(57)【要約】【課題】微生物感染による敗血症の予防または治療剤を提供すること。【解決手段】（１）大豆抽出物または大豆発酵物を有効成分とする、微生物感染による敗血症の予防または治療剤。（２）イソフラボンを有効成分とする、微生物感染による敗血症の予防または治療剤。（３）上記（１）または（２）記載の予防または治療剤を含む、飲食品、医薬品または化粧品。  本発明の敗血症の予防または治療剤は、ＴＮＦ-αの異常産生抑制活性が高く医薬品、化粧品、食品の分野において有用である。本発明の剤は、敗血症を発症しやすい状態となっている深在性真菌症患者のために特に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
大豆抽出物または大豆発酵物を有効成分とする、微生物感染による敗血症の予防または治療剤。
【請求項２】
イソフラボンを有効成分とする、微生物感染による敗血症の予防または治療剤。
【請求項３】
請求項１または２記載の予防または治療剤を含む、飲食品、医薬品または化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物感染による敗血症の予防または治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
敗血症とは、真菌や細菌等の微生物感染に起因する全身的な炎症反応（Systemic Inflammatory Response Syndrome：SIRS）である。敗血症と、それに引き続いて発生しやすい敗血症性ショック、敗血症性多臓器不全（以下、本発明では総称して「敗血症」と言う）の問題は、医療現場においては深刻である。敗血症は、細菌由来のエンドトキシンが血液中へ侵入して、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ-α）等の各種炎症性サイトカインが産生されることにより発症すると考えられている。ＴＮＦ-αは、活性化マクロファージなどが産生する代表的なサイトカインの一種で、マクロファージを細菌、ウイルス、寄生虫などで刺激したときに産生される。細菌感染に伴うＴＮＦ-αの異常産生は、敗血症の病態にも深く関わっていることが知られている。ＴＮＦ-αは、さまざまな免疫・炎症反応に関与し、種々の炎症性疾患の病態にも深く関わる。
【０００３】
ＴＮＦ-αの異常産生を抑制あるいは阻害する物質は、敗血症を始めとする種々の炎症性疾患の予防、改善、または治療剤として有用であり、植物原料（シソ、茶葉など）の抽出物等を有効成分とするＴＮＦ-αの産生抑制剤が公知である（例えば、特許文献１〜６参照。）。上述の作用を有し、かつ、これまでの長い食経験で安全性の保証された経口摂取可能なＴＮＦ-α産生抑制作用を有する物質の登場が求められている。
【０００４】
ところで深在性真菌症は、全身の臓器や組織が真菌で侵される感染症である。癌や臓器移植、後天性免疫不全症候群などの免疫の抑制状態にある患者にとり致命的な疾患であり、近年増加している。また、抗癌、抗細菌化学療法を伴う全身管理、または外科的、救命医学的処置によって、深在性真菌症の易感染患者は増加の一途にある。深在性真菌症の患者においては、真菌が生産するβ−グルカンによって、細菌由来エンドトキシンに対する感受性が向上し、敗血症性ショックが起こりやすいという問題がある。
【０００５】
以上のように、微生物感染による敗血症の予防または治療剤を開発することは、医療上重要な問題である。
【０００６】
【特許文献１】特開平７−２１５８８４号公報
【特許文献２】特開平７−２５８０９７号公報
【特許文献３】特開平１０−７２３６１号公報
【特許文献４】特開２００１−４８８０４号公報
【特許文献５】特開２００１−２３８６３８号公報
【特許文献６】特開２００３−２６５８６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
微生物感染による敗血症の予防または治療剤を提供すること。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、大豆抽出物、特に大豆発酵物を由来とするイソフラボンが、微生物感染におけるＴＮＦ-αの異常産生を抑制することを見出し、本発明を完成した。すなわち本発明は、以下に記載する敗血症の予防または治療剤である。
（１）大豆抽出物または大豆発酵物を有効成分とする、微生物感染による敗血症の予防または治療剤。
（２）イソフラボンを有効成分とする、微生物感染による敗血症の予防または治療剤。
（３）上記（１）または（２）記載の予防または治療剤を含む、飲食品、医薬品または化粧品。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の敗血症の予防または治療剤は、ＴＮＦ-αの異常産生抑制活性が高く、医薬品、化粧品、食品の分野において有用である。本発明の剤は、敗血症を発症しやすい状態となっている深在性真菌症患者のために特に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は、大豆抽出物または大豆発酵物を有効成分とする、微生物感染による敗血症の予防または治療剤である。微生物とは、敗血症に関与しうる真菌類、細菌等である。また、敗血症とは、敗血症と、それに引き続いて発生しやすい敗血症性ショック、敗血症性多臓器不全も含む。
【００１１】
有効成分である大豆抽出物とは、丸大豆、脱脂大豆、胚芽、大豆ミール、分離蛋白質等の原料大豆から、適当な溶剤を用いて抽出された抽出物をいう。抽出処理に用いる溶剤は特に限定されず、通常の極性溶媒、両極性溶媒等が使用できる。溶剤としては、例えば、有機溶媒またはそれを含む溶剤、水と有機溶媒との混合液等が使用できる。有機溶媒としては例えば、低級アルコール（具体的にはエタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール）、エーテル類（具体的にはジエチルエーテル）、ハロゲン化炭化水素（具体的にはクロロホルム）、ニトリル類（具体的にはアセトニトリル）、エステル類（具体的には酢酸エチル）、ケトン類（具体的にはアセトン）などの他に、ヘキサン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド等であるが、作業性の面から、エタノール、メタノール、または、酢酸エチルが好ましい。有機溶媒は２種以上を混合して使用しても良い。水と有機溶媒の混合比は限定されないが、有機溶媒が２０％以上、特に４０〜９０％であることが望ましい。
【００１２】
なお、有機溶媒を含む溶剤での抽出の前に、原料大豆を水や熱水で抽出することにより、水に可溶の夾雑物を除くことができる。この場合、水抽出後の滓を回収し、それを溶剤抽出に供する。抽出効率向上のため、抽出工程は複数回繰り返すことが好ましい。抽出後は吸引濾過等を行って有効成分を含む溶剤を回収する。以上により溶液状の大豆抽出物が得られる。なお、大豆抽出物中の有効成分を濃縮・精製するために更なる溶媒抽出、合成吸着剤やイオン交換樹脂処理等を行ってもよい。
【００１３】
また、本発明でいう有効成分は、大豆発酵物であってもよい。大豆発酵物とは、大豆原料に微生物や酵素を作用させて得られる発酵物をいう。微生物としては、麹菌、乳酸菌、酵母などが使用できる。大豆発酵物は常法により抽出処理や濃縮処理を行い、敗血症の予防・治療効果を有する有効成分を濃縮・精製することが好ましい。
【００１４】
乳酸菌を用いて大豆発酵物の抽出物を得る場合、大豆の青臭みの発生を未然に防止するため、大豆を磨砕時に８０℃以上の高温水と共に磨砕する等により、大豆に含有するリポキシゲナーゼを失活して得られた呉から常法によりオカラを分離し青臭みのない豆乳を得、ＵＨＴ殺菌する。加熱殺菌された豆乳に乳酸菌を接種し乳酸発酵を行うのであるが、乳酸菌は特に限定されない。通常は牛乳及び牛乳製品に用いられる乳酸菌、例えば、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｌｕｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）等があげられる。上記の乳酸菌は予め豆乳又はその他の適当な培養基質で培養しておく。発酵処理すべき前記の豆乳に対し、上記の培養した乳酸菌の培養液を添加する。添加量は豆乳に対して０．５〜３．０重量％程度である。
【００１５】
発酵条件は使用する乳酸菌の種類、原料豆乳の濃度等により適宜決定すればよいが、通常は２０〜４２℃で１０〜２４時間乳酸発酵を行い、発酵豆乳を製造する。この発酵豆乳をスプレードライ等により乾燥し大豆発酵物を得る。なお、大豆発酵物として醤油を製造するときの副産物である醤油粕も使用することができる。得られた大豆発酵抽出物にはイソフラボン、サポニン、糖類、ペプチドなどが含まれている。
【００１６】
大豆発酵物を抽出処理する場合、発酵物を細かくすりつぶしてから抽出することが好ましい。得られた大豆発酵抽出物は、溶剤を含んだ状態のものやその濃縮物、抽出物から溶剤を除去した乾燥物等、いかなる状態でも、使用できる。ただし、保存性、有機溶媒の安全性の点で、大豆発酵抽出物は乾燥物の状態にするのが好ましい。
【００１７】
本発明の剤において、特に好ましい有効成分はイソフラボンである。イソフラボンは大豆等の植物原料から得られたものでも、化学合成されたものでもよい。イソフラボンは、大豆原料に微生物や酵素を作用させて得られる発酵物を抽出処理や濃縮処理することによっても得られる。イソフラボンは、配糖体またはアグリコンのいずれの状態であってもよい。アグリコンとは、例えばゲニステイン、ダイゼイン、グリシテインであり、配糖体とは例えばゲニスチン、ダイジン、グリシチン等である。
【００１８】
実施例に示す通り、イソフラボンを高濃度に含有する大豆発酵物は、真菌あるいは細菌感染条件下における血中のＴＮＦ-α濃度の上昇を有意に抑制する。すなわち、大豆抽出物、大豆発酵物またはイソフラボンは、微生物感染による敗血症の予防または治療剤として有用であり、飲食品、医薬品または化粧品として、ヒトを含む哺乳動物に対して使用できる。
【００１９】
本発明の剤を摂取する一般的な方法は経口摂取である。すなわち、飲食品、栄養補助食品、特別用途食品（病者用食品、妊産婦・授乳婦用粉乳、乳児用調製粉乳、高齢者用食品、特定保健用食品）、経腸栄養剤、医薬部外品、あるいは医薬品に有効量を配合し、摂取すればよい。また、本発明の剤は、経腸栄養法（成分栄養、低残さ食、天然食品流動食として、経口、あるいは経鼻的に挿入したチューブや胃瘻、空腸瘻から栄養を注入する方法）によって摂取してもよい（山東勤弥,岡田正,“最新内科学大系第6巻肥満症・臨床栄養”井村裕夫他編,中山書店,p.289-307, 1995）。
【００２０】
本発明の剤の形状は特に限定されないが、投与目的、疾患の種類、症状、投与する動物の種によって異なり、とくに限定されないが、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤として、直接投与したり、飼料や飲水に混じて投与することができる。有効成分の投与量は、動物の種、投与目的、疾患の種類、症状により異なり、とくに限定されないが、1〜2000mg/kg、好ましくは、５〜1000mg/kg、さらに好ましくは10〜200mg/kg程度である。なお、イソフラボンは、日常摂取されているものであり、本発明において使用される量では、毒性は知られていない。
【実施例】
【００２１】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
【００２２】
試験例では、本発明の剤の敗血症性ショックに対する効果を確認するため、真菌由来のβグルカン負荷によるエンドトキシン投与モデルを使用した。このモデルでは真菌由来のβグルカンを注射してエンドトキシンに対する感受性が上昇しているマウス（深在性真菌症感染と同様の状態となっている）を使用する。このマウスにエンドトキシンであるリポ多糖(Lipopolysaccharide：LPS)を投与するとＴＮＦ-αの異常産生が起こり、敗血症ショックが誘発される。具体的には、まずマウスにβグルカンを腹腔内注射し、次いで、イソフラボンを高濃度に含有する大豆発酵物をマウスに連続経口投与する。その後、ＬＰＳを静脈注射し、ＴＮＦ-α産生を誘導した後、血清中のＴＮＦ-α量を測定する。
【００２３】
［試験例］
１）被検動物：
雄性DBA/2 マウス（購入週令：６週令、日本チャールズリバー社）を使用した。マウスは、群分けし、１週間予備飼育した後、実験に供した。予備飼育期間中、および実験期間中は、通常の日照サイクルで飼育し、市販の固形飼料（オリエンタル酵母社製：MF 飼料）および飲水は自由摂取させた。
２）本発明の剤：
イソフラボンを３０％含有する大豆発酵抽出物「ソイアクトY」（キッコーマン社製）
３）試験方法：
まず、βグルカン（ＳＩＧＭＡ社製）を生理食塩水に溶解した溶液0.2ml（200μg/マウス）を腹腔内投与し、深在性真菌症感染モデルマウスを作製した。
【００２４】
被検マウスとして、１）イソフラボン群、２）コントロール群の２群（１群１０匹）を設定した。イソフラボン群には、イソフラボンをCMC（カルボキシメチルセルロース）溶液に溶解、懸濁させたものを経口投与し、コントロール群にはCMC溶液のみを経口投与する。
【００２５】
上記１)〜２)群に対して、イソフラボン溶液を0.2ml（60 mg/shot）、あるいはＣＭＣ溶液0.2 mlを、胃ゾンデを用いて、経口投与した。次いで、１）イソフラボン投与群、２）コントロール群の各群に対して、ＬＰＳ（ＳＩＧＭＡ社製）を生理食塩水に溶解した溶液（50 μg/マウス）を静脈注射した。90分後、採血し、１時間室温に放置した。遠心分離し、上清を適度に希釈し、上清中のＴＮＦ-α濃度を、ＥＬＩＳＡ 測定キット（アマシャムファルマシア社製、[(m)ＴＮＦ-α], mouse, ELISA system, RPN2718）で測定した。
【００２６】
結果を、図１に示す。イソフラボン群は、コントロール群に比較して、血中のＴＮＦ-α濃度の上昇を有意に抑制していることが認められた（危険率1％未満：Fisher検定）。すなわち、イソフラボンを経口投与することによって、ＬＰＳによるＴＮＦ-αの異常産生が抑制され、その結果、全身的な敗血症ショックを予防することができることが示された。
【００２７】
［実施例］
「ソイアクトY」5 g、糖類50 g、蜂蜜15 g、アスコルビン酸１ g、クエン酸0.5 g、および香料適量に、水を加えて、総量１ kgとし、濾過滅菌後、ビンに100 mlずつ無菌的に充填し飲料とした。この飲料は、有効成分をイソフラボンとし、微生物感染による敗血症の予防または治療のために使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】試験例に記載した、血清中のＴＮＦ-α濃度測定結果を示す。図中のエラーバーは、標準誤差を示す。
【図１】
2005232032.tif 000002