(57)【要約】      （修正有）【課題】より信頼性の高い検量線を作成する方法およびより定量下限の小さい結晶の定量方法を提供する。【解決手段】結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を、それぞれ独立に粉砕処理し、それぞれの粉砕結晶を、それぞれ所定量ずつ秤量し、混合処理を行い、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末を得る。該標準混合粉末のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成する。定量すべき結晶試料を粉砕処理し、ラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、作成した検量線とから、定量すべき結晶試料中の各結晶形の含有量または該結晶試料の結晶化度を算出する。【選択図】図１
2005337777.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を、それぞれ独立に気流式粉砕機を用いて粉砕処理し、それぞれの粉砕結晶を得るステップと、
（ｂ）前記粉砕結晶を、それぞれ所定量ずつ秤量し、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えてなる中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめることにより、前記粉砕結晶の混合処理を行い、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末を得るステップと、
（ｃ）該標準混合粉末のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成するステップと、
（ｄ）定量すべき結晶試料を粉砕処理するステップと、
（ｅ）前記粉砕処理された結晶試料のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、定量すべき結晶試料中の各結晶形の含有量または該結晶試料の結晶化度を算出するステップを含むことを特徴とする結晶の定量方法。
【請求項２】
前記ステップ（ｄ）において、定量すべき結晶試料を、気流式粉砕機を用いて粉砕処理する請求項１に記載の結晶の定量方法。
【請求項３】
（ａ）結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を、それぞれ独立に気流式粉砕機を用いて粉砕処理し、それぞれの粉砕結晶を得るステップと、
（ｂ）前記粉砕結晶を、それぞれ所定量ずつ秤量し、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えてなる中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめることにより、前記粉砕結晶の混合処理を行い、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末を得るステップと、
（ｃ）該標準混合粉末のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成するステップを含むことを特徴とする結晶試料中の各結晶形の含有量または結晶化度を定量するための検量線の作成方法。
【請求項４】
（ａ）結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を、それぞれ独立に気流式粉砕機を用いて粉砕処理し、それぞれの粉砕結晶を得るステップと、
（ｂ）前記粉砕結晶を、それぞれ所定量ずつ秤量し、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えてなる中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめることにより、前記粉砕結晶の混合処理を行い、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末を得るステップと、
（ｃ）該標準混合粉末のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成するステップと、
（ｆ）定量すべき前記結晶を含む製剤試料のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、定量すべき前記結晶を含む製剤試料中の各結晶形の含有量または該製剤試料中の結晶の結晶化度を算出するステップを含むことを特徴とする製剤中の結晶の定量方法。
【請求項５】
請求項１または４に記載の結晶の定量方法を利用して、製造された結晶または製剤中に含まれる各結晶の含有量もしくは該結晶の結晶化度を決定し、該含有量もしくは結晶化度の変化に応じて結晶の製造工程または該結晶を含む製剤を製造する製剤化工程を制御することを特徴とする結晶または製剤の製造管理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、結晶の定量方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
結晶多形が存在する化合物は、結晶形によって種々の性質が異なり、同一の化学組成を有していても、例えば溶解度、溶解速度、安定性、吸湿性等の物理化学的性質や、例えば効力、分解物、代謝物、毒性、製剤特性等の諸特性が異なる場合が多い。そのため、結晶多形を有する化合物を、例えば医薬原体として用いる場合は、医薬原体という分野の特性上、当然に、異なる結晶形を含まないか、もしくは多形の組成比率が一定になるよう制御された医薬原体を提供することが要求され、その製造プロセスの開発においては、当該プロセスにおいて、目的とする結晶形とは異なる結晶形の化合物が生成しないかどうか、得られた原体中に、目的とする結晶形とは異なる結晶形の化合物が含まれていないかどうか、あるいは多形の組成比率が一定になっているかどうか、さらには、製造した医薬原体の保存中や製剤過程において、結晶形の変化がないかどうか等結晶多形の有無、多形の含有量等を確認することが極めて重要であった。また、結晶化度が異なる場合も、前記結晶多形の場合と同様に、物理化学的性質や諸特性が異なることが多く、結晶化度が一定になるように制御された医薬原体を提供することが要求され、その製造プロセスにおいても、同様に、目的とする結晶化度の化合物が得られているか、製造後の保存過程、製剤過程等において、結晶化度の変化がないかどうか等を確認することが極めて重要であった。
【０００３】
従来、かかる結晶多形や結晶化度を定量する方法の一つとして、ラマン分光法が用いられていた。これは、特定の結晶形あるいは結晶化度の結晶をメノウ製乳鉢を用いてすりつぶし、すりつぶした結晶粉末を所定量ずつ採取、混合した後、ラマンスペクトルを測定し、前記結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と混合粉末中のそれぞれの結晶粉末の重量または結晶化度との相関の検量線を作成した後、含量未知の結晶試料を同様にすりつぶし、ラマンスペクトルを測定し、得られたスペクトル中の各結晶に特徴的なスペクトル領域のピーク強度と前記検量線とから、前記結晶試料中のそれぞれの結晶形の含有量や結晶試料の結晶化度を定量する方法であるが、検量線の信頼性の点から、定量下限が５〜１０％程度といわれており、また、すりつぶす際に結晶形の転移、非晶化、結晶化等が起こるおそれもあり、例えば医薬原体等の分野における微量の結晶多形の有無、微量の結晶もしくは非晶の有無等を分析する方法としては、必ずしも適しているとは言えなかった。さらに、製剤中に含まれる結晶についても、製剤中の結晶含有量自体が少量であるため、定量下限はさらに大きくなり、結晶形の含有量や結晶試料の結晶化度を精密に定量することは難しかった。
【０００４】
定量下限を小さくし、より信頼性の高い検量線を作成するためには、結晶をできるだけ均質に、結晶形、結晶性等を変化させることなく粉砕し、均等に混合した標準混合粉末を調製し、該標準混合粉末を用いて検量線を作成する必要があるが、これまで、結晶をできるだけ均質に、結晶形の転移、非晶化、結晶化等を起こさせることなく粉砕し、混合して、標準混合粉末を調製する方法は知られておらず、また、より定量下限の小さな結晶や製剤中の結晶の定量方法は知られていなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような状況のもと、本発明者は、結晶をできるだけ均質に、結晶形の転移、非晶化、結晶化等を起こさせることなく粉砕し、混合した標準混合粉末を調製でき、より信頼性の高い検量線を作成でき、より定量下限の小さい結晶の定量方法を開発すべく鋭意検討したところ、結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を気流式粉砕機を用いて粉砕処理することにより、粉末結晶が得られ、かかる粉末結晶を、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えた中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめて、前記粉末結晶を混合処理することにより、結晶形の転移、結晶化度の変化等を起こすことなく、混合状態が均質な混合粉末を得ることができ、該混合粉末を標準混合粉末として、ラマンスペクトルを測定することにより、混合粉末中の各結晶形の重量または該混合粉末の結晶化度と、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有なピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度との相関により信頼性が高く、定量下限も小さい精密な検量線を作成することができ、かかる検量線を用いることにより、含量未知の結晶や製剤中の結晶を、より精密に定量することができることを見出し、本発明に至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち本発明は、
１．（ａ）結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を、それぞれ独立に気流式粉砕機を用いて粉砕処理し、それぞれの粉砕結晶を得るステップと、
（ｂ）前記粉砕結晶を、それぞれ所定量ずつ秤量し、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えてなる中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめることにより、前記粉砕結晶の混合処理を行い、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末を得るステップと、
（ｃ）該標準混合粉末のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成するステップと、
（ｄ）定量すべき結晶試料を粉砕処理するステップと、
（ｅ）前記粉砕処理された結晶試料のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、定量すべき結晶試料中の各結晶形の含有量または該結晶試料の結晶化度を算出するステップを含むことを特徴とする結晶の定量方法および該定量方法に用いる検量線の作成方法等を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、より定量下限が小さく、精密な定量が可能となるため、微量の結晶多形の定量、微量の非晶の定量等の精密な定量が必要とされる医薬の分野はもちろん、他の分野においても有用である。さらに、かかる定量方法を用いることにより、製造された結晶や製剤中に含まれる各結晶の含有量または結晶の結晶化度をより精密に決定することができ、製剤の各部位における各結晶の含有量または結晶の結晶化度を把握することができるため、該含有量または結晶化度の変化に応じて結晶の製造工程または該結晶を含む製剤を製造する製剤化工程をより精密に制御することができ、工業的にも有利である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の結晶の定量方法のうち、定量すべき試料が結晶試料の場合の定量方法は、以下の（ａ）〜（ｅ）の各ステップを含むことを特徴とするものであり、かかる定量方法により、より定量限界の小さい検量線を作成することができ、結晶試料中に微量含まれる結晶形や非晶等を定量することができる。
（ａ）結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を、それぞれ独立に気流式粉砕機を用いて粉砕処理し、それぞれの粉砕結晶を得るステップ（以下、ステップ（ａ）と略記する。）、（ｂ）前記粉砕結晶を、それぞれ所定量ずつ秤量し、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えてなる中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめることにより、前記粉砕結晶の混合処理を行い、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末を得るステップ（以下、ステップ（ｂ）と略記する。）、（ｃ）該標準混合粉末のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成するステップ（以下、ステップ（ｃ）と略記する。）、（ｄ）定量すべき結晶試料を粉砕処理するステップ（以下、ステップ（ｄ）と略記する。）、（ｅ）前記粉砕処理された結晶試料のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、定量すべき結晶試料中の各結晶形の含有量または該結晶混合物の結晶化度を算出するステップ（以下、ステップ（ｅ）と略記する。）。
【０００９】
以下、図１に示したフロー図に基づき、各ステップごとに、順に説明する。
【００１０】
ステップ（ａ）は、前記のとおり、結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶を、それぞれ独立に気流式粉砕機を用いて粉砕処理し、それぞれの粉砕結晶を得るステップ（図１  Ｓ１）である。かかるステップにより、微細で、異方性のない粉砕結晶が得られる。
【００１１】
結晶形または結晶化度の異なる二種以上の結晶をそれぞれ独立に粉砕処理する気流式粉砕機としては、ノズルから噴出する圧縮空気もしくは圧縮不活性ガスで生じるジェット気流中に、粉砕すべき結晶を供給し、ジェット気流中での結晶同士の衝突や結晶の衝突板への衝突により、結晶を粉砕する粉砕機であれば特に制限されない。かかる気流式粉砕機としては、例えばジェットミル等が挙げられ、通常市販されているものが用いられる。市販されているジェットミルとしては、例えばＡ−Ｏジェットミル（株式会社セイシン企業製）、スパイラルジェットミル（ホソカワミクロン株式会社製）、カウンタージェットミル（ホソカワミクロン株式会社製）、シングルトラックジェットミル（ホソカワミクロン株式会社製）、スーパーシングルトラックジェットミル（ホソカワミクロン株式会社製）、カレントジェット（日清エンジニアリング株式会社製）等が挙げられる。
【００１２】
結晶の粉砕が行われるミル部分の材質は特に制限されず、例えばステンレス、アルミナ、ジルコニア、炭化ケイ素、チッ化ケイ素等が挙げられる。
【００１３】
かかる粉砕処理では、後述する検量線の精度の観点から、通常Ｄ90が約１０μｍ以下の粉砕結晶が得られるよう、気流式粉砕機の気流量、ジェット気流を生じさせるための圧縮空気や圧縮不活性ガスの圧力、気流式粉砕機に投入する結晶量等の粉砕条件を適宜決められる。
【００１４】
気流式粉砕機から排出された粉砕結晶を採取し、所定数の結晶について粉砕処理が終了すれば（図１  Ｓ２）、次ステップ（ｂ）に進む。なお、採取した粉砕結晶を、さらに気流式粉砕機に投入し、粉砕処理を二回以上行ってもよい。
【００１５】
ステップ（ｂ）は、前記ステップ（ａ）で得られた粉砕結晶を、それぞれ所定量ずつ秤量し、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えてなる中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめることにより、前記粉砕結晶の混合処理を行い、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末を得るステップ（図１  Ｓ３）である。
【００１６】
かかるステップ（ｂ）により、前記ステップ（ａ）で得られた微細な、無配向化された粉砕結晶を、結晶形の転移、結晶化度の変化等を起こすことなく、均一に混合でき、信頼性の高い検量線を作成可能な標準混合粉末を得ることができる。
【００１７】
標準混合粉末は、二種以上の結晶形の含有割合または結晶化度の異なるものが複数作成される。標準混合粉末の個数は二個以上であればよい。もちろん個数が多いほど、より精密な検量線が作成可能であるため、目的等に応じて個数を決めればよい。また、例えば後述するステップ（ｄ）の定量すべき結晶混合物中に含まれる各結晶形の含有量または該結晶混合物の結晶化度が予想できる場合には、予想される含有量の近傍または予想される結晶化度の近傍における検量線を作成するようにしてもよい。
【００１８】
前記ステップ（ａ）で得られた粉砕結晶の秤量には、例えば電子天秤等の秤量器が用いられ、該秤量器でそれぞれ所定量が秤量される。秤量する所定量は検量線が作成可能であれば、特に限定されない。
【００１９】
秤量した各粉砕結晶を、少なくともその外面が弾性体で形成されてなる混合媒体を備えてなる中空容器に入れ、該中空容器を振動もしくは回転せしめることにより、前記粉砕結晶の混合処理が行われ、結晶形の含有割合または結晶化度の異なる複数の標準混合粉末が得られる。
【００２０】
中空容器は、粉砕結晶を投入する投入口と混合後の混合粉末を排出する排出口が設けられた中空の密閉容器であればよく、その大きさは特に制限されない。投入口と排出口を別々に設けてあってもよいし、投入口と排出口を兼ねた投入／排出口を一つ設けてあってもよい。
【００２１】
中空容器の材質は特に制限されず、例えばステンレス、アルミナ、ジルコニア、セラミック等が挙げられる。また、粉砕結晶や混合媒体と接触する中空容器の内面が、弾性体で形成された中空容器を用いると、混合時の粉砕結晶への衝撃をより弱めることができるため、混合処理時の粉砕結晶の結晶形の転移、結晶化度の変化等がより起こりにくく、好ましい。
【００２２】
混合媒体としては、例えば球状、柱状等粉砕結晶と接触して粉砕結晶を混合することが可能な形状であればよく、その個数も、中空容器内で混合媒体が動く余裕があれば特に制限されない。
【００２３】
かかる混合媒体の少なくともその外面は弾性体で形成されており、これにより、粉砕結晶との接触においても、粉砕結晶の結晶形の転移、結晶化度の変化等を起こすことなく、混合することができる。
【００２４】
混合媒体は、前記のとおり、少なくともその外面が弾性体で形成されており、ある程度の弾力性を有するものであればよく、混合媒体全体が弾性体で形成されていてもよい。外面が弾性体で形成され、内部が例えばセラミック等の弾性体以外の硬い材質で形成された混合媒体の場合、弾性体で形成された外面層は、混合媒体が粉砕結晶と接触した際、該粉砕結晶の結晶形や結晶化度等を変化させない程度の弾力性を有する厚みを有しておればよい。
【００２５】
弾性体としては、通常ＪＩＳ  Ｋ６２５３に規定されているタイプＡデュロメータで測定したゴム硬さが２０〜９０の範囲である弾性体が用いられ、好ましくは前記ゴム硬さが４０〜８５の範囲である弾性体が用いられる。
【００２６】
かかる弾性体の材質としては、例えば天然ゴム、合成ゴム、樹脂、エラストマー、コルク等が挙げられ、合成ゴム、樹脂が好ましい。合成ゴムとしては、例えばシリコンゴム、ウレタンゴム、フッ素ゴム、多硫化ゴム、アクリルゴム、ブタジエンゴム、スチレンゴム、スチレンブタジエンゴム、アクリロニトリルブタジエンゴム、イソプレンイソブチレンゴム、エチレンプロピレンゴム、クロロプレンゴム、クロロスルホン化ポリエチレンゴム等が挙げられ、シリコンゴム、ウレタンゴムが好ましい。樹脂としては、例えば塩化ビニル樹脂、ポリエチレン樹脂等が挙げられる。
【００２７】
また、例えばカーボン、鉄等の導電材をかかる弾性体に混合せしめた導電性ゴム等の導電性弾性体を用いてもよく、例えば静電気を帯びた粉体や静電気を帯びやすい粉体を混合する場合には、かかる導電性弾性体を用いることが好ましい。
【００２８】
混合媒体の大きさや使用個数は、中空容器の中空部の大きさにより適宜決めればよい。
【００２９】
中空容器の振動もしくは回転は人為的に行ってもよいし、機械的に行ってもよい。混合処理の再現性という点から、機械的に振動もしくは回転せしめることが好ましい。単位時間当りの振動数もしくは回転数は特に制限されない。混合時間は、混合媒体の数、振動数もしくは回転数、粉砕結晶の種類等に応じて適宜決めればよい。
【００３０】
機械的に中空容器を振動もしくは回転せしめるものとしては、例えば中空容器を振動もしくは回転せしめる振動もしくは回転装置を備えた混合装置が挙げられる。かかる中空容器を振動もしくは回転せしめる振動もしくは回転装置を備えた混合装置としては、例えば円筒型混合器、Ｖ型混合器、振動ミル、回転ミル、転動ミル等が挙げられ、通常市販されているものが用いられる。
【００３１】
また、前記のとおり、中空容器の少なくとも内面が、弾性体で形成されてなる中空容器を用いることにより、混合処理時の粉砕結晶への衝撃をより弱めることができるため、さらに混合処理時の粉砕結晶の結晶形の転移、結晶化度の変化等がより起こりにくく、より好ましい。
【００３２】
所定数の粉砕結晶について混合処理が終了すれば（図１  Ｓ４）、次ステップ（ｃ）に進む。
【００３３】
ステップ（ｃ）は、前記ステップ（ｂ）で得た標準混合粉末のラマンスペクトルを測定し（図１  Ｓ５およびＳ６）、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成するステップ（図１  Ｓ７）である。なかでも、得られたラマンスペクトル中の各結晶に特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成することが好ましい。
【００３４】
標準混合粉末のラマンスペクトルを測定する方法としては、通常のラマンスペクトル法でよいが、なかでもＦＴ−ラマンスペクトル法（フーリエ変換ラマンスペクトル法）が好ましい。通常略一定量の各標準混合粉末を秤量し、ラマン分光分析装置で測定が行われる。かかるラマン分光分析装置としては、通常市販の装置が用いられる。各標準混合粉末のラマンスペクトルの測定回数は特に制限されず、標準混合粉末の個数等により適宜決めればよいが、得られたラマンスペクトル中の各結晶に特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成する場合には、より信頼性の高い検量線を作成する観点から、各標準混合粉末について２回以上測定することが好ましく、３回以上測定することがより好ましい。
【００３５】
得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピーク（以下、固有ピークと略することもある。）の大きさと該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成してもよいし、得られたラマンスペクトル中の各結晶に特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成してもよい。
【００３６】
得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさと該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成する場合は、通常予め各結晶について、単独でラマンスペクトル測定を行い、各結晶の固有ピークを選定しておき、得られたラマンスペクトルから、選定した各固有ピークの大きさを求め、求めた固有ピークの大きさを縦軸に、標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度を横軸とし、それぞれのデータをプロットすることにより、検量線が作成される。プロットする際の固有ピークの大きさとしては、例えば固有ピークの強度、固有ピークのピーク面積、固有ピークの相対強度、固有ピークが複数の場合は、その和等が挙げられる。なお、結晶形が異なる二種以上の結晶を用いて標準混合粉末を調製した場合は、前記各結晶形が特異的に有するピーク、すなわちいずれか一つの結晶形には検出され、他の結晶形では検出されない各結晶形に固有のピークを固有ピークとすればよい。
【００３７】
得られたラマンスペクトル中の各結晶に特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線を作成する場合は、通常得られたラマンスペクトルを、例えば線形重回帰分析（ＭＬＲ）主成分回帰分析（ＰＣＲ）、部分最小二乗（ＰＬＳ）回帰分析等のケモメトリクスによる多変量解析手法を用いて検量線が作成される。ケモメトリクスによる多変量解析手法には、通常市販の多変量解析ソフトが用いられる。通常得られたラマンスペクトルは、例えばベクトル正規化、微分、ベースライン補正等の前処理を行った後に、多変量解析され、前処理後のラマンスペクトルを説明変量とし、該標準混合粉末中の各結晶形の重量または該標準混合粉末の結晶化度を目的変量として、多変量解析され、検量線が作成される。
【００３８】
各結晶に特徴的なスペクトル領域としては、例えばいずれかの結晶にしか存在しないピークが存在する領域、ピーク形状の差異が大きな領域等目的変量と相関がありそうな領域が適宜選択され、例えば多変量解析ソフトによりかかるスペクトル領域を選択するようにしてもよい。
【００３９】
なお、結晶化度は、通常結晶試料の結晶化度を１００％、粉末Ｘ線回折プロファイル中に回折ピークが検出されない非晶試料の結晶化度を０％として、規定されるため、本発明においては、標準混合粉末を調製する際の結晶化度の異なる結晶の結晶化度とその混合重量比とから、標準混合粉末の結晶化度を求めればよい。例えば結晶化度１００％の結晶と結晶化度１０％の結晶、すなわち非晶とを用い、結晶化度１００％の結晶／結晶化度１０％の結晶（重量比）が、１００／０、８０／２０、５０／５０、２０／８０および０／１００の５種の標準混合粉末を調製した場合の各標準混合粉末の結晶化度は、それぞれ１００％、８２％、５５％、２８％および１０％となる。
【００４０】
所定数の標準混合粉末について、ラマンスペクトルの測定が終了すれば（図１  Ｓ６）、ラマンスペクトル中の各結晶に特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、標準混合粉末中の各結晶形の重量または標準混合粉末の結晶化度との相関の検量線が作成される（図１  Ｓ７）。
【００４１】
検量線が作成されれば、次ステップ（ｄ）に進む。
【００４２】
ステップ（ｄ）は、定量すべき結晶試料を粉砕処理するステップ（図１  Ｓ８）である。
【００４３】
粉砕処理は、例えば定量すべき結晶試料をメノウ製乳鉢に入れ、人為的にもしくは機械的にすりつぶす方法でもよいし、前記ステップ（ｂ）と同様の気流式粉砕機を用いる方法により粉砕処理を行ってもよい。後者の前記ステップ（ｂ）と同様の気流式粉砕機を用いる方法により粉砕処理を行うことが、結晶形の転移、結晶化度の変化等が起こるおそれがより少なく、好ましい。
【００４４】
定量すべき結晶試料の粉砕処理が終了すれば、次ステップ（ｅ）へ進む。
【００４５】
ステップ（ｅ）は、前記ステップ（ｄ）で粉砕処理された結晶試料のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、定量すべき結晶試料中の各結晶形の含有量または該結晶試料の結晶化度を算出するステップ（図１  Ｓ９）である。
【００４６】
前記ステップ（ｄ）で粉砕処理された結晶試料のラマンスペクトルの測定は、通常のラマンスペクトル法により実施すればよい。その測定に用いる試料量は、通常前記ステップ（ｃ）においてラマンスペクトルの測定に用いられた標準混合粉末の量と略同量とされる。前記ステップ（ｃ）で作成された検量線が、ラマンスペクトル中の各結晶に特徴的なスペクトル領域のピーク強度をもとに作成された場合には、結晶試料についても、２回以上ラマンスペクトルを測定することが好ましく、３回以上測定することがより好ましい。
【００４７】
結晶試料のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、各結晶形の含有量または結晶化度を算出する。なお、前記検量線を作成する際に、得られたラマンスペクトルを前処理した場合には、得られた結晶試料のラマンスペクトルについても、同様の前処理を行った後、各結晶形の含有量または結晶化度が算出される。
【００４８】
定量すべき試料が、結晶を含む製剤試料の場合には、製剤試料を粉砕処理せず、そのままラマンスペクトルを測定し、前記製剤中の結晶形の含有量または結晶の結晶化度を定量することができる。かかる定量方法は、前記ステップ（ａ）〜（ｃ）に続き、（ｆ）定量すべき前記結晶を含む製剤試料のラマンスペクトルを測定し、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、定量すべき前記結晶を含む製剤試料中の各結晶形の含有量または該製剤試料中の結晶の結晶化度を算出するステップ（以下、ステップ（ｆ）と略記する。）を含むことを特徴とするものであり、図２にそのフロー図を示した。
【００４９】
ステップ（ｆ）では、製剤試料を粉砕処理せずに、そのままラマンスペクトルの測定が行われる。かかる製剤試料としては、例えば凍結乾燥製剤、錠剤等が挙げられる。製剤試料の場合には、そのまま測定することができるため、例えば製剤表面の中央近傍と周端近傍等の各部位の結晶形の含有量や結晶化度の微量の変化の有無等を確認することができる。また、前記製剤を割断し、その割断面についてラマンスペクトルを測定することにより、前記製剤の表面と内部の結晶形の含有量や結晶化度の微量の変化の有無等も確認することができる。
【００５０】
ラマンスペクトルが測定された後、前記ステップ（ｅ）と同様にして、得られたラマンスペクトル中の各結晶に固有のピークの大きさまたは特徴的なスペクトル領域のピーク強度と、前記ステップ（ｃ）で作成した検量線とから、前記製剤中に含まれる各結晶形の含有量または結晶化度を算出する（図２  Ｓ１０）。
【００５１】
また、本発明の定量方法を利用して、製造された結晶または製剤中に含まれる各結晶の含有量または該結晶の結晶化度を測定し、該含有量または結晶化度の変化に応じて、該結晶の製造工程または該結晶を含む製剤を製造する製剤化工程における、結晶多形の生成または結晶化度に影響を及ぼす因子条件を制御し、管理することにより、各結晶の含有量または結晶化度が安定した結晶または該結晶を含む製剤を生産することができる。
【実施例】
【００５２】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
【００５３】
実施例１
＜粉砕結晶の取得＞
セイシン企業製Ａ−Ｏジェットミル（ベンチュリー圧０．５ＭＰａ、グランディング圧１  ０．５ＭＰａおよびグランディング圧２  ０．５ＭＰａ）を用いて、γ形インドメタシン結晶を粉砕処理（ジェットミルへの結晶の供給速度は、１時間当たり３０〜４０ｇ）し、粒子径約１０μｍ以下のγ形粉砕結晶（結晶化度１００％とした。）を得た。また、γ形インドメタシン結晶を１８０℃で溶融させた後、液体窒素で急冷せしめて、インドメタシン非晶を得、該非晶を粉砕処理し、粒子径約１０μｍ以下の粉砕非晶（結晶化度０％とした。）を得た。
【００５４】
＜標準混合粉末の調製＞
γ形粉砕結晶と粉砕非晶をそれぞれ所定量ずつ秤量し、全体がウレタンゴムで形成されたウレタンゴム製ボール（直径約２０ｍｍ、重さ約４〜５ｇ、タイプＡデュロメータで測定したゴム硬さ７０）を混合媒体（個数；３個）とする振動ミル（株式会社シーエムティ科学製  ＴＩ−１００型）の中空容器内に入れ、振動回転数１７３０ｒｐｍ／６０Ｈｚおよび振幅７ｍｍで、３分間振動させ、表１に示す１２種類の結晶化度の異なる標準混合粉末  １〜１２（それぞれ約２ｇ）を調製した。
【００５５】
【表１】
2005337777.tif 000003
【００５６】
＜検量線の作成＞
調製した標準混合粉末  １〜１２について、それぞれラマンスペクトルを測定した。測定には、サーモエレクトロン社製Ｎｅｘｕｓ８７０型フーリエ変換型ラマン分光分析装置を用いた（レーザー波長１０６４ｎｍ；レーザーパワー４５０ｍＷ；ビームスプリッターＣａＦ２；検出器ＩｎＧａＡｓ；分解能４ｃｍ−１；積算回数１００回）。なお、各標準混合粉末を、５ｍｍφのチューブに入れて、３回ずつ測定を行った（１２試料×３回測定で、合計３６スペクトルが得られた。）。
【００５７】
得られたラマンスペクトルについて、ベースライン補正の一つであるＭＳＣ（Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｖｅ  Ｓｃａｔｔｅｒ  Ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）および二次微分を組み合わせた前処理を行った後、サーモエレクトロン社製ソフトウエアＴＱ  ＡｎａｌｙｓｔＴＭ（バージョン６．１．１）を用い、１７３０〜１５２０ｃｍ−１の領域のラマンスペクトルを説明変量とし、結晶化度（％）を目的変量としたＰＬＳ回帰分析を行った。標準誤差ＳＥＰを最小にすることにより、検量線を作成した。なお、検量線の作成には、標準混合粉末  １、３、５、７、９、１０および１２の７種の標準混合粉末のラマンスペクトル（７試料×３回測定の合計２１スペクトル）を用いた。前処理後のラマンスペクトルを図２に示した。検量線の作成に用いた７種の標準混合粉末の結晶化度の実際値を横軸とし、検量線を用いて算出した予測値を縦軸とした相関図を図３に示した。標準混合粉末  ２、４、６、８および１１の５種のラマンスペクトル（５試料×３回測定の合計１５スペクトル）を作成した検量線の検定用に用い、検定用の標準混合粉末中の結晶化度の実際値を横軸とし、検量線を用いて算出した予測値を縦軸とした相関図を図４に示した。検量線作成の相関係数は、１．００００、標準誤差ＳＥＰは、０．１９１５％、検量線検定の相関係数は、１．００００、標準誤差ＳＥＰは、０．５７０６％であった。
【００５８】
＜錠剤試料の結晶化度の定量＞
三協パイオテク株式会社製打錠機タブレッティングテスターを用い、打錠圧を変えて打錠成形し、γ形インドメタシン結晶の錠剤試料１〜４をそれぞれ３錠作製した。そのうちの２錠について、表面中央近傍のラマンスペクトルを測定した（測定条件は上記と同様であり、１錠めについては両面を、２錠めについては片面のみの合計３回測定）。上記検量線から、各錠剤試料中の結晶の結晶化度を求め、その結果を下記表２に示した。打錠条件を以下に示す。
【００５９】
（打錠条件）
打錠圧  錠剤試料１・・２００ｋｇｆ／ｃｍ２（２０ＭＰａ相当）
錠剤試料２・・５００ｋｇｆ／ｃｍ２（４９ＭＰａ相当）
錠剤試料３・・１０００ｋｇｆ／ｃｍ２（９８ＭＰａ相当）
錠剤試料４・・２０００ｋｇｆ／ｃｍ２（１９６ＭＰａ相当）
錠剤サイズ  ７ｍｍ径Ｒ錠
錠剤重量    １２５ｍｇ
抜取モード  開放抜取
打錠温度    室温（約２５℃）
【００６０】
【表２】
2005337777.tif 000004
【００６１】
また、錠剤試料４の表面周端近傍のラマンスペクトルを測定した。さらに、錠剤試料４を２つに割り、その割断面の中央近傍のラマンスペクトルを測定した（１錠めについては、それぞれの割断面、２錠めについては一方の割断面の合計３回測定）。上記検量線から、各錠剤試料中の結晶の結晶化度を求め、その結果を表３に示した。
【００６２】
【表３】
2005337777.tif 000005
【００６３】
実施例２
＜標準混合粉末の調製＞
前記実施例１と同様にして、γ形粉砕結晶（結晶化度１００％とした。）と粉砕非晶（結晶化度０％とした。）を得、それぞれ所定量ずつ秤量し、振動ミルで混合処理し、１２種類の混合粉末を得た。それぞれの混合粉末に、所定量のマンニトール（混合粉末に対して９重量倍）を加え、表４に示す１２種類の結晶化度の異なる標準混合粉末  １’〜１２’（それぞれ約２ｇ）を調製した。
【００６４】
【表４】
2005337777.tif 000006
【００６５】
＜検量線の作成＞
調製した標準混合粉末  １’〜１２’について、前記実施例１と同じ測定条件でそれぞれラマンスペクトルを３回測定した（１２試料×３回測定で、合計３６スペクトルが得られた。）。
【００６６】
得られたラマンスペクトルについて、ＭＳＣおよび二次微分を組み合せた前処理を行った後、サーモエレクトロン社製ソフトウエアＴＱ  ＡｎａｌｙｓｔＴＭ（バージョン６．１．１）を用い、１７３０〜１５２０ｃｍ−１の領域のラマンスペクトルを説明変量とし、結晶化度（％）を目的変量としたＰＬＳ回帰分析を行った。標準誤差ＳＥＰを最小にすることにより、検量線を作成した。なお、検量線の作成には、標準混合粉末  １’、３’、５’、７’、９’、１０’および１２’の７種の標準混合粉末のラマンスペクトル（７試料×３回測定の合計２１スペクトル）を用いた。前処理後のラマンスペクトルを図５に示した。検量線の作成に用いた７種の標準混合粉末の結晶化度の実際値を横軸とし、検量線を用いて算出した予測値を縦軸とした相関図を図６に示した。標準混合粉末  ２’、４’、６’、８’および１１’の５種のラマンスペクトル（５試料×３回測定の合計１５スペクトル）を作成した検量線の検定用に用い、検定用の標準混合粉末中の結晶化度の実際値を横軸とし、検量線を用いて算出した予測値を縦軸とした相関図を図７に示した。検量線作成の相関係数は、１．００００、標準誤差ＳＥＰは、０．５７１９％、検量線検定の相関係数は、１．００００、標準誤差ＳＥＰは、１．３７６４％であった。
【００６７】
＜錠剤試料の結晶化度の定量＞
γ形インドメタシン結晶とマンニトールの混合粉末（γ形インドメタシン結晶／マンニトール重量比＝１／９）を、前記実施例１と同様に、三協パイオテク株式会社製打錠機タブレッティングテスターを用い、打錠圧を変えて打錠成形し、錠剤試料５〜８をそれぞれ３錠作製した。錠剤試料の表面中央近傍のラマンスペクトルを測定した（測定条件は上記と同様、１錠めについては両面、２錠めについては片面のみの合計３回測定）。上記検量線から、各錠剤試料中の結晶の結晶化度を求め、その結果を下記表５に示した。打錠条件を以下に示す。
【００６８】
（打錠条件）
打錠圧  錠剤試料５・・２００ｋｇｆ／ｃｍ２（２０ＭＰａ相当）
錠剤試料６・・５００ｋｇｆ／ｃｍ２（４９ＭＰａ相当）
錠剤試料７・・１０００ｋｇｆ／ｃｍ２（９８ＭＰａ相当）
錠剤試料８・・２０００ｋｇｆ／ｃｍ２（１９６ＭＰａ相当）
錠剤サイズ  ７ｍｍ径Ｒ錠
錠剤重量    １２５ｍｇ
抜取モード  開放抜取
打錠温度    室温（約２５℃）
【００６９】
【表５】
2005337777.tif 000007
【００７０】
また、錠剤試料８の表面周端近傍のラマンスペクトルを測定した。さらに、錠剤試料８を２つに割り、その割断面の中央近傍のラマンスペクトルを測定した（１錠めについては、それぞれの割断面、２錠めについては一方の割断面の合計３回測定）。上記検量線から、各錠剤試料中の結晶の結晶化度を求め、その結果を表６に示した。
【００７１】
【表６】
2005337777.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】本発明の結晶試料の定量方法のフロー図である。
【図２】本発明の製剤試料の定量方法のフロー図である。
【図３】実施例１の標準混合粉末  １〜１２について、ラマンスペクトルを測定し、ＭＳＣおよび二次微分を組み合わせた前処理を行った後のスペクトルである。
【図４】実施例１の検量線作成用の７種の標準混合粉末の結晶化度の実際値と、検量線を用いて算出した予測値の相関図である。
【図５】実施例１の検量線検定用の５種の標準混合粉末の結晶化度の実際値と、検量線を用いて算出した予測値の相関図である。
【図６】実施例２の標準混合粉末  １’〜１２’について、ラマンスペクトルを測定し、ＭＳＣおよび二次微分を組み合わせた前処理を行った後のスペクトルである。
【図７】実施例２の検量線作成用の７種の標準混合粉末の結晶化度の実際値と、検量線を用いて算出した予測値の相関図である。
【図８】実施例２の検量線検定用の５種の標準混合粉末の結晶化度の実際値と、検量線を用いて算出した予測値の相関図である。
【図１】
2005337777.tif 000009
【図２】
2005337777.tif 000010
【図３】
2005337777.tif 000011
【図４】
2005337777.tif 000012
【図５】
2005337777.tif 000013
【図６】
2005337777.tif 000014
【図７】
2005337777.tif 000015
【図８】
2005337777.tif 000016