(57)【要約】【課題】  ヒトサイトメガロウィルス等のウィルス疾患の感染防止、治療効果を持つ抗ウィルス剤を得る。【解決手段】  例えば、CH3-CO-NH-(CH2)n-NH-CO-CH3〔ｎは、２〜８の整数を示す。〕で示されるヘキサメチレンビスアセトアミド、ヘプタメチレンビスアセトアミド、オクタメチレンビスアセトアミド、又はＥメチレンビスアセトアミド等のハイブリッド極性化合物又はその塩を有効成分とし、更に、薬学的に許容される薬剤又は担体とを更に含むもの。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイブリッド極性化合物（hybrid polar compound） 又はその塩を有効成分とする抗ウイルス剤。
【請求項２】
前記抗ウイルス剤が、薬学的に許容される薬剤又は担体とを更に含むことを特徴とする請求項２に記載の抗ウイルス剤。
【請求項３】
前記ハイブリッド極性化合物が、下記式（１）
（１）CH3-CO-NH-(CH2)n-NH-CO-CH3〔ｎは、２〜８の整数を示す。〕
で表される化合物またはＥメチレンビスアセトアミドであることを特徴とする請求項１又は２に記載の抗ウイルス剤。
【請求項４】
前記ハイブリッド極性化合物が、その分子構造中にメチレン基を６以上有するものであることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の抗ウイルス剤。
【請求項５】
前記ハイブリッド極性化合物が、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヘプタメチレンビスアセトアミド、オクタメチレンビスアセトアミド又はＥメチレンビスアセトアミドから選ばれた１つ以上であることを特徴とする請求項１〜４の何れか１項に記載の抗ウイルス剤。
【請求項６】
前記抗ウイルス剤が、抗ヒトサイトメガロウイルス剤であることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項に記載の抗ウイルス剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトサイトメガロウイルス等のウイルス疾患の感染防止、治療効果を持つ抗ウイルス剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、ハイブリッド極性化合物（hybrid polar compound） は、細胞の分化誘導剤として知られており、その１種であるヘキサメチレンビスアセトアミド（ＨＭＢＡ）については、急性骨髄性白血病（acute myeloid leukemia）等への治療効果が報告されている。（非特許文献１）
【０００３】
また、その他の学術的報告として、ＨＭＢＡが、ミトコンドリアからのチトクロムＣの放出やＢｃｌ２蛋白質レベルの低下により、多剤耐性を有する細胞株の細胞死を誘導すること（非特許文献１）や、ヘルペスウイルスの複製促進作用を有することが知られている（非特許文献２）。しかし、これらＨＭＢＡ等のハイブリッド極性化合物に関する抗ウイルス効果に関する知見は報告されていない。
【０００４】
一方、ヒトサイトメガロウイルスは、ヘルペスウイルスの１種であり、日本人の９０％程度、欧米人では５０％程度に潜伏感染しているウイルスである。ヒトサイトメガロウイルスは、感染後、まず、前初期蛋白質(Immediate Early Proteins)を誘導する。このうちの主要前初期蛋白質(Major Immediate Early Proteins (MIE))が、ＩＥ１及びＩＥ２である。ヒトサイトメガロウイルスは、その後、初期蛋白質(Early Proteins (E))の発現、ウイルス遺伝子の合成、後期蛋白質(Late Proteins(L))の発現を介して、宿主内で複製・増殖する。
【０００５】
サイトメガロウイルスは、通常ではヒトに疾病をもたらすおそれは低いが、例えば妊婦に感染すると胎盤を通じて胎児にも感染し、巨細胞封入体症の原因となり、場合によっては脳障害が起こることもあり、また、免疫抑制剤の投与を受けている患者などにおいては潜伏ウイルスが再活性化され、間質性肺炎や肝炎、脳炎、網膜炎、神経疾患、痴呆等の疾病を引き起こすことが知られている。
【０００６】
現在、こうしたヒトサイトメガロウイルスの治療薬（DNA合成阻害薬）としては、ガンシクロビル（gancicrovir）やホスホカーネット(phosphocarnet)等が使用されている。
【０００７】
【非特許文献１】Ruefli, A. A.ら 、Blood, 2000, vol.95, p2378-2385.
【非特許文献２】Preston, C. M. ら、Virology, 1998, 249, p418-426.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、既存の抗ヒトサイトメガロウイルス剤（ガンシクロビル等）には、細胞病毒や耐性ウイルスの出現等の問題があった。また、既存の抗サイトメガロウイルス剤は、ウイルス複製サイクル内のＤＮＡ合成段階を抑制するものであるので、より高くしかも迅速に抗ウイルス効果を得るため、ＤＮＡ合成期より以前の複製ステップを阻害する化合物が求められている。
【０００９】
このため、現状では、上記問題点の解消された、高活性かつ複製初期段階に作用する優れた抗ヒトサイトメガロウイルス剤の作出を求められている。
【００１０】
本発明は、ヒトサイトメガロウイルス等のウイルス疾患の感染防止、治療効果を持つ抗ウイルス剤を得ることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
請求項１に記載された発明に係る抗ウイルス剤は、ハイブリッド極性化合物又はその塩を有効成分とするものである。
【００１２】
請求項２に記載された発明に係る抗ウイルス剤は、請求項１に記載の抗ウイルス剤が、薬学的に許容される薬剤又は担体とを更に含むことを特徴とするものである。
【００１３】
請求項３に記載された発明に係る抗ウイルス剤は、請求項１又は２に記載のハイブリッド極性化合物が、下記式（１）
（１）CH3-CO-NH-(CH2)n-NH-CO-CH3〔ｎは、２〜８の整数を示す。〕
で表される化合物またはＥメチレンビスアセトアミドであることを特徴とするものである。
【００１４】
請求項４に記載された発明に係る抗ウイルス剤は、請求項１〜３の何れか１項に記載のハイブリッド極性化合物が、その分子構造中にメチレン基を６以上有するものであることを特徴とするものである。
【００１５】
請求項５に記載された発明に係る抗ウイルス剤は、請求項１〜４の何れか１項に記載のハイブリッド極性化合物が、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヘプタメチレンビスアセトアミド、オクタメチレンビスアセトアミド又はＥメチレンビスアセトアミドから選ばれた１つ以上であることを特徴とするものである。
【００１６】
請求項６に記載された発明に係る抗ウイルス剤は、請求項１〜５の何れか１項に記載の抗ウイルス剤が、抗ヒトサイトメガロウイルス剤であることを特徴とするものである。
【発明の効果】
【００１７】
本発明では、ＨＭＢＡ（ヘキサメチレンビスアセトアミド）やＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）等のハイブリッド極性化合物やこれらの誘導体が、抗ヒトサイトメガロウイルス効果を有することを見出したため、これらを投与することにより、同ウイルス感染に基づく間質性肺炎、肝炎や脳炎、網膜炎等の感染症に対する予防治療効果が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
上記課題を解決するために本発明者らは鋭意研究を行った結果、分化誘導剤として知られている、ヘキサメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)6-NH-CO-CH3）、ヘプタメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)７-NH-CO-CH3）、オクタメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)８-NH-CO-CH3）、Ｅメチレンビスアセトアミド（ジエチルビス（ペンタメチレン-N,N-ジメチルカルボキサミド）マロネート）等のハイブリッド極性化合物が、優れた抗ウイルス活性を有することを見出した。また、ハイブリッド極性化合物の中でも、特にメチレン基数６以上のものの抗ウイルス活性が高く、細胞病毒等の問題を克服しつつヒトサイトメガロウイルスを排除できることを見出し本発明を完成した。すなわち、本発明は、ハイブリッド極性化合物を有効成分とする抗ウイルス剤を提供するものである。
【００１９】
具体的には、本発明の抗ウイルス剤は、ハイブリッド極性化合物を有効成分とし、更に、薬学的に許容される薬剤又は担体とを更に含むものである。
【００２０】
薬学的に許容される薬剤又は担体とは、一般的に、薬剤又は担体の特性は、用いられる投与の特定の様式に依存する。例えば、液状組成物は通常、水、生理食塩水、緩衝塩類溶液、水性デキストロース、グリセロール、エタノール、のような薬学的および生理学的に許容される液体、その組合せ、または溶媒等を含む注射可能な液体を含む。薬剤又は担体は滅菌することができ、製剤は投与様式に適合する。
【００２１】
固体組成物（例えば、粉末、丸剤、錠剤、またはカプセル剤）に関しては、従来の非毒性固体担体は、例えば製薬等級のマンニトール、乳糖、デンプン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、およびステアリン酸マグネシウムを含みうる。生物学的に中性の担体の他に、投与すべき薬剤組成物は、湿潤剤、乳化剤、保存剤、およびpH緩衝剤等、例えば酢酸ナトリウムまたはモノラウリン酸ソルビタンのような非毒性補助物質の少量を含みうる。
【００２２】
更に、固形組成物や液状組成物には、保存剤、抗酸化剤、可溶化剤、乳化剤、増粘剤、可塑剤、吸着剤、香料、着色剤、分散剤、矯味矯臭剤、甘味剤、防腐剤なども製剤中の各有効成分を阻害しない範囲で使用できる。
【００２３】
ハイブリッド極性化合物とは、合成された極性化合物を指し、具体的には、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）やヘキサメチレンビスアセトアミド（ＨＭＢＡ；CH3-CO-NH-(CH2)6-NH-CO-CH3）、ヘプタメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)７-NH-CO-CH3）、オクタメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)８-NH-CO-CH3）、Ｅメチレンビスアセトアミド（ＥＭＢＡ；ジエチルビス（ペンタメチレン-N,N-ジメチルカルボキサミド）マロネート）の化合物を挙げることができる。即ち、２つの極性基を共通に有することからハイブリッド極性化合物と呼ばれ、これは無極性のアルキル鎖（例えば、アルカンまたはアルケン）鎖によって分離していてもよく、水性および有機溶媒の双方に可溶性である。
【００２４】
また、本発明は、ハイブリッド極性化合物として、その構造中にメチレン基を６以上有するものである上記の抗ウイルス剤を提供する。メチレン基を６以上とは、不連続ではなく、炭素数６以上の直鎖状アルキレン基としての構造を分子中に持つことを指す。メチレン基を６以上有するものは、抗ウイルス活性が高い利点を有する。
【００２５】
具体的なメチレン基を６以上有するハイブリッド極性化合物としては、ハイブリッド極性化合物が、ヘキサメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)6-NH-CO-CH3）、ヘプタメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)７-NH-CO-CH3）、オクタメチレンビスアセトアミド（CH3-CO-NH-(CH2)８-NH-CO-CH3）又はＥメチレンビスアセトアミド（ジエチルビス（ペンタメチレン-N,N-ジメチルカルボキサミド）マロネート ）を挙げることができ、活性が高い。即ち、CH3-CO-NH-(CH2)n-NH-CO-CH3〔ｎは、６〜８の整数を示す。〕およびＥＭＢＡが好ましい。
【００２６】
本発明の抗ウイルス剤は、ヒトサイトメガロウイルスのＩＥ１蛋白質およびＩＥ２蛋白質の産生を抑止するものであるので、特にこれらの蛋白質と同一または類似の蛋白質を有するウイルスに対して用いることが好ましい。本発明の抗ウイルス剤の効果を期待し得るウイルスとしては、ヒトサイトメガロウイルスの他、例えば、ＥＢウイルスや水痘帯状疱疹ウイルスが挙げられる。
【００２７】
本発明での抗ウイルス剤としては、注射可能な液体製剤の形態としては、血中濃度が０．１〜５ｍＭとなるよう投与することが好ましく、間質性肺炎や肝炎、脳炎、網膜炎、神経疾患、痴呆等の用途に用いる。有効成分のハイブリッド極性化合物としては、たとえば、ＨＭＢＡは既に市販されているものを用いることができる（アルドリッチ社製）。
【実施例】
【００２８】
実施例１.ＴＰＣ−１細胞増殖への影響
２０万個のヒト甲状腺ガン由来のＴＰＣ−１細胞をプレートに接種し、翌日（０日）に０−２０ｍＭのヘキサメチレンビスアセトアミド（ＨＭＢＡ；アルドリッチ社製）を含む、５％牛胎児血清含有ダルベコ変法イーグル培地（日水製薬製；以下「５％牛胎児血清」を省略して「ダルベコ変法イーグル培地」という」）で３０日間培養し、ＴＰＣ−１細胞増殖に及ぼすＨＭＢＡ処理効果を検証した。培養は、５％ＣＯ２ インキュベーター（３７℃）内で行い、培養中、５日毎に培地交換（アスピレーターで培地を吸引除去後交換）した。
【００２９】
図１はＴＰＣ−１細胞増殖に及ぼすＨＭＢＡ処理効果の結果を示す線図であり、図において、横軸はＨＭＢＡ処理時間（日数）、縦軸は各時点で測定した全細胞数である。図に示す通り、ＨＭＢＡを２０ｍＭの濃度で添加されたものは処理後１５日目で細胞死を起こし、５〜１０ｍＭの濃度で添加されたものは細胞増殖を抑制したが、細胞死を起こさなかった。
【００３０】
実施例２．ウイルス感染と維持の阻害
約１００万個のヒト甲状腺ガン由来のＴＰＣ−１細胞にヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を１時間吸着感染後、ＨＭＢＡの不含培地（●）と、５ｍＭ  ＨＭＢＡの含有培地（○）で、２０日間、５日毎に培地交換して維持し、５，１０，１５，２０日目の全産生ウイルス量とウイルス蛋白質とを計測した。なお、全ウイルス量は、細胞を含む培養液を−８５℃フリーザー内で凍結した後融解し、これを更に１分間超音波処理して細胞抽出液を作製し、この抽出液を適宜希釈後、ＨＥＬ（ヒト胎児肺由来）細胞に接種し、プラーク法により計測した（以下の実施例も同様）。図２はＴＰＣ−１細胞のウイルス感染後の動向を示す線図であり、図において、横軸は感染後時間（日数）、縦軸はウイルス力価（ＰＦＵ／ｍｌ）である。図２に示す通り、ＨＭＢＡはヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）の感染が持続することを阻害することが判った。
【００３１】
図３はヒトサイトメガロウイルスの感染後５，１０，１５，２０日の細胞内に合成されたウイルス蛋白質をウエスタンブロット法で検出した電気泳動ゲルの模式図である。図において、レーン５，１０，１５，２０は感染後の日数を示し、ＭｏｃｋはＨＭＢＡ不含培地、ＨＭＢＡは５ｍＭ  ＨＭＢＡの含有培地を示す。検出した蛋白質は、ＭＩＥ (IE1とIE2), Early(E)、Late(L)及びアクチンである。図３に示す通り、ＨＭＢＡが添加された培地では１０日目からウイルスＭＩＥ、Ｅ及びＬ蛋白質の全てが検出されず、ウイルス蛋白質合成を阻害することが判った。
【００３２】
一方、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）が持続した感染が確認されたＴＰＣ−１（以下、ＴＰＣ−１ｐｉと記す）細胞を、ＨＭＢＡ不含培地（●と■）又は５ｍＭ  ＨＭＢＡ含有培地（○と□）で３０日間、５日毎に培地交換して維持した。図示した各時点での全産生ウイルス量（実線）および培地中に放出されたウイルス（点線）を測定した。なお、、培地中に放出されたウイルス量は、培養液を2,000rpmで５分間遠心分離し、細胞破砕物等の浮遊物を除去した後、上記と同様にプラーク法を用いて計測した。
【００３３】
図４はＴＰＣ−１ｐｉ細胞のウイルス感染の動向を示す線図であり、図において、横軸は感染後時間（日数）、縦軸はウイルス力価（ＰＦＵ／ｍｌ）である。図４に示す通り、ＨＭＢＡ処理により、培地中のウイルスは処理１０日迄に、全ウイルス量も２５日迄に検出レベル以下に低下した。これにより、ＨＭＢＡはＨＣＭＶ持続感染を治癒させることが判った。
【００３４】
実施例３．ガンシクロビルとのウイルス増殖抑制効果の比較
ヒトサイトメガロウイルスの治療薬として市販されているガンシクロビル（gancicrovir)と、ＨＭＢＡとのウイルス増殖抑制効果を比較した。具体的には、ＴＰＣ−１ｐｉ細胞をガンシクロビル（２．５−２０μｇ／ｍｌ）及び５ｍＭ  ＨＭＢＡで１０日間処理（５日目に培地交換）した後、全産生ウイルス量を測定して比較した。
【００３５】
図５はＨＭＢＡとガンシクロビルとのウイルス増殖抑制効果を比較したグラフであり、図において、横軸は添加前、各濃度のガンシクロビル、ＨＭＢＡであり、縦軸はウイルス力価（ＰＦＵ／ｍｌ）である。図５に示す通り、ガンシクロビルはヒトサイトメガロウイルス増殖を１０−２〜１０−４迄抑制したが、ＨＭＢＡの抑制効果はそれよりさらに強力で、約１０−６迄の低下が認められた。これにより、ＨＭＢＡはガンシクロビルに比べ、より強くヒトサイトメガロウイルス増殖を阻害することが判った。
【００３６】
実施例４．抗原及びウイルス関連蛋白質合成の抑制効果の検討
ＴＰＣ−１ｐｉ細胞をＨＭＢＡ不含培地（ｍｏｃｋ；パネルＡ，Ｂ，ＥとＦ）と、５ｍＭ  ＨＭＢＡ含有培地（ＨＭＢＡ；パネルＣ，Ｄ，ＧとＨ）とで、３０日迄、５日毎に培地交換して維持した。処理１０日と３０日後に、ＭＩＥ抗原（ＭＩＥＡ）と後期抗原（ＬＡ）を蛍光抗体染色し、両抗原陽性細胞数を比較した。図６は各々の蛍光抗体染色の結果を示す図面代用写真である。
【００３７】
図６に示す通り、処理１０日後には両抗原陽性細胞数に著しい減少が認められ（パネルＣとＧ）、３０日後には検出レベル以下となった（パネルＤとＨ）。これにより、ＴＰＣ−１ｐｉ細胞におけるヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）のＭＩＥ抗原（ＭＩＥＡ）と後期抗原（ＬＡ）の陽性細胞数がＨＭＢＡ処理により著明に減少することが判った。
【００３８】
一方、ＴＰＣ−１ｐｉ細胞をＨＭＢＡ不含培地（ｍｏｃｋ）と、５ｍＭ  ＨＭＢＡ含有培地（ＨＭＢＡ）で２０日間、５日毎に培地交換して維持し、０，１，２，３，４，５，１０，１５，２０日後の各培地のＩＥ１蛋白質発現レベルとＩＥ２蛋白質発現レベルとを、ウエスタンブロット法で検討した。
【００３９】
図７はウエスタンブロット法で検出した電気泳動ゲルの模式図である。図７に示す通り、未処理細胞には常時ＩＥ１蛋白質発現とＩＥ２蛋白質発現とが確認されたが、ＨＭＢＡ処理直後よりＩＥ２蛋白質発現レベルが著しく低下し（上図）、１０日後検出レベル以下となった。一方、ＩＥ１蛋白質は２０日後に検出されなくなった（下図）。これにより、ＨＭＢＡはウイルスＩＥ２蛋白質合成を優先的に阻害することが判った。
【００４０】
更に、ＴＰＣ−１細胞にＨＣＭＶを感染後５日間、ＨＭＢＡ不含培地（●）または５ｍＭ  ＨＭＢＡ含有培地（○）で維持し、１−５日後にＭＩＥ抗原，初期抗原（Ｅａｒｌｙ抗原［Ｅ］）および後期抗原（Ｌａｔｅ抗原［Ｌ］）のウイルス蛋白質合成と、全産生ウイルス量を測定した。図８はウエスタンブロット法で検出した電気泳動ゲルの模式図である。図９はＴＰＣ−１細胞のウイルス感染後の動向を示す線図であり、図において、横軸は感染後時間（日数）、縦軸はウイルス力価（ＰＦＵ／ｍｌ）である。
【００４１】
その結果、図９に示す通り、ＨＭＢＡ処理細胞では、ＨＣＭＶ増殖が１／５００〜１／１，０００抑制され、図８に示す通り、その原因は感染後最初に合成されるＭＩＥ蛋白質のうちＩＥ２蛋白質合成が選択的に阻害され、その結果ＥおよびＬ蛋白質合成が抑制されることによることが明らかとなった。これにより、ＨＭＢＡによるＨＣＭＶ増殖阻害は、ＩＥ２蛋白質合成阻害に起因することが判った。
【００４２】
実施例５．ＴＰＣ−１とＨＥＬ細胞とにおけるウイルス増殖への影響
実施例４の図９に示した通り、ＴＰＣ−１細胞へのＨＣＭＶ感染を検討したが、他の細胞についても検証した。具体的には、ヒト胎児由来胚細胞のＨＥＬ細胞についても、ウイルス増殖への影響を検証した。
【００４３】
ＨＥＬ細胞と１グループのＴＰＣ−１細胞に、ＨＣＭＶをＭＯＩ（感染の度合）＝０．０１と５でそれぞれ感染させ、もう一方のグループのＴＰＣ−１細胞には、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）をＭＯＩ＝０．０１で感染させた。１時間の吸着後、細胞をハンクスの平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）で洗浄し、表１に示した濃度のＨＭＢＡを含むダルベコ変法イーグル培地を加えた。結果を次の表１に示す。なお、表１に示すＨＣＭＶおよびＨＳＶ−２産生量は、それぞれ感染１２０時間後と７２時間後に測定されたものである。
【００４４】
【表１】
2005154275.tif 000002
【００４５】
表１に示す通り、ＨＥＬ細胞においても、ＴＰＣ−１細胞ほどではないが、ＨＭＢＡの添加量に応じてヒトサイトメガロウイルスの増殖阻害作用が確認された。また、単純ヘルペスウイルス２型の増殖阻害作用は確認されなかった。
【００４６】
実施例６．ＨＭＢＡ作用標的の解析
１グループのＴＰＣ−１細胞を０−３０ｍＭ  ＨＭＢＡでＨＣＭＶ感染前２４時間３７℃（５％  ＣＯ２ インキュベーター内）で前処理した。細胞をＨＢＳＳで洗浄後、ＨＣＭＶをＭＯＩ＝５で感染し、２５時間後にウエスタンブロッテイング法により合成されたＭＩＥ蛋白質を解析した（図１０（Ａ）レーン１−６）。もう一方のグループのＴＰＣ−１細胞は、ＨＭＢＡ前処理することなくＨＣＭＶをＭＯＩ＝５で感染させた。１時間吸着後、細胞を０−３０ｍＭ  ＨＭＢＡを含む培溶液で維持し、２５時間後にＭＩＥ蛋白質合成の有無を検討した（図１０（Ａ）レーン７−１２）。その結果、１０−３０ｍＭ  ＨＭＢＡ前処理細胞には、ＩＥ１とＩＥ２蛋白質合成が認められた（図１０（Ａ）レーン４−６）のに対し、後処理された細胞にはＩＥ１とＩＥ２両蛋白質の合成は認められなかった（図１０（Ａ）レーン７−１２）。
【００４７】
また、３０ｍＭのＨＭＢＡで０−５日間感染前処理したもの（図１０（Ｂ）レーン１−６）および後処理したもの（図１０（Ｂ）レーン７−１２）についてもウエスタンブロッティングを行った（他の条件は上記と同様）。その結果、１−５日間前処理した細胞には、いずれもＩＥ１とＩＥ２蛋白質の発現が認められた（図１０（Ｂ）レーン２−６）のに対し、後処理した細胞には、両蛋白質の発現は認められなかった。これらの結果から、ＨＭＢＡ処理によりＭＩＥ蛋白質合成に必要な細胞機能が損なわれることによりＩＥ１とＩＥ２蛋白質が合成されなくなるのではないこと、およびＨＭＢＡによるＨＣＭＶ増殖阻害効果の標的は、ウイルス側にあることが判明した。これにより、ＨＭＢＡによるＨＣＭＶ増殖阻害は、宿主細胞機能ではなく、ウイルス機能を介して発揮されることが判った。
【００４８】
実施例７．製剤
次の処方Ａ，Ｂに示す通り、ＨＭＢＡを用いた製剤を２例作成した。これら注射可能な液体製剤の形態としては、血中濃度が０．１〜５ｍＭとなるよう投与することが好ましく、間質性肺炎や肝炎、脳炎、網膜炎、神経疾患、痴呆等の用途に用いることができる。
Ａ．
ＨＭＢＡ              １００ｍｇ
マンニトール        １０００ｍｇ
亜硫酸水素ナトリウム      ５ｍｇ
注射用蒸留水        全量１０ｍｌ
【００４９】
Ｂ．
ＨＭＢＡ          １００ｍｇ
塩化ナトリウム  １７２０ｍｇ
塩化カリウム        ６０ｍｇ
塩化カルシウム        ６ｍｇ
注射用水        全量１０ｍｌ
【００５０】
以上のように、本発明の抗ウイルス剤は、ウイルス複製サイクルの最当初段階で発現するＩＥ（特にＩＥ２）蛋白質の合成を抑制するので、強いウイルス増殖抑制効果と共に細胞病毒等前記問題点の少ない優れた効果を期待できる。
【００５１】
また、ＨＭＢＡ（ヘキサメチレンビスアセトアミド）等のハイブリッド極性化合物（hybrid polar compounds）が、抗ヒトサイトメガロウイルス効果を有することを見出した。これを投与することにより、同ウイルス感染に基づく間質性肺炎、肝炎や脳炎、網膜炎等の感染症に対する予防治療効果が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】ＴＰＣ−１細胞増殖に及ぼすＨＭＢＡ処理効果の結果を示す線図である。
【図２】ＴＰＣ−１細胞のウイルス感染後の動向を示す線図である。
【図３】ヒトサイトメガロウイルスの感染後５，１０，１５，２０日の細胞内合成ウイルス蛋白質をウエスタンブロット法で検出した電気泳動ゲルの模式図である。
【図４】ＴＰＣ−１ｐｉ細胞のウイルス感染の動向を示す線図である。
【図５】ＨＭＢＡとガンシクロビルとのウイルス増殖抑制効果を比較したグラフである。
【図６】各々の蛍光抗体染色の結果を示す図面代用写真である。
【図７】ウエスタンブロット法で検出したウイルス蛋白質の電気泳動ゲルの模式図である。
【図８】ウエスタンブロット法で検出したウイルス蛋白質の電気泳動ゲルの模式図である。
【図９】ＴＰＣ−１細胞のウイルス感染後の動向を示す線図である。
【図１０】感染細胞内に合成されたウイルス蛋白質をウエスタンブロット法で検出した電気泳動ゲルの模式図である。
【図１】
2005154275.tif 000003
【図２】
2005154275.tif 000004
【図３】
2005154275.tif 000005
【図４】
2005154275.tif 000006
【図５】
2005154275.tif 000007
【図７】
2005154275.tif 000008
【図８】
2005154275.tif 000009
【図９】
2005154275.tif 000010
【図１０】
2005154275.tif 000011
【図６】
2005154275.tif 000012