(57)【要約】【課題】  アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれる微量のメタクリル酸アルキルエステルを精密に定量できる定量方法を提供すること。【解決手段】  （１）アクリル酸メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルを溶媒を用いて抽出する工程と、（２）純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相として用い、２００〜２３０ｎｍの範囲内の波長の吸収を測定する液体クロマトグラフ法により、前記工程（１）で得られた抽出液中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を測定する工程と、（３）前記工程（２）で測定した吸収ピーク面積から、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量を算出する工程とを有することを特徴とする定量方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルエステルの含量を液体クロマトグラフ法により定量する定量方法であって、
（１）アクリル酸メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルを溶媒を用いて抽出する工程と、
（２）純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相として用い、２００〜２３０ｎｍの範囲内の波長の吸収を測定する液体クロマトグラフ法により、前記工程（１）で得られた抽出液中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を測定する工程と、
（３）前記工程（２）で測定した吸収ピーク面積から、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量を算出する工程と
を有することを特徴とする定量方法。
【請求項２】
前記工程（１）で用いる溶媒がアセトンである請求項１に記載の定量方法。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の定量方法により定量されるメタクリル酸アルキルエステルの含量が０．１質量％以下であることを特徴とする医薬外用製剤用アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体。
【請求項４】
アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の医薬外用製剤用としての適正性を評価する試験方法であって、
（１）アクリル酸メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルを溶媒を用いて抽出する工程と、
（２）純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相として用い、２００〜２３０ｎｍの範囲内の波長の吸収を測定する液体クロマトグラフ法により、前記工程（１）で得られた抽出液中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を測定する工程と、
（３）前記工程（２）で測定した吸収ピーク面積から、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量を算出する工程と、
（４）前記工程（３）で得られたメタクリル酸アルキルエステルの含量について、適正基準値を０．１質量％以下に設定し、当該含量が適正基準値以下のアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を医薬外用製剤用として適正と評価する工程と
を有することを特徴とする試験方法。
【請求項５】
前記工程（１）で用いる溶媒がアセトンである請求項４に記載の試験方法。
【請求項６】
薬物と、請求項４又は５に記載の試験方法により適正と評価されたアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体とを含有する医薬外用製剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体クロマトグラフ法を使用した、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に存在する微量のメタクリル酸アルキルエステルの精密な定量方法に関する。また、医薬外用製剤用アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の試験方法、及び医薬外用製剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体は、耐塩性に優れたゲル化剤として、クリームやジェル剤などの化粧料に使用されている。また、医薬外用剤としての使用も提案されており、例えば、特許文献１には、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル、薬物、水を含有する局所療法製剤が提案されている。
しかし、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体は、皮膚炎等を誘発することが知られている。その主な原因としては、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に存在する未反応のモノマーであるメタクリル酸アルキルエステルによる刺激が考えられている。例えば非特許文献１では、メタクリル酸アルキルエステルが、アレルギー接触皮膚炎との関連があるとの報告がなされている。
すなわち、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体は、アクリル酸とメタクリル酸アルキルエステルを原料とし、これらを共重合反応させて得られるが、反応条件によっては、未反応のモノマー、すなわちアクリル酸やメタクリル酸アルキルエステルが残存することが容易に推定される。つまり、同グレードの製品であっても、僅かな製造条件・環境等の違いにより、メタクリル酸アルキルの含有量がロットにより異なることが予想される。そのため、使用するアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体によっては、メタクリル酸アルキルエステルの含量が多く、これによって上記問題が生じていると推察される。
特に、有効成分として薬物が多く配合されている医薬外用剤にアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を含有させた場合、傷や炎症を起こした患部に適用した際に、強い刺激を生じたり、症状を悪化させるなどの問題が生じる傾向が強く、そのため、従来、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を医薬外用剤に適用することは困難であった。
【０００３】
このような問題に対し、化粧料、医薬外用剤等の外用剤として、メタクリル酸アルキルエステル含量が低いアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を使用することが考えられる。
しかし、これまで、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中の不純物であるメタクリル酸アルキルエステルの含量は、特に測定する必要がなく、精密定量がなされたという報告はない。例えば、一般的に、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の組成分析方法としては、吸光度法や核磁気共鳴スペクトルを用いた測定がなされているが、これらの方法では、メタクリル酸アルキルエステル（モノマー）と、主成分であるアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体（高分子）とを区別することはできず、定量できない。また、特許文献２には、アクリル酸系共重合体をエステル化熱分解してガスクロマトグラフ法で分離し、質量分析計で定性分析し、バイオグラムで定量分析する組成分析方法が提案されているが、この方法は、共重合体そのものの組成を分析することが目的であり、微量に存在するモノマー量を定量するものではない。
【０００４】
また、特に、有効成分として薬物を多く含有する医薬外用製剤においては、薬物による刺激がメタクリル酸アルキルエステルにより助長される可能性が高く、損傷皮膚へ適用する場合があるなど、特に注意を要するため、従来使用されていた化粧料よりも厳格な品質が要求される。そのため、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステル含量を精度良く定量することが、医薬外用製剤適用に際して、必須の条件となる。
【０００５】
一方、従来、微量な定量分析に用いられている定量法の１つとして、ガスクロマトグラフ法、液体クロマトグラフ法等のクロマトグラフ法が知られている。
そこで、メタクリル酸アルキルエステルの微量定量法として、クロマトグラフ法を用いることが考えられる。
【特許文献１】特開２０００−１１９１９７号公報
【特許文献２】特開平９−３３５０８号公報
【非特許文献１】金澤由基子、小島幸一、秦野研究所年報２２、３１−３７（１９９９）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、通常のクロマトグラフ法でメタクリル酸アルキルエステルを精密に測定することは困難である。
例えばガスクロマトグラフ法では、ガスクロマトグラフ装置のインジェクター等に用いられているガラス表面に残るシラノール基のＯＨに測定対象物質（メタクリル酸アルキルエステル）が吸着し、精密な測定が困難である。
また、液体クロマトグラフ法では、検出器として示差屈折計を使用するのが通常であるが、この検出方法では微量分析としての精度が得られない。
また、液体クロマトグラフ法において、検出器として、精度の高い測定が可能である紫外吸光光度計を使用することも考えられるが、メタクリル酸アルキルエステルは、通常の測定領域である波長１９０〜４００ｎｍの範囲内では特異的な紫外吸収を有しておらず、２００ｎｍ付近での吸収がわずかに認められるのみである。しかし、この波長は特異性がある吸収域ではなく、移動相に使用されるアセトニトリルやメタノールなどの各種溶媒も吸収を有しているため、通常は、測定波長として設定されていない。特に、高分子中の不純物である未反応モノマーのように、含量が微量である場合は、設定したとしても検出することは不可能である。
このように、従来の分析方法では、メタクリル酸アルキルエステルの微量分析は困難である。
【０００７】
本発明は、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれる微量のメタクリル酸アルキルエステルを精密に定量できる定量方法、該定量方法を用いて得られる医薬外用製剤用アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の試験方法、及び該試験方法を用いて得られる医薬外用製剤組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、検討の結果、高純度のアセトニトリルを移動相として用いる液体クロマトグラフ法により、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルを高い精度で定量できることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成した。
すなわち、本発明の第１の発明は、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルエステルの含量を液体クロマトグラフ法により定量する定量方法であって、
（１）アクリル酸メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルを溶媒を用いて抽出する工程と、
（２）純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相として用い、２００〜２３０ｎｍの範囲内の波長の吸収を測定する液体クロマトグラフ法により、前記工程（１）で得られた抽出液中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を測定する工程と、
（３）前記工程（２）で測定した吸収ピーク面積から、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量を算出する工程と
を有することを特徴とする定量方法である。
前記第１の発明においては、前記工程（１）で用いる溶媒がアセトンであることが好ましい。
また、本発明の第２の発明は、前記定量方法により定量されるメタクリル酸アルキルエステルの含量が０．１質量％以下であることを特徴とする医薬外用製剤用アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体である。
また、本発明の第３の発明は、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の医薬外用製剤用としての適正性を評価する試験方法であって、
（１）アクリル酸メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルを溶媒を用いて抽出する工程と、
（２）純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相として用い、２００〜２３０ｎｍの範囲内の波長の吸収を測定する液体クロマトグラフ法により、前記工程（１）で得られた抽出液中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を測定する工程と、
（３）前記工程（２）で測定した吸収ピーク面積から、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量を算出する工程と、
（４）前記工程（３）で得られたメタクリル酸アルキルエステルの含量について、適正基準値を０．１質量％以下に設定し、当該含量が適正基準値以下のアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を医薬外用製剤用として適正と評価する工程と
を有することを特徴とする試験方法である。
前記第３の発明においては、前記工程（１）で用いる溶媒がアセトンであることが好ましい。
また、本発明の第４の発明は、薬物と、前記試験方法により適正と評価されたアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を含有する医薬外用製剤組成物である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の定量方法によれば、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれる微量のメタクリル酸アルキルエステルを精密に定量できる。
また、本発明の定量方法により定量されるメタクリル酸アルキルエステルの含量が０．１質量％以下のアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体は、医療外用製剤用として好適なものである。
また、本発明の試験方法によれば、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の医薬外用製剤用としての適正性を評価することができる。
また、本発明の試験方法により適正と評価されたアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を含有する医薬外用製剤組成物は、傷や炎症を起こした患部に適用した際に、強い刺激感を与えたり、症状を悪化させることが少ない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下に、本発明をより詳細に説明する。
≪定量方法≫
本発明の定量方法は、下記（１）〜（３）の工程を有することを特徴とする。
（１）アクリル酸メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルを溶媒を用いて抽出する工程（分離工程）
（２）純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相として用い、２００〜２３０ｎｍの範囲内の波長の吸収を測定する液体クロマトグラフ法により、前記工程（１）で得られた抽出液中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を測定する工程（測定工程）
（３）前記工程（２）で測定した吸収ピーク面積から、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量を算出する工程（算出工程）
【００１１】
（１）分離工程
まず、分離工程では、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体から、未反応のモノマーであるメタクリル酸アルキルエステルを分離する。
なお、本発明において、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体とは、アクリル酸と、メタクリル酸アルキルエステルとを含むモノマー成分を重合させて得られる共重合体である。
本発明の定量方法が適用されるアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体としては、特に制限はなく、合成したものであっても、市販のものであってもよい。
【００１２】
アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体からのメタクリル酸アルキルエステルの分離は、溶媒を用いた抽出により行う。
溶媒としては、特に制限はないが、メタクリル酸アルキルエステルを溶解し、かつアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を溶解しにくいものものが好ましく、例えば、アセトン、アセトアルデヒド、エチルメチルケトン、プロピルメチルケトン、ブチルメチルケトン、ジエチルケトン、エチルプロピルケトン、４−ヘプタノンなどのケトン系溶媒、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等の環状エーテル系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒などが挙げられる。これらの溶媒は、１種単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。
これらのなかでも、ケトン系溶媒、とりわけアセトンは、メタクリル酸アルキルエステルの抽出率が高く、高い精度での定量が可能となることから好ましい。
また、溶媒の純度は高いほど好ましく、例えば、アセトンとしては、純度９９．５％以上のものを使用することが好ましい。
【００１３】
抽出は、例えば以下の手順で行うことが好ましい。
まず、アセトン等の溶媒に、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体（以下、定量試料ということがある）を、該定量試料の濃度が０．１〜１０質量％となる量で添加する。
次いで、室温にて５分以上放置した後、抽出操作を行う。抽出操作は、ガラス棒等で測定サンプルを押し潰すようにして行うことが好ましい。また、抽出操作においては、上記押し潰しに代えて、あるいは上記押し潰しに加えて、攪拌や加熱（６０℃以下）を行ってもよい。
次いで、上記抽出操作で得られた抽出液を、必要があれば、ろ過もしくは遠心分離により固液分離し、その上澄液を得る。
そして、上記操作で得られた抽出液又は上澄液を所定の濃度に調整して測定サンプルとし、次の工程（２）に供する。濃度調整は、例えば、抽出液中のメタクリル酸アルキルエステル濃度が、下記工程（２）で検量線を作成する際に使用する標準物質溶液の濃度の下限値と上限値との範囲内となるように、抽出に用いたのと同じ溶媒を用いて希釈するか、あるいは濃縮することにより行うことができる。なお、濃度調整として、例えば希釈を行う場合、希釈溶媒は、抽出に用いた溶媒を用いることが好ましい。
【００１４】
なお、ろ過や遠心分離は、一般的に、液体クロマトグラフ用の試料の調製に用いられている方法により行うことができ、例えば溶媒としてアセトンを用いる場合、ろ過は、アセトンに適用可能な高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）用ろ過フィルター、例えばＧＬサイエンス（株）製クロマトディスク等を用いて行うことができる。
【００１５】
（２）測定工程
測定には、特定のアセトニトリルを移動相とし、紫外吸光光度計を検出器とした液体クロマトグラフ法を使用する。
紫外吸光光度計の測定波長は２００〜２３０ｎｍであり、この範囲内の波長の吸収を測定することによって、前記工程（１）で得られた測定サンプル（濃度調整した抽出液）中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を求める。好ましくは２００〜２２０ｎｍ、最も好ましくは２１０ｎｍの吸収を測定する。
【００１６】
アセトニトリルは、純度９９．６％以上の高純度アセトニトリルを使用することを必須とする。アセトニトリルの純度は、好ましくは９９．７％以上、より好ましくは９９．８％以上である。このような条件を満たすアセトニトリルは、吸光度（Ａｂｓ）が、２００ｎｍで０．１以下、２１０ｎｍで０．０５以下、２２０ｎｍで０．０２以下、２３０ｎｍで０．０２以下、２４０〜４００ｎｍで０．０１以下であるため、本発明の移動相として好適である。
さらに、アセトニトリルとしては、密度（２０℃）０．７８０〜０．７８４ｇ／ｍＬ、屈折率１．３４３〜１．３４６、水分０．０５質量％以下、不揮発性物質０．００１質量％以下、酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ酢酸として）０．００１質量％以下、過酸化物（Ｈ２Ｏ２として）５ｐｐｍ以下のものを使用することが好ましい。これにより、吸光度がさらに低くなり、移動相としてさらに好ましいものとなる。
このような高純度アセトニトリルは、市販の液体クロマトグラフ用のアセトニトリルを、蒸留、活性炭等による有機物の除去、モレキュラーシーブ（関東化学）等による脱水等の方法で処理することによって得ることができる。
また、市販品のアセトニトリルでは  関東化学社製アセトニトリル（グラジエント溶出用）などが前記条件を満足する。
なお、通常、液体クロマトグラフに使用されるアセトニトリルの純度（９９．５％程度）では、本発明の測定波長である２００〜２３０ｎｍ領域の吸収ピークを阻害するため、使用できない。また、他の移動相でも、本発明の精度は得られない。
【００１７】
紫外吸光光度計としては、２００〜２３０ｎｍの波長を測定できるものであれば特に制限なく使用することができ、例えば島津製作所製紫外分光光度計検出器ＳＰＤ−１０Ａなどがあげられる。
カラムとしては、逆相系を用いることが好ましい。カラムの口径は１〜８ｍｍが好ましく、４〜６ｍｍがより好ましい。カラムの長さは１〜３０ｃｍが好ましく、１５〜２５ｃｍがより好ましい。カラムの充填剤は、平均粒子径が２．５〜１５μｍであることが好ましく、３〜５μｍがより好ましい。充填剤の比表面積は１００〜４００ｍ２／ｇが好ましい。ポアサイズは６〜３０ｎｍが好ましい。
【００１８】
測定工程においては、濃度既知の標準メタクリル酸アルキルエステルの溶液を用い、濃度によるピーク面積を測定して、濃度とピーク面積との関係を示す検量線を作成するための測定と、測定サンプルの測定とを行う。
検量線用の標準メタクリル酸アルキルエステル（標準物質）は、定量試料に原料（モノマー）として用いられているメタクリル酸アルキルエステルのアルキル基のいずれかと同じアルキル鎖長のものを使用してもよく、その平均鎖長のものを使用することもできる。また、他の鎖長の標準物質を使用してもよいが、炭素数が１〜３０のものが好適である。入手の容易性から、メタクリル酸ステアリルもしくはメタクリル酸ドデシルが好ましい。
【００１９】
（３）算出
ついで、上記工程（２）で得られた標準物質及び測定サンプルの吸収ピーク面積のデータをもとに、検量線法により、定量試料中のメタクリル酸アルキルエステルの濃度を算出する。
【００２０】
定量試料中のメタクリル酸アルキルエステルの濃度は、例えば以下の式により求めることができる。
Ｍ（％：質量％）＝（Ｍｓ／Ｍｔ）×（Ａｔ／Ａｓ）×１００
なお、上記式中、各略号は以下の意味を有する。
Ｍ：定量試料中のメタクリル酸アルキルエステル含量（質量％）
Ｍｓ：標準物質溶液濃度（メタクリル酸アルキルエステルｇ／溶媒ｍＬ）
Ｍｔ：定量試料の希釈濃度（定量試料量ｇ／抽出溶媒ｍＬ）
Ａｓ：標準物質溶液のピーク面積
Ａｔ：希釈した抽出液（測定サンプル）のピーク面積
【００２１】
本発明の定量方法によれば、従来困難であったアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルを精度良く定量することができ、例えば、０．１ｐｐｍといった低濃度のメタクリル酸アルキルエステルの定量が可能となる。そのため、医薬外用製剤として安全に使用可能なアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を、容易に選定することが可能である。さらに、メタクリル酸アルキルエステル量を厳格に制限する必要がある医薬外用製剤の品質管理にも好適に利用することができる。
【００２２】
≪医薬外用製剤用アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体≫
本発明の医薬外用製剤用アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体は、前記定量方法により定量されるメタクリル酸アルキルエステルの含量が０．１質量％以下であることを特徴とするものである。前記定量方法により定量される含量が０．１質量％以下であることにより、医薬外用製剤に用いた際に、傷などの患部に強い刺激感を与えたり、症状を悪化させることがない。
メタクリル酸アルキルエステルの含量は、より好ましくは０．０５質量％以下であり、最も好ましくは０である。
【００２３】
本発明の医薬外用製剤用アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体は、０．２％水溶液、ｐＨ７．０〜７．５としたときの粘度（２０℃）が１０００〜５００００ｍＰａ・ｓであることが好ましく、５０００〜３５０００ｍＰａ・ｓであることが更に好ましい。これにより、患部に塗布しやすい製剤を調製可能となる。
また、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体において、アクリル酸の含量は、４０〜７０質量％が好ましく、５０〜６５質量％がより好ましい。これにより、患部に塗布しやすい製剤を調製可能となる。
また、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体のアルキル基としては、直鎖状でも、分岐状でも、環状でもよい。アルキル基の炭素数は８〜３６が好ましく、１０〜３０がより好ましい。これは、アルキル基の炭素数が少ないほど、皮膚上の塩分と反応して、あれ（よれ）を発生し、ゲルを保てなくなる傾向があるためで、より炭素数が大きい方が好ましい。
【００２４】
≪試験方法≫
本発明の試験方法は、下記（１）〜（４）の工程を有することを特徴とする。
（１）アクリル酸メタクリル酸アルキルエステル共重合体中に含まれるメタクリル酸アルキルを溶媒を用いて抽出する工程（分離工程）
（２）純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相として用い、２００〜２３０ｎｍの範囲内の波長の吸収を測定する液体クロマトグラフ法により、前記工程（１）で得られた抽出液中のメタクリル酸アルキルエステルの吸収ピーク面積を測定する工程（測定工程）
（３）前記工程（２）で測定した吸収ピーク面積から、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量を算出する工程（算出工程）
（４）前記工程（３）で得られたメタクリル酸アルキルエステルの含量について、適正基準値を０．１質量％以下に設定し、当該含量が適正基準値以下のアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を医薬外用製剤用として適正と評価する工程（評価工程）
【００２５】
（１）〜（３）の工程は、前記本発明の定量方法における工程（１）〜（３）と同様にして行うことができる。
【００２６】
（４）評価工程
次いで、上記工程（３）で算出した、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体中のメタクリル酸アルキルエステルの含量の適正基準値（上限値）を設定し、それ以下の含量の場合に医薬外用製剤用に適当と判断する。
適正基準値は、皮膚への刺激を考慮して、０．１質量％以下に設定する。より好ましくは０．０５質量％以下に設定する。
メタクリル酸アルキルエステルの含量がこの適正基準値以下であると、医薬外用製剤へのアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の配合量を、例えば、ゲル化剤として通常配合される量である２．０質量％以下の値とした場合に、医薬外用製剤組成物中のメタクリル酸アルキルエステル量が０．００２質量％（２００ｐｐｍ）以下となる。メタクリル酸アルキルエステル量がこのような値であれば、皮膚への刺激がほとんど生じない。
【００２７】
≪医薬外用製剤組成物≫
本発明の医薬外用製剤組成物は、薬物と、前記試験方法により適正と評価されたアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体とを含有するものである。このような医薬製剤組成物を用いた医薬外用製剤は、傷等に対する薬物による刺激が助長されず、安全なものである。
【００２８】
医薬外用製剤組成物中、前記アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体の配合量は、上限値としては、傷等に対する刺激性を考慮すると、２．０質量％以下が好ましく、１．０質量％以下がより好ましい。また、下限値としては、０を越える量であれば、充分にゲル化効果を発揮でき、より好ましくは０．５質量％以上である。
すなわち、医薬外用製剤組成物中に含まれるメタクリル酸アルキルエステルの量は、０〜０．００２質量％（０〜２００ｐｐｍ）であることが好ましく、０〜０．００１質量％（０〜１００ｐｐｍ）であることがより好ましい。
【００２９】
薬物としては、特に制限はなく、例えば、
（１）抗炎症剤：トルフェナム酸、メフェナム酸、フルフェナム酸、サリチル酸、サリチル酸メチル、サリチル酸グリコール、サリチル酸ナトリウム、アスピリン、サザピリン、アルクロフェナク、スプロフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、フェンブフェン、グリチルレチン酸、インドメタシン、アセメタシン、メチアジン酸、プロチジン酸、スリンダク、プラノプロフェン、フェンチアザク、ジフルニサル、チアプロフェン酸、オキサプロジン、ジクロフェナックナトリウム、オキシフェンブタゾン、ピロキシカム、フェルビナク、ブフェキサマク、サリチル酸グリコール、フェナセチンフェニルブタゾン、トルメチンナトリウム等
（２）抗ヒスタミン剤：ジフェンヒドラミンおよびその塩、クロルフェニラミンおよびその塩等
（３）局所麻酔剤：アミノ安息香酸エチル、リドカインおよびその塩、ジブカインおよびその塩等
（４）血行促進剤：、カプサイシン、トウガラシ、酢酸トフェロール等
（５）殺菌剤：アクリノール、イソプロピルメチルフェノール、塩酸クロルヘキシジン、グルコン酸クロルヘキシジン、フェノール、レゾルシン、イオウ等
（６）抗菌剤：スルファジアジン、スルフイソミジン、ホモスルファミン等のサルファ剤等
（７）抗真菌剤：硝酸ミコナゾール、硝酸エコナゾール、シクロピロックス、オラミン、クロトリマゾール、ピロルニトリン等
（８）鎮痛剤：サリチル酸メチル、アスピリン、アミノピリン、アセトアミノフェン、エテンザミド等
（９）角質軟化剤：尿素等
（１０）ビタミン類：アスコルビン酸、塩酸ピリドキシン等の水溶性ビタミン類、トコフェロール、酢酸トコフェロール、パルミチン酸、レチノール、ビタミンＡ油等の油溶性ビタミン類等
（１１）ムコ多糖類：ヘパリン類似物質やコンドロイチン硫酸ナトリム等
（１２）酸性アミノ酸：グリシン、アラニン等の中性アミノ酸、トリプトファン、フェニルアラニン等の芳香性アミノ酸、ヒスチジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等
などがあげられる。これらは１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
薬物の配合量は、各々の薬物の有効量を考慮して設定されるが、通常、組成物中、０．０１〜２０質量％の範囲で設定される。
【００３０】
本発明の医薬外用製剤組成物には、上記アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体および薬物の他に、必要に応じて、他の任意成分を、本発明の効果を損なわない範囲において適宜配合することができる。
他の任意成分としては、例えば以下のような、医薬外用剤に通常使用される各種の成分が配合できる。
【００３１】
（１）油性成分
流動パラフィン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類、メチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキン、ジメチルシクロポリシロキサン等のシリコン油類、ミツロウ等のロウ類、オレイン酸オクチルドデシル、オレイン酸オレイル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル等の脂肪酸エステル類、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム等の金属石鹸類、オレイン酸オクチルドデシル、オレイン酸オレイル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、アジピン酸ジイソプロピル、オレイン酸イソプロピル、グリセリンモノオレイン酸エステルグリセリン、ジオレイン酸エステル、オレイン酸オクチルドデシル、オレイン酸オレイル等の脂肪酸エステル類、ラウリルアルコール、セチルアルコール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ベヘニルアルコール、エイコソニルアルコール、エライジルアルコール、リノレイルアルコールなどの直鎖脂肪アルコール、コレステロール、ジヒドロコレステロール、フィトステロール、ラノリンアルコール等の環状脂肪アルコール、オクチルドデカノール、ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール等の合成脂肪アルコール等の脂肪アルコール類、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸等の飽和脂肪酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、ウンデシレン酸等の不飽和脂肪酸等の脂肪酸類等が挙げられる。これらは、１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
油性成分を配合することにより、皮膚への塗布及びなじみが良好となる。
医薬外用製剤組成物中における油性成分の配合量は、組成物全体の０．０５〜５０質量％が好ましく、０．１〜３０質量％がより好ましい。
【００３２】
（２）低級アルコール
低級アルコールとしては、下記一般式：
Ｒ−ＯＨ
［式中、Ｒは低級アルキル基を表す。］
で表されるもの、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール等、及びそれらを変性させた各種変性アルコール（メタノール、ゲラニオール、八アセチルしょ糖、１０質量％安息香酸デナトリウムアルコール溶液等の変性アルコール）等が挙げられる。これらは、１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
Ｒの低級アルキル基の炭素数は１〜６が好ましく、１〜３がより好ましい。
低級アルコールを配合することにより、皮膚への塗布及びなじみが良好となる。また、低級アルコールにより、油溶性成分が配合しやすくなる。
医薬外用製剤組成物中における低級アルコールの配合量は、組成物全体の５〜８０質量％が好ましく、１０〜７０質量％がより好ましく、２０〜６０質量％がさらに好ましい。
【００３３】
（３）多価アルコール
エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ジブチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリンや、ショ糖、乳糖、マルトース、マンニトール、エリスリトール、キシリトール等の糖類及び糖アルコール等が挙げられる。これらは、１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
多価アルコールを配合することにより、皮膚への塗布及びなじみが良好となる。
医薬外用製剤組成物中における多価アルコールの配合量は、組成物全体の５〜８０質量％が好ましく、１０〜７０質量％がより好ましく、２０〜６０質量％がさらに好ましい。
【００３４】
（４）界面活性剤
アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、ノニオン界面活性剤、両性界面活性剤のいずれも使用できるが、ノニオン界面活性剤、両性界面活性剤が好ましい。
ノニオン界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリプロピレンアルキルエーテル等のエーテル系化合物、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等のエステル系化合物、ポリオキシエチレンヒマシ油・硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン重合体等が挙げられる。
両性界面活性剤としては、ラウリルジメチルベタインなどのアルキルベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタインなどのアルキルアミドベタイン、アルキルスルホベタイン、イミダゾリン等が挙げられる。
アニオン界面活性剤としては、飽和高級脂肪酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキルエーテルスルホン酸塩、アルキルエーテルスルホン酸塩等が挙げられる。
カチオン界面活性剤としては、塩化トリメチルアルキルアンモニウムなどの４級アンモニウム塩、ジメチルアルキルアミン塩酸塩などのアルキルアミン塩等が挙げられる。
これらは、１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
界面活性剤を配合することにより、皮膚への塗布及びなじみが良好となる。また、界面活性剤により、油溶性成分が配合しやすくなる。
医薬外用製剤組成物中における界面活性剤の配合量は、組成物全体の０．０１〜１０質量％が好ましく、０．０５〜５質量％がより好ましい。
【００３５】
（５）水溶性高分子
カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルメロース、クロスカルメロース、メチルセルロース等のセルロース誘導体、部分α化澱粉などの加工澱粉、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、クロスポピドン、ポリエチレングリコール、キサンタンガム、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、グアーガム、ローカストビーンガム、プルラン、ゼラチン、ポリアクリル酸ナトリウム等が挙げられる。これらは、単独または２種類以上組み合わせて用いることができる。
水溶性高分子を配合することにより、皮膚への塗布及びなじみが良好となる。
医薬外用製剤組成物中における水溶性高分子の配合量は、製剤の設定粘度により適宜選択されるが、組成物全体の０．０１〜５質量％が好ましく、０．０５〜２質量％がより好ましい。
【００３６】
（６）ｐＨ調整剤
ｐＨ調整剤としては、塩酸、リン酸、ホウ酸等の無機酸、乳酸、酒石酸、クエン酸等の有機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン、トリイソプロパノルールアミン等の各種アミン類、リン酸水素カリウム、リン酸水素ナトリム等のリン酸塩、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム等の有機塩類などがあげられる。ジイソプロパノールアミン及びトリイソプロパノールアミンは、特に酸性薬物を使用した場合のｐＨ安定性が良好であるため、好ましい。これらは、１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
ｐＨ調整剤の量は、設定ｐＨにより適宜選択することができ、本発明の医薬外用製剤組成物のｐＨは、皮膚に対する刺激性等を考慮すると、好ましくは３〜８、より好ましくは４〜７に調整される。
【００３７】
（７）粉体
タルク、カオリン、ベントナイト及びケイ酸アルミニウムマグネシウム等の層状珪酸塩鉱物、酸化チタン、酸化亜鉛等の無機粉体；及びナイロン、シリカ、ポリメタクリル酸メチル等の球状粉体、ポリエチレンビーズ、セルロース粉末、スターチ等の有機粉体等が挙げられる。
（８）キレート剤
エデト酸類、ピロリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、グルコン酸塩等が挙げられる。
（９）色素
酸性染料、塩基性染料、酸化染料などを任意に使用可能である。
（１０）香料
ペパーミント油、スペアミント油、ハッカ油、ユーカリ油、ジャスミン油、ラベンダー油、レモン油、オレンジ油、ライム油、マンダリン油、ローズ油、ローズマリー油などの植物性香料、モノテルペン類、ジテルペン類、セスキテルペン類等の合成香料があげられる。具体的には、メント−ル、ボルネオール、ゲラニオール、リナロール、シトロネロール、ネロール、リモネン、ピネン、カンフェン、シトラール、シトロネラール、シネオール、クルクメン、ヒノキ酸、ヒノキオール、フィト−ル等が挙げられる。
（１１）防腐剤
ジブチルヒドロキシトルエン、安息香酸類、パラベン類、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ソルビン酸及びその塩類、デヒドロ酢酸及びその塩類、ホウ酸、ホウ砂、サリチル酸及びその塩類等が挙げられる。
これらは、それぞれ、１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
これら（７）〜（１１）の成分の配合量は、それぞれ、組成物全体の０．０１〜５０質量％が好ましく、０．０２〜３０質量％がより好ましく、０．０５〜１０質量％がより好ましい。
【００３８】
（１２）清涼化剤
ｌ−メントール、メントール誘導体、カンフル、ハッカ油、ユーカリ油、ケイヒ油、ボルネオール、ウイキョウ油、ミント等が挙げられる。好ましくはｌ−メントール、ハッカ油、カンフルである。これらは、１種または２種類以上組み合わせて用いることができる。
医薬外用製剤組成物中における清涼化剤の配合量は、組成物全体の０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜５質量％がより好ましい。
【００３９】
＜医薬外用製剤＞
本発明の医薬外用製剤組成物は、精製水、常水等の水を加えて、液状、ジェル状、乳液状、クリーム状等の医薬外用製剤として使用される。
医薬外用製剤中、水の配合量は、医薬製剤全体の３０〜７５質量％が好ましく、３５〜６０質量％がより好ましい。配合量をこの範囲内とすることにより、ゲルの硬さが適度なものとなり、例えば外用剤として用いる場合に、取り扱いやすい、塗布しやすい、肌になじみやすい等の利点がある。
医薬外用製剤としては、例えば、皮膚外用剤、粘膜外用剤等が挙げられる。医薬外用製剤の形態としては、液剤、ジェル剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、貼付剤などが挙げられる。
医薬外用製剤のｐＨは、皮膚に対する刺激性等を考慮すると、３〜８が好ましく、４〜７がより好ましい。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を示して本発明をより詳細に説明する。
実験１「メタクリル酸ステアリルを使用した、液体クロマトグラフにおける移動相の検討」
メタクリル酸ステアリル０．１質量％のアセトニトリル溶液（純度９５．０％、９９．５％、９９．８％）、メタノール溶液（純度９９．５％、９９．７％、９９．８％）、アセトン溶液（純度９９．５％、９９．７％、９９．８％）を用意し、以下の条件の液体クロマトグラフにより波長２００〜２３０ｎｍの吸収を測定した。
（測定条件）
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
カラム：関東化学製Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ  ＲＰ−１８（５μｍ，４．６×１５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
移動相：表１の移動相
流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
面積の測定範囲：溶媒ピークの後からメタクリル酸ステアリルの保持時間の約３倍の範囲
【００４１】
得られたメタクリル酸ステアリルのピークの明瞭性とピーク面積の精度（６回測定した相対標準偏差（又は変動係数））を、下記の基準で評価した。その結果を表１に示す。なお、明瞭なピークが得られなかったものについては、精度の評価は行わなかった。
なお、上記クロマトグラフ条件では、メタクリル酸ステアリルの保持時間は、約１１分であった。
（評価基準）
＜ピーク＞  ○：明瞭な単一ピーク
△：やや不明瞭なピーク
×：ピークなし、又は不明瞭ピーク
＜精度＞    ○：相対標準偏差１．５以下
△：相対標準偏差１．５〜３．０
×：相対標準偏差３．０以上
【００４２】
【表１】
2005181137.tif 000002
【００４３】
上記結果より、移動相として純度９９．６％以上のアセトニトリルを使用した場合にのみ、メタクリル酸アルキルエステルの定量を、明瞭な吸収ピークで、ピーク面積の精度良く行うことができることがわかった。
【００４４】
次に、メタクリル酸ステアリルのアセトニトリル溶液（純度９５．０％、９９．５％、９９．８％）について、メタクリル酸ステアリルの濃度を、０．００５質量％、０．０１質量％、０．０５質量％、０．１質量％、０．２質量％と変化させ、各種濃度におけるピーク面積の相対標準偏差（３回測定、単位：％）を求めた。その結果を表２に示す。
下記結果より、純度９９．８％のアセトニトリルを使用した場合、非常に優れた精度で定量できたことがわかった。
【００４５】
【表２】
2005181137.tif 000003
【００４６】
実験２「アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体からのメタクリル酸アルキルエステルの分離条件の検討」
市販のアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体（Ｎｏｖｅｏｎ社製「カーボポール１３８２」）、及び標準メタクリル酸アルキルエステルとしてメタクリル酸ドデシルを使用して、下記の手順で、本発明の定量方法においてアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体からメタクリル酸アルキルエステルを分離する際の条件の検討を行った。
まず、抽出溶媒として、アセトン、ヘキサン、酢酸エチル、シクロヘキサン、アセトニトリルを用いて抽出効率を比較した。
これらの抽出溶媒を用いて、以下の（１）、（２）の方法で抽出を行い、それぞれ２種の試料（１）、（２）を得た。
（１）アクリル酸・メタクリル酸アルキル０．５ｇを精密に量り、抽出溶媒１０ｍＬを加え、室温で１０分間放置した後、この上澄み液をとり、試料（１）（１回抽出）とした。
（２）アクリル酸・メタクリル酸アルキル０．５ｇを精密に量り、抽出溶媒１０ｍＬを加え、室温で１０分間放置し、上澄み液Ａを得た。その残さに、さらに抽出溶媒１０ｍＬを加え、室温で１０分間放置し、上澄み液Ｂを得た。上澄み液Ａと上澄み液Ｂとをあわせたものを試料（２）（２回抽出）とした。
【００４７】
また、抽出溶媒としてアセトンを用い、下記（３）の方法で抽出を行い、得られた試料（３）を、抽出効率を算出する基準として用いた。
（３）アクリル酸・メタクリル酸アルキル０．５ｇを精密に量り、アセトン１０ｍＬを加え、室温で１０分間放置し、上澄み液Ｃを得た。その残さに、さらにアセトン１０ｍＬを加え、室温で１０分間放置し、上澄み液Ｄを得た。その残さに、さらにアセトン１０ｍＬを加え、室温で１０分間放置し、上澄み液Ｅを得た。上澄み液Ｃと上澄み液Ｄと上澄み液Ｅとをあわせたものを試料（３）（３回抽出）とした。
【００４８】
これらの試料（１）〜（３）にそれぞれで用いた抽出溶媒を加えて正確に５０ｍＬとした後、液体クロマトグラフ用フィルター（０．４５μｍ）を用いてろ過したものを試料溶液（１）〜（３）とし、実験１で用いたのと同じ条件で、移動相として純度９９．８％のアセトニトリルを用いて、定量した。
そして、試料溶液（３）の濃度を基準（抽出効率１００％）として、それ以外の試料溶液の抽出効率を求めた。その結果を表３に示す。
下記の通り、抽出効率は、試料（３）を１００％とすると、アセトン以外の溶媒は５０％以下であり、アセトンの抽出効率が優れていることがわかった。
なお、アセトンで抽出された物質は、高速液体クロマトグラフィーによって多波長検出器を用い、標準メタクリル酸アルキルとの比較によって、メタクリル酸アルキルであると同定された。
【００４９】
【表３】
2005181137.tif 000004
【００５０】
実施例１、比較例１〜３
定量試料として、市販品アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステルであるＮｏｖｅｏｎ社製カーボポール１３８２（Ｌｏｔ．０７１ＣＫ２２９）を用い、以下の手順で、定量試料に含まれるメタクリル酸アルキルエステルの定量を行った。
まず、定量試料０．５ｇを精密に量り、アセトン２０ｍＬを加えた。室温で１０分間放置した。この上澄み液全量をとり、アセトンを加えて正確に２５ｍＬとした後、液体クロマトグラフ用フィルター（ＨＰＬＣ用ろ過フィルター  クロマトディスク（タイプ：２５Ｎ，孔径：０．４５μｍ）、ＧＬサイエンス（株）製）を用いてろ過したものを試料溶液とした。
別途に、標準メタクリル酸ステアリル（東京化成工業社製：純度９５％以上）０．０１ｇを精密に量り、アセトンを加えて正確に５０ｍＬとした。この液１０ｍＬを正確に量り、アセトンを加えて正確に５０ｍＬとした。さらに、この液１０ｍＬを正確に量り、アセトンを加えて正確に２０ｍＬとしたものを標準溶液とした。
【００５１】
試料溶液及び標準溶液２０μＬにつき、以下に記したシステム条件で液体クロマトグラフ法による測定を行い、ピーク面積を自動積分法により求めた。
なお、このシステム条件は、予め、下記のシステム条件適合性試験において、メタクリル酸アルキルエステルの定量に適合することを確認した。
（システム条件）
・検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２１０ｎｍ）
・カラム：関東化学製Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ  ＲＰ−１８（内径４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリカゲルを充てんしたもの）
・カラム温度：４０℃
・移動相：アセトニトリル（密度（２０℃）０．７８０〜０．７８４ｇ／ｍＬ、屈折率１．３４３〜１．３４６、水分０．０５質量％以下、不揮発性物質０．００１質量％以下、酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ酢酸として）０．００１質量％以下、過酸化物（Ｈ２Ｏ２として）５ｐｐｍ以下
・流量：メタクリル酸ステアリルの保持時間が約１０分になるように調整
・面積の測定範囲：溶媒ピークの後からメタクリル酸ステアリルの保持時間の約３倍の範囲
【００５２】
（システム条件適合性試験）
検出限界の確認：標準溶液１ｍＬを正確に量り、アセトンを加えて正確に１００ｍＬとした。この液２０μＬから得たメタクリル酸ステアリルのピーク面積が、標準溶液２０μＬから得たメタクリル酸ステアリルピーク面積の０．８〜１．２％になることを確認した。
分離性能の確認：標準メタクリル酸ステアリル、標準メタクリル酸ｎ−ドデシル各々０．０１ｇを精密に量り、アセトンを加えて５０ｍＬとした。この液１０ｍＬを量り、アセトンを加えて５０ｍＬとした。さらに、この液１０ｍＬを量り、アセトンを加えて２０ｍＬとした溶液２０μＬにつき、上記のシステム条件で操作したとき、標準メタクリル酸ｎ−ドデシル、メタクリル酸ステアリルの順に溶出し、完全に分離したことを確認した。なお、メタクリル酸ｎ−ドデシル、メタクリル酸ステアリルの保持時間は、それぞれ、約４分、約１１分であった。
システムの再現性：標準溶液２０μＬにつき、上記の条件で試験を６回繰り返したとき、メタクリル酸ステアリルのピーク面積の相対標準偏差が２．０％以下であることを確認した。
なお、本試験方法は、別に規定するもののほか、日局・通則および一般試験法を準用した。
【００５３】
次いで、上記で得られたピーク面積から、下記数式に従って、定量試料中のメタクリル酸アルキルエステルの濃度（メタクリル酸ステアリル（Ｃ１８）としての量）を算出した。
【００５４】
【数１】
2005181137.tif 000005
なお、上記式中、各略号は以下の意味を有する。
ＡＳ：標準溶液のメタクリル酸ステアリルのピーク面積
ＡＴ：試料溶液の溶媒を除いたピーク面積の合計
Ｗ：定量試料の質量（ｇ）
【００５５】
上記と同様の操作をさらに２回繰り返して、ピーク面積および濃度を求め、３回の測定の標準偏差を求めた。その結果を表４に示す。
【００５６】
実施例２
実施例１の抽出溶媒をヘキサンに変えて同様の操作を行った。その結果を表４に示す。
【００５７】
比較例１
比較例１として、実施例１の移動相を９９．８％メタノールに変えて同様の操作を行った。その結果を表４に示す。
【００５８】
比較例２
比較例２として、実施例１の移動相を９９．５％アセトニトリルに変えて同様の操作を行った。その結果を表４に示す。
【００５９】
【表４】
2005181137.tif 000006
【００６０】
上記のように、移動相として純度９９．６％以上のアセトニトリルを用いた実施例１，２では、定量試料中のメタクリル酸アルキルエステルを検出できた。
特に、アセトンを溶媒としてメタクリル酸アルキルエステルを抽出分離し、純度９９．６％以上のアセトニトリルを移動相とした液体クロマトグラフ法により定量を行った実施例１では、メタクリル酸アルキルエステルを非常に高い精度で定量できた。
【００６１】
試験例１「医薬製剤」
実施例１の方法に準じて定量されたメタクリル酸アルキルエステル含量がそれぞれ０．０１質量％、０．０７質量％、０．１３質量％であるアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体Ａ〜Ｃを使用して、表５〜７の組成の医薬外用製剤サンプル１〜１４を、以下の手順で調製した。
水、１，３−ブチレングリコールに、アクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体を添加し、撹拌、溶解後、薬物（ケトプロフェン、サリチル酸グリコール又はリドカイン）を溶解させたエタノール、イソプロパノール混合液を添加し、トリエタノールアミンでｐＨを調整して、医薬外用製剤（ジェル）サンプル１〜６を得た。
また、医薬外用製剤（クリーム）サンプル７〜１０、医薬外用製剤（貼付剤）サンプル１１〜１４を、各々、定法にしたがって製造した。
なお、表５〜７中の数値は質量％である。
また、表５〜７中、トリイソプロパノールアミン、ジイソプロパノールアミンはｐＨ調整剤であり、適量とは、表中に示したｐＨにする量である。
また、水の残量とは、各サンプルの総量を１００質量％とする量である。
【００６２】
調製した医薬外用製剤サンプル１〜１４について、下記の手順で、皮膚刺激性の評価を行った。
＜皮膚刺激性の評価＞
健常成人（２０〜６０歳）３０人に前腕内側にフィンチャンバー（発売元：大正製薬株式会社）を用いて、２４時間閉塞貼付（クローズドパッチ）した。
皮膚刺激性は貼付除去約１時間後及び２４時間後に皮膚症状の観察し、下記の６段階で評価し、た。「＋」以上の陽性反応が発現した被験者数を総被験者数で除し、その商を百分率で表したものを陽性率とした。その結果を表５〜７に併記する。
［判定基準］
反応なし・・・・・・・・・・・・・・・・・−
軽い紅斑・・・・・・・・・・・・・・・・・±
紅斑・・・・・・・・・・・・・・・・・・・＋
紅斑＋浮腫・・・・・・・・・・・・・・・・＋＋
紅斑＋浮腫＋丘疹、漿液性丘疹、小水疱・・・＋＋＋
大水疱・・・・・・・・・・・・・・・・・・＋＋＋＋
【００６３】
【表５】
2005181137.tif 000007
【００６４】
【表６】
2005181137.tif 000008
【００６５】
【表７】
2005181137.tif 000009
【００６６】
その結果、メタクリル酸アルキルエステル含量が０．１質量％を越えるアクリル酸・メタクリル酸アルキルエステル共重合体Ｃを用いたサンプル６以外の医薬外用製剤サンプルは、いずれも、貼付除去約２４時間後の陽性率が０％であり、皮膚刺激性の少ないものであった。