(57)【要約】      （修正有）【課題】ゼアキサンチンの安価で、安定供給可能な、安全性の高い製造方法を提供する。【解決手段】１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列が特定の塩基配列と実質的に相同であるアスタキサンチン生産微生物に突然変異を誘発し、生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率（質量％）が親株のそれよりも高い変異株を選抜してゼアキサンチン生産微生物を取得し、前記ゼアキサンチン生産微生物を培養することにより得た培養物からゼアキサンチン又はゼアキサンチンを含有するカロテノイド混合物を採取することを含むゼアキサンチンの製造方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列が配列番号１に記載の塩基配列と実質的に相同であるアスタキサンチン生産微生物に突然変異を誘発し、生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率（質量％）が親株のそれよりも高い変異株を選抜してゼアキサンチン生産微生物を取得し、前記ゼアキサンチン生産微生物を培養することにより得た培養物からゼアキサンチン又はゼアキサンチンを含有するカロテノイド混合物を採取することを含むゼアキサンチン又はゼアキサンチンを含有するカロテノイド混合物の製造方法。
【請求項２】
生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率（質量％）が親株のそれより高い変異株の選抜が、固体培地上で黄色〜橙色を呈するコロニーを選択することを含む工程により行われる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ゼアキサンチン生産微生物により生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率が２０質量％以上であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ゼアキサンチン生産微生物により生産されるエキネノン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、カンタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチン及びアスタキサンチンのそれぞれの総カロテノイド生産量に対する比率がいずれも１０質量％未満であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ゼアキサンチンを含有するカロテノイド混合物がβ−クリプトキサンチン及び／又はβ−カロテンを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
アスタキサンチン生産微生物がＥ−３９６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３）およびその変異株、並びにＡ−５８１−１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４６７１）およびその変異株から選ばれる請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然黄色色素及び抗酸化作用物質として飼料配合剤、食品素材、化粧品素材、医薬品素材等に有用なゼアキサンチン、又はゼアキサンチン、β−クリプトキサンチン及びβ−カロテン等を含有するカロテノイド混合物の微生物的製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ゼアキサンチンはトウモロコシなど種々の植物に含まれ天然の黄色色素として飼料に添加され、ニワトリなどの家禽類の卵黄、肉、表皮の色調を改善する用途および食品の着色料としての用途が知られる。また強力な抗酸化作用を有し（Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６２（１），１３４−１３７，１９９６）、抗腫瘍効果が報告されている（Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１８（２），２２７−２３３，１９９５）。ゼアキサンチンはルテインとともに網膜及び水晶体に存在し眼の健康維持に関与していることが知られている（ＦＯＯＤ  Ｓｔｙｌｅ  ２１，３（３），５０−５３，１９９９）。これらの生理的効果からゼアキサンチンは健康食品素材、化粧品素材及び医薬品素材として有用である。β−クリプトキサンチンは柑橘類に含まれ、抗腫瘍効果を有することが知られ（Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１８（２），２２７−２３３，１９９５）、食品素材および飼料配合剤としての用途がある。β−カロテンはプロビタミンＡ作用、抗酸化作用を有し、飼料添加物、食品添加物、天然着色料等として広く使用されている。
【０００３】
ゼアキサンチンの製造法としてはオキソイソホロンの不斉還元により得た光学活性なヒドロキシケトンを原料として用いる化学合成法（Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，６３（１），４５，１９９１）、トウモロコシの種子から抽出する方法（生体色素，１９７４，朝倉書店）が知られている。またマリーゴールドから抽出する方法も知られるが（特開平８−０９２２０５）、マリーゴールド由来カロテノイドの主成分はルテインでありゼアキサンチンの含量は低い。また微生物が生産する例としてはスピルリナ藻類（特開平１０−１５５４３０）、ナンノクロリス属微細藻類（特開平７−５９５５８）、フレキシバクター属細菌（特開平５−３２８９７８）、アルテロモナス属細菌（特開平５−４９４９７）、フラボバクテリウム属細菌（Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ，  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  ２ｎｄ  ｅｄｎ，  Ｖｏｌ．１，  ５２９−５４４，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、細菌アグロバクテリウム・オウランティアクム（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１２８，１３９−１４４，１９９５）、新属の細菌Ｅ−３９６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３）（特開平７−７９７９６，特開平８−９９６４，米国特許第５，６０７，８３９号，米国特許第５，８５８，７６１号）が知られている。
【特許文献１】特開平７−７９７９６号公報
【特許文献２】特開平８−９９６４号公報
【特許文献３】米国特許第５，６０７，８３９号明細書
【特許文献４】米国特許第５，８５８，７６１号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、前述のゼアキサンチン化学合成法は有機溶剤を使用するので安全性および近年の天然物指向の面で問題がある。また従来の微生物による培養では生産性が低いので実用的でない。植物からの抽出ではゼアキサンチン含量が低いためにコストがかかりすぎるうえに天候に左右されるので安定供給が困難であるという欠点を有する。カロテノイド化合物生産菌として知られるＥ−３９６株は各種試験により既にその安全性が確認されアスタキサンチンを含有するカロテノイド化合物を工業的規模で高濃度に生産する方法が確立されているものの、生産される総カロテノイド中のゼアキサンチン比率は低い。
このためゼアキサンチンの安価で、安定供給可能な、安全性の高い製造方法が求められていた。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題を解決するため本発明者らは鋭意検討した結果、アスタキサンチンを生産する微生物を変異処理することにより、生産される総カロテノイド量に対するゼアキサンチンの比率が高い微生物が容易に得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００６】
即ち、本発明は以下の手段を提供する。
（１）１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列が配列番号１に記載の塩基配列と実質的に相同であるアスタキサンチン生産微生物に突然変異を誘発し、生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率（質量％）が親株のそれよりも高い変異株を選抜してゼアキサンチン生産微生物を取得し、前記ゼアキサンチン生産微生物を培養することにより得た培養物からゼアキサンチン又はゼアキサンチンを含有するカロテノイド混合物を採取することを含むゼアキサンチン又はゼアキサンチンを含有するカロテノイド混合物の製造方法。
（２）生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率（質量％）が親株のそれより高い変異株の選抜が、固体培地上で黄色〜橙色を呈するコロニーを選択することを含む工程により行われる前記（１）に記載の方法。
（３）前記ゼアキサンチン生産微生物により生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率が２０質量％以上であることを特徴とする前記（１）に記載の方法。
（４）前記ゼアキサンチン生産微生物により生産されるエキネノン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、カンタキサンチン、アドニルビン、アドニキサンチン及びアスタキサンチンのそれぞれの総カロテノイド生産量に対する比率がいずれも１０質量％未満であることを特徴とする前記（１）に記載の方法。
（５）ゼアキサンチンを含有するカロテノイド混合物がβ−クリプトキサンチン及び／又はβ−カロテンを含むことを特徴とする前記（１）に記載の方法。
（６）アスタキサンチン生産微生物がＥ−３９６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３）およびその変異株、並びにＡ−５８１−１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４６７１）およびその変異株から選ばれる前記（１）〜（５）のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、安価で、安定供給可能な、安全性の高いゼアキサンチンの製造方法が提供される。
また、本発明の方法によれば、ゼアキサンチン生産変異株の中には、主生成物としてゼアキサンチンとともに、副生成物としてβ-クリプトキサンチン及び／又はβ-カロテンを同時に生産する場合もあり、本発明はこれらのカロテノイド混合物（ゼアキサンチンとβ-クリプトキサンチン及び／又はβ-カロテン）を効率的に製造する方法としても有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の方法においては変異の親株としてアスタキサンチンを生産する微生物が用いられるが、このような微生物としては、その１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡの塩基配列が配列番号１に記載の塩基配列と実質的に相同であるアスタキサンチン生産細菌が挙げられる。ここで言う実質的に相同であるとはＤＮＡの塩基配列決定の際のエラー頻度等を考慮し９８％以上の相同性であることを意味する。
【０００９】
上記配列と実質的に相同な配列を有するアスタキサンチン生産微生物としては、具体的には、Ｅ−３９６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３）およびＡ−５８１−１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４６７１）、ならびにＥ−３９６株あるいはＡ−５８１−１株を変異改良することで得られる各種変異株およびこれら２種の近縁種を挙げることができる。配列番号１のＤＮＡ塩基配列は、Ｅ−３９６株のリボソームＲＮＡに対応するものであり、また配列番号２のＤＮＡ塩基配列は、Ａ−５８１−１株のリボソームＲＮＡに対応するものである。Ｅ−３９６株とＡ−５８１−１株の１６ＳリボソームＲＮＡの塩基配列の相同性は９９．４％であり、極めて近縁な株であることが判明した。よって、これらの菌株はカロテノイドを生産する細菌として一つのグループを形成している。本発明の方法において用いられる変異の親株は、Ｅ−３９６株およびＡ−５８１−１株ならびにＥ−３９６株あるいはＡ−５８１−１株の変異株およびこれらの菌株の近縁種として、１６ＳリボソームＲＮＡに対応するＤＮＡ塩基配列が配列番号１に記載の塩基配列と９８％以上の相同性を有するアスタキサンチン生産細菌として定義される。
【００１０】
本発明に使用するアスタキサンチン生産微生物として挙げられるＥ−３９６株について説明する。この株は、本発明者らが新しく単離したものであり、工業技術院生命工学工業技術研究所（独立行政法人産業技術研究所  特許生物寄託センター）に平成5年4月２７日にＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３として寄託された。さらに具体的な他の微生物としてはＡ−５８１−１株を挙げることができる。この株は、発明者らが新しく単離したものであり、工業技術院生命工学工業技術研究所（独立行政法人産業技術研究所  特許生物寄託センター）に平成６年５月２０日にＦＥＲＭ  ＢＰ−４６７１として寄託された。
【００１１】
本発明においてアスタキサンチン生産微生物を変異処理する方法は、突然変異を誘発するものであれば特に限定されない。たとえば、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）、などの変異剤による化学的方法、紫外線照射、Ｘ線照射などの物理的方法、遺伝子組換え、トランスポゾンなどによる生物学的方法などを用いることができる。この変異処理は１回でもよいし、また、例えばこの突然変異処理によりアスタキサンチン生産微生物の変異体を得て、これをさらに突然変異処理するというように２回以上の変異処理を行ってもよい。
【００１２】
次に、上記のようにして得られるアスタキサンチン生産微生物の突然変異体の中から、生産されるゼアキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率（質量％）が親株のそれよりも高くなっている変異株を選抜してゼアキサンチン生産微生物を取得する。この目的のために、変異処理後に固体培地上にコロニーを形成させ、ランダムにコロニーを取得してもよいが、ゼアキサンチン生産微生物のコロニーは黄色〜橙色を呈する場合が多いので、親株の赤色〜赤橙色のコロニーに比較して黄色〜橙色を呈するコロニーを選択することにより、効率的にゼアキサンチン生産微生物（変異株）を選抜することができる。この工程を含むことによりゼアキサンチンの総カロテノイド量に対する比率の高い変異株を取得できる確率は飛躍的に向上する。
【００１３】
次いで、上述のようにして選択された変異株コロニーを慣用の方法により培養し、培養終了後に各変異株の培溶液中に含まれるカロテノイド化合物を分析することにより、ゼアキサンチンの生産比率が高い変異株を選抜することができる。
【００１４】
変異株の培養は、例えば、生産菌の生育に必要で、カロテノイド化合物を生成する成分を含む培地で培養することにより行うことができる。培養方法は試験管、フラスコなどの振とう培養、通気撹拌培養などいずれの方法でもよい。カロテノイド化合物の分析方法は、カロテノイド化合物を分離検出できる方法なら何でも良いが、たとえば、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ペーパークロマトグラフィーなどを用いることができる。
【００１５】
本発明においてゼアキサンチン生産微生物の取得は、ゼアキサンチンの総カロテノイド量に対する比率の高い変異株を選抜することにより行われるが、ここで言う総カロテノイド量とは、アスタキサンチン、カンタキサンチン、アドニキサンチン、β−カロテン、エキネノン、ゼアキサンチン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、アドニルビンなどのカロテノイド化合物の総量をいう。
【００１６】
Ｅ−３９６株のごときアスタキサンチン生産微生物は、アスタキサンチン、カンタキサンチン、アドニキサンチン、β−カロテン、エキネノン、ゼアキサンチン、β−クリプトキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、アドニルビンなど多種のカロテノイド化合物を同時に生成するので、ゼアキサンチンの総カロテノイド量に対する比率は低く、通常は０〜１０質量％程度である。本発明においては、アスタキサンチン生産微生物に突然変異を誘発し、生産するゼアキサンチンの総カロテノイド量に対する比率が特に高い変異株を選抜する。その選抜の基準となるゼアキサンチンの比率は、変異前の親株のゼアキサンチン生産比率より高いことが最低限の条件であるが、生産される総カロテノイド量に対してゼアキサンチンを好ましくは２０質量％以上、より好ましくは４０質量％以上、さらに好ましくは６０質量％以上のゼアキサンチン比率を示す変異株を選抜する。
【００１７】
アスタキサンチンの生合成はβ−カロテンを上流とし、ケト化酵素および水酸化酵素によりそれぞれ両端の６員環が修飾されて行われると推定されている（図１参照）。このケト化酵素が完全に欠損すれば、β−カロテン、β−クリプトキサンチン、ゼアキサンチンだけが生産され、ケト化酵素を必要とするエキネノン、カンタキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、アドニルビン、アドニキサンチンおよびアスタキサンチンは生産されないことが推定される。またこのケト化酵素が不完全に欠損すれば、エキネノン、カンタキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、アドニルビン、アドニキサンチンおよびアスタキサンチンの総カロテノイド量に対する比率が低くなることが推定される。したがって、変異株の中からゼアキサンチン生産微生物を選抜するためのもう一つの有効な手段としては、エキネノン、カンタキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、アドニルビン、アドニキサンチンおよびアスタキサンチンの総カロテノイド量に対するそれぞれの比率が低いことを基準に選抜する方法を用いることができる。前述化合物それぞれの総カロテノイドに対する比率がいずれも、１０質量％未満、より好ましくは５質量％未満、さらに好ましくは１質量％未満であることを基準に選抜することができる。
【００１８】
本発明においてゼアキサンチンまたはセアキサンチンを含有するカロテノイド混合物を採取するために、ゼアキサンチン生産微生物を培養する方法は、ゼアキサンチンを生成する条件であればいずれの方法でもよいが、例えば、以下のような方法を採用できる。すなわち、培地としては生産菌が生育に必要な炭素源、窒素源、無機塩および必要であれば特殊な要求物質（例えば、ビタミン、アミノ酸、核酸等）を含むものを使用する。炭素源としてはグルコース、シュークロース、フルクトース、トレハロース、マンノース、マンニトール、マルトース等の糖類、酢酸、フマル酸、クエン酸、プロピオン酸、リンゴ酸、マロン酸等の有機酸、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、イソブタノール等のアルコール類等が挙げられる。添加割合は炭素源の種類により異なるが、通常培地１Ｌ当たり１〜１００ｇ、好ましくは２〜５０ｇである。窒素源としては、例えば、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、アンモニア、尿素等の１種または2種以上が用いられる。添加割合は窒素源の種類により異なるが、通常培地１Ｌに対し０．１〜２０ｇ、好ましくは１〜１０ｇである。無機塩としてはリン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸水素二ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸鉄、塩化鉄、硫酸マンガン、塩化マンガン、硫酸亜鉛、塩化亜鉛、硫酸銅、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム等の１種または2種以上が用いられる。添加割合は無機塩の種類により異なるが、通常、培地１Ｌに対し０．１ｍｇ〜１０ｇである。特殊な要求物質としてはビタミン類、核酸類、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、麦芽エキス、コーンスティープリカー、乾燥酵母、大豆粕、大豆油、オリーブ油、トウモロコシ油、アマニ油等の１種または２種以上が用いられる。添加割合は特殊な要求物質の種類により異なるが、通常、培地１Ｌに対し０．０１ｍｇ〜１００ｇである。培地のｐＨは２〜１２、好ましくは６〜９に調整する。培養条件は１０〜７０℃、好ましくは２０〜３５℃の温度であり、通常１日〜２０日間、好ましくは２〜９日間振とう培養あるいは通気撹拌培養を行う。
【００１９】
次に、以上の方法により得られた培養液から水分を除去する作業を行う。ゼアキサンチン含有物を得るために、培養液からどの程度の水分除去が必要かは培養液の色素含有量等の状態により異なるが、一般にまずろ過の作業を行いさらに水分の除去が必要であれば沈殿物の乾燥を行う。ろ過の方法は、通常のろ過法、遠心分離法などにより行うことができる。さらに水分を除去する必要がある場合には、沈殿物を乾燥する方法をとることが可能である。乾燥の方法としては、通常の噴霧乾燥、ドラム乾燥、凍結乾燥などが挙げられる。
【００２０】
必要に応じ抽出によりカロテノイド化合物の含量を高くすることもできる。抽出原料としては培養液そのものを用いても、ろ過後の沈殿物またはそれを乾燥したものを用いてもよい。抽出に用いる有機化合物は特に限定されないが、例えばテトラヒドロフラン、ピリジン、ジオキサン、シクロヘキサノン、シクロヘキサノール、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、エチルメチルケトン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの水溶性有機溶媒を用いることができる。これらは単独で用いても２種以上を混合して用いてもあるいはこれらと水とを混合して用いてもよい。得られた抽出液は減圧濃縮などにより溶媒を除去し製品とすることができる。必要により脱臭処理を行うことや植物油に懸濁することが可能である。
【００２１】
また、カロテノイド化合物の含量をさらに高くする必要がある場合には、上記水溶性有機溶媒抽出液に非極性有機溶媒及び水を加え、液液抽出を行うことができる。非極性溶媒としては例えばヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン、石油エーテル、ナフサ、ケロシン等を用いることができる。液液抽出後に得られた非極性溶媒相は分離回収したのち、濃縮又は加水又は非極性溶媒の追加又は冷却を行うことにより高純度のカロテノイド化合物を析出させることができる。濃縮、加水、非極性溶媒の追加及び冷却の工程はそれぞれ単独に実施してもよいが、必要に応じいくつかを組み合わせて実施することも可能である。得られた析出物はろ過により容易に回収されるので、必要に応じ溶媒等で洗浄を行い、乾燥して高純度の抽出精製物とすることができる。
【００２２】
以上の方法で得られるゼアキサンチンを含む培養沈殿物、沈殿乾燥物、抽出物、抽出精製物等の中から、飼料配合剤、食品素材、化粧品素材及び医薬品素材としてそれぞれ必要な製品形態を選択することができる。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
〔実施例１〕
Ｅ−３９６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３）を濃度２００ｍｇ／ＬのＮＴＧ（Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン）で、温度２８℃、３０分間静置して変異処理を行った。表１の組成からなる培地６ｍｌを内径１８ｍｍの試験管に入れ１２１℃、１５分間蒸気殺菌し、試験管培地を作製した。黄色〜橙色を呈する変異株コロニー２００株を選抜し、それぞれ試験管培地に１白金耳植菌、２８℃で４日間、３３０ｒｐｍの往復振とう培養を行った。次にこの培養物を遠心分離し、得られた菌体のカロテノイド化合物の分析を高速液体クロマトグラフィーにより行ったところ、総カロテノイド生産量に対するゼアキサンチンの比率が６０質量％以上を示す菌株を１株得た。この菌株のカロテノイド化合物の分析結果を表２に示した。比較のために上記と同じ条件で培養したＥ−３９６株培養液のカロテノイド化合物の分析結果を表３に示した。
【００２４】
【表１】
2005087097.tif 000002
【００２５】
【表２】
2005087097.tif 000003
【００２６】
【表３】
2005087097.tif 000004
【００２７】
〔実施例２〕
Ｅ−３９６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３）を濃度２００ｍｇ／ＬのＮＴＧ（Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン）で、温度２８℃、３０分間静置して変異処理を行った。表１の組成からなる培地６ｍｌを内径１８ｍｍの試験管に入れ１２１℃、１５分間蒸気殺菌し、試験管培地を作製した。変異株コロニーをランダムに１，５００株選抜し、それぞれ試験管培地に１白金耳植菌、２８℃で４日間、３３０ｒｐｍの往復振とう培養を行った。次にこの培養物を遠心分離し、得られた菌体のカロテノイド化合物の分析を高速液体クロマトグラフィーにより行ったところ、エキネノン、カンタキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、アドニルビン、アドニキサンチンおよびアスタキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率がいずれも１０質量％未満である菌株を１株得た。この菌株のカロテノイド化合物の分析結果を表４に示した。
【００２８】
【表４】
2005087097.tif 000005
【００２９】
〔実施例３〕
Ｅ−３９６株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４２８３）をＮＴＧで変異処理し、赤色の色調が濃いコロニーを選抜してアスタキサンチンの生産性が向上した変異株Ｙ−５５９株を取得した。このＹ−５５９株をさらに１５０ｍｇ／ＬのＮＴＧで変異処理した。表１の組成からなる培地６ｍｌを内径１８ｍｍの試験管に入れ１２１℃、１５分間蒸気殺菌し、試験管培地を作製した。黄色〜橙色を呈する変異株コロニー３５０株を選抜し、それぞれ試験管培地に１白金耳植菌、２８℃で５日間、３３０ｒｐｍの往復振とう培養を行った。次にこの培養物を遠心分離し、得られた菌体のカロテノイド化合物の分析を高速液体クロマトグラフィーにより行ったところ、エキネノン、カンタキサンチン、３−ヒドロキシエキネノン、アステロイデノン、アドニルビン、アドニキサンチンおよびアスタキサンチンの総カロテノイド生産量に対する比率がいずれも１％未満である菌株を１株得た。この菌株のカロテノイド化合物の分析結果を表５に示した。比較のために上記と同じ条件で培養したＹ−５５９株培養液のカロテノイド化合物の分析結果を表６に示した。
【００３０】
【表５】
2005087097.tif 000006
【００３１】
【表６】
2005087097.tif 000007
【００３２】
〔実施例４〕
Ａ−５８１−１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−４６７１）にＵＶランプで紫外線を照射し変異処理を行った。表１の組成からなる培地６ｍｌを内径１８ｍｍの試験管に入れ１２１℃、１５分間蒸気殺菌し、試験管培地を作製した。黄色〜橙色を呈する変異コロニー２８０株を選抜し、それぞれ試験管培地に１白金耳植菌し、２８℃で４日間、３３０ｒｐｍの往復振とう培養を行った。次にこの培養物を遠心分離し、得られた菌体のカロテノイド化合物の分析を高速液体クロマトグラフィーにより行ったところ、総カロテノイド量に対するゼアキサンチンの比率が２０質量％以上を示す菌株を１株得た。この菌株のカロテノイド化合物の分析結果を表７に示した。比較のために上記と同じ条件で培養したＡ−５８１−１株培養液のカロテノイド化合物の分析結果を表８に示した。
【００３３】
【表７】
2005087097.tif 000008
【００３４】
【表８】
2005087097.tif 000009
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の方法は、色素や抗酸化剤等に有用なゼアキサンチン、並びにゼアキサンチン、β-クリプトキサンチン及び／又はβ-カロテンを高濃度に含有するカロテノイド混合物をの製造に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】アスタキサンチンの生合成経路を示す図である。
【図１】
2005087097.tif 000010
【配列表】
2005087097000001.app