(57)【要約】【課題】癌の骨髄転移抑制剤の開発に用いるためのスクリーニング材料、及びこれを用いたスクリーニング法を新たに提供する。【課題解決手段】   骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞を生体外で共培養した破骨細胞誘導系をスクリーニング材料とし、癌の骨髄転移抑制剤の候補物質を該スクリーニング材料を構成する該破骨細胞誘導系に含有させて培養し、破骨細胞への分化誘導を抑制する程度を指標にして該候補物質を選別し、癌の骨髄転移抑制薬剤をスクリーニングする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性型ビタミンＤ３を培地に含有せしめて構築した破骨細胞誘導系に、癌転移抑制剤の候補物質を加えて培養し、破骨前駆細胞から破骨細胞への分化誘導を抑制する程度を指標にして、該候補物質の選別を行うことを特徴とする、癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング方法。
【請求項２】
前記指標が計測された破骨細胞の数である請求項１に記載のスクリーニング方法。
【請求項３】
破骨細胞誘導系に、さらにＭ−ＣＳＦが含有されていることを特徴とする請求項１又は２に記載のスクリーニング方法。
【請求項４】
骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性型ビタミンＤ３を含有せしめて構築した破骨細胞誘導系を有することを特徴とする、癌の骨髄転移モデル。
【請求項５】
破骨細胞誘導系に、さらにＭ−ＣＳＦが含有されていることを特徴とする、請求項４に記載の癌の骨髄転移モデル。
【請求項６】
骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性型ビタミンＤ３を培地含有せしめて構築した破骨細胞誘導系を有することをを特徴とする、癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング材料。
【請求項７】
破骨細胞誘導系に、さらにＭ−ＣＳＦが含有されていることを特徴とする、請求項６に記載の癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング方法、該スクリーニングに使用する癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング材料、及び癌の骨髄転移に関する研究あるいは薬剤開発を行うための癌の骨髄転移モデルに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌の診断、治療技術が著しく進歩したにも関わらず、癌で死亡する人が後を絶たないのは、癌の転移が抑制できないからといっても過言ではない。癌の転移の中でも、骨（骨髄）に対する転移は、血液癌、乳癌、前立腺癌等で増えており、激しい痛みを伴って患者のQOL（Quality of Life:生活の質）を低下させるにも関わらず、その機構は解明されていないため、転移機構の解明及び骨髄転移抑制薬の開発が急務となっている。
癌細胞が骨に転移を起こす際には、生理的条件下で骨を破壊する細胞である破骨細胞をうまく利用している可能性が高い。骨にはインシュリン様増殖因子を初め、様々な種類の増殖因子が含まれており、破骨細胞が骨を破壊すると、それが骨髄内に滲み出し、癌細胞に有利に作用する上に、破骨細胞が破壊してできた空間は、癌細胞にとっての増殖の場となる。
【０００３】
これまでに、骨髄に対する癌の転移モデルは極めて少なく、破骨細胞を視野に入れた癌の骨髄転移モデルはほとんど存在しない。例えば、癌転移抑制薬のスクリーニング方法として、コネキシン２６遺伝子の発現レベルが癌の転移能と相関があることから、コネキシン２６を指標とする方法が知られているが（特許文献１参照）、骨髄転移モデルを用いての試験は行われておらず、骨髄転移癌に対する抑制薬のスクリーニング法として有効とはいえない。
【０００４】
【特許文献１】特開2001-017184号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、緊急に問題解決が迫られている、癌の骨髄転移抑制剤の開発に用いるためのスクリーニング材料、及びこれを用いたスクリーニング法を新たに提供するとともに、癌の骨髄転移機構の解明等に有用な癌の骨髄転移モデルを提供しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究の結果、骨髄に転移を起こす癌細胞と、骨髄から採った内皮細胞、及び破骨細胞との3者の関わりを解析した結果、この癌細胞が内皮細胞を刺激して、内皮細胞表面にある破骨細胞分化誘導因子（ODF；Osteoclast  Differentiation FactorまたはRANKL； receptor  activator of NFkB）の数を増加させ、破骨前駆細胞から破骨細胞への分化誘導を促進させ、この破骨細胞が癌の骨髄転移に関与することを見出すとともに、上記骨髄転移性癌細胞、内皮細胞及び破骨前駆細胞を生体外で共培養した破骨細胞誘導系は、癌の骨髄転移モデルとなりうるものであって、この骨髄転移モデルを用いることにより、極めて簡便、かつ効率的に骨髄転移抑制薬剤をスクリ−ニングできることを確かめ、本発明を完成するに至ったものである。
【０００７】
すなわち本発明は、以下の（１）〜（７）に記載されるとおりである。
（１）骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性型ビタミンＤ３を培地に含有せしめて構築した破骨細胞誘導系に、癌転移抑制剤の候補物質を加えて培養し、破骨前駆細胞から破骨細胞への分化誘導を抑制する程度を指標にして、該候補物質の選別を行うことを特徴とする、癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング方法。
（２）前記指標が計測された破骨細胞の数である上記（１）に記載のスクリーニング方法。
（３）  破骨細胞誘導系に、さらにＭ−ＣＳＦが含有されていることを特徴とする上記（１）又は（２）に記載のスクリーニング方法。
（４）骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性型ビタミンＤ３を含有せしめて構築した破骨細胞誘導系を有することを特徴とする、癌の骨髄転移モデル。
（５）  破骨細胞誘導系に、さらにＭ−ＣＳＦが含有されていることを特徴とする、上記（４）に記載の癌の骨髄転移モデル。
（６）  骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性型ビタミンＤ３を培地含有せしめて構築した破骨細胞誘導系を有することをを特徴とする、癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング材料。
（７）破骨細胞誘導系に、さらにＭ−ＣＳＦが含有されていることを特徴とする、上記（６）に記載の癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング材料。
【発明の効果】
【０００８】
骨髄転移性癌細胞は、骨髄由来の内皮細胞と接触することにより該内皮細胞を刺激し、癌細胞により刺激された内皮細胞は、破骨前駆細胞を刺激して破骨細胞への分化誘導を促進する。この破骨細胞は骨を破壊し、癌細胞の骨髄転移に関与する。本発明によれば、骨髄転移癌細胞、骨髄由来内皮細胞、破骨前駆細胞からなる破骨細胞誘導系を構築し、この系に癌の骨髄転移抑制薬剤の候補物質を加えて、破骨細胞への誘導抑制の程度を測定するという極めて簡便で、効率的な手法により、上記候補物質の選別を行い、癌の骨髄転移抑制薬剤のスクリーニングを行うことができる。また、本発明は、上記細胞の共存下、破骨細胞の分化誘導を指標としてスクリーニングを行うもので、このような生体内に近い状態で癌の骨髄転移抑制薬の活性を調べる上で非常に重要であり、抑制薬のスクリーニング法として非常に優れている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明においては、骨髄転移抑制薬の候補物質を、骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞および破骨前駆細胞の共培養系に活性型ビタミンＤ３を加えて、破骨細胞誘導系を構築する。この細胞系は癌の骨髄転移モデルとして有用であり、これをスクリーニング材料とし、癌転移抑制薬剤の候補物質とともに培養して、破骨前駆細胞から破骨細胞への分化誘導を抑制する程度を指標にして、該候補物質の選別を行って、上記候補物質の中から癌転移抑制薬剤をスクリーニングするものである。
このようなスクリーニング手法は、本発明者等が解明した癌の骨随転移のメカニズムに基づき、種々の検討を加え見いだされたものであり、まず、本発明の理解のため癌の骨髄転移メカニズムについて、図１１に基づき説明する。
【００１０】
癌細胞は、内皮細胞と接触することにより内皮細胞を刺激して、内皮細胞表面の破骨細胞分化誘導因子（ＯＤＦ（Osteoclast  Differentiation Factor））の量を増大させる。なお、この破骨細胞分化誘導因子（ＯＤＦ）は、ＲＡＮＫＬ（Receptor Activater of NFkB）とも称される。このＯＤＦ量が増大した内皮細胞は、表面にＯＤＦレセプターを有する破骨前駆細胞を刺激して分化誘導し、破骨細胞の生成を促進させる。次いで、この破骨細胞は骨を破壊するが、この破壊により骨に元々含まれる増殖因子が骨髄内に滲み出し、癌細胞の増殖を助ける事により、癌細胞に有利に作用するとともに、破骨細胞が破壊して生じた空間は、癌細胞にとって増殖の場となる。癌細胞は増殖因子の豊富な骨髄内で定着し、増殖を起こす事により転移が成立する。
【００１１】
本発明の癌の骨髄転移モデルは、このような癌の骨髄転移メカニズムを生体外で発現するものであり、該モデルは癌の骨髄抑制剤のスクリーニング材料としても極めて有用であることが分かった。
すなわち、本発明の癌の骨髄転移モデルあるいは癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニング材料は、骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性型ビタミンＤ３を加えて、破骨細胞誘導系を構築することからなるものであり、このスクリーニング材料及び該スクリーニング材料を用いたスクリーニング方法について、図１に基づき以下具体的に説明する。
【００１２】
本発明においては、破骨前駆細胞として例えば骨髄から採取した新鮮な骨髄細胞（図中、BM cellsは、BALB/cマウスの骨髄から採取した骨髄細胞である。）、骨髄から採取して株化細胞として樹立した内皮細胞（図中、ＢＭＣに相当、参考文献：Okada T et al. Int J Cancer,1995,63,823-830）、及び骨髄に転移を起こす癌細胞（図中、B9/BM1は元々ミエローマ細胞にネオマイシン(抗生物質)抵抗性遺伝子を移入してからマウスに静脈内投与し、骨髄から取り出した細胞をネオマイシン添加培地で培養して生き残ってきた細胞を増殖させ、再びマウスに静脈内投与してまた骨髄から取り出してネオマイシン添加培地で培養し、さらにクローニングすることにより、100％の効率で骨髄に転移を起こす細胞として樹立されたものである。参考文献：Hawley TS et al. Growth Factors,1991,5,327-338）を、活性型ビタミンＤ３、Ｍ−ＣＳＦ（Macrophage colony stimulating factor）、IL-6とともに、F12:DMEM(1:1)培地に10%のFCS(牛胎児血清)を加えた培地に投入し破骨細胞誘導系を構築する。この破骨細胞誘導系においては、Ｍ−ＣＳＦ（Macrophage colony stimulating factor）、及びIL-6は必ずしも必要ではないが、Ｍ−ＣＳＦは加えた方が望ましい。
【００１３】
癌の骨髄転移抑制剤の候補物質は、この破骨細胞誘導系に添加して所定期間（例えば、６日間、ただし3日後に培地を交換する）培養する。所定期間経過後、ＴＲＡＰ（tartrate resisitant acid phosphatase）染色を行なう。多核かつ赤く染色された破骨細胞を顕微鏡下で同定してその数を計測する。この数が上記候補物質を添加しない場合と比較して低い場合には、該候補物質が癌の骨髄転移抑制剤である可能性がある。
【００１４】
この候補物質による破骨細胞の生成抑制は、骨髄転移性癌細胞の内皮細胞刺激による内皮細胞表面の破骨細胞分化誘導因子（ＯＤＦ）の増大を抑制する場合、ＯＤＦと破骨細胞上のレセプターとの相互作用を抑制する場合、破骨前駆細胞から破骨細胞への分化誘導を抑制する場合等によるが、候補物質のスクリーニングにおいては、これらの各プロセスの抑制を検出する方法によっても良く、例えば、内皮細胞表面の分化誘導因子の量を測定する方法も考えられるが、これよりも破骨細胞の数を測定する方が、遙かに簡単で、効率が良く、数多くの物質から癌の骨髄転移抑制をスクリーニングする手段として包括的かつ実用的である。
【００１５】
また、本発明においては、骨髄転移性癌細胞の内皮細胞刺激を抑制する物質であるＣＤ４４（ヒアルロン酸レセプター）に対する抗体及びＯＤＦとそのレセプターとの結合を抑制する物質であるＯＰＧ（osteoprotegerin；ＯＤＦのデコイレセプター）を、前記破骨細胞誘導系に添加して、これら物質が破骨細胞の生成を抑制することを実際に確認している。
したがって、上記癌の骨髄転移抑制物質の候補物質の選別において、これら破骨細胞の生成抑制が確認された物質を標準物質として用い、その生成抑制の程度を比較してもよい。標準物質よりもさらに高い生成抑制を示した候補物質については、骨髄転移抑制剤である確度はさらに高くなる。
以下に、本発明の実施例を示すが、本発明はこれらに限定されない。
【実施例１】
【００１６】
〔破骨細胞誘導系〕  
（１）２４ウェル培養プレート（２４個の穴のある培養プレート）の各ウエルに、F12/DMEM培地を収容し、10%のFCSを加えた溶液に入れた2X105個/wellの骨髄細胞（BM cell;BALB/ｃマウスから骨髄を採取した新鮮な細胞）と、1X104個/wellの骨髄から採取して株化細胞として樹立した内皮細胞（BMC；参考文献：Okada T et al. Int J Cancer,1995,63,823-830）及び1X104個/wellの骨髄に転移を起こす癌細胞(B9/BM; 参考文献：Hawley TS et al. Growth Factors,1991,5,327-338)と、3 ng/mlのM-CSF（Macrophage colony stimulating factor）とを、図３に示す組み合わせで投入し、３７℃、５％２酸化炭素の存在下６日間培養した。途中3日後に培地交換を行なった。活性型ビタミンＤ３はこれらの組み合わせのいずれにも加えた。培養後TRAP(tartrate resistant acid phosphatase) 染色し、染色により多核かつ赤く染色された破骨細胞（図２）の数を顕微鏡下で計測した。TRAP染色は、24ウェルプレートにまいた細胞の培養液を除去し、PBS(リン酸緩衝生理食塩水)で1回洗浄後、10％ホルマリン添加PBSを加えて10分間固定後、エタノール：アセトン（1：1）溶液で1分間再固定し、風乾後TRAP染色液を加えて20分室温放置後、水洗して顕微鏡で観察した。
【００１７】
結果を図３に示す。図３によれば、癌細胞と内皮細胞及びＭ−ＣＳＦが存在する場合、最も多くの破骨細胞が観察されたが、Ｍ−ＣＳＦを添加しなかった培地でもかなりの数の破骨細胞が観察され、少なくとも癌細胞と内皮細胞が存在すれば、破骨細胞の誘導が増強されることが判明した。
【００１８】
（２）  内皮細胞と破骨前駆細胞との相互作用による破骨細胞の誘導には、直接接触が必要か否かを調べるため、上記共培養において内皮細胞（ＢＭＣ）と破骨前駆細胞（BM cell）とを8umの穴のあるポリカーボネートフィルターで隔離する場合としない場合とに分け、併せて癌細胞（B9/BM）、Ｍ−ＣＳＦおよび活性型ビタミンＤ３を図４に示す組み合わせで用いて、細胞数、添加物共に上記（１）と同様に培養を行ない、上記と同様に破骨細胞の数を計測した。結果を図４に示す。これによれば、癌細胞、Ｍ−ＣＳＦ及び活性型ビタミンＤ３の全てを含む培地においても、内皮細胞（ＢＭＣ）が隔離されていれば破骨細胞への誘導が促進されず、破骨細胞の誘導には内皮細胞と破骨前駆細胞との直接接触が必要であることが分かる。
【００１９】
（３）上記内皮細胞（BMC）と骨髄転移性癌細胞(B9/BM)とを、培養期間を４日間とした以外は、上記（１）と同様に培養し、培養後内皮細胞をODFに対する抗体及びFITC標識した2次抗体で染色してセルソーターで解析することにより、内皮細胞（BMC）上に発現した破骨細胞分化誘導因子（ＯＤＦ）の量を測定した。また比較のため、癌細胞を使用しない内皮細胞単独培養の場合、及び癌細胞と内皮細胞の共培養系にIL-６を含有させた場合の破骨細胞分化誘導因子（ＯＤＦ）の発現量を測定した。結果を図５に示す。これによれば、内皮細胞（BMC）単独の場合は、破骨細胞分化誘導因子の発現量はわずかであるが、癌細胞(B9/BM)と共培養することにより、その発現量は有意に増加していることが明らかである。またIL−６の添加の影響はほとんどない。
さらに、このODFの発現が遺伝子レベルでも増加するかどうかを、癌細胞と共培養した内皮細胞から全RNAを採取してRT-PCR(Reverse Transcriptase Polymerase
Chain Reaction)法（採取したRNAから逆転写酵素によってDNAを合成し、それをポリメラーゼチェインリアクション法により増幅して、アガロース電気泳動しODFに相当するバンドの量を測定する事）によって解析した。結果を図６に示す。図６（上図）によれば、内皮細胞及び癌細胞がない場合（Co-cultureマイナス）に比べて、内皮細胞及び癌細胞がある場合（Co-cultureプラス）の場合の方が、バンドが濃い事が分かる。また、このバンドの濃さを定量化してグラフにしたのが下図であり、OPGの場合はどれも変わらないのに対して、RANKL(OPGと同じ)の場合はCo-cultureプラスにおいて発現量が増加しているのが分かる。
したがって、癌細胞と内皮細胞との共培養により、ODFの発現量が遺伝子レベルでも増加する事が判明した。
【００２０】
また、この骨髄転移性癌細胞は元来IL-6（interleukin-6: B-リンパ球の増殖因子）がなくては増殖できない細胞であるが、内皮細胞と共培養すると、IL-6を添加しなくてもよく増殖することが認められた。そこで内皮細胞培養上清中のIL-6をELISA（enzyme-linked immumo-sorbent assay）法によって測定した結果、癌細胞の刺激により、内皮細胞からのIL-6産生量が有意に増加していることが判明した（図８）。
【００２１】
（４）上記癌細胞（B9/BM）を5X106個/マウスの用量でマウスに静脈内投与して、58日後、大腿骨及び頚骨のレントゲン写真を撮影した。この結果明らかな転移が確認された（図９、右が癌細胞投与群、左が非投与群）。また、この大腿骨及び頚骨をTRAP染色して破骨細胞を検出した結果、癌細胞投与群で明らかに破骨細胞が増加していることが判明した(図１０、右が癌細胞投与群、左が非投与群)。
【００２２】
以上をまとめると、骨髄転移性癌細胞は内皮細胞を刺激してその表面の破骨細胞分化誘導因子（ODF）の量を増やす事によって破骨前駆細胞から破骨細胞への分化誘導を増強させる。また、破骨細胞の分化誘導は実際に癌の骨髄転移に密接に関連する。したがって、本発明における、骨髄転移性癌細胞、骨髄由来の内皮細胞及び破骨前駆細胞、並びに活性ビタミンＤ３を含有する破骨細胞誘導系は、生体内の癌転移のメカニズムを再現できる、癌の骨髄転移モデルとなりうる。
【実施例２】
【００２３】
〔破骨細胞誘導系を用いたスクリーニングの検証〕
２４ウエル培養プレートの各ウエルに、F12/DMEM培地を収容し、10%のFCSを加えた溶液に入れた2X105個/wellの骨髄細胞（BM cell）と、1X104個/wellの骨髄から採取して株化細胞として樹立した内皮細胞（BMC）及び1X104個/wellの骨髄に転移を起こす癌細胞(B9/BM)と、3 ng/mlのM-CSF（Macrophage colony stimulating factor）及び10nM（添加量お願いします）の活性型ビタミンＤ３を加え、破骨細胞誘導系を構築し、癌の骨髄転移抑制剤のスクーリニング材料とした。また、これとは別に同上の数の骨髄細胞のみを単独培養した。
【００２４】
一方、スクリーニング検証物質として、破骨細胞分化誘導因子（ODF）のデコイレセプターであるOPG（osteoprotegerin）3ug/ml、及びヒアルロン酸のレセプターであるCD44 に対する抗体(抗CD44抗体、15ug/ml)をそれぞれ１００ul/well、上記破骨細胞誘導系を構成する培養系（cocultureに対応）に加えた。この際、比較のためＯＰＧ及び抗ＣＤ４４抗体の両方を加えない培養系も作製した。次いで、これら培養系を３７℃、５％二酸化炭素の存在下６日間培養した。(途中3日後に培地交換を行ない、この時OPG及び抗CD44抗体も添加した。)次いで、上記と実施例１（１）と同様にTRAP(tartrate resistant acid phosphatase) 染色し、染色により多核かつ赤く染色された破骨細胞（図２）の数を顕微鏡下で計測した。
【００２５】
結果を図７に示す。図７によれば、ＯＰＧ及び抗ＣＤ４４抗体の両方を加えない場合、誘導される破骨細胞数が顕著に増大するのに対して、ＯＰＧあるいは抗ＣＤ４４抗体を加えた場合は、破骨細胞数は有意に減少した。ＯＰＧは内皮細胞上のＯＤＦによる破骨前駆細胞刺激を抑制し、また、抗ＣＤ４４抗体は癌細胞による内皮細胞刺激を抑制するものであり、これらはともに癌の骨髄転移に重要な働きをする破骨細胞の分化誘導を抑制した。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】癌の骨髄転移抑制剤のスクリーニングに用いる破骨細胞誘導系の構築するための工程概略図である。
【図２】破骨細胞誘導系において分化誘導された破骨細胞をTRAP染色して撮影した顕微鏡写真である。
【図３】骨髄転移性癌細胞（B9/BM）、内皮細胞（BMC)、破骨前駆細胞（BM cell）及びＭ−ＣＳＦを各種組みあわせで培養した場合において、それぞれ分化誘導された破骨細胞の数を計測したグラフである。
【図４】破骨細胞誘導系において、内皮細胞（BMC）を隔離した場合と、隔離しない場合とにおいて、それぞれ分化誘導された破骨細胞の数を計測したグラフである。
【図５】内皮細胞（BMC）単独の場合、内皮細胞（BMC）と骨髄転移性癌細胞（B9/BM）を共培養した場合、及び該共培養系においてさらにＩＬ−６を添加した場合とにおける、内皮細胞（BMC）上の各ＯＤＦ発現量を蛍光強度により測定した結果を示すグラフである。
【図６】骨髄転移性癌細胞（B9/BM）と共培養した内皮細胞（B9/BM）から全ＲＮＡを採取してＲＴ−ＰＣＲ法により増幅し、ＯＤＦに相当するバンドを測定した電気泳動図（上図）、及び該バンドの濃さを定量化したグラフである。
【図７】破骨細胞誘導系において、ＣＤ４４に対する抗体およびＯＰＧを添加した場合において、分化誘導される破骨細胞数の数を計測したグラフである。
【図８】骨髄転移性癌細胞（B9/BM）と内皮細胞（BMC）とを共培養した場合において、内皮細胞から産生されるＩＬ−６の量をELISA法により測定した結果を示すグラフである。
【図９】骨髄転移性癌細胞（B9/BM）をマウスに静脈注射し、５８日後に撮影した大腿骨のレントゲン写真である（右が骨髄転移性癌細胞投与群（矢印は癌転移部位）、左が非投与群）。 コメント；上記レントゲン写真は１枚ですので、大腿骨か頚骨かどちらかであるはずです。
【図１０】上記図９の大腿骨を、ＴＲＡＰ染色して破骨細胞を検出した結果を示す顕微鏡写真である（右が骨髄転移性癌細胞投与群（矢印は癌転移部位）、左が非投与群）。
【図１１】癌細胞の骨髄転移メカニズムを示す模式図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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