(57)【要約】【課題】  水分散性が良好なマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を提供する。【解決手段】    少なくともマレイミド基と水酸基とを含有し、かつマレイミド基と水酸基との含有比率Ａ（マレイミド基／水酸基、モル比）が０．０１＜Ａ＜１．０である架橋ポリマー粒子であることを特徴とするマレイミド基含有架橋ポリマー粒子。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくともマレイミド基と水酸基とを含有し、かつマレイミド基と水酸基との含有比率Ａ（マレイミド基／水酸基、モル比）が０．０１＜Ａ＜１．０である架橋ポリマー粒子であることを特徴とするマレイミド基含有架橋ポリマー粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マレイミド基含有架橋ポリマー粒子に関し、特に診断薬および医薬品担体、クロマトグラフィ担体、粘性調整剤、樹脂成形材料、塗料添加剤、架橋／硬化剤および化粧品添加剤のような用途に好適に使用可能なマレイミド基含有架橋ポリマー粒子に関する。
【背景技術】
【０００２】
イオン交換樹脂、キレート樹脂のような機能性架橋ポリマー粒子は、種々の化学物質の担体として従来から広く用いられている。このような機能性架橋ポリマー粒子は、不溶性の重合体の表面に種々の反応性基を有する。従来からカルボキシル基、水酸基、および１級および２級アミノ基のような種々の活性水素含有基が導入された機能性ポリマーが種々の用途に用いられてきた。
【０００３】
近年では、核酸やペプチド、抗体のような生体分子あるいは生体分子類似の合成分子を活性を保持したまま架橋ポリマー粒子に固定し、アフィニティクロマトグラフィや診断薬、検査薬などに用いられるようになった。このようにより選択性の高い担持体粒子として用いる場合は、生体分子あるいは生体分子類似の合成分子中のＳＨ基との間に選択的で安定な結合を形成し確実に担持可能なマレイミド基を有するものが望まれていた。このような用途では、ポリマー担体は所望量の物質を均一かつ確実に担持する必要があり、かつ、水系溶媒に対する良好な分散性を有する必要がある。
【０００４】
マレイミド基を含有する架橋ポリマー粒子の公知例は少ない。例えば、マレイミド基を含有するリン脂質膜が表面に存在する微粒子が開示されている（例えば、特許文献１参照。）。
しかしながら、この方法では、Ｎ−（６−マレイミドカプロイロキシ）サクシンイミドのごときマレイミド基含有化合物をリン脂質と反応させ、カラムクロマトグラフィなどの方法で精製してマレイミド基含有リン脂質をあらかじめ作製しなければならない。さらに、多段の処理をへてマレイミド基を含有するリン脂質膜を作製し、これを磁性粒子のごとき核粒子上に形成するので、工程がきわめて複雑で、さらに核粒子とマレイミド基を含有するリン脂質膜とは化学結合していないので物理的に弱いという欠点がある。
【０００５】
また、マレイミド基を含有するポリスチレン粒子が掲載されている例がある（例えば、非特許文献１参照。）。しかしながら、マレイミド基は疎水性が強い官能基で、水性媒体中での分散性が非常に悪いものであった。またマレイミド基は０．４ｍｍｏｌ／ｇ以下であって前記目的には官能基量として不十分であった。
【特許文献１】特開平１１−１０６３９１号公報
【非特許文献１】２００１／２００２製品カタログ，Ｆｕｌｋａ社，ｐ．９０９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、水分散性が良好なマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題は、下記の本発明により達成された。
即ち本発明は、
少なくともマレイミド基と水酸基とを含有し、かつマレイミド基と水酸基との含有比率Ａ（マレイミド基／水酸基、モル比）が０．０１＜Ａ＜１．０である架橋ポリマー粒子であることを特徴とするマレイミド基含有架橋ポリマー粒子である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、水分散性が良好なマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明のマレイミド基含有架橋ポリマー粒子は、少なくともマレイミド基と水酸基とを含有し、かつマレイミド基と水酸基との含有比率Ａ（マレイミド基／水酸基、モル比）が０．０１＜Ａ＜１．０である架橋ポリマー粒子であることを特徴とする。前記含有比率Ａを０．０１＜Ａ＜１．０とすることで、水系溶媒における分散性が良好となり、かつシステインを含有するペプチド、酵素、その他のタンパク質、還元抗体、あるいは末端にＳＨ基を有するＤＮＡ、ＲＮＡなどの親水性ＳＨ基含有化合物に対しての反応性が向上する。
以下、本発明を具体的に説明する。
【００１０】
本発明のマレイミド基含有架橋ポリマー粒子は、マレイミド基および水酸基を、架橋ポリマー粒子の表面に有しても、また、架橋ポリマー粒子の内部に有しても、また、表面及びその内部の両方に有してもよい。
前記含有比率Ａは、水系溶媒中での分散性がより良好となる点で、０．９以下であることが好ましく、０．８以下であることがより好ましい。又、前記含有比率Ａは、より反応性が向上する点で、０．０２以上であることが好ましく、０．０５以上であることがより好ましい。
一方、前記含有比率Ａが１．０を超えると、粒子同士が凝集しやすくなり分散が不十分となってしまう。又、前記含有比率Ａが０．０１未満であると、反応性が低下してしまう。
【００１１】
本発明のマレイミド基含有架橋ポリマー粒子は、カラムクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等の分離精製用の担持体として利用する場合、マレイミド基の含有量は０．００１ｍｍｏｌ／ｇ以上であることが好ましく、単位質量当たりの反応量をできるだけ多くするという観点から、０．０１ｍｍｏｌ／ｇ以上であることがより好ましく、０．１ｍｍｏｌ／ｇ以上がより好ましい。前記マレイミド基の含有量を０．００１ｍｍｏｌ／ｇ以上とすることによりＳＨ基含有化合物との反応速度をより上げることができる。
【００１２】
このように、本発明のマレイミド基含有架橋ポリマー粒子は、水系溶媒における分散性が良好で、該マレイミド基含有架橋ポリマー粒子の担持性は生体分子あるいは生体分子類似の合成分子中のＳＨ基との間に選択的で安定な結合を形成するもので、選択性の高い担持体粒子として利用できる。
【００１３】
本発明のマレイミド基含有架橋ポリマー粒子は、特に限定されるものではなく、種々の用途に応じて選択可能であるが、乾燥状態での平均粒径が０．５〜５００μｍであることが好ましく、固液分離の容易性の観点から、１〜１００μｍであることがより好ましく、５〜５０μｍであることが特に好ましい。
前記乾燥状態での平均粒径が０．５〜５００μｍであると、単位質量当たりの十分な反応量を維持したまま、濾過あるいは遠心分離による固液分離特性をより向上することができる。
【００１４】
本発明のマレイミド基含有架橋ポリマー粒子は、水酸基を含有する架橋ポリマー粒子と、後述するマレイミド基含有化合物とを反応させることにより得られる。
前記水酸基を含有する架橋ポリマー粒子は、該架橋ポリマー粒子を構成する成分の一つである重合体として、水酸基を含有する単量体を重合することにより得られた重合体（以下、「水酸基含有重合体」という場合がある。）の他、更に水酸基を含有する単量体と他の単量体とを共重合することによって得られた重合体（以下、「水酸基含有共重合体」という場合がある。）が挙げられもので、前記重合体としては前記水酸基含有共重合体が好ましい。前記水酸基を含有する架橋ポリマー粒子は、重合時に架橋構造としても、重合によりポリマー粒子化した後に架橋させてもよい。さらに、加水分解可能な官能基を有する架橋ポリマー粒子を加水分解した後、少なくとも２個の水酸基を有する化合物とを反応させて得られた重合体、あるいは、エステル交換可能な官能基を有する架橋ポリマー粒子と、少なくとも２個の水酸基を有する化合物とを反応させて得られた重合体であってもよい。
【００１５】
前記水酸基含有重合体の具体例としては、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ヒドロキシメチルベンジル（メタ）アクリレートなどの水酸基を含有する単量体の重合による重合体；ｔ−ブチル（メタ）アクリレート重合体、ベンジル（メタ）アクリレート重合体等の加水分解可能な重合体を加水分解してカルボキシル基に変換した後、対応するジオールでエステル化して得られた重合体；ｔ−ブチル（メタ）アクリレート重合体等のエステル交換可能な重合体に、対応するジオールでエステル交換して得られた重合体；ハロゲン化メチルスチレン重合体等の置換反応可能な重合体を対応するジオールでエーテル化して得られた重合体等が挙げられる。また、Ｗａｎｇレジンとして知られる水酸基含有スチレン系重合体でもよい。これらの中でも特にｔ−ブチル（メタ）アクリレート重合体をキシレンジオール、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコールのごときジオールでエステル化して得られた水酸基含有（メタ）アクリル系重合体、Ｗａｎｇレジンタイプの水酸基含有スチレン系重合体が反応性の点で好ましい。
尚、本明細書において、「（メタ）アクリレート」とは、「アクリレート」又は「メタクリレート」を表すものとする。
【００１６】
更に、前記水酸基含有共重合体において、前記水酸基を含有する単量体と共重合する他の単量体としては、ジビニルベンゼン、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、グリシジル（メタ）アクリレート、２−（［１'−メチルプロピリデンアミノ］カルボキシアミノ）エチル（メタ）アクリレート等の架橋性を有する単量体が好ましく挙げられる。
【００１７】
また、前記水酸基を含有する架橋ポリマー粒子は、上述の水酸基含有共重合体又は水酸基含有共重合体を構成する単量体の他に、更に、別の単量体を共重合させたてもよい。好適な前記別の単量体としては、スチレン、メチル（メタ）アクリレート等が挙げられる。
【００１８】
本発明において、水酸基を含有する架橋ポリマー粒子を得る方法には、公知の方法が利用でき、例えば、懸濁重合法、乳化重合法、分散重合法、シード重合法等が好適に用いられる。さらに、膜乳化法として知られる乳化方法を使って懸濁重合することもできる。
【００１９】
前記重合には、必要に応じて、当業者には周知の重合開始触媒を用いることができる。
具体的には、ジアシルパーオキサイド、ケトンパーオキサイドおよびアルキルハイドロパーオキサイドのような有機過酸化物；過酸化水素およびオゾンのような無機過酸化物；アゾビスバレロニトリル（ＡＩＢＮ；和光純薬社よりＶ−６０として入手可能）、２，２’−アゾビス（２−メチルブチロニトリル）（和光純薬社よりＶ−５９として入手可能）および２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）（和光純薬社よりＶ−６５として入手可能）のような油溶性アゾ系有機化合物；２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）二酸塩（和光純薬社よりＶ−５０として入手可能）、２，２’−アゾビス［２−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）プロピオンアミド］（和光純薬社よりＶＡ−０８６として入手可能）および２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］二酸塩（和光純薬社よりＶＡ−０４４として入手可能）のような水溶性アゾ系有機化合物が挙げられる。これら重合開始触媒を用いる場合は、重合が良好に開始されるのに充分な量で用いられる。このような量は当業者に周知であるが、一般には０．１〜５．０質量％の量で用いることが好ましい。
【００２０】
更に、着色を目的に、水酸基を含有する架橋ポリマー粒子に、公知の染料、顔料、カーボンブラック、磁性粉などを添加することも可能である。
また、前記水酸基を含有する架橋ポリマー粒子を構成する単量体とともに、トルエン、オクタン、シクロヘキサノン、ジブチルフタレート、ラウリルアルコール等の非重合性の添加剤を入れ、重合後に抽出除去して粒子を多孔質とすることも可能である。
【００２１】
本発明における水酸基を含有するする架橋ポリマー粒子は、特殊な反応性官能基を有さないので添加剤や溶媒との反応、残存による粒子物性への悪影響が全くないか、きわめて少ないという利点がある。
【００２２】
前記水酸基を含有するする架橋ポリマー粒子と反応するマレイミド基含有化合物は、特に限定されないが、ヒドロキシメチルマレイミド、ヒドロキシエチルマレイミドが好ましい。
本発明において、前記含有比率Ａの制御（０．０１＜含有比率Ａ＜１．０に制御）は、前記水酸基を含有するする架橋ポリマー粒子とマレイミド基含有化合物とを反応させるときに、水酸基を含有するする架橋ポリマー粒子の架橋度、マレイミド基含有化合物の添加量、反応時間、反応温度の少なくともいずれか一つを制御することにより行える。
【００２３】
詳しくは、前記水酸基を含有する架橋ポリマー粒子の架橋度が高いと、マレイミド基の導入量が少なくなり、前記含有比率Ａは小さくなる傾向がある。
また、前記水酸基を含有するする架橋ポリマー粒子の架橋度は、０．０１％〜１０％であることが好ましい。前記架橋度が０．０１％未満であると、乾燥時に融着することがある。一方、前記架橋度が１０％を超えると、マレイミドの反応性が低下することがある。
【００２４】
前記マレイミド基含有化合物の添加量が多くなると、前記含有比率Ａは高くなる傾向がある。前記マレイミド基含有化合物の好適な添加量は、前記水酸基を含有する架橋ポリマー粒子のエステル部の組み合わせ及びこれら官能基の導入量により異なるが、水酸基を含有する架橋ポリマー粒子の質量で約０．１〜１０倍量であることが好ましい。
【００２５】
前記反応時間が長くなると、前記含有比率Ａは高くなる傾向がある。前記反応時間は１時間〜２４時間であることが好ましい。前記反応時間が１時間未満であると、目的の含有比率Ａを得るために多量のマレイミド基含有化合物が必要になることがある。一方、前記反応時間が２４時間を超えると、水が共存する場合加水分解することがある。
【００２６】
前記反応温度が高くなると、前記含有比率Ａは高くなる傾向がある。前記反応温度は８０℃〜２００℃であることが好ましい。前記反応温度が８０℃未満であると、目的の含有比率Ａを得るために多量のマレイミド基含有化合物が必要になることがある。一方、前記反応温度が２００℃を超えると、不純物が生成することがある。
【００２７】
前記水酸基含有架橋ポリマー粒子とマレイミド基含有化合物との反応は、水１分子が外れて縮合した形態であり、従来公知の反応によって行うことができるが、中でも、エーテル化触媒の存在下で行うことが好ましい。
この反応には酸性あるいは塩基性の公知のエーテル化触媒が好適に使用できる。例えば、塩基性の触媒としては、アルカリ金属やアルカリ土類金属の水酸化物、酸化物、炭酸塩、重炭酸塩等が使用でき、単独又は２種類以上混合して使用できる。酸性の触媒としては、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸等の無機酸やｐ−トルエンスルホン酸、トリクロロ酢酸、酢酸等の有機酸が使用でき、これらは水和物の形態でもよい。また、ハイドロタルサイト類の固体触媒でも使用が可能である。
【００２８】
塩基性触媒や酸性触媒を使用する場合のその使用量は、対応する塩基又は酸として、マレイミド基含有化合物に対して、０．０１〜４０質量％が好ましく、０．１〜１５質量％がより好ましい。固体触媒を使用する場合のその使用量は、マレイミド基含有化合物に対して、０．００１〜１００質量％が好ましく、０．１〜５０質量％がより好ましい。これらの触媒は、反応液に均一に溶解した状態で使用しても不溶の状態で使用してもよいが、均一溶解状態では、使用量を少なくすることができる。一方、不溶の状態では、反応後に反応液から常法により容易に触媒を分離回収することができる。
【００２９】
前記エーテル化反応の溶剤としては、反応を阻害しないものであればいずれの溶媒も使用できる。例えば、トルエン、キシレン、メシチレンが挙げられる。
【００３０】
前記マレイミド基導入量の再現性の面で、あらかじめ反応前に粒子を分級処理し、粒径をそろえてから反応させることが望ましい。こうして得られたマレイミド含有架橋ポリマー粒子は、メタノール等の溶媒に希釈分散させ、濾別し、更に水洗及び／又は溶剤洗浄の後、噴霧乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥等の通常の手段によって粉体として単離することができる。
【００３１】
前記操作により得られた架橋ポリマー粒子におけるマレイミド基量は、粒子に存在するマレイミド基を過剰量の２−メルカプトエチルアミンと反応させ、反応後に残った２−メルカプトアミンの量を測定することにより、逆に粒子のマレイミド基を求めることができる。その具体例としては、例えば、（株）同仁化学研究所の総合カタログ（平成１４年３月２９日発行）第一部プロトコル集の８０ページに記載されている。
【００３２】
前記操作により得られた架橋ポリマー粒子における水酸基量は、一般的な滴定法により求めることができる。
例えば、架橋ポリマーを無水酢酸のピリジン溶液等の試薬を一定量加え、加熱して、水を加えて加水分解し、遠心分離器により粒子と上澄みとに分ける。上澄みをフェノールフタレイン等の指示薬を用いて、エタノール性水酸化カリウム溶液等で滴定することにより、その水酸基量を求めることができる。
【００３３】
本発明のマレイミド基含有架橋ポリマー粒子は、診断薬および医薬品担体、クロマトグラフィ担体、粘性調整剤、樹脂成形材料、塗料添加剤、架橋／硬化剤および化粧品添加剤のような用途に好適に使用可能である。
【実施例】
【００３４】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例中、部は質量部を示す。
【００３５】
（架橋ポリマー粒子Ａの合成）
ｔ−ブチルメタクリレート（和光純薬（株）製）１００部、ジビニルベンゼン（純度５５％）２部を用いて懸濁重合を行い、分級操作を施し平均粒径１５μｍの架橋ポリマー粒子を得た。得られた粒子をイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥して架橋ポリマー粒子Ａ（架橋度：１％）を得た。
【００３６】
（ヒドロキシメチルマレイミドＢの合成）
２４部のマレイミド（アルドリッチ（株）製）、２１部の３５％ＨＣＯＨ（和光純薬（株）製）、５％ＮａＯＨ水溶液を０．７部入れ、４０℃で２時間反応させたところ、ヒドロキシメチルマレイミドの白色結晶が析出した。減圧濾過後、常温で真空乾燥した。このようにして得たヒドロキシメチルマレイミドの粗結晶を酢酸エチルで再結晶し、２２部のヒドロキシメチルマレイミドＢを得た。
【００３７】
（実施例１）
前記架橋ポリマー粒子Ａ  １０部をメシチレン（和光純薬（株）製）５０部に分散させ、キシレンジオール（和光純薬（株）製）５０部を加え、窒素雰囲気下テトラ−ｎ−プロポキシチタンを０．２部滴下し、１４時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥して水酸基を含有する架橋ポリマー粒子を得た。
このようにして得られた水酸基含有架橋ポリマー粒子１０部に前記ヒドロキシメチルマレイミドＢ  ５部、トルエン３５０部を入れ６０〜７０℃の状態で撹拌し、触媒のｐ−トルエンスルホン酸一水和物０．４部を入れ、温度を上げて６時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥してマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を得た。このようにして得られたマレイミド基含有架橋ポリマー粒子のマレイミド基量および水酸基量を以下の方法で測定した。
【００３８】
＜マレイミド基含有架橋ポリマー粒子中のマレイミド基定量法＞
マレイミド基含有架橋ポリマー粒子を一定量ねじ口試験管にＷ（ｇ）秤量し、あらかじめ調製した２−メルカプトエチルアミン（東京化成社製）の反応液を、２−メルカプトエチルアミンが過剰量になるよう一定量加え、攪拌反応させた。更にこれを遠心分離したのち上澄み溶液の２−メルカプトアミンと４，４’−ジチオジピリジンとを反応させ、３２４ｎｍの吸光度をからモル吸光係数ε＝１９８００を用いて上澄み溶液中の２−メルカプトエチルアミン量Ｂ（ｍｏｌ）を求めた。ブランクとして、サンプルを含まない系の２−メルカプトアミン量Ｃ（ｍｏｌ）も同様に測定し、下記の式に従ってマレイミド基量Ｍ（ｍｍｏｌ／ｇ）を求めた。
Ｍ＝（Ｃ−Ｂ）／Ｗ×１０００
【００３９】
＜マレイミド基含有架橋ポリマー粒子中の水酸基定量法＞
マレイミド基含有架橋ポリマー粒子をキャップ付き試験管に秤量し、あらかじめ調製した無水酢酸（和光純薬（株）製）のピリジン（和光純薬（株）製）溶液を一定量加え、９５度の温度条件で２４時間加熱した。
さらに、蒸留水を加えて試験管中の無水酢酸を加水分解させた後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離して粒子と上澄みに分けた。粒子をさらにエタノール（和光純薬（株）製）で超音波分散と遠心分離を繰り返し洗浄し、上澄みと洗浄液とをコニカルビーカーに集め、指示薬にフェノールフタレイン（和光純薬（株）製）を用いて０．１Ｍのエタノール性水酸化カリウム溶液（和光純薬（株）製）で滴定した。
粒子を用いないブランク実験も行い、その差分から下式に従って水酸基量（Ｄｍｍｏｌ／ｇ）を算出した。
Ｄ＝（（Ｅ−Ｇ）×０．１×ｆ）／ｗ
ここで、Ｅはブランク実験での滴下量（ｍｌ）、Ｇはサンプルの滴下量（ｍｌ）、ｆは水酸化カリウム溶液のファクター、ｗは粒子の重量（ｇ）である。
【００４０】
前記測定の結果、マレイミド基量は、０．６ｍｍｏｌ／ｇで、水酸基量は１．２ｍｍｏｌ／ｇであり、含有比率Ａは０．５であった。
このマレイミド基含有架橋ポリマー粒子１部を１０部の純水に入れ、３０秒間超音波処理して顕微鏡観察したところ良好に分散していることを確認した。一方、末端システインのノナペプチド（和光純薬（社）製ラミニン）と２５℃で反応させ、３時間後の結合量を調べたところ、ほぼ全量が粒子に結合した。
【００４１】
（実施例２）
前記架橋ポリマー粒子Ａ  １０部をメシチレン（和光純薬（株）製）５０部に分散させ、ジエチレングリコール（和光純薬（株）製）５０部を加え、窒素雰囲気下テトラ−ｎ−プロポキシチタンを０．２部滴下し、１０時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥して水酸基を含有する架橋ポリマー粒子を得た。
このようにして得られた水酸基を含有する架橋ポリマー粒子１０部に前記ヒドロキシメチルマレイミドＢ  ２部、トルエン３５０部を入れ６０〜７０℃の状態で撹拌し、触媒のｐ−トルエンスルホン酸一水和物０．４部を入れ、温度を上げて６時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥してマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を得た。このようにして得られたマレイミド基含有架橋ポリマー粒子のマレイミド基量および水酸基量を実施例１と同様に測定したところ、マレイミド基量は、０．０１３ｍｍｏｌ／ｇで、水酸基量は０．８ｍｍｏｌ／ｇであり、含有比率Ａは０．０１６であった。このマレイミド基含有架橋ポリマー粒子１部を１０部の純水に入れ、３０秒間超音波処理して顕微鏡観察したところ分散は良好であった。一方、末端ステインのノナペプチド（和光純薬（社）製ラミニン）と２５℃で反応させ、３時間後の結合量を調べたところ、９５％と高いものであった。
【００４２】
（実施例３）
前記架橋ポリマー粒子Ａ  １０部をメシチレン（和光純薬（株）製）５０部に分散させ、ジエチレングリコール（和光純薬（株）製）５０部を加え、窒素雰囲気下テトラ−ｎ−プロポキシチタンを０．２部滴下し、１０時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥して水酸基を含有する架橋ポリマー粒子を得た。
このようにして得られた水酸基含有架橋ポリマー粒子１０部に前記ヒドロキシメチルマレイミドＢ  ７部、トルエン３５０部を入れ６０〜７０℃の状態で撹拌し、触媒のｐ−トルエンスルホン酸一水和物０．４部を入れ、温度を上げて６時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥してマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を得た。このようにして得られたマレイミド基含有架橋ポリマー粒子のマレイミド基量および水酸基量を実施例１と同様に測定したところ、マレイミド基量は、０．３ｍｍｏｌ／ｇで、水酸基量は０．３３ｍｍｏｌ／ｇであり、含有比率Ａは０．９１であった。このマレイミド基含有架橋ポリマー粒子１部を１０部の純水に入れ、３０秒間超音波処理して顕微鏡観察したところ分散は良好であった。一方、末端ステインのノナペプチド（和光純薬（社）製ラミニン）と２５℃で反応させ、３時間後の結合量を調べたところ、ほぼ全量が粒子に結合した。
【００４３】
（比較例１）
前記架橋ポリマー粒子Ａ  １０部をメシチレン（和光純薬（株）製）５０部に分散させ、キシレンジオール（和光純薬（株）製）５０部を加え、窒素雰囲気下テトラ−ｎ−プロポキシチタンを０．２部滴下し、４時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥して水酸基含有架橋ポリマー粒子を得た。
このようにして得られた水酸基含有架橋ポリマー粒子１０部に前記ヒドロキシメチルマレイミドＢ  ２０部、トルエン３５０部を入れ６０〜７０℃に加熱撹拌し、触媒のｐ−トルエンスルホン酸一水和物０．４部を入れ、温度を上げて６時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥してマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を得た。このようにして得られたマレイミド基含有架橋ポリマー粒子のマレイミド基量および水酸基量を実施例１と同じ方法で測定を行ったところ、マレイミド基量は、０．４ｍｍｏｌ／ｇで、水酸基量は０．２ｍｍｏｌ／ｇであり、含有比率Ａは２．０であった。
このマレイミド基含有架橋ポリマー粒子１部を１０部の純水に入れ、３０秒間超音波処理して顕微鏡観察したところ凝集がほぐれず分散が不十分であった。
【００４４】
（比較例２）
水酸基を含有する架橋ポリマー粒子（国産化学（社）製Ｗａｎｇレジン）１０部に前記ヒドロキシメチルマレイミドＢ  １部、トルエン３００部を入れ６０〜７０℃に加熱撹拌し、触媒のｐ−トルエンスルホン酸一水和物０．２部を入れ、温度を上げて１時間還流下反応させた。得られた粒子をメタノールに分散／洗浄しさらにイオン交換水及び溶剤で洗浄後、単離乾燥してマレイミド基含有架橋ポリマー粒子を得た。このようにして得られたマレイミド基含有架橋ポリマー粒子のヒドロキシメチルマレイミドと反応させて比較のマレイミド基含有粒子を得た。得られたマレイミド基含有架橋ポリマー粒子のマレイミド基量と水酸基量を実施例１と同じ方法で測定を行ったところ、マレイミド基量は、０．００５ｍｍｏｌ／ｇで、水酸基量は０．６ｍｍｏｌ／ｇであり、含有比率Ａは０．００８であった。
このマレイミド基含有架橋ポリマー粒子１部を１０部の純水に入れ、３０秒間超音波処理して顕微鏡観察したところ分散は良好であった。一方、末端ステインのノナペプチド（和光純薬（社）製ラミニン）と２５℃で反応させ、３時間後の結合量を調べたところ、５％と低いものであった。