(57)【要約】【課題】  経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価する方法を提供すること。【解決手段】  哺乳動物に評価対象薬物を経口投与または腹腔内投与し、胃粘膜の壁細胞におけるプロトンポンプの発現量の増加の程度を指標にして行うことを特徴とする。本発明の方法によれば、例えば、評価対象薬物が副作用として胃粘膜障害を引き起こす可能性があるかどうかを見極めることが可能となる。従って、本発明の方法は、胃粘膜障害のない薬物をスクリーニングする場合などに採用しうる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価する方法であって、哺乳動物に評価対象薬物を経口投与または腹腔内投与し、胃粘膜の壁細胞におけるプロトンポンプの発現量の増加の程度を指標にして行うことを特徴とする方法。
【請求項２】
哺乳動物がマウスまたはラットであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
非ステロイド性抗炎症剤（NSAIDs）であるインドメタシンは、優れた抗炎症作用を発揮するものの、経口投与により胃潰瘍や胃炎などの胃粘膜障害を引き起こすことが知られている。インドメタシンの作用は、シクロオキシゲナーゼ（COX）の阻害によるものであるが、経口投与による胃粘膜障害の発生は、このCOX阻害作用が胃粘膜防御因子であるプロスタグランジン（PG）を減少させることが原因であるとされている。近年の研究において、COXにはCOX-1とCOX-2の二種類あることが明らかにされており、COX-1は構成型のCOX、COX-2は誘導型のCOXであると考えられている。COX-1は生体内の恒常性を保つ働きを担っており胃粘膜にも存在し、その保護作用を有するPGを生産する機能を果たしていると考えられている。一方、COX-2は炎症部位で誘導されてくるCOXであり、炎症部位でのPGの多くはCOX-2に由来するものであると考えられている。インドメタシンは、他の多くのNSAIDsと同様に、COX-1とCOX-2の両者を抑制する非選択的COX阻害剤であることから、経口投与による胃粘膜障害の発生は、胃粘膜の保護に関与するCOX-1を阻害することによるものであるとされている。従って、最近では、COX-2を選択的に阻害する薬剤の開発が精力的に行われている（例えば特許文献１参照）。
【特許文献１】特開２００３−３４６９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
抗炎症剤だけでなく、経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価することは、副作用として胃粘膜障害を引き起こす可能性があるのかどうかを見極めるためなどに重要であると考えられる。しかしながら、このような評価を行う方法は未だ提案されていない。
そこで本発明は、経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは上記の点に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、マウスに薬物を腹腔内投与すると、胃粘膜の壁細胞におけるプロトンポンプの発現量が増加し、増加の程度は薬物の種類によって異なることを見出した。
【０００５】
上記の知見に基づいてなされた本発明の経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価する方法は、請求項１記載の通り、哺乳動物に評価対象薬物を経口投与または腹腔内投与し、胃粘膜の壁細胞におけるプロトンポンプの発現量の増加の程度を指標にして行うことを特徴とする。
また、請求項２記載の方法は、請求項１記載の方法において、哺乳動物がマウスまたはラットであることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価する方法によれば、例えば、副作用として胃粘膜障害を引き起こす可能性があるかどうかを見極めることが可能となる。従って、本発明の方法は、胃粘膜障害のない薬物をスクリーニングする場合などに採用しうる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
プロトンポンプ（H+K+ATPase）は、生体膜の両側のH+の電気化学ポテンシャル差に逆らってATPのエネルギーでH+を能動輸送し、胃腔に胃酸分泌を行う胃粘膜の壁細胞に存在する膜蛋白質である（胃腔に胃酸分泌を行うかわりに胃内のK+を細胞内に取り込む）。本発明においては、マウスやラットなどの哺乳動物に評価対象薬物を経口投与または腹腔内投与し、プロトンポンプの発現量の増加の程度を調べる。プロトンポンプの発現量の増加の程度が大きいほど、胃酸分泌量が多くなるので、炎症を惹起させる可能性が高いことから、胃粘膜障害を引き起こす可能性が高いと評価することができる。なお、評価対象薬物は原体のみならず製剤化されたものであってもよい。
【０００８】
胃粘膜の壁細胞におけるプロトンポンプの発現量はどのような方法を用いて調べてもよいが、例えば、マウスやラットなどを用いて評価を行う場合、評価対象薬物の経口投与または腹腔内投与から所定時間（例えば1〜5時間）経過後に胃を摘出し、胃粘膜の組織切片を作製してプロトンポンプを免疫染色することで、その発現量を画像処理ソフトで数値化して調べる方法が挙げられる。胃粘膜の組織切片の作製は、生検で採取した組織を用いて行ってもよい。この方法によれば、患者（ヒト）に投与する薬物を選択する場合において、患者に適した胃粘膜障害のない薬物を選択するための評価を行うといったことも可能である。
【実施例】
【０００９】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に何ら限定して解釈されるものではない。
【００１０】
実施例Ａ
（試験方法）
方法１：
5weeksで購入したWister系雄ラットを1週間予備飼育した。16時間絶食（飲水自由）後、インドメタシンを生理食塩水とTween80の混合液に懸濁し、投与量0.4mL/匹で10mg/kg腹腔内投与した。180分経過後に頚椎脱臼にてラットを処理し、胃を摘出して大湾切開してホルマリン固定の後、胃粘膜の組織切片を作製した。この組織切片に対し、抗プロトンポンプ抗体としてMBL社の“Anti-Mouse Proton pump”、染色キットとしてVECTOR社の“VECTASTAIN ABC-AP Mouse IgG Kit”、発色キットとして同社の“Alkaline Phosphatase Substrate kit I <VECTOR Red>”を用いてプロトンポンプを免疫染色した。得られた標本それぞれから無作為に230〜250程度の測定箇所を選択し、顕微鏡下で画像化し、NIH-image（パブリックドメインソフトウェア）を用いた画像解析を行って、その発色濃度比と発色面積比からプロトンポンプの発現量を数値化した。結果を表1に示す。
【００１１】
方法２：
5weeksで購入したWister系雄ラットを1週間予備飼育した。16時間絶食（飲水自由）後、16,16-ジメチルプロスタグランジンE2を方法1と同様にして腹腔内投与した。180分経過後に頚椎脱臼にてラットを処理し、方法1と同様にしてプロトンポンプを免疫染色し、その発現量を数値化した。結果を表1に示す。
【００１２】
方法３：
5weeksで購入したWister系雄ラットを1週間予備飼育した。16時間絶食（飲水自由）後、16,16-ジメチルプロスタグランジンE2を方法1と同様にして腹腔内投与した。さらに30分経過後、インドメタシンを方法1と同様にして腹腔内投与した。180分経過後に頚椎脱臼にてラットを処理し、方法1と同様にしてプロトンポンプを免疫染色し、その発現量を数値化した。結果を表1に示す。
【００１３】
【表１】
2005181267.tif 000002
【００１４】
（試験結果）
表1から明らかなように、胃粘膜障害を引き起こすインドメタシンを投与した場合の方が胃粘膜防御因子である16,16-ジメチルプロスタグランジンE2を投与した場合に比較してプロトンポンプの発現量が多いことがわかった。また、16,16-ジメチルプロスタグランジンE2の前投与により、インドメタシンの投与によるプロトンポンプの発現量の増加を抑制することができることがわかった。以上の結果より、評価対象薬物の胃粘膜への作用は、薬物を腹腔内投与して誘導されるプロトンポンプの発現量の増加の程度を指標にして評価することができることがわかった。なお、以上の傾向は、薬物を経口投与した場合でも同様であった。
【００１５】
実施例Ｂ
実施例Aの試験方法の方法1と同様にしてインドメタシンを投与し、30分経過後、60分経過後、120分経過後、180分経過後のプロトンポンプの発現量を調べた。結果を表2に示す。また、実施例Aの試験方法の方法3と同様にして、ファモチジン（1mg/kg,0.5%CMC）、ラフチジン（10mg/kg,0.5%CMC）、ラベプラゾール（30mg/kg,0.5%CMC）をそれぞれインドメタシンの投与30分前に投与した場合のインドメタシンの投与から30分経過後、60分経過後、120分経過後、180分経過後のプロトンポンプの発現量を調べた。結果を表3〜表5に示す。表2〜表5から明らかなように、ヒスタミンH2拮抗剤であるファモチジンと胃粘膜保護作用を有するヒスタミンH2拮抗剤であるラフチジンは、インドメタシンの投与によるプロトンポンプの発現量の増加を抑制することができ、とりわけラフチジンの効果は非常に優れていることがわかった。一方、プロトンポンプ阻害剤であるラベプラゾールには、その効果が認められなかった。
【００１６】
【表２】
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【００１７】
【表３】
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【００１８】
【表４】
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【００１９】
【表５】
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【産業上の利用可能性】
【００２０】
本発明は、経口投与される薬物の胃粘膜への作用を評価する方法を提供する点において産業上の利用可能性を有する。