(57)【要約】  【課題】  分析効率および分析感度が良好な分析用チップを簡単に調製する方法を提供すること。  【解決手段】  チップ基板と、この上に剥離可能に積層されていて且つ貫通孔を有する薄膜部材とを有しており、該貫通孔とチップ基板表面とが協働して試料を収容するための凹部を形成している積層体の該凹部に、試料を含有する溶液を供給して試料をチップ基板表面に固定化したのち、該薄膜部材を除去することを特徴とする分析用チップの調製方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
チップ基板と、この上に剥離可能に積層されていて且つ貫通孔を有する薄膜部材とを有しており、該貫通孔とチップ基板表面とが協働して試料を収容するための凹部を形成している積層体の該凹部に、試料を含有する溶液を供給して試料をチップ基板表面に固定化したのち、該薄膜部材を除去することを特徴とする分析用チップの調製方法。
【請求項２】
チップ基板に貫通孔を有する薄膜部材を積層して該貫通孔とチップ基板の表面等の協働により表面に試料を収容するための凹部を有する積層体を形成し、該凹部に試料を含有する溶液を供給して試料をチップ基板表面に固定化したのち、該薄膜部材を除去することを特徴とする分析用チップの調製方法。
【請求項３】
薄膜部材の除去を積層体から薄膜部材を剥離することにより行うことを特徴とする請求項１又は２に記載の分析用チップの調整方法。
【請求項４】
薄膜部材が自己吸着力を持つ樹脂からなることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかに記載の分析用チップの調整方法。
【請求項５】
チップ基板が多孔性基板であることを特徴とする請求項１ないし４のいずれかに記載の分析用チップの調製方法。
【請求項６】
チップ基板の表面部が金属で被覆された回折格子に形成されていることを特徴とする請求項１ないし５のいずれかに記載の分析用チップの調整方法。
【請求項７】
チップ基板の表面が試料と結合してこれを固定化し得る官能基を有する有機高分子物質で被覆されていることを特徴とする請求項１ないし６のいずれかに記載の分析用チップの調製方法。
【請求項８】
試料がＤＮＡまたは蛋白質であることを特徴とする請求項１ないし７のいずれかに記載の分析用チップの製造方法。
【請求項９】
薄膜部材の厚さが１〜２０００μｍであることを特徴とする請求項１ないし８のいずれかに記載の分析用チップの調整方法。
【請求項１０】
積層体が複数の凹部を有しており、かつ１個の凹部の底面積が０．５×１０-10〜７ｍｍ2であることを特徴とする請求項１ないし９のいずれかに記載の分析用チップの調整方法。
【請求項１１】
請求項１ないし１０のいずれかに記載の方法により調整された分析用チップ。
【請求項１２】
チップ基板と、この上に剥離可能に積層されていて且つ貫通孔を有する薄膜部材とを有しており、該貫通孔とチップ基板表面とが協働して試料を収容するための凹部を形成している積層体からなることを特徴とする分析用チップ基板。
【請求項１３】
薄膜部材が自己吸着力をもつ樹脂からなることを特徴とする請求項１２に記載の分析用チップ基板。
【請求項１４】
薄膜部材がシリコンラバーからなることを特徴とする請求項１３に記載の分析用チップ基板。
【請求項１５】
薄膜部材の厚さが１〜２０００μｍであることを特徴とする請求項１１ないし１４のいずれかに記載の分析用チップ基板。
【請求項１６】
薄膜部材が複数の貫通孔を有しており、かつ１個の貫通孔の開孔部面積が０．５×１０-10〜７ｍｍ2であることを特徴とする請求項１１ないし１５のいずれかに記載の分析用チップ基板。
【請求項１７】
チップ基板が多孔性基板であることを特徴とする請求項１１ないし１６のいずれかに記載の分析用チップ基板。
【請求項１８】
チップ基板の表面部が金属で被覆された回折格子に形成されていることを特徴とする請求項１１ないし１７のいずれかに記載の分析用チップ基板。
【請求項１９】
チップ基板の表面が試料と結合してこれを固定化し得る官能基を有する有機高分子物質で被覆されていることを特徴とする請求項１１ないし１８のいずれかに記載の分析用チップ基板。
【請求項２０】
請求項１２ないし１９のいずれかに記載の分析用チップ基板に用いる剥離可能な薄膜部材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微量の試料を用いて所定の反応を行なわせ、その反応を定性的ないしは定量的に検出するための分析用チップおよびその調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微量の生体試料を分析用チップ上で分析することが広く行われるようになってきている。このような分析用チップとして、例えば、ハイブリダイゼーション法を利用してＤＮＡ（デオキシリボヌクレオチド）の塩基配列を解析するのに用いられるＤＮＡチップ、抗原−抗体反応や酵素反応を利用した診断チップなどがある。
従来、このような析用チップは、チップ基板の上に、多数の試料すなわち検体や検出用試薬などの機能性分子をスポット状に固定することにより作製されているが、分析作業の効率化のために、単位面積当たりのスポットの数を増加させることが求められている。
【０００３】
このため、特許文献１では、チップ基板の表面に感光性樹脂で枠体を形成し、枠中に機能性分子を供給して固定化する方法が提案されている。しかしながら、感光性樹脂では、枠体の高さが１〜２０μｍと低いので１スポット当たりの機能性分子の量が少ないため分析感度が悪く、また、枠体を形成するのに、パターニング、エッチング、洗浄などの複数の工程が必要であり、手間がかかるという問題がある。
そこで、特許文献２では、チップ基板に多数の微細な貫通孔を有する薄膜部材を積層して、チップ基板の表面に高さ３〜５００μｍの枠体を形成する方法が提案されている。
【特許文献１】特開平１１−１８７９００号公報
【特許文献２】特開２００２−２７９８４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
この方法は、枠体の形成が簡単であり、かつ枠体の高さも任意に設定できるので、優れた方法である。
しかしながら、背の高い枠体で囲まれていると、枠体の底部までは不活性処理液や洗浄液が届き難いため、機能性分子を固定化した後の不活性化処理や洗浄が十分に行えず、非特異的な反応が起きて分析精度が低下するという問題がある。また、この分析用チップを用いて分析するに際し、固定化された機能性分子の底部にまで検体や試料に到達し難いので、底部では反応が十分に行われず、１スポットあたりの機能性分子の量が多くなったにもかかわらず、分析感度はそれほど高まらないという問題もある。
本発明は、機能性分子の固定化に際しては枠体のもたらす利点を享受し、しかも分析に際しては枠体のもたらす弊害を回避する方法を提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、機能性分子を基板上に固定する際には枠体を用い、分析を行う際には枠体を外すことにより、上記課題を解決できることを見出し本発明に到達した。
すなわち、本発明の要旨は、チップ基板と、この上に剥離可能に積層されていて且つ貫通孔を有する薄膜部材とを有しており、該貫通孔とチップ基板表面とが協働して試料を収容するための凹部を形成している積層体の該凹部に、試料を含有する溶液を供給して試料をチップ基板表面に固定化したのち、該薄膜部材を除去することを特徴とする分析用チップの調製方法に存する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、特開２００２−２７９８４号公報に記載の方法と同じく、貫通孔を有する薄膜部材を基板に積層するだけの簡素な手段により、貫通孔とチップ基板を協働させて試料を収容する凹部を高密度で形成できるので、分析効率を向上させられるという利点がある。また、薄膜部材は剥離可能であるため、機能性分子を固定化した後は、薄膜部材を剥離することなどで除去することにより、洗浄をより正確に行うことができる。更に分析に際しては固定化された機能性分子の底部まで試薬が到達するので、分析感度も向上するという利点がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
チップ基板としては、材質、形状とも従来のものと同様のものを用いることができる。例えば基板の素材としては、ポリオレフィン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリアミド、アクリル酸系樹脂等の樹脂材料、ガラス、アルミナ、炭素、金属等の無機材料などが挙げられる。限られた空間に高密度で三次元に機能性分子を固定できるので、平均孔径が１００ｎｍ〜１００μｍ、空孔率が３０〜８０％程度の多孔質のチップ基板が好ましい。
チップ基板の形状は、特に限定されないが、平板状が好ましく、その厚さは、通常０．５〜５ｍｍ程度である。
【０００８】
チップ基板は、本発明にかかる分析用チップを表面プラズモン共鳴法に用いる場合には、基板の表面部にエバネッセント波を生じさせるための回折格子が形成されているのが好ましい。かつ、表面プラズモン波を誘起するために回折格子の表面は金属で被覆されているのが好ましい。
回折格子としては、深さ１０〜１００ｎｍ程度の複数の溝が、溝と溝の間隔２００〜２０００ｎｍ程度で並列して刻まれたものが挙げられる。
金属としては、表面プラズモン波を誘起しうるものであればよく、金、銀、銅、アルミニウムおよびこれらを含む合金などが挙げられる。なかでも、感度や安価な点では銀が好ましく、安定性の面では金が好ましい。金属層は、蒸着、スパッタリング、メッキ、その他のコーティングなどによって形成され、その厚さは通常２０〜３００ｎｍ、好ましくは３０〜１６０ｎｍ程度である。
【０００９】
チップ基板の表面は、基板に固定化する機能性分子と結合し得る官能基を有する有機高分子物質で被覆されていることが好ましい。このような官能基としては、カルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基、アルデヒド基、カルボニル基、エポキシ基、ビニル基、チオール基、マレイミド基、スクシニル基、リン酸基、イミダゾール基などが挙げられる。これらの官能基を有する有機高分子物質のなかでも、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、アガロース、カラギーナン、アルギン酸、澱粉、セルロースなどの水溶性有機高分子物質は、水への溶解度が高く、機能性分子の固定密度を向上させることができるので好ましく用いられる。なかでも三次元構造を有する被覆層を与えるポリアクリル酸やカルボキシメチルデキストランなどが好ましい。
【００１０】
このような官能基を有する有機高分子物質の被覆層は、直接有機高分子物質を被覆することにより形成することができる。または例えば、カルボキシル基を有する（メタ）アクリル酸およびその塩、ヒドロキシル基を有する２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、アルデヒド基を有するアクロレイン、エポキシ基を有するグリジシル（メタ）アクリレート、スクシニル基を有するＮ−ヒドロキシスクシイミド（メタ）アクリレート、リン酸基を有するホスマー、イミダゾール基を有するビニルイミダゾールなどのモノマーを含む溶液をチップ基板上に塗布した後、活性エネルギー線を照射するか、または加熱等して重合させることにより形成することができる。
【００１１】
有機高分子物質が有する官能基がカルボキシル基の場合、基板上にカルボキシル基と共有結合する官能基を予め導入しておき、縮合剤の存在下、酸性条件でカルボキシル基を有するモノマーを共有結合させる方法で有機高分子物質の被覆層を作成するのが好ましい。
【００１２】
基板上に予め導入しておく官能基としては、アミノ基、水酸基、チオール基などが挙げられ、官能基の導入が容易で有機化合物の固定化反応の制御が容易であることからアミノ基が好ましい。官能基の導入方法としては、金属表面にアミノ基を導入する場合は、システアミン塩酸塩などのアミノ基を有するチオール化合物を金属表面に作用させることにより、ガラス表面にアミノ基を導入する場合は、アミノプロピルトリエトキシシランなどのアミノ基を有するシランカップリング剤をガラス表面に作用させることにより簡単に導入することができる。
【００１３】
縮合剤としては、カルボジイミドなどが挙げられる。カルボキシル基はアルカリ性溶液中では脱プロトン化、酸性溶液ではプロトン化している。このため、カルボキシル基を有する有機高分子物質は、アルカリ性溶液中では鎖が広がっており、酸性溶液中では比較的コンパクトな構造をとる傾向にあると考えられる。カルボキシル基を有する高分子鎖をコンパクトな構造で基板表面に固定化することにより、カルボキシル基を高密度で有する表面を得ることができる。このため、反応は、酸性条件、ｐＨ５以下、特にｐＨ４以下で行うのが好ましく、特に好ましいのはｐＨ３以下である。
【００１４】
被覆層を形成している有機高分子物質と機能性分子との結合に際しては、有機高分子物質の官能基を公知の方法により活性化させるのが好ましい。カルボキシル基を有する有機高分子物質の場合は、有機高分子物質の被覆膜の表面をカルボジイミドおよびその塩などの活性化剤を含有する水溶液に接触させることにより活性化することができる。
【００１５】
薄膜部材としては、圧着により基板に容易に積層、特に密着でき、かつ基板から容易に除去できるものが好ましい。例えば表面に接着力の弱い接着剤層を有する薄膜層を用いれば、圧着により基板に接着させ、かつ剥離により基板から除去することができる。好ましくは自己吸着力のある樹脂、具体的には、（１）反応液、試料液等を用いる際に、気体、液体などが漏れないように吸着対象物（基板）に密着することができ、かつ（２）剥離する際に、薄膜部材あるいは吸着対象物（基板）を破損させることなく簡単に剥離することができる樹脂、例えばシリコンゴムなどで作成した薄膜部材を用いる。この薄膜部材は接着剤を用いずとも圧着するだけで基板に積層することができ、かつ簡単に基板から剥離することができる。なお、基板からの薄膜部材の除去は剥離によるのが最も簡単であるが、基板上に固定されている機能性分子が損なわれない場合には有機溶媒で除去することもできる。
【００１６】
薄膜部材には、チップ基板への積層状態においてチップ基板と協働して機能性分子を収容する凹部を構成するための貫通孔が設けられている。その一例を図１に示す。薄膜部材の厚さは１μｍ以上、好ましくは１００μｍ以上、より好ましくは３００μｍ以上であり、通常２０００μｍ以下、好ましくは１０００μｍ以下である。薄膜部材が薄すぎると、凹部に収容できる機能性分子の量が少なくなり、厚すぎると薄膜部材の加工が難しくなる。薄膜部材の貫通孔の断面形状は任意であるが、通常円形ないしはこれに類似した形状である。凹部の底面積および貫通孔の開孔面積は０．５×１０-10〜７ｍｍ2であることが望ましい。
【００１７】
薄膜部材は、樹脂のシートにレーザー加工や打ち抜き加工により貫通孔を形成することにより作製することができる。また、多数の凸部を備えた金型に溶融樹脂を注入した後、脱型して成形してもよい。後者は大量生産に向き、製造コストも低減できる。
【００１８】
次いで、チップ基板上に上記の薄膜部材を積層して形成した、薄膜部材の貫通孔と基板との協働による多数の凹部を有する積層体の該凹部へ機能性分子を供給して基板に機能性分子を固定化する作業は、前述の公開公報に記載の方法など、公知の方法で行えばよい。例えば、凹部に機能性分子を含む溶液をインクジェット法などの方法により供給した後、一定時間放置して基板上に機能性分子を固定する。
【００１９】
機能性分子としては、酵素、抗体、抗原、レクチンなどの蛋白質、ペプチド、ホルモン、薬物などの低分子化合物、核酸、糖、オリゴ糖、多糖などの糖鎖、脂質、ウイルス若しくは細胞を構成する分子、アレルゲンなどの特異的な反応をしうるものが挙げられる。なかでも、蛋白質、ＤＮＡが好ましく用いられる。
機能性分子は、金、などの金属、ポリスチレンなどの高分子ポリマーなどからなる粒径１ｎｍ〜１００μｍ程度の粒子に担持されていてもよい。
【００２０】
機能性分子が基板に固定化された後、薄膜部材をチップ基板から剥離すると、チップ基板上に機能性分子が固定された分析用チップが得られる。
薄膜部材を剥離した後は、常法により洗浄して夾雑物を除去したり、有機高分子物質の層で非特異的な反応が起こるのを防ぐため、有機高分子物質の層に存在する官能基を不活性化したりする。不活性化は官能基がカルボキシル基の場合には、エタノールアミンなどのブロッキング剤を１モル／リットル程度の割合で含有する水溶液に１５分間程度浸漬させることにより行うことができる。本発明では固定化された機能性分子の洗浄や有機高分子物質の官能基の不活性化の際には、機能性分子間に隔壁が存在しないので、洗浄や不活性化が妨げられることがない。
【００２１】
本発明にかかる分析用チップの表面に、常法により検体を含む溶液を接触させ、固定化されている機能性分子と検体との相互作用を測定することにより検体の分析が行われる。
【００２２】
機能性分子と検体の相互作用としては、通常、標的分子と検体間の共有結合、疎水結合、ファンデルワールス結合、静電力による結合などの結合のうち少なくとも１つから生じる分子間に働く力による作用が用いられる。相互作用の具体例としては、抗原と抗体間の結合及び解離、蛋白質レセプターとリガンド間の結合及び解離、接着分子と相手方分子の間の結合及び解離、酵素と基質の間の結合及び解離、アポ酵素と補酵素の間の結合及び解離、核酸とそれに結合する蛋白質の間の結合及び解離、情報伝達系における蛋白質同士の間の結合及び解離、糖蛋白質と蛋白質との間の結合及び解離、糖鎖と蛋白質の間の結合及び解離などが挙げられる。
【００２３】
相互作用の測定方法としては、例えば、蛍光法、化学発光法、ＲＩ法、表面プラズモン共鳴法、質量分析法、水晶発振子法、電気化学的方法による検出法が挙げられる。この中で、蛍光法、化学発光法、ＲＩ法などにおいては、通常検体に結合させた標識物質のシグナルを測定することにより、相互作用の測定が行われているが、必要に応じて機能性分子に標識物質を結合させたものを使用してシグナルを測定してもよい。また、表面プラズモン共鳴法による検出は、検体を無標識で分析できるので好適に用いられる。
【００２４】
本発明にかかる分析用チップを表面プラズモン共鳴法に用いた場合、シグナルが強く、均一になる。その理由は定かではないが、従来の枠体を用いずに機能性分子をスポットした分析チップでは、機能性分子の固定量が少ないためシグナルが弱くなり、また、枠体内に機能性分子を収容して形成された分析チップでは、活性化、洗浄などの溶液で基板を処理する時や、分析を行う際に検体を含む溶液と機能性分子とが反応する時などに、溶液の進入が枠体に妨げられ反応が十分に行えないためシグナルが弱くなる。しかし、本発明の方法により得られた分析チップでは、枠体があるため十分な固定量が得られ、また、各種処理や反応が十分にできるのでシグナルが強くなるものと推察される。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。
【００２６】
＜実施例１および比較例１＞
（１）表面にアミノ基を有する基板の作製
６０ｍｌの水に、システアミン塩酸塩３４ｍｇを溶かした溶液に、大きさが２．５ｃｍ×２．５ｃｍの金被覆グレーティングチップ（平板状のポリカーボネート製の基体の表面に、溝ピッチ約８７０ｎｍ、溝深さ約４０ｎｍの凸凹形状を形成し、この凸凹形状の表面に金を厚さ約８０ｎｍとなるように蒸着したセンサチップ）を浸漬し、室温で２０分間保持したのち、センサチップを蒸留水で洗浄した。この処理は、金被覆された基板表面に、金−硫黄結合を介してアミノ基を導入するものである。
【００２７】
（２）ポリアクリル酸の基板表面への固定化
２５ｍｌの水に、１．２５ｇのポリアクリル酸（分子量５０，０００）（ポリサイエンス社製）と２４ｍｇの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を溶解させた。溶液のｐＨを２．２に調整した後、この溶液２．５ｍｌに、上記（１）で得たアミノ化された基板を浸漬し、１時間反応させた。反応終了後、チップを蒸留水で洗浄した。この処理は、金表面上のアミノ基とポリアクリル酸のカルボキシル基をＥＤＣにより縮合させて、アミド結合を形成させるものである。
【００２８】
（３）機能性分子の固定化
上記（２）で得たポリアクリル酸で覆われた基板を、Ｎ−ヒドロキシスクシイミド（ＮＨＳ）を０．１Ｍ及びＥＤＣを０．４Ｍの濃度で含有する溶液に室温で１０分間浸漬した後、蒸留水で洗浄し、カルボキシル基を活性化させた。
大きさ２．５ｃｍ×２．５ｃｍ、厚さ０．５ｍｍのシリコンラバーに直径０．５ｍｍの貫通孔を１００個あけ、薄膜部材を作製した。基板表面の半分に、この薄膜部材を積層し、残りの半分には薄膜部材を積層せずそのままにした。
マウスＩｇＧ(ランパイアバイオロジカルラボラトリー社製)を１００μｇ／ｍｌとなるように酢酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ５．０）に溶解させた溶液を、スポッタ（Ｐａｃｋａｒｄ社製「ＢｉｏＣｈｉｐ  ＡｒｒａｙｅｒTM」）を用いて、薄膜部材を積層した基板表面上では、貫通孔に注入した。貫通孔１箇所当たりの溶液量は７０ｎｌであった。（実施例１）
また、薄膜部材を積層していない基板表面上では、直径０．５ｍｍとなるようにスポッタで基板に直接スポットした。１スポットあたりの溶液量は１７．５ｎｌであった。（比較例１）
１５分間反応させた後、薄膜部材を剥離し、基板全体を１モル／リットルのエタノールアミン水溶液に浸漬した後、乾燥し、リガンド（マウスＩｇＧ）の固定化された分析用チップを製造した。得られた分析用チップをＳＰＲ測定装置（HTS Biosystems Inc.社製「FLEX CHIPSTM Kinetic Analysis System」）に装着し、リガンド（マウスＩｇＧ）の固定化に伴う共鳴角の変化量を測定した。なお、リガンド（マウスＩｇＧ）を注入した部分と注入しない部分の測定を行い、その差を固定化に伴う変化量とした。結果を表−１に示す。
【００２９】
（４）アナライト反応時の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定
ＳＰＲ測定装置に装着された分析用チップに、アンチ−マウスＩｇＧ（イムノプローブ社製）を切断して得たアンチ−マウスFab.を１０μｇ/ｍｌ、ＨＥＰＥＳを１０ｍＭ、ＮａＣｌを１０ｍＭ及びＥＤＴＡ−２Ｎａを３ｍＭで含有する溶液を、流速５００μｌ／ｍｉｎで８分間流し、３７℃で反応させた。
この溶液の注入後に、角度スキャングを行いながら反射光の強度を測定し、リガンドを固定させた基板表面の共鳴角に対する共鳴角の差から、蛋白質固定化に伴う共鳴角変化の値を算出した。結果を表−１に示す。
【００３０】
【表１】
2005181079.tif 000002
【００３１】
＜参考例＞
試料を収容するための凹部を有する積層体において、チップ基板表面の洗浄、官能基の活性化反応あるいは不活性化反応、機能性分子と検体との相互作用反応などの凹部底面を構成するチップ基板での反応への枠体の影響を検討するためのモデル実験として、基板表面の活性化処理を、枠体を積層する前（参考例１）又は後（参考例２）に行い、リガンドの付着量から活性化処理が枠体によってどのくらい妨害されるかを比較した。
【００３２】
＜参考例１＞
大きさが２．５ｃｍ×２．５ｃｍの金被覆グレーティングチップ（平板状のポリカーボネート製の基体の表面に、溝ピッチ約８７０ｎｍ、溝深さ約４０ｎｍの凸凹形状を形成し、この凸凹形状の表面に金を厚さ約８０ｎｍとなるように蒸着したセンサチップ）を、１６−メルカプトヘキサデカノイックアシッドを５ｍＭとなるようにエタノールに溶解した溶液に浸漬し、２時間程度反応させた後、蒸留水で洗浄することにより、Ｃ１６膜が基板上に形成され分析用チップを作製した。
次に、実施例１の（３）と同様にして、カルボキシル基を活性化させた後、実施例１と同様に、薄膜部材を積層した後、貫通孔にマウスＩｇＧを注入した。
得られた分析チップ用をＳＰＲ装置に装着し、リガンド（マウスＩｇＧ）の固定化に伴う共鳴角の変化量を測定した。また、標準偏差を平均値で割った値（ＣＶ）を求めた。結果を表−２に示す。
【００３３】
＜参考例２＞
参考例１で作製したＣ１６膜が基板上に形成された分析用チップに、実施例１と同様に、薄膜部材を積層した後、実施例１の（３）と同様にして、カルボキシル基を活性化させ、貫通孔にマウスＩｇＧを注入した。
得られた分析用チップをＳＰＲ装置に装着し、リガンド（マウスＩｇＧ）の固定化に伴う共鳴角の変化量を測定した。また、標準偏差を平均値で割った値（ＣＶ）を求めた。結果を表−２に示す。
【００３４】
【表２】
2005181079.tif 000003
【００３５】
表−２より、参考例２は参考例１に比べ共鳴角変化量が小さいことがわかる。これは、枠体の内部に活性化液が入り難く、基板表面の活性化が不十分となるため、リガンドの固定量が減少したものと考えられる。
また、ＣＶは、数値が大きいほど、リガンドの付着量にばらつきがあることを示す。参考例２は、枠体の内部に入る活性化液の量が、貫通孔ごとに異なるため、結果として参考例１に比べてリガンドの付着量にばらつきが生じたものと考えられる。
これより、枠体は各種の処理を妨げとなることが推察される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】本発明に用いる薄膜部材の平面図
【図２】本発明の分析用チップの調製方法を説明するための断面図
【符号の説明】
【００３７】
１    チップ基板
２    薄膜部材
３    貫通孔
３ａ  凹部
４    有機高分子物質の被覆層
【図１】
2005181079.tif 000004
【図２】
2005181079.tif 000005