(57)【要約】【課題】 均一な磁性を有し、分散安定性に優れ、粒径分布の狭い磁性体内包粒子及びそれを用いてなる免疫測用粒子を提供する【解決手段】有機高分子物質からなる粒子の内部に平均粒径１〜３０ｎｍの磁性体を分散状態で含有してなり、かつ、粒子表面に抗原又は抗体と共有結合可能な官能基を有するリンカーが結合されている磁性体内包粒子。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機高分子物質からなる粒子の内部に平均粒径１〜３０ｎｍの磁性体を分散状態で含有し
てなり、かつ、粒子表面に抗原又は抗体と共有結合可能な官能基を有するリンカーが結合
されていることを特徴とする磁性体内包粒子。
【請求項２】
磁性体の平均粒径が１〜１０ｎｍであることを特徴とする請求項１記載の磁性体内包粒子
。
【請求項３】
官能基は、エポキシ基であることを特徴とする請求項１又は２記載の磁性体内包粒子。
【請求項４】
リンカーは、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテルであることを特徴とする請求
項１、２又は３記載の磁性体内包粒子。
【請求項５】
請求項１、２、３又は４記載の磁性体内包粒子に、前記磁性体内包粒子の粒子表面に結合
したリンカーを介して、抗原又は抗体が結合してなることを特徴とする免疫測定用粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、均一な磁性を有し、分散安定性に優れ、粒径分布の狭い磁性体内包粒子及びそ
れを用いる免疫測定用粒子に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、磁性体含有高分子粒子の作製法として（１）作製済みの高分子粒子に鉄イオンを含
ませて磁性体を作製する方法、（２）モノマーから高分子粒子を重合する過程で作製済み
の磁性体粒子を含ませる方法（特許文献１参照）、（３）別々に作製した高分子粒子と磁
性体粒子とを複合化させる方法（特許文献２参照）が知られている。また、この他、（４
）磁性体粒子を高分子等で被覆する方法（特許文献３参照）がある。
【０００３】
（１）の方法は鉄イオンを高分子粒子に吸収させるため、表面に磁性体が露出し、磁性体
が酸化するという課題があった。また（２）の方法は磁性体粒子が均一に高分子粒子に取
り込まれないという課題や、粒径の制御が困難で粒径分布の広い物となるという課題があ
った。また、（３）の方法は高分子粒子が凝集するため、粒径の小さな粒子には使用でき
ないという課題がある。また、（４）の方法は、被覆が均一にできないため、浮遊性や分
散性が悪く、また、磁性体粒子表面の一部が露出する場合があった。
【０００４】
一方、微量免疫測定法としては、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、蛍光イム
ノアッセイ等が従来から知られており、既に実用化されている。これらの方法は、それぞ
れアイソトープ、酵素、蛍光物質を標識として付加した抗原又は抗体を用い、これと特異
的に反応する抗体又は抗原の有無を検出する方法である。このような免疫測定法に際して
、磁性体内包粒子は、効率よくかつ簡便にＢ／Ｆ分離を行うために用いられている。また
、Ｂ／Ｆ分離以外の使用（特許文献４参照）や、磁性体内包粒子自体を標識材料とする免
疫測定法（特許文献５、特許文献６、特許文献７参照）が開示されている。
【０００５】
【特許文献１】特開平９−２０８７８８号公報
【特許文献２】特開平６−２３１９５７号公報
【特許文献３】特開平６−９２６４０号公報
【特許文献４】特開２０００−８８８５２号公報
【特許文献５】特開平６−１４８１８９号公報
【特許文献６】特開平７−２２５２３３号公報
【特許文献７】特表２００１−５２４６７５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記課題に鑑み、均一な磁性を有し、分散安定性に優れ、粒径分布の狭い磁性
体内包粒子及びそれを用いてなる免疫測用粒子を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、有機高分子物質からなる粒子の内部に平均粒径１〜３０ｎｍの磁性体を分散状
態で含有してなり、かつ、粒子表面に抗原又は抗体と共有結合可能な官能基を有するリン
カーが結合されている磁性体内包粒子である。
以下に本発明を詳述する。
【０００８】
本発明の磁性体内包粒子は、有機高分子物質からなる粒子の内部に平均粒径１〜３０ｎｍ
の磁性体を分散状態で含有してなるものである。
上記有機高分子物質は、粒子のコアを形成するための疎水性モノマーと、水中で安定に分
散する粒子を形成しつつ粒子のシェルを形成するための親水性モノマーとからなる重合体
を主構成成分とするものである。
【０００９】
＜疎水性モノマー＞
上記疎水性モノマーとしては、例えば、スチレン、α−メチルスチレン、ｐ−メチルスチ
レン、ｐ−クロロスチレン、クロロメチルスチレン等のスチレン系モノマー；塩化ビニル
；酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル等のビニルエステル類；アクリロニトリル等の不飽和
ニトリル類；メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ
）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリ
レート、エチレングリコール（メタ）アクリレート、トリフルオロエチル（メタ）アクリ
レート、ペンタフルオロプロピル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリ
レート、グリシジルメタクリレート、テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリレート等の
アクリル系モノマー等が挙げられる。これら疎水性モノマーは単独で用いてもよく、２種
以上を併用しても良い。
【００１０】
上記疎水性モノマーとしては、好ましくは、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ
）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレー
ト、ステアリル（メタ）アクリレート、エチレングリコール（メタ）アクリレート、トリ
フルオロエチル（メタ）アクリレート、ペンタフルオロプロピル（メタ）アクリレート、
シクロヘキシル（メタ）アクリレート、グリシジルメタクリレート、テトラヒドロフルフ
リル（メタ）アクリレート等のアクリル系モノマーが用いられる。
【００１１】
上記疎水性モノマーとしては、より好ましくは、重合による粒子形成と磁性体形成とを同
時進行するため、粒子重合中に高濃度に金属イオンを取り込む能力に優れたグリシジル基
を有するアクリル系モノマーが用いられる。上記アクリル系モノマーの中でも、特にグリ
シジルメタクリレート（ＧＭＡ）は鉄イオン及びマグネタイトとの親和性が高いため特に
好適に使用される。
【００１２】
上記疎水性モノマーとしては、架橋性モノマーも使用できる。上記架橋性モノマーとして
は、例えば、ジビニルベンゼン、ジビニルビフェニル、ジビニルナフタレン、エチレング
リコールジ（メタ）アクリレート、１，６−ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、
ネオペンチルグリコールジ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）
アクリレート、テトラメチロールメタントリ（メタ）アクリレート、テトラメチロールプ
ロパンテトラ（メタ）アクリレート、ジアリルフタレート及びその異性体、トリアリルイ
ソシアヌレート及びその誘導体等が挙げられる。これら架橋性モノマーは単独で用いても
よく、２種以上を併用しても良い。
この中でも、エチレングリコールジ（メタ）アクリレートは鉄イオン及びマグネタイトと
の親和性が高いため好適に使用される。
【００１３】
＜親水性モノマー＞
上記親水性モノマーとしては、例えば、アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、フマル
酸、マレイン酸等の重合性不飽和結合を有するカルボン酸；重合性不飽和結合を有するリ
ン酸エステル；重合性不飽和結合を有するスルホン酸エステル；ジメチルアミノエチルメ
タクリレート４級塩、ジエチルアミノエチルメタクリレート４級塩等のアクリロイル基を
有するアミンの塩やビニルピリジン等のビニル基を有する含窒素化合物の塩等のカチオン
基を有するビニル系モノマー；２−ヒドロキシエチルメタクリレート、ポリエチレングリ
コール（メタ）アクリレート、（メタ）アクリルアミド、メチロールアクリルアミド、グ
リセロールメタクリレート（ＧＬＭ）等の非イオン性ビニル系モノマー等が挙げられる。
これら親水性モノマーは、単独で用いてもよく、２種以上を併用しても良い。この中でも
、下記一般式で表されるポリエチレングリコール（メタ）アクリレートは、水中で粒子を
安定に分散する能力が高く、磁性体の形成を妨げないので好適に使用される。
ＣＨ２＝ＣＲ−ＣＯＯ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｈ
式中、ＲはＨ又はＣＨ３を表し、ｎは２〜２０の整数を表す。ｎの好ましい下限は２であ
り、好ましい上限は１０である。
【００１４】
上記磁性体は、粒子を形成させる重合過程において粒子内部で金属イオンが酸化して形成
したものであるのが好ましい。
＜金属イオン＞
上記金属イオンは、磁性体を形成するものであれば特に限定されないが、好ましくは、鉄
イオン、コバルトイオン、ニッケルイオン等であり、より好ましくは、鉄イオンである。
磁性体であるマグネタイトは塩化第２鉄を酸化剤等で酸化して得られる。
【００１５】
上記磁性体の平均粒径は１〜３０ｎｍである。１ｎｍ未満であると、磁性体の磁性応答特
性が減少する。また、３０ｎｍを超えると、粒子内での分散性が低下する。好ましい下限
は２ｎｍであり、また、好ましい上限は２０ｎｍであり、より好ましい上限は１０ｎｍで
ある。
【００１６】
本発明の磁性体内包粒子は、上記有機高分子物質からなる粒子の内部に上記磁性体を分散
状態で含有している。即ち、本発明の磁性体内包粒子においては、磁性体が粒子表面に露
出することなく、粒子内部に分散した状態で存在している。
【００１７】
本発明の磁性体内包粒子の磁性体含有量は、その重合組成により０．１〜４０重量％の範
囲で調整するのが好ましい。０．１重量％未満であると、磁性体内包粒子の磁性応答特性
が減少し、免疫測定に使用した際の測定感度が低下する。また、４０重量％を超えると、
粒子の重合操作性が低下し、粒子重合中に金属イオンを取り込み難くなる。好ましい下限
は１重量％であり、好ましい上限は３０重量％である。
【００１８】
また、本発明の磁性体内包粒子は、上記有機高分子物質からなる粒子表面に抗原又は抗体
と共有結合可能な官能基を有するリンカーが結合されているものである。
＜リンカー＞
上記リンカーとは、磁性体内包粒子を免疫測定に使用した際、有機高分子物質からなる粒
子と抗原、抗体等の化合物との間に存在することになる化学物質である。上記リンカーは
、立体障害が起こらないような長さで、かつ、非特異的吸着が生じにくい化合物であり、
有機高分子物質からなる粒子及び抗原、抗体等の化合物と結合する前は、その分子末端に
、例えば、アミノ基、カルボキシル基、エポキシ基、トシル基、チオール基等の抗原又は
抗体と共有結合可能な官能基を有していることが好ましい。本発明におけるリンカーとし
ては、粒子表面にグリシジル基含有モノマー由来のエポキシ基、又は、エポキシ基の開環
により生じる水酸基、アミノ基等と抗原、抗体等を適当な距離を置いて結合し得るもので
あれば特に限定されない。好ましくは、エポキシ基を複数末端に有する化合物、例えば、
ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジル
エーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、トリメチロールプロパンポリ
グリシジルエーテル等が挙げられる。より好ましくは、ポリエチレングリコールジグリシ
ジルエーテルが挙げられる。
【００１９】
本発明の磁性体内包粒子の平均粒径は、その重合条件により０．０５〜１μｍの範囲で調
整するのが好ましい。０．０５μｍ未満や１μｍを超えると、磁性体内包粒子の粒子形状
の制御及び重合操作がしづらくなる。好ましい下限は０．０７μｍであり、好ましい上限
は０．８μｍである。
【００２０】
本発明の磁性体内包粒子は、内部に磁性体を分散状態で含有する有機高分子物質からなる
粒子を製造し、この粒子表面にリンカーを導入することにより製造することができる。
内部に磁性体を分散状態で含有する有機高分子物質からなる粒子は、水系溶媒中において
疎水性モノマー及び／又は親水性モノマーを重合して粒子を形成する工程と、上記粒子中
に金属イオンを取り込みながら上記金属イオンを酸化して磁性体を形成する工程とからな
り、上記粒子を形成する工程と上記磁性体を形成する工程とを同時に進行させる方法によ
り製造される。
水系溶媒中において疎水性モノマー及び／又は親水性モノマーを重合して粒子を形成する
工程においては、重合開始剤が用いられる。
【００２１】
＜重合開始剤＞
上記重合開始剤としては特に限定されず、例えば、水溶性の有機アゾ化合物、無機過酸化
物、有機過酸化物等が挙げられる。
上記重合開始剤の好適な例としては、過硫酸カリウム（以下「ＫＰＳ」と記す；重合温度
７０℃）、アゾビスアミジノプロパン塩酸塩（重合温度７０℃）、２，２−アゾビス［２
−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］ジハイドロクロライド（重合温度６０℃）
が挙げられる。このうち過酸化物系重合開始剤であるＫＰＳは、重合開始とともに２価の
鉄イオンの酸化に寄与することが期待され、ＫＰＳを用いた場合は、モノマーと鉄イオン
による重合とマグネタイト生成とが同時に進行することが想定される。アゾビスアミジノ
プロパン塩酸塩及び２，２−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］
ジハイドロクロライドは酸化力が弱く、２価の鉄イオンの緩やかな酸化反応に関与する重
合開始剤となる。なお、アゾビスアミジノプロパン塩酸塩としては、商品名「Ｖ−５０」
（和光純薬工業社製）が、２，２−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロ
パン］ジハイドロクロライドとしては、商品名「ＶＡ−０４４」（和光純薬工業社製）が
市販されている。
上記重合開始剤は、Ｆｅ２＋の酸化により消費されたり、Ｆｅ３＋によってラジカル活性
を失う場合があるため、粒子成長を促す目的で、粒子成長過程に後添加することが有効で
ある。この場合、新たな２次粒子は形成されず、粒子表面がポリマーで被覆される。
【００２２】
＜ｐＨ調整剤＞
本発明において、重合と同時に磁性体を作製するためには、重合系内のｐＨは塩基性に調
整されるのが好ましい。上記重合開始剤としてＫＰＳを用いた系では、水中での分散安定
性がよく粒径分布の狭い単分散粒子が得られるというメリットがあるが、酸化力の制御が
できず重合系内が酸性になるために磁石への引き寄せられ方の弱い粒子になるというデメ
リットがある。一方、上記重合開始剤として酸化力を持たない２，２−アゾビス［２−（
２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］ジハイドロクロライドを用いた系では、重合系
内のｐＨがほぼ中性であるというメリットがある。
重合系内のｐＨを弱塩基性に保つには、一般的な塩基を使用することができる。
好ましくはＮＨ４ＯＨがｐＨ調整剤として使用される。上記ｐＨ調整剤は、必要に応じて
数回添加することができる。
【００２３】
＜重合方法＞
上記有機高分子物質からなる粒子は、懸濁重合、分散重合、乳化重合、ソープフリー乳化
重合等の粒子重合法により製造できるが、最終的に得られる磁性体内包粒子のＣｖ値は５
％以下であることが好ましいので、粒径分布の制御に優れたソープフリー乳化重合により
好適に製造される。
以下、ソープフリー乳化重合による粒子の製造方法を例示するが、この方法に限定される
ものではない。
【００２４】
代表的な重合組成は、以下のとおりである。
親水性モノマー／疎水性モノマーからなるモノマー組成物：３ｇ
Ｈ２Ｏ：１００ｇ
四つ口フラスコに上記モノマー組成物及び水を秤量する。それぞれの口には攪拌棒、還流
冷却管を取り付ける。次に、系を恒温槽に入れ、攪拌しながら系内を窒素置換する。恒温
槽は、添加する重合開始剤の重合温度に調整するのが好ましく、例えば、重合開始剤とし
てＫＰＳ又はアゾビスアミジノプロパン塩酸塩を用いる場合は７０℃とするのが好ましく
、重合開始剤として２，２−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］
ジハイドロクロライドを用いる場合は５０〜６０℃とするのが好ましい。その後、水に溶
かした重合開始剤を注射筒で系内に注入する。この時点を重合開始とし、所定時間後に注
射筒を用いて磁性源となるＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏの水溶液を注入する。ＦｅＣｌ２・４Ｈ
２Ｏは重合開始剤の１／３〜４倍モルを水５ｇに溶かしたものを使用する。即ち、重合開
始剤により上述のモノマーの重合を開始するとともに２価の鉄イオンの酸化（マグネタイ
ト化）を行うことにより粒子を製造する。
重合は開始から２時間〜２４時間行うことが好ましい。適度な酸化力を得るために、重合
途中にＮＨ４ＯＨを加えてもよく、更に、重合による粒子の成長を促すために、重合途中
に重合開始剤を加えてもよい。この様にして磁性体を分散状態で含有する有機高分子物質
からなる粒子を得ることができる。
【００２５】
上記モノマー組成物には、共重合モノマーとして反応性乳化剤を添加してもよい。
＜反応性乳化剤＞
上記反応乳化剤としては、例えば、下記一般式で表される反応性乳化剤類が挙げられる。
【００２６】
【化１】
2005241547.tif 000002
【００２７】
これら反応性乳化剤は、単独で用いてもよく、２種以上を併用しても良い。
製造した粒子は、残存モノマー、重合開始剤、未反応の鉄イオン等を取り除くために遠心
分離・再分散を蒸留水で繰り返し行い精製する。遠心分離を行った後、上澄みをデカンテ
ーションにより捨て、蒸留水を加え、ガラス棒により再分散を行う。精製後、得られた粒
子は、ガラス製バイアルに移し、ふた・パラフィルムで密閉・保存する。
【００２８】
作製した粒子表面へのリンカーの導入は、例えば、粒子をアルカリ性水溶液中に分散し、
続いて、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル等のリンカーとなる化学物質を加
えて、２４時間程度混合することによりなし得る。
【００２９】
本発明の磁性体内包粒子の表面に導入されているリンカーの官能基と、抗原又は抗体のア
ミノ基やチオール基等とを化学結合させて、磁性体内包粒子の表面に抗原又は抗体が結合
した免疫測定用粒子を作製することができる。このような本発明の磁性体内包粒子に抗原
又は抗体が結合している免疫測定用粒子もまた、本発明の１つである。
【００３０】
本発明の磁性体内包粒子や免疫測定用粒子は、免疫測定法に用いることができる。
上記免疫測定法としては、例えば、磁性体内包粒子を担体として用いたラジオイムノアッ
セイ、酵素イムノアッセイ等公知の方法が挙げられ、サンドイッチ法や競合法により、目
的とする抗原又は抗体を測定することができる。
また、上記方法の標識物質であるアイソトープ、酵素等の代わりに、本発明の磁性体内包
粒子を標識として用いることができる。
【発明の効果】
【００３１】
本発明の磁性体内包粒子及び免疫測定用粒子は、磁性体を均一に分散含有する粒径分布の
狭い粒子であり、かつ、分散安定性に優れているので、本発明の磁性体内包粒子又は免疫
測定用粒子を免疫測定に用いることにより、感度がよく精密な測定を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定
されるものではない。
【００３３】
（参考例１〜７）
２００ｍＬの四つ口フラスコに表１に示す各種モノマー及び水９０ｇを秤量した。それぞ
れの口には攪拌シールと攪拌棒、還流冷却管、セラムラバーを取り付けた。系を７０℃の
恒温槽に入れ、２００ｒｐｍで攪拌しながら系内を３０分間窒素置換した。その後、水に
溶かした重合開始剤であるＫＰＳ  ０．０６ｇを１０ｇの水に溶解し注射筒で系内に注入
した。この時点を重合開始時とし、２分後に注射筒を用いて所定量のＦｅＣｌ２・４Ｈ２
Ｏ水溶液を注入した。重合は重合開始から２０時間行った。適度な酸化力を得るために、
重合途中にＮＨ４ＯＨ  ０．１６５ｇを加えた。
作製した粒子は、遠心分離・再分散を蒸留水で４回繰り返し行うことで精製した。この際
、遠心分離は２０℃、１３５００ｒｐｍで行った。遠心分離を行った後、上澄みをデカン
テーションにより捨て、蒸留水を加え、ガラス棒により再分散を行って磁性体を含有する
粒子を得た。
【００３４】
【表１】
2005241547.tif 000003
【００３５】
表中の記載は以下のとおりである。
ＧＭＡ：グリシジルメタクリレート
ＥＧＤＭ：エチレングリコールジメタクリレート
ＡＡｍ：アクリルアミド
ＰＥ−９０：ポリエチレングリコールメタクリレート（ｎ＝２）
ＰＥ−３５０：ポリエチレングリコールメタクリレート（ｎ＝８）
ＮＥ−２０：
【００３６】
【化２】
2005241547.tif 000004
【００３７】
式中、ＸはＨを表す。
【００３８】
ＳＥ−２０：
【００３９】
【化３】
2005241547.tif 000005
【００４０】
式中、ＸはＳＯ４ＮＨ４を表す。
【００４１】
得られた粒子分散液について、目視で粒子の分散状態を観察した。また、精製した粒子を
水で希釈し、金属メッシュで支持したコロジオン膜上に沈着固定して、透過型電子顕微鏡
（ＴＥＭ）により、粒子の形態を観察した。
【００４２】
参考例１は、一部凝集塊が認められ、時間が経つにつれて粒子が沈降する分散安定性のや
や低いものであったため、超音波処理により再分散した。一方、親水性モノマーとしてポ
リエチレングリコールメタクリレートを用いた参考例２〜５、及び、反応性乳化剤を用い
た参考例６、７は、いずれも凝集塊が認められず、分散安定性の高い粒子が得られた。特
に、反応性乳化剤を用いた参考例６、７は、粒子サイズが小さく、分散安定性が優れてい
ることが認められた。また、参考例１〜７の粒子は、いずれも粒子内部に磁性体を分散状
態で含み、粒子表面がきれいな輪郭であることが観察された。図１に参考例２の粒子のＴ
ＥＭ写真（平均粒径；粒子０．２１μｍ、磁性体５ｎｍ）を示した。
【００４３】
参考例１〜７で作製した粒子が、磁石へ引き寄せられることを確認するために、１．５ｍ
Ｌのマイクロチューブに少量取り、蒸留水で適当に希釈して磁石つきマイクロチューブ立
て（ＤＹＮＡＬ社製、ＭＰＣ（登録商標）−Ｍ）にチューブを立てて、分散している粒子
が磁石に引き寄せられることを目視により確認した。特に、親水性モノマーとしてポリエ
チレングリコールメタクリレートを用いた参考例２〜５は、他の参考例に比べ磁力が大き
いことがうかがえた。各参考例における粒子の磁性体の平均粒径を表２に示した。
【００４４】
【表２】
2005241547.tif 000006
【００４５】
（参考例８）
２００ｍＬの四つ口フラスコに下記に示す各種モノマー及び水を秤量した。
ＡＡｍ／ＧＭＡ／ＥＧＤＭ／Ｈ２Ｏ＝０．１５／２．８３５／０．０１５／９０（ｇ）
それぞれの口には攪拌シールと攪拌棒、還流冷却管、セラムラバーを取り付けた。系を７
０℃の恒温槽に入れ、２００ｒｐｍで攪拌しながら系内を３０分間窒素置換した。その後
、水に溶かした重合開始剤であるＫＰＳ  ０．０６ｇを１０ｇの水に溶解し注射筒で系内
に注入した。この時点を重合開始時とし、所定時間後に注射筒を用いてＦｅＣｌ２・４Ｈ
２Ｏ水溶液（ＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ  ０．１６５ｇを水５ｇに溶解）を注入した。重合開
始１分後に適度な酸化力を得るためＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ＝０．１６５／５（ｇ）を加え、
２時間重合を行った。
【００４６】
作製した粒子は、遠心分離・再分散を蒸留水で４回繰り返し行うことで精製した。この際
、遠心分離は２０℃、１３５００ｒｐｍで行った。遠心分離を行った後、上澄みをデカン
テーションにより捨て、蒸留水を加え、ガラス棒により再分散を行って磁性体を含有する
粒子を得た。
【００４７】
（参考例９）
重合開始後、所定時間に下記物質を添加したこと、重合時間が３時間であること以外は参
考例８と同様に磁性体を含有する粒子を得た。
重合開始３０分後  ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ＝０．１６５／５（ｇ）
重合開始６０分後  ＫＰＳ／Ｈ２Ｏ＝０．１６５／５（ｇ）
【００４８】
（参考例１０）
重合開始後、所定時間に下記物質を添加したこと、重合時間が３時間であること以外は参
考例８と同様に磁性体を含有する粒子を得た。
重合開始６０分後  ＫＰＳ／Ｈ２Ｏ＝０．１６５／５（ｇ）、ＦｅＣｌ２・４Ｈ２Ｏ／Ｈ
２Ｏ＝０．０８８／５（ｇ）
重合開始１２０分後  ＧＭＡ＝０．５（ｇ）、ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ＝０．１６５／５（ｇ
）
【００４９】
（参考例１１）
重合開始後、所定時間に下記物質を添加したこと、重合時間が４時間であること以外は参
考例８と同様に磁性体を含有する粒子を得た。
重合開始１分後  ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ＝０．１６５／５（ｇ）
重合開始１２０分後  ＫＰＳ／Ｈ２Ｏ＝０．１６５／５（ｇ）
【００５０】
参考例８〜１１で得られた粒子に対し、ＴＥＭによる粒子の形態観察を行なった。
参考例９、１０は、いずれも、参考例８よりも多くの磁性体を含み、粒径が増大している
ことが認められた。また、参考例１１では、内部に参考例９、１０と同程度の磁性体を含
み、粒子表面がきれいな輪郭であることが観察された。
これまでの実験より、粒子成長の速い段階でＮＨ４ＯＨを加えることは、成長を阻害する
要因になっていることが推測された。一方、重合開始剤の後添加は、重合率がほぼ１００
％になり、また、２次粒子が形成されず粒子表面がポリマーで覆われていることが観察さ
れ、有効な手段であることが確認された。各参考例における粒子の磁性体の平均粒径を表
３に示した。
【００５１】
【表３】
2005241547.tif 000007
【００５２】
（実施例１）
参考例２で作製した磁性体を含有する粒子１．０ｇを１０％アンモニア水５０ｍＬに投入
し、７０℃で２０時間攪拌した。次いで、イオン交換水を用いて遠心洗浄を３回行い、５
０ｍＬのイオン交換水に分散させた。続いて、エチレングリコールジグリシジルエーテル
３０ｇを添加混合し、水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨを１１に調整した後、室温で
２４時間攪拌した。反応後、イオン交換水を用いて遠心洗浄を３回行い、エポキシ基を有
するリンカーが結合した本発明の磁性体内包粒子を得た。
【００５３】
更に、実施例１で得られた磁性体内包粒子から以下の方法により本発明の免疫測定用粒子
を作製した。
（免疫測定用粒子の作製）
実施例１で作製した磁性体内包粒子１２ｍｇに０．１Ｍホウ酸バッファーを１ｍＬを加え
、１５０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離を行い、上清を除去した。得られた沈渣に、０
．１Ｍホウ酸バッファーを３８０μＬ、抗α−ｈＣＧモノクローナル抗体溶液（５．０ｍ
ｇ／ｍＬ）を２０μＬ加え、十分混和して、室温にて２０時間攪拌した。反応液は１５０
００ｒｐｍにて１０分間遠心分離を行い、未反応の抗α−ｈＣＧモノクローナル抗体を除
去した。なお、磁性体内包粒子への抗α−ｈＣＧモノクローナル抗体結合量は、上清の蛋
白濃度測定から仕込みの５５％であることを確認した。得られた沈渣は１００ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬに懸濁させ、再度遠心分離を行った。その沈渣を１００ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に牛血清アルブミンを５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように溶
解した溶液９００μＬに懸濁させ、３７℃で１時間攪拌し、ブロッキング処理を行った。
その後１５０００ＲＰＭにて２０分間遠心分離を行い、沈渣に０．１Ｍホウ酸バッファー
を１ｍＬを添加し、超音波で分散させた。続いて、１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５
）に牛血清アルブミン及びグリセロールを各々５％（ｗ／ｖ）の濃度になるように溶解し
、更にアジ化ナトリウムを０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度になるように溶解した溶液１ｍＬ
に懸濁させ、免疫測定用粒子を得た。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明は、上述の構成よりなるので、疎水モノマーと親水性モノマーとを共重合して粒子
を形成する反応と、粒子内に金属イオンを取り込ませながら金属イオンを変性して磁性体
を形成する反応を同時に行い、磁性体を分散状態で含有する粒子とし、この表面にリンカ
ーを導入することにより、均一な磁性を有し、かつ、粒径分布の狭い磁性体内包粒子を得
ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】参考例２の粒子（平均粒径；粒子０．２１μｍ、磁性体５ｎｍ）のＴＥＭ写真である。
【図１】
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