(57)【要約】    【課題】  プローブ先端への析出物を自動で洗浄することができるようにする。    【解決手段】    プローブ１は３重管構造となっており、液体クロマトグラフからの溶離液が最内側の流路を流れ、その外側の流路をマトリックス溶液が流れ、最外側の流路を空気又はアセトンが流れるようになっている。分析前に前の分析の際に析出したマトリックス化合物を洗い流すためにアセトンを流してプローブ１の先端部を洗浄し、その後、空気を流して洗浄液を蒸発させる。    【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
プレート上に液体クロマトグラフなどの送液機構から送液される試料液に添加剤溶液を添加して先端部から滴下させるプローブを備えた分画装置において、
前記プローブは前記添加剤溶液からの析出物を溶解する洗浄液を随時前記先端部に送ることのできる洗浄液流路を備えていることを特徴とする分画装置。
【請求項２】
前記プローブの先端部は３重管構造であり、最内管を前記試料液が流れ、その外側の管を前記添加剤溶液が流れ、最外側の管が前記洗浄液流路となっている請求項１に記載の分画装置。
【請求項３】
前記プローブは前記先端部に気体を随時供給して前記先端部を乾燥させる気体供給流路を備えている請求項１に記載の分画装置。
【請求項４】
前記プローブの先端部は３重管構造であり、最内管を前記試料液が流れ、その外側の管を前記添加剤溶液が流れ、最外側の管が前記洗浄液流路と前記気体供給流路とを兼ねている請求項３に記載の分画装置。
【請求項５】
前記添加剤溶液はマトリックス支援レーザ脱離イオン化による質量分析法で分析を行なうための試料作成用のマトリックス化合物の溶液であり、前記洗浄液は前記マトリックス化合物を溶解する有機溶剤である請求項１から４のいずれかに記載の分画装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフ）などの送液機構から送液される試料液に添加剤溶液を添加して先端部からマイクロプレートやサンプルプレートなどのプレート上に滴下してサンプルを移動させるプローブを備えて、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（マトリックス支援レーザ脱離イオン化法飛行時間型質量分析）などで分析するためのサンプルを調製するための分画装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質やペプチドなどの構造や働きの解明を行なうプロテオーム解析の分野では、最近注目されているＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳなどを用いた分析が行なわれている。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳは生体試料にマトリックス溶液を添加し乾燥させてサンプルとした後、レーザ光線を当てることによりイオン化して質量分析を行なう方法であるが、その際使用される試料は数μＬというような微量である。
【０００３】
マトリックス化合物として用いられるのは脂溶性物質であり、マトリックス溶液はマトリックス化合物を溶媒で高濃度に溶解した溶液である。マトリックス化合物はアセトニトリルなどの有機溶媒にはよく溶ける。しかし、液体クロマトグラフで生体試料を分離して溶出させマトリックス溶液を同時に添加して滴下させながら分画する場合、分画時間は通常１０分以上である。プローブ先端部において高濃度のマトリックス溶液は常に大気と接しているために、経時的に溶媒は蒸発しており、結果として、プローブ先端でマトリックス化合物が析出する。
【０００４】
マトリックス化合物がプローブ先端に析出するとプローブ先端とサンプルプレート間の距離が一定に保つことができないばかりでなく、滴下させる際の位置も定まらず、均一な液滴を作ることが困難になり不都合となる。
さらには、析出したマトリックス内にＨＰＬＣにより分離溶出してきた測定対象成分が取り込まれて正確な分析ができなくなる。
そのため、従来は、分画のための滴下に入る前にシリンジなどを用いて手動でプローブ先端をアセトンなどの溶剤で洗浄してプローブ先端に析出したマトリックス化合物を取り除いている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
分画動作の前にプローブ先端を手動で洗浄する操作は煩わしく、作業性も悪い。
そこで、本発明は添加剤溶液を添加した場合のプローブ先端への析出物を自動で洗浄することができるようにすることを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、プレート上に液体クロマトグラフなどの送液機構から送液される試料液に添加剤溶液を添加して先端部から滴下させるプローブを備えた分画装置において、前記プローブは添加剤溶液からの析出物を溶解する洗浄液を随時前記先端部に送ることのできる洗浄液流路を備えていることを特徴とするものである。
【０００７】
好ましい形態ではプローブの先端部は３重管構造となっており、最内管を試料液が流れ、その外側の管を前記添加剤溶液が流れ、最外側の管が前記洗浄液流路となっている。
前記プローブは先端部に気体を随時供給して先端部を乾燥させる気体供給流路を備えていてもよい。
その場合の好ましい形態では、プローブの先端部は３重管構造であり、最内管を試料液が流れ、その外側の管を添加剤溶液が流れ、最外側の管が前記洗浄液流路と前記気体供給流路とを兼ねている。
【０００８】
前記添加剤溶液の一例はマトリックス支援レーザ脱離イオン化による質量分析法で分析を行なうための試料作成用のマトリックス化合物の溶液であり、その場合の前記洗浄液はマトリックス化合物を溶解する有機溶剤である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明では洗浄液流路を備えてプローブ先端部に洗浄液を送るようにしたので、プローブ先端部に析出したマトリックス化合物を自動で除去することができるようになる。
プローブに残留した洗浄液を布で取り除く方法では、その際に布がプローブに触れるためプローブ位置がずれてしまい、滴下位置が正確でなくなってしまうことがあるが、プローブ先端から気体を噴出させて、洗浄後にプローブ先端部に残った洗浄液をその気体により乾燥させて蒸発させるようにすれば、液滴の滴下位置がずれることがなく、引き続き行なわれる生体試料の分画を均一に行なうことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下に一実施例を説明する。
図１は分画装置の一実施例を液体クロマトグラフとともに示す概略構成図である。
溶離液を送るポンプ４８、試料を注入するインジェクター４６、試料成分を分離するカラム４４、及び検出器４２を溶離液の流路に沿って配置した高速液体クロマトグラフの検出器４２の下流にキャピラリ２を介して液滴を滴下するプローブ１が接続されている。
【００１１】
プローブ１はＴ型３方ジョイントＪ１、Ｊ２を備え、上流側のジョイントＪ１は溶離液を送液するキャピラリ２とマトリックス溶液を送液する管１６とを接続させ、下流側のジョイントＪ２は空気及び洗浄液としてのアセトンを供給する管１８を接続させ、プローブ１の出口側の先端部は３重管構造を形成している。
【００１２】
溶離液がポンプ４８によって送られ、インジェクター４６から試料が注入される。インジェクター４６に注入された試料はカラム４４で成分ごとに分離され検出器４２で検出される。溶離液はキャピラリ２を通ってプローブ１よりサンプルプレートＳ上に滴下され捕集される。
【００１３】
溶離液に添加する添加剤溶液としてはマトリックス溶液を使用する。マトリックス化合物としては、ニコチン酸、２−ピラジンカルボン酸、シナピン酸（３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、５−メトキシサリチル酸、痾−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（ＣＨＣＡ）、３−ヒドロキシピコリン酸、ジアミノナフタレン、２−（４−ヒドロキシフェニルアゾ）安息香酸、ジスラノール、コハク酸、５−（トリフルオロメチル）ウラシル、グリセリン等を使用することができる。
【００１４】
このようなマトリックス化合物を溶解する洗浄液は、アセトン、アセトニトリルなどの有機溶剤である。
ここでは、マトリックス溶液として、例えば、ＣＨＣＡ（α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸）を水とアセトニトリルの混合溶液で溶解した飽和溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を使用し、洗浄液としてアセトンを使用する。
【００１５】
マトリックス溶液は、ポンプ４９によってＴ型３方ジョイントＪ１でキャピラリ２と接続されている管１６中を送液され、キャピラリ２の外側を流れてプローブ１の先端部から試料成分を含む溶離液と同時に滴下される。
空気供給管２４及び洗浄液供給管２６はＴ型３方ジョイントＪ３によって合流し、その共通の流路となっている配管１８は３方Ｔ型ジョイントＪ２によって溶離液が流れるキャピラリ２及びマトリックス溶液が流れる管と接続され、空気及び洗浄液はマトリックス溶液が流れる管のさらに外側を流れるようになっている。洗浄液としては、ここでは例えばアセトンを使用する。
【００１６】
空気供給管２４にはバルブ２８が取り付けられており、バルブ２８の開閉によって空気の供給が制御される。洗浄液供給管２６にはポンプ３０が設けられており、ポンプ３０が動作することで洗浄液のアセトンが洗浄液供給管２６を流れてプローブ１に供給される。
【００１７】
液体クロマトグラフからの溶離液を滴下する際は、サンプルプレートＳに溶離液と同時にマトリックス溶液がプローブ１の先端より滴下される。液体の滴下後はマトリックス化合物がプローブ１の先端部に析出することがあるため、洗浄液供給管２６より洗浄液のアセトンをプローブ１の先端部に供給し、プローブ１の先端部を洗浄する。プローブ１先端部の洗浄後、洗浄液がプローブ１の先端部に残留しないように、バルブ２８を開いて空気をプローブ１先端部に供給し、プローブ１の先端部に残留した洗浄液を蒸発させる。
【００１８】
図２は一実施例のプローブを詳細に示す断面図である。
上流側の第１のＴ型３方ジョイントＪ１の直交しないジョイントａ,ｂの２つを高速液体クロマトグラフからの溶離液が送液される一番細いキャピラリ２が横断している。上流側のジョイントａはスリーブ１２を介し、メイルナットなどの配管部品１０ａを用いて密封されている。
【００１９】
Ｔ型３方ジョイントＪ１の直交するジョイントｃにはマトリックス溶液が送液される配管１６が接続され、メイルナットなどの配管部品１０ｃで密封されている。一番細いキャピラリ２が出ているジョイントｂでは、キャピラリ２にキャピラリ４が被せられ、スリーブ２２を介してメイルナットなどの配管部品１０ｂを用いて密封されている。
【００２０】
下流側のＴ型３方ジョイントＪ２には、上流側のジョイントａからキャピラリ２,４が挿入され、スリーブ３２を介してメイルナットなどの配管部品２０ａを用いて密封されている。キャピラリ２,４と直交するジョイントｃには空気及び洗浄液のアセトンを供給する管１８が接続され、メイルナットなどの配管部品２０ｃで密封されている。最も下流側のジョイントｂでは、キャピラリ２,４に配管８が被せられ、メイルナットなどの配管部品２０ｂを用いて密封されている。
【００２１】
Ｔ型３方ジョイントＪ２の側方に位置するＴ型３方ジョイントＪ３には、ジョイントａから空気供給管２４が挿入され、ジョイントｂからＴ型３方ジョイントＪ２と接続する配管１８が挿入され、ジョイントｃから洗浄液供給管２６が挿入されて、それぞれの管２４，１８，２６がメイルナットなどの配管部品３０ａ，３０ｂ，３０ｃを用いて密封されている。
【００２２】
空気供給管２４にはバルブ２８が設けられており、バルブ２８が開閉することにより空気のプローブ１先端部への供給のオン／オフが切り換えられる。洗浄液供給管２６にはポンプ２９が設けられており、ポンプ２９の動作のオン／オフによってアセトンが配管１８を通ってプローブ１先端部に供給されるオン／オフが切り換えられる。
【００２３】
マトリックス溶液は脂溶性物質であるマトリックス化合物を溶媒で高濃度に溶解した溶液であるため、液体クロマトグラフで試料を分離して溶出させマトリックス溶液を同時に添加して滴下させながら分画を続けていると、プローブ先端部においてマトリックス溶液が大気と接して溶媒が蒸発し、プローブ先端でマトリックス化合物が析出する。
【００２４】
そこで、分析終了後又は次の分析前にポンプ２９を作動させてアセトンを例えば２００μＬ送液し、プローブ１の先端部をアセトンで洗浄する。ポンプ２９より送り出されたアセトンは乾燥蒸発用ガスラインと接続させるためのＴ型ジョイントＪ３を経由してプローブ１の２重管と３重管の間を流れてプローブ１先端部に固着したマトリックス化合物を洗い流す。その後、乾燥蒸発用ガスバルブ２８を開き、残留したアセトンを蒸発させる。
【００２５】
この実施例のように、空気供給管２４と洗浄液供給管２６とをＴ型ジョイントを用い手接続した場合には、アセトンなどの洗浄液がガスバルブ２８側に逆流しないよう流路抵抗を調節するのが好ましい。例えば、空気供給管２４として内径０．１ｍｍで長さが１００ｍｍ程度の配管を使用する。
Ｔ型ジョイントＪ３の代わりに３方電磁弁を用いてもよく、その場合には洗浄液がガスバルブ２８側に逆流を考慮しなくてもすむ。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】分画装置の一実施例を液体クロマトグラフとともに示す概略構成図である。
【図２】一実施例のプローブを詳細に示す断面図である。
【符号の説明】
【００２７】
１      プローブ
２,４    キャピラリ
８      配管
１０ａ,１０ｂ,１０ｃ,２０ａ,２０ｂ,２０ｃ,３０ａ,３０ｂ,３０ｃ    配管部品
１２,２２,３２    スリーブ
１６      添加剤供給管
１８      接続管
２４      空気供給管
２６      洗浄液供給管
２８      バルブ
４２      検出器
４４      カラム
４６      インジェクター
３０,４８,４９      ポンプ
Ｓ      サンプル容器
Ｊ１,Ｊ２,Ｊ３    Ｔ型３方ジョイント
【図１】
2005201828.tif 000003
【図２】
2005201828.tif 000004