(57)【要約】【課題】配糖体を高感度で、再現性よく、簡便な操作で、かつ高い精度で定量分析することができる、配糖体の分析方法及び配糖体の分析用キットを提供すること。【解決手段】少なくとも１種の配糖体を含有した試料を、親水性ポリエーテルスルホン膜上で展開し、分離された配糖体を該膜上で固定化することを特徴とする、配糖体類の分析方法、並びに親水性ポリエーテルスルホン膜と配糖体に特異的な試薬と配糖体中の糖部分を開環させうる試薬と配糖体を前記膜に固定化するに適したタンパク質と配糖体を分離するに適した展開溶媒とを含有した、該分析方法に用いるための配糖体の分析用キット。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の配糖体を含有した試料を、親水性ポリエーテルスルホン膜上で展開し、分離された配糖体を該膜上で固定化することを特徴とする、配糖体類の分析方法。
【請求項２】
（１）  親水性ポリエーテルスルホン膜において、分析対象の配糖体を含有した試料を展開して、それにより、試料中の配糖体をそれぞれ分離するステップ、
（２）  前記ステップ（１）で分離された配糖体を、該膜上に固定化するステップ、
（３）  前記ステップ（２）で固定化された配糖体を、該配糖体に特異的な試薬により検出するステップ、及び
（４）  前記ステップ（３）で検出された配糖体に対応するスポットの面積を測定するステップ、
を含む、請求項１記載の分析方法。
【請求項３】
分析対象の配糖体がジンセノシド類またはグリチルリチンである、請求項１又は２記載の分析方法。
【請求項４】
下記（Ａ）〜（Ｅ）
（Ａ）親水性ポリエーテルスルホン膜、
（Ｂ）配糖体に特異的な試薬、
（Ｃ）配糖体中の糖部分を開環させうる試薬、
（Ｄ）配糖体を前記（Ａ）の膜に固定化するに適したタンパク質、
（Ｅ）配糖体を分離するに適した展開溶媒、
を含有してなる、請求項１〜３いずれか１項に記載の分析方法に用いるための配糖体の分析用キット。
【請求項５】
分析対象の配糖体がジンセノシド類またはグリチルリチンである、請求項４記載の分析用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、配糖体の分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、タンパク質、ペプチド等の分析を行なう場合、該タンパク質、ペプチド等を、ポリアクリルアミドゲル等を用いた電気泳動により分離し、ナイロン膜やポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜へ転写して、当該膜上で抗原抗体反応により染色するウエスタンブロット法が繁用されている（非特許文献１）。しかしながら、前記ポリアクリルアミドゲル等を用いた電気泳動等は、ジンセノシド類、グリチルリチン等の配糖体類のような低分子化合物に対して、分離能が低いため、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を用いられているのが一般的である（非特許文献２）。
【０００３】
前記ＴＬＣは、前記配糖体の分離能に優れる。しかしながら、分析対象物である配糖体等の検出のための発色を容易に行なうことができない場合があり、ＴＬＣプレート上で、抗体を用いて、抗原抗体反応により直接染色することは極めて困難である。
【０００４】
前記ジンセノシド類は、種々の薬理活性を持つ人参固有の配糖体であり、医薬品の候補化合物、リード化合物と目されている重要な天然化合物である。しかしながら、薬用人参は、ジンセノシド類に類似した多種の配糖体を含有しているうえ、薬用人参中のジンセノシド類の含有量が低く、さらに産地、採取時期等により質的にも量的にも変動が大きいため、検出が困難である。
【非特許文献１】Proc. Natl. Acad. Sci. USA.,76, 4350-4354 (1979)
【非特許文献２】Chem. Phar. Bull., 22, 2407-2412 (1974)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の１つの側面は、配糖体を高感度で検出すること、再現性よく検出すること、簡便な操作で行なうこと、高い精度で定量分析すること等の少なくとも１つを可能にする、配糖体の分析方法を提供することにある。また、本発明の他の側面は、前記配糖体の分析方法を簡便に行なうことができる、配糖体の分析用キットを提供することにある。本発明の他の課題は、本明細書の記載から明らかである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち、本発明は、
〔１〕  少なくとも１種の配糖体を含有した試料を、親水性ポリエーテルスルホン膜上で展開し、分離された配糖体を該膜上で固定化することを特徴とする、配糖体類の分析方法、
〔２〕  （１）  親水性ポリエーテルスルホン膜において、分析対象の配糖体を含有した試料を展開して、それにより、試料中の配糖体を分離するステップ、
（２）  前記ステップ（１）で分離された配糖体を、該膜上に固定化するステップ、
（３）  前記ステップ（２）で固定化された配糖体を、該配糖体に特異的な試薬により検出するステップ、及び
（４）  前記ステップ（３）で検出された配糖体に対応するスポットの面積を測定するステップ、
を含む、前記〔１〕記載の分析方法、
〔３〕  分析対象の配糖体がジンセノシド類またはグリチルリチンである、前記〔１〕又は〔２〕記載の分析方法、
〔４〕  下記（Ａ）〜（Ｅ）
（Ａ）親水性ポリエーテルスルホン膜、
（Ｂ）配糖体に特異的な試薬、
（Ｃ）配糖体中の糖部分を開環させうる試薬、
（Ｄ）配糖体を前記（Ａ）の膜に固定化するに適したタンパク質、
（Ｅ）配糖体を分離するに適した展開溶媒、
を含有してなる、前記〔１〕〜〔３〕いずれか１項に記載の分析方法に用いるための配糖体の分析用キット、並びに
〔５〕  分析対象の配糖体がジンセノシド類またはグリチルリチンである、前記〔４〕記載の分析用キット、
に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の配糖体の分析方法によれば、配糖体、例えば、ジンセノシド類、グリチルリチン等を、高感度で、再現性よく、簡便に検出することができ、精度よく定量分析することができるという優れた効果を奏する。また、本発明の配糖体の分析用キットによれば、本発明の配糖体の分析方法を簡便に行なうことができ、配糖体、例えば、ジンセノシド類、グリチルリチン等を、高感度で、再現性よく、簡便に検出することができ、精度よく定量分析することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明は、ポリエーテルスルホン膜上に人参エキス、甘草エキスを供し、適切な展開溶媒で展開することにより、該ポリエーテルスルホン膜上で、ジンセノシド類、グリチルリチン等の低分子化合物の配糖体をそれぞれ分離することができるという本発明者らの驚くべき知見に基づく。
【０００９】
本発明の１つの側面は、少なくとも１種の配糖体を含有した試料を、親水性ポリエーテルスルホン膜上で展開し、分離された配糖体を該膜上で固定化することを特徴とする、配糖体類の分析方法である。
【００１０】
本発明の分析方法は、配糖体を含有した試料の展開及び分離に際し、親水性ポリエーテルスルホン膜が用いられているため、簡便な操作で配糖体を分析することができる。また、本発明の分析方法によれば、従来のウエスタンブロット法に基づく配糖体の分析方法のように、ポリアクリルアミドゲル等による電気泳動後、ゲル上の泳動パターンを、膜に転写する操作を行なうことなく、配糖体を分析することができるため、操作が簡便であり、全操作に要する時間も縮減することができる。また、本発明の分析方法では、前記親水性ポリエーテルスルホン膜が用いられているため、従来法の加熱・加圧によるＴＬＣ板から膜への全成分の転写ステップを回避することができ、膜への転写効率の影響を受けない精度の高い分析を行なうことができる。
【００１１】
前記親水性ポリエーテルスルホン膜は、孔サイズが、例えば、０．３〜１．０μｍのものであればよい。かかる親水性ポリエーテルスルホン膜は、例えば、ＰＡＬＬ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製、商品名：ＭｕｓｔａｎｇTMＥを、適切な手段により正に荷電するように処理し、シート状に加工することにより得られる。なお、本発明の分析方法においては、前記親水性ポリエーテルスルホン膜と同等の性質を有する膜、例えば、イオン交換能を有し、正に荷電し、孔サイズが、０．３〜１．０μｍの膜を用いてもよい。
【００１２】
本発明の分析方法により分析されうる配糖体としては、種々の配糖体が挙げられ、特に限定されないが、ジンセノシド類（例えば、ジンセノシドＲｂ１、ジンセノシドＲｃ、ジンセノシドＲｄ、ジンセノシドＲｅ、ジンセノシドＲｇ１、ジンセノシドＲｇ３ジンセノシドＭ１等）、グリチルリチン等が挙げられる。
【００１３】
前記ジンセノシド類は、例えば、下記式１：
【００１４】
【化１】
2005321318.tif 000002
【００１５】
により示される構造を有する化合物である。ここで、前記式１中のＲ1、Ｒ2及びＲ3は、前記ジンセノシドＲｂ１、ジンセノシドＲｃ、ジンセノシドＲｄ、ジンセノシドＲｅ及びジンセノシドＲｇ１に対応して、下記表１に示すとおりである。
【００１６】
【表１】
2005321318.tif 000003
【００１７】
一方、グリチルリチンは、下記式２：
【００１８】
【化２】
2005321318.tif 000004
【００１９】
により示される構造を有する化合物である。
【００２０】
本発明の分析方法は、具体的には、
（１）  親水性ポリエーテルスルホン膜において、分析対象の配糖体を含有した試料を展開して、それにより、試料中の配糖体を分離するステップ、
（２）  前記ステップ（１）で分離された配糖体を、該膜上に固定化するステップ、
（３）  前記ステップ（２）で固定化された配糖体を、該配糖体に特異的な試薬により検出するステップ、及び
（４）  前記ステップ（３）で検出された配糖体に対応するスポットの面積を測定するステップ、
により行なわれうる。
【００２１】
前記ステップ（１）で用いられうる試料としては、特に限定されないが、例えば、植物、具体的には、人参、甘草、柴胡、サフラン、大黄、Ｓｏｌａｎｕｍ属植物等の抽出物が挙げられる。
【００２２】
前記植物から配糖体を含有した試料を調製する手法としては、配糖体を分析可能な状態で抽出できる手法であれば、特に限定されないが、例えば、日本薬局方、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，４０４、２７９−２８２、（１９９２）等に記載の抽出法等が挙げられる。
【００２３】
試料中に含まれる配糖体を展開するための展開液としては、高極性溶媒であればよく、アセトニトリル、メタノール系溶媒が挙げられ、逆相クロマトグラフィー、分離（溶出）力の観点から、特にアセトニトリル系溶媒が好ましい。
【００２４】
前記ステップ（２）においては、前記ステップ（１）で得られた親水性ポリエーテルスルホン膜を、そのまま、配糖体の糖部分を開環させうる試薬、すなわち、配糖体の糖部分を酸化反応によりアルデヒド基とするに適した酸化反応試薬を用いて処理して、糖部分をアルデヒド基とし、該糖部分にタンパク質を付加して、ハプテン−タンパク複合体を形成させることにより、配糖体を、ポリエーテルスルホン膜上に固定化させる。
【００２５】
前記配糖体の糖部分を開環させうる試薬としては、過ヨウ素酸塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウム等）等が挙げられる。
【００２６】
酸化反応を行なう条件は、例えば、前記親水性ポリエーテルスルホン膜を、親水性ポリエーテルスルホン膜が浸る程度（例えば、２０〜３０ｍｌ）の量の過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）に浸漬し、室温（２５℃）で１時間インキュベーションすることなどが挙げられる。
【００２７】
前記ステップ（２）で用いられるタンパク質としては、配糖体を前記膜に固定化するに適し、前記酸化反応により生じた糖のアルデヒド基との結合（カップリング反応）に必須のアミノ基（−ＮＨ2）を有するリジン残基を含むタンパク質であればよく、特に限定されないが、例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、スキンミルク、ゼラチン等が挙げられ、リジン残基の数が多く、カップリング反応を効率よく行ないうる観点から、特にＢＳＡが好ましい。
【００２８】
前記ステップ（３）において、前記ステップ（２）で得られた膜上に固定化された配糖体と、分析対象の配糖体に対応する配糖体標品に特異的な試薬とを接触させ、配糖体を検出する。
【００２９】
前記配糖体標品に特異的な試薬としては、例えば、配糖体標品に特異的に結合する抗体、例えば、抗ジンセノサイド類抗体、抗グリチルリチンモノクローナル抗体等が挙げられる。
【００３０】
抗体を用いた場合、慣用の抗原抗体反応により、分析対象の配糖体を検出することができる。前記配糖体標品に特異的に結合する抗体に対する２次抗体、標識物質（例えば、酵素、蛍光物質）、必要により、発色性基質等を組み合わせて用いることができる。
【００３１】
前記標識物質として用いられる酵素としては、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等が挙げられる。
【００３２】
前記蛍光物質としては、例えば、５−ジメチルアミノナフタレンスルホニルクロリド等が挙げられる。
【００３３】
前記発色性基質としては、４−クロロ−１−ナフトール、ジアミノベンジジン、３−アミノ−９−エチルカルバゾール等が挙げられ、十分な検出感度を得る観点から、特に４−クロロ−１−ナフトール、ジアミノベンジジンが好ましい。
【００３４】
前記ステップ（４）において、前記ステップ（３）で検出されたスポットを、画像解析手段により分析し、かかる分析結果に基づき、スポット面積を数値化し、適切な計算手段、例えば、表計算ソフトを用いて、標準品の濃度、エリア面積をＸ軸及びＹ軸にとり、Ｘ軸のみ対数の検量線を作成することにより、配糖体を検出する。
【００３５】
前記画像解析手段は、例えば、
−  膜（６．３×９．０ｃｍ）を、２００ｄｐｉ、ＰＩＣＴファイル（保存形態）、８ビットグレイスケールで画像として取りこみ、
−  該画像について、Ｕｎｄｏ  ＆  Ｃｌｉｐｂｏａｒｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  Ｓｉｚｅで内部画像バッファーの大きさを３００Ｋに設定し、
−  得られた画像データについて、Ｆｌｏｙｄ−Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇのエラー拡散アルゴリズムのデフォルトパラメータで、画像全体のヒストグラムから閾値を設定して、画像中のスポットに対応する部分及びそれ以外の部分、すなわち、閾値以上の部分と、閾値以下の部分とに分離させ、
−  Ｓｍｏｏｔｈ機能により、画像のノイズを減少させ、
−  Ｍｉｎｉ  Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｅを設定せず、面積（Ａｒｅａ）、各スポットの長径（Ｅｌｌｉｐｓｅ  Ｍａｊｏｒ  Ａｘｉｓ）及び短径（Ｅｌｌｉｐｓｅ  Ｍｉｎｏｒ  Ａｘｉｓ）を選択するよう設定し、画像上の発色スポットを選択して、Ｐｉｘｅｌで、測定する
ことにより、発色スポットの数値化を行ない得る手段であればよい。なお、本発明の分析方法においては、前記画像解析手段として、例えば、ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ、ＬＩＡ３２、Ｉｍａｇｅ  Ｊ等又はこれらと同様の機能を有する汎用ソフトウェアが用いられうる。本発明においては、各スポットについて、前記画像解析手段により、面積を測定することで、再現性のある定量化を行なうことができる。具体的には、前記画像解析手段により、各スポットを白黒画像に変換し、黒に変換した部分のみの面積を測定すればよい。各スポットは歪な形態をし、一定した形ではないため、前記ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅは、ドット単位で測定し、測定エリアを細かく指定できることから、再現性よく測定できる点で有利である。
【００３６】
前記計算手段は、前記画像解析手段により得られた数値を元に、検量線を作成できる手段であればよく、例えば、マイクロソフト社製、商品名：Ｅｘｃｅｌ、ヒューリンクス社製、商品名：Ｋａｌｅｉｄａ  Ｇｒａｐｈ等又はそれらと同等の機能を有する手段が挙げられる。
【００３７】
本発明の分析方法により人参や甘草の配糖体、例えば、ジンセノシドＲｂ１、グリチルリチン等を分析する場合、例えば、
１）  人参や甘草の粗抽出エキスをポリエーテルスルホン膜にスポットし、適切な展開溶媒で展開し、
２）  ポリエーテルスルホン膜を過ヨウ素酸ナトリウム溶液中に浸漬し、次に、前記タンパク質溶液中に浸漬させて反応させ、ハプテン−タンパク複合体を形成させることにより配糖体類の膜への固定化し、
３）  膜を、抗ジンセノシドＲｂ１モノクローナル抗体、抗グリチルリチンモノクローナル抗体と接触させて抗原抗体反応を行なった後、ペルオキシダーゼ標識２次抗体、続いて過酸化水素、基質を加えて反応させ、配糖体を染色し、
４）  染色された各ジンセノシドおよびグリチルリチンのスポット面積を画像解析ソフトウェア及び表計算ソフトを用いて数値化し、
当該配糖体を定量分析することができる。
【００３８】
なお、本発明の分析方法では、植物体、例えば、薬用人参、甘草の組織、器官等の切片をポリエーテルスルホン膜で被うことにより、配糖体（例えば、ジンセノシド類、グリチルリチン等）を膜に移し、簡便に染色、定量（検出）することができる。かかる態様も本発明に含まれる。かかる態様の分析方法によれば、分析対象の配糖体を高い割合で含有した部位の検索が極めて迅速に行なうことができる点で有利である。
【００３９】
本発明の他の側面は、下記（Ａ）〜（Ｅ）
（Ａ）親水性ポリエーテルスルホン膜、
（Ｂ）配糖体に特異的な試薬、
（Ｃ）配糖体中の糖部分を開環させうる試薬、
（Ｄ）配糖体を前記（Ａ）の膜に固定化するに適したタンパク質、
（Ｅ）配糖体を分離するに適した展開溶媒、
を含有した、本発明の分析方法に用いるための配糖体の分析用キットである。
【００４０】
かかる分析用キットによれば、本発明の分析方法を簡便に行なうことができ、再現性の高い分析が可能になる。
【００４１】
なお、本発明の分析方法及び分析用キットは、糖脂質等、従来ＴＬＣにより分析されていた化合物の分析にも応用可能である。
【００４２】
以下、本発明を実施例により説明するが、本発明は、かかる実施例により限定されるものではない。
【実施例１】
【００４３】
（１）ジンセノシド類の展開
白人、紅人、ヒゲ人参、田七人参、アメリカ人参及び竹節人参それぞれの乾燥粉末５０ｍｇについて、メタノール１ｍ１を用いて、５回抽出操作を行なった。得られた抽出物  ５ｍｌを、遠心分離（１００００ｒｐｍ、２分間）した。その後、上清のメタノールを、窒素気流中で留去した。得られた残渣を、小量のメタノール（１０００μｌ）に溶解し、試料を得た。また、ジンセノシド類の標品（和光純薬株式会社製）を対照とした。
【００４４】
得られた試料  １μｌ及びジンセノシド類の標品（２ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．２５ｍｇ／ｍｌ）  １μｌをポリエーテルスルホン膜（商品名：ＭｕｓｔａｎｇTMＥ、ＰＡＬＬ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ製、大きさ：６．３ｃｍ×９．０ｃｍ、厚さ１４０μｍ、孔サイズ０．４５μｍ）にスポットした。
【００４５】
その後、前記ポリエーテルスルホン膜上の試料を、水：アセトニトリル：酢酸（体積比）＝７５：２５：１で５０分間展開した。
【００４６】
その後、ポリエーテルスルホン膜を、過ヨウ素酸ナトリウム溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）  ３０ｍｌ中に１時間浸漬させ、酸化反応を行なった。反応後、膜を水洗いし、１重量％  ＢＳＡ含有炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）に移し、３時間、配糖体の糖部分とＢＳＡとを反応させた。反応後、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．０）で洗浄した。非特異的結合を避けるために、膜を、スキンミルク−ＰＢＳ  ３０ｍｌで、３時間ブロッキングした。これらの一連の操作によりジンセノシド類を完全にポリエーテルスルホン膜へ固定化させた。
【００４７】
ついで、ポリエーテルスルホン膜と、抗ジンセノシドＲｂ１モノクローナル抗体（九州大学  薬学部  正山研究室にて作製）とを３時間反応させた。反応後の膜を、０．０５重量％  Ｔｗｅｅｅｎ２０（商品名）含有ＰＢＳ溶液  ２０ｍｌで洗浄し、該膜を、１０００倍希釈したペルオキシダーゼ標識抗マウスｌｇＧヤギ抗体（ＩＣＮ社製、商品名：ＰＥＲＯＸＩＤＡＳＥ−ＣＯＮＪＹＵＧＡＴＥＤ  ＧＯＡＴ  ＩＧＧ  ＦＲＡＣＴＩＯＮ  ＴＯ  ＭＯＵＳＥ  ＩＧＧ  ＦＣ−２ＭＬ）と、１時間反応させた。反応後、膜を、０．０５重量％  Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ  ２０ｍｌで洗浄し、基質の４−クロロ−１−ナフトール、ジアミノベンジジン等と過酸化水素とを用いて、４０分間維持して染色した。
【００４８】
その後、展開した膜を抗体染色した。結果を図１に示す。図中、白人は、レーンＩ、紅人は、レーンＩＩ、ヒゲ人参は、レーンＩＩＩ、田七人参は、レーンＩＶ、アメリカ人参は、レーンＶ、竹節人参は、レーンＶＩに示し、レーン１〜５は、ジンセノシドＲｂ１標品を示す。
【００４９】
その結果、図１に示されるようなスポットが得られた。かかる結果より、人参に固有なジンセノシド類が特異的に検出されていることがわかる。
【００５０】
（２）グリチルリチンの展開
刻西北甘草、刻灸西北甘草、刻灸西北甘草、東北甘草、刻西北甘草、光果甘草、脹果甘草及びウラル甘草それぞれの乾燥粉末３０ｍｇから、前記（1）と同様に、メタノール抽出により、試料を得た。得られた試料及びグリチルリチンの標品それぞれ  １μｌを前記ポリエーテルスルホン膜にスポットした。その後、前記ポリエーテルスルホン膜上の試料を、水：アセトニトリル：酢酸（体積比）＝７５：２５：１で５０分間展開した。
【００５１】
その後、前記（１）と同様の操作で、グリチルリチンをポリエーテルスルホン膜に固定化させ、抗グリチルリチンモノクローナル抗体（九州大学  薬学部  正山研究室にて作製）を用いて染色した。
【００５２】
結果を図２に示す。図中、刻西北甘草は、レーンＩ、刻灸西北甘草は、レーンＩＩ、刻灸西北甘草は、レーンＩｌｌ、東北甘草は、レーンＩＶ、刻西北甘草は、レーンＶ、光果甘草は、レーンＶＩ、脹果甘草は、レーンＶＩＩ、ウラル甘草は、レーンＶＩＩＩに示し、レーン１〜４は、グリチルリチンの標品を示す。
【００５３】
その結果、図２に示されるようなスポットが得られた。かかる結果より、甘草に固有のグリチルリチンが特異的に検出されていることがわかる。
【００５４】
（３）スポットの分析
前記（１）及び（２）で検出されたスポットについて、画像スキャナー（ＥＰＳＯＮ社製、商品名：ＧＴ−９７００Ｆ）を用いて、スキャン条件：白黒写真モード、解像度２００ｄｐｉでスキャンして、データをコンピューターに入力した。その後、各画像について、画像解析ソフトウェア（ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ）を用いて、単位をミリメーターとし、面積測定用の設定で、面積（Ａｒｅａ）、スポットの長径（Ｅｌｌｉｐｓｅ  Ｍａｊｏｒ  Ａｘｉｓ）及び短径（Ｅｌｌｉｐｓｅ  Ｍｉｎｏｒ  Ａｘｉｓ）の条件で数値化した。数値化されたデータについて、表計算ソフト（マイクロソフト社製、商品名：Ｅｘｃｅｌ）を用いて、Ｙ軸をＡｒｅａ、Ｘ軸を標品量（μｇ）の対数表示として、検量線を作成し、定量値を算出した。また、対照として、ＨＰＬＣにより定量した結果を示す。
【００５５】
なお、ＨＰＬＣの条件は、ジンセノイド類の場合、カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（商品名）  ５Ｃ１８（４．５×１５０ｍｍ、ナカライテスク社製）、溶離液：５０ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4含有３０％（体積）ＣＨ3ＣＮ（水：アセトニトリル＝７０：３０）、流速：１．０ｍｌ／分、検出：ＵＶ２０２ｎｍ、リテンションタイム：ジンセノシドＲｂ１について、８分、ジンセノシドＲｃについて、１０分、ジンセノシドＲｄについて、２３分であり、グリチリチンの場合、カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（商品名）  ５Ｃ１８（４．５×１５０ｍｍ、ナカライテスク社製）、溶離液：水：アセトニトリル：酢酸＝４５：３２：３、流速：０．５ｍｌ／分、検出：ＵＶ２５４ｎｍ、リテンションタイム：８分である。
【００５６】
結果を表２〜５に示す。表中、「ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ」は、試料について、前記ポリエーテルスルホン膜を用いた検出とＮＩＨ  Ｉｍａｇｅによる数値化とＥｘｃｅｌによる算出とにより分析した結果を示し、「ＨＰＬＣ」は、試料を、「ＨＰＬＣ」で分析した結果を示す。
【００５７】
【表２】
2005321318.tif 000005
【００５８】
【表３】
2005321318.tif 000006
【００５９】
【表４】
2005321318.tif 000007
【００６０】
【表５】
2005321318.tif 000008
【００６１】
その結果、「ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ」及び「ＨＰＬＣ」両方の数値が近似していた。したがって、前記ポリエーテルスルホン膜を用いた検出とＮＩＨ  Ｉｍａｇｅによる数値化とＥｘｃｅｌによる算出とにより、試料中の分析対象物を定量的に分析できることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明により、配糖体の簡便な定量分析が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００６３】
【図１】図１は、人参抽出物の配糖体の検出結果である。図中、白人は、レーンＩ、紅人は、レーンＩＩ、ヒゲ人参は、レーンＩＩＩ、田七人参は、レーンＩＶ、アメリカ人参は、レーンＶ、竹節人参は、レーンＶＩに示し、レーン１〜５は、ジンセノシドＲｂ１標品を示す。
【００６４】
【図２】図２は、甘草抽出物の配糖体の検出結果である。図中、刻西北甘草は、レーンＩ、刻灸西北甘草は、レーンＩＩ、刻灸西北甘草は、レーンＩｌｌ、東北甘草は、レーンＩＶ、刻西北甘草は、レーンＶ、光果甘草は、レーンＶＩ、脹果甘草は、レーンＶＩＩ、ウラル甘草は、レーンＶＩＩＩに示し、レーン１〜４は、グリチルリチンの標品を示す。
【図１】
2005321318.tif 000009
【図２】
2005321318.tif 000010