(57)【要約】【課題】  柑橘病害を防除できる新規な微生物、該微生物を用いた柑橘病害の生物防除剤及び柑橘病害の生物防除方法を提供する。【解決手段】  Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する新規微生物ＳＣ−１菌株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４２２）；Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する微生物の培養物及び／又は微生物菌体及び／又は微生物の代謝産物及び／又は微生物の胞子を有効成分として含有することを特徴とする柑橘病害防除剤；及び柑橘病害の生物防除方法。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する新規微生物ＳＣ−１菌株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４２２）。
【請求項２】
Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する微生物の培養物及び／又は微生物菌体及び／又は微生物の代謝産物及び／又は微生物の胞子を有効成分として含有することを特徴とする柑橘病害防除剤。
【請求項３】
Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する微生物が、請求項１記載の新規微生物ＳＣ−１菌株であることを特徴とする請求項２記載の柑橘病害防除剤。
【請求項４】
柑橘病害が、柑橘黒点病、柑橘灰色かび病、柑橘そうか病、柑橘かいよう病、柑橘褐色腐敗病、柑橘緑かび病、柑橘青かび病、柑橘軸腐病及び柑橘黒腐病からなる群から選択されることを特徴する請求項２又は３記載の柑橘病害防除剤。
【請求項５】
請求項２〜４のいずれか１項記載の柑橘病害防除剤を、柑橘植物体、柑橘果実又は柑橘果実貯蔵箱に施用することを特徴とする柑橘病害の生物防除方法。
【請求項６】
施用方法が、噴霧、浸漬、塗布、粉衣及び注入処理からなる群から選択されることを特徴とする請求項５記載の柑橘病害の生物防除方法。
【請求項７】
請求項１記載の新規微生物ＳＣ−１菌株の培養菌体を、噴霧することを特徴とする請求項５記載の柑橘病害の生物防除方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ（グリオクラディウム）属に属し、柑橘病害に対する防除能を有する新規微生物、並びにこれを用いた柑橘病害防除剤及び柑橘病害の生物防除方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
温暖多湿な我が国の柑橘類栽培では、年間を通じて多種多様な病害が発生し、薬剤（農薬）による病害防除は欠かせない技術となっている。しかし、近年、環境保全の面から農薬使用量の低減が望まれ、化学農薬（化学殺菌剤）に代わる生物防除技術の開発が要望されている。ここで、生物防除とは、一般に、病原体を抑制することができる別の微生物を用いて病原体を駆除することを意味する。
【０００３】
非病原性微生物を利用した植物の病害防除の研究は、イネや野菜分野においては盛んに行われているが、果樹の分野、特に柑橘類ではこれまで殆ど行われていない。
【０００４】
例えば、特許文献１には、多数の有害な真菌に対する防除能を有する真菌株Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ（グリオクラディウム・カテヌラタム）及びそれを含んでなる組成物及びそれらを用いた植物病害の生物防除方法が開示されている。しかしながら、実施例を見ると、このＧｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ菌株の生物防除能が示されているのは、カリフラワー、キュウリ、ヒメウイキョウ、大麦、小麦、トマト、テンサイ及びレタス等の野菜類であり、果樹については全く検討されていない。
【０００５】
【特許文献１】特表平１０−５０６２８８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、柑橘黒点病、柑橘灰色かび病、柑橘そうか病、柑橘かいよう病、柑橘褐色腐敗病、柑橘緑かび病、柑橘青かび病、柑橘軸腐病及び柑橘黒腐病などの柑橘病害を防除できる新規な微生物を提供することを目的とする。
【０００７】
また、本発明は、上記微生物を用いた、柑橘病害の生物防除剤及び柑橘病害の生物防除方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的を達成するため、本発明者らは鋭意研究を重ね、柑橘植物体から、柑橘病害に対する防除能を有する新規な糸状菌Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍ（グリオクラディウム・ロゼウム）（以下、ＳＣ−１菌株という）を見出し、この新規糸状菌の培養菌体を柑橘植物体に噴霧することによって、柑橘病害を防除できることを見出した。
【０００９】
なお、柑橘病害の微生物を用いた生物防除法は、これまで全く知られておらず、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ属菌に関して、柑橘病害に対する防除効果を認めたのは本発明者らが初めてである。
【００１０】
すなわち、本発明の第１の態様は、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する新規微生物ＳＣ−１菌株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４２２）を提供する。
【００１１】
本発明の第２の態様は、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する微生物の培養物及び／又は微生物菌体及び／又は微生物の代謝産物及び／又は微生物の胞子を有効成分として含有することを特徴とする柑橘病害防除剤を提供する。
【００１２】
本発明の第３の態様は、上記第２の態様の柑橘病害防除剤を、柑橘植物体、柑橘果実又は柑橘果実貯蔵箱に施用することを特徴とする柑橘病害の生物防除方法を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の新規微生物ＳＣ−１菌株を、柑橘病害の防除に利用することにより、化学殺菌剤の使用量を低減でき、環境に悪影響を及ぼすことなく、柑橘病害を有効に防除することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の第１の態様は、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する新規微生物ＳＣ−１菌株に関する。
【００１５】
本発明の新規微生物ＳＣ−１菌株は、柑橘病害に対する防除能を有する糸状菌であり、以下のようにして単離されたものである。
【００１６】
［ＳＣ−１菌株の単離方法］
分離源：柑橘植物体（柑橘園にあった２０年生の温州ミカンの枯れ枝）
分離培地：ポテトデキストロース寒天培地（以下、ＰＤＡという；ｐＨ５．６；日水製薬社製、Ｃｏｄｅ：０５７０９）
分離方法：３０ｍＬの滅菌水を入れた３００ｍＬの三角フラスコに１ｃｍの長さに切った上記枯れ枝５ｇを入れ、室温で１時間振とうした。得られた振とう液１ｍＬを、１０ｍＬの滅菌水中に入れ、順次希釈した。各希釈液から０．１ｍＬをとり、ＰＤＡ平面培地上に塗沫し、２５℃で５〜７日間培養し、出現した単一集落の先端の一部を、新たなＰＤＡ平面培地に移植した。移植７日後、単一集落を確認した後、集落の一部（５×５ｍｍ）を、再度新たなＰＤＡ平面培地に移植した。移植７日後、単一集落であることを確認した後、集落の一部をＰＤＡ斜面培地に保存した。その後の菌株の管理は２０℃の室内にて行い、６ヶ月ごとにＰＤＡ斜面培地に移植して保存した。
【００１７】
上記のようにして単離された本発明の新規微生物ＳＣ−１菌株は、下記の微生物学的性質及び遺伝子解析により、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍであると同定した。本願出願人は、この微生物に「ＳＣ−１」の識別番号を付し、この微生物を産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託した。（微生物寄託番号  ＦＥＲＭ  Ｐ−１９４２２）
【００１８】
［ＳＣ−１菌株の微生物学的性質］
菌そう：表面は綿状で白色からピンク色、裏面は白色から黄色。臭気はない。
【００１９】
菌糸：隔壁を有し、無色。
【００２０】
分生子柄：透明で直立し、菌糸から直接立ち上がる。その上部はホウキ状に分岐し、粗面、隔壁を有する。
【００２１】
分生子形成細胞（フィアライド）：３〜４本。
【００２２】
分生子：フィアライドの先端に着生し、透明、楕円形、１細胞、大きさは２〜３×４〜８μｍ。生育温度域は５〜３５℃で、至適温度域は２５〜２７℃。
【００２３】
［遺伝子解析］
ＳＣ−１菌株について、２８ＳｒＲＮＡ遺伝子Ｄ２領域の３１８塩基配列を決定した。（３１８塩基配列については、本願明細書末尾の配列表を参照されたい。）
【００２４】
本発明のＳＣ−１菌株を培養するために用いられる培地の栄養源としては、通常の微生物の生育に必要であって、本菌が資化可能な栄養源であれば、如何なる炭素源、窒素源及び無機塩類等でもよい。
【００２５】
炭素源としては、例えば、ブドウ糖やショ糖等が利用できる。窒素源としては、硝酸塩やアンモニウム塩等が利用できる。無機塩類としては、リン酸塩やナトリウム等を用いることができる。
【００２６】
本発明のＳＣ−１菌株は、柑橘病害に対する防除能、すなわち、柑橘病害の原因菌に対する拮抗作用を有する。ここで、柑橘病害とは、柑橘植物に悪影響を与える菌に起因する種々の病害をいい、具体的には、例えば、柑橘黒点病、柑橘灰色かび病、柑橘そうか病、柑橘かいよう病、柑橘褐色腐敗病、柑橘緑かび病、柑橘青かび病、柑橘軸腐病、柑橘黒腐病等が挙げられる。
【００２７】
次に、本発明の第２の態様である柑橘病害防除剤の製造方法について説明する。
【００２８】
本発明の柑橘病害防除剤は、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する微生物の培養物及び／又は微生物菌体及び／又は微生物の代謝産物及び／又は微生物の胞子を有効成分として含有する。すなわち、本発明の柑橘病害防除剤は、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する微生物の培養物、微生物菌体、微生物の代謝産物及び／又は微生物の胞子のいずれか１種以上を有効成分とする。好ましくは、本発明の柑橘病害防除剤は、Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍ  ｒｏｓｅｕｍに属する微生物の培養物、微生物菌体及び／又は微生物の胞子のいずれか１種以上を有効成分とする。
【００２９】
まず、上記本発明のＳＣ−１菌株を適当な培地で培養する。ここで使用する培地は、ＳＣ−１菌株が増殖するものであれば特に制限されず、通常使用されているポテトデキストロース寒天培地を使用すればよい。培養してＳＣ−１菌株を増殖させた後、遠心分離により集菌を行い（微生物菌体）、その使用目的や散布方法に応じて製剤化することができる。また、培養終了後、菌体を分離せずにそのまま（微生物の培養物）使用することもできる。さらには、微生物の培養液中に存在する、微生物の代謝産物又は微生物の胞子のみを分離して製剤化することもできる。
【００３０】
次に、本発明の第３の態様である、柑橘病害の生物防除方法について説明する。
【００３１】
本発明の柑橘病害の生物防除方法は、上記本発明の柑橘病害防除剤を、一般に用いられている施用方法により施用することからなる。
【００３２】
柑橘病害防除剤の施用の対象は、通常は柑橘植物体であるが、柑橘果実のみ又は柑橘果実貯蔵箱に施用することもできる。
【００３３】
施用方法としては、例えば、噴霧、浸漬、塗布、粉衣、注入処理などが挙げられ、特に噴霧処理が好ましい。これらの施用方法は、当分野で通常用いられる手法によって実施できる。
【００３４】
噴霧処理を行う場合の、柑橘病害防除剤の噴霧量は、柑橘植物１樹に対して、通常５〜１５Ｌ、好ましくは１０〜１５Ｌの範囲である。
【００３５】
本発明の柑橘病害の生物防除方法における、施用頻度、施用時期等は、施用対象となる柑橘植物の生育周期に応じて適宜選択すべきであるが、例えば、ミカンであれば、６月及び７月の２回とするのが好ましい。
【００３６】
また、本発明の柑橘病害防除剤と化学殺菌剤（化学農薬）とを組み合わせて施用する（体系防除）こともできる。例えば、ミカンであれば、６月と８月には化学殺菌剤を散布し、７月に本発明の柑橘病害防除剤を散布するなどである。ここで、用いられる化学殺菌剤としては、柑橘病害に対して従来から用いられてきた薬剤を用いることができ、例えば、エムダイファー水和剤（クミアイ化学工業株式会社製）、ジマンダイセン水和剤（ダウ・ケミカル日本株式会社製）、ストロビードライフロアブル（クミアイ化学工業株式会社製）などが挙げられる。
【００３７】
ミカン栽培において、化学殺菌剤は、通常６、７及び８月に薬剤散布を行うが、本発明の柑橘病害防除剤と化学殺菌剤とを組み合わせることにより、本発明の柑橘病害防除剤単独よりも効率的に柑橘病害を防除することができると共に、化学殺菌剤の散布回数を３回から２回に減らすことができ、化学殺菌剤の使用量を低減することができる。
【実施例】
【００３８】
以下、試験例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明する。
【００３９】
（試験例１）ＳＣ−１菌の柑橘黒点病に対する拮抗作用
方法：
柑橘黒点病菌のα胞子懸濁液（１０4／ｍＬ）とＳＣ−１菌の胞子懸濁液（１０4／ｍＬ）を等量混合したものを、試験管の底に０．３ｍＬ注入した。この試験管に高圧滅菌した５ｃｍ長の柑橘植物の枯れ枝を、１試験管あたり５本挿入し、１ヶ月後、枯れ枝上に形成された柑橘黒点病菌の胞子角を計数した。１区あたり５試験管（２５本の枯れ枝）を用いた。対照として、柑橘黒点病菌のみの区を設けた。
【００４０】
結果：
結果を下記表１に示す。
【００４１】
【表１】
2005073586.tif 000002
【００４２】
表１の結果から、ＳＣ−１菌を共存させることにより、柑橘黒点病菌の増殖が抑制できることがわかる。
【００４３】
（試験例２）ミカン園における柑橘黒点病に対するＳＣ−１菌株の防除効果試験
方法：
（１）試験ほ場
静岡県清水市駒越西  柑橘試験場ほ場  ３ａ
（品種：青島温州８年生  １区１樹、３連制）
【００４４】
（２）柑橘病害防除剤及び防除方法：
ＳＣ−１菌をポテトデキストロース液体培地で７日間振とう培養（２５℃）後、培養液原液を水道水で希釈し、１０6／ｍＬの菌液を作製し、噴霧器を使って散布した。
【００４５】
（３）試験区
ＳＣ−１菌散布区（１０6／ｍＬ、３Ｌ／樹；６月、７月の２回散布）
ジマンダイセン水和剤散布区（６００倍希釈、３Ｌ／樹、６月、７月、８月の３回散布）
無処理区（６月〜８月の期間殺菌剤無散布）
【００４６】
（４）薬剤散布日
平成１２年６月２２日、７月２１日、８月２３日
【００４７】
（５）調査
柑橘黒点病の調査は平成１２年１１月９日に行い、下記計算式を用いて防除効果を求めた。
【００４８】
発病果率（％）＝（発病果数÷調査果数）×１００
【００４９】
発病度＝（(発病指数×該当発病果数)÷(７×調査果数)）×１００
発病指数  ０：病斑がないもの
１：病斑が散見されるもの
３：病斑が果面の１／４に分布するもの
５：病斑が果面の１／４〜１／２に分布するもの
７：病斑が果面の１／２以上に分布するもの
【００５０】
防除価＝１００−（(処理区の発病度÷無処理区の発病度)×１００）
【００５１】
結果：
結果を下記表２に示す。
【００５２】
【表２】
2005073586.tif 000003
【００５３】
表２の結果から、ＳＣ−１菌は、化学殺菌剤であるジマンダイセン水和剤には及ばないものの、ジマンダイセン水和剤の７９％（（３８．２÷４８．４）×１００）の防除効果を示すことが明らかとなった。
【００５４】
（試験例３）ミカン園における柑橘黒点病に対するＳＣ−１菌株からなる生物防除剤と化学殺菌剤との組み合わせによる防除効果試験
方法：
（１）試験ほ場
静岡県引佐郡三ヶ日町  柑橘試験場西遠分場ほ場  ２０ａ
（品種：宮川早生３７年生  １区１樹、３連制）
【００５５】
（２）柑橘病害防除剤及び防除方法：
ＳＣ−１菌をポテトデキストロース液体培地で７日間振とう培養（２５℃）後、培養液原液を水道水で希釈し、１０6／ｍＬの菌液を作製し、噴霧器を使って散布した。
【００５６】
（３）試験区
体系防除ＳＣ−１菌散布区
６月：エムダイファー水和剤（６００倍希釈、３Ｌ／樹）
７月：ＳＣ−１菌（１０6／ｍＬ、３Ｌ／樹）
８月：ジマンダイセン水和剤（８００倍希釈、３Ｌ／樹）
慣行防除区
６月：エムダイファー水和剤（６００倍希釈、３Ｌ／樹）
７月：ジマンダイセン水和剤（８００倍希釈、３Ｌ／樹）
８月：ジマンダイセン水和剤（８００倍希釈、３Ｌ／樹）
無処理区（６月〜８月の期間殺菌剤無散布）
【００５７】
（４）薬剤散布日
平成１４年６月３日、７月１１日、８月１９日
【００５８】
（５）調査
柑橘黒点病の調査は平成１４年１０月１３日に行い、上記試験例２に記載の計算式を用いて防除効果を求めた。
【００５９】
結果：
結果を下記表３に示す。
【００６０】
【表３】
2005073586.tif 000004
【００６１】
表３の結果から、ＳＣ−１菌からなる柑橘病害防除剤と化学殺菌剤との組み合わせからなる体系防除は、従来の化学殺菌剤のみを用いる慣行防除にほぼ匹敵する防除効果を示すことが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明によれば、環境に悪影響を及ぼすことなく、柑橘病害を有効に防除することができ、良好な柑橘果実を生産することが可能となる。
【００６３】
さらに、本発明の柑橘病害防除剤と化学殺菌剤とを組み合わせた体系防除により、化学殺菌剤のみによる場合とほぼ同等の防除効果が得られ、化学殺菌剤の使用量を低減することができる。
【配列表】
2005073586000001.app