(57)【要約】【課題】  複数の処理容器における設置スペースが有利に確保されると共に、処理液による処理が効率的に施されることにより、生体組織片から分離される単一種の細胞が有利に量産される新規な構造の生体組織片からの細胞単離装置を提供することにある。【解決手段】  周方向の複数箇所においてそれぞれ処理容器２６を支持する回転ステージ３０と、処理容器２６に収容された生体組織片２４に対して所定の処理を施す複数の処理領域６０のうちの特定の処理領域６０ｂに設置されて、該領域６０ｂに導かれた処理容器に対して所定の処理液を供給する処理液供給手段１４と、複数の処理領域６０のうちの別の特定の処理領域６０ｃに設置されて、該領域６０ｃに導かれた処理容器２６から所定の処理液を排出せしめる処理液排出手段１６と、回転ステージ３０を回転駆動させて、該回転ステージ３０に支持された処理容器２６を複数の処理領域６０のうちで目的とする処理領域に導く回転駆動手段３６とを、含んで形成した。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
採取した生体組織片を収容する複数の処理容器と、
水平面内で回転可能に配設されて、周方向の複数箇所においてそれぞれ前記処理容器を支持する回転ステージと、
該回転ステージの回転作動によって前記処理容器が導かれる、該回転ステージの周方向においてそれぞれ設定されて、該回転ステージの回転作動によって導かれた該処理容器に収容せしめられた前記生体組織片に対して所定の処理を施す複数の処理領域と、
かかる複数の処理領域のうちの特定の処理領域に設置されて、該特定の処理領域に導かれた前記処理容器に対して所定の処理液を供給する処理液供給手段と、  前記複数の処理領域のうちの別の特定の処理領域に設置されて、該別の特定の処理領域に導かれた前記処理容器から該処理容器に収容された所定の処理液を排出せしめる処理液排出手段と、
前記回転ステージを回転駆動せしめて、該回転ステージによって支持された前記処理容器を前記複数の処理領域のうちで目的とする処理領域に導く回転駆動手段と
を、含んで形成したことを特徴とする生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項２】
前記回転ステージを覆うカバー部材を設けて、該回転ステージで支持された前記処理容器の導かれる前記複数の処理領域を、外部空間から実質的に隔離すると共に、かかる処理領域の雰囲気を調節するガス調節手段を設けた請求項１に記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項３】
前記ガス調節手段が、前記カバー部材で覆われた前記処理領域に対して雰囲気を調節するためのガスを供給するガス供給部と、該処理領域からガスを排出するガス排出部を備えており、それらガス供給部とガス排出部にそれぞれ除菌用フィルタを装着した請求項２に記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項４】
前記回転ステージを覆うカバー部材を設けて、該回転ステージで支持された前記処理容器の導かれる前記複数の処理領域を、外部空間から実質的に隔離すると共に、かかる処理領域の湿度を調節する湿度調節手段を設けた請求項１乃至３の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項５】
前記回転ステージを覆うカバー部材において、開閉可能な扉を備えた小窓を設けて、該小窓を通じて前記処理容器を該回転ステージに対して支持せしめたり取り出したりすることが出来るようにした請求項２乃至４の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項６】
前記回転ステージで支持された前記処理容器の内部の温度を調節するための温度調節手段を設けた請求項１乃至５の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項７】
前記回転ステージで支持された前記処理容器を加振する加振手段を設けた請求項１乃至６の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項８】
前記加振手段が、前記回転ステージを全体として加振する請求項７に記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項９】
前記処理液供給手段が、前記処理液としての洗浄液を収容した洗浄液タンクと、前記処理液としての消毒液を収容した消毒液タンクと、前記処理液としての抗生物質の溶液を収容した抗生物質溶液タンクと、前記処理液としての細胞分離剤の溶液を収容した細胞分離溶液タンクと、前記処理液としての細胞剥離剤の溶液を収容した細胞剥離溶液タンクと、前記処理液としての剥離停止剤の溶液を配合した剥離停止溶液タンクとの少なくとも１つを備え、前記回転ステージで支持された前記処理容器に対するそれら各処理液の供給の開始と停止をそれぞれ自動的に行うようにした請求項１乃至８の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項１０】
前記回転ステージで支持された前記処理容器の内部の状況を撮像する撮像手段を設けると共に、該撮像手段によって得られた情報を表示するモニタ手段を設けた請求項１乃至９の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項１１】
前記処理液は通過させるが前記生体組織片を構成する生体細胞の通過は阻止し得る大きさの通孔を備えた隔壁によって内部が仕切られることにより、該生体組織片が収容せしめられる収容領域と、前記処理液排出手段による該処理液の排出を行う排液領域とが区画形成された容器を、前記処理容器として採用した請求項１乃至１０の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項１２】
前記処理容器が、前記回転ステージから着脱可能とされていると共に、該回転ステージに対して位置決めされて固定的に取り付けられるようになっている請求項１乃至１１の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置。
【請求項１３】
請求項１乃至１２の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置に用いられる前記処理容器であって、
前記処理液は通過させるが前記生体組織片を構成する生体細胞の通過は阻止し得る大きさの通孔を備えた隔壁によって内部が仕切られることにより、該生体組織片が収容せしめられる収容領域と、前記処理液排出手段による該処理液の排出を行う排液領域とを区画形成したことを特徴とする処理容器。
【請求項１４】
前記処理溶液が収容される前記容器本体に対して、前記生体組織片を収容する収容領域を内部に形成する収容容器を別体形成し、該収容容器を該容器本体の内部に対して着脱可能に組み付けることにより、該容器本体の内部で該収容容器の外側に前記排液領域を形成すると共に、該廃液領域と該収容領域を相互に連通する連通孔を該収容容器に形成した請求項１３に記載の処理容器。
【請求項１５】
請求項１乃至１２の何れかに記載の生体組織片からの細胞単離装置を用いて、採取した生体組織片を収容せしめた処理容器を前記回転ステージによって支持せしめて、該回転ステージの回転作動に基づいて該処理容器を前記複数の処理領域のうちの適当な領域に順次に導くことにより、該生体組織片に対して、以下の各処理を順次に施すことを特徴とする生体組織片からの細胞単離方法。
（ａ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての洗浄液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該洗浄液を排出することによる洗浄処理。
（ｂ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての消毒液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該消毒液を排出することによる消毒処理。
（ｃ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての抗生物質溶液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該抗生物質溶液を排出することによる抗生物質処理。
（ｄ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての細胞分離溶液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該細胞分離溶液を排出することによる細胞分離処理。
（ｅ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての細胞剥離溶液を供給し、所定の処理時間の経過後、該処理液供給手段により該処理容器に対して前記処理液としての細胞剥離停止剤を供給することによる細胞剥離処理。
【請求項１６】
前記回転ステージによって支持せしめた前記複数の処理容器の全てにおいて、前記（ｄ）に記載の細胞分離溶液と前記（ｅ）に記載の細胞剥離溶液と前記（ｅ）に記載の細胞剥離停止剤の何れかを供給せしめた状態で、該回転ステージを全体として加振する請求項１５に記載の生体組織片からの細胞単離方法。
【請求項１７】
前記洗浄処理や前記消毒処理、前記抗生物質処理、前記細胞分離処理、前記細胞剥離処理を予め設定したプログラムに従って自動的に順次に施すようにした請求項１５又は１６に記載の生体組織片からの細胞単離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、採取した生体組織片から単一の細胞を取り出すための細胞単離装置に係り、特に、処理液を用いて生体組織片を処理せしめることにより、生体組織片を単一の細胞に分離する細胞単離装置とその関連技術に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
人を含む動物から採取した生体組織片（細胞片）の一部乃至は全てを単一の細胞に分離する、所謂、細胞単離を行う手段の一種として、例えば、それぞれに種類の異なる処理液を複数用いて生体組織片を処理することが知られている。このような処理では、一般に、所定の処理容器に対して所定の処理液を収容せしめると共に生体組織片を導き入れて、該生体組織片に処理液による処理を施す。その後、処理容器に収容された使用済みの処理液を廃棄すると共に別の処理液を充填したり、或いは、生体組織片を所定の処理容器から取り出して別の処理液が収容された処理容器に導き入れたりすること等によって、生体組織片に別の処理液による処理を施す。而して、これらの処理を複数回繰り返して行うことにより、生体組織片から目的とする単一の細胞が得られる。従来、このような処理液を用いた生体組織片の単離処理は、単一の細胞の需要や供給が少ないこともあって、専ら、ピペットやピンセット等を用いた手作業により行っていた。
【０００３】
ところが、近年、培養皮膚や培養角膜等の組織等価物の普及に伴い該組織等価物の素材となる単一細胞の量産化が求められる状況にあって、手作業による処理では、複数の異なる処理液を使用して複数の組織片を順次に処理する場合に、処理済みの組織片と未処理の組織片が同じスペースに置かれることにより、処理する順番や使用する処理液の種類等を間違える等のミスを生じ易いという問題や、複数の組織片を広い範囲に置くと、作業者が広い範囲で個々の処理容器にまで移動して処理液の注入と廃棄を行う必要があることから、作業が面倒で効率も悪いという問題等を内在していた。その結果、手作業による処理では、組織片の単離が効率的に処理され難く、産業界の要求に対して十分に対応することが難しかったのである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は上述の如き事情を背景として為されたものであって、その解決課題とするところは、複数の処理容器の配置スペースが効率的に確保されると共に、それら複数の処理容器に収容された組織等価物に対する各種の処理液による処理を効率的に施すことが出来、複数の処理容器を用いた組織等価物に対する処理を作業者がミスなく容易に実施することが可能とされて、生体組織片から単一種の細胞を有利に量産することの出来る、新規な構造の細胞単離装置を提供することにある。
【０００５】
また、本発明は、本発明に従う構造とされた新規な構造の細胞単離装置に採用されて、生体組織片から細胞を単離するための各種の処理液の給排を、生体組織片や細胞を保護しつつ、容易に行うことを可能と為し得て、本発明に従う構造とされた細胞単離装置による処理を一層容易に且つ効率的に行うことを可能とし得る、新規な構造の処理容器を提供することも、目的とする。
【０００６】
さらに、本発明は、本発明に従う構造とされた新規な構造の細胞単離装置を用いて、生体組織片を処理することにより、単一種の細胞を効率的に量産することの出来る、新規な細胞単離方法を提供することも、目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
以下、このような課題を解決するために為された本発明の態様を記載する。なお、以下に記載の各態様において採用される構成要素は、可能な限り任意の組み合わせで採用可能である。また、本発明の態様乃至は技術的特徴は、以下に記載のものに限定されることなく、明細書全体および図面に記載され、或いはそれらの記載から当業者が把握することの出来る発明思想に基づいて認識されるものであることが理解されるべきである。
【０００８】
（細胞単離装置に関する本発明の態様１）
細胞単離装置に関する本発明の態様１の特徴とするところは、（ｉ）採取した生体組織片を収容する複数の処理容器と、（ii）水平面内で回転可能に配設されて、周方向の複数箇所においてそれぞれ前記処理容器を支持する回転ステージと、(iii) 該回転ステージの回転作動によって前記処理容器が導かれる、該回転ステージの周方向においてそれぞれ設定されて、該回転ステージの回転作動によって導かれた該処理容器に収容せしめられた前記生体組織片に対して所定の処理を施す複数の処理領域と、（iv）かかる複数の処理領域のうちの特定の処理領域に設置されて、該特定の処理領域に導かれた前記処理容器に対して所定の処理液を供給する処理液供給手段と、（ｖ）前記複数の処理領域のうちの別の特定の処理領域に設置されて、該別の特定の処理領域に導かれた前記処理容器から該処理容器に収容された所定の処理液を排出せしめる処理液排出手段と、（vi）前記回転ステージを回転駆動せしめて、該回転ステージによって支持された前記処理容器を前記複数の処理領域のうちで目的とする処理領域に導く回転駆動手段とを、含んで形成した生体組織片からの細胞単離装置にある。
【０００９】
このような本態様に従う構造とされた細胞単離装置においては、複数の処理容器が回転ステージの周方向の複数箇所に支持されていることから、回転ステージが回転されることに伴い、各処理容器が適当な処理液供給手段が設置された処理領域に導き入れられ、かかる処理領域において、処理容器に所定の処理液が供給されることとなる。更に、処理液が収容された処理容器が回転ステージの回転に伴い、適当な処理液排出手段が設置された処理領域に導き入れられ、かかる処理領域において、処理容器から処理液が排出されることとなる。
【００１０】
従って、目的とする処理に応じて、回転ステージを適当に回転させることにより、生体組織片を収容した処理容器に対して、処理液供給手段における処理液の供給と処理液排出手段における処理液の排出を順次に行うことが出来るのである。しかも、これら処理液供給手段や処理液排出手段による処理液の給排スペースを複数の処理容器において共用することが可能であり、処理容器の設置効率が向上され得る。それ故、生体組織片が効率的に処理されて、単一種の細胞の量産化が有利に図られ得るのである。
【００１１】
加えて、本態様の細胞単離装置においては、回転ステージの回転位置を管理するだけで、回転ステージ上に位置固定的に載置された複数の処理容器を特定し、各処理容器への処理液の給排や、処理液による処理などの処理ステップを管理することが可能となる。それ故、複数種類の処理液を順次に給排して処理するに際しても各処理容器を個別に移動させる必要がないこと等と相俟って、複数の処理容器を、各処理工程毎に効率的に管理することが出来るのであり、複数工程の処理を順次に施すに際して、処理容器を間違ったり、施す処理を間違うなどといった、人為的なミスを防止することが出来るのである。
【００１２】
なお、本態様における処理液供給手段や処理液排出手段の形状や大きさ、構造等は、何等限定されるものでなく、生産速度やコスト等を考慮して、当業者が適宜に設定変更し得る事項の一つである。
【００１３】
具体的には、例えば、特定の処理領域に公知のマニピュレータや知能ロボット或いはコンピュータ等で給排が自動的に制御される給排管路等を設置して、直接に人手を介さずに処理液を供給や排出等させたり、或いは、複数の処理領域に複数の作業者を配して、ピペット等を用いて処理液を手作業で供給または排出させたりすること等により、処理液供給手段や処理液排出手段が実現されるようにしても良い。特に本態様では、後者の如く手作業を採用する場合においても、回転ステージの回転に伴い処理容器が特定の処理領域に待機せしめられた作業者に搬送されることから、作業者が処理容器ごとに移動して処理を行う等の手間が省けると共に、作業者が処理容器を勝手に移動させて処理容器を取り違える等の問題が回避されるのであり、以て、従来の手作業等では到底達成され得ない程に効率的で且つ確実な生体組織片の処理が実現され得るのである。なお、作業者によって処理液の給排を行う場合には、予め作業者を処理液を供給するグループと排出するグループに分けておくことも有効であり、それによって、各作業者の作業が簡便化されることにより、効率の更なる向上が図られ得る。
【００１４】
また、本態様において、処理液供給手段や処理液排出手段は、複数種類の処理液に対応してそれぞれ複数設置しても良いが、複数の処理液の種類毎に処理液供給手段を複数設置する一方、処理液排出手段を単一として共用することも可能である。更にまた、複数の処理液を供給する処理液供給手段は、回転ステージの周上に設置された複数の処理領域に分けて設置しても良いが、複数の処理液供給手段による処理液の処理容器に対する供給を一つの処理領域において選択的に行うようにしても良い。その場合には、処理容器上に開口する一つの供給管路をバルブ手段等で切り換えて複数種類の処理液収容タンクの何れかに接続せしめることにより、必要とする処理液が複数の中から選択的に供給管路を通じて処理容器に供給されるようにすることが出来る。或いはまた、回転ステージを一方向に所定量ずつ回転させることで、処理容器に対する各種の処理液の供給と排出が順次に行われるように、回転ステージの周方向において各別の処理液の供給手段と排出手段の処理領域を順次に設置しても良い。また、回転ステージに対する処理容器の配設形態は、特に限定されるものでなく、回転ステージの径方向に複数列並ぶようにして、同心的な複数の円周上にそれぞれ複数の処理容器を載置することも可能である。
【００１５】
（細胞単離装置に関する本発明の態様２）
細胞単離装置に関する本発明の態様２の特徴とするところは、本発明の前記態様１に係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記回転ステージを覆うカバー部材を設けて、該回転ステージで支持された前記処理容器の導かれる前記複数の処理領域を、外部空間から実質的に隔離すると共に、かかる処理領域の雰囲気を調節するガス調節手段を設けたことにある。
【００１６】
このような本態様では、処理領域において生体組織片の細胞の生命活動に適した環境が有利に実現され得る。なお、ガス調節手段には、例えば、カバー部材に貫設されて処理領域と外部空間を連通させる通気管に設けられたバルブや処理領域に所定のガスを吐出するガスボンベのバルブ等が採用される。
【００１７】
（細胞単離装置に関する本発明の態様３）
細胞単離装置に関する本発明の態様３の特徴とするところは、本発明の前記態様１又は２に係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記ガス調節手段が、前記カバー部材で覆われた前記処理領域に対して雰囲気を調節するためのガスを供給するガス供給部と、該処理領域からガスを排出するガス排出部を備えており、それらガス供給部とガス排出部にそれぞれ除菌用フィルタを装着したことにある。
【００１８】
このような本態様では、処理領域が略無菌状態に保持されつつ、処理領域の雰囲気が速やかに調節されることとなり、生体組織片における細胞の生命活動により好適な環境が安定して維持され得る。なお、ガス供給部としては、例えば、酸素ガスボンベや二酸化炭素ガスボンベ等を備えたバルブ手段や調圧手段を含んで有利に構成される。また、ガス排出部は、例えば、カバー部材の内部空間に開口する管体を、バルブ手段を通じて大気に解放せしめたり、ガス吸引手段に接続せしめることによって、有利に構成され得る。
【００１９】
（細胞単離装置に関する本発明の態様４）
細胞単離装置に関する本発明の態様４の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至３の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記回転ステージを覆うカバー部材を設けて、該回転ステージで支持された前記処理容器の導かれる前記複数の処理領域を、外部空間から実質的に隔離すると共に、かかる処理領域の湿度を調節する湿度調節手段を設けたことにある。
【００２０】
このような本態様にあっては、処理領域に対して生体組織片における細胞の生命活動に適した湿気を付与することが可能となり、以て、目的とする単一の細胞がより有利に量産される。なお、湿度調節手段としては、例えば加湿器や乾燥器（除湿器）等が挙げられる。
【００２１】
（細胞単離装置に関する本発明の態様５）
細胞単離装置に関する本発明の態様５の特徴とするところは、本発明の前記態様２乃至４の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置にあって、前記回転ステージを覆うカバー部材において、開閉可能な扉を備えた小窓を設けて、該小窓を通じて前記処理容器を該回転ステージに対して載置せしめたり取り出したりすることが出来るようにしたことにある。
【００２２】
このような本態様においては、カバー部材の密閉性を保持しつつ、処理容器を容易に取り扱うことが出来る。また、本態様では、特に限定されるものでないが、小窓乃至はカバー部材の全体が光透過性を有する樹脂材料等を用いて形成されて、処理領域の内部が視認可能とされるようにすることが望ましい。それによって、処理容器の取り扱い性が向上されると共に、生体組織片に施される各処理を容易に観察したり確認することが可能となる。
【００２３】
（細胞単離装置に関する本発明の態様６）
細胞単離装置に関する本発明の態様６の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至５の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記回転ステージで支持された前記処理容器の内部の温度を調節するための温度調節手段を設けたことにある。
【００２４】
このような本態様においては、処理領域の内部を生体組織片の細胞の生命活動に適した温度に保持させることが出来る。なお、温度調節手段としては、例えば、カバー部材や回転ステージ等に装着されて、カバー部材や回転ステージを直接に加熱／冷却する加熱手段や冷却手段の他、処理容器の内部の空気を温める電熱や蒸気等を利用した各種加熱／冷却手段が好適に採用されることとなり、その他、処理容器を加熱／冷却する手段や、処理容器に導き入れる処理液を加熱／冷却する温調器などが、何れも採用可能である。また、本態様においては、回転ステージや処理容器等に設置されて、該処理容器における処理液や細胞の温度を保持するロックウールやグラスウール、炭化コルク等を含む断熱材乃至は保温材等が、上述の如き積極的な温度調節手段と併せて採用されることが望ましい。
【００２５】
（細胞単離装置に関する本発明の態様７）
細胞単離装置に関する本発明の態様７の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至６の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記回転ステージで支持された前記処理容器を加振する加振手段を設けたことにある。
【００２６】
このような本態様においては、処理容器に処理液を収容した形態で処理容器を加振することにより、処理液が生体組織片に対して効果的に浸潤される。これにより、目的とする処理が生体組織片に対してより一層有利に施される。なお、本態様の加振手段としては、例えば各処理容器に所定の振動機を配設して、各処理容器に振動を個別に及ぼすようにしたり、或いは特定の処理領域に振動機を設置して、該処理領域に導き入れられた処理容器に振動を及ぼすようにしたりすること等が適用可能である。
【００２７】
（細胞単離装置に関する本発明の態様８）
細胞単離装置に関する本発明の態様８の特徴とするところは、本発明の前記態様７に係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記加振手段が、前記回転ステージを全体として加振することにある。
【００２８】
このような本態様においては、回転ステージに支持された複数の処理容器が一様に加振されることから、処理液による処理を簡単な構造で多くの処理容器に収容された細胞に対して全体的に効率良く施すことが出来る。なお、本態様では、例えば、振動機等の加振手段を回転ステージの所定の箇所に配設して、回転ステージが回転する状態又は回転しない状態で、加振手段を用いて回転ステージの全体を加振せしめることにより、処理容器の全てに振動を及ぼすようにすることが可能である他、回転ステージの回転軸を回転に伴い揺動せしめる揺動機構を設けて、回転に伴い回転ステージが揺動されることにより、処理容器の全てに振動を及ぼすようにしても良い。
【００２９】
（細胞単離装置に関する本発明の態様９）
細胞単離装置に関する本発明の態様９の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至８の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記処理液供給手段が、前記処理液としての洗浄液を収容した洗浄液タンクと、前記処理液としての消毒液を収容した消毒液タンクと、前記処理液としての抗生物質の溶液を収容した抗生物質溶液タンクと、前記処理液としての細胞分離剤の溶液を収容した細胞分離溶液タンクと、前記処理液としての細胞剥離剤の溶液を収容した細胞剥離溶液タンクと、前記処理液としての剥離停止剤の溶液を配合した剥離停止溶液タンクとの少なくとも１つを備え、前記回転ステージで支持された前記処理容器に対するそれら各処理液の供給の開始と停止をそれぞれ自動的に行うようにしたことにある。
【００３０】
このような本態様においては、生体組織片に対して細胞の分離に係る処理が、一層効率的に且つ簡便に施される。即ち、前述の複数の処理が自動的に施されることから、各処理容器に対して、それぞれ、適量の処理液による各種処理が施されると共に、処理液の作業手順を人為的ミスで間違えたり、手作業等で処理液を供給することに伴い生体組織片を汚染したりする等の不具合が防止される。それ故、目的とする品質特性を備えた単一の細胞を一層効率良く量産することが可能となるのである。
【００３１】
（細胞単離装置に関する本発明の態様１０）
細胞単離装置に関する本発明の態様１０の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至９の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記回転ステージで支持された前記処理容器の内部の状況を撮像する撮像手段を設けると共に、該撮像手段によって得られた情報を表示するモニタ手段を設けたことにある。
【００３２】
このような本態様においては、処理容器の内部の状況を外部から容易に把握することが可能となり、生体組織片に対する処理の状況を容易に確認や監視等することが出来る。それ故、生体組織片の状況に応じて、例えば、処理液の供給量や排出量を調節すること等により、細胞の生命活動が好適に維持されるように図ることも可能となる。また、撮像手段を例えば特定の処理領域に設置することにより、処理容器ごとに撮像手段を設置したり移動させたりすることなく、回転ステージの回転に伴い複数の処理容器の全てを順次に撮像することが可能となる。それ故、特に状況把握が重要となる特定処理領域に撮像手段を設置して監視することにより、効率的な監視を行うことが出来る。なお、撮像手段には、例えばＣＣＤカメラ等が採用されると共に、撮像手段によって得られた情報を表示するモニタ手段には、ＣＲＴや液晶表示装置などが好適に採用される。
【００３３】
（細胞単離装置に関する本発明の態様１１）
細胞単離装置に関する本発明の態様１１の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至１０の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記処理液は通過させるが前記生体組織片を構成する生体細胞の通過は阻止し得る大きさの通孔を備えた隔壁によって内部が仕切られることにより、該生体組織片が収容せしめられる収容領域と、前記処理液排出手段による該処理液の排出を行う排液領域とが区画形成された容器を、前記処理容器として採用したことにある。
【００３４】
このような本態様においては、生体組織片が収容領域に対して良好に保持されることにより、処理液の排出に際して、処理液と共に生体組織片やその細胞の排出を防止することが出来る。その結果、処理液の排出作業の自動化を一層容易に実現することが出来るのであり、排出作業の効率も向上され得る。
【００３５】
（細胞単離装置に関する本発明の態様１２）
細胞単離装置に関する本発明の態様１２の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至１１の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置において、前記処理容器が、前記回転ステージから着脱可能とされていると共に、該回転ステージに対して位置決めされて固定的に取り付けられるようになっていることにある。      
【００３６】
このような本態様では、処理容器自体を着脱可能としたことにより、例えば、処理容器に対する生体組織片の収容作業や、処理容器からの単離細胞の取出作業を、回転ステージから処理容器を取り外した状態で行うことで、作業を容易とすることが出来る。また、例えば、比較的多くの処理時間を有する処理工程では、回転ステージから処理容器を一旦取り外して別の装置で管理し、所定時間の経過後に回転ステージに戻すことも可能であり、それによって、一層効率的に多数の処理容器を用いた細胞単離処理を行うことが可能となる。
【００３７】
（処理容器に関する本発明の態様１）
処理容器に関する本発明の態様１の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至１２の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置に用いることの出来る前記処理容器であって、前記処理液は通過させるが前記生体組織片を構成する生体細胞の通過は阻止し得る大きさの通孔を備えた隔壁によって内部が仕切られることにより、該生体組織片が収容せしめられる収容領域と、前記処理液排出手段による該処理液の排出を行う排液領域とを区画形成した処理容器にある。
【００３８】
このような本態様に従う構造とされた処理容器においては、収容領域と排液領域を備えていることにより、生体組織片に対する悪影響や単離細胞の流出等の問題を抑えつつ、処理容器からの処理液の排出を効率的に行うことが可能となる。      
【００３９】
なお、本態様に係る処理容器の適用範囲は、特に上述の細胞単離装置だけに限定されるものでなく、その他、本態様の処理容器は、例えば、底面に細胞を接着して該細胞の単層培養を行う培養用の処理容器の他、生体組織片を保持しつつ処理液を排出させる各種処理装置の容器に適用可能であり、汎用性に優れている。      
【００４０】
（処理容器に関する本発明の態様２）
処理容器に関する本発明の態様２の特徴とするところは、本発明の前記態様１に係る処理容器において、処理溶液が収容される容器本体に対して、前記生体組織片を収容する収容領域を内部に形成する収容容器を別体形成し、該収容容器を該容器本体の内部に対して着脱可能に組み付けることにより、該容器本体の内部で該収容容器の外側に前記排液領域を形成すると共に、該排液領域と該収容領域を相互に連通する連通孔を該収容容器に形成したことにある。
【００４１】
このような本態様においては、生体組織片を収容する収容容器を容器本体から取り外すことにより、収容容器と共に生体組織片やその細胞を処理容器から分離させることが出来、生体組織片やその細胞を処理容器から独立して多様に取扱うことが可能となる。具体的には、例えば、処理液を排出する際に、収容容器に収容された処理液を連通孔および通孔を通じて排液領域から排出させる一方、収容領域から収容容器を取り外して、該収容容器を揺動させることに伴い生体組織片に付着した処理液を振り払って連通孔を通じて外部に排出させること等が可能となる。或いは、各別の処理液が収容された容器本体に対して、生体組織片を収容した収容容器を順次に組み付け、取り外すことにより、生体組織片に対して順次に異なる処理液による処理を施すことも可能となる。
【００４２】
（細胞単離方法に関する本発明の態様１）
細胞単離方法に関する本発明の態様１の特徴とするところは、本発明の前記態様１乃至１２の何れかに係る生体組織片からの細胞単離装置を用いて、採取した生体組織片を収容せしめた処理容器を前記回転ステージによって支持せしめて、該回転ステージの回転作動に基づいて該処理容器を前記複数の処理領域のうちの適当な領域に順次に導くことにより、該生体組織片に対して、以下の各処理を順次に施す生体組織片からの細胞単離方法にある。（ａ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての洗浄液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該洗浄液を排出することによる洗浄処理。（ｂ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての消毒液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該消毒液を排出することによる消毒処理。（ｃ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての抗生物質溶液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該抗生物質溶液を排出することによる抗生物質処理。（ｄ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての細胞分離溶液を供給し、所定の処理時間の経過後、前記処理液排出手段により該細胞分離溶液を排出することによる細胞分離処理。（ｅ）前記処理液供給手段により前記処理容器に対して前記処理液としての細胞剥離溶液を供給し、所定の処理時間の経過後、該処理液供給手段により該処理容器に対して前記処理液としての細胞剥離停止剤を供給することによる細胞剥離処理。
【００４３】
このような本発明方法に従えば、前述の本発明に従う構造とされた特定構造の細胞単離装置を巧く利用して、生体組織片に対する処理が効率的に施されることとなり、単一細胞の量産化が有利に図られ得る。
【００４４】
（細胞単離方法に関する本発明の態様２）
細胞単離方法に関する本発明の態様２の特徴とするところは、本発明の前記態様１に係る生体組織片からの細胞単離方法において、前記回転ステージによって支持せしめた前記複数の処理容器の全てにおいて、前記（ｄ）に記載の細胞分離溶液と前記（ｅ）に記載の細胞剥離溶液と前記（ｅ）に記載の細胞剥離停止剤の何れかを供給せしめた状態で、該回転ステージを全体として加振することにある。
【００４５】
このような本態様においては、回転ステージを介して処理容器の全てが加振されることから、各処理容器に収容された生体組織片に対して処理液（細胞分離溶液、細胞剥離溶液または細胞剥離停止剤）が効果的に浸潤等されることとなり、各処理液による処理をより効果的に且つ効率的に行うことが可能となる。なお、本態様においては、回転ステージ上の処理容器の全てに対して同一の処理液を供給して加振することにより、各処理容器で同一処理工程を同時に実行するようにしても良いし、その他、処理容器に応じて異なる種類の処理液を供給して加振することにより、処理容器に応じて異なる種類の処理工程を同時に実行しても良い。具体的には、例えば、幾つかの処理容器では細胞分離溶液による細胞分離処理を行うと同時に、別の処理容器では細胞剥離溶液による細胞剥離処理を行い、残りの処理容器では細胞剥離停止剤による細胞剥離停止処理を行うことが可能である。
【００４６】
（細胞単離方法に関する本発明の態様３）
細胞単離方法に関する本発明の態様３の特徴とするところは、本発明の前記態様１又は２に係る生体組織片からの細胞単離方法において、前記洗浄処理や前記消毒処理、前記抗生物質処理、前記細胞分離処理、前記細胞剥離処理を予め設定したプログラムに従って自動的に順次に施すようにしたことにある。
【００４７】
このような本態様においては、作業者の手を煩わせることや、処理における人為的なミスが回避されることから、単離した細胞を有利に量産することができる。
【発明の効果】
【００４８】
上述の説明からも明らかなように、本発明に従う構造とされた生体組織片からの細胞単離装置においては、回転ステージに支持された複数の処理容器が、回転ステージの回転に伴い処理液供給手段や処理液排出手段等が設けられた特定の処理領域に順次に導かれることから、処理液による処理が複数の生体組織片に対して確実に且つ効率的に施されることに加えて、処理液供給手段や処理液排出手段を複数の処理容器において共有化させることが出来、処理容器の設置効率の向上や装置構造の簡略化が図られ得る。それ故、生体組織片に対する処理が効率的に施されて、単一細胞の量産が有利に実現可能となるのである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
以下、本発明を更に具体的に明らかにするために、本発明の実施形態について説明する。先ず、図１には、本発明の一実施形態としての細胞単離装置１０が示されている。この細胞単離装置１０は、処理装置１２や処理液供給手段としての供給装置１４、処理液排出手段としての排出装置１６、維持装置１８、監視装置２０、制御装置２２等を含んで構成されている。また、処理装置１２には、図２〜３にも示されているように、生体組織片としての患者から採取した皮膚片２４を収容した処理容器２６の複数が収容配置されている。而して、細胞単離装置１０は、処理装置１２において供給装置１４と排出装置１６による処理液の処理が各処理容器２６の皮膚片２４に施されることにより、各皮膚片２４を単一種の細胞に分離することができるようになっている。
【００５０】
より詳細には、処理装置１２は、カバー部材としてのハウジング２８を備えている。ハウジング２８は、略矩形箱体形状を呈していると共に、少なくともその上壁部や側壁部等に光透過性を有する合成樹脂材等が用いられて形成されている。これにより、ハウジング２８内部が、密閉状態に保持されていると共に、処理装置１２の外部から視認可能とされている。更に、処理装置１２の底壁部には、回転ステージとしての薄肉の略円盤形状を呈する回転テーブル３０が配設されている。
【００５１】
また、回転テーブル３０の中央部分には、回転軸３２が固着されている。回転軸３２は、軸方向（図３中、上下）に延びて、その一方の端部が回転テーブル３０に固着されていることにより、回転テーブル３０と一体的に回転されるようになっている。また、回転軸３２は、ハウジング２８の底壁部を貫通して下方に延びており、その下方先端部分にギアハウジング３４を介して回転駆動手段としての駆動用モータ３６が取り付けられている。駆動用モータ３６は、中心軸回りに回転可能な出力軸３８が軸方向上方（図３中、上方）に向かって突設された電動モータ（図示せず）を内蔵している。一方、ハウジング２８には、該電動モータの通電状態を手動によりＯＮ／ＯＦＦする駆動スイッチ４０が取り付けられている。そして、駆動スイッチ４０をオンすることで、電動モータの出力軸３８が手動で回転駆動せしめられるようになっている。
【００５２】
また、出力軸３８の先端部分には、ギアハウジング３４が配設されている。ギアハウジング３４は、中空の略円板形状を呈しており、出力軸３８と同一中心軸上に位置せしめられて、出力軸３８の先端部分を収容している。更に、ギアハウジング３４の中心軸に偏倚した位置には、回転テーブル３０の回転軸３２が出力軸３８と平行に延びていると共に、回転軸３２の先端部分がギアハウジング３４に収容されている。更にまた、ギアハウジング３４には、図示しない遊星歯車等の歯車機構が収容配置されている。そして、歯車機構を介して電動モータの出力軸３８と回転テーブル３０の回転軸３２が連結されている。これにより、出力軸３８の回転に伴い歯車機構を介して回転テーブル３０が回転軸３２の中心軸回りに回転されるようになっている。また、出力軸３８の回転によってギアハウジング３４が出力軸３８回りに回転されることに伴い、回転軸３２がギアハウジング３４の中心軸回り、換言すれば電動モータの出力軸３８回りに回転されることとなり、回転テーブル３０が出力軸３８回りに回転されるようになっている。即ち、回転テーブル３０は、出力軸３８の回転に伴い回転軸３２回りの回転と出力軸３８回りの回転が生ぜしめられることにより、全体として軸直角方向等に揺動されると共に、ハウジング２８内部の水平面内で回転可能に配設されている。なお、このことからも明らかなように、本実施形態では、回転テーブル３０を全体として加振する加振手段が、駆動用モータ３６やギアハウジング３４、回転軸３２を含んで構成されている。また、電動モータには、例えば、公知のインダクションモータやユニバーサルモータ、直流型直巻の整流子モータ等が適宜に採用可能であり、それによって、出力軸３８、ひいては回転テーブル３０の回転速度や回転方向、回転位置等を変更制御できるようになっている。
【００５３】
さらに、回転テーブル３０には、複数の固定凹所４２が設けられている。固定凹所４２は、略平面視矩形状を呈しており、軸方向上方に向かって開口している。また、これら複数の固定凹所４２は、回転テーブル３０の中心軸回りにおいて、それぞれ、周方向に所定の離隔距離をもって配置されている。さらに、各固定凹所４２には、処理容器２６が固定されている。なお、固定凹所４２の数：ｎ（個）は、何等限定されるものでないが、好ましくは、３＜ｎ＜１７に設定されている。因みに、本実施形態では、固定凹所４２が、８個設けられている。
【００５４】
処理容器２６は、図５にも示されているように、容器本体４４を備えている。容器本体４４は、底壁４６や一対の第一側壁４８，４８、一対の第二側壁５０，５０を含んで構成されている。底壁４６は、長手状の略平面視矩形平板形状を呈している。また、底壁４６の長手方向両端部には、略矩形平板形状を有する第一側壁４８が略鉛直方向（図１中、上下）に延びるように一体的に設けられていると共に、底壁４６の幅方向両端部には、長手状の略矩形平板形状を有する第二側壁５０が略鉛直方向に延びるように一体的に設けられている。また、第一側壁４８の幅方向両端部と第二側壁５０の幅方向両端部が、それぞれ、隣り合う側壁の幅方向端部と一体的に結合されていると共に、第一側壁４８の上端部と第二側壁５０の上端部が、略同じ高さに位置せしめられている。これにより、容器本体４４が、上方に向かって開口する略平面視矩形状の有底筒体形状とされている。また、容器本体４４は、光透過性を有するポリスチレンやポリカーボネート等の合成樹脂材を用いて形成されていることにより、全体として光透過性を有している。なお、容器本体４４の大きさ等は、特に限定されるものでないが、本実施形態では、例えば、容器本体４４の縦寸法：ｌ、換言すれば第二側壁５０の長手寸法が、１２（ｃｍ）≦ｌ≦２０（ｃｍ）とされていると共に、容器本体４４の横寸法：ｗ、換言すれば第一側壁４８の長手寸法が、５（ｃｍ）≦ｗ≦１０（ｃｍ）とされており、更に容器本体４４の高さ寸法：ｈ、換言すれば第一側壁４８乃至は第二側壁５０の高さ寸法が、１（ｃｍ）≦ｈ≦５（ｃｍ）とされている。
【００５５】
さらに、一対の第一側壁４８，４８の対向面間における一対の第二側壁５０，５０の対向面間には、隔壁としての仕切板５２が配設されている。この仕切板５２は、略矩形平板形状を有していると共に、アルミニウムや鉄等の金属材やポリプロピレンやポリスチレン等の合成樹脂材等を用いて形成されている。また、仕切板５２は、全体に多数の通孔を備えた網目構造とされている。ここにおいて、通孔の形状や大きさ等は、何等限定されるものでないが、本実施形態では、通孔の最大内法寸法：ｄが、望ましくは１（μｍ）≦ｄ≦１０（ｍｍ）に、より望ましくは１（ｍｍ）≦ｄ≦８（ｍｍ）に、更により望ましくは３（ｍｍ）≦ｄ≦５（ｍｍ）に設定されている。蓋し、通孔の最大内法寸法：ｄが１μｍよりも小さくなると、該通孔を通じての後述する処理液の通水性が悪くなる一方、通孔の最大内法寸法が１０ｍｍよりも大きくなると、皮膚片２４や該皮膚片２４を構成する生体細胞としての単一種の細胞が通孔に詰まったり、通孔を通り抜けたりするおそれがあるからである。なお、仕切板５２の上端部は、容器本体４４の開口端部と略同じ高さに設定されている。
【００５６】
更にまた、仕切板５２が、その幅方向両端部が一対の第一側壁４８，４８に、下端部が底壁４６に、それぞれ密着状に固着されることにより、第一側壁４８と平行に延びるようにして容器本体４４に固定されている。また、仕切板５２は、長手方向一方（図５中、右）の第一側壁４８側に偏倚して位置決め配置されている。これにより、本実施形態では、一対の第一側壁４８，４８の対向面間における一対の第二側壁５０，５０の対向面間が、仕切板５２によって二分されている。以て、底壁４６、第一側壁４８、第二側壁５０および仕切板５２で区画された空間において、仕切板５２を挟んで、長手方向一方（図５中、左）の第一側壁４８側には、大きな略平面視矩形状を呈する収容領域５４が形成されていると共に、長手方向他方（図５中、右）の第一側壁４８側には、小さな略平面視矩形状を呈する排液領域５６が形成されている。
【００５７】
そして、このような構造とされた処理容器２６が、回転テーブル３０の固定凹所４２に着脱可能に嵌め込まれていると共に、処理容器２６の底壁４６が、固定凹所４２の底部に支持されている。これにより、複数の処理容器２６が、回転テーブル３０から着脱可能とされていると共に、回転テーブル３０の回転軸３２回りにおいて、それぞれ、周方向に所定の離隔距離をもって位置決めされて固定的に取り付けられている。また、固定凹所４２は、図示しない位置センサを備えており、固定凹所４２に処理容器２６が固定された際に、後述の制御装置２２に電気信号を入力して、回転テーブル３０上における処理容器２６の位置情報および数を知らせるようになっている。
【００５８】
なお、本実施形態では、必要に応じて、固定凹所４２の底部に油圧モータ等の昇降手段が配設されており、該昇降手段を用いて該底部の長手方向一方の端部が他方の端部よりも鉛直方向上方に位置せしめられるように駆動せしめられることにより、固定凹所４２の底部が、傾斜せしめられる構造とされる。これにより、固定凹所４２の底部の傾斜に伴い該底部に支持された処理容器２６の底壁４６が水平方向に対して所定の傾斜角度で傾斜せしめられることにより、処理容器２６における収容領域５４が排液領域５６よりも鉛直方向上方に位置せしめられることとなる。以て、収容領域５４に収容された処理液が仕切板５２に設けられた多数の通孔を通じて排液領域５６に集められるようになっている。
【００５９】
さらに本昇降手段の別の用途に関しては、例えば図１５に示されているように、排出装置１６において、液体排出管路１０８とは別に設けられた細胞懸濁液回収管路１０９を通じて、単一細胞に単離した細胞懸濁液を遠沈管等の別に用意した細胞懸濁液回収容器１０７に回収するために、本昇降手段により固定凹所４２の底部を傾斜させることによって、細胞懸濁液回収管路１０９の開口部を細胞懸濁液中に開口せしめることにも用いることができる。
【００６０】
また、ハウジング２８の底壁部と回転テーブル３０の間には、保温プレート５８が配設されている。保温プレート５８は、薄肉の略矩形平板形状を有しており、グラスウールやロックウール、炭化コルク等の断熱材乃至は保温材を用いて形成されている。そして、保温プレート５８は、ハウジング２８の底壁部と回転テーブル３０の間に介装せしめられて、中央部に回転テーブル３０の回転軸３２が貫通された形態で、ハウジング２８に支持されている。これにより、回転テーブル３０に支持された各処理容器２６における皮膚片２４や処理液の温度が、所定時間、保持されるようになっている。
【００６１】
さらに、上述の如く、複数の処理容器２６がハウジング２８内部の水平面内において回転可能に配設されている回転テーブル３０に対して回転軸３２回りに支持されていることにより、ハウジング２８内部における回転テーブル３０の回転軸３２回りには、複数の処理領域６０が設けられている。
【００６２】
また、ハウジング２８の側壁部の適当な箇所には、小窓としての開口窓６２が貫設されている。更に、開口窓６２には、丁番等を用いて開閉可能な扉６４が配設されている。従って、開口窓６２を開けた状態とすることにより、処理容器２６が、開口窓６２を通じて回転テーブル３０の固定凹所４２に対して支持されたり取り出されたりすることが出来るようになっていると共に、開口窓６２を閉じた状態とすることにより、ハウジング２８の密閉状態が保持されるようになっている。これにより、複数の処理領域６０のうちの一つの処理領域６０ａには、扉６４を備えた開口窓６２を含む作業スペース６６が設けられている。
【００６３】
また、処理装置１２の周囲には、維持装置１８が設けられている。かかる維持装置１８は、ガス調節手段としてのガス給排装置６８と湿度調節手段としての加湿器７０を含んで構成されている。ガス給排装置６８は、ガス供給部としての酸素ガス（Ｏ2 ）ボンベや二酸化炭素ガス（ＣＯ2 ）ボンベとガス排出部としての吸引ポンプ等を含む負圧源を含んで構成されている。また、ガス給排装置６８には、酸素ガスボンベから吐出する酸素ガスを導く供給管路や二酸化炭素ガスボンベから吐出する二酸化炭素ガスを導く供給管路、負圧源に接続されたガス排出管路等の複数の管路からなるガス給排管路７２が接続されている。また、加湿器７０には、蒸気を吐出せしめて空気中に湿気を与える公知の構造が採用されている。また、加湿器７０には、加湿器本体から吐出する蒸気を導く蒸気供給管路７４が接続されている。そして、これらガス給排管路７２や蒸気供給管路７４が、それぞれ、処理装置１２のハウジング２８を貫通していると共に、各管路の先端開口部が、ハウジング２８の内部に開口している。これにより、酸素ガスボンベや二酸化炭素ガスボンベまたは各ガス供給管路等に取り付けられた図示しないバルブが開いた状態で、酸素ガスや二酸化炭素ガスが、各ガス供給管路を通じてハウジング２８内に供給されるようになっている。更に、負圧源またはガス排出管路等に取り付けられたバルブが開いた状態で、ハウジング２８内の空気が、ガス排出管路を通じて排出されるようになっている。また、図面に明示されていないが、ガス給排管路７２には、除菌用フィルタが装着されている。これにより、ハウジング２８の内部に対して所定のガスや空気等の流体を給排せしめる際に、流体に含まれる細菌等が除去されることとなり、細胞の生存環境が清浄に保持されるようになっている。
【００６４】
また、処理装置１２には、ハウジング２８内における酸素ガスの濃度や二酸化炭素ガスの濃度を検出して電気信号に変換するガス濃度センサ７６が設けられていると共に、ハウジング２８内の湿度を検出して電気信号に変換する湿度センサ７８が設けられている。
【００６５】
さらに、処理装置１２の周囲には、監視装置２０が配設されている。監視装置２０は、撮像手段としてのＣＣＤカメラ８０と変換装置８２を含んで構成されている。ＣＣＤカメラ８０は、公知の電荷結合素子を用いた撮影により画像データを得る走査型の固体撮像デバイスとされている。また、ＣＣＤカメラ８０は、前述の作業スペース６６が設けられた処理領域６０ａの上方においてハウジング２８等に支持されており、該処理領域６０ａに導き入れられた処理容器２６における皮膚片２４を撮影するようになっている。また、ＣＣＤカメラ８０で撮影した画像データは、変換装置８２に導かれて所定の電気信号等に変換されるようになっている。
【００６６】
更にまた、処理装置１２の周囲には、供給装置１４が配設されている。かかる供給装置１４は、目的とする皮膚片２４からの細胞の単離処理に供される各種の溶液を収容せしめたタンクの複数を含んで構成される。本実施形態に係る供給装置１４は、液体培地槽８４や洗浄液タンクとしての洗浄液槽８６、消毒液タンクとしての消毒液槽８８、抗生物質溶液タンクとしての抗生物質溶液槽９０、細胞分離溶液タンクとしての細胞分離溶液槽９２、細胞剥離溶液タンクとしての細胞剥離溶液槽９４、剥離停止溶液タンクとしての剥離停止溶液槽９６を含んで構成されている。
【００６７】
また、液体培地槽８４には、処理液としての液体培地が収容されている。液体培地には、皮膚片２４等を含む生体組織片を培養する各種の液体が採用可能であり、例えばＧＰ液体培地、ＳＣＤ液体培地、サブロー・ブドウ糖液体培地、ポテト・デキストロース液体培地、ＴＧ液体培地、プレインハートシュージョン液体培地およびニュートリエント液体培地等が適宜に採用される。更に、洗浄液槽８６には、処理液としての洗浄液が収容されている。洗浄液には、生体組織片の生存を維持させつつ、生体組織片を洗浄する各種溶液が採用可能であり、例えばリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）やトリス緩衝食塩水、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等が適宜に採用される。更にまた、消毒液槽８８には、例えば、処理液としてのイソジン等の消毒液が収容されている。また、抗生物質溶液槽９０には、処理液としての抗生物質の溶液が収容されている。抗生物質には、例えばストレプトマイシンやゲンタマイシン、ペニシリン、アンホテリシンＢ等が適宜に採用される。更に、細胞分離溶液槽９２には、単一細胞へのダメージを抑えつつ、生体組織片を複数の単一細胞からなる所定の細胞片に分離する処理液としての細胞分離剤の溶液が収容されている。本実施形態では、該細胞分離剤として、例えばディスパーゼ等のタンパク質分解酵素が好適に採用される。更にまた、細胞剥離溶液槽９４には、細胞片を単一の細胞に分離する処理液としての細胞剥離剤の溶液が収容されている。本実施形態では、細胞剥離剤として、例えばトリプシンやコラゲナーゼ等のタンパク質分解酵素が適宜に採用される。また、剥離停止溶液槽９６には、細胞剥離剤の溶液による単離処理を停止する処理液としての剥離停止剤の溶液が収容されている。剥離停止剤の溶液には、例えば、前述の細胞剥離剤にトリプシン等が採用される場合に、トリプシン中和液等が採用される。また、これら複数の槽は、内部温度が３〜５℃に設定された貯蔵庫９８に収容配置されている。これにより、各槽に収容された処理液が、３〜５℃に保持されている。
【００６８】
さらに、液体培地槽８４や洗浄液槽８６、消毒液槽８８、抗生物質溶液槽９０、細胞分離溶液槽９２、細胞剥離溶液槽９４、剥離停止溶液槽９６には、液体供給管路１００が接続されている。この液体供給管路１００は、一方の開口端部付近における液体の導入経路に電動バルブ１０２が配設されている。更に、液体供給管路１００の中間部分における液体の導入経路には、供給ユニット１０４が配設されている。供給ユニット１０４は、公知の温水機器等からなる加温装置や電動バルブ、液体供給ポンプを含んで構成されている。これら電動バルブや供給ユニットが、後述の制御装置によって駆動制御されるようになっている。更にまた、液体供給管路１００が供給ユニット１０４の電動バルブから各槽に向かって複数の管路に分岐されており、これら分岐した各管路が、各槽に接続されている。      
【００６９】
また、液体供給管路１００の先端開口部が、処理装置１２のハウジング２８を貫通して、ハウジング２８内部における複数の処理領域６０のうちの一つの処理領域に開口している。而して、回転テーブル３０に支持された特定の処理容器２６が処理領域に導き入れられることによって、処理容器２６における収容領域５４乃至は排液領域５６の上方に液体供給管路１００の開口部が位置せしめられるようになっている。これにより、当該処理領域が、処理液供給領域６０ｂとされている。
【００７０】
従って、供給ユニット１０４における電動バルブと液体供給ポンプを駆動させて、上述の複数の槽に収容された処理液から所定の処理液が、択一的に供給ユニット１０４の加温装置に導き入れられると共に、加温装置で約３７℃に加温された後に、電動バルブ１０２を開状態にして、液体供給管路１００の先端開口部から吐出される。これにより、温度が約３７℃に保持された所定の処理液が、処理容器２６の収容領域５４に導き入れられると共に、収容領域５４に収容された皮膚片２４が、処理液に浸漬される。また、上述の説明からも、処理容器２６の内部の温度を調節するための温度調節手段が、ハウジング２８内部において処理容器２６の下方に設置された保温プレート５８や供給ユニット１０４の加温装置を含んで構成されている。
【００７１】
なお、本実施形態では、液体供給管路１００の開口部が処理容器２６の収容領域５４の上方に位置せしめられて、所定の処理液が収容領域５４に直接に吐出されることにより、皮膚片２４が処理液に浸漬されるようになっているが、例えば、液体供給管路１００の開口部が処理容器２６の排液領域５６の上方に位置せしめられて、所定の処理液が、排液領域５６に吐出された後に、仕切板５２の多数の連通孔を通じて収容領域５４に導き入れられることにより、皮膚片２４が処理液に浸漬されるようにしても良い。また、本実施形態では、供給ユニット１０４や電動バルブ１０２が後述の制御装置２２で制御されることにより、各槽における処理液が、処理容器２６に対して所定の分量に正確に注入されるようになっている。
【００７２】
また、処理装置１２の周囲には、排出装置１６が設けられている。排出装置１６は、所定の箱体状を呈する廃棄液タンク１０６に液体排出管路１０８が接続された構造とされている。更に、液体排出管路１０８における液体の導入経路には、電動バルブ１１０が設けられている。更にまた、液体排出管路１０８の液体導入経路または廃棄液タンク１０６には、図示しない液体排出ポンプが設けられている。また、これら電動バルブ１１０や液体排出ポンプが、後述の制御装置２２によって駆動制御されるようになっている。
【００７３】
さらに、液体排出管路１０８の先端開口部が、処理装置１２のハウジング２８を貫通して、ハウジング２８内部における複数の処理領域６０のうちの一つの処理領域に開口している。而して、回転テーブル３０に支持された特定の処理容器２６が処理領域に導き入れられることによって、処理容器２６における排液領域５６に液体排出管路１０８の開口部が位置せしめられるようになっている。これにより、当該処理領域が、処理液排出領域６０ｃとされている。なお、液体排出管路１０８の開口部には、必要に応じて、開口部を排液領域５６の底部に対して接近／離隔方向に変位せしめる公知の揺動機構や回動機構、伸縮機構等が配設される。また、本実施形態では、処理液の排出に際して、固定凹所４２が傾斜されることに伴い、処理容器２６が、固定凹所４２の底部に設置された昇降手段によって、排液領域５６が収容領域５４よりも鉛直下方に位置せしめられるように傾斜せしめられることにより、重力の作用を利用して、収容領域５４に収容された処理液が、排液領域５６側に導かれて液体排出管路１０８から廃棄液タンク１０６に排出されるようにしても良い。
【００７４】
このような排出装置１６においては、液体排出管路１０８の開口部が排液領域５６の底部に対して接近する方向に変位されるか、或いは昇降手段によって排液領域の底部が液体排出管路１０８の開口部に向かって変位されることにより、液体排出管路１０８の開口部が排液領域５６に収容された処理液に開口される。更に、電動バルブ１１０が開いた形態で、液体排出ポンプを駆動させることにより、排液領域５６に収容された処理液が該開口部から吸引されると共に、収容領域５４に収容された処理液が仕切板５２の連通孔を通じて排液領域５６に導かれて液体排出管路１０８の開口部から吸引され、液体排出管路１０８を通じて廃棄液タンク１０６に排出されるようになっている。
【００７５】
さらに、必要に応じて、液体排出管路１０８とは別に、前述の如き細胞懸濁液回収管路１０９が併設される。（図１５参照）かかる細胞懸濁液回収管路１０９によって、単一細胞に単離した細胞懸濁液を、処理容器２６から、廃棄液タンク１０６とは異なる、遠沈管等の細胞懸濁液回収容器１０７に回収することが可能とされている。
【００７６】
なお、細胞懸濁液回収管路１０９においても、液体排出管路１０８と同様に、その開口部が処理容器２６の底部に対して接近する方向に変位されるか、或いは前述の昇降手段によって固定凹所４２の底部を傾斜させて、細胞懸濁液回収管路１０９の開口部に向かって変位されることにより、細胞懸濁液回収管路１０９の開口部が処理容器２６に収容された細胞懸濁液に開口される。
【００７７】
また、本実施形態では、図面からも明らかなように、処理液供給領域６０ｂと処理液排出領域６０ｃが回転テーブル３０の回転軸３２を挟んだ軸直角方向で対向位置せしめられている。更に、複数の固定凹所４２が、回転テーブル３０の回転軸３２を挟んだ複数の軸直角方向で、それぞれ、一対の固定凹所４２，４２が対向位置せしめられるようにして、回転テーブル３０に設けられている。
【００７８】
また、処理装置１２の周囲には、制御装置２２が配設されている。本実施形態における制御装置２２は、例えば一般的なコンピュータシステムを用いて構成されており、中央演算処理装置（ＣＰＵ）１１２と、それに接続されたＲＯＭ，ＲＡＭ，ハードディスク等の記憶装置１１４を備えていると共に、ＣＰＵ１１２に対して適当なインターフェースを介して接続されたキーボードやマウス等の入力装置（図示せず）や、モニタ手段としての表示装置１１６を備えている。そして、ＣＰＵ１１２は、予めＲＯＭに記憶された制御プログラムとＲＡＭに一時記憶された監視装置２０からのデータ等を含む各種のデータに従い、入力装置から入力される信号や記憶装置１１４に記憶されたデータを処理して、各種の電気信号を出力して処理装置１２や供給装置１４、排出装置１６、維持装置１８を制御するようになっている。
【００７９】
詳細には、細胞単離装置１０を稼働する電気信号が入力装置からＣＰＵ１１２に入力されると、処理装置１２、供給装置１４、排出装置１６、維持装置１８および監視装置２０の電源がオンされる。而して、処理装置１２の回転テーブル３０が回転されて、回転テーブル３０に支持された複数の処理容器２６が、作業スペース６０ａの上方に位置せしめられたＣＣＤカメラ８０を通過する際に、ＣＣＤカメラ８０で連続にまたは断続に撮影される。また、撮影された映像が、制御装置２２の表示装置１１６に映し出される。
【００８０】
さらに、維持装置１８が稼働されることにより、酸素ガスや二酸化炭素ガス、蒸気が、ガス給排管路７２や蒸気供給管路７４を通じて処理装置１２のハウジング２８内に吐出される。一方、処理装置１２に設けられたガス濃度センサ７６や湿度センサ７８の検出信号がＣＰＵ１１２に入力されて、ＣＰＵ１１２が予めＲＯＭに記憶された設定数値と照合した結果に基づいて、維持装置１８における酸素ガスや二酸化炭素ガス、蒸気のハウジング内２８に対する吐出量が、フィードバック的に制御される。
【００８１】
また、予め回転テーブル３０における複数の固定凹所４２のうちのいくつかに処理容器２６が固定されていることにより、処理容器２６を固定した固定凹所４２の位置センサが、ＣＰＵ１１２に電気信号を出力して、回転テーブル３０上における処理容器２６の数や位置情報をＲＡＭ等の記憶装置１１４に記憶させる。更に、ＣＰＵ１１２が、記憶装置１１４に記憶されたデータを処理して、回転テーブル３０（駆動用モータ３６）に制御信号を出力する。そして、特定の固定凹所４２に固定された処理容器２６が、回転テーブル３０の回転に伴い処理液供給領域６０ｂに導き入れられると共に、固定凹所４２の位置センサ等に基づくＣＰＵ１１２の制御信号によって、回転テーブル３０の回転が停止される。
【００８２】
また、予めＲＯＭに記憶された制御プログラムに従い、ＣＰＵ１１２が処理液供給用の制御信号を供給装置１４の供給ユニット１０４に出力すると、供給装置１４に設けられた複数の処理液槽のうちの特定の処理液槽が供給ユニット１０４の電動バルブと連通状態とされて、当該処理液槽の処理液が、供給ユニット１０４の液体供給ポンプによって加温装置に導かれて加温処理が施される。更に、処理液が、約３７℃に加温された後に、電動バルブ１０２が開状態に切換作動されて、液体供給管路１００を通じて処理液供給領域６０ｂに収容された処理容器２６に注入される。
【００８３】
また、ＣＰＵ１１２が、記憶装置１１４に記憶された処理容器２６の位置データに基づき駆動用モータ３６に制御信号を出力する。そして、回転テーブル３０が回転されて、上記処理液が収容された処理容器２６が、処理液供給領域６０ｂから出される一方、該処理容器２６と異なる処理容器２６が処理液供給領域６０ｂに導き入れられて、回転テーブル３０の回転が停止される。更に、予めＲＯＭに記憶された制御プログラムに従い、前述の作動制御と同様に、処理液が処理液供給領域６０ｂに位置せしめられた処理容器２６に注入される。更にまた、他の固定凹所４２に固定された処理容器２６にも、前述の作動制御と同様にして、所定の処理液が注入される。それによって、回転テーブル３０上に位置決め固定された全ての処理容器２６が、処理液供給領域６０ｂに順次に導き入れられて、所定の処理液を供給せしめられる。
【００８４】
また、処理液が収容された処理容器２６が、記憶装置１１４に記憶されたタイムテーブルや処理容器２６の位置データに基づいて、回転テーブル３０上で所定時間、保持される。なお、かかる処理は、回転テーブル３０の回転が停止された状態で行われることも勿論可能であるが、特に本実施形態では、処理液の処理が行われる所定の時間、回転テーブル３０が連続に又は不連続に回転されている状態で行われる。これにより、回転テーブル３０の回転に伴いギアハウジング３４等を含む加振手段で回転テーブル３０が全体として加振されることにより、回転テーブル３０に支持された処理容器２６が加振されることから、各処理容器２６において処理液が皮膚片２４に有効に浸潤されることとなる。
【００８５】
さらに、ＣＰＵ１１２がタイムテーブルや処理容器２６の位置情報に従い制御信号を回転テーブル３０に出力することによって回転テーブル３０が回転され、所定時間が経過した処理容器２６が、処理液排出領域６０ｃに導き入れられると共に、回転テーブル３０が停止される。
【００８６】
また、予めＲＯＭに記憶された制御プログラムに従い、ＣＰＵ１１２が処理液排出用の制御信号を排出装置１６に出力すると、液体排出管路１０８の開口部が処理容器２６の排液領域５６の底部に向かって変位して排液領域５６の処理液に開口される。或いは、ＣＰＵ１１２が処理装置１２に制御信号を出力して、固定凹所４２の底部が昇降手段によって鉛直方向上方に向かって変位されることに伴い、排液領域の底部が液体排出管路１０８の開口部に向かって変位されることにより、液体排出管路１０８の開口部が排液領域５６に収容された処理液に開口される。更に、ＣＰＵ１１２の制御信号により電動バルブ１１０が開いた形態で、排出装置１６の液体排出ポンプが駆動される。これにより、排液領域５６に収容された処理液が、該開口部から吸引されると共に、収容領域５４に収容された処理液が仕切板５２の連通孔を通じて排液領域５６に導かれて液体排出管路１０８の開口部から吸引され、液体排出管路１０８を通じて廃棄液タンク１０６に排出される。以て、処理容器２６に収容された皮膚片２４に対して処理液による処理が施される。
【００８７】
また、ＣＰＵ１１２が、記憶装置１１４に記憶された処理容器２６の位置データに基づき駆動用モータ３６に制御信号を出力する。そして、回転テーブル３０が回転されて、上記処理液が排出された処理容器２６が、処理液供給領域６０ｃから出されると共に、処理液が収容された別の処理容器２６が処理液供給領域６０ｃに導き入れられて、回転テーブル３０の回転が停止される。更に、予めＲＯＭに記憶された制御プログラムに従い、前述の作動制御と同様に、処理液供給領域６０ｃに位置せしめられた処理容器２６における処理液が排出される。更にまた、他の固定凹所４２に固定された、処理液が収容された処理容器２６も、前述の作動制御と同様にして、該処理液が排出される。従って、回転テーブル３０上に位置決め固定された全ての処理容器２６が、処理液供給領域６０ｃに順次に導き入れられて、処理液が排出される。それによって、全ての処理容器２６に収容された皮膚片２４に対して処理液による処理が施される。
【００８８】
また、ＣＣＤカメラ８０で撮影された映像が、前述の如く、制御装置２２の表示装置１１６に映し出される一方、撮影された画像データが、変換装置８２に導かれ、皮膚片２４の細胞密度の特徴抽出処理を施されて特徴データに変換されると共に、その特徴データが、ＣＰＵ１１２に入力されてＲＡＭ等の記憶装置１１４に記憶される。更に、ＣＰＵ１１２が、記憶装置１１４に記憶された特徴データと予めＲＯＭに記憶されている細胞密度データを照合する。その結果、特徴データが目標とする細胞密度データと著しく異なる場合等には、ＣＰＵ１１２が、供給装置１４に制御信号を出力して、当該特徴データを有する皮膚片２４が収容された処理容器２６における処理液の吐出量を変更設定したり、維持装置１８に制御信号を出力して、酸素ガスや二酸化炭素ガス等の吐出量を変更設定することに伴いハウジング２８内の雰囲気を調節したりするようになっている。
【００８９】
而して、特定の処理液が排出された処理容器２６は、目的とする処理が予め設定された制御プログラムに従って、再び処理液供給領域６０ｂに導き入れられて、特定の処理液槽における処理液を供給せしめられると共に、再び処理液排出領域６０ｃに導き入れられて処理液を排出せしめられる。そして、目的とする処理液に係る供給処理と排出処理が複数回繰り返されて終了した後、処理を終えた処理容器が、作業スペースに導き入れられて、開口窓から手作業またはマニピュレータ等で取り出される。なお、本実施形態に係る細胞単離装置１０においては、ＲＡＭ等の記憶装置１１４に記憶された固定凹所４２の位置データと、予めＲＯＭ等の記憶装置１１４に記憶されている各固定凹所４２に固定された処理容器２６に割り当てられた処理時間のタイムテーブルに従って、処理液供給領域６０ｂにおいて所定の処理液を処理容器２６に注入させると同時に、処理液排出領域６０ｃにおいて所定の処理液を処理容器２６から排出させることが可能である。
【００９０】
次に、上述の如き構造とされた細胞単離装置１０を用いて、生体組織片としての皮膚片２４に単離処理を施す、皮膚片２４の細胞単離方法に係る一具体例について説明するが、本発明はかかる具体例に限定されるものでない。
【００９１】
先ず、表１にも示されているように、処理装置１２の回転テーブル３０に設けられた８つの固定凹所４２にNo.1〜8 の番号を付して、これらの番号を予め制御装置２２のＲＯＭ等を含む記憶装置１１４に記憶させておく。また、８つの処理容器２６を用意して、これらの容器２６にNo.1〜8 の番号を付する。更に、ヒトから採取した皮膚片２４の複数を用意して、これら皮膚片２４の８つに適当な品番（本実施形態では、例えばLot.No.3234 〜3241）を付する。
【００９２】
【表１】
2005218376.tif 000003
【００９３】
また、各皮膚片２４を各処理容器２６の収容領域５４に収容配置する。更に、処理装置１２のハウジング２８の開口窓６２を開口して、作業スペース６０ａに位置せしめられた固定凹所４２に該凹所４２の番号に該当する番号の処理容器２６を固定する。更にまた、処理装置１２に取り付けられた駆動スイッチ４０をオンして回転テーブル３０を回転させ、処理容器２６を固定した固定凹所４２を作業スペース６０ａから出すと共に、別の固定凹所４２を作業スペース６０ａに導く。また、かかる凹所４２に該当する番号の処理容器２６を固定する。而して、他の固定凹所４２にも同様に処理容器２６を固定することにより、本実施形態では、８つの固定凹所４２の全てに処理容器２６を固定する。また、かかる固定に際して、各固定凹所４２に設けられた位置センサが制御装置２２のＣＰＵ１１２に電子信号を出力することにより、各固定凹所４２に処理容器２６が固定されていることが記憶装置１１４に記憶される。また、各処理容器２６に収容された皮膚片２４の品番を、制御装置２２における入力装置のキーボード等から入力して記憶装置１１４に記憶させる。それによって、表１に示される如き皮膚片２４の収容位置データが記憶装置１１４に記憶される。
【００９４】
また、予めＲＯＭ等を含む記憶装置１１４には、表２にも示されるように、処理液供給領域６０ｂにおいて、各処理容器２６に各種の処理液を施す手順や所定の処理液を保持する時間、該処理液を施す回数等を設定した処理プログラムが記憶されている。
【００９５】
【表２】
2005218376.tif 000004
【００９６】
さらに、ＲＡＭ等を含む記憶装置１１４には、表３にも示されるように、各固定凹所４２に固定された処理容器２６に対して各種の処理液を注入する時間または排出する時間が、前述の処理プログラムに従って振り分けられたタイムテーブルが記憶される。
【００９７】
【表３】
2005218376.tif 000005
【００９８】
而して、各固定凹所４２に処理容器２６を固定した後に、細胞の単離処理を開始する電気信号を入力装置からＣＰＵ１１２に入力することにより、回転テーブル３０を回転させて、No.1の固定凹所４２に固定された処理容器２６を、処理液供給領域６０ｂに導き入れると共に、固定凹所４２の位置センサ等に基づくＣＰＵ１１２の制御信号によって、回転テーブル３０の回転を停止する。
【００９９】
また、処理プログラムに従い、ＣＰＵ１１２が処理液供給用の制御信号を供給装置１４の供給ユニット１０４に出力すると、供給装置１４に設けられた洗浄液槽８６を供給ユニット１０４の電動バルブと連通させて、洗浄液槽８６に収容されたＰＢＳ等の洗浄液を、供給ユニット１０４の液体供給ポンプによって加温装置に導いて加温処理する。更に、洗浄液を、約３７℃に加温した後に、電動バルブ１０２を開状態に切換作動せしめて、液体供給管路１００を通じて処理液供給領域６０ｂに収容されたNo.1の処理容器２６に注入する。
【０１００】
また、ＣＰＵ１１２が、記憶装置１１４に記憶された皮膚片２４の収容位置データに基づき駆動用モータ３６に制御信号を出力する。そして、回転テーブル３０を回転させて、No.1の処理容器２６を処理液供給領域６０ｂから出す一方、No.2の処理容器２６を処理液供給領域６０ｂに導き入れて、固定凹所４２の位置センサ等に基づくＣＰＵ１１２の制御信号により回転テーブル３０の回転を停止させる。更に、処理プログラムやタイムテーブルに従い、No.1の処理容器２６と同様に、洗浄液を処理液供給領域６０ｂに位置せしめられたNo.2の処理容器２６に注入する。更にまた、No.3〜8 の処理容器２６にも、No.1,2の処理容器２６と同様にして、洗浄液を注入する。それによって、No.1〜8 の処理容器２６に洗浄液を注入する。
【０１０１】
また、洗浄液を収容したNo.1〜8 の処理容器２６を、記憶装置１１４に記憶されたタイムテーブルや処理容器２６の位置データに基づいて、回転テーブル３０上で、回転テーブル３０が回転している状態で、それぞれ、３０秒間保持する。その後、処理プログラムやタイムテーブルに基づくＣＰＵ１１２の制御信号に従い、No.1の処理容器２６を、処理液排出領域６０ｃに導き入れると共に、回転テーブル３０を停止させる。
【０１０２】
また、処理プログラムやタイムテーブルに従い、ＣＰＵ１１２が処理液排出用の制御信号を排出装置１６に出力して、液体排出管路１０８の開口部をNo.1の処理容器２６の排液領域５６に収容された洗浄液に開口する。更に、ＣＰＵ１１２の制御信号により電動バルブ１１０を開いた形態で、排出装置１６の液体排出ポンプを駆動させる。これにより、排液領域５６に収容された洗浄液を液体排出管路１０８の開口部から吸引させて、液体排出管路１０８を通じて廃棄液タンク１０６に排出する。
【０１０３】
また、ＣＰＵ１１２が、記憶装置１１４に記憶された皮膚片２４の収容位置データに基づき駆動用モータ３６に制御信号を出力する。そして、回転テーブル３０を回転させて、No.1の処理容器２６を処理液排出領域６０ｃから出す一方、No.2の処理容器２６を処理液排出領域６０ｂに導き入れて、固定凹所４２の位置センサ等に基づくＣＰＵ１１２の制御信号により回転テーブル３０の回転を停止させる。更に、処理プログラムやタイムテーブルに従い、No.1の処理容器２６と同様に、No.2の処理容器２６に収容された洗浄液を液体供給管路を通じて廃棄液タンク１０６に排出する。更にまた、No.3〜8 の処理容器２６にも、No.1,2の処理容器２６と同様にして、洗浄液を排出する。これにより、No.1〜8 の処理容器２６に収容された皮膚片２４に対して洗浄処理を施す。
【０１０４】
特に本実施形態では、回転テーブル３０に対して複数の処理容器２６が支持されていることから、全ての処理容器２６に洗浄液を注入する前に、洗浄液の注入後３０秒が経過したNo.1の処理容器２６から洗浄液を順次に排出している。具体的に、本実施形態の洗浄処理では、表３のタイムテーブルにも示されているように、N o.1 の処理容器２６からNo.4の処理容器２６まで洗浄液を順次に注入すると共に、３０秒間が経過した時点で、No.1の処理容器２６から洗浄液を排出すると同時に、No.5の処理容器２６から洗浄液を注入する。
【０１０５】
続いて、本実施形態では、タイムテーブルや処理プログラムに従い、No.5の処理容器２６から洗浄液を排出すると同時に、洗浄処理が完了したNo.1の処理容器２６から洗浄液を再び注入して、No.1〜8 の処理容器２６に対して洗浄処理を繰り返し行う。
【０１０６】
また、２回目の洗浄処理に係るNo.5の処理容器２６から洗浄液を排出すると同時に、２回目の洗浄処理を完了したNo.1の処理容器２６から消毒液槽８８における消毒液としてのイソジンを注入する。そして、前述の洗浄処理における作動制御と同様にして、No.2〜8 の処理容器２６を処理液供給領域６０ｂに順次に導いて、イソジンを注入して、各処理容器２６において、それぞれ、６０秒間イソジンを保持する。その後、No.1〜8 の処理容器２６を処理液排出領域６０ｃに順次に導いて、イソジンを排出する。これにより、No.1〜8 の処理容器２６に収容された皮膚片２４に対して消毒処理を施す。
【０１０７】
また、消毒処理を施したNo.1〜8 の処理容器２６に対して、前述と同様の洗浄処理を３回繰り返して施す。更に、洗浄処理が完了したNo.1〜8 の処理容器２６を処理液供給領域６０ｂに順次に導いて、抗生物質溶液槽９０におけるストレプトマイシンやゲンタマイシン等の抗生物質の溶液を注入すると共に、各処理容器２６において、それぞれ、３０分間抗生物質溶液を保持する。その後、No.1〜8
の処理容器２６を処理液排出領域６０ｃに順次に導いて、抗生物質溶液を排出する。これにより、No.1〜8 の処理容器２６に収容された皮膚片２４に対して抗生物質処理を施す。
【０１０８】
さらに、抗生物質処理を施したNo.1〜8 の処理容器２６に対して、前述と同様の洗浄処理を施す。更にまた、該洗浄処理に係るNo.5の処理容器２６から洗浄液を排出すると同時に、当該洗浄処理を完了したNo.1の処理容器２６を処理液供給領域６０ｂに導き入れて、細胞分離溶液槽９２に収容された細胞分離溶液としてのディスパーゼを注入する。そして、前述の洗浄処理における作動制御と同様にして、No.2〜8 の処理容器２６を処理液供給領域６０ｂに順次に導いて、ディスパーゼを注入する。また、タイムテーブルや処理プログラムに従い、ディスパーゼを収容したNo.1の処理容器２６を作業スペース６０ａに導き入れて、回転テーブル３０の回転を停止させる。そして、扉６４を開けて、開口窓６２からNo.1の処理容器２６を取り出し、図示しない所定のインキュベータに収容する。更に、ディスパーゼを収容したNo.2〜8 の処理容器２６を、駆動スイッチ４０のＯＮ／ＯＦＦの切換作動によって作業スペース６０ａに順次に導き入れて、開口窓６２から取り出し、No.1の処理容器２６と同様に、インキュベータに収容する。そして、これらNo.1〜8 の処理容器２６をインキュベータにて１６時間保持する。なお、かかる保持の間、細胞単離装置１０の稼働は停止されていても良い。
【０１０９】
また、１６時間経過した後に、No.1〜8 の処理容器２６をインキュベータから取り出して、各処理容器２６に収容された皮膚片２４から細胞片としての表皮をピンセット等を用いて採取する。また、No.1〜8 の番号を付した８つの処理容器２６を新たに用意して、これら処理容器２６の収容領域５４に、それぞれ、表皮を収容する。
【０１１０】
さらに、前述の皮膚片２４と同様にして、処理装置１２のハウジング２８の開口窓６２から各固定凹所４２に該凹所４２の番号に該当する番号の処理容器２６を順次に固定する。これにより、各固定凹所４２に設けられた位置センサによって、表皮の収容位置データを記憶装置１１４に記憶させる。そして、各固定凹所４２に処理容器２６を固定した後に、細胞の単離処理を再開する電気信号を入力装置からＣＰＵ１１２に入力することにより、回転テーブル３０を回転させて、No.1の固定凹所４２に固定された処理容器２６を、処理液供給領域６０ｂに導き入れると共に、固定凹所４２の位置センサ等に基づくＣＰＵ１１２の制御信号によって、回転テーブル３０の回転を停止させる。
【０１１１】
また、処理プログラムに従い、前述の洗浄処理に係る作動制御と同様にして、細胞剥離溶液槽９４に収容された細胞剥離溶液としてのトリプシンを、No.1の処理容器２６に注入する。更に、No.2〜8 の処理容器２６も処理液供給領域６０ｂに順次に導いて、トリプシンを注入せしめる。而して、各処理容器２６において、それぞれ、１５分間トリプシンを保持する。その後、No.1〜8 の処理容器２６を処理液排出領域６０ｃに順次に導いて、トリプシンを排出する。
【０１１２】
さらに、トリプシンを排出したNo.1〜8 の処理容器２６を処理液供給領域６０ｂに順次に導いて、剥離停止溶液槽９６に収容された剥離停止溶液としてのウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含んだ処理液を注入すると共に、各処理容器２６において、それぞれ、５分間ＦＢＳを保持する。その後、No.1〜8 の処理容器２６を処理液排出領域６０ｃに順次に導いて、ＦＢＳを排出する。これにより、No.1〜8 の処理容器２６に収容された表皮に対して細胞剥離処理を施して、単一種の細胞に分離する。
【０１１３】
なお、特に図面等に明示されていないが、本実施形態では、必要に応じて、細胞を培養する電気信号を入力装置からＣＰＵ１１２に入力して、処理液供給領域６０ｂに導き入れられた処理容器２６に対して液体培地槽８４に収容された液体培地を注入しても良い。これにより、皮膚片乃至は表皮の形状や大きさ等を設定変更することが可能となり、それに伴って目的とする単一細胞の形状や大きさ等を設定変更することが出来る。
【０１１４】
このような本態様に従う構造とされた細胞単離装置１０においては、回転テーブル３０に支持された複数の処理容器２６が、回転テーブル３０の回転に伴い処理液供給領域６０ｂや処理液排出領域６０ｃに順次に導かれて、各種の処理液による処理が、複数の皮膚片２４に対して自動的に施される。従って、複数の処理液における供給処理や排出処理が、皮膚片２４ごとに手作業で行われる等の大きな困難を伴うことなく、複数の皮膚片２４に対して簡便に且つ確実に施される。それ故、皮膚片２４が効率的に処理されて、単一種の細胞が有利に量産されるのである。
【０１１５】
しかも、本実施形態では、供給装置が設けられた処理液供給領域や排出装置が設けられた処理液排出領域が、それぞれ、一つだけ設けられた形態であっても、回転テーブル上に設置されていることから、回転テーブルに支持された複数の処理容器が両領域に効率良く導かれる。それによって、処理容器の設置効率の向上と相俟って、単一細胞の量産効率の更なる向上が図られ得る。
【０１１６】
さらに、本実施形態では、所定の処理容器２６において所定の処理液の供給が行われると同時に、別の所定の処理容器において所定の処理液の排出が行われていることにより、作業の無駄が省かれて、作業効率が有利に向上され得るのである。
【０１１７】
以上、本発明の一実施形態について詳述してきたが、これはあくまでも例示であり、かかる実施形態における具体的な記載によって、本発明は、何等限定されるものでなく、当業者の知識に基づいて種々なる変更、修正、改良等を加えた態様で実施可能であり、また、そのような実施態様が、本発明の趣旨を逸脱しない限り、何れも、本発明の範囲内に含まれるものであることは、言うまでもない。      
【０１１８】
例えば、前記実施形態では、各固定凹所４２に対して処理容器２６が固定されることにより、合計８つの処理容器２６を用いて細胞の単離処理が行われるようになっていたが、かかる処理容器２６の数等は何等限定されるものでなく、表４にも示されているように、４つの処理容器２６を用いて細胞の単離処理を行うようにしても良い。
【０１１９】
【表４】
2005218376.tif 000006
【０１２０】
また、前記実施形態では、同一の処理時間で、No.1の処理容器２６において所定の処理液が供給される一方、No.5の処理容器２６において所定の処理液が排出されるようになっていたが、例えば、表４に示されているように、No.1の処理容器２６からNo.8の処理容器２６まで順次に処理液による処理を完了させた後に、No.1〜8 の処理容器２６を次の処理工程に備えて回転テーブル３０上で待機させることも可能である。
【０１２１】
さらに、前記実施形態において採用された処理容器２６は、例示の如き形状や構造等に限定されるものでなく、各種の処理容器が採用可能である。以下に、前記実施形態に採用される別の処理容器について説明する。なお、以下の説明中、前記実施形態と実質的に同一の構造とされた部材および部位については、図中に前記実施形態と同一の符号を付することによりそれらの詳細な説明を省略する。      
【０１２２】
図６〜７には、容器本体４４の収容領域５４に対して収容容器１１８が着脱可能に取り付けられた処理容器が示されている。かかる収容容器１１８は、略平面視長手状の有底矩形筒体形状を呈していると共に、全体に多数の連通孔を備えたメッシュ構造とされている。また、容器本体４４に設けられた隔壁としての仕切板１２０が、第一および第二側壁４８，５０の高さ寸法よりも小さな高さ寸法を有しており、容器本体４４の高さ方向中間部分において、その幅方向両端部分が第二側壁５０に固着されている。それによって、仕切板１２０の上端部と容器本体４４の開口部および仕切板１２０の下端部と容器本体４４の底壁４６の間に、それぞれ、通孔１２２が設けられている。そして、容器本体４４の収容領域５４に収容容器１１８が嵌め込まれることにより、収容容器１１８の内部が、該容器１１８の側壁の連通孔と仕切板１２０の上下端部に設けられた通孔１２２，１２２を通じて、排液領域５６と連通されている。また、皮膚片２４等の生体組織片が収容容器１１８に収容配置されるようになっている。
【０１２３】
また、図８〜９には、底部仕切板１２４を備えた処理容器が示されている。底部仕切板１２４は、薄肉の略平面視矩形板状を呈していると共に、表面に多数の連通孔を備えたメッシュ構造とされており、容器本体４４の底壁４６から所定の高さ位置において軸直角方向に拡がるようにして、第一側壁４８、一対の第二側壁５０，５０および仕切板５２に固着されている。これにより、処理容器２６における収容領域５４の底部には、底壁４６、第一側壁４８、一対の第二側壁５０，５０、仕切板５２および底部仕切板１２４で区画された底部領域１２６が設けられている。そして、底部領域１２６は、仕切板５２の通孔を通じて排液領域５６と連通されていると共に、底部仕切板１２４の連通孔を通じて収容領域５４の上方と連通されている。また、底部仕切板１２４における底壁４６からの高さ寸法：ｈ’は、特に限定されるものでないが、好ましくは０．５ｍｍ以上に、より好ましくは１ｍｍ以上に設定されている。
【０１２４】
さらに、図１０〜１１には、浅底の収容容器１１８を備えた処理容器が示されている。処理容器における収容領域５４の底部には、容器本体４４の側壁から収容領域５４に向かって突出せしめられて、仕切板１２０から離隔した側の第一側壁４８および一対の第二側壁５０，５０の長手方向に沿って連続にまたは不連続に延びる支持部材１２８が固着されている。そして、収容容器１１８が、収容領域５４に嵌め込まれて、その下端縁部が支持部材１２８で支持されており、収容領域５４の底壁４６から所定の鉛直方向上方に取り付けられている。なお、本具体例の収容容器１１８は、容器本体４４の仕切板１２０に重ね合わされる側壁１３０が連通孔を備えたメッシュ構造とされていると共に、該側壁を除く他の璧部が連通孔を備えない板部材により形成されている。
【０１２５】
更にまた、図１２には、小形の収容容器１１８を備えた処理容器が示されている。かかる収容容器１１８の長手方向の長さが、容器本体４４の収容領域５４の長手方向の長さよりも小さくされている。また、収容容器１１８は、長手方向の両端に位置する側壁１３０，１３０が、多数の連通孔を備えたメッシュ構造とされていると共に、それ以外の壁部が連通孔を備えない板部材により形成されている。そして、収容容器１１８が、収容領域５４に嵌め込まれて、その下端縁部が支持部材１２８で支持されており、収容領域５４の底壁４６から所定の鉛直方向上方に取り付けられている。また、収容容器１１８の長手方向両端の側壁の一方１３０ａが、容器本体４４の仕切板１２０に重ね合わされていると共に、他方１３０ｂが、容器本体４４の仕切板１２０から離隔した側の第一側壁４８と長手方向で離隔して対向位置せしめられている。これにより、収容容器１１８の側壁１３０ｂと容器本体４４の第一側壁４８の対向面間には、第二の排液領域１３２が設けられている。この第二の排液領域１３２は、収容容器１１８の側壁１３０，１３０の連通孔および容器本体４４の仕切板１２０の通孔１２２，１２２を通じて排液領域５６と連通されていると共に、収容領域５４の底部における容器本体４４の底壁４６と収容容器１１８の底部の対向面間を通じて排液領域５４と連通されている。
【０１２６】
また、図６，７等に示される収容容器１１８は、かかる形態に限定されるものでなく、例えば図１３に示されているように、収容容器１１８の開口部分に対して開閉可能な蓋体１３４を取り付けたり、或いは図１４に示されるように取手部１３６，１３６を取り付けたり等した収容容器が採用可能である。なお、図１３に示される蓋体１３４には、連通孔を備えたメッシュ構造のものや連通孔を備えない板状のもの等が採用される。
【０１２７】
さらに、処理容器２６においては、上述の形状や大きさ、構造に限定されるものでなく、例えば、有底筒体形状を呈していると共に、底部が円弧状断面とされた公知の遠沈管の如き形状等を採用しても良い。
【０１２８】
また、前記実施形態では、回転テーブル３０の全体を加振する加振手段として例示のギアハウジング３４を含むクランクアームの如き構造が採用されていたが、これに限定されるものでなく、例えば回転テーブル３０と同一中心軸上に駆動用モータ３６の出力軸３８を固着して回転テーブル３０が出力軸３８と一体的に回転されるようにすると共に、駆動用モータ３６に案内レール等を取り付けて駆動用モータ３６および回転テーブル３０が軸直角方向に揺動可能とされ、更に出力軸３８と平行に延び、且つ回転に伴い駆動用モータ３６のハウジング２８に対して当接／離隔されるカムを配設することにより、カムの回転による駆動用モータ３６への当接／離隔に伴い駆動用モータ３６および回転テーブル３０に軸直角方向の揺動変位を及ぼして、以て、回転テーブル３０が全体として加振されるようにしても良い。なお、カムが、必要に応じて、回転されることにより、回転テーブル３０が連続してまたは断続的に加振されることは言うまでもない。
【０１２９】
さらに、前記実施形態では、処理液供給領域６０ｂや処理液排出領域６０ｃが、それぞれ、一つずつ設けられていたが、回転テーブル３０の回転軸３２回りに設けられた処理領域６０において複数設けられることも可能である。
【０１３０】
更にまた、前記実施形態では、処理容器２６がハウジング２８の開口窓６２を通じて手作業でハウジング２８内に出入されるようになっていたが、例えば、マニピュレータやその他産業用ロボット、人工知能ロボット等を用いて、自動的に出入されるようにしても良い。
【０１３１】
また、複数の処理領域６０の少なくとも一つにおいて、細胞を培養するインキュベータを設置して、処理容器２６が該インキュベータに対して自動的に収容されたり、取り出されたりすることも可能である。
【０１３２】
加えて、前記実施形態では、生体組織片としてヒトの皮膚片を採用して、該皮膚片から表皮を採取して単一の細胞に分離されるものに適用されるものの具体例が示されていたが、本発明はこれに限定されるものでなく、角膜や網膜、心臓、肝臓、筋肉等のヒトを含むあらゆる動物の組織片を生体組織片として採用し、細胞の単離処理を行う技術分野において有利に適用可能であることは勿論である。
【図面の簡単な説明】
【０１３３】
【図１】本発明の一実施形態としての細胞単離装置をモデル的に示す説明図である。
【図２】図１における細胞単離装置の一部を構成する処理装置を拡大して示す説明図であって、図３のII−II断面に相当する図である。
【図３】図２に示された処理装置を示す斜視図である。
【図４】図２に示された処理装置の一部をモデル的に示す斜視説明図である。
【図５】図１に示された細胞単離装置の一部を構成する処理容器を拡大して示す斜視説明図である。
【図６】図１における細胞単離装置に採用される別の一具体例としての処理容器を示す斜視説明図である。
【図７】図６における処理容器の一形態をモデル的に示す斜視説明図である。
【図８】図１における細胞単離装置に採用されるまた別の一具体例としての処理容器を示す斜視説明図である。
【図９】図８における処理容器を示す縦断面説明図である。
【図１０】図１における細胞単離装置に採用される更に別の一具体例としての処理容器を示す斜視説明図である。
【図１１】図１０における処理容器を示す縦断面説明図である。
【図１２】図１における細胞単離装置に採用される更にまた別の一具体例としての処理容器を示す斜視説明図である。
【図１３】図６における処理容器の一部を構成する別の一具体例としての収容容器を示す斜視説明図である。
【図１４】図６における処理容器の一部を構成するまた別の一具体例としての収容容器を示す斜視説明図である。
【図１５】本発明の１実施形態における懸濁液回収方法を説明する説明図である。
【符号の説明】
【０１３４】
１０  細胞単離装置
１４  供給装置
１６  排出装置
２４  組織片
２６  処理容器
３０  回転テーブル
６０  処理領域
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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