(57)【要約】【課題】異所性石灰化抑制剤をスクリーニングする方法を提供する。【解決手段】  簡便に作製することのできる異所性石灰化疾患モデルを提供する。更にＸ線ＣＴ技術を用いた動物の石灰化を評価する方法を提供する。これらを利用することにより、異所性石灰化抑制剤のスクリーニングを従来よりも簡便に行うことが可能となる。【選択図】  なし。【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物に起炎剤を注入することにより作製される異所性石灰化疾患モデル動物。
【請求項２】
動物がげっ歯類動物である請求項１記載の異所性石灰化疾患モデル動物。
【請求項３】
げっ歯類動物がラットである請求項２記載の異所性石灰化疾患モデル動物。
【請求項４】
起炎剤の注入部位が後肢である、請求項１〜３いずれか記載の異所性石灰化疾患モデル動物。
【請求項５】
起炎剤がMycobacterium butyricumである請求項１〜４いずれか記載の異所性石灰化疾患モデル動物。
【請求項６】
石灰化がアキレス腱において惹起されることを特徴とする請求項1〜５いずれか記載の異所性石灰化疾患モデル動物。
【請求項７】
下記の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法：
（ａ）動物に起炎剤を注入する工程、
（ｂ）被験物質を投与する工程、
（ｃ）石灰化の程度を評価する工程。
【請求項８】
工程（ａ）における動物がげっ歯類動物である請求項７記載のスクリーニング方法。
【請求項９】
工程（ａ）における動物がラットである請求項8記載のスクリーニング方法。
【請求項１０】
工程（ａ）における起炎剤がMycobacterium butyricumである請求項７〜９いずれか記載のスクリーニング方法。
【請求項１１】
工程（ｃ）における石灰化が、アキレス腱における石灰化である請求項７〜１０いずれか記載のスクリーニング方法。
【請求項１２】
工程（ｃ）における石灰化の程度の評価が、エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）を用いるものである請求項７〜１１いずれか記載のスクリーニング方法。
【請求項１３】
下記の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法：
（ａ）異所性石灰化疾患モデル動物を作製する工程、
（ｂ）被験物質を投与する工程、
（ｃ）石灰化の程度をエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）を用いて評価する工程。
【請求項１４】
エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）を用いることを特徴とする動物の石灰化の評価方法。
【請求項１５】
動物がげっ歯類動物である請求項１４記載の評価方法。
【請求項１６】
げっ歯類動物がラットである請求項１５記載の評価方法。
【請求項１７】
アキレス腱の石灰化を評価する請求項１６記載の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、異所性石灰化のモデル動物に関する。更に、本発明は、動物の石灰化を測定する評価方法および異所性石灰化を抑制する剤のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
異所性石灰化とは、正常では石灰化しない部位にリン酸カルシウムの結晶が沈着する状態を指す。異所性石灰化は脊椎損傷後、股関節形成術後、後縦靭帯骨化症（OPLL）等で認められる疾患であり、有効な治療薬はあまりない。異所性石灰化を抑制する治療薬をスクリーニングするためには、適切な疾患モデル動物と石灰化の評価方法が必須である。
【０００３】
これまでに異所性石灰化のモデル動物としては、Zucker fatty ラットおよびttwマウスとかが知られている（非特許文献１、２、３）。Zucker fatty ラット（遺伝性肥満ラット）はアキレス腱（4ヶ月以上）や脊柱靭帯（14ヶ月以上）に骨化巣形成が見られる。ttwマウス（自然発症マウス）は椎間板の変化が著しく、脊柱靭帯の石灰化巣形成の評価は困難である。このように、既知の異所性石灰化のモデル動物は、作製するのが非常に難しく、作製に非常に時間がかかることから、簡便に作製できる異所性石灰化のモデル動物は知られていない。
【０００４】
また、当該疾患モデル動物の石灰化を評価する方法としては、Ｘ線を用いて平面的に調べる方法（非特許文献４）、あるいは病理学的に調べる方法が知られているが、非常に手間がかかり、数値化した客観的な評価は困難である。また、(i)ラットに新鮮な骨幹骨を脱灰して得た骨基質を同種のラットの筋肉内に移植すると骨基質の産生とその石灰化が観察される系を用い、骨芽細胞の活性指標であるアルカリフォスファターゼ活性を測定する方法、(ii)ラットにビタミンＤを大量に投与することにより誘導される腎臓の石灰化が誘導される系を用い、腎臓中のカルシウム濃度を測定する方法も知られているが、これらの方法も決して簡便な評価方法とは言えない。そのため、簡便で短期に石灰化を評価することができる新たな評価方法が求められている。
【非特許文献１】米田  知二、東医大誌、51(3)、300-310、1993）
【非特許文献２】彦根  亮  他、整形外科、44(8)増刊、1107-1113、1993
【非特許文献３】Yasuhiro Hosoda 他、TheRyumachi、21(Suppl)、157-164、1981
【非特許文献４】東医大誌、51(3)、300-310、1993
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、短期間で作製できる異所性石灰化疾患モデル動物、石灰化の簡便な評価方法、および異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明者らは、上記の課題を解決すべく、石灰化、特に異所性石灰化を観察できる疾患モデル動物を作製すべく鋭意検討した。その結果、慢性関節炎リュウマチの疾患モデル動物のひとつであるアジュバント関節炎ラットにおいてアキレス腱が石灰化していることを新たに見出し、異所性石灰化のモデル動物として用いることができることを明らかにした。本モデル動物は、既存の異所性石灰化動物モデルであるZucker fatty ラットおよびttwマウスと比べて、動物入手が容易であり、モデル作製が短期間にできること、およびモデル作製が簡便であるという優れた利点を有する。
【０００７】
更に、本発明者らは、異所性石灰化疾患モデル動物における石灰化の評価方法を検討し、エックス線ＣＴ（computed tomography）技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Computed Tomography）を利用することによって評価できることを見いだした。具体的には、エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Computed Tomography）を利用した動物研究用の骨密度測定装置を用いることにより、アキレス腱の石灰化を検出することが可能であることを見いだした。本発明である動物の石灰化の評価方法は、従来の評価方法と比べて評価方法が簡便であり、3次元的に石灰化を評価することができるため正確であるという優れた特徴を有する。
本発明者は、これらの知見を用いることにより石灰化抑制剤のスクリーニングを行うことができることを確認し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明の要旨は、以下に示される。
［１］動物に起炎剤を注入し、石灰化を惹起させることを特徴とする、異所性石灰化疾患モデル動物、
［２］動物がげっ歯類動物である前記［１］記載の異所性石灰化疾患モデル動物、
［３］げっ歯類動物がラットである前記［２］記載の異所性石灰化疾患モデル動物、
［４］起炎剤の注入部位が後肢である、前記［１］〜［３］いずれか記載の異所性石灰化疾患モデル動物、
［５］起炎剤がMycobacterium butyricumである前記［１］〜[４］記載の異所性石灰化疾患モデル動物、
［６］石灰化がアキレス腱において惹起されることを特徴とする前記［１］〜［５］いずれか記載の異所性石灰化疾患モデル動物、
［７］下記の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法：
（ａ）動物に起炎剤を注入する工程、
（ｂ）被験物質を投与する工程、
（ｃ）石灰化の程度を評価する工程、
［８］工程（ａ）における動物がげっ歯類動物である前記［７］記載のスクリーニング方法、
［９］工程（ａ）における動物がラットである前記［８］記載のスクリーニング方法、
［１０］工程（ａ）における起炎剤がMycobacterium butyricumである前記［７］〜［９］いずれか記載のスクリーニング方法、
［１１］工程（ｃ）における石灰化が、アキレス腱における石灰化である前記［７］〜［１０］いずれか記載のスクリーニング方法、
［１２］工程（ｃ）における石灰化の程度の評価が、エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）を用いるものである前記［７］〜［１１］いずれか記載のスクリーニング方法、
［１３］下記の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法：
（ａ）異所性石灰化疾患モデル動物を作製する工程、
（ｂ）被験物質を投与する工程、
（ｃ）石灰化の程度をエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）を用いて評価する工程、
［１４］エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）を利用することを特徴とする動物の石灰化の評価方法、
［１５］石灰化量を体積骨密度（mg/cm3）として検出する前記［１４］記載の評価方法、
［１６］骨密度測定機器XCT-960Aを用いる前記［１４］または［１５］記載の評価方法、
［１７］動物がげっ歯類動物である前記［１４］〜［１６］いずれか記載の評価方法、
［１８］げっ歯類動物がラットである前記［１７］記載の評価方法、
［１９］アキレス腱の石灰化を評価することを特徴とする前記［１８］記載の評価方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の異所性石灰化疾患モデルは既存の異所性石灰化疾患モデルと比べて簡便に作製することができる。また、本発明のエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を利用した石灰化の測定方法によって該疾患モデルの石灰化が３次元的に容易に評価することができるため、従来に比べて簡便且つ正確に異所性石灰化抑制剤の評価をすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明における「異所性石灰化」とは、異所性石灰化の症状を示す疾患であればよい。例えば、ヒトにおいては脊椎損傷後の石灰化、股関節形成術後の石灰化、および後縦靭帯骨化症（OPLL）等を挙げることができるが、これらに特に限定されない。
本発明における「異所性石灰化抑制剤」とは、上記の異所性石灰化疾患の症状を緩和、抑制するものであれば特に限定されず、当該症状としては、具体的には軟部組織の石灰化等が挙げられる。
本発明における「異所性石灰化疾患モデル動物」とは、人における異所性石灰化疾患の１または複数の症状を呈する動物を表す。
「動物」としては、起炎剤を投与することが可能であれば、その種類、年齢、性別等、特に限定されないが、例えば、ウサギ、マウス、モルモット、ラット等の哺乳動物、好ましくはげっ歯類動物、特に好ましくはラットが挙げられる。
【００１１】
本発明における「起炎剤」とは、乾燥結核死菌  Mycobacterium.tuberculosis 、乾燥結核死菌（脱脂菌体、細菌壁、ペプチドグリカン、Wax）D、Streptococcus pyogenesの細胞壁由来のcarbohydrate-peptidoglycan complex 、Mycobacterium.tuberculosis H37Ra、乾燥牛酪死菌  Mycobacterium butyricum などを挙げることができるが、これらに限定されない。好ましくはMycobacterium butyricumを挙げることができ、複数の成分を含有していても良い。
【００１２】
本発明における「エックス線ＣＴ技術」とは、従来のエックス線装置がエックス線の透視像をそのまま忠実に描出する平面的ものであるのに対して、多方向からの一元投影データを基にコンピューターによる画像の再構成を行うもので、横断画像を描出することができる。
本発明における「ｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）」とは、従来の腰椎などの体幹部骨密度の測定装置であるQCT法を、前腕骨や脛骨などの末梢骨の骨密度を測定する目的で開発された測定法のことである。
本発明における「XCT-960A」とは、株式会社エルクコーポレーションの定量的ＣＴ骨密度測定機器XCT-960Aのことである。
【００１３】
以下に、本発明の実施の態様について詳細に説明する。
本発明の第１の態様は、動物に起炎剤を注入することにより作製される異所性石灰化疾患モデル動物である。本発明の異所性石灰化疾患モデル動物の作製方法を、以下に具体的に詳しく述べる。
異所性石灰化疾患モデルの作製方法
（１）石灰化の惹起
本発明の異所性石灰化疾患モデル動物は、以下の工程で作製される。すなわち、動物に、起炎剤を溶媒に懸濁した注射液を注入することによって作製することができる。
ここで、起炎剤を懸濁する溶媒としては、例えば、流動パラフィン、鉱物油（Bayol F,Drakeol）、生理食塩液などを挙げることができ、好ましくは流動パラフィンが挙げられる。起炎剤の濃度は、例えば0.1〜100mg/ml、好ましくは1〜20ug/ml、特に好ましくは2.5〜7.5mg/mlの濃度で溶媒に懸濁すればよい。注入する部位は、例えば前肢、後肢、尾、腹腔内などを挙げることができるが、好ましくは後肢が挙げられる。
また、起炎剤の投与量は、特に限定されないが、例えば、0.1〜10ml、好ましくは0.1〜1.0ml、特に好ましくは0.1〜0.2mlである。起炎剤の投与回数は、石灰化が惹起できる回数であればよく、例えば、１回〜複数回であり、好ましくは1回である。通常は１回のみ投与する。
【００１４】
（２）石灰化の評価
上記の処置を行った動物について、起炎剤の投与から一定日数経過後に解剖を行えば、石灰化症状が起こっていることが確認できる。具体的には、例えば、後肢に起炎剤を投与した場合はアキレス腱に石灰化症状が起っていることが確認できる。石灰化の評価時期は、石灰化が起っていればよく、特に限定はされない。例えば、起炎剤投与から14日〜63日、好ましくは起炎剤投与から21日〜35日後に石灰化を評価することができる。通常は、動物に起炎剤投与から3週間後に解剖を行い、石灰化を評価する。
【００１５】
上記の処置を行った動物の石灰化は、公知の異所性石灰化疾患モデル動物の評価方法、あるいは、下記の本発明の第２の態様であるエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いた石灰化評価方法で評価することができる。公知の異所性石灰化疾患モデル動物の評価方法とは、具体的には、Ｘ線を用いた評価方法、病理学的に評価する方法を挙げることができる。
Ｘ線を用いた石灰化の評価方法は、米田の方法が挙げられる（東医大誌、51(3)、300-310、1993）。具体的には、軟X線所見から、石灰化をスコア付けして評価をすることができる。例えば、あきらかな石灰化陰影のないものを0点、点状石灰化陰影を有するものを1点、石灰化陰影がアキレス腱前後径1/4〜1/2のものを2点、アキレス腱前後径の1/2に達する石灰化陰影を有するものを3点というようにスコア付けをする。
病理学的に石灰化を評価する方法は、渡辺らの方法が挙げられる（東医大誌、60(1)、29-39、2002）。具体的には、未脱灰の組織を樹脂包埋し、von Kossa染色を実施して、石灰沈着を確認することによって評価をすることができる。
【００１６】
本発明の第２の態様は、エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いて石灰化症状を評価する方法である。本発明の石灰化の評価方法を、以下に具体的に詳しく述べる。
Ｘ線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いた動物の石灰化評価方法
（１）動物
石灰化が惹起されているモデル動物であれば、本発明の異所性石灰化疾患モデル動物の他、公知の異所性石灰化疾患モデル動物であってもよい。公知の石灰化モデル動物としては、例えば、Zucker fatty ラットおよびttwマウスを挙げることができる。Zucker fatty ラットではアキレス腱（米田  知二、東医大誌、51(3)、300-310、1993）や脊柱靭帯（彦根  亮  他、整形外科、44(8)増刊、1107-1113、1993）に骨化巣形成が認められ、ttwマウス（自然発症マウス）では脊柱靭帯の石灰化巣形成が認められることが知られており（Yasuhiro Hosoda 他、TheRyumachi、21(Suppl)、157-164、1981）、これらの疾患モデル動物の作製方法も公知である。
【００１７】
（２）石灰化評価方法
本発明のエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いた石灰化の評価方法とは、摘出組織のエックス線ＣＴ技術を利用して得られた横断画像から、海綿骨と皮質骨様を区別して物理量である体積骨密度（mg/kg）を石灰化量として解析することによって評価をする方法のことである。
具体的には、例えば、本発明である異所性石灰化疾患モデル動物の石灰化を評価する場合は、後肢に起炎剤を投与した場合はアキレス腱に石灰化が起っているため、後肢を摘出し、摘出した後肢アキレス腱の石灰化量をエックス線ＣＴ装置であるｐＱＣＴ装置（XCT-960A）を用いて0.6mm間隔で5回測定し、骨塩密度解析プログラムによりそれぞれの断面画像の関心領域（ROI）に占める海綿骨骨塩密度（trabecular  density）を算出してアキレス腱石灰化量とする。
動物の石灰化の評価はｐＱＣＴ（peripheral Quantitative Tomography）法を用いた市販の骨塩密度測定装置を用いることによって行うことができる。装置はｐＱＣＴ法を用いて動物の石灰化を測定できる装置であれば良く、例えば株式会社エルクコーポレーションのXCT-960A、XCT Research SA, XCT Research M, XCT 3000 Researchなどを挙げることができるが、好ましくはXCT-960Aを挙げることができる。
【００１８】
本発明の第３の態様は、上記の本発明である異所性石灰化疾患モデル動物を用いたスクリーニング方法である。
本発明の異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む方法によって実施することができる：
（ａ）動物に起炎剤を注入する工程、
（ｂ）被験物質を投与する工程、
（ｃ）石灰化の程度を評価する工程。
【００１９】
本発明の異所性石灰化疾患モデル動物を用いた異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法を、以下に具体的に詳細に述べる。
異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法
（１）動物
上記の本発明の異所性石灰化疾患モデル動物を用いる。
石灰化が惹起されているモデル動物を一匹単独で用いることもできるが、通常、動物個体差による誤差をできるだけ小さくするために、対照群を設けたり、複数の動物を用いてもよい。通常、正常動物群、異所性石灰化発症コントロール群、異所性石灰化発症薬物投与群に分けられる。
（２）刺激剤注射
上記と同じ方法で、刺激剤を（１）の異所性石灰化発症群の動物に注射する。
【００２０】
（３）被験物質の投与
被験物質の投与方法、および投与量は特に限定されない。具体的には、ラット用ゾンデを用いて被験物質のメチルセルロース懸濁液を強制経口投与する方法、被験物質の生理食塩水溶液等を用いて静脈注射する方法、腹腔内投与する方法、または皮下投与する方法などが挙げられる。本スクリーニング方法においては、被験物質投与群と共にコントロール群を設けても良い。
ここで、コントロール群には、被験物質を含まない投与液を同一の方法で投与する。例えば、被験物質を0.5％メチルセルロース懸濁液として経口投与する場合、コントロール群には0.5％メチルセルロース懸濁液のみが経口投与される。
ここで被験物質の投与時間、投与回数は、何ら限定されるものではないが、1日あたり1〜2回投与することが好ましい。被験物質の投与期間は特に限定されないが、連続して7〜28日間投与することができる。また、被験物質の投与開始時期については、特に限定されず、石灰化発症前から予防的に投与するのであってもよいし、石灰化発症後に投与を開始するのでもよい。好ましくは石灰化惹起当日から18日後の間に薬物投与を開始し、以後18日〜35日間連続投与する。更に好ましくは、石灰化惹起日から連続28日間投与する。
【００２１】
（４）一般症状の観察
一般症状は検疫期間中および投与開始後は毎日1回の頻度で、全動物について観察する。観察項目としては、体重の増減等が挙げられ、これらは被験動物の健康状態を表わす指標として用いることもできる。
（５）石灰化の評価
最終投与翌日に石灰化を引き起こしている組織の石灰化の程度を上記の石灰化の評価方法にて評価する。石灰化の評価方法はいずれの方法を用いても良く、例えば、公知の石灰化評価方法であるＸ線を用いた評価方法、病理学的に評価する方法、または本発明のエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いた石灰化評価方法を挙げることができるが、本発明のエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いた石灰化評価方法が好ましい。
具体的には、本発明の異所性石灰化疾患モデル動物の石灰化の程度を、上記の公知の石灰化評価方法あるいは本発明の石灰化評価方法で評価することによって異所性石灰化抑制剤のスクリーニングを実施することができる。
【００２２】
本発明においては、エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法により石灰化が評価できることを初めて見出した。
従って、本発明の異所性石灰化抑制剤のスクリーニング方法は、次の工程（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を含む方法も包含するものである：
（ａ）異所性石灰化疾患モデル動物を作製する工程、
（ｂ）被験物質を投与する工程、
（ｃ）石灰化の程度をエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法（peripheral Quantitative Tomography）を用いて評価する工程。
【００２３】
異所性石灰化疾患のモデル動物は、例えば、上記の公知の異所性石灰化疾患モデル動物であるZucker fatty ラット、ttwマウス、および本発明の異所性石灰化疾患モデル動物を挙げることができるが、好ましくは本発明の異所性石灰化疾患モデル動物である。
エックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いた石灰化評価は上記の方法で実施することができる。具体的には、異所性石灰化疾患モデル動物の石灰化が起っている組織を採取し、石灰化部位の石灰化の程度をエックス線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いて評価することによってスクリーニングを実施することができる。
実施例で詳述するように、本発明の異所性石灰化抑制剤のスクリーニングを用いれば、石灰化を抑制する剤を簡便に評価をすることができる。
【００２４】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２５】
アジュバント関節炎モデル動物の作製
検疫期間中に順調な体重の増加を示したラット（Lewis、雄、6週令）にメノウ鉢で完全に粉砕した100mgの  Mycobacterium butyricum  を20mlの流動パラフィンに懸濁後、0.2ml/animalを右側後肢足蹠皮下に投与し、関節炎を惹起した。惹起後17日目に体重および左側後肢容積を用い、１群8匹に群分けした。
【００２６】
被験物質の投与
エチドロネートは生理食塩液に溶解させ20mg/mlの濃度に調製した。被験物質水溶液を背部皮下に投与した。コントロール群には生理食塩液のみを投与した。投与液量はいずれの群においても0.1ml/100g体重とした。投与は原則として午前中に行った。投与期間は関節炎惹起17日目から10日間実施した。
被験物質としてビスフォイスフォネート化合物であるエチドロネート（エチドロン酸二ナトリウム）を評価した。
【００２７】
一般的所見
一般症状：検疫期間中および投与開始後は毎日1回の頻度で、全動物について観察した。
体重：動物購入当日および群分け時に全動物について実施した。検疫期間中は週に3回の頻度で、全動物について実施した。投与期間中は投与前に毎日測定した。
上記の結果、健常と認められる個体を実験に供した。
【００２８】
アキレス腱での石灰化の評価
最終投与翌日に注射側後肢を採取し、8％-ホルムアルデヒド溶液で固定後、後肢を軟Ｘ線写真撮影装置（SR0-M50）を用い、40キロボルト、4ミリアンペア、2分の撮影条件でFRフィルム（フジフィルム社製）に撮影後、写真上のアキレス腱の石灰化陰影を肉眼で確認後、ｐＱＣＴ装置（XCT-960A）を用いてアキレス腱石灰化部位の骨塩密度測定を実施し、解析プログラムにより関心領域設定（ROI）あたりの海綿骨（trabecular）骨塩密度を解析し、この値を石灰化量とした。
【００２９】
結果
既知の炎症疾患モデルであるアジュバント関節炎ラットにおいてアキレス腱に石灰化が認められ、ｐＱＣＴ法を用いた骨塩密度測定装置（XCT-960A）で簡便に定量的に石灰化を測定することができた（図２）。アキレス腱の石灰化量は、コントロール群では266.7mg/cm3であったのに比較して、エチドロネート投与群では142.77mg/cm3であり、エチドロネートの石灰化抑制作用が確認できた（図1）。
以上の結果から、アジュバント関節炎ラットのアキレス腱が石灰化していることが明らかとなったため、本疾患モデルを異所性石灰化疾患モデルとして用いることが可能であることが判明した。また、Ｘ線ＣＴ技術によるｐＱＣＴ法を用いて異所性石灰化疾患モデル動物の石灰化量を簡便に解析することができることも判明した。これらを用いて異所性石灰化抑制剤のスクリーニングを実施することが非常に有用であることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明の異所性石灰化疾患モデルは簡便に作製することができる異所性石灰化疾患モデルとして有効であり、Ｘ線CT技術を利用した動物の石灰化の評価方法は石灰化症状を3次元的に容易に評価することができる。これらを用いることにより、従来に比べて簡便に異所性石灰化抑制剤のスクリーニングを実施することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】異所性石灰化疾患モデル動物（アジュバント関節炎ラット）におけるアキレス腱石灰化に対するエチドロネートの石灰化抑制効果を石灰化密度として示した図である（n=8）。
【図２】後肢のエックス線CT断面図。（a）脛骨とアキレス腱の石灰化部位。（b）アキレス腱石灰化部位拡大図。円の中央は高値の石灰化部位、円の濃色部分は低値の石灰化部位である。
【図１】
2005087082.tif 000002
【図２】
2005087082.tif 000003