(57)【要約】【課題】経腟採卵（ＯＰＵ）と体外受精（ＩＶＦ）を組み合わせたＯＰＵ−ＩＶＦにおいて、ＯＰＵ卵子数が少ない場合、胚発生率が低下する傾向がみられる。少数の卵子または胚の場合であっても、個体別に集合して培養することによって、個体ごとの胚発生率を向上させる体外受精用培養プレートを提供する。【解決手段】卵子または胚は通過しないが培養液は通過できるメッシュあるいはフィルターから成る隔壁で培養槽を複数に区分することによって、個体別培養を可能とし、同時に、培養液が通過、拡散できる隔壁を持った培養槽で複数の個体を集合して一体的に培養することで多数胚培養と同様の培養環境を作り、少数の卵子または胚の場合であっても、個体ごとの胚発生率を向上させる体外受精用培養プレート。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵子または胚は通過しないが培養液は通過できるメッシュあるいはフィルターから成る隔壁で培養槽を複数に区分し、複数個体の卵子または胚を個体別に集合して一体的に培養することによって、個体ごとの胚発生率を向上させる体外受精用培養プレート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトまたは動物の体外受精に用いる培養プレートに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、超音波撮影装置（エコーカメラ）の改良が進み、エコーカメラを応用した経腟採卵（ＯＰＵ）と体外受精（ＩＶＦ）と組み合わせたＯＰＵ−ＩＶＦ技術は、ヒトでは不妊治療のひとつとして、牛では高能力雌牛後代の増産技術のひとつとして応用されている。牛では個体別に培養することによって子牛の血統登録が可能なことから、ＯＰＵ−ＩＶＦ技術による子牛生産が拡大すると期待されたが、移植可能胚に発育するまでの胚発生率が低く、普及定着までには至っていない。発明者の試験では、１頭からＯＰＵ採取される正常卵子数が平均８個以上の場合、５０％程度の高い胚発生率が得られるが、２〜３個以下の場合は胚盤胞まで発生する率は極めて低く移植可能胚の作出は難しかった。
【０００３】
その原因を調べるため屠場由来卵子を用いた実験で、１胚、２胚、３胚、４胚および５胚ずつ発生培養した結果、１〜２胚ずつ培養したときの胚盤胞発生率は、５胚ずつ培養したときのそれより有意（ｐ＜0.05％）に低かった。この理由として、O'Dorhertyら（文献、Theriogenology,48:161-169,1997）が提唱しているように、胚は互いに作用しあって胚の発育を促進させる何らかの因子（胚発育促進因子と呼ぶ）を培養液中に分泌していることが推察された。
【０００４】
本発明者は、培養液中に分泌されていると思われる胚発育促進因子を屠場由来卵子を用いた多数胚培養液で準備し、その培養液の一部を１胚だけの培養ドロップに添加し培地交換することによって、１胚培養でも多数胚培養の胚発生率に近い培養成績を得ることが可能であることを見出した。しかし、この方法を応用してＯＰＵ−ＩＶＦを行うとき、同時に屠場由来卵子のＩＶＦを行い多数胚培養液を準備しなければならず、同時並行で両者を実施するには困難が予想された。また、発明者の実験では、冷凍保存した多数胚培養液では１胚培養の発生率は改善しなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＯＰＵ−ＩＶＦを行うとき、同時に屠場由来卵子などで多数胚培養液を準備するのではなく、複数の個体からＯＰＵ採取された卵子あるいは胚を集合して一体の培養環境で培養することによって、多数胚培養と同様の培養環境を作り、少数の卵子または胚の場合であっても、個体別の胚発生率を向上させる体外受精用培養プレートの提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、卵子または胚は通過しないが培養液は通過できるメッシュあるいはフィルターから成る隔壁で培養容器を少なくても４室以上に区画することによって、個体別の培養を可能とし、培養液は隔壁を通過、拡散し、各区画を一体とした培養環境で培養可能な体外受精用培養プレートを見出した。
【０００７】
蓋体とプレート本体からなり、外観は四角形平面型培養シャーレに類似した培養用プレートである。プレート本体の中央部は円形すり鉢に陥没しその陥没部分が培養槽となる。この培養槽は、培養液が通過、拡散できる隔壁で少なくても４区画以上に区分されており、培養槽内側表面は培養に適した表面加工が施されている。プレート本体上面には区画に対応した番号が印されている。
【発明の効果】
【０００８】
エコーカメラを応用したへ経腟採卵（ＯＰＵ）と個体ごとの体外受精（ＩＶＦ）と組み合わせた牛のＯＰＵ−ＩＶＦにおいて、１頭から採取される卵子数が２〜３個以下の場合は胚盤胞まで発生する率は極めて低く、移植可能胚の作出は難しかった。しかし、本発明によって、複数の個体からＯＰＵ採取された卵子あるいは胚を集めて一体化して培養することが可能となり、多数胚培養と同様の培養環境を作り出すことによって、結果的に個体別の胚発生率の向上が期待できる。高能力雌牛の後代を増産する技術として、現在、ホルモン剤等を使用した過剰排卵処理による方法が主流となっているが、この方法では年間に実施できる回数は４〜６回が限度といわれており、後代の増産数には限界がある。ＯＰＵ−ＩＶＦでは過剰排卵処理を行う必要がなく、週２回の連続ＯＰＵも可能といわれていることから、本発明を用いたＩＶＦ技術を取り入れることによって、高能力雌牛からの後代増産が飛躍的に伸びることが期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
図面を参照して説明する。顕微鏡下での操作性を考慮して大きさは、蓋体（図１）をプレート本体（図２）にかぶせた状態でたて、よこが概ね４０〜６０ｍｍ程度の四角形、高さは１０〜２０ｍｍ程度が適当と考える。蓋体１は、通気性を確保するため適度の間隙を持ってプレート本体２を覆う。プレート本体の中央部分は円形すり鉢状に陥没し、ここが培養槽４になる。プレート本体の上面には培養槽の区画に対応した番号５が印されている。プレート本体底面の外縁３は蓋体を受け止め、蓋体１をかぶせたままでも持ちやすく加工されている。
【００１０】
培養槽（図３）は、プレート本体の中央部にあり、底の平らな円形すり鉢状で、槽の内側表面は培養に適した表面加工が施されている。培養槽の底部は、卵子または胚は通過できないが培養液は通過できるメッシュまたはフィルターからなる隔壁９で複数の区画に区分される。実際には、図３に示したように４等分の区画が使い易いと考える。隔壁９は、培養槽の側面７と底面８に隙間なく接着し、必要に応じて、培養液の拡散に影響しない範囲で、支柱あるいは補強材で側面７または底面８から支持される。
【００１１】
培養槽（図３）の大きさは、培養液量を５０〜１５０マイクロリットルと想定して、底面内径の直径が６〜８ｍｍ程度、外周すなわちプレート本体上面の直径が１５〜２０ｍｍ程度、隔壁の高さが３〜５ｍｍ程度が適当と考えられる。
【００１２】
蓋体１とプレート本体２の材質は無色透明のプラスチックが適当と考える。使用前にプレート本体および蓋体を合せて滅菌しておく必要がある。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の蓋体の斜視図である。
【図２】本発明のプレート本体の斜視図である。
【図３】本発明のプレート本体培養槽の斜視図である。
【符号の説明】
【００１４】
１．蓋体
２．プレート本体
３．プレート本体底面の縁
４．プレート本体の培養槽
５．プレート本体上面に印した区画番号
６．プレート本体培養槽の周縁部
７．プレート本体培養槽の側面
８．プレート本体培養槽の底面
９．プレート本体培養槽を区画する隔壁
【図１】
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【図２】
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【図３】
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