(57)【要約】【課題】本発明は、新規脂肪族化合物、これを含有する医薬、並びにＰＰＡＲγ及びα（ＰＰＡＲ：Peroxisome proliferator-activated receptor、ペルオキシソーム増殖因子応答性受容体）の作動または循環器系疾患（動脈硬化症など）、脂質代謝病（高コレステロール症（高脂血症等）など）、糖尿病（特に、２型糖尿病（NIDDM））の予防若しくは治療におけるこれらの使用に関する。【解決手段】式Ｉ【化１】2005232005.tif 000015(式中、Ｒは、置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎは １６から２２の間のいずれかの整数であり、 ｍは不飽和数を表し、２から７の間のいずれかの整数である）を表し、ｌは０から１０の間のいずれかの整数であり、ＲAは水素若しくは炭素数１〜１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基である）で表される脂肪族化合物若しくはその立体異性体、またはそれらの製薬学的に許容される塩。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005232005.tif 000011
(式中、
Ｒは、置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎは １６から２２の間のいずれかの整数であり、 ｍは不飽和数を表し、２から７の間のいずれかの整数である）を表し、ｌは０から１０の間のいずれかの整数であり、ＲAは水素若しくは炭素数１〜１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基である）で表される脂肪族化合物若しくはその立体異性体、またはそれらの製薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒが、ＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎは １６から２０の間のいずれかの整数であり、 ｍは不飽和数を表し、３から６の整数である）であり、ｌが１から３の間のいずれかの整数である、請求項１に記載の脂肪族化合物若しくはその立体異性体、またはそれらの製薬学的に許容される塩。
【請求項３】
式
【化２】
2005232005.tif 000012
（式中、ｌは１から３の間のいずれかの整数であり、ＲAは水素若しくは炭素数１〜１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基である）
で表される、請求項１に記載の脂肪族化合物若しくはその立体異性体、またはそれらの製薬学的に許容される塩。
【請求項４】
式
【化３】
2005232005.tif 000013
で表される、請求項１に記載の脂肪族化合物若しくはその立体異性体、またはそれらの製薬学的に許容される塩。
【請求項５】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、ＰＰＡＲγ受容体に作動する医薬。
【請求項６】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、ＰＰＡＲα受容体に作動する医薬。
【請求項７】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、循環器系疾患を治療する為の医薬。
【請求項８】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、動脈硬化症を治療する為の医薬。
【請求項９】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、高脂血症を治療する為の医薬。
【請求項１０】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、降コレステロール効果を有する医薬。
【請求項１１】
請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有する、2型糖尿病を治療する為の医薬。
【請求項１２】
Ｒ−ＣＯ−ＯＨ[Ｒは、置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎ及びｍは請求項１で定義した通りである）を表す]で示される化合物と、
（ＣＯＣｌ）2との反応生成物に、
式ＩＩ
【化４】
2005232005.tif 000014
（ｌ及びＲAは請求項１で定義した通りである）の化合物
を反応させることを含む請求項 1の化合物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規脂肪族化合物、これを含有する医薬、並びにＰＰＡＲγ及びα（ＰＰＡＲ：Peroxisome proliferator-activated receptor、ペルオキシソーム増殖因子応答性受容体）の作動または循環器系疾患（動脈硬化症など）、脂質代謝病（高脂血症（高コレステロール症等）など）、糖尿病（特に、２型糖尿病（NIDDM））の予防若しくは治療におけるこれらの使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病、特に２型糖尿病(NIDDM)の成因は、遺伝的要因の他に、脂肪や砂糖の採りすぎ、運動不足などの環境的要因により、肥満がおこり、それがインスリンの働きを悪くして糖代謝が悪化する機構にあることが明らかにされつつある。
【０００３】
すなわち、過食などにより内臓に余分な脂肪が蓄積し、その結果内臓脂肪の合成、分解が活発化して、門脈血中の遊離脂肪酸が高くなる。この遊離脂肪酸の亢進は、高脂血症を発症させ、一方、脂肪組織の遊離脂肪酸や脂肪組織から分泌されるＴＮＦαなどによって、末梢組織のインスリン感受性を低下させることにより、インスリンシグナル伝達であるインスリンがインスリン受容体(IR)と結合し、インスリン受容体基質(IRS)経由で、糖取り込み、糖利用する作用を弱め、高血糖を生じることが考えられている。
【０００４】
従って、２型糖尿病治療の場合には、血糖を低下させるだけでなく、脂質レベルを低下させることが重要である。
一方、コレステロールなどの脂質代謝や吸収に関与する酵素群を含む細胞内小器官のぺルオキシソームの研究において、ペルオキシソーム増殖因子によって活性化される受容体ＰＰＡＲα、σ（あるいはβ）、γが、核内受容体として発見された。ＰＰＡＲα、σ、γは、特異的な組織分布をしており、その機能についても解明されてきている。
【０００５】
ＰＰＡＲγは脂肪組織において高度に発現し、脂肪細胞分化及び脂肪産生を促すことにより、糖質や脂質の恒常性に関与していると考えられている。ＰＰＡＲγ作動薬は、血糖降下、高 TG（トリアシルグリセロール）血症改善、降コレステロールなどの作用を示すことから、糖尿病薬、抗動脈硬化薬、脂質代謝改善薬としての可能性が指摘されている（'98 Diabetologia 41, p.257）。
【０００６】
インスリン抵抗性糖尿病薬として開発されたチアゾリジンジオン(TZD)誘導体は、血糖低下作用の機構についてまだ不明な点もあるが、ＰＰＡＲγを活性化することによって、インスリンシグナル破錠によって引き起こされるインスリン抵抗性を改善し、血糖を低下させるという考え方が提案されている ('99 Cell. 100 p. 1863)。
【０００７】
しかし、TZDは、強い副作用を引き起こす問題点がある。即ち、トログリタゾン（ノスカール）については、肝障害が報告され、発売が中止になり、また、ピオグリタゾン（アクトス）については、心不全の死亡例が報告されている。
【０００８】
ＰＰＡＲαは、肝臓に主に分布し、脂質レベルの調節に関与しているといわれている。ＰＰＡＲαを介して、肝では血清トリグリセリドを分解するリポタンパクリパーゼの誘導とリパーゼ抑制因子アポCIIIの抑制と、おもに小腸ではリパーゼ活性化因子アポCIIの誘導がおこり、また血中では遊離脂肪酸の細胞内への取込みのために肝臓、筋肉、脂肪、小腸などの各組織に特異的な脂肪酸輸送タンパクと結合タンパクが誘導されると考えられている( '98 J. B. C.)。さらに、いずれの組織内でもミトコンドリアのβ酸化系が亢進し、とくに肝臓ではペルオキシソームでの酸化系が著しく亢進する。これらの協同的な作用により全身で脂肪の利用系が活性化し、エネルギー消費が盛んになることで、血中のトリグリセリドを低下させると予想されている。抗高脂血症薬のフィブレート系薬物はＰＰＡＲαを介して作用するといわれている。しかし、フィブレート系薬物も副作用の問題があり、脂肪肝をきたした肝障害を引き起こすことが知られている。
【０００９】
このようにＰＰＡＲγ及びαに作動するものは、糖尿病薬、抗動脈硬化薬、脂質代謝改善薬、抗高脂血症薬として期待されるが、一方、ＴＺＤやフィブレート系薬剤に見られるように、ＰＰＡＲγ、α活性が強いものであっても副作用が強くでる場合がある。
【００１０】
従って、ＰＰＡＲγ及びαの作動性を指標にし、かつ上記病気の治療薬として適切であるものを探索する必要がある。
【００１１】
【発明の解決しようとする課題】
本発明者らは、上記の点に鑑み、鋭意研究を行った結果、下記一般式Ｉで示される化合物若しくはその立体異性体を新たに発見し、この化合物（以下、その立体異性体を含めて「本発明化合物」という）が、in  vitroでＰＰＡＲγ受容体及びＰＰＡＲα受容体作動性を有し、さらに、in vivoで、血糖値を降下させるだけでなく、トリグリセリドレベルなどの脂質レベルも降下させることを見出した。本発明はこの知見に基づくものであり、その目的は新規な脂肪族化合物、その製造方法及び医薬を提供する事にある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明は、式Ｉ
【００１３】
【化５】
2005232005.tif 000002
(式中、
Ｒは、置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎは １６から２２の間のいずれかの整数であり、 ｍは不飽和数を表し、２から７の間のいずれかの整数である）を表し、ｌは０から１０の間のいずれかの整数であり、ＲAは水素若しくは炭素数１〜１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基である）で表される脂肪族化合物若しくはその立体異性体、またはそれらの製薬学的に許容される塩に関する。
（上記式（Ｉ）におけるＲの定義のＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−の不飽和結合の位置に関しては、アミド結合ＮＨＣＯの"Ｃ"の位置を１とし、隣の炭素に順番に２，３，４…と番号をつけて位置を示し、以下の説明に用いる。）
【００１４】
【発明の実施の形態】
前記式Ｉにおける置換基について説明する。
「炭素数１から１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基」の具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−アミル基、３−メチルブチル基、ネオペンチル基、、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基などのアルキル基があげられる。
【００１５】
「置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−」とは、任意の置換基を有するＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−を意味する。
任意の置換基の例としては、水酸基、ハロゲン原子、炭素数１から１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基、炭素数３から７のシクロアルキル基、アリール基があげられる。
【００１６】
Rの置換基について以下に説明する。
「炭素数３から７のシクロアルキル基」の具体例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基およびシクロヘプチル基などがあげられる。
【００１７】
「アリール基」の具体例としては、フェニル基などがあげられる。
「炭素数１から１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基」の具体例は、上記の通りである。
【００１８】
本発明の一般式Ｉの化合物に関して、好ましい態様としては、以下のものがあげられる。
ｌは、好ましくは、１から３の間のいずれかの整数であり、さらに好ましくは、１である。
【００１９】
ｎは、好ましくは、１６から２０の間のいずれかの整数である。
ｍは、好ましくは、３から６の整数であり、さらに好ましくは、５または６である。
【００２０】
本発明は、前記一般式Ｉにおいて、Ｒが、ＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎは １６から２０の間のいずれかの整数であり、 ｍは不飽和数を表し、３から６の整数である）であり、ｌが１から３の間のいずれかの整数であり、ＲAは式Ｉの記号の字義と同一である、脂肪族化合物若しくはその立体異性体、またはそれらの製薬学的に許容される塩を提供する。
【００２１】
Ｒの好ましい例は、ドコサヘキサエン酸（ｎ＝２０、ｍ＝６）やエイコサペンタエン酸（ｎ＝１８、ｍ＝５）、リノレン酸（ｎ＝１６、ｍ＝３）に由来するものであるが、これに限定されない。
【００２２】
Ｒの任意の置換基は、式Ｉ化合物の溶解度に影響を与えないものが好ましい。置換基がアルキルの場合は、分子量が小さいもの、例えば、炭素数１〜４のアルキル基が好ましく、さらに好ましくは、メチル基である。
【００２３】
また、好ましい置換位置は、アミド結合に近接しない位置であり、例えば、位置３〜２３、さらに好ましくは位置３〜２０である。
置換基を有するＲの好ましい例は、置換基OHを有する誘導体の場合、ドコサヘキサエン酸（DHA）の水酸化誘導体又はエイコサペンタエン酸（EPA）の水酸化誘導体由来があげられるが、ドコサヘキサエン酸（DHA）の水酸化誘導体由来がより好ましい。水酸化誘導体の立体配置は（Ｒ）配置でも（Ｓ）配置でも構わないが、（Ｓ）配置であることが好ましい。ドコサヘキサエン酸（DHA）の水酸化誘導体として最も好ましいのは4 (S) - OH - DHA、 10 (S) - OH - DHA、11 (S) - OH - DHA、 14 (S) - OH - DHA、8 (S) - OH - DHA、および 17 (S) - OH - DHAであるが、これに限定されない。
【００２４】
本発明は、前記一般式Ｉの化合物が下記の式である化合物を提供する。
【００２５】
【化６】
2005232005.tif 000003
（式中ＲAは式Ｉの記号の字義と同一であり、ｌは１〜３のいずれかの整数である。）
本発明の一般式Ｉ及びＩＡの化合物において、好ましい態様は以下のものがあげられる。
【００２６】
ＲAは、水素が好ましいが、ＲAがアルキル基の場合は、好ましくは炭素数１〜６であり、さらに好ましくは炭素数１〜４である。
本発明化合物の好ましい化合物には以下の化合物、その光学異性体またはそれらの製薬学的に許容される塩があげられる。
【００２７】
【化７】
2005232005.tif 000004
本発明における立体異性体とは、（Ｒ）、（Ｓ）及びラセミ体のいずれの光学異性、並びにシス、トランス及びその混合物のいずれの幾何異性を含むことを意味する。幾何異性では、シスが好ましい。
【００２８】
また、本発明におけるその製薬学的に許容される塩とは、例えば硫酸、塩酸、リン酸などの鉱酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸などの有機酸との塩などがあげられる。この中で塩酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩などの塩が好ましい。
【００２９】
本発明化合物は、以下の実施例に示すように、ＰＰＡＲγ及びα作動性を有し、特に、ＰＰＡＲγ活性はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の２倍の活性を有する。
【００３０】
従って、本発明は、ＰＰＡＲγに作動する医薬及びＰＰＡＲαに作動する医薬を提供する。
ここで、ＰＰＡＲγに作動する医薬とは、脂肪細胞などの細胞の核内受容体であるＰＰＡＲγが関与する種々の疾患を予防、治療する医薬をいう。例えば、糖尿病薬、抗動脈硬化薬、脂質代謝改善薬があげられる。ＰＰＡＲαに作動する医薬とは、細胞の核内受容体であるＰＰＡＲαが関与する種々の疾患を予防、治療する医薬をいう。例えば、抗脂血症薬があげられる。
【００３１】
本発明化合物は、以下の実施例に示すように、糖尿病モデルにおいてピオグリタゾンに見られるような体重増加の副作用を有さず、血糖値を下げ、血中トリグリセリドなどの脂質レベルを下げることができる。
【００３２】
従って、本発明化合物は、循環器系疾患（動脈硬化症など）、脂質代謝病（高脂血症（高コレステロール症等）など）、糖尿病（特に、２型糖尿病（NIDDM）の予防若しくは治療に優れている。
【００３３】
ここで、循環器系疾患とは、血液およびリンパの循環状態が障害され、組織や細胞に障害をおこしている疾患をいう。例としては、血栓性疾患、動脈硬化性疾患があげられる。
【００３４】
ここで、血栓性疾患とは、血栓によって血管が閉塞した状態をいい、動脈血栓症及び静脈血栓症に分けられる。動脈血栓は、主として動脈硬化に合併して生じ、冠状動脈の血栓は、心筋梗塞の原因となり、また、脳動脈の血栓は、脳梗塞の原因となる。静脈血栓症は、表在静脈や深部静脈の血栓症があり、急性の深部静脈血栓症の場合、肺梗塞を生じることがある。
【００３５】
ここで、動脈硬化性疾患は、動脈壁が肥厚し、弾性を失った状態をいい、例えば、アテローム（粥状）硬化、メンケベルグ型動脈硬化、細小動脈硬化の３型がある。
【００３６】
ここで、脂質代謝病とは、脂質の代謝障害によって生じる疾患をいい、例えば、高脂血症がある。高脂血症とは、血清コレステロールおよび、ないしはトリグリセリド値が増加した病態をいい、例えば、高コレステロール症や高中性脂質症があげられる。
【００３７】
本発明に於ける各化合物は経口または非経口（注射剤、外用剤、坐剤など）で投与することができる。その投与量は約0.0001〜約1g / kg体重／日を１日１回又は数回の範囲が好適であるが、この投与量は疾患の種類、患者の年齢、体重、症状により適宜増減することができる。
【００３８】
本発明の化合物を医薬として用いるためには、固体組成物、液体組成物およびその他の組成物のいずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択される。医薬組成物は、本発明の化合物を常用の賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、pH調節剤、溶解剤、などを添加し、常用の製剤技術によって、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤などに調製することができる。
賦形剤、増量剤としては、例えば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげることができる。
【００３９】
製剤の酸化を防止するためには、酸化防止剤（トコフェロール等）を添加したり、シクロデキストリン等の包接剤で包接したり、ゼラチン等の皮膜でカプセル化することができる。
【００４０】
更に、前記化合物を、乳化剤として、リン脂質あるいは非イオン界面活性剤を用いて、Ｏ／Ｗ型製剤として特開平６−２９８６４２に記載のように調製することができる。乳化剤は、単独あるいは２種以上組み合わせて使用でき、添加量は、適宜でよいが、０．００１〜１０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）である。
【００４１】
リン脂質としては、大豆由来リン脂質、卵黄由来リン脂質、リゾレシチン、フォスファチジルコリン（レシチン）、フォスファチジルセリンなどの単独あるいは組み合わせが使用可能である。非界面活性剤としては、分子量５００〜１５０００のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（例えば、プルロニックＦ−６８）、分子量１０００〜１００００のポリアルキレングリコール、分子量１０００〜２００００のポリオキシアルキレン共重合体、硬化ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体、ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルなどの単独あるいは組み合わせが好適に用いられるがこれに限定されない。
【００４２】
また、本発明化合物は以下のように製造することができる。
式ＩＩのアミン
【００４３】
【化８】
2005232005.tif 000005
(式中、ｌは0から１０の間のいずれかの整数であり、ＲAは水素若しくは炭素数１〜１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基である）と、
式ＩＩＩ化合物：Ｒ−ＣＯ2−Ｒ’ [Ｒ’は水素または炭素数１〜４のアルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基）を示し、Ｒは、置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎは １６から２２の間のいずれかの整数であり、 ｍは不飽和数を表し、２から７の間のいずれかの整数である）を表す]で示される化合物とを出発原料として、アミド化方法によって製造することができる。
【００４４】
出発原料の式ＩＩのアミンは、常法に従って合成することができる。
出発原料の式ＩＩＩのカルボン酸またはエステルは、常法に従って合成することができる。エステルの場合は、対応するカルボン酸またはその塩から通常のエステル形成反応によって製造することができる。上記対応するカルボン酸またはその塩は、合成品でも天然品でもよい。経済性の点では合成品の方がよいが、天然品の方が毒性がより少ない点で好ましい。天然品は、例えば、魚類の鰓、頭部、筋肉内、眼窩油などから分離、精製したものがあげられる。
【００４５】
式ＩＩＩのカルボン酸またはエステルが置換基を有するものも、天然品でも合成品でもよい。
合成で置換基を導入する方法は、当業者に通常用いられる方法、例えば、式ＩＩＩのカルボン酸またはエステルに、置換または付加反応によって置換基を導入する方法があげられる。
【００４６】
置換基がアルキル基の場合は、ＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)ＣＯＯＨにアルキル化剤を用いて導入することができる。
また、置換基がOH基の場合は、天然由来のDHAを水酸化し、これをHPLCなどによって分画することにより合成してもよく、特に制限はない。例えば、ニジマス鰓細胞や上皮細胞、哺乳動物血小板、あるいはRBL-1などのヒト白血球由来株化細胞懸濁液に10〜200mMのDHAを基質として加え、10〜37℃にて1〜50分間反応させて得ることもできる。反応液を酸性（ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸などにより）にすることによって反応を停止し、各OH誘導体を有機溶媒（クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、アセトニトリルなど）を用いて抽出した後、展開溶媒（クロロホルム、メタノール、酢酸エチル、アセトニトリル、水、トリフルオロ酢酸など）によってHPLC、あるいは薄層クロマトグラフィーなどの方法によって分画することができるが、これらの方法に限定されるものではない。また、各OH誘導体は部位特異的な酵素を用いた選択的な合成法によって調製することもできる。なお、4 (S) - OH - DHA、 10 (S) - OH - DHA、11 (S) - OH - DHA、 14 (S) - OH - DHA、8 (S) - OH - DHA、および 17 (S) - OH - DHAについては、和光純薬工業より市販されており、入手することが可能である。
【００４７】
出発原料を合成によって得る場合には、式ＩＩのアミンまたは式ＩＩＩのカルボン酸またはエステルは、分離してもよく、または溶媒に溶解したまま用いることもできる。
【００４８】
アミド化方法は、限定されるものではないが、一般的に混合酸無水物法で合成できる。ここでは下記方法をあげる。
（１）Ｗｅｉｎｒｅｂ方法
式ＩＩのアミンとトリアルキルアルミニウム、特に（ＣＨ3）3Ａｌとの反応物に、式ＩＩＩのエステルを反応させることにより、本発明化合物は製造することができる。その反応を以下のスキームを用いて詳細に説明する。
【００４９】
【化９】
2005232005.tif 000006
上記第1工程の化合物Aの生成反応は、式ＩＩのアミン（好ましくは、塩酸塩などの酸付加塩）と(CH3)3Alとを反応させることによって行う。この反応は、芳香族炭化水素溶媒（例えば、トルエン、キシレン、ベンゼン）中、冷却下で行うことが好ましい。
【００５０】
このとき、式ＩＩのアミンの1当量に対し、(CH3)3Alは、0.5〜5.0当量であることが好ましい。
上記第2工程は、第1工程で得られた化合物Aに、式ＩＩＩのエステルを反応させることによって行う。この反応は、芳香族炭化水素溶媒（例えば、トルエン、キシレン、ベンゼン）中、加熱下で行うことが好ましい。反応温度は、40〜70℃が好ましい。反応温度は、生成物が分解しやすいので、約70℃を超えないことが好ましい。反応時間は、1〜5時間が好ましい。
【００５１】
このとき、化合物Aの1当量に対し式ＩＩＩのエステルは5〜20当量であることが好ましい。
（２）（ＣＯＣｌ）2を用いる方法
式ＩＩＩのカルボン酸：Ｒ−ＣＯ−ＯＨ [Ｒは、置換されてもよいＣＨ3ＣnＨ(2n-2m)−（ｎは １６から２２の間のいずれかの整数であり、 ｍは不飽和数を表し、２から７の間のいずれかの整数である）を表す]で示される化合物と（ＣＯＣｌ）2との反応によって生じる酸塩化物に、
式ＩＩのアミン
【００５２】
【化１０】
2005232005.tif 000007
(式中、ｌは0から１０の間のいずれかの整数であり、ＲAは水素若しくは炭素数１〜１０の直鎖でも分枝鎖でもよいアルキル基である）
を反応させることによっても本発明化合物を得ることができる。
【００５３】
上記第１工程：式ＩＩＩのカルボン酸と（ＣＯＣｌ）2との反応による酸塩化物の生成反応は、炭化水素溶媒（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム）あるいは芳香族炭化水素溶媒（例えば、トルエン、キシレン、ベンゼン）中、冷却下でおこなうことが好ましい。
【００５４】
このとき、式ＩＩＩのカルボン酸：Ｒ−ＣＯ−ＯＨの１当量に対し、（ＣＯＣｌ）2は、１〜５当量であることが好ましい。
上記第２工程：第１工程で得られた酸塩化物と式ＩＩのアミンとの反応は、芳香族炭化水素溶媒（例えば、トルエン、キシレン、ベンゼン）中でおこなうことが好ましい。反応温度は、−５〜５℃が好ましい。反応温度は、生成物が分解しやすいので、約５℃を超えないことが好ましい。反応時間は、０．５〜５時間が好ましい。
【００５５】
このとき、酸塩化物の１当量に対し、式ＩＩのアミンは、１〜５当量であることが好ましい。
いずれの製法でも反応終了後、必要に応じて、常法（ろ過、溶媒抽出、再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィーなど）に従って、本発明の化合物を単離、精製することができる。
【００５６】
また、立体異性体は、適当な原料を選択することにより、または立体異性体の混合物の場合にはクロマトグラフィー若しくはラセミ分割法により、立体化学的に純粋な異性体を得ることができる。
【００５７】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、これは本発明の技術範囲を限定するものではない。
【００５８】
（実施例1）（4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z）−Ｎ−[（フリル−２−イル）メチル]ドコサヘキサエンアミドの合成方法
15％ Me3Alのn-ヘキサン溶液12mlとモレキュラーシーブ（MS4A）で乾燥させた17mlトルエンと混合し、これに1.5ml(16.8mmol)フルフリルアミンを加え、冷却浴上で20分間撹拌した。室温に戻した後、7ml乾燥トルエン中6.0g(16.8mmol) ドコサヘキサエン酸（DHA）エチルエステルを4分間で滴下し、70℃湯浴上で撹拌した。次に、氷浴上で9℃に冷却した後、0.67M HCl 29mlを約4分間で滴下し、氷浴上で10分間撹拌したものを分液した。水層を酢酸エチルで抽出(20ml×1回)し、それを有機層と合わせたものを飽和食塩水20mlで洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、40℃水浴上で減圧濃縮した。最後に、濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカ  70g、ヘキサン-酢酸エチル 9:1 →2:1 (V:V)）することによって精製し、ＩＲ及びＮＭＲによって、下記化合物であることを確認した。
【００５９】
【化１１】
2005232005.tif 000008
（実施例2）ＰＰＡＲγ作動性試験
培養株化上皮細胞COS- 1にＣａＰＯ4 共沈殿法を用いて、 GAL 4（酵母転写アクチベーター） -ＰＰＡＲγ融合タンパク質発現プラスミド（エフェクタープラスミド）、と併せてレポータープラスミド 17 M2 CAT（ GAL 4応答配列 + TKプロモーター +クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ cDNA）を導入した後、培養培地（ＤＭＥＭ  [ＧＩＢＣＯ（株）]＋１０％活性炭処理非動化ウシ血清[Whittecker（株）]）に被験物質を添加し 24時間後 に、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）アッセイに処し、CAT活性を測定した。ＰＰＡＲγ作動性は、陰性対照（無添加）のCAT活性を100%とした場合の、相対的 CAT活性を算出する事で評価した（'00 J.B.C 275 p33201; '90 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, p.9995; '94 J. B. C. 269, p.32700; '95 ibid. p. 5858）
被験物質として、実施例１化合物及び抗糖尿病作用が知られているドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）のエチルエステル体を用い、陽性対照として、ＰＰＡＲγのリガンドであることが知られている15デオキシ - PG J2（１５−デオキシ−△１２，１４−プロスタグランジン  J２）(Bio Mol  製)を用いた。
【００６０】
実験の結果、 実施例１化合物は 3 micro M濃度にて564±107%と有意にＰＰＡＲγ転写活性を上昇させた。これは、陽性対照として用いた 15 デオキシ- PG J2の約半分ほどの作動性であった。
【００６１】
また、DHAのエステル体のＰＰＡＲγ転写活性は200％前後であった。
従って、実施例１化合物は、DHAのエステル体より約２倍のＰＰＡＲγ転写活性を有することがわかった。
【００６２】
（実施例3）ＰＰＡＲα作動性試験
培養株化上皮細胞COS- 1にＣａＰＯ4 共沈殿法を用いて、GAL 4（酵母転写アクチベーター） -ＰＰＡＲα融合タンパク質発現プラスミド（エフェクタープラスミド）、と併せてレポータープラスミド 17 M2 CAT（ GAL 4応答配列 + TKプロモーター +クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ cDNA）を導入した後、培養培地（ＤＭＥＭ  [ＧＩＢＣＯ（株）]＋１０％活性炭処理非動化ウシ血清[Whittecker（株）]）に被験物質を添加し 24時間後に、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）アッセイに処し、 CAT活性を測定した。ＰＰＡＲα作動性は、陰性対照（無添加）のCAT活性を100%とした場合の、相対的 CAT活性を算出する事でＰＰＡＲα作動性を評価した（'00 J.B.C 275 p33201;'90 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, p.9995; '94 J. B. C. 269, p.32700; '95 ibid. p. 5858）
被験物質として、実施例１化合物及び陽性対照として、ＰＰＡＲαのリガンドであることが知られている8(S)-HETE （５，９，１１，１４−エイコサテトラエン酸、８−ヒドロキシ−、[S  −（E，Z，Z，Z）]−）(Cayman Chemical（株）製)を用いた。
【００６３】
実験の結果、実施例１化合物は 3 micro M濃度にて353±67%と有意に PPAR α転写活性を上昇させた。これは、陽性対照として用いた8(S)-HETEの約半分ほどの作動性であった。
【００６４】
（実施例4）NIDDMモデル動物に対する作用1
三協（株）より購入した遺伝的NIDDMマウスKK-Ay/TaJcl（６週齢、雄、体重約３０ｇ、１群６匹）を用いて、本発明化合物の体重（B.W. gain）、白色脂肪量の体重に対する割合（WAT/B.W.）、血糖値（B.G.）、血中トリグリセリド（TG）、血中遊離脂肪酸（FFA）、血中総コレステロール（血中のエステル型コレステロール量と血中の遊離型コレステロール量とをたしたもの、以下の実験例も同じ）（TC）、レベルに及ぼす作用を検討した。
【００６５】
陰性対照群としてビヒクルの5％アラビアゴム溶液を用い、陽性対照群として、武田薬品（株）から購入したピオグリタゾンを乳鉢で粉砕して、5％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーでよく撹拌したものをピオグリタゾン成分として100mg/kgを用い、各々強制経口経路にて１日１回、１５日間反復投与した。被験化合物として実施例１化合物を用い、これを5％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーと超音波でよく撹拌し、懸濁液としたものを3mg/kg（低用量群）、30mg/kg（中用量群）、300mg/kg（高用量群）強制経口経路にて１日１回、１５日間反復投与した。
【００６６】
次にシリンジを用いて腹大動脈を採血し、５０μｌＥＤＴＡと混合した。その血液を９００ｒｐｍ、２０分遠心した後できた上層を血漿画分とした。一方で、採血した腹大動脈血を４℃に１２時間放置して凝固させた後、３，０００ｒｐｍ、１５分間遠心した後できた上層を血清画分とした。血漿画分及び血清画分それぞれを分離後、血漿画分にて血糖値レベルを酵素法（ＧＬＵ−ＤＨ法）（Banauch D, et al; J. Clin. Chem. Biochem., Vol. 13, p. 101-107, 1975） で、血清画分にて、血中トリグリセリドレベルを酵素法（遊離グリセロール消去法）(Tamaoku K, et al; Chem. Pharm. Bull., Vol. 30, p. 2492-2497, 1982)で、血中遊離脂肪酸を酵素法（Sugo S, et al; Clin. Chem., Vol. 36, p. 163, 1990）で、血中総コレステロールレベルを酵素法（Richmond W; Clin. Chem., Vol. 19, p. 1350-1356, 1973）で測定した。白色脂肪量は、睾丸の周りを測定した（以下の実験例も同じ）。
【００６７】
この結果、実施例１化合物が血糖値（B.G.）、血中トリグリセリド（TG ）を、改善する傾向が観察された（図1,2）。また陽性対照群として用いたピオグリタゾンは体重を増加させる副作用を有するが、一方、実施例１化合物は体重増加を抑制しながら、有意に白色脂肪重量の体重に対する割合（WAT/B.W.）を減少させることが確認された（図3）。
【００６８】
（実施例5）NIDDMモデル動物に対する作用2
三協（株）より購入した遺伝的NIDDMラットZucker diabetic fatty rat（ＺＤＦラット）（９週齢、雄、体重約４００ｇ、１群６匹）を用いて、本発明化合物の体重（B.W. gain）、白色脂肪量の体重に対する割合（WAT/B.W.）、血糖値（B.G.）、血中トリグリセリド（TG）、血中遊離脂肪酸（FFA）、血中総コレステロール（TC）、レベルに及ぼす作用を検討した。
【００６９】
陰性対照群としてビヒクルの5％アラビアゴム溶液を用い、陽性対照群として、武田薬品（株）から購入したピオグリタゾンを乳鉢で粉砕して、5％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーでよく撹拌したもの30mg/kgを用い、各々強制経口経路にて１日１回、７日間反復投与した。被験化合物として実施例１化合物を用い、これを5％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーと超音波でよく撹拌し、懸濁液としたものを10mg/kg（低用量群）、30mg/kg（中用量群）、100mg/kg（高用量群）強制経口経路にて１日１回、７日間反復投与した。
【００７０】
次にシリンジを用いて腹大動脈を採血し、チトラール（山之内製薬（株）製）と混合した。その血液を９００ｒｐｍ、２０分遠心した後できた上層を血漿画分とした。一方で、採血した腹大動脈血を４℃に１２時間放置して凝固させた後、３，０００ｒｐｍ、１５分間遠心した後できた上層を血清画分とした。血漿画分及び血清画分それぞれを分離後、血漿画分にて血糖値レベルを酵素法（ＧＬＵ−ＤＨ法）（Banauch D, et al; J. Clin. Chem. Biochem., Vol. 13, p. 101-107, 1975） で、血清画分にて、血中トリグリセリドレベルを酵素法（遊離グリセロール消去法）(Tamaoku K, et al; Chem. Pharm. Bull., Vol. 30, p. 2492-2497, 1982)で、血中遊離脂肪酸を酵素法（Sugo S, et al; Clin. Chem., Vol. 36, p. 163, 1990）で、血中総コレステロールレベルを酵素法（Richmond W; Clin. Chem., Vol. 19, p. 1350-1356, 1973）で測定した。
【００７１】
この結果、実施例１化合物が血糖値（B.G.）、血中トリグリセリド（TG）を改善する傾向が観察され、また血中総コレステロール（TC）を有意に減少させることが確認された（図4, 5, 6）。
【００７２】
（実施例6）NIDDMモデル動物に対する作用3
三協（株）より購入した遺伝的NIDDMマウスdb/dbマウス（８週齢、雄、体重約３０ｇ、１群６匹）を用いて、本発明化合物の体重（B.W. gain）、白色脂肪量の体重に対する割合（WAT/B.W.）、血糖値（B.G.）、血中トリグリセリド（TG）、血中遊離脂肪酸（FFA）、血中総コレステロール（TC）、レベルに及ぼす作用を検討した。
【００７３】
陰性対照群としてビヒクルの5％アラビアゴム溶液を用い、陽性対照群として、武田薬品（株）から購入したピオグリタゾンを乳鉢で粉砕して、5％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーでよく撹拌したものを100mg/kg強制経口経路にて１日１回、２８日間反復投与した。被験化合物として、実施例１化合物を用い、これを5％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーと超音波でよく撹拌し、懸濁液としたものを30mg/kg（低用量群）、100mg/kg（中用量群）、300mg/kg（高用量群）強制経口経路にて１日１回、２８日間反復投与した。
【００７４】
次にシリンジを用いて腹大動脈を採血し、５０μｌＥＤＴＡと混合した。その血液を９００ｒｐｍ、２０分遠心した後できた上層を血漿画分とした。一方で、採血した腹大動脈血を４℃に１２時間放置して凝固させた後、３，０００ｒｐｍ、１５分間遠心した後できた上層を血清画分とした。血漿画分及び血清画分それぞれを分離後、血漿画分にて血糖値レベルを酵素法（ＧＬＵ−ＤＨ法）（Banauch D, et al; J. Clin. Chem. Biochem., Vol. 13, p. 101-107, 1975） で、血清画分にて、血中トリグリセリドレベルを酵素法（遊離グリセロール消去法）(Tamaoku K, et al; Chem. Pharm. Bull., Vol. 30, p. 2492-2497, 1982)で、血中遊離脂肪酸を酵素法（Sugo S, et al; Clin. Chem., Vol. 36, p. 163, 1990）で、血中総コレステロールレベルを酵素法（Richmond W; Clin. Chem., Vol. 19, p. 1350-1356, 1973）で測定した。
【００７５】
この結果、実施例１化合物が血糖値（B.G.）、血中トリグリセリド（TG）、血中遊離脂肪酸（FFA）、血中総コレステロール（TC）を濃度依存的に有意に減少させることが確認された（図7, 8, 9, 10）。また陽性対照群として用いたピオグリタゾンは過剰な体重増加を誘発したが、実施例１化合物にその作用は認められなかった。
【００７６】
（実施例7）正常ラットへの影響
本発明化合物の安全性を確認するために、SDラット（１０週齢、雄、体重約４００ｇ、１群６匹）に実施例１化合物を用い一般で行われる経口経路単回投与の毒性試験での最大用量である2g/kgを経口経路で単回投与し、毒性の有無の検討を行った。ラットは、投与後正常に増重し、投与1週間後の剖検でも組織に特に異常は認められなかった。従って、本発明化合物は、毒性がないことが確認された。
【００７７】
（実施例8）正常ラットの血糖値に及ぼす影響
三協（株）より購入したＳＤラット（６週齢、雄、体重約２００ｇ、１群６匹）を用いて、本発明化合物の血糖値（Ｂ．Ｇ．）に及ぼす作用を検討した。
【００７８】
対照としてビヒクルの５％アラビアゴム溶液を、強制経口経路にて１日１回、１４日間反復投与した。被験化合物として実施例１化合物を用い、５％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーと超音波でよく撹拌し、懸濁液としたものを３０ｍｇ／ｋｇ（低用量群）、１００ｍｇ／ｋｇ（中用量群）、３００ｍｇ／ｋｇ（高用量群）強制経口経路にて１日１回、１４日間反復投与した。
【００７９】
最終投薬完了後、１２時間絶食させたのち、ヘパリンをくぐらせたシリンジを用いて腹大動脈を採血し、チトラールを分注したチューブに移した。９００ｒｐｍ、２０分遠心した後できた上層を血漿画分として、血糖値レベルを酵素法（ＧＬＵ−ＤＨ法）（Banauch D, et al; J. Clin. Chem. Biochem., Vol. 13, p. 101-107, 1975）で測定した。
【００８０】
この結果、実施例１化合物が、血糖値（Ｂ．Ｇ．）に及ぼす影響は認められなかった。
【００８１】
【表１】
2005232005.tif 000009
（実施例9）フルクトース負荷高トリグリセリド（ＴＧ）ラットに及ぼす影響
三協（株）より購入したＳＤラット（６週齢、雄、体重約２００ｇ、１群６匹）に、２５％フルクトース（半井化学）含有水溶液を７日間自由に摂取させることで、フルクトース負荷高ＴＧラットモデルを作製した。このモデル動物を用いて、本発明化合物が血中ＴＧに及ぼす作用を検討した。
【００８２】
陰性対照群として５％アラビアゴム溶液を用い、陽性対照群として、ＳＩＧＭＡ（株）から購入したベザフィブレートを５％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーでよく撹拌したものを１００ｍｇ／ｋｇ強制経口経路にて１日１回、６日間反復投与した。被験化合物として、実施例１化合物を用い、これを５％アラビアゴム溶液にボルテックスミキサーと超音波でよく撹拌し、懸濁液としたものを３０ｍｇ／ｋｇ（低用量群）、１００ｍｇ／ｋｇ（中用量群）、３００ｍｇ／ｋｇ（高用量群）強制経口経路にて１日１回、６日間反復投与した。
【００８３】
最終投薬完了後、１２時間絶食させたのち、腹大動脈血を採血した。血液を４℃に１２時間放置して凝固させた後、３，０００ｒｐｍ、１５分間遠心分離した後得られた血清について、トリグリセライドＧテストワコー（和光純薬工業（株）製）を用いて血中トリグリセリドを測定した。
【００８４】
この結果、実施例１化合物は、血中ＴＧを濃度依存的に減少させる傾向が確認された。
【００８５】
【表２】
2005232005.tif 000010
【００８６】
【発明の効果】
本発明化合物は、ＰＰＡＲγ及びα作動性を有し、特に、ＰＰＡＲγ活性はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）の２倍の活性を有する。また、本発明化合物は、糖尿病モデルにおいて体重増加の副作用を有さず、血糖値をさげ、血中トリグリセリドなどの脂質レベルをさげることができる。従って、本発明化合物は、循環器系疾患（動脈硬化症など）、脂質代謝病（高コレステロール症（高脂血症等）など）、糖尿病（特に、２型糖尿病（NIDDM）の予防若しくは治療に優れている。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ＫＫ−Ａｙマウスの血糖値に及ぼす作用を示すグラフである。
【図２】  ＫＫ−Ａｙマウスの血中トリグリセリドレベルに及ぼす作用を示すグラフである。
【図３】  ＫＫ−Ａｙマウスの白色脂肪量の体重に対する割合に及ぼす作用を示すグラフである。
【図４】  ＺＤＦラットの血糖値に及ぼす作用を示すグラフである。
【図５】  ＺＤＦラットの血中トリグリセリドレベルに及ぼす作用を示すグラフである。
【図６】  ＺＤＦラットの血中総コレステロールレベルに及ぼす作用を示すグラフである。
【図７】  ｄｂ／ｄｂマウスの血糖値に及ぼす作用を示すグラフである。
【図８】  ｄｂ／ｄｂマウスの血中トリグリセリドレベルに及ぼす作用を示すグラフである。
【図９】  ｄｂ／ｄｂマウスの血中総コレステロールレベルに及ぼす作用を示すグラフである。
【図１０】  ｄｂ／ｄｂマウスの血中遊離脂肪酸レベルに及ぼす作用を示すグラフである。
【図１】
2005232005.tif 000016
【図２】
2005232005.tif 000017
【図３】
2005232005.tif 000018
【図４】
2005232005.tif 000019
【図５】
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【図６】
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【図７】
2005232005.tif 000022
【図８】
2005232005.tif 000023
【図９】
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【図１０】
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