の投与経路、例えば非経口投与、経口投与又は局所投与によって患者に投与できる。好ましくは、粉末又は懸濁液として鼻腔内経路によって、又は吸入剤として肺系を通じて投与される。非経口投与される場合、米国特許第５，６１２，０５２号明細書（その内容を参照として本明細書中に含める）に記載されているように、等張水性媒体中又は非水性の吸収可能ゲル形成性液体ポリエステル中の分散物として投与されるのが好ましい。本発明の結合マイクロ粒子及び／又は被包マイクロ粒子を含む製剤は種々の任意の成分も含有できる。このような成分には、界面活性剤、粘度調節剤、薬効成分、細胞成長調節剤、染料、錯生成剤、抗酸化剤、カルボキシメチルセルロースのようなその他のポリマー、ガーゴム、ひまし油のようなワックス／油類、グリセリン、フタル酸ジブチル及びフタル酸ジ（２−エチルヘキシル）ならびに多くのその他のものがあるが、これらに限定されない。このような任意成分は、使用する場合、製剤の総量中約０．１％〜約２０％、好ましくは約０．５％〜約５％含む。
【００６２】
結合マイクロ粒子又は被包マイクロ粒子の、患者に投与されるべき有効投与量は、担当の医師又は獣医によって決定されてよく、また、一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質について考慮される適正な投与量並びにマイクロ粒子上に固定化された一つ以上のペプチド及び／又は一つ以上のタンパク質の量によって変化する。そのような投与量は当業者には公知であるか、又は当業者が決定することができる。
【００６３】
米国特許第５，６１２，０５２号明細書にゲルフォーマーの製造が開示されている（その内容を参照として本明細書中に含める）。ゲルフォーマーの特定の例は以下の通りである。
【００６４】
６０／４０トリメチレンカーボネート／グリコリド及びポリエチレングリコール−４００の８０／２０（重量）ブロックコポリマーの製造（ＧＦ−１）：撹拌器と窒素入り口とを備えた火炎乾燥樹脂ケトル(flame-dried resin kettle)にポリエチレングリコール４００（０．９９モル、１１９．５ｇ）、第一錫オクトアート（トルエン中０．２Ｍ、４，７００ｍｌ、０．９４６ミリモル）、グリコリド（１．７８モル、２０６．５ｇ）及びトリメチレンカーボネート（２．６５モル、２７０ｇ）を入れた。反応器をアルゴンで数回パージし、次いで、溶融するまで加熱し、次いで攪拌しながら約１５０℃まで約１２時間加熱した。反応終了時、流動性を維持させながら温度を下げ、過剰のモノマーを減圧下で除去した。得られたポリマーを赤外線スペクトル及びＮＭＲならびに分子量についてゲル浸透クロマトグラフィーにより分析した。
【００６５】
６０／４０トリメチレンカーボネート／グリコリド及びポリエチレングリコール−４００の１５／８５（重量）ブロックコポリマーの製造（ＧＦ−２）：表題のコポリマーをＧＦ−１について記載した手順に従って合成したが、ポリエチレングリコール４００（１．０６３モル、４２５ｇ）、第一錫オクトアート（トルエン中０．２Ｍ、１，７６０ｍｌ、０．３５ミリモル）、グリコリド（０．２７９モル、３２．４ｇ）及びトリメチレンカーボネート（０．４１８モル、４２．６ｇ）を使用し、約９時間攪拌した。
【００６６】
９０／１０トリメチレンカーボネート／グリコリド及びポリエチレングリコール−１５００の８０／２０（重量）ブロックコポリマーの製造（ＧＦ−３）：表題のコポリマーをＧＦ−１について記載した手順に従って合成したが、ポリエチレングリコール１５００（０．２６７モル、４００ｇ）、第一錫オクトアート（トルエン中０．２Ｍ、１，２００ｍｌ、０．２４７ミリモル）、グリコリド（０．０９７モル、１１．２ｇ）及びトリメチレンカーボネート（０．８７モル、８８．７ｇ）を使用し、約１３時間攪拌した。
【００６７】
実施例Ｉ
陽イオン交換体（ＣＥ）として使用される、クエン酸で開始されたポリ（グリコール酸）ポリマー（ＰＧＣＡ）の製造、微粉化、及び精製
実施例Ｉ（ａ）：７／１  ＰＧＣＡ−５００ｍｌのガラス製反応容器に、２４２．６３ｇのグリコリド（Ｐｕｒａｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ａｒｋｅｌｓｅｄｉｊｋ、オランダ）と５７．３７ｇのクエン酸（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｄｏｒｓｅｔ，Ｕ．Ｋ．）を入れた。クエン酸は、Ａｂｄｅｒｈａｌｄｅｎ装置（Ａｌｄｒｉｃｈ，ミズーリ州セントルイス，ＵＳＡ）中でシリカゲル（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ，Ｌｅｉｃｓ．，Ｕ．Ｋ．）上でさらに乾燥させてあった。反応容器を約４０℃の油浴中に浸漬し、約３０分間真空下（０．０４ｍｂａｒ）に置いた。次に浴を下げてその温度を約１１０℃に上げた。この温度に達した後、反応容器を酸素除去した窒素雰囲気下に置き、再浸漬した。内容物は、Ｈｅｉｄｏｌｐｈスタラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｅｌｅｋｔｒｏ  ＧｍｂＨ，Ｋｅｌｈｅｉｍ，ドイツ）を用いて約１００ｒｐｍで攪拌した。反応容器の内容物が溶融したら、トルエン（Ｒｉｅｄｅｌ
ｄｅ−Ｈａｅｎ，Ｓｅｅｌｚｅ，ドイツ）中０．１Ｍ  ２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液（Ｓｉｇｍａ，ミズーリ州セントルイス，ＵＳＡ）１．０９ｍｌを加えた（化学量論比５０ｐｐｍ）。液体窒素トラップ経由で約３０秒間再度真空を適用し、モノマーをあまり除去することなくトルエンを除去した。次に油浴温度を約５分間約１２０℃に上げ、その後さらに約１５０℃に上げた。約１００ｒｐｍという一定の機械的攪拌下で約４時間この温度に保った。標記ポリマーを得た。
【００６８】
実施例Ｉ（ｂ）：１０／１  ＰＧＣＡ−実施例Ｉａの手順に従って標記ポリマーを得た。ただし、２５７．４０ｇのグリコリド、４２．６０ｇのクエン酸、及び１．１０ｍｌのトルエン中０．１Ｍ  ２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液（化学量論比５０ｐｐｍ）を使用した。
【００６９】
実施例Ｉ（ｃ）：１５／１  ＰＧＣＡ−機械的スタラーとアルゴン入口を備えた火炎乾燥樹脂ケトルに、グリコリド（２．５８６ｍｏｌｅ、３００ｇ）、無水クエン酸（０．１７２ｍｏｌｅ、３３ｇ）、及び２−エチルヘキサン酸第一スズ（トルエン中０．２Ｍ、８６２ｍｌ、０．１７２ｍｍｏｌｅ）を充填した。重合反応容器とその内容物は乾燥アルゴンで数回パージした。重合充填物の溶融後、反応物を加熱し、ポリマーが溶融物から析出するまで約１６０℃で攪拌した。部分析出後攪拌はすぐにやめた。反応は約１６０℃で約２時間続けた。重合の最後に温度を１２０℃未満に下げ、過剰のモノマーを減圧下で除去した。単離したポリマーの組成は赤外分光法とＮＭＲを用いて確認した。
【００７０】
微粉化−実施例Ｉ（ａ）、Ｉ（ｂ）及びＩ（ｃ）の各ポリマーを、まずＫｎｉｆｅグラインダー（ＩＫＡ，Ｓｔａｕｆｅｎ，ドイツ）を用いて粉砕した。次に、加圧乾燥窒素流を用いてＡｌｊｅｔ  Ｍｉｃｒｏｎｉｚｅｒ（Ｆｌｕｉｄ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ａｌｊｅｔ，Ｐｌｕｍｓｔｅａｄｓｖｉｌｌｅ、ペンシルベニア州、ＵＳＡ）中で微粉化した。実施例Ｉ（ａ）は、体積分布モデルと分散剤として２００／５  ｃＳ  シリコーン油（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｓｅｎｅｆｆｅ、ベルギー）を用いたＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ／Ｅ（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｓ．，Ｕ．Ｋ．）中での分析で、粒子の平均直径が２４．８４μｍであった。実施例Ｉ（ｂ）とＩ（ｃ）の粒子の平均直径は微粉化後それぞれ４．６９μｍ及び６．３１μｍであった。
【００７１】
精製／ナトリウム塩の形成−実施例Ｉ（ａ）、Ｉ（ｂ）及びＩ（ｃ）の５０ｇずつを２Ｌのアセトン（Ｒｉｅｄｅｌ  ｄｅ−Ｈａｅｎ，Ｓｅｅｌｚｅ，ドイツ）中に分散し、ソニケーター（Ｂｒａｎｓｏｎ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ  ＢＶ，Ｓｏｅｓｔ、オランダ）に約３０分間入れた。この間、分散物はＵｌｔｒａ−ｔｕｒｒａｘ  Ｔ２５ホモジナイザ（ＩＫＡ，Ｓｔａｕｆｅｎ，ドイツ）を用いて約９，５００ｒｐｍでホモジナイズもした。この音波処理／均質化ステップの後、分散物をＳｏｒｖａｌｌ遠心機（Ｓｏｒｖａｌｌ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、デラウェア州、ＵＳＡ）中で約５，０００ｒｐｍで約３０分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、遠心分離ケーキを新鮮なアセトン中に再懸濁して、音波処理／均質化ステップを繰り返した。二回目の遠心分離が完了したら、上澄みを廃棄し、ケーキを脱イオン水中に再懸濁した。次に最後の音波処理／均質化ステップを１回実施して残りのアセトンをすべて除去した。分散物は再度約５，０００ｒｐｍで約３０分間遠心分離した。
【００７２】
遠心分離ケーキを新鮮な脱イオン水中に再懸濁し、分散物のｐＨをモニタした。０．２Ｍ炭酸ナトリウム溶液を、ｐＨをｐＨ約８〜ｐＨ約９に上げるに足る量それぞれに（攪拌しながら）加えた。分散物を約３０分間攪拌した後、Ｗｈａｔｍａｎ  ｎｏ．１（直径２４ｃｍ）ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上に真空ろ過した。ろ過ケーキをさらに脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ
Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒ（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）で凍結乾燥させた。
【００７３】
加熱速度１０℃／分で、ＴＡ  ＤＳＣ９１２Ｓ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ、デラウェア州、ＵＳＡ）を用いて示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）により純度をモニタした。各例について得られたＤＳＣサーモグラムはモノマーのグリコリドについての吸熱ピークを何ら示さず、実施例Ｉ（ａ）、Ｉ（ｂ）及びＩ（ｃ）について、それぞれ１７６℃、１７８℃及び１８０℃の吸熱を示した。
【００７４】
実施例II
グリコリド／リンゴ酸コポリマーＰＧＭＡのマイクロ粒子陽イオン交換体の製造
標記マイクロ粒子を実施例Ｉ（ｃ）に記載の方法に従って合成したが、ただしグリコリド（２．５８６ｍｏｌｅ、３００ｇ）、無水リンゴ酸（０．１７２ｍｏｌｅ、２３ｇ）及び２−エチルヘキサン酸第一スズ（トルエン中０．２Ｍ、８６２ｍｌ、０．１７２ｍｍｏｌｅ）を使用した。示差走査熱量測定法を用いてポリマーの融点を測定した（Ｔｍ＝２０６℃）。
【００７５】
Ｗｉｌｅｙミルを用いて固体ポリマーを粉砕し、平均の粒子直径約１２５μｍを達成した。粒径をさらに直径約５〜１０μｍに減少させるのは、加圧乾燥窒素を取り入れるジェットミルを用いて達成した。得られたマイクロ粒子をアセトンで濯ぎ微量のモノマーと低分子量オリゴマーを除去した。次に生成物を、使用するまで減圧下４０℃で乾燥させた。乾燥マイクロ粒子の平均直径は粒径アナライザを用いて測定した。
【００７６】
実施例III
陽イオン交換体（ＣＥ）として使用される、酒石酸で開始されたポリ（グリコール酸）ポリマー（ＰＧＴＡ）の製造、微粉化、及び精製
実施例III（ａ）：１０／１  ＰＧＴＡ−５００ｍｌのガラス製反応容器に、２６４．６５ｇのグリコリド（Ｐｕｒａｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ａｒｋｅｌｓｅｄｉｊｋ、オランダ）と３４．２２ｇのＬ−酒石酸（Ｒｉｅｄｅｌ  ｄｅ−Ｈａｅｎ，Ｓｅｅｌｚｅ，ドイツ）を入れた。酒石酸は、Ａｂｄｅｒｈａｌｄｅｎ装置（Ａｌｄｒｉｃｈ，ミズーリ州セントルイス）中でシリカゲル（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ，Ｌｅｉｃｓ．，Ｕ．Ｋ．）上でさらに乾燥させてあった。反応容器を約４０℃の油浴中に浸漬し、約３０分間真空下（０．０４ｍｂａｒ）に置いた。次に浴を下げてその温度を約１１０℃に上げた。この温度に達した後、反応容器を酸素除去した窒素雰囲気下に置き、再浸漬した。内容物は、Ｈｅｉｄｏｌｐｈスタラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｅｌｅｋｔｒｏ  ＧｍｂＨ，Ｋｅｌｈｅｉｍ，ドイツ）を用いて約１００ｒｐｍで攪拌した。反応容器の内容物が溶融したら、トルエン（Ｒｉｅｄｅｌ  ｄｅ−Ｈａｅｎ，Ｓｅｅｌｚｅ，ドイツ）中０．１Ｍ  ２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液（Ｓｉｇｍａ，ミズーリ州セントルイス，ＵＳＡ）１．１４ｍｌを加えた（化学量論比５０ｐｐｍ）。液体窒素トラップ経由で約３０秒間再度真空を適用し、モノマーをあまり除去することなくトルエンを除去した。次に油浴温度を約５分間約１２０℃に上げ、その後さらに約１５０℃に上げた。約１００ｒｐｍという一定の機械的攪拌下で約４時間この温度に保った。標記ポリマーを得た。
【００７７】
微粉化−実施例III（ａ）をまずＫｎｉｆｅグラインダー（ＩＫＡ，Ｓｔａｕｆｅｎ，ドイツ）を用いて粉砕した。次に、加圧乾燥窒素流を用いてＡｌｊｅｔ
Ｍｉｃｒｏｎｉｚｅｒ（Ｆｌｕｉｄ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ａｌｊｅｔ，Ｐｌｕｍｓｔｅａｄｓｖｉｌｌｅ、ペンシルベニア州、ＵＳＡ）中で微粉化した。これによって、体積分布モデルと分散剤として２００／５  ｃＳ  シリコーン油（Ｄｏｗ
Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｓｅｎｅｆｆｅ、ベルギー）を用いたＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ／Ｅ（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｓ．，Ｕ．Ｋ．）中での分析で、粒子の平均直径１２．４２μｍを得た。
【００７８】
精製／ナトリウム塩の形成−実施例III（ａ）の５０ｇ分を２Ｌのアセトン（Ｒｉｅｄｅｌ  ｄｅ−Ｈａｅｎ）中に分散し、ソニケーター（Ｂｒａｎｓｏｎ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ  ＢＶ，Ｓｏｅｓｔ、オランダ）に約３０分間入れた。この間、分散物はＵｌｔｒａ−ｔｕｒｒａｘ  Ｔ２５ホモジナイザ（ＩＫＡ，Ｓｔａｕｆｅｎ，ドイツ）を用いて約９，５００ｒｐｍでホモジナイズも行った。この音波処理／均質化ステップの後、分散物をＳｏｒｖａｌｌ遠心機（Ｓｏｒｖａｌｌ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、デラウェア州、ＵＳＡ）中で約５，０００ｒｐｍで約３０分間遠心分離した。上澄みを廃棄し、遠心分離ケーキを新鮮なアセトン中に再懸濁して、音波処理／均質化ステップを繰り返した。二回目の遠心分離が完了したら、上澄みを廃棄し、ケーキを脱イオン水中に再懸濁した。次に最後の音波処理／均質化ステップを１回実施して残りのアセトンをすべて除去した。分散物は再度約５，０００ｒｐｍで約３０分間遠心分離した。
【００７９】
遠心分離ケーキを新鮮な脱イオン水中に再懸濁し、分散物のｐＨをモニタした。０．２Ｍ炭酸ナトリウム溶液を、ｐＨをｐＨ約８〜ｐＨ約９に上げるに足る量加えた。分散物を約３０分間攪拌した後、Ｗｈａｔｍａｎ  ｎｏ．１（直径２４ｃｍ）ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上に真空ろ過した。ろ過ケーキをさらに脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ  Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒ（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）中で凍結乾燥させた。
【００８０】
加熱速度１０℃／分で、ＴＡ  ＤＳＣ９１２Ｓ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ、デラウェア州、ＵＳＡ）を用いてＤＳＣにより純度をモニタした。得られたＤＳＣサーモグラムはモノマーのグリコリドについての吸熱ピークを何ら示さず、１８１℃で吸熱を示した。
【００８１】
実施例III（ｂ）：１５／１  ＰＧＴＡ−標記ポリマーを実施例Ｉ（ｃ）に記載の手順に従って合成した。ただし、グリコリド（２．５８６ｍｏｌｅ、３００ｇ）、無水酒石酸（０．１７２ｍｏｌｅ、２６．８ｇ）及び２−エチルヘキサン酸第一スズ（トルエン中０．２Ｍ、８６２ｍｌ、０．１７２ｍｍｏｌｅ）を使用した。示差走査熱量測定法を用いてポリマーの融点を測定した（Ｔｍ＝２０４℃）。
【００８２】
Ｗｉｌｅｙミルを用いて固体ポリマーを粉砕し、平均の粒子直径約１２５μｍを達成した。粒径をさらに直径約５〜１０μｍに減少させるのは、加圧乾燥窒素を取り入れるジェットミルを用いて達成した。得られたマイクロ粒子をアセトンで濯ぎ、微量のモノマーと低分子量オリゴマーを除去した。次に生成物を、使用するまで減圧下約４０℃で乾燥させた。乾燥マイクロ粒子の平均直径は粒径アナライザを用いて測定した。
【００８３】
実施例IV
ポリグリコリドベースのマイクロ粒子陰イオン交換体（ＡＥ−１）の製造
陰イオン交換体の製造は二段階で達成される。第一に、低分子量のポリグリコリドを実施例Ｉ（ｃ）と同様の手順を用いて製造する。ただし以下の重合用充填物を使用する。すなわち、グリコリド（１ｍｏｌｅ、１１６ｇ）、開始剤として１，３−プロパンジオール（３０ｍｍｏｌｅ、２．２２ｇ）及び２−エチルヘキサン酸第一スズ（０．０３ｍｍｏｌｅ）である。次に、ポリマーの粒径減少と精製を実施例Ｉ（ｃ）にも記載されているように実施する。第二のステップで、実質的に非イオン性マイクロ粒子をジアミン、例えばジオキサン中公知濃度のヘキサンジアミンの熱希釈溶液（〜８０℃）中、アルゴン下でインキュベートする。ジオキサン中のジアミン濃度は酸滴定によって測定する。反応が実質的に起こらなくなったら、アミド化マイクロ粒子をろ過によって分離し、ジオキサンで濯ぎ、減圧下で乾燥させる。陰イオン交換体（アミド化粒子）の結合能は、（１）窒素についての元素分析、及び（２）ナプロキセンに結合する程度（ＨＰＬＣを用い、希釈溶液から除去される薬物の程度を測定する）、によって測定される。後者は、公知濃度の水酸化ナトリウム希釈溶液で固定化されたナプロキセンを放出させることによって確認される。
【００８４】
実施例Ｖ
被包材料として使用される、プロパンジオールで開始されたポリ（ラクチド−コ−グリコリド）コポリマー（ＰＬＧＰＤ）の製造
実施例Ｖ（ａ）：７５／２５  Ｐ（ｌ）ＬＧＰＤ−５００ｍｌのガラス製反応容器に、２３５．０１ｇのｌ−ラクチド（Ｐｕｒａｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ａｒｋｅｌｓｅｄｉｊｋ、オランダ）、６３．０９ｇのグリコリド（Ｐｕｒａｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ａｒｋｅｌｓｅｄｉｊｋ、オランダ）、及び１．９０ｇのプロパンジオール（Ｒｉｅｄｅｌ  ｄｅ−Ｈａｅｎ，Ｓｅｅｌｚｅ，ドイツ）を入れ、次いでトルエン（Ｒｉｅｄｅｌ  ｄｅ−Ｈａｅｎ，Ｓｅｅｌｚｅ，ドイツ）中０．１Ｍの２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液（Ｓｉｇｍａ，ミズーリ州セントルイス、ＵＳＡ）３．９６ｍｌを加えた（化学量論比２００ｐｐｍ）。真空下で約１時間乾燥してトルエンを除去した後、反応容器を酸素除去窒素雰囲気下に置き、約１６０℃に予熱した油浴に浸漬した。反応容器の内容物は、Ｈｅｉｄｏｌｐｈスタラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｅｌｅｋｔｒｏ  ＧｍｂＨ，Ｋｅｌｈｅｉｍ，ドイツ）を用い約１００ｒｐｍで攪拌した。内容物が溶融したら、温度を約１８０℃に上げ、この温度を約３時間維持した。アモルファスコポリマーが得られた。該コポリマーは分子量（ＭＷ）約１２，５００ｇ／ｍｏｌを有することが、Ｗａｔｅｒｓ  ５１０  Ｐｕｍｐ、Ｗｙａｔｔ  Ｍｉｎｉｄａｗｎ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，カリフォルニア州サンタバーバラ、ＵＳＡ）による光散乱検出を用いるＷａｔｅｒｓ  ４１０  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｒｅｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒ（示差屈折計）（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，マサチューセッツ州、ＵＳＡ）によるゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によってわかった。
【００８５】
実施例Ｖ（ｂ）：９０／１０  Ｐ（ｌ）ＬＧＰＤ−標記生成物を実施例Ｖ（ａ）の手順に従って合成した。ただし、２７４．３１ｇのｌ−ラクチド、２４．５５ｇのグリコリド、１．１４ｇのプロパンジオール、及びトルエン中０．１Ｍの２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液３．８９ｍｌ（化学量論比２００ｐｐｍ）を用いた。結晶性コポリマーが得られた。該コポリマーはＧＰＣにより分子量約２０，７８０ｇ／ｍｏｌを有することがわかった。
【００８６】
実施例Ｖ（ｃ）：９０／１０  Ｐ（ｄ，ｌ）ＬＧＰＤ−標記生成物を実施例Ｖ（ａ）の手順に従って得た。ただし、２７４．３１ｇのｄ，ｌ−ラクチド、２４．５５ｇのグリコリド、１．１４ｇのプロパンジオール、及びトルエン中０．１Ｍの２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液３．８６ｍｌ（化学量論比２００ｐｐｍ）を用いた。アモルファスコポリマーが得られた。該コポリマーはＧＰＣにより分子量約２０，６５０ｇ／ｍｏｌを有することがわかった。
【００８７】
実施例Ｖ（ｄ）：被覆材料として使用される、プロパンジオールで開始されたポリ（ｌ−ラクチド−コ−ｄ，ｌ−ラクチド）コポリマー（ＰＬＧＰＤ）、８０／２０  Ｐ（ｌ）Ｌ（ｄ，ｌ）ＬＰＤ
標記生成物を実施例Ｖ（ａ）の手順に従って得た。ただし、２３９．０９ｇのｌ−ラクチド、５９．７７ｇのｄ，ｌ−ラクチド（Ｐｕｒａｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ａｒｋｅｌｓｅｄｉｊｋ、オランダ）及び１．１４ｇのプロパンジオールを用い、トルエン中０．１Ｍの２−エチルヘキサン酸第一スズ溶液３．９６ｍｌ（化学量論比２００ｐｐｍ）を加えた。アモルファスコポリマーが得られた。該コポリマーはＧＰＣにより分子量（ＭＷ）約２２，３２０ｇ／ｍｏｌを有することがわかった。ＤＳＣにより４８℃でガラス転移を示した。
【００８８】
精製−実施例Ｖ（ａ）、Ｖ（ｂ）、及びＶ（ｃ）をそれぞれ、アセトニトリル（Ｌａｂｓｃａｎ，ダブリン，アイルランド）中３０％（Ｗ／Ｗ）溶液の噴霧によって洗浄した。噴霧は、循環浴に接続されたジャケット付き６Ｌ反応容器中の約２℃に冷却された脱イオン水中に８ｍｌ／分で行い、Ｈｅｉｄｏｌｐｈスタラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｅｌｅｋｔｒｏ  ＧｍｂＨ，Ｋｅｌｈｅｉｍ，ドイツ）を用い、約３５０ｒｐｍで攪拌した。溶液をＶｉｂｒａ−Ｃｅｌｌ  ＶＣ５０  Ａｔｏｍｉｚａｔｉｏｎノズル（Ｂｉｏｂｌｏｃｋ，Ｉｌｌｋｉｒｃｈ、フランス）に、Ｍａｓｔｅｒｆｌｅｘポンプ（Ｃｏｌｅ  Ｐａｒｍｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，Ｎｉｌｅｓ，イリノイ州、ＵＳＡ）を用いて供給し、噴霧は音波処理周波数１２ｋＨｚを用いて達成した。得られた分散物をＷｈａｔｍａｎ
Ｎｏ．１（直径２４ｃｍ）ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上にろ過し、ろ過ケーキを脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ  Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｒ（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）中で凍結乾燥させた。
【００８９】
加熱速度１０℃／分で、ＴＡ  ＤＳＣ９１２Ｓ（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ、デラウェア州、ＵＳＡ）を用いてＤＳＣにより純度を確認した。実施例Ｖ（ａ）、Ｖ（ｂ）、Ｖ（ｃ）及びＶ（ｄ）について、それぞれ４４℃、４９℃、４５℃及び４８℃のガラス転移（Ｔｇ）を示した。
【００９０】
実施例VI
ペプチド付加陽イオン交換体の製造
実施例VI（ａ）：ペプチドＡ（ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2、ＬＨＲＨ類似体）の付加−実施例Ｉ（ａ）、Ｉ（ｂ）、Ｉ（ｃ）及びII（ａ）の各ナトリウム塩４ｇを、７０ｍｌの脱イオン水中に溶解したペプチドＡ（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  Ｌｔｄ．，ダブリン、アイルランド）の遊離塩基１．３３ｇを含む溶液中に分散させた。分散物は、室温で攪拌しながら約２時間インキュベートした後、直径９ｃｍのＷｈａｔｍａｎ  Ｎｏ．１ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上にろ過した。ろ過ケーキをさらに脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）中で凍結乾燥させた。次に、サンプルを窒素について元素分析で分析し、結合したペプチドＡの量を測定した。以下の結果が得られた。
【００９１】
【表１】
2005047928.tif 000002
【００９２】
実施例VI（ｂ）：ペプチドＢ（Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2、２個のＣｙｓはジスルフィド結合によって結合、ソマトスタチン類似体）の付加−実施例VI（ｂ）の手順に従い、実施例Ｉ（ａ）、Ｉ（ｂ）、Ｉ（ｃ）及びII（ａ）の各ナトリウム塩４ｇと、ペプチドＢ（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  Ｌｔｄ．，ダブリン、アイルランド）の遊離塩基１．３３ｇを用いて、ペプチドＢをその上に固定化した実施例Ｉ（ａ）、Ｉ（ｂ）及びＩ（ｃ）の結合マイクロ粒子を得た。サンプルを窒素含有量について元素分析で分析し、結合したペプチドＢの量を測定した。得られた結果を以下に示す。
【００９３】
【表２】
2005047928.tif 000003
【００９４】
実施例VII
噴霧による被包されたポリペプチド付加陽イオン交換体の製造
以下に示すようにポリペプチド付加陽イオン交換体を被包コポリマーのアセトニトリル（Ｌａｂｓｃａｎ，ダブリン、アイルランド）溶液中に分散した。この分散は、Ｕｌｔｒａ−ｔｕｒｒａｘ  Ｔ２５（ＩＫＡ、Ｓｔａｕｆｅｎ，ドイツ）を用い約９，５００ｒｐｍで約５分間ホモジナイズすることによって達成された。被包コポリマー／アセトニトリル溶液の濃度は１２．５％〜２５％（Ｗ／Ｗ）の範囲で、被包コポリマー対ポリペプチド付加陽イオン交換体の比率は重量比で１：１〜１．３：１の範囲であった。
【００９５】
分散後、分散物を２ｍｌ／分の流量に設定されたセラミックピストンポンプ（ＦＭＩ，Ｏｙｓｔｅｒ  Ｂａｙ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ）を用い、音波処理周波数が１６ｋＨｚのＶｉｂｒａ−Ｃｅｌｌ  ＶＣ５０噴霧ノズル（Ｂｉｏｂｌｏｃｋ，Ｉｌｌｋｉｒｃｈ、フランス）に供給した。ノズルに達すると分散物は、ドライアイスペレット（Ａ．Ｉ．Ｇ．，ダブリン、アイルランド）を加えて約−８０℃に冷却されたイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）（Ｌａｂｓｃａｎ，ダブリン、アイルランド）中に噴霧された。ＩＰＡは捕集非溶媒として作用し、Ｈｅｉｄｏｌｐｈスタラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｅｌｅｋｔｒｏ  ＧｍｂＨ，Ｋｅｌｈｅｉｍ，ドイツ）を用い、約３００ｒｐｍで攪拌した。噴霧が完了すると、全分散物を約１０℃〜約室温にまで解凍させた。次に、被包マイクロ粒子をＷｈａｔｍａｎ  Ｎｏ．１ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上に真空ろ過した。ろ過ケーキを脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ凍結乾燥器（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）中で凍結乾燥させた。得られた被包マイクロ粒子は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ／Ｅ（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｓ．，Ｕ．Ｋ．）と水中１％Ｔｗｅｅｎ２０を分散剤として用いて粒径の分析をした。また、被包マイクロ粒子は窒素含有量についても元素分析によって分析し、ペプチド含有量を測定した。以下の表に、実施した様々な被包実験を示す。
【００９６】
【表３】
2005047928.tif 000004
【００９７】
すべてのサンプルは、１８０μｍシーブ（Ｂｉｏｂｌｏｃｋ，Ｉｌｌｋｉｒｃｈ，フランス）のふるいにかけてからインビボ及び／又はインビトロ試験を実施した。
結合マイクロ粒子又は被包マイクロ粒子は、以下の方法によって結合ペプチド又は結合タンパク質の放出速度を評価するインビトロ試験を実施することができる。約５０ｍｇの質量を有する結合マイクロ粒子又は被包マイクロ粒子の一部を連続フローセルシステムに入れる。このシステムではｐＨ約７．２及び約３７℃の緩衝リン酸塩溶液が約４５ｍｌ／時の速度で結合マイクロ粒子又は被包マイクロ粒子の全体に流れている。放出された薬物を含む緩衝液のサンプルを、約４℃で回収し、１又は２日の間隔でペプチド又はタンパク質濃度について分析する。各マイクロ粒子の放出特性を２週間にわたって測定する。
【００９８】
結合マイクロ粒子又は被包マイクロ粒子は、以下の方法によってインビボ系における結合ペプチド又は結合タンパク質の放出速度を評価する試験を実施することができる。サンプルを雄のＷｉｓｔａｒラット（Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｔｒｉｎｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ、ダブリン、アイルランド）に、大腿部への筋肉内注射により投与する。懸濁媒体は、塩類溶液中３％のカルボキシメチルセルロースと１％のＴｗｅｅｎ２０からなる。ペプチドＡ付加サンプルについては有効等価投与量が４０μｇ／Ｋｇ／日である。ペプチドＢ付加サンプルは１ｍｇ／Ｋｇ／日である。サンプルは心穿刺によって採取し、血漿ペプチド濃度をペプチドＡ及びペプチドＢに特異的なラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によってモニタする。ペプチドＡ付加サンプルの場合（ペプチドＡはＬＨＲＨ類似体）、テストステロンＲＩＡもテストステロン抑制をモニタするのに使用される。懸濁媒体の代替として、特定の例ではゲルフォーマー(gel-formers)も使用できる。結果を以下の表Ａ及びＢに示す。
【００９９】
【表４】
2005047928.tif 000005
【０１００】
【表５】
2005047928.tif 000006
【０１０１】
実施例VIII
VIII（ａ）：溶媒としてアセトニトリル及び非溶媒として室温のＩＰＡを使用する噴霧
約１．０６ｇの実施例Ｉ（ｃ）の陽イオン交換体（ポリペプチドに結合していない）を、実施例Ｖ（ａ）の被包コポリマーのアセトニトリル（Ｌａｂｓｃａｎ，ダブリン、アイルランド）中２５．２４％（Ｗ／Ｗ）溶液に、陽イオン交換体対被包コポリマーの比が重量比で約１．０３：１になるように分散させた。この分散は、Ｕｌｔｒａ−ｔｕｒｒａｘ  Ｔ２５（ＩＫＡ、Ｓｔａｕｆｅｎ，ドイツ）を用い約９，５００ｒｐｍで約５分間ホモジナイズすることによって達成された。
【０１０２】
分散後、分散物を２ｍｌ／分の流量に設定されたセラミックピストンポンプ（ＦＭＩ，Ｏｙｓｔｅｒ  Ｂａｙ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ）を用い、音波処理周波数が１６ｋＨｚのＶｉｂｒａ−Ｃｅｌｌ  ＶＣ５０噴霧ノズル（Ｂｉｏｂｌｏｃｋ，Ｉｌｌｋｉｒｃｈ、フランス）に供給した。ノズルに達すると分散物は、室温（１７〜２２℃）のＩＰＡ（Ｌａｂｓｃａｎ，ダブリン、アイルランド）中に噴霧された。このＩＰＡは捕集非溶媒として作用し、Ｈｅｉｄｏｌｐｈスタラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｅｌｅｋｔｒｏ  ＧｍｂＨ，Ｋｅｌｈｅｉｍ，ドイツ）を用い、約３００ｒｐｍで攪拌された。噴霧が完了すると、分散物はさらに６０分間室温で攪拌され、その後被包マイクロ粒子をＷｈａｔｍａｎ  Ｎｏ．１ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上に真空ろ過することによって回収した。ろ過ケーキを脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ凍結乾燥器（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）中で凍結乾燥させた。得られた粒子は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ／Ｅ（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｓ．，Ｕ．Ｋ．）と水中１％Ｔｗｅｅｎ２０を分散剤として用いて粒径について分析した。得られた粒子は平均粒径（ｄ（０．５））８４．７５μｍを有していた。
【０１０３】
実施例VIII（ｂ）：溶媒として酢酸エチル及び非溶媒として室温のＩＰＡを使用する噴霧
噴霧は実質的に実施例VIII（ａ）の手順に従って実施したが、実施例Ｖ（ａ）の被包コポリマーの酢酸エチル（Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ  Ｈａｅｎ，Ｓｅｅｌｚｅ，ドイツ）中２４．８８％（Ｗ／Ｗ）溶液に分散させた約０．９９ｇの実施例Ｉ（ｃ）の陽イオン交換体（ポリペプチドに結合していない）を使用し、陽イオン交換体対被包コポリマーの比が重量比で約０．９６：１になるように分散させた。得られた粒子は平均粒径（ｄ（０．５））１００．５６μｍを有していた。
【０１０４】
実施例VIII（ｃ）：溶媒として酢酸エチル及び高周波数プローブを使用する噴霧
約１．０２ｇの実施例Ｉ（ｃ）の陽イオン交換体（ポリペプチドに結合していない）を、実施例Ｖ（ａ）の被包コポリマーの酢酸エチル（Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ
Ｈａｅｎ）中１５．１４％（Ｗ／Ｗ）溶液に、陽イオン交換体対被包コポリマーの比が重量比で約１．０５：１になるように分散させた。この分散は、Ｕｌｔｒａ−ｔｕｒｒａｘ  Ｔ２５（ＩＫＡ、Ｓｔａｕｆｅｎ，ドイツ）を用い約９，５００ｒｐｍで約５分間ホモジナイズすることによって達成された。
【０１０５】
分散後、分散物を５ｍｌ／分の流量に設定されたセラミックピストンポンプ（ＦＭＩ，Ｏｙｓｔｅｒ  Ｂａｙ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ）を用い、超音波周波数の設定が約３４．６ｋＨｚのＭａｒｔｉｎ  Ｗａｌｔｅｒ  ４００  ＧＳＩＰネブライザ（Ｓｏｄｅｖａ，Ｌｅ  Ｂｏｕｇｅｔ  ｄｕ  Ｌａｃ，フランス）に供給した。ノズルに達すると分散物は、ドライアイスペレット（Ａ．Ｉ．Ｇ．，ダブリン、アイルランド）を加えて約−７７℃に冷却されたＩＰＡ（Ｌａｂｓｃａｎ，ダブリン、アイルランド）中に噴霧された。このＩＰＡは捕集非溶媒として作用し、Ｈｅｉｄｏｌｐｈスタラー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ  Ｅｌｅｋｔｒｏ  ＧｍｂＨ，Ｋｅｌｈｅｉｍ，ドイツ）を用い、約３００ｒｐｍで攪拌された。噴霧が完了すると、被覆粒子をＷｈａｔｍａｎ  Ｎｏ．１ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上に真空ろ過することによって回収した。ろ過ケーキを脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ凍結乾燥器（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）中で凍結乾燥させた。得られた粒子は、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ／Ｅ（Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｓ．，Ｕ．Ｋ．）と水中１％Ｔｗｅｅｎ２０を分散剤として用いて粒径について分析した。得られた粒子は平均粒径（ｄ（０．５））９５．６９μｍを有していた。
【０１０６】
実施例IX
ＣＥへの結合とそれに続くソマトスタチン類似体のペプチドＣ及びＤの被包
実施例IX（ａ）：ペプチドＣの付加
実施例Ｉ（ｃ）のナトリウム塩約１．０１ｇを、４０ｍｌの脱イオン水に溶解したペプチドＣの遊離塩基０．２５ｇを含む溶液に分散した。ペプチドＣは、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2の構造を有し、２個のＣｙｓ残基はジスルフィド結合によって結合している（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  Ｌｔｄ．，ダブリン、アイルランド）。分散物は、攪拌しながら約２時間インキュベートした後直径９ｃｍのＷｈａｔｍａｎ  Ｎｏ．１ろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｌ．Ｌｔｄ．，Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ，ケント州，Ｕ．Ｋ．）上に真空ろ過した。ろ過ケーキを脱イオン水で濯ぎ、凍結し、Ｅｄｗａｒｄｓ  ＳｕｐｅｒＭｏｄｕｌｙｏ（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｃｒａｗｌｅｙ，ウェストサセックス州，Ｕ．Ｋ．）中で凍結乾燥させた。次に、サンプルを窒素分析に送り、結合したペプチドの量を測定した。２０．２１％であった。
【０１０７】
実施例IX（ｂ）：ペプチドＤの付加
実施例IX（ａ）の手順を使用したが、実施例Ｉ（ｃ）のナトリウム塩約２．０４ｇを、８０ｍｌに溶解したペプチドＤの遊離塩基０．５１ｇを含む溶液に分散させたものを使用した。ペプチドＤは、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジニル−エチルスルホニル−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2の構造を有し、２個のＣｙｓ残基はジスルフィド結合によって結合している（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  Ｌｔｄ．，ダブリン、アイルランド）。次に、サンプルを窒素分析に送り、結合したペプチドの量を測定した。１９．５３％であった。
【０１０８】
実施例Ｘ
実施例IX（ａ）及びIX（ｂ）の結合マイクロ粒子を実施例VIIに記載のように被包し、次の結果が得られた。
【０１０９】
【表６】
2005047928.tif 000007
【０１１０】
実施例ＸＩ
ゲルフォーマー製剤の製造
５ｍｌのシリンジバレル中で約２０ｒｐｍで約１０分間機械的マイクロミキサーを使用して、実施例ＶＩＩ（ａ）（０．３ｇ）の被包マイクロ粒子を液体ゲルフォーマー（双方が米国特許第５，６１２，０５２号明細書に開示されている実施例Ｉの「Ａ］成分と実施例IIIのＣ成分との５０／５０混合物２．０ｍｌ）と混合した。乾燥熱によりゲルフォーマーを予備滅菌し、層流フード中で滅菌した撹拌器を使用して混合を行った。（プランジャーを導入した後）５ｍｌシリンジから製剤をより小さなシリンジ（製剤を投与するのに使用する目的）中に押し出しした。光学顕微鏡を用いて製剤の均質性を検討した。前記より小さなシリンジを乾燥パッケージ中に貯蔵するために組立、使用まで約４℃に保った。