(57)【要約】  【課題】  簡易な構造であるが、手作業によらず、自動操作により接着依存性細胞を培養するための細胞培養容器と、これを用いた細胞培養装置を提供する。  【解決手段】  モータにより回転軸を中心に回転するディスク（2000）と、前記ディスクに固定された前記回転軸に対して所定半径位置に形成された１個以上の初代培養容器（2100a〜d）と、初代培養容器（2100a〜d）より外側に形成された複数個の二代培養容器（2200a〜d，2201a〜d，2202a〜d，2203a〜d）と、初代培養容器から引き出され、前記二代培養容器より半径方向外側の分岐点（2184a〜d）で分岐され、少なくとも２個以上の二代培養容器へ接続される流路（2180a〜d）を備える。【選択図】      図４
2005218404.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
モータにより回転軸を中心に回転する剛体と、前記剛体に固定され前記回転軸に対して所定半径位置に形成された１個以上の初代細胞培養容器と、前記初代細胞培養容器より外側に形成された複数個の継代細胞培養容器と、前記初代細胞培養容器から引き出され、前記継代細胞培養容器より半径方向外側の分岐点で分岐され、少なくとも２個以上の継代細胞培養容器へ接続される流路を有した細胞培養容器を備えたことを特徴とする細胞培養装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、接着依存性細胞を培養するための細胞培養装置に関し、特に継代培養を自動的に行えるようにした細胞培養装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
組織工学の飛躍的な進展により、ヒトの皮膚、軟骨等の細胞を分離・培養し、in vitro（試験管内、体外で行う試験、検査、処理、投与および照射実験などの総称）で組織の再構築を行った後、患者の幹部に移植する再生医療技術が開発されている。しかしながら、現在、世界で事業化されている培養組織作製法のほとんどは熟年オペレータの手作業によるものであった（例えば、手作業による培養組織作製法の例として、非特許文献1参照。）。
【非特許文献１】株式会社  秀潤社発行「バイオ実験イラストレイテッド（6）すくすく育て細胞培養」P92
【０００３】
培養組織作製法は一般に、組織から単離した細胞を直接培養器に移して行う初代培養、初代培養によって培養された細胞を更に二代、三代と次々に培養器へ移しかえる継代作業、継代作業によって移しかえられた培養器おいて、二代、三代の培養を行う継代培養、培養器内に敷かれる細胞の培養にとって必要な栄養分を含む培地を新しく交換するための培地交換作業等の工程が含まれる。
【０００４】
しかしながら、従来の手作業による培養組織作製法では、大量生産には不向きであるだけでなく、製品価格に占める相対的な人件費の高騰を招いていた。また、ヒューマンエラー等によりコンタミネーションが発生すると、それにより細胞が死滅しやすくなり、目標の細胞数が得られなくなる問題もあった（例えば、非特許文献2参照。）。
【非特許文献２】日本エム・イー学会雑誌（BME）“再生医療のための細胞培養システムの開発”；Vol.16，No．2，2002，P10〜17
【０００５】
そこで、手作業でなく細胞培養プログラムにより培地交換操作、継代培養操作等をタイミング良く自動的に行う細胞培養装置が特許文献1に提案されている。
【特許文献１】特開2001-275659号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献1記載の細胞培養装置では、細胞を継代する過程である第1培養ユニットから第2培養ユニットへの細胞懸濁液の移動をする際に、細胞移動ポンプを用いていた。細胞懸濁液の継代の移動のために移動ポンプを用いた細胞培養装置では、構造が複雑になり、高価になる問題があった。
本発明の目的は、簡易な構造であるが、手作業によらず、自動操作により接着依存性細胞を培養するための細胞培養装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明によれば、モータにより回転軸を中心に回転する剛体と、前記剛体に固定され前記回転軸に対して所定半径位置に形成された1個以上の初代細胞培養容器と、前記初代細胞培養容器より外側に形成された複数個の継代細胞培養容器と、前記初代細胞培養容器から引き出され、前記継代細胞培養容器より半径方向外側の分岐点で分岐され、少なくとも2個以上の継代細胞培養容器へ接続される流路を有した細胞培養容器を備えたことを特徴とする細胞培養装置が提供される。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、より簡易な構造であるが、手作業によらず、自動操作により接着依存性細胞を培養するための細胞培養容器と、これを用いた細胞培養装置を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
先ず、本発明の第一の実施形態を図面に基づいて説明する。
図1aは、本発明の第１の実施形態による細胞培養装置1000を示したもので、前面には培養室ドア1010と培養液室ドア1020の2つのドアがあり、それぞれは培養を行うための培養室1015と、培養に用いる培地等の試薬を保存する培養液室1025（ここでは図示せず。）へ別々にアクセスするために設置されている。
【００１０】
図1bは培養室ドア1010と培養液室ドア1020を表示しないで、細胞培養装置1000の内部の培養室1015と培養液室1025を示したものである。培養室1015の上部には、撹拌扇3080が、内部の温度や湿度、二酸化炭素濃度等、細胞培養のための雰囲気を一様にするために設置される。また、培養室1015の奥面には、温度センサ3050や湿度センサ3060、二酸化炭素濃度センサ3070が設置され、これらのセンサが雰囲気の状態変化を検出し、制御装置（図示せず。）に信号を伝達する。制御装置は、それぞれが設定した範囲を超える信号の変動を検出したときには、この値を設定範囲に戻すように制御を加える。
【００１１】
培養室1015の床部には、細胞培養容器としてディスク2000が中心シャフト3005を介して回転モータ3000に接続されて設置されている。この細胞培養装置1000の制御は、前面に設置した操作パネル1040を利用して、操作手順や培養条件の入力、培養操作の開始と停止等が可能である。さらに、細胞培養装置1000は電源パネル1030付近に設置した外部インターフェース（図示せず。）を介して別に設置したコンピュータに接続できるので、一台のコンピュータで一台または複数台の細胞培養装置1000を制御することができるようにすることも可能である。
【００１２】
なお、培養液室1025内には、この内部に設置した交換用培地バッグや細胞剥離のための薬剤（例えばトリプシン等）バッグ3090やリン酸緩衝食塩水用バッグ3010があり、リン酸緩衝食塩水用バッグ3010の温度を4℃に保ち、これらをディスク2000に注入する直前に細胞培養に適した温度（例えば37℃）に加熱する機構（図示せず。）も有している。
【００１３】
図2は、説明の都合上、ドアや壁、培養液室1025を表示せず、培養室1015の内部を示したものである。細胞培養容器としてのディスク2000が回転モータ3000に接続されて設置され、回転モータ3000はディスク2000の内部で遠心力が50×908m／（毎秒・毎秒）に達するように制御される。ディスク2000の上部には培地モニタ3040が設置されていて、ディスク2000に保持された培地について、そのpH値に依存して変化する色のほか濁りを検出し、制御装置（図示せず。）に信号を伝達している。また、培地やリン酸緩衝食塩水、細胞剥離のための薬剤（例えばトリプシン等）を供給するためのピペッタ3010が設置されている。ピペッタ3010の先端には、2本以上のピペッタチューブが設置されており、本実施形態では、培地とリン酸緩衝食塩水を注入するためのピペッタチューブと、細胞剥離のための薬剤（例えばトリプシン等）を注入するためのピペッタチューブとの2本設置されている。
【００１４】
これらは、ピペッタ駆動装置（図示せず。）によって、ピペッタ3010の回転停止位置が制御され、ディスク2000への薬剤の注入は、培養液室1025からの送液パイプ（図示せず。）途中に設置された切り替え装置（図示せず。）の流路切り替えによって制御される。また、ディスク2000から培養した細胞を取り出すためのピペッタ3020と、これによって取り出された細胞を格納する収穫用チューブ3110が設置されている。これらについては後述する。
【００１５】
ディスク2000の下面には、位相差顕微鏡3030が設置されていて、ディスク2000に対して、位相差顕微鏡3030と反対側に設置された照明光源（図示せず。）による照明によって、ディスク2000内の細胞の個数や形態を局所的に観察することができる。さらに、スライダー3032は、位相差顕微鏡3030をディスク2000の半径方向に走査するとともに、その回転方向についても走査可能とする。これによってディスク2000内の細胞の個数や形態を全面にわたって観察できる。
【００１６】
図3aは、細胞培養容器としてのディスク2000の表面を示したもので、説明のために、ディスク面上の一部のフィルムを表示していない。ディスク2000はポリスチレン製で、このディスク2000には初代培養容器2100、2代培養容器2200の他、これらを結ぶ継代流路が形成されており、表面は防水性フィルム2010で覆われている。防水性フィルム2010には、初代培養容器2100及び2代培養容器2200の内部の湿度や圧力等雰囲気を培養室1015と均一にするための空気穴2050が培養容器毎に設けられている。なお、空気穴2050は、この穴を介して細胞培養を阻害する物質が浸入するのを防ぐために、通気性とともに防水性も備えたフィルムで覆う場合がある。
【００１７】
図3bは、ディスク2000の裏面を示したもので、説明のために、ディスク面上の一部のフィルムを表示していない。この面には、初代培養容器2100や2代培養容器2200から培地等を抜き取るための培地抜き流路2145、2245等（ここでは、表示せず。）が形成されており、この表面を防水性フィルム2030が覆っている。防水性フィルム2030には、中心穴2020が形成されている。
【００１８】
図3aと図3bに示したディスク2000の培養容器や継代流路が形成されている部分は、ポリスチレンを射出成形して製作する他に、同じポリスチレンを板材に成形した後に切削しても製作することができる。また、ポリスチレンの材料の他に、メタクリル樹脂を射出成形したり、これを切削しても製作することができる。いずれの場合でも、接着系細胞の形態や培地の様子を観察するためにディスク2000を透明にするとともに、接着依存性細胞が増殖するために接着する初代培養容器2100、2代培養容器2200の床面を、細胞が接着しやすくなるように、その表面にコラーゲンをコーティングしたり、プラズマ照射によってラジカルを発生させたりすると良い。なお、樹脂材料の他にガラス材でディスク2000を形成したり、薄いガラス材を初代培養容器2100、2代培養容器2200の床面に貼り付けても、ディスク2000を透明にしてその内部を観察することができ、また、細胞を培養することができる。
【００１９】
図4は、ディスク2000の構造について説明するために、その表面を覆う防水性フィルム2010を省略して表示したものである。2100a〜dは初代培養容器であり、その各々に初代培養容器から培地等の溶液の交換のために溶液を抜き取るための流路2145a〜dが接続してある。この流路2145a〜dは、複数の初代培養容器（図4では4個）から培地を同時に抜き取るため、各培養容器から、溶液をディスク2000から外部へ取り出す穴2147までの距離が同一になるよう、途中で折り曲げてある。2180a〜dは初代培養容器2100 a〜dから二代培養容器2200a〜d，2201a〜d，2202a〜d，2203a〜dへ細胞を含む溶液を継代するための流路である。二代培養容器2200a〜d，2201a〜dはそれぞれ流路2186a〜dで、2202a〜d，2203a〜dはそれぞれ流路2188a〜dで接続されている。また、2245a〜dは二代培養容器2202a〜dと2203a〜dからそれぞれ培地等の溶液の交換のために溶液を抜き取るための流路であり、2247a〜dは二代培養容器2200a〜dと2201a〜dからそれぞれ培地等の溶液の交換のために溶液を抜き取るための流路である。
【００２０】
これらの流路2245a〜dと2247a〜dは、各培養容器からディスク2000の外部へ溶液を取り出す穴2251までの距離が同一になるよう、途中で流路を折り曲げるとともに、互いの干渉を避けるために、片方を図3bに示したディスク2000の裏面に設置した流路を介して穴2251に接続されている。
【００２１】
次に、本発明の第一の実施形態における接着依存性細胞の培養方法の各工程について説明する。ただし、以下の説明では説明をわかりやすくするため、90度ずつ4分割して設置した初代培養装置2100a〜dや流路2145a〜d等のすべてについては図示せず、断面あるいは1／4のみで、図を説明する。
【００２２】
（1）培養する細胞の注入（播種）
培養する細胞を培地に懸濁し、この溶液を注射器を使って防水フィルム2010に穿孔しながら初代培養容器2100a〜dに注入（播種とも言う）する。細胞溶液を注入後、ディスク2000を細胞培養装置1000中の中心シャフト3005にセットし、キャップ3007（ここでは、図示せず。）で固定する。この後、初代培養容器2100a〜d等に播種された細胞をこの容器の底面で一様に分布させるため、ディスク2000を中心シャフト3005について揺動させる。この揺動では、初代培養容器2100a〜d中の細胞を含む溶液（培地）が泡立たないような条件で、かつ、複数の揺動条件（振幅、揺動頻度の種類、少なくとも2種類以上）でするのが好ましい。
【００２３】
図5は、細胞培養中のディスク2000と、初代培養容器2100aを含む断面を示したものである。培地4000は、初代培養容器2100aの底面付近にあり、培地等の溶液を抜き取るための流路2145aや、防水フィルム2010には触れられることはない。そのため、流路2145aに培地が浸入して、培地が減ってしまうことはない。この後、ディスク2000を静置し、細胞が培養容器中の底面に接着するのを待つ。なお、ディスク2000を、その最外周で5cm／毎秒以下のゆっくりとした速度で回転させると、細胞培養装置1000内の環境条件に局所的な分布が生じた場合に、これによる細胞培養への影響を緩和することができる。
【００２４】
（2）培地交換
培地交換する際には、まず、ディスク2000を回転させる。図6は、この状態の断面を示したもので、発生した遠心力によって、初代培養容器2100a中の培地が流路2145aに掛かるようになる。そして、ディスク2000上面の流路2145aと、キャップ3007内部の流路3009と、中心シャフト3005内部の流路3006と、図示しない回転側から静止側に流体を取り出す機構、たとえば回転ユニオンを介して、負圧によって培地4000をディスク2000の外へ取り出す。このとき、ディスク2000の回転数について、遅い回転数から培地4000を抜きはじめ、抜き取る量に応じて早い回転数に上げていくと、培地4000の液面が常に流路2145aの入り口にあり、防水性フィルム2010を培地で汚すことがないので、位相差顕微鏡3030で観察する際画像がクリアのまま保たれるという利点がある。
【００２５】
培地の抜き取りが完了した後、ディスク2000を静止させて、ピペッタ3010を使って、新しい培地を各培養容器2100a等に注入する。そして、注入後、培地を培養容器中に行き渡らせるため、ディスク2000を、中心シャフト3005を用いて揺動させる。このときには、培養容器底面に貼り付いた細胞にストレスを与えないように、ゆっくりとした揺動を短時間与える。
【００２６】
（3）継代
以上に述べた培地交換を繰り返した後、位相差顕微鏡3030で培養容器中の細胞を観察し、目的とする細胞密度に達した時に、細胞の継代を行う。図7は、継代前の培養状態を示すためにディスク2000の一部を表示したものであり、表面の防水性フィルム2010は表示していない。このときには、初代培養容器2100a内の培地4000は、培養容器底面に広がっており、ディスク2000の表面に設置した継代のための流路2180aに培地が浸入することはない。
【００２７】
この状態から、まず、前述の培地交換と同様，培地を抜き取る。続いて、培養容器底面に貼り付いた細胞を洗浄するために、ピペッタ3010を使ってリン酸緩衝食塩水（以下、PBSとする）を注入する。注入後、細胞の洗浄を促進するためにディスク2000を揺動させる。洗浄後、前述の培地交換と同様、PBSを抜き取る。続いて、培養容器底面に貼り付いた細胞を剥がすために、ピペッタ3010を使ってトリプシンを注入する。注入後、5分程度静置した後、培養容器底面から細胞を剥がすことを促進させるためにディスク2000を揺動させる。続いて、トリプシンが培養容器底面から細胞を剥がす効果を失活させるために、ピペッタ3010を使って培地を注入する。注入後、トリプシンの失活を促進するためにディスク2000を揺動させる。続いて、失活したトリプシンと培地（両方合わせてトリプシン溶液4200とする）と細胞の混合液からトリプシン溶液と細胞を分離するために、ディスク2000を回転させて遠心分離を行う。このとき、遠心分離後に初代培養容器2100aの壁面に細胞が固く凝集しないように、遠心力は小さくし、遠心時間も短くする。例えば、遠心力は30〜50G、遠心時間は2分程度とすると、この条件が実現される。
【００２８】
この遠心分離中は、図8に示すように、初代培養容器2100a中の溶液の液面4201が、継代用の流路2180aの途中に設置された屈曲部2182aの位置よりも、遠心力方向外側に位置するように、トリプシンとこれを失活させるために注入する培地の液量を決定する。これにより、遠心分離中に細胞を含むトリプシン溶液が継代用の流路2182aから流れ出してしまうのを防ぐ。
【００２９】
遠心分離が終了後、遠心分離の回転数を低くし、前述の培地交換と同様に、トリプシン溶液を抜き取る。但し、少しトリプシン溶液を残すようにし、初代培養容器2100a中の細胞が乾燥しないようにする。このため、培地等の溶液を抜き取るための流路2145aの初代培養容器2100a中での入り口の位置を、初代培養容器2100a中で遠心力が最大となる部分よりも内側に設置する。ただし、この構造であっても、前述の培地の交換においては、ディスク2000の回転数を徐々に上げながら、流路2145aの初代培養容器2100a中での入り口に培地の液面を寄せながら抜き取れば、全ての培地を抜き取ることは可能となる。
【００３０】
続いて、次世代の二代培養容器2200aと2201aと2202aと2203aへ細胞を継代するために、ピペッタ3010を使って培地を注入する。この時の液量は、図9のように、培地注入後にディスク2000を回転させて遠心力を発生させたときに、初代培養容器2100a中で細胞を含む培地4300の液面4301が継代用の流路2180aの途中に設置された屈曲部2182aの位置よりも、遠心力方向内側に位置するように決定する。
【００３１】
注入後、直ちに、ディスクを揺動させて、初代培養容器2100中の遠心力方向外側の壁面付近に軽く凝集した細胞を培地中に懸濁する。このとき、懸濁によって泡が生じない限り、揺動条件を激しくし、細胞が個々に分離した状態になるようにする。
【００３２】
続いて、初代培養容器2100a中の細胞を含む培地を二代培養容器2200aと2201aと2202aと2203aへ送液するために、ディスク2000を高速で回転させる。図9は、この回転開始直後の様子を示したもので、初代培養容器2100中で細胞を含む培地4300の液面4301が継代用の流路2180aの途中に設置された屈曲部2182aの位置よりも、遠心力方向内側に位置するようになり、この結果、細胞を含む培地は屈曲部2182aを乗り越えて継代のための流路2180に流れ出す。
【００３３】
図10は、流れ出した細胞を含む培地4300aが、流路2180aの先端にある分岐流路2184aで別れ、二代培養容器2200aと2202aに流れ込んだ様子を示している。本実施の形態では、流路2180aが、培養容器2200aと2202a方向へ分岐される際の分岐流路2184aが、ディスク2000の半径方向外寄り、より具体的には、二代培養容器の最も半径方向外側より更に外側に位置している。このことにより、細胞を含む培地4300が二代培養容器2200aと2202aへ流れる際に働く力における遠心力の割合が大きくなるので、二代培養容器2200a側と2202a側へ流路抵抗の微妙な違いが生じても、バランス良く両者（二代培養容器2200と2203）へ細胞を含む培地4300を供給できる。その結果、ディスク2000の回転を続けると、二代培養容器2200aと2202a内の細胞を含む培地4300が同じ遠心力方向の高さになり、液量も等しくなる。
【００３４】
図11は，細胞を含む培地4300が、流路2180aの先端にある分岐流路2184 aで別れ、二代培養容器2200aと2202aに流れ込み、さらに、二代培養容器2200aからは流路2186aを介して二代培養容器2201aへ、二代培養容器2202aからは流路2188aを介して二代培養容器2203aへ進んだ様子を示している。このときも、二代培養容器2200a，2201a，2202a，2203aにある細胞を含む培地4300には遠心力がそれぞれに等しく作用するので液面が等しくなり（液面4304）、両者の液量は等しくなる。
【００３５】
なお、図11中で、初代培養容器2100a中の細胞を含む培地4300の液面4306が、流路2180の途中に設置された屈曲部2182の位置よりも、遠心力方向外側に位置しているが、この状態では、遠心力方向のサイフォンの原理によって細胞を含む培地4300は流路2180に吸い込まれていくようになっている。そのため、初代培養容器2100a中の細胞を含む培地4300のすべてが、流路2180aを介して二代培養容器2200a，2201a，2202a，2203aへと継代されることになる。
【００３６】
次に，二代培養容器2200a，2201a，2202a，2203a中の細胞を含む培地がそれぞれの培養容器中に行き渡るようにディスク2000を揺動させる。この揺動では、初代培養容器2100aへの播種時と同様に、それぞれの培養容器の細胞を含む培地4300が泡立たないような条件で、かつ、複数の揺動条件（振幅，揺動頻度の種類、少なくとも2種類以上）でするのが好ましい。
【００３７】
この後の細胞培養方法は、初代培養容器2100aにおける培養方法と同一であり、説明は省略する。次に、位相差顕微鏡3030で培養容器中の細胞を観察し、目的とする細胞密度に達した時に、細胞の収穫を行う。この操作では、二代培養容器2200aと2201a，2202a，2203aから培地を抜くこと、PBSを注入し細胞を洗浄すること、トリプシンを注入し細胞を培養容器底面から剥がすこと、トリプシンを失活させるために培地を注入することまでは、前述の初代培養容器2100aにおける継代作業の一部と同一であり、説明は省略する。
【００３８】
これに続く、収穫作業としては、トリプシン溶液中の細胞を十分懸濁するために、ディスク2000を揺動させる。そして、トリプシン溶液と細胞をまとめて、収穫用ピペッタ3020を使って収穫用チューブ3110に収集する。そして、収穫用チューブ3110は、細胞培養装置1000から取り出され、遠心分離の後、保存処理される。
【００３９】
以上説明した本実施形態によれば、人手を使うことなく培地交換作業が自動化でき、細胞培養装置1000内にディスク2000を入れたまま細胞を培養するため、細胞の育成環境の変化を最小限にすることができるので、ストレスを抑えることができ、またコンタミネーションも抑えることができる。特に、二代培養容器2200aと2202a方向へ分岐される際の分岐流路2184aが、ディスク2000の半径方向外寄り、より具体的には、二代培養容器の最も遠心力方向外側より更に外側に位置しているので、細胞を含む培地4300が二代培養容器2200aと2202aへ流れる際に働く力における遠心力の割合が大きくなり、結果的に二代培養容器2200a側と2202a側へ流路抵抗の微妙な違いが生じても、バランス良く両者（二代培養容器2200aと2202a）へ細胞を含む培地4300を供給できるという効果が生じる。
【００４０】
次に、本発明の第二の実施形態を図面に基づいて説明する。
図12は、本発明の別の実施例を示したものである。図2で示した構成部品のうち、本発明を説明するのに必要な部品のみを表示してある。図12において、培養容器2920，2930，2932は、回転する円盤2900上に固定されており、2920は初代培養容器、2930と2932は二代培養容器である。初代培養容器2920と二代培養容器2930、2932は継代用のパイプ2940で連結されている。また、それぞれの培養容器には，培地等抜き取り用パイプ（図示せず。）が設置され、円盤2900に設置された培地等抜き取り用流路（図示せず。）に接続されている。この流路は、第1の実施形態における培地抜き流路2145a〜dと同様の構造を備えている。
【００４１】
次に、本発明の第二の実施形態における接着依存性細胞の培養方法について説明する。
培養する細胞を培地に懸濁し、この溶液をピペッタを使って注入穴2921から培養容器2920に注入（播種とも言う）する。注入後以降の培養方法において、円盤2900の制御方法は第1の実施形態と同様であり、説明は省略する。
【００４２】
図13は、円盤2900上の培養容器2920，2930，2932と、これらを結ぶ継代用のパイプ2940の配置を示したものである。継代用のパイプ2940は、その形状が、実施例1での図10中継代用流路2180と同様の形になるよう、円盤2900に設置された溝に沿って埋め込まれている。そして、継代用のパイプ2940の先端位置は、二代培養容器2930と2932と比べて、遠心力がより大きくなる外側の位置まで伸ばされ、そこで分岐流路2950に接続し、分岐流路2950は二代培養容器2930と2932に接続されている。この構成によれば、培養容器2920から2930と2932への継代において、細胞を含む培地を等量、送液することができるのは第1の実施形態と同じ理由で明らかである。
【００４３】
以上説明した本実施の形態によれば、人手を使うことなく培地交換作業が自動化でき、細胞培養装置1000内にディスク2000を入れたまま細胞を培養するため、細胞の育成環境の変化を最小限にすることができるので、ストレスを抑えることができ、またコンタミネーションも抑えることができる。特に、継代用のパイプ2940の先端位置は、培養容器2930と2932と比べて、遠心力がより大きくなる半径方向外側の位置まで伸ばされ、そこで分岐流路2950に接続されているので、細胞を含む培地が二代培養容器2930と2932へ流れる際に働く力における遠心力の割合が大きくなり、結果的に二代培養容器2930側と2932側へ流路抵抗の微妙な違いが生じても、バランス良く両者（培養容器2930と2932）へ細胞を含む培地4300を供給できるという効果が生じる。また、本実施の形態特有の効果として、培養容器として安価なT型フラスコに流路としてのパイプを接続した構成で実施が可能になるため、安価に細胞培養装置を構成ことができるという点が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】第一の実施の形態における細胞培養装置の概観図およびその内部を示す図。
【図２】第一の実施の形態における培養室内部の概観図。
【図３】第一の実施の形態における細胞培養ディスクの概観図およびその内部を示す図。
【図４】第一の実施の形態における細胞培養ディスク上の細胞培養容器と、継代に用いる流路を示す図。
【図５】第一の実施の形態における細胞培養ディスク上の細胞培養容器から培地等を抜き取るための構造を示す図。
【図６】第一の実施の形態における細胞培養ディスク上の細胞培養容器から培地等を抜き取っている様子を示す図。
【図７】第一の実施の形態における継代前の様子を示す図。
【図８】第一の実施の形態における遠心分離中の様子を示す図。
【図９】第一の実施の形態における初代培養容器2100a〜dから二代培養容器(2200 a〜d，2201a〜d，2202a〜d，2203a〜d)へ送液開始直後の様子を示す図。
【図１０】第一の実施の形態における細胞を含む培地が培養容器(2200a〜dと2202 a〜d)に流れ  込んだ様子を示す図。
【図１１】第一の実施の形態におけるサイフォンの原理で送液されている様子を示す図。
【図１２】第二の実施の形態における細胞培養装置の概観図。
【図１３】第二の実施の形態における細胞培養装置を鉛直方向上側から見た図。
【符号の説明】
【００４５】
2000  ディスク
2100a〜d  初代培養容器
2200a〜d，2201 a〜d，2202a〜d，2203a〜d  二代培養容器
2180  流路
2184  分岐流路
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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