(57)【要約】  【課題】  本発明は、顕微鏡による観測中に試料がずれることを防止できるずれ防止シート、及びそのような部材を用いた顕微鏡を提供することを目的とする。  【解決手段】  顕微鏡を用いた測定の際に試料のずれを防止するために、試料を入れる試料容器とその試料容器を搭載する試料容器搭載ステージとの間に置かれるずれ防止シートであって、その両面の少なくとも一部にずれ防止手段を有するずれ防止シートなど。  【選択図】図３
2005141002.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
顕微鏡を用いた測定の際に試料のずれを防止するために、試料を入れる試料容器とその試料容器を搭載する試料容器搭載ステージとの間に置かれるずれ防止シートであって、その両面の少なくとも一部にずれ防止手段を有するずれ防止シート。
【請求項２】
中空円状である請求項１に記載のずれ防止シート。
【請求項３】
ずれ防止手段が、接着性樹脂からなる部分である請求項１に記載のずれ防止シート。
【請求項４】
少なくともひとつの面の粘着力が、１０ｇｆ／１０ｍｍ〜１０００ｇｆ／１０ｍｍである請求項１に記載のずれ防止シート。
【請求項５】
ずれ防止手段が、接着部材である請求項１に記載のずれ防止シート。
【請求項６】
直径が、６０ｍｍ〜６４．９ｍｍ、又は３５ｍｍ〜３９．９ｍｍの中空円状である請求項１に記載のずれ防止シート。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載のずれ防止シートを具備する顕微鏡。
【請求項８】
前記顕微鏡はガラスボトムディッシュを搭載するための円筒状の凹部をステージ上に有し、当該凹部に前記ずれ防止シートを設置する請求項７に記載の顕微鏡。
【請求項９】
請求項７又は請求項８に記載の顕微鏡による測定方法。
【請求項１０】
請求項７又は請求項８に記載の顕微鏡を用いた生物試料の測定方法
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、顕微鏡測定試料のずれを防止、又は軽減するためのずれ防止シート、そのようなずれ防止シートを含む顕微鏡、そのような顕微鏡を用いた生物試料の測定方法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
顕微鏡で試料を測定する場合、観測対象は動かないことが好ましい。このため、例えば、装置のゆれに由来する試料のずれを防ぐ耐震ベンチを用いた光学顕微鏡が市販されている（カール  ツァイス  イエナ  ゲゼルシャルト  ミット  ベシュレンクテル  ジャフツング社  ＬＳＭ５１０  ＭＥＴＡなど）。図１を用いて従来の顕微鏡の一例を説明する。図１に示されるように、従来の顕微鏡１は、例えば観測する試料を搭載するステージ２と、ステージ位置調整部３と、図示しない対物レンズと、接眼レンズ４等を含んでいる。そして、耐震ベンチを用いた顕微鏡などでは、顕微鏡の周囲が振動しても耐震ベンチにより測定系がずれないように工夫されている。
【０００３】
顕微鏡によりある試料を観察する方法として、試料をガラス基板（スライドグラス）上に載せ、その上にカバーガラスなどの薄いガラス板をかぶせて、試料を観察する方法がある。このような測定の場合に、ガラス基板が動くことを防ぐために、ガラス基板（スライドグラス）に圧力を加え押さえるアームが用いられる。
【０００４】
生物の蛍光観察などに用いる光学顕微鏡の中には、温度を一定に保つなどのために、試料を搭載したガラスボトムディッシュを、顕微鏡のステージ上に設けられた凹部に埋め込むタイプのものがある。図２（ａ）は、試料を搭載するガラスボトムディッシュ５と、顕微鏡のステージ上に設けられたガラスボトムディッシュ用の凹部６の様子を示す図である。そして、凹部６の直径は、ガラスボトムディッシュを設置した後に取り出すことを考慮して、ガラスボトムディッシュ５に比べて余裕を持つように設計される。したがって、図２（ｂ）に示すように、従来の光学顕微鏡では、凹部６の径とガラスボトムディッシュ５の径との差に起因する隙間７ができる。光学顕微鏡などを用いて生物の蛍光測定をする際、通常マイクロメートルオーダーの領域を観測し、１μｍ程度の領域を測定することもある。従来の光学顕微鏡では、試料を含むガラスボトムディッシュを埋め込む部分に隙間があるため、測定中に試料がどうしてもずれてしまい、適切な測定ができないという問題があった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、顕微鏡による観測中に試料がずれることを防止できるずれ防止シート、及びそのような部材を用いた顕微鏡を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明は、ガラスボトムディッシュを用いる顕微鏡などにおいて、ガラスボトムディッシュを挿入する凹部内に設置することにより、ガラスボトムディッシュがずれることを防止するずれ防止シート、及びそのような部材を用いた顕微鏡や、そのような顕微鏡を用いた生物試料の測定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題の少なくともひとつは、以下の発明により解決される。
（１）  第１の発明は、顕微鏡を用いた測定の際に試料のずれを防止するために、試料を入れる試料容器とその試料容器を搭載する試料容器搭載ステージとの間に置かれるずれ防止シートであって、その両面の少なくとも一部にずれ防止手段を有するずれ防止シートである。この発明によれば、顕微鏡による測定の際に、試料がずれる事態を防止することができる。このため、特に生物試料の観察のように、測定領域が狭い場合でも、試料のずれを防止して、適切に測定することができる。
（２）  第１の発明の好ましい態様は、中空円状である上記（１）に記載のずれ防止シートである。このような形状であれば、ガラスボトムディッシュを用いた観察の際に、ガラスボトムディッシュがずれることを防止できる。
（３）  第１の発明の好ましい別の態様は、ずれ防止手段が、接着性樹脂からなる部分である上記（１）に記載のずれ防止シートである。
（４）  第１の発明の好ましい別の態様は、少なくともひとつの面の粘着力が、１０ｇｆ／１０ｍｍ〜１０００ｇｆ／１０ｍｍである上記（１）に記載のずれ防止シートである。この程度の粘着性があれば、ガラスボトムディッシュがずれる事態を防止でき、またずれ防止シートを顕微鏡から取り外すこともできる。なお、このような粘着性を得るためには、例えばずれ防止手段として、粘着性のあるもの（例えば、表面に接着剤や接着性樹脂などが塗布されているもの）を採用すればよい。このような粘着性のあるずれ防止手段を用い、試料をずれ防止手段に押し付けると、試料とずれ防止手段との接着性が高まるので、試料がずれる事態をより効果的に防止できる。
（５）  第１の発明の好ましい別の態様は、ずれ防止手段が、接着部材である上記（１）に記載のずれ防止シートである。接着部材としては、公知の接着剤を用いることができ、これにより試料がずれる事態を防止できる。
（６）  第１の発明の好ましい別の態様は、直径が、６０ｍｍ〜６４．９ｍｍ、又は３５ｍｍ〜３９．９ｍｍの中空円状である上記（１）に記載のずれ防止シートである。この大きさであれば、現在市販されているガラスボトムディッシュのずれ防止に効果的に用いることができる。
【０００８】
（７）  第２の発明は、上記（１）〜（６）のいずれかに記載のずれ防止シートを具備する顕微鏡である。このような顕微鏡であれば、特に生物試料を観察する場合に、試料がずれる事態を防止することができる。したがって、このような顕微鏡は、特に生物試料を観察する際に好適に用いられることとなる。
（８）  好ましい第２の発明の態様は、ガラスボトムディッシュを搭載するための円筒状の凹部をステージ上に有し、当該凹部に前記ずれ防止シートを設置する上記（７）に記載の顕微鏡である。
【０００９】
（９）  第３の発明は、上記（７）又は（８）に記載の顕微鏡による測定方法、及びこのような顕微鏡を用いた生物試料の測定方法である。ずれ防止シート、及びずれ防止シートを具備する顕微鏡を用いることにより、測定中に試料が動く事態を軽減できる。
（１０）  第３の発明の好ましい別の態様は、上記（７）又は（８）に記載の顕微鏡を用いた生物試料の測定方法である。光学顕微鏡などを用いて生物試料の蛍光測定をする際、通常マイクロメートルオーダーの領域を観測し、１μｍ程度の領域を測定することもある。試料が動かなければ、このような補正を行う必要がなく、作業負担が軽減できる。また、試料が動かない方が、データの信憑性が高まる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、顕微鏡による観測中に試料がずれることを防止できるずれ防止シート、及びそのような部材を用いた顕微鏡を提供することができる。
【００１１】
本発明によれば、試料がずれることを防止できるずれ防止シート、特にガラスボトムディッシュを用いる顕微鏡において、ガラスボトムディッシュを挿入する凹部内に設置することにより、ガラスボトムディッシュがずれることを防止するずれ防止シート、そのような部材を用いた顕微鏡や、そのような顕微鏡を用いた生物試料の測定方法を提供することができる。これにより、特に生物試料の経時測定を適切に行うことができるようになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明の実施の形態を図面に基づいて詳細に説明する。図３は、本発明のずれ防止シートの例を示す図である。
【００１３】
本発明のずれ防止シートの形状は、特に限定されるものではないが、図３（ａ）に示されるように、中空円状のものや、図３（ｂ）のように円状のものが挙げられ、好ましくは図３（ａ）に示されるような中空円状のものである。円状のものでは、顕微鏡による測定の際に、測定光が、本発明のずれ防止シートを通過することとなり、測定データにずれ防止シートによる影響が現れるが、中空円状のものではこのような事態が発生しないためである。
【００１４】
ずれ防止シートの厚さは、比較的薄く、ほぼ均一な厚さを有するものであれば特に限定されるものではなく、公知の厚さを有する接着樹脂シートなどを用いることができる。ずれ防止シートの厚さとして、好ましくは０．０１ｍｍ〜５ｍｍであり、より好ましくは０．１ｍｍ〜２ｍｍであり、更に好ましくは０．２ｍｍ〜０．５ｍｍであり、特に好ましくは０．３５ｍｍである。一般的に、光学顕微鏡は、所定の光路距離を計算し、設計されているので、ずれ防止シートがあまりに厚いと、この距離がくるうなどの問題があるからである。
【００１５】
ずれ防止シートが、中空円状や、円状のものである場合、ずれ防止シートの直径は、凹部の直径と同じか、又は凹部の直径よりも小さいものであれば特に限定されるものではない。ずれ防止シートの直径が凹部の直径と同じであれば、ずれ防止シートを凹部に設置することが容易ではない。一方、ずれ防止シートの直径が凹部の直径に比べてあまりに小さければ、ずれ防止効果がそれほど期待できないし、ガラスボトムディッシュの安定性が悪くなる。したがって、ずれ防止シートの直径は、凹部の直径に比べて、好ましくは０．１ｍｍ〜５ｍｍ小さく、より好ましくは０．５ｍｍ〜３ｍｍ小さく、特に好ましくは１ｍｍ〜２ｍｍ小さいものが挙げられる。ずれ防止シートの具体的な直径としては、ガラスボトムディッシュの直径としては６０ｍｍ、３５ｍｍのものが挙げられる。そして、顕微鏡の凹部の直径は、６５ｍｍや４０ｍｍ程度のものがあるので、ずれ防止シートの直径としては、それらの直径よりも先に説明した程度小さな直径を有するものが挙げられる。
【００１６】
ずれ防止シートが中空円状である場合、そのくりぬかれた円の直径は、特に限定されるものではないが、ガラスボトムディッシュに設けられるホール部（観測部）の直径よりも大きなものが挙げられる。このような大きさであれば、顕微鏡による観測の際に、ずれ防止シートが常に観測されないので、ずれ防止シートが観測像に及ぼす影響を排除できる。
【００１７】
ずれ防止シートの少なくともひとつの面には、ずれ防止手段が設けられている。上記の「少なくともひとつの面」とは、ずれ防止シートの面のうち、顕微鏡の一部と接触する面と、試料容器と接触する面の片方又は両方の面を意味する。これらの面は、実質的に同一の物理的性質や化学的性質をもつ面であっても良いし、異なる物理的性質や、異なる化学的性質をもつ面であっても良い。「顕微鏡の一部と接触する面」における「顕微鏡の一部」としては、ガラスボトムディッシュを設置するための試料容器搭載ステ―ジ上に設けられた凹部の底などが挙げられる。「試料容器と接触する面」における「試料容器」としては、公知の顕微鏡による測定用の試料容器が挙げられ、例えば、ガラスボトムディッシュなどが挙げられる。
【００１８】
ずれ防止手段の例としては、ずれ防止シートの少なくともひとつの面が接着性樹脂により成形されるものや、ずれ防止シートの少なくともひとつの面の表面にずれ防止加工を施し表面が特殊な物理形状を採るものや、ずれ防止シートの少なくともひとつの面が接着部材であるものなどが挙げられる。
【００１９】
図４に、ずれ防止シート表面形状や、ずれ防止シートの構成の例を示す。ずれ防止シートの形状は、特に限定されるものではないが、図４（ａ）に示されるように複数のプリズム９がシートに搭載され、又はシートと一体成形されているものや、図４（ｂ）のように複数の矩形部１０がシートに搭載され、又はシートと一体成形されているものや、図４（ｃ）のように複数の柱状凸部１１がシートに搭載され、又はシートと一体成形されているものなどが挙げられる。柱状凸部の形状としては、円柱状、角柱状等公知の形状を選択することができる。ずれ防止シートの構成は、図４（ｄ）に示されるようにシート部１２と接着部材部１３とを含むものであっても良い。接着部材は、ずれ防止シートの両面に設けられていても良いし、片面のみに設けられていても良い。
【００２０】
ずれ防止シートの色は、特に限定されるものではないが、顕微鏡を用いた測定に影響を与えない色が好ましい。したがって、ずれ防止シートの色は、好ましくは無色透明、白色、灰色、有色透明であるが、より好ましくは無色透明、白色であり、特に好ましくは無色透明である。
【００２１】
ずれ防止シートの硬さとしては、特に限定されるものではないが、例えばアスカーＣ硬度計により５°〜２０°のものが挙げられ、好ましくは１０°〜１８°であり、より好ましくは1２°〜１６°であり、特に好ましくは１４°である。
【００２２】
ずれ防止シートの表面の粘着力としては、特に限定されるものではないが、好ましくは１０ｇｆ／１０ｍｍ〜１０００ｇｆ／１０ｍｍでり、より好ましくは１００ｇｆ／１０ｍｍで〜５００ｇｆ／１０ｍｍである。この程度の粘着性があれば、ガラスボトムディッシュがずれる事態を防止でき、またずれ防止シートを顕微鏡から取り外すこともできるからである。なお、この粘着力については、公知のピックアップ式タックメーターにより測定することができる。
【００２３】
ずれ防止シートの材質は、特に限定されるものではなく、プラスチック、金属などを用いることができ、好ましくはプラスチックである。ずれ防止シートに用いられるプラスチックとしては、例えば、アクリロニトリルブタジエンスチレン共重合体（Acrylonitrile-Butadiene-Styrene resin）、アクリル酸エステルゴム（Acrylic acid ester rubber）、アクリロニトリル塩素化ポリエチレンスチレン共重合体（Acrylonitrile-Chlorinated polyethylene-Ctyrene）、アタクチックポリプロピレン（Atactic Polypropylene）、アクリロニトリルスチレン共重合体（Acrylonitrile-Styrene copolymer）、アクリロニトリルスチレンアクリレート（Acrylonitrile-Styrene-Acrylate）、二軸延伸ポリプロピレン（Biaxially Oriented Polypropylene）、シス1・4ポリブタジエンゴム（Cis-1,4 polybutadiene rubber）、塩素化ポリエチレン（Chlorinated Polyethylene）、クロロプレンゴム（Chloroprene-Rubbe）、エチレンメタクリル酸（Ethylene Methacrylic Acid）、エポキシ樹脂（Epoxy resin）、エチレンプロピレンジエン三元共重合体（Ethylene-Propylene-Diene Methylene linkage）、エチレン酢酸ビニル共重合体（Ethylene-Vinylacetate copolymer）、イソプレンゴム（Isoprene Rubber）、メチルメタクリレートブタジエンスチレン共重合体（Methyl Methacrylate-Butadiene-Styrene Resin）、ポリアミド（PolyAmide）、ポリブタジエンアクリルニトリル（Polybutadiene Acrylonitrile）、ポリ-n-ブチルメタクリレート（Poly-n-ButylMethAcrylate）、ポリブタジエンスチレン（Polybutadiene Styrene）、ポリブチレンテレフタレート（Polybutylene Terephthalate）、ポリカーボネート（PolyCarbonate）、ポリエチレン（PolyEthylene）、ポリエチレンテレフタレート（PolyEthyleneTerephthalate）、ポリメタクリル酸メチル（アクリル）（PolyMethylMethAcrylate）、ポリプロピレン（Polypropylene）、ポリプロピレン共重合体（Polypropylene Copolymer）、ポリビニルアルコール（PolyVinylAlcohol）、ポリ酢酸ビニル（PolyVinylAcetate）、ポリビニルブチラール（PolyVinylButyral）、アクリロニトリルスチレン共重合体（Styrene-AcryloNitrile copolymer）、スチレンブタジエンゴム（Styrene-Butadiene Rubber）、スチレンブロック共重合体（Styrenic-Block-Copolymers）、スチレンブタジエンスチレンブロック共重合体、スチレンイソプレンスチレンブロック共重合体、エチレンエチルアクリレート（Ethylene-Ethyl-Acrylate）、エチレン酢酸ビニル共重合体（Ethylene-Vinylacetate copolymer）などが挙げられ、これらの樹脂は単独で用いられても、２種以上を組み合わせて用いられてもよい。ずれ防止シートの材質としては、好ましくは公知の接着性プラスチックであり、特に好ましくはエチレンエチルアクリレート（Ethylene-Ethyl-Acrylate）、エチレン酢酸ビニル共重合体（Ethylene-Vinylacetate copolymer）である。なお、ずれ防止シートの材質としては、熱安定剤、可塑剤、滑剤、酸化防止剤、充填剤、顔料など公知の樹脂添加物を配合しても良い。
【００２４】
ずれ防止シートの少なくとも片面に接着部材を設ける場合の接着部材としては、特に限定されることはなく、例えば公知の粘着テープに用いられている接着部材を用いることができる。また、接着部材として、ブチル系ゴムなどの粘土状の素材（例えば、商品名Ｍｒペタリという粘土素材）を用いてもよい。
【００２５】
ずれ防止シートとしては、ずれ防止手段の設けられている面が汚れ、ずれ防止手段のずれ防止能力（粘着力など）が落ちた場合であっても、布や水を含ませた綿棒などで洗浄することにより、ずれ防止能力（粘着力など）が回復するものが好ましい。このような、ずれ防止シートであれば、顕微鏡に装着したまま、使用することができ、頻繁にずれ防止シートを取り替える必要がないという利点があるからである。
【００２６】
ずれ防止シートの製造方法は、特に限定されず、金属フィルムやプラスチックフィルムなどに関する公知の製造方法を採用することができる。ずれ防止シートの製造方法としては、好ましくは引き出し成形、押出し成形、射出成形、カレンダー成形によりシートを形成し、そのシートを加工する成形が挙げられる。また、市販の樹脂シートをはさみやカッターなどで形状を整えて、ずれ防止シートとしてもよい。
【００２７】
図５に、本発明のずれ防止シートの利用方法を示す概略図を示す。本発明のずれ防止シートの利用方法としては、図５（ａ）に示されるように、本発明のずれ防止シート８を、凹部６内にはまるように設置し、その後、試料容器であるガラスボトムディッシュ５をステ―ジ上の凹部６内に設置する方法が挙げられる。
【００２８】
図５（ｂ）は、本発明のずれ防止シート８をステ―ジ上の凹部６内に設置した際のずれ防止シートと凹部との関係の一例を表す図である。図５（ｂ）に示されるように、本発明のずれ防止シート８は、凹部６内にはまるように設置される。
【００２９】
図５（ｃ）は、図５（ｂ）に続いて、凹部６にガラスボトムディッシュ５を設置した際の、凹部６、ずれ防止シート８、及びガラスボトムディッシュ５の関係の一例を表す図である。図５（ｂ）に示されるように、ガラスボトムディッシュ５の少なくとも一部は、ずれ防止シート８と接触する。ずれ防止シート８の摩擦効果によりガラスボトムディッシュ５のずれが防止される。したがって、顕微鏡による測定の際、ガラスボトムディッシュ５中の試料がずれる事態を防止でき、又は試料のずれを少なくできるのでより正確に観測できることとなる。
【００３０】
本発明のずれ防止シートを具備する顕微鏡としては、公知の顕微鏡を用いることができる。このような顕微鏡としては、試料をガラス基板（スライドグラス）上に載せ、その上にカバーガラスなどの薄いガラス板をかぶせるタイプのものや、ステージ上にガラスボトムディッシュを埋設するための凹部を有する顕微鏡が挙げられ、好ましくは後者である。後者の例としては、光学顕微鏡や、共焦点レーザー走査式顕微鏡などが挙げられる。
【００３１】
本発明のずれ防止シートを具備する顕微鏡は、あらゆる試料を観測する際に好ましく用いることができ、生物試料の測定に好適に用いることができ、特に長時間にわたる生物資料の測定に好適に用いることができる。すなわち、本発明のずれ防止シートを搭載した顕微鏡を用いた生物試料の測定方法は、測定中に試料がずれる事態を防止して適切な測定が可能となる。本発明のずれ防止シートを搭載した顕微鏡を用いた生物試料の測定方法（本発明の測定方法）は、特に限定されるものではなく、生きている細胞の測定や、死んでいる細胞の測定などあらゆる生物試料の測定が挙げられ、例えば長時間（例えば1時間以上）測定を行うものが挙げられ、より具体的には、ＦＲＥＴ、ＦＲＡＰ、ＦＬＩＰを用いた生物試料の測定方法などが挙げられる。
【００３２】
ＦＲＥＴとは、蛍光共鳴エネルギー移動を意味し、蛍光波長がある程度近接している２種類の蛍光分子が近接している状況の下で、励起された蛍光分子（ドナー）の光エネルギーが、残りの蛍光分子（アクセプター）に移動する現象である。この現象を利用すれば、細胞内の微小な変化を把握することができる。このＦＲＥＴ測定においては、経時変化をも測定することが通常であるから、本発明の測定方法は、長時間にわたるＦＲＥＴ測定に際して予期しない試料のずれを防ぐことができるため好ましい。
【００３３】
ＦＲＡＰとは、蛍光褪色後蛍光回復を意味する。ＦＲＡＰ測定においては、褪色させていない特定の領域外から蛍光プローブが移動すると、褪色させた領域の蛍光が回復する。この様子を経時的に測定することにより、分子などが移動する様子を蛍光により可視化して観測できる。本発明の測定方法は、長時間にわたるＦＲＡＰ測定に際して予期しない試料のずれを防ぐことができるため好ましい。
【００３４】
ＦＬＩＰとは、褪色蛍光消失を意味する。ＦＬＩＰ測定は、特定の領域を繰り返し褪色させ、この領域と別の領域における蛍光が消失する様子を観測し、分子などが移動する様子を測定する方法である。本発明の測定方法は、長時間にわたるＦＬＩＰ測定に際して予期しない試料のずれを防ぐことができるため好ましい。
【００３５】
以上のとおり、本発明の生物試料の測定方法として、具体的にＦＲＥＴ、ＦＲＡＰ、ＦＬＩＰを挙げたが、先に説明したとおり、本発明の測定方法は、ずれ防止シート、及びずれ防止シートを具備する顕微鏡を用いることにより、測定中に試料が動く事態を軽減するものであれば、これらの測定方法に限定されるものではない。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）ずれ防止シートの作成
株式会社エクシールコーポ製のスーパークリアタックシート（Ｔ・Ｇシート）から、外径４０ｍｍ内径３５ｍｍの略中空円状の形状を有するシートをはさみにて切り出した。スーパークリアタックシートは、ＰＥＴシートの両面にウレタンによる接着層を設け、その上に表面保護層としてＰＥＴ薄膜を設けたものである。
スーパークリアタックシートの硬度は、アスカーＣ硬度計による測定で１４°、粘着力は２７０ｇｆ／１４ｍｍであり、表面粗さは♯８０であった。
【００３７】
（実施例２）ずれ防止シートを具備した顕微鏡、及びそのような顕微鏡を用いた生物試料の測定
カール  ツァイス  イエナ  ゲゼルシャルト  ミット  ベシュレンクテル  ジャフツング社製の蛍光顕微鏡ＬＳＭ５１０  ＭＥＴＡのステージ上の凹部の底面に、実施例１で製造したずれ防止シートを設置し、新たな顕微鏡を製造した。
ガラスボトムディッシュに、ＧＦＰ（Green Fluorescent Protein）を発現させたヒトの細胞を固定した。このガラスボトムディッシュを先の顕微鏡に設置した。その後、ヒト細胞に波長が４８８ｎｍであるアルゴンレーザーを照射して、２マイクロメートル四方の領域の蛍光を褪色させた。図６は、レーザーによりある領域の蛍光を褪色させたヒト細胞である。その後、３００秒毎に試料を観測した。
【００３８】
特に図示しないが、レーザーにより蛍光を褪色した部位の角の地点をＲＯＩ１とし、その部位から１マイクロメートル離れた地点をＲＯＩ２とした。蛍光強度は、測定時間が経過すると弱くなる。したがって、ＲＯＩ２は、経時変化により蛍光強度が弱くなることについての参照点である。
【００３９】
図７に、ヒト細胞の蛍光測定結果を示す。図７では、ＲＯＩ１の初期蛍光強度を１００とし、ＲＯＩ２の蛍光強度の変化を補正値として用い、補正後のＲＯＩ１の蛍光強度を示す。図７からわかるように、蛍光強度は８０００秒経過後もほぼ一定であり、試料がずれていないことがわかる。なお、ヒト細胞上の蛍光を褪色した部位のずれは、最大で０．７μｍであった。
【００４０】
（比較例１）
ずれ防止シートを用いなかった以外は、実施例２と同様にしてヒト細胞の蛍光観察を行い（図８）、蛍光強度の経時変化を観察した（図９）。図８中、○１で表される点は、ＲＯＩ１に対応し、○２で表される点は、ＲＯＩ２に対応する。その結果、補正後の蛍光強度は、測定とともに弱まり、約３０００秒経過後は、低いおよそ一定の値となった。この測定結果は、測定とともに、試料がずれ、３０００秒経過後は、測定点が完全にヒト細胞上の蛍光を褪色した部分に変わったことに由来する。すなわち、ずれ防止シートを用いない観測では、測定試料が測定中にずれることが確認された。なお、ヒト細胞上の蛍光を褪色した部位のずれは、最大で３．６μｍであった。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のずれ防止シートは、顕微鏡による測定の際に測定対象試料が動くことを防止できるので、公知の顕微鏡に利用し、その測定精度を向上させることができる。
本発明のずれ防止シートは、通常の顕微鏡に用いることができることは勿論のこと、特に生物試料の観測に用いられる顕微鏡（例えば、ガラスボトムディッシュを用いる顕微鏡など）に好適に用いることができる。
【００４２】
本発明のずれ防止シートを具備する顕微鏡は、測定精度が高く、補正の必要がなくなるため、公知の測定方法のために用いることができ、特に生物試料を用いた長時間にわたる微小領域の測定用に好適に用いることができる。
【００４３】
本発明のずれ防止シートを具備する顕微鏡を用いた測定方法は、測定中に観測対象試料が動く事態を軽減できるため、あらゆる試料の測定精度を上げることができ、また補正を行う負担を軽減できる。このような測定方法は、特に長時間にわたる測定が必要で、かつ微小領域を観測する生物試料の測定方法に好適に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】図１は、従来の顕微鏡の一例を示す図である。
【図２】図２は、試料を搭載するガラスボトムディッシュと、顕微鏡のステージ上に設けられたガラスボトムディッシュ用の凹部の関係を示す図である。図２（ａ）は、ガラスボトムディッシュを、凹部６に設置した様子を示す図である。図２（ｂ）は、ガラスボトムディッシュを凹部に設置した際のガラスボトムディッシュと凹部の関係を表す図である。
【図３】図３は、本発明のずれ防止シートの例を示す図である。図３（ａ）は、中空円状のものを、図３（ｂ）は、円状のものを表す。
【図４】図４は、ずれ防止シート表面形状や、ずれ防止シートの構成の例を示す図である。図４（ａ）は複数のプリズムがシートに搭載され、又はシートと一体成形されているもの、図４（ｂ）は複数の矩形部がシートに搭載され、又はシートと一体成形されているもの、図４（ｃ）は複数の柱状凸部がシートに搭載され、又はシートと一体成形されているものの例を示す。図４（ｄ）は、シート部と接着部材部とを含むずれ防止シートの例を示す。
【図５】図５は、本発明のずれ防止シートの利用方法を示す図である。図５（ａ）は、本発明のずれ防止シートの設置方法の例を示す。図５（ｂ）は、ずれ防止シートをステ―ジ上の凹部内に設置した際のずれ防止シートと凹部との関係の一例を表す図である。図５（ｃ）は、図５（ｂ）に続いて、凹部にガラスボトムディッシュを設置した際の、凹部、ずれ防止シート、及びガラスボトムディッシュの関係の一例を表す図である。
【図６】図６は、実施例２における、ある領域の蛍光をレーザーにより褪色させたヒト細胞の図面に代わる写真である。
【図７】図７は、実施例２におけるヒト細胞の蛍光測定結果を表すグラフである。
【図８】図８は、比較例１における、ある領域の蛍光をレーザーにより褪色させたヒト細胞の図面に代わる写真である。
【図９】図９は、比較例１におけるヒト細胞の蛍光測定結果を表すグラフである。
【符号の説明】
【００４５】
１  顕微鏡
２  ステージ
３  ステージ位置調整部材
４  接眼レンズ
５  ガラスボトムディッシュ
６  ステ―ジ上の凹部
７  ステ―ジ上の凹部とガラスボトムディッシュとの間隔
８  ずれ防止シート
９  プリズム
１０  矩形部
１１  突起部
１２  シート部
１３  接着部材部
１４  ヒト細胞
１５  蛍光を褪色した部位
【図１】
2005141002.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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