(57)【要約】      （修正有）【課題】生物学的に活性な医薬用ポリペプチドの継続的放出組成物の提供。【解決手段】ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）のＮ−アシル化誘導体を含む共重合体、並びに前記共重合体及びポリペプチドを含む組成物。前記ポリマーの遊離アミンの１ないし５０％はグルタリル基でアシル化され、５０ないし９９％はプロピオニル基でアシル化されており、前記ポリペプチドは、少なくとも一つの有効なイオン形成性アミンを含み、ここにおいて前記組成物中に存在する前記ポリペプチドの少なくとも５０重量パーセントは、前記ポリマーとイオン結合している。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）のＮ−アシル化誘導体を含む共重合体であって、ここにおいて前記ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）の遊離アミンの１ないし５０パーセントはグルタリル基でアシル化され、前記ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）の遊離アミンの５０ないし９９パーセントはプロピオニル基でアシル化され、そして、前記ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）のＮ−アシル化誘導体の末端モノマーは、次式：
【化１】
2005054194.tif 000013
（式中、Ｒ5はグルタリル基、プロピオニル基およびＨからなる群から選択され、
Ｒ6はグルタリル基、プロピオニル基およびＨからなる群から選択され、そして
Ｒ7はＣＯＨまたはＣＨ2ＯＨである）
の基である、前記共重合体。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連する出願との相互参照
本出願は、１９９５年６月６日に出願された出願番号第０８／４６８，９４７号の分割出願である、１９９７年９月９日に出願された同時系属中の出願、出願番号第０８／９２９，３６３号の連続した部分である。
【０００２】
発明の背景
ポリマー薬物放出系は、医薬用ポリペプチドの制御放出のために開発されてきた。例えば、ポリ（ＤＬ−乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸−グリコール酸）、及びポリ（ε−カプロラクトン）のような合成ポリエステルは、マイクロカプセル、薄膜、又は棒状物の形で、生物学的に活性なポリペプチドを放出するために使用されてきた。例えば、米国特許第４，７６７，６２８号、及び第４，６７５，１８９号並びにＰＣＴ出願公開ＷＯ９４／００１４８を参照されたい。
【０００３】
合成ポリマー鎖に加えて、天然のポリマー及びその誘導体も、酵素的分解によって解離される同様な継続放出組成物中の成分として使用されてきた。このような天然のポリマーの一つの例は、キチン質を基剤とするもの、即ちポリ（Ｎ−アセチルグルコサミン）である。然しながら、キチン質は水に不溶であるために、他に主として部分的に脱アセチル化されたキチン質、例えばキトサンを基剤とする可溶化された誘導体が試みられてきた。例えば、Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｐ．Ａ．等、Ｅｄｓ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｈｉｔｉｎ  ＆  Ｃｈｉｔｏｓａｎ（１９９２）を参照されたい。キトサンはある種の真菌中に見出すことができるが、生物分解性のキトサンの生産は、一般的に合成により行われる。Ｍｉｍａ等、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．２８：１９０９−１９１７（１９８３）を参照されたい。キトサンの合成誘導体もまた、ポリマーのｉｎ  ｖｉｖｏの生物学的特性を変更するために調製されてきた。Ｍｕｚｚａｒｅｌｌｉ等、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓ．２０７：１９９−２１４（１９８０）を参照されたい。
【０００４】
キチン質、並びにキチン質誘導体の使用は、多くの薬物放出系で提案されてきた。例えば欧州特許出願公開４８６，９５９、４８２，６４９、５２５，８１３Ａ１、及び５４４，０００Ａ１；並びに米国特許第５，２７１，９４５号を参照されたい。
［特許文献１］  欧州特許出願公開第４８６，９５９号明細書
［特許文献３］  欧州特許出願公開第４８２，６４９号明細書
［特許文献４］  欧州特許出願公開第５２５，８１３Ａ１号明細書
［特許文献５］  欧州特許出願公開第５４４，０００Ａ１号明細書
［特許文献６］  米国特許第５，２７１，９４５号明細書
［非特許文献１］  Ｓａｎｆｏｒｄ，Ｐ．Ａ．等、Ｅｄｓ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｈｉｔｉｎ  ＆  Ｃｈｉｔｏｓａｎ（１９９２）
［非特許文献２］  Ｍｉｍａ等、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．２８：１９０９−１９１７（１９８３）
［非特許文献３］  Ｍｕｚｚａｒｅｌｌｉ等、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓ．２０７：１９９−２１４（１９８０）
【０００５】
発明の概要
一つの側面において、本発明は、ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）のＮ−アシル化誘導体を含む共重合体を特徴とし、ここにおいてポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）の遊離アミンの１ないし５０パーセントは、第１のアシル基でアシル化され、第１のアシル基はＣＯＥ1であり、ここでＥ1は、Ｃ3-33カルボキシアルキル、Ｃ3-33カルボキシアルケニル、Ｃ7-39カルボキシアリールアルキル、及びＣ9-39カルボキシアリールアルケニルからなる群から選択され、そしてポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）の遊離アミンの５０ないし９９パーセントは、第２のアシル基でアシル化され、第２のアシル基はＣＯＥ2であり、ここでＥ2は、Ｃ1-30アルキル、Ｃ2-30アルケニル、Ｃ6-37アリールアルキル、及びＣ8-37アリールアルケニルからなる群から選択され、但し誘導体の遊離アミンの少なくとも一つは第１のアシル基でアシル化されていることを条件とする。
【０００６】
共重合体は、好ましくは約３，０００ないし９０，０００ダルトンの分子量を有する。他の好ましい態様において、ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）の９０パーセントを超える遊離アミンが、第１のアシル基又は第２のアシル基のいずれかでアシル化される。好ましくは、ポリ（２−アミノ−２−デオキシ−Ｄ−グルコース）の遊離アミンの１０ないし３０パーセントが、第１のアシル基でアシル化される。誘導体の遊離ヒドロキシ基の一部（例えば、１ないし３０パーセント）は、第１のアシル基又は第２のアシル基のいずれかでアシル化することができる。
【０００７】
好ましい態様において、共重合体は、以下の式：
【０００８】
【化１】
2005054194.tif 000002
【０００９】
［式中：
Ｒ1は、それぞれの個々の繰り返し単位において、第１のアシル基、第２のアシル基、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ2は、それぞれの個々の繰り返し単位において、第１のアシル基、第２のアシル基、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ3は、それぞれの個々の繰り返し単位において、第１のアシル基、第２のアシル基、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ4は、第１のアシル基、第２のアシル基、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ5は、第１のアシル基、第２のアシル基、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ6は、第１のアシル基、第２のアシル基、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ7は、ＣＯＨ及びＣＨ2ＯＲ8からなる群から選択され；
Ｒ8は、第１のアシル基、第２のアシル基、及びＨからなる群から選択され；
ｎは、２ないし２００であり；そして
繰り返し単位の１ないし５０パーセントにおいて、Ｒ1は第１のアシル基であり、そして繰り返し単位の５０ないし９９パーセントにおいて、Ｒ1は第２のアシル基であり、但し少なくとも一つの繰り返し単位において、Ｒ1は第１のアシル基であることを条件とする。］
のものである。
【００１０】
ＣＯＥ1及びＣＯＥ2は、それぞれ−Ｃ＝Ｏ・Ｅ1及び−Ｃ＝Ｏ・Ｅ2を示す。置換基カルボキシアルキル、カルボキシアルケニル、カルボキシアリールアルキル、及びカルボキシアリールアルケニルは、１−４個のカルボン酸官能基を含むことができる。第１のアシル基の例は、制約されるものではないが、スクシニル、２−（Ｃ1-30アルキル）スクシニル、２−（Ｃ2-30アルケニル）スクシニル、マレイル、フタリル、グルタリル、及びイタコニルを含む。第２のアシル基の例は、制約されるものではないが、アセチル、ベンゾイル、プロピオニル、及びフェニルアセチルを含む。
【００１１】
本発明は、更に上記の共重合体及びポリペプチドを含む組成物を特徴とし、ポリペプチドは、少なくとも一つの有効なイオン形成性アミン(ionogenic amine)を含み、ここにおいて組成物中に存在するポリペプチドの少なくとも５０重量パーセントは、ポリマーにイオン結合している。好ましくは、組成物は５ないし５０重量パーセントのポリペプチドを含む。
【００１２】
本発明の好ましい態様は、第１のアシル基が、スクシニルであり、そして第２のアシル基がアセチルであり、そしてＲ7が、ＣＯＨ又はＣＨ2ＯＨである共重合体；請求項１の前記共重合体およびＨ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2又は医薬的に受容可能なその塩を含み、ここにおいて二つのＣｙｓはジスルフィド結合によって結合し、ここで前記組成物中に存在するＨ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2又は医薬的に受容可能なその塩の少なくとも５０重量パーセントは、前記共重合体にイオン結合している組成物；前記共重合体及び：
【００１３】
【化２】
2005054194.tif 000003
【００１４】
からなる群から選択されるペプチド又は医薬的に受容可能なその塩を含み、ここで前記組成物中に存在する前記ペプチド及び医薬的に受容可能なその塩の少なくとも５０重量パーセントが前記共重合体とイオン結合している組成物；前記共重合体及び（ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2）、（［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｔｒｐ6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）6，Ａｚｇｌｙ10］−ＬＨＲＨ）、（［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｌｅｕ6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｔｒｐ6，ＭｅＬｅｕ7，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、及び（［Ｄ−Ｎａｌ6］−ＬＨＲＨ）からなる群から選択されるペプチド、又は医薬的に受容可能なその塩を含み、前記組成物中に存在する前記ペプチド又は医薬的に受容可能なその塩の少なくとの５０重量パーセントが前記共重合体とイオン結合している組成物；前記共重合体及び副甲状腺ホルモン、その類似体又は医薬的に受容可能なその塩を含み、ここで前記組成物中に存在する副甲状腺ホルモン、その類似体又は医薬的に受容可能なその塩の少なくとも５０重量パーセントが前記共重合体とイオン結合している組成物を含む。
【００１５】
本発明の更に好ましい態様は、第１のアシル基がグルタリルであり、そして第２のアシル基がプロピオニルでありそしてＲ7がＣＯＨ又はＣＨ2ＯＨである共重合体；前記共重合体及びＨ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2を含み、ここにおいて二つのＣｙｓはジスルフィド結合で結合し、ここで前記組成物中に存在するＨ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2の少なくとも５０重量パーセントは、前記共重合体とイオン結合している組成物；前記共重合体及び：
【００１６】
【化３】
2005054194.tif 000004
【００１７】
からなる群から選択されるペプチド又は医薬的に受容可能なその塩を含み、前記組成物中に存在する前記ペプチド又は医薬的に受容可能なその塩の少なくとも５０重量パーセントが前記共重合体とイオン結合している組成物；前記共重合体及び（ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2）、（［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｔｒｐ6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）6，Ａｚｇｌｙ10］−ＬＨＲＨ）、（［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｌｅｕ6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、（［Ｄ−Ｔｒｐ6，ＭｅＬｅｕ7，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、及び（［Ｄ−Ｎａｌ6］−ＬＨＲＨ）からなる群から選択されるペプチド、又は医薬的に受容可能なその塩を含み、前記組成物中に存在する前記ペプチド又は医薬的に受容可能なその塩の少なくとも５０重量パーセントが前記共重合体とイオン結合している組成物；並びに前記共重合体及び副甲状腺ホルモン、その類似体又は医薬的に受容可能なその塩を含み、ここで前記組成物中に存在する副甲状腺ホルモン、その類似体又は医薬的に受容可能なその塩の少なくとも５０重量パーセントが前記共重合体とイオン結合している組成物を含む。
【００１８】
適当なポリペプチドの例は、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン、ボンベシン、ガストリン放出ペプチド、カルシトニン、ブラジキニン、ガラニン（ｇａｌａｎｉｎ）、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、成長ホルモン（ＧＨ）、アミリン、タキキニン、セクリチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、エンケファロン、エンドセリン、カルシトニン遺伝子放出ペプチド（ＣＧＲＰ）、ニューロメジン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）、グルカゴン、ニューロテンシン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）、グルカゴン放出ペプチド（ＧＬＰ）、バソアクティブインテスティナルペプチド（ＶＩＰ）、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、モチリン、サブスタンスＰ、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、ＴＳＣ及び生物学的に活性なこれらの類似体を含む。本明細書中で使用される“生物学的に活性な類似体”の用語は、生理学的な又は治療的な活性を有する、天然に存在する、組み換え型の、及び合成の、ペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質を包含する。一般的に、この用語は、改変されていない、又は天然に存在するペプチド、タンパク質、又はポリペプチドのそれに対して、定量的に同様なアゴニスト又はアンタゴニスト効果を示すペプチド、タンパク質、又はポリペプチドの全ての断片及び誘導体、例えば天然の化合物中に存在する一つ又はそれ以上のアミノ酸残基が置換又は削除された、或いはＮ−又はＣ−末端残基が構造的に改変されたものを包含する。有効なイオン形成性アミンの用語は、共重合体中のカルボキシル基とイオン結合を形成することが可能な、ポリペプチド中に存在する遊離アミンを指す。
【００１９】
他のソマトスタチン類似体の例は、制約されるものではないが、上記に引用した参考文献中に開示されている、以下のソマトスタチン類似体を含む：
Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2酢酸塩（ソマツリン（ＳＯＭＡＴＵＬＩＮＥ）（商標）としてもまた知られる）、ここで二つのシステインは、ジスルフィド結合で結合している；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−β−Ｎａｌ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−β−Ｎａｌ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ；
Ｈ−Ｇｌｙ−Ｐｅｎ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ；
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｐｅｎ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ；
Ｈ−Ｐｈｅ−Ｐｅｎ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｅｎ−Ｔｈｒ−ＯＨ；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−オール；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｒｐ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ*−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ*−Ｔｈｒ−ＮＨ2（Ｌｙｓ*及びＡｓｐ*間にアミド架橋が形成されている）；
Ａｃ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｂｕ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｌ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨＥｔ；
Ａｃ−Ｌ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2−ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ（Ｍｅ）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ（Ｍｅ）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨＥｔ；
Ａｃ−ｈＡｒｇ（ＣＨ3，ヘキシル）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−ｈＡｒｇ（ヘキシル2）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨＥｔ；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2；
プロピオニル−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｄ−ｈＡｒｇ（ＣＨ2ＣＦ3）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｄ−ｈＡｒｇ（Ｅｔ）2−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−４−Ｃｌ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｄ−Ｃｙｓ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｂｍｐ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｂｍｐ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｂｍｐ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−ｐ−Ｃｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｂｍｐ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−β−Ｎａｌ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−β−Ｎａｌ−ＮＨ2；
Ｈ−ペンタフルオロ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−ペンタフルオロ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−β−Ｎａｌ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−β−Ｎａｌ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−ｐ−Ｃｌ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ａｃ−Ｄ−ｐ−Ｃｌ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ａｂｕ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−β−Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｎ−Ｍｅ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆ）−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ（Ｆ）−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−ｐ−Ｃｌ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｄ−Ａｌａ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｄ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｄ−Ａｌａ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｄ−Ａｌａ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｄ−Ａｂｕ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｔｙｒ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ｔ−４−ＡｃｈｘＡｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−ｔ−４−ＡｃｈｘＡｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ｔ−４−ＡｃｈｘＡｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−４−Ａｍｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−４−Ａｍｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ｔ−４−Ａｍｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−ＮＨ（ＣＨ2）4ＣＯ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−β−Ａｌａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｇｌｕ）−ＯＨ；
シクロ（Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ）；
シクロ（Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ）；
シクロ（Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ｆ）−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ（ＮＯ2）−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ（Ｂｒ）−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ（Ｉ）−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ｂｍｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ）−ＯＨ；
シクロ（Ｂｍｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ）−ＯＨ；
シクロ（Ｂｍｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｔｐｏ−Ｃｙｓ）−ＯＨ；
シクロ（Ｂｍｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−ＭｅＬｅｕ−Ｃｙｓ）−ＯＨ；
シクロ（Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ（５Ｆ）−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ（Ａｃ）−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−ＮＨ−（ＣＨ2）3−ＣＯ）；
シクロ（Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
シクロ（Ｏｒｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇａｂａ）；
Ｈ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＮＨ2；及び
Ｈ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ（Ｉ）−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＮＨ2。
【００２０】
二つの遊離チオール（例えば、Ｃｙｓ、Ｐｅｎ、又はＢｍｐ残基）がペプチド中に存在する場合は、これらの間にジスルフィド架橋が形成される；然しながら、ジスルフィド架橋は示されていない。
【００２１】
更に以下の式：
【００２２】
【化４】
2005054194.tif 000005
【００２３】
［式中：
Ａ1は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、β−Ｎａｌ、β−Ｐａｌ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、２，４−ジクロロ−Ｐｈｅ、ペンタフルオロ−Ｐｈｅ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ、又はｏ−Ｘ−ＰｈｅのＤ−若しくはＬ−異性体であり、ここにおいてＸは、ＣＨ3、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3又はＮＯ2であり；
Ａ2は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、β−Ｎａｌ、ピリジル−Ａｌａ、Ｔｒｐ、２，４−ジクロロ−Ｐｈｅ、ペンタフルオロ−Ｐｈｅ、ｏ−Ｘ−Ｐｈｅ、又はｐ−Ｘ−Ｐｈｅであり、ここにおいてＸは、ＣＨ3、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3又はＮＯ2であり；
Ａ3は、ピリジル−Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、β−Ｎａｌ、２，４−ジクロロ−Ｐｈｅ、ペンタフルオロ−Ｐｈｅ、ｏ−Ｘ−Ｐｈｅ、又はｐ−Ｘ−Ｐｈｅであり、ここにおいてＸは、ＣＨ3、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3又はＮＯ2であり；
Ａ6は、Ｖａｌ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、Ｔｈｒ、Ａｂｕ、又はＳｅｒであり；
Ａ7は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、β−Ｎａｌ、ピリジル−Ａｌａ、Ｔｒｐ、２，４−ジクロロ−Ｐｈｅ、ペンタフルオロ−Ｐｈｅ、ｏ−Ｘ−Ｐｈｅ、又はｐ−Ｘ−Ｐｈｅであり、ここにおいてＸは、ＣＨ3、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3又はＮＯ2であり；
Ａ8は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、β−Ｎａｌ、ピリジル−Ａｌａ、Ｔｒｐ、２，４−ジクロロ−Ｐｈｅ、ペンタフルオロ−Ｐｈｅ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ、又はｏ−Ｘ−ＰｈｅのＤ−若しくはＬ−異性体であり、ここにおいてＸは、ＣＨ3、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＯＨ、ＯＣＨ3又はＮＯ2であり；
それぞれのＲ1及びＲ2は、独立にＨ、低級アシル又は低級アルキルであり；そしてＲ3は、ＯＨ又はＮＨ2であり；但し、Ａ1及びＡ8の少なくとも一つ及びＡ2及びＡ7の一つは、芳香族アミノ酸でなければならないことを条件とし；そして更にＡ1、Ａ2、Ａ7及びＡ8が全て芳香族アミノ酸であることはできないことを条件とする。］
のソマトスタチンアゴニストも含まれる。
【００２４】
本発明の方法に使用される直鎖アゴニストの例は：
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−ｐ−クロロ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−ｐ−ＮＯ2−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｎａｌ−ｐ−クロロ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−ｐ−クロロ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−ＮＨ2；及び
Ｈ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｌａ−β−Ｄ−Ｎａｌ−ＮＨ2；
を含む。
【００２５】
所望する場合、一つ又はそれ以上の化学分子、例えば、糖誘導体、モノ又はポリ−ヒドロキシＣ2-12アルキル、モノ又はポリ−ヒドロキシＣ2-12アシル基、或いはピペラジン誘導体を、ソマトスタチンアゴニストに、例えば、そのＮ−末端アミノ酸に結合することができる。ＰＣＴ出願公開ＷＯ８８／０２７５６、欧州特許出願公開０  ３２９  ２９５、及びＰＣＴ出願公開ＷＯ９４／０４７５２を参照されたい。Ｎ−末端化学置換を含むソマトスタチンアゴニストの例は：
【００２６】
【化５】
2005054194.tif 000006
【００２７】
又は医薬的に受容可能なその塩である。
本発明の複合体又は組成物中に組み込むことができる特定のＬＨＲＨ類似体の例は、トリプトレリン（ＴＲＹＰＴＯＲＥＬＩＮ）（商標）（ｐ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ2）、ブセレリン（［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、デスロレリン（ｄｅｓｌｏｒｅｌｉｎ）（［Ｄ−Ｔｒｐ6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、フェルチレリン（ｆｅｒｔｉｒｅｌｉｎ）（［ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、ゴスレリン（ｇｏｓｒｅｌｉｎ）（［Ｄ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）6，Ａｚｇｌｙ10］−ＬＨＲＨ）、ヒストレリン（ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ）（［Ｄ−Ｈｉｓ（Ｂｚｌ）6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、ロイプロレリン（ｌｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎ）（［Ｄ−Ｌｅｕ6，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、ルトレリン（ｌｕｔｒｅｌｉｎ）（［Ｄ−Ｔｒｐ6，ＭｅＬｅｕ7，ｄｅｓ−Ｇｌｙ−ＮＨ210］−ＬＨＲＨ（１−９）ＮＨＥｔ）、ナファレリン（ｎａｆａｒｅｌｉｎ）（［Ｄ−Ｎａｌ6］−ＬＨＲＨ）及び医薬的に受容可能なその塩である。
【００２８】
組成物からのポリペプチドの放出は、組成物の化学構造を変化させることによって変更することができる。ポリマーの分子量を増加させることは、複合体からのペプチドの放出の速度を減少させるであろう。ポリマー中のカルボン酸基の数を増加することは、組成物にイオン結合するポリペプチドの量を増加させ、そして結果として複合体からのペプチドの放出量を増加するであろう。
【００２９】
ポリペプチドの放出は、（ａ）組成物を、弱酸の二価又は多価金属イオンの可溶性塩で処理する（例えば、カルシウム、鉄、マグネシウム、又は亜鉛）；（ｂ）粒子を、グリコリド共重合体又はシリコーン油で製造した薄い吸収性の層で、球、円筒又は平面状に被覆する；或いは（ｃ）組成物を、吸収性のグリコリド共重合体でマイクロカプセル化することによって更に調節することができる。一つの態様において、組成物は０．０１ないし２０重量パーセントの多価金属を含む。
【００３０】
ポリペプチドの選択によって、組成物は多くの疾患の治療に使用することができる。例えば、スマトスタチン、ボンベシン、ＧＲＰ、ＬＨＲＨ、及びその類似体は、各種の形態の癌を治療することが示されている。ＧＨ、ＧＲＦ、及びＧＨＲＰのような成長因子並びにその類似体は、青年期及び老年期の両方の成長を刺激することが示されている。カルシトニン、アミリン、ＰＴＨ、及びＰＴＨｒＰ、並びにその類似体は、骨粗鬆症及び他の骨の疾患を治療することが示されている。
【００３１】
組成物は、非経口投与、例えば筋肉内、皮下、硬膜内、又は腹膜内注射用に設計される。好ましくは、組成物は筋肉内に投与される。
本発明の組成物は、医薬的に受容可能なベヒクル（例えば、マンニトール又はポリソルベートのような担体物質を含む又は含まない水）との懸濁液として投与される、粉末又は微粒子の形であることができる。組成物は、更にトロカールを使用した非経口的な植え込み、例えば筋肉中の植え込みのための棒状物の形で形成することができる。
【００３２】
上記の疾病及び疾患の治療のための本発明の組成物の投与量は、投与の方法、患者の年齢及び体重及び治療される患者の状態によって変化し、そして最終的には立ち会う医師又は獣医師によって決定されるであろう。このような立ち会う医師又は獣医師によって決定されるような組成物の量を、本明細書中では“治療的に有効な量”と呼ぶ。
【００３３】
もう一つの側面において、本発明は、共重合体を合成する方法を特徴とし、方法は：キトサンを弱酸と反応させて、低分子量の多糖類を製造し；低分子量の多糖類の遊離アミンの１ないし５０パーセントを第１のアシル化剤と反応させ、この第１のアシル化剤は、Ｃ4−Ｃ34ポリカルボキシアルカン、Ｃ4−Ｃ34ポリカルボキシアルケン、Ｃ8−Ｃ40ポリカルボキシアリールアルカン、Ｃ10−Ｃ40ポリカルボキシアリールアルケン、又はそのアシル化誘導体からなる群から選択され；そして低分子量多糖類の遊離アミンの５０ないし１００パーセントを第２のアシル化剤と反応させ、この第２のアシル化剤は、Ｃ2-31モノカルボキシアルカン、Ｃ3-31モノカルボキシアルケン、Ｃ7-38モノカルボキシアリールアルカン、Ｃ9-35モノカルボキシアリールアルケン、又はそのアシル化誘導体からなる群から選択される工程を含む。低分子量多糖類の第１のアシル化剤及び第２のアシル化剤の両者との反応は、アミン測定剤（例えば、フルオレスカミン（ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ））により測定することができて、低分子量の多糖類の遊離アミンの１ないし５０パーセントが第１のアシル化剤でアシル化され、そして低分子量の多糖類の遊離アミンの５０ないし９９パーセントが第２のアシル化剤でアシル化されことを確実にする。例えば、Ｂａｉｌｅｙ，Ｐ．Ｄ．，Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ）（１９９０）；Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ，Ｈ，等、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．１２０：１０８−１１８（１９６７）；Ｓｔｅｉｎ，Ｓ，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．１５５：２０３−２１２（１９７３）を参照されたい。
【００３４】
キトサンを弱酸（例えば、亜硝酸）と反応させて、ポリマーを切断し、これによってその分子量を減少する（例えば、２，５００−８０，０００ダルトン）。好ましい態様において、第１のアシル化基及び第２のアシル化剤は、低分子量多糖類と連続的に、例えば第１のアシル化剤が、第２のアシル化剤が反応させられる前に反応させられるか、又は第２のアシル化剤が、第１のアシル化剤が反応させられる前に反応させられるのいずれか、或いは同時に反応させられる。遊離アミンのアシル化の結果として、低分子量多糖類の遊離ヒドロキシ基の一部もアシル化することができる。遊離ヒドロキシ基のアシル化の程度は、ｐＨ又はアシル化反応中に使用される溶媒若しくは試薬、或いは使用されるアシル化剤を変更することによって変化することができる。
【００３５】
アシル化誘導体の例は、制約されるものではないが、無水物及びＮ−アシル化複素環（例えば、イミダゾール及びピラゾール）を含む。Ｂｏｄａｎｓｋｙ等、Ｔｈｅ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，８７−１５０（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９８４）を参照されたい。試薬ポリカルボキシアルカン、ポリカルボキシアルケン、ポリカルボキシアリールアルカン、及びポリカルボキシアリールアルケン又はそのアシル化誘導体は、２−５個のカルボン酸官能基を含む反応物を含むか、或いはそれから得られる。置換基モノカルボキシアルカン、モノカルボキシアルケン、モノカルボキシアリールアルカン、及びモノカルボキシアリールアルケンは、１個のみのカルボン酸官能基を含む反応物を含むか、或いはそれから得られる。第１のアシル化剤の例は、制約されるものではないが、無水コハク酸、２−（Ｃ1-30アルキル）コハク酸無水物、２−（Ｃ2-30アルケニル）コハク酸無水物、無水マレイン酸、グルタル酸無水物、イタコン酸無水物、及び無水フタル酸を含む。第２のアシル化剤は、制約されるものではないが、無水酢酸、安息香酸無水物、Ｎ，Ｎ’−ジアセチル−３，５−ジメチルピラゾール、Ｎ，Ｎ’−ジアセチルイミダゾール、フェニル酢酸無水物、プロピオン酸無水物、及び酪酸無水物を含む。
【００３６】
なおもう一つの側面において、本発明は、組成物を合成する方法を特徴とし、この方法は：キトサンを、弱酸と反応させて、低分子量の多糖類を製造し；低分子多糖類の遊離アミノ基の１ないし５０パーセントを第１のアシル化剤と反応させ、この第１のアシル化剤は、Ｃ4−Ｃ34ポリカルボキシアルカン、Ｃ4−Ｃ34ポリカルボキシアルケン、Ｃ8−Ｃ40ポリカルボキシアリールアルカン、Ｃ10−Ｃ40ポリカルボキシアリールアルケン、又はそのアシル化誘導体からなる群から選択され；低分子量多糖類の遊離アミンの５０ないし１００パーセントを第２のアシル化剤と反応させ、この第２のアシル化剤は、Ｃ2-31モノカルボキシアルカン、Ｃ3-31モノカルボキシアルケン、Ｃ7-38モノカルボキシアリールアルカン、Ｃ9-35モノカルボキシアリールアルケン、又はそのアシル化誘導体からなる群から選択され；アシル化された低分子量多糖類を塩基で中和し；そして中和されたアシル化低分子量多糖類をポリペプチド塩と混合し、ここにおいてポリペプチド塩は、少なくとも一つのイオン形成性アミンを含んでいて、ポリペプチド−共重合体イオン結合複合体を形成する工程を含む。
【００３７】
中和工程は、好ましくは低分子多糖類を水に乳化可能又は可溶性にする。好ましい態様において、塩基は、無機塩基（例えば水酸化ナトリウム）である。ポリペプチド塩は、好ましくは弱酸の塩（例えば酢酸塩、乳酸塩又はクエン酸塩）である。イオン結合複合体は、得られた混合物の濾過又は遠心によって分離することができる。
【００３８】
本発明の複合体は、多相乳化を必要とする操作を使用する必要なしに、注射用微小球又は微粒子、及び植え込み用薄膜又は棒状物に容易に製造することができる。好ましくは微粒子は：（ａ）組成物を非プロトン性、水混和性有機溶媒中に溶解し；（ｂ）有機溶媒を水に混合し；そして（ｃ）微粒子を水から分離することによって製造される。好ましい態様において、有機溶媒は、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、及びジメチルエチレングリコールの群から選択される。
【００３９】
本発明の他の特徴及び利益は、詳細な説明及び特許請求の範囲から、明白となるであろう。
発明の詳しい説明
本発明の共重合体及び共重合体−ポリペプチドイオン結合複合体の合成及び使用は、充分に当業者の能力の範囲である。他に明示されない限り、本明細書中で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明の属する当業者によって通常了解されると同様な意味を有する。更に、本明細書中に記載されている全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参考文献として援用される。
【００４０】
当業者が、本明細書中の記載に基づいて、本発明をその最大限の範囲まで使用することができると信じられる。以下の特定な態様は、従って、単に例示として解釈されるべきで、そして開示されない部分を、いかなる意味ででも制約するものではない。
【実施例】
【００４１】
実施例１：キトサンの解重合
キトサン（Ｐｒｏｔａｎ，Ｉｎｃ．，Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ，ＮＨ）を、機械的撹拌機で一日間撹拌することによって、酢酸水溶液中に溶解する。窒素ガスを溶液を通して泡状で流し、その間亜硝酸ナトリウム水溶液を加える。半時間後、溶液を焼結ガラス漏斗を通して減圧下で濾過して、最初のキトサン溶液中に存在した不溶性粒子を除去する。濾過された溶液にＮａＯＨの水溶液を加え、そして溶液をメタノール中で激しく撹拌して、ポリマーを沈殿させる。次いで得られた沈殿物を濾過し、そして水及びメタノールで交互に５回洗浄する。次いで沈殿物を、真空オーブン中で６０℃で二日間乾燥する。解重合されたキトサンは、鎖の一端にアルデヒド基を含む。アルデヒド末端基は、ＮａＢＨ4との反応によって第一ヒドロキシル基に還元することができる。解重合産物は、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によって分析して、プルラン(Pullulan)標準品との比較で、その分子量及び分子量分布（ＭＷＤ）の両方を測定することができる。ＮＭＲ（核磁気共鳴）及びＩＲ（赤外）分析を解重合産物のＮ−アセチル化の量の測定に使用することができる。
【００４２】
実施例２：解重合キトサンの部分的スクシニル化
実施例１からの解重合されたキトサンを、０．１Ｍの酢酸水溶液に溶解する。この溶液に、メタノールを加え、続いてアセトン中の無水コハク酸溶液を加える。得られた溶液を、室温で２４時間撹拌する。スクシニル化の完了後、次いで溶液をアセトン水溶液中で沈殿させる。得られた沈殿物を、遠心により収集し、そしてメタノールで５回洗浄する。次いで沈殿物を０．５ＭのＫＯＨに溶解し、そして水に対してｐＨ７に透析する。次いで透析された溶液を減圧下で濃縮し、アセトン水溶液中で沈殿させ、そして真空オーブン中で６０℃で乾燥する。
【００４３】
各種の程度のスクシニル化を得るために、アシル化の進行に応じて、反応の程度を、アシル化されていないアミン基の数を分析することによってモニターすることができる。アシル化されていないアミン基の数は、反応混合物から抜き出した試料を、アミン検出剤（例えばフルオレスカミン）でクエンチすることによって測定することができる。存在するアミンの量は、共重合体に対する標準曲線を使用してスペクトロフォレチック的に（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃａｌｌｙ）測定することができる。従って、無水コハク酸は、所望するアシル化のパーセントが達成されるまで、追加として連続して加えることができる。精製された産物の正確なアシル化の程度は、1Ｈ  ＮＭＲスペクトル及び伝導度滴定を使用して測定することができる。
【００４４】
実施例３：Ｎ−スクシニル化キトサンのアセチル化
実施例２からの部分的にスクシニル化された試料を、０．１Ｍの酢酸水溶液に溶解する。この溶液に、次いでメタノール及び無水酢酸を加え、そして反応混合物を室温で一日中撹拌する。次いでこの溶液を、アセトン水溶液中で沈殿させる。得られた沈殿物を、遠心により収集し、そしてメタノールで５回洗浄する。次いで沈殿物を０．１ＮのＫＯＨに溶解し、そして水に対してｐＨ７に透析する。最終溶液を凍結乾燥して、最終産物を得る。アシル化の進行は、実施例２で論じたようにスペクトロフォレチック的に測定することができ、そして精製された産物の正確なアシル化の程度は、1Ｈ  ＮＭＲ分光及び伝導度滴定を使用して測定することができる。
【００４５】
実施例４：ポリ（Ｎ−アシル−Ｄ−グルコサミン）−ペプチドイオン結合複合体の調製
実施例３のＮ−スクシニル化キトサンカリウム塩を水に溶解する。ソマトスタチンポリペプチド類似体のソマツリン（商標）（Ｄ−Ｎａｌ−ｃ［Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ］Ｔｈｒ−ＮＨ2酢酸塩；Ｋｉｎｅｒｔｏｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ）の水溶液を、撹拌されたポリマーの溶液に加える。沈殿物が形成され、そして濾過し、そして真空オーブン中で４０℃で乾燥する。
【００４６】
得られたイオン結合複合体のポリペプチド含有量は、最初に加えたペプチドの量と、濾液及び洗浄溶液中に含まれる遊離の残留ペプチドの量との間の差によって決定することができる。得られたイオン結合複合体のペプチド含有量は、最初のＮ−スクシニル化キトサンの炭素／窒素比と、得られたイオン結合複合体のそれとを比較することによって決定することができる。ＧＰＣ分析を分子量及びＭＷＤの測定に使用することができ、示差走査熱量計（ＤＳＣ）を熱的特性に、そしてＮＭＲ及びＩＲを化学的同定のために使用することができる。
【００４７】
実施例５：キトサンの均質解重合
キトサン（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｄｏｒｓｅｔ，Ｅｎｇｌａｎｄ、高分子量、１０ｇ）を、Ｈｅｉｄｏｌｐｈの機械的混合機（モデルＲＺＲ２１０２、Ｋｅｌｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して約１４４ｒｐｍで撹拌された２Ｌのガラスビーカー中の、１Ｌの０．１Ｍの酢酸（酢酸９９．８％ｍｉｎ．、Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ  Ｈａｅｎ、商品番号３３２０９）水溶液に溶解した。溶解は約４時間内で完了した。最終の解重合されたキトサンの固有粘度、ηinhは、亜硝酸ナトリウムの濃度及び解重合に要した時間、ｔdepolyに従属することを示した（表１）。固有粘度、ηinhは、キャノン−フェンスケ型に基づくウッベローデ粘度計（Ｐｏｕｌｔｅｎ  Ｓｅｌｆｅ  ＆  Ｌｅｅ  ｌｔｄ．，５０番、４０℃の定数０．００３８９０（ｍｍ2／秒）／秒）を使用して、０．１Ｍ酢酸を溶液として測定した。
【００４８】
【表１】
2005054194.tif 000007
【００４９】
５−２０ｍｌの脱イオン（ＤＩ）水（量による）中の、亜硝酸ナトリウム（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．  Ｌｔｄ．，Ｇｉｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｄｏｒｓｅｔ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を、溶液に加えた。必要な解重合時間の後、溶液を焼結ガラス漏斗（２５−５０μ、Ａｃｅ  Ｇｌａｓｓ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｖｉｎｅｌａｎｄ，Ｎ．Ｊ．）を通してできるだけ早く濾過して、不溶性物質を除去した。濾過した溶液に、ＤＩ水中のＮａＯＨ（Ａｌｄｒｉｃｈ）（１００ｍｌ中の４．５ｇないし４００ｍｌ中の２０ｇの範囲）を加えて、ＮａＮＯ2の解重合作用をクエンチした。次いで溶液を激しく撹拌したメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、３００ｍｌ）中に加えて、ポリマーを沈殿させた。懸濁液を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＣ  ５Ｂ  ｐｌｕｓ遠心機を使用して、４，０００ｒｐｍで、４℃で３５分間遠心した。遠心後、上清をデカントして除去し、そして沈殿物を水／メタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級）混合物（１Ｌ、８０：２０）で洗浄した。懸濁液を前と同様に遠心し、上清を再度デカントして除去し、そして解重合したキトサンを、Ｅｄｗａｒｄｓ  Ｓｕｐｅｒ  Ｍｏｄｕｌｙｏ凍結乾燥器で一晩冷蔵した後、二日間で凍結乾燥した。解重合したキトサンを、真空オーブン（Ｂｉｏｂｌｏｃｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ、３０℃で−２２ｍｍＨｇ）中で更に一日間乾燥した。
【００５０】
実施例６：不均質解重合
キトサン（１８．０ｇ、前と同じ）及びＮａＮＯ2（前と同じ）を、１Ｌのガラスビーカーに加えた。トリフルオロ酢酸溶液（Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ  Ｈａｅｎ、６００ｍｌのＤＩ水中の２３ｍｌ、０．５Ｍ）をビーカーに加え、そして混合物をＨｅｉｄｏｌｐｈの機械的撹拌機（前と同じ）を使用して撹拌した。ＴＦＡ溶液の添加により、相当量の泡立ちが観察された。溶液を焼結ガラス漏斗（前と同じ）で濾過した。ＮａＯＨ溶液（１６５ｍｌのＤＩ水中の１３．３ｇ）を、濾過された溶液に加えた。次いで得られた溶液を激しく撹拌されたメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、３００ｍｌ）中に加えた。遠心及び洗浄を、均質解重合と同様に行った。表２に一連の解重合実験の結果を示す。
【００５１】
【表２】
2005054194.tif 000008
【００５２】
不均質法においては、溶解及び解重合は同時に起こるので、この方法をより早い方法にする。両方の方法は、同様な収率を与える（表１；７６．７％の収率で０．３３ＤＬ／ｇ、及び６９．１％の収率で０．３０ＤＬ／ｇ）が、しかし不均一な方法では、より多い量のキトサンを使用することができる；１０ｇに対して１８ｇ。０．２３−１．５１ＤＬ／ｇの範囲の固有粘度値を持つ乾燥した解重合されたキトサン試料（実施例５及び６から）を、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｐｉｎ  ４００  ＮＭＲ分光計を使用して、ＣＤ3ＣＯＯＤ水溶液中で13Ｃ  ＮＭＲによって分析した。炭素Ｃ1ないしＣ6の化学シフトを、表３に示す。特定の炭素の化学シフトは、固有粘度と共に増加する。
【００５３】
【表３】
2005054194.tif 000009
【００５４】
元素分析を、実施例５及び６からの解重合キトサン試料に対して行った（表４）。
【００５５】
【表４】
2005054194.tif 000010
【００５６】
アミノ含有率、即ちアミノ基を含むキトサン繰り返し単位の比率は、Ｇｕｍｍｏｗ及びＲｏｂｅｒｔ（Ｂｅｒｙｌ．Ｄ．Ｇｕｍｍｏｗ，Ｇｅｏｒｇｅ  Ａ．Ｆ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８６，１２３９−１２４４（１９８５）、この内容は本明細書中で援用される）によって概略示された方法に従って、酸性赤８８（アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）、染料含有率約７５％）を使用した異染性滴定によって得た。アミノ含有率の値は、表５に示す。
【００５７】
【表５】
2005054194.tif 000011
【００５８】
表４及び５中の一連の解重合キトサン試料の窒素％値及びアミノ含有率値から、ηinhの減少が、アミノ含有率の減少によって伴われ、解重合を伴なう脱アミノ化を示していることは明白である。
【００５９】
グルタリル化／プロピオニル化の計算
グルタリル化／プロピオニル化反応に必要なグルタル酸無水物及びプロピオン酸無水物の量は、二つの無水物間の所望するモル比、量及び使用される解重合キトサンのアミノ含有率に依存する。化学量論的なグルタリル化／プロピオニル化のための無水物の量の一般式をここに示す：
必要なグルタル酸無水物（ＧＡ）の量＝所望するＧＡ比率×キトサンの量×アミノ含有率×１１４．１*／１６１**
*式量（ＧＡ）
**１６１＝キトサンの繰り返し単位の式量
必要なプロピオン酸無水物（ＰＡ）の量＝所望するＰＡ比率×キトサンの量×アミノ含有率×１３０．１４***／１６１
***式量（ＰＡ）。
【００６０】
実施例７Ａ：解重合キトサンのグルタリル化／プロピオニル化
１．５１ＤＬ／ｇの固有粘度を持つ実施例５からの解重合されたキトサンを、０．１Ｍの酢酸（１５０ｍｌ中の４．０１ｇ）中に溶解した。この試料のアミノ含有率は、この時点では未知であったが、しかしこれは固有粘度０．９８ＤＬ／ｇの解重合されたキトサンの０．７４及びＡｌｄｒｉｃｈからの低分子量キトサンの０．７８（表５）の間であることを仮定することができる。アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、ＡＲ級、２９．９ｍｌ、２３．６２ｇ）中の、グルタル酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９５％、６．０ｇ）及びプロピオン酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９９＋％ｍ、６．０ｇ）溶液を、グルタル酸無水物の約５．７倍過剰、及びプロピオン酸無水物の約５．０倍過剰で、キトサン溶液に加え、そして一晩撹拌したままにした。本質的にゲル状である得られた溶液を、アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級、２００ｍｌ）中に注いで、沈殿を誘発した。分散物を４０００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。遠心後、上清をメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、６００ｍｌ）で洗浄し、そして前と同様に遠心した。上清をデカントして取り除き、そして産物を一晩の冷蔵後凍結乾燥した。使用した大過剰の酸無水物のために、凍結乾燥産物を０．２ＭのＮａＯＨ溶液に再溶解することによって洗浄し、不溶性物質を除去するために濾過し、そしてメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、３００ｍｌ）中で沈殿させた。４０００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間の遠心後、上清をデカントして取り除き、そして産物を凍結乾燥により乾燥し（二日間）、そして一日間真空乾燥した。元素分析により測定された最終産物の窒素％は、３．９２％であった。
【００６１】
実施例７Ｂ：解重合キトサンのグルタリル化／プロピオニル化
０．９８ＤＬ／ｇの固有粘度を持つ実施例５からの解重合されたキトサンを、０．１Ｍの酢酸（６４ｍｌ中の１．２３ｇ）に溶解した。この試料のアミノ含有率は０．７４と計算された（表５）。アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級、１０．１ｍｌ、８ｇ）中の、グルタル酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９５％、１．３３ｇ）及びプロピオン酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９９＋％ｍ、１．３３ｇ）溶液を、グルタル酸無水物の約３．８倍過剰、及びプロピオン酸無水物の約３．３倍過剰で、キトサン溶液に加え、そして一晩撹拌したままにした。得られた溶液を、アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級、８０ｍｌ）中に注いで、沈殿を誘発した。分散物を４０００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。遠心後、上清をメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、６００ｍｌ）で洗浄し、そして前と同様に遠心した。上清をデカントして取り除き、そして産物を一晩の冷蔵後、凍結乾燥により乾燥し、そして真空オーブンで乾燥した（一日間）。元素分析から決定されたこの産物の窒素％は、５．１１％であった。
【００６２】
実施例７Ｃ：解重合キトサンのグルタリル化／プロピオニル化
０．９８ＤＬ／ｇの固有粘度を持つ実施例５からの解重合されたキトサンを、０．１Ｍの酢酸（１５０ｍｌ中の４．０２ｇ）に溶解した。この試料のアミノ含有率は、０．７４と計算された（表５）。アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級、２９．４ｍｌ、２３．２ｇ）中の、グルタル酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９５％、４．０１ｇ）及びプロピオン酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９９＋％ｍ、４．０５ｇ）溶液を、グルタル酸無水物の約３．８倍過剰、及びプロピオン酸無水物の約３．３倍過剰で、キトサン溶液に加え、そして一晩撹拌したままにした。得られた溶液を、アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級、２００ｍｌ）中に注いで、沈殿を誘発した。分散物を４０００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。遠心後、上清をメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、６００ｍｌ）で洗浄し、そして前と同様に遠心した。上清をデカントして取り除き、そして産物を一晩の冷蔵後凍結乾燥した。使用した大過剰の酸無水物のために、凍結乾燥産物を０．２ＭのＮａＯＨ溶液に再溶解することによって洗浄し、不溶性物質を除去するために濾過し、そしてメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、３００ｍｌ）中で沈殿させた。４０００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間の遠心後、上清をデカントして取り除き、そして産物を凍結乾燥により乾燥し（二日間）、そして一日間真空乾燥した。元素分析から決定されたこの産物の窒素％は、５．１１％であった。
【００６３】
実施例７Ｄ：解重合キトサンのグルタリル化／プロピオニル化
０．３０ＤＬ／ｇの固有粘度を持つ実施例６からの解重合されたキトサンを、０．１Ｍの酢酸（１５０ｍｌ中の４．０１ｇ）に溶解した。この試料のアミノ含有率は０．５６と計算された。アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、ＡＲ級、２９．９ｍｌ、２３．６ｇ）中の、グルタル酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９５％、３．０ｇ）及びプロピオン酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９９＋％ｍ、１．０ｇ）溶液を、キトサン溶液に加え、そして一晩撹拌したままにした。得られた溶液を、アセトン（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級、２００ｍｌ）中に注いで、沈殿を誘発した。分散物を４０００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。遠心後、上清をメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、６００ｍｌ）で洗浄し、そして前と同様に遠心した。上清をデカントして取り除き、そして産物を一晩の冷蔵後、二日間の凍結乾燥により乾燥し、そして真空で一日間乾燥した。元素分析から決定されたこの産物の窒素％は、５．２９％であった。
【００６４】
グルタリル化／プロピオニル化−速度論的研究
６．５１グラムの、固有粘度０．９８ＤＬ／ｇ及び０．７４のアミノ含有率の実施例５からのキトサンを、０．１Ｍの酢酸水溶液（２２５ｍｌ）に溶解した。プロピオン酸無水物とグルタル酸無水物のモル比４が、最終産物に所望された。グルタル酸無水物（Ａｌｄｒｉｃｈ、９５％、１．４４３ｇ）をメタノール（１０ｍｌ）（Ｌａｂｓｃａｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、ＨＰＬＣ級）中に溶解し、そして溶液を室温で撹拌されたキトサン溶液に加えた。約２時間後、反応混合物の４０ｍｌのアリコートをアセトン（Ｌａｂｓｃａｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、Ａ．Ｒ．級）中で沈殿させ、２９００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。沈殿物をメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級）で洗浄し、そして乾燥した。もう一つの４０ｍｌのアリコートを４時間後採取し、前と同様に沈殿し、洗浄し、そして乾燥した。４０ｍｌのアリコートを採取した直後（４時間）、プロピオン酸無水物溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ、９９＋％、メタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、１０ｍｌ）中の２．６４８９ｇ）を反応混合物中に加えた。更に２時間の反応後（グルタル酸無水物の添加から６時間の全反応時間に相当）、全混合物をアセトン（Ｌａｂｓｃａｎ、ＡＲ級、３３０ｍｌ）中で沈殿させ、分散物をＳｏｒｖａｌｌ  ＲＣ  ｐｌｕｓ遠心機で、４０００ｒｐｍで、約４℃で約３０分間遠心した。遠心後、上清をデカントにより取り除き、そしてケークをメタノール（Ｌａｂｓｃａｎ、ＨＰＬＣ級、４００ｍｌ）で２回洗浄し、凍結乾燥し、そして真空オーブンで乾燥した。実施例５及び６に記載したような異染性滴定を、２時間、４時間及び最後の６時間目に採取された、三つの改変されたキトサン試料について行った。これら三つの試料のアミノ含有率を、表６に示す。
【００６５】
【表６】
2005054194.tif 000012
【００６６】
実施例８Ａ：ポリ（Ｎ−プロピオニル化、Ｎ−グルタリル化、Ｎ−アセチル化−Ｄ−グルコサミン）−ペプチドイオン結合複合体の調製
１．００３８グラムの実施例７Ａからの産物を、２０ｍｌの０．２ＭのＮａＯＨ溶液に溶解した。４５０μｌの酢酸を、グルタリル化／プロピオニル化溶液に加えて、ｐＨを約６に下げた。次いで改変されたキトサンの溶液を、３．７３ｇのＤＩ水中の、１２２．９ｍｇの、二つのシステインがジスルフィド結合によって結合している、Ｈ−β−Ｄ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨ2酢酸塩（ソマツリン（商標）としても知られる）（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  ｌｔｄ．，Ｂｌａｎｃｈａｒｄｓｔｏｗｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、Ｂ／Ｎ  ９３Ｋ２５０５ＤＬ３、酢酸塩＝１２．３７％、効力＝８２．６８％）の溶液にゆっくりと加え、そして沈殿が観察された。沈殿物はまたポリマー及び薬物の複合体としても知られる。分散物を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００遠心機を使用して２９００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。上清をデカントして取り除き、そして更なる操作のために保存した。沈殿物は冷蔵庫に置いた。酢酸を保存した上清にｐＨが約４に下がるまで加えた。更なる沈殿を確実にした。分散物を前と同様に遠心し、そして次いで冷蔵庫で保管した。第１及び第２の遠心からの沈殿物を凍結乾燥し、真空オーブンで乾燥し、そして得られた収率はそれぞれ３１．７％（３５６．９ｍｇ）及び３６．４％（４０９．６ｍｇ）で、混合した収率は６８．１％であった。元素分析を混合した試料について行った。混合した複合体の元素分析から測定された窒素％は、４．６０％であり、そして実施例７Ａからの産物の３．９２％の窒素％を使用して、ソマツリン（商標）の付加％は、６．７％と計算された。
【００６７】
ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ：  実施例８Ａの複合体を、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（１％）を含む生理食塩水に懸濁し、そしてラット当たり７．５ｍｇペプチド当量で注射した。この複合体によって誘導されたラットの血漿中のソマツリン（商標）濃度は、１５日間にわたって、最大値６３６，７５７±１２４，７５９ｐｇ／ｍｌないし最小値８６３±１４５ｐｇ／ｍｌであった。表７を参照。
【００６８】
実施例８Ｂ：ポリ（Ｎ−プロピオニル化、Ｎ−グルタリル化、Ｎ−アセチル化−Ｄ−グルコサミン）−ペプチドイオン結合複合体の調製
１．００１０グラムの実施例７Ａからの産物を、１２ｍｌの０．２ＭのＮａＯＨ溶液に溶解した。２５０μｌの酢酸をグルタリル化／プロピオニル化溶液に加えて、ｐＨを約６に下げた。次いで改変されたキトサンの溶液を、２．８７ｇのＤＩ水中の、１２０．３ｍｇのソマツリン（商標）（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  ｌｔｄ．，Ｂｌａｎｃｈａｒｄｓｔｏｗｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、Ｂ／Ｎ  ９３Ｋ２５０５ＤＬ３、酢酸塩＝１２．３７％、効力＝８２．６８％）の溶液にゆっくりと加え、そして沈殿が観察された。使用したＮａＯＨ溶液の体積が少ないため、得られた溶液は非常に粘性であった。分散物を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００遠心機を使用して２９００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。上清をデカントして取り除き、そして更なる操作のために保存した。沈殿物は冷蔵庫に置いた。酢酸を保存した上清にｐＨが約４に下がるまで加えた。更なる沈殿を確実にした。分散物を前と同様に遠心し、そして次いで冷蔵庫で保管した。第１及び第２の遠心からの沈殿物を凍結乾燥し、真空オーブンで乾燥し、そして得られた収率はそれぞれ５３．５％（６００．４ｍｇ）及び２０．９％（２３４．８ｍｇ）で、混合した収率は７４．４％であった。元素分析を混合した試料について行った。混合した複合体の元素分析から測定された窒素％は、４．３０％であり、そして実施例７Ａからの産物の３．９２％の窒素％を使用して、ソマツリン（商標）の付加％は、４．０％と計算された。
【００６９】
ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ：  複合体を、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（１％）を含む生理食塩水に懸濁し、そしてラット当たり７．５ｍｇペプチド当量で注射した。この複合体によって誘導されたラットの血漿中のソマツリン（商標）濃度は、１５日間にわたって、最大値５４５，３６７±６９，４４５ｐｇ／ｍｌないし最小値１１３４±３２５ｐｇ／ｍｌであった。表７を参照。
【００７０】
実施例８Ｃ：ポリ（Ｎ−プロピオニル化、Ｎ−グルタリル化、Ｎ−アセチル化−Ｄ−グルコサミン）−ペプチドイオン結合複合体の調製
１．０１９０グラムの実施例７Ｂを、２０ｍｌの０．２ＭのＮａＯＨ溶液に溶解した。２００μｌの酢酸をグルタリル化／プロピオニル化溶液に加えて、ｐＨを約６に下げた。次いで改変されたキトサンの溶液を、２．５６ｇのＤＩ水中の、１０２．１ｍｇのソマツリン（商標）（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  ｌｔｄ．，Ｂｌａｎｃｈａｒｄｓｔｏｗｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、Ｂ／Ｎ  ９３Ｋ２５０５ＤＬ３、酢酸塩＝１２．３７％、効力＝８２．６８％）の溶液にゆっくりと加え、そして沈殿が観察された。分散物を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００遠心機を使用して２９００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。上清をデカントして取り除き、そして更なる操作のために保存した。沈殿物は冷蔵庫に置いた。酢酸を保存した上清にｐＨが約４に下がるまで加えた。更なる沈殿を確実にした。分散物を前と同様に遠心し、そして次いで冷蔵庫で保管した。第１及び第２の遠心からの沈殿物を凍結乾燥し、真空オーブンで乾燥し、そして得られた混合した収率は７４％（８２７．１ｍｇ）であった。この複合体のソマツリン（商標）の付加％は、実施例４Ｄのソマツリン（商標）付加％と同様であり、即ち１４％とされた。
【００７１】
ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ：  複合体を、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（１％）を含む生理食塩水に懸濁し、そしてラット当たり７．５ｍｇペプチド当量で注射した。この複合体によって誘導されたラットの血漿中のソマツリン（商標）濃度は、９日間にわたって、最大値１６８，１４１±９０，９７２ｐｇ／ｍｌないし最小値１０００ｐｇ／ｍｌであった。表７を参照。
【００７２】
実施例８Ｄ：ポリ（Ｎ−プロピオニル化、Ｎ−グルタリル化、Ｎ−アセチル化−Ｄ−グルコサミン）−ペプチドイオン結合複合体の調製
１．０１４９グラムの実施例７Ｃを、１５ｍｌの０．０５ＭのＮａＯＨ溶液に溶解した。この実施例のＮａＯＨのモル濃度は、実施例８Ｃのそれより低い。２００μｌの酢酸をグルタリル化／プロピオニル化溶液に加えて、ｐＨを約６に下げた。次いで改変されたキトサンの溶液を、３．０ｇのＤＩ水中の、１２５．２ｍｇのソマツリン（商標）（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  ｌｔｄ．，Ｂｌａｎｃｈａｒｄｓｔｏｗｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、Ｂ／Ｎ  ９３Ｋ２５０５ＤＬ３、酢酸塩＝９．３７％、効力＝８０．６８％）の溶液にゆっくりと加え、そして沈殿が観察された。分散物を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００遠心機を使用して２９００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。上清をデカントして取り除き、そして更なる操作のために保存した。沈殿物は冷蔵庫に置いた。酢酸を保存した上清にｐＨが約４に下がるまで加えた。更なる沈殿を確実にした。分散物を前と同様に遠心し、そして次いで冷蔵庫で保管した。第１及び第２の遠心からの沈殿物を凍結乾燥し、真空オーブンで乾燥し、そして得られた混合した収率はわずか２４％（２７０ｍｇ）であった。元素分析を混合した試料について行った。混合した複合体の元素分析から測定された窒素％は、６．３４％であり、そして実施例７Ｃからの産物の５．１１％の窒素％を使用して、ソマツリン（商標）の付加％は、１４．０％と計算された。
【００７３】
ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ：  複合体を、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（１％）を含む生理食塩水に懸濁し、そしてラット当たり７．５ｍｇペプチド当量で注射した。この複合体によって誘導されたラットの血漿中のソマツリン（商標）濃度は、１２日間にわたって、最大値１９２，４１９±１１２，６２１ｐｇ／ｍｌないし最小値１０００ｐｇ／ｍｌであった。表７を参照。
【００７４】
実施例８Ｅ：ポリ（Ｎ−プロピオニル化、Ｎ−グルタリル化、Ｎ−アセチル化−Ｄ−グルコサミン）−ペプチドイオン結合複合体の調製
２．０グラムの実施例７Ｄを、２８ｍｌの０．０５ＭのＮａＯＨ溶液に溶解した。次いで改変されたキトサンの溶液を、６．０ｇのＤＩ水中の、２４６．０ｍｇのソマツリン（商標）（Ｋｉｎｅｒｔｏｎ  ｌｔｄ．，Ｂｌａｎｃｈａｒｄｓｔｏｗｎ，Ｄｕｂｌｉｎ，Ｉｒｅｌａｎｄ、Ｂ／Ｎ  ９３Ｋ２５０５ＤＬ３、酢酸塩＝９．３７％、効力＝８０．６８％）の溶液にゆっくりと加え、そして沈殿が観察された。分散物を、Ｓｏｒｖａｌｌ  ＲＴ６０００遠心機を使用して２９００ｒｐｍで、約４℃で約２５分間遠心した。上清をデカントして取り除いた。沈殿物を２４ｍｌのＤＩ水で洗浄し、そして前と同様に遠心した。次いで沈殿物を冷蔵庫に置いた。元素分析を産物について行った。複合体の元素分析から測定された窒素％は、６．６％であり、そして実施例７Ｄからの産物の５．２９％の窒素％を使用して、ソマツリン（商標）の付加％は、１５％と計算された。
【００７５】
ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ：  複合体を、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（１％）を含む生理食塩水に懸濁し、そしてラット当たり３．７５ｍｇペプチド当量で注射した。この複合体によって誘導されたラットの血漿中のソマツリン（商標）濃度は、１０日間にわたって、最大値１４５，４２９±１２２，７４３ｐｇ／ｍｌないし最小値５００±１５９ｐｇ／ｍｌであった。表７を参照。
【００７６】
他の態様
本発明はその詳細な説明に関連して記載されてきたが、上記の説明は例示することを意図したもので、そして特許請求の範囲で規定される、本発明の範囲を制約することを意図したものではないことは了解されるべきである。他の側面、利益、及び改変は特許請求の範囲内である。