(57)【要約】【課題】  抗菌・抗カビ性を有する銀含有複合蛋白質の低コスト化を実現できる、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法を提供する。【解決手段】（１）乳清蛋白質加水分解物を限外濾過膜処理する工程、（２）前記限外濾過膜処理における膜非透過画分を回収する工程、および（３）回収した膜非透過画分と銀塩とを液中で接触させて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を得る工程を有することを特徴とする水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）乳清蛋白質加水分解物を限外濾過膜処理する工程、
（２）前記限外濾過膜処理における膜非透過画分を回収する工程、および
（３）回収した膜非透過画分と銀塩とを液中で接触させて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を得る工程
を有することを特徴とする水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法。
【請求項２】
前記（１）工程で用いられる乳清蛋白質加水分解物の分解率が１５〜３０％であることを特徴とする請求項１に記載の水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法。
【請求項３】
前記（２）工程において回収される膜非透過画分の蛋白質含量が６０質量％以上であることを特徴とする請求項１または２に記載の水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法。
【請求項４】
前記（３）工程において、６０〜９０℃の液中で前記膜非透過画分と銀塩とを接触させて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を生成させることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法に関し、特に、限外濾過膜を使用して乳清蛋白質加水分解精製物を製造する際に副生成物として大量に発生する限外濾過膜非透過の余剰産物を有効に利用できる、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
蛋白質を加水分解して得られるペプチドと遊離アミノ酸との混合物は、単独の蛋白質やアミノ酸混合物等と比較して種々の優位性があるため、各方面から注目されている。
例えば、栄養学的にはジペプチド又はトリペプチドはアミノ酸とは別の径路により、その構成アミノ酸の混合物よりも速く吸収されること、及び蛋白質の加水分解物は、その構成アミノ酸と比較して個々のアミノ酸の吸収量に変動がないことなどが明らかにされている（非特許文献１）。
また、食品蛋白質は、人間にとって異種蛋白質であり、消化が不十分な状態で抗原性を有するまま体内に吸収された場合、アレルギー症状を呈することがある。この解決策の一つとして食品中の蛋白質を酵素によって抗原性を低減又は消失させるために加水分解することが行われており、このような蛋白質加水分解物を配合した食品も増加している（例えば、特許文献１及び非特許文献２）。
更に、食品蛋白質の抗原性を低減させるために蛋白質加水分解物に対し限外濾過膜を用いた精製工程が有効であることが知られている（例えば、非特許文献３）。
【０００３】
上記のような利点を有する蛋白質加水分解物であっても、限外濾過膜を用いて製造した場合、限外濾過膜を透過せずに保持される残渣画分（本明細書において膜非透過画分、保持画分、または余剰産物ということもある。）が副生成物として大量に発生し、廃水処理の負荷増大など環境への悪影響が問題視され、利用法を検討してもコストに見合わないなど、産業上適当な用途が見当たらないのが現状であった。
特に乳清蛋白質加水分解精製物を製造する際に生じる限外濾過膜非透過の余剰産物は、乳清蛋白質加水分解物を大量に処理する際に避けては通れない問題であるが、その有効な利用方法は未だなかった。
【０００４】
一方、近年では、医療用機械器具、文具類、繊維製品、紙製品、日用雑貨品や浴用製品などにおいて、健康衛生面に配慮して、細菌やカビなどの各種微生物が繁殖しないように抗菌・抗カビ処理を施したものが多く用いられている。例えば、病院においては、院内感染を防止する観点から、抗菌・抗カビ性を付与したプラスチック製の文具類や器具などが用いられている。このように人体や食品などに直接接触するものについては、より高い安全性が求められており、優れた抗菌・抗カビ性能を有する抗菌・抗かび剤およびそれで処理した製品の開発が望まれている。
【０００５】
このような抗菌・抗カビ剤として、水不溶性の硬蛋白質、例えば卵殻膜、羽毛、羊毛、絹およびこれらから分離したコラーゲン、絹フィブロイン、エラスチンなどに、銀、銅、亜鉛などの抗菌・抗かび性金属を吸着させた蛋白質抗菌・抗カビ剤が提案されている（例えば、特許文献２、特許文献３、及び特許文献４）。これらの蛋白質抗菌・抗カビ剤は、例えば、卵殻膜粉末と硝酸銀水溶液とを混合・撹拌し、得られた混合溶液中の沈殿を濾取・水洗・脱水および乾燥することにより得られている（例えば、特許文献２）。
【０００６】
また、本発明者らの一人は、特定量の活性チオール基を含有する水可溶性の蛋白質と銀塩とを液中で接触させることにより、効率的に銀を担持した新規な複合蛋白質を開発し、その複合蛋白質が極めて高い抗菌・抗かび活性を有する事実を見出し、既に特許出願している（例えば、特許文献５）。
【特許文献１】特開平４−２４８９５９号公報
【特許文献２】特開平６−６５０１３号公報
【特許文献３】特開平８−１８８５１３号公報
【特許文献４】特開平８−２５８２３５号公報
【特許文献５】特開２０００−３４４７９８号公報
【非特許文献１】代謝、第２７巻、ｐ．９９３−１０００
【非特許文献２】ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・デイリー・アンド・フード・サイエンス（Japanese Journal of Dairy and Food Sciense）、第３３巻、第１号、１９８４年、ｐ．Ａ−５〜Ａ−１２ページ
【非特許文献３】ペディアトリクス・ガストロエンテロロジカル・ニュートリション（Pediatrics Gastroenterological Nutrition）、第４巻、１９８５年、ｐ．４０８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記のような抗菌・抗カビ剤にあっては、低コスト化が重要な課題の一つであり、原料費もできるだけ低く抑えることが求められている。
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、抗菌・抗カビ性を有する銀含有複合蛋白質の低コスト化を実現できる、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、限外濾過膜を用いた乳清蛋白質加水分解精製物の製造の際に大量に生じる限外濾過膜非透過の余剰産物に着目した。そして、鋭意検討を重ねた結果、該余剰産物を銀の担持体として好適に利用できること、及びそれにより抗菌・抗カビ剤に好適な銀含有複合蛋白質を製造できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明の水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法は、（１）乳清蛋白質加水分解物を限外濾過膜処理する工程、（２）前記限外濾過膜処理における膜非透過画分を回収する工程、および（３）回収した膜非透過画分と銀塩とを液中で接触させて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を得る工程を有することを特徴とする。
前記（１）工程で用いられる乳清蛋白質加水分解物の分解率が１５〜３０％であることが好ましい。
前記（２）工程において回収される膜非透過画分の蛋白質含量が６０質量％以上であることが好ましい。
前記（３）工程において、６０〜９０℃の液中で前記膜非透過画分と銀塩とを接触させて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を生成させることが好ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明において用いられる、乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜処理における膜非透過画分は、限外濾過膜を用いて乳蛋白質加水分解精製物を製造した場合に、副生成物として大量に発生する余剰産物であり、これまでは廃棄処理されていたものである。
本発明によれば、かかる余剰産物を蛋白質原料として用いて、効率的に銀が担持された水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を低コストで製造することができる。該水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物は、極めて高い抗菌・抗カビ活性を有するので、抗菌・抗カビ活性剤として用いることができる。すなわち本発明によれば、抗菌・抗カビ剤の原料費を大幅に低減させることができ、低コスト化を実現することができる。
また本発明によれば、これまで廃棄処理されていた、乳蛋白質加水分解精製物製造時の余剰産物を有効に利用することができるので、廃棄処理コストを削減できるとともに、廃棄処理に伴う環境への悪影響を防止することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。図１は本発明の方法の一実施態様を示したフローチャートである。
ただし、本発明は以下の好ましい実施態様に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００１２】
＜乳清蛋白質加水分解物＞
本発明において用いられる乳清蛋白質加水分解物は、乳清蛋白質濃縮物、または乳清蛋白質分離物等を蛋白質分解酵素で加水分解して得られるものである。
本発明で使用する乳清蛋白質加水分解物の原料は、乳清蛋白質を主成分とするものであれば、如何なるものでも使用することができ、市販の各種乳清蛋白質、例えば、乳清蛋白質濃縮物（ＷＰＣ）、乳清蛋白質分離物（ＷＰＩ）等を使用することができる。また、牛乳、脱脂乳、全脂粉乳、脱脂粉乳から乳清蛋白質を常法により精製することもできる。
【００１３】
乳清蛋白質加水分解物を得るには、まず、乳清蛋白質を主成分とする原料を水又は温湯に分散し、溶解して乳清蛋白質を含有する溶液を調製する。該溶液の濃度は格別の制限はないが、通常、蛋白質換算で５〜１５％前後の濃度範囲にするのが効率性及び操作性の点から望ましい。また、乳清蛋白質を含有する溶液を６５〜９０℃で１０秒間〜３０分間程度加熱殺菌することが、雑菌汚染による変敗防止の点から望ましい。
【００１４】
次いで、前記乳清蛋白質を含有する溶液に酸剤またはアルカリ剤を添加し、溶液のｐＨを、使用する酵素（プロテアーゼ）の至適ｐＨ又はその付近に調整することが好ましい。この場合の酸剤又はアルカリ剤は、食品に許容されるものであれば如何なるものであってもよく、具体的には、酸剤としてはクエン酸、酢酸、リンゴ酸、グルコン酸等の有機酸、塩酸等の無機酸等を、アルカリ剤としては水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム等をそれぞれ例示することができる。
【００１５】
次いで、乳清蛋白質を含有する溶液に、単独又は複数のプロテアーゼを添加する。プロテアーゼは特に制限は無く、市販品等が使用可能である。
動物由来のプロテアーゼとしてペプシン、パンクレアチン、トリプシン、キモトリプシン等が挙げられ、市販品としてペプシン（ヴォルフガング・ミュールバウワー社製）、パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製）、ＰＴＮ６．０Ｓ（ノボザイム・ジャパン社製）、キモトリプシン（日本バイオコン社製）等を例示できる。
植物由来のプロテアーゼとしてパパイン、ブロメライン等が挙げられ、市販品としてパパイン３００（日本バイオコン社製）、ブロメラインＦ（天野エンザイム社製）等を例示できる。
微生物由来のプロテアーゼとしてバチルス属細菌由来のプロテアーゼ、乳酸菌由来のプロテアーゼ、アスペルギルス属カビ由来のプロテアーゼ、ストレプトマイセス属放線菌由来のプロテアーゼ、サッカロミセス属酵母由来のプロテアーゼ等が挙げられ、市販品としてプロテアーゼＮ（天野エンザイム社製）、アルカラーゼ２．４Ｌ（ノボザイム・ジャパン社製）、ビオプラーゼｓｐ−２０（長瀬生化学工業社製）、プロテアーゼＡ（天野エンザイム社製）等を例示できる。
【００１６】
ここで、乳酸菌由来のプロテアーゼは、例えば特公昭５４−３６２３５号公報第６欄４行「（３）使用する酵素について」の項に記載の方法により次のとおり製造することができる。
まず、乳酸菌（ビフィズス菌を含む）を公知の方法（例えば特公昭４８−４３８７８号公報記載の方法）により培養し、得られた培養液を遠心分離して乳酸菌菌体を回収し、滅菌水に菌体を懸濁し、遠心分離して乳酸菌菌体を回収する操作を２回繰り返す。この後、菌体を洗浄し、２０％の濃度で菌体を滅菌水に懸濁し、菌体破砕機［例えば、ダイノミル（Willy Bachnfen Engineering）社製。ＫＤＬ型］により菌体を破砕し、凍結乾燥して、乳酸菌由来のプロテアーゼ粉末を得る。
乳酸菌としては、ビフィドバクテリウム属の乳酸菌であるビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・インファンチス（Bifidobacterium infantis）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）など、ラクトバシラス属の乳酸菌であるラクトバチルス・ヘルベチクス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Lactobacillus bulgaricus）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）など、ストレプトコッカス属の乳酸菌であるストレプトコッカス・サーモフィルス（Streptococcus thermophillus）などを例示することができる。  
【００１７】
乳清蛋白質を含有する溶液に添加するプロテアーゼは、４〜１０℃の冷水に分散し、溶解して得られるプロテアーゼ溶解液の形態で使用することが好ましい。該プロテアーゼ溶解液の濃度は格別の制限はないが、通常３〜１０％程度の酵素濃度として使用することが効率性及び操作性の点から望ましい。プロテアーゼの使用量は、基質濃度、酵素力価、反応温度、及び反応時間により異なるが、一般的には、乳蛋白質１ｇ当たり２０〜２００００活性単位の割合で添加する。
【００１８】
尚、プロテアーゼ活性の活性単位の定義は、カゼイン（メルク社製。商品名：ハマーシュタイン）にプロテアーゼを作用させ、３０℃で１分間に１μｇのチロシンに相当するアリルアミノ酸のフォリン試薬での呈色反応を示す酵素活性力価を１活性単位とする。
【００１９】
また、特に乳酸菌由来のプロテアーゼ活性については次のように定義する。すなわち、ロイシルパラニトロアニリド（国産化学社製）を０．１モルのリン酸緩衝液（ｐＨ７）に溶解して２ｍＭの基質溶液を調製する。酵素溶液１ｍｌに基質溶液１ｍｌを添加し、３７℃で５分間反応させ、その後３０％の酢酸溶液２ｍｌを添加して反応を停止させ、反応液をメンブランフィルターで濾過し、波長４１０ｎｍで吸光度を測定する。乳酸菌由来のプロテアーゼの活性単位は１分間に１μｍｏｌのロイシルパラニトロアニリドを分解するのに必要な酵素量を１活性単位と定義し、次式により求める。
エキソ型プロテアーゼ活性単位＝２０×（Ｐ／Ｑ）
（但し、Ｐは波長４１０ｎｍにおける試料の吸光度、Ｑは波長４１０ｎｍにおける０．２５ｍＭパラニトロアニリンの吸光度を示す。）
【００２０】
プロテアーゼの添加に当っては、１種類ずつ溶解し、添加することが望ましいが、添加の順番には特に制限はない。酵素反応の温度は格別の制限はなく、酵素作用発現の最適温度範囲を含む実用に供され得る範囲から選ばれ、通常３０〜６０℃の範囲から選ばれる。酵素加水分解の反応時間、反応温度等の反応条件は、得ようとする加水分解物についての所望の理化学的性質が得られるように設定することが好ましい。
必要がある場合には加水分解及び／又は遊離アミノ酸の程度を適宜モニターする。モニターの方法としては、加水分解の程度は、蛋白質の分解率を経時的に測定し、モニターすることができる。
尚、本明細書における「分解率（％）」は、ケルダール法（日本食品工業学会編、「食品分析法」、株式会社光琳、昭和５９年、第１０２頁）により試料の全窒素量を測定し、ホルモール滴定法（満田他編、「食品工学実験書」、上巻、養賢堂、１９７０年、第５４７頁）により試料のホルモール態窒素量を測定し、これらの測定値から分解率を次式により算出した。
分解率（％）＝（ホルモール態窒素量／全窒素量）×１００
また、遊離アミノ酸の程度は、加水分解を開始し、分解液中に遊離した特定アミノ酸の量を経時的に測定する。具体的には、例えば公知の方法（例えば、特開平８−１１２０６４号公報）により、ＨＰＬＣ、バイオテックアナライザー（旭化成工業社製）、パフュージョン・クロマトグラフィー（パーセプティブ・バイオシステム社製。BioCAD）等を用いて経時的に遊離する特定アミノ酸を測定することによりモニターすることができる。使用する原料蛋白質及び酵素の種類により遊離するアミノ酸の量が異なるので、最も遊離し易いアミノ酸を特定アミノ酸として選択するのが望ましい。
【００２１】
そして、酵素による加水分解が所望の程度に達したら、該加水分解を停止させて乳清蛋白質加水分解物を含有する溶液を得る。
酵素による加水分解の停止は、加水分解液中の酵素の失活または酵素の除去により行うことができる。酵素の失活は、常法による加熱失活処理により実施することができる。加熱失活処理の加熱温度と保持時間は、使用した酵素の熱安定性を考慮し、十分に失活できる条件を適宜設定することができるが、例えば、８０〜１３０℃の温度範囲で３０分間〜２秒間の保持時間で行うことができる。
【００２２】
本発明において、乳清蛋白質加水分解物の分解率は１５〜３０％が好ましく、中でも１５〜２５％が特に好ましい。乳清蛋白質加水分解物の分解率が１５％未満である場合、限外濾過膜透過画分の回収率が低下し、廃棄物利用の効果が十分に得られなくなる。また分解率が３０％を超えると、乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分の中の活性チオール基の含有量が低下する場合があり、結果として、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物における銀結合量の低下を引き起こすことが考えられる。
【００２３】
＜限外濾過膜処理＞
次に、上記で得られた乳清蛋白質加水分解物を含有する溶液について、限外濾過膜により分離精製処理を施す。ここで用いる限外濾過膜としては、ＳＥＰ１０１３（旭化成工業社製。分画分子量：３，０００）、ＳＩＰ１０１３（旭化成工業社製。分画分子量：６，０００）、ＮＴＵ３３０６（日東電工社製。分画分子量：２０，０００）等を例示できる。
この限外濾過膜処理により、前記乳清蛋白質加水分解物を含有する溶液は、膜を透過した画分（膜透過画分）と膜を透過しなかった残渣としての画分（膜非透過画分、膜保持画分）とに分けられる。
本発明では、膜非透過画分を回収し、これを水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物製造のための次工程へ供する。
なお、膜透過画分は、ペプチドおよび遊離アミノ酸を高度に含有する乳清蛋白質加水分解精製物として、各種製品の製造工程に供することができる。
【００２４】
本発明で用いられる、乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分（膜非透過画分）における蛋白質含量は、６０％以上が好ましく、７０％以上が特に好ましい。なぜなら乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分における蛋白質含量が７０％以上となるまで精製を進めることが、限外濾過膜透過画分の回収率を向上させる点、及び限外濾過膜保持画分における活性チオール基の含有量を十分に確保して水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物における銀結合効率を向上させる点の両方において好ましい。
ここで、本明細書における「蛋白質含量」は、ケルダール法（日本食品工業学会編、「食品分析法」、株式会社光琳、昭和５９年、第１０２頁）により試料の全窒素量を測定し、その測定値に係数６．３８を乗じて算出される値である。
【００２５】
＜水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の生成＞
次いで、上記で回収された乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分と銀塩とを液中で接触させて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を生成させる。
回収された限外濾過膜保持画分は、そのまま、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の生成工程に用いることができるが、これを脱イオン水等に溶解または分散させた液も該限外濾過膜保持画分と同様に用いることができる。
【００２６】
また、回収された限外濾過膜保持画分のうちの、少なくとも蛋白質を含む一部を、限外濾過膜保持画分と同様に銀塩との接触に用いることもできる。
また、回収された限外濾過膜保持画分に由来する、少なくとも蛋白質を含む加工品を、限外濾過膜保持画分と同様に銀塩との接触に用いることもできる。
例えば、回収された乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分を一旦、濃縮し、乾燥し、粉末とし、その後、再び水溶液に還元した還元水溶液も、限外濾過膜保持画分と同様に用いることができる。このように一旦粉末化して還元する方法を採用すれば、必要な時に必要な量だけの還元水溶液を用いて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を製造することができる。
【００２７】
水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を製造するために使用される銀塩としては、液中で銀イオンを解離し、蛋白質と銀との結合を阻害しないものであれば特に限定されない。具体的には、硝酸銀、亜硝酸銀、硫酸銀、過塩素酸銀、酸化銀、および塩化銀などの無機酸塩、酢酸銀、乳酸銀、蓚酸銀などの有機酸塩、ジアミン銀硝酸塩およびジアミン銀硫酸塩などの錯塩などが挙げられ、中でも特に硝酸銀、および酢酸銀が水に対する溶解性の点で好ましい。
【００２８】
乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分と銀塩とを液中で接触させる方法としては、混合・攪拌および振盪などの公知の方法を用いることができる。中でも、混合・攪拌が工業的に好ましい。攪拌を用いた具体的な方法としては、
（１）限外濾過膜保持画分と銀塩とを液中で一度に混合して攪拌する方法、
（２）液中で限外濾過膜保持画分を攪拌しながら、この中に水に溶解した銀塩を徐々に加えて、液中の銀イオン濃度を徐々に上げる方法、
（３）液中で限外濾過膜保持画分を攪拌しながら、この中に細かく粉砕した銀塩を徐々に加えて溶解させ、液中の銀イオン濃度を徐々に上げる方法、および
（４）銀塩水溶液を撹拌しながら、この中に限外濾過膜保持画分を徐々に加えて最終的に液中の銀イオン濃度を一定に保つ方法などが挙げられる。
中でも（２）の方法は、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物が再現性よく、高収率で得られるので特に好ましい。
【００２９】
接触させる限外濾過膜保持画分と銀塩の割合は、接触させる条件にもよるが、通常、限外濾過膜保持画分中の蛋白質１ｇに対して、銀塩０．２〜３ｇ程度が好ましい。より具体的には、蛋白質濃度が１〜２０ｍｇ／ｍｌの限外濾過膜保持画分含有液１０００ｍｌに対して、濃度５〜２５０ｍＭ程度の銀塩水溶液を約１０００ｍｌの割合で用いるのが好ましい。ただし、銀含有率の高い水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物が効率よく得られるのであれば、限外濾過膜保持画分含有液と銀塩水溶液の液量比は特に限定されない。
【００３０】
また、限外濾過膜保持画分と銀塩とを接触させる際の条件は、限外濾過膜保持画分と銀塩とが均一に混合され、銀含有率の高い水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物が効率よく得られる条件であればいずれでもよいが、例えば攪拌による接触の場合には、６０〜９０℃、好ましくは６５〜７５℃に加温し、処理時間は２４時間以内であることが好適である。
尚、前記温度範囲を超えると生成物（水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物）が著しく着色（銀由来による着色）したものになり好ましくない。
また、前記温度条件で行った場合であっても、含有脂質に由来するものによって着色されたと考えられる場合は、イソプロピルアルコール等によって脱色することも可能である。
さらに、処理時間は２４時間以内であっても、生成物の粒子径などの出来栄えを向上させるためには、できるだけその範囲内で時間をかけて少しずつ反応を行った方が好適である。
【００３１】
限外濾過膜保持画分と銀塩との接触処理を行った液は、そのまま水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を含有する液剤の調製に用いることができる。
あるいは、限外濾過膜保持画分と銀塩との接触処理を行った液を濾過し、濾取した残渣を脱イオン水またはエタノールなどで洗浄し、次いで乾燥することにより固体状の水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を分取することができる。こうして得られた固体状の水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物中の銀含有率は、例えば、日本薬局方「プロテイン銀」の定量法に基づくチオシアン酸アンモニウム滴定法による銀含有率の測定（以下、この測定を「本発明における銀含有率測定法」という）により求めることができる。
【００３２】
限外濾過膜保持画分と銀塩との接触処理を行った液を用いて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を含有する液剤を調製する場合には、該液剤中に存在する水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の分散性をよくするため（沈殿防止）や、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を紙などへ塗工する場合のバインダー効果を高めるために、限外濾過膜保持画分と銀塩とを接触させる際に、あらかじめ安定化液として１０％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液を添加しておくことが好ましい。
【００３３】
以上記載したとおり、本発明の方法によれば、乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分（限外濾過膜非透過の余剰産物）を用いて、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を製造することが可能である。
本発明の方法により得られる水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物は抗菌・抗カビ剤の有効成分として利用することができ、特に該抗菌・抗かび剤で処理された抗菌・抗カビ紙等を提供する上で特に有効である。
すなわち、本発明は、これまで有効な利用方法が知られておらず廃棄処分されていた乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜非透過の余剰産物を、銀の担持体として有効に利用できる方法を提供するものである。乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜非透過の余剰産物は特に安全性が高いので、抗菌・抗カビ剤の有効成分としての水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の原料として好適であり、各種製品の抗菌・抗カビ加工に適用可能であるうえ、非常に安価に、かつ大量に入手できる材料であるので、抗菌・抗カビ剤や抗菌・抗カビ製品の低コスト化へ大きく寄与することができる。
【００３４】
本発明によって製造された水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を含有する抗菌・抗カビ剤は、公知の方法によって、医療用機械器具、文具類、繊維製品、紙製品、日用雑貨品や浴用製品などに含有させることにより、抗菌・抗カビ性を有する製品が得られる。
これらの対象品の中でも特に紙製品に対しては極めて優れた抗菌・抗カビ性を発現させることができる。尚、「紙」とは、植物から得られるセルロース性繊維を液中に分散し湿式抄紙して得られるシート状材料だけでなく、紙と類似の繊維絡合状の構造と物性をもつ、合成紙のようなシート状材料をも含有する。具体的には、新聞紙や板紙などの古紙、印刷紙、コピー紙、およびライナー紙などが挙げられる。
【００３５】
本発明によって製造された水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を含有する抗菌・抗カビ剤によって紙を処理する方法としては、適量の水もしくは水性媒体に分散させた水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を、紙表面へ塗布、浸漬、またはスプレー（シャワー）等をすることにより紙に含浸させる方法、並びに水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物をパルプスラリーとともに抄紙する方法、などが挙げられる。
特に、塗布による方法は、既存の抄紙工程の装置を転用できる点で好ましい。紙に塗布する場合、好ましい塗布量は紙の種類やその用途などにより異なるが、通常、１ｍ２あたり０ ．０１〜１０ｇ、より好ましくは０．１〜５ｇである。塗布量が１ｍ２あたり０ ．０１ｇ未満の場合には、充分な抗菌・抗かび効果が得られないので好ましくない。また、塗布量が１ｍ２あたり１０ｇを超える場合には、それ以上の抗菌・抗かび効果が期待できず、コスト高になるので好ましくない。
【実施例】
【００３６】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
＜実施例１＞
〔乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分及び水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造〕
乳清蛋白質濃縮物（蛋白質含有量７５％。ミライ社製）１０ｋｇを精製水９０ｋｇに溶解し、水酸化カリウム（日本曹達社製）４６ｇを添加してｐＨを７．４に調整し、ブロメライン（天野エンザイム社製。商品名：ブロメラインF）６，０００万活性単位（蛋白質１ｇ当たり８，０００活性単位）及びトリプシン（日本バイオコン社製。商品名：トリプシンＶ）９，３７５万活性単位（蛋白質１ｇ当たり１２，５００活性単位）を添加し、５０℃で加水分解した。酵素反応の進行を分解率によりモニターし、分解率が１５．１％に達した時点で、９０℃で１０分間加熱して酵素を失活させた後、１０℃に冷却した。この加水分解液を、分画分子量２０，０００の限外濾過膜モジュール（日東電工社製。商品名：ＮＴＵ−３２５０）により処理し、限外濾過膜透過画分及び限外濾過膜保持画分に分取し、引き続きそれぞれを濃縮し、噴霧乾燥して、粉末状の限外濾過膜透過画分約７．８ｋｇ、及び限外濾過膜保持画分約２．２ｋｇを製造した。
【００３７】
次に、容量２０００ｍｌの反応容器中で、前記乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分７１．５ｇ（タンパク質換算値として約５０ｇ）を脱イオン水６５０ｍｌに分散し、７５℃で加温溶解した。この溶液に別途調製した１０％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液５００ｍｌを７５℃で添加混合し、さらに５０ｍＭの硝酸銀水溶液２００ｍｌを滴下添加して、１時間攪拌し、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物液剤を製造した（蛋白質含有率４％）。尚、得られた水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物液剤中の銀含有率を本発明における銀含有率測定法により求めたところ、０．２０５質量％であった。
【００３８】
＜実施例２＞
〔乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分を用いた水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物（精製粉剤）の製造〕
容量１０Ｌの反応容器中で、実施例１で製造した乳清蛋白質加水分解物の限外濾過膜保持画分９０．０ｇ（タンパク質換算値として約６３ｇ）に脱イオン水８Ｌを添加し、７５℃で加温溶解した。この溶液に５０ｍＭ硝酸銀水溶液を滴下添加し、７５℃で１時間攪拌して、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物溶液を調製した。得られた水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物溶液を一晩静置し、濾紙No.２を用いて濾過した。濾別した残渣を脱イオン水３Ｌで３回洗浄し、次いでイソプロピルアルコール１Ｌで洗浄した後、残渣を５０℃で３６時間減圧加熱乾燥して水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物粉剤５５．８２ｇを製造した。尚、得られた水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物精製粉剤中の銀含有率を本発明における銀含有率測定法により求めたところ、６．２３質量％であった。
【００３９】
＜参考試験＞
実施例１で製造した水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物液剤を塗工した板紙について、黄色ブドウ球菌に対する抗菌力試験を行った。
（１）試料の調製
表１に記載したように、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物液剤の塗工量の異なる試験試料１〜試験試料３を常法により調製した。また、水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物液剤の塗工を行わない試料を対照試料とした。
（２）試験方法
供試菌として Staphylococcus aureus IFO 12732、培地としてＳＣＤ寒天培地を使用し、銀等無機抗菌剤の抗菌評価試験法II（１９９５年度版、銀等無機抗菌剤研究会編）による最小殺菌濃度（ＭＢＣ ）の測定に準拠して抗菌力試験を行った。
（３）試験結果
本試験の結果を表１に示す。表１は各試料における静菌活性及び殺菌活性を測定した結果を示している。尚、殺菌活性は、［接種直後の菌数（Ａ）の常用対数値］−［１８時間培養後の菌数（ｂ）の常用対数値］によって算出し、静菌活性は、［対照試料における１８時間培養後の菌数（ｂ）の常用対数値］−［各試験試料における１８時間培養後の菌数（ｂ）の常用対数値］によって算出した。
【００４０】
【表１】
2005269925.tif 000003
【００４１】
表１に示されるように、有効成分である水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物液剤の塗工量が、板紙１平方メートル当り６８ｍｇ以上で静菌活性が認められた。また、同様に１５３ｍｇ以上で殺菌活性が認められた。また、静菌活性と塗工量との関係については、塗工量が６８ｍｇ、１０５ｍｇ、１５３ｍｇと増加するにしたがって静菌活性も２．３、２．４、３．６と増大した。以上の結果より、有効成分である水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物液剤を塗工した板紙は、塗工していない板紙（対照試料）に比して、黄色ブドウ球菌に対して抗菌力を有することが判明し、その抗菌力は有効成分の塗工量に比例して強くなることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明によれば、限外濾過膜を用いて乳蛋白質加水分解精製物を製造した場合に、副生成物として大量に発生する限外濾過膜非透過の余剰産物を有効に利用することができるので、廃棄処理する際に問題になっていた環境汚染への影響が克服される。
また、本発明によれば、乳蛋白質加水分解物の限外濾過膜非透過の余剰産物を用いて、効率的に銀が担持された水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物を製造できるとともに、こうして得られる水不溶性銀高含有乳清蛋白質加水分解物は、極めて高い抗菌・抗カビ活性を有するので、安全性が確保された抗菌・抗カビ活性の機能を生かして、文具類や器具などの製造原料として極めて好適に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】本発明の水不溶性銀含有乳清蛋白質加水分解物の製造方法の実施形態のフローチャートを示す図である。
【図１】
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