(57)【要約】【課題】  本発明は、試料の内部の微生物又は細胞の温度を高い精度で測定する方法を提供することを目的とする。【解決手段】  以下の(i)〜(iii)の工程を含む、試料の内部に存在する微生物又は細胞の温度を測定する方法：(i)蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞内に存在せしめる工程、(ii)前記試料中の微生物又は細胞に励起光を照射し、前記蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程、及び(iii)予め測定しておいた蛍光強度と温度との関係から前記試料中の微生物又は細胞の温度又は温度変化を求める工程。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料の内部に存在する微生物又は細胞の温度を測定する方法であって、
(i)蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞内に存在せしめる工程
、
(ii)前記試料中の微生物又は細胞に励起光を照射し、前記蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程、及び
(iii)予め測定しておいた蛍光強度と温度との関係から前記試料中の微生物又は細胞の温
度又は温度変化を求める工程、
を含有する温度測定方法。
【請求項２】
試料が生物であり温度測定対象が細胞であって、上記工程(i)が、蛍光タンパク質をコー
ドした遺伝子を細胞に導入し、当該細胞に該蛍光タンパク質を発現させる工程である、請求項１に記載の温度測定方法。
【請求項３】
蛍光タンパク質が、EGFP又はDsRedである、請求項２に記載の温度測定方法。
【請求項４】
試料の内部の微生物又は細胞の温度を制御する方法であって、
(i)蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞内に存在せしめる工程
、
(ii)前記試料中の微生物又は細胞に励起光を照射し、上記蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程、
(iii)予め測定しておいた蛍光強度と温度との関係から前記試料中の微生物又は細胞の温
度又は温度変化を確認する工程、及び
(iv)工程(iii)で確認した温度又は温度変化に基づいて、微生物又は細胞が目的温度とな
るように温度制御を行う工程、
を含有する温度制御方法。
【請求項５】
試料の内部の微生物又は細胞の温度を制御する方法であって、
(i)蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞内に存在せしめる工程
、
(ii)前記試料中の微生物又は細胞に励起光を照射し、上記蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程、
(iii)予め測定しておいた蛍光強度と温度との関係から前記試料中の微生物又は細胞の温
度又は温度変化を確認する工程、
(iv)工程(iii)で確認した温度又は温度変化に基づいて、微生物又は細胞が目的温度とな
るような温度制御条件を設定する工程、及び
(v)工程(iv)で設定した温度制御条件で、前記試料の内部の微生物又は細胞の温度を制御
する工程、
を含有する温度制御方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、温度測定方法に関する。より詳細には、試料の内部の微生物又は細胞の温度を測定する方法に関する。また、本発明は、温度制御方法、より詳細には、対象物の内部の微生物又は細胞の温度を制御する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の科学技術のめざましい進展により、各種の技術分野でマイクロスケールの微小領域における局所分析の必要性が高まっている。特に、赤外線照射技術によって、被測定物中の特定の微小領域のみを正確に加熱することが可能となっており、それに伴って、当該特定領域の温度を測定・制御する技術の開発が待たれている。
【０００３】
特に、遺伝子工学の分野では、熱ショックプロモーターの下流に発現させたい目的の遺伝子を有している遺伝子組み換え動物（トランスジェニック動物）を作成した場合、特定の細胞（領域）のみに目的遺伝子を発現させたい場合には、目的の細胞だけに熱を与えて、その他の細胞は加熱されないように制御することが求められる。このような場合に、微小領域における三次元的（空間的）な温度分布を正確に測定し、制御する手段が不可欠である。
【０００４】
しかしながら、試料の内部、特に生物試料の内部を細胞単位の微小領域で、温度を高い精度で測定する手段については未だ確立されていないのが現状である。また、これまでに、温度に依存して蛍光強度が変化する蛍光物質を用いて試料表面の温度を測定する方法は報告されているが（例えば、特許文献１等参照）、これを微小領域における三次元的（空間的）な温度分布の測定、制御に適用することについては知られていない。
【特許文献１】特開２００１−２７２２７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで本発明の目的は、上記従来技術の課題を解決することである。より詳細には、本発明は、試料の内部の微小領域（微生物又は細胞）の温度を高い精度で測定する方法を提供することを目的とするものである。また、本発明は、試料内部の微生物又は細胞の温度を制御する方法を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討したところ、蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞に存在せしめ、該蛍光物質より発せられる蛍光強度を測定することにより、試料の内部の測定対象領域の温度を正確に測定できることを見出した。本発明はかかる知見に基づいて、更に検討を重ねて開発されたものである。
【０００７】
即ち、本発明は、下記に掲げる温度測定方法である。
項１．  試料の内部に存在する微生物又は細胞の温度を測定する方法であって、
(i)蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞内に存在せしめる工程
、
(ii)前記試料中の微生物又は細胞に励起光を照射し、前記蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程、及び
(iii)予め測定しておいた蛍光強度と温度との関係から前記試料中の微生物又は細胞の温
度又は温度変化を求める工程、
を含有する温度測定方法。
項２．  試料が生物であり温度測定対象が細胞であって、上記工程(i)が、蛍光タンパク
質をコードした遺伝子を細胞に導入し、当該細胞に該蛍光タンパク質を発現させる工程である、項１に記載の温度測定方法。
項３．  蛍光タンパク質が、EGFP又はDsRedである、項２に記載の温度測定方法。
【０００８】
また、本発明は、下記に掲げる温度制御方法である。
項４．  試料の内部の微生物又は細胞の温度を制御する方法であって、
(i)蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞内に存在せしめる工程
、
(ii)前記試料中の微生物又は細胞に励起光を照射し、上記蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程、
(iii)予め測定しておいた蛍光強度と温度との関係から前記試料中の微生物又は細胞の温
度又は温度変化を確認する工程、及び
(iv)工程(iii)で確認した温度又は温度変化に基づいて、微生物又は細胞が目的温度とな
るように温度制御を行う工程、
を含有する温度制御方法。
項５．  試料の内部の微生物又は細胞の温度を制御する方法であって、
(i)蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の微生物又は細胞内に存在せしめる工程
、
(ii)前記試料中の微生物又は細胞に励起光を照射し、上記蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程、
(iii)予め測定しておいた蛍光強度と温度との関係から前記試料中の微生物又は細胞の温
度又は温度変化を確認する工程、
(iv)工程(iii)で確認した温度又は温度変化に基づいて、微生物又は細胞が目的温度とな
るような温度制御条件を設定する工程、及び
(v)工程(iv)で設定した温度制御条件で、前記試料の内部の微生物又は細胞の温度を制御
する工程、
を含有する温度制御方法。
【０００９】
以下、本発明の実施の形態を詳細に説明する。
（１）温度測定方法
本発明の温度測定方法において、試料とは、温度測定の対象となる微生物又は細胞を内部に含有するものである。当該試料は、照射する励起光と発する蛍光を透過可能であることを限度として、特に制限されない。当該試料の具体例として、生物；生体組織；微生物又は細胞を含有する高分子材料等を挙げることができる。かかる生物としては、例えば、線虫、ショウジョウバエ、魚類、ホヤ、カエル、マウス、ラット等の遺伝子導入可能な実験動物が例示される。また、かかる生体組織としては、例えば、上記実験動物の組織又は組織切片を挙げることができる。また、微生物又は細胞を含有する高分子材料としては、微生物又は細胞を包理したアクリルアミドゲル等が例示される。これらの中で、生物及び生体組織は、好適な試料である。
【００１０】
本発明において、上記試料内部に存在する細胞又は微生物の温度を測定対象とする。本発明では、上記試料内部の一個の細胞又は一個の微生物を個別に測定できる。例えば、試料が生物である場合、生物中に存在する一つの特定の細胞の温度だけを測定することができる。
【００１１】
本発明の温度測定方法は、第一の工程として、蛍光強度が温度に依存する蛍光物質を試料中の細胞又は微生物内に存在せしめる工程に供する。
【００１２】
本発明で使用される蛍光物質としては、蛍光強度が温度に依存する有機化合物であれば
、その別を問わない。特に、蛍光強度の温度依存性が高い蛍光物質は、温度変化を高い感度で検知できるので好適に使用できる。
【００１３】
当該蛍光物質の具体例として、緑色蛍光タンパク質（EGFP；Enhanced Green Fluorescent Protein）、赤色蛍光タンパク質（DsRed；Discoma sp. Red Fluorescent Protein）等の蛍光タンパク質、並びにローダミンＢ、Ｃｙ３、フルオレセイン（fluorecein）、テトラメチルローダミン（tetramethylrhodamine）等の蛍光団を持つ蛍光有機化合物を例示できる。これらの蛍光物質の中で、好ましくは蛍光タンパク質、特にEGFP及びDsRedを挙げ
ることができる。
【００１４】
蛍光タンパク質は、遺伝子工学的手段を利用することにより、測定対象となる微生物又は細胞内で産生させることができる点で利点がある。EGFPを用いる場合であれば、２５〜６０℃程度において、１℃程度の温度変化を正確に検知できる。また、DsRedを用いる場
合であれば、２５〜７０℃程度において、１℃程度の温度変化を正確に検知できる。また、Ｃｙ３を用いる場合であれば、１５〜９５℃程度において、１℃程度の温度変化を正確に検知することができる。
【００１５】
温度測定対象となる細胞又は微生物が試料内部に存在する位置については、上記蛍光物質が発する蛍光強度を外部から測定可能であることを限度として特に限定されないが、通常、試料の表面から１００μｍ以内であることが望ましい。但し、観察に２光子レーザ顕微鏡を用いる場合等は、５００μｍ以内の位置にまで範囲を広げることも可能である。
【００１６】
上記試料中の細胞又は微生物内に上記蛍光物質を存在させる方法としては、試料の種類、測定対象の種類、蛍光物質の種類に応じて適宜好ましい手段を採用すればよく、試料に損傷等の悪影響を与えずに、蛍光強度を測定可能な量の上記蛍光物質を細胞又は微生物に存在させることを限度として特に制限されない。例えば、上記蛍光物質を細胞又は微生物内に直接注入する方法等を挙げることができる。この様な方法として、具体的には、蛍光物質を細胞又は微生物内に微小ガラス管で注入する方法（マイクロインジェクション法）が例示される。また、蛍光物質として、蛍光タンパク質を使用する場合であれば、上記蛍光タンパク質をコードした遺伝子を細胞又は微生物内に導入しておき、当該細胞又は微生物に該蛍光タンパク質を発現させる方法が挙げられる。かかる方法として、具体的には、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、リポソーム法、エレクトロポレーション法等により、細胞又は微生物内に上記蛍光タンパク質をコードした遺伝子を導入し、発現させる方法が例示される。
【００１７】
本発明では、次いで、前記試料中の細胞又は微生物に励起光を照射し、該蛍光物質より発せられる特定波長の蛍光強度を測定する工程に供する。
【００１８】
温度測定対象の細胞又は微生物に照射する励起光については、該細胞又は微生物内に存在する蛍光物質の種類に応じて適宜設定することができるが、例えば、Xeランプからの光線；Ｈｇランプからの光線；Ｄ2ランプからの光線；ハロゲンランプ；タングステンラン
プ；エキシマレーザー；バイオレットレーザー（４０５、４４０ｎｍ）；及びＡｒイオンレーザー（４５８、４８８、５１５ｎｍ）、ＨｅＮｅ Ｇレーザー（５４３ｎｍ）、Ｈｅ
Ｎｅ Ｒレーザー（６３３ｎｍ）等の可視レーザー等を挙げることができる。
【００１９】
蛍光物質より発せられる蛍光強度の測定において、測定する蛍光波長については蛍光が認められる蛍光波長であれば特に制限されない。当該波長として、検出感度を高めるという観点から、最も強い蛍光を発する蛍光波長であることが望ましい。例えば、蛍光物質としてEGFPを使用する場合であれば５００〜
５２０ｎｍ程度、好ましくは５１０ｎｍ程度の蛍光波長の蛍光強度を測定することが望ま
しく、またDsRedを使用する場合であれば５７０〜５９０ｎｍ程度、好ましくは５８０ｎ
ｍ程度の蛍光波長の蛍光強度を測定することが望ましい。また、Ｃｙ２の場合であれば、５５０〜５７０ｎｍ程度、好ましくは５６０ｎｍ程度の蛍光波長を測定することが望ましい。なお、蛍光強度の測定は、蛍光顕微鏡や高感度ＣＣＤカメラを用いて行うことができる。
【００２０】
本発明では、第三の工程として、予め測定した蛍光強度と温度との関係から前記試料中の細胞又は微生物の温度を求める工程に供する。以下に、測定した蛍光強度の値から細胞又は微生物の温度又は温度変化を求める方法について説明する。
【００２１】
本発明で使用する蛍光物質は、温度に依存して蛍光強度を変化させる特性を備えている。従って、使用する蛍光物質について、単位重量あたりの蛍光強度と温度との相関関係を予め求めておく。次いで、測定した蛍光強度の値と細胞又は微生物内に存在する蛍光物質の量から、該細胞又は微生物において、蛍光物質が発する単位重量あたりの蛍光強度を算出する。かかる蛍光強度を上記相関関係に照合することによって、細胞又は微生物の温度や温度変化を求めることができる。
【００２２】
また、細胞又は微生物内に存在する蛍光物質の量が不明な場合であっても、当該細胞又は微生物の温度と発せられる蛍光強度との関係を予め求めておくことによって、細胞又は微生物の温度や温度変化を求めることができる。また、温度測定対象の細胞又は微生物から測定される蛍光強度を経時的に測定し、上記相関関係を基にして、当該細胞又は微生物における相対的な温度変化を知ることもできる。
【００２３】
また、細胞又は微生物の経時的な温度変化の有無のみを測定したい場合であれば、測定した蛍光強度の値に変化があるか否かを判定すればよい。
【００２４】
（２）温度制御方法
本発明は、更に、上記温度測定方法を利用した温度制御方法を提供する。即ち、本発明の温度制御方法は、上記温度測定方法に従って細胞又は微生物の温度又は温度変化を確認し、次いで、斯くして確認した温度又は温度変化に基づいて、細胞又は微生物が目的温度となるように温度制御を行うものである。かかる温度制御方法において、温度制御は、例えば、細胞又は微生物の温度を経時的にモニターしながら、該細胞又は微生物が目的温度になるように加熱や冷却の条件を適宜調整することにより行われる。なお、温度制御は、例えば、細胞又は微生物に対して赤外線を照射する方法、マイクロヒートプレート（顕微鏡用透明加熱板）を用いて加熱する方法等により実施することができる。
【００２５】
また、前記温度測定方法を利用して、試料中の細胞又は微生物の温度又は温度変化を確認し、これに基づいて、細胞又は微生物が目的温度となるような温度制御条件を設定することができる。このように設定した温度制御条件を、蛍光物質が含まれていない同様の試料に対して適用することにより、当該試料の内部の細胞又は微生物の温度を簡便に目的温度に制御することができる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明の温度測定方法によれば、試料の内部の細胞又は微生物の温度を高い精度で測定することができる。故に、本発明の温度測定方法は、例えば、ある試料内の特定領域を特定の温度に制御する必要がある場合に、その温度制御条件を設定するための試験に有用である。
【００２７】
また、本発明の温度測定方法は、試料内部の直径１μｍ程度の局所領域（細胞又は微生物）における温度の測定が可能であるので、細胞又は微生物の温度測定に有用である。特
に本発明の方法は、試料として生物を使用する場合、当該生物中の細胞単位で温度測定が可能であるので、赤外線照射によって生物内の特定の細胞だけを所定温度に加熱する場合に、その条件設定の試験に有用である。
【００２８】
また、本発明の温度制御方法によれば、上記温度測定方法を利用することにより、正確且つ簡便に、試料の内部の細胞又は微生物の温度を制御することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
以下に、試験例および実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
試験例１  ＥＧＦＰの蛍光強度の温度依存性の確認
蛍光蛋白質（ＥＧＦＰ）の蛍光強度の温度依存性を確認するために、下記試験を行った。
【００３０】
ＨＥＰＥＳ緩衝溶液（20mM HEPES-KOH(pH 7.5), 100mM KCl, 2mM MgCl2）にEGFPを１μｇ／ｍｌとなるように溶解して、蛍光物質含有溶液を調製した。当該蛍光物質含有溶液を光路長１ｍｍのマイクロセルに入れて、４７３ｎｍの励起波長を照射し、２５〜６０℃の温度条件下での４８０〜５７５ｎｍにおける蛍光強度を測定した。
【００３１】
得られた結果を図１及び２に示す。図１には各温度におけるEGFPの蛍光スペクトルを示す。図２には、５１０ｎｍにおけるEGFPの蛍光強度と温度との関係を示す。図２に示す蛍光強度は、２５℃の５１０ｎｍにおけるEGFPの蛍光強度を１とした場合の相対強度である。図１及び２から、EGFPの蛍光強度は、温度に依存して変動することが確認された。特に、温度上昇に伴って、EGFPの蛍光強度は低下し、その温度の上昇と蛍光強度の低下には直線関係があることが明らかとなった（図２参照）。
【００３２】
試験例２  DsRedの蛍光強度の温度依存性の確認
ＨＥＰＥＳ緩衝溶液（20mM HEPES-KOH(pH 7.5), 100mM KCl, 2mM MgCl2）にDsRedを１
．２μｇ／ｍｌとなるように溶解して、蛍光物質含有溶液を調製した。当該蛍光物質含有溶液を光路長１ｍｍのマイクロセルに入れて、５３２ｎｍの励起波長を照射し、２５〜７０℃の温度条件下での５５０〜６５０ｎｍにおける蛍光強度を測定した。
【００３３】
得られた結果を図３及び４に示す。図３には、各温度におけるDsRedの蛍光スペクトル
を示す。図４には、５８０ｎｍにおけるDsRedの蛍光強度と温度との関係を示す。図４に
示す蛍光強度は、２５℃の５８０ｎｍにおけるDsRedの蛍光強度を１とした場合の相対強
度である。この結果、DsRedの蛍光強度は、温度上昇に伴って低下し、その温度の上昇と
蛍光強度の低下には直線関係があることが明らかとなった（図３及び４参照）。
【００３４】
試験例３  Ｃｙ３の蛍光強度の温度依存性の確認
HEPES緩衝溶液（20mM HEPES-KOH(pH 7.5), 100mM KCl, 2mM MgCl2）にＣｙ３を３００
ｎＭとなるように溶解して、蛍光物質含有溶液を調製した。当該蛍光物質含有溶液を光路長１ｍｍのマイクロセルに入れて、５３２ｎｍの励起波長を照射し、１５〜９５℃の温度条件下での５４０〜６２０ｎｍにおける蛍光強度を測定した。
【００３５】
得られた結果を図５及び６に示す。図５には、各温度におけるＣｙ３の蛍光スペクトルを示す。図６には、５６０ｎｍにおけるＣｙ３の蛍光強度と温度との関係を示す。図６に示す蛍光強度は、２５℃の５６０ｎｍにおけるDsRedの蛍光強度を１とした場合の相対強
度である。この結果、上記試験例１及び２の結果と同様、Ｃｙ３の蛍光強度は、温度上昇に伴って低下し、その温度の上昇と蛍光強度の低下には直線関係があることが明らかとなった（図５及び６参照）。
【００３６】
実施例１  温度測定・制御−１
EGFPを発現する大腸菌をポリアクリルアミドゲルに包理したものをモデル（試料）として、下記方法によりゲル中の大腸菌の温度測定を行った。
【００３７】
≪EGFPを発現する大腸菌の調製≫
大腸菌における発現ベクター（pGEX-6P）にEGFP遺伝子を挿入したものを大腸菌（BL21
株）に導入した。この大腸菌を０．２ｍＭ IPTG （isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside）存在下のLB液体培地で培養して、EGFPを発現させた。
【００３８】
≪上記大腸菌を包理したポリアクリルアミドゲルの調製≫
HEPES緩衝溶液（20mM HEPES-NaOH(pH 7.5), 10mM NaCl）に、１１重量％となるように
ポリアクリルアミドを溶解させた。次いで、上記で調製したEGFP発現大腸菌を最終濃度が１×１０4cells/mlとなるように添加した。これを容器（縦３ｍｍ、横３ｍｍ、高さ５０
μｍ）に入れて、これにTEMED（N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine）を添加するこ
とでゲル化させて、大腸菌を包理したポリアクリルアミドゲルを作成した。
【００３９】
≪検量線の作成≫
上記大腸菌を含有する水溶液（１×１０4cels/ml）を温度制御可能なマイクロヒートプレートで２０〜６０℃の各種温度に加熱し、赤外レーザーを照射した際に１菌体当たり発せられる５１０ｎｍにおける蛍光強度を高感度ＣＣＤカメラ（ロングパスフィルター入り；Olympus GFP用）を用いて測定した。かくして得られた蛍光強度と温度との相関関係を
図７に示す。図７に示す蛍光強度は、２５℃の５１０ｎｍにおけるEGFPの蛍光強度を１とした場合の相対強度である。
【００４０】
≪ポリアクリルアミドゲル中の大腸菌の温度測定及び制御≫
上記で調製した大腸菌を包理したポリアクリルアミドゲルを試料として、当該ゲル中の１つの大腸菌に赤外レーザー（１０ｍＷ又は３０ｍＷ）を７秒間照射し、赤外レーザー照射中及び照射前後に大腸菌から発せられる５１０ｎｍの蛍光強度を、高感度冷却ＣＣＤカメラ（ロングパスフィルター入り；Olympus GFP用）により測定した。測定した蛍光強度
から、蛍光強度と温度との相関関係（図７）に基づいて、当該大腸菌の温度を算出した。得られた結果を図８に示す。図８から分かるように、赤外レーザー照射時にはゲル中の大腸菌の温度が高く、照射前後ではゲル中の大腸菌の温度は低いことが確認できた。この結果から、本発明によって、試料中の微生物の温度測定やその温度制御を高い精度で実施できることが分かった。
【００４１】
実施例２  温度測定・制御−２
実施例１で調製した大腸菌を包理したポリアクリルアミドゲル中の１つの大腸菌に照準を合わせて赤外レーザー（３３ｍＷ）を照射した。この赤外レーザー照射時に、赤外レーザー照射を受けている大腸菌の温度と、上記ゲル中で、赤外レーザー照射を受けている大腸菌から様々な距離に位置している他の大腸菌の温度を実施例１と同様の方法で測定した。
【００４２】
得られた結果を図９に示す。なお、図９において、「ｚ軸深さ」とは赤外レーザー照射を受けている大腸菌から測定対象大腸菌までの赤外レーザーの光軸（ｚ軸）方向の距離（μｍ）を示す。また、図９において、「ｚ軸（光軸）からの距離」とは、赤外レーザー照射を受けている大腸菌から測定対象大腸菌までのｚ軸に対して垂直方向の距離（μｍ）を示す。
【００４３】
図９から明らかなように、本発明の温度測定方法によって、空間（試料）内に分布し、
三次元的な位置関係で存在している各々の大腸菌の温度を測定できることが確認された。
【００４４】
以上の実施例１及び２の結果から、試料中の大腸菌内に存在する蛍光物質の蛍光強度を測定することにより、当該大腸菌の温度乃至温度変化を測定、制御できることが明らかとなった。また、当該実験結果から、本発明の方法は、微小領域（微生物又は細胞）の温度の測定に実用できることが分かった。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】試験例１において測定した各温度のEGFPの蛍光スペクトルを示す図である。
【図２】５１０ｎｍにおけるEGFPの蛍光強度と温度との関係を示す図である（試験例１）。
【図３】試験例２において測定した各温度のDsRedの蛍光スペクトルを示す図である。
【図４】５８０ｎｍにおけるDsRedの蛍光強度と温度との関係を示す図である（試験例２）。
【図５】試験例３において測定した各温度のＣｙ３の蛍光スペクトルを示す図である。
【図６】５６０ｎｍにおけるＣｙ３の蛍光強度と温度との関係を示す図である（試験例３）。
【図７】実施例１で使用したEGFP発現大腸菌の蛍光強度と温度との相関関係を示す図である。
【図８】実施例１において、ポリアクリルアミドゲル中のＥＧＦＰ発現大腸菌の赤外レーザー照射前後の温度を示す図である。
【図９】実施例２において、ポリアクリルアミドゲル中に分布している各々の大腸菌の位置関係とその温度測定結果を示す図である。図９中、右上欄に記載のマークに対応する数値の単位は温度（℃）である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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