(57)【要約】【課題】  口腔内細菌と宿主の二方面から総合的にリスクを判断することが可能であり、且つ検査を受けた患者が自分のう蝕リスクを一目で理解することが可能な免疫クロマトグラフィー法を用いたう蝕リスク検査用具を提供する。【解決手段】  二種の多孔質膜片が非吸収性の素材の基材に固定されているう蝕リスク検査用具であり、多孔質膜片の一種は、片端にミュータンス菌と結合する抗体が赤色系の着色粒子を付着した状態で含まれた検体滴下部が、中程にミュータンス菌と結合する抗体とは異なる抗体が含まれた検出部が、検出部を挟んで検体滴下部と反対側の端に検体吸収部を有し、もう一種の多孔質膜片は、片端にヒトの唾液中に分泌されるSIgAと結合する抗体が青色系の着色粒子を付着された状態で含まれた検体滴下部が、中程にSIgAと結合する抗原が含まれた検出部が、検出部を挟んで検体滴下部と反対側の端に検体吸収部を有するう蝕リスク検査用具とする。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
長さを持つ二種の多孔質膜片（Ｘ）及び多孔質膜片（Ｙ）とが非吸収性の素材から成る基材（Ｚ）に固定されているう蝕リスク検査用具であって、
多孔質膜片（Ｘ）は、その片端にストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体（Ａ’）が赤色系の着色粒子（Ｐｒ）を付着された状態で含まれた検体滴下部（Ｘ１）が配置されており、中程にストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体（Ａ’）とは異なる抗体（Ａ）が含まれた検出部（Ｘ２）が配置されており、該検出部（Ｘ２）を挟んで検体滴下部（Ｘ１）と反対側の端に検体吸収部（Ｘ３）が配置されており、
多孔質膜片（Ｙ）は、その片端にヒトの唾液中に分泌されるSＩgAと特異的に結合する抗体（Ｂ）が青色系の着色粒子（Ｐｂ）を付着された状態で含まれた検体滴下部（Ｙ１）が配置されており、中程にヒトの唾液中に分泌されるSＩgAと特異的に結合する抗原（Ｓ）が含まれた検出部（Ｙ２）が配置されており、該検出部（Ｙ２）を挟んで検体滴下部（Ｙ１）と反対側の端に検体吸収部（Ｙ３）が配置されていることを特徴とするう蝕リスク検査用具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫クロマトグラフィー法を用い口腔内細菌に起因する要因と宿主に起因する要因との二方面から総合的にう蝕のリスクを検査するう蝕リスク検査用具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、う蝕の進行を抑制する対策を考えたり、う蝕の治療計画を立てるために歯科医療術者が患者のう蝕リスクを把握しようという動きが起き始めている。う蝕は口腔内の状況や生活習慣等に起因する多因子性の疾患であり「口腔内細菌」，「宿主」及び「食物」の三要因が揃うことで発症することが知られている（例えば、非特許文献１参照）。患者自身にう蝕リスクを理解させることは、オーラルケアの維持継続に対して動機を与える上でも重要なことである。
【０００３】
特に口腔内細菌とう蝕の発症との間には密接な関係があることが知られており、口腔内細菌の一種であるミュータンス連鎖球菌の数が多いほどう蝕が発症する確率が高いことが報告されてからミュータンス連鎖球菌の数を簡易に定量し、う蝕リスクを把握しようとする試みが数多く行われてきた。ヒトの唾液中に存在するミュータンス連鎖球菌の数を簡易に定量する方法としては、ミュータンス連鎖球菌の一種であるストレプトコッカス・ミュータンスに特異的に反応するモノクロ−ナル抗体を応用して定量しようとするもの（例えば、特許文献１及び２参照。）や、簡易培養キットで増殖した菌体そのものを目視により定量するもの等がある（例えば、特許文献３参照。）。
【０００４】
また、「宿主」の観点からう蝕リスクを把握する方法としては、例えば唾液の分泌量や唾液の緩衝能等の測定が一般的に行われてきたが、近年ストレプトコッカス・ミュータンス菌の体表層物質の一部である特定のタンパク質が、歯面に対するストレプトコッカス・ミュータンス菌の初期付着に関連があることが確認され、特定のタンパク質を抗原としてその抗体となる物質を探求したところ、口腔粘膜から唾液中へ分泌される分泌型免疫グロブリン抗体A（以下SIgAと記す）が歯面に対するストレプトコッカス・ミュータンス菌の付着を防御する機能を持つことが解明された。即ち、ヒトの唾液中におけるSIgAの抗体価が高いと歯面に対してストレプトコッカス・ミュータンス菌が付着し難く、う蝕リスクが低いことが究明されう蝕リスク検査方法として提案されている（特許文献４参照。）。
【０００５】
しかしながら、これらのう蝕リスク検査は「口腔内細菌」や「宿主」等の各々の要素毎に行われていたため、本来う蝕は多因子性の疾患であるにも関わらず種々の要素に関するリスクから総合的なリスクを判断することが難しいという問題があった。また、一般的に免疫クロマトグラフィー法を用いてう蝕リスクを検査する際、う蝕リスクが高いことを示す場合にも低いことを示す場合にも、その判定結果が赤色系の線で示されることが多く検査を受けた患者は自分のう蝕リスクが高いのか若しくは低いのかを一目で理解することが困難であった。
【０００６】
【非特許文献１】KeyesPH : Recent advances in dental caries research, bacteriology, bacteriological findings, and biological implications, Int Dent J 1962;12:443
【特許文献１】特開平2-177898号公報
【特許文献２】特開平10-36400号公報
【特許文献３】米国特許5374538号公報
【特許文献４】特願2002-273125号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ヒトのう蝕リスクを把握する際に口腔内細菌と宿主の二方面から総合的にう蝕リスクを判断することが可能であり、且つ検査を受けた患者が自分のう蝕リスクを一目で理解することが可能な免疫クロマトグラフィー法を用いたう蝕リスク検査用具を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
即ち本発明は、長さを持つ二種の多孔質膜片（Ｘ）及び多孔質膜片（Ｙ）とが非吸収性の素材から成る基材（Ｚ）に固定されているう蝕リスク検査用具であって、多孔質膜片（Ｘ）は、その片端にストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体（Ａ’）が赤色系の着色粒子（Ｐｒ）を付着された状態で含まれた検体滴下部（Ｘ１）が配置されており、中程にストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体（Ａ’）とは異なる抗体（Ａ）が含まれた検出部（Ｘ２）が配置されており、該検出部（Ｘ２）を挟んで検体滴下部（Ｘ１）と反対側の端に検体吸収部（Ｘ３）が配置されており、
多孔質膜片（Ｙ）は、その片端にヒトの唾液中に分泌されるSＩgAと特異的に結合する抗体（Ｂ）が青色系の着色粒子（Ｐｂ）を付着された状態で含まれた検体滴下部（Ｙ１）が配置されており、中程にヒトの唾液中に分泌されるSＩgAと特異的に結合する抗原（Ｓ）が含まれた検出部（Ｙ２）が配置されており、該検出部（Ｙ２）を挟んで検体滴下部（Ｙ１）と反対側の端に検体吸収部（Ｙ３）が配置されていることを特徴とするう蝕リスク検査用具である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係るう蝕リスク検査用具は、一つのう蝕リスク検査用具で口腔内細菌と宿主との二方面から総合的にリスクを判断することが可能であり、更にヒトの唾液中に存在するストレプトコッカス・ミュータンス菌の数が多くう蝕リスクが高い場合には赤色系の染み、ヒトの唾液中に分泌されるSIgAが多くう蝕リスクが低い場合には青色系の染みが現れるため患者自身が自分のう蝕リスクの高低を視覚的にも理解し易いう蝕リスク検査用具である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、図面を用い本発明に係るう蝕リスク検査用具について詳細に説明するが、本発明は本実施例に限定されるものではない。
【００１１】
図１は、二種の多孔質膜片Ｘ及び多孔質膜片Ｙとがそれぞれ一つずつ非吸収性の素材から成る基材Ｚに固定されているう蝕リスク検査用具の一実施例を模式的に示す斜視説明図である。
【００１２】
図１の図面中Ｚは、二種の多孔質膜片Ｘ及び多孔質膜片Ｙとが固定されている基材である。基材Ｚは非吸収性の素材から成り、例えば、ポリスチレン，ポリエステル，酢酸セルロース等から形成されたものが使用できる。その形状としては、フィルム状，板状，帯状，短冊状，円盤状等いずれでも良いが、多孔質膜を安定して設置するには０．１〜５ｍｍ程度の厚みの有る板状が好ましい。
【００１３】
図１の図面中Ｘ及びＹは多孔質膜片であり、唾液が毛細管現象によって多孔質膜中を展開されるには多孔質膜片の形状は長方形等長さを持つ形状であることが好ましいが、角が丸みを帯びた長円であったり、周辺が直線ではなく曲線であっても良い。その材質としては、例えば、セルロース膜，酢酸セルロース膜またはニトロセルロース等のセルロース膜誘導体膜、ガラスフィルター、濾紙等が使用できる。多孔質膜片Ｘと多孔質膜片Ｙは形状や材質が同じであっても異なっていてもよく、基材Ｚへの固定は常法によって行うことができ、例えば、両面テープや接着剤を用いて固定すれば良い。固定する際の多孔質膜片Ｘ及び多孔質膜片Ｙの配置の仕方は特に限定されないが、図１に示したように多孔質膜片Ｘと多孔質膜片Ｙとが長手方向に平行な位置関係になるように配置すると安定感があって良い。また、多孔質膜Ｘ及びＹはそれぞれ複数あっても良く、その場合は検査の精度向上が期待できたり検査の効率向上が期待できる。
【００１４】
図１中のＸ１は検体滴下部、Ｘ２は検出部、Ｘ３は検体吸収部であり、多孔質膜片Ｘにおいて検体滴下部Ｘ１と検体吸収部Ｘ３とは検出部Ｘ２を挟んで反対側の端へクリップ等を用いて固定すれば良い。検体吸収部Ｘ３は滴下された唾液を吸収しやすい素材であれば特に限定されず例えば濾紙等が使用できる。
【００１５】
検体滴下部Ｘ１には抗体Ａ’が、検出部Ｘ２には抗体Ａが含まれている。抗体Ａ’と抗体Ａは、歯科用診断や研究用基剤で通常用いられる方法で調製されたストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体であれば特に限定されないが、抗体Ａと抗体Ａ’は種類が異なることが必要である。検体滴下部Ｘ１に含まれる抗体Ａ’には金コロイド粒子（British Biocell International社製）等の赤色系の着色粒子Ｐｒが付着されている。
【００１６】
赤色系の着色粒子Ｐｒは、通常免疫クロマトグラフィー法で用いられるものの中で抗体の活性を妨げない赤色系を示す物質であれば特に限定されず、赤色系は市販品等マンセル色相環でいう5RP  10RP  5R  10R  5YR等を示し、中でも10RP  5R  10Rのような色調を示す粒子が好ましい。
【００１７】
検出部Ｘ２に含まれる抗体Ａは、必要に応じてウシ血清アルブミン含有リン酸緩衝液等で希釈し、例えば図１のように多孔質膜Ｘの長手方向と垂直になるようマイクロピペットで塗布して多孔質膜Ｘに固定して使用される。
【００１８】
図１中のＹ１は検体滴下部、Ｙ２は検出部、Ｙ３は検体吸収部であり、多孔質膜片Ｘと同様に検体滴下部Ｙ１と検体吸収部Ｙ３とは検出部Ｙ２を挟んで反対側の端へクリップ等を用いて固定すれば良い。検体吸収部Ｙ３は滴下された唾液を吸収しやすい素材であれば特に限定されず例えば濾紙等が使用できる。
【００１９】
検体滴下部Ｙ１にはヒトの唾液中に分泌されるSIgAと特異的に結合する抗体Ｂが、検出部Ｙ２にはヒトの唾液中に分泌されるSIgAの抗原Ｓが含まれている。ヒトの唾液中に分泌されるSIgAと特異的に結合する抗体Ｂは、歯科用診断や研究用で通常用いられる方法で調製された抗体であれば特に限定されずに使用でき、青色系の着色粒子Ｐｂが付着されている。図１に示されたう蝕リスク検査用具の場合には、ヒトの唾液中に分泌されるSIgAと特異的に結合する抗体Ｂ（MONOCLONAL ANTI-HUMAN IGA（SIGMA社製））には青色系粒子Ｐｂとして青色ラテックス粒子（Merck Chimie S.A.S社製）が1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide Hydrochlorideを用いて付着されている。
【００２０】
検出部Ｘ２に含まれるSIgAの抗原Ｓとしては、例えば、PAc（Protein  Antigen  cerotype C）(361-386)とよばれるタンパク質を使用でき、SIgAの抗原として機能すれば特に限定されず使用することができる。抗原Ｓは、必要に応じてリン酸緩衝液等で希釈し、例えば図１のように多孔質膜Ｙの長手方向と垂直になるようマイクロピペットで塗布して多孔質膜Ｙに固定して使用される。
【００２１】
青色系の着色粒子Ｐｂは、通常免疫クロマトグラフィー法で用いられる着色粒子であって抗体の活性を妨げない物質であれば特に限定されず、青色系としてはマンセル色相環でいう10P  5P  10PB  5PB  10B  5B  10BG  5BG  10G  5G  10GY  5GY等を示し、中でも5PB  10B  5B  10BG  5BG  10G  5G  10GYのような色調をもつ粒子が好ましい。
【００２２】
図１に示した二種の多孔質膜片Ｘ及び多孔質膜片Ｙとが非吸収性の素材から成る基材Ｚに固定されているう蝕リスク検査用具を用いてう蝕リスクを検査する方法を説明する。多孔質膜片Ｘの検体滴下部Ｘ１にヒトの唾液を滴下すると、ヒトの唾液中にストレプトコッカス・ミュータンス菌が存在すれば、ストレプトコッカス・ミュータンス菌は検体滴下部Ｘ１に含まれている赤色系の着色粒子Ｐｒが付着された抗体Ａ’と結びつき、その結びついた状態で多孔質膜片Ｘ中を毛細管現象によって検体滴下部Ｘ１から検体吸収部Ｘ３へ移動して行く。移動の途中で検出部Ｘ２を通過する際にストレプトコッカス・ミュータンス菌は多孔質膜片Ｘに固定された抗体Ａにより補足され、ヒトの唾液中に存在するストレプトコッカス・ミュータンス菌の数が多ければ（う蝕リスクが高ければ）多孔質膜片Ｘ上の検出部Ｘ２に赤色の染みとして現れる。
【００２３】
同様に、多孔質膜片Ｙの検体滴下部Ｙ１にヒトの唾液を滴下すると、ヒトの唾液中にSIgAが存在すれば、SIgAは検体滴下部Ｘ１に含まれている青色系の着色粒子Ｐｂが付着された抗体Ｂと結びつき、結合した状態で多孔質膜片Ｙ中を毛細管現象によって検体滴下部Ｙ１から検体吸収部Ｙ３へ移動して行き、移動の途中で検出部Ｙ２を通過する際にSIgAは固定された抗原Ｓにより補足されヒトの唾液中に存在するSIgAが多ければ（う蝕リスクが低ければ）多孔質膜片Ｙ上に青色の染みとして現れる。このようにそれぞれに現れた染みの色を目視で判断して患者のう蝕リスクを判定するのである。
【００２４】
本発明におけるう蝕リスク検査用具を用いて検査する際に用いる唾液は、通常歯科用診断で唾液の検査と同様の方法によって調製され、また必要に応じて調製しておくこともできる。例えばストレプトコッカス・ミュータンス菌数の測定では刺激唾液を、1mol/LのNaOHを含む溶液及び5％のポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテルを含有する0.5mol/Lのクエン酸を含む溶液で処理したり、SIgA抗体価の測定では刺激唾液を1％Tween20-0.5%スキムミルクを含むPBSで10倍希釈する等して使用できる。
【００２５】
また、多孔質膜片Ｘの検体滴下部Ｘ１と多孔質膜片Ｙの検体滴下部Ｙ１へ滴下される唾液が各々異なる調製をされている場合には、検体滴下部Ｘ１と検体滴下部Ｙ１とを異なる形にしたり、異なる記号や数字を記す等しておくと、滴下する唾液を間違える虞がなくより好ましい。
【００２６】
目視で判断した結果からう蝕リスク判定する際、表１のようなリスク判定表を予め作成しておくと、患者への説明も容易となり更に好ましい。表１中ではストレプトコッカス・ミュータンス菌は虫歯菌と表現している。
【００２７】
【表１】
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【００２８】
本発明に係るう蝕リスク検査用具の応用例としては、検体滴下部Ｘ１にストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体Ａ’を赤色系の着色粒子Ｐｒを付着された状態で含ませておく代わりに、う蝕リスク検査用具外で赤色系の着色粒子Ｐｒを付着された抗体Ａ’を含む溶液とヒトの唾液とを混合してから検体滴下部Ｘ１に滴下する方法もできる。同様に、検体滴下部Ｙ１に青色系のヒトの唾液中に分泌されるSＩgAと特異的に結合する抗体Ｂを青色系の着色粒子Ｐｂを付着された状態で含ませておく代わりに、う蝕リスク検査用具外で青色系の着色粒子Ｐｂを付着された抗体Ｂを含む溶液とヒトの唾液とを混合してから検体滴下部Ｙ１に滴下してう蝕リスクを検査することもできる。
【００２９】
更に異なる本発明に係るう蝕リスク検査用具の応用例としては、基材Ｚに固定される多孔質膜片を１つにして、その片端の検体滴下部にストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する赤色系の着色粒子Ｐｒを付着された抗体Ａ’とヒトの唾液中に分泌されるSＩgAと特異的に結合する青色系の着色粒子（Ｐｂ）が付着された抗体Ｂとが同時に含まれ、中程にストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体Ａ’とは異なる抗体Ａとヒトの唾液中に分泌されるSIgAの抗原Ｓとが間隔を開けて含まれている形態のう蝕リスク検査用具も考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明に係るう蝕リスク検査用具の一実施例を模式的に示す斜視説明図。
【符号の説明】
【００３１】
Ｘ：多孔質膜Ｘ
Ｘ１：検体滴下部
Ｐｒ：赤色系着色粒子
Ａ’：ストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体
Ｘ２：検出部
Ａ：ストレプトコッカス・ミュータンス菌と特異的に結合する抗体
Ｘ３：検体吸収部
Ｙ：多孔質膜Ｙ
Ｙ１：検体滴下部
Ｐｂ：青色系着色粒子
Ｂ：ヒトの唾液中に分泌されるSＩgAと特異的に結合する抗体
Ｙ２：検出部
Ｓ：ヒトの唾液中に分泌されるSIgAの抗原
Ｙ３：検体吸収部
Ｚ：基材
【図１】
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