(57)【要約】【課題】  例えば腎コロボーマ症候群等のＰＡＸ２遺伝子変異疾患の診断に有用なポリヌクレオチドを提供する。【解決手段】  ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方を欠損したＤＮＡ配列を含むポリヌクレオチドである。または、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに７７５位のＧがＣに置換したＤＮＡ配列を含むポリヌクレオチドである。さらには、これらのポリヌクレオチドと相補的な塩基配列である。いずれかのポリヌクレオチドを検出することによりヒトＰＡＸ２遺伝子変異を検出する。【選択図】  図１
2005110605.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方を欠損したＤＮＡ配列を含むことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項２】
ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列が、配列番号１で表されるＤＮＡ配列であることを特徴とする請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
請求項１記載のポリヌクレオチドと相補的な配列を有することを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項４】
ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに７７５位のＧがＣに置換したＤＮＡ配列を含むことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項５】
ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列が、配列番号１で表されるＤＮＡ配列であることを特徴とする請求項４記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
請求項４記載のポリヌクレオチドと相補的な配列を有することを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれか１項記載のポリヌクレオチドを検出することを特徴とするヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法。
【請求項８】
ヒト組織よりＤＮＡを抽出する工程と、上記ヒト組織より抽出したＤＮＡをＰＣＲ反応で増幅する工程と、上記増幅産物を制限酵素処理して請求項１〜請求項６のいずれか１項記載のポリヌクレオチドが検出されるか否かを調べる工程とを有することを特徴とする請求項７記載のヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法。
【請求項９】
上記ＰＣＲ反応において配列番号２及び配列番号３で表されるプライマーを用いることを特徴とする請求項８記載のヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトＰＡＸ２遺伝子に変異を含むポリヌクレオチド及びこれを用いたＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＡＸ（Paired box）遺伝子は、動物種を超えてほぼ完全に保存された１２８個の特異的アミノ酸配列のpaired boxを持つ転写因子の遺伝子の総称であり、上記ＰＡＸ遺伝子は、特異的にＤＮＡと結合能力を持つタンパクを産生し、他の遺伝子の活性化もしくは抑制を行うことにより発生過程を調節する働きを持つ。現在までにＰＡＸ１からＰＡＸ９までの９種類が同定されており、これらの遺伝子はショウジョウバエ胚の前後軸を決定する一群のホメオボックス遺伝子として知られている。
【０００３】
Torresらは、ＰＡＸ２遺伝子ノックアウトマウスを作成し、ＰＡＸ２遺伝子発現が正常な腎の発生において重要であることを示した。具体的には、ＰＡＸ２遺伝子のヘテロ異常マウスは腎の低形成を示し、ホモ異常マウスでは腎、尿管及び生殖器が全く形成されず、眼、耳及び中脳も不完全であり、出生後すぐ死に至る（非特許文献１）。一方、ＰＡＸ２遺伝子を過剰に発現するマウスも作製され、同マウスは大きな多嚢胞腎を形成しており、先天性ネフローゼ症候群及び末期腎不全を呈して生後数日以内に死亡する事が示されている（非特許文献２）。すなわち、ＰＡＸ２遺伝子発現が過剰であった場合には腎の嚢胞化もしくは異形成化が起こり、一方ＰＡＸ２遺伝子発現が過少であった場合には腎の低形成が起こり、何れの場合にも正常な腎の発生は見られない。
【０００４】
ヒトにおいては、ＰＡＸ２遺伝子異常に起因する臨床例として、腎及び眼の異常を呈す腎コロボーマ症候群（Renal-coloboma syndrome）が知られている。同症候群は、腎における異常としては、腎低形成、蛋白尿、進行性腎不全及び膀胱尿管逆流現象等が挙げられ、眼における異常としては、視神経乳頭の形成不全を含めた両側性視神経低形成及び網膜剥離が挙げられる。また、これまで、腎コロボーマ症候群の患者が有するＰＡＸ２遺伝子の変異についても種々の解析がなされ、数種類の遺伝子異常が報告されている（非特許文献３）。
【０００５】
【非特許文献１】Torres M, et al : Pax-2 controls multiple steps of urogenital development. Development 121: 4057-4065, 1995
【非特許文献２】Dressler GR, et al : Deregulation of Pax-2 expression in transgenic mice generates severe kidney abnormalities. Nature 362 : 65-73, 1993
【非特許文献３】Salomon R, et al : PAX2 mutations in oligomeganephronia. Kidney Int 59 : 457-462, 2001
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
腎コロボーマ症候群では、各臓器における異常の程度が多様であり、これまで精度の高い臨床診断方法が確立されておらず、その診断は容易ではなかった。そこで、ＰＡＸ２遺伝子解析により遺伝子異常が同定されれば、診断の確定や遺伝カウンセリングに非常に有用である。
【０００７】
本発明では、例えば腎コロボーマ症候群等のＰＡＸ２遺伝子変異疾患の診断に有用なポリヌクレオチドを提供することを目的とする。また、本発明は、このポリヌクレオチドを利用したヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明者らは、鋭意検討の結果、ヒトＰＡＸ２遺伝子の新規な遺伝子異常を明らかとし、この新規遺伝子異常がヒトＰＡＸ２遺伝子疾患の１つである腎コロボーマ症候群の診断に極めて有効であることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち本発明のポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方を欠損したＤＮＡ配列を含むことを特徴とする。
【００１０】
また、本発明のポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方を欠損したＤＮＡ配列を含むポリヌクレオチドと相補的な配列を有することを特徴とする。
【００１１】
さらに、本発明のポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに７７５位のＧがＣに置換したＤＮＡ配列を含むことを特徴とする。
【００１２】
さらにまた、本発明のポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに７７５位のＧがＣに置換したＤＮＡ配列を含むポリヌクレオチドと相補的な配列を有することを特徴とする。
【００１３】
以上のようなポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子疾患の患者のゲノムＤＮＡ中に特異的に見出されるため、例えば被験者のゲノムＤＮＡ中からこれら特定の変異を含むポリヌクレオチドを検出することにより、ヒトＰＡＸ２遺伝子変異疾患の診断や遺伝カウンセリング等に用いられる診断用プローブとして利用することができる。
【００１４】
また、本発明のヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法は、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方を欠損したＤＮＡ配列を含むか、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２と、エクソン２に隣接するイントロン１の一部及びイントロン２の一部とを含むＤＮＡ配列において、エクソン１の先頭からエクソンの塩基配列を数えたときに７７５位のＧがＣに置換したＤＮＡ配列を含むか、又はこれらの相補配列を含むポリヌクレオチドを検出することを特徴とする。
【００１５】
以上のようなヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法は、被験者からゲノムＤＮＡを抽出し、上記のようなヒトＰＡＸ２遺伝子変異疾患患者に特有なヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２の６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方を欠損しているか、又は７７５位のＧがＣに置換したポリヌクレオチドを用いて、ヒトＰＡＸ２遺伝子疾患であるか否かの診断や遺伝カウンセリング等を行うことができる。
【００１６】
なお、本明細書中、配列番号１の塩基配列は、正常なヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２（エクソン１の先頭から数えて第５８７位から第７５５位）、エクソン２の上流のイントロン１の一部（４１塩基）及び下流のイントロン２の一部（３５塩基）を含む塩基配列である。すなわち、「エクソン１から数えたときに６６２位のＧ」及び「６６３位のＣ」は、それぞれ配列番号１の塩基配列における「１１７位のＧ」及び「１１８位のＣ」に対応する。また、「エクソン１から数えたときに７７５位のＧ」は、配列番号１の塩基配列における「２１０位のＧ」に対応する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明のポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子疾患患者に特有な変異であるヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２における６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方が欠損したエクソン２を含むものであるので、これをヒトＰＡＸ２遺伝子疾患診断用のプローブとして利用することにより、ヒトＰＡＸ２遺伝子疾患の診断を迅速且つ容易に行うことができる。
【００１８】
また、本発明のポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子疾患患者に特有な変異である、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２における７７５位のＧがＣへ置換したエクソン２を含むものであるので、これをヒトＰＡＸ２遺伝子疾患診断用のプローブとして利用することにより、ヒトＰＡＸ２遺伝子疾患の診断を迅速且つ容易に行うことができる。
【００１９】
さらに、本発明のヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法によれば、ヒトＰＡＸ２遺伝子疾患患者に特有な新規な遺伝子変異を有する上記ポリヌクレオチドを利用することにより、例えば眼底所見や腎臓に関する内科的検査所見から腎コロボーマ症候群が疑われる患者及びその血縁者について、ＰＡＸ２遺伝子異常の有無を効率的且つ高精度に検査することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、本発明のポリヌクレオチド及びヒトＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法について記述する。
【００２１】
本発明のポリヌクレオチドは、ヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２における６６２位のＧ及び６６３位のＣの両方が欠損したエクソン２を含む塩基配列或いはその相補的な塩基配列、又はヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２における７７５位のＧがＣへ置換したエクソン２を含む塩基配列或いはその相補的な塩基配列である。具体的には、配列番号１記載の塩基配列（Sanyanusin P, et al. Genomic Structure of the Human PAX2 Gene. Genomics 35, 258-261, 1996）において、エクソン２に位置する第６６２位のＧ及び第６６３位のＣの双方に欠損を有するポリヌクレオチドである（以下の文中において 662-663del2変異と略称する。）か、又は、請求項１記載の塩基配列において、エクソン２に位置する７７５位のＧがＣに置換したポリヌクレオチドである（以下の文中において G755C変異と略称する。）。
【００２２】
ここで、配列番号１で示される塩基配列は、ヒトＰＡＸ２遺伝子のＤＮＡの一部であり、イントロン１の一部であるエクソン２の上流４１塩基と、エクソン２（第５８７位塩基から第７５５位塩基）と、及びイントロン２の一部であるエクソン２の下流３５塩基とから構成されている。なお、本発明のポリヌクレオチドが有するエクソン２に隣接するイントロン１及びイントロン２の一部は、上述の塩基数に限定されず適宜設計することができる。
【００２３】
本発明のＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法は、例えば以下のように実施される。眼底所見や腎臓に関する内科的検査所見から腎コロボーマ症候群が疑われる場合に、被験者本人又はその代諾者（原則として親権者）に本疾患について説明し、インフォームド・コンセントが得られた場合に被験者から末梢血を採取する。同末梢血中の白血球よりゲノムＤＮＡを抽出する。
【００２４】
本発明のＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法は、ヒト組織よりＤＮＡを抽出し、抽出したＤＮＡに上述の特定の変異を有するポリヌクレオチドが含まれているか否かを調べることにより達成される。具体的には、先ず、ヒト組織よりゲノムＤＮＡを抽出し、抽出したゲノムＤＮＡに対して適当なＰＣＲプライマーを用いてＰＣＲ反応によりヒトＰＡＸ２遺伝子のエクソン２を含むポリヌクレオチドを増幅する。ＰＣＲプライマーは、変異が起こっていると予想される塩基配列部分を内包する配列を増幅する目的でデザインした塩基配列を適宜用いることができる。例えば、ＰＡＸ２遺伝子のエクソン２を特異的に増幅する為のプライマーとして、配列番号２で表されるフォワードプライマー及び配列番号３で表されるリバースプライマーを用いることができる。また、他の部位を増幅するプライマーを作製してＰＣＲ反応を行うことにより、別のＰＡＸ２遺伝子変異を検出することもできる。
【００２５】
次に、ＰＣＲ反応後の増幅産物について、制限酵素を用いて特異的な塩基配列の切断を行い、例えば例えばゲル電気泳動により遺伝子の変異の状態を検出する。例えば、662-663del2変異を検出する場合には制限酵素Hha Iを、G755C変異を検出する場合には制限酵素Pml Iを用いることができる。また、他の制限酵素を選択することにより別のＰＡＸ２遺伝子変異を検出することも可能である。
【００２６】
上述した制限酵素Hha Iを用いた制限酵素切断処理を行うと、制限酵素Hha Iによって正常（662-663del2の変異を起こしていない）対立遺伝子（２４５塩基）は128塩基対と117塩基対の２つのバンドに切断されるが、662-663del2の変異を起こしている対立遺伝子は、制限酵素の切断する配列内に2塩基の欠損を有している為、正常な認識が行われず、切断されないままの243塩基（245塩基から2塩基欠損）の１つのバンドがみられる。また、制限酵素Pml Iによって正常（G755Cの変異を起こしていない）対立遺伝子は切断されず245塩基の１つのバンドがみられるが、G755Cの変異を起こしている対立遺伝子は210と35塩基の２つのバンドに切断される。これらの制限酵素による切断処理後のＤＮＡは、ゲル電気泳動を行い、エチジウムブロマイド染色によりＤＮＡ断片の検出を行う。ここで、電気泳動のゲルとしては、アガロースゲル又はポリアクリルアミドゲルが挙げられる。以下に述べる実施例においてはアガロースゲルを用いたが、塩基数の少ない短いＤＮＡ断片を検出する場合には分解度の高いポリアクリルアミドゲルを選択することも可能である。
【００２７】
なお、ＰＡＸ２遺伝子変異を検出する方法としては上述の制限酵素切断処理を利用する方法に限定されず、例えばＤＮＡシークエンシング解析を行うことによりＰＡＸ２遺伝子変異の状況を精密に分析し、ＰＡＸ２遺伝子変異の有無を検出する方法等を利用することも可能である。
【実施例】
【００２８】
次に、本発明を適用した具体的な実施例について、実験結果に基づいて説明する。ＰＡＸ２遺伝子変異は、具体的には以下に述べるような方法で検出することができる。
【００２９】
実験1  ＤＮＡ抽出
被験者より末梢血１０ｍｌをエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）入り採血管に採取した。同末梢血を５ｍｌずつ２本の５０ｍｌプラスチックチューブに分注し、各チューブに４℃の溶液Ａ［10ｍM KHCO3, 0.15M NH4Cl及び0.1mM EDTA(pH7.3)］を４５ｍｌ加えた。十分に混和した後、氷上で６０分間静置し溶血させた。その後、３２００ｒｐｍで１０分間遠心して上清を捨てた。１０ｍｌの溶液Ａを再度チューブに加え、十分に混和した後３２００ｒｐｍで１０分間遠心して上清を捨て白血球の沈殿を得た。同一検体を２本の内、１本のチューブは凍結保存した。もう１本のチューブに４ｍｌの溶液Ｂ［0.075M NaCl及び0.024M EDTA（pH8.0）］を加え十分に混和した。その後ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を終濃度１％となるように加え、同時に、proteinase Kを終濃度２００μｇ／ｍｌとなるように加え、３７℃で一晩おだやかに混和（７０ｒｐｍ程度）した。
【００３０】
次に、４ｍｌのフェノール（水飽和）をチューブに加え４時間室温で十分に混和した後、３２００ｒｐｍで１０分間遠心して上層を別のチューブに移した。同チューブ内に、４ｍｌのフェノール（水飽和）／クロロホルム／イソアミルアルコール（２５：２４：１）を加えて、２時間室温で十分に混和した。３２００ｒｐｍで１０分間遠心した後、上層を別のチューブに移して、４００μｌの３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）、及び１０ｍｌのエタノールを加え十分に混和し、ＤＮＡを沈殿させた。同チューブを３２００ｒｐｍで５分間遠心して上清を捨て、５ｍｌの８０％エタノールを加え十分に混和した後、３２００ｒｐｍで５分間遠心して上清を捨て、沈殿を軽く風乾させた。得られた沈殿を１ｍｌの溶液Ｃ［10mM Tris-HCl及び1ｍM EDTA（pH8.0）］に溶解しＤＮＡ濃度を測定し、適当な濃度に希釈を行った。
【００３１】
実験２  ＰＡＸ２遺伝子エクソン２のＰＣＲ増幅
上述した方法で得られた白血球由来のゲノムＤＮＡ５００ｎｇを鋳型として、プライマーexon2F（配列番号２）及びexon2R（配列番号３）と、KOD-Plus-DNA Polymerase (TOYOBO社製)を用いて、常法に従い反応溶液量５０μｌ中にてＰＣＲ反応を行った。なお、反応温度は、９４℃において２分間反応させた後に、９４℃１５秒の熱変性と６０℃３０秒のアニーリング及び６８℃３０秒の伸長反応を１サイクルとして３５サイクル行った。
【００３２】
実験３  遺伝子変異のシークエンス解析
ＰＣＲ反応物をアガロースゲル電気泳動により分画及び精製し、DYEnamic ET Terminator Cycle Sequence Kit (Amersham Biosciences社製)を用いてABI PRISMTM 377 DNA Sequencer(Applied Biosystems社製)により塩基配列を解析した。その結果、662-663del2の変異を起こしている例と、G755Cの変異を起こしている例が検出された。
【００３３】
実験４  エクソン２のＰＣＲ産物の制限酵素処理
実験２と同様のＰＣＲ反応を行い、反応物の内５μｌを３％アガロースゲルで電気泳動し、エチジウムブロマイド染色を行い正しく増幅されていることを確認した。ＰＣＲ反応物の残り４５μｌにフェノール（水飽和）／クロロホルム（１：１）を４５μｌ加えボルテックスミキサーにて混和し、５０００ｒｐｍで３分間遠心した後、上層を別のチューブに移しクロロホルム／イソアミルアルコール（２４：１）を４５μｌ加え再びボルテックスミキサーにて混和し、５０００ｒｐｍで３分間遠心した。上層を別のチューブに移し３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）５μｌとエタノール１１０μｌを加え混和し、−８０℃で２０分静置してＤＮＡを沈殿させた。その後１５０００ｒｐｍで１０分間遠心して上清を捨て、沈殿に７０％エタノールを１００μｌ加え十分に混和し、再度１５０００ｒｐｍで５分間遠心して上清を捨て、沈殿を軽く風乾させた。次に、沈殿を８．５μｌの前記溶液Ｃで溶解し、制限酵素０．５μｌと専用の１０倍濃度の緩衝液１μｌを加えて、３７℃で一晩反応させた。ここで、662-663del2変異の検出については制限酵素Hha I（5 unit、Roche社製）、G755C変異の検出については制限酵素Pml I（10 unit、New England BioLabs社製）を用いた。
【００３４】
次に、制限酵素処理後の反応液を３％アガロースゲルで電気泳動し、エチジウムブロマイドで染色した。結果を図１に示す。制限酵素Hha Iによってレーン１の正常ＤＮＡは１２８と１１７塩基対の２つのバンドに切断されたが、レーン２に示す例では、662-663del2変異を有する対立遺伝子は切断されず２４３塩基対のバンドとして検出され、同変異を有さない対立遺伝子が切断されたため、３つのバンドが検出された。一方、レーン３に示すように、制限酵素Pml Iによって正常ＤＮＡは切断されず２４５塩基対の１つのバンドのみ検出されたが、レーン４の例ではG755C変異を有する対立遺伝子が２１０と３５塩基対の２つのバンドに切断され、同変異を有さない対立遺伝子は切断されないため、２４５塩基対のバンドも検出された。３５塩基対のバンドは分子量が小さすぎるため３％アガロースゲル電気泳動とエチジウムブロマイド染色では確認が困難であるものと考えられた。
【００３５】
前述した662-663del2変異を有する遺伝子を持っていた披験者、及びG755C変異を有する遺伝子を持っていた被験者の家系図を図２に示す。図中、四角印は男性を、丸印は女性を示し、その内、黒丸印（●）はＰＡＸ２遺伝子変異の解析を行った被験者４名（全て女性）を示す。
【００３６】
図２（ａ）に示す662-663del2変異を有する遺伝子を持っていた被験者（２名）は、他の臨床的知見と併せて、腎コロボーマ症候群と診断された患者であった。また、この家系において、腎不全で透析をしている患者（ＨＤ）が他に４名いた（但し、これらの４名について眼科領域の検索及び遺伝子解析は未施行）。一方、図２（ｂ）に示すG755C変異を有する遺伝子を持っていた被験者（２名）も腎コロボーマ症候群と診断された。以上に示したように、ＰＡＸ２遺伝子変異の解析結果は、腎低形成や視神経乳頭の形成不全等の臨床的知見と併せて、腎コロボーマ症候群の確定診に利用することができることがわかる。
【００３７】
以上に記述した方法により、ＰＡＸ２遺伝子変異（662-663del2変異あるいはG755C変異）の有無を高精度に且つ簡便に判断することができる。また、本発明のＰＡＸ２遺伝子変異検出方法は、使用するＰＣＲプライマー、又は制限酵素の選択により、上記の遺伝子変異以外の変異遺伝子の検出を行うことも可能である。従って、本発明のＰＡＸ２遺伝子変異の検出方法は、腎コロボーマ症候群が疑われる患者及びその血縁者についてＰＡＸ２遺伝子解析を行うことにより、腎コロボーマ症候群の診断の確定や遺伝カウンセリングに非常に有用である。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
我が国では、腎コロボーマ症候群自体診断された人はほとんどおらず、腎低形成はあってもコロボーマは見られない症例についての報告があるのみである。症例報告では、Oculo-encephalo-hepato-renal syndromeやacro-oculo-renal syndromeという亜型でごく数例が報告されているだけである。ましてや、日本人でＰＡＸ２遺伝子検索がされている例は皆無である。本発明は、このように認知度の低い非常に稀な病気の遺伝子変異を見つけた珍しい研究結果に基づくものであり、腎コロボーマ症候群の確定診等において、非常に有用な手だてとなる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】ＰＡＸ２遺伝子エクソン２のＰＣＲ産物について制限酵素処理を行った後、３％アガロースゲル電気泳動を行い、エチジウムブロマイド染色を行ってＤＮＡ断片の検出を行った結果を示す図面代用写真である。
【図２】（ａ）は662-663del2変異を有する遺伝子を持っていた披験者の家系図、（ｂ）はG755C変異を有する遺伝子を持っていた被験者の家系図である。
【符号の説明】
【００４０】
Ａｐ    脳血管障害を有している症例
Ｄ      既に死亡している親族
ＨＤ    血液透析を受けている腎不全症例
ＨＴ    高血圧症例
ＵＫ    眼科的および腎機能障害の検索を行っていない親族
【図１】
2005110605.tif 000003
【図２】
2005110605.tif 000004
【配列表】
2005110605000001.app